СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ КОЖНОЙ РАНЫ У СВИНЕЙ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD FOR MODELLING SKIN WOUNDS IN PIGS IN EXPERIMENT

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения лечения ожоговых ран у лабораторных животных (свиней), изучения приживления аутотрансплантатов а также для разработки способов лечения ожогов.
Строгие нормы законодательства Российской Федерации, которые регулируют разработку, безопасность и внедрение новых лекарственных средств и видов лечения в клинику, в последнее время ужесточаются. Предполагают лабораторные in vitro исследования, которые сопровождаются доклиническими in vivo экспериментами на различных подопытных животных, с последующим клиническим тестированием. Получается, чтобы достичь внедрения положительных результатов лабораторных исследований в клинику, необходима подходящая и эффективная экспериментальная in vivo модель. Постоянно разрабатываются новые способы экспериментальных моделей у лабораторных животных (О способах воспроизведения термических ожогов в эксперименте / Н. И. Кочетыгов. - JL: ВМОЛА им. СМ. Кирова, 1964. - 46 с.; Способ заживления операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций у свиней / Авторы: Никитенко, Храмов, Жданов, Лепский. - http://patents.su/3-1824193-sposob-zazhivleniya-operacionnykh-ran-i-profilaktiki-gnojjo-khirurgicheskikh-infekcijj-u-svinejj.html; Изменение клеточного состава в регенерирующей ткани экспериментальных ран свиней / Авторы: Кулешов СМ., Кулешова Ю.В., Кулешов Р.С - http://kk.convdocs.org/docs/index-166035.html).
За аналог предполагаемого изобретения принят способ моделирования ожога в эксперименте у животных (мышей, крыс), осуществляющийся посредством погружения области спины животного в воду, нагретую до температуры 65-100°С. Ожоги, полученные таким способом, сопровождаются развитием влажного некроза кожи. Для теплоизоляции глубоких тканей подкожно вводят 150-200 мл воздуха на момент нанесения ожога с последующим его удалением. (Моделирование заболеваний. Под ред. проф. С. В.Андреева, М. "Медицина", 1973 г.).
К недостаткам способа относятся:
1. Сложность применения у более крупных животных (свиней);
2. Прогревание не только кожи, но и скелетных мышц животного;
3. Развитие влажного некроза кожи;
4. Сложность метода термоизоляции глубоких тканей: подкожного введения 150-200 мл воздуха на момент нанесения ожога с последующим его удалением, что не позволяет в достаточно полной мере перенести данную модель к ситуации возникновения ожогов у человека.
5. Сложность создания раны заданного размера.
В качестве ближайшего аналога нами принят способ моделирования полнослойной кожной раны у самки свиней породы Большая Белая, где 6 полнослойных ран защищены от краевой эпителиализации и ретракции пластиковыми камерами диаметром 4 см., затем происходит наложение на раны исследуемых покрытий, с последующим забором биопсионного материала для оценки их эффективности. (Свиная экспериментальная модель, как эффективный инструмент переноса научных знаний в клинику для пополнения арсенала комбустиолога. Шевченко Р.В., Джеймс С.Э., Рид М.Дж., Гилберт Ф.М., Сиббонс П.Д., Сантин М., Шарп Дж.Р., Нокс П. Научно-исследовательский центр им. Блонд МакИндо, Брайтонский Университет, Ожоговый центр им. МакИндо Больницы Королевы Виктории, г. Ист Гринстид, Научно-исследовательский центр Норсвик Парк, Харроу, г. Лондон, Великобритания. Электронный научно-практический журнал «Комбустиология» Номер 30 / 2007. http://combustiolog.ru/o-zhumale)
К недостаткам способа относятся:
1. Несовершенство метода защиты от краевой эпителизации пластиковыми камерами;
2. Непроизвольная травматизация животным раневых поверхностей;
3. Невозможность создания ран разной глубины термического поражения;
4. Невозможность объективной оценки эффективности исследуемых биоматериалах на ранах различной глубины термического поражения;
5. Расположение ран не на одном участке поверхности тела животного.
