СПОСОБЫ ПРОИЗВОДСТВА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИ ПРОЦЕССИРОВАННЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ

1. Применение Lys-C для процессинга одноцепочечного ботулинического нейротоксина серотипа A (BoNT/A) путем гидролиза для образования двухцепочечного ботулинического нейротоксина серотипа A (BoNT/A).
C
C
2. Применение по п. 1, в котором одноцепочечный ботулинический нейротоксин серотипа A (BoNT/A) является встречающимся в естественных условиях нейротоксином, рекомбинантным нейротоксином или модифицированным нейротоксином, таким как нейротоксин, лишенный нативного Н-домена, или его части, или производные с другими аминокислотными остатками, заменяющими Н-домен нейротоксина.
3. Применение по п. 2, в котором одноцепочечный ботулинический нейротоксин серотипа A (BoNT/A) включает аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%-ную идентичность последовательности с полипептидной последовательностью, выбранной из любой SEQ ID NO: 3-10;
предпочтительно, в котором Lys-C гидролизует одноцепочечный ботулинический нейротоксин серотипа A (BoNT/A) по положению сразу к С-концу от основного аминокислотного остатка внутри вышеуказанной последовательности из любой SEQ ID NO: 3-10.
4. Применение по любому из пп. 1-3, в котором С-конец L-цепи и N-конец Η-цепи двухцепочечного ботулинического нейротоксина серотипа A (BoNT/A) идентичны соответствующему двухцепочечному ботулиническому нейротоксину серотипа А (ΒοΝΤ/Α), выделенному из клостридий дикого типа.
5. Применение по любому из пп. 1-3, в котором двухцепочечный клостридиальный нейротоксин серотипа A (BoNT/A) имеет идентичную аминокислотную последовательность при сравнении с соответствующим двухцепочечным полипептидом ботулинического нейротоксина серотипа Α (ΒοΝΤ/Α), образованным из такого же одноцепочечного полипептида ботулинического нейротоксина серотипа A (BoNT/A) в клостридиях дикого типа.
6. Способ производства протеолитически процессированного полипептида, включающий стадию контакта:
(а) первого полипептида, вышеуказанного первого полипептида, являющегося Lys-С;
со
(б) вторым полипептидом, причем вышеуказанный второй полипептид подвержен протеолизу вышеуказанным первым полипептидом;
в котором вышеуказанный контакт приводит к протеолитическому процессингу вышеуказанного второго полипептида до по меньшей мере двух продуктов расщепления;
в котором второй полипептид является одноцепочечным ботулиническим нейротоксином серотипа Α (ΒοΝΤ/Α) и в котором вышеуказанный первый полипептид гидролизует одноцепочечный ботулинический нейротоксин серотипа Α (ΒοΝΤ/Α) для образования двухцепочечного ботулинического нейротоксина серотипа А (ΒοΝΤ/Α).
C
C
7. Способ по п. 6, в котором вышеуказанный одноцепочечный ботулинический нейротоксин серотипа Α (ΒοΝΤ/Α) является встречающимся в естественных условиях нейротоксином, рекомбинантным нейротоксином или модифицированным нейротоксином, таким как нейротоксин, лишенный нативного Н-домена или его части, или производные с другими аминокислотными остатками, заменяющими H домен нейротоксина.
8. Способ по п. 7, в котором второй полипептид включает аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%-ную идентичность последовательности с полипептидной последовательностью, выбранной из любой SEQ ID NO: 3-10;
предпочтительно в которой первый полипептид протеолитически расщепляет второй полипептид в положении сразу к С-концу от основного аминокислотного остатка внутри вышеуказанной последовательности из любой SEQ ID NO: 3-10.
9. Способ по любому из пп. 6-8, в котором С-конец L-цепи и N-конец Η-цепи двухцепочечного ботулинического нейротоксина серотипа Α (ΒοΝΤ/Α) идентичны соответствующему двухцепочечному ботулиническому нейротоксину серотипа Α (ΒοΝΤ/Α), выделенному из клостридий дикого типа.
10. Способ по любому из пп. 6-8, в котором двухцепочечный клостридиальный нейротоксин серотипа A (BoNT/A) имеет идентичную аминокислотную последовательность при сравнении с соответствующим двухцепочечным полипептидом ботулинического нейротоксина серотипа Α (ΒοΝΤ/Α), образованным из такого же одноцепочечного полипептида ботулинического нейротоксина серотипа A (ΒοΝΤ/Α) в клостридиях дикого типа.
11. Способ по п. 6, в котором вышеуказанный контакт происходит внутри клетки, в клеточном лизате, в очищенном клеточном лизате или в объекте.
12. Применение способа по п. 6 для оценки качества продукта или для производства лекарственного препарата.
13. Композиция, содержащая протеолитически процессированный полипептид, получаемая способом по любому из пп. 6-11;
предпочтительно где композиция является фармацевтической композицией, включающей процессированный полипептид, получаемый способом по любому из пп. 6-11, и фармацевтически приемлемый носитель.
14. Композиция по п. 13, где вышеуказанная композиция включает смесь процессированного и непроцессированного второго полипептида, вышеуказанную смесь, содержащую менее чем 5% непроцессированного второго полипептида.
