АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА РОСТА НЕРВОВ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ получения антитела, подходящего для применения у лошади, включающий стадии:
- получения донорного антитела вида, отличного от лошади, причем донорное антитело характеризуется специфичностью связывания в отношении целевого антигена, присутствующего у лошадей;
- сравнения каждого аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности каркасных участков донорного антитела с каждым аминокислотным остатком, присутствующем в соответствующем положении в аминокислотной последовательности каркасных участков одного или нескольких лошадиных антител, для идентификации одного или нескольких аминокислотных остатков в пределах аминокислотной последовательности каркасных участков донорного антитела, которые отличаются от одного или нескольких аминокислотных остатков в соответствующем положении в пределах аминокислотной последовательности каркасных участков одного или нескольких лошадиных антител; и
- замещение одного или нескольких идентифицированных аминокислотных остатков в донорном антителе одним или несколькими аминокислотными остатками, присутствующими в соответствующем положении в одном или нескольких лошадиных антителах.
2. Нейтрализующее антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые способны специфично связываться с лошадиным фактором роста нервов (NGF), причем антитело или связывающий фрагмент антитела содержит вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 85% идентичностью с ней, и/или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с ней.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, в котором легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 85% идентичностью по отношению к ней и/или в котором тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8 и SEQ ID NO:9, или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 85% идентичностью последовательности по отношению к ней.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.3, в котором тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6 или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 85% идентичностью последовательности по отношению к ней.
5. Антитело против лошадиного NGF или связывающий лошадиный NGF фрагмент по любому из пп.2-4, в котором тяжелая цепь относится к лошадиному изотипу НС2.
6. Антитело или связывающий фрагмент по любому из пп.2-4, причем связывание антитела или фрагмента с лошадиным NGF ингибирует способность лошадиного NGF связываться с рецепторами лошадиного NGF р75 или TrkA.
7. Антитело или связывающий фрагмент антитела по любому из пп.2-4 для применения при лечении, подавлении или ослаблении боли у лошади, лечении артрита или артритического состояния у лошади, лечении состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или лечении индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.
8. Антитело против лошадиного NGF или его связывающий лошадиный NGF фрагмент, причем указанные антитело или связывающий фрагмент антитела содержат вариабельный участок легкой цепи, содержащий по меньшей мере одно из:
каркасного участка FR1, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10,
каркасного участка FR2, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11,
каркасного участка FR3, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12, и
каркасного участка FR4, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13,
и/или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий по меньшей мере одно из:
каркасного участка FR1, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14,
каркасного участка FR2, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15,
каркасного участка FR3, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, и
каркасного участка FR4, состоящего из или содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
9. Антитело против лошадиного NGF или связывающий лошадиный NGF фрагмент по п.8, которые содержат вариабельный домен легкой цепи, имеющий:
(i) участок FR1 SEQ ID NO:10, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: I2 представляет собой V, S7 представляет собой Т, А9 представляет собой Е, L11 представляет собой V, S12 представляет собой Т или А, А13 представляет собой V, S14 представляет собой Т, Е17 представляет собой Q, Т18 представляет собой R, T20 представляет собой Е, I21 представляет собой I, L, М или V, и Е22 представляет собой К; или участок FR1 SEQ ID NO: 10, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: D1 представляет собой G, К или V, I2 представляет собой F, N, S или Т, V3 представляет собой А, G, I или М, М4 представляет собой L, Q или V, Т5 представляет собой А или I, S7 представляет собой F, А9 представляет собой D, Р или S, S10 представляет собой F, L или Т, L11 представляет собой S, S12 представляет собой Е или V, А13 представляет собой L, Q или Т, S14 представляет собой А или Р, L15 представляет собой Р или R, G16 представляет собой R, T18 представляет собой S, G или К, V19 представляет собой А, T20 представляет собой D или V, I21 представляет собой Т, и Е22 представляет собой L, N, Q, R, S или Т; и/или
