ОСУЩЕСТВЛЯЕМЫЙ IN VITRO СПОСОБ МОНИТОРИНГА ПАТОГЕННОЙ НАГРУЗКИ В ПОПУЛЯЦИИ ЖИВОТНЫХ

1. Осуществляемый in vitro способ мониторинга нагрузки по меньшей мере одним патогеном в популяции птиц, при этом способ включает следующие стадии:
(a) отбор и объединение материала образцов экскрементов, полученных от популяции птиц;
(b)гомогенизацию материала объединенного образца, полученного на стадии (a);
(c) разбавление и необязательно стабилизацию материала объединенного образца, полученного на стадии (b), с использованием водного буферного раствора;
(d) лизирование клеточного материала, содержащегося в разбавленном материале образца, полученном на стадии (c);
(e) выделение материала, представляющего собой нуклеиновые кислоты, из лизированного материала образца, полученного на стадии (d);
(f) выявление и количественное определение по меньшей мере одного патогенспецифического целевого гена или его функционального фрагмента, содержащегося в изоляте нуклеиновых кислот, полученном на стадии (e);
(g) повторение стадий (a)–(f) через последовательные промежутки времени; и
(h) отслеживание изменений количества по меньшей мере одного патогенспецифического целевого гена с течением времени.
2. Способ по п. 1, где популяция птиц представляет собой стадо домашней птицы.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, где патоген выбран из патогенных видов бактерий, патогенных видов вирусов и/или патогенных одноклеточных эукариот.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, где изменения показателей нагрузки более чем одним патогеном отслеживают одновременно.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где материал образца экскрементов выбран из группы, состоящей из образцов помета, образцов жидкого навоза или образцов выводимых из организма экскрементов и их растворов/суспензий.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, где материал образца представляет собой фекалии.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где материал объединенного образца, полученный на стадии (a), представляет собой смешанный образец, полученный из отдельных образцов экскрементов.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где размер выборки, необходимый для конкретной популяции, определяют с использованием следующей формулы:
,
0
при этом n представляет собой рекомендованный размер выборки;
Z равняется 1,96 при доверительном уровне, составляющем 95%;
p представляет собой расчетную долю популяции, характеризующуюся наличием рассматриваемого атрибута, q равняется 1-p; и
e представляет собой доверительный интервал, выраженный в виде дроби.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, где материал объединенного образца из стадии (а) получают путем:
(a1) разделения помещения для животных или пространства, в котором популяция животных содержится, на области, образующие сетку из однородных ячеек;
(a2) определения по меньшей мере одного произвольного участка отбора образцов в пределах первой ячейки и сбора одного первого образца из указанного по меньшей мере одного участка отбора образцов; и
(a3) проведения последовательного отбора отдельных образцов экскрементов из оставшихся ячеек с использованием таких же относительных участков отбора образцов в пределах каждой ячейки; и необязательно
(a4) повторения стадий (a2) и (a3) для получения по меньшей мере одной повторной выборки.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, где водный буферный раствор, используемый на стадии (c), содержит хаотропные соли.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стадия (d) лизирования предусматривает стадию (d1) нагревания, стадию (d2) измельчения и стадию (d3) центрифугирования.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, где выявление и количественное определение по меньшей мере одного патогенспецифического целевого гена на стадии (f) осуществляют с помощью qPCR.
13. Применение способа по любому из пп. 1–12 для мониторинга изменений показателя нагрузки по меньшей мере одним патогеном в популяции птиц с течением времени.
14. Применение способа по любому из пп. 1–12 для определения необходимости в проведении кормовых вмешательств или медицинских вмешательств.
15. Применение способа по любому из пп. 1–12 для контроля эффективности кормовых вмешательств или медицинских вмешательств.