СПОСОБЫ УЛУЧШЕННОГО УДАЛЕНИЯ ПРИМЕСЕЙ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ХРОМАТОГРАФИИ НА ОСНОВЕ СВЯЗЫВАНИЯ С БЕЛКОМ А

1. Способ очистки полипептида, содержащего Fc-область, при этом способ предусматривает стадии:
(a) приведения в контакт матрицы для хроматографии на основе связывания с белком А с образцом, содержащим (i) полипептид, содержащий Fc-область, и (ii) одну или несколько примесей, при условии, что полипептид, содержащий Fc-область, связывается с белком A; и
(b) промывки матрицы промывочным раствором, где промывочный раствор содержит одно из (i) бензоатной соли при концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 1,0 M, и (ii) бензилового спирта при концентрации, составляющей от приблизительно 0,5% до приблизительно 4% объем/объем (об./об.), или как первое, так и второе, и где промывочный раствор характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 4,0 до приблизительно 10,0.
2. Способ по п. 1, где промывочный раствор содержит: 1) бензоатную соль; 2) бензиловый спирт или 3) бензоатную соль и бензиловый спирт.
3. Способ по п. 1 или 2, где бензоатная соль присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 0,5 M.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где бензоатная соль представляет собой бензоатную соль щелочного металла.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где бензоатная соль представляет собой бензоат натрия.
6. Способ по п. 5, где бензоат натрия присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 0,3 M.
7. Способ по п. 5, где бензоат натрия присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 0,3 M.
8. Способ по п. 5, где бензоат натрия присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где бензиловый спирт присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 1% до приблизительно 4% (об./об.).
10. Способ по любому из пп. 1-8, где бензиловый спирт присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 1% до приблизительно 2% (об./об.).
11. Способ по любому из пп. 1-8, где бензиловый спирт присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 2% (об./об.) до приблизительно 4% (об./об.).
12. Способ по любому из пп. 1-11, где промывочный раствор дополнительно содержит буферное средство.
13. Способ по п. 11, где буферное средство выбрано из группы, состоящей из фосфата, триса, аргинина, ацетата и цитрата.
14. Способ по п. 11 или 13, где буферное средство присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 500 мМ.
15. Способ по п. 11 или 13, где буферное средство присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 50 мМ или приблизительно 500 мМ.
16. Способ по любому из пп. 1-15, где промывочный раствор характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 5,0 до приблизительно 10,0.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где промывочный раствор характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0.
18. Способ по любому из пп. 1-16, где промывочный раствор характеризуется показателем pH, составляющим приблизительно 5,0, приблизительно 6,0, приблизительно 7,0, приблизительно 9,0 или приблизительно 10,0.
19. Способ по любому из пп. 1-18, где промывочный раствор дополнительно содержит бензолсульфонат натрия.
20. Способ по п. 19, где бензолсульфонат натрия присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 0,5 M.
21. Способ по любому из пп. 1-20, где промывочный раствор дополнительно содержит каприловую кислоту.
22. Способ по п. 21, где каприловая кислота присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.
23. Способ по любому из пп. 1-22, где промывочный раствор дополнительно содержит гексиленгликоль.
24. Способ по п. 23, где гексиленгликоль присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 1% до приблизительно 10% (об./об.).
25. Способ по любому из пп. 1-24, где промывочный раствор дополнительно содержит креатин.
26. Способ по п. 25, где креатин присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 100 мМ.
27. Способ по любому из пп. 1-26, где промывочный раствор дополнительно содержит аргинин.
28. Способ по п. 27, где аргинин присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 1,0 M.
29. Способ по п. 27, где аргинин присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M.
30. Способ по любому из пп. 27-29, где аргинин представляет собой аргинин-HCl.
31. Способ по любому из пп. 27-30, где промывочный раствор, содержащий аргинин, характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 4,0 до приблизительно 6,0.
32. Способ по любому из пп. 27-30, где промывочный раствор, содержащий аргинин, характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 8,0 до приблизительно 10,0.
33. Способ по любому из пп. 1-32, где промывочный раствор дополнительно содержит одну или несколько солей, не являющихся буферными.
34. Способ по п. 33, где одна или несколько солей, не являющихся буферными, выбраны из группы, состоящей из хлорида натрия, бромида натрия, хлорида калия, бромида калия, хлорида магния, бромида магния, хлорида кальция, бромида кальция и любых их комбинаций.
35. Способ по п. 33, где одна или несколько солей, не являющихся буферными, представляют собой хлорид натрия и/или хлорид калия.
36. Способ по любому из пп. 33-35, где одна или несколько солей, не являющихся буферными, присутствуют в концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 1,0 M.
