СОЕДИНЕНИЕ АМИНОПИРАЗОЛОПИРИМИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМОЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ТИРОЗИНКИНАЗНОГО РЕЦЕПТОРА НЕЙРОТРОФИЧЕСКОГО ФАКТОРА
AMINOPYRAZOLOPYRIMIDINE COMPOUND USED AS INHIBITOR OF TYROSINE KINASE RECEPTOR OF NEUROTROPHIC FACTOR

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
Настоящее изобретение имеет приоритет и преимущества Китайских патентных заявок на изобретение №№201610970314.3 и 201710044000.5, поданных в Государственное ведомство по интеллектуальной собственности Китая 28 октября 2016 года и 21 января 2017 года соответственно, которые во всей их полноте включены в данное описание изобретения посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области медицинской химии и, более конкретно, к соединению аминопиразолопиримидина, способу его получения, фармацевтической композиции, содержащей это соединение, и к применению его в лечении заболевания, опосредованного Trk-киназой.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
NTRK/TRK (тропомиозин-рецепторная киназа) представляет собой тирозинкиназный рецептор нейротрофического фактора и принадлежит семейству рецепторной тирозинкиназы. Семейство Trk включает в себя в основном три члена, а именно: NTRK1/TrkA, NTRK2/TrkB и NTRK3/TrkC. Интактная Trk-киназа содержит три области: внеклеточный домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен. Внеклеточный домен Trk-киназы связывается с соответствующим лигандом и затем может вызывать изменение конформации киназы с образованием димера. Внутриклеточный домен Trk-киназы подвергается аутофосфорилированию для активации его собственной киназной активности, которая затем активирует пути нисходящей передачи сигнала (такие как MAPK, AKT, PKC и т.д.) и продуцирует соответствующие биологические функции, когда NGF (фактор роста нервов) связывается с TrkA, BDNF (производный нейротрофический фактор) связывается с TrkB, и NT3 (нейротрофический фактор 3) связывается с TrkC.
Trk-киназа играет важную физиологическую роль в создании нервов, включая рост и сохранение функции нейрональных аксонов, возникновение и развитие памяти и защиту нейронов от повреждения и т.д. Между тем, большое количество исследований показали, что активация Trk сигнального пути также строго коррелируется с возникновением и развитием опухоли. Активированные сигнальные белки Trk обнаружены в нейробластоме, раке предстательной железы и раке молочной железы и т.д. Открытие в последние годы различных слитых белков Trk также продемонстрировало их биологическую функцию в стимулировании опухолеобразования. Раньше всех был обнаружен слитый белок ТРМ3-TrkA в клетках рака ободочной кишки с инцидентностью примерно 1,5% у испытуемых клинических пациентов. Впоследствии разные типы слитых белков Trk, такие как CD74-NTRK1, MPRIP-NTRK1, QKI-NTRK2, ETV6-NTRK3, BTB1-NTRK3 и т.д., были обнаружены в разных типах клинических образцов опухолей пациентов, таких как рак легкого, рак в области головы и шеи, рак молочной железы, рак щитовидной железы, глиома и т.д. Эти разные слитые белки NTRK сами по себе находятся в высокоактивированном состоянии киназной активности без необходимости связываться с лигандом и поэтому могут непрерывно фосфорилировать нисходящие сигнальные пути, индуцировать пролиферацию клеток и стимулировать возникновение и развитие опухоли. Следовательно, в последние годы слитые белки Trk стали эффективной противораковой мишенью и горячей точкой исследований. Например, в WO 2010048314, WO 2012116217, WO 2010033941 и т.д. раскрыты ингибиторы Trk-киназы, имеющие разные структуры ядра. Кроме того, мутация мишени, которая происходит после непрерывного введения, является важной причиной устойчивости опухоли. Недавно имели место случаи мутации NTRK в клинических условиях, такие как мутации NTRK1 G595R и G667C (Russo М et al. Cancer Discovery, 2016, 6(1), 36-44) и мутация NTRK3 G623R (Drilon A. et al., Annals of Oncology 2016, 27(5), 920-926), и обнаружение нового ингибитора Trk-киназы ожидается, чтобы решить проблему лекарственной устойчивости опухолей, вызванной мутацией NTRK.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль
где
1
2
9
9
9
1-10
2
1-10
1-6
1-6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Салкила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где Салкил возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила, Салкокси, возможно замещенного 3-6-членного циклоалкила, возможно замещенного 3-6-членного алифатического гетероциклила, возможно замещенного 6-10-членного арила и возможно замещенного 5-10-членного ароматического гетероциклила;
3
10
10
11
10
11
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, гидрокси, нитро, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -C(=S)NRR, 6-10-членного арила и 5-10-членного ароматического гетероциклила, где 6-10-членный арил и 5-10-членный ароматический гетероциклил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из Салкила, Салкоксикарбонила, возможно замещенного пирролидинила, возможно замещенного морфолинила и возможно замещенного пирролидинилкарбонила;
4
7
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, нитро, гидрокси, амино и циано;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, нитро, гидрокси, амино и циано, или R и R вместе образуют оксо;
8
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из 5-10-членного ароматического гетероциклила и 6-10-членного арила, где 5-10-членный ароматический гетероциклил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, кислорода, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
9
1-10
1-10
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из Салкила и фенила, где Салкил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
10
11
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
1-6
1-4
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, Салкила, Cалкокси, 3-6-членного циклоалкила и 6-10-членного арила, где Салкил, Салкокси, 3-6-членный циклоалкил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро, циано, Салкила, и группы гидрокси(Салкил), 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила и -N,N-ди(Cалкил)амино;
или
10
11
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют 5-10-членный алициклический гетероциклил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро и циано.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk, у млекопитающего, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей его (ее) фармацевтической композиции.
В еще одном другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей его (ее) фармацевтической композиции в получении лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk.
В еще одном другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей его (ее) фармацевтической композиции в профилактике или лечении заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, или содержащая его (ее) фармацевтическая композиция для применения в профилактике или лечении заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Нижеследующее описание включает в себя конкретные детали, обеспечивающие полное понимание различных раскрытых воплощений. Однако специалист в данной области поймет, что эти воплощения могут быть осуществлены с использованием других методов, компонентов, веществ и т.п. вместо одной или более из этих конкретных деталей.
По всему тексту данного описания изобретения фраза "одно воплощение", или "воплощение", или "в другом воплощении", или "в некоторых воплощениях" означает, что по меньшей мере одно воплощение включает в себя конкретный эталонный элемент, структуру или характеристику, имеющие отношение к воплощению. Так, встречающаяся в разных местах материалов заявки фраза "в одном воплощении", или "в воплощении", или "в другом воплощении", или "в некоторых воплощениях" необязательно относится к одному и тому же воплощению. Более того, конкретные элементы, структуры или характеристики возможно могут быть объединены любым подходящим образом в одном или более чем одном воплощении.
Следует иметь в виду, что форма единственного числа, использованная в этом описании изобретения и прилагаемой формуле изобретения, охватывает объект во множественном числе, если контекст четко не диктует иное. Так, например, реакция, включающая использование упомянутого "катализатора", включает использование катализатора или двух или более катализаторов. Следует иметь в виду, что термин "или" обычно включает в себя значение "и/или" и тогда используется, если контекстом четко не определено иное.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли
где
1
2
9
9
9
1-10
2
1-10
1-6
1-6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Салкила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где Салкил возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила, Салкокси, возможно замещенного 3-6-членного циклоалкила, возможно замещенного 3-6-членного алифатического гетероциклила, возможно замещенного 6-10-членного арила и возможно замещенного 5-10-членного ароматического гетероциклила;
3
10
10
11
10
11
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, гидрокси, нитро, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -C(=S)NRR, 6-10-членного арила и 5-10-членного ароматического гетероциклила, где 6-10-членный арил и 5-10-членный ароматический гетероциклил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из Салкила, Салкоксикарбонила, возможно замещенного пирролидинила, возможно замещенного морфолинила и возможно замещенного пирролидинилкарбонила;
4
7
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, нитро, гидрокси, амино и циано;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, нитро, гидрокси, амино и циано, или R и R вместе образуют оксо;
8
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из 5-10-членного ароматического гетероциклила и 6-10-членного арила, где 5-10-членный ароматический гетероциклил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, кислорода, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
9
1-10
1-10
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из Салкила и фенила, где Салкил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
10
11
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
1-6
1-4
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, Салкила, Салкокси, 3-6-членного циклоалкила и 6-10-членного арила, где Cалкил, Cалкокси, 3-6-членный циклоалкил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро, циано, Салкила, и группы гидрокси(Салкил), 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила и -N,N-ди(Cалкил)амино;
или
10
11
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют 5-10-членный алициклический гетероциклил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро и циано.
8
1-6
1-6
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R выбран из группы, состоящей из 5-10-членного ароматического гетероциклила и 6-10-членного арила, где 5-10-членный ароматический гетероциклил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси.
1
2
9
9
9
1-6
2
1-6
1-4
1-4
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Салкила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где Салкил возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила, Салкокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, тетрагидрофуранила, дигидрофуранила, пирролидинила, N-метилпирролидинила, пиразолидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, тетрагидротиофенила, фенила, 4-метилфенила, 4-метоксифенила, фурила, пирролила и пиразинила;
3
10
10
11
10
11
1-4
1-4
R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, гидрокси, нитро, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -C(=S)NRR, фенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила и пиразолила, где фенил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил и пиразолил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из Салкила, Салкоксикарбонила, пирролидин-1-ила, 3-гидроксипирролидин-1-ила, морфолин-4-ила и 3-гидроксипирролидин-1-илкарбонила;
4
7
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода, нитро, гидрокси, амино и циано;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода, нитро, гидрокси, амино и циано, или R и R вместе образуют оксо;
8
1-4
1-4
R выбран из группы, состоящей из фенила, фурила, пирролила, тиенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, пиридила, пиридонила и пиразинила, где фенил, фурил, пирролил, тиенил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, пиридил, пиридонил и пиразинил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
9
1-6
1-6
1-4
1-4
R выбран из группы, состоящей из Салкила и фенила, где Салкил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила и Салкокси;
10
11
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, н-пропила, изопропила, метокси, этокси, н-пропокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила и фенила, где метил, этил, н-пропил, изопропил, метокси, этокси, н-пропокси, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изопропила, гидроксиметила, 2-гидроксиэтила, 3-гидрокси-н-пропила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино;
или
10
11
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и гидрокси.
1
2
9
9
9
2
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, метила, этила, н-пропила, изопропила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где метил, этил, н-пропил и изопропил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода, нитро, гидрокси, циано, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, тетрагидрофуранила, дигидрофуранила, пирролидинила, N-метилпирролидинила, пиразолидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолин-4-ила, тиоморфолин-4-ила, тетрагидротиофенила, фенила, 4-метилфенила, 4-метоксифенила, фуранила, пирролила и пиразинила;
3
10
10
11
2
R выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода, циано, гидрокси, нитро, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -C(=S)NH, фенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила и пиразолила, где фенил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил и пиразолил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из метила, этила, н-пропила, изопропила, метоксикарбонила, этоксикарбонила, пирролидин-1-ила, 3-гидроксипирролидин-1-ила, морфолин-4-ила и 3-гидроксипирролидин-1-илкарбонила;
4
7
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода и гидрокси;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода и гидрокси, или R и R вместе образуют оксо;
8
R выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, пиридонила и пиразинила, где фенил, пиридил, пиридонил и пиразинил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, метокси и этокси;
9
R выбран из группы, состоящей из метила, этила, н-пропила, изопропила и фенила, где метил, этил, н-пропил, изопропил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода, метила, этила, метокси и этокси;
10
11
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклогексила и фенила, где метил, этил, метокси, этокси, циклопропил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, метила, этила, гидроксиметила, 2-гидроксиэтила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино;
или
10
11
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода и гидрокси.
8
8
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R представляет собой фенил, который возможно замещен одним или более атомами фтора; предпочтительно R представляет собой 2,5-дифторфенил.
1
2
9
9
9
2
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, метила, этила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где метил и этил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из морфолин-4-ила и 4-метоксифенила;
3
10
10
11
2
R выбран из группы, состоящей из водорода, брома, циано, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -C(=S)NH, фенила, оксазолила, тиазолила и пиразолила, где фенил, оксазолил, тиазолил и пиразолил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из метила, этоксикарбонила, морфолин-4-ила и 3-гидроксипирролидин-1-илкарбонила;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора и гидрокси, или R и R вместе образуют оксо;
9
R выбран из группы, состоящей из метила, этила и фенила, где фенил возможно замещен одним или более чем одним метилом;
10
11
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклогексила и фенила, где этил, метокси, этокси, циклопропил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, гидрокси, метила, гидроксиметила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила и N,N-диметиламино;
или
10
11
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, где пирролидин-1-ил возможно замещен одним или более гидрокси.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения, соединение формулы I имеет структуру, представленную формулой II
1
2
3
5
6
где R, R, R, R и R такие, как определено для соединения формулы I.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения соединение формулы II имеет структуру, представленную формулой III
где
1
2
5
6
R, R, R и R такие, как определено для соединения формулы II;
3a
7a
7a
8a
R выбран из группы, состоящей из R и NRR;
7a
8a
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
1-6
1-4
2
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, Салкила, Cалкокси, 3-6-членного циклоалкила и 6-10-членного арила, где Cалкил, Cалкокси, 3-6-членный циклоалкил и 6-10-членный арил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро, циано, Салкила, Салкила, замещенного гидрокси, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила и группы -N(Салкил);
или
7a
8a
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют 5-10-членный алифатический гетероциклил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро и циано.
7a
8a
В некоторых воплощениях R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, н-пропила, изопропила, метокси, этокси, н-пропокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила и фенила, где метил, этил, н-пропил, изопропил, метокси, этокси, н-пропокси, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изопропила, гидроксиметила, 2-гидроксиэтила, 3-гидрокси-н-пропила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино;
или
7a
8a
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и гидрокси.
7a
8a
В некоторых воплощениях R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклогексила и фенила, где метил, этил, метокси, этокси, циклопропил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йод, гидрокси, метила, этила, гидроксиметила, 2-гидроксиэтила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино;
или
7a
8a
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, который возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, йода и гидрокси.
1
2
6a
6a
6a
2
В некоторых воплощениях R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, метила, этила, -C(=O)R, -C(=O)NHR и -S(=O)R, где метил и этил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, пиперидин-4-ила, морфолин-4-ила, тиоморфолин-4-ила, фенила, 4-метилфенила и 4-метоксифенила;
3a
7a
7a
8a
R выбран из группы, состоящей из R и NRR;
5
6
5
6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора и гидрокси, или R и R вместе образуют оксо;
6a
R выбран из группы, состоящей из метила, этила и 4-метилфенила;
7a
8a
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклогексила и фенила, где метил, этил, метокси, этокси, циклопропил, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, гидрокси, метила, гидроксиметила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино;
или
7a
8a
R и R вместе с N, к которому они присоединены, образуют пирролидин-1-ил, который возможно замещен одним или более гидрокси.
