Генетические факторы предрасположенности к аденомиозу

© О. В. Голубева, ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Т. Э. Иващенко, Д. А. Ниаури, ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К АДЕНОМИОЗУ

В. С. Баранов, Э. К. Айламазян

НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, Санкт-Петербург

В настоящее время аденомиоз все чаще рассматривают как отдельную нозологическую единицу. Этиология заболевания до сих пор остается неизвестной. Аденомиоз можно отнести к классу полигенных, мульфакториальных заболеваний. Целью настоящей работы являлось определить роль аллельных вариантов генов CYP19, GSTT1, GSTM1, Р53 в патогенезе аденомиоза и проанализировать их корреляцию с клиническими проявлениями заболевания. Выявлено, что делеции в двух генах GST T1 и GSTM1 встречались достоверно чаще у пациентов с аденоми-озом, чем в контрольной группе

(16,7 ± 5,1 % и 5,5 ± 2,7 %, соответственно, р < 0,05 dfl). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития аденомиоза выше почти в 3,5 раза при генотипе GST Т10/0 + GST Ml 0/0 (OR = 3,4; С1:1,04-11,09). Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного варианта гена CYP19 (del(TCT)) между группами пациентов с аденомиозом и контролем выявил статистически значимые различия (р < 0,05; df2). Так, частота носительства аллеля D у больных составила 61,1 ± 6,6 % и была достоверно выше, чем в контрольной группе (37,5 ± 5,7 %) (р < 0,01; dfl). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития аденомиоза повышается в 2,5 раза при носительстве del(TCT) в гене CYP19 (OR = 2,63; С1:1,28-5,37). При анализе распределения сочетаний генотипов по генам GST T1 и GSTM1 в подгруппах больных аденомиозом с бесплодием и без такового выявлены достоверные статистически значимые различия как при сравнении подгрупп между собой, так и при сравнении с контрольной группой (р < 0,001, dí3, р < 0,01, dí3, соответственно). Так, генотип GST TI 0/0 + GSTM1 +/+ встречается в 8 раз чаще у больных аденомиозом с бесплодием (71,4 ± 17,1 %) по сравнению с больными аденомиозом без такового (8,5 ± 4,1 %). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск бесплодия у больных аденомиозом почти в 27 раз выше при генотипе GST Т1 0/0 + GST Ml +/+ (OR = 26,88; CI:5,72-126,37).

Ключевые слова: аденомиоз; гены CYP1; GSTT1; GSTM1; Р53

Введение

На сегодняшний день эндометрноз остается одной из нерешенных проблем современной гинекологии и занимает 3-е место по частоте в структуре гинекологических заболеваний у женщин после воспалительных заболеваний женских гениталий и миомы матки [3]. В соответствии с локализацией процесса выделяют: 1) эндометриоз генитальный — внутренний и наружный и 2) экстрагенитальный эндометриоз. К внутреннему эндометриозу относится процесс, развивающийся в мышечной оболочке матки (согласно последней номенклатуре названный аденомиозом) и эндометриоидное поражение маточных труб. В настоящее время аденомиоз все чаще рассматривают как отдельную нозологическую единицу [4].

Аденомиоз выявляют у женщин ближе к концу репродуктивной жизни, почти всегда у повторнородящих женщин и чаще всего в высших социально-экономических группах населения [7]. Этиология заболевания остается неизвестной. Аденомиоз можно отнести к классу полигенных, мульфакториальных заболеваний. Во многих отношениях аденомиоз сходен с онкологическими заболеваниями. В генезе заболевания важная роль принадлежит не одному, а многим различным генам. Патологические эффекты мутантных вариантов (аллелей) этих генов в значительной степени провоцируются действием неблагоприятных факторов внешней среды.

Целью работы являлось определить роль аллельных вариантов генов СУР19, СБТИ, СБТМ!, Р53 в патогенезе аденомиоза и проанализировать их корреляцию с клиническими проявлениями заболевания.

Материал и методы

В ходе настоящей работы обследовано 54 пациентки с аденомиозом в возрасте от 27 до 58 лет (средний возраст — 44,91 ± 0,66 года). Около 80 % пациенток были старше 41 года. У всех больных диагноз был подтвержден во время гистероскопии или чревосечения, а также результатами гистологического исследования. Все женщины обследовались, наблюдались и проходили лечение в гинекологическом отделении НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта.

Контрольную группу составили 72 женщины в возрасте от 17 до 35 лет без симптомов эндометриоза, проживающие в Северо-западном регионе РФ.

