СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО G-CSF

1. G-CSF-предшественник, содержащий сигнальный пептид и G-CSF-пептид, где сигнальный пептид содержит последовательность человеческого сигнального пептида дикого типа молекулы человеческого G-CSF/b, содержащего, по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из:
- делеции Glu29,
- вставки Glu26,
- замены Lys11Leu,
- замены His21Phe и
- замены Gln28Leu.
2. G-CSF-предшественник по п.1, содержащий, по меньшей мере, две или, по меньшей мере, три или, по меньшей мере, четыре или пять мутаций по п.1.
3. G-CSF-предшественник по п.1 или 2, содержащий до 3 дополнительных мутаций в сигнальном пептиде, выбранных из вставки, делеции и замены.
4. Полинуклеотид, кодирующий G-CSF-предшественник по любому из пп.1-3.
5. Полинуклеотид, комплементарный полинуклеотиду по п.4.
6. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.4 или 5.
7. Трансфицированная клетка, содержащая полинуклеотид по п.4 или 5, или вектор по п.6.
8. Трансфицированная клетка по п.7, где клетка представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно человеческую клетку, более предпочтительно клетку HEK293 и более предпочтительно клетку HEK293F.
9. Трансфицированная клетка по п.7 или 8, где трансфекция является транзиторной.
10. Трансфицированная клетка по п.7 или 8, где трансфекция является стабильной.
11. Способ экспрессии G-CSF, содержащий стадии
- культивирования трансфицированных клеток по любому из пп.7-10 в подходящей культуральной среде;
- изолирования G-CSF из культуральной среды.
12. Способ по п.11, где культивирование осуществляют при рН в интервале 6,8-7,5, предпочтительно 7,1-7,3.
13. Способ по п.11, где культивирование осуществляют в присутствии инсулина с концентрацией в интервале 5-25 мг/мл, предпочтительно 15-25 мг/мл, более предпочтительно 15-20 мг/мл.
14. Способ по любому из пп.11-13, где культуральная среда является бессывороточной.