Применение ион-парной хроматографии для анализа органических и неорганических примесей в препаратах нитратов изосорбида

ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ПРИМЕНЕНИЕ ИОН-ПАРНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ АНАЛИЗА ОРГАНИЧЕСКИХ И НЕОРГАНИЧЕСКИХ ПРИМЕСЕЙ В ПРЕПАРАТАХ НИТРАТОВ ИЗОСОРБИДА

А.С. Осипов, Е.Б. Нечаева, О.А. Победин

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Osipov@regmed.ru

Резюме: Показана принципиальная возможность использования подвижных фаз, содержащих тетрагексиламмония гидро-генсульфат для разделения нитрит- и нитрат-ионов, в условиях позволяющих использовать нитроэтан для оценки пригодности хроматографической системы при определении органических примесей в препаратах изосорбида мононитрата и изосорбида динитрата. На хроматографической колонке Hypersil ODS было достигнуто лучшее разрешение пиков компонентов анализируемой смеси.

Ключевые слова: ВЭЖХ, изосорбида мононитрат, изосорбида динитрат.

ION-PAIR CHROMATOGRAPHY IN THE ANALYSIS OFORGANIC AND INORGANIC IMPURITIES INISOSORBIDE NITRATES PREPARATIONS

A.S. Osipov, E.B. Nechaeva, O.A. Pobedin

Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

Abstract: The article substantiates the possibility of using mobile phases containing tetrahexylammonium hydrogensulfate for separating nitrite and nitrate ions, under the conditions that allow to use nitroethane for assessing chromatogramphic system suitability when detecting organic impurities in isosorbide mononitrate and isosorbide dinitrate. Best results in test mixture components pike resolution were achieved by using Hypersil ODS chromatography column.

Key words: HPLC, isosorbide mononitrate, isosorbide dinitrate.

Лекарственные средства, содержащие изосорбида мононитрат (ИСМН) и изосорбида динитрат (ИСДН), применяются в медицинской практике для лечения сердечной недостаточности. Действующим веществом ИСМН является 5-нитроизомер. Содержание примеси 2-нитроизомера ИСМН, а также ИСДН контролируется в субстанции и лекарственных препаратах ИСМН. При определении примесей в лекарственных препаратах необходимой частью исследования является проверка пригодности хроматографической системы, т.е. подтверждение способности используемой в анализе колонки разделять пики ближайшей примеси и действующего вещества. В соответствующих монографиях ведущих зарубежных Фармакопей на препараты ИСМН и ИСДН для этих целей обычно применяют стандартный образец 2-изомера ИСМН. Следует отметить, что 2-изомер ИСМН мало доступен. Кроме того, является взрывчатым веществом. В отличие от соответствующих эфиров азотной кислоты, нитроалканы невзрывоопасны при обычных условиях и без существенных ограничений поставляются многими фирмами-изготови-телями. Ранее было показано, что среди протестированных соединений только нитроэтан наиболее подходит для цели проверки пригодности хромато-

графической системы при анализе препаратов, содержащих ИСМН и ИСДН [1, 3].

В монографиях Европейской и Британской фармакопей контролируется содержание примесей неорганических нитратов в субстанциях и лекарственных формах ИСМН и ИСДН. Содержание неорганических нитратов контролируется также в субстанциях нитроглицерина и пентаэритритила тетранитрата. В отличие от этого, в соответствующих статьях Фармакопеи США содержание примесей неорганических нитратов не контролируется ни в субстанциях, ни в лекарственных формах препаратов из группы органических нитратов. В нормативных документах подавляющее большинство зарегистрированных в Российской Федерации лекарственных препаратов ИСМН и ИСДН контролируется содержание неорганических нитратов. При этом используется методика ТСХ, описанная в Европейской и Британской фармакопеях. Хроматографирование осуществляется на пластинах с силикагелем, подвижная фаза: уксусная кислота — ацетон — толуол (15:30:60). Проявление хроматограмм посредством опрыскивания пластин раствором калия иодида и крахмала с последующей экспозицией в течение 15 мин в ультрафиолетовом свете при 254 нм и регистрацией хроматограмм при видимом свете. Ме-

Ежеквартальный рецензируемый научно-практический журнал

№1, 2013

тодика обладает сравнительно невысокой чувствительностью и, кроме того, не позволяет полностью разделять нитрат- и нитрит-ионы.