У 70,4 % больных аденомиозом наблюдались обильные менструации. Мажущие кровянистые выделения до и/или после менструации наблюдались у 64,8 % больных с аденомиозом, нерегулярный менструальный цикл (НМЦ) зарегистрирован почти у половины женщин.

Болевой синдром различной степени выраженности отмечался более чем у половины пациенток с аденомиозом. Интенсивность и иррадиация болей при аденомиозе находилась в прямой зависимости от глубины прорастания в миомет-рий и степени поражения перешейка матки. Накануне менструации отмечали чувство тяжести в нижних отделах живота 88,9 ± 4,3 % женщин. Почти у половины пациенток были жалобы на иррадиацию болей в поясничную область и прямую кишку (при поражении перешейка). Боли во время половых контактов (диспареуния) также отмечены у половины больных с аденомиозом (55,6 ± 6,7 %).

Гистероскопия выполнена у 21 пацентки с аденомиозом, экстирпация матки — у 34 из 54 пациенток, и была обусловлена тяжестью заболевания. Гистероскопическое обследование проводилось помощью гистеромата фирмы «ЭФА» (Санкт-Петербург). При проведении операций в полость матки вводили гистероскоп 5 мм, в качестве операционной среды использовали 5 %-ный раствор глюкозы. Гистероскопия позволяла рассмотреть внутреннюю поверхность матки, устья маточных труб и эндометриоидные ходы, открывающиеся в полость матки в виде темно-красных точечных отверстий на фоне бледно-розовой слизистой оболочки, характерный рисунок «булыжной мостовой» или «пчелиных сот». При гистероскопии четко визуализировались эндометриоидные ходы, создающие неровность внутренних контуров матки. Окончательный диагноз аденомиоза устанавливали после гистологического исследования материала, полученного при трепанбиопсии эндометрия.

У 42,6 ± 6,7 % пациенток аденомиоз сочетался с миомой матки, с полипами эндометрия (33 %), фолликулярными и серозными кистами яичников (20,4 ± 5,5 %). У 51,8±6,8 % пациенток помимо аденомиоза диагностировали и наружный генитальный эндометриоз 1-3 степени тяжести.

Методом ПЦР и ПЦР-ПДРФ анализа исследованы частоты полиморфных вариантов генов GSTT1, GSTM1, Р53, CYP19. Выделение ДНК из лимфоцитов перефирической крови проводили в соответствии с методикой, приведенной в руководстве Sambrook et al. (1989) с некоторыми модификациями. Амплификацию ДНК проводили на программируемом термоциклере фирмы «ДНК-технология» (Москва). Смесь для амплификации объемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера, 67 мМ трис-HCl, рН 8.8, 16,6 мМ сульфата аммония, 6,7 мМ MgCl2, 6,7 мкМ ЭДТА, 10 мМ меркаптоэтанола, 170 мкг BSA, 1,0 мМ каждого dNTP и 1U Tth-ДНК-полиме-

разы (производства «Бион», Москва). После окончания ПЦР специфичность амплификации и количество амплификата проверяли методом электрофореза в 7 %-ом полиакриламидном геле (ПААГ). Гель окрашивали водным раствором бромистого этидия (0,5 мкг/мл), просматривали в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе Macrovue (Pharmacia ГКВ, Великобритания) и фотографировали с помощью системы видеогель-документации (Vilber Tourmat).

Гомозигот и гетерозигот по нормальному аллелю «+» генов GSTM1 и GSTT1 определяли на электрофореграммах по наличию продуктов амплификации размерами 271 п. о. (GSTM1) и фрагмента 315 п. о. (GSTT1). Отсутствие соответствующих фрагментов указывало на гомозиготно сть индивидуума по делециям двух генов. В качестве внутреннего контроля использовали фрагмент гена CFTR 10 экзона. Гетерозиготные особи 0/+ в наших экспериментах не дискриминировались.

При анализе инсерции 16 п. о. в гене Р53, аллель, содержащий вставку, определяли на электрофореграммах по наличию продукта амплификации размером 448 п. о., а аллель, содержащий делецию по наличию продукта меньшего размера (432 п. о.).

Рестрикцию ПЦР продукта фрагмента гена Р53 для выявления полиморфизма Arg72Pro проводили с использованием эндонуклеазы BstUl («Сибэнзим», Новосибирск) согласно рекомендации фирмы-изготовителя. Аллель 72Рго идентифицировали по отсутствию сайта рестрикции для эндонуклеазы BstUl. Анализ полноты рестрикции проводили методом электрофореза в ПААГ и визуализировали после окраски этидиум-бро-мидом в проходящем ультрафиолетовом свете.

