Жидкостная Цитология как стандартизованная технология приготовления препаратов

ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ КАК СТАНДАРТИЗОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

исследования - количеству тестов), из которых 1093 анализа (0,084% от всех исследований) попали под определение критических значений. Чаще всего требовали неотложных действий результаты анализов мочи пациенток женских консультаций, которые составили 36,3% от общего количества переданных телефонограмм. На биохимические показатели пришлось 30,3%, иммунохимические тесты - 22,9%, общий анализ крови - 7,6%, тесты системы гемостаза - 2,9% от

тревожных значений. Информирование ЛПУ происходило в течение 10-20 мин после получения критического значения аналита.

Политика критических значений, реализованная в МЦКДЛ Санкт-Петербурга, позволяет сохранить взаимодействие лаборатории с клиницистами в условиях выполнения исследований в КДЛ, расположенной вне лечебного учреждения.

ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ КАК СТАНДАРТИЗОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

Л. В. Никитина, И. П. Шабалова, К. Т. Касоян, Т. В. Джангирова. Иммуноцитохимическое исследование на основе жидкостной цитологии. ГБОУ ДПО РМАПО Минз-дравсоцразвития РФ, Москва

Цель исследования - изучение возможностей использования жидкостной цитологии и иммуноцитохимических методов на материале гастробиопсий в диагностике патологии желудка.

Материал для исследования был получен у 75 пациентов с помощью щипцовой биопсии. С биоптатов делали мазки-отпечатки на стекло для традиционного цитологического исследования. У 40 больных, помимо биоптата, брали соскобы щеткой. У 35 пациентов брали второй биоптат из того же патологического очага и помещали его в стабилизирующий раствор.

Для иммуноцитохимического исследования использовали готовые антитела с-егЪВ-2 (Иег-2/пеи), СЕАСАМ6 (рако-воэмбриональный антиген).

В 37 из 40 наблюдений материал, полученный с помощью щетки, был неинформативным. У всех 35 пациентов, биоптат которых помещали в стабилизирующий раствор и гомогенизировали его путем растирания для проведения жидкостной цитологии, получен полноценный материал. Мазки-отпечатки с биоптата оказались информативными во всех наблюдениях. Иммуноцитохимическое исследование было проведено у 35 пациентов по соответствующему протоколу. Исходя из полученных нами данных, порогом чувствительности экспрессии с-егЪВ-2 (Иег-2/пеи) в диагностике дисплазии и рака желудка можно считать наличие умеренной экспрессии, порогом чувствительности СЕАСАМ6 - выраженной экспрессии.

Умеренная и выраженная экспрессия с-егЪВ-2 (Нег-2/пеи) и выраженная экспрессия СЕАСАМ6 может рассматриваться как маркер возможной тяжелой дисплазии, рака или начальный этап неопластического процесса.

Н. Н. Волченко, Е. Н. Славнова, А. А. Тугулукова. Методы жидкостной цитологии в диагностике негинекологического материала. ФГБУ МНИ онкологический институт им. П. А. Герцена Минздравсоцравития РФ

В последние годы методы жидкостной цитологии активно внедряются в клиническую цитологию. Первоначально методы жидкостной цитологии использовали для приготовления гинекологических мазков. В настоящее время жидкостная цитология применяется и для получения цитологических препаратов негинекологического материала. В нашей стране эта область цитологии только начинает развиваться. В настоящее время на рынке существует большое число приборов, позволяющих готовить препараты методом жидкостной цитологии, работа которых основана на разных физических принципах. Они позволяют получить распределение патологического материала на небольшом участке стекла, что значительно сокращает время просмотра препарата, а оставшийся в фиксирующей жидкости клеточный материал может быть использован для применения современных методов в

онкоцитологии. Дальнейшее развитие цитологии и применение современных методов, таких как иммуноцитохимия и молекулярная генетика, морфометрия, компьютерный анализ изображений, бесспорно требуют получения высококачественных тонкослойных цитологических препаратов.

Цель исследования - сравнение диагностической точности, особенностей морфологических изменений, качества иммуноцитохимических исследований при использовании тонкослойных препаратов, полученных с помощью E-prep Processor и центрифуги Cytospin с рутинным приготовлением цитологических препаратов.

