КОМБИНАЦИЯ ИНГИБИТОРА MCL-1 И СТАНДАРТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ, ЕЁ ПРИМЕНЕНИЕ И СОДЕРЖАЩИЕ ЕЁ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ
COMBINATION OF AN MCL-1 INHIBITOR AND A STANDARD DRUG FOR THE TREATMENT OF HEMATOLOGICAL MALIGNANCIES, ITS USE AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING IT

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к комбинация ингибитора Mcl-1 со вторым противораковым агентом, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов (таких как идарубицин, даунорубицин), цитарабина (также известный как цитозин арабинозид или ara-С) и гипометилирующих агентов (таких как децитабин, азацитидин). Настоящее изобретение относится к комбинации ингибитора Mcl-1 со вторым противораковым агентом, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, даунорубицина, митоксантрона, цитарабина, децитабина, азацитидина и гвадецитабина, более предпочтительно идарубицина, даунорубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина. Также изобретение относится к применению указанной комбинации для лечения злокачественного новообразования, в частности гематологического злокачественного новообразования, и более предпочтительно острой миелоидной лейкемии (AML), миелодиспластических синдромов, острой лимфоцитарной лейкемии (ALL) и лимфомы. Также обеспечиваются фармацевтические препараты, подходящие для введения таких комбинаций.
Наличие множества приобретенных мутаций в нескольких клонах в каждом случае AML делает концепцию успешного избирательного нацеливания особенно сложной. Данное изобретение предлагает концепцию, согласно которой злокачественные новообразования с разнообразными и многоклональными молекулярными композициями можно успешно лечить комбинацией ингибитора Mcl-1 и цитотоксического препарата, способного эффективно активировать клеточный апоптоз разнородным образом, что приводит к общей гибели раковых клеток, кроме того, что достигается при использовании ингибитора Mcl-1 или стандартной медицинской химиотерапии (SOC) раздельно. Этот подход может привести к повышению частоты ремиссии и увеличению клиренса минимального остаточного заболевания в условиях индукционной химиотерапии, и это может привести к снижению частоты рецидивов заболевания и, как пример, к более высоким показателям общего излечения при AML. AML предлагается в качестве модельного примера благодаря способности количественно измерять изменения клональной композиции поочередно с лечением с использованием цифровых PCR и RT-qPCR.
Ингибиторы Mcl-1 в сочетании с низкодозовой химиотерапией SOC могут повысить направленность лейкозных стволовых клеток и клеток-предшественников за счет снижения апоптотического порога. Этот подход может быть использован в условиях пост-ремиссии в качестве поддерживающей терапии для устранения остаточных стволовых клеток AML и клонов предлейкозных стволовых клеток, состоящих из различных молекулярных и цитогенетических аномалий. Принцип демонстрации эрадикации лейкозных и предлейкозных предшественников будет продемонстрирован путем снижения уровней клональных минимальных остаточных заболеваний или предлейкозных клонов, измеренных в дифференцированных мононуклеарных клетках в пост-ремиссионных условиях после воздействия ингибитора Mcl-1 в комбинации с SOC химиотерапией.
Предпосылки создания изобретения
Апоптоз представляет собой строго регулируемый путь гибели клеток, который инициируется различными цитотоксическим стимулами, включая онкогенный стресс и химиотерапевтические средства. Было показано, что уклонение от апоптоза является отличительным признаком злокачественного новообразования и что эффективность многих химиотерапевтических средств зависит от активации внутреннего митохондриального пути. Три разные подгруппы белков Bcl-2 семейства контролируют внутренний апоптотический путь: (I) проапоптотические ВН3 (Bcl-2 гомология 3)-только белки; (II) способствующие выживанию представители, такие как сам Bcl-2, Bcl-x1, Bcl-w, Mcl-1 и Bcl-2al; и (III) проапоптотические эффекторные белки ВАХ и BAK (Czabotar и др., Nature Reviews Molecular cell biology 2014, 15, 49-63). Сверхэкспрессия анти-апоптотических представителей Bcl-2 семейства наблюдается при многих злокачественных новообразованиях, в особенности при злокачественных заболеваниях системы крови, таких как лимфома из клеток зоны мантии (MCL), фолликулярная лимфома/диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (FL/DLCL) и множественная миелома (Adams и Cory, Oncogene 2007, 26, 1324-1337). Фармакологическое ингибирование анти-апоптотических белков Bcl-2, Bcl-x1, Bcl-w и Mcl-1 с помощью разработанных недавно ВН3-миметических лекарственных средств, таких как АВТ-199 (вкнктоклакс), АВТ-263 (навитоклакс) и S63845, является терапевтической стратегией для индуцирования апоптоза и вызывает регрессию опухоли при злокачественном новообразовании (Zhang et al., Drug Resist. Updat. 2007, 10, 207-217; Kotschy et al., Nature 2016, 538, 477-482). Тем не менее, проводятся наблюдения относительно механизмов резистентности к ВН3 миметикам (Choudhary et al., Cell Death и Disease 2015, 6, e1593) и применение комбинационной терапии могло бы улучшить эффективность и задержать или даже отменить развитие устойчивости.
Острая миелоидная лейкемия (AML) представляет собой стремительно развивающееся смертельное злокачественное заболевание крови, возникающее при клоновой трансформации гемопоэтических стволовых клеток, что приводит к параличу нормального функционирования костного мозга и смерти вследствие осложнений от абсолютной панцитопении. AML отвечает за 25% всех лейкозов у взрослых, и самый большой коэффициент заболеваемости наблюдается в Соединенных Штатах Америки, Австралии и Европе (WHO. GLOBOCAN 2012. Estimated cancer incidence, mortality and prevalence worldwide in 2012. International Agency for Research on Cancer). Во всем мире, ежегодно диагностируется приблизительно 88 тыс.новых случаев. AML продолжает сохранять наиболее низкий коэффициент выживаемости из всех лейкозов, с предполагаемым 5-ти летним выживанием только 24%.
Современные способы лечения AML включают введение цитарабина отдельно или в комбинации с антрациклином, таким как даунорубицин или идарубицин. Низкие дозы цитарабина для лечения и деметилирующие агенты, такие как азацитидин и децитабин, также рекомендуются в качестве вариантов низкой интенсивности для пациентов, не имеющих права на интенсивную химиотерапию (Dohner et al., DOI 10.1182/blood-2016-08-733196). Несмотря на то, что стандартная терапия AML (цитарабин в комбинации с антрациклинами) была задумана более 4 десятилетий назад, внедрение успешных целевых методов лечения этого заболевания остается нерешенной целью. Концепция целевой терапии при AML была затруднена осознанием того, что это заболевание развивается в виде мультиклональной иерархии с быстрым ростом лейкозных субклонов как основной причины устойчивости к лекарственным средствам и рецидива заболевания (Ding et al., Nature 2012, 481, 506-510). Недавние клинические исследования продемонстрировали эффективность ингибиторов Bcl-2 в лечении AML (Konopleva et al., American Society of Hematology 2014, 118).
Остается необходимость в новом лечении и терапии гематологического злокачественного новообразования, в частности AML, миелодиспластических синдромов, ALL и лимфомы, и более предпочтительно, в лечении AML. Настоящее изобретение обеспечивает новую комбинацию ингибитора Mcl-1 и второго противоракового агента, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов, более предпочтительно идарубицина, даунорубицина, митоксантрона, цитарабина, децитабина, азацитидина и гвадецитабина, и более предпочтительно идарубицина, даунорубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина. Результаты показывают, что ингибитор Mcl-1 в комбинации со вторым противораковым агентом, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, цитарабина и децитабина, синергетически взаимодействует с клеточными линиями AML (Фигура 1; Таблицы 3, 4 и 5). Нами также показано, что комбинация ингибитора Mcl-1 со вторым противораковым агентом, где второй противораковый агент выбран из идарубицина или децитабина, проявляет синергетическую проапоптотическую активность в первичных образцах AML человека (Фигуры 2 и 6; Таблица 6). Нами также показано, что подмножество первичных образцов AML было чувствительным к комбинации ингибитора Мс1-1 с цитарабином, тогда как нормальные человеческие клетки-предшественники CD34 + были устойчивы к той же дозе (Фигура 3). Нами также показано, что ингибитор Mcl-1 в сочетании с децитабином хорошо переносился без потери веса в течение лечения и, тем не менее, приводит к усилению активности против AML у человека на модели ксенотрансплантата, полученной от пациента in vivo (Фигуры 4, 5 и 6). В завершение, нами показано, что комбинация ингибитора Mcl-1 с цитарабином может быть полезна для лечения пациентов с ALL (Таблица 7).
