СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ ЗАГРЯЗНЕНИЯ УРОЖАЯ МИКОТОКСИНАМИ
METHOD FOR REDUCTION OF LEVEL OF HARVEST POLLUTION WITH MYCOTOXINS

Настоящее изобретение относится к способам снижения уровня загрязнения микотоксинами растения и/или собранного растительного материала, которые заключаются в том, что материал для размножения растений обрабатывают химическим фунгицидом.
Многочисленные виды грибов являются серьезными вредителями имеющих важное экономическое значение сельскохозяйственных культур. Кроме того, загрязнение сельскохозяйственных культур грибными токсинами является главной проблемой для сельского хозяйства во всем мире. Микотоксины, такие как фумонизины, зеараленоны и трихотецены, являются токсичными грибными метаболитами, часто встречающимися в сельскохозяйственных продуктах, которые способны вызывать проблемы со здоровьем у позвоночных животных.
Трихотецены представляют собой сесквитерпеновые эпоксидные микотоксины, продуцируемые видами Fusarium, Trichothecium и Myrothecium, которые являются сильными ингибиторами синтеза белка в эукариотических организмах.
Примерами трихотеценовых микотоксинов являются токсин Т-2, токсин НТ-2, изотриходермол, DAS, 3-деацетилкалонектрин, 3,15-дидеацетилкалонектрин, сцирпентриол, неосоланиол; 15-ацетилдезоксиниваленол, ниваленол, 4-ацетилниваленол (фузаренон-Х), 4,15-диацетилниваленол, 4,7,15-ацетилниваленол и дезоксиниваленол (ниже в настоящем описании обозначен как «DON») и их различные ацетилированные производные.
1
Фумонисины представляют собой токсины, продуцируемые видами Fusarium, которые растут на некоторых сельскохозяйственных продуктах, в основном на зерне, в полевых условиях или при хранении. Заболевание, называемое фузариозным кладоспориозом (оливковая плесень) кукурузы, вызывается Fusarium verticillioides и F.proliferatum, которые являются распространенными продуцентами фумонисина. Выделено более десяти химических форм фумонисинов, среди которых фумонисин B является наиболее преобладающим в загрязненном зерне и, по-видимому, наиболее токсичным.
К видам Fusarium, которые продуцируют микотоксины, такие как фумонисины и трихотецены, относятся F.acuminatum, F.crookwellense, F., verticillioides, F.culmorum, F.avenaceum, F.equiseti, F.moniliforme, F.graminearum (Gibberella zeae), F.lateritium, F.poae, F.sambucinum, (G.pulicaris), F.proliferatum, F.subglutinans и F.sporotrichioides.
Острые и хронические микотоксикозы у сельскохозяйственных животных и у человека связаны с потреблением пшеницы, ржи, ячменя, овсов, риса и кукурузы, зараженных видами Fusarium, которые продуцируют трихотеценовые микотоксины. Эксперименты с использованием химически чистых трихотеценрв в низких дозах позволили воспроизвести многие из симптомов, наблюдаемых у животных при вызываемых заплесневелым зерном токсикозах, включая анемию и иммуносупрессию, кровотечение, рвоту и отказ от корма. Исторические и эпидемиологические данные для человеческой популяции свидетельствуют о наличии связи между эпидемиями определенных заболеваний и потреблением зерна, зараженного видами Fusarium, которые продуцируют трихотецены. В частности, вспышки приводящего к летальному исходу заболевания, известного как пищевой токсический агранулоцитоз, которые происходили в России, начиная с 19-го столетия, были связаны с потреблением перезимовавшего зерна, которое было заражено видами Fusarium, продуцировавшими трихотеценовый токсин Т-2. В Японии вспышки сходного заболевания, которое называют акакаки-био (akakabi-byo) или заболеванием, вызываемым настоящей мучнистой росой, связано с зерном, зараженным видами Fusarium, которые продуцируют трихотецен DON. Трихотецены были обнаружены в образцах токсичного зерна, которое вызывало недавние вспышки заболевания в Индии и Японии. Таким образом, существует необходимость в разработке сельскохозяйственных методов предупреждения загрязнения микотоксинами и создания сельскохозяйственных культур, имеющих пониженные уровни загрязнения микотоксинами.