Материал для цитологического исследования был получен от 68 больных с различными злокачественными новообразованиями: молочной железы - 9, жидкости серозных полостей -19, слюнной железы - 7, щитовидной железы - 3, легких - 4, мягких тканей - 10, печени - 1, почек - 2, надпочечников - 1, мочи - 1, кишечника - 1, лимфатических узлов - 10. В полученных двумя методами жидкостных препаратах оценивались фон, клеточность, особенности морфологии. Обязательно проводились цитогистологические сопоставления. В 18 случаях проведено иммуноцитохимическое исследование.

Проведение цитогистологических сопоставлений показало, что эффективность цитологического метода составила 90,8%, достоверность - 97,7%, расхождения составили 2,3%, неудачно взятый материал - 6,9%. Применение метода жидкостной цитологии совместно с рутинным цитологическим исследованием позволяет повысить эффективность цитологической диагностики за счет уменьшения количества неудачно взятого материала. Обеспечивается сохранность цитологического материала, даже единичные патологические клетки попадают в исследуемый материал. Использование Е-ргер-препаратов позволяет уменьшить фон, что позволяет повысить чувствительность цитологического метода. Жидкостные технологии приготовления препаратов позволяют избежать загрязнения их детритом, эритроцитами, элементами воспаления, что значительно облегчает их просмотр и более выражено при применении Е-Prep, чем в цитоспино-вых препаратах. Получение монослоя позволяет сократить количество ложноотрицательных результатов и облегчает просмотр цитологических мазков. Препараты, приготовленные с помощью Е-Prep, отличались более равномерным распределением клеток на стекле. Однако частичная фрагментация клеток, нарушение эпителиально-стромального соотношения, разрозненное расположение клеток, сморщивание или легкое лизирование, более округлая или вытянутая форма, изменение размера клетки в большинстве случаев не позволяют по одним жидкостным мазкам без рутинных цитологических препаратов установить цитологический диагноз. В мазках, приготовленных с помощью Cytospin, изменения в клетках менее выражены за счет применения питательной среды, позволяющей максимально сохранить клетки. Однако клетки меняли свою форму, становились более округлыми, изменялись размеры клеток, чаще укрупнялись, реже уменьшались и даже сморщивались, что без совместного

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 9, 2012

использования рутинных мазков затрудняло постановку цитологического диагноза. Таким образом, для установления цитологического диагноза по жидкостным препаратам в обоих случаях необходимо проводить исследование совместно с традиционными цитологическими мазками.

Полученные с помощью жидкостных технологий препараты можно использовать для проведения иммуноцитохими-ческого исследования. Уменьшается расход дорогостоящих реактивов, что особенно важно при иммуноцитохимических и молекулярно-генетических исследованиях. Выраженность экспрессии антител совпадает при использовании обеих жидкостных методик, но в препаратах, приготовленных с помощью аппарата Е-Prep, отмечались более чистый фон, большее число патологических клеток в мазке, что значительно облегчает оценку реакции, сокращая время просмотра мазка. Благодаря достоинствам препаратов, приготовленных с помощью аппарата Е-Prep, удалось провести иммуноцитохи-мию в 3 из 18 случаев. В 2 случаях центрифужные препараты оказались неинформативны из-за большого числа элементов крови, и в 1 большое количество клеточного детрита не позволило провести иммуноцитохимию.

Монослойные препараты с хорошо сохранившимися клетками на определенной фиксированной площади позволяют использовать современные компьютерные технологии обработки изображений, проведения морфометрии.

Однако существуют и недостатки жидкостных препаратов, среди которых являются следующие.

Цитолог в своем заключении опирается не на одну, отдельно взятую клетку, а на совокупность клеток. Часто большое значение придается взаимному расположению клеток и их взаимодействию с элементами стромы, что нарушается при получении жидкостных препаратов и в большинстве случаев требует просмотра их совместно с рутинными цитологическими мазками.

Большое значение для оценки процесса имеет фон препарата, в жидкостных препаратах он значительно снижен или отсутствует - эритроциты, нейтрофильные лейкоциты, лим-

фоциты, детрит, миксоидное вещество, что лишает цитолога дополнительной диагностически важной информации.

Морфология клеток в жидкостных препаратах отличается по сравнению с рутинными цитологическими препаратами, необходим опыт в просмотре таких препаратов.

