ДВУХЦЕПОЧЕЧНАЯ МОЛЕКУЛА РНК И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 22 или 23 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую SEQ ID NO:1 от 5' к 3', и
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую
i) модифицированные нуклеотиды в первом и последних двух нуклеотидах цепи-"пассажира"; и
ii) терминальную модификацию нуклеотида на 5' -конце.
2. Молекула РНК по п. 1, при этом молекула представляет собой 23 пары оснований в длину, и активная цепь содержит SEQ ID NO:2.
3. Молекула РНК по п. 1, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и/или 23 SEQ ID NO:4, при этом меньше, чем половина от общего числа нуклеотидов в цепи-"пассажире" являются модифицированными нуклеотидами.
4. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды, расположенные в положениях i) 1 и 2, и/или ii) 22 и 23 SEQ ID NO:4.
5. Молекула РНК по любому из пп. 2 и 3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды, расположенные в положениях i) 1 и 2, и ii) 22 и 23 SEQ ID NO:4.
6. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях i) 3 и 4, и/или ii) 19 и 20 SEQ ID NO:4.
7. Молекула РНК по п. 6, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях i) 3 и 4 или ii) 19 и 20 SEQ ID NO:4, но не в обоих положениях i) и ii).
8. Молекула РНК по п. 4, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 5 и 6 относительно SEQ ID NO:4.
9. Молекула РНК по п. 4, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 9 и 10 SEQ ID NO:4.
10. Молекула РНК по п. 4, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 и 12 SEQ ID NO:4.
11. Молекула РНК по п. 4, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 13 и 14 SEQ ID NO:4.
12. Молекула РНК по п. 4, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 17 и 18 SEQ ID NO:4.
13. Молекула РНК по п. 4, в которой число модифицированных нуклеотидов в цепи-"пассажире" равно от четырех до восьми.
14. Молекула РНК по п. 13, в которой число модифицированных нуклеотидов в цепи-"пассажире" равно от пяти до семи.
15. Молекула РНК по п. 14, в которой число модифицированных нуклеотидов в цепи-"пассажире" равно шести.
16. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" не имеет модифицированного нуклеотида, расположенного в положениях 7, 8, 9, 15 и 16 SEQ ID NO:4.
17. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 1, 2, 21, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
18. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 1, 2, 3, 4, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
19. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 1, 2, 19, 20, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
20. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой активная цепь содержит, по меньшей мере, два модифицированных нуклеотида, при этом модифицированные нуклеотиды не находятся в первых двух положениях на 5'-конце.
21. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой активная цепь не содержит модифицированного нуклеотида в первых двух положениях на 5'-конце.
22. Молекула РНК по п. 1, в которой активная цепь не содержит модифицированного нуклеотида в первом или последних двух положениях от концов.
23. Молекула РНК по п. 20, в которой активная цепь имеет модифицированные нуклеотиды в положениях 3, 4, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 и/или 18 SEQ ID NO:2.
24. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 15 и 16 SEQ ID NO:2.
25. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 3 и 4 SEQ ID NO:2.
26. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 11 и 12 SEQ ID NO:2.
27. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 11, 12, 13 или 14 SEQ ID NO:2.
28. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 17 и 18 SEQ ID NO:2.
29. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 11, 12, 15 и 16 SEQ ID NO:2.
30. Молекула РНК по п. 29, в которой активная цепь дополнительно содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 13, 14, 17 и 18 SEQ ID NO:2.
31. Молекула РНК по п. 23, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 3, 4, 15 и 16 SEQ ID NO:2.
32. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой активная цепь не имеет любых модифицированных нуклеотидов.
33. Молекула РНК по п. 29, в которой цепь-"пассажир" не содержит любых модифицированных нуклеотидов, за исключением 5'-терминальной модификации.
34. Молекула РНК по п. 29, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 20, 21, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
35. Молекула РНК по п. 29, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 3, 4, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
36. Молекула РНК по п. 29, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1,2, 19, 20, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
37. Молекула РНК по п. 30, в которой цепь-"пассажир" не содержит любых модифицированных нуклеотидов, за исключением 5'-терминальной модификации.
38. Молекула РНК по п. 30, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 20, 21, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
39. Молекула РНК по п. 30, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 3, 4, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
40. Молекула РНК по п. 30, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 19, 20, 22 и 23 SEQ ID NO:4. [Α-ID 206/P-ID215]
41. Молекула РНК по п. 31, в которой цепь-"пассажир" не содержит любых модифицированных нуклеотидов, за исключением 5'-терминальной модификации.
42. Молекула РНК по п. 31, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 21, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
43. Молекула РНК по п. 31, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 3, 4, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
44. Молекула РНК по п. 31, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:4 и модифицированные нуклеотиды в положениях 1, 2, 19, 20, 22 и 23 SEQ ID NO:4.
45. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой терминальная модификация цепи-"пассажира" содержит группу низшего алкиламина.
46. Молекула РНК по любому из пп. 1-3, в которой модифицированные нуклеотиды имеют модификации сахара.
