Экспериментальное изучение регенераторной активности костной ткани в условиях алкогольной интоксикации и возможности ее коррекции

более 50 КОЕ, а в 2 из 18 случаях (11,1%) - обильный рост -сплошной рост несосчитываемых колоний. После отбора характерных однотипных колоний готовились препараты в виде мазков, окрашенных по Граму для микроскопического исследования с помощью обычного светового микроскопа.

Микроскопия приготовленных препаратов осуществлялась для проверки чистоты культуры с изучением морфологии клеток. Результатом исследования явилось определение круглых или овально-вытянутой формы почкующихся клеток. Последующий пересев культуры из колоний на мясо-пептонный бульон (МПБ) с 2% глюкозой позволил выявить псевдомицелий и хламидоспоры. В приготовленных микроскопических препаратах были обнаружены нити из удлиненных клеток располагающихся друг за другом не имеющих общей оболочки и перегородок, которые являлись псевдомицелием. На концах этих нитей располагались хламидоспоры, имеющие округлую форму, большую величину и резко контурированную оболочку. Наличие хламидоспор являлось типичным признаком гриба Candida albicans.

Биохимические свойства разных видов грибов рода Candida не одинаковы, что использовалось для их дифференциации наряду с морфологическими и культуральными признаками.

Для оценки биохимических свойств грибов использовали их способность ферментировать и ассимилировать углеводы. В последнее время при идентификации грибов вида Candida в основном используют 5 углеводов: глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу и лактозу. Установлено, что глюкоза, фруктоза, мальтоза стимулирует рост Candida, а лактоза, сахароза, ксилоза - не вступают в реакцию.

Результаты биохимического исследования показали, что в пробирках с глюкозой и мальтозой отмечается активизация роста гриба Candida, а с сахарозой и лактозой отсутствует. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что у 16 из 47 больных (34%) бактериологически обследованных, в представленных для изучения материалах дентина коневых каналов выделенные микроорганизмы являются дрожжеподобными грибами Candida albicans.

Результаты исследований позволяют сделать вывод, что микроскопическая и микологическая оценка дентина корневых каналов зубов при хронических периодонтитах выявила в 16% случаев элементы грибов рода Candida которые в составе микробных ассоциаций оказывают синергидное влияние на течение патологического процесса в периодонте. Бактериологическое исследование патологического материала позволило определить вид гриба Candida albicans и определить формы его псевдомицелия.

Таким образом, бактериоскопическое и бактериологическое исследование дентина корневых каналов зубов является эффективным методом диагностики для выявления грибов рода Candida в составе микробных ассоциаций в дентине корневых каналов зубов при хроническом гранулирующем периодонтите, и прогнозирует поиск методов соответствующей терапии.

Литература

1. Бажанов, Н.Н. Состояние и перспективы профилактики и лечения гнойных воспалительных заболеваний челюстнолицевой области / Н.Н. Бажанов, В.А. Козлов, Т.Г. Максимовский, Т. Г. Робустова // Материалы 3 съезда стоматологической ассоциации (общероссийской).- М., 1996.- С. 3-8.

2. Боровский, Е.В. Состояние эндодонтии в цифрах и фактах /Е.В. Боровский // Клиническая стоматология.- 2003.- №1.-С. 38^0.

3. Даурова, Ф. Ю. Роль биомеханического процесса формирования и очистки корневого канала в профилактике хронических форм верхушечного периодонтита / Ф. Ю. Даурова, И.В. Багдасарова, З.С. Хабадзе// Стоматология детского возраста и профилактика.- 2007.- № 2.- С. 13-18.

4. Кунин, А.А. Роль микрофлоры инфицированного дентина при кариесе и его осложнениях в развитии и распространении острой одонтогенной и перекрестной инфекции / А.А. Кунин, Б.Р. Шумилович, О.А. Азарова //Материалы 3 съезда стоматологической ассоциации (общероссийской).- М., 1996.- С.62-63.