Кроме того, продуцирующие микотоксины виды Fusarium являются деструктивными патогенами, и они атакуют широкий спектр видов растений. Острая фитотоксичность микотоксинов и их встречаемость в тканях растений позволяет предположить также, что эти микотоксины участвуют в патогенезе Fusarium на растениях. Это указывает на то, что микотоксины играют роль в развитии заболевания и, следовательно, снижение их токсичности для растения может также предупреждать или ослаблять заболевание растения. Кроме того, снижение уровней заболевания может оказывать дополнительное благоприятное действие, заключающееся в снижении уровня загрязнения микотоксинами растения и прежде всего зерна, когда растение представляет собой злаковое растение.
Таким образом, существует необходимость в снижении уровня загрязнения микотоксинами растений и прежде всего собранных продуктов.
При создании изобретения неожиданно было установлено, что обработка материала для размножения растений, прежде всего семени растения, химическим фунгицидом может снижать загрязнение микотоксинами растения и собранных продуктов, например, колосьев (початков) у злаковых культур, таких как пшеница или кукуруза. Это действие является неожиданным, поскольку существует временной интервал между проведением обработки и образованием колосьев (початков): применяемый для обработки фунгицид должен исчезнуть задолго до того, как образуются колосья (початки).
Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ снижения загрязнения микотоксинами растения и/или собранного растительного материала, который заключается в том, что
а) обрабатывают материал для размножения растений одним или несколькими химическими фунгицидами,
б) проращивают или выращивают указанный материал для размножения растений с получением растения и
в) собирают растительный материал с указанного растения.
Особое преимущество изобретения заключается в том, что борьба с патогенными грибами, такими как грибы, относящиеся к одному или нескольким видам р.Fusarium, осуществляемая на ранних стадиях развития растения, позволяет контролировать загрязнение продуцируемыми такими грибами микотоксинами растения и/или собранного растительного материала. В одном из вариантов осуществления изобретения путем борьбы с патогенными грибами, такими как грибы, относящиеся к одному или нескольким видам р.Fusarium, снижают уровень загрязнения материала для размножения растений, загрязнения микотоксинами растения или собранного растительного материала.
Одним из объектов настоящего изобретения является способ, заключающийся в том, что
(I) обрабатывают материал для размножения растений одним или несколькими химическими фунгицидами,
(II) проращивают или выращивают указанный материал для размножения растений с получением растения,
(III) собирают растительный материал с указанного растения и
(IV) достигают снижения уровня загрязнения микотоксинами (а) растения, выращенного из обработанного материала для размножения растений, и/или (б) собранного растительного материала.
Понятие «материал для размножения растений» относится ко всем генеративным частям растения, таким как семена, которые можно применять для размножения растения, и к вегетативному растительному материалу, такому как черенки и клубни (например, картофеля). Среди них следует отметить, например, семена (в строгом смысле этого слова), корни, плоды, клубни, луковицы, корневища, части растений. К ним можно отнести также пророщенные растения и молодые растения, которые предназначены для пересадки после прорастания или после появления (всхода) из почвы. Такие молодые растения можно защищать также перед пересадкой с помощью полной или частичной обработки путем погружения материала для размножения растения. В предпочтительном варианте осуществления изобретения материал для размножения растений представляет собой семена.
Фунгицид или фунгициды, которые можно применять в способах обработки, предлагаемых в настоящем изобретении, включают (но не ограничиваясь ими) флудиоксонил, дифеноконазол, тиабендазол, тритиконазол, ипконазол, протиоконазол, прохлораз, карбендазим, тирам, окспоконазол, трифлумизол, пефуразоат, метконазол, флуоксастробин, азоксистробин, пираклостробин, трифлоксистробин, пикоксистробин, гуазатин, тебуконазол, тетраконазол, имазалил, эпоксиконазол, карбоксин и флухинконазол.
