КОРМ СУХОЙ ПОЛНОРАЦИОННЫЙ ДЛЯ СОБАК КРУПНЫХ ПОРОД СБАЛАНСИРОВАННОГО АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА С ДОКАЗАННЫМИ БИО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ (ВАРИАНТЫ)
DRY FULL RATION FODDER FOR LARGE BREED DOGS BALANCED IN TERMS OF AMINO ACID COMPOSITION WITH PROVED BIO-FUNCTIONAL PROPERTIES (VERSIONS)

Изобретение относится к мясной промышленности и может быть использовано в ветеринарии, а именно для кормления собак.
В последнее десятилетие большое внимание уделяется специализированным кормам для различных категорий животных. Многочисленные исследования показали, что компоненты кормов обладают не только питательной ценностью, но и регулируют различные функции и биохимические реакции организма. Корма для собак являются многокомпонентными системами, состав которых должен обладать необходимой плотностью обменной энергии и отвечать потребности целевой категории пород собак в макронутриентах (белок, жир, углеводы, кальций, фосфор, пищевые волокна) и микронутриентах (витамины, таурин, микроэлементы). Недостаточная сбалансированность корма по источникам белка, жиров, макро- и микроэлементов может приводить к развитию алиментарных заболеваний, нарушений липидного и углеводного обмена у собак, нарушению баланса микрофлоры и деятельности желудочно-кишечного тракта, развитию клинических проявлений пищевой аллергии. Таким образом, очевидно, что для профилактики развития клинических признаков пищевой аллергии, повышения антиоксидантного статуса, профилактики функциональных нарушений со стороны деятельности желудочно-кишечного тракта собак и восстановления баланса его микрофлоры необходимо вводить в состав кормов для собак гипоаллергенные кормовые ингредиенты, обладающие антиоксидантными пребиотическим действием.
В частности, известны композиции кормового продукта для домашнего животного (Патент RU №2447676 C2, A23K 1/16, 20.04.2012). Композиция кормового продукта для домашнего животного включает: от около 5 до около 70% белка; от около 0,5 до около 1,6% метионина; от около 50 до около 200 частей на миллион марганца; от около 0,1 до около 0,5% докозогексаеновой (ДГК), от около 0,1 до около 0,7% эйкозопентаеновой кислоты (ЭПК); от около 1200 до около 7500 частей на миллион холина; от около 1000 до около 2000 частей на миллион таурина, от около 2,5 до около 6% линолевой кислоты, от около 1 до около 3% общих n-3 жирных кислот, от около 50 до около 1200 МЕ/кг витамина Е, от около 50 до около 500 частей на миллион витамина С, от около 50 до около 500 частей на миллион карнитина и от около 2,5 до около 7 г лизина/1000 ккал. Способ регуляции экспрессии генов у собаки включает введение указанной композиции собаке или самке перед наступлением или во время беременности (когда щенок находится в утробе), или во время вскармливания молоком, или после отъема. Изобретение обеспечивает благоприятную модификацию экспрессии генов у животного таким образом, что усиливается общее развитие и снижение частоты заболеваний у животного.
Недостатком данного изобретения является тот факт, что он ориентирован она применение для регуляции экспрессии генов у следующих групп собак: беременные и кормящие самки, щенки в возрасте до 1 года, что не позволяет применять у всех категорий собак крупных пород. В примерах, иллюстрирующих данное изобретение, показано, что при кормлении щенков в возрасте до 1 года предложенной композицией по сравнению с контролем наблюдается понижающая регуляция генов активации иммунитета, что предполагает активацию функций иммунной системы. Последняя, в свою очередь, может провоцировать развитие клинических проявлений пищевой аллергии у собак с чувствительной кожей.
Известна кормовая композиция (RU №2428055 C2, A23K 1/16, A23K 1/00, A23L 1/30, A23L 1/302, 10.09.2011), содержащая биологически активную добавку, включающую животный гидролизат. Изобретение относится к биологически активным добавкам (БАД), содержащим пробиотики. БАД для животных содержит, по меньшей мере, один пробиотик и животный гидролизат, сухие пивные дрожжи, витамин С, витамин Е, бета-каротин, протеинат цинка, протеинат марганца, сульфат железа, протеинат меди, йодат кальция и селенит натрия. Предложена кормовая композиция, содержащая БАД и один или несколько ингредиентов, подходящих для употребления животным. Изобретение позволяет получить БАД, которая способствует укреплению иммунной системы, усиливает благоприятные воздействия пробиотиков и продлевает срок жизнеспособности пробиотиков.
