Функциональная взаимосвязь секреции и инкреции гидролитических ферментов в условиях восстановительного периода после мышечного напряжения

УДК 577.121:616.71-003.8-089.22 ББК 54.581.4

Трифонова Елена Борисовна

кандидат биологических наук, заведующая клинико-биохимическая лаборатория Федеральное государственное учреждение Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В. Д. Чаклина Министерства здравоохранения и социального развития России

г. Екатеринбург Trifonova Elena Borisovna Candidate of Biology Head of the Clinic-Biochemistry Laboratory Federal State Institution The Ural Research Institute of Traumatology and Orthopaedics named after V.D.

Chaklin

Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation

Yekaterinburg

Значение биоэнергетического метаболизма в регуляции костного ремоделирования в условиях иммобилизации Bioenergetic Metabolism Value in Bone Remodeling Under the Conditions of

Immobilization

В эксперименте на крысах линии Вистар показано, что снижение минеральной плотности костной ткани при длительной иммобилизации сопровождается ростом активности реакций биоэнергетики в костной ткани с превалированием аэробного окисления и снижением активности процессов окислительного обмена в скелетной мышечной ткани, что в целом играет одну из ведущих ролей в регуляции костного ремоделирования.

It is shown that mineral density decrease of a bone tissue in case of a long immobilization is accompanied by the activity growth of bio-energetic reactions in a bone tissue with predominance of aerobic oxidation and decrease in the activity of oxidative exchange processes in a skeletal muscular tissue in the experiment on rats of the Vistar line. On the whole, it plays one of the main roles in bone remodeling regulation.

Ключевые слова: костная ткань, метаболизм, иммобилизация.

Key words: bone tissue, metabolism, immobilization.

Изменение баланса костного ремоделирования, определяющего динамику уровня минеральной плотности костной ткани (МПК), во многом обусловлено функциональным состоянием обменных процессов в остеогенных клетках [13, С. 134). Однако изменение состава и функциональной активности остеогенных клеток - не единственный механизм, обеспечивающий оптимизацию

сопряжения остеолизиса и костеобразования. Необходимым условием является поступление достаточного количества макроэргов в ткани, которое может обеспечить в основном митохондриальное окисление. Его активация связана как с интенсивным коллагенообразованием, так и с дифференцировкой остеогенных клеток. Именно в остеобластах одну из ключевых ролей играют митохондрии. В период индукции остеобласт-дифференцировки пятикратно увеличен пул АТР через дыхательную цепь, а баланс аэробного и анаэробного окисления связан со степенью зрелости остеогенных клеток [11, С. 413; 12, С. 1220].

Известно, что физиологическое костное ремоделирование обеспечивается в основном за счет анаэробного окисления, в то время как при репаративном остеогенезе активирован и гликолиз, и кислородзависимые реакции [6, С. 9; 7, С.19]. Высокая скорость эндогенного дыхания обнаружена в

митохондриальном и микросомальном компартаментах дистракционного регенерата и в тканях ложных суставов, концы которых, как правило, остеопоротичны [3, С.6]. К особенностям биоэнергетического обмена скелетной мышечной ткани при экспериментальной гипокинезии относят активацию гликолиза [15, С.40].

Наряду с этим отсутствуют данные о состоянии биоэнергетического метаболизма костной и скелетной мышечной тканей при снижении МПК, в том числе в условиях иммобилизации, что и явилось целью данного исследования. При иммобилизации инициирующим фактором снижения МПК считают гипокинезию, влияющую на все системы организма. Однако единой точки зрения на патогенез остеопоротических изменений при формировании иммобилизационного остеопороза (ИОП) в доступной литературе нами не обнаружено.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 50 самцах крыс линии Вистар в возрасте трёх месяцев, у которых ампутировали кости голени правой задней конечности на уровне её проксимального отдела, создавая неопороспособное бедро1. По данным гистоморфометрии на 90-105-е сутки

1 Операции выполнены научным сотрудником УНИИТО канд.мед.наук А.Ю.Кучиевым Вестник ЧГПУ 42011 308

