СКОНСТРУИРОВАННЫЕ НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Набор для получения иммуноглобулинового белка, содержащий первую выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую i) транслируемую область, кодирующую иммуноглобулиновый белок, и ii) модификацию нуклеиновой кислоты, где первая нуклеиновая кислота способна избегать врожденного иммунного ответа клетки, в которую вводят первую выделенную нуклеиновую кислоту, где транслируемая область, по-существу, не содержит нуклеотиды цитидин и урацил; и упаковку и инструкции к нему.
2. Набор по п. 1, где иммуноглобулиновый белок содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из полноразмерного антитела, полипептида тяжелой цепи, полипептида легкой цепи, Fab-домена или полипептида одноцепочечного вариабельного фрагмента (ScFv), и первая выделенная нуклеиновая кислота содержит матричную рибонуклеиновую кислоту, содержащую 5-метил-цитидин и псевдоуридин.
3. Набор по п. 1, где первая выделенная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 4 и/или 6 [ритуксимаба];
b) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из a);
c) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид SEQ ID NO: 5 и/или 7 [ритуксимаба];
d) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из c);
e) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, по меньшей мере, на 95% идентичный SEQ ID NO: 5 и/или 7 [ритуксимабу];
f) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из e);
g) нуклеотидной последовательности, содержащей фрагмент по любому из a)-f); и
h) подвергнутый оптимизации кодонов вариант нуклеотидной последовательности по любому из a)-g).
4. Набор по п. 3, где иммуноглобулиновый белок иммуноспецифично связывается с полипептидом CD20.
5. Набор по п. 3, где иммуноглобулиновый белок специфически индуцирует антитело-зависимую клеточную цитотоксичность CD20+ клеток при контакте с ними.
6. Набор по п. 3, где иммуноглобулиновый белок получают для применения в лечении лейкоза, лимфомы, отторжения трансплантата органа или аутоиммунного заболевания или нарушения.
7. Клетка млекопитающего, получаемая с применением набора по п. 1.
8. Набор по п. 1, где первая выделенная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 8 и/или 10;
b) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из a);
c) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид SEQ ID NO: 9 и/или 11;
d) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из c);
e) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, по меньшей мере на 95% идентичной SEQ ID NO: 9 и/или 11;
f) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной нуклеотидной последовательности из e); и
g) нуклеотидной последовательности, содержащей фрагмент по меньшей мере 30 нуклеотидов в длину по любому из a)-f).
9. Набор по п. 8, где иммуноглобулиновый белок иммуноспецифично связывается с полипептидом рецептора HER-2/neu.
10. Набор по п. 8, где иммуноглобулиновый белок специфически индуцирует антитело-зависимую клеточную цитотоксичность, апоптоз, арест клеточного цикла или их комбинацию в клетках HER2/neu+ при контакте с ними.
11. Набор по п. 8, где иммуноглобулиновый белок получают для применения в лечении HER2/neu-позитивного рака молочной железы.
12. Выделенный иммуноглобулиновый белок, получаемый из продуцирующей клетки, содержащей первую выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую i) транслируемую область, кодирующую иммуноглобулиновый белок, и ii) модификацию нуклеиновой кислоты, где первая нуклеиновая кислота способна избегать врожденного иммунного ответа клетки, где транслируемая область, по-существу, не содержит нуклеотиды цитидин или урацил или комбинацию нуклеотидов цитидин и урацил.
13. Белок по п. 12, где продуцирующая клетка представляет собой клетку, выделенную из человека.
14. Фармацевтический препарат, содержащий эффективное количество белка по п. 13.
15. Фармацевтический препарат, содержащий эффективное количество первой нуклеиновой кислоты, содержащей i) транслируемую область, кодирующую иммуноглобулиновый белок, и ii) модификацию нуклеиновой кислоты, где первая нуклеиновая кислота демонстрирует сниженную деградацию клеточными протеазами и способна избегать врожденного иммунного ответа клетки, в которую вводят первую нуклеиновую кислоту, где транслируемая область, по-существу, не содержит нуклеотиды цитидин и урацил.
16. Фармацевтический препарат по п. 15, где первая нуклеиновая кислота демонстрирует сниженную деградацию клеточными протеазами.
17. Способ получения представляющего интерес гетерологичного белка в клетке, включающий стадию:
i) получения клетки-мишени, способной осуществлять трансляцию белка; и
ii) введения в клетку-мишень композиции, содержащей первую выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую транслируемую область, кодирующую указанный представляющий интерес гетерологичный белок, и модификацию нуклеозида, в таких условиях, что представляющий интерес белок продуцируется в клетке.
18. Способ по п. 17, дополнительно включающий стадию по существу выделения представляющего интерес белка из клетки.
19. Способ по п. 17, где представляющий интерес белок представляет собой секретируемый белок.
20. Способ по п. 17, где представляющий интерес белок представляет собой иммуноглобулиновый белок.
21. Способ по п. 17, где представляющий интерес белок представляет собой внутриклеточный белок.
22. Способ повышения продукции представляющего интерес рекомбинантно экспрессируемого белка в клетке, включающий стадии:
i) получения клетки-мишени, содержащей гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую представляющий интерес белок; и
ii) введения в клетку-мишень композиции, содержащей первую выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую транслируемую область, кодирующую трансляционный эффекторный белок, и модификацию нуклеозида, в таких условиях, что эффекторный белок продуцируется в клетке, таким образом, повышая продукцию рекомбинантно экспрессируемого белка в клетке.
23. Способ по п. 22, где представляющий интерес белок представляет собой иммуноглобулиновый белок.
24. Способ по п. 22, где представляющий интерес белок представляет собой секретируемый белок.
25. Способ по п. 22, где представляющий интерес белок представляет собой внутриклеточный белок.
26. Способ по п. 22, где клетка-мишень представляет собой клетку млекопитающего.
27. Способ по п. 22, где клетка-мишень представляет собой дрожжевую клетку.
28. Способ по п. 22, где клетка-мишень представляет собой бактериальную клетку, клетку насекомого или растительную клетку.
29. Способ по п. 22, где трансляционный эффекторный белок представляет собой транспортирующий церамид белок (CERT).
30. Способ модуляции уровня представляющего интерес белка, включающий стадии:
i) модуляции активности, по меньшей мере, одной трансляционной эффекторной молекулы в клетке-мишени, где модуляция включает введение в клетку-мишень первой выделенной нуклеиновой кислоты, содержащей транслируемую область, кодирующую трансляционный эффекторный белок, и модификацию нуклеозида; и
ii) культивирования клеток.
31. Набор для получения белка, содержащий первую выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую транслируемую область, кодирующую белок, где первая нуклеиновая кислота содержит модификацию нуклеиновой кислоты, где первая нуклеиновая кислота демонстрирует сниженную деградацию в клетке, в которую вводят первую выделенную нуклеиновую кислоту, по сравнению с нуклеиновой кислотой, не содержащей модификацию нуклеиновой кислоты; и упаковку и инструкции к нему.
32. Набор для получения белка, содержащий первую выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую транслируемую область, кодирующую белок, где первая нуклеиновая кислота содержит модификацию нуклеиновой кислоты, где первая нуклеиновая кислота является более стабильной в клетке, в которую вводят первую выделенную нуклеиновую кислоту, по сравнению с нуклеиновой кислотой, не содержащей модификацию нуклеиновой кислоты; и упаковку и инструкции к нему.