ПРОИЗВОДНЫЕ ЭТИНИЛА
ETHINYL DERIVATIVES

Настоящее изобретение относится к соединениям формул IA и IB
или их фармацевтически приемлемым солям или кислотно-аддитивным солям, рацемической смеси, или их соответствующим энантиомерам и/или оптическим изомерам и/или стереоизомерам.
Неожиданно было обнаружено, что соединения формул IA и IB являются положительными аллостерическими модуляторами (PAMs) метаботропного глутаматного рецептора 4 (mGluR4). Метаботропный глутаматный рецептор 4 является белком, который кодируется геном GRM4 у млекопитающих.
Вместе с GRM6, GRM7 и GRM8 он принадлежит к группе III семейства метаботропных глутаматных рецепторов и отрицательно связан с аденилатциклазой посредством активации белка Gai/o. Он экспрессируется главным образом на пресинаптических нервных окончаниях, функционируя как ауторецептор или гетероцептор, и его активация приводит к уменьшению высвобождения нейромедиатора из пресинаптических окончаний. В настоящее время mGluR4 уделяется большое внимание, в основном благодаря его уникальному распределению и недавним свидетельствам того, что активация этого рецептора играет ключевую модуляторную роль во многих путях, относящихся и не относящихся к ЦНС (Celanire S, Campo В, Expert Opinion in Drug Discovery, 2012)
Сходство в лигандсвязывающих доменах рецепторов mGluR группы III создает проблему для идентификации селективных ортостерических агонистов этого рецептора, хотя в этой области был достигнут некоторый прогресс. Однако нацеливание на положительные аллостерические модуляторы (РАМ), а не на ортостерические агонисты, обеспечивает более широкую возможность для идентификации молекул, которые являются исключительно селективными в отношении mGluR.
Модуляторы mGluR4 РАМ являются перспективными терапевтическими средствами для лечения двигательных (и немоторных) симптомов, а также агентами, модифицирующими заболевание при болезни Паркинсона не через дофаминергический подход.
Болезнь Паркинсона (БП) является прогрессирующим нейродегенеративным заболеванием, которое приводит к потере дофаминергических нейронов в черной субстанции (SN). Одним из последствий недостатка дофамина при этом заболевании является серия двигательных расстройств, включая брадикинезию, акинезию, тремор, расстройства походки и проблемы с равновесием. Эти двигательные нарушения образуют отличительный признак БП, хотя есть много других немоторных симптомов, связанных с заболеванием. На ранних стадиях заболевания симптомы БП эффективно лечат путем замещения или увеличения дофамина с использованием агонистов дофаминовых рецепторов D2, леводопы или ингибиторов моноаминоксидазы В. Однако по мере прогрессирования заболевания эти агенты становятся все менее эффективными при контроле моторных симптомов. Кроме того, их использование ограничено появлением побочных эффектов, включая дискинезии, вызванные агонистами допамина.
Следовательно, остается потребность в новых подходах к лечению БП, которые повышают эффективность контроля моторных симптомов. Активация метаботропного глутаматного рецептора 4 (mGluR4) была предложена в качестве потенциального терапевтического подхода к болезни Паркинсона. Член mGluRs III группы, mGluR4, является преимущественно пресинаптическим рецептором глутамата, который экспрессируется в нескольких ключевых местах в контурах базальных ганглиев, контролирующих движение. Активация mGluR4 с предпочтительными агонистами группы III снижает ингибирующий и возбуждающий постсинаптические потенциалы, предположительно, за счет уменьшения высвобождения ГАМК и глутамата соответственно.
Поиск новых лекарств, которые снимают моторные симптомы паркинсонизма, одновременно ослабляя продолжающуюся дегенерацию нигростриатальных нейронов, представляет особый интерес. Ортостерический агонист mGluR4 L-AP4 продемонстрировал нейропротекторные эффекты на модели грызунов с БП 6-OHDA и первый положительный аллостерический модулятор (-) - РНССС снижал нигростриатальную дегенерацию у мышей, получавших 1-метил-4-фенил-1,2,3, 6-Тетрагидропиридин (МРТР). Эти исследования предоставляют убедительные доклинические данные, свидетельствующие о том, что активаторы mGluR4 представляют собой приемлемый подход не только для симптоматического лечения БП, но и потенциально в качестве модификаторов заболевания для этого показания.
