Искусственная роговица, полученная путем трехмерной биопечати

1. Способ изготовления искусственной роговицы, включающий:
культивирование живых стромальных клеток;
3D-биопечать слоя стромальных клеток с инкапсулированием живых стромальных клеток в первую наносетку гидрогеля;
культивирование живых эндотелиальных клеток роговицы (СЕС);
3D-биопечать слоя СЕС с инкапсулированием живых СЕС во вторую наносетку гидрогеля;
культивирование живых эпителиальных клеток роговицы (СЕрС);
3D-биопечать слоя СЕрС с инкапсулированием живых СЕрС в третью наносетку гидрогеля и
прикрепление слоя СЕС к первой стороне слоя стромальных клеток и слоя СЕрС ко второй стороне слоя стромальных клеток.
2. Способ по п. 1, где стадии культивирования выполняют параллельно.
3. Способ по п. 1, где стадии 3D-биопечати слоя СЕС и слоев СЕрС выполняют параллельно.
4. Способ по п. 1, где стадия прикрепления слоя СЕС к первой стороне слоя стромальных клеток включает последовательную печать слоя стромальных клеток и слоя СЕС.
5. Способ по п. 1, где стадия прикрепления слоя СЕС к первой стороне слоя стромальных клеток включает нанесение тонкой пленки гидрогеля между этими двумя слоями и отверждение посредством воздействия UV-излучения.
6. Способ по п. 1, где стадия прикрепления слоя СЕрС ко второй стороне слоя стромальных клеток включает нанесение тонкой пленки гидрогеля между этими двумя слоями и отверждение посредством воздействия UV-излучения.
7. Способ по п. 1, дополнительно включающий смешивание СЕС с раствором форполимера на основе комплекса акрилоилированного PEG и коллагена перед 3D-биопечатью слоя СЕС.
8. Способ по п. 7, где раствор форполимера дополнительно содержит МА-НА.
9. Способ по п. 1, дополнительно включающий смешивание СЕрС с раствором форполимера на основе комплекса акрилоилированного PEG и коллагена перед 3D-биопечатью слоя СЕрС.
10. Способ по п. 9, где раствор форполимера дополнительно содержит МА-НА.
11. Способ по п. 1, дополнительно включающий инкапсулирование стромальных клеток в гидрогель на основе комплекса акрилоилированного PEG и коллагена перед 3D-биопечатью слоя стромальных клеток.
12. Способ по п. 11, где раствор форполимера дополнительно содержит МА-НА.
13. Способ по п. 11, где стромальные клетки инкапсулируют при плотности клеток в диапазоне от около 5 миллионов/мл до 25 миллионов/мл стромальных клеток.
14. Способ по п. 1, где стадия культивирования живых СЕрС включает культивирование LSC и дифференцировку LSC в СЕрС.
15. Способ по п. 14, где LSC получают из аутологичной ткани.
16. Способ по п. 1, где стадия культивирования живых СЕС включает культивирование предшественников СЕС от донора-человека и дифференцировку предшественников СЕС в СЕС.
17. Способ по п. 14, где предшественников СЕС получают из аутологичной ткани.
18. Способ по п. 1, где первая, вторая и третья наносетки гидрогеля содержат PEGDA.
19. Искусственная роговица, содержащая
слоистую структуру, содержащую:
полученный путем 3D-биопечати слой стромальных клеток, содержащий живые стромальные клетки, инкапсулированные в первую наносетку гидрогеля, при этом слой стромальных клеток имеет первую сторону и вторую сторону;
полученный путем 3D-биопечати слой СЕС, содержащий живые эндотелиальные клетки роговицы (СЕС), инкапсулированные во вторую наносетку гидрогеля;
полученный путем 3D-биопечати слой СЕрС, содержащий живые эпителиальные клетки роговицы (СЕрС), инкапсулированные в третью наносетку гидрогеля; и
где слой СЕС прикреплен к первой стороне слоя стромальных клеток, а слой СЕрС прикреплен ко второй стороне слоя стромальных клеток.
20. Искусственная роговица по п. 19, где один или несколько из слоя СЕС и слоя СЕрС прикреплены с помощью тонкой пленки гидрогеля, нанесенной между слоями и отвержденной посредством воздействия UV-излучения.
21. Искусственная роговица по п. 19, где живые стромальные клетки инкапсулируются в гидрогель перед биопечатью слоя стромальных клеток.
22. Искусственная роговица по п. 21, где гидрогель содержит комплекс акрилоилированного PEG и коллагена.
23. Искусственная роговица по п. 20, где гидрогель дополнительно содержит МА-НА.
24. Искусственная роговица по п. 19, где живые СЕС инкапсулируются в гидрогель перед биопечатью слоя СЕС.
25. Искусственная роговица по п. 24, где гидрогель содержит комплекс акрилоилированного PEG и коллагена.
26. Искусственная роговица по п. 25, где гидрогель дополнительно содержит МА-НА.
27. Искусственная роговица по п. 19, где живые СЕрС включают в себя культивированные и дифференцированные LSC.
28. Искусственная роговица по п. 19, где живые СЕрС инкапсулируются в гидрогель перед биопечатью слоя СЕрС.
29. Искусственная роговица по п. 28, где гидрогель содержит комплекс акрилоилированного PEG и коллагена.
30. Искусственная роговица по п. 29, где гидрогель дополнительно содержит МА-НА.