Противоопухолевая активность нового соединения из класса нитрозоалкилмочевин

А.Е. Бармашов, Г.З. Чкадуа, И.Н. Михайлова, Н.В. Голубцова, О.С. Бурова, З.А. Соколова,

П.К. Иванов, Е.В. Степанова, Л.В. Демидов, А.Ю. Барышников ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ АУТОЛОГИЧНОЙ ДЕНДРИТНОКЛЕТОЧНОЙ ВАКЦИНЫ

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва

Задачи исследования. Оценить иммунологическую эффективность дендритноклеточной вакцины.

Материалы и методы. В работе были использованы мононуклеары периферической крови; клетки линии те1 Ког, из которых был получен опухолевый лизат. Иммунизация больных проводилась в дозе 3-5 млн. аутологичных нагруженных опухолевыми антигенами дендритных клеток. Число интерферон-у-продуцирующих клеток определялось методом БЬШРОТ. Гуморальный иммунный ответ определялся по наличию антител к опухолеассоциированным антигенам в сыворотке крови иммунизированных больных иммуноцитохимическим флуорес-цетным методом.

Результаты исследования. При оценке Т-клеточного ответа у пациентов, получавших дендритноклеточную вакцину, у 6 из 14 (42,9%) было зафиксировано повышение изучаемого показателя в ответ на опухолевый лизат. У двух больных (14,3%) - понижение. У остальных 6 пациентов число исследуемых клеток оставалось на том же уровне. Представленные результаты говорят о стимуляции Т-клеточного ответа у отдельных больных по данному параметру. Следует отметить, что у большинства больных имеется иммунный ответ и при инкубации мононуклеаров с ФГА. Кроме того, ответ при стимуляции опухолевым лизатом наблюдается достоверно чаще у больных с ответом при активации лимфоцитов ФГА.

В сыворотке крови пациентов, получающих дендритноклеточную вакцину, не было обнаружено антител к антигенам меланомы.

Выводы. У пациентов, получающих дендритноклеточную вакцину, отсутствовали антитела к антигенам меланомы на всем протяжении наблюдений, что говорит об отсутсвии гуморального иммунного ответа на вакцинацию. Исследование иммунного ответа методом БЫ8РОТ выявило стимуляцию противоопухолевого Т-клеточного иммунитета при иммунизации дендритноклеточной вакциной у 6 из 14 пациентов. У разных больных число интерферон-у-продуцирующих клеток увеличилось от 2,1 до 10,9 раз по сравнению с моментом до первой ва-кинации.

М.А. Барышникова1, Б. Альбассит1, Н.С. Сапрыкина1, Г.Л.Левит2, Т.В.Матвеева2, В.П. Краснов2 ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ НОВОГО СОЕДИНЕНИЯ ИЗ КЛАССА НИТРОЗОАЛКИЛМОЧЕВИН

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН, Москва

2Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург

Цель исследования. Изучить противоопухолевую активность ормустина - нового соединения из класса нитро-зоалкилмочевин in vitro и in vivo.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность in vitro изучали с помощью МТТ-теста на клеточных линиях диссеминированной меланомы человека Mel Kor и Т-лимфобластного лейкоза человека Jurkat. Также на клеточной линии Jurkat исследовали влияние ормустина на индукцию апоптоза методом двойного окрашивания аннексином V-FITC/пропидиум йодидом (An/PI) и определением активной каспазы-3. Противоопухолевую активность in vivo изучали на 190 мышах линий DBA/2, C57BL/6 и гибридов BDF1(C57Bl/6 х DBA/2), массой 2227 г. Штаммы перевиваемых опухолей мышей LLC, B-16 и лимфолейкоз P388 были получены из Банка опухолевых штаммов РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Лимфолейкоз P388 прививали внутрибрюшинно, эпидермоид-ную карциному лёгкого Льюис (LLC) и меланому B-16 - подкожно. Ормустин вводили мышам-опухоленосителям однократно, внутрибрюшинно. Лечение животных проводили через 24 ч (при Р388) или через 48 ч (при LLC и B-16) после трансплантации мышам опухоли.

Результаты. ИК50 ормустина на клеточной линии Mel Kor 8х10-4 М при инкубации 24 ч, 5,5х10-4 М - 48 ч и 5х10-4 М - 72 ч, ИК50 на клеточной линии Jurkat 7х10-4 М при инкубации 24 ч, 3х10-4 М - 48 и 72 ч. Под действием ормустина количество клеток в раннем апоптозе (An+PI-) составило 88 %, в позднем апоптозе или некрозе - 3,5 %. Без препарата колечество клеток в раннем апоптозе составило 10%, в позднем - 2,5 %. Количество клеток, экспрессирующих активную каспазу-3, составило 77 %.

Ормустин in vivo не только значительно увеличивал (на 26-238%) продолжительность жизни мышей с лимфо-лейкозом P388, но и вызывал их излечение. При лечении животных с солидными опухолями LLC и B-16 орму-стин также дозозависимо значительно ингибировал рост первичного опухолевого узла, увеличивал латентный период появления опухолей у мышей и увеличивал продолжительность жизни.

Выводы. Выявлено, что ормустин индуцирует гибель опухолевых клеток по механизму раннего апоптоза. На животных при однократном внутрибрюшинном введении ормустин проявил высокую дозозависимую противоопухолевую активность.

Работа выполнена при финансовой поддержке УрО РАН (проект 12-П-3-1030).___________________________

№ 2/том 12/2013

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