Влияние сероводорода на освобождение медиатора и выявление экспрессии цистатионин-гамма-лиазы в диафрагмальной мышце мыши

Том 152, кн. 2

Естественные науки

2010

УДК 612.816.7

ВЛИЯНИЕ СЕРОВОДОРОДА НА ОСВОБОЖДЕНИЕ МЕДИАТОРА И ВЫЯВЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ЦИСТАТИОНИН-ГАММА-ЛИАЗЫ В ДИАФРАГМАЛЬНОЙ МЫШЦЕ МЫШИ

Е.В. Герасимова, С.Г. Вологин, Ю.А. Мухачева, Г. Ф. Ситдикова

Аннотация

Анализировали влияние сероводорода (Н28) на освобождение медиатора из двигательного нервного окончания мыши и выявляли возможность его эндогенного синтеза в области нервно-мышечного синапса с использованием внеклеточного микроэлектродного отведения синаптических сигналов и метода полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. Гидросульфид натрия (МаН8) - донор Н28 - увеличивал частоту миниатюрных токов концевой пластинки без изменения их амплитудно-временных параметров и амплитуду вызванных токов концевой пластинки. Ь-цистеин -субстрат синтеза Н28 - усиливал освобождение медиатора, тогда как р-цианоаланин -блокатор цистатионин-у-лиазы - приводил к эффектам, противоположным действию МаН8. Выявлена экспрессия мРНК цистатионин-у-лиазы - фермента синтеза Н28 -в диафрагмальной мышце мыши. Сделано заключение, что Н28 может синтезироваться в области нервно-мышечного синапса в диафрагмальной мышце мыши и модулировать передачу сигнала в системе мотонейрон - скелетная мышца.

Ключевые слова: сероводород, секреция медиатора, нервно-мышечный синапс, мРНК, цистатионин-у-лиаза.

Введение

Сероводород (H2S) - хорошо известный токсичный газ, который в последнее время наряду с оксидом азота (NO) и монооксидом углерода относят к новому классу эндогенных модуляторов физиологических функций [1]. Эндогенно H2S синтезируется из L-цистеина пиридоксаль-5'-фосфатзависимыми ферментами -цистатионин^-синтазой (CBS) и цистатионин-у-лиазой (CSE) [2, 3]. Экспрессия ферментов CBS и CSE является тканеспецифичной. CBS, будучи основным ферментом синтеза H2S в мозге, также экспрессируется в печени и почках [4, 5]. Второй фермент, катализирующий синтез H2S, (CSE) обнаружен в основном в почках, печени, сердечно-сосудистой системе, гладких мышцах [6-9]. В центральной нервной системе H2S усиливает индукцию долговременной потенциации в гиппокампе [10], регулирует активность серотонинергических нейронов, освобождение кортикотропного гормона гипофиза [11, 12]. Как и другие газы, H2S расслабляет гладкие мышцы [9, 13]. Кроме того, H2S защищает нейроны и миокард от оксидативного стресса [14, 15] и регулирует секрецию инсулина [16, 17]. Показано, что H2S приводит к увеличению содержания внутриклеточного кальция в астроцитах и вызывает кальциевые волны, опосредуя взаимодействие

между нейронами и глией [18]. H2S стимулирует капсаицинчувствительные сенсорные нервные окончания, способствуя секреции тахикининов, вещества P и нейрокинина А, и вызывает дозозависимое сокращение мышц мочевого пузыря у крысы [19]. Ранее нами было показано, что H2S усиливает спонтанное и вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки [20]. Роль H2S в регуляции синаптической передачи у теплокровных животных еще не исследована.

Целью работы являлся анализ влияния H2S на освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе и выявление мРНК цистатионин-у-лиазы (CSE) в диафрагмальной мышце мыши.

1. Методы исследования

1.1. Электрофизиологический метод. Эксперименты проводились на нервно-мышечном препарате диафрагмы мыши с использованием микроэлектродного внеклеточного отведения токов концевой пластинки (ТКП) - вызванной секреции медиатора - и миниатюрных токов концевой пластинки (МТКП) -спонтанной секреции медиатора - в условиях постоянной перфузии препарата раствором Кребса для теплокровных животных (в мМ): NaCl - 154; KCl - 5; CaCl2 - 2; HEPES - 5, MgCl2 - 1, глюкоза - 11 (t = 20 ± 0.5 °С, рН 7.2-7.4). Для устранения сокращения мышц в раствор добавляли d-тубокурарин (20-30 мкМ).

