Способ определения персонального "окна имплантации" у женщин на основе анализа транскрипционного профиля генов
METHOD OF DETERMINING PERSONAL "IMPLANTATION WINDOW" IN WOMEN BASED ON ANALYSIS OF TRANSCRYPTION PROFILE OF GENES

1. Область техники.
Изобретение относится к области медицины (в частности, репродуктивной медицины и вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), а также к области науки (в частности, молекулярной биологии и эмбриологии) и может быть использовано для определения персонального «окна имплантации» у женщин в программах экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки.
2. Уровень техники.
Функциональный слой эндометрия при воздействии стероидных гормонов циклически претерпевает процессы регенерации, секреторной трансформации и отторжения в течение менструального цикла. Цель этих физиологических изменений заключается в синхронизации процессов созревания бластоцисты и тканей эндометрия, а также обеспечении рецептивного статуса эндометрия, восприимчивого к имплантации эмбриона. Имплантация бластоцисты осуществляется в строго определенный период «окна имплантации», соответствующий 7-8 дню после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), у женщин с 28-дневным менструальным циклом это соответствует 19-21 дню МЦ.
Морфологические изменения эндометрия на протяжении менструального цикла описаны Noyes R.W. более 60 лет назад и широко используются до настоящего времени. Критерии Noyes R.W. и соавт. основаны на таких морфологических параметрах, как наличие вакуолей, отек стромы, секреция желез и др. [1, 2]. Однако точность данных критериев поставлена под сомнение в рандомизированных исследованиях [3, 4]. Поэтому в настоящее время гистологическое исследование функционального слоя эндометрия является недостаточным и должно дополняться новыми высокоинформативными методами оценки рецептивности эндометрия.
В последние годы были проведены исследования глобальных транскрипционных профилей генов при различных заболеваниях, оказывающих влияние на состояние эндометрия. Помимо этого, накоплен большой объем информации о маркерах рецептивности эндометрия и транскрипционном профиле генов в разные стадии менструального цикла.
Большинство исследователей изучали транскрипционные профили в тотальной ткани эндометрия без ее разделения на отдельные компоненты. Ponnampalam А.Р. et al. первыми использовали микроматричный анализ для исследования транкрипционных сигнатур (отпечатков) генов на всех стадиях менструального цикла [5]. Они выделили 425 генов, экспрессия которых повышена хотя бы в одной фазе менструального цикла более чем в 2 раза. На основе анализа этих данных они выделили 7 групп генов, имеющих максимальные уровни экспрессии в определенную стадию менструального цикла: менструация, ранняя пролиферация, средняя пролиферация, поздняя пролиферация, ранняя секреция, средняя секреция, поздняя секреция.
Группа исследователей Talbi S. et al. выделили 4 кластера генов с высоким уровнем экспрессии, позволяющих дискриминировать 4 стадии: пролиферация, ранняя, средняя и поздняя секреция [6]. Помимо этого, они описали связь уровня экспрессии этих генов с их функциями и биологическими процессами, характерными для каждой из выделенных стадий.
Значительная часть публикаций посвящена сравнению глобальных транскрипционных сигнатур генов стадии «окна имплантации» с другими стадиями менструального цикла: со стадией пролиферации [7, 8, 9], ранней секреции [10, 11, 12, 13, 14, 15, 16], поздней секреции [16, 17].
Помимо накопления информации об особенностях экспрессионных профилей стадии «окна имплантации», некоторые диагностические платформы уже предложены к практическому применению для определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программах ЭКО и ПЭ. В качестве примера можно привести тест «Endometrial Receptivity Array (ERA)», представляющий собой микрочип, содержащий 238 генов. Применение данного теста рекомендовано в естественном цикле на ЛГ+7  день менструального цикла (д.м.ц.) или цикле с применением заместительной гормональной терапии на 5-й день назначения прогестерона (18). Использование данного чипа позволило повысить частоту имплантации эмбрионов по различным оценкам на 10-20% [19].
