Структура геномов (фенотип популяций), доминирующих на территории УрФО генетических групп возбудителя лейкоза крупного рогатого скота

Ветеринарный врач. 2023. № 5. С. 30 - 36 The Veterinarian. 2023; (5): 30 - 36

Научная статья

УДК 619:636.2:575.174:578.828.11 DOI: 10.33632/1998-698Х_2023_5_30

Структура геномов (фенотип популяций), доминирующих на территории УрФО генетических групп возбудителя лейкоза крупного рогатого скота

Ирина Михайловна Донник, Антонина Павловна Порываева, Максим Валерьевич Петропавловский, Альбина Геннадьевна Исаева, Алиса Сергеевна Романова

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Уральский федеральный аграрный научно-исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук», Екатеринбург, Россия

Автор, ответственный за переписку: Петропавловский Максим Валерьевич, petropavlovsky_m@mail.ru

Аннотация. Объект исследования - крупный рогатый скот разновозрастных групп, принадлежащий сельскохозяйственным организациям, биоматериалы. Цель работы - изучить молекулярно-генетические свойства возбудителя лейкоза крупного рогатого скота на территории УрФО. Работа выполнена в лаборатории лейкоза отдела мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней, в отделе ветеринарной лабораторной диагностики с испытательной лабораторией Уральского научно-исследовательского ветеринарного института - структурного подразделения ФГБНУ «Уральский федеральный аграрный научно-исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук». В процессе работы применяли серологические, молекулярно-генетические, статистические методы обработки данных.

Новизна исследований - получены новые знания о распространении и циркуляции возбудителя лейкоза на территории УрФО, новые знания о молекулярно-генетических свойствах различных географических вариантов вируса лейкоза крупного рогатого скота (BLV).

Ключевые слова: крупный рогатый скот, вирус лейкоза крупного рогатого скота, молекулярно-генетическая диагностика, генетические группы.

Structure of genomes (phenotype of populations) of genetic groups of BLV dominating in the

territory of the Ural Federal District

Irina M. Donnik, Antonina P. Poryvaeva, Maxim V. Petropavlovsky, Albina G. Isaeva, Alice S. Romanova

Federal State Budgetary Scientific Institution "Ural Federal Agrarian Scientific Research Centre, Ural Branch of the Russian Academy of Sciences", Yekaterinburg, Russia Corresponding author: Maxim V. Petropavlovsky, petropavlovsky_m@mail.ru

Abstract. The object of research is cattle of different age groups belonging to agricultural organizations, biomaterials. The purpose of the work is to study the molecular genetic characteristics of BLV in the territory of the Ural Federal District. The work was performed in the laboratory of leukemia of the Department of Monitoring and Forecasting of Infectious Diseases, in the Department of Veterinary Laboratory diagnostics with the testing laboratory of the Ural Research Veterinary Institute - a structural subdivision of the Ural Federal Agrarian Research Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences. Serological, molecular genetics, statistical methods of data processing were used in the process of work.

The novelty of the research is that new knowledge has been obtained about the spread and circulation of BLV in the territory of the Ural Federal District, new knowledge about the molecular genetic characteristics different geographic variants of bovine leukemia virus (BLV).

Keywords: cattle, bovine leukemia virus, molecular genetics diagnostics, genetic groups.

Введение. Экономический ущерб, причиняемый распространением лейкоза крупного рогатого скота, обусловлен снижением качественных и количественных показателей продуктивности, преждевременной выбраковкой высокопродуктивных особей, нарушением селекционно-племенной

работы и потерей генофонда ценных пород, затратами на выполнение требований действующих ветеринарных правил [1, 2, 3, 4].

Ведущая роль в оздоровлении, профилактике и успешной ликвидации лейкоза принадлежит современным эффективным методам диагностики, включая молекулярно-генетические (ПЦР), на базе которых разработаны методики генотипирования (ПЦР-ПДРФ или ДНК секвенирования), позволяющие идентифицировать высокопатогенные штаммы и определять риски их распространения, прогнозировать возможность межвидовой передачи. Актуальное значение для методологии диагностических исследований имеет биоинформационная база данных, в которую включены нуклеотидные последовательности возбудителей вирусных и бактериальных инфекций на конкретной территории, в конкретных природно-географических и социально-экономических условиях, и её наполняемость новыми сведениями [5, 6, 7, 8, 9].

