Экспериментальное исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения мизопростола с мексидолом при язвенных поражениях, вызванных бутадионом

УДК 615.27:616.3-002.44 DOI 10.21685/2072-3032-2018-2-2

О. П. Ерохина, А. В. Лапштаева

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИУЛЬЦЕРОГЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ КОМБИНИРОВАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ МИЗОПРОСТОЛА С МЕКСИДОЛОМ ПРИ ЯЗВЕННЫХ ПОРАЖЕНИЯХ, ВЫЗВАННЫХ БУТАДИОНОМ

Аннотация.

Актуальность и цели. Изучено влияние комбинации мизопростола и мек-сидола на показатели перекисного окисления липидов при моделировании язв бутадионом в дозе 200 мг/кг.

Материалы и методы. Проведены эксперименты на белых нелинейных крысах (5 серий, в каждой серии 8 крыс). Первую серию составили интактные крысы, вторую серию (контроль) - крысы, получающие внутрибрюшинно бутадион в дозе 200 мг/кг, в третьей, четвертой и пятой сериях животные с профилактической целью дополнительно получали мизопростол в дозах 0,045 мг/кг (1 % от LD50), 0,09 мг/кг (2 % от LD50), 0,225 мг/кг (5 % от LD50) в течение 5 дней. Определяли показатели: аланинаминотрансферазу, ас-партатаминотрансферазу, лактатдегидрогеназу, малоновый диальдегид при спонтанном и железоиндукцированном окислении и активность каталазы в плазме и эритроцитах.

Результаты. Установлено, что комбинированное введение мизопростола с мексидолом повышает антиульцерогенную способность данных препаратов, чем при использовании их в виде монотерапии.

Ключевые слова: перекисное окисление липидов, малоновый диальдегид, железоиндуцированное окисление.

O. P. Erokhina, A. V. Lapshtaeva

AN EXPERIMENTAL STUDY OF ANTIULCEROGENIC EFFECTIVENESS OF THE COMBINED USE OF MISOPROSTOL WITH MEXIDOL IN ULCERATIVE LESIONS CAUSED BY PHENYLBUTAZONE

Abstract.

Background. The aim of the investigation was to study the effect of misoprostol incombination with mexidol on the indices of lipid peroxidation in the simulation of ulcers by phenylbutazone in a dose of 200 mg/kg.

Material and methods. Conducted 5 series of experiments on white rats, in each series for 8 rats. The 1th series of intact animals. 2th series (control) amounted to animals who received phenylbutazone in a dose of 200 mg/kg of intraperitoneal. 3th, 4 th and 5th series additionally prophylactically animals received misoprostol in the dose 0,045 mg/kg (1 % of LD50), 0,09 mg/kg (2 % of LD50), 0,225 mg/kg (5 %

© 2018 Ерохина О. П., Лапштаева А. В. Данная статья доступна по условиям всемирной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая дает разрешение на неограниченное использование, копирование на любые носители при условии указания авторства, источника и ссылки на лицензию Creative Commons, а также изменений, если таковые имеют место.

of LD50) for 5 days. On day 6 was carried out the slaughter of animals. Determined indicators: AlT, AsT, LDG, the level of malondialdehyde in spontaneous (MDA) and iron induced (Fe-MDA) oxidation and catalase activity in plasma and erythro-cytes.

Results and discussion. It is established that the combined introduction of misoprostol with mexidol increases antiulcerogenic the ability of these drugs when used as mootherapy.

Key words: lipid peroxidation, malondialdehyde, and iron induced oxidation.