С помощью микроматричного анализа установлено, что у каждой четвертой пациентки с неудачными попытками эктракорпорального оплодотворения происходит смещение окна имплантации на 2 дня, что имеет фатальные последствия для реализации программы вспомогательных репродуктивных технологий [20]. Концепция универсального соответствия стадии «окна имплантации» 19-21 дню менструального цикла оказалась несостоятельной. В связи с этим, определение персонального «окна имплантации» и коррекция времени переноса эмбрионов может быть одним из способов повышения результативности программ ВРТ.
В силу высокой стоимости исследований на основе микроматричного анализа, включающей стоимость наборов, оборудования и программной поддержки, этот метод в нашей стране не получил широкого распространения. Как альтернатива дорогому и трудоемкому методу микроматричного анализа предлагается метод обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) - метод, не уступающий по чувствительности и специфичности микроматричному анализу, но более доступный для рутинного использования. Для определения персонального «окна имплантации» у женщин с неудачными попытками в программе ЭКО и ПЭ в отличие от аналога «Endometrial Receptivity Array (ERA)» предлагается исследование не сотен, а одного-двух десятков генов с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени, а также интегральный критерий оценки транскрипционного профиля по соотношению уровней представленности транскриптов.
На момент подачи заявки из свободных источников было известно о следующих наиболее близких аналогах:
- Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием (патент РФ №2553340). Попов Ю.В., Бурыкина П.Н., Коган Е.А., Демура Т.А., Чупрынин В.Д., Аскольская С.И. Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки. Способ заключается в определении количества пиноподий в поверхностном эпителии, уровня экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена-альфа в строме эндометрия, их соотношения, а также уровня экспрессии имплантационного фактора LIF на 21-24 день менструального цикла методом ИФА. Нарушение фертильности, связанное с миомой матки, диагностируется при количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов. Данный метод предусмотрен только для пациенток, планирующих беременность, с миомой матки, не деформирующей полость матки и размерами миоматозных узлов до 5,0 см в диаметре.
Описанный способ основан на методах морфологического и иммуногистохимического исследования тканей эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии. Недостатком данного способа диагностики является отсутствие интегрального критерия оценки нарушения фертильности. Не понятной остается интерпретация результатов, когда изменены не все показатели.
- Способ прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (патент РФ №2562559). Айламазян Э.К., Джемлиханова Л.Х., Гзгзян A.M., Ниаури Д.А., Коган И.Ю., Шарфи Ю.Н. Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Преимущество данного способа состоит в интегральной оценке нескольких параметров: 1) определении оптической плотности экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, 2) определении содержания сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов, 3) определении систолодиастолического отношения (S/D) и индекса резистентности (IR) спиральных артерий в день введения триггера овуляции. На основании полученных показателей рассчитывают значение регрессионной функции (Z) по формуле. При значении Z>0 прогнозируют, что эндометрий рецептивен, а при Z<0 - эндометрий не рецептивен.
Описанный способ основан на методах допплерометрического исследования кровотока в сосудах матки, иммуногистохимического определения LIF в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии, а также исследования слизи цервикального канала на содержание VEGF методом мультиплексного ИФА-анализа. Предлагаемый способ отличается от данного аналога тем, что исследование может быть проведено в одном образце биологического материала (ткани эндометрия, полученные путем пайпель-биопсии) с использованием одного метода исследования - ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Способ, описанный в аналоге, позволяет прогнозировать рецептивность эндометрия и наступление беременности в результате стимулированного цикла ЭКО. Предлагаемый способ дает возможность определения персонального «окна имплантации» и его последующего использования метода в естественных циклах и циклах заместительной гормональной терапии при переносах криоконсервированных/размороженных эмбрионов, а также коррекции времени переноса эмбриона.
3. Описание изобретения.