Один из недостатков приведенной выше кормовой композиции заключается во введении в организм домашнего животного (кошки или собаки) экзогенных пробиотических микроорганизмов с кормом в количестве 106-109 живых клеток в сутки, что может приводить к выраженному изменению баланса микрофлоры желудочно-кишечного тракта животного. Данный подход оправдан при наличии стойких нарушений микрофлоры желудочно-кишечного тракта животного, влияющих на функционирование иммунной и пищеварительной систем. В то же время в большинстве случаев более рациональной стратегией является стимуляция эндогенной симбиотической микрофлоры за счет введения в состав корма факторов, способствующих стимуляции ее роста, повышению жизнеспособности, адгезивных и колонизирующих свойств. Одним из назначений, раскрытых в Патенте (RU №2428055 С2, A23K 1/16, A23K 1/00, A23L 1/30, A23L 1/302, 10.09.2011), является улучшение здоровья, в частности состояния желудочно-кишечного тракта домашнего животного. В то же время заявления о положительном влиянии предложенной БАД на здоровье домашнего животного базируются исключительно на известных данных по биологической активности пробиотиков, витаминов и микроэлементов. В приведенных примерах отмечается, что при введении БАД в состав корма путем распыления по поверхности или гомогенного распределения во всем объеме корма приводило к значимому возрастанию предпочтительности данного корма для домашних животных, однако отсутствуют данные напрямую демонстрирующие биофункциональность предложенной БАД.
Известны композиции, сбалансированные по соотношению лизина и незаменимых аминокислот (Патент RU №2426443 C2, A23K 1/00, A23K 1/16, 20.08.2011). Группа изобретений относится к кормлению животных. Включает композиции, сбалансированные по соотношению лизина и незаменимых аминокислот и метаболизируемой энергии, применение данных композиций, а также способы профилактики или лечения ожирения у животного без сопутствующей потери мышечной массы. Группа изобретений позволяет контролировать массу тела животного за счет профилактики и лечения ожирения у животного без сопутствующей потери мышечной массы, либо ее сохранения и прироста.
Недостатком данных композиций для кормления собак крупных пород с нормальной массой тела является высокое содержание белка (>33%), что может приводить к повышенной нагрузке на печень и почки и увеличению размеров печени (гепатомегалия). Кроме того, повышение количества потребляемого пищевого белка может провоцировать развитие клинических признаков пищевой аллергии у собак с чувствительной кожей, что ограничивает сферу применения данного изобретения.
12
Известен корм для профилактики метаболических нарушений, усиления иммунитета и гепатопротекторной функции у сельскохозяйственных, домашних животных, птицы и рыб (Патент RU №2386342 C1, A23K 1/00, A23K 1/16, 20.04.2010). В состав корма входят следующие компоненты: рибоксин, кальций глицерофосфат, фруктоза, метилурацил, витамин В, аскорбиновая кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, фолиевая кислота, глюкоза, хитозан, олигофруктоза и инулин в соотношении 30/70, источники белка, жиры и полиненасыщенные жирные кислоты при определенном соотношении компонентов. Корм также содержит в качестве компонентов, тормозящих липогенез в печени: фосфолипиды - лецитин, L-карнитин, β-каротин. Корм в качестве источников белка также содержит соевую муку, соевый шрот, рапсовый жмых. А в качестве источников жиров и полиненасыщенных жирных кислот корм содержит рыбий жир, льняное масло. Корм обеспечивает усиление иммунитета и может быть использован для ускорения роста и снижения развития гепатозов печени сельскохозяйственных, домашних животных, птицы и рыб.
Недостатком данного изобретения является, то, что оно представляет собой неполнорационный корм, а кормовую добавку, которую добавляют в состав кормовых рационов сельскохозяйственных, домашних животных, птицы и рыб. Данный корм не сбалансирован по содержанию β-каротина (0,8%) и белка (0,6%), в то время как корма для взрослых собак крупных пород должны содержать не менее 18% белка. Кроме того, в качестве белковых кормовых ингредиентов использованы только компоненты растительного происхождения (соевая мука, соевый шрот, рапсовый жмых). В примерах, характеризующих данное изобретение, не приводятся данные по его поедаемости и биофункциональности при кормлении непродуктивных животных, в частности собак.
Патентных документов, описывающих кормовые добавки для непродуктивных (домашних) животных на основе пептидного гидролизата пера домашней птицы, обладающие доказанными био-функциональными свойствами, не обнаружено. Таким образом, изобретение - функциональная кормовая добавка, разработанное в рамках Государственного контракта, соответствует всем условиям патентоспособности и может получить правовую охрану на территории целого ряда стран.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является корм PROXBOCT Мясное ассорти для кормления всех категорий взрослых собак, производимый ООО «АллерПетфуд» (Россия). В качестве ингредиентов данный корм содержит злаки и продукты растительного происхождения, мясо и мясные субпродукты, таурин, минеральные вещества, водо- и жиро растворимые витамины. Данный корм содержит не менее 18% сырого протеина, не менее 8% сырого жира, не более 5% сырой клетчатки, не более 10% влаги, не более 1,1% фосфора, 1,3% влаги, 5000 МЕ/кг витамина А и 50 МЕ/кг витамина Е.
Технической задачей изобретения является разработка рецептур функциональных кормов с высокой пищевой и энергетической ценностью, а также удовлетворение потребности животных в основных компонентах пищи.
Поставленная задача решается предлагаемыми вариантами.
1
2
5
3
6
Корм сухой полнорационный для собак крупных пород, сбалансированный по аминокислотному составу, включает ингредиенты в следующем соотношении, мас.%: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксид марганца (0,0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (2600,0), витамин D (78900,0), витамин Е (0,0135), витамин B (0,0002), витамин В (0,00024), витамин В (0,0046), витамин В (0,0016), витамин В (0,00015), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 7,46; пшеничная мука (30,31), ячменная мука (18,10), дрожжи (3,00), горох (6,92), соя (3,31), кровяная мука (3,50), мясная мука (11,00), белковый концентрат из пера (6,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7).
