СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА, СОДЕРЖАЩЕГО БИОСИНТЕТИЧЕСКИЙ КЛАСТЕР, КОДИРУЮЩИЙ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННУЮ ПОЛИКЕТИД-СИНТАЗУ РАПАМИЦИНА

1. Способ получения рекомбинантного штамма, который содержит биосинтетический кластер, кодирующий генетически модифицированную поликетид-синтазу рапамицина, где метилмалонил-КоА-специфичный АТ-домен модуля 10 заменяют малонил-КоА-специфичным АТ-доменом.
2. Способ по п.1, где метилмалонил-КоА-специфичный АТ-домен модуля 10 заменяют малонил-КоА-специфичным АТ-доменом из одного из следующих кластеров: рапамицина, моненсина, FK506, эритромицина, FK520, амфотерицина, анголамицина, тилозина, «хиг», FK523, меридамицина, антаскомицина, FK525 и тсукубамицина.
3. Способ по п.2, где малонил-КоА-специфичный АТ-домен выбирают из одного из следующих кластеров: рапамицина, моненсина и FK506.
4. Способ по п.3, где АТ-домен выбирают из группы, состоящей из АТ-домена модуля 2 рапамицина, АТ-домена модуля 3 моненсина, АТ-домена модуля 6 моненсина, АТ-домена модуля 8 моненсина, АТ-домена модуля 3 FK506 и АТ-домена модуля 7 FK506.
5. Способ по п.4, где малонил-КоА-специфичный АТ-домен происходит из модуля 2 рапамицина.
6. Способ по любому из пп.1-5, где способ включает дополнительные этапы:
(а) выделение AT, подлежащего введению, как единого фрагмента ДНК с подходящими фланкирующими участками связывания рестриктаз,
(б) амплификацию и выделение районов последовательности ДНК, гомологичных фланкирующим последовательностям АТ-мишени, с использованием подходящих участков связывания рестриктаз,
(в) лигирование вместе трех фрагментов ДНК, описанных в (а) и (б), с получением в фазе с рамкой считывания последовательности левосторонней (LHS) гомологии с последующим донорным АТ-доменом с последующей правосторонней (RHS) гомологией,
(г) введение полной последовательности из (в) в вектор для введения в штамм-хозяин для получения конечной плазмиды, где упомянутая плазмида включает
(I) oriT для конъюгации,
(II) один или более маркеров устойчивости,
(III) чувствительный к температуре ориджин репликации, так что интегранты можно будет отбирать путем культивации при 37°C,
(IV) ориджин репликации Е. coli,
(д) трансформацию штамма-хозяина путем конъюгации с применением конечной плазмиды, как описано в (г) выше,
(е) отбор трансформированных клеток по устойчивости к соответствующему антибиотику,
(ж) получение первичных интегрантов путем культивации при 37°C с селекцией с помощью антибиотиков,
(з) скрининг вторичных рекомбинантов путем выращивания в отсутствие антибиотика, также при 37°C,
(и) идентификацию нужного штамма по способности продуцировать целевой продукт, и
(к) при необходимости подтверждение генетики штамма с помощью стандартных способов.