СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ IgG ПОСРЕДСТВОМ ТЕПЛОВОЙ ОБРАБОТКИ

1. Способ получения композиции IgG из раствора IgG, частично очищенного от человеческой плазмы, включающий стадии:
a) диафильтрации частично очищенного раствора IgG;
b) стабилизации раствора, полученного на стадии a);
с) тепловой обработки раствора, полученного на стадии b);
d) избирательной адсорбции агрегатов и/или полимеров с высокой молекулярной массой из раствора, подвергнутого тепловой обработке на стадии c), посредством катионной хроматографии; и
е) диафильтрации и получения в виде готовой формы раствора, полученного на стадии d).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют, начиная с раствора IgG, очищенного от человеческой плазмы, имеющей содержание IgG более чем 95% по отношению к сумме белков.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют, начиная с раствора IgG, очищенного от человеческой плазмы, имеющей содержание IgG более чем 97% по отношению к сумме белков.
4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (a) диафильтрации выполняют до тех пор, пока концентрация этанола не будет менее чем 0,5% (масса/объем), предпочтительно менее чем 0,1% (масса/объем).
5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (a) диафильтрации выполняют до тех пор, пока концентрация неденатурированных осаждающих реагентов, таких как PEG, октановая кислота, совместимые неионные детергенты или любая их смесь, не составит меньше, чем 2% (масса/объем) и в любом случае не будет подниматься до более чем 3% полимера после стадии c).
6. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (a) диафильтрации проводят до тех пор, пока ионная сила первоначального раствор IgG не составит менее чем 1 мС/см.
7. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что значение pH в конце стадии (a) находится в пределах диапазона 4,2-6,0.
8. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (a) диафильтрации выполняют с водой для инъекций или с буферным раствором низкой ионной силы.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что буферный раствор низкой ионной силы представляет собой ≤5 мМ раствор уксусной кислоты или ацетата натрия, имеющий pH между 4,0 и 5,0.
10. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (a) диафильтрации проводят в режиме тангенциального потока через мембраны, имеющие отсечение по молекулярной массе между 10 кДа и 100 кДа.
11. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии (a) диафильтрации белки концентрируют до концентрации, не превышающей приблизительно 5% (масса/объем), предпочтительно между 2% и 4% (масса/объем).
12. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что сорбитол используют в качестве стабилизирующего агента на стадии (b) стабилизации.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что концентрация сорбитола, используемого на стадии (b) стабилизации, составляет меньше, чем 50% (масса/масса), а предпочтительно между 30% и 35% масс.
14. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии (b) стабилизации pH доводят до между 4,6 и 5,2.
15. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что тепловую обработку (стадия c) проводят при температуре между 55°C и 63°C, в течение периода времени между 1 и 24 часами.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что тепловую обработку (стадия c) проводят при температуре, равной 60±1°C, в течение 10-11 часов.
17. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию избирательной адсорбции осуществляют в хроматографической колонке с сильным катионным обменом.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что сильная катионообменная смола включает по меньшей мере одну из катионных сульфоновых групп, таких как сульфониловую, сульфоновую или сульфопропиловую группы, ковалентно связанные с нерастворимой синтетической перфузионной матрицей, содержащей полиметакрилат или полистирол, размер частиц которого варьирует между 20 и 100 мкм.
19. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии избирательной адсорбции инжектируемый поток составляет 5-30 объемов колонки/час.
20. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что хлорид натрия добавляют к раствору, подвергнутому тепловой обработке на стадии c), до итоговой концентрации между 0,2 и 0,5 M (моль/литр).
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что после добавления хлорида натрия pH раствора на стадии c) доводят до между 4,2 и 5,5.
22. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии избирательной адсорбции используют между 1 и 10 литрами смолы на каждый кг IgG (сухой), требующий очистки, что эквивалентно загрузке между 100 и 1000 мг IgG/мл смолы.
23. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии избирательной адсорбции осуществляют элюирование, используя понижающийся солевой градиент.
24. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что способ включает по меньшей мере одну дополнительную стадию обработки для инактивации/удаления вирусов.
25. Способ по п.22, отличающийся тем, что дополнительную стадию обработки для инактивации/удаления вирусов проводят до или после стадии тепловой обработки.
26. Способ по п.22, отличающийся тем, что дополнительную стадию обработки для инактивации/удаления вирусов проводят посредством инкубирования при кислом pH в присутствии или отсутствии пепсина, или посредством обработки неионными детергентами, ионными растворителями или посредством нанофильтрации.
27. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (e) диафильтрации проводят водой для инъекций или буферным раствором низкой ионной силы.
28. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии (e) диафильтрации добавляют стабилизаторы для получения итоговой готовой формы.
29. Способ по п.28, отличающийся тем, что pH итоговой готовой формы находится между 4,6 и 5,8.
30. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что стадию (e) диафильтрации проводят в режиме тангенциального потока через мембраны, имеющие отсечение по молекулярной массе между 10 кДа и 100 кДа.
31. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на стадии (e) диафильтрации белки концентрируют до значения между 5% и 22% (масса/объем).