7a
8a
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, гидрокси, метила, этила, метокси, этокси, циклопропила, циклогексила и фенила, где метил, этил, метокси, этокси, циклогексил и фенил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, гидрокси, метила, гидроксиметила, 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ила, N,N-диметиламино и N,N-диэтиламино.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения соединение формулы III имеет структуру, представленную формулой IIIa
3a
5
6
где R, R и R такие, как определено для соединения формулы III.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения соединение формулы II имеет структуру, представленную формулой IV
5
6
где, R и R такие, как определено для вышеупомянутого соединения формулы II;
1b
2b
1-10
1-10
1-6
1-6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Салкила, где Салкил возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила, Салкокси, возможно замещенного 3-6-членного циклоалкила, возможно замещенного 3-6-членного алициклического гетероциклила, возможно замещенного 6-10-членного арила и возможно замещенного 5-10-членного ароматического гетероциклила;
3b
2
1-6
1-6
R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, гидрокси, нитро, -C(=S)NH, 6-10-членного арила и 5-10-членного ароматического гетероциклила, где 6-10-членный арил и 5-10-членный ароматический гетероциклил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из Салкила, Салкоксикарбонила, возможно замещенного пирролидинила, возможно замещенного морфолинила и возможно замещенного пирролидинилкарбонила.
1b
2b
1-6
1-6
1-4
1-4
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Салкила, где Салкил возможно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, нитро, гидрокси, циано, Салкила, Салкокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, тетрагидрофуранила, дигидрофуранила, пирролидинила, N-метилпирролидинила, пиразолидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тио морфолинила, тетрагидротиофенила, фенила, 4-метилфенила, 4-метоксифенила, фурила, пирролила и пиразинила;
3b
2
1-4
1-4
R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, гидрокси, нитро, -C(=S)NH, фенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила и пиразолила, где фенил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил и пиразолил, каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из Салкила, Салкоксикарбонила, пирролидин-1-ила, 3-гидроксипирролидин-1-ила, морфолин-4-ила и 3-гидроксипирролидин-1-илкарбонила.
1b
2b
В некоторых воплощениях настоящего изобретения R и R независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, метила и этила, где метил и этил, каждый независимо, возможно замещены фенилом, 4-метилфенилом или 4-метоксифенилом;
3b
2
R выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, йода, циано, -C(=S)NH, фенила,  где фенил,  каждый независимо, возможно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из метила, этила, метоксикарбонила, этоксикарбонила, пирролидин-1-ила, морфолин-4-ила и 3-гидроксипирролидин-1-илкарбонила.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению выбраны из следующих соединений:
или их фармацевтически приемлемой соли.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль согласно настоящему изобретению. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит фармацевтически приемлемый(е) эксципиент(ы).
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть получена путем объединения соединения согласно настоящему изобретению с подходящим(и) фармацевтически приемлемым(и) эксципиентом(ами). Например, фармацевтическая композиции по настоящему изобретению может быть приготовлена в твердых, полутвердых, жидких или газообразных формах, таких как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, пастилки, мази, эмульсии, суспензии, растворы, сиропы, пасты, суппозитории, инъекции, ингаляционные формы, гели, микросферы, аэрозоли и т.п.
Типичные пути введения соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей его (ее) фармацевтической композиции включают, без ограничения, пероральное, ректальное, местное, ингаляционное, парентеральное, сублингвальное, интравагинальное, интраназальное, внутриглазное, интраперитонеальное, внутримышечное, подкожное, трансдерамальное и внутривенное введение.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть получена с использованием способов, общеизвестных в данной области, таких как традиционный способ смешивания, способ растворения, способ гранулирования, способ изготовления драже, способ измельчения, способ эмульгирования, способ сублимационной сушки и т.п.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения фармацевтическая композиция находится в пероральной форме. Для перорального введения фармацевтическая композиция может быть приготовлена путем смешивания активного(ых) соединения(й) с фармацевтически приемлемым(и) эксципиентом(ами), общеизвестным(и) в данной области. Такие эксципиенты дают возможность приготовления соединений по настоящему изобретению в форме таблеток, пилюль, пастилок, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, эмульсий, суспензий и т.п. для перорального введения пациентам.
Твердая пероральная фармацевтическая композиция может быть получена стандартным способом смешивания, наполнения или таблетирования. Например, она может быть получена путем смешивания активного соединения с твердым эксципиентом, возможно измельчения полученной смеси, добавления других подходящих эксципиентов, если это необходимо, и последующей переработки смеси в гранулы для получения таблеток или драже. Подходящие эксципиенты включают, без ограничения, связующие вещества, разбавители, разрыхлители, смазывающие вещества, глиданты, подсластители, корригенты и т.п.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут быть пригодны для парентерального введения, например в форме стерильных растворов, суспензий или лиофилизированных продуктов в подходящей стандартной лекарственной форме.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk, у млекопитающего, включающему введение нуждающемуся в этом млекопитающему, предпочтительно человеку, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или его фармацевтической композиции.
В некоторых воплощениях ежесуточно вводимая доза соединения формулы I согласно настоящему изобретению при всех способах введения составляет от 0,01 мг/кг массы тела до 300 мг/кг массы тела, предпочтительно от 10 мг/кг массы тела до 300 мг/кг массы тела и более предпочтительно от 25 мг/кг массы тела до 200 мг/кг массы тела в форме однократной дозы или разделенной дозы.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или его фармацевтической композиции в получении лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk.
В еще одном аспекте согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль или его фармацевтическая композиция для применения в профилактике или лечении заболевания, опосредованного тирозинкиназным рецептором Trk.
Определения
Если не утверждается иное, нижеследующие термины, использованные в данном документе, имеют указанные ниже значения. Конкретный термин не должен рассматриваться как неясный или неопределенный, когда он специально не определен. Его следует понимать в соответствии с его обычным значением. Торговое наименование, использованное в данном документе, относится к соответствующему продукту или его активному ингредиенту.
Термин "замещенный" означает, что один или более атомов водорода на данном атоме замещен заместителем, при условии, что данный атом имеет нормальное валентное состояние, и соединение после замещения является стабильным. Когда заместитель представляет собой оксо (т.е. =O), и это означает, что два атома водорода замещены, тогда на ароматической группе замещение заместителем оксо не будет происходить.
2
3
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
3
Термин "возможный" или "возможно" означает, что описанное после него событие или обстоятельство может иметь место или может не иметь места, и что описание включает в себя примеры, где указанное событие или обстоятельство имеет место, и примеры, где указанное событие или обстоятельство не имеет места. Например, если этильная группа "возможно" замещена одним или более атомами фтора или хлора, то это означает, что этильная группа может быть незамещенной (СНСН), моно-замещенной (такой как CHCHF, CHClCH), мульти-замещенной (такой как CHFCHF, CHClCHF, CHCHF и т.д.) или полностью замещенной (CClCF, CFCF). Специалист в данной области поймет, что применительно к любой группе, содержащей один или более заместителей, любое замещение или любая форма замещения, которые пространственно невозможны и/или не синтезируются, не будут включены.
14
14
14
14
14
14
16
14
16
14
16
16
16
14
14
16
2
2
t
t
t
t
2
Термин "возможно замещенный" в данном документе означает, что группа возможно может быть замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, галогена, галогеналкила, галогеналкенила, алкокси, алкилтио, циано, нитро, гидрокси, меркапто, -C(=S)OH, группы -С(=S)O-алкил, -C(=S)-H, группы -С(=S)-алкил, арила, арилокси, аралкила, циклоалкила, циклоалкилокси, циклоалкилалкила, циклоалкенила, циклоалкенилокси, циклоалкенилалкила, алифатического гетероциклила, алифатического гетероциклилокси, алифатического гетероциклилалкила, ароматического гетероциклила, ароматического гетероциклилокси, ароматического гетероциклилалкила, гидроксиамино, алкоксиамино, -OC(O)-R, -N(R), -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R), -N(R)C(O)OR, -N(R)C(O)R, -N(R)(S(O)R) (где t равно 1 или 2), -S(O)OR (где t равно 1 или 2), -S(O)R (где t равно 0, 1 или 2) и -S(O)N(R) (где t равно 1 или 2), где каждый R и каждый R независимо представляет собой водород, алкил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, арилалкил, алифатический гетероциклил, алифатический гетероциклилалкил, ароматический гетероциклил, или ароматический гетероциклилалкил. Предпочтительно, заместители независимо выбраны из группы, состоящей из алкила, галогена и гидрокси.
m-n
1-6
Выражение C в данном документе означает, что эта группировка имеет целое число атомов углерода в пределах данного диапазона. Например, "С" означает, что эта группа может иметь 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода, 4 атома углерода, 5 атомов углерода или 6 атомов углерода.
Когда любая переменная (такая как R) встречается больше одного раза в составе или структуре соединения, тогда в каждом случае она определена независимо. Так, например, если группа замещена двумя R, то каждый R имеет независимое значение.
Термин "галоген" или "галогено" относится к фтору, хлору, брому и йоду.
Термин "гидрокси" относится к группе -ОН.
Термин "циано" относится к группе -CN.
2
Термин "амино" относится к группе -NH.
2
Термин "нитро" относится к группе -NO.
n
2n
2
2
2
Термин "гидроксиалкил" относится к -CHOH. Например, гидроксиметил относится к -СНОН, и 2-гидроксиэтил относится к -СНСНОН.
n
2n+1
1-6
Термин "алкил" относится к гидрокарбильной группе формулы CH. Алкильная группа может быть прямой или разветвленной. Например, термин "Салкил" относится к алкильной группе, имеющей 1-6 атомов углерода (такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, неопентил, гексил, 2-метилпентил и т.д.). Аналогично, алкильная группировка (т.е. алкил) в группе алкокси, группе моноалкиламино, группе диалкиламино, группе алкилсульфонил, группе алкоксикарбонил и группе алкилтио имеет то же определение, которое указано выше.
Термин "алкокси" относится к группе -О-алкил.
Термин "циклоалкил" относится к полностью углеродному кольцу, которое является полностью насыщенным и может существовать в форме моноциклического кольца, мостикового кольца или спироциклического кольца. Если не указано иное, карбоцикл обычно представляет собой 3-10-членное кольцо. Не являющиеся ограничивающими примеры циклоалкила включают, без ограничения, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, норборнил (бицикло[2.2.1]гептил), бицикло[2.2.2]октил, адамантил и т.д.
Термин "алифатический гетероциклил" относится к полностью насыщенному или частично ненасыщенному (но не полностью ненасыщенному гетероароматическому) неароматическому кольцу, которое может существовать в форме моноциклического кольца, бициклического кольца или спироциклического кольца. Если не указано иное, алифатическое гетероциклическое кольцо обычно представляет собой 3-6-членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (предпочтительно 1 или 2 гетероатома), независимо выбранных из атомов серы, кислорода и/или азота. Не являющиеся ограничивающими примеры алифатического гетероциклила включают, без ограничения, оксиранил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, пирролидинил, N-метилпирролидинил, дигидропирролил, пиперидинил, пиперазинил, пиразолидинил, 4Н-пиранил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидротиенил и т.д.
Термин "арил" относится к группе полностью углеродного моноциклического или конденсированного полициклического ароматического кольца, имеющего сопряженную π-электронную систему. Например, арил может иметь 6-20, 6-14 или 6-12 атомов углерода. Арил может иметь по меньшей мере одно ароматическое кольцо, и его не ограничивающие примеры включают, без ограничения, фенил, нафтил, антрил и 1,2,3,4-тетрагидронафталин и т.д.
Термин "ароматический гетероциклил" относится к моноциклической или конденсированной полициклической системе, содержащей по меньшей мере один кольцевой атом, выбранный из N, О и S, а остальные кольцевые атомы представляют собой С, и имеющей по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Предпочтительный ароматический гетероциклил имеет единственное 4-8-членное кольцо, в частности единственное 5-8-членное кольцо, или имеет конденсированное полициклическое кольцо, содержащее 6-14, в частности 6-10 атомов в кольце. Не являющиеся ограничивающими примеры ароматического гетероциклила включают, без ограничения, пирролил, фурил, тиенил, тиазолил имидазолил, оксазолил, пиразолил, пиридил, пиримидинил, пиразинил, хинолинил, изохинолинил, тетразолил, триазолил, триазинил, бензофуранил, бензотиенил, индолил, изоиндолил и т.д.
Термин "лечение" или "осуществление лечения" относится к введению соединений или препаратов по настоящему изобретению для предупреждения, ослабления или устранения заболеваний или одного или более симптомов, ассоциированных с заболеваниями, включая:
(1) профилактику возникновения заболеваний или состояний у млекопитающих, в частности в случаях, когда млекопитающие восприимчивы к этим состояниям, но они не диагностированы у них;
(2) торможение заболеваний или состояний, т.е. ограничение их развития; или
(3) устранение заболеваний или состояний, т.е. выздоровление после заболеваний или состояний.
Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество соединения по настоящему изобретению, которое (1) лечит или предупреждает конкретное заболевание, состояние или расстройство, (2) смягчает, ослабляет или устраняет один или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, или (3) предупреждает или задерживает проявление одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, как описано в данном документе. Количество соединений по настоящему изобретению, составляющее так называемое "терапевтически эффективное количество", зависит от соединения, заболевания, состояния и его тяжести, пути введения и возраста млекопитающего, подлежащего лечению, но может быть определенно рутинно специалистами в данной области на основе их знаний и приведенного в данном документе описания.
Термин "фармацевтически приемлемый" относится к соединению, веществу, композиции и/или лекарственной форме, которые пригодны для контакта с тканями человека и животного без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений в рамках разумного медицинского суждения и согласуется с приемлемым соотношением польза/риск.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" охватывает, без ограничения, соль присоединения кислоты, образованную соединением формулы I и неорганической кислотой, соль присоединения кислоты, образованную соединением формулы I и органической кислотой, или соль присоединения, образованную соединением формулы I и кислотной аминокислотой, и т.д. Термин "фармацевтическая композиция" относится к смеси одного или более соединений по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей и фармацевтически приемлемого эксципиента. Назначение фармацевтической композиции заключается в облегчении введения соединения по настоящему изобретению в организм.
Термин "фармацевтически приемлемый эксципиент" относится к тем эксципиентам, которые не вызывают значительной стимуляции в организме и не ухудшают биологическую активность и свойства активного соединения. Подходящие эксципиенты известны специалистам в данной области, такие как углеводы, воски, водорастворимые полимеры и/или полимеры, способные набухать в воде, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, вода и т.п.
Фразу "содержат" и ее варианты, такие как "содержит" и "содержащий", следует толковать в открытом и инклюзивном смысле, то есть как "включающий, но без ограничения". Если не указано иное, использованные в данном документе сокращения имеют следующие значения:
мин означает минуты;
ч означает часы;
DCM означает дихлорметан;
THF означает тетрагидрофуран;
DMF означает N,N-диметилформамид;
DMSO означает диметилсульфоксид;
МеОН означает метанол;
2
HO означает вода;
РЕ означает петролейный эфир;
ЕА означает этилацетат;
4
Ti(OEt) означает тетраэтилтитанат;
DMAP означает 4-диметиламинопиридин;
TFA означает трифторуксусная кислота;
TBDMSCl означает трет-бутилдиметилхлорсилан;
4
NaBH означает боргидрид натрия;
NaHMDS означает гексаметилдисилазид натрия;
2
(ВОС)O означает ди-трет-бутил-дикарбонат;
NBS означает N-бромсукцинимид;
Реагент Лавессона относится к 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфиду;
DBU означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен;
DAST означает трифторид диэтиламиносеры;
HATU означает гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония;
DIEA означает N,N-диизопропилэтиламин;
DME означает диметиловому эфир;
TLC означает тонкослойная хроматография;
М означает молярная концентрация моль/л; например, 2М означает 2 моль/л;
н. означает эквивалентная концентрация; например, 1 н. HCl означает соляная кислота в концентрации 1 моль/л; 2 н. NaOH означает гидроксид натрия в концентрации 2 моль/л;
Ts означает пара-метилбензолсульфонил;
TsCl означает пара-толуолсульфонилхлорид;
Et означает этил;
Me означает метил;
Ас означает ацетил;
РМВ означает пара-метоксибензил;
TBS означает трет-бутилдиметилсилил.