Анализировали амплитуду, время нарастания (RT), время полуспада (т) и частоту МТКП. В качестве донора H2S использовали гидросульфид натрия (NaHS) [10], так как в водных растворах он диссоциирует до иона натрия (Na) и гидросульфидного аниона (HS), который, вступая в реакцию с протоном (Н+), образует H2S. Известно, что в физиологическом растворе одна треть H2S находится в недиссоциированной форме, а остальные две трети существуют в виде HS- [10]. Использовали субстрат синтеза H2S (L-цистеин) и блокатор синтеза H2S (ß-цианоаланин), все вещества производства фирмы Sigma (США).

1.2. Проведение обратной транскрипции (ОТ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Образец ткани замораживали в жидком азоте и разрушали пестиком в фарфоровой ступке. Выделение нуклеиновых кислот проводили с помощью TRIzol-реагента, используя «Набор для выделения ДНК/РНК» (НПФ «Литех», Россия). Обратную транскрипцию (ОТ) проводили в течение 1 ч при температуре 37 °С в реакционной смеси объемом 50 мкл, содержащей буфер для проведения ОТ (50 мМ Трис-HCl (pH = 8.3), 75 мМ KCl, 3 мМ MgCl2, 10 мМ ди-тиотрейтол), 0.2 мМ смесь нуклеотидтрифосфатов dNTP (ООО «Хеликон», Россия), 1 мкМ праймера oligo(dT)i5, 5 единиц ингибитора рибонуклеаз IRNase (ООО «Хеликон», Россия), 20 единиц M-MuLV обратной транскриптазы (НПФ «СибЭнзим», Россия) и 5 мкл полученного препарата нуклеиновых кислот.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили в термоциклере «Mys-tercycler gradient» (Eppendorf, Германия). Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала буфер для проведения ПЦР (60 мМ Трис-HCl, 1.5 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 10 мМ 2-меркаптоэтанол, 0.1% Тритон Х-100), 0.2 мМ смесь dNTP, 1 единицу Taq ДНК-полимеразы (НПФ «СибЭнзим», Россия), 1 мкМ праймеров CSEmm-s (5'-aagcagtggctgcgttg) и CSEmm-a (5'-tgtggtgtaatcgctgcc), а также 5 мкл

препарата кДНК, полученного в ОТ. Амплификационный синтез ДНК проводили по следующей температурной программе: 1 цикл (94 °С - 5 мин), 40 циклов (94 °С - 1 мин, 67 °С - 1 мин, 72 °С - 1 мин), 1 цикл (72 °С - 5 мин); хранение -10 °С.

Для проверки специфичности проведенной реакции ОТ-ПЦР к полученным продуктам амплификации ДНК вносили 10 единиц эндонуклеазы рестрикции HaelII (НПФ «СибЭнзим», Россия), содержание MgCl2 в смеси доводили до 10 мМ и проводили инкубацию в течение 2 ч при температуре 37 °С.

Детекцию результатов ПЦР проводили методом электрофореза в 4%-ном агарозном геле, содержащем бромистый этидий (1 мкг/мл). В работе использовали маркеры молекулярных размеров (НПФ «СибЭнзим», Россия).

2. Результаты исследования

Аппликация NaHS (100 мкМ) в перфузируемый раствор Кребса приводила к быстрому и обратимому увеличению вызванной секреции медиатора. Наблюдалось увеличение амплитуды ТКП, которое к 10-й минуте эксперимента достигло 136.3 ± 7.4% (n = 7;p < 0.05) относительно контроля (рис. 1, а, б). При этом наблюдали увеличение частоты МТКП до 210.1 ± 42.5% (n = 4; p < 0.05) (рис. 2, а, б) относительно контроля к 15-й минуте эксперимента. Амплитудно-временные характеристики МТКП в присутствии NaHS достоверно не изменялись: в контроле средняя амплитуда МТКП составила 0.43 ± 0.01 мВ, RT = 0.5 ± 0.06 мс, т = 1.06 ± 0.14 мс, а после добавления NaHS средняя амплитуда МТКП составила 0.41 ± 0.01 мВ, RT = 0.5 ± 0.05 мс, т = 1.01 ± 0.1 мс (n = 4;p > 0.05).

