СОЕДИНЕНИЯ СУЛЬФОНАМИДА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ STAT5
SULPHONAMIDE COMPOUNDS AND USE THEREOF AS STAT5 INHIBITORS

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001] Настоящее изобретение относится к соединениям, которые представляют собой ингибиторы белка STAT5, включая соединения формулы (I).
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[1]
[2,3]
[4]
[5,6]
[0002] Многочисленные ингибиторы были разработаны для воздействия на сигнальный путь JAK-STAT, основную движущую силу гемопоэтических злокачественных новообразований. В то время как внимание было сосредоточено на выявлении основных эффективных ингибиторов киназ для подавления активности STAT, ингибиторы проявляли плохую киназную селективность, сердечно-сосудистую токсичность, а в некоторых клинических случаях, приобретенную устойчивость. Многие ингибиторы киназ применяли в комбинации, для того, чтобы пытаться бороться с устойчивостью. Альтернативная стратегия для снижения побочной токсичности, представляет собой воздействие на белки непосредственно нижележащие от киназ, такой как белок переносчик сигнала и активатор транскрипции 5 (STAT).
[7]
[8,9]
[10]
[11]
[0003] В нормальных клетках, активация белков STAT5 жестко регулируется цитокинами (IL-2, IL-5, IL-7, GM-CSF, эритропоэтин (ЕРО), тромбопоэтин и пролактин) и факторами роста. Связывание этих внеклеточных лигандов с их целевыми рецепторами индуцирует активацию рецептор-связанных JAK киназ, которые фосфорилируют ключевые тирозиновые остатки в рецепторе, обеспечивая стыковочные сайты для доменов, гомологичных участкам SRC 2 (SH2), неактивных цитоплазматических мономеров STAT5. STAT5 затем фосфорилируется специфическими тирозиновыми остатками, либо Y694 (STAT5A) либо Y699 (STAT5B), на С-конце. Фосфорилированные мономеры STAT5 образуют либо гомо- либо гетеро- STAT5X-STATX димеры посредством реципрокных фосфотирозин-8Н2 взаимодействий. Активированные димеры STAT5 перемещаются в ядро, где связываются с элементами ответа ДНК STAT5, индуцируя транскрипцию генов, участвующих в пролиферации (Bcl-xl, с-Мус, pim-1), дифференциации клеток (р21), клеточном выживании (MCL-1), воспалении (Osm) и апоптозе (JAB). В отличие от этого, мутации в цитозольных киназах (TEL-JAK2, Bcr-Abl, FLT-3), а также сверхактивных рецептор-связанных тирозинкиназах (SRC, EGFR) индуцируют конститутивное фосфорилирование белков STAT5, увеличивая работу анти-апоптотических генов, которые могут внести свой вклад в проявление фенотипа рака.
[12]
[0004] Подходы, направленные на непосредственное воздействие на STAT5, были ограничены производным хромона, ингибитором ацилгидразина, выявленным высокопроизводительной флуоресцентной поляризацией (ФП). В то время как это вещество проявляет in vitro потенциальное нарушение взаимодействия STAT5:EPOR фосфопептид, для ингибирования STAT5 в клетках требуются более высокие концентрации.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которые представляют собой ингибиторы белка STAT5. В одном варианте осуществления соединение формулы (I) имеет следующую структуру
где
1
2
n
6
10
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил или -С(=O)-(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
3
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
1
4
X представляет собой -COOR'', -P(O)(OR''), тетразол, -C(=O)NR''-OH или -CFOH, при этом R'' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
4
5
4
5
R и R представляют собой Н, или вместе R и R представляют собой -С(=O);
1
6
1
6
R представляет собой Н, ОН, галоген, (С-С)-алкил или (С-С)-алкокси;
n представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; и
m представляет собой 1, 2, 3 или 4;
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват, пролекарство и/или стереоизомер.
[0006] Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединения по изобретению и фармацевтически приемлемые наполнители, носители и/или добавки.
[0007] В одном варианте осуществления соединения по изобретению представляют собой ингибиторы белка STAT5. В одном аспекте настоящего изобретения, соединения формулы (I) применимы для лечения или профилактики расстройств при таком состоянии или заболевании, которое опосредованно белком STAT5. В другом варианте осуществления состояние или заболевание представляет собой гемопоэтические злокачественные новообразования, кожные заболевания, немеланомный рак кожи, рак предстательной железы или воспаление.
[0008] Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из приведенного ниже подробного описания. Следует понимать, однако, что подробное описание и конкретные примеры, показывающие предпочтительные варианты осуществления применения, приводятся только в качестве иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в пределах сущности и объема настоящего изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники из этого подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0009] Изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие фигуры, где:
[0010] Фиг. 1 представляет собой дендрограмму, демонстрирующую, что соединение по изобретению не ингибирует тестируемые киназы (попадание определяют, как более 35% ингибирования);
[0011] На фиг. 2 представлены кривые поверхностного плазмонного резонанса (SPR), показывающие аффинности связывания соединений по изобретению по отношению к белкам STAT3 и STAT5;
[0012] На фиг. 3 представлены калибровочные кривые для белков дикого типа STAT5b и STAT3 с использованием меченных флуоресцином фосфопептидов (5-FAM-pYLPQTC и 5-FAM-GpYLVLDKW для STAT3 и STAT5B, соответственно);
[0013] На фиг. 4 представлены нормированные кривые флуоресцентной поляризации (ФП), показывающие конкурентное связывание контрольных ингибиторов STAT5 (пимозида и хромона) и белка дикого типа STAT5B.
[0014] На фиг. 5 представлены нормированные кривые ФП, показывающие конкурентное связывание соединений 13a-d по изобретению и белков дикого типа STAT5B и STAT3.
[0015] На фиг. 6 представлены графики, показывающие цитотоксический потенциал соединений 13a-d по изобретению в анализах жизнеспособности клеток К562;
[0016] На фиг. 7 представлены графики, показывающие цитотоксический потенциал соединений 13a-d по изобретению в анализах жизнеспособности клеток MV4-11;
[0017] На фиг. 8 представлен график, показывающий А) ингибирование pSTAT5 соединением по изобретению в клетках К562; В) инициирование апоптоза через 24 ч и нокдаун MCL-1; С) соединение не влияет на pSTAT3 в клетках MDA-МВ-231, вплоть до 20 мкМ; и D) нокдаун целевого нижележащего с-Мус, через 5 ч;
[0018] На фиг. 9 представлены серии спектров ЖХ-МС, показывающие метаболическую стабильность в гепатоцитах мыши соединения по изобретению в различные моменты времени: А) 0 мин; В) 120 мин; и С) 240 мин;
[0019] На фиг. 10 представлены тандемные масс-спектры первого пика спектров ЖХ-МС фиг. 9;
[0020] На фиг. 11 представлены тандемные масс-спектры второго пика спектров ЖХ-МС фиг. 9;
[0021] На фиг. 12 представлены тандемные масс-спектры третьего пика спектров ЖХ-МС фиг. 9;
[0022] На фиг. 13 представлены тандемные масс-спектры четвертого пика спектров ЖХ-МС фиг. 9; и
[0023] На фиг. 14 представлено влияние соединения по изобретению на клетки CD34+ и MV4-11 AML.
[0024] На фигуре 15 представлены А) нормированная кривая ФП, показывающая конкурентное связывание соединения по изобретению и белка дикого типа STAT1; В) влияние соединения по изобретению на уровни фосфорилирования STAT1 в клетках К562 и MDA-MB-231; С) уровни фосфорилирования STAT5 в клетках MDA-MB-231; D) жизнеспособность клеток соединения по изобретению в клетках MDA-MB-231.
[0025] На фиг. 16 представлены А) ингибирование pSTAT5 соединением по изобретению (10 мкМ, желтые стрелки) в клетках MV-4;11 через 5 и 24 ч; В) через 24 часа, апоптоз инициировали с помощью детектируемой расщепленной PARP-1; С) соединение по изобретению индуцировало полный нокдаун нижележащего гена-мишени, MCL-1 при концентрации 10 мкМ.
[0026] На фиг. 17 представлена метаболическая стабильность соединения по изобретению в HLS9 и MMLS9 с НАДФН через 60 мин.
[0027] На фиг. 18 представлены А) метаболическая стабильность соединения по изобретению и положительного контроля (верапамил) в гепатоцитах человека и мыши через 120 мин; В) оставшиеся проценты соединения и положительного контроля (верапамил) в нагретых до кипения гепатоцитах человека и мыши через 120 мин в качестве отрицательного контроля.
[0028] На фиг. 19 представлен однофазовый подбор распада для аналитических точек данных ВЭЖХ соединения по изобретению в присутствии избытка трипептида глутатиона (10 мМ).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определения
1
р
[0029] Термин ''(С-С)-алкил'', используемый в данном описании, подразумевает прямую и/или разветвленную цепь, насыщенные алкильные радикалы, содержащие от одного до ''р'' атомов углерода, и включает (в зависимости от значения р) метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, 2,2-диметилбутил, н-пентил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, н-гексил и тому подобное, где переменная р представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкильном радикале.
1
р
[0030] Термин ''(С-С)-алкокси'' подразумевает алкильную группу, как определено выше, имеющую присоединенный атом кислорода. Используемый в данном описании, термин подразумевает прямую и/или разветвленную цепь, насыщенные алкильные радикалы, имеющие присоединенный атом кислорода, и содержащие от одного до ''р'' атомов углерода, и включает (в зависимости от значения р) метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, изобутокси, трет-бутокси, 2,2-диметилбутил, н-пентокси, 2-метилпентокси, 3-метилпентокси, 4-метилпентокси, н-гексокси и тому подобное, где переменная р представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкокси радикале.
1
р
[0031] Термин ''галоген-замещенный-(С-С)-алкил'', используемый в данном описании, подразумевает прямую и/или разветвленную цепь, насыщенные алкильные радикалы, содержащие от одного до ''р'' атомов углерода, в котором по меньшей мере один, и более, и включительно все из атомов водорода замещены атомами галогена, и включает (в зависимости от значения р) фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорметил, 1-фторэтил, 1,1-дифторэтил и тому подобное, где переменная р представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкильном радикале.
[0032] Термин ''арил'', используемый в данном описании, относится к циклическим группам, которые содержат по меньшей мере одно ароматическое кольцо, например, одиночное кольцо (например, фенил) или несколько конденсированных колец (например, нафтил). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, арильная группа содержит 6, 9 или 10 атомов, таких как фенил, нафтил, инданил, антраценил, 1,2-дигидронафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, флуоренил, инданил, инденил и тому подобное.
[0033] Термин ''галоген'', используемый в данном описании, относится к атому галогена, и включает фтор (F), хлор (Cl), бром (Br) и йод (I).
[0034] Термин ''фармацевтически приемлемая соль'' относится, например, к соли, которая сохраняет требуемую биологическую активность соединения по настоящему изобретению и не придает нежелательных токсикологических эффектов, а также может относиться к соли присоединения кислоты или к соли присоединения основания.
[0035] Термин ''сольват'', используемый в данном описании, подразумевает соединение или его фармацевтически приемлемую соль, где молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым во вводимой дозе. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода и тому подобное. Когда вода является растворителем, молекула называется ''гидрат''. Образование сольватов будет варьироваться в зависимости от соединения и сольвата. В общем, сольваты образуются путем растворения соединения в соответствующем растворителе, и выделения сольвата путем охлаждения или с использованием антирастворителя. Сольват, как правило, сушат, или подвергают азеотропной перегонке в условиях окружающей среды.
[0036] В вариантах осуществления настоящего изобретения, соединения могут иметь асимметричный центр. Эти соединения существуют в виде энантиомеров. Там, где соединения обладают более чем одним асимметричным центром, они могут существовать в виде диастереомеров. Следует понимать, что все такие изомеры и их смеси в любой пропорции входят в объем настоящего изобретения. Следует также понимать, при том, что стереохимия соединений может быть такой, как показано в любом из соединений, перечисленных в данном описании, такие соединения могут также содержать определенное количество (например, менее 20%, предпочтительно менее 10%, более предпочтительно менее 5%) соединений по изобретению, имеющих альтернативную стереохимию. Например, соединения по изобретению, которые показаны без каких-либо стереохимических обозначений, следует понимать, как рацемические смеси (т.е. содержащие одинаковое количество каждого возможного энантиомера или диастереомера). Тем не менее, следует понимать, что все энантиомеры и диастереомеры включены в объем настоящего изобретения, в том числе и их смеси в любой пропорции.
[0037] Термин ''эффективное количество'' или ''терапевтически эффективное количество'' или ''фармацевтически эффективное количество'', используемый здесь, подразумевает эффективное количество, при дозировке и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого результата. Например, в контексте лечения субъекта с заболеванием, опосредованным STAT5, эффективное количество представляет собой то количество, которое, например, ингибирует белок STAT5 у субъекта. Эффективные количества могут варьироваться в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и/или масса тела субъекта. Количество получаемого соединения, которое будет соответствовать такому количеству, будет изменяться в зависимости от различных факторов, таких, как получаемые лекарственные средства или соединения, фармацевтический состав, способ введения, тип состояния, заболевания или расстройства, особенности субъекта, подвергаемого лечению, и тому подобное, но тем не менее может быть рутинно определено специалистом в данной области.
[0038] Используемый в данном описании термин ''пролекарство'' относится к веществу, которое получают в неактивной форме, которая превращается в активную форму (т.е. лекарственное средство) внутри тела или его клеток под действием, например, эндогенных ферментов или других химических веществ и/или условий. Производные пролекарств соединений по изобретению или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, могут быть получены способами, известными обычным специалистам в данной области, и включают в себя сложные эфиры любых свободных гидроксильных или карбоксильных фрагментов соединений.
[0039] Используемый в данном описании термин ''субъект'' относится ко всем членам царства животных, включая млекопитающих, и соответствующим образом относится к людям. Член животного царства включает в себя, без ограничения, млекопитающих (таких как человек, примат, свинья, овца, корова, представитель семейства лошадиных, лошадь, верблюд, представитель семейства псовых, собака, представитель семейства кошачьих, кошка, тигр, леопард, куница, норка, куница каменная, хорек, домашнее животное, домашний скот, кролик, мышь, крыса, морская свинка или другой грызун, тюлень, кит и тому подобное), рыб, амфибий, рептилий и птиц (таких как водоплавающие, перелетные птицы, перепел, утка, гусь, домашняя птица или курица). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, субъект нуждается в соединении или композиции по изобретению.
Соединения по изобретению
[0040] В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (А), которые представляют собой ингибиторы STAT5. В одном варианте осуществления соединение формулы (А), имеет следующую структуру
1
2
n
6
10
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
где R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил или -C(=O)-(CH)-(C-C)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
3
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
1
4
2
6
10
X представляет собой -COOR'', -P(O)(OR''), тетразол, -C(=O)NR''-OH или -CFOH, при этом R'' представляет собой Н или (С-С)-алкил или -СН-(С-С)-арил;
4
5
3
4
5
4
5
R и R независимо друг от друга или одновременно представляют собой Н или CF, при этом по меньшей мере один из R или R представляет собой Н, или вместе R и R представляют собой -С(=O) или -C(=S);
1
6
1
6
R представляет собой Н, ОН, галоген, (С-С)-алкил или (С-С)-алкокси;
каждый n независимо или одновременно представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5, или 6; и
m представляет собой 1, 2, 3 или 4;
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват, пролекарство и/или стереоизомер.
[0041] В одном варианте осуществления соединение формулы (А) представляет собой соединение формулы (I), которые представляют собой ингибиторы STAT5. В одном варианте осуществления соединение формулы (I) имеет следующую структуру
1
2
n
6
10
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
где R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил или -C(=O)-(CH)-(C-C)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
3
2
n
6
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R представляет собой -(СН)-(С-С)-арил, при этом арильные группы необязательно замещены от одного до пяти заместителями, выбранными из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
1
4
X представляет собой -COOR'', -P(O)(OR''), тетразол, -C(=O)NR''-OH или -CFOH, при этом R'' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
4
5
4
5
R и R представляют собой Н или вместе R и R представляют собой -С(=O);
1
6
1
6
R представляет собой Н, ОН, галоген, (С-С)-алкил или (С-С)-алкокси;
каждый n независимо или одновременно представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5, или 6; и
m представляет собой 1, 2, 3 или 4;
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват, пролекарство и/или стереоизомер.
1
6
10
2
6
10
6
10
1
2
2
[0042] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, R представляет собой -(С-С)-арил, -(СН)-(С-С)-арил или -С(=O)-(С-С)-арил. В другом варианте осуществления R представляет собой фенил, нафтил, -СН-фенил, -СН-нафтил, -С(=O)-фенил или -С(=O)-нафтил.
1
1
6
1
4
1
6
1
1
6
1
6
1
1
4
1
4
1
1
3
3
[0043] В другом варианте осуществления изобретения, необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из галогена, CN, (С-С)-алкила, галоген-замещенного-(С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления изобретения, необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из галогена, (С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из фтор-, хлор-, бром-, (С-С)-алкила или (С-С)-алкокси. В дополнительном варианте осуществления, необязательные заместители арильной группы R выбраны из от одного до трех заместителей, выбранных из фтор-, метила и трет-бутила. В одном варианте осуществления, необязательные заместители арильной группы R выбраны из от одного до трех заместителей, выбранных из CN, -CF, -СН, F, изопропила и трет-бутила.
1
[0044] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, фрагмент R представляет собой
или
1
[0045] В другом варианте осуществления фрагмент R представляет собой
или
1
[0046] В другом варианте осуществления, фрагмент R представляет собой
или
2
6
10
2
6
10
2
2
[0047] В одном варианте осуществления настоящего изобретения, R представляет собой -(С-С)-арил или -(СН)-(С-С)-арил. В другом варианте осуществления R представляет собой фенил или -СН-фенил.
2
1
4
3
2
3
1
4
2
1
4
3
2
3
3
[0048] В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из галогена, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил. В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до трех из галогена, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, и -(циклопропил)-CF. В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R представляют собой от одной до трех групп хлор-, CF или -(циклопропил)-CF.
2
[0049] В другом варианте осуществления, фрагмент R представляет собой
3
6
10
2
6
10
3
2
[0050] В другом варианте осуществления R представляет собой -(С-С)-арил или -(СН)-(С-С)-арил. В другом варианте осуществления R представляет собой фенил или -СН-фенил.
3
1
6
1
6
3
1
3
1
3
3
1
3
[0051] В одном варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из галогена, ОН, (С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из фтор-, хлор-, бром-, ОН, (С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления необязательные заместители арильной группы R выбраны от одного до пяти из фтор-, хлор-, бром- и (С-С)-алкила.
3
[0052] В одном варианте осуществления, фрагмент R представляет собой
или
3
[0053] В другом варианте осуществления, фрагмент R представляет собой
или
1
4
[0054] В дополнительном варианте осуществления изобретения R представляет собой Н, ОН, фтор-, хлор-, бром-, или (С-С)-алкил. В другом варианте осуществления, Н, F или ОН.
2
1
4
1
4
[0055] В другом варианте осуществления изобретения X представляет собой COOR'', -P(O)(OR'') или тетразол, где R'' представляет собой Н или (C-C)-алкил (такой как трет-бутил). В одном варианте осуществления X представляет собой -COOR'', где R'' представляет собой Н или (С-С)-алкил. В одном варианте осуществления X представляет собой -СООН. В одном варианте осуществления X представляет собой -СОО-бензил.
[0056] В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) имеет следующую структуру
или
[0057] В другом варианте осуществления соединение формулы (I) имеет следующую структуру
[0058] В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I.A)
6
7
8
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
где R, R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
9
10
1
6
1
6
1
4
3
2
3
1
4
R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны от одного до пяти из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси, галоген-замещенного-(С-С)-алкила, -(циклопропил)-CF, -NO, CN, -SOR' и -COOR', при этом R' представляет собой Н или (С-С)-алкил;
2
2
1
4
2
6
10
X представляет собой -COOR'', -P(O)(OR''), тетразол, -C(=O)NR''-OH или -CFOH, при этом R'' представляет собой Н, (С-С)-алкил, или -СН-(С-С)-арил;
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват, пролекарство и/или стереоизомер.
6
7
8
1
6
1
4
1
6
6
7
8
3
1
6
1
6
6
7
8
3
1
4
1
4
6
7
8
3
3
6
8
3
1
4
3
6
8
7
[0059] В другом варианте осуществления изобретения R, R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, галогена, CN, (С-С)-алкила, галоген-замещенного-(С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления изобретения R, R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, галогена, CN, CF, (С-С)-алкила и (С-С)-алкокси. В другом варианте осуществления R, R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, фтор-, хлор-, бром-, CN, CF, (С-С)-алкила или (C-С)-алкокси. В одном варианте осуществления, R, R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, CN, -CF, -СН, F, изопропила и трет-бутила. В другом варианте осуществления R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны из Н, CN, -CF, (С-С)-алкила (такого как -СН, изопропил или трет-бутил). В одном варианте осуществления R и R представляют собой трет-бутил и R представляет собой Н.
9
10
1
6
1
6
1
4
9
10
1
6
9
10
10
10
[0060] В одном варианте осуществления R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны от одного до пяти из галогена, ОН, (С-С)-алкила, (С-С)-алкокси или галоген-замещенного-(С-С)-алкила. В одном из вариантов осуществления R и R независимо друг от друга или одновременно выбраны от одного до пяти из Cl, F, Br, ОН или (С-С)-алкила. В одном варианте осуществления R представляет собой Cl в пара-положении. В другом варианте осуществления R представляет собой пять атомов фтор-. В другом варианте осуществления R представляет собой четыре атома фтор- в орто- и мета-положениях. В другом варианте осуществления R представляет собой три метильные группы в орто- и пара- положениях.
1
4
2
6
10
[0061] В одном варианте осуществления X представляет собой -COOR'', где R'' представляет собой Н, (С-С)-алкил или -СН-(С-С)-арил. В одном варианте осуществления X представляет собой -СООН, -СОО(трет-бутил) или -СОО-бензил. В другом варианте осуществления X представляет собой -СООН.
Композиции
[0062] Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (А), (I) и (I.A), как определено выше (соединения по изобретению), или их фармацевтически приемлемые соли, сольваты и пролекарства, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Соединения находятся в составе фармацевтических композиций для введения субъектам, предпочтительно людям, в биологически совместимой форме, пригодной для введения in vivo.
