Сравнительная характеристика отечественных стандартных образцов иммуногенной активности коклюшной вакцины

DEVELOPMENT OF TEST SAMPLES FOR QUALITY CONTROL OF MEASUREMENTS OF WATER PERMANGANATE OXIDATION

S.P. Chernova, L.V. Trubacheva, M.V. Didik, S.Yu. Lohanina, S.A. Makaeva, Yu.A. Gryazeva

Seven samples for testing permanganate oxidation of various types of waters are developed. The test samples are dry mixtures, containing substance simulator of permanganate oxidation and the ions of dry residue of water, which makes created samples similar in composition to real samples to be tested. Metrological characteristics of test samples are established.

Key words: permanganate oxidation, test samples , certification of test samples, interlaboratory comparison tests.

Статья поступила в редакцию 14.06.2013 г.

УДК 006.9:53.089.68:579

сравнительная характеристика отечественных стандартных образцов иммуногенной активности коклюшной вакцины

В статье приведена информация по вновь изготовленному отраслевому стандартному образцу (ОСО) иммуногенной активности коклюшной вакцины. ОСО изготовлен из трех штаммов Bordetella pertussis с серотиповым составом 1.2.3, 1.2.0 и 1.0.3 соответственно. Штаммы с разным серотиповым составом были взяты в ОСО в равных соотношениях. Новый ОСО охарактеризован по отношению к международному стандарту и ранее изготовленным и использовавшимся при производстве и контроле коклюшного компонента комбинированных вакцин отраслевым стандартным образцам. Показано, 127051 что новый ОСО, как и ранее изготовленные, обладает высокой иммуногенной активностью и может быть использован при сравнительной оценке иммуногенной активности коклюшного компонента комбинированных вакцин.

Алексеева И.А.

Канд. мед. наук, главный эксперт лаборатории анатоксинов и антитоксических препаратов ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ РФ г. Москва, Петровский б-р, 8 Тел.: 8 (499) 241-37-95 E-mail: iaalex@list.ru

Чупринина Р.П.

Введение

Стандартные образцы (эталоны) широко используют в разных отраслях деятельности человека. Они предназначены для метрологического обеспечения измерений, калибровки средств измерений, сравнения с производимой фармацевтической продукцией при контроле показателей выпускаемой продукции. Эксперты Международной организации здравоохранения (ВОЗ) с целью стандартизации и унификации методов измерения и критериев оценки важных показателей качества медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) и фармацевтических лекарственных средств (ФЛС) на международном уровне утверждают эталоны (МЭ) и так

Д-р мед. наук, старший научный сотрудник, главный эксперт Управления экспертизы противобактериальных МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» 127051, г. Москва, Петровский б-р, 8 Тел.: 8 (499) 241-37-95

называемые референс-пре-параты [1]. Введение единых критериев оценки качественных характеристик фармацевтической продукции способствовало широкому использованию во всем мире МИБП и ФЛС разных производств различных стран. Международные рефе-ренс-препараты и эталоны предоставляются Национальным органам контроля странам-производителям МИБП и ФЛС для аттестации национальных стандартных образцов или референс-препаратов.

Необходимость разработки стандартного образца коклюшной вакцины в нашей стране возникла при

освоении и промышленном выпуске коклюшной моновакцины и комбинированных КДС, а затем АКДС вакцин различными предприятиями страны. Первый стандартный образец иммуногенной активности коклюшной вакцины (НС-1) был изготовлен в 1963 г. коллективом под руководством профессора М.С. Захаровой, разработчика коклюшной вакцины [2]. Метрологические характеристики НС-1 были установлены по стандартному образцу иммуногенности коклюшной вакцины США, НС-1 предназначен для сравнительной оценки иммуногенной активности коклюшного компонента комбинированных вакцин.

В связи с уменьшением запасов НС-1 в 1977 г. была изготовлена и в 1987 г. зарегистрирована в Реестре отраслевых стандартных образцов МИБП [3, 4] очередная серия стандартного образца иммуногенной активности коклюшной вакцины - ОСО-3. После более чем 35-летнего периода успешного использования ОСО-3 возникла необходимость пополнить запасы ОСО. В 2008 г. была изготовлена очередная серия ОСО иммуногенной активности коклюшной вакцины - ОСО-4.