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к комбинации, которая содержит: (а) ингибитор Mcl-1 формулы (I):
где:
D представляет собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
Е представляет собой фурильное, тиенильное или пирролильное кольцо,
1
3
4
5
X, Х, Х и Х независимо друг от друга представляют собой атом углерода или атом азота,
2
26
Х представляет собой C-R группу или атом азота,
означает, что кольцо является ароматическим,
3
Y представляет собой атом азота или C-R группу,
4
Z представляет собой атом азота или C-R группу,
1
1
6
2
6
1
6
6
1
6
1
6
8
0
6
11
11
1
6
11
11
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
R представляет собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С1-Сб)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, гидрокси(С1-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -Cy, -алкил(С-С)-NRR', -O-алкил(С-С)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -С(О)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(С-С)-NR-C(O)-OR', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
2
3
4
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
11
11
1
0
6
1
R, R, R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(C-C)-NRR', -O-Cy, -алкил(С-С)-Су,
2
6
1
2
6
1
1
6
11
11
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
-алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(C-C)-NRR', -О-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', - алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
1
2
2
3
3
4
4
5
1
6
0
6
11
11
13
13
0
6
1
или заместители пары (R, R), (R, R), (R, R), (R, R) образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено 1-2 группами, выбранными из галогена, линейного или разветвленного (С-С)алкила, -алкил(C-C)-NRR', -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
6
7
1
6
2
6
2
6
6
1
6
1
6
0
6
11
11
1
6
11
11
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
l1
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
6
7
1
6
13
13
0
6
1
R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С1-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, - алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(C-C)-NRR', -O-Cy, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С), или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
2
W представляет собой -СН- группу, -NH- группу или атом кислорода,
8
1
8
a
b
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, -CHRR группу, ар ильную группу, гетероар ильную группу, арилалкил(С-С)-группу, или гетероарилалкил(С-С)-группу,
9
1
6
2
6
2
6
2
1
6
2
2
6
2
2
6
2
2
3
2
6
2
2
0
6
0
6
3
14
14
14
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, -Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -Су-Су, -алкинил(С-С)-O-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, атом галогена, циано группу, -C(O)-R, или -C(O)-NRR',
10
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
4
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, арилалкил(С-С)-группу, циклоалкилалкил(С-С)-группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, или -алкил(С-С)-O-Су,
9
10
или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
11
11
1
6
0
6
1
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, необязательно замещенный линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или -алкил(С-С)-Су,
11
11
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен 1-2 группами, которые представляют собой атом водорода, или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода вышеуказанных возможных заместителей могут быть дейтерированы,
12
3
5
0
6
0
6
6
5
0
6
6
5
0
6
11
0
6
6
5
6
0
6
7
5
0
6
0
6
9
5
0
6
9
11
R представляет собой -Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-NR-алкил(С-С)-Су, -Cy-Cy-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-Су, -NH-C(O)-NH-R,
5
0
6
11
0
6
9
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
2
11
11
-Су-алкил(С-С)-NR-алкил(С-С)-Су, -C(O)-NRR', -NRR', -OR, -NR-C(O)-R', -O-алкил(С-С)-OR, -SO-R, -C(O)-OR,
при возможности, что аммоний, который определен таким образом, существует в виде цвиттерионной формы или имеет одновалентный анионный противоион,
13
13
14
14
1
6
R, R', R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
a
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкнльную группу,
b
c
c
c
c
2
R представляет собой -O-C(O)-O-R группу, -O-C(O)-NRR' группу, или -O-Р(O)(OR) группу,
c
c
1
8
1
6
1
6
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, циклоалкильную группу, (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, или (C-С) алкоксикарбонил(С-С) алкильную группу,
c
c
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен группой, которая представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
1
2
3
4
5
6
7
8
10
Су, Су, Су, С, Су, Су, Су, Су и Су независимо друг от друга, представляют собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
9
Су представляет собой
9
20
2
2
2
p
18
19
q
20
1
6
2
r
2
s
2
q
21
21
-
-
или Су представляет собой гетероарильную группу, которая замещена группой, выбранной из -O-Р(O)(OR); -O-Р(O)(OМ); -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R; гидрокси; гидрокси(С-С)алкила; -(CH)-U-(CH)-гетероциклоалкила; или -U-(CH)-NRR',
15
2
p
18
19
q
20
1
6
1
6
2
q
21
21
2
r
2
s
R представляет собой атом водорода; -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу; линейную или разветвленную (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу; -U-(CH)-NRR' группу; или -(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу,
16
1
6
2
r
2
s
2
r
20
2
2
2
р
18
19
q
20
-
+
R представляет собой атом водорода; гидрокси группу; гидрокси(С-С)алкильную группу; -(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу; (CH)-U-V-O-P(O)(OR) группу, -O-Р(O)(OМ) группу, -(СН)-O-(CHR-CHR-O)-R группу;
2
22
23
2
q
2
2
-(CH)p-O-C(O)-NRR группу; или -U-(CH)-NRiRr группу,
17
2
p
18
19
q
20
20
2
2
1
6
2
r
2
s
2
q
21
21
-
-
R представляет собой атом водорода; -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу; -O-P(O)(OR) группу; -O-Р(O)(OМ) группу; гидрокси группу; гидрокси (С-С)алкильную группу; -(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу; -U-(CH)-NRR' группу; или альдоновую кислоту,
М представляет собой фармацевтически приемлемый одновалентный катион,
U представляет собой связь или атом кислорода,
2
6
V представляет собой -(CH)- группу или -С(О)- группу,
18
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода или (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу,
19
1
6
R представляет собой атом водорода или гидрокси(С-С)алкильную группу,
20
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
21
21
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
21
21
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
22
1
6
1
6
2
p
24
24
2
p
18
19
q
20
R представляет собой (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, -(CH)-NRR' группу, или -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу,
23
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода или (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу,
22
23
1
6
или заместители пары (R, R) образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-18 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-5 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу или гетероциклоалкильную группу,
24
24
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
24
24
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
25
1
6
R представляет собой атом водорода, гидрокси группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
26
1
6
R представляет собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или циано группу,
27
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
28
30
-
-
-
R представляет собой -O-Р(O)(O)(O) группу, -O-P(O)(O)(OR) группу,
30
30
2
2
30
10
29
29
29
29
-
-O-P(O)(OR)(OR') группу, -O-SO-O группу, -O-SO-OR группу, -Су, -O-C(O)-R группу, -O-C(O)-OR группу или -O-C(O)-NRR' группу;
29
29
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу или линейную или разветвленную амино(С-С)алкильную группу,
30
30
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С1-Сб)алкильную группу или арилалкил(С-С)-группу,
n является целым числом, равным 0 или 1,
p является целым числом, равным 0, 1 или 2,
q является целым числом, равным 1, 2, 3 или 4,
r и s являются независимо целым числом, равным 0 или 1, причем следует понимать, что:
- "арил" означает фенильную, нафтильную, бифенильную, инданильную или инденильную группу,
- "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, которая состоит из 5 - 10 кольцевых членов, которая содержит по меньшей мере один ароматический фрагмент и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
- "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов,
- "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов, и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и может включать конденсированные, мостиковые или спирокольцевые системы,
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
причем арильная, гетероарильная, циклоалкильная и гетероциклоалкильная группы, которые определены таким образом, и алкил, алкенил, алкинил, алкокси, могут быть замещены 1-4 группами, выбранными из необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкенильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкинильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкокси группы, необязательно замещенной группы (C-С)алкил-S-, гидрокси, оксо (или N-оксида, где необходимо), нитро, циано, -C(O)-OR', -O-C(O)-R', -C(O)-NR'R'', -NR'R'', -(C=NR')-OR'' линейного или разветвленного
1
6
1
6
(С-С)полигалогеналкила, трифторметокси, или галогена, причем следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода вышеуказанных возможных заместителей, могут быть дейтерированы,
или их энантиомеры, диастереоизомеры, атропоизомеры или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
и (б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
Указанные соединения формулы (I), их синтез, их применение для лечения злокачественного новообразования и их фармацевические составы описаны в WO 2015/097123, WO 2016/207216, WO 2016/207217, WO 2016/207225, WO 2016/207226, и WO 2017/125224, содержание которых включены посредством ссылки.