Предложен способ оценки рецептивности эндометрия у пациенток, проходящих лечение бесплодия в программе ЭКО и ПЭ, по уровню представленности транскриптов отдельных функциональных генов в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8) с целью оптимизации времени переноса эмбрионов в полость матки, в первую очередь, криоконсервированных/размороженных эмбрионов.
В ходе исследования 71 образца эндометрия, соответствующих 19-21 дню менструального цикла, были выбраны наиболее информативные маркеры рецептивности эндометрия и предложен способ определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программе вспомогательных репродуктивных технологий, путем измерения уровня мРНК генов прогестаген-ассоциированного эндометриального протеина РАЕР, дипептидилпептидазы DPP4, главного комплекса гистосовместимости II класса DO-бета-цепь HLA-DOB и гомеобокса 7 НОХ7 (MSX1) по сравнению с уровнем представленности референсных генов, например, В2М, GUSB, ТВР.
В рецептивном эндометрии (эндометрий стадии средней секреции) по сравнению с пререцептивным (эндометрий стадии ранней секреции) экспрессия мРНК генов PAEP и DPP4 повышена в 144 и 46 раз, а экспрессия мРНК генов HLA-DOB и MSX1 снижена в 17,5 и 2,8 раз соответственно (p<0,001).
Уровень представленности мРНК предлагаемых генов может служить как дополнительным, так и независимым исследуемым параметром при оценке рецептивности эндометрия в образцах, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipaht Ltd, Великобритания) в естественных или в циклах заместительной гормональной терапии, предшествующих переносу криоконсервированных/размороженных эмбрионов.
Для оценки уровня представленности мРНК исследуемых генов в эндометрии можно использовать метод полимерзазной цепной реакции в режиме реального времени с предварительной стадией обратной транскрипции. Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.
В качестве примера, для выделения кластеров образцов может быть использован метод бинарной логистической регрессии. В этом случае индекс рецептивности эндометрия может быть рассчитан по формуле:
(формула 1), где р - индекс рецептивности эндометрия;
z - значение регрессионной функции, определяется по формуле:
(формула 2),
где  – соотношение уровней экспрессии мРНК соответствующих генов.
Если значение функции р менее или равно пороговому значению (p≤cut off), делают заключение о несоответствии эндометрия стадии «окна имплантации»; если значение p>cut off, делают заключение о хорошей рецептивности эндометрия и его соответствии стадии окна имплантации. Пороговое значение определяют на основе экспериментальных данных с помощью ROC-анализа.
4. Реализация изобретения
Взятие материала путем пайпель-биопсии эндометрия на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.). Фрагменты тканей помещают в пластиковую пробирку объемом 1,5 мл, в которую предварительно внесено 700 мкл транспортной среды для стабилизации РНК в биопробах (например, IntactRNA, Евроген, Россия, кат № NL001), обрабатывают и хранят согласно Инструкции производителя. Выделение РНК проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к Комплекту реагентов для выделения РНК и ДНК «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС» (ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Россия, регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08867 от 21.09.2010 г/, ТУ 9398-035-46482062-2009). Полученные препараты РНК желательно сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции.
2
Обратную транскрипцию проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к набору реагентов с использованием AMV-обратной транскриптазы (Fermentas, Литва, кат № ЕР0641) в комплектации с 5 х буфером для обратной транскрипции (состав: 250 mM Tris-HCl (рН 8.5 при 25°С), 40 mM MgCl, 150 mM KCl, 5 mM DTT). В состав ОТ-смеси входят дНТФ в конечной концентрации 0,2 мМ каждого и смесь случайных гексамеров в конечной концентрации 0,5 рМ.