[0063] Композиции, содержащие соединения по изобретению, могут быть получены известными способами для получения фармацевтически приемлемых композиций, которые могут быть введены субъектам, таким образом, что эффективное количество активного вещества объединяют в виде смеси с фармацевтически приемлемым носителем. Подходящие носители раскрыты, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences (2003 - 20th edition) и в The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19), опубликованной в 1999 г. Исходя из этого, композиции содержат, хотя и не исключительно, растворы веществ в сочетании с одним или более фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, а также содержатся в буферных растворах с подходящим рН, и изоосмотических с физиологическими жидкостями.
[0064] Соединения по изобретению могут быть фармацевтически применимы в форме свободного основания, в форме солей, сольватов и в виде гидратов. Все формы включены в объем изобретения. Соли присоединения кислоты и основания могут быть образованы соединениями по изобретению для применения в качестве источников свободного основания, даже если конкретная соль сама по себе требуется только как промежуточный продукт, как, например, когда соль получают только с целью очистки и идентификации. Таким образом, все соли, которые могут быть образованы соединениями по изобретению, находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Способы лечения и применений
[0065] Соединения по изобретению, включая соединения формулы (А), (I) и (I.A) представляют собой ингибиторы белка STAT5. В одном варианте осуществления соединения по изобретению представляют собой селективные ингибиторы STAT5 относительно их активности в отношении STAT5 и STAT3. В одном варианте осуществления соединения по изобретению имеют значения KD менее 200 нм, необязательно менее 150 нм, необязательно менее 100 нМ, или необязательно менее 50 нМ.
[0066] Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения, раскрыт способ лечения или профилактики заболевания, или состояния, опосредованного белком переносчиком сигнала и активатором транскрипции 5 (STAT5), включающий введение фармацевтически эффективного количества соединения по изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. В одном из вариантов осуществления заболевание или состояние, опосредованное STAT5, представляет собой заболевание или состояние, при котором ингибирование белка STAT5 принесло бы пользу. В одном из вариантов осуществления заболевание или состояние представляет собой гемопоэтические злокачественные новообразования, кожное заболевание, немеланомный рак кожи, рак предстательной железы или воспаление, включающий введение фармацевтически эффективного количества соединения по изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. В одном из вариантов осуществления гемопоэтическое злокачественное новообразование представляет собой лейкоз. В другом варианте осуществления лейкоз представляет собой острый лейкоз, хронический лейкоз, лимфоцитарный лейкоз или миелоцитарный лейкоз. В другом варианте осуществления кожное заболевание представляет собой псориаз или дерматит.
[0067] В другом варианте осуществления соединения по изобретению могут быть применимы для ингибирования белка переносчика сигнала и активатора транскрипции 5 (STAT5). В другом варианте осуществления соединения по изобретению могут быть применимы для получения лекарственного средства для ингибирования белка переносчика сигнала и активатора транскрипции 5 (STAT5). В одном аспекте изобретения, соединения по изобретению могут быть применимы для лечения или профилактики гемопоэтических злокачественных новообразований, кожных заболеваний, немеланомного рака кожи, рака предстательной железы или воспаления. В одном из вариантов осуществления гемопоэтическое злокачественное новообразование представляет собой лейкоз. В другом варианте осуществления лейкоз представляет собой острый лейкоз, хронический лейкоз, лимфоцитарный лейкоз или миелоцитарный лейкоз. В другом варианте осуществления кожное заболевание представляет собой псориаз или дерматит.
[0068] В другом варианте осуществления соединения по изобретению применяют в качестве зондов для исследования функции STAT5 в различных патологических клетках. В одном из вариантов осуществления соединения по изобретению специфически ингибируют STAT5, и, следовательно, соединения используют в качестве зондов для определения, вовлечен ли STAT5 в развитие болезней или болезненных состояний.
[0069] Несмотря на то, что изобретение было описано в связи с конкретными вариантами осуществления, очевидно, что многие альтернативы, модификации и вариации будут очевидны специалистам в данной области. Соответственно, предполагается охватить все такие альтернативы, модификации и вариации, которые попадают в пределы сущности и широкого объема прилагаемой формулы изобретения. Кроме того, цитирование или идентификация любой ссылки в данной заявке не должно быть истолковано как признание того, что такая ссылка доступна в качестве предшествующего уровня техники для настоящего изобретения.
[0070] Изобретение проиллюстрировано следующими характерными примерами. Как очевидно специалистам в данной области техники, многие из деталей примеров могут быть изменены, в то время как практическая часть изобретения раскрыта в данном описании.
Примеры
[0071] Экспериментальные протоколы
[0072] Пример 1. Химические способы
2
2
4
3
3
6
2
2
1
13
-1
[0073] Безводные растворители метанол, ДМСО, CHCl, ТГФ и ДМФ были приобретены у Sigma Aldrich и применялись непосредственно из герметично-закупоренных бутылок. Молекулярные сита активировали путем нагрева до 300°С в вакууме в течение ночи. Все реакции проводили в атмосфере сухого азота в стеклянном сушильном шкафу и контролировали на степень завершенности с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием силикагеля (визуализированный в УФ-свете, или полученный путем обработки окрашивающим средством KMnO). ЯМР спектры регистрировали спектрометром Bruker Avance III при 23°С, работающем при частоте 400 МГц для Н ЯМР-спектроскопии и 100 МГц для С ЯМР-спектроскопии, либо в CDCl, CDOD или d-ДМСО. Химические сдвиги (d) представлены в частях на миллион (млн) после калибровки по остаточному изотопному растворителю. Константы взаимодействия (J) представлены в Гц. Масс-спектрометрию выполняли на масс-спектрометре AB/Sciex QStar с источником ESI, МС/МС и возможностью точного измерения масс, связанного с капиллярной системой ЖХ Agilent 1100. Перед биологическими испытаниями, чистоту ингибитора оценивали с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ (офВЭЖХ). Анализ с помощью офВЭЖХ проводили с использованием колонки Phenomenex Luna 5u С18 150 мм × 4,6 мм при 1,2 мN мин, и с использованием градиентных смесей. Линейный градиент состоял из изменяющейся композиции растворителей либо из (I) 15% MeCN и 85% HO с 0,1% ТФУ (об/об) до 100% MeCN в течение 30 минут, и (II) 15% MeCN и 85% HO с 0,1% ТФУ (об/об) до 100% MeCN в течение 60 минут, УФ-детектирование при 250 нм. Для представления данных ВЭЖХ, чистота в процентах приведена в скобках после времени удерживания для каждого состояния. Химическая чистота, измеренная с помощью ВЭЖХ, всех биологически оцениваемых соединений составляет более 95%. ВЭЖХ-следы для всех тестируемых соединений представлены в виде иллюстративного материала.
[0074] Соединения по изобретению синтезировали следующим общим способом, как показано на схеме 1.
t
t
3
3
2
2
3
3
3
2
5
5
2
2
3
3
6
6
2
3
2
2
2
3
2
3
2
3
Схема 1: a) i) KOBu, BnBr, ДМФ, 0°C → комнатная температура, 1 ч; затем KOBu, BnBr, ДМФ, 0°С → комнатная температура, 16 ч, 47%; b) 1) альдегид, АсОН, 3Å молекулярное сито, СНОН, 45°С, 2 ч; 2) NaCNBH, 45°С, 16 ч, 36-96%; с) альдегид, 3Å молекулярное сито, CHCl, NaOAc, Na(OAc)BH, комнатная температура, 16 ч, 88%; d) (CH)CSOCl или CFSOCl, KCO, CHCN, 16 ч, 0°С → комнатная температура, 60-77%; е) 1) p-Cl(CH)BnBr, CsCO, ДМФ, комнатная температура, N, 2 ч, 70%; f) CHCl:ТФУ 1:1, комнатная температура, 1 ч, 90%; g) PPhCl, CHCl, 30 мин, 100°С нагрев микроволновым излучением, 20-98%; h) Н, Pd/C, 1:1 ТГФ/СНОН, 3-10 ч, комнатная температура, 35-95%. ДМФ - N,N-диметилформамид, ТФУ - трифторуксусная кислота
t
t
2
2
2
4
[0075] Общий способ а (дибензилация салициловой кислоты). К перемешанному раствору 4-аминосалициловой кислоты (1,0 экв) в ДМФ (0,1 М) при 0°С добавляли KOBu (1,2 экв). Через 15 мин бромистый бензил (1,2 экв) добавляли по каплям. Суспензию оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение еще 4 ч, после чего реакционный сосуд снова охлаждали до 0°С. Еще раз добавляли KOBu (1,2 экв) перед добавлением по каплям бромистого бензила (1,2 экв). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, после чего реакцию гасили HO. Раствор затем повторно экстрагировали этилацетатом и органическими фазами вместе взятыми. Органические фазы затем отмывали HO и насыщенным раствором соли, затем концентрировали, сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera с градиентом 4:1 гексан/EtOAc при пониженном давлении.
3
3
2
2
[0076] Общий способ b (восстановительное аминирование с использованием цианоборгидрида натрия). К раствору защищенной бензилом 4-аминосалициловой кислоты 5 (1,0 экв) и уксусной кислоты (1,5 экв), перемешанном в безводном СНОН (0,1 М) с 3Å молекулярным ситом, добавляли альдегид (1,0 экв). Раствор нагревали до 45°С в течение 3 ч и затем давали остыть до комнатной температуры. Далее, NaCNBH (1,3 экв) добавляли порциями и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли CHCl, фильтровали и концентрировали в вакууме. Концентрат очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera, используя градиент Hexanes/EtOAc.
3
2
2
[0077] Общий способ с (восстановительное аминирование с использованием триацетоксиборгидрида натрия). К раствору защищенной бензилом 4-аминосалициловой кислоты 5 (1,2 экв) и уксусной кислоты (1,2 экв), перемешанном в безводном дихлорэтане (0,1 м) с 3Å молекулярным ситом, добавляли альдегид (1,0 экв). Затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, после чего добавляли Na(OAc)BH (1,5 экв) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли CHCl, фильтровали и концентрировали в вакууме. Концентрат очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera, используя градиент Hexanes/EtOAc.
2
3
2
2
3
2
4
[0078] Общий способ d (сульфонилирование глицина и трет-бутилового эфира саркозина). Раствор аминокислоты трет-бутилового эфира (1 экв) и КСО (1,1 экв) растворяли в безводном ацетонитриле и охлаждали до 0°С, после чего добавляли сульфонилхлорид (1 экв). Полученный раствор оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в CHCl. Органические фазы объединяли, а затем последовательно отмывали 0,1 М HCl, насыщенным раствором NaHCO и солевым раствором. Органические фазы затем сушили над NaSO и концентрировали в вакууме, с образованием производных 7 и 8 без дополнительной очистки.
2
3
2
2
2
4
[0079] Общий способ е (алкилирование сульфонамида). Раствор 8 (1 экв) и CsCO (1,3 экв) растворяли в безводном ДМФ с последующим добавлением p-ClBnBr (1 экв). Полученный раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили HO, а затем несколько раз экстрагировали этилацетатом. Органические фазы объединяли и промывали HO, насыщенным раствором соли, сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera с градиентом 2:1 Hexanes/EtOAc при пониженном давлении.
2
2
3
3
[0080] Общий способ f (удаления защитной группы трет-бутилового эфира). Раствор аминокислоты трет-бутилового эфира (1 экв) растворяли в ТФУ и немедленно разбавляли CHCl в смеси 1:1 (0,1 М) раствора. Полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч, а затем выпаривали совместно с СНОН (3 раза) и CHCl (3 раза). Полученный остаток переносили без какой-либо очистки.
3
2
3
3
2
3
2
4
[0081] Общий способ g (PPhCl связывание пептида). К перемешанному раствору карбоновой кислоты 10 (1,1 экв) в CHCl (0,1 М) добавляли PPhCl (2,5 экв). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 5 мин при комнатной температуре или до полного растворения, с последующим добавлением по каплям вторичного анилина 6 (1,0 экв). Реакционную смесь затем нагревали в микроволновой печи при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, с последующим последовательным отмыванием насыщенным раствором NaHCO и солевым раствором. Органические слои затем сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Концентрат абсорбировали непосредственно на силикагеле для очистки колоночной хроматографией с использованием градиента гексанов и EtOAc.
3
2
2
2
2
2
3
[0082] Общий способ h (гидрогенолиз бензинового эфира и дибензилового эфира). Защищенную бензилом салициловую кислоту, 11 (1 экв) растворяли в перемешанном растворе СНОН/ТГФ (1:2, 0,1 М). Раствор тщательно дегазировали перед осторожным добавлением 10%-ного Pd/C (10 мг/ммоль). Газ Н пропускали через растворитель в течение 5 мин, после чего раствор помещали в атмосферу газа Н и непрерывно перемешивали в течение 2-5 ч, контролировали завершение реакции с помощью ТСХ. Газ Н откачивали и реакционную смесь отфильтровали через целит, чтобы удалить катализатор Pd и концентрировали в вакууме. Полученный остаток адсорбировали на силикагеле и разделяли на колонки с использованием Biotage Isolera в градиенте CHCl, СНОН и 1% уксусной кислоты.
[0083] Промежуточная характеристика данных
H
3
2
2
2
C
3
21
19
3
[0084] Бензил 4-амино-2-(бензилокси)бензоат (3). Соединение 3 синтезировали в соответствии с общим способом а, получали конечный продукт в виде оранжевого твердого вещества (47%): δ (400 МГц, d-CDCl) 5,07 (s, 2Н, СН), 5,21 (s, 2Н, СН), 5,99 (brs, 2Н, NH), 6,18 (dd, J=8,6 и 1,8 Гц, 1Н, СН)), 6,32 (d, J=1,7 Гц, 1Н, СН), 7,28-7,38 (8Н, m, СН), 7,47 (d, J=7,2 Гц, 2Н, СН), 7,60 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 65,8, 70,2, 99,1, 106,7, 109,0, 126,8, 127,5, 127,7, 127,9, 128,3, 128,4, 134,3, 136,6, 136,7, 152,2, 160,7, 165,7; LRMS (ES+), вычислено для [CHNO+Н] 333,18, обнаружено 334,2.
H
3
2
2
2
C
3
26
23
4
[0085] Бензил 2-(бензилокси)-4-((фуран-2-илметил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью фуран-2-карбальдегида по 1,5 ммоль в соответствии с общим способом b (74%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,36 (d, J=5,4 Гц, 2Н, СН), 4,54 (br s, 1Н, NH), 5,12 (s, 2Н, СН), 5,31 (s, 2Н, СН), 6,19 (d, J=3,4 Гц, 1Н, СН), 6,21 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,24 (dd, J=8,6 и 2,0 Гц, 1Н, СН), 6,31 (q, J=3,0, 1,8, и 4,6 Гц, 1Н, СН) 7,26-7,50 (m, 11Н, 11 СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 40,6, 65,7, 70,4, 97,5, 104,9, 107,2, 108,9, 110,3, 126,8, 127,5, 127,6, 127,9, 128,2, 128,4, 134,2, 136,6, 136,7, 142,0, 151,4, 152,2, 160,7, 165,5 LRMS (ES+). Вычислено для [CHNO+Н] 413,16 обнаружено 414,2.
H
3
2
2
2
C
3
26
23
3
[0086] Бензил 2-(бензилокси)-4-((тиофен-2-илметил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью тиофен-2-карбальдегида по 1,5 ммоль в соответствии с общим способом b (73%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,50 (s, 2Н, СН), 4,54 (br s, 1Н, NH), 5,10 (s, 2Н, СН), 5,31 (s, 2Н, СН), 6,20 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,25 (dd, J=8,6 и 2,0 Гц, 1Н, СН), 6,97 (br, 2Н, СН), 7,23 (dd, J=1,3, 4,8 Гц, 1Н, СН), 7,27-7,58 (m, 10Н, 10 СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 51,6, 65,4, 70,6, 96,5, 104,9, 109,5, 125,6, 126,2, 127,0, 127,1, 127,6, 128,8, 136,5, 140,3, 152,5, 161,3, 168,8 LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 429,14 обнаружено 430,2.
H
3
3
2
2
2
С
3
26
25
3
3
[0087] Бензил-2-(бензилокси)-(((1-метил-Н-имидазол-2-ил)метил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 1-метил-1Н имидазол-2-карбальдегида по 1,5 ммоль в соответствии с общим способом b (43%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,53 (s, 3Н, СН), 4,27 (d, J=5,4 Гц, 2Н, СН), 5,08 (s, 2Н, СН), 5,21 (br, 1Н, NH), 5,31 (s, 2Н, СН), 6,24 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н, СН), 6,30 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,81 (s, 1Н, СН), 6,96 (s, 1Н, СН), 7,23-7,51 (m, 10Н, 10 СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 14,1, 20,9, 29,6, 32,4, 40,1, 60,2, 65,7, 70,3, 97,6, 104,7, 108,6, 121,6, 126,9, 127,1, 127,5, 127,9, 128,2, 134,2, 136,7, 144,0, 152,5, 160,7, 165,7 LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 427,19 обнаружено 428,21.
H
3
2
2
2
2
2
C
3
25
25
3
[0088] Бензил 2-(бензилокси)-4-((циклопропилметил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью циклопропанкарбальдегида по 1,5 ммоль в соответствии с общим способом b (66%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,25 (dd, J=5,3 и 10,0 Гц, 2Н, СН), 0,56 (dd, J=5,7, 13,0 Гц, 2Н, СН), 1,05 (br, 1Н, СН), 2,97 (s, 2Н, СН), 4,40 (br, 1Н, NH), 5,13 (s, 2Н, СН), 5,33 (s, 2Н, СН), 6,15 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,19 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,27-7,58 (m, 10Н, 10 СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl), 3,4, 10,4, 14,1, 48,2, 60,3, 65,7, 70,3, 96,9, 104,6, 107,9, 126,8, 127,4, 127,6, 127,9, 128,2, 128,3, 134,3, 136,7, 136,8, 153,1, 160,9, 165,7 LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 387,18 обнаружено 388,20.
H
3
2
2
2
2
2
2
C
3
29
29
3
[0089] Бензил-2-(бензилокси)-4-((бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илметил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью бицикло[2,2,1]гепт-5-ен-2-карбальдегида по 1,5 ммоль в соответствии с общим способом b (36%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,58-0,73 (m, 1Н, СН), 1,25-1,46 (m, 2Н, СН) 1,47-1,60 (m, 1Н, СН), 1,85-2,03 (m, 1Н, СН), 2,31 (br, 1Н, СН), 2,79 (br, 1Н, СН), 2,84-2,98 (m, 2Н, СН) 4,38 (br, 1Н, NH), 5,14 (s, 2Н, СН), 5,35 (s, 2Н, СН), 5,94-6,00 (m, 1Н, СН), 6,20-6,27 (m, 1Н, СН), 6,15 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,19 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,27-7,50 (m, 10Н, 10 СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 30,2, 38,4, 42,3, 44,2, 47,4, 49,5, 65,7, 70,3, 96,9, 104,6, 107,6, 126,9, 127,5, 127,6, 127,9, 128,3, 128,4, 131,8, 134,2, 136,1, 136,7, 136,8, 137,8, 153,2, 160,9, 165,8 LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 439,21 обнаружено 440,21.
H
3
3
2
2
2
C
3
32
33
3
[0090] Бензил 2-(бензилокси)-4-(4-трет-бутилбензил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 4-трет-бутилбензалдегид по 0,9 ммоль в соответствии с общим способом b (96%): δ (400 МГц, d-CDCl) 1,19 (s, 9Н, 3 СН), 4,13 (s, 2Н, СН), 4,40 (br s, 1Н, NH), 4,92 (s, 2Н, СН), 5,17 (s, 2Н, СН), 6,02 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,06 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,08-7,32 (m, 14Н, 14 СН), 7,71 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 31,0, 34,2, 47,0, 65,5, 70,1, 96,9, 104,6, 107,9, 125,3, 126,7, 126,9, 127,3, 127,4, 127,7, 128,1, 128,2, 134,1, 134,9, 136,5, 136,6, 150,2, 152,8, 160,6, 165,5; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 480,25 обнаружено 481,26.
H
3
2
2
2
2
C
3
32
27
3
[0091] Бензил 2-(бензилокси)-4-(нафтален-2-илметиламино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 2-нафтальдегида по 0,9 ммоль в соответствии с общим способом с (88%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,35 (s, 2Н, NHCH), 4,52 (br s, 1Н, NH), 4,92 (s, 2H, CH), 5,19 (s, 2Н, СН), 6,70 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,12 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,11-7,22 (m, 6Н, СН), 7,25-7,30 (m, 4Н, 4 СН), 7,34-7,39 (m, 2Н, 2 СН), 7,61-7,75 (m, 5Н, 5 СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 47,1, 65,2, 69,7, 96,7, 104,4, 107,9, 124,7, 125,2, 125,3, 125,7, 126,2, 126,9, 127,0, 127.1, 127,3, 127,7, 127,8, 127,9, 132,1, 132,7, 133,7, 135,1, 136,1, 152,3, 160,3, 165,1; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 474,21, обнаружено 475,21.
H
3
3
2
2
2
C
3
36
41
3
[0092] Бензил 2-(бензилокси)-4-(3,5-ди-трет-бутилбензил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 3,5-ди-трет-бутилбензальдегид по 0,9 ммоль в соответствии с общим способом b (60%): δ (400 МГц, d-CDCl) 1,34 (s, 18Н, 6 СН), 4,30 (s, 2Н, СН), 4,40 (br s, 1Н, NH), 5,11 (s, 2Н, СН), 5,32 (s, 2Н, СН), 6,22 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,26 (dd, J=8,6 и 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,15-7,53 (m, 13Н, 13 СН), 7,87 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 31,0, 34,2, 47,0, 65,5, 70,1, 96,9, 104,6, 107,9, 121,8, 122,4, 125,3, 126,7, 126,9, 127,3, 127,4, 127,7, 128,1, 128.2, 134,1, 134,9, 136,5, 136,6, 150,2, 152,8, 160,6, 165,5; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 535,31, обнаружено 536,30.