В соответствии с первым аспектом изобретения, обеспечивается комбинация, которая содержит:
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (II), частный случай ингибитора Mcl-1 формулы (I):
где:
4
Z представляет собой атом азота или C-R группу,
1
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
11
11
8
R представляет собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, циано, -NRR', -Cy или атом галогена,
2
3
4
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
R, R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу,
1
6
0
6
11
11
-S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(С-С)-NRR',
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
-O-Cy, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -О-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR' -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR' или -SO-алкил(С-С),
2
3
3
4
1
6
13
13
0
6
1
или заместители одной из групп (R, R), (R, R) образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, групп -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
6
7
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу,
1
6
0
6
11
11
-S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(С-С)-NRR',
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
-О-Су -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су -O-алкил(С-С)R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO- алкил(С-С),
6
7
1
6
13
13
0
6
1
или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, группы -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
8
1
8
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, ар ильную группу, гетероарильную группу, арилалкил(С-С)-группу, или гетероарилалкил(С-С)-группу,
9
1
6
2
6
2
6
2
1
6
2
2
6
2
2
6
2
2
3
2
6
2
2
0
6
0
6
3
14
14
14
R представляет собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, -Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -Су-Су, -алкинил(С-С)-O-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, атом галогена, циано группу, -C(O)-R, или -C(O)-NRR',
11
11
1
6
0
6
1
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, необязательно замещенную линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, или -алкил(С-С)-Су,
11
11
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен группой, которая представляют собой атом водорода, или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода возможных заместителей могут быть дейтерированы,
12
5
5
0
6
6
5
0
6
0
6
6
5
0
6
11
0
6
6
5
6
0
6
7
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
R представляет собой -Су, -Су-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-О-алкил(С-С)-Су, -Cy-алкил(C-C)-NR-алкил(C-C)-Cy, -Су-Су-O-алкил(С-С)-Су, -C(O)-NRR', -NRR', -OR, -NR-C(O)-R', -O-алкил(C-C)-OR,
2
11
11
11
-SO-R, -C(O)-OR, или -NH-C(O)-NH-R,
13
13
14
14
1
6
R, R', R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
25
1
6
R представляет собой атом водорода, гидрокси группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
1
2
3
5
6
7
8
Су, Су, Су, Су, Су, Су и Су независимо друг от друга, представляют собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
n является целым числом, равным 0 или 1, причем следует понимать, что:
- "арил" означает фенильную, нафтильную, бифенильную, инданильную или инденильную группу,
- "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, которая состоит из 5-10 кольцевых членов, которая имеет по меньшей мере один ароматический фрагмент и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
- "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов,
- "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов, и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и может включать конденсированные, мостиковые или спирокольцевые системы,
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
причем арильная, гетероарильная, циклоалкильная и гетероциклоалкильная группы, которые определены таким образом, и алкил, алкенил, алкинил, алкокси, могут быть замещены 1-4 группами, выбранными из необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкенильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкинильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкокси группы, необязательно замещенной группы (C-С)алкил-S-, гидрокси, оксо (или N-оксида, где необходимо), нитро, циано, -C(O)-OR', -O-C(O)-R', -C(O)-NR'R'', -NR'R'', -(C=NR')-OR'' линейного или разветвленного (С-С)полигалогеналкила, трифторметокси, или галогена, причем следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода вышеуказанных возможных заместителей, могут быть деитерированы,
или их энантиомеры, диастереоизомеры, атропоизомеры или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
и (б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
В первом варианте осуществления, изобретение обеспечивает комбинацию, которая содержит:
a
(а) соединение 1: (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или ее фармацевтически приемлемую кислоту, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
В качестве альтернативы, изобретение обеспечивает комбинацию, которая содержит:
a
(а) соединение 2: (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или ее фармацевтически приемлемую кислоту, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
В особом варианте осуществления, второй противораковый агент представляет собой антрациклин, выбранный из идарубицина, даунорубицина и митоксантрона, более предпочтительно, идарубицина и даунорубицина, еще более предпочтительно, представляет собой идарубицин.
В особом варианте осуществления, второй противораковый агент представляет собой гипометилирующий агент, выбранный из децитабина, азацитидина и гвадецитабина, более предпочтительно, децитабина и азацитидина, еще более предпочтительно, представляет собой децитабин.
В особом варианте осуществления, второй противораковый агент представляет собой идарубицин, даунорубицин, цитарабин, децитабин и азацитидин, более предпочтительно, идарубицин, цитарабин и децитабин.
В другом варианте осуществления, изобретение обеспечивает комбинацию, как описано выше, для применения для лечения злокачественного новообразования, более предпочтительно, лечения гематологического злокачественного новообразования. Лечение AML, миелодиспластических синдромов, острой лимфоцитарной лейкемии и лимфомы является особенно предпочтительным. Более предпочтительным является лечение AML.
В другом варианте осуществления, изобретение обеспечивает применение комбинации, как описано выше, для приготовления лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, более предпочтительно, лечения гематологического злокачественного новообразования, еще более предпочтительно лечения AML, миелодиспластических синдромов, острой лимфоцитарной лейкемии и лимфомы.
В другом варианте осуществления, изобретение обеспечивает лекарственное средство, которое содержит, отдельно или вместе,
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (I) и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
или
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (II), как описано выше, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где ингибитор Mcl-1 и второй противораковый агент обеспечивают в эффективных количествах для лечения злокачественного новообразования.
В другом варианте осуществления, изобретение обеспечивает способ лечения злокачественного новообразования, который включает совместное введение терапевтически эффективного количества:
(а) ингибитора Mcl-1 формулы (I) и
(б) второго противоракового агента, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
или
(а) ингибитора Mcl-1 формулы (II), как описано выше, и
(б) второго противоракового агента, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
субъекту, нуждающемуся в этом.
a
В другом варианте осуществления, ингибитор Mcl-1 представляет собой (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту (Соединение 1).
a
В другом варианте осуществления, ингибитор Mcl-1 представляет собой (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту (Соединение 2).
Краткое описание фигур
На Фигуре 1 проиллюстрированы в качестве примера эффект ингибирования роста клеток и синергичные матрицы комбинации для ингибирования роста клеток (слева) и ингибирования избытка Loewe (справа), обеспечиваемые Соединением 2 (ингибитор Mcl-1) в комбинации с идарубицинои на клеточной линии AML OCI-AML3 в двух независимых экспериментах. Значения в матрице эффекта находятся в диапазоне от 0 (нет ингибирования) до 100 (полное ингибирование). Значения в матрице синергизма представляют собой степень ингибирования роста, превышающую теоретическую аддитивность, рассчитанную на основании активности отдельных средств Соединения 2 и идарубицина в тестируемых концентрациях.
50
На Фигуре 2 проиллюстрировано, что комбинация ингибитора Mcl-1 с идарубицином обладает синергетической активностью при AML. Ряд первичных образцов AML от пациентов с различными цитогенетическими и молекулярными характеристиками инкубировали в течение 48 часов с одним Соединением 2 или идарубицином отдельно или в комбинации и с определенным поражающим эффектом LC. Это показало существенный синергизм этой комбинации в большой пропорции первичных образцов AML.
На Фигуре 3 проиллюстрировано сравнение активности первичных образцов AML относительно здоровых CD34 + донорских клеток для цитарабина, Соединения 2 (ингибитор Mcl-1) и Соединения 2 в комбинации с цитарабином. Показана жизнеспособность первичных клеток AML и нормальных CD34 + клеток (серая линия), нормализованных к контролю носителя после воздействия цитарабина, показаны Соединения 2 и Соединение 2 в комбинации с цитарабином (в нМ).
На Фигуре 4 проиллюстрировано поддержание нормальной массы тела в течение терапии. Мышей NSG лечили децитабином 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг внутрибрюшинно или децитабином 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг в комбинации с Соединением 2 (ингибитор Mcl-1) 25 мг/кг (в/в) в течение 1 недели.
На Фигуре 5 проиллюстрирована гематологическая токсичность у мышей NSG в течение терапии. Мышей NSG лечили децитабином 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг с помощью интраперитонеальной инъекции или децитабином 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг в комбинации с Соединением 2 (ингибитор Mcl-1) 25 мг/кг (в/в) в течение 1 недели и количество лейкоцитов (WBC), тромбоцитов, гемоглобина (НЬ), количество эритроцитов (RBC) определяют с помощью анализатора крови Хемавета.
