СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОСЬМИ КОМПОНЕНТОВ ИЗ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ КИТАЙСКОЙ МЕДИЦИНЫ

1. Способ выделения восьми компонентов из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, состоящей из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200-300, эфедры китайской 60-100, ревеня лекарственного 40-60, гуттуинии сердцелистной 200-300, жимолости японской 200-300, вайды красильной 200-300, пачули 60-100, высушенных корневищ щитовника 200-300, родиолы розовой 60-100, ментола 5-9, горького миндаля 60-100, корня солодки 60-100 и гипса 200-300; при этом способ выделения включает следующие этапы: (1) общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом и 50% этанолом, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;
(2) берут экстракт элюированной 50% этанолом части, полученный на этапе (1), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG; последовательно элюируют раствором метанол-вода при соотношениях 20:80, 40:60, 60:40, 80:20 и 100% метанолом с получением в результате Fr.A - Fr.E;
(3) берут образец Fr.A, полученный на этапе (2), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;
(4) берут образец Fr.A-2, полученный на этапе (3), и смешивают его с силикагелем, затем загружают в колонку с силикагелем и разделяют в изократическом режиме при объемном соотношении дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;
(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин и 12-13 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении, выполняют следующие разделения:
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;
(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со временем удерживания 10-11 мин, 17-19 мин и 21-24 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении; при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду; 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, и после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;
(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин соответственно, и удаляют растворитель при пониженном давлении, собранную жидкость, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждают с образованием белого осадка с помощью раствора метиленхлорида-метанола с объемным соотношением 2:1 с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, колонка для хроматографии: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.
2. Способ выделения восьми компонентов по п. 1, при этом способ выделения включает следующие этапы: (1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола;
(2) берут 200 г экстракта элюированной 50% этанолом части, полученного на этапе (1), добавляют к 200 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG S-50 мкм, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG, S-50 мкм с соотношением высоты слоя 1:4, при пониженном давлении последовательно элюируют с помощью 6 л раствора метанол-вода с соотношением 20:80, с помощью 7 л раствора с соотношением 40:60, с помощью 7 л раствора с соотношением 60:40, с помощью 5 л раствора с соотношением 80∶20 и с помощью 3 л 100% метанола с получением в результате Fr.A – Fr.E;
(3) берут 50,0 г образца Fr.A, полученного на этапе (2), добавляют к 50 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;
(4) берут 3,2 г образца Fr.A-2, полученного на этапе (3), и смешивают его с 6,4 г силикагеля, 200–300 меш, помещают в колонку с силикагелем, соотношение высоты слоя 1:50, разделяют в изократическом режиме с объемным соотношением дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении с получением Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;
(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин, 12-13 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении, и выполняют следующие разделения: фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;
(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду, время удерживания 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;
(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, и раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.
3. Способ выделения восьми компонентов по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200, жимолости японской 300, вайды красильной 200, ревеня лекарственного 40, пачули 60, высушенных корневищ щитовника 300, родиолы розовой 100, ментола 9, эфедры китайской 60, горького миндаля 100, гуттуинии сердцелистной 200, корня солодки 100 и гипса 200.
4. Способ выделения восьми компонентов по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 300, жимолости японской 200, вайды красильной 300, ревеня лекарственного 60, пачули 100, высушенных корневищ щитовника 200, родиолы розовой 60, ментола 5, эфедры китайской 100, горького миндаля 60, гуттуинии сердцелистной 300, корня солодки 60 и гипса 300.
5. Способ выделения восьми компонентов по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 278, жимолости японской 294, вайды красильной 285, ревеня лекарственного 55, пачули 95, высушенных корневищ щитовника 290, родиолы розовой 87, ментола 8,5, эфедры китайской 88, горького миндаля 80, гуттуинии сердцелистной 284, корня солодки 95 и гипса 277.
6. Способ выделения восьми компонентов по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины получают с помощью следующих этапов:
(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;
(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;
(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;
(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью от 1,10 до 1,15, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;
(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до получения экстракта с относительной плотностью от 1,15 до 1,20, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.