СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ ДОЗ АЛЛОГЕННЫХ T-КЛЕТОК С ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ
METHODS AND COMPOSITIONS FOR ADMINISTRATION OF DOSES OF ALLOGENEIC T-CELLS WITH CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США с порядковым №62/750215, поданной 24 октября 2018 года, предварительной заявки на патент США с порядковым №62/716898, поданной 9 августа 2018 года; и предварительной заявки на патент США с порядковым №62/579426, поданной 31 октября 2017 года, содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки в их полном объеме.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Настоящее изобретение относится к терапевтическим схемам для лечения нарушений, в том числе пролиферативных нарушений и иммунных нарушений. Терапевтические схемы по настоящему изобретению включают введение одной или нескольких доз иммунных клеток, содержащих аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором. Терапевтические схемы по настоящему изобретению можно применять в предупреждении и/или лечении нарушений, в том числе рака.
ОПИСАНИЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА, ПРЕДСТАВЛЕННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ
[0003] Содержание текстового файла, представленного в данном документе в электронном виде, включено посредством ссылки в их полном объеме: машиночитаемая форма перечня последовательностей (название файла: ALGN-012-03WO Sequence Listing.txt, дата составления 30 октября 2018 года, размер файла 39283 байта).
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0004] Доступны различные способы в отношении адоптивной клеточной терапии с использованием сконструированных клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, такие как химерные антигенные рецепторы (CAR)-T-клеток. Однако дозы аллогенных CAR-T-клеток, необходимые для эффективности лечения заболевания и достижения ремиссии у пациентов-людей, неизвестны. В данном документе предусмотрены способы, композиции и изделия для введения пациентам доз и повторного введения доз аллогенных CAR-T-клеток. Раскрытые в данном документе способы обеспечивают снижение риска токсичности и/или повышение эффективности, например, путем увеличения воздействия на субъект введенных клеток (например, путем улучшения увеличения количества и/или персистенции вводимых клеток).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
[0005] Настоящее изобретение относится к терапевтическим схемам для лечения нарушения, такого как рак. Более конкретно, настоящее изобретение относится к терапевтическим схемам для лечения нарушения, такого как рак, путем введения аллогенных CAR-T-клеток. Особенности способов, в том числе время введения доз и количества вводимых клеток, обеспечивают различные преимущества, такие как улучшенная эффективность и/или более низкая токсичность, например, вследствие повышенного воздействия на субъект вводимых клеток.
[0006] Предусмотрены способы введения субъектам CAR-T-клеток, например, для лечения заболеваний и/или нарушений у субъектов. Как правило, способы включают введение однократных или многократных доз таких клеток и/или введение последующей дозы субъекту, предварительно получавшему лечение с помощью предыдущей (например, первой) дозы таких клеток. Также предусмотрены клетки, композиции и изделия для применения в таких способах.
5
6
7
8
[0007] В некоторых вариантах осуществления способы предусматривают лечение взрослого субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD19+ В-клеточный лейкоз, включающее введение субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека (например, UCART19 (CD19 CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-KneTKH), где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 6×10 клеток/доза, приблизительно 6×10 клеток/доза, приблизительно 6-8×10 клеток/доза и приблизительно 1,8-2,4×10 клеток/доза.
7
[0008] В некоторых вариантах осуществления способы предусматривают лечение педиатрического субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD19+ В-клеточный лейкоз, включающее введение субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека (например, UCART19 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки), или UCART19 (CD19CAR/R2+_TCRαβ-_T-клетки), или UCART19 (CD19CAR/TCRαβ-_T-клетки), где по меньшей мере одна доза составляет приблизительно 2-8 × 10 клеток/доза.
6
6
6
6
6
6
6
6
[0009] В некоторых вариантах осуществления способы предусматривают лечение субъекта, у которого имеется рефрактерная и/или рецидивирующая острая неходжкинская лимфома (например, В-крупноклеточная лимфома или фолликулярная лимфома), при этом способ включает введение субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки), где по меньшей мере одна доза составляет от приблизительно 20×10 клеток/доза до приблизительно 360×10 клеток/доза, например, приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза, 240×10 клеток/доза или приблизительно 360×10 клеток/доза.
[0010] В некоторых вариантах осуществления способы включают (а) введение субъекту с заболеванием первой дозы аллогенных CAR-T-клеток и (b) введение субъекту последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток. В других вариантах осуществления способы осуществляют путем введения субъекту последующей дозы или доз, как в (b), субъекту, которому ранее вводили первую дозу, как в (а). В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой специфические в отношении опухолевых антигенов CAR-T-клетки. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T-клетками (например, UCART19 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки)). В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой опухоль. В некоторых вариантах осуществления оно представляет собой рак, злокачественное новообразование, неоплазму или другое пролиферативное заболевание или нарушение, такое как лейкоз, лимфома, например, хронический лимфолейкоз (CLL), острый лимфобластный лейкоз (ALL (например, рецидивирующий/рефрактерный ALL)), неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз, диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL), множественную миелому, фолликулярную лимфому, лимфому из мантийных клеток, медленно растущую В-клеточную лимфому, В-клеточные злокачественные новообразования, формы рака толстой кишки, легкого (например, мелкоклеточный и немелкоклеточный рак легкого), печени, молочной железы, предстательной железы, яичника, кожи, меланому, рак кости и головного мозга, рак яичника, формы эпителиального рака, почечно-клеточную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, лимфому Ходжкина, карциному шейки матки, колоректальный рак, глиобластому, нейробластому, саркому Юинга, медуллобластому, остеосаркому, синовиальную саркому, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC) и/или мезотелиому. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому. В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз. В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующий или рефрактерный острый лимфобластный лейкоз. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой неходжкинскую лимфому (NHL). В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующую или рефрактерную В-крупноклеточную лимфому. В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующую или рефрактерную фолликулярную лимфому.
[0011] В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ALL). В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз у детей (ALL). В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лимфоидное злокачественное новообразование на поздней стадии, такое как В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (B-ALL). В некоторых вариантах заболевание представляет собой рефрактерный B-ALL, например рефрактерный B-ALL у взрослых. В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующий B-ALL, например рецидивирующий B-ALL у взрослых. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой экстрамедуллярное заболевание, ассоциированное, например, с одной или более формами рака, описанными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается выявляемое молекулярное заболевание и/или минимальное остаточное заболевание на момент введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдаются один или более симптомов заболевания на момент введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой рак, и у субъекта наблюдается рецидив во время начала введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому, и у субъекта наблюдается более чем 5% бластных клеток в костном мозге на момент введения последующей дозы.
[0012] В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой рак, и у субъекта наблюдается морфологическое заболевание. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому, и у субъекта наблюдается экстрамедуллярное заболевание (т.е. наличие 6 ластов вне костного мозга) на момент введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому, и у субъекта наблюдается более чем 5% бластных клеток в костном мозге на момент введения последующей дозы. В других вариантах осуществления заболевание представляет собой рак, и у субъекта не наблюдается морфологическое заболевание во время начала введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому, и у субъекта не наблюдается более чем 5% бластных клеток в костном мозге на момент введения последующей дозы.
4
4
5
5
6
6
6
7
7
8
8
8
6
6
6
6
6
6
6
6
[0013] В некоторых вариантах осуществления способы включают (а) введение субъекту, страдающему заболеванием, первой дозы аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления первая доза содержит приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 1×10, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 4,8×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления первая доза содержит от приблизительно 20×10 клеток до приблизительно 360×10 клеток, например, приблизительно 20×10 клеток, приблизительно 40×10 клеток, приблизительно 80×10 клеток, приблизительно 120×10 клеток, 240×10 клеток или приблизительно 360×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают (b) введение субъекту последующей дозы CAR-T-клеток в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 5 недель после начала введения согласно (а) до менее чем приблизительно 24 недели после него.
6
[0014] В некоторых вариантах осуществления субъекту с рецидивирующим/рефрактерным ALL вводят первую и последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток, каждая из которых содержит приблизительно 6×10 клеток, и последующую дозу CAR-T-клеток в (b) вводят через приблизительно 99 дней после начала введения в (а).
[0015] В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение дополнительных последующих или последующих доз таким образом, что вводят первую и несколько последующих доз, например, в соответствии с дозируемыми количествами и временными графиками, указанными для первой и последующих доз. В некоторых вариантах осуществления первую из одной или более последующих доз вводят за время, которое составляет по меньшей мере или более чем 5 недель после начала введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления введение первой, второй и последующих доз включает введение по меньшей мере трех доз в течение приблизительно 5 недель. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят через приблизительно 16 недель после начала введения первой дозы, и дополнительную последующую или последующую дозу вводят на неделе 17 после начала введения первой дозы. В некоторых вариантах осуществления дополнительные последующие дозы вводят на неделе 17 и/или неделе 34 после начала введения первой дозы.
[0016] В некоторых аспектах время введения последующей(-их) дозы(доз) является дополнительным, при этом у субъекта не наблюдается иммунный ответ, например, не наблюдается выявляемый адаптивный иммунный ответ у хозяина, специфический в отношении CAR-T после указанной первой (или предыдущей) дозы.
[0017] В некоторых вариантах осуществления время между введением первой дозы (исходной дозы), например, началом введения первой или предыдущей дозы и началом введения последующей дозы (например, началом введения последующей дозы) составляет более чем приблизительно 4 недели, например, более чем приблизительно 5, 6, 7, 8 или 9 недель, например, более чем приблизительно 20 недель, например, от приблизительно 9 и до приблизительно 35 недель, от приблизительно 14 и до приблизительно 28 недель, от 15 до 27 недель или от 16 недель и до приблизительно 18 недель; и/или составляет или составляет приблизительно 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 недель. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы (например, начало введения) осуществляют через более чем приблизительно 5 недель после введения первой или предыдущей дозы (например, начала введения) и менее чем приблизительно 24 недели после него. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы начинают через 17 недель после начала введения первой дозы. В некоторых вариантах осуществления время между введением первой и последующей дозы (например, начало введения) или предыдущей и следующей за ней последующей дозой составляет от более чем приблизительно 5 недель до менее чем приблизительно 24 недели, как например от 10 до 24 недель, как например приблизительно 17 недель. В некоторых вариантах осуществления время между введением первой и последующей дозы (например, начало введения) составляет приблизительно 17 недель. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы (например, начало введения) осуществляют более чем через приблизительно 7 дней после и менее чем через приблизительно 365 дней после введения первой или предыдущей дозы (например, начала введения). В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы (например, начало введения) осуществляют более чем через приблизительно 30 дней после и менее чем через приблизительно 110 дней после введения первой или предыдущей дозы (например, начала введения).
[0018] В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается отсутствие персистенции CAR-T-клеток на момент введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается субоптимальный ответ на момент введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления субоптимальный ответ может включать любое из одного или более из следующего: (i) полный ответ (CR), полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi) с выявляемым минимальным остаточным заболеванием (у пациентов с лейкозом) и отсутствием цитогенетического ответа; (ii) полный ответ костного мозга; (iii) частичный ответ или (iv) стабильный ответ.
[0019] В некоторых вариантах осуществления введение первой дозы приводит к облегчению одного или более симптомов заболевания у субъекта после введения первой дозы. В некоторых вариантах осуществления на момент введения последующей дозы у субъекта произошел рецидив, и/или один или более симптомов заболевания усилились после первоначального облегчения (например, ремиссии), возникшего после первой дозы.
[0020] В некоторых вариантах осуществления последующая доза клеток содержит CAR-T-клетки в количестве, достаточном для облегчения заболевания у субъекта. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы приводит к дополнительному облегчению заболевания у субъекта. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы приводит к облегчению заболевания у субъекта по сравнению с состоянием непосредственно перед началом введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы приводит к MRD-негативности. В некоторых вариантах осуществления способ обеспечивает облегчение заболевания в большей степени и/или в течение более длительного периода времени по сравнению со способом с альтернативной схемой введения доз, где субъекту вводят клетки в первой дозе и клетки в последующей дозе в виде однократной дозы. Облегчение может предусматривать уменьшение общего количества клеток, например опухолевых клеток, ослабление заболевания у субъекта в органе субъекта, в ткани субъекта или в биологической жидкости субъекта. Облегчение может предусматривать уменьшение молекулярного выявления с помощью проточной цитометрии или количественной ПЦР, массы или объема опухоли и/или уменьшение количества и/или степени метастазов. В некоторых вариантах осуществления облегчение предусматривает улучшение выживаемости субъекта, например, увеличение времени выживания или выживания без инцидентов, без прогрессировать или без рецидивов.
[0021] В некоторых вариантах осуществления заболевание сохраняется после введения первой дозы, и/или введения первой дозы недостаточно для устранения заболевания у субъекта. В некоторых вариантах осуществления введение указанной последующей дозы приводит к облегчению заболевания у субъекта по сравнению с состоянием непосредственно перед началом введения последующей дозы.
[0022] В некоторых вариантах осуществления введение первой дозы не вызывает у субъекта тяжелого синдрома высвобождения цитокинов (CRS). Тяжесть синдрома высвобождения цитокинов (CRS) может быть оценена в соответствии с измененной классификацией, описанной в документе Lee DW, et al., Blood 2014;124(2): 188-195, который включен в данный документ посредством ссылки в полном его объеме. В некоторых вариантах осуществления введение первой дозы не вызывает CRS у субъекта. В некоторых вариантах осуществления на основании клинических данных введение первой дозы не вызывает тяжелого CRS у большинства субъектов. В некоторых вариантах осуществления введение первой дозы не вызывает CRS, охватывающий комбинацию (1) персистирующей лихорадки (повышение температуры до по меньшей мере 38 градусов Цельсия в течение по меньшей мере трех дней) и (2) сывороточного уровня С-реактивного белка (CRP) до по меньшей мере или до приблизительно 20 мг/дл, и/или не вызывает CRS, охватывающий гипотензию, требующую использования двух или более вазопрессоров, или дыхательную недостаточность, требующую искусственной вентиляции легких.
[0023] В некоторых вариантах осуществления введение первой дозы не вызывает нейротоксичность степени 3 или более высокой степени у субъекта. В некоторых вариантах осуществления на основании клинических данных введение первой дозы не вызывает нейротоксичность степени 3 или более высокой степени у большинства субъектов. В некоторых вариантах осуществления симптомы, ассоциированные с клиническим риском нейротоксичности и/или нейротоксичности степени 3 или более высокой степени, включают спутанность сознания, делирий, выраженную афазию, притупление болевой чувствительности, миоклонию, летаргию, изменение психического состояния, судороги, сходную с приступом активность, приступы (необязательно при подтверждении с помощью электроэнцефалограммы [EEG]), повышенные уровни бета-амилоида (АР), повышенные уровни глутамата и повышенные уровни радикалов кислорода.
[0024] В некоторых вариантах осуществления субъекта получал лечение с помощью нацеленного на опухоль терапевтического средства перед введением первой дозы. В некоторых аспектах субъект является рефрактерным или невосприимчивым к указанному терапевтическому средству на момент введения первой дозы и/или последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления после введения первой дозы и перед указанным введением последующей дозы или перед введением первой дозы способы дополнительно включают оценивание в сыворотке крови уровня фактора, указывающего на CRS, симптома заболевания и/или индикатора иммунного ответа хозяина у субъекта в отношении рекомбинантного рецептора (например, к CAR), такого как гуморальный или клеточный иммунный ответ. В некоторых таких вариантах осуществления выявленный симптом заболевания представляет собой или включает общее количество клеток, относящихся к заболеванию, у субъекта, в органе субъекта, в ткани субъекта или в биологической жидкости субъекта, молекулярное выявление с помощью проточной цитометрии или количественной ПЦР, массу или объем солидной опухоли или количество или степень метастазов.
[0025] В некоторых вариантах осуществления способы включают оценку симптома заболевания перед введением последующей дозы и на основании результата оценки, определение последующей дозы клеток, подлежащих введению субъекту. В некоторых вариантах осуществления, если при оценке определено, что у субъекта имеется морфологическое заболевание, субъекту вводят последующую дозу, содержащую менее чем, более чем или приблизительно такое же количество аллогенных CAR-T-клеток, как и количество аллогенных CAR-T-клеток в первой дозе. В некоторых вариантах осуществления, если при оценке определено, что у субъекта имеется минимальное остаточное заболевание, ему вводят последующую дозу, содержащую увеличенное количество аллогенных CAR-T-клеток по сравнению с первой дозой. В некоторых вариантах осуществления последующая доза содержит приблизительно такое же количество аллогенных CAR-T-клеток, как и количество в первой дозе. В некоторых вариантах осуществления количество аллогенных CAR-T-клеток на килограмм, вводимых в последующей дозе, составляет менее чем, или равно, или приблизительно равно количеству на килограмм, введенному в первой дозе. В других вариантах осуществления количество аллогенных CAR-T-клеток, вводимое в последующей дозе, больше чем количество аллогенных CAR-T-клеток, вводимое в первой дозе. В некоторых вариантах осуществления последующая доза содержит увеличенное количество таких клеток по сравнению с первой дозой, например, в по меньшей мере 2, 5 или 10 раз больше, чем количество в первой дозе. В некоторых вариантах осуществления количество CAR-T-клеток на килограмм, вводимое в последующей дозе, в по меньшей мере или в приблизительно 2 раза или в по меньшей мере или в приблизительно 3 раза больше, чем количество рецептор-экспрессирующих (например, CAR-экспрессирующих) клеток на килограмм, вводимое в первой дозе.
[0026] В некоторых вариантах осуществления популяция аллогенных CAR-T-клеток в первой дозе увеличивается в количестве у субъекта после введения первой дозы и/или после введения последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления увеличение количества подтверждается увеличением уровня С-реактивного белка (CRP) в сыворотке крови после введения первой дозы и/или последующей дозы по сравнению с уровнем непосредственно перед введением. В некоторых вариантах осуществления увеличение количества подтверждается с помощью РК, как оценено с помощью, например, без ограничения проточной цитометрии. В некоторых вариантах осуществления увеличение количества подтверждается увеличением в сыворотке крови уровня нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, измеренного с помощью qPCR, после введения первой дозы и/или последующей дозы по сравнению с уровнем непосредственно перед введением. В некоторых вариантах осуществления увеличение составляет в по меньшей мере 1, 2 или 3 раза.
[0027] В некоторых вариантах осуществления клетки первой дозы и клетки второй или последующей дозы получены из одного и того же донора. В некоторых вариантах осуществления клетки первой дозы и клетки второй или последующей дозы получены из разных доноров.
[0028] В некоторых вариантах осуществления первая и/или последующая доза не является дробной дозой. Например, в некоторых вариантах осуществления клетки первой дозы вводят в одной фармацевтической композиции, содержащей клетки первой дозы, и/или клетки последующей дозы вводят в одной фармацевтической композиции, содержащей клетки последующей дозы. В других вариантах осуществления первая и/или последующая доза представляет собой дробную дозу, например, когда клетки первой дозы вводят с помощью некоторого количества композиций, в общей сложности включающих клетки первой дозы, в течение периода времени, составляющего не более чем три дня; и/или последующая доза представляет собой дробную дозу, где клетки последующей дозы вводят с помощью некоторого количества композиций, в общей сложности включающих клетки последующей дозы, в течение периода времени, составляющего не более чем три дня.
[0029] В некоторых вариантах осуществления способы включают введение последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток субъекту, которому ранее вводили первую дозу аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу клеток вводят в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 5 недель после начала введения первой дозы до менее чем приблизительно 24 недели после него. В некоторых вариантах осуществления количество аллогенных CAR-T-клеток, вводимое в последующей дозе, такое же, как в первой дозе. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T-клеток (например, UCART19).
6
8
6
7
6
6
6
9
5
8
5
8
5
6
7
7
8
8
6
[0030] В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в первой дозе, составляет от приблизительно 0,5×10 клеток до 5×10 клеток, от приблизительно 0,75×10 клеток до 8×10 клеток или от приблизительно 5×10 клеток до 7×10 клеток, каждое включительно. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в первой дозе CAR-T-клеток, специфических в отношении CD19, составляет от приблизительно 0,5×10 клеток до 1×10 клеток, от приблизительно 1×10 клеток до 3×10 клеток или от приблизительно 6×10 клеток до 2,4×10 клеток, каждое включительно. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в первой дозе клеток UCART19, составляет приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6 × 10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8 × 10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в первой дозе клеток UCART19, составляет приблизительно 6 × 10 клеток.
6
9
5
8
5
8
5
6
7
7
8
8
6
6
[0031] В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в последующей дозе CAR-T-клеток, специфических в отношении CD19, составляет от приблизительно 0,5×10 клеток до 1×10 клеток, от приблизительно 1×10 клеток до 3×10 клеток или от приблизительно 6×10 клеток до 2,4×10 клеток, каждое включительно. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в последующей дозе клеток UCART19, составляет приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в последующей дозе клеток UCART19, составляет приблизительно 6×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления количество клеток, вводимых в первой и последующей дозе клеток UCART19, составляет приблизительно 6×10 клеток.
