Способ спектральной идентификации травы Mansoa alliacea (Lam.)
METHOD FOR SPECTRAL IDENTIFICATION OF GRASS MANSOA ALLIACEA (LAM.)

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа идентификации растительного сырья - травы Mansoa alliacea (Lam.) путем последовательного анализа спектральных характеристик водно-спиртового извлечения после проведения пробоподготовки.
В патенте RU 2662059 «Способ спектральной идентификации плодов шиповника и витаминного сбора» от 23.07.2018 Бюл. №21 (G01N 33/00 (2006.01); A61K 36/73 (2006.01)) описан способ идентификации плодов шиповника и витаминного сбора №1 путем получения спиртового извлечения с использованием этанола концентрацией 95%, аликвоту которого, равную 5-8 мл, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5-8 мл кислоты уксусной 30%, 8 мл спиртового 2% раствора алюминия хлорида, доводят 95% этанолом до метки (рН раствора 1,6±0,4) и снимают спектр на фоне раствора сравнения, состоящего из 8 мл спиртового извлечения и 5-8 мл кислоты уксусной 30%, доведенных до метки 95% этанолом; при этом на спектре поглощения обнаруживаются одновременно три максимума поглощения, соответствующие: фенолкарбоновым кислотам при 311 нм для витаминного сбора №1 и 323 нм для плодов шиповника; флавоноидам при 411 нм для витаминного сбора №1 и 404 нм для плодов шиповника; антоцианам при 540 нм для витаминного сбора №1 и 526 нм для плодов шиповника.
Также известен способ идентификации цветков ромашки аптечной (патент RU 2641093 от 15.01.2018 Бюл. №2 (МПК G01N 21/33 (2006.01) A61K 36/28 (2006.01)), позволяющий качественно отличить цветки ромашки аптечной от примеси - цветков трехреберника продырявленного путем сравнения абсорбционных спектров растворов, отличающийся тем, что анализируют растворы, содержащие спиртовые извлечения цветков ромашки аптечной и цветков трехреберника продырявленного, комплексообразователь и буферный раствор с рН, равным 4-5, спектрофотометрическим методом при длине волны 340±2 нм, и при наличии максимума поглощения при указанной длине волны на спектре поглощения извлечения цветков идентифицируют цветки трехреберника продырявленного, а при отсутствии максимума поглощения извлечения цветков при указанных длинах волн идентифицируют цветки ромашки аптечной. Способ идентификации цветков ромашки аптечной, позволяющий качественно отличить цветки ромашки аптечной от примеси - цветков трехреберника продырявленного путем сравнения абсорбционных спектров растворов по п. 1, отличающийся тем, что в качестве комплексообразователя используют алюминия хлорид. который включает анализ растворов, содержащих спиртовые извлечения цветков ромашки аптечной и цветков трехреберника продырявленного, комплексообразователь и буферный раствор с рН, равным 4-5, спектрофотометрическим методом при длине волны 340±2 нм.
Известна публикация [Боков Д.О., Самылина И.А., Попов Д.М. Спектрофотометрия в анализе двух видов подснежника (Galanthus L.) // Бутлеровские сообщения. - 2015. - Т. 42. - №. 5. - С. 71-77]. В данном исследовании получены «спектрофотометрические профили» поглощения настоек матричных гомеопатических на основе лекарственного растительного сырья двух видов подснежника Воронова и белоснежного. Показано, что данный метод может применяться при доказательстве подлинности настоек.
Предложенные методы справедливы только для перечисленных выше видов растительного сырья, и не пригодны для подтверждения подлинности травы.
Прототипом является публикация [A. Marakhova, J.J. Zuniga, Т.А. Lobaeva et al. Investigation of flavonoids in Mansoa alliacea (Lam.) leaves // materials of 44-th FEBS congress, 2019]. В данной работе предложена методика количественного определения флавоноидов в пересчете на апигенин и кверцетин после экстракции 70% спиртом этиловым на водяной бане в течение 20 мин с последующим образованием комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом в присутствии 2 капель кислоты уксусной с концентрацией 30% и снятием спектра поглощения с детектированием комплексов флавоноидов при длинах волн 391±2 и 438±2 нм. Однако поглощение при данных длинах волн является типичным для комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом и могут наблюдаться для других видов растительного сырья. В связи с этим, описанный в литературе метод не пригоден для идентификации травы Mansoa alliacea (Lam.).
Известен способ определения флавоноидов в траве Mansoa alliacea (Lam.) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии [Fernanda В. Pires, Carolina В. Dolwitsch,  et el. Qualitative and quantitative analysis of the phenolic content of Connarus var. angustifolius, Cecropia obtusa, Cecropia palmata and Mansoa alliacea based on HPLC-DAD and UHPLC-ESI-MS/MS.//Brazilian journal of pharmacognosy. - Vol. 27. - Issue 4. - 2017. - Pp. 426-433]. Однако предлагаемый авторами метод дает возможность определить качественный флавоноидный состав Mansoa alliacea (Lam.), представленный рутином и кверцетрином. Эти флавоноиды встречаются и в других видах растений, поэтому установление их содержания не может быть использовано для идентификации травы Mansoa alliacea (Lam.).