47. Молекула РНК по п. 46, в которой модификация сахара представляет собой 2'-OMe.
48. Двухцепочечная молекула РНК длиной 20-23 пары оснований, при этом молекула РНК имеет тупые концы на обеих сторонах, содержит активную цепь, имеющую последовательность SEQ ID NO:2, и полностью комплементарную цепь-"пассажир" с модифицированным нуклеотидом на 5'-конце, при этом активная цепь содержит, по меньшей мере, один модифицированный внутренний нуклеотид и при этом двухцепочечная молекула РНК является более стабильной по сравнению с двухцепочечной молекулой РНК с тупыми концами, лишенной любой модификации внутреннего нуклеотида.
49. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу РНК, по любому из пп. 1-48.
50. Способ обеспечения клетки активностью miR-34a, включающий введение в клетку молекулы РНК по любому из пп. 1-48.
51. Способ уменьшения клеточной пролиферации, включающий введение в клетку эффективного количества молекулы РНК по любому из пп. 1-48.
52. Способ индукции апоптоза в клетке, включающий введение в клетку эффективного количества молекулы РНК по любому из пп. 1-48.
53. Способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей молекулу РНК по любому из пп. 1-48.
54. Способ по п. 54, включающий дополнительную терапию рака.
55. Способ по п. 53, в котором у пациента был диагностирован рак.
56. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 23 или 24 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую
i) SEQ ID NO:5 от 5' к 3', и
ii) по меньшей мере, один модифицированный внутренний нуклеотид; и
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую терминальную модификацию нуклеотида на 5'-конце.
57. Молекула РНК по п. 56, при этом молекула представляет собой 23 пары оснований в длину.
58. Молекула РНК по п. 56, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положениях 1 (G), 2 (С), 3 (А), 21 (С), 22 (С) и/или 23 (U) SEQ ID NO:6.
59. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды, расположенные в подгруппе положений,
при этом подгруппа представляет собой i) 1 (А), 2 (А) и 3 (С) и/или ii) 22 (С) и 23 (А) SEQ ID NO:6.
60. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях i) 1 (А), 2 (А) и 3 (С) SEQ ID NO:6.
61. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях ii) 22 (С) и 23 (A) SEQ ID NO:6.
62. Молекула РНК по п. 59, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях 1 (А), 2 (А), 3 (С), 22 (С) и 23 (A) SEQ ID NO:6.
63. Молекула РНК по п. 59, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях i) или ii) SEQ ID NO:6, но не в обоих положениях i) и ii).
64. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой цепь-"пассажир" дополнительно содержит модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях 4 (А), 7 (А), 8 (G), 9 (С), 10 (U), 11 (А), 12 (А), 13 (С), 14 (U), 19 (U) и/или 21 (С) SEQ ID NO:6.
65. Молекула РНК по п. 56, в которой цепь-"пассажир" не имеет модифицированный нуклеотид, расположенный в положениях 5 (U), 6 (С) и 15 (А) и/или 16(C) SEQ ID NO:6.
66. Молекула РНК по п. 56, в которой число модифицированных нуклеотидов в цепи-"пассажире" равно от двух до восьми.
67. Молекула РНК по п. 66, в которой число модифицированных нуклеотидов в цепи-"пассажире" равно от трех до пяти.
68. Молекула РНК по п. 56, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 1 (А), 2 (А), 3 (С), 17 (А), 18 (С), 21 (С), 22 (С) и 23 (A) SEQ ID NO:6.
69. Молекула РНК по п. 56, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 1 (А), 2 (А), 3 (С), 11 (А), 12 (А), 13 (С), 14 (U), 21 (С), 22 (С) и 23 (A) SEQ ID NO:6.
70. Молекула РНК по п. 56, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 1 (А), 2 (А), 3 (С), 11 (А), 12 (А), 13 (С), 14 (U), 17 (А), 18 (С), 21 (С), 22 (С) и 23 (A) SEQ ID NO:6.
71. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой активная цепь содержит, по меньшей мере, два модифицированных нуклеотида, при этом модифицированные нуклеотиды не находятся в первых двух положениях на 5'-конце.
72. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой активная цепь не имеет модифицированного нуклеотида в первых двух положениях на 5'-конце.
73. Молекула РНК по п. 56, в которой активная цепь не содержит модифицированного нуклеотида в первом или последних двух положениях от концов.
74. Молекула РНК по п. 71, в которой активная цепь содержит модифицированные нуклеотиды в положениях 3 (G), 4 (С), 11 (G), 12 (U), 13 (А), 14 (G), 15 (С), 16 (С), 17 (U) и/или 18 (G) SEQ ID NO:5.
75. Молекула РНК по п. 74, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 (G) и 12 (U) SEQ ID NO:5.
76. Молекула РНК по п. 74, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 17 (U) и 18 (G) SEQ ID NO:5.
77. Молекула РНК по п. 74, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 (G), 12 (U), 17 (U) и 18 (G) SEQ ID NO:5.