Субстрат эндогенного синтеза H2S в тканях (L-цистеин) в концентрации 1 мМ увеличивал амплитуду ТКП до 111.2 ± 1.4% (n = 4; р < 0.05) (рис. 1, а, б) по отношению к контролю. Для блокирования фермента синтеза H2S CSE использовали ß-цианоаланин в концентрации 1 мМ. Аппликация ß-цианоаланина на нервно-мышечный препарат приводила к уменьшению амплитуды ТКП до 72.8 ± 4.2% (n = 6; p < 0.05) по отношению к контролю (рис. 1, а, б).

Для выявления мРНК CSE в диафрагмальной мышце мыши применяли метод ОТ-ПЦР. Используя информацию о нуклеотидной последовательности мРНК CSЕ мыши, содержащуюся в базе данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov, локус NM_145953), мы разработали олигонуклеотидные праймеры CSEmm-s и CSEmm-a. Данные праймеры являются гомологами олигонуклеотидов, описанных для выявления мРНК CSE у крысы Rattus norvégiens [9], и модифицированы нами с учетом особенностей нуклеотидной последовательности мРНК, выявленной у мыши. На рис. 3 представлен фрагмент мРНК CSE, амплифицируе-мый в ходе реакции ОТ-ПЦР.

При введении в реакцию ОТ-ПЦР препаратов нуклеиновых кислот (n = 6), полученных из тканей печени и диафрагмальной мышцы мыши, на электрофо-реграмме были выявлены фрагменты, соответствующие теоретически ожидаемому молекулярному размеру - 232 п.н. (пары нуклеотидов) (рис. 4, дорожки 1 и 2). Уровень детектированного сигнала в образцах диафрагмальной мышцы был значительно ниже, чем в образцах печени. Уровень сигнала, сопоставимый с уровнем детектированного сигнала, был получен лишь при десятикратном разведении препаратов нуклеиновых кислот, полученных из печени.

а)

б)

140 120 100 80 60 40 20 0

I- цианоаланин

ж

МаНЭ Ь-цистеин В-цианоаланин

Рис. 1. Влияние МаИБ, Ь-цистеина и р-цианоаланина на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши: а - усредненные ответы нервного окончания и следующие за ними ТКП (по 10 реализаций). Стрелки указывают на изменения амплитуды ТКП после аппликации МаИБ (100 мкМ), Ь-цистеина (1 мМ) или р-цианоаланина (1 мМ) в отдельных экспериментах; б - изменение амплитуды ТКП при действии МаИБ, Ь-цистеина и р-цианоаланина по отношению к контролю

а)

контроль,

И

МаНЭ

б)

300250 Ё 200

Е 150

п

Й -п з- 50

0

Контроль

МаНв

Рис. 2. Влияние МаИБ (100 мкМ) на спонтанные токи концевой пластинки в нервно-мышечном синапсе мыши: а - миниатюрные токи концевой пластинки в контроле и при действии МаИБ (отдельный эксперимент); б - изменение частоты МТКП при действии МаИБ

241 ttggaaa|aag садtggctgc gt-tgglatggg дсааадсаса gtLL^ffPLt tgcatcgggt 301 cttgctgcca ccattacgat tacccatctt ttaaaagcag gagatgaaat catttgcatg 361 gatgaagtgt atggaggcac caacaggtac ttcaggaggg tggcatctga atttggaotg

421 aagatttctt ttgtagattg ttccaaaacc aaattgctag aggjcagcgat tacaccacaa

Рис. 3. Последовательность мРНК CSE, амплифицируемая в ОТ-ПЦР (232 п.н.). В рамке -области посадки праймеров, черным выделен сайт распознавания эндонуклеазы рестрикции HaelII

Рис. 4. Результаты выявления мРНК CSE в ОТ-ПЦР: М - маркер молекулярных размеров; образцы: 1 - печень