В многочисленных исследованиях российских и зарубежных учёных доказано, что проблемы ликвидации лейкоза крупного рогатого скота BLV связаны с генетической вариабельностью вируса. Показано, что острота и интенсивность патологических изменений в организме животных, инфицированных BLV, во многом зависит от генотипа вируса [10, 11]. Установлена корреляция между генетической принадлежностью вирусов и их географическим расположением [12]. Разработка и применение методов генотипирования BLV: RFLP (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов), фрагментарное и полное геномное секвенирование позволило сформировать 12 различных генетических групп возбудителя. Однако проведенные исследования по изучению генетической характеристике и классификации изолятов BLV не являются всеобъемлющими [9, 13, 14, 15]. Требуют дальнейшего изучения вопросы о эпизоотических особенностях географического доминирования отдельных вариаций вируса лейкоза, о степени и риске формирования новых генетических групп BLV

[9, 16].

Анализ научных публикаций по теме выполненных исследований показал, что наполнение новыми сведениями, расширение и детализация биоинформативной базы данных о молекулярно-генетических свойствах возбудителя лейкоза на конкретной территории, в конкретных природно-географических и социально-экономических условиях позволит не только охарактеризовать его патогенные свойства, определить эпизоотические особенности географического доминирования генетических вариаций возбудителей, но и совершенствовать программы оздоровления и защиты сельскохозяйственных животных от лейкоза, более точно прогнозировать эпизоотические риски.

Цель работы - изучить молекулярно-генетические свойства возбудителя лейкоза крупного рогатого скота на территории УрФО.

Научная новизна. Получены новые знания о распространении и циркуляции возбудителя лейкоза на территории УрФО, новые знания о молекулярно-генетических свойствах различных географических вариантов вируса лейкоза крупного рогатого скота (BLV).

Материалы и методы. Исследования выполнены в Уральском НИВИ - структурном подразделении ФГБНУ УрФАНИЦ УрО РАН. Исследования проведены в сельскохозяйственных организациях (СХО) по разведению крупного рогатого скота на территории Российской Федерации. Объект исследования - разновозрастные группы крупного рогатого скота, принадлежащие сельскохозяйственным организациям Уральского федерального округа, биоматериалы.

Ретроспективный и оперативный анализ о распространении заболевания проведен на основе сведений официальной ветеринарной отчетности и статистики.

Серологические исследования. Антитела к вирусу лейкоза крупного рогатого скота определяли методом ИФА, с использованием набора IDEXX Leukosis Serum Screening-тест, производства IDEXX Montpellier SAS (Франция), в соответствии с прилагаемой к нему инструкцией. Учет результатов исследований методом твердофазного ИФА проводили на ридере SUNRISE (Tecan, Австрия) с интерпретацией результатов на оригинальном программном обеспечении xChekAssayManagementSystem (IDEXX Laboratories Inc., США, а также на фотометре «iMark™» («BioRAD», США).

Молекулярно-генетические исследования биоматериалов проводили методом полимеразной цепной реакции. Выделение ДНК производили из цельной крови, лейкоцитарной фракции крови. При молекулярно-генетических исследованиях изолятов BLV использовали коммерческие наборы реагентов для выделения ДНК «Diatom DNA Prep 200» компания ООО «ИзоГен» (Москва), тест-наборы «Лейкоз» для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции Ampli Sens (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва) в соответствии с прилагаемым к ним инструкциям.

Для проведения гнездовой (nested) ПЦР применяли мастер микс наборы - БиоМастер HS-Tag ПЦР (2X), ООО «Биолабмикс» (Новосибирск).

Измерение концентрации ДНК проводили флуориметрическим методом при помощи прибора MaxLife H100 Mod.2 ООО «МВМ Диагностика» (Барнаул). Амплификацию в режиме реального времени проводили с применением оборудования Real-time CFX 9б Touch (Bio-Rad, США), Quant Studio 5 (США).