В конкретном варианте осуществления изобретения фунгицид представляет собой флудиоксонил, дифеноконазол, тиабендазол, тритиконазол, ипконазол, протиоконазол, прохлораз, карбендазим, тирам, окспоконазол, трифлумизол, метконазол, флуоксастробин, азоксистробин, трифлоксистробин или тебуконазол, предпочтительно флудиоксонил или тиабендазол.
Способ, предлагаемый в настоящем изобретении, можно применять для снижения уровня загрязнения микотоксинами растения и/или собранного растительного материала многочисленных полезных сельскохозяйственных культур, включая (но не ограничиваясь ими) зерновые (пшеница, ячмень, рожь, овсы, маис (или кукуруза), рис, сорго и родственные культуры), бобовые растения (бобы, чечевицы, горохи, соя, арахис и родственные культуры), масличные растения (рапс, горчица, подсолнечники и родственные культуры), огурцовые растения (кабачки, огурцы, дыни и родственные растения), овощные культуры (шпинат, салат, спаржа, капусты, моркови, баклажаны, луки, перец, томаты, картофели, паприка и родственные растения). Собранный растительный материал, который получают с растений, обработанный с помощью способа, предлагаемого в изобретении, должен иметь меньший уровень загрязнения микотоксинами, чем растительный материал, собранный с необработанных растений. В одном из вариантов осуществления изобретения сельскохозяйственная культура представляет собой культуру, дающую продукт, предназначенный для потребления человеком, такую как мелкозерновые злаки, кукуруза, овсы и арахис; предпочтительно сельскохозяйственную культуру выбирают из кукурузы и пшеницы.
В конкретном варианте осуществления изобретения растение или собранный растительный материал имеет уровень загрязнения микотоксинами ниже по меньшей мере на 10%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 20%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 30%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 40%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 50%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 60%, более предпочтительно ниже по меньшей мере на 70% и еще более предпочтительно ниже по меньшей мере на 80%, чем растительный материал, собранный с необработанных растений.
Обработка материала для размножения растений определенными фунгицидами, предлагаемыми в изобретении, предпочтительно обеспечивает снижение уровня митотоксинов, составляющее от 20 до 60%, более предпочтительно от 30 до 50%, по сравнению с уровнями, достигаемыми при обработке другими фунгицидами.
В контексте настоящего изобретения собранный растительный материал может включать (но не ограничиваясь ими), например, клетки, семена, плоды, листья, цветки, стебли и т.п. В конкретном варианте осуществления изобретения собранный растительный материал представляет собой семя.
Обработка материала для размножения растений может включать также обработку дополнительными действующими веществами в сочетании с химическими фунгицидами, предлагаемыми в настоящем изобретении, которую можно осуществлять одновременно и/или последовательно. Такие дополнительные соединения могут представлять собой другие обладающие пестицидной активностью действующие вещества, биологические агенты, удобрения или доноры микроэлементов или другие препараты, влияющие на рост растения, такие как инокулянты. Например, семя обычно обрабатывают, нанося защитное покрытие, содержащее инсектициды, фунгициды, бактерициды, нематоциды, моллюскициды, репелленты для птиц, регуляторы роста или их смеси.
Одно и то же обладающее пестицидной активностью действующее вещество может обладать не только пестицидной активностью, например, пестицид может обладать фунгицидной, инсектицидной и нематоцидной активностью. Известно конкретно, что альдикарб обладает инсектицидной, акарицидной и нематоцидной активностью, в то время как известно, что метам обладает инсектицидной, гербицидной, фунгицидной и нематоцидной активностью, а тиабендазол и каптан могут обладать нематоцидной и фунгицидной активностью.
