СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОСТРОГО ДЕСТРУКТИВНОГО ИНФИЦИРОВАННОГО ПАНКРЕОНЕКРОЗА
METHOD FOR SIMULATING ACUTE DESTRUCTIVE INFECTED PANCREONECROSIS

Изобретение относиться к медицине, в частности к экспериментальной хирургии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ моделирования деструктивного панкреатита, описанный Шалимовым С.А. и соавт., 1989 г., с применением аппарата «Криоэлектроника»: после извлечения через лапаротомное отверстие поджелудочной железы на ее поверхности устанавливают аппликатор установки «Криоэлектроника», замораживают нужных размеров участок до температуры от -25°С до -100°С и ниже, поддерживают эту температуру в течение 3-5 мин, а затем размораживают. На участке, подвергшемся криовоздействию, возникает острый геморрагический панкреатит с исходом в очаговый некроз и склероз. Прилегающие участки железы остаются интактными. Если площадь криодеструкции превышает 30% площади всей железы, животное погибает. Деструкции подвергается как эндо-, так и экзокринная ткань. После чего поджелудочная железа погружалась в брюшную полость животного.
Недостатками данного способа являются: отсутствие ограниченности воспалительного процесса от органов брюшной полости, с развитием панкреатита и ферментативного перитонита.
Технический результат изобретения: создание управляемого способа моделирования острого деструктивного инфицированного панкреонекроза, близкого к таковому, развивающемуся в клинических условиях.
2
Технический результат достигается тем, что после моделирования деструктивного панкреонекроза путем криодеструкции поджелудочной железы крысы аппликатором площадью 0,6 см в течение 5 сек, охлажденным в жидком азоте в течение 40 сек, производится погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в заранее сформированную искусственным путем из наружной и внутренней косых мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость, с последующим в нее введением 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка. Перед ушиванием операционной раны к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.
Изобретение поясняется чертежами.
Фиг.1 - формирование полости из мышц передней брюшной стенки.
Фиг.2 - выведение из брюшной полости комплекса поджелудочной железы и селезенки.
Фиг.3 - нанесение криодеструкции на поджелудочную железу.
Фиг.4 - погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в сформированную искусственным путем из мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость.
Фиг.5 - введение в сформированную искусственным путем из мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка.
Фиг.6 - закрепление фистулы к листкам наружной косой мышцы передней брюшной стенки животного для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.
Способ осуществляется следующим образом.
Моделирование острого деструктивного инфицированного панкреонекроза проводят на половозрелых крысах линии «Wistar», средней массой тела 250-300 г, без признаков заболеваний, прошедших карантин и содержащихся на стандартном пищевом и питьевом режиме в условиях вивария.
2
Под общим наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг, внутрибрюшинно), с соблюдением правил асептики и антисептики проводят лапаротомию параректальным разрезом слева, длинной до 2 см. Выполняют моделирование острого деструктивного инфицированного панкреонекроза путем криодеструкции поджелудочной железы крысы аппликатором площадью 0,6 см в течение 5 сек, охлажденным в жидком азоте в течение 40 сек, производится погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в заранее сформированную искусственным путем из наружной и внутренней косых мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость, с последующим в нее введением 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка. Перед ушиванием операционной раны к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.
Пример конкретного выполнения
Исследование проводилось в условиях операционного блока НИИ Экологической медицины на базе Курского государственного медицинского университета. Использовались половозрелые крысы самцы линии «Wistar» без признаков заболеваний, прошедшие карантин и содержащиеся на стандартном пищевом и питьевом режиме в условиях вивария. Все манипуляции выполнялись с соблюдением требований к гуманному обращению с животными (г.Страсбург, Франция, 1986).
С соблюдением правил асептики и антисептики под общим наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг, внутрибрюшинно) проводилась лапаротомия параректальным разрезом слева, длинной до 2 см. В рану выводился комплекс селезенка с желудочно-селезеночной связкой. Поджелудочная железа изолировалась от органов брюшной полости путем наложения 1-2 швов на листки внутренней косой мышцы, а от окружающих тканей - стерильной салфеткой.
Перед моделированием острого деструктивного инфицированного панкреонекроза производили измерение микроциркуляции в желудочно-селезеночной связке методом лазерной доплеровской флоуметрии (ЛДФ). Исследование осуществляли при помощи аппарата - лазер-доплеровского флоуметра «Biopac-systems MP-100» и датчика «TSD-144». Запись и обработка данных производилась при помощи программы AcqKnowledge 3.8.1. Уровень микроциркуляции регистрировали в 24 точках желудочно-селезеночной связки по ходу сегментарных селезеночных артерий. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 сек в каждой точке. Из полученных 24 значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции у данного животного.
