ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ПРОТИВОВИРУСНОГО ПРЕПАРАТА И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЭТИМ ПРЕПАРАТОМ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF ANTIVIRAL PREPARATION AND METHOD FOR PREVENTION AND TREATMENT OF VIRAL DISEASES BY THIS PREPARATION

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, а именно к разработке фармацевтической композиции и способу применения противовирусного препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro, обладающего противовирусным действием.
Актуальность разработки новых противовирусных препаратов определяется широким распространением вирусных заболеваний, таких как грипп, герпес, цитомегаловирусные инфекции, гепатит и т.д., и недостаточностью лекарственных препаратов для их лечения. В последние годы наблюдается популяционное снижение иммунитета, связанное с ухудшением среды обитания человека, что также способствует увеличению вирусных заболеваний.
Известен способ профилактики и лечения вирусных заболеваний, включающий применение лекарственного средства [Ридостин, Циклоферон, Даларгин, Гриппферон, Арбидол-Лэнс, Ацикловир-Акри]. Однако данный известный способ не во всех случаях эффективен.
Известна фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний, включающая 0,004-0,040 г гидрохлорида 2-бензилбензимидазола гидрохлорида (дибазол), 0,025-0,100 г аскорбиновой кислоты и 0,0005-0,005 г дипептида мононатриевой соли L-глутамил-L-триптофана (тимоген) в качестве иммуномодулятора, которую можно рассматривать в качестве прототипа [патент РФ №2165254]. В данной композиции дибазол выполняет функции индуктора эндогенного интерферона, дипептид является иммуномодулятором, аскорбиновая кислота антиоксидантом. В прототипе предлагается фармацевтическая композиция, которая собирается в одну лекарственную форму, которая может быть расфасована в желатиновые капсулы или выпускаться в виде таблеток или таблеток, покрытых оболочкой. Недостатком этой известной композиции является сложность ее производства, требуются специальные меры защиты дипептида в желудочно-кишечном тракте от протеолиза.
Указанный технический результат достигается применением дипептида формулы (I) Gly-Pro в качестве противовирусного препарата в водном растворе. Подобные пептиды, относящиеся к глипролинам, устойчивы в желудочно-кишечном тракте и в то же время, как показывают примеры, обладают специфическим противовирусным действием. Фармацевтическая композиция, содержащая дипептид формулы (I) Gly-Pro, проста в изготовлении, что сильно снижает стоимость лекарственного препарата.
Известен способ профилактики и лечения вирусных заболеваний за счет применения гептапептида Селанк формулы Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro путем интраназального введения его 0,12-0,18% раствора в суточной дозе 550-650 мкг в течение 10-18 дней [патент РФ №2337703, 10.11.2008 г., бюл. №31, Андреева Л.А., Ершов Ф.И., Зозуля А.А., Мезенцева М.В., Мясоедов Н.Ф., Середенин С.Б., Сургучева И.М., Учакина О.Н., Учакин П.Н., Средство профилактики и лечения вирусных заболеваний и способ профилактики и лечения вирусных заболеваний].
Данный способ можно считать прототипом предлагаемого изобретения.
Техническим результатом, достигаемым при реализации настоящего изобретения, является расширение ассортимента противовирусных лекарственных средств, повышение эффективности профилактики и лечения вирусных заболеваний, снижение стоимости препарата за счет значительного упрощения синтеза предлагаемого дипептида формулы (I) Gly-Pro вместо гептапептида Селанк.
Указанный технический результат достигается тем, что дипептид формулы (I) Gly-Pro применяют в качестве средства профилактики и лечения вирусных заболеваний вирусной этиологии (грипп, герпес, цитомегаловирусные инфекции) в следующей фармацевтической композиции.
Фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний, содержащая водный раствор дипептида формулы (I) Gly-Pro, отличается тем, что содержит дипептид формулы (I) Gly-Pro в концентрации 0,9-1,5%, дополнительно нипагин в качестве консерванта при следующем соотношении компонентов, г/л:
дипептид формулы (I)
9,0-15,0
нипагин
0,9-1,1
дистиллированная вода
до 1 л.
Достигается указанный технический результат за счет способа профилактики и лечения вирусных заболеваний, предусматривающего применение лекарственного препарата, где в качестве лекарственного препарата используют дипептид формулы (I) Gly-Pro путем интраназального введения его 0,9-1,5%-ного раствора в суточной дозе 12-20 мг/сутки в течение 2-3 дней, а именно:
способа профилактики вирусных заболеваний, включающего введение фармацевтической композиции 2 капли в каждый носовой ход 6 раз в сутки течение 2 суток;
способа лечения вирусных заболеваний, включающего введение фармацевтической композиции 3 капли в каждый носовой ход 7 раз в сутки в течение 3 суток.
Собственными исследованиями было установлено, что препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro способен подавлять репродукцию вирусов гриппа, вируса простого герпеса (ВПГ) 1 и 2 типов, цитомегаловирусные инфекции и может быть применен для профилактики и лечения вирусных заболеваний, вызванных вирусами, не оказывая при этом неблагоприятного побочного действия.
Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение.
Пример 1. Изучение влияния способа введения препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro на противовирусную активность в отношении вируса энцефаломиокардита (ВЭМК)
Исследования проводились на белых беспородных мышах весом 14-16 грамм по 5 мышей на каждый способ введения. Животных инфицировали вирусом энцефаломиокардита (ВЭМК).
Препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в концентрациях 1%; 0,5%; 0,2%; 0,1% с добавкой 0,1% нипагина в качестве консерванта вводили животным внутрибрюшинно, интраназально, перорально по 0,2 мл/мышь в момент заражения.
Контрольную группу составляли мыши, зараженные гриппом и получавшие плацебо. Срок наблюдения - 15 дней.
Противовирусный эффект препарата оценивали по выживаемости мышей (% выживаемости, % защиты, средняя гармоническая величина времени жизни).
Оценку активности препарата проводили, учитывая:
1) среднюю гармоническую величину времени жизни для каждой группы мышей, включающую в себя информацию о всех особях, вычисляемую по формуле:
1
1
2
2
a
a
1/τ=(X/t+X/t+…+X/t):n, где t - день гибели животных, Х - количество погибших животных в день t, а - день наблюдения; n - количество животных в группе (5 мышей);
2) кратность защиты (КЗ) - кратность уменьшения количества заболевших и павших животных в опытной группе по сравнению с контролем, вычисляемую по формуле:
КЗ = % павших животных в контрольной группе/% павших животных в опытной группе;
3) индекс эффективности препарата (ИЭ), вычисляемый по формуле:
ИЭ=[(КЗ-1)/КЗ]×100%.
Таблица 1
Противовирусная активность препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro при разных способах введения в отношении вируса энцефаломиокардита
№ п.п.
Способ введения
Концентрация препарата
% выживаемости
% защиты
τ*
1
перорально
0,5
20
20
7,63
2
интраназально
0,5
40
40
8,33
3
внутрибрюшинно
0,5
20
20
7,14
4
контроль
100 LD50
0
0
5,35
Примечание: τ* - средняя гармоническая величина времени жизни животных.
Исследования противовирусной активности препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в отношении ВЭМК показали, что препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro способствует защите 20-40% мышей в зависимости от способа введения. Наибольшая защита наблюдалась при интраназальном способе введения препарата.
Пример 2. Изучение способа введения препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro на противовирусную активность в отношении вируса гриппа A/Aichi/1/68
Исследования проводились на белых беспородных мышах весом 14-16 грамм по 5 мышей на каждый способ введения. Животных инфицировали вирусом гриппа A/Aichi/1/68. Препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в концентрации 0,5% с добавкой 0,1% нипагина в качестве консерванта вводили животным внутрибрюшинно, интраназально, перорально по 0,3 мл/мышь в момент заражения. Контрольная группа состояла из 10 мышей, зараженных гриппом и получивших плацебо. Срок наблюдения - 15 дней. Противовирусный эффект препарата оценивали по выживаемости мышей (кратность защиты (КЗ), индекс эффективности препарата (ИЭ), τ* - средняя гармоническая величина времени жизни животных).
Таблица 2
Противовирусная активность препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro при разных способах введения в отношении вируса гриппа A/Aichi/1/68
№ п.п.
Способ введения
Концентрация препарата
Кратность защиты (КЗ)
Индекс эффективности препарата (ИЭ)
1
перорально
0.5
1,25
20
2
интраназально
0,5
1,67
60
3
внутрибрюшинно
0,5
1,25
40
4
контроль вируса
100 LD50
1,0
0
Исследование противовирусной активности препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в отношении вируса гриппа A/Aichi/1/68 показала, что препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro способствует защите 20-40% мышей в зависимости от способа введения. Наибольшая защита наблюдалась при интраназальном способе введения.
Пример 3. Изучение влияния дозы вводимого препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro на противовирусную активность в отношении вируса энцефаломиокардита мышей (ВЭМК)
Исследования проводились на мышах весом 14-16 грамм - по 5 мышей на каждую точку. Животных заражали вирусом энцефаломиокардита (ВЭМК) в дозе 100 LD50.
Препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в концентрациях 1%; 0,5%; 0,2%; 0,1% с добавкой 0,1% нипагина в качестве консерванта вводили животным интраназально по 0,2 мл/мышь в момент заражения. Контрольную группу составляли мыши, зараженные ВЭМК и получавшие плацебо. Срок наблюдения - 15 дней. Противовирусный эффект препарата оценивали по выживаемости мышей (% выживаемости, % защиты, средняя гармоническая величина времени жизни) по формулам, приведенным выше (см. пример 2). Данные приведены в таблице 3.
Таблица 3
Зависимость противовирусной активности в отношении вируса ВЭМК от дозы препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro
№ п.п.