1
2
5
3
6
Корм сухой полнорационный для собак крупных пород с чувствительной кожей, сбалансированный по аминокислотному составу, включает ингредиенты в следующем соотношении, мас.%: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксид марганца (0.0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (1200,0), витамин D (56700,0), витамин Е (0,0095), витамин B (0,00015), витамин В (0,0003), витамин В (0,0036), витамин В (0,0016), витамин В (0,00015), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 7,78; пшеничная мука (25,99), ячменная мука (22,60), дрожжи (2,50), горох (8,39), соя (1,84), кровяная мука (3,50), мясная мука (14,00), функциональный кератин пера (3,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7).
1
2
5
3
6
Корм сухой полнорационный для щенков собак крупных пород, сбалансированный по аминокислотному составу, включает ингредиенты в следующем соотношении, мас.%: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксид марганца (0.0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (1200,0), витамин D (69800,0), витамин Е (0,0095), витамин B (0,00015), витамин В (0,0003), витамин В (0,0038), витамин В (0,0016), витамин В (0,00014), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 6,58; пшеничная мука (29,16), ячменная мука (22,63), дрожжи (3,50), горох (3,71), соя (3,52), кровяная мука (3,50), мясная мука (11,00), функциональный кератин пера (6,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7).
Технический результат заключается в получении функциональных кормов с высокой пищевой и энергетической ценностью и доказанными биофункциональными свойствами - гипоаллергенностью, антиоксидантным и пробиотическим действием.
Разработка рецептур новых функциональных кормов для собак была проведена с учетом требований отечественных и международных стандартов к минимальному содержанию макро- и микронутриентов в кормах для взрослых собак, а также щенков, беременных и кормящих животных, а именно:
- рекомендации действующих в настоящее время на территории Российской Федерации «Ветеринарно-санитарных норм и требований к качеству кормов для непродуктивных животных» (№13-7-2/1010 от 15 июля 1997 г.);
- требования международных стандартов Американской Ассоциации Государственных Инспекторов по контролю качества кормов AAFCO (American Association of Feed Control Officers).
Современные рекомендации по кормлению собак основаны на результатах научных исследований их потребности в энергии, белке, аминокислотах, витаминах, макро- и микроэлементах и других питательных веществах. В этой связи существенное внимание уделяется совершенствованию норм кормления, созданию сбалансированных по содержанию питательных веществ кормов и поиску новых биологически активных добавок с целью сокращения затрат на производство кормов и обеспечения полноценности рационов.
В связи с наличием физиологических ограничений по содержанию белка в кормах для собак (не более 35%, иначе эффективность усвоения белка собаками резко снижается) ввод новых белковых компонентов в рационы собак должен осуществляться таким образом, чтобы не нарушать сбалансированность рациона по аминокислотному составу. В качестве источников белка и аминокислот в кормах для собак традиционно используют кровяную муку, мясную муку и другие высокобелковые компоненты. Актуальной задачей является поиск новых белковых ингредиентов для кормов, позволяющих эффективно заменять существующие белковые источники. В связи с этим широкие перспективы имеют кормовые ингредиенты, полученные при гидротермическом гидролизе пера - белковый концентрат из пера (БКП) и сочетании гидротермического и ферментативного гидролиза - функциональный кератин пера (ФКП).
БКП получают методом кратковременной высокотемпературной обработки перо-пухового сырья, раскрытым в патенте RU 2413422 C1, А23К 1/00, 16.10.2009. БКП представляет собой кормовой ингредиент с содержанием белка 83-87%, содержанием жира 4,5-5,5%, содержанием влаги до 5%, содержанием золы до 1%, переваримостью пепсином in vitro не менее 85%, содержанием лизина не менее 1,4%, серосодержащих аминокислот (метионин+цистин) - не менее 5,1%. БКП предназначен для использования в качестве белкового кормового ингредиента с повышенной усвояемостью для балансирования аминокислотного состава кормов для сельскохозяйственных животных и птицы, домашних, в том числе непродуктивных животных.
ФКП получают из БКП методом ферментативного гидролиза в мягких технологических условиях (значения pH близкие к нейтральным, температура 50-55°С), исключающих выраженную рацемизацию и деградацию термолабильных аминокислот (лизина, лейцина, метионина, тирозина, триптофана, аспарагиновой кислоты) и обеспечивающих получение кормового белкового ингредиента, содержащего азот в основном в форме пептидов, что обуславливает его высокую (>98%) переваримость и позволяет белковым соединениям быстрее всасываться в кровь по сравнению со смесями свободных аминокислот, эквивалентных по аминокислотному составу. Важным аспектом применения белковых гидролизатов для кормления животных является снижение антигенности и аллергенности кормов при частичной замене традиционных белковых ингредиентов на белково-пептидные гидролизаты, что позволяет применять данные корма у животных, склонных к проявлению пищевой аллергии. БКП представляет собой белковый комплекс полипептидов, олигопептидов и свободных аминокислот, с содержанием белка 87-89%, жира - до 2%, влаги - не более 8%, золы - не более 4%, со средневесовой молекулярной массой белково-пептидных компонентов около 4800 кДа и относительным содержанием высокомолекулярных (М.м. >10 кДа) потенциально аллергенных компонентов не более 2%, что свидетельствует о его гипоаллергенности.