Задачи:
• полное предотвращение краевой эпителизации;
• исключение непроизвольной травматизации животным раневых поверхностей;
• создание ран разной глубины термического поражения;
• объективная оценка эффективности исследуемых биоматериалах на ранах различной глубины термического поражения;
• закрытие после эксперимента оставшихся ран с помощью аутодермопластики;
• оставить животное живым после эксперимента;
• создание раны на одном боку.
Сущностью изобретения, включающего нанесение ожоговой раны, ее иссечение, выполнение аутопластики и/или наложение раневых покрытий является следующее: раневую поверхность создают разной глубины на одном боку животного, выполняют первичную и отсроченную аутопластику и/или наложение раневых покрытий, рану формируют с условием отступа от краев и между участками пластики и/или раневыми покрытиями 1-2 см, и после эксперимента на рану выполняют свободную кожную аутопластику расщепленными трансплантатами толщиной 0,3-0,5 мм, взятыми на этом же боку животного.
Технический результат: данный способ позволяет достоверно оценить эффективность приживления аутопластики и раневых покрытий на раневой поверхности; полностью предотвратить краевую эпителизацию; выполнять серии биопсий из раны в течение 2-3-х недель; обеспечивать удобство проведения наркоза и пробуждения животного в следствие формирования раны на одном боку; обеспечить не травматизацию раневой поверхности вследствие создания раны с одной стороны; выполнять на одном животном рану различной глубины и выполнять аутопластику как на чистую хирургическую рану, так и на гнойную; в конце эксперимента выполнять аутопластику, тем самым сохранять жизнь животного.
Осуществление моделирования ран у свиньи производят следующим образом. В условиях операционной под наркозом в положении на боку после стандартной обработки операционного поля животному на верхнем боку производят разметку будущего раневого дефекта с помощью сантиметровой линейки. Раскаленной металлической контактной площадкой наносится ожоговая рана необходимых размеров и необходимой глубины (IIIБ и IV ст. по классификации Вишневского). Затем электродерматомом производится некрэктомия, в результате чего формируется две раны: рана, у которой дном является нижние слои дермы и мозаично обнаженные участки подкожно-жировой клетчатки, и рана, у которой дном является поверхностная фасция и мышечная ткань. Затем отступив от краев раны по 1-2 см. (для предотвращения краевой эпителизации) к дну раны фиксируются исследуемые раневые покрытия и/или аутопластика с условием расстояния между раневыми покрытиями и/или аутопластики 1-2 см. Накладывают асептическую повязку. Животное пробуждается из наркоза в положении на боку. Каждые 3-4 дня после операции под общим обезболиванием, так же в положении на боку, как и в ходе операции с участков раны и раневыми покрытиями и/или аутопластикой выполняется биопсия. Накладываются асептические повязки. Через 7-9 дней ожоговая рана на поверхностной фасции и мышечной ткани начинает гранулировать и на нее, так же выполняется наложение раневых покрытий и/или аутопластики, что дает возможность оценить эффективность исследуемых раневых покрытий на одном животном, как на чистой хирургической ране, так и на гранулирующей ране. В дальнейшем при перевязках через 3-4 дня так же производятся биопсии для изучения в динамике приживления раневых покрытий и/или аутопластики на ранах различной глубины. После эксперимента, через 2-3 недели от первой операции, на оставшиеся раны у животного выполняют свободную кожную аутопластику расщепленными трансплантатами толщиной 0,3-0,5 мм. взятыми на этом же боку. Через 5-7 дней после последней аутопластики повязки снимают, наблюдается полная эпителизация раневой поверхности.
По данной методике выполнено 4 эксперимента.