Целью данной работы является сравнительная оценка аттестованных характеристик нового ОСО-4 и возможности его использования для метрологического обеспечения измерений при проведении сравнительного определения иммуногенной активности коклюшного компонента комбинированных вакцин как на стадии производства, так и в готовой форме препарата.

Материалы и методы

Технология изготовления ОСО включала: выращивание культуры Bordetella pertussis на среде КУА; смыв культуры 6 %-ным раствором декстрана; обезвреживание микробной взвеси мертиолятом в конечной концентрации 1 : 5 000 в течение 6 месяцев при температуре (5 ± 3) °С. Обезвреженную коклюшную суспензию с помощью стандартного образца мутности ОСО 42-28-85-10 П (10 МЕ), метрологические характеристики которого установлены с применением Международного эталона мутности, разводили до концентрации 60 млрд микробных клеток в 1 мл, разливали в ампулы по 1 мл и лиофильно высушивали.

Разработка ОСО велась с учетом рекомендаций международных и национальных нормативных документов [1, 5, 6, 7, 8].

Образцы новой серии ОСО-4 аттестовали по показателям, по которым ранее были охарактеризованы НС-1 и ОСО-3: средняя масса сухого вещества в ампуле, мг; остаточная влажность, %; количество коклюшных микробных клеток, млрд в ампуле. Иммуногенную

активность выражали в МЕ и обозначали показателем «количество международных единиц (МЕ) в ампуле». Показатели «средняя масса сухого вещества в ампуле, мг» и «остаточная влажность, %» до 2005 г. (срок действия ФС) определяли в соответствии с действующей ФС [9]. После 2005 г. описание вышеназванных методов исследования было перенесено в частные ФСП. Имму-ногенную активность стандартных образцов оценивали согласно рекомендации ВОЗ в тесте экспериментального менингоэнцефалита при интрацеребральном заражении иммунизированных мышей вирулентной культурой B. pertussis [10]. Оценку активности проводили с применением действующих международных эталонов ВОЗ коклюшной вакцины. За время наблюдения с 1977 г. и по настоящее время было использовано три международных эталона: первый был изготовлен в 1958 г. и содержал в ампуле 35 МЕ; второй МЭ (№ 66/302) был изготовлен в 1980 г. и содержал в ампуле 46 МЕ, МЭ (№ 66/303), введенный в 1998 г., содержал в ампуле также 46 МЕ. Аттестованное значение показателя иммуногенной активности международного эталона, как правило, устанавливают в международных испытаниях и выражают в принятых условных МЕ без указания границы погрешности [1, 11] .

Количество МЕ в 1 мл препарата рассчитывали с помощью метода Вустера - Вильсона [12].

Учитывая особенности МИБП и соответственно особенность СО, используемого для метрологического обеспечения измерений показателей качества МИБП, а также рекомендации отечественных и зарубежных нормативных документов [1, 5, 6, 7, 8] однородность стандартного образца оценивали по показателю «средняя масса сухого вещества в ампуле, мг». Стабильность -по основному показателю качества коклюшной вакцины (иммуногенной активности), который определяли в сравнении с МЭ на протяжении всего срока использования (хранения).

Для оценки возможности применения ОСО-4 для метрологического обеспечения определения иммуногенной активности коклюшного компонента фармацевтических препаратов взамен ОСО-3 и МЭ были использованы коммерческие серии АКДС (вакцина коклюшно-дифте-рийно-столбнячная адсорбированная) производства ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова, ФГУП «НПО «Микроген» и Бубо-Кок (вакцина против коклюша, дифтерии, столбняка и гепатита В адсорбированная) производства НПК «Комбиотех», Москва.

Испытание проводили с применением аутбредных и инбредных мышей линий CBWA и F1(С57Bl/6j х CBA), чувствительных к токсинам коклюшного микроба.