Промежуточные соединения и соединения согласно настоящему изобретению могут существовать также в форме разных таутомеров, и все такие формы входят в объем настоящего изобретения. Термин "таутомер" или "таутомерная форма" относится к структурным изомерам с разными энергиями, которые способны к взаимному превращению по причине низкого энергетического барьера. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимопревращения посредством миграции протона, такие как кето-енольная изомеризация и имин-енаминная изомеризация. Конкретным примером протонных таутомеров является имидазольная группировка, в которой протон мигрирует между двумя кольцевыми атомами азота. Валентные таутомеры включают взаимопревращения в результате перегруппировки некоторых образующих связи электронов. Типичные енольные таутомеры показаны ниже, но ими не ограничены.
2
3
11
13
14
13
15
15
17
18
31
32
35
18
123
125
36
Соединения по настоящему изобретению также включают меченные изотопами соединения по настоящему изобретению, которые идентичны соединениям, перечисленным в данном документе, по структуре, но отличаются тем, что один или более атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличающуюся(ееся) от атомной массы или массового числа, обычно встречающейся(егося) в природе. Примеры изотопов, которые могут быть введены в соединения по настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, йода и хлора, такие как Н, Н, C, С, С, N, N, O, O, O, Р, Р, S, F, I, I и Cl соответственно.
3
14
3
14
15
13
11
18
Некоторые меченные изотопами соединения по настоящему изобретению (например, меченные Н и С) полезны в анализах распределения соединений и/или субстратов в тканях. Тритиированные (т.е. Н) и углерод-14 (т.е. С) изотопы являются особенно предпочтительными ввиду легкости их получения и обнаружения. Испускающие позитрон изотопы, такие как O, N, С и F, полезны для исследований методом позитронно-эмиссионной томографии (PET) с целью проверки степени занятости рецептора субстратом. Меченные изотопами соединения по настоящему изобретению обычно могут быть получены по методикам, аналогичным методикам, раскрытым на Схемах и/или в Примерах, приведенных ниже, путем замены немеченого реагента меченым реагентом.
2
Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами (такими как дейтерий, т.е. Н) может давать некоторые терапевтические преимущества за счет более высокой стабильности, например увеличения периода полувыведения in vivo или снижения требований к дозировке, и, следовательно, может быть предпочтительным в некоторых случаях, причем дейтерирование может быть частичным или полным, и частичное дейтерирование означает, что по меньшей мере один атом водорода заменен по меньшей мере одним дейтерием. Типичные дейтерированные соединения показаны ниже, но ими не ограничены.
Соединения по настоящему изобретению могут быть асимметрическими, имеющими, например, один или более стереоизомеров. Если не указано иное, все стереоизомеры, такие как энантиомеры и диастереомеры, охвачены в данном документе. Соединения, содержащие асимметрический(е) атом(ы) углерода, по настоящему изобретению могут быть выделены в активной оптически чистой форме или в рацемической форме. Активная оптически чистая форма может быть получена из рацемической смеси или может быть синтезирована с использованием хирального(ых) исходного(ых) веществ(а) или хирального(ых) реагента(ов). Не являющиеся ограничивающими примеры стереоизомеров включают, без ограничения:
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены различными способами синтеза, известными специалисту в данной области, включая конкретные воплощения, проиллюстрированные ниже, воплощения, представляющие собой комбинацию таких конкретных воплощений с другими химическими способами синтеза, и эквиваленты, известные специалисту в данной области. Предпочтительные воплощения включают, без ограничения, рабочие Примеры, приведенные в настоящей заявке.
Химическую реакцию в конкретных воплощениях настоящего изобретения проводят в соответствующем растворителе, который должен быть подходящим для химического(их) превращения(й) и требуемо го(ых) в настоящем изобретении реагента(ов) и веществ(а). Для того чтобы получить соединения по настоящему изобретению, специалисту в данной области потребуется произвести модификацию или выбор стадии(й) синтеза или методик(и) реакции(й) на основе существующих воплощений.
Важное значение в разработке пути синтеза в данной области имеет выбор подходящей защитной группы для реакционноспособной функциональной группы, такой как аминогруппа в настоящем изобретении. Например, можно сделать ссылку на Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4th Ed). Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons, Inc. Все источники информации, указанные в данном документе, во всей их полноте включены в него.
В некоторых воплощениях соединение формулы III по настоящему изобретению может быть получено специалистом в области органического синтеза с использованием стандартных способов, представленных на общей Схеме 1:
Общая Схема 1
1
5
6
7a
8a
где R представляет собой водород или ацетил; и R, R, R и R такие, как определено для соединения формулы III.
В некоторых воплощениях соединение формулы III по настоящему изобретению может быть получено специалистом в области органического синтеза с использованием стандартного способа, представленного на общей Схеме 2:
Общая Схема 2
1
5
6
7a
8a
где R представляет собой водород или ацетил; и R, R, R и R такие, как определено для соединения формулы III.
В некоторых воплощениях соединение формулы III по настоящему изобретению может быть получено специалистом в области органического синтеза с использованием стандартного способа, представленного на Схеме 3:
Общая Схема 3
1
2
5
6
7a
8a
где X представляет собой галоген, включающий, например, фтор, хлор, бром и йод; R представляет собой водород или ацетил; и R, R, R, R и R такие, как определено для соединения формулы III.
В некоторых воплощениях соединение формулы IV по настоящему изобретению может быть получено специалистом в области органического синтеза с использованием стандартного способа, представленного на общей Схеме 4:
Общая Схема 4
1b
5
6
где X представляет собой галоген, включая, например, фтор, хлор, бром и йод; R представляет собой водород или ацетил; и R и R такие, как определено для соединения формулы IV.
В некоторых воплощениях соединение формулы IV по настоящему изобретению может быть получено специалистом в области органического синтеза с использованием стандартного способа, представленного на Схеме 5:
Общая Схема 5
2b
5
6
где X представляет собой галоген, включая, например, фтор, хлор, бром и йод; R, R, и R такие, как определено для соединения формулы IV; и соединение формулы K-1 может быть получено с использованием способа получения соединения формулы K.
Для ясности настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется приведенными ниже примерами, но эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Все реагенты, использованные в настоящем изобретении, имеются в продаже и могут быть использованы без дополнительной очистки.
ПРИМЕРЫ
Получение промежуточных соединений
Пример получения 1: (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин (Соединение II)
Стадия А: 4-Хлор-N-метокси-N-метилбутанамид
К раствору гидрохлорида N,O-диметилгидроксиамина (69,1 г) в DCM (200 мл) добавляли пиридин (150 мл) и перемешивали при 0°С в течение 15 мин, и затем в полученную смесь добавляли 4-хлорбутирилхлорид (100 г) и непрерывно перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM, и органическую фазу промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (125,1 г), который использовали на следующей стадии без очистки.
Стадия В: 4-Хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутан-1-он
Раствор хлорида изопропилмагния в THF (2М, 604 мл) добавляли по каплям к раствору 2-бром-1,4-дифторбензола (244,7 г) в THF (1 л), который был охлажден до -50°С. После завершения добавления по каплям температуру поднимали до 0°С при перемешивании в течение 1 ч. Реакционную смесь снова охлаждали до -50°С. В реакционную смеси добавляли по каплям раствор 4-хлор-N-метокси-N-метилбутирамида (100 г) в THF (200 мл) при перемешивании, и смесь постепенно нагревали до 30°С и затем непрерывно перемешивали при 30°С в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Собранную органическую фазу промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (101 г).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.59-7.55 (m, 1H), 7.26-7.20 (m, 1Н), 7.17-7.11 (m, 1H), 3.68-3.65 (m, 2Н), 3.20-3.16 (m, 2Н), 2.25-2.19 (m, 2Н). m/z=219[M+1].
Стадия С: (S,E)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутилен)-2-метилпропан-2-сульфинамид
К раствору 4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутан-1-она (155,4 г) и (S)-2-метилпропан-2-сульфинамида (129,2 г) в THF (1,0 л) добавляли тетраэтилтитанат (243,2 г) при перемешивании. Смесь перемешивали при 70°С в течение дополнительных 16 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, разбавляли этилацетатом и фильтровали. Фильтрат промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (207 г).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.38-6.90 (m, 3Н), 3.66-3.58 (m, 2Н), 3.44-3.22 (m, 1H), 3.0-2.80 (m, 1H), 2.25-2.01 (m, 2Н), 1.30 (s, 9Н). m/z=322 [М+1].
Стадия D: (S)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутил)-2-метилпропан-2-сульфинамид
4
К раствору (S,E)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутилен)-2-метилпропан-2-сульфенамида (177,5 г) в THF (1,5 л) медленно порциями добавляли NaBH (18,78 г) при -65°С, поддерживая в то же время температуру реакционной системы, не превышающую -60°С, на всем протяжении добавления. После завершения добавления полученную смесь перемешивали при -60°С в течение 30 мин и медленно нагревали до -40°С. TLC выявила отсутствие исходных веществ. Реакционный раствор медленно вливали в ледяную воду и гасили, а затем экстрагировали этилацетатом с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (173,2 г), который использовали на следующей стадии без очистки.
Стадия Е: (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин и (S)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
К раствору (S)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутил)-2-метилпропан-2-сульфенамида (193,2 г) в THF (1,8 л) медленно по каплям добавляли раствор NaHMDS (2 М) в THF (343 мл) при -78°С, поддерживая в то же время температуру реакционной системы, не превышающую -75°С, на всем протяжении добавления. После завершения добавления полученную смесь перемешивали при -60°С в течение 30 мин, медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. TLC выявила отсутствие исходных веществ. Реакционный раствор гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, экстрагировали этилацетатом, сушили над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (100 г) и (S)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (59 г).
1
+
3
Е1: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.06-6.88 (m, 3Н), 4.96 (d, J=7,2 Гц, 1H), 3.93-3.87 (m, 1H), 3.01-2.95 (m, 1Н), 2.30-2.24 (m, 1H), 1.97-1.71 (m, 3Н), 1.16 (s, 9H). m/z=288 [M+1].
1
+
3
E2: H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.04-6.87 (m, 3Н), 5.32 (d, J=7,2 Гц, 1H), 3.67-3.55 (m, 2Н), 2.20-2.16 (m, 1Н), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.82-1.74 (m, 2H), 1.10 (s, 9H). m/z=288 [M+1].
Стадия F: (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
4М раствор HCl в 1,4-диоксане (27 мл) медленно по каплям добавляли к твердому (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидину (5,2 г) при -10°С, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, подщелачивали раствором NaOH и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,3 г).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.31-7.26 (m, 1H), 6.99-6.93 (m, 1H), 6.91-6.85 (m, 1Н), 4.46 (t, J=7,6 Гц, 1H), 4.20-3.60 (m, 1Н), 3.27-3.21 (m, 1H), 3.15-3.10 (m, 1H), 2.31-2.25 (m, 1H), 2.05-1.85 (m, 2Н), 1.75-1.67 (m, 1Н). m/z=184 [M+1].
Пример получения 2: 2-(2,5-дифторфенил)пирролидин (Соединение I2)
Стадия А: трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилат
К раствору 2-пирролидона (100 г) и DMAP (72 г) в ацетонитриле (1,0 л) добавляли ди-трет-бутил-дикарбонат (308 г) при 0-5°С и перемешивали при 20-35°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток разбавляли этилацетатом и затем промывали водой. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (215,5 г).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.75 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 2.52 (t, J=8,0 Гц, 2Н), 2.00 (dd, J=15,2 Гц, J=7,2 Гц, 2Н), 1.53 (s, 9Н).
Стадия В: трет-бутил-5-(2,5-дифторфенил)-2,3-дигидро-1Н-пиррол-1-карбоксилат
К раствору 2-бром-1,4-дифторбензола (186 г) в THF (1,0 л) добавляли 2,0М раствор хлорида изопропилмагния в THF (482 мл) при -40°С и непрерывно перемешивали при 5°С в течение 1 ч. В вышеуказанную реакционную смесь добавляли по каплям раствор трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (215,5 г) в THF (250 мл) и непрерывно перемешивали при 10°С в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (323,4 г), который использовали на следующей стадии без очистки.
Стадия С: 5-(2,5-дифторфенил)-3,4-дигидро-2Н-пиррол
К раствору трет-бутил-5-(2,5-дифторфенил)-2,3-дигидро-1Н-пиррол-1-карбоксилата (318,4 г) в DCM (1,0 л) добавляли TFA (421 мл) при -40°С и перемешивали при 20-35°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток разбавляли этилацетатом и затем промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (224,4 г), который использовали на следующей стадии без очистки.
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.68-7.64 (m, 1H), 7.08-7.04 (m, 2Н), 4.04-3.99 (m, 2Н), 3.02-2.97 (m, 2Н), 2.08-2.00 (m, 2Н). m/z=182 [M+1].
Стадия D: 2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
2
4
К раствору 5-(2,5-дифторфенил)-3,4-дигидро-2Н-пиррола (224,4 г) в смеси МеОН/HO (об./об.=4/1, 2,0 л) добавляли NaBH (93,82 г) и перемешивали при 20-35°С в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили 1 н. водным раствором HCl и подщелачивали 2 н. водным раствором NaOH, затем экстрагировали DCM и сушили над безводным сульфатом натрия. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (171,3 г).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.28-7.19 (m, 1H), 6.97-6.91 (m, 1Н), 6.87-6.82 (m, 1Н), 4.39 (t, J=7,5 Гц, 1H), 3.18-3.12 (m, 1H), 3.04 (dd, J=14,8 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 2.31-2.19 (m, 1H), 2.01-1.75 (m, 3Н), 1.65-1.58 (m, 1Н). m/z=184 [M+1].
Пример получения 3: (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I3) и (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I4)
Стадия А: (R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-2-он
(R)-4-Гидрокси-2-пирролидон (6,0 г) растворяли в DMF (60 мл), и в этот раствор добавляли TBDMSCl (9,8 г) и имидазол (6,05 г) при 0°С, и полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. После определения завершения реакции в реакционную систему добавляли воду, и выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали и сушили в течение ночи под инфракрасной лампой с получением (R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси) пирролидин-2-она (10,7 г).
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.45 (s, 1H), 4.44 (m, 1H), 3.42 (m, 1Н), 2.93 (m, 1Н), 2.40 (m, 1Н), 1.85 (m, 1H), 0.79 (s, 9Н), 0.00 (s, 6 Н).
Стадия В: трет-бутил-(R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилат
2
К раствору (R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-2-она (10,67 г) в ацетонитриле (150 мл) добавляли триэтиламин (8,26 мл) и DMAP (3,0 г) при 0°С, и в эту смесь добавляли по каплям (Вос)О (15 мл) в защитной атмосфере газа азота. После завершения добавления полученную смесь перемешивали в течение 5 мин и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную систему вливали в воду, экстрагировали этилацетатом и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 10/1) с получением трет-бутил-(R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (14,5 г).
