СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ IgE-АНТИТЕЛ К СТАФИЛОКОККУ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНОГО АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, ИМЕЮЩЕГО ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АЛЛЕРГЕНАМ СТАФИЛОКОККА, С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ IGE-АНТИТЕЛ К СТАФИЛОКОККУ И СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТАФИЛОКОККОВОЙ АЛЛЕРГИИ

2
2
2
4
1. Тест-система ИФА для определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, включающая планшеты одноразового применения с иммобилизованной активной аллергенной субстанцией (ААС), выделенной из стафилококка, на стрипах; ААС St. aureus; положительный и отрицательный контроли (сыворотки); конъюгат анти-IgE-антител; твин-20; буфер с добавлением Твина (pH 7,0-7,2) для приготовления раствора для отмывок; цитратный буфер (pH 4,7) для приготовления рабочего раствора; ортофенилендиамин (ОФД) в виде таблеток 0,0002 г и пергидроль HO - 37% - для приготовления красящего раствора; HSO в качестве стоп-раствора; и инструкцию по использованию набора.
2. Активная аллергенная субстанция (ААС), выделенная из стафилококка, которая состоит из трех активных фракций с молекулярными массами 50, 130 и 170 кДа.
3. Способ определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, с применением тест-системы по п.1, включающий подготовку твердой фазы (планшет) для сорбции ААС с использованием КББ (pH 9,5); нанесение раствора ААС в лунки планшета; инкубацию ААС на твердой фазе в холоде при 2-4°C в течение 2 суток; отмывание буфером (pH 7,0-7,2) трижды, подсушивание; нанесение контрольных и испытуемых сывороток в лунки соответствующих стрипов с 50 мкл буфера (pH 7,0-7,2); инкубацию в термостате при 37°C в течение 2,5 ч; отмывание буфером (pH 7,0-7,2) трижды, подсушивание стрипов; нанесение раствора конъюгата во все лунки стрипов; инкубацию в холоде при 2-4°C в течение 18-20 ч; нанесение красителя ОФД в цитратном буфере (pH 4,7) во все лунки стрипов; нанесение во все лунки стоп-раствора; контроль реакции ИФА по оптической плотности во всех образцах при длине волны 492 нм на мультискане.
4. Способ по п.3, в котором планшетом является одноразовый планшет с высокой сорбцией.
5. Способ по п.3, в котором ААС является ААС St. aureus.
6. Способ по п.3, в котором промывочный раствор содержит натрия хлорид, Твин 20, дистиллированную воду.
7. Способ по п.3, в котором раствор конъюгата получают путем помещения конъюгата, представляющего собой моноклональные антитела против эпсилон-цепи IgE человека, в буфер натриевой соли - Твин 20.
8. Способ по п.3, в котором цитратный буфер содержит лимонную кислоту 0,1 М, натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,2 М, натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,2 М, дистиллированную воду.
9. Способ по п.3, в котором красящий раствор получают путем растворения в цитратном буфере 1 таблетки ортофенилендиамина, с последующим внесением пергидроля 37%.
2
4
10. Способ по п.3, в котором стоп раствором является серная кислота (HSO) 50%.
11. Способ диагностики стафилококковой аллергии, включающий определение специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного с использованием способа по п.2, причем позитивная реакция оценивается 2-4 классом.
12. Способ по п.11, в котором стафилококковой аллергией является аллергия немедленного типа.