СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАРУШЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ У МУЖЧИН
METHOD OF DIAGNOSING REPRODUCTIVE FUNCTION IN MEN

Изобретение относится к медицине, к способам анализа биологических материалов, и может быть использовано для диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин в урологии, андрологии, дерматовенерологии, репродуктивной медицине и хирургии, онкологии, для мониторинга генетических последствий природных и антропогенных воздействий, в ветеринарии и животноводстве.
Традиционно для оценки состояния репродуктивной функции в частности сперматогенеза известно использование 4-х подходов.
Первым традиционным подходом, давно применяющимся в медицине, является семиологический анализ эякулята, при котором практически характеризуют концентрацию, двигательную активность и морфологию сперматозоидов, наличие лейкоцитов, иных соматических клеток (см. например SU 1330567, 15.07.1987). Недостатком способа является невозможность при выполнении семиологического анализа эякулята получить информацию о физиологичности или нарушении прохождения половых клеток через все последовательные стадии сперматогенеза в целом.
Вторым традиционным подходом оценки разных этапов сперматогенеза является гистологический анализ препаратов срезов биоптата яичка с определением характеристики цикла сперматогенного эпителия, по расчету индекса половых клеток относительно числа клеток Сертоли (см. например RU 2199117, 20.02.2003). Анализ проводят после изъятия фрагмента яичка (биопсия) и его фиксации путем обезвоживания кусочка биоптата яичка по спиртам восходящей концентрации и ксилолу, заливки в парафин, приготовления срезов и их окрашивания с последующим микрокопированием гистологических препаратов биоптата яичка. Недостатком способа является: травма яичка при хирургическом получении биоптата, развитие аутоиммунного процесса в яичке и нарушение сперматогенеза и плодовитости; время приготовления гистопрепаратов биоптата яичка составляет 3-5 дней; результаты анализа сперматогенеза получают на локальном участке яичка (биоптате), и их нельзя экстраполировать на все яичко в целом или на оба яичка, поскольку в них часто протекают локальные процессы. Кроме того, проведение биопсии яичка допускается только для пациентов с азооспермей или олигозооспермией тяжелой степени (ВОЗ, 1982, 1999). Такие пациенты составляют не более 30% от числа мужчин, обращающихся к специалистам по поводу нарушения сперматогенеза и бесплодия. То есть около 70% мужчин не имеют возможности получения квалифицированной информации о причинах и степени нарушения сперматогенеза до его конечного этапа - до сперматозоидов.
Третий подход оценки разных этапов сперматогенеза является цитологический способ анализа половых клеток эякулята на всех последовательных стадиях их развития с определением числа дегенерирующих гамет (см. например RU 2328736, 10.07.2008).
Анализ проводят после взятия пробы половых и соматических клеток из осадка центрифугированного эякулята, обработанных в течение часа раствором 0,55-0,56% хлористого калия при температуре 37,0-37,1°С; их последующей фиксацией в смеси метанолового спирта и ледяной уксусной кислоты с добавлением 0,1-0,2 мл хлороформа. Препарат высушивают и окрашивают красителем Гимза с последующим микроскопированием. Недостатком способа является трудоемкость метода, качество приготовления препаратов и интерпретации результатов анализа зависят от квалификации лаборанта, малое количество препаратов, которое может проанализировать лаборант в течение трудового дня, использование сильно действующего яда (метиловый спирт), при просушивании препарата над пламенем газовой или спиртовой горелки легко клетки сжечь, что скажется на результатах анализа.
Четвертый подход - иммунохимический, связанный с выявлением антигенов сперматозоидов и антиспермальных антител, ассоциированных с бесплодием. Существует несколько антигенов (АГ) сперматозоидов, антитела к которым обладают агглютинирующей и иммобилизирующей сперматозоиды активностью. Все они являются сильными иммуногенами, способными вызывать образование антиспермальных антител (АСАТ), ассоциированных с клиническим бесплодием, снижающих фертильность у экспериментальных животных или влияющих на процесс оплодотворения in vitro. Предполагают, что иммунологическое бесплодие возможно связано с комбинированным воздействием различных антител к множеству антигенов спермы. Определение и изучение частных АГ спермы служит целям понимания повреждения функций сперматозоидов и механизмов оплодотворения, а также направлению разработки доступных коммерческих тест-систем для детекции антиген-специфических АСАТ.