Для определения делеции трех нуклеотидов (del(TCT)) в гене CYP19 проводили электрофо-ретическое разделение ПЦР продукта в10 %-ном неденатурирующем ПААГ.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы "STATISTICA v5.5a". При сравнении частот генотипов использовали стандартный критерий х2-Относительный риск (OR) развития заболевания при определенном генотипе рассчитывали по стандартной формуле OR = a/b xd/c, где а и b — количество больных, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно, и с и d — количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно. OR указан с 95 %-ным доверительным интервалом. Границы доверительного интервала вычисляли по формулам OR = OR(1~ 196/ ^%2>

J min

hOR =OR(1 + 1>96/Vä

Таблица

Распределение генотипов GST Tl, GST Ml, Р53, CYP19 генов в группе больных с аденомиозом и в контрольной группе

Ген Генотип Аденомиоз Контроль

n M±m, % n M±m, % P

GSTM1 0/0 28 51,9 ±6,8 30 41,7 ±5,8 p > 0,05

+ 26 48,1 ±6,8 42 58,3 ±5,8 -

GSTT1 0/0 18 33,3 ±6,4 16 22,2 ±4,9 p > 0,05

+ 36 66,7 ± 6,4 56 77,8 ±4,9

ins/ins 1 1,9 ± 1,8 0 0 -

ins/del 11 20,4 ± 5,5 9 12,5 ±3,9 p > 0,05

Р53 del/del 42 77,8 ± 5,7 63 87,5 ±3,9 -

Pro/Pro 4 7,4 ±3,6 3 4,2 ±2,4 -

Pro/Arg 19 35,2 ± 6,5 28 38,9 ± 5,7 p > 0,05

Arg/Arg 31 57,4 ± 6,7 41 56,9 ±5,8 -

D/D 10 18,5 ±5,3 6 8,3 ±3,3 -

CYP19 D/I 23 42,6 ± 6,7 21 29,2 ± 5,4 p < 0,05

I/I 21 38,9 ± 6,6 45 62,5 ±5,7 -

Результаты

В настоящей работе впервые проведен анализ ассоциации аденомиоза с аллельными вариантами генов GSTT1(Del), GST Ml (Del), P53(ins/del, Argil Pro), CYP19 (del(TCT)). Результаты представлены в таблице.

В результате проведенного анализа полиморфных вариантов гена GSTM1 не выявлено статистически достоверных различий в частотах мутации этого гена у пациентов с аденомиозом и контрольной группе (51,9± 6,8 %и41,7± 5,8 %, соответственно). Частота гомозигот по нулевому аллелю GST Т1 оказалась несколько выше у пациентов с аденомиозом, чем в контроле (33,3 ± 6,4 % и 22,2 ± 4,9 %, соответственно). Эти различия, однако, были статистически не достоверны.

Мы проанализировали распределение сочетаний генотипов сразу по двум генам глюта-тион-Б-трансфераз в группах больных аденомиозом и в контроле. При этом в зависимости от генотипа все индивидуумы были разделены на 4 группы: GST Т1 0/0 + GST Ml 0/0 (1); GST Tl 0/0 + GST Ml +/+ (2); GST Tl +/+ + GST Ml 0/0 (3) и GST Tl +/+ + GST Ml+/+(4).

У пациентов с аденомиозом распределение сочетаний генотипов глютатион-8-трансфераз в целом достоверно не отличалось от такового в контрольной группе (р > 0,05; df3). Следует отметить, что делеции в двух генах GST Т1 и GST Ml по сравнению с остальными генотипами встречались достоверно чаще у пациентов с аденомиозом, чем в контрольной группе (16,7 ±5,1 % и 5,5 ± 2,7 %, соответственно, р < 0,05; dfl). Согласно рассчитанному коэффициенту соотношения шансов риск развития аденомиоза выше почти в 3,5 раза

при генотипе GSTT10/0 + GST Ml 0/0 (OR = 3,4; 0:1,04-11,09).

При анализе ins/del полиморфизма гена Р53 не выявлены статистически достоверные различия частот генотипов в исследуемых группах. Вместе с тем, у пациентов с аденомиозом частота генотипа ins/del почти в 2 раза превышала таковую в контроле (20,4 ± 5,5 % и 12,5 ± 3,9 %, соответственно). Интересно, что генотип ins/ins не встречался в контрольной группе и был зарегистрирован только у пациентов.

