Апоптозиндуцирующее действие противотуберкулёзных препаратов основного ряда in vitro

Апоптозиндуцирующее действие противотуберкулёзных препаратов основного ряда in vitro

О. А. ВАСИЛЬЕВА, В. А. СЕРЕБРЯКОВА, О. И. УРАЗОВА, В. В. НОВИЦКИЙ,

Т. Е. КОНОНОВА, И. О. НАСЛЕДНИКОВА

Сибирский государственный медицинский университет, Томск

Apoptosis-Inducing Action of Antituberculosis Drugs of the Main Group in Vitro

O. A. VASILYEVA, V. A. SEREBRYAKOVA, O. I. URAZOVA, V. V. NOVITSKY,

T. E. KONONOVA, I. O. NASLEDNIKOVA

Siberian State Medical University, Tomsk

Проведено исследование влияния противотуберкулёзных препаратов основного ряда (изониазида, рифампицина, этамбу-тола) на апоптоз лимфоцитов периферической крови in vitro у больных туберкулёзом лёгких. Показано, что все изученные препараты индуцируют апоптотическую гибель лимфоцитов in vitro, что может приводить к нарушению формирования ан-тигенспецифического ответа при туберкулёзе легких.

Ключевые слова: monurnud, ршрамішціїп, этамбутол, апоптоз л^мфощтов, туберкулёз легккх.

The influence of the main antituberculosis drugs (isoniazid, rifampicin, ethambutol) on in vitro apoptosis of peripheral blood lymphocytes from patients with pulmonary tuberculosis was researched. It was shown that all the investigated drugs induced apoptotic death of the lymphocytes in vitro, that could result in disturbance of antigen-specific response formation in pulmonary tuberculosis.

Key words: isoniazid, rifampicin, ethambutol, lymphocytes apoptosis, pulmonary tuberculosis.

Введение

В последние годы во многих странах, независимо от уровня их экономического развития, отмечается увеличение заболеваемости и распространенности туберкулёза лёгких. Одной из главных причин недостаточной эффективности лечения являются побочные реакции на противотуберкулёзные препараты. Возникая в процессе комбинированной химиотерапии, они существенно ограничивают её возможности и снижают эффективность лечения больных туберкулёзом лёгких по основным показателям — срокам прекращения бактериовыделения и частоте закрытия каверн [1].

Несмотря на большой опыт применения противотуберкулёзных препаратов, проблема их побочного действия на макроорганизм до настоящего времени остаётся актуальной. Поскольку доклинические и клинические испытания не позволяют выявить весь спектр возможных нежелательных побочных реакций на препараты, очевидна необходимость продолжения исследований и оценки негативных реакций на лекарственные средства и после внедрения их в практику [2].

© Коллектив авторов, 2010

Адрес для корреспонденции: 634050, г. Томск, Московский тракт, 2

Судьба любой живой клетки зависит от генетики самой клетки и действия факторов окружения. Именно баланс внутриклеточных и внеклеточных факторов определяет, находится ли клетка в состоянии покоя, пролиферации, диф-ференцировки или на пути к программированной гибели [3].

Несмотря на многообразие выделяемых типов программированной смерти клеток, апоптоз на сегодняшний день является наиболее изученным механизмом гибели клеток, в том числе лимфоцитарных. Показано, что при туберкулёзной инфекции отмечаются нарушения антигенспеци-фического ответа лимфоцитов, высказывается предположение о возможной делеции антигенре-активных клеток вследствие их активационно-индуцированного апоптоза [4—6].

Апоптоз Т-лимфоцитов является неблагоприятным фактором при туберкулёзной инфекции, поскольку потеря равновесия между пролиферацией Т-клеток и клеточной гибелью приводит к элиминации специфических защитных клонов лимфоцитов. Это предрасполагает к персистенции возбудителя инфекции и развитию вторичных иммунодефицит-ных состояний [7]. При этом не исключено, что значительный вклад в развитие апоптотической гибели клеток вносят химиопрепараты, используемые для специфической противотуберкулёзной терапии.