Фрагмент гена env 444 п.н. амплифицировали с помощью гнездовой (nested) ПЦР с использованием следующих праймеров: env 5032 tct-gtg-cca-agt-ctc-cca-gat-a, env 5608 aac-aac-aac-ctc-tgg-gaa-ggg-t, env 5099 ccc-aca-agg-gcg-gcg-ccg-gtt-t, env 5521 gcg-agg-ccg-ggt-cca-gag-ctg-g (D. Beier et al., 2001), синтезированных компанией ООО «Синтол» (Москва). Реакцию проводили в два раунда со следующими параметрами циклов: 2 минуты при 94°С (1 цикл), 30 секунд при 95°С, 30 секунд при 62°С (внешние праймеры) или 30 секунд 70°С (внутренние праймеры), 60 секунд 72°С (40 циклов), 4 минуты 72°С. В первом раунде постановки гнездовой ПЦР электрофоретическая подвижность ампликонов соответствовала длине фрагмента 600 п.н., во втором - 444 п.н.

ПДРФ-анализ (RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism) осуществляли путём разрезания участка ДНК (444 п.н. env гена) с помощью эндонуклеаз рестрикции BamHI, PvuII, BclI (Thermo Fisher Scientific, США) со следующими параметрами циклов: BamHI, PvuII - 37°С 2 часа; BclI - 55°С 2 часа. Анализ размеров образующихся фрагментов (рестриктов) проводили путём гель-электрофореза по методике Y. Asfaw et al., 2005.

В качестве контроля амплификации, на всех этапах исследований использовали ДНК, выделенную из референтной линии клеток FLK-BLV. Культивирование клеточной линии FLK BLV (M. Van Der Maaten, J. Miller, A. Boothe, 1974) производили монослойным способом на среде 199, с добавлением 10 % бычьей эмбриональной сыворотки.

Учет реакции осуществляли методом горизонтального элекрофореза с применением 1,5% агарозного геля с добавлением бромистого этидия в качестве интеркалирующего красителя для ДНК. В работе применяли оборудование, систему для гель-документирования с УФ источником света E-Gel Imagen Sistem (Termo Fisher Scentific Inc.). Для определения размера ампликонов, после проведения ПЦР исследований использовали маркер «Step100» ООО «Биолабмикс» (Новосибирск) и ДНК-маркеры 1 Kb НПО «СибЭнзим» (Новосибирск).

Биоинформатические исследования.

Филогенетический анализ изолятов BLV осуществляли с применением технологий секвенирования таргетного участка гена env gp51.

ДНК-секвенирование производили в двух направлениях на генетическом анализаторе ABI 3500 Genetic Analyzer с использованием набора реагентов ABI PRISM BigDye™ Terminator Cycle 3.1 (Applied Biosystems, США) в соответствии с инструкцией. Полученные последовательности анализировали в программе SeqScape 3 (Applied Biosystems, США). Множественное выравнивание производили при помощи программы MEGA X (S. Kumar et al., 2018) методом MUSCLE (MUltiple Sequence Comparison by Log-Expectation). Меж - и внутригрупповые дистанции вычисляли с помощью алгоритма Maximum Composite Likelihood (MCL). Филогенетическое дерево выстраивали методом Neighbour-Joining с использованием алгоритма расчета генетических дистанций MaximumCompositeLikelihood и Kimura 2 - параметра модели с использованием дискретного гамма распределения для моделирования скорости эволюции между сайтами в программе MEGA X. Позиции, содержащие пропуски и вырожденные нуклеотиды, исключали в процессе анализа при попарном сравнении последовательностей (опция Pairwaise Deletion).

Изучение генетической структуры BLV проводили c использованием сведений о последовательностях различных штаммов и изолятов возбудителей, представленных в базе данных NCBI. Кластерный анализ изолятов BLV осуществляли на основе 117 нуклеотидных последовательностей длиной до 445 п.н., опубликованных в базах данных NCBI GenBank. В выборку включали сиквенсы, имеющие различное географическое происхождение и классификацию, а также последовательности, полученные в ходе экспериментальных исследований на территории РФ.

Для обработки полученных данных использовали программу Microsoft Excel, входящую в пакет программ Microsoft Office Pro 19.

