Средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии
MEANS FOR NEMATODOSIS AND EIMERIOSIS TREATMENT IN VETERINARY

Изобретение относится к фармации, более точно - к антипаразитарным фармацевтическим средствам, может быть использовано в качестве антинематодозного (антигельминтного) и антиэймериозного (антикокцидиозного) средства в ветеринарии для лечения домашних, диких и сельскохозяйственных животных и птиц (далее - животных), зараженных нематодами и эймериями.
Как известно из исследованного заявителем уровня техники, тяжелые формы паразитозов преимущественно регистрируются на фоне иммунодефицитных состояний при полиинвазии. В организме животных, зараженных одновременно нематодами и эймериями, происходит интоксикация продуктами жизнедеятельности паразитов и продуктами гнилостной микрофлоры кишечника, сопровождающаяся в том числе и кровавыми выделениями, что ведет к нарушению функции нервной системы, вызывая угнетение животных, вплоть до коматозного состояния, тремора мышц и паралича конечностей.
В результате интоксикация больных животных продуктами обмена паразитов и гнилостной микрофлоры они (животные) теряют в весе, мясо переболевших животных имеет низкую питательную ценность и быстро портится при хранении, у птиц снижается яйценоскость.
На дату представления настоящей заявки заявителем выявлено, что подавляющее большинство отечественных либо зарубежных лекарственных средств не обладают комплексным антинематодозным и антиэймериозным воздействием, а выявленные средства комплексного действия обладают существенными недостатками для реализации заявленных целей, так как являются токсичными и не рекомендованы к использованию для лечения продуктивных видов животных.
Нематоды - это круглые черви, относятся к представителям гельминтов - паразитических многоклеточных организмов, относящихся к низшим червям.
Гельминтозы (группа заболеваний, вызываемых гельминтами), в частности - нематодозы (аскаридоз, эзофагостомоз, анкилостомоз, токсокароз, трихоцефалез, энтеробиоз и др.) являются одними из основных паразитарных заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных, а также птиц, наносят существенный ущерб экономике и представляют опасность для человека.
Эймериозы (кокцидиозы) - это остро, подостро и хронически протекающие болезни птиц и животных, вызываемые различными видами простейших, относящихся к подцарству Protozoa и к семейству Eimeriidae.
Эймериозы вызываются простейшими, паразитирующими преимущественно в эпителиальных клетках кишечника. При сильной степени инвазии (проникновении паразитов в организм хозяина) эймериозы могут вызывать массовую гибель животных (Акбаев М.Ш., Воселеевич Ф.И., Акбаев P.M. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос. - 2008. - 756 с.) [1].
Разработка лекарственных средств для профилактики и лечения паразитарной полиинвазии, воздействующих на различные звенья патологического процесса, является актуальной задачей фармации на дату представления настоящей заявки.
Известные антигельминтные синтетические средства по химической структуре делятся на производные этаноламина, бензимидазола, салициламида, солей пиперазина и другие (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна. Т 2. - 2004) [2]; (Червяков Д.К. Лекарственные средства в ветеринарии. - М. Колос, 1977) [3]; (патент РФ 2242976) [4]; (патент РФ 2211835) [5].
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены ряд технических решений, применяемых по назначению, а именно - в качестве антипаразитарных средств известны:
- карбонилоксицианометильные производные (патент РФ 2296747) [6];
- производные милбемицина (патент РФ 2226531) [7];
- производные тетрагидрофуроизоксазола (патент РФ 1586154) [8];
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены композиционные антигельминтные средства, включающие:
- фенбендазол, сульфадимезин, серу и цеолит (патент РФ 2302864) [9];
- клозантел, новокаин, поливинилпирролидон (патент РФ 2278661) [10];
- альбендазол, медный купорос и ацетилцеллюлозу (патент РФ 2195280) [11].
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены современные средства против нематод (Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение. - М.: Типография Россельхозакадемии. - 2009. - 406 с.) [12]:
- фебтал (III класс токсичности);
- нилверм (II класс токсичности).
Общими недостатками известных антигельминтных средств являются:
- необходимость многократного применения;
- высокие лечебные дозы;
- побочное нейротоксическое действие;
- низкая эффективность применения по назначению;
- высокая общая токсичность;
- при этом лошадям и крупному рогатому скоту парентеральное введение (преимущественно в виде инъекций и/или ингаляций) нилверма не рекомендуется в силу того, что он оказывает холиномиметическое действие (холиномиметические средства - вещества, возбуждающие холинорецепторы - биохимические системы организма, с которыми реагирует ацетилхолин, который в малых дозах является физиологическим передатчиком нервного возбуждения, а в больших дозах может вызвать стойкую деполяризацию в области синапсов и блокировать передачу возбуждения) не только на нематоды, но и на организм хозяина, что нередко приводит к смертельному исходу даже при использовании препарата в терапевтических дозах (Кармолиев Р.С. Гельминтозы животных Западного Казахстана / Р.С. Кармолиев // Ветеринария. - 2006. - №1. - С. 36-38) [13], (Кузьмин А.А. Антигельминтики в ветеринарной медицине / А.А. Кузьмин // М.: Аквариум, 2000. - 144 с.) [14].
