САЙТ-СПЕЦИФИЧНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНСУЛИНА

1. Конъюгат инсулина, в котором инсулин и Fc-область иммуноглобулина связаны друг с другом через непептидильный полимерный линкер, выбранный из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинации, и один конец непептидильного полимера связан с аминокислотным остатком бета-цепи инсулина, за исключением ее N-конца, а другой его конец связан с Fc-областью иммуноглобулина.
2. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором непептидильный полимер связан с любым из аминокислотных остатков в положениях 20-29 бета-цепи инсулина.
3. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором непептидильный полимер связан с любым из аминокислотных остатков в положениях 25-29 бета-цепи инсулина.
4. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором непептидильный полимер связан с остатком лизина в положении 29 бета-цепи инсулина.
5. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором аминокислотный остаток бета-цепи инсулина, с которым связан непептидильный полимер, имеет аминогруппу или тиоловую группу.
6. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором инсулин представляет собой нативный инсулин или вариант, который получен одним из способов замены, добавления, удаления и модификации некоторых аминокислот нативного инсулина или их комбинацией, производное инсулина, агонист инсулина или его фрагмент.
7. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором оба конца непептидильного полимера связаны с аминогруппой или тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка Fc-области иммуноглобулина и бета-цепи инсулина соответственно.
8. Конъюгат инсулина по п. 7, в котором аминокислота представляет собой природную или неприродную аминокислоту.
9. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором Fc-область иммуноглобулина агликозилирована.
10. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором Fc-область иммуноглобулина состоит из одного-четырех доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов СН1, СН2, СН3 и СН4.
11. Конъюгат инсулина по п. 10, в котором Fc-область иммуноглобулина дополнительно содержит шарнирную область.
12. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область, имеющую происхождение от IgG, IgA, IgD, IgE или IgM.
13. Конъюгат инсулина по п. 12, в котором каждый домен Fc-области иммуноглобулина представляет собой гибрид доменов из разных источников, имеющих происхождение от иммуноглобулинов, выбранных из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
14. Конъюгат инсулина по п. 12, в котором Fc-область иммуноглобулина представляет собой димер или мультимер, состоящий из одноцепочечных иммуноглобулинов, состоящих из доменов из одного и того же источника.
15. Конъюгат инсулина по п. 12, в котором Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4.
16. Конъюгат инсулина по п. 12, в котором Fc-область иммуноглобулина представляет собой человеческую агликозилированную Fc-область IgG4.
17. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором непептидильный полимер связан с аминогруппой или тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка бета-цепи инсулина с образованием пептидной, гемитиоацетальной, иминной или тиодиоксопирролидинильной связи.
18. Конъюгат инсулина по п. 1, в котором каждый из обоих концов непептидильного полимера независимо имеет реакционноспособную группу, выбранную из группы, состоящей из альдегидной группы, пропиональдегидной группы, бутиральдегидной группы, малеимидной группы и сукцинимидного производного.
19. Конъюгат инсулина по п. 18, в котором сукцинимидное производное представляет собой сукцинимидилкарбоксиметил, сукцинимидилвалерат, сукцинимидилметилбутаноат, сукцинимидилметилпропионат, сукцинимидилбутаноат, сукцинимидилпропионат, N-гидроксисукцинимид или сукцинимидилкарбонат.
20. Конъюгат инсулина по п. 18, в котором оба конца непептидильного полимера имеют бутиральдегидную реакционноспособную группу или сукцинимидилвалератную реакционноспособную группу соответственно.
21. Композиция инсулина длительного действия, имеющая улучшенные продолжительность действия и стабильность in vivo, содержащая конъюгат инсулина по любому из пп. 1-20.
22. Композиция инсулина длительного действия по п. 21, используемая для лечения диабета.
23. Способ получения конъюгата инсулина по п. 1, включающий стадии:
(1) ковалентного связывания непептидильного полимера с аминокислотным остатком бета-цепи инсулина, за исключением ее N-конца;
(2) выделения комплекса инсулина, в котором непептидильный полимер ковалентно связан с аминокислотным остатком бета-цепи инсулина, за исключением ее N-конца, из реакционной смеси со стадии (1), и
(3) ковалентного связывания Fc-области иммуноглобулина с другим концом непептидильного полимера выделенного комплекса с получением конъюгата инсулина, в котором Fc-область иммуноглобулина и инсулин связаны с каждым концом непептидильного полимера.
24. Способ по п. 23, где непептидильный полимер связывается с аминогруппой или тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка бета-цепи инсулина с образованием пептидной, гемитиоацетальной, иминной или тиодиоксопирролидинильной связи.
25. Способ по п. 23, где каждый из обоих концов непептидильного полимера независимо имеет альдегидное производное, малеимидное производное или сукцинимидное производное в качестве реакционноспособной группы.
26. Способ по п. 23, где оба конца непептидильного полимера связаны с аминогруппой или тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка бета-цепи инсулина за исключением ее N-конца и Fc-области иммуноглобулина соответственно.
27. Способ по п. 23, где каждый из обоих концов непептидильного полимера независимо имеет бутиральдегидную группу или сукцинимидилвалератную реакционноспособную группу.
28. Способ по п. 23, где стадию (1) проводят в щелочной среде при рН 9,0 плюс/минус 2.
29. Способ по любому из пп. 23-28, где молярное соотношение инсулина и непептидильного полимера на стадии (1) составляет от 1:1,5 до 1:10.
30. Способ по любому из пп. 23-28, где молярное соотношение комплекса инсулина и Fc-области иммуноглобулина на стадии (3) составляет от 1:1 до 1:10.