5. Кунин, А.А. Качественный состав микрофлоры корневых каналов на этапах лечения хронического периодонтита / А.А. Кунин, А.Н. Степанов// Технологии третьего тысячеле-тия:Сб.науч.тр. - Воронеж, 2003.- С.38-39.

6. Шулимович, Б.Г. Клинико-микробиологические изменения дентина кариозных полостей на этапах лечения кариеса и некоторых его осложнений: Автореф. дис... канд. мед. наук / Б.Г. Шумилович.- Воронеж, 1996.- 22 с.

LABORATORY DIAGNOSIS OF CHRONIC GRANULATING PERIODONTITIS COMPLICATED WITH MYCOTIC COMPONENT.

A.V.SHISHKIN Voronezh State Medical Academy after N.N.Burdenko.

The article reflects the pathological effects of fungi of the genus Candida in the composition of microbial associations in mixed infections. Also held mycological assessment of dentin walls of root canals with chronic granulating periodontitis.

Key words: periodontitis, fungi of Candida, dentine of root canals.

УДК 616.7-001.5:613.81

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ РЕГЕНЕРАТОРНОЙ АКТИВНОСТИ КОСТНОЙ ТКАНИ В УСЛОВИЯХ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ И ВОЗМОЖНОСТИ ЕЕ КОРРЕКЦИИ * * **

В.А. КОКОЕВ , Г.В. ТОБОЕВ , А.А. ЕПХИЕВ

На модели алкогольной интоксикации в условиях ингибирования альдегиддегидрогиназы тетурамом изучена регенерация костной ткани у белых крыс линии «Вистар». Показано угнетение регенераторной акивности у алкоголизированных животных, в сравнении с активным и пассивным контролем. Также выявлено корригирующее влияние препарата «Ацизол» на репаративную регенерацию кости. Ключевые слова: регенерация костной ткани, алкогольная интоксикация, ацизол.

Среди многочисленных проблем, встречающихся у больных с травматическими повреждениями костей лицевого скелета, особое место занимают вопросы, связанные с регенерацией костной ткани, в особенности у лиц злоупотребляющих алкоголем.

Как известно, одним из метаболических эффектов этанола является повышение перекисного окисления липидов на фоне подавления антиоксидантной системы клетки. При этом, необходимо учесть, что повреждение костей влечет за собой нарушение микроциркуляции и развитие ишемии костной ткани, что создает неблагоприятные условия для репаративной регенерации костной ткани. Таким образом, при травматическом переломе челюстных костей у лиц с пагубным злоупотреблением алкоголем мы имеем сочетание двух неблагоприятных для формирования костной мозоли факторов и последующей ее перестройкой процессов, что сказывается на сроках сращения. Согласно литературным данным, этанол нарушает регенераторную активность костной ткани в эксперименте [1,2,3].

Ввиду большого числа таких пациентов и их госпитализации эта проблема является на наш взгляд актуальной, требующей комплексного, в том числе экспериментального изучения. Как известно, при каждом повторном введении этанола нарушения метаболизма усугубляются, то наиболее достоверным в плане экстраполяции является эксперимент с состоянием звеньев алко-гольметаболизирующих систем, характерным для хронической алкогольной интоксикации у человека. В качестве же препарата, потенциально способного корригировать нарушения в системе энергообмена в условиях снижения микроциркуляции и тканевой гипоксии привлекает внимание ацизол, улучшающий доставку кислорода и снижающий потребность организма в кислороде.

Материалы и методы исследования. Экспериментальное исследование проведено на 150 белых крысах линии «Wistar» массой 180-200 гр. В эксперимент отбирались животные стандартизированные по времени бокового положения при алкогольном наркозе, которое служит показателем активности алкогольмета-болизирующих ферментных систем. Время бокового положения у всех отобранных животных было более двух часов, что свидетельствовало о большей восприимчивости их к алкогольной интоксикации. Для воспроизведения алкогольной интоксикации опытной группе животных в течении всего срока эксперимента

Северо-Осетинская государственная медицинская академия,

362019, г. Владикавказ, ул.Пушкинская, 40.