после ампутации снижение МПК бедренной кости животных соответствовало остеопорозу . У всех крыс в течение года после операции (интервал 30 суток) исследовали кровь, костный мозг, костную и скелетную мышечную ткани оперированной и контрлатеральной конечностей. Группа сравнения - 40 интактных крыс аналогичного пола и возраста. Животных содержали в условиях вивария на стандартном рационе, выводили из опыта в соответствующие сроки эксперимента (эвтаназию выполняли передозировкой эфира) с учетом положений международной конвенции о «Правилах работ с экспериментальными животными» (European Communities Council Directives of 24 November 1986, 86/609/EEC).

Для биохимических исследований были взяты бедренные кости животных, скелетные мышцы, кровь. Тканевые гомогенаты получали методом быстрой заморозки тканей в жидком азоте и последующим измельчением в механическом микроразмельчителе, центрифугировали в режиме 0/+4°С на высокоскоростной центрифуге Sorval [1, С.2] В тканевых гомогенатах и в крови определяли показатели биоэнергетического обмена: общую активность

лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и малатдегидрогеназы (МДГ), концентрацию лактата (МК), пирувата (ПВК), общего белка. В скелетной мышечной ткани и в крови дополнительно изучали общую активность креатинфосфокиназы (КФК) и уровень глюкозы. В рамках комплексного эксперимента определяли особенности маркеров костного ремоделирования, минерального обмена, гематологические параметры крови и костного мозга. Лабораторные исследования выполнены на высокотехнологичном оборудовании: биохимическом анализаторе Specific basic (Konelab), фотометре с проточной кюветой Stat Fax 1904 (Medica), гематологическом анализаторе Cell Dyn 1300 (Abbott) унифицированными методами с использованием оригинальных тест-систем, контрольных материалов и калибраторов (Konelab, Biocon, Siemens) [5, С. 224].

2 Морфометрия выполнена зав. лабораторией морфологии УНИИТО канд.мед.наук И.П.Кудрявцевой

309 Вестник ЧГПУ42011

Статистическая обработка полученных данных выполнена параметрическим и непараметрическим дисперсионным, дискриминантным,

3

регрессионным анализами .

Результаты и их обсуждение. Ранее нами было показано, что уже к 30 суткам иммобилизации в костной ткани крыс возросла активность костных изоферментов щелочной (ЩФтерм) и кислой фосфатаз ()КФтарт) -

метаболических маркеров остеобластов и остеокластов соответственно, что свидетельствовало об активации костного ремоделирования и предполагало возможную активацию окислительного обмена [8, С.76]. Как следует из таблицы 1, общая активность ЛДГ в этот период в опытной группе снижена в 2 раза по сравнению с интактной группой (р<0,05). Пик активности ЛДГ выявили на 210-240 сутки после операции у всех крыс.

Таблица 1

Динамика общей активности лактатдегидрогеназы костной ткани крыс

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер. 30 60 90 120 150 180 210 240 270

Интактные 912± 73 п=5 1118 ± 100 п=5 661± 156П п=4 496± 120П п=6 427± 128П п=5 545± 68П п=4 561± 222П п=4 582± 83П п=7 1215± 160 п=6 59± 0.5П п=4

Опы тные оперир. конеч. 570± 52* п=5 117± 26*П п=4 288± 164П п=5 409± 109П п=5 299± 87*П п=4 270± 85* п=5 625± 101 п=5 1245± 169П п=5 245± 136*П п=4

контрла- тер. конеч. 367± 95* п=5 546± 258* п=4 846± 385 п=5 885± 257* п=5 497± 232* п=4 577± 140* п=5 593± 103* п=5 1052± 99П п=5 372± 63* п=4

*- р< 0,05 по сравнению с интактной группой * - р< 0,05 по сравнению с фоном

М- среднее, т - стандартное отклонение, п - число исследований

Интересна различная динамика общей активности ЛДГ в контрлатеральной и оперированной конечностях: снижение через месяц в контрлатеральной конечности сменилось тенденцией роста, в то время как в опытной - наоборот. Кроме того, первый подъем активности в