Результаты и обсуждение

Первый стандартный образец иммуногенной активности коклюшной вакцины НС-1 был изготовлен из штамма B. pertussis 305 (серотип 1.2.3.±), выделенного в 1956 г. от человека, больного коклюшем. Для изготовления ОСО-3 были отобраны штаммы трех актуальных серотипов B. pertussis 312 (1.2.3.), 267 (1.0.3.) и 305 (1.2.0.) для воспроизведения стандартным образцом коклюшной вакцины содержания агглютиногенов 1, 2 и 3 соответственно. Новая серия ОСО-4 была изготовлена из штаммов B. pertussis 475 серотипа 1.2.3., 305 серотипа 1.2.0. и 267 серотипа 1.0.3. В ОСО-3 и ОСО-4 указанные штаммы были взяты в равных соотношениях.

В табл. 1 представлены данные сравнительного анализа трех серий отечественных ОСО иммуногенной активности коклюшной вакцины.

Сравнительная характеристика стандартных образцов свидетельствует, что они имеют сходные технические и аттестованные характеристики. Отличие заключается в составе штаммов, на основе которых изготовлены ОСО, и значения аттестуемой характеристики средней массы сухого вещества в ампуле.

При определении метрологи- _

ческих характеристик НС-1 с применением первого МЭ коклюшной вакцины установлено, что в ампуле содержалось 28 МЕ. Аттестованное значение иммуногенной активности представлено, так же как и в МЭ, без указания границ погрешности. Стабильность лиофильно высушенного НС-1 определяли в динамике на протяжении срока хранения в сравнении с МЭ коклюшной вакцины. Полученные результаты продемонстрировали стабильность показателя иммуногенной активности (количество МЕ в ампуле) на протяжении более 20 лет (период наблюдения). Стабильное содержание количества МЕ в ампуле стандарта НС-1 было также подтверждено данными, полученными в Национальном институте здоровья США. Количество международных единиц при калибровании по международному эталону в 1965 г. составило 27,7 МЕ/мл, в 1971 г. -33,8 МЕ/мл (n = 7) [13].

ОСО-3, используемый с 1978 г. и зарегистрированный в Реестре ОСО в 1987 г. под № 42-28-89, до настоящего времени успешно используют на производстве (изготовление и контроль коклюшной вакцины) и в контролирующих организациях для сравнительной оценки иммуногенной активности коклюшного компонента коммерческих серий вакцин АКДС и Бубо-Кок. В течение всего этого времени периодически оценивали количественное содержание МЕ в этом образце в сравнении с МЭ. Полученные результаты, отражающие стабильность препарата, представлены в табл. 2.

Несмотря на то что в анализируемые периоды времени использовали разные международные эталоны и мышей, отличающихся по категории (аутбредные и инбредные), показатели содержания МЕ в ампуле ОСО существенно не отличались. Колебания количества МЕ в ампуле ОСО № 42-28-89 обусловлены вариабельностью биологической модели: чувствительностью лабораторных животных, неоднородностью популяции, клиническим состоянием здоровья животных, условиями их содержания и кормления, их категорией.

Сравнительные данные свидетельствуют, что несмотря на длительный период, прошедший с момента

Таблица 1

Сравнительная характеристика отраслевых стандартных образцов иммуногенной активности коклюшной вакцины

Показатели ОСО коклюшной вакцины

НС-1 ОСО-3 ОСО-4

Технические характеристики

Наполнитель декстран 6 % декстран 6 % декстран 6 %

Штамм Bordetella pertussis, серотип 305

Обезвреживание коклюшной культуры мертиолят 1 : 5 000 мертиолят 1 : 5 000 мертиолят 1 : 5 000

Аттестованные характеристики

Средняя масса сухого вещества в ампуле, мг 65,9 ± 0,7

Коэффициент вариации, % 1,06 3,66 2,2

Остаточная влажность, % д.о.* 1,08 0,45

Количество коклюшных микробных клеток, млрд в амп. 50** 60 ± 2,4

Количество МЕ в ампуле 28 30 28

Примечания: * д.о. - данные отсутствуют; валу отсутствуют.

