УЛУЧШЕННЫЕ АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА ЧЕЛОВЕКА (HRSV), И ПОЛИПЕПТИДЫ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ ТАКИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И/ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

1. Полипептид, который содержит или, по существу, состоит из по меньшей мере одного одиночного вариабельного домена, который специфически связывает белок F hRSV, и выбран из следующих:
a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;
b) одиночных вариабельных доменов, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 аминокислотного отличия от одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что
i) одиночный вариабельный домен содержит аспарагиновую кислоту (Asp, D) в положении 1 (указанное положение определено согласно нумерации по Кабату); и
ii) одиночный вариабельный домен связывает белок F hRSV с такой же, примерно такой же или большей афинностью (указанная аффинность измерена методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или одиночный вариабельный домен имеет такую же, примерно такую же или большую активность (как определено здесь) по сравнению с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 аминокислотного отличия.
2. Полипептид по п. 1, где по меньшей мере один одиночный вариабельный домен выбран из следующих:
a) SEQ ID NO: 140-141 и 154-157;
b) одиночных вариабельных доменов, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 аминокислотного отличия от одной из SEQ ID NO: 140-141 и 154-157, при условии, что:
i) одиночный вариабельный домен содержит пролин (Pro, P) в положении 14, аргинин (Arg, R) в положении 19, лейцин (Leu, L) в положении 20 и лейцин (Leu, L) в положении 108 (указанные положения определены согласно нумерации по Кабату); и
ii) одиночный вариабельный домен связывает белок F hRSV с такой же, примерно такой же или большей афинностью (указанная аффинность измерена методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или одиночный вариабельный домен имеет такую же, примерно такую же или большую активность (как определено здесь) по сравнению с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 аминокислотного отличия.
3. Полипептид по п. 1, который содержит или по существу состоит из по меньшей мере одного одиночного вариабельного домена с SEQ ID NO: 5, где мутирован один или несколько аминокислотных остатков, выбранные из следующих: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19R, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54D, и где глутаминовая кислота в положении 1 была заменена на аспарагиновую кислоту.
4. Полипептид по п. 3, который содержит или по существу состоит из по меньшей мере одного одиночного вариабельного домена с SEQ ID NO: 5, где мутированы следующие аминокислотные остатки:
- Glu1Asp;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Arg105Gln;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.
5. Полипептид согласно любому из пп. 1-4, который дополнительно содержит один или несколько других одиночных вариабельных доменов, необязательно соединенных через один или более пептидных линкеров.
6. Полипептид по п. 5, который является тривалентным полипептидом.
7. Полипептид по п. 6, который направлен против и/или специфически связывает белок F hRSV, и выбран из следующих полипептидов:
a) SEQ ID NO: 142-145 и 162-165;
b) полипептидов, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 аминокислотного отличия от одной из SEQ ID NO: 142-145 и 162-165, при условии, что
i) первый одиночный вариабельный домен, заключенный в указанном полипептиде, имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в положении 1; и
ii) полипептид связывает белок F hRSV с такой же, примерно такой же или большей афинностью (указанная аффинность измерена методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или одиночный вариабельный домен имеет такую же, примерно такую же или большую активность (как определено здесь) по сравнению с полипептидом без 3, 2 или 1 аминокислотного отличия.
8. Полипептид по п. 7, который направлен против и/или специфически связывает белок F hRSV, и выбран из следующих полипептидов:
a) SEQ ID NO: 144-145 и 162-165;
b) полипептидов, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 аминокислотного отличия от одной из SEQ ID NO: 144-145 и 162-165, при условии, что
i) одиночный вариабельный домен, заключенный в указанном полипептиде, содержит пролин (Pro, P) в положении 14, аргинин (Arg, R) в положении 19, лейцин (Leu, L) в положении 20 и лейцин (Leu, L) в положении 108 (указанные положения определены согласно нумерации по Кабату); и
ii) полипептид связывает белок F hRSV с такой же, примерно такой же или большей афинностью (указанная аффинность измерена методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или полипептид имеет такую же, примерно такую же или большую активность (как определено здесь) по сравнению с полипептидом без 3, 2 или 1 аминокислотного отличия.
9. Полипептид по п. 7 или 8, содержащий или по существу состоящий из SEQ ID NO: 53 в которой первая глутаминовая кислота была заменена на аспрарагиновую кислоту, и в которой, необязательно, в по меньшей мере одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) одиночном вариабельном домене(ах) который(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранные из следующих: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19R, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.
10. Полипептид по п. 9, содержащий или, по существу, состоящий из SEQ ID NO: 53, где по меньшей мере в одном одиночном вариабельном домене, который образует часть SEQ ID NO: 53, мутирован(ы) следующий(ие) аминокислотный(ые) остаток(тки):
- Glu1Asp;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Arg105Gln;
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или
- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.
11. Полипептид по п. 7, содержащий или, по существу, состоящий из одной из SEQ ID NO: 142-145 и 162-165.
12. Нуклеиновая кислота, которая кодирует полипептид по любому из пп. 1-11.
13. Хозяин или клетка-хозяин, который экспрессирует или который в подходящих условиях способен экспрессировать полипептид по любому из пп. 1-11, и/или который содержит нуклеиновую кислоту по п. 12.
14. Композиция, содержащая полипептид по любому из пп. 1-11 или нуклеиновую кислоту по п. 12.
15. Композиция по п. 14, которая представляет собой фармацевтическую композицию.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество полипептида по любому из пп. 1-11 и носитель, подходящий для доставки в легкие.
17. Способ получения полипептида по любому из пп. 1-11, включающий, по меньшей мере, стадии:
a) экспрессии в подходящих клетке-хозяине или организме-хозяине или в другой подходящей системе экспрессии нуклеиновой кислоты по п. 12,
или
культивирования и/или поддержания хозяина или клетки-хозяина по п. 13 в условиях, которые таковы, что указанные хозяин или клетка-хозяин экспрессируют и/или продуцируют полипептид по любому из пп. 1-11, необязательно, с последующим;
b) выделением и/или очисткой полипептида по любому из пп. 1-11, полученного таким образом.
18. Способ профилактики и/или лечения заражения hRSV, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества полипептида по любому из пп. 1-11 и/или композиции по любому из пп. 14-16.
19. Способ профилактики и/или лечения, по меньшей мере, одного заболевания выбранного из респираторного заболевания, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, бронхиолита (воспаления мелких дыхательных путей в легких), пневмонии, одышки, кашля, (рецидивирующего) стридора и астмы, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества полипептида по любому из пп. 1-11 и/или композиции по любому из пп. 14-16.
20. Фармацевтическое устройство, подходящее для доставки в легкие, содержащее полипептид по любому из пп. 1-11 и/или композицию, включающую его.
21. Фармацевтическое устройство по п. 20, которое представляет собой ингалятор для жидкостей (например, суспензии тонких твердых частиц или капель), аэрозоль или ингалятор для сухого порошка.