НИИ морфологии человека РАМН, 117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д. 3

ежедневно внутрижелудочно вводился 48% раствор этилового спирта в дозе 4,2 мг/кг и один раз в четыре дня суспензия тетура-ма 48% спирте в дозе 25 мг/кг веса. Особенность данной методики, разработанной для воспроизведения алкогольной кардиомио-патии, позволяет в короткие сроки воспроизвести характерные для хронической алкогольной интоксикации повреждения.

Контрольной группе животных внутрижелудочно суспензия тетурама на водопроводной воде в той же дозировке в аналогичные по длительности сроки, что и опытным животным (активный контроль). Также имелась группа из 30 животных которым не осуществлялось введение никаких растворов и суспензий. 30 животным после формирования костного дефекта на фоне введения этанола с тетурамом вводился внутримышечно ацизол в дозе 3,4 мг/кг. веса в течение всего срока эксперимента.

Животным опытных и контрольных групп под эфирным наркозом на бедренной кости ссекался участок длинной 5 мм глубиной до половины диаметра кости. Края разреза мягких тканей сопоставляли с угловыми швами. Поскольку инфекционновоспалительный процесс чаще встречался при переломах нижнечелюстных костей в клинике. Для изучения регенераторного процесса в костной ткани в динамике животные выводились из эксперимента на 3, 6, 20 и 45 сутки. Участок костного дефекта вырезался, подвергался декальцинации с последующей заливкой в парафин и приготовлением срезов толщиной 3 мкм. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону.

Результаты и их обсуждение. Сравнительный анализ репа-ративных процессов в области сформированного дефекта бедренной кости у подопытных животных показывает, что при алкогольной интоксикации формирование костной заместительной ткани во всех случаях микро- и макроскопически протекало медленнее, чем у животных группы активного и пассивного контроля.

Так, макроскопически, у животных контрольной группы на 3 сутки участок дефекта был прикрыт грануляциями, гематома полностью регрессировала и не определялась не вооруженным глазом. Грануляции у группы с алкогольной интоксикацией были выражены на много слабее, у некоторых животных визуально определялись мелкие участки сохранившейся гематомы. Область дефекта кости у животных получавших тетурам не имела отличий от животных пассивного контроля. Через 6 суток, животных контрольной группы формировалась выступающая над поверхностью кости плотноватой консистенции мозоль у алкоголизированных животных. Мозоль была мягкоэластической консистенции в отличии от сероватого цвета. В контроле была красноватой во всех случаях. На 20 сутки после формирования дефекта у контрольных животных и в большинстве случаев у алкоголизированных мозоли имели одинаковых вид, однако на 45 сутки в контроле мозоль была по виду костной и значительно уменьшалась в размере, в большинстве случаев слабо выступая над поверхностью кости.

Гистологическая картина регенерирующей ткани также позволяет судить об отставании в репарации дефекта у опытной группы животных. В препаратах, полученных из участка повреждения контрольной группы на 3 сутки отмечалось преобладание воспалительных элементов гранулирующей ткани над клеточными, по периферии с единичными группами с хондро- и остеобластов. У алкоголизированных животных в эти сроки присутствовало большое количество макрофагов, имелись фрагменты некротизирован-ной кости. При окраске по Ван-Гизону определялись отдельные пучки тонких коллагеновых волокон без четкой ориентации.

На 6 сутки у животных контрольной группы в формирующейся мозоли преобладали хондробласты среди большого количества волокнистой ткани, группы остеобластов. В опытной группе регенерирующая ткань была представлена в основном волокнами и сосудистым компонентом, количество клеток пролиферирующей костной ткани было меньшим по сравнению с контролем. В препаратах, полученных у животных, выведенных из эксперимента спустя 20 дней после травматического воздействия, выявлялись признаки более слабой регенераторной активности, которые плохо определялись макроскопически. У контрольной группы в полностью сформированной хрящевой мозоли в большом объеме отмечались участки формирующейся костной ткани с трабекулами, количество которых у животных подвергающихся алкоголизации было значительно меньше. Через 45 дней после начала эксперимента у животных контрольной группы наблюдалось воспаление архитектоники кости, имевшей хорошо развитые трабекулы и сформированные гаверсовы каналы у большей части животных. В опытной группе большая часть

препаратов содержала костную ткань различного направления и различной толщины костными трабекулами, находящихся на разных фазах резорбции.

