ПРОИЗВОДНЫЕ [1,2,3]ТРИАЗОЛО[4,5-D]ПИРИМИДИНА С АФФИННОСТЬЮ К КАННАБИНОИДНЫМ РЕЦЕПТОРАМ ТИПА 2
DERIVATIVES OF [1,2,3]TRIAZOLO[4,5-D]PYRIMIDINE WITH AFFINITY TO CANNABINOID RECEPTORS OF TYPE 2

Настоящее изобретение относится к новым [1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидиновым производным с аффинностью к каннабиноидным рецепторам 2 типа (СВ2), к их получению и их диагностическому и терапевтическому применению.
Настоящее изобретение относится, в частности, к соединению формулы (I)
где
1
R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из галосульфонила, галосульфонилалкила, изотиоцианатоалкила, изотиоцианато, аминоалкилдисульфанилалкила, гидроксиалкилдисульфанилалкила, гидроксиалкилдисульфанила, аминоалкилдисульфанила, галогена, алкила, пиридинилдисульфанилалкила, бензотриазолилсульфонилалкила, дигидроксиалкилдисульфанилалкила и пиридинилдисульфанила и возможно дополнительно замещено циано;
2
3
R и R независимо выбраны из водорода, гидроксила, галогена, тиогидроксила, тиогидроксиазетидинила, азидо, изотиоцианато и алкилдисульфанила;
1
2
3
при условии, что по меньшей мере один из R, R и R представляет собой группу, содержащую сульфонил, изотиоцианато, дисульфанил, тиогидроксила или азидо;
4
R представляет собой алкил или фенилгалоалкил; и
n представляет собой 0 или 1;
или его фармацевтически приемлемой соли или эфиру.
Были обнаружены новые [1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидиновые производные, которые обладают высокой активностью и хорошей селективностью в отношении каннабиноидных рецепторов СВ2. Данные соединения обладают «модулирующим действием» на активность рецепторов СВ2. Термин «модулирующее действие» в частности означает агонистический, антагонистический и/или обратный агонистический эффекты.
Агонисты каннабиноидных рецепторов 2 типа полезны для лечения и/или профилактике у млекопитающих. Соединение формулы (I) особенно полезно при лечении или профилактике, например, боли, атеросклероза, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетической ретинопатии, глаукомы, сахарного диабета, воспаления, воспалительного заболевания кишечника, ишемически-реперфузионного повреждения, острой печеночной недостаточности, фиброза печени, фиброза легких, фиброза почек, системного фиброза, острого отторжения аллотрансплантата, хронической нефропатии аллотрансплантата, диабетической нефропатии, гломерулонефропатии, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, ишемии / инфаркта миокарда, системного склероза, термического повреждения, жжения, гипертрофических рубцов, келоидов, гингивита, пирексии, цирроза печени или рака, регуляции костной массы, нейродегенерации, инсульта, транзиторной ишемической атаки или увеита.
Обратные агонисты каннабиноидных рецепторов 2 типа полезны для лечения и/или профилактике у млекопитающих.
Соединение формулы (I) является, в частности, полезным при лечении или профилактике боли, невропатической боли, астмы, остеопороза, воспаления, психических заболеваний, психозов, онкологии, энцефалита, малярии, аллергии, иммунологических нарушений, артрита, желудочно-кишечных расстройств, психических расстройств, ревматоидного артрита, психоза и аллергии.
Каннабиноидные рецепторы являются классом рецепторов клеточной мембраны, относящимся к суперсемейству G-белок сопряженных рецепторов. В настоящее время известно два подтипа, названных Каннабиноидный Рецептор 1 (СВ1) и Каннабиноидный Рецептор 2 (СВ2). СВ1 рецептор в основном экспрессируется в центральной нервной системе (например, в миндалине мозжечка, гиппокампе) и в меньшем количестве в периферической нервной системе. СВ2, который кодируется геном CNR2, в основном экспрессируется на периферии, на клетках иммунной системы, таких как макрофаги и Т-клетки (Ashton, J. С.et al. Curr Neuropharmacol 2007, 5(2), 73-80; Miller, A. M. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 299-308; Centonze, D., et al. Curr Pharm Des 2008, 14(23), 2370-42), и в самсамса чсссссссссжелудочно-кишечном тракте (Wright, K. L. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 263-70). CB2 рецепторы также широко распространены в головном мозге, где их обнаружили в основном в микроглие, а не в нейронах (Cabral, G.A. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2): 240-51).
Модуляторы каннабиноидных рецепторов 2 типа полезны для терапии или профилактике у млекопитающих.
Интерес к агонистам рецепторов СВ2 неуклонно растет в течение последнего десятилетия (в настоящее время 30-40 патентных заявок в год) в связи с тем, что некоторые из ранних соединений, как было показано, оказывают благотворное воздействие на доклинических моделях некоторых заболеваний человека, включая хроническую боль (Beltramo, М. Mini Rev Med Chem 2009, 9(1), 11-25), атеросклероз (Mach, F. et al. J Neuroendocrinol 2008, 20 Suppl 1, 53-7), регулирование костной массы (Bab, I. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 182-8), нейровоспаление (Cabral, G.A. et al. J Leukoc Biol 2005, 78(6), 1192-7), ишемические/реперфузионные повреждения (Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62), системный фиброз (Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36; Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6), фиброз печени (Julien, В. et al. Gastroenterology 2005, 128(3), 742-55; Munoz-Luque, J. et al. J Pharmacol Exp Ther 2008, 324(2), 475-83).
Ишемическое/реперфузионное (E/R) повреждение является основной причиной повреждения тканей, происходящего в условиях, таких как инсульт, инфаркт миокарда, искусственное кровообращение и другие сосудистые операции и трансплантация органов, а также основным механизмом повреждения органов-мишеней, осложняющим течение циркуляторного шока различной этиологии. Все эти состояния характеризуются нарушением нормального кровоснабжения, приводящего к недостаточной оксигенации тканей. Ре-оксигенация, например, реперфузия, является основным лечением для восстановления нормальной оксигенации тканей. Однако отсутствие кислорода и питательных веществ из крови создает условия, при которых восстановление циркуляции приводит к дальнейшему повреждению тканей. Ущерб от реперфузионного повреждения является отчасти результатом воспалительной реакции поврежденных тканей. Белые клетки крови, собирающиеся в области по вновь возвращающейся крови, высвобождают множество воспалительных факторов, таких как интерлейкины, а также свободных радикалов в ответ на повреждение ткани. Восстановленный кровоток вновь вводит кислород в клетки, что повреждает клеточные белки, ДНК и плазматическую мембрану.
Дистанционное ишемическое прекондиционирование (RIPC) отражает стратегию освоения эндогенных защитных возможностей организма от повреждений в результате ишемии и реперфузии. Она описывает интересный феномен, при котором временная несмертельная ишемия и реперфузия одного органа или ткани придает устойчивость к последующему эпизоду "летального" ишемического реперфузионного повреждения в удаленном органе или ткани. Реальный механизм, посредством которого временная ишемия и реперфузия органа или ткани обеспечивает защиту в настоящее время неизвестно, хотя существует несколько гипотез.
Гуморальная гипотеза предполагает, что эндогенное вещество (например, аденозин, брадикинин, опиоиды, CGRP, эндоканнабиноиды, ангиотензин I или какой-либо другой еще не идентифицированный гуморальный фактор), генерируемое в удаленном органе или ткани, попадает в кровь и активирует свой соответствующий рецептор в целевой ткани и тем самым мобилизует различные внутриклеточные пути кардиопротекции, причастные к ишемическому прекондиционированию.
Последние данные показывают, что эндоканнабиноиды и их рецепторы, в частности СВ2, могут быть вовлечены в прекондиционирование и способствуют предотвращению реперфузионного повреждения посредством подавления воспалительного ответа (Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62). В частности, недавние исследования с использованием агонистов СВ2 продемонстрировали эффективность этой концепции для уменьшения I/R повреждений в сердце (Defer, N. et al. Faseb J 2009, 23(7), 2120-30), мозге (Zhang, M. et al. J Cereb Blood Flow Metab 2007, 27(7), 1387-96), печени (Batkai, S. et al. Faseb J 2007, 21(8), 1788-800) и почках (Feizi, A. et al. Exp Toxicol Pathol 2008, 60(4-5), 405-10).
Более того, за последние несколько лет, все большее количество литературы показывает, что СВ2 также может представлять интерес при субхронических и хронических условиях. Специфическая положительная регуляция СВ1 и СВ2, как было показано, ассоциирована, в животных моделях хронических заболеваний, связанных с фиброзом (Garcia-Gonzalez, Е. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6; Yang, Y. Y. et al. Liver Int 2009, 29(5), 678-85), с соответствующей экспрессией CB2 в миофибробластах, клетках, ответственных за прогрессирование фиброза.
Активация СВ2 рецепторов селективными агонистами СВ2, по сути, как было показано, оказывает анти-фиброзный эффект при диффузной системной склеродермии (Garcia-Gonzalez, Е. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6) и СВ2 рецепторы рассматривали как критическую цель при экспериментальном кожном фиброзе (Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36) и в патофизиологии печени, в том числе фиброгенезе, связанном с хроническими заболеваниями печени (Lotersztajn, S. et al. Gastroenterol Clin Biol 2007, 31(3), 255-8; Mallat, A. et al. Expert Opin Ther Targets 2007, 11(3), 403-9; Lotersztajn, S. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 286-9).
Обратные агонисты каннабиноидных рецепторов 2 типа полезны для терапии и/или профилактике у млекопитающих.
Соединение формулы (I) особенно полезно при лечении или профилактике боли, нейропатической боли, астмы, остеопороза, воспалений, психических заболеваний, психозов, онкологии, энцефалита, малярии, аллергии, иммунологических расстройств, артритов, желудочно-кишечных расстройств, психических расстройств, ревматоидного артрита, психоза и аллергии.
Интерес к лигандам рецептора СВ2 неуклонно растет в течение последнего десятилетия (в настоящее время 30-40 патентных заявок в год). Доказательства из различных источников подтверждают мнение, липид-эндоканнабиноидный сигналинг через рецепторы СВ2 является частью защитной системы млекопитающих (Pacher, P. Prog Lipid Res 2011, 50, 193). Его модуляция либо селективными агонистами рецепторов СВ2 или обратными агонистами/антагонистами (в зависимости от заболевания и его стадии) обладает уникальным терапевтическим потенциалом при широком количестве заболеваний. Для обратных агонистов/антагонистов СВ2 терапевтические возможности были продемонстрированы при различных патологических состояниях, включая боль (Pasquini, S. J Med Chem 2012, 55(11): 5391), нейропатическую боль (Garcia-Gutierrez, M.S. Br J Pharmacol 2012, 165(4): 951), психические заболевания (Garcia-Gutierrez, M.S. Br J Pharmacol 2012, 165(4): 951), психозы (Garcia-Gutierrez, M.S. Br J Pharmacol 2012, 165(4): 951), остеопороз и воспаления (Sophocleous, A. Calcif Tissue Int 2008, 82(Suppl. 1):Abst OC18), психические заболевания и психозы (Garcia-Gutierrez, M.S. Br J Pharmacol 2012, 165(4): 951), онкология (Preet, A. Cancer Prev Res 2011, 4: 65), энцефалит и малярия (Zimmer, A. WO 2011045068), аллергия и воспаление (Ueda, Y. Life Sci 2007, 80(5): 414), энцефалит и малярия (Zimmer, WO 2011045068), астма (Lunn, C.A. J Pharmacol Exp Ther 2006, 316(2): 780), иммунные нарушения (Fakhfouri, G. Neuropharmacology 2012, 63(4): 653), ревматоидный артрит (Chackalamannil, S. US 7776889), артрит (Lunn, C.A. J Pharmacol Exp Ther 2006, 316(2): 780), и желудочно-кишечные расстройства (Barth, F. FR 2887550).
Соединения по изобретению связываются с и модулируют СВ2 рецепторы и 5 обладают сниженной активностью в отношении рецепторов СВ1.
Соединения по настоящему изобретению содержат функциональные группы, такие как сульфонилфторид, изотиоцианат, тиол, азид и метилдисульфанил, которые возможно могут использоваться для образования ковалентных связей рецепторами СВ2. Такие низкомолекулярные органические молекулы в качестве ковалентных модификаторов могут быть использованы для детекции и локализации целей, для визуализации, и для терапевтического применения (см., например. Adebayo A Adeniyi, Ramesh Muthusamy & Mahmoud ES Soliman, Expert Opin. Drug Discov. (2016) 11(1):79-90).
1
8
В настоящем описании термин "алкил", самостоятельно или в комбинации, означает прямоцепочечную или с разветвленной цепью алкильную группу с 1-8 атомами углерода, в частности, прямоцепочечную или с разветвленной цепью алкильную группу с 1-6 атомами углерода и, более конкретно, прямоцепочечную или с разветвленной цепью алкильную группу с 1-4 атомами углерода. Примерами прямоцепочечных или с разветвленной цепью С-С алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, изомерные пентилы, изомерные гексилы, изомерные гептилы и изомерные октилы, в частности, метил, этил, пропил, бутил и пентил. Конкретными примерами алкила являются метил, этил и трет-бутил.
