ОТЛИЧНЫЕ ОТ ЧЕЛОВЕКА ЖИВОТНЫЕ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ К РН ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

1. Генетически модифицированное отличное от человека животное, содержащее в своей зародышевой линии локус иммуноглобулина, содержащий замену или вставку в вариабельный локус иммуноглобулина по меньшей мере одного негистидинового кодона на гистидиновый кодон, при этом гистидиновый кодон не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии.
2. Отличное от человека животное по п. 1, причем отличное от человека животное содержит первый и второй вариабельный локус, причем по меньшей мере первый или второй вариабельный локус содержит вставку по меньшей мере одного гистидинового кодона или замену по меньшей мере одного негистидинового кодона на гистидиновый кодон.
3. Отличное от человека животное по п. 2, у которого как первый, так и второй вариабельный локус содержит замену или вставку по меньшей мере одного негистидинового кодона на гистидиновый кодон.
4. Отличное от человека животное по п. 3, у которого первый вариабельный локус содержит по меньшей мере функциональную часть нереаранжированного вариабельного локуса тяжелой цепи (нереаранжированные сегменты V, D, J).
5. Отличное от человека животное по п. 4, у которого нереаранжированный вариабельный локус тяжелой цепи содержит по меньшей мере часть локуса человека (нереаранжированные сегменты V, D, J).
6. Отличное от человека животное по п. 4, у которого нереаранжированный локус тяжелой цепи представляет собой локус человека, содержащий нереаранжированные сегменты V, синтетический сегмент D, который содержит линкер, и сегмент J человека.
7. Отличное от человека животное по п. 6, у которого синтетический сегмент D содержит по меньшей мере один гистидиновый кодон.
8. Отличное от человека животное по п. 3, у которого второй вариабельный локус содержит по меньшей мере функциональную часть переаранжированного локуса легкой цепи (нереаранжированные сегменты V, J).
9. Отличное от человека животное по п. 4, у которого второй вариабельный локус содержит реаранжированную последовательность вариабельного гена легкой цепи иммуноглобулина (реаранжированная последовательность VJ).
10. Отличное от человека животное по п. 1, у которого замена негистидинового кодона на гистидиновый кодон и/или вставка гистидинового кодона находится в последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен, и гистидин находится в области, выбранной из N-концевой области цепи иммуноглобулина, области петли 4 цепи иммуноглобулина, CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи, CDR3 тяжелой цепи, CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи, CDR3 легкой цепи и их комбинации.
11. Отличное от человека животное по п. 2, у которого по меньшей мере один из первого вариабельного локуса или второго вариабельного локуса функционально связан с эндогенной отличной от человеческой последовательностью нуклеиновой кислоты константной области в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина.
12. Отличное от человека животное по п. 5, у которого первый вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, D, J человека) функционально связан с эндогенной отличной от человеческой последовательностью нуклеиновой кислоты константной области тяжелой цепи иммуноглобулина.
13. Отличное от человека животное по п. 12, у которого первый вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, D, J человека) функционально связан с эндогенной отличной от человеческой последовательностью нуклеиновой кислоты константной области тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина.
14. Отличное от человека животное по п. 6, у которого второй вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, J) функционально связан с эндогенным отличным от человеческого локусом константной области легкой цепи иммуноглобулина.
15. Отличное от человека животное по п. 14, у которого эндогенная отличная от человеческой последовательность константной области легкой цепи иммуноглобулина находится в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина.
16. Генетически модифицированное отличное от человека животное, содержащее
по меньшей мере часть нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека (нереаранжированные сегменты V, D, J), функционально связанную с генной последовательностью константной области, причем один или несколько из генных сегментов V, D и J содержат по меньшей мере одну замену негистидинового кодона на гистидиновый кодон или вставку по меньшей мере одного гистидинового кодона, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии человека;
по меньшей мере часть нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека (нереаранжированные сегменты V, J), функционально связанную с генной последовательностью константной области, причем один или несколько из генных сегментов V и J содержат по меньшей мере одну замену негистидинового кодона на гистидиновый кодон или вставку по меньшей мере одного гистидинового кодона, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии человека;
причем отличное от человека животное экспрессирует вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина, который содержит гистидин, полученный из замены или вставки гистидина в зародышевой линии мыши.
17. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 16, причем отличное от человека животное представляет собой млекопитающее.
18. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 17, причем млекопитающее представляет собой грызуна.
19. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 18, причем грызуна выбирают из группы, состоящей из мыши, крысы и хомяка.
20. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 16, у которого нереаранжированная последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связана с отличной от человеческой последовательностью константной области.
21. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 20, у которого отличная от человеческой последовательность нуклеиновой кислоты константной области, функционально связанная с нереаранжированной последовательностью нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, находится в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина в зародышевой линии отличного от человека животного.
23. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 16, у которого отличная от человеческой последовательность нуклеиновой кислоты константной области, функционально связанная с нереаранжированной последовательностью нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, находится в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина в зародышевой линии отличного от человека животного.