[0032] В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение схемы для лимфодеплеции перед первой дозой и/или перед введением последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает циклофосфамид, флударабин и/или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает один или более из циклофосфамида, флударабина, антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) и/или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления введение схемы для лимфодеплеции предусматривает введение циклофосфамида и флударабина перед введением первой дозы и антитела к CD-52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) после введения первой дозы. В некоторых вариантах осуществления введение схемы для лимфодеплеции включает введение схемы для лимфодеплеции перед введением первой дозы и необязательно в момент времени, отличный от момента времени перед введением последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции вводят за 2-10 дней перед введением первой дозы. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции вводят за 2-10 дней перед введением второй дозы. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции вводят за 2-10 дней перед введением первой дозы и за 2-14 дней перед введением второй дозы. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции вводят в течение курса, составляющего 1, 2, 3, 4 или 5 дней.
2
2
2
2
[0033] В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает введение приблизительно 90-120 мг/м флударабина и приблизительно 1500 мг/м циклофосфамида. В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает введение приблизительно 150 мг/м флударабина и приблизительно 120 мг/м циклофосфамида.
2
2
2
2
2
2
2
2
[0034] В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает введение флударабина в дозе от приблизительно 30 до 150 мг/м; циклофосфамида в дозе от приблизительно 300 до 4000 мг/м или антитела к CD52 (например, антитела к CD52, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) в дозе от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления флударабин вводят в дозе от приблизительно 30 до 150 мг/м; циклофосфамид вводят в дозе от приблизительно 300 до 4000 мг/м и антитело к CD52 (например, антитело к CD52, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг. В некоторых вариантах осуществления флударабин вводят в дозе приблизительно 30 мг/м/день; циклофосфамид вводят в дозе приблизительно 300 мг/м/день, или антитело к CD52 (например, антитело к CD52, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг/день. В некоторых вариантах осуществления флударабин вводят в дозе приблизительно 30 мг/м/день; циклофосфамид вводят в дозе приблизительно 300 мг/м/день, и антитело к CD52 (например, антитело к CD52, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг/день.
[0035] В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает введение флударабина и циклофосфамида. В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает введение флударабина, циклофосфамида и лекарственного средства к CD52 (например, антитела к CD52, имеющего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции дополнительно предусматривает введение Mensa (натрий-2-меркаптоэтансульфонат). В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции дополнительно предусматривает введение по меньшей мере одного кортикостероида. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят непосредственно перед введением антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10). В некоторых вариантах осуществления кортикостероид представляет собой метилпреднизолон, вводимый в дозе 1-5 мг/кг (например, 2 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят за по меньшей мере два дня перед введением CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид не вводят в течение по меньшей мере двух дней перед введением CAR-T-клеток.
[0036] В некоторых вариантах осуществления пациент получает премедикацию в отношении связанной с инфузией реакции перед схемой для лимфодеплеции. Премедикация может предусматривать введение, например, антигистаминного средства или ацетаминофена.
[0037] В некоторых вариантах осуществления компоненты схемы для лимфодеплеции флударабин/циклофосфамид (FC) или флударабин/циклофосфамид/антитело к CD52 (FCA) вводят одновременно; в других вариантах осуществления компоненты вводят последовательно. В некоторых вариантах субъект получает схему FC перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток и схему FCA перед повторным введением доз средства для лечения с помощью CAR-T-клеток. В некоторых вариантах субъект получает схему FCA перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток; и вторую схему FCA перед повторным введением доз средства для лечения с помощью CAR-T- клеток. В некоторых вариантах осуществления субъект получает схему FC перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) после первой дозы средства для лечения с помощью CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления субъект получает схему FC перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) после первой дозы средства для лечения с помощью CAR-T-клеток; и субъект дополнительно получает схему FC перед второй/последующей дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) после второй/последующей дозы средства для лечения с помощью CAR-T-клеток.
[0038] В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение средства для ослабления заболевания перед введением первой дозы и/или перед введением второй/последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение химиотерапевтического средства перед первой дозой и/или перед введением второй/последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления субъект предварительно получал лечение с помощью химиотерапевтического средства перед первой дозой. В некоторых вариантах осуществления химиотерапевтическое средство представляет собой или предусматривает кондиционирующую химиотерапию, которая уменьшает тяжесть заболевания у субъекта перед первой дозой и/или последующей дозой. В некоторых вариантах осуществления введение химиотерапевтического средства включает введение химиотерапевтического средства перед введением первой дозы и необязательно в момент времени, отличный от момента времени перед введением второй/последующей дозы. В некоторых вариантах химиотерапевтическое средство вводят за 2-10 дней перед введением первой дозы. В некоторых вариантах химиотерапевтическое средство вводят за 2-10 дней перед введением второй/последующей дозы. В некоторых вариантах химиотерапевтическое средство вводят за 2-10 дней перед введением первой дозы и за 2-14 дней перед введением второй/последующей дозы.
[0039] Также предусмотрены клетки и композиции для применения и вариантов применения аллогенных CAR-T-клеток и композиции для лечения заболевания у субъекта, такого как опухоль или рак. Также предусмотрены клетки и композиции для применения и вариантов применения аллогенных CAR-T-клеток и композиции для изготовления лекарственного препарата для лечения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления композиции или клетки для применения или вариантов медицинского применения предназначены для применения через 4-24 недели после предыдущего лечения. В некоторых вариантах осуществления композиции или клетки для применения составлены для введения последующей дозы в количестве, достаточном для уменьшения тяжести заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T-клеток (например, UCART19).
6
6
7
[0040] В некоторых вариантах осуществления таких вариантов медицинского применения композиции или клетки предназначены для применения, которое включает введение субъекту, у которого имеется заболевание, первой дозы аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления первая доза содержит приблизительно 1×10 общего количества клеток, приблизительно 6×10 общего количества клеток или приблизительно 1×10 общего количества клеток. В некоторых вариантах осуществления композиции или клетки предназначены для применения, которое включает введение субъекту последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток в момент времени, который составляет по меньшей мере или более чем приблизительно 4 недели после начала введения первой дозы и менее чем приблизительно 24 недели после него.
[0041] В некоторых вариантах осуществления аллогенные CAR-T-клетки предусмотрены для применения в способах лечения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления клетки предназначены для применения через приблизительно 4-24 недели после предыдущего лечения. В некоторых вариантах осуществления клетки для применения составлены для введения последующей дозы в количестве, достаточном для уменьшения тяжести заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T-клеток (например, UCART19).
[0042] В некоторых вариантах осуществления любых таких композиций или клеток для применения или вариантов медицинского применения у субъекта не наблюдается морфологическое заболевание и/или у субъекта не наблюдается более чем 5% бластных клеток в костном мозге.
5
6
7
7
8
8
[0043] В некоторых вариантах осуществления композиции или клетки предназначены для применения в способе, включающем введение субъекту, у которого имеется заболевание, первой дозы аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления первая доза составляет приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления клетки предназначены для применения в способе, который включает введение субъекту последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 5 недель после начала введения первой дозы до менее чем приблизительно 24 недели после него.
5
6
7
7
8
8
[0044] В данном документе также предусмотрены варианты применения аллогенных CAR-T-клеток для изготовления лекарственного препарата, предназначенного для лечения заболевания у субъекта, включающие клетки, которые составлены и/или упакованы для введения субъекту в первой и последующей дозах. В некоторых вариантах осуществления лечение предусматривает введение клеток субъекту в первой и последующей дозах, где первая доза включает приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T-клеток (например, UCART19).
5
6
7
7
8
8
[0045] В некоторых вариантах осуществления клетки для применения составлены и/или упакованы для введения субъекту в первой и последующей дозах, и/или лечение предусматривает введение клеток субъекту в первой и последующей дозах. В некоторых вариантах осуществления первая доза содержит приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток.
5
6
7
7
8
8
[0046] В некоторых вариантах осуществления применение включает случаи, когда первое и последующие введения включают введение клеток в одной или более стандартных дозах, при этом каждая стандартная доза содержит приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток.
[0047] В некоторых вариантах осуществления клетки или применение включают случаи, когда первое введение предусматривает введение однократной стандартной дозы. В некоторых вариантах осуществления клетки или применение включают случаи, когда последующее введение предусматривает введение двух или более стандартных доз. В некоторых вариантах осуществления клетки или применение включают случаи, когда последующее введение предусматривает введение однократной стандартной дозы.
[0048] В некоторых вариантах осуществления предусмотрено применение клеток для лечения заболевания, где заболевание представляет собой опухоль или рак. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лимфоидное злокачественное новообразование, такое как, например, без ограничения острые и хронические лейкозы, лимфомы, множественные миеломы, миелоидное злокачественное новообразование (например, лейкозы, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические/миелопролиферативные неоплазмы) или недифференцированное злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления композиция или клетки предназначены для применения в лечении острого лимфобластного лейкоза (ALL). В некоторых вариантах осуществления ALL является рецидивирующим/рефрактерным ALL. В некоторых вариантах осуществления композиция или клетки предусмотрены для применения в лечении неходжкинской лимфомы, такой как рецидивирующая или рефрактерная неходжкинская лимфома. В некоторых вариантах осуществления композиция или клетки предназначены для применения в лечении рецидивирующей или рефрактерной В-крупноклеточной или фолликулярной лимфомы.
[0049] В некоторых вариантах осуществления клетки, композиция или применение включают случаи, когда последующая доза составлена для введения приблизительно такого же количества аллогенных CAR-T-клеток, как и количество аллогенных CAR-T-клеток, специфических в отношении CD19, в предыдущей дозе. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая клетки последующей дозы, составлена для введения увеличенного количества аллогенных CAR-T-клеток по сравнению с первой дозой или предыдущей дозой. В некоторых вариантах осуществления клетки, композиция или применение включают случаи, когда последующая доза составлена для введения количества аллогенных CAR-T-клеток, меньшего чем количество аллогенных CAR-T-клеток, специфических в отношении CD19, в предыдущей дозе.
[0050] Также предусмотрены фармацевтические наборы для лечения пациента, страдающего от заболевания, такого как рак, при этом набор содержит CAR-T-клетки и антитело к CD52. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой С019-специфические CAR-T-клетки, такие как клетки UCART19. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют CAR под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления набор содержит первый контейнер, содержащий CAR-T-клетки, и второй контейнер, содержащий антитело к CD52. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из первого и второго контейнеров представляет собой гибкий мешок для инфузии клеток. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит этикетку или листок-вкладыш, содержащие инструкции по введению субъекту CAR-T-клеток и антитела к CD52.
[0051] Также предусмотрены изделия для применения в указанных способах. В некоторых вариантах осуществления изделие включает в себя некоторое количество контейнеров, например герметизируемых контейнеров, каждый из которых отдельно содержит стандартную дозу аллогенных CAR-T-клеток для введения субъекту, упаковочный материал и/или этикетку или листок-вкладыш. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T- клеток (например, UCART19).
5
6
7
7
8
8
[0052] В некоторых вариантах осуществления стандартная доза содержит количество клеток, которое подлежит введению в самой низкой дозе в указанных способах, например в размере первой дозы. В некоторых вариантах осуществления стандартная доза включает приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток.
[0053] В некоторых вариантах осуществления этикетка или листок-вкладыш содержат инструкции по введению субъекту некоторого количества стандартных доз, например, путем введения определенного количества таких стандартных доз, например одной стандартной дозы, при введении первой дозы, а затем введения последующей дозы, включающей одну или некоторое количество стандартных доз. В некоторых вариантах осуществления в инструкциях описано осуществление первого введения, при этом указанное первое введение включает доставку субъекту одной из указанных стандартных доз и осуществление последующего введения, причем указанное последующее введение включает введение субъекту одной или некоторого количества указанных стандартных доз. В некоторых вариантах осуществления в них описано, что последующее введение должно осуществляться в период времени от приблизительно 5 до приблизительно 24 недели после указанного первого введения. В некоторых вариантах осуществления контейнеры представляют собой или содержат гибкие мешки для инфузии клеток. В некоторых вариантах осуществления способы предназначены для аллогенного введения. В некоторых вариантах осуществления этикетка и/или упаковочный материал дополнительно включает идентификатор, специфический в отношении субъекта, который указывает, что клетки были получены из субъекта и/или должны вводиться субъекту специфически. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются специфическими в отношении CD19 CAR-T- клеток (например, UCART19).
[0054] Также предусмотрен способ получения популяции аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), направленных на представляющую интерес мишень, включающий: (а) выделение мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) от здорового донора; (b) активацию Т-клеток в РВМС; (с) трансдуцирование активированных Т-клеток лентивирусным вектором, где лентивирусный вектор представляет собой самоинактивирующийся рекомбинантный вектор, экспрессирующий CAR, представляющий интерес; (d) нарушение экспрессии генов TCRαβ и CD-52 в субпопуляции Т-клеток; (е) увеличение популяции Т-клеток и (f) обогащение популяции Т-клеток в отношении TCRαβ-отрицательных клеток; в результате чего образуется популяция «готовых» аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток). В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки включают аллогенные CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T- клетки.
6
6
[0055] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клетки), содержащие CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, для применения в способе лечения субъекта, у которого имеется рефрактерная и/или рецидивирующая неходжкинская лимфома, при этом способ включает введение субъекту по меньшей мере одной дозы CAR-T-клеток, где по меньшей мере одна доза составляет от приблизительно 20×10 клеток/доза до приблизительно 360×10 клеток/доза.
[0056] Также предусмотрены (CAR)-T-KneTKH с химерным антигенным рецептором (CAR-T-клетки) для применения в способе лечения, включающем: (а) введение субъекту первой дозы CAR-T-клеток и (b) введение субъекту последующей дозы CAR-T-клеток в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 28 дней после начала указанного в (а) введения до менее чем приблизительно 200 дней после него.
[0057] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) для применения в способе лечения, включающем введение субъекту последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток, которому ранее вводили первую дозу аллогенных CAR-T-клеток, где последующую дозу клеток вводят в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 5 недель после начала введения первой дозы до менее чем приблизительно 24 недели после него. Необязательно, где во время введения у субъекта не наблюдается выявляемый адаптивный иммунный ответ хозяина, специфический в отношении CAR- T-клеток.
[0058] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) для применения в способе лечения, включающем введение субъекту последующей дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR), где перед указанным введением субъект получал предыдущую дозу CAR-T-клеток в количестве, достаточном для демонстрации клинического эффекта у субъекта; и на момент введения у субъекта не проявляется выявляемый адаптивный иммунный ответ организма, специфический в отношении CAR-T-клеток; и/или время между указанными предыдущей и последующей дозами составляет от более чем приблизительно 5 недель до менее чем приблизительно 24 недели.
5
6
7
8
[0059] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клетки), содержащие CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, для применения в способе лечения взрослого субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий CD19+ В-клеточный острый лимфобластный лейкоз, где способ включает введение субъекту по меньшей мере одной дозы CAR-T- клеток, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 6×10 клеток/доза, 6×10 клеток/доза, приблизительно 6-8×10 клеток/доза и приблизительно 1,8-2,4×10 клеток/доза.
7
[0060] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клетки), содержащие CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, для применения в способе лечения педиатрического субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий CD19 +В-клеточный острый лимфобластный лейкоз, включающем введение субъекту по меньшей мере одной дозы CAR-T-клеток, содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета к CD19 человека, где по меньшей мере одна доза составляет приблизительно 2-8×10 клеток/доза.
[0061] Также предусмотрены аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR) для применения в лечении заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток, где клетки предназначены для применения в момент времени от приблизительно 5 до 24 недель после предыдущего лечения; и при этом клетки составляют для введения последующей дозы в количестве, достаточном для облегчения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток.
[0062] В некоторых вариантах осуществления способы лечения, раскрытые в данном документе, применяли в отношении субъектов, которые получали лечение с помощью антитела для истощения CD52+ клеток (например, антитела, содержащего SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10), или которые будут получать лечение с помощью указанного антитела как части указанных способов лечения. Эти способы лечения могут включать применение CAR-T-клеток (например, UCART19), дефицитных по CD52.
[0063] Также предусмотрены способы получения популяции аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), направленных на мишень, представляющую интерес, включающие:
(a) выделение мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) от здорового донора;
(b) активацию Т-клеток в РВМС;
(c) трансдуцирование активированных Т-клеток лентивирусным вектором, где лентивирусный вектор представляет собой самоинактивирующийся рекомбинантный вектор, экспрессирующий CAR, представляющий интерес;
(d) нарушение экспрессии генов TCRαβ1 и CD-52 в субпопуляции Т-клеток;
(e) увеличения популяции Т-клеток и
(f) обогащение популяции Т-клеток в отношении TCRαβ-отрицательных клеток
с получением тем самым популяции аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0064] На ФИГ. 1 изображена иллюстративная схема, показывающая возможные стадии схемы многократного введения доз для лечения с помощью аллогенных CAR- T-клеток.
[0065] На ФИГ. 2А и ФИГ. 2В показаны данные кинетики от двух пациентов, получавших вторую инфузию UCART19 (исследование с повторным введением доз).
[0066] На ФИГ. 3А изображена иллюстративная схема, показывающая стадии схемы введения доз для лечения с помощью аллогенных CAR-T-клеток.
[0067] На ФИГ. 3В изображена иллюстративная схема, показывающая стадии схемы введения доз для лечения с помощью аллогенных CAR-T-клеток.
[0068] На ФИГ. 4А и ФИГ. 4В изображены иллюстративные блок-схемы в отношении получения аллогенных CAR-T-клеток.
[0069] На ФИГ. 5 изображен иллюстративный сконструированный продукт на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19+ (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки).
[0070] На ФИГ. 6А и ФИГ. 6В показан план исследования в отношении применения продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом.
[0071] На ФИГ. 7А показан статус исследования после начала применения продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом.
[0072] На ФИГ. 7 В показан ответ, продолжительность ремиссии и повторное введение доз UCART19 у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом.
[0073] На ФИГ. 8А и ФИГ. 8В изображен профиль РК проточной цитометрии и кинетика UCART19 у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом.
[0074] На ФИГ. 9 показан план исследования применения продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[0075] На ФИГ. 10 показан статус исследования после начала применения продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[0076] На ФИГ. 11 показаны ответ и продолжительность ремиссии (противолейкозная активность) UCART19 у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[0077] На ФИГ. 12 показана клеточная кинетика UCART19 у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[0078] На ФИГ. 13А, ФИГ. 13В и ФИГ. 13С показаны данные в отношении химеризма в крови после применения UCART19 у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[0079] На ФИГ. 14 показан ответ пациента №18 на повторное введение доз, как описано в примере 3.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Общие методики
[0080] При осуществлении способов и композиций, описанных в настоящем изобретении, на практике используются, если не указано иное, традиционные методики молекулярной биологии (в том числе рекомбинантные методики), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах компетенции специалиста в данной области техники. Такие методики в полном объеме поясняются в литературе, такой как Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).
Определения
[0081] Используемый в данном документе термин «аллогенный» означает, что клетки или популяция клеток, используемые для лечения пациентов, происходят не из указанного пациента, а из донора, за исключением донора, совместимого с лейкоцитарным антигеном человека (HLA).
[0082] Используемый в данном документе термин «аутологичный» означает, что клетки, клеточная линия или популяция клеток, используемые для лечения пациентов, происходят из указанного пациента или из донора, совместимого с лейкоцитарным антигеном человека (HLA).
[0083] Используемый в данном документе термин «иммунная клетка» относится к клетке гематопоэтического происхождения, функционально участвующей в инициации и/или осуществлении врожденного и/или адаптивного иммунного ответа.
[0084] Используемый в данном документе термин «химерный антигенный рецептор» или, альтернативно, «CAR» относится к молекуле, которая, находясь в иммунной эффекторной клетке, обеспечивает клетке специфичность в отношении мишени и внутриклеточный сигнал при взаимодействии с мишенью.
[0085] Используемый в данном документе термин «схема введения доз» относится к общему курсу лечения, назначаемого пациенту, например лечению CAR-Т-клетками.
[0086] Как используется в данном документе, «лечение» представляет собой подход для получения благоприятных или требуемых клинических результатов. Для целей настоящего изобретения благоприятные или требуемые клинические результаты включают без ограничения одно или более из следующего: уменьшение пролиферации (или разрушение) опухолевых или раковых клеток, ингибирование метастазирования опухолевых клеток, сокращение объема или уменьшение размера опухоли, ремиссию заболевания (например, рака), ослабление симптомов, возникающих в результате заболевания (например, рака), повышение качества жизни тех, кто страдает от заболевания (например, рака), уменьшение дозы других лекарственных препаратов, необходимых для лечения заболевания (например, рака), задержку прогрессирования заболевания (например, рака), излечение заболевания (например, рака) и/или продление выживания пациентов, у которых имеется заболевание (например, рак). «Уменьшение заболеваемости» означает любое из снижения степени тяжести (которое может включать уменьшение потребности и/или количества (например, воздействия) других лекарственных средств и/или видов терапии, обычно используемых для лечения указанного заболевания.