В конкретном варианте осуществления изобретения фунгицид, предлагаемый в изобретении, применяют в сочетании с одним или несколькими другими активными действующими веществами, такими как инсектициды, фунгициды, бактерициды, нематоциды, моллюскициды, репелленты для птиц, регуляторы роста или их смеси. Предпочтительными в качестве компонентов комбинации соединениями являются клотианидин, имидаклоприд, мефеноксам, металаксил, тиаметоксам, тефлутрин, абамектин и репеллент для птиц. Наиболее эффективной для обработки кукурузы является комбинация, содержащая тиабендазол, флудиоксонил, мефеноксам и азоксистробин, а для обработки пшеницы - комбинация, содержащая флудиоксонил.
Нормы расхода пестицида(ов) должны варьироваться, например, в зависимости от типа сельскохозяйственной культуры, конкретных действующих веществ, входящих в комбинацию, типа материала для размножения растений (при необходимости), но таким образом, чтобы действующие вещества входили в комбинацию в эффективном количестве для обеспечения требуемого усиленного действия, и их можно определять опытным путем.
Как правило, для протравливания семян нормы расхода могут варьироваться от 0,5 до 1000 г действующего вещества на 100 кг семян.
Предпочтительные нормы расхода фунгицида, как правило, составляют от 0,5 до 500 г, предпочтительно от 1 до 100 г или от 2,5 до 25 г действующего вещества на 100 кг семян растения. В одном из вариантов осуществления изобретения норма расхода флудиоксонила может составлять от 2,5 до 5 г, а норма расхода тиабендазола - от 10 до 20 г действующего вещества из расчета на 100 кг семян растений.
В том случае, когда комбинация содержит (I) тиабендазол, (II) мефеноксам и (III) флудиоксонил и азоксистробин, обычные нормы расхода при протравливании семян, прежде всего кукурузы, составляют 15-25 г тиабендазола, 1-4 г мефеноксама, 1-5 г флудиоксонила и 0,5-2 г азоксистробина в каждом случае из расчета на 100 кг семян.
Еще один объект настоящего изобретения относится к применению композиции, содержащей один или несколько химических фунгицидов, для снижения уровня загрязнения микотоксинами растения и/или собранного растительного материала, при котором композицию применяют для обработки материала для размножения растений и указанный материал для размножения растений проращивают или выращивают с получением растения, с которого собирают указанный растительный материал.
Другой объект настоящего изобретения относится к применению обработки материала для размножения растений одним или несколькими химическими фунгицидами для снижения уровня загрязнения микотоксинами растения и/или собранного растительного материала.
Методы нанесения обладающих пестицидной активностью действующих веществ, их смесей или композиций или обработки ими материала для размножения растений, прежде всего семян, известны в данной области и включают методы обработки материала для размножения путем протравливания, нанесения покрытия, гранулирования и замачивания. В предпочтительном варианте осуществления изобретения комбинацию наносят или обрабатывают ею материал для размножения растений таким методом, чтобы не индуцировать прорастание; как правило, замачивание семян индуцирует прорастание, поскольку содержание влаги в обработанном семени оказывается слишком высоким. Таким образом, примерами пригодных методов нанесения (или обработки) на материал для размножения растений, такой как семя, могут служить протравливание семян, нанесения покрытия на семена или гранулирование семян и т.п.
Предпочтительно материал для размножения растений представляет собой семя. Хотя, по-видимому, способ, предлагаемый в настоящем изобретении, можно применять для семени в любом физиологическом состоянии, предпочтительно, чтобы семя находилось в достаточно стойком состоянии, чтобы не испытывать повреждения в процессе обработки. Как правило, семя должно представлять собой семя, которое собрали с поля, отделили от растения и очистили от всех стержней, стеблей, наружной шелухи (листовой обертки початка для кукурузы) и окружающей мякоти или другого растительного материала, не относящегося к семени. Предпочтительно семя должно быть биологически стабильным в той степени, чтобы обработка не могла вызвать биологического повреждения семени. Обработку семени, по-видимому, можно проводить в любое время в период между сбором семени и посевом семени или во время процесса посева (направленные обработки семян). Семя можно также замачивать с использованием методов, известных специалистам, либо до, либо после обработки.