Термины "галоген" или "гало", самостоятельно или в комбинации, означают фтор, хлор, бром или йод и, в частности, фтор, хлор или бром, более конкретно фтор и хлор. Термин "галоген", в сочетании с другой группой, обозначает замещение указанной группы по меньшей мере одним атомом галогена, в частности, замещенные одним-пятью атомами галогена, в частности, одним-четырьмя галогенами, т.е. одним, двумя, тремя или четырьмя галогенами.
Термин "галоалкил", самостоятельно или в комбинации, обозначает алкильную группу, замещенную по меньшей мере одним галогеном, в частности замещенную одним-пятью галогенами, предпочтительно одним-тремя галогенами. Предпочтительным "галоалкилом" является дифторметил.
Термины "гидроксил" и "гидрокси", самостоятельно или в комбинации, означают группу -ОН.
2
Термин "амино", самостоятельно или в комбинации, означает первичную аминогруппу (-NH), вторичную аминогруппу (-NH-), или третичную аминогруппу (-N-).
2
Термин "сульфонил", самостоятельно или в комбинации, означает -SO группу.
Термин "дисульфанил", самостоятельно или в комбинации, означает -S-S- группу.
Термин "изотиоцианато", самостоятельно или в комбинации, означает группу -N=C=S.
Термины "тиогидроксил" или "тиогидрокси", самостоятельно или в комбинации, означает группу -SH.
3
Термин "азидо", самостоятельно или в комбинации, означает группу -N.
Термин " фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований или свободных кислот, которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Соли образуются с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, в частности соляная кислота, и органических кислот, таких как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, N-ацетилцистеин. Кроме того, эти соли могут быть получены посредством добавления неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, полученные из неорганических оснований включают, без ограничения, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния. Соли, полученные из органических оснований, включают, без ограничения, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, такие как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, лизин, аргинин, N- этилпиперидин, пиперидин, полиаминовые смолы. Соединение формулы (I) может также присутствовать в виде цвиттерионов. Особенно предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями соединений формулы (I) являются соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты и метансульфоновой кислоты.
"Фармацевтически приемлемые эфиры" означает, что соединения общей формулы (I) могут быть дериватизированы по функциональным группам с получением производных, которые способны превратиться обратно в исходные соединения в условиях in vivo. Примеры таких соединений включают физиологически приемлемые и метаболически лабильные эфирные производные, такие как метоксиметиловые эфиры, метилтиометиловые эфиры и пивалоилоксиметиловые эфиры. Дополнительно, любые физиологически приемлемые эквиваленты соединений общей формулы (I), аналогичные метаболически лабильным эфирам, которые способны превращаться в исходные соединения общей формулы (I) in vivo, включены в объем настоящего изобретения.
rd
Если один из исходных материалов или соединений формулы (I) содержат одну или более функциональных групп, которые не являются стабильными или являются реактивными в условиях реакции одной или нескольких реакционных стадий, соответствующие защитные группы (как описано, например, в "Protective Groups in Organic Chemistry" by T. W. Greene and P. G. M. Wutts, 3 Ed., 1999, Wiley, New York) могут быть введены перед критической стадией, используя способы, хорошо известные в данной области. Такие защитные группы могут быть удалены на более поздней стадии синтеза с использованием стандартных способов, описанных в литературе. Примерами защитных групп являются трет-бутоксикарбонил (Вое), 9-флуоренилметил карбамат (Fmoc), 2-триметилсилилэтил карбамат (Теос), карбобензилокси (Cbz) и п-метоксибензилоксикарбонил (Moz).
Соединение формулы (I) может содержать несколько асимметричных центров и может присутствовать в форме оптически чистых энантиомеров, смесей энантиомеров, таких как, например, рацематы, смесей диастереоизомеров, диастереоизомерных рацематов или смесей диастереоизомерных рацематов.
Термин "асимметричный атом углерода" означает атом углерода с четырьмя различными заместителями. Согласно правилам Кана - Ингольда - Прелога асимметричный атом углерода может быть "R" или "S" конфигурации.
Настоящее изобретение относится, в частности, к соединению формулы (I), где
1
R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила, где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из галосульфонила, галосульфонилалкила, изотиоцианатоалкила, изотиоцианато, аминоалкилдисульфанилалкила, гидроксиалкилдисульфанилалкила, гидроксиалкилдисульфанила, аминоалкилдисульфанила, галогена и алкила;
2
3
R и R независимо выбраны из водорода, гидроксила, галогена, тиогидроксила, тиогидроксиазетидинила, азидо, изотиоцианато и алкилдисульфанила;
1
2
3
при условии, что по меньшей мере один из R, R и R представляет собой группу, содержащую сульфонил, изотиоцианато, дисульфанил, тиогидроксил или азидо;
4
R представляет собой алкил или фенилгалоалкил; и
n представляет собой 0 или 1;
или его фармацевтически приемлемой соли или эфиру.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к:
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила, где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из галосульфонила, галосульфонилалкила, изотиоцианатоалкила, изотиоцианато, галогена и алкила;
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила, где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из фторсульфонила, фторсульфонилметила, изотиоцианатометила, изотиоцианато, хлоро и метила;
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой фторсульфонилфенил, фторсульфонилметилфенил, изотиоцианатометилфенил, изотиоцианатофенил, хлорфенил и метил[1,2,5]оксадиазолил;
2
3
2
3
Соединение формулы (I), где R представляет собой водород и R представляет собой гидроксил, тиогидроксил, азидо, изотиоцианато или метилдисульфанил, или R и R оба одновременно представляют собой фтор;
4
Соединение формулы (I), где R представляет собой трет-бутил или фенилдифторметил; и
Соединение формулы (I), где n представляет собой 1;
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила, где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из галосульфонила, галосульфонилалкила, изотиоцианатоалкила, изотиоцианато, галогена, алкила, гидроксиалкилдисульфанилалкила, пиридинилдисульфанилалкила, дигидроксиалкилдисульфанилалкила и возможно дополнительно замещено циано.
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой кольцо, выбранное из фенила и [1,2,5]оксадиазолила где указанное кольцо замещено одним заместителем, выбранным из фторсульфонила, фторсульфонилметила, изотиоцианатометила, изотиоцианато, хлора, метила, гидроксиэтилдисульфанилэтила, фторсульфонилэтила, пиридинилдисульфанилэтила, дигидроксиэтилдисульфанилэтила и возможно дополнительно замещено циано; и
1
Соединение формулы (I), где R представляет собой фторсульфонилфенил, фторсульфонилметилфенил, изотиоцианатометилфенил, изотиоцианатофенил, хлорфенил, метил[1,2,5]оксадиазолил, гидроксиэтилдисульфанилэтилфенил, фторсульфонилэтилфенил, пиридинилдисульфанилэтилфенил, дигидроксиэтилдисульфанилэтилфенил или (фторсульфонил)(циано)фенил.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к соединению формулы (I), выбранному из:
2-({5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)бензол-1-сульфонилфторид;
(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метансульфонилфторид;
[2-({5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]метансульфонилфторид;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
(3S)-1-(5-трет-бутил-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ол;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[(2-изотиоцианатофенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}бензол-1-сульфонилфторид;
2-{[(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метил]дисульфанил}этан-1-амин;
2-{[(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метил]дисульфанил}этан-1-ол;
2-[(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)дисульфанил]этан-1-ол;
2-[(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)дисульфанил]этан-1-амин;
2-{[2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]дисульфанил}этан-1-амин;
2-({[2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]метил}дисульфанил)этан-1-амин;
2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)бензол-1-сульфонилфторид;
2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)бензол-1-сульфонилфторид;
[2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]метансульфонилфторид;
[2-({5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]метансульфонилфторид;
(3S)-1-(5-[дифтор(фенил)метил]-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ол;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[(2-изотиоцианатофенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}азетидин-3-тиол;
(3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
(3R)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
(3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
(3R)-1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-трет-бутил-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-[дифтор(фенил)метил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид;
2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]метилдисульфанил]этанол;
2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанол;
2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]1иетил]фенил]этилдисульфанил]этанол;
3-[[2-[2-(бензотриазол-1-илсульфонил)этил]фенил]метил]-5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этансульфонилфторид;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанамин;
2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанамин;
3-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]пропан-1,2-диол;
2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[415-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]дисульфанил]этанол;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-(пиридин-2-илдисульфанил)фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин; и
2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]-3-этинилбензолсульфонилфторид.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), выбранному из:
2-({5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)бензол-1-сульфонилфторид;
(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метансульфонилфторид;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
(3S)-1-(5-трет-бутил-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ол;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[(2-изотиоцианатофенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}бензол-1-сульфонилфторид;
1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
(3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол;
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-трет-бутил-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
7-(3-азидопирролидин-1-ил)-3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин;
2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид;
2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]зтанол;
2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этансульфонилфторид;
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин;
3-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]пропан-1,2-диол; и
2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]-3-этинилбензолсульфонилфторид.
Получение соединений формулы (I) согласно настоящему изобретению может проводиться в соответствии с последовательными или конвергентными путями синтеза. Синтез соединений согласно настоящему изобретению показан на следующих схемах. Навыки, необходимые для осуществления реакций и очистки полученных соединений известны квалифицированным специалистам. Заместители и индикаторы, используемые в данных ниже описаниях способов получения, прежде всего, имеют значения данные здесь, если не указано иного. Более детально, соединения формулы (I) могут быть получены способами, описанными ниже, способами, приведенными в примерах или аналогичными способами. Подходящие реакционные условия для индивидуальных реакций известны квалифицированным специалистам. Более подробно, соединения формулы (I) могут быть получены способами, данными ниже, способами, приведенными в примерах или аналогичными способами. Подходящие условия реакции для отдельных реакционных стадий известны специалисту в данной области техники. Кроме того, для условий реакций, описанных в литературе, затрагивающих описанные реакции см., например: Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations, 2nd Edition, Richard C. Larock. John Wiley & Sons, New York, NY. 1999). Авторами было обнаружено, что удобно проводить реакции в присутствии или в отсутствие растворителя. Нет особых ограничений в отношении природы используемого растворителя, при условии, что он не оказывает вредного влияния на реакцию или участвующие в ней реагенты, и что он может растворить реагенты, по меньшей мере, в некоторой степени. Описанные реакции могут протекать в широком диапазоне температур, и точная температура реакции не является критической для изобретения. Удобно проводить описанные реакции в температурном диапазоне между -78°С до температуры кипения. Время, необходимое для реакции, также может широко варьироваться в зависимости от многих факторов, особенно от реакционной температуры и природы реагентов. Тем не менее, период времени от 0,5 ч до нескольких суток, обычно будет достаточным для получения описанных промежуточных соединений и соединений. Последовательности реакций не ограничены показанными на схемах, однако, зависимость от исходного материала и их соответствующая химическая активность последовательности реакционных стадий может быть изменена без ограничений. Исходные материалы являются как коммерчески доступными, так и могут быть получены согласно способам аналогичным описанным здесь, способами, описанными в ссылках, приведенных в описании или в примерах, или способами известными в уровне техники.
3
а) Галиды II являются либо коммерчески доступными или могут быть синтезированы в соответствии со способами, известными в уровне техники. Эти галиды II удобно взаимодействуют с азидом натрия в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, этанол или ДМФ с получением азидопроизводных III. Альтернативные предпочтительные условия включают применение растворителей, таких как DMA, NMP или DMSO, еще более предпочтительными являются NMP и DMSO. В полярных апротонных растворителях, таких как NMP и DMSO, алкилирование обычно может быть проведено при более низкой температуре, чем например в ацетонитриле, часто при температуре от комнатной до 40°С (это справделиво, например, для BnCl, 1-хлор-2-(хлорметил)бензола или PMB-Cl; это зависит, конечно, от реакционноспособности галидов II) и, следовательно, обеспечивает лучшие условия безопасности процесса (внимание: органические азиды являются, как известно, потенциально опасными и безопасность методики должна быть всегда тщательно оценена). Добавление воды может быть полезным, поскольку это увеличивает растворимость азида натрия и обеспечивает более устойчивый кинетический профиль, помогающий растворить твердые комки NaN. Это также может приводить к лучшей фильтрации конечно реакционной смеси азида. Фильтрация реакционной смеси может быть необходима, например, если последующая реакция циклоприсоединения проводится в потоковом режиме в реакторах с небольшими каналами. Азид не выделяют и его раствор лучше всего вводить на следующей стадии. Это также позволить избежать его выделения, которое также приводит к проблемам безопасности.
b) Производные триазола IV могут быть получены посредством реакции циклоприсоединения [3+2] азидопроизводных III и 2-цианоацетамида в присутствии подходящего основания, такого как метоксид натрия или этоксид натрия, в подходящем растворителе, таком как метанол, этанол или DMF. Альтернативные предпочтительные условия включают взаимодействие азида с 2-цианоацетамидом в растворителях, таких как NMP или DMSO, в присутствии гидроксида натрия. Постадийную методику обычно проводят при температуре от комнатной до 50°С, предпочтительно между комнатной температурой и 40°С (внимание, безопасность процесса должа быть всегда тщательно оценена). Методика циклопроисоединения может быть также адаптирована для потокового режима (релевантный пример из литературы см. Org. Process Res. Dev., 2009, 13 (6), pp 1401-1406) и в этом случае реакционная температура может увеличена выше 50°С, например (без ограничения) между 50°С и 90°С, предпочтительно между 60°С и 70°С.
c) Производные триазола V могут быть получены ацилированием IV с помощью ацилгалида в присутствии основания, такого как DIEA, DMAP, пиридин и т.д.. Наблюдалось двойное ацилирование и образование побочных нитрильных продуктов. Это может быть существенным в случае работы, например, в пиридине в качестве растворителя. Однако, они могут быть минимизированы при использовании DMA или NMP, предпочтительно DMA, в качестве растворителя вместо пиридина. Предпочтительные условия включают применение 1.0-2 экв. пиридина и пивалоилхлорида, предпочтительно от 1.0 до 1.5 экв., предпочтительно около 1.5экв. при 50-100°С, предпочтительно между 75-85°С. Эти полярные растворители с высокой температурой кипения также позволяют сокращать последующую стадию циклизации, что существенно упрощает методику.
