Иммуногенная сепарация на основе использования моноклональных антител

ленную” зону, когда доброкачественные процессы в организме определяют значения онкомаркеров, выходящие за пределы нормы. Все женщины с повышенными результатами взяты на учет в областной онкоцентр, им назначено лечение соответствующих заболеваний.

Верхняя Пышма, несмотря на высокую канцероопасность производства, размещенного в этом городе, является по он-копатологии относительно спокойным городом. Средний за 10 лет показатель заболеваемости по всем локализациям опухолей в сумме на 100 тыс. населения составил 3 человека (в г. Екатеринбурге — 234; в расчет не взяты города экологического бедствия). Только по трем локализациям рака в В. Пыш-ме показатели выше, чем в среднем по области — это рак молочной железы (32,2 при 23,3 среднеобластных), легкого (68,8 против 61,8), кожи (24,6 прот ив 22,2). Однако рак молочной железы не является профессиональным заболеванием.

Таким образом, использование онкомаркеров дает возможность расширить круг пациентов с подозрением на наличие опухоли (как злокачественной, так и доброкачественной природы). Акцент противораковых мероприятий целесообразно сделать на нрофосмотрах, так как основная часть населения трудится на промышленных предприятиях.

Мониторинг сывороточных опухоле-ассоциированных антигенов у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС

Дрыгнна Л.Б., Смольянннов П.Н., Алхутова H.A., Калинина Н.М.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербург, Россия

Ликвидаторы последствий аварии (ЛПА) на ЧАЭС представляют собой группу населения, для которой характерно осложнённое течение соматических заболеваний и высокая вероятность возникновения предраковых состояний и онкологической патологии, причём наиболее вероятно образование солидных опухолей с латентным периодом не менее 10 лет от момента радиационного воздействия до начала заболевания. Для обнаружения ранних признаков развития неоплазий актуальным является определение уровня сывороточных опухолеассоциированных антигенов (ОМ). Цель настоящего исследования заключалась в проведении программы скрининга ОМ у ЛПА для выявления лице высоким онкологическим риском в отдалённые сроки (через 10 лет).

Для этого использовалось количественное иммунофер-ментное определение онкомаркеров — РЭА, АФП, CA 19-9, Г1СА и НСЕ (тест-системы фирмы HOFFMAN LA-ROCH Е, Швейцария). За дискриминационные концентрации (ДК) маркеров были приняты наибольшие значения их содержания в сыворотке (плазме) крови практически здоровых людей. Нами были проанализированы образцы крови 84 ЛПА 1986-87 гг. в возрасте 30-55лет, получивших дозу облучения 2 -30 сГр и 25 практически здоровых людей. В случае превы-

шения ДК образцы крови исследовались повторно после лечения для исключения неспецифического повышения уровня ОМ, связанног о с острой формой имеющихся заболеваний. Средний уровень РЭА у здоровых людей составил 1,92±0,29 нг/мл, у ЛПА — 2,72±0,75 нг/мл, превышение ДК (более 5 нг/мл) отмечено у 7 человек (8,3%). Средний уровень СА19-9 у доноров составил 6,63± 1,19 Е/мл, у ЛПА — 12,33± 1,16 Е/мл и был достоверно выше, чем у доноров (р<0,05). Повышенный уровень СА 19-9 (свы ше 37 Е/мл) выявлен у 6 ЛПА (7,1%). Средний уровень АФП у доноров и ЛПА составил 1,95±0,65 иЗ,48±0,55 МЕ/мл соответственно (р<0,05). Превышение ДК свыше 10 МЕ/мл у ЛПА зафиксировано в 3 случаях (3,6 %). Концентрация ПСЕ в норме и у ЛПА составила соответственно 9,42±2,44 и 35,43±8,73 нг/мл (достоверность различия р<0,01), причём гювышенныиуро-вень НСЕ (более 22 нг/мл) был отмечен у 17 ЛПА (20,2%). Повышенная концентрация ПСА у Л ПА, при среднем уровне 2,51 ±0,36 нг/мл, выявлена у 20 человек (23,8 %), однако степень повышения (от 4 до 10 нг/мл) была характерна для доброкачественных гиперплазий. Из 84 ЛПА у 10 (11,9 %) было зарегистрировано одновременное повышение концентрации нескольких сывороточных ОМ. Нормализация показателей концентрации ОМ после лечения произошла не во всех случаях. В результате выполненных исследований была определена группа болы )ых (7,1 %), требующих углублённого обследования и динамического наблюдения, что подтверждает необходимость проведения скрининга ОМ среди ЛПА в отдаленном периоде после воздействия комплекса факторов радиационной катастрофы.