Способ, принятый нами за прототип, характеризуется получением целевого антигена ядерных компонентов репродуктивных тканей из тканей семенников молодых самцов белых крыс, выделяя ядра пахитенных сперматоцитов, а из осадка пахитенных ядер проводят экстракцию антигена. Для выделения целевого антигена суспензию пахитенных ядер ресуспендируют, лизируют, гидролизируют хроматин, очищают от грубого дебриса центрифугированием, а супернатант подвергается ультрацентрифугированию в ступенчатом градиенте сахарозы для очистки синаптонемных комплексов, которые используют в качестве целевого антигена, который ковалентно связывают с поверхностью лунок микропланшета, затем в серию лунок вносят исследуемые пробы биологической жидкости, представляющей собой сыворотку крови больного, и после проведения твердофазного иммуноферментного анализа по спектрофотометрическим показателям определяют оптическую плотность исследуемых образцов (Гомберг М.А. Мужское бесплодие как результат нарушения гематотестикулярного барьера при ХИ / Гомберг М.А., Анискова И.Н., Дадашев С.Я. // Новости дерматологии и венерологии южного Кавказа. - 2007. - №1(4). - С.6-10).
Недостатком данного способа, прежде всего, является отсутствие точных количественных критериев отнесения пациентов к группе имеющих нарушения репродуктивной функции. Кроме того, примененный метод позволяет диагностировать нарушения репродуктивной функции у ограниченного числа лиц, а именно у пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией в анамнезе.
Технической задачей предложенного способа нарушений репродуктивной функции у мужчин является дальнейшее развитие методики, заключающееся в выработке точных количественных критериев отнесения пациентов к группе имеющих нарушения, что позволяет разработать на базе способа полную автоматизированную систему оценки, вне зависимости от квалификации лаборанта; расширить количество диагностируемых заболеваний / состояний.
Решение поставленной задачи базируется на принципиально новом подходе к способу диагностики нарушений репродуктивной функции-проведении тИФА и реализуется за счет получения специфического ядерного антигена из семенников молодых самцов белых крыс.
Подробное описание изобретения.
1. Получение ядерного антигена.
2
Целевой антиген получают, подвергая ферментативному гидролизу пахитенные ядра сперматоцитов из семенников молодых самцов белых крыс. Ядерный антиген сперматоцитов грызунов приготавливают следующим образом: выделяют ядра пахитенных сперматоцитов из семенников молодых самцов белых крыс массой 50-70 г согласно общепринятой методике (см. в частности Горач Г.Г., Сафронов В.В., Коломиец О.Л., Богданов Ю.Ф. Биохимический и ультраструктурный анализы синаптонемного комплекса в сперматоцитах млекопитающих. Цитология. - 1985. - T.XXVII. - №12. - С.1347-1352), из осадка пахитенных ядер проводят экстракцию антигена, ресуспендируют в 10 мл 0,1 мМ MgCl в 0,01 М Трис HCl (рН - 7.4); затем добавляют 90 мл раствора, содержащего 5 мМ ЭДТА и 0,01 М Трис-HCl (рН 8,5) и инкубируют 5-10 мин при комнатной температуре, далее добавляют ДНК-азу II (ДНК II, 200-300 ед Kunitz в 1 мг, Serva) из расчета 85 ед на 1 мл суспензии и инкубируют 60 мин при комнатной температуре, периодически встряхивают; затем пробы центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин при 4°С; по 15 мл супернатанта наносят на ступенчатый градиент сахарозы 1,5/1,8/2,0 М в 0,01 М растворе Трис-HCl (рН 7.4) и центрифугируют при 80000 об/мин в течение 90 мин в роторе SW-27.1; синаптонемные комплексы концентрируются на границах слоев 1,5/1,8 и 1,8/2,0 М. Выделенный вышеописанным образом целевой антиген представляет собой определенный и постоянный набор белков синаптонемного комплекса, которые способны в опыте связывать специфичные антитела, при этом антиген постоянного биохимического состава может быть получен многократно. Кроме того, появляется возможность единовременного обследования большого количества проб (до 40 анализов), а также получение больших количеств готового антигена и его длительное хранение (до 1 года) в замороженном состоянии.