6
На Фигуре 6 проиллюстрирована превосходная эффективность децитабина в комбинации с Соединением 2 (ингибитор Mcl-1) по сравнению с одним из агентов, взятым отдельно. Мышам NRG-SG3 трансплантировали 10 первичных клеток AML (AML54). Приживление было подтверждено через 6 недель путем обнаружения hCD45 в периферической крови. Затем группам мышей давали а) носитель, б) Соединение 2 (ингибитор Mcl-1) 25 мг/кг в/в (2 дня) в) децитабин 0,4 мг/кг/д с помощью интраперитонеальной инъекции (5 дней) или г) комбинацию Соединение 2 + децитабин. Мышей умерщвляли на 8-й день после этого и определяли тяжесть лейкемии по проточной цитометрии покрасневшей бедренной кости, показывающей процент человеческих CD45 + клеток, после указанной процедуры.
Подробное описание изобретения
Поэтому изобретение обеспечивает в варианте осуществления Е1, комбинацию, которая содержит:
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (I):
где:
D представляет собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
Е представляет собой фурильное, тиенильное или пирролильное кольцо,
1
3
4
5
Х, Х, Х и Х независимо друг от друга представляют собой атом углерода или атом азота,
2
26
Х представляет собой C-R группу или атом азота,
означает, что кольцо является ароматическим,
3
Y представляет собой атом азота или C-R группу,
4
Z представляет собой атом азота или C-R группу,
1
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
8
0
6
11
11
1
6
11
11
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
R представляет собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -Cy, - алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -С(О)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
2
3
4
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
11
11
1
0
6
1
R, R, R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, - алкил(C-C)-NRR', -O-Cy, -алкил(С-С)-Су,
2
6
1
2
6
1
1
6
11
11
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
-алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(C-C)-NRR', -О-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
1
2
2
3
3
4
4
5
1
6
0
6
11
11
13
13
0
6
1
или заместители пары (R, R), (R, R), (R, R), (R, R) образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено 1-2 группами, выбранными из галогена, линейного или разветвленного (С-С)алкила, -алкил(С-С)-NRR', -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
6
7
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу,
1
6
0
6
11
11
-S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(С-С)-NRR',
1
6
11
11
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
-О-алкил(С-C)-NRR', -O-Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(C-C)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -С(О)-NRR, -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR-алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
6
7
1
6
13
13
0
6
1
или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, группы -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
2
W представляет собой -СН- группу, -NH- группу или атом кислорода,
8
1
8
a
b
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, -CHRR группу, ар ильную группу, гетероарильную группу, арилалкил(С-С)-группу, или гетероарилалкил(С-С)-группу,
9
1
6
2
6
2
6
2
1
6
2
2
6
2
2
6
2
2
3
2
6
2
2
0
6
0
6
3
14
14
14
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, -Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -Су-Су, -алкинил(С-С)-O-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, атом галогена, циано группу, -C(O)-R, или -C(O)-NRR',
10
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
У4
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, арилалкил(С-С)-группу, циклоалкилалкил(С-С)-группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, или -алкил(С-С)-O-С,
9
10
или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
11
11
1
6
0
6
1
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, необязательно замещенную линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, или -алкил(С-С)-Су,
11
11
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен 1-2 группами, которые представляют собой атом водорода, или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода возможных заместителей могут быть дейтерированы,
12
5
5
0
6
0
6
6
5
0
6
6
5
0
6
11
0
6
6
5
6
0
6
7
5
0
6
0
6
9
5
0
6
9
11
5
0
6
11
0
6
9
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
2
11
11
R представляет собой -Cy, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-NR-алкил(С-С)-Су, -Су-Су-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-Су, -NH-C(O)-NH-R, -Су-алкил(С-С)-NR-алкил(С-С)-Су, -C(O)-NRR' -NRR', -OR, -NR-C(O)-R', -O-алкил(С-С)-OR, -SO-R, -C(O)-OR,
при возможности, что аммоний, который определен таким образом, существует в виде цвиттерионной формы или имеет одновалентный анионный противоион,
13
13
14
14
1
6
R, R', R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
a
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
b
c
c
c
c
2
R представляет собой -O-C(O)-O-R группу, -O-C(O)-NRR' группу, или -O-P(O)(OR) группу,
c
c
1
8
1
6
1
6
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, циклоалкильную группу, (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, или (C-С)алкоксикарбонил(С-С)алкильную группу,
c
c
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен группой, которая представляет собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
1
2
3
4
5
6
7
8
10
Су, Су, Су, Су, Су, Cy, Су, Су и Су независимо друг от друга, представляют собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
9
Су представляет собой
9
20
2
2
2
p
18
19
q
20
1
6
2
r
2
s
2
q
21
21
-
+
или Су представляет собой гетероарильную группу, которая замещена группой, выбранной из -O-P(O)(OR); -O-Р(O)(OМ); -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R; гидрокси; гидрокси(С-С)алкила; -(CH)-U-(CH)-гетероциклоалкила; или -U-(CH)-NRR',
15
2
p
18
19
q
20
1
6
1
6
2
q
21
21
2
r
2
s
R представляет собой атом водорода; -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу; линейную или разветвленную (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу; -U-(CH)-NRR' группу; или-(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу,
16
1
6
2
r
2
s
2
r
20
2
2
2
р
18
19
q
20
-
+
R представляет собой атом водорода; гидрокси группу; гидрокси(С-С)алкильную группу; -(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу; (CH)-U-V-O-P(O)(OR) группу; -O-Р(O)(OМ) группу; -(СН)-O-(CHR-CHR-O)-R группу;
2
p
22
23
2
q
21
21
-(CH)-O-C(O)-NRR группу; или -U-(CH)-NRR' группу,
17
2
p
18
19
q
20
20
2
2
1
6
2
r
2
3
2
q
21
21
-
+
R представляет собой атом водорода; -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу; -O-P(O)(OR) группу; -O-Р(O)(OМ) группу; гидрокси группу; гидрокси(С-С)алкильную группу; -(СН)-U-(СН)-гетероциклоалкильную группу; -U-(CH)-NRR' группу; или альдоновую кислоту,
+
М представляет собой фармацевтически приемлемый одновалентный катион,
U представляет собой связь или атом кислорода,
2
s
V представляет собой -(CH)- группу или -С(О)- группу,
18
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода или (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу,
19
1
6
R представляет собой атом водорода или гидрокси(С-С)алкильную группу,
20
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
21
21
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
21
21
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
22
1
6
1
6
2
p
24
24
2
p
18
19
q
20
R представляет собой (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, -(CH)-NRR' группу, или -(CH)-O-(CHR-CHR-O)-R группу,
2
6
R3 представляет собой атом водорода или (С1-С)алкокси(С1-Сб)алкильную группу,
22
23
1
6
или заместители пары (R, R) образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-18 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-5 гетероатомов, выбранных из кислорода, сераы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу или гетероциклоалкильную группу,
24
24
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
24
24
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, которая представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
25
1
6
R представляет собой атом водорода, гидрокси группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
26
1
6
R представляет собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или циано группу,
27
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
28
30
30
30
2
2
30
10
29
29
29
29
-
-
-
R представляет собой -O-Р(O)(O)(O) группу, -O-P(O)(O)(OR) группу, -O-P(O)(OR)(OR') группу, -O-SO-O'' группу, -O-SO-OR группу, -Cy, -O-C(O)-R группу, -O-C(O)-OR группу или -O-C(O)-NRR' группу;
29
29
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу или линейную или разветвленную амино(С-С)алкильную группу,
30
30
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу или арилалкил(С-С)-группу,
n является целым числом, равным 0 или 1,
p является целым числом, равным 0, 1 или 2,
q является целым числом, равным 1, 2, 3 или 4,
r и s являются независимо целым числом, равным 0 или 1, причем следует понимать, что:
- "арил" означает фенильную, нафтильную, бифенильную, инданильную или инденильную группу,
- "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, которая состоит из 5-10 кольцевых членов, которая имеет по меньшей мере один ароматический фрагмент и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
- "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов,
- "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов, и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и может включать конденсированные, мостиковые или спирокольцевые системы,
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
причем арильная, гетероарильная, циклоалкильная и гетероциклоалкильная группы, которые определены таким образом, и алкил, алкенил, алкинил, алкокси, могут быть замещены 1-4 группами, выбранными из необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкенильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкинильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной группы (С-С)алкокси, необязательно замещенной группы (C-С)алкил-S-, гидрокси, оксо (или N-оксида, где необходимо), нитро, циано, -C(O)-OR',
1
6
1
6
-O-C(O)-R', -C(O)-NR'R'', -NR'R'', -(C=NR')-OR'', линейной или разветвленной (С-С)полигалогеналкильной группы, трифторметокси, или галогена, причем следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода вышеуказанных возможных заместителей, могут быть дейтерированы,
или их энантиомеры, диастереоизомеры, атропоизомеры или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
и (б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
Дополнительные перечисленные варианты осуществления (Е) изобретения описаны в данной заявке. Следует понимать, что признаки, указанные в каждом из вариантов осуществления, могут быть объединены с другими указанными признаками для обеспечения дополнительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
