СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАРИАНТОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, ПОЛЕЗНЫХ ДЛЯ ПРОДУЦИРОВАНИЯ ВИТАМИНА К2, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ПРИГОТОВЛЕНИИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

1. Способ получения естественного варианта штамма молочнокислых бактерий, который продуцирует в стандартных условиях брожения количество витамина К2, превышающее, по меньшей мере, примерно в 1,2 раза то количество, которое продуцирует упомянутый штамм молочнокислых бактерий, культивируемый в тех же условиях, притом, что упомянутый способ включает, по меньшей мере,
a) культуру упомянутого штамма молочнокислых бактерий в стандартных условиях брожения на селективной среде, вызывающей изменение окислительно-восстановительного состояния клетки; и
b) отбор упомянутого варианта, если он продуцирует, по меньшей мере, примерно в 1,2 раза больше витамина К2, чем упомянутый штамм молочнокислых бактерий, культивируемый в тех же условиях.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что упомянутый штамм молочнокислых бактерий выбирают из числа родов Lactococcus, Leuconostoc, Enterococcus и Propionibacterium.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что упомянутый штамм молочнокислых бактерий выбирают из числа видов Lactococcus lactis, Leuconostoc lactis, Leuconostoc pseudomesenteroides, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc dextranicum, Enterococcus faecium, Propionibacterium sp.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что упомянутую селективную среду выбирают из числа культуральных сред, содержащих бацитрацин или окислитель, такой как перекись.
5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что экспрессия, по меньшей мере, одного гена, выбранного из числа генов №1-27, перечисленных ниже:
№ гена
Название гена
Функция соответствующего белка
№ доступа НЦБИ (Национального центра биотехнологической информации)
1
cys D
O-ацетилгомосерин сульфгидрилаза
llmg_0091
2
gpo
Протеин gpo (глутатион перекисьаза)
llmg_1088
3
metE
5-метилтетрагидроптероилтриглутамат-гомоцистеин метилтрансфераза
llmg_1225
4
Мнимая НАДН дегидрогеназа
llmg_0195
5
metF
Протеин metF Метилен-тетрагидрофолат редуктаза
llmg_1226
6
trxH
Тиоредоксин типа Н
llmg_0406
7
fur
Протеин, регулирующий ассимиляцию железа
llmg_1023
8
qor
Хинон оксидоредуктаза
llmg_1850
9
frdc
Субъединица флавопротеина фумарат редуктазы
llmg_1441
10
adhE
Алкоголь-ацетальдегид дегидрогеназа
llmg_2432
11
purC
Фосфорибозиламиноимидазол-сукцинокарбоксамид синтаза
llmg_0973
12
cydB
Убихинол цитохром D оксидаза, субъединица II
llmg_1863
13
purE
Каталитическая субъединица фосфорибозиламиноимидазол карбоксилазы
llmg_0999
14
purQ
Фосфорибозилформилглицинамидин синтаза I
llmg_0975
15
trxA
Тиоредоксин
llmg_0779
16
noxB
НАДН дегидрогеназа
llmg_1734
17
cpo
Негемовая хлорперекисьаза
llmg_1737
18
metK
Протеин metK S-аденозилметионин синтаза
llmg_2160
19
trxB1
Протеин trxB1 Тиоредоксин редуктаза
llmg_1588
20
cysK
О-ацетилсерин сульфгидрилаза
llmg_1775
21
metC
Цистатионин бета-лиаза
llmg_1776
22
metS
Протеин metS Метионил-тРНК синтетаза
llmg_1764
23
feoB
Гомолог протеина В, обеспечивающего транспорт двухвалентного железа
llmg_0199
24
citB
Аконитат гидратаза
llmg_0636
25
icd
Изоцитрат дегидрогеназа
llmg_0637
26
fhuD
Протеин, аффинный к субстрату транспортной системы авидин-биотин-
llmg_0349
перекисьазного комплекса (АВС) феррихрома
27
ldh
L-лактат дегидрогеназа
llmg_1120
у упомянутого варианта изменена в сравнении упомянутым штаммом молочнокислых бактерий.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что экспрессия генов №1-27 у упомянутого варианта изменена по сравнению с упомянутым штаммом молочнокислых бактерий.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что экспрессия, по меньшей мере, одного гена, выбранного из числа генов №1-15, увеличивается у упомянутого варианта по сравнению с упомянутым штаммом молочнокислых бактерий.
8. Способ по п.5, отличающийся тем, что экспрессия, по меньшей мере, одного гена, выбранного из числа генов №16-27, уменьшается у упомянутого варианта по сравнению с упомянутым штаммом молочнокислых бактерий.
9. Естественный вариант штамма молочнокислых бактерий, который продуцирует в стандартных условиях брожения количество витамина К2, превышающее, по меньшей мере, примерно в 1,2 раза, то количество, которое продуцирует упомянутый штамм молочнокислых бактерий, культивируемый в тех же условиях, который может быть получен способом по любому и пп.1-8, а также биологически чистые культуры и фракции культур упомянутого варианта.
10. Естественный вариант по п.9, отличающийся тем, что он является естественным вариантом I-3557, депонированным в Национальной коллекции культур и микроорганизмов (CNCM, Институт Пастера, 25 ул.Доктора Ру, 75724 Париж, п.о.15, Франция) 20.01.2006 г.
11. Естественный вариант по п.9, отличающийся тем, что он является естественным вариантом I-3558, депонированным в Национальной коллекции культур и микроорганизмов (CNCM, Институт Пастера, 25 ул.Доктора Ру, 75724 Париж, п.о.15, Франция) 20.01.2006 г.
12. Применение устойчивости к бацитрацину для получения естественных вариантов штаммов молочнокислых бактерий, которые продуцируют в стандартных условиях брожения количество витамина К2, превышающее, по меньшей мере, примерно в 1,2 раза, количество витамина, продуцируемое упомянутым штаммом молочнокислых бактерий, культивируемым в тех же условиях.
13. Применение устойчивости к окислителю, например, к перекиси для получения естественных вариантов штаммов молочнокислых бактерий, которые продуцируют в стандартных условиях брожения количество витамина К2, превышающее, по меньшей мере, примерно в 1,2 раза, количество витамина, продуцируемое упомянутым штаммом молочнокислых бактерий, культивируемым в тех же условиях.
14. Молочная закваска, которая включает, по меньшей мере, один вариант по любому из пп.9-11.
15. Способ производства пищевого продукта, обогащенного витамином К2, включающий, по меньшей мере:
a) введение, по меньшей мере, одного варианта по любому из пп.9-11, и/или, по меньшей мере, одной закваски по п.14, на промежуточном этапе приготовления упомянутого продукта; и
b) получение упомянутого продукта, обогащенного витамином К2.
16. Пищевой продукт, обогащенный витамином К2, который может быть получен способом по п.15.
17. Пищевой продукт по п.16, отличающийся тем, что он является продуктом, подвергнутым брожению, и/или свежим молочным продуктом.
18. Применение, по меньшей мере, одного варианта по любому из пп.9-11, и/или, по меньшей мере, одной закваски по п.14 для приготовления пищевого продукта, обогащенного витамином К2.
19. Применение по п.18, отличающееся тем, что упомянутый пищевой продукт, обогащенный витамином К2, увеличивает прочность костей того, кто его потребляет.