СПОСОБ МОДЕЛЬНО-ДИСКРИМИНАЦИОННОЙ ОЦЕНКИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПОКРЫТЫХ КИШЕЧНОРАСТВОРИМОЙ ОБОЛОЧКОЙ
METHOD FOR MODEL-DISCRIMINATIVE ESTIMATION OF PHARMACEUTICAL EQUIVALENCE OF DRUGS WITH ENTERIC COATING

Изобретение относится к фармации, фармакологии и клинической фармакологии и касается способа анализа медицинских препаратов. Изобретение позволяет оценивать фармацевтическую эквивалентность воспроизведенных лекарственных средств (ЛС), покрытых кишечнорастворимой оболочкой.
Известен способ оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, реализованный в тесте «Растворение», с помощью которого определяют количество действующего вещества, которое в стандартных условиях за определенное время должно перейти в раствор из твердой дозированной лекарственной формы [1]. Способ включает следующие стадии: лекарственные формы помещают в соответствующую среду растворения, предварительно нагретую до T=37±0,05°C, включают аппарат «Вращающаяся корзинка» или «Лопастная мешалка» при определенной скорости вращения (50-100 об/мин) и через время, указанное в частных фармакопейных статьях, или через 45 мин, отбирают аликвоты, фильтруют их и определяют количество действующего вещества, перешедшего в раствор, путем измерения оптической плотности на спектрофотометре при максимальном поглощении изучаемого вещества.
Недостатками данного способа являются:
1. Низкая информативность способа при оценке взаимозаменяемости ЛС: способ не гарантирует подтверждения взаимозаменяемости лекарственных средств у пациентов с болезнями пищеварительного тракта.
2. Способ позволяет определить количественные параметры кинетики растворения ЛС в зависимости от физико-химических свойств активного фармацевтического ингредиента, но без учета экспозиции ЛС в средах с динамически изменяющимися под действием патологического дуодено-гастрального рефлюкса (ДГР) или фармакологической кислотосупрессии значениями pH.
В качестве ближайшего аналога выбран способ оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, реализованный в тесте кинетики растворения для твердых дозированных лекарственных форм (ЛФ), таблеток и капсул, покрытых кишечнорастворимой оболочкой [2].
Способ включает следующие стадии: лекарственные формы сначала помещают в среду растворения, нагретую до T=37,0±0,5°C, с pH=1,2±0,05, включают мотор лопастной мешалки, через 2 часа отбирают аликвоту, фильтруют и измеряют количество действующего вещества, затем переносят ЛФ в буферный раствор с pH=6,8±0,05, начинают перемешивание, через 45 мин (если нет других указаний) отбирают пробы, фильтруют и измеряют количество действующего вещества, перешедшего в раствор, методами спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, масс-спектрометрии, описанными в частной фармакопейной статье.
Недостатками ближайшего аналога являются:
1. Данный способ изучения воздействия высоких значений pH (здесь 6,8±0,05) на стабильность лекарственных форм, защищенных кишечнорастворимыми оболочками, не позволяет дифференцировать влияние среды тонкого кишечника, в которой ЛС должно дезинтегрироваться естественным образом, от влияния патологического ДГР, который может приводить к преждевременному высвобождению ЛС в желудке.
2. Данный способ не позволяет оценивать особенности кинетики растворения ЛС в условиях, соответствующих условиям среды желудка при курсовом применении препаратов, снижающих внутрижелудочную кислотопродукцию.
Задачей настоящего исследования является разработка способа модельно-дискриминационной оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, покрытых кишечнорастворимой оболочкой.
Поставленная задача решается благодаря тому, что выбранные условия двухэтапного проведения сравнительного теста кинетики растворения (СКТР) соответствуют по временным характеристикам и параметрам кислотности условиям нахождения ЛС в желудочно-кишечном тракте пациентов с гастроэнтерологической патологией [3, 4].
Техническим результатом заявленного изобретения является повышение точности определения фармацевтической эквивалентности воспроизведенных ЛС, защищенных кишечнорастворимыми оболочками.