Пример №1: в условиях операционной под наркозом в положении на правом боку после стандартной обработки операционного поля животному на левом боку производят разметку будущего раневого дефекта с помощью сантиметровой линейки. Раскаленной металлической контактной площадкой наносится ожоговая рана (20 см. на 15 см.) необходимой глубины (IIIБ и IV ст. по классификации Вишневского). Затем электродерматомом производится некрэктомия, в результате чего формируется две раны: рана, у которой дном является нижние слои дермы и мозаично обнаженные участки подкожно-жировой клетчатки (проксимальнее - ближе к позвоночнику), и рана, у которой дном является поверхностная фасция и мышечная ткань (Рис. 1). Затем отступив от краев раны по 1-2 см. (для предотвращения краевой эпителизации) к дну раны фиксируются пять исследуемых раневых покрытия (размерами 2,5-4 см. на 2,5-4 см. каждое) с условием расстояния между раневыми покрытиями 1-2 см. (Рис. 2). Накладывают асептическую повязку (Рис. 3). Животное пробуждается из наркоза в положении на правом боку. Каждые 4 дня после операции под общим обезболиванием, так же в положении на боку, как и в ходе операции с участков раны и раневыми покрытиями выполняется биопсия (Рис. 4). Накладываются асептические повязки. Через 8 дней ожоговая рана на поверхностной фасции и мышечной ткани начинает гранулировать (Рис. 5) и на нее, так же выполняется наложение четырех раневых покрытий (размерами 2,5-4 см. на 2,5-4 см. каждое) с условием расстояния между раневыми покрытиями 1-2 см. (Рис. 6), что дает возможность оценить эффективность исследуемых раневых покрытий на одном животном, как на чистой хирургической ране, так и на гранулирующей ране. В дальнейшем при перевязках через 4 дня так же производятся биопсии для изучения в динамике приживления раневых покрытий на ранах различной глубины. После эксперимента, через 3 недели от первой операции, на оставшиеся раны у животного выполняют свободную кожную аутопластику расщепленными трансплантатами толщиной 0,3-0,5 мм. взятыми на этом же боку (Рис. 7). Через 7 дней после последней аутопластики повязки снимают, наблюдается полная эпителизация раневой поверхности (Рис. 8).
Пример №2: в условиях операционной под наркозом в положении на левом боку после стандартной обработки операционного поля животному на правом боку производят разметку будущего раневого дефекта с помощью сантиметровой линейки. Раскаленной металлической контактной площадкой наносится ожоговая рана (18 см. на 13 см.) необходимой глубины (IIIБ и IV ст. по классификации Вишневского). Затем электродерматомом производится некрэктомия, в результате чего формируется две раны: рана, у которой дном является нижние слои дермы и мозаично обнаженные участки подкожно-жировой клетчатки, и рана, у которой дном является поверхностная фасция и мышечная ткань. Затем отступив от краев раны по 1-2 см. (для предотвращения краевой эпителизации) к дну раны фиксируются три исследуемых раневых покрытия (размерами 2,5-4 см. на 2,5-4 см. каждое) с условием расстояния между раневыми покрытиями 1,5-2 см. Накладывают асептическую повязку. Животное пробуждается из наркоза в положении на левом боку. Каждые 3 дня после операции под общим обезболиванием, так же в положении на левом боку, как и в ходе операции с участков раны на и раневыми покрытиями выполняется биопсия. Накладываются асептические повязки. Через 9 дней ожоговая рана на поверхностной фасции и мышечной ткани начинает гранулировать и на нее, так же выполняется наложение трех раневых покрытий (размерами 2,5-4 см. на 2,5-4 см. каждое) с условием расстояния между раневыми покрытиями 1-2 см., что дает возможность оценить эффективность исследуемых раневых покрытий на одном животном, как на чистой хирургической ране, так и на гранулирующей ране. В дальнейшем при перевязках через 3 дня так же производятся биопсии для изучения в динамике приживления раневых покрытий на ранах различной глубины. После эксперимента, через 3 недели от первой операции, на оставшиеся раны у животного выполняют свободную кожную аутопластику расщепленными трансплантатами толщиной 0,3-0,5 мм. взятыми на этом же боку. Через 8 дней после последней аутопластики повязки снимают, наблюдается полная эпителизация раневой поверхности.