Роль генов фолатного цикла и второй фазы системы биотрансформации ксенобиотиков у больных агрессивными и индолентными лимфомами

Приложение

афереза выявляется более низкое количество активированных моноцитов и более низкая продукции провоспалительных цитокинов (IL-6 и IL-8). Анализ сроков реконституции лимфоцитов и ранних исходов трансплантации ГСК в группах больных, получивших мобилизацию ГСК с использованием разных форм Г-КСФ, не выявил статистически значимых различий.

Заключение. Анализ исходов ауто-ГСК у больных лимфо-

мами с различными режимами мобилизации, а также изучение взаимосвязи исходов с особенностями субпопуляционного состава и функциональной активностью трансплантируемых клеток, возможно, позволит выявить новые предикторы исходов и обосновать новые стратегии оптимизации ТГСК, связанные с регуляцией субпопуляционного состава и функциональной активности клеток продукта афереза.

Особенности распространения полиморфизмов гена VKORC1 среди коренного населения европейской части Крайнего Севера Российской Федерации

Н.И. Белова, П.А. Лавринов, Н.А. Воробьева, А.И. Воробьева, Т.Н. Зуева ФБГУ Северный филиал Гематологического научного центра Минздравсоцразвития России; ГБОУ ВПО Северный государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России, Архангельск

Введение. Витамин K играет важную роль в механизмах поддержания нормальной активности системы гемостаза, и механизмов развития патологии, приводящей к повышению риска кровотечений и тромбозов. Наследственные дефекты генов ферментов, участвующих в превращении витамина K могут влиять не только на риск тромбозов и кровотечений, но и на формирование плаценты и плацентарного кровообращения, риск осложнений беременности. Исследования в других странах выявили наличие межпопуляционных различий в частотах встречаемости основных полиморфизмов гена VKORC1. Подобных исследований на Крайнем Севере РФ не проводили. Ввиду исторической обособленности популяции ненцев и других народов Крайнего Севера, на них нельзя экстраполировать результаты исследований, проводимых в отношении представителей других популяций.

Цель работы - выявить особенности распространения полиморфизмов гена VKORC1 среди популяции коренных жителей европейской части Крайнего Севера РФ. Задачи -определить частоту встречаемости полиморфизмов C1173T и G3730A гена VKORC1 среди популяции жителей Ненецкого автономного округа (НАО); сравнить полученные данные с распространенностью полиморфизмов C1173T и G3730A гена VKORC1 в популяции жителей Северо-Запада России.

Материалы и методы. Исследование проводили на базе лаборатории ДНК-диагностики ЦНИЛ СГМУ Было исследовано 88 коренных жителей НАО. Объектом исследования являлась геномная ДНК, полученная из лейкоцитов периферической венозной крови. Генотипирование проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью

аллельспецифичных праймеров с детекцией методом электрофореза в агарозном геле.

Результаты и обсуждение. Полиморфный аллель 1173Т гена VKORC1 обнаружен у 76,1% обследованных, а аллель 3730А - у 53,2%. Соответствующие показатели для популяции Северо-Западного региона, по данным литературы, составляют 56,5% и 61,7%. Распространенность полиморфизмов гена VKORC1 среди популяции коренных жителей европейской части Крайнего Севера РФ отличается от таковой среди жителей Северо-Западного региона РФ. Наиболее распространеным (76,1%) является аллель гена VKORC1 1173T. У людей с генотипом Т/Т скорость синтеза, а поэтому и концентрация фермента витамин К-эпоксидредуктазы минимальна. Это обуславливает склонность к гипокоагуляции, но и в свою очередь является протективным к венозной тромбоэмболии (K.Lacut, et al.). Не стоит забывать, что эпоксидредуктаза витамина К играет важную роль в обызвествлении сосудов. M. Teichert et al. выявили взаимосвязь полиморфизма 1173 с обызвествлением артерий (риск обызвествления увеличивается на 19% для носителей хотя бы одного Т-аллеля). У людей с генотипом VKORC1 1173 С/C активность фермента максимальна, и риск к гиперкоагуляции увеличен. Полиморфизм VKORC1 3730 A/A также повышает активность фермента и склонность к гиперкоагуляции.

Заключение. Исследования распространенности полиморфизмов гена VKORC1 в отдельных популяциях населения, а также анализ риска развития тромботических эпизодов в зависимости от региона проживания позволит более эффективно работать в сфере предупреждения тромбозассо-циированных заболеваний и проблем беременности.

Роль генов фолатного цикла и второй фазы системы биотрансформации ксенобиотиков у больных

агрессивными и индолентными лимфомами

О.В. Березина, А.С. Вайнер, Е.Н. Воронина, Т.И. Поспелова, М.Л. Филипенко ГБОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России; НИИ химической биологии

и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

Введение. Неходжкинские злокачественные лимфомы (НХЗЛ) - это гетерогенная группа злокачественных лимфопролиферативных заболеваний, которые имеют различную скорость опухолевой прогрессии, что может быть связано не только с мутациями, приобретенными подвергшимися озлокачествлению клетками в фазу инициации, промоции и прогрессии лимфомы, но и с исходными генетическими характеристиками клеток, т. е. полиморфизмами генов. Цель работы - изучение связи аллельных вариантов генов ключевых ферментов фолатного цикла C677T и A1298C гена MTHFR, A2756G генаMTR, А66G генаMTRR, G1958A генаMTHFD1, С1420Т гена SHMT1, T833C/844ms68 гена CBS и генов биотрансформации ксенобиотиков GSTT1 и GSTM1 у больных НХЗЛ с риском развития заболевания.