Иммуногенная сепарация на основе использования моноклональных антител

Иванов П.К., Блохин Д.Ю., Донская О.Н.,

Полосухина Е.Р.,Хулуп Г.Я.,Барышников А.Ю.

Российский онкологический научный центр

им.Н.Н.Блохина РАМН, Витебский Государственный

медицинский институт, Беларусь

Применение высокодозной химио- и лучевой терапии приводит не только к подавлению опухолевого процесса, но и к гибели активно пролиферирующих стволовых клеток костного мозга, являющихся предшественниками всех ростков гемопоэза. Одним из путей преодоления гемотоксичности является аутотрансплантация костного мозга, которая предполагает, что трансплантированный костный мозг не должен быть контаминирован метастатическими клетками. Перспективным методом позитивной селекции является иммуномагнитная сепарация на основе применения моноклональных антител (МКА) к CD34 антигену. С другой стороны, иммуномагнитная сепарация может эффективно применяться и для негативной селекции, а именно для выявления и удаления метастазирующих клеток при раке молочной железы с помощью МКА, реагирующих с опухолевыми клетками.

Целью работы явилась отработка условий применения в модельных системах иммуносорбента (ИММС) на

основе МКЛ к антигену CD34 ICO-115, к антигену CD50 ICO-60, к антигену CD3 ГСО-90 и антигену ЛГ4, являющемуся маркером эпителиальной железистой ткани, ICO-25.

Материалы н методы: Эксперименты проводили на перевиваемых клеточных линиях, а также молельных системах. состоящих из смеси клеток перевиваемых клеточных линий: Jurkat- экспрессирует CD3 антиген; Eskol - экспрессирует CD50: КО 1 - экспрессирует CD34; Caov — экспрессирует антиген, определяемый МКА ICO-25; JY- не экспрессирует ни одного из исследуемых антигенов, а также на клетках периферической кропи больных хроническим ми-елолейкозом в стадии бластнопо криза (ХМЛ GK) и лимфоцитах периферической кровиздоровых доноров. Антигенный состав клеточной суспензии до инкубации с ИММС и несвязавшиеся фракции анализировали на проточном ци-тофлуориметре в реакции иммунофлуоресценции. Используемые МКА получены и охарактеризованы в РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН. В качестве основы для иммуно-сорбета использовали полистирольные микросферы размером 4 микрон с включенными в них частицами Fe Ог

Результаты: ИММС /шоснове МКА ICO-115, направленных к антигену стволовых клеток CD34, с высокой эффективностью (97%) извлекал С034-позитнвные клетки из культуры линии KG1, экспрессирующей CD34 антиген на 100% клеток. В молельной системе из смеси клеток линий Kül nJY, неэкспрессирующейС034, ИММС разделял клетки со 1 00% эффективностью при доле клеток CD34+ в смеси от 1 до 10%. Аналогичные результаты получены при выделении CD34 клеток из периферической крови б-го К. с диагнозом ХМЛ БК и содержанием бластных CD34 клеток 80%. Показана специфичность полученного ИММС, в качестве нег ативного контроля использовали лимфоциты периферической крови здоровых доноров. ИММС на основе МКА 1СО-90, являющегося маркером зрелых Т-кле-ток, показал 100% специфичность в сепарации CD3 клеток в культуре линии Jurkat, атакже в выделении CD3 мо-нонуклеарных клеток здоровых доноров. Получены достоверные результаты по сепарации CD50 - клеток в модельной системе из смеси CD50 -клеток JY и CD50-негативных клеток Eskol. На основе МКА ICO-25 получен ИММС, показавший специфическое связывание с клетками Caov.