Таблица 1. Относительное количество CD95+ лимфоцитов у здоровых доноров и больных туберкулёзом лёгких

Группы исследования Уровень экспрессии CD95

Фоновый Индуцированный изониазидом Индуцированный рифампицином Индуцированный этамбутолом

Здоровые доноры 24,30+1,24 46,72+3,18 48,39+4,86 40,23+4,30

р7<0,01 р1<0,01 р7<0,01

Больные лекарственно-чувствительным

туберкулёзом лёгких 33,34+3,12 47,08+4,20 64,75+4,19 51,87+5,17

р2<0,05 р7<0,01 р1<0,05 р1<0,05

р3<0,01 р2<0,05

Больные лекарственно-устойчивым

туберкулёзом лёгких 23,21+2,24 42,94+5,47 56,00+6,79 46,92+6,83

р1<0,05 р1<0,05 р1<0,05

Примечание. Здесь и в табл. 2: р1- уровень статистической значимости различий по сравнению с фоновым уровнем; р2 - по сравнению со здоровыми донорами; р3 - по сравнению с больными с лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких.

В то же время одновременное назначение для лечения нескольких противотуберкулёзных препаратов приводит к ситуации, в которой трудно определить, какой из препаратов индуцирует нежелательным эффект. Эксперименты in vitro позволяют оценить прямое влияние конкретного препарата на отдельные структурно-метаболические и функциональные параметры иммуноком-петентныгх клеток.

В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось изучение прямого действия основных противотуберкулёзный препаратов (изониазид, рифампицин, этамбутол) на апоптоз лимфоцитов крови у здоровыгх доноров и больных инфильтративным туберкулёзом лёгких с лекарственной чувствительностью и устойчивостью возбудителя.

Материал и методы

В основу исследования положены результаты обследования 60 впервые вышвленныгх больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких (ТЛ) в возрасте от 18 до 55 лет (47 мужчин и 13 женщин). Все обследованные пациенты находились на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулёзной больнице во фтизиотерапевтическом отделении № 1. Диагноз заболевания устанавливали на основании клинической картины, данный: рентгенологического исследования лёгких, результатов микроскопического и бактериологического исследования мокроты.

В зависимости от чувствительности возбудителя к основным противотуберкулёзным препаратам (ПТП) все больные быши распределены на две группы. Первую группу составили 35 пациентов, выделяющих микобактерии туберкулёза (МБТ), чувствительные к основным ПТП, во вторую группу быши включены 25 пациентов, выделяющие МБТ, устойчивые как минимум к трём препаратам — изониазиду, рифампици-ну, стрептомицину. В исследование не включались пациенты моложе 18 и старше 55 лет, инфицированные вирусами гепатита и с ВИЧ-инфекцией, страдающие аллергическими, иммунологическими и иными инфекционными заболеваниями в стадии обострения. Контрольную группу (группу сравнения) составили 25 практически здоровыгх доноров с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту.

Материалом для исследования служила периферическая кровь, взятая утром натощак из локтевой вены в количестве 10

мл. Уровень апоптоза лимфоцитов у больныгх туберкулёзом лёгких оценивали до начала проведения специфической противотуберкулёзной химиотерапии.

Выделение лимфоцитов периферической крови осуществляли методом градиентного центрифугирования [8]. Для оценки влияния ПТП на апоптоз лимфоцитов субстанции химиопрепаратов (Sigma, США) добавляли в среду для культивирования клеток (RPMI-1640) в дозах, сопоставимым: с сывороточной концентрацией этих препаратов с учётом фармакокинетических сведений. Конечная концентрация ис-следуемыгх ПТП в культуральной среде составила 10 мкг/мл — для изониазида и рифампицина и 25 мкг/мл — для этамбуто-ла. В контрольные пробы вносили полную среду RPMI-1640. Для оценки апоптоза клетки культивировали при 37°С и 5% СО2 в течение 20 ч. После инкубации пробирки встряхивали, центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин, осадок использовали для подсчёта CD95+ и annexin V положительных лимфоцитов. Определение CD95+ клеток производили с помощью моноклональный: антител фирмы Сорбент (Москва, Россия) в лимфоцитотоксическом тесте [9]. Детекцию апоптотических лимфоцитов периферической крови осуществляли с помощью набора Annexin V Fitc (Beckman Coulter, Франция) методом люминесцентной микроскопии.

Результаты и обсуждение

В результате определения уровня фоновой экспрессии молекул CD95 на поверхности лимфоцитов обнаружили, что исходное количество клеток, предуготовленных к апоптозу, у больных с лекарственно-чувствительным туберкулёзом лёгких (ЛЧТЛ) в 1,4 раза превышало их уровень в группе сравнения, а у больных с лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких (ЛУТЛ) было сопоставимо с контролем (табл. 1). При этом уровень спонтанного апоптоза лимфоцитов (по количеству annexin V+ клеток) у больных инфильтративным ТЛ оставался в пределах нормы (табл. 2).

