Влияние условий сушки на содержание 20-гидрокси-экдизона в лисьях левзеи сафлоровидной

ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА

а.А. Карусевич, Д.В. Моисеев, Г.Н. Бузук

влияние условий сушки на содержание 20-гидрокси-

экдИзона в лисьях левзеи саф-

лоровидной

Витебский государственный медицинский университет

Изучено влияние температуры сушки на содержание 20-гидроксиэкдизона в листьях левзеи сафлоровидной (Rhaponti-cum carthamoides). Лекарственное растительное сырье подвергалось сушке при температуре 20, 40, 60, 80, 100 и 120°С. Сушка проводилась в сушильных шкафах с принудительной вентиляцией и без нее. Для количественного определения фитоэкдистероида использовался метод ВЭЖХ. ВЭЖХ-определение проводилось на обращенно-фазовой колонке (Waters Spherisorb ODS-2 250x4,6 мм, 5 мкм) с изократическим режимом элюирования. Оптимальная температура сушки листьев левзеи без принудительной вентиляции 120°С, с принудительной вентиляцией 80°С.

ВВЕДЕНИЕ

Температура сушки имеет важнейшее значение в процессе доведения лекарственного растительного сырья (ЛРС) до товарного вида. Даже при правильной первичной заготовке неправильная сушка будет приводить к снижению содержания действующих веществ ниже показателей, указанных в нормативной документации [1]. По некоторым данным, в процессе

сушки может происходить накопление действующих веществ [2].

Доброкачественность ЛРС оценивалась нами по содержанию в нем 20-гидроксиэкдизона (20Е). Количество 20Е может служить оценкой фармакологической активности любого лекарственного средства, содержащего экдистероиды [3], поскольку основная масса экдистероидов приходится именно на него [4]. И хотя это не самый активный экдистероид [5], но методики его количественно определения достаточно отработаны и широко известны [6-9].

Целью настоящего исследования являлось выяснение зависимости содержания 20Е в растительном сырье от условий сушки.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Количественное определение 20Е проводили методом обращенно-фазового варианта ВЭЖХ по разработанной нами методике [10].

Пробоподготовка. Подготовка исследуемых образцов: Растения культивировали, как было описано ранее [9]. Сбор образцов производили только с растений второго года вегетации и старше [9,11]. Образцы заготавливали в июле 2007 года в оптимальный период сбора по показателям сырьевая масса-содержание 20Е, из образцов выделяли усредненную пробу. Далее пробы сушили в сушильных шкафах при температурах 20, 40, 60, 80, 100 и 120°С. Для сушки применяли шкафы с принудительной вентиляцией и без нее. Время сушки в таком режиме колебалось от 4 суток до 2 часов (таблица 1). Потеря в массе при высушивании сырья в среднем составила около 69%.

Таблица 1 - Зависимость времени сушки от температуры

Температура сушки, °С 20 40 60 80 100 120

Без вентиляции, ч. 96 27 9 6,5 3 2

С принудительной вентиляцией, ч. 80 11 4 2,2 0,8 0,5

Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО): около 0,0100 г (точная навеска) 20-гидроксиэкзидона (производства Sigma-Aldrich) взвешивали в мерной колбе на 100,0 мл, затем доводили до метки 70% этанолом, фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и инжектировали в хроматограф.

Подготовка образцов: Около 10 г порошка сухих листьев (точная навеска) левзеи сафлоровидной помещали в коническую колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 100 мл 70% этанола и настаивали при периодическом перемешивании в течение суток. Затем содержимое колбы отфильтровывали через хлопчатобумажную ткань в мерную колбу вместимостью 200 мл, фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и инжектировали в хроматограф.

Для анализируемого раствора и РСО получали не менее пяти хромато-

грамм, площадь пиков и другие параметры рассчитывали как среднее значение пяти определений.

Содержание 20Е в листьях левзеи сафлоровидной вычисляли по следующей формуле:

С,% = 5"ссл Х Мстанд х 100%,

8станд хМиссл '

где С,% - количественное содержание 20Е,

Б - площади пиков РСО и исследуемого образца,

М - массы навесок РСО и исследуемого образца в граммах.

РЕЗУЛЬТАТЫИ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При сушке сырья без принудительной вентиляции были получены следующие результаты (рисунок 1).

Температура сушки, °С

Рис.1. Динамика содержания 20Е в зависимости от температуры сушки

(без принудительной вентиляции^

Как видно из графика, содержание 20Е снижается при увеличении температуры сушки с 20 до 60°С. При этих температурах возможно разрушение 20Е вследствие активности ферментов. При температуре свыше 80°С происходит инактивация

Как и в случае сушки без принудительной вентиляции, содержание 20Е снижается при увеличении температуры сушки с 20 до 60°С. Затем происходит резкое увеличение содержания 20 Е (при 80°С) с последующим снижением. Такое снижение содержания 20Е при увеличении температуры сушки, на наш взгляд, связано с тем, что сырье высыхает достаточно быстро и неравномерно. В высохшем сырье начинается термическое разрушение 20Е.