H
3
2
2
2
C
3
28
24
3
[0093] Бензил 2-(бензилокси)-4-((4-фторбензил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 4-фторбензальдегида по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом b (45%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,30 (s, 2Н, СН), 4,50 (br s, 1Н, NH), 5,07 (s, 2Н, СН), 5,30 (s, 2Н, СН), 6,14 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,20 (dd, J=8,6 и 2,0 Гц, 1Н, СН), 6,96-7,08 (m, 2Н, СН), 7,22-7,40 (m, 10Н, 10 СН), 7,40-7,45 (m, 2Н, СН), 7,87 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 46,9, 65,7, 70,3, 97,3, 104,8, 115,3, 115,6, 126,7, 127,5, 127,6, 127,8, 128,2, 128,3, 128,7, 128,8, 133,7, 134,2, 136,6, 152,4, 160,7, 160,8, 165,5; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNO+Н] 441,17, обнаружено 442,20.
H
3
2
2
2
C
3
28
20
5
3
[0094] Бензил 2-(бензилокси)-4-(((перфторфенил)метил)амино)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью 2,3,4,5,6-пентафторбензальдегида по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом b (36%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,45 (s, 2Н, СН), 4,75 (br s, 1Н, NH), 5,09 (s, 2Н, СН), 5,27 (s, 2Н, СН), 6,21 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,22 (dd, J=8,6. 2,0 Гц, 1Н, СН), 7,21-7,50 (m, 10Н, 10 СН), 7,80 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 13,9, 20,8, 35,0, 60,2, 65,8, 70,1, 97,0, 104,7, 109,4, 126,7, 127,5, 127,6, 127,8, 128,2, 128,3, 134,3, 136,4, 136,5, 151,3, 160,7, 165,4, 171,0; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNO+Н] 513,14, обнаружено 514,20.
H
3
2
2
2
С
3
28
25
3
[0095] Бензил 4-(бензиламино)-2-(бензилокси)бензоат. Производное 4 синтезировали с помощью бензальдегида по 1,2 ммоль в соответствии с общим способом а (210 мг, 40%): δ (400 МГц, d-CDCl) 4,21 (s, 2Н, СН), 4,95 (s, 2Н, СН), 5,20 (s, 2Н, СН), 6,03 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,09 (dd, J=8,6, 2,1 Гц, 1Н, СН), 7,15-7,34 (m, 15Н, СН), 7,73 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 47,5, 66,7, 70,3, 97,2, 104,8, 108,3, 126,8, 127,2, 127,4, 127,5, 127,6, 127,9, 128,2, 128,3, 128,6, 134,2, 136,6, 136,7, 138,1, 152,8, 160,8, 165,6; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNO+Н] 424,19, обнаружено 425,22.
H
3
3
3
3
3
2
C
3
16
25
4
[0096] Трет-бутил 2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетат.Производное 5 синтезировали с применением общего способа d (77%): δ (400 МГц, CDCl) 1,37 (s, 9Н, СН) 2,30 (s, 3Н, СН), 2,61 (s, 6Н, СН) 2,82 (s, 3Н, СН), 3,99 (s, 2Н, СН), 6,95 (s, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 21,0, 22,9, 27,5, 35,1, 51,6, 130,6, 137,4, 141,3, 145,5, 170,2; LRMS (ES+) вычислено для [CHNOS+Н] 285,10, обнаружено 286,22.
H
3
3
3
3
2
C
3
12
17
4
[0097] 2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)уксусная кислота. Производное 6 синтезировали в соответствии с общим способом f (95%): δ (400 МГц, CDCl) 2,32 (s, 3Н, СН), 2,61 (s, 6Н, СН), 2,82 (s, 3Н, СН), 3,99 (s, 2Н, СН), 6,95 (s, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 21,0, 22,9, 35,1, 51,6, 130,6, 137,4, 141,3, 145,5, 170,2; LRMS (ES+) вычислено для [CHNOS+Н] 271,09, обнаружено 272,28.
H
3
3
3
2
C
3
13
14
5
4
[0098] Трет-бутил 2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетат. Производное 5 синтезировали с применением общего способа d (90%): δ (400 МГц, CDCl) 1,37 (s, 9Н, СН) 3,03 (s, 3Н, СН), 4,10 (s, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 27,5, 35,1, 51,6, 82,8, 115,6, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 376,06, обнаружено 377,09.
H
3
3
2
C
3
9
6
5
4
[0099] 2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)уксусная кислота. Производное 6 синтезировали с применением общего способа f (97%): δ (400 МГц, CDCl) 2,86 (s, 3Н, СН), 4,10 (s, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 35,5, 51,6, 115,6, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 320,00, обнаружено 321,05.
H
3
3
3
3
3
2
2
2
2
С
3
38
40
4
6
[00100] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-((1-метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,16 ммоль в соответствии с общим способом g (60%): δ (400 МГц, d-CDCl) 2,32 (s, 3Н, СН), 2,62, (s, 6Н, 2СН), 2,90 (s, 3Н, СН), 3,39 (d, J=3,1 Гц, 3Н, СН) 3,44-3,59 (m, 2Н, СН), 3,92, (s, 2Н, СН), 5,18 (s, 2Н, СН), 5,33 (s, 2Н, СН), 6,93 (dd, J=8,6 и 2,1 Гц, 1Н, СН), 7,00 (s, 2Н, СН), 7,27-7,55 (m, 11Н, СН), 7,68 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 7,89 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 21,6, 22,5, 33,4, 35,6, 48,1, 49,3, 65,6, 70,7, 104,5, 113,8, 116,2, 120,2, 126,8, 127,1, 127,6, 128,8, 130,4, 131,1, 136,3, 136,7, 137,2, 141,3, 145,2, 147,0, 152,3, 161,3, 166,5, 168,3; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 680,27, обнаружено 681,28.
H
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
38
38
2
7
[00101] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(фуран-2-илметил)-2-(N,2,4,6 тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 1,0 ммоль в соответствии с общим способом g (30%): δ (400 МГц, d-CDCl) 2,27 (s, 3, СН), 2,54, (s, 6Н, 2СН), 2,77 (s, 3Н, СН), 3,67 (s, 2Н, СН), 4,77 (s, 2Н, СН), 5,06 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,08 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,25 (dd, J=8,6 и 2,1 Гц, 1Н, СН), 6,60 (m, 2Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,27-7,49 (m, 11Н, СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,7, 34,6, 66,9, 70,7, 109,4, 110,4, 113,6, 119,8, 126,9, 128,0, 128,1, 128.1, 128,4, 128,5, 131,7, 133,1, 135,6, 135,7, 140,4, 142,1, 142,4, 149,7, 158,8, 165.2, 166,7; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 666,24, обнаружено 667,24.
H
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
38
38
2
6
2
[00102] Бензил 2-(бензилокси)-4-(2-(N-2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)-N-(тиофен-2-илметил)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,9 ммоль в соответствии с общим способом g (24%): δ (400 МГц, d-CDCl) 2,28 (s, 3Н, СН), 2,56 (s, 6Н, 2СН), 2,78 (s, 3Н, СН), 3,67 (s, 2Н, СН), 4,90 (s, 2Н, СН), 5,03 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,50-6,63 (m, 2Н, 2СН), 6,72 (d, J=3,1 Гц, 1Н, СН), 6,86 (m, 1Н, СН), 6,91 (s, 2Н, СН), 7,21 (d, 1Н, СН), 7,29-7,43 (m, 10Н, СН), 7,84 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ(100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,7, 29,6, 34,6, 47,5, 49,4, 66,9, 70,7, 113,7, 119,8, 121,0, 125,0, 126,4, 126,9, 127,7, 128,1, 128,4, 128,6, 131,8, 133,2, 135,6, 138,6, 140,5, 142,4, 144,5, 158,8, 165,2, 166,6; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 682,22, обнаружено 683,18.
H
3
2
2
3
3
3
2
2
2
2
C
3
37
40
2
6
[00103] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(циклопропилметил)-2-(N-2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,8 ммоль в соответствии с общим способом g (34%): δ (400 МГц, d-CDCl): 0,035 (dd, J=5,1 и 10,0 Гц, 2Н, СН), 0,33 (dd, J=5,3 и 12,9 Гц, 2Н, СН), 1,05 (br, 1Н, СН), (2,27 (s, 1Н, СН), 2,56 (s, 6Н, СН), 2,77 (s, 3Н, СН), 3,47 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 3,67 (s, 2Н, СН), 5,18 (s, 2Н, СН), 5,38 (s, 2Н, СН), 6,77 (dd, J=1,6 и 8,0 Гц, 1Н, СН), 6,81 (d, J=1,6 Гц, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,25-7,46 (m, 10Н), 7,89 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 3,6, 9,6, 14,1, 22,7, 34,6, 53,5, 60,2, 66,9, 70,7, 114,1, 120,1, 120,7, 126,9, 127,9, 128,1, 128,1, 128,4, 128,5, 131,7, 133,1, 135,7, 140,5, 142,2, 145,4, 158,8, 165,2, 166,4 LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 640,26, обнаружено 641,24.
H
3
2
3
3
3
2
C
3
41
44
2
6
[00104] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илметил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом g (25%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,40 (d, J=2,7 Гц, 1Н, СН), 0,78-0,94 (m, 1Н, СН), 1,05-1,13 (m, 1Н, СН), 1,22-1,44 (m, 4Н, СН) 11,56-1,64 (m, 1Н, СН), 2,05-2,13 (m, 1Н, СН), 2,27 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,78 (s, 3Н, СН), 3,68 (s, 2Н, СН), 5,19 (d, J=11,2 Гц, 2Н, СН), 5,38 (d, J=4,3 Гц, 2Н, СН), 5,69 (dd, J=2,5 и 5,4 Гц, 1Н, СН), 6,07 (dd, J=3,2, 5,7 Гц, 1Н, СН), 6,68-6,78 (m, 2Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,25-7,45 (m, 10Н, СН), 7,90 (d, J=8,1 Гц, СН);); δ (100 МГц, d-CDCl) 30,3, 31,0, 38,4, 38,7, 41,6, 42,3, 44,1, 44,3, 45,1, 47,4, 48,7, 49,5, 65,7, 70,3, 96,9, 104,6, 104,6, 107,6, 126,9, 127,5, 127,6, 127,9, 128,3, 128,4, 131,8, 134,2, 134,3, 136,2, 136,8, 136,9, 137,8, 153,3, 160,9, 165,8. LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 692,29, обнаружено 693,30.
H
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
40
40
2
6
[00105] Бензил-4-(N-бензил-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)-2-(бензилокси)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,39 ммоль в соответствии с общим способом g (20%): δ (400 МГц, d-CDCl): 2,28 (s, 3Н, СН), 2,55 (s, 6Н, 2 СН), 2,79 (S, 3Н, СН), 3,68 (s, 2Н, СН), 4,79 (s, 2Н, СН), 4,95 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,47 (s, 1Н, СН), 6,51 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,04-7,09 (m, 2Н, СН), 7,23-7,27 (m, 4Н, СН), 7,29-7,36 (m, 8Н, СН), 7,37-7,42 (m, 2Н, СН), 7,79 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ(100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,7, 34,7, 49,5, 52,9, 66,9, 70,6, 126,9, 127,6, 127,9, 128,1, 128,1, 128,4, 128,5, 128,7, 131,8, 133,1, 135,6, 136,5, 140.5, 142,4, 158,7, 165,2, 166,8. LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 676,26, обнаружено 677,28.
H
3
3
3
3
2
2
2
2
С
3
40
40
2
6
[00106] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(нафтален-1-илметил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,39 ммоль в соответствии с общим способом g (20%): δ (400 МГц, d-CDCl): 2,28 (s, 3Н, СН), 2,55 (s, 6Н, 2 СН), 2,79 (S, 3Н, СН), 3,68 (s, 2Н, СН), 4,79 (s, 2Н, СН), 4,95 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,47 (s, 1Н, СН), 6,51 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,04-7,09 (m, 2Н, СН), 7,23-7,27 (m, 4Н, СН), 7,29-7,36 (m, 8Н, СН), 7,37-7,42 (m, 2Н, СН), 7,79 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,7, 34,7, 49,5, 52,9, 66,9, 70,6, 126,9, 127.6, 127,9, 128,1, 128,1, 128,4, 128,5, 128,7, 131,8, 133,1, 135,6, 136,5, 140,5, 142,4, 158,7, 165,2, 166,8, LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 726,28, обнаружено 727,28.
3
3
3
2
2
2
2
C
3
40
39
2
6
[00107] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(4-фторбензил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,39 ммоль в соответствии с общим способом g (39%): 2,27 (s, 1Н, СН), 2,54 (s, 6Н, СН), 2,77 (s, 3Н, СН), 3,68 (s, 2Н, СН), 3,73 (s, 2Н, СН), 5,01 (s, 2Н, СН), 5,35 (s, 2Н, СН), 6,37-6,64 (m, 2Н, СН), 6,87-6,99 (m, 4Н, СН), 6,98-7,10 (m, 2Н, СН), 7,27-7,46 (m, 10Н, СН), 7,82 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН); δ(100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,6, 34,7, 49,5, 52,1, 66,9, 70,6, 113,7, 115,1, 115,3, 119,8, 126,8, 127,9, 128,1, 128,4, 128,5, 130,5, 131,7, 132,3, 133,1, 135,5, 140,4, 142,4, 144,6, 158,7, 165,1, 166,8; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 694,25, обнаружено 695,25.
3
3
3
2
2
2
2
C
3
40
35
5
2
6
[00108] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-((перфторфенил)метил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,27 ммоль в соответствии с общим способом g (58%): 2,28 (s, 1Н, СН), 2,53 (s, 6Н, СН), 2,77 (s, 3Н, СН), 3,66 (s, 2Н, СН), 4,97 (s, 2Н, СН), 5,12 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,57 (dd, J=8,6 и 2,1 Гц, 1Н, СН), 6,67 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,27-7,46 (m, 10Н, СН), 7,83 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ(100 МГц, d-CDCl) 14,0, 20,7, 22,6, 34,7, 39,9, 49,3, 67,0, 70,8, 113,3, 119,4, 121,4, 126,7, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 131,7, 133,3, 135,4, 135,5, 140,4, 142,5, 143,5, 158,9, 164,9, 166,7; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 766,21, обнаружено 767,25.
H
3
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
41
42
2
6
[00109] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(4-метилбензил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат.Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,39 ммоль в соответствии с общим способом g (28%): δ (400 МГц, d-CDCl): 2,28 (s, 3Н, СН), 2,31 (s, 3Н, СН) 2,55 (s, 6Н, 2 СН), 2,79 (S, 3Н, СН), 3,66 (s, 2Н, СН), 4,73 (s, 2Н, СН), 4,96 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,38-6,57 (m, 2Н, 2СН), 6,89-6,98 (m, 4Н, СН), 7,04 (s, 2Н, СН), 7,29-7,43 (m, 10Н, 10 СН), 7,78 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,8, 20,9, 22,6, 34,6, 49,5, 52,5, 66,8, 70,6, 126,8, 127,9, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 128,7, 129,0, 131,7, 133,0, 133,5, 135,6, 137,2, 140,4, 142,3, 158,6, 165,1, 166,6. LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 690,28, обнаружено 691,28.
H
3
3
3
3
3
2
2
2
2
С
3
44
48
2
6
[00110] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(4-(трет-бутил)бензил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,39 ммоль в соответствии с общим способом g (37%): δ (400 МГц, d-CDCl): 1,28 (s, 9Н, С(СН)), 2,28 (s, 3Н, СН), 2,55 (s, 6Н, 2 СН), 2,78 (s, 3Н, СН), 3,67 (s, 2Н, СН), 4,75 (s, 2Н, СН), 4,91 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,44 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,55 (dd, J=2,0 и 8,6 Гц, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,01 (d, J=8,4 Гц, 2Н, СН) 7,27 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 7,29-7,48 (m, 10Н, 10 СН), 7,80 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,8, 22,6, 31,1, 34,3, 34,6, 49,5, 52,5, 66,8, 70,5, 125,2, 126,9, 127,9, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 131,7, 133,0, 133,5, 135,6, 140,5, 142,3, 150,6, 158,6, 165,2, 166,6; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 732,32, обнаружено 733,36.
Н
3
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
48
56
2
6
[00111] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(3,5-(-ди-трет-бутил)бензил)-2-(N,2,4,6-тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат.Вторичный анилин 4 соединяли с производным мезитила 6 по 0,20 ммоль в соответствии с общим способом g (38%): δ (400 МГц, d-CDCl): 1,24 (s, 18Н, 6СН), 2,04 (s, 3Н, СН), 2,56 (s, 6Н, 2 СН), 2,76 (s, 3Н, СН), 3,70 (s, 2Н, СН), 4,80 (s, 2Н, СН), 4,85 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,42 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,56 (dd, J=2,0, 8,6 Гц, 1Н, СН), 6,88-6,99 (m, 4Н, СН)& 2СН), 7,27-7,44 (m, 11Н, СН), 7,80 (d, J=8,31 Гц, 2Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,7, 22,6, 31,2, 34,4, 34,6, 49,5, 53,3, 66,8, 70,5, 121,2, 123,0, 126,8, 127,9, 128,0, 128,3, 128,4, 131,7, 132,9, 135,5, 135,6, 140,5, 142,3, 150,9, 158,6, 165,1, 166,4; LRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS] 788,39, обнаружено 789,41.
H
3
3
2
2
2
2
C
3
35
27
5
2
7
[00112] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(фуран-2-илметил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метил фенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом g (31%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,05 (s, 3Н, СН), 3,84 (s, 2Н, СН), 4,68 (s, 2Н, СН), 5,08 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,02 (d, J=3,2 Гц, 1Н, СН), 6,25 (m, 1Н, СН), 6,58 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,67 (dd, J=8,6, 2,1 Гц, 1Н, СН), 7,26-7,53 (m, 11Н, СН), 7,85 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 35,9, 51,6, 66,9, 70,6, 109,5, 110,3, 113,5, 119,6, 126,9, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 133,2, 135,5, 142,4, 149,0, 158,7, 165,1; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 714,15, обнаружено 715,16.
H
3
3
2
2
2
2
С
3
35
27
5
2
6
[00113] Бензил-2-(бензилокси)-4-(2-(N-2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)-N-(тиофен-2-илметил)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом g (68%): δ (400 МГц, d-CDCl); 3,06 (s, 3Н, СН), 3,87 (s, 2Н, СН), 4,86 (s, 2Н, СН), 5,07 (s, 2Н, СН), 5,37 (s, 2Н, СН), 6,60 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,68 (d, J=2,1 Гц, 1Н, СН), 6,70 (dd, J=8,6, 2,1 Гц, 1Н, СН), 6,88 (m, 1Н, СН), 7,25 (d, J=2,6 Гц, 1Н, СН), 7,29-7,46 (m, 10Н, СН), 7,88 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 14,0, 20,8, 24,5, 35,8, 36,4, 47,4, 51,6, 60,2, 66,9, 70,6, 113,6, 119,7, 121,3, 126,1, 126,4, 126,9, 127,7, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 133,2, 135,5, 137,9, 143,7, 158,7, 165,1, 165,7; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 730,12, обнаружено 731,12.
H
3
2
2
3
2
2
2
2
C
3
34
29
5
2
6
[00114] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(циклопропилметил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,5 ммоль в соответствии с общим способом g (93%): δ (400 МГц, d-CDCl); 0,01 (dd, J=5,1 и 10,0 Гц, 2Н, СН), 0,36 (dd, J=5,3 и 12,9 Гц, 2Н, СН), 0,73 (br, 1Н, СН), 3,04 (s, 3Н, СН), 3,38 (d, J=7,19 Гц, 2Н, СН), 3,86 (s, 2Н, СН), 5,22 (s, 2Н, СН), 5,38 (s, 2Н, СН), 6,84 (d, J=1,6 Гц, 1Н, СН), 6,85 (dd, J=1,6 и 8,0 Гц, 1Н, СН), 7,28-7,47 (m, 10Н, СН), 7,91 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 3,4, 9,3, 14,0, 35,9, 51,7, 53,6, 66,9, 70,7, 113,9, 119,9, 126,9, 127,9, 128,1, 128,4, 128,5, 133,2, 135,5, 135,6, 144,7, 158,7, 165,1, 165,6; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 688,17, обнаружено 689,19.
H
3
2
2
3
2
C
3
38
33
5
2
6
[00115] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-илметил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом g (84%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,40 (d, J=2,7 Гц, 1H, СН), 0,78-0,94 (m, 1Н, СН), 1,05-1,13 (m, 1Н, СН) 1,22-1,44 (m, 4Н, СН) 11,56-1,64 (m, 1Н, СН), 2,05-2,13 (m, 1Н, СН), 2,78 (s, 3Н, СН), 3,68 (s, 2Н, СН), 5,19 (s, 2Н, СН), 5,38 (s, 2Н, СН), 5,69 (dd, J=2,5 и 5,4 Гц, 1Н, СН), 6,07 (J=3,2, 5,7 Гц, 1Н, СН), 6,68-6,78 (m, 2Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 7,25-7,45 (m, 10Н, СН), 7,90 (d, J=8,1 Гц, СН); δ(100 МГц, d-CDCl) 29,8, 35,9, 37,0, 41,7, 42,0, 44,2, 45,0, 49,3, 51,9, 53,4, 66,9, 70,7, 113,6, 119,4, 126,8, 126,9, 128,0, 128,1, 128,4, 128,6, 131,8, 133,2, 135,6, 137,4, 144,8, 158,7, 165,1, 165,6; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 740,20, обнаружено 741,21.
H
3
3
2
2
2
2
C
3
37
29
5
2
6
[00116] Бензил-4-(N-бензил-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)-2-(бензилокси)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,5 ммоль в соответствии с общим способом g (64%): δ (400 МГц, d-CDCl): 3,05 (s, 3Н, СН), 3,87 (s, 2Н, СН), 4,71 (s, 2Н, СН), 4,99 (s, 2Н СН), 5,35 (s, 2Н, СН), 6,49 (s, 1Н, СН), 6,63 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН), 7,03 (m, 2Н, СН), 7,19-7,44 (m, 12Н, СН) 7,83 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 35,8, 51,8, 52,9, 66,9, 70,6, 113,8, 119,8, 121,2, 126,9, 127,8, 128,0, 128,1, 128,3, 128,4, 128,5, 128,6, 133,2, 135,5, 135,9, 144,0, 158,6, 165,1, 165,8; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 724,17, обнаружено 725,17.
