Показатели спонтанного и индуцированного апоптоза при Helicobacter pilory-инфекции

выше группах детей. Оказалось, что самая высокая частота D аллеля — 73% наблюдается в группе гипертен-зивных детей с гломерулонефритом. В группе контроля оно составила — 47%, а в группе нормотензивных детей с гломерулонефритом аллель D встречается с наименьшей частотой — 21%. Сравнительный анализ частоты встречаемости D аллеля показал, что группа гипер-тензивных детей с гломерулонефритом статистически значимо отличается от группы нормотензивных детей с гломерулонефритом (p=0,000) и от группы контроля (p=0,0009).

Таким образом, в группе гипертензивных детей с гломерулонефритом наблюдается статиститчески значимое преобладание D аллеля и DD генотипа, как по сравнению с группой нормотензивных детей с гломерулонефритом, так и по сравнению с группой контроля.

Для подтверждения роли полиморфизма гена ACE в развитии артериальной гипертензии у детей с гломерулонефритом была проведена оценка относительного риска (RR) развития патологии у носителей определенного генотипа. Оценку полученных значений проводили исходя из того что, при RR=1 и при RR<1 отсутствует ассоциация между генотипом и риском развития патологии, при RR>1 наблюдается положительная ассоциация, т.е. генотип можно считать фактором риска.

Для детей с гломерулонефритом высокий риск развития артериальной гипертензии был обнаружен при

носительстве DD генотипа, RR=16,5 (рис.1). Таким образом, гомозиготный по делетированному аллелю DD генотип является фактором высокого риска развития артериальной гипертензии для детей с гломерулонефритом.

Таким образом, полиморфизм гена ACE играет важную роль в развитии не только эссенциальной артериальной гипертензии, но и при симптоматической артериальной гипертензии. Для пациентов с гломерулонефритом установлена ассоциация гомозиготного делетированного DD генотипа гена ACE с развитием артериальной гипертензии. Частота встречаемости этого генотипа значимо выше в группе гипертензив-ных детей с гломерулонефритом, как по сравнению с группой нормотензивных детей с гломерулонефритом, так и по сравнению с группой здоровых детей. У детей с гломерулонефритом и генотипом DD риск развития артериальной гипертензии в 16 раз выше, чем у детей с гломерулонефритом и другим генотипом — II или ID. Обследование детей, с указанной почечной патологией, на полиморфизм гена ACE может способствовать раннему выявлению детей с риском развития артериальной гипертензии, а также для принятия своевременных мер по профилактике и уменьшению возможных последствий, связанных с ухудшением течения основного почечного заболевания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Баирова Т. А. Клинико-эпидемиологические и генетические особенности и закономерности формирования эссенциальной артериальной гипертензии у подростков разных популяций Восточной Сибири: дис. ...д-ра мед. наук. — Иркутск, 2008. — 287 с.

2. Бимбаев А.Б. Прогностические маркеры эссенциальной артериальной гипертензии у подростков разных этнических групп, проживающих на территории республики Бурятия: ав-тореф. дис. .канд. мед. наук. — Иркутск, 2004. — 21с.

3. Гогин Е.Е. Артериальная гипертония и почки // Тер. архив. — 1997. — №6. — С. 65-68.

4. Глотов А.С., Иващенко Т.Э., Образцова Г.И. и др. Зависимость между возникновением стабильной артериальной гипертензии у детей и полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем // Молекулярная биология. — 2007. — Т. 41, №1. — С. 18-25.

5. Долгих В.В., Колесникова Л.И. Патогенез эссенциальной артериальной гипертензии у детей. — Иркутск: Изд-во ВСНЦ СО РАМН, 1999. — 218 с.

6. Долгих Б.Б., Колесникова Л.И., Баирова Т.А. и др. Некоторые молекулярно-генетические предикторы, контролирующие разные звенья патогенеза эссенциальной артериальной гипертензии у детей и подростков Байкальского региона // Здоровье, медицинская экология, наука. — 2009. — №2. — С. 76-79.

