Способ дифференциальной диагностики инвазивного протокового рака и фиброаденомы молочной железы
METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF INVASIVE DUCTAL CANCER AND MAMMARY GLAND FIBROADENOMA

Изобретение относится к медицине.
Известны способы дифференциальной диагностики инвазивного протокового рака и фиброаденомы молочной железы, к которым относятся:
1) тонкоигольная биопсия, заключающаяся во взятии пункции из различных участков молочной железы и изучении клеточного состава пунктата. Результат цитологического исследования во многом зависит от того, каким образом и из каких участков опухоли был взят материал и как он обработан. Тонкоигольная биопсия только в 30-54% случаев дает объективный результат, связанный с вышеуказанными факторами. Таким образом, в 46-70% случаев тонкоигольная биопсия не показательна (Jebsen P.W., Hagmar В.М., Nesland J.M. Metaplastic breast carcinoma. A diagnostic problem in fine needle aspiration biopsy // Acta Cytol. 1991. Vol. 35. P. 396-401). Кроме того, тонкоигольная биопсия вызывает микротравму, которая приводит к ускорению опухолевого роста (Збицкая М.А. Роль биопсии в прогрессии рака молочной железы / М.А. Збицкая // Здоровье человека как основа национальной безопасности: материалы Сибирского конгресса. - Красноярск, 2006. - С. 311-313);
2) тканевая биопсия, включающая забор образца ткани из опухоли молочной железы. Вырезается небольшой кусочек для более детального исследования. После тщательного анализа врач делает вывод о доброкачественности или злокачественности опухоли (Семиглазов В.Ф., Хирургическое лечение рака молочной железы, история и современность. Практическая онкология. 2002. Т. 3. №.1. С. 21-28; Семиглазов В.Ф., Семиглазов В.В. Скрининг рака молочной железы. Практическая онкология. 2010. T. 11. №2. С. 60-65). Этот способ является травматичным и технически сложным, а взятие кусочка ткани опухоли, особенно повторно, активирует опухолевую прогрессию и может явиться причиной метастазирования (Збицкая М.А. Влияние биопсий опухоли на прогрессирование процесса у больных раком молочной железы / М.А. Збицкая, Уральский медицинский журнал - 2007. - №2. - С. 67-70);
3) определение в крови или плазме ракового эмбрионального антигена (РЭА), который представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 180 кДа. Повышенную концентрацию РЭА в сыворотке крови выявляют у 30-50% больных раком молочной железы (Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 800 с.), т.е. этот показатель не является достаточно чувствительным (прототип).
Раскрытие изобретения
Предлагаемое изобретение дает возможность выявлять злокачественную опухоль - инвазивный протоковый рак, или доброкачественную - фиброаденому, основываясь на определении цитокинпродуцирующей функции иммунокомпетентных клеток крови при влиянии на них раково-эмбрионального антигена (РЭА). Это позволяет своевременно выявить этиологию опухоли и начать адекватное лечение. Предлагаемый способ является более чувствительным по сравнению с прототипом.
Предлагаемый способ дифференциальной диагностики инвазивного протокового рака и фиброаденомы молочной железы характеризуется тем, что определяют концентрацию моноцитарного хемоаттрактантного белка МСР-1 в супернатанте клеток крови пациента, инкубированных с РЭА и без РЭА, после чего вычисляют индекс влияния РЭА (ИВ РЭА) на продукцию МСР-1 клетками крови по формуле: ИВ РЭА=А/Б, где А - уровень продукции МСР-1 под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции МСР-1 без РЭА, и при величине ИВ РЭА, не превышающей 1,79, диагностируют инвазивный протоковый рак, а при величине ИВ РЭА, равной или превышающей 1,80, диагностируют фиброаденому.
Способ осуществляют следующим образом.
Цельную кровь, взятую из вены пациента в количестве 1 мл, помещают в стерильный флакон с 4 мл среды (стерильная питательная среда ДМЕМ), содержащей гепарин 2,5 МЕ/мл и гентамицин 100 мкг/мл. Аккуратно перемешивают содержимое флакона, затем из него в стерильных условиях забирают 0,980 мл разбавленной крови и помещают ее в стерильный флакон, содержащий 0,020 мл РЭА (Canceroembryonic Antigen Human Colon Adenocarcinoma Cell Line) производства Calbiochem, Германия; концентрация РЭА в разбавленной крови составляет 2 мкг/м. Содержимое флакона аккуратно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 24 часа. Параллельно в тех же условиях инкубируют клетки крови в той же питательной среде без РЭА. В течение первого часа инкубации содержимое флаконов аккуратно перемешивают 1 раз. После инкубации путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 10 минут осаждают клетки крови и отбирают супернатант из пробы клеток, инкубированных с РЭА (продукция цитокинов под влиянием РЭА), и из пробы клеток, инкубированных без РЭА (спонтанная продукция цитокинов), в которых с помощью твердофазного иммуноферментного анализа определяют концентрацию моноцитарного хемоаттрактантного белка МСР-1. Индекс влияния РЭА на продукцию МСР-1 клетками крови высчитывают по формуле: ИВ РЭА=А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина. ИВ РЭА МСР-1 выражают в условных единицах.
Определение индекса влияния РЭА на продукцию клетками крови МСР-1 у 37 больных с опухолью молочной железы показало, что из 26 пациентов с выявленным инвазивным протоковым раком (ИПР) ИВ РЭА МСР-1, не превышающий 1,79, отмечали у 23 человек (88,5%), а ИВ РЭА МСР-1, равный 1,80 и более, отмечали у 3 женщин (11,5%).
Из 11 пациентов с выявленной фиброаденомой у 10 человек ИВ РЭА МСР-1 был равен или превышал 1,80 (91%), а ИВ РЭА МСР-1, не превышающий 1,79, имел место у одной женщины (9%).
Оценка статистической значимости различий проводилась с использованием точного метода Фишера, р=0,00001.
Наличие инвазивного протокового рака или фиброаденомы контролировали путем патогистологического исследования биоптатов. Для получения численного выражения клинической значимости предлагаемого способа выявления злокачественных и доброкачественных опухолей молочной железы использовали ROC-анализ с определением показателя AUC (Area Under Curve), который рассчитывали при помощи метода трапеций. О качестве теста судили по экспертной шкале для значений AUC: 0,9-1,0 - отличное качество модели, 0,8-0,9 - очень хорошее качество модели, 0,7-0,8 - хорошее качество модели, 0,6-0,7 - среднее качество модели, 0,5-0,6 - неудовлетворительное качество модели.
Предлагаемый способ выявления злокачественных и доброкачественных опухолей молочной железы показал очень хорошее качество модели (AUC=0,85).
Клинические примеры
1. Больная К-а, 57 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак левой молочной железы, ИВ РЭА МСР-1 - 0,66 условных единиц.
Заключение патологоанатома: инвазивный протоковый рак со скиррозным типом роста.
2. Больная Ф-к, 77 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак правой молочной железы, ИВ РЭА МСР-1 - 1,45 условных единиц.
Заключение патологоанатома: инвазивный протоковый рак.
3. Б-ная К-о, 57 лет, диагноз - фиброаденома правой молочной железы, ИВ РЭА МСР-1 - 2,54 условных единиц.
Заключение патологоанатома: фиброаденома правой молочной железы.
4. Б-ная Г-н, 21 года, диагноз - фиброаденома правой молочной железы, ИВ РЭА МСР-1 - 3,95 условных единиц.
Заключение патологоанатома: фиброаденома правой молочной железы.