H
3
3
2
2
2
2
C
3
41
31
5
2
6
[00117] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(нафтален-1-илметил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат.Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,5 ммоль в соответствии с общим способом g (83%): δ (400 МГц, d-CDCl): 3,06 (s, 3Н, СН), 3,90 (s, 2Н, СН), 4,87 (s, 2Н, СН), 4,88 (s, 2Н СН), 5,33 (s, 2Н, СН), 6,48 (s, 1Н, СН), 6,63 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН), 7,14-7,53 (m, 14Н, СН) 7,67-7,88 (m, 3Н, СН) δ(100 МГц, d-CDCl) 35,8, 51,9, 53,0, 66,9, 70,6, 113,8, 119,8, 126,1, 126,2, 126,8, 127,5, 127,6, 127,8, 127,9, 128,1, 128,4, 132,7, 132,9, 133,2, 133,3, 135,4, 135,5, 158,7, 165,0, 166,0; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 774,18, обнаружено 775,19.
3
2
2
2
2
C
3
37
29
6
2
6
[00118] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(4-фторбензил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-фенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,2 ммоль в соответствии с общим способом g (73%): 3,05 (s, 3Н, СН), 3,88 (s, 2Н, СН), 4,67 (s, 2Н, СН), 5,05 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,53 (s, 2Н, СН), 6,61 (dd, J=2,05, 8,63 Гц, 2Н, СН), 6,87-7,04 (m, 4Н, СН), 7,28-7,48 (m, 10Н, СН), 7,84 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 35,8, 50,8, 51,8, 52,2, 67,0, 70,6, 113,7, 115,2, 115,4, 119,8, 121,3, 126,8, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 130,3, 130,4, 131,7, 133,2, 135,4, 135,5, 143,8, 158,7, 161,0, 163,4, 165,0, 165,9; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 742,16, обнаружено 743,16.
3
2
2
2
2
C
3
37
24
10
2
6
[00119] Бензил-2-(бензилокси)-4-(2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)-N-((перфторфенил)метил)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,1 ммоль в соответствии с общим способом g (74%): 3,04 (s, 3Н, СН), 3,85 (s, 2Н, СН), 4,88 (s, 2Н, СН), 5,15 (s, 2Н, СН), 5,36 (s, 2Н, СН), 6,65 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,69 (dd, J=8,6, 2,1 Гц, 1Н, СН), 7,28-7,50 (m, 10Н, СН), 7,87 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 35,3, 35,6, 48,3, 65,6, 70,9, 104,6, 112,2, 113,9, 115,4, 116,7, 127,1, 128,9, 131,3, 136,1, 136,2, 137,8, 141,4, 144,7, 147,3, 161,2, 166,8, 168,4; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 814,12, обнаружено 815,14.
H
3
3
3
2
2
2
2
C
3
35
29
5
4
6
[00120] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-((1-метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,2 ммоль в соответствии с общим способом g (72%): δ (400 МГц, d-CDCl) 2,28 (s, 3Н, СН), 3,80 (d, J=3,1 Гц, 3Н, СН), 3,20 (s, 2Н, СН), 4,22 (s, 2Н, СН), 4,51 (s, 2Н, СН), 4,76 (s, 2Н, СН), 6,26 (dd, J=8,6, 2,1 Гц, 1Н, СН), 6,29 (s, 2Н, СН), 6,78-6,99 (m, 10Н, СН), 6,35 (s, 1Н, СН), 6,41 (s, 1Н, СН), 7,68 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 7,44 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 33,4, 35,6, 48,1, 49,3, 65,6, 70,7, 104,5, 112,3, 113.8, 116,2, 120,2, 126,8, 127,1, 127,6, 128,8, 130,4, 131,1, 136,3, 136,7, 137,2, 144.9, 147,0, 152,3, 161,3, 166,5, 168,3; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 728,17 обнаружено 729,18.
H
3
3
3
2
2
2
2
C
3
41
37
5
2
6
[00121] Бензил-2-(бензилокси)-4-(N-(4-(трет-бутил)бензил)-2-(2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензоат. Вторичный анилин 4 соединяли с производным пентафтора 6 по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом g (98%): δ (400 МГц, d-CDCl): 1,29 (s, 9Н, С(СН)), 3,04 (s, 3Н, СН), 3,85 (s, 2Н, СН), 4,67 (s, 2Н, СН), 4,94 (s, 2Н СН), 5,34 (s, 2Н, СН), 6,46 (d, J=2,0 Гц, 1Н, СН), 6,65 (dd, J=2,0, 8,6 Гц, 1Н, СН), 6,96 (d, J=8,7 Гц, 2Н, СН), 7,27-7,42 (m, 12Н, СН), 7,83 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 31,1, 34,3, 35,8, 51,8, 52,6, 66,9, 70,6, 113,8, 119,8, 125,3, 126,9, 128,0, 128,1, 128,4, 128,5, 132,9, 133,2, 135,4, 135,5, 150,8, 158,6, 165,1; LRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS] 780,23, обнаружено 781,23.
[00122] Синтез тетраподальных ингибиторов (13a-d)
H
3
3
3
3
3
2
C
3
15
23
4
[00123] Трет-бутил (мезитилсульфонил)глицинат. Производное 9 синтезировали с применением общего способа d (71%): δ (400 МГц, CDCl) 1,36 (s, 9Н, (СН)), 2,29 (s, 3Н, СН), 2,65 (s, 6Н, СН), 3,60 (d, J=5,4 Гц, 2Н, СН), 5,08 (t, J=5,13 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 20,8, 23,0, 27,7, 46,5, 81,9, 130,0, 137,4, 140,1, 145,0, 167,5; LRMS (ES+) вычислено для [CHNOS+Н] 313,13, обнаружено 314,11.
H
3
3
3
3
3
2
2
C
3
22
28
4
[00124] Трет-бутил N-(4-хлорбензил)-N-(мезитилсульфонил)глицинат. Производное 10 синтезировали с применением общего способа е (77%): δ (400 МГц, CDCl) 1,34 (s, 9Н, (СН)), 2,29 (s, 3Н, СН), 2,63 (s, 6Н, СН), 3,70 (s, 2Н, СН), 4,49 (s, 2Н, СН) 6,95 (s, 2Н, СН), 7,08 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН), 7,25 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 20,8, 23,0, 27,7, 46,5, 51,8, 81,9, 128,6, 130,0, 132,3, 134,6, 137,4, 140,1, 145,0, 167,5; LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 437,14, обнаружено 438,10.
H
3
3
3
2
2
C
3
18
20
4
[00125] N-(4-хлорбензил)-N-(мезитилсульфонил)глицинат. Производное 11 синтезировали с применением общего способа f (90%): δ (400 МГц, CDCl) 2,29 (s, 3Н, СН), 2,63 (s, 6Н, СН), 3,70 (s, 2Н, СН), 4,49 (s, 2Н, СН) 6,95 (s, 2Н, СН), 7,08 (d, J=8,0 Гц, 2Н, СН), 7,25 (d, J=8,0 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 20,8, 23.0, 46,5, 51,8, 128,6, 130,0, 132,3, 134,6, 137,4, 140,1, 145,0, 167,5; LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 381,08, обнаружено 382,07.
H
3
3
3
2
C
3
12
12
5
4
[00126] Трет-бутил ((перфторфенил)сульфонил)глицинат.Производное 9 синтезировали с применением общего способа d (71%): δ (400 МГц, CDCl) 1,40 (s, 9Н, СОО(СН)), 3,93 (s, 2Н, СН), 5,54 (s, 1Н, NH); δ (400 МГц, CDCl) 27,5, 45.1, 82,8, 115,6, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 361,04, обнаружено 362,09.
H
3
3
3
2
2
C
3
19
17
5
4
[00127] Трет-бутил N-(4-хлорбензил)-N-((перфторфенил)сульфонил)глицинат. Производное 10 синтезировали с применением общего способа е (71%): δ (400 МГц, CDCl) 1,37 (s, 9Н, (СН)), 3,93 (s, 2Н, СН), 4,57 (s, 2Н, СН), 7,24 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,33 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 27,5, 52,5, 53,0, 81,8, 112,6, 126,5, 130,1, 132,4, 134,3, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ES+) вычислено для [CHFCINOS+Н] 485,05, обнаружено 486,10.
H
3
2
2
C
3
15
9
5
4
[00128] N-(4-хлорбензил)-N-((перфторфенил)сульфонил)глицинат. Производное 11 синтезировали с применением общего способа f (92%): δ (400 МГц, CDCl) 4,13 (s, 2Н, СН), 4,58 (s, 2Н, СН), 7,25 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН), 7,35 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 52,8, 54,2, 112,6, 126,5, 130,1, 132,4, 134,3, 136,5, 144,8, 145,9, 172,0; LRMS (ES+) вычислено для [CHFCINOS+Н] 428,99, обнаружено 429,99.
H
3
3
3
3
3
2
2
2
2
C
3
54
59
2
6
[00129] Бензил-2-(бензилокси)-4-(2-((1Ч-(4-хлорбензил)-2,4,6-триметилфенилсульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)бензоат. Производное 12 синтезировали с применением общего способа g (55%): δ (400 МГц, CDCl) 1,26 (s, 18Н, (СН)), 2,31 (s, 3Н, СН), 2,60 (s, 6Н, СН), 3,58 (s, 2Н, СН), 4,56 (s, 2Н, СН), 4,75 (s, 4Н, СН), 5,32 (s, 2Н, СН), 6,24 (br s, 2Н, СН), 6,93 (s, 2Н, СН), 6,96 (s, 2Н, СН), 7,03 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН), 7,14 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН), 6,93 (s, 2Н, СН), 7,29-7,38 (m, 10Н, СН), 7,70 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 20,8, 22,8, 31,4, 34,6, 45,7, 49,5, 53,3, 66,9, 70,5, 113,5, 120,0, 121,3, 123,4, 127,0, 127,9, 128,0, 128,3, 128,4, 128,5, 130,3, 131,9, 132,6, 133,7, 135,4, 135,5, 140,3, 142,5, 150,9, 158,5, 165,2, 166,2; LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 898,38, обнаружено 899,39.
H
3
3
3
2
2
2
2
2
C
3
50
45
2
6
[00130] Бензил 2-(бензилокси)-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,4,6-триметилфенилсульфонамидо)-N-(нафтален-2--илметил)ацетамидо)бензоат. Производное 12 синтезировали с применением общего способа g (72%): δ (400 МГц, CDCl) 2,27 (s, 3Н, СН), 2,59 (s, 6Н, СН), 3,58 (s, 2Н, СН), 4,62 (s, 2Н, СН), 4,71 (s, 2Н, СН), 4,86 (s, 2Н, СН), 5,30 (s, 2Н, СН), 6,21 (d, J=7,9 Гц, 1Н, СН), 6,27 (s, 1Н, СН), 6,94 (s, 2Н, СН), 7,07 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,16 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,19 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН), 7,22-7,27 (m, 2Н, СН), 7,28-7,38 (m, 5Н, СН), 7,42-7,53 (m, 4Н, СН), 7,62-7,78 (m, 4Н, СН), 7,82 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 20,8, 22,8, 45,6, 49,9, 52,9, 66,9, 70,5, 126,0, 126,2, 126,8, 127,5, 127,6, 127,8, 128,0, 128,1, 128,2, 128,3, 128,4, 128,6, 130,1, 131,8, 132,5, 132,6, 132,9, 133,6, 133,8, 135,3, 135,5, 140,3, 142,5, 158,6, 165,1, 166,6; LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 836,27, обнаружено 837,28.
H
3
2
2
2
2
2
С
3
47
34
5
2
6
[00131] Бензил 2-(бензилокси)-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(нафтален-2--илметил)ацетамидо)бензоат. Производное 12 синтезировали с применением общего способа g (61%): δ (400 МГц, CDCl) 3,77 (s, 2Н, СН), 4,67 (s, 2Н, СН), 4,73 (s, 2Н, СН), 4,83 (s, 2Н, СН), 5,29 (s, 2Н, СН), 6,31 (d, 1Н, СН), 6,39 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН), 7,13-7,23 (m, 5Н, СН), 7,23-7,29 (m, 5Н, СН), 7,29-7,36 (m, 5Н, СН), 7,41 (s, 1Н, СН), 7,45-7,54 (m, 2Н, СН), 7,64-7,75 (m, 2Н, СН), 7,78 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 7,81-7,89 (m, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 47,5, 50,5, 53,0, 66,9, 70,6, 113,2, 119,5, 121,3, 126,1, 126,3, 126,9, 127,5, 127,9, 128,1, 128,3, 128,4, 128,9, 129,9, 132,7, 132,9, 133,1, 133,2, 134,3, 135,2, 135,4, 143,7, 158,7, 165,0, 165,8; LRMS (ES+) вычислено для [CHCIFNOS+Н] 884,17, обнаружено 885,19.
H
3
3
3
2
2
2
2
2
C
3
51
48
5
2
6
[00132] Бензил-2-(бензилокси)-4-(2-((1Ч-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)бензоат. Производное 12 синтезировали с применением общего способа g (61%): δ (400 МГц, CDCl) 1,25 (s, 18Н, (СН)), 3,75 (s, 2Н, СН), 4,63 (s, 2Н, СН), 4,70 (s, 2Н, СН), 4,76 (s, 2Н, СН), 5,30 (s, 2Н, СН), 6,25 (s, 1Н, СН), 6,33 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН), 6,85 (s, 2Н, СН), 7,17 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,25 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,28-7,37 (m, 12Н, СН), 7,78 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 31,1 34,5, 47,6, 50,3, 53,3, 111,3, 116,2, 117,2, 118,9, 121,6, 123,0, 128,9, 129,9, 132,0, 132,5, 134,3, 134,4, 136,4, 138,9, 143,5, 145,0, 145,9, 146,8, 151,0, 162,7, 165,3, 172,2; LRMS (ES+) вычислено для [CHCIFNOS+Н] 946,28, обнаружено 947,30.
H
3
3
3
2
2
2
3
37
36
5
2
6
[00133] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 13а синтезировали с применением общего способа h (76%): δ (400 МГц, CDCl) 1,25 (s, 18Н, (СН)), 3,80 (s, 2Н, СН), 4,61 (s, 2Н, СН), 4,73 (s, 2Н, СН), 6,25 (s, 1Н, СН), 6,36 (s, 1Н, СН), 6,88 (s, 2Н, СН), 7,15 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,24 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,31 (s, 1Н, СН), 7,75 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН); 5С (400 МГц, CDCl) 31,1, 34,5, 47,6, 50,3, 121,6, 128,7, 128,9, 129,9, 132,5, 134,4, 151,0, 162,7, 172,4; LRMS (ES+) вычислено для [CHCIFNOS+Н] 766,19, обнаружено 765,18; ВЭЖХ (I), (II) tR = 48,22 мин (95,25%).
H
3
3
3
3
2
2
2
3
40
47
2
6
[00134] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,4,6-триметилфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 13b синтезировали с применением общего способа h (59%): δ (400 МГц, CDCl) 1,25 (s, 18Н, (СН)з), 2,29 (s, 3Н, СН), 2,60 (s, 6Н, СН) 3,59 (s, 2Н, СН), 4,60 (s, 2Н, СН), 4,72 (s, 2Н, СН), 6,11 (s, 1Н, СН), 6,25 (s, 1Н, СН), 6,92 (s, 2Н, СН), 6,96 (s, 2Н, СН), 7,05 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 7,14 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 7,31 (s, 1Н, СН), 7,73 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); 5С (400 МГц, CDCl) 20,6, 20,8, 22,7, 31,2, 34,5, 45,6, 49,6, 53,3, 117,1, 118,9, 121,4, 123,2, 128,6, 130,2, 131,9, 132,4, 133,6, 133,7, 134,8, 140,3, 142,6, 147,3, 150,8, 162,6, 166,1, 173,1, 177,4; LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 718,28, обнаружено 717,3; ВЭЖХ (I) tR = 32,08 мин (97,63%), (II) tR = 49,69 мин (97,12%).
H
3
3
3
2
2
2
3
36
33
2
6
[00135] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,4,6-триметилфенил)сульфонамидо)-N-(нафтален-2-илметил)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 13 с синтезировали с применением общего способа h (72%): δ (400 МГц, CDCl) 2,34 (s, 3Н, СН) 2,63 (s, 6Н, СН) 3,88 (s, 2Н, СН), 4,40 (s, 2Н, СН), 4,90 (s, 2Н, СН), 6,31 (s, 1Н, СН), 6,51 (s, 1Н, СН), 7,03 (s, 2Н, СН), 7,08 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН) 7,20 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 7,44-7,49 (m, 2Н, СН), 7,67-7,93 (m, 5Н, СН); 5С (400 МГц, CDCl) 21,0, 23,0, 47,5, 50,5, 53,0, 107,0, 107,2, 110,7, 125,1, 126,0, 127,6, 1270, 127,3, 128,6, 130,1, 131,7, 132,5, 133,7, 134,2, 135,2, 137,7, 141,1, 143,8, 145,1, 148,3, 163,1, 166,9, 173,2 LRMS (ES+) вычислено для [CHCINOS+Н] 656,17, обнаружено 655,20; ВЭЖХ (I) tR = # мин (#%), (II) tR = # мин (#%). Заполнение поля
H
3
2
2
2
C
3
33
22
5
2
6
[00136] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(-нафтален-2-илметил)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 13d синтезировали с применением общего способа h (61%): δ (400 МГц, CDCl) 3,88 (s, 2Н, СН), 4,66 (s, 2Н, СН), 4,90 (s, 2Н, СН), 6,31 (s, 1Н, СН), 6,51 (s, 1Н, СН), 7,15-7,36 (m, 4Н, СН), 7,41-7,57 (m, 3Н, СН), 7,67-7,93 (m, 5Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 47,5, 50,5, 53,1, 66,9, 70,6, 113,2, 119,6, 121,2, 126,2, 126,3, 126,9, 127,5, 127,6, 127,8, 127,9, 128,1, 128,4, 128,6, 128,9, 129,9, 132,7, 132,9, 133,1, 133,2, 134,3, 135,2, 135,4, 143,7, 158,7, 165,0, 165,8; LRMS (ES+) вычислено для [CHCIFNOS+Н] 704,08, обнаружено 703,09; ВЭЖХ (I) tR = 26,58 мин (94,41%), (II) tR = 41,17 мин (84,06%).
H
3
2
3
3
3
2
2
2
2
C
3
24
30
2
7
[00137] 2-(гидрокси)-4-(N-(тетрагидрофуран-2-ил)метил)-2-(N,2,4,6 тетраметилфенилсульфонамидо)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8а гидрогенизировали по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом h (95%): δ (400 МГц, d-CDCl) 1,79-2,04 (m, 4Н, 2СН), 2,29 (s, 3Н, CH(Ph)), 2,57 (s, 6Н, 2CH(Ph)), 2,82 (s, 3Н, CHNSO), 3,61-3,79 (m, 2H, COCH), 3,80-3,89 (m, 4Н, NHCH ТГФ, O-СН), 4,02-4,17 (m, 1Н, СН), 6,72 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН (Ph)), 6,79 (s, 1Н, СН (Ph)), 6,93 (s, 2Н, СН), 7,83 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 21,1, 22,9, 25,4, 29,3, 29,8, 34,9, 49,9, 53,3, 68,1, 117,1, 119,1, 131,7, 132,1, 132,3, 140,8, 142,9, 148,0, 163,1; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 490,18, обнаружено 491,20; ВЭЖХ (I) tR = 16,45 мин (96,95%), (II) tR = 24,99 мин (96,49%).
H
3
3
3
3
2
2
2
C
3
24
2
6
2
[00138] 2-(гидрокси)-4-(2-((N,2,4,6 тетраметилфенилсульфонамидо)-N-(тиофен-2-илметил)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8b гидрогенизировали по 0,2 ммоль в соответствии с общим способом h (82%); δ (400 МГц, d-CDCl) 2,28 (s, 3Н, CH(Ph)), 2,57 (s, 6Н, 2СН), 2,85 (s, 3Н, CHNSO), 3,79 (s, 2Н, СОСН), 4,94 (s, 2Н, CHAr), 6,48 (d, 1Н, J=8,3 Гц, СН), 6,58 (s, 1Н, СН), 6,77 (d, 1Н, J=3,1 Гц, СН), 6,85-6,87 (m, 1Н, СН), 6,93 (s, 2Н, СН), 7,21 (d, 1Н, J=5,3 Гц, СН), 7,88 (d, 1Н, J=8,4 Гц, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 22,6, 29,5, 34,6, 47,6, 49,5, 118,8, 125,9, 126,4, 127,5, 131,4, 131,8, 132,4, 138,3, 140,6, 142,6, 165,2; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 502,12, обнаружено 503,1; ВЭЖХ (I) tR = 18,77 мин (87,95%), (II) tR = 29,19 мин (87,95%).
H
3
2
2
3
3
3
2
C
3
23
26
2
6
1
[00139] 4-(М-(циклопропилметил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-бензойная кислота. Производное 8d гидрогенизировали по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом h (90%); δ (400 МГц, d-CDCl) 0,05-0,18 (m, 2Н, СН), 0,37-0,49 (m, 2Н, СН), 0,77-0,97 (m, 1Н, СН), 2,28 (S, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,83 (s, 3Н, СН), 3,53 (d, J=71,2 Гц, 2Н), 3,79 (s, 2Н, СН), 6,71 (d, J=8,4 Гц, Н СН), 6,77 (d, J=1,4 Гц, 1Н, СН), 6,94 (s, 2Н, СН), 7,94 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 3,6, 9,6, 20,6, 20,8, 22,6, 29,5, 34,7, 49,5, 53,6, 111,9, 117,2, 119,2, 131,5, 131,8, 132,3, 140,6, 142,6, 147,9, 162,9, 166,7, 172,7, 177,3; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 460,17, обнаружено 461,2; ВЭЖХ (I) tR = 18,10 мин (93,12%), (II) tR = 27,83 мин (93,25%).
