БИСПЕЦИФИЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО, СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВАЮЩЕЕСЯ С VEGF И ANG2

1. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF (фактор роста эндотелия сосудов) и ANG2 (ангиопоэтин-2), содержащее антитело к VEGF или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с VEGF, и однодоменное антитело к ANG2, которое специфически связывается с ANG2, где однодоменное антитело к ANG2 ковалентно связано с антителом к VEGF или его антигенсвязывающим фрагментом непосредственно через пептидную связь или опосредованно через линкер.
n
2. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 1, где однодоменное антитело к ANG2 связано с карбоксильным концом тяжелой цепи антитела к VEGF или его антигенсвязывающего фрагмента непосредственно через пептидную связь или опосредованно через линкер, предпочтительно линкер представляет собой (G), где n больше или равно 1.
3. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 1 или 2, где однодоменное антитело к ANG2 содержит области CDR1 (определяющая комлементарность область 1), представленную в SEQ ID NO: 5 или имеющую не более 3 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 6 или имеющую не более 6 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 7 или имеющую не более 3 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью.
4. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-3, где однодоменное антитело к ANG2 содержит области CDR1, представленную в SEQ ID NO: 14, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 15, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 7.
5. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-4, где однодоменное антитело к ANG2 содержит области CDR1, CDR2 и CDR3, представленные в любом из следующих:
i) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 6, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7;
ii) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 8, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 9, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7;
iii) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 10, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7; или
iv) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 11, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7.
6. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-5, где однодоменное антитело к ANG2 представляет собой антитело ламы или гуманизированное антитело.
7. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 6, где гуманизированное антитело содержит каркасную область тяжелой цепи, полученную из человеческого антитела или варианта его каркасной области, где вариант каркасной области имеет не более 10 обратных аминокислотных мутаций в каркасной области тяжелой цепи человеческого антитела;
предпочтительно обратная мутация(-и) представляет собой одну или более мутацию, выбранную из группы, состоящей из 5Q, 30N, 83K, 84P, 93N и 94A.
8. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 6, где однодоменное антитело к ANG2 содержит последовательность, представленную в любом из следующих:
v) последовательность, представленная в SEQ ID NO: 16, предпочтительно последовательность, представленная в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13, или
vi) последовательность, представленная в SEQ ID NO: 27, предпочтительно последовательность, представленная в SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26.
9. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-8, где антитело к VEGF или его антигенсвязывающий фрагмент содержит области:
HCDR1 (определяющая комплементарность область 1 тяжелой цепи), HCDR2 и HCDR3, представленные в SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34, соответственно; и LCDR1 (определяющая комплементарность область 1 легкой цепи), LCDR2 и LCDR3, представленные в SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 37, соответственно.
10. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 9, где антитело к VEGF или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, представленную в SEQ ID NO: 28, и вариабельную область тяжелой цепи, представленную в SEQ ID NO: 30.
11. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по п. 10, где антитело к VEGF или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь, представленную в SEQ ID NO: 29, и тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO: 31 или 54.
12. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-11, содержащее первую полипептидную цепь, выбранную из любой из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 55 или 56, и/или вторую полипептидную цепь, представленную в SEQ ID NO: 29.
13. Однодоменное антитело к ANG2, содержащее области CDR1, представленную в SEQ ID NO: 5 или имеющую не более 3 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 6 или имеющую не более 6 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 7 или имеющую не более 3 мутаций по типу аминокислотных замен по сравнению с указанной последовательностью.
14. Однодоменное антитело к ANG2 по п. 13, содержащее области CDR1, представленную в SEQ ID NO: 14, CDR2, представленную в SEQ ID NO: 15, и CDR3, представленную в SEQ ID NO: 7.
15. Однодоменное антитело к ANG2 по п. 14, содержащее CDR1, CDR2 и CDR3, представленные ниже:
i) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 6, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7;
ii) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 8, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 9, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7;
iii) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 10, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7; или
iv) CDR1, представленная в SEQ ID NO: 5, CDR2, представленная в SEQ ID NO: 11, и CDR3, представленная в SEQ ID NO: 7.
16. Однодоменное антитело к ANG2 по п. 15, выбранное из антитела ламы и гуманизированного антитела.
17. Однодоменное антитело к ANG2 по п. 16, где гуманизированное антитело содержит каркасную область тяжелой цепи, полученную из человеческого антитела или варианта его каркасной области, где вариант каркасной области имеет не более 10 обратных аминокислотных мутаций в каркасной области тяжелой цепи человеческого антитела;
предпочтительно обратная мутация(-и) представляет собой одну или более мутацию, выбранную из группы, состоящей из 5Q, 30N, 83K, 84P, 93N и 94A.
18. Однодоменное антитело к ANG2 по п. 16, содержащее последовательность, представленную ниже:
v) последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, предпочтительно содержащее последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13, или
vi) последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27, предпочтительно содержащее последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26.
19. Однодоменное антитело к ANG2, которое конкурирует за связывание с человеческим ANG2 с однодоменным антителом к ANG2 или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп. 13-18.
20. Однодоменное антитело к ANG2, содержащее те же последовательности области CDR1, CDR2 и CDR3, что и однодоменное антитело, представленное в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13.
21. Моноклональное антитело, содержащее однодоменное антитело к ANG2 по любому из пп. 13-20.
22. Биспецифическое антитело, содержащее однодоменное антитело к ANG2 по любому из пп. 13-20.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество биспецифического антитела, специфически связывающегося с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменного антитела к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклонального антитела по п. 21, или биспецифического антитела по п. 22, а также один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, буферов или эксципиентов.
24. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменное антитело к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклональное антитело по п. 21, или биспецифическое антитело по п. 22.
25. Клетка-хозяин, трансформированная молекулой нуклеиновой кислоты по п. 24, где клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из прокариотической клетки и эукариотической клетки.
26. Способ обнаружения или определения человеческого ANG2 in vitro, включающий применение биспецифического антитела, специфически связывающегося с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменного антитела к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклонального антитела по п. 21, или биспецифического антитела по п. 22.
27. Набор, содержащий биспецифическое антитело, специфически связывающееся с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменное антитело к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклональное антитело по п. 21, или биспецифическое антитело по п. 22.
28. Способ лечения заболевания, связанного с VEGF-опосредованным и/или ANG2-опосредованным ангиогенезом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества биспецифического антитела, специфически связывающегося с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменного антитела к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклонального антитела по п. 21, или биспецифического антитела по п. 22, или фармацевтической композиции по п. 23.
29. Способ лечения рака или ангиогенного заболевания глаз, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества биспецифического антитела, специфически связывающегося с VEGF и ANG2, по любому из пп. 1-12, или однодоменного антитела к ANG2 по любому из пп. 13-20, или моноклонального антитела по п. 21, или биспецифического антитела по п. 22, или фармацевтической композиции по п. 23, предпочтительно где рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, опухоли надпочечников, рака маточной трубы, плоскоклеточной карциномы, рака яичника, рака желудка, колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого, холангиокарциномы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы, рака кожи и рака печени; ангиогенное заболевание глаз выбрано из группы, состоящей из неоваскулярной глаукомы, возрастной макулярной дегенерации (ВМД), диабетического макулярного отека, неоваскуляризации роговицы, неоваскуляризации роговичного трансплантата, отторжения роговичного трансплантата, ретинальной/хориоидальной неоваскуляризации, неоваскуляризации радужно-роговичного угла (рубеоза), неоваскулярного заболевания глаза, рестеноза сосудов и артериовенозной мальформации (АВМ).