Нейропротекторные эффекты селективных модуляторов mGluR4 также были описаны в Neuroreport, 19(4), 475-8, 2008, Proc.Natl. Acad. Sci, USA, 100(23), 13668-73, 2003 и J.Neurosci. 26(27), 7222-9, 2006 и Mol. Pharmacol. 74(5), 1345-58, 2008..
Тревожные расстройства являются одними из наиболее распространенных психиатрических расстройств в мире и сопутствуют болезни Паркинсона (Prediger R, et al. Neuropharmacology 2012; 62: 115-24). Чрезмерная глутаматергическая нейротрансмиссия является одной из важных особенностей патофизиологии тревожности. На основе пресинаптической локализации mGluR4 в областях мозга, связанных с тревожными расстройствами и расстройствами настроения, и ослабления чрезмерной возбудимости головного мозга, активаторы mGluR4 могут представлять собой новое поколение анксиолитических средств (Eur. J. Pharmacol., 498 (1-3), 153-6, 2004).
В 2010 году Addex сообщил, что ADX88178 был активен в двух доклинических моделях тревожности у грызунов: тест на закапывание шариков на мышах и ЕРМ на мышах и крысах. ADX88178 также показал анксиолитический профиль в тесте ЕРМ на крысах после перорального приема.
Также было показано, что модуляторы mGluR4 оказывают антидепрессивное действие (Neuropharmacology, 46 (2), 151-9, 2004).
Кроме того, было показано, что модуляторы mGluR4 участвуют в ингибировании секреции глюкагона (Diabetes, 53 (4), 998-1006, 2004). Следовательно, ортостерические или положительные аллостерические модуляторы mGluR4 обладают потенциалом для лечения диабета 2 типа благодаря его гипогликемическому эффекту.
Более того, было показано, что mGluR4 экспрессируется в клеточной линии рака предстательной железы (Anticancer Res. 29 (1), 371-7, 2009) или колоректальной карциноме (Cli. Cancer Research, 11 (9) 3288-95, 2005). Следовательно, модуляторы mGluR4 также могут играть потенциальную роль в лечении рака.
Можно ожидать других предполагаемых эффектов mGluR4 РАМ для лечения рвоты, обсессивно-компульсивного расстройства, анорексии и аутизма.
Соединения формул IA и IB отличаются ценными терапевтическими свойствами. Их можно использовать при лечении или профилактике расстройств, связанных с аллостерическими модуляторами рецептора mGluR4.
Наиболее предпочтительными показаниями для соединений, которые являются аллостерическими модуляторами рецептора mGluR4, являются болезнь Паркинсона, тревожность, рвота, обсессивно-компульсивное расстройство, анорексия, аутизм, нейропротекция, рак, депрессия и диабет 2 типа.
Настоящее изобретение относится к соединениям формул IA и IB и к их фармацевтически приемлемым солям, к этим соединениям в качестве фармацевтически активных веществ, к способам их получения, а также к их применению для лечения или профилактики расстройств, связанных с аллостерическими модуляторами рецепторов mGluR4, таких как болезнь Паркинсона, тревожность, рвота, обсессивно-компульсивное расстройство, аутизм, нейропротекция, рак, депрессия и диабет типа 2, и к фармацевтическим композициям, содержащим соединения формул IA и IB.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики болезни Паркинсона, тревожности, рвоты, обсессивно-компульсивного расстройства, анорексии, аутизма, нейропротекции, рака, депрессии и диабета 2 типа, который включает введение эффективного количества соединения формул IA и IB нуждающемуся в этом млекопитающему.
Кроме того, изобретение включает все рацемические смеси, все их соответствующие энантиомеры и/или оптические изомеры или аналоги, содержащие изотопы водорода, фтора, углерода, кислорода или азота.
