Низкомолекулярные гликоконъюгаты противовирусного препарата рибавирин с производными галактозамина - новый подход адресной терапии заболеваний печени

86

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

фективное лечение некоторых злокачественных новообразований.

Цель исследования — получение микрогелей комплексного действия путем совместной иммобилизации на фосфатах полисахаридов интерферона альфа-2Ь (ИФН a-2b) и темозоломида.

Материалы и методы. В качестве полимеров-носителей цитокина и низкомолекулярного противоопухолевого вещества выбраны микрогели фосфатов крахмала и декстрана с содержанием фосфатных групп 7,5—11,8 % и средними размерами в интервале от 7,7 до 600 мкм. Количество сорбированного белка определяли методом Брэдфорд. Концентрацию темозоломида в микрогелях определяли методом спектрофотометрии при длине волны 330 нм. Основные методы исследования комбинированных микрочастиц: ИК-спектроскопия, гравиметрия, динамическое светорассеива-ние, сканирующая электронная микроскопия.

Результаты. Исследованы процессы сорбции ИФН a-2b, темозоломида, а также совместной иммобилизации белка и цитостатика на микрогелях фосфатов полисахаридов в зависимости от концентрации активных веществ во внешнем растворе. Показано, что степень извлечения ИФН a-2b микрогелями из растворов с концентрацией белка 8,2—820 мкг/мл не зависит от наличия темозоломида и находится в интервале от 59 до 98 %. Установлено, что в присутствии ИФН a-2b сорбционная способность фосфатов полисахаридов по отношению к темозоломиду повышается, при этом коэффициент распределения темо-золомида между фазами микрогелей и внешнего раствора увеличивается вдвое. Учитывая низкую растворимость те-мозоломида в воде, можно предположить, что причиной этого могут являться гидрофобные взаимодействия темо-золомида с гидрофобными участками белка, сорбированного на микрогелях. В модели in vitro установлено, что микрогели с включенными ИФН a-2b) и темозоломидом обладают пролонгированным эффектом, который проявляется в длительном (в течение суток) высвобождении активного вещества.

Заключение. Впервые определены оптимальные условия получения микрогелей на основе фосфатов полисахаридов, содержащих комплекс активных компонентов в терапевтической дозе.

С.А. Ягубов, Ф.В. Доненко, М.В. Киселевский ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ МЕТРОНИДАЗОЛА

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. Метронидазол (МТ) — высокоэффективный лекарственный препарат с противоинфекционной активностью, а при проведении радиотерапии онкологических заболеваний он используется как радиосенсибилизатор. Существуют единичные публикации, свидетельствующие о влиянии МТ на иммунную систему, которые, однако, нуждаются в уточнении.

Цель исследования — изучить влияние на иммунную систему животных.

Материалы и методы. В экспериментальных исследованиях использованы мыши линии CBA/Lac, полученные

из питомника «Столбовая» (Московская область). МТ — официальный препарат. Животные разделены на 4 группы. Первая группа — контрольная, получавшая физиологический раствор внутрибрюшинно (в/ б); во 2-й группе МТ вводили в/ б в дозе 100 мг/кг массы тела животных в течение 10 дней; в 3-й группе животные получали физиологический раствор перорально (п/о); в 4-й группе — п/о в дозе 1 г/кг массы тела животного однократно. Выбранные режимы соответствуют усредненным курсам приема МТ. Общетоксический эффект МТ на животных и на иммунную систему оценивали по изменению массы тела животных, изменению массы селезенки по отношению к массе тела, изменению фенотипа мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови, изменению содержания сывороточных цитокинов — ГЬ-1, ГЬ-2, ГЬ-4, ГЬ-6, ГЬ-10, ГЬ-12, ЮТ-а, 1Ш-у, TGF-p.

