Использование современных технологий в изучении посттравматической регенерации кожи

этой группе ни разу не встретились признаки а7, а8, а15, а16, а18-а20, а30-а31,а36, а44,а54-а56, а61-а67 (21 признак- 31% исследованных признаков, являющиеся неинформативными для диагностики сотрясения головного мозга.

В группе ^, по сравнению с другими группами исследования, наиболее часто встречались признаки а5, а7-а8, а16-а19, а21, а31, а44, а52-а54, а58, а60-а65, а67, т.е.21 признак - 31% от общего количества исследуемых признаков, которые можно считать наиболее информативными для данной группы исследования. В этой группе ни разу не встретились признаки а6, а24, а28, а29, а30, а34, а36, а37, а47, а55, а56, т.е. 11 признаков (16% от общего количества исследуемых признаков), являющихся неинформативными для диагностики повреждений костно-связочного аппарата и спинного мозга шейного отдела позвоночника. Наиболее редко в этой группе встречались признаки а1-а4, а14, а20, а25, а27, а38, а39, а42, а46, а49, а50 -14 признаков (20% от общего количества исследуемых), являющиеся малоинформативными.

В группе d2, по сравнению с другими группами исследования, наиболее часто встречались признаки а6, а11, а20, а22 т.е. 4 признака (6%) от общего количества исследуемых признаков. Эти признаки являются наиболее информативными для данной группы исследования. В этой группе ни разуневстретились признаки а10, а24, а25, а27, а28, а30, а31, а40, а45, а56, а61-а67, т.е. 16 признаков (24% от общего

количества исследуемых признаков), которые можно считать неинформативными для диагностики так называемого "ушиба шейного отдела позвоночника". Наиболее редко в этой группе встречались признаки а13, а15, а16, а18, а23, а26, а29, а32-а36, а41, а44, а47, а48, а51, а55, а57-а59, а62 - 21 признак (31% от общего количества исследуемых), т.е. эти признаки являются малоинформативными.

В группе d3 по сравнению с другими группами исследования, наиболее часто встречались признаки а12, а15, а30, а34 а36, а38, а48, а55, а56 т,е. 9 признаков -13% исследуемых признаков, которые можно считать наиболее информативными для данной группы исследования. В этой группе ни разу не встретились признаки а24, а27, а61-а67, т.е. 9 признаков (13% от общего количества исследуемых признаков), являющиеся не информативными для диагностики сочетанного с сотря-сениемголовного мозга повреждения шейного отделапозво-ночника. Наиболее редко в этой группе встречались признаки а6-а10, а19, а28, а31, а37, а40, а45, а54 -12 признаков (18% от общего количества исследуемых), которые можно считать малоинформативными.

Таким образом, оценивая полученные результаты, в каждой группе исследования можно выделить комплекс симптомов, позволяющих проводить дифференциальную диагностику изолированных и сочетанных с сотрясением головного мозга повреждений шейного отдела позвоночника.

Литература

1. Алексеев В.В. Неврологические аспекты лечения острых скелетно-мышечных болевых синдромов. //РМЖ,- 2004. - Том 12. -№ 5. - С. 266.

2. Величко Р.В. //Актуальные проблемы морфологии: Сборник научных трудов. - Красноярск, 2004. - С. 54 - 56

3. Веселовский В.П. Диагностика синдромов остеохондроза позвоночник. - Казань, 1990. - С. 288.

4. Епифанов В.А. Средства физической реабилитации в терапии остеохондроза позвоночника. Изд-во - ВНТИЦ, 1997. - С. 490.

5. Новиков Ю.О., Галлямова А.Ф., Машкин М.В., Гильмитдинов У.К. // Здравоохранение Башкортостана, 2002. - № 3 - С. 79

6. УльрихЭ.В., МушкинА.Ю. Вертебрология в терминах, цифрах, рисунках. Санкт-Петербург, 2002. - С. 162.

7. ЦивьянЯ.Л. Повреждения позвоночника. М., - "Медицина", 1971. - С.16.

© Г.М. Харин, 2004

УДК 616.5-003.93-02: 616-001-076

Г.М. Харин

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СОВРЕМЕННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ В ИЗУЧЕНИИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ

Кафедра судебной медицины

Казанского государственного медицинского университета

В эксперименте на крысах с моделированием резаных и полнослойных ран кожи спины изучена пролиферативная активность кератиноцитов с использованием антител к ядерному хроматину пролиферирующих клеток и метода проточной цитофлуориметрии. Получены данные, отражающие динамику регенераторного потенциала в процессе заживления ран кожи. Результаты исследования свидетельствуют об их судебно-медицинской значимости в разработке критериев оценки давности причинения повреждений.