3 Статистическая обработка данных совместно с науч. сотр института математики и механики УрО РАН

канд.ф.-м. наук К.С. Кобылкиным

контралатеральной конечности соответствовал периоду окончательного формирования ИОП, превышая не только активность ЛДГ в опытной конечности (в 2,2 раза, р < 0,05), но и референсные значения (в 2,1 раза, р < 0,05). По-видимому, это компенсаторная реакция на изменения васкуляризации, а также активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) и перераспределение субстратов окисления, поскольку иммобилизацию, относят к реакции стресса [2, С. 53; 10, С.257]. Необходимо отметить, что у интактных крыс общая активность ЛДГ костной ткани значимо коррелирует с ФИ (Кспирмена = 0,37), в то время как у опытных такой зависимости не отметили.

У интактных крыс в течение года общая активность МДГ костной ткани снижена, чем до операции. Напротив, в опытной группе (исключение 30-е сутки) отметили её значимый рост, а максимум выявили на 60-е сутки в оперированной конечности (в 2 раза выше фоновой величины и в 14,9 раз -интактных значений, р < 0,05). После завершения формирования

остеопоротических сдвигов в костной ткани общая активность МДГ снижалась, достигая исходных значений к концу наблюдения (таблица 2). Интерес представляет тот факт, что именно в период снижения общей активности МДГ морфологи выявили признаки регресса ИОП.

Таблица 2

Динамика общей активности малатдегидрогеназы костной ткани крыс,

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер 30 60 90 120 150 180 210 240 270

Интактные 270± 33 п =5 303± 139 п=5 40± 9П п=4 29± 6П п=5 19± 15П п=4 17± 3П п=5 82± 39 п=4 28± 3П п=5 34± 9П п=5 68± 12П п=4

Опы тные оперир. конеч. 53± 15** п=5 599± 29П* п=4 519± 64П* п=5 178± 72* п=5 252± 82* п=4 186± 28П* п=5 208± 19 п=5П* 81± 11** п=5 222± 34* п=4

контрла т. конеч. 110± 68** п=5 462± 115П* п=4 648± 89П* п=5 528± 218* п=5 192± 64* п=4 295± 34* п=5 341± 106* п=5 85± 25** п=5 214± 43* п=4

По динамике индекса МК/ПВК оценивали баланс аэробных и анаэробных реакций (таблица 3). В интактной группе на 90 и 180 сутки превалировали анаэробные реакции в костной ткани, а опытной группе этот индекс в течение полугода ниже в 1,5-2,0-3,1 раза (р < 0,05, исключение - 120 сутки). Динамика индекса МК/ПВК при снижении МПК отрицательно коррелировала с активностью маркеров костного метаболизма: фосфатазным индексом (ФИ) = ЩФтерм/КФтарт (активность щелочной фосфатазой

термолабильной/активность кислой фосфатазы тартратрезистентной), КСпирмена = - 0,41 (р < 0,05); индексом кальций/магний костной ткани, КСпирмена = - 0,36 (р < 0,05); также с концентрацией ПВКмышц, КСпирмена = - 0,32 (р < 0,05); с уровнем цитоза костного мозга КСпирмена = - 0,43 (р < 0,05).

Таблица 3

Динамика индекса лактат/пируват костной ткани крыс,

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер 30 60 90 120 150 180 210 240 270

Интактные 5,1±0 ,9 n=5 5,7± 2,7 n=5 10,3± 2,3^ n=5 14,0± 3,3^ n=4 4,0± 0,9 n=4 6,6± 4,3 n=5 17,3± 8,7^ n=4 8,5± 1,7^ n=6 10,7± 0,3^ n=4

Опы тные оперир. конеч. 5,3± 3,1 n=5 5,5± 2,5* n=4 7,4± 0 4** n=5 4,8± 1,3 n=5 4,6± 3,5 n=4 5,5± 2,6* n=5 6,8± 2,8 n=4 9,0± 2,0** n=5 5,7± 1,1* n=4

