ЛЕЧЕНИЕ СИНДРОМА САНФИЛИППО ТИПА В

1. Способ лечения болезни Санфилиппо типа В (SanB), включающий этап интратекального введения нуждающемуся в лечении субъекту рекомбинантного белка альфа-N-ацетилглюкозаминидазы (Naglu).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный белок Naglu представляет собой гибридный белок, содержащий домен Naglu и нацеливающий на лизосомы фрагмент.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный домен Naglu содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO:1 (зрелый белок Naglu человека).
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный домен Naglu содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:1 (зрелый белок Naglu человека).
5. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный домен Naglu содержит аминокислотную последовательность, идентичную SEQ ID NO:1 (зрелый белок Naglu человека).
6. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный нацеливающий на лизосомы фрагмент представляет собой фрагмент IGF-II.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную зрелому IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную зрелому IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
9. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90% идентичную зрелому IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
10. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность, включающую остатки 8-67 зрелого IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
11. Способ по любому из п.п.2-10, отличающийся тем, что указанный гибридный белок также содержит линкер между доменом Naglu и нацеливающий на лизосомы фрагмент.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанный линкер также содержит одну или более последовательностей GAP.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанный линкер содержит аминокислотную последовательность
GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP, что соответствует остаткам 721-777 последовательности SEQ ID NO:6.
14. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный нацеливающий на лизосомы фрагмент присоединен непосредственно или через линкер к С-концу домена Naglu.
15. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный нацеливающий на лизосомы фрагмент присоединен непосредственно или через линкер к N-концу домена Naglu.
16. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный белок получают из клеток человека.
17. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный белок получают из клеток СНО.
18. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение приводит к доставке белка Naglu в одну или более тканей-мишеней головного мозга.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что указанную одну или более тканей-мишеней головного мозга выбирают из группы, состоящей из тканей серого вещества, белого вещества, перивентрикулярных областей, паутинной оболочки, оболочек головного мозга, новой коры головного мозга, мозжечка, глубоких тканей коры головного мозга, молекулярной пластинки, области дорсального стриатума, среднего мозга, глубоких областей моста или продолговатого мозга, и их комбинаций.
20. Способ по п.18, отличающийся тем, что указанный белок Naglu доставляют в нейроны, глиальные клетки, периваскулярные клетки и/или менингеальные клетки.
21. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный белок Naglu далее доставляют в нейроны спинного мозга.
22. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение дополнительно обеспечивает системную доставку белка Naglu в периферические ткани-мишени.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что периферические ткани-мишени выбраны из печени, почек и/или сердца.
24. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение приводит к лизосомальной локализации в тканях-мишенях головного мозга, нейронов спинного мозга и/или периферических тканях-мишенях.
25. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение приводит к уменьшению лизосомного накопления в тканях-мишенях головного мозга, нейронах спинного мозга и/или периферических тканях-мишенях.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанное лизосомальное накопление определяют окрашиванием на LAMP-1.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что лизосомальное накопление снижается по меньшей мере на 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, в 1 раз, в 1,5 раза или в 2 раза по сравнению с контролем.
28. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение приводит к снижению вакуолизации в нейронах.
29. Способ по п.28, отличающийся тем, что нейроны включают клетки Пуркинье.
30. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введении приводит к увеличению ферментативной активности Naglu в тканях-мишенях мозга, нейронов спинного мозга и/или периферических тканях-мишенях
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что ферментативная активность Naglu увеличивается по меньшей мере в по меньшей мере в 1 раз, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 6 раз, в 7 раз, в 8 раз, в 9 раз или в 10 раз по сравнению с контролем.
32. Способ по п.30, отличающийся тем, что повышенная ферментативная активность HNS составляет по меньшей мере около 10 нмоль/ч/мг, 20 нмоль/ч/мг, 40 нмоль/ч/мг, 50 нмоль/ч/мг, 60 нмоль/ч/мг, 70 нмоль/ч/мг, 80 нмоль/ч/мг, 90 нмоль/ч/мг, 100 нмоль/ч/мг, 150 нмоль/ч/мг, 200 нмоль/ч/мг, 250 нмоль/ч/мг, 300 нмоль/ч/мг, 350 нмоль/ч/мг, 400 нмоль/ч/мг, 450 нмоль/ч/мг, 500 нмоль/ч/мг, 550 нмоль/ч/мг или 600 нмоль/ч/мг.
