СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АДАПТОГЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ
AGENT HAVING ADAPTOGENIC ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии и касается средства из растительного сбора, обладающего адаптогенной активностью.
Известные адаптогены растительного и животного происхождения (настойка плодов лимонника, заманихи, аралии, корня женьшеня, экстракт левзеи, родиолы розовой, элеутерококка, пантокрин, рантакрин, и др.) обладают способностью вводить организм в состояние неспецифически повышенной сопротивляемости путем регуляции течения стрессорных реакций, повышения резистентности клеток и организма в повреждающему действию вредных факторов (К.В.Яременко. Учение Н.В. Лазарева о СНПС и адаптогенах как базовая теория профилактической медицины. // Психофармакология и биологическая наркология. 2005. Т.5. №4. С.1086-1092). Несмотря на увеличивающийся арсенал новых адаптогенов, разработка и внедрение новых средств с адаптогенной активностью из широко распространенного и доступного растительного сырья остается актуальной задачей практической фармации.
Техническим результатом, получаемым при осуществлении изобретения, является расширение ассортимента высокоэффективных и безвредных лекарственных средств для повышения резистентности организма при повышенной физической и умственной нагрузке.
Результат достигается тем, что средство, обладающее адаптогенной активностью, характеризуется тем, что оно содержит корни элеутерококка колючего, корни родиолы розовой, корни солодки уральской, побеги черники обыкновенной, траву тимьяна ползучего в следующем соотношении, мас.%:
корни элеутерококка колючего - 18-22,
корни родиолы розовой 13-17,
корни солодки уральской 18-22,
побеги черники обыкновенной 18-22,
трава тимьяна ползучего 23-27.
Для доказательства существенности предложенных признаков способа, а именно соотношения сырья, были проведены серии экспериментов, данные которых представлены ниже.
Для опытов использовано сырье, качество которого соответствует действующим статьям ГФ XI изд. (Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина. - 1987. - 337 с.; Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина. - 1990. - 400 с.) и соответствующих ГОСТов (ГОСТ 29046-91). Сырье измельчали по отдельности, согласно требованиям соответствующих ГОСТов и ГФ Х изд. (Государственная фармакопея СССР. Х изд. - М., 1968. Статья 349 «Настои и отвары». С.370-372): - до размера частиц 0,5-2,0 мм. Совершенствование технологии приготовления и контроля качества витаминных чаев. / Актуальные проблемы фармацевтической технологии: Научн. труды ВНИИФ. - Т.32. - М., 1997. - С.151-159).
Пример 1. Измельченные до размера частиц 0,5-2,0 мм и просеянные: корни элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) - 18 - 22%, корни родиолы розовой (Rhodiola rosea L.) - 13-17%, корни солодки уральской (Glycyrrhiza uralensa Fisch.) - 18-22%, побеги черники обыкновенной (Vaccmium myrtillus L.) - 18-22%, трава тимьяна ползучего (Thymus serpyllum L.) - 23-27% смешивали.
Для оценки адаптогенной активности испытуемого средства изучали влияние испытуемого средства на общую физическую, силовую, скоростную выносливости подопытных животных на различных моделях. Предварительно перед экспериментами, с целью исключения влияния спирта этилового, препарат сравнения - жидкий экстракт элеутерококка (ВФС 42-1281-82) деалкоголизировали на роторном испарителе при 37°С до 1/10 от исходного объема, полученный водный остаток доводили дистиллированной водой до первоначального объема.
Указанная нами композиция была разработана с учетом фармакологических свойств входящих в ее состав лекарственных растений. Так, элеутерококк и родиола розовая - оказывают тонизирующее и общеукрепляющее действие, повышают физическую и умственную работоспособность; солодка - обладает широким спектром фармакологической активности, в том числе кортикостероидоподобным и отхаркивающим действием; тимьян - оказывает противовоспалительное и антибактериальное действие; черника - обладает тонизирующими свойствами, а также является витаминоносным растением.