Сущность предложенного способа:
1. Способ модельно-дискриминационной оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, заключается в применении двухэтапного сравнительного теста кинетики растворения препаратов для тестирования устойчивости их кишечнорастворимых лекарственных форм к устойчивой медикаментозной кислотосупрессии и патологическому дуоденогастральному рефлюксу, при этом на первом этапе проводится сравнительный тест кинетики растворения путем последовательного помещения по одной единице твердой дозированной лекарственной формы в среду растворения, нагретую до T=37,0±0,5°C, с pH=1,2±0,05, объемом 1000 мл, перемешивания с помощью лопастной мешалки со скоростью 50 об/мин, отбора аликвоты через 2 часа и ее фильтрации, определения в аликвоте количества действующего вещества, перешедшего в раствор, переноса лекарственной формы в фосфатный буферный раствор с рН=6,8±0,05 объемом 1000 мл, перемешивания с помощью лопастной мешалки со скоростью 50 об/мин, отбора аликвоты через 45 мин с восполнением отобранного объема средой растворения, фильтрации аликвоты, измерения в аликвоте количества действующего вещества, перешедшего в раствор, при этом заявленное изобретение отличается тем, что на первом этапе твердую дозированную лекарственную форму помещают в 500 мл кислой среды растворения, перемешивают лопастной мешалкой со скоростью 100 об/мин, переносят в щелочную среду растворения объемом 900 мл с pH=7,0±0,05, перемешивают с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбирают аликвоты через 10, 15, 20, 30, 45 и 60 минут и в дополнительное расчетное время объемом 5 мл с восполнением этого объема средой растворения, аликвоты фильтруют, прибавляют к 2 мл фильтрата аликвот по 400 мкл 0,25 моль/л натрия гидроксида, определяют количество действующего вещества, перешедшего в раствор, параллельно проводят второй этап сравнительного теста кинетики растворения, включающий последовательное помещение по одной единице твердой дозированной лекарственной формы в среду растворения, с рН=4,0±0,05 объемом 500 мл, перемешивание с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбор проб через 10, 15, 20, 30, 45 и 60 минут объемом 5 мл с восполнением этого объема средой растворения, фильтрацию аликвот, прибавление к 2 мл фильтрата аликвот по 400 мкл 0,25 моль/л натрия гидроксида, определение количества действующего вещества, перешедшего в раствор, перенос лекарственной формы в фосфатный буферный раствор с pH=7,0±0,05, объемом 900 мл, перемешивание с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбор проб через 10, 15, 20, 30, 45 и 60 минут и в дополнительное расчетное время.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно определяют точку отбора аликвоты из среды растворения с pH=7,0±0,05 по формуле
,
где Tp - это расчетная временная точка - время воздействия патологического рефлюкса на твердую дозированную лекарственную форму, покрытую кишечнорастворимой оболочкой;
Тк - это время появления лекарственного средства в крови для референсного препарата, согласно справочным данным;
0,121 - это доля времени, в течение которой согласно справочным данным у больных с патологическим дуоденогастральным рефлюксом при проведении внутрижелудочной pH-метрии регистрируются значения внутрижелудочного pH≥7,0;
t - это 1 минута на равномерное распределение в растворе активного компонента твердой дозированной лекарственной формы.
Между совокупностью существенных признаков заявляемого способа проведения сравнительного теста кинетики растворения и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь, а именно в результате моделирования в тесте условий динамических рефлюкс-обусловленных колебаний значений pH или его устойчивого повышения в связи с курсовым применением препаратов, снижающих внутрижелудочную кислотопродукцию, стало возможным применение сравнительного теста кинетики растворения для оценки влияния статистических и динамических изменений внутрижелудочного pH, характерных для пациентов с патологическим дуоденогастральном рефлюксом, на стабильность в желудке твердых лекарственных форм, покрытых кишечнорастворимой оболочкой.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.
Средства и методы измерений
В качестве объектов исследования используют оригинальные (Препарат Рабепразола натрия; ПР) и воспроизведенные ЛС (ВЛС1, ВЛС2, ВЛС3): таблетки, содержащие 20 мг рабепразола натрия, покрытые кишечнорастворимой оболочкой.
Кинетику растворения изучаемых препаратов проводят на приборе ERWEKA DT 600, Германия (аппарат «Лопастная мешалка»), со скоростью 100 об/мин и температурой нагрева бани 37±0,5°C.
1
2
Эквивалентность профилей высвобождения оценивают с помощью факторов различия и сходимости f и f [5].
2
t
t
2
Фактор сходимости f представляет собой логарифмическое преобразование значения суммы квадратов ошибок, рассчитанных по разности между испытуемым (T) и референтным (R) препаратом во всех временных точках отбора. При полном сходстве кривых растворения f принимает значение 100.
1
1
Для подтверждения сходства профилей растворения используют фактор различия f. Фактор различия f отражает процент ошибки между двумя кривыми по всем точкам времени. Он равняется нулю, если профили сравниваемых препаратов идентичны. По мере увеличения различий между двумя профилями растворения значение фактора различия возрастает.
1
2
Профили растворения принято считать подобными, если значение f находится в пределах диапазона от 0 до 15, а значение f - в диапазоне от 50 до 100.
