РЕЦЕПТУРА ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ РНК

1. Фармацевтическая композиция, включающая
(a) одноцепочечную самореплицирующуюся РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп; и
(b) полиалкиленимин.
2. Композиция, включающая
(a) одноцепочечную самореплицирующуюся РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп; и
(b) полиалкиленимин;
для применения в качестве лекарственного средства.
3. Композиция по п. 1 или 2, при этом молярное отношение числа атомов азота (N) в полиалкиленимине к числу атомов фосфора (P) в одноцепочечной РНК (соотношение N:P) составляет от 2,0 до 15,0, предпочтительно от 6,0 до 12,0.
4. Композиция, включающая
(a) одноцепочечную самореплицирующуюся РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп; и
(b) полиалкиленимин;
причем молярное отношение числа атомов азота (N) в полиалкиленимине к числу атомов фосфора (P) в одноцепочечной РНК (соотношение N:P) составляет от 2,0 до 15,0, предпочтительно от 6,0 до 12,0.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, при этом ионная сила составляет 50 мМ или меньше, при этом предпочтительно концентрация одновалентных катионных ионов составляет 25 мМ или меньше, а концентрация двухвалентных катионных ионов составляет 20 мкМ или меньше.
6. Композиция, включающая
(a) одноцепочечную самореплицирующуюся РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп; и
(b) полиалкиленимин;
причем ионная сила составляет 50 мМ или меньше.
7. Композиция по п. 6, при этом концентрация одновалентных катионных ионов составляет 25 мМ или меньше, а концентрация двухвалентных катионных ионов составляет 20 мкМ или меньше.
8. Композиция по любому из пп. 1-7, при этом одноцепочечная самореплицирующаяся РНК представляет собой цис-репликон.
9. Композиция по любому из пп. 1-8, при этом одноцепочечная самореплицирующаяся РНК происходит из вируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEEV).
10. Композиция по п. 9, при этом одноцепочечная самореплицирующаяся РНК соответствует или в основном соответствует геномной РНК VEEV или его аттенюированной формы, причем открытая рамка считывания, кодирующая структурные белки, заменена на открытую рамку считывания, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп.
11. Композиция по п. 9 или 10, при этом антиген либо пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп, является мембранным белком типа белка оболочки вируса.
12. Композиция по любому из пп. 9-11, при этом антигеном является гемагглютинин вируса гриппа.
13. Композиция по любому из пп. 1-8, при этом одноцепочечная самореплицирующаяся РНК происходит из вируса Semliki Forest (SFV).
14. Композиция по п. 13, при этом одноцепочечная самореплицирующаяся РНК соответствует или в основном соответствует геномной РНК SFV или его аттенюированной формы, причем открытая рамка считывания, кодирующая структурные белки, заменена на открытую рамку считывания, кодирующую пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп.
15. Композиция по п. 13 или 14, при этом антиген либо пептид или белок, содержащий антиген или эпитоп, не является мембранным белком.
16. Композиция по любому из пп. 13-15, при этом антигеном является капсидный белок вируса.
17. Композиция по любому из пп. 1-16, которая предназначена для внутримышечного введения типа внутримышечной инъекции.
18. Композиция по любому из пп. 1-17, при этом одноцепочечная РНК и полиалкиленимин находятся в полиплексных частицах.
19. Композиция по любому из пп. 1-18, при этом полиалкиленимин имеет следующую общую формулу (I)
,
где R означает H, ацил или группу, имеющую следующую общую формулу (II)
,
1
где R означает Н или группу, имеющую следующую общую формулу (III)
,
n, m и l выбраны независимо из целых чисел от 2 до 10; а
2
7
5
p, q и r – целые числа, причем сумма p, q и r такова, что средняя молекулярная масса полимера составляет от 1,5⋅10 до 10 Да, предпочтительно от 5000 до 10 Да, более предпочтительно от 10000 до 40000 Да, более предпочтительно от 15000 до 30000 Да, еще более предпочтительно от 20000 до 25000 Да.
20. Композиция по п. 19, при этом n, m и l выбраны независимо из 2, 3, 4 и 5, предпочтительно из 2 и 3.
1
21. Композиция по п. 19 или 20, при этом R означает H.
22. Композиция по любому из пп. 19-21, при этом R означает H или ацил.
23. Композиция по любому из пп. 1-22, при этом полиалкиленимин включает полиэтиленимин и/или полипропиленимин, предпочтительно полиэтиленимин.
24. Композиция по любому из пп. 1-23, при этом по меньшей мере 92% атомов N в полиалкиленимине являются протонируемыми.
25. Композиция по любому из пп. 1-24, дополнительно содержащая одну или несколько добавок.
26. Композиция по п. 25, при этом одна или несколько добавок выбраны из группы, состоящей из буферных веществ, сахаридов, стабилизаторов, криопротекторов, лиопротекторов и хелатообразующих веществ.
27. Композиция по п. 26, при этом буферные вещества включают по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES), 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES), 3-морфолино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), буферов на основе уксусной кислоты и ацетата и их аналогов, буферов на основе фосфорной кислоты и фосфата и буферов на основе лимонной кислоты и цитрата.
28. Композиция по п. 26 или 27, при этом сахариды включают по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из моносахаридов, дисахаридов, трисахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, предпочтительно из глюкозы, трегалозы и сахарозы.
29. Композиция по любому из пп. 26-28, при этом криопротекторы включают по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из таких гликолей, как этиленгликоль, пропиленгликоль и глицерин.
30. Композиция по любому из пп. 26-29, при этом хелатообразующее вещество включает EDTA.
31. Композиция по любому из пп. 1-30, при этом композиция содержит забуференную HEPES глюкозу (HBG), забуференную MES глюкозу (MBG), забуференную ацетатом глюкозу или забуференную HEPES трегалозу (HBT).
32. Композиция по любому из пп. 18-31, при этом z-средний размер частиц по данным динамического рассеяния света составляет менее 200 нм, предпочтительно менее 150 нм и более предпочтительно менее 100 нм и/или индекс полидисперсности частиц по данным динамического рассеяния света составляет менее 0,5, предпочтительно менее 0,3 и более предпочтительно менее 0,2.
33. Композиция по любому из пп. 18-32, при этом дзета-потенциал частиц составляет 20 мВ или больше, предпочтительно от 25 до 40 мВ.
34. Композиция по любому из пп. 31-33, при этом HBG содержит 5% глюкозы (вес./об.) и 10 мМ HEPES, pH 7,1.
35. Композиция по любому из пп. 31-33, при этом HBT содержит 10% трегалозы (вес./об.) и 10 мМ HEPES, pH 7,1.
36. Композиция по любому из пп. 18-35, при этом частицы являются нейтральными или положительно заряженными при физиологическом pH.
37. Композиция по любому из пп. 1-36, при этом одноцепочечная РНК представляет собой молекулу из от 6000 до 15000 нуклеотидов, предпочтительно от 9000 до 12000 нуклеотидов.
38. Композиция по любому из пп. 1-37 для применения в терапии.
39. Композиция по любому из пп. 1-38, которая является вакцинной композицией.
40. Композиция по любому из пп. 1-39 для индуцирования иммунного ответа.
41. Композиция по п. 40, которая вводится внутримышечно.
42. Способ индуцирования иммунного ответа, включающий стадию введения композиции по любому из пп. 1-40.
43. Способ по п. 42, при этом композицию вводят внутримышечно.
44. Композиция по п. 40 или 41 либо способ по п. 42 или 43, при этом иммунный ответ направлен против антигена или эпитопа.