СИНЕРГЕТИЧЕСКАЯ СМЕСЬ БЕТА-ГАЛАКТООЛИГОСАХАРИДОВ С БЕТА-1,3 И БЕТА-1,4/1,6 СВЯЗЯМИ
SINERGIC MIXTURE OF BETA-GALACTOOLIGOSACCHARIDES WITH BETA-1,3 AND BETA-1,4/1,6 BONDS

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к питательным композициям, включающим два структурно отличающихся бета-олигосахарида, в частности к смеси, подходящей для питания грудных детей.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Неусвояемые олигосахариды (NDO) являются основным компонентом грудного молока. NDO грудного молока поддерживают рост благоприятной кишечной микробиоты с преобладанием бифидобактерий. Также известно, что некоторые NDO грудного молока способны непосредственно предотвращать адгезию патогенов и токсинов. Наличие микробиоты, богатой бифидобактериями, ассоциируется со снижением риска атопических заболеваний, таких как атопические дерматиты, пищевая аллергия и астма, и снижением риска инфекций, вызываемых патогенами. Следовательно, считается, что неусвояемые олигосахариды (NDO) ответственны за снижение частоты инфекционных и атопических заболеваний, наблюдаемых у грудных детей, получающих грудное молоко, по сравнению с грудными детьми, получающими смеси для детского питания. NDO являются важным фактором врожденной иммунной системы в грудном молоке, которым мать защищает ребенка, имеющего незрелую приобретенную иммунную систему, и еще не полностью развитую врожденную иммунную систему.
Грудное молоко является предпочтительным питанием для грудных детей. Однако существуют обстоятельства, при которых грудное вскармливание невозможно или не желательно, в таких случаях хорошей альтернативой является смесь для детского питания. Композиции таких смесей для детского питания должны иметь оптимальный состав для того, чтобы максимально имитировать положительное воздействие грудного молока. Оптимальная композиция включает NDO.
В WO 2007/067053 описывается смесь для детского питания, включающая пребиотики растительного происхождения: инулин и олигосахариды, включающие галактуроновую кислоту и синтезированный из лактозы пребиотик трансгалактоолигосахарид для снижения инфекций.
В WO 2005/039597 описывается применение кислых и нейтральных олигосахаридов для усиления иммунной системы и лечения и/или предупреждения нарушений иммунной системы.
В WO 01/642255 описывается композиция, включающая пребиотик для усиления иммунного ответа.
Bifidobacterium bifidum
В EP 1 644 482 описываются новые штаммы , продуцирующие новый фермент с галактозидазной активностью, превращающий лактозу в новую смесь галактоолигосахаридов. Смесь олигосахаридов может быть введена во множество пищевых продуктов или кормовых продуктов для животных для улучшения здоровья желудочно-кишечного тракта, способствуя росту бифидобактерий в желудочно-кишечном тракте и подавляя рост патогенной микрофлоры.
Известно множество смесей для детского питания, включающих NDO, но все еще могут быть сделаны дополнительные улучшения смесей с NDO, оказывающих улучшенное воздействие на кишечную микробиоту и/или врожденную иммунную систему.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Авторы настоящего изобретения неожиданно установили, что смесь бета-1,3 галактоолигосахаридов и бета-1,4 и/или 1,6-галактоолигосахаридов и, предпочтительно, также фруктоолигосахаридов оказывает улучшенное воздействие на стимуляцию иммунной системы по сравнению с единственным компонентом. Наблюдается повышенный ответ на вакцинацию, указывающий на Th1 ответ.
Следовательно, комбинация по настоящему изобретению является по существу преимущественной для людей с пониженным Th1 ответом по сравнению со здоровыми взрослыми, в частности, новорожденных грудных детей. Комбинация по настоящему изобретению подходит для лечения и/или предупреждения инфекций, и/или поддержания ответа на вакцинацию перед, во время и/или после вакцинации. Комбинация по настоящему изобретению по существу подходит для лечения и/или предупреждения за счет повышения Th1 ответа заболеваний, предупреждение и/или лечение которых может быть осуществлено за счет повышения Th1 ответа и/или Th1 /Th2 баланса, в частности, аллергии, атопических дерматитов, астмы, пищевой аллергии, аллергического ринита (например, поллиноза), аллергии на пылевого клеща и другие формы гиперчувствительности, такие как общая анафилактическая реакция и острая крапивница.
ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ
n
m
n
m
Настоящее изобретение относится к питательной композиции, включающей по меньшей мере два различных бета-галактоолигосахарида (BGOS) A и B, где a) BGOS A имеет структуру Gal-Glu и/или Gal, с n = от 2 до 6 и m = от 2 до 7 и включает по меньшей мере 80% суммарных бета-1,4 и бета-1,6 связей между двумя галактозными остатками от общего числа связей между галактозными остатками, и b) BGOS B имеет структуру Gal-Glu и/или Gal, с n = от 2 до 6 и m = от 2 до 7 и включает по меньшей мере 80% бета-1,3 связей между двумя галактозными остатками от общего числа связей, и c) массовое соотношение между BGOS A и BGOS B составляет от 1 до 5.