В результате проведенных исследований были разработаны рецептуры: корм сухой полнорационный для взрослых собак крупных пород сбалансированного аминокислотного состава - ФПК1; корм сухой полнорационный для взрослых собак с чувствительной кожей сбалансированного аминокислотного состава- ФПК2 и корм сухой полнорационный для щенков собак крупных пород сбалансированного аминокислотного состава- ФПК3.
В качестве ключевых белковых ингредиентов разрабатываемых ФПК для собак использовали БКП при разработке рецептуры ФПК1 и ФКП - при разработке рецептур ФПК2 и ФПК3. По ценовой категории ФКП ориентирована применение в качестве кормового ингредиента в составе специализированных кормов для домашних животных, в том числе собак. Поскольку ФКП обладает более высокой переваримостью in vitro по сравнению с БКП (>85 и >98% соответственно) и является гипоаллергенным кормовым ингредиентом, он может обоснованно применяться в качестве компонентов кормов для собак с чувствительной кожей (собак и склонные к аллергическим реакциям, в том числе к проявлениям пищевой аллергии), а также у возрастных групп собак, у которых снижена эффективность переваривания пищи в желудочно-кишечном тракте (щенки, собаки старше 8 лет).
Следует отметить, что помимо ингредиентов животного происхождения в состав кормов для собак для обеспечения их необходимой плотностью обменной энергии (3,5-4,0 ккал/г) также входят компоненты растительного и микробиального происхождения (кукуруза, соя, сухие дрожжи, пшеничная мука и др.), которые также содержат определенное количество белка. Поэтому при разработке рецептур ФПК со сбалансированным аминокислотным составом также учитывалось содержание белка и незаменимых аминокислот в ингредиентах кормов, имеющих растительное или микробиальное происхождения. При расчетах использовались справочные данные по содержанию белка и незаменимых аминокислот в различных кормовых ингредиентах согласно [Nutrient requirements of dogs and cats Washington D.C.: NationalAcademiesPress, 2006. - 398 pp.], а также данные по аминокислотному составу и содержанию белков ФКП и БКП.
На основе результатов проведенных многопараметрических расчетов были установлены оптимальные соотношения кормовых ингредиентов, обеспечивающих сбалансированность аминокислотного состава, а также углеводную составляющую плотности обменной энергии ФПК. Необходимо отметить, что при разработке рецептур ФПК-1, ФПК-2, ФПК-3 использовали критерий экономической целесообразности. В результате для каждого из ФПК1, ФПК2 и ФПК3 были разработаны составы белково-углеводных модулей. Состав полученных белково-углеводных модулей ФПП1, ФПП2 и ФПП3 представлен в таблице 1.
Разработанные корма ФПК1-ФПК3 по содержанию незаменимых аминокислот и белка полностью удовлетворяют требованиям AAFCO (таблица 2, 3). На рис.1 показана степень удовлетворения кормов для взрослых собак крупных пород (ФПК1, ФПК2) и щенков собак крупных пород (ФПК3) рекомендациям AAFCO по минимальному содержанию незаменимых аминокислот в кормах для взрослых собак, щенков, беременных и кормящих животных.
Разработанные ФПК особенно богаты ароматическими аминокислотами (тирозин, фенилаланин) и алифатическими аминокислотами с разветвленными боковыми радикалами (лейцин, изолейцин, валин). По соотношению содержания фенилаланина и суммы фенилаланина и тирозина все разработанные ФПК удовлетворяют потребностям собак (не менее 60% фенилаланина от суммарного содержания фенилаланина и тирозина). По соотношению содержания метионина от суммы серосодержащих аминокислот все предложенные белково-углеводные модули удовлетворяют кормовым потребностям собак (не менее 30% метионина от суммарного содержания метионина и цистеина).
Помимо сбалансированности по аминокислотному составу разрабатываемые новые полнорационные ФПК должны удовлетворять потребности взрослых собак и щенков в жирах, витаминах, макро- и микроэлементах (требования стандартов AAFCO к минимальному содержанию макро- и микронутриентов в кормах для собак).
В качестве жировых ингредиентов разрабатываемых ФПК использовали подсолнечное масло и говяжий жир.
Для обеспечения требуемого содержания минеральных компонентов использовались следующие ингредиенты: кормовой трикальцийфосфат, оксид марганца, медь сернокислая пятиводная, железо (II) сернокислое семиводное, калий йодистый, цинк сернокислый семиводный, препарат «Селениум Ист» («Селениум Ист», кормовая добавка производства компании «AngelYeastCo., Ltd» - КИТАЙ). Препарат «Селениум Ист» представляет собой микрокапсулированный порошок от светло-желтого до светло-коричневого цвета с содержанием селена 2000 мг/кг, при этом до 99% селена в составе препарата находится в органической форме - в виде селенометионина, что обеспечивает высокую усвояемость селена на фоне более низкой токсичности по сравнению с традиционно используемым для обогащения кормов селеном селенитом натрия.