2. Нанесение антигена на поверхность лунок микропланшета.
Полученный вышеописанным способом целевой антиген ковалентно связывают с поверхностью лунок микропланшета согласно общепринятым методам (Нго Т.Т., Ленхофф Г. (ред.) Иммуноферментный анализ. Пер. англ. М.: "Мир", 1988, с.172-192). Для связывания с поверхностью лунок целевой антиген разводят 1% раствором бикарбоната аммония до конечной концентрации белка 10 нг/мл. Далее оставшиеся сайты связывания забивают 1% раствором бычьего сывороточного альбумина. В качестве связывающего (сшивающего) бифункционального агента используют 0,25% раствор глутарового альдегида. После завершения реакции связывания микропланшет промывают и высушивают при 37°С в течение 3-х часов. Процедуру твердофазного иммунноферментного анализа проводят в традиционном варианте (Нго Т.Т., Ленхофф Г. (ред.) Иммуноферментный анализ. Пер. англ. М.: "Мир", 1988, с.193-209). В качестве исследуемой биологической жидкости может быть использована сыворотка крови. Сыворотку крови получают стандартным методом для чего, например, проводят забор периферической крови из вены, с последующим получением плазмы крови и удалением фибриногена путем либо естественного свертывания плазмы либо осаждением фибриногена ионами кальция.
Для проведения тИФА были использованы вторичные меченные пероксидазой антитела против IgG мыши (НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АМН) и обычный продажный набор с заменой микропланшетов на подготовленные, как указано выше с проведением тИФА согласно инструкции. В качестве примера использован набор фирмы «ВекторБест» - «Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum.
Проведение иммуноферментного анализа
Во все лунки микропланшета внести по 90 мкл раствора для разведения сывороток (PC). В 2 лунки планшета внести по 10 мкл положительного контрольного образца (К+), в 2 лунки - по 10 мкл отрицательного контрольного образца (К-), в 1 лунку - 10 мкл КК (контроль конъюгата), в остальные лунки - по 10 мкл цельных испытуемых сывороток, перемешать пипетированием. Микропланшет заклеить пленкой и инкубировать 30 мин при 37°С. За 5-10 мин до окончания инкубации приготовить раствор конъюгата в рабочем разведении. В качестве отрицательного контрольного образца (К-) использовали стандартные сыворотки крови фертильных пациентов.
По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть лунки микропланшета 5 раз промывочным раствором. В каждую лунку внести по 100 мкл раствора конъюгата (антивидовые антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена) в рабочем разведении. Микропланшет заклеить пленкой и инкубировать 30 мин при 37°С. По окончании инкубации промыть лунки 5 раз промывочным раствором. Приготовить раствор тетраметилбензидин (ТМБ) в рабочем разведении. Затем внести в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ в рабочем разведении. Микропланшет поместить на 30 мин в защищенное от света место при (18-25)°С. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента и немедленно измерить оптическую плотность (ОП).
Регистрация и оценка результатов
Результаты тИФА регистрировали стандартным методом с помощью спектрофотометра ("DOMBI PLATE", Россия), измеряя оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - в диапазоне 620-650 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществляется по воздуху.
Исследуемую сыворотку расценивают как положительную, если соответствующее ей значение ОП равно или превышает величину ОПкрит, которая в результате проведенных исследований была определена как 0,37.
Лабораторные исследования были проведены на базе лаборатории цитогенетики института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН (Москва) и в Краснодарском краевом центре планирования семьи и репродукции (Краснодар). Данная работа проведена на 56 сыворотках крови инфертильных и фертильных мужчин. Показатели фертильности мужчин предварительно были оценены с помощью: анамнестических данных, семиологического анализа, цитологического (количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток эякулята) анализа и иммунохимического определения поверхностных антиспермальных антител (АСАТ) как в сыворотке крови, так и спермоплазме.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась программой STATISTICA v.6 (StatSoft, Inc. 2001). Определение аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в высоком титре в образцах крови инфертильных пациентов позволил выявить достоверное повышенное значение ОП при выявлении АСАТ в спермоплазме или АСАТ в сыворотке крови (68% и 71,43%, соответственно, различия достоверны р=0,0004). Определение аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в высоком титре в образцах крови инфертильных и фертильных мужчин позволило выявить, что достоверное повышение ОП связано с возрастанием количества неидентифицированных половых клеток, что подтверждалось высокой статистически значимой корреляцией (r=0,8601 при р=0,019). Определена высокая статистически значимая корреляция стадий прелептотены-зиготены с аутоантителами к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей (r=1,00 при р=0,005). Выявленные нарушения нашли свое отражение на функциональном и морфологическом состояниях зрелых сперматозоидов.
