Повышение противоопухолевой активности цисплатина в комбинации с дигоксином

36

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

что связано с удалением популяции клеток, обладающей признаками СИРК. На модели опухолей головного мозга человека показано, что доброкачественные новообразования не содержат TAMRA-позитивных клеток, тогда как в злокачественных опухолях такие клетки детектируются. Показано, что с повышением степени злокачественности опухоли наблюдается тенденция к росту числа СИРК, способных интернализовать экзогенную двуцепочечную ДНК.

Заключение. Обнаруженное свойство СИРК — интернализовать фрагменты двуцепочечной экстраклеточной ДНК естественным механизмом — является перспективной базой как для создания диагностикумов для анализа содержания СИРК, так и для разработки стратегии таргетной терапии при лечении онкологических заболеваний, включая глиомы, направленной на элиминацию СИРК.

Ю.И. Должикова1, В. А. Даванков2, М.П. Цюрупа2, Л.А. Павлова2, М.В. Киселевский1 ПОИСК АЛЬТЕРНАТИВНЫХ ГЕМОСОРБЕНТОВ ДЛЯ ЛИМФОСОРБЦИИ БОЛЬНЫХ С СЕПСИСОМ

ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ФГУН «ИНЭОС им. А.Н. Несмеянова» РАН, Москва

Введение. Анализ причин смерти онкологических больных выявил, что инфекционные осложнения являлись причиной гибели не менее 1/3 пациентов. Для решения проблем по нивелированию последствий синдрома системной воспалительной реакции организма пациентов внимание было обращено на методы экстракорпоральной детоксика-ции (ЭКД). В настоящее время лимфосорбция является одним из перспективных методов ЭКД для комплексной терапии сепсиса. Использование существующих устройств приводит к потере целевых молекул и некоторых необходимых организму белков, а также наблюдается недостаточная биосовместимость ряда применяемых сорбентов. Это обосновывает необходимость поиска новых материалов, перспективных для использования в качестве матрицы для лимфосорбции. Вызывают интерес в данном аспекте гемосовместимые сверхсшитые полистиролы, внутренняя удельная поверхность которых порядка 1500 м2/г и которые, возможно, эффективны для снижения концентрации триггеров воспаления и метаболитов в лимфе.

Цель исследования — оценка перспективности применения сверхсшитого полистирола серии Стиросорб в качестве матрицы устройства для элиминации метаболитов (мочевина, креатинин), бактериального липополисахари-да (ЛПС) из лимфы больного с сепсисом in vitro.

Материалы и методы. Для исследования был создан макет колонки объемом 100 мл на основе сорбента ряда сверхсшитого полистирола, разработанного в ИНЭОС им. А.Н. Несмеянова. Через этот макет было перфузиро-вано 700 мл лимфы онкологического больного с тяжелым сепсисом со скоростью 80—100 кап/мин. Биохимические параметры лимфы были получены на анализаторе Sapphire 400 (TOKYO BOEKI, Япония). Уровень ЛПС был определен с использованием коммерческих наборов на основе LAL-теста (Hycult Biotechnology, Нидерланды).

Результаты. Анализ лимфы до и после перфузии через макет колонки со Стиросорбом показал снижение уровня

ЛПС на 86 %, мочевины — на 20 %, креатинина — на 40 %. Уровень альбумина снизился менее чем на 2 %.

Заключение. Применение сорбента серии Стиросорб в качестве матрицы устройства для элиминации мочевины, креатинина и ЛПС из лимфы больного с сепсисом in vitro показало обнадеживающие результаты, которые могут стать основанием для внедрения в клиническую практику сверхсшитых полистиролов и устройств на их основе для ЭКД онкологических больных с сепсисом.

Е.А. Дудко1, В.Ю. Чернов2, Т.А. Богуш1, Н.С. Сапрыкина1, Ю.Б. Дьякова1, В.Ю. Кирсанов1, З.С. Шпрах1, А.А. Каменский2, Б.Е. Полоцкий1, С.А. Тюляндин1 ПОВЫШЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ЦИСПЛАТИНА В КОМБИНАЦИИ СДИГОКСИНОМ

ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО «МГУ им. М. В Ломоносова», Москва

Введение. Использование гликолиза в качестве основного источника энергии даже в аэробных условиях (эффект Варбурга) является фундаментальным отличием опухолевой клетки от нормальной. Ингибирование гликолиза при воздействии сердечных гликозидов сопровождается повышением цитотоксичности противоопухолевых препаратов в отношении опухолевых клеток in vitro — не только чувствительных, но и резистентных.

