КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ HTNFA

1. Способ порционной кристаллизации для кристаллизования антитела против hTNFα, включающий стадии
(a) предоставления водного раствора указанного антитела в смеси с солью неорганического фосфата в качестве кристаллизационного агента; и
(b) инкубации указанной водной кристаллизационной смеси до тех пор, пока не образуются кристаллы указанного антитела.
2. Способ кристаллизации по п.1, где рН указанной водной кристаллизационной смеси находится в диапазоне примерно от рН 3 до 5.
3. Способ кристаллизации по п.1, где указанная водная кристаллизационная смесь содержит буфер.
4. Способ кристаллизации по п.3, где указанный буфер содержит ацетатный буфер.
5. Способ кристаллизации по п.4, где буфер содержит ацетат натрия.
6. Способ кристаллизации по любому из пп.3-5, где концентрация буфера в указанной водной кристаллизационной смеси составляет от 0 до 0,5 М.
7. Способ кристаллизации по п.1, где фосфатная соль представляет собой гидрофосфатную соль.
8. Способ кристаллизации по п.1, где фосфатная соль представляет собой соль щелочного металла или смесь по меньшей мере двух различных солей щелочных металлов.
9. Способ кристаллизации по п.7 или 8, где концентрация фосфатной соли в кристаллизационной смеси находится в диапазоне примерно от 1 до 6 М.
10. Способ кристаллизации по п.9, где концентрация соли в кристаллизационной смеси находится в диапазоне примерно от 1,0 до 3,0 М.
11. Способ кристаллизации по любому из пп.1-5, 7 и 8, где соблюдено по меньшей мере одно из следующих дополнительных условий кристаллизации:
a) инкубацию осуществляют в течение примерно от 1 ч до примерно 60 дней;
b) инкубацию осуществляют при температуре примерно от 4°С до примерно 37°С;
c) концентрация антитела находится в диапазоне примерно от 0,5 до примерно 100 мг/мл.
12. Способ кристаллизации по любому из пп.1-5, 7 и 8, дополнительно включающий стадию сушки указанных кристаллов.
13. Способ кристаллизации по любому из пп.1-5, 7 и 8, дополнительно включающий стадию замены кристаллизационного маточного раствора другим буфером.
14. Способ кристаллизации по любому из пп.1-5, 7 и 8, где объем порции находится в диапазоне примерно от 1 мл до 20,000 л.
15. Кристалл антитела против hTNFα, который можно получить при помощи способа кристаллизации, как определено в п.1.
16. Кристалл антитела против hTNFα, при условии, что указанное антитело не является INFLIXIMAB.
17. Кристалл по п.15, обладающий игольчатоподобной морфологией с максимальной длиной l примерно 2-500 мкм и соотношением l/d примерно от 3 до 30.
18. Кристалл по п.15, где указанное антитело представляет собой поликлональное антитело или моноклональное антитело.
19. Кристалл по п.16, где указанное антитело представляет собой поликлональное антитело или моноклональное антитело.
20. Кристалл по п.18, где указанное антитело выбирают из группы, состоящей из химерных антител, гуманизированных антител, негликозилированных антител, антител человека и антител мыши.
21. Кристалл по п.18, где указанное антитело представляет собой антитело IgG.
22. Кристалл по п.20, где указанное антитело выбирают из группы, состоящей из антител IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
23. Кристалл по п.22, где указанное антитело представляет собой антитело против TNFα человека группы IgG1.
-8
-3
-1
-7
50
24. Кристалл по п.23, полученный из выделенного антитела человека, которое диссоциирует от hTNFα с Kd 1·10M или меньше и константой скорости Ка 1·10 с или меньше, каждая из которых определена при помощи поверхностного плазменного резонанса, и нейтрализует цитотоксичность hTNFα в стандартном тесте in vitro L929 с IC 1·10 M или меньше.
off
-3
-1
25. Кристалл по п.23, полученный из выделенного антитела человека со следующими характеристиками: а) диссоциирует от TNFα человека с константой скорости K 1·10 с или меньше, как определено при помощи поверхностного плазменного резонанса; b) обладает доменом легкой цепи CDR3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3 или последовательность, модифицированную из SEQ ID NO:3, путем одного замещения аланина в положении 1, 4, 5, 7 или 8 или путем одного - пяти замещений консервативных аминокислот в положениях 1, 3, 4, 6, 7, 8 и/или 9; с) обладает доменом тяжелой цепи CDR3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или последовательность, модифицированную из SEQ ID NO:4, путем одного замещения аланина в положении 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 или 11 или путем одного - пяти замещений консервативных аминокислот в положениях 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 и/или 12.