Для проверки специфичности продуктов, полученных в реакции ОТ-ПЦР, образовавшиеся амплификоны были обработаны эндонуклеазой рестрикции HaeIII. На электрофореграмме продукты эндонуклеазного расщепления были выявлены в области 39 и 193 п.н. (рис. 4, дорожка 3), что соответствует теоретически ожидаемому разрезанию амплифицированного фрагмента ДНК CSE в сайте узнавания рестриктазы HaeIII. Обработка рибонуклезой А препаратов нуклеиновых кислот, полученных из диафрагмальной мышцы, не вызывала ам-плификационного синтеза ДНК в ходе ОТ-ПЦР (рис. 4, дорожка 4). Это свидетельствует о том, что молекулярной мишенью в реакции ОТ-ПЦР служила мРНК, а не геномная низкомолекулярная ДНК, попадающая в препараты нуклеиновых кислот при использовании TRIzol-реагента.

На основании совокупности полученных результатов можно сделать вывод об экспрессии мРНК CSE в изученных образцах диафрагмальной мышцы мыши.

3. Обсуждение результатов

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что экзогенный H2S оказывает облегчающее влияние на спонтанное и вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе диафрагмальной мышцы мыши. Анализ влияния H2S на спонтанную секрецию медиатора показал увеличение частоты МТКП без изменения их амплитудно-временных параметров, что свидетельствует об отсутствии влияния газа на чувствительность постсинаптических холинорецеп-торов. Подобный эффект мы наблюдали и в нервно-мышечном синапсе кожно-грудинной мышцы лягушки [20] - по-видимому, H2S имеет сходные молекулярные мишени действия как у холоднокровных, так и у теплокровных животных. Увеличение освобождения медиатора может быть связано с изменением элекрогенеза двигательного нервного окончания и усилением входящего кальциевого тока, тем более что из литературных данных известно, что целый ряд клеточных эффектов H2S опосредуется его влиянием на активность ионных каналов ткане- и видоспецифичным образом [21]. Так, гипералгезия, вызванная аппликацией NaHS, может быть связана с активацией Т-типа Са -каналов в первичных афферентных нейронах у крысы [22]. H2S ингибирует L-тип Са-каналов в кардиомиоцитах, но в то же время активирует L-тип Са2-каналов в нейронах, регулируя таким образом концентрацию ионов кальция в клетке [23]. Кроме того, показано, что H2S может влиять на работу Са-активируемых калиевых каналов, как усиливая их активность в культуре GH3 клеток крысы [24], так и ингибируя ее в клетках HEK 293, экспрессирующих а-субъединицу каналов [25].

В двигательной нервной терминали лягушки мы не обнаружили изменений параметров ответа нервного окончания при действии H2S, однако нельзя исключать влияния газа на ионные каналы у теплокровных животных. Возможно также, что H2S непосредственно вмешивается в механизмы экзоцитоза синап-тических везикул, связанные с трансформацией белков SNARE-комплекса, о чем свидетельствует увеличение частоты МТКП. Известно, что в водных растворах сероводород обладает свойствами восстановителя [5] и способен восстанавливать дисульфидные связи белковых молекул [26]. Можно предположить, что H2S приводит к изменению окислительно-восстановительного статуса SNARE-комплекса, что влияет на стабильность белковых взаимосвязей [27, 28]. Кроме того, H2S может усиливать синтез цАМФ в нейрональных клетках [29]. Повышение внутриклеточной концентрации цАМФ приводит к усилению секреции медиатора за счет активации протеинкиназы А и регуляции внутриклеточного уровня Са2+ [30, 31]. В экспериментах на холоднокровных животных нами было показано, что увеличение уровня цАМФ в нервном окончании снижало выраженность воздействия NaHS на вызванное освобождение медиатора. Однако при этом NaHS не оказывал прямого влияния на активность аденилатциклазы [32]. Таким образом, вопрос о молекулярных мишенях сероводорода в нервно-мышечном синапсе остается открытым.

Эндогенно H2S может синтезироваться из L-цистеина ферментами CBS и CSE [9, 10, 13]. Серосодержащие аминокислоты являются главными источниками эндогенного синтеза H2S. Во внеклеточной жидкости цистеин образует димер, называемый цистин. Цистеин и цистин имеют специфические транспортные системы для переноса через плазматическую мембрану, увеличение

внеклеточного уровня цистеина ведет к росту его внутриклеточной концентрации [33]. Концентрация цистина в плазме составляет 100-200 мкМ, а цистеина -около 10-20 мкМ [34]. L-цистеин в концентрации более 1 мМ обычно используется в качестве субстрата синтеза H2S в различных исследованиях в связи с тем, что CBS и CSE имеют низкую аффинность к цистеину [35]. В наших экспериментах L-цистеин в концентрации 1 мМ приводил к незначительному увеличению вызванного освобождения медиатора, что, по-видимому, связано с высоким эндогенным уровнем этой аминокислоты в ткани.