Для исследований из растительного сбора готовили отвар в соотношении 1:10. Рекомендуемая доза для человека: 1 г (1/2 чайной ложки) залить 100 крутого кипятка, настоять 10-15 мин., процедить. Принимать по 100 мл 1 раз утром за 30 мин. до еды. Для экспериментальных животных доза - 5 мл отвара на животное.
1
Экспериментальная работа на мышах линий СВА; F (СВАхС57В1/6) обоего пола массой 20-22 г. Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г. и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».
Статистическую обработку полученных данных осуществляли общепринятым методом с использованием критерия Манна-Уитни (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М., 2000. - 236 с.). Различия считали достоверными при вероятности 95% (Р<0,05).
Определение острой токсичности адаптогенного средства. Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г. Острую токсичность адаптогенного средства определяли с использованием метода Кербера (Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л., 1963. - 148 с.) при его однократном внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении в виде отвара в дозах от 1,0 - до 395,0 мл/кг массы животного. Конечный вводимый объем животным составлял 1,0 мл/кг. Животные контрольных групп получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней с момента введения испытуемого средства. В течение всего периода эксперимента наблюдали за общим состоянием и поведением животных, регистрировали видимые признаки интоксикации и количество погибших животных с осмотром внутренних органов и гистологическим исследованием жизненно важных органов при гибели животных.
Установлено, что внутрижелудочное и внутрибрюшинное введение адаптогенного средства в объемах 1,0-395 мл/кг не вызывало гибели животных в течение всего периода наблюдения. У животных, получавших испытуемое средство, не отмечали видимых признаков интоксикации; поведенческие реакции и общее состояние не отличалось от такового у животных контрольной группы; животные опытных групп оставались активными, хорошо принимали корм, стул был нормальным в течение всего периода наблюдения. Полученные данные позволяют отнести адаптогенное средство к группе практически не токсичных веществ по классификации Сидорова К.К. (Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения. // Токсикология новых промышленных химических веществ. - М., 1973. С.47-51).
Изучение влияния адаптогенного средства на общую физическую выносливость подопытных животных.
Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 19-20 г. Для определения общей физической выносливости использовали общепринятую методику плавания в бассейне с температурой воды 20,0±0,5°С с грузом, составляющим 5% от массы тела в соответствии с методическими рекомендациями, изложенными в руководстве (Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. Методические указания. - М., 1999. - 86 с.). С целью определения дозозависимого эффекта, отвар исследуемого средства вводили внутрижелудочно однократно за 1 ч до тестирования в объемах 0,5; 1,0; 3,0; 5,0 и 7,0 мл/кг. При изучении время - зависимого эффекта, препарат вводили профилактически однократно в объеме 3,0 мл/кг за 0,5; 1,0; 3,0; 6,0 и 24,0 часа до тестирования. Для исследования зависимости от кратности введения, испытуемое средство вводили профилактически в объемах 1,0; 3,0 и 5,0 мл/кг в течение 3-х, 7 и 14 дней 1 раз в день за 30 мин до кормления. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения здесь и далее использовали деалкоголизированный раствор экстракта элеутерококка в объемах 3,0 и 5,0 мл/кг. Общую физическую выносливость животных определяли путем плавания животных до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное погружение животного под воду. Полученные данные приведены в табл.1-6.
