СВЕРХЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ТРАНСПОРТЕРА ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТЫ ПУТИ БЕТА-ОКИСЛЕНИЯ, ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОФЛАВИНА ПОСРЕДСТВОМ ФЕРМЕНТАЦИИ EREMOTHECIUM

1. Способ получения рибофлавина в генетически модифицированном организме рода Eremothecium, причем указанная генетическая модификация связана с поглощением жирных кислот и/или путем бета-окисления указанного организма, включающий:
(i) выращивание указанных организмов в культуральной среде, предпочтительно в присутствии содержащих жирные кислоты масел и, необязательно, в присутствии нелипидных источников углерода; и
(ii) выделение рибофлавина из культуральной среды.
2. Способ по п. 1, причем указанная генетическая модификация приводит по меньшей мере к увеличению активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) и/или увеличению активности AGOS_AER358Cp (Pox1) и/или увеличению активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) указанного организма.
3. Способ по п. 2, причем указанный генетически модифицированный организм способен накапливать по меньшей мере на 5-10% больше рибофлавина, чем сравнимый организм без генетической модификации.
4. Способ по п. 2, причем
(i) указанное увеличение активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_ACL174W (fat1); и/или
(ii) указанное увеличение активности AGOS_AER358Cp (Pox1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AER358C (pox1); и/или
(iii) указанное увеличение активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и активности AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AGL060W (fox2) и гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3).
5. Способ по п. 4, причем указанную сверхэкспрессию гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) обеспечивают посредством сильного, предпочтительно конститутивного и необязательно регулируемого промотора, или путем обеспечения по меньшей мере второй копии гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) в геноме организма.
6. Способ по п. 1, причем указанный генетически модифицированный организм содержит по меньшей мере одну дополнительную генетическую модификацию.
7. Способ по п. 6, причем указанная дополнительная генетическая модификация приводит к изменению по меньшей мере одной активности, выбранной из группы, содержащей:
(i) GLY1;
(ii) SHM2;
(iii) ADE4;
(iv) PRS 2,4;
(v) PRS 3;
(vi) MLS1;
(vii) BAS1
(viii) RIB1;
(ix) RIB 2;
(x) RIB 3;
(xi) RIB 4;
(xii) RIB 5; и
(xiii) RIB 7.
8. Способ по п. 6, причем указанная дополнительная генетическая модификация приводит по меньшей мере к одному из следующих изменений:
(i) активность GLY1 увеличивается; и/или
(ii) активность SHM2 уменьшается или устраняется; и/или
(iii) активность ADE4 увеличивается и/или обеспечивается в качестве устойчивой к ингибированию обратной связи версии; и/или
(iv) активность PRS 2,4 увеличивается; и/или
(v) активность PRS 3 увеличивается; и/или
(vi) активность MLS1 увеличивается; и/или
(vii) активность ВAS1 уменьшается или устраняется; и/или
(viii) активность RIB 1 увеличивается; и/или
(ix) активность RIB 2 увеличивается; и/или
(x) активность RIB 3 увеличивается; и/или
(xi) активность RIB 4 увеличивается; и/или
(xii) активность RIB 5 увеличивается; и/или
(xiii) активность RIB 7 увеличивается.
9. Способ по любому из пп. 1-8, причем указанный организм, принадлежащий к роду Eremothecium, представляет собой вид Eremothecium ashbyi, Eremothecium coryli, Eremothecium cymbalariae, Eremothecium gossypii, Eremothecium sinecaudum или Eremothecium sp. CID1339.
10. Применение гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) для увеличения накопления рибофлавина в организме рода Eremothecium.
11. Применение по п. 10, причем ген AGOS_ACL174W (fat1), ген AGOS_AER358C (pox1), ген AGOS_AGL060W (fox2) и/или ген AGOS_AFR302W (pot1/fox3) сверхэкспрессируется посредством сильного, предпочтительно конститутивного и, необязательно, регулируемого промотора или посредством обеспечения по меньшей мере второй копии гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) в геноме организма.
12. Применение по п. 10 или 11, причем указанный организм, принадлежащий к роду Eremothecium, представляет собой вид Eremothecium ashbyi, Eremothecium coryli, Eremothecium cymbalariae, Eremothecium gossypii, Eremothecium sinecaudum или Eremothecium sp. CID1339.
13. Способ обеспечения накапливающего рибофлавин организма, принадлежащего к роду Eremothecium, путем генетической модификации указанного организма, причем указанная генетическая модификация связана с поглощением жирных кислот и/или путем бета-окисления указанного организма.
14. Способ по п. 13, причем указанная генетическая модификация приводит по меньшей мере к увеличению активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) и/или увеличению активности AGOS_AER358Cp (Pox1) и/или увеличению активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) указанного организма.
15. Способ по п. 13, причем указанный генетически модифицированный организм способен накапливать по меньшей мере на 5-10% больше рибофлавина, чем сравнимый организм без генетической модификации.
16. Способ по п. 14, причем
(i) указанное увеличение активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_ACL174W (fat1); и/или
(ii) указанное увеличение активности AGOS_AER358Cp (Pox1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AER358C (pox1); и/или
(iii) указанное увеличение активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и активности AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AGL060W (fox2) и гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3).
17. Способ по п. 16, причем указанную сверхэкспрессию гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) обеспечивают сильным, предпочтительно конститутивным и необязательно регулируемым промотором, или путем обеспечения по меньшей мере второй копии гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) в геноме организма.
18. Способ по п. 13, причем указанный генетически модифицированный организм содержит по меньшей мере одну дополнительную генетическую модификацию.
