СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОРАЖЕНИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ НЕРВОВ У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В РАННЕМ ПОСТКОНТАКТНОМ ПЕРИОДЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ СУЛЕМЫ
METHOD OF DIAGNOSING AFFECTION OF PERIPHERAL NERVES IN LABORATORY ANIMALS IN EARLY POST-CONTACT PERIOD OF EXPOSURE TO MERCURIC CHLORIDE

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине, и касается способов диагностики поражения периферических нервов конечностей у лабораторных животных.
Известны способы электронейромиографической диагностики (ЭНМГ -диагностики) состояния периферической нервной системы у лабораторных животных. В исследованиях Авалиани Т.В., Чеботарь Н.А. [1] регистрировалась частота электромиографических реакций (ЭМГ - реакций) m.m. tibialis anterior и m.m., gastrocnemius справа и слева через 20 и 40 мин. после перерезки спинного мозга в грудном отделе у крысят. Однако данный способ является трудоемким, требует длительных затрат времени и связан с конечным умерщвлением животных, что не позволяет проводить исследования в динамике.
В качестве прототипа выбрана методика исследования состояния периферических нервов по данным стимуляционной миографии у лабораторных крыс при воздействии препарата медиксола в эксперименте, связанном с моделированием паркинсонического синдрома [2]. В прототипе предложена оценка состояния периферических нервов путем определения основных показателей стимуляционной миографии (амплитуда М-ответа и скоростные показатели) и интерференционной миограммы по срединному и большеберцовому нервам лабораторных крыс после введения лекарственного препарата.
Задачей, решаемой данным изобретением, было разработка способа диагностики нарушений функционального состояния периферических нервов у лабораторных животных в раннем постконтактном периоде воздействия сулемы менее трудоемкого, чем прототип.
Поставленная задача решалась путем проведения стимуляционной электронейромиографии после окончания 7-недельного воздействия сулемы, регистрации амплитуды мышечного ответа (М-ответа), латентного периода мышечного ответа, расчета канонической величины, сравнения полученного результата с константой с последующим заключением о наличии или отсутствии нарушений состояния периферических нервов у животного.
Способ осуществляется следующим образом.
После окончания 7-недельного воздействия сулемы на крыс животным проводят стимуляционную электронейромиографию (ЭНМГ) и регистрируют следующие показатели: амплитуда М-ответа, латентный период М-ответа.
Рассчитывают каноническую величину по формуле:
Кв=5,95+0,98а-1,14в,
где Кв - каноническая величина;
5,95 - константа;
0,98; -1,14 - дискриминантные коэффициенты;
а, в - числовые значения результатов исследования: а - амплитуда М-ответа (мВ), в - латентный период М-ответа (мс).
При Кв больше 5,95 (константы) делают заключение об отсутствии признаков воздействия сулемы на периферические нервы; при Кв меньше или равно 5,95 - диагностируют поражение периферических нервов от воздействия сулемы.
Клиническими исследованиями, выполненными в Ангарском филиале ВСНЦ ЭЧ СО РАМН-НИИ медицины труда и экологии человека, доказана эффективность применения метода электронейромиографии (ЭНМГ) в диагностике функционального состояния периферических нервов на верхних и нижних конечностях [3]. Выявлены основные клинические проявления нейроинтоксикаций (ртутной, хлорорганической), в которые входит клинически манифестная или латентная дистальная полиневропатия конечностей [4].
Характерными изменениями являлось снижение скорости проведения импульса на нижних конечностях, возрастание времени проведения импульса на уровне концевых немиелинизированных волокон при стимуляции нервов на руках и ногах. Сочетанное поражение нервов при отсутствии объективных клинических симптомов у больных с хронической ртутной интоксикацией (ХРИ) расценивалось как латентная полиневропатия [5], которая выявлялась у всех больных с ХРИ.
Эффективность метода ЭНМГ в диагностике поражений периферических нервов при интоксикации парами металлической ртути изучена достаточно хорошо в наших исследованиях и по данным литературы [6], вместе с тем, мы не нашли результатов применения ЭНМГ-обследования при длительном воздействии хлорида ртути (сулемы) на периферическую нервную систему в постконтактном периоде.
В связи с этим для подтверждения вовлечения в патологический процесс при воздействии сулемы не только отделов центральной нервной системы, но и периферических нервов и возможности ЭНМГ-диагностики в раннем постконтактном периоде было проведено экспериментальное моделирование интоксикации сулемой у белых крыс.
