Современные судебно-биохимические технологии исследования биообъектов

была разработана в прошлом столетии, для ее применения в настоящее время необходимо внести ряд корректировок для достоверной оценки результата. Нами предложены поправки в диагностическую площадь срезов для объективной оценки результатов подсчета. • Ключевые слова: жировая эмболия, В. А. Адкин, диагностический срез

ВВЕДЕНИЕ

Прижизненная жировая эмболия характеризуется наличием жира в сосудах в виде вытянутых колбасовидных или червеобразных включений, т.е. носящих обтурирую-щий просветы сосудов характер.

Для решения вопроса о достоверности подсчета жировых эмболов и применения классификации по В. А. Адки-ну нами была проведена серия экспериментов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования являлись гистологические препараты, полученные из 222 кусочков легких от 68 трупов (от 2 до 5 фрагментов легких от каждого трупа), из которых было приготовлено 476 срезов с окраской суданом III. В изученных случаях было забрано не менее двух и не более пяти объектов легких на окраску суданом III и гематоксилином-эозином.

Для выявления жировых включений из фиксированных не более двух суток в 10 %-м растворе формалина кусочков легких на замораживающем микротоме делали тонкие срезы ткани легкого, помещали их на предметное стекло, окрашивали суданом III, затем гематоксилином, заливали глицерином, накладывали покровную слюду, края которой закрепляли менделеевской замазкой. Параллельно часть кусочков легких пускали в парафиновую проводку, срезы окрашивали гематоксилином, эозином.

При окраске гематоксилином, эозином во всех случаях в просветах ряда сосудов были обнаружены небольшие округло-овальные оптические пустоты, похожие на жировые эмболы. Оценка наличия жировых эмболов проводилась на микроскопах Биолам-L-l, XS-90 на площади срезов 2 кв. см. При окраске суданом III жировые эмболы обнаружены были в сосудах различного калибра в виде округлых обтурирующих, выполняющих весь просвет сосуда, и колбасовидных однородных капель оранжево-желтого цвета.

Учитывалось, что классификация степеней жировой эмболии малого круга кровообращения по В. И. Адкину создавалась на микроскопах с увеличением х56 (окуляр х7, объектив х8), отсутствующем в современных моделях микроскопов. По классификации В. И. Адкина, подсчет жировых эмболов производился в 10 полях зрения микроскопа. В современных микроскопах для количественной оценки показателей (в т.ч. и жировых эмболов) используется наиболее часто увеличение х100 (окуляр х10, объектив х10). Таким образом, ряд экспертов имели сомнения в соответствии подсчета жировых эмболов на современных микроскопах с использованием методики Ад-кина. Но необходимая диагностическая площадь срезов, по нашим расчетам, соответствует 2 см2 (2 стандартных среза легких 1х1 см).

ВЫВОДЫ

Т. обр., оценку степени выраженности жировой эмболии легких необходимо проводить с учетом критериев, предложенных В. И. Адкиным (количественная оценка жировых эмболов, калибр эмболизированных сосудов), но на вышеуказанной диагностической площади срезов.

СОВРЕМЕННЫЕ СУДЕБНО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕХНОЛОГИИ ИССЛЕДОВАНИЯ БИООБЪЕКТОВ

В.А. Павлюшина1, к.м.н. Н.А. Романько1,2

• 1Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области

• 2Кафедра судебной медицины (зав. -д.м.н., проф. В. А. Клевно) ФУВ ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М. Ф. Владимирского»

• Аннотация: Статья посвящена вопросу успешного внедрения в повседневную практику производства новых методик биохимических исследований на современных анализаторах, выполняющих автоматическое определение концентрации необходимого аналита в сыворотке трупной крови. Полученные данные позволяют утверждать, что биохимические исследования сыворотки трупной крови могут содержать необходимую судебно-медицинским экспертам информацию, но для правильной интерпретации исследований необходимо соблюдение правил времени забора биоматериала, а также места забора, условий хранения и доставки на исследование.

• Ключевые слова: биохимические анализаторы, специальные условия забора биоматериала для получения сыворотки при биохимических исследованиях, наиболее информативные биохимические показатели сыворотки аутопсийной крови

ВВЕДЕНИЕ

В СБО Бюро СМЭ были введены в работу биохимические анализаторы, с помощью которых нам удалось значительно расширить количество биохимических исследований и улучшить их качество, так как они проводятся в сыворотке крови. Основные рекомендуемые методики исследования биохимического профиля трупного материала в современных условиях мало отличаются от методик, используемых десятки лет назад. Спектр методик очень узок, они заимствованы из клинических лабораторий и адаптированы к судебным исследованиям, зачастую без должного внимания к качеству исследуемой крови.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В течение трех лет мы проводили биохимические исследования трупной крови по сыворотке, постепенно расширяя количество внедренных методик. В настоящее время в отделении выполняются исследования на анализаторах для определения глюкозы, мочевины, креатина, общего белка, альбумина, холестерина, щелочной фосфа-тазы, креатинфосфокиназы, креатинфосфокиназы-МВ, лактатдегидрогеназы, альфа-ГБДГ, АСТ, АЛТ, гаммаглют-амилтранспептидазы, холинэстеразы, амилазы, билирубина, мочевой кислоты и С-реактивного белка, тропонина I и N-терминальной части мозгового натрийуретического пептида (NT-pro BNP) в сыворотке трупной крови.

В 2015 году в судебно-биохимическом отделении Бюро СМЭ» выполнено 17 419 экспертных исследований.

Наибольшая доля исследований приходилась на определение общего белка 748-34 %, ЛДГ и сердечного изо-фермента альфа-ГБДГ 1513-34 %; альбумина 746-33 %, гликированного гемоглобина 923-25 %, холинэстеразы 866-24 %, АсТ и АлТ 1484-33,6 %, мочевины 1259-28,9 %; креатинина 1255-28,7 %, глюкозы 2088-12,5 %.