Е2. Комбинация в соответствии с Е1, которая содержит:
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (II), частный случай ингибитора Mcl-1 формулы (I):
где:
4
Z представляет собой атом азота или C-R группу,
1
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
R представляет собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную
1
6
11
11
8
(С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, группу циано, -NRR', -Су или атом галогена,
2
3
4
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
0
6
11
11
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
R, R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(C-C)-NRR', -О-Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR', -О-C(O)-R', -C(O)-NRR', -NR11-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(С-С)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или -SO-алкил(С-С),
2
3
3
4
1
6
13
13
1
6
1
или заместители одной из групп (R, R), (R, R) образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-37 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
6
7
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
0
6
11
11
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
12
11
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
11
2
11
11
2
1
6
R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидрокси группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, циано группу, нитро группу, -алкил(С-С)-NRR', -O-Cy, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -О-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(С-С)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', или-SO-алкил(С-С),
6
7
1
6
13
13
1
6
1
или заместители пары (R, R), когда они присутствуют на двух расположенных рядом атомах углерода, образуют вместе с атомами углерода, которые их несут, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, -NRR', -алкил(С-С)-Су или оксо,
8
1
8
1
6
1
6
R представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, ар ильную группу, гетероарильную группу, арилалкил(С-С)-группу, или гетероарилалкил(С-С)-группу,
9
1
6
2
6
2
6
2
1
6
2
2
6
2
2
6
2
2
3
2
6
2
2
0
6
0
6
3
14
14
14
R представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, -Су, -алкил(С-С)-Су, -алкенил(С-С)-Су, -алкинил(С-С)-Су, -Су-Су, -алкинил(С-С)-O-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, атом галогена, циано группу, -C(O)-R, или -C(O)-NRR',
11
11
1
6
1
6
1
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, необязательно замещенный линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или -алкил(С-С)-Су,
11
11
1
6
или заместители пары (R, R') образуют вместе с атомом азота, который их несет, ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, причем следует понимать, что указанный азот может быть замещен группой, которая представляет собой атом водорода, или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода возможных заместителей могут быть дейтерированы,
12
5
5
0
6
6
5
0
6
0
6
6
5
0
6
11
0
6
6
5
6
0
6
7
11
11
11
11
11
11
11
1
6
11
2
11
11
11
R представляет собой -Cy, -Су-алкил(С-С)-Су, -Су-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Су, -Cy-алкил(C-C)-NR-алкил(C-C)-Cy, -Су-Су-O-алкил(С-С)-Су, -C(O)-NRR', -NRR', -OR, -NR-C(O)-R', -O-алкил(С-С)-OR, -SO-R, -C(O)-OR, или -NH-C(O)-NH-R,
13
13
14
14
1
6
R, R', R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
25
1
6
R представляет собой атом водорода, гидрокси группу, или гидрокси(С-С)алкильную группу,
1
2
3
5
6
7
8
Су, Су, Су, Су, Су, Су и Су независимо друг от друга, представляют собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
n является целым числом, равным 0 или 1, причем следует понимать, что:
- "арил" означает фенильную, нафтильную, бифенильную, инданильную или инденильную группу,
- "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, которая состоит из 5 - 10 кольцевых членов, которая имеет по меньшей мере один ароматический фрагмент и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
- "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов,
- "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, которая содержит 3-10 кольцевых членов, и содержит 1-3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и может включать конденсированные, мостиковые или спирокольцевые системы,
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
причем арильная, гетероарильная, циклоалкильная и гетероциклоалкильная группы, которые определены таким образом, и алкил, алкенил, алкинил, алкокси, могут быть замещены 1-4 группами, выбранными из необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкенильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкинильной группы, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкокси группы, необязательно замещеннойй (С-С)алкил-S-, гидрокси группы, оксо (или N-оксида, где необходимо), нитро, циано, -C(O)-OR', -O-C(O)-R', -C(O)-NR'R'', -NR'R'', -(C=NR')-OR'', линейного или разветвленного (С1-Сб)полигалогеналкила, трифторметокси, или галогена, причем следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и причем следует понимать, что один или несколько атомов углерода вышеуказанных возможных заместителей, могут быть деитерированы,
или их энантиомеры, диастереоизомеры, атропоизомеры или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
и (б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного применения.
Е3. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой антрациклин, выбранный из идарубицина, даунорубицина и митоксантрона, более предпочтительно, идарубицина и даунорубицина, еще более предпочтительно, представляет собой идарубицин.
Е4. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой гипометилирующий агент, выбранный из децитабина, азацитидина и гвадецитабина, более предпочтительно, децитабина и азацитидина, еще более предпочтительно, представляет собой децитабин.
Е5. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, даунорубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина.
Е6. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой идарубицин.
Е7. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой цитарабин.
Е8. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой децитабин.
Е9. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, где второй противораковый агент представляет собой азацитидин.
a
Е10. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е9, где ингибитор Mcl-1 представляет собой (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.
a
Е11. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е9, где ингибитор Mcl-1 представляет собой (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.
Е12. Комбинация в соответствии с Е1 или Е2, которая содержит:
a
a
(а) ингибитор Mcl-1, выбранный из (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановой кислоты или (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановаой кислоты, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина, для одновременного, последовательного или раздельного применения.
a
Е13. Комбинация в соответствии с Е11 или Е12, где доза (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил) тиено [2,3-d] пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановой кислоты в течение комбинированного лечения составляет от 25 мг до 1500 мг.
a
Е14. Комбинация в соответствии с E11, Е12 или Е13, где (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту вводят в течение комбинированного лечения один раз в неделю.
Е15. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е14, где ингибитор Mcl-1 вводят перорально.
Е16. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е14, где ингибитор Mcl-1 вводят внутривенно.
Е17. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е16, для применения для лечения злокачественного новообразования.
Е18. Комбинация в соответствии с Е17, где злокачественное новообразование представляет собой острую миелоидную лейкемию.
Е19. Комбинация в соответствии с Е17, где злокачественное новообразование представляет собой острую лимфоцитарную лейкемию.
Е20. Комбинация для применения в соответствии с любым из Е17 - Е19, где ингибитор Mcl-1 и второй противораковый агент обеспечивают в количествах, которые совместно являются терапевтически эффективными для лечения злокачественного новообразования.
Е21. Комбинация для применения в соответствии с Е20, где ингибитор Mcl-1 и второй противораковый агент обеспечивают в количествах, которые являются синергетически эффективными для лечения злокачественного новообразования.
Е22. Комбинация для применения в соответствии с Е21, где Mcl-1ингибитор и второй противораковый агент обеспечивают в синергетически эффективных количествах, которые позволяют уменьшить дозу, необходимую для каждого соединения при лечении злокачественного новообразования, обеспечивая эффективное лечение злокачественного новообразования, с последующим уменьшением побочных эффектов.
Е23. Комбинация в соответствии с любым из El - Е16, для применения для лечения острой миелоидной лейкемии у пациентов, которые достигают ремиссии.
Е24. Комбинация в соответствии с любым из E1 - Е23, которая дополнительно содержит один или несколько наполнителей.
Е25. Комбинация в соответствии с Е1, которая дополнительно содержит третий противораковый агент.
Е26. Комбинация в соответствии с Е25, где второй противораковый агент представляет собой цитарабин, и третий противораковый агент представляет собой даунорубицин или идарубицин.
Е27. Применение комбинации в соответствии с любым из E1 - Е26, для приготовления лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования.
Е28. Применение в соответствии с Е27, где злокачественное новообразование представляет собой острую миелоидную лейкемию.
Е29. Применение в соответствии с Е27, где злокачественное новообразование представляет собой острую лимфоцитарную лейкемию.
Е30. Лекарственное средство, которое содержит, отдельно или вместе,
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (I), как определено в Е1, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где ингибитор Mcl-1 и второй противораковый агент обеспечивают в эффективных количествах для лечения злокачественного новообразования.
Е31. Лекарственное средство, которое содержит, отдельно или вместе,
(а) ингибитор Mcl-1 формулы (II), как определено в Е2, и
(б) второй противораковый агент, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов,
для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где ингибитор Mcl-1 и второй противораковый агент обеспечивают в эффективных количествах для лечения злокачественного новообразования.
Е32. Лекарственное средство в соответствии с Е30 или Е31, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, даунорубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина.