(ii) участок FR2 SEQ ID NO:11, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: К5 представляет собой R, Q8 представляет собой Е, S9 представляет собой А, К11 представляет собой R или Е, и L12 представляет собой R; или участок FR2 SEQ ID NO: 11, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: Y2 представляет собой F или Н, Q3 представляет собой R или S, Q4 представляет собой Н, К, R или V, К5 представляет собой V, Р6 представляет собой I, L или S, S9 представляет собой Р, R, V или Т, Р10 представляет собой L, K11 представляет собой I или L, L12 представляет собой А, Е, G, H, Q, или W, L13 представляет собой F, I, M или V, I14 представляет собой F, Т, М или V, и Y15 представляет собой А, С, D, Е, F, G, H, Q, R, S, Т или V; и/или
(iii) участок FR3 SEQ ID NO:12, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: S4 представляет собой D, F6 представляет собой Y, D14 представляет собой Е, Y15 представляет собой F, S16 представляет собой Т, N20 представляет собой S, S24 представляет собой A, S29 представляет собой I, S или Т, и F31 представляет собой Y; или участок FR3 SEQ ID NO:12, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: G1 представляет собой D или F, V2 представляет собой А или F, Р3 представляет собой L или S, S4 представляет собой А, Е, G или L, F6 представляет собой L, S7 представляет собой С, F, G, N, R или Т, G8 представляет собой A, S9 представляет собой D, Е, G, К, R, Т или W, G10 представляет собой А, R или V, S11 представляет собой А, F, Т или Y, G12 представляет собой Е или Т, Т13 представляет собой А, S или W, S16 представляет собой А или V, L17 представляет собой F или Р, Т18 представляет собой A, I, S или V, I19 представляет собой V, N20 представляет собой D, G или Т, S21 представляет собой D, Е, Р, R или Т, Q23 представляет собой Е или R, S24 представляет собой Е или Т, Е25 представляет собой A, D, G или Т, D26 представляет собой N, V27 представляет собой А, L, Е, G или S, A28 представляет собой G, S29 представляет собой D, Е, F, L, М, N или V, Y30 представляет собой С, и F31 представляет собой H, S, Т, V или W; и/или
(iv) участок FR4 SEQ ID NO:13, который модифицирован следующей аминокислотной заменой: L9 представляет собой I; или участок FR4 SEQ ID NO:13, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: F1 представляет собой I или L, Q3 представляет собой L, Т5 представляет собой S, К6 представляет собой М, N или R, L7 представляет собой М или V, Е8 представляет собой А, D или К, L9 представляет собой F, М или V, и К10 представляет собой А, Е, G, I, Q, R, Т или V.
10. Антитело против лошадиного NGF или связывающий лошадиный NGF фрагмент по п.9, которые содержат вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий:
(i) участок FR1 SEQ ID NO:14, который модифицирован следующей аминокислотной заменой: N13 представляет собой К; или участок FR1 SEQ ID NO: 14, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: К5 представляет собой Q, G10 представляет собой D, L11 представляет собой Q, V12 представляет собой М, N13 представляет собой М или R, P14 представляет собой I или S, S15 представляет собой А или G, Q16 представляет собой Е, Т17 представляет собой A, S19 представляет собой Т, Т21 представляет собой S или V, Т23 представляет собой A, F или S, V24 представляет собой I, S25 представляет собой Т, G26 представляет собой A, F27 представляет собой А, G, I, М, N Q или S, S28 представляет собой D, H, I, L, N или Р, L29 представляет собой D, S, Т или V, и Т30 представляет собой Е, I, N или R; и/или
(ii) участок FR2 SEQ ID NO: 15, который модифицирован следующей аминокислотной заменой: W12 представляет собой F; или участок FR2 SEQ ID NO:15, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: V2 представляет собой L, A5 представляет собой Р, S или V, К8 представляет собой W, G9 представляет собой R, L10 представляет собой Р или W, W12 представляет собой Е, H, R, V или Y, и G14 представляет собой А, D или S; и/или