При анализе другого полиморфного варианта гена Р53 (Arg72Pro) у пациентов с аденомиозом и в контрольной группе не выявлено статистически достоверных различий в частотах генотипов. Так, частота генотипов Pro/Pro, Arg/Pro, Arg/Arg составили в группе пациентов 7,4 ± 3,6 %, 35,2 ± 6,5 % и 57,4 ± 6,7 %, а в контрольной группе —4,2 ± 2,4 %, 38,9 ± 5,7 % и 56,9 ± 5,8 % соответственно.

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного варианта гена CYP19 (del(TCT)) между группами пациентов с аденомиозом и контролем выявил статистически значимые различия (р < 0,05; df2). Частоты генотипов D/D, D/I и I/I составили: 8,3 ± 3,3 %, 29,2 ± 5,4 % и 62,5 ± 5,7 % в контроле и 18,5 ± 5,3 %, 42,6±6,7% и 38,9 ± 6,6 % у больных. Носительство аллеля D среди среди больных составило 61,1±6,6 %, и оказалась почти вдвое выше, чем в контроле (37,5 ± 5,7 %) (р < 0,01; dfl)(pnc. 1). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития аденомиоза при наличии del(TCT) в гене CYP19 (OR = 2,63; С1:1,28-5,37) повышается в 2,5 раза.

Представлялось интересным сравнить частоты полиморфных вариантов изученных генов глюта-

D/- Г/1

аденомиоз

I ] контроль

Рис. 1. Распределение частоты носительства del(TCT) в гене CYP19 у больных аденомиозом и в контрольной группе

тион-Б-трансфераз в зависимости от особенностей клинических проявлений основного заболевания, главными из которых являются: бесплодие (58,5 ± 6,2 %), НМЦ (27,7 ± 5,6 %), выраженный болевой синдром (53,8 ± 6,1 %), перименструаль-ные выделения (40 ±6,1 %).

Согласнополученнымданнымупациентовс аденомиозом и бесплодием частота делеции гена GST Ml составила 14,3 ± 13,2 %, тогда как в контрольной группе эта величина достигала 58,3 ± 5,8 %. Полученные различия статистически достоверны (р < 0,01, dfl). При сравнении частоты этой мутации у больных аденомиозом с бесплодием и без такового также выявлены достоверные различия (р < 0,05, dfl).

При анализе гена GST Т1 показано, что частота носительства делеции в гомозиготе составила 71,4± 17,1 % у больных с аденомиозом и бесплодием. Интересно отметить, что при сравнении частоты генотипа GST Т1 0/0 в группе больных аденомиозом с бесплодием и в контрольной группе также выявлены статистически значимые различия (71,4 ± 17,1 % и 22,2±4,9%, соответственно р < 0,05; dfl), тогда как при анализе группы с аденомиозом в целом подобные отличия выявлены не были. При сравнении подгруппы больных аденомиозом с бесплодием и без такового также выявлены достоверные различия (р < 0,05; dfl). Частота генотипа GST Ml 0/0 составила 14,3 ± 13,2 % и 57,4 ± 7,2 %, соответственно. Частота генотипа GST Т1 0/0в подгруппе пациентов с аденомиозом и бесплодием превышала таковую в подгруппе пациентов с аденомиозом без бесплодия в 2,5 раза (71,4±17,1% и 27,7±6,5%, соответственно). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития бесплодия у больных аденомиозом при генотипе GST Т1 0/0 выше почти в 8,5 раза (OR = 7,08;CI:1,42-35,17).

При анализе распределения сочетаний генотипов по генам GSTT1 и GSTM1 в подгруппах боль-

71,4

38,3 36,1 34 41,7 —

I

19,1 16,7 14,3 14,3

•: [-1  -

Т-М- Т-М+ Т+М- Т+М+

Ас бесплодием  А без бесплодия .j контроль

Рис. 2. Распределение сочетанных генотипов по генам GSTT1 и GST Ml в группе больных аденомиозом с бесплодием и без бесплодия и в контрольной группе

ных аденомиозом с бесплодием и без такового выявлены достоверные статистически значимые различия как при сравнении подгрупп между собой, так и при сравнении с контрольной группой (р < 0,001; df3 и р < 0,01; df3, соответственно). Генотип GST Т1 0/0 + GST Ml +/+ встречается в 8 раз чаще в подгруппе больных аденомиозом с бесплодием (71,4± 17,1 %) по сравнению с группой больных аденомиозом без такового (8,5 ±4,1 %) (рис. 2).

Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития бесплодия у больных аденомиозом при генотипе GST Т1 0/0 + GST Ml +/+ почти в 27 раз выше (OR = 26,88; С1:5,72-126,37).

