СПОСОБЫ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ПЕГИЛИРОВАНИЯ

1. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-цистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного цистеинового остатка с образованием в продукте 1,3-тиазолидиновой группы, где указанный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
2. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-цистеинового остатка молекулы по п.1, где указанный способ дополнительно включает
взаимодействие в реакционном растворе свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного цистеинового остатка с образованием в промежуточном продукте 1,3-тиазолидиновой группы; и
доведение рН реакционного раствора до значения приблизительно 7, при котором указанный промежуточный продукт перегруппируется с образованием конечного продукта, где указанный промежуточный продукт имеет структуру
и указанный конечный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
3. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-пеницилламинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного пеницилламинового остатка с образованием в продукте 5,5-диметил-1,3-тиазолидиновой группы, где указанный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
4. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-пеницилламинового остатка молекулы по п.3, где указанный способ дополнительно содержит
взаимодействие в реакционном растворе свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного пеницилламинового остатка с образованием в промежуточном продукте 5,5-диметил-1,3-тиазолидиновой группы; и
доведение рН реакционного раствора до значения приблизительно 7, при котором указанный промежуточный продукт перегруппируется с образованием конечного продукта, где указанный промежуточный продукт имеет структуру
и указанный конечный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
5. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-гомоцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного гомоцистеинового остатка с образованием в продукте шестичленной кольцевой системы, где указанный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
6. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой D или L-гомоцистеинового остатка молекулы по п.5, где указанный способ дополнительно содержит
взаимодействие в реакционном растворе свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-аминогруппой указанного гомоцистеинового остатка с образованием в промежуточном продукте шестичленной кольцевой системы; и
доведение рН реакционного раствора до значения приблизительно 7, при котором, указанный промежуточный продукт перегруппируется с образованием конечного продукта, где указанный промежуточный продукт имеет структуру
и указанный конечный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
7. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной свободной селеногруппой и свободной α-аминогруппой D или L-селенцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной свободной селеногруппой и свободной α-аминогруппой указанного селенцистеинового остатка с образованием в продукте пятичленной кольцевой системы, где указанный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
8. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной свободной селеногруппой и свободной α-аминогруппой D или L-селенцистеинового остатка молекулы по п.7, где указанный способ дополнительно содержит
взаимодействие в реакционном растворе свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной свободной селеногруппой и свободной α-аминогруппой указанного селенцистеинового остатка с образованием в промежуточном продукте пятичленной кольцевой системы; и
доведение рН реакционного раствора до значения приблизительно 7, при котором указанный промежуточный продукт перегруппируется с образованием конечного продукта, где указанный промежуточный продукт имеет структуру
и указанный конечный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
9. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных альдегидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-метил-аминогруппой D или L-N-метилцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной альдегидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью и свободной α-метиламиногруппой указанного N-метилцистеинового остатка с образованием в продукте 3-метил-1,3-тиазолидиновой группы, где указанный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
10. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных малеимидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью D или L-N-метилцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной малеимидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью указанного N-метилцистеина с образованием конъюгированного продукта, где указанный конъюгированный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
11. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных малеимидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью D или L-пеницилламинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной малеимидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью указанного пеницилламинового остатка с образованием конъюгированного продукта, где указанный конъюгированный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
12. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных малеимидных групп, с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью D или L-гомоцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной малеимидной группы указанного PEG с неокисленной сульфгидрильной боковой цепью указанного гомоцистеинового остатка с образованием конъюгированного продукта, где указанный конъюгированный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
13. Способ химического конъюгирования PEG, содержащего одну или несколько свободных малеимидных групп, с неокисленной селен-содержащей боковой цепью D или L-селенцистеинового остатка молекулы, включающий взаимодействие свободной малеимидной группы указанного PEG с неокисленной селен-содержащей боковой цепью указанного селенцистеинового остатка с образованием конъюгированного продукта, где указанный конъюгированный продукт имеет структуру
1
2
где R представляет собой указанный PEG, и R представляет собой указанную молекулу.
14. Способ по любому из пп.1-13, в котором свободная альдегидная или малеимидная группа присоединяется к указанному PEG посредством линкера, который может содержать в качестве функциональной группы амид, сложный эфир, сульфонамид, сульфонил, тиол, окси, алкил, алкенил, алкинил, арил, малеимид или амин или любое их сочетание.
15. Способ по п.14 , в котором указанный PEG имеет линейную, разветвленную или сильноразветвленную структуру.
16. Способ по п.15, в котором указанный PEG имеет среднюю молекулярную массу от примерно 100 Да до примерно 500 000 Да, предпочтительно от примерно 1 000 Да до примерно 50 000 Да.
17. Способ по любому из пп.1-13, в котором указанный цистеиновый, пеницилламиновый, гомоцистеиновый, селенцистеиновый, N-метилцистеиновый или малеимидный остаток находится в органической молекуле, предпочтительно белке или пептиде.
18. Способ по любому из пп.1-13, в котором указанный конъюгированный продукт содержит один или несколько фрагментов белка, пептида или органической молекулы или любое их сочетание.
19. Способ по любому из пп.1-13, в котором в реакции используют восстановитель.
20. Способ по п.19, в котором указанный восстановитель выбирают из группы, состоящей из ТСЕР, соединений, содержащих неокисленную сульфгидрильную группу, и соединений, содержащих неокисленную свободную селеногруппу.