Вводимая доза препарата, %
% выживаемости
% защиты
τ*
1
1,0
20
20
6,76
2
0,5
40
40
8,33
3
0,2
20
20
8,06
4
0,1
40
40
9,80
контроль
0
0
0
5,35
Как видно из приведенных данных, наилучший результат по отношению к вирусу энцефаломиокардита достигается при введении интраназально 0,09-0,15% раствора препарата с добавкой 0,1% нипагина в качестве консерванта, что соответствует введению примерно 12-14 мг/кг в сутки.
Пример 4. Изучение влияния дозы вводимого препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro на противовирусную активность в отношении вируса гриппа A/Aichi/1/68
Исследования проводились на белых беспородных мышах весом 14-16 грамм - по 5 мышей на каждый способ введения. Животных заражали вирусом гриппа A/Aichi/1/68.
Препарат на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro в концентрациях 1%; 0,5%; 0,2%; 0,1% вводили животным интраназально по 0,3 мл/мышь в момент заражения.
Контрольная группа состояла из 10 мышей, зараженных вирусом гриппа A/Aichi/1/68 и получавших плацебо. Срок наблюдения - 15 дней. Противовирусный эффект препарата оценивали по выживаемости мышей (кратность защиты (КЗ), индекс эффективности препарата (ИЭ)). Полученные данные приведены в таблице 4.
Таблица 4
Зависимость противовирусной активности от дозы препарата
№ п.п.
Вводимая доза препарата (% раствор препарата)
Кратность защиты (КЗ)
Индекс эффективности препарата (ИЭ)
1
1,0
1,25
20
2
0,5
1,67
40
3
0,2
1,25
20
4
0,1
1,67
40
контроль
0
1,0
0
Как видно из приведенных данных, наилучший результат по отношению к вирусу гриппа A/Aichi/1/68 достигается при введении интраназально 0,3 мл 0,09-0,15% раствора препарата, содержащего 0,1% нипагина в качестве консерванта, что соответствует введению 18-20 мг/кг в сутки.
Таким образом, данные, приведенные в таблицах 3-4, показывают, что дозы 12-20 мг/кг в сутки при интраназальном способе введения обеспечивают противовирусную защиту животных.
Пример 5. Исследование противовирусной активности препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro при разных схемах введения
Исследовалась эффективность препарата при инфекции, вызванной вирусом энцефаломиокардита мышей (ВЭМК), при введении по следующим схемам:
профилактика -
1) за 24 часа до заражения;
2) 2 дня подряд за 24 и 48 часов до заражения;
лечение -
1) через 24 часа после заражения;
2) через 24 и 48 часов после заражения;
3) 3 раза подряд через 24, 48 и 72 часа после заражения.
Препарат вводили, исходя из предыдущих экспериментов, интраназально.
Заражение проводили вирусом энцефаломиокардита мышей (ВЭМК) в дозе 100 LD50.
Результаты по изучению противовирусной активности препарата при разных схемах введения в отношении вируса гриппа на модели экспериментальной инфекции, вызванной ВЭМК у мышей, представлены в таблице 5. Показано, что препарат защищал животных от действия ВЭМК. Выживших животных было при профилактической схеме введения препаратов в 3,5 больше по сравнению с контролем и в 4 раза - при использовании препарата на основе дипептида формулы (I) Gly-Pro для лечения мышей.
Таблица 5
Выживаемость мышей при разных схемах введения препарата
Схема введения препарата
% выживаемости
Профилактическое1-разовое введение за 24 часа до инфицирования
50
Профилактическое2-разовое введение за 48 и 24 часа до инфицирования
70
Лечение1-разовое введение через 24 часа после инфицирования
60
Лечение2-разовое введение через 24 инфицирования и 48 часов после инфицирования
60
Лечение3-разовое через 24, 48 и 72 часа после инфицирования
80
Контроль
20
Полученные данные показали, что наибольший противовирусный эффект в отношении ВЭМК достигается при введении препарата до заражения один раз в сутки в течение двух суток, а в случае лечения после заражения вирусом - один раз в сутки в течение трех суток.
В целом приведенные примеры показывают противовирусный эффект препарата при интраназальном способе введения животным в дозе 12-20 мг/кг в сутки. Для профилактики препарат вводится в течение двух суток, в случае лечения - в течение трех суток.
Из данных, приведенных в таблицах 3 и 4, следует, что эффективность препарата при интраназальном способе введения мышам при использовании 0,1%; 0,2%; 0,5%; 1,0% раствора препарата с добавлением 0,1% нипагина в качестве консерванта примерно одинакова. Однако для создания суточной дозы 12-20 мг/кг сутки удобно использовать 1% раствор препарата. В этом случае суточная доза 12 мг/сутки соответствует 24 каплям, т.е. 2 капли в каждый носовой ход 6 раз в сутки, а суточная доза 20 мг/сутки соответствует 40 каплям, т.е. 3 капли в каждый носовой ход 7 раз в сутки.