ЖИВОТНЫЕ, УСТОЙЧИВЫЕ К ВИРУСУ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ

1. Генетически модифицированная свинья, резистентная к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован.
2. Генетически модифицированная свинья, резистентная к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой инактивирован, по меньшей мере, один аллель гена CD163, причем инактивация аллеля CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС).
3. Генетически модифицированная свинья по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что оба аллеля гена SIGLEC1 были инактивированы.
4. Генетически модифицированная свинья по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что оба аллеля гена CD163 были инактивированы, причем инактивация аллелей CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС).
5. Генетически модифицированная свинья, резистентная к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован и, по меньшей мере, один аллель гена CD163 был инактивирован.
6. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован, включающий:
энуклеацию ооцита свиньи;
слияние ооцита с фибробластной клеткой донорской свиньи, содержащей в геноме фибробластной клетки по меньшей мере, один инактивированный аллель SIGLEC1; и
активацию ооцита для получения эмбриона.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что дополнительно включает перенос эмбриона в репродуктивный тракт суррогатной свиньи, у которой начался эструс, но не завершилась овуляция; и при этом беременность и роды в срок дают генетически модифицированную свинью, геном которой содержит, по меньшей мере, один инактивированный аллель SIGLEC1.
8. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой инактивирован, по меньшей мере, один аллель гена CD163, причем инактивация аллеля CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), при этом способ включает:
энуклеацию ооцита свиньи;
слияние ооцита с фибробластной клеткой донорской свиньи, содержащей в геноме фибробластной клетки по меньшей мере, один инактивированный аллель CD163; и
активацию ооцита для получения эмбриона.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что дополнительно включает перенос эмбриона в репродуктивный тракт суррогатной свиньи, у которой начался эструс, но не завершилась овуляция; и при этом беременность и роды в срок дают генетически модифицированную свинью, геном которой содержит, по меньшей мере, один инактивированный аллель CD163.
10. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой оба аллеля гена SIGLEC1 были инактивированы, включающий:
спаривание самки генетически модифицированной свиньи, полученной по способу согласно пп. 6 или 7 с самцом генетически модифицированной свиньи, полученным по способу согласно пп. 6 или 7 для получения F1-потомства;
скрининг F1-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой оба аллеля гена SIGLEC1 были инактивированы.
11. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой оба аллеля гена CD163 были инактивированы, причем инактивация аллелей CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), при этом способ включает:
спаривание самки генетически модифицированной свиньи, полученной по способу согласно пп. 8 или 9 с самцом генетически модифицированной свиньи, полученным по способу согласно пп. 8 или 9 для получения F1-потомства;
скрининг F1-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой оба аллеля гена CD163 были инактивированы.
12. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что, по меньшей мере, один аллель был инактивирован посредством частичной или полной делеции.
13. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что, по меньшей мере, один аллель был инактивирован посредством использования рекомбинационной системы Cre-lox.
14. Способ по п. 6 или 7, отличающийся тем, что аллель SIGLEC1 был инактивирован посредством делеции части экзона 1 и экзонов 2 и 3 полностью.
15. Способ по п. 8 или 9, отличающийся тем, что аллель CD163 был инактивирован путем замены экзона 7 на богатый цистеином домен 8 фагоцитарного рецептора (SRCR) из CD163L.
16. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что энуклеацию выполняют в микроманипуляционной среде при помощи микропипетки.
17. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что слияние выполняют в среде для слияния.
18. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что активация ооцита включает инкубирование ооцита в присутствии тимеросала.
19. Способ по пп. 7 или 9, отличающийся тем, что перенос включает перенос эмбриона в фаллопиеву трубу через яичниковые бахромки суррогатной матери.
20. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы, причем инактивация аллелей CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), при этом способ включает:
спаривание самки генетически модифицированной свиньи по п. 1 с самцом генетически модифицированной свиньи по п. 2 или спаривание самца генетически модифицированной свиньи по п. 1 с самкой генетически модифицированной свиньи по п. 2 для получения F1-потомства;
скрининг F1-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован и, по меньшей мере, один аллель гена CD163 был инактивирован;
спаривание генетически модифицированных свиней, у которых, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован и, по меньшей мере, один аллель гена CD163 был инактивирован друг с другом для получения Р2-потомства; и
скрининг Р2-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы.
21. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы, причем инактивация гена CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), при этом способ включает:
спаривание самки генетически модифицированной свиньи по п. 3 с самцом генетически модифицированной свиньи по п. 4 или спаривание самца генетически модифицированной свиньи по п. 3 с самкой генетически модифицированной свиньи по п. 4 для получения F1-потомства;
спаривание F1-потомства для получения Р2-потомства; и
скрининг Р2-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы.
22. Способ получения генетически модифицированной свиньи, резистентной к инфекции вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы, причем инактивация гена CD165 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС), при этом способ включает:
спаривание генетически модифицированной свиньи, у которой инактивированы, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 и, по меньшей мере, один аллель гена CD163, с другой генетически модифицированной свиньей, у которой инактивированы, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 и, по меньшей мере, один аллель гена CD163, с получением F1-потомства; и
скрининг F1-потомства для идентификации генетически модифицированной свиньи, у которой оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163 были инактивированы.
23. Способ по любому из пп. 20-22, отличающийся тем, что при скрининге используются полимеразная цепная реакция (ПЦР) или Саузерн-блот.
24. Потомство генетически модифицированной свиньи, полученное по способу согласно любому из пп. 6-9 и 20-22, отличающееся тем, что, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC1 был инактивирован.
25. Потомство генетически модифицированной свиньи, полученное по способу согласно любому из пп. 6-9 и 20-22, отличающееся тем, что у него инактивирован, по меньшей мере, один аллель гена CD163, причем инактивация аллеля CD 163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС).
26. Потомство генетически модифицированной свиньи, полученное по способу согласно любому из пп. 6-9 и 20-22, отличающееся тем, что у него инактивирован, по меньшей мере, один аллель гена SIGLEC 1 и, по меньшей мере, один аллель гена CD163, причем инактивация аллеля CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС).
27. Потомство генетически модифицированной свиньи, полученное по способу согласно любому из пп. 6-9 и 20-22, отличающееся тем, что у него инактивированы оба аллеля гена SIGLEC1 и оба аллеля гена CD163, причем инактивация аллелей CD163 приводит к белку CD163, неспособному связывать и/или обнажать вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ВРРСС).