Цистатионин-у-лиаза интенсивно экспрессируется в печени, почках, глад-комышечной ткани [6, 8-10]. Для выявления фермента в области нервно-мышечного синапса использовали метод ОТ-ПЦР, с помощью которого была показана специфическая экспрессия мРНК CSE в диафрагмальной мышце мыши. Нельзя исключать также наличия фермента в нервных окончаниях, шваннов-ских клетках или гладкомышечных клетках сосудов, также присутствующих в исследуемом образце, несмотря на преобладание массовой доли мышечной ткани. В любом случае наличие фермента предполагает возможный синтез H2S в области нервно-мышечного синапса. На это указывают и эксперименты с бло-катором CSE - Р-цианоаланином, - который снижал вызванное освобождение медиатора, что противоположно действию H2S и L-цистеина. Синтез H2S регулируется как на уровне экспрессии ферментов CSE и CBS в тканях, так и путем изменения их активности [36, 37]. В частности, в гладкомышечных клетках NO может регулировать уровень H2S путем увеличения активности CSE через нитро-зилирование цистеиновых остатков молекулы. Кроме того, NO увеличивает экспрессию фермента, поглощение цистеина и активность цГМФ-зависимой протеинкиназы, которая также является стимулятором фермента CSE [38].

Таким образом, полученные нами данные свидетельствует о том, что сероводород может синтезироваться в области нервно-мышечного синапса в диа-фрагмальной мышце мыши и модулировать передачу сигнала в системе мотонейрон - скелетная мышца.

Работа поддержана грантами Министерства образования (№ 2.1.1/786), РФФИ (проект № 09-04-00748) и Президента РФ для государственной поддержки ведущих научных школ РФ (НШ-5250.2010.4).

Summary

E.V. Gerasimova, S.G. Vologin, Y.A. Mukhacheva, G.F. Sitdikova. Effects of Hydrogen Sulfide on Transmitter Release and the Reveal of Cystathionine y-lyase Expression in Mouse Diaphragm.

The effects of hydrogen sulfide (H2S) on transmitter release from mouse motor nerve ending and possibility of its endogenous synthesis were analyzed using extracellular micro-electrode technique and reverse transcriptase polymerase chain reaction. Sodium hydrosulfide (100 дМ - the donor of H2S - increased the frequency of miniature end-plate currents without changing of amplitude-temporary parameters and the amplitude of evoked end-plate currents. L-cystein (1 mM) - the substrate of H2S synthesis enhanced the transmitter release whereas the inhibition of cystathionine y-lyase - enzyme of H2S synthesis by p-cyanoalanine induced the opposite effect. The expression of mPNA of cystathionine y-lyase was determined in mouse diaphragm. It was concluded that H2S could be synthesized nearby of neu-

romuscular junction of mouse diaphragm and modulated the signal transmission in the system

motoneuron-skeletal muscle.

Key words: hydrogen sulfide, transmitter release, neuromuscular junction, mRNA, cystathionine y-lyase.

Литература

1. Mustafa A.K., Gadalla M.M., Snyder S.H. Signaling by Gasotransmitters // Sci. Signal. -2009. - V. 2, No 68. - P. 1-8.

2. StipanukM.H., BeckP.W. Characterization of the enzymic capacity for cysteine desulph-hydration in liver and kidney of the rat // Biochem. J. - 1982. - V. 206, No 2. - P. 267-277.

3. Swaroop M., Bradley K., Ohura T. et al. Rat cystathionine beta-synthase. Gene organization and alternative splicing // J. Biol. Chem. - 1992. - V. 267, No 16. - P. 11455-11461.

4. Meier M., Janosik M., Kery V., Burkhard P. Structure of human cystathionine beta-synthase: a unique pyridoxal 5'-phosphate-dependent heme protein // EMBO J. - 2001. -V. 20, No 15. - P. 3910-3916.