Для определения уровня представленности мРНК исследуемых генов используют стандартный метод ПЦР «в реальном времени» в стандартных условиях с праймерами и флуоресцентно-мечеными пробами (зонды), специфичными к последовательностям определяемых РНК. Для избежания обработки образцов ДНКазой лучше использовать олигонуклеотиды, не взаимодействующие с геномной ДНК. Например, на конечный объем реакционной смеси 35 мкл состав реакционной смеси может быть следующим: 66 мМ трис-HCl, рН 8,8, 16,6 мМ аммония сульфат, 0,01% Tween-20, 0,001% желатин, 3 мМ хлористый магний, по 250 мкМ каждого из дНТФ по 12.5 пмоль каждого праймера и зонда, 0,8 единиц Taq-полимеразы.
Для повышения чувствительности и специфичности реакции желательно использовать «горячий» старт, который обеспечивается либо использованием Taq-полимеразы, активируемой при высокой температуре, либо методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенных слоем парафина. Нижний слой содержит дНТФ, праймеры и зонд, верхний - матрицу и Taq-полимеразу. Смешение слоев и превращение их в реакционную смесь происходит только при плавлении парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки.
Проявку накопления продуктов реакции проводят с помощью флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов (зондов) или интекалирующих красителей. Уровень представленности транскриптов и их соотношение можно рассчитывать с помощью метода ΔCq.
Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.
Пример использования изобретения
В амбулаторных условиях с помощью аспирационной кюретки «Pipelle de Cornier» (Laboratorie C.C.D.», Франция) проведена аспирационная пайпель-биопсия эндометрия. Обследовано две группы женщин репродуктивного возраста. Первую группу составили 47 пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, обратившихся для проведения программы ЭКО и ПЭ, с успешным результатом реализации данной программы. Критериями включения пациенток в исследование были: возраст женщин до 39 лет; регулярный менструальный цикл; трубно-перитонеальный фактор бесплодия; сохраненный овариальный резерв; наличие в анамнезе не более 3-х неудачных попыток ЭКО; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ; отсутствие противопоказаний к проведению ЭКО и вынашиванию беременности; фертильная или субфертильная сперма супруга; нормальный кариотип обоих супругов. Критерии исключения: бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором; бесплодие, связанное с отсутствием овуляции; миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения; олигоастенотератозооспермия (по нормативам ВОЗ, 2010 год); пороки развития внутренних половых органов; соматические и психические заболевания, являющиеся противопоказанием для вынашивания беременности и родов. Биоптат эндометрия получен на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipath Ltd, Великобритания), основанном на определении уровня ЛГ в моче. Пайпель-биопсия выполнена в цикле, предшествующем стимуляции суперовуляции.
Вторую группу составили 24 условно-здоровые женщины (группа сравнения), обратившихся с целью профилактического осмотра или подбора средств контрацепции. Критерии включения: возраст женщин до 39 лет; регулярный 28-дневный менструальный цикл; наличие детей; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ, соответствие эндометрия 19-21 дню менструального цикла. Критерии исключения: миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения.
Помимо исследования транскрипционного профиля генов выполнено гистологическое исследование. Биоптаты эндометрия фиксировали в 10%-м нейтральном формалине в течение 24 часов, после соответствующей стандартной обработки заключали в парафин. Срезы толщиной 5 мкн окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе при увеличении от ×50 до ×400.
Кластерный анализ результатов исследования транскрипционных профилей генов позволил выделить 2 группы образцов: пререцептивного и рецептивного эндометрия (фиг. 1). На фигуре представлены тепловые карты дерева иерархической классификации 71 образца тканей биоптатов эндометрия на основе исследования уровней экспрессии мРНК функциональных генов с помощью количественной ОТ-ПЦР. Выделено две группы образцов, которые можно охарактеризовать как пререцептивный и рецептивный эндометрий. По градиенту изменения содержания транскриптов темно-серым цветом отмечены образцы с высоким уровнем экспрессии, светло-серым - с низким.
Разделение на группы хорошо соотносилось, однако не во всех случаях совпадало с данными гистологического исследования биоптатов эндометрия. Так, только 27 (77,1%) из 35 образцов стадии средней секреции согласно данным гистологического исследования были определены методом ОТ-ПЦР как «рецептивный эндометрий». 8 образцов, идентифицированных гистологическим методом как стадия средней секреции, функционально были незрелыми и не готовыми к имплантации эмбриона, все они относились к группе женщин с бесплодием.
