РАЗДЕЛЕНИЕ БИСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ И ПОБОЧНЫХ ПРОДУКТОВ ПРОЦЕССА ПОЛУЧЕНИЯ БИСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ГИДРОКСИАПАТИТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Способ выделения биспецифического антитела, содержащего Fc-домен, из раствора, содержащего указанное биспецифическое антитело, где указанный способ включает
(a) контактирование указанного раствора с гидроксиапатитной хроматографической средой,
(b) адсорбцию указанного биспецифического антитела на гидроксиапатитной хроматографической среде и
(c) элюирование указанного биспецифического антитела из гидроксиапатитной хроматографической среды в присутствии хлорид-ионов,
где
указанный раствор также содержит (i) один или более чем один фрагмент указанного биспецифического антитела, где указанный один или более чем один фрагмент содержит Fc-домен;
и/или (ii) где
указанный раствор также содержит один или более чем один полипептид, имеющий молекулярную массу, большую чем молекулярная масса указанного биспецифического антитела, и содержащий по меньшей мере одну из двух тяжелых цепей указанного биспецифического антитела, где один или более чем один указанный полипептид также содержит Fc-домен.
2. Способ по п. 1, в котором этап (с) включает получение фракции элюата, причем эта фракция содержит указанное биспецифическое антитело, но не содержит по меньшей мере один из указанных одного или более чем одного фрагмента и/или не содержит по меньшей мере один из указанных одного или более чем одного полипептида.
3. Способ по п. 2,
где по меньшей мере один из указанных одного или более чем одного фрагмента представляет собой ½ антитела или ¾ антитела; и/или
где по меньшей мере один из указанных одного или более чем одного полипептида представляет собой 5/4 антитела.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанное элюирование проводят в присутствии элюирующего буфера, имеющего рН от 6,5 до 7,5, при концентрации фосфат-ионов в диапазоне от примерно 1 мМ до примерно 20 мМ, концентрации ионов кальция от примерно 0,001 мМ до примерно 0,5 мМ и концентрации хлорид-ионов от примерно 10 мМ до примерно 200 мМ.
5. Способ по п. 4, где указанное элюирование проводят в присутствии элюирующего буфера, имеющего рН от 6,5 до 7,5, при концентрации фосфат-ионов примерно 10 мМ, концентрации ионов кальция примерно 0,1 мМ, и где концентрацию хлорид-ионов повышают градиентно от примерно 50 мМ до примерно 500 мМ.
6. Способ по п. 5, где указанный градиент представляет собой линейный градиент, ступенчатый градиент или их сочетание в линейно-ступенчатом градиенте.
7. Способ по п. 1, где указанный раствор содержит фракцию, содержащую биспецифическое антитело, или объединенные фракции, содержащие биспецифическое антитело, из элюата аффинной хроматографической среды, имеющей специфичность в отношении Fc-домена антитела, каппа-домена легкой цепи антитела и/или лямбда-домена легкой цепи антитела.
8. Способ по п. 1, где указанный способ также включает предшествующий или последующий процесс ионообменной хроматографии, который отделяет указанное биспецифическое антитело по меньшей мере от одного из указанных фрагментов, указанных полипептидов и/или гомодимера ½ антитела.
9. Способ по п. 8, где указанная ионнообменная технологическая операция представляет собой катионообменную технологическую операцию.
10. Способ по п. 1, где указанное биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело типа CrossMab, или где одна из тяжелых цепей указанного биспецифического антитела содержит scFab.
11. Способ по п. 1, где указанное биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело типа "ключ в замке" (KiH).
12. Способ по п. 1, где указанное биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело типа CrossMab и KiH, и где указанное биспецифическое антитело имеет специфичность в отношении рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и рецептора инсулиноподобного фактора роста (IGFR) или обладает специфичностью к Ang2 и фактору роста эндотелия сосудов (VEGF).
13. Способ по п. 1, где одна из тяжелых цепей указанного биспецифического антитела содержит scFab, где указанное биспецифическое антитело является биспецифическим антителом типа KiH, и где указанное биспецифическое антитело обладает специфичностью в отношении Ang2, и
VEGF обладает специфичностью в отношении EGFR и IGFR или обладает специфичностью в отношении TWEAK и IL17.