Железо (II) сернокислое семиводное было выбрано в качестве источника железа, поскольку биодоступность железа из этой формы существенно выше по сравнению с оксидами и карбонатом железа. Помимо микроэлементов в состав ФПК также должны быть введены водо- и жирорастворимые витамины в количествах, удовлетворяющих кормовые потребности собак.
ФПК2 предназначен для питания собак с чувствительной кожей. В связи с этим при расчете состава белково-углеводных модулей минимизировали содержание потенциально аллергенных кормовых ингредиентов - сухих дрожжей и проводили частичную замену потенциально аллергенной сои на горох. Снижение содержания кровяной муки в корме позволяет также уменьшить возможность развития аллергических реакций от приема корма.
Как видно из таблицы 3, рецептуры ФПК отличаются по общему содержанию белка: максимальное содержание белка (29,7%) характерно для ФПК3, в то время как ФПК2 и ФПК1 содержат белка на 2,5 и 4,9% ниже по сравнению с ФПК3. Более низкое содержание белка в ФПК2 оправдано с позиций гипоаллергенности корма. По содержанию белка ФПК3 и ФПК2 превышают минимальные требования AAFCO в среднем на 27%, ФПК1 - на 13%. По относительной доли фенилаланина от общего содержания ароматических аминокислот и доле метионина от общего содержания серосодержащих аминокислот разработанные рецептуры ФПК1-ФПК3 удовлетворяют требованиям к рационам питания собак (таблица 3).
Результаты тестирования гипотензивной активности (способности ингибировать ангиотензин-1-превращающий фермент) экспериментальных образцов ФПК1-ФПК3 приведены в таблице 4. Следует отметить, что экспериментальный образец ФПК1, в состав которого входит БКП, характеризуется в среднем в 3 раз более низкими величинами гипотензивной активности по сравнению с экспериментальными образцами ФПК2 и ФПК3, содержащими ФКП. Это обусловлено высокой растворимостью ФКП в отличие от нерастворимого БКП. При экстракции пептиды, входящие в состав ФКП, переходят в экстракт, благодаря чему экспериментальные образцы ФПК2 и ФПК3 обладают существенно более выраженной гипотензивной активностью по сравнению с экспериментальными образцами ФПК1. Помимо пептидов, входящих в состав ФКП, вклад в суммарную гипотензивную активность ФПК вносят и другие компоненты исследуемых кормов. Например, в этой роли могут выступать пептиды, содержащиеся в составе мясной муки - карнозин и ансерин.
Результаты тестирования антиоксидантной активности экспериментальных образцов ФПК1-ФПК3 in vitro по отношению к пероксильному радикалу (ORAC) и катион-радикалу АБТС (ТЕАС) приведены в таблице 5. Экспериментальные образцы ФПК1, содержащие в качестве одного из ингредиентов БКП, характеризуются в среднем вдвое меньшими значениями АОЕ гидрофильной фракции по отношению к пероксильному радикалу. В то же время по величине АОЕ гидрофильной фракции по отношению к катион-радикалу АБТС и АОЕ липофильной фракции по отношению к пероксильному радикалу все исследуемые экспериментальные образцы ФПК не имели значимых отличий друг с другом (таблица 5).
Корм производят следующим образом.
1
2
5
3
6
Пример 1. Для получения корма сухого полнорационного для собак крупных пород, сбалансированного по аминокислотному составу (ФПК1), необходимые в соответствии с рецептурой количества ингредиентов: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксид марганца (0,0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (2600,0), витамин D (78900,0), витамин Е (0,0135), витамин B (0,0002), витамин В (0,00024), витамин В (0,0046), витамин В (0,0016), витамин В (0,00015), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 7,46; пшеничная мука (30,31), ячменная мука (18,10), дрожжи (3,00), горох (6,92), соя (3,31), кровяная мука (3,50), мясная мука (11,00), белковый концентрат из пера (6,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7) взвешивались. Горох и соя измельчались на молотковой дробилке. Все ингредиенты за исключением говяжьего жира и подсолнечного масла перемешивались с помощью лабораторного смесителя. Полученную смесь подготавливали к экструдированию в лопаточном горизонтальном кондиционере, в который поступала кормосмесь при помощи подающего шнека для нагревания до температуры 90-100°С и увлажнения водой и паром. Увлажняющую смесь экструдировали при 90-100°С с последующей сушкой при температуре 95°С в течение 40 мин. На поверхность полученных гранул распыляли необходимое количество горячей смеси говяжьего жира и подсолнечного масла. Экспериментальные партии ФПК1 были расфасованы по 7 кг и упакованы в полиэтиленовые мешки.
1
2
5
3
6
Пример 2. Для получения корма сухого полнорационного для собак крупных пород с чувствительной кожей, сбалансированного по аминокислотному составу (ФПК2), необходимые в соответствии с рецептурой количества ингредиентов: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксидмарганца (0.0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (1200,0), витамин D (56700,0), витамин Е (0,0095), витамин B (0,00015), витамин В (0,0003), витамин В (0,0036), витамин В (0,0016), витамин В (0,00015), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 7,78; пшеничная мука (25,99), ячменная мука (22,60), дрожжи (2,50), горох (8,39), соя (1,84), кровяная мука (3,50), мясная мука (14,00), функциональный кератин пера (3,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7) взвешивались. Горох и соя измельчались на молотковой дробилке. Все ингредиенты за исключением говяжьего жира и подсолнечного масла перемешивались с помощью лабораторного смесителя. Полученную смесь подготавливали к экструдированию в лопаточном горизонтальном кондиционере, в который поступала кормосмесь при помощи подающего шнека для нагревания до температуры 90-100°С и увлажнения водой и паром. Увлажняющую смесь экструдировали при 90-100°С с последующей сушкой при температуре 110°С в течение 40 мин. На поверхность полученных гранул распыляли необходимое количество горячей смеси говяжьего жира и подсолнечного масла. Экспериментальные партии ФПК2 были расфасованы по 7 кг и упакованы в полиэтиленовые мешки.