7. Колесникова Л. И., Долгих Б.В., Урыбин И.Ю. и др. Полиморфизмы ApoB3 VNTR, B1AR A145G, ACE I/D и эссен-циальная артериальная гипертензия у детей и подростков // Бюллетень СО РАМН. — 2008. — №3(131). — С. 63-66.

8. Кутырина И.М. Современные аспекты патогенеза почечной артериальной гипертонии // Нефрология. — 2000. — Т. 4, №1. — С. 112-115.

9. Мартынов А.И. Многофакторность артериальной гипертонии // Клиническая геронтология. — 2002. — №2. — С. 3-6.

10. Шадрина Н.А. Клинико-генетические детерминанты формирования симптоматической артериальной гипертензии при хроническом гломерулонефрите у детей и подростков: ав-тореф. дис. .канд. мед. наук. — Иркутск, 2006. — 27с.

Информация об авторах: Колесникова Любовь Ильинична — директор, член-корр. РАМН, д.м.н., профессор, Долгих Владимир Валентинович — заместитель директора по науке, д.м.н., профессор,

Беляева Елена Владимировна — аспирант, м.н.с., е-шай: belyeva_irk@mail.ru,

Шенин Владимир Анатольевич — заведующий лабораторией, д.б.н.,

Альбот Вадим Владимирович — заведующий отделением, к.м.н.,

Астахова Татьяна Александровна — с.н.с., к.м.н.

© АГЕЕВА Е.С. — 2012 УДК 616:612.017.1-092

ПОКАЗАТЕЛИ СПОНТАННОГО И ИНДУЦИРОВАННОГО АПОПТОЗА ПРИ HELICOBACTER PILORY-ИНФЕКЦИИ

Елизавета Сергеевна Агеева

Резюме. Helicobacter pylori-ассоциированные заболевания (хронический гастрит, язвенная болезнь) сопровождаются дисрегуляцией процессов клеточной гибели. Оценивали спонтанный и индуцированный перекисью водорода апоптоз лимфоцитов крови у коренных и пришлых жителей Республики Хакасии. Обсуждается роль нарушений апоптоза в регуляции иммунного ответа при Helicobacter pylori-инфицировании.

Ключевые слова: Helicobacter pylori, язвенная болезнь, хакасы, апоптоз, лимфоциты

SPONTANEOUS AND INDUCED APOPTOSIS IN THE HELICOBACTER PILORY-INFECTION

E.S. Ageeva

Summary. Helicobacter pylori-associated diseases (chronic gastritis and gastric ulcer) are accompanied by disregulation of cellular death. The spontaneous and induced by hydrogen peroxide apoptosis of blood lymphocytes in native and strangers populations of Republic of Khakassia has been estimated. The role of disturbance of apoptosis in regulations of immune response in Helicobacter pylori infection is discussed.

Key words: Helicobacter pylori, gastric ulcer, Khakas, apoptosis, lymphocytes.

Helicobacter pylori (HP) является наиболее часто встречающейся инфекцией, уровень ее распространенности в разных регионах России колеблется от 50 до 7080% [2]. Одним из механизмов длительной персистен-ции HP является способность данного инфекционного агента поражать лимфоциты и модифицировать иммунный ответ макроорганизма.

Эпидемиологическое исследование распространенности язвенной болезни (ЯБ) у коренных и пришлых жителей Хакасии показало, что при высоком уровне инфицированности HP (95,2% среди хакасов и 95,4% среди европеоидов) показатели заболеваемости различались (4,5% и 8,1%, соответственно) [1, 3]. В связи, с этим определенный интерес представляет изучение закономерностей функционирования иммунной системы у разных этнических групп (хакасов и европеоидов), проживающих на одной территории. Новые знания о молекулярно-генетических механизмах патогенеза HP-ассоциированной гастродуоденальной патологии (ЯБ и хронического гастрита (ХГ)) могут позволить прогнозировать течение болезни и совершенствовать имеющиеся терапевтические подходы.

Целью исследования являлась оценка спонтанного и индуцированного апоптоза лимфоцитов крови у коренных и пришлых жителей Хакасии, больных ЯБ и ХГ, в условиях хронической инфекции HP.

