СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ ОТ МАТЕРЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ ОБОСТРЕНИЕ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD OF ASSESSING INFLUENCE OF HERPES VIRUS INFECTION ON ERYTHROCYTE MEMBRANE STABILITY IN NEWBORNS OF MOTHERS SUFFERED AGGRAVATED HERPES VIRUS INFECTION IN THIRD TRIMESTER OF PREGNANCY

Цель исследования показать, что если при обострении у беременной в третьем триместре герпес-вирусной инфекции вирус герпеса преодолевает фетоплацентарный барьер ворсинок синцитиотрофобласта и в периферической крови новорожденного, стимулирует нарастание в мембранах эритроцитов новорожденного продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА), то в них происходят структурные изменения - снижается содержание β-спектрина. Мембраны эритроцитов плода и новорожденного, как общеизвестно, имеют отличающуюся друг от друга структуру: у новорожденного и плода они шаровидной формы, диаметр их от 8 до 10 мкм в отличие от материнских, имеющих дисковидную форму и диаметр от 7 до 7.5 мкм.
Уязвимость белковой стромы эритроцитов новорожденных при попадании в его кровь вируса герпеса и нарастании малонового диальдегида становится очень опасным явлением для новорожденного.
Спектрин является главным протеином мембран эритроцитов, выполняющим функцию цитоскелета мембраны (V.T.Marchesi, 1983) [7]. α- и β-спектриновые нити переплетаясь, образуют основу цитоскелета эритроцита (J.Palek. 1985 [8]; А.И.Воробьев, 2007 [1]; M.J.Telen, R.E.Kaufinan, 2004 [9]). Изменение структуры молекулы спектрина или снижение его содержания нарушают устойчивость мембраны эритроцитов. Не исключено, что фактором, отрицательно влияющим на содержание спектрина, являются перекиси липидов, выработка которых, стимулируется обострением герпес-вирусной инфекции. В качестве прототипа взяты работы: Иванова В.П., Лукашова А.Д., Полоникова А.В. (2000) [2], отмечающих, что при гипотонии нарушается содержание основных мембранных белков эритроцитов, а также работу Штехмана М.И (2004) [5], в которой автор указывает, что при гипохромной анемии под влиянием нарушения электролитного баланса в эритроцитах происходит изменение структуры мембранного белка-спектрина.
Однако, в работе Иванова В.П., Лукашова А.А. и Полоникова А.В. [2] нет указаний, какие именно факторы становятся причиной нарушения содержания белков цитоскелета мембран эритроцитов при гипотонии, а в работе Штехмана М.И. [5] основной причиной изменения цитоскелета эритроцитов считается нарушение баланса электролитного состава эритроцитов.
В работах М.Т. Луценко и И.А. Андриевской (2009) описываются изменения в мембранах эритроцитов беременной, но не новорожденного [3].
В отличие от вышеуказанных работ в представленной заявке имеются следующие элементы отличия.
1. Авторы указывают, что вирус герпеса, заражая беременную, проникает через барьер в кровь новорожденного.
2. У новорожденного увеличивается в мембранах эритроцитов содержание малонового диальдегида.
3. Под влиянием герпес-вирусной инфекции с прямым участием малонового диальдегида в мембранах эритроцитов новорожденного нарушается структура скелетных белков - снижается содержание β-спектрина.
В своих исследованиях мы обращаем внимание на фактор, наиболее токсично действующий на мембрану эритроцитов, - малоновый диальдегид, который активно вырабатывается в клеточных мембранах под влиянием инфекционного начала - герпес-вирусной инфекции, а изменения происходят не у взрослых пациентов, а в эритроцитах новорожденных, родившихся от матерей, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции.
Заявленный способ имеет следующие приемы.
1. Исследовали кровь у 20 беременных в третьем триместре гестации и 20 новорожденных, родившихся от этих матерей. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).
2. В мембранах эритроцитов новорожденных методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия, выявляли β-спектрин с помощью денситометрии на аппарате «Biometra» (Германия).
3. Малоновый диальдегид определяли в периферической крови новорожденных спектрофотометрическим методом на аппарате «Stat-Fax-1900» (USA) по методу, предложенному И.Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили (1977).
4. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
Исследования показали, что в случае обострения герпес-вирусной инфекции у беременной в третьем триместре гестации высокий титр антител в периферической крови отмечается как у матери, так и у новорожденного (1:12800).
При этом в периферической крови новорожденного обнаруживается накопление до 1,65±0,09 мкмоль/мл МДА (контроль - 0,4 мкмоль/мл; р<0,001). Изучение методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия в мембранах эритроцитов новорожденного отмечается снижение содержания β-спектрина до 6,01±0,22% (контроль - 7,11±0,40%; р<0,001).
ф
Проведенный дискриминантный анализ показал, что дискриминантная функция (D) по формуле.
Имя выборки
Объем выборки
Количество параметров
Расстояния Махалан
Критерий Фишера, различия выборок
Вероятность различия выборок
Граничное значение дискриминантной функции
Вероятность ошибочности классиф., %
493
14
2
5.49
101.38
100.000
-55.45
.513
00R
14
2
.513
D<sub>ф</sub>=(-9.236×β - спектрин)+(+19.029×МДА)
где D<sub>ф</sub> - дискриминантная функция;
β-спектрин - белок стромы эритроцитов, содержащийся в мембранах эритроцитов;
- 9,236 - коэффициент, автоматически выставляемый компьютером в дискриминантном уравнении при значении β-спектрина, равном 6,01%;МДА - малоновый диальдегид;
+ 19,029 - коэффициент, автоматически выставляемый компьютером в дискриминантном уравнении при значении МДА -1,65 мкмоль/мл.
ф
ф
Таким образом, при обострении герпес-вирусной инфекции в периферической крови новорожденного увеличивается содержание малонового диальдегида (МДА), что приводит к снижению в мембранах эритроцитов β-спектрина до 6,01±0,22% (контроль - 7,11±0,40%), выявляемого методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилфосфатом натрия. По вычисленному значению D в формуле дискриминантной функции D=(-9.236×β-спектрин)+(+19.029×МДА) более (-24,03) оценивают неустойчивость мембран эритроцитов, формирующую угрозу разрушения эритроцитов и развитие внутриутробной анемии.
Литература
1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. - М.: Изд. «Ньюдиамед», 2007 - 1275 с.
2. Иванов В.П, Лукашов А.А, Полоников А.В. Содержание основных белков мембран эритроцитов у больных первичной артериальной гипотонией и ее связь с наследственностью, предрасположенной к сердечно-сосудистой патологии // Тер. Архив. 2000. - №9. - С.69-73.
3. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Дифференциальная диагностика устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии РАМН, 2009. - №4. - С.71-74.
4. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. Москва. - 1977. - 390 с.
5. Штехман М.И. Железодефицитная анемия и беременность // Гинекология. 2004. - Т.6, №4. - 11 с.
6. Marchesi V.T. Functional proteins of the human red cell membrane semin // Hematol. 1979. - Vol.16. - P.3-20.
7. Marchesi V.T. The red cell membrane skeleton recent progress // Blood. 1983. - P.1-11.
8. Palek J. Hereditary elliptocytosis and related disordes // Clin. Hematol. 1985. - Vol.14, №1. Р.45-87.
9. Telen M.J., Kaufman R.E. The mature erythrocyte. Wintrobs Clinical Hematology. Ed.J.P.Greer, J.Forster, J.N.Lukens. Chapter 8.11th edition. Lippincott William and Wilkins. 2004. P.217-247.