АГРЕГАЦИЯ, ЗАВИСЯЩАЯ ОТ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

1. Способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноглобулин, включающий следующие этапы:
a) выравнивание аминокислотной последовательности четвертой каркасной области тяжелой цепи иммуноглобулина по отношению к референсной последовательности xxxxTTxTxSS (SEQ ID NO: 01) или ххххТххТххх (SEQ ID NO: 11) с целью достижения максимального уровня идентичности аминокислотных последовательностей,
b) определение в выровненных аминокислотных последовательностях положений с отличающимися аминокислотными остатками в четвертой каркасной области тяжелой цепи и в референсной последовательности;
c) модификация иммуноглобулина путем замены аминокислотного остатка в четвертой каркасной области тяжелой цепи в положении, определенном на этапе b), который является треонином или серином в референсной последовательности, и при этом не является треонином или серином в четвертой каркасной области тяжелой цепи, на соответствующий остаток треонина или серина, присутствующий с референсной последовательности;
d) предложение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноглобулин.
2. Способ гуманизирования иммуноглобулина, включающий следующие этапы:
a) выравнивание аминокислотной последовательности четвертой каркасной области тяжелой цепи иммуноглобулина по отношению к референсной последовательности xxxxTTxTxSS (SEQ ID NO: 01) или ххххТххТххх (SEQ ID NO: 11) с целью достижения максимального уровня идентичности аминокислотных последовательностей,
b) определение в выровненных аминокислотных последовательностях положений с отличающимися аминокислотными остатками в четвертой каркасной области тяжелой цепи и в референсной последовательности;
c) гуманизирование иммуноглобулина путем замены аминокислотного остатка в четвертой каркасной области тяжелой цепи в положении, определенном на этапе b), который является треонином или серином в референсной последовательности, и при этом не является треонином или серином в четвертой каркасной области тяжелой цепи, на соответствующий остаток треонина или серина, как в референсной последовательности;
d) возможно, предложение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированный иммуноглобулин.
3. Способ получения иммуноглобулина, включающий следующие этапы:
a) выравнивание аминокислотной последовательности четвертой каркасной области тяжелой цепи иммуноглобулина по отношению к референсной последовательности xxxxTTxTxSS (SEQ ID NO: 01) или ххххТххТххх (SEQ ID NO: 11) с целью достижения максимального уровня идентичности аминокислотных последовательностей,
b) определение в выровненных аминокислотных последовательностях положений с отличающимися аминокислотными остатками в четвертой каркасной области тяжелой цепи и в референсной последовательности;
c) модификация иммуноглобулина путем замены аминокислотного остатка в четвертой каркасной области тяжелой цепи в положении, определенном на этапе b), который является треонином или серином в референсной последовательности, и при этом не является треонином или серином в четвертой каркасной области тяжелой цепи, на соответствующий остаток треонина или серина, как в референсной последовательности;
d) культивирование клетки млекопитающего, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность модифицированной тяжелой цепи иммуноглобулина, и нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность соответствующей легкой цепи, для экспрессии тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина;
e) выделение иммуноглобулина из клетки млекопитающего или культуральной среды и, таким образом, получение иммуноглобулина.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что референсная аминокислотная последовательность представляет собой ххххТххТххх (SEQ ID NO: 11).
5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что определение и модификация производятся в отношении аминокислотного остатка треонина в положении 5 и/или 8 референсной аминокислотной последовательности.
6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что референсная последовательность представляет собой последовательность WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 02), или последовательность WGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 03), или последовательность WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 04), или последовательность WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 05), или последовательность WGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 06).
7. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что этап модификации представляет собой модификацию иммуноглобулина путем замены аминокислотного остатка в четвертой каркасной области тяжелой цепи в положении, определенном на предыдущем этапе, который является треонином в референсной последовательности, и при этом не является треонином в четвертой каркасной области тяжелой цепи, на соответствующий остаток треонина, как в референсной последовательности.
8. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что способ включает в качестве первого этапа предложение или определение аминокислотной последовательности четвертой каркасной области тяжелой цепи иммуноглобулина.
9. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что иммуноглобулин является иммуноглобулином человека или гуманизированным иммуноглобулином.
10. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что иммуноглобулин является химерным иммуноглобулином, или иммуноглобулином с пересаженной областью CDR, или иммуноглобулином с отсутствующим эпитопом для Т-клеток, или их вариантом.
11. Способ по п.3, отличающийся тем, что клетка млекопитающего является клеткой СНО или клеткой НЕК.