ВЫСОКОСТАБИЛЬНЫЙ Т-КЛЕТОЧНЫЙ РЕЦЕПТОР И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Т-клеточный рецептор (TCR), где:
(1) гидрофобный коровый домен TCR является мутантным; и
(2) TCR обладает стабильностью более высокой, чем стабильность соответствующего TCR, имеющего гидрофобное ядро дикого типа.
2. TCR по п. 1, где участки CDR (участки, определяющие комплементарность) TCR являются такими же, как участки CDR TCR дикого типа, или содержат мутацию, повышающую аффинность.
3. TCR по п. 1, где TCR является растворимым.
4. TCR по п. 1, где TCR содержит (а) всю или часть α-цепи TCR, за исключением ее трансмембранного домена; и (б) всю или часть β-цепи TCR, за исключением ее трансмембранного домена;
и каждый из (а) и (б) независимо содержит функциональный вариабельный домен или функциональный вариабельный домен и по меньшей мере часть константного домена цепи TCR.
5. TCR по п. 1, где TCR представляет собой одноцепочечныей TCR, состоящий из вариабельного домена α-цепи TCR и вариабельного домена β-цепи TCR, связанных гибким линкерным пептидом.
6. TCR по любому из пп. 1-5, где одна или более чем одна из следующих позиций в вариабельном домене α-цепи TCR является мутантной: аминокислота в позициях 11, 13, 19, 21, 53, 76, 89, 91 или 94 вариабельного домена α-цепи, и/или аминокислота в третьей, пятой или седьмой позиции с конца α-цепи короткого пептида, кодируемого J-геном, где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT (международная база данных по иммуногенетике).
7. TCR по любому из пп. 1-5, где одна или более чем одна из следующих позиций в вариабельном домене α-цепи, представленном в SEQ ID NO. 9 или SEQ ID NO. 29, или SEQ ID NO. 31, или SEQ ID NO. 33 TCR, является мутантной: аминокислота в позиции 11, 13, 19, 21, 53, 76, 89, 91 или 94 вариабельного домена α-цепи, и/или аминокислота в третьей, пятой или седьмой позиции с конца α-цепи короткого пептида, кодируемого J-геном, где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT.
8. TCR по любому из пп. 1-5, где одна или более чем одна из следующих позиций в вариабельном домене β-цепи TCR является мутантной: аминокислота в позиции 11, 13, 19, 21, 53, 76, 89, 91 или 94 вариабельного домена β-цепи и/или аминокислота во второй, четвертой или шестой позиции с конца β-цепи короткого пептида, кодируемого J-геном, где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT.
9. TCR по любому из пп. 1-5, где одна или более чем одна из следующих позиций в вариабельном домене β-цепи, представленном в SEQ ID NO. 11 или SEQ ID NO. 30, или SEQ ID NO. 32, или SEQ ID NO. 34 в TCR, является мутантной: аминокислота в позиции 11, 13, 19, 21, 53, 76, 89, 91 или 94 вариабельного домена β-цепи, и/или аминокислота во второй, четвертой или шестой позиции с конца β-цепи короткого пептида, кодируемого J-геном, где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT.
10. TCR по любому из пп. 1-5, где вариабельный домен α-цепи TCR содержит один или более чем один аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из: 11L, 11М или 11Е; 13V, 13R или 13K; 19V; 21I; 91L или 91I; и 94V или 94I; и/или вариабельный домен β-цепи TCR содержит один или более чем один аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из: 11L или 11V; 13V; 19V; 89L; 91F или 91I; 94V или 94L; шестая позиция с конца β-цепи, кодируемой J-геном, представляет собой Т; и четвертая позиция с конца β-цепи, кодируемой J-геном, представляет собой М; где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT.
11. TCR по любому из пп. 1-5, где аминокислотный остаток, находящийся в вариабельном домене α-цепи и/или вариабельном домене β-цепи TCR и расположенный на поверхности, является мутантным.