Таким образом, по данным большие отличия в темпах формирования тканевых структур свойственных репаративному остеогенезу приходятся на разные сроки заживления. Группа животных, которым параллельно с алкоголизацией вводился ацизол по макроскопическим признакам у большинства животных, выведенных из эксперимента через 3 дня, была ближе к контрольной группе. Дефекты были свободны от некротизированных тканей и активно гранулировали. Однако гистологически имели место небольшие участки некроза и обильная воспалительная инфильтрация.

На 6 сутки сформировавшаяся мозоль у животных данной группы была мягкоэластичной, как у алкоголизированных животных, однако гистологически выявлялось большое количество сосудов, хондро- и остеобластов. При окраски по Ван-Гизону обращало на себя внимание большое количество толстых, неравномерно расположенных коллагеновых волокон. Через 20 дней в препаратах определялась хрящевая мозоль с меньшим, чем в контроле количеством клеточных элементов, но значительным объемом волокнистого компонента и множественными кровеносными сосудами. Имелись островки формирования костной ткани по количеству и размерам не превышающие данный показатель у группы алкоголизированных животных. Однако при изучении костной ткани животных, получавших ацизол в течении 45 дней отмечались в подавляющем числе случаев сформированные костные трабекулы с признаками восстановления архитектоники кости.

Таким образом, при применении ацизол, улучшающего процессы транспорта кислорода к тканям отмечался некоторый корригирующий эффект, основным проявлением которого была усиленная васкуляризация и фибриногенез, а также ускоренная перестройка косной мозоли, возможно за счет активации остео-кластической резорбции.

Выводы:

1. Алкогольная интоксикации в условиях ингибирования альдегиддегидрогеназы снижает регенеративную активность костной ткани.

2. Наиболее вероятным механизмом замедления темпов репа-ративной регенерации кости при воздействии этанола является нарушение пролиферации комбиальных элементов остеогенной ткани.

3. Препараты, улучшающие доставку кислорода к тканям оказывают корригирующее влияние на алкогольиндуцированое нарушение репаративного остеогенеза в эксперименте.

Литература

1. Adult-onset alcohol consumption induces osteopenia in female rats / H.A. Hogan [et al.] // Alcohol. Clin. Exp. Res.- 2001.-Vol.25.- №5.- P.746-754

2. Chronic ethanol consumption results in deficient bone repair in rats / D.A. Chakkalakal [et al]// Alcohol and Alcoholism.- 2002.-Vol.37.- №1.- P.13-20

3. Fracture healing and bone mass in rats fed on liquid diet containing ethanol / N. Elmali [et al]// Alcohol. Clin. Exp. Res.- 2002.-Vol.26.- №4.- P. 509-513

THE EXPERIMENTAL STUDY OF THE REGENERATIVE ACTIVITIY OF THE BONE TISSUE ON THE CONDITION OF ALCOGOLIC INTOXICATION AND THE CORRECTIVE POSSIBILITY OF THIS TISSUE

A.A. YEPHIEV, G.V. TOBOEV, V.A. KOKOEV

North Osetian state medical academy Institute of Human Morphology of RAMS

The regenerative ability of the bone tissue of white rats of the «Wistar» line has been studied in accordance with the model of alcoholic intoxication on the condition of inhibition with aldehydedehy-droginaz teturam. It has been found that animals intoxicated with alcohol had reduced regenerative activity on comparison to active and passive control group. It has also been revealed that there is the corrective effect of the «Acizolum» preparation at the reparation of regenerative ability bone.

Key words: regenerative activity of bone tissue, alcoholics intoxication, Acizolum.