Материалы и методы

Обследовано 126 этнически чистых хакасов (коренное население) и 125 европеоидов (русских, пришлое население). Из них 120 больных ХГ (хакасы — 60 и европеоиды — 60), 71 — больной ЯБ двенадцатиперстной кишки (хакасы — 36 и европеоиды — 35). Средний возраст хакасов — 44,3±9,2 года, европеоидов — 42,7±11,6 года. Контрольную группу составили 60 здоровых доноров (хакасы — 30 и европеоиды — 30) с аналогичными характеристиками по полу и возрасту.

Диагноз ЯБ и ХГ был верифицирован при помощи морфологической оценки изменений слизистой оболочки желудка. HP диагностировали с использованием четырех методов: морфологического, быстрого уреаз-ного теста, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и серологического метода — ИФА (уровень специфических IgG к HP в сыворотке крови).

Для оценки апоптотической гибели лимфоциты крови (3х106 клеток/мл) культивировали в среде RPMI-1640 с L-глутамином (SIGMA, UK), содержащим 10% фетальной телячьей сыворотки и антибиотики. Апоптоз лимфоцитов крови оценивали через 24 ч с использованием микроскопа «MICROS» (Австрия) при увеличении объектив 100 х окуляр 10 (окрашивание гематоксилин-эозином). Подсчитывали не менее 200 клеток. Критериями, характеризующими апоптоз in vitro, являлись карио— и цитопатологические изменения (конденсация и маргинация хроматина, уменьшение объема клетки, пузырчатость и фрагментация клеточного ядра) [4]. Результаты выражали в %, характеризующих количество клеток с апоптотической морфологией ко всем остальным клеткам.

Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова с поправкой Лиллиефорса. Рассчитывали медиану (Me) и интерквартильный размах в виде 25 и 75 процентилей (Q25 и Q ). Для проверки статистической значимости различий показателей в сравниваемых группах использовали критерий Вилкоксона-Манна-Уитни. Различия считались статистически значимыми при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение

Установлено, что относительное количество лимфоцитов у европеоидов, больных ЯБ и ХГ, соответствовало 36,2% (30,3-40,0) и 39,5% (36,2-43,3) и было статистически значимо выше, чем у здоровых доноров — 26,2 (20,3-27,9)%, р<0,05. Абсолютное содержание лимфоцитов крови у больных ЯБ ((2,3 (1,9-2,7)х10 9/л) и ХГ (2,8 (2,1-3,5)х10 9/л) статистически не отличалось от такового показателя у здоровых доноров (1,9 (1,8-2,2)х10 9/л).

У хакасов, больных ЯБ, абсолютное и относительное содержание лимфоцитов крови достоверно превышало аналогичные показатели у европеоидов, больных ЯБ, р<0,05. Среди хакасов с ЯБ абсолютное количество лимфоцитов составило 3,4 (2,9-3,7) х109/л, относительное — 52,3 (45,6-59,4) %. Данные значения были выше, чем в контроле — 2,1 (1,7-2,3) х109/л и 25,5 (21,0-29,0) %, р<0,05. При ХГ статистически значимых различий между хакасами и европеоидами выявлено не было. Абсолютное количество лимфоцитов у хакасов, больных ХГ, составило 2,5 (2,2-2,8) х109/л, относительное — 46,1 (39,5-53,4) %. Число лимфоцитов крови у больных ХГ было ниже, чем у больных ЯБ, но выше, чем у здоровых доноров (р<0,05).

Анализ апоптотической гибели лимфоцитов у европеоидов показал, что уровень спонтанного апоптоза при ЯБ составил 21,4 (19,4-23,6) %, при ХГ — 24,3 (21,827,1) %. В группе здоровых доноров данный показатель был равен 17,9 (16,5-19,0) %. Полученные нами данные показывают, что у больных ЯБ и ХГ происходило достоверное увеличение апоптотически измененных лимфоцитов крови (табл. 1). У европеоидов уровень индуцированного перекисью водорода апоптоза лимфоцитов крови у пациентов с ЯБ составил 26,4 (22,0-28,6) %, у больных ХГ — 29,6 (27,8-33,8) %. Оба показателя были ниже по сравнению с контролем — 31,6 (27,1-34,8) %, р<0,05 (табл. 1).

