ВЕТЕРИНАРНЫЙ ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ПРЕПАРАТ
VETERINARY ANTIVIRAL DRUG

Изобретение относится к медицине, ветеринарии, фармакологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтическим препаратам, которые используются при лечении вирусных инфекций разной этиологии.
4
Известен противовирусный препарат, содержащий в качестве активного вещества морфолиний 2-(5-метил-1,2,4-триазол-3-илтио)ацетат (см. п. Украины №1988 от 22.12.86 г., опубл. 20.12.94 г., М. Кл. C07D 413/12, А61К 31/41, А61К 31/535). Торговое наименование морфолиния 2-(5-метил-1,2,4-триазол-3-илтио)ацетата - тиотриазолин.
Известный препарат хотя и проявляет противовирусную активность, однако ее величина недостаточно высока. Кроме того, увеличение дозы тиотриазолина приводит к снижению функций иммунной системы организма и снижению его резистентности.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому препарату является ветеринарный противовирусный препарат (см. п. Украины №36330 от 22.04.2008 г., опубл. 27.10.2008 г., М. Кл. C07D 249/00, A61K 31/41), содержащий в качестве активного вещества пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат.
Известный препарат проявляет противовирусную активность и характеризуется низкой токсичностью. Использование известного препарата снижает биологическую активность вируса инфекционного бронхита птицы (ВИБП), штамм H-120, и вируса энцефаломиелита птицы (ВЭМ), штамм Calnek 1143.
Пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат проявляет также и иммунностимулирующую активность (см. п. Украины №87184 от 02.08.2007 г., опубл. 25.06.2009 г., М. Кл. C07D 249/12).
Известный препарат хотя и проявляет противовирусную и иммунностимулирующую активности, однако их величина недостаточно высока.
В основу изобретения поставлена задача усовершенствования ветеринарного противовирусного препарата, в котором за счет введения новых ингредиентов и новых соотношений ингредиентов обеспечивается повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.
Поставленная задача решается тем, что в известном ветеринарном противовирусном препарате, содержащем в качестве активного вещества пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, новым, в соответствии с заявляемым изобретением, является то, что препарат дополнительно содержит сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты в массовом соотношении 1:(0,03-0,05).
Новым также является то, что в качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты препарат содержит метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.
Новым также является то, что препарат изготавливается в лекарственной форме порошка, или стерильного раствора, или мази.
Новым также является то, что при изготовлении препарата в лекарственной форме стерильного раствора препарат содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и воду очищенную при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты
0,03-1,0
Вода очищенная
Остальное
Новым также является то, что при изготовлении препарата в лекарственной форме мази препарат содержит пиперединий 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и липофильную, или жировую, или гидрофильную основу мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты
0,03-1,0
Основа мази
79,0-98,07
Между совокупностью существенных признаков заявляемого изобретения и достигаемым результатом существует следующая причинно-следственная связь.
Дополнительное введение в состав противовирусного препарата сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты в заявляемом массовом соотношении обеспечивает повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности заявляемого препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты не проявляют противовирусной и иммунностимулирующей активности, а обычно используются как консерванты в растворах лекарственных препаратов. Однако установлено, что они активируют противовирусное и иммунностимулирующее действие пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата. Поэтому заявляемый препарат, содержащий указанные ингредиенты в заявляемом соотношении, характеризуется противовирусной и иммунностимулирующей активностями, более высокими по сравнению с только пиперидинием 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетатом (прототипом).
Заявляемое соотношение ингредиентов в препарате является оптимальным и установлено экспериментально.
При снижении доли сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты ниже заявляемой снижается противовирусная и иммунностимулирующая активности препарата.
Повышение доли сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты выше заявляемой нецелесообразно, поскольку не приводит к дальнейшему повышению противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата.
В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты препарат может содержать метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.
Препарат может быть изготовлен в лекарственной форме порошка, или стерильного раствора, или мази.
При изготовлении препарата в лекарственной форме стерильного раствора он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и воду очищенную при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойно1 кислоты
0,03-1,0
Вода очищенная
Остальное
Заявляемое соотношение ингредиентов в составе стерильного раствора обеспечивает оптимальное соотношение пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата и сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты - 1:(0,03-0,05), а также оптимальное их содержание в растворе, что обеспечивает достижение заявляемого терапевтического эффекта. Причем при изготовлении заявляемого стерильного раствора не требуется дополнительное использование консервантов, поскольку сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты обладают указанными свойствами.
При изготовления препарата в лекарственной форме мази он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и липофильную, или жировую, или гидрофильную основу мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты
0,03-1,0
Основа мази
79,0-98,07
В качестве основы мази могут быть использованы, например, составы, содержащие масло растительное, глицерол, эмульгатор №1, моноглицериды дистиллированные, или ланолин, или вазелин.
Заявляемое соотношение ингредиентов в составе мази обеспечивает оптимальное соотношение пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата и сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты - 1:(0,03-0,05), а также оптимальное их содержание в составе мази, что обеспечивает достижение заявляемого терапевтического эффекта при одновременном обеспечении легкости нанесения и равномерности распределения мази на коже и слизистой оболочке.