- данные по доверительному интер-

Таблица 2

Стабильность показателя иммуногенной активности ОСО № 42-28-89 за период 1977-2010 гг.

Показатель / год 1977-1980 гг.*

Среднее геометрическое значение показателя

Иммуногенная активность, МЕ/амп, Р = 0,95 30,18

Коэффициент вариации, % 11,3 18,5 10,4 5,4

Примечания: * испытания проведены на аутбредных мышах; ** испытания проведены на мышах линии CBWA (тетрагибриды); *** испытания проведены на мышах F1 (С57 х СВА).

изготовления, ОСО № 42-28-89 стабилен. Это подтверждает возможность его использования в качестве стандартного образца, необходимого для определения иммуногенной активности коклюшного компонента отечественных вакцин [14]. Исходя из этого иммуно-генную активность новой серии ОСО коклюшной вакцины (ОСО-4) оценивали в сравнении с МЭ коклюшной вакцины серии 66/303 и ОСО № 42-28-89.

На основании тринадцати опытов было установлено, что при определении значений аттестуемых характеристик ОСО-4 в сравнении с ОСО № 42-28-89 в ампуле содержалось 30,2 МЕ, в сравнении с МЭ серии 66/303 - 29,3 МЕ (табл. 3).

При определении значений иммуногенной активности коклюшной вакцины СО разводят, учитывая при этом количество содержащихся в нем МЕ. Для удобства использования СО в испытании и с учетом длительности использования стандарта условно приняли, что в 1 ампуле содержится 28 МЕ.

Таблица 3

Иммуногенная активность ОСО-4 при сравнении с ОСО № 42-28-89 и международным эталоном коклюшной вакцины № 66/303

Показатель Количественное содержание МЕ в амп. ОСО-4

При сравнении с ОСО № 42-28-89 При сравнении с МЭ 66/303

Иммуногенная активность, МЕ/амп 30,2*

Коэффициент вариации, % 21,7 30,8

*Средняя геометрическая величина с указанием доверительных интервалов.

Следующая серия исследований проведена для оценки сопоставимости результатов испытания иммуно-генной активности коклюшного компонента комбинированных вакцин при параллельном использовании ОСО № 42-28-89 и ОСО-4, исходя из содержания в ампуле последнего 30 и 28 МЕ соответственно. Испытания были проведены с использованием аутбредных мышей и ошибка метода (коэффициент вариации) составила 40 %. Результаты исследований свидетельствуют о сопоставимости полученных результатов (табл. 4).

Таблица 4

Иммуногенная активность коклюшного компонента комбинированных вакцин, определенная по отношению к ОСО № 42-28-89 и ОСО-4

Препарат Иммуногенная активность, рассчитанная по сравнению с ОСО № 42-28-89, МЕ/мл Иммуногенная активность, рассчитанная по сравнению с ОСО-4, МЕ/мл

Бубо-Кок, сер. 025 17,1 17,4*; 16,2**

Бубо-Кок, сер. 027 13,9 14,1*; 13,2**

Бубо-Кок, сер. 036 13,2 13,4* 12,6**

Бубо-Кок, сер. 041 11,7 11,8* 11,1**

Бубо-Кок, сер. 046 9,9 8,9* 8,3**

АКДС, сер. 14 8,7 7,9* 7,3**

АКДС, сер. 88 8,3 8,4* 7,9**

АКДС, сер. 84 8,4 6,6* 6 2**

АКДС, сер. 108 13,8 9,7* 9,1**

АКДС, сер. 015 10,5 8,3* 7,8**

Примечания:*расчет иммуногенной активности, исходя из содержания в ампуле 30 МЕ; ** расчет иммуногенной активности, исходя из содержания в ампуле 28 МЕ.