Результаты исследований. Проведенным ретроспективным и оперативным анализом данных диагностических исследований установлено, что лейкоз наиболее актуален для трех субъектов Уральского региона с развитым молочным животноводством: Челябинская область - 109 неблагополучных пунктов, Курганская область - 72, Тюменская область - 48. В Свердловской области,

сохраняется стойкое благополучие по лейкозу в течение длительного времени - средняя инфицированность животных за последние 5 лет составляет 0,043 % (рис. 1).

0,070% 0,060% 0,050% 0,040% 0,030% 0,020% 0,010% 0,000%

Рисунок 1 - Динамика показателя инфицированности вирусом лейкоза

Генетическое разнообразие ВЬУ и мониторинг географического распространения отдельных вариантов, с последующей кластеризацией вируса лейкоза на отдельные группы изучали на изолятах BLV, выделенных на территории Российской Федерации. Молекулярно-генетический метод геноидентификации изолятов BLV состоял из исследования фрагментов генома вируса лейкоза методами ПЦР-ПДРФ, ДНК-секвенирования коротких участков генома БЬУ с последующей биоинформатической обработкой нуклеотидных последовательностей. Кластерный (филогенетический) анализ этих изолятов вируса лейкоза установил, что на территории РФ персистируют 04, 07, 08 генетические группы вируса лейкоза. Группа G4 (бельгийский генотип) - в Московской, Тюменской, Челябинской областях, Краснодарском крае; группа G7 (австралийский генотип) - в Новосибирской, Вологодской, Тюменской, Свердловской областях и Краснодарском крае; группа G8 - в Московской области. Циркуляция на территории субъекта более чем одного генотипа BLV зарегистрирована в Тюменской области и Краснодарском крае ^4, G7), а также в Московской области (04, 08). При оценке результатов RFLP исследований было установлено, что в популяциях крупного рогатого скота обследуемых географических зон бельгийский генотип G4 БЬУ доминирует над австралийским генотипом G7 БЬУ.

Генотипированием ПЦР-ПДРФ методом изолятов ВЬУ, которые были получены в разное время из животноводческих организаций, расположенных на территории Тюменской области, установлено, что в период 2010-2020 гг. произошло замещение доминирующего генотипа возбудителя. В 2010 году на территории области доминировал «австралийский генотип» ВЬУ (66,7%), доля «бельгийского генотипа» ВЬУ составляла 22,2 %, «смешанного» - 11,1 % (рис. 2). В 2020 году в 94 % проб присутствовал «бельгийский генотип» ВЬУ, который доминировал над остальными генотипами («австралийский» определен в 4 %, а «смешанный генотип» - в 2 % проб).

2014 г. 2015 г. 2016 г. 2017 г. 2018 г. 2019 г. 2020 г. 2021 г.

У

2020 Г. 2010 Г. 4,0% 94,0% 2,0%

/

У

66,7% 22,2% 11,1%

У БЬУ БЬУ

Рисунок 2 - Долевое распределение генотипов изолятов ВЬУ на территории Тюменской области

Распространение бельгийского генотипа ^4 BLV) на территории Тюменской области, может быть связано с иммунобиологическими особенностями этого штамма. Более агрессивное воздействие G4 BLV на иммунную систему восприимчивых животных способствует повышенной провирусной нагрузке на организм, что приводит к более быстрому распространению бельгийского варианта возбудителя среди поголовья крупного рогатого скота и постепенному вытеснению австралийского генотипа ^7 BLV). Предполагаемым источником инфицирования поголовья Тюменской области данным вариантом вируса лейкоза может являться местный, а также импортированный в 2011 году из США крупный рогатый скот. Вероятно, что был получен ложноотрицательный результат серологических тестов при импортировании крупного рогатого скота из Западной Европы.

Таким образом, генотипирование RFLP-методом изолятов BLV, позволило получить новые данные об изменении генетического ландшафта и доминантного генотипа вируса лейкоза на территории субъекта РФ.

Полученные данные дополняют созданную теоретическую базу по изучению молекулярно-генетических и иммунобиологических, эпизоотологических особенностей ВЦУ. Полученные результаты позволяют оценить (SNP) мутации генома возбудителя, эпизоотические особенности географического доминирования отдельных вариаций вируса лейкоза.