При анализе некоторых других клинических проявлений заболевания показано следующее: у больных аденомиозом и НМЦ достоверно чаще встречается генотип GST T1 0/0±GST Ml 0/0, чем в контрольной группе (21,1 ±8,6 % и 5,6 ± 2,9 %, соответственно, р < 0,05; dfl). Для больных аденомиозом с перименструальными выделениями также характерен генотип GST Т1 0/0+ GST Ml 0/0 (р < 0,05; dfl).

Нами проведен анализ двух полиморфных вариантов гена Р53 в зависимости от клинических проявлений заболевания. При анализе взаимосвязи ins/del полиморфизма и полиморфного варианта Arg72Pro гена Р53 с клиническими проявлениями аденомиоза статистически достоверных различий не выявлено. Отмечено некоторое возрастание частоты генотипа Pro/Pro в подгруппах больных с аденомиозом и НМЦ по сравнению с контрольной группой (13 ± 7,0 % и 4,2 ± 2,4 %, соответственно). Однако полученные данные статистически недостоверны.

При анализе частот полиморфных вариантов инсерционно/делиционного полиморфизма гена CYP19 в зависимости от клинических проявлений заболевания статистически достоверных различий выявлено не было.

Обсуждение

Накопленные к настоящему времени факты указывают на то, что развитие эндометриоза, так же, как и аденомиоза, определяется многими факторами. Этиология заболевания до сих пор неясна, хотя существуют гормональные, иммунологические, генетические, оксидативные и некоторые другие теории, объясняющие этиологию и патогенез заболевания. Не вызывает сомнения большой вклад генетических составляющих в семейные формы эндометриоза. Генная сеть этого заболевания, сложна и разнообразна [2]. Она исключает различные гены метаболизма (детоксикации), гены, ответственные за иммунный статус, эндокринные функции, гены межклеточных взаимодействий, проонкогены. Во многих отношениях эндометриоз и его самостоятельная клиническая форма — аденомиоз — сходны с онкологическими заболеваниями.

Все проанализированные нами полиморфные варианты генов в той или иной степени вовлечены и в патогенез опухолевых заболеваний [1]. Существуют данные об ассоциации полиморфизма генов GSTT1(Del), GST Ml (Del), P53 (ins/del, Argil Pro), CYP19 (del(TCT)) с развитием онкологической патологии.

Изученные нами гены GST Ml и GSTT1 кодируют две различные формы глютатион-8-транс-фераз — Ml и Т1. В настоящее время известны полиморфные варианты этих генов, так называемые нулевые аллели, которые на уровне фенотипа в гомозиготном состоянии проявляются в отсутствии белковых продуктов, которые, как известно, играют важную роль во второй фазе системы детоксикации ксенобиотиков [5].

В результате проведенного анализа полиморфных вариантов генов GSTM1, GSTT1 не выявлено статистически достоверных различий в частотах делеций отдельных генов глютатион-трансфераз между группой пациентов с аденомиозом и контролем. Следует, однако, отметить, что делеции сразу в двух генах GST Т1 и GST Ml у пациентов с аденомиозом встречались достоверно чаще, чем в контрольной группе (16,7 ±5,1 % и 5,5 ± 2,7 %, соответственно, р < 0,05; dfl). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития аденомиоза у женщин с генотипом GST T10/0±GST Ml 0/0 выше почти в 3,5 раза, чем при «функционально активных» генотипах по этим генам (OR = 3,4; 0:1,04-11,09).

Ассоциация «нулевых» вариантов глутатион-S-трансфераз с эндометриозом была выявлена нами еще 10 лет назад [11, 19] и неоднократно подтверждалась многочисленными последующими исследованиями [10, 12, 13, 20, 21], однако существуют работы, в которых подобные за-

кономерности не обнаружены [17, 18]. Данные о взаимосвязи аденомиоза и полиморфизма генов системы детоксикации в современной литературе отсутствуют.

