СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО СВЯЗЫВАЮЩЕГО ПАРТНЕРА МУЛЬТИСПЕЦИФИЧНОГО СВЯЗУЮЩЕГО

1. Способ определения in vitro наличия и/или концентрации связывающего партнера, который может быть специфически связан с первой областью связывания мультиспецифического связующего, в котором связывающий партнер, связанный с мультиспецифическим связующим, элиминируют из образца перед детекцией связывающего партнера путем инкубации образца с моноспецифическим связующим, специфически связывающимся со второй областью связывания мультиспецифического связующего.
2. Способ иммунологического определения в образце наличия и/или концентрации связывающего партнера мультиспецифического связующего с помощью иммунологического анализа, в котором мультиспецифическое связующее элиминируют из образца перед детекцией связывающего партнера.
3. Способ определения in vitro наличия и/или концентрации связывающего партнера мультиспецифического связующего, в котором связывающий партнер может быть специфически связан с первой областью связывания мультиспецифического связующего, включающий этап:
инкубации образца, содержащего связывающий партнер и мультиспецифическое связующее, с моноспецифическим связующим, которое специфически связывается со второй областью связывания мультиспецифического связующего, отличной от первой области связывания.
4. Способ определения in vitro наличия и/или концентрации антигена мультиспецифического антитела в образце, в котором антиген, подлежащий определению, может быть специфически связан с первой областью связывания мультиспецифического антитела, включающий этап:
инкубации образца, содержащего мультиспецифическое антитело, связанный с мультиспецифическим антителом антиген и свободный антиген, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй областью связывания мультиспецифического антитела, отличной от первой области связывания.
5. Способ по п. 3 или 4, дополнительно в качестве второго этапа включающий следующий этап:
- элиминации из образца комплекса моноспецифическое связующее -мультиспецифическое связующее перед определением наличия и/или концентрации свободного связывающего партнера.
6. Способ по п. 3 или 4, включающий в качестве заключительного этапа:
- определение концентрации связывающего партнера в образце, из которого элиминировано мультиспецифическое связующее.
7. Способ по пп. 2, 3 или 4, включающий следующие этапы:
- инкубации образца, содержащего связывающий партнер и мультиспецифическое связующее, с моноспецифическим связующим, которое специфически связывается со второй областью связывания мультиспецифического связующего, отличной от первой области связывания,
- элиминации из образца комплекса моноспецифическое связующее -мультиспецифическое связующее перед определением наличия или концентрации свободного связывающего партнера, и
- определения концентрации связывающего партнера в образце, из которого элиминировано мультиспецифическое связующее.
8. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что связывающий партнер выбран из группы, включающей антиген, мишень и аналит.
9. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что связывающий партнер представляет собой не входящий в состав комплекса связывающий партнер, или свободный связывающий партнер.
10. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что область связывания представляет собой сайт связывания или пару вариабельных доменов тяжелой цепи антитела и легкой цепи антитела.
11. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что мультиспецифическое связующее выбрано из антитела, химерного полипептида, содержащего антитело или фрагмент антитела и полипептид, не являющийся антителом, химерного полипептида, содержащего антитело или фрагмент антитела и растворимый рецептор, или химерного полипептида, содержащего антитело или фрагмент антитела и пептидную связывающую молекулу.
12. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что мультиспецифическое связующее представляет собой антитело.
13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что определение наличия и/или концентрации антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, со связывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело - антиген, и
- установление зависимости между формированием комплекса захватывающее антитело - антиген и концентрацией антигена в образце.
14. Способ по п. 8, отличающийся тем, что определение концентрации антигена включает следующие этапы:
инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело - антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело - антиген с меченым антителом, в ходе которой захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена, и
- установление зависимости между формированием комплекса захватывающее антитело - антиген - меченое антитело и концентрацией антигена в образце.
15. Способ по п. 8, отличающийся тем, что определение концентрации антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело - антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело - антиген с меченым антителом, в ходе которой захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело - антиген - меченое антитело с детектирущим антителом, содержащим детектируемую метку, в ходе которой детектирующее антитело специфически связывается с эпитопом меченого антитела, находящимся за пределами вариабельных доменов меченого антитела, и
- установление зависимости между формированием комплекса захватывающее антитело - антиген - меченое антитело и концентрацией антигена в образце.
16. Способ по п. 11, отличающийся тем, что антитело представляет собой биспецифическое антитело или триспецифическое антитело, или тетраспецифическое антитело, или пентаспецифическое антитело, или гексаспецифическое антитело.