Заключение. В ранее выполненных научно-исследовательских работах (2019-2021 гг.) было показано, что эффективность оздоровительных мероприятий и лечебно-профилактических программ по защите сельскохозяйственных животных от заразных заболеваний в значительной степени определяется базой данных о молекулярно-генетические свойствах возбудителей на конкретной территории, в конкретных природно-географических и социально-экономических условиях [1, 4, 7,1 2, 15]. Изучение развития патологических процессов при заразных болезнях, разработка и совершенствование лечебно-профилактических и диагностических препаратов в современных условиях невозможны без постоянного наполнения и обновления этой базы.

Выполненная научно-исследовательская работа позволила получить новые данные о распространении и циркуляции вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЦУ) на территории УрФО; новые данные о молекулярно-генетических свойствах его различных географических вариантов.

Кластерным (филогенетическим) анализом изолятов географических вариантов ВЦУ установлено, что на территории РФ персистируют G4, G7, G8 генетические группы вируса лейкоза. На территории четырех субъектов РФ зарегистрирована циркуляция более чем одного генотипа ВЦУ: генетические группы G4, G7 в Тюменской, Курганской области и Краснодарском крае; генетические группы G4, G8 в Московской области. При этом доказано, что в популяциях крупного рогатого скота обследуемых географических зон доминирует бельгийский генотип G4 ВЦУ. На примере Тюменской области изучена динамика изменения генетического ландшафта и доминантного генотипа вируса лейкоза на территории субъекта. Показано, что в течение 10 лет происходило замещение доминирующего «австралийского генотипа» ВЦУ и минорного «смешанного генотипа» ВЦУ «бельгийским генотипом». За анализируемый период (2010-2020 гг.) доля «бельгийского генотипа» ВЦУ в генетическом ландшафте увеличилась с 22,2% (2010 г) до 94% (2020 г). При этом суммарная доля минорных генотипов ВЦУ уменьшилась в 5,6 раз. В 2010 году суммарная доля минорных «бельгийского генотипа» ВЦУ и «смешанного генотипа» ВЦУ составляла 33,3%, а в 2020 году только 6% («австралийский генотип» ВЦУ + «смешанный генотип»). Определяющим моментом в процессе изменения генетического ландшафта, на наш взгляд, является агрессивное воздействие G4 ВЦУ на иммунную систему крупного рогатого скота, обусловленное молекулярно-генетической пластичностью возбудителя. Данное предположение подтверждается результатами филогенетического анализа изолятов ВЦУ «бельгийского генотипа», полученных на территории Тюменской области, которые формировали отдельные новые кластеры (субгенотипы) и подкластеры в пределах G4 группы.

Таким образом, выполненные исследования позволили расширить и детализировать базу данных по молекулярно-генетическим свойствам вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЦУ), Полученные данные имеют значение для сельскохозяйственной отрасли и ветеринарной практики, так как они позволяют определять риски распространения «агрессивных» штаммов вируса лейкоза, прогнозировать возможность межвидовой передачи возбудителей и конструировать новые современные подходы к мерам профилактики и борьбы с патогеном.

Литература

1. Гулюкин, М. И. Научно-обоснованная модель противоэпизоотических мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота / М. И. Гулюкин, А. Д. Забережный, К. П. Юров и др. // Ветеринария и кормление. - 2018. - № 1. - С. 4-7.

2. Гулюкин, М. И. Распространение и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в центральном федеральном округе / М. И. Гулюкин, Т. В. Степанова, Л. А. Иванова и др. // Ветеринария и кормление. - 2019. - № 6. - С. 8 - 14.

3. Донник, И. М. Ликвидация лейкоза крупного рогатого скота в условиях промышленного производства / И. М. Донник, О. И. Пономарева, Р. А. Кривонос и др. // Ветеринария Кубани. - 2021. - № 2. - С. 3-8.

4. LaDronka R. Impact of bovine leukemia virus on herd level production indicators on U.S. dairy farms. In: 97th Annual Meeting of the Conference of Research Workers in Animal Diseases. Chicago, IL; 2016.