Для лечения эймериозов птиц и животных заявителем выявлены ряд лекарственных средств, обладающих антиэймериозной активностью: химкокцид, трихопол, салиномицин, байкокс, нитрофурановые (фуракриллин, фуразолан, фуразолидон) и сульфаниламидные средства (сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфапередозин, норсульфазол, фталазол), а также левомицетин, мономиецин и многие другие (Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос, - 2000. 559 с.); [15]; (Плешаков С.А., Ларионов С.В., Розовенко М.В. Эффективность фуракриллина и фуразонала при эймериозе кроликов // Ж. «Ветеринария». - №8. - Саратов, 1997. с. 28-30); [16]; (Плешаков С.А. Научные основы применения комплексных препаратов на базе нитрофуранов при эймериозе кроликов // Автореф. дисс. канд. вет. наук. - 1999. - 18 с.) [17].
Общими недостатками известных антиэймериозных средств является:
- дороговизна,
- токсичность,
- кумуляция в съедобных тканях животных,
- иммунодепрессивное действие,
- опасность развития резистентных штаммов возбудителя.
Кроме указанных недостатков, несмотря на широкое использование лекарственных средств для лечения и профилактики эймериозов, не удается получить 100%-ные показатели экстенсэффективности и интенсэффективности (экстенсэффективность - это отношение количества животных, освободившихся полностью от паразита, к количеству обработанных животных, выраженное в процентах; интенсэффективность - это отношение среднего количества уничтоженных или выделившихся паразитов к среднему количеству имевшихся до обработки, выраженное в процентах [http://www.webvet.ru/information/226/]). Поэтому эти средства применяют неоднократно.
Например, для лечения эймериоза кроликов применяют фуразолидон по 250 мг/кг в течение 10 дней, а после 5 дневного перерыва - сульфадиметоксин - в первый день 2 г, в последующие 9 дней - по 1 г на животного (Пономаренко В.Я. К вопросу о химиопрофилактике кокцидиоза кроликов // Материалы научной конференции паразитологов УАССР. - Ч. 2. - Киев. - 1975. - С. 116.) [18].
Из исследованного уровня техники выявлен способ лечения коров, больных эймериозом, включающий скармливание с кормом кокцидина и дополнительное введение однократно 10% раствора эраконда - фитопрепарата, стимулирующего обменные процессы и повышающего резистентность организма в дозе 4,5-5,5 мг/кг массы тела (патент РФ 2234932) [19].
Из исследованного уровня техники выявлен способ лечения эймериоза у животных и птиц, включающий двукратное с интервалом 5 дней скармливание ксимедона или ксимедонгидрохлорида в дозе 30 мг/кг массы тела мелким животным и дополнительно введение фуразолидона в дозе 20 мг/кг массы тела пятидневным курсом с интервалом 3 дня (патент РФ 2322235) [20].
50
Известен способ лечения кокцидиозов, в частности, эймериозов, разработанный заявителем, на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана (патент РФ 2473334) [21], включающий 2-х кратный прием с интервалом в 24 часа фармацевтической композиции «Депрот-14» в дозе 4 мг/кг (в пересчете на действующее вещество - соль фосфония) при ЛД 2500 мг/кг и препарат «Депрот-эрин» с более низкой одноразовой лечебной дозой 2,5 мг/кг и низкой токсичностью (патент РФ 2557889) [22].
Известны разработанные заявителем четвертичные соли фосфония, обладающие высокими антибактериальными свойствами вследствие взаимодействия с липидными компонентами клеточных мембран (Галкина И.В., Мельникова Н.Б., Тудрий Е.В., Галкин В.И. и др. Взаимодействие солей фосфония с липидными компонентами мембран. Фармация, 2009 - №4. - С. 35-38). [23].
Известную из [23] четвертичную соль фосфония в заявленном техническом решении используют в качестве активной компоненты в новом лекарственном средстве, обладающем ранее не известными антинематодозными и антиэймериозными свойствами.
Из исследованного уровня техники выявлены препараты «Стоп-кокцид» и «Прококс» для лечения изоспороза у плотоядных животных на основе толтразурила (Бадова О.В., Бурцева Т.В. и др. Сравнительная оценка эффективности современных препаратов при лечении изоспороза. Аграрный вестник Урала, 2016 - №06 (148). - С. 4-7) [24]. Показано, что известные препараты обладают одновременно антигельминтными и антикокцидиоцидными свойствами.
