СТАБИЛЬНАЯ КОМПОЗИЦИЯ БЕЛКА ИММУНОГЛОБУЛИНА С ДВОЙНЫМИ ВАРИАБЕЛЬНЫМИ ДОМЕНАМИ

1. Водная композиция, содержащая стабильный в водной среде белок DVD-Ig (AS-DVD-Ig) и буфер, молярность которого составляет от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ, при этом pH указанной композиции составляет от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,5.
2. Водная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, относительный процент мономеров которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной по меньшей мере приблизительно 50 мг/мл уменьшается менее чем приблизительно на 15%, что определяют с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ).
3. Водная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, относительный процент мономеров которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной по меньшей мере приблизительно 50 мг/мл уменьшается менее чем приблизительно на 10%, что определяют с помощью ЭХ.
4. Водная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой как белок DVD-Ig, относительный процент мономеров которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной по меньшей мере приблизительно 50 мг/мл, уменьшается менее чем приблизительно на 5%, что определяют с помощью ЭХ
5. Водная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит приблизительно 6% или менее агрегатов, что определяют с помощью анализа ЭХ.
6. Водная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит приблизительно 5% или менее агрегатов, что определяют с помощью анализа ЭХ.
7. Водная композиция по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что pH указанной композиции составляет от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.
8. Водная композиция по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, изменение относительной (отн.) площади пика мономеров которого составляет приблизительно 10% или менее после 21 дня хранения при приблизительно 40 °C при концентрации, равной приблизительно 100 мг/мл, в водной композиции при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5.
9. Водная композиция по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, изменение отн. площади пика мономеров которого составляет приблизительно 1% или менее после 21 дня хранения при приблизительно 5 °C при концентрации, равной приблизительно 100 мг/мл, при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5 в водной композиции.
10. Водная композиция по любому из пп. 1-9, дополнительно содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из поверхностно-активного вещества, полиола и комбинации перечисленных компонентов.
11. Водная композиция по п. 10, отличающаяся тем, что указанный полиол выбран из группы, состоящей из сорбита, маннита и сахарозы.
12. Водная композиция по п. 11, отличающаяся тем, что указанный полиол представляет собой маннит, и тем, что концентрация маннита выбрана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 10 до приблизительно 100 мг/мл, от приблизительно 20 до приблизительно 80, от приблизительно 20 до приблизительно 70, от приблизительно 30 до приблизительно 60, и от приблизительно 30 до приблизительно 50 мг/мл.
13. Водная композиция по п. 11, отличающаяся тем, указанный что полиол представляет собой сорбит.
14. Водная композиция по п. 13, отличающаяся тем, что концентрация сорбита выбрана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 20 до приблизительно 60 мг/мл, от приблизительно 25 до приблизительно 55 мг/мл, от приблизительно 30 до приблизительно 50 мг/мл, и от приблизительно 35 до приблизительно 45 мг/мл.
15. Водная композиция по п. 11, отличающаяся тем, что указанный полиол представляет собой сахарозу.
16. Водная композиция по п. 15, отличающаяся тем, что концентрация сахарозы выбрана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 60 до приблизительно 100 мг/мл, от приблизительно 65 до приблизительно 95 мг/мл, от приблизительно 70 до приблизительно 90 мг/мл, и от приблизительно 75 до приблизительно 85 мг/мл.
17. Водная композиция по любому из пп. 10-16, отличающаяся тем, что указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
18. Водная композиция по п. 17, отличающаяся тем, что концентрация полисорбата выбрана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 0,001% до приблизительно 1%, от приблизительно 0,005% до приблизительно 0,05%, от приблизительно 0,005% до приблизительно приблизительно 0,02%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,05%, и приблизительно равна 0,1%.
19. Водная композиция по п. 17 или 18, отличающаяся тем, что указаный полисорбат представляет собой полисорбат 80 или полисорбат 20.
20. Водная композиция по п. 19, отличающаяся тем, что концентрация полисорбата 80 или полисорбата 20 составляет от приблизительно 0,005% до приблизительно 0,02%.
21. Композиция по любому из пп. 1-20, отличающаяся тем, что указанный буфер выбран из группы, состоящей из ацетатного, гистидинового, глицинового, аргининового, фосфатного и цитратного буфера.
