Исследование CD80, CD86, PD-1, PD-L1, Fas и FasL на в- и T-клетках у больных хроническим лимфолейкозом

V Евразийский гематологический форум

КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ

в сыворотке: ЛДГ и СРБ — в лаборатории биохимии, ферритина — иммуноферментным (ЕЫБА) методом («Ферритин-ИФА-БЕСТ», Россия). При оценке уровня ферритина были использованы значения, установленные производителем тест-системы, — 10-350 нг/мл. Для оценки величины относительного риска использовали отношение шансов (ОШ) с 95%-м доверительным интервалом (95% ДИ). Общую выживаемость (ОВ) оценивали с использованием функции вероятности выживания Каплана—Мейера. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05. Учитывая общность полученных результатов, группы пациентов с НХЛ и ЛХ были объединены и оценивались совместно.

Результаты. В дебюте заболевания отмечается прямая зависимость повышения содержания ферритина, активности ЛДГ (г = 0,45; р < 0,05) и уровня СРБ (г = 0,53; р < 0,05), что характеризует ферритин как один из маркеров острой фазы. Однако показатели ОШ неблагоприятного исхода заболевания (т. е. недостижение ремиссии лимфомы после 4-6 курсов химиотерапии) продемонстрировали наибольшее значение, полученное для ферритина (ОШ 3,305; 95% ДИ 3,024-10,668; р < 0,05), в сравнении с СРБ (ОШ 1,102; 95% ДИ 0,436-2,786; р > 0,05) и ЛДГ (ОШ 2,989; 95% ДИ 0,910-9,814; р > 0,05). Таким образом, вероятность неблагоприятного течения заболевания в 3,3 раза выше у пациентов с высоким ферритином (> 350 нг/мл) в дебюте лимфопролиферативного заболевания. Показатель 3-летней ОВ у пациентов с гиперфер-ритинемией и впервые диагностированной лимфомой составил 47,65 %, медиана ОВ — 40 мес. (3,3 года). Медиана ОВ была существенно меньше (40 мес.) у пациентов с уровнем ферритина более 350 нг/мл в дебюте заболевания в сравнении с группой больных с нормальным уровнем ферритина, когда медиана ОВ за период наблюдения не была достигнута (р = 0,004). У пациентов с уровнем ферритина более 350 нг/мл в сыворотке до начала лечения возрастает риск смерти (ОШ 8,122; 95% ДИ 1,764-7,396; р < 0,05) в сравнении с подгруппой лиц с ферритином менее 350 нг/мл в дебюте опухолевого процесса.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что ферритин является чувствительным неблагоприятным прогностическим маркером. Представляется возможным объединить больных лимфомами с высоким содержанием ферритина в дебюте заболевания в группу с неблагоприятным прогнозом и худшими показателями ОВ.

Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.

Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.

The relative risk and the odds ratio (OR) were analysed with 95% confidence interval (95% CI). The overall survival (OS) rate was assessed using the Kaplan-Meier analysis. The differences were considered significant at p <0.05. The patients with NHL and HL were analysed together.

Results. At the onset of the disease, the direct correlation between the increase of ferritin, LDH (r = 0.45, p < 0.05), CRP (r = 0.53, p < 0.05) levels was found, which characterizes ferritin as an acute phase marker. However, the OR of the poor outcome (i.e., failure to achieve remission after 4-6 courses of chemotherapy) showed the highest index of OR obtained for ferritin (OR 3.305, 95% CI 3.024-10.668, p < 0.05) compared with CRP (OR 1.102, 95% CI 0.436-2.786, p > 0.05), and LDH (OR 2.989, 95% CI 0.910-9.814, p > 0.05). Thus, the probability of poor clinical outcome was 3.3 times higher in patients with high ferritin at the onset of the disease (> 350 ng/ml). The 3-year OS in patients with hyperferritinemia and newly diagnosed lymphoma was 47.65 %, the median OS rate was 40 months (3.3 years). The median OS rate was significantly lower in patients with a ferritin level >350 ng/ml at the onset of the disease (40 months) compared to patients with normal ferritin levels, when the median OS rate was not achieved during the observation period (p = 0.004). In patients with a serum ferritin level of more than 350 ng/ml, the risk of death increases (OR 8.122, 95% CI 1.764-7.396, p < 0.05) in comparison with a subgroup of individuals with ferritin of less than 350 ng/ml at the onset of the disease.

