ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МУКОПОЛИСАХАРИДОЗА I ТИПА

1. Полинуклеотид, содержащий:
(a) левый (5´) лентивирусный длинный концевой повтор (LTR);
(b) сигнал упаковки Psi (ψ);
(c) ретровирусный элемент экспорта;
(d) центральный полипуриновый тракт/ДНК-FLAP (cPPT/FLAP);
(e) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид альфа-L-идуронидазу (IDUA); и
(f) правый (3´) лентивирусный LTR.
2. Полинуклеотид по п. 1, где лентивирус выбран из группы, состоящей из: ВИЧ (вируса иммунодефицита человека; включая ВИЧ 1 типа и ВИЧ 2 типа); вируса Висна-Маеди (ВВМ); вируса артрита-энцефалита козы (ВАЭК); вируса инфекционной анемии лошади (ВИАЛ); вируса иммунодефицита кошки (ВИК); бычьего вируса иммунодефицита (БВИ) и вируса иммунодефицита обезьяны (ВИО).
3. Полинуклеотид по п. 1 или 2, где лентивирус представляет собой ВИЧ-1 или ВИЧ-2.
4. Полинуклеотид по любому из пп. 1-3, где лентивирус представляет собой ВИЧ-1.
5. Полинуклеотид по любому из пп. 1-4, где промотор 5´ LTR замещен на гетерологичный промотор, выбранный из группы, состоящей из: промотора цитомегаловируса (ЦМВ), промотора вируса саркомы Рауса (ВСР) и промотора вируса обезьян 40 (ВО40).
6. Полинуклеотид по любому из пп. 1-5, где 3´ LTR содержит одну или более модификаций.
7. Полинуклеотид по любому из пп. 1-6, где 3´ LTR содержит одну или более делеций, предотвращающих вирусную транскрипцию после первого цикла репликации вируса.
8. Полинуклеотид по любому из пп. 1-6, где 3´ LTR содержит делецию TATA-бокса и сайтов связывания транскрипционных факторов Sp1 и NF-κB в U3-участке 3´ LTR.
9. Полинуклеотид по любому из пп. 1-6, где 3´ LTR представляет собой самоинактивирующийся (SIN) LTR.
10. Полинуклеотид по любому из пп. 1-9, где промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA, выбран из группы, состоящей из: промотора субъединицы интегрина альфа M (ITGAM; CD11b), промотора CD68, промотора хемокинового рецептора 1, содержащего мотив C-X3-C (CX3CR1), промотора связывающей ионизированный кальций адапторной молекулы 1 (IBA1), промотора трансмембранного белка 119 (TMEM119), промотора spalt-подобного траснкрипционного фактора 1 (SALL1), промотора сопряженного с G-белком рецептора адгезии E1 (F4/80), энхансера миелопролиферативного вируса саркомы, промотора с делецией участка отрицательного контроля с замещенным сайтом связывания праймера dl587rev (MND) и их транскрипционно активных фрагментов.
11. Полинуклеотид по любому из пп. 1-9, где промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA, содержит промотор фактора элонгации 1 альфа (EF1α) или его транскрипционно активный фрагмент.
12. Полинуклеотид по любому из пп. 1-9, где промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA, представляет собой короткий промотор EF1α.
13. Полинуклеотид по любому из пп. 1-9, где промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA, представляет собой длинный промотор EF1α.
14. Полинуклеотид по любому из пп. 1-13, где полинуклеотид, кодирующий полипептид IDUA, представляет собой кДНК.
15. Полинуклеотид по любому из пп. 1-14, где полинуклеотид, кодирующий полипептид IDUA, является кодон-оптимизированным для экспрессии.
16. Полинуклеотид, содержащий:
(a) левый (5´) LTR ВИЧ-1;
(b) сигнал упаковки Psi (ψ);
(c) ретровирусный элемент экспорта RRE;
(d) cPPT/FLAP;
(e) промотор MND или промотор EF1α, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA; и
(f) правый (3´) LTR ВИЧ-1.
17. Полинуклеотид, содержащий:
(a) левый (5´) гибридный LTR ВИЧ-1 c промотором ЦМВ;
(b) сигнал упаковки Psi (ψ);
(c) ретровирусный элемент экспорта RRE;
(d) cPPT/FLAP;
(e) промотор MND или промотор EF1α, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид IDUA; и
(f) правый (3´) SIN LTR ВИЧ-1.
18. Полинуклеотид по любому из пп. 1-17, дополнительно содержащий сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста или сигнал полиаденилирования кроличьего β-глобина.
19. Клетка млекопитающего, трансдуцированная лентивирусным вектором, содержащим полинуклеотид по любому из пп. 1-18.
20. Клетка млекопитающего по п. 19, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой гемопоэтическую клетку.
+
21. Клетка млекопитающего по п. 19 или 20, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой CD34 клетку.
22. Клетка млекопитающего по любому из пп. 19-21, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой стволовую клетку или прогениторную клетку.
23. Клетка-продуцент, содержащая: первый полинуклеотид, кодирующий gag, второй полинуклеотид, кодирующий pol, третий полинуклеотид, кодирующий env, и полинуклеотид по любому из пп. 1-18.
24. Лентивирусный вектор, продуцированный клеткой-продуцентом по п. 23.
25. Композиция, содержащая лентивирусный вектор, который содержит полинуклеотид по любому из пп. 1-18, или клетку млекопитающего по любому из пп. 19-22.
26. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и лентивирусный вектор, который содержит полинуклеотид по любому из пп. 1-18, или клетку млекопитающего по любому из пп. 19-22.
27. Способ лечения МПС I, включающий введение субъекту лентивирусного вектора, содержащего полинуклеотид по любому из пп. 1-18; клетки, трансдуцированной указанным лентивирусным вектором, содержащим полинуклеотид по любому из пп. 1-18; или клетки млекопитающего по любому из пп. 19-22.
28. Способ лечения МПС I, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п. 26.
29. Способ снижения у субъекта по меньшей мере одного симптома, связанного с МПС I, включающий введение указанному субъекту лентивирусного вектора, содержащего полинуклеотид по любому из пп. 1-18; клетки, трансдуцированной лентивирусным вектором, содержащим полинуклеотид по любому из пп. 1-18; или клетки млекопитающего по любому из пп. 19-22.
30. Способ снижения у субъекта по меньшей мере одного симптома, связанного с МПС I, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции по п. 26.
31. Способ по п. 29 или 30, отличающийся тем, что МПС I представляет собой синдром Гурлер (МПС I-Г), синдром Шейе-Гурлер (МПС I-Ш/Г) или синдром Шейе (МПС I-Ш).
32. Способ по п. 29 или 30, отличающийся тем, что МПС I представляет собой тяжелую форму МПС I или ослабленную форму МПС I.
33. Способ по п. 29 или 30, отличающийся тем, что по меньшей мере один симптом выбран из группы, состоящей из: накопления ГАГ, слепоты, потери слуха, задержки обучения и речевого развития, респираторного заболевания, сердечного заболевания, скелетного дисморфизма и снижения когнитивной функции.