СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ УСИЛЕНИЯ ТРОМБОЦИТАРНЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЯХ ПИЩЕВАРЕНИЯ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ
METHOD FOR PROPHYLACTICS OF THROMBOCYTE DISTURBANCES INCREASE IN CASE OF FUNCTIONAL DIGESTION DISTURBANCES IN NEONATAL CALVES

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гематологии.
Аналогов предлагаемого способа нормализации тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения не существует.
В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются полизон - фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(S-оксо-S-амино)-масляной кислоты (Овчинников А. и др. Полизон - стимулятор роста // Птицеводство, 2006. - №12. - с.14-15) и крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот, оказывающий эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышая выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).
Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из полизона и крезацина, не применялся у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения с целью нормализации тромбоцитарного гемостаза (агрегации тромбоцитов (AT) с АДФ, коллагеном, тромбином, ристомицином, перекисью водорода, адреналина и сочетаниями индукторов - АДФ+адреналин, АДФ+коллаген, адреналин+коллаген и внутрисосудистой активности тромбоцитов (ВАТ)).
Целью изобретения является повышение эффективности коррекции имеющихся нарушений тромбоцитарного гемостаза и профилактики их усиления у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для профилактики усиления тромбоцитарных нарушений и коррекции уже имеющихся новорожденным телятам с функциональными нарушениями пищеварения в течение 3 суток выпаивают полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг.
Способ позволяет нормализовать тромбоцитарный гемостаз у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения в течение 3 суток, переводя его на уровень, характерный для здоровых новорожденных телят. При соблюдении санитарных норм содержания и кормления телят в последующем возможно поддержание тромбоцитарного гемостаза в оптимальном режиме функционирования, что позволит исключить у них риск тромботических осложнений, задержку роста и развития молодняка, оздоровить стадо и в последующем получать от них здоровое потомство.
Заявляемый способ осуществляется следующим способом.
Взятие крови производят в утренние часы. Берут 9 мл крови из вены через толстую иглу самотеком в пробирку с цитратом натрия в соотношении 9:1 для оценки агрегации тромбоцитов. Сразу же определяется количество тромбоцитов в венозной крови.
Оценка AT осуществляется следующим способом (А.С.Шитикова. В кн.: Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н.Петрищева, Л.П.Папаян. СПб.: 1999. С.49-52).
9
Кровь забирают с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения богатой тромбоцитами плазмы (БТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БеТП). БТП стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления исходной БТП аутологичным образцом БеТП (до 200·10/л.). Концентрация кровяных пластинок в исходной БТП подсчитывается в камере Горяева (в 50 больших квадратах). Объемы смешиваемых БТП и БеТП определяют по формуле:
,
БеТП
V - объем бедной тромбоцитами плазмы,
БТП
V - объем богатой тромбоцитами плазмы,
N - счетная концентрация тромбоцитов в исходной БТП (клеток/мкл).
-4
-6
Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят для каждого индуктора 0,02 мл плазмы и разными пипетками по 0,02 мл р-ра индуктора. В качестве агонистов применяется АДФ (0,5×10М), коллаген (разведение основной суспензии 1:2), тромбин (0,125 ед/мл), адреналин (0,5×10М) и сочетания индукторов - АДФ+адреналин, АДФ+коллаген и адреналин+коллаген с тех же концентрациях. Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами и включают секундомер. Смесь перемешивают так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см.
Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов к стеклу секундомер отключают, фиксируя время агрегации тромбоцитов.
Реакцию повторяют 2-3 раза с каждым индуктором, находя среднее арифметическое значение.
Оценка ВАТ осуществляется следующим способом (Шитикова А.С. и соавт. Метод определения внутрисосудистой активности тромбоцитов и его значение в клинической практике. // Клиническая лабораторная диагностика, 1997, №2. - С.23-35). Из иглы, введенной в вену, сливают 2-3 мл крови на вату и следующие 2 мл наливают в силиконированную центрифужную пробирку с 8 мл раствора 0,125% глутаральдегида. Полученную кровь сразу же центрифугируют 6 мин при 1000 об/мин. В случае неполного осаждения эритроцитов (супернатант розового цвета) отбирают 2 мл надосадочной жидкости в другую пробирку и центрифугируют в том же режиме в течение 1 минуты. Супернатант разводят раствором глутаральдегида в четыре раза (0,1 мл + 0,3 мл раствора), перемешивают пипеткой 5 раз и заполняют камеру Горяева, которую помещают на 20 мин в увлажненную чашку Петри.