Препарат «Стоп-кокцид» вводят перорально в дозе 0,2 мл/кг массы тела (10 мг толтразурила/кг массы тела) один раз в день в течение трех дней. Данное средство представляет собой суспензию для орального применения, которая содержит толтразурил 50 мг/см3. Он медленно всасывается в желудочно-кишечном тракте и оказывает кокцидиоцидное действие на слизистой и подслизистой оболочках. Кроме того, препарат обладает широким спектром кокцидиоцидного действия на стадиях внутриклеточного развития паразитов, оказывает действие на все виды кокцидий, включая Eimeria spp., Isospora spp., Cistoisospora spp., паразитирующих у щенков собак. Толтразурил повреждает митохондрии и нарушает процессы деления ядра кокцидий, изменяет процесс формирования макрогаметоцитов, блокируя дыхательные ферменты, и вызывает гибель паразитов. В отличие от кокцидиостатиков, вызывающих задержку роста, толтразурил благодаря кокцидиозным свойствам позволяет сократить продолжительность применения до разового, после которого организм является стерильным в отношении кокцидий.
Недостатком известного препарата является высокая токсичность, так как убой животных на мясо разрешается не ранее чем через 70-91 сутки после применения Стоп-кокцида в связи с наличием кумулятивных свойств (см. Интернет-ресурс https://www.vidal.ru/veterinar/stop-coccid-28161).
Препарат «Прококс» также назначают взрослым собакам и щенкам с 2-недельного возраста с лечебной и профилактической целью при паразитарных инвазиях, вызванных нематодами и кокцидиями следующих видов: нематоды Toxocara canis (половозрелые особи, неполовозрелые особи, личинки L4); Uncinaria stenocephala (половозрелые особи); Ancylostoma caninum (половозрелые особи); Trichuris vulpis (половозрелые особи); кокцидии: Isospora ohioensis, Isospora burrowsi, Isospora neorivolt, Isospora canis.. При этом препарат «Прококс» применяют однократно
Недостатком известного препарата является невозможность его использования для лечения продуктивных видов животных, так как он обладает кумулятивными свойствами, в силу чего «Прококс» не представляется возможным использовать по назначению - для лечения продуктивных видов животных (см. Интернет-ресурс: https://www.vetlek.ru/shop/?gid=124&id=8631).
Таким образом, представляется возможным констатировать следующее:
Общими недостатками выявленных заявителем известных технических решений является то, что принцип использования антинематодозных и антиэймериозных средств основан прежде всего на многократном их применении, что в первую очередь является не безвредным (неиндифферентным) для любого организма, т.к. многие из них обладают токсическим, раздражающим и иммунодепрессивным действием.
К тому же, длительное применение одного лекарства приводит к появлению дисбактериоза, способствуют угнетению ферментативной активности желудочно-кишечного тракта и могут быть причиной других функциональных изменений в организме животных.
Кроме этого, подавляющее большинство известных технических решений не обладают комплексным антинематодозным и антиэймериозным воздействием, а выявленные препараты комплексного действия обладают существенными недостатками для реализации заявленных целей, так как являются токсичными и не рекомендованы к использованию для лечения продуктивных видов животных.
Следовательно, изыскание новых средств, воздействующих на различные звенья патологического процесса, и схем их применения для профилактики и лечения полиинвазивных паразитозов животных, а также человека, является актуальной задачей как фармации, так и ветеринарии.
50
Заявленное техническое решение позволило создать более эффективное средство на основе соли четвертичного фосфония с длиной алкильного радикала в шестнадцать атомов углерода С 16 с одноразовой лечебной дозой 2,0 мг/кг и низкой токсичностью (ЛД 225 мг/кг - III класс опасности), обладающее одновременно и антиэймериозной, и антинематодозной активностью.
Целью заявленного технического решения является создание эффективного малотоксичного антинематодозного и антиэймериозного средства для ветеринарии с низкими лечебными дозами, расширяющего арсенал средств указанного назначения.
Более конкретно, целью заявленного технического решения является создание нового по механизму действия средства на основе соли четвертичного фосфония, характеризующегося следующим комплексом свойств:
- комплексной эффективностью в отношении и нематод, и эймерий;
- низкими лечебными дозами;
- разовым введением средства;
- низкой токсичностью;
- удобным методом введения средства во время кормления животных в виде масляного раствора.
50
Техническим результатом заявленного изобретения является создание нового по механизму действия малотоксичного (ЛД 225 мг/кг) средства на основе соли фосфония С-16, эффективного для лечения как нематодозов, так и эймериозов при однократном приеме в дозе 2.0 мг/кг. Средство используют при утреннем кормлении в виде масляного раствора.