Цель исследования — оценка модифицирующего воздействия сердечного гликозида дигоксина (Диг) на противоопухолевый эффект цисплатина (ЦП), реализация которого ассоциирована с активностью энергетически зависимых ферментов репарации повреждений дезоксирибонуклеи-новой кислоты.

Материалы и методы. Исследование проведено на самках мышей линии СВА/Lac массой тела 20—22 г с внутри-брюшинно (в/б) трансплантированным раком молочной железы Эрлиха, в клетках которого основным путем генерации энергии является гликолиз. Изучено влияние однократного в/б введения сердечного гликозида Диг за 1 ч до в/б введения ЦП на противоопухолевый эффект цито-статика в диапазоне концентраций с линейной зависимостью доза — эффект — 2,5 и 5,0 мг/кг. Статистическую оценку достоверности различий между группами по медиане и средней продолжительности жизни павших мышей проводили с помощью критериев Манна — Уитни и Стью-дента. Различия считали достоверными прир < 0,05.

Результаты. 1. При введении Диг достигнут противоопухолевый эффект ЦП, превышающий максимально возможный на использованной экспериментальной модели: увеличение продолжительности жизни животных с опухолью на 77 % при дозе ЦП 2,5 мг/кг, что в 2 раза выше эффекта монотерапии цитостатиком в этой дозе, и в 1,5 раза — при дозе ЦП 5,0 мг/кг, которая является максимально эффективной (при дальнейшем повышении дозы ЦП отмечалась гибель мышей от токсичности). В пересчете на дозу цитостатика введение Диг за 1 ч до ЦП привело более чем к двукратному повышению его эффективности.

2. При оценке достоверности выявленных различий показано, что противоопухолевый эффект ЦП при дозах

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

37

2,5 и 5,0 мг/кг реализовался с высоким уровнем достоверности (р < 0,0001). Высоко достоверными (р < 0,0001) были различия при сравнении групп ЦП 2,5 мг/кг и ЦП 2,5 мг/кг + Диг, а также между группами ЦП 2,5 мг/кг + Диг и ЦП 5,0 мг/кг независимо от того, с каким «контролем» проводили сравнение — мыши с опухолью без воздействия или при введении Диг.

Заключение. Диг повышает противоопухолевое действие ЦП более чем в 2 раза в пересчете на дозу цитостатика, что превышает эффект от ЦП, достижимый на использованной экспериментальной модели при монотерапии цитостатиком.

Поддержано грантами РФФИ № 15-04-06991-а и № 16-34-01049 мол-а.

Е.А. Дудко, М.В. Родионова, О.М. Рябинина, А.Н. Гришанина, С.Д. Коломийцев, Н.О. Вихлянцева, Е.А. Богуш, В.Ю. Кирсанов, И. К. Воротников, Т.А. Богуш СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МЕТОДОВ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ И ИММУНОГИСТОХИМИИ В ОПРЕДЕЛЕНИИ ЭКСПРЕССИИ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ АЛЬФА

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Эстрогеновые рецепторы альфа (ЭРа) — клеточная мишень, которая положила начало развитию современной таргетной терапии, а тамоксифен — первый таргет-ный препарат, который с 1977 г. до наших дней занимает лидирующую позицию в адъювантной гормональной терапии рака молочной железы (РМЖ). На лечение тамоксифеном отвечают до 20 % пациентов с ЭР-негативными опухолями, а при наличии в опухоли ЭР в 20 % случаев положительный результат терапии отсутствует. Возможным объяснением этого факта могут быть эффекты антиэстрогена, не связанные с его взаимодействием с ЭР, а также ошибки при определении статуса ЭР в опухоли иммуногистохимическим (ИГХ) методом, который рутинно используется в клинике.

Цель исследования — сравнить информативность нового количественного иммунофлуоресцентного метода, ассоциированного с проточной цитофлуориметрией (ПЦФ), со стандартным ИГХ-анализом экспрессии ЭРа.