Е33. Способ лечения злокачественного новообразования, который включает совместное введение терапевтически эффективного количества:
(а) ингибитора Mcl-1 формулы (I), как определено в Е1, и
(б) второго противоракового агента, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов, субъекту, нуждающемуся в этом.
Е34. Способ лечения злокачественного новообразования, который включает совместное введение терапевтически эффективного количества:
(а) ингибитора Mcl-1 формулы (II) как определено в Е2, и
(б) второго противоракового агента, где второй противораковый агент выбран из антрациклинов, цитарабина и гипометилирующих агентов, субъекту, нуждающемуся в этом.
Е35. Способ в соответствии с Е33 или Е34, где второй противораковый агент выбран из идарубицина, даунорубицина, цитарабина, децитабина и азацитидина.
a
Е36. Способ в соответствии с Е33 или Е34, где ингибитор Mcl-1 формулы (I) представляет собой (2R)-2-{[(5S)-S-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.
Е37. Способ сенсибилизации пациента, который (I) не поддается лечению по меньшей мере одной химиотерапией, или (II) у которого рецидив после лечения химиотерапией, или в том и другом случае (I) и (II), где способ включает совместное введение терапевтически эффективного количества ингибитора Mcl-1 формулы (I) как указано в Е1, в комбинации со вторым противораковым агентом, как описано выше, указанному пациенту.
Е38. Способ сенсибилизации пациента, который (I) не поддается лечению по меньшей мере одной химиотерапией, или (II) у которого рецидив после лечения химиотерапией, или в том и другом случае (I) и (II), где способ включает совместное введение терапевтически эффективного количества ингибитора Mcl-1 формулы (I) как указано в Е2, в комбинации со вторым противораковым агентом, как описано выше, указанному пациенту.
"Комбинация" относится либо к комбинации с фиксированной дозой в одной отдельно взятой дозированной форме (например, капсуле, таблетке или саше), комбинации с нефиксированной дозой, или набору для комбинированного введения, где соединение согласно настоящему изобретению и один или несколько компонентов из комбинации (например, другое лекарственное средство, как объясняется ниже, также обозначается в виде "терапевтического средств" или "соагента") могут вводиться независимо в одно и то же время или раздельно в течение временных интервалов, в особенности, если эти временные интервалы предоставляют возможность для компонентов комбинации проявлять совместный, например, синергетический эффект.
Термины "совместное введение" или "комбинированное введение" или тому подобные, как используется в настоящей заявке, охватывают введение выбранного компонента комбинации отдельно взятому субъекту, который в этом нуждается (например, пациенту), и включают схемы лечения, при которых агенты не обязательно вводятся одним и тем же путем введения или в одно и то же время.
Термин "комбинация с фиксированной дозой" обозначает, что активные компоненты, например, соединение формулы (I) и один или несколько компонентов комбинации, оба вводятся пациенту одновременно в форме единого целого или дозировки.
Термин "комбинация с нефиксированной дозой" обозначает, что активные компоненты, например, соединение согласно настоящему изобретению и один или несколько компонентов комбинации, оба вводятся пациенту в виде раздельных составляющих либо одновременно или последовательно, без специфических временных ограничений, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента. Последнее также применяется для коктейльной терапии, например, введение трех или более активных компонентов.
Термин 'злокачественное новообразование' означает класс заболевания, при котором группа клеток демонстрирует неконтролируемый рост. Типы злокачественных новообразований включают гематологические злокачественные новообразования, включая острую миелоидную лейкемию, миелодиспластические синдромы, острую лимфоцитарную лейкемию и лимфому. Типы злокачественных новообразований также включают солидные опухоли, включая карциному, саркому или бластому.
Термин "совместно терапевтически эффективны" обозначает, что терапевтические средства могут вводиться раздельно (в хронологически установленном порядке, в особенности специфически к последовательности образом) в такие временные интервалы, что они могут предпочтительно, у теплокровного животного, в особенности у человека, лечить, все еще проявляя (предпочтительно синергетическое) взаимодействие (совместный терапевтический эффект). В любом случае, это может быть установлено, в частности, путем определения последующих уровней в крови, свидетельствующих о том, что оба соединения присутствуют в крове человека, подвергаемого лечению, по меньшей мере на протяжении определенных временных интервалов.
Термин «стандартный лекарственный препарат» или «стандартная химиотерапия» означает идарубицин, даунорубицин, митоксантрон, цитарабин, децитабин, гвадецитабин или азацитидин. В частности, «стандартный лекарственный препарат» или «стандартная химиотерапия» предполагает идарубицин, даунорубицин, цитарабин, децитабин или азацитидин.
"Синергетически эффективны" или "синергизм" обозначает, что терапевтический эффект, наблюдаемые после введения двух или более агентов является больше, чем сумма терапевтических эффектов, наблюдаемых после введения каждого отдельно взятого средства.
Как используется в настоящей заявке, термин "лечить", "лечение" или "терапия" любого заболевания или нарушения относится в одном варианте осуществления, к ослаблению заболевания или нарушения (то есть, облечение или остановка или уменьшение развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления "лечить", "лечение" или "терапия" относится к ослаблению или облегчению по меньшей мере одного физического параметра, включая те, которые могут не ощущаться пациентом. В еще другом варианте осуществления, "лечить", "лечение" или "терапия" относится к модуляции заболевания или нарушения, либо физически, (например, стабилизация различимого симптома), физиологически, (например, стабилизация физического параметра), или обоих.
Как используется в настоящей заявке, субъект "нуждается в" лечении, если такой субъект будет получать преимущества биологически, медицински или качества жизни от такого лечения.
Термин «ремиссия» относится к уменьшению или исчезновению признаков и симптомов злокачественного новообразования.
В другом аспекте, обеспечивается способ сенсибилизации человека, который (I) рефракторный к по меньшей мере одному химиотерапевтическому лечению, или (II) имеет рецидив после лечения с применением химиотерапии, или в обоих случаях (I) и (II), где способ включает введение ингибитора Mcl-1 формулы (I) в комбинации со вторым противораковым агентом, как описано выше, пациенту. Пациент, который сенсибилизируется, представляет собой пациента, который отвечает на лечение, включающее введение ингибитора Mcl-1 формулы (I) в комбинации со вторым противораковым агентом, как описано выше, или у которого не развилась резистентность к такому лечению.
"Лекарственное средство" обозначает фармацевтическую композицию, или комбинацию нескольких фармацевтических композиций, которые содержат один или несколько активных компонентов в присутствии одного или нескольких наполнителей.
'AML' означает острую миелоидную лейкемию.
'ALL' означает острую лимфоцитарную лейкемию. В фармацевтических композициях в соответствии с изобретением, пропорция активных компонентов по весу (вес активных компонентов по отношению к общему весу композиции) составляет 5-50%.
В качестве фармацевтических композиций в соответствии с изобретением, более специфически используют те, которые являются подходящими для введения пероральным, парентеральным и в особенности внутривенным, через-или транс-кожным, назальным, ректальным, подъязычным, глазным или респираторным путем, более специфически таблетки, драже, подъязычные таблетки, твердые желатиновые капсулы, таблетки для медленного растворения под языком, капсулы, пастилки, инъецируемые препараты, аэрозоли, глазные капли или капли в нос, суппозитории, кремы, мази, кожные гели и др.
Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут содержать один или несколько наполнителей или носителей, выбранных из разбавителей, смазывающих веществ, связующих, дезинтеграторов, стабилизаторов, консервантов, абсорбентов, красителей, подсластителей, ароматизаторов и др.
В качестве неограничивающего примера можно указать:
в качестве разбавителей: лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза, глицерин,
в качестве смазывающих веществ: диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота и ее магниевая и кальциевая соли, полиэтиленгликоль,
в качестве связующих: алюмосиликат магния, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и поливинилпирролидон,
в качестве дезинтеграторов: агар, альгиновая кислота и ее натриевая соль, шипучие смеси.
Соединения комбинации могут вводиться одновременно или последовательно. Путь введения предпочтительно представляет собой внутривенную инфузию или инъекцию, и соответствующие фармацевтические композиции могут предоставлять возможность немедленного или отстроченного высвобождения активных компонентов. Соединения комбинации, кроме того, могут вводиться в форме двух раздельных фармацевтических композиций, каждая из которых содержит один из активных компонентов, или в форме единственной фармацевтической композиции, в которой активные компоненты представлены в смеси.