Заявленный технический результат достигается применением заявленного средства (далее для удобства изложения в тексте используется условное авторское название - «Соль фосфония С-16»), состоящего из н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида (1) в качестве активного компонента, растворенного в подсолнечном масле, при весовом соотношении 1:99.
Механизм действия активного компонента предлагаемого лекарственного средства, по мнению заявителя, заключается в том, что соль фосфония является амфифильным поверхностно-активным веществом с высоким катионным зарядом на атоме фосфора. Это позволяет ей (соли фосфония) встраиваться в цитоплазматическую мембрану паразита, как синтетическому аналогу фрагмента природной мембраны, что приводит к образованию пор и, в дальнейшем - к разрыву мембраны. Это обеспечивает облегченное, по сравнению с аналогами по назначению, проникновение активного компонента заявленного лекарственного средства в тело паразита и может служить объяснением его (заявленного средства) антинематодозных и антиэймериозных свойств, низкой лечебной дозы, достаточности разового введения, низкой токсичности (Галкина И.В., Мельникова H.Б., Тудрий Е.В., Галкин В.И. и др. Взаимодействие солей фосфония с липидными компонентами мембран. Фармация, 2009 - №4. - С. 35-38). [23].
Сущность заявленного технического решения заключается в создании антинематодозного и антиэймериозного средства, содержащего н-гексадецилтритрифенилфосфоний бромид и подсолнечное масло (в качестве растворителя и вспомогательного вещества) при их весовом соотношении 1:99.
Заявленное техническое решение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение антинематодозного и антиэймериозного средства «Соль фосфония С-16», формы его применения для лечения птиц и животных.
Получают действующий компонент заявленного средства - н-гексадецилтрифенилфосфонийбромид формулы (1) способом, описанным в статье заявителя (Галкина И.В., Мельникова Н.Б., Тудрий Е.В., Галкин В.И., Жильцова О.Е., Жукова О.В., Егорова С.Н. Взаимодействие солей фосфония с липидными компонентами мембран. Фармация, 2009 - №4. - С. 35-38.) [23]:
Готовят 1% раствор соли фосфония в подсолнечном масле. Для этого растирают 1,0 г полученного н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида (1) в фарфоровой ступке до получения бесцветной однородной пудры и растворяют в 99,0 г подсолнечного масла при комнатной температуре, например, плюс 25°C. Используют масло подсолнечное нерафинированное, первый сорт, холодный отжим, ГОСТ 1129-2013. Получают заявленное средство под условным авторским названием «Соль фосфония С-16».
Для лечения птиц во время утреннего кормления им дают пищевой гранулят, увлажненный полученным по Примеру 1 средством «Соль фосфония С-16».
Для лечения крупных животных во время утреннего кормления им дозируют полученное по Примеру 1 средство «Соль фосфония С-16» - в зависимости от веса животного.
Пример 2. Испытание антинематодозной эффективности средства «Соль фосфония С-16» при гетеракидозе цесарок.
Антинематодозную эффективность в отношении нематод Heterakis gallinarum исследовали на молодняке цесарок в условиях вивария кафедры эпизоотологии, паразитологии и радиобиологии ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ в октябре-ноябре 2015 года.
Тридцать цесарок в возрасте 1,5 месяцев заражали инвазионными яйцами Heterakis gallinarum в дозе 1 тысяча яиц на голову, после чего по принципу аналогов (т.е. имеющих сходные клинические признаки, одинаковую живую массу и степень инвазии) их (цесарок) разделили на 3 группы по 10 голов в каждой. Содержание цесарок во время эксперимента напольное, питание промышленным комбикормом. Через 35 суток после заражения первая группа птиц однократно получила заявленное средство «Соль фосфония С-16» в дозе 2 мг/кг веса по действующему веществу (далее - ДВ). Цыплятам второй группы задавали известное средство фебтал гранулят 22,2% двукратно в смеси с комбикормом, в дозе 10 мг/кг. Третья группа птиц была контрольной - без лечения. Для отбора помета птиц рассаживали отдельно в клетки, полученный материал исследовали по методу Дарлинга: до лечения, и на 7, 15 и 30 сутки после лечения.
Результаты исследований приведены в Таблице 1.
Из Таблицы 1 видно, что перед лечением интенсивность инвазии (ИИ) в первой группе составляет 21±1,6 яиц, во второй - 27±1,2, в третьей - 19±1,9 яиц. Экстенсивность инвазии равняется 100%.