26. Кристалл по п.23, полученный из выделенного антитела человека с вариабельной областью легкой цепи (LCVR), включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и вариабельной областью тяжелой цепи (HCVR), включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.
27. Кристалл по п.26, полученный из антитела D2E7.
28. Кристалл по п.19, где указанное антитело выбирают из группы, состоящей из химерных антител, гуманизированных антител, негликозилированных антител, антител человека и антител мыши.
29. Кристалл по п.19, где указанное антитело представляет собой антитело IgG.
30. Кристалл по п.28, где указанное антитело выбирают из группы, состоящей из антител IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
31. Кристалл по п.30, где указанное антитело представляет собой антитело против TNFα человека группы IgG1.
-8
-3
-1
-7
50
32. Кристалл по п.31, полученный из выделенного антитела человека, которое диссоциирует от hTNFα с Kd 1·10 M или меньше и константой скорости Ка 1·10 с или меньше, каждая из которых определена при помощи поверхностного плазменного резонанса, и нейтрализует цитотоксичность hTNFα в стандартном тесте in vitro L929 с IC 1·10 M или меньше.
off
-3
-1
33. Кристалл по п.31, полученный из выделенного антитела человека со следующими характеристиками: а) диссоциирует от TNFα человека с константой скорости K 1·10 с или меньше, как определено при помощи поверхностного плазменного резонанса; b) обладает доменом легкой цепи CDR3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3 или последовательность, модифицированную из SEQ ID NO:3, путем одного замещения аланина в положении 1, 4, 5, 7 или 8 или путем одного - пяти замещений консервативных аминокислот в положениях 1, 3, 4, 6, 7, 8 и/или 9; с) обладает доменом тяжелой цепи CDR3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или последовательность, модифицированную из SEQ ID NO:4, путем одного замещения аланина в положении 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 или 11 или путем одного-пяти замещений консервативных аминокислот в положениях 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 и/или 12.
34. Кристалл по п.31, полученный из выделенного антитела человека с вариабельной областью легкой цепи (LCVR), включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и вариабельной областью тяжелой цепи (HCVR), включающей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.
35. Кристалл по п.34, полученный из антитела D2E7.
36. Фармацевтическая композиция, содержащая (а) кристаллы антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, и (b) по меньшей мере один фармацевтический эксципиент; которая предоставлена в твердом, полутвердом или жидком составе, причем каждый состав содержит указанное антитело в кристаллической форме.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая а) кристаллы антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, и (b) по меньшей мере один фармацевтический эксципиент, который заключает или инкапсулирует кристаллы указанного антитела.
38. Композиция по п.36, где указанная композиция имеет концентрацию антитела больше чем примерно 1 мг/мл.
39. Композиция по п.36, где указанная композиция имеет концентрацию антитела больше чем примерно 200 мг/мл.
40. Композиция по п.36 или 37, где указанный эксципиент содержит по меньшей мере один полимерный необязательно биоразлагаемый носитель или по меньшей мере один масляный или липидный носитель.
41. Композиция по п.38, где указанный полимерный носитель представляет собой полимер, выбранный из одной или более групп, состоящих из поли(акриловой кислоты), поли(цианоакрилатов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(депсипептидов), сложных поли(эфиров), поли(молочной кислоты), поли(молочной-со-гликолевой кислоты) или PLGA, поли(β-гидроксибутриата), поли(капролактона), поли(диоксанона), поли(этиленгликоля), поли(гидроксипропил)метакриламида, поли(органо)фосфазена, сложных поли(ортоэфиров), поли(винилового спирта), поли(винилпирролидона), сополимеров алкилвинилового эфира малеинового ангидрида, полиолов плюроников, альбумина, альгината, целлюлозы и производных целлюлозы, коллагена, фибрина, желатина, гиалуроновой кислоты, олигосахаридов, гликаминогликанов, сульфатированных полисахаридов, их смесей и сополимеров.