контрла т. конеч. 5,7± 1,1 n=5 7,1± 1,14 n=4 6,7± 2,9* n=5 5,3± 1,8 n=5 3,3± 2,6 n=4 5,5± 1,5* n=5 11,6± 4,9 n=5 7,2± 1,9* n=5 4,8± 1,3* n=4

*- р< 0,05 по сравнению с интактной группой * - р< 0,05 по сравнению с фоном

М- среднее, т - стандартное отклонение, п - число исследований

Полученные результаты отражают превалирование анаэробного окисления у интактных крыс, что согласуется с литературными данными. Напротив, при снижении МПК аэробные процессы в костной ткани активированы, начиная с 30 суток. Рост общей активности МДГ значимо коррелировал с динамикой метаболических маркеров остеогенных клеток:

^ЩФт^рМ^ КСпирмена_ 0,36, Кфтарт, КСпирмена_ 0,34; с фИ крови КСпирмена 0,37;

с минеральными индексами крови Са/Pn, КСпирмена = 0,25, Ca/Mg, КСпирмена = 0,39, с цитозом костного мозга, КСпирмена = 0,64.

ВестникЧГПУ 42011 312

Данные эксперимента свидетельствует о принципиально ином балансе аэробного и анаэробного окислительного метаболизма при снижении МПК в условиях иммобилизации: на фоне общей активации биоэнергетических реакций превалировали аэробные процессы.

Основные пути образования АТФ в скелетной мышце - гликолиз, окислительные реакции в митохондриях и рефосфорилирование креатинфосфата. Миофибриллы поддерживают обмен веществ по аэробному пути в условиях значительно меньшего количества кислорода, чем другие высокодифференцированные ткани [9, С. 1417; 16, С. 315.).

Динамика общей активности ЛДГ скелетной мышечной ткани за весь период эксперимента значимо отличалась между группами (таблица 4). В опытной группе интенсификация гликолиза выявлена только на 210-270 сутки. Также как и в костной ткани, через месяц иммобилизации активность ЛДГ в ней значимо ниже в 4,2 раза, на 150 сутки - в 9,6 раза, чем в группе сравнения. Формирование ИОП сопряжено, по нашим данным, с низкой активностью анаэробного окисления, в том числе и в скелетной мышце.

Таблица 4

Динамика общей активности лактатдегидрогеназы скелетной мышечной

ткани крыс

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер. 30 60 90 150 210 240 270

Интактные 973± 1214± 344± 317± 1247±3 251± 379± 314±

107 727 4,3* 90* 22 59* 108* 81*

п=5 п=5 п=4 п=4 п=4 п=4 п=5 п=7

Опытны оперир. 287± 215± 178± 130± 65± 805± 218±

е конеч. 180** 27* 52* * 7 2 * 8 2 270 67*

п=5 п=4 п=5 п=5 п=5 п=5 п=4

контрла 428± 278± 203± 143± 271± 719± 246±

т. 29* 34* 34* 41** 72* 441 55*

конеч. п=5 п=4 п=5 п=5 п=5 п=5 п=4

Снижение МПК (до 90-105 суток) сопровождалось более низкими значениями индекса МК/ПВК в скелетной мышечной ткани опытных крыс по сравнению с интактной группой (таблица 5), также как и в костной ткани.