Из 36 образцов стадии ранней секреции согласно данным гистологического исследования 32 (88,9%) были определены методом ОТ-кПЦР как «пререцептивный эндометрий». 4 образца, идентифицированных гистологическим методом как стадия ранней секреции, функционально были готовыми к нидации эмбриона, все они также относились к группе женщин с бесплодием.
Разделения образцов в отдельные кластеры в зависимости от группы обследованных женщин (группа сравнения или женщины с бесплодием) не наблюдалось.
-14
-12
-7
-12
-11
-7
-11
-9
-12
-7
В рецептивном эндометрии по сравнению с пререцептивным была повышена экспрессия мРНК генов РАЕР в 144 раза (53-663, р=5,8×10), GPX3 в 143 (61-299, р=1,5×10), IGFBP1 в 52 раза (3,7-3395, р=2,8×10), DPP4 в 46 (16-138, р=1,7×10), НАВР2 в 26 (14-54, р=4,0×10), AQP3 в 5,9 (1,7-8,5, р=1,0×10), IMPA2 в 4,7 (3,6-7,8, p=2,5×10), TAGLN в 3,3 (2,7-8,1, р=1,5×10), ММР7 в 2,4 (1,2-6,4, р=0,03) раз, снижена экспрессия мРНК генов HLA-DOB в 17,5 (9,5-26,5, р=8,2×10), MSX1 в 2,8 (1,4-4,2, р=3,4×10), POSTN в 1,6 (0,9-3,3, р=0,002) раз (фиг. 2). На фигуре отражено изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном и рецептивном эндометрии. По оси «x» перечислены гены. Значение медианы уровня экспрессии мРНК в пререцептивном эндометрии принято за 1 о.е. По оси «y» отложено значение медианы уровня экспрессии мРНК в тканях рецептивного эндометрия (данная величина показывает во сколько раз количество мРНК выше по сравнению с пререцептивным эндометрием). Столбцы, направленные вверх, свидетельствуют о повышении экспрессии, вниз - о понижении.
На основе многофакторного анализа подобрана дискриминантная функция, позволяющая классифицировать образцы по уровню экспрессии 4 генов: РАЕР, DPP4, MSX1 и HLA-DOB. Уравнение линейной функции имело вид:
(формула 3), где
z - классифицирующая дискриминантная функция;
- соотношение уровней экспрессии мРНК соответствующих генов.
-13
Распределение значения ИРЭ в образцах представлено на рисунке (фиг. 3). Оптимальное значение величины порога отсечения (точки cut off) определено с помощью ROC-анализа. Площадь под ROC-кривой составила AUC=1,0 (р=6,6×10). Пороговое значение (cut off) ИРЭ составило 62. Значения показателей cut off выше 62 классифицирует образцы как «рецептивный эндометрий». Чувствительность и специфичность предложенного метода оценки рецептивности эндометрия в области порогового значения составила 100% по сравнению с кластерным анализом.
ЛИЕРАТУРА
1. Noyes R.W., Hertig AT., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril. 1950; 1: 3-17.
2. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol. 1975; 122: 262-263.
3. Murray M.J., Meyer W.R., Zaino R.J., Lessey B.A., Novotny D.B., Ireland K, et al. A critical analysis of the accuracy, reproducibility, and clinical utility of histologic endometrial dating in fertile women. Fertil Steril. 2004; 81: 1333-1343.
4. Coutifaris C., Myers E.R., Guzick D.S., Diamond M.P., Carson S.A., Legro R.S., et al. Histological dating of timed endometrial biopsy tissue is not related to fertility status. Fertil Steril. 2004; 82: 1264-1272.