БЕТА-ГАЛАКТООЛИГОСАХАРИДЫ
n
m
n
m
Настоящее изобретение относится к питательной композиции, включающей по меньшей мере два различных бета-галактоолигосахарида (BGOS) A и B, где BGOS A имеет структуру Gal-Glu и/или Gal, с n = от 2 до 6 и m = от 2 до 7 и включает по меньшей мере 80% суммарных бета-1,4 и бета-1,6 связей между двумя галактозными остатками от общего числа связей между галактозными остатками, и где BGOS B имеет структуру Gal-Glu и/или Gal, с n = от 2 до 6 и m = от 2 до 7 и включает по меньшей мере 80% бета-1,3 связей между двумя галактозными остатками от общего числа связей, и массовое соотношение между BGOS A и BGOS B составляет от 1 до 5, более предпочтительно, в пределах от 1,25 до 4, еще более предпочтительно, в пределах от 1,5 до 3,5. Например, Gal-Gal и Gal-Gal-Glu имеет % связей между двумя галактозными остатками или 0% или 100% бета-1,3, или 0% или 100% бета-1,4, или 0% или 100% бета-1,6. Дополнительно Gal-Gal-Gal и Gal-Gal-Gal-Glu имеют % связей между двумя галактозными остатками или 0% или 50% или 100% бета-1,3, или 0% или 50% или 100% бета-1,4, или 0% или 50% или 100% бета-1,6. Например, дополнительно указанно, что Gal-Gal-Gal или Gal-Gal-Gal-Glu может иметь % связей между двумя галактозными остатками 50% бета-1,4 и 50% бета-1,6. Такие олигосахариды подпадают под определение BGOS A.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин «по меньшей мере два различных бета-галактоолигосахарида A и B», как указано выше, также указывается как «комбинация BGOS A и B». Используемый в описании настоящей патентной заявки термин бета-галактоолигосахариды (BGOS) также может относиться к трансгалактоолигосахаридам (TOS). BGOS и TOS являются синонимами. BGOS определены как олигосахариды по меньшей мере с двумя галактозно-маннозными единицами, которые связаны вместе бета-связью. Необязательно в концевой области присутствует одна из концевых глюкозных единиц. BGOS по настоящему изобретению имеют степень полимеризации (СП) в пределах от 2 до 7.
Подходящим способом получения BGOS является обработка лактозы бета-галактозидазой. В зависимости от специфичности используемого фермента, галактозная единица гидролизована из лактозы и соединена с другой лактозной единицей бета-связью с получением трисахарида. Галактозная единица также может быть соединена с другой единичной галактозной единицей с получением дисахарида. Последующие галактозные единицы соединены с получением олигосахаридов. Большая часть таких полученных олигосахаридов имеет СП 7 или менее.
Bacillus circulans
Подходящим способом получения бета-1,6 и/или бета-1,4 GOS, BGOS A является использование бета-галактозидазы из . Коммерчески доступным источником BGOS является Vivinal-TOS от Borculo Domo, The Netherlands. Vivinal-GOS включает BGOS главным образом с бета-1,4 и бета-1,6 связями.
S. thermophilus
S. thermophilus
S. thermophilus
Подходящим способом получения бета-1,3 GOS, BGOS B является использование бета-галактозидазы из . В частности, подходящим является использование бета-галактозидазы из штамма CNCM I 1470 и/или CNCM I 1650 в способе по Примеру 4, описанном в FR2723960, или в Примере 6 EP0778885.  CNCM 1-1620 депонирован в соответствии с условиями Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры 23 августа 1995 года в Collection Nationale de Cultures de Microorganisms van Institute Pasteur, Paris, France компанией Gervais Danone.  CNCM 1-1470 депонирован в соответствии с условиями Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры 25 августа 1994 г. в Collection Nationale de Cultures de Microorganisms van Institute Pasteur, Paris, France компанией Gervais Danone. Оба штамма также указаны в WO 96/06924.
BGOS по настоящему изобретению являются неусвояемыми. Не человеческие расщепляющие ферменты (включая человеческую лактазу) способны гидролизовать BGOS. Следовательно, при потреблении BGOS достигает толстой кишки интактным и доступным для ферментации кишечной микробиотой.
Оба BGOS A и B должны присутствовать в достаточном количестве относительно друг друга. Дополнительно, BGOS B должен присутствовать в меньшем количестве по сравнению с BGOS A, поскольку в грудном молоке больше преобладают NDO с бета-1,4 и бета-1,6 гликозидными связями по сравнению с бета-1,3 гликозидными связями. Смесь BGOS A и BGOS B с относительно низким количеством BGOS B демонстрирует улучшенное воздействие на иммунную систему. Следовательно, массовое соотношение между A и B составляет в пределах от 1 до 5, более предпочтительно, в пределах от 1,25 до 4, еще более предпочтительно, в пределах от 1,5 до 3,5. Такое массовое соотношение гарантирует оптимальное улучшенное воздействие BGOS A и B.