(iii) участок FR3 SEQ ID NO:16, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: Т3 представляет собой S, R6 представляет собой К, F14 представляет собой Y, Q16 представляет собой Т, M17 представляет собой L, и R32 представляет собой G; или участок FR3 SEQ ID NO:16, который модифицирован одной или несколькими из аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из следующих: А2 может представлять собой С, G, I, Т или V, Т3 может представлять собой D, I, М, N или R, I4 представляет собой V, Т5 представляет собой I, L или S, R6 представляет собой Е или S, D7 представляет собой Е или N, T8 представляет собой А, Е, I, Р, S или Y, S9 представляет собой Е, G, К или Т, К10 представляет собой Е, L, N, Q или R, S11 представляет собой G, К, N или R, Q12 представляет собой Е, Н или R, V13 представляет собой А, I, L, F или S, F14 представляет собой L, R, S, Т или V, L15 представляет собой V, Q16 представляет собой I, M17 представляет собой V, N18 представляет собой D, К, R, S или Т, S19 представляет собой D, Е, G, К, М или Т, L20 представляет собой М или V, Т21 представляет собой S, S22 представляет собой D, Е, G или R, Е23 представляет собой D или G, T25 представляет собой А, А26 представляет собой S, V27 представляет собой D, Y29 представляет собой А, F, I или W, A31 представляет собой Е, G, I, S, Т или V, и R32 представляет собой А, Е, G, Н, I, К или S; и/или
(iv) участок FR4 SEQ ID NO:17, который модифицирован следующей аминокислотной заменой: Q3 представляет собой Р.
11. Антитело против лошадиного NGF или связывающий лошадиный NGF фрагмент по любому из пп.8-10, в котором тяжелая цепь относится к лошадиному изотипу НС2.
12. Антитело или связывающий фрагмент по любому из пп.8-10, причем связывание антитела или фрагмента с лошадиным NGF ингибирует способность лошадиного NGF связываться с рецепторами лошадиного NGF р75 или TrkA.
13. Антитело или связывающий фрагмент антитела по любому из пп.8-10 для применения при лечении, подавлении или ослаблении боли у лошади, лечении артрита или артритического состояния у лошади, лечении состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или лечении индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.
14. Способ лечения, подавления или ослабления боли у лошади, для лечения артрита или артритического состояния у лошади, для лечения состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или для лечения индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней, включающий стадии:
- получения терапевтически эффективного количества антитела против лошадиного NGF или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.2-13, и
- введения его лошади, нуждающейся в этом.
15. Фармацевтическая композиция для лечения, подавления или ослабления боли у лошади, для лечения артрита или артритического состояния у лошади, для лечения состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или для лечения индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней, содержащая терапевтически эффективное количество эквинизированного антитела против лошадиного NGF или его связывающего фрагмента по любому из пп.2-13 вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или разбавителем.
16. Фармацевтическая композиция по п.15 для применения при лечении, подавлении или ослаблении боли у лошади, лечении артрита или артритического состояния у лошади, лечении состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или лечении индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.
17. Выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.2-13.
18. Нуклеиновая кислота по п.17 для применения при лечении, подавлении или ослаблении боли у лошади, лечении артрита или артритического состояния у лошади, лечении состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или лечении индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.
19. Применение антитела или связывающего фрагмента антитела по любому из пп.2-13 при получении лекарственного препарата для лечения, подавления или ослабления боли у лошади, для лечения артрита или артритического состояния у лошади, для лечения состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или для лечения индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.
20. Применение нуклеиновой кислоты по п.17 при получении лекарственного препарата для лечения, подавления или ослабления боли у лошади, для лечения артрита или артритического состояния у лошади, для лечения состояния, вызванного, связанного с или приводящего в результате к повышенной экспрессии лошадиного NGF или повышенной чувствительности к NGF у лошади, или для лечения индуцируемой к пролиферации NGF опухоли у лошади и состояний, связанных с ней.