H
3
3
3
3
2
2
C
3
24
28
4
6
[00140] 2-гидрокси-4-(N-((1-метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-2-((N,2,4,6 тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8с гидрогенизировали по 0,15 ммоль в соответствии с общим способом h (40%); δ (400 МГц, d-CDCl) 2,28 (s, 3Н, СН), 2,50 (s, 6Н, СН), 2,81 (s, 3Н, СН), 3,78 (s, 2Н, СН), 4,06 (s, 2Н, СН), 6,40 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 6,46 (s, 1Н, СН), 6,91 (s, 2Н, СН), 7,00 (s, 1Н, СН), 7,25 (s, 1Н, СН), 7,65 (d, J=8,2 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 22,6, 33,1, 34,6, 47,8, 49,5, 106,0, 113,2, 120,5, 127,1, 131,4, 131,9, 138,2, 140,6, 142,9, 147,3, 152,4, 164,8, 166,9, 171,8; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 500,17, обнаружено 501,20; ВЭЖХ (I) tR = 10,65 мин (98,04%), (II) tR = 15,79 мин (83,06%).
Н
3
2
2
2
3
3
3
2
2
2
C
3
27
34
2
6
[00141] 4-(N-(бицикл[2.2.1]гептан-2-илметил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8е гидрогенизировали по 0,14 ммоль в соответствии с общим способом h (35%); δ (400 МГц, d-CDCl) 0,78-1,06 (m, 2Н, СН), 1,07-1,22 (m, 2Н, СН), 1,29-1,60 (m, 3Н, СН, СН), 1,82-2,04 (m, 2Н, СН), 2,22 (s, 3Н, СН), 2,47 (s, 6Н, СН), 2,70 (s, 3Н, СН), 3,45 (s, 2Н, СН), 3,63 (s, 2Н, СН), 3,81 (s, 2Н, СН), 6,51 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН), 6,64 (s, 1Н, СН), 6,86 (s, 2Н, СН), 7,85 (d, J=8,0 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 22,5, 22,6, 29,7, 34,3, 34,4, 36,7, 38,7, 39,6, 51,3, 131,5, 131,8, 137,2, 140,4, 142,5, 148,3, 164,4, 166,2, 171,3; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 514,21, обнаружено 515,20; ВЭЖХ (I) tR = 22,48 мин (99,40%), (II) tR = 35,27 мин (96,56%).
H
3
3
3
3
2
2
C
3
26
28
2
6
[00142] 4-(N-бензил-2-((N,2,4,6 тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8д гидрогенизировали по 0,07 ммоль в соответствии с общим способом h (75%); δ (400 МГц, d-CDCl) 2,29 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,87 (s, 3Н, СН), 3,81 (s, 2Н, СН), 4,82 (s, 2Н, СН), 6,41 (d, J=8,1 Гц, 1Н, СН), 6,54 (s, 1Н, СН), 6,94 (s, 2Н, СН), 7,06-7,16 (m, 2Н, СН), 7,18-7,25 (m, 3Н, СН), 7,84 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 22,6, 34,6, 49,6, 52,9, 118,8, 127,6, 128,4, 131,6, 131,8, 136,2, 140,5, 142,5, 166,8; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 496,17, обнаружено 497,17; ВЭЖХ (I) tR = 19,17 мин (98,29%), (II) tR = 29,81 мин (97,35%).
H
3
3
3
3
2
2
C
3
26
28
2
6
[00143] 2-гидрокси-4-(N-(4-метилбензил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8f гидрогенизировали по 0,04 ммоль в соответствии с общим способом h (85%); δ (400 МГц, d-CDCl) 2,30 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,87 (s, 3Н, СН), 3,79 (s, 2Н, СН), 4,77 (s, 2Н, СН), 6,41 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН), 6,52 (s, 1Н, СН), 6,93 (s, 2Н, СН), 6,98 (d, J=8,3, 2Н, СН), 7,04 (d, J=8,3 Гц, 2Н, СН), 7,82 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 20,9, 22,6, 31,7, 34,6, 36,8, 49,5, 52,6, 116,7,118,7, 128,3, 129,0, 131,5, 131,7, 132,0, 133,2, 137,2, 140,5, 142,5, 147,1, 162,7, 163,3, 166,7, 171,8; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 510,18, обнаружено 511,20; ВЭЖХ (I) tR = 20,32 мин (95,53%), (II) = 31,81 мин (93,81%).
H
3
3
3
3
2
2
C
3
26
27
2
6
[00144] 4-(N-(4-фторбензил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8h гидрогенизировали по 0,1 ммоль в соответствии с общим способом h (89%); δ (400 МГц, d-CDCl): 2,29 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,86 (s, 3Н, СН), 3,82 (s, 2Н, СН), 4,79 (s, 2Н, СН), 6,43 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН), 6,55 (s, 1Н, СН), 6,84-7,01 (m, 4Н, СН), 7,02-7,17 (m, 2Н, СН), 7,85 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,8, 22,6, 29,5, 34,8, 49,6, 52,2, 111,7, 115,2, 115,4, 116,9, 118,9, 130,2, 130,3, 131,4, 131,8, 132,0, 132,3, 140,5, 142,6, 147,2, 160,9, 162,8, 163,4, 166,8, 171,8; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 514,16, обнаружено 515,20; ВЭЖХ (I) tR = 19,48 мин (96,92%), (II) tR = 30,84 мин (92,79%).
H
3
3
3
2
2
C
26
23
5
2
6
[00145] 2-гидрокси-4-(N-((перфторфенил)метил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8i гидрогенизировали по 0,16 ммоль в соответствии с общим способом h (90%); δ (400 МГц, d-ДМСО): 2,24 (s, 3Н, СН), 2,40 (s, 6Н, СН), 2,73 (s, 3Н, СН), 3,71 (s, 2Н, СН), 4,93 (s, 2Н, СН), 6,60 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН), 6,79 (s, 1Н, СН), 6,97 (s, 2Н, СН), 7,76 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-ДМСО): 20,8, 22,6, 34,6, 36,8, 49,5, 115,4, 131,6, 136,4, 141,3, 145,3, 162,9, 166,7, 172,7; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 586,12, обнаружено 587,10; ВЭЖХ (I) tR = 20,63 мин (99,83%), (II) tR = 32,50 мин (98,56%).
H
3
3
3
3
3
2
2
C
3
30
36
5
2
6
[00146] 4-(N-(4-(трет-бутил)бензил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8k гидрогенизировали по 0,08 ммоль в соответствии с общим способом h (40%); δ (400 МГц, d-CDCl): 1,29 (s, 9Н, СН), 2,29 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,86 (s, 3Н, СН), 3,81 (s, 2Н, СН), 4,79 (s, 2Н, СН), 6,47 (d, J=8,5 Гц, 1Н, СН), 6,57 (s, 1Н, СН), 6,94 (s, 2Н, СН), 7,03 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН), 7,27 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН), 7,84 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ(100 МГц, d-CDCl): 20,5, 20,8, 22,6, 31,1, 34,3, 34,6, 49,5, 52,7, 116,8, 118,9, 125,3, 127,9, 131,5, 131,7, 132,2, 133,1, 140,5, 142,5, 150,5, 162,7, 166,7, 173,0, 177,0; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 552,23, обнаружено 553,20; ВЭЖХ (I) tR = 23,33 мин (98,57%), (II) tR = 37,15 мин (98,89%).
H
3
3
3
3
3
2
2
C
3
2
6
[00147] 4-(N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 81 гидрогенизировали по 0,07 ммоль в соответствии с общим способом h (65%); δ (400 МГц, d-CDCl): 1,24 (s, 18Н, СН), 2,28 (s, 3Н, СН), 2,58 (s, 6Н, СН), 2,81 (S, 3Н, СН), 3,83 (s, 2Н, СН), 4,83 (s, 2Н, СН), 6,46 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 6,55 (s, 1Н, СН), 6,93 (s, 2Н, СН), 6,95 (s, 2Н, СН), 7,28 (s, 1Н, СН), 7,83 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,5, 20,8, 22,6, 31,2, 34,4, 34,5, 49,5, 53,4, 121,3, 122,9, 131,4, 131,7, 132,0, 135,0, 140,5, 142,5, 150,8, 162,7, 177,1; HRMS (ES+) Вычислено для [C34H44NOS+Н] 608,29, обнаружено 609,30; ВЭЖХ (I) tR = 26,49 мин (99,72%), (II) tR = 42,87 мин (98,62%).
H
3
3
3
3
2
2
C
3
30
30
2
6
[00148] 2-гидрокси-4-(N-(нафтален-2-илметил)-2-((N,2,4,6-тетраметилфенил)сульфонамидо)-ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8j гидрогенизировали по 0,09 ммоль в соответствии с общим способом h (40%); δ (400 МГц, d-CDCl): 2,24 (s, 3Н, СН), 2,57 (s, 6Н, СН), 2,89 (s, 3Н, СН), 3,84 (s, 2Н, СН), 4,99 (s, 2Н, СН), 6,42 (d, J=8,2 Гц, 1Н, СН), 6,58 (s, 1Н, СН), 6,91 (s, 2Н, СН), 7,27 (s, 1Н, СН), 7,38-7,50 (m, 2Н, СН), 7,54 (s, 1Н, СН), 7,68-7,88 (m, 4Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,5, 20,7, 22,6, 34,7, 49,6, 53,1, 111,8, 116,8, 118,9, 125,9, 126,1, 127,5, 127,6, 128,3, 131,4, 131,8, 132,2, 132,6, 133,0, 133,6, 140,5, 142,5, 147,4, 162,8, 167,0, 172,5, 177,0; HRMS (ES+) Вычислено для [CHNOS+Н] 546,18, обнаружено 547,20; ВЭЖХ (I) tR = 21,21 мин (97,90%), (II) tR = 33,46 мин (95,26%).
H
3
2
3
2
2
2
C
3
21
19
5
2
7
[00149] 2-гидрокси-4-(2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)-N-((тетрагидрофуран-2-ил)метил)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8m гидрогенизировали по 0,1 ммоль в соответствии с общим способом h (70%); δ (400 МГц, d-CDCl): 1,41-1,60 (m, 1Н, СН), 1,79-2,01 (m, 3Н, СН, СН), 3,07 (s, 3Н, СН), 3,67 (d, J=6,5 Гц, 2Н, СН), 3,71-3,89 (m, 2Н, СН), 3,93-4,21 (m, 2Н, СН), 6,80 (d, J=8,2 Гц, 1Н, СН), 6,89 (s, 1Н, СН), 7,95 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,5, 25,2, 28,8, 31,7, 35,7, 36,8, 52,0, 52,9, 67,7, 116,7, 118,6, 132,3, 146,9, 162,9, 163,3, 171,9, 176,1; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 538,08, обнаружено 539,10; ВЭЖХ (I) tR = 24,63 мин (97,67%), (II) tR = 26,45 мин (95,84%).
H
3
3
2
2
C
3
21
15
5
2
6
2
[00150] 2-гидрокси-4-(2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамид)-N-(тиофен-2-илметил)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8n гидрогенизировали по 0,1 ммоль в соответствии с общим способом h (95%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,03 (s, 3Н, СН), 3,97 (s, 2Н, СН), 4,83 (s, 2Н, СН), 6,52 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН), 6,65 (s, 1Н, СН), 6,68 (s, 1Н, СН), 6,78-6,85 (m, 1Н, СН), 7,17 (d, J=5,4 Гц, 1Н, СН), 7,87 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl) 20,5, 22,6, 29,3, 29,6, 31,6, 32,3, 34,2, 35,9, 47,8, 52,0, 52,2, 112,1, 117,1, 119,0, 126,3, 126,6, 127,6, 132,7, 137,8, 146,8, 147,1, 163,1, 163,2, 165,7, 172,5, 176,5; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 550,03, обнаружено 551,0; ВЭЖХ (I) tR = 26,91 мин (64,94%), (II) tR = 30,17 мин (92,72%).
H
3
3
2
2
C
21
17
5
4
6
2
[00151] 2-гидрокси-4-(N-((1-метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8о гидрогенизировали по 0,16 ммоль в соответствии с общим способом h (54%): δ (400 МГц, d-ДМСО) 2,94 (s, 3Н, СН), 3,60 (s, 3Н, СН), 3,61 (s, 2Н, СН), 4,99 (s, 2Н, СН), 6,64 (s, 1Н, СН), 6,78 (s, 1Н, СН), 7,18 (s, 1Н, СН), 7,37 (s, 1Н, СН), 7,72 (s, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-ДМСО); 33,1, 34,6, 47,8, 49,5, 106,0, 113,2, 120,5, 127,1, 131,4, 131,9, 138,2, 140,6, 142,9, 147,3, 152,4, 164,8, 166,9, 171,8; HRMS (ES+) Вычислено для [CHFNOS+Н] 548,08, обнаружено 549,10; ВЭЖХ (I) tR = 17,52 мин (74,54%), (II) tR = 15,87 мин (79,92%).
H
3
2
2
3
2
2
3
20
17
5
2
6
2
[00152] 4-(N-(циклопропилметил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8р гидрогенизировали по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом h (87%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,04-0,18 (m, 2Н, СН), 0,40-0,59 (m, 2Н, СН), 0,78-1,00 (m, 1Н, СН), 3,07 (S, 3Н, СН), 3,49 (d, J=7,2 Гц, 2Н, СН), 4,04 (s, 2Н, СН), 6,83 (s, 1Н, СН), 6,90 (s, 1Н, СН), 8,00 (d, J=8,3 Гц, 1Н, СН); 5С (100 МГц, d-CDCl): 3,5, 9,4, 20,5, 35,8, 52,0, 53,8, 111,9, 117,2, 119,1, 132,6, 147,4, 163,0, 165,7, 172,9; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 508,07, обнаружено 509,10; ВЭЖХ (I) tR = 26,33 мин (97,61%), (II) tR = 29,31 мин (96,90%).
H
3
2
2
2
2
2
3
2
2
C
3
24
23
5
2
6
[00153] 4-(N-(бицикл[2.2.1]гептан-2-илметил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8q гидрогенизировали по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом h (66%): δ (400 МГц, d-CDCl) 0,40-0,61 (m, 1Н, СН), 0,85-1,07 (m, 2Н, СН), 1,08-1,27 (m, 3Н, СН, СН), 1,28-1,45 (m, 2Н, СН), 1,72-1,90 (m, 1Н, СН), 1,99 (s, 1Н, СН), 2,07 (s, 1Н, СН), 2,94 (s, 3Н, СН), 3,48-3,70 (m, 2Н, СН), 4,00 (s, 2Н, СН), 6,83 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 6,91 (s, 1Н, СН), 7,86 (d, J=8,2 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 28,2, 29,4, 34,3, 34,4, 37,7, 38,7, 39,6, 42,6, 48,9, 113,2, 131,5, 131,8, 137,2, 140,4, 142,5, 148,3, 164,4, 166,2, 171,3; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 562,12, обнаружено 563,10; ВЭЖХ (I) tR = 30,77 мин (98,73%), (II) tR = 36,21 мин (99,12%).
H
3
3
2
2
C
3
2
6
[00154] 4-(N-(бензил-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8s гидрогенизировали по 0,3 ммоль в соответствии с общим способом h (87%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,10 (s, 3Н, СН), 4,06 (s, 2Н, СН), 4,78 (s, 2Н, СН), 6,55 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН), 6,69 (s, 1Н, СН), 7,04-7,16 (m, 2Н, СН), 7,26-7,32 (m, 3Н, СН), 7,89 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 29,6, 30,3, 35,9, 50,8, 52,2, 53,2, 111,9, 115.8, 117,1, 119,1, 128,0, 128,4, 128,6, 132,2, 132,6, 135,7, 139,1, 143,5, 146,1, 147,1, 163,1, 166,0, 172,3; HRMS (ES+) вычислено для [C23H17F5NOS+Н] 544,07, обнаружено 545,10; ВЭЖХ (I) tR = 19,74 мин (97,50%), (II) tR = 30,90 мин (96,37%).
H
3
3
3
2
2
C
3
27
25
5
2
6
[00155] 4-(N-(4-трет-бутил)бензил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамидо)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8w гидрогенизировали по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом h (92%): δ (400 МГц, d-CDCl) 1,29 (s, 9Н, СН), 3,10 (s, 3Н, СН), 4,08 (s, 2Н, СН), 4,76 (s, 2Н, СН), 6,59 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 6,72 (s, 1Н, СН), 7,01 (d, J=8,1 Гц, 2Н, СН), 7,29 (d, J=8,15 Гц, 2Н, СН), 7,90 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 31,1, 32,0, 34,3, 35,8, 37,1, 52,1, 52,9, 116,9, 118,8, 125,4, 127,9, 132,50, 150,8, 162,92, 165.9, 172,4; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 600,14, обнаружено 601,10; ВЭЖХ (I) tR = 23,68 мин (98,12%), (II) tR = 37,81 мин (98,08%).
H
3
2
2
С
3
27
19
5
2
6
[00156] 2-гидрокси-4-(N-(нафтален-2-илметил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамид)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8v гидрогенизировали по 0,4 ммоль в соответствии с общим способом h (73%): δ (400 МГц, d-CDCb) 3,10 (s, 3Н, СН), 4,09 (s, 2Н, СН), 4,95 (s, 2Н, СН), 6,54 (d, J=8,4 Гц, 1Н, СН), 6,72 (s, 1Н, СН), 7,23 (s, 1Н, СН), 7,40-7,56 (m, 3Н, СН), 7,67-7,94 (m, 4Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,6, 35,7, 52,1, 53,1, 118,9, 125,8, 126,0, 126,1, 127,5, 127,6, 128,5, 132,5, 132,7, 133,0, 133,1, 162,8, 166,1, 177,5; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 594,09, обнаружено 595,10; ВЭЖХ (I) tR = 21,64 мин (90,45%), (II) tR = 34,27 мин (88,02%).
H
3
3
2
2
C
3
23
16
6
2
6
[00157] 4-(N-(4-фторбензил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамид)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8t гидрогенизировали по 0,15 ммоль в соответствии с общим способом h (63%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,09 (s, 3Н, СН), 4,05 (s, 2Н, СН), 4,75 (s, 2Н, СН), 6,54 (d, J=8,53 Гц, 1Н, СН), 6,68 (s, 1Н, СН), 6,90-7,03 (m, 2Н, СН), 7,03-7,12 (m, 2Н, СН), 7,92 (d, J=8,50 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 20,5, 29,6, 35,9, 52,0, 52,2, 52,4, 112,1, 115,5, 115,7, 117,1, 117,6, 119,1, 120,4, 129,6, 130,3, 130,4, 131,7, 132,7, 146,9, 147,0, 161,2, 163,1, 163,6, 165,9, 172,7, 176,5; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 562,06, обнаружено 563,10; ВЭЖХ (I) tR = 19,99 мин (98,87%), (II) tR = 31,40 мин (97,59%).
H
3
3
2
2
C
3
23
12
10
2
6
[00158] 2-гидрокси-4-(2-((2,3,4,5,6-пентафтор-Н-метилфенил)сульфонамид)-N-((перфторфенил)метил)ацетамидо)бензойная кислота. Производное 8u гидрогенизировали по 0,07 ммоль в соответствии с общим способом h (89%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,06 (s, 3Н, СН), 4,01 (s, 2Н, СН), 4,94 (s, 2Н, СН), 6,62 (d, J=8,34 Гц, 1Н, СН), 6,73 (s, 1Н, СН), 7,95 (d, J=8,52 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 29,6, 30,8, 31,3, 35,8, 40,0, 52,0, 58,3, 61,4, 109,0, 112,9, 115,6, 116,8, 118,4, 125,9, 133,0, 136,1, 136,3, 136,5, 138,5, 138,6, 138,9, 142,5, 143,5, 144,0, 145,0, 146,0, 146,5, 163,1, 165,9, 171,5, 173,4; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 634,03, обнаружено 635,0; ВЭЖХ (I) tR = 20,88 мин (98,71%), (II) tR = 33,06 мин (98,39%).
H
3
3
2
2
C
3
23
12
10
2
6
4-(N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)-2-((2,3,4,5,6-пентафтор-N-метилфенил)сульфонамид)ацетамидо)-2-оксибензойная кислота. Производное 8х гидрогенизировали по 0,07 ммоль в соответствии с общим способом h (89%): δ (400 МГц, d-CDCl) 3,06 (s, 3Н, СН), 4,01 (s, 2Н, СН), 4,94 (s, 2Н, СН), 6,62 (d, J=8,34 Гц, 1Н, СН), 6,73 (s, 1Н, СН), 7,95 (d, J=8,52 Гц, 1Н, СН); δ (100 МГц, d-CDCl): 29,6, 30,8, 31,3, 35,8, 40,0, 52,0, 58,3, 61,4, 109,0, 112,9, 115,6, 116,8, 118,4, 125,9, 133,0, 136,1, 136,3, 136,5, 138,5, 138,6, 138,9, 142,5, 143,5, 144,0, 145,0, 146,0, 146,5, 163,1, 165,9, 171,5, 173,4; HRMS (ES+) вычислено для [CHFNOS+Н] 634,03, обнаружено 635,0; ВЭЖХ (I) tR = 26,48 мин (99,42%), (II) tR = 43,39 мин (98,62%).
Другие соединения по изобретению были синтезированы в соответствии со схемой 2:
t
t
2
3
3
2
2
3
5
5
2
2
3
3
6
6
2
3
2
2
2
3
2
3
2
3
Схема 2: (A) a) i) KOBu, BnBr, ДМФ, 0°С → комнатная температура, 1 ч; затем KOBu, BnBr, ДМФ, 0°С комнатная температура, 16 ч, 60%; b) SOCl, трет-бутанол, дихлорметан, 0°С → комнатная температура, 83%; с) 1) альдегид, АсОН, 3Å молекулярное сито, СНОН, 45°С, 2 ч; 2) NaCNBH, 45°С, 16 ч, 56-96%; d) альдегид, 3Å молекулярное сито, CHCl, NaOAc, Na(OAc)BH, комнатная температура, 16 ч, 82%; (е) d) CFSOCl, KCO, CHCN, 16 ч, 0°С → комнатная температура, 60-77%; f) 1) p-Cl(CH)BnBr, CsCO, ДМФ, комнатная температура, N, 2 ч, 70%; g) CHCl: ТФУ 1:1, комнатная температура, 1 ч, 90%; h) PPhCl, CHCl, 30 мин, 100°С нагрев микроволновым излучением, 20-98%; i) Н, Pd/C, 1:1 ТГФ/СНОН, 3-10 ч, комнатная температура, 35-95%. ia) 1:1 ТФУ/дихлорметан, 30 мин, комнатная температура ДМФ - N,N-диметилформамид, ТФУ - трифторуксусная кислота.
t
t
2
2
2
4
[00159] Общий способ а (дибензилация салициловой кислоты). К перемешанному раствору 4-аминосалициловой кислоты (1,0 экв) в ДМФ (0,1 М) при 0°С добавляли KOBu (1,2 экв). Через 15 мин бромистый бензил (1,2 экв) добавляли по каплям. Суспензию оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение еще 4 ч, после чего реакционный сосуд снова охлаждали до 0°С. Еще раз добавляли KOBu (1,2 экв) перед добавлением по каплям бромистого бензила (1,2 экв). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, после чего реакцию гасили HO. Раствор затем повторно экстрагировали этилацетатом и органическими фазами вместе взятыми. Органические фазы затем промывали HO и насыщенным раствором соли, затем концентрировали, сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera с градиентом 4:1 гексан/EtOAc при пониженном давлении.