У хакасов, больных ЯБ, уровень лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза составил 18,5 (16,7-20,0) % и был статистически значимо выше, чем число апоптотически измененных клеток крови у лиц контрольной группы (15,7 (13,6-16,4) %; р<0,05). У

Таблица 1

Показатели спонтанного и индуцированного перекисью водорода апоптоза лимфоцитов крови у хакасов и европеоидов, больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, ассоциированными с Helicobacter pylori

Группы Спонтанный апоптоз, % Индуцированный апоптоз, %

Европеоиды Здоровые доноры 17,9 (16,5-19,0) 31,6 (27,1-34,8) 3

Больные ЯБ 21,4 (19,4-23,6) 1 26,4 (22,0-28,6) 13

Больные ХГ 24,3 (21,8-27,1) 1 29,6 (27,8-33,8) 23

Хакасы Здоровые доноры 15,7 (13,6-16,4) 4 27,9 (23,0-30,1) 3

Больные ЯБ 18,5 (16,7-20,0) 1,4 23,7 (21,9-27,6) 3

Больные ХГ 14,8 (11,2-21,0) 4 22,9 (19,8-25,6) 34

Примечание: 1 — р<0,05 — статистически значимые различия при сравнении показателей со здоровыми донорами, 2 — р<0,05 — статистически значимые различия при сравнении показателей при сравнении показателей у больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, 3 — р<0,05 — статистически значимые различия при сравнении показателей при сравнении показателей спонтанного и индуцированного апоптоза, 4— р<0,05 статистически значимые различия при сравнении показателей у хакасов и европеоидов.

больных ХГ апоптоз лимфоцитов соответствовал 14,8 (11,2-21,0) % (табл. 1). Анализ уровня индуцированного апоптоза в лимфоцитах крови у хакасов, больных ЯБ, соответствовал 23,7 (21,9-27,6) %, в группе больных ХГ — 22,9 (19,8-25,6) %. Оба показателя статистически значимо не отличались от такового у здоровых доноров — 27,9 (23,0-30,1) %, (табл. 1).

Вероятно, что дифференциацию полученных нами результатов может объяснить гетерогенность субтипов НР. Исследования, проведенные нами ранее, показали этно-экологическую обусловленность распределения штаммов НР: у европеоидов с ЯБ связаны S1S2 субтипы УаеА штаммы, у хакасов — CagA [7, 8]. Сочетание продуцируемых разными штаммами НР, биологически активных факторов (уреаза, муциназа, липаза, каталаза, супе-роксидисмутаза, цитотоксин, вызывающий вакуолизацию эпителиоцитов (УасА), цитокин-ассоциированный белок (CagA), белок теплового шока (№р60)) отличается спектром гисто- и цитотоксических эффектов: участие в модуляции экспрессии генов через различные сигнальные пути, модификация апоптотической гибели клеток [5]. Так, например, цитотоксин УасА усиливает апоптоз клеток эндотелия, макрофагов и Т-лимфоцитов [6]. CagA-штаммы вызывают «окислительный взрыв» в

фагоцитарных клетках, оказывают непрямое цитоток-сическое действие на клетки слизистой оболочки желудка, усиливают Fas-опосредованный апоптоз, воспалительный процесс характеризуется более быстрым и злокачественным развитием.

Таким образом, апоптоз клеток иммунокомпе-тентного звена играет важную роль в поддержании регуляции и исхода воспаления. Повышение апоптоза приводит к дефициту иммунокомпетентных клеток, изменению субпопуляционного состава лимфоцитов и является одним из проявлений нарушений иммунореактивности. Нами было выявлено, что у хакасов и европеоидов, больных хроническим гастритом и язвенной болезнью, отмечались однонаправленные, но разной степени выраженности, изменения апоптоти-ческой гибели лимфоцитов крови. Обнаруженные закономерности реализации апоптотической гибели им-мунокомпетентных клеток являются важным звеном нарушения иммунореактивности макроорганизма в патогенезе НР-ассоциированных заболеваний, так как уменьшение количества иммунокомпетеных клеток сопряжено с изменениями соотношения субпопуляций лимфоцитов и является одним из проявлений иммунореактивности.

