АНТИТЕЛА ПРОТИВ ТОФАЦИТИНИБА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО МОНИТОРИНГА

1. Иммуногенный конъюгат тофацитиниба, содержащий тофацитиниб, связанный с иммуногенным носителем, представляющим собой белок, выбранный из группы, состоящей из гемоцианина лимфы улитки и бычьего сывороточного альбумина, где:
(a) иммуногенный конъюгат тофацитиниба имеет структуру
где BSA представляет собой бычий сывороточный альбумин; или
(b) иммуногенный конъюгат тофацитиниба имеет структуру
где KLH представляет собой гемоцианин лимфы улитки.
2. Способ оценки концентрации тофацитиниба в образце, включающий:
(a) предоставление образца, предположительно содержащего тофацитиниб;
(b) приведение образца или экстракта образца в контакт с антителом, специфичным к тофацитинибу, в условиях, подходящих для связывания антитела с тофацитинибом, с образованием смеси для анализа; и
(c) выявление связывания антитела с тофацитинибом.
3. Выделенное антитело, имеющее более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II и метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
4. Выделенное антитело по п. 3, где антитело имеет аффинность связывания с тофацитинибом, в 25, 30, 40 или 50 раз превышающую аффинность связывания с метаболитом 1 или метаболитом 2.
5. Выделенное антитело по п. 4, где антитело получено с использованием иммуногенного конъюгированного соединения тофацитиниба, содержащего тофацитиниб, связанный с иммуногенным носителем.
6. Способ определения количества тофацитиниба в образце, включающий:
(a) предоставление известного количества меченого конкурента, содержащего тофацитиниб, связанный с выявляемой меткой;
(b) предоставление селективного антитела против тофацитиниба;
(c) объединение образца, селективного антитела против тофацитиниба и меченого конкурента, где тофацитиниб в образце конкурирует с меченым конкурентом за связывание с селективным антителом против тофацитиниба; и
(d) определение количества тофацитиниба в образце измерением количества меченого конкурента, не связанного с антителом, посредством выявления метки.
7. Способ по п. 6, где селективное антитело против тофацитиниба имеет более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II
и/или метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
8. Способ по п. 7, где антитело имеет более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II и метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
9. Набор для определения количества тофацитиниба в образце, содержащий:
меченый конкурент, содержащий тофацитиниб, связанный с выявляемой меткой; и по меньшей мере одно селективное антитело против тофацитиниба;
где меченый конкурент конкурирует с тофацитинибом в образце за связывание с антителом против тофацитиниба.
10. Набор по п. 9, где селективное антитело против тофацитиниба имеет более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с по меньшей мере одним метаболитом тофацитиниба, выбранным из группы, состоящей из метаболита 1 тофацитиниба Формулы II
и метаболита 2 тофацитиниба Формулы III
11. Набор по п. 10, где антитело имеет более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II и метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
12. Набор для конкурентного иммунологического анализа для определения концентрации тофацитиниба в образце, где конкурентный иммунологический анализ включает:
(a) по меньшей мере одно селективное антитело против тофацитиниба;
(b) соединение тофацитиниба, конъюгированное с выявляемой меткой;
где конъюгированное соединение тофацитиниба конкурирует с тофацитинибом в образце за связывание с антителом; и
где метка обеспечивает сигнал, являющийся показателем концентрации тофацитиниба в образце, когда тофацитиниб присутствует в образце в концентрации, определяемой при терапевтическом лекарственном мониторинге.
13. Набор по п. 12, где антитело имеет более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II и метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
14. Выделенное антитело, связывающееся с тофацитинибом, но по существу не связывающееся с по меньшей мере одним метаболитом тофацитиниба, выбранным из группы, состоящей из метаболита 1 тофацитиниба Формулы II и метаболита 2 тофацитиниба Формулы III
15. Выделенное антитело по п. 14, по существу не связывающееся с метаболитом 1 тофацитиниба Формулы II и метаболитом 2 тофацитиниба Формулы III
16. Антитело по п. 3, способное выявлять тофацитиниб в образце без существенного выявления метаболита тофацитиниба в образце, где количество тофацитиниба входит в диапазон от приблизительно 5 нг/мл до 1215 нг/мл, от приблизительно 5 нг/мл до 405 нг/мл или от приблизительно 15 нг/мл до 1215 нг/мл.
17. Выделенное антитело, имеющее более высокую аффинность связывания с тофацитинибом, чем с по меньшей мере одним метаболитом тофацитиниба, выбранным из группы, состоящей из метаболита 1 тофацитиниба Формулы II и метаболита 2 тофацитиниба Формулы III, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, где вариабельный домен тяжелой цепи содержит три области, определяющие комплементарность (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), выбранные из группы, состоящей из:
(a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 37;
(b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 38;
(c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 39;
и где вариабельный домен легкой цепи содержит три CDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), выбранные из группы, состоящей из:
(d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34,
(e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 35; и
(f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 34.
18. Антитело по п. 17, содержащее:
(a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18;
(b) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(c) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29;
(d) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(e) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18;
(f) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36;
(g) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и также содержащее LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(h) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 12, и также содержащее вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 11;
(i) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;
(j) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(k) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(l) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(m) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
(n) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9;
(o) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11;
(p) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 12, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; и
(q) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 12, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 11.
19. Антитело по п. 15, выбранное из группы, состоящей из:
(a) антитела, содержащего HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, и также содержащего LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(b) антитела, содержащего HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и также содержащего LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, и LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(c) антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 12, и также содержащего вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(d) антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и также содержащего вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; и
(e) антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и также содержащего вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
20. Антитело по п. 19(a), способное выявлять тофацитиниб в образце в концентрации в диапазоне от приблизительно 15 нг/мл до 1215 нг/мл.
21. Антитело по п. 19(b), способное выявлять тофацитиниб в образце в концентрации в диапазоне от приблизительно 5 нг/мл до 405 нг/мл.
22. Набор по п. 11, содержащий антитело по п. 19(a) и антитело по п. 19(b), который может быть использован для выявления тофацитиниба в образце в концентрации в диапазоне от приблизительно 5 нг/мл до приблизительно 1215 нг/мл.
23. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по п. 18.
24. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 23.
25. Способ получения антитела по п. 18, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 24 в условиях, при которых продуцируется антитело.
26. Способ по п. 25, дополнительно включающий выделение антитела.