Для каждой временной точки производят расчет стандартных отклонений (RSD, %). Результаты исследования считаются достоверными, если соответствуют действующим нормативным требованиям. Величина относительного стандартного отклонения (RSD, %) не должна превышать 10% для всех временных точек за исключением первой.
Для получения статистически достоверных результатов исследование проводят на 12 таблетках для каждого препарата.
Количественное определение рабепразола натрия проводят на жидкостном хроматографе Shimadzu LC-6A, Япония, со спектрофотометрическим детектором SPD-6A.
Условия хроматографирования:
Подвижная фаза - смесь ацетонитрила с фосфатным буфером с pH=6,8 в соотношении 40:60 v/v. Элюирование осуществлялось в изократическом режиме.
Колонка - ODS Hypersil 125×4,6 мм, 5 мкм
Скорость потока - 0,9 мл/мин
Температура колонки - 22±0,2°C
Длина волны - 280 нм
Объем вводимой пробы - 20 мкл
Общее время анализа - 6 мин
Время удерживания пика рабепразола натрия - 2,9±0,1 мин
p
Пример 1. Определение дополнительной временной точки (T) отбора проб на Этапе I
Рабепразол натрия определяется в крови у здоровых добровольцев через 90 минут, после однократного приема препарата ПР в дозе 20 мг [6].
p
к
T=(Т×0,121)+t=(90×0,121)+1=11,89 мин ≈ 12 мин.
Пример 2. Количественное определение рабепразола натрия в аналитах
Для количественного определения рабепразола натрия использовали исходный маточный раствор с концентрацией 0,2 мг/мл в метаноле. Из исходного раствора готовили растворы с концентрациями 0,02, 0,01 и 0,005 мг/мл. Для стабилизации полученных стандартных растворов добавляли 0,25М раствор NaOH (из расчета 400 мкл на 2 мл раствора).
В диапазоне концентраций от 0,005 до 0,1 мг/мл наблюдалась линейная зависимость концентрации от площади пиков (фиг. 1). Методика количественного определения рабепразола натрия была валидирована. Правильность и прецизионность методики соответствовала критериям приемлемости.
Пример 3. Определение устойчивости референсного препарата ПР и воспроизведенного лекарственного средства ВЛС1 к патологическому ДГР и к воздействию среды желудка при медикаментозной кислотосупрессии
Усредненные значения количества рабепразола натрия (%), высвободившегося в раствор из изучаемых лекарственных средств, приведены в таблице 1.
Высвобождение рабепразола натрия в среде растворения с pH=7,0±0,05 из препарата ВЛС1 начинается с 12-ой минуты, а из препарата сравнения ПР - с 20-ой минуты. Согласно данным по фармакокинетике рабепразола натрия и сведениям по доле времени, в течение которого при патологическом рефлюксе внутрижелудочный pH превышает значение 7,0, это означает, что рабепразол натрия будет выходить из лекарственной формы ВЛС1 под влиянием патологического дуоденогастрального рефлюкса уже в желудке. К 45 минутам в раствор переходит из препарата ПР 79,2% рабепразола натрия, из препарата ВЛС1 - 72,3%.
2
1
Усредненные профили растворения ПР и ВЛС1 в среде растворения pH=7,0±0,05 представлены на фиг. 2. Изучение кинетики высвобождения рабепразола натрия из исследуемых лекарственных средств в среде растворения pH=7,0±0,05 показало, что имеются различия в динамике высвобождения рабепразола натрия из препарата ВЛС1, по сравнению с ПР. Фактор сходимости составил f=48,9, а фактор различия - f=19,9.
Высвобождения рабепразола натрия из препарата сравнения и воспроизведенного лекарственного средства ВЛС1 в среде растворения pH=4,0±0,05 не происходит (таблица 2).
Таким образом, препарат ВЛС1 неустойчив к действию высокоамплитудных колебаний внутрижелудочного pH, связанных с патологическим ДГР, но устойчив к условиям фармакологической супрессии внутрижелудочной кислотопродукции. Препарат ПР устойчив к воздействию патологического ДГР и фармакологической супрессии кислотопродукции.
Пример 4. Определение устойчивости референсного препарата ПР и воспроизведенного лекарственного средства ВЛС2 к патологическому ДГР и к воздействию среды желудка при медикаментозной кислотосупрессии
Усредненные значения количества рабепразола натрия (%), высвободившегося в раствор из изучаемых лекарственных средств (таблетки 20 мг), приведены в таблице 1. Высвобождение рабепразола натрия в среде растворения с pH=7,0±0,05 из препаратов ВЛС2 и ПР начинается с 20-ой минуты. К 45 минутам в раствор переходит из препарата сравнения ПР 79,2% рабепразола натрия, а из препарата сравнения ВЛС2 - 82,4%.