Применяемые схемы дозирования изменяются в зависимости от пола, возраста и веса пациента, пути введения, природы злокачественного новообразования и любых сопутствующих лечений и находится в диапазоне от 25 мг до 1500 мг Mcl-1 ингибитора в неделю, более предпочтительно от 50 мг до 1400 мг в неделю. Доза второго противоракового агента, как описано выше, будет такой же, как используется при его самостоятельном введении.
Фармакологические данные ПРИМЕР 1: Влияние на пролиферацию in vitro комбинации ингибитора Mcl-1 с идарубицином, цитарабином и децитабином на клеточных линиях острой миелоидной лейкемии (AML) Вещества и методы
Клеточные линии получали и поддерживали в основной среде, дополненной фетальной бычьей сывороткой, как указано в Таблице 1. Дополнительно, все питательные среды содержали пенициллин (100 МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл) и L-глутамин (2 мМ).
2
Клеточные линии культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO, и распространяли в Т-150 колбах. Во всех случаях, клетки размораживали из замороженных стоков, пропускали через ≥ 1 пассаж, используя подходящие разведения, подсчитывали и оценивали их жизнеспособность, используя CASY счетчик клеток перед высеванием 150 мкл/лунку при плотностях, указанных в Таблице 1, в 96-луночные планшеты. Все клеточные линии определяли как не содержащие микоплазматических загрязнений с помощью собственных методов. Маточные растворы соединений готовили при концентрации 5 мМ в ДМСО и хранили при -20°С.
2
50
50
Чтобы проанализировать активность соединений как отдельных агентов, клетки высевали и обрабатывали девятью 2-кратными серийными разведениями каждого соединения, раздаваемого индивидуально непосредственно в планшеты для анализа клеток. Влияние соединений на жизнеспособность клеток оценивали после 3 дней инкубации при 37°С/5% CO путем количественного определения уровней АТФ в клетках с использованием CellTiterGlo при концентрации реагента 75 мкл/лунку. Все эксперименты были выполнены в трех экземплярах. Люминесценцию количественно определяли на многофункциональном планшет-ридере. Значения IC для одного агента рассчитывали с использованием стандартного подбора четырехпараметрической кривой. Значение IC определяется как концентрация соединения, при которой сигнал CTG уменьшается до 50% от измеренного для контроля носителя (ДМСО) (Таблица 2).
Для анализа активности соединений в комбинации с цитарабином (Таблица
2
3), идарубицином (Таблица 4) и децитабином (Таблица 5),, клетки высевали и обрабатывали семи или восьми 3,16-кратными серийными разведениями для каждого диспергированого соединения, либо индивидуально, либо во всех возможных перестановках в шахматном порядке, непосредственно в планшетах для анализа клеток, как указано на Фигуре 1. Влияния отдельно взятых агентов, а также их комбинаций в шахматном порядке, на жизнеспособность клеток оценивали после инкубирования в течение 3 дней при 37°С/5% CO путем количественного определения клеточных уровней АТФ, используя CellTiterGlo в количестве 75 мкл реагента/лунку. Осуществляли по меньшей мере два независимых эксперимента, каждый из них осуществляли в двух повторах. Люминесценцию количественно определяли на многоцелевом планшет-ридере.
Оценивали потенциальные синергетические взаимодействия между комбинациями соединений, используя 2D матрицу избытка ингибирования в соответствии с моделью аддитивности Loewe и представляли в виде Оценки синергизма (Lehar et al., Nature Biotechnology 2009, 27(7), 659-66). Все расчеты осуществляли, используя программное обеспечение Clalice™ Bioinformatics, доступное на вебсайте Horizon.
Время удвоения, указанное в Таблице 1, представляет собой среднее значение времени удвоения, полученное в различных пассажах (в Т-150 колбах), проведенных из размороженных клеток при их высевании в 96-луночные планшеты.
Оценка синергизма
SS ~ 0 → Аддитивный
SS≥1 → Слабый синергизм
SS≥2 → Синергизм
Результаты
50
Влияние на пролиферацию комбинации ингибиторов Mcl-1 данного изобретения с цитарабином, идарубицином и децитабином оценивали на панели 13 клеточных линий AML. Ингибиторы Mcl-1 как отдельные агенты сильно ингибировали рост большинства из 13 протестированных линий AML (значения IC от 1 нМ до 2,2 мкМ - Таблица 2). В комбинации со стандартными лекарственными средствами цитарабином, идарубицином и децитабином наблюдалось синергетическое ингибирование роста (то есть Оценка синергизма - выше 2 (Lehar et al, 2009)) для большинства протестированных клеточных линий (Таблицы 3, 4 и 5). Эти данные указывают на то, что комбинация ингибиторов Mcl-1 с стандартными лекарственными препаратами для медицинской помощи для лечения гематологического злокачественного новообразования может быть полезной для лечения пациентов с AML.
ПРИМЕР 2: Синергетическая проапоптотическая активность комбинации ингибиторов Mcl-1 с идарубицином в первичных образцах AML человека
Вещества и метод: Пациент с клетками AML
Образцы костного мозга от пациентов с AML были собраны после информированного согласия в соответствии с руководящими принципами, утвержденными Комитетом по этике научных исследований при больнице Альфреда.
4
Мононуклеарные клетки выделяли центрифугированием в градиенте плотности Ficoll-Hypaque (GE Healthcare, Австралия) и лизис эритроцитов проводили с использованием 0,156 М NHCl, 0,017 М Tris-HCl, при рН 7,2, как описано ранее (Rijal et al., Blood 2015, 125, 2815-2824). Клетки затем повторно суспендировали в забуференном фосфатом соляном растворе, содержащем 2% фетальной бычьей сыворотки (FBS; Sigma, Австралия). Затем мононуклеарные клетки суспендировали в среде RPMI-1640 (GIBCO, Австралия), содержащей пенициллин и стрептомицин (GIBCO) и инактивированную теплом фетальную бычью сыворотку 15% (Sigma). Клетки промывали в фосфатно-соляном буфере (PBS), содержащем 2% FBS, перед использованием.
Анализ жизнеспособности клеток
5
2
50
Свежеочищенные мононуклеарные клетки из образцов пациентов с AML доводили до концентрации 2,5×10/мл, и отбирали аликвоту клеток объемом 100 мкл на лунку в 96-луночные планшеты (Sigma). Клетки затем обрабатывали идарубицином и Соединением 2 в рамках 5 log-концентраций в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ в течение 48 часов. Для анализов комбинаций препараты добавляли в соотношении 1: 1, получая концентрации от 1 нМ до 10 мкМ, и клетки инкубировали при 37°С и 5% CO. Клетки затем окрашивали с помощью красителя Sytox blue nucleic acid stain (Invitrogen, Австралия) и флуоресценцию измеряли с помощью проточного цитометрического анализа с использованием LSR-II Fortessa (Becton Dickinson, Австралия). Для сбора данных использовали программное обеспечение FACSDiva, а программное обеспечение FlowJo использвали для анализа. Властные клетки стробировали с использованием свойств прямого и бокового рассеяния. Параметры жизнеспособных клеток, которые не включали Sytox blue, определяли при 6 концентрациях для каждого препарата и 50% летальной концентрации (LC, в мкМ).
Результаты
Влияние на выживаемость комбинации ингибиторов Mcl-1 согласно изобретению с идарубицином оценивали в нескольких первичных образцах AML человека (Фигура 2; Таблица 6). Даже если несколько образцов являются чувствительными к ингибиторам Mcl-1 и стандартным лекарственным препаратам для лечения AML в качестве монотерапии, большее количество образцов, где монотерапия неэффективна или слабоэффективна, являются синергетически чувствительными к комбинации ингибиторов Mcl-1 со стандартными лекарственными препаратами для лечения гематологического злокачественного новообразования, демонстрируя, что комбинация может быть полезна для лечения пациентов с AML.
ПРИМЕР 3: Лейкозные бластные клетки показывали большую чувствительность к ингибиторам Mcl-1 в комбинации с цитарабином, чем кроветворные клетки-предшественники CD34 +
Вещества и метод: Анализы колониеобуазоеания
Анализы колониеобразования проводили на свежеочищенных и замороженных мононуклеарных фракциях от пациентов с AML.
4
5
3
2
Первичные клетки культивировали в двух экземплярах в 35 мм сосудах (Griener-bio, Германия) от 1×10 до 1×10. Клетки высевали в 0,6% агара (Difco, Австралия): AIMDM 2х (IMDM порошок-Invitrogen, дополненный NaHCO, декстраном, Pen/Strep, В-меркаптоэтанолом и аспарагином): фетальная бычья сыворотка (Sigma) в соотношении 2:1:1. Для оптимальных условий роста все сосуды содержали GM-CSF (100 нг на сосуд), IL-3 (100 нг на сосуд R&D Systems, США), SCF (100 нг/сосуд системы R & D) и ЕРО (4 ед./сосуд). Рост происходил в течение 2-3 недель в присутствии и отсутствии препарата при 37°С и 5% CO в инкубаторе с высокой влажностью. После инкубации планшеты фиксировали с помощью 2,5% глутаральдегида в соляном растворе и оценивали, используя GelCount от Oxford Optronix (Абингдон, Великобритания).
