АBC-ТРАНСПОРТЕРЫ ДЛЯ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОГО ПРОИЗВОДСТВА РЕБАУДИОЗИДОВ

1. Генетически модифицированная клетка-хозяин, способная продуцировать один или несколько стевиоловых гликозидов, содержащих гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую АВС-транспортер, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из последовательностей со следующими идентификаторами: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30.
2. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 1, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей со следующими идентификаторами: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8.
3. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую геранилгеранилпирофосфатсинтазу (GGPPS), энт-копалилпирофосфатсинтазу (CPS), энт-кауренсинтазу (KS), энт-каурен-19-оксидазу (KO), 13-гидроксилазу энт-кауреновой кислоты (KAH), цитохром р450 редуктазу (CPR) и одну или несколько УДФ-глюкозилтрансфераз (UGT).
4. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 3, отличающаяся тем, что одна или несколько УДФ-глюкозилтрансфераз (UGT) выбраны из группы, состоящей из UGT85C2, UGT74G1, UGT91D_like3, UGT76G1, EUGT11 и UGT40087.
5. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 4, отличающаяся тем, что геранилгеранилпирофосфатсинтаза (GGPPS) содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 9, энт-копалилпирофосфатсинтаза (CPS) содержит аминокислотную последовательность, имеющая по меньшей мере 80%) идентичности последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 10, энт-кауренсинтаза (KS) включает аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с идентификатором SEQIDNO: 11, энт-каурен-19-оксидаза (КО) содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%) идентичность последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 12, 13-гидроксилаза энт-кауреновой кислоты (KAH) содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 13, редуктаза цитохрома р450 (CPR) содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 14, и одна или несколько УДФ-глюкозилтрансфераз (UGT) содержат аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%) идентичности последовательности аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей со следующими идентификаторами: SEQIDNO: 15, SEQIDNO: 16, SEQIDNO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQIDNO: 19.
6. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 5, отличающаяся тем, что геранилгеранилпирофосфатсинтаза (GGPPS) содержит аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 9, энт-копалилпирофосфатсинтаза (CPS) содержит аминокислотную последовательность с идентификатором SEQIDNO: 10, энт-каурен-синтаза (KS) содержит аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 11, энт-каурен-19-оксидаза (KO) включает аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 12, 13-гидроксилаза энт-кауреновой кислоты (KAH) содержит аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 13, редуктаза цитохрома р450 (CPR) содержит аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 14, а одна или несколько УДФ-глюкозилтрансфераз (UGT) содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей со следующими идентификаторами: SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19.
7. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что клетка-хозяин выбрана из бактериальной клетки, грибковой клетки, водорослевой клетки, клетки насекомого и клетки растения.
8. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 7, отличающаяся тем, что клетка-хозяин представляет собой клетку Saccharomyces cerevisiae.
9. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 1.
10. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 2.
11. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 3.
12. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 4.
13. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 5.
14. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 6.
15. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 7.
16. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 15, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит одну или несколько аминокислотных замен относительно аминокислотной последовательности с идентификатором SEQ ID NO: 7.
17. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 16, отличающаяся тем, что одна или несколько аминокислотных замен выбраны из V666A, Y942N, L956P HE1320V.
18. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 8.
19. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 28.
20. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 29.
21. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 30.
22. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что один или несколько стевиоловых гликозидов выбраны из группы, состоящей из Reb A, Reb В, Reb D, Reb Е и Reb М.
23. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 22, отличающаяся тем, что один или несколько стевиоловых гликозидов содержат Reb М.
24. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов.
25. Полинуклеотид по п. 24, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты включает кодирующую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей с идентификаторами SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID. NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, где кодирующая последовательность функционально связана с гетерологичным промотором.
26. Способ получения стевиола или одного или нескольких стевиоловых гликозидов, включающий стадии:
(a) культивирование популяции клеток-хозяев по любому из пп. 1-23 в среде с источником углерода в условиях, подходящих для получения стевиола или одного или нескольких стевиоловых гликозидов с получением культурального бульона; а также
(b) выделение указанного стевиола или одного или нескольких стевиоловых гликозидов из культуральной жидкости.
27. Способ получения Reb D, включающий стадии:
(a) культивирование популяции клеток-хозяев по любому из пп. 1-23 в среде с источником углерода в условиях, подходящих для получения Reb D с получением культурального бульона; а также
(b) выделение указанного соединения Reb D из культурального бульона.
28. Способ получения Reb М, включающий стадии:
(a) культивирование популяции клеток-хозяев по любому из пп. 1-23 в среде с источником углерода в условиях, подходящих для получения Reb М с получением культурального бульона; а также
(b) выделение указанного соединения Reb М из культурального бульона.
29. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% одного или нескольких стевиоловых гликозидов накапливаются в просвете органеллы.
30. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% одного или нескольких стевиоловых гликозидов накапливаются внеклеточно.
31. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 1-23, дополнительно содержащая УДФ-глюкозилтрансферазу (UGT), имеющую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO: 18.
32. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 1-23, дополнительно содержащая УДФ-глюкозилтрансферазу (UGT), имеющую аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 18.
33. Генетически модифицированная клетка-хозяин, способная продуцировать изопреноидное соединение, содержащее гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую АВС-транспортер, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из последовательностей с идентификаторами SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30.
34. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 33, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей с идентификаторами SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO:.
35. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 33 или 34, дополнительно содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую аморфа-4,11-диенеинтазу, и нуклеиновую кислоту, кодирующую аморфа-4,11-диеноксидазу.
36. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 35, отличающаяся тем, что изопреноидное соединение выбрано из артемизинового спирта, артемизинового альдегида и артемизиновой кислоты.
37. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 36, отличающаяся тем, что клетка-хозяин выбрана из бактериальной клетки, грибковой клетки, водорослевой клетки, клетки насекомого и клетки растения.
38. Генетически модифицированная клетка-хозяин по п. 37, отличающаяся тем, что клетка-хозяин представляет собой клетку Saccharomyces cerevisiae.
39. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 1.
40. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 2.
41. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 3.
42. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 4.
43. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 5.
44. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 6.
45. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 7.
46. Генетически модифицированная клетка-хозяин по любому из пп. 33-38, отличающаяся тем, что АВС-транспортер содержит аминокислотную последовательность, имеющую последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 8.
47. Способ получения артемизиловой кислоты, включающий стадии:
(a) культивирование популяции клеток-хозяев по любому из пп. 33-46 в среде с источником углерода в условиях, подходящих для получения артемизиновой кислоты с получением культурального бульона; а также
(b) выделение артемизиновой кислоты из культурального бульона.
48. Способ получения изопреноидного соединения, включающий стадии:
(a) культивирование популяции клеток-хозяев по п. 33 в среде с источником углерода в условиях, подходящих для получения изопреноидного соединения с получением культурального бульона; а также
(b) выделение изопреноидного соединения из культурального бульона.