УЛУЧШЕННЫЕ N-ТЕРМИНАЛЬНЫЕ КЭППИНГ МОДУЛИ ДЛЯ СКОНСТРУИРОВАННЫХ БЕЛКОВ С АНКИРИНОВЫМ ПОВТОРОМ

1. Связывающий белок, включающий, по крайней мере, один домен анкиринового повтора, где указанный домен анкиринового повтора включает N-терминальный кэппирующий модуль, имеющий аминокислотную последовательность
GSDLGKKLLE AARAGQDDEV RILLKAGADV NA (SEQ ID NO: 14) или
GSDLGKKLLE AARAGQDDEV RELLKAGADV NA (SEQ ID NO: 15), в которой аминокислотный остаток L в положении 24 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 является необязательно замененным V, I или A;
вплоть до 9 аминокислот SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 в других положениях, отличных от положения 24, необязательно являются замененными любыми аминокислотами;
в которой G в положении 1 и/или S в положении 2 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 являются необязательно отсутствующими.
2. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где указанный N-терминальный кэппирующий модуль обеспечивает более высокое значение Tm в PBS для указанного домена анкиринового повтора по сравнению с домером анкиринового повтора, который имеет идентичную аминокислотную последовательность N-терминального кэппирующего модуля за исключением того, что аминокислотный остаток, соответствующий положению 24 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 представляет собой M вместо L, V, I или A.
3. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотный остаток A в положении 26 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 не замещается или замещается Н, Y, K или R.
4. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотный остаток R в положении 21 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 не замещается или замещается E.
5. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотный остаток I в положении 22 SEQ ID NO: 14 или аминокислотный остаток E в положении 22 SEQ ID NO: 15 не замещается или замещается V.
6. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотный остаток K в положении 25 SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15 не замещается или замещается A или E.
7. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотные остатки RILLKA от положения 21 до положения 26 SEQ ID NO: 14 или аминокислотные остатки RELLKA от положения 21 до положения 26 SEQ ID NO: 15 не замещаются.
1
2
3
4
5
6
7
8. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где указанный N-терминальный кэппирующий модуль включает последовательность GSXLXKKLLE AARAGQDDEV XXLXXXGADV NA (SEQ ID NO: 5), в которой G в положении 1 и/или S в положении 2 SEQ ID NO: 5 являются необязательно отсутствующими;
1
X представляет собой аминокислотный остаток G, A, или D;
2
X представляет собой аминокислотный остаток G или D;
3
X представляет собой аминокислотный остаток R или E;
4
X представляет собой аминокислотный остаток I, E или V;
5
X представляет собой аминокислотный остаток L, V, I или A;
6
X представляет собой аминокислотный остаток A, K или E; и
7
X представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из A, H, Y, K и R.
9. Связывающий белок в соответствии с п. 1, где аминокислотная последовательность указанного N-терминального кэппирующего модуля представляет собой
GSDLGKKLLEAARAGQDDEVRILLKAGADVNA (SEQ ID NO: 14) или
GSDLGKKLLEAARAGQDDEVRELLKAGADVNA (SEQ ID NO: 15), в которой G в положении 1 и/или S в положении 2 of SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15 являются необязательно отсутствующими.
10. Связывающий белок, включающий, по крайней мере, один домен анкиринового повтора, где указанный домен анкиринового повтора включает N-терминальный кэппирующий модуль, имеющий аминокислотную последовательность, характеризующуюся, по крайней мере, с 70%-ной идентичностью аминокислотной последовательности с
GSDLGKKLLE AARAGQDDEV RILLKAGADV NA (SEQ ID NO: 14) или
GSDLGKKLLE AARAGQDDEV RELLKAGADV NA (SEQ ID NO: 15), и при условии, что аминокислотный остаток в положении 24 в аминокислотной последовательности указанного N-терминального кэппирующего модуля представляет собой L, V, I или A;
и такие N-терминальные кэппирующие молекулы, где аминокислоты в положениях 1 и/или 2 являются отсутствующими.
11. Связывающий белок в соответствии с п. 10, где указанный N-терминальный кэппирующий модуль обеспечивает более высокое значение Tm в PBS для указанного домена анкиринового повтора по сравнению с доменом анкиринового повтора, который имеет идентичную аминокислотную последовательность за исключением того, что аминокислотный остаток, соответствующий положению 24 указанного N-терминального кэппирующего модуля представляет собой M.
12. Связывающий белок в соответствии с п. 11, где аминокислотный остаток в положении 26 указанного N-терминального кэппирующего модуля представляет собой A, Н, Y, K или R.
13. Связывающий белок в соответствии с п. 11, где аминокислотный остаток в положении 21 указанного N-терминального кэппирующего модуля представляет собой R или E.
14. Связывающий белок, включающий, по крайней мере, один домен анкиринового повтора, где указанный домен анкиринового повтора включает C-терминальный кэппирующий модуль, имеющий аминокислотную последовательность
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
XDKXGKTXXD XXXDXGXEDX AEXLQKAA (SEQ ID NO: 6), в которой
1
X представляет собой аминокислотный остаток Q или K;
2
X представляет собой аминокислотный остаток A, S или F;
3
X представляет собой аминокислотный остаток A или P;
4
X представляет собой аминокислотный остаток A или F;
5
X представляет собой аминокислотный остаток I или L;
6
X представляет собой аминокислотный остаток S или A;
7
X представляет собой аминокислотный остаток I или A;
8
X представляет собой аминокислотный остаток A, E или N;
9
X представляет собой аминокислотный остаток N или H;
10
X представляет собой аминокислотный остаток L или I;
11
X представляет собой аминокислотный остаток I или V; и
2
4
7
8
в которой X не является F, если X представляет собой F, а X представляет собой I и X представляет собой N или E.
15. Нуклеиновая кислота, которая кодирует связывающий белок в соответствии с любым из пп. 1-14.
16. Фармацевтическая композиция, включающая связывающий белок в соответствии с любым из пп. 1-14 или нуклеиновую кислоту в соответствии с п. 15, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.