Ключевые СЛОви: раны кожи, регенерация, иммуногистохимия, цитометрия.

G.M. Kharin

USE OF MODERN TECHNOLOGIES IN STUDYING POSTTRAUMATIC REGENERATION OF THE SKIN

Kazan

Proliferative activity of keratinocytes was studied by using PCNA-antibodies and method of flow cytofluorimetry in experiment on rats with modelling cut and full-layer skin wounds. Received data reflect dynamics of regenerative po-tential during wounds' healing. Results of investigation confirm their forensic significance in elaboration of criteria for evaluation of the injury terms.

Key words: skin wounds, regeneration, immunohistochemistry, cytometry.

С целью поиска критериев давности и прижизненно- результатах гистологического анализа, сводимых к визу-

сти причинения повреждений была предпринята попытка альному определению степени выраженности процессов

изучения динамики заживления резаных и полнослойных альтерации, воспаления и регенерации в пораженной тка-

ран кожи спины у крыс. Теоретическая важность и прак- ни [1,2, 3,4]. Получаемые при этом данные не всегда удов-

тическая значимость проведенного исследования обуслов- летворяют судебно-медицинских экспертов, поскольку не

лена тем фактом, что по настоящее время определение сро- содержат информации об уровне дифференцировки кле-

ков причинения повреждений по традиции базируется на точных элементов, их функциональной активности и сте-

пени зрелости тканевых структур, что нередко приводит к весьма существенным ошибкам при интерпретации приводимых в заключениях фактов.

Известно, что ключевым звеном в процессе заживления ран является эпителизация дефектов, во многом связанная с интенсивностью пролиферации кератиноцитов. Оценка этого процесса стала более объективной в связи с внедрением в исследовательскую практику современных технологий, в частности, методовиммуногистохимического анализа и проточной цитофлуориметрии [5], что было использовано нами для установления пролиферативной активности клеток эпидермиса в динамике посттравматической регенерации кожи.

В экспериментах, проведенных совместно с Т.Р. Джор-джикия и К.В. Ситкиной, на депилированную поверхность спины лабораторных крыс под легким эфирным наркозом наносились резаные раны всей толщи кожи линейной формы длиной 4,0 см, а в другой группе животных -полнослойные раны площадью 1 см2, которые прикрывались фиксированным стерильным материалом. Изучение объектов поврежденной ткани проводилось на сроках эксперимента от 6 часов до 28 суток. Контролем служили участки интактной кожи спины, расположенные на расстоянии 1,0 см от боковых стенок ран. Часть опытного и контрольного материала фиксировалась в 10% растворе нейтрального формалина с последующей заливкой в парафин. Гистотопографические серийные срезы изъятых объектов окрашивались гематоксилин-эозином, по Ван Гизону и иммуногистохимическим методом с использованием антител к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA). Последующий морфометрический анализ включал в себя определение процентного содержания пролиферирующих клеток с помощью стереометрической сетки последовательно в десяти полях зрения в направлении от краев повреждений к неизмененной ткани эпидермиса. Другая часть изучаемого материала в виде полосок эпидермиса шириной 1,0-1,5 мм, взятых с краев ран, помещалась в фосфатно-солевой буфер (pH - 7,4), а затем подвергалась механической дезагрегации с помощью гомогенизатора ножом Medicon. Полученную суспензию пропускали через фильтр Filcon и окрашивали с использованием CycleTest plus DNA reagent kit по инструкции производителя (BD Biosciences). Цитофлуориметрический анализ и интерпретация ДНК-гистограмм проводились на проточном цитометре Facs Calibur(Becton Dickinson,USA) с определением количества плоидных клеток и распределением ихпо фазам клеточного цикла (G0-G1/S/G2-M). В ходе исследования применялся внешний диплоидный контроль в виде суспензии мононуклеаров периферичес-койкрови ивнутренний контроль, представляющийсобой показатели измерений образцов интактной кожи. Вся цифровая информация подвергалась статистической обработке методами вариационной статистики с использованием компьютерной программы Microsoft Excel.