Термин «фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль» охватывает соль с неорганическими и органическими кислотами, такими как соляная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота или n-толуолсульфоновая кислота.
Получение соединений формул IA и IB по настоящему изобретению можно проводить последовательными или конвергентными способами синтеза. Синтез соединений по изобретению показан на следующей схеме 1. Навыки, необходимые для проведения реакции и очистки полученных продуктов, известны специалистам в данной области. Заместители и индексы, используемые в последующем описании процессов, имеют значение, приведенное здесь ранее.
Соединения формул IA и IB могут быть получены способами, приведенными ниже, способами, приведенными в примерах, или аналогичными способами. Подходящие условия реакции для отдельных стадий реакции известны специалисту в данной области. Последовательность реакций не ограничивается той, что показана на схемах, однако в зависимости от исходных материалов и их соответствующей реакционной способности последовательность стадий реакции может быть свободно изменена. Исходные материалы либо коммерчески доступны, либо могут быть получены способами, аналогичными способам, приведенным ниже, способами, описанными в ссылках, приведенных в описании или в примерах, или способами, известными в данной области техники.
Настоящие соединения формул IA и IB и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены способами, известными в уровне техники, например вариантом способа, описанным ниже, который содержит
- Алкилирование соединения формулы
этилйодидом и разделение изомеров на соединения формул
Или, в случае необходимости, конвертирование полученных соединений в их фармацевтически приемлемые соли.
Получение соединений формулы IA и IB далее более детально описано на Схеме 1 и в примерах 1-2.
Пример 1
Соединения общей формулы I могут быть получены, например, взаимодействием 2,6-дифторо-4-йодо-фениламина 6 с подходящим синтезированным аминоэфиром формулы CDI в растворителе, таком как ДМФ, с образованием требуемого аналога мочевины формула 7. Замыкание кольца соединения 7 с помощью сильного основания, такого как NaH и введение метила посредством алкилирования защищенного пиразола 8 дает требуемое алкилированное соединение 9. Связывание по Соногашире соединения 9 с фенилацетиленом 10 дает после депротекции SEM группы требуемое этинильное соединение 12. Введение этила посредством алкилирования и разделение образовавшихся изомером дает требуемые конечные соединения формулы I (Схема 1).
В целом, последовательность стадий для синтеза соединений формулы I также может быть модифицирована в некоторых случаях.
Биологическое тестирование и данные:
50
Определение значений ЕС с использованием анализа мобилизации Са2+ in vitro на клетках HEK293, экспрессирующих рекомбинантный mGlu4 человека:
Получили моноклональную клеточную линию HEK-293 стабильно трансфицированную cDNA, кодирующей рецепторы mGlu4 человека; для работы с положительными аллостерическими модуляторами (РАМ) mGlu4, отобрали клеточные линии с низким уровнем экспрессии и низкой конститутивной активностью рецепторов для того, чтобы дифференцировать активность агонистов от активности РАМ. Клетки культивировали согласно стандартным протоколам (Freshney, 2000) в среде Игла, модифицированной по Дульбекко с высоким содержанием глюкозы и добавлением 1 мМ глутамина, 10% (об./об.) инактивированной нагреванием бычьей сыворотки, Пенициллин/Стрептомицин, 50 мкг/мл гидромицина и 15 мкг/мл бластицидина (все реагенты для культивирования клеток и антибиотики были производства Invitrogen, Basel, Switzerland).
4
20
20
Приблизительно за 24 часа перед экспериментом, засеяли 5×10 клеток/лунка в покрытые поли-D-лизином черные с прозрачным дном 96-луночные планшеты. Клетки нанесли с 2.5 мкМ Fluo-4AM в буфере для нанесения (1xHBSS, 20 мМ HEPES) в течение 1 часа при 37°С и промыли 5 раз буфером для нанесения. Клетки перенесли в систему Functional Drug Screening System 7000 (Hamamatsu, Paris, France), и добавили 11 полулогарифмических разведений тестируемых соединений при 37°С и клетки инкубировали в течение 10-30 минут с онлайн записью флуоресценции. После этой преинкубационной стадии, к клеткам добавили агонист 2S-2-амино-4-фосфонобутановую кислоту (L-AP4) при концентрации, соответствующей ЕС с онлайн записью флуоресценции; с целью посчитать дневные изменения в ответной реакции клеток, ЕС L-AP4 определили непосредственно перед каждым экспериментом посредством записи полной кривой доза-ответ для L-AP4.
