СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЕ
METHOD FOR RAPID DIAGNOSIS OF RESISTANCE AND SUSCEPTIBILITY TO ACETYLSALICYLIC ACID

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано в диагностике и лечении больных ишемической болезнью сердца (ИБС).
Известен способ определения резистентности к ацетилсалициловой кислоте (АСК), который заключается в сравнении индуцированной агрегации тромбоцитов посредством агрегатометрии через 2-3 и 5 дней после начала приема АСК. Резистентность к АСК диагностируется при Аденозиндифосфат (АДФ)-индуцированной агрегации тромбоцитов более 70% и с арахидоновой кислотой (АК) - более 20% [3, 7]. Однако данный способ не позволяет определить резистентность к препарату до начала терапии.
Еще один способ диагностики резистентности заключается в исследовании АДФ - индуцированной и АСК-зависимой агрегации тромбоцитов с определением коэфициента ингибирования агрегации (КИА): величина КИА<24% свидетельствует о резистентности к АСК, при КИА≥24% - о чувствительности к АСК [5]. Но данный способ является весьма трудоемким и длительным.
Также резистентность определяют при исследовании коллаген-индуцированной и индуцированной арахидоновой кислотой (АК) агрегации методом импедансной агрегатометрии до и после инкубации с АСК до начала лечения антитромбоцитарными препаратами. Аспиринрезистентными считались лица, имеющими агрегацию, индуцированную коллагеном более 8 Ом после инкубации с АСК. Однако данный способ требует затрат времени и реактивов [9].
Эффективность АСК во вторичной профилактике ИБС не представляет сомнений [6]. Но по литературным данным резистентность к препарату может наблюдаться у 8-57% популяции [8], что может привести к развитию неблагоприятных сосудистых событий. Поэтому важно иметь в диагностическом арсенале простой, быстрый и достоверный метод выявления резистентности к АСК до начала лечения.
Задачей изобретения является уменьшение риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ИБС, простота, скорость диагностики, достоверность полученных результатов.
-5
Поставленную задачу решают за счет того, что кровь у пациента забирают до начала антитромбоцитарной терапии, в качестве антикоагулянта применяют 3,2% цитрата натрия, помещают 0,5 мл крови в опытную кювету, пропускают через образец крови короткий, порядка 10 с, импульс тока с последующей регистрацией функции спада поляризации образца, а затем выполняют Фурье-преобразование этой функции и рассчитывают параметры импеданс-годографов в диапазоне частот 0,1-125 кГц, используя диэлектрический Фурье-спектрометр, при значениях референтного интервала r0=4,518-4,551, x0=1,925-1,939, y0=-1,395 - -1,385 диагностируют чувствительность, а при значениях r0=4,504-4,517, x0=1,914-1,926, y0=-1,384 - -1,375 - резистентность к ацетилсалициловой кислоте.
-5
Способ осуществляют следующим способом: у пациентов забирают кровь из кубитальной вены в объеме 4,0 мл в вакумтейнер с цитратом натрия 3,2%, помещают 0,5 мл крови в опытную кювету, пропускают через образец крови короткий (порядка 10 с) импульс тока с последующей регистрацией функции спада поляризации образца, а затем выполняют Фурье-преобразование этой функции и рассчитывают параметры импеданс-годографов в диапазоне частот 0.1-125 кГц.
Диэлектрические характеристики крови были описаны с помощью трех так называемых «коуловских» параметров (r0, x0, y0) [2]. Данные характеристики крови описывают физические параметры мембраны клеток крови и позволяют косвенно судить об их состоянии [1]. Данный прибор применялся в медицине, например, для диагностики острого коронарного синдрома без подъема сегмента ST на ЭКГ [4].
Полученные результаты подвергали статистической обработке, и резистентность или чувствительность определяли при условии, если значения всех параметров r0, x0, y0 импеданс-годографа образца крови попадали в диапазон, определенный опытным путем для этих двух состояний (Таблица 1).
Правомерность разделения на резистентных и чувствительных к АСК пациентов на основании диэлектрических параметров крови, была проверена изучением особенностей агрегации тромбоцитов методом оптической агрегометрии при инкубировании последних с АСК и последующим ответом агрегации тромбоцитов на 8-10-дневную терапию препаратом. Для определения диапазона, характеризующего чувствительность или резистентность к АСК, исследовалась кровь 32 пациентов со стенокардией II-III функционального класса (Таблица 2), отменивших АСК за 7-10 дней до предстоящего аорто-коронарного шунтирования, измерялись диэлектрические характеристики крови и агрегация тромбоцитов. Резистентность и чувствительность к АСК подтверждали измерением агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой (АК) до и после инкубации с АСК до начала лечения антитромбоцитарными препаратами. Аспиринчувствительность определяли при уровне агрегации с АК (после инкубации с АСК) ниже 20%, в противоположном случае диагностировали аспирирезистентность. Также измеряли агрегацию тромбоцитов с АК на 8-е - 10-е сутки от начала терапии АСК: аспиринчувствительность определяли при уровне агрегации с АК ниже 20%, в противоположном случае диагностировали аспирирезистентность. По результатам этих тестов пациенты были разделены на 2 группы: АСК-резистентных (10 человек) (АР) и АСК-чувствительных (22 человек) (АЧ). Выявлены значимые отличия между r0, x0, y0 импеданс-годографа образца крови (критерий Мана-Уитни). P=0,020 для r0 крови, p=0,025 для x0, и p=0,025 для y0 между группами.