Как следует из данных, приведенных в таблице 1, однократное введение испытуемого средства белым мышам в объемах 0,5 и 1,0 мл/кг не оказывало существенного влияния на продолжительность плавания животных, тогда как при использовании средства в объеме 3,0 мл/кг г отмечалось повышение общей физической выносливости на 32% по сравнению с данными у мышей контрольной группы. При увеличении объема испытуемого средства отмечалось повышение его адаптогенной активности. Так, при введении в объеме 5,0 мл/кг, продолжительность плавания животных опытной группы повышалась в среднем на 45% по сравнению с таковым у мышей контрольной группы. При однократном введении препарата в более высоких дозах (5,0 и 7,0 мл/кг) выявлено аналогичное адаптогенное действие: физическая работоспособность повышалась в среднем на 40-45% по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом эффективность испытуемого средства была аналогичной таковой у препарата сравнения - экстракта элеутерококка в аналогичных дозах. Учитывая, что время плавания животных, получавших испытуемое средство в объеме 3,0 мл/кг, статистически не отличалось от такового у мышей, получавших его в объемах 5,0 и 7,0 мл/кг, в дальнейших экспериментах, в качестве экспериментально-терапевтического был использован объем исследуемого средства, соответствующий 3,0 мл/кг.
Таблица 1
Влияние адаптогенного средства на общую физическую выносливость белых мышей в зависимости от вводимого объема (M±SD)
Группы животных
Объем, мл/кг
n
Продолжительность плавания, мин
Контрольная (Н<sub>2</sub>О)
-
20
15,9±1,63
Опытная 1 (испытуемое средство)
0,5
20
16,2±1,45
Опытная 2 (испытуемое средство)
1,0
20
17,3±1,36
Опытная 3 (испытуемое средство)
3,0
20
21,4±1,54*
Опытная 4 (испытуемое средство)
5,0
20
25,3±1,41*
Опытная 5 (испытуемое средство)
7,0
20
24,3±1,67*
Опытная 6 (элеутерококк)
3,0
20
20,3±1,18*
Опытная 7 (элеутерококк)
5,0
20
21,2±1,59*
Условные обозначения: * - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных контрольной группы при Р<0,05.
Установлено также, что выраженность адаптогенного эффекта испытуемого средства зависит от времени введения (табл.2).
Таблица 2
Влияние адаптогенного средства в объеме 3,0 мл/кг на общую физическую выносливость белых мышей в зависимости от времени введения (M±SD)
Группы животных
Время после введения, ч
n
Продолжительность плавания, мин
Контрольная (Н<sub>2</sub>О)
-
20
15,9±1,63
Опытная 1 (испытуемое средство)
0,5
20
21,4±1,54*
Опытная 2 (испытуемое средство)
1,0
20
23,1±1,32*
Опытная 3 (испытуемое средство)
3,0
20
21,6±1,23*
Опытная 4 (испытуемое средство)
6,0
20
20,3±1,42*
Опытная 5 (испытуемое средство)
24,0
20
15,2±1,34
Из данных, приведенных в указанной таблице, следует, что стимулирующий эффект испытуемого препарата проявляется уже через 30 минут после его однократного введения в объеме 3,0 мл/кг: продолжительность плавания белых мышей увеличивалась на 34% по сравнению с контролем. Через 1,0 час после введения препарата работоспособность белых мышей повысилась почти на 40% и оставалась на этом уровне еще в течение 3-х часов, после чего адаптогенное действие начинало снижаться: через 6 часов время плавания мышей опытной группы превышало данные в контроле только на 32%, а по прошествии суток с момента введения препарата работоспособность животных опытной группы снижалась до уровня мышей в контроле.
При исследовании зависимости фармакологического эффекта препарата от кратности его введения установлено, что многократное профилактическое его введение белым мышам сопровождается повышением адаптогенной активности (табл.3).