На 7 сутки после заражения у цесарок всех групп в пробах помета также были выявлены яйца гетеракисов, но их количество в пробах помета было значительно ниже, чем до лечения. Интенсивность инвазии в группах варьирует от 4±0,9 до 22±1,1 яиц в 1 грамме помета. Интенс- (ИЭ) и экстенсэффективность (ЭЭ) в первой опытной группе выше и составляет 81% и 90% соответственно, против 70% и 80% во второй группе.
На 15 сутки после дачи лекарственных средств интенсивность инвазии в опытных группах снизилась. Интенсэффективность (ИЭ) в первой группе составила 90,5%, экстенсэффективность (ЭЭ) 90%, во второй - 81,5% и 80% соответственно.
На 30 сутки после скармливания средства интенсивность инвазии в опытных группах продолжала медленно снижаться или колебалась на высоком уровне излечения.
В контрольной группе интенсивность инвазии возросла с 19±1,9 до начала лечения до 30±1,3 в конце опыта.
Следовательно, при гетеракидозе цесарок заявленное средство «Соль фосфония С-16», введенное в дозе 2 мг/кг однократно, показывает более высокую антигельминтную эффективность, чем известное средство фебтал, введенное в дозе 10 мг/кг двукратно.
Пример 3. Изучение антинематодозной эффективности средства «Соль фосфония С-16» при аскаридиозе кур.
Антинематодозную эффективность заявленного средства «Соль фосфония С-16» при аскаридиозе кур изучали на 30 спонтанно зараженных птицах в возрасте 50 суток, содержащихся в частном подворье. Исследования проводили в ноябре-декабре 2015 года. После гельминтоовоскопического исследования проб помета были сформированы три группы птиц по 10 голов в каждой. Птицы первой группы получали заявленное средство «Соль фосфония С-16» перорально однократно в дозе 2 мг/кг веса (по ДВ). Птицам второй группы задавали известное средство нилверм (тетрамизол) двукратно в смеси с комбикормом, в дозе 40 мг/кг. Третья группа птиц была контрольной - без лечения. Помет от каждой птицы исследовали по методу Дарлинга до лечения и на 7, 15 и 30 сутки после лечения. Результаты исследований представлены в Таблице 2.
На 7 сутки после лечения интенсивность инвазии (ИИ) в первой группе составляет 3±1,7. Интенс- и экстенсэффективность равняется 78,6% (ИЭ) и 80% (ЭЭ) соответственно. Во второй группе 7 птиц полностью освободились от аскаридии. У трех птиц были выявлены яйца. Интенсэффективность и экстесэффективность лечения составили 53,8% (ИЭ) и 70% (ЭЭ) соответственно.
Через 15 суток интенсивность инвазии (ИИ) в первой группе равняется 2±0,7. Интенс- и экстенсэффективность равняется 85,8% (ИЭ) и 80% (ЭЭ) соответственно. В этот период из 10 птиц в первой группе 8 - полностью освободились от аскаридии. Интенсивность инвазии (ИИ) во второй группе составила 4±1,3, интенсэффективность лечения (ИЭ) - 69,2%, экстенсэффективность (ЭЭ) - 70%.
На 30 сутки только у одной птицы в первой группе были выявлены яйца аскарисов, т.е. ЭЭ составила 90%. Интенсивность инвазии во второй группе (ИИ) составила 3±0,3; интенсэффективность лечения (ИЭ) - 77%, экстенсэффективность (ЭЭ) - 80%.
В контрольной группе интенсивность инвазии (ИИ) в течение опыта варьировала от 15±1,5 до 25±1,6 яиц.
Таким образом, результаты изучения антинематодозной эффективности заявленного средства «Соль фосфония С-16» на естественно зараженных аскаридиозом птицах показали, что заявленное средство, введенное в дозе 2 мг/кг однократно, обладает более высокой противопаразитарной эффективностью, чем известное средство нилверм, введенное в дозе 40 мг/кг двукратно. Экстенсэффективность средства «Соль фосфония С-16» в разные сроки варьировала от 80% до 90%, против 70%-80% при применении нилверма.
Пример 4. Изучение антинематодозной эффективности средства «Соль фосфония С-16» при кишечных стронгилятозах крупного рогатого скота.
Антинематодозную эффективность соли фосфония при стронгилятозах изучали в ООО «СЭТиле» Мамадышского района Республики Татарстан на 21 теленке в возрасте 10-11 месяцев, средней живой массой 230-250 кг, которые были отобраны в результате гельминтоовоскопического исследования. Телята были инвазированы кишечными стронгилятами (Nematodirus spathiger).
Животных разделили на 2 опытные и одну контрольную группы (по 7 голов). Телята в течение опыта находились в равных условиях содержания. Кормление и поение животных проводили в соответствии с зоотехническими нормами.
