Матриксная металлопротеиназа-9 как потенциальная молекулярная мишень для терапии меланомы кожи

клетками. Известно, что ^-6, ^-8, ^-10, IL-1a и его рецепторный антагонист ^-1 ЯЛ способны продуцироваться опухолевыми клетками и проявляют себя как факторы усиления опухолевой прогрессии, активирующие ангиогенез и миграцию опухолевых клеток, а ТОТ-а, являясь индуктором апоптоза и неоангиогенеза, может вызывать усиление гибели лимфоцитов, находящихся на данной территории, и распространение туда опухолевых клеток.

Цель исследования. Изучить локальный (тканевой) уровень цитокинов при раке толстой и прямой кишки.

Материал и методы. Нами было проведено изучение локального уровня цитокинов (Т№-а, ^-2, ^-6, ^-8, 1Ь-10,1Ь-1а, ^-1ЯЛ), выделенных из ткани опухоли, а также визуально не измененных участков кишки, отступя 1-3 см (пе-ритуморальная зона) и 10 см (линия резекции) от края опухоли у 19 больных спорадическими аденокарциномами толстого кишечника и прямой кишки (III стадии), в возрасте от 36 до 76 лет. Первую группу составили образцы тканей толстой кишки (п=9), вторую - образцы тканей прямой кишки (п=10). Цитокины определяли иммуноферментным методом с помощью наборов «Вектор-Бест».

Результаты. Показано, что уровни большинства исследованных цитокинов в ткани опухоли не имеют статистически значимых различий в зависимости от ее локализации. Статистически достоверное отличие содержание цитокинов в опухоли наблюдается только по уровню ^-1а, который был ниже в опухолях прямой кишки (при раке прямой кишки - 236 ± 64,8 пг/мл, при раке толстой кишки - 587 ± 27,9 пг/мл, р<0,05). В ткани перитуморальной зоны, как и области линии резекции, различия уровня этого цито-

кина при раке толстой и прямой кишки были статистически недостоверны. Сопоставление уровней ^-1ЯА в исследуемых образцах показало, что в перитуморальной зоне его уровень в первой группе (2875 ± 369 пг/мл) был статистически достоверно ниже, чем во второй (4144 ± 466 пг/мл, р<0,05). Различия уровней этого цитокина между тканью опухоли (4928 ± 166 пг/мл) и образцами немалигнизированной ткани (перитуморальная зона - 2875 ± 369 пг/ мл, линия резекции - 3040 ± 344 пг/мл, р<0,05) регистрируются только при раке толстой кишки, тогда как при раке прямой кишки они не наблюдаются. Уровень 1Ь-2 в образцах ткани, отстоящей от опухоли толстой кишки на 1-3 см (3,74 ± 1,51 пг/мл), также был ниже, чем в образцах ткани перитуморальной зоны опухоли прямой кишки (12,1 ± 3,37 пг/мл, р<0,05). Количество этого цитокина было минимальным в перитуморальной зоне образцов первой группы (3,74 ± 1,51 пг/мл), а во второй группе - в ткани, взятой по линии резекции (4,4 ± 0,87 пг/мл). При опухолях толстой кишки наблюдалось статистически достоверное снижение уровня ^-8 по мере удаления от опухоли (514 ± 5,66 пг/ мл), т.е. в ткани линии резекции (95 ± 21 пг/мл) он был ниже, чем в перитуморальной зоне (255 ± 48 пг/мл, р<0,05), а при раке прямой кишки такой зависимости не выявлено.

Выводы. Изучение локального уровня цитокинов (ТОТ-а, 1Ь-2, 1Ь-6, 1Ь-8, 1Ь-10, ^-1ЯЛ) показало, что независимо от локализации опухоли в толстой или прямой кишке их содержание было высоким в ткани опухоли по сравнению с немалигнизированными участками. Вероятно, найденные изменения свидетельствуют об ау-токринной продукции опухолью исследованных цитокинов при аденокарциномах кишечника.

МАТРИКСНАЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗА-9 КАК ПОТЕНЦИАЛЬНАЯ МОЛЕКУЛЯРНАЯ МИШЕНЬ ДЛЯ ТЕРАПИИ МЕЛАНОМЫ КОЖИ

М.Б. АКСЕНЕНКО

Красноярский государственный медицинский университет

Актуальность. Матриксная металло- системы эндопептидаз, принимающих участие

протеиназа-9 (ММП-9) является ферментом в деструкции внеклеточного матрикса, обеспе-

чении опухолевой инвазии и метастазирования. Кроме способности к процессам деградации компонентов межклеточного матрикса, отмечено участие ММП-9 в аутокринном типе регуляции апоптоза и клеточной пролиферации.

Цель исследования. Оценить роль матрикс-ной металлопротеиназы-9 (ММП-9) в развитии меланомы кожи и определить возможность использования данного фермента в качестве патогенетической мишени при меланоме кожи.

Материал и методы. Было проведено исследование биоптатов кожи 102 пациентов с меланоцитарными новообразованиями кожи. Образцы кожи фиксировали в 10 % нейтральном забуференном формалине, срезы подвергали им-муногистохимическому окрашиванию по стандартной методике с моноклональными антителами к ММР-9 (ЛЬсат, разведение 1:250). Клетки меланомы кожи культивировали в среде ЯРМ1 в СО2-инкубаторе с 5 % содержанием СО2. По достижении концентрации 1,5*105 клеток мл-1 в клетки осуществлялась трансфекция интерферирующих РНК (иРНК) с помощью Lipofectamine 2000 (1отШ^еп) и РНК. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток осуществлялось с использованием моноклональных антител к ММР-9 (ЛЬсат, разведение 1:250), к РСКЛ (разведение 1:400). В отдельной серии экспериментов использовались скрамблированные последовательности РНК. В дальнейшем была создана экспериментальная модель меланомы кожи на мышах, линии С57 В16. Животные были разделены на 2 группы (контрольную и опытную) случайным образом. Трансплантация культуры опухолевых клеток меланомы В16 производилась путём подкожного введения 0,5 мл взвеси опухолевой

ткани в растворе Хенкса (1:10). На 10-е сут после трансплантации опухоли животным опытной группы было начато введение Inhibitor MMP-9 I (Calbiochem) в концентрации 5nM. Животные контрольной группы оставались без лечения. Животные находились в эксперименте до естественной гибели, после чего производилась оценка выживаемости животных-опухоленосителей, производился расчёт торможения роста опухоли (ТРО) и увеличения продолжительности жизни животных (УПЖ).

Результаты. При оценке данных иммуноги-стохимического исследования было выявлено 3-кратное увеличение уровня ММП-9 в клетках меланомы кожи по сравнению с контролем. При оценке уровня экспрессии ММП-9 в клетках культуры меланомы иммуноцитохимический (ИЦХ) индекс в контроле составил 244,25. На культуре клеток меланомы было произведено селективное ингибирование ММП-9, таким образом, показатель ИЦХ-индекс снизился до 100, оставаясь при этом на уровне 237,7 в клетках, инкубированных со скрамблированными РНК. Ингибирование ММП-9 вызывало снижение уровня клеточной пролиферации в 3 раза. При оценке выживаемости животных средняя продолжительность жизни животных (СПЖ) опытной группы увеличилась в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой, а показатель УПЖ составил 37 %. Таким образом, ингибитор ММП-9 оказывал биологически значимый эффект на продолжительность жизни животных-опухоленосителей.

Выводы. Селективное воздействие на активность матриксной металлопротеиназы-9 может быть использовано для формирования новых терапевтических стратегий при меланоме кожи.

ДЕПРЕССИЯ МАКРОФАГОВ И ИзМЕНЕНИЕ МАТРИКСНЫХ металлопротеиназ и их тканевого ингибитора при развитии и метастазировании аденокарциномы ЛЕГКИХ ЛЬЮИС

Т.В. АЛЕКСЕЕНКО, С.Я. жАНАЕВА, Т.А. КОРОЛЕНКО

НИИ физиологии СО РАМН, г. Новосибирск

Актуальность. Известно, что матриксные деградацию основных компонентов внеклеточ-

металлопротеиназы (ММР), осуществляющие ного матрикса, играют важную роль в развитии