Способ получения средства, обладающего гастропротективной, противовоспалительной, антиоксидантной активностью
METHOD OF OBTAINING MEANS OWNING GASTROSPARING, ANTI-INFLAMMATORY, ANTIOXIDANT ACTIVITY

Изобретение относится к области фармации, и касается способа получения средства, обладающего гастропротективным, противовоспалительным, антиоксидантным свойствами, на основе корней феруловидки щетинистой Ferulopsis hystrix (Bunge) Pimenov в виде экстракта сухого.
Феруловидка щетинистая (Ferulopsis hystrix (Bunge) Pimenov) это многолетнее растение семейства Apiaceae. В народной медицине F. hystrix широко применяется как противоопухолевое, коронарорасширяющее, антикоагулирующее, желчегонное, спазмолитическое, бактериостатическое средство [3, 4]. В монгольской медицине встречается в рецептах сборов, применяющихся при лечении рака легких, желудка и пищевода [20]. В тувинской народной медицине данное растение издавна получило широкое применение и в настоящее время продолжает занимать лидирующие позиции в качестве противовоспалительного, ранозаживляющего средства, а также при онкологических и инфекционных заболеваниях, в том числе при туберкулезе [13].
По данным литературы известно, что корни F. hystrix содержат кумарины, флавоноиды, фенолы и эфирные масла [11, 15, 20], стероиды β-ситостерин) [10]. Из кумариновых производных в составе корней F. hystrix обнаружены гистрицин, либанорин, ороселон, ороселол, пеуценидин, бухтармин [10, 11, 17], ангелмарин, ангелицин, вагинидиол, зосимин, 2'(S)-колумбианетин сульфат, колумбианадин, либанотин, скополетин, умбеллиферон, эвгенин и эдультин [19]. Общее содержание кумаринов в надземной и подземной частях растения составляет 3,9% и 4,6% соответственно [15, 16, 19, 20].
Известен препарат плантаглюцид, суммарный препарат из листьев подорожника большого и содержащий смесь полисахаридов. Данное средство применяется как спазмолитическое и противовоспалительное средство и предназначено для лечения больных гипацидным гастритом, а также язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки при нормальной или пониженной кислотности [9].
Известен препарат калефлон, представляющий собой очищенный экстракт из цветков календулы лекарственной. Этот препарат назначают в качестве противовоспалительного средства, стимулирующего также репаративные процессы при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и при хронических гастритах в период обострения [9].
Недостатками указанных средств являются слабо выраженная противовоспалительная, антиоксидантная, гастропротективная активность по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу.
Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих противовоспалительной, антиоксидантной, гастропротективной активностью, за счет использования широко распространенного растительного сырья, имеющего надежную и обеспеченную сырьевую базу," повышение фармакологической активности. Использование растительного средства в виде экстракта сухого, позволит получать препарат с постоянным содержанием действующих веществ.
Для этого растительный материал, состоящий из измельченных корней феруловидки щетинистой, экстрагируют трехкратно при отношении 1 мас. ч. сырья: 10 об. ч экстрагента при температуре 60°С и интенсивном перемешивании. При первом и втором контакте фаз используется экстрагент 40% этиловый спирт в течение 90 и 60 минут соответственно, при третьем контакте фаз - экстракция 30% этиловым спиртом в течение 60 минут. Спиртовое извлечение после экстракций упаривают до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений сепарируют. Полученный продукт доупаривают приблизительно до 1/5 и высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход готового продукта составляет 23,06% от массы растительного материала. Сухой экстракт представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%.
Предлагаемый способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов.
Подбор оптимального экстрагента является одним из основных факторов при получении извлечений. Для подбора типа экстрагента изучены процессы экстрагирования сырья водой очищенной, этиловым спиртом различной концентрации: 30, 40, 50, 60, 70%.
Количественная оценка экстракции велась по выходу суммы экстрактивных веществ [5, 6], а также учитывались характеристики полученных высушенных экстрактов.
Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.
С учетом характеристик сухих экстрактов, а также извлечения экстрактивных веществ предлагаем использовать 30 и 40% этанол в качестве экстрагента.
*- здесь и далее среднее значение из трех определений
На процесс экстракции, качество вытяжки и полноту выхода биологически активных веществ большое влияние оказывает измельчение растительного сырья. Сырье подвергалось измельчению до размера частиц 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 мм. Данные анализа представлены в таблице 2.