[0087] «Облегчение» или «облегчать» означает ослабление или улучшение одного или более симптомов по сравнению со случаем, когда лечение не назначено. «Облегчение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
[0088] Используемый в данном документе термин «эффективная доза» или «эффективное количество» лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для достижения любого одного или более из благоприятных или требуемых результатов. Для профилактического применения благоприятные или требуемые результаты включают устранение или уменьшение риска, сокращение степени тяжести или отсрочку возникновения заболевания, в том числе биохимических, гистологических и/или поведенческих симптомов заболевания, его осложнений и промежуточных патологических фенотипов, представленных в ходе развития заболевания. Эффективную дозировку можно вводить за одно или более введений. Для целей настоящего изобретения эффективная доза лекарственного средства, CAR-T-клеток или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для осуществления профилактического или терапевтического лечения либо непосредственно, либо косвенно. Как понятно в клиническом контексте, эффективная доза лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может достигаться или может не достигаться в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективная доза» может рассматриваться в контексте введения одного или более терапевтических средств, и можно считать, что одно средство подлежит введению в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более другими средствами можно достичь или достигается требуемый результат.
[0089] «Индивидуум» или «субъект» представляет собой млекопитающее, например человека. Млекопитающие также включают без ограничения сельскохозяйственных животных, животных, используемых в спорте, домашних животных, приматов, лошадей, собак, кошек, мышей и крыс.
[0090] «Рефрактерный» в контексте данного документа относится к заболеванию (например, раку), которое не поддается лечению. В вариантах осуществления рефрактерный рак может быть устойчивым к лечению до или в начале лечения. В других вариантах осуществления рефрактерный рак может стать резистентным во время лечения. Рефрактерный рак также упоминается в данном документе как резистентный рак.
[0091] Термин «рецидивирующий», используемый в данном документе, относится к возвращению заболевания (например, рака) или признаков и симптомов заболевания, такого как рак, после периода улучшения, например, после предыдущего лечения с помощью средства для лечения, например, средства для лечения рака.
[0092] Используемый в данном документе термин «минимальное остаточное заболевание» или «MRD» относится к заболеванию низкого уровня, выявленному в различных клинических ситуациях. В некоторых вариантах осуществления MRD относится к молекулярно определенному рецидиву после ремиссии.
[0093] Используемый в данном документе термин «вектор» означает конструкцию, которая способна доставлять и экспрессировать один или более из гена(-ов) или последовательности(-ей), представляющих интерес, в клетке-хозяине. Примеры векторов включают без ограничения вирусные векторы, векторы экспрессии голой ДНК или РНК, плазмиды, космиды или фаговые векторы, векторы экспрессии ДНК или РНК, ассоциированные с катионными конденсирующими средствами, векторы экспрессии ДНК или РНК, инкапсулированные в липосомы, а также определенные эукариотические клетки, такие как клетки-продуценты.
[0094] Используемый в данном документе термин «последовательность контроля экспрессии» означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Последовательность контроля экспрессии может представлять собой промотор, такой как конститутивный или индуцибельный промотор, или энхансер. Последовательность контроля экспрессии функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая должна быть транскрибирована.
[0095] «Антитело» представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., посредством по меньшей мере одного антигенраспознающего сайта, расположенного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемый в данном документе термин «антитело» охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. «антигенсвязывающую часть») или его единственную цепь, слитые белки, содержащие антитело, и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит антигенраспознающий сайт, в том числе, например, scFv, однодоменные антитела {например, антитела акулы и верблюда), макситела, минитела, интратела, диатела, триатела, тетратела, v-NAR и bis-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 23 (9): 1126-1136). Антитело включает антитело любого класса, например, IgG, IgA или IgM (или их подкласс), и при этом антитело не обязательно должно относиться к какому-либо конкретному классу. В зависимости от аминокислотной последовательности антитела константной области его тяжелых цепей иммуноглобулины могут относиться к разным классам. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут дополнительно подразделяться на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные области тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называют соответственно альфа, бета, эпсилон, гамма и мю. Хорошо известны структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов.
2
[0096] Термин «антигенсвязывающая часть» антитела, используемый в данном документе, относится к одному или более фрагментам интактного антитела, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с данным антигеном (например, опухолевым антигеном). Антигенсвязывающие функции антитела могут выполняться фрагментами интактного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином «антигенсвязывающая часть» антитела, включают Fab; Fab'; F(ab'); Fd-фрагмент, состоящий из доменов VH и СН1; Fv-фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, о дно доменный (dAb) фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), а также выделенная область, определяющая комплементарность (CDR).
[0097] Термин «scFv» относится к слитому белку, содержащему по меньшей мере один фрагмент антитела, содержащий вариабельную область легкой цепи, и по меньшей мере один фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, где вариабельные области легкой и тяжелой цепи связаны друг с другом, например, посредством синтетического линкера, например короткого гибкого полипептидного линкера, и способны экспрессироваться в виде одноцепочечного полипептида, и где scFv сохраняет специфичность интактного антитела, из которого он получен. Если не указано иное, то используемый в данном документе scFv может иметь вариабельные области VL и VH в любом порядке, например, относительно N-концевых и С-концевых концов полипептида, scFv может содержать VL-линкер-VH или может содержать VH-линкер-VL.
[0098] Термин «моноклональное антитело» (Mab) относится к антителу, которое получено из одной копии или клона, включая, например, любой эукариотический, прокариотический или фаговый клон, но не к способу, с помощью которого его получают. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело по настоящему изобретению существует в гомогенной или фактически гомогенной популяции.
2
[0099] «Гуманизированное» антитело относится к формам антител, отличных от человеческих {например, мышиным), которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab') или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность, полученную из иммуноглобулина, отличного от человеческого. Как правило, гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (реципиентное антитело), в которых остатки из области, определяющей комплементарность (CDR) реципиента, заменены остатками из CDR вида, отличного от человека (донорное антитело), такого как мышь, крыса или кролик, характеризующиеся требуемой специфичностью, аффинностью и активностью.
[00100] Используемый в данном документе термин «человеческое антитело» означает антитело, имеющее аминокислотную последовательность, соответствующую последовательности антитела, которое может быть получено из человека и/или которое было получено с применением любой из методик получения человеческих антител, известных специалистам в данной области техники и раскрытых в данном документе. Это определение человеческого антитела включает антитела, содержащие по меньшей мере один человеческий полипептид тяжелой цепи или по меньшей мере один человеческий полипептид легкой цепи. Одним из таких примеров является антитело, содержащее полипептиды мышиной легкой цепи и человеческой тяжелой цепи. Человеческие антитела можно получать с помощью различных методик, известных из уровня техники. В одном варианте осуществления человеческое антитело выбрано из фаговой библиотеки, где в фаговой библиотеке экспрессируются человеческие антитела (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). Человеческие антитела также могут быть получены путем иммунизации животных, которым локусы человеческого иммуноглобулина были трансгенно введены вместо эндогенных локусов, например, мышей, у которых гены эндогенного иммуноглобулина были частично или полностью инактивированы. Этот подход описан в патентах США №№5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425 и 5661016. Альтернативно человеческое антитело может быть получено путем иммортализации человеческих В-лимфоцитов, которые продуцируют антитело, направленное против целевого антигена (такие В-лимфоциты могут быть выделены из субъекта или могут быть иммунизированы in vitro). См., например, Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p.77, 1985; Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (l):86-95 и патент США №5750373.
[00101] «Вариабельная область» антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела или вариабельной области тяжелой цепи антитела либо по отдельности, либо в комбинации. Как известно из уровня техники, каждая вариабельная область тяжелой и легкой цепей состоит из четырех каркасных областей (FR), соединенных тремя определяющими комплементарность областями (CDR), также известными как гипервариабельные области, которые способствуют образованию антигенсвязывающего сайта антител. Если требуются варианты вариабельной области субъекта, в частности с заменой в аминокислотных остатках за пределами CDR-области (т.е. в каркасной области), подходящую аминокислотную замену, часто консервативную аминокислотную замену, можно определить путем сравнения вариабельной области субъекта с вариабельными областями других антител, которые содержат последовательности CDR1 и CDR2 в том же каноническом классе, что и вариабельная область субъекта (Chothia and Lesk, J Mol Biol 196 (4):901-917, 1987). При выборе FR для фланкирования CDR субъекта, например, в случае гуманизации или оптимизации антитела, FR из антител, которые содержат последовательности CDR1 и CDR2 в одном и том же каноническом классе, являются предпочтительными.
[00102] «CDR» вариабельного домена представляют собой аминокислотные остатки в пределах вариабельной области, которые идентифицируются в соответствии с определениями согласно Kabat, Chothia, накоплению согласно как Kabat, так и Chothia, AbM, контактными и/или конформационными определениями или в соответствии с любым способом определения CDR, хорошо известным из уровня техники.
th
st
[00103] Используемые в данном документе термины «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» включают любой материал, который в сочетании с активным ингредиентом обеспечивает ингредиенту способность сохранять биологическую активность и не вступать в реакцию с иммунной системой субъекта. Примеры включают без ограничения любые стандартные фармацевтические носители, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, воду, эмульсии, такие как эмульсия масло/вода, и различные типы смачивающих средств. Предпочтительными разбавителями для аэрозольного или парентерального введения являются забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) или нормальный (0,9%) физиологический раствор. Композиции, содержащие такие носители, составлены с помощью хорошо известных общепринятых способов (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; and Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21 Ed. Mack Publishing, 2005).
[00104] Ссылка на «приблизительно» в отношении значения или параметра в данном документе включает (и описывает) варианты осуществления, которые направлены на это значение или параметр per se. Например, описание, относящееся к «приблизительно X», включает описание «X». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон.
[00105] Ясно, что какие бы варианты осуществления ни описывались в данном документе с формулировкой «содержащий», другие аналогичные варианты осуществления, описываемые терминами «состоящий из» и/или «состоящий фактически из», также предусмотрены.
[00106] Когда аспекты или варианты осуществления по данному раскрытию описаны в терминах группы Маркуша или другой группы альтернатив, изобретение охватывает не только всю группу, перечисленную в целом, но каждого представителя группы индивидуально и все возможные подгруппы основной группы, но также в основную группу с отсутствием одного или более членов группы. Настоящее изобретение также предусматривает явное исключение любого одного или более из заявленных членов группы.
[00107] Диапазоны: во всем данном изобретении различные аспекты изобретения могут быть предусмотрены в формате диапазона. Следует понимать, что описание в формате диапазона дано просто для удобства и краткости и не должно рассматриваться как жесткое ограничение объема настоящего изобретения. Соответственно, следует считать, что описание диапазона конкретно раскрывает все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в пределах данного диапазона. Например, описание диапазона, такого как от 1 до 6, должно рассматриваться как включающее в частности раскрытые поддиапазоны, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и т.д., а также отдельные числа в пределах данного диапазона, например, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. В качестве другого примера диапазон, такой как 95-99% идентичность, включает что-либо с 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью и включает поддиапазоны, такие как 96-99%, 96-98%, 96-97%, 97-99%, 97-98% и 98-99% идентичности. Это применимо независимо от широты диапазона.
[00108] Если не определено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понятно специалисту средней квалификации в данной области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. В случае противоречия настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущество. Во всем описании и формуле изобретения слово «содержать» или его варианты, такие как «содержит» или «содержащий», следует понимать, как подразумевать как включающие указанное целое число или группу целых чисел, но не исключающие какого-либо другого целого числа или группы целых чисел. Если согласно контексту не требуется иное, то термины в единственном числе будут охватывать формы множественного числа, и термины во множественном числе будут включать форму единственного числа.
[00109] B данном документе описаны иллюстративные способы и материалы, хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, также могут применяться в практическом осуществлении или тестировании способов и композиций, описанных в данном документе. Указанные материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения.
Лечение с помощью CAR-T-клеток
[00110] В данном документе предусмотрены способы, композиции и изделия для применения в клеточной терапии для лечения заболеваний, в том числе различных форм рака и опухолей. Способы включают введение аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR), которые специфически связываются с антигенами, ассоциированными с заболеванием, и приводят в результате к ответу, такому как иммунный ответ против таких молекул при связывании с такими антигенами.
[00111] Способы по данному изобретению можно применять для лечения, например, гематологических неоплазм (классификация ВОЗ, 2008) и солидных опухолей. Гематологические неоплазмы включают, например, лимфоидные злокачественные новообразования (острые и хронические лейкозы, лимфомы, множественные миеломы), миелоидные злокачественные новообразования (лейкозы, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические или миелопролиферативные неоплазмы) и недифференцированные злокачественные новообразования. Солидные опухоли включают, например, солидные опухоли, экспрессирующие антиген(-ы), на которые нацелены CAR-T-клетки, используемые в лечении.
[00112] Способы являются подходящими для лечения популяции взрослых и детей, включая все возрастные группы, и могут применяться в виде любой линии лечения, в том числе первой линии или последующих линий.
[00113] B некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой опухоль. В некоторых вариантах осуществления оно представляет собой рак, злокачественное новообразование, неоплазму или другое пролиферативное заболевание или нарушение, такое как лейкоз, лимфома, например, хронический лимфолейкоз (CLL), ALL (например, рецидивирующий/рефрактерный ALL), неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз, диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL), множественную миелому, рефрактерную фолликулярную лимфому, лимфому из мантийных клеток, медленно растущую В-клеточную лимфому, В-клеточные злокачественные новообразования, формы рака толстой кишки, легкого (например, мелкоклеточный и немелкоклеточный рак легкого), печени, молочной железы, предстательной железы, яичника, кожи, меланому, рак кости и головного мозга, рак яичника, формы эпителиального рака, почечно-клеточную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, лимфому Ходжкина, карциному шейки матки, колоректальный рак, глиобластому, нейробластому, саркому Юинга, медуллобластому, остеосаркому, синовиальную саркому, плоскоклеточную карциному головы и шеи (HNSCC) и/или мезотелиому. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лейкоз или лимфому. В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз. В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующий или рефрактерный острый лимфобластный лейкоз. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой неходжкинскую лимфому (NHL).
[00114] В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ALL). В некоторых вариантах заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз у детей (ALL).
[00115] В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой лимфоидное злокачественное новообразование на поздней стадии, такое как В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (B-ALL). В некоторых вариантах заболевание представляет собой рефрактерный B-ALL, например рефрактерный В-ALL у взрослых. В некоторых вариантах заболевание представляет собой рецидивирующий B-ALL, например рецидивирующий B-ALL у взрослых.
[00116] В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой неходжкинскую лимфому, например В-крупноклеточную и/или фолликулярную лимфому. В-крупноклеточная лимфома может представлять собой В-крупноклеточную лимфому, которая диагностирована с помощью гистологических или цитологических способов в соответствии с пересмотром классификации лимфом ВОЗ 2018 года: диффузная В-крупноклеточная лимфома (DLBCL), не указанная иным образом (NOS) (В-клеток терминального центра [GCB] и отличных от GCB), DLBCL, сосуществующая с фолликулярной лимфомой любой степени, интраваскулярная В-крупноклеточная лимфома, DLBCL, ассоциированная с хроническим воспалением, анапластическая лимфомакиназно-положительная (ALK+) DLBCL, положительная в отношении вируса Эпштейна-Барр (EBV+) DLBCL-NOS, Т-клеточно/гистиоцит-обогащенная В-крупноклеточная лимфома, DLBCL с перестройкой IRF4/MUM1, В-клеточные лимфомы высокой степени злокачественности с транслокацией MYC и BCL2 и/или BCL6 (двойное/тройное попадание), первичная кожная DLBCL-ножной тип, трансформация фолликулярной лимфомы в DLBCL, первичная медиастинальная В-клеточная лимфома (PMBCL) или фолликулярная лимфома. Параметры, которые следует учитывать для лечения, включают, например, кинетические параметры введенных CAR-T, оценивание заболевания (адаптированное к целевому заболеванию) и состояние здоровья субъекта.
[00117] Способы лечения могут предусматривать несколько стадий, в том числе лимфодеплецию (необязательно с премедикацией), лечение и необязательное повторное лечение.
Лимфодеплеция
[00118] В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции (LD) вводят субъекту перед первой и/или последующей дозами CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции (LD) вводят субъекту одновременно с первой и/или последующей дозами CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления схему для лимфодеплеции вводят до, во время и/или после первой и/или последующей доз CAR-T-клеток.
[00119] Подходящие схемы для LD описаны в данном документе и/или известны из уровня техники. В некоторых вариантах осуществления LD начинают перед, одновременно или после инфузии CAR-T. Дозы и сроки введения LD могут быть адаптированы в отношении первого или последующего введений доз CAR-T. В некоторых вариантах осуществления продолжительность LD составляет от приблизительно 3 до 5 дней. В некоторых вариантах осуществления временное окно между окончанием LD и началом введения CAR-T составляет от приблизительно 2 дней до приблизительно 2 недель. В некоторых вариантах осуществления LD начинают за приблизительно 15-7 дней перед введением дозы CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления LD начинают за приблизительно 19-5 дней перед введением дозы CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления LD начинают за приблизительно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней перед введением дозы CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления продолжительность схемы для LD составляет приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней. В некоторых вариантах осуществления дозу CAR-T-клеток вводят через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней после окончания LD.
[00120] B некоторых вариантах осуществления схема для LD включает введение одного или более химиотерапевтических лекарственных средств.
5
[00121] B некоторых вариантах осуществления схема для LD включает введение антитела к CD52, такого как антитело, которое распознает человеческий антиген кластера дифференцировки (CD) 52, гликопротеин клеточной поверхности, экспрессируемый в большинстве лимфоидных клеток. Используемое в данном документе моноклональное антитело к CD52 представляет собой антитело, которое направлено против гликопротеина клеточной поверхности CD52 размером 21-28 кДа. CD52 представляет собой распространенную молекулу (примерно 5 × 10 антигенсвязывающих сайтов на клетку), присутствующую в по меньшей мере 95% всех лимфоцитов и моноцитов/макрофагов периферической крови человека. Иллюстративные антитела к CD52 для применения в описанных в данном документе способах и композициях включают, например, алемтузумаб. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит последовательности HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в таблице 1 ниже.
[00122] B некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит VH и/или VL, содержащие последовательности, представленные в таблице 2 ниже.
[00123] B некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит VH, имеющую последовательность под SEQ ID NO: 8, или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит VL, имеющую последовательность под SEQ ID NO: 10, или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит VH, имеющую последовательность под SEQ ID NO: 8, и VL, имеющую последовательность под SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит VH, кодируемую последовательностью ДНК под SEQ ID NO:9, и VL, кодируемую последовательностью ДНК под SEQ ID NO: 11.
[00124] B некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональное антитело IgG1-каппа (mAb). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 представляет собой алемтузумаб. Алемтузумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, полученное из рекомбинантной ДНК, направленное против гликопротеина клеточной поверхности CD52 размером 21-28 кДа. См., например, Saif et al., Pediatr Transplant 2015 Mar; 19(2):211-8. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит одну или более последовательностей CDR, выделенных или полученных из CDR алемтузумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8 или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит последовательность под SEQ ID NO:10 или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит HCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 2, HCDR2, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 3, HCDR3, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 4, LCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 5, LCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 6, и/или LCDR3, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 содержит HCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 2, HCDR2, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 3, HCDR3, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 4, LCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 5, LCDR1, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 6, и LCDR3, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 7; где антитело к CD52 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10 или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
[00125] B некоторых вариантах осуществления LD предусматривает введение комбинации средств терапии. В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (диапазон суммарной дозы от приблизительно 90 до 150 мг/м) и циклофосфамид (диапазон суммарной дозы от приблизительно 1000 до 4000 мг/м) с лекарственным средством к CD52 или без него {например, антителом к CD52, например антителом, содержащим последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) (суммарная доза от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/кг или фиксированная доза от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг, от приблизительно 25 до приблизительно 60 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 120 мг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 30 мг/м) и циклофосфамид (диапазон суммарной дозы от приблизительно 500 до 600 мг/м) с лекарственным средством к CD52 или без него {например, антителом к CD52) (суммарная доза от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/кг или фиксированная доза от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг, от приблизительно 25 до приблизительно 60 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 120 мг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 30 мг/м) и циклофосфамид (приблизительно 300 мг/м) с лекарственным средством к CD52 или без него {например, антителом к CD52) (суммарная доза от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/кг или фиксированная доза от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг, от приблизительно 25 мг до приблизительно 60 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 120 мг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 90 мг/м), циклофосфамид (приблизительно 1500 мг/м) с лекарственным средством к CD52 или без него (например, антителом к CD52, приблизительно 1 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 150 мг/м) и циклофосфамид (приблизительно 130 мг/мкг) с лекарственным средством к CD52 или без него (например, антителом к CD52, суммарная доза от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/кг или фиксированная доза от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг, от приблизительно 25 до приблизительно 60 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 120 мг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 150 мг/м) и циклофосфамид (приблизительно 120 мг/кг или 130 мг/мкг) с лекарственным средством к CD52 или без него (например, антителом к CD52), суммарная доза от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/кг или фиксированная доза от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг, от приблизительно 25 до приблизительно 60 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 120 мг). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 30 мг/м/день) и циклофосфамид (приблизительно 300 мг/м/день) с лекарственным средством к CD52 или без него (например, антителом к CD52, приблизительно 13 мг/день). В некоторых вариантах осуществления комбинация включает флударабин (приблизительно 30 мг/м/день) и циклофосфамид (приблизительно 300 мг/м/день) с лекарственным средством к CD52 или без него (например, антителом к CD52, приблизительно 10 мг/день). В некоторых вариантах осуществления указанные выше дозы вводят в течение одного дня. В некоторых вариантах осуществления указанные выше дозы вводят в течение нескольких дней.