Качество выполняемых исследований контролировали с помощью современных калибровочных материалов и контрольных сывороток, соблюдая правила Вестгарда. Биохимические анализаторы, используемые в биохимическом отделении на основании протокола технических испытаний системы сертификации ГОСТ Р Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии, получили сертификаты соответствия. Все наборы для in vitro диагностики на анализаторах имеют регистрационные удостоверения Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. В последние три года постоянно повышается процент судеб-но-биохимических исследований от общего количества судебно-медицинских исследований трупов.

В 2015 году в работу запущен иммуноферментный анализатор Personal LAB для определения кардиоспеци-фического тропонина I для диагностики инфаркта миокарда и определения N-терминальной части мозгового натрийуретического пептида (NT-pro BNP), повышенные концентрации которого определяются в случае смерти от причин, связанных с сердечной недостаточностью. Анализатор Personal Lab может автоматически выполнять: разведение образцов, пипетирование стандартов/контролей образцов, фотометрирование на основном, референс-ном и/или зашкальном фильтре с фактором домножения. Зашкальный фильтр - уникальная функция, позволяющая при зашкале (например, превышении максимальным стандартом предела ОП прибора) получить достоверные и точные результаты. Кроме того, анализатор Personal Lab позволяет выполнять отдельные стадии и/или группы стадий, если это необходимо, вручную (например, малые объемы проб, которые нет возможности внести в автоматическом режиме, можно внести вручную, если приостановить на время прибор на определенной стадии процесса).

Проведенные нами исследования позволяют сделать выводы, что получить сыворотку, пригодную для биохимических исследований, от трупного материала без следов гемолиза возможно. Большинство биохимических показателей остаются стабильными в сыворотке при заборе материала в интервале от 0 до 24 ч (некоторые до 48 ч), что подтверждается исследованиями, опубликованными зарубежными экспертами. В сыворотке крови, при достаточном ее количестве и условии хранения в заморозке до -20 °C, сохраняется большинство биохимических параметров, что позволяет создавать нам архив и при необходимости при однократном размораживании повторить любые исследования. Мы негативно относимся к публикациям, в которых содержится информация о стабильности биохимических показателей в трупной цельной крови до 10-14 дней и более - они никак не подтверждаются проведенными нами исследованиями.

Биохимические исследования дополняют другие, а иногда являются очень информативными данными для выводов судебно-медицинского эксперта, когда морфологические изменения еще не успели сформироваться. Основной трудностью широкого применения биохимических исследований по сыворотке крови являлся гемолиз. В нашем отделении удалось получать качественную сыворотку от трупного материала с помощью применения специальных пробирок BD Vacutainer и соблюдения правил преаналитики биохимического исследования. За три года исследований мы можем сделать определенные выводы о стабильности некоторых аналитов, определяемых в аутопсийной крови (сыворотке), и о соответствии предсмертных значений посмертным при отсутствии патологии, при которой эти маркеры должны изменяться.

Полученные нами данные могут использоваться и в других судебно-биохимических отделениях, особенно

если эти отделения расположены вблизи моргов, что сократит время доставки материала и позволит чаще получать качественную сыворотку, пригодную для биохимических исследований с проведением контроля качества.

ВЫВОДЫ

• Судебно-биохимическое отделение является структурным подразделением Бюро судебно-медицинской экспертизы, отличается от других подразделений и имеет свою специфику. Основные задачи отделения: выполнение исследований, требующих специальных познаний в области применения биохимических методов анализа.

• В судебно-биохимическом отделении ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» с 2013 года введены в эксплуатацию современные биохимические анализаторы, что позволило максимально расширить спектр исследований биохимических аналитов и повысить их качество, уделяя особое внимание преаналитическому этапу.

• Итоги работы за 2015 год позволяют наглядно убедиться в масштабности наших исследований.

• Результаты проведенных нами исследований могут быть внедрены и в других судебно-биохимических отделениях бюро судебно-медицинской экспертизы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ У-ХРОМОСОМНЫХ БТР ЛОКУСОВ ВСУДЕБНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙЭКСПЕРТИЗЕ

Ш. Пурэвдулам, Б. Тэнуун, Б. Гантуяа, С. Ганболд

• Национальный институт судебных экспертиз (дир. - Х. Улзийбаяр) Министерства юстиции Монголии, Улан-Батор

• Аннотация: Для анализа ДНК в лабораторию были присланы содержимое влагалища потерпевшей, в котором обнаружена сперма преступника, а также образец крови потерпевшей. Нами была выделена геномная ДНК из крови потерпевшей и спермы преступника; затем установили генотипы по аутосомным ло-кусам потерпевшей и гаплотип Y-хромосомных микросателлитных локусов преступника и опубликовали результаты ДНК-анализа.

• Ключевые слова: половые преступления, судебно-генетическая экспертиза, Y-хромосома, STR-локус

ВВЕДЕНИЕ

В судебно-экспертной практике немало случаев занимают преступления против половой неприкосновенности и половой свободы личности.

Наиболее распространенным и надежным методом для сбора биологических объектов для анализа ДНК является соскоб или тампон с содержимым, изъятым из влагалища потерпевшей специальной ватной палочкой. После сбора генетический материал передается в ДНК-лабораторию, осуществляющую процедуру определения генотипа и гаплотипа данного человека.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами экспертизы являются кровь и смешанные биологические следы на тампонах, изъятых из влагалища потерпевшей.

Из образцов жидкой крови выделяли ДНК стандартным фенол-хлороформным методом.

Из смешанных биологических следов на тампонах, изъятых из влагалища потерпевшей, выделяли ДНК, ис-