Предпочтительно, питательная композиция по настоящему изобретению включает по меньшей мере 250 мг суммарных BGOS A и B на 100 мл, более предпочтительно, по меньшей мере 400, еще более предпочтительно, по меньшей мере 600 мг. Предпочтительно, композиция не включает более чем 2500 мг суммарных BGOS A и B на 100 мл, более предпочтительно, не более чем 1500 мг. Предпочтительно, питательная композиция по настоящему изобретению включает по меньшей мере 1 масс.% суммарных BGOS A и B по сухому веществу, более предпочтительно, по меньшей мере 2 масс.%, еще более предпочтительно, по меньшей мере 4 масс.%. Предпочтительно, композиция не включает более чем 20 масс.% суммарных BGOS A и B по сухому веществу от общей массы композиции, более предпочтительно, не более чем 10 масс.%. Меньшие количества приводят к более низкой эффективности композиции, в то время как наличие более высокого количества BGOS может привести к побочным эффектам, таким как осмотические нарушения, боли в животе, метеоризм, газообразование и/или вздутие кишечника.
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению также включает фруктоолигосахариды (FOS). Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает фруктоолигосахариды. Фруктоолигосахариды, используемые в настоящем изобретении, относятся к углеводам, состоящим более чем на 50%, предпочтительно, более чем на 65% из фруктозных единиц на основе мономерных субъединиц, в которых, по меньшей мере, 50%, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 90% фруктозных единиц связаны бета-гликозидной связью, предпочтительно, бета-2,1 гликозидной связью. Глюкозная единица может присутствовать на восстанавливающем конце цепочки галактозных единиц. Предпочтительно, фруктоолигосахариды имеют СП или среднюю степень СП в пределах от 2 до 250, более предпочтительно, в пределах от 2 до 100, еще более предпочтительно, в пределах от 10 до 60. Фруктоолигосахариды включают леван, гидролизованный леван, инулин, гидролизованный инулин и синтезированные фруктоолигосахариды. Предпочтительно, композиция включает короткоцепочечные фруктоолигосахариды со средней степенью полимеризации (СП), составляющей в пределах от 3 до 6, более предпочтительны гидролизованный инулин или синтетические фруктоолигосахариды. Предпочтительно, композиция включает длинноцепочечные фруктоолигосахариды со средней СП более 20. Предпочтительно, композиция включает, как короткоцепочечные, так и длинноцепочечные фруктоолигосахариды. Подходящие для использования в композициях фруктоолигосахариды также легко коммерчески доступны, например, от RaftilineHP (Orafti). Предпочтительно, питательная композиция по настоящему изобретению включает по меньшей мере 25 мг FOS на 100 мл, более предпочтительно, по меньшей мере 40, еще более предпочтительно, по меньшей мере 60 мг. Предпочтительно, композиция не включает более чем 250 мг FOS на 100 мл, более предпочтительно, не более чем 150 мг. Предпочтительно, питательная композиция по настоящему изобретению включает по меньшей мере 0,15 масс.% FOS по сухому веществу, более предпочтительно, по меньшей мере 0,25 масс.%, еще более предпочтительно, по меньшей мере 0,4 масс.%. Предпочтительно, композиция включает не более чем 1,5 масс.% FOS по сухому веществу от общей массы композиции, более предпочтительно, не более чем 1 масс.%. Присутствие FOS демонстрирует дополнительное улучшенное воздействие на иммунную систему.
ПИТАТЕЛЬНАЯ КОМПОЗИЦИЯ
Предпочтительно, в питательной композиции присутствует комбинация по настоящему изобретению BGOS A и B. Композиция по настоящему изобретению не является грудным молоком. Предпочтительно, композицию по настоящему изобретению вводят полностью, более предпочтительно, орально.
Композиция по настоящему изобретению предпочтительно, является смесью для детского питания. Композиция по настоящему изобретению преимущественно может быть применена в качестве сбалансированного питания для грудных детей. Композиция по настоящему изобретению предпочтительно, включает липиды, белки и углеводы и предпочтительно, вводится в жидкой форме. Композиция по настоящему изобретению включает сухой пищевой продукт, предпочтительно, порошки, сопровождаемые приложенными инструкциями о том, как смешивать указанную сухую пищевую смесь с подходящей жидкостью, предпочтительно, водой.
