СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА T-КЛЕТОК, ПОПУЛЯЦИЯ ИММУННЫХ ЭФФЕКТОРНЫХ КЛЕТОК, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЕЕ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОБЛАСТОЗА

1. Способ производства T-клеток, включающий
(a) активацию популяции T-клеток и стимуляцию популяции T-клеток к пролиферации;
(b) трансдукцию T-клеток с помощью вирусного вектора, содержащего полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор (CAR) к антигену созревания B-клеток (BCMA);
(c) культивирование трансдуцированных T-клеток для пролиферации;
при этом стадии a)-c) выполняют в присутствии ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), и
при этом уровень дифференцировки Т-клеток является сниженным в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в присутствии ингибитора PI3K, по сравнению с уровнем дифференцировки Т-клеток в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в отсутствие ингибитора PI3K.
2. Способ по п. 1, где CAR содержит внеклеточный домен, содержащий антитело или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают BCMA, шарнирный домен, трансмембранный домен, один или более костимулирующих доменов и домен передачи первичного сигнала.
3. Способ производства T-клеток, включающий
(a) активацию популяции T-клеток и стимуляцию популяции T-клеток к пролиферации;
(b) трансдукцию T-клеток с помощью вирусного вектора, содержащего полинуклеотид, кодирующий CAR к BCMA, где CAR содержит антитело или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают BCMA, шарнирный домен IgG1, CD28 или CD8α, трансмембранный домен CD28 или CD8α, костимулирующие домены CD28, OX40 или 4-1BB и домен передачи первичного сигнала CD3ζ;
(c) культивирование трансдуцированных T-клеток для пролиферации;
при этом стадии a)-c) выполняют в присутствии ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), и
при этом уровень дифференцировки Т-клеток является сниженным в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в присутствии ингибитора PI3K, по сравнению с уровнем дифференцировки Т-клеток в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в отсутствие ингибитора PI3K.
4. Способ по п. 2 или 3, где антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из верблюжьего Ig (антитела верблюдовых (VHH)), Ig NAR, Fab-фрагментов, Fab'-фрагментов, F(ab)'2-фрагментов, F(ab)'3-фрагментов, Fv, одноцепочечного Fv-антитела («scFv»), бис-scFv, (scFv)2, минитела, диатела, триатела, тетратела, стабилизированного дисульфидными связями Fv-белка («dsFv») и однодоменного антитела (sdAb, нанотела).
5. Способ по любому из пп. 1-4, где ингибитор PI3K представляет собой общий ингибитор PI3K, выбранный из группы, состоящей из BEZ235, LY294002 и GDC-0941.
6. Способ по любому из пп. 1-4, где ингибитор PI3K представляет собой селективный ингибитор PI3K, выбранный из группы, состоящей из BYL719, GSK2636771, TGX-221, AS25242, CAL-101 и IPI-145.
7. Способ по любому из пп. 1-4, где ингибитор PI3K представляет собой ингибитор PI3-K, представляющий собой ZSTK474.
8. Способ производства T-клеток, включающий
(a) активацию популяции T-клеток и стимуляцию популяции T-клеток к пролиферации;
(b) трансдукцию T-клеток с помощью вирусного вектора, содержащего полинуклеотид, кодирующий CAR к BCMA, где CAR содержит scFv, который связывает BCMA, шарнирный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, костимулирующие домены 4-1BB и домен передачи первичного сигнала CD3ζ;
(c) культивирование трансдуцированных T-клеток для пролиферации;
при этом стадии a)-c) выполняют в присутствии ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), и
при этом уровень дифференцировки Т-клеток является сниженным в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в присутствии ингибитора PI3K, по сравнению с уровнем дифференцировки Т-клеток в случае Т-клеток, произведенных в соответствии со стадиями a)-c), выполняемыми в отсутствие ингибитора PI3K, где ингибитор PI3K представляет собой ZSTK4.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где CAR к BCMA дополнительно содержит сигнальный пептид.
10. Способ по п. 9, где сигнальный пептид предусматривает сигнальный полипептид тяжелой цепи IgG1 или сигнальный полипептид CD8α.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где способ включает выделение мононуклеарных клеток периферической крови в качестве источника Т-клеток.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где активация T-клеток включает приведение T-клеток в контакт с антителом к CD3 или его CD3-связывающим фрагментом.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где стимуляция T-клеток включает приведение T-клеток в контакт с антителом к CD28 или его CD28-связывающим фрагментом, B7-1 или его CD28-связывающим фрагментом или B7-2 или его CD28-связывающим фрагментом.
14. Способ по любому из пп. 1-13, где вирусный вектор представляет собой ретровирусный вектор.
15. Способ по любому из пп. 1-13, где вирусный вектор представляет собой лентивирусный вектор.
16. Популяция иммунных эффекторных клеток, содержащих вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий CAR к BCMA, где иммунные эффекторные клетки были активированы и стимулированы к пролиферации в присутствии ингибитора PI3K, при этом активация и стимуляция, выполняемые в присутствии ингибитора PI3K, обеспечивают повышение уровня экспрессии одного или более из CD62L, CCR7, CD28, CD27, CD122 или CD127 и обеспечивают снижение уровня экспрессии CD57 или KLRG1 в популяции иммунных эффекторных клеток по сравнению с популяцией иммунных эффекторных клеток, активированных и стимулированных в отсутствие ингибитора PI3K, где ингибитор PI3K выбран из группы, состоящей из BEZ235, LY294002, GDC-0941, BYL719, GSK2636771, TGX-221, AS25242, CAL-101, IPI-145 и ZSTK474.
17. Популяция иммунных эффекторных клеток по п. 16, где иммунные эффекторные клетки включают Т-клетки или естественные клетки-киллеры (NK).
18. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию иммунных эффекторных клеток по п. 16 или 17 и физиологически приемлемый наполнитель.
19. Способ лечения гемобластоза у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции по п. 18.
20. Способ по п. 19, где гемобластоз представляет собой B-клеточное новообразование, выбранное из группы, состоящей из множественной миеломы (MM), хронического лимфолейкоза (CLL) или неходжкинской лимфомы (NHL).
21. Способ по п. 20, где MM выбрана из группы, состоящей из клинически выраженной множественной миеломы, вялотекущей множественной миеломы, плазмоцитарного лейкоза, несекреторной миеломы, IgD-миеломы, остеосклеротической миеломы, солитарной плазмоцитомы кости и экстрамедуллярной плазмоцитомы.
22. Способ по п. 20, где NHL выбрана из группы, состоящей из лимфомы Беркитта, хронического лимфолейкоза/мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (CLL/SLL), диффузной В-крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, иммунобластной крупноклеточной лимфомы, лимфобластной лимфомы из B-клеток-предшественников и лимфомы из клеток мантийной зоны.