Результаты. В указанных режимах МТ не изменял достоверно массы тела животных. Селезеночный индекс уменьшался в обеих экспериментальных группах, получивших МТ, по сравнению с соответствующим контролем на 35 и 43 % при в/ б и п/о приеме препарата. Введение МТ не сопровождалось достоверным изменением количества основных субпопуляций лимфоцитов по сравнению с контрольными группами. В частности, доля В-клеток (CD19+) составляла в контрольных группах 22 ± 2 %, 20 ± 2 % и 23 ± 2 % при в/ б и п/о введении МТ соответственно. Среди Т-клеток отмечалось небольшое повышение CD4+-лимфоцитов, содержание которых увеличивалось с 37 ± 2 % до 41 ± 3 % и 42 ± 2 % соответственно. Введение МТ приводило также к увеличению НК фХ5+) — с 12 ± 2 до 14 ± 2 %. Наряду с изменением количества перечисленных клеток отмечалась также очевидная тенденция к повышению уровня НКТ (CD3+/DX5+) и Т-регуляторных клеток (CD4+/CD25+). CD8+-лимфоциты в меньшей степени подвержены действию МТ. Введение МТ не оказывало значительного влияния на уровень сывороточных цитокинов. В то же время независимо от пути введения МТ отмечалось достоверное снижение спонтанной и индуцированной продукции всех изученных цитокинов в 2,5—3 раза.

Заключение. Таким образом, применение МТ оказывает стимулирующее влияние на показатели иммунной системы.

Э.Ю. Ямансаров1, Р.А. Петров1, С.А. Петров1, И.В. Салтыкова1, Е.Э. Ондар1, И.В. Кисляков1, Е.К. Белоглазкина1, Н.В. Зык1, В.Э. Котелянский1, А.Г. Мажуга12

НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ ГЛИКОКОНЪЮГАТЫ ПРОТИВОВИРУСНОГО ПРЕПАРАТА РИБАВИРИН С ПРОИЗВОДНЫМИ ГАЛАКТОЗАМИНА - НОВЫЙ ПОДХОД АДРЕСНОЙ ТЕРАПИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ

МГУ им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва, Россия;

2Национальный исследовательский технологический университет «МИСиС», Москва, Россия

Введение. Среди онкологических заболеваний человека гепатоклеточная карцинома (НСС) является одной из наиболее распространенных и по числу смертельных

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

87

исходов занимает 2-е место в мире. Из множества причин, вызывающих HCC, особо стоит отметить вирус гепатита С (HCV). Установлена прямая связь между вирусным и опухолевым заболеваниями печени: в 60 % случаев заражения HCV развиваются осложнения в виде HCC. ASGPR — специфичный рецептор, экспрессированный в большом количестве на поверхности гепатоцитов (до 106 рецепторов на клетку) и селективно связывающий остатки галактозамина. Золотым стандартом лечения HCV признается терапия противовирусным агентом рибавирин. Поэтому логичным этапом развития исследований терапии HCC и HCV является создание низкомолекулярных кова-лентно-связанных конъюгатов рибавирина и специфичных к ASGPR моносахаридов.

Цель исследования — синтез и идентификация новых низкомолекулярных конъюгатов рибавирина и #-ацетилга-лактозамина с улучшенным фармакологическим профилем.

Материалы и методы. Структура конъюгатов установлена методами спектроскопии ЯМР и масс-спектрометрии. Спектры ЯМР1Н и 13С регистрировали на приборе Bruker DPX-300 и Agilent 400 MR. Масс-спектры высокого разрешения регистрировали на приборе Bruker micrOTOF II.

Результаты. В настоящей работе были синтезированы и охарактеризованы 2 ковалентных коньюгата рибавирина и #-ацетилгалактозамина. Первоначально методом карбо-диимидной этерификации получены предшественники конъюгатов — сложные эфиры рибавирина и 5-гексиновой кислоты. Наличие расщепляемой связи между линкером и препаратом обеспечит высвобождение рибавирина в физиологических условиях гепатоцитов. Последующее взаимодействие азидопроизводных #-ацетилгалактозамина с терминальными тройными связями линкеров в условиях катализа йодида меди (I) (метод «клик-химии») позволило селективно осуществить конъюгацию пролекарств и специфических моносахаридов.

Заключение. В результате проделанной работы синтезированы новые тривалентные гликоконъюгаты рибави-рина, в которых биоактивная молекула выступает в качестве основы для создания адресного лиганда ASGPR. Полученные соединения представляют большой интерес для дальнейшего тестирования биологических свойств in vitro и in vivo.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (№ 16-33-60166) и Российского научного фонда (РНФ № 14—34—00017).

