Синтез и анти-ВИЧ-1 активность 1-[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]производных урацила

Выживаемость в группе, получавшей клопи-догрель, составила 90 %, данные достоверны как по отношению к контролю (р < 0,01), так и по отношению к группе мышей, получавшей тикло-пидин (р < 0,05). Легкие животных, которым вводили клопидогрель, имели нормальную окраску с минимальными точечными потемнениями.

При пероральном введении соединения РУ-286 гибель животных уменьшалась в 11,2 раза по сравнению с контролем (р < 0,01) и в 2,3 раза по сравнению с группой, получавших тиклопи-дин. По сравнению с клопидогрелем смертность в группе крыс, получивших соединение РУ-286, была выше на 20 %, однако различия не были статистически достоверны. Животные были более активны, наблюдалось уменьшение выраженности двигательных нарушений. Можно также отметить, что внешние проявления генерализованного тромбоза развивались постепенно в отличие от контрольной группы. Макроскопическая оценка при морфологическом исследовании легких показала сокращение площади массивного тромбоза, легкие в целом имели нормальную светло-розовую окраску.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о наличии антитромботических свойств у антагонистов пуриновых Р2У1-

рецепторов, что позволяет рассматривать их как потенциальный класс новых антитромботиче-ских средств.

ЛИТЕРАТУРА

1. Зиганшин А. У., Зиганшина Л. Е., Бернсток Дж. // Бюлл. эксперимент. биол. и медицины. - 2002. - Т. 134, № 10. - С. 364-370.

2. Сакаев М. Р., Миндукшев И. В., Лесиовская Е. Е. и др. // Эксперим. и клинич. фармакол. - 2000. - № 3. - С. 65-69.

3. Стуковина А. Ю., Черников М. В., Гоечко О. Ю. // Тез. докл. VIII Регион. конф. молодых исследователей Волгоградской области. - Волгоград, 2003. - С. 40-41.

4. Di Minno G., et al. // J. Clin. Invest. - 1985. - Vol. 75. - P. 328-338.

5. Hallam T. J., Rink T. J // J. Physiol. (Lond). -1985. - Vol. 368. - P. 131-146.

6. Hourani S. M. O., Hall D. A. // Trends Pharmacol. Sci. - 1994.-Vol. 15.-P. 103-108.

7. MacKenzie A. B., Mahaut-Smith M. P. // Biochim. Biophys. Acta. - 1996.-Vol. 1278, № 1.-P. 131-136.

8. Ralevic V., Burnstock J. // Pharmacol. Rev. -1998. - Vol. 50, №3. - P. 415-492.

Выражаем благодарность фирме "Sanofi-syntelabo", Франция, за любезно предоставленную субстанцию вещества клопидогрель.

© Коллектив авторов, 2006

УДК 615:547.854.4:616.98-097-022

СИНТЕЗ И АНТИ-ВИЧ-1 АКТИВНОСТЬ 1-[2-(2-БЕНЗИЛ-4-МЕТИЛФЕНОКСИ)ЭТИЛ]ПРОИЗВОДНЫХ

УРАЦИЛА

М. С. Новиков, Ю. А. Орлова, А. А. Озеров, Т. Хартман, Р. У. Букхайт

Лаборатория фармацевтической химии ВНЦ РАМН и АВО, ImQuest BioScience Inc.

Ингибиторы обратной транскриптазы (ОТ) явились первым классом анти-ВИЧ препаратов, применяемым в клинике для лечения СПИДа. Они блокируют ранние стадии жизненного цикла вируса. В настоящее время известны две группы ингибиторов ОТ: нуклеозидные аналоги (зи-довудин, ламивудин) и ненуклеозидные ингибиторы ОТ ВИЧ (невирапин, делавердин, эфави-ренц). С теоретической точки зрения ингибиторы ОТ ВИЧ необходимо применять как для терапии, так и с профилактическими целями, поскольку они могут предотвращать интеграцию провирусной ДНК в клеточную ДНК.

С середины 1990-х годов в комбинированной терапии ВИЧ-инфекции и СПИДа стали применяться ингибиторы протеазы. Это дало заметное понижение заболеваемости и смертности от

оппортунистических инфекций. Использование в терапии СПИДа комбинации ингибиторов ОТ и ингибиторов протеазы способно обеспечить длительную супрессию репликации вируса и предупреждение лекарственной резистентности вируса, что приводит к долговременной клинической пользе [6, 7].