5. Гулюкин, М. И. Генетический полиморфизм вируса лейкоза крупного рогатого скота на территории Российской Федерации / М. И. Гулюкин и др. // Российская сельскохозяйственная наука. -2016. - № 5. - С.

6. Гулюкин, М. И. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и генетические варианты возбудителя на территории животноводческих хозяйств Центрального федерального округа Российской Федерации / М. И. Гулюкин, Н. Г. Козырева // Ветеринария Кубани. - 2017. - № 6. - С. 49.

7. Донник, И. М. Характеристика молекулярно-генетической структуры вируса лейкоза, циркулирующего в популяции крупного рогатого скота в разных регионах РФ / И. М. Донник // Аграрный вестник Урала. - 2012. - № 10-2(105). - С. 14-17.

8. Петропавловский, М. В. Эпизоотологическая и филогенетическая оценка вируса лейкоза крупного рогатого скота на территории Российской Федерации / М. В. Петропавловский, И. М. Донник, Н. А. Безбородова // Инновации и продовольственная безопасность. - 2018. - № 3 (21). - С. 161-165.

9. Suzuki, A. Phylogenetic Analysis of South African Bovine Leukaemia Virus (BLV) Isolates / A. Suzuki et al. // Viruses. - 2020. - № 12 (8). - P. 898.

10. Bai, L. Novel CD8+ cytotoxic T cell epitopes in bovine leukemia virus with cattle / L. Bai, S. Takeshima, E. Isogai et al. // Vaccine. - 2015. - Vol. 33 - P. 7194-7202.

11. Petropavlovsky, M. V. Immuno-biological evaluation of individual genetic variants of bovine leukemia virus in the conditions of the Ural region / M. V. Petropavlovsky, N. A. Vereshchak, N. A. Bezborodova, O. Yu. Oparina. Digital agriculture - development strategy Proceedings of the International Scientific and Practical Conference (ISPC 2019). Advancesin Intelligent Systems Research. - 2019. - P. 372377.

12. De Brogniez, A. Mutation of a Single Envelope N-Linked Glycosylation Site Enhances the Pathogenicity of Bovine Leukemia Virus / De Brogniez A., Bouzar A. B., Jacques J. R. et al. // J. Virology. -2015. - V. 89 (17). - P. 8945-56.

13. Petropavlovsky, M.V. Detection and immunobiological characterization of bovine leukemia virus in Russian Federation territory in dependence on geographikal variations. / M. V. Petropavlovsky, I. M. Donnik, N. A. Bezborodova, A. S. Krivonogova // Journal of Integrated OMICS. - 2019. - Т. 9. № 1. - P. 255.

14. Pluta, A. Molecular characterization of bovine leukemia virus from Moldovan dairy cattle / A. Pluta, M. Rola-Luszczak, P.Kubis et al. // J. Arch. Virol.- 2017. - Vol. 162. - P. 1563-1576.

15. Rola-Luszczak, M. The Molecular Characterization of Bovine Leukaemia Virus Isolates from Eastern Europe and Siberia and Its Impact on Phylogeny / M. Rola-Luszczak, A. Pluta, M. Olech, I. Donnik, M. Petropavlovskiy // PLoS One. - 2013. - Vol. 8. - Issue 3.

16. Donnik, I. M. Revisiting the issue of the molecular-genetic structure of the causative agent of the bovine leukemia virus in the Russian Federation / I. M. Donnik, A. S. Krivonogova, M. V. Petropavlovsky, I. A. Shkuratova, M. Rola-Luszczak, J. Kuzrmak // Indian Journal of Science and Technology. - 2016. - Т. 9. № 42. - P. 104253.

References

1. Gulyukin, M. I. A scientifically based model of antiepizootic measures for bovine leukemia / M. I. Gulyukin, A.D. Zaberezhny, K. P. Yurov et al. // Veterinary medicine and feeding. - 2018. - No. 1. - pp. 4-7.

2. Gulyukin, M. I. Distribution and measures to combat bovine leukemia in the Central Federal District / M. I. Gulyukin, T. V. Stepanova, L. A. Ivanova et al. // Veterinary medicine and feeding. - 2019. - No. 6. -pp. 8-14.