50
50
Ответы измеряли как пик увеличения флуоресценции минус базальный уровень (т.е. флуоресценция без добавления L-AP4), нормализованный по максимальному стимулирующему эффекту, полученному с насыщающими концентрациями L-AP4. Графики строили в процентах от максимальной стимуляции с использованием XLfit, программы, строящей кривые, которая итеративно наносит точки данных с использованием алгоритма Левенберга - Марквардта. Использованным уравнением одноточечного конкурентного анализа являлось у=А+((B-A)/(1+((x/C)D))), где у представляет собой % максимального стимулированного эффекта, А представляет собой минимум у, В представляет собой максимум у, С представляет собой ЕС, х представляет собой log10 концентрации конкурирующего соединения и D представляет собой наклон кривой (коэффициент Хилла). Из этих кривых были рассчитаны ЕС (концентрация лекарственного средства при которой достигалось 50% максимальной активации рецепторов), коэффициент Хилла, а также максимальный ответ в % от максимального эффекта стимуляции, полученного посредством насыщающих концентраций L-AP4.
20
20
Положительные сигналы, полученные в течение преинкубации с РАМ тестовыми соединениями (т.е. до внесения ЕС концентрации L-AP4) были индикативными для агонистической активности, отсутствие таких сигналов демонстрировало отсутствие агонистической активности. Снижение сигнала, наблюдаемое после внесения ЕС концентрации L-AP4 было индикативным для ингибиторной активности тестового соединения.
50
Демонстрация экспериментальных данных для mGlu4 РАМ Са2+ мобилизационного скринингового анализа и определения значений ЕС и % Emax.
Соединения формул IA и IB и их фармацевтически приемлемые соли могут применяться в качестве лекарственных средств, например в виде фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты могут быть введены перорально, например, в виде таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий. Однако введение также может быть осуществлено ректально, например, в форме суппозиториев, или парентерально, например, в виде растворов для инъекций.
Соединения формул IA и IB и их фармацевтически приемлемые соли могут быть переработаны с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических препаратов. Лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли и т.п. могут быть использованы, например, в качестве таких носителей для таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п.; в зависимости от природы активного вещества никаких носителей, однако, обычно не требуется в случае мягких желатиновых капсул. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.п. Адъюванты, такие как спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п., могут быть использованы для водных инъекционных растворов на основе водорастворимых солей соединений формул IA и IB, но, как правило, не являются необходимыми. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, природные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и т.п.
Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Они также могут содержать другие терапевтически ценные вещества.
Как упоминалось ранее, лекарственные средства, содержащие соединение формул IA и IB или их фармацевтически приемлемые соли и терапевтически инертный эксципиент, также являются объектом настоящего изобретения, так же как и способ получения таких лекарственных средств, который включает приведение одного или более соединений формул IA и IB или их фармацевтически приемлемых солей и, при необходимости, одного или более других терапевтически ценных веществ в галенову лекарственную форму вместе с одним или более терапевтически инертным носителем.
Как также упоминалось ранее, применение соединений формул IA и IB для получения лекарственных средств для профилактики и/или лечения указанных выше заболеваний также является объектом настоящего изобретения.
Дозировка может варьироваться в широких пределах и, конечно, должна соответствовать индивидуальным требованиям в каждом конкретном случае. В общем, эффективное дозирование для перорального или парентерального введения находится в интервале 0,01-20 мг/кг/день, дозировка 0,1-10 мг/кг/день является предпочтительной для всех описанных показаний. Суточная доза для взрослого человека весом 70 кг, соответственно, находится в интервале 0,7-1400 мг в день, предпочтительно между 7 и 700 мг в день.