[00126] B некоторых вариантах осуществления флударабин и циклофосфамид вводят в первый день, и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят на второй день. В некоторых вариантах осуществления флударабин и циклофосфамид вводят в первый день перед введением CAR-T-клеток, и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят на второй день; где второй день является тем же днем, в который вводят CAR-T-клетки, или второй день является следующим днем после того, в который вводят CAR-T-клетки. В некоторых вариантах осуществления флударабин и циклофосфамид вводят в первый день, CAR-T-клетки вводят на второй день и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят через по меньшей мере приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 недель после второго дня. В некоторых вариантах осуществления флударабин и циклофосфамид вводят перед введением CAR-T-клеток, и антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) вводят через по меньшей мере приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 недель после введения CAR-T-клеток.
[00127JB некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции предусматривает введение флударабина и циклофосфамида (FC). В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции предусматривает введение флударабина и антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) (FA). В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции предусматривает введение циклофосфамида и антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) (CA). В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции предусматривает введение флударабина, циклофосфамида и антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) (FCA).
[00128] Выбор конкретных лекарственных средств для схемы для лимфодеплеции перед первой или второй/последующей дозами CAR-T-клеток может быть определен на основе гематологического анализа и гематологического восстановления пациента. В случае повторного введения доз вторая схема для лимфодеплеции может быть более или менее интенсивной по сравнению с первой схемой для лимфодеплеции (например, на основании восстановления лимфоцитов, нейтрофилов и вирусной реактивации после первой дозы). Например, во время повторного введения доз, если уровни лимфоцитов и нейтрофилов являются высокими, можно применять сильную или агрессивную схему для лимфодеплеции. Альтернативно, во время повторного введения доз, если уровни лимфоцитов являются низкими, можно применять более слабую или менее агрессивную схему для лимфодеплеции. В некоторых вариантах осуществления, если количество бластов во время повторного введения доз является большим, применяют сильную или агрессивную схему для лимфодеплеции. В некоторых вариантах осуществления, если количество бластов во время повторного введения доз является низким, применяют более слабую или менее агрессивную схему для лимфодеплеции.
[00129] B некоторых вариантах осуществления повышенную интенсивность схемы для LD можно применять во время повторного введения доз (с лекарственным средством к CD52 или без него). В некоторых вариантах осуществления можно применять пониженную интенсивность схемы для LD, например, в случае лимфопении степени 3-4 во время повторного введения дозы (с лекарственным средством к CD52 или без него).
[00130] B некоторых вариантах осуществления компоненты схемы для лимфодеплеции флударабин/циклофосфамид (FC) или флударабин/циклофосфамид/антитело к CD52 (FCA) вводят одновременно; в других вариантах осуществления компоненты вводят последовательно. В некоторых вариантах субъект получает схему FC перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток и схему FCA перед повторным введением доз средства для лечения с помощью CAR-T-клеток. В некоторых вариантах субъект получает схему FCA перед первой дозой средства для лечения с помощью CAR-T-клеток; и вторую схему FCA перед повторным введением доз средства для лечения с помощью CAR-T- клеток.
[00131] Иллюстративные схемы для LD представлены в таблицах 3А, 3В, 3С, 3D и 3Е. В таблицах 3А-3Е время введения, указанное в графике, относится к времени введения дозы CAR-T-клеток (Д. 0) в днях. Отрицательные числа указывают на дни перед введением CAR-T-клеток (в Д. 0).
[00132] B некоторых вариантах осуществления схема для LD может дополнительно включать лечение с помощью Mensa (2-меркаптоэтансульфонат натрия).
Премедикация
[00133] B некоторых вариантах осуществления способы могут предусматривать премедикацию в отношении связанной с инфузией реакции перед схемой для лимфодеплеции. В некоторых вариантах осуществления способы могут предусматривать премедикацию, вводимую перед лечением с помощью антитела к CD52. В некоторых вариантах премедикация может предусматривать лечение с помощью высоких доз кортикостероидов. Например, премедикация может предусматривать лечение с помощью 2 мг/кг метилпреднизолона. В некоторых вариантах осуществления премедикацию вводят непосредственно перед инфузией антитела к CD52. В некоторых вариантах осуществления премедикацию прекращают за по меньшей мере один или за по меньшей мере два дня перед любой инфузией CAR-Т-клеток (например, UCART19).
[00134] В некоторых вариантах премедикация может включать лечение с помощью одного или более из антигистаминного средства, цимедидина, ранитидина и ацетаминофена. Антигистаминное средство можно вводить, например, за приблизительно 1 день, приблизительно 1 час или приблизительно 0,5 часа перед введением антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10). Ацетаминофен можно вводить, например, за приблизительно 1 день, приблизительно 1 час или приблизительно 0,5 часа перед введением антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10).
Лечение
[00135] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки вводят посредством внутривенной инфузии. В некоторых вариантах осуществления внутривенную инфузию осуществляют в течение приблизительно 1 минуты, приблизительно 3 минут, приблизительно 5 минут, приблизительно 10 минут, приблизительно 30 минут, приблизительно 1 часа, приблизительно 3 часов, приблизительно 6 часов, приблизительно 12 часов или приблизительно 24 часов.
5
6
7
8
[00136] В некоторых вариантах осуществления способ лечения взрослого субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD19+ В-клеточный лейкоз, предусматривает включение введения субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 6×10 клеток/доза, приблизительно 6×10 клеток/доза, приблизительно 6-8×10 клеток/доза и приблизительно 1,8-2,4×10 клеток/доза. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют CAR под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой UCART19(CD19)CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются CD-52-дефицитными. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой смесь CD52-дефипитных и CD52-положительных клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют переключатель безопасности, такой как RQR8.
7
[00137] В некоторых вариантах осуществления способ лечения педиатрического субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD19+ В-клеточный лейкоз, предусматривает введение субъекту по меньшей мере одной дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD 19 человека, где по меньшей мере одна доза составляет приблизительно 2-8×10 клеток/доза. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют CAR под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой UCART19(CD19)CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются CD-52-дефицитными. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой смесь CD52-дефицитных и CD52-положительных клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют переключатель безопасности, такой как RQR8.
6
6
6
6
6
6
6
6
[00138] В некоторых вариантах осуществления способ лечения субъекта, у которого имеется неходжкинская лимфома (например, рефрактерная и/или рецидивирующая В-крупноклеточная лимфома или фолликулярная лимфома), предусматривает введение субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих, например, CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, где по меньшей мере одна доза составляет от приблизительно 20×10 клеток/доза до приблизительно 360×10 клеток/доза. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза, 240×10 клеток/доза и приблизительно 360×10 клеток/доза. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют CAR под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой UCART19(CD19)CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки являются CD-52-дефицитными. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой смесь CD52-дефицитных и CD52-положительных клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки экспрессируют переключатель безопасности, например переключатель безопасности RQR8, описанный в данном документе.
[00139] В некоторых вариантах осуществления экспрессия CAR является выявляемой у субъекта в течение периода длительностью по меньшей мере 14 дней или по меньшей мере 28 дней после введения CAR. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается CR (полный ответ) или Cri (полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови) в течение по меньшей мере 1 месяца, по меньшей мере 1,3 месяца, по меньшей мере 1,4 месяца, по меньшей мере 1,6 месяца, по меньшей мере 1,8 месяца, по меньшей мере 2 месяцев, по меньшей мере 2,3 месяца, по меньшей мере 1,4 месяца, по меньшей мере 1,6 месяца, по меньшей мере 1,8 месяца, по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 3,3 месяца, по меньшей мере 3,4 месяца, по меньшей мере 3,6 месяца, по меньшей мере 3,8 месяца, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев или по меньшей мере 36 месяцев после введения CAR-T (например, UCART19).
Способы повторного лечения с помощью CAR-T-клеток
[00140] В данном документе также предусмотрены способы повторного лечения (повторного введения доз) с помощью CAR-T-клеток. В частности, способы предусматривают введение одной или более последующих доз клеток субъектам, получавшим первую дозу, и/или введение первой и одной или более последующих доз. Как правило, дозы вводят в конкретных количествах и в соответствии с конкретными временными параметрами. В некоторых вариантах осуществления способы, как правило, предусматривают введение первой дозы клеток, уменьшая тем самым тяжесть заболевания, за которой следует последующая доза клеток, вводимая в течение конкретного временного окна относительно первой дозы, или введение последующей дозы субъекту, получавшему такую первую дозу. В некоторых вариантах осуществления затем вводят дополнительные последующие дозы, например, в течение того же или аналогичного периода времени относительно последующей дозы. В некоторых вариантах осуществления количество вводимых клеток и время введения нескольких доз предназначены для улучшения одного или более исходов, таких как уменьшение вероятности или степени токсичности для субъекта, улучшение воздействия на субъект и/или персистенции введенных клеток и/или улучшение терапевтической эффективности. Также предусмотрены изделия, содержащие клетки и предназначенные для введения в соответствии с такими схемами введения доз.
[00141] В некоторых вариантах осуществления у субъекта, которого подвергают лечению с помощью одной или более последующих доз клеток, имеется рецидив. Это означает то, что у пациента наблюдается CR (полный ответ) или Cri (полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови) в первый момент времени после исходной дозы, однако во второй, более поздний момент времени, наблюдается рецидив. Рецидив может представлять собой, например, морфологический рецидив, характеризующийся количеством бластов в костном мозге, большим, чем или равным 5%, наличие экстрамедуллярного заболевания, ассоциированного с наличием бластов в костном мозге, или наличие минимального остаточного заболевания (MRD), определяемого как количество бластов в костном мозге, больше чем или равное 3-10 бластам.
[00142] В некоторых вариантах осуществления у субъекта, которого подвергают лечению с помощью одной или более последующих доз клеток, наблюдается субоптимальный ответ после введения исходной дозы. Например, у субъекта может наблюдаться наличие минимального остаточного заболевания (MRD) через приблизительно 7, приблизительно 14, приблизительно 28, приблизительно 60, приблизительно 90, приблизительно 120 или приблизительно 365 дней после введения исходной дозы.
[00143] В некоторых вариантах осуществления у субъекта, которого подвергают лечению с помощью одной или более последующих доз клеток, наблюдается непостоянство персистенции CAR после введения исходной дозы. Например, у субъекта могут присутствовать CAR, выявляемые после исходной дозы (Д. 0, увеличение количества CAR), однако не присутствовать выявляемый CAR после Д. 0. Отсутствие выявляемого CAR в некоторых вариантах осуществления имеет место даже при том, что у субъекта наблюдаются некоторые признаки активности CAR-T-клеток (например, синдром высвобождения цитокинов).
[00144] В некоторых вариантах осуществления у субъекта, подлежащего лечению с помощью одной или более из последующих доз клеток, не наблюдается существенное увеличение количества CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется отсутствием выявляемого увеличения количества CAR и отсутствием ответа через приблизительно 7, приблизительно 14, приблизительно 28, приблизительно 60, приблизительно 90, приблизительно 120 или приблизительно 365 дней после введения исходной дозы. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется отсутствием выявляемого увеличения количества CAR и некоторыми признаками ответа на лечение (например, субъект, положительный в отношении MRD) через приблизительно 7, приблизительно 14, приблизительно 28, приблизительно 60, приблизительно 90, приблизительно 120 или приблизительно 365 дней после введения исходной дозы. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется отсутствием выявляемого увеличения количества CAR и полным ответом (например, MRD-негативный субъект) через приблизительно 7, приблизительно 14, приблизительно 28, приблизительно 60, приблизительно 90, приблизительно 120 или приблизительно 365 дней после введения исходной дозы.
5
6
7
7
8
8
[00145] В некоторых вариантах осуществления предусмотренные способы включают последующую дозу клеток, которую вводят в приблизительно том же количестве, а следовательно в той же дозе, что и первую дозу клеток. Как показано в данном документе, введение последующей дозы клеток может быть преимущественным по сравнению с введением однократной дозы. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы (доз) клеток, например, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 1,8×10 клеток или приблизительно 2,4×10 клеток, ассоциировано с повышенной общей выживаемостью у субъектов, в частности у субъектов, которые демонстрируют морфологическое заболевание перед лечением. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение первой дозы клеток, которые могут размножаться в присутствии антигенов, ассоциированных с заболеванием, и обеспечивать уменьшение симптомов, ассоциированных с заболеванием, но без той же степени токсических исходов, которые могут быть ассоциированы с более высокой дозой.
[00146] В некоторых вариантах осуществления первая доза, как правило, также является достаточно большой, чтобы быть эффективной для уменьшения тяжести заболевания. В некоторых случаях первая доза является достаточно большой, чтобы уменьшить тяжесть заболевания, если доза клеток является достаточной для размножения in vivo и ослабления заболевания. В некоторых вариантах осуществления клетки первой дозы обеспечивают таким образом ослабление или уменьшение тяжести заболевания, например размера опухоли, не вызывая тяжелых нежелательных исходов. В некоторых случаях первая доза представляет собой количество клеток, которое эффективно для уменьшения опухолевой нагрузки, как например, путем ослабления заболевания от морфологического состояния до минимального остаточного заболевания (MRD) и/или клинической или полной ремиссии. В некоторых аспектах первая доза является низкой дозой. В некоторых аспектах, например, в контексте относительно низкой тяжести заболевания, первая доза может быть более высокой.
[00147] В некоторых вариантах осуществления адаптированная в отношении рисков схема введения доз может использоваться для определения подходящего числа или количества или относительного числа или количества клеток или CAR-T-клеток в дозе. Например, в некоторых аспектах перед инфузией CAR-T-клеток определяют тяжесть заболевания у субъекта и на основе тяжести заболевания выбирают первую дозу CAR-T-клеток (например, низкую или высокую дозу), которая может минимизировать токсичность и максимизировать эффективность, например, на основании наблюдений, описанных выше и в других местах данного документа, в которых более высокие дозы клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы (например, CAR-экспрессирующих, таких как CAR-экспрессирующие Т-клетки), могут быть ассоциированы с токсическими исходами, как например тяжелая нейротоксичность, у субъектов, характеризующихся тяжестью морфологического заболевания, которые необязательно наблюдаются или не наблюдаются в значительной степени, у субъектов с относительно более низкой тяжестью заболевания. Например, у субъектов с высокой опухолевой нагрузкой в костном мозге перед лечением, что в некоторых случаях может быть ассоциировано с более значительным увеличением количества CAR-T-клеток после лечения, наблюдался более высокий риск развития тяжелой нейротоксичности, которая может потребовать лечения в ICU.
[00148] В некоторых вариантах осуществления субъекта оценивают в отношении ответа после первой дозы аллогенных CAR-T-клеток. Такую оценку можно проводить через приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 недель после введения первой или предыдущей дозы аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления субъекта оценивают в отношении ответа через приблизительно один, приблизительно два или приблизительно три месяца после введения первой дозы аллогенных CAR-T-клеток.
[00149] В некоторых вариантах осуществления экспрессия антигенов, на которые нацелены CAR-T, может быть подтверждена перед введением последующей дозы CAR-T-клеток. Например, экспрессию антигенов можно оценивать с помощью проточной цитометрии в крови, в других матрицах или в солидных опухолях. В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении отсутствия антител к HLA, которые развиваются у субъекта против предыдущего введения CAR-T. В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении отсутствия антител к scFv, которые развиваются у субъекта после предыдущего введения доз CAR-T. В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении отсутствия каких-либо серьезных проблем безопасности после любого курса CAR-T (первый или последующие курсы). В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении пригодности для последующей лимфодеплеции, ассоциированной с введением доз CAR-T. В некоторых вариантах осуществления отсутствие донор-специфических антител к HLA, к scFv CAR и/или к TALEN после введения доз клеток CAR-T указывает на пригодность субъекта для введения последующей дозы CAR-T-клеток.
[00150] В некоторых вариантах осуществления отсутствие персистенции CAR-T-клеток по истечении дня от первой оценки ответа после введения дозы CAR-T-клеток указывает на пригодность субъекта для введения последующей дозы CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении отсутствия персистенции CAR-T-клеток по истечении дня от первой оценки ответа после введения доз CAR-T-клеток. Оценку можно проводить в зависимости от заболевания, например, через приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 недель после введения доз, независимо от оцениваемого ответа. Параметры для оценки кинетики включают, например, AUCO-временную точку оценки ответа, Cmax (пиковое увеличение количества трансгена CAR-T, время последнего обнаруживаемого количественно трансгена и уровень увеличения количества CAR-T-клеток в любых других тканях или жидкостях. Субоптимальный ответ после первого введения CAR-T, независимо от персистенции CAR-T, может включать одно или более из следующего: (а) полный ответ (CR) или полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi) с выявляемым минимальным остаточным заболеванием (например, у пациентов с лейкозом); (b) отсутствие цитогенетического ответа; (с) полный ответ костного мозга; (d) частичный ответ и/или (е) стабильный ответ.
[00151] В некоторых вариантах осуществления субъекта можно оценивать в отношении наличия нежелательного явления по истечении дня от первой оценки ответа после введения дозы CAR-T-клеток. Оценку можно проводить, например, через приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 недель после введения доз. В некоторых вариантах осуществления оценку можно проводить, например, в течение первых четырех недель (вплоть до 28 дня) после введения доз CAR-T. Иллюстративные нежелательные явления приведены в таблице 4.
[00152] В некоторых вариантах осуществления рецидив заболевания может относиться к рецидиву после достижения оптимального CR после первого введения доз CAR-T. В некоторых вариантах осуществления рецидив заболевания может относиться к рецидиву после достижения одного или более CR при введении CAR-T, независимо от того, когда происходит рецидив.
[00153] Последующая доза CAR-T может быть получена от того же или другого донора (донора здоровых клеток, используемых для получения CAR-T). В последующей дозе можно применять ту же или другую (более высокую или более низкую) дозу CAR-T-клеток.
[00154] CAR-T-клетки можно вводить в виде единичной дозы или в виде дробной дозы. Например, доза может быть разделена на две или более доз в течение периода, такого как, например, семидневный период. В некоторых вариантах осуществления дробная доза предусматривает первое и второе введения в течение периода. В некоторых вариантах осуществления при каждом из первого и второго введений вводят равное количество клеток. В некоторых вариантах осуществления во время первого введения вводят меньше клеток, чем во время второго введения. В некоторых вариантах осуществления во время первого введения вводят большее количество клеток, чем во время второго введения. В некоторых вариантах осуществления дробная доза предусматривает первое, второе введение и третье введение в течение периода. В некоторых вариантах осуществления при каждом из первого, второго и третьего введений вводят равное количество клеток. В некоторых вариантах осуществления во время первого введения вводят меньше клеток, чем во время второго и третьего введений. В некоторых вариантах осуществления во время первого введения вводят большее количество клеток, чем во время второго и третьего введений. В некоторых вариантах осуществления во время второго введения вводят меньше клеток, чем во время первого и третьего введений. В некоторых вариантах осуществления во время второго введения вводят большее количество клеток, чем во время первого и третьего введений. В некоторых вариантах осуществления во время третьего введения вводят меньше клеток, чем во время первого и второго введений. В некоторых вариантах осуществления во время третьего введения вводят большее количество клеток, чем во время первого и второго введений.
[00155] В некоторых вариантах осуществления дробную дозу вводят в течение первого дня и второго дня. В некоторых вариантах осуществления половину дозы вводят в первый день, и половину дозы вводят на второй день. В некоторых вариантах осуществления одну треть дозы вводят в первый день, а две трети дозы вводят на второй день. В некоторых вариантах осуществления две трети дозы вводят в первый день, а одну треть дозы вводят на второй день. В некоторых вариантах осуществления каждую частичную дозу дробной дозы вводят в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней друг после друга. В конкретных вариантах осуществления каждую частичную дозу дробной дозы вводят в течение 7 дней друг после друга. В некоторых вариантах осуществления каждую частичную дозу вводят в последующий день.
[00156] В некоторых вариантах осуществления дробную дозу вводят в течение первого дня, второго дня и третьего дня. В некоторых вариантах осуществления одну треть дозы вводят в первый день, одну треть дозы вводят во второй день и одну треть дозы вводят в третий день. В некоторых вариантах осуществления каждую частичную дозу дробной дозы вводят в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней друг после друга. В конкретных вариантах осуществления каждую частичную дозу дробной дозы вводят в течение 7 дней друг после друга. В некоторых вариантах осуществления каждую частичную дозу вводят в последующий день.
[00157] В некоторых вариантах осуществления дробную дозу вводят в течение по меньшей мере трех дней, например, по меньшей мере четырех дней, по меньшей мере пяти дней, по меньшей мере шести дней или по меньшей мере семи дней.