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 4.38-4.40 (m, 1Н), 3.86 (dd, J=11.4, 5,6 Гц, 1H), 3.62 (dd, J=11.4, 3,2 Гц, 1Н), 2.71 (dd, J=15.6, 5,6 Гц, 1Н), 2.48 (dd, J=3.4, 5,6 Гц, 1Н), 1.56 (s, 9Н), 0.89 (m, 9Н), 0.08 (m, 6Н).
Стадия С: трет-бутил-((2R)-2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксибутил)карбамат
2,5-Дифторбромбензол (14,8 г) растворяли в сухом тетрагидрофуране (100 мл) и охлаждали до -78°С, а затем в этот раствор добавляли 2 М раствор хлорида изопропилмагния в THF (35 мл). Реакционную систему постепенно нагревали до 0°С, перемешивали в течение 2 ч, а затем снова охлаждали до -78°С. В реакционную систему добавляли раствор трет-бутил-(R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (15,6 г) в тетрагидрофуране (50 мл), снова нагревали до 0°С и перемешивали в течение 3,5 ч. В полученную смесь добавляли метанол и затем боргидрид натрия (4,46 г) при 0°С и перемешивали в течение 1 ч. После завершения реакции реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, экстрагировали этилацетатом и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 5/1) с получением трет-бутил-((2R)-2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксибутил)карбамата (15,4 г).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.22-7.30 (m, 1Н), 6.87-6.97 (m, 2Н), 5.16-5.30 (m, 1Н), 4.79 (s, 1H), 4.08-4.13 (m, 1Н), 3.21- 3.37 (m, 2Н), 1.92-1.78 (m, 2Н), 1.45 (s, 9Н), 1.30-1.21 (m, 1Н), 0.92 (s, 9Н), 0.13 (s, 6Н).
Стадия D: трет-бутил-(4R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-карбоксилат
трет-Бутил-((2R)-2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидрокси бутил)карбамат (15,4 г) растворяли в дихлорметане и охлаждали до -60°С, и в этот раствор добавляли триэтиламин (14,8 мл) и метансульфонилхлорид (3 мл) по каплям, и перемешивали в течение 2 ч, поддерживая ту же самую температуру. Затем добавляли DBU (8 мл), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции реакционную систему вливали в воду и экстрагировали дихлорметаном (50 мл × 3). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 25/1) с получением трет-бутил-(4R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-карбоксилата (11,28 г).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.98-7.33 (m, 3Н), 5.17-5.49 (m, 1H), 4.50-4.55 (m, 1Н), 3.60-3.93 (m, 2Н), 2.40-2.60 (m, 1Н), 1.92-2.01 (m, 1H), 1.30-1.21 (m, 9Н), 0.86-1.08 (m, 9Н), 0.08-0.21 (m, 6Н).
Стадия Е: трет-бутил-(4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилат
трет-Бутил-(4R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-1-карбоксилат (11,3 г) растворяли в соответствующем количестве тетрагидрофурана (150 мл), добавляли фторид тетрабутиламмония (13,0 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 1 ч. После определения завершения реакции реакционную систему вливали в ледяную воду, экстрагировали этилацетатом (х2) и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 3/1) с получением указанного в заголовке соединения (6,5 г).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.80-7.16 (m, 3Н), 5.02-5.20 (m, 1H), 4.43-4.51 (m, 1H), 3.57-3.85 (m, 2Н), 2.04-2.60 (m, 1Н), 1.95-2.02 (m, 1H), 1.58-1.72 (m, 1H), 1.20-1.42 (m, 9Н).
Стадия F: трет-бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат (а) и трет-бутил-(2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат(b)
К раствору трет-бутил-(4R)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидрокси-пирролидин-1-карбоксилата (1,0 г) в дихлорметане (50 мл) добавляли по каплям реагент DAST (0,883 мл) при -78°С и перемешивали в течение 2 ч, поддерживая ту же самую температуру. Полученную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия при 0°С и экстрагировали дихлорметаном (х2). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 25/1) с получением трет-бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата а (478 мг) и трет-бутил-(2S,4S)-2-(2,5-дифтор фенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата b (311 мг).
трет-Бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат (а):
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.91-7.00 (m, 3Н), 5.12-5.30 (m, 2Н), 4.05-4.10 (m, 1H), 3.61-3.71 (m, 1H), 2.71-2.75 (m, 1H), 1.97-2.07 (m, 1Н), 1.21-1.62 (m, 9Н).
трет-Бутил-(2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат (b):
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.87-7.00 (m, 3Н), 5.19-5.32 (m, 2Н), 3.70-3.96 (m, 2Н), 2.40-2.26 (m, 2Н), 1.20-1.65 (m, 9Н).
Стадия G1: (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I3)
К раствору трет-бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (478 мг) в дихлорметане (20 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 1 ч. После определения завершения реакции растворитель удаляли, и в концентрированную смесь добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом, и органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли с получением (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (299 мг) без дополнительной очистки.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.85-7.26 (m, 3Н), 5.20-5.35 (m, 1Н), 4.71-4.75 (m, 1Н), 3.16-3.40 (m, 2Н), 2.58-2.69 (m, 1H), 1.66-1.83 (m, 2Н).
Стадия G2: (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I4)
(2S,4S)-2-(2,5-Дифторфенил)-4-фторпирролидин (167 мг) был получен из соединения b, полученного на стадии F, способом, который описан для стадии G1.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6.89-7.26 (m, 3Н), 5.20-5.35 (m, 1H), 4.41-4.45 (m, 1H), 3.44-3.53 (m, 1H), 3.00-3.12 (m, 1H), 2.57-2.65 (m, 1H), 1.70-2.04 (m, 2Н).
Пример получения 4: 2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин (Соединение I5)
Стадия А: трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-оксопирролидин-1-карбоксилат
К раствору оксалилхлорида (195 мг) в дихлорметане (5 мл) добавляли по каплям раствор DMSO (225 мг) в дихлорметане (1 мл) при -78°С, и реакцию проводили в течение 30 мин, поддерживая ту же самую температуру. Затем в реакционную систему добавляли по каплям раствор трет-бутил-(4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилата (Стадия Е в Примере получения 3, 115 мг) в дихлорметане (3 мл), и реакцию проводили в течение 1,5 ч, поддерживая ту же самую температуру. В реакционную систему добавляли по каплям триэтиламин (0,9 мл) и перемешивали в течение 5 мин. Полученную смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Затем реакционную смесь гасили водой, экстрагировали этилацетатом и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 5/1) с получением трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-оксопирролидин-1-карбоксилата (31 мг).
1
3
Н ЯМР (400 М Гц, CDCl) δ 7.05-6.88 (m, 3Н), 5.4(s, 1H), 4.06 и 3.92 (d, J=19.1, 2Н), 3.20 (dd, J=19.1, 10,6 Гц, 1H), 2.61 (d, J=19,1 Гц, 1H), 1.42 (s, 9Н).
Стадия В: трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин-1-карбоксилат
трет-Бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-оксопирролидин-1-карбоксилат (50 мг) растворяли в дихлорметане (10 мл) и охлаждали до -78°С, в этот раствор добавляли по каплям реагент DAST (0,1 мл), и реакцию проводили в течение 2 ч, поддерживая ту же самую температуру. Затем полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи, а затем гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 15/1) с получением трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин-1-карбоксилата (24 мг).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.08-6.84 (m, 3Н), 5.30-5.20 (m, 1Н), 4.14-3.79 (m, 2Н), 2.98-2.76 (m, 1H), 2.44-2.21 (m, 1H), 1.46-1.25 (m, 9Н).
Стадия С: 2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин
Соединение I5 (288 мг) получали из трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин-1-карбоксилата (460 мг) по методике, описанной для стадии G1 Примера получения 3 (1 мл трифторуксусной кислоты и 15 мл дихлорметана).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.40-7.27 (m, 1Н), 7.11-6.89 (m, 2Н), 4.77-4.60 (m, 1Н), 3.49-3.29 (m, 2Н), 2.78-2.69 (m, 1Н), 2.19-2.05 (m, 1Н), 1.79-1.98 (s, 1H).
Пример получения 5: (3R)-5-(2,5-дифторфенил)-3-гидроксипирролидин (Соединение I6)
Соединение I6 (1,21 г) получали из трет-бутил-(4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилата (2,15 г) по методике, которая описана для стадии G1 Примера получения 3 (12 мл трифторуксусной кислоты и 80 мл дихлорметана).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.37-7.23 (m, 1H), 7.01-6.83 (m, 2Н), 4.77-4.66 (t, J=8,0 Гц, 0.5Н), 4.56-4.42 (m, 1H), 4.37 (t, J=8,0 Гц, 0.5Н), 3.27-3.12 (m, 1Н), 3.10-3.02 (m, 1Н), 2.67-2.57 (m, 0.5Н), 2.34-2.29 (0.5Н), 1.92-1.59 (m, 3Н).
Пример получения 6: 5-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-3-он (Соединение I7)
К раствору трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-оксопирролидин-1-карбоксилата (Стадия А в Примере получения 4, 100 мг) в дихлорметане (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 1 ч. Растворитель удаляли выпариванием при пониженном давлении с получением Соединения I7, которое напрямую использовали на следующей стадии.
Пример 1: этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
Стадия А: этил-(Z)-3-амино-4,4,4-трихлор-2-циано-бутеноат
К раствору этилцианоацетата (41,22 г) и трихлорацетонитрила (100 г) в этаноле (120 мл) добавляли по каплям триэтиламин (2,0 г) при 0°С. После завершения добавления полученную смесь подвергали реакции при 0°С в течение 2 часов и постепенно нагревали до комнатной температуры и непрерывно подвергали реакции в течение 30 минут. После завершения реакции растворитель удаляли концентрированием, и остаток растворяли в дихлорметане и затем очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя дихлорметаном) с получением указанного в заголовке соединения (93,0 г).
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 10.20 (brs, 1H), 6.93 (brs, 1H), 4.30 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 1.33 (t, J=7,2 Гц, 3Н).
Стадия В: этил-3,5-диамино-1Н-пиразол-4-карбоксилат
К раствору этил-(Z)-3-амино-4,4,4-трихлор-2-циано-бутеноата (92,1 г) в DMF (250 мл) медленно по каплям добавляли гидразингидрат (50 г), эту реакционную смесь нагревали до 100°С, и реакцию проводили в течение 1,5 часов при перемешивании. Растворитель удаляли концентрированием, и остаток суспендировали с дихлорметаном и затем оставляли стоять в течение ночи. Полученную смесь фильтровали под разрежением, и твердое вещество собирали, промывали дихлорметаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения (41,0 г).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 10.4 (brs, 1H), 5.35 (brs, 4Н), 4.13 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 1.24 (t, J=7,2 Гц, 3Н). m/z=171[M+1].
Стадия С: этил-2-амино-5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
К раствору этоксида натрия (33,2 г) в этаноле (500 мл) последовательно добавляли этил-3,5-диамино-1Н-пиразол-4-карбоксилат (20,8 г) и 1,3-диметил-пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дион (17,0 г) при комнатной температуре. Затем полученную смесь нагревали до 90°С, и реакцию проводили в течение 12 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и доводили до рН=7 добавлением 1 н. раствора соляной кислоты. Твердое вещество собирали и промывали этанолом с получением указанного в заголовке соединения (18,4 г).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 11.17 (brs, 1H), 8.24 (d, J=8,0 Гц, 1H), 5.93 (s, 2Н), 5.90 (d, J=8,0 Гц, 1H), 4.26 (q, J=7,2 Гц, 2H), 1.27 (t, J=7,2 Гц, 3Н). m/z=223[M+1].
Стадия D: этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат и этил-2-ацетамидо-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
К раствору этил-2-амино-5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (33,6 г) в ацетонитриле (500 мл) добавляли оксихлорид фосфора (110 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь нагревали до 40°С, и реакцию проводили в течение 5 часов. После охлаждения смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и этилацетат. Смешанный раствор расслаивали, и водную фазу экстрагировали однократно этилацетатом. Этилацетатную фазу объединяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением коричневого масла. Затем это коричневое масло очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью этилацетат/петролейный эфир (об./об. = 2/1)) с получением этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (4,5 г) и этил-2-ацетамидо-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (3,0 г).
1
+
3
Этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.29 (d, J=7,2 Гц, 1H), 6.80 (d, J=7,2 Гц, 1H), 5.51 (brs, 2Н), 4.43 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 1.44 (t, J=7,2 Гц, 3H). m/z=241[M+1].
1
+
6
Этил-2-ацетамидо-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат: Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 10.10 (s, 1H), 8.65 (d, J=7,2 Гц, 1H), 6.98 (d, J=7,2 Гц, 1H), 4.47 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2.35 (s, 3Н), 1.47 (t, J=7,2 Гц, 3Н). m/z=283[M+1].
Стадия Е: этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
К раствору этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (300 мг) и (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (275 мг) в н-бутаноле (2,5 мл) добавляли N,N-диметилизопропиламин (324,0 мг), и эту смесь подвергали реакции в герметично закрытой пробирке при 160°С в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали под разрежением при пониженном давлении. Осадок на фильтре промывали этанолом и сушили с получением указанного в заголовке соединения (365 мг).
1
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8.52-8.16 (m, 1Н), 7.41-6.82 (m, 3Н), 6.44-6.28 (m, 1Н), 5.96 (s, 2Н), 5.63-5.20 (m, 1Н), 4.24-3.86 (m, 3Н), 3.62-3.40 (m, 1H), 2.48-2.28 (m, 1Н), 2.08-1.78 (m, 3Н), 1.38-1.01 (m, 3Н).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.81 (m, 1H), 7.12-6.65 (m, 3Н), 6.24-5.50 (m, 1H), 5.45-4.98 (m, 3Н), 4.48-3.46 (m, 4Н), 2.63-2.26 (m, 1H), 2.19-1.92 (m, 3Н), 1.53-1.05 (m, 3Н). m/z=388[M+1].
Пример 2: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
К раствору этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (144 мг) в смеси метанол/вода (об./об. = 1/10, 3,0 мл) добавляли по каплям 4 н. раствор гидроксида натрия (0,95 мл) при комнатной температуре. После завершения добавления по каплям полученную смесь нагревали до 90°С, и реакцию проводили в течение 12 часов. После завершения реакции смесь доводили до примерно рН=7 1 н. раствором соляной кислоты, и осадок собирали, промывали водой и сушили с получением указанного в заголовке соединения (80,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 10.50 (brs, 1H), 8.55-8.15 (m, 1Н), 7.40-6.88 (m, 3Н), 6.51-6.20 (m, 1H), 5.95 (s, 2Н), 5.54-5.15 (m, 1H), 4.05-3.88 (m, 1H), 3.80-3.51 (m, 1H), 2.55-2.35 (m, 1H), 2.11-1.80 (m, 3Н). m/z=360[M+1].