5. Wang R. Two's company, three's a crowd: can H2S be the third endogenous gaseous transmitter? // FASEB J. - 2002. - V. 16, No 13. - P. 1792-1798.

6. Lu Y., O'Dowd B.F., Orrego H., Israel Y. Cloning and nucleotide sequence of human liver cDNA encoding for cystathionine gamma-lyase // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1992. - V. 189, No 2. - P. 749-758.

7. Van der Molen E.F., Hiipakka M.J., van Lith-Zanders et al. Homocysteine metabolism in endothelial cells of a patient homozygous for cystathionine beta-synthase (CS) deficiency // Thromb. Haemost. - 1997. - V. 78. - P. 827-833.

8. Yap S., Naughten E., Wilcken B. et al. Vascular complications of severe hyperhomocys-teinemia in patients with homocystinuria due to cystathionine beta-synthase deficiency: effects of homocysteine-lowering therapy // Semin. Thromb. Hemost. - 2000. - V. 26. -P. 335-340.

9. Zhao W., Zhang J., Lu Y., Wang R. The vasorelaxant effect of H2S as a novel endogenous gaseous K(ATP) channel opener // EMBO J. - 2001. - V. 20, No 21. - P. 6008-6016.

10. Abe K., Kimura H. The possible role of hydrogen sulfide as an endogenous neuromodulator // J. Neurosci. - 1996. - V. 16. - P. 1066-1071.

11. Russo C.D., Tringali G., Ragazzoni E. et al. Evidence that hydrogen sulphide can modulate hypothalamo-pituitary-adrenal axis function: in vitro and in vivo studies in the rat // J. Neuroendocrinol. - 2000. - V. 12. - P. 225-233.

12. Kombian S.B., Reiffenstein R.J., Colmers W.F. The actions of hydrogen sulfide on dorsal raphe serotonergic neurons in vitro // J. Neurophysiol. - 1993. - V. 70, No 1. - P. 81-96.

13. Hosoki R., Matsuki N., Kimura H. The possible role of hydrogen sulfide as an endogenous smooth muscle relaxant in synergy with nitric oxide // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1997. - V. 237, No 3. - P. 527-531.

14. Kimura Y., Dargusch R., Schubert D., Kimura H. Hydrogen sulfide protects HT22 neuronal cells from oxidative stress // Antioxid. Redox. Signal. - 2006. - V. 8, No 3-4. -P. 661-670.

15. Sivarajah A., McDonaldM.C., Thiemermann C. The production of hydrogen sulfide limits myocardial ischemia and reperfusion injury and contributes to the cardioprotective effects of preconditioning with endotoxin, but not ischemia in the rat // Shock. - 2006. -V. 6, No 2. - P. 154-161.

16. Ali M.Y., Whiteman M., Low C.M., Moore P.K. Hydrogen sulfide reduces insulin secretion from HIT-T15 cells by a KATP channel-dependent pathway // J. Endocrinol. - 2007. -V. 195. - P. 105-112.

17. Kaneko Y., Kimura Y., Kimura H., Niki I. L-cysteine inhibits insulin release from the pancreatic beta-cell: possible involvement of metabolic production of hydrogen sulfide, a novel gasotransmitter // Diabetes. - 2006. - V. 55, No 5. - P. 1391-1397.

18. Nagai Y., Tsugane M., Oka J., Kimura H. Hydrogen sulfide induces calcium waves in astrocytes // FASEB J. - 2004. - V. 18. - P. 557-559.

19. Patacchini R., Santicioli P., Giuliani S., Maggi C.A. Hydrogen sulfide (H2S) stimulates capsaicin-sensitive primary afferent neurons in the rat urinary bladder // Br. J. Pharmacol. -2004. - V. 142, No 1. - P. 31-34.

20. Герасимова Е.В., Ситдикова Г.Ф., Зефиров А.Л. Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки // Нейро-химия. - 2008. - Т. 25, № 1-2. - С. 138-145.

21. Tang G., Wu L., Wang R. Interaction of hydrogen sulfide with ion channels // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. - 2010. - V. 37, No 7. - P. 753-763.

22. Kawabata A., Ishiki T., Nagasawa K. et al. Hydrogen sulfide as a novel nociceptive messenger // Pain. - 2007. - V. 132. - P. 74-81.