Материал и методы. Обследованы 146 больных НХЗЛ. Контрольную группу для генов фолатного цикла составили 549 доноров, для полиморфных локусов GSTM1 и GSTT1 -177 доноров Новосибирского центра крови. Определение полиморфных вариантов генов MTHFD1 и CBS проводили методом ПЦР-ПДРФ; генов MTHFR, MTRR, MTR и SHMT -

методом ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфной последовательности ДНК. Для определения делеции в генах GSTM1 и GSTT1 также использовали метод ПЦР-РВ с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green с дальнейшей регистрацией кривых плавления.

Результаты и обсуждение. В обеих группах распределение генотипов для всех исследуемых полиморфных локусов соответствовало распределению Харди-Вайнберга. Не выявлено статистически значимых различий в частотах встречаемости аллелей и генотипов полиморфных локусов генов MTHFR, MTRR, CBS, MTR и GSTT1 между больными НХЗЛ и контролем. Для полиморфного локуса G1258A гена MTHFD1 выявлена ассоциация мутантного 1958A-аллеля (OR = 0,578, C.I. [0,415-0,805]; p < 0,001) и A/A-генотипа (OR = 0,283, C.I. [0,130-0,613]; p < 0,00079) со снижением риска возникновения агрессивных лимфом. В тоже время, сочетание мутантных l420T-аллелей в гомозиготном T/T-генотипе SHMT1 обуславливает повышение риска развития данной

31

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3

группы лимфом в 2,2 раза (р < 0,02), что говорит о суммации эффектов минорных аллелей. Для полиморфного локуса GSTM1 отмечена большая частота делеционного генотипа в группе больных с индолентными лимфомами по сравнению с популяционной выборкой и агрессивными НХЗЛ, что позволило оценить вклад делеции в гене GSTM1 в предрасположенность к развитию индолентных вариантов заболевания. Выявлено, что у носителей мутантного генотипа GSTM1 риск развития индолентных НХЗЛ увеличен в 2 раза по срав-

нению с носителями нормального генотипа (OR = 1,96, C.I. [1,072-3,581];р < 0,02).

Заключение. Разнонаправленное влияние однонуклеотидных замен в генах фолатного цикла MTHFD1 и SHMT1 и делеции в гене GSTM1 на возникновение индолентных и агрессивных вариантов НХЗЛ может говорить о разных молекулярных механизмах опухолевой трансформации и требует исследования комплекса генов с целью определения предрасположенности к развитию НХЗЛ.

Абсолютная лимфоцитопения: фактор неблагоприятного прогноза при всех стадиях первичной лимфомы Ходжкина

Т.И. Богатырева, В.В. Павлов, О.А. Конова, С.Е. Хаит ФГБУ Медицинский радиологический научный центр Минздравсоцразвития России, Обнинск

Введение. Лимфоцитопения входит в перечень семи факторов риска, составивших Международный прогностический индекс (МПИ) для больных лимфомой Ходжкина (ЛХ) III-IV стадии [Hasenclever, Diehl, 1998]. Учитывают снижение в периферической крови абсолютного ( менее 0,6 х 109/л) или относительного (менее 8%) содержания лимфоцитов. Наш анализ 474 больных ЛХ III-IV стадии, пролеченных по схеме СОРР в период 1974-1989 гг, подтвердил прогностическую значимость абсолютной лимфоцитопении; однако относительная лимфоцитопения, часто сопутствующая лейкоцитозу, не ассоциировалась с учащением неудач лечения [Bogatyreva et al., 2004]. Цель данной работы состояла в оценке вклада абсолютной лимфоцитопении в неудачи современных программ лечения первичной ЛХ.

Материалы и методы. В период 1998-2012 гг. в МРНЦ было пролечено 580 первичных больных ЛХ, распределенных в 4 прогностические группы: 1-я группа (п = 41) I-II стадия без факторов риска; 2-я группа (п = 170) I-II стади c факторами риска (МТИ не менее 0,35, Е-стадия, более 3 вовлеченных областей, B-симптомы); 3-я группа (п = 173) III-IV стадия без факторов риска, принятых в МРНЦ; 4-я группа (п = 196) III-IV стадия с факторами риска МРНЦ (лимфоидное истощение или нодулярный склероз II типа, перикардит, поражение костей/костного мозга). Больным 1-3-й групп назначали схему ABVD, в 4-й группе применяли BEACOPP. Прогностический индекс каждого больного определяли по сумме факторов риска МПИ: мужской пол, возраст старше 45 лет, IV стадия, альбумин ниже 40 г/л, гемоглобин ниже 105 г/л, лейкоцитоз выше 15 х 109/л; лимфоцитопенией считали число клеток менее 0,9 х 109/л. Индекс МПИ не менее 4 баллов относили к неблагоприятному прогнозу. Оценивали 5-летнюю общую выживаемость (ОВ) и свободу от прогрессирования (FFP). Медиана наблюдения для всех больных составила 60 мес (12-156 мес).