Однако применение в клинике ингибиторов ОТ и протеазы ограничено их специфическими недостатками: нуклеозидные ингибиторы ОТ имеют относительно невысокий терапевтический индекс и обычно вызывают у людей серьезные побочные эффекты; ненуклеозидные ингибиторы ОТ обладают меньшей токсичностью и более высокой специфичностью, однако к ним быстро развивается устойчивость вируса [10]; использование ингибиторов протеазы сопрово-

ждается липодистрофией и другими серьезными нарушениями метаболизма [3]. Кроме того, ингибиторы протеазы бессмысленно применять в профилактических целях, поскольку они блокируют вирусную репродукцию на поздних (постинтеграционных) стадиях жизненного цикла вируса.

Лекарственная резистентность является наиболее серьезной клинической проблемой в лечении инфекций как бактериальной или вирусной природы, так и онкологических заболеваний. Особенно остро стоит эта проблема в терапии ВИЧ-инфекции. Появление устойчивых к действию лекарств вариантов ВИЧ - основная причина неудач в радикальном лечении СПИДа. Поскольку резистентные штаммы вируса способны передаваться между индивидуумами в человеческой популяции, то в настоящий момент в США и Европе около 10 % вновь установленных ВИЧ-1 инфекций имеют устойчивость к одному или даже ко всем трем указанным классам анти-ВИЧ-1 препаратов [8, 9]. По этой причине поиск новых противовирусных агентов, имеющих генетический барьер и активных как в отношении дикого штамма ВИЧ-1, так и в отношении мутантных изолятов вируса, устойчивых к действию известных анти-ВИЧ-1 препаратов, представляется весьма важной и актуальной задачей.

Известно, что некоторые

алкенилдиарилметаны (1) [5] и 2-(дифенил-метокси)этилпроизводные 2-метил-5-

нитроимидазола (2) [4] проявляют мощную анти-ВИЧ-1 активность in vitro.

OMe

MeO.

R1

COOMe

OMe

R2

Rl

O OMe

R2

CH,

N

o2n

В плане поиска новых ингибиторов репродукции ВИЧ-1 нами был синтезирован ряд новых N -производных урацила, также содержащих в составе заместителя диарилметильный фрагмент. На первой стадии синтеза исходные 2-бензил-4-метилфенолы (3) в растворе кипящего изопропилового спирта обрабатывали 4-кратным молярным избытком 1,2-дибромэтана в присутствии 2,5-кратного молярного избытка карбоната калия и каталитического количества краун-эфира РВ-18-СР-6. Вследствие значительного стерического эффекта со стороны бен-зильной группы, реакция протекала достаточно медленно и требовала кипячения в течение 3040 ч. При этом выход 2-(2-бензил-4-метилфенокси)-1-бромэтанов (4) составил 5966 %. Вторая стадия синтеза заключалась в конденсации триметилсилилпроизводного урацила с бромэфирами 4 (Р3 = СН3, /-Рг или С1; Р = Н, СН3 или ¿-Вы), которая проводилась в соответствии с разработанной нами ранее методикой [1]. Эквимолярные количества 2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидина и бром-эфира 4 нагревали при 180-190 °С в течение 3 ч, что приводило после гидролиза к целевым 1 -[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]урацилам (511), выход которых составил 66-83 %:

O

R4

R3

R3

4

R3

5 - 16

где R1, R2 = Н или СН3; R3 = CH3, i-Pr или Cl; R4 = H, CH3 или t-Bu; X = O или NH.

3

1

По этой схеме нами также были синтезированы [2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]произ-водные, содержащие различные модификации в остатке урацила. Так, конденсация триметилси-лилпроизводного тимина с эквимолярным количеством 2-(2-бензил-4-метилфенокси)-1-бромэтана (4) при нагревании до 180-190 °С с выходом 69 % привела к 1 -[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]тимину (12). 6-Метилура-цильный аналог был синтезирован путем алки-лирования 2,5-кратного молярного избытка 6-метилурацила бромэфиром 4 в растворе ДМФА в присутствии карбоната калия. После разделения смеси Ж-моно- и Ж,Ш-дизамещенных продуктов алкилирования целевой 1-[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]-6-метилурацил (13) был получен с выходом 38 %. Обработка цито-зина бромэфиром 4 в растворе ДМФА в присутствии карбоната калия с выходом 70 % привела к 1 -[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]цито-зину (14).