Таблица 5

Динамика индекса лактат/пируват скелетной мышечной ткани крыс,

Серия эксперимента С рок наблюдения

до опер. 30 60 90 150 210 240 270

Интактные 16,8± 7,7± 28,6± 20,3± 30,1± 19,1± 47,0±

3,7 0,6* 6,1* 3,3 5,2* 1,2 8,7*

п=4 п=5 п=4 п=5 п=4 п=8 п=8

Опыт- оперир. 12,3± 3,1± 5,8± 11,0± 20,2± 42,2± 32,8± 3,4±

ные конеч. 1,2 * ,4 0 0,7* 2,5* 3,7 7,6* 9,0* 0,7**

п=5 п=5 п=4 п=5 п=5 п=5 п=4 п=4

контрлат. 4,4± 5,0± 6,6± 14,6± 30,5± 27,1± 6,1±

конеч. 0,1** 0,3* 1,5** 2,1 9,3* 14,1 0,8**

п=5 п=4 п=4 п=4 п=5 п=4 п=4

*- р< 0,05 по сравнению с интактной группой * - р< 0,05 по сравнению с фоном

М- среднее, т - стандартное отклонение, п - число исследований

Динамика общей активности МДГ в скелетной мышечной ткани и в костной ткани оперированных животных противоположна. На фоне многократного роста активности МДГ костной ткани, в скелетной мышце отметили её снижение (таблица 6). Минимумы выявлены в период 90-240 сутки, то есть после завершения формирования ИОП. Наиболее низкую активность МДГ отметили в скелетной мышце оперированной конечности: через месяц - в 5,8 раза значимо ниже, чем у интактных крыс и в 1,7 раза ниже, чем в контрлатеральной конечности, а к моменту формирования ИОП - в 2,2 раза значимо ниже, чем у интактных крыс и в 2,1 раза ниже, чем в контрлатеральной конечностью.

Таблица 6

Динамика общей активности малатдегидрогеназы скелетной мышечной

ткани крыс

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер. 30 60 90 150 210 240 270

Интактные 256± 55±3* 29± 42±9* 63± 56± 39±

109 п=4 13* п=4 13* 19* 10*

232± п=5 п=4 п=5 п=8 п=7

Опытны оперир. 27 44± 33±5* 13±3* 4±1** 23± 3±2** 42±

е конеч. п=5 14* п=4 п=5 п=5 10** п=5 11*

п=5 п=5 п=4

контр- 75±5* 54± 27±6* 4±1** 22±2** 11±5** 40±

лат. п=5 12* п=5 п=5 п=5 п=5 8

конеч. п=4 п=4

*- р< 0,05 по сравнению с интактной группой * - р< 0,05 по сравнению с фоном

М- среднее, т - стандартное отклонение, п - число исследований

В интактной группе степень анаэробизации окислительного обмена с возрастом увеличивалась, так как обнаружили рост индекса МК/ПВК, как и в опытной группе, но после завершения формирования ИОП. До 90 суток эксперимента величина данного индекса в опытной группе крыс значимо ниже как по сравнению с фоном, так и с группой интактных крыс (таблица 7).

Таблица 7

Динамика индекса лактат/пируват скелетной мышцы крыс,

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер. 30 60 90 150 210 240 270

Интактные 16,8± 7,7± 28,6± 20,3± 30,1± 19,1± 47,0±

3,7 0,6* 6,1* 3,3 5.2* 1,2 8,7*

п=5 п=4 п=5 п=4 п=4 п=8 п=8

Опыт- оперир. 12,3± 3,1± 5,8± 11,0± 20,2± 42,2± 32,8± 3,4±

ные конеч. 1,2 * ,4 0 0,7* 2,5* 3,7 7,6* 9,0* 0,7**

п=5 п=5 п=4 п=5 п=4 п=5 п=4 п=4

контр- 4,4± 5,0± 6,6± 14,6± 30,5± 27,1± 6,1±

лат. 0,1** 0,3* 1,5** 2,1 9,3* 14,1 0,8**

конеч. п=5 п=4 п=5 п=4 п=5 п=4 п=4

В течение всего эксперимента общая активность КФК скелетной мышечной ткани снижена (исключение 270 сутки, таблица 8). Напротив, в интактной группе наблюдали её рост с максимумом в 90-150 сутки, что выше (в 7,2-13,1 раза соответственно срокам, р < 0,05), чем у опытных крыс. Низкая активность КФК при иммобилизации значимо коррелировала с активностью гликолиза и уровнем глюкозы в мышце (Кспирмена = - 0,73 и -0,76 соответственно), индексом гликолиза, ФИ и уровнем кальция в кости (КСпирмена = - 0,49, - 0,53; 0,42).