ВЫВОДЫ Результаты проведенных исследований показывают, что условия сушки значительно влияют на содержание 20Е в

ферментов и при быстрой сушке в течение 2-3 часов сырье высыхает быстрее, чем происходит термическое разрушение 20Е.

Динамика изменения концентрации 20Е в режиме сушки с принудительной вентиляцией представлена на рисунке 2.

листьях левзеи. Такая существенная разница (0,093% против 0,226%) может свидетельствовать о том, что 20-гидроксиэкдизон, находящийся в листьях левзеи, подвергается химическим превращениям под действием ферментов.

Таким образом, оптимальным режимом сушки будет процесс без принудительной вентиляции при температуре 120°С, с принудительной вентиляцией при 80°С.

SUMMARY A.A. Karusevich, D.V. Moiseev, G.N. Buzuk INFLUENCE OF CONDITIONS OF DRYING ON THE QUANTITY OF 203

0,2 -,

£1 0)

О О

0,05

0 -I-1-1-1-1-1

20 40 60 80 100 120

Температура сушки, °С

Рис. 2. Динамика изменения концентрации 20Е в режиме сушки с принудительной вентиляцией

HYDROXYECDIZONE IN LEAVES OF RHAPONTICUM CARTHAMOIDES

Influence of temperature of drying on the quantity of 20-Hydroxyecdizone in leaves of Rhaponticum carthamoides is studied. The leaves of Rhaponticum carthamoides were exposed to drying at temperature 20, 40, 60, 80, 100 and 120ОС. Drying was spent with compulsory ventilation and without it. For quantitative definition phytoecdisteroids the method HPLC was used. The definition was spent in a reverse-phase column (Waters Spherisorb ODS-2 250x4,6 mm, 5 microns) with isocratic eluation. Optimum temperature of drying of leaves Leuzea without compulsory ventilation was 120°С, with compulsory ventilation was 80°С.

ЛИТЕРАТУРА

1. Фитоэкдистероиды / Л.И Алексеева [и др.]; под общ. ред. В.В. Володина. -СПб.: Наука, 2003. - 293 с.

2. Фитоэкдистероиды - растительные аналоги гормонов линьки насекомых / В.В. Володин [и др.] // Растительные ресурсы. -2004. - Вып.2 - С. 1-18.

3. Вересковский, В.В. Левзея-перспективное лекарственное, пищевое и кормовое растение / В.В. Вересковский, Минск: Наука и техника, 1992. - 64 с.

4. Пчеленко, Л.Д. Адаптогенный эффект экдистероидсодержащей фракции Seratulla coronata L. / Л.Д. Пчеленко, Л.Г. Метелкина, С.О. Володина // Химия растительного сырья. - 2002. - №1. - С. 69-80.

5.Тимофеев, Н.П. Накопление и сохранность 20-гидроксиэкдизона в лекарственном сырье левзеи / Н.П. Тимофеев // Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами создание функциональных продуктов. Мат. докл. 1-ой Рос. научно-практ. конф. [Электронный ресурс]. - 2006. - Режим

доступа: http/: www.leuzea.ru/левзея сафло-ровидная новейший экдистероид содержащий продукт - Leuzea-Rhaponticum carthamoides New ecdysteroid containing product.htm. - Дата доступа:16.07.2006.

6. Зарембо, Е.В. Содержание 20-гидроксиэкдизона в видах родов Rhaponticum Ludw. и Serratula L. флоры Дальнего Востока России / Е.В. Зарембо, Л.И. Соколова, П.Г. Горовой // Растительные ресурсы. - 2001. - №3. - С. 59-64.

7. Алексеева, Л.И. Метод концентрирования минорных гидрофобных экдистерои-дов с использованием фронтальной хроматографии / Л.И. Алексеева, В.В. Володин, В. Г. Лукша // Растительные ресурсы. -2000. - №4. - С. 122-127.

8. Экдистероиды в культурах клеток Serr-tulla coronata и Ajuga reptans / В.Н. Филиппова [и др.] // Химия растительного сырья.

- 2002. - №1. - С. 57-62.

9. Карусевич, А.А. Культивирование левзеи сафлоровидной с целью получения надземной фитомассы / А. А. Карусевич // Вестник фармации. - 2005. - №3. - С.20 -26.

10. Карусевич, А. А. Идентификация и количественное определение 20-гидроксиэкдизона в листьях левзеи сафло-ровидной методом ВЭЖХ / А.А. Карусевич, Д.В. Моисеев, Г.Н. Бузук // Вестник фармации. - 2007. - №3. - С. 55-59.

11. Карусевич, А.А. Изучение динамики накопления 20-гидроксиэкдизона и определение времени заготовки листьев лев-зеи сафлоровидной / А.А. Карусевич, Д.В. Моисеев, Г. Н. Бузук // Вестник фармации.

- 2008. - № 1. - С. 24-28.

Поступила 15.05.200S г.