НЕПРЯМЫЕ ОДНОРОДНЫЕ АНАЛИЗЫ ПО ИЗМЕНЕНИЮ ПОДВИЖНОСТИ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В ОБРАЗЦАХ ПАЦИЕНТА

1. Способ обнаружения присутствия или уровня биологического препарата в образце, где способ включает:
(a) контакт образца с немеченым растворимым антигеном, который связывается с биологическим препаратом с образованием немеченого комплекса между антигеном и биологическим препаратом в образце;
(b) контакт образца со стадии (a) с меченой формой биологического препарата с образованием меченого комплекса между антигеном и меченым биологическим препаратом;
(c) проведение гель-фильтрационной хроматографии немеченых и меченых комплексов для отделения немеченых и меченых комплексов от свободного меченого биологического препарата и для определения количества свободного меченого биологического препарата; и
(d) сравнение количества свободного меченого биологического препарата, обнаруженного на стадии (c), со стандартной кривой известных количеств биологического препарата, тем самым определяя присутствие или уровень биологического препарата в образце.
2. Способ по п. 1, в котором антиген включает растворимый фрагмент, вариант или мономер связанного с мембраной белка, гликозилированного белка, мультимерного белка, нерастворимого белка, белка, который трудно экспрессировать или очищать, и/или большого белка.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором антиген представляет собой растворимый фрагмент молекулы клеточной поверхности.
4. Способ по п. 3, в котором молекула клеточной поверхности представляет собой молекулу клеточной адгезии (CAM).
5. Способ по п. 4, в котором молекула клеточной адгезии (CAM) представляет собой член, выбираемый из группы, состоящей из Ig-суперсемейства CAM, интегрина, кадгерина и селектина.
6. Способ по п. 5, в котором интегрин представляет собой α4β7 интегрин.
7. Способ по п. 6, в котором растворимый фрагмент включает фрагмент α4, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3, и/или фрагмент β7, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO:4.
8. Способ по п. 6 или 7, в котором биологический препарат представляет собой ведолизумаб.
9. Способ по п. 1 или 2, в котором антиген представляет собой цитокин или его мономер.
10. Способ по п. 9, в котором цитокин представляет собой субъединицу p40 из IL-12 или IL-23.
11. Способ по п. 10, в котором субъединица p40 включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NOS:6, 7, 11, 12 или 13.
12. Способ по п. 10 или 11, в котором биологический препарат представляет собой устекинумаб.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором стандартную кривую генерируют путем инкубации антигена и меченого биологического препарата с серийным разведением известного количества биологического препарата.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором площадь под кривой (AUC) свободного меченого биологического препарата откладывают против log известного количества биологического препарата, и уровень биологического препарата в образце вычисляют путем интерполяции.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором образец представляет собой сыворотку.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором меченый биологический препарат представляет собой меченый флуорофором биологический препарат.
17. Способ по любому из пп. 1-16, в котором образец получают от субъекта, получавшего лечение биологическим препаратом.
18. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:1.
19. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4 по п. 18, дополнительно включающий КИСЛЫЙ пептид.
20. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4 по п. 18 или 19, дополнительно включающий линкер.
21. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4 по любому из пп. 18-20, в котором аминокислотная последовательность имеет, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:3.
22. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4 по любому из пп. 18-21, дополнительно включающий аффинную метку.
23. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:2.
24. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7 по п. 23, дополнительно включающий ОСНОВНОЙ пептид.
25. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7 по п. 23 или 24, дополнительно включающий сайт расщепления протеазой.
26. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7 по любому из пп. 23-25, дополнительно включающий аффинную метку.
27. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7 по любому из пп. 23-26, дополнительно включающий линкер.
28. Выделенный растворимый полипептид интегрина β7 по любому из пп. 23-27, в котором аминокислотная последовательность имеет, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:4.
29. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4β7, включающий:
(a) полипептид интегрина α4, имеющий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:1, в котором полипептид интегрина α4 связан с первым членом пары связывания, и
(b) полипептид интегрина β7, имеющий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:2, в котором полипептид интегрина β7 связан со вторым членом пары связывания.
30. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4β7 по п. 29, в котором пару связывания выбирают из группы, состоящей из суперспирализованных пептидов, пептидов с лейциновыми застёжками, пептидов «замок на причале», авидин-биотина и их производных.
31. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4β7 по п. 30, в котором суперспирализованные пептиды представляют собой КИСЛЫЙ-ОСНОВНОЙ пептиды.
32. Выделенный растворимый полипептид интегрина α4β7 по любому из пп. 29-31, в котором полипептид интегрина α4 и полипептид интегрина β7 гетеродимеризуются через цистеиновый мостик или его производные.
33. Выделенный растворимый полипептид IL-12p40, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NOS:6, 11, 12 или 13.
34. Выделенный растворимый полипептид IL-12p40 по п. 33, в котором полипептид дополнительно включает аффинную метку.
35. Выделенный растворимый полипептид IL-12p40 по п. 33 или 34, в котором аминокислотная последовательность имеет, по меньшей мере, 80% идентичности с SEQ ID NO:7.