78. Молекула РНК по п. 77, в которой активная цепь дополнительно содержит модифицированный нуклеотид в положениях 3 (G), 4 (С), 13 (А), 14 (G), 15 (С) и/или 16(C) SEQ ID NO:5.
79. Молекула РНК по п. 74, в которой цепь-"пассажир" не содержит любые модифицированные нуклеотиды.
80. Молекула РНК по п. 68, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 (G), 12 (U), 17 (U) и 18 (G) SEQ ID NO:5.
81. Молекула РНК по п. 69, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 (G), 12 (U), 17 (U) и 18 (G) SEQ ID NO:5.
82. Молекула РНК по п. 70, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положениях 11 (G), 12 (U), 17 (U) и 18 (G) SEQ ID NO:5.
83. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой терминальная модификация цепи-"пассажира" содержит группу низшего алкиламина.
84. Молекула РНК по любому из пп. 56-58, в которой модифицированные нуклеотиды имеют модифицированные сахара.
85. Молекула РНК по п. 84, в которой модификация сахара представляет собой 2'-OMe.
86. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 23 или 24 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую
i) SEQ ID NO:5 от 5' к 3', и
ii) по меньшей мере, один модифицированный внутренний нуклеотид; и
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую терминальную модификацию нуклеотида на 5'-конце и, по меньшей мере, одну модификацию сахара в положениях 1 (G), 2 (С), 3 (А), 21 (С), 22 (С) и/или 23 (U) SEQ ID NO:6.
87. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 23 или 24 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую, по меньшей мере, основания 1-23 SEQ ID NO:5 от 5'к 3'; и
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую:
i) терминальную модификацию нуклеотида на 5'-конце;
ii) модификацию сахара в первых трех и последних трех нуклеотидах; и
iii) ) модификацию сахара нуклеотидов в одном или нескольких из положений 11 (А), 12 (А), 13 (С), 14 (U), 17 (А) и/или 18 (С) SEQ ID NO:6.
88. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу РНК по любому из пп. 56-87.
89. Способ обеспечения клетки активностью miR-34c, включающий введение в клетку молекулы РНК по любому из пп. 56-86.
90. Способ уменьшения клеточной пролиферации, включающий введение в клетку эффективного количества молекулы РНК по любому из пп. 56-86.
91. Способ индукции апоптоза в клетке, включающий введение в клетку эффективного количества молекулы РНК по любому из пп. 56-86.
92. Способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей молекулу РНК по любому из пп. 56-86.
93. Способ по п. 92, включающий дополнительную терапию рака.
94. Способ по п. 92, при этом у пациента был диагностирован рак.
95. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 22 или 23 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую
i) SEQ ID NO:5 от 5' к 3', и
ii) по меньшей мере, один модифицированный внутренний нуклеотид; и
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую терминальную модификацию нуклеотида на 5'-конце.
96. Молекула РНК по п. 95, при этом молекула представляет собой 23 пары оснований в длину.
97. Молекула РНК по пунктам 95 и 96, в которой активная цепь содержит модифицированный нуклеотид в положении 3, 4, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 и/или 18 в активной цепи.
98. Молекула РНК по любому из пп. 95 и 96, в которой активная цепь содержит, по меньшей мере, два модифицированных внутренних нуклеотида.
99. Молекула РНК по п. 98, в которой активная цепь содержит не больше, чем 11 модифицированных внутренних нуклеотидов.
100. Молекула РНК по любому из пп. 95 и 96, в которой цепь-"пассажир" содержит, по меньшей мере, один модифицированный внутренний нуклеотид.
101. Молекула РНК по п. 100, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положении 1, 2, 3, 4, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 19, 21 и/или 22 в цепи-"пассажире".
102. Молекула РНК по любому из пп. 95 и 96, в которой цепь-"пассажир" не имеет модифицированного нуклеотида в положении 15 и/или 16.
103. Молекула РНК по любому из пп. 95 и 96, в которой цепь-"пассажир" содержит SEQ ID NO:3.
104. Молекула РНК по п. 103, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положении 1, 2, 3, 5, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21 и/или 22 в цепи-"пассажире".
105. Молекула РНК по любому из пп. 95-96, в которой активная цепь содержит SEQ ID NO:5.
106. Молекула РНК по п. 105, в которой цепь-"пассажир" содержит модифицированный нуклеотид в положении 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 19, 21, 22 и/или 23 в цепи-"пассажире".
107. Молекула РНК по любому из пп. 95-96, в которой активная цепь содержит последовательность SEQ ID NO:9.
108. Двухцепочечная молекула РНК с тупыми концами длиной 22 или 23 пары оснований, содержащая:
a) активную цепь, имеющую
i) SEQ ID NO:9 от 5' к 3', и
ii) модифицированный нуклеотид в положении 3, 4, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 и/или 18;
b) полностью комплементарную цепь-"пассажир", содержащую терминальную модификацию нуклеотида на 5'-конце.