СПОСОБ УЛУЧШЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМАТОЗОИДОВ
METHOD OF IMPROVING SPERMATOSOID MOBILITY

Изобретение относится к области животноводства и может быть использовано при искусственном осеменении животных.
Известен способ повышения концентрации сперматозоидов за счет центрифугирования. Для улучшения исходных свойств спермы используют методики, основанные на центрифугировании или флотации сперматозоидов в специальных средах (Бесплодие в супружестве / под ред. И.Ф. Юнды // Киев, "Здоровья". - 1990 - 464 с.; Panel P. Insemenation artificielles intra-uterines / P.Panel, J.P.Chansigaud, J.B. de Meeus, G.Magnin // J.Gynecol. Obstet. Biol. Reprod. - 1995. - N 24 - p.496-504).
Существенным недостатком центрифугирования является механическое повреждение, алютинация, в результате чего снижается подвижность сперматозоидов и, как следствие, оплодотворяющая активность. Метод флотации не приводит к механическому повреждению сперматозоидов, при этом повышение подвижности происходит за счет перемещения активноподвижных сперматозоидов.
2
Известен способ улучшения подвижности сперматозоидов путем воздействия на пробу раствором α-макроглобулина (RU №2167675, МПК А61К 39/395, А61Р 15/08, публ. 10.11.1999).
Известен способ повышения качественных показателей спермы, таких как увеличение числа подвижных сперматозоидов, увеличение дыхательной способности сперматозоидов и другие, путем обработки спермы перфтораном. Перфторан - кровезаменитель с газотранспортной функцией улучшает газообмен и метаболизм на уровне тканей (RU №2318211, МПК G01N 33/48, публ. 27.02.2008).
Недостатками известных способов является то, что они не обладают генопротекторным действием и не защищают ДНК сперматозоидов от повреждающего действия свободных радикалов. Известно, что одной из причин низкой оплодотворяемости сперматозоидов выступает модификация ДНК свободными радикалами, образующимися при окислительном стрессе, возникающем при действии неблагоприятных факторов эндогенной и экзогенной природы. Причем окислительный стресс может приводить к гибели сперматозоидов путем апоптоза.
Технический результат заключается в улучшении оплодотворяющих свойств спермы за счет повышения подвижности и жизнеспособности сперматозоида.
Сущность изобретения заключается в том, что в способе улучшения подвижности сперматозоидов в пробу эякулята добавляют такое количество раствора карнозина с аскорбиновой кислотой, чтобы получить концентрацию карнозина равной 4-5 мМ с 0,02% аскорбиновой кислотой с последующей оценкой возрастания активности сперматозоидов как высокую и достаточную для оплодотворения.
Карнозин является природным антиоксидантом и эффективным буфером, поддерживающим рН в цитоплазме клеток (Болдырев А.А. Карнозин. Правдивая история о сказочном соединении и его исследованиях / А.А. Болдырев // Химия и жизнь. 1997. - №10 - С.10-15). Карнозин ранее применялся в медицине для лечения катаракты, воспалительных процессов глаза различной этиологии (глазные капли «Карнозин 5%», «Севитин»), лечения трофических язв, развившихся на почве хронической венозной недостаточности.
Если концентрация карнозина будет менее 5 мМ, а аскорбиновой кислоты менее 0,02%, то антиоксидантное и генопротекторное действие компонентов на сперматозоиды будет недостаточным и при этом эффект повышения подвижности сперматозоидов малозначимым.
с
Способ осуществляется следующим образом. Эякулят, применяемый для искусственного осеменения свиноматок, получен от хряков-производителей и разбавлен в соотношении 1:1 средой для хранения ГХЦС (глюкозо-хелато-цитратно-сульфатная). Обрабатывают образцы, хранящиеся при 16-18°С. Рассчитано, что к образцу спермы объемом 9,9 мл добавляют 0,1 мл раствора, содержащего 50 мМ карнозина с 0,2% аскорбиновой кислотой на цитрат-фосфатном буфере, чтобы получить концентрацию карнозина равной 4-5 мМ с 0,02% аскорбиновой кислотой. Смесь инкубируют в течение 30 мин. Определяют подвижность путем микрокопирования нативного препарата. Подвижность спермиев (П) в баллах вычисляют по формуле согласно указаниям ГОСТ 20909.4 (Национальный стандарт Российской Федерации. Сперма хряков разбавленная, сохраненная. Санитарные и биологические нормы. Технические требования и методы испытания / М.: Стандартин-форм-2010):
,
где: n - общее число подсчитанных спермиев;
1
n - число подсчитанных спермиев с прямолинейным поступательным движением;
10 - постоянный коэффициент.
Показатели подвижности активных сперматозоидов оценивают до и после обработки раствором карнозина с аскорбиновой кислотой. Пригодной для успешного осеменения считается сперма, оцениваемая 6 баллами подвижности. В обработанных образцах подвижность повышается в среднем на 1,5-2 балла.
По сравнению с известными решениями предлагаемое позволяет улучшить оплодотворяющие свойства спермы за счет повышения подвижности и жизнеспособности сперматозоида in vitro путем активирования подвижности всех сперматозоидов при сохранении их исходной концентрации.