ЛИТЕРАТУРА

1. Агеева Е.С., Штыгашева О.В., Цуканов В.В. и др. Иммунологические особенности течения гастродуоденальной патологии у жителей Хакасии // Иммунология. — 2009. — Т. 30, № 3. — С. 162-165.

2. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Суханов А.В. и др. Исследование хеликобактерного гастрита в Иркутской области: роль и место морфологического метода. // Сибирский медицинский журнал. — 2009. — Т. 85, №2. — С. 78-82.

3. Штыгашева О.В., Цуканов В.В. Ассоциация саg A и vac A штаммов Helicobacter pylori и язвенной болезни в организованной популяции г. Абакана. // Росс. журнал гастроэнтер., гепатологии и колопроктол. — 2004. — №2. — С. 84-87.

4. Allen R.T., Hunter W.J., Agrawal DK. Morphological and Biochemical Characterization and Analysis of Apoptosis // Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. — 1997. — Vol. 37, №4. — P. 215-228.

5. Dixon M.F. Histological classification of gastritis and Helicobacter Pylori infection: an agreement at last? The International Workshop on the Histopathology of Gastritis // Helicobacter. — 1997. — Vol.2. — P. 17-24.

6. Suares G., Reyes V.E., Beswick E.J. Immune response to H. pylori // World J. Gastroenterology. — 2006. — Vol. 12 (35). — P5593-5598.

7. Targa A.C., Cesar A.C., Cury P.M., et al. Apoptosis in different gastric lesions and gastric cancer: relationship with Helicobacter pylori, overexpresion of p53 and aneuploidy // Genet. Mol. Res. — 2007. — Vol. 6 (3). — P 554-565.

8. Wang J., Brooks E.G., Bamford K.B., et al. Negative Selection of T Cells by Helicobacter pylori as a Model for Bacterial Strain Selection by Immune Evasion // J. Immunol. — 2001. — Vol. 167, № 2. — P. 926-934.

Информация об авторах: 655004, Республика Хакасия, г. Абакан, ул. Родниковая, 13, тел. (3902) 342720; факс (3902) 222172, e-mail: Ageevaeliz@rambler.ru Агеева Елизавета Сергеевна — заведующая кафедрой, к.м.н.

© ЛУКИЧЕВА Э.В., ТОНКИХ Ю.Л., ЦУКАНОВ В.В., БРОННИКОВА Е.П., ВАСЮТИН А.В. — 2012 УДК: 616.366-003.7-08

АССОЦИАЦИЯ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СПЕКТРА СЫВОРОТКИ КРОВИ С ЛИПИДНЫМ СОСТАВОМ ЖЕЛЧИ У КОРЕННЫХ И ПРИШЛЫХ ЖИТЕЛЕЙ ЭВЕНКИИ, БОЛЬНЫХ ХОЛЕЛИТИАЗОМ

Эллина Викторовна Лукичева2, Юлия Леонгардовна Тонких1, Владислав Владимирович Цуканов1,

Елена Петровна Бронникова1, Александр Викторович Васютин1

Резюме. Целью исследования было изучить содержание, соотношение и взаимосвязь липидов желчи и крови у больных с холелитиазом среди коренных и пришлых жителей Эвенкии. В Эвенкии поперечным методом обследовано 411 коренных и 552 пришлых жителей. У европеоидов распространенность холелитиаза составила 6,9%; у эвенков — 3,4% (р=0,02). Содержание, соотношение и взаимосвязь липидов желчи и крови имели отличия у эвенков и европеоидов больных холелитиазом. Соотношение насыщенных к ненасыщенным жирным кислотам в сыворотке крови было повышеное у лиц с холелитиазом в сравнении со здоровыми пациентами в обеих обследованных популяциях.

Ключевые слова: холелитиаз, жирные кислоты, липидный метаболизм.

ASSOCIATION OF THE FATTY ACID SPECTRUM OF BLOOD SERUM WITH LIPID COMPOSITION OF BILE IN NATIVE AND ALIEN INHABITANTS OF EVENKIA SUFFERING FROM CHOLELITHIASIS

в9