Таблица 3
Влияние адаптогенного средства на общую физическую выносливость белых мышей в зависимости от кратности введения (M±SD)
Группы животных
Объем, мл/кг
n
Продолжительность плавания, мин
при 3-дневном введении
при 7-дневном введении
при 14-дневном введении
Контрольная (H<sub>2</sub>O)
-
20
18,7±1,47
20,2±1,32
21,54±1,63
Опытная 1 (испытуемое средство)
1,0
20
28,2±1,43*
29,3±1,47*
31,5±1,74*
Опытная 2 (испытуемое средство)
3,0
20
30,2±1,84*
37,2±1,89*
38,5±1,46*
Опытная 3 (испытуемое средство)
5,0
20
32,7±1,39*
38,3±2,12*
39,7±2,26*
Опытная 4 (элеутерококк)
3,0
20
30,1±1,46*
33,3±1,45*
34,3±2,04*
Как следует из приведенной таблицы 3, наиболее выраженное повышение физической выносливости отмечается при его 7-дневном введении в объемах 3,0 и 5,0 мл/кг: продолжительность плавания мышей указанных опытных групп увеличивается соответственно на 84% и 90% по сравнению с данными животных контрольной группы. Несколько менее выраженное действие препарат оказывал при его введении в течение 3-х дней, а при введении в течение 14 дней его эффективность была аналогичной таковой при введении в течение 7 дней. При этом адаптогенная активность испытуемого средства при многократном введении превосходила таковую у препарата сравнения - экстракта элеутерококка.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что испытуемое средство оказывает стимулирующее действие на общую физическую выносливость, характеризующуюся преобладанием аэробных процессов энергообеспечения тканей. Установлено, что при однократном введении, наиболее выраженное адаптогенное действие препарат оказывает в объемах 3,0-5,0 мл/кг при введении за 1,0 часа до исследования; его эффективность повышается при многократном профилактическом введении: наиболее выраженное повышение физической выносливости отмечается при его 7-дневном профилактическом введении в объеме 3,0 мл/кг.
Пример 2. Изучение влияния адаптогенного средства на скоростную выносливость подопытных животных.
Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г. Влияние испытуемого средства на скоростную физическую выносливость определяли по продолжительности бега животных на 10-дорожечном третбане при скорости движения полотна третбана 40 м/мин (Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. Методические указания. - М., 1999. - 86 с.). Исследуемое средство вводили внутрижелудочно в объеме 3,0 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также профилактически многократно, в течение 7 дней в указанном объеме 1 раз в день за 30 мин до кормления. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный раствор экстракта элеутерококка в объеме 3,0 мл/кг. Скоростную физическую выносливость оценивали по продолжительности бега животных до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное нахождение животного на электрической сетке третбана под напряжением 70 В. Полученные данные приведены в таблице 4.
Таблица 4
Влияние адаптогенного средства на скоростную физическую выносливость белых мышей (M±SD)
Группы животных
n
Продолжительность бега, с
при однократном введении
при 7-дневном введении
Контрольная (Н<sub>2</sub>О)
20
224,1±13,8
226,7±18,7
Опытная 1 (испытуемое средство)
20
238,3±17,4
303,3±24,6<sup>*</sup>
Опытная 2 (элеутерококк)
20
235,5±21,1
274,6±19,2<sup>*</sup>
Как следует из данных, приведенных в табл.5, однократное введение данного средства в указанном объеме, а также препарата сравнения не оказывало значительного влияния на скоростную физическую выносливость белых мышей, продолжительность бега животных опытной группы статистически не отличалась от таковой у животных контрольной группы (р≥0,05).
Установлено, что многократное профилактическое введение испытуемого средства в течение 7 дней сопровождалось существенным повышением скоростной выносливости, о чем свидетельствовало увеличение продолжительности бега животных опытной группы на 34% по сравнению с данными мышей контрольной группы. При этом эффективность испытуемого средства превосходила таковую у экстракта элеутерококка. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что испытуемый препарат в объеме 3,0 мл/кг повышает скоростную физическую выносливость, характеризующуюся преобладанием анаэробных процессов в тканях только при многократном введении.