После инкубации с изониазидом среднее количество CD95+ и annexin V-презентирующих лимфоцитов у больных ТЛ и у здоровых доноров в среднем увеличивалось в 2 раза (р<0,05) относительно исходного его уровня. При этом существенных различий между величинами показателя апоптоза в сравниваемых группах установлено не было (см. табл. 1, 2).

-о-

Таблица 2. Относительное количество аппехт У-презентирующих лимфоцитов у здоровых доноров и больных туберкулёзом лёгких

Группы исследования _Уровень экспрессии аппехш (% положи тельных лимфоцитов)_____

Фоновый Индуцированный Индуцированный Индуцированный изониазидом рифампицином этамбутолом

Здоровые доноры

Больные лекарственно-чувствительным туберкулёзом лёгких

Больные лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких

8,01+0,80

10,03+1,20

10,85 + 1,81

16,74+1,87

р1<0,01

19,04+2,52

р1<0,01

20,88+3,47

р1<0,01

15,89+0,94

р1<0,01

24,31+3,39

р1<0,01

р2<0,05

25,62+3,47

р1<0,01

р2<0,05

14,04+1,49

р1<0,01

17,88+1,83

р1<0,01

16,27+3,10

р1<0,01

Добавление в культуру клеток рифампицина также приводило к значительному увеличению числа СБ95+ и аппехт У-положительных лимфоцитов в сравнении с их фоновым количеством во всех группах исследования. Наряду с этим, у больных с лекарственно-чувствительным вариантом ТЛ число СБ95+ лимфоцитов превышало норму (табл. 1, 2). В результате оценки количества клеток, вступивших в раннюю фазу апоптоза, при действии рифампицина у больных ЛЧТЛ и ЛУТЛ регистрировались значения, превышающие соответственно в 1,5 (р<0,05) и 1,6 (р<0,05) раза аналогичные показатели у здоровых доноров (см. табл. 2). Воздействие этамбутола сопровождалось статистически достоверным увеличением числа лимфоцитов, предуготовленных к апоптозу и вступивших в раннюю фазу клеточной гибели, как у пациентов с ТЛ вне зависимости от чувствительности возбудителя к ПТП, так и в группе контроля (см. табл. 1, 2).

Сравнительный анализ представленных результатов у больных ТЛ в зависимости от исследуемого ПТП не выявил достоверных различий между группами (см. табл. 1, 2).

Согласно данным литературы, нарушение ан-тигенспецифического ответа при туберкулёзе может быть обусловлено апоптозом антигенреак-тивных клеток, а также перераспределением и сосредоточением (компартментализацией) их в очаге инфекции [4]. Однако при оценке спонтанного апоптоза лимфоцитов мы отмечали лишь повышение количества СБ95+ клеток у больных ЛЧТЛ без увеличения числа апоптотических аппехт У-презентирующих лимфоцитов, что не противоречит данным, полученным другими исследователями [10]. Известно, что экспрессия молекулы СБ95 на Т-клетках не является обязательным критерием их апоптотической гибели, а является лишь маркером активации [11], в связи с чем число СБ95+ клеток может не совпадать с количеством апоптотических клеток, выявляемых другими методами [12].

Повышенный уровень экспрессии Баз-рецептора на лимфоцитах у больных с ЛЧТЛ, по-видимому, связан с тем, что в ответ на внедрение возбудителя у них развивается гиперергическая реакция иммунокомпетентных клеток, опосредующая функциональное истощение иммунной системы, а при лекарственно-устойчивом варианте заболевания на фоне дезактивации клеток макро-фагальной системы и нарушения презентации антигена устанавливается гипо- и анергия иммунокомпетентных клеток с сохранением резерва их реактивности [13].

Ранее в нашей лаборатории Новицким В. В. и соавт. [2005] было выявлено увеличение активности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в лимфоцитах у больных ЛУТЛ, а также повышение количества апоптотических лимфоцитов у пациентов вне зависимости от чувствительности возбудителя к основным ПТП после проведения интенсивной фазы лечения, что было связано авторами с токсическим действием лекарственных средств [14].

Одним из путей инициации апоптоза является повреждение структуры ДНК. Проводились исследования, в которых изучалось влияние курса противотуберкулёзной терапии, включавшей изо-ниазид, рифампицин, пиразинамид и этамбутол, на появление хромосомных аберраций в лимфоцитах. Было убедительно доказано, что назначение ПТП вызывает значительное увеличение числа хромосомных аберраций у больных ТЛ по сравнению с нелечеными пациентами и здоровыми донорами [15, 16]. Эти данные могут служить свидетельством генотоксического действия анти-микобактериальных препаратов, реализация которого, по-видимому, возможна в синтетическом и постсинтетическом периодах интерфазы [15].