3
2
3
3
d) Триазолопиримидиновые производные VI могут быть получены внутримолекулярной циклизацией триазолопроизводного V в присутствии основания, такого как KHCO, NaCO и воды, либо в присутствии либо без растворителя, такого как метанол, этанол, диоксан и толуол. Альтернативные предпочтительные условия включают применение DMA или NMP в качестве растворителей, предпочтительно DMA. Реакция может быть проведена в присутствии KHCO при 130-170°С, предпочтительно между 140 и 160°С. Соединение VI может существовать в виде таутомера или смеси таутомеров, например:
4
2
3
Возможно, амидоамиды IV могут взаимодействовать с нитрилами R-CN в присутствии основания, такого как KCO в растворителе, таком как DMF, предпочтительно при температурах, близких к температуре кипения растворителя, с непосредственным получением пиримидинонов VI.
3
2
2
3
e) Хлориды VII могут быть получены посредством взаимодействия VI с хлорирующим реагентом, таким как POCl, SOCl или (COCl) в присутствии подходящего основания, например N,N-диэтиланилин, лутидин или пиридин. Альтернативные предпочтительные условия включают применение реактива Вильсемйера в качестве хлорирующего средства. Он также может быть получен in situ посредством взаимодействия оксалилхлорида с ДМФ. Хлорирование может быть проведено, например, в ацетонитриле, ДХМ или AcOEt, предпочтительно в ДХМ. Эти условия позволяют использовать средние реакционные температуры и, например, избежать гашения избытка POCl после прохождения реакции. Неочищенный продукт может быть использован на следующей стадии.
f) Хлориды VII удобно взаимодействуют с аминонуклеофилами в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, DIEA или DBU в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, метанол, толуол или ДМФ с получением триазоло-пиримидиновых производных I.
1
1
1
1
2
2
2
2
Эти производные могут быть конечными соединениями, однако, предпочтительно, когда R-CH = замещенной бензильной группе, например, п-метоксибензил, эти группы могут быть отщеплены с помощью ТФУ, CAN, гидрогенезирования и т.д. для получения производных I (R-CH=Н). R-CH = бензил представляет собой подходящую альтернативную защитную группу. Она позволяет применять PMB-Cl (для получения соответствующего азидного промежуточного соединения III), которая, как известно, обладает некоторыми свойствами термостабильности (см. например Organic Process Research & Development 2005, 9, 1009-1012) и различное качество в зависимости от поставщика. Бензильная группа может быть отщеплена в обычных условиях гидрогенолиза также, например, в присутствии кислот.Когда применяется HCl, производные I (R-CH=Н), возможно, могут быть выделены в виде солей.
1
2
2
3
2
3
3
3
Триазольные производные I (R-CH=Н) удобно взаимодействует либо с галидом (или сульфонатом, таким как мезилат, нонафлат или тозилат) в присутствии подходящего основания, такого как DIEA, DBU, KCO, или CsCO в растворителе, таком как ДМФ, дмоксан или толуол, или альтернативно, со спиртом в условиях реакции Мицунобу с использованием подходящего диазодикарбоксилата (DEAD, DIAD и т.д.) и фосфина, например, PBu или PPh в подходящем растворителе, таком как ТГФ, ДХМ, толуол, с получением конечных триазоло-пиримидиновых производных I.
rd
Если одно из исходных веществ, соединений формулы II, реагентов ацилирования, использованных на стадии с) или аминов, используемых на стадии f), содержит одну или более функциональных групп, которые являются нестабильными или реактивными в реакционных условиях на одной или более реакционных стадий, подходящие защитные группы (Р) (как описано, например, в T.W. Greene et al., Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley and Sons Inc. New York 1999, 3 edition) могут быть введены до критической стадии с использованием способов, хорошо известных в уровне техники. Такие защитные группы могут быть удалены на более поздней стадии синтеза с использованием обычных способов, известных в уровне техники.
Если одно или более соединений формул II-VII, реагентов ацилирования, применяемых на стадии d) или аминов, применяемых на стадии f). содержат хиральные центры, триазолопиримидины формулы I могут быть получены в виде смесей диастереомеров или энантиомеров, которые могут быть разделены способами, хорошо известными в уровне техники, например (хиральной) ВЭЖХ или кристаллизацией. Рацемические соединения могут, например, быть разделены на их антиподы через диастереомерные соли посредством кристаллизации или посредством разделения антиподов с помощью специальных хроматографических способов, используя либо хиральный адсорбент, либо хиральный элюент.
Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения формулы (I), содержащему взаимодействие соединения формулы (А)
в присутствии соединения формулы (В)
1
4
и основания, где R-R и n являются такими, как определено выше.
В способе по настоящему изобретению основание представляет собой, например, триэтиламин, DIEA или DBU.
В способе по настоящему изобретению может быть использован растворитель, который может быть выбран, например, из ацетонитрила, метанола, толуола и ДМФ.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), полученному в соответствии со способом по изобретению.
В другом воплощении настоящего изобретения предложены фармацевтическая композиция или лекарственное средство, содержащие соединение по настоящему изобретению и терапевтически инертный носитель, разбавитель или эксципиент, а также способ применения соединений настоящего изобретения для получения такой композиции и лекарственного средства. В одном примере, соединение формулы (I) может быть приготовлено путем смешивания при комнатной температуре, соответствующем рН и при желаемой степени чистоты, с физиологически приемлемыми носителями, например, носителями, которые нетоксичны для реципиентов в используемых дозах и концентрациях, в галенову форму введения. РН композиции зависит в основном от конкретного применения и концентрации соединения, но предпочтительно может варьироваться от примерно 3 до примерно 8. В одном примере соединение формулы (I) готовится в ацетатном буфере при рН 5. В другом воплощении соединение формулы (I) является стерильным. Соединение может храниться, например, в виде твердой или аморфной композиции, в виде лиофилизированного препарата или в виде водного раствора.
Композиции изготавливаются, дозируются и вводятся в соответствии с надлежащей медицинской практикой. Факторы, рассматриваемые в данном контексте, включают конкретное расстройство, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние конкретного пациента, причину расстройства, место доставки агента, способ введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим врачам.
Соединения по изобретению можно вводить любыми подходящими путями, в том числе перорально, местно (в том числе трансбуккально и подъязычно), ректально, вагинально, трансдермально, парентерально, подкожно, внутрибрюшинно, внутрилегочно, внутрикожно, интратекально и эпидурально и интраназально, и, при желании для местного лечения, введение в очаг поражения. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить в любой удобной форме для введения, например, таблетки, порошки, капсулы, растворы, дисперсии, суспензии, сиропы, спреи, суппозитории, гели, эмульсии, пластыри и т.п. Такие композиции могут содержать обычные для фармацевтических препаратов компоненты, например, разбавители, носители, модификаторы рН, подсластители, наполнители и другие активные агенты.
Типичный препарат готовят путем смешивания соединения по настоящему изобретению и носителя или эксципиента. Подходящие носители и эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники и подробно описаны, например, в Ansel, Howard С, et al., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; and Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Композиции могут также включать один или более буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активные вещества, смачивающие агенты, смазывающие агенты, эмульгаторы, суспендирующие агенты, консерванты, антиоксиданты, кроющие агенты, глиданты, технологические добавки, красители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, разбавители и другие известные добавки для обеспечения элегантной презентации препарата (например, соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или помощи в изготовлении фармацевтического продукта (например, лекарственного средства).
Настоящее изобретение также относится к:
Соединение формулы (I) для применения в качестве терапевтически активного вещества;
Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) и терапевтически инертный носитель;
Применение соединения формулы (I) для получения лекарственных средств для лечения или профилактики боли, нейропатической боли, атеросклероза, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетической ретинопатии, глаукомы, сахарного диабета, воспаления, воспалительного заболевания кишечника, ишемически-реперфузионного повреждения, острой печеночной недостаточности, фиброза печени, фиброза легких, фиброза почек, системного фиброза, острого отторжения аллотрансплантата, хронической нефропатии аллотрансплантата, диабетической нефропатии, гломерулонефропатии, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, ишемии / инфаркта миокарда, системного склероза, термического повреждения, жжения, гипертрофических рубцов, келоидов, гингивита, пирексии, цирроза печени или рака, регуляции костной массы, нейродегенерации, инсульта, транзиторной ишемической атаки, увеита, астмы, остеопороза, психиатрических заболеваний, психоза, онкологии, энцефалита, малярии, аллергии, иммунологических нарушений, артрита, желудочно-кишечных расстройств, ревматоидного артрита или аллергии;
Соединение формулы (I) для применения при лечении или профилактике боли, нейропатической боли, атеросклероза, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетической ретинопатии, глаукомы, сахарного диабета, воспаления, воспалительного заболевания кишечника, ишемически-реперфузионного повреждения, острой печеночной недостаточности, фиброза печени, фиброза легких, фиброза почек, системного фиброза, острого отторжения аллотрансплантата, хронической нефропатии аллотрансплантата, диабетической нефропатии, гломерулонефропатии, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, ишемии / инфаркта миокарда, системного склероза, термического повреждения, жжения, гипертрофических рубцов, келоидов, гингивита, пирексии, цирроза печени или рака, регуляции костной массы, нейродегенерации, инсульта, транзиторной ишемической атаки, увеита, астмы, остеопороза, психиатрических заболеваний, психоза, онкологии, энцефалита, малярии, аллергии, иммунологических нарушений, артрита, желудочно-кишечных расстройств, ревматоидного артрита или аллергии;
Способ лечения или профилактики боли, нейропатической боли, атеросклероза, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетической ретинопатии, глаукомы, сахарного диабета, воспаления, воспалительного заболевания кишечника, ишемически-реперфузионного повреждения, острой печеночной недостаточности, фиброза печени, фиброза легких, фиброза почек, системного фиброза, острого отторжения аллотрансплантата, хронической нефропатии аллотрансплантата, диабетической нефропатии, гломерулонефропатии, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, ишемии / инфаркта миокарда, системного склероза, термического повреждения, жжения, гипертрофических рубцов, келоидов, гингивита, пирексии, цирроза печени или рака, регуляции костной массы, нейродегенерации, инсульта, транзиторной ишемической атаки, увеита, астмы, остеопороза, психиатрических заболеваний, психоза, онкологии, энцефалита, малярии, аллергии, иммунологических нарушений, артрита, желудочно-кишечных расстройств, ревматоидного артрита или аллергии, который включает введение эффективного количества соединения формулы (I) нуждающемуся в этом пациенту; и
Применение соединений формулы (I) для детекции или визуализации рецепторов СВ2.
Настоящее изобретение далее проиллюстрировано следующими примерами, которые носят неограничивающий характер.
Примеры
Аббревиатуры
6
MS = масс спектрометрия; CAN = нитрат церия аммония; CAN = номер химического вещества химической информационной службы США; Ас = ацетил; DIEA = N,N-диизопропилэтиламин; DBU = 1,8-Диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен; ДМФ = диметилформамид; ВЭЖХ = ЖХ = высокоэффективная жидкостная хроматография; HRMS = масс-спектрометрия высокого разрешения; MeCN = ацетонитрил; NBS =N-бромсукцинимид; NCS = N-хлорсукцинимид; NMR данные даны в миллионных частях (δ) относительно внутреннего тетраметилсилана и относятся к сигналу дейтериевой сигнализации из образца растворителя (d-DMSO если указано иного); константы взаимодействия (J) даны в Герцах; ТГФ = тетрагидрофуран; ТФУ = трифторуксусная кислота; ДХМ = дихлорметан.
