Исследование реакций кислородзависимого метаболизма фагоцитов различных компартментов у потомства самок крыс с лекарственной патологией печени

Вестник Челябинского государственного университета. 2013. № 7 (298). Биология. Вып. 2. С. 133-135.

А. В. Шопова

ИССЛЕДОВАНИЕ РЕАКЦИЙ КИСЛОРОДЗАВИСИМОГО МЕТАБОЛИЗМА ФАГОЦИТОВ РАЗЛИЧНЫХ КОМПАРТМЕНТОВ У ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ЛЕКАРСТВЕННОЙ ПАТОЛОГИЕЙ ПЕЧЕНИ

Проведено исследование реакций клеточного метаболизма моноцитов и перитонеальных макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальной патологией печени. Установлено угнетение метаболической активности макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным поражением печени. Результаты исследования позволяют сделать вывод о том, что у матерей с лекарственным поражением печени рождается физиологически незрелое потомство с угнетением защитных реакций, что ведет к нарушению неспецифической резистентности организма плода.

Ключевые слова: мать, потомство, лекарственное поражение печени.

Введение. На протяжении многих десятилетий в России продолжается стойкий демографический кризис, связанный, в первую очередь, со снижением рождаемости. При этом важным этапом его преодоления служит воспроизводство здорового поколения, возможное лишь при наличии сохранного здоровья обоих родителей, и особенно, здоровья матери. В связи с этим одной из актуальных проблем является влияние патологии гепатобилиарной системы на течение беременности и развитие потомства.

Многочисленными экспериментальными исследованиями было показано, что хроническая патология печени матери различного генеза (токсического, аутоиммунного, холестатического) обусловливает нарушение становления у потомства систем жизнеобеспечения, а именно кроветворной, иммунной, репродуктивной, макрофагаль-ной систем [1. С. 86].

В связи с этим, целью исследования явилось изучение влияния экспериментальной патологии гепатобилиарной системы матери на активность реакций кислородзависимого клеточного метаболизма в моноцитах периферической крови и перитонеальных макрофагах у потомства.

Материалы и методы исследования. В эксперименте были использованы лабораторные крысы (самки) «Вистар» из 17 пометов и их потомство на 1, 30 и 60 день постнатального развития. Сроки исследования выбраны с учётом общепринятого подразделения возрастных периодов крыс [2. С. 86-89].

Все экспериментальные животные были разделены на 2 группы. В первую группу вошли животные от интактных матерей — контрольная группа (К), во вторую — потомство от самок с лекарственным поражением печени, опытная группа (О). Для создания модели лекарственно-

го гепатита был использован парацетамол, который вводился двукратно в дозе 2,5 г на кг массы тела интрагастрально. Поражение печени верифицировали с помощью морфологических (цен-тролобулярные некрозы печеночных долек, пе-риваскулярная гиперплазия и гипертрофия куп-феровских клеток, расширение синусоидных капилляров, лимфогистиоцитарная инфильтрация портальных трактов, увеличение количества двуядерных и полиплоидных гепатоцитов), биохимических (повышение активности ферментов АлАТ, АсАТ, ЛДГ, повышение свободного билирубина) и иммунологических (повышение титра противопеченочных антител 1:280, 1:560) критериев.

Кислородзависимый клеточный метаболизм оценивали по двум показателям — интегральному тесту восстановления нитросинего тетразо-лия (спонтанный и индуцированный НСТ-тест) и уровню содержания в макрофагах фермента цикла трикарбоновых кислот сукцинатдегидро-геназы. Принцип НСТ-теста основывается на восстановлении растворимого бесцветного нитросинего тетразолия в диформазан, который распределяется в цитоплазме в виде гранул, окрашивающихся в тёмно-синий цвет. Данный тест отражает степень активности кислородзависимых механизмов бактерицидной активности фагоцитов, в основе которой лежит активация НАДФН2-оксидазы. Сукцинатдегидрогеназа представляет собой ферментативный комплекс, являющийся одновременно компонентом дыхательной цепи митохондрий и цикла трикарбоновых кислот и ключевым ферментом конечного метаболического пути окислительного разрушения биологически активных веществ. Активность сукци-натдегидрогеназы позволяет судить об энергетическом потенциале клеток, функциональной

состоятельности и количестве активных митохондрий [3. С. 179].

Результаты и обсуждение. Нами установлено, что наибольшее значение среднего гистохимического показателя в спонтанном НСТ-тесте у ин-тактных крысят имеется среди моноцитов периферической крови на 30 день (1,81 ± 0,14) и среди макрофагов брюшной полости на 60 день постна-тального онтогенеза (1,64 ± 0,12). Аналогичная закономерность выявлена и у подопытных животных, у которых наибольшее значение среднего гистохимического показателя в спонтанном НСТ-тесте выявлено в моноцитах периферической крови (2,08 ± 0,07) и в перитонеальных макрофагах (1,77 ± 0,13). Обращает на себя внимание, что у подопытных животных средний гистохимический показатель как в перитонеальных макрофагах, так и в моноцитах периферической крови снижен по сравнению с контролем (табл. 1).