Примеры реализации заявленного способа.
Пример 1. Больной Абрамов, 31 год. Брак - 2; детей нет; жалобы при обращении - бесплодие 6 лет, внутриматочная инсеминация - 5 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 2.5 мл, цвет - сероватый, срок разжижения 40 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 203×10, общее количество сперматозоидов 507,5×10, активно подвижных (а+b) - 70%, живые сперматозоиды - 77%, нормальные сперматозоиды - 77%, патологические формы - 23%, клетки сперматогенеза - 1, лейкоциты - 1×10. Заключение: полизооспермия
Количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток эякулята (ККА НПК): Индекс НПК - 20%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 91%; Неразошедшиеся сперматиды 33%; Неидентифиц. половые клетки - 9%; Клетки эпителия - 2%; Лейкоциты - 8%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено. Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,39.
Пример 2. Больной Хрускин, 31 год. Брак - 1; детей нет; жалобы при обращении - бесплодие 4,5 года, внутриматочная инсеминация - 4 попытки.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 2 раза.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-беловатый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.3, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 5×10, общее количество сперматозоидов 15×10, активно подвижных (а+b) - 44%, живые сперматозоиды - 97%, нормальные сперматозоиды - 40%, патологические формы - 60%, клетки сперматогенеза - 1,6, лейкоциты - 0,2×10. Заключение: олигоIIастенозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 18%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 95%; Неразошедшиеся сперматиды 23%; Неидентифиц. половые клетки 5%; Клетки эпителия - 1%; Лейкоциты - 19%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,6.
Пример 3. Больной Евко, 36 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 9 лет, попытки: экстакорпаральное оплодотворение - 4 попытки, внутриматочная инсеминация - 6 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: генитальный герпес, уреаплазмоз.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-беловатый, срок разжижения 30 минут; рН - 7.5, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята - 69×10, общее количество сперматозоидов - 207×10, активно подвижных (а+b) - 65%, живые сперматозоиды - 83%, нормальные сперматозоиды - 78%, патологические формы - 22%, клетки сперматогенеза - 6, лейкоциты - 2,5×10. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 14%; В прелептотене-зиготене 7,5%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 81,5%; Неразошедшиеся сперматиды - 23,5%; Неидентифиц. половые клетки - 11%; Клетки эпителия - 5%; Лейкоциты - 21%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,57.
Пример 4. Больной Ищенко, 46 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 8 лет, попытки: экстакорпаральное оплодотворение - 1 попытка, внутриматочная инсеминация - 8 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: генитальный герпес.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 3.2 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.4, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 62×10, общее количество сперматозоидов 198,4×10, активно подвижных (а+b) - 81%, живые сперматозоиды - 94%, нормальные сперматозоиды - 83%, патологические формы - 17%, клетки сперматогенеза - 2, лейкоциты - 3,2×10. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 14%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 97%; Неразошедшиеся сперматиды - 34%; Неидентифиц. половые клетки - 3%; Клетки эпителия - 14%; Лейкоциты - 23%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,48.
Пример 5. Больной Маруласов, 34 года. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 9 лет.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 4 раза, трихомониаз.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 32×10, общее количество сперматозоидов 64×10, активно подвижных (а+b) - 59%, живые сперматозоиды - 70%, нормальные сперматозоиды - 82%, патологические формы - 18%, клетки сперматогенеза - 2,4, лейкоциты - 16×10. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 5,6%; В прелептотене-зиготене - 1,8%; В пахитене - 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 98,2%; Неразошедшиеся сперматиды - 5,5%; Неидентифиц. половые клетки - 0%; Клетки эпителия - 17%; Лейкоциты - 31,5%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,48.