Введение

В настоящее время в практике лечения больных, страдающих заболеваниями опорно-двигательного аппарата, широко используются нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) [1]. Многие пациенты часто принимают НПВП без назначения врача. Но, к сожалению, клинические достоинства НПВП ограничены большим риском возникновения серьезных осложнений, одним из которых является НПВП-индуцированная гастропатия [2, 4]. Эта патология связана с системным действием НПВП и развивается независимо от способа введения препаратов (внутрь, в виде суппозиториев или парентерально) и проявляется видимым повреждением слизистой оболочки верхних отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) с формированием эрозий и язв, а также угрожающих жизни осложнений - кровотечений, перфораций и нарушений проходимости ЖКТ [3]. Среди больных, регулярно принимающих НПВП, подобные побочные эффекты возникают в 20-40 % случаев [5]. Учитывая данные об антиульцерогенной активности препаратов с анти-оксидантным типом действия, считаем целесообразным исследование возможности повышения противоязвенной эффективности гастропротективных препаратов методом их комбинации с мексидолом в качестве возможного метода лечения и профилактики НПВП-гастропатий. Поэтому целью нашего исследования явилось изучение влияния мизопростола в комбинации с мек-сидолом на показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ) при моделировании язв бутадионом в дозе 200 мг/кг.

Материалы и методы исследования

В ходе работы были проведены эксперименты на белых нелинейных крысах (5 серий, в каждой серии 8 крыс). Масса крыс 160-190 г. Первую серию составили интактные крысы, вторую серию (контроль) - крысы, получавшие внутрибрюшинно бутадион в дозе 200 мг/кг, в третьей, четвертой и пятой сериях животные с профилактической целью дополнительно получали мизопростол в дозах 0,045 мг/кг (1 % от LD50), 0,09 мг/кг (2 % от LD50), 0,225 мг/кг (5 % от LD50) в течение 5 дней. Забой животных осуществляли гильотинным методом после внутрибрюшинного введения 100 мг/кг тиопен-тала натрия на шестой день. Определяли концентрацию в крови аланинами-нотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), лактатдегидрогена-зы (ЛДГ). Показатели процессов перекисного окисления оценивали по уровню малонового диальдегида (МДА) при спонтанном и железоиндукцирован-ном окислении (Fe-МДА), а также по активности каталазы в плазме и эритроцитах.

Результаты и обсуждение

При введении бутадиона у всех крыс определялось поражение желудка, у 73 % из них наблюдались признаки внутрижелудочного кровотечения. Отмечалось истончение слизистой оболочки желудка, она становилась рыхлой. Общее количество язв в желудке составляло 15,7 ± 1,5 на одно животное, из них 8,6 ± 0,7 были глубокими. Соотношение глубоких язв к общему количеству язвенных дефектов в желудке составило 78,8 ± 2,7 %, к общей площади -81,2 ± 1,3 %. Общая площадь язв составила 18,1 ± 4,6 мм2, площадь глубоких язв - 11,7 ± 3,4 мм2, т.е. 77 % от общей площади язвенных дефектов. Слизистая оболочка кишечника крыс контрольной группы была подвержена язвенному эффекту бутадиона у всех животных группы. Образование язв было в основном в дистальном отделе тонкого кишечника и в толстом кишечнике. В тонкой кишке у 59 % крыс выявлена перфорация кишечной стенки. Стенки кишечника были тонкими, а петли кишечника спаяны между собой.

ЬБ50 мизопростола составила 9 мг/кг с доверительной границей от 6,92 до 10,8 мг/кг. В эксперименте использовались, с учетом межвидового переноса, следующие дозы препарата: 1 % от ЬБ50 (0,045 мг/кг), 2 % от ЬБ50 (0,09 мг/кг) и 5 % от ЬБ50 (0,225 мг/кг).

