КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ СТАБИЛЬНОГО И ДОЛГОВРЕМЕННОГО ПРИЖИВЛЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОНКРЕТНЫХ ПРОТОКОЛОВ ДЛЯ Т/В-КЛЕТОЧНОЙ ДЕПЛЕЦИИ

1. Способ лечения субъекта, нуждающегося в несингенном клеточном или тканевом трансплантате, включающий:
5
6
(а) трансплантацию субъекту дозы без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток, причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки содержат меньше чем 5×10 CD3+ Т-клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5×10 CD34+ клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки получают путем сепарации указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из:
(I) способа, включающего
(i) добавление к незрелым гематопоэтическим клеткам антитела, которое специфически связывается с поверхностным маркером, причем указанное антитело метят с помощью магнитно-чувствительного средства;
(ii) иммобилизацию указанных незрелых гематопоэтических клеток, специфически связанных с указанным антителом, меченным указанным магнитно-чувствительным средством, в матрице посредством магнитного поля;
(iii) отмывку указанной матрицы для удаления несвязанных клеток; и
(iv) удаление указанного магнитного поля для элюирования связанных клеток из указанной матрицы;
(II) на основании продукта, секретируемого указанными Т-клетками; и
(III) на основании экспрессии по меньшей мере одного поверхностного маркера Т-клеток, выбранного из группы, состоящей из 4-1ВВ, РохР3, CD154, CD4, CD8, CD25, GITR CD137, латентного TGF-бета (LAP), GARP (LRRC32) и CD121a/b;
и впоследствии
(b) введение субъекту терапевтически эффективного количества циклофосфамида, причем указанное терапевтически эффективное количество составляет 25-200 мг на кг массы тела, тем самым обеспечивая лечение субъекта.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий:
(i) кондиционирование субъекта в режиме кондиционирования сниженной интенсивности перед стадией (а); или
(ii) кондиционирование субъекта путем in vivo Т-клеточной циторедукции перед стадией (а), и необязательно при котором указанную in vivo Т-клеточную циторедукцию осуществляют с помощью антител.
6
3. Способ по п. 1, при котором доза указанных без-Т-клеточных незрелых гемопоэтических клеток содержит 5-40×10 CD34+ клеток на кг массы тела субъекта.
4. Способ по п. 1, при котором указанные без-Т-клеточные незрелые гемопоэтические клетки:
6
+
-
(i) содержат меньше чем 1×10 CD8 TCRα/β клеток на кг массы тела субъекта; или
(ii) получают с помощью MACS™.
5. Способ по п. 1, при котором:
если указанный поверхностный маркер представляет собой Т-клеточный поверхностный маркер, указанные несвязанные клетки содержат без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки; или
если указанный поверхностный маркер представляет собой поверхностный маркер незрелых гематопоэтических клеток, указанные связанные клетки содержат без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки.
6. Способ по п. 1, дополнительно включающий сепарацию В-клеток от указанных без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток путем применения антитела, которое специфически связывается с В-клеточным поверхностным маркером.
7. Способ по п. 1, при котором:
(i) указанная матрица представляет собой ферромагнитную матрицу или содержит сферы магнитно-чувствительного или ферромагнитного материала; или
(ii) при котором указанное магнитно-чувствительное средство включает в себя суперпарамагнитную частицу, и необязательно при котором указанную суперпарамагнитную частицу конъюгируют с указанным антителом в комбинации со специфической к антииммуноглобулину, авидину и/или антигаптену микрочастицей.
8. Способ по п. 1, при котором указанную сепарацию указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток осуществляют с использованием сепарации в высокоградиентном магнитном поле (HGMS) или с использованием разделительной колонки.
9. Способ по п. 1, при котором указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки получают от несингенного донора.
10. Способ по п. 1, при котором субъект представляет собой субъекта - человека.
11. Способ по п. 2, при котором указанное кондиционирование сниженной интенсивности включает немиелоаблативное кондиционирование и необязательно при котором указанное немиелоаблативное кондиционирование включает в себя по меньшей мере одно из тотального облучения тела (TBI), тотального облучения лимфоидной ткани (TLI), химиотерапевтического средства и/или иммунотерапии антителами.
12. Способ по п. 11, при котором:
(i) указанное TBI включает дозу однократного или фракционированного облучения в пределах диапазона, выбранного из группы, состоящей из 1-7,5 Гр и 1-3,5 Гр; или
(ii) указанное химиотерапевтическое средство включает в себя по меньшей мере одно из бусульфана, флударабина, мелфалана и тиотепы; или
(iii) указанное антитело включает в себя по меньшей мере одно из антитела к CD52, антитела - антитимоцитарного глобулина (ATG) и антитела к CD3 (ОКТ3).