Преимущественно композиция по настоящему изобретению включает липидный компонент, где липидный компонент предпочтительно, обеспечивает от 5 до 50% всех калорий, белковый компонент предпочтительно, обеспечивает от 5 до 50% всех калорий, и компонент усваиваемого углевода предпочтительно, обеспечивает от 15 до 85% всех калорий. Преимущественно композиция по настоящему изобретению включает липидный компонент, обеспечивающий от 20 до 50% всех калорий, белковый компонент, обеспечивающий от 5 до 30% всех калорий, и компонент усваиваемого углевода, обеспечивающий от 30 до 70% всех калорий. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает липидный компонент, обеспечивающий от 35 до 50% всех калорий, белковый компонент, обеспечивающий от 7,5 до 12,5% всех калорий, и компонент усваиваемого углевода, обеспечивающий от 40 до 55% всех калорий. Для расчета % всех калорий для белка следует принимать во внимание общую энергию, обеспечиваемую белками, пептидами и аминокислотами.
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из животных липидов, исключая человеческие липиды, и растительных липидов. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает комбинацию растительных липидов и по меньшей мере одно масло, выбранное из группы, состоящей из рыбьего жира, животного жира, водорослевого масла, грибкового масла и бактериального масла. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦ-ПНЖК). ДЦ-ПНЖК представляют жирные кислоты или жирные ацильные цепи длиной в пределах от 20 до 24 атомов углерода, предпочтительно, 20 или 22 атома углерода, включающие две или более ненасыщенные связи. ДЦ-ПНЖК могут быть обеспечены как свободные жирные кислоты, в форме триглицеридов, в форме диглицеридов, в форме моноглицеридов, в форме фосфолипидов или как смесь одного или более из указанного выше.
Белок, используемый в питательной композиции по настоящему изобретению, предпочтительно, выбирают из группы, состоящей из животного белка, не являющегося белком человека (предпочтительно, молочные белки), растительных белков (предпочтительно, соевого белка и/или рисового белка), их гидролизатов, свободных аминокислот и их смесей. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению содержит казеин, сывороточный белок, гидролизованный казеин и/или гидролизованный сывороточный белок. Предпочтительно, белок включает интактный белок, более предпочтительно, интактный сывороточный коровий белок и/или интактный казеиновый коровий белок.
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению содержит усвояемые углеводы, выбранные из группы, состоящей из сахарозы, лактозы, глюкозы, фруктозы, сухих веществ кукурузного сиропа, крахмала и мальтодекстринов, более предпочтительно, лактозы.
Bifidobacterium breve
Bifidobacterium breve
B. breve
Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает .  представляют собой грамм-положительные, анаэробные разветвленные палочковидные бактерии.  по настоящему изобретению предпочтительно, имеют, по меньшей мере, 95% идентичность последовательности 16 S рРНК при сравнении со штаммом B. breve ATCC 15700, более предпочтительно, по меньшей мере, 97% идентичность (. 44:846-849).
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
Предпочтительные штаммы  представляют собой выделенные из фекалий здоровых грудных детей, находящихся на грудном вскармливании. Как правило, они коммерчески доступны от производителей молочно-кислых бактерий, но также могут быть выделены непосредственно из фекалий, идентифицированы, охарактеризованы и продуцированы.  могут быть жизнеспособными или не жизнеспособными. Согласно предпочтительному варианту воплощения настоящего изобретения, штамм представляет  CNCM 1-2219, депонированный в соответствии с условиями Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры 31 мая 1999 года в Collection Nationale de Cultures de Microorganisms (CNCM), Paris, France компанией Gervais Danone, как опубликовано в EP 1189517. Было установлено, что присутствие этого штамма приводит к дополнительно улучшенному ответу на вакцинацию.
Bifidobacterium breve
B. breve
B. breve,
B. breve
B. breve,
B. breve
Bifidobacterium breve
B. breve
3
3
3
13
3
13
4
12
5
11
5
10
3
3
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает жизнеспособные и/или не жизнеспособные . В случае жизнеспособных , количество составляет по меньшей мере 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) на г сухой массы композиции по настоящему изобретению, или в случае не жизнеспособных  количество предпочтительно, составляет по меньшей мере 10 КОЕ на г сухой массы композиции по настоящему изобретению. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает в пределах от 10до 10 КОЕ  или, в случае не жизнеспособных  в пределах, эквивалентных от 10 до 10 КОЕ на г сухой массы композиции по настоящему изобретению, предпочтительно, в пределах от 10 до 10, более предпочтительно, в пределах от 10 до 10, наиболее предпочтительно, в пределах от 10 до 10 КОЕ, или эквивалента КОЕ  на г сухой массы композиции по настоящему изобретению. Количество не жизнеспособных  эквивалентно по меньшей мере 10 КОЕ на г сухой массы композиции по настоящему изобретению, что означает, что не жизнеспособные Bifidobacterium breve в количестве, эквивалентном по меньшей мере 10 КОЕ жизнеспособных  на г сухой массы композиции.