2
2
3
2
2
2
2
[00160] Общий способ b (защита трет-бутилом салициловой кислоты). 4-аминобензойную кислоту суспендировали в SOCl (2,0 экв) при 25°С. Суспензию нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. SOCl удаляли при пониженном давлении, пока не останутся следы азеотропной смеси с CHCl (3-кратно). Полученный хлорангидрид растворяли в CHCl и добавляли раствор трет-бутанола в CHCl при перемешивании раствора, который охлаждали до 0°С. Твердый белый осадок - гидрохлоридную соль гасили 1,0М КОН и экстрагировали этилацетатом (4-кратно).
3
3
2
2
[00161] Общий способ с (восстановительное аминирование с использованием цианоборгидрида натрия). К раствору защищенной 4-аминосалициловой кислоты 1/1а (1,0 экв) и уксусной кислоты (1,5 экв), перемешанном в безводном СНОН (0,1 М) с 3Å молекулярным ситом, добавляли альдегид (1,0 экв). Раствор нагревали до 45°С в течение 3 ч и затем давали остыть до комнатной температуры. Далее, NaCNBH (1,3 экв) добавляли порциями и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли CHCl, фильтровали и концентрировали в вакууме. Концентрат очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera, используя градиент Hexanes/EtOAc с образованием вторичных анилинов 2.
3
2
2
[00162] Общий способ d (восстановительное аминирование с использованием триацетоксиборгидрида натрия). К раствору защищенной 4-аминосалициловой кислоты 1/1 а (1,2 экв) и уксусной кислоты (1,2 экв), перемешанном в безводном дихлорэтане (0,1 М) с ЗА молекулярным ситом добавляли альдегид (1,0 экв). Затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, после чего добавляли Na(OAc)BH (1,5 экв) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли CHCl, фильтровали и концентрировали в вакууме. Концентрат очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera, используя градиент Hexanes/EtOAc с образованием производных вторичного анилина 2.
2
3
2
2
3
2
4
[00163] Общий способ е (сульфонилирование глицина и саркозина трет-бутилового эфира). Раствор аминокислоты трет-бутилового эфира (1 экв) и KCO (1,1 экв) растворяли в безводном ацетонитриле и охлаждали до 0°С, после чего добавляли сульфонилхлорид (1 экв). Полученный раствор оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в CHCl. Органические фазы объединяли, а затем последовательно промывали 0,1 М HCl, насыщенным раствором NaHCO и солевым раствором. Органические фазы затем сушили над NaSO и концентрировали в вакууме, с образованием производных 3 без дополнительной очистки.
2
3
2
2
2
4
[00164] Общий способ f (алкилирование сульфонамида). Раствор 3 (1 экв) и CSCO (1,3 экв) растворяли в безводном ДМФ с последующим добавлением р-ClBnBr (1 экв). Полученный раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили HO, а затем несколько раз экстрагировали этилацетатом. Органические фазы объединяли и промывали HO, насыщенным раствором соли, сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали с использованием автоматизированного колоночного хроматографа Biotage Isolera с градиентом 2:1 Hexanes/EtOAc при пониженном давлении с получением соединения 4.
2
2
3
3
[00165] Общий способ g (удаления защитной группы трет-бутилового эфира). Раствор аминокислоты трет-бутилового эфира (1 экв) растворяли в ТФУ и немедленно разбавляли CHCl в смеси 1:1 (0,1 М) раствора. Полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч, а затем выпаривали совместно с СНОН (3 раза) и CHCl (3 раза). Полученный остаток переносили без какой-либо очистки с получением соединений 5.
3
2
3
3
2
3
2
4
[00166] Общий способ h (PPhCl связывание пептида). К перемешанному раствору карбоновой кислоты (5) (1,1 экв) в CHCl (0,1 М) добавляли PPhCl (2,5 экв). Реакционную смесь перемешивали 5 мин при комнатной температуре до полного растворения, с последующим добавлением по каплям вторичного анилина 2 (1,0 экв). Реакционную смесь затем нагревали в микроволновой печи при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, с последующим последовательным промыванием насыщенным раствором NaHCO и солевым раствором. Органические фазы затем сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Концентрат абсорбировали непосредственно на силикагеле для очистки колоночной хроматографией с использованием градиента гексанов и ЕЮАс с образованием производных 6.
3
2
2
2
2
2
3
[00167] Общий способ i (гидрогенолиз бензилового эфира и дибензилового эфира). Защищенную бензилом салициловую кислоту, 6 (1 экв) растворяли в перемешанном растворе СНОН/ТГФ (1:2, 0,1 М). Раствор тщательно дегазировали перед осторожным добавлением 10%-ного Pd/C (10 мг/ммоль). Газ Н пропускали через растворитель в течение 5 мин, после чего раствор помещали в атмосферу газа Н и непрерывно перемешивали в течение 2-5 ч, контролировали завершение реакции с помощью ТСХ. Газ Н откачивали и реакционную смесь отфильтровали через целит, чтобы удалить катализатор Pd и концентрировали в вакууме. Полученный остаток адсорбировали на силикагеле и разделяли на колонки с использованием Biotage Isolera в градиенте CHCl, СНОН и 1% уксусной кислоты с получением окончательных молекулярных серий 7.
2
2
3
[00168] Общий способ i (кислотное снятие защиты функциональных групп трет-бутила). Защищенную трет-бутилом салициловую кислоту, растворяли в пропорции 1:1 ТФУ/дихлорметан и перемешивали в течение 30 минут. Неочищенный раствор концентрировали в вакууме. Полученный остаток адсорбировали на силикагеле и разделяли на колонки с использованием Biotage Isolera в градиенте CHCl, СНОН и 1% уксусной кислоты с получением окончательных молекулярных серий 7.
[00169] Промежуточная характеристика данных
H
3
2
2
C
3
21
19
3
+
[00170] Бензил 4-амино-2-(бензилокси)бензоат (Схема 2-1). Соединение 1 синтезировали в соответствии с общим способом а, получали конечный продукт в виде оранжевого твердого вещества (47%): δ (400 МГц, d-CDCl) 5,07 (s, 2Н, СН), 5,21 (s, 2Н, СН), 5,99 (br s, 2Н, NH2), 6,18 (dd, J=8,6 и 1,8 Гц, 1Н, СН)), 6,32 (d, J=1,7 Гц, 1Н, СН), 7,28-7,38 (8Н, гл, СН), 7,47 (d, J=7,2 Гц, 2Н, СН), 7,60 (d, J=8,6 Гц, 1Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 65,8, 70,2, 99,1, 106,7, 109,0, 126,8, 127,5, 127,7, 127,9, 128,3, 128,4, 134,3, 136,6, 136,7, 152,2, 160,7, 165,7; LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 333,2, обнаружено 333,2.
[00171]
1
13
+
6
6
11
16
2
[00172] Трет-бутил 4-аминобензоат (1а). Производное 1а синтезировали в соответствии с общим способом b на (83%): Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,06-1,19 (m, 7Н), 1,39 (s, 1Н), 1,46 (s, 16Н), 1,52 (d, J=3,6 Гц, 3Н), 1,88 (s, 1Н), 1,96 (s, 6Н), 4,00 (q, J=7,1 Гц, 4Н), 5,82 (d, J=15,3 Гц, 4Н), 6,47-6,55 (m, 4Н), 7,50-7,59 (m, 4Н), 7,79-7,98 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, ДМСО-d) δ 28,16, 28,30, 79,14, 112,80, 117,95, 119,36, 119,66, 129,89, 131,18, 153,37, 165,58. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 194,11, обнаружено 194,15.
1
13
+
18
22
2
[00173] Трет-бутил 4-(бензиламино)бензоат (2а). Производное 2а синтезировали в соответствии с общим способом с на (67%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,62 (s, 9Н), 4,37 (d, J=5,3 Гц, 2Н), 4,76 (t, J=5,7 Гц, 1Н), 6,54-6,63 (m, 2Н), 7,26-7,41 (m, 5Н), 7,84-7,94 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 28,27, 47,41, 79,74, 111,50, 120,25, 127,19, 127,26, 128,61, 131,25, 138,56, 151,50, 166,14. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 284,15, обнаружено 284,16.
1
13
+
22
22
2
[00174] Бензил 4-((4-метилбензил)амино)бензоат (2b). Производное 2b синтезировали в соответствии с общим способом с на (80%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,50-1,57 (m, 1Н), 2,36 (s, 3Н), 4,33 (d, J=4,7 Гц, 2Н), 4,57 (d, J=5,4 Гц, 1Н), 5,30 (d, J=14,9 Гц, 6Н), 6,55-6,63 (m, 2Н), 7,17 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,24 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,29-7,43 (m, 3Н), 7,45 (dt, J=6,1, 1,6 Гц, 2Н), 7,88-7,97 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,97, 47,24, 53,36, 65,83, 111,51, 118,22, 127,26, 127,84, 128,37, 129,31, 131,58, 135,17, 136,58, 137,06, 151,83, 166,50. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 332,15, обнаружено 332,17.
1
13
+
24
26
2
[00175] Бензил 4-((4-изопропилбензил)амино)бензоат (2с). Производное 2с синтезировали в соответствии с общим способом с на (76%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,26 (d, J=7,0 Гц, 6Н), 2,91 (гепт, J=6,9 Гц, 1Н), 4,34 (s, 2Н), 4,53 (s, 1Н), 5,32 (s, 2Н), 6,59 (dd, J=8,5, 1,2 Гц, 2Н), 7,22 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,24-7,40 (m, 4Н), 7,44 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,88-7,95 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 23,87, 33,68, 47,31, 65,82, 111,48, 118,30, 126,69, 127,39, 127,81, 127,84, 128,35, 131,59, 135,47, 136,56, 148,18, 151,76. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 360,18, обнаружено 360,18.
1
13
+
25
28
2
[00176] Бензил 4-((4-(трет-бутил)бензил)амино)бензоат (2d). Производное 2d синтезировали в соответствии с общим способом с: Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,34 (s, 9Н), 4,35 (s, 2Н), 5,33 (s, 2Н), 6,56-6,63 (m, 2Н), 7,23-7,48 (m, 9Н), 7,89-7,96 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 31,23, 34,41, 47,21, 65,82, 111,49, 118,29, 125,56, 127,13, 127,82, 127,85, 128,36, 131,60, 135,13, 151,79, 166,46. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 374,20, обнаружено 374,22.
1
+
4
25
28
2
[00177] Трет-бутил 4-((4-(трет-бутил)бензил)амино)бензоат (2d). Производное 2d синтезировали в соответствии с общим способом с на (71%): Н ЯМР (400 МГц, метанол-d) δ 1,29 (s, 5Н), 1,54 (s, 5Н), 4,32 (s, 1Н), 6,56 (d, J=8,7 Гц, 1Н), 7,26 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 7,35 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,62-7,70 (m, 1Н). LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 331,22, обнаружено 331,24.
22
19
3
2
+
[00178] Бензил 4-((4-(трифторметил)бензил)амино)бензоат (2е). Производное 2е синтезировали в соответствии с общим способом с на (71%): LRMS (ESI+) вычислено для CHFNO [М+Н] 386,13, обнаружено 386,15.
1
13
+
22
19
2
[00179] Бензил 4-((4-цианобензил)амино)бензоат (2f). Производное 2f синтезировали в соответствии с общим способом d на (60%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,24 (t, J=7,2 Гц, 1Н), 2,02 (s, 1Н), 4,10 (q, J=7,1 Гц, 1Н), 4,41 (d, J=4,4 Гц, 2Н), 4,72 (s, 1Н), 5,12 (t, J=6,0 Гц, 1Н), 5,27 (s, 2Н), 6,52 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,23-7,46 (m, 8Н), 7,54 (dd, J=8,1, 5,6 Гц, 3Н), 7,85 (d, J=8,4 Гц, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) 6 14,07, 46,77, 63,75, 65,90, 110,75, 111,65, 118,61 (d, J=19,5 Гц), 126,87, 127,50, 127,85 (d, J=15,2 Гц), 128,41, 131,58, 132,02, 132,33, 136,38, 144,38, 151,46, 166,51. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 343,13, обнаружено 343,14.
1
13
+
29
36
2
[00180] Бензил 4-((3,5-ди-трет-бутилбензил)амино)бензоат (2g). Производное 2g синтезировали в соответствии с общим способом d на (60%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,26 (d, J=7,0 Гц, 6Н), 2,91 (гепт, J=6,9 Гц, 1Н), 4,34 (s, 2Н), 5,32 (s, 2Н), 6,59 (dd, J=8,5, 1,2 Гц, 2Н), 7,22 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,24-7,40 (m, 4Н), 7,44 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,88-7,95 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 23,87, 33,68, 47,31, 65,82, 111,48, 118,30, 126,69, 127,39, 127,81, 127,84, 128,35, 131,59, 135,47, 136,56, 148,18, 151,76. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 430,26, обнаружено 430,28.
1
13
+
26
38
2
[00181] Трет-бутил 4-((3,5-ди-трет-бутилбензил)амино)бензоат (2g). Производное 2g синтезировали в соответствии с общим способом d на (85%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,47 (s, 18Н), 1,68 (s, 9Н), 4,43 (d, J=5,1 Гц, 2Н), 4,67 (t, J=5,3 Гц, 1Н), 6,66-6,73 (m, 2Н), 7,32 (d, J=1,8 Гц, 2Н), 7,50 (t, J=1,8 Гц, 1Н), 7,93-8,00 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) 6 28,34, 31,49, 34,82, 48,43, 79,64, 111,45, 120,27, 121,47, 121,90, 131,32, 137,58, 151,18, 151,74, 166,15. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 396,28, обнаружено 396,30.
1
13
+
23
18
6
2
[00182] Бензил 4-((3,5-бис(трифторметил)бензил)амино)бензоат (2h). Производное 2h синтезировали в соответствии с общим способом с на (41%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 4,53 (d, J=5,8 Гц, 2Н), 4,71 (t, J=5,9 Гц, 1Н), 5,31 (s, 2Н), 6,52-6,61 (m, 2Н), 7,27-7,39 (m, 3Н), 7,39-7,46 (m, 2Н), 7,80 (s, 3Н), 7,87-7,96 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 46,80, 65,99, 111,75, 119,52, 121,39, 127,01, 127,86, 127,89, 128,37, 131,66, 132,13, 136,35, 141,29, 150,87, 166,27. LRMS (ESI+) вычислено для CHFNO [М+Н] 454,12, обнаружено 454,15.
1
13
+
22
19
2
2
[00183] Бензил 4-((3-цианобензил)амино)бензоат (2i). Производное 2i синтезировали в соответствии с общим способом d на (83%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,24 (q, J=7,6, 7,1 Гц, 1Н), 3,49 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 4,38 (d, J=5,7 Гц, 3Н), 4,67 (d, J=2,9 Гц, 3Н), 5,14 (d, J=4,9 Гц, 2Н), 5,26 (s, 3Н), 6,49-6,57 (m, 3Н), 7,23-7,39 (m, 5Н), 7,34-7,43 (m, 5Н), 7,44-7,63 (m, 11Н), 7,80-7,88 (m, 3Н). С ЯМР(101 МГц, хлороформ-d) δ 46,40, 63,43, 65,96, 111,68, 111,95, 112,33, 118,40, 127,78, 127,94, 128,42, 129,06, 129,42, 129,96, 130,36, 130,76, 130,89, 130,99, 131,49, 131,60, 136,33, 140,30, 142,65, 151,50, 166,67. LRMS (ESI+) вычислено для CHNO [М+Н] 343,13, обнаружено 343,16.
H
3
3
2
C
3
12
12
5
4
+
[00184] Трет-бутил ((перфторфенил)сульфонил)глицинат (3). Производное 3 синтезировали с применением общего способа е (71%): δ (400 МГц, CDCl) 1,40 (s, 9Н, СОО(СН)з), 3,93 (s, 2Н, СН), 5,54 (s, 1Н, NH); δ (400 МГц, CDCl) 27,5, 45,1, 82,8, 115,6, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ESI+) вычислено для CHFNOS [М+Н] 361,0, обнаружено 362,1.
H
3
3
3
2
2
С
3
19
17
5
4
+
[00185] Трет-бутил N-(4-хлорбензил)-N-((перфторфенил)сульфонил)глицинат (4). Производное 4 синтезировали с применением общего способа f (71%): δ (400 МГц, CDCl) 1,37 (s, 9Н, (СН)), 3,93 (s, 2Н, СН), 4,57 (s, 2Н, СН), 7,24 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН), 7,33 (d, J=8,5 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 27,5, 52,5, 53,0, 81,8, 112,6, 126,5, 130,1, 132,4, 134,3, 136,5, 144,8, 145,9, 167,0; LRMS (ESI+) вычислено для CHFClNOS [М+Н] 485,0, обнаружено 486,1.
H
3
2
2
C
3
15
9
5
4
+
[00186] N-(4-хлорбензил)-N-((перфторфенил)сульфонил)глицинат (5). Производное 5 синтезировали с применением общего способа g (92%): δ (400 МГц, CDCl) 4,13 (s, 2Н, СН), 4,58 (s, 2Н, СН), 7,25 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН), 7,35 (d, J=8,2 Гц, 2Н, СН); δ (400 МГц, CDCl) 52,8, 54,2, 112,6, 126,5, 130,1, 132,4, 134,3, 136,5, 144,8, 145,9, 172,0; LRMS (ESI+) вычислено для CHFClNOS [М+Н] 428,9, обнаружено 429,9.
1
13
+
33
29
5
2
5
[00187] Трет-бутил 4-(N-бензил-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензоат (6а). Производное 6а синтезировали с применением общего способа h (61%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,25 (S, 3Н), 1,56 (s, 27Н), 2,04 (s, 1Н), 3,72 (s, 3Н), 4,65 (s, 4Н), 4,72 (s, 6Н), 6,79 (d, J=8,0 Гц, 6Н), 7,02 (dd, J=6,5, 2,9 Гц, 6Н), 7,18 (d, J=8,4 Гц, 6Н), 7,23-7,31 (m, 16Н), 7,88 (d, J=8,1 Гц, 6Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 27,93, 47,57, 50,51, 53,13, 81,66, 127,67, 127,85, 128,45, 128,57, 128,93, 129,89, 131,07, 132,72, 135,74, 143,14, 164,22, 165,62. LRMS (ESI+) вычислено для CHFClNOS [М+Н] 695,14, обнаружено 695,16.
1
13
+
37
29
2
5
[00188] Бензил 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-метилбензил)ацетамидо)бензоат (6b). Производное 6b синтезировали с применением общего способа h (68%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,27 (t, J=7,1 Гц, 2Н), 2,05 (s, 1Н), 2,33 (s, 5Н), 3,73 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 4,13 (q, J=7,1 Гц, 1Н), 4,68 (d, J=12,0 Гц, 5Н), 5,34 (s, 3Н), 6,83 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 6,91 (d, J=7,8 Гц, 3Н), 7,08 (d, J=7,8 Гц, 3Н), 7,16-7,23 (m, 3Н), 7,23-7,47 (m, 11Н), 7,98 (d, J=8,2 Гц, 3Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,98, 47,62, 50,54, 52,87, 66,97, 127,97, 128,16, 128,31, 128,51, 128,55, 128,94, 129,14, 129,91, 130,46, 131,34, 132,66, 132,76, 134,25, 135,46, 137,66, 143,77, 164,96, 165,49. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIF5NOS [М+Н] 743,13, обнаружено 743,15.
1
13
+
39
33
5
2
5
[00189] Бензил-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-изопропилбензил)ацетамидо)бензоат (6с). Производное 6с синтезировали с применением общего способа h (55%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 0,88 (dt, J=11,6, 7,3 Гц, 1Н), 1,25 (d, J=6,9 Гц, 12Н), 2,90 (р, J=6,9 Гц, 2Н), 3,73 (s, 2Н), 4,68 (d, J=13,2 Гц, 6Н), 5,35 (s, 4Н), 6,82 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 6,95 (d, J=7,9 Гц, 3Н), 7,11-7,21 (m, 7Н), 7,26 (d, J=3,1 Гц, 4Н), 7,29-7,47 (m, 9Н), 7,98 (d, J=8,1 Гц, 3Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 23,78, 33,65, 47,61, 50,50, 52,93, 66,99, 126,51, 127,95, 128,17, 128,32, 128,52, 128,56, 128,94, 129,93, 130,46, 131,34, 132,69, 132,97, 135,45, 143,87, 148,66, 164,99, 165,47. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 771,16, обнаружено 771,17.
1
13
+
40
35
5
2
5
[00190] Бензил-4-(N-(4-(трет-бутил)бензил)-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензоат (6d). Производное 6d синтезировали с применением общего способа h (71%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,31 (d, J=1,3 Гц, 10Н), 3,72 (s, 1Н), 4,67 (d, J=13,0 Гц, 4Н), 5,34 (s, 2Н), 6,82 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6,95 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,18 (d, J=8,0 Гц, 3Н), 7,24-7,37 (m, 7Н), 7,37-7,42 (m, 4Н), 7,44 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 7,98 (d, J=8,1 Гц, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 31,14, 34,41, 47,59, 50,48, 52,85, 67,00, 125,35, 127,93, 128,17, 128,24, 128,33, 128,52, 128,94, 129,93, 131,35, 132,57, 132,66, 134,27, 135,42, 143,90, 165,00, 165,45. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 785,18 обнаружено 785,21.