Conclusion. The obtained data indicate that ferritin is a sensitive prognostic marker of a poor outcome. It is possible to included patients with high ferritin lymphoma at the onset of the disease into a group with poor prognosis and the worst OS rate.

Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.

Funding. The study received no external funding.

ИССЛЕДОВАНИЕ CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS И FASL НА В- И T-КЛЕТКАХ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ

Д.С. Бадмажапова, И.В. Гальцева, Ю.О. Давыдова, Н.М. Капранов, Е.Е. Звонков, Е.Н. Паровичникова

ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, Москва, Российская Федерация

Актуальность и цели. Согласно современным представлениям, развитие опухоли связано со способностью опухолевых клеток к уклонению от иммунного ответа. Оно достигается, с одной стороны, за счет уменьшения на поверхности опухолевых клеток экспрессии таких молекул, как MHC, Fas-рецептора, опухоль-ассоции-рованных антигенов, а с другой — путем блокирования активации Т-лимфоцитов. Поскольку субстратом хронического лимфолейко-

CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS, AND FASL IN B- AND T-CELLS IN PATIENTS WITH CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA

DS Badmazhapova, IV Gal'tseva, YuO Davydova, NM Kapranov, EEZvonkov, EN Parovichnikova

National Medical Hematology Research Center, Moscow, Russian Federation

Background & Aims. Tumor development is considered to be associated with the ability of cancer cells to evade the immune response. It is achieved by reducing the expression of surface MHC, Fas-receptor, and tumor-associated antigens and by blocking the activation of T-lymphocytes. Since the substrate of CLL is B-cells, the inhibition of T-cells may result from the expression of co-stimulating molecules, for example, CD80/CD86, PD-L1 and FAS-L, responsible for the negative

http://bloodjournal.ru/ V Евразийский гематологический форум 523

за (ХЛЛ) являются B-клетки, к анергии T-клеток может приводить изменение экспрессии на опухолевых клетках костимулирующих молекул, например CD80/CD86, PD-L1 и FAS-L, отвечающих за негативную регуляцию активации T-клеток и индукцию апоптоза. При этом экспрессия PD-1 и FAS на Т-клетках может также отличаться от нормальной и отражать их состояние анергии при ХЛЛ.

Материалы и методы. В исследование включено 7 пациентов с ХЛЛ (3 — на этапе прогрессирования, 4 — в дебюте заболевания). Мужчин было 4, женщин — 3, медиана возраста — 64 года (диапазон 55-72 года). Контрольная группа — 29 здоровых доноров. Исследовали экспрессию CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS на опухолевых В-клетках, а также PD-1, PD-L1, FAS на поверхности CD4+ и CD8+ Т-клеток периферической крови пациентов с ХЛЛ и здоровых доноров. Периферическая кровь больных ХЛЛ и здоровых доноров изучалась на проточном цитометре BD FACSCanto II с использованием панели антител, включающей CD80 FITC, CD86 APC, CD274 (PD-L1) PE-Cy7, CD279 (PD-1) FITC, CD95 (FAS) PE-Cy7, CD19 PE, CD5 PerCP, CD4 APC-Cy7, CD8 PerCP. Данные представлены в виде среднего ± стандартная ошибка среднего. Статистическая значимость различий средних определялась с помощью критерия Манна—Уитни.

Результаты. Доля В-лимфоцитов CD80+ доноров была статистически значимо выше, чем у больных ХЛЛ: 20,5 ± 1,7 vs 7,4 ± 4,7 % (p = 0,01). Доля FAS+ среди опухолевых В-клеток статистически значимо ниже, чем на В-клетках здоровых доноров: 6,9 ± 2,4 vs 14,1 ± 2,4 % (p = 0,014). Статистически значимых различий среди В-клеток CD86+, PD-1+, PD-L1+ у доноров и у больных ХЛЛ не выявлено. У пациентов с ХЛЛ доля Т-клеток PD-1+ статистически значимо выше, чем у здоровых доноров, как среди клеток CD8+ (30,4 ± 5,7 vs 16,9 ± 1,3 %; р < 0,001), так и клеток CD4+ (34,8 ± 4,8 vs 10,8 ± 0,9 %; р < 0,001). Доля Т-клеток PD-L1+ у больных ХЛЛ и доноров статистически значимо не различалась.