Наиболее оптимальным измельчением растительного сырья является степень измельчения 1,0-2,0 мм. Дальнейшее измельчение растительного материала нецелесообразно из-за затруднения экстрагирования (очень мелкий порошок образует с растворителем тестообразную массу, что затрудняет процесс фильтрации), а более крупное измельчение не рационально, так как в сырье замедляется процесс экстракции биологически активных веществ.
Изучена зависимость извлечения суммы экстрагируемых веществ в различных соотношениях к количеству сырья. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что оптимальное соотношение сырья и экстрагента является 1:10 для однократного залива сырья. Дальнейшее увеличение соотношения нецелесообразно ввиду незначительного повышения выхода действующих веществ, а также в связи с увеличением расхода экстрагента.
Изучено влияние температурного режима на выход экстрактивных веществ. Из данных таблицы 4 видно, что повышение температуры увеличивает выход веществ. Для получения экстракта сухого выбрана температура 60°С, которая обеспечивает оптимальное извлечение биологически активных веществ. Большее повышение температуры с одной стороны может привести к разрушению термолабильных веществ, ухудшению растворения или испарению некоторых веществ (например, эфирных масел), переходу в извлечение большого количества балластных веществ, с другой стороны -увеличивает энергозатратность производства готового продукта.
Для определения продолжительности экстракции определено время наступления равновесной концентрации в системе сырье-экстрагент при трехкратной экстракции разными типами экстрагента. Для этого массу навески сырья экстрагировали последовательно спиртами 40% и 30% в соотношении 1:10 на водяной бане при температуре 60°С при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз 40%-ым этанолом через заданные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ. Затем проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-ом контакте фаз и в 3-ем контакте - 30 или 40% спирт в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ.
По результатам данных таблицы 5 видно, что равновесное состояние наступает при 1-ом контакте фаз через 90 мин, при 2-ом и 3-ем контакте фаз по 60 мин.
Пример способа получения экстракта сухого: 1 кг корней феруловидки щетинистой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0-2,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 10 л 40%-ным спиртом этиловым в соотношении сырье : экстрагент 1:10. Первую экстракцию выполняют при температуре 60°С в течение 90 мин при постоянном перемешивании. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую экстракцию выполняют в течение 60 мин при температуре 60°С, подавая в экстрактор 40%-ный спирт этиловый в количестве, равном слитому в первой экстракции. Третью экстракцию выполняют 30%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин при той же температуре в количестве равном слитому После второй экстракции. Объединенное водно-спиртовое извлечение после экстракций последовательно порциями упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°С 8 ч. Получают 232,5 г экстракта сухого.
Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен.
Оценка гастропротективного и антиоксидантного действия средства при иммобилизационном стрессе
Исследования выполнены на 40 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-180 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ №708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986).
Животные были разделены на 6 групп: интактная, контрольная и 4 опытных. Животным I-III опытных групп в течение 7 дней до моделирования стресс-индуцированного состояния вводили внутрижелудочно средство (экстракт сухой корней феруловидки щетинистой) в дозах 50, 100 и 200 мг/кг соответственно, животным IV опытной группы - плантаглюцид в дозе 300 мг/кг. Крысы интактной и контрольной групп получали очищенную воду в эквивалентном объеме по аналогичной схеме введения. Иммобилизационный стресс моделировали общепринятым методом путем фиксации животных в положении лежа на спине в течение 24 часов [2]. Животных интактной группы стрессовому воздействию не подвергали. Через 24 часа животных декапитировали и определяли наличие деструкций в слизистой оболочке желудка, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Рассчитывали среднее количество каждого вида деструкций на 1 животное в группе. Для каждого вида повреждений подсчитывали индекс Паулса по формуле [1].
Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по приросту продукта пероксидации - малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [14]. Состояние эндогенной антиоксидантной системы характеризовали по активности каталазы в сыворотке крови [7], супероксиддисмутазы (SOD) в эритроцитах [8] и по содержанию восстановленного глутатиона (GSH) в крови [18].
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ «Biostat-2006» с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считали статистически значимыми при Р≤0,05.
Результаты исследований показали, что на фоне 24-часовой иммобилизации у животных контрольной группы наблюдались разного рода деструкции в виде кровоизлияний, точечных эрозий и полосовидных язв (таблица 6), индекс Паулса для которых составил 4,6; 2,5 и 0,4 соответственно.
