АНТИРАБИЧЕСКАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ДИКИХ И БРОДЯЧИХ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕЕ
RABIES VACCINE FOR ORAL IMMUNISATION OF WILD AND STRAY CARNIVOROUS ANIMALS  AND METHOD FOR PRODUCING SAME

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики, и в частности для получения вакцины против бешенства животных.
Известен способ получения вирусвакцины против бешенства для пероральной иммунизации плотоядных, при котором выращенную в перевиваемой культуре клеток почки сайги суспензию вируса бешенства, штамм ТС-80, смешанную со стабилизирующей средой и пектином в соотношении 1:1:(1-2), подвергают сублимационному высушиванию в течение 48-72 ч, размалывают в шаровой мельнице и заполняют полученной массой полые брикеты-приманки (Патент РФ № 2157700, МПК А61К 39/205, 10.20.2000).
Известен способ изготовления вирусвакцины против бешенства для оральной иммуннизации диких плотоядных животных, при котором вирус бешенства, штамм ТС-80 смешивают со стабилизирующей средой, полученный полуфабрикат наносят на приманку из муки, замораживают и высушивают сублимацией в течение 24-30 ч. (Патент РФ № 2250781, МПК А61К 39/12, А61К 39/205, 27.04.2005).
Недостатками этих способов являются многостадийность (7-10 этапов), продолжительность получения готовых форм и высокая себестоимость, при этом получают брикеты-приманки, не обеспечивающие гарантированную сохранность, поедаемость и стабильность вакцины.
Наиболее близким аналогом является антирабическая вакцина для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая иммунизирующий антиген бешенства и аттрактант, причем в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер-тетрациклин. Использование неочищенного зерна хлебных злаков позволяет нарушать целостность слизистой ротовой полости животных, что увеличивает эффект их вакцинирования (Патент РФ № 2440139, МКИ А61К 39/205, А61Р 31/12, 03.11.2010).
Также известен способ получения антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости с последующим получением иммунизирующего антигена бешенства и добавлением к нему аттрактанта и формообразующего компонента. Вируссодержащую жидкость замораживают при минус 20-40°C, затем готовят приманку в течение 25-30 минут при температуре 55-60°C, снижают температуру до 40-45°C, вносят в приманку вирус и готовую форму препарата замораживают при минус 20-40°C. (Патент РФ № 2440139, МКИ А61К 39/205, А61Р 31/12, 03.11.2010).
Недостатком ближайшего аналога является многокомпонентность и жесткие условия хранения готового препарата (минус 20-40°C), неудобство в применении при различных погодных условиях, а также многостадийность и сложность процесса получения целевого продукта (частая смена температурных режимов).
Технический результат от использования изобретения заключается в упрощении и ускорении способа при увеличении сроков хранения и сохранении антигенной и иммуногенной активности целевого продукта.
50
Технический результат достигается в антирабической вакцине для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, включающей иммунизирующий антиген бешенства и аттрактант, отличающийся тем, что в качестве иммунизирующего антигена бешенства используется антиген авирулентного вируса бешенства с инфекционной активностью 6,0-8,5 lg МЛД/мл, в качестве формообразующего компонента содержит цеолит природный или синтетический, при следующем содержании компонентов, мас. %:
Антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0-8,5 lg МЛД<sub>50</sub>/мл
1,0-2,0
цеолит природный или синтетический
10,0-50,0
аттрактант
остальное
Технический результат достигается также в антирабической вакцине для пероральной иммунизации диких плотоядных животных тем, что в качестве авирулентного антигена бешенства используют авирулентный антиген бешенства, полученный из штамма ERA G333, или штамма РВ-97, или штамма «Щелково-51», или штамма ТС-80.
Технический результат достигается также в антирабической вакцине для пероральной иммунизации диких плотоядных животных тем, что в качестве цеолита природного содержит цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения или минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животным и птице «СТИМУЛ».
Технический результат достигается также в антирабической вакцине для пероральной иммунизации диких плотоядных животных тем, что в качестве цеолита синтетического содержит цеолит NaX или NaA-У.
Технический результат достигается также в антирабической вакцине для пероральной иммунизации диких плотоядных животных тем, что в качестве аттрактанта используют муку комовую из рыбы, или мясокостную муку, или гидролизат эритроцитов.
Технический результат достигается также в антирабической вакцине для оральной иммунизации диких плотоядных животных тем, что дополнительно содержит тетрациклин в конечной концентрации 0,3-1,2%.