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
Эквивалент КОЕ может быть определен проведением анализа 5' нуклеазой с пробами  и праймерами, как описано в WO 2005039319, в продукте (то есть смеси для детского питания), включающем нежизнеспособные , и сравнением его с калибровочной кривой, полученной от сопоставимого продукта (например, стандартная смесь для детского питания), в котором известно количество КОЕ добавленных сухих жизнеспособных . Сухие жизнеспособные бифидобактерии могут быть коммерчески получены, как описано выше. Показатель КОЕ на калибровочной кривой, полученной для живых , которые имеют такой же отклик при анализе с 5 'нуклеазой, как продукт, включающий инактивированные , считается эквивалентным количеством КОЕ нежизнеспособных . В качестве альтернативы, количество КОЕ на г сухой массы может быть определено в композиции только перед стадией инактивации. Предпочтительно,  инактивированы нагреванием.
Также важно, что жидкий пищевой продукт не имеет избыточной калорийности, однако все еще обеспечивает достаточно калорий для питания субъекта. Следовательно, предпочтительно, жидкий пищевой продукт имеет калорийность в пределах от 0,1 до 2,5 ккал/мл, еще более предпочтительно, калорийность составляет в пределах от 0,5 до 1,5 ккал/мл, наиболее предпочтительно, в пределах от 0,6 до 0,8 ккал/мл.
-1
-1
Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению находится в жидкой форме. Предпочтительно, она имеет ограниченную вязкость, таким образом, может быть применена в качестве жидкого детского питания и жидкого клинического питания, которое может быть введено через соску, трубку или соломинку, сохраняя при этом низкую вязкость. В предпочтительном варианте воплощения композиция по настоящему изобретению имеет вязкость менее 600 мПа*с, предпочтительно, менее 250 мПа*с ,более предпочтительно, менее 60 мПа*с, еще более предпочтительно, менее 35 мПа*с, наиболее предпочтительно, менее 6 мПа*с, как измерено при скорости сдвига 100 си при температуре 20ºC. Используемый в описании настоящей патентной заявки термин «вязкость» относится к физическому параметру, определенному при использовании следующего способа. Вязкость может быть определена при использовании реометра Carri-Med CSL. Используют коническую геометрию (6 см 2° акриловый конус) и промежуток между плитой и конусом устанавливают равным 55 мкм. Линейное непрерывное напряжение сдвигового усилия составляет в пределах от 0 до 150 с в течение 20 секунд. Следует отметить, что композиция в порошкообразной форме с инструкцией по получению водного раствора, например, добавлением воды в определенной пропорции с получением затем вязкости, как указано выше, также входит в объем притязаний настоящего изобретения.
ПРИМЕНЕНИЕ
Было установлено, что комбинация BGOS A и B по настоящему изобретению синергетически стимулирует иммунную систему. В частности, повысился ответ на вакцинацию, что указывает на повышенный Th1 ответ. Воздействие комбинации этих двух компонентов выше, чем воздействие только одного компонента.
Комбинация по настоящему изобретению преимущественно может быть использована для лечения и/или предупреждения заболеваний, и, следовательно, настоящее изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения заболеваний у млекопитающих, указанный способ включает введение композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B млекопитающему. Другими словами, настоящее изобретение также относится к применению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для получения композиции, предпочтительно, питательной композиции для лечения и/или предупреждения заболеваний. Другими словами, настоящее изобретение относится к композиции или питательной композиции, включающей композицию по настоящему изобретению, включающую BGOS A и B, для применения в лечении и/или профилактике заболеваний. Предпочтительно, млекопитающим является человек, еще более предпочтительно, млекопитающим является грудной ребенок. Следовательно, настоящее изобретение также относится к применению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для получения композиции, предпочтительно, питательной композиции для лечения и/или предупреждения заболеваний у грудных детей. Или, другими словами, настоящее изобретение относится к композиции или питательной композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для применения в лечении и/или профилактике заболеваний у грудных детей.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин «грудной ребенок» относится к ребенку в возрасте от 0 до 6 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 4 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 2 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 1 года.
Также настоящее изобретение относится к способу обеспечения питания грудного ребенка, указанный способ включает введение композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, грудному ребенку. Другими словами, настоящее изобретение также относится к применению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для получения питательной композиции для обеспечения питания грудного ребенка. Другими словами, настоящее изобретение относится к композиции или питательной композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для применения для обеспечения питания грудного ребенка или для применения для вскармливания грудного ребенка.
Композиция по настоящему изобретению, включающая BGOS A и B, преимущественно может быть использована для повышения ответа Th1, повышения баланса Th1/Th2, восстановления дисбаланса ответов Th1/Th2, поддержания благоприятного баланса Th1/Th2 и/или для лечения и предупреждения расстройств, связанных с дисбалансом Th1/Th2. Следовательно, композиции, которые предложены, например, для стимуляции созревания иммунной системы, усиления сопротивляемости патогенам усилением иммунной системы и/или поддержанием иммунной системы, являются частью настоящего изобретения. В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения расстройств, связанных с иммунной системой, указанный способ включает введение указанному млекопитающему композиции, включающей терапевтически эффективное количество композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B. В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу усиления иммунного ответа у млекопитающего, указанный способ включает введение млекопитающему композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B.