Тесноту связи между показателями иммуногенной активности коклюшного компонента комплексных вакцин, калиброванных по ОСО № 42-28-89 и ОСО-4, оценивали по коэффициенту ранговой корреляции Спирмена [15]. Установлено, что теснота связи между показателями иммуногенной активности коклюшного компонента комплексных вакцин, рассчитанных по отношению к ОСО № 42-28-89 и ОСО-4, является высокой: коэффициент ранговой корреляции (г) равен 0,87 при p < 0,01. Полученные данные свидетельствуют о высокой корреляции показателей иммуногенной активности коклюшного компонента, полученных при использовании ОСО № 42-28-89 и ОСО-4, а также подтверждают возможность использования ОСО-4 для сравнительного определения иммуногенной активности коклюшного компонента комбинированных вакцин.

Заключение

Результаты проведенных исследований показали, что новая серия 4 ОСО иммуногенной активности коклюшной вакцины по аттестованным характеристикам удовлетворяет требованиям, предъявляемым к стандартным образцам: обладает высокой иммуногенной активностью, позволяет получать воспроизводимые и сопоставимые показатели активности у коклюшного

компонента коммерческих серий комбинированных вакцин. ОСО-4 подготовлен для регистрации и включения в реестр стандартных образцов.

Приготовленные ранее по той же технологии НС-1 и ОСО № 42-28-89 характеризовались стабильностью по количественному содержанию в ампуле МЕ на протяжении более 20 и 35 лет (срок наблюдения) соответственно.

Использование стабильного по иммуногенной активности стандартного образца является гарантом выпуска качественного препарата для практики здравоохранения. Коклюшные вакцины, выдержавшие испытание в тесте экспериментального менингоэнцефалита и активность которых рассчитана в сравнении с отечественными ОСО иммуногенной активности, удовлетворяют требованиям нормативной документации и являются высокоэффективными препаратами. Подтверждением эффективности отечественных вакцин являлось резкое снижение заболеваемости коклюшем после начала использования АКДС вакцины в 1960-е гг. В настоящее время при высоком охвате населения декретированного возраста прививками АКДС и Бубо-Кок-вакцинами, заболеваемость коклюшем держится на низком уровне.

Таким образом, приготовление и использование ОСО является одним из важнейших моментов в технологическом процессе изготовления и контроля препарата, соответствующего требованиям нормативной документации.

ЛИТЕРАТУРА

1. WHO Expert Committee on biological standardization. Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference standards. Geneva, 2004.

2. Захарова М.С. Активная иммунизация против коклюша // Эффективность специфической профилактики инфекционных болезней. М., 1968. С. 31-61.

3. Отраслевые стандартные образцы состава и свойств медицинских иммунобиологических препаратов. Описания утвержденных образцов. Вып. I. М.: МЗ СССР, 1988.

4. Волкова Р.А., Фадейкина О.В., Мовсесянц А.А., Борисевич И.В. Опыт ГИСК им. Л.А. Тарасевича по разработке и аттестации медицинских иммунобиологических препаратов // Стандартные образцы. 2011. № 4. С. 17-21.

5. WHO manual for the establishment of national and other secondary standards for vaccines. Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/11.03. URL: www.who.int/vaccines-documents.

6. РМГ 93-2009 Рекомендации по межгосударственной стандартизации. ГСИ. Оценивание метрологических характеристик стандартных образцов. М.: Издательство стандартов, 2002. 26 с.

7. МУК 4.1/4.2.588-96 «Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям».

8. МУК 4.2.2317-08 «Отбор, проверка и хранение производственных штаммов коклюшных, паракоклюшных и бронхисеп-тикозных бактерий».

9. ФС 42-3874-99 Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов.

10. Серия технических докладов ВОЗ. 1992. 800. Сороковой доклад.

11. Совместная декларация МБМВ, МОЗМ, ИЛАК и ИСО по метрологической прослеживаемости от 09.11.2011 г.

12. Worcester J, Wilson E.B. A table determining LD50 of the fifty per cent end-point // Nat. Acad. Sc. Proc. 1943. Vol. 29. P. 207-212.