В процессе обработки материала для размножения желательно обеспечивать равномерное распределение действующих веществ и их сцепление с семенами. Обработка может варьироваться от нанесения тонкой пленки (протравливание) состава, содержащего действующее(ие) вещество(а), на материал для размножения растений, такой как семя, когда можно различить исходный размер и/или форму, до образования промежуточного состояния (такого как покрытие) и затем до создания толстой пленки (например, путем формирования гранул, состоящих из нескольких слоев различных материалов, таких как носители, например, глины; различные композиции, например, содержащие другие действующие вещества; полимеры; и красители), когда нельзя более различить исходную форму и/или размер семени.
Обработка семян предусматривает обработку непосеянного семени, при этом следует понимать, что понятие «непосеянное семя» включает семя в любой период времени между сбором семени и посевом семени в почву для прорастания и выращивания растения.
Подразумевается, что обработка непосеянного семени не относится к таким методам, с помощью которых действующее вещество вносят в почву, но она включает любой метод обработки, который обеспечивает направленное воздействие на семя в процессе посадки.
Предпочтительно обработку производят до посадки семени, так что посаженное семя уже заранее обработано комбинацией. В частности, обработку, предлагаемую в изобретении, предпочтительно осуществляют путем нанесения покрытия на семя или пеллетирование семян (формирования гранул). В результате обработки действующие вещества сцепляются с семенем и становятся пригодными для осуществления борьбы с патогенами и/или вредителями.
Обработанные семена можно хранить, обрабатывать, высевать и культивировать таким же образом, как и семя, обработанное другими действующими веществами.
Пестициды (включая фунгициды) можно применять в немодифицированной форме, но, как правило, их применяют в форме композиций. Их можно вносить в сочетании с другими носителями, поверхностно-активными веществами или другими облегчающими внесение адъювантами, которые обычно применяют в технологии приготовления препаративных форм. Пригодные носители и адъюванты могут быть твердыми или жидкими, и они представляют собой субстанции, которые обычно применяют в технологии приготовления препаративных форм, например, природные или регенерированные минеральные субстанции, растворители, диспергирующие агенты, смачивающие агенты, прилипатели, загустители, связующие вещества или удобрения.
Пестицид удобно включать известным методом в состав препаративных форм, например, эмульгирующихся концентратов, суспензионных концентратов, пригодных для нанесения покрытия паст, готовых к применению распыляемых или разбавляемых растворов, разбавляемых эмульсий, смачивающихся порошков, растворимых порошков, текучих суспензий, дустов, гранул или путем капсулирования, например, в полимерные вещества. В зависимости от природы композиций методы внесения, такие как опрыскивание, обработка в виде тумана, опыливание, разбрасывание, нанесение покрытия или полив, выбирают в соответствии с поставленными целями и конкретными условиями.
Препаративные формы приготавливают известным в данной области методом, как правило, путем смешения до однородного состояния и/или измельчения действующего вещества с наполнителями, например, растворителями, твердыми носителями и при необходимости с поверхностно-активными веществами (детергентами).
Пригодными растворителями являются (но не ограничиваясь ими):
ароматические углеводороды, предпочтительно фракции, содержащие 8-12 атомов углерода, например, ксилоловые смеси или замещенные нафталины, фталаты, такие как дибутилфталат или диоктилфталат, алифатические углеводороды, такие как циклогексан или парафины, спирты и гликоли и их простые и сложные эфиры, такие как этанол, этиленгликоль, простой монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, кетоны, такие как циклогексанон, сильные полярные растворители, такие как N-метил-2-пирролидон, диметилсульфоксид или диметилформамид, а также растительные масла или эпоксидированные растительные масла, такие как эпоксидированное кокосовое масло или соевое масло; или вода.