Иммунная система новорожденного грудного ребенка характеризуется избыточным Th2 ответом. В процессе созревания иммунной системы повышается ответ Th1, и баланс Th1/Th2 сдвигается в сторону показателей, наблюдаемых у здоровых взрослых людей. Следовательно, комбинация по настоящему изобретению является по существу преимущественной для грудных детей. Настоящее изобретение относится к поддержанию созревания иммунной системы у грудных детей. В другом варианте воплощения настоящего изобретения способ относится к введению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, человеку в возрасте от 0 до 6 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 4 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 2 лет, более предпочтительно, в возрасте от 0 до 1 года. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения способ относится к стимуляции созревания иммунной системы у человеческих субъектов в возрасте от 0 до 6 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 4 лет, предпочтительно, в возрасте от 0 до 2 лет, более предпочтительно, в возрасте от 0 до 1 года.
Слишком низкий баланс Th1/Th2 приводит к чрезвычайной чувствительности к незнакомым компонентам, что может привести к множеству различных иммунологических реакций, например, аллергии и связанных с ними заболеваний, таких как атопический дерматит, астма, пищевая аллергия, аллергический ринит (например, поллиноз), аллергии на пылевого клеща и другие формы гиперчувствительности, такие как общая анафилактическая реакция и острая крапивница. Следовательно, композиция по настоящему изобретению, включающая BGOS A и B, является по существу преимущественной для лечения и/или предупреждения расстройств, выбранных из группы, состоящей из аллергии, пищевой аллергии, атопического дерматита, астмы, аллергических конъюнктивитов, аллергического ринита, аллергии на пылевого клеща и крапивницы. Композиция по настоящему изобретению, включающая BGOS A и B, повышает баланс Th1/Th2.
Повышение ответа Th1 приводит к повышению ответа против патогенных бактерий и/или вирусов. Следовательно, композиция по настоящему изобретению, включающая BGOS A и B, подходит для лечения и/или предупреждения инфекций. Композиция по настоящему изобретению, включающая BGOS A и B, может быть преимущественно использована для лечения и/или предупреждения кишечных инфекций, диареи, флегмоны кишечника, общих инфекций и/или инфекций дыхательных путей.
Также было установлено, что комбинация по настоящему изобретению может быть соответственно использована для поддержания процессов вакцинации, например, усиление воздействия на процесс вакцинации. Комбинация по настоящему изобретению подходит для поддержания ответа на вакцинацию перед, во время и/или после вакцинации. Следовательно, композицию по настоящему изобретению, включающую BGOS A и B, преимущественно используют для лечения и/или предупреждения инфекций, и/или для использования для усиления ответа на вакцинацию.
Следовательно, комбинация по настоящему изобретению является преимущественной для человеческих субъектов, страдающих от иммуннодефицита, в частности у лиц пожилого возраста, страдающих от «старения» иммунной системы, людей, страдающих от СПИДА или инфицированных вирусом иммунодефицита человека, и/или пациентов с раком, в частности пациентов с раком и/или пациентов, прошедших химиотерапию, облучение, и кахектических пациентов с раком.
Комбинацию по настоящему изобретению преимущественно используют для питания лиц пожилого возраста. Лица пожилого возраста имеют пониженный ответ Th1. Лица пожилого возраста очень подвержены осложнениям от вирусных инфекций. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения композицию по настоящему изобретению, включающую BGOS A и B, используют для лечения и/или предупреждения «старения» иммунной системы у лиц пожилого возраста. В одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к обеспечению питания лиц пожилого возраста. Лицом пожилого возраста является персона в возрасте от 55 лет или более, в частности в возрасте 65 лет или более.
Следовательно, различные варианты воплощения настоящего изобретения относятся к применению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для получения композиции, предпочтительно, питательной композиции для
- стимуляции иммунной системы,
- усиления ответа на вакцинацию,
- предупреждения и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из астмы, аллергии, атопического дерматита, аллергических конъюнктивитов, аллергии на пылевого клеща, крапивницы и аллергического ринита,
- применения для предупреждения и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из инфекций, диареи и флегмоны кишечника,
- улучшения иммунной системы, указанное улучшение выбирают из группы, состоящей из повышения ответа Th1, повышения баланса Th1/Th2 и снижения ответа Th2,
- лечения и/или предупреждения «старения» иммунной системы у лиц пожилого возраста,
- для пациентов с ВИЧ и/или СПИД,
- пациентов с раком, в частности пациентов с раком и/или пациентов с раком, прошедших химиотерапию и/или облучение, и кахектических пациентов с раком,
- пациентов с хроническим обструктивным заболеванием легких и/или
- пациентов с диабетом.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин «предупреждение» заболевания или определенного расстройства также означает «лечение персоны с риском развития» заболевания или определенного расстройства.
