СПОСОБ ОЧИСТКИ АПОЛИПОПРОТЕИНА А-1

1. Способ очистки аполипопротеина А-1, включающий стадии:
a) смешивание фракции плазмы IV с раствором 1-8 М мочевины, формируя подготовительный раствор фракции IV;
b) загрузка подготовительного раствора, полученного на стадии а), в первую колонку для анионной хроматографии, и последующее элюирование с буфером I, содержащим 1-8 М мочевину, имеющим проводимость 1-4 мс/см, с получением элюента I, который главным образом содержит ароА-1 протеин;
c) загрузка элюента I во вторую колонку для анионной хроматографии, сначала элюирование буфером II, имеющим проводимость 1-15 мс/см, и затем элюирование буфером III, имеющим проводимость 30-100 мс/см, с получением чистого ароА-1 протеина.
2. Способ по п.1, в котором фракцию плазмы IV получают с помощью способа низкотемпературного фракционирования этанолом.
3. Способ по п.1, в котором буфер II включает 0-1 М мочевину.
4. Способ по п.1, в котором буфер III включает 0-1 М мочевину.
5. Способ по п.1, в котором концентрация мочевины в стадии а) и b) составляет 3-8 М.
6. Способ по п.1, в котором концентрация мочевины в стадии а) и b) составляет 5-7 М.
7. Способ по п.1, в котором проводимость буфера I составляет 2-4 мс/см, проводимость буфера II составляет 7-15 мс/см, и проводимость буфера III составляет 70-95 мс/см.
8. Способ по п.1, в котором проводимость буфера I составляет 2,5-3,6 мс/см, проводимость буфера II составляет 9-12 мс/см, проводимость буфера III составляет 80-90 мс/см.
9. Способ по п.1, в котором каждая колонка для анионообменной хроматографии является одной из 1) высокоэффективной колонкой для ионообменной хроматографии и 2) низкоэффективной колонкой для ионообменной хроматографии.
10. Способ по п.1, в котором каждая колонка для анионообменной хроматографии является одной из 1) колонкой для QAE ионного обмена и 2) колонкой для DEAE ионного обмена.
11. Способ по п.1, в котором массовое соотношение фракции IV в стадии 1 и мочевины составляет 1:30-300.
12. Способ по п.1, в котором массовое соотношение фракции IV в стадии и мочевины составляет 1:90-240.
13. Способ по п.1, в котором массовое соотношение фракции IV в стадии и мочевины составляет 1:150-210.
2
2
14. Способ по п.1, в котором буферы I, II, III стадий b) и с) содержат, по меньшей мере, одну соль, выбранную из группы, включающей NaCl, КСl, MgCl и СаСl.
15. Способ по п.1, в котором буферы элюирования I, II, III стадий b) и с) содержат NaCl.
16. Способ по п.1, в котором, между стадиями а) и b), центрифугируют подготовительный раствор фракции IV с удалением осадков и затем фильтруют.
17. Способ по п.16, в котором подготовительный раствор фракции IV центрифугируют при скорости 6000-10000 об/мин и фильтруют с помощью мембраны, имеющей размер пор 0,2-0,6 мкм.
18. Способ по п.1, в котором, между стадиями а) и b), наибольшее количество примесей иллюируют с помощью буфера IV, имеющего проводимость 4,5-70 с/см.
19. Способ по п.18, в котором буфер IV содержит 0-1 М мочевину.
2
2
20. Способ по п.18, в котором буфер IV содержит, по меньшей мере, одну соль, выбранную из группы, включающей NaCl, КСl, MgCl и СаСl.
21. Способ по п.18, в котором буфер IV содержит NaCl.
22. Способ по п.1, в котором pH буферов I, II и III составляет 7,2-8,5.
23. Способ по п.1, в котором буферы I, II и III содержат Tris буфер.
24. Способ по п.1, в котором pH буферов I, II и III составляет 7,5-8.
25. Способ по п.1, в котором pH буферов I, II и III составляет 7,8.
26. Способ по п.1, дополнительно содержащий, после стадии с), по меньшей мере, одну ультрафильтрацию чистого ароА-1 протеин, добавление стабилизатора к чистому ароА-1 протеину и лиофилизацию чистого ароА-1 протеина.
27. Аполипопротеин А-1, полученный по способу по п.1.