Для изучения соотношения "структура-активность" нами был получен аналог, содержащий в составе мостика, связывающего остаток урацила с дифенилметановым фрагментом, три метиленовые группы. Его синтез был осуществлен путем конденсации эквимолярных количеств 2,4-бис(триметилсилил-окси)пиримиди-на и 3-(2-бензил-4-метилфенокси)-1-бромпропана (17). Целевой 1-[3-(2-бензил-4-метилфенокси)про-пил]урацил (18) был получен с выходом 76%:

Br

CH,

O

17

CH,

18

Аналогичным образом, путем конденсации эквимолярных количеств 2,4-

бис(триметилсилилокси)пиримидина и 1 -бром-2-[2-(1-нафтилметил)-4-метилфенокси]этана (19) был получен 1-[2-[2-(1-нафтилметил)-4-метилфенокси]этил]урацил (20), выход которого составил 49 %:

Br

CH,

19

H

'JO

CH,

20

Физико-химические свойства полученных веществ представлены в таблице. Структура целевых соединений 5-16, 18 и 20 подтверждена ЯМР 1Н спектроскопией. Химические сдвиги, мультиплетность и интегральная интенсивность сигналов протонов соответствуют расчетным значениям. Чистота и индивидуальность соединений доказаны методом тонкослойной хроматографии, состав - элементным анализом.

Противовирусные свойства в отношении ВИЧ-1 in vitro полученных 1-[2-(2-бензил-4-метилфенокси)этил]производных урацила были исследованы в ImQuest Bioscience Inc. (Мериленд, США) в соответствии с ранее описанным методом [2]. Исследования показали, что 1-[2-[2-(3,5-диметилбензил)-4-метилфенокси]этил]урацил (9) проявляет заметную вирусингибиторную активность: соединение ингибирует на 50 % репродукцию вируса в концентрации 0,26 дМ. Однако за счет относительно высокой цитотоксично-сти (ЦК50 13,6 дМ) это соединение имеет относительно низкий индекс селективности - 52,3.

Таблица

Свойства синтезированных соединений

Соединение R1 R2 R3 R4 Rf (система) Выход, % Тпл, С

5 H H 4-Me H 0,53 (А) 66 146-147

6 Н Н 4-Ме 2-Ме 0,44 (А) 70 173-174

7 Н Н 4-Ме 3-Ме 0,35 (А) 83 127-128

8 H H 4-Me 2,5-Me2 0,68 (А) 79 175-177

9 H H 4-Me 3,5-Me2 0,58 (А) 74 156-158

10 H H 4-Me 2,4,6-Me3 0,50 (А) 67 208-209

O

Окончание табл.

Соединение R1 R2 R3 R4 Rf (система) Выход, % Тпл, С

11 Н Н 4-Ме 2,3-Me2-5-t-ßu 0,71 (А) 75 166-168

12 Me H 4-Me H 0,60 (А) 69 134-135

13 H Me 4-Me H 0,44 (А) 38 160-161

14 H H 4-Me H 0,45 (Б) 70 222-223

15 H H 4-/-Pr H 0,55 (А) 54 106-107

16 H H 4-Cl H 0,48 (А) 62 169-170

18 H H 4-Me H 0,70 (А) 76 157-158

20 Н Н 4-Ме - 0,56 (А) 49 192-194

Таким образом, нами синтезирован ряд новых производных урацила, содержащих в своем составе дифенилметановый фрагмент, который связан с остатком урацила двух- или трехугле-родным мостиком. Найдено, что некоторые представители этого ряда соединений проявляют заметную активность в отношении ВИЧ-1 in vitro. Результаты исследований могут служить основой для дальнейшего целенаправленного поиска новых анти-ВИЧ-1 лекарственных веществ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Спектры ЯМР Н регистрировали на спектрометре "Bruker DRX-500" (500 МГц) в ДМСО-D6, внутренний стандарт ТМС. Интерпретацию спектров осуществляли с помощью лицензионной программы ACD/HNMR "Predictor Pro 3.0" фирмы "Advanced Chemistry Development" (Канада). Масс-спектры регистрировали на спектрометре "Varian MAT-111" c прямым вводом образцов в ионный источник, энергия ионизирующих электронов 70 эВ. ТСХ выполняли на пластинах "Silufol UV-254", проявление - в парах йода. В качестве элюента использовали системы: этилацетат (А); хлороформ-метанол, 10:1 (Б); гексан-этилацетат, 10:1 (В). Температуры плавления измерены в стеклянных капиллярах на приборе 'Mel-Temp 3.0" (Laboratory Devices Inc., США).