Генотоксические эффекты ряда ДНК-по-вреждающих агентов (в том числе и отдельных химиопрепаратов) реализуются за счёт непосредственного воздействия их на ядро клетки, при этом происходит активация гена р53, что приво-

дит к подавлению процессов, связанных с делением клеток [17].

Исходя из известных способов индукции апоп-тоза и полученных нами данных, следует, что изучаемые препараты способны запускать апоптоз как по внешнему пути (поскольку ПТП способствуют усилению экспрессии Раз-рецептора — СБ95), так и по внутреннему. Последний реализуется при воздействии активными соединениями кислорода, окисью азота, токсинами или отдельными химиотерапевтическими препаратами. При этом отмечается резкое снижение электрохимического потенциала митохондриальной мембраны, которое сопровождается выходом из митохондрии в цитоплазму цитохрома С и других апоптогенных молекул [18, 19]. Помимо этого, в цитоплазму поступают также образовавшиеся в митохондриях активные формы кислорода и свободные радикалы. Их накопление приводит к нарушениям биоэнергетического статуса клетки, которые несовместимы с её нормальной жизнедеятельностью [20].

Учитывая данные литературы и основываясь на ранее полученных собственных результатах [21], следует отметить, что повышенный уровень апоптоза лимфоцитов при действии изониазида, рифампицина и этамбутола, вероятнее всего, обусловлен запуском программированной клеточной гибели по митохондриальному пути (за счёт нарушений в энергетическом статусе клеток, активации ПОЛ, повреждений структуры ДНК), что отчасти подтверждается отсутствием корреляции между количеством СБ95+ и аппехт У-презентирующих лимфоцитов.

Доказательством того, что апоптоз лимфоцитов реализуется по внутреннему пути, являются данные, полученные другими исследователями, изучающими токсичность ПТП. Так, на клетках гепато-мы Нер-02 было показано, что изониазид оказывает токсический эффект за счёт индукции апоптоза посредством оксидативного стресса. Последнее подтверждалось снижением концентрации восстановленного глутатиона и увеличением содержания активных форм кислорода в клетках [22]. Цитотоксический эффект изониазида оценивали также другие ученые на 3 линиях клеток: человеческой гепатомы Нер-02, лимфобластомы АНН-1 и на клетках лимфомы мышей УАС-1. После 24-часовой инкубации клеточных линий с изониазидом было отмечено значительное увеличение количества аппехт У-положительных апоптотических клеток. Кроме того, индукция апоптоза сопровождалась снижением мембранного потенциала митохондрий и появлением разрывов ДНК. Через 36 ч инкубации авторы наблюдали изменения в клеточном цикле апоптотических клеток — появление суб-01-пика на гистограмме клеточного цикла. Более того, нарушения клеточного цикла отмечали даже при низких концентрациях изониазида, которые, по сути,

не токсичны. Таким образом, эти данные свидетельствуют о токсическом эффекте изониазида, реализующемся через индукцию апоптоза и нарушение клеточного цикла в клетках млекопитающих [23].

Значительное увеличение количества CD95+ клеток у больных с ЛЧТЛ и annexin V+ лимфоцитов при действии рифампицина у больных ТЛ обеих групп наблюдения (с ЛЧТЛ и ЛУТЛ) по сравнению со здоровыми донорами свидетельствует о большей чувствительности клеток больного (нежели здорового) организма к экзогенным воздействиям, что, возможно, является одним из механизмов формирования вторичной иммунной недостаточности при ТЛ, опосредованной лекарственным воздействием на фоне противотуберкулёзной терапии.

Кроме того, М. М. Юсунбаевой и соавт. [2008] в результате проведённого генетического исследования у больных инфильтративным ТЛ обнаружено достоверное увеличение частоты встречаемости нулевого генотипа гена GSTM1 (глутатион^-транс-феразы) по сравнению со здоровыми донорами. Это приводит к полному отсутствию белкового продукта данного гена — глутатион^-трансферазы — важнейшего фермента глутатионового цикла, осуществляющего метаболизм ксенобиотиков. Таким образом, делеция гена GSTM1 способствует накоплению в клетке токсичных промежуточных метаболитов без их дальнейшего обезвреживания, что может вызывать оксидативный стресс, а также приводит к деструкции и развитию апоптоза, что, несомненно, оказывает негативное воздействие на инфицированный микобактериями организм и снижает возможности клеток полноценно отвечать на раздражители [24].

