НИТРИТРЕДУКТАЗА В КАЧЕСТВЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ МИШЕНИ ПРОТИВ ТУБЕРКУЛЕЗА И СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ТУБЕРКУЛЕЗА

1. Способ скрининга ингибиторов нитритредуктазы, пригодных в качестве противотуберкулезного препарата, включающий:
i. инфицирование культуры макрофагов Thp1 микобактериями Mycobacterium tuberculosis;
ii. промывание культуры инфицированных макрофагов 1× раствором PBS с последующим добавлением свежей среды (минимальная поддерживающая среда, MEM), содержащей 50 мМ нитрата натрия;
iii. добавление 2,5 мкл ингибиторов в DMSO вместе со стандартными ингибиторами narG, nirB и glnA1 в их соответствующей IC90. в культуру инфицированных макрофагов на день 0 и день 5, соответственно, и инкубацию планшета до дня 8; и
iv. оценку уровня аммиака/нитрита в культуральной среде для определения числа жизнеспособных клеток.
2. Способ по п. 1, в котором ингибиторы выбраны из группы, состоящей из ферментов, принадлежащих нитратному метаболическому пути, которые убивают бактерии Mycobacterium tuberculosis в дормантной/латентной стадии.
3. Способ по п. 2, в котором ингибиторы выбраны из группы, состоящей из рифампицина, пентахлорфенола, стрептомицина, изониазида, этамбутола, пиразинамида.
4. Способ по п. 1, в котором ингибиторы направлены против активной и дормантной стадии Mycobacterium tuberculosis (МТВ).
5. Способ по п. 1, в котором бактерии находятся в аэробных условиях, на индуцированной гипоксией дормантной стадии и в макрофагах Thp1 клеточной линии острой моноцитарной лейкемии человека.
6. Применение ингибиторов по п. 1 против нитритредуктазы в качестве лекарственного препарата, направленного против Mycobacterium tuberculosis (МТВ).
7. Способ определения тяжести туберкулеза у людей, включающий:
a) получение биологической жидкости от указанного субъекта;
b) добавление реагентов А и В в образец, полученный на этапе (а); определение интенсивности окрашивания раствора, полученного на этапе (b), где пурпурное окрашивание является показателем наибольшей тяжести заболевания, а бледно-розовое - наименьшей;
c) определение титра бактерий, присутствующих в образце, полученном на этапе (b), где уровень окрашивания определяется путем сравнения с цветовыми полосками или стандартными цветовыми кодами.
8. Способ по п. 7, в котором бактерии определяют в клиническом образце, содержащем биологическую жидкость, выбранную из группы, состоящей из мокроты, мочи, крови и т.д.
9. Способ по п. 7, в котором реагент А представляет собой сульфаниловую кислоту.
10. Способ по п. 7, в котором реагент В представляет собой N-(1-нафтил)этилендиамина дигидрохлорид (NEDD).
11. Диагностический набор для обнаружения заболеваний Mycobacterium tuberculosis, включающий реагенты А и В по пп. 9 и 10 вместе с руководством по применению и необязательно с добавками и носителями.
12. Применение диагностического набора по п. 11 для определения степени тяжести заболевания Mycobacterium tuberculosis.