1
2
5
3
6
Пример 3. Для получения корма сухого полнорационного для щенков собак крупных пород, сбалансированный по аминокислотному составу (ФПК3), необходимые в соответствии с рецептурой количества ингредиентов: кукурузная мука, содержащая в своем составе премикс (оксид марганца (0.0013), железо сернокислое семиводное (0,1), медь сернокислая (0,015), калий йодистый (0,00018), цинк сернокислый (0,073), препарат «Селениум Ист» (0,00005), витамин А (1200,0), витамин D (69800,0), витамин Е (0,0095), витамин B (0,00015), витамин В (0,0003), витамин В (0,0038), витамин В (0,0016), витамин В (0,00014), фолиевая кислота (0,00012)) общей массой 58; пшеничная мука (29,16), ячменная мука (22,63), дрожжи (3,50), горох (3,71), соя (3,52), кровяная мука (3,50), мясная мука (11,00), функциональный кератин пера (6,00), говяжий жир (8,70), подсолнечное масло (1,00), трикальций фосфат кормовой (0,7) взвешивались. Горох и соя измельчались на молотковой дробилке. Все ингредиенты за исключением говяжьего жира и подсолнечного масла перемешивались с помощью лабораторного смесителя. Полученную смесь подготавливали к экструдированию в лопаточном горизонтальном кондиционере, в который поступала кормосмесь при помощи подающего шнека для нагревания до температуры 90-100°С и увлажнения водой и паром. Увлажняющую смесь экструдировали при 90-100°С с последующей сушкой при температуре 120°С в течение 40 мин. На поверхность полученных гранул распыляли необходимое количество горячей смеси говяжьего жира и подсолнечного масла. Экспериментальные партии ФПК3 были расфасованы по 7 кг и упакованы в полиэтиленовые мешки.
Созданные новые ФПК были охарактеризованы физико-химическим и микробиологическим показателям, установленным требованиями «Ветеринарно-санитарных норм и требований к качеству кормов для непродуктивных животных» (№13-7-2/1010 от 15 июля 1997 г.). Были проанализированы следующие физико-химические показатели ФПК: массовая доля влаги (ГОСТ 13496.3), массовая доля сырого протеина (ГОСТ 25011), массовая доля сырого жира (ГОСТ 17681), массовая доля сырой клетчатки (ГОСТ 13496.2), массовая доля сырой золы (ГОСТ 26226), массовая доля кальция (ГОСТ 26570), массовая доля фосфора (ГОСТ 26657). Полученные результаты представлены в таблице 2. По содержанию белка, жира, кальция и фосфора созданные новые ФПК1, ФПК2 и ФПК3 полностью удовлетворяют требованиям «Ветеринарно-санитарных норм и требований к качеству кормов для непродуктивных животных» (№13-7-2/1010 от 15 июля 1997 г.) и международных стандартов AAFCO к качеству кормов для собак.
Для доказательства функциональных свойств созданных кормов для собак были проведены сравнительные испытания прототипа (корм PROXBOCT Мясное ассорти, ООО «Аллер Петфуд», Россия) ФПК1 и ФПК2 на собаках крупных пород - кавказская и среднеазиатская овчарка. Испытания проводились на базе питомника ООО «ТЕРМИНАЛ». Анализ полученных проб сыворотки крови и фекальных масс проводился на базе Федерального государственного бюджетного учреждения науки института биохимии им. А.Н. Баха Российской академии науки ООО «БИОТРОФ».
Для анализа функциональных свойств кормов были сформированы 3 экспериментальные группы животных, включающих взрослых собак пород кавказская и среднеазиатская овчарка численностью по 8 собак в каждой:
1) контрольная группа животных получала корм PROXBOCT Мясное ассорти, ООО «АллерПетфуд», Россия;
2) опытная группа, которая получала ФПК1-корм сухой полнорационный для взрослых собак крупных пород сбалансированного аминокислотного состава;
3) опытная группа собак с чувствительной кожей, которая получала ФПК2-корм сухой полнорационный для взрослых собак с чувствительной кожей сбалансированного аминокислотного состава.
Всем животным перед проведением испытаний проводились физикальные и лабораторные исследования. Критерием исключения из исследовательских испытаний являлись выявленные заболевания внутренних органов и другие заболевания. Всем животным перед проведением исследований проводилась плановая вакцинация не ранее чем за 2 месяца до проведения исследований. Поскольку наличие гельминтозов оказывает существенное влияние на усвоение питательных компонентов кормов, непосредственно перед проведением исследований всем собакам проводили двукратную дегельминтизацию с интервалом в 14 дней препаратом Досалид. Испытания ФПК проводили по истечении 2 недель после последнего цикла дегельминтизации. Расчет рациона для каждого отдельного животного проводили с учетом массы тела животного.
