СНИЖЕНИЕ ТАБАК-СПЕЦИФИЧНЫХ НИТРОЗАМИНОВ В РАСТЕНИЯХ

1. Мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная растительная клетка табака, содержащая:
(i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий, по существу, из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов, и имеющей по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 10, или SEQ ID NO:l 1;
(ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, изложенным в (i);
(iii) полипептид, содержащий, состоящий или состоящий, по существу, из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов и имеющей по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 5, или SEQ ID NO: 6, или SEQ ID NO: 7, или SEQ ID NO: 12, или SEQ ID NO: 13, или SEQ ID NO: 14; или
(iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, изложенный в (i),
и где экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида модулирована по сравнению с контрольным растением табака, содержащим контрольную растительную клетку табака;
уровни нитратов в мутантном, не встречающемся в природе или трансгенном растении табака, содержащем мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку табака, модулированы по сравнению с контрольным растением табака, содержащим контрольную растительную клетку табака; и
уровни табак-специфичных нитрозаминов (TSNA) в высушенном мутантном, не встречающемся в природе или трансгенном растении табака, содержащем мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку табака, снижены по сравнению с высушенным контрольным растением табака, содержащим контрольную растительную клетку табака.
2. Мутантная растительная клетка табака по п. 1, где указанная мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная растительная клетка табака содержит одну или несколько мутаций, которые уменьшают уровень нитратов в мутантном, не встречающемся в природе или трансгенном растении табака, содержащем мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку табака, по сравнению с контрольным растением табака, содержащим контрольную растительную клетку табака, соответственно, где мутация (мутации) является мутацией по типу замены в положении G163 из SEQ ID NO: 5; или
где указанная мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная растительная клетка табака содержит одну или несколько мутаций, которые увеличивают уровень нитратов в мутантном, не встречающемся в природе или трансгенном растении табака, содержащем мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку табака, по сравнению с контрольным растением табака, содержащим контрольную растительную клетку табака, соответственно, где мутация (мутации) является мутацией по типу замены в положении Р143 из SEQ ID NO: 13.
3. Мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение или его составная часть, содержащие растительную клетку табака по п. 1 или 2.
4. Способ модулирования содержания по меньшей мере нитратов в растении табака или его составной части, включающий этапы:
(а) модулирования экспрессии или активности:
(i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий, по существу, из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов, и имеющей по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 10, или SEQ ID NO: 11;
(ii) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, изложенным в (i); или
(iii) полипептида, содержащего, состоящего или состоящего, по существу, из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов, и имеющей по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 5, или SEQ ID NO: 6, или SEQ ID NO: 7, или SEQ ID NO: 12, или SEQ ID NO: 13, или SEQ ID NO: 14;
(b) необязательно измерения содержания по меньшей мере нитратов по меньшей мере в части мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения табака, полученного на этапе (а); и
(c) идентификации мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения табака, в котором содержание по меньшей мере нитратов изменено по сравнению с контрольным растением табака, в котором экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида, изложенного в (а), не была модулирована.
5. Способ по п. 4, где содержание 4-(метилнитрозамино)-1-(3-пиридил)-1-бутанона (NNK) и/или содержание никотина модулируют в растении табака; и/или
где содержание по меньшей мере N-нитрозоникотина (NNN) является, по существу, таким же, как в контрольном растении табака.
6. Способ по п. 4 или 5, где составная часть растения табака представляет собой лист, соответственно, высушенный лист.
7. Растение табака или его составная часть, которая получена или может быть получена с помощью способа по любому из пп.4-6.
8. Мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение табака по п. 3 или 7, где содержание NNK составляет приблизительно 110 нг/г или менее, необязательно, где содержание нитратов составляет приблизительно 7 мг/г или менее.
9. Растительный материал табака, в том числе биомасса, семена, стебель или листья растения табака, по любому из пп. 3, 7 или 8.
10. Табачное изделие, содержащее растительную клетку табака по п. 1, по меньшей мере часть растения табака по любому из пп. 3, 7 или 8 или растительный материал табака по п. 9.
11. Способ получения высушенного растительного материала табака, предпочтительно высушенных листьев, со сниженными в нем уровнями по меньшей мере NNK, включающий этапы:
(a) получения по меньшей мере части растения табака по любому из пп. 3, 7 или 8 или растительного материала табака по п. 9;
(b) необязательно сбора с него растительного материала табака и
(c) сушки растительного материала табака в течение периода времени, достаточного для снижения в нем уровней по меньшей мере NNK.
12. Выделенный полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий, по существу, из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов и имеющей по меньшей мере 99,1% идентичности последовательности с SEQ ID NO:l, или 97,1% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 2, или 63% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 3, или 61% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 4, или 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10, или 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11.
13. Выделенный полипептид, кодируемый полинуклеотидом по п. 12.
14. Выделенный полипептид, содержащий, состоящий или состоящий по существу из последовательности, кодирующей член семейства CLC хлоридных каналов, и имеющей по меньшей мере 99,1% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 5, или по меньшей мере 98,1% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 6, или по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 7, или по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12, или по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 13, или по меньшей мере 60% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 14.
15. Конструкция, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид по п. 12.