РЕАКТИВ И НАБОР РЕАКТИВОВ ДЛЯ АНАЛИЗА НЕЗРЕЛЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ

1. Реактив для анализа незрелых лейкоцитов, включающий:
поверхностно-активное вещество, которое способно повреждать клеточные мембраны эритроцитов и зрелых лейкоцитов,
солюбилизирующее вещество, которое вызывает сжатие поврежденных клеток крови, и
краситель для окрашивания нуклеиновой кислоты,
причем реактив имеет осмотическое давление не ниже, чем 10 мОсм/кг и ниже, чем 150 мОсм/кг.
2. Реактив по п.1, где концентрация поверхностно-активного вещества в реактиве составляет от 500 до 15000 м.д.
3. Реактив по п.1, где поверхностно-активным веществом является полиоксиэтиленовое неионное поверхностно-активное вещество.
4. Реактив по п.3, где полиоксиэтиленовое неионное поверхностно-активное вещество имеет следующую формулу (I):
1
2
9-25
где R представляет Cалкильную, алкенильную или алкинильную группу; Rпредставляет -O-, -COO- или
и n является целым числом от 10 до 40.
5. Реактив по п.3, где полиоксиэтиленовым неионным поверхностно-активным веществом является полиоксиэтиленолеиловый эфир.
6. Реактив по п.5, где полиоксиэтиленолеиловый эфир имеет формулу (I), в которой n составляет от 15 до 20.
7. Реактив по п.1, где солюбилизирующее вещество выбирают их группы, состоящей из производного саркозина, производного холевой кислоты и метилглюканамида.
8. Реактив по п.1, где концентрация солюбилизирующего вещества в реактиве составляет от 100 до 400 м.д., когда солюбилизирующим веществом является производное саркозина; от 50 до 1300 м.д., когда солюбилизирующим веществом является производное холевой кислоты; и от 500 до 1100 м.д., когда солюбилизирующим веществом является метилглюканамид.
9. Реактив по п.1, где красителем для окрашивания нуклеиновой кислоты является, по меньшей мере, один краситель, выбранный из группы, состоящей из:
(1) красителя, имеющего следующую формулу (II):
1
2
-
где R и R являются низшей алкильной группой; n равно 1 или 2; X является анионом; и Z является атомом серы, атомом кислорода, или атомом углерода, который замещен низшей алкильной группой;
(2) красителя, имеющего следующую формулу (III):
1
2
-
где R и R являются низшей алкильной группой; n равно 1 или 2; X является анионом;
(3) красителя, имеющего следующую формулу (IV):
1
2
3
4
5
-
где R является атомом водорода или низшей алкильной группой; R и R являются атомом водорода, низшей алкильной группой или низшей алкокси группой; R является атомом водорода, ацильной группой или низшей алкильной группой; R является атомом водорода или необязательно замещенной низшей алкильной группой; Z является атомом серы, атомом кислорода или атомом углерода, который замещен низшей алкильной группой; n равно 1 или 2; и X является анионом;
(4) красителя, имеющего следующую формулу (V):
1
2
где X и X являются независимо Cl или I;
(5) красителя, имеющего следующую формулу (VI):
(6) красителя, имеющего следующую формулу (VII):
(7) красителя, имеющего следующую формулу (VIII):
(8) красителя, имеющего следующую формулу (IX):
(9) красителя, имеющего следующую формулу (X):
(10) йодида пропидия или бромида этидия;
(11) гетеродимера этидий-акридин, диазида этидия, гомодимера-1 этидия, гомодимера-2 этидия, моноазида этидия, триметиленбис[[3-[[4-[[(3-метилбензотиазол-3-ий)-2-ил]метилен]-1,4-дигидрохинолин]-1-ил]пропил]диметиламиний] тетрайодида (TOTO-1), 4-[(3-метилбензотиазол-2(3H)-илиден)метил]-1-[3-(триметиламино)пропил]хинолиний дийодида (TO-PRO-1), N,N,N',N'-тетраметил-N,N'-бис[3-[4-[3-[(3-метилбензотиазол-3-ий)-2-ил]-2-пропенилиден]-1,4-дигидрохинолин-1-ил]пропил]-1,3-пропандиаминий тетрайодида (TOTO-3) или 2-[3-[[1-[3-(триметиламино)пропил]-1,4-дигидрохинолин]-4-илиден]-1-пропенил]-3-метилбензотиазол-3-ий дийодида (TO-PRO-3).
10. Реактив по п.1, который имеет pH от 5,0 до 9,0.
11. Набор реактивов для анализа незрелых лейкоцитов, включающий:
первый реактив, который включает поверхностно-активное вещество, которое способно повреждать клеточные мембраны эритроцитов и зрелых лейкоцитов, и солюбилизирующее вещество, которое вызывает сжатие поврежденных клеток крови, и который имеет осмотическое давление не ниже чем 10 мОсм/кг и ниже чем 150 мОсм/кг, и
второй реактив, который включает краситель для окрашивания нуклеиновой кислоты.
12. Набор реактивов по п.11, где поверхностно-активным веществом является полиоксиэтиленовое неионное поверхностно-активное вещество.
13. Способ классифицирования лейкоцитов, включающий стадии:
смешивания биологического образца, возможно содержащего незрелые лейкоциты, с реактивом для анализа незрелых лейкоцитов, включающим поверхностно-активное вещество, которое способно повреждать клеточные мембраны эритроцитов и зрелых лейкоцитов, солюбилизирующее вещество, которое вызывает сжатие поврежденных клеток крови, и краситель для окрашивания нуклеиновой кислоты, и имеющим осмотическое давление не ниже чем 10 мОсм/кг и ниже чем 150 мОсм/кг, для окрашивания нуклеиновой кислоты зрелых лейкоцитов, и
измерения, по меньшей мере, одной величины светорассеяния и, по меньшей мере, одной величины флуоресценции незрелых лейкоцитов, подвергнутых обработке на предшествующей стадии, для классифицирования незрелых лейкоцитов на основе разницы интенсивностей светорассеяния и флуоресценции.