33. Способ по п.30, отличающийся тем, что ферментативная активность Naglu увеличивается в поясничной области.
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что повышенная ферментативная активность Naglu в поясничной области составляет по меньшей мере около 500 нмоль/ч/мг, 600 нмоль/ч/мг, 700 нмоль/ч/мг, 800 нмоль/ч/мг, 900 нмоль/ч/мг, 1000 нмоль/ч/мг, 1500 нмоль/ч/мг, 2000 нмоль/ч/мг, 3000 нмоль/ч/мг, 4000 нмоль/ч/мг, 5000 нмоль/ч/мг, 6000 нмоль/ч/мг, 7000 нмоль/ч/мг, 8000 нмоль/ч/мг, 9000 нмоль/ч/мг или 10000 нмоль/ч/мг.
35. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанное интратекальное введение приводит к снижению интенсивности, тяжести, частоты или задержке появления по меньшей мере одного симптома или признака синдрома Санфилиппо В.
36. Способ по п.35, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один симптом или признак болезни SanB представляет собой потерю слуха, задержку развития речи, дефицит моторных навыков, гиперактивность, умственную отсталость, агрессивность и/или нарушение сна.
37. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение осуществляют один раз в 2 недели.
38. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение осуществляют один раз в месяц.
39. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение осуществляют один раз каждые 2 месяца.
40. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что интратекальное введение применяют в сочетании с внутривенным введением.
41. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанное внутривенное введение осуществляют не чаще, чем один раз в месяц.
42. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанное внутривенное введение осуществляют не чаще, чем один раз каждые 2 месяца.
43. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанное интратекальное введение применяют в отсутствие внутривенного введения.
44. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанное интратекальное введение применяют в отсутствие одновременной иммуносупрессорной терапии.
45. Способ по любому из пп.2-10, отличающийся тем, что указанный гибридный белок Naglu вводят концентрации больше, чем приблизительно 20 мг/мл.
46. Терапевтический гибридный белок, содержащий
домен Naglu;
нацеливающий на лизосомы фрагмент, и
отличающий тем, что после введения указанный терапевтический гибридный белок направляется в лизосомы и терапевтически активен in vivo.
47. Терапевтический гибридный белок по п.46, отличающийся тем, что указанный домен Naglu содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO:1 (зрелый белок Naglu человека).
48. Терапевтический гибридный белок по п.46, отличающийся тем, что указанный домен Naglu содержит аминокислотную последовательность, идентичную SEQ ID NO:1 (зрелый белок Naglu человека).
49. Терапевтический гибридный белок по любому из пп.46-48, отличающийся тем, что указанный нацеливающий на лизосомы фрагмент представляет собой фрагмент IGF-II.
50. Терапевтический гибридный белок по п.49, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 70% идентичную зрелому IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
51. Терапевтический гибридный белок по п.49, отличающийся тем, что указанный фрагмент IGF-II содержит аминокислотную последовательность, включающую остатки 8-67 зрелого IGF-II человека (SEQ ID NO:3).
52. Терапевтический гибридный белок по любому из пп.46-48, отличающийся тем, что указанный гибридный белок также содержит линкер между доменом Naglu и нацеливающим на лизосомы фрагментом.
53. Терапевтический гибридный белок по п.52, отличающийся тем, что указанный линкер содержит аминокислотную последовательность
GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP, которая соответствует остаткам 721-777 последовательности SEQ ID NO:6.
54. Терапевтический гибридный белок по п.52, отличающийся тем, что указанный нацеливающий на лизосомы фрагмент присоединен непосредственно или через линкер к С-концу домена Naglu.
55. Терапевтический гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную SEQ ID NO:6 (полноразмерный гибридный белок Naglu-IGF-II), отличающийся тем, что после введения указанный терапевтический гибридный белок направляется в лизосомы и терапевтически активен in vivo.