2-(2-Бензил-4-метилфенокси)-1-бромэтан (4). Смесь 17,5 г (88,3 ммоль) 2-бензил-4-ме-тилфенола, 30,0 г (217 ммоль) К2СО3, 30,0 мл (348 ммоль) 1,2-дибромэтана и 0,6 г DB-18-CR-6 в 150 мл безводного изопропилового спирта кипятят в течение 40 ч (контроль ТСХ по исчезновению пятна исходного фенола в системе В). Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении, остаток перегоняют в вакууме. Собирают фракцию, кипящую при 192-196 °С / 2 мм рт. ст., и получают 16,9 г (выход 66 %) вязкой прозрачной бесцветной жидкости, которая при комнатной температуре кристаллизуется. Тпл = 58-59 °С, Rf 0,71 (система В). 1H ЯМР-спектр (CCl4), 5, м.д., J (Гц): 2,14 с (3Н, СНэ); 3,28 т (2Н, J = 6 Гц, 1\1-СН2); 3,80 с (2Н, Ph^); 3,96 т (2Н, J = 6 Гц, О-СН2); 6,466,48 м (1Н, Н-5'); 6,46-6,48 м (2H, H-3', H-6'); 6,97-

7,11 м (5Н, ОаНа).

Соединения 4, 17 и 19 получают аналогично.

1-[2-(2-Бензил-4-метилфенокси)этил]ура-цил (5). К 2,4-бис(триметилсилилокси)пирими-дину, полученному кипячением 1,5 г (13,4 ммоль) урацила в 50 мл гексаметилдисилазана в присутствии каталитического количества хлорида аммония, добавляют 4,1 г (13,4 ммоль) 2-(2-бензил-4-метилфенокси)-1-бромэтана (4) и нагревают при 180-190 °С в течение 3 ч с защитой от влаги воздуха. Образовавшуюся вязкую прозрачную светло-коричневую жидкость оставляют на ночь при комнатной температуре. Реакционную массу растворяют в 25 мл этилацетата и добавляют 10 мл изопропилового спирта. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре этилацетатом (2 х 10 мл), сушат на воздухе при комнатной температуре и дважды кристаллизуют из смеси 30 мл изопро-пилового спирта и 10 мл ДМФА. Получают 3,0 г соединения 5 (выход 66 %) в виде белого кристаллического вещества, Тпл = = 146-147 °С, Rf 0,53 (система A). 1H ЯМР-спектр (ДМСО-06), 5, м.д., J (Гц): 2,18 с (3Н, СН3); 3,81 с (2Н, РИСН2); 4,07 т (2Н, J = 6 Гц, 1\1-СН2); 4,14 т (2Н, J = 6 Гц, О-СН2); 5,48 д (1Н, J = 8 Гц, Н-5); 6,84-6,98 м (3Н, ароматические Н); 7,12-7,25 м (5Н, ароматические Н); 7,60 д (1Н, J = 8 Гц, Н-6); 11,31 уш. с (1Н, NH). Масс-спектр m/z: 336 [M]+.

Соединения 6-12, 15, 16, 18 и 20 получают аналогично.

1-[2-(2-Бензил-4-метилфенокси)этил]-6-метилурацил (13). Суспензию 3,0 г (23,8 ммоль) 6-метилурацила и 1,35 г (9,8 ммоль) К2СО3 в 50 мл безводного ДМФА перемешивают при 80 °С в течение 1 ч до образования К-соли 6-метилурацила, затем добавляют раствор 2,9 г (9,5 ммоль) 2-(2-бензил-4-метилфенокси)-1-бром-этана (4) в 10 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают еще 4 ч при той же температуре. Реакционную массу выливают в 200 мл холодной воды и помещают на ночь в холодильник. Водный слой декантируют, твердый остаток сушат на воздухе при комнатной температуре, растворяют в смеси 60 мл четыреххлористого углерода и 20 мл изопро-пилового спирта, фильтруют, фильтрат разбавляют 20 мл гексана и помещают на ночь в холо-

дильник, вновь фильтруют и добавляют еще 20 мл гексана. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 10 мл гексана, сушат на воздухе и перекристаллизовывают из смеси 30 мл изопропилового спирта и 20 мл гексана. Получают 1,25 г соединения 13 (выход 38 %) в виде светло-желтого мелкокристаллического вещества, Тпл = 160-161 °С, Rf 0,44 (система А). 1H ЯМР-спектр (ДМСО-06), 5, м.д., J (Гц): 2,16 с (3Н, СН3); 2,34 с (3Н, СН3); 3,85 с (2Н, PhCH2); 4,09 т (2Н, J = 6 Гц, N-CH2); 4,15 т (2Н, J = 6 Гц, О-СН2); 6,85-6,99 м (3Н, ароматические Н); 7,10-7,24 м (5Н, ароматические Н); 7,60 с (1Н, Н-6); 11,20 уш. с (1Н, NH). Масс-спектр m/z: 350 [M]+.