13. Способ по п. 1, при котором указанная концентрация указанного циклофосфамида составляет приблизительно 100-200 или приблизительно 100 мг на кг массы тела.
14. Способ по п. 1, при котором указанный циклофосфамид вводят в однократной дозе или в двух дозах, и необязательно при котором:
(i) каждая из указанных двух доз содержит концентрацию, составляющую приблизительно 50 мг на кг массы тела; или
(ii) каждую из указанных двух доз вводят в дни 3 и 4 после стадии (а).
15. Способ по п. 1, при котором субъект:
(i) характеризуется наличием злокачественного заболевания, и необязательно при котором указанное злокачественное заболевание представляет собой гематопоэтическую злокачественную опухоль; или
(ii) характеризуется наличием незлокачественного заболевания, и необязательно при котором указанное незлокачественное заболевание представляет собой генетическое заболевание или нарушение, гемопоэтическую аномалию, аутоиммунное заболевание или метаболическое нарушение.
16. Способ по п. 1, при котором указанный клеточный или тканевой трансплантат:
(i) выбирают из группы, состоящей из незрелых гемопоэтических клеток, печени, поджелудочной железы, селезенки, почки, сердца, легкого, кожи, кишечника и лимфоидной/гемопоэтической ткани или органа; или
(ii) трансплантируют субъекту перед, одновременно или после указанной трансплантации указанной дозы без-Т-клеточных незрелых гемопоэтических клеток указанному субъекту; или
(ii) включает котрансплантацию нескольких органов.
17. Способ по п. 16, при котором указанный клеточный или тканевой трансплантат и указанные без-Т-клеточные незрелые гемопоэтические клетки получают от одного донора.
18. Способ лечения субъекта, нуждающегося в трансплантации незрелых гемопоэтических клеток, включающий:
5
6
(а) трансплантацию подвергнутому кондиционированию субъекту дозы без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток, причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки содержат меньше чем 5×10CD3+ Т-клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5×10 CD34+ клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки получают путем сепарации указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из:
(I) способа, включающего:
(i) добавление к незрелым гематопоэтическим клеткам антитела, которое специфически связывается с поверхностным маркером, причем указанное антитело метят с помощью магнитно-чувствительного средства;
(ii) иммобилизацию указанных незрелых гематопоэтических клеток, специфически связанных с указанным антителом, меченным указанным магнитно-чувствительным средством, в матрице посредством магнитного поля;
(iii) отмывку указанной матрицы для удаления несвязанных клеток; и
(iv) удаление указанного магнитного поля для элюирования связанных клеток из указанной матрицы;
(II) на основании продукта, секретируемого указанными Т-клетками; и
(III) на основании экспрессии по меньшей мере одного поверхностного маркера Т-клеток, выбранного из группы, состоящей из 4-1 ВВ, FoxP3, CD 154, CD4, CD8, CD25, GITR CD137, латентного TGF-бета (LAP), GARP (LRRC32) и CD121a/b;
и впоследствии
(b) введение субъекту терапевтически эффективного количества циклофосфамида, причем указанное терапевтически эффективное количество составляет 25-200 мг на кг массы тела, тем самым обеспечивая лечение субъекта.
19. Способ лечения субъекта, нуждающегося в трансплантации незрелых гематопоэтических клеток, включающий:
(a) кондиционирование субъекта согласно протоколу кондиционирования сниженной интенсивности, причем указанное кондиционирование сниженной интенсивности включает в себя тотальное облучение тела (TBI) и химиотерапевтическое средство;
5
6
(b) трансплантацию субъекту дозы без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток, причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки содержат меньше чем 5×10 CD3+ Т-клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5×10 CD34+ клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки получают путем сепарации указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из:
(I) способа, включающего:
(i) добавление к незрелым гематопоэтическим клеткам антитела, которое специфически связывается с поверхностным маркером, причем указанное антитело метят с помощью магнитно-чувствительного средства;
(ii) иммобилизацию указанных незрелых гематопоэтических клеток, специфически связанных с указанным антителом, меченным указанным магнитно-чувствительным средством, в матрице посредством магнитного поля;
(iii) отмывку указанной матрицы для удаления несвязанных клеток; и
(iv) удаление указанного магнитного поля для элюирования связанных клеток из указанной матрицы;
(II) на основании продукта, секретируемого указанными Т-клетками; и
(III) на основании экспрессии по меньшей мере одного поверхностного маркера Т-клеток, выбранного из группы, состоящей из 4-1ВВ, FoxP3, CD154, CD4, CD8, CD25, GITR CD137, латентного TGF-бета (LAP), GARP (LRRC32) и CD121a/b;
и впоследствии
(с) введение субъекту терапевтически эффективного количества циклофосфамида, причем указанное терапевтически эффективное количество составляет 25-200 мг на кг массы тела, тем самым обеспечивая лечение субъекта.