Получение фармацевтических композиций, содержащих соединения по изобретению:
Методика изготовления
1. Смешивают ингредиенты 1, 2, 3 и 4 и гранулируют с очищенной водой.
2. Высушивают гранулы при 50°С.
3. Пропускают гранулы через подходящее измельчающее оборудование.
4. Добавляют ингредиент 5 и перемешивают три минуты; прессуют на подходящем прессе.
Методика изготовления
1. Смешивают ингредиенты 1, 2 и 3 в подходящем смесителе в течение 30 минут.
2. Добавляют ингредиенты 4 и 5 и перемешивают в течение 3 минут.
3. Заполняют подходящие капсулы.
Соединение формулы I, лактозу и крахмал сначала смешивают в смесителе и затем в измельчителе. Смесь возвращают в смеситель; туда добавляют тальк и тщательно перемешивают. Смесью заполняют подходящие капсулы с помощью аппарата, например твердые желатиновые капсулы.
Методика изготовления
Соединение формул IA и IB растворяют в смеси полиэтиленгликоля 400 и воды для инъекций (часть). рН доводят до 5.0 с помощью уксусной кислоты. Объем доводят до 1.0 мл посредством добавления оставшегося количества воды. Раствор фильтруют, заполняют им флаконы с использованием подходящего оборудования и стерилизуют.
Экспериментальный раздел:
Пример 1
(4S)-3'-[2,6-Дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-2-этил-1'-метил-спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
Стадия 1:2-((2-(Триметилсилил)этокси)метил)-6,7-дигидро-2Н-индазол-4(5Н)-он
3
+
6,7-Дигидро-2Н-индазол-4(5Н)-он (CAS 912259-10-0) (1.46 г, 10.7 ммоль) растворили в NUA (15 мл) и охладили до 0-5°С. Гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле) (450 мг, 11.3 ммоль, 1.05 экв.) добавили осторожно по порциям и смесь перемешивали в течение 60 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь охладили снова до 0-5°С и (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан (2.28 мл, 2.15 г, 12.9 ммоль, 1.2 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали осторожно насыщенным раствором NaHCO и дважды этилацетатом. Органические слои промыли солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Требуемый 2-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-6,7-дигидро-2Н-индазол-4(5Н)-он (колич. выход) получили в виде желтого масла, MS: m/e=267.2 (М+Н).
Стадия 2: (NЕ)-2-метил-N-[1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-илиден]пропан-2-сульфинамид
3
+
2-((2-(Триметилсилил)этокси)метил)-6,7-дигидро-2Н-индазол-4(5Н)-он (Пример 1, стадия 1) (40g, 150.14 ммоль) растворили в 400 мл ТГФ (THF). (R)-2-Метилпропан-2-сульфинамид (CAS 196929-78-9) (27.3 г, 225.2 ммоль, 1.5 экв.) и этоксид титана (IV) (102.75 г, 93.4 мл, 450.42 ммоль, 3.0 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 4 часов при 70°С. Реакционную смесь охладили и добавили насыщенный раствор NaHCO и этилацетат. Образовавшуюся суспензию отфильтровали через целит и фильтрат экстрагировали дважды этилацетатом. Органические слои промыли солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Требуемый (NE)-2-метил-N-[1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-илиден]пропан-2-сульфинамид (20.0 г, 36% выход) получили в виде коричневого масла, MS: m/e=370.2 (М+Н).