Пример 3: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-метилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамид
2
К раствору (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (20,0 мг), гидрохлорида метиламина (5,0 мг) и HATU (25 мг) в сухом DMF (1,0 мл) добавляли по каплям N,N-диметилизопропиламин (16,9 мг) под в защитной атмосфере N. После завершения добавления по каплям полученную смесь подвергали реакции в течение 5 часов при комнатной температуре. После завершения реакции в смесь добавляли воду и этилацетат и перемешивали в течение 15 минут. Смешанный раствор расслаивали, и водную фазу экстрагировали однократно этилацетатом. Затем этилацетатную фазу объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением светло-желтого остатка, который затем очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью дихлорметан/метанол (об./об. = 25/1)) с получением указанного в заголовке соединения (8,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.13-7.88 (m, 1H), 7.13-6.86 (m, 3Н), 6.75-6.64 (m, 1H), 6.14-5.95 (m, 1H), 5.60-5.20 (m, 3Н), 3.95-3.74 (m, 2Н), 3.10-2.70 (m, 3Н), 2.60-2.43 (m, 1Н), 2.23-1.95 (m, 3Н). m/z=373[M+1].
Пример 4: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамид
К раствору этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин- 1-ил)-пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (310 мг) в метаноле (5,0 мл) добавляли водный аммиак (5,0 мл), и эту смесь подвергали реакции в герметично закрытой пробирке при 150°С в течение 48 часов. Затем в смесь добавляли воду и этилацетат и перемешивали в течение 5 минут. Смешанный раствор расслаивали, и водную фазу экстрагировали однократно этилацетатом. Затем этилацетатную фазу объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением светло-желтого остатка, который затем очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью петролейный эфир/этил ацетат (об./об. = 1/1) с получением указанного в заголовке соединения (45,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.18-7.88 (m, 1H), 7.10-6.67 (m, 3Н), 6.21-5.98 (m, 1H), 5.65-4.98 (m, 5Н), 4.05-3.58 (m, 2Н), 2.60-2.40 (m, 1H), 2.24-1.95 (m, 3Н). m/z=359[M+1].
Пример 5: этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
а
2-(2,5-Дифторфенил)пирролидин (365 мг) и этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат (400 мг) добавляли в н-бутанол, и реакцию проводили в течение ночи в герметично закрытой пробирке при 160°С, а затем очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА = 1/3) с получением указанного в заголовке соединения (607 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.90 (s, 1Н), 7.10-6.70 (m, 3Н), 6.20-5.00 (m, 4Н), 4.23-3.40 (m, 4Н), 2.60-2.30 (m, 1H), 2.18-1.90 (m, 3Н), 1.50-1.33 (m, 3Н). m/z=388[М+1].
а
Пример 6: 2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
В герметично закрываемую пробирку, изготовленную из железа и заполненную раствором этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (200 мг) в н-бутаноле (6 мл), добавляли водный аммиак (10 мл) при комнатной температуре и кипятили с обратным холодильником при 160°С в течение 36 ч при перемешивании. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем прямо в нее добавляли силикагель с получением образца, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (25 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.18-7.83 (m, 1H), 7.15-6.66 (m, 3Н), 6.24-5.56 (m, 2Н), 5.52-4.70 (m, 4Н), 4.06-3.53 (m, 2Н), 2.59-2.42 (m, 1H), 2.27-1.92 (m, 3Н). m/z=359[M+1].
а
Пример 7: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(3-метилуреидо)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
Стадия А: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(((4-нитрофенокси)-карбонил)амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
К раствору этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (337 мг) в THF (15 мл) медленно порциями добавляли 57% гидрид натрия (74 мг) при 0°С, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную систему снова охлаждали 0°С, и в реакционную смесь добавляли пара-нитрофенилхлорформиат (264 мг). Затем реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь затем гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта, который напрямую использовали на следующей стадии без очистки.
a
Стадия В: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(3-метилуреидо)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
Неочищенный продукт этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(((4-нитрофенокси)карбонил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат, полученный на вышеуказанной стадии, растворяли в THF (10 мл) при комнатной температуре. В реакционный раствор добавляли метиламин (4 мл) и перемешивали в течение 10 мин. После завершения реакции в этот раствор добавляли силикагель с получением образца. Затем полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали сухой колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (281 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.91-8.63 (m, 1H), 8.20-8.71 (m, 2Н), 7.19-6.80 (m, 3Н), 6.26 (s, 0.5Н), 5.95-5.62 (m, 1H), 5.15 (s, 0.5Н), 4.52-3.44 (m, 4Н), 2.94 (d, J=7,2 Гц, 3Н), 2.62-2.28 (m, 1Н), 2.19-1.95 (m, 3Н), 1.57-1.42 (m, 2H), 1.37-1.05 (m, 1H). m/z=445[M+1].
a
Пример 8: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метилфенил)-сульфониламино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
a
К раствору этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (389 мг) в пиридине (1,5 мл) добавляли TsCl (475 мг), и эту смесь подвергали реакции при 90°С в течение 8 часов. После завершения реакции добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и этилацетат и перемешивали в течение 15 минут. Смешанный раствор расслаивали, и водную фазу экстрагировали однократно этилацетатом. Этилацетатную фазу объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением светло-желтого остатка, который затем очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюируя смесью дихлорметан/метанол (об./об. = 30/1)) с получением указанного в заголовке соединения (350 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.52-9.31 (m, 1H), 8.28-8.01 (m, 1H), 7.94 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.13-6.60 (m, 3Н), 5.81-5.60 (m, 1Н), 5.20-5.13 (m, 1H), 4.41-4.10 (m, 2Н), 4.05-3.48 (m, 2Н), 2.60-2.40 (m, 1H), 2.20-1.92 (m, 3Н), 1.45-1.12 (m, 6Н). m/z=542[M+1].
a
Пример 9: этил-(R)-2-ацетиламино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
К раствору этил-2-ацетамидо-5-хлорпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (50,0 мг) и (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (40,0 мг) в н-бутаноле (1,5 мл) добавляли N,N-диметилизопропиламин (45,0 мг), и реакцию затем проводили в герметично закрытой пробирке при 160°С в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали под разрежением при пониженном давлении. Осадок на фильтре промывали этанолом и сушили с получением указанного в заголовке соединения (25,0 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 10.13-9.88 (m, 1H), 8.40-8.12 (m, 1H), 7.15-6.65 (m, 3Н), 5.89-5.78 (m, 1H), 5.21-5.11 (m, 1H), 4.48-4.16 (m, 2Н), 4.14-3.51 (m, 2Н), 2.60-2.20 (m, 4Н), 2.18-1.97 (m, 3Н), 1.45-1.17 (m, 3Н). m/z=430[M+1].
а
Пример 10: (2-амино-5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил) (3-гидроксипирролидин-1-ил)метанон
а
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (9,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (20,0 мг) и 3-гидроксипирролидина (8,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.13-7.91 (m, 1H), 7.10-6.60 (m, 3Н), 6.20-5.00 (m, 4Н), 4.56-4.35 (m, 1H), 4.08-3.30 (m, 6Н), 2.51-2.31 (m, 1H), 2.15-1.71 (m, 6Н). m/z=429[M+1].
а
Пример 11: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-гидроксициклогексил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (3,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (13,0 мг) и 4-аминоциклогексанола (6.21 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.40-8.01 (m, 1H), 7.78-7.58 (m, 1H), 7.13-6.58 (m, 3Н), 6.22-6.08 (m, 1H), 5.53-5.50 (m, 2Н), 5.25-5.05 (m, 1H), 4.02-3.51 (m, 4Н), 2.60-2.38 (m, 1Н), 2.20-1.15 (m, 12Н). m/z=457[M+1].
а
Пример 12: 2-амино-5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-((транс)-4-гидроксициклогексил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (12,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (30,0 мг) и (транс)-4-аминоциклогексанола (6,21 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.21-7.85 (m, 1H), 7.80-7.58 (m, 1Н), 7.15-6.58 (m, 3Н), 6.22-6.00 (m, 1H), 5.82-5.05 (m, 3Н), 4.02-3.48 (m, 4Н), 2.60-2.38 (m, 1Н), 2.20-1.10 (m, 12Н). m/z=457[M+1].
а
Пример 13: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(2-гидроксиэтил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (5,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (30,0 мг) и 2-аминоэтанола (7,56 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.80 (m, 1H), 7.55-7.35 (m, 1H), 7.10-6.65 (m, 3Н), 6.20-6.00 (m, 1H), 5.65-5.30 (m, 3Н), 4.00-3.20 (m, 6Н), 2.60-2.40 (m, 1Н), 2.23-1.92 (m, 4Н). m/z=403[M+1].
а
Пример 14: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-фторфенил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (11,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (30,0 мг) и пара-фторанилина (13,98 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.88-9.60 (m, 1H), 9.05-8.80 (m, 1H), 8.21-7.80 (m, 1H), 7.71-7.48 (m, 1H), 7.36-6.53 (m, 5Н), 6.28-6.03 (m, 1H), 5.80-5.55 (m, 1H), 4.18-3.20 (m, 4Н), 2.68-2.38 (m, 1Н), 2.03-1.91 (m, 3Н). m/z=453[M+1].
a
Пример 15: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N,N-диметилпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (8,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (30,0 мг) и N,N-диметиламина (5,67 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.21-7.93 (m, 1H), 7.11-6.60 (m, 3Н), 6.20-5.01 (m, 4Н), 3.98-3.53 (m, 2Н), 3.30-2.60 (m, 6Н), 2.52-2.38 (m, 1H), 2.14-1.96 (m, 3Н). m/z=387[M+1].
а
Пример 16 (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-((1-гидрокси-2-метилпропан-2-ил)окси)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (3,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (13,0 мг) и гидрохлорида 2-(аминоокси)-2-метил-1-пропанола (полученного согласно WO 2010003025, 5,67 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.20-9.01 (m, 1H), 8.18-7.85 (m, 1H), 7.19-6.58 (m, 3Н), 5.80-5.03 (m, 4Н), 4.05-3.20 (m, 4Н), 2.60-2.38 (m, 1H), 2.21-2.00 (m, 3Н), 1.40-1.15 (m, 7Н). m/z=447[M+1].
а
Пример 17: 2-амино-5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-((2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)метокси)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (6,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (13,0 мг) и O-((2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)метил)гидроксиамина (7,94 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.43-9.30 (m, 1H), 8.40-7.80 (m, 1Н), 7.15-6.65 (m, 3Н), 5.78-5.06 (m, 4Н), 4.60-4.32 (m, 1H), 4.12-3.60 (m, 5Н), 2.60-2.40 (m, 1H), 2.28-2.00 (m, 4Н), 1.47 (s, 3Н), 1.40 (s, 3Н). m/z=489[M+1].
a
Пример 18: (R)-2-амино-N-(трет-бутокси)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (6,5 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (13,0 мг) и трет-бутилгидроксиамина (4,81 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.89-9.60 (m, 1H), 8.20-7.85 (m, 1H), 7.15-6.45 (m, 3Н), 5.80-5.02 (m, 3Н), 4.05-3.40 (m, 2Н), 2.60-2.35 (m, 1H), 2.20-1.95 (m, 4Н), 1.30 (s, 9Н). m/z=431[M+1].
а
Пример 19: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(2-(диметиламино)этил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Обращаясь к Примеру 3, указанное в заголовке соединение (25,0 мг) было получено из (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислоты (50,0 мг) и N,N-диметилэтилендиамина (17,5 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.80 (m, 1H), 7.45-7.05 (m, 1Н), 7.01-6.65 (m, 2Н), 5.80-5.51 (m, 1H), 5.48-5.03 (m, 3Н), 4.20-3.40 (m, 5Н), 3.05-2.81 (m, 3Н), 2.66 (s, 6Н), 2.25-1.97 (m, 3Н). m/z=430[M+1].
а
Пример 20: этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(метиламино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
К раствору этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (260,0 мг) в метаноле (3,0 мл) добавляли водный раствор формальдегида (0,2 мл) при комнатной температуре, и в эту смесь добавляли порциями цианоборгидрид натрия (127 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После завершения реакции реакционный раствор вливали в ледяную воду, сделанную слабо основной водным раствором гидроксида натрия, и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (180 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.90 (m, 1H), 7.15-6.60 (m, 3Н), 6.21-6.05 (m, 1H), 5.80-5.55 (m, 1H), 5.21-5.01 (m, 1H), 4.40-3.60 (m, 4Н), 2.99 (m, 3Н), 2.60-2.38 (m, 1H), 2.18-1.95 (m, 3Н), 1.46-1.20 (m, 3Н). m/z=402[M+1].
а
Пример 21: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(метиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
Обращаясь к Примеру 4, указанное в заголовке соединение (20 мг) было получено из этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(метиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (150,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.90 (m, 1H), 7.15-6.65 (m, 4Н), 6.48-6.30 (m, 1Н), 6.15-5.96 (m, 1H), 5.70-4.95 (m, 2H), 4.00-3.58 (m, 2H), 2.97 (d, J=4,4 Гц, 3Н), 2.60-2.40 (m, 1H), 2.20-1.85 (m, 3H). m/z=373[M+1].
a
Пример 22: этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(этиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
a
Обращаясь к Примеру 20, этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат (50,0 мг) подвергали взаимодействию с 40% водным раствором ацетальдегида (0,051 мл) с получением указанного в заголовке соединения (40,0 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.90 (m, 1H), 7.18-6.68 (m, 3Н), 6.21-6.01 (m, 1H), 5.82-5.52 (m, 1H), 5.22-5.01 (m, 1H), 4.50-3.72 (m, 4Н), 3.38 (dq, J=7.2, 5,6 Гц, 2Н), 2.59-2.32 (m, 1H), 2.15-1.90 (m, 3Н), 1.45-1.10 (m, 6Н). m/z=416[M+1].
Пример 23: этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((2-морфолинилэтил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
a
Обращаясь к Примеру 20, указанное в заголовке соединение (4,4 мг) было получено из этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (20,0 мг) и 4-(2,2-диметоксиэтил)морфолина (14,7 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.18-7.80 (m, 1H), 7.15-6.60 (m, 3Н), 6.55-6.38 (m, 1Н), 5.85-5.50 (m, 1H), 5.22-5.00 (m, 1H), 4.40-3.51 (m, 10Н), 3.08-2.30 (m, 7Н), 2.20-1.95 (m, 3Н), 1.55-1.30 (m, 3Н). m/z=501[M+1].
а
Пример 24: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
К твердому этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилату (829 мг) в круглодонной колбе добавляли 48% серную кислоту (20 мл) при комнатной температуре и кипятили с обратным холодильником при 100°С в течение 12 ч при перемешивании. После завершения реакции реакционный раствор вливали в ледяную воду, сделанную  водным раствором гидроксида натрия, и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (376 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.17-8.15 (d, J=6,8 Гц, 1H), 7.31-7.25 (m, 1H), 7.15-7.10 (m, 1H), 6.86-6.82 (m, 1Н), 5.95-5.69 (m, 1Н), 5.37-5.26 (m, 1H), 5.17 (brs, 2Н), 5.11 (brs, 1H), 3.86 (t, J=8,4 Гц, 1H), 3.60-3.47 (m, 1H), 2.46-2.33 (m, 1H), 2.02-1.93 (m, 1H), 1.91-1.83 (m, 2Н). m/z=316[M+1].