Совпадение диагноза резистентности к АСК составляет 70%, а чувствительности к АСК - 73%.
Исходя из полученных данных можно предположить, что тромбоцит, резистентный к АСК, более активный, фенотипически отличается от чувствительного к АСК тромбоцита, что изменяет диэлектрические параметры крови [1].
Клинический пример №1. Пациент Ц., 51 год, история болезни №1842140 (данные №8 в таблице 2). Находился на стационарном лечении в кардиохирургическом отделении №1 Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии с 18.04.2014 г. по 05.05.2014 г. с диагнозом: Основной: Ишемическая болезнь сердца (ИБС). Стенокардия II ф.кл. Постинфарктный кардиосклероз. Операция: 23.04.2014 г. Аутовенозное аортокоронарное шунтирование ветви тупого края (ВТК) 1, задней межжелудочковой ветви (ЗМЖВ). Маммарокоронарное шунтирование передней нисходящей (ПНА). Осложнение: Сердечная недостаточность 2а (II ф.кл. по NYHA). Фон: Дислипидемия. Гипертоническая болезнь III, риск 4. Атеросклероз брахиоцефальных артерий, гемодинамически не значимый. При поступлении пациента в стационар проведено исследование диэлектрических характеристик крови: r0 - 4,531, x0 - 1,931, y0 - -1,388. Прогноз: аспиринчувствительный пациент, что подтверждается данными индуцированной агрегации. Уровень агрегации с АК до и после инкубации с АСК - 75 и 12 соответственно. Через 10 суток после лечения АСК уровень агрегации, индуцированной АК, - 8. Аспиринчувствительность подтвердилась, рекомендовано продолжить терапию АСК (Рис. 1. Агрегация тромбоцитов, индуцированная АК. А - до лечения, Б - до лечения с инкубацией с АСК, В - после лечения).
Клинический пример №2. Пациент О., 54 года, история болезни №4668140 (данные №24 в таблице 2). Находился на стационарном лечении в кардиохирургическом отделении №1 Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии с 01.09.2014 г. по 12.09.2014 г. с диагнозом: ИБС. Стенокардия III ф.кл. Операция: 03.09.2014 г. Аутовенозное аортокоронарное шунтирование ВТК1, ЗМЖВ. Маммарокоронарное шунтирование ПНА. Осложнение: Сердечная недостаточность 2а, III ф.кл. по NYHA. Фон: Гипертоническая болезнь III, риск 4. Атеросклероз брахиоцефальных артерий. Сахарный диабет II тип, впервые выявленный. При поступлении пациента в стационар проведено исследование диэлектрических характеристик крови: r0 - 4,506, x0 - 1,922, y0 - -1,383. Прогноз: аспиринрезистентный пациент, что подтверждается данными индуцированной агрегации. Уровень агрегации с АК до и после инкубации с АСК - 107 и 112 соответственно. Через 10 суток после лечения АСК уровень агрегации, индуцированной АА, - 101. Аспиринрезистентность подтвердилась, рекомендовано лечение тиенопиридинами (Рис. 2. Агрегация тромбоцитов, индуцированная АК. А - до лечения, Б - до лечения с инкубацией с АСК, В - после лечения).
Предлагаемый способ позволяет в лечебном учреждении любого уровня быстро и малозатратно осуществить диагностику резистентности к АСК до начала лечения. Своевременная диагностика резистентности к АСК предотвратит развитие нежелательных коронарных событий у больных ИБС, резистентных к препарату. Способ может быть рекомендован для применения в клинической практике.
Источники информации
1. Косинова А.А., Ковалев А.В., Гринштейн Ю.И., Суховольский В.Г., Савченко А.А. Диэлектрические характеристики крови и ее компонентов у больных стабильной стенокардией // Сибирское медицинское обозрение. - 2013. - №4. - С. 24-28.
2. Коул К.С. Нервный импульс (теория и эксперимент) // Теоретическая и математическая биология. - 1968. - С. 154-193.
3. Момот А.П. Патология гемостаза. Принципы и алгоритмы клинико-лабораторной диагностики. - Спб.: Форма Т, 2006. - с. 95
4. Патент РФ №2348041, G01N 33/68, бюл. №6, 27.02.2009 г.
5. Патент РФ №2413953, G01N 33/86, бюл. №7, 10.03.2009 г.
6. Antithrombotic Trialists' Collaboration. Collaborative meta-analysis of randomised trials of antiplatelet therapy for prevention of death, myocardial infarction, and stroke in high risk patients. BMJ. 2002 Jan 12; 324(7329): 71-86.
7. Gum P.A., Thamilarasan M., watanabe J. et al. Aspirin use and all-cause mortality among patients being evaluated for known or suspected coronary disease: A propensity analysis // JAMA. - 2001. - Vol. 286 (10). - P. 1187-1194.
8. Cañivano Petreñas L., García Yubero C. Resistance to aspirin: Prevalence, mechanisms of action and association with thromboembolic events. A narrative review // Farm. Hosp. - 2010. - V. 34, №1. - P. 32-43
9. Ivandic BT, Giannitsis E, Schlick P, Staritz P, Katus HA, Hohlfeld T. Determination of aspirin responsiveness by use of whole blood platelet aggregometry. Clin Chem. 2007 Apr; 53(4): 614-9.