Стадия 3: Метил 2-[(4S)-4-[[(R)-трет-бутилсульфинил]амино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат
3
+
Метилацетат (22.25 г, 23.9 мл, 300.3 ммоль, 3 экв.) растворили в 370 мл безводного ТГФ и раствор охладили до -70°С. LDA (2.0 М в ТГФ/гептан/этилбензол) (150 мл, 300.3 ммоль, 3 экв.) добавили по каплям при -75°С до -65°С и смесь перемешивали в течение 45 минут при -70°С. Хлортитана триизопропоксид (1.0 М в дихлорметане) (400 мл, 400 ммоль, 4 экв.) добавили по каплям при -75°С до -65°С и смесь перемешивали в течение 45 минут при -70°С. (NE)-2-метил-N-[1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-илиден]пропан-2-сульфинамид (Пример 1, стадия 2) (37 г, 100 ммоль), растворенный в 370 мл безводного ТГФ добавили по каплям при -75°С до -65°С и смесь перемешивали в течение 1 часа при -70°С. Насыщенный раствор NaHCO добавили и смесь перемешивали в течение 10 минут. Этилацетат добавили к образовавшейся суспензии и смесь перемешивали в течение 10 минут. Образовавшуюся суспензию отфильтровали через целит и фильтрат экстрагировали дважды этилацетатом. Органические слои промыли водой и солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Неочищенный продукт очистили с помощью флеш-хроматографии. Требуемый метил 2-[(4S)-4-[[(R)-трет-бутилсульфинил]амино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (22 г, 40% выход) получили в виде коричневого масла, MS: m/e=444.2 (М+Н).
Стадия 4: Метил 2-[(4S)-4-амино-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат
3
+
Метил 2-[(4S)-4-[[(R)-трет-бутилсульфинил]амино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (Пример 1, стадия 3) (20 г, 45.08 ммоль) растворили в 500 мл этилацетата и HCI (4н в этилацетате) (56.3 мл, 225.4 ммоль, 5 экв.) добавили по каплям при 0-5°С. Смесь перемешивали в течение 30 минут при 0-5°С. Реакционную смесь эвапорировали при 0-5°С и экстрагировали насыщенным раствором NaHCO и три раза дихлорметаном. Органические слои объединили, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Требуемый метил 2-[(4S)-4-амино-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (340 мг, 54% выход) получили в виде желтого масла, MS: m/e=340.1 (М+Н).
Стадия 5: Метил 2-[(4S)-4-[(2,6-дифторо-4-йодо-фенил)карбамоиламино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат
+
2,6-дифторо-4-йодоанилин (14.4 г, 56.56 ммоль, 1.2 экв.) растворили в ДМФ (250 мл) и CDI (9.17 г, 56.56 ммоль, 1.2 экв.) добавили при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 1 часа при 100°С. К этой смеси добавили метил 2-[(4S)-4-амино-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (Пример 1, стадия 4) (16 г, 47.13 ммоль, 1.0 экв.), растворенный в 20 мл ДМФ, при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь влили в воду и экстрагировали три раза этилацетатом. Органические слои промыли водой и солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Неочищенный продукт очистили с помощью флеш-хроматографии. Требуемый метил 2-[(4S)-4-[(2,6-дифторо-4-йодо-фенил)карбамоиламино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (9.1 г, 19% выход) получили в виде коричневой смолы, MS: m/e=621.1 (М+Н).
Стадия 6: (4S)-3'-(2,6-Дифторо-4-йодо-фенил)-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
4
+
(18 г, 29.01 ммоль) метил 2-[(4S)-4-[(2,6-дифторо-4-йодо-фенил)карбамоиламино]-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-6,7-дигидро-5Н-индазол-4-ил]ацетат (Пример 1, стадия 5) растворили в NUA (360 мл) и гидрид натрия (60% в минеральном масле) (1.74 г, 43.52 ммоль, 1.5 экв.) добавили при 0-5°С. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали насыщенным раствором NHCI и три раза этилацетатом. Органические слои промыли солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Требуемый (4S)-3'-(2,6-дифторо-4-йодо-фенил)-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион (240 мг, 86% выход) получили в виде желтой смолы, MS: m/e=589.0 (М+Н).