Заключение: Показана пригодность полученных иммуносорбентов на основе МКА для позитивной и негативной селекции нормальных и опухолевых клеток.

Влияние клеточных факторов на продукцию нитроксид анионов макрофагами в норме и при опухолевом росте

Киселева Е. П.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург, Россия

В настоящее время большое внимание уделяется вопросам регуляции ангиогенеза в норме и при росте опухо-

лей. Опухолевые клетки выделяют факторы, непосредственно стимулирующие ангиогенез — например, GM-CSF и VEGF. Кроме того, эти и другие опухолевые продукты могут активировать макрофаги, которые также выделяют ан-гногенные факторы. Продукция нитроксид анионов имеет большое значение для роста сосудов. Как показано рядом авторов, в зависимости от концентрации, нитроксил анионы могут ускорять или замедлять ангиогенез in vivo. Известно, что нормальный клеточный метаболит— молочная кислота, выделяется опухолевыми клетками в большом количестве. Недавно было показано, что культивирование макрофагов в присутствии лактата вызывает продукцию ими ангиогенных факторов —л частности. VEGF.

Целью настоящей работы было изучить продукцию нитроксид анионов макрофагами в присутствии лактата, а также супернатантов опухолевых и эндотелиальных клеток. Кроме того, эту же фукцию оценивали при ко-культивиропании макрофагами с клетками мышиной гепатомы 22а, фпбробластами L929 или эндотелиальными клетками человека ECV304. В качестве модели использовали мышиные перитонеальные макрофаги от нормальных животных или опухоленосителей, которым инокулировалн клетки сингенпоп гепатомы 22а. Оценку продукции нитроксид анионов проводили с помощью измерения концентрации N02'n супернатантах клеток спектрофотометрическим методом.

Полученные результаты показали, ч то лактат натрия в концентрации 15 мМ является индуктором синтеза N02' как в макрофагах контрольных животных, гак и опухоленосителей. При исследовании этого показателя у мышей с гепатомой в динамике опухолевого роста было выявлено два пика усиления: на раннем этапе (! сут. после инокуляции) и на поздних сроках роста (30 сут. после инокуляции), когда опухоли достигали значителы гых размеров.

Кокультивнрование макрофагов интактных животных с опухолевыми клетками гепатомы 22а и фпбробластами L929 в течение 48 час. вызывает активацию синтеза нитритов, причем фибробласты более активно стимулируют функцию макрофагов. При раздельном культивировании в супернатантах гепатомы 22а, фпбробластов или эндотелиальных клеток содержание нитритов нами не обнаружено. Культивирован и с макрофагов в присутствии супернатантов 72-часовых культур вышеперечисленных клеток стимулировало продукцию NOj' макрофагами, причем наиболее активным оказался супернатант гепатомы 22а.

Полученные данные позволяют заключить, что молочная кислота является индуктором синтеза нитроксид анионов в макрофагах и может иметь большое значение как стимулятор ангиогенеза при опухолевом росте. Наши исследования согласуются с данными других авторов о том, что культивирование макрофагов в присутствии опухолевых клеток приводит к стимуляции продукции нитроксид анионов. По-видимому, опухолевые клетки выделяют факторы, стимулирующие эту функцию макрофагов, что подтверждается также активностью супернатантов. Возможно, одним из таких факторов является повышенное содержание лактата. Впервые было показано, что супернатан ты