2
В сосуд Дюара, содержащий жидкий азот, на 40 сек погружался аппликатор с площадью рабочей поверхности 0,6 см, при погружении аппликатор держали за шелковую нить. После извлечения из жидкого азота аппликатор захватывался пинцетом и на 5 сек прижимался к левой доле поджелудочной железы так, чтобы избежать контакта с селезеночными сосудами. После замораживания поджелудочной железы дожидались ее оттаивания. Затем комплекс поджелудочной железы и селезенки погружался в полость, образованную наружной и внутренней косой мышцами передней брюшной стенки крысы. В полость вводилась микробная взвесь золотистого стафилококка в объеме 0,3 мл. Перед ушиванием полости к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов. Установленная фистула частично укрывалась кожей.
В эксперименте производилось 4 серии исследований:
1 серия - крысы без лечения, 2 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную оперативным путем полость мази «Левомеколь», 3 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную полость гипохлорита натрия в геле гидроксиметилцеллюлозы, 4 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную полость геля гидроксиметилцеллюлозы.
Во всех сериях крысы выводились из эксперимента на 3, 5, 7, 10 сутки.
При выведении крыс из эксперимента проводилось измерение микроциркуляции в желудочно-селезеночной связке методом лазерной доплеровской флоуметрии (ЛДФ). После замера микроциркуляции проводился забор крови из левого желудочка сердца для проведения биохимического исследования, исследования OAK (плазматические клетки), забор тканей и органов для подсчета КОЕ, гистологического исследования комплекса поджелудочной железы и селезенки, печени, почек, сердца, тонкой кишки.
Результаты проведенных исследований
Таблица 1
Распределение экспериментальных животных по группам опытов
№ п\п
Название группы
Характер эксперимента
Количество животных
1
интактная
Без лечения
96
2
сравнения
Введение в брюшную полость мази «Левомеколь»
96
3
контрольная
Введение в брюшную полость иммобилизированным гипохлоритом натрия в геле полимеров
96
Таблица 2
Уровень летальности в исследуемых группах
Название группы
3 сутки
5 сутки
7 сутки
10 сутки
итактаная
97,5%
83,3%
83,3%
79,1%
сравнения
79,3%
70,8%
66,6%
62,5%
контрольная
62,5%
54,2%
42%
30%
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями первой группы
При исследовании уровня летальности: смертность в 3 контрольной в 1,4 раза (46,8%) меньше, чем во 2 сравнения (69,7%), и в 1,8 раза ниже, чем в итактной (83,3%).
Таблица 3
Динамика показателей эндогенной интоксикации у животных с экспериментальным панкреонекрозом
показатели
Сроки после операции
Группы животных
1
2
3
ЛИИ, усл. ед. (здоровые животные - 1,1±0,3)
3
7,6±0,5
6,3±0,4
4,5±0,5*
5
6,3±0,4
4,9±0,4
1,9±0,4*
7
6,1±0,4
3,3±0,3*
1,3±0,3*
10
4,9±0,3
2,1±0,3*
1,2±0,3*
Лейкоциты*10<sup>3</sup>\мл (здоровые животные - 8,8±0,4)
3
19,1±0,8
17,4±0,7
14,9±0,5*
5
17,2±0,6
13,5±0,4
9,5±0,4*
7
12,7±0,4
10,7±0,3*
8,0±0,3*
10
11,1±0,4
8,9±0,2*
8,1±0,3*
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями первой группы
При исследовании общего анализа крови установлено, что нормализация лейкоцитоза и лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) в контрольной группе наступала к 5-м суткам, а в группе сравнения - на 7 сутки.
Таблица 4
Результаты бактериологического исследования ткани из очага инфицирования у крыс с экспериментальным панкреонекрозом
№
Название группы
Количество микроорганизмов, КОЕ*10<sup>3</sup>/мл
3 сутки
5 сутки
7 сутки
10 сутки
1
интактные
89,5±7,2
84,2±5,8
81,1±4,8
78,1±1,8
2
сравнения
61,3±6,2
58,4±5,0
53,6±3,2
47,2±2,1
3
контрольная
37,8±6,7
32,2±4,6
29,4±2,2
26,7±1,2
Примечание: достоверность различий средних, р<0,05.
При бактериологическом исследовании количество микроорганизмов в 1 г ткани очага инфицирования на 3 сутки в контрольной группе в 1,6 раза ниже, чем в группе сравнения и почти в 2 раза ниже к 10-м суткам.
Таким образом, предложенная модель позволяет экспериментально изучать действие лекарственных препаратов на течение инфицированного панкреонекроза.