Нами были выявлены наиболее информативные показатели, позволяющие определить каноническую величину для отнесения животных к группе с наличием признаков хронического воздействия сулемы на периферические нервы в раннем постконтактном периоде интоксикации.
Было обследовано по 8 крыс контрольной и опытной групп сразу после окончания 7-недельного воздействия сулемы в дозе 0,05 мг (по ртути) на 100 г массы. Референтный и стимулирующий электроды вводили в m.biceps femoris, заземляющий электрод фиксировали на стопе. При проведении исследования животные фиксировались на манипуляционном столике. Параметры стимуляции задавались методикой проведения стимуляционной ЭНМГ. Анализировались следующие показатели стимуляционной миографии: амплитуда мышечного ответа (М-ответа, мВ), латентный период (латентность, мс), Исследования проводились в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к Приказу Минздрава СССР от 12.08.1977 г. №755).
Достоверность полученных информативных показателей в результате проведенного анализа представлена в таблице 1.
Таблица 1
Достоверность информативных показателей ЭНМГ v белых крыс с хронической интоксикацией сулемой и в контроле
№
Показатели
F включения
Р
1.
Амплитуда М-ответа, мВ
6,58
0,022
2.
Латентный период М-ответа, мс
3,82
0,004
Пример 1. Белая крыса из опытной группы животных, которым подкожно вводили сулему из расчета 0,05 мг на 100 г массы животного (расчет по ртути) в физиологическом растворе в течение 7 недель по 5 дней в неделю. Крысе проводилось ЭНМГ-обследование непосредственно после окончания воздействия сулемы, определены следующие числовые значения:
а - амплитуда М-ответа - 3,23 мВ
в - латентный период М-ответа - 6,3 мс
Кв=5,95+0,98а-1,14в=1,95
Заключение: 1,95<5,95 в данном случае имеют место признаки воздействия сулемы на периферические нервы.
Пример 2. Крыса из опытной группы животных. Проведение ЭНМГ-обследования осуществлялось также сразу после окончания затравки, определены следующие показатели:
а - амплитуда М-ответа - 2,5 мВ
в - латентный период М-ответа - 5 мс
Кв=5,95+0,98а-1,14в=2,7
Заключение: 2,7<5,95, в данном случае имеются признаки воздействия сулемы на периферические нервы.
Пример 3. Крыса из контрольной группы животных. Проводилось ЭНМГ-тестирование, определены следующие значения:
а - амплитуда М-ответа - 5,98 мВ
в - латентный период М-ответа - 2,5 мс
Кв=5,95+0,98а-1,14в-8,95
Заключение: 8,95>5,95, в данном случае нет признаков воздействия сулемы на периферические нервы.
Предлагаемый способ позволяет с наименьшим количеством регистрируемых показателей достоверно определить наличие поражений периферических нервов животного после воздействия сулемы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Авалиани Т.В. Полиненасыщенные жирные кислоты уменьшают индуцированные патологические нарушения у крысят / Т.В. Авалиани, Н.А. Чеботарь // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 2002. - Т.38. - №1. - С.62-65.
2. Воронина Т.А. Особенности противопаркинсонического действия медиксола в эксперименте при моделировании паркинсонического синдрома и в клинике у пациентов болезнью Паркинсона / Воронина Т.А., Авакян Г.Н., Попова О.А. Катунина Е.В., Неробкова Л.Н., Капица И.Г. // Нейрохирургия и Неврология Казахстана. - www.medi.ru.
3. Лахман О.Л. Диагностическая значимость электронейромиографического обследования периферических нервов при воздействии вредных производственных факторов (вибрация, ртуть, комплекс токсических веществ, выделяющийся на пожаре): Метод. Рекомендации / Лахман О.Л., Русанова Д.В., Картапольцева Н.В. // Ангарск. - 2006. - 23 с.].
4. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс. М.: МАИК «Наука / Инетрпериодика», 2001. - 343 с.
5. Русанова Д.В. Поражения периферических нервов при воздействии металлической ртути и комплекса токсичных веществ / Д.В.Русанова, О.Л.Лахман // Медицина труда и промышленная экология. - 2005. - №12. - С.28-32.
th
6. Frantik E. Integration of behavioral and neurophysiological approachers in neurotoxicology:[Pap.] 6 Int. Congr. "Toxicol. discovery and Exp. Hum. Perspect. ", Rome, 28 June - 3 July, 1992 / E. Frantik, M. Horvath // Toxicol. Lett. - 1992. - 64/65, Spec. Issue. - P.225-229.