37. Способ по любому из пп. 1-36, где промывочный раствор представляет собой раствор, выбранный из группы, состоящей из
(i) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и бикарбонат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 50 мМ, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 10,0;
(ii) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2%, аргинин при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и фосфат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 50 мМ, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 9,0;
(iii) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 7,0;
(iv) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), и хлорид натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 7,0;
(v) раствора, содержащего гексиленгликоль при концентрации, составляющей приблизительно 10% (об./об.), бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 7,0;
(vi) раствора, содержащего бензолсульфонат при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 М, бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 7,0;
(vii) раствора, содержащего каприловую кислоту при концентрации, составляющей приблизительно 50 мМ, бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, аргинин при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, и хлорид натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 7,0;
(viii) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), и аргинин при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 6,0;
(ix) раствора, содержащего бензоат натрия при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), и аргинин при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 5,0; и
(x) раствора, содержащего бензиловый спирт при концентрации, составляющей приблизительно 2% (об./об.), и аргинин при концентрации, составляющей приблизительно 0,5 M, характеризующегося показателем pH, составляющим приблизительно 5,0.
38. Способ по любому из пп. 1-37, дополнительно предусматривающий стадию промывки матрицы первым раствором до промывки матрицы промывочным раствором из стадии (b) согласно п. 1.
39. Способ по п. 38, где первый раствор содержит буфер, выбранный из группы, состоящей из фосфатного буфера, трис-буфера, ацетатного буфера, карбонатного буфера, цитратного буфера и любых их комбинаций.
40. Способ по п. 39, где первый раствор содержит буфер при концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 100 мМ.
41. Способ по любому из пп. 38-40, где первый раствор представляет собой фосфатный буфер.
42. Способ по любому из пп. 1-41, дополнительно предусматривающий стадию промывки матрицы вторым раствором после промывки матрицы промывочным раствором из стадии (b) согласно п. 1.
43. Способ по п. 42, где второй раствор содержит буфер, выбранный из группы, состоящей из фосфатного буфера, трис-буфера, ацетатного буфера, карбонатного буфера, цитратного буфера и любых их комбинаций.
44. Способ по п. 43, где второй раствор содержит буфер при концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 100 мМ.
45. Способ по любому из пп. 42-44, где второй раствор характеризуется показателем pH, составляющим от приблизительно 5,0 до приблизительно 7,0.
46. Способ по любому из пп. 42-45, где второй раствор содержит по сути низкое количество соли или не содержит соль.
47. Способ по любому из пп. 1-46, дополнительно предусматривающий стадию приведения в контакт матрицы для хроматографии на основе связывания с белком А с элюирующим раствором после одной или нескольких стадий промывки.
48. Способ по п. 47, дополнительно предусматривающий стадию сбора элюата, содержащего полипептид, содержащий Fc-область.
49. Способ по п. 48, дополнительно предусматривающий стадию фильтрования элюата посредством глубинного фильтрования.
50. Способ по п. 48 или 49, где элюат содержит менее приблизительно 500 частей на миллион (ppm) одной или нескольких примесей.
51. Способ по любому из пп. 1-50, где способ обеспечивает в результате полипептид, содержащий Fc-область, очищенный от одной или нескольких примесей до более высокой степени, чем обеспечивает соответствующий способ, в котором отсутствует стадия промывки матрицы промывочным раствором.
52. Способ по любому из пп. 1-51, где одна или несколько примесей представляют собой белки клетки-хозяина (HCP).
53. Способ по п. 52, где один или несколько HCP выбраны из группы, состоящей из фосфолипаз, кластерина, сериновых протеаз, факторов элонгации и любых их комбинаций.
54. Способ по п. 52 или 53, где HCP представляет собой белок 2, подобный гипотетической фосфолипазе В (PLBL2).
55. Способ по п. 52 или 53, где клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего.
56. Способ по любому из пп. 52-55, где клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка (CHO).
57. Способ по любому из пп. 1-56, где Fc-область представляет собой Fc-область человека.
58. Способ по п. 57, где Fc-область человека предусматривает Fc-область IgG1, IgG2 или IgG4 человека.
59. Способ по любому из пп. 1-56, где Fc-область представляет собой Fc-область мыши.
60. Способ по п. 59, где Fc-область мыши предусматривает Fc-область IgG1, IgG2 или IgG3 мыши.
61. Способ по любому из пп. 1-60, где полипептид, содержащий Fc-область, представляет собой антитело.
62. Способ по п. 61, где антитело представляет собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
63. Способ по п. 61 или 62, где антитело представляет собой моноклональное антитело.
64. Способ по п. 61 или 62, где антитело представляет собой биспецифическое антитело или триспецифическое антитело.
