СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗИГОТНОСТИ ГЕНА FAD3 В КАНОЛЕ

1. Способ определения зиготности растения канолы, содержащего ген fad-3c, причем упомянутый способ включает в себя:
получение геномного образца ДНК от упомянутого растения канолы;
получение приведенного в контакт образца посредством приведения упомянутого геномного образца ДНК в контакт с первым праймером и вторым праймером, причем упомянутый первый праймер преимущественно связывается с участком упомянутого гена fad-3c, расположенным против хода транскрипции от локализации представляющего интерес однонуклеотидного полиморфизма, упомянутый второй праймер преимущественно связывается с участком упомянутого гена fad-3c, расположенным по ходу транскрипции от представляющего интерес однонуклеотидного полиморфизма, причем упомянутый первый праймер и упомянутый второй праймер производят ампликон, когда подвергаются условиям полимеразной цепной реакции (ПЦР);
подвергание упомянутого приведенного в контакт образца условиям ПЦР, причем производится упомянутый ампликон;
предоставление возможности каждому из первого флуоресцентного зонда и второго флуоресцентного зонда гибридизоваться с ампликоном в течение периода времени и при температуре 50-70 градусов Цельсия, причем упомянутый первый флуоресцентный зонд преимущественно гибридизуется с упомянутым ампликоном, когда упомянутый представляющий интерес однонуклеотидный полиморфизм не присутствует в упомянутом ампликоне, упомянутый второй флуоресцентный зонд преимущественно гибридизуется с упомянутым ампликоном, когда упомянутый представляющий интерес однонуклеотидный полиморфизм присутствует в упомянутом ампликоне;
повышение упомянутой температуры после периода времени, определенного на стадии предоставления возможности;
регистрацию упомянутой флуоресценции, создаваемой каждым из упомянутых первого и второго зондов во время стадии повышения; и
определение зиготности упомянутого растения канолы, причем стадия определения содержит сравнение флуоресценции, создаваемой каждым из первого и второго зондов, причем флуоресценция первого и второго зондов, преимущественно соответствующая флуоресценции, создаваемой в гомозиготном SNP-положительном контрольном образце, указывает на наличие упомянутого представляющего интерес однонуклеотидного полиморфизма, флуоресценция первого и второго зондов, преимущественно соответствующая флуоресценции, создаваемой в гомозиготном SNP-отрицательном контрольном образце, указывает на отсутствие наличия упомянутого представляющего интерес однонуклеотидного полиморфизма, и флуоресценция первого и второго зондов, преимущественно соответствующая флуоресценции, создаваемой в гетерозиготном SNP-положительном контрольном образце, указывает на то, что упомянутое растение канолы содержит первый аллель, содержащий упомянутый представляющий интерес однонуклеотидный полиморфизм, и второй аллель, не содержащий упомянутый представляющий интерес однонуклеотидный полиморфизм.
2. Способ по п. 1, в котором упомянутые ампликоны состоят из 91-154 пар оснований.
3. Способ по п. 1, в котором упомянутый однонуклеотидный полиморфизм состоит из полиморфизма G->A.
4. Способ по п. 3, в котором упомянутая последовательность дикого типа содержит в упомянутой локализации глицин.
5. Способ по п. 1, в котором упомянутый способ применяют для верификации интрогрессии при селекции у кроссбредных растений канолы.
6. Способ по п. 1, в котором упомянутые праймеры содержат SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, и упомянутые первый и второй зонд содержат SEQ ID NO: 5 и 4.
7. Способ по п. 1, в котором упомянутые первый и второй зонды помечены как флуоресцентным красителем, так и гасителем.
8. Способ по п. 7, в котором упомянутый первый зонд содержит FAM в качестве упомянутого флуоресцентного красителя на 5'-конце упомянутого первого зонда и MGB-гаситель на 3'-конце упомянутого первого зонда.
9. Способ по п. 7, в котором упомянутый второй зонд помечен VIC на 5'-конце упомянутого второго зонда и MGB-гасителем на 3'-конце упомянутого второго зонда.
10. Способ по п. 1, в котором упомянутый второй зонд содержит SEQ ID NO: 4.
11. Способ по п. 1, в котором результаты флуоресценции упомянутого способа считывают непосредственно в планшет-ридере.
12. Способ по п. 1, в котором упомянутый образец ДНК получают от растения канолы в поле.
13. Способ по п. 1, в котором стадия повышения включает в себя повышение упомянутой температуры с по существу однородными приращениями температуры за период времени.
14. Способ по п. 1, в котором упомянутую флуоресценцию, создаваемую каждым из упомянутых первого и второго зондов во время стадии повышения, регистрируют на стадии регистрации во время каждого приращения на стадии повышения.
15. Набор для осуществления способа по п. 1, причем упомянутый набор содержит упомянутый первый праймер, упомянутый второй праймер, упомянутый первый зонд и упомянутый второй зонд.
16. Набор по п. 15, в котором упомянутый первый праймер состоит из SEQ ID NO: 2, упомянутый второй праймер состоит из SEQ ID NO: 3, упомянутый первый зонд состоит из SEQ ID NO: 5, и упомянутый второй зонд состоит из SEQ ID NO: 4.