СПОСОБ КОНТРОЛЯ РЕАКЦИИ МОДИФИКАЦИИ ПОЛИПЕПТИДА

1. Способ активации серин-протеазного фактора свертывания крови, включающий стадии, на которых:
(а) измеряют начальную концентрацию серинпротеазного фактора свертывания крови;
(б) измеряют начальную долю активированного серинпротеазного фактора свертывания крови;
(в) рассчитывают время реакции активации серин-протеазного фактора свертывания крови путем корреляции значений, измеренных на каждой из стадий (а) и (б), со значением необходимой доли активированного серинпротеазного фактора свертывания крови; и
(г) выполняют реакцию активации серинпротеазного фактора свертывания крови в течение времени, рассчитанного на стадии (в);
(д) завершают реакцию по истечении времени реакции, рассчитанного на стадии (в).
2. Способ по п.1, где время реакции, T, на стадии (в) рассчитывают в соответствии с формулой (I):
где «akt» относится к необходимой доли расщепляемого полипептида, «akt0» относится к начальной доли расщепляемого полипептида, измеренной на стадии (б), «F0» относится к начальной концентрации полипептида (в г/л), измеренной на стадии (а), k(T) относится к константе реакции для данной реакции (в л/г/мин), как функция от температуры, T, и xb относится к мольной доли.
3. Способ по п.2, где k(T) представляет собой полином или сплайн.
4. Способ по п.1, где корреляцию, описанную на стадии (в), рассчитывают в соответствии с формулой (II):
где akt, akt0, k, xb и F0 являются такими, как определено в п.2, и k является константой реакции.
5. Способ по п.4, где k=0,29.
6. Способ по п.1, где xb=1.
7. Способ предотвращения расщепления активированного серинпротеазного фактора свертывания крови, включающий стадии, на которых:
(а) измеряют начальную концентрацию серинпротеазного фактора свертывания крови;
(б) измеряют начальную долю активированного серинпротеазного фактора свертывания крови;
(в) рассчитывают время реакции активации серинпротеазного фактора свертывания крови путем корреляции значений, измеренных на каждой из стадий (а) и (б), со значением необходимой доли активированного серинпротеазного фактора свертывания крови; и
(г) выполняют реакцию активации серинпротеазного фактора свертывания крови в течение времени, рассчитанного на стадии (в);
(д) завершают реакцию по истечении времени реакции, рассчитанного на стадии (в).
8. Способ по любому из пп.1-7, где указанная серинпротеаза представляет собой фактор VII, аналог или производное фактора VII, или фактор IX.
9. Способ по п.8, где указанный аналог фактора VII представляет собой V158D/E296V/M298Q-FVII(a).
10. Способ по любому из пп.1-7, где необходимая доля расщепления находится между 90 и 99%, например между 94 и 99%, например между 95 и 97%, например между 96 и 98%, например между 97 и 99%.
11. Способ по любому из пп.1-7, где реакция расщепления дополнительно включает добавление ионов кальция (например, хлорида кальция).
12. Способ по любому из пп.1-7, где реакцию активации проводят при pH между 6,0 и 8,0, в частности между 6,25 и 6,75 (например, 6,5±0,05).
13. Способ по любому из пп.1-7, где завершают реакцию, понижая pH до значения ниже приблизительно 6,0, такого как между 5,5 и 6,0 (например, 5,8).
14. Серин-протеаза, которая может быть получена по способу, как определено в любом из предшествующих пунктов.
15. Композиция, включающая аналог активированного фактора VII(a) или его производное, которые могут быть получены по способу, как определено в любом из предшествующих пунктов.