Пример 3. Изучено влияние адаптогенного средства на скоростную выносливость на фоне дозированных физических нагрузок. Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г. Предварительную дозированную физическую нагрузку осуществляли с помощью принудительного бега животных в третбане при скорости движения ленты 28 м/мин в течение 3-х мин. Животных, получивших предварительную физическую нагрузку, распределяли на 4 подгруппы. Первой группе предлагаемое нами средство вводили внурижелудочно по 3,0 мл/кг, однократно за 1 час до исследования, а второй группе - так же за час до исследования в течение 7 дней. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный раствор экстракта элеутерококка в объеме 3,0 мл/кг, по такой же схеме (3 группа - однократно, 2 группа - в течение 7 дней). Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды.
В первый день длительность бега составляла 4,5 мин, в последующие 7 дней продолжительность бега последовательно увеличивалась на 0,23 мин и составила 5,7 мин. В 1 и 3 группе при однократном введении препаратов отмечено увеличение продолжительности бега при введении предлагаемого средства на 23% а при введении элеутерококка - на 20%. После семидневного приема препаратов отмечено увеличение скоростной выносливости при приеме предлагаемого средства на 86% по сравнению с контрольной группой. Элеутерококк же повышал скоростную выносливость на 72%
На 7 день, через 1 ч после последнего введения указанного средства, определяли скоростную выносливость по продолжительности бега в третбане до полного утомления. Полученные данные приведены в табл.5.
Таблица 5
Влияние адаптогенного средства на скоростную выносливость белых мышей на фоне предварительных физических нагрузок (M±SD)
Группы животных
Продолжительность бега, с
при однократной нагрузке
при 7-дневной нагрузке
Контрольная (Н<sub>2</sub>О), (n=20)
272,1±16,3
293,3±21,2
Опытная (испытуемое средство), (n=20)
337,3±18,9*
545,3±23,6*
Интактная (n=20)
329,9±19,5*
504,7±24,9*
Данные, приведенные в таблице 6, свидетельствуют, что однократное введение указанного средства в объеме 3,0 мл/кг на фоне однократной дозированной нагрузки, оказывало протекторное действие, предотвращая снижение физической работоспособности мышей опытной группы.
Полученные данные свидетельствуют, что введение испытуемого средства в указанном объеме на фоне дозированных физических нагрузок оказывает адаптогенное действие, предотвращая развитие утомления после однократной нагрузки. Более выраженное адаптогенное действие испытуемое средство оказывает при многократном введении на фоне ежедневных дозированных физических нагрузок.
Изучение влияния испытуемого средства на силовую выносливость подопытных животных.
Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г. В опытах использовали модель «виса на шесте». Животным опытной группы внутрижелудочно вводили деалкоголизированный раствор указанного средства в объеме 3,0 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в указанном объеме 1 раз в день за 30 мин до кормления. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. Влияние испытуемого средства на силовую выносливость определяли по времени «виса животных на шесте», от начала удержания до момента падения. Данные опыта приведены в табл.6.
Таблица 6
Влияние адаптогенного средства на силовую выносливость белых мышей (M±SD)
Группы животных
Продолжительность виса на шесте, мин
при однократном введении
при 7-дневном введении
Контрольная (H<sub>2</sub>O, n=20)
15,3±1,52
16,2±1,24
Опытная 1 (испытуемое средство, n=20)
22,6±1,63*
28,2±1,35*
Опытная 2 (элеутерококк, n=20)
21,9±1,33*
25,3±1,37*
Как следует из данных, приведенных в таблице 8, при однократном введении данного средства в объеме 3,0 мл/кг, время виса мышей опытной группы повышается на 46% по сравнению с таковым у животных контрольной группы. Многократное введение испытуемого средства сопровождается более выраженным повышением силовой выносливости животных, о чем свидетельствует увеличение продолжительности виса мышей опытной группы в среднем на 75% по сравнению с данными у животных контрольной группы. Эффективность испытуемого средства была аналогичной таковой у препарата сравнения.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что испытуемое средство обладает адаптогенной активностью, при этом наиболее выраженную активность проявляло при многократном профилактическом введении в объеме 3,0 мл/кг на фоне ежедневных дозированных физических нагрузок.