Примечание: * - различия статистически значимы между контрольной и опытной группами при Р≤0,05; n - число животных в группе.
Установлено, что у 100% животных, получавших средство в дозах 50 и 100 мг/кг и плантаглюцид в дозе 300 мг/кг, на фоне иммобилизационного стресса в слизистой оболочке желудка отмечались кровоизлияния. Среднее число данных деструкций и индекс Паулса для них были на 11-14% ниже показателей контрольных животных (таблица 6). Количество эрозий у животных данных опытных групп было в 1,8 раза меньше чем в контроле. Учитывая, что данные повреждения выявлялись у 75%, 50% и 63% животных указанных опытных групп, индекс Паулса для них был в 2,3; 3,6 и 3,1 раза ниже такового в контроле. Полосовидные язвы в первой опытной группе, также как и в контрольной группе, наблюдали у половины животных, при этом среднее число данных деструкций и индекс Паулса для них были на 25% ниже, чем в контроле. Учитывая, что во второй и четвертных опытных группах полосовидные язвы отмечались у 3 из 8 животных, индекс Паулса был в 2,0 раза ниже такового в контроле. Наиболее выраженное гастропротективное влияние испытуемый экстракт проявлял в дозе 200 мг/кг. Выраженных деструктивных изменений - эрозий и полосовидных язв, у животных третьей опытной группы не отмечалось. У одного животного из восьми слизистая оболочка желудка была интактной: бледно-розовая со слегка смазанным рельефом. У 89% животных отмечались кровоизлияния, среднее число данных деструкции и индекс Паулса для них были соответственно в 2,4 и 2,7 раза ниже, чем в контроле (таблица 6).
Результаты исследований, представленные в таблице 7, свидетельствуют, что иммобилизационный стресс сопровождается активацией свободнорадикального окисления, о чем свидетельствует повышение концентрации продукта этого процесса - МДА в 2,3 раза, а также снижение активности ферментов антиоксидантной защиты организма (каталазы, SOD и GSH - в 2,1; 3,8 и 2,8 раза соответственно) по сравнению с показателями интактных животных.
Примечание: * - различия статистически значимы между контрольной и опытной группами при Р≤0,05; n - число животных в группе.
Установлено, что курсовое введение животным экстракта корней феруловидки щетинистой, в дозах 100 и 200 мг/кг и плантаглюцида в дозе 300 мг/кг вызывает снижение содержания МДА на 36%; 44% и 45% соответственно по сравнению с показателем контрольных животных. На фоне введения исследуемых средств активность каталазы повышается в среднем в 2,0 раза, содержание GSH - в 2,6; 2,8 и 2,4 раза, активность SOD - в 3,8; 2,8 и 3,4 раза соответственно по сравнению с контролем. У животных, получавших испытуемый фитоэкстракт в дозе 50 мг/кг, уровень МДА в сыворотке крови значимо не отличался от показателя контрольных животных, при этом активность каталазы была выше таковой контрольных животных в 2,0 раза, активность SOD - в 2,2 раза и содержание GSH - в 1,7 раза.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что экстракт сухой корней феруловидки щетинистой, во всех исследуемых дозах обладает гастропротективным и антиоксидантным действием. Наиболее выраженное гастропротективное и антиоксидантное действие, превосходящее таковое у плантаглюцида, испытуемое средство проявляет в дозе 200 мг/кг.
Гастропротективное действие экстракта корней феруловидки щетинистой при индометациновом повреждении желудка у белых крыс
Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180-200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ №708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986).
Животные были разделены на 4 группы: контрольная и три опытных. Животным I и II опытных групп внутрижелудочно вводили экстракт корней феруловидки щетинистой соответственно в дозах 100 и 200 мг/кг в течение 7 дней, последнее введение осуществляли за 1 час до получения ульцерогенного агента. Крысы III опытной группы получали препарат сравнения - плантаглюцид в дозе 300 мг/кг по аналогичной схеме. Крысы контрольной группы получали эквивалентное количество воды очищенной по аналогичной схеме. Повреждение слизистой оболочки желудка воспроизводили путем однократного внутрижелудочного введения животным индометацина в дозе 60 мг/кг в виде суспензии [2] на фоне 24-часовой. пищевой депривации. Через 6 часов после введения индометацина крыс забивали под легким эфирным наркозом. Для оценки состояния слизистой оболочки желудка, его разрезали по большой кривизне и подсчитывали количество деструкций, которые подразделяли на эрозии и полосовидные язвы. Рассчитывали среднее количество каждого вида деструкций на 1 животное в группе и определяли их размеры. Для каждого вида повреждений подсчитывали индекс Паулса по формуле [1].