Результаты
В клоногенных анализах подмножество первичных образцов AML и нормальных клеток-предшественников CD34 + человека были устойчивы к 100 нМ Соединения 2. В отличие от этого, стандартные лекарственные препараты, такие как цитарабин 10 нМ, были токсичными для клоногенного роста как лейкемических, так и нормальных клеток-предшественников. В конце концов, подмножество первичных образцов AML было чувствительным к 10 нМ Соединения 2 + цитарабина, тогда как на нормальные клетки-предшественники CD34 + человека эта доза имела меньшее воздействие (Фигура 3).
ПРИМЕР 4: ингибитор Mcl-1 в комбинации с децитабином является хорошо переносимым in vivo
Для определения переносимости Соединения 2 в комбинации с децитабином мышам NSG вводили:
а) децитабин 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг с помощью интраперитонеальной инъекции, или
б) децитабин 0,4 мг/кг или 0,8 мг/кг в комбинации с Соединением 2 25 мг/кг (в/в),
в течение 1 недели и количество лейкоцитов (WBC), тромбоцитов, гемоглобина (Hb), количество эритроцитов (RBC) определяли с помощью анализатора крови Hemavet.
Соединение 2 в сочетании с децитабином является хорошо переносимым (Фигура 5) и мыши не теряли вес в течение лечения (Фигура 4).
Взятые в целом, Примеры 2, 3 и 4 показывают, что комбинация ингибиторов Mcl-1 и стандартного лекарственного препарата для лечения гематологического злокачественного новообразования является новым подходом к лечению, в частности, AML, без необходимости в дополнительной химиотерапии и с приемлемым терапевтическим окном безопасности.
ПРИМЕР 5: ингибитор Mcl-1 в сочетании с децитабином синергетически ингибирует PDX AML in vivo
Вещества и метод
6
Лейкозные бластные клетки костного мозга из образца AML54 пациента с AML внутривенно инъецировали мышам NOD--IL2Rγcnull (NRG) (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, США) для размножения. Мыши NRG-SG3 подвергали мониторингу на развитие лейкемии с помощью проточного цитометрического анализа периферической крови в отношении СВ45-позитивных (hCD45 +) клеток человека. Для создания мышиных моделей первичной AML у пациентов мышей NRG-SG3 инъецировали 1×10 лейкозными бластными клетками посредством инъекции в хвостовую вену, и животных наблюдали на предмет прогрессирования лейкемии с использованием проточного цитометрического анализа периферической крови в отношении hCD45 + клеток. Количество клеток hCD45 + в костном мозге от бедренных костей у умерщвленных животных использовали для определения степени инфильтрации лейкемии. Клетки костного мозга извлекали путем промывки бедренных костей в PBS с добавлением 2% эмбриональной бычьей сыворотки. Чтобы определить действие на AML, группы мышам вводили контрольный носитель, децитабин (0,4 мг/кг) ежедневно в течение 5 дней, интраперитонеально, дважды в неделю внутривенно инъекцией Соединения 2 (ингибитор Mcl-1, 25 мг/кг) или децитабина в комбинации с Соединением 2. Эффективность препарата определяли с помощью проточного цитометрического анализа клеток hCD45 + в костном мозге, выделенном из бедренных костей мышей в носителе.
Результаты
Как показано на Фигуре 6, наблюдалось значительное снижение количества клеток AML человека у мышей, которым вводили децитабин в комбинации с Соединением 2, причем клетки hCD45 + составляли менее 9% лейкоцитов костного мозга. Эти результаты показывают, что комбинация ингибитора Mcl-1 и стандартного лекарственного препарата для лечения гематологического злокачественного новообразования эффективно убивает объемные бластные клетки AML человека в PDX-модели AML54.
ПРИМЕР 6: Синергетическая проапоптотическая активность комбинации ингибиторов Mcl-1 со стандартными лекарственными препаратами для медицинской помощи в первичных образцах ALL человека
Вещества и метод: первичные образцы ALL пациента
4
Образцы костного мозга или периферической крови пациентов с ALL были собраны после информированного согласия в соответствии с руководящими принципами, утвержденными Комитетом по этике научных исследований в больнице Альфреда. Мононуклеарные клетки выделяли центрифугированием в градиенте плотности Ficoll-Paque (GE Healthcare, Australia) с последующим уменьшением эритроцитов в лизисном буфере хлорида аммония (NHCl) при 37°С в течение 10 минут. Затем клетки повторно суспендировали в забуференном фосфатом соляном растворе, содержащем 2% фетальной бычьей сыворотки (Sigma, Австралия). Затем мононуклеарные клетки суспендировали в среде RPMI-1640 (GIBCO, Австралия), содержащей пенициллин и стрептомицин (GIBCO) и инактивированную теплом фетальную бычью сыворотку 15% (Sigma).
Анализ жизнеспособности клеток
5
2
Свежеочищенные мононуклеарные клетки из образцов пациентов с ALL доводили до концентрации 2,5×10/мл, и отбирали аликвоту клеток объемом 100 мкл на лунку в 96-луночные планшеты (Sigma). Клетки затем обрабатывали указанными лекарственными средствами в рамках 6 log-концентраций в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ в течение 48 часов. Для анализов комбинаций препараты добавляли в соотношении 1:1, получая концентрации от 1 нМ до 10 мкМ, и клетки инкубировали при 37°С и 5% CO. Клетки затем окрашивали с помощью красителя Sytox blue nucleic acid stain (Invitrogen, Австралия) и флуоресценцию измеряли с помощью проточного цитометрического анализа с использованием LSR-II Fortessa (Becton Dickinson, Австралия). Для сбора данных использовали программное обеспечение FACSDiva, а программное обеспечение FlowJo использвали для анализа. Властные клетки стробировали с использованием свойств прямого и бокового рассеяния. Параметры жизнеспособных клеток, которые не включали Sytox blue, определяли при 6 концентрациях для каждого препарата и 50% летальной концентрации (LC50, в мкМ).
Результаты
Влияние на выживаемость комбинации ингибиторов Mcl-1 согласно изобретению с цитарабином оценивали в нескольких первичных образцах ALL человека (Таблица 7). Даже если несколько образцов являются чувствительными к ингибиторам Mcl-1 и стандартным лекарственным препаратам для лечения ALL в качестве монотерапии, большее количество образцов, где монотерапия неэффективна или слабоэффективна, являются синергетически чувствительными к комбинации ингибиторов Mcl-1 со стандартными лекарственными препаратами для лечения гематологического злокачественного новообразования, демонстрируя, что комбинация может быть полезна для лечения пациентов с ALL.
ПРИМЕР 7: ингибитор Mcl-1 в сочетании с децитабином синергетически ингибирует PDX AML in vivo
Вещества и метод
6
Для создания мышиных моделей первичной AML у пациентов, мышей NOD-IL2Rcγnull (NRG-SG3) (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, США) инъецировали 1×10 лейкозными бластными клетками путем инъекции в хвостовую вену, и животных, наблюдали наблюдали на предмет прогрессирования лейкемии с использованием проточного цитометрического анализа периферической крови в отношении hCD45 + клеток. Количество клеток hCD45 + в костном мозге от бедренных костей у умерщвленных животных использовали для определения степени инфильтрации лейкемии. Клетки костного мозга извлекали путем промывки бедренных костей в PBS с добавлением 2% эмбриональной бычьей сыворотки. Чтобы определить действие комбинации Соединение 1+децитабин, мышам вводили Соединение 1 по 25 мг/кг дважды в неделю внутривенно и децитабин интраперитонеально каждый день (D1-D5) по 0.4 мг/кг. Эффективность препарата определяли с помощью проточного цитометрического анализа клеток hCD45 + в костном мозге, выделенном из бедренных костей. Грудные кости фиксировали в формалине, делали срезы и окрашивали гематоксилином и эозином или анти-hCD45 для оценки тяжести лейкемии и насыщенности лейкозными клетками..
Результаты
Полученные результаты показывают, что комбинация ингибиторов Mcl-1 со стандартными лекарственными препаратами для лечения гематологического злокачественного новообразования может быть полезной для лечения пациентов с AML.