Японскими учеными доказано, что рифампи-цин усиливает экспрессию индуцибельной NO-синтазы и таким образом повышает продукцию оксида азота в эпителиальных клетках лёгких человека [25]. Известно, что NO в определенной концентрации способен индуцировать апоптоз [26, 27], поэтому не исключено, что усиление апоптотической гибели лимфоцитов, зарегистрированное нами при действии рифампицина, может быть опосредованным через повышение концентрации окиси азота.

D. Gil и соавт. [2003] указывают на то, что ри-фампицин и этамбутол в больших дозах способны вмешиваться в обмен ионов кальция внутри макрофагов мышей, в частности усиливают его выход из внутриклеточного депо (изониазид не влиял на этот процесс) [28]. Показано, что одной из причин запуска апоптоза является повышенное поступление внутрь клетки ионов Са2+ и Mg2+, которые активируют Са2+/Mg2+-зависимую эндонуклеазу, осуществляющую фрагментацию ядерного хроматина, Са2+-зависимую трансглутаминазу, форми-

О

рующую перекрестные сшивки между цитозольными белками. Это приводит к необратимым структурным изменениям в клетке, в том числе к образованию ригидных оболочек вокруг апоптоз-ных телец, а также опосредует повышение активности клеточных протеиназ, реализующих фазу «экзекуции» апоптоза. У больных ТЛ после проведения интенсивной фазы лечения было выявлено увеличение концентрации кальция в лимфоцитах периферической крови, сочетающееся с повышенным уровнем апоптоза [5]. Таким образом, изменение концентрации кальция под действием ПТП также может вносить свой вклад в реализацию гибели лимфоцитов путем апоптоза.

Известно, что основной механизм действия рифампицина связан с ингибированием ДНК-за-висимой РНК-полимеразы возбудителей инфекционных заболеваний, в том числе микобактерий. Известно также, что рифампицин не влияет на изоформу фермента, характерную для клеток млекопитающих. Однако, учитывая схожесть процессов транскрипции и трансляции в клетках возбудителей инфекционных заболеваний и в митохондриях млекопитающих, в которых также имеется ДНК-зависимая РНК-полимераза, схо-

ЛИТЕРАТУРА

1. Мишин В. Ю. Медикаментозные осложнения комбинированной химиотерапии туберкулёза лёгких. М.: 2007; 248.

2. Астахова А. В., Лепахин В. К. Лекарства. Неблагоприятные побочные реакции и контроль безопасности. М.: 2004; 256.

3. Потапнев М. П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами. Иммунология 2002; 4: 237—343.

4. Хонина Н. А., Сахно Л. В., Норкин М. Н. и др. Апоптоз лимфоцитов как возможный механизм нарушения антигенспецифического ответа при туберкулёзе лёгких. Мед иммунол 2001; 3: 1: 51—59.

5. Шилъко Т. А., Уразова О. И., Новицкий В. В. и др. Апоптоз, микро-и макроэлементный состав лимфоцитов крови у больных туберкулёзом лёгких. Клин лаб диагн 2008; 8: 24—26.

6. Новицкий В. В., Синицына В. А., Воронкова О. В. и др. Цитокинпро-дуцирующая активность мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у больных туберкулёзом лёгких до лечения и на фоне химиотерапии. Проблем тубер бол лёгких 2005; 6: 39—42.

7. Пичугин А. В., Апт А. С. Апоптоз клеток иммунной системы при туберкулёзной инфекции. Там же 2005; 12: 3—7.

8. Голъдберг Е. Д., Дыгай А. М., Шахов В. П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: 1992; 264.

9. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. и др. Оценка иммунологического статуса человека при массовых обследованиях: Методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения. Иммунология 1992; 6: 51—62.

10. Бойчук С. В., Яушев М. Ф., Мустафин И. Г. Изучение механизмов апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных ин-фильтративным туберкулёзом лёгких. Проблем тубер бол лёгких 2003; 6: 36—39.

11. Салина Т. Ю., Худзик Л. Б. Иммунопатогенетические механизмы в течении туберкулёзной инфекции. Проблем тубер 2001; 8: 32—34.

12. Sillett H. K., Cruickshank S. M., Southgate J., Trejdosiewicz L. K. Transforming growth factor-beta promotes 'death by neglect' in postactivated human T cells. Immunology 2001; 102: 3: 310—316.