Результаты и обсуждение. Доли больных с МПИ не менее 4 баллов в 1, 2, 3 и 4-й группах распределились как 0%, 0%, 8% и 20%. Встречаемость абсолютной лимфоцитопении составила 2%, 10%, 9% и 20% соответственно, причем часть этих случаев в 3-й (7%) и 4-й группах (13%) приходилась на больных с МПИ 0-3. Результаты лечения при МПИ не менее 4 были хуже, чем у больных с МПИ 0-3: FFP в 3-й группе была 67% против 85% (р = 0,069), а в 4-й группе 53% против 77% (р = 0,002); ОВ в 3-й и 4-й группах была, 72% против 97% соответственно; р = 0,001 и 71% против 88%; р = 0,059. Самостоятельную прогностическую значимость лимфоцитопении оценивали в 1-2-й группах и среди больных 3-4-й групп, имевших МПИ 0-3. В 1-й группе единственный случай ранней прогрессии отмечен у больного с содержанием лимфоцитов 0,78 х 109/л, ОВ для всей группы составила 100%. Во 2-й группе, у 17 больных с лимфоцитопенией FFP была 43% против 91% (р = 0,001), а ОВ 57% против 95% (р = 0,001). В 3-й группе, у 12 больных с лимфоцитопенией FFP составила 67% против 87% (р = 0,055), без статистически значимого снижения ОВ (90% против 97%, статистически незначимо). В 4-й группе, у 26 больных с лимфоцитопе-нией FFP составила 53% против 78% (р = 0,013), а ОВ 62% против 91% (р = 0,039).

Заключение. При планировании лечения первичной ЛХ всех стадий сниженное содержание лимфоцитов периферической крови (ниже 0,9 х 109/л) должно учитываться как дополнительный фактор неблагоприятного прогноза. При ранней стадии (I-II) и благоприятной поздней (III-IV стадии без факторов риска) у таких больных вместо схемы ABVD необходимо назначать BEACOPP-21. При III-IV стадии с факторами неблагоприятного прогноза (лимфоидное истощение или нодулярный склероз II типа, перикардит, вовлечение костей или костного мозга) методом выбора для больного с исходной лимфоцитопенией является BEACOPP-14.

Трансфузии лимфоцитов донора в аплазии после химиотерапии при рецидиве лейкоза после трансплантации аллогенного костного мозга.

Р.Ф. Богданов, Л.П. Менделеева, Л.С. Любимова, И.В. Гальцева, Л.А. Кузьмина, Е.И. Желнова, Е.М. Грецов,

А.В. Мисюрин, Е.В. Домрачева, Е.Н. Паровичникова, В.Г. Савченко ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва

Введение. Рецидив лейкоза после трансплантации аллогенного костного мозга (алло-ТКМ) ограничивает успехи данного вида лечения. Применение химиотерапии с последующими трансфузиями лимфоцитов донора (ТЛД) направлено на максимальное удаление опухолевой массы и индукцию эффекта трансплантат против лейкоза. Целью исследования было изучение эффективности ТЛД в период аплазии после проведения химиотерапии по поводу рецидива лейкоза у реципиентов аллогенного костного мозга.

Материалы и методы. В исследование включены 22 больных (17 - ОМЛ, 3 - ОЛЛ, 2 - ХМЛ) с гематологическим рецидивом заболевания после алло-ТКМ от родственного HLA-совместимого донора: 15 мужчин и 7 женщин в возрасте 16-60 лет (медиана возраста 27 лет). Предтрансплантаци-

онное кондиционирование выполняли по миелоаблативной программе (БУ + ЦФ) у 18 больных и в режиме пониженной интенсивности (Флюд + БУ + АТГ) у 4 больных. Рецидив лейкоза был диагностирован через 6,2 мес (3-51 мес) после алло-ТКМ. Лимфоциты донора переливали после проведения курса химиотерапии в период миелотоксического агранулоцитоза. ТЛД выполняли 1 раз в неделю (п = 9) или с интервалом 2-4 нед (п = 13. Количество трансфузий на одного больного составило от 2 до 4. При этом суммарное количество перелитых лимфоцитов варьировало от 3,1 до 6,5 х 108клеток/кг (медиана 4,1 х 108 клеток/кг), количество CD3+-клеток колебалось от 0,1 до 4,48 х 108CD3+-клеток/кг (медиана 2,26 х 108CD3+-клеток/кг). Всего выполнено 63 ТЛД. После каждой ТЛД осуществляли введение ИЛ-2 (2-9 млн МЕ). Мониторинг

32