СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ ОТ МАТЕРЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ ОБОСТРЕНИЕ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD OF ASSESSING INFLUENCE OF HERPES VIRUS INFECTION ON ERYTHROCYTE MEMBRANE STABILITY IN NEWBORNS OF MOTHERS SUFFERED AGGRAVATED HERPES VIRUS INFECTION IN THIRD TRIMESTER OF PREGNANCY

Цель исследования заключается в оценке действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов периферической крови новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре гестации обострение герпес-вирусной инфекции, вызывающей повышение активности перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов, что подтверждается нарастанием продуктов перекисного окисления МДА и снижением в мембранах эритроцитов скелетного белка α-спектрина.
α-Спектрин является одним из главных протеинов мембранного цитоскелета эритроцитов. Он сконцентрирован на цитозольной поверхности эритроцитарной мембраны и находится в тесной связи с β-спектрином и белком полосы 4.1 (V.T.Marchesi, 1979, 1983). В результате способности спектрина к самосборке образуются его олигомеры, которые, соединяясь, образуют конечную форму цитоскелетного белка тетрамер-спектрин (J.Palek, 1985; А.И.Воробьев, 2007). α- и β-спектриновые нити, переплетаясь, образуют основу цитоскелета эритроцита (А.И.Воробьев, 2007; M.J.Telen, R.E.Kaufman, 2004). Изменение структуры молекулы спектрина или снижение его содержания нарушают, прежде всего, устойчивость мембраны эритроцитов. В качестве прототипа взяты работы: Иванова В.П., Лукашова А.А., Полоникова А.В. (2000), отмечающих, что при гипотонии нарушается содержание основных спектриновых белков мембран эритроцитов в периферической крови, а также работу Штехмана М.И (2004), в которой автор указывает, что при гипохромной анемии под влиянием нарушения электролитного баланса в эритроцитах происходит изменение структуры мембранного белка - спектрина. В работе М.Т.Луценко и И.А.Андриевской (2009, №4, С.71-74) описываются изменения стромальных белков в дискоцитах периферической крови матери при обострении герпес-вирусной инфекции.
Однако в работе Иванова В.П., Лукашова А.А. и Полоникова А.В. нет указаний, какие именно факторы становятся причиной нарушения содержания белков цитоскелета мембран эритроцитов при гипотонии, а в работе Штехмана М.И. основной причиной изменения цитоскелета эритроцитов считается нарушение баланса электролитного состава эритроцитов. В работе М.Т.Луценко и И.А.Андриевской изменения стромальных белков описываются в эритроцитах беременной, что должно отличаться от мегалоцитов, находящихся в крови новорожденного.
В своих исследованиях мы обращаем внимание на фактор, наиболее токсично действующий на мембрану эритроцитов - перекиси жирных кислот, которые активно вырабатываются под влиянием инфекционного начала - герпес-вирусной инфекции и на изменения, происходящие не у взрослых пациентов, а в эритроцитах (мегалоцитах) новорожденных, родившихся от матерей, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции.
Помимо этого мы отмечаем нарастание в крови новорожденного МДА - продукта перекисного окисления липидов. Под влиянием обостряющейся герпес-вирусной инфекции и при нарастании перекисного окисления авторами доказано методом гель-электрофореза снижение скелетного белка α-спектрина.
Заявленный способ имеет следующие приемы:
1. Исследовали кровь у 20 беременных в третьем триместре гестации и 20 новорожденных, родившихся от этих матерей. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).
2. Содержание перекисей в периферической крови определяли по содержанию малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты (МДА) по И.Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили (1977) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).
3. В мембранах эритроцитов новорожденных методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия выявляли α-спектрин с помощью денситометрии на аппарате «Biometra» (Германия).
4. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
Исследования показали, что в случае обострения герпес-вирусной инфекции у беременной в третьем триместре гестации высокий титр антител в периферической крови отмечается как у матери, так и в периферической крови новорожденного (1:12800). При этом в периферической крови новорожденного обнаруживается накопление большого количества продуктов перекисного окисления липидов (МДА) до 1.56±0.07 мкмоль/мл (контроль - 0.4 мкмоль/мл). Изучение методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия в мембранах эритроцитов новорожденных отмечено снижение содержания α-спектрина до 5.47±0.18% (контроль - 6.46±0.47%; p<0.001).
Проведенный дискриминантный анализ показал, что дискриминантная функция (Dф) определяется следующей:
Имя выборки
Объем выборки
Количество параметров
Расстояния Махалан
Критерий Фишера, различия выборок
Вероятность различия выборок
Граничное значение дискриминантной функции
Вероятность ошибочности классиф, %
493
14
2
4.53
68.97
100.000
-15.03
1.734
00R
14
2
1.734
Dф=(-4.13×α-спектрин)+(+14.33×МДА)
Dф=(-4.131×5.47)+(+14.334×1.56);
Dф=(-22.596)+(+22.361)=-0.235;
Dф (-0.235)>граничного значения (-15.03).
Следовательно, при Dф (-0.235) > граничного значения (-15,03) отмечается снижение α-спектрина и создается угроза нарастания неустойчивости мембран эритроцитов новорожденного, что может привести к формированию внутриутробной анемии.
Литература
1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. - М: Изд. «Ньюдиамед», 2007. - 1275 с.
2. Иванов В.П, Лукашов А.А, Полоников А.В. Содержание основных белков мембран эритроцитов у больных первичной артериальной гипотонией и ее связь с наследственностью предрасположенной к сердечно-сосудистой патологии // Тер. Архив. 2000. - №9. - С.69-73.
3. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Дифференциальная диагностика устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии РАМН, 2009. - №4. - С.71-74.
4. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитурровой кислоты // Современные методы в биохимии. - Москва, 1977. - 390 с.
5. Штехман М.И. Железодефицитная анемия и беременность // Гинекология. - 2004. - Т.6. - №4. - 11 с.
6. Marchesi V.T. Functional proteins of the human red cell membrane semin // Hematol. - 1979. - Vol.16. - P.3-20.
7. Marchesi V.T. The red cell membrane skeleton recent progress // Blood. - 1983. - P.1-11.
8. Palek J. Hereditary elliptocytosis and related disordes // Clin. Hematol. - 1985. - Vol.14. - №1. - P.45-87.
th
9. Telen M.J., Kaufman R.E. The mature erythrocyte. Wintrobs Clinical Hematology. Ed. J.P.Greer, J.Forster, J.N.Lukens. // Chapter 8.11 edition. Lippincott William and Wilkins. - 2004. - P.217-247.