СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ АЛЬФА-ГАЛАКТОЗИДАЗА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Мультимерная белковая структура, содержащая, по меньшей мере, два мономера α-галактозидазы, ковалентно связанных друг с другом через связывающий фрагмент, где мультимерная белковая структура обладает характеристиками, выбранными из группы, состоящей из:
(a) проявления α-галактозидазной активности при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы на один час, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в условия человеческой плазмы на один час;
(b) проявления α-галактозидазной активности, которая уменьшается при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы на один час, по меньшей мере, на 10% меньше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в условия человеческой плазмы на один час;
(c) проявления α-галактозидазной активности, которая остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы, на один час;
(d) проявления α-галактозидазной активности при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на одну неделю, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в лизосомальные условия на одну неделю;
(e) проявления α-галактозидазной активности, которая уменьшается при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на одну неделю, по меньшей мере, на 10% меньше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в лизосомальные условия на одну неделю;
(f) проявления α-галактозидазной активности, которая остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на один день;
(g) проявления α-галактозидазной активности немедленно после помещения мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия, которая, по меньшей мере, на 10% больше, чем активность нативной α-галактозидазы немедленно после помещении нативной α-галактозидазы в условия, соответствующие условиям в лизосоме;
(h) проявления α-галактозидазной активности немедленно после помещения мультимерной белковой структуры в водный раствор, имеющий рН 7 и температуру 37°C, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы немедленно после помещении нативной α-галактозидазы в водный раствор, имеющий рН 7 и температуру 37°C и
(i) времени полураспада в кровотоке в физиологической системе, которое, по меньшей мере, на 20% больше, чем время полураспада в кровотоке нативной α-галактозидазы.
2. Мультимерная белковая структура, содержащая, по меньшей мере, два мономера α-галактозидазы, ковалентно связанных друг с другом через связывающий фрагмент, где связывающий фрагмент отсутствует в нативной α-галактозидазе.
3. Мультимерная белковая структура по п.2, отличающаяся характеристиками, выбранными из группы, состоящей из:
(a) проявления α-галактозидазной активности при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы на один час, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в условия человеческой плазмы на один час;
(b) проявления α-галактозидазной активности, которая уменьшается при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы на один час, по меньшей мере, на 10% меньше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в условия человеческой плазмы на один час;
(c) проявления α-галактозидазной активности, которая остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в условия человеческой плазмы, на один час;
(d) проявления α-галактозидазной активности при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на одну неделю, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в лизосомальные условия на одну неделю;
(e) проявления α-галактозидазной активности, которая уменьшается при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на одну неделю, по меньшей мере, на 10% меньше, чем активность нативной α-галактозидазы при помещении нативной α-галактозидазы в лизосомальные условия на одну неделю;
(f) проявления α-галактозидазной активности, которая остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на один день;
(g) проявления α-галактозидазной активности немедленно после помещения мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия, которая, по меньшей мере, на 10% больше, чем активность нативной α-галактозидазы немедленно после помещении нативной α-галактозидазы в условия, соответствующие условиям в лизосоме;
(h) проявления α-галактозидазной активности немедленно после помещения мультимерной белковой структуры в водный раствор, имеющий рН 7 и температуру 37°C, которая, по меньшей мере, на 10% выше, чем активность нативной α-галактозидазы немедленно после помещении нативной α-галактозидазы в водный раствор, имеющий рН 7 и температуру 37°C и
(i) времени полураспада в кровотоке в физиологической системе, большего, чем время полураспада в кровотоке нативной α-галактозидазы.
4. Мультимерная белковая структура по п.3, где α-галактозидазная активность мультимерной белковой структуры, которая остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия на один день, также остается практически неизменной при помещении мультимерной белковой структуры в лизосомальные условия для одну неделю.
5. Мультимерная белковая структура по п.3, где время полураспада мультимерной белковой структуры в кровотоке, большее, чем время полураспада в кровотоке нативной α-галактозидазы, превосходит время полураспада нативной α-галактозидазы, по меньшей мере, на 20%.
6. Мультимерная белковая структура по п.2, характеризующаяся α-галактозидазной активностью в органе при введении мультимерной белковой структуры позвоночному животному, где орган выбран из группы, состоящей из селезенки, сердца и почек.
7. Мультимерная белковая структура по п.2, содержащая два мономера α-галактозидазы, где белковая структура представляет собой димерную белковую структуру.
8. Мультимерная белковая структура по п.2, где α-галактозидаза имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.
9. Мультимерная белковая структура по п.2, где связывающий фрагмент содержит поли(алкиленгликоль).
10. Мультимерная белковая структура по п.2, где, по меньшей мере, один связывающий фрагмент имеет общую формулу:
1
1
2
3
4
2
-X-(CRR-CRR-Y)n-X-,
1
2
где каждый из X и X представляет собой функциональную группу, которая образует ковалентную связь с, по меньшей мере, одним мономером α-галактозидазы;
5
Y представляет собой O, S или NR;
n представляет собой целое число от 1 до 200 и
1
2
3
4
5
каждый из R, R, R, R и R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкильной, циклоалкильной, алкенильной, алкинильной, алкоксильной, гидроксильной, оксо, тиольной и тиоалкоксильной групп.
11. Фармацевтическая композиция, содержащая мультимерную белковую структуру любому из пп.2-10 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, дополнительно содержащая галактозу.
13. Мультимерная белковая структура по любому из пп.2-10 для применения в качестве лекарственного средства.
14. Мультимерная белковая структура по п.13, где лекарственное средство предназначено для лечения болезни Фабри.
15. Мультимерная белковая структура по любому из пп.2-10 для применения для лечения болезни Фабри.
16. Способ лечения болезни Фабри, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества мультимерной белковой структуры по любому из пп.2-10, что приводит к лечению болезни Фабри.
17. Способ получения препарата мультимерной белковой структуры по любому из пп.2-10, где способ включает взаимодействие α-галактозидазы со сшивающим агентом, который включает связывающий фрагмент и, по меньшей мере, две реакционноспособные группы.
18. Способ по п.17, где молярное соотношение указанного связывающего агента к мономеру α-галактозидазы находится в диапазоне от 5:1 до 500:1.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая мультимерную белковую структуру по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
20. Фармацевтическая композиция по п.11, дополнительно содержащая галактозу.
21. Мультимерная белковая структура по п.1 для применения в качестве лекарственного средства.
22. Мультимерная белковая структура по п.21, где лекарственное средство предназначено для лечения болезни Фабри.
23. Мультимерная белковая структура по п.1 для применения для лечения болезни Фабри.
24. Способ лечения болезни Фабри, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества мультимерной белковой структуры по п.1, что приводит к лечению болезни Фабри.
25. Способ получения мультимерной белковой структуры по п.1, где способ включает взаимодействие α-галактозидазы со сшивающим агентом, который включает связывающий фрагмент и, по меньшей мере, две реакционноспособные группы.