а
Пример 25: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
К твердому этил-(R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилату (2,0 г) в круглодонной колбе добавляли 48% серную кислоту (24 мл) и кипятили с обратным холодильником при 100°С в течение 12 ч при перемешивании. После завершения реакции реакционный раствор вливали в ледяную воду, сделанную  водным раствором гидроксида натрия, и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,354 г).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.89 (d, J=7,6 Гц, 1Н), 7.06-7.00 (m, 1H), 6.93-6.87 (m, 1H), 6.75-6.71 (m, 1H), 5.68 (brs, 1H), 5.46 (brs, 1H), 5.24 (brs, 1H), 4.22-3.63 (m, 4Н), 3.50-2.41 (m, 1H), 2.05-1.92 (m, 3Н). m/z=316[M+1].
a
Пример 26: этил-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)оксазол-4-карбоксилат
а
Стадия А: этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
К раствору этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (3,0 г) и 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (2,51) г) в н-бутаноле (20 мл) добавляли DIEA (4,2 мл) при комнатной температуре, и реакционную смесь нагревали до 160°С и кипятили с обратным холодильником при этой температуре в течение 8 ч при перемешивании. После завершения реакции полученную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления н-бутанола, и в смесь добавляли силикагель для получения образца. Затем полученную смесь очищали сухой колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (4,56 г), которое напрямую использовали на следующей стадии.
Стадия В: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
К раствору этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (2,0 г), полученного на Стадии А, в THF (20 мл) медленно порциями добавляли 57% гидрид натрия (1,98 г) при 0°С и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную систему снова охлаждали до 0°С. Затем в реакционную смесь добавляли пара-метоксибензилхлорид (4,2 мл), нагревали смесь до 90°С и кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч. Реакционную смесь гасили путем вливания в нее ледяной воды, и затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,366 г).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.05-7.93 (m, 1H), 7.35-7.24 (m, 2Н), 7.09-6.98 (m, 1H), 6.95-6.81 (m, 3Н), 6.79-6.70 (m, 1H), 6.56-6.41 (m, 1H), 6.23-5.52 (m, 1H), 5.28-5.06 (m, 1H), 4.49 (d, J=5,6 Гц, 2Н), 4.42-4.18 (m, 2Н), 4.13-3.92 (m, 2Н), 3.78 (s, 3Н), 2.61-2.34 (m, 1H), 2.07-1.95 (m, 3Н), 1.53-1.18 (m, 3Н). m/z=508[M+1].
a
Стадия С: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
К раствору этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензил-амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (900 мг) в н-бутаноле (10 мл) в герметично закрываемой пробирке, изготовленной из железа, добавляли водный аммиак (10 мл) при комнатной температуре, и смесь перемешивали и кипятили с обратным холодильником при 160°С в течение 36 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем прямо в нее добавляли силикагель для получения образца, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (143 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.18-7.94 (m, 1H), 7.31-7.25 (m, 2Н), 7.12-6.98 (m, 1Н), 6.94-6.90 (m, 1H), 6.87-6.74 (m, 3Н), 6.72-6.66 (m, 1H), 6.20-5.93 (m, 1Н), 5.81-4.65 (m, 3Н), 4.49 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 4.02-3.81 (m, 5Н), 2.58-2.39 (m, 1Н), 2.26-1.97 (m, 3Н). m/z=479[M+1].
а
Стадия D: этил-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)оксазол-4-карбоксилат
a
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензил-амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамида (20 мг) в THF (3 мл) добавляли 80% этил-3-бромпируват (12 мг) и бикарбонат натрия (11 мг) при комнатной температуре и затем нагревали до 90°С и кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем прямо в нее добавляли силикагель для получения образца, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2,12 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.21-8.08 (m, 1H), 8.06-7.95 (m, 1H), 7.34 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7.07-6.96 (m, 1H), 6.93-6.64 (m, 5Н), 6.40-4.83 (m, 2Н), 4.58 (d,J=10,0 Гц, 2Н), 4.36 (dd, J=14,4 Гц, J=7,2 Гц, 2Н), 4.11 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 3.78 (s, 3Н), 2.61-2.38 (m, 1H), 2.16-1.99 (m, 3Н), 1.42-1.05 (m, 3Н). m/z=575[M+1].
а
Пример 27: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)-пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
Стадия А: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
Обращаясь к методике эксперимента на стадии D Примера 26, этил-3-бромпируват заменяли 1-бромацетоном с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (5 мг), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
a
Стадия В: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амина (5 мг) в DCM (2 мл) медленно добавляли трифторацетат (0,5 мл) при 0°С и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления трифторуксусной кислоты и дихлорметана. Остаток разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2,65 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.11-7.93 (m, 1H), 7.42-7.31 (m, 1Н), 7.09-6.95 (m, 1H), 6.90-6.65 (m, 2Н), 6.23-5.02 (m, 4Н), 4.20-3.42 (m, 2Н), 2.58-2.43 (m, 1H), 2.20 (s, 3Н), 2.16-1.92 (m, 3Н). m/z=397[M+1].
a
Пример 28: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
Стадия А: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-тиокарбоксамид
а
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензил-амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамида (200 мг) в толуоле (12 мл) добавляли реагент Лавессона (102 мг) при комнатной температуре. Смесь нагревали до 100°С и кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч в защитной атмосфере газа азота и затем концентрировали при пониженном давлении. Силикагель добавляли прямо в смесь для получения образца, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (95 мг), которое напрямую использовали на следующей стадии.
а
Стадия В: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
Обращаясь к методике эксперимента на стадии D Примера 26, этил-3-бромпируват заменяли 1-бромацетоном с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (34 мг), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
a
Стадия С: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
а
Обращаясь к методике эксперимента на стадии В Примера 27, 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин заменяли 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амином с получением указанного в заголовке соединения (10 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.20-7.85 (m, 1H), 7.08-6.99 (m, 1Н), 6.94-6.41 (m, 3Н), 6.26-5.40 (m, 3.5Н), 5.15-4.89 (m, 0.5Н), 4.30-3.21 (m, 2Н), 2.61-2.28 (m, 4Н), 2.16-1.92 (m, 3Н). m/z=413[M+1].
а
Пример 29: этил-2-(2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоксилат
Стадия А: этил-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоксилат
Обращаясь к методике эксперимента на стадии D Примера 26, 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамид заменяли 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-тиокарбоксамидом (115 мг) с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (75 мг), которое напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
а
Стадия В: этил-2-(2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоксилат
а
Обращаясь к методике эксперимента на стадии В Примера 27, 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-амин заменяли этил-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоксилатом (30 мг) с получением указанного в заголовке соединения (13 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.23-7.81 (m, 2Н), 7.13-7.00 (m, 1H), 6.96-6.81 (m, 1Н), 6.72 (brs, 1Н), 6.28-5.42 (m, 3Н), 5.17-5.02 (m, 1Н), 4.39 (dd, J=13,2 Гц, J=6,4 Гц, 2Н), 4.19-3.46 (m, 2Н), 2.50 (m, 1H), 2.18-1.94 (m, 3Н), 1.47-1.22 (m, 3Н). m/z=471[M+1].
а
Пример 30: (2-(2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-ил)((S)-3-гидроксипирролидин-1-ил)метанон
a
Стадия А: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)-амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоновая кислота
а
К твердому этил-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил) амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоксилату (45 мг) в круглодонной колбе добавляли смесь метанол/вода (об./об. = 3/1, 8 мл) при комнатной температуре и затем охлаждали до 0°С. Добавляли гидроксид натрия (15 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. После завершения реакции полученную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления метанола, подкисляли соляной кислотой и затем экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (50 мг), который напрямую использовали на следующей стадии без очистки.
a
Стадия В: (2-(2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-ил)((S)-3-гидроксипирролидин-1-ил)метанон
а
Неочищенную 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-((4-метоксибензил)амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-ил)тиазол-4-карбоновую кислоту (50 мг), полученную на вышеуказанной стадии, (S)-3-гидроксипирролидин (9 мг) и DIEA (45 мг) растворяли в DMF (5 мл) при комнатной температуре. В реакционную смесь добавляли HATU (35 мг) при 0°С и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Затем в смесь добавляли воду, чтобы погасить реакцию. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом, и органическую фазу промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта конденсации, который затем растворяли в DCM. Добавляли TFA (1,0 мл), и реакцию проводили в течение 3 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (15 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.25-7.59 (m, 2Н), 7.05 (brs, 1H), 6.95-6.56 (m, 2Н), 6.18-5.96 (m, 0.5Н), 5.93-5.42 (m, 1Н), 5.24-5.01 (m, 0.5Н), 4.55 (brs, 1H), 4.31-3.38 (m, 7Н), 2.62-2.41 (m, 1H), 2.22-1.94 (m, 5Н). m/z=512[M+1].
а
Пример 31: 2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-тиоамид
а
Стадия А: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-тиокарбоксамид
а
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензил-амино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамида (200 мг) в толуоле (12 мл) добавляли реагент Лавессона (102 мг) при комнатной температуре. Смесь нагревали до 100°С и кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч в защитной атмосфере газа азота и затем концентрировали при пониженном давлении. Силикагель добавляли прямо в смесь для получения образца, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (95 мг), которое напрямую использовали на следующей стадии.
а
Стадия В: 2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-тиоамид
a
а
Обращаясь к методике эксперимента на стадии В Примера 27, 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(4-метоксибензил)-3-(4-метилоксазол-2-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин заменяли 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-2-(4-метоксибензиламино)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-тиокарбоксамидом (30 мг) с получением указанного в заголовке соединения (14 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.64-9.38 (m, 0.4Н), 8.75 (brs, 0.6Н), 8.17-7.92 (m, 1Н), 7.10-6.81 (m, 3Н), 6.75-6.03 (m, 3Н), 5.80-5.63 (m, 0.5Н), 5.57-5.40 (m, 1Н), 5.25-5.09 (m, 0.5Н), 4.02-3.79 (m, 2Н), 2.53 (m, 1H), 2.42-2.96 (m, 3Н). m/z=375[M+1].
а
Пример 32: (R)-3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амина (180 мг) в трихлорметане медленно добавляли NBS (122 мг) при перемешивании в ледяной бане. После завершения добавления полученную смесь подвергали реакции в течение 30 минут и затем гасили соответствующим количеством воды и экстрагировали дихлорметаном. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и полученный остаток очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (114 мг).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.85 (d, J=7,0 Гц, 1H), 7.05-7.00 (m, 1H), 6.92-6.88 (m, 1H), 6.78-6.74 (m, 1H), 5.70 (brs, 1H), 5.30 (brs, 1H), 4.20-3.68 (m, 4H), 2.47 (m, 1H), 2.06-2.02 (m, 3H). m/z=394[M+1]+.
Пример 33: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(3-морфолинилфенил)-пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-амин
а
Стадия А: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
Обращаясь к Примеру 9, (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин заменяли 2-(2,5-дифторфенил)пирролидином с получением этил-2-ацетиламино-5-(2-(2,5-дифтор-фенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата.
a
Этил-2-ацетиламино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат (822 мг) добавляли к 48% концентрированной серной кислоте при перемешивании в ледяной бане. После завершения добавления полученную смесь нагревали до 100°С и реакцию проводили в течение 6 ч, а затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционный раствор вливали в лед, доводили до примерно рН=8 1 н. раствором гидроксида натрия и затем экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (483 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.91 (d, J=7,6 Гц, 1H), 7.07-7.01 (m, 1H), 6.92-6.88 (m, 1H), 6.75-6.70 (m, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.47 (s, 1Н), 5.25 (brs, 1H), 3.92 (m, 1Н), 3.75 (m, 1Н), 2.45 (m, 1H), 2.12-1.92 (m, 3Н). m/z=316[М+1].
а
Стадия В: 3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
a
а
Обращаясь к Примеру 32, (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин заменяли 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амином с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 73%.
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.85 (d, J=7,0 Гц, 1H), 7.06-7.01 (m, 1H), 6.92-6.87 (m, 1H), 6.78-6.74 (m, 1H), 5.70 (brs, 1H), 5.30 (brs, 1H), 4.21-3.68 (m, 4Н), 2.46 (m, 1H), 2.06-2.01 (m, 3Н). m/z=394[М+1].
а
Стадия С: 3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино
a
2
К раствору 3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амина (440 мг) и триэтиламина (932 мкл) в дихлорметане медленно по каплям добавляли (Вос)O (1,07 мл) при перемешивании в ледяной бане и затем добавляли DMAP (13,6 мг). После завершения добавления полученную смесь нагревали до комнатной температуры, реакцию проводили в течение 3 ч, и затем в нее добавляли подходящее количество воды. Смесь затем экстрагировали дихлорметаном. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и остаток выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (379 мг).
+
m/z=494[М+1].
а
Стадия D: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(3-морфолинилфенил)-пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
К раствору 3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино (30 мг) в смеси DME/вода (об./об. = 1/1) добавляли (3-морфолинилфенил)бороновую кислоту (15 мг), фосфат калия (26 мг) и тетра(трифенилфосфин)палладий (1,4 мг) в герметичном трубчатом реакторе. Реакционную смесь продували газом азотом, нагревали до 110°С, и реакцию проводили в течение ночи. Затем в нее добавляли подходящее количество воды, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и остаток очищали и выделяли тонкослойной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,52 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.22 (brs, 1Н), 7.05 (m, 2Н), 6.91-6.89 (m, 2Н), 6.77-6.75 (m, 2Н), 5.83 (brs, 1H), 5.33 (brs, 1H), 4.53-4.14 (m, 2Н), 4.00-3.63 (m, 5Н), 3.19 (m, 4Н), 2.44 (m, 1H), 2.08-2.01 (m, 3Н). m/z=477[М+1].
а
Пример 34: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин
а
Стадия А: (R)-3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино
а
a
Обращаясь к стадии С в Примере 33, 3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амин заменяли (R)-3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-амином с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 56%.
m/z=494[М+1]+.
Стадия В: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино
К раствору (R)-3-бром-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино (40 мг) в смеси 1,4-диоксан/вода (об./об. = 4/1) добавляли пинаколовый эфир 1-метил-4-пиразол-бороновой кислоты (25 мг), карбонат калия (22 мг) и тетра(трифенилфосфин)палладий (4,6 мг) в микроволновом реакторе. Реакционную смесь продували газом азотом, и реакцию проводили под воздействием микроволнового излучения при 120°С в течение 1 ч. Затем в смесь добавляли подходящее количество воды, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и остаток очищали и выделяли тонкослойной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (30 мг).
m/z=496[М+1]+.
Стадия С: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-амин
а
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-2-трет-бутоксикарбониламино (30 мг) в дихлорметане медленно по каплям добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл) при перемешивании в ледяной бане. После завершения добавления по каплям смесь нагревали до комнатной температуры, и реакцию проводили в течение 3 ч. Растворитель и трифторуксусную кислоту удаляли дистилляцией при пониженном давлении. После добавления подходящего количества воды полученную смесь доводили до примерно рН=8 насыщенным раствором карбоната натрия и затем экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и остаток очищали и выделяли тонкослойной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (14 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.11 (s, 1H), 7.12-7.05 (m, 1H), 6.94-6.92 (m, 1H), 6.80-6.75 (m, 1H), 5.96 (brs, 1H), 5.55 (brs, 1H), 4.28 (brs, 2Н), 4.02-3.63 (m, 5Н), 2.59-2.41 (m, 1Н), 2.11-2.05 (m, 3Н). m/z=396[М+1].
a
Пример 35: этил-2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
(2R,4S)-2-(2,5-Дифторфенил)-4-фторпирролидин (108 мг), этил-2-амино-5-хлорпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат (155 мг) и N,N-диизопропилэтиламин (129 мг) растворяли в н-бутаноле, и реакцию проводили при 160°С в течение ночи в герметично закрытой пробирке. После определения завершения реакции растворитель удаляли. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА=3/1) с получением указанного в заголовке соединения (142 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.98-7.84 (m, 1H), 7.04-6.94 (m, 3Н), 5.70-5.90 (m, 1Н), 5.24-5.50 (m, 4Н), 4.85-4.45 (m, 1Н), 4.42-4.21 (m, 2Н), 4.11-3.93 (m, 1Н), 2.85-3.10 (m, 1Н), 2.04-2.30 (m, 1Н), 1.40 (m, 3Н). m/z=406[M+1].