65. Способ по любому из пп. 1-64, дополнительно предусматривающий до стадии (a) корректирование собранного материала, содержащего полипептид, содержащий Fc-область, с достижением конечной концентрации бензоатной соли, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 0,5 M, и показателя pH, составляющего от приблизительно 7,0 до приблизительно 9,0, с получением образца, содержащего (i) полипептид, содержащий Fc-область, и (ii) одну или несколько примесей.
66. Способ очистки полипептида, содержащего Fc-область, при этом способ предусматривает стадии:
(A) корректирования собранного материала, содержащего полипептид, содержащий Fc-область, с достижением конечной концентрации бензоатной соли, составляющей от приблизительно 0,1 M до приблизительно 0,5 M, и показателя pH, составляющего от приблизительно 7,0 до приблизительно 9,0, с получением образца, содержащего (i) полипептид, содержащий Fc-область, и (ii) одну или несколько примесей; и
(B) приведения в контакт образца с по меньшей мере одной матрицей для хроматографии.
67. Способ по п. 65 или 66, где бензоатная соль представляет собой бензоатную соль щелочного металла.
68. Способ по п. 67, где бензоатная соль представляет собой бензоат натрия.
69. Способ по любому из пп. 65-68, где конечная концентрация бензоатной соли в собранном материале составляет от приблизительно 0,4 M до приблизительно 0,5 M.
70. Способ по любому из пп. 65-69, где показатель pH собранного материала составляет от приблизительно 7,0 до приблизительно 8,0.
71. Способ по любому из пп. 65-69, где показатель pH собранного материала составляет от приблизительно 8,0 до приблизительно 9,0.
72. Способ по любому из пп. 65-67, где собранный материал получен из культуры, содержащей клетку-хозяина, сконструированную для экспрессии полипептида.
73. Способ по п. 72, где клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку-хозяина.
74. Способ по п. 73, где эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка (CHO).
75. Способ по любому из пп. 65-74, где собранный материал осветляют до корректирования.
76. Способ по любому из пп. 65-74, где собранный материал осветляют после корректирования.
77. Способ по любому из пп. 66-76, где по меньшей мере одна матрица для хроматографии предусматривает матрицу для аффинной хроматографии.
78. Способ по п. 77, где матрица для аффинной хроматографии представляет собой матрицу для хроматографии на основе связывания с белком А или матрицу для хроматографии на основе связывания с белком G.
79. Способ по любому из пп. 65-78, дополнительно предусматривающий стадию приведения в контакт по меньшей мере одной матрицы для хроматографии с по меньшей мере одним промывочным раствором.
80. Способ по любому из пп. 65-79, дополнительно предусматривающий стадию приведения в контакт по меньшей мере одной матрицы для хроматографии с элюирующим раствором.
81. Способ по п. 80, дополнительно предусматривающий стадию сбора элюата, содержащего полипептид, содержащий Fc-область.
82. Способ по п. 81, дополнительно предусматривающий стадию фильтрования элюата посредством глубинного фильтрования.
83. Способ по п. 81 или 82, где элюат содержит менее приблизительно 500 частей на миллион (ppm) одной или нескольких примесей.
84. Способ по любому из пп. 66-83, где способ обеспечивает в результате полипептид, содержащий Fc-область, очищенный от одной или нескольких примесей до более высокой степени, чем обеспечивает соответствующий способ, в котором отсутствует стадия корректирования собранного материала, содержащего полипептид, содержащий Fc-область, с получением образца.
85. Способ по любому из пп. 66-84, где одна или несколько примесей представляют собой белки клетки-хозяина (HCP).
86. Способ по п. 85, где один или несколько HCP выбраны из группы, состоящей из фосфолипаз, кластерина, сериновых протеаз, факторов элонгации и любых их комбинаций.
87. Способ по п. 85 или 86, где HCP представляет собой белок 2, подобный гипотетической фосфолипазе В (PLBL2).
88. Способ по любому из пп. 66-87, где Fc-область представляет собой Fc-область человека.
89. Способ по п. 82, где Fc-область человека предусматривает Fc-область IgG1, IgG2 или IgG4 человека.
90. Способ по любому из пп. 66-89, где Fc-область представляет собой Fc-область мыши.
91. Способ по п. 90, где Fc-область мыши предусматривает Fc-область IgG1, IgG2 или IgG3 мыши.
92. Способ по любому из пп. 66-91, где полипептид, содержащий Fc-область, представляет собой антитело.
93. Способ по п. 92, где антитело представляет собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
94. Способ по п. 92 или 93, где антитело представляет собой моноклональное антитело.
95. Способ по п. 92 или 93, где антитело представляет собой биспецифическое антитело или триспецифическое антитело.