ПЛАЗМИДА, СОДЕРЖАЩАЯ НУКЛЕОТИДНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, КОДИРУЮЩУЮ МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ПРЕДШЕСТВЕННИК ИНСУЛИНА, И СПОСОБ ЕЕ ТРАНСФЕКЦИИ В КЛЕТКИ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО, ТРАНСГЕННОЕ МЛЕКОПИТАЮЩЕЕ, ПРОДУЦИРУЮЩЕЕ УКАЗАННЫЙ ПРЕДШЕСТВЕННИК, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

1. Плазмида, включающая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модифицированный предшественник инсулина, функционально связанный с промотором, управляющим экспрессией указанной последовательности нуклеиновой кислоты в клетках молочной железы млекопитающих.
2. Плазмида по п.1, в котором промотор представляет собой бета-казеиновый промотор.
3. Плазмида по п.1, дополнительно включающая ген устойчивости к антибиотику.
4. Плазмида по п.1, в котором ген устойчивости к антибиотикам представляет собой ген устойчивости к неомицину.
5. Плазмида по п.1, в котором модифицированный предшественник инсулина представляет собой модифицированный предшественник инсулина млекопитающего.
6. Плазмида по п.1, в котором модифицированный предшественник инсулина представляет собой модифицированный предшественник человеческого инсулина, модифицированный предшественник коровьего инсулина, модифицированный предшественник свиного инсулина, модифицированный предшественник овечьего инсулина, модифицированный предшественник козьего инсулина или модифицированный предшественник инсулина грызунов.
7. Плазмида по п.1, которая представляет собой pβmhuIP.
8. Плазмида по п.1, которая представляет собой pNJK IP.
9. Плазмида по п.1, которая представляет собой pβKLE IP.
10. Плазмида по п.1, дополнительно включающая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей козий β-казеиновый промотор, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент инсулятора куриного β-глобина, включающего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующий интроны и нетранслируемые экзоны из козьего гена β-казеина.
11. Плазмида по п.1, дополнительно включающая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей нетранслируемый фрагмент первого экзона гена β-казеина.
12. Плазмида по п.1, дополнительно включающая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фрагмент коровьего гена α-лактальбумина и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сайт расщепления энтерокиназы, который находится выше по ходу транскрипции от модифицированного предшественника инсулина.
13. Плазмида по п.1, в котором модифицированный предшественник инсулина включает модифицированный С-пептид.
14. Плазмида по п.1, в котором модифицированный С-пептид включает аминокислоты, обычно не обнаруживающиеся в природном проинсулине.
15. Плазмида по п.1, в котором модифицированный С-пептид включает следующие три аминокислоты: Ala-Ala-Lys.
16. Плазмида по п.1, в котором модифицированный предшественник инсулина дополнительно включает модифицированную В-цепь.
17. Плазмида по п.1, в котором модифицированный предшественник инсулина содержит модифицированную В-цепь, содержащую всю аминокислотную последовательность природной В-цепи, за исключением аминокислот С-конца.
18. Способ трансфекции плазмидой по любому из пп.1-17 клеток млекопитающего, включающий введение плазмиды в липосому и контактирование указанной липосомы с клетками млекопитающего.
19. Способ по п.18, в котором липосомы представляют собой катионные липиды.
20. Трансгенное млекопитающее, отличное от человека, которое включает плазмиду по любому из пп.1-17 и образует в своем молоке модифицированный предшественник инсулина.
21. Трансгенное млекопитающее по п.20, в котором плазмиду обнаруживают в соматических и половых клетках млекопитающего.
22. Трансгенное млекопитющее по п.20, в котором млекопитающее принадлежит к видам крупного рогатого скота, свиней, овец, коз или грызунов.
23. Трансгенное млекопитающее по п.20, в котором млекопитающее принадлежит к видам крупного рогатого скота.
24. Трансгенное млекопитающее по п.20, в котором у трансгенного млекопитающего отсутствует гипогликемия.
25. Способ создания отличного от человека трансгенного млекопитающего, включающий трансфекцию соматических клеток плазмидой по любому из пп.1-17, при которой плазмида инкорпорируется в геном клеток с получением в результате трансгенных соматических клеток, энуклеацию зрелой яйцеклетки с получением яйцеклетки с удаленным ядром, слияние одной из соматических клеток с указанной яйцеклеткой с образованием одноклеточного эмбриона, имплантацию эмбриона в матку млекопитающего-реципиента и мониторинг беременности до рождения трансгенного млекопитающего.
26. Способ по п.25, в котором соматические клетки представляют собой фибробласты.
27. Способ по п.25, в котором трансгенные соматические клетки получают выделением из самки, являющейся трансгенной по продукции в молоке модифицированного предшественника инсулина.