Схемы введения доз
[00158] В некоторых вариантах осуществления аллогенные CAR-T-клетки вводят с использованием фиксированной дозы. В других вариантах осуществления аллогенные CAR-T-клетки вводят с использованием привязки доз к диапазонам. Например, привязку доз к диапазонам можно использовать во избежание риска широкого диапазона воздействий CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления можно использовать привязку к весу. Например, без ограничения субъектам <66 кг можно вводить дозу X, а субъектам >66 кг можно вводить дозу приблизительно 1,33Х. В некоторых вариантах субъектам>50 кг можно вводить одну дозу, а субъектам <50 кг можно вводить другую дозу.
[00159] Иллюстративные уровни доз для первой дозы UCART19 приведены в таблице 5а для применения у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом.
[00160] Иллюстративные уровни доз для первой дозы UCART19 приведены в таблице 5b для применения у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[00161] Иллюстративные формы дозы для первой дозы UCART19 приведены в таблице 5с для применения у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза.
[00162] Иллюстративные дозы для первой дозы UCART19 приведены в таблице 5d для применения у взрослых пациентов с неходжкинской лимфомой, такой как рецидивирующая/рефрактерная В-крупноклеточная и/или фолликулярная лимфома.
5
8
4
6
6
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
4
6
6
8
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
[00163] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз аллогенных CAR-T-клеток предусматривает введение первой дозы CAR-T-клеток, составляющей от приблизительно 1×10 до 5×10 клеток или от приблизительно 1×10 клеток/кг до приблизительно 3×10 клеток/кг. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз аллогенных CAR-T-клеток предусматривает введение первой дозы CAR-T-клеток, составляющей приблизительно 6×10 клеток (фиксированная доза). В некоторых вариантах осуществления схема введения доз аллогенных CAR-T-клеток предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 10×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10 или приблизительно 9×10 CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток (привязка к весу) или приблизительно 1,8×10 клеток (привязка по весу). В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза, 240×10 клеток/доза или приблизительно 360×10 клеток/доза (привязка по весу). В некоторых вариантах осуществления доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза и приблизительно 240×10 клеток/доза, в случае если субъект имеет вес, равный 50 кг или меньше. В некоторых вариантах осуществления доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза и приблизительно 360×10 клеток/доза, где субъект имеет вес более чем 50 кг.
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
4
6
8
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
4
6
6
[00164] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение последующей дозы, составляющей приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 10×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5× 10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10, приблизительно 9×10, приблизительно 1×10, приблизительно 2×10, приблизительно 3×10, приблизительно 4×10, приблизительно 5×10, приблизительно 6×10, приблизительно 7×10, приблизительно 8×10 или приблизительно 9×10 CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение последующей дозы, составляющей приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток или приблизительно 1,8×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз аллогенных CAR-T-клеток предусматривает введение последующей дозы CAR-T-клеток, составляющей приблизительно 6×10 клеток (фиксированная доза). В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение последующей дозы, составляющей приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза, 240×10 клеток/доза или приблизительно 360×10 клеток/доза (привязка по весу). В некоторых вариантах осуществления доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза и приблизительно 240×10 клеток/доза, в случае если субъект имеет вес, равный 50 кг или меньше. В некоторых вариантах осуществления доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза и приблизительно 360×10 клеток/доза, где субъект имеет вес более чем 50 кг.
6
6
[00165] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз аллогенных CAR-T-клеток предусматривает введение первой дозы CAR-T-клеток, составляющей приблизительно 6×10 клеток и последующей дозы CAR-T-клеток, составляющей приблизительно 6×10 клеток. В некоторых вариантах осуществления последующая доза CAR-T-клеток содержит приблизительно такое же число клеток, как и предыдущая доза CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующая доза CAR-T-клеток содержит больше клеток, чем предыдущая доза CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующая доза CAR-T-клеток содержит меньше клеток, чем предыдущая доза CAR-T-клеток.
[00166] В некоторых вариантах осуществления последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток можно вводить в течение конкретного временного окна относительно исходной или предыдущей доз аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток вводят через приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели после введения исходной или предыдущей доз аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток вводят в диапазоне приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или даже 24 месяца после введения исходной или предыдущей доз аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток вводят через приблизительно 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 или 110 дней после введения исходной или предыдущей доз аллогенных CAR-T-клеток.
[00167] В некоторых вариантах осуществления время между введением первой дозы (исходной дозы), например, началом введения первой или предыдущей дозы и началом введения последующей дозы (повторной дозы, например, началом введения последующей дозы) составляет более чем приблизительно 4 недели, например, более чем приблизительно 5, 6, 7, 8 или 9 недель, например, более чем приблизительно 20 недель, например, от приблизительно 9 и до приблизительно 35 недель, от приблизительно 14 и до приблизительно 28 недель, от 15 до 27 недель или от 16 недель и до приблизительно 18 недель; и/или составляет или составляет приблизительно 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 недель. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы (например, начало введения) осуществляют через более чем приблизительно 5 недель после введения первой или предыдущей дозы (например, начала введения) и менее чем приблизительно 24 недели после него. В некоторых вариантах осуществления введение последующей дозы начинают через 17 недель после начала введения первой дозы. В некоторых вариантах осуществления время между введением первой и последующей дозы (например, начало введения) или предыдущей и следующей за ней последующей дозой составляет от более чем приблизительно 5 недель до менее чем приблизительно 24 недели, как например от 10 до 24 недель, как например приблизительно 17 недель. В некоторых вариантах осуществления время между введением первой и последующей дозы (например, начало введения) составляет приблизительно 17 недель.
[00168] В некоторых вариантах осуществления субъект получает повторную дозу через период времени от 28 дней до 9 месяцев после первой инфузии CAR-T. Можно применять ту же схему для лимфодеплеции, что и для первого введения доз CAR-T, или схему можно адаптировать к состоянию пациента и степени восстановления иммунной системы хозяина.
[00169] В некоторых вариантах осуществления, если у субъекта имеется рецидив заболевания после введения последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток, - можно вводить дополнительную последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления, если у субъекта имеется рецидив заболевания после введения последующей дозы аллогенных CAR-T-клеток и наблюдается отсутствие персистенции CAR-T, - можно вводить дополнительную последующую дозу аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления две или более последующих дозы аллогенных CAR-T-клеток можно вводить после первой дозы. Можно использовать различные схемы для последующего введения доз для увеличения продолжительности ответа аллогенных CAR-T. Например, последующие дозы CAR-T можно вводить, например, через месяц (после первой дозы CAR-T) или каждые 3 месяца. Можно вводить любое количество последующих инфузий. Время повторного введения доз может быть адаптировано к состоянию здоровья пациента. Иллюстративная схема введения доз показана на ФИГ. 1.
6
6
6
6
6
6
[00170] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, за которой следует последующая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, вводимая через приблизительно 99 дней после введения первой дозы. В других вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, с последующей поддерживающей дозой, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, каждые 4 недели до достижения молекулярной ремиссии. В других вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение первой дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, с последующей поддерживающей дозой, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток, каждые 8 недели до достижения молекулярной ремиссии.
6
[00171] В других вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение раз в два месяца дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток.
6
В других вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток.
[00172] Тем не менее, могут быть применимы другие схемы введения доз, в зависимости от типа фармакокинетического распада, которого желает достичь практикующий врач. Прогресс такой терапии легко контролировать с помощью традиционных методик и анализов. В предпочтительных вариантах осуществления первая доза и первая последующая и дополнительные последующие дозы разделены во времени друг от друга на по меньшей мере четыре недели. Схему введения доз можно менять со временем.
5
4
5
6
7
7
8
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
9
5
5
[00173] Как правило, для введения аллогенных CAR-T-клеток исходная потенциальная доза может составлять от приблизительно 1,1 до приблизительно 2,3×10 клеток/кг CAR-T-клеток. Для цели настоящего изобретения типичная фиксированная доза CAR-T-клеток могла бы находиться в диапазоне от приблизительно 1×10 до 1×10, до 1×10, до 1×10, до 1×10, до 1×10 клеток или больше, в зависимости от упомянутых выше факторов. Например, можно применять дозу, составляющую приблизительно 0,3×10 клеток, приблизительно 0,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, приблизительно 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4.5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5× 10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток или приблизительно 1×10 клеток или больше. Для последующих введений в течение нескольких недель или дольше, в зависимости от заболевания, лечение продолжают до тех пор, пока не произойдет требуемое подавление симптомов или пока не будут достигнуты достаточные терапевтические уровни, например молекулярная ремиссия.
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
9
7
8
8
8
[00174] Иллюстративные схемы введения доз предусматривают введение первой дозы, составляющей приблизительно 0,3×10 клеток, приблизительно 0,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, приблизительно 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток, приблизительно 1×10 клеток, приблизительно 1,5×10 клеток, приблизительно 2×10 клеток, приблизительно 2,5×10 клеток, приблизительно 3×10 клеток, приблизительно 3,5×10 клеток, приблизительно 4×10 клеток, приблизительно 4,5×10 клеток, приблизительно 5×10 клеток, приблизительно 5,5×10 клеток, приблизительно 6×10 клеток, приблизительно 6,5×10 клеток, приблизительно 7×10 клеток, приблизительно 7,5×10 клеток, приблизительно 8×10 клеток, приблизительно 8,5×10 клеток, приблизительно 9×10 клеток, приблизительно 9,5×10 клеток или приблизительно 1×10 клеток аллогенных CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят ежемесячно. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят через месяц. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые три месяца. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые четыре месяца. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые пять месяцев. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые шесть месяцев. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые семь месяцев. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят приблизительно каждые восемь месяцев. В предпочтительных вариантах осуществления первая доза и первая последующая и дополнительные последующие дозы разделены во времени друг от друга на по меньшей мере приблизительно четыре недели. В некоторых вариантах осуществления последующую дозу вводят через месяц.
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
6
[00175] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 1×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 2×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 3×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 4×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 5×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 7×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 8×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 1×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 9×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту первой дозы, составляющей приблизительно 1×10 CAR-T-клеток в Д. 0, и последующей дозы, составляющей приблизительно 6×10 CAR-T-клеток от приблизительно Д. 30 до приблизительно Д. 110.
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
[00176] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции в период от Д. -7 до Д. -2, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, за которой следует необязательная схема для лимфодеплеции в период от Д. 60 до Д. 100, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в период от Д. 63 до Д. 104. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции в период от Д. -7 до Д. -2, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, за которой следует необязательная схема для лимфодеплеции в период от Д. 60 до Д. 90, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в период от Д. 63 до Д. 104. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции (LD) в Д. -7, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, с последующей LD со сниженной интенсивностью (по сравнению с предыдущей LD) в Д. 70, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в Д. 99. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции в Д. -15, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, за которой следует схема для лимфодеплеции в Д. 60, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в Д. 75. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции в период от Д. -7 до Д. -2, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, за которой следует необязательная схема для лимфодеплеции в период от Д. 60 до Д. 90, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в период от Д. 63 до Д. 104. В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение субъекту схемы для лимфодеплеции в период от Д. -7 до Д. -2, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 6×10 CAR-T-клеток в Д. 0, за которой следует необязательная схема для лимфодеплеции в период от Д. 60 до Д. 90, за которой следует последующая доза, составляющая 6×10 CAR-T-клеток в период от Д. 63 до Д. 104.
6
6
6
6
6
6
2
2
[00177] В некоторых вариантах осуществления схема введения доз предусматривает введение схемы для лимфодеплеции в период от Д. -5 до Д. -3, за которой следует первая доза, составляющая приблизительно 20×10 клеток, приблизительно 40×10 клеток, приблизительно 80×10 клеток, приблизительно 120×10 клеток, приблизительно 240×10 клеток или приблизительно 360×10 клеток, за которой следует последующая доза CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления схема для лимфодеплеции включает флударабин, вводимый в дозе приблизительно 30 мг/м; циклофосфамид, вводимый в дозе приблизительно 300 мг/м; и необязательно антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10), вводимое в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг.
[00178] Тем не менее, могут быть применимы другие схемы введения доз, в зависимости от типа фармакокинетического распада, которого желает достичь практикующий врач. Прогресс такой терапии легко контролировать с помощью традиционных методик и анализов. В некоторых вариантах осуществления первая доза и первая последующая и дополнительные последующие дозы разделены во времени друг от друга на по меньшей мере четыре недели. Схему введения доз можно менять со временем.
Аллогенные CAR-T-клетки и дополнительные средства
[00179] Далее следует описание иллюстративных CAR-T-клеток, используемых в соответствии с настоящим изобретением.
[00180] Способы включают введение CAR-T-клеток, которые специфически связываются с антигеном, ассоциированным с заболеванием, и приводят в результате к ответу, такому как иммунный ответ против таких молекул при связывании с таким антигеном. В способах, описанных в данном документе, можно использовать любые аллогенные CAR-T-клетки, если специально не указан конкретный способ, ассоциированный с конкретным типом аллогенных CAR-T-клеток (например, клеток UCART19). В некоторых вариантах осуществления способы и композиции по настоящему изобретению осуществляют на практике с использованием аллогенной CAR-T-клетки, специфической в отношении опухолеспецифического антигена.
[00181] В некоторых вариантах осуществления способы и композиции по настоящему изобретению осуществляют на практике с использованием аллогенной CAR-T-клетки, специфической в отношении CD 19. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка экспрессирует CAR, содержащий домен связывания CD 19. В некоторых вариантах осуществления домен связывания CD 19 содержит о дно цепочечный вариабельный фрагмент (scFv). В некоторых вариантах осуществления scFv происходит из антитела к CD 19 (например, антитела 4G7). В некоторых вариантах осуществления scFv содержит VH и VL, выделенные или полученные из антитела к CD 19 (например, антитела 4G7). В некоторых вариантах осуществления scFv содержит HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LDCR2 и LCDR3, выделенные или полученные из антитела к CD 19 (например, антитела 4G7).
[00182] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка экспрессирует CAR, содержащий домен связывания CD 19, домен 4-1 ВВ и/или домен CD3-дзета.
[00183] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка дополнительно экспрессирует «переключатель безопасности». Переключатели безопасности могут содержать эпитоп, который обеспечивает отбор трансдуцированных клеток, и эпитоп, который обеспечивает выявление и/или удаление клеток, экспрессирующих полипептид. В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности содержит мимотоп. Иллюстративные переключатели безопасности раскрыты, например, в WO 2013/153391, который включен в данный документ посредством ссылки в полном его объеме. В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности связывается с ритуксимабом. В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности экспрессируется в транс с CAR (например, в виде отдельного полипептида в одной и той же клетке). В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности представляет собой RQR8. В некоторых вариантах осуществления RQR8, содержащий переключатель безопасности, экспрессируется в транс. Последовательности полной длины и компонентов для RQR8 показаны в таблице 6 ниже.
[00184] В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности представляет собой R2.
[00185] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки не содержат переключатель безопасности.
[00186] В некоторых вариантах осуществления последовательность, кодирующая переключатель безопасности, предусмотрена в том же векторе, содержащем последовательность, кодирующую CAR. В некоторых вариантах осуществления последовательность, кодирующая переключатель безопасности, предусмотрена в векторе, отличном от вектора, который содержит последовательность, кодирующую CAR.
[00187] В некоторых вариантах осуществления последовательность, кодирующая переключатель безопасности, предусмотрена в том же полипептиде, который содержит CAR (т.е. предусмотрена в цис-положении). В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности предусмотрен в полипептиде, отличном от CAR (т.е. предусмотрен в транс-положении).
[00188] Соответственно, в некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности экспрессируется в транс с CAR (например, в виде отдельного полипептида в одной и той же клетке). В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности представляет собой RQR8. В некоторых вариантах осуществления RQR8, содержащий переключатель безопасности, экспрессируется в транс.
[00189] В некоторых вариантах осуществления переключатель безопасности экспрессируется в цис-положении относительно CAR и содержит мимотоп, специфический для антитела, как описано в WO 2013/153391.
[00190] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка дополнительно содержит инактивированный ген CD52. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка является CD52-дефицитной. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки для введения пациенту содержат смесь CD52-дефицитных и CD52-положительных клеток.
[00191] В некоторых вариантах осуществления композиция CAR-T-клеток для введения пациенту включает смесь клеток с различными генотипами. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит CAR-T-клетки, где приблизительно 40%, приблизительно 45%, приблизительно 50%, приблизительно 55%, приблизительно 60%, приблизительно 65%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 99% или приблизительно 100% клеток имеют инактивированный ген CD52. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит CAR-T-клетки, где приблизительно 40%, приблизительно 45%, приблизительно 50%, приблизительно 55%, приблизительно 60%, приблизительно 65%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 99% или приблизительно 100% клеток имеют инактивированный ген TRAC. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит CAR-T-клетки, где приблизительно 40%, приблизительно 45%, приблизительно 50%, приблизительно 55%, приблизительно 60%, приблизительно 65%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 99% или приблизительно 100% клеток имеют инактивированный ген CD52, и дополнительно, где приблизительно 40%, приблизительно 45%, приблизительно 50%, приблизительно 55%, приблизительно 60%, приблизительно 65%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 99% или приблизительно 100% клеток имеют инактивированный ген TRAC.
+
[00192] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой CAR-T-клетки UCART19. UCART19 является лекарственным продуктом на основе аллогенных сконструированных Т-клеток человека, разрабатываемым для лечения CD19-экспрессирующих В-клеточных лейкозов, в том числе острого лимфобластного лейкоза у молодежи и подростков, взрослых и детей (B-ALL). Опубликованная информация, связанная с UCART19, включает: Qasim et al., «Molecular remission of infant B-ALL after infusion of universal TALEN gene-edited CAR T cells» Sci Transl Med 2017 Jan 25;9(374), Gouble et al., «In Vivo Proof of Concept of Activity and Safety of UCART19, an Allogeneic «Off-the-Shelf» Adoptive T-Cell Immunotherapy Against CD19 B-Cell Leukemias» Blood 2014, 124(21) page 4689., а также патентную публикацию США №14/891296, опубликованную 2 мая 2016 года как US 20160145337, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки в их полном объеме. Посредством UCART19 обеспечивается экспрессия CAR, направленного против CD 19 человека, вместе с переключателем безопасности RQR8 с объединением эпитопов антигенов CD34 и CD20. UCART19 содержит CAR 4-1BB/CD3-дзета для CD19 человека, состоящий из одного или более пептидов, показанных в таблице 7, и/или как описано в публикации заявки на патент США №2016/0145337, который включен в данный документ посредством ссылки в его полном объеме.
[00193] UCART19 дополнительно подвергали одновременному разрушению генов TRAC и CD52 с последующим истощением оставшихся TCRαβ+клеток. UCART19 содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), полученный из мышиной гибридомы 4G7 к CD 19 человека, шарнир CD8 и трансмембранный домен, костимулирующий домен 4-1 ВВ и сигнальный домен CD3-дзета. Лекарственное вещество (DS) UCART19 определяется как аллогенные генетически модифицированные CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки: (i) содержащие интегрированный самоинактивирующийся (SIN) рекомбинантный лентивирусный вектор для доставки, который экспрессирует CAR для CD 19 для перенаправления Т-клеток к опухолевым клеткам CD19+ и их устранения, (ii) экспрессирующие переключатель безопасности RQR8 с обеспечением восприимчивости к ритуксимабу, (iii) которые являются TCRαβ-отрицательными в связи с разрушением гена TRAC с использованием редактирования генов TALEN на основе мРНК с последующим истощением оставшихся TCRαβ+клеток во время процесса получения и (iv) которые представляют собой смесь CD52-нокаутных и CD52-положительных клеток в связи с разрушением гена CD52 с использованием редактирования генов TALEN на основе мРНК с целью обеспечить введение UCART19 пациентам, ранее лечившихся или получавших лечение с помощью антитела к CD52 (например, антитела, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10).
[00194] Иллюстративные процедуры для получения UCART19 показаны на ФИГ. 4А и на ФИГ. 4 В.
[00195] Используемый в данном документе термин UCART19 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки) относится к клеткам UCART19, экспрессирующим CAR CD 19 и переключатель безопасности RQR8. Клетки также содержат инактивированный ген TRAC. Необязательно, клетки содержат инактивированный ген CD52.
[00196] Используемый в данном документе термин UCART19 (CD19CAR/R2+_TCRαβ-_T-клетки) относится к клеткам UCART19, экспрессирующим CAR CD 19 и переключатель безопасности R2. Клетки также содержат инактивированный ген TRAC. Необязательно, клетки содержат инактивированный ген CD52.
[00197] Используемый в данном документе термин UCART19 (CD19CAR/TCRαβ-Т-клетки) относится к клеткам UCART19, экспрессирующим CAR CD 19. Клетки также содержат инактивированный ген TRAC. Необязательно, клетки содержат инактивированный ген CD52.
[00198] В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки представляют собой аллогенные CAR-T-клетки, экспрессирующие аминокислотную последовательность, показанную под SEQ ID NO: 1.