24. Генетически модифицированное отличное от человека животное, содержащее
по меньшей мере часть нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека (нереаранжированные сегменты V, D, J), функционально связанную с генной последовательностью константной области, причем один или несколько из нереаранжированных генных сегментов V, D и J содержат по меньшей мере одну замену негистидинового кодона на гистидиновый кодон или вставку по меньшей мере одного гистидинового кодона, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии человека;
реаранжированную последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека (реаранжированную последовательность VJ), функционально связанную с генной последовательностью константной области легкой цепи, причем реаранжированная последовательность VJ содержит по меньшей мере одну замену негистидинового кодона на гистидиновый кодон или вставку по меньшей мере одного гистидинового кодона, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии человека;
причем отличное от человека животное экспрессирует вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина, который содержит гистидин, полученный из замены или вставки гистидина в зародышевой линии мыши.
25. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 24, которое представляет собой млекопитающее.
26. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 25, которое представляет собой грызуна.
27. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 26, выбранное из группы, состоящей из мыши, крысы и хомяка.
28. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 24, у которого нереаранжированная последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связана с отличной от человеческой последовательностью константной области.
29. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 28, у которого отличная от человеческой последовательность константной области, функционально связанная с нереаранжированной последовательностью нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, находится в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина в зародышевой линии отличного от человека животного.
30. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 29, у которого отличная от человеческой последовательность константной области, функционально связанная с реаранжированной последовательностью нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, находится в эндогенном отличном от человеческого локусе иммуноглобулина в зародышевой линии отличного от человека животного.
31. Генетически модифицированное отличное от человека животное, причем животное содержит в своей зародышевой линии по меньшей мере одну замену или по меньшей мере одну вставку негистидинового кодона на гистидиновый кодон в локус тяжелой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон локуса тяжелой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии; и
по меньшей мере одну замену или по меньшей мере одну вставку негистидинового кодона на гистидиновый кодон в локус легкой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон локуса легкой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии;
популяцию В-клеток, которая характеризуется повышенным наличием остатков гистидина в тяжелых и легких цепях иммуноглобулина в популяции В-клеток, по сравнению с отличным от человека животным дикого типа.
32. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 31, у которого повышение представляет собой повышение приблизительно в 2-4 раза.
33. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 31, у которого повышение представляет собой повышение приблизительно в 2-10 раз.
34. Генетически модифицированное отличное от человека животное, которое экспрессирует легкие и тяжелые цепи иммуноглобулина, которые содержат гистидины, кодируемые заменами и/или вставками в последовательности иммуноглобулина зародышевой линии отличного от человека животного.
35. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 1, у которого последовательность вариабельной области содержит кластер из 2, 3, 4 или 5 гистидинов, которые представляют собой замены гистидиновым кодоном негистидинового кодона и/или вставки гистидиновых кодонов.
36. Генетически модифицированное отличное от человека животное по п. 5, у которого нереаранжированный локус тяжелой цепи содержит генные сегменты D, которые инвертированы по отношению к направлению ориентации локуса тяжелой цепи.
37. Способ получения отличного от человека животного, которое производит вариабельные домены антител с гистидинами, кодируемыми гистидиновыми кодонами зародышевой линии, предусматривающий:
модификацию отличного от человека животного в его зародышевой линии для включения по меньшей мере одной замены гистидиновым кодоном негистидинового кодона или вставки гистидинового кодона в нереаранжированный вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, D, J) тяжелой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии; и
модификацию отличного от человека животного в его зародышевой линии для включения по меньшей мере одной замены гистидиновым кодоном негистидинового кодона или вставки гистидинового кодона в нереаранжированный вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, J) легкой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии.
38. Способ по п. 37, при котором способ предусматривает генетическую модификацию зародышевой линии мыши для включения по меньшей мере части нереаранжированного вариабельного локуса (сегменты V, D и J) тяжелой цепи иммуноглобулина человека и получение замены или вставки гистидина в нереаранжированный вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, D и J) тяжелой цепи иммуноглобулина человека.
39. Способ по п. 37, при котором способ предусматривает генетическую модификацию зародышевой линии мыши для включения по меньшей мере части нереаранжированного локуса (переаранжированных сегментов V, J) легкой цепи иммуноглобулина человека и получение замены или вставки гистидина в нереаранжированный локус легкой цепи иммуноглобулина человека.
40. Способ по п. 37, при котором отличное от человека животное представляет собой грызуна.
41. Способ по п. 40, при котором грызуна выбирают из мыши, крысы и хомяка.
42. Способ получения отличного от человека животного, которое производит вариабельные домены антител с гистидинами, кодируемыми гистидиновыми кодонами зародышевой линии, предусматривающий:
модификацию отличного от человека животного для включения по меньшей мере одной замены гистидиновым кодоном негистидинового кодона или вставки гистидинового кодона в нереаранжированный вариабельный локус (нереаранжированные сегменты V, D, J) тяжелой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии; и
модификацию отличного от человека животного для включения по меньшей мере одной замены гистидиновым кодоном негистидинового кодона или вставки гистидинового кодона в реаранжированную вариабельную последовательность (реаранжированную последовательность VJ) легкой цепи иммуноглобулина, при этом гистидиновый кодон нереаранжированной вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина не кодируется соответствующим генным сегментом дикого типа зародышевой линии.
43. Способ по п. 42, при котором отличное от человека животное представляет собой грызуна.
44. Способ по п. 43, при котором грызуна выбирают из мыши, крысы и хомяка.