Мизопростол сильно ограничивал повреждение желудка при введении бутадиона. Так, мизопростол в дозе 1 % от ЬБ50 ограничивал процесс уль-церогенеза в желудке у 20 % животных, в дозе 2 % от ЬБ50 - у 10 %, в дозе 5 % от ЬБ50 - у 70 % крыс (р < 0,05 по х2). Мизопростол в дозе 1 % от ЬБ50 не изменял общую площадь язв, а в дозе 2 и 5 % от ЛД 50 достоверно ее уменьшал на 82 % (р < 0,05) и 93 % (р < 0,05) соответственно. Введение мизопростола предотвращало у многих животных истончение стенки тонкого и толстого кишечника. Так, мизопростол в дозе 1, 2 и 5 % от ЬБ50 уменьшил количество крыс с язвами в тонкой и толстой кишке на 40 и 10 % (р < 0,05 по х2), 60 и 50 % (р < 0,05 по х2), 70 и 50 % (р < 0,05 по х2) соответственно.

При применении мексидола язвы в желудке были у крыс всех серий, у некоторых обнаружены признаки внутрижелудочного кровотечения, но при увеличения дозы мексидола количество крыс с кровотечением уменьшалось. Так, при введении мексидола в дозе 1, 2 и 5 от ЬБ50 общее число язв уменьшилось до 5,7 ± 0,3 (р < 0,005), 2,8 ± 0,3 (р < 0,001) и 3,4 ± 0,4 (р < 0,001), их площадь до 2,2 ± 0,3 мм2 (р < 0,05), 0,33 ± 0,5 мм2 (р < 0,01) и 0,2 ± 0,2 мм2 (р < 0,01) соответственно.

Изучение комбинации мексидола с мизопростолом дало возможность повысить антиязвенную эффективность этих препаратов на данной модели ульцерогенеза, полностью остановить повреждение мембранозной части желудка, сохранить целостность складок слизистой оболочки и эластичность мышечной части желудка. Так, при комбинированном применении мексидола с мизопростолом язвообразование угнеталось в желудке у 84 % (р < 0,05 по х2) крыс, кровотечения не было ни у одного из животных (р < 0,05 по х 2). Тогда как мизопростол в виде монотерапии в соответствующей дозе ограничивал процесс образования язв в желудке у 21 % крыс, а кровотечения наблюдались в группе с применением монотерапиеи мизопростолом у 19 % крыс.

При комбинированном использовании мизопростола и мексидола достоверно уменьшалось количество поверхностных язв и их площадь в желудке. Общее число язв и их площадь снизилось на 93 и 97 % по сравнению с контролем (р < 0,001) и на 87 и 93 % по сравнению с серией с применением мизопростола в дозе 2 % от LD50 в виде монотерапии (р < 0,001). Таким образом, комбинированное введение мизопростола и мексидола усиливает антиязвенный эффект препаратов.

Комбинированное применение мизопростола и мексидола уменьшило общее число язв в тонкой кишке по сравнению с монотерапией мизопросто-лом на 85 % (р < 0,05), а их площадь - на 76 % (р < 0,005).

В толстой кишке при введении комбинации мексидола с мизопросто-лом площадь язв уменьшилась на 92 % (р < 0,05 по %2) по сравнению с монотерапией мизопростолом. Таким образом, комбинированное введение мизо-простола с мексидолом усиливает антиульцерогенную способность противоязвенных препаратов.

В данном эксперименте курсовое применение бутадиона вызывало резкое снижение резерва липидов для перекисного окисления (РЛПО) в плазме, эритроцитах. В контрольной группе обнаружен рост активности АЛТ, АСТ, ЛДГ по сравнению с интактными крысами.

Мизопростол в изученных дозах снизил активность процессов ПОЛ в плазме и эритроцитах по сравнению с контрольной группой (р < 0,05). Активность каталазы в эритроцитах снижалась по сравнению с данными серии с использованием мизопростола в дозе 2 % от LD50 (р < 0,005), а активность супероксиддисмутазы (СОД) уменьшилась по сравнению с данными контрольной серии в 5 раз (р < 0,01).

Использование мексидола в дозе 1 % от LD50 уменьшило содержание МДА и Fe-МДА в плазме крови (р < 0,05). РЛПО во всех дозах был выше контрольного уровня и соответствовал данным интактных крыс.