Между тем важная роль генетического полиморфизма генов системы детоксикации уже установлена для многих онкологических и неонкологических заболеваний. Ферменты, кодируемые этими генами, обеспечивают защиту организма от многих ксенобиотиков, в том числе от свободных радикалов. Известно, что необходимым условием функционирования здоровых клеток, в том числе эндометрия, является поддержание на определенном уровне перекисного окисления липидов (ПОЛ), скорость и регуляция которых осуществляется многокомпонентной антиоксидантной системой (АОС). Существует гипотеза [16], согласно которой усиление роста гетеротопичес-кого эндометрия при эндометриозе может быть обусловлено увеличением продуктов пероксида-ции липидов в перитонеальной жидкости. У женщин с наружным генитальным эндометриозом концентрация продуктов перекисного окисления липидов в перитонеальной жидкости нарастает пропорционально увеличению распространенности патологического процесса [6]. Ферменты, кодируемые генами GST Ml, GST Т1, участвуют во второй фазе системы детоксикации ксенобиотиков. При снижении или отсутствии активности этих генов нарушается баланс между ферментами первой и второй фаз системы детоксикации, следствие чего может быть накопление активных метаболитов, что способствует развитию оксида-тивного стресса — одного из ключевых компонентов повреждения ткани и развития опухолевых процессов.

Особый интерес представляет анализ клинических проявлений заболевания в зависимости от аллельных вариантов изученных генов.

При анализе подгруппы больных аденомиозом с бесплодием выявлено достоверное понижение частоты делеции гена GST Ml (14,3 ± 13,2 %) по сравнению с контрольной группой (58,3 ± 5,8 %) (р < 0,01; dfl). При сравнении подгруппы больных аденомиозом с бесплодием и без такового также выявлены достоверные различия в частотах делеции гена GSTM1 (14,3 ± 13,2 % и 57,4 ± 7,2 %, соответственно, р < 0,05; dfl). В то же время в подгруппе пациентов с аденомиозом и бесплодием зарегистрировано существенное повышение частоты делеции гена GST Т1 по сравнению с подгруппой больных аденомиозом без бесплодия (р < 0,05; dfl). Интересно отметить, что при сравнении частоты генотипа GST Т1 0/0 в группе больных аденомиозом с бесплодием и в контрольной группе также выявлены статистически значи-

мые различия (71,4 ± 17,1 % и 22,2 ± 4,9 %, соответственно, р < 0,05; dfl), тогда как при анализе группы с аденомиозом в целом подобные отличия выявлены не были. Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития бесплодия у больных аденомиозом выше почти в 8,5 раза при генотипе GST Т1 0/0 (OR = 7,08; С1:1,42-35,17).

Так как генитальный эндометриоз относится к заболеваниям опухолевой природы, большой интерес представляло изучение полиморфных вариантов генов, обеспечивающих экстренное удаление поврежденных и потенциально опасных клеток. Известно, что белок р53 является ключевым элементом контроля клеточного ответа на различные виды стресса. Белок р53 осуществляет важную «социальную» функцию в многоклеточном организме, включая процесс программированной клеточной гибели (апоптоз), именно этим достигается удаление поврежденных и, следовательно, потенциально опасных клеток из организма. Инактивация р53, наблюдаемая в большинстве опухолей, свидетельствует в пользу его противоопухолевой активности.

При анализе частот двух полиморфных вариантов гена Р53 — ins/del 16 пар оснований и замены Arg на Pro в 72-м положении аминокислотной последовательности белка нами не выявлены статистически значимых отличий в распределении генотипов у больных аденомиозом и в контрольной группе. Однако у пациентов с аденомиозом частота гетерозигот по инсерции почти в 2 раза превышала таковую в контрольной группе (20,4 ± 5,5 % и 12,5±3,9%, соответственно), итолько у них был зарегистрирован генотип ins/ins, который не встречался в контрольной группе.

Изученный нами ген CYP19 кодирует фермент ароматазу, который принимает непосредственное участие в метаболизме стероидных гормонов и, как предполагают, играет ключевую роль в генезе эндометриоза [9, 14, 15].

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного варианта гена CYP19 (del(TCT)) между группами пациентов с аденомиозом и контролем выявил статистически значимые различия (р < 0,05; df2). Частота носительства ал-леля D среди больных составила 61,1±6,6%, что достоверно выше, чем в контрольной группе (37,5 ± 5,7 %) (р < 0,01; dfl). Согласно коэффициенту соотношения шансов риск развития аде-номиоза повышается в 2,5 раза при носительстве del(TCT) в гене CYP19 (OR = 2,63; С1:1,28-5,37).

Работ, посвященных анализу полиморфных вариантов гена CYP19 у больных с генитальным эн-дометриозом, крайне мало, и, соответственно, нет однозначного мнения о роли полиморфизма данного гена в патогенезе заболевания. Так, напри-

мер, в работе японских авторов проанализирована роль полиморфного микросателлита (ТТТА)п в интроне 4 гена CYP 19 и делеции трех нуклео-тидов (ТСТ) в развитии эндометриоза и аденоми-оза. Авторы не выявили ассоциации числа ТТТА тандемных повторов с развитием изучаемых заболеваний, однако было обнаружено увеличение частоты аллеля с делецией трех нуклеотидов у больных с эндометриозом. Высказано предположение, что возникновение и рост эндометри-оидной ткани могут быть связаны с измененной транскрипцией CYP19 гена [8].