22. Водная композиция по любому из пп. 1-21, отличающаяся тем, что молярность указанного буфера находится в диапазоне от 10 до 20 мМ.
23. Водная композиция по любому из пп. 1-22, отличающаяся тем, что концентрация указанного белка AS-DVD-Ig составляет от приблизительно 1 до приблизительно 200 мг/мл.
24. Водная композиция по п. 23, отличающаяся тем, что концентрация указанного белка AS-DVD-Ig выбирана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 20 до приблизительно 100 мг/мл, от приблизительно 1 до приблизительно 250 мг/мл, от приблизительно 10 до приблизительно 230 мг/мл, от приблизительно 20 до приблизительно 210 мг/мл, от приблизительно 30 до приблизительно 190 мг/мл, от приблизительно 40 до приблизительно 170 мг/мл, от приблизительно 50 до приблизительно 150 мг/мл, от приблизительно 60 до приблизительно 130 мг/мл, от приблизительно 70 до приблизительно 110 мг/мл, и от приблизительно 80 до приблизительно 105 мг/мл белка AS-DVD-Ig.
25. Водная композиция, содержащая стабильный в водной среде белок DVD-Ig (AS-DVD-Ig), буфер, молярность которого составляет от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ, поверхностно-активное вещество и полиол, при этом pH указанной композиции составляет от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,5.
26. Водная композиция по п. 25, отличающаяся тем, что указанный полиол выбран из группы, состоящей из сорбита, маннита и сахарозы.
27. Водная композиция по п. 26, отличающаяся тем, что указанный полиол представляет собой сорбит.
28. Водная композиция по п. 27, отличающаяся тем, что концентрация сорбита составляет от приблизительно 30 до приблизительно 50 мг/мл.
29. Водная композиция по п. 26, отличающаяся тем, что указанный полиол представляет собой сахарозу.
30. Водная композиция по п. 29, отличающаяся тем, что концентрация сахарозы составляет от приблизительно 70 до приблизительно 90 мг/мл.
31. Водная композиция по любому из пп. 25-30, отличающаяся тем, что указанный буфер выбран из группы, состоящей из ацетатного, гистидинового, глицинового, аргининового, фосфатного и цитратного буфера.
32. Водная композиция по любому из пп. 25-31, отличающаяся тем, что молярность указанного буфера находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 мМ.
33. Водная композиция по любому из пп. 25-32, отличающаяся тем, что концентрация указанного белка AS-DVD-Ig составляет от приблизительно 1 до приблизительно 200 мг/мл.
34. Водная композиция по любому из пп. 25-32, отличающаяся тем, что концентрация указанного белка AS-DVD-Ig выбрана из группы, состоящей из следующих диапазонов концентраций: от приблизительно 20 до приблизительно 100 мг/мл, от приблизительно 1 до приблизительно 250 мг/мл, от приблизительно 10 до приблизительно 230 мг/мл, от приблизительно 20 до приблизительно 210 мг/мл, от приблизительно 30 до приблизительно 190 мг/мл, от приблизительно 40 до приблизительно 170 мг/мл, от приблизительно 50 до приблизительно 150 мг/мл, от приблизительно 60 до приблизительно 130 мг/мл, от приблизительно 70 до приблизительно 110 мг/мл, и от приблизительно 80 до приблизительно 105 мг/мл белка AS-DVD-Ig.
35. Композиция, содержащая белок AS-DVD-Ig, полиол, буфер и поверхностно-активное вещество, причем pH указанной композиции составляет от приблизительно 5 до приблизительно 7 и при этом указанный белок AS-DVD-Ig проедставляет собой белок DVD-Ig, относительный процент мономеров которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной приблизительно 60 мг/мл уменьшается менее чем приблизительно на 15%, что определяют с помощью ЭХ.
36. Композиция по п. 35, отличающаяся тем, что указанный полиол выбран из группы, состоящей из сорбита, маннита и сахарозы.
37. Композиция по п. 35 или 36, отличающаяся тем, что указанный буфер выбран из группы, состоящей из ацетатного, гистидинового, глицинового, аргининового, фосфатного и цитратного буфера.
38. Композиция по любому из пп. 35-38, отличающаяся тем, что указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
39. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80 или полисорбат 20.
40. Композиция по п. 39, отличающаяся тем, что концентрация указанного полисорбата 80 или указанного полисорбата 20 составляет от приблизительно 0,005% до приблизительно 0,02%.