Пример 1
2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид
a) 2-(Бромометил)бензол-1-сульфонилфторид
+
Смесь фенилметилсульфонилфторида (CAS 444-31-5, 350 мг, 2.01 ммоль, 1 экв.), NBS (429 мг, 2.41 ммоль, 1.2 экв.) и AIBN (33 мг, 0.20 ммоль, 0.1 экв.) в MeCN (2.00 мл) кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удалили и толуол (5 мл) добавили. Суспензию отфильтровали через целит (промыв дополнительно толуолом) и фильтрат сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (1.5% EtOAc в гексанах) дала 2-(бромометил)бензол-1-сульфонилфторид (407 мг, 1.6 ммоль, 80% выход), в виде бесцветного осадка. HRMS (EI+) 251.9251 (М).
b) 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид
3
4
+
(3S)-1-(5-трет-бутил-3Н-триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ол (CAS 1433946-74-7, 50 мг, 0.19 ммоль, 1.0 экв.) и 2-(бромометил)бензол-1-сульфонилфторид (53 мг, 0.21 ммоль, 1.1 экв.) растворили в ДМФ (1.0 мл) при комнатной температуре. Затем NEt (40 мкл, 0.29 ммоль, 1.5 экв.) добавили и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Смесь разбавили EtOAc (20 мл), промыли 5% водн. LiCl (2×2 мл) и солевым раствором (1×5 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (EtOAc/гексаны/АсОН 5:5:1) дала 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид (23 мг, 0.053 ммоль, 28% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 435.1607 (М+Н).
Пример 2
(2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метансульфонилфторид
a) о-Толилметансульфонилфторид
3
4
3
4
+
1-(Хлорметил)-2-метилбензол (CAS 552-45-4, 3.35 g, 23.8 ммоль, 1.00 экв.) и тиомочевину (1.81 г, 23.8 ммоль, 1.00 экв.) объединили с EtOH (24 мл) и кипятили в течение 1 ч. Растворитель удалили с получением бесцветного осадка. MeCN (34.3 мл) и водн. HCl (2 М, 6.9 мл) добавили и смесь перемешивали до растворения большей части осадка. NCS (12.7 г, 95.1 ммоль, 4 экв.) затем добавили по порциям при такой скорости, чтобы температура не превысили 23°С (внутренняя температура, охлаждение с помощью ванны со льдом). После завершения добавления, охлаждающую ванну убрали и желтую смесь перемешивали в течение 30 минут. Затем ее влили в дополнительную воронку, содержащую воду (100 мл), перенос контролировали качественно с помощью эфира. Затем водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (3×50 мл). Объединенные органические фазы промыли насыщ. водн. NaHCO (30 мл) и солевым раствором (30 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали с получением 5.84 г неочищенного материала, который растворили в смеси 3:1 ацетон : вода (100 мл). Фторид калия добавили (2.77 г, 47.6 ммоль, 2 экв.). После перемешивания в течение ночи смесь разбавили водой (300 мл) и экстрагировали эфиром (3×100 мл). Объединенные органические фазы промыли насыщ. водн. NaHCO (30 мл), водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (5% EtOAc в гексанах) дала о-толилметансульфонилфторид (2.04 г, 10.8 ммоль, 45.5% выход) в виде бесцветного масла, которое отвердело в течение ночи. HRMS (EI+) 188.0303 (М).
b) (2-(Бромометил)фенил)метансульфонилфторид
4
2
2
+
о-Толилметансульфонилфторид (188 мг, 1.00 ммоль, 1 экв.), NBS (196 мг, 1.10 ммоль, 1.1 экв.) и бензоилпероксид (32.3 мг, 0.10 ммоль, 0.1 экв.) объединили с CCl (5.00 мл) и кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Растворитель удалили и флеш-хроматография на силикагеле (15% CHCl в гексанах) дала (2-(бромометил)фенил)метансульфонилфторид в виде бесцветного осадка (213 мг, 0.750 ммоль, чистота 94% (6% исходное вещество), 71% выход). HRMS (EI) 265.9410 (М).
с) (2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}фенил)метансульфонилфторид
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1438465-59-8, 50 мг, 0.18 ммоль) и (2-(бромометил)фенил)метансульфонилфторида и выделили в виде бесцветного масла (15 мг, 0.032 ммоль, 18% выход). HRMS (ESI+) 469.1624 (М+Н).
Пример 3
[2-({5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил}метил)фенил]метансульфонилфторид
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из (3S)-1-(5-трет-бутил-3Н-триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ола (CAS 1433946-74-7, 55 мг, 0.21 ммоль, 1.0 экв.) и (2-(бромометил)фенил)метансульфонилфторида и выделили в виде бесцветного масла (31 мг, 0.069 ммоль, 33% выход). HRMS (ESI+) 449.1767 (М+Н).
Пример 4
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
a) 1-(Азидометил)-2-(хлорметил)бензол
3
4
3
3
1
13
о-ксилилена дихлорид (CAS 612-12-4, 3.23 g, 18.4 ммоль, 1.00 экв.) растворили в DMSO (18.4 мл) и NaN (1.20 г, 18.4 ммоль, 1.00 экв.) добавили. Через 2 ч реакционную смесь разбавили водой (200 мл) и экстрагировали EtOAc (3×70 мл). Органическую фазу промыли солевым раствором (2×20 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Повторная флеш-хроматография на силикагеле (2% EtOAc в гексанах) дала 1-(Азидометил)-2-(хлорметил)бензол (520 мг, 2.86 ммоль, 15.5% выход) в виде бесцветного масла. Н NMR (400 MHz, CDCl) δ=7.48-7.32 (m, 4Н), 4.68 (s, 2Н), 4.53 (s, 2Н). С NMR (101 MHz, CDCl) δ=136.0, 134.3, 130.8, 130.2, 129.4, 129.2, 52.1, 43.6.
b) 1-(Хлорметил)-2-(изотиоцианатометила)бензол
3
2
+
1-(Азидометил)-2-(хлорметил)бензол (421 мг, 2.32 ммоль, 1.00 экв.) и трифенилфосфин (669 мг, 2.55 ммоль, 1.10 экв.) растворили в CHCl (4.65 мл) при комнатной температуре. CS (1.19 мл, 19.7 ммоль, 8.50 ммоль) добавили и смесь перемешивали в течение 1 ч. Смесь сразу подвергли флеш-хроматографии на силикагеле (2% EtOAc в гексанах) с получением 1-(хлорметил)-2-(изотиоцианатометил)бензола (114 мг, 0.577 ммоль, 24.9% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (EI+) 197.0054 (М).
c) 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1438465-59-8, 56 мг, 0.20 ммоль) и 1-(хлорметил)-2-(изотиоцианатометила)бензола и выделили в виде бесцветного масла (37 мг, 0.083 ммоль, 42% выход). HRMS (ESI+) 444.1772 (М+Н).
Пример 5
(3S)-1-(5-трет-бутил-3-{[2-(изотиоцианатометила)фенил]метил}-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ол
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из (3S)-1-(5-трет-бутил-3Н-триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ола (CAS 1433946-74-7, 57 мг, 0.22 ммоль, 1.0 экв.) и 1-(хлорметил)-2-(изотиоцианатометила)бензола и выделили в виде бесцветного масла (45 мг, 0.106 ммоль, 49% выход). HRMS (ESI+) 424.1916 (М+Н).
Пример 6
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[(2-изотиоцианатофенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1438465-59-8, 45 мг, 0.16 ммоль) и 1-бромометил-2-изотиоцианатобензола (CAS 108288-40-0) и выделили в виде бесцветного масла (20 мг, 0.047 ммоль, 29% выход). HRMS (ESI+) 430.1621 (М+Н).
Пример 7
2-{[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил}бензол-1-сульфонилфторид
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[5-трет-бутил-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторида (Пример 1, стадия b), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1438465-59-8, 60 мг, 0.21 ммоль) и 2-(бромометил)бензол-1-сульфонилфторида и выделили в виде бесцветного масла (33 мг, 0.072 ммоль, 34% выход). HRMS (ESI+) 455.1470 (М+Н).
Пример 8
1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол
а) 1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат
3
2
2
2
2
2
2
2
2
+
1-[5-трет-бутил-3-(2-хлор-бензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]-пирролидин-3-ол (CAS 1433362-08-3, 154 мг, 0.398 ммоль, 1.00 экв.) и NEt (111 мкл, 0.796 ммоль, 2.00 экв.) растворили в CHCl (1.80 мл) и охладили до 0°С. Затем MsCl (62 мкл, 0.80 ммоль, 2.0 экв.) добавили в виде раствора в CHCl (0.40 мл). Через 40 мин реакционную смесь разбавили водой и экстрагировали CHCl. Объединенные органические фазы сконцентрировали и остаток подвергли флеш-хроматографии на силикагеле (5% EtOAc в CHCl) с получением 1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфоната (170 мг, 0.366 ммоль, 92% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 465.1469 (М+Н).
b) 8-(1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат
3
4
+
1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат (361 мг, 0.776 ммоль, 1.00 экв.) растворили в ДМФ (7.76 мл), тиоацетат калия (887 мг, 7.76 ммоль, 10.0 экв.) добавили и смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавили водой и экстрагировали EtOAc. Органические фазы промыли разбавленным водн. NaHCO и солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (градиент 10% - 20% EtOAc в гексанах) дала S-(1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат (345 мг, 0.735 ммоль, 95% выход) в виде бесцветного осадка. HRMS (ESI+) 445.1579 (М+Н).
с) 1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол
2
3
4
2
2
+
S-(1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат (109 мг, 0.245 ммоль, 1.00 экв.) растворили в смеси 1:1 МеОН и ТГФ (2.40 мл). KCO (203 мг, 1.47 ммоль, 6 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавили водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3×20 мл). Органические фазы промыли солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (CHCl:гексаны:МеОН 50:50:1) дала 1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол (86 мг, 0.21 ммоль, 87% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 403.1468 (М+Н).
Пример 9
1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}азетидин-3-тиол
+
Суспензию 5-(трет-бутил)-7-хлор-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1433362-85-6, 20 мг, 59.5 мкмоль), азетидин-3-тиола гидрохлорида (CAS 179337-60-1, 11.2 мг, 89.2 мкмоль) и DIPEA (23.1 мг, 30.5 мкл, 178 мкмоль) в ацетонитриле (3 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель удалили при пониженном давлении и остаток очистили с помощью препаративной ТСХ (силикагель, 2.0 мм, 3:1 Гептан : EtOAc) с получением соединения, указанного в заголовке (11 мг, 48%), в виде бесцветного полутвердого масла. HRMS (ESI+) 389.1297 (М+Н).
Пример 10
(3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол или энантиомер
a) 3-((5-(трет-бутил)-7-хлор-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол
2
2
2
2
+
5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-он (CAS 1919022-49-3, 235 мг, 0.812 ммоль, 1.00 экв.) и одну каплю ДМФ растворили в CHCl (2.71 мл). Оксалилхлорид (80 мкл, 0.89 ммоль, 1.1 экв.) добавили и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле (0.5% МеОН в CHCl) дала 3-((5-(трет-бутил)-7-хлор-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол (230 мг, 0.757 ммоль, 92% выход) в виде бесцветного осадка. HRMS (MALDI+) 308.1021 (М).
b) Пирролидин-3-ил метансульфоната гидрохлорид
2
3-Метансульфонилокси-пирролидин-1-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир (CAS 141699-57-2, 768 мг, 2.89 ммоль, 1.00 экв.) растворили в EtO (8.7 мл) и HCl (4 M в диоксане, 8.68 мл, 17.4 ммоль, 6 экв.) добавили. Смесь перемешивали в течение ночи, сконцентрировали и остаток использовали без дополнительной очистки.
c) 1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат
2
2
3
+
3-((5-(трет-бутил)-7-хлор-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол (300 мг, 0.98 ммоль, 1.00 экв.) растворили в CHCl (4.87 мл) при комнатной температуре и добавили пирролидин-3-ил метансульфоната гидрохлорид (216 мг, 1.07 ммоль, 1.10 экв.). Затем NEt (272 мкл, 1.95 ммоль, 2.00 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 30 минут. Целит добавили и растворитель эвапорировали. Флеш-хроматография на силикагеле (50% EtOAc в гексанах) дала 1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ила метансульфонат (426 мг, 0.89 ммоль, 91% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 437.1715 (М+Н).
d) S-(1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат
4
+
1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ила метансульфонат (147 мг, 0.337 ммоль, 1.0 экв.) и тиоацетат калия (385 мг, 3.37 ммоль, 10.0 экв.) объединили с ДМФ (1.8 мл) и нагревали до 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и разбавили EtOAc (50 мл). Органическую фазу промыли водой (10 мл), 5% водн. LiCl (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (15% EtOAc в гексанах) дала S-(1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил)этантиоат (107 мг, 0.257 ммоль, 76% выход). HRMS (ESI+) 417.1813 (М+Н).
e) S-[(3S)-1-[5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]пирролидин-3-ил] этантиоат
Рацемический S-(1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат (107 мг, 0.257 ммоль) подвергли разделению с помощью хиральной ВЭЖХ с получением соединения, указанного в заголовке (25 мг, 0.06 ммоль, 23%).
f) (3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол
2
3
2
4
+
Смесь S-[(3S)-1-[5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]пирролидин-3-ил]этантиоата (25 мг, 0.06 ммоль) и KCO (45.6 мг, 330 мкмоль) в ТГФ (3 мл), воду (1 мл) и метанол (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Реакционную смесь влили в воду (30 мл) и экстрагировали EtOAc (2×30 мл). Объединенные экстракты промыли водой/солевым раствором (1:1), высушили над NaSO и сконцентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очистили с помощью препаративной ТСХ (силикагель, 1.0 мм, 1:1 гептан/EtOAc) с получением соединения, указанного в заголовке (12 мг, 52% выход) в виде бесцветного осадка. MS(ESI): m/z=374.1 [М]
Пример 11
(3R)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол или энантиомер
a) S-[(3R)-1-[5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]пирролидин-3-ил] этантиоат
Рацемический S-(1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат (107 мг, 0.257 ммоль) подвергли разделению с помощью хиральной ВЭЖХ с получением соединения, указанного в заголовке (33 мг, 0.08 ммоль, 31%).
b) (3R)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол
+
По аналогии со способом, описанным в примере 10 (стадия f), S-[(3R)-1-[5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]пирролидин-3-ил] этантиоат гидролизовали с получением соединения, указанного в заголовке (14 мг, 61%) в виде бесцветного осадка. MS(ESI): m/z=374.1 [М]
Пример 12
(3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол или энантиомер
1
3
По аналогии со способом, описанным для синтеза (3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиола (Пример 10, стадии a, c-f) соединение, указанное в заголовке (11 мг, 60%) получили в виде бесцветного осадка для 5-трет-бутил-7-хлор-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1433362-85-6). Н NMR (300 MHz, CDCl) δ=1.20-1.32 (m, 1H) 1.36 (s, 9H) 2.17-2.50 (m, 2H) 3.87-4.20 (m, 2H) 4.25-4.61 (m, 2H) 5.86 (s, 2H) 7.14-7.25 (m, 3H) 7.38-7.41 (m, 1H).
