Способ прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию
METHOD FOR PREDICTING THE RISK OF EXACERBATION OF CHRONIC GINGIVITIS IN PATIENTS WITH A NEW CORONAVIRUS INFECTION

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и микробиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Известен способ определения состояний пародонта (RU 2435505 С1), включающий определение количества десневой жидкости в зубодесневой бороздке зубов, при этом определяют количество десневой жидкости в зубодесневой бороздке или пародонтальном кармане в области всех имеющихся зубов, сравнивают полученные величины с выявленной закономерностью и делают вывод о тяжести и распространенности патологического процесса в целом и (или) в области того или иного зуба, после чего проводят показанные лечебные мероприятия и повторно определяют количество десневой жидкости в области имеющихся зубов, сравнивают полученные величины с исходными данными и выявленной закономерностью, после чего делают вывод о влиянии мероприятия на пародонт пациента, изменение распространенности и тяжести заболевания. К недостаткам известного способа можно отнести невысокую надежность выводов о тяжести и распространенности патологического процесса лишь по одному из многочисленных параметров и характеристик заболевания; а также отсутствие данных у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Известен способ диагностики степени тяжести пародонтита (RU 2269138 С2) путем биохимического контроля эффективности лечения и индивидуального прогноза течения заболевания. Способ предусматривает исследование крови из десны пациента, определение в крови содержания фосфатидилинозитов, при этом по показаниям содержания фосфатидилинозитов, выраженным в нмоль на 1 мг белка, диагностируют при значении концентрации фосфатидилинозитов 7 нмоль на 1 мг белка отсутствие патологии пародонта, при повышении концентрации фосфатидилинозитов до 10 нмоль на 1 мг белка диагностируют легкую степень пародонтита, при концентрации фосфатидилинозитов от 10 до 15 нмоль на 1 мг белка диагностируют среднюю степень пародонтита, при концентрации фосфатидилинозитов выше 15 нмоль на 1 мг белка диагностируют пародонтит тяжелой степени тяжести Известный способ позволяет определить степень тяжести пародонтита, однако точность при диагностике недостаточна, особенно на ранних стадиях и при хроническом протекании воспалительного процесса без обострения, поскольку основан только на биохимических результатах. Одним из недостатков является отсутствие данных для прогнозирования течения и риска развития обострений хронического гингивита. Кроме того, данный метод предполагает использование высокотоксичных реактивов (хлороформ-метанол), трудоемок и не всегда доступен в практической медицине. Материалом исследования в данном методе является кровь из десны пациента, что в стоматологическом кабинете осуществить бывает не всегда просто и доступно. Также недостатком является отсутствие данных у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, и отсутствие стандартизации процедуры взятия крови из десны, возможность разбавления образца крови слюной.
Известен способ прогнозирования течения хронического пародонтита (RU 2691304 С1), заключающийся в оценке папиллярно-маргинально-альвеолярный индекса по Парма (РМА), исследовании микроциркуляции тканей пародонта с помощью лазерной допплеровской флоуметрии, исследовании содержания малонового диальдегида (МДА) в слюне и, на основе этого, производят расчет индекса прогнозирования течения хронического пародонтита. К недостаткам данного способа можно отнести наличие специального оборудования для исследования микроциркуляции тканей пародонта с помощью лазерной допплеровской флоуметрии, что возможно далеко не во всех стоматологических поликлиниках и делает невозможным проведение данного способа; а также отсутствие данных у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Известен также способ диагностики состояния полости рта и определения тактики лечения, основанный на анализе микробиома (Method and system for microbiome-derived diagnostics and therapeutics for oral health US 20190172555 A1), заключающийся в обнаружении в образце пациента определенных микроорганизмов или их генетических характеристик и сравнение результирующего количества каждого признака с рассчитанными эталонными значениями рисков развития патологий полости рта (гингивит и кариес). Недостатком метода является необходимость идентификации широкого спектра (более 20) генетических характеристик микроорганизмов, требующих применения высокотехнологичных, трудоемких, длительных, дорогостоящих лабораторных анализов (секвенирование, ПЦР). Помимо этого, отсутствуют данные о возможности применения данного метода для прогноза обострения хронической стоматологической патологии.
Целью изобретения является разработка способа прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию по значениям микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка.
Заявленное изобретение решает задачу разработки более точного способа прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, путем микробиологической оценки видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка.