Е.В. Ярославцева-Исаева, М.А. Каплан, В.Н. Капинус, И.С. Спиченкова

ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ РАКА КОЖИ МНОЖЕСТВЕННОЙ ФОРМЫ С ОТЕЧЕСТВЕННЫМИ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРАМИ

Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цы-ба - филиал ФГБУ«НМИРЦ» Минздрава России, Обнинск, Калужская область, Россия

Введение. По количеству случаев рак кожи (РК) (кроме меланомы) в структуре злокачественных новообразований занимает 2-е место (после рака молочной железы). В 2015 г. выявлено 276,3 случая на 100 тыс. населения.

При этом множественная форма (2 и более очагов) РК (ба-зально-клеточный, плоскоклеточный), по данным разных авторов, встречается в 4,2—24 % случаев. Среди больных базально-клеточным РК (БКРК) с множественными очагами особую группу занимает синдром Горлина-Гольца. Это наследственное заболевание с аутосомно-доминант-ным типом наследования часто сочетается с кистами челюстей (чаще нижней), аномалиями позвоночника и ребер, изменениями глаз, наличием мелких углублений на ладонях и подошвах, нарушениями нервной и эндокринной систем.

Цель исследования — оценить эффективность фотодинамической терапии (ФДТ) РК, множественной формы с отечественными фотосенсибилизаторами (ФС).

Материалы и методы. В нашем отделении с 1999 по 2016 г. проведена ФДТ 1671 больному РК, из них у 362 (21,3 %) больных выявлены множественные очаги. По гистологическому варианту среди больных РК множественной формы преобладал БКРК в 93,9 % случаев, плоскоклеточный — в 6,1 % случаев. По распространенности процесса ТШ0М0 выявлен у 104 (28,7 %) больных, Т2ШМ0 - у 250 (69,1 %), Т3-4ШМ0 - у 8 (2,2 %). Больным с Т3-4ШМ0 лечение проводили с паллиативной целью. Возраст больных - от 28 до 87 лет, средний возраст - 68,8 года, 56 % женщин, 44 % мужчин. Множественные очаги БКРК выявлены у 8 (2,2 %) пациентов с синдромом Горлина-Гольца, у 3 (0,8 %) с псориазом, у 8 (2,2 %) с хроническим лимфолейкозом. По количеству очагов у 259 (71,5 %) пациентов выявлено от 2 до 5 очагов, у 71 (19,6 %) — от 6 до 10 очагов, у 32 (8,9 %) — более 10 очагов РК. Больным проводили ФДТ с ФС фотосенс, фотолон, фотодитазин, радахлорин на полупроводниковых лазерных аппаратах. Использовали различные методики ФДТ: дистанционную, многокурсовую, интерстициальную, в некоторых случаях в комбинации с лазерной деструкций, электрохимическим лизисом и лучевой терапией (ЛТ). Всем пациентам проводили флуоресцентную диагностику: спектроскопию и визуализацию с целью выявления скрытых очагов, планирования световой дозы и контроля над процессом лечения.

Результаты. У 312 (92 %) больных с РК множественной формы получена полная регрессия всех очагов, наблюдаются без рецидива болезни; у 25 (8 %) больных возникли рецидивы в 1 из очагов или появление новых очагов. Рецидивирующий РК выявлен у 10 (45,5 %) больных с плоскоклеточным РК и у 7 (21,8 %) больных с количеством очагов РК более 10, у больных с синдромом Горлина Гольца (появление новых очагов). Все больные с Т3-4^М0 живы, получена стабилизация процесса, у 1 больного с количеством очагов более 10 выявлен метастаз плоскоклеточного рака в подмышечный лимфатический узел через 20 лет после установления диагноза, проведена ЛТ.

Заключение. ФДТ с отечественными ФС — эффективный метод лечения РК множественной формы при отсутствии системных осложнений, с возможностью многократного использования и одновременного проведения флуоресцентной диагностики. Больные РК с количеством очагов более 10, с плоскоклеточным РК, множественной формы и с синдромом Горлина-Гольца должны находиться под динамическим наблюдением всю жизнь.

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