50
Технический результат достигается также в способе получения антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, включающем приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости с последующим получением иммунизирующего антигена бешенства и добавлением формообразующего компонента и аттрактанта тем, что в качестве иммунизирующего антигена бешенства используют антиген авирулентного вируса бешенства с инфекционной активностью 6,0-8,5 lg МЛД/мл, к которому добавляют в качестве формообразующего компонента цеолит природный или синтетический, с последующей экспозицией 60-90 минут при комнатной температуре, причем цеолит используют с размером частиц 50-500 мкм и предварительно термически обработанный при 120-180°C в течение 2,0-3,0 ч, а целевой продукт получают путем экструзии с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре.
Известно использование штаммов ERA G333, РВ-97 (Патент РФ № 2440139, МКИ А61К 39/205, А61Р 31/12, 03.11.2010), «Щелково-51» (Патент РФ №2191600, МКИ А61К 39/205, 27.10.2002) и штамм ТС-80 (Патент РФ № 2157700, МПК А61К 39/205, 10.20.2000) для вакцин против бешенства плотоядных животных.
2
2
3
6
30
72
20
2
Известен цеолит природный (клиноптилолит) представляющий собой цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения. Кристаллохимическая формула клиноптилолита: (KNaCa) [AlSiO]HO (ТУ РА 37209976.2010).
Известен цеолит природный представляющий собой минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животным и птице «СТИМУЛ» (ТУ №2163-002-55345068-2001), изготовитель ОАО «Промцеолит».
Известен цеолит синтетический - Цеолит NaX (ТУ 2163-077-05766575-99) и Цеолит NaA-У (ТУ 2163-003-15285215-2006).
Известен гидролизат эритроцитов - биологически активного вещества с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 80% и с массовой долей железа не менее 0,2% (патент РФ № 2274003; МПК A23J 1/06, Бюл. №11, 20.04.2006), получаемый из гемоглобина крови сельскохозяйственных животных. Используется при производстве пищевых продуктов, биологически активных добавок к пище (БАД к пище), кормов, ветеринарных и лекарственных препаратов с целью профилактики и лечения железодефицитных состояний человека и животных.
Известна мясокостная мука (ГОСТ 17536-82), предназначенная для применения в производстве комбикормов и при кормлении скота и птиц.
Известна мука кормовая из рыбы (ГОСТ 2116-2000), предназначенная для выработки комбикормов и для кормления сельскохозяйственных животных.
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».
Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».
Нами впервые показано, что оральные вакцины, изготовленные по предлагаемому способу, обладали высокой вкусовой привлекательностью и поедаемостью для плотоядных животных, что обеспечило 100% иммунизацию животного.
Нами впервые установлено, что присутствие цеолита в приманке значительно повышает поедаемость и усвояемость антирабической вакцины, что приводит к ускорению иммуногенеза. Нами также показано, что гранулы цеолита при попадании в пасть животного нарушают целостность слизистой ротовой полости животных, что увеличивает эффект вакцинации. Кроме того, исследования показали, что цеолиты, формирующие основу препарата, обеспечивали "защиту" сорбированного антигена на первых этапах продвижения по желудочно-кишечному тракту животного и действовали как адьювант, активизируя процесс антителообразования. Также, испытания по разбрасыванию заявленной вакцины с помощью беспилотников и малой авиации с высоты 20 и 150 м не вызвало каких-либо повреждений готовой формы приманки-вакцины (из адсорбированного на цеолите антигена), что позволило получить неочевидный положительный эффект - упрощение способа применения при сохранении антигенной и иммуногенной активности целевого продукта, т.е. предложение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Впервые на основе цеолита реализован способ приготовления антирабической вакцины для перорального применения, позволивший исключить высоко затратный способ лиофильного обезвоживания, обогатить готовую форму препарата необходимыми качествами для ее применения в различных погодных условиях (большой диапазон температуры и влажности) и обеспечить длительное хранение при сохранении активности вакцины.