Смесь BGOS A и B с отличающимися связями, предпочтительно, приводит к улучшенной ферментации и/или улучшенной кишечной микробиоте, предпочтительно, обогащенной бактериями, продуцирующими молочную кислоту, в частности, бифидобактериями и/или молочно-кислыми бактериями, по сравнению только с одним компонентом. Предпочтительно, повышено образование лактата и/или ацетата. Продуцирование органических кислот, предпочтительно, ведет к снижению кишечного pH.
В одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к применению композиции по настоящему изобретению, включающей BGOS A и B, для получения композиции, предпочтительно, питательной композиции для применения для улучшения кишечной микробиоты. Предпочтительно, кишечная микробиота улучшена за счет повышения количества и/или активности бактерий, продуцирующих молочную кислоту. Предпочтительно, бактерии, продуцирующие молочную кислоту, выбирают из группы, состоящей из бифидобактерий и лактобактерий.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Улучшенное воздействие BGOS A и B на повышение ответа Th1
Способы
Воздействие рационов включает (a) комбинацию BGOS A и фруктоолигосахаридов, (b) BGOS B и (c) комбинацию BGOS A и B и фруктоолигосахридов, тестируемую на мышиных моделях, где ответ на антиген измеряют с использованием ответа гиперчувствительности замедленного типа (DTH). Этот DTH-ответ измеряют пролиферацией Th1 клеток на ушных раковинах мышей после местной сенсибилизации антигеном, присутствующим в вакцине. При ответе на инфекцию и/или вакцинацию сенсибилизация антигеном вызывает пролиферацию Th1 клеток. Эти Th1 клетки образуют инфильтрат на ухе при его последующей сенсибилизации антигеном и вызывают опухание. Инфильтрация Th1 клетками уха происходит в течение около 24 часов с отложенным опуханием. При большем количестве пролиферированных Th1 клеток во время начальной вакцинации и/или инфекции наблюдается больший DTH-ответ при сенсибилизации антигеном.
В качестве источника BGOS A используют Vivinal-GOS (Borculo Domo Ingredients, Netherlands)). В качестве источника фруктоолигосахаридов (FPS) используют RaftilineHP, Orafti, Tiense, BelGlum.
S. thermophilus
Рационы (a) и (c) включают массовое соотношение неусвояемых олигосахаридов от Vivinal GOS:FPS в пределах 9:1 и 1 масс.% суммарных неусвояемых олигосахаридов от Vivinal GOS и FPS от общей массы мышиного рациона. Vivinal GOS включает по меньшей мере 67 масс.% BGOS A, остальное главным образом представляют неусвояемые Gal-Glu дисахариды. Рационы (b) и (c) включают в качестве источника BGOS B препарат, полученный после инкубации лактозы штаммом  CNCM 1-1620 в способе по Примеру 4, описанном в FR2723960. Было добавлено 3 масс.% этого препарата от общей массы рациона. Количество BGOS в этом препарате составляет около 245 мг/г. Количество BGOS B составляет около 223 мг/г, остальные BGOS представляют BGOS A. Остальная часть препарата главным образом включает лактозу и неусвояемые Gal-Glu дисахариды. Из BGOS основная часть состоит из трисахаридов (около 88%) и тетрасахаридов (около 12 масс.%).
Используют самок мышей C57B1/6 в возрасте 6 недель (Harlan Nederland BV, Horst, Нидерланды), группу содержат при обычном 12-часовом режиме день/ночь. Разделяют по 10 животных в группе и по 3 животных в группах отрицательного контроля. Животные получают полусинтетические рационы (Research Diet Services, Wijk bij Duurstede, Нидерланды). Контрольные рационы получают согласно спецификациям AIN93G (Reeves et al (1993) J Nutrition 123 (11): 1923-31), в рационы на основе этих спецификаций добавляют олигосахариды.
Вакцинацию начинают после 20 дневной адаптации к новым условиям содержания и рационам. Образцы крови берут перед вакцинацией - день 0. В первый день вакцинации - день 1 вакцину вводят подкожно. После трех недель проводят ревакцинацию (день 22). Через девять дней после повторной вакцинации (день 31) проводят измерение толщины базального слоя эпидермиса уха мыши с использованием пружинного микрометра Digimatic (Mitutoyo, Veenendaal, the Netherlands) и индуцируют ответ гиперчувствительности замедленного типа (DTH), проводя инъекцию раствора антигена в.к. (внутрикожно) в ушную раковину мыши. Через 24 часа (день 32), измеряют DTH-ответ, берут образец крови и умертвляют мышь. Из толщины уха через 24 часа вычитают толщину уха t=0.