20. Способ индукции донор-специфической толерантности у субъекта, нуждающегося в несингенном клеточном или тканевом трансплантате, включающий:
5
+
6
(а) трансплантацию субъекту дозы без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток, полученных от несингенного донора, причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки содержат меньше чем 5×10 CD3 Т-клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5×10 CD34+ клеток на кг массы тела субъекта, и причем указанные без-Т-клеточные незрелые гематопоэтические клетки получают путем сепарации указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из:
(I) способа, включающего:
(i) добавление к незрелым гематопоэтическим клеткам антитела, которое специфически связывается с поверхностным маркером, причем указанное антитело метят с помощью магнитно-чувствительного средства;
(ii) иммобилизацию указанных незрелых гематопоэтических клеток, специфически связанных с указанным антителом, меченным указанным магнитно-чувствительным средством, в матрице посредством магнитного поля;
(iii) отмывку указанной матрицы для удаления несвязанных клеток; и
(iv) удаление указанного магнитного поля для элюирования связанных клеток из указанной матрицы;
(II) на основании продукта, секретируемого указанными Т-клетками; и
(III) на основании экспрессии по меньшей мере одного поверхностного маркера Т-клеток, выбранного из группы, состоящей из 4-1ВВ, FoxP3, CD154, CD4, CD8, CD25, GITR CD137, латентного TGF-бета (LAP), GARP (LRRC32) и CD121a/b;
и впоследствии
(b) введение субъекту терапевтически эффективного количества циклофосфамида, причем указанное терапевтически эффективное количество составляет 25-200 мг на кг массы тела, тем самым индуцируя донор-специфическую толерантность у субъекта.
21. Способ по п. 1, при котором указанную сепарацию:
(i) проводят с использованием антитела и необязательно при котором указанное антитело соединяют с флуоресцентным красителем, гаптеном или магнитной частицей; или
(ii) проводят с использованием проточной цитометрии или магнитной сортировки клеток.
22. Способ по п. 1, при котором указанная сепарация указанных Т-клеток от указанных незрелых гематопоэтических клеток на основании указанного продукта, секретируемого указанными Т-клетками, включает в себя сепарацию Т-клеток, меченных продуктом секреции, причем указанные Т-клетки соединили с обеспечивающим захват фрагментом, который специфически связывает продукт, секретируемый указанными Т-клетками, и причем указанные Т-клетки культивировали в условиях, при которых продукт секретируется и связывается с указанным обеспечивающим захват фрагментом, тем самым получая Т-клетки, меченные указанным продуктом секреции, причем указанные Т-клетки не лизируют с помощью указанного способа и причем указанный продукт секреции метят с помощью фрагмента - метки,
и необязательно при котором указанный продукт секреции представляет собой цитокин, антитело или гормон,
и необязательно при котором указанный фрагмент - метка представляет собой специфическое к продукту секреции антитело или является конъюгированным с фторхроматом, намагничиваемым или содержит магнитные частицы,
и необязательно при котором указанный обеспечивающий захват фрагмент соединяют с указанными Т-клетками или В-клетками через якорный фрагмент, или он представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и необязательно при котором указанное антитело является биспецифическим или направлено против Т-клеточного или В-клеточного поверхностного маркера.
23. Способ по п. 1, дополнительно включающий сепарацию В-клеток от указанных без-Т-клеточных незрелых гематопоэтических клеток на основании продукта, секретируемого указанными В-клетками, включающую в себя сепарацию В-клеток, меченных продуктом секреции, причем указанные В-клетки соединили с обеспечивающим захват фрагментом, который специфически связывает продукт, секретируемый указанными В-клетками, и причем указанные В-клетки культивировали в условиях, при которых продукт секретируется и связывается с указанным обеспечивающим захват фрагментом, тем самым получая В-клетки, меченные указанным продуктом секреции, причем указанные В-клетки не лизируют с помощью указанного способа и причем указанный продукт секреции метят с помощью фрагмента - метки,
и необязательно при котором указанный продукт секреции представляет собой цитокин, антитело или гормон,
и необязательно при котором указанный фрагмент - метка представляет собой специфическое к продукту секреции антитело или является конъюгированным с фторхроматом, намагничиваемым или содержит магнитные частицы,
и необязательно при котором указанный обеспечивающий захват фрагмент соединяют с указанными Т-клетками или В-клетками через якорный фрагмент, или он представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и необязательно при котором указанное антитело является биспецифическим или направлено против Т-клеточного или В-клеточного поверхностного маркера.