Пример 13
(3R)-1-{5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиол или энантиомер
1
3
По аналогии со способом, описанным для синтеза (3S)-1-{5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}пирролидин-3-тиола (Пример 10, стадии c-f) соединение, указанное в заголовке (12 мг, 60%) получили в виде бесцветного осадка из 5-трет-бутил-7-хлор-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (CAS 1433362-85-6). Н NMR (300 MHz, CDCl) δ=1.21-1.32 (m, 1Н) 1.36 (s, 9Н) 2.19-2.39 (m, 2Н) 3.87-4.22 (m, 2Н) 4.27-4.61 (m, 2Н) 5.86 (s, 2Н) 7.13-7.25 (m, 3Н) 7.38-7.40 (m, 1Н).
Пример 14
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
3
4
+
1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат (194 мг, 0.444 ммоль, 1.00 экв.) растворили в ДМФ (3.70 мл) и добавили NaN (144 мг, 2.22 ммоль, 5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы промыли солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (20% EtOAc в гексанах) дала 7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (153 мг, 0.399 ммоль, 90% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 384.2005 (М+Н).
Пример 15
5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
a) 1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-амин
3
2
2
+
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (32 мг, 0.078 ммоль, 1.0 экв.), воду (28 мкл, 1.6 ммоль, 20 экв.) и PPh (41 мг, 0.16 ммоль, 2.0 экв.) объединили с ТГФ (710 мкл) и перемешивали при 50°С в течение 1.5 ч. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле (10% МеОН в CHCl) дала 1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-амин (21 мг, 0.054 ммоль, 70% выход) в виде бесцветного осадка. HRMS (ESI+) 386.1857 (М+Н).
b) 5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
1
1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-амин (12 мг, 0.031 ммоль, 1.0 экв.) объединили с N,N'-тиокарбонилдиимидазолом (11 мг, 0.062 ммоль, 2.0 экв.) в ТГФ (155 мкл) и перемешивали в течение ночи. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле дала 5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (6.5 мг, 0.015 ммоль, 49% выход) в виде бесцветного масла. Н NMR (300 MHz, Хлороформ-d) δ=7.43-7.38 (m, 1Н), 7.27-7.17 (m, 3Н), 5.87 (s, 2Н), 4.64-4.47 (m, 2Н), 4.40-4.27 (m, 1Н), 4.17-4.04 (m, 1Н), 4.02-3.92 (m, 1Н), 2.55-2.27 (m, 2Н), 1.37 (s, 9Н).
Пример 16
5-трет-бутил-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
3
2
+
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (50 мг, 0.13 ммоль, 1.0 экв.), PPh (41 мг, 0.16 ммоль, 1.2 экв.) растворили в ТГФ (650 мкл) и добавили CS (79 мкл, 1.3 ммоль, 10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле (20% EtOAc в гексанах) дала 5-трет-бутил-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (33 мг, 0.083 ммоль, 63% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 400.1665 (М+Н).
Пример 17
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(2-хлорфенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 14) соединение, указанное в заголовке, получили из 1-(5-(трет-бутил)-3-(2-хлорбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфоната и выделили в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 412.1763 (М+Н).
Пример 18
5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
а) 5-амино-1-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид
3
5-амино-1-(2-хлорбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (CAS 93444-91-8, 2.01 г, 15.2 ммоль, 1.0 экв.) и DIPEA (0.27 мл, 1.52 ммоль, 0.1 экв.) растворили в ДМСО (9.7 мл) и NaN (1.04 г, 15.9 ммоль, 1.05 экв.) добавили по порциям. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Во втором реакционном сосуде цианоацетамид (1.91 г, 22.8 ммоль, 1.5 экв.) растворили в ДМСО (7.8 мл) и воде (1.2 мл). Затем 32% водный NaOH (1.4 мл, 15.2 мл, 1.0 экв.) добавили медленно (экзотермичность) и смесь перемешивали в течение 15 мин. Ранее приготовленный раствор органоазида медленно добавили (экзотермичность) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Воду (20 мл) добавили медленно (экзотермичность). Получившуюся суспензию охладили до 0°С и перемешивали в течение 1 ч. Фильтрация (промывая водой, 2×5 мл) и сушка дали 5-амино-1-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (2.0 г, 9.0 ммоль, 59% выход) в виде бежевого осадка.
b) 5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-он
2
3
4
2
2
+
5-амино-1-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (1.50 г, 6.72 ммоль, 1.00 экв.), 2,2-дифтор-2-фенилацетонитрил (1.60 г, 10.5 ммоль, 1.56 экв.) и KCO (4.64 г, 33.6 ммоль, 5.00 экв.) объединили с ДМФ (19.2 мл) и нагревали to 90°С в течение ночи. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и влили в воду со льдом. Водн. HCl (1 М) добавили до рН=3 и ее экстрагировали EtOAc (3×100 мл). Объединенные органические фазы промыли водн 5% LiCl и солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали с получением коричневого масла. Тритурирование остатка 2-PrOH и фильтрация дали бледно-желтый осадок (1.45 г). Фильтрат сконцентрировали и подвергли хроматографии на силикагеле (CHCl:ацетон 9:1+1% МеОН). Фракции, содержащие продукт, объединили, сконцентрировали, и остаток снова тритурировали с помощью 2-PrOH с получением другой части 5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-она (в сумме 1.72 г, 4.79 ммоль, 71% выход). HRMS (ESI+) 360.1015 (М+Н).
c) 3-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол
2
2
4
+
5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-он (112 мг, 0.237 ммоль, 1.00 экв.) растворили в CHCl (790 мкл) и добавили одну каплю ДМФ. Оксалилхлорид (42 мкл, 0.474 ммоль, 2.00 экв.) добавили по каплям и смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1.5 ч. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и разбавили с помощью EtOAc (30 мл). Органическую фазу промыли водой и солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (20% EtOAc в гексанах) дала 3-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол (80 мг, 0.21 ммоль, 89% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 378.0677 (М+Н).
d) 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат
2
2
3
+
3-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)-4-метил-1,2,5-оксадиазол (151 мг, 0.401 ммоль, 1.00 экв.) объединили с пирролидин-3-ил метансульфоната гидрохлоридом (97 мг, 0.48 ммоль, 1.2 экв.) и CHCl (1.34 мл). NEt (112 мкл, 0.802 ммоль, 2.00 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 30 минут. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле (50% EtOAc в гексанах) дала 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфонат (165 мг, 0.326 ммоль, 81% выход). HRMS (ESI+) 507.1374 (М+Н).
e) S-(1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат
1
По аналогии со способом, описанным для синтеза S-(1-(5-(трет-бутил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоата (Пример 10, стадия f) соединение, указанное в заголовке, синтезировали из 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ила метансульфоната (92 мг, 0.182 ммоль) и выделили в виде слегка желтого воска (80 мг, 0.164 ммоль, 91% выход). Н NMR (300 MHz, Хлороформ-d) δ=7.70-7.62 (m, 2Н), 7.42-7.35 (m, 3Н), 5.90 (s, 2Н), 4.61 (dd, J=12.2, 6.2, 0.5Н), 4.34-4.08 (m, 3Н), 3.89 (td, J=7.0, 2.9, 1Н), 3.76 (dd, J=12.5, 4.7, 0.5Н), 2.63-2.39 (m, 1Н), 2.36 (s, 1.5Н), 2.34 (s, 1.5Н), 2.34 (s, 3Н), 2.24-2.01 (m, 1H), смесь ротамеров.
f) 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-тиол
4
4
+
S-(1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил) этантиоат (35 мг, 0.072 ммоль, 1.0 экв.) растворили в ТГФ (700 мкл) и охладили до 0°С. NaOMe (1 М в МеОН, 94 мкл, 0.94 ммоль, 1.3 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 1 ч. Насыщ. водн. NHCl добавили и смесь экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (25% EtOAc в гексанах) дала 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-тиол (22 мг, 0.049 ммоль, 69% выход) в виде бесцветного осадка. HRMS (ESI+) 445.1371 (М+Н).
g) 5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
4
4
+
К раствору 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-тиола (19 мг, 0.043 ммоль, 1.0 экв.) в NaHPO-буфере (0.5 М, 260 мкл) и EtOH (450 мкл) добавили метилметантиосульфонат (160 мкл, 0.056 ммоль, 1.3 экв, разбавили в EtOH 1:30). Смесь перемешивали в течение 12 часов. Добавили дополнительное количество метил метан тиосульфоната (40 мкл, 0.011 ммоль, 0.3 экв.). Смесь перемешивали в течение 2 ч. EtOAc (100 мл) добавили. Смесь промыли водой и солевым раствором, высушили над MgSO и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (20% EtOAc в гексанах) дала 5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (14 мг, 0.029 ммоль, 67% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 491.1245 (М+Н).
Пример 19
3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-[дифтор(фенил)метил]-7-[3-(метилдисульфанил)пирролидин-1-ил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 18, стадии b-g) соединение, указанное в заголовке, получили из 5-амино-1-(2-хлорбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамида (CAS 93444-91-8) и выделили в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 519.0995 (М+Н).
Пример 20
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-5-[дифтор(фенил)метил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил) метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 14) соединение, указанное в заголовке, получили из 1-(5-(дифтор(фенил)метил)-3-((4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфоната (66 мг, 0.13 ммоль, 1.0 экв.) и выделили в виде бесцветного осадка (54 мг, 0.12 ммоль, 91% выход). HRMS (ESI+) 454.1661 (М+Н).
Пример 21
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-трет-бутил-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 14) соединение, указанное в заголовке, получили из 1-(3-(2-хлорбензил)-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-3-ил метансульфоната (64 мг, 0.12 ммоль, 1.0 экв.) и выделили в виде бесцветного осадка (47 мг, 0.098 ммоль, 82% выход). HRMS (ESI+) 482.1412 (М+Н).
Пример 22
3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
3
+
7-(3-Азидопирролидин-1-ил)-3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (31 мг, 0.064 ммоль, 1.0 экв.) и CS (39 мкл, 0.64 ммоль, 10 экв.) растворили в ТГФ (322 мкл) и PPh (20 мг, 0.77 ммоль, 1.2 экв.) добавили. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Целит добавили и растворитель удалили. Флеш-хроматография на силикагеле (25% EtOAc в гексанах) дала 3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (16 мг, 0.032 ммоль, 50% выход) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 498.1069 (М+Н).
Пример 23
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 3-[(2-хлорфенил)метил]-5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3-изотиоцианатопирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 22), соединение, указанное в заголовке, получили из 7-(3-азидопирролидин-1-ил)-5-[дифтор(фенил)метил]-3-[(4-метил-1,2,5-оксадиазол-3-ил)метил]-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (39 мг, 0.086 ммоль, 1.0 экв.) и выделили в виде бесцветного масла (18 мг, 0.038 ммоль, 45% выход). HRMS (ESI+) 470.1314 (М+Н).