а
Пример 36: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
К раствору этил-2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фтор пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (142 мг) в н-бутаноле добавляли водный аммиак (2 мл), небольшое количество хлорида аммония и каталитическое количество йодида тетрабутиламмония, и эту реакционную смесь перемешивали при 160°С в течение 30 ч в герметично закрытой пробирке, изготовленной из железа. Затем растворитель удаляли, и полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (об./об.: РЕ/ЕА=1,5/1) с получением указанного в заголовке соединения (25 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.23 (d, J=12,8 Гц, 1Н), 8.02 (d, J=6,4 Гц, 1Н), 7.02-7.08 (m, 1Н), 6.92-6.96 (m, 1Н), 6.82-6.86 (m, 1Н), 5.93 (brs, 1Н), 5.70-5.20 (m, 5Н), 4.35-4.10 (m, 1Н), 4.09-3.97 (m, 1Н), 3.02-2.93 (m, 1Н), 2.28-2.10 (m, 1Н). m/z=377[M+1].
а
Пример 37: этил-2-амино-5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
Обращаясь к Примеру 35, (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I3) заменяли (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидином (Соединение I4) с получением указанного в заголовке соединения (70 мг).
1
Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8.02-7.98 (m, 1Н), 7.14-6.72 (m, 3Н), 5.83 (m, 1Н), 5.55-5.20 (m, 4Н), 4.40-4.28 (m, 3Н), 4.15-3.95 (m, 1Н), 2.80-2.60 (m, 1Н), 2.56-2.47 (m, 1Н), 1.30-1.45 (m, 3Н). m/z=406 [М+1]+.
а
Пример 38: этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
Обращаясь к Примеру 35, (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (Соединение I3) заменяли 2-(2,5-дифторфенил)-4,4-дифторпирролидином (Промежуточное соединение I5) с получением указанного в заголовке соединения (1,3 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.15-7.98 (m, 1Н), 7.14-6.85 (m, 3Н), 5.83-5.79 (m, 1Н), 5.58-5.20 (m, 3Н), 4.45-4.20 (m, 4Н), 3.20-3.00 (m, 1Н), 2.65-2.45 (m, 1Н), 1.30-1.45 (m, 3Н). m/z=424[M+1].
а
Пример 39: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N-метилпиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Этил-2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат (50 мг) помещали в герметичный трубчатый реактор и затем добавляли раствор метиламина в метаноле (2 мл) и перемешивали при 100°С в течение 40 ч. Растворитель удаляли выпариванием при пониженном давлении, и полученный остаток очищали тонкослойной хроматографией (ЕА) с получением указанного в заголовке соединения (30 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.04 (d, J=6,0 Гц, 1Н), 7.10-6.81 (m, 3Н), 6.10-5.80 (m, 1Н), 5.70-5.20 (m, 4Н), 4.40-3.90 (m, 2Н), 3.02-2.93 (m, 5Н), 2.23-2.04 (m, 1H). m/z=391[M+1].
a
Пример 40: (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N(2-гидроксиэтокси)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
Обращаясь к Примеру 3, гидрохлорид метиламина заменяли 1-[2-(аминоокси)этокси]этиленом, и полученную смесь промывали 1 н. раствором соляной кислоты во время экстракции и окончательно выделяли тонкослойной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения.
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.36 (s, 1Н), 8.11 (s, 1Н), 7.11-7.05 (m, 1Н), 6.97-6.93 (m, 1Н), 6.75-6.72 (m, 1Н), 6.15 (brs, 1Н), 5.54 (brs, 1Н), 5.33 (s, 2Н), 4.01-3.81 (m, 7Н), 2.53 (m, 1Н), 2.30-1.99 (m, 3Н). m/z=419[М+1].
а
Пример 41: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил
а
К раствору 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамида (45 мг) и триэтиламина (100 мкл) в дихлорметане (10 мл) добавляли по каплям раствор трифторуксусного ангидрида (63 мг) в дихлорметане (2 мл) при перемешивании в ледяной бане. Реакционную смесь подвергали реакции в ледяной бане в течение 1 часа и затем гасили насыщенным раствором карбоната натрия, экстрагировали дихлорметаном и затем очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (22 мг).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8.35 (s, 1Н), 7.24-7.12 (m, 3Н), 6.40 (brs, 0.5H), 6.10 (s, 2H), 5.91 (brs, 0.5H), 5.51 (d, J=52,4 Гц, 1H), 5.36 (m, 1H), 4.11-4.01 (m, 2H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.30-2.19 (m, 1H). m/z=359[M+1].
а
Пример 42: этил-2-амино-5-((4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
Обращаясь к стадии Е Примера 1, (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин заменяли (3R)-5-(2,5-дифторфенил)-3-гидроксипирролидином (Соединение I6) с получением указанного в заголовке соединения (выход: 66%).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.97 (s, 0.5Н), 7.88 (d, J=7,4 Гц, 0.5Н), 7.08-7.02 (m, 1.5Н), 6.97-6.83 (m, 1.5H), 5.80 (d, J=7,2 Гц, 1H), 5.41 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.70 (d, J=17,8 Гц, 1H), 4.46-4.28 (m, 2H), 4.17-3.97 (m, 2H), 2.81-2.62 (m, 1H), 2.47 (brs, 0.5H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.76 (brs, 0.5H), 1.40 (t, J=7,0 Гц, 3Н). m/z=404 [M+1].
a
Пример 43: этил-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)-4-оксопирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
Обращаясь к стадии Е Примера 1, (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин заменяли 5-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-3-оном (Соединение I7) с получением указанного в заголовке соединения (выход: 4%).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.11 (d, J=7,4 Гц, 1Н), 7.29-7.27 (m, 1Н), 7.12-6.86 (m, 2Н), 5.99 (d, J=7,4 Гц, 1Н), 5.90 (m, 1Н), 5.42 (s, 2Н), 4.43 (q, J=7,0 Гц, 2Н), 4.31-4.07 (m, 2Н), 3.31 (dd, J=18.6, 10,6 Гц, 1Н), 2.79 (d, J=18,6 Гц, 1Н), 1.46 (t, J=7,0 Гц, 3Н). m/z=402 [M+1].
a
Пример 44: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил
Стадия А: трет-бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)-пирролидин-1-карбоксилат
К раствору трифенилфосфина (4,55 г) в тетрагидрофуране (40 мл) добавляли по каплям диизопропилазодикарбоксилат (3,51 г) при перемешивании в ледяной бане. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение примерно 30 минут, и большое количество твердого вещества выпало в осадок. В реакционный раствор последовательно добавляли пара-нитробензойную кислоту (2,66 г), и трет-бутил-(4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидрокси пирролидин-1-карбоксилат (4,33 г, который был получен на стадии Е в Примере 3) по каплям. Полученную смесь подвергали реакции при комнатной температуре в течение 3 часов, гасили водой, экстрагировали дихлорметаном и затем очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2.84 г).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.35 (d, J=2,0 Гц, 2Н), 8.23 (d, J=2,0 Гц, 2Н), 7.08-6.89 (m, 3Н), 5.59 (s, 1Н), 5.38-5.12 (m, 1Н), 4.15-3.83 (m, 2Н), 2.74 (q, J=8,0 Гц, 1Н), 2.33-2.18 (m, 1Н), 1.53-1.15 (m, 9Н). m/z=449[M+1].
Стадия В: гидрохлорид (3S,5R)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата
К раствору трет-бутил-(2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)-пирролидин-1-карбоксилата (0,74 г) в диоксане (3 мл) добавляли по каплям концентрированную соляную кислоту (0,7 мл) при перемешивании в ледяной бане, затем нагревали до 80°С, и реакцию проводили в течение 20 мин при перемешивании. Полученную смесь концентрировали для удаления растворителя, и полученный неочищенный продукт (0,64 г) напрямую использовали на следующей стадии.
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 10.71 (brs, 1Н), 9.75 (brs, 1Н), 8.38-8.35 (m, 4Н), 7.70-7.60 (m, 1Н), 7.44-7.33 (m, 2Н), 5.73 (t, J=4,0 Гц, 1Н), 5.13 (q, J=6,4 Гц, 1Н), 3.84 (dd, J=4.0, 8,0 Гц, 1Н), 3.60 (d, J=12 Гц, 1Н), 2.80-2.60 (m, 2Н). m/z=349[M+1].
а
Стадия С: (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат
а
Гидрохлорид (3S,5R)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата (0,64 г), диизопропилэтиламин (1,1 г) и N,N-диметилформамид (5 мл) добавляли в сухой одногорлый сосуд на 100 мл и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем туда добавляли бензотриазол-1-трис(триметиламино)-трифторфосфат (0,88 г), и реакционная система превращалась из мутной в прозрачную. В нее добавляли 2-амино-5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил (0,35 г, который был получен, обращаясь к стадии С Примера 1, с заменой этил-3,5-диамино-1H-пиразол-4-карбоксилата 3,5-диамино-1Н-пиразол-4-карбонитрилом).
Вышеуказанный раствор поддерживали при температуре 100°С, и реакцию проводили в течение 2 ч. Растворитель удаляли дистилляцией при пониженном давлении, и остаток растворяли дихлорметаном и затем очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,59 г)
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.30 (d, J=4,0 Гц, 2Н), 8.20 (d, J=4,0 Гц, 2Н), 7.93 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7.14-6.84 (m, 3Н), 6.00-5.30 (m, 3Н), 4.45 (brs, 3Н), 4.24 (dd, J=4, 12 Гц, 1Н), 3.00-2.85 (m, 1Н), 2.56-2.44 (m, 1H). m/z=506[M+1].
a
Стадия D: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил
а
К раствору (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата (0,51 г) в метаноле (3 мл) добавляли по каплям 4 н. раствор гидроксида натрия (1,5 мл) при перемешивании в ледяной бане, и затем перемешивали при комнатной температуре в течение примерно 1 часа. Полученную смесь делали нейтральной добавлением 4 н. соляной кислоты в ледяной бане, экстрагировали дихлорметаном и затем очищали и выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,32 г).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8.40-8.16 (m, 1Н), 7.35-6.95 (m, 3Н), 6.18-5.92 (m, 2H), 5.78 (brs, 1Н), 5.42-5.12 (m, 2H), 4.50-4.35 (m, 1Н), 4.02-3.80 (m, 1.5H), 3.45 (brs, 0.5H), 2.43-2.28 (m, 1H), 2.08-1.93 (m, 1H). m/z=357[M+1].
a
Пример 45: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Стадия A: (3S,5R)-1-(2-амино-3-карбамоил-пиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат
+
Указанное в заголовке Стадии С Примера 44 соединение (50 мг) суспендировали в концентрированной 98% серной кислоте (1,5 мл), перемешивали, и реакцию проводили при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционный раствор вливали в ледяную воду, и рН системы доводили до слабоосновного добавлением 4 н. раствора гидроксида натрия. Полученную смесь затем экстрагировали дихлорметаном, сушили и фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта (43 мг), который напрямую использовали на следующей стадии. m/z=524[M+1].
a
Стадия В: 2-амино-5-((2R,4s)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
а
Обращаясь к стадии D Примера 44, (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат заменяли (3S,5R)-1-(2-амино-3-карбамоил-пиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-3-ил-4-нитробензоатом с получением указанного в заголовке соединения (выход: 66%).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8.18-7.95 (m, 1Н), 7.12-6.80 (m, 3Н), 6.38-6.20 (m, 1Н), 5.48-5.37 (m, 1Н), 4.58-4.45 (m, 1Н), 4.02-3.85 (m, 1Н), 3.70-3.55 (m, 1Н), 2.55-2.24 (m, 1Н), 2.11-1.98 (m, 1Н). m/z=375[M+1].
а
Пример 46: 2-амино-5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил
Стадия А: гидрохлорид (3S,5S)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата
Обращаясь к стадии В Примера 44, трет-бутил-(2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)пирролидин-1-карбоксилат заменяли трет-бутил-(2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)пирролидин-1-карбоксилатом (который был получен на стадии А Примера 44) с получением указанного в заголовке соединения (выход: 100%).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) s 10.71 (brs, 1Н), 10.10 (brs, 1Н), 8.38-8.35 (m, 4Н), 7.780-7.69 (m, 1Н), 7.44-7.35 (m, 2H), 5.75 (s, 1H), 5.04 (t, J=8,0 Гц, 1H), 3.88-3.65 (m, 2H), 3.02-2.95 (m, 1H), 2.51-2.38 (m, 1H). m/z=349[M+1].
а
Стадия В: (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат
+
Обращаясь к стадии С Примера 44, гидрохлорид (3S,5R)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата заменяли гидрохлоридом (3S,5S)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоата с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (выход: 60%), который напрямую использовали на следующей стадии. m/z=506 [М+1].
а
Стадия С: 2-амино-5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбонитрил
а
a
Обращаясь к стадии D Примера 44, (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат заменяли (3S,5S)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-3-ил-4-нитробензоатом с получением указанного в заголовке соединения (выход: 70%).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8.13-7.92 (m, 1Н), 7.11-6.81 (m, 3Н), 6.33-5.60 (m, 1Н), 5.55-5.15 (m, 1Н), 4.56-4.48 (m, 1Н), 3.95-3.60 (m, 2Н), 2.71-2.55 (m, 1Н), 2.16-1.95 (m, 1Н). m/z=357[M+1].
a
Пример 47: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Стадия A: (3S,5S)-1-(2-амино-3-карбамоил-пиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат
а
a
+
Обращаясь к стадии А Примера 45, (3S,5R)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат заменяли (3S,5S)-1-(2-амино-3-цианопиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)-пирролидин-3-ил-4-нитробензоатом с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (выход: 75%), который напрямую использовали на следующей стадии. m/z=524[M+1].
а
Стадия В: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
a
Обращаясь к стадии D Примера 44, (3S,5R)-1-(2-амино-3-карбамоил-пиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоат заменяли (3S,5S)-1-(2-амино-3-карбамоил-пиразоло[1,5-]пиримидин-5-ил)-5-(2,5-дифторфенил)пирролидин-3-ил-4-нитробензоатом с получением указанного в заголовке соединения (выход: 80%).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.10-7.98 (m, 1Н), 7.15-6.90 (m, 3Н), 6.08-5.78 (m, 1Н), 5.61-4.92 (m, 5Н), 4.80-4.71 (m, 1Н), 4.05-3.84 (m, 2Н), 2.80-2.71 (m, 1Н), 2.25-2.13 (m, 1Н), 1.80 (brs, 1Н). m/z=375 [М+1].
a
Пример 48: этил-2-амино-5-((4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
а
Стадия А: этил-2-амино-5-((4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)-пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
a
К раствору этил-2-амино-5-((4R)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (50 мг, Пример 42), пара-нитробензойной кислоты (41 мг) и диизопропилазодикарбоксилата (47 мкл) в дихлорметане медленно добавляли трифенилфосфин (81 мг) при перемешивании в ледяной бане. Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры, и реакцию проводили в течение ночи. Полученную смесь концентрировали дистилляцией при пониженном давлении, и остаток выделяли колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (55 мг).