Таблица 8

Динамика общей активности креатинфосфокиназы скелетной мышечной

ткани крыс,

Серия эксперимента Срок наблюдения

до опер. 30 60 90 150 210 240 270

Интактные 6790± 378 п=5 7320± 500 п=4 5488± 1029 п=4 19863± 4316* п=4 18039± 6717* п=4 6720± 1650 п=4 6347± 736 п=8 4460± 710* п=4

Опытн ые оперир. конеч. 5645± 847 п=5 3125± 540* п=4 2747± 389** п=4 1377± 254** п=5 210± 52** п=4 79± 22** п=4 6471± 720 п=4

контрлат конеч. 6275± 545 п=5 3879± 670* п=5 3113± 650** п=4 1892± 460** п=4 589± 33** п=5 92± 26** п=5 5852± 790 п=4

*- р< 0,05 по сравнению с интактной группой * - р< 0,05 по сравнению с фоном

М- среднее, т - стандартное отклонение, п - число исследований

Итак, в скелетной мышечной ткани при длительной иммобилизации снижена активность ферментов как анаэробного, так и аэробного окисления, а также КФК. Низкая гликолитическая активность скелетной мышцы могла быть обусловлена распадом некоторых мышечных белков. Адаптацию к формированию ИОП в виде снижения общей активности МДГ связываем с

просветлением митохондриального матрикса, уменьшением количества крист,

2+

снижением активности Са -зависимой АТФ-азы, что иногда отмечают при

гипокинезии [4, С.84). Кроме того, мы обнаружили существенное накопление

глюкозы в скелетной мышечной ткани при снижении количества белка.

Корреляция уровня глюкозы и активности ферментов биоэнергетического

обмена отрицательная (КСпирмена = - 0,72, р <0,05), что косвенно предполагало ВестникЧГПУ42011 316

окисление иных субстратов (липидов, аминокислот) или связано с дефицитом коферментов. В мышечной ткани опытной и контрлатеральной конечностей изменения аналогичны: максимальное накопление глюкозы - в 150 и 240 суток, (значимо выше фоновых значений в 2,9 и 4,9 раза соответственно срокам и в 12 раз выше, чем в группе сравнения, р < 0,05). У интактных крыс выявили рост уровня белка в скелетной мышечной ткани с максимумом в 210 суток, в опытной группе, наоборот - снижение к 150 суткам в 1,3 раза по сравнению с фоном (р < 0,05), а на 90-е и 210-е сутки его концентрация значимо ниже в 1,6 и 1,9 раза соответственно, чем у интактных крыс. Уровень белка в скелетной мышечной ткани в целом в течение года достоверно ниже в опытной группе, что, по-видимому, обусловлено как снижением белкового синтеза, так и увеличением деструкции белков при гипокинезии.

Заключение. Таким образом, длительная иммобилизация, ведущая к снижению МПК до уровня остеопороза, вызывает значительные изменения окислительного метаболизма тканей опорно-двигательного аппарата.

Вклад аэробных процессов в энергообеспечение костного ремоделирования при сниженной МПК возрос в десятки раз по сравнению с интактными крысами, у которых превалировал гликолиз. Актуальность активации именно аэробного окисления в костной ткани связываем с возросшей метаболической активностью всех остеогенных клеток [8, С. 76], что предполагает увеличение потребности в макроэлементах - магнии и

неорганическом фосфате, так как метаболизирует в тканях не АТР, а

2 2

комплексы М^АТР " и РпАТР ". Ранее нами было показано, что снижение МПК при иммобилизации происходит в основном за счет значимого пролонгированного дефицита магния и неорганического фосфата [14, С. 305] поскольку эти макроэлементы непосредственно участвуют в окислительных реакциях, что в свою очередь ведет также к снижению МПК. Считаем, что данная адаптация биоэнергетических систем тканей опорно-двигательного аппарата к длительной иммобилизации играет одну из ключевых ролей в механизме регуляции костного ремоделирования.

Библиографический список

1. Биохимические исследования зрелой костной ткани и дистракционного регенерата кости [Текст]: информационное письмо / сост. К.С. Десятниченко. - Курган, 1992.