При комбинированном введении мизопростола и мексидола содержание МДА в плазме крови составило 17,3 ± 1,2 ммоль/л, что достоверно не отличается от данных интактного и контрольного уровней. Уровень Fe-МДА в плазме составил 32,6 ± 4,15 ммоль/л, что достоверно выше данных контроля (р < 0,05). РЛПО плазмы снижался до 1,2 ± 0,2 (р < 0,05). Активность катала-зы в плазме не отличалась от данных интактной группы и составила 0,21 ± 0,01 мккат/(с-л). В эритроцитах содержание МДА снижалось по сравнению с контрольной группой (р < 0,05). Уровень активности СОД в эритроцитах соответствовал интактному уровню и составил 0,32 ± 0,06 у.е.

Рост ульцерогенных эффектов при комбинировании мизопростола с мексидолом подтверждается и гистологическим исследованием. На фоне введения бутадиона у крыс контрольной группы на слизистой оболочке желудка, отдельных частях тонкого и толстого кишечника крыс были язвы округлой формы с нависающим краями. В дне язв видна слизь и фибрин, некротический детрит, густая лимфолейкоцитарная инфильтрация. Под тканевым детритом - зона полной деструкции коллагеновых волокон с макро-фагальной реакцией. Около мышечного слоя - полоса молодой грануляционной ткани. Инфильтрация проникла глубже в подслизистую оболочку по ходу отечной соединительной ткани, расслаивая ее на отдельные части, вдоль сосудистых сплетений проникала в наружный продольный, средний циркуляр-

ный и внутренний слои мышечной оболочки желудка. Глубокая воспалительная инфильтрация серозной, мышечной и подслизистой оболочек стенки желудка говорит о перфорации стенки желудка. Похожие изменения видны в стенках кишечника.

При введении мексидола в изученных дозах снизилось повреждающее действие бутадиона. Видны очаговые некробиотические и некротические изменения в клетках поверхностного слоя слизистой с десквамацией цилиндрического эпителия, инфильтрацией лимфоцитоподобными клетками, отеком слизистой и подслизистой оболочек стенки желудка, что говорит о поверхностном гастрите по сравнению с язвенным и эрозивным гастритом контрольных крыс. В тонкой и толстой кишке были признаки язвенного энтерита и колита с выраженными гиперпластическими явлениями в лимфоидной ткани толстой кишки, что является результатом специфической защитной реакции в ответ на антигенную стимуляцию организма крыс.

Использование мизопростола в изученных дозах улучшило морфологическую картину. Приблизилось к норме состояние слизистой оболочки желудка по сравнению с контролем, но остался отек в подслизистой основе, что подтверждает наличие нарушения кровообращения. В тонкой кишке сохранена общая структура оболочек, но наблюдаются стандартные изменения в слизистой оболочке в виде очаговых дистрофических, некробиотических и некротических изменений. Аналогичные изменения видны и в толстой кишке с отеком и расслоением стромы стенки толстой кишки.

При комбинированном введении мизопростола с мексидолом по сравнению с контролем обнаружено отсутствие воспалительной инфильтрации, сохранение эпителия в слизистой желудка и тонкого кишечника. В толстой кишке - явные деструктивные изменения в поверхностном слое эпителия. Процессы нарушения кровообращения обнаружены в подслизистом слое желудка и толстого кишечника.

Таким образом, при комбинированном использовании мизопростола с мексидолом обнаружен гастропротективный и энтеропротективный эффекты, которые сильнее выражены, чем при монотерапии данными препаратами.

Заключение

1. Изученная комбинация мизопростола с мексидолом в дозах 2 % от LD50 повышает гастро- и энтеропротекторный эффекты мизопростола при поражении желудка, тонкого и толстого кишечника, вызванном бутадио-ном, что проявляется в ограничении числа крыс с язвами, отсутствием крыс с кровотечением в желудке, перфорацией в кишечнике, в уменьшении количества и площади язв на слизистой оболочке желудка, тонкого и толстого кишечника.