Твердые носители, применяемые, например, для дустов и диспергируемых порошков, представляют собой, как правило, природные минеральные наполнители, такие как кальцит, тальк, каолин, монтмориллонит или аттапульгит. Для улучшения физических свойств можно добавлять также высокодисперсную кремниевую кислоту или высокодисперсные абсорбирующие полимеры. Пригодными гранулированными абсорбирующими носителями являются носители пористого типа, например, пемза, битый кирпич, сепиолит или бентонит, а пригодными носителями несорбирующего типа являются, например, кальцит или песок. Кроме того, можно применять многочисленные предварительно гранулированные материалы неорганического или органического происхождения, прежде всего доломит или измельченные в порошок растительные остатки.
Пригодными поверхностно-активными веществами, в зависимости от природы действующего вещества, предназначенного для включения в композицию, являются неионогенные, катионогенные и/или анионогенные поверхностно-активные вещества, обладающие хорошими эмульгирующими, диспергирующими и смачивающими свойствами. Под понятие «поверхностно-активные вещества» подпадают также смеси поверхностно-активных веществ. Поверхностно-активные вещества, применяемые в технологии приготовления препаративных форм, хорошо известны в данной области.
Наиболее предпочтительными облегчающими нанесение адъювантами являются также природные или синтетические фосфолипиды цефалинового или лецитинового ряда, например, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилглицерин и лизолецитин.
Когда фунгицид применяют в сочетании с другими ингредиентами, такими как другие пестициды, то компоненты можно наносить на предназначенный для обработки материал для размножения растений одновременно или последовательно через короткие интервалы времени, например, в один и тот же день, при необходимости в сочетании с другими носителями, поверхностно-активными веществами или другими облегчающими нанесение адъювантами, обычно применяемыми в технологии приготовления препаративных форм. В предпочтительном варианте осуществления изобретения компоненты наносят одновременно.
В том случае, когда компоненты наносят одновременно, их можно наносить в виде композиции, содержащей каждый из компонентов, в этом случае каждый из компонентов можно получать из отдельного источника и смешивать вместе (такая композиция известна под названием «смесь, приготовленная в одном резервуаре» (баковая смесь), готовая к применению композиция, бульон или суспензия для опрыскивания), необязательно в сочетании с другими пестицидами, или компоненты можно получать в виде одного источника, представляющего собой смесь (известную как премикс, концентрат, включенное в состав препаративной формы соединение (или продукт)), и необязательно смешивать с другими пестицидами.
Как правило, композиция в виде баковой смеси, предназначенная для применения при протравливании семян, содержит от 0,25 до 80%, предпочтительно от 1 до 75%, соединений, представляющих собой действующие вещества, и от 99,75 до 20%, предпочтительно от 99 до 25%, твердых или жидких вспомогательных веществ (включая, например, растворитель, такой как вода), где вспомогательные вещества могут представлять собой поверхностно-активное вещество в количестве от 0 до 40%, предпочтительно от 0,5 до 30%, в пересчете на препаративную форму в виде баковой смеси.
Как правило, препаративная форма в виде премикса, предназначенная для применения при протравливании семян, содержит от 0,5 до 99,9%, предпочтительно от 1 до 95% соединений, представляющих собой действующие вещества, и от 99,5 до 0,1%, предпочтительно от 99 до 5% твердого или жидкого адъюванта (включая, например, растворитель, такой как вода), где вспомогательные вещества могут представлять собой поверхностно-активное вещество в количестве от 0 до 50%, предпочтительно от 0,5 до 40%, в пересчете на препаративную форму в виде премикса.
В то время как поступающие в продажу продукты предпочтительно приготавливают в виде концентратов (например, композиции (препаративной формы) в виде премикса), конечный потребитель, как правило, применяет разбавленные препараты (например, композицию в виде баковой смеси).