Таким образом, данные, полученные в результате проведенного спонтанного НСТ-теста позволяют судить об угнетении кислородзависимой метаболической активности моноцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным поражением печени.

Другим показателем активности внутриклеточного кислородзависимого метаболизма явля-

* результаты статистически достоверны

ется стимулированный НСТ-тест, для проведения которого использовали инертные частицы латекса диаметром 1,2 мкм (из расчёта 100 частиц на 1 кариоцит).

Установлено, что у интактных крысят наибольшее значение среднего гистохимического показателя индуцированного НСТ-теста выявлено на 60-й день исследования в мононуклеарах изучаемых компартментов и составляет в моноцитах периферической крови 2,07 ± 0,14, а в перитонеальных макрофагах 2,19 ± 0,3 (табл. 2).

Одновременно с этим, у подопытных животных средний гистохимический показатель как в перитонеальных макрофагах, так и в моноцитах периферической крови снижен по сравнению с контролем на всех сроках исследования.

Вместе с тем, нельзя не отметить тот факт, что наибольшее увеличение среднего гистохимического показателя в стимулированном НСТ-тесте по сравнению со спонтанным НСТ-тестом выявляется в контрольной группе. Одновременно с этим, при изучении среднего гистохимического показателя стимулированного НСТ-теста в опытной группе во всех случаях отмечается лишь незначительное его повышение.

В ходе работы по изучению среднего гистохимического показателя сукцинатдегидрогеназы нами было установлено, что максимальные значе-

Таблица 1

Средний гистохимический показатель в спонтанном НСТ-тесте в клетках системы мононуклеарных фагоцитов в различные периоды постнатального развития

Группа Моноциты периферической крови Перитонеальные макрос заги

1 30 60 1 30 60

К 1,48 ± 0,11 1,81 ± 0,14 1,76± 0,09 1,5 ± 0,15 1,79 ± 0,06 2,08 ± 0,07

О 1,22 ± 0,16 1,29 ± 0,05* 1,64 ± 0,12 1,14 ± 0,02* 1,43 ± 0,11* 1,77 ± 0,13

Таблица 2

Средний гистохимический показатель в индуцированном НСТ-тесте в клетках системы мононуклеарных фагоцитов в различные периоды постнатального развития

Группа Моноциты периферической крови Перитонеальные макрофаги

1 30 60 1 30 60

К 1,87 ± 0,12 2,04 ± 0,19 2,07 ± 0,14 1,94 ± 0,02 2,11 ± 0,18 2,19 ± 0,3

О 1,25 ± 0,18* 1,28 ± 0,15* 1,71 ± 0,13 1,15 ± 0,11* 1,46 ± 0,07* 1,8 ± 0,04

* результаты статистически достоверны

2.5 . 2,

1.5 1

0,5 0

60

Моноциты

периферической

крови

1

30 60

Перитонеальные

макрофаги

К

О

Активность сукцинатдегидрогеназы в клетках системы мононуклеарных фагоцитов в различные периоды постнатального развития

ния характерны для моноцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов на 60 день постнатального онтогенеза как у опытных, так и у интактных крысят (рис.). При этом отмечается, что у подопытных животных активность сукци-натдегидрогеназы как в перитонеальных макрофагах, так и в моноцитах периферической крови снижена по сравнению с контролем.

Выводы и заключение. Оценивая результаты проведенного исследования, можно отметить, что кислородзависимая метаболическая активность перитонеальных макрофагов и моноцитов периферической крови, изучаемая с помощью спонтанного и индуцированного HCT-теста, а также с помощью фермента сукцинатдегидрогеназы, существенно снижена у потомства самок крыс с экспериментальным лекарственно-индуцированным поражением печени в различные периоды постна-тального онтогенеза по сравнению с потомством интактных крыс. Выявленное изменение среднего гистохимического показателя при стимулированном HCT-тесте в сравнении со спонтанным в группе с лекарственным поражением гепатобили-арной системы, позволяет судить о несовершенстве кислородзависимых клеточных механизмов, которые по своей сути являются одним из показа-

телей жизнеобеспечения клетки. Недостаточное по сравнению с контролем повышение среднего гистохимического показателя в опыте говорит об извращении реакций кислородзависимого метаболизма и выражается в нарушении иммунной и неспецифической резистентности [4. С. 324].

Список литературы

1. Брюхин, Г В. Сравнительный анализ субпо-пуляционного состава тимоцитов и Т-лимфоцитов периферической крови потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза // Иммунология. 2004. № 2. С. 83-86.

2. Западнюк, И. П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте : учеб. пособие / И. П. Западнюк, В. И. Западнюк, Е. А. Захария, Б. В. Западнюк. 3-е изд., перераб., доп. Киев : Вища шк., 1983. 383 с.

3. Сапожников, А. Г Гистологическая микроскопическая техника : руководство / А. Г. Сапожников, А. Е. Доросевич. Смоленск : САУ, 2000. 475 с.

4. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский. Новосибирск : Наука : Сиб. отд-ние, 1989. 341 с.