41. Композиция, содержащая белок AS-DVD-Ig, полиол, гистидиновый буфер и полисорбат, причем pH указанной композиции составляет от приблизительно 5 до приблизительно 7, и при этом указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, агрегация которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной приблизительно 60 мг/мл составляет менее чем приблизительно 15%, что определяют с помощью ЭХ .
42. Композиция по любому из пп. 35-41, которая представляет собой водную композицию.
43. Композиция по любому из пп. 35-41, которая представляет собой лиофилизированную композицию.
44. Композиция по любому из пп. 1-43, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig содержит первую и вторую полипептидные цепи, каждая из которых независимо содержит VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен;
C представляет собой константный домен;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 представляет собой Fc-область;
n представляет собой 0 или 1,
при этом указанные домены VD1 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют первый функциональный сайт связывания мишени и указанные домены VD2 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют второй функциональный сайт связывания мишени.
45. Композиция по п. 44, отличающаяся тем, что указанная первая полипептидная цепь содержит первый VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи;
C представляет собой константный домен тяжелой цепи;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 представляет собой Fc-область;
n представляет собой 0 или 1, и
при этом, указанная вторая полипептидная цепь содержит второй VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи;
C представляет собой константный домен легкой цепи;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 не включает Fc-область;
n представляет собой 0 или 1,
причем указанные домены VD1 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют первый функциональный сайт связывания мишени и указанные домены VD2 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют второй функциональный сайт связывания мишени.
46. Композиция по п. 44 или 45, содержащая две первых полипептидных цепи и две вторых полипептидных цепи, отличающаяся тем, что указанный связывающий белок содержит четыре функциональных сайта связывания мишени.
47. Композиция по любому из пп. 44-46, отличающаяся тем, что X1 не является CL.
48. Композиция по любому из пп. 44-47, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig содержит три участка, определяющих комплементарность, из последовательностей аминокислот вариабельной области легкой или тяжелой цепи, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 28-75.
49. Композиция по любому из пп. 44-48, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig содержит последовательность аминокислот легкой или тяжелой цепи, представленную в последовательностях SEQ ID NO: 28-75.
50. Композиция по любому из пп. 44-49, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig специфично связывается с белками, выбранными из группы, состоящей из: CD20/CD80, VEGF/Her2, TNF/RANKL, TNF/DKK, CD20/RANKL, DLL4/PLGF, TNF/SOST, IL-9/IgE, IL-12/IL-18, TNF/IL-17, TNF/PGE2, IL1α/IL1β и DLL4/VEGF.
51. Композиция по любому из пп. 44-49, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig специфично связывается с белками, выбранными из группы, состоящей из IL4/IL13, IL1α/IL1β и TNF-альфа/IL17.
52. Композиция по п. 50, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig специфично связывается с TNF и IL-17.
53. Композиция по п. 52, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig, специфичный к TNFα/IL17, представляет собой DVD A (последовательности SEQ ID NO: 62 и 63).
54. Композиция по п. 50, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig специфично связывается с IL1α/IL1β.
55. Композиция по п. 54, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig, специфичный к IL1α/IL1β, представляет собой DVD Цельсия (последовательности SEQ ID NO: 66 и 67).
56. Композиция по п. 50, отличающаяся тем, что указанный белок AS-DVD-Ig специфично связывается с IL-12/IL-18.
57. Композиция по любому из пп. 1-56, отличающаяся тем, что указанная композиция представляет собой фармацевтическую композицию.
58. Фармацевтическая композиция, содержащая стабильный в водной среде белок DVD-Ig (AS-DVD-Ig) и буфер, молярность которого составляет от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ, при этом указанный белок AS-DVD-Ig представляет собой белок DVD-Ig, относительный процент мономеров которого после 14 дней хранения при приблизительно 40 градусах Цельсия в составе композиции в гистидиновом или цитратно-фосфатном буфере при концентрации, равной приблизительно 60 мг/мл, и при pH композиции от 4,5 до 7,5уменьшается менее чем приблизительно на 10%, что определяют с помощью ЭХ,.
59. Фармацевтическая композиция по п. 58, дополнительно содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из поверхностно-активного вещества, полиола и комбинации перечисленных компонентов.
60. Способ лечения расстройства, включающий введение фармацевтической композиции по п. 58 или 59 таким образом, что она лечит указанное расстройство.
