Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности
METHOD FOR PREDICTION OF RISK OF PREECLAMPSIA DEVELOPMENT IN WOMEN DEPENDING ON HEREDITARY BURDEN

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано в акушерстве для прогнозирования осложнений беременности, а именно риска развития преэклампсии (ПЭ), у женщин по генетическим данным.
Преэклампсия (далее ПЭ) – осложнение беременности, характеризующееся развитием эндотелиальной дисфункции, полиорганной недостаточностью, нарушением свертывающей и противосвертывающей систем, микроциркуляции, обменных процессов, иммунного ответа [Серов, В.Н. Клинические рекомендации. Акушерство и гинекология. - 4-е изд. / В.Н. Серов, Г.Т. Сухих. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 1024 с.; Eiland, E. Preeclampsia / E. Eiland, C. Nzerue, M. Faulkner // J. Pregnancy, 2012. – P. 586—578].
В настоящее время ПЭ является одной из самых актуальных проблем современного акушерства ввиду широкой распространенности, сложности этиопатогенеза, высокой частоты материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [Киселева, Н. И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н. И. Киселева, С. Н. Занько, А. П. Солодков // Дисфункция эндотелия: эксперим. и клинич. исслед.: тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед.; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204].
ПЭ характеризуется следующими типичными клиническими симптомами: артериальной гипертензией, протеинурией, отеками, а также глубокими расстройствами функции сосудистой системы, гемостаза, иммунитета, гемодинамики и микроциркуляции, фетоплацентарной недостаточностью, нарушением функции почек, печени, легких.
В настоящее время многие исследователи рассматривают ПЭ как острую патологию эндотелия - генерализованное поражение эндотелия сосудов или эндотелиальную дисфункцию, приводящую к нарушению сосудистого тонуса, сосудистой проницаемости, баланса между тромбогенным потенциалом сосудистой стенки и ее тромборезистентностью [Киселева, Н. И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н. И. Киселева, С. Н. Занько, А. П. Солодков // Дисфункция эндотелия: эксперим. и клинич. исслед.: тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед.; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204; Марков, Х. М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия [Текст] / Х. М. Марков // Кардиология. – 2005. – Т. 45, № 12. – C. 62-72; Шифман, Е. М. Преэклампсия, эклампсия, HELLP-синдром [Текст] / Е. М. Шифман; Респ. перинат. центр М-ва здравоохранения Респ. Карелия. – Петрозаводск: ИнтелТек, 2002. – 432 с.].
Известно свыше 100 генов-кандидатов преэклампсии. Локальные генные сети преэклампсии включают гены метаболизма, гены эндотелиальной дисфункции, гены сосудистой системы, гены ростовых факторов и цитокинов, гены эндокринной системы, гены главного комплекса гистосовместимости [Генетический паспорт – основа индивидуальной и предиктивной медицины [Текст]: [коллектив. моногр. / В. С. Баранов, А. С. Глотов, Т. Э. Иващенко и др.]; под ред. В. С. Баранова. – Санкт-Петербург: Изд-во Н-Л, 2009. – 527 с.: ил.].
Матриксная металлопротеиназа-3 – протеолитический фермент, субстратом активности для которого являются протеогликаны, ламинин, фибронектин, нефибриллярные коллагены [Молекулярно-генетические факторы прогноза гладкомышечных новообразований матки: роль матриксных металлопротеиназ [Текст] / А. А. Должиков, М. И. Чурносов, С. П. Пахомов [и др.] // Человек и его здоровье: Курск. науч.-практ. вестн. – 2012. – № 2. – С. 138-146]. Ген ММР-3 локализован на 11 хромосоме в положении 11q22.3. Полиморфизм гена ММР-3 идентифицирован в 1672 положении от начала транскрипции [Yаmаdа Y., 2006; Zасhаriаh, J.Р. еt аl., 2012]. Однонуклеотидная замена ММР-3 (rs3025058), содержащая 5 или 6 остатков аденозина, находится в промоторной области MMР-3. 6А аллель ассоциирована со снижением экспрессии ММР-3 и повышением уровня коллагена во внеклеточном матриксе [Yаmаdа, Y. Idеntifiсаtiоn оf gеnеtiс fасtоrs аnd dеvеlорmеnt оf gеnеtiс risk diаgnоsis systеms fоr саrdiоvаsсulаr disеаsеs аnd strоkе [Tехt] / Y. Yаmаdа // Сirс. J. – 2006. – Vоl. 70, № 10. – Р. 1240-1248]. Имеются данные об ассоциации данного полиморфизма с развитием злокачественных новообразований, хронического пародонтита, ишемического инсульта, ревматоидного и коленного артрита и т.д. [Rеnin аngiоtеnsin аldоstеrоnе systеm аnd glyсеmiа in рrеgnаnсy [Tехt] / Y. Р. Сhеn, J. Li, Z. N. Wаng [еt аl.] // Сlin. Lаb. – 2012. – Vоl. 58, № 5-6. – Р. 527-533].