Сущность изобретения поясняется нижеприведенными примерами практического апробирования и промышленной реализации изобретения.
Пример 1. При использовании заявляемого препарата в форме порошка активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты смешивают в заявляемом соотношении 1:(0,03-0,05). В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.
Полученный порошок фасуют по 5, 10, 30, 100 г и используют, добавляя в корм животным, исходя из соотношения 30 г на 1 тонну корма.
Порошок эффективен для лечения и профилактики вирусных заболеваний (классическая чума, африканская чума, цирковирусная инфекция, парвовирусная инфекция, грипп, везикулярная болезнь, вирусный гастроэнтерит + эшерихиоз), в условиях угрозы вспышки инфекций птицы, вызываемых РНК- и ДНК-содержащими вирусами (болезнь Марека, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, оспа, грипп, энтеровирусами водоплавающей птицы), а также эффективен для активации общей резистентности, повышения сохранности, роста и развития поголовья молодняка животных, усиления иммунного ответа на вакцины и предотвращения послеоперационных осложнений.
Пример 2. При использовании заявляемого препарата в форме стерильного раствора растворяют в очищенной воде активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты при следующем соотношении ингредиентов, масс.%
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты
0,03-1,0
Вода очищенная
Остальное
В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.
Полученный раствор разливают в ампулы по 1-10 мл, запаивают их и стерилизуют. Получают 1-20% (по содержанию пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата) стерильный раствор, предназначенный для перорального использования. Растворы стабильны к влиянию разных факторов окружающей среды. Полученные растворы используют, добавляя в воду для питья животным из расчета 1 мл 1%-го раствора на 2 литра воды для питья. Лекарственная форма предназначена для лечения и профилактики вирусных заболеваний (классическая чума, африканская чума, цирковирусная инфекция, парвовирусная инфекция, грипп, везикулярная болезнь, вирусный гастроэнтерит + эшерихиоз), в условиях угрозы вспышки инфекций птицы, вызываемых РНК- и ДНК-содержащими вирусами (болезнь Марека, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, оспа, грипп, энтеровирусами водоплавающей птицы), а также эффективна для активации общей резистентности, повышения сохранности, роста и развития поголовья молодняка животных, усиления иммунного ответа на вакцины и предотвращения послеоперационных осложнений.
Пример 3. При использовании заявляемого препарата в форме мази активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты смешивают с липофильной, или жировой, или гидрофильной основой мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:
Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат
1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты
0,03-1,0
Основа мази
79,0-98,07
В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.
В качестве основы мази могут быть использованы, например, составы, содержащие масло растительное, глицерол, эмульгатор №1, моноглицериды дистиллированные, или ланолин, или вазелин.
Полученную гомогенную 1-20% (по содержанию пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата) мазь расфасовывают в тубы и бушоны. Мазь эффективна для лечения инфекционных осложнений в послеоперационном периоде и для сопутствующей терапии раневых поражений кожных покровов животных.
Оценка противовирусной активности заявленного препарата.
Противовирусную активность заявляемого препарата определяли в отношении эталонных штаммов: штаммов вирусов вазекулярного стоматита, чумы собак и инфекционного энцефаломиелита кур. Проявление активности препарата в отношении эталонных штаммов означает и проявление активности в отношении других штаммов.
В таблице 1 приведены результаты определения противовирусной активности заявляемого препарата при его использовании одновременно с инфицированном клеточной культуры HEP-2 вирусом вазекулярного стоматита (ВВС) и действием в течение всего периода репродукции вируса (в часах) в сравнении с аналогичными испытаниями препарата по прототипу и тиотриазолина.
Таблица 1
Часы
ВВС, lg
BBC + препарат по прототипу, lg
Δ lg
BBC + тиотриазолин, lg
Δ lg
BBC + заявляемый препарат, lg
Δ lg
24
2,5
1,5
1,0
1,0
1,5
1,7
0,8
31
3,5
2,0
1,5
1,0
2,5
2,2
1,3
48
5,0
3,5
1,5
4,0
1,0
3,3
1,7
72
>10
3,5
6,5
6,5
3,5
3,2
6,8
120
>10
>10
0
>10
0
0
>10
Из таблицы 1 видно, что заявляемый препарат снижает инфекционную активность вируса вазекулярного стоматита во всех временных диапазонах по сравнению с препаратом по прототипу и тиотриазолином при аналогичном режиме их использования, что подтверждает более высокую противовирусную активность заявляемого препарата.
Оценка иммуностимулирующей активности заявленного препарата.
Оценку иммуностимулирующей активности заявляемого препарата осуществляли в сравнении с препаратом по прототипу (пиперидинием 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетатом) и аналогом (тиотриазолином) путем исследования влияния препаратов на показатели крови в разные временные режимы отбора крови (через каждые три часа после введения исследуемых препаратов). Результаты исследований приведены в таблице 2.
