СПОСОБ IN VITRO-ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА

1. Моноклональное антитело, которое распознает в β-амилоидном пептиде (Aβ) по меньшей мере эпитоп, соответствующий последовательности
Val-His-His-Gln-Lys (SEQ ID NO:3),
и которое связывается с изоформами человеческого β-амилоидного пептида, содержащими указанную последовательность.
1-42
1-40
2. Моноклональное антитело по п.1, аффинность связывания которого с Aβ больше, чем его аффинность связывания с Aβ, причем обе аффинности связывания измерены посредством ELISA.
3. Моноклональное антитело по п.2, связывающееся с отложениями человеческого β-амилоидного пептида в ткани мозга индивидуумов, страдающих болезнью Альцгеймера.
4. Моноклональное антитело по п.3, избирательно связывающееся с нейритными бляшками и сосудистыми отложениями амилоида.
5. Моноклональное антитело по п.4, проявляющее большую аффинность связывания в отношении подгруппы нейритных бляшек, состав которых подобен составу сосудистых отложений амилоида.
6. Моноклональное антитело по п.1, которое продуцируется гибридомной клеточной линией ECACC 06030101.
7. Гибридомная клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело по любому из пп.1-5.
8. Гибридомная клеточная линия по п.7, полученная посредством слияния линии клеток мышиной миеломы P3/X63-Ag.653 с клетками селезенки мышей линии BALB/c, иммунизированных по меньшей мере одним пептидом, который содержит последовательность Val-His-His-Gln-Lys (SEQ ID NO:3).
1-40
9. Гибридомная клеточная линия по п.7, полученная посредством слияния линии клеток мышиной миеломы P3/X63-Ag.653 с клетками селезенки мышей линии BALB/c, иммунизированных пептидом Aβ.
1-40
10. Гибридомная клеточная линия по п.9, полученная посредством слияния линии мышиной миеломы P3/X63-Ag.653 с клетками селезенки мышей линии BALB/c, иммунизированных пептидом Aβ, соединенным с KLH.
11. Гибридомная клеточная линия по п.10, которая содержит по существу чистый образец ECACC 06030101.
12. Применение моноклонального антитела по любому из пп.1-6 в in vitro-диагностике болезни Альцгеймера в образце ткани мозга, взятой у индивидуума, страдающего указанным заболеванием.
13. Применение по п.12, где стадия прогрессии заболевания коррелирует с присутствием в образце подгруппы нейритных бляшек, обнаруженных благодаря их связыванию с моноклональным антителом.
14. Композиция, которая содержит моноклональное антитело по любому из пп.1-6, связанное с веществом, которое позволяет детектировать указанное антитело или его фрагмент.
15. Композиция по п.14, где вещество, с которым соединено моноклональное антитело, является вторым антителом, способным связываться с указанным первым антителом, при этом указанное второе антитело связано с ферментом, способным катализировать превращение особого вещества в другое, которое можно детектировать.
16. Композиция по п.15, где вещество, превращение которого катализируется ферментом, является хромогенным веществом.
17. Композиция по п. 16, где второе антитело связано с щелочной фосфатазой, а используемым хромогенным веществом является нитросиний тетразолиевый.
18. Композиция по п. 16, где второе антитело связано с пероксидазой хрена, а используемым хромогенным веществом является диаминобензидин.
19. Композиция по любому из пп.14-18, которая содержит по меньшей мере одно иное антитело, специфичное по меньшей мере в отношении одного участка последовательности, отличающегося от β-амилоидного пептида.
20. Композиция по п.19, которая содержит моноклональное антитело по любому из пп.1-6, соединенное с веществом, которое можно детектировать, и еще одно антитело или другие антитела, специфичные в отношении одного или более различных участков последовательности β-амилоидного пептида, соединенные с различными веществами, которые также можно детектировать.
21. Композиция по п.20, где вторым антителом против другого участка последовательности β-амилоидного пептида, является антитело EM2.
22. Композиция по п.21, где моноклональное антитело по любому из пп.1-6 соединено со вторым антителом, связанным с пероксидазой хрена, и хромогенное вещество диаминобензидин (DAB) используется в качестве вещества для превращения, которое можно детектировать, тогда как антитело EM2 соединяется со вторым антителом, связанным с щелочной фосфатазой, и хромогенное вещество нитросиний тетразолиевый используется в качестве вещества для превращения, которое можно детектировать.
23. Композиция по п.20, где вторым антителом против другого участка последовательности β-амилоидного пептида является антитело EM3.
24. Композиция по п.23, где моноклональное антитело по любому из пп.1-6 соединяется со вторым антителом, связанным с пероксидазой хрена, и хромогенное вещество диаминобензидин (DAB) используется в качестве вещества для превращения, которое можно детектировать, тогда как антитело EM3 соединено со вторым антителом, связанным с щелочной фосфатазой, и хромогенное вещество нитросиний тетразолиевый используется в качестве вещества для превращения, которое можно детектировать.
25. Применение композиции по любому из пп.14-24 в диагностике болезни Альцгеймера по образцу ткани мозга, взятой у индивидуума, имеющего указанное заболевание.
26. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера в образце ткани мозга, взятой у индивидуума, страдающего указанным заболеванием, включающий в себя детектирование присутствия в указанном образце нейритных бляшек и сосудистых отложений амилоида вследствие связывания моноклонального антитела по любому из пп.1-6 по меньшей мере с одной изоформой β-амилоидного пептида, которая содержит по меньшей мере последовательность Val-His-His-Gln-Lys (SEQ ID NO:3) и которая присутствует в нейритных бляшках и/или сосудистых отложениях амилоида.