42. Инъецируемая жидкая композиция, содержащая кристаллы антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, и имеющая концентрацию антитела в диапазоне примерно от 10 до 400 мг/мл.
43. Суспензия кристаллов, содержащая кристаллы антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, имеющая концентрацию антитела больше чем примерно 100 мг/мл.
44. Способ лечения млекопитающего, включающий стадию введения млекопитающему эффективного количества кристаллов антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35.
45. Способ лечения млекопитающего, включающий стадию введения млекопитающему эффективного количества композиции по любому из пп.36-41.
46. Способ по п.43 или 44, где композицию вводят парентерально, перорально или при помощи инъекции.
47. Способ лечения связанного с TNFα расстройства у субъекта, который включает введение терапевтически эффективного количества кристаллов антитела, как определено в любом из пп.15-35.
48. Способ по п.47, где указанное связанное с TNFα расстройство выбирают из группы, состоящей из
аутоиммунного заболевания, в частности, ревматоидного артрита, ревматоидного спондилита, остеоартрита и подагрического артрита, аллергии, рассеянного склероза, аутоиммунного диабета, аутоиммунного увеита и нефротического синдрома; инфекционного заболевания, отторжения трансплантата или заболевания «трансплантат против хозяина», злокачественного новообразования, легочного расстройства, интестинального расстройства, кардиального расстройства, воспалительных заболеваний костей, заболевание резорбции костей, алкогольного гепатита, вирусного гепатита, фульминантного гепатита, нарушений свертывания, ожогов, повреждения реперфузии, келоидного образования, образования рубцовой ткани, лихорадки, периодонтального заболевания, ожирения и радиационной токсичности; спондилоартропатии, легочного расстройства, коронарного расстройства, метаболического расстройства, анемии, боли, нарушений работы печени, заболевания кожи, заболевания ногтей, или васкулита, болезни Бехсета, ревматоидного спондилита, астмы, хронического обструкционного заболевания легких (COPD), идиопатического фиброза легких (IPF), рестеноза, диабета, анемии, боли; нарушения, связанного с болезнью Крона; ювенильного ревматоидного артрита (JRA), инфекции вирусом гепатита С, псориаза, псориатического артрита, и хронического пятнистого псориаза, старческой кахексии, болезни Альцгеймера, отека мозга, воспалительной травмы головного мозга, синдрома хронической усталости, дерматомиозита, реакций на лекарственные средства, отека в спинном мозге и/или вокруг спинного мозга, наследственной перемежающейся лихорадки, синдрома Фелти, фиброза, гломерулонефритида, ослабления протезов, микроскопической ангиопатии, расстройства разнородной соединительной ткани, множественной миеломы, рака и кахексии, множественного нарушения работы органов, миелодиспластического синдрома, орхитного остеолиза; панкреатита, включая острый, хронический и панкреатический абсцесс; периодонтального заболевания полимиозита, прогрессирующей почечной недостаточности, псевдоподагры, гангренозной пиодермии, рецидивирующей полихондрии, ревматического заболевания сердца, саркоидоза, склерозирующего холангита, нарушения мозгового кровообращения, восстановления торакоабдоминальной аневризмы аорты (ТААА); периодического синдрома, связанного с рецептором TNF (TRAPS); симптомов, связанных с вакцинацией желтой лихорадки; воспалительных заболеваний, связанных с ухом; хронического воспаления уха или воспаления уха у детей, увеита, ишиаса, простатита, эндометриоза, хориоидальной неоваскуляризации, волчанки, синдрома Шегрена и дегенерации влажного пятна.
49. Применение кристаллов антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, для получения фармацевтической композиции для лечения связанного с TNFα заболевания, как определено в п.38.
50. Кристалл антитела против hTNFα, как определено в любом из пп.15-35, для применения в медицине.