Пример 24
2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид
а) 5-амино-1-(2-(бензилтио)бензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид
+
По аналогии со способом, описанным для 5-амино-1-(2-винилбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамида (Пример 27, стадия а), соединение, указанное в заголовке, получили из о-бензилмеркаптобензилхлорида (CAS 4521-46-4, 3.39 г, 13.6 ммоль, 1.00 экв.), азида натрия (930 мг, 14.3 ммоль, 1.05 экв.) и 2-цианоацетамида (1.72 г, 20.4 ммоль, 1.50 экв.) и выделили в виде бесцветного осадка (4.03 г, 11.9 ммоль, 87%). HRMS (ESI+) 362.1051 (M+Na).
b) 3-(2-(Бензилтио)бензил)-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-он
2
3
+
5-амино-1-(2-(бензилтио)бензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (679 мг, 2.00 ммоль, 1.00 экв.) объединили с ДМФ (4 мл), 2,2-дифтор-2-фенилацетонитрил (459 мг, 3.00 ммоль, 1.50 экв.) и KCO (1.38 г, 10.0 ммоль, 5.00 экв.) и нагревали до 90°С в течение ночи. После охлаждения до КТ добавили воду. Преципитат отфильтровали с получением загрязненного материала. Дополнительная очистка с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (20% ацетон в толуоле) дала соединение, указанное в заголовке, в виде желтого осадка (406 мг, 0.854 ммоль, 43%). HRMS (ESI+) 479.1347 (М+Н).
c) 2-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензол-1-сульфонилфторид
2
2
4
2
2
4
2
2
4
+
3-(2-(Бензилтио)бензил)-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-он (150 мг, 0.315 ммоль, 1.00 экв.) объединили с MeCN (6.4 мл), АсОН (80 мкл) и водой (0.16 мл) и охладили до -13°С (вода со льдом NaCl, внешняя температура). 1,3-дихлор-5,5-диметилгидантоин (124 мг, 0.631 ммоль, 2.00 экв.) добавили и смесь перемешивали при такой температуре в течение 1.5 ч. Реакционную смесь затем разбавили CHCl (100 мл), промыли солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Неочищенное вещество растворили в смеси ацетона (1.0 мл) и воды (50 мкл). Фторид калия (92 мг, 1.6 ммоль, 5.0 экв.) добавили при КТ и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавили CHCl (100 мл), отфильтровали, высушили над MgSO, отфильтровали снова и сконцентрировали. Остаток перерастворили в CHCl (1.6 мл). ДМФ (25 мкл, 0.32 ммоль, 1.0 экв.) добавили с последующим оксалилхлоридом (56 мкл, 0.63 ммоль, 2.0 экв.). Реакционную смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Поскольку ТСХ анализ показал неполную конверсию, добавили другую порцию оксалилхлорида (56 мкл, 0.63 ммоль, 2.0 экв.) и перемешивание продолжили при температуре кипения в течение 2 ч. Реакционную смесь охладили до КТ, разбавили EtOAc (100 мл), промыли полунасыщенным водн. бикарбонатом натрия, 5% водн. LiCl и солевым раствором, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10% EtOAc в гексанах 15% - 20%) дала соединение, указанное в заголовке, в виде желтого масла (48 мг, 0.11 ммоль, 33%за 3 стадии). HRMS (ESI+) 454.0352 (М+Н).
d) 2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид
2
2
4
+
2-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензол-1-сульфонилфторид (20 мг, 0.044 ммоль, 1.0 экв.) объединили с (S)-пирролидин-3-олом (4.2 мг, 0.048 ммоль, 1.1 экв.) и CHCl (0.2 мл). Триэтиламин (9.2 мкл, 0.066 ммоль, 1.5 экв.) добавили. Через 30 мин при КТ реакционную смесь разбавили EtOAc (50 мл), промыли 5% водн. LiCl, и солевым раствором (2х), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (50% EtOAc в гексанах) дала соединение, указанное в заголовке, в виде бесцветного масла (16 мг, 0.032 ммоль, 72%). HRMS (ESI+) 505.1261 (М+Н).
Пример 25
2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]метилдисульфанил]этанол
a) S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензилбензотиоат
3
4
+
S-2-(йодометил)бензилбензотиоат (160 мг, 0.435 ммоль, 1.05 экв.) и 5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (CAS 1438465-59-8, 117 мг, 0.414 ммоль, 1.00 экв.) растворили в ДМФ (0.8 мл). NEt (87 мкл, 0.62 ммоль, 1.5 экв.) добавили и смесь перемешивали при КТ в течение ночи. Реакционную смесь разбавили EtOAc (80 мл), промыли 5% водн. LiCl (3×10 мл), солевым раствором (10 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (5% EtOAc в гексанах до 20%) дала соединение, указанное в заголовке, в виде бесцветного масла (90 мг, 0.172 ммоль, 42%). HRMS (ESI+) 523.2083 (М+Н).
b) 2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]метилдисульфанил]этанол
2
3
4
2
2
2
2
2
2
2
2
2
4
2
2
+
S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензилбензотиоат (34 мг, 0.065 ммоль, 1.0 экв.) растворили в смеси МеОН (1 мл) и ТГФ (0.8 мл). KCO (45 мг, 0.33 ммоль, 5.0 экв.) добавили и смесь перемешивали до тех пор, пока ТСХ не показал полную конверсию исходного вещества. Смесь затем разбавили EtOAc (50 мл), промыли водн. HCl (0.5 М), водой и солевым раствором (10 мл каждого), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Остаток растворили в CHCl (0.2 мл) и добавили в раствор бензотриазола (7.7 мг, 0.065 ммоль, 1.0 экв.) и 1-хлорбензотриазола (15 мг, 0.095 ммоль, 1.5 экв.) в CHCl (0.65 мл) при -78°С. Раствор нагревали до -20°С и поддерживали при этой температуре в течение 20 мин. Раствор меркаптоэтанола в CHCl (0.5 М, 0.21 мл, 0.11 ммоль, 1.6 экв.) добавили. Раствор поддерживали при -20°С в течение 30 мин. Реакционную смесь погасили посредством добавления раствора тиосульфата натрия ⋅5HO (16 мг, 0.065 ммоль, 1.0 экв.) в воде (0.4 мл) и насыщ. бикарбонат натрия (0.4 мл) и смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин. Воду (5 мл) добавили и водную фазу экстрагировали CHCl (3×2 мл). Объединенные органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (5% EtOAc в гексанах до 25%) дала продукт, загрязненный бензотриазолом. Вторая флеш-хроматография на силикагеле (7.5% EtOAc в CHCl) дала соединение, указанное в заголовке, в виде бесцветного масла (7.0 мг, 0.014 ммоль, 22% за две стадии). HRMS (ESI+) 495.1808 (М+Н).
Пример 26
2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]бензолсульфонилфторид
2
2
2-((7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензол-1-сульфонилфторид (10 мг, 0.022 ммоль, 1.0 экв.) и 3,3-дифторпирролидина гидрохлорид (3.3 мг, 0.023 ммоль, 1.05 экв.) объединили с CHCl (0.1 мл). Триэтиламин (7 мкл, 0.46 ммоль, 2.1 экв.) добавили. Через 30 мин смесь сразу подвергли флеш-хроматографии с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветной пены (10 мг, 0.019 ммоль, 87%).
Пример 27
5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин
a) 5-амино-1-(2-винилбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид
1
Азид натрия (0.852 г, 13.1 ммоль, 1.05 экв.) добавили по порциям в раствор хлорметилстриола (CAS 22570-84-9, 1.91 г, 12.5 ммоль, 1.00 экв.) и DIPEA (0.22 мл, 1.3 ммоль, 0.10 экв.) в ДМСО (12.5 мл) и перемешивали в течение 1.5 ч при КТ. Суспензию затем перенесли в раствор 2-цианоацетамида (1.58 г, 18.7 ммоль, 1.50 экв.) и 20% водн. NaOH (2.25 мл, 12.5 ммоль, 1.00 экв.) в ДМСО (12.5 мл) и получившуюся смесь перемешивали в течение 3.5 ч при КТ. Воду (100 мл) добавили при охлаждении на ледяной бане. Через 20 мин суспензию отфильтровали. Осадок на фильтре промыли водой (3×40 мл), EtOH (2×20 мл) и диэтиловым эфиром (2×20 мл) с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного осадка (2.23 г, 9.15 ммоль, 73%). Н NMR (300 MHz, Ацетон-d6) δ 7.63-7.56 (m, 1Н), 7.38-7.23 (m, 2Н), 7.17 (dd, J=17.3, 11.0 Hz, 1Н), 7.02 (s, 1Н), 6.90-6.81 (m, 1Н), 6.41 (s, 1Н), 5.97 (s, 2Н), 5.75 (dd, J=17.3, 1.4 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.38 (dd, J=11.1, 1.3 Hz, 1H).
b) 5-(дифтор(фенил)метил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4H)-он
2
3
+
2,2-дифтор-2-фенилацетонитрил (629 мг, 4.11 ммоль, 2.00 экв.) и KCO (1.42 г, 10.3 ммоль, 5.00 экв.) добавили в раствор 5-амино-1-(2-винилбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамида (500 мг, 2.06 ммоль, 1.00 экв.) в ДМФ (6.9 мл). Колбу закрыли и поместили на масляную баню, предварительно нагретую до 80°С. Через 3 ч, дополнительно добавили 2,2-дифтор-2-фенилацетонитрил (157 мг, 1.03 ммоль, 0.50 экв.) и смесь перемешивали в течение ночи при 80°С. После охлаждения до КТ, воду (10 мл) и 2 М водн. HCl (5.2 мл) добавили. Получившуюся суспензию перемешивали в течение 20 мин и затем отфильтровали. Осадок на фильтре промыли водой (30 мл), EtOH (30 мл) и эфиром (30 мл), и высушили с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного осадка (357 мг, 0.941 ммоль, 46%). HRMS (ESI+) 380.1319 (М+Н).
c) 7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
3
3
4
+
POCl (0.36 мл, 3.9 ммоль, 2.0 экв.) добавили в раствор 5-(дифтор(фенил)метил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(4Н)-она (0.74 г, 2.0 ммоль, 1.0 экв.) и ДМФ (кол.) в смеси толуола (14.8 мл) и MeCN (14.8 мл). Получившуюся смесь перемешивали при 80°С в течение 6 ч. Дополнительное количество POCl (0.37 мл, 4.0 ммоль, 1.0 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение ночи при 80°С. После охлаждения до КТ добавили EtOAc (80 мл). Раствор промыли водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл). Органические фазы высушили над MgSO и отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) дала соединение, указанное в заголовке (617 мг, 1.55 ммоль, 80%) в виде желтого осадка. HRMS (ESI+) 398.0986 (М+Н).
d) 5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
2
+
Триэтиламин (70 мкл, 0.50 ммоль, 2.5 экв.) добавили к смеси 7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (80 мг, 0.20 ммоль, 1.0 экв.) и 3,3-дифторпирролидина гидрохлорида (35 мг, 0.24 ммоль, 1.2 экв.) в CHCl (2 мл). Получившуюся смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Летучие компоненты удалили и остаток подвергли флеш-хроматографии на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) с получением соединения, указанного в заголовке (91 мг, 0.19 ммоль, 97%), в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 469.1758 (М+Н).
е) S-2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенетил этантиоат
2
3
3
4
+
5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (20 мг, 0.043 ммоль, 1.0 экв.) объединили с ДМФ (0.7 мл), тиоуксусной кислотой (0.012 мл, 0.17 ммоль, 4.0 экв.) и BiO (0.2 мг, 0.4 мкмоль, 0.01 экв.) и смесь продули азотом. BrCCl (0.4 мкл, 4 мкмоль, 0.1 экв.) добавили и смесь облучали бытовой лампой (15 Вт) в течение ночи. После добавления EtOAc и воды слои разделили. Органический слой промыли 5% водн. LiCl и солевым раствором. Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10-40% EtOAc в гексанах) дала соединение, указанное в заголовке (10 мг, 0.018 ммоль, 43%). HRMS (ESI+) 567.1549 (M+Na).
f) 2-(2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиол
2
3
4
KCO (37 мг, 0.26 ммоль, 2.0 экв.) добавили в раствор S-2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенетил этантиоата (72 мг, 0.13 ммоль, 1.0 экв.) в смеси МеОН (1.0 мл) и ТГФ (0.2 мл). Получившуюся реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. добавили EtOAc (30 мл). Органические фазы промыли 2 М водн. HCl (20 мл), водой (20 мл) и солевым раствором (20 мл). После высушивания над MgSO и фильтрации, растворитель удалили с получением соединения, указанного в заголовке (64 мг, 0.13 ммоль, 96%), которое использовали как есть для последующих реакций.
g) 5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
2
2
2
3
3
2
2
+
2-(2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиол (20 мг, 0.040 ммоль, 1.0 экв.) добавили в раствор 1-хлорбензотриазола (9.2 мг, 0.060 ммоль, 1.5 экв.) и бензотриазола (4.7 мг, 0.040 ммоль, 1.0 экв.) в CHCl (0.4 мл) при -78°С и перемешивали в течение 1 ч при -20°С. Пиридин-2-тиол (6.6 мг, 0.060 ммоль, 1.5 экв.) добавили при -20°С и смесь перемешивали в течение 6 ч. Смесь погасили водной NaSO и насыщ. водн. NaHCO. Органический слой разделили и водную фазу экстрагировали CHCl (3×10 мл). Объединенные органические фазы сконцентрировали и остаток подвергли препаративной ТСХ (20% EtOAc в гексанах) с получением соединения, указанного в заголовке (6.5 мг, 0.001 ммоль, 27%) в виде бесцветного масла. HRMS (ESI+) 612.1613 (М+Н).