[00199] Что касается всех способов, описанных в данном документе, ссылка на композиции CAR-T-клеток также включает композиции, содержащие одно или более дополнительных средств. Эти композиции могут дополнительно содержать подходящие вспомогательные вещества, такие как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, в том числе буферы, которые хорошо известны из уровня техники. Композиции и способы, раскрытые в данном документе, можно применять отдельно или в комбинации с другими традиционными способами лечения.
[00200] CAR-T-клетки можно вводить субъекту посредством любого подходящего пути. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что примеры, описанные в данном документе, предназначены не для ограничения, а для иллюстрации доступных методик. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки вводят субъекту в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение, например, в виде болюса или с помощью непрерывной инфузии в течение периода времени, посредством внутримышечного, внутрибрюшинного, интрацереброспинального, трансдермального подкожного, внутрисуставного, подъязычного, интрасиновиального, посредством инсуффляционного, интратекального, перорального, ингаляционного или местного путей введения. Введение может быть системным, например внутривенным, или локализованным. Для введения пригодны коммерчески доступные распылители для жидких составов, в том числе струйные распылители и ультразвуковые распылители. Жидкие составы можно распылять непосредственно, а лиофилизированный порошок можно распылять после восстановления.
[00201] Для введения можно применять различные составы CAR-T-клеток. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество могут находиться в различных составах. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества известны из уровня техники и являются относительно инертными веществами, которые облегчают введение фармакологически эффективного вещества. Например, вспомогательное вещество может придавать форму или консистенцию или действовать как разбавитель. Подходящие вспомогательные вещества включают без ограничения стабилизирующие средства, смачивающие и эмульгирующие средства, соли для варьирования осмолярности, инкапсулирующие средства, буферы и усилители проникновения через кожу.
[00202] Эти средства можно комбинировать с фармацевтически приемлемыми носителями, такими как физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и т.п. Конкретная схема введения доз, т.е. доза, время введения и повторение, будет зависеть от конкретного индивидуума и его истории болезни.
[00203] Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозах и концентрациях, и могут включать буферы, такие как на основе фосфатной, цитратной и других органических кислот; соли, такие как хлорид натрия; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкоза, манноза или декстрины; хелатирующие средства, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы с металлами (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (PEG).
Фармацевтические наборы и изделия
[00204] Также предусмотрены фармацевтические наборы для лечения пациентов, страдающих от заболевания, такого как рак. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический набор содержит CAR-T-клетки и антитело к CD52. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический набор содержит клетки UCART19 и антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический набор содержит первый контейнер, содержащий CAR-T-клетки (например, клетки UCART19), и второй контейнер, содержащий антитело к CD52 (например, антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10) В некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетки (например, клетки UCART 19) являются CD52-дефицитными. В некоторых вариантах осуществления набор содержит несколько контейнеров, содержащих CAR-T-клетки, причем количество CAR-T-клеток в каждом контейнере является одинаковым или разным. В некоторых вариантах осуществления первый и/или второй контейнеры представляют собой гибкие мешки для инфузии клеток. В некоторых вариантах осуществления первый и/или второй контейнеры представляют собой флаконы или пробирки (например, стеклянные или пластиковые флаконы или пробирки). Фармацевтический набор может дополнительно содержать этикетку или листок-вкладыш, содержащие инструкции по введению субъекту CAR-T-клеток и антитела к CD52.
6
8
[00205] Также предусмотрены изделия, содержащие некоторое количество герметизируемых контейнеров, каждый из которых по отдельности содержит стандартную дозу аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) для введения субъекту, при этом указанная стандартная доза составляет от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 клеток; упаковочный материал и этикетку или листок-вкладыш, содержащие инструкции по введению субъекту некоторого количества указанных стандартных доз посредством осуществления первого введения и последующего введения, причем указанное первое введение включает доставку субъекту одной из указанных стандартных доз, и указанное последующее введение включает введение субъекту одной или некоторого количества указанных стандартных доз. В некоторых вариантах осуществления на изделиях указывают, что указанное последующее введение необходимо осуществлять за период времени от приблизительно 30 до 150 дней, необязательно за приблизительно 30 дней, приблизительно 60 дней, приблизительно 90 дней или приблизительно 99 дней, после указанного первого введения. В некоторых вариантах осуществления контейнеры представляют собой или содержат гибкие мешки для инфузии клеток. В некоторых вариантах осуществления контейнеры представляют собой или содержат флаконы или пробирки (например, стеклянные или пластиковые флаконы или пробирки).
ПРОНУМЕРОВАННЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00206] Настоящее изобретение и изобретения, описанные в данном документе, могут быть описаны со ссылкой на следующие пронумерованные иллюстративные варианты осуществления.
6
6
[00207] 1. Способ лечения субъекта, у которого имеется рефрактерная и/или рецидивирующая неходжкинская лимфома, предусматривающий введение субъекту по меньшей мере одной дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1 ВВ/CD3-дзета для CD 19 человека, где по меньшей мере одна доза составляет от приблизительно 20×10 клеток/доза до приблизительно 360×10 клеток/доза.
[00208] 2. Способ согласно варианту осуществления 1, где неходжкинская лимфома представляет собой В-крупноклеточную лимфому.
[00209] 3. Способ согласно варианту осуществления 1, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.
6
6
6
6
6
6
[00210] 4. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-3, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза, приблизительно 240×10 клеток/доза и приблизительно 360×10 клеток/доза.
6
6
6
[00211] 5. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-4, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 80×10 клеток/доза и приблизительно 240×10 клеток/доза, в случае если субъект имеет вес, равный 50 кг или меньше.
6
6
6
6
[00212] 6. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-4, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 20×10 клеток/доза, приблизительно 40×10 клеток/доза, приблизительно 120×10 клеток/доза и приблизительно 360×10 клеток/доза, где субъект имеет вес более чем 50 кг.
[00213] 7. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-6, где CAR-T-клетки являются CD52-дефицитными.
[00214] 8. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-6, где CAR-T-клетки предусматривают смесь CD52-дефицитных и CD-52-положительных клеток.
[00215] 9. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-8, где CAR-T-клетки содержат CAR под SEQ ID NO: 1.
[00216] 10. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-9, где CAR-T-клетки включают UCART19(CD19)CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки.
[00217] 11. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-9, где CAR-T-клетки не экспрессируют переключатель безопасности.
[00218] 12. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-11, где экспрессия CAR является выявляемой у субъекта в течение периода длительностью по меньшей мере 14 дней после введения CAR-T-клеток.
[00219] 13. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-12, где экспрессия CAR является выявляемой у субъекта в течение периода длительностью по меньшей мере 28 дней после введения CAR-T-клеток.
[00220] 14. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-13, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 1 месяца после введения CAR-T.
[00221] 15. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-14, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 2 месяцев после введения CAR-T.
[00222] 16. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-15, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 6 месяцев после введения CAR-T.
[00223] 17. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-16, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 12 месяцев после введения CAR-T.
[00224] 18. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-17, где субъект получает первую схему для лимфодеплеции до введения по меньшей мере одной дозы.
[00225] 19. Способ согласно варианту осуществления 18, где первая схема для лимфодеплеции включает введение флударабина и циклофосфамида.
[00226] 20. Способ согласно варианту осуществления 18, где первая схема для лимфодеплеции включает введение флударабина, циклофосфамида и антитела к CD52.
[00227] 21. Способ согласно варианту осуществления 19 или 20, где первая схема для лимфодеплеции дополнительно включает введение Mensa (натрий-2-меркаптоэтансульфонат).
[00228] 22. Способ согласно любому из вариантов осуществления 19-21, где первая схема для лимфодеплеции дополнительно включает введение по меньшей мере одного кортикостероида.
[00229] 23. Способ согласно варианту осуществления 22, где кортикостероид вводят непосредственно перед введением антитела к CD52.
[00230] 24. Способ согласно варианту осуществления 22 или 23, где кортикостероид представляет собой метилпреднизолон.
[00231] 25. Способ согласно варианту осуществления 24, где метилпреднизолон вводят в дозе 2 мг/кг.
[00232] 26. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-25, где пациент получает премедикацию в отношении связанной с инфузией реакции перед схемой для лимфодеплеции.
[00233] 27. Способ согласно варианту осуществления 26, где премедикация включает по меньшей мере одно антигистаминное средство.
[00234] 28. Способ согласно варианту осуществления 26 или 27, где премедикация включает введение ацетаминофена.
2
2
[00235] 29. Способ согласно любому из вариантов осуществления 19-28, где флударабин вводят в дозе приблизительно 30 мг/м/день; циклофосфамид вводят в дозе приблизительно 300 мг/м/день, или антитело к CD52 вводят в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг/день.
2
2
[00236] 30. Способ согласно любому из вариантов осуществления 20-28, где флударабин вводят в дозе приблизительно 30 мг/м/день; циклофосфамид вводят в дозе приблизительно 300 мг/м/день, и антитело к CD52 вводят в дозе от приблизительно 10 до приблизительно 13 мг/день.
[00237] 31. Способ согласно любому из вариантов осуществления 18-30, где первую схему для лимфодеплеции начинают за приблизительно 1-15 дней до введения по меньшей мере одной дозы.
[00238] 32. Способ согласно любому из вариантов осуществления 18-31, где первую схему для лимфодеплеции вводят в течение курса, составляющего 1, 2, 3, 4 или 5 дней.
[00239] 33. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1-32, где субъект получает последующую дозу CAR-T-клеток.
[00240] 34. Способ согласно варианту осуществления 33, где у субъекта наблюдается субоптимальный ответ на момент введения последующей дозы.
[00241] 35. Способ согласно варианту осуществления 34, где субоптимальный ответ предусматривает:
(a) полный ответ (CR), полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi) с выявляемым минимальным остаточным заболеванием (пациенты с лейкозом) и отсутствием цитогенетического ответа;
(b) полный ответ костного мозга;
(c) частичный ответ или
(d) стабильный ответ.
[00242] 36. Способ согласно любому из вариантов осуществления 33-35, где последующая доза содержит приблизительно такое же количество клеток, как и количество клеток в первой дозе.
[00243] 37. Способ согласно любому из вариантов осуществления 33-35, где последующая доза содержит увеличенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00244] 38. Способ согласно любому из вариантов осуществления 33-35, где последующая доза содержит уменьшенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00245] 39. Способ согласно любому из вариантов осуществления 33-38, где последующую дозу вводят через по меньшей мере 14, по меньшей мере 28, по меньшей мере 42 или по меньшей мере 56 дней после первой дозы.
[00246] 40. Фармацевтический набор для лечения пациента, страдающего от рака, при этом набор содержит:
(a) Т-клетки с CAR для CD 19 и
(b) антитело к CD52.
[00247] 41. Фармацевтический набор согласно варианту осуществления 40, где CAR-T-клетки представляют собой клетки UCART19.
[00248] 42. Фармацевтический набор согласно варианту осуществления 40 или 41, где CAR-T-клетки экспрессируют CAR под SEQ ID NO: 1.
[00249] 43. Фармацевтический набор согласно любому из вариантов осуществления 40-42, где антитело к CD52 содержит последовательность под SEQ ID NO: 8 и/или SEQ ID NO: 10.
[00250] 44. Фармацевтический набор согласно любому из вариантов осуществления 40-43, где набор содержит первый контейнер, содержащий CAR-T-клетки, и второй контейнер, содержащий антитело к CD52.
[00251] 45. Фармацевтический набор согласно варианту осуществления 44, где по меньшей мере один из первого и второго контейнеров представляет собой гибкий мешок для инфузии клеток.
[00252] 46. Фармацевтический набор согласно любому из вариантов осуществления 40-45, где набор дополнительно содержит этикетку или листок-вкладыш, содержащие инструкции по введению субъекту CAR-T-клеток и антитела к CD52.
[00253] 47. Способ лечения, предусматривающий:
(a) введение субъекту, у которого имеется заболевание, первой дозы Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток) и
(b) введение субъекту последующей дозы CAR-T-клеток в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 28 дней после начала указанного в (а) введения до менее чем приблизительно 200 дней после него.
[00254] 48. Способ согласно варианту осуществления 47, где CAR-T-клетки являются аллогенными.
4
8
[00255] 49. Способ согласно варианту осуществления 47 или 48, где первая доза содержит от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 общего количества клеток.
5
6
7
7
8
8
8
[00256] 50. Способ согласно варианту осуществления 49, где первая доза содержит приблизительно 6×10 общего количества клеток, приблизительно 6×10 общего количества клеток, приблизительно 6×10 общего количества клеток, приблизительно 8×10 общего количества клеток, приблизительно 1,8×10 общего количества клеток, приблизительно 2,4×10 общего количества клеток или приблизительно 5×10 общего количества клеток.
4
7
[00257] 51. Способ согласно варианту осуществления 47 или 48, где первая доза содержит от 1×10 до 2×10 клеток на килограмм веса тела субъекта.
4
5
6
6
6
[00258] 52. Способ согласно варианту осуществления 51, где первая доза содержит приблизительно 1×10, приблизительно 1×10, приблизительно 1×10, приблизительно 3×10 или приблизительно 9×10 клеток на килограмм веса тела субъекта.
[00259] 53. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-52, где последующую дозу CAR-T-клеток вводят через приблизительно 28 дней, приблизительно 60 дней или приблизительно 99 дней после начала указанного введения согласно (а).
[00260] 54. Способ согласно варианту осуществления 53, где последующую дозу CAR-T-клеток вводят через приблизительно 99 дней после начала указанного введения согласно (а).
[00261] 55. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-54, где после стадии (а) и перед стадией (b) субъекту вводят промежуточную схему для лимфодеплеции.
[00262] 56. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-55, где промежуточная схема для лимфодеплеции включает введение субъекту флударабина, циклофосфамида и антитела к CD52 в течение от приблизительно 0 до 14 дней перед стадией (b).
2
2
[00263] 57. Способ согласно варианту осуществления 56, где флударабин вводят в дозе от приблизительно 90 до 150 мг/м; циклофосфамид вводят в дозе от приблизительно 1000 до 4000 мг/м, и антитело к CD52 вводят в дозе от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг.
[00264] 58. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-57, где субъекту вводят первую схему для лимфодеплеции.
[00265] 59. Способ согласно варианту осуществления 47, где первая схема для лимфодеплеции включает введение субъекту флударабина, циклофосфамида и антитела к CD52.
2
2
[00266] 60. Способ согласно варианту осуществления 59, где флударабин вводят в дозе от приблизительно 90 до 150 мг/м; циклофосфамид вводят в дозе от приблизительно 1000 до 4000 мг/м, и антитело к CD52 вводят в дозе от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг.
[00267] 61. Способ согласно любому из вариантов осуществления 58-60, где первую схему для лимфодеплеции начинают за приблизительно 15-5 дней до стадии (а).
[00268] 62. Способ согласно любому из вариантов осуществления 58-60, где первую схему для лимфодеплеции завершают за приблизительно 2-10 дней до стадии (а).
[00269] 63. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-62, где ответ оценивают между стадией (а) и стадией (b).
[00270] 64. Способ согласно варианту осуществления 63, где ответ оценивают перед промежуточной лимфодеплецией.
5
8
[00271] 65. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-64, где последующая доза содержит от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 общего количества клеток.
6
[00272] 66. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-65, где последующая доза содержит приблизительно 6×10 общего количества клеток.
[00273] 67. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-66, где введение согласно (а) приводит к облегчению заболевания у субъекта, на что указывает ослабление одного или более симптомов заболевания после указанного в (а) введения.
[00274] 68. Способ согласно варианту осуществления 67, где на момент введения согласно (b) у субъекта произошел рецидив.
[00275] 69. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-68, где последующая доза клеток содержит клетки в количестве, достаточном для облегчения заболевания у субъекта.
[00276] 70. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-69, где введение согласно (b) приводит к дополнительному облегчению заболевания у субъекта.
[00277] 71. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-70, где введение последующей дозы приводит к облегчению заболевания у субъекта по сравнению с состоянием непосредственно перед началом введения последующей дозы.
[00278] 72. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-71, где способ приводит к облегчению заболевания в большей степени и/или в течение более длительного периода времени по сравнению со способом, включающим альтернативную схему введения доз, где субъекту вводят клетки согласно (а) и клетки согласно (b) в однократной дозе.
[00279] 73. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-72, где заболевание сохраняется после введения первой дозы, и/или введения первой дозы недостаточно для устранения заболевания у субъекта.
[00280] 74. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-73, где у субъекта отсутствует персистенция CAR-T-клеток на момент введения согласно (b).
[00281] 75. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-74, где у субъекта наблюдается один или более симптомов заболевания на момент введения согласно (b).
[00282] 76. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-75, где у субъекта наблюдается субоптимальный ответ на момент введения согласно (b).
[00283] 77. Способ согласно варианту осуществления 76, где субоптимальный ответ предусматривает:
(a) полный ответ (CR), полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi) с выявляемым минимальным остаточным заболеванием (пациенты с лейкозом) и отсутствием цитогенетического ответа;
(b) полный ответ костного мозга;
(c) частичный ответ или
(d) стабильный ответ.
[00284] 78. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-77, где исход, связанный с синдромом высвобождения цитокинов (CRS), у субъекта в день 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 после введения согласно (b) не является выявляемым или снижается на значение от приблизительно 20% до приблизительно 99% по сравнению со способом, включающим альтернативную схему введения доз, где субъекту вводят клетки согласно (b) без осуществления введения первой дозы.
[00285] 79. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-78, где последующая доза содержит приблизительно такое же количество клеток, как и количество клеток в первой дозе.
[00286] 80. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-78, где последующая доза содержит увеличенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00287] 81. Способ согласно варианту осуществления 80, где последующая доза содержит на по меньшей мере приблизительно 5% больше клеток, чем количество клеток в первой дозе.
[00288] 82. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-78, где последующая доза содержит уменьшенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00289] 83. Способ согласно варианту осуществления 82, где последующая доза содержит на по меньшей мере приблизительно 5% меньше клеток, чем количество клеток в первой дозе.
[00290] 84. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-83, где заболевание представляет собой опухоль или рак.
[00291] 85. Способ согласно варианту осуществления 84, где рак представляет собой лейкоз или лимфому.
[00292] 86. Способ согласно варианту осуществления 84, где опухоль или рак представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ALL), представляет собой хронический лимфолейкоз (CLL), HNSCC, неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз, диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL), множественную миелому, рефрактерную фолликулярную лимфому, лимфому из мантийных клеток, медленно растущую В-клеточную лимфому, В-клеточные злокачественные новообразования, формы рака толстой кишки, легкого, печени, молочной железы, предстательной железы, яичника, кожи, меланому, рак кости и головного мозга, рак яичника, формы эпителиального рака, почечно-клеточную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, лимфому Ходжкина, карциному шейки матки, колоректальный рак, глиобластому, нейробластому, саркому Юинга, медуллобластому, остеосаркому, синовиальную саркому или мезотелиому.
[00293] 87. Способ согласно варианту осуществления 86, где ALL является рецидивирующим или рефрактерным ALL.
[00294] 88. Способ лечения, предусматривающий введение последующей дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) субъекту, которому ранее вводили первую дозу аллогенных CAR-T-клеток, где последующую дозу клеток вводят в момент времени, который представляет собой от по меньшей мере или более чем приблизительно 5 недель после начала введения первой дозы до менее чем приблизительно 24 недели после него.
[00295] 89. Способ лечения, предусматривающий введение субъекту последующей дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR), где перед указанным введением субъект получал предыдущую дозу CAR-T-клеток в количестве, достаточном для демонстрации клинического эффекта у субъекта; и на момент введения у субъекта не проявляется выявляемый адаптивный иммунный ответ организма, специфический в отношении CAR-T-клеток; и/или время между указанными предыдущей и последующей дозами составляет от более чем приблизительно 5 недель до менее чем приблизительно 24 недели.
[00296] 90. Способ согласно варианту осуществления 88, где количество клеток, вводимых в последующей дозе, такое же, как и количество клеток, вводимых в первой дозе.
[00297] 91. Способ согласно варианту осуществления 88, где количество клеток, вводимых в последующей дозе, больше, чем количество клеток, вводимых в первой дозе.
[00298] 92. Применение композиции, содержащей аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR), для изготовления лекарственного препарата, предназначенного для лечения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток, где композиция предназначена для применения в момент времени от приблизительно 5 до приблизительно 24 недель после предыдущего лечения; и/или композиция составлена для введения последующей дозы в количестве, достаточном для облегчения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток.
[00299] 93. Композиция, содержащая аллогенные Т-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR), для применения в лечении заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток, где клетки предназначены для применения в момент времени от приблизительно 5 до 24 недель после предыдущего лечения; и при этом клетки составляют для введения последующей дозы в количестве, достаточном для облегчения заболевания у субъекта, ранее получавшего лечение с помощью CAR-T-клеток.
[00300] 94. Применение согласно варианту осуществления 92 или композиция для применения в соответствии с вариантом осуществления 93, где доза CAR-T-клеток в предыдущем лечении обеспечивала облегчение одного или более симптомов заболевания у субъекта перед применением последующей дозы.