13. Захарова М.С, Маливанова О.М, Чупринина Р.П. Национальный стандарт коклюшной вакцины, его изучение и использование при контроле выпускаемых вакцин // Тезисы докладов на Междунар. симп. по стандартизации медицинских биологических препаратов. М., 1972. C. 92-94.

14. Чупринина Р.П., Алексеева И.А. Оценка стабильности стандарта коклюшной вакцины ОСО-3 // Микробиология. 2004. № 5. С. 68-71.

15. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена // [по Л.Е. Полякову, 1971]. URL: www.infamed.com/stat/s05.html.

COMPARISON OF REFERENCE MATERIALS OF IMMUNOGENIC ACTIVITY OF PERTUSSIS VACCINE

I.A. Alekseeva, R.P. Chuprinina

The article provides the information on the newly prepared branch reference material (BRM) of immunogenic activity ofpertussis vaccine. The BRM is prepared from three Bordetella pertussis strains with serotype composition 1.2.3., 1.2.0. and 1.0.3 respectively. Strains with different serotype composition were taken from the BRM in equal proportions. The new BRM was characterized against the international standard and previously prepared branch reference materials, used in the production and control of pertussis component of combination vaccines. It is shown, that the new BRM as well as previously prepared BRMs have high immunogenic activity and can be used in comparison assessment of immunogenic activity of pertussis component of combination vaccines.

Статья поступила в редакцию 15.10.2013 г. УДК 006.9:53.089.68:53.082.4:539.8

стандартные образцы скорости распространения продольных и сдвиговых ультразвуковых волн в твердых материалах

ТЕРЕНТЬЕВ Г.И.

Заведующий лабораторией физических и химических методов метрологической аттестации стандартных образцов ФГУП «УНИИМ» 620000, г. Екатеринбург, ул. Красноармейская, 4 Тел.: (343) 355-49-22 E-mail: terentiev@uniim.ru

ГЕРАСИМОВА Н.Л.

Старший инженер ФГУП «УНИИМ»

СКОРОХОД А.Г.

Главный инженер

ООО «ТД» Аргоси Технолоджис»

115054, г. Москва, Стремянный пер.,

МОЖАЕВА Е.В.

Старший инженер ФГУП «УНИИМ»

КИМ Н.А.

Ведущий инженер ФГУП «УНИИМ»

КУЗНЕЦОВА М.Ф.

Заместитель заведующего лаборатории ФГУП «УНИИМ»

В работе представлены результаты разработки комплектов стандартных образцов скорости распространения продольных (в диапазоне от 2500 до 6500 м/с) и сдвиговых (в диапазоне от 1200 до 3300 м/с) ультразвуковых волн в твердых материалах. Комплект состоит из 6 образцов двух типов размеров. В качестве материала СО выбраны: стекло органическое бесцветное марки ТОСП, алюминиевый сплав марки Д16, латунь марки Л63. СО предназначены для поверки (калибровки), градуировки и испытаний средств измерений скорости распространения продольных и сдвиговых ультразвуковых волн в кернах горных пород, аттестации методик измерений и контроля точности измерений. Приведены результаты аттестации СО на рабочем эталоне 1-го разряда «Установке ИЗУ для комплексного измерения акустических параметров твердых сред» по ГОСТ Р 8.756-2011.

Ключевые слова: стандартные образцы скорости распространения продольных и сдвиговых ультразвуковых волн, государственный первичный эталон, материал СО, метрологические характеристики, прослеживаемость, поверка, испытания средств измерений.

Вопросам обес-п е ч е н и я е ди н с тв а и требуемой точности измерений скоростей распространения продольных и сдвиговых ультразвуковых волн в твердых материалах придается большое значение. В 2012 г. Хабаровским филиалом

ВНИИФТРИ утвержден «Государственный первичный эталон единиц скоростей распространения продольных, сдвиговых и поверхностных ультразвуковых волн в твердых средах» - ГЭТ 189-2012. В состав эталона включены «наборы исходных мер скорости распространения продольных ультразвуковых волн», которые в качестве компаратора передают размер единицы рабочим эталонам первого разряда [1, 2]. Разработаны и применяются «комплекты ультразвуковых образцов