1
13
+
34
28
8
2
5
[00191] Трет-бутил-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил) сульфонамидо)-N-(4-(трифторметил)бензил)ацетамидо)бензоат (6е). Производное 6е синтезировали с применением общего способа h (77%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,57 (s, 5Н), 3,75 (s, 1Н), 4,63 (s, 1Н), 4,77 (s, 1Н), 6,83 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 7,18 (dd, J=8,2, 4,0 Гц, 2Н), 7,27 (d, J=9,0 Гц, 2Н), 7,55 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,92 (d, J=8,2 Гц, 1Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) 6 27,92, 47,60, 50,51, 52,76, 77,06, 81,81, 125,44, 125,48, 127,50, 128,78, 128,97, 129,84, 131,31, 132,59, 132,68, 134,36, 139,71, 142,91, 166,03. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 763,12 обнаружено 763,15.
1
13
+
37
26
5
3
5
[00192] Бензил-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-цианбензил)ацетамидо)бензоат (6f). Производное 6f синтезировали с применением общего способа h (60%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 6 1,25 (t, J=7,1 Гц, 1Н), 2,04 (s, 1Н), 3,77 (s, 1Н), 4,62 (s, 2Н), 4,78 (s, 2Н), 5,34 (s, 2Н), 6,86 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 7,17 (dd, J=8,4, 2,6 Гц, 4Н), 7,24-7,30 (m, 2Н), 7,30-7,45 (m, 5Н), 7,55-7,62 (m, 2Н), 7,97-8,05 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 47,67, 50,55, 52,85, 67,10, 127,65, 128,19, 128,37, 128,53, 128,99, 129,09, 129,82, 130,92, 131,67, 132,33, 132,51, 134,40, 135,32, 140,93, 143,34, 164,71, 166,16. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 754,11 обнаружено 754,15.
1
13
+
44
43
5
2
5
[00193] Бензил-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)бензоат (6g). Производное 6g синтезировали с применением общего способа h (84%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 0,82-0,93 (m, 1Н), 1,24-1,37 (m, 25Н), 3,71 (s, 2Н), 4,62 (s, 2Н), 4,74 (s, 3Н), 5,35 (s, 3Н), 6,75 (d, J=8,0 Гц, 3Н), 6,85 (s, 3Н), 7,15 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 7,24 (d, J=8,1 Гц, 4Н), 7,29-7,46 (m, 10Н), 7,94 (d, J=8,0 Гц, 3Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 31,18, 34,56, 47,70, 50,27, 53,34, 66,94, 121,51, 123,13, 128,05, 128,09, 128,28, 128,51, 128,92, 129,97, 131,11, 132,59, 134,31, 134,47, 135,47, 150,98, 165,27. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 841,24 обнаружено 841,27.
1
1
13
+
41
45
5
2
5
[00194] Трет-бутил 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)бензоат (6g). Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,24 (s, 18Н), 1,56 (s, 9Н), 3,52-3,87 (m, 2Н), 4,61 (s, 2Н), 4,74 (d, J=12,3 Гц, 2Н), 6,71 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6,81-6,87 (m, 2Н), 7,14 (d, J=8,5 Гц, 2Н), 7,20-7,34 (m, 3Н), 7,84 (d, J=8,0 Гц, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 27,94, 31,16, 34,55, 47,68, 50,26, 53,34, 81,60, 121,45, 123,10, 127,83, 128,91, 129,97, 130,81, 132,22, 132,62, 134,28, 134,55, 150,92, 164,26, 165,33. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 807,26 обнаружено 807,29.
1
13
+
38
25
11
2
5
[00195] Бензил-4-(N-(3,5-бис(трифторметил)бензил)-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензоат (6h). Производное 6h синтезировали с применением общего способа h (89%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 0,81-0,94 (m, 1Н), 1,21-1,32 (m, 3Н), 2,04 (s, 1Н), 3,46 (s, 1Н), 3,79 (s, 3Н), 4,13 (dt, J=14,3, 7,6 Гц, 1Н), 4,55 (d, J=17,3 Гц, 2Н), 4,62 (s, 4Н), 4,87 (s, 5Н), 5,32 (d, J=18,0 Гц, 6Н), 6,86 (d, J=8,1 Гц, 5Н), 7,17 (d, J=8,3 Гц, 6Н), 7,23-7,33 (m, 7Н), 7,33-7,46 (m, 15Н), 7,57 (s, 5Н), 7,81 (d, J=9,5 Гц, 4Н), 7,90 (d, J=8,6 Гц, 1Н), 8,02 (d, J=8,2 Гц, 5Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 46,75, 47,54, 50,35, 52,41, 65,94, 67,11, 111,72, 119,44, 121,50, 121,87, 124,21, 127,04, 127,51, 127,84, 128,14, 128,35, 128,39, 128,42, 128,52, 129,03, 129,82, 131,07, 131,45, 131,62, 131,79, 132,12, 132,40, 134,48, 135,32, 138,44, 143,28, 164,65, 166,42. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 865,09 обнаружено 865,12.
1
13
+
37
26
5
3
5
[00196] Бензил-4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3-цианобензил)ацетамидо)бензоат (6i). Производное 6i синтезировали с применением общего способа h (63%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,20-1,29 (m, 2Н), 2,03 (s, 2Н), 3,77 (s, 2Н), 4,11 (q, J=7.1 Гц, 1Н), 4,62 (s, 2Н), 4,76 (s, 3Н), 5,34 (s, 3Н), 6,85 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 7,18 (d, J=8,2 Гц, 3Н), 7,28 (d, J=8,3 Гц, 3Н), 7,30-7,46 (m, 12Н), 7,58 (dq, J=7,8, 1,2 Гц, 2Н), 8,00 (d, J=8,2 Гц, 3Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 47,66, 50,48, 52,47, 67,08, 112,71, 127,66, 128,16, 128,34, 128,52, 129,00, 129,46, 129,83, 130,90, 131,62, 131,67, 131,83, 132,51, 132,81, 134,37, 135,35, 136,39, 137,35, 143,34, 164,71, 166,15. LRMS (ESI+) вычислено для CHCIFNOS [М+Н] 754,11 обнаружено 754,14.
1
13
[00197] 4-(N-бензил-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензойная кислота (7а): Производное 7а синтезировали с применением общего способа i (45%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 3,75 (s, 2Н), 4,65 (s, 2Н), 4,74 (s, 2Н), 6,68-6,90 (m, 2Н), 6,90-7,14 (m, 2Н), 7,19 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,26-7,41 (m, 5Н), 7,98 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 11,25 (s, 1Н), С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,66, 47,64, 50,50, 53,22, 127,86, 127,96, 128,04, 128,47, 128,52, 128,64, 128,80, 128,96, 129,93, 131,83, 131,99, 132,61, 134,33, 135,52, 143,38, 143,46, 144,33, 165,69, 170,43.
1
13
-
30
21
5
2
6
[00198] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-метилбензил)ацетамидо)бензойная кислота (7b). Производное 7b синтезировали с применением общего способа i (53%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 2,11 (s, 6Н), 2,33 (s, 3Н), 3,74 (s, 1Н), 4,70 (s, 4Н), 6,77 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,80-6,95 (m, 3Н), 7,08 (d, J=7,7 Гц, 2Н), 7,16-7,35 (m, 5Н), 7,96 (dd, J=22,4, 8,1 Гц, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,64, 20,97, 47,62, 50,51, 51,04, 52,87, 128,03, 128,34, 128,51, 128,67, 128,78, 128,95, 129,14, 129,92, 131,66, 131,79, 132,57, 133,98, 137,64, 144,46, 165,70, 170,35, 177,40. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 651,0785, обнаружено 651,0791.
1
13
-
32
25
5
2
5
[00199] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-изопропилбензил)ацетамидо)бензойная кислота (7 с). Производное 7 с синтезировали с применением общего способа i (69%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,24 (dd, J=11,6, 7,0 Гц, 7Н), 2,06 (d, J=18,9 Гц, 2Н), 2,80-2,94 (m, 1Н), 3,47 (s, 6Н), 3,72 (s, 1Н), 4,11 (q, J=7,1 Гц, 1Н), 4,63 (s, 2Н), 4,68 (s, 2Н), 6,81 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,94 (dd, J=7,9, 4,0 Гц, 2Н), 7,15 (dd, J=19,3, 8,0 Гц, 3Н), 7,23-7,33 (m, 2Н), 7,88-8,00 (m, 2Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 14,00, 20,59, 20,87, 23,74, 33,63, 47,62, 50,48, 50,50, 52,97, 53,26, 60,33, 77,08, 116,11, 116,26, 126,49, 127,93, 128,53, 128,66, 128,75, 128,93, 129,94, 130,22, 131,55, 131,67, 132,63, 132,88, 134,29, 136,40, 138,94, 142,39, 143,43, 144,13, 144,99, 146,04, 148,68, 165,54, 169,00, 171,22, 176,02. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 679, 1098, обнаружено 679, 1105.
1
13
-
33
27
5
2
5
[00200] 4-(N-(4-(трет-бутил)бензил)-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензойная кислота (7d). Производное 7d синтезировали с применением общего способа i (63%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,30 (s, 9Н), 3,65-3,82 (s, 2Н), 4,65 (s, 2Н), 4,69 (s, 2Н), 6,84 (d, J=7,1 Гц, 2Н), 6,95 (d, J=7,8 Гц, 2Н), 7,17 (s, 2Н), 7,27 (dd, J=13,5, 7,9 Гц, 5Н), 7,97 (s, 1Н), 10,22 (s, 1Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 31,12, 34,39, 47,63, 50,48, 52,95, 116,12, 125,35, 127,95, 128,22, 128,93, 129,96, 131,79, 132,49, 132,65, 134,27, 143,50, 144,24, 165,61. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 693, 1255, обнаружено 693,1270.
1
13
-
4
30
18
8
2
5
4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-(трифторметил)бензил)ацетамидо)бензойная кислота (7е). Производное 7е синтезировали с применением общего способа i (95%): Н ЯМР (400 МГц, метанол-d) δ 3,87 (s, 2Н), 4,61 (s, 2Н), 4,86 (s, 2Н) 7,02 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7,21-7,35 (m, 7Н), 7,58 (d, J=7,9 Гц, 2Н), 7,95 (dd, J=8,4, 1,5 Гц, 2Н). С ЯМР (101 МГц, MeOD) δ 47,91, 50,61, 52,16, 124,91, 124,95, 127,68, 128,45, 128,68, 129,83, 130,94, 131,03, 131,09, 131,18, 131,50, 133,29, 133,78, 140,61, 166,49, 166,83. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 705,0503, обнаружено 705,0513.
1
13
-
30
18
5
3
5
[00201] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(4-цианобензил)ацетамидо)бензойная кислота (7f). Производное 7f синтезировали с применением общего способа i (54%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 0,86 (t, J=10,5 Гц, 4Н), 1,25 (s, 10Н), 1,42 (s, 2Н), 2,10 (s, 7Н), 3,78 (s, 3Н), 4,59-4,67 (m, 4Н), 4,78 (s, 4Н), 6,80 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6,89 (d, J=7,9 Гц, 3Н), 7,18 (dd, J=8,4, 2,4 Гц, 7Н), 7,29 (dd, J=18,1, 10,1 Гц, 12Н), 7,59 (d, J=7,9 Гц, 6Н), 7,77 (s, 1Н), 7,99 (dd, J=22,5, 7,9 Гц, 6Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,72, 22,53, 29,54, 47,66, 50,54, 51,04, 52,90, 77,07, 112,00, 116,09, 118,14, 127,68, 128,48, 128,61, 128,83, 129,00, 129,05, 129,85, 131,97, 132,10, 132,33, 132,36, 132,45, 133,78, 134,46, 136,37, 138,95, 140,85, 140,97, 143,44, 143,83, 145,95, 166,22, 166,32, 169,86, 177,13. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 662,0581, обнаружено 662.0590.
1
13
-
37
35
5
2
5
[00202] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3,5-ди-трет-бутилбензил)ацетамидо)бензойная кислота (7g). Производное 7g синтезировали с применением общего способа i (78%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 1,24 (d, J=1,1 Гц, 10Н), 4,62 (s, 1Н), 4,75 (s, 1Н), 6,77 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 6,85 (s, 1Н), 7,15 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 7,18-7,28 (m, 2Н), 7,28-7,34 (m, 1Н), 7,96 (d, J=8,0 Гц, 1Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 31,32, 34,72, 47,87, 50,42, 53,54, 77,21, 121,73, 123,33, 128,41, 129,09, 130,15, 131,74, 132,69, 134,51, 146,24, 151,19, 165,39, 169,84. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 749,1881, обнаружено 749,1902.
1
13
-
31
17
11
2
5
[00203] 4-(N-(3,5-бис(трифторметил)бензил)-2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)ацетамидо)бензойная кислота (7h). Производное 7h синтезировали с применением общего способа i (86%): Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 2,12 (s, 6Н), 3,81 (s, 4Н), 4,64 (d, J=10,9 Гц, 5Н), 4,88 (d, J=2,9 Гц, 6Н), 6,78 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 6,89 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 7,14-7,25 (m, 6Н), 7,25-7,35 (m, 8Н), 7,56 (d, J=1,6 Гц, 6Н), 7,82 (d, J=6,8 Гц, 4Н), 8,01 (dd, J=26,3, 8,2 Гц, 6Н). С ЯМР (101 МГц, хлороформ-d) δ 20,61, 47,54, 50,36, 50,88, 52,40, 52,46, 111,76, 121,48, 121,90, 124,19, 127,66, 128,43, 128,53, 128,61, 128,88, 129,04, 129,85, 130,07, 131,83, 132,12, 132,26, 132,33, 133,66, 138,28, 138,35, 143,90, 144,00, 166,47, 166,56, 170,12, 177,61. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 773,0377, обнаружено 773,0387.
1
13
-
6
6
30
18
5
3
5
[00204] 4-(2-((N-(4-хлорбензил)-2,3,4,5,6-пентафторфенил)сульфонамидо)-N-(3-цианобензил)ацетамидо)бензойная кислота (7i). Производное 7i синтезировали с применением общего способа i (67%): Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 3,96 (s, 2Н), 4,55 (s, 2Н), 4,84 (s, 2Н), 7,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 7,35 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 7,39-7,51 (m, 2Н), 7,58 (s, 1Н), 7,69 (dt, J=7,4, 1,6 Гц, 1Н), 7,88 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 13,10 (s, 1Н). С ЯМР(101 МГц, ДМСО-d) δ 28,27, 49,34, 51,31,51,79, 111,72, 118,86, 128,32, 128,78, 128,29, 129,88, 130,35, 131,01, 131,08, 131,11, 131,09, 131,57, 132,90, 133,09, 134,44, 138,51, 166,58, 166,69. HRMS (ESI-) вычислено для [CHCIFNOS] 662,0581, обнаружено 662,0581.
[00205] Пример 2: Исследование киназы DiscoverX
[00206] Профилирование KINOMEscan киназы проводили, как уже описано ранее (Fabian et al., 2005; Karaman et al., 2008). Для большинства способов, киназа-меченые штаммы фага Т7 выращивали параллельно в блоках на 24 лунки в клетке-хозяине Е. coli, полученной из штамма BL21. E.coli выращивали до фазы логарифмического роста и инфицировали фагом Т7 из замороженного стока (множественность заражения равна 0,4) и инкубировали при встряхивании при 32°С до лизиса (90-150 минут). Лизаты центрифугировали (6000 × g) и фильтровали (0,2 мкм) для удаления остатков клеток. Остальные киназы получали в клетках НЕК-293, а затем метили ДНК для определения количественной ПЦР, как описано ранее (Wodicka et al., 2010). Покрытые стрептавидином магнитные гранулы обрабатывали биотинилированными низкомолекулярными лигандами в течение 30 минут при комнатной температуре, чтобы получить аффинные смолы для исследования киназ. Обработанные лигандами гранулы блокировали избытком биотина и промывали блокирующим буфером (SeaBlock (Pierce), 1% БСА, 0,05% твин 20, 1 мМ ДТТ) для удаления несвязанного лиганда и для уменьшения неспецифического связывания фага. Реакции связывания проводили путем комбинирования киназ, обработанных лигандами аффинных гранул и тестируемых соединений в 1-кратном буфере (20% SeaBlock, 0,17-кратный PBS, 0,05% твин 20, 6 мМ ДТТ). Соединение 13а получали, в виде 40-кратного стокового раствора в 100% ДМСО и непосредственно разводили в анализе. Все реакции проводили в полипропиленовых планшетах на 384 лунки в конечном объеме 0,04 мл. Аналитические планшеты инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч, и аффинные гранулы отмывали промывочным буфером (1-кратный PBS, 0,05% твин 20). Затем гранулы ресуспендировали в элюирующем буфере (1-кратный PBS, 0,05% твин 20, 0,5 мкМ небиотинилированных аффинных лигандов) и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 30 минут. Концентрация киназы в элюатах измеряли с помощью количественной ПЦР и данные представлены в виде %Ctrl (фиг. 1). Данные для 13а также представлены для простоты на дендрограмме (фиг. 1).
[00207] Обсуждение
[00208] Для определения селективности 13а для STAT5, побочную активность киназы исследовали как возможную альтернативную цель для эффектора фосфорилирования STAT5. Соединение 13а оценивали по отношению к 120 типичным киназам, покрывающим разнообразие семейств киназ (DiscoveRx). Сверхчувствительную количественную ПЦР (колПЦР) использовали для измерения уровней иммобилизованных киназ после обработки соединением 13а при 5 мкМ. 13а показало незначительное воздействие по отношению к банку киназ и, в частности, по отношению к основным STAT5 активирующим киназам, JAK 1/2, ABL и FLT-3. Эти данные указывают на то, что ингибирование фосфорилирования STAT5 является следствием взаимодействия с доменом SH2 STAT5 и происходит не за счет ингибирования основных киназ.
[00209] Пример 3: Исследования с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR).
D
[00210] Взаимодействие His-меченых STAT3 и STAT5 с малыми молекулами были исследованы с помощью SPR-спектроскопии. Эксперименты по связыванию проводили на биосенсоре ProteOn XPR36 (Bio-Rad) при 25°С с использованием сенсорного чипа НТЕ (Bio-Rad, Онтарио, Канада). Проточные ячейки сенсорного чипа были заполнены раствором никеля при 30 мкN мин в течение 120 с, чтобы насытить поверхность Трис-NTA ионами Ni(II). Очищенные His-меченые STAT3 и STAT5 (SignalChem, Британская Колумбия, Канада) в буфере PBST (PBS с 0,005% (об/об) твин-20 и 0,001% ДМСО рН 7,4) вводили в первый и второй каналы чипа, соответственно, в вертикальном направлении, при скорости потока 25 мкг/мкл в течение 300 с, что достигало, в среднем, приблизительно 8000 резонансных единиц (РЕ). После отмывки буфером PBST, связывание соединений (13a-d) с иммобилизованными белками контролировали путем введения диапазона концентраций вместе с контролем при скорости потока 100 мкл/мин в течение 200 с, для каждого из этих соединений. Когда введение соединений было завершено, подвижный буфер пропускали по иммобилизованным субстратам для неспецифически связанных ингибиторов для диссоциации в течение 600 с. После диссоциации соединений, поверхность чипа регенерировали введением 1 М NaCl, при скорости потока 100 мкл/мин в течение 18 сек. Опорный канал Interspot использовали для неспецифического связывания исправлений и пустой канал, используемый при каждой инъекции аналита служил в качестве двойного значения для коррекции возможного дрейфа базовой линии. Данные проанализировали с помощью Proteon Manager Software версии 3.1. Модель связывания Ленгмюра 1:1 была использована для определения значения K. О контрольных экспериментах уже сообщалось, что подтверждает этот протокол. Эксперименты по связыванию проводили при нескольких концентрациях, 13b, d (5, 1,67, 0,56, 0,19 мкМ, верхнее значение представляет собой 5) и 13с (10, 3,3, 1,1, 0,37 мкМ, верхнее значение представляет собой 10) на фиг. 2.
[00211] Обсуждение
D
off
on
D
[00212] Эксперименты по связыванию с помощью SPR были проведены для измерения кинетической ассоциации и диссоциации с использованием Proteon XPR36 (Biorad) с полноразмерными His-мечеными STAT5 и STAT3 (SignalChem), иммобилизованными на чипе биосенсора. Ингибиторы показали наномолярные аффинности связывания для STAT5 и селективность для STAT5 вместо белка STAT3. Соединение 13а показало наиболее сильную K (k/k) 41,9±4 нМ с 7-кратной селективностью для STAT5 по сравнению со STAT3, K=287±29 нм.
[00213] Пример 4: Анализ флуоресцентной поляризации
[00214] Связывание соединений по изобретению с доменом SH2 STAT5b оценивали с использованием анализа флуоресцентной поляризации, подобно тому, что уже описан15. Аналогичные методы применяли также к белку STAT3 с целью определения специфичности соединений (13a-d). Флуоресцентные анализы выполняли в плоских черных планшетах на 384 лунки (Corning) и измерения флуоресцентной поляризации проводили с помощью прибора Infinite М1000 (Tecan, Крайльсхайм, Германия). Содержание и условия для буфера для всех анализов были следующие: 20 мМ HEPES, 50 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 2 мМ дитиотреитол, pH 7,5, и конечную концентрацию ДМСО в лунках поддерживали на уровне 10%.
[00215] Калибровочные кривые для белков дикого типа STAT3 и STAT5b были получены путем инкубирования меченных флуоресцином фосфопептидов конечной концентрации 10 нМ (5-FAM-pYLPQTC (SEQ ID NO: 1) и 5-FAM-GpYLVLDKW (SEQ ID NO: 2) для STAT3 и STAT5B, соответственно), которые, как известно, связывают домены SH2, с увеличением концентрации белка (как показано на фиг. 3). Точку, в которой было связано 80% меченных флуоресцином фосфопептидов, использовали в качестве оптимальной концентрации белка, необходимой для конкурентного анализа флуоресцентной поляризации.
[00216] Для анализа флуоресцентной поляризации STAT5b, пептид 5-FAM-GpYLVLDKW (SEQ ID NO: 2) и белок STAT5b сначала инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Соединения титровали при концентрациях от 1 до более 60000 нМ и дополнительно инкубировали в течение 15 минут, при этом проводили измерения точки флуоресцентной поляризации в трех повторах. В лунках конечные концентрации меченных флуоресцином фосфопептидов и STAT5B составляли 10 нМ и 250 нМ, соответственно. Тот же самый подход применяли для аналогичных анализов ФП для STAT3, за исключением того, что пептид 5-FAM-pYLPQTC (SEQ ID NO: 1) использовали в качестве зонда, и конечная концентрация STAT3 составляла 150 нМ в каждой лунке.