9
9
6
9
2
6
3
9
С целью определения абсолютного содержания тромбоцитов в 10/л крови в заполненной камере Горяева в пяти больших квадратах подсчитывают число всех единичных кровяных пластинок вне зависимости от их формы. Полученную величину для вычисления содержания тромбоцитов в 10/л крови нужно умножить на 5×4×10×5×10=1×10, где первые две цифры - поправки на произведенные в ходе исследования разведения крови, вторые две цифры - поправки, связанные с высотой камеры Горяева (0,1 мм) и с площадью, на которой подсчитывались кровяные пластинки (5 больших квадратов = 1/5 мм), 10 - коэффициент пересчета 1 мм в 1 л. Определив абсолютное содержание тромбоцитов в исследуемой крови, переводят относительные величины отдельных форм тромбоцитов (в %) в абсолютное их содержание в 10/л крови.
В этом же препарате подсчитывают число агрегатов разного размера (т.е. содержащих по 2, 3, 4, 5 и т.д. кровяных пластинок), приходящихся на 500 свободных тромбоцитов. Результат оценивают по распределению агрегатов разного размера, приходящихся на 100 свободных тромбоцитов. Результаты суммируются в виде двух величин: 1) числа агрегатов малого размера, содержащих по 2-3 тромбоцита, и 2) числа агрегатов среднего и большого размера, содержащих по 4 и более тромбоцитов. Изменение этих величин в патологических условиях более наглядно выявляет повышение процесса внутрисосудистой активации кровяных пластинок.
Оценка степени агрегации осуществляется также и по относительному числу всех тромбоцитов, вовлеченных в агрегационную реакцию. Последнее может быть выявлено по процентному отношению числа агрегировавших тромбоцитов к общему их числу в препарате (т.е. к сумме свободно лежащих клеток и вовлеченных в агрегацию) по формуле:
,
где х, у, z и т.д. - число агрегатов соответствующего размера, приходящееся на 500 свободных тромбоцитов. Эта формула не может быть применена в том случае, когда в препарате имеются необратимые, оптически гомогенные агрегаты или настолько большие, что в них невозможно подсчитать число клеток. В этом случае ограничиваются данными распределения агрегатов разного размера.
После установления у новорожденного теленка с функциональными нарушениями пищеварения начальных признаков тромбоцитопатии в течение 3 суток выпаивают полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг.
2
2
Пример. Новорожденный теленок №123, 4 сутки жизни с функциональными нарушениями пищеварения 1 день обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой агрегационной активности тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 35,0 с., коллаген 28,0 с., тромбин 36,0 с., НО 37,0 с., адреналин 78,0 с., АДФ+адреналин 28,0 с., АДФ+коллаген 24,2 с., адреналин+коллаген 23,0 с.) и внутрисосудистой активности тромбоцитов (дискоциты 70%, дискоэхиноциты 16%, сфероциты 6%, сфероэхиноциты 6%, биополярные формы 2%), что указывало на начало развития активации тромбоцитов.
2
2
Теленку в течение 3 суток выпаивали полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг. Это позволило через 3 суток полностью профилактировать усиление тромбоцитарных нарушений и полностью купировать тромбоцитопатию, нормализовав агрегационную активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 43,0 с., коллаген 36,0 с., тромбин 56,0 с., НO 50,0 с., адреналин 102,0 с., АДФ+адреналин 37,0 с., АДФ+коллаген 32,0 с., адреналин+коллаген 30,0 с.) и внутрисосудистую активность тромбоцитов (дискоциты 82%, диско-эхиноциты 10%, сфероциты 3%, сферо-эхиноциты 4%, биополярные формы 1%), исключив риск развития тромботических нарушений.
В дальнейшем данного теленка было рекомендовано содержать на рациональном режиме питания, что профилактировало рецидив функциональных нарушений пищеварения и риск повторного возникновения тромбоцитарных нарушений.
Способ позволяет нормализовать тромбоцитарный гемостаз у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения в течение короткого периода лечения, переводя его на уровень, характерный для здоровых телят. При соблюдении в последующем режима рационального питания возможно исключить рецедивирование функциональных нарушений пищеварения, что обеспечит поддержание первичного гемостаза в оптимальном режиме функционирования и позволит существенно снизить риск тромботических осложнений, способствуя нормальному росту и развитию телят.