6
8
[00301] 95. Применение аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) в изготовлении лекарственного препарата для применения в способе лечения заболевания, при этом указанный способ включает введение субъекту, у которого имеется заболевание, первой дозы CAR-T-клеток, причем указанная первая доза содержит от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 общего количества клеток; введение субъекту последующей дозы CAR-T-клеток в момент времени, который составляет по меньшей мере или более чем приблизительно 4 недели после и менее чем приблизительно 24 недели после начала указанного введения согласно (а).
[00302] 96. Применение согласно вариантам осуществления 92, 94 или 95 или композиция для применения в соответствии с вариантом осуществления 93, где заболевание представляет собой лейкоз или лимфому.
[00303] 97. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-83, применение согласно любому из вариантов осуществления 92 или 94-95 или композиция для применения в соответствии с вариантом осуществления 93, где CAR-Т-клетки представляют собой CAR-T-клетки, специфические в отношении опухолевого антигена.
[00304] 98. Способ согласно любому из вариантов осуществления 47-83, применение согласно любому из вариантов осуществления 92 или 94-95 или композиция для применения в соответствии с вариантом осуществления 93, где CAR-T-клетки представляют собой клетки UCART19.
[00305] 99. Изделие, содержащее:
6
8
некоторое количество герметизируемых контейнеров, каждый из которых по отдельности содержит стандартную дозу аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) для введения субъекту, при этом указанная стандартная доза содержит от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 клеток; упаковочный материал и этикетку или листок-вкладыш, содержащие инструкции по введению субъекту некоторого количества указанных стандартных доз посредством осуществления первого введения и последующего введения, причем указанное первое введение включает доставку субъекту одной из указанных стандартных доз, и указанное последующее введение включает введение субъекту одной или некоторого количества указанных стандартных доз.
[00306] 100. Изделие согласно варианту осуществления 99, где в инструкциях указано, что указанное последующее введение необходимо осуществлять в период времени от приблизительно 30 до 150 дней, необязательно в приблизительно день 30, приблизительно день 60, приблизительно день 90 или приблизительно день 99, после указанного первого введения.
[00307] 101. Изделие согласно варианту осуществления 99 или 100, где контейнеры представляют собой или содержат гибкие мешки для инфузии клеток.
5
6
7
8
[00308] 102. Способ лечения взрослого субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD 19+ В-клеточный лейкоз, предусматривающий введение субъекту по меньшей мере одной дозы Т-клеток с аллогенным химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, где по меньшей мере одна доза выбрана из группы, состоящей из приблизительно 6×10 клеток/доза, 6×10 клеток/доза, приблизительно 6-8×10 клеток/доза и приблизительно 1,8-2,4×10 клеток/доза.
7
[00309] 103. Способ лечения педиатрического субъекта, у которого имеется рефрактерный и/или рецидивирующий острый лимфобластный CD 19+ В-клеточный лейкоз, предусматривающий введение субъекту по меньшей мере одной дозы аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), содержащих CAR 4-1ВВ/CD3-дзета для CD19 человека, где по меньшей мере одна доза составляет приблизительно 2-8×10 клеток/доза.
[00310] 104. Способ согласно варианту осуществления 102 или 103, где CAR-T-клетки являются CD52-дефицитными.
[00311] 105. Способ согласно варианту осуществления 102 или 103, где CAR-T-клетки предусматривают смесь CD52-дефицитных и CD-52-положительных клеток.
[00312] 106. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-105, где CAR-T-клетки экспрессируют CAR с последовательностью под SEQ ID NO: 1.
[00313] 107. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-106, где CAR-T-клетки включают UCART19 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки).
[00314] 108. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-107, где экспрессия CAR является выявляемой у субъекта в течение периода длительностью по меньшей мере 42 дня после введения CAR-T-клеток.
[00315] 109. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-108, где экспрессия CAR является выявляемой у субъекта в течение периода длительностью по меньшей мере 56 дней после введения CAR-T-клеток.
[00316] 110. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-109, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 1,3 месяца после введения UCART19.
[00317] 111. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-110, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 1,8 месяца после введения UCART19.
[00318] 112. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-111, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 3,6 месяца после введения UCART19.
[00319] 113. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-112, где у субъекта наблюдается состояние CR или Cri в течение по меньшей мере 12,4 месяца после введения UCART19.
[00320] 114. Способ согласно любому из вариантов осуществления 102-113, где субъект получает первую схему для лимфодеплеции до введения по меньшей мере одной дозы.
[00321] 115. Способ согласно варианту осуществления 114, где первая схема для лимфодеплеции включает введение флударабина и циклофосфамида.
[00322] 116. Способ согласно варианту осуществления 114, где первая схема для лимфодеплеции включает введение флударабина, циклофосфамида и антитела к CD52.
2
2
[00323] 117. Способ согласно варианту осуществления 115 или 116, где флударабин вводят в дозе от приблизительно 30 до 150 мг/м; циклофосфамид вводят в дозе от приблизительно 300 до 4000 мг/м, и антитело к CD52 вводят в дозе от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг.
[00324] 118. Способ согласно любому из вариантов осуществления 114-117, где первую схему для лимфодеплеции начинают за приблизительно 1-15 дней до введения по меньшей мере одной дозы.
[00325] 119. Способ согласно любому из вариантов осуществления 114-118, где субъект получает последующую дозу CAR-T-клеток.
[00326] 120. Способ согласно варианту осуществления 119, где у субъекта наблюдается субоптимальный ответ на момент введения последующей дозы.
[00327] 121. Способ согласно варианту осуществления 120, где субоптимальный ответ предусматривает:
(a) полный ответ (CR), полный ответ с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi) с выявляемым минимальным остаточным заболеванием (пациенты с лейкозом) и отсутствием цитогенетического ответа;
(b) полный ответ костного мозга;
(c) частичный ответ или
(d) стабильный ответ.
[00328] 122. Способ согласно варианту осуществления 119, где последующая доза содержит приблизительно такое же количество клеток, как и количество клеток в первой дозе.
[00329] 123. Способ согласно варианту осуществления 119, где последующая доза содержит увеличенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00330] 124. Способ согласно варианту осуществления 119, где последующая доза содержит уменьшенное количество клеток по сравнению с первой дозой.
[00331] 125. Способ получения популяции аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток), направленных на мишень, представляющую интерес, включающий:
- выделение мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) от здорового донора;
- активацию Т-клеток в РВМС;
- трансдуцирование активированных Т-клеток лентивирусным вектором, где лентивирусный вектор представляет собой самоинактивирующийся рекомбинантный вектор, экспрессирующий CAR, представляющий интерес;
- нарушение экспрессии генов TCRαβ и CD-52 в субпопуляции Т-клеток;
- увеличение популяции Т-клеток и
- обогащение популяции Т-клеток в отношении TCRαβ-отрицательных клеток
- с получением тем самым популяции аллогенных Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) (CAR-T-клеток).
[00332] 126. Способ согласно варианту осуществления 125, где стадию (с) осуществляют через приблизительно 3-4 дня после стадии (b).
[00333] 127. Способ согласно варианту осуществления 125 или 126, где стадию (d) осуществляют через приблизительно 2 дня после стадии (с).
[00334] 128. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-127, где стадию (f) осуществляют через приблизительно 10-12 дней после стадии (d).
[00335] 129. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-128, где CAR-T-клетки являются CD52-дефицитными.
[00336] 130. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-129, где CAR-T-клетки предусматривают смесь CD52-дефицитных и CD-52-положительных клеток.
[00337] 131. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-130, где CAR-T-клетки экспрессируют CAR с последовательностью под SEQ ID NO: 1.
[00338] 132. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-131, где CAR-T-клетки включают UCART19 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки).
[00339] 133. Способ согласно любому из вариантов осуществления 125-132, где лентивирусный вектор из стадии (с) дополнительно экспрессирует переключатель безопасности.
[00340] 134. Способ согласно варианту осуществления 133, где переключатель безопасности представляет собой RQR8.
ПРИМЕРЫ
[00341] Следующие примеры предназначены для иллюстрации способов и материалов по настоящему изобретению. Подходящие модификации и адаптации описанных заболеваний и параметров, обычно встречающихся в данной области техники, которые являются очевидными специалистам в данной области, находятся в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Пример 1. Схема введения доз аллогенных CAR-T
[00342] Этот пример иллюстрирует лечение с помощью нескольких доз аллогенных CAR-T-клеток.
2
2
[00343] Перед введением CAR-T-клеток субъектам с заболеванием вводили схему для лимфодеплеции. Такая схема лечения может предусматривать, например, лечение с помощью флударабина (общая доза в диапазоне от приблизительно 30 до 150 мг/м) и с помощью циклофосфамида (общая доза в диапазоне от приблизительно 300 до 4000 мг/м), с помощью лекарственного средства к CD52 (например, с помощью антитела к CD52, такого как антитело, содержащее последовательность под SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10) (общая доза в диапазоне от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг).
4
8
[00344] Субъектам вводили первую дозу CAR-T-клеток в количестве от приблизительно 1×10 до приблизительно 5×10 клеток в Д. 0.
[00345]Приблизительно между Д. 24 и Д. 62 оценивали ответ на первую дозу CAR-T-клеток. Количество CAR-T-клеток, присутствующих в периферической крови субъектов, получавших лечение, определяли посредством выполнения проточной цитометрии образца клеток в отношении поверхностной экспрессии CAR-специфического маркера, CD4 и/или CD8. Положительное MRD и/или утрата персистенции предполагали последующее введение доз CAR-T-клеток.
2
2
4
8
[00346] Перед последующим введением доз CAR-T-клеток субъектам с MRD вводили схему для лимфодеплеции. Такая схема лечения может предусматривать, например, лечение с помощью флударабина (общая доза в диапазоне от приблизительно 30 до 150 мг/м) и циклофосфамида (общая доза в диапазоне от приблизительно 300 до 4000 мг/м), с антителом к CD52 или без него (общая доза в диапазоне от приблизительно 0,3 до 1 мг/кг). Между 2 и 14 днями после лимфодеплеции субъектам вводили дозу CAR-T-клеток в количестве от приблизительно 1×10 до приблизительно 1×10 клеток. Оценивали ответ на дозу CAR-T-клеток и определяли количество CAR-T-клеток, присутствующих в периферической крови субъектов, получавших лечение. Положительное MRD и/или утрата персистенции предполагали последующее введение доз CAR-T-клеток. Многократные дозы аллогенных CAR-T могли вводить до тех пор, пока не достигалась MRD-негативность.
[00347] Пример 2. Применение продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом
[00348] Данное исследование было проведено в отношении лечения B-ALL. В-ALL является неизлечимым у ~60% взрослых пациентов. При рецидиве прогноз очень плохой (общая выживаемость <10%). Стандартная терапия включает комбинацию химиотерапия ± аллогенная SCT.
[00349] Субъектам вводили универсальную адоптивную терапию на основе аллогенных Т-клеток, направленных на CD19+ злокачественные новообразования.
[00350] Экспрессия транс гена достигалась с использованием лентивирусной трансдукции. UCART19 содержит scFv для CD19 и внутриклеточный домен, содержащий CD3ζ+4-1ВВ. CAR-T-клетка дополнительно содержит RQR8 (мимотоп CD20), переключатель безопасности, экспрессируемый в транс-положении. CAR-T-клетки получали с помощью дополнительного нокаута с использованием технологий на основе TALEN. В частности, TRAC подвергали нокауту с целью предотвратить TCR-опосредованное распознавание антигенов HLA пациента. CD52 подвергали нокауту с целью обеспечить применение антител к CD52 при лимфодеплеции. Иллюстративная UCART19 клетка, используемая в данном документе (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-_T-клетки), представлена на ФИГ. 5.
[00351] Это исследование имело по меньшей мере 3 цели, и схематические изображения плана исследования представлены на ФИГ. 6А и ФИГ. 6В (ВМА=аспирация костного мозга).
[00352] Цель №1: оценка безопасности и переносимости UCART19 в разных дозах и определение максимально переносимой дозы (MTD). (ФИГ. 3В).
[00353] Цель №2: оценка противолейкозной активности.
[00354] Цель №3: оценка увеличения количества и персистенции UCART19.
[00355] На ФИГ. 3В показан план исследования, имеющий следующие особенности:
- Открытое несравнительное исследование с повышением дозы для оценки до 4 уровней дозы (DL) UCART19 и определения максимальной переносимой дозы (MTD) у взрослых пациентов с R/R (рецидивирующим/рефрактерным) B-ALL.
- За повышением дозы следовала часть расширения безопасности, пациенты получали MTD-дозу или рекомендуемую дозу (RD).
2
2
- Схема для лимфодеплеции (LD) начиналась с Д. -7 предыдущей инфузии UCART19 и объединяла циклофосфамид 1500 мг/м и флударабин 90 мг/м без антитела к CD52 (FC) или с антителом к CD52, 1 мг/кг (FCA).
- Во время части расширения роль антитела к CD52 могла быть исследована у 2 групп пациентов (LD с FC или FCA).
- В Д. 0 UCART19 вводили в виде одной не дробной дозы посредством медленной инфузии IV (5 минут).
- Оценку токсичности, ограничивающей дозу, осуществляли через 28 дней после инфузии (Д. 28).
- Аспирацию/биопсию костного мозга осуществляли перед LD в Д. -1, в Д. 28 и Д. 84.
- Минимальное остаточное заболевание (MRD) определяли по <10-4 бластам в костном мозге, обнаруживаемым с помощью проточной цитометрии (FLC) и/или с помощью qPCR.
- По завершении исследования (Д. 84 после инфузии) пациента переводили на долгосрочное последующее исследование (LTFU) в течение 15-летнего периода.
[00356]Ключевые критерии соответствия для данного исследования включали:
- Возраст ≥16 лет, не более <70 (мужчина или женщина).
+
- Пациент с CD19 рецидивирующим или рефрактерным (рецидивирующий/рефрактерный; R/R) B-ALL в соответствии с рекомендациями Национальной комплексной онкологической сети (NCCN, 2017).
+
-3
- Морфологическое или MRD (≥1×10, определенное с помощью проточной цитометрии и/или qPCR).
- Кто исчерпал доступные варианты лечения.
- Отсутствие предыдущего лечения с помощью исследуемых продуктов генной или клеточной терапии.
- Клинически не подозревалось экстрамедуллярное вовлечение.
- Адекватная функция почек, печени, легких и сердца.
- Нет активной инфекции.
- Нет активной лейкемии ЦНС.
6
5
7
6
8
[00357] Данные, представленные в данном документе, относятся к 12 пациентам, которые получали лечение, при этом шесть пациентов при первом уровне дозы, составляющей 6×10 клеток (примерно 1×10 клеток на килограмм), и шесть пациентов при втором уровне дозы, составляющей 6-8×10 общего количества клеток (примерно 1×10 клеток на килограмм). Ни один пациент еще не получал лечение при третьем и конечном уровнях дозы, составляющих от 1,8 до 2,4×10 общего количества клеток. Большинство пациентов получали три или больше линий предыдущего лечения, три из которых ранее получали лечение с помощью блинатумомаба и семь получали предыдущее лечение с помощью алло-SCT (трансплантация аллогенных стволовых клеток), что отражает клиническую практику в Европе, где 10 из 12 пациентов были включены в исследование.
[00358] Характеристики пациентов представлены ниже в таблице 8.
Безопасность
[00359]Все 12 включенных пациентов получали UCART19 в целевой дозе клеток после лимфодеплирующей химиотерапии, состоящей из циклофосфамида и флударабина, при этом 10 пациентов получали антитело к CD52 (схема FCA) и два пациента не получали антитело к CD52 (схема FC). В таблице 6 ниже обобщены нежелательные явления по степени в зависимости от инфузии UCART19, а также те, которые связаны со схемой для лимфодеплеции. Степень 1 представляет легкую токсичность, степень 2 представляет умеренную токсичность, степень 3 представляет тяжелую токсичность, и степень 4 представляет опасную для жизни токсичность. Степень токсичности 5 представляет токсичность, приводящую к смерти.
[00360] Наиболее частым нежелательным явлением, связанным с UCART19, был CRS, зарегистрированный у 11 пациентов (два пациента, страдающих тяжелыми случаями CRS, один степени 3 и один степени 4). Тоцилизумаб вводили 6/11 пациентам. CRS коррелировал с увеличением сывороточных цитокинов (IL-6, IL-10 и IFN-гамма) и увеличением количества UCART19 в крови у всех пациентов.
[00361] Вирусная реактивация (CMV и/или аденовирус) произошла у 4 пациентов (от G1 до G3).
[00362] У трех пациентов развилась длительная цитопения, определяемая как стойкая цитопения по истечении 42 дней после инфузии UCART19.
[00363] У троих пациентов наблюдались легкие, или степени 1, нейротоксические явления.
[00364] У одного пациента наблюдались нежелательные явления GvHD степени 1 на коже, которые устранялись с помощью местных стероидов.
[00365] Сообщалось о двух случаях токсичности, ограничивающих дозу. Первый случай произошел при первом уровне дозы, и он представлял собой CRS степени 4, связанный с UCART19, и ассоциированный с нейтропеническим сепсисом степени 5, связанным с лимфодеплецией и UCART19. Смерть наступила в день 15 после инфузии UCART19. Второй случай, длительная цитопения степени 4, произошел при втором уровне дозы и был описан как связанный с лимфодеплецией и UCART19. Этот пациент перенес алло-SCT и имел несвязанное легочное кровотечение степени 5 в условиях инфекции в день 19 после алло-SCT или день 82 вследствие инфузии UCART19. В других испытаниях аутологичной терапии на основе Т-клеток с CAR для CD19 сообщалось о нежелательных явлениях степени 5 отчасти из-за поздней стадии заболевания и сопутствующих состояний.
[00366] Также сообщалось о двух дополнительных случаях смерти, которые не были отнесены к последствиям применения UCART19. Один пациент умер от прогрессирующего заболевания, а один пациент от осложнений, связанных с алло-SCT. Смертность, связанная с трансплантацией, возникала у примерно 20-30% пациентов вследствие алло-SCT.
Эффективность
[00367] На ФИГ. 7А показан статус исследования. На ФИГ. 7В показан ответ, продолжительность ремиссии и повторное введение доз UCART19 в этом испытании (противолейкозная активность).
[00368] MRD-CR возникает, когда пациент достигает CR, и отсутствуют какие-либо признаки клеток ALL в костном мозге в случае применения чувствительных тестов, таких как полимеразная цепная реакция или проточная цитометрия. Значения частоты CR или CRi является типичным нормативным стандартом, однако исследования как у детей, так и у взрослых с ALL продемонстрировали сильную корреляцию между минимальным остаточным заболеванием (MRD+) и рисками в отношении рецидива.
[00369] Из 12 пациентов, которым вводили UCART19, двоих невозможно было подвергнуть оценке (один умер в день 15, как отмечалось выше, и один не достиг оценки в день 28 на момент сбора данных). Восемь из 10 оцениваемых пациентов достигли CR, определяемого как отсутствие каких-либо признаков или симптомов рака, или CR с неполным восстановлением числа форменных элементов крови (CRi). Семь пациентов достигли MRD-CR.
[00370] У этих 2 пациентов с рефрактерным заболеванием не наблюдалось увеличение количества UCART19.
[00371] Шесть пациентов получали лечение с помощью алло-SCT, в том числе четыре пациента после первой дозы UCART19 и два пациента после второй дозы. Согласно данным, собранным в этом исследовании, четыре пациента сохраняли состояние MRD-CR в месяцы 12,4, 3,6, 1,8 и 1,3 после инфузии UCART19 (молекулярная ремиссия).
[00372] Увеличение количества CAR-T-клеток обнаруживали в крови с дня 7 после инфузии UCART19 с достижением пика размножения между днем 10 и днем 17. У одного пациента на втором уровне дозы наблюдался самый высокий пик, связанный с длительной персистенцией вплоть до дня 42, все еще сохраняющейся на момент прекращения сбора данных. При втором уровне дозы самая длительная персистенция, наблюдаемая на момент прекращения сбора данных, происходила в день 56.
[00373] У двоих пациентов, принимавших схему FC, не было выявлено какого-либо увеличение количества CAR-T-клеток. Подобный недостаток увеличения количества CAR-T-клеток наблюдался у двоих из 10 пациентов на схеме FCA.
[00374] На ФИГ. 8А и ФИГ. 8В изображен профиль PK проточной питометрии и кинетика UCART19 у взрослых пациентов с рецидивирующим/рефрактерным CD19+ В-клеточным острым лимфобластным лейкозом. В частности, при ссылке на ФИГ. 8А и ФИГ. 8В предварительные данные в отношении проточной цитометрии при DL1 и DL2 показывают, что UCART19 был выявляемым в крови от Д. 3 до Д. 14 с пиком пролиферации между Д. 10 и Д. 17. Один пациент при DL2 продемонстрировал самый высокий пик, связанный с самой длительной персистенцией. Среди этих пациентов с увеличением количества клеток при DL1: 1 пациент продемонстрировал персистенцию UCART19 до Д. 42; при DL2: у 2 пациентов наблюдалась персистенция до Д. 42 и сохраняющаяся персистенция в Д. 56. Предварительные данные показывают, что уровень увеличения количества UCART19 не коррелировал с ответом в Д. 28; вместо этого MRD-CR в Д. 28 наблюдали даже при низких уровнях увеличения количества UCART19. После первой дозы UCART19 не наблюдали какого-либо увеличения количества у 2 из 10 пациентов, получавших LD с FCA, и у 2 из 2 пациентов, получавших FC.