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ «Biostat-2006» с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считали статистически значимыми при Р≤0,05.
При макроскопическом осмотре стенки желудка контрольных животных выявлено, что введение животным индометацина вызывает структурные изменения в слизистой оболочке желудка, характеризующиеся выраженной гиперемией секреторного отдела желудка, а также наличием разного рода деструкций. Так, эрозии определялись у 100% животных данной группы, полосовидные язвы - у 80%. Индекс Паулса для эрозий и полосовидных язв составлял соответственно 9,8 и 2,4 соответственно (таблица 8).
Установлено, что экстракт сухой корней феруловидки щетинистой проявляет выраженное гастропротективное влияние при индометациновом повреждении, сопоставимое с таковым у препарата сравнения - плантаглюцида. Так, если во всех опытных группах эрозии отмечались также как и в контрольной группе у 100% животных, то среднее число данных деструкций и соответственно индекс Паулса для них были соответственно на 45%, 49% и 55% ниже показателя контрольных животных. Полосовидные язвы отмечались у 40% и 20% животных, получавших экстракт феруловидки щетинистой в дозах 100 и 200 мг/кг и у 80% животных, получавших плантаглюцид в дозе 300 мг/кг. Наименьшее количество полосовидных язв и соответственно индекс Паулса для них отмечалось в группе животных, получавших экстракт феруловидки щетинистой в дозе 200 мг/кг. Так, если в первой и третьей опытных группах среднее число данных деструкции было ниже показателя контрольной группы в 1,9 и 1,4 раза, а индекс Паулса для них - в 3,8 и 1,4 раза, то во второй опытной группе среднее число полосовидных язв и индекс Паулса для них - в 5,0 и 20,0 раз соответственно относительно контроля.
Таким образом, профилактическое" введение белым крысам экстракта корней феруловидки щетинистой на фоне острого индометацинового повреждения оказывает выраженное гастропротективное действие, ограничивая развитие дистрофических и некротических процессов в стенке желудка. Экстракт корней феруловидки щетинистой в дозе 200 мг/кг оказывает более выраженное гастропротективное влияние, превосходящее таковое препарата сравнения - плантагюцида.
Оценка противовоспалительной активности экстракта корней феруловидки щетинистой
Экспериментальная работа выполнена на белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ №708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986).
Острое асептическое воспаление воспроизводили путем субплантарного введения в заднюю правую конечность крысы 0,1 мл 3% водного раствора формалина [12]. За 3 часа до введения данного раствора, а также через 5 и 18 часов после инициации воспаления животным I-IV опытных групп внутрижелудочно вводили экстракт сухой корней феруловидки щетинистой в дозах 50, 100, 200 и 300 мг/кг в виде водной взвеси в объеме 10 мл/кг. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в изоэффективной дозе 100 мг/кг по аналогичной схеме. Животные контрольной группы в равном объеме и одинаковом режиме получали воду очищенную. Выраженность отека оценивали онкометрическим методом по разнице между объемами здоровой и отечной лапки. Об антиэкссудативной активности исследуемого средства судили по степени угнетения отека: % угнетения отека = ΔVк-ΔVo/ΔVk;
где: ΔVк - разность объемов лапок с отеком и без отека у животных контрольной группы;
ΔVo - разность масс лапок с отеком и без отека у животных опытной группы.
Полученные данные представлены в таблице 9.
Примечание: * - различия статистически значимы между контрольной и опытной группами при Р≤0,05; n - число животных в группе.
Результаты исследования показали, что экстракт корней феруловидки щетинистой в дозах 50 и 100 мг/кг статистически значимо угнетает отек лапки белых крыс на 34% и 40% по сравнению с контролем. Наиболее выраженное антиэкссудативное действие испытуемый экстракт проявляет в дозах 200 и 300 мг/кг: объем отека был на 43% ниже показателя контрольных животных. У животных, получавших препарат сравнения - калефлон, разность объемов здоровой и лапки с отеком была на 22% меньше таковой у животных контрольной группы.
Таким образом, исследуемый экстракт корней феруловидки щетинистой обладает антиэкссудативной активностью, снижая степень экссудации, индуцированную флогогенным агентом - формалином. При этом противовоспалительная активность экстракта в разы превосходит таковую препарата сравнения - калефлона.
