Новые мутации в гене-супрессоре опухолевого роста TP53 у больных раком молочной железы

нами было показано, что полиморфизм Arg-72Pro гена ТР53 вносит значительный вклад в развитие локорегионарного метастазирования: больные РМЖ с генотипом Arg/Arg имели повышенный риск развития метастазов, тогда как пациентки с генотипом Pro/Pro характеризовались низкой частотой лимфогенного метастази-рования (Чердынцева Н.В. и др., 2007; Denisov E.V. et al., 2009).

Цель исследования - изучение связи полиморфизма Arg72Pro гена-супрессора ТР53, детектируемого в опухолевой ткани, с характером опухолевого роста РМЖ.

Материал и методы. В качестве исследуемого материала использовалась опухолевая ДНК больных РМЖ (n=99), получавших комплексное лечение в клинике НИИ онкологии СО РАМН. Статус полиморфизма Arg72Pro гена ТР53 определяли с помощью рестрикционного анализа (Ara S. et al., 1990). Статистическая обработка данных проводилась в пакете прикладных программ STATISTICA 6.0.

Результаты. В настоящее время выделяют два типа опухолевого роста РМЖ: уницен-трический и мультицентрический. Первый тип, представляющий собой один опухолевый очаг, характеризуется более благоприятным прогнозом. Мультицентричный РМЖ представляет собой несколько опухолевых очагов, расположенных отдельно друг от друга в разных квадрантах молочной железы. Данная форма рака более инвазивна и ассоциирована с большим размером опухолевого узла, с большей

вероятностью лимфогенного метастазирова-ния и рецидивирования, низкой экспрессией рецепторов половых гормонов и более частым позитивным Негё/пеи-статусом. Было проведено изучение полиморфизма Arg72Pro гена ТР53 в опухолевой ткани больных РМЖ с различным характером опухолевого роста. Мы показали тенденцию к увеличению частоты генотипа Pro/Pro (15,0%) в группе больных с уницен-трическим РМЖ по сравнению с пациентками с мультицентрическим характером роста, где данный генотип не был представлен вообще (0,0%; р(Ф)=0,1). Отмечена также тенденция к увеличению и уменьшению частот аллелей Arg и Pro, соответственно, в группе пациенток с мультицентрическим характером опухолевого роста РМЖ (p=0,07). Полученные результаты косвенно подтверждают установленную ранее ассоциацию полиморфизма Arg72Pro гена ТР53 с риском развития локорегионарного метаста-зирования. Больные РМЖ с генотипом Arg/Arg чаще характеризуются мультицентрическим характером опухолевого роста и, соответственно, высокой частотой лимфогенного метастазиро-вания. Напротив, пациенткам с генотипом Pro/ Pro свойствен уницентрический РМЖ и низкая вероятность метастазирования в регионарные лимфоузлы.

Таким образом, полученные результаты наряду с представленными ранее свидетельствуют о вкладе Arg72Pro полиморфизма гена ТР53 в опухолевой ткани в клиническое течение РМЖ.

НОВЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНЕ-СУПРЕССОРЕ ОПУХОЛЕВОГО РОСТА ТР53 У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Т.С. ДУЛЬЦЕВА1, Т.В. СУХАНОВСКАЯ2, Е.В. ДЕНИСОВ

2,3

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск1 Томский государственный университет2 НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск3

Актуальность. Наиболее универсальным генетическим изменением в опухолях человека являются соматические мутации в гене ТР53. Белок р53, являющийся своего рода «стражем генома», поддерживает генетическую стабильность и удаляет потенциально опасные в плане

злокачественного перерождения клетки. Мутации в гене ТР53 значительно модифицируют активность белка р53, что в целом отражается на запуске р53-опосредованных процессов, таких как репарация ДНК, апоптоз, клеточный арест и т.д. Опухоли с мутантным р53 характеризуются

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2010. Приложение № 1

повышенной пролиферацией, усиленным ангиогенезом, способностью к метастазированию и устойчивостью к химио- и лучевой терапии. В настоящее время идентифицировано около 3 тыс. мутаций гена ТР53, встречающихся в 3Q-5Q% случаев рака молочной железы (РМЖ). Однако на территории Российской Федерации спектр мутаций гена ТР53 у больных РМЖ охарактеризован слабо (база данных мутаций гена ТР53, версия R14; Petitjean A. et al., 2QQ7).

Целью настоящего исследования явилось изучение спектра мутаций в гене-супрессоре опухолевого роста ТР53 в опухолях молочной железы.

Материал и методы. В качестве исследуемого материала использовали опухолевую ДНК больных РМЖ (n=22), проходивших лечение в клинике НИИ онкологии СО РАМН. Анализ мутаций гена ТР53 проводился в 5-м и 8-м экзонах с помощью секвенирования. Секвенирование ДНК осуществляли в Межинститутском центре секвенирования ДНК (http://sequest.niboch.nsc. ru/index.html), созданном на базе Института цитологии и генетики СО РАН и Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск. Пакет прикладных программ DNAdynamo (Blue Tractor Software Ltd.) использовали для анализа хроматограмм секвенирования.

Результаты. У больных РМЖ в опухолевой ткани нами выявлены следующие мутации гена ТР53: c.426T>A (p.P142P) и c.488A>G (p.Y163C) в 5-м экзоне, c.827C>A (p.A276D), c.837G>T (p.G279G) и c.856G>A (p.E286K) в 8-м экзоне. Мутации c.488A>G, c.827C>A и c.856G>A ранее уже были идентифицированы при РМЖ (Davidoff A.M. et al., 1992; Hartmann A. et al., 1995; Kandioler-Eckersberger D. et al., 2QQQ). Однако на территории РФ данные нарушения показаны впервые. Кроме того, мутации

c.426T>A и c.837G>T прежде не детектировались у больных РМЖ. Функциональный эффект мутаций гена ТР53 различен. В большей степени он обусловлен типом нуклеотидной замены, отражающейся либо не отражающейся на изменении аминокислотного состава в структуре белка р53. Выделяют несколько типов мутаций. Наиболее часто встречающиеся (до 75%) -миссенс-мутации (несинонимичные замены), приводящие к замене аминокислоты в структуре белка. Мутации типа фреймшифт, нонсенс, сайленс (синонимичные) и сплайс встречаются много реже. В нашем исследовании мутации c.488A>G, c.827C>A, c.856G>A относятся к группе миссенс-мутаций и приводят к замене аминокислот Tyr>Cys, Ala>Asp, Glu>Lys соответственно. Мутации c.426T>A и c.837G>T являются сайленс-мутациями. Миссенс- и сайленс-мутации значительно различаются между собой по функциональным свойствам. Показано, что большая часть миссенс-мутаций приводит к потере связывающей способности белка р53 с ДНК и инактивации мутантным белком р53 белка р53 дикого типа. Все это позволяет отнести данную группу мутаций к генетическим нарушениям с ярко выраженными онкогенными свойствами (Brosh R., Rotter V., 2009). В отношении функциональной значимости сайленс-мутаций гена ТР53 однозначного мнения в настоящее время не выработано (Strauss B.S., 2000; Gorlov I.P.. Amos C.I., 2004).

Таким образом, в ходе настоящего исследования у больных РМЖ были идентифицированы новые мутации гена-онкосупрессора ТР53, ранее не встречавшиеся как на территории Российской Федерации, так и при самом заболевании. Функциональный эффект и роль в развитии РМЖ идентифицированных мутаций является предметом будущих исследований.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2Q1Q. Приложение № 1