5. Ponnampalam A.P., Weston G.C., Trajstman A.C., Susil В., Rogers PA. Molecular classification of human endometrial cycle stages by transcriptional profiling. Mol Hum Reprod. 2004; 10 (12): 879-893.
6. Talbi S., Hamilton A.E., Vo K.C., Tulac S., Overgaard M.T., Dosiou C., Le Shay N., Nezhat C.N., Kempson R., Lessey B.A., Nayak N.R., Giudice L.C. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 2006; 147 (3): 1097-1121.
7. Kao L.C., Germeyer A., Tulac S., Lobo S., Yang J.P., Taylor R.N., et al. Expression profiling of endometrium from women with endometriosis reveals candidate genes for disease based implantation failure and infertility. Endocrinology. 2003; 144: 2870-2881.
8. Borthwick J., Charnock-Jones S., Tom B.D., Hull M.L., Teirney R., Phillips S.C., et al. Determination of the transcript profile of human endometrium. Mol Hum Reprod. 2003; 9: 19-33.
9. Kuokkanen S., Chen В., Ojalvo L., Benard L., Santoro N., Pollard J.W. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium. Biol Reprod. 2010; 82 (4): 791-801.
10. Diaz-Gimeno P, Horcajadas JA, Martmez-Conejero JA, Esteban FJ,  P, Pellicer A,  C. A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature. Fertil Steril. 2011; 95(1): 50-60.
11. Carson D., Lagow E., Thathiah A., Al-Shami R., Farach-Carson M.C., Vernon M., et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high-density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002; 8: 971-979.
12. Riesewijk A., Martin J., Horcajadas J.A., Polman J., Pellicer A., Mosselman S., et al. Gene expression profiling of human endometrial receptivity on days LH+2 versus LH+7 by microarray technology. Mol Hum Reprod. 2003; 9: .253-264.
13. Mirkin S., Arslan M., Churikov D., Corica A., Diaz J.I., Williams S., et al. In search of candidate genes critically expressed in the human endometrium during the window of implantation. Hum Reprod. 2005; 20: 2104-2117.
14. Franchi A., Zaret J., Zhang X., Bocca S., Oehninger S. Expression of immunomodulatory genes, their protein products and specific ligands/receptors during the window of implantation in the human endometrium. Mol Hum Reprod. 2008; 14 (7): 413-421.
15. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J.,  Т., Dewailly D., Hamamah S. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle. Hum Reprod. 2009; 24 (1): 198-205.
16. Tseng L.H., Chen I., Chen M.Y., Yan H., Wang C.N., Lee C.L. Genome-based expression profiling as a single standardized microarray platform for the diagnosis of endometrial disorder: an array of 126-gene model. Fertil Steril. 2010; 94 (1): 114-119.
17. Critchley H.O., Robertson K.A., Forster Т., Henderson T.A., Williams A.R., Ghazal P. Gene expression profiling of mid to late secretory phase endometrial biopsies from women with menstrual complaint. Am J Obstet Gynecol. 2006; 195 (2): 406.e1-416.
18. Garrido-Gomez Т., Ruiz-Alonso M., Blesa D., Diaz-Gimeno P., Vilella F.,  C. Profiling the gene signature of endometrial receptivity: clinical results. Fertil Steril. 2013; 99 (4): 1078-1085.
19. Mahajan N. Endometrial receptivity array: Clinical application. J Hum Reprod Sci. 2015; 8(3): 121-129.
20. Ruiz-Alonso M., Galindo N., Pellicer A.,  C. What a difference two days make: "personalized" embryo transfer (pET) paradigm: a case report and pilot study. Hum Reprod. 2014; 29 (6): 1244-1247.
Описание фигур
Фиг. 1. Тепловые карты дерева иерархической классификации
Фиг. 2. Изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном (стадия средней секреции) и рецептивном эндометрии (стадия средней секреции - окно имплантации).
Фиг. 3. Распределение индекса рецептивности эндометрия в кластерах пререцептивного и рецептивного эндометрия.