Предпочтительные предназначенные для протравливания семян препаративные формы в виде премикса представляют собой водные суспензионные концентраты. Препаративную форму можно наносить на семена с помощью обычных методов и машин для протравливания, таких как метод псевдоожиженного слоя, метод вальцовой мельницы, ротостатические протравливатели семян и барабанные машины для дражирования. Можно применять также другие методы, такие как метод фонтанирующего слоя. Перед нанесением покрытия семена можно заранее откалибровать. После нанесения покрытия семена, как правило, сушат и затем переносят в калибровочную машину для калибровки. Такие процедуры известны в данной области.
В сочетании с обычными методами, предлагаемыми в настоящем изобретении, можно применять также обычные методы контроля микотоксинов, такие как опрыскивание листьев и использование биологических агентов.
Для каждого объекта и варианта осуществления изобретения понятие «состоящий практически» и его флексии представляют собой предпочтительный вариант понятия «содержащий» и его флексий, а понятие «состоящий из» и его флексии являются предпочтительным вариантом понятия «состоящий практически из» и его флексий.
Ниже изобретение проиллюстрировано с помощью примеров, не ограничивающих объем изобретения.
Примеры
4
Семена озимой пшеницы погружают в суспензию GFP макроконидий генетически модифицированного штамма F.graminearum, имеющую концентрацию 10 спор/мл.
Образец инокулированных семян протравливают флудиоксонилом исходя из нормы расхода 5 г действующего вещества на 100 кг семян (обозначен как лот Б).
Непротравленные инокулированные семена (лот А) и протравленные флудиоксонилом семена (лот Б) выращивают в горшках до полной зрелости (колошение).
Обнаружение Fusarium на различных стадиях развития растения осуществляют с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для специфического обнаружения видов Fusarium.
С самого начала развития и до достижения полной зрелости растения отрезают сегменты стебля для выявления присутствия Fusarium с помощью ПЦР.
После полного созревания растения собирают зерно и количественно оценивают уровень дезоксинилваленола (DON) в семенах растений, выращенных из непротравленных и протравленных флудиоксонилом семян. Результаты обобщены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Обнаружение модифицированного Fusarium graminearum в пшенице на различных стадиях роста
Уровень заражения F.graminearum (ПЦР-анализ: шкала интенсивности от 0 до 4)*
Стадия роста (GS) растения в момент проведения ПЦР-анализа (ВВСН GS)
Сегменты
Лот Асемя растения, выращенного из непротравленного семени
Лот Бсемя растения, выращенного из протравленного семени
окончание кущения (GS 29)
главные корни
0
0
корневище
4
0
придаточные корни
0
0
подземная часть растения (0,5 см)
2
0
выше подземной части растения (0,5 см)
1
0
длина колоса 1-2 см (GS 31)
первое междоузлие
3
0
второе междоузлие
0
0
будущие междоузлия и колос
0
0
начало колошения (GS 51)
1-е междоузлие
4
0
2-е междоузлие
1
0
3-е междоузлие
0
0
4-е междоузлие
0
0
колос
0
0
полное созревание (GS 94)
1-е междоузлие
4
0
2-е междоузлие
4
0
3-е междоузлие
3
0
4-е междоузлие
3
0
5-е междоузлие
2
0
колос+зерна
2,5
0
* - анализируют в 3 повторностях 6 растений; количество продукта амплификации оценивают по шкале интенсивности от 0 до 4: 0 - полоса отсутствует, 0,5 - полоса с очень слабой интенсивностью, 1 - полоса со слабой интенсивностью, 2 - полоса со средней интенсивностью, 3 - полоса с сильной интенсивностью, 4 - полоса с очень сильной интенсивностью.
Таблица 2
Количество дезоксинилваленола (DON в част./миллиард) в колосе растения пшеницы
Количество DON (част./миллиард)*
Стадия роста в момент проведения анализа (ВВСН)
Сегменты
Лот Асемя растения, выращенного из непротравленного семени
Лот Бсемя растения, выращенного из протравленного семени
Полное созревание (GS 94)
колос+зерна
7650 част./миллиард
0
* - анализируют в 3 повторностях 6 растений.