19. Способ по п. 18, причем указанная дополнительная генетическая модификация приводит к изменению по меньшей мере одной активности, выбранной из группы, содержащей:
(i) GLY1;
(ii) SHM2;
(iii) ADE4;
(iv) PRS 2, 4;
(v) PRS 3;
(vi) MLS1;
(vii) BAS1
(viii) RIB 1;
(ix) RIB 2;
(x) RIB 3;
(xi) RIB 4;
(xii) RIB 5; и
(xiii) RIB 7.
20. Способ по п. 18, причем указанная дополнительная генетическая модификация приводит по меньшей мере к одному из следующих изменений:
(i) активность GLY1 увеличивается; и/или
(ii) активность SHM2 уменьшается или устраняется; и/или
(iii) активность ADE4 увеличивается и/или обеспечивается в качестве устойчивой к ингибированию обратной связи версии; и/или
(iv) активность PRS 2, 4 увеличивается; и/или
(v) активность PRS 3 увеличивается; и/или
(vi) активность MLS1 увеличивается; и/или
(vii) активность BAS1 уменьшается или устраняется; и/или
(viii) активность RIB 1 увеличивается; и/или
(ix) активность RIB 2 увеличивается; и/или
(x) активность RIB 3 увеличивается; и/или
(xi) активность RIB 4 увеличивается; и/или
(xii) активность RIB 5 увеличивается; и/или
(xiii) активность RIB 7 увеличивается.
21. Способ по любому из пп. 13-20, причем указанный организм, принадлежащий к роду Eremothecium, представляет собой вид Eremothecium ashbyi, Eremothecium coryli, Eremothecium cymbalariae, Eremothecium gossypii, Eremothecium sinecaudum или Eremothecium sp. CID1339.
22. Накапливающий рибофлавин организм, принадлежащий к роду Eremothecium, являющийся генетически модифицированным, причем указанная генетическая модификация связана с поглощением жирных кислот и/или путем бета-окисления указанного организма.
23. Организм по п. 22, в котором указанная генетическая модификация приводит по меньшей мере к увеличению активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) и/или увеличению активности AGOS_AER358Cp (Pox1) и/или увеличению активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) указанного организма.
24. Организм по п. 22, причем указанный генетически модифицированный организм способен накапливать по меньшей мере на 5-10% больше рибофлавина, чем сравнимый организм без генетической модификации.
25. Организм по п. 23, причем
(i) указанное увеличение активности AGOS_ACL174Wp (Fat1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_ACL174W (fat1); и/или
(ii) указанное увеличение активности AGOS_AER358Cp (Pox1) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AER358C (pox1); и/или
(iii) указанное увеличение активности AGOS_AGL060Wp (Fox2) и активности AGOS_AFR302Wp (Pot1/Fox3) обусловлено сверхэкспрессией гена AGOS_AGL060W (fox2) и гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3).
26. Организм по п. 25, в котором указанная сверхэкспрессия гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) обеспечивается сильным, предпочтительно конститутивным и необязательно регулируемым промотором, или путем обеспечения по меньшей мере второй копии гена AGOS_ACL174W (fat1), гена AGOS_AER358C (pox1), гена AGOS_AGL060W (fox2) и/или гена AGOS_AFR302W (pot1/fox3) в геноме организма.
27. Организм по п. 22, причем указанный генетически модифицированный организм содержит по меньшей мере одну дополнительную генетическую модификацию.
28. Организм по п. 27, в котором указанная дополнительная генетическая модификация приводит к изменению по меньшей мере одной активности, выбранной из группы, содержащей:
(i) GLY1;
(ii) SHM2;
(iii) ADE4;
(iv) PRS 2, 4;
(v) PRS 3;
(vi) MLS1;
(vii) BAS1
(viii) RIB 1;
(ix) RIB 2;
(x) RIB 3;
(xi) RIB 4;
(xii) RIB 5; и
(xiii) RIB 7.
29. Организм по п. 27, в котором указанная дополнительная генетическая модификация приводит по меньшей мере к одному из следующих изменений:
(i) активность GLY1 увеличивается; и/или
(ii) активность SHM2 уменьшается или устраняется; и/или
(iii) активность ADE4 увеличивается и/или обеспечивается в качестве устойчивой к ингибированию обратной связи версии; и/или
(iv) активность PRS 2, 4 увеличивается; и/или
(v) активность PRS 3 увеличивается; и/или
(vi) активность MLS1 увеличивается; и/или
(vii) активность BAS1 уменьшается или устраняется; и/или
(viii) активность RIB 1 увеличивается; и/или
(ix) активность RIB 2 увеличивается; и/или
(x) активность RIB 3 увеличивается; и/или
(xi) активность RIB 4 увеличивается; и/или
(xii) активность RIB 5 увеличивается; и/или
(xiii) активность RIB 7 увеличивается.
30. Организм по любому из пп. 22-29, причем указанный организм, принадлежащий к роду Eremothecium, представляет собой вид Eremothecium ashbyi, Eremothecium coryli, Eremothecium cymbalariae, Eremothecium gossypii, Eremothecium sinecaudum или Eremothecium sp. CID1339.
31. Применение организма по любому из пп. 22-30 для получения рибофлавина.
32. Применение по п. 31, причем указанный организм, принадлежащий к роду Eremothecium, представляет собой вид Eremothecium ashbyi, Eremothecium coryli, Eremothecium cymbalariae, Eremothecium gossypii, Eremothecium sinecaudum или Eremothecium sp. CID1339.
33. Продукт-рибофлавин по меньшей мере от одного организма по любому из пп. 22-30.