В опытную группу 3 собак с чувствительной кожей были включены животные с хроническими аллергическими поражениями кожного покрова (тусклым шерстным покровом, эритематозными поражениями, кожным зудом, участка милихенизации, расчесами, зудящими алопециями), с исключенным и другими причинами аллергических реакций кожного покрова. При первичном клиническом анализе крови у животных данной группы выявляли эозинофилию (более 10% эозинофиловна 100 клеток белой крови).
В ходе исследований определяли массу животных, поедаемость корма.
Гематологические и биохимические исследования включали определение лейкоцитарной формулы, антиоксидантной емкости (АОЕ) крови по отношению к пероксильному радикалу, содержания ТБК-реактивных продуктов, содержания иммуноглобулинов IgG и IgE классов.
Взятие анализов крови проводилось по следующему плану: 1) непосредственно перед сменой рациона; 2) через 1 неделю после смены рациона; 3) через 3 недели; 4) через 5 недель. 5) через 8 недель. Взятие образцов крови проводилось утром натощак у неседированных животных. Получение венозной крови проводили методом венепункции из латеральной подкожной вены голени.
Кроме того, через 8 недель проводили забор каловых масс для анализа состава микрофлоры.
У собак всех трех групп отмечалась 100% поедаемость корма. После смены рациона не отмечалось системных нарушений. Со стороны желудочно-кишечного при смене рационов симптомов пищевой непереносимости в виде рвоты и диареи не отмечалось. После смены рациона в группах ФПК1 и ФПК2 отмечалось уменьшение объема каловых масс, они приобретали более плотную консистенцию. В группе животных с аллергическими заболеваниями через 1 неделю не было отмечено изменений со стороны кожного покрова. В то же время через 3 недели после смены рациона были отмечены клинические улучшения состояния шерстного покрова: снижение интенсивности кожного зуда, уменьшение количества/площади кожных поражений, улучшение качества шерсти.
Массу тела животных в контрольной и опытных группах измеряли до смены рациона и через 1 и 2 месяца после начала эксперимента. Результаты измерений представлены в таблице 6. Как видно из таблицы 6, после изменения рациона во всех трех группах не отмечалось значимого изменения массы тела животных.
Для анализа лейкоцитарных формул готовили мазки венозной крови по стандартной методике не позднее 1 часа после взятия крови. Высушенные на воздухе мазки окрашивали по методу Романовского. Проводили микроскопию мазков в крови (увеличение 100, под иммерсией) на микроскопе (Motic ВА300) и под счет лейкоцитарной формулы на 100 клеток. Данные анализа лейкоцитарных формул периферической крови в контрольной и опытных группах собак представлены в таблице 7.
В ходе эксперимента количество нейтрофилов в периферической крови во всех группах собак значимо не изменялось (таблица 7). Во всех группах собак по истечении 1 недели дачи новых рационов отмечалось увеличение количества моноцитов, вероятно, обусловленное сменой рациона. Уровень моноцитов в группе собак, получавших ФПК1, на 5 неделе эксперимента возвращался к исходному, в то время как в контрольной группе оставался несколько повышенным по сравнению с исходным уровнем (таблица 7). Количество эозинофилов у собак контрольной группы значимо не изменялось в ходе эксперимента (таблица 7). В 3-й опытной группе через 1 неделю после начала дачи ФПК2 было отмечено повышение среднего уровня эозинофилов, что обусловлено кратковременной реакцией на смену рациона. В последующие отборы, на 3, 5 и 8 неделю эксперимента, отмечалось стойкое снижение уровня эозинофилов у животных, получавших ФПК2, что свидетельствует о его гипоаллергенности. Таким образом, результаты анализа лейкоцитарных формул свидетельствуют, что ФПК2 обладает преимуществом по сравнению с известным прототипом.
Определение общего содержания IgG и IgE в сыворотке крови собак проводилось методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборов IgG (canine) Elisa и IgE (canine) ELISA (AlpcoDiagnostics, США). Результаты анализа уровней иммуноглобулинов класса G и Е в сыворотке крови собак из различных экспериментальных групп приведены в таблице 8. Анализ динамики сывороточной концентрации IgG у собак контрольной группы и группы, получавшей ФПК2, свидетельствует об увеличении сывороточной концентрации IgG в период 1-8 недель после смены рациона. У собак, получавших ФПК1, сывороточная концентрация оставалась постоянной в ходе 0-3 недель после смены рациона, на 5 неделе отмечался выраженный подъем уровня IgG антител в сыворотке крови с последующим возвратом к уровню исходных значений к 8 неделе после смены рациона, что обусловлено среднесрочной реакцией на смену рациона.
Анализ динамики уровня общего IgE в сыворотке крови (таблица 8) показал, что в группе собак, которые содержались на ФПК2, базальный уровень характеризовался более высокими значениями IgE по сравнению с контрольной группой и группой ФПК1 (258,7 мкг/мл по сравнению с 202,9 мкг/мл в контрольной группе и 106,6 мкг/мл в группе ФПК1). В ходе проведения эксперимента в группе ФПК2 отмечалось снижение уровня IgE, который к 8 неделе достиг значений контрольной группы (116,8 мкг/мл). Таким образом, ФПК2 является гипоаллергенным кормом и обладает преимуществом по сравнению с прототипом. В группе ФПК1 не было выявлено достоверных изменений уровня IgE, что говорит об отсутствии выраженных аллергических реакций на корм.