Литература
1. Амосова, Е.Н. Поиск новых противоязвенных средств из растений Сибири и Дальнего Востока / Е.Н. Амосова, Е.П. Зуева, Т.Г. Разина и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1998. - Т. 61, №6. - С. 31-35.
2. Багинская, А.И. Экспериментальные модели эрозивно-язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки / А.И. Багинская, Е.В. Ферубко, Е.Н. Курманова, Е.Н. Воскобейникова, В.К. Колхир, Н.И. Сидельников. - М., 2017. - 96 с.
3. Блинова, К.Ф. Лекарственные растения тибетской медицины Забайкалья / К.Ф. Блинова, В.Б. Куваев // Вопросы фармакогнозии. - 1965. - Вып. 3. - С. 163-178.
4. Варлаков, М.Н. Избранные труды / под ред. А.Д. Туровой. - М., 1963. - 172 с.
5. Государственная фармакопея XIII издания, http://pharmacopoeia.ru/gosudarstvennaya-farmakopeya-xiii-online-gf-13-online/
6. Государственная фармакопея СССР XI издание. Т. 1. - М., 1987. - 295 с.
7. Королюк, М.А. Методы определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова // Лабораторное дело. - 1988. - №6. - С. 16-19.
8. Макаренко, Е.В. Комплексное определение активности супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в эритроцитах у больных с хроническими заболеваниями печени / Е.В. Макаренко // Лабораторное дело. - 1988. - №11. - С. 48-50.
9. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - М.: Новая волна, 2012, - 1216 с.
10. Никонов, Г.К. Химико-фармацевтическое изучение некоторых природных кумаринов / Г.Г. Никонов. Автореф. дис. … д-ра фармац. наук. - Л., 1964. - 32 с.
11. Растительные ресурсы: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. Т. 3. Семейство Fabaceae - Apiaceae / Отв. ред. А.Л. Буданцев. - СПб; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2010. - 601 с.
12. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть I / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.
13. Серенот, С.К. Тувинская народная медицина: лекарственные растения, травы, лишайники, грибы с параллельным описанием их использования в китайской, монгольской и тибетской медицинах / С.К. Серенот. - Кызыл, 2009. - 264 с.
14. Стальная, И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью ТБК /И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - С. 66-68.
15. Тараскин, В.В. Сравнительный анализ состава эфирного масла Phlojodicarpus turczaninovii sipl. (aplaceae), произрастающего в Монголии и Бурятии / В.В. Тараскин, Л.Д. Раднаева, С.В. Жигжитжапова, О.А. Аненхонов, Ж. Ганбаатар // Вестник Бурятского государственного университета. 2011. - Вып. 3. - С. 111-115.
16. Тараскин, В.В. Выделение рабочего стандартного образца пеуценидина - ангулярного фурокумарина зонтичных флоры Бурятии и Монголии / В.В. Тараскин, Л.Д. Раднаева, Э.Э. Шульц, Ж. Ганбаатар, И.Г. Николаева // Экологобезопасные и ресурсосберегающие технологии и материалы. - Улан-Удэ, 2014. - С. 231-232.
17. Щагалов, Л.И. Фуранокумарины корней Peucedanum hystrix / Л.И. Шагалов, Г.А. Кузнецова, Л.П. Маркова, В.М. Виноградова // Химия природных соединений. - 1981. - №4. -С. 518-523.
18. Akerboom, T.P.M. Assay of glutathione, glutathione disulfide and glutathione mixed disulfides in biological samples / T.P.M. Akerboom, H. Sies // Methods Enzymol. - 1981. - Vol. 77. - P. 373-382.
19. Ganbaatar, J. Coumarins from Peucedanum hystrix growing in Mongolia / J. Ganbaatar, E.E. Shults, D. Otgonsuren, L.D. Radnaeva, V.V. Taraskin, D. Badamkhand // Mongolian Journal of Chemistry. - 2011. - №12. - P. 42-49.
20. Shults, E.E. Plant coumarins. IX.* Phenolic compounds of Ferulopsis hystrix growing in Mongolia. Cytotoxic activity of 8,9-dihydrofurocoumarins / E.E. Shults, Zh. Ganbaatar, T.N. Petrova // Chemistry of Natural Compounds. - 2012. - Vol. 48, №2. - P. 211-217.