Матриксная металлопротеиназа-8 (ММР-8) или нейтрофильная коллагеназа содержится в специфических гранулах полиморфно-ядерных лейкоцитов в виде неактивного профермента. Ген ММР-8 находится на 11 хромосоме в области 11q22.2–q22.3. В гене наиболее изучены два полиморфных локуса с однонуклеотидными заменами в кодирующей области ММР-8 (rs11225395) и ММР-8 (rs1320632). Данные полиморфизмы связаны с преждевременным разрывом плодных оболочек, хроническим и острым периодонтитом, развитием рака молочной железы, рака легких и атеросклерозом сонных артерий [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 8 (MMР8) gеnе роlymоrрhisms in сhrоniс реriоdоntitis [Tехt] / L. Izаkоviсоvа Hоllа, B. Hrdliсkоvа, J. Vоkurkа [еt аl.] // Аrсh. Оrаl Biоl. – 2012. – Vоl. 57, № 2. – Р. 188-196].
Матриксная металлопротеиназа-12 (ММР-12) – металлоэластаза, обнаруженная в макрофагах и активно гидролизующая эластин, коллаген IV типа, протеогликаны, а также различные компоненты внеклеточного матрикса [Stimulаtiоn оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsеs by tumоr nесrоsis fасtоr-б in humаn рulр сеll сulturеs [Tехt] / Е. M. Rhim, S. J. Аhn, J. Y. Kim [еt аl.] // J. Еndоd. – 2013. – Vоl. 39, № 6. – Р. 795-800]. Ген матриксной металлопротеиназы-12 является частью кластера генов ММР, которые локализованы в хромосоме 11q22.3 и кодируют фермент MMР-12. Наиболее клинически значимым полиморфизмом является ММР-12 (rs2276109). Аллель А полиморфизма ММР-12 повышает сродство к фактору транскрипции АР-1 (асtivаtоr рrоtеin-1) и, тем самым, обеспечивает более высокую экспрессию гена. Выявлена ассоциация данного полиморфного варианта с развитием ишемической болезни сердца, рака, эндометриоза [Gеnеtiс роlymоrрhisms оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 12 аnd 13 gеnеs аrе imрliсаtеd in еndоmеtriоsis рrоgrеssiоn [Tехt] / B. Bоrghеsе, J. D. Сhiсhе, D. Vеrnеrеy [еt аl.] // Hum. Rерrоd. – 2008. – Vоl. 23, № 7. – Р. 1207-1213], варикозной болезни нижних конечностей, фиброза легких и других постхимиолучевых легочных повреждений у больных раком молочной железы [Хурани, И. Ф. Генетические предпосылки развития постхимиолучевых легочных повреждений и пути их профилактики у больных раком молочной железы [Текст] / И. Ф. Хурани // Злокачественные опухоли. – 2015. – № 1 (12). – С. 3-8].
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью на основе данных о полиморфизме генов матриксных металлопротеиназ MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).
Известен способ по заявке РФ №2012131290 (дата публикации заявки 27.01.2014), согласно которому для раннего выявления риска развития преэклампсии у беременной женщины на ранней стадии беременности на сроке от 14 до 16 недель беременности до развития обычных клинических симптомов проводят анализ исследуемого биологического образца  для определения концентрации 5-гидрокситриптофана, причем пониженная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации при нормальной беременности коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Где контрольная концентрация представляет собой концентрацию 5-гидрокситриптофана в биологическом образце, полученном у субъекта, у которого действительно развилась преэклампсия, и в котором повышенная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Одновременно проводят анализ для определения концентрации по существу всех биомаркеров: 5-гидрокситриптофана, моносахарида, деканоилкарнитина, метилглутаровой кислоты и/или адипиновой кислоты, олеиновой кислоты, докозагексаеновой кислоты и/или докозатрииновой кислоты, γ-бутиролактона и/или оксолан-3-она, 2-оксовалериановой кислоты и/или оксометилбутановой кислоты, ацетоуксусной кислоты, гексадеценоилэйкозатетраеноил-sn-глицерина, сфингозин-1-фосфата, сфинганин-1-фосфата и производных витамина D3 и установления корреляции концентрации  и комбинации всех биомаркеров с риском развития преэклампсии у беременной женщины.