- 14 с.

2. Взаимодействие провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в процессе адаптации организма к 30-суточной гипокинезии [Текст] / Ю.Г. Камскова, Я. В. Латюшин, Н.В. Мамылина, Л.П. Щетинкина // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2008. - № 1. - С. 53-54.

3. Гюльназарова С.В. Иммобилизационный остеопороз: патогенез и принципы лечения несращений костей на этом фоне [Текст] // Вестник травматологии и ортопедии им. В.Д. Чаклина. - 2010. - № 2. - С.5-12.

4. Кузнецов С. Л. Механизмы адаптации энергетического метаболизма волокон скелетной мышечной ткани [Текст] / С.Л. Кузнецов, Е.А. Папас, Ф. Гутова // VI международный Конгресс морфологов: тезисы докладов. - Морфология. - 2002. - Т.121, № 2-3. - С.84.

5. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) [Текст]: учебное пособие / под ред. проф. М.И.Прохоровой. - Л.: ЛГУ, 1982. - 272 с.

6. Осипенко А.В. Иммунобиологические механизмы регенерации тканей [Текст] / Осипенко А.В., Черешнев В.А. - Екатеринбург: УрО РАН, 1997. - 130 с.

7. Попков Д. А. Влияние гипербарической оксигенации на окислительновосстановительные процессы при удлинении голени [Текст] / Д.А.Попков, Н.В.Сазонова, Л.С.Кузнецова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 10. - С.19.

8. Трифонова Е.Б. Метаболическая концепция иммобилизационного остеопороза [Текст] // Вестник травматологии и ортопедии им. В.Д.Чаклина. - 2010. - № 3. - С.75-80

9. Уайт А. Основы биохимии: в трех томах [Текст] / А.Уайт, Ф. Хендлер, Э. Смит, Р. Хилл [и др.] - М.: «Мир», 1981. - 1878 с.

10. Шибкова Д.З. Цейликман О.Б., Григорьев И.И. О механизмах развития гипоплазии лимфоидных органов при ежедневных иммобилизациях [Текст] //Вестник Челябинского госуд. педаг. университета. - 2006. - № 5. - С. 257-264.

11. ATP and UTP At Low Concentrations Strongly Inhibit Bone Formation by Osteoblasts: A Novel Role for the P2Y 2 Receptor in Bone Remodeling [Text] / A. Hoebertz, S. Mahendran, G. Burnstock, T. R. Arnett // J. Сell.Biochem. - 2002. - Vol.86. - P.413-419.

12. Komarova S.V..Bioenergetics and mitochondrial transmembrane potential during differentiation of cultured osteoblasts. TiAl [Text] / S.V. Komarova, F.I. Ataullakhanov, R.K. Globus // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2001. - Vol.279. - P.1220-1229.

13. Lieben L. Bone and Metabolism: A Complex Crosstalk [Text] / L. Lieben, F. Callewaert, R. Bouillon // Horm.Res. - 2009. - Vol.1 (1). - Р.134-138.

14. Trifonova E.B. Modeling of the immobilized osteoporosis [Text] / E.B. Trifonova,

K.S. Kobylkin // Osteoporosis international. - 2010. - Vol.21 (1). - S.305.

15. Vanadium Supplementation Effect of Vanadium Metabolism During Hypokinesia in Rats [Text] / V.A.Deogenov, K.K.Kakuris, Y.G.Zorbas, A.G.Luzhkov // Tokaj J.Exp.Clin.Med. -2010. - Vol.35 (1). - P.40-45.

16. Waters D.L. Mitochondrial function in physically active elders with sarcopenia [Text] / D.L.Waters, P.G.Mullins, C.R. Qualls [et al.] // Mech.Ageing Dev. - 2009. - Vol.130 (5). - P.315-324.

Bibliography

1. ATP and UTP At Low Concentrations Strongly Inhibit Bone Formation by Osteoblasts: A Novel Role for the P2Y 2 Receptor in Bone Remodeling [Text] / A. Hoebertz, S. Mahendran, G. Burnstock, T. R. Arnett // J. Сell. Biochem. - 2002. - Vol.86. - P. 413-419.

