УЛУЧШЕННЫЕ СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА

1. Способ получения рекомбинантного полипептида с использованием вариантного прополипептида, включающий следующие этапы:
- культивирование клетки млекопитающего, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид в виде прополипептида (гибридного полипептида из просегмента и полипептида), в котором эндогенный сайт ферментативного расщепления между просегментом и полипептидом заменяется экзогенным сайтом расщепления протеазой,
- извлечение рекомбинантного вариантного полипептида или вариантного прополипептида из клетки или культивационной среды и, таким образом, получение рекомбинантного полипептида.
2. Способ по п. 1, где экзогенный сайт расщепления протеазой выбирают из группы, содержащей сайт расщепления плазмином, сайт расщепления фурином, сайт расщепления IgA-протеазой, сайт расщепления протеазой TEV (от англ. tobacco etch virus - вирус табачной мозаики), сайт расщепления гранзимом В, сайт расщепления тромбином, сайт расщепления фактором 10, сайт расщепления энтерокиназой, сайт расщепления субтилизином, сайт расщепления катепсином, сайт расщепления металлопротеиназой, сайт расщепления протеазой IDES (от англ. IgG-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes - фермент Streptococcus pyogenes, расщепляющий IgG), сайт расщепления протеазой PreScission или их функциональные варианты.
3. Способ по п. 1, где расщепление прополипептида осуществляют во время очистки полипептида.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где экзогенная протеаза представляет собой IgA-протеазу.
5. Способ получения гибридного полипептида, включающий следующие этапы:
- культивирование клетки млекопитающего, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую вариантный гибридный полипептид, где аминокислотная последовательность гибридного полипептида была модифицирована путем замены в гибридном прополипептиде эндогенного сайта расщепления протеазой между просегментом и гибридным полипептидом на экзогенный (относительно происхождения частей полипептида) или искусственный сайт расщепления протеазой,
- извлечение гибридного полипептида или гибридного прополипептида из клетки или культивационной среды и, таким образом, получение (рекомбинантного) гибридного полипептида.
6. Способ по п. 1 или 5, характеризующийся тем, что гибридный полипептид содержит биологически активную группу, линкерный пептид и одновалентную связывающую группу, которая связывается с рецептором гематоэнцефалического барьера (ВВВ, от англ. blood-brain-barier).
7. Способ по п. 6, характеризующийся тем, что линкерный пептид содержит один или более чем один отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
8. Способ по п. 1 или 5, характеризующийся тем, что полипептид представляет собой нейротрофический фактор.