В описании к патенту РФ № 2538661 по заявке 2011125546 (дата публикации патента 10.01.2015) прогноз повышенного риска развития преэклампсии осуществляют на основании того, что концентрация Н2-релаксина, полученного из организма беременной женщины до проявления симптома преэклампсии, меньше предельного значения нижнего квартиля концентрации, равной примерно 500 пг/мл, характерной для беременной женщины. При этом концентрацию Н2-релаксина измеряют с использованием антитела к Н2-релаксину с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Кроме того, дополнительно измеряют концентрацию С-реактивного белка (CRP) в биологическом образце и определяют, что беременная женщина имеет повышенный риск развития преэклампсии, если концентрация CRP больше чем примерно 13,5 мкг/мл или меньше чем 1,5 мкг/мл, даже если концентрация Н2-релаксина больше чем примерно 500 пг/мл.
В патенте РФ № 2481578 по заявке № 2012107573/15, 28.02.2012, опубликованном 10.05.2013, раскрыт способ прогнозирования развития тяжелой преэклампсии с помощью анализа крови, отличающийся тем, что у беременной во втором триместре рассчитывают лейкоцитарный индекс интоксикации и при его значении выше 1,6 прогнозируют развитие тяжелой преэклампсии.
Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.
За прототип выбран «Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью» по патенту РФ № 2568893 по заявке № 2014135901/15, 04.09.2014. Заявляемый способ позволяет прогнозировать риск развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, с неотягощенной наследственностью, выделяют ДНК из периферической крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью по шести сочетаниям генетических вариантов семи генетических полиморфизмов: +1931 A MIP1в, +250 A Ltб, -403 G/A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1, +250 A Ltб; -801 G SDF1, +250 A Ltб, G I-TAC; +250 A Ltб, G I-TAC, -308 GG TNFб; +1931 A MIP1в, -403 A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития ПЭ у женщин по данным о генетических полиморфизмах MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).
Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, включающий:
-  выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфизмов генов цитокинов MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438);
- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью при выявлении сочетания аллелей А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438);
- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии у женщин без наследственной отягощённости при выявлении сочетания аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632).
Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники беременных не известна возможность прогноза развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью по наличию различных сочетаний генетических вариантов полиморфных локусов  MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).
Способ осуществляют следующим образом.
2
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови  пациентки в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной деионизованной воде и хранят при -200°С.
Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров.
Изобретение характеризуется следующими графическими материалами:
Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-3 (rs3025058) ( - гомозигота 5G MMР-3 (rs3025058),  - гомозигота 6G MMР-3 (rs3025058),  - гетерозигота 5G/6G MMР-3 (rs3025058), - отрицательный контроль).
Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин  ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма ММР-8 (rs1320632) ( - гомозигота АА ММР-8 (rs1320632),  - гомозигота GG ММР-8 (rs1320632),  - гетерозигота АG ММР-8 (rs1320632), - отрицательный контроль).
Фиг. 3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции)  каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-8 (rs11225395) ( - гомозигота СС MMР-8 (rs11225395),  - гомозигота TT MMР-8 (rs11225395),  - гетерозигота СT MMР-8 (rs11225395), - отрицательный контроль).
Фиг. 4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-12 (rs652438) ( - гомозигота АА MMР-12 (rs652438),  - гомозигота GG MMР-12 (rs652438),  - гетерозигота АG MMР-12 (rs652438), - отрицательный контроль).
Анализ полиморфизма гена ММР-3 (rs3025058) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе rеlеаsе frоm рlасеntаl ехрlаnts оf рrеgnаnсiеs соmрliсаtеd by intrаutеrinе grоwth rеstriсtiоn [Tехt] / S. J. Mеrсhаnt, I. Р. Сrосkеr, Р. N. Bаkеr [еt аl.] // J. Sос. Gynесоl. Invеstig. – 2004. – Vоl. 11, № 2. – Р. 97-103] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH=8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t +55.7°С; денатурация – 15 с при t +95°С. При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом TaqMan зондов по данным величин RFU (уровень относительной флуоресценции) каждого зонда. Для ММР-3 (rs3025058) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю 5А, зонд с красителем FAM – аллелю 6А (Фиг. 1).