Вакцины состоят из 100 мкл в.к. (внутрикожно) инъекции 1:1 смеси раствора антигена и адъюванта Stimune (Specol, Cedi-diagnostics BV, Lelystad, Нидерданды). Раствор антигена представляет собой разведение 1:100 Influvac 2002/2003 (Solvay Pharmaceuticals, Weesp, Нидерданды) в PBS. Influvac представляет собой трехвалентную белковую вакцину, содержащую 3×3011 г/мл гемагглютинина трех различных штаммов вируса гриппа. Для DTH-ответов мышам вводят в.к. 25 мкл диализированной Influvac в оба уха в качестве DTH-сенсибилизации.
Результаты
Рационы, содержащие комбинацию 1 масс.% BGOS A, индуцируют статистически значимое повышение на 100% ответа DTH (см., Таблицу 1). BGOS B также индуцируют статистически значимое повышение на 112% ответа DTH. Неожиданно было установлено, что комбинация BGOS A и B демонстрирует самое высокое повышение ответа на 192%.
Эти результаты указывают на дополнительное улучшенное воздействие, обеспеченное введением BGOS A и BGOS B, на повышение ответа Th1.
Таблица 1Ответ DTH
Группа
Средний DTH мкм (s.e.)
∆ DTH мкм
Относительный DTH
Sham
24,3 (0,6)
0
0
Плацебо
66,5 (0,3)
42,2
1,00
Группа a BGOS A
108,9 (0,3)*
84,6
2,00
Группа b BGOS B
113,6 (0,3)*
89,3
2,123
Группа c BGOS A + B
147,6 (0,2)*<sup>a</sup>
123,2
2,92
* p<0,05 по сравнению с плацебо
<sup>a</sup> p<0,05 по сравнению с группой a и b
Результаты этого эксперимента указывают на то, что настоящее изобретение может быть преимущественно использовано для поддержания ответа на вакцинацию. Также результаты этого эксперимента указывают на то, что это может быть преимущественно использовано у субъектов с низким ответом Th1, в частности грудных детей. Также результаты этого эксперимента указывают на то, что это может быть преимущественно использовано у субъектов с низким ответом Th1, в частности у лиц пожилого возраста, страдающих или имеющих риск возникновения «старения» иммунной системы, пациентов с ВИЧ, пациентов со СПИДом и/или пациентов с раком, прошедших химиотерапию и/или облучение, и кахектических пациентов с раком, пациентов, страдающих от ХОБЛ и/или пациентов, страдающих от диабета. Эта модель указывает на то, что основные иммунологические изменения, которые могут быть благоприятными при всех расстройствах с неудовлетворительной работой иммунной системы. Известно, что иммунная система грудных детей, людей пожилого возраста, инфицированных ВИЧ, пациентов с раком, пациентов с ХОБЛ и/или пациентов с диабетом не работает на полную мощность. Для всех указанных выше может быть полезной дополнительная помощь.
Пример 2: Молочная смесь для детского питания
S. thermophilus
Смесь для детского питания получают при использовании таких ингредиентов, как обезжиренное молоко, сывороточный белок, лактоза, растительный жир, минеральные вещества, витамины и микроэлементы, как известно из предшествующего уровня техники. В качестве источника BGOS B используют препарат, полученный после инкубации лактозы штаммом CNCM 1-1620 в способе по Примеру 4, описанном в FR2723960, и также в Примере 1. Конечная концентрация по сухому веществу от общей массы композиции смеси для детского питания составляет 5,4 масс.%. В качестве источника BGOS A используют Vivinal GOS. Дополнительно используют фруктоолигосахариды (Raftilin HP).
Ингредиенты пастеризуют, смешивают, гомогенизируют, стерилизуют и подвергают распылительной сушке с получением порошка, как известно из предшествующего уровня техники.
Готовая композиция смеси для детского питания после восстановления до готовой к потреблению смеси для детского питания включает на 100 мл:
- 68 ккал
- 1,45 г белка (казеин и сывороточный белок молока, частично гидролизованный)
- 8,6 г усвояемых углеводов (главным образом лактоза и мальтодекстрин)
- 3,1 г жиров (главным образом растительные жиры)
- 0,8 г не усвояемых олигосахаридов, включающих
* из которых 0,08 г фруктоолигосахриды (источник raftininHP),
S. thermophilus
* из которых 0,22 г не усвояемые олигосахариды, полученные при использовании штамма  (около 73 масс.% BGOS B, 7,3 масс.% BGOS A и остальное Gal-Glu не усвояемые дисахариды),
* из которых 0,5 г не усвояемые олигосахариды, как в Vivinal GOS (по меньшей мере 67 масс.% BGOS A, остальное главным образом Gal-Glu не усвояемые дисахариды).
Микроэлементы, минеральные вещества, витамины и другие микронутриенты (таурин, холин, инозитол, нуклеотиды, карнитин), как известно из предшествующего уровня техники.