Таблица 2
Показатели крови
Период отбора крови
Исследуемый препарат
Заявляемый препарат
Пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат (прототип)
Тиотриазолин (аналог)
1
2
3
4
5
Альбумин, г/л
I
27,7
26,7
26,0
II
28,3
26,3
27,6
III
29,3
28,3
29,0
Общий белок, г/л
I
53,0
49,0
53,6
II
60,7
56,7
59,3
III
54,7
54,0
54,3
Щелочн. фосф-за, д/мл
I
707,3
551,0
705,0
II
640,5
650,7
289,3
III
704,6
680,3
703,67
АлАТ, ед/л
I
74,5
71,6
53,6
II
80,3
79,7
41,3
III
62,6
73,67
51,7
ЛДГ, ед/л
I
1215,5
1050,3
1212,3
II
898,4
895,3
822,3
III
693,7
534,0
690,3
АсАТ, ед/л
I
52,3
51,6
44,6
II
55,4
51,7
42,0
III
57,2
56,3
45,3
ГГТП, ед/л
I
84,4
83,6
73,3
II
102,2
101,3
56,6
III
46,7
45,3
53,7
Продолжение таблицы 2
1
2
3
4
5
Креатинин, мкмоль/л
I
82,5
77,3
80,7
II
84,6
83,4
82,3
III
81,7
80,3
78,3
Мочевина, ммоль/л
I
4,25
4,13
2,76
II
3,87
3,67
2,67
III
3,56
3,43
3,23
Глюкоза, ммоль/л
I
4,88
4,6
5,26
II
6,23
6,03
6,67
III
5,4
4,7
5,27
Холестерин, ммоль/л
I
3,54
3,43
2,86
II
4,15
4,0
3,56
III
4,05
3,90
3,8
Триглицериды, ммоль/л
I
1,12
1,0
1,0
II
0,87
0,8
0,87
III
0,75
0,67
0,73
Амилаза, ед/л
I
4620,7
4617,6
3779,3
II
4887,4
4880,0
2623,6
III
4956,4
4954,0
3610,0
Билирубин общ., мкмоль/л
I
12,8
12,0
11,3
II
8,45
8,3
9,37
III
7,25
7,0
9,0
- прямой, мкмоль/л
I
3,71
3,6
3,3
II
3,45
3,0
3,3
III
3,52
3,3
3,0
- непрямой, мкмоль/л
I
8,36
8,3
8,0
II
5,54
5,3
5,3
III
4,85
3,7
5,0
Тимоловая проба, ед.
I
2,73
2,56
2,76
II
3,05
2,9
2,13
III
2,35
2,1
2,4
Фосфор, ммоль/л
I
1,32
1,19
1,31
II
1,12
1,02
0,97
III
2,03
1,90
1,94
Кальций, ммоль/л
I
2,44
2,36
2,52
II
1,56
1,45
1,21
III
1,41
1,36
1,27
Альб./глобул.
I
1,22
1,20
0,94
II
0,91
0,87
0,88
III
1,17
1,1
1,15
АсАТ/АлАТ
I
0,85
0,71
0,86
II
1,11
1,06
1,01
III
0,91
0,88
0,92
Из таблицы 2 видно, что биохимические показатели крови при введении заявляемого препарата превышают биохимические показатели крови при введении препарата по прототипу и тиотриазолина, что свидетельствует о более высокой иммуностимулирующей активности заявляемого препарата по сравнению и с прототипом, и с аналогом.
50
Кроме того, экспериментально установлено, что заявляемый лекарственный препарат имеет не только высокую противовирусную и иммуностимулирующую активности, но и не проявляет раздражающего и сенсибилизирующего действия, не токсичен в рекомендованных дозах. LD при внутрижелудочном введении лабораторным животным (белым мышам, крысам) и цыплятам составляет 12000 мг/кг.
Тесты in vitro и in vivo не обнаруживают мутагенной активности.
Представленные экспериментальные результаты показали:
заявляемый препарат обладает более высокими противовирусной и иммуностимулирующей активностями по сравнению с прототипом, что убедительно подтверждает достижение поставленной задачи.
Высокая активность заявляемого препарата является совершенно не очевидной для специалиста. Действительно, используемые для получения активной части препарата ингредиенты:
- пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат имеет значительно меньшую противовирусную и иммуностимулирующую активности;
- сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты проявляют только консервирующие свойства и не обладают противовирусным и иммуностимулирующим действием.
Заявляемый же препарат, содержащий указанные ингредиенты в заявляемом соотношении, показал активность, гораздо большую по сравнению с прототипом. Кроме того, заявляемый препарат хорошо растворяется практически во всех типах основ, используемых для изготовления лекарственных форм - стерильных растворов, мазей. Экспериментально установлено, что явно выраженное лечебное действие заявляемый препарат проявляет во всех заявленных лекарственных формах и во всех пределах заявленных значений содержания отдельных ингредиентов.
Таким образом, введение новых ингредиентов и новые соотношения ингредиентов обеспечивают повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.