12. TCR по п. 11, где TCR содержит один или более чем один аминокислотный остаток вариабельного домена α-цепи, выбранный из группы, состоящей из: 4L; 12N; 16S; 93N или 93R; 97N; 100G; 105S; и последняя позиция α-цепи, кодируемой J-геном, представляет собой D; и/или TCR содержит один или более чем один аминокислотный остаток вариабельного домена β-цепи, выбранный из группы, состоящей из: 4I; 101L; последняя позиция β-цепи, кодируемой J-геном, представляет собой D; и третья позиция с конца β-цепи, кодируемой J-геном, представляет собой Е; где нумерация позиций аминокислот является нумерацией, представленной в IMGT.
13. TCR по любому из пп. 1-5, где TCR содержит вариабельный домен α-цепи, аминокислотная последовательность которого выбрана из группы, состоящей SEQ ID NO. 15, 17, 35, 37, 39, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 97, 99, 101, 103, 105 и 107; и/или
TCR содержит вариабельный домен β-цепи, аминокислотная последовательность которого выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO. 16, 18, 36, 38, 40, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 98, 100, 102, 104, 106 и 108.
14. TCR по любому из пп. 1-5, где комбинация вариабельного домена α-цепи и вариабельного домена β-цепи TCR выбрана из группы, состоящей из:
(а) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 15, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
(б) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 17, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 18;
(в) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 15, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 18;
(г) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 35, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 36;
(д) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 37, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 38;
(е) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 39, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 40;
(ж) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 75, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 86;
(з) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 76, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 87;
(и) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 77, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 88;
(к) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 78, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 89;
(л) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 79, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 90;
(м) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 80, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 91;
(н) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 81, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 92;
(о) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 82, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 93;
(п) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 83, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 94;
(р) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 84, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 95;
(с) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 85, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 96;
(т) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 97, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 98;
(у) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 99, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 100;
(ф) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 101, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 102;
(х) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 103, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 104;
(ц) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 105, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 106; и
(ч) вариабельного домена α-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 107, и вариабельного домена β-цепи, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 108.
15. TCR по п. 4, где TCR представляет собой α/β гетеродимерный TCR, имеющий последовательность константного домена α-цепи и последовательность константного домена β-цепи, и цистеиновые остатки образуют дисульфидную связь между константными доменами α- и β-цепей.
16. TCR по п. 15, где цистеиновые остатки образуют искусственную дисульфидную связь между константными доменами α- и β-цепей TCR.
17. TCR по любому из пп. 1-5, где конъюгат связан с С-концом или N-концом α-цепи и/или β-цепи TCR.
18. TCR по п. 17, где конъюгат, связанный с TCR, представляет собой обнаруживаемый маркер, терапевтический агент, группировку, модифицирующую PK (фармакокинетический профиль), или их комбинацию; и предпочтительно, терапевтический агент, связанный с TCR, представляет собой антитело против CD3, связанное с С- или N-концом α-цепи или β-цепи TCR.
19. TCR по п. 1, где мутация в TCR отобрана при помощи технологии фагового дисплея.
20. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, кодирующую TCR по любому из пп. 1-19, или комплементарную ей последовательность.
21. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 20.
22. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 21, или в которой экзогенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 20 интегрирована в хромосому.
23. Способ получения TCR по любому из пп. 1-19, включающий:
(1) инкубацию клетки хозяина по п. 22, таким образом экспрессирующей TCR по п. 1.
(2) выделение или очистку TCR.
24. Комплекс TCR, включающий одну или более чем одну молекулу TCR по любому из пп. 1-19.
25. Применение TCR по любому из пп. 1-19 для производства лекарственного средства для лечения опухоли, вирусной инфекции или аутоиммунного заболевания.
26. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и безопасную и эффективную дозу TCR по любому из пп. 1-19.
27. Способ лечения заболевания, включающий введение TCR по любому из пп. 1-19 или комплекса TCR по п. 24, или фармацевтической композиции по п. 26 субъекту, нуждающемуся в таком введении;
предпочтительно, заболевания включают опухоль, аутоиммунное заболевание и вирусную инфекцию.
28. Выделенная клетка, презентирующая TCR по п. 1.
29. Способ получения TCR по любому из пп. 1-19, включающий:
(1) введение мутации аминокислотного остатка в гидрофобный коровый домен TCR; и
(2) отбор TCR, стабильность которых существенно увеличена, таким образом получая TCR по любому из пп. 1-19.