СРЕДСТВА И СПОСОБЫ ПРОИЗВОДСТВА ИСКУССТВЕННЫХ КАПСУЛЬНЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ NEISSERIA MENINGITIDIS

1. Способ in vitro получения капсульных полисахаридов (CPS) Neisseria meningitidis, где упомянутый способ включает стадии:
(a) контактирования по меньшей мере одного донорного углевода по меньшей мере с одной капсульной полимеразой (СР);
(b) инкубации упомянутого углевода с упомянутыми капсульными полимеразами, где указанный углевод является активированным или указанный углевод является активированным во время этого этапа; и
(c) выделения образовавшегося в результате капсульного полисахарида,
где полученные капсульные полисахариды являются синтетическими или искусственными капсульными полисахаридами Neisseria meningitidis серологической группы W-135, специфическими капсульными полисахаридами или где полученные капсульные полисахариды являются искусственными химерными капсульными полисахаридами, содержащими капсульные полисахариды или субъединицы капсульных полисахаридов Neisseria meningitidis серологических групп Y/W-135, W-135/Y, B/W-135, C/W-135, B/Y/W-135, C/Y/W-135, B/W-135/Y, C/W-135/Y, Х/А или А/Х.
2. Способ по п.1, где упомянутый химерный капсульный полисахарид содержит капсульные полисахариды или субъединицы капсульных полисахаридов Neisseria meningitidis серологических групп W-135 и Y.
3. Способ по п.1, где на стадии (а) упомянутый по меньшей мере один донорный углевод и упомянутая по меньшей мере одна капсульная полимераза дальше подвергаются контакту с акцепторным углеводом.
4. Способ по п.1, где упомянутый по меньшей мере один донорный углевод является активированным путем связывания активирующего нуклеотида.
5. Способ по п.4, где упомянутый активирующий нуклеотид выбран из группы, состоящей из: СМР, UDP, TDP и AMP.
6. Способ по п.1, где упомянутая капсульная полимераза является
(а) CP-W-135, как представлено в SEQ ID Nos:1 или 2; или
(б) функционально активным производным CP-W-135, степень идентичности которого с SEQ ID Nos:1 или 2 составляет по меньшей мере 80%, причем функционально активное производное CP-W-135 способно синтезировать капсульный полисахарид серогруппы W и серогруппы Y.
7. Способ по п.1, где по меньшей мере один донорный углевод является
(а) CMP-Neu5Ac и по меньшей мере один донорный углевод является UDP-Gal или UDP-Glc, или
(б) выбирается из группы, включающей Gal-1-P или сиаловую кислоту.
8. Способ по п.7, где упомянутая сиаловая кислота является Neu5Ac.
9. Способ по п.1, где по меньшей мере один донорный углевод является GlcNAc-1-P или ManNAc-1-P.
10. Способ по п.7, где по меньшей мере один донорный углевод подвергается контакту с активирующим ферментом во время стадии (а) согласно п.1 и активирован во время стадии (b) согласно п.1, причем Gal-1-P активирована с помощью USP-сахарно пирофосфорилазы и Nu5Ac активирована с помощью СМР-Nu5Ac синтетазы.
11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая пирофосфорилазу или ее фрагмент, где упомянутая молекула нуклеиновой кислоты содержит молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, которая состоит из:
(a) молекулы нуклеиновой кислоты, которая имеет нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO:9;
(b) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:10;
(c) молекулы нуклеиновой кислоты, которая имеет нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO:9, где один или более нуклеотидов добавлены, удалены или заменены;
(d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:10, где один или более аминокислотных остатков добавлены, удалены или заменены;
(e) молекулы нуклеиновой кислоты, которая является по меньшей мере на 45% идентичной нуклеотидной последовательности согласно SEQ ID NO:9;
(f) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 45% идентичной к аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO:10;
(g) молекулы нуклеиновой кислоты, комплементарной к молекуле нуклеиновой кислоты согласно какой-либо одной из (а)-(f);
(h) молекулы нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при жестких условиях с какой-либо из молекул нуклеиновой кислоты согласно (а)-(g);
(i) молекулы нуклеиновой кислоты, которая отличается от последовательности молекулы нуклеиновой кислоты согласно какой-либо одной из (а)-(h) вследствие вырожденности генетического кода; и
(j) функционального фрагмента молекулы нуклеиновой кислоты согласно (а)- (i).
12. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.11.
13. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.12.
14. Полипептид, закодированный молекулой нуклеиновой кислоты по п.11.
15. Способ по п.7, где Gal-1-P или Glc-1-P подвергается контакту с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей пирофосфорилазу, или с полипептидом, который кодируется молекулой нуклеиновой кислоты во время стадии (а) по п.1 и активирован во время стадии (b) по п.1, где указанная нуклеиновая кислота, кодирующая пирофосфорилазу, или ее фрагмент выбирается из группы, включающей:
(a) молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:9;
(b) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10;
(c) молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:9, где один или более нуклеотидов добавлены, удалены или заменены;
(d) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, где один или более аминокислотных остатков добавлен, изъят или замещен;
(e) молекулу нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 45% идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:9;
(f) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 45% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10;
(g) молекулу нуклеиновой кислоты, комплементарную к молекулам нуклеиновой кислоты по любому из (a)-(f);
(h) молекулу нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при строгих условиях с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из (a)-(g);
(i) молекулу нуклеиновой кислоты, которая отличается от нуклеотидной последовательности по любому из (a)-(h) вследствие вырожденности генетического кода; и
(j) функциональный фрагмент молекулы нуклеиновой кислоты (a)-(i).
16. Способ по п.15, где на стадии (а) по меньшей мере один донорный углевод дальше подвергается контакту с PEP и/или по меньшей мере с одним нуклеотидом.
17. Способ по п.16, где упомянутый по меньшей мере один нуклеотид выбран из группы, состоящей из: СМР, CDP, CTP, UMP, UDP и UTP.
18. Способ по п.3, где упомянутый акцептор является олигомерным или полимерным W-135 капсульным полисахаридом, олигомерным или полимерным Y капсульным полисахаридом, олигомерной или полимерной α2,8-связанной сиаловой кислотой и/или олигомерной или полимерной α2,9-связанной сиаловой кислотой, или где указанный акцептор является капсульным полисахаридом Neissria meningitidis серогруппы А или Х или углеводом со структурой, содержащей терминальные GlcNAc остатки.
19. Способ по п.18, где акцептор несет одну или больше дополнительных функциональных групп в своем восстанавливающем конце.
20. Способ по п.18, где углеводная структура, содержащая терминальные GlcNAc-остатки, выбрана из группы, состоящей из гиалуроновой кислоты, гепарина сульфата, гепарана сульфата и протеинсвязанных олигосахаридов.
21. Способ по п.18, где упомянутый акцепторный капсульный полисахарид является очищенным и/или гидролизованным.
22. Химерный капсульный полисахарид Neisseria meningitidis, который может быть получен способом по п.1.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая химерный капсульный полисахарид по п.22 и приемлемый фармацевтический носитель.
24. Способ профилактики или лечения пациента, имеющего болезнь Neisseria meningitides, способ включает введение пациенту эффективного количества химерного капсульного полисахарида по п.22 или фармацевтической композиции, включающей химерный капсульный полисахарид и приемлемый фармацевтический носитель.
25. Способ по п.24, где субъектом является человек.
26. Способ по п.24, где болезнь Neisseria meningitidis вызвана Neisseria menmgitidis серологической группы А, В, С, W-135, Х или Y.