17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что антитело представляет собой биспецифическое антитело.
18. Способ по п. 11, отличающийся тем, что антитело представляет собой биспецифическое антитело, имеющее первую область связывания, которая специфически связывается с первым антигеном или первым эпитопом антигена, а также имеющее вторую область связывания, которая специфически связывается со вторым антигеном или вторым эпитопом антигена.
19. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что моноспецифическое связующее представляет собой антиидиотипическое антитело.
20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
- инкубацию образца, содержащего мультиспецифическое антитело, связанный с мультиспецифическим антителом антиген и свободный антиген, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй областью связывания мультиспецифического антитела, отличной от первой области связывания, для образования комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело, и
- удаление из образца комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело.
21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
- инкубацию образца, содержащего антиген и мультиспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй областью связывания мультиспецифического антитела, отличной от первой области связывания, для образования комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело,
- удаление из образца комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело, и
- определение концентрации антигена в образце, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело.
22. Способ по п. 20 или 21, отличающийся тем, что комплекс антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело представляет собой смесь комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело и комплекса антиидиотипическое антитело - мультиспецифическое антитело - антиген.
a
5
23. Способ по п. 19, отличающийся тем, что константа ассоциации k, характеризующая связывание антиидиотипического антитела со второй областью связывания мультиспецифического антитела, равна 10 л/моль*с или более.
D
-8
24. Способ по п. 19, отличающийся тем, что значение K, характеризующее связывание антиидиотипического антитела со второй областью связывания мультиспецифического антитела, равно 5·10 моль/л или менее.
25. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что инкубация с антиидиотипическим антителом составляет от приблизительно 10 минут до приблизительно 36 часов.
26. Способ по п. 12, отличающийся тем, что концентрацию мультиспецифического антитела в образце доводят до значения приблизительно от 2 мкг/мл до приблизительно 15 мкг/мл.
27. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что общую концентрацию антигена в образце доводят до значения приблизительно от 1 нг/мл до приблизительно 250 нг/мл.
28. Способ по п. 19, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело связано или конъюгировано с твердой фазой.
29. Способ по п. 19, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело конъюгировано (иммобилизовано) с использованием специфически связывающейся пары.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что связывающаяся пара (первый компонент/второй компонент) выбрана из стрептавидина или авидина/биотина, антитела/антигена, лектина/полисахарида, стероида/стероид-связывающего белка, гормона/рецептора гормона, фермента/субстрата, IgG/белка А и/или G.
31. Способ по п. 29 или 30, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело конъюгировано с биотином и иммобилизовано с использованием иммобилизованного авидина или стрептавидина.
32. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело биотинилировано, а твердая фаза покрыта стрептавидином.
33. Способ по п. 19, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело представляет собой биотинилированное антиидиотипическое антитело, направленное против мультиспецифического связующего и конъюгированное с твердой фазой при помощи стрептавидина.
34. Способ по п. 28, отличающийся тем, что твердая фаза представляет собой покрытые стрептавидином парамагнитные гранулы или покрытые стрептавидином гранулы сефарозы.
35. Способ по п. 19, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело представляет собой смесь, содержащую по меньшей мере два антиидиотипических антитела, которые различаются сайтами, по которым они конъюгированы с твердой фазой.
36. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что смесь антиидиотипических антител содержит антиидиотипическое антитело, конъюгированное с твердой фазой по меньшей мере через две различные аминогруппы.
37. Способ по п. 28, отличающийся тем, что конъюгацию антиидиотипического антитела с его партнером для конъюгации осуществляют путем химического связывания по N-концевым и/или ε-аминогруппам (лизина), и/или ε-аминогруппам различных лизинов, карбоксильным, сульфгидрильным, гидроксильным и/или фенольным функциональным группам аминокислотного скелета терапевтически активного антитела и/или спиртовым группам углеводной структуры терапевтически активного антитела.
38. Способ по п. 28, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело конъюгировано с твердой фазой при помощи пассивной адсобрции.
39. Способ по пп. 1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что образец содержит мультиспецифическое антитело, свободный антиген и комплексы мультиспецифическое антитело - антиген, а определению подлежит свободный антиген мультиспецифического антитела.
40. Применение антиидиотипического антитела, которое специфически связывается с первой областью связывания мультиспецифического антитела, для элиминации из образца антигена, связанного со второй областью связывания мультиспецифического антитела.