3. Donnik, I. M. Liquidation of leukemia of cattle in conditions of industrial production / I. M. Donnik, O. I. Ponomareva, R. A. Krivonos et al. // Veterinary medicine of Kuban. - 2021. - No. 2. - pp. 3-8.

4. Ladronka R. The effect of the bovine leukemia virus on the production indicators of livestock on dairy farms in the USA. In: 97th annual meeting of the Conference of Scientists on Animal Diseases. Chicago, Illinois; 2016.

5. Gulyukin, M. I. Genetic polymorphism of bovine leukemia virus on the territory of the Russian Federation / M. I. Gulyukin et al. // Russian Agricultural Science. - 2016. - No. 5. - S.

6. Gulyukin, M. I. The spread of bovine leukemia and genetic variants of the pathogen on the territory of livestock farms of the Central Federal District of the Russian Federation / M. I. Gulyukin, N. G. Kozyreva // Veterinary medicine of Kuban. - 2017. - No. 6. - pp. 4-9.

7. Donnik, I. M. Characteristics of the molecular genetic structure of the leukemia virus circulating in the cattle population in different regions of the Russian Federation / I. M. Donnik // Agrarian Bulletin of the Urals. - 2012. - № 10-2(105). - Pp. 14-17.

8. Petropavlovsk, M. V. Epizootological and phylogenetic assessment of bovine leukemia virus on the territory of the Russian Federation / M. V. Petropavlovsk, I. M. Donnik, N. A. Bezborodova // Innovation and food security. - 2018. - № 3 (21). - Pp. 161-165.

9. Suzuki, A. Phylogenetic Analysis of South African Bovine Leukaemia Virus (BLV) Isolates / A. Suzuki et al. // Viruses. - 2020. - № 12 (8). - P. 898.

10. Bai, L. Novel CD8+ cytotoxic T cell epitopes in bovine leukemia virus with cattle / L. Bai, S. Takeshima, E. Isogai et al. // Vaccine. - 2015. - Vol. 33 - P. 7194-7202.

11. Petropavlovsky, M. V. Immuno-biological evaluation of individual genetic variants of bovine leukemia virus in the conditions of the Ural region / M. V. Petropavlovsky, N. A. Vereshchak, N. A. Bezborodova, O. Yu. Oparina. Digital agriculture - development strategy Proceedings of the International Scientific and Practical Conference (ISPC 2019). Advancesin Intelligent Systems Research. - 2019. - P. 372377.

12. De Brogniez, A. Mutation of a Single Envelope N-Linked Glycosylation Site Enhances the Pathogenicity of Bovine Leukemia Virus / De Brogniez A., Bouzar A. B., Jacques J. R. et al. // J. Virology. -2015. - V. 89 (17). - P. 8945-56.

13. Petropavlovsky, M.V. Detection and immunobiological characterization of bovine leukemia virus in Russian Federation territory in dependence on geographikal variations. / M. V. Petropavlovsky, I. M. Donnik, N. A. Bezborodova, A. S. Krivonogova // Journal of Integrated OMICS. - 2019. - T. 9. № 1. - P. 255.

14. Pluta, A. Molecular characterization of bovine leukemia virus from Moldovan dairy cattle / A. Pluta, M. Rola-Luszczak, P.Kubis et al. // J. Arch. Virol.- 2017. - Vol. 162. - P. 1563-1576.

15. Rola-Luszczak, M. The Molecular Characterization of Bovine Leukaemia Virus Isolates from Eastern Europe and Siberia and Its Impact on Phylogeny / M. Rola-Luszczak, A. Pluta, M. Olech, I. Donnik, M. Petropavlovskiy // PLoS One. - 2013. - Vol. 8. - Issue 3.

16. Donnik, I. M. Revisiting the issue of the molecular-genetic structure of the causative agent of the bovine leukemia virus in the Russian Federation / I. M. Donnik, A. S. Krivonogova, M. V. Petropavlovsky, I. A. Shkuratova, M. Rola-Luszczak, J. Kuzrmak // Indian Journal of Science and Technology. - 2016. - T. 9. № 42.- P. 104253.

© Донник И.М., Порываева А.П., Петропавловский М.В., Исаева А.Г., Романова А.С., 2023