Наши результаты свидетельствуют об увеличение частоты аллеля с делецией трех нуклеотидов у пациентов с аденомиозом. Различия с данными японских авторов, по-видимому, можно связать с существованием популяционных и расовых различий, которые выявлены при изучении ассоциации полиморфизма этого гена с развитием заболевания. В настоящий момент из-за малочисленности генетических исследований полиморфизма гена CYP19 у пациентов с эндометриозом нет однозначного мнения о его роли в этиологии и патогенезе заболевания, однако, основываясь на полученных нами данных, можно предположить, что делеция трех нуклеотидов (ТСТ) в гене CYP19 ассоциирована с развитием аденомиоза в нашей популяции.

Таким образом, в результате проведенного исследования удалось установить, что аденомиоз достоверно ассоциирован с нулевым генотипом по двум генам 2-й фазы детоксикации (GST Ml и GST Т1), а также с делеционным полиморфизмом гена CYP19, играющим важную роль в метаболизме эстрогенов. Получены предварительные данные и в отношении возможной ассоциации изученных генов с различными клиническими проявлениями аденомиоза.

Дальнейшие исследования генетических аспектов аденомиоза и эндометриоза, изучение вкладов сочетаний конкретных аллелей генов «предрасположенности» в этиологию и патогенез этих распространенных гинекологических заболеваний имеет важное значение для разработки новых методов лечения заболевания, для создания комплексной программы их профилактики с учетом индивидуальных особенностей генома.

Литература

1. Баранов В. С. Геном человека — научная основа профилактической медицины/Баранов В. С. //Вестник РАМН. — 2000. — №10. — С. 27-37.

2. Баранов В. С. Экологическая генетика и предиктивная медицина / Баранов В. С. // Экологическая генетика. — 2004. — № 1. — С. 22-29.

3. Баскаков В. П. Эндометриоидная болезнь / Баскаков В. П., Цвелев Ю. В., Кира Е. Ф. — СПб.: Изд-во Н-Л, 2002. — 452 с.

4. Гинекология от десяти учителей: пер. с англ. / Ред. Кэмп-белл С., Монг Э. — М.: МИА, 2003. — 328 с.

Б. Кукес В. /".Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты / Кукес В. Г. — М.: Реафарм, 2004. — 144 с.

6. Посисеева Л. В. Значение оксида азота в патогенезе бесплодия при наружном генитальном эндометриозе / Посисеева Л. В., Назарова А. О., Назаров С. Б. // Акуш. и гин. — 2000. — №6. — С. 27-30.

7. Эдмонс Д. К. Эндометриоз / Эдмонс Д. К. // Руководство Дьюхерста по акушерству и гинекологии для последипломного обучения: пер. с англ. / Ред. Ч. Р. Уитфилд, ред. перевода. В.И. Краснопольский. — М.: Медицина, 2003. — С.582-594.

8. Association of the CYP17 gene and CYP19 gene polymorphisms with risk of endometriosis in Japanese women / Kado N.. Kitawaki J., Obayashi H. [et al.] // Hum. Reprod. — 2002. — Vol. 17, N4.-P. 897-902.

9. Attar E. Aromatase and other steroidogenic genes in endometriosis: translational aspects /Attar E., Bulun S.E. // Hum. Reprod. Update. — 2006, Vol.12, N 1.-P.49-56.

10. CYP1A1, CYP19, and GSTM1 polymorphisms increase the risk of endometriosis / Arvanitis D. A., Koumantakis G. E., Goumenou A. G. [et al.] // Fertil. Steril. — 2003. — Vol. 79. — P. 702-709.

11. Glutathione S-transferase M1 gene polymorphism and susceptibility to endometriosis in a French population / Baranova H., Bothorishvilli R., Canis M., Albuisson E. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 1997. — Vol. 3,N9. — P. 775-780.

12. Hur S. E. Polymorphism of the genes encoding the GSTM1, GSTT1 and GSTP1 in Korean women: no association with endometriosis/Hur S. E., Lee J. Y., Moon H. S., Chung H. W. /Mol. Hum. Reprod.-2005.-Vol. 11, N 1. — P. 15-19.