Телятам первой группы скармливали заявленное средства «Соль фосфония С-16» в дозе 2 мг/кг (по ДВ) перорально с кормом, 2-й группе - известное средство ивермек вводили инъекционно внутримышечно однократно в бедро животного в дозе 0,4 мл/20 кг, что в пересчете равнозначно 200 мг/кг. Препараты применяли однократно. Третья группа была контрольной и состояла из инвазированных телят, которых не подвергали лечению.
Пробы фекалий для исследования брали до начала лечения, а также через 7, 15 и 30 суток после лечения. Ежедневно проводили клинический осмотр.
Интенсивность инвазии оценивали путем копроскопических исследований фекалий.
Данные о терапевтической эффективности использованных антинематодозных препаратов при кишечных стронгилятозах телят представлены в Таблице 3.
Из Таблицы 3 видно, что до лечения все телята были инвазированы кишечными стронгилятами. Количество яиц нематод в 1 г фекалий варьировало от 352±1,8 до 404±1.2 экземпляров.
Через 7 суток, как видно из таблицы 3, произошло значительное снижение количества яиц нематод в фекалиях телят и улучшение общего состояния животных, получавших лечение (1-я и 2-я группы). В 3-й группе нарастала инвазия.
Через 15 суток после введения средств интенсивность инвазии у телят 1-й и 2-й опытных групп снизилась, а у контрольных животных отмечается увеличение числа яиц кишечных стронгилят. Интенсэффективность (ИЭ) средств во 2-й группе, где применяли ивермек, равняется 84,4%, интенсивность инвазии (ИИ) составляет 55±0,8 яиц. В 1-й группе (при применении «Соли фосфония С-16») ИЭ составила 91.9% при интенсивности инвазии 30±1,3 яиц.
Показатель экстенсэффективности (ЭЭ) в 1-й опытной группе телят (при применении «Соли фосфония С-16») через 15 суток составил 90%, во 2-й опытной группе животных (при применении ивермека) - 80%.
Через 30 суток полностью (100%) излечились телята, получавшие заявленное средство «Соль фосфония С-16». Частично излечилась группа животных, получавшая известное средство ивермек.
В результате копроскопического исследования проб фекалии телят на 7 и 30 сутки также были получены данные о более высокой антинематодозной эффективности «Соли фосфония С-16».
У телят контрольной группы, где животных не дегельминтизировали, интенсивность инвазии на протяжении всех исследований варьировала от 404±1,12 до 441±0,9 яиц в 1 г фекалий. У них проявлялись клинические признаки, характерные для стронгилятозов желудочно-кишечного тракта - истощение, анемичность видимых слизистых оболочек, интоксикация.
Таким образом, заявленное средство «Соль фосфония С-16» в дозе 2 мг/кг при однократном применении телятам, зараженным стронгилятами, показал высокую эффективность. Экстенсэффективность заявленного средства на 7, 15 и 30 сутки после его применения составила 85,8%; 90% и 100% против 71,6%, 80% и 85,8% соответственно во второй группе (с применением известного средства ивермек, введенного в количестве 200 мг/кг или 0,4 мл/20 кг живого веса).
Пример 5. Изучение противоэймериозной эффективности средства «Соль фосфония С-16».
Противоэймериозную эффективность лекарственного средства «Соль фосфония С-16» изучали на 24 телятах 6-8 месячного возраста, содержащихся в СХПК «Урал» Кукморского района Республики Татарстан. Животные были естественно инвазированы эймериями видов: Е. bovis, E. zuernii, Е. ellipsoidalis и др..
Клинические признаки характеризовались исхуданием, периодически появляющейся диареей, общим угнетением и снижением аппетита.
После проведения копрологических исследований животные по признаку аналогов (имеющие сходные клинические признаки, одинаковую живую массу и степень инвазии) были разделены на 3 группы (по 8 голов), из них две опытные и одна контрольная.
Телятам 1-ой группы однократно выпаивали заявленное средство «Соль фосфония С-16» в дозе 2 мг/кг. Животные второй группы получали известное средство фуразолидон в дозе 20 мг/кг двумя пятидневными курсами с интервалом в 3 дня. Третья группа телят была контрольной - без лечения. Животные всех групп содержались в одинаковых условиях, кормление проводилось в соответствии с зоотехническими нормами. Ежедневно проводили клинический осмотр поголовья. Пробы фекалий для исследования брали: до начала лечения и через 7, 15 и 30 суток после лечения.
Результаты изучения противоэймериозной эффективности исследуемых средств на крупном рогатом скоте представлены в Таблице 4.
Из Таблицы 4 видно, что интенсивность эймериозной инвазии у естественно зараженных телят колеблется от 292,0±1,4 до 344±1,8.