Метод жидкостной цитологии позволяет получать высококачественные стандартные, монослойные цитологические препараты, является более эффективным, чувствительным в сравнении с рутинным методом. Он может успешно использоваться в диагностике опухолей молочной железы, щитовидной, слюнной железы, опухолей мягких тканей, вы-потных жидкостей, метастазов в лимфатические узлы в сочетании с рутинным методом, так как в настоящее время еще нет достаточно накопленного опыта в просмотре таких препаратов (изменены морфология клеток, фон, пространственное расположение клеток).

Цитологические препараты, приготовленные методом жидкостной цитологии, могут успешно применяться для проведения иммуноцитохимического исследования, морфоме-трии, компьютерной обработки изображений. Более тщательный анализ структур клетки достигается благодаря равномерному распределению клеточного материала на стекле, хорошо визуализирующимся деталям ядра и цитоплазмы, чистому фону, значительному снижению числа элементов воспаления, эритроцитов, артефактов. Наряду с этим надо отметить, что метод жидкостной цитологии в сравнении с рутинным имеет свои морфологические особенности, которые необходимо учитывать: вид и снижение фона, структурные изменения, такие как преимущественно разрозненное расположение клеток, фрагментация крупных клеточных скоплений, нарушение эпителиально-стромального соотношения, уменьшение размера клеток, отдельные клетки приобретают более округлую или вытянутую форму, разреженный хроматин. Описание особенностей морфологии жидкостных цитологических препаратов при патологических процессах различных локализаций позволяет накопить необходимый опыт и в целом улучшить качество постановки морфологического диагноза.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

В. В. Делекторская. Нейроэндокринные опухоли: эпидемиология, номенклатура, лабораторная и морфологическая диагностика. ФГБУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Нейроэндокринные опухоли (НЭО) были впервые описаны в конце XIX века. Данная группа новообразований обладает общей способностью синтезировать биологически активные вещества и включает широкий спектр относительно редких опухолей, правильная диагностика, клинико-морфологическая характеристика и оценка особенностей «биологического поведения» которых являются необыкновенно сложной и актуальной задачей.

Эпидемиология. НЭО могут возникать в любых органах, но наиболее часто локализованы в различных отделах пищеварительной системы, легких и бронхах. Частота возникновения данных опухолей увеличилась приблизительно в 5 раз за последние 30 лет, что частично может быть связано с улучшением и расширением возможностей диагностики. С помощью регрессионного анализа показано, что частота встречаемости НЭО в 2013 г. составит 8 случаев на 100 000 населения.

Номенклатура. Различия в терминологии часто вызывают трудности в оценке этих опухолей. В настоящее время подразумевается, что все НЭО обладают злокачественным потенциалом и их нельзя рассматривать как доброкачественные новообразования. В соответствии с классификацией ВОЗ

2010 г выделяют 2 основных типа нейроэндокринных новообразований: нейроэндокринная опухоль (высокодифферен-цированная) и нейроэндокринная карцинома (низкодиффе-ренцированная, НЭК). Различная степень злокачественности этих опухолей (Grade, G1, G2, G3) основана на оценке гистологии и определении пролиферирующей фракции (уровня митотической активности и индекса Ki67).

Лабораторная и морфологическая диагностика. Углу -бленное изучение НЭО позволило выделить маркеры нейро-эндокринной дифференцировки клеток, которые представляют следующие классы молекул: ассоциированые с секреторными гранулами, ассоциированные с синаптическими пузырьками, промежуточные филаменты, адгезивные молекулы, цитозольные. Два основных маркера хромогранин А и синаптофизин рекомендованы для обязательного использования в процессе морфологической диагностики НЭО. Важно отметить, что хромогранин А, который продуцируется и секретируется нейроэндокринными клетками, может определяться в сыворотке и плазме крови при биохимическом исследовании, а также в ткани опухоли при иммуногистохи-мическом (ИГХ) анализе. Уровни хромогранина А в плазме крови используются для мониторинга ответа на терапию. Морфологическая верификация нейроэндокринного характера опухоли принципиально важна для выбора тактики лечения пациента. НЭО различной локализации классифицируются в соответствии со статусом дифференцировки и типом