Общее содержание ТБК-реактивных продуктов в сыворотке крови определяли спектрофотометрическим методом. В качестве стандарта использовали 1,1,3,3-тетраэтоксипропан. Общее содержание ТБК-реактивных продуктов в сыворотке крови выражали в мМ эквивалентов малонового диальдегида (МДА). Антиоксидантную емкость сыворотки крови по отношению к пероксильному радикалу определяли спектрофлуориметрическим методом. В качестве стандарта использовали водорастворимый аналог витамина Е-тролокс. Антиоксидантную емкость (АОЕ) сыворотки крови выражали в мкМ эквивалентов тролокса (ТЭ). Результаты анализа показателей антиоксидантного статуса в сыворотке крови собак из различных экспериментальных групп приведены в таблице 9.
Из данных таблицы 9 видно, что исходный уровень АОЕ сыворотки крови по отношению к пероксильному радикалу в группе собак с чувствительной кожей был достоверно ниже по сравнению с величинами данного показателя в контрольной группе и группе собак, получавших ФПК1. В ходе 8 недель кормления в контрольной группе АОЕ сыворотки крови снизилась на 29,6%, в группе ФПК1 - на 35,2%, в группе ФПК2 - на 11,01% по сравнению с исходными значениями АОЕ в каждой из экспериментальных групп собак. По завершении 8 недель кормления величина АОЕ сыворотки крови у собак, содержащихся на ФПК2, была выше на 11% по сравнению с показателями контрольной группы, что свидетельствует об антиоксидантом эффекте ФПК2 и наличии у него преимущества по сравнению с прототипом.
Через 1 неделю после смены рациона во всех трех группах собак выявлено резкое снижение уровня общей концентрации ТБК - реактивных продуктов, являющихся маркерами активности процессов перекисного окисления липидов. Необходимо отметить исходно высокий уровень ТБК - реактивных продуктов в сыворотке крови собак с чувствительной кожей, что свидетельствует о большей интенсивности у них процессов перекисного окисления липидов. Через 3 недели после смены рациона отмечалось восстановление уровня МДА до исходного в контрольной группе и группе 2 (ФПК1), в то время как в группе 3 (ФПК2) уровень ТБК-реактивных продуктов оставался ниже исходного уровня, что свидетельствует о наличии у ФПК2 антиоксидантных свойств, и наличии у него преимущества по сравнению с прототипом.
Исследование состава микрофлоры фекальных масс, полученных от собак из различных экспериментальных групп, проводили методом T-RFLP-анализа (terminal restriction fragment length polymorphism). ДНК из содержимого фекалий собак выделяли экстракцией фенолом/хлороформом и очисткой раствором СТАВ.
ПЦР-амплификацию генов 16S рРНК бактерий проводили с использованием праймеров: 63F (CAGGCCTAACACATGCAAGTC) - с меткойна 5′-конце (флуорофор D4-WellRed); 1492R (TACGGHTACCTTGTTACGACTT). Амплифицированный фрагмент выделяли из агарозного геля с помощью 3М раствора гуанидина тиоционата.
Рестрикцию ампликонов проводили с помощью рестриктаз HaeIII, HhaI и MspI («Fermentas»), в течение 2 ч при 37°С. После окончания рестрикции ДНК из реакционной смеси осаждали этанолом, растворяли в SLS (BeckmanCoulter) с добавлением маркера молекулярного веса - 600 п.н. (BeckmanCoulter) и разделяли в условиях капиллярного электрофореза с флуоресцентной детекцией с использованием автоматического секвенатора CEQ8000 (BeckmanCoulter). Вычисление размеров пиков и их площади проводили с использованием программного блока Fragment Analysis (BeckmanCoulter). Для идентификации пиков T-RFLP-граммы для трех эндонуклеаз (HaeIII, HhaI и MspI) обрабатывали с помощью программы FragmentSorter (http://www.oardc.ohiostate.edu/trflpfragsort/index.php). Результаты анализа относительного содержания различных групп микроорганизмов в фекальных массах собак опытных и контрольной группы приведены в таблице 10.
По результатам проведенных исследований показано, что содержание бифидобактерий в фекалиях собак опытных групп (ФПК1 и ФПК2) существенно выше по сравнению с контрольной группой. Таким образом, БКП и ФКП обладают бифидогенным действием, которое более выражено в случае ФКП. Наличие БКП и ФКП в составе кормов для собак способствует стимуляции роста симбиотических бифидобактерий и обуславливает преимущество ФПК1 и ФПК2 по сравнению с прототипом. Вместе с бифидогенным эффектом содержание собак на ФПК1 и ФПК2 не вызывает выраженного изменения количества полезных антагонистических микроорганизмов семейства Bacillaceae и целлюлозолитических бактерий (семейства Ruminococcaceae, Lachnospiraceae, Eubacteriaceae), обладающих способностью расщеплять углеводы кормов, по сравнению с величиной данных показателей у собак контрольной группы.