СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ЭРОЗИИ РОГОВИЦЫ
METHOD FOR MODELING IN THE EXPERIMENT RECURRENT EROSION OF CORNEA

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования рецидивирующей эрозии, и может быть использовано для изучения лечебного эффекта при хирургическом или терапевтическом воздействии на роговицу при данной патологии.
Известно, что рецидивирующая эрозия роговицы, являясь полиэтиологичной и часто встречающейся патологией, может в итоге не только приводить к потере трудоспособности, но и к инвалидизации пациентов. Вместе с тем большинство случаев все же поддается простому консервативному лечению, однако в некоторых случаях требуется особый терапевтический подход, а в ряде случаев и хирургическое вмешательство.
В настоящее время доказано, что независимо от этиологии, главной причиной развития РЭР является неполноценность базальной мембраны и нестабильность адгезии эпителия к строме.
При анализе литературных данных нами не было найдено способа моделирования именно рецидивирующей эрозии роговицы. Однако для этих целей можно использовать следующие способы.
Способ моделирования щелочного ожога роговицы у кроликов - метод Обенбергера (Obenberger, J. Paper strips and rings as simple tools for standartization of experimental eye injuries / J. Obenberger // Ophthalmol. Res. - 1975. - Vol. 7. - P. 363-366), заключающийся в аппликации диска фильтровальной бумаги (в виде круга диаметром 8 мм), смоченной 2,5% раствором гидроксида натрия с экспозицией 5 секунд на роговицу под местной анестезией (0,4% инокаином).
Однако как показали морфологические исследования, основным недостатком этого способа является формирование ожога роговицы третьей степени тяжести по классификации Б.П. Поляка (1957), когда повреждаются не только те ткани, которые подверглись прямому воздействию, но и глубжележащие структуры. В этой связи кроме деструктивных изменений эпителиоцитов, отмечалось и разрушение стромы захватывающее не менее 1/3 ее толщины. При этом клиническая картина классической рецидивирующей эрозии не развивается.
Известен также способ воссоздания кислотного ожога (Экспериментальное моделирование травматических повреждений роговицы [Текст] / Канюков В. Н. [и др.] // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2014. - №12, ч. 1, декабрь. - С. 156-158.), заключающийся в аппликации диска фильтровальной бумаги (в виде круга диаметром 8 мм), смоченной 3% раствором уксусной кислоты с экспозицией 5 секунд на роговицу под местной анестезией (0,4% инокаином).
Основным недостатком и этого способа остается формирование тяжелого ожога роговицы, при котором развивается коагуляционный (сухой) некроз - кислотная денатурация белков. При этом данный способ исключает развитие классической клинической картины рецидивирующей эрозии.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ моделирования эрозии роговицы по методу С. Hanna, J.E. O'Brien (Hanna, С.Cellturnover in the adult human eye / C. Hanna, D.S. Bicknell, J.E. O'Brien // Arch Ophthalmol. - 1961. - Vol. 65. - P. 695-703.), который выбран в качестве прототипа и заключается в выполнении местной анестезией (0,4% инокаином), после чего легким прижатием трепана с поршнем диаметром 8 мм на роговицу наносят метку, окрашенную 0,1% раствором флюоресцеина натрия. В пределах метки лезвием соскабливают эпителий роговицы. Дефект эпителия снова окрашивают раствором флюоресцеина для того, чтобы отчетливее были видны форма и размер эрозии роговицы. Недостатком способа является то, что он не предусматривает деструкцию базальной мембраны эпителия роговицы и адгезивных молекул. В результате чего, пролиферирующий из неповрежденных участков эпителий сохраняет возможность адгезироваться к роговичной поверхности. Поэтому рецидивирующая эрозия не развивается.
Технический результат при использовании изобретения - экспериментальное моделирование патологического процесса, максимально приближенного к патогенезу рецидивирующей эрозии роговицы.
Указанный технический результат достигается тем, что способ моделирования в эксперименте рецидивирующей эрозии роговицы, включает в себя биомикроскопический контроль при помощи операционного микроскопа или щелевой лампы и выполняется после предварительной местной (инсталляционной и ретробульбарной) анестезии путем тотальной деэпителизации роговицы, качество которой оценивают с помощью 2% раствора флуоресцина натрия, после которой при помощи контактной диафрагмы необходимого диаметра и длинноволновой ультрафиолетовой установки (длина волны 365 нм, мощность 90 В) выполняют локальное облучение роговицы в необходимой области в течение 45 минут на расстоянии от 5 до 20 см в зависимости от требуемой итоговой интенсивности клинических проявлений.
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами: на фиг. 1 - схематично отражены основные этапы способа моделирования рецидивирующей эрозии, на фиг. 2 представлена фотография глаза кролика на первые сутки после моделирования рецидивирующей эрозии по предлагаемому способу, на фиг. 3 - то же, на тридцатые сутки;
Способ воспроизведения РЭР реализуется следующим образом. После предварительной местной инсталляционной (0.5% раствором алкаина) и ретробульбарной анестезии (2% раствором лидокаина) глазное яблоко выводили и фиксировали в этом состоянии с помощью перчаточной резинки (Фиг. 1а). Далее после тотальной деэпителизации, проведенной путем механического удаления эпителия роговицы затупленным скребком под операционным микроскопом (Фиг. 1б), оценивали качество деэпителизации с помощью 2% раствора флуоресцина (Фиг. 1в). Затем при помощи при помощи контактной диафрагмы необходимого диаметра экранировали область роговицы, которая не подвергалась облучению (Фиг. 1г), а длинноволновой ультрафиолетовой установкой (длина волны 365 нм, мощность 90 Вт) производили локальное облучение роговицы в необходимой области в течение 45 минут на расстоянии от 5 до 20 см (Фиг. 1д) в зависимости от требуемой итоговой интенсивности клинических проявлений.
Сущность изобретения поясняется следующим примером.
Исследование выполнено на 8 кроликах (16 глаз). На правых глазах (основная группа) моделировали рецидивирующую эрозию роговицы по предлагаемому способу, а на левых (группа контроля) выполняли только тотальную деэпителизацию. В результате в основной группе сразу после 45-минутного УФ-воздействия отмечали равномерное глубокое помутнение стромы роговицы по типу «облачка» за счет отека стромы, ее деэпителизацию с прокрашиванием раствором флюоресцеина натрия (Фиг. 2). К 30-м суткам деэпителизированный участок поражения сохранялся в виде локальной эрозии эпителия в центре облученной области (Фиг. 3). При этом на контрольных глазах эпителизация наступала уже на 7-8 день.
Таким образом, предлагаемый способ является стандартизированным, а его эффективность доказана экспериментально. При этом он исключает повреждение лимбальной области, а значит механизм развития лимбальной недостаточности, что важно, не принимает участие в патогенезе экспериментальной рецидивирующей эрозии роговицы. Кроме того, способ основан на деструкции базальной мембраны эпителия роговицы и адгезивных молекул, что происходит без фатального повреждения Боуменовой мембраны, за счет чего пролиферирующий из неповрежденных участков эпителий теряет возможность адгезироваться к роговичной поверхности в облученной области, по причине чего длительно сохраняется эпителиальная эрозия. При этом чередуются периоды эпителизации и эрозирования облученной области. Вследствие чего способ является экспериментальной моделью, основанной на патогенезе рецидивирующей эрозии роговицы. Регулировка интенсивности получаемых клинических проявлений определяется расстоянием УФ-установки до поверхности роговицы (по итогам эксперимента: на расстоянии 5 см проявления максимальны, на расстоянии 20 см минимальны).