Стадия 7: (4S)-3'-(2,6-Дифторо-4-йодо-фенил)-1'-метил-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
+
(17 г, 28.9 ммоль) (4S)-3'-(2,6-Дифторо-4-йодо-фенил)-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-диона (Пример 1, стадия 6) растворили в ДМФ (200 мл) и карбонат цезия (14.12 г, 43.34 ммоль, 1.5 экв.) и йодометан (4.92 г, 2.16 мл, 34.67 ммоль, 1.2 экв.) добавили при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь влили в воду и экстрагировали три раза этилацетатом. Органические слои промыли водой и солевым раствором, высушили над сульфатом натрия и эвапорировали досуха. Неочищенный продукт очистили с помощью флеш-хроматографии на колонке с силикагелем с элюцией градиентом петролейный эфир:этилацетат 10:1 до 1:1. Требуемый (4S)-3'-(2,6-дифторо-4-йодо-фенил)-1'-метил-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион (15.7 г, 90% выход) получили в виде желтой смолы, MS: m/e=603.2 (М+Н).
Стадия 8: (4S)-3'-[2,6-Дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1'-метил-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
+
(4S)-3'-(2,6-Дифторо-4-йодо-фенил)-1'-метил-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион (Пример 1, стадия 7) (12 г, 19.9 ммоль) и фенилацетилен (3.05 г, 3.32 мл, 29.9 ммоль, 1.5 экв.) растворили в 120 мл ТГФ. Триэтиламин (10.1 г, 13.9 мл, 99.6 ммоль, 5 экв.), бис-(трифенилфосфин)-палладия (II) дихлорид (420 мг, 0.6 ммоль, 0.03 экв.), трифенилфосфин (313 мг, 1.2 ммоль, 0.06 экв.) и йодид меди (I) (114 мг, 0.6 ммоль, 0.03 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 3 часов при 60°С. Реакционную смесь эвапорировали с изолютом. Неочищенный продукт очистили с помощью флеш-хроматографии на колонке с силикагелем с элюцией градиентом этилацетат:гептан 30:70 до 100:0. Требуемый (4S)-3'-[2,6-дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1'-метил-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион (11.2 г, 98% выход) получили в виде коричневой пены, MS: m/e=577.3 (М+Н).
Стадия 9: (4S)-3'-[2,6-Дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1'-метил-спиро[1,5,6,7-тетрагидроиндазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
+
Соединение, указанное в заголовке получили в виде белой пены, MS: m/e=447.2 (М+Н), с использованием химических реакций, аналогичных описанным в Примере 1, стадия 4 посредством перемешивания реакционной смеси в течение 2 часов при 80°С, начиная с (S)-1'-(2,6-дифторо-4-(фенилэтинил)фенил)-3'-метил-2-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-2,5,6,7-тетрагидро-1'Н-спиро[индазол-4,4'-пиримидин]-2',6'(3'H,5'H)-диона (Пример 1, стадия 8).
Стадия 10: (4S)-3'-[2,6-Дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-2-этил-1'-метил-спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
+
Соединение, указанное в заголовке, получили в виде белого осадка, MS: m/e=475.4 (М+Н), с использованием химических реакций, аналогичных описанным в Примере 1, стадия 7, начиная с (4S)-3'-[2,6-дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1'-метил-спиро[1,5,6,7-тетрагидроиндазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-диона (Пример 1, стадия 9) и йодэтана. Требуемый (4S)-3'-[2,6-дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-2-этил-1'-метил-спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион получили разделением двух образовавшихся изомеров с использованием колонки Reprosil Chiral NR с помощью смеси гептан:этанол 60:40 в качестве элюента, собрав пик А.
Пример 2
(4S)-3'-[2,6-Дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1-этил-1'-метил-спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион
+
Соединение, указанное в заголовке получили в виде белого осадка, MS: m/e=475.4 (М+Н), с использованием химических реакций, аналогичных описанным в Примере 1, стадия 7, начиная с (4S)-3'-[2,6-дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1'-метил-спиро[1,5,6,7-тетрагидроиндазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-диона (Пример 1, стадия 9) и йодэтана. Требуемый (4S)-3'-[2,6-дифторо-4-(2-фенилэтинил)фенил]-1-этил-1'-метил-спиро[6,7-дигидро-5Н-индазол-4,6'-гексагидропиримидин]-2',4'-дион получили разделением двух образовавшихся изомеров с использованием колонки Reprosil Chiral NR с помощью смеси гептан:этанол 60:40 в качестве элюента, собрав пик В.