15. Композиция по п. 13 или 14, где вышеуказанную композицию выпускают в твердой, жидкой или аэрозольной (газообразной) форме.
16. Композиция по п. 13, где вышеуказанная композиция является лекарственным препаратом или косметической композицией.
17. Композиция по п. 13 для применения в лечении заболевания или нарушения, выбранного из произвольной мышечной силы, фокальной дистонии, включая цервикальную, краниальную дистонию, и доброкачественного идиопатического блефароспазма, гемифациального спазма и фокальной спастичности, желудочно-кишечных расстройств, повышенного потоотделения, и косметической коррекции морщин, в следующем аспекте также блефароспазма, оромандибулярной дистонии, дистонии размыкания челюсти, дистонии смыкания челюсти, бруксизма, синдрома Мейжа, лингвальной дистонии, апраксии века, открытой цервикальной дистонии, антеколлиса, ретроколлиса, латероколлиса, тортиколлиса, фарингеальной дистонии, ларингиальной дистонии, спастической дистонии/аддукторного типа, спастической дистонии/абдукторного типа, спастической одышки, дистонии конечностей, дистонии плеча, профессиональной дистонии, писчего спазма, спазма музыканта, спазма игрока в гольф, дистонии ног, аддукции бедра, сгибания колена при абдукции бедра, разгибания колена, сгибания стопы, разгибания стопы, эквиноваруса, дистонии деформированной стопы, спонтанного тонического разгибания большого пальца стопы, сгибания пальца стопы, разгибания пальца стопы, аксиальной дистонии, синдрома «Пизанской башни», дистонии брюшной стенки, сегментной дистонии, односторонней дистонии, генерализованной дистонии, Х-сцепленной дистонии-паркинсонизма, дистонии при кортико-базальной дегенерации, Х-сцепленной дистонии-паркинсонизма, поздней дистонии, дистонии при спинально-церебеллярной атаксии, дистонии при паркинсонизме, дистонии при хорее Хантингтона, дистонии при болезни Галлевордена-Шпатца, ДОФА-индуцированных дискинезий/ДОФА-индуцированной дистонии, поздних дискинезий/поздней дистонии, пароксизмальных дискинезий/дистоний, кинезиогенного, некинезиогенного вызванного действиями нистагма мягкого неба, миоклонической миокимии, ригидности, слабых мышечных судорог, наследственного тремора подбородка, парадоксальной активности жевательных мышц, односторонних спазмов жевательных мышц, гипертрофической бранхиальной миопатии, гипертрофии жевательной мышцы, гипертрофии передней большеберцовой мышцы, нистагма, осциллопсийного надъядерного паралича взора, эпилепсии парциальной непрерывной, планирования операции спастической кривошеи, паралича абдуктора голосовых связок, не поддающейся лечению мутантной дисфории, дисфункции верхнего сфинктера пищевода, гранулемы голосовых связок, синдрома Жиль де ла Туретта с заиканием, миоклонии среднего уха, защитного закрывания глотки, постларингэктомии, нарушения речи, защитного опущения верхнего века, энтропиона, дисфункции сфинктера Одди, псевлоахалазии, не связанного с ахалазией расстройства пищевода, моторных расстройств пищевода, вагинизма, послеоперационной иммобилизации, тремора, дисфункции мочевого пузыря, детрузорно-сфинктерной диссинергии, спазма сфинктера мочевого пузыря, гемифациального спазма, реиннервационных дискинезий, морщин в уголках глаз из-за применения косметики, асимметрии мимических мышц, ямочек на подбородке, синдрома мышечной скованности, столбняка, гиперплазии предстательной железы, ожирения, лечения косоглазия при детском церебральном параличе, сопутствующего смешанного паралича, состояния после операции по поводу отслоения сетчатки, состояния после операции катаракты, афакии с миозитным косоглазием, миопатического косоглазия, диссоциированного вертикального смещения, в качестве вспомогательного средства при операции косоглазия, эзотропии, экзотропии, ахалазии, анальных трещин, гиперактивности экзокринных желез, синдрома Фрея, парадоксального слезотечения, усиленного потоотделения, аксиллярного, ладонного, подошвенного, ринореи, относительной гиперсаливации при инсульте, при паркинсонизме, при спастических состояниях при боковом амиотрофическом склерозе, при аутоиммунных процессах при энцефалите и миелите, множественном склерозе, поперечном миелите, болезни Девика, вирусных инфекций, бактериальных инфекций, паразитарных инфекций, грибковых инфекций, при наследственном спастическом парапарезном постапоплектическом синдроме, полушарном инфаркте, инфаркте ствола мозга, инфаркте спинного мозга, мигрени, при травме центральной нервной системы, поражении полушарий, поражении ствола мозга, поражении спинного мозга, кровоизлиянии в центральной нервной системе, кровоизлиянии в мозг, субарахноидальном кровоизлиянии, субдуральном кровоизлиянии, интраспинальном кровоизлиянии, при неоплазиях, опухолях полушарий, опухолях ствола мозга, опухолях спинного мозга, храпе.