2. Biochemical Investigation of Mature Bone Tissue and Distractional Bone Regenerate [Text] / K.S. Desyatnitchenko // Information Letter. - Kurgan, 1992. - 14 p.

3. Gyulnazarova, S.V. Immobilization Osteoporosis: Pathogenesis and Treatment Principles of Bone Nonunion [Text] / Herald of Traumatology and Orthopedics n.a. V.D. Chaklin. -2010. - № 2. - P.5-12.

4. Interaction Between Pro-Inflammatory and Anti-Inflammatory Cytokines During Organizm Adaptation to the 30-Day Hypokinesia [Text] / Yu.G. Kamskova, V.Ya. Latyushin, N.V. Mamylina, L.P. Shchetinkina / / Herald of the Ural Medical Academy. - 2008. - № 1. - P.53-54.

5. Komarova, S.V. Bioenergetics and Mitochondrial Transmembrane Potential During Differentiation of Cultured Osteoblasts. TiAl [Text] / S.V. Komarova, F.I. Ataullakhanov, R.K. Globus // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2001. - Vol.279. - P. 1220-1229.

6. Kuznetsov, S.L. Adaptation Mechanisms of Energy Metabolism in Skeletal Muscle Fibers [Text] / S.L. Kuznetsov, E.A. Papas, F. Gutova // VI International Congress of Morphology: Reports Thesis. - Morphology. - 2002. - V.121, № 2-3. - P.84.

7. Lieben, L. Bone and Metabolism: A Complex Crosstalk [Text] / L. Lieben, F. Callewaert, R. Bouillon // Horm.Res. - 2009. - Vol.1 (1). - P.134-138.

8. Methods of Biochemical Analysis (Lipid and Energy Metabolism) [Text]: Study

Guide / Ed. by Prof. M.I. Prokhorova. — L.: LSU, 1982. - 272 p.

9. Osipenko, A.V. Immunobiological Mechanisms of Tissue Regeneration [Text] / A.V. Osipenko, V.A. Chereshnev. — Ekaterinburg: The Ural Branch of RAS, 1997. - 130 p.

10. Popkov, D.A. Hyperbaric Oxygenation Influence on Oxidation and Reduction Processes While Leg Lengthening [Text] / D.A. Popkov, N.V. Sazonova, L.S. Kuznetsova / Clinical Laboratory Diagnostics. - 2002. - № 10. - P.19.

11. Shibkova, D.S. Tseylikman, O.B., Grigoriev, I.I. On the Mechanisms of Hypoplasia Development of the Lymphoid Organs at Daily Immobilization [Text] // Herald of Chelyabinsk State Pedagogical University. - 2006. - № 5. - P. 257-264.

12. Trifonova, E.B. Metabolic Concept of Immobilization Osteoporosis [Text] Herald of Traumatology and Orthopedics n.a. V.D. Chaklin. - 2010. - № 3. - P.75-80.

13. Trifonova, E.B. Modeling of the Immobilized Osteoporosis [Text] / E.B. Trifonova, K.S. Kobylkin // Osteoporosis International. - 2010. - Vol.21 (1). - P.305.

14. Vanadium Supplementation Effect of Vanadium Metabolism During Hypokinesia in Rats [Text] / V.A. Deogenov, K.K. Kakuris, Y.G. Zorbas, A.G. Luzhkov // Tokaj J. Exp. Clin. Med.

- 2010. - Vol.35 (1). - P.40-45.

15. Waters, D.L. Mitochondrial Function in Physically Active Elders with Sarcopenia [Text] / D.L. Waters, P.G. Mullins, C.R. Qualls [et al.] // Mech. Ageing Dev. - 2009. - Vol.130 (5).

- P.315-324.

16. White, A. Bases of Biochemistry: In 3 Volumes [Text] / A. White, F. Handler, E. Smith, R.Hill [et al.]. - M.: Mir, 1981. - 1878 p.