Соединение 14 получают аналогично.

Исследование анти-ВИЧ-1 активности in vitro. CEM-SS-клетки суспендировались в куль-туральной среде в количестве 105 клеток/мл и инфицировались ВИЧ-1 (штамм HTLV-IIIb) при мультипликации инфекции 0,2. Немедленно после инфицирования вирусом вносились растворы, содержащие различные концентрации исследуемого вещества в ДМСО, и инкубировались в течение 4 дней при 37 оС. Число живых клеток устанавливалось на 4-й день инкубации при помощи бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия, при этом устанавливалась концентрация вещества, которая на 50 % защищала CEM-SS-клетки от цитопатического

УДК 616.379-008.64-085.547.458.6

эффекта ВИЧ-1 (ИК50). Цитотоксичность тестируемых соединений определялась параллельно, при этом определялась концентрация вещества, которая на 50 % уменьшала количество CEM-SS-клеток (ЦК50). Расчетным путем определяли индекс селективности, являющийся отношением цитотоксической концентрации к ингибиторной концентрации: ЦК50/ИК50 [10]'

ЛИТЕРАТУРА

1' Новиков М. С, Озеров А. А. // ХГС - 2005' - C 1071-1076'

2' Buckheit R. W, White E .L, Fliakas-Boltz V, et al' //Antimicrob' Agents Chemother' - 1999' - Vol' 43. -P. 1827-1834'

3' Calza L., Manfredi R., Chiodo F. // Int J' Antimicrob' Agents' - 2003' - Vol' 22' - P' 89-99'

4' De Martino G., La Regina G., Di Pasquali А, et al' // J' Med' Chem' - 2005' - Vol' 48' - P' 4378-4388'

5' Deng B.-L., Hartman T.L., Buckheit R.W., et al' // Там же' - P' 6140-6155'

6' Montaner J. S., Reiss P., Cooper D., et al' // JAMA' - 1998' - Vol' 279' - P' 930-937'

7' Pialoux G., Raffi F., Brun-Vezinet F., et al' // N' Engl' J' Med' - 1998' - Vol' 339' - P' 1269-1276'

8' Salomon П., Wainberg M., Brenner B., et al' // AIDS' - 2000' - Vol' 14' - P' 17-23'

9' Tamalet C, Pasquier C, Yahi N., et al' // J' Med' Virol' - 2000' - Vol' 61' - P' 181-186'

10' Wainberg M. А. // J' Acquir Immune' Defic Syndr - 2003' - Vol' 34' - SuppL 1' - S' 2-7'

© Коллектив авторов, 2006

КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ "АСТРОЛИНА", ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ИНУЛИНА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ II ТИПА

П. А. Бакумов, Ю. В. Козыренко, Н. В. Деркач

Кафедра клинической фармакологии и интенсивной терапии, кафедра общей врачебной практики и профессиональных заболеваний ВолГМУ

Сахарный диабет II типа является одним из наиболее распространенных заболеваний во всем мире и представляет собой хроническое заболевание, имеющее кумулятивный характер и приводящее к ранней инвалидизации и летальности в связи с поздними сосудистыми осложнениями, в числе которых - микроангио-патии (ретинопатия и нефропатия), макроангио-патии (инфаркт миокарда, инсульт, гангрена нижних конечностей) [1, 2]. Для сахарного диабета II типа характерно раннее развитие и быстрое прогрессирование атеросклероза, являющегося патогенетическим субстратом ишемической болезни сердца. Атеросклероз различных сосудистых регионов развивается у больных сахарным диабетом в 2-5 раз чаще, чем у лиц без диабета, что обусловлено наличием дополнительных факторов риска: гипергликемией, инсу-линорезистентностью и гиперинсулинемией, па-

тологией тромбоцитарного звена гемостаза, диабетической нефропатией [1]. Поэтому сахарный диабет II типа остается одной из актуальных проблем здравоохранения и требует поиска новых методов и препаратов, позволяющих повысить эффективность терапии, способствующих лучшей компенсации метаболических нарушений, улучшению качества жизни больных. Имеются данные о нормализующем влиянии на углеводный и липидный обмен инулина - полисахарида, содержащегося в растительных экстрактах клубней топинамбура [3].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Разработать оптимальный режим дозирования препарата, содержащего инулин (астролин) в комплексном лечении больных сахарным диабетом II типа с сопутствующей патологией сердечно-сосудистой системы, оценить влияние астролина на углеводный обмен, показатели