Технический результат достигается тем, что у пациентов проводят микробиологическое исследование содержимого десневого желобка с применением инструмента для сбора содержимого десневого желобка. Сбор материала проводят утром натощак, до процедуры чистки зубов. Исследуемый зуб очищают ватным тампоном без использования антисептических растворов. Инструмент, не касаясь иных поверхностей, вводят в десневой желобок. Контролируют глубину его погружения по цветной метке. После достижения дна желобка инструмент наклоняют и собирают его содержимое в ложбинки рабочей части. После выведения из ротовой полости инструмент с его содержимым помещают в стерильную пробирку с тиогликолевой средой и транспортируют в бактериологическую лабораторию в изотермических условиях в течении 30 минут. В лаборатории биоматериал со средой подвергается вортексированию с помощью аппарата Vortex V-1 plus (Biosan, Латвия) в течение 1 минуты. Далее с помощью одноразовой стерильной микробиологической петли материал засевают на плотные питательны среды: универсальные хромогенные [1. Pezzlo М (1998), Clinical Microbiology Reviews 1:268-280; 2. Wilkie M.E., Almond M.K., Marsh F.P. (1992), British Medical Journal 305:1137-1141; 3. Friedman M.P. et al (1991), Journal of Clinical Microbiology, 29:2385-2389; 4. Murray P., Traynor P. Hopson D., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:1600-1601; 5. Soriano F., Ponte C., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:3033-3034; 6. Merlino et al (1995) Abstr. Austr. Microbiol. 16(4): 17-3.], анаэробная среда [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], 5% кровяной агар с бараньей кровью [Atlas, Ronald М., 1946-. Handbook of microbiological media. - Taylor & Francis, 2010-01-01.], селективная среда для клостридий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], лактобактерий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03709] и вейллонелл [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03709]. Посевы инкубируют при 37°С в течении 2 дней для аэробов и до 5 дней для анаэробов. Идентификацию выделенных микроорганизмов проводят с использованием MALDI-ToF масс-спектрометрии, на приборе Microflex LT (Bruker, Германия), с последующей оценкой количества видов микроорганизмов, имеющих статистически достоверное отличие по распространенности среди пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, с обострением и без обострения хронического гингивита.
Сущность изобретения заключается в том, что в способе прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, оценивается наличие видов микроорганизмов Streptococcus oralis, Neisseria elongata, Streptococcus intermedius, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium durum, Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mitis, Streptococcus gordonii, Veillonella parvula 1 группа или отсутствие Haemophilus parainfluenzae - 2 группа. На основе полученных данных рассчитывают индекс прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита. В случае выделения микроорганизмов из 1 группы или отсутствия микроорганизмов из 2 группы, присваивается 1 балл, затем баллы суммируются. Значение индекса более 3 свидетельствует о высоком риске развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию. Значение индекса менее или равное 3 свидетельствует об отсутствии риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Сущность заявленного способа поясняется следующими примерами:
Пример 1. Пациент В., 36 лет. Диагноз: Хронический гингивит. Была произведена оценка стоматологического и микробиологического статуса на фоне новой коронавирусной инфекции. Значение микробиологического индекса составило 2. На повторном приеме была выявлена положительная динамика заболевания, без перехода в обострение хронического гингивита.
Пример 2. Пациент П., 27 лет. Диагноз: Хронический гингивит в стадии обострения. Была произведена оценка стоматологического и микробиологического статуса на фоне новой коронавирусной инфекции. Значение индекса составило 4. На повторном приеме была выявлена негативная динамика заболевания, с переходом в обострение хронического гингивита.
Критериальные значения микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка определены при обследовании 75 пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, в возрасте от 18 до 44 лет; на первом этапе проводили стоматологический осмотр, включающий выявления жалоб, анамнеза жизни и анамнеза заболевания, вредных привычек, оценки состояния полости рта, для изучения состояния тканей пародонта проводили индексную оценку (упрощенный индекс гигиены полости рта Грина-Вермиллиона (OHI-S), индекс РМА (Parma), индекс кровоточивости десневых сосочков по Saxer Muhlemann), по результатом которого пациенты были разделены на 2 группы: с обострением и без обострения хронического гингивита. Далее был проведен микробиологический анализ содержимого десневого желобка, включающего в себя посев на плотные питательные среды: универсальные хромогенные, анаэробная среда, 5% кровяной агар с бараньей кровью, селективная среда для клостридий, лактобактерий и вейллонелл, с последующей инкубацией, видовую идентификацию микроорганизмов методом MALDI-ToF масс-спектрометрии. Оказалось, что имеются достоверные различия в микробиоме полости рта при различном течении гингивита (статистический анализ выполнен с применением метода Хи-квадрат Пирсона фиг. 1).
Обнаружено, что обострение хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, характеризуется наличием Streptococcus oralis, Neisseria elongata, Streptococcus intermedius, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium durum, Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mitis, Streptococcus gordonii, Veillonella parvula и отсутствием Haemophilus parainfluenzae.
Расчет микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка заключался в присвоении по 1 баллу при обнаружении Streptococcus oralis, Neisseria elongata, Streptococcus intermedius, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium durum, Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mitis, Streptococcus gordonii, Veillonella parvula и отсутствии Haemophilus parainfluenzae. Полученные баллы суммировались.
Проведенный корреляционный анализ выявил достоверные сильные корреляционные связи значений микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию с течением гингивита (коэффициент корреляции Спирмена составил 0,720; р<0,001).
На фиг. 2 представлена ROC-кривая, характеризующая зависимость микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию вне обострения и при обострении гингивита (AUC-0,927; р<0,001; пороговое значение: ≤3); Проведенный ROC-анализ продемонстрировал высокую прогностическую способность определения микробиологического индекса видового разнообразия микрофлоры, выделенной из десневого желобка у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию для определения риска обострения гингивита; позволил установить оптимальные пороговые значение данного показателя и приемлемые уровни чувствительности (80%) и специфичности (100%) для выбранных пороговых значений, указанный в способе прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию.
Таким способом было обследовано 75 пациентов с хроническим гингивитом на фоне новой коронавирусной инфекции, в возрасте от 18 до 44 лет, значение индекса прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию, было повышено.