Пример 6. Больной Шугай, 46 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 4 года.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 4 раза, гонорея, трихомониаз
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.5, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 18×10, общее количество сперматозоидов 36×10, активно подвижных (а+b) - 29%, живые сперматозоиды - 40%, нормальные сперматозоиды - 75%, патологические формы - 25%, клетки сперматогенеза - 2,4, лейкоциты - 3,5×10. Заключение: олигоастенозооспермия, некроспермия, лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 19%; В прелептотене-зиготене - 5%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 91%; Неразошедшиеся сперматиды - 10%; Неидентифиц. половые клетки - 9%; Клетки эпителия - 12%; Лейкоциты - 32%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,62.
Пример 7. Больной Савенко, 29 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 3 года, внутриматочная инсеминация - 4 попытки.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 1 раз, гонорея, трихомониаз.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 12×10, общее количество сперматозоидов 24×10, активно подвижных (а+b) - 69%, живые сперматозоиды - 88%, нормальные сперматозоиды - 66%, патологические формы - 34%, клетки сперматогенеза - 0,5, лейкоциты - 0,8×10. Заключение: олигозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 4,3%; В прелептотене-зиготене - 3%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 89%; Неразошедшиеся сперматиды - 7,3%; Неидентифиц, половые клетки - 8%; Клетки эпителия - 17%; Лейкоциты - 38%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,68.
Фертильные мужчины и пациенты, у которых бесплодный брак по женскому фактору (контроль).
Пример 8. Больной Баринов, 30 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 7 лет, попытка.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 4.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 50 минут; рН - 7.4, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 106×10, общее количество сперматозоидов 424×10, активно подвижных (а+b) - 53%, живые сперматозоиды - 58%, нормальные сперматозоиды - 83%, патологические формы - 17%, клетки сперматогенеза - 1,0, лейкоциты - 0,4×10. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 2,9%; В прелептотене-зиготене - 1,9%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 90,2%; Неразошедшиеся сперматиды - 6,45%; Неидентифиц. половые клетки - 7,76%; Клетки эпителия - 28%; Лейкоциты - 13,4%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,13.
Пример 9. Больной Савчук, 26 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 0,5 года.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз, микоплазмоз
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 40 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 45×10, общее количество сперматозоидов 135×10, активно подвижных (а+b) - 65%, живые сперматозоиды - 58%, нормальные сперматозоиды - 88%, патологические формы - 12%, клетки сперматогенеза - 0,6, лейкоциты - 0,9×10. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 2,7%; В прелептотене-зиготене - 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 93%; Неразошедшиеся сперматиды - 2,6%; Неидентифиц. половые клетки - 7%; Клетки эпителия - 11%; Лейкоциты - 9,5%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - не обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,13.
Пример 10. Больной Рыбалко, 26 лет. Брак - 1; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 5 лет.
Перенесенные урогенитальные инфекции: уреаплазмоз.
6
6
6
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.3, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 42×10, общее количество сперматозоидов 84×10, активно подвижных (а+b) - 58%, живые сперматозоиды - 82%, нормальные сперматозоиды - 61%, патологические формы - 39%, клетки сперматогенеза - 0,56, лейкоциты - 0,2×10. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 6%; В прелептотене-зиготене - 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 67%; Неразошедшиеся сперматиды - 17%; Неидентифиц. половые клетки - 33%; Клетки эпителия - 4%; Лейкоциты - 9%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - не обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,25.
Таким образом, предлагаемый способ диагностики нарушений репродуктивной функции у мужчин, заключающийся в определения аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей, демонстрирует высокую степень соответствия с данными цитологической и семиологической диагностики. Данный способ для определения аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в сыворотке крови выявляет нарушения сперматогенеза, проявляющиеся в профазе I мейоза и диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин, позволяет получать сравнимые между собой количественные показатели и не требует оперативного вмешательства.
Использование способа определения аутоантител против мейотических ядерных антигенов позволяет дать объективную оценку состоянию сперматогенеза, прост в исполнении и полностью автоматизирован, что позволяет проводить большое количество однотипных исследований; обеспечивает повышение точности и эффективности диагностики; требует низких трудозатрат; не зависит от человеческого фактора (квалификации лаборанта). Неинвазивность способа исключает травму яичка и риск развития аутоиммунных осложнений.