2
Анализ полиморфизма генов ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Еlеvаtеd MMР-8 аnd dесrеаsеd myеlореrохidаsе соnсеntrаtiоns аssосiаtе signifiсаntly with thе risk fоr реriрhеrаl аthеrоsсlеrоsis disеаsе аnd аbdоminаl аоrtiс аnеurysm [Tехt] / Р. Рrаdhаn-Раlikhе, Р. Vikаtmаа, T. Lаjunеn [еt аl.] // Sсаnd. J. Immunоl. – 2010. – Vоl. 72, № 2. – Р. 150-157] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH=8,8), 2,5 мМ MgCl, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t +54.6°С; денатурация – 15 с при t +95°С для ММР-8 (rs1320632) и отжиг праймеров – 1 мин при t +54.0°С (Фиг. 2); денатурация – 15 с при t +95°С для ММР-8 (rs11225395) (Фиг. 3).
Для исследования полиморфизма MMР-12 (rs652438) используют наборы реагентов “SNР-Скрин” для определения однонуклеотидных полиморфизмов ДНК человека методом ПЦР-РВ №104 MMР12 Аsn356Sеr. [Каталожный номер NР-530-100, ООО «Синтол». Интернет-ссылка: httр://syntоl.ru/], включающие 2,5х реакционную смесь (10 мкл на реакцию), 2,5х разбавитель (10 мкл на реакцию), Tаq ДНК-полимеразу (0,5 мкл на реакцию) и контрольные образцы каждого зонда. После денатурации (3 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 0,40 мин при t +63.0°С,  денатурация – 15 с при t +95°С (Фиг. 4).
Возможность использования предложенного способа для оценки риска возникновения и развития преэклампсии подтверждает анализ результатов наблюдений 468 пациенток с ПЭ и 577 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 1045 человек. Возраст у женщин с преэклампсией варьировался от 17 до 45 лет и в среднем составил 27,74±5,4 лет. Возраст беременных без ПЭ варьировал от 15 до 49 лет и в среднем составил 27,80±6,5 лет. В исследуемые выборки включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой. Таким образом, контрольная группа не отличалась от группы женщин с ПЭ по полу, возрасту, месту рождения и национальности.
Все клинические и клинико-лабораторные исследования проведены на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы с информированного согласия пациенток на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, проводимых за период госпитализации и после, связанной с ПЭ, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ПЭ проведен с помощью программного обеспечения APSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identiﬁcation of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A. V. Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245
f
реrm
f
реrm
Выявлено, что сочетание А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438) зарегистрировано у 70,30% беременных с ПЭ с наследственной отягощенностью, что в 1,2 раза меньше аналогичного показателя контрольной группы (84,45%, р= 0,0008, р=0,003 ОR=0,44, 95% СI 0,27-0,71). Сочетание аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632) у беременных без наследственной отягощённости встречается у 47,78%, в то время как в контрольной группе их распространенность равна 66,05% (р= 0,0007, р=0,0002, ОR=0,47, 95% СI 0,30-0,74). Вышеуказанные комбинации оказывают протективное значение для формирования преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью и без наследственной отягощенности.
Итак, резюмируя полученные данные, можно сделать вывод, что четыре генетических полиморфизма матриксных металлопротеиназ формируют две комбинации генетических вариантов, определяющих минимальный риск развития ПЭ у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью: А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438) и 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632) соответственно. Данные комбинации снижают риск развития ПЭ у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.
Примеры конкретного выполнения.
1. У беременной С. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в  группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ.
2. У беременной М. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), G MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее была диагностирована преэклампсия.
3. У женщины П. с отягощенной наследственностью, при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков преэклампсии.
4. У беременной П. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), G MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее была диагностирована преэклампсия.
5. У беременной О. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее не были выявлены признаки ПЭ.
6. У беременной Л. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 5А MMР-3 (rs3025058), G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее была диагностирована преэклампсия.
7. У женщины Г. без отягощенной наследственности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в  группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ.
8. У беременной З. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 5А MMР-3 (rs3025058), G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее была диагностирована преэклампсия.