Материалы и методы. Оценка экспрессии ЭРа проведена в хирургических образцах РМЖ (n = 60). Использованы антитела к ЭРа — SP1, ab27614, вторичные — ab98510. Уровень экспрессии ЭРа (количество специфически окрашенных клеток относительно показателя при инкубации с вторичными антителами) анализировали с помощью программы FlowJo 10.0 и статистического критерия Колмогорова-Смирнова. Градация уровня экспрессии маркера: высокий — количество окрашенных клеток в опухоли > 40 %; низкий — < 40 %.

Результаты. 1. В целом по группе при использовании ИГХ-метода и ПЦФ показано совпадение показателей частоты встречаемости ЭРа-негативных (27 %) и ЭРа-позитивных (73 %) опухолей.

2. ИГХ-методом только у 20 % ЭРа-позитивных опухолей выявлен низкий уровень маркера, а у остальных уровень экспрессии ЭРа был более 70 %.

3. При оценке методом ПЦФ у 43 % опухолей уровень экспрессии ЭРа был < 40 % (33,6 ± 4,7 %), а у остальных — > 40 % (53,1 ± 8,8 %).

4. При сравнении экспрессии ЭРа по каждому из образцов показано, что среди опухолей, отнесенных по результатам ИГХ-исследования в группу ЭРа-негативных, методом ПЦФ в 33 % случаев выявлены ЭРа с уровнем экспрессии от 23 до 60 % (43,4 ± 18,3 %), а среди ЭРа-позитивных опухолей, напротив, в 12,5 % случаев ЭРа не определялись.

Заключение. Выявлена дискордантность показателей экспрессии ЭРа в опухоли при оценке ИГХ-методом и ПЦФ. Поскольку статус ЭРа в опухоли является важнейшим ориентиром при выборе тактики лечения РМЖ, а ПЦФ в отличие от полуколичественного ИГХ-анализа позволяет строго количественно определять экспрессию маркера, использование ПЦФ в клинике следует признать предпочтительным, а для верификации молекулярного диагноза при получении отрицательного результата при ИГХ-иссле-довании — необходимым.

Поддержано РФФИ (гранты №№ 15-04-06991-а и 16-34-01049 мол-а).

Н.П. Ермакова, О.И. Коняева, Н.Ю. Кульбачевская, В. А. Чалей, А. А. Сергеев, К. А. Сережин, В.М. Бухман ИЗУЧЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ОРМУСТИНА НА МОРСКИХ СВИНКАХ. ОЦЕНКА АНАФИЛАКТОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Новый препарат класса нитрозомочевин — Ормустин синтезирован в ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН. В лаборатории разработки лекарственных форм РОНЦ им. Н.Н. Блохина создана лиофилизированная лекарственная форма Ормустина и проводится ее доклиническое изучение.

Цель исследования — изучение аллергизирующих свойств Ормустина.

Материалы и методы. Исследования проведены на 60 морских свинках-самках массой тела 230—250 г. Ормустин вводили в суммарных дозах: 1 терапевтическая доза (ТД) — 67 мг/кг; 10ТД — 670 мг/кг; 2ТД — 134 мг/кг для морских свинок, пересчитанных с ТД для мышей. Режим и путь введения сенсибилизации: 1-й день — подкожно, 3-й и 5-й дни — внутримышечно. Для сенсибилизации препарат вводили 1 группе животных в разовых дозах, равных 1/3 ТД = 22,3 мг/кг, и 2 другим группам животных в разовых дозах 1/3 10ТД = 223 мг/кг через день. После введения сенсибилизирующей дозы, в 10 раз превышающей терапевтическую, наблюдали гибель всех морских свинок на 3—5-е сутки после последнего введения на фоне проявлений нефротоксичности (граница между корковым и мозговым слоями почек значительно увеличена, вишневого цвета). Поэтому была дополнительно введена группа животных с сенсибилизирующей разовой дозой Ормустина, равной 1/32ТД = 44,66 мг/кг. После сенсибилизации в этой группе наблюдали гибель 3 из 10 морских свинок на 4, 5 и 6-й дни. Для разрешения Ормустин вводили в суммарных дозах 1ТД и 2ТД/кг массы тела морской свинки. Препарат применяли в концентрации 2,45 % в 5 % растворе глюкозы. Разрешение проводили внутрисердечно на 18-й день после окончания сенсибилизации. В качестве контроля использовали 5 % раствор глюкозы и сыворотку крупного рогатого скота. Объемы