Через 7 суток после лечения у животных 1-й и 2-й опытных групп произошло снижение ооцист. Интенсивность инвазии в первой группе составляет 50,0%, во второй - 35,5%.
Через 15 суток после лечения происходит дальнейшее снижение ооцист эймерий у животных 1-й и 2-й опытных групп. В 1-й группе их количество равняется 100±1,6, во второй - 170±0,9, а интенсэффективность - 65,8% и 45,2% соответственно. В этот период семь животных из 1-й и пять - из 2-й опытных групп полностью освободились от эймерий.
Через 30 суток после лечения интенсивность эймериозной инвазии в первой группе снизилась до 300±1,9 ооцист, интенсэффективность составила 89,8%, а экстенсэффективность - 87,5%. После лечения фуразолидоном среднее количество ооцист у телят в этот период составило 105±1,7, интенсэффективность и экстенсэффективность - 66,2% и 62,5% соответственно.
Интенсивность эймериозной инвазии у телят контрольной группы за период опыта возросла до 370±2,9 ооцист, против 344±1.8 в начале опыта.
Следовательно, интенсэффективность заявленного средства «Соль фосфония С-16» при эймериозе крупного рогатого скота выше, чем у известного средства фуразолидон: через 7 суток - на 14,5%, через 15 суток - на 20,6%, через 30 суток - на 23,6%, а эктенсэффективность выше на 25,0%, 25,0% и 25,3% соответственно. При этом заявленное средство введено в дозе 2 мг/кг однократно, а фуразолидон - в дозе 20 мг/кг двумя пятидневными курсами.
Пример 6. Изучение острой токсичности средства «Соль фосфония С-16».
Расчет параметров острой токсичности соли фосфония при внутрижелудочном введении проводят в соответствии с методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ (1997 г.), используя метод Кербера.
Острую токсичность заявленной соли фосфония изучали на 70 белых мышей, массой тела 20-22 г. Животные были разделены на 7 групп - 6 опытных и одну контрольную (по 10 голов в каждой).
Заявленное средство «Соль фосфония С-16», полученное по Примеру 1, вводили однократно в желудок при помощи иглы с булавовидным утолщением. Мышам шести опытных групп средство вводили из расчета 100, 150, 200, 250, 300 и 350 мг/кг соответственно. Контрольным животным вводили по 1 мл дистиллированной воды.
Опытные и контрольные животные содержались в одинаковых условиях, получали одинаковый рацион. Кормление животных осуществляли через 2 часа после введения лекарственного средства. За животными вели наблюдение в течение 6-ти суток. Учитывали поведение животных, общее состояние, двигательную активность, состояние шерстного покрова, нарушение физиологических функций, прием корма. Случаи гибели регистрировали, павших животных вскрывали.
После однократного внутрижелудочного введения заявленного средства «Соль фосфония С-16» в дозе 100 мг/кг у опытных мышей не наблюдалось изменений в поведении и общем состоянии. В последующие 6 дней наблюдения животные оставались живыми, адекватно реагировали на раздражители, охотно принимали корм и воду.
При дозе заявленного средства 150 мг/кг животные старались уединиться, выгибали спину, осторожно передвигались по клетке. Через сутки пали две мыши. При вскрытии обнаружено кровоизлияние в брюшной полости.
При дозе заявленного средства 200 мг/кг животные проявляли беспокойство, потирали лапами мордочки, выгибали спину, отмечалась взъерошенность шерстного покрова. Четыре мыши погибли через 72 часа после введения лекарственного средства. При дозе заявленного средства 250 мг/кг наблюдали более выраженное действие. Мыши старались уединиться, не пили воду, теряли подвижность, не реагировали на болевые, световые раздражители. Через 30-40 минут животные начинали двигаться. На 6-й день из группы погибли шесть мышей из десяти. При вскрытии погибших мышей отмечали в кишечнике накопление газов, полнокровие сосудов легких, сердца, печени и головного мозга.
При дозе заявленного средства 300 мг/кг отмечалось угнетение, отказ от корма и воды, взъерошенность шерстного покрова, снижение реакции на внешние раздражители, спустя 1-2 часа после введения средства наступало нарушение координации движения. Гибель восьми мышей наступила в течение 1-2-х часов.
При дозе заявленного средства 350 мг/кг отмечалось общее угнетение, учащенное дыхание, взъерошенность, зуд, животные зарывались в подстилку и через 7-12 часов все мыши погибли. При вскрытии павших животных были выявлены патологоанатомические изменения, свойственные острому отравлению: брыжеечные сосуды кровенаполнены, печень и селезенка увеличена, слизистая желудка и кишечника утолщена с кровоизлияниями.
В Таблице 5 приведены результаты изучения острой токсичности заявленного средства «Соль фосфония С-16».