Результаты проведенного исследования позволили установить, что полная эпителизация линейных резаных ран прослеживалась спустя 10-12 суток, а полнослойных ран на 18-21 день после нанесения повреждений, хотя реформирование структурных компонентов собственно дермы продолжалось и на более поздних сроках с образованием рубца. В динамике заживления линейных резаных ран первоначально отмечалось статистически недостоверное уменьшение количества PCNA-экспрессирующих клеток, которое сочеталось с морфологическими проявлени-

Таблица№ 1

Процентное содержание PCNA-экспрессирующих кератиноцитов в динамике заживления резаных и полнослойных ран кожи

Условия эксперимента Резаная рана Полнослойная рана

Контроль 20,8+1,6 20,8+1,6

6 часов 18,0+2,1 23,9+1,9

1 сутки 17,6+1,9 23,0+2,5

2 сутки 18,9+2,0 43,1+3,8

3 сутки 21,3+1,5 20,9+1,0

5 сутки 39,9+2,3 17,9+2,2

7 сутки 44,0+3,2 40,3+2,7

14 сутки 23,1+1,0 31,0+1,4

21 сутки 20,1+1,3 49,0+3,7

28 сутки 20,6+1,8 26,2+2,9

ями нерезкого отека, гиперемией, скопления отдельных групп немногочисленных эритроцитов и лейкоцитов в области раны. Спустя трое суток изучаемые показатели приближались к контрольным величинам, что имело место на фоне макрофагальной реакции и пролиферации фибробластов в поврежденных структурах собственно дермы. Дальнейшие наблюдения свидетельствовали о возрастании пролиферативной активности кератиноцитов, достоверно превышающей контрольные значения при 510 суточной давности причинения повреждений, с последующим снижением количества РСМЛ-экспрессирующих клеток при полной эпителизации раны.

В отличие от линейных резаных повреждений при полнослойных ранах кожи процентное содержание РСМЛ-экспрессирующих кератиноцитов достоверно увеличивалось почти вдвое на сроках эксперимента 2 и 7-21 суток, а затем приближалась к контрольным показателям. Подобная динамика свидетельствовала о том, что процесс регенерации эпидермиса имел волнообразную интенсивность течения с периодической сменой пролиферативной активности кератиноцитов на разных сроках эксперимента. Кроме того, нами отмечена неравномерная локализация РСМЛ-экспрессирующих клеток на различном расстоянии от краев полнослойной раны. На сроках эксперимента 6 часов и одни сутки отдельные скопления этих клеток отмечались на некотором удалении от раневой поверхности, что могло служить подтверждением преобладания вне-раневого вставочного роста при контракции раны. При более поздних наблюдениях (14-21 сутки) наибольшая пролиферация кератиноцитов наблюдалась в центре эпи-телизации бывших дефектов. Было отмечено усиление регенераторного потенциала кератиноцитов, наползающих на раневую поверхность в случаях гипертрофического разрастания эпидермиса и его миграции по раневому ложу. Также прослеженные факты, свидетельствующие о состоянии РСМЛ-экспрессирующих клеток эпидермиса в зависимости от степени восстановления структурных компонентов собственно дермы. В случаях, когда эти структуры приобретали органотипическую ориентацию, количество пролиферирующих клеток в эпидермисе находилось на уровне контрольных показателей. Однако при эпители-зации дефекта, на фоне сохраняющейся грануляционной ткани и беспорядочно формирующихся волокнистых структур кератиноциты сохраняли свою высокую пролиферативную активность.

Не менее важными представляются данные, отражающие результаты использования проточной цитофлуориметрии для оценки регенераторного потенциала поврежденной кожи.

Как следует из представленной таблицы № 2, митотический потенциал клеточных элементов по данным про-

Таблица № 2 Изменение количества клеток в S-фазе митотического цикла в динамике посттравматической регенерации кожи

Условия эксперимента Резаная рана Полнослойная рана

6 часов - 16,2+4,4 - 10,9+3,1

1 сутки - 15,2+4,7 - 8,0+2,9

2 сутки - 9,9+1,4 + 6,8+1,9

3 суток + 4,0+0,9 + 6,6+1,1

5 суток + 16,0+1,8 + 11,9+2,7

7 суток + 19,9+1,7 + 30,6+2,9

14 суток + 8,1+1,0 + 26,0+3,3

21 суток + 1,7+0,5 + 13,9+1,4

28 суток - 2,7+0,8 - 1,1+0,4

за счет первичного натяжения, а во второй - путем контракции. Однако в индивидуальных наблюдениях отмечалась такая же зависимость пролиферативной активности ке-ратиноцитов от формирования структурных компонентов дермы, какая была прослежена при исследовании количества PCNA-экспрессирующих клеток.

Полученные данные свидетельствуют о судебно-медицинской значимости выявленных изменений, поскольку при обоих используемых методах изучения регенерации кожи сам факт обнаружения сдвигов пролиферативной активности кератиноцитов однозначно свидетельствует о прижизненности причинения повреждений. Прослеженная динамика регенераторного потенциала может отражать характер и стадийность заживления ран кожи, а также служить основанием для дальнейшего поиска критериев оценки давности образования повреждений. Информативность и эффективность использованных нами методических подходов подтверждается результатами ряда исследований [6,7,8,9]. В этой связи внедрение вэкспертную практику методов иммуногистохимического анализа и проточной цитофлуориметрии должно означать переход на более высокий уровень изучения основных закономерностей посттравматической регенерации органов и тканей.

точной цитофлуориметрии первоначально снижался, а затем в определенной степени коррелировал с изменениями количества PCNA-экспрессирующих кератиноцитов.

Статистически достоверные увеличения численности клеток, находящихся в S-фазе, наблюдалось на сроках 5-7 суток в случаях причинения резаных ран и в интервале 721 сутки при полнослойных ранах. Отмеченные различия результатов проточной цитофлуориметрии вполне закономерны, поскольку отражают специфику заживления ран кожи, которая в первой серии эксперимента происходила

Литература

1. Витер В.И., Хасанянова С.В. Исследование патоморфологии кожных ран для доказательства давности их происхождения // Проблемы экспертизы в медицине. - Ижевск: Экспертиза, 2002. - № 2. - С. 37 - 39.

2. Ефимов Е.А. Закономерности полноты посттравматической регенерации кожи //Архив патологии. - 1995. - № 2. - С. 85 - 87.

3. Науменко В.Г., Митяева НА Гистологический и цитологический методы исследования в судебной медицине. - М.: Медицина, 1980. - 304 с.

4. Саркисов Д.С., Пальцын А.А., Музыкант Л.И. и др. Морфология раневого процесса // Раны и раневая инфекция. Под ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. - М.: Медицина, - 1982. - С. 55 - 113.

5. Харин Г.М., Челышев Ю.А., Джорджикия Т.Р. и др. Иммуногистохимический анализ динамики заживления кожных ран //Альманах судебной медицины. - СПб., 2001. - № 2. - С. 125 - 127.

6. Betz P. Immunohistocemical parameters for the age estimation of human skin wounds. A review //Am. J. Forensic Med. Pathol. - 1995. - № 16 (3). - P. 203 - 209.

7. FieguthA., Kleemann W.J., von Wasilevsky R. e. a. Influence of postmortem changes on immunohistochemichal reaction in skin // Int. J. Legal Med. - 1997. - № 110 (1)- P. 18 - 21.

8. Hausmann R.,Nerlich P.,Betz P. The time-related expression ofp53 protein in human skin wounds - a quantitative immunohistochemical analysis //Int. J. Legal Med. - 1998 - № 111 (4). - P. 169 - 172.

9. Prathiba V.,Rao K.S.,Cupta P.D. Altered expression of keratins during abnormal wound heal ing in human skin // Cytobios. - 2001. - № 104 (405). - P. 43 - 51.

© Ю.Е. Морозов, Т.В. Козлова, В.К. Мамедов, 2004 УДК 340.624

Ю.Е. Морозов, Т.В. Козлова, В.К. Мамедов МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ АЛКОГОЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ

Российский центр судебно-медицинской экспертизы (директор - проф. Ю.И. Пиголкин) Минздрава РФ, Москва

Произведена оценка удельной электропроводности ликвора трупов лиц с разной степенью тяжестью черепномозговой травмы. Выявлены достоверные отличия значений удельной электропроводности и показателя поляризации ликвора при разной степени тяжести ЧМТ.

Ключевые СЛОви: спинномозговая жидкость (ликвор), удельная электропроводность, коэффициент поляризации, черепно-мозговая травма.

J.E.Morozov, T.V.Kozlova, V.K.Mamedov MORPHOLOGICAL CRITERIONS OF NEUROENDOCRINAL ABNORMALITIES IN ALCOHOLIC DISEASE

Moskow

There was made an estimation of liquor specific electroconductivity of people,died from basal cerebral trauma of different degree. Verification data of specific electroconductivity and polarization liquor characteristics in the cases of basal cerebral trauma are presented.

Keywords: liquor,specific electroconductivity,polarization coefficient,basal cerebral trauma.

Хорошо известно, что хроническая алкогольная инток- морфологические изменения, однако при обосновании

сикация (ХАИ) вызывает тяжелые функциональные и танатогенеза соматических осложнений алкогольной бо-