2. Комбинация мизопростола с мексидолом (в дозах 2 % от LD50) при моделировании язв бутадионом показывает лучший гастропротективный эффект, чем мизопростол (2 % от LD50), что подтверждается уменьшением частоты образования язв и кровотечений в желудке, а также снижением площади язвенных дефектов в тонком кишечнике.

3. Применение мизопростола в комбинации с мексидолом на фоне поражения желудочно-кишечного тракта в виде язвообразования, индуцированного бутадионом, позволило усилить антиоксидантную защиту желудка, что подтверждается результатами эксперимента.

Библиографический список

1. Маев, И. В. Терапия гастропатии, индуцированной приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, у лиц пожилого возраста / И. В. Маев, Е. Г. Лебедева // Справочник поликлинического врача. - 2011. - № 3. - С. 26-31.

2. Пахомова, И. Г. Поражения верхних отделов желудочно-кишечного тракта, ассоциированные с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов / И. Г. Пахомова, Л. Н. Белоусова // Эффективная фармакотерапия. Неврология. -2014. - № 5. - С. 48.

3. Пахомова, И. Г. Новые возможности в минимизации риска НПВП-индуцированных гастропатий / И. Г. Пахомова // РМЖ. - 2014. - № 10. - С. 772.

4. Трухан, Д. И. Выбор нестероидного противовоспалительного препарата с позиций профилактики НПВП-гастропатий и лекарственной безопасности / Д. И. Трухан // Consilium Medicum. - 2014. - № 8. - С. 14-19.

5. Поражения органов пищеварения, индуцированные приемом нестероидных противовоспалительных препаратов / под общ. ред. А. В. Шаброва, Ю. П. Успенского. - СПб. : ИнформМед, 2013. - С. 284.

References

1. Maev I. V., Lebedeva E. G. Spravochnikpoliklinicheskogo vracha [A reference book of an outpatient clinic's doctor]. 2011, no. 3, pp. 26-31.

2. Pakhomova I. G., Belousova L. N. Effektivnaya farmakoterapiya. Nevrologiya [Effective pharmacotherapy. Neurology]. 2014, no. 5, p. 48.

3. Pakhomova I. G. Novye vozmozhnosti v minimizatsii riska NPVP-indutsirovannykh gas-tropatiy [New opportunities in minimization of NPVP-evoked gastropathy risks]. Russian Medical Journal. 2014, no. 10, p. 772.

4. Trukhan D. I. Consilium Medicum. 2014, no. 8, pp. 14-19.

5. Porazheniya organov pishchevareniya, indutsirovannye priemom nesteroidnykh pro-tivovospalitel'nykh preparatov [Digestive organ lesions evoked by taking nonsteroidal anti-inflammatory drugs]. Under the general editorship of A. V. Shabrov, Yu. P. Uspen-skiy. Saint-Petersburg: InformMed, 2013, p. 284.

Ерохина Ольга Петровна старший преподаватель, кафедра иммунологии, микробиологии и вирусологии, Национальный исследовательский Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева

E-mail: grishkinao@mail.ru

Лапштаева Анна Васильевна ассистент, кафедра иммунологии, микробиологии и вирусологии, Национальный исследовательский Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева

E-mail: av_lapshtaeva@mail.ru

Erokhina Ol'ga Petrovna Senior lecturer, sub-department of immunology, microbiology and virology, National Research Ogarev Mordovia State University

Lapshtaeva Anna Vasil'evna Assistant, sub-department of immunology, microbiology and virology, National Research Ogarev Mordovia State University

УДК 615.27:616.3-002.44 Ерохина, О. П.

Экспериментальное исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения мизопростола с мексидолом при язвенных поражениях, вызванных бутадионом / О. П. Ерохина, А. В. Лапшта-ева // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2018. - № 2 (46). - С. 12-18. - БОТ 10.21685/2072-3032-2018-2-2.