Необходимо отметить, что данные ионы обладают значительным поглощением в области 200—210 нм и поэтому могут обнаруживаться УФ-детекторами ВЭЖХ. Собственно сама возможность детектирования органических нитратов обусловлена присутствием в молекулах этих соединений нитрогрупп. Для разделения нитрат- и нитрит-ионов, а также органических нитратов может быть использована ион-парная хроматография с тетраал-киламинами на обращенно-фазовых колонках [4, 5]. Следует отметить, что наиболее рационально было бы использовать одно хроматографическое разделение для анализа примесей органической и неорганической природы в лекарственных препаратах этой группы. Целью данной работы является исследование возможности применения тетрагек-силаммония гидрогенсульфата (ТГА) в подвижной фазе для анализа примесей в препаратах органических нитратов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Для хроматографирования использовали стандартные образцы органических нитратов Европейской фармакопеи. Содержание действующих веществ в стандартах: изосорбида 5-мононитрата — 88,9%, изо-сорбида 2-мононитрата — 90% изосорбида динитрата — 40%. Работа проводилась с использованием хроматографа «Agilent», серия 1100 (Agilent Technologies, США). Хроматографическое разделение проводили на колонках Диасфер-110-С18 150 х 4,6 мм; 5 мкм

(БиоХимМак, Россия) и Hypersil ODS C18 150 х 4,6 мм; 5 мкм (Agilent Technologies, США). Условия хроматографирования: скорость потока — 1 мл/мин, детектирование осуществляли при 215 нм, температура колонок 25 °С. Объем ввода пробы — 20 мкл. В работе использовали нитроэтан и тетрагексиламмоний гидрогенсульфат (Fluka, США, Швейцария).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведенных ранее исследований было показано, что применение подвижных фаз, состоящих из смеси метанола, ацетонитрила и воды, позволяет использовать нитроэтан для оценки пригодности хроматографической системы при определении органических примесей в препаратах ИСМН и ИСДН [1]. На основании этого в данном исследовании применили подвижную фазу следующего состава: 5 мМ ТГА, 10 мМ К2НРО4 (рН 6,5) в воде - метанол — ацетонитрил (80:15:5).

При разделении анализируемой смеси на колонке Диасфер- 110-C18 времена удерживания соединений составили: 2-изомер ИСМН — 2,50 мин, нитроэтан — 2,85 мин, 5-изомер ИСМН — 3,77 мин, нитрит-ион — 7,35 мин, ИСДН — 16,26 мин, нитрат ион — 18,52 мин. Для колонки Hypersil ODS величины времен удерживания соответственно: 2-изомер ИСМН — 2,67 мин, нитроэтан — 3,06 мин, 5-изомер ИСМН — 4,14 мин, нитрит-ион — 9,11 мин, ИСДН — 19,40 мин, нитрат-ион — 25,03 мин. Величины коэффициента разрешения между близко расположенными пиками приведены в таблице 1. На колонке Hypersil ODS было достигнуто лучшее разрешение (Рис. 1), чем на колонке Диасфер-110-С18.

Таблица 1

РАЗРЕШЕНИЕ МЕЖДУ ПИКАМИ АНАЛИЗИРУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Наименование хроматографической колонки Разрешение между пиками нитроэтана и 2-изомера ИСМН Разрешение между пиками нитроэтана и 5-изомера ИСМН Разрешение между пиками ИСДН и нитрат иона

Диасфер-110-С18 150 х 4,6 мм; 5 мкм 1,41 3,01 1,43

Hypersil ODS C18 150 х 4,6 мм; 5 мкм 1,70 3,82 3,41

mAU

Рис. 1. Хроматограмма разделения смеси органических и неорганических нитратов. Условия анализа: колонка — Иуреш1 ОБ8 С18150 х 4,6 мм; 5мкм.; скорость потока — 1,0 мл/мин; подвижная фаза: 5 мМ ТГА, 10 мМ КНРО4 (рН 6,5) в воде — метанол — ацетонитрил (80:15:5); детектирование при 215 нм.

1 — 2-изомер изосорбида мононитрата; 2 — нитроэтан; 3 — 5-изомер изосорбида мононитрата; 4 — нитрит-ион; 5 — изосорбида динитрат; 6 — нитрат-ион.

ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Ведомости НЦЭСМП

ВЫВОДЫ

Показана принципиальная возможность использования подвижных фаз, содержащих ТГА, для разделения нитрит и нитрат-ионов в условиях,

ЛИТЕРАТУРА

позволяющих использовать нитроэтан для оценки пригодности хроматографической системы при определении органических примесей в препаратах ИСМН и ИСДН.

1. Осипов А.С., Нечаева Е.Б., Дёмина Н.Б. Применение нитроалканов для анализа препаратов нитратов изосорбида // Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып. 64. Пятигорск. 2009.

С. 316-318.

2. Осипов А.С., Нечаева Е.А., Орлов Е.Н. Оптимизация условий анализа при определении примесей в препаратах нитратов изосорбида методом ВЭЖХ // Сборник научных трудов «Разработка, исследова-

ние и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып. 65. Пятигорск. 2010.

С. 363-366.

3. Осипов А.С., Орлов Е.Н. Применение нитроалканов для анализа примесей в лекарственных препаратах нитратов изосорбида методом ВЭЖХ // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2010. № 11. С. 28-32.

4. Осипов А.С., Нечаева Е.Б., Дёмина Н.Б. Применение ион-парной хроматографии для анализа примесей в препаратах

органических нитратов // Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып. 63. Пятигорск. 2008.

С. 313-316.

5. Осипов А.С., Нечаева Е.Б., Дёмина Н.Б. Применение солей тетраалкиламмони-евых соединений для анализа примесей в препаратах органических нитратов методом ВЭЖХ // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2010. № 3. С. 21-24.