Способ иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса РВ-97 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав 1 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД<sub>50</sub>/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в металлические из нержавеющей стали формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 2.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав 2 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД<sub>50</sub>/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в металлические из нержавеющей стали формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 3.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ERA G333 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанную при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав 3 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД<sub>50</sub>/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в металлические из нержавеющей стали формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 4.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанную при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав 4 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в металлические из нержавейки формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 5.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса «Щелково-51» с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав 5 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в стеклянные формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 6.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства «Щелково-51» с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав 6 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в стеклянные формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 7.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ТС-80 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав 7 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в стеклянные формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 8.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ТС-80 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав 8 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в стеклянные формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 9.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса РВ-97 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 9 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 10.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 10 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 11.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ERA G333 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанную при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 11 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 12.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанную при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 12 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 13.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса «Щелково-51» с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД<sub>50</sub>/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0,
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 13 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 14.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства «Щелково-51» с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 14 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 15.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ТС-80 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 15 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 16.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ТС-80 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 16 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 17.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса РВ-97 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав 17 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0,
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 18.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав 18 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 19.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ERA G333 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанную при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав 19 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 20.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанную при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав 20 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 21.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса «Щелково-51» с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав 21 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 22.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства «Щелково-51» с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав 22 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 23.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ТС-80 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав 23 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 24.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ТС-80 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав 24 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 25.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса РВ-97 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 25 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 26.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - цеолитовый туф Нор-Кохбского месторождения Ноемберянского района Республики Армения с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - муки кормовой рыбной, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 26 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 27.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ERA G333 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанную при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 27 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 28.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г природного цеолита - минеральную цеолитсодержащую добавку к кормам животных и птице «Стимул» с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанную при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 28 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 29.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса «Щелково-51» с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 29 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 30.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства «Щелково-51» с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaX с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - гидролизат эритроцитов, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства
с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 30 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 31.
50
К 10 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса ТС-80 с инфекционной активностью 6,0 lg МЛД/мл, добавляют 100 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 50-100 мкм и предварительно термически обработанный при 120°C в течение 2,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 60 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостную муку, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 6,0 lg МЛД50/мл
1,0
цеолит природный или синтетический
10,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 0,3%, получая состав 31 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Пример 32.
50
К 20 г антигена бешенства, полученного из авирулентного штамма вируса бешенства ТС-80 с инфекционной активностью 8,5 lg МЛД/мл, добавляют 500 г синтетического цеолита - цеолит NaA-У с размером частиц 400-500 мкм и предварительно термически обработанный при 180°C в течение 3,0 ч. Оставляют реакционную смесь на 90 мин для сорбции вируса. К полученному полуфабрикату добавляют до 1000 г аттрактанта - мясокостной муки, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас. %:
антиген авирулентного вируса бешенства с
инфекционной активностью 8,5 lg МЛД50/мл
2,0
цеолит природный или синтетический
50,0
аттрактант
остальное
В полученный состав дополнительно вводят тетрациклин в конечной концентрации 1,2%, получая состав 32 антирабической вакцины для пероральной иммунизации диких плотоядных животных. Далее полученный состав путем экструзии размещают в пластиковые формы с последующим капиллярно-химическим обезвоживанием полученной массы при комнатной температуре и получают готовую вакцину.
Для испытания готовых вакцин, полученных согласно примерам 1-32, использовали беспородных щенков 3-5 месячного возраста, проверенных на отсутствие антител к вирусу бешенства. В каждом опыте использовали по 2-3 щенка, содержащихся в отдельных ячейках. Для определения вкусовой привлекательности щенкам предлагали на выбор приманку с экспериментальной вакциной и контрольную композицию аттрактанта без цеолита и вируса. Исходя из потребления и/или предпочтения, определяли степень привлекательности. За состоянием животных вели наблюдение в течение 30 суток. Активность вируснейтрализующих антител определяли в реакции нейтрализации с использованием референс-сыворотки.
3
Готовые вакцины, полученные по примерам 1-32, испытывали на прочность (при сбрасывании с 20 м и 150 м не ломались и не рассыпались - сохраняли первоначальную форму), термостабильность (выдерживание от минус 20 до плюс 40°C не влияет на физические показатели и биологические свойства), влагоустойчивость (при экспозиции в течение суток при комнатной температуре сохраняли первоначальную форму - не происходило размокания приманок при 90% влажности), вкусовую привлекательность, безвредность (100% поедаемость, при введении перорарольно собакам не вызывала аллергических реакций, при скармливании до 5 приманок одной особи не проявлялись видимые клинические признаки бешенства в течение 2 месяцев), активность вируснейтрализующих антител в сыворотке крови животных, вакцинированных однократно 1-2 дозами заявляемой вакцины определялась на уровне выше 0,9-2,1 МЕ/см, что превышало признанный ВОЗ лимит надежности.
Вирус-вакцина для орального применения в виде приманок-таблеток сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 12 месяцев при 6-8°C.
Как показали результаты экспериментальных исследований, предлагаемый способ получения антирабической вакцины для оральной иммунизации диких плотоядных животных позволяет упростить и сократить стадийность технологического процесса, снизить сроки получения целевого продукта в 2-3 раза, получить конечный продукт более высокого качества по иммуногенности, стабильности, физическим показателям и значительно снизить его себестоимость.