Мутант фосфолипазы С с высокой ферментативной активностью

1. Выделенный полипептид, выбранный из группы, состоящей из:
(1) полипептида, представленного в SEQ ID NO: 7, и
(2) полипептида, имеющего идентичность последовательности SEQ ID NO: 7 по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, где аминокислотные остатки полипептида, соответствующие по меньшей мере одной из аминокислот 6, 8, 10 и 104 в SEQ ID NO: 7, идентичны аминокислотам 6, 8, 10 и/или 104 в SEQ ID NO: 7, соответственно, и полипептид обладает активностью фосфолипазы С с SEQ ID NO: 7.
2. Выделенный полипептид по п. 1, где в SEQ ID NO: 7 аминокислота 6 представляет собой пролин или триптофан; аминокислота 8 представляет собой аланин, лейцин или изолейцин; каждая из аминокислот 10 и 104 независимо представляет собой серии или треонин; причем предпочтительно выделенный полипептид представляет собой полипептид, представленный в SEQ ID NO: 4.
3. Выделенный полипептид, имеющий идентичность последовательности SEQ ID NO: 4 по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, где аминокислотные остатки выделенного полипептида, соответствующие аминокислотам 6, 8, 10 и 104 в SEQ ID NO: 4, представляют собой пролин, валин, серии и серии, соответственно, причем предпочтительно полипептид получен из Bacillus subtilis.
4. Полинуклеотидная последовательность, выбранная из группы, состоящей из:
(1) полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид по любому из пп. 1-3; и
(2) последовательности, комплементарной полинуклеотидной последовательности (1); и
(3) фрагмента от 15 до 30 п. о. (пар оснований) последовательности (1) или (2);
причем предпочтительно полинуклеотидная последовательность представляет собой последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.
5. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая полинуклеотидную последовательность по п. 4 и одну или более чем одну регуляторную последовательность, функционально связанную с полинуклеотидной последовательностью, причем предпочтительно конструкция нуклеиновой кислоты представляет собой вектор, более предпочтительно вектор представляет собой экспрессионный вектор или клонирующий вектор.
6. Генетически сконструированная клетка-хозяин, содержащая полинуклеотидную последовательность по п. 4 или конструкцию нуклеиновой кислоты по п. 5.
7. Композиция, содержащая полипептид по любому из пп. 1-3 и возможно адъюванты, где адъюванты предпочтительно представляют собой адсорбирующие вещества, выбранные из группы, состоящей из: активированного угля, оксида алюминия, диатомовой земли, пористых керамических веществ и пористого стекла.
8. Применение полипептида по любому из пп. 1-3, полинуклеотидной последовательности по п. 4, конструкции нуклеиновой кислоты по п. 5, клетки-хозяина по п. 6 или композиции по п. 7 в очистке масел и жиров, модификации фосфолипидов, модификации пищевых продуктов, пищевой промышленности и фармацевтической промышленности.
9. Способ ферментативного дегуммирования, включающий дегуммирование с использованием полипептида по любому из пп. 1-3, предпочтительно включающий стадию приведения в контакт полипептида по любому из пп. 1-3 с неочищенным маслом, предпочтительно включающую приведение в контакт полипептида с неочищенным маслом при 50-70°С.
10. Способ по п. 9, включающий один или более чем один из следующих признаков:
(1) полипептид добавляют в количестве от 10 до 1000 миллионных долей (м.д.), предпочтительно от 50 до 500 м.д., более предпочтительно от 100 до 300 м.д. исходя из массы неочищенного масла;
(2) дегуммирование включает перемешивание при 50-60°С в течение 1-3 часов с последующим повышением температуры до 80-90°С и выдерживанием в течение 1-10 минут; и
(3) неочищенное масло выбрано из группы, состоящей из соевого масла, подсолнечного масла, арахисового масла, рапсового масла, масла из рисовых отрубей, кукурузного масла, оливкового масла, пальмового масла, пальмоядрового масла, пальмового олеина, масла канола, касторового масла, кокосового масла, кориандрового масла, хлопкового масла, масла лесного ореха, конопляного масла, льняного масла, масла из косточек манго, масла пенника лугового, копытного масла, сафлорового масла, масла камелии (camellia), таллового масла и масла камелии (tsubaki).