СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОРИНЕБАКТЕРИЙ ПОСРЕДСТВОМ СВЕХЭКСПРЕССИИ ФЕРМЕНТОВ ПЕНТОЗОФОСФАТНОГО ПУТИ

1. Способ получения метионина с использованием коринеформной бактерии, включающий этап культивирования по меньшей мере одной коринеформной бактерии, которая получена путем генетической модификации из исходного организма таким образом, что указанная коринеформная бактерия появляет повышенное количество и/или активность по меньшей мере одного фермента пентозофосфатного пути по сравнению с исходным организмом.
2. Способ по п.1, в котором количество и/или активность по меньшей мере транскетолазы, транальдолазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы или 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышаются по сравнению с исходным организмом.
3. Способ по п.1, в котором количество и/или активность по меньшей мере транскетолазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, транскетолазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы или глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышается по сравнению с исходным организмом.
4. Способ по п.3, в котором количество и/или активность по меньшей мере транскетолазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышается по сравнению с исходным организмом.
5. Способ по одному из пп.1-4, в котором количество и/или активность указанного фермента (ферментов) повышают путем увеличения числа копий последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих указанные ферменты, путем повышения транскрипции и/или трансляции последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих указанные ферменты, введением мутаций в последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие указанные ферменты или их комбинацию.
6. Способ по одному из пп.1-4, в котором число копий генов увеличивают путем использования автономно реплицирующихся векторов, включающих последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих указанные ферменты, и/или путем хромосомной интеграции дополнительных копий последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих указанные ферменты, в геном исходного организма.
7. Способ по п.1, в котором активность повышается путем использования сильных промоторов.
EFTu
groES
SOD
λR
8. Способ по п.7, в котором сильный промотор выбран из группы, включающей P, P, P и P.
SOD
9. Способ по п.8, в котором используется промотор P.
SOD
10. Способ по п.7, в котором количество и/или активность транскетолазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышают по сравнению с исходным организмом путем замещения их соответствующих эндогенных промоторов сильным промотором, которым предпочтительно является промотор P.
11. Способ по п.5, в котором транскетолаза несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 293 или 327 последовательности SEQ ID No. 12, причем 6-фосфоглюконатдегидрогеназа несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 150, 209, 269, 288, 329, 330 или 353 последовательности SEQ ID No. 6.
12. Способ по п.10 или 11, в котором количество и/или активность транскетолазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышают по сравнению с исходным организмом путем замещения их соответствующих эндогенных промоторов сильным промотором, причем транскетолаза несет по меньшей мере одну мутацию в положении 293 или 327 последовательности SEQ ID No. 12, а 6-фосфоглюконатдегидрогеназа несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 150, 209, 269, 288, 329, 330 или 353 последовательности SEQ ID No. 6.
13. Способ по одному из пп.1-4, в котором коринеформная бактерия выбрана из группы, включающей виды Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium acetoglutamicum, Corynebacterium jeikeum, Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium thermoaminogenes, Corynebacterium melassecola и Corynebacterium effiziens.
14. Способ по п.13, в котором применяют штамм С.glutamicum.
15. Способ по одному из пп.1-4 и 14, в котором метионина образуется по меньшей мере примерно на 2% по меньшей мере примерно на 5% по меньшей мере примерно на 10% по меньшей мере примерно на 20%, предпочтительно по меньшей мере примерно на 30% по меньшей мере примерно на 40% по меньшей мере примерно на 50% и, более предпочтительно по меньшей мере примерно в 2 раза по меньшей мере примерно в 5 раз и по меньшей мере примерно в 10 раз больше по сравнению с исходным организмом.
16. Коринеформная бактерия, полученная путем генетической модификации из исходного организма таким образом, что указанная коринеформная бактерия проявляет повышенное количество и/или активность по меньшей мере двух ферментов пентозофосфатного пути по сравнению с исходным организмом.
17. Коринеформная бактерия по п.16, у которой количество и/или активность по меньшей мере транскетолазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, транскетолазы и 6-фосфоглюконатдетидрогеназы или глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышена по сравнению с исходным организмом.
18. Коринеформная бактерия по п.16, у которой количество и/или активность по меньшей мере транскетолазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышено по сравнению с исходным организмом.
19. Коринеформная бактерия по одному из пп.16-18, у которой количество и/или активность указанного фермента (ферментов) повышают путем увеличения числа копий последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих указанные ферменты, повышения транскрипции и/или трансляции генов, кодирующих указанные ферменты, введением мутаций в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие указанные ферменты или их комбинации.
20. Коринеформная бактерия по п.19, у которой число копий гена увеличивают путем использования автономно реплицирующихся векторов, включающих последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую указанные ферменты, и/или путем хромосомной интеграции дополнительных копий последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих указанные ферменты, в геном исходного организма.
21. Коринеформная бактерия по п.19, в которой активность повышают путем применения сильного промотора.
EFTu
groES
SOD
λR
22. Коринеформная бактерия по п.21, в которой сильный промотор выбран из группы, включающей p, P, P и P.
SOD
23. Коринеформная бактерия по п.22, в которой применяют промотор P.
SOD
24. Коринеформная бактерия по п.21, в которой количество и/или активность транскетолазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышают по сравнению с исходным организмом путем замещения их соответствующих эндогенных промоторов более сильным промотором, которым предпочтительно является промотор P.
25. Коринеформная бактерия по п.19, в которой транскетолаза несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 293 или 327 последовательности SEQ ID No. 12, и в которой 6-фосфоглюконатдегидрогеназа несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 150, 209, 269, 288, 329, 330 или 353 последовательности SEQ ID No. 6.
26. Коринеформная бактерия по п.24 и 25, у которой количество и/или активность транскетолазы и 6-фосфоглюконатдегидрогеназы повышают по сравнению с исходным организмом путем замещения их соответствующих эндогенных промоторов сильным промотором, причем транскетолаза несет по меньшей мере одну мутацию в положении, соответствующем положению 293 или 327 SEQ ID No. 12, а 6-фосфоглюконатдегидрогеназа несет по меньшей мере одну мутацию в положении 150, 209, 269, 288, 329, 330 или 353 последовательности SEQ ID No. 6.
27. Коринеформная бактерия по пп.16-18 и 20-25, которая выбрана из группы, включающей виды Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium acetoglutamicum, Corynebacterium jeikeum, Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium thermoaminogenes, Corynebacterium melassecola и Corynebacterium effiziens.
28. Коринеформная бактерия по п.27, которая представлена штаммом С.glutamicum.
29. Коринеформная бактерия по одному из пп.16-18, 20-25 и 28, в которой метионина образуется по меньшей мере примерно на 2% по меньшей мере примерно на 5% по меньшей мере примерно на 10% по меньшей мере примерно на 20%, предпочтительно по меньшей мере примерно на 30% по меньшей мере примерно на 40% по меньшей мере примерно на 50% и более предпочтительно по меньшей мере примерно в 2 раза по меньшей мере примерно в 5 раз и по меньшей мере примерно в 10 раз больше по сравнению с исходным организмом.
30. Применение коринеформной бактерии по одному из пп.16-29 для получения метионина.