Пример 28
2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанол
2
2
4
2
2
+
Йод (30 мг, 0.12 ммоль, 3.0 экв.) добавили по порциям в раствор 2-меркаптоэтанола (0.014 мл, 0.20 ммоль, 5.0 экв.), пиридина (0.019 мл, 0.24 ммоль, 6.0 экв.) и 2-(2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (20 мг, 0.040 ммоль, 1.0 экв.) в CHCl (0.3 мл) и МеОН (0.1 мл). Получившуюся смесь перемешивали в течение 2 ч при КТ. EtOAc (20 мл) добавили и раствор промыли солевым раствором (10 мл). Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Препаративная ТСХ (5% EtOAc в CHCl) дала соединение, указанное в заголовке (9 мг, 0.02 ммоль, 39%). HRMS (ESI+) 579.1613 (М+Н).
Пример 29
2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанол
а) 5-(трет-бутил)-7-хлор-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
3
3
4
+
5-амино-1-(2-винилбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (1.00 г, 4.11 ммоль, 1.00 экв.) растворили в диметилацетамиде (3.4 мл). Пиридин (0.499 мл, 6.17 ммоль, 1.50 экв.) и пивалоилхлорид (0.759 мл, 6.17 ммоль, 1.50 экв.) добавили. Получившуюся смесь перемешивали при 85°С в течение 5.5 ч перед добавлением KHCO (2.06 g, 20.6 ммоль, 5.00 экв.). Температуру повысили до 155°С и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охладили до КТ. Воду добавили и получившуюся суспензию отфильтровали. Остаток на фильтре промыли этанолом и эфиром, и высушили с получением промежуточного соединения триазолопиримидона (1.22 г). Промежуточное соединение объединили с MeCN (11.4 мл), POCl (0.74 мл, 7.9 ммоль, 2.0 экв.) и N,N-диэтиланилином (0.63 мл, 4.0 ммоль, 1.0 экв.). Получившуюся смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. После охлаждения до КТ, EtOAc (80 мл) добавили. Раствор промыли водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) дало соединение, указанное в заголовке в виде желтого осадка (847 мг, 2.58 ммоль, 63% за две стадии). HRMS (ESI+) 328.1327 (М+Н).
b) 5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
2
+
5-(трет-бутил)-7-хлор-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин (847 мг, 2.58 ммоль, 1.00 экв.) и 3,3-дифторопирролидина гидрохлорид (445 мг, 3.10 ммоль, 1.20 экв.) объединили с CHCl (25 мл). Триэтиламин (0.90 мл, 6.5 ммоль, 2.5 экв.) добавили и получившуюся смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Летучие компоненты удалили и остаток подвергли флеш-хроматографии на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного масла (968 мг, 2.43 ммоль, 94%). HRMS (ESI+) 399.2101 (ESI+H).
c) S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенетил этантиоат
4
AIBN (21 мг, 0.13 ммоль, 0.10 экв.) добавили в раствор 5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (500 мг, 1.26 ммоль, 1.0 экв.) и тиоуксусной кислоты (0.90 мл, 13 ммоль, 10 экв.) в толуоле (5 мл). Смесь продули азотом в течение 10 мин и нагревали при температуре кипения в течение ночи. Дополнительное количество AIBN (21 мг, 0.13 ммоль, 0.10 экв.) добавили и смесь кипятили с обратным холодильником в течение дополнительных 10 ч. После охлаждения до КТ, EtOAc (100 мл) добавили. Раствор промыли насыщенным водным бикарбонатом натрия (2×40 мл) и солевым раствором (40 мл). Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) дало соединение, указанное в заголовке (393 мг, 0.828 ммоль, 66%).
d) 2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиол
2
3
4
S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенетил этантиоат (100 мг, 0.211 ммоль, 1.00 экв.) растворили в МеОН (4.0 мл) и ТГФ (1.0 мл). KCO (58 мг, 0.42 ммоль, 2.0 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение ночи. EtOAc (40 мл) добавили и раствор промыли 2 М водн. HCl (20 мл), водой (20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Неочищенный тиол использовали в последующих реакциях без дополнительной очистки.
е) 2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанол
2
2
4
2
2
+
Йод (35 мг, 0.14 ммоль, 3.0 экв.) добавили по порциям в раствор 2-меркаптоэтанола (0.016 мл, 0.23 ммоль, 5.0 экв.), пиридина (0.022 мл, 0.28 ммоль, 6.0 экв.) и 2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (20 мг, 0.046 ммоль, 1.0 экв.) в CHCl (0.3 мл) и МеОН (0.1 мл). Получившуюся смесь перемешивали в течение 8 ч при КТ. EtOAc (20 мл) добавили и раствор промыли солевым раствором (10 мл). Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Препаративная ТСХ (5% EtOAc в CHCl) дала соединение, указанное в заголовке (4 мг, 0.008 ммоль, 17%). HRMS (ESI+) 509.1962 (М+Н).
Пример 30
3-[[2-[2-(Бензотриазол-1-илсульфонил)этил]фенил]метил]-5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин
2
2
2
2
3
3
2
2
+
2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиол (15 мг, 0.035 ммоль, 1.0.) добавили к N-хлорбензотриазолу (8.0 мг, 0.052 ммоль, 1.5 экв.) и бензотриазолу (4.1 мг, 0.035 ммоль, 1.0 экв.) в CHCl (0.3 мл) и перемешивали в течение 1 ч при -78°С. Затем 2-меркаптоэтанол (7 мкл, 0.1 ммоль, 1.5 экв.) добавили при -20°С и смесь нагревали до КТ. Реакцию погасили посредством добавления водного NaSO и насыщ. водного NaHCO. Фазы разделили и водную фазу экстрагировали CHCl (3×10 мл). Объединенные органические слои сконцентрировали под вакуумом и остаток подвергли препаративной ТСХ (20% EtOAc в гексанах) с получением соединения, указанного в заголовке (2 мг, 3 мкмоль, 10%). HRMS (ESI+) 582.2206 (М+Н).
Пример 31
2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этансульфонилфторид
3
4
4
+
N-хлорсукцинимид (20 мг, 0.15 ммоль, 4.0 экв.) медленно добавили в раствор S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенетил этантиоата (18 мг, 0.037 ммоль, 1.0 экв.) в смеси MeCN (0.6 мл) и 2М водн. HCl (0.12 мл, 0.24 ммоль, 6.5 экв.) при 0°С. Получившийся раствор перемешивали в течение 40 мин. EtOAc (20 мл) и насыщ. NaHCO (20 мл) добавили, и слои разделили. Органическую фазу промыли солевым раствором (20 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали с получением неочищенного сульфонилхлорида, который растворили в смеси ацетона (0.5 мл) и воды (0.025 мл). Фторид калия (10 мг, 0.18 ммоль, 5.0 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение 6.5 ч при КТ. EtOAc (20 мл) добавили. Органические фазы промыли водой (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Препаративная ТСХ (20% EtOAc в гексанах) дала соединение, указанное в заголовке (9 мг, 0.02 ммоль, 53%). HRMS (ESI+) 483.1780 (М+Н).
Пример 32
5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин
2
2
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 27, стадия g) соединение, указанное в заголовке, получили из 2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (20 мг, 0.046 ммоль, 1.0 экв.), пиридин-2-тиола (26 мг, 0.23 ммоль, 5.0 экв.), йода (35 мг, 0.14 ммоль, 3.0 экв.) и пиридина (0.022 мл, 0.28 ммоль, 6.0 экв.) в CHCl (0.3 мл) и выделили с помощью препаративной ТСХ (6 мг, 0.01 ммоль, 24%). HRMS (ESI+) 542.1972 (М+Н).
Пример 33
2-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанамин
2
2
2
2
3
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 27, стадия g) соединение, указанное в заголовке, получили из 2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (30 мг, 0.069 ммоль, 1.0 экв.), 2-аминоэтантиола (27 мг, 0.35 ммоль, 5.0 экв.), йода (53 мг, 0.21 ммоль, 3.0 экв.) и пиридина (0.034 мл, 0.42 ммоль, 6.0 экв.) в CHCl (1.0 мл) и МеОН (0.3 мл) и выделили с помощью препаративной ТСХ (20% МеОН в CHCl, 1% NEt) в виде масла (5.5 мг, 0.008 ммоль, 16%). HRMS (ESI+) 508.2118 (М+Н).
Пример 34
2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанамин
2
2
2
2
3
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-[[2-[2-(пиридин-2-илдисульфанил)этил]фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 27, стадия g) соединение, указанное в заголовке, получили из 2-(2-((5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (20 мг, 0.040 ммоль, 1.0 экв.), 2-аминоэтантиола (15 мг, 0.20 ммоль, 5.0 экв.), йода (30 мг, 0.12 ммоль, 3.0 экв.) и пиридина (0.019 мл, 0.24 ммоль, 6.0 экв.) в CHCl (0.5 мл) и МеОН (0.2 мл) и выделили с помощью препаративной ТСХ (20% МеОН в CHCl, 1% NEt) в виде масла (4.5 мг, 0.008 ммоль, 20%). HRMS (ESI+) 578.1774 (М+Н).
Пример 35
3-[2-[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]пропан-1,2-диол
2
2
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]метилдисульфанил]этанола (Пример 25, стадия b) соединение, указанное в заголовке, получили из S-2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)бензилбензотиоата (25 мг, 0.058 ммоль, 1.0 экв.) и тиоглицерина (9.4 мг, 0.087 ммоль, 1.5 экв.) и выделили с помощью препаративной ТСХ (40% EtOAc в CHCl) в виде бесцветного масла (22 мг, 0.041 ммоль, 71%). HRMS (ESI+) 539.2070 (М+Н).
Пример 36
2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]дисульфанил]этанол
а) 5-амино-1-(2-йодобензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-амино-1-(2-винилбензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамида (Пример 27, стадия а) соединение, указанное в заголовке, получили из 2-йодобензилметансульфоната (CAS 183789-20-0, 6.67 г, 21.4 ммоль, 1.00 экв.) и выделили в виде бесцветного осадка (6.32 г, 18.4 ммоль, 86%). HRMS (ESI+) 344.0010 (М+Н).
b) 5-(трет-бутил)-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-7(4Н)-он
3
+
5-амино-1-(2-йодобензил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксамид (0.500 г, 1.46 ммоль, 1.00 экв.) растворили в диметилацетамиде (2.4 мл). Пиридин (0.18 мл, 2.2 ммоль, 1.5 экв.) и пивалоилхлорид (0.27 мл, 2.2 ммоль, 1.5 экв.) добавили и смесь перемешивали при 85°С в течение 4 ч. KHCO (1.01 г, 7.29 ммоль, 5.0 экв.) добавили и смесь перемешивали при 155°С в течение ночи. Раствор охладили до КТ. Воду (100 мл) добавили и получившуюся суспензию отфильтровали. Осадок на фильтре промыли водой (50 мл), EtOH (50 мл) и диэтиловым эфиром (50 мл), и высушили с получением соединения, указанного в заголовке (120 мг, 0.293 ммоль, 20%) в виде бесцветного осадка. HRMS (ESI+) 410.0467 (М+Н).
c) 5-(трет-бутил)-7-хлор-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 7-хлор-5-(дифтор(фенил)метил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 27, стадия с), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-(трет-бутил)-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3)триазоло[4,5-b]пиридин-7(4Н)-она (180 мг, 0.440 ммоль, 1.00 экв.) и выделили в виде бесцветного осадка (130 мг, 0.304 ммоль, 69%). HRMS (ESI+) 428.0128 (М+Н).
d) 5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 5-(дифтор(фенил)метил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-винилбензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидина (Пример 27, стадия d), соединение, указанное в заголовке, получили из 5-(трет-бутил)-7-хлор-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридина (128 мг, 0.299 ммоль, 1.00 экв.) и выделили в виде бесцветного масла (148 мг, 0.299 ммоль, 99%). HRMS (ESI+) 409.0908 (М+Н).
e) S-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)метил)фенил) этантиоат
4
+
5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3-(2-йодобензил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин (20 мг, 0.040 ммоль, 1.0 экв.) растворили в толуоле (0.4 мл) и продули азотом. Йодид меди (0.8 мг, 4 мкмоль, 0.1 экв.), 1,10-фенантролин (1.5 мг, 8.0 мкмоль, 0.2 экв.) и тиоацетат калия (6.9 мг, 0.060 ммоль, 1.5 экв.) добавили и смесь перемешивали при 100°С в течение 19 ч. Воду (20 мл) и EtOAc (20 мл) добавили и смесь перемешивали в течение 5 мин. Фазы разделили и водный слой экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Объединенные органические слои высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (10% EtOAc в гексанах) дала соединение, указанное в заголовке (17 мг, 0.038 ммоль, 95%). HRMS (ESI+) 447.1771 (М+Н).
f) 2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)метил)бензолтиол
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил)метил)фенил)этантиола (Пример 29, стадия d) соединение, указанное в заголовке, получили из S-(2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)метил)фенил)этантиоата (61 мг, 0.14 ммоль, 1.0 экв.) и выделили в виде неочищенного материала (53 мг) для применения на следующей стадии без очистки.
g) 2-[[2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]дисульфанил]этанол
2
2
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанола (Пример 28), соединение, указанное в заголовке, получили из неочищенного 2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)метил)бензолтиола (20 мг, 0.049 ммоль, 1.0 экв.) и меркаптоэтанола и выделили с помощью препаративной ТСХ (10% EtOAc в CHCl) (11 мг, 0.023 ммоль, 46%). HRMS (ESI+) 481.1645 (М+Н).
