СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В КЛЕТКИ СОСУДИСТОГО РУСЛА

1. Способ дифференциации плюрипотентных стволовых клеток в клетки сосудистого русла, включающий следующие стадии:
а) получение монослоя плюрипотентных стволовых клеток в среде для плюрипотентности;
б) инкубирование указанных клеток в примирующей среде, дополненной маленькой молекулой, которая активирует бета-катенин и/или сигнализацию Wnt, и/или сигнализацию hedgehog (HH), выбранной из группы низкомолекулярных ингибиторов киназы 3 гликогенсинтазы (Gsk3a-b), низкомолекулярных ингибиторов CDC-подобной киназы 1 (Clk1-2-4), низкомолекулярных ингибиторов митогенактивируемой протеинкиназы 15 (Mapk15), низкомолекулярных ингибиторов киназы двойной специфичности, регулируемой фосфорилированием тирозина (Y) (Dyrk1a-b 4), низкомолекулярных ингибиторов циклин-зависимой киназы 16 (Pctk1-3 4), сглаженных (SMO) активаторов и модуляторов взаимодействия между β-катенином (или γ-катенином) и коактивирующими белками СВР (белок, связывающий CREB) и p300 (белок p300, связывающий E1A);
в) индуцирование дифференциации посредством инкубирования указанных примированных клеток в индуцирующей среде.
2. Способ по п. 1 для дифференциации плюрипотентных стволовых клеток в эндотелиальные клетки.
3. Способ по п. 1 для дифференциации плюрипотентных стволовых клеток в гладкомышечные клетки сосудов.
4. Способ по п. 1, где стадия а) дополнительно включает инкубирование указанных клеток в среде для плюрипотентности в течение 18-30 часов.
5. Способ по п. 1, где стадия б) дополнительно включает инкубирование указанных клеток в примирующей среде в течение 2-4 суток.
6. Способ по п. 1, где стадия в) дополнительно включает инкубирование указанных клеток в индуцирующей среде в течение 18-48 часов.
7. Способ по п. 1, где указанная среда для плюрипотентности стадии а) представляет собой бессывороточную среду, дополненную ингибитором Rho-ассоциированного белка, образующего суперспираль, из семейства серин/треониновых киназ протеинкиназ (ингибитор ROCK киназы).
8. Способ по п. 7, где указанный ингибитор ROCK киназы выбран из группы состоящей из следующих: 1-(5-изохинолинсульфонил)гомопиперазин), N-бензил-2-(пиримидин-4-иламино)тиазол-4-карбоксамид) и (+)-(R)-N-транс-4-(1-аминоэтил)-N-(4-пиридил)цикло-гексанкарбоксамида дигидрохлорид).
9. Способ по п. 1, где указанная примирующая среда стадии б) представляет собой бессывороточную среду, дополненную инсулином, трансферрином и прогестероном.
10. Способ по п. 1, где указанная маленькая молекула, которая активирует бета-катенин и/или сигнализацию Wnt, и/или сигнализацию hedgehog (HH) стадии б) представляет собой 3-(3-амино-фенил)-4-(1-метил-1Н-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион.
11. Способ по п. 1, где указанная примирующая среда стадии б) дополнительно содержит рекомбинантный морфогенный белок кости-4 (BMP-4).
12. Способ по п. 1, где указанная индуцирующая среда представляет собой бессывороточную среду, дополненную VEGF-A (фактор роста эндотелия сосудов) или плацентарным фактором роста 1 (PLGF-1) и низкомолекулярным активатором аденилатциклазы.
13. Способ по п. 12, где указанные низкомолекулярные активаторы аденилатциклазы выбраны из группы, включающей форсколин ((3R)-(6аальфаН)додекагидро-6бета,10альфа,10baльфa-тригидрокси-3бета,4абета,7,7,10абета-пентаметил-1-оксо-3-винил-1Н-нафто[2,1-b]пиран-5бета-ил ацетат), 8-бром-цАМФ(8-бромаденозин-3′,5′-циклический монофосфат) и адреномедуллин.
14. Способ по п. 1, где указанная индуцирующая среда представляет собой среду с заменителем сыворотки или бессывороточную среду, дополненную активаторами сигнализации TGFбета и сигнализации PDGF.
15. Способ по п. 1, где указанная плюрипотентная стволовая клетка представляет собой индуцированную плюрипотентную стволовую клетку.
16. Способ по п. 15, где указанная индуцированная плюрипотентная стволовая клетка представляет собой человеческую клетку.
17. Способ по п. 15, где указанную индуцированную плюрипотентную стволовую клетку получают от субъекта, страдающего от заболевания, ассоциированного с сосудистыми осложнениями.
18. Способ по любому из пп. 1-17, дополнительно включающий стадию
г) инкубирования продукта стадии в) при условиях, подходящих для пролиферации эндотелиальных клеток или гладкомышечных клеток сосудов.
19. Эндотелиальные клетки или гладкомышечные клетки сосудов, полученные способом по любому из пп. 1-18.
20. Биобанк эндотелиальных клеток или гладкомышечных клеток сосудов, полученных способом согласно любому из пп. 1-18.
21. Применение эндотелиальных клеток или гладкомышечных клеток сосудов, полученных способом согласно любому из пп. 1-18, или биобанка по п. 20 в качестве модели in vitro для заболеваний, ассоциированных с сосудистыми осложнениями.
22. Терапевтическая композиция, содержащая эндотелиальные клетки, полученные способом согласно любому из пп. 1-18, или биобанк по п. 20.