13. Воронкова О. В., Уразова О. И., Новицкий В. В., Стрелис А. К. Иммунопатология туберкулёза лёгких. Томск: 2007; 194.

14. Новицкий В. В., Стрелис А. К., Ткаченко С. Б. и др. Активность ПОЛ и апоптоза при туберкулёзе лёгких. Бюллетень экспер биол мед 2005; 140: 11: 497—499.

жая с микробной, необходимая для синтеза митохондриальных белков, можно предположить, что рифампицин изменяет активность дыхательных ферментов митохондриального происхождения за счёт нарушения синтеза молекул ферментов. Это ведет к снижению синтеза АТФ, а в условиях торможения митохондриальных функций и дефицита энергии усиливается свободнорадикальное окисление молекул и инициируется программированная гибель клетки.

Заключение

Таким образом, результаты проведённого исследования свидетельствуют о том, что противотуберкулёзные препараты основного ряда способствуют индукции апоптоза лимфоцитов in vitro, что может приводить к нарушению формирования антигенспецифического ответа при туберкулёзе лёгких вследствие дефицита специфических Т-клеток и нарушения их функциональной активности. При достаточной выраженности этих иммуноингибирующих воздействий отсутствие радикального и стойкого антибактериального эффекта данных препаратов делает больного беззащитным перед лицом неискоренённой инфекции.

15. Новицкий В. В., Стрелис А. К., Уразова О. И. и др. Цитогенетический статус лимфоцитов периферической крови при туберкулёзе лёгких до лечения и на фоне химиотерапии. Проблем тубер бол лёгких 2005; 5: 43—46.

16. Masjedi M. R., Heidary A., Mohammadi F. et al. Chromosomal aberrations and micronuclei in lymphocytes of patients before and after exposure to anti-tuberculosis drugs. Mutagenesis 2000; 15: 6: 489—494.

17. Филъченков А. А. Апоптомодуляторы. Биомед хим 2003; 49: 4: 333—359.

18. Филъченков А. А., Залесский В. Н. Прижизненная неинвазивная визуализация апоптоза: состояние и перспективы исследований. Мед визуал 2003; 3: 126—131.

19. Мойбенко А. А., Досенко В. Е., Нагибин В. С. Ферментативные механизмы апоптоза. Патол физиол экспер тер 2005; 3: 17—26.

20. Lee H. C., Wei Y. H. Mitochondrial role in life and death of the cell. J Biomed Sci 2000; 7: 1: 2—15.

21. Василъева О. А., Уразова О. И., Серебрякова В. А. и др. Оценка влияния противотуберкулёзных препаратов на цитохимический статус лимфоцитов in vitro. Проблем тубер бол лёгких. 2008; 3: 27—30.

22. Bhadauria S., Singh G., Srivastava S. Isoniazid induces oxidative stress, mitochondrial dysfunction and apoptosis in Hep G2 cells. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2007; 53: 1: 102—114.

23. Schwab C. E., Tuschl H. In vitro studies on the toxicity of isoniazid in different cell lines. Hum Exp Toxicol 2003; 22: 11: 607—615.

24. Юсунбаева М. М., Карунас А. С., Бикмаева А. Р. и др. Исследование полиморфных локусов ряда генов цитокинов (TNFA, IL1B, IL1RA) и генов детоксикации ксенобиотиков (CYP1A1, CYP2E1, GSTM1) у больных инфильтративным туберкулёзом лёгких. Пульмонология 2008; 3: 59—63.

25. Yuhas Y., Berent E., Ovadiah H. et al. Rifampin augments cytokine-induced nitric oxide production in human alveolar epithelial cells. Antimicrob Agents Chemother 2006; 50: 1: 396—398.

26. Залесский В. H., Великая Н. В. Механизмы цитотоксических эффектов активных молекул кислорода и развитие апоптоза. Су-часш проблеми токсикологи [Электронный ресурс] Электрон журн 2003; 1. http://www.medved.kiev.ua/arhiv_mg/1_2003.htm

27. Каминская Г. О. Оксид азота, его биологическая роль и участие в патологии органов дыкания. Проблем тубер бол лёгких 2004; 6: 3—11.

28. Gil D., Garcia L.F., Rojas M. Modulation of macrophage apoptosis by antimycobacterial therapy: physiological role of apoptosis in the control of Mycobacterium tuberculosis. Toxicol Appl Pharmacol 2003; 190: 111—119.

О