Пример 37
5-трет-бутил-7-(3,3-Дифторопирролидин-1-ил)-3-[[2-(пиридин-2-илдисульфанил)фенил]метил]триазоло[4,5-d]пиримидин
+
По аналогии со способом, описанным для синтеза 2-[2-[2-[[5-[дифтор(фенил)метил]-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]фенил]этилдисульфанил]этанола (Пример 28) соединение, указанное в заголовке, получили из неочищенного 2-((5-(трет-бутил)-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-ил)метил)бензолтиола (30 мг, 0.063 ммоль, 1.0 экв.) и 2-меркаптопиридина и выделили с помощью препаративной ТСХ (20% EtOAc в гексанах) (20 мг, 0.034 ммоль, 46%). HRMS (ESI+) 584.1312 (М+Н).
Пример 38
2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]-3-этинилбензолсульфонилфторид
a) 3-бромо-2-метилбензол-1-сульфонилфторид
+
3-бромо-2-метил-бензолсульфонилхлорид (CAS 886501-61-7, 727 мг, 2.70 ммоль. 1.00 экв.) растворили в ацетоне (8.5 мл) и воде (0.5 мл). Фторид калия (783 мг, 13.5 ммоль, 5.00 экв.) добавили и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Большую часть ацетона удалили в потоке азота. Остаток разделили между EtOAc (100 мл) и водой (20 мл). Водную фазу отбросили. Органическую фазу промыли солевым раствором (20 мл), высушили над MgSO4, отфильтровали и сконцентрировали с получением бесцветного осадка (628 мг, 2.48 ммоль, 92%). HRMS (MALDI+) 251.9250 (М).
b) 2-метил-3-((триметилсилил)этинил)бензол-1-сульфонилфторид
3
2
+
3-бромо-2-метилбензол-1-сульфонилфторид (628 мг, 2.48 ммоль, 1.00 экв.), Pd(PPh)Cl (174 мг, 0.25 ммоль, 0.10 экв.) и Cul (71 мг, 0.37 ммоль, 0.15 экв.) поместили в 25 мл грушевидную колбу. После откачки и заполнения азотом (2х), MeCN (12.4 мл) добавили, с последующим DIPEA (867 мкл, 4.96 ммоль, 2.00 экв.). Азот барботировали через черный раствор в течение 5 минут, перед добавлением TMS-ацетилена (696 мкл, 4.96 ммоль, 2.00 экв.). Колбу закрыли и поместили в предварительно нагретую масляную баню (50°С). Через 3 ч дополнительное количество TMS-ацетилена (2.00 экв.) добавили и перемешивание продолжили при 50°С в течение ночи. Через 24 ч смесь охладили до КТ, отфильтровали через целит и разделили между водой и EtOAc. Водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (3×20 мл). Объединенные органические фазы промыли водой и солевым раствором, высушили над MgSO4, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (0.7% EtOAc в гексанах) дала коричневое масло, которое затвердело при хранении (чистота 94%, 610 мг, 2.12 ммоль, 85%). Анализ NMR показал приблизительно 6% остаточного исходного соединения. HRMS (MALDI+) 270.0541 (М).
c) 2-(Бромометил)-3-((триметилсилил)этинил)бензол-1-сульфонилфторид
+
2-метил-3-((триметилсилил)этинил)бензол-1-сульфонилфторид (26 мг, 0.096 ммоль, 1.00 экв.) объединили с NBS (86 мг, 0.48 ммоль, 5.00 экв.), AIBN (2 мг, 0.012 ммоль, 0.13 экв.) и MeCN (0.5 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при 80°С. Летучие компоненты удалили и остаток очистили с помощью препаративной ТСХ с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного масла (15 мг, 0.043 ммоль, 48%). HRMS (MALDI+) 370.9543 (M+Na). (Примечание: реакция не завршается, также не завершается, если добавляют дополнительное количество NBS/AIBN).
d) 2-[[5-трет-бутил-7-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)триазоло[4,5-d]пиримидин-3-ил]метил]-3-этинилбензолсульфонилфторид
4
4
+
2-(Бромометил)-3-((триметилсилил)этинил)бензол-1-сульфонилфторид (30 мг, 0.086 ммоль, 1.00 экв.) объединили с ДМФ (0.4 мл), триметиламином (18 мкл, 0.13 ммоль, 1.5 экв.) и 5-трет-бутил-7-(3,3-дифтор-пирролидин-1-ил)-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидином (CAS 1438465-59-8, 27 мг, 0.095 ммоль, 1.1 экв.). Через 30 мин, смесь разбавили EtOAc (100 мл), промыли 5% водн. LiCl (2×20 мл) и солевым раствором (20 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Флеш-хроматография на силикагеле (5% EtOAc в гексанах) дала смесь двух региоизомерных продуктов алкилирования (14 мг). Смесь растворили в ТГФ (0.5 мл) и добавили триметиламина три гидрофторид (8.2 мг в 0.1 мл ТГФ, 0.051 ммоль, 2.0 экв.). Через 4 ч смесь разбавили EtOAc (15 мл), промыли насыщ. водн. бикарбонатом натрия и солевым раствором (3 мл каждого). Сушка над MgSO, фильтрация и концентрирование дали неочищенный материал, который очистили посредством преп. ТСХ (25% EtOAc в гексанах) с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного масла (5 мг, 0.011 ммоль, 13% за 2 стадии). HRMS (ESI+) 479.1474 (М+Н).
Пример 39
Фармакологические тесты
Следующие тесты проводились для определения активности соединений формулы (I):
Анализ связывания радиолиганда
2
Аффинность соединений настоящего изобретения в отношении каннабиноидных рецепторов СВ1 определяли с использованием рекомендуемого количества препаратов мембран (PerkinElmer) клеток почек эмбриона человека (HEK), экспрессирующих рецепторы человека CNR1 или CNR2 в сочетании с 1.5 или 2.6 нМ [3Н]-СР-55,940 (Perkin Elmer) в качестве радиолиганда, соответственно. Связывание проводили в связывающем буфере (50 мМ Tris, 5 мМ MgCl2, 2.5 нМ ЭДТА и 0.5% (мас./об.) свободного от жирных кислот БСА, рН 7.4 для СВ1 рецепторов и 50 мМ Tris, 5 мМ MgCl, 2.5 мМ ЭГТА и 0.1% (мас./об.) свободного от жирных кислот БСА, рН 7.4 для СВ2 рецепторов) в общем объеме 0.2 мл в течение 1 ч при 30°С со встряхиванием. Реакцию остановили быстрой фильтрацией через микрофильтровальные планшеты покрытые 0.5% полиэтиленимином (UniFilter GF/B фильтровальный планшет; Packard). Связавшуюся радиоактивность анализировали для Ki с использованием нелинейного регрессионного анализа (Activity Base, ID Business Solution, Limited), с определением Kd значений для [3H]CP55,940 из экспериментов по насыщению. Соединения формулы (I) показали прекрасную аффинность в отношении СВ2 рецепторов с аффинностью ниже 10 мкМ, более конкретно от 1 нМ до 3 мкМ и еще более конкретно от 1 нМ до 100 нМ.
Соединения в соответствии с формулой (I) обладают активностью в вышеприведенном анализе (Ki), в частности от 0.5 нМ до 10 мкМ, более конкретно от 0.5 нМ до 3 мкМ и еще более конкретно от 0.5 нМ до 100 нМ.
Все соединения связывались с СВ2 со значениями Ki ниже 3 мкМ и по меньшей мере 3-х кратной селективностью по отношению к СВ1 в соответствующем анализе.
цАМФ анализ
2
3
Клетки СНО, экспрессирующие СВ1 или СВ2 рецепторы человека засеяли за 17-24 часов до эксперимента в размере 50.000 клеток на лунку в черные 96 луночные планшеты с плоским прозрачным дном (Corning Costar #3904) в среде DMEM (Invitrogen No. 31331), поддержанной 1х НТ, с 10% фетальной телячьей сывороткой и инкубировали при 5% CO и 37°С в инкубаторе с контролем влажности. Среду роста заменили нв бикарбонатный буфер Кребса-Рингера с 1 мМ IBMX и инкубировали при 30°С в течение 30 мин. Соединения добавили до конечного анализируемого объема 100 мкл и инкубировали в течение 30 мин при 30°С. Используя cAMP-Nano-TRF набор для детекции (Roche Diagnostics) анализ остановили добавлением 50 мкл лизирующего реагента (Tris, NaCl, 1.5% Triton Х100, 2.5% NP40, 10% NaN) и 50 мкл раствора для детекции (20 мкМ mAb Alexa700-cAMP 1:1, и 48 мкМ Ruthenium-2-АНА-сАМР) и встряхивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Разрешенный во времени перенос энергии измеряли с помощью TRF-ридера (Evotec Technologies GmbH), оснащенного ND : YAG лазером в качестве источника возбуждения. Планшет измеряли дважды при волне возбуждения при 355 нм и и эмиссии с задержкой в 100 нс и промежутком 100 нс, общим временем экспозиции 10 с при 730 (ширина полосы 30 нм) или 645 нм (ширина полосы 75 нм), соответственно. FRET сигнал рассчитывался следующим образом: FRET = T730-Alexa730-P(T645-B645) с Р = Ru730-B730/Ru645-B645, где Т730 представляет собой тестируемую лунку, измеренную при 730 нМ, Т645 представляет собой тестируемую лунку, измеренную при 645 нм, В730 и В645 представляют собой контрольные буферы при 730 нм и 645 нм, соответственно, содержание цАМФ определяли по функции стандартной кривой, охватывающей от 10 мкМ до 0.13 нМ сАМФ.
50
50
Значения ЕС определяли с использованием анализа Activity Base (ID Business Solution, Limited). Значения EC для широкого диапазона агонистов каннабиноида согласно данному анализу согласовывались со значениями, опубликованными в научной литературе.
Анализ транслокации β-аррестина PathHunter™ (DiscoveRx)
2
3
Клеточная линия PathHunter™ β-arrestin СНО-K1 CNR1 (каталожный номер #93-0200С2) и клеточная линия β-arrestin СНО-K1 CNR2 (каталожный номер #93-0706С2) были приобретены в DiscoveRx Corporation. Клеточная линия была создана для экспрессии ЕА фрагмента β-галактозидазы, слитого с β-аррестином и ProLink комплиментарного пептида, слитого с целевым рецептором. PathHunter™ белковый анализ комплиментации (DiscoveRx Corporation #93-0001) выполнили в соответствии с протоколом производителя. Планшеты для анализа засеяли с содержанием 7500 (CNR1) и 10000 (CNR2) клеток в 384-луночные планшеты (Corning Costar #3707, белые, прозрачное дно) в 20 мкл реагента для посева клеток 2 (Discoverx #93-0563R2A). После инкубации при 37°С (5% CO, 95% относительная влажность) в течение ночи, 5 мкл теститруемого соединения добавили (конечная концентрация ДМСО 1%) и инкубацию продолжили при 30°С в течение 90 мин. Затем добавили реагент для детекции (12 мкл) и инкубацию продолжили при комнатной температуре в течение 60 мин. Планшеты анализировали на хемилюминесцентный сигнал с использованием ридера Victor V (Perkin Elmer).
Пример A
Покрытые оболочкой таблетки, содержащие следующие ингредиенты могут быть изготовлены обычным способом:
Активный ингредиент просеивают и смешивают с микрокристаллической целлюлозой и смесь гранулируют с раствором поливинилпирролидона в воде. Затем гранулят смешивают с карбоксиметилкрахмалом натрия и стеаратом магния и прессуют с получением ядер массой 120 или 350 мг соответственно. Ядра лакируют с помощью водного раствора/суспензии упомянутого выше пленочной оболочки.
Пример В
Капсулы, содержащие следующие ингредиенты, могут быть изготовлены обычным способом:
Компоненты просеивают и смешивают и ими наполняют капсулы размера 2.
Пример С
Растворы для инъекций могут обладать следующим составом:
Активный ингредиент растворили в смеси полиэтиленгликоля 400 и воды для инъекций (часть). РН довели до 5,0 посредством добавления уксусной кислоты. Объем довели до 1,0 мл посредством добавления остаточного количества воды. Раствор отфильтровали, разлили в пузырьки с помощью соответствующего оборудования и стерилизовали.