Выводы. Меньшая доля опухолевых В-клеток FAS+ у больных ХЛЛ свидетельствует об их уклонении от FAS-индуцированного апоптоза. Снижение доли опухолевых клеток CD80+ может способствовать нарушению формирования второго костимулирующе-го сигнала для Т-клеток. На Т-лимфоцитах пациентов обнаружена более высокая экспрессия PD-1 по сравнению с Т-лимфоцитами доноров, но не PD-L1, что указывает на преобладание негативной регуляции Т-клеточного звена. Степень анергии и иммунного дисбаланса может служить фактором прогноза и обоснованием применения таргетной иммунотерапии.

Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.

Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.

regulation of T-cell activation and induction of apoptosis. The expression of PD-1 and FAS on T-cells may also differ from normal and reflect their non-responsiveness in CLL.

Materials & Methods. The study included 7 patients with CLL (3 patients had disease progression, 4 patients had newly diagnosed disease). The demographic characteristics were the following: 4 males and 3 females; the median age was 64 years (range 55-72 years). The control group consisted of 29 healthy participants. The expression of CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS on tumor B-cells, as well as the expression of PD-1, PD-L1, FAS on the surface of CD4+ and CD8+ T-cells of peripheral blood of patients with CLL and healthy donors were studied. Peripheral blood of CLL patients and healthy controls was studied with a BD FACSCanto II flow cytometry using an antibody panel comprising CD80 FITC, CD86 APC, CD274 (PD-L1) PE-Cy7, CD279 (PD-1) FITC, CD95 (FAS) PE-Cy7, CD19 PE, CD5 PerCP, CD4 APC-Cy7, CD8 PerCP. The data were presented as the mean ± standard error of the mean. The statistical significance of the mean differences was determined using the Mann-Whitney test.

Results. The proportion of CD80+ B-lymphocytes in controls was significantly higher compared to CLL patients: 20.5 ± 1.7 vs 7.4 ± 4.7 % (p = 0.01). The proportion of FAS+ among tumor B-cells was statistically significantly lower compared to B-cells of the healthy controls: 6.9 ± 2.4 vs 14.1 ± 2.4 % (p = 0.014). There were no statistically significant differences among CD86+ B-cells, PD-1+, PD-L1+ in the control group and in CLL patients. In patients with CLL, the proportion of PD-1+ T-cells was significantly higher compared to the controls that in the healthy controls: both among CD8+ cells (30.4 ± 5.7 vs 16.9 ± 1.3 %, p < 0.001) and CD4+ cells (34.8 ± 4.8 vs 10.8 ± 0.9 %, p < 0.001). The proportion of PD-L1+ T-cells in patients with CLL and controls was similar.

Conclusions. A smaller proportion of tumor B-cells FAS+ in CLL patients indicates their evasion from FAS-induced apoptosis. Reducing the proportion of CD80+ cancer cells may interfere with the formation of a second costimulatory signal for T-cells. Higher PD-1 expression was found on T-lymphocytes of patients compared to T-lymphocytes in controls, but not PD-L1, indicating a predominance of negative regulation of the T-cell link. The degree of anergy and immune imbalance can serve as a prognostic factor and the rationale for the use of targeted immunotherapy.

Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.

Funding. The study received no external funding.

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОФЕНОТИПА ОПУХОЛЕВЫХ ПЛАЗМОЦИТОВ КОСТНОГО МОЗГА И ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ

К.А. Белоусов, Ю.Ю. Чуксина, Т.А. Митина, А.К. Голенков, А.Н. Митин, С.В. Шевелев

ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. Н.Ф. Владимирского», Москва, Российская Федерация

Цель. Изучить и сопоставить клинические особенности множественной миеломы (ММ), а также иммунофенотипические особенности опухолевыхплазматических клеток в костном мозге (ПК

IMMUNOPHENOTYPES OF TUMOR BONE MARROW PLASMA CELLS AND CIRCULATING PERIPHERAL BLOOD PLASMA CELLS IN MULTIPLE MYELOMA

KA Belousov, YuYu Chuksina, TA Mitina, AK Golenkov, AN Mitin, SV Shevelev

NF Vladimirsky Moscow Regional Scientific Research Institute, Moscow, Russian Federation

Aim. To correlate the clinical forms of multiple myeloma (MM) with the immunophenotype of tumor bone marrow plasma cells (BMPC) and circulating peripheral blood plasma cells (PBPC).

Materials & Methods. The study included 19 patients with MM (14 with primary MM, 5 with relapsing/refractory MM; aged 51-85 years;