61. Лиофилизированная композиция, содержащая стабильный в лиофилизированном состоянии белок DVD-Ig (LS-DVD-Ig), отличающаяся тем, что после восстановления влагосодержания указанной композицииона содержит от приблизительно 1 до приблизительно 100 мг/мл белка LS-DVD-Ig, от приблизительно 10 до приблизительно 50 мМ буфера, полиол, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,2 мг/мл полисорбата, и ее pH составляет от приблизительно 5 до приблизительно 7.
62. Лиофилизированная композиция по п. 61, отличающаяся тем, что pH указанной композиции составляет от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5.
63. Лиофилизированная композиция по п. 61 или 62, отличающаяся тем, что наблюдаемое изменение отн. площади пика мономеров указанного белка LS-DVD-Ig после ускоренного хранения в течение 21 дня при приблизительно 40°C при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5 в водной композиции составляет более чем 10%, когда его включают в состав указанной композиции при концентрации большей, чем приблизительно 100 мг/мл.
64. Лиофилизированная композиция по любому из пп. 61-63, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig содержит первую и вторую полипептидные цепи, каждая из которых независимо содержит VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен;
C представляет собой константный домен;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 представляет собой Fc-область;
n представляет собой 0 или 1,
при этом указанные домены VD1 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют первый функциональный сайт связывания мишени и указанные домены VD2 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют второй функциональный сайт связывания мишени.
65. Лиофилизированная композиция по п. 64, отличающаяся тем, что указанная первая полипептидная цепь содержит первый VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи;
C представляет собой константный домен тяжелой цепи;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 представляет собой Fc-область;
n представляет собой 0 или 1, и
тем, что указанная вторая полипептидная цепь содержит второй VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, где
VD1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи;
VD2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи;
C представляет собой константный домен легкой цепи;
X1 представляет собой линкер при условии, что он не является CH1;
X2 не включает Fc-область;
n представляет собой 0 или 1,
причем указанные домены VD1 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют первый функциональный сайт связывания мишени и указанные домены VD2 на указанных первой и второй полипептидных цепях образуют второй функциональный сайт связывания мишени.
66. Лиофилизированная композиция по п. 64 или 65, содержащая две первых полипептидных цепи и две вторых полипептидных цепи, при этом указанный связывающий белок содержит четыре функциональных сайта связывания мишени.
67. Лиофилизированная композиция по любому из пп. 64-66, отличающаяся тем, что X1 не является CL.
68. Лиофилизированная композиция по любому из пп. 64-67, отличающаяся тем, что белок LS-DVD-Ig содержит три участка, определяющих комплементарность, из последовательностей аминокислот вариабельной области легкой или тяжелой цепи, представленных в последовательностях SEQ ID NO: с 28 по 75.
69. Лиофилизированная композиция по любому из пп. 63-66, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig содержит последовательность аминокислот легкой или тяжелой цепи, представленную в последовательностях SEQ ID NO: с 28 по 75.
70. Лиофилизированная композиция по любому из пп. 61-69, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig специфично связывается с белками, выбранными из группы, состоящей из CD20/CD80, VEGF/Her2, TNF/RANKL, TNF/DKK, CD20/RANKL, DLL4/PLGF, TNF/SOST, IL-9/IgE, IL-12/IL-18, TNF/IL-17, TNF/PGE2, IL1α/IL1β или DLL4/VEGF.
71. Лиофилизированная композиция по п. 70, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig специфично связывается с TNF и IL-17.
72. Лиофилизированная композиция по п. 70, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig специфично связывается с IL1α/IL1β.
73. Лиофилизированная композиция по п. 70, отличающаяся тем, что указанный белок LS-DVD-Ig специфично связывается с IL-12/IL-18.
74. Лиофилизированная композиция, полученная путем лиофилизации водной композиции, содержащей белок LS-DVD-Ig, буфер с молярностью от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ, поверхностно-активное вещество и полиол, при этом pH указанной композиции составляет от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,5.
75. Лиофилизированная композиция по п. 74, отличающаяся тем, что указанный буфер выбран из группы, состоящей из гистидинового, сукцинатного и цитратного и/или фосфатного буфера.
76. Лиофилизированная композиция по п. 74-75, отличающаяся тем, что указанный полиол выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита, сахарозы и трегалозы.