15
i
[00217] Полученные измерения флуоресцентной поляризации нормализовали и наносили на график зависимости от концентрации соединения по логарифмической шкале. Исходные данные обрабатывали с помощью фиттинга стандартной дозо- нормализованной кривой ингибирования ответа с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6. Значения IC50 преобразовывали в значения К с помощью уравнения 1, которое делает поправку на концентрацию белка и более точно определяет константы ингибирования в анализе флуоресцентной поляризации, чем уравнение Ченга-Прусоффа. Все константы ингибирования и расчетные значения K обобщены в таблице 1.
d
d
[00218] Уравнение 1: модифицированное уравнение Ченга-Прусоффа, содержащее поправочный коэффициент для концентрации белка. Для анализа STAT5b, [Пептид] = 10 нМ, [Белок] = 250 нМ и K= 170 нМ. Для анализа STAT3, [Пептид] = 10 нМ, [Белок] = 160 нМ и K= 105 нМ.
i
i
[00219] Как показано на фиг. 4 и 5, соединения по изобретению оценивали с использованием ФП, при этом обнаружили, что соединение 13а эффективно нарушает взаимодействия между фосфопептидом и STAT5B, K=145 нМ. Кроме того, соединение 13а было 1000-кратно более селективным для STAT5B по отношению к STAT3, при этом STAT3 K=143 мкМ.
[00220] Пример 5: клеточные линии и методы культивирования
[00221] Клетки эритролейкоза человека К562 и МВ-4-11 культивировали в среде Дульбекко, модифицированной по способу Исков (Gibco) с добавлением 10% ФБС (Sigma). Линии клеток карциномы молочной железы MDA-MB-231 и MDA-MB-468 выращивали в среде Игла, модифицированной по способу Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% ФБС (Sigma). Для понижения активности STAT5, клетки обрабатывали 5, 10, 15, 20 мкМ соединений 13a-d STAT5, в моменты времени 3 ч и 5 ч. В качестве контроля, клетки обрабатывали только ДМСО.
50
50
[00222] Как показано на фиг. 6 и 7, соединение 13а оценивали по всей клеточной активности по отношению к трансформированным STAT5 клеточным линиям CML и AML, К562 (BCR-ABL) и MV-4;11 (FLT3-ITD), соответственно. Жизнеспособность клеток оценивали после окончания обработки при различных концентрациях ингибитора (от 0,78 до 50 мкМ) с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue (72 ч). По сравнению с ингибиторами STAT5 (8j, 8l, 8v, 8х), значения IC для 13a-d были в 2-3 раза выше у активности, чем активность в диапазоне от 3 до 20 мкм (поддерживающая). Соединение 13а показало самую высокую активность в клетках MV4;11, трансформированных FLT3-ITD, IC=3,5 мкМ.
[00223] Пример 6: Вестерн-блоттинг
6
[00224] 1×10 клеток выращивали во флаконах 25 см для культивирования клеток (Cellstar) и обрабатывали ингибитором 13а. Белки экстрагировали с использованием буфера RIPA с протеазой и ингибиторами фосфатов и тщательно подготавливали для определения белка (набор для анализа белка ВСА, Pierce). В каждом анализе, 30 мкг очищенного цельноклеточного экстракта разделяли в 10% полиакриламид-SDS геле и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Bio-Rad). Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в течение по меньшей мере 1 ч, с последующим инкубированием в течение ночи с первичными антителами.
[00225] Иммунологический анализ проводили с использованием антител к общему STAT5 (Cell Signaling # 9363), фосфорилированному STAT5 (Tyr 694) (Cell Signaling, кат. # 9359), общему STAT3 (Cell Signaling # 4904) и фосфорилированному STAT3 (Tyr 705) (Cell Signaling # 9661), расщепленной каспазе-3 (Asp175) (Cell Signaling # 9661), расщепленной PARP-1 (ab72805) анти-циклину D1 (Abeam аМ6663), анти-циклину-02 (Abeam ab94685), анти-с-Мус (Abeam ab32072) и β-актину (Cell Signaling # 3700) в качестве контроля для нанесения, с последующим использованием флуоресцентных конъюгированных козьих вторичных антител Alexa Fluor 488 (Signaling Cell # 4408) и Alexa Fluor 647.
[00226] На фиг. 8 показано опосредованное соединением 13а ингибирование уровней фосфорилирования STAT5. Лейкозные клетки К652 обрабатывали соединением 13а в течение 5 ч, клетки собирали, и определяли уровни фосфорилированного STAT5 (Y694) (А). 13а снижало pSTAT5 в зависимости от дозы и аблировало pSTAT5 выше 10 мкМ без изменений в общей концентрации STAT5 или расщепленной PARP-1. Однако обнаружили, что клетки К562 подвергаются клеточной гибели (расщепленная PARP-1, каспаза-3) через 24 ч при 15 мкМ, указывающей на то, что 13а индуцирует апоптоз в результате инактивации STAT5 (В). Для исследования селективности, клетки рака молочной железы MDA-MB-231, которые имеют высокую активность pSTAT3 и низкую активность pSTAT5, оценивали в отношении дифференциального ингибирования pSTAT соединением 13а. pSTAT3 не ингибировался в дозах, соответствующих ингибированию STAT5 в линии лейкозных клеток (С). Оценивали модуляцию транскрипционных мишеней STAT5, MCL-1, CYCLIND1/D2 и MYC, лежащих ниже от STAT5. Предполагали, что соединение 13а должно снижать экспрессию генов и индуцировать апоптоз в 24 ч. Клеткам К562 вводили дозу соединения 13а в тех же концентрациях, при которых наблюдали селективное ингибирование STAT5. Через 5 ч наблюдали дозозависимое снижение MYC и полный нокдаун MCL-1 наблюдали через 24 ч (D).
[00227] Пример 7 - Свойства ADME
[00228] Метаболическую стабильность соединения 13а оценивали с помощью исследования ADME в гепатоцитах мыши, как показано на фиг. 9-13. Получили спектры ЖХ-МС и тандемной МС/МС, иллюстрирующие, что присутствие метаболитов 13а является минимальным, и что большинство интактного соединения 13а восстанавливается через 240 мин.
[00229] Как показано на фиг. 9, соединение 13а оценивали по его метаболической стабильности в гепатоцитах мыши и получили спектры ЖХ-МС в различные моменты времени. Пик 1: 13а, конъюгированное с глутатионом+дегидратация (MW = 1054,2 г/моль). Пик 2: 13а, конъюгированное с глутатионом + ацетилирование + дегидратация (MW = 1096,3 г/моль). Пик 3: окисление соединения 13а (MW = 783,2 г/моль). Пик 4: интактное соединение 13а (MW = 767). Относительные площади пиков для пика 1: (менее 1%), пика 2: (менее 1%), пика 3: (от 1 до 10%), пика 4: (более 10%).
[00230] На фиг. 10 показаны тандемные масс-спектры (МС/МС) для пика 1, иллюстрирующие фрагментацию с целью установления структуры соединения 13а, дегидратированного и конъюгированного с глутатионом. На фиг. 11 показаны тандемные масс-спектры (МС/МС) для пика 2, иллюстрирующие фрагментацию с целью установления структуры соединения 13а, дегидратированного, ацетилированного и конъюгированного с глутатионом. На фиг. 12 показаны тандемные масс-спектры (МС/МС) для пика 3, иллюстрирующие фрагментацию с целью установления структуры окисления соединения 13а. На фиг. 13 показаны тандемные масс-спектры (МС/МС) для пика 4, иллюстрирующие фрагментацию исходного соединения 13а.
[00231] Пример 8 - Влияние на клетки CD34+и клетки MV4-11 AML
[00232] Соединение 13а оценивали в клетках пуповины CD34+ здорового человека, чтобы определить побочные эффекты и широту терапевтического действия. Существовало различие, примерно на порядок, в чувствительности, с небольшим снижением жизнеспособности клеток при 10 мкМ соединения 13а, в то время как клетки MV-4;11 прекращали существование при тех же концентрациях.
[00233] Как показано на фиг. 14, соединение 13а показало незначительное влияние на клетки пуповины CD34+ здорового человека при 10 мкМ с ограниченным влиянием на жизнеспособность клеток по сравнению с клетками MV4;11.
[00234] Пример 9 - Влияние на клетки CML и AML
50
50
[00235] Для исследования селективности, клетки рака молочной железы MDA-MB-231, которые имеют высокую активность pSTAT3 и незначительную активность pSTAT5, фиг. 8с и 15с, оценивали в отношении дифференциального ингибирования pSTAT соединением 13а. pSTAT3 не ингибировался при дозах, соответствующих ингибированию pSTAT5 в линии лейкозных клеток, и не были затронуты уровни ни общего белка STAT3, ни STAT5. Кроме того, не было обнаружено никаких видимых уровней pSTAT1 в обеих линиях клеток К562 и MDA-MB-231. Соответственно, 13а не нарушает комплекс фосфопептид-STAT1 при значениях IC более 150 мкм, фиг. 15а. Было также показано, что соединение 13а в 3 раза менее цитотоксично в клетках MDA-MB-231 (IC=10 мкМ), чем в линии лейкозных клеток с высоким pSTAT5, фиг. 15d.
[00236] Предыдущие отчеты показывают, что нокдаун pSTAT5 в лейкозных клетках аннулирует экспрессию MCL-1 как на уровне мРНК, так и на уровне белка, и является достаточным для индукции апоптоза. Кроме того, экспрессия MCL-1 сильно зависит от сигнальных путей STAT5, что предполагает, что ингибиторы STAT5 могут быть важны для запуска апоптоза в лейкозных клетках. В отношении селективности, установленной выше от фактора транскрипции, а также в пределах семейства STAT, исследовали нижележащие эффекты нокдауна pSTAT5, в частности модуляцию транскрипционных мишеней STAT5. Для подтверждения ингибирующих эффектов соединения 13а, проводили эксперименты по измерению изменений в уровне экспрессии известных генов, регулируемых STAT5, MCL-1, CYCLIN D1/D2 и MYC в клетках К562.
[00237] В клетки К562 вводили дозу соединения 13а в тех же концентрациях, при которых наблюдали селективное ингибирование pSTAT5. Через 5 ч наблюдали дозозависимое снижение экспрессии c-MYC, а полный нокдаун MCL-1 наблюдали через 24 ч при 15 мкМ, что согласуется с их соответствующими темпами клеточной регенерации, фиг. 8d.
[00238] Соответственно, Вестерн-блот анализ уровней белка pSTAT5 и нижележащего гена-мишени экспрессии также были проведены для линии клеток AML, MV-4;11. В соответствии с клеточной линией CML К562, 13а при аналогичных концентрациях показало дозозависимое снижение pSTAT5 через 5 ч, с полной абляцией фосфорилирования через 24 ч при 10 мкМ, фиг. 16а. Кроме того, через 24 ч наблюдали начало апоптоза, фиг. 16b, а также полный нокдаун мишени MCL-1 при 10 мкМ, фиг. 16 с. В целом, 13а имело более выраженную активность в клетках AML, чем в клетках CML. Эти данные, в сочетании с Вестерн-блот анализом pSTAT5, сильными in vitro нарушениями комплексообразования STATS/фосфопептид (таблица 1), исследованием SPR (фиг. 2) и KINOME (фиг. 1), и результатами по всей клетке (фиг. 6 и 7), показывают, что агенты, связывающие STAT5, ингибируют транскрипционную функцию STAT5.
[00239] Пример 9 - Метаболические исследования
[00240] Первичные гепатоциты широко используются для биотрансформации лекарственных средств из-за их сильного сходства с клетками печени человека in vivo. Интактные гепатоциты содержат окислительные ферменты фазы I, а также ферменты фазы II, подобно сульфо- и глюкуронозилтрансферазам. Гепатоциты могут быть получены из различных видов животных, с помощью способа, при котором требуется вся печень, что не может быть осуществлено в случае с печенью человека. Предпочтительно, печень человека получают от пациентов, перенесших частичную резекцию из-за метастазов в печени. После выделения, гепатоциты криоконсервируют, чтобы сохранить каталитическую активность ферментов метаболизма. Таким образом, провели исследование всасывания, распределения, метаболизма и выведения (ADME) фракций s9 и интактных гепатоцитов, чтобы понять физико-химические свойства и метаболический профиль соединения 13а.
[00241] Метаболическую стабильность 13а оценивали для объединенных фракций s9 печени человека и мыши, и гепатоцитов человека и мыши. Концентрации исходного лекарственного средства 13а оценивали с помощью ЖХ-МС/МС, чтобы оценить его стабильность в обеих реакционных системах.
[00242] Для получения объединенных фракций s9, раствор фракции s9 вместе с НАДФН добавляли в каждую лунку. В отрицательный контроль не добавляли НАДФН, который использовали, чтобы исключить фактор нестабильности самого препарата. В качестве положительного контроля использовали Верапамил, известный препарат метаболизируемый ферментами печени. Реакцию инициировали добавлением 13а и выполняли в двух повторах. Аликвоты брали из реакционного раствора на 0 и 60 минутах. Реакцию останавливали добавлением холодного метанола. Затем образцы анализировали с помощью ЖХ-МС/МС для определения метаболического профиля. Как показано на фиг. 17, через 60 мин, 13а восстанавливали на 59,82% во фракциях s9 печени человека (HLS9), по сравнению с только 6,96% восстановленного соединения во фракциях s9 печени мыши (MMLS9). Более низкое восстановление 13а в MMLS9 по сравнению с HLS9 обусловлено в 1,5 раза большей концентрацией CPY450 и фазой II конъюгированных ферментов.
6
6
[00243] Соединение 13а затем оценивали в интактных гепатоцитах человека и мыши. Подобно фракциям s9, Верапамил использовали в качестве положительного контроля в анализе. Криоконсервированные гепатоциты оттаивали и высевали в чашки при рабочей плотности клеток 0,5×10жизнеспособных клеток/мл. Часть гепатоцитов при плотности 0,5×10 жизнеспособных клеток/мл кипятили в течение 5 мин перед добавлением в чашку в качестве отрицательного контроля, для того чтобы исключить ферментативную активность, так чтобы субстрат частично или вовсе не обновлялся, и чтобы исключить возможность нестабильности самого 13а. Добавляли оба соединения 13а и Верапамил и временные точки 0 мин и 120 мин были приняты добавлением холодного метанола, для остановки реакции, и оставшиеся проценты 13а анализировали с помощью ЖХ-МС/МС. Как показано на фиг. 18, 13а восстанавливают в значительной части на 68,56% в гепатоцитах человека по сравнению с 53,37% в гепатоцитах мыши. Как и ожидалось, отрицательный контроль имел более высокий темп восстановления 13а на приблизительно 85% в обеих системах печени.
[00244] В целом, очевидно, что 13а является стабильным в объединенных фракциях s9 мыши и человека, а также в гепатоцитах. В рамках этих исследований, был выявлен ряд метаболитов фазы I и фазы II в гепатоцитах мыши. Как показано на фиг. 9, соединение 13а поддается восстановлению на более 85% после 4 ч с тремя измеримыми метаболитами фазы I и фазы II. Каждый пик от начального масс-спектра запускали повторно посредством тандемных масс-спектров, чтобы идентифицировать основной пик вместе с соответствующими паттернами фракционирования этого метаболита. Во-первых, авторы изобретения провели анализ тандемных масс-спектров пика 4, который подтвердил, что исходное лекарственное средство 13а было восстановлено. Присутствует от 1 до 10% после 4 ч, пик 1 с основным m/z 1054,2, соответствует фазе II, конъюгированный с глутатионом метаболит 13а, фиг. 10. Пик 2, с другой стороны, представляет собой комбинацию метаболизма фазы I и фазы II. Основной масс-пик при m/z 1096,3 соответствует конъюгированному глутатионом 13а (m/z 1054,2), которое было дополнительно ацетилировано. Вероятнее всего, авторы установили, что ацетилирование происходит при кислом положении остатка салициловой кислоты, фиг. 11.
[00245] В качестве основного метаболита восстановленного на 10-20%, пик 3 представляет собой продукт метаболизма фазы I, в котором 13а (m/z 767,1) окисляли с получением основного пика с m/z 783,1. Основываясь на паттерне фрагментации, вероятнее всего, сайт окисления может находиться в основании глицина или бензилового кольца салициловой кислоты, фиг. 12.
[00246] Два основных пика соответствовали глутатионовому производному исходного лекарственного средства 13а, которые в совокупности составляют 10% восстанавливаемых метаболитов. Исследовали стабильность 13а при более жестких условиях с избытком трипептида глутатиона. Принимая во внимание структуру 13а, пентафторбензол представляет собой функциональный фрагмент, который, вероятно, наиболее восприимчив к нуклеофильной атаке фермента GST. В частности, пара-положение, обедненное электронами, облегчает нуклеофильное ароматическое замещение. Эксперименты ВЭЖХ соединения 13а с 1000-кратной концентрацией трипептида глутатиона (10 мМ), по отношению к 13а (100 мкМ) запускали в фосфатном (HEPES) буфере, который выбирали на основании растворимости 13а в этой буферной системе. Данные, полученные с помощью аналитических экспериментов ВЭЖХ, обрабатывали с использованием программного обеспечения ORIGIN с помощью уравнения экспоненциального распада. Это модель для химических/биологических процессов, во время которых темп в котором что-то происходит, пропорционален количеству остатка. Каждая молекула лекарственного средства имеет определенную вероятность быть метаболизированной в небольшом временном интервале. Таким образом, как только концентрация лекарственного средства снижается, скорость его метаболизма снижается также. Как показано на фиг. 19, 13а (убывающая линии) устойчиво к конъюгации с глутатионом (возрастающая линия) в течение периода времени 20 ч.
Ссылки, процитированные в данном описании, и включенные в него в качестве ссылки
(1) Hasinoff, В.В., Patel, D. The lack of target specificity of small molecule anticancer kinase inhibitors correlated with their ability to damage myocytes in vitro. Toxicol. Appl. Pharm. 2010, 249, 132-39.
(2) Mouhayar, E., Durand, J. В., Cortes, J. Cardiovascular toxicity of tyrosine kinase inhibitors. Expert. Opin. Drug Saf. 2013, 12, 687-96.
(3) Yang, В., Papoian, T. Tyrosine kinase inhibitor (TKI)-induced cardiotoxicity: approaches to narrow the gaps between preclinical safety evaluation and clinical outcome. J. Appl. Toxicol. 2012, 32, 945-51.
(4) Engelman, J. A., Settleman, J. Acquired resistance to tyrosine kinase inhibitors during cancer therapy. Curr. Opin. Genet. Dev. 2008, 18, 73-79.
(5) Barouch-Bentov, R. Mechanisms of Drug-Resistance in Kinases. Expert. Opin. Inv. Drug. 2011, 2, 153-208.
(6) Daub, H., Specht, K., Ullrich, A. Strategies to overcome resistance to targeted protein kinase inhibitors. Nat. Rev. Drug. Discov. 2004, 3, 1001-10.
(7) Shyh-Han, T, Nevaleinen, M. T. Signal Transducer and Activator of Transcription 5A/B in prostate and breast cancers. Endocr. Relat. Cancer. 2008, 15, 367-90.
(8) Becker, S., Groner, В., Muller, C. W. Three-dimensional structure of the Stat3beta homodimer bound to DNA. Nature. 1998, 394, 145-51.
(9) Chen, X., Vinkemeier, U., Zhao, Y, Jeruzalmi, D., Darnell J. E., Kuriyan, J. Crystal structure of a tyrosine phosphorylated Stat-1 dimer bound to DNA. Cell. 1998, 93, 827-39.
(10) Nosaka, T, Kawashima, T, Misawa, K., Ikuta, K., Mui, A.L., Kitamura, T STAT5 as a molecular regulator of proliferation, differentiation and apoptosis in hematopoietic cells. EMBO. J. 1999, 18, 4754-65.
(11) A) Cumaraswamy, A.A., Todic, A., Resetca, D., Minden, M.D., Gunning, P.T Inhibitors of Stat5 protein signaling. Med. Chem. Comm. 2012, 3, 22-27. B) Cumaraswamy, A.A., Gunning, P.T Progress towards direct inhibitors of Stat5 protein. Horm. Mol. Biol. Clin. Invest. 2012, 10, 281-286.
(12) Muller, J., Sperl, В., Reindl, W., Kiessling, A., Berg, T. Discovery of chromone-based inhibitors of the transcription factor Stat5. ChemBioChem. 2008, 9, 723-27.
(13) Nelson, E.A., Walker, S.R., Xiang, M., Weisberg, E., Bar-Natan, M., Barrett, R., Liu, S., Kharbanda, S., Christie, A. L, Nicolais, M., Griffin, J.D., Stone, R.M., Kung, A.L., Frank, D.A. The STAT5 inhibitor pimozide displays efficacy in models of acute myelogenous leukemia driven by FLT3 mutations. Blood. 2011, 117, 3421-29.
(14) Walker, S. R., Xiang, M., Frank, D. A. Distinct roles of STAT3 and STAT5 in the pathogenesis and targeted therapy of breast cancer. Mol. Cell. Endocrinol. 2014, 382, 616-21.
(15) Muller, J., Schust, J., Berg, T. A high-throughput assay for signal transducer and activator of transcription 5b based on fluorescence polarization. Anal. Biochem. 2008, 375, 249-54.
(16) Page, B.D., Khoury, H., Laister, R.C, Fletcher, S., Vellozo, M., Manzoli, A., Yue, P., Turkson, J., Minden, M.D., Gunning, P.T. Small molecule STAT5-SH2 domain inhibitors exhibit potent antileukemia activity. J. Med. Chem. 2012, 55, 1047-55.
(17) Andricopulo, A.D., Salum, L.В., Abraham, D.J. Structure-based drug design strategies in medicinal chemsitry. Curr. Top. Med. Chem. 2009, 9, 771-90.
(18) Kraskouskaya, D., Duodu, E., Arpin, С.C, Gunning, P.T. Progress towards the development of SH2 domain inhibitors. Chem. Soc. Rev. 2013, 42, 3337-70.