[00375] Также оценивали роль антитела к CD52 при увеличении количества UCART19.
Пример 3. Повторное введение доз UCART19 пациенту с рецидивирующим/рефрактерным CD19-положительным B-ALL
[00376] Этот пример иллюстрирует лечение с помощью UCART19, где лечение предусматривает последующую дозу UCART19, вводимую после первой дозы UCART19, как вводили в примере 2.
[00377] Два пациента из вышеуказанного исследования в примере 2 получали вторую дозу UCART19, и оба достигли MRD-CR.
Пациент №4
6
2
2
6
[00378] 23-летний пациент мужского пола с рецидивирующим/рефрактерным CD19-положительным B-ALL получал однократную дозу UCART19 (6×10 общего количества клеток, доза DL1) в день 0 (Д. 0) исследования. Схему для лимфодеплеции (флударабин, 122 мг/м; циклофосфамид, 1230 мг/м и антитело к CD52, 1 мг/кг) вводили в течение шести дней перед инфузией UCART19. Какой-либо существенной токсичности не наблюдали. У этого пациента наблюдался рецидив заболевания CD19+ в Д. 61 после 1-й дозы (LD с FCA); 2-я доза (LD с FC) обеспечила этому пациенту достижение MRD- в Д. 28. Затем пациент получал схему для лимфодеплеции пониженной интенсивности в течение периода времени шесть дней (флударабин и циклофосфамид без антитела к CD52). Через 99 дней после исходной инфузии UCART19 пациенту повторно вводили ту же дозу (6×10 общего количества клеток) UCART19.
[00379] Данные показаны на графике на ФИГ. 2А. В момент, непосредственно предшествовавший введению последующей дозы UCART19, UCART19 не был выявляемым у пациента (ФИГ. 2А).
[00380] Пациент достигал MRD-негативности в Д. 28 после инфузии второй дозы UCART19. Таким образом, введение доз UCART19 после рецидива после молекулярной ремиссии после лечения с помощью первой дозы UCART19 было эффективным для достижения MRD-негативности. Пациента переводили на стадию трансплантации аллогенных стволовых клеток через 6 недель после второй дозы.
Пациент №13
7
2
2
7
2
2
[00381] Пациент мужского пола, 31 год, диагноз рефрактерный B-ALL. Пациент получал 1-ую инфузию UCART19; полученная доза составляла 8×10 общего количества клеток (уровень дозы 2) после лимфодеплеции, объединяющей флударабин (суммарная доза 90 мг/м) и циклофосфамид (суммарная доза 1500 мг/м) (FC). После 1-го введения доз: UCART19 не был выявляемым (<1 клеток/мкл с помощью проточной цитометрии). В день 28 (28 дней после инфузии UCART19) какой-либо противолейкозной активности не наблюдали (89% бластов в костном мозге). В течение 28 дней после инфузии UCART19 не сообщалось о каком-либо механизме действия, связанном с токсичностью. Пациент был исключен из исследования и получил вторую инфузию UCART19 (суммарная доза 8×10 общего количества клеток) (через 48 дней после первой дозы) из гуманных соображений («Specials» в Великобритании). Схема для лимфодеплеции объединяла флударабин (суммарная доза 90 мг/м), циклофосфамид (суммарная доза 1500 мг/м) и антитело к CD52 (суммарная доза 1 мг/кг) (FCA). Пациент характеризовался низким уровнем увеличения количества UCART19 (10 клеток/мкл) в день 10, после Д. 14 какой-либо UCART19 не обнаруживали. Сообщалось о низкой степени CRS. Противолейкозную активность наблюдали в день 14 и Д. 28 с отрицательным минимальным остаточным заболеванием (MRD-негативный), что определяли с помощью проточной цитометрии и qPCR. Пациента подвергали аллотрансплантации (через 63 дня после второй дозы). В конце концов у него был рецидив 15 августа 2018 года (через 112 дней после трансплантации) с низким уровнем выявленного MRD (молекулярный рецидив). Пациент все еще жив через 9,3 месяца после первой дозы UCART19 и через 7,8 месяца после второй дозы UCART19. Данные предусмотрены на ФИГ. 2B.f
[00382] Обоих пациентов впоследствии перевели на алло-SCT.
Пациент №18
8
2
2
2
2
[00383] Пациент мужского пола, 22 года, диагноз B-ALL. Пациент получал 1-ую инфузию UCART19 из 1,8×10 клеток (уровень дозы 3) после лимфодеплеции, объединяющей флударабин (суммарная доза 90 мг/м), циклофосфамид (суммарная доза 1500 мг/м) и антитело к CD52 (суммарная доза 40 мг) (FCA). Какой-либо UCART19 не был выявляемым и не сообщалось о механизме действия, связанном с токсичностью. В день 28 (28 дней после инфузии UCART19) какой-либо противолейкозной активности не наблюдалось (медуллярная биопсия показала 15% бластов). Пациент был невосприимчивым и получал вторую инфузию UCART19 (через 75 дней после первой дозы) с усиленной схемой для лимфодеплеции с помощью флударабина (суммарная доза 120 мг/м), циклофосфамида (суммарная доза 1500 мг/м) и антитела к CD52 (суммарная доза 1 мг/кг=65 мг) (FCA). Пациент продолжал участие в исследовании, так как повторное введение доз было разрешено согласно измененному протоколу. Пик увеличения количества UCART19 наблюдался в день 7, при этом UCART19 был выявляемым в день 10 (10 клеток/мкл), а в день 14 UCART19 не был выявляемым. В день 28 после второй дозы пациент не проявлял ответа и прогресса. Ответ пациента №18 на повторное введение доз показан на ФИГ. 14.
[00384] Этот результат демонстрирует, что повторное введение доз аллогенных CAR-T эффективно для достижения MRD-негативности после рецидива.
[00385] Пример 4. Применение продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у педиатрических пациентов с высоким риском рецидивирующего/рефрактерного CD19+ В-клеточного острого лимфобластного лейкоза
[00386] В-клеточный острый лимфобластный лейкоз является наиболее распространенным злокачественным заболеванием у детей и составляет 80% лейкозов у детей. Наиболее распространенный возраст составляет 2-10 лет (пики в 3-4 года), выживаемость составляет ~90%. Рецидив может произойти у 10% детей, при этом выживает около 40-50%, если только нет высокого риска, и в данном случае выживает приблизительно 10-30%.
[00387] В этом исследовании использовали такие же уровни UCART19, как представлены в примере 2.
[00388] Это исследование имело как минимум следующие цели:
- Оценка безопасности и переносимости UCART19 при фиксированной дозе.
- Оценка способности UCART19 индуцировать молекулярную ремиссию в Д. 28, Д. 56, Д. 84 и/или перед началом схемы алло-SCT.
- Оценка уровня ремиссии, продолжительности ремиссии, времени до ремиссии, выживаемости при конкретных заболеваниях и выживаемости без прогрессирования заболевания.
- Оценка доли пациентов, перенесших алло-SCT.
- Оценка фенотипа, миграции, увеличения количества и персистенции UCART19.
[00389] Ключевые критерии соответствия для данного исследования включали:
- Возраст от 6 месяцев до <18 лет (мужской и женский пол).
-3
- Пациент с CD19+R/R B-ALL, морфологическое или MRD+ (≥1×10, определенное посредством проточной цитометрии и/или qPCR)
- Кто исчерпал доступные варианты лечения.
- Соответствует параметрам включения для алло-SCT с подходящим донором.
- Отсутствие предыдущего лечения с помощью исследуемых продуктов генной или клеточной терапии.
- Нет активной инфекции.
- Нет активной лейкемии ЦНС.
[00390] На ФИГ. 9 показан план исследования.
2
7
6
[00391] Схему для лимфодеплеции начинали с Д. -7 (в течение недели предыдущей инфузии UCART19) и объединяли: циклофосфамид (С) (60 мг/кг/день в течение 2 дней), флударабин (F) (30 мг/м/день в течение 5 дней) и без антитела к CD52 (А) (0,2 мг/кг/день в течение 5 дней). В Д. 0 фиксированную дозу UCART19 (общее количество клеток 2×10, эквивалентное 1,1-2,3×10 клеток/кг) вводили в виде одной не дробной дозы посредством медленной инфузии IV в течение 5 минут.
[00392] Оценку безопасности осуществляли в Д. 28 после введения UCART19. ВМА осуществляли на исходном уровне, Д. -1, Д. 14 (необязательно), Д. 28, Д. 56, Д. 84 или перед началом схемы кондиционирования алло-SCT или при визите досрочного прекращения (по усмотрению исследователя). В течение 12-месячного периода последующего наблюдения ВМА будут осуществляться в М. 1, М. 2, М. 3, М. 6 и М. 12 после аллотрансплантации для оценки заболевания. Для рефрактерных пациентов ВМА будет осуществляться необязательно, в соответствии с решением исследователя.
Результаты
6
[00393] В исследование были включены шесть пациентов. Шесть пациентов проходили лечение при дозе клеток с привязкой по весу, эквивалентной 1,1-2,3×10 клеток/кг. Пять пациентов получали три или больше линий предыдущего лечения, а трое получили четыре или больше линий предыдущего лечения. Двое пациентов ранее проходили лечение посредством алло-SCT. Характеристики пациентов представлены ниже в таблице 10.
Безопасность
[00394] Все шесть зарегистрированных пациентов получали UCART19 в целевой дозе клеток после лимфодеплирующей химиотерапии, состоящей из циклофосфамида и флударабина. Пять пациентов также получали антитела к CD52. В таблице 11 ниже обобщены нежелательные явления по степени в зависимости от инфузии UCART19, а также те, которые связаны со схемой для лимфодеплеции и/или UCART19. [Степень 1 представляет легкую токсичность, степень 2 представляет умеренную токсичность, степень 3 представляет тяжелую токсичность, и степень 4 представляет опасную для жизни токсичность. Степень токсичности 5 представляет токсичность, приводящую к смерти.]
[00395] Наиболее частыми нежелательными явлениями, связанными с UCART19, были CRS у всех пациентов, получавших лечение, при этом один пациент страдал CRS степени 3. Нейротоксические явления от легкой до умеренной степени отмечались у троих из шести пациентов, получавших лечение. У троих пациентов наблюдалась длительная цитопения, которая, как сообщалось, была связана с лимфодеплецией, а в некоторых случаях, возможно, связана с UCART19. Вирусная реактивация цитомегаловирусом (CMV), аденовирусом, вирусом BK и метапневмовирусом была отнесена к последствиям лимфодеплеции. У одного пациента наблюдали временное GvHD на коже степени 1. Двое пациентов умерли от рецидива заболевания вследствие алло-SCT и один пациент умер от осложнений алло-SCT. Случаев смерти, связанных с лечением, не было. Данные представлены в таблице 12.
Эффективность
[00396] На ФИГ. 10 показан статус исследования. На ФИГ. 11 показан ответ и продолжительность ремиссии (противолейкозная активность).
[00397] Все пациенты завершали 28-дневный период оценки и подвергались оценке в отношении противолейкозной активности. Пять из шести пациентов достигли MRD-CR, и все пятеро перенесли алло-SCT. Двое пациентов находились в состоянии ремиссии через более чем 13 месяцев после инфузии UCART19, в момент прекращения сбора данных, и трое пациентов умерли вследствие алло-SCT, двое из-за рецидива заболевания и один из-за осложнений, связанных с трансплантатом. Один пациент покинул исследование из-за отсутствия ответа и получил последующее лечение с помощью блинатумомаба вне исследования. Это единственный пациент, который получал схему FC.
[00398] Клеточная кинетика была оценена и показана на ФИГ. 12. Количество копий вектора UCART19 (VCN) измеряли в крови и костном мозге с помощью qPCR. Предварительные данные показали, что для 5 из 6 пациентов UCART19 обнаружили в крови в Д. 7, с пиком пролиферации, наблюдаемым около Д. 14. UCART19 не обнаружили у одного пациента, который впоследствии перенес рецидив. У 3 из 5 пациентов UCART19 сохранялся в крови до Д. 28. У 2 из 5 пациентов UCART19 продолжал оставаться выявляемым в крови в Д. 42. Персистенцию после Д. 42 не измеряли, поскольку UCART 19 исключали с помощью схемы кондиционирования для алло-SCT.
[00399] Оценивали кинетику цитокинов. У 2 из 6 пациентов имелось повышение уровня IL-6 и IFNγ. Повышение цитокинов не наблюдалось у 4 из 6 пациентов. Все 6 пациентов страдали CRS. CRS G3 наблюдался у пациента 1 и CRS G2 у пациента 8. Время до начала развития первых симптомов CRS находилось в диапазоне от Д. 5 до Д. 9.
[00400] Оценивали химеризм доноров Т-клеток (ФИГ. 13А, ФИГ. 13В, ФИГ. 13С). UCART19 обнаруживали в крови от Д. 7 до по меньшей мере Д. 42 у всех пациентов, кроме одного, по молекулярным признакам химеризма доноров Т-клеток.
[00401] Пример 5. Применение продукта на основе аллогенных Т-клеток с CAR для CD19 (UCART19) у пациентов с рецидивирующей/рефрактерной В-крупноклеточной и/или фолликулярной лимфомой
[00402] Диффузная В-крупноклеточная лимфома (DLBCL), которая составляет от 20% до 30% случаев В-клеточной неходжкинской лимфомы (B-NHL), является фатальной при отсутствии лечения. Первичную медиастинальную В-крупноклеточную лимфому (PMBCL) и трансформированную фолликулярную лимфому (FL) обычно подвергают лечению согласно парадигме DLBCL. DLBCL включает группу молекулярно разнообразных агрессивных лимфом, которые отличаются не только хромосомными изменениями, но также сигнальным путем активации и клиническим исходом. Само заболевание может быть de novo или может быть результатом трансформации индолентных В-лимфом, таких как трансформированная фолликулярная лимфома. В США годовой показатель заболеваемости DLBCL составляет 6,9 на 100000, и это наиболее распространенная форма B-NHL.
[00403] Примерно половина всех пациентов с агрессивной B-NHL имеет рецидив или рефрактерное заболевание, при этом, по оценкам, от 10 до 15% пациентов с DLBCL имели первичное рефрактерное заболевание и дополнительно 20-30% рецидивов после исходного объективного ответа (Chaganti et al, 2016). В-клеточные лимфомы с высокой степенью злокачественности с аберрациями в MYC, BCL2 и/или BCL6, в том числе лимфомы с «двойным попаданием» и «тройным попаданием», ассоциированы с плохим прогнозом, даже условиях раннего диагностирования (Rosenthal and Younes, 2017).
[00404] Это исследование представляет собой несравнительное открытое многоцентровое исследование фазы 1/2, посвященное оценке безопасности, эффективности, клеточной кинетики и фармакодинамики UCART19 у взрослых пациентов с рецидивирующей/рефрактерной В-крупноклеточной лимфомой или фолликулярной лимфомой. Исследование разделено на фазы повышения дозы (фаза 1) и расширения дозы (фаза 2). В ходе фазы 1 исследования будут использоваться CAR-T-клетки, содержащие переключатель безопасности RQR8 (CD19CAR/RQR8+_TCRαβ-Т-клетки). В ходе фазы 2 исследования один или более пациентов могут получать CAR-T-клетки, которые не содержат переключатель безопасности RQR8 (CD19CAR/TCRαβ-_T-клетки или CD19CAR/R2+_TCRαβ-_T-клетки).
[00405] Критерии включения в исследование могут включать одно или более из следующих.
1. Гистологически и цитологически подтвержденный диагноз В-крупноклеточной лимфомы в соответствии с пересмотром классификации лимфом ВОЗ 2018 года: диффузная В-крупноклеточная лимфома (DLBCL), не указанная иным образом (NOS) (В-клеток терминального центра [GCB] и отличных от GCB), DLBCL, сосуществующая с фолликулярной лимфомой любой степени, интраваскулярная В-крупноклеточная лимфома, DLBCL, ассоциированная с хроническим воспалением, анапластическая лимфомакиназно-положительная (ALK+) DLBCL, положительная в отношении вируса Эпштейна-Барр (EBV+) DLBCL-NOS, Т-клеточно/гистиоцит-обогащенная В-крупноклеточная лимфома, DLBCL с перестройкой IRF4/MUM1, В-клеточные лимфомы высокой степени злокачественности с транслокацией MYC и BCL2 и/или BCL6 (двойное/тройное попадание), первичная кожная DLBCL-ножной тип, трансформация фолликулярной лимфомы в DLBCL, первичная медиастинальная В-клеточная лимфома (PMBCL) или фолликулярная лимфома.
2. Рецидивирующая или рефрактерная агрессивная В-крупноклеточная лимфома или фолликулярная лимфома, как определено следующим:
Первичная рефрактерность, определяемая как лучший ответ при прогрессирующем заболевании или стабильном заболевании после по меньшей мере 4 циклов терапии первой линии (например, 4 цикла RCHOP) со стабильной продолжительностью заболевания, не превышающей 6 месяцев после последней дозы терапии.
Рефрактерность (определяемая как лучший ответ при стабильном заболевании или прогрессирующем заболевании) в отношении второй или большей линией терапии.
Рецидив через ≤1 год после трансплантации аутологичных стволовых клеток (SCT).
3. Пациенты должны были получить по меньшей мере 2 линии предыдущей терапии, в том числе антрациклин и моноклональное антитело к CD20.
4. Пациенты мужского или женского пола ≥18 лет.
5. Статус общего состояния в соответствии с Восточной объединенной онкологической группой (ECOG) составлял 0 или 1.
6. Предполагаемый период выведения ≥12 недель после инфузии ALLO-501 (по мнению исследователя).
7. Отсутствие донор-специфических антител к HLA.
8. Адекватная гематологическая функция, в том числе:
3
9
Абсолютное число нейтрофилов (ANC)≥1500/мм или >1,5×10/л.
3
9
Абсолютное число лимфоцитов (ALC)≥200/мм или ≥0,2×10/л.
3
9
Число тромбоцитов (ALC)≥50000/мм или ≥50×10/л.
Гемоглобин ≥9 г/дл.
9. Адекватная почечная функция, в том числе:
Расчетный клиренс креатинина ≥60 мл/мин, рассчитанный с использованием стандартного способа для учреждения и не зависящий от диализа. В сомнительных случаях для более точной оценки клиренса креатинина можно использовать 24-часовой тест сбора мочи.
10. Адекватная функция печени, в том числе:
Общий билирубин ≤2,0 мг/дл, за исключением пациентов с синдромом Гилберта, у которых общий билирубин должен составлять менее чем 3,0 мг/дл.
Аспартат- и аланинаминотрансфераза (AST и ALT)≤3×ULN, ≤5,0×ULN, если печень поражена опухолью.
Щелочная фосфатаза ≤2,5×ULN (≤5×ULN при метастазах в костях).
11. Нормальные уровни насыщения крови кислородом (SpO2)≥91% при воздухе помещения.
12. Фракция выброса левого желудочка (LVEF) ≥45% и отсутствие гемодинамически значимого выпота перикарда при скрининге.
13. Устранены острые последствия любой предыдущей терапии до исходной степени тяжести или степени СТСАЕ ≤1, за исключением нежелательных явлений (АЕ), не представляющих риска для безопасности по мнению исследователя.
14. Сероотрицательный результат в отношении антигена вируса гепатита В; положительные тесты на гепатит В могут быть дополнительно оценены с помощью подтверждающих тестов, и если подтверждающие тесты являются отрицательными -пациента можно зачислять в исследование.
15. Сероотрицательный результат в отношении антитела к гепатиту С при отрицательном результате в отношении антигена. Если тест на антитела к гепатиту С является положительным, то пациенты должны быть протестированы на наличие антигена с помощью RT-PCR и являться отрицательными в отношении РНК HCV.
16. Отрицательный результат при тесте сыворотки крови на наличие беременности (для женщин с детородным потенциалом) при скрининге.
17. Пациенты женского пола без детородного потенциала должны соответствовать хотя бы 1 из следующих критериев:
Достигли постменопаузального статуса, определяемого следующим образом: прекращение регулярных менструаций в течение не менее 12 последовательных месяцев без альтернативной патологической или физиологической причины; статус может быть подтвержден уровнем фолликулостимулирующего гормона в сыворотке (FSH), подтверждающим состояние постменопаузы.
Подверглись документально подтвержденной гистерэктомии и/или двусторонней овариэктомии.
Характеризуются медицински подтвержденной недостаточностью яичников.
Все другие пациенты женского пола (в том числе пациенты женского пола с перевязкой маточных труб) считаются имеющими детородный потенциал.
18. Подтверждение лично подписанного и датированного документа информированного согласия, указывающего, что пациент был проинформирован обо всех соответствующих аспектах данного исследования.
19. Готовность и возможность соблюдать запланированные визиты, план лечения, лабораторные тесты и другие процедуры.
[00406] Исследования фазы 1 и фазы 2 будут разделены на различные периоды, в том числе скрининг, лимфодефицит, лечение и последующее наблюдение. Один цикл определяется как комбинация одного периода лимфодