СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВ В РАСТЕНИЯХ

1. Способ получения гетерологичного целевого пептида или белка, включающий:
a) контакт целого и интактного растения или части целого и интактного растения с клетками Agrobacterium, суспендированными в текучей среде, где клетки Agrobacterium включают экспрессируемую конструкцию, кодирующую гетерологичный целевой пептид или белок;
b) обработку целого и интактного растения или части целого и интактного растения и клеток Agrobacterium в одном или более циклах давления, в результате чего клетки Agrobacterium инфильтрируют целое растение или часть растения,
где по меньшей мере один из циклов давления включает повышение давления относительно атмосферного давления и поддерживается в течение периода продолжительностью 0,5-60 с.
2. Способ инфильтрации клеток Agrobacterium в целое и интактное растение или часть целого интактного растения, включающий:
a) контакт целого и интактного растения или части целого и интактного растения с клетками Agrobacterium, суспендированными в текучей среде;
b) обработку целого растения или части целого и интактного растения и клеток Agrobacterium в одном или более циклах давления,
где по меньшей мере один из циклов давления включает повышение давления относительно атмосферного давления и поддерживается в течение периода продолжительностью 0,5-60 с.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, где экспрессируемая конструкция является экспрессируемой в растении конструкцией и выбрана так, чтобы обеспечивать транзиентную экспрессию гетерологичного целевого пептида или белка.
4. Способ по п.3, где давление поддерживается в течение периода продолжительностью 0,5-60 с.
5. Способ по п.3, где давление приложено к целому и интактному растению или части целого и интактного растения, тогда как указанное растение или часть растения находится в контакте с клетками Agrobacterium в суспензии бактериальных клеток.
6. Способ по п.3, где суспензия клеток Agrobacterium включает OD600 по меньшей мере 1,0.
7. Способ по п.3, где целое растение или часть растения и клетки Agrobacterium обрабатывают в одном или более циклах давления в закрытой системе, в особенности системе, включающей в себя камеру, предназначенную для помещения в нее целого растения или части растения, и приспособление для регулируемого повышения давления воздуха и/или текучей среды в камере.
8. Способ по п. 7, где камера имеет такую конфигурацию, что все растение, включая его наземные и подземные части, погружено в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и подвергнуто воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
9. Способ по п. 7, где камера имеет такую конфигурацию, что только все или часть наземных частей растения погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, но при этом все растение, включая наземные части, а также подземные части растения, подвергнуто воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
10. Способ по п. 7, где камера имеет такую конфигурацию, что все или часть наземных частей растения погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и подвергнуто воздействию давления в одном или более циклах давления, тогда как подземные части растения, в особенности корень растения, помещены вне камеры таким образом, что они не погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и не подвергнуты воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
11. Способ по п.3, где этап обработки целого растения или части растения включает:
a) по меньшей мере 2 цикла; или
b) по меньшей мере 3 цикла; или
c) по меньшей мере 4 цикла; или
d) по меньшей мере 8 циклов.
12. Способ по п.3, где по меньшей мере один из циклов давления включает обработку целого растения или части растения давлением:
a) по меньшей мере 3,5 бар; или
b) по меньшей мере 4,5 бар; или
c) по меньшей мере 6,5 бар; или
d) по меньшей мере 8 бар; или
e) по меньшей мере 12 бар.
13. Способ по п.3, где давление приложено в интервале между:
a) 0,5 с/цикл и 10 с/цикл; или
b) 1 с/цикл и 5 с/цикл; или
c) 0,5 с/цикл и 1 с/цикл.
14. Способ по п.3, где этап обработки целого растения или части растения давлением, которое повышено относительно атмосферного давления, включает:
a) по меньшей мере 1 цикл при давлении по меньшей мере 8 бар, в течение по меньшей мере 0,5 с/цикл; или
b) по меньшей мере 2 цикла при давлении по меньшей мере 6 бар, в течение по меньшей мере 0,5 с/цикл; или
c) по меньшей мере 8 циклов при давлении по меньшей мере 4,5 бар, в течение по меньшей мере 1 с/цикл.
15. Способ по п.14, где этап обработки целого растения или части растения давлением, которое повышено относительно атмосферного давления, включает по меньшей мере 8 циклов при давлении по меньшей мере 4,5 бар, в течение по меньшей мере 1 с/цикл.
16. Способ по п.3, где этап контакта целого растения или части растения с клетками Agrobacterium включает:
a) погружение растения или его части в суспензию клеток Agrobacterium, где суспензия включает OD600 по меньшей мере 2,5,
b) обработку растения или его части аэрозолем, полученным при использовании суспензии клеток Agrobacterium, включающей OD600 по меньшей мере 2,5.
17. Способ по п.3, где этапы включают:
a) погружение растения или его части в суспензию клеток Agrobacterium в закрытой камере, и
b) приложение давления жидкой текучей среды к суспензии клеток Agrobacterium, включающей погруженное растение или его часть.
18. Способ по п. 3, где растение является видом Nicotiana, в особенности видом Nicotiana tabacum, на стадии развития 8, 9 или 10, где растения имеют среднюю высоту приблизительно от 6,5 см до приблизительно 16,5 см.
19. Способ по п. 3, где все применяемые циклы давления включают повышение давления относительно атмосферного давления.
20. Способ по п. 3, где обработку давлением, включающую один или более циклов давления, применяют тогда, когда целое и интактное растение или часть целого и интактного растения погружены в суспензию бактериальных клеток.
21. Способ по п. 3, где множество растений или частей растения подвергают контакту с клетками Agrobacterium, суспендированными в текучей среде, и обрабатывают одним или более циклами давления.
22. Способ по любому из пп. 4-17, где растение является видом Nicotiana, в особенности видом Nicotiana tabacum, на стадии развития 8, 9 или 10, где растения имеют среднюю высоту приблизительно от 6,5 см до приблизительно 16,5 см.
23. Способ по любому из пп. 4-17, где все применяемые циклы давления включают повышение давления относительно атмосферного давления.
24. Способ по любому из пп. 4-17, где обработку давлением, включающую один или более циклов давления, применяют тогда, когда целое и интактное растение или часть целого и интактного растения погружены в суспензию бактериальных клеток.
25. Способ по любому из пп. 4-17, где множество растений или частей растения подвергают контакту с клетками Agrobacterium, суспендированными в текучей среде, и обрабатывают одним или более циклами давления.
26. Система для инфильтрации бактерий Agrobacterium в целое и интактное растение или часть целого и интактного растения, и/или для получения гетерологичного пептида или белка в целом и интактном растении или части целого и интактного растения, включающая в себя камеру, предназначенную для помещения в нее целого растения или части растения, и приспособление, предназначенное для регулируемого повышения давления воздуха и/или текучей среды в камере.
27. Система по п.26, включающая в себя компрессор и редуктор давления.
28. Система по п.26, включающая в себя множество впускных отверстий, выпускных отверстий и трубопроводов, обеспечивающих линию потока текучей среды между внутреннем и внешним пространством камеры, где поток текучей среды регулируется.
29. Система по любому из пп. 26-28, где камера включает, во внутреннем пространстве, множество форсунок, которые имеют размеры, позволяющие разбрызгивать или распылять жидкость.
30. Система по любому из пп. 26-28, где камера имеет такую конфигурацию, что все растение, включая его наземные и подземные части, погружено в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и подвергнуто воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
31. Система по любому из пп. 26-28, где камера имеет такую конфигурацию, что только все или часть наземных частей растения погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, но при этом все растение, включая наземные части, а также подземные части растения, подвергнуто воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
32. Система по любому из пп. 26-28, где камера имеет такую конфигурацию, что все или часть наземных частей растения погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и подвергнуты воздействию давления в одном или более циклах давления, тогда как подземные части растения, в особенности корень растения, помещены вне камеры таким образом, что они не погружены в инфильтрационную среду, содержащую клетки Agrobacterium, и не подвергнуты воздействию давления, приложенного в одном или более циклах давления.
33. Система по п.32, где камера включает одно или более отверстий, обеспечивающих проход наземных частей растения во время установки или извлечения, причем по краям отверстий расположены эластичные уплотнения.
34. Система по п.33, где указанное эластичное уплотнение является упругим пневматическим или гидравлическим уплотнением.
35. Применение системы по любому из пп. 26-34 для инфильтрации бактерий Agrobacterium в целое растение или часть растения, и/или для получения гетерологичного пептида или белка в целом растении или части растения.