13. Low-penetrance genes are associated with increased susceptibility to endometriosis / Arvanitis D. A., GoumenouA. G., Matalliotakis I. M. [et al.] // Fertil. Steril. — 2001. — Vol. 76, N6. — P. 1202-1206.

14. Meinhardt fy.The essential role of the aromatase/p450arom / Meinhardt U., Mullis P. E. //Semin. Reprod. Med. — 2002. — Vol. 20, N3. — P. 277-284.

15. Modulation of oestrogen receptor signalling by association with the activated dioxin receptor / Ohtake F., Takeyama K., MatsumotoT. [et al.] // Nature. — 2003. — Vol. 423. — P. 545-550.

16. Murphy A. A. Clinical aspects of endometriosis / Murphy A. A.// Ann. N.-Y. Acad. Sci. — 2002. — Vol. 955. — P. 1-10.

17. No association of endometriosis with glutathione S-transferase M1 and T1 null mutations in a Japanese population / Morizane M., YoshidaS., NakagoS. [et al.] //J. Soc. Gynecol. Investig. — 2004. — Vol. 11, N2. — P. 118-121.

18. OXEGENE Collaborative Group. Linkage and association studies of the relationship between endometriosis and genes encoding the detoxification enzymes GSTM1, GSTT1 and CYP1A1 / Hadfield R. M., Manek S., Weeks D. E. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 2001. — Vol., N11. — P. 1073-1078.

19. Proportion of the GSTM1 0/0 genotype in some Slavic populations and its correlation with cystic fibrosis and some multifactorial diseases / Baranov V. S., Ivashchenko Т. E., Bakay В., Aseev M. V. [et al.] // Hum. Genet. — 1996. — Vol.97, N4. — P. 516-520.

20. Tumor necrosis factor-alpha-308 promoter and p53 codon 72 gene polymorphisms in women with leiomyomas / Hsieh Y. Y., Chang С. C., Tsai F. J. [et al.] // Fertil. Steril. — 2004. — Vol. 82, Suppl 3. — P. 1177-1181.

21. ZondervanK. T. The genetic basis of endometriosis/Zondervan К. Т., Cardon L. R., Kennedy S. H. // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. — 2001. — Vol. 13, N3. — P. 309-314.

Статья представлена M. В. Асеевым НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта,

Санкт-Петербург

GENETIC FACTORS OF PREDISPOSITION TO ADENOMIOSIS

Golubeva O.B., Ivashchenko Т. E., Niauri D. A., Baranov V.S., Ajlamazjan E. K.

Summary: Now adenomiosis is often considered as separate nosologic unit. Etiology of the disease still remains unknown. Adenomiosis is possibly related to a class of polygenic, multifactorial diseases. The purpose of the present study was to define a role of allelic variants of genes CYP19, GS Tl, GST Ml, P53 in pathogenesis of adenomiosis and to analyze their correlation with clinical manifestation ofdisease. Itisrevealed, that deletion in two genes GST Tl and GST Ml occurred authentically more often in patients with adenomiosis, than in control group (16,7 ± 5,1 % and 5,5 ± 2,7 %, respectively, p < 0,05; df = 1). According to odds ratio the risk of adenomiosis development is almost in 3,5 times higher for GSTT10/0 + GST Ml 0/0 genotype (OR = 3,4; 0:1,04—11,09). The comparative analysis of genotype frequencies of polymorphic variant of CYP19 gene (del(TCT)) between groups of patients with adenomiosis and the controls has revealed statistically significant difference (p < 0,05; df = 2). So, the frequency of carriers of D allele in patients was 61,1 ±6,6% and it was relatively higher, than in control group (37,5 ± 5,7 %; p < 0,01, df = 1). According to odds ratio the risk of adenomiosis development raises in 2,5 times for carriers of del (TCT) in CYP19 gene (OR = 2,63; CI: 1,28-5,37). The analysis of distribution of genotypes combinations for GST Tl and GST Ml genes in subgroups of adenomiosis patients with and without sterility revealed statistically significant difference both for comparison of subgroups among themselves, and as compared to control group (p < 0,0005; df = 3 andp <0,01; df = 3, respectively). So, GST Tl 0/0 + GSTM1 +/+ genotype meets in 8 times more often in adenomiosis patients with sterility (71,4± 17,1 %) in comparison with patients without it (8,5 ± 4,1 %). According to odds ratio the risk of sterility in patients with adenomiosis is almost in 27 times higher for GSTT1 0/0 + GSTM1 +/+ genotype (OR = 26,88; CI: 5,72-126,37).

Key words: adenomiosis; CYP19; GSTT1; GSTM1; P53 genes