2
Изучение кинетики высвобождения рабепразола натрия из исследуемых лекарственных средств в среде растворения pH 7,0±0,05 показало, что имеются различия в динамике высвобождения рабепразола натрия из препарата ВЛС2, по сравнению с ПР. Фактор сходимости составил f=52,2, а фактор различия - 26,2.
В среде растворения с pH 4,0±0,05 высвобождение рабепразола натрия происходит только из таблеток ВЛС2 (таблица 2, фиг. 5.), из препарата ПР высвобождения изучаемого вещества не происходит. Высвобождение рабепразола натрия из препарата ВЛС2 начинается с 12-й минуты и составляет в среднем 10,0%. Через час в раствор переходит 97,5% изучаемого вещества.
Высвобождение рабепразола натрия из таблеток ВЛС2 в среде растворения с pH=4,0±0,05 свидетельствует о неустойчивости его кишечнорастворимой оболочки в среде желудка с pH=4,0, соответствующим среднесуточным значениям pH при адекватной курсовой кислотосупрессии.
Действующее вещество не должно выходить в раствор с pH=4,0±0,05 из ЛС, защищенного от действия соляной кислоты желудка. Если действующее вещество выходит в раствор, это свидетельствует о нестабильности такого ЛС в среде желудка при медикаментозной супрессии кислотопродукции.
Пример 5. Определение устойчивости референсного препарата ПР и воспроизведенного лекарственного средства ВЛС3 к патологическому ДГР и к воздействию среды желудка при медикаментозной кислотосупрессии
2
1
Изучение кинетики высвобождения рабепразола натрия из исследуемых лекарственных средств в среде растворения pH 7,0±0,05 показало, что профили кинетики растворения из препарата ВЛС3, по сравнению с ПР (фиг. 4), сходны. Фактор сходимости составил f=65,6, а фактор различия - f=0,44. Высвобождение рабепразола натрия в среде растворения с pH=7,0±0,05 из препаратов ВЛС3 и ПР начинается с 20-ой минуты.
Высвобождения рабепразола натрия из препарата сравнения и воспроизведенного лекарственного средства ВЛС3 в среде растворения pH=4,0±0,05 не происходит.
Приведенные данные свидетельствуют об устойчивости лекарственной формы ВЛС3 к воздействию патологического ДГР и среды желудка при устойчивой фармакологической кислотосупрессии.
Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВЛС1 - воспроизведенное лекарственное средство №1
ВЛС2 - воспроизведенное лекарственное средство №2
ВЛС3 - воспроизведенное лекарственное средство №3
ВЛС4 - воспроизведенное лекарственное средство №4
ВК - аппарат «Вращающаяся корзинка»
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ДГР - дуоденогастральный рефлюкс
ЛМ - аппарат «Лопастная мешалка»
ЛП - лекарственный препарат
ЛС - лекарственное средство
ЛФ - лекарственная форма
ПР - препарат рабепразола натрия (оригинальный)
р
Т - расчетная временная точка - время воздействия патологического рефлюкса на твердую дозированную лекарственную форму, покрытую кишечнорастворимой оболочкой
к
Т - время появления лекарственного средства в крови для референсного препарата, согласно справочным данным
СТКР - сравнительный тест кинетики растворения
1
f - фактор различия
2
f - фактор сходимости
pH - водородный показатель
ЛИТЕРАТУРА
1. Руководство по экспертизе лекарственных средств / Под ред. проф. А.Н.Миронова. Том 2. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 177.
2. ОФС 42-0135-09//XII государственная Фармакопея Российской Федерации, часть 2.
3. Fuchs К.Н., DeMeester T.R., Hinder R.A. et al. Computerized Identification of Pathologic Duodenogastric Reflux Using 24-hour Gastric pH Monitoring. Ann.Surg. - 1991. - Vol. 213. - N1. - P. 13-20.
4. Bell NJ, Burget D, Howden CW, et al. Appropriate acid suppression for the management of gastro-oesophageal reflux disease. Digestion - 1992 - Vol. 51. - P. 59-67.
5. Moore J.W. and Flanner H.H. Mathematical Comparison of Dissolution profiles // Pharm Technol - 1996. - Vol. 20. - No. 6. - P. 64-74.
6. Сереброва С.Ю. Сравнительная клиническая фармакология современных ингибиторов протонной помпы: автореф. дис.… докт. мед. наук. - М., 2009.