50
ЛД вычисляли по формуле:
50
100
ЛД=ЛД-ΣZD:n,
где:
Z - среднее арифметическое из числа животных, у которых отмечен учитываемый эффект под влиянием 2-смежных доз;
D - интервал между двумя смежными дозами;
n - число животных в каждой группе;
50
При внутрижелудочном введении ЛД лекарственного средства составила 225±14,54 мг/кг массы тела по действующему веществу (ДВ).
Таким образом, установлено, что заявленное средство «Соль фосфония С-16» при внутрижелудочном введении, в соответствии с ГОСТ 121.007-76, по своим токсикологическим характеристикам относится к III классу опасности.
В результате вышеизложенного можно сделать вывод, что заявителем достигнуты поставленные цели и заявленный технический результат, а именно: создано эффективное средство для ветеринарии на основе н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида в качестве активного компонента, растворенного в подсолнечном масле в весовом соотношении 1:99, расширяющее арсенал средств заявленного назначения и обладающее заявленным комплексом свойств:
- эффективностью в отношении нематод и эймерий, при этом более высокой эффективностью по сравнению с известными препаратами для лечения нематодозов и эймериозов (см. Примеры 2, 3, 4, 5).
- низкими лечебными дозами - 2.0 мг/кг в пересчете на действующее вещество - н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, что в несколько раз ниже лечебных доз известных средств (см. Примеры 2, 3, 4, 5);
- разовым введением средства по сравнению с многократным применением у подавляющего большинства известных средств (см. Примеры 2, 3, 4, 5);
50
- низкой токсичностью - ЛД 225 мг/кг (III класс опасности) (см. Пример 6);
- удобным методом введения средства во время кормления животных в виде масляного раствора по сравнению с менее удобным инъекционным введением известных препаратов.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, т.к. из исследованного уровня техники заявителем не выявлено технических решений, имеющих заявленную совокупность признаков.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как заявленное лекарственное средство обладает комплексным антинематодозным и антиэймериозным свойством в низких лечебных дозах при низкой токсичности, что не является очевидным для специалиста в анализируемой области техники.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленное средство может быть получено посредством использования известных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.
Список использованных источников
1. Акбаев М.Ш., Воселеевич Ф.И., Акбаев P.M. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос. - 2008. - 756 с.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна. Т 2. - 2004.
3. Червяков Д.К. Лекарственные средства в ветеринарии. - М. Колос, 1977.
4. Патент РФ 2242976, опубл. 27.12.2004.
5. Патент РФ 2211835, опубл. 10.09.2003.
6. Патент РФ 2296747, опубл. 27.10.2005.
7. Патент РФ 2226531, опубл.10.04.2004.
8. Патент РФ 1586154, опубл. 20.12.2006.
9. Патент РФ 2302864, опубл. 20.07.2007.
10. Патент РФ 2278661, опубл. 16.02.2004.
11. Патент РФ 2195280, опубл. 27.12.2002.
12. Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение. - М.: Типография Россельхозакадемии. - 2009. - 406 с.
13. Кармолиев Р.С. Гельминтозы животных Западного Казахстана / Р.С. Кармолиев // Ветеринария. - 2006. - №1. - С. 36-38
14. Кузьмин А.А. Антигельминтики в ветеринарной медицине / А.А. Кузьмин // М.: Аквариум, 2000. - 144 с.
15. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос, - 2000. 559 с.
16. Плешаков С.А., Ларионов С.В., Розовенко М.В. Эффективность фуракриллина и фуразонала при эймериозе кроликов // Ж. «Ветеринария». - №8. - Саратов, 1997. с. 28-30.
17. Плешаков С.А. Научные основы применения комплексных препаратов на базе нитрофуранов при эймериозе кроликов // Автореф. дисс. канд. вет. наук. - 1999. - 18 с.
18. Пономаренко В.Я. К вопросу о химиопрофилактике кокцидиоза кроликов // Материалы научной конференции паразитологов УАССР. - Ч. 2. - Киев. - 1975. - С. 116
19. Патент РФ 2234932, опубл. 27.08.2004) [].
20. Патент РФ 2322235, опубл. 20.04.2008, Бюл. №11.
21. Патент РФ 2473334, опубл. 27.01.2013.
22. Патент РФ 2557889, опубл. 27.01.2013.
23. Галкина И.В., Мельникова Н.Б., Тудрий Е.В., Галкин В.И. и др. Взаимодействие солей фосфония с липидными компонентами мембран. Фармация, 2009 - №4. - С. 35-38.
24. Бадова О.В., Бурцева Т.В. и др. Сравнительная оценка эффективности современных препаратов при лечении изоспороза. Аграрный вестник Урала, 2016 - №06. - С. 4-7).