Для способа экстракции под воздействием электрического напряжения известны следующие документы.
Патент 2522227 от 10.07.2014, описывающий способ раздельного выделения дубильных веществ и флавоноидов из лекарственного растительного сырья, заключающийся в том, что сырье сначала экстрагируют очищенной водой при комнатной температуре при постоянном напряжении электрического поля 9-12 В, в течение 30-40 мин, полученный экстракт, содержащий сумму дубильных веществ, сливают, а экстракцию обработанного сырья ведут новой порцией воды при переменном напряжении электрического поля 4 В с частотой 77-100 Гц в течение 30-40 мин с получением экстракта, содержащего флавоноиды.
Патент 2453322 от 20.06.2012, предлагающий Способ холодной водной экстракции флавоноидов из лекарственного растительного сырья с наложением электрического поля, отличающийся тем, что экстракцию проводят при напряжении электрического поля 5 В и частотой 105 Гц при перемешивании в течение 30-60 мин.
Однако предложенные в вышеперечисленных патентах условия не способствуют совместной экстракции сразу нескольких фракций фенольных соединений и не позволяют получить спектр поглощения с разделением максимумов поглощения по длинам волн.
Техническим результатом является повышение разрешающей способности предложенного метода.
Он достигается за счет того, что после воздействия электрического напряжения мощностью 5 В и частотой 3000 Гц при времени экстракции 30-50 мин и последующего проведения реакции комплексообразования с раствором алюминия хлорида в присутствии кислоты соляной разведенной с концентрацией 8%, на абсорбционном спектре четко прослеживаются три выраженных максимума поглощения при длинах волн 280±2 нм; 379±2 нм, 438±2 нм и плато при длине волны 302±2 нм. Именно эти условия позволяют однозначно идентифицировать траву Mansoa alliacea, в отличие от экстракции при нагревании, где обнаруживаются только 2 максимума поглощения, которые могут проявляться у других видов растительного сырья и не могут указывать однозначно на принадлежность к траве Mansoa alliacea.
5
При уменьшении частоты тока с 10 до 3000 Гц позволяет разделить фенольные соединения по длинам волн.
Присутствие на спектре поглощения сразу трех четко различимых максимумов поглощения при характерных длинах волн и плато отличить траву Mansoa alliacea (Lam.) от других видов растительного сырья.
Практически способ осуществляется следующим образом.
Пример. 1. Навеску воздушно-высушенной травы Mansoa alliacea (Lam.), измельченной до размера частиц 5 мм, массой около 1 г (точная навеска) помещают в химический стакан между сетчатыми электродами из нержавеющей стали, подключенными к генератору, заливают 100 мл водно-спиртового раствора с концентрацией 70% и подвергают воздействию электрического напряжения мощностью 5 В и частотой 3000 Гц в течении 30 мин. В мерную колбу вместимостью 25 мл отбирают 3 мл извлечения, прибавляют 2 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида, 0,4 мл кислоты соляной разведенной, доводят до метки 70% спиртом этиловым и снимают спектр поглощения по сравнению с раствором сравнения через 10-40 мин от начала реакции. Раствор сравнения готовят добавлением в мерную колбу 3 мл извлечения, 0,4 мл кислоты соляной разведенной и доведением до метки спиртом этиловым концентрацией 70%. При этом на абсорбционном спектре обнаруживаются три максимума поглощения при длинах волн 280±2 нм; 379±2 нм и 438±2 нм; «плечо» при длине волны 302±2 нм. (фиг. 1, спектр 1).
Пример 2. Навеску воздушно - высушенной травы Mansoa alliacea (Lam.), измельченной до размера частиц 5 мм, массой около 1 г (точная навеска) помещают в химический стакан между сетчатыми электродами из нержавеющей стали, подключенными к генератору, заливают 100 мл водно-спиртового раствора с концентрацией 70% и подвергают воздействию электрического напряжения мощностью 5 В и частотой 3000 Гц в течении 50 мин. В мерную колбу вместимостью 25 мл отбирают 3 мл извлечения, прибавляют 2 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида, 0,4 мл кислоты соляной разведенной, доводят до метки 70% спиртом этиловым и снимают спектр поглощения по сравнению с раствором сравнения через 10-40 мин от начала реакции. Раствор сравнения готовят добавлением в мерную колбу 3 мл извлечения, 0,4 мл кислоты соляной разведенной и доведением до метки спиртом этиловым концентрацией 70%. При этом на абсорбционном спектре обнаруживаются три максимума поглощения при длинах волн 280±2 нм; 379±2 нм и 438±2 нм; плато при длине волны 302±2 нм (фиг. 1, спектр 2).
Представленные примеры приведены для подтверждения технического результата и ни в коем случае не ограничивают объем притязаний данного изобретения.
Таким образом, предложенный способ соответствует условиям патентоспособности новизна и изобретательский уровень.