+
m/z=553[М+1].
a
Стадия В: этил-2-амино-5-((4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилат
a
К раствору этил-2-амино-5-((4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-(4-нитробензоилокси)-пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (200 мг) в метаноле медленно по каплям добавляли раствор гидроксида натрия (1 н., 2 мл) при перемешивании в ледяной бане. Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры, и реакцию проводили в течение 2 часов. Затем растворитель метанол удаляли дистилляцией при пониженном давлении, и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия, концентрировали дистилляцией при пониженном давлении, и остаток затем выделяли и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (103 мг).
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7.99 (s, 1Н), 7.01 (m, 3Н), 5.83 (brs, 1Н), 5.32-5.30 (m, 3Н), 4.71 (m, 1Н), 4.34-4.02 (m, 4Н), 2.75-2.69 (m, 1Н), 2.24-2.05 (m, 1Н), 1.40 (t, J=7,0 Гц, 3Н). m/z=404[M+1].
а
Пример 49: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N-(2-гидроксиэтил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
Стадия А: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновая кислота
а
Обращаясь к Примеру 2, указанное в заголовке соединение (160 мг) было получено из этил-2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксилата (300 мг, который был получен в Примере 35).
1
+
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 10.98 (brs, 1Н), 8.25 (s, 1Н), 7.33-6.89 (m, 3Н), 6.24 (brs, 0.5Н), 5.89 (s, 2Н), 5.66 (brs, 0.5Н), 5.39 (d, J=53,4 Гц, 1H), 5.25-5.23 (m, 1H), 4.10-4.01 (m, 2H), 2.72 (m, 1H), 2.29-1.99 (m, 1H). m/z=378[M+1].
а
Стадия В: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N-(2-гидроксиэтил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
а
Обращаясь к Примеру 3, (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновую кислоту заменяли 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислотой (100 мг), и гидрохлорид метиламина заменяли этаноламином (160 мг) с получением указанного в заголовке соединения (18 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.03 (s, 1Н), 7.53 (brs, 1Н), 7.13-6.79 (m, 3Н), 5.96 (brs, 1Н), 5.49-5.30 (m, 4Н), 4.14-3.92 (m, 2Н), 3.78-3.73 (m, 2Н), 3.55-3.53 (m, 2Н), 2.98-2.94 (m, 1Н), 2.31-1.99 (m, 1Н). m/z=421[М+1].
а
Пример 50: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N-(2-гидроксиэтокси)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
a
Обращаясь к Примеру 3, (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновую кислоту и гидрохлорид метиламина заменяли 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислотой и 1-[2-(аминоокси)этокси]этиленом соответственно, и смесь промывали 1 н. соляной кислотой во время экстракции и окончательно выделяли тонкослойной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения.
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9.23 (brs, 1Н), 8.04 (s, 1Н), 7.18-6.78 (m, 3Н), 6.00 (brs, 1Н), 5.50-5.11 (m, 4Н), 4.10-4.00 (m, 4Н), 3.88-3.71 (m, 2Н), 2.98-2.96 (m, 1Н), 2.22-2.01 (m, 1Н). m/z=437[М+1].
а
Пример 51: 2-амино-N-циклопропил-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
a
а
Обращаясь к Примеру 3, (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновую кислоту заменяли 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислотой, и гидрохлорид метиламина заменяли циклопропиламином с получением указанного в заголовке соединения.
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.03 (d, J=5,2 Гц, 1Н), 7.65-7.19 (m, 1Н), 7.18-7.06 (m, 1Н), 7.05-6.92 (m, 1Н), 6.83-6.79 (m, 1Н), 5.92 (brs, 1Н), 5.53-5.35 (m, 4Н), 4.25 (brs, 1Н), 4.06-3.94 (m, 1Н), 3.06-2.96 (m, 1Н), 2.76 (brs, 1Н), 2.26-2.10 (m, 1Н), 0.88-0.82 (m, 2Н), 0.56-0.54 (m, 2Н). m/z=417[М+1].
а
Пример 52: 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N-(1-(гидроксиметил)циклопропил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоксамид
а
а
Обращаясь к Примеру 3, (R)-2-амино-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновую кислоту заменяли 2-амино-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-]пиримидин-3-карбоновой кислотой, и гидрохлорид метиламина заменяли гидрохлоридом 1-аминоциклопропанметанола с получением указанного в заголовке соединения.
1
+
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8.04 (brs, 1Н), 7.95-7.31 (m, 1Н), 7.10-7.04 (m, 1Н), 6.99-6.94 (m, 1Н), 6.88-6.84 (m, 1Н), 6.23-5.62 (m, 1Н), 5.48-5.35 (m, 4Н), 5.09-4.47 (m, 1Н), 4.42-4.15 (m, 1Н), 4.07-3.95 (m, 1Н), 3.82-3.25 (m, 2Н), 3.06-2.96 (m, 1Н), 2.22-2.12 (m, 1Н), 1.06-0.83 (m, 4Н). m/z=447[М+1].
Анализы биологической активности
50
1. Анализ на ингибирующую активность (IC) против NTRK киназы
2
3
50

Платформа для тестирования в отношении активности TrkA, TrkB и TrkC киназ была создана на основе анализа гомогенной флуоресценции с разрешением во времени (HTRF), и активность соединений тестировали с использованием этой платформы. Соединения подвергали трехкратному градиентному разведению 100%-ным DMSO, начиная с исходной концентрации 1 мМ (11 концентраций в сумме). 4 мкл разведенного образца для каждой концентрации добавляли к 96 мкл реакционного буфера (50 мМ HEPES, рН7, 4,5 мМ MgCl, 1 мМ NaVO, 0,001% Tween-20, 0,01% BSA и 1 мМ DTT) и смешивали до гомогенного состояния для использования в качестве 4* соединения. Реакционный буфер использовали для приготовления 2* TrkA, TrkB и TrkC киназ (приобретены у Carna Biosciences 08-186, 08-187, 08-197, и их конечные концентрации составляли 0,5 нМ, 0,1 нМ и 1 нМ соответственно) и 4* субстратной смеси (АТР+TK пептид) (где конечные концентрации АТР составляли 40 мкМ, 50 мкМ и 20 мкМ соответственно; TK пептид, HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio, и его конечная концентрация составляла 100 нМ) для использования. 2,5 мкл 4* соединения добавляли в 384-луночный планшет (OptiPlate-384, приобретен у PerkinElmer), и затем 5 мкл 2* TrkA, TrkB и TrkC киназ добавляли и смешивали до однородного состояния центрифугированием. Затем 2,5 мкл 4* субстратной смеси добавляли для инициирования реакции (суммарный реакционный объем 10 мкл). 384-луночный планшет помещали в инкубатор и инкубировали в течение 60 мин при 23°С. Затем реакцию останавливали добавлением 5 мкл меченного криптатом Eu3+ антитела к фосфотирозину (HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio) и 5 мкл стрептавидина Streptavidin-XL-665 (HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio). После инкубирования в течение 1 ч в инкубаторе значения флуоресценции регистрировали на Envision (приобретен в PerkinElmer). Длина волны возбуждения была равна 320 нм, и длина волны эмиссии для детектирования была равна 665 нм и 620 нм. Ферментативную активность представляли в виде соотношения двух результатов при двух длинах волны эмиссии. Ферментативную активность для каждого соединения тестировали при 11 концентрациях, и значения IC соединений получали путем вычисления данных с использованием программного обеспечения GraFit6.0 (Erithacus Software).
50
2. Анализ на ингибирующую активность (IC) против JAK2 киназы
2
50

Платформа для тестирования в отношении активности JAK2 киназы была создана на основе анализа гомогенной флуоресценции с разрешением во времени (HTRF), и активность соединений тестировали с использованием этой платформы. Соединения подвергали трехкратному градиентному разведению 100%-ным DMSO, начиная с исходной концентрации 1 мМ (11 концентраций в сумме). 4 мкл разведенного образца для каждой концентрации добавляли к 96 мкл реакционного буфера (50 мМ HEPES, рН7, 10 мМ MgCl, 1 мМ EDTA, 0,01% Tween-20, 0,005% BSA и 2 мМ DTT) и смешивали до гомогенного состояния. 2,5 мкл полученной жидкости затем добавляли в 384-луночный планшет (OptiPlate-384, приобретен у PerkinElmer), и 5 мкл JAK2-киназы (приобретена у Carna, ее конечная концентрация 0,05 нМ) добавляли и смешивали до гомогенного состояния центрифугированием. Затем 2,5 мкл смеси АТР (конечная концентрация 5 мкМ) и TK-пептида (HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio, конечная концентрация 100 нМ) добавляли для инициирования реакции (суммарный реакционный объем 10 мкл). 384-луночный планшет помещали в инкубатор для инкубирования в течение 120 мин при 23°С. Затем реакцию останавливали добавлением 5 мкл меченного криптатом Eu3+ антитела к фосфотирозину (приобретено у Cisbio) и 5 мкл стрептавидина Streptavidin-XL-665 (HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio). После инкубирования в течение 1 ч в инкубаторе значения флуоресценции регистрировали на Envision (приобретен в PerkinElmer). Длина волны возбуждения была равна 320 нм, и длина волны эмиссии для детектирования была равна 665 нм и 620 нм. Ферментативную активность представляли в виде соотношения двух результатов при двух длинах волны эмиссии. Ферментативную активность для каждого соединения тестировали при 11 концентрациях, и значения IC соединений получали путем вычисления данных с использованием программного обеспечения GraFit6.0 (Erithacus Software).
50
G667C
3. Анализ на ингибирующую активность (IC) против TrkA киназы
G667C
G667C
G667C

G667C

2
3
50
TrkA (киназный домен) киназу экспрессировали в клетках Sf9 (приобретены у Invitrogen) с использованием pIEX-Вас-4 (приобретен у Merck) и очищали, используя аффинную хроматографию с Ni колонкой на АКТА Purifier (GE company). Платформа для тестирования в отношении активности TrkA киназы была создана на основе анализа гомогенной флуоресценции с разрешением во времени (HTRF), и активность соединений тестировали с использованием этой платформы. Соединения подвергали пятикратному градиентному разведению 100%-ным DMSO, начиная с исходной концентрации 1 мМ (8 концентраций в сумме). 4 мкл разведенного образца для каждой концентрации добавляли к 96 мкл реакционного буфера (50 мМ HEPES, рН 7,4, 5 мМ MgCl, 1 мМ NaVO, 0,001% Tween-20, 0,01% BSA и 1 мМ DTT) и смешивали до гомогенного состояния для использования в качестве 4* соединения. Реакционный буфер использовали для приготовления 2* TrkA киназ (конечная концентрация составляла 0,5 нМ) и 4* субстратной смеси (АТР+TK пептид) (где конечная концентрация АТР составляла 15 мкМ; TK пептид, HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio, и его конечная концентрация составляла 100 нМ) для использования. 2,5 мкл 4* соединения добавляли в 384-луночный планшет (OptiPlate-384, приобретен в PerkinElmer) и затем 5 мкл 2* TrkA киназ добавляли и смешивали до гомогенного состояния центрифугированием. Затем 2,5 мкл 4* субстратной смеси добавляли для инициирования реакции (суммарный реакционный объем 10 мкл). 384-луночный планшет помещали в инкубатор для инкубирования в течение 60 мин при 23°С. Затем реакцию останавливали добавлением 5 мкл меченного криптатом Eu3+ антитела к фосфотирозину (HTRF KinEASE™-TK, приобретено у Cisbio) и 5 мкл стрептавидина Streptavidin-XL-665 (HTRF KinEASE™-TK, приобретен у Cisbio). После инкубирования в течение 1 ч в инкубаторе значения флуоресценции регистрировали на Envision (приобретенном в PerkinElmer). Длина волны возбуждения была равна 320 нм, и длина волны эмиссии для детектирования была равна 665 нм и 620 нм. Ферментативную активность представляли в виде соотношения двух результатов при двух длинах волны эмиссии. Ферментативную активность для каждого соединения тестировали при 11 концентрациях, и значения IC соединений получали путем вычисления данных с использованием программного обеспечения GraFit6.0 (Erithacus Software).
В вышеизложенных экспериментах по определению активности, если конкретно не указанное иное, нижеуказанные термины имеют следующие значения:
"*" означает умножение и указывает кратность.
"3-кратное градиентное разведение" означает, что 2 объема раствора разбавителя добавляли к 1 объему исходного раствора 1 для получения исходного раствора 2; и затем брали 1 объем исходного раствора 2, и к нему добавляли 2 объема раствора разбавителя для получения исходного раствора 3. Разные концентрации растворов получали аналогичным образом.
"5-кратное градиентное разведение" означает, что 4 объема раствора разбавителя добавляли к 1 объему исходного раствора 1 для получения исходного раствора 2; и затем брали 1 объем исходного раствора 2, и к нему добавляли 4 объема раствора разбавителя для получения исходного раствора 3. Разные концентрации растворов получали аналогичным образом.
"Конечная концентрация" относится к концентрации в реакционной системе в целом в момент инициирования реакции и представляет собой концентрацию в расчете на суммарный реакционный объем.
"%" означает массовую концентрацию.
"Tween-20" относится к Tween 20.
"BSA" относится к бычьему сывороточному альбумину.
"DTT" относится к дитиотрейтолу.
"EDTA" относится к этилендиаминтетрауксусной кислоте.
Соединения, полученные в вышеприведенных Примерах, анализировали в соответствии с биологическими методами, описанными в настоящей заявке, и результаты следующие:
Соединения из Примеров демонстрируют великолепную ингибирующую активность против TrkA, TrkB и TrkC. Более того, соединения из Примеров демонстрируют высокоселективное ингибирование против Trk по сравнению с JAK2.
Соединения из Примеров также демонстрируют великолепную ингибирующую активность против мутантной TrkA.
Фармакокинетический анализ
Самцы крыс SD были получены из Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. Крыс размещали по три крысы на группу, и им отдельно вводили образец суспензии, предназначенный для тестирования (5 мг/кг), путем однократного введения в желудок. Перед экспериментом животные голодали в течение ночи, и время голодания составляло от 10 ч до введения до 4 ч после введения. После введения брали образы крови через 0,25 ч, 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч и 24 ч. После наркотизирования животных изофлураном с использованием аппарата для анестезии для маленьких животных брали 0,3 мл цельной крови из венозного сплетения свода желудка и помещали в пробирку с антикоагулянтом гепарином. Образец центрифугировали при 4°С при 4000 об/мин в течение 5 мин, и плазму переносили в центрифужную пробирку и хранили при -80°С до начала анализа. Образец в плазме экстрагировали методом преципитации белков, и экстрагированную жидкость анализировали методом LC/MC/MC (жидкофазная хроматография/масс-спектрометрия/масс-спектрометрия).