27. Способ по п.26, где моноклональное антитело содержится в композиции по любому из пп.14-18.
28. Способ по п.26, где присутствие нейритных бляшек, детектируемых посредством моноклонального антитела по любому из пп.1-6, коррелирует со стадией прогрессии заболевания.
1-40
1-40
29. Способ по любому из пп.26-28, где присутствие изоформы Aβ пептида β-амилоида в нейритных бляшках, детектируемых посредством моноклонального антитела, подтверждается вследствие связывания антитела, специфичного в отношении карбокси-конца изоформы Aβ β-амилоидного пептида.
1-40
30. Способ по п.29, где антителом, специфичным в отношении карбокси-конца изоформы Aβ β-амилоидного пептида, является EM2.
1-42
31. Способ по п.30, где присутствие дополнительных нейритных бляшек и/или диффузных бляшек детектируется вследствие связывания с антителом, специфичным в отношении карбокси-конца изоформы Aβ β-амилоидного пептида.
1-42
32. Способ по п.31, где антителом, специфичным в отношении карбокси-конца изоформы Aββ-амилоидного пептида, является EM3.
33. Моноклональное антитело по любому из пп.1-6, связывающееся с растворимыми формами человеческого β-амилоидного пептида в образцах биологических жидкостей или полученных из них растворов.
34. Моноклональное антитело по п.33, связывающееся с растворимыми формами человеческого β-амилоидного пептида в образцах спинномозговой жидкости, крови, плазмы или мочи.
35. Моноклональное антитело по п.34, связывающееся с растворимыми формами человеческого пептида β-амилоида в образцах мочи.
36. Композиция, содержащая моноклональное антитело по любому из пп.33-35, где антитело соединено с веществом или частицей, которая способствует выделению комплексов антиген-фрагмент антитела из раствора, в котором они присутствуют.
37. Композиция по п.36, где веществом или частицей, способствующей выделению комплексов антиген-фрагмент антитела из раствора, в котором они присутствуют, является магнитная частица.
38. Композиция по п.37, где связью между антителом и магнитной частицей является ковалентная связь.
39. Применение моноклонального антитела по любому из пп.33-35 в in vitro-диагностике болезни Альцгеймера в образце биологической жидкости или полученного из нее раствора.
40. Применение по п.39, где моноклональное антитело содержится в композиции по любому из пп.36-38.
41. Применение по п.40, где моноклональное антитело содержится в композиции по п.38.
42. Применение по п.41, где композицию по п.38 добавляют к образцу биологической жидкости или к полученному из нее раствору с тем, чтобы сформировался комплекс антиген-антитело с формами β-амилоидного пептида, присутствующими в образце биологической жидкости или полученного из нее раствора.
43. Применение по п.42, где выделение образующихся комплексов антиген-антитело из биологической жидкости или раствора, в котором они встречаются, осуществляется посредством использования магнитного поля.
44. Применение по п.43, где формы β-амилоидного пептида, выделенные из биологической жидкости или полученного из нее раствора в виде комплексов антиген-антитело, отделяют от антитела после их выделения из биологической жидкости или раствора, в которых они присутствуют, и перед их идентификацией и/или количественной оценкой.
45. Применение по п.44, где формы β-амилоидного пептида идентифицируют и/или количественно оценивают посредством масс-спектрометрии MALDI-TOF.
46. Применение по любому из пп.39-45, где образцом биологической жидкости является образец мочи.
1-42
47. Применение по любому из пп.44, где стадия прогрессии болезни Альцгеймера коррелирует с концентрацией изоформы Aβ в образце.
48. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера в образце биологической жидкости или полученного из нее раствора, который включает в себя детектирование в указанном образце по меньшей мере одной изоформы β-амилоидного пептида, который содержит по меньшей мере последовательность Val-His-His-Gln-Lys (SEQ ID NO:3), вследствие ее связывания с моноклональным антителом по пп.33-35, включающий в себя следующие стадии:
a) добавление композиции по п.37 или 38 к образцу биологической жидкости или полученного из нее раствора;
b) выжидание в течение времени, достаточного для образования комплексов антиген-антитело между по меньшей мере одной изоформой β-амилоидного пептида и антителом, содержащимися в композиции;
c) наложение магнитного поля для выделения комплексов антиген-антитело из раствора;
d) удаление раствора;
e) отделение антитела от молекул β-амилоидного пептида;
f) идентификацию и количественную оценку изоформ β-амилоидного пептида, выделенных из образца биологической жидкости или полученного из нее раствора.
49. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера п.48, где образцом биологической жидкости является образец мочи.
50. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера по п.49, где композиция, добавляемая на стадии a), содержит моноклональное антитело по любому из пп.30-32, ковалентно связанное с соответствующими магнитными частицами посредством модификации одного или более остатков, присутствующих в Fc-области указанного антитела.
51. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера по п.50, где идентификацию и количественную оценку изоформ β-амилоидного пептида, выделенного из образца мочи, осуществляют посредством масс-спектрометрии MALDI-TOF.
52. Способ in vitro-диагностики болезни Альцгеймера по п.51, где стадию е) отделения антитела или фрагмента антитела от молекул β-амилоидного пептида осуществляют в α-циано-4-гидроксикоричной кислоте в водном ацетонитриле, содержащем трифторуксусную кислоту.