23. Garcia-Bereguiain M.A., Samhan-Arias A.K., Martin-Romero F.J., Gutierrez-Merino C. Hydrogen sulfide raises cytosolic calcium in neurons through activation of L-type Ca2+ channels // Antiox. Redox Signal. - 2008. - V. 10. - P. 31-41.

24. Sitdikova G.F., Weiger T.M., Hermann A. Hydrogen sulfide increases calcium-activated potassium (BK) channel activity of rat pituitary tumor cells // Pflugers Arch. Eur. J. Phy-siol. - 2010. - V. 459, No 3. - P. 389-397.

25. Telezhkin V., Brazier S.P., Cayzac S. et al. Hydrogen sulfide inhibits human BKCa channels // Adv. Exp. Med. Biol. - 2009. - V. 648. - P. 65-72.

26. Qu K., Lee S.W., Bian J.S. et al. Hydrogen sulfide: Neurochemistry and neurobiology // Neurochem. Int. - 2008. - V. 52. - P. 155-165.

27. Duman J.G., Forte J.G. What is the role of SNARE proteins in membrane fusion? // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2003. - V. 285. - P. C237-C249.

28. LoPachin R.M., Barber D.S. Synaptic cysteine sulfhydryl groups as targets of electro-philic neurotoxicants // Toxicol. Sci. - 2006. - V. 94, No 2. - P. 240-255.

29. Kimura M. Hydrogen sulfide induces cyclic AMP and modulates the NMDA receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2000. - V. 267. - P. 129-133.

30. Takasago T., Imagawa T., Shigekawa M. Phosphorylation of the cardiac ryanodine receptor by cAMP-dependent protein kinase // J. Biochem. - 1989. - V. 106, No 5. - P. 872-877.

31. Terrian D.M., Ways D.K. Persistent enhancement of sustained calcium-dependent glutamate release by phorbol esters: requirement for localized calcium entry // J. Neurochem. -1995. - V. 64. - P. 172-180.

32. Ситдикова Г.Ф., Герасимова Е.В., Хаертдинов Н.Н., Зефиров А.Л. Роль циклических нуклеотидов в эффектах сероводорода на освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки // Нейрохимия. - 2009. - Т. 26, № 4. - Р. 312-317.

33. Lu S.C. Regulation of hepatic glutathione synthesis: current concepts and controversies // FASEB J. - 1999. - V. 13. - P. 1169-1183.

34. Kamoun P. Endogenous production of hydrogen sulfide in mammals // Amino Acids. -2004. - V. 26. - P. 243-254.

35. Dominy J.E., Stipanuk M.H. New roles for cysteine and transsulfuration enzymes: production of H2S, a neuromodulator and smooth muscle relaxant // Nutr. Rev. - 2004. -V. 62, No 9. - P. 348-353.

36. Eto K, Ogasawara M., Umemura K. et al. Hydrogen sulfide is produced in response to neuronal excitation // J. Neurosci. - 2002. - V. 22. - P. 3386-3391.

37. Chaudhari K., Wisniewski N.H., Bearden S.E. Role of sex and eNOS in cystathionine-y-lyase expression in mouse heart, brain and skeletal muscle // FASEB J. - 2007. - V. 21. -P. 577.6. - URL: http://www.fasebj.org/cgi/content/meeting_abstract/21/5/A448-b, свободный.

38. Fiorucci S., Distrutti E., Cirino G., Wallace J.L. The emerging roles of hydrogen sulfide in the gastrointestinal tract and liver // Gastroenterol. - 2006. - V. 131. - P. 259-271.

Поступила в редакцию 21.01.10

Герасимова Елена Вячеславовна - кандидат биологических наук, ассистент кафедры физиологии человека и животных Казанского (Приволжского) федерального университета.

E-mail: levchenkova_elena@rambler.ru

Вологин Семён Германович - научный сотрудник ТатНИИСХ Россельхозакаде-мии, г. Казань.

E-mail: semen_vologin@mail.ru

Мухачева Юлия Анатольевна - студент кафедры физиологии человека и животных Казанского (Приволжского) федерального университета.

E-mail: musha1202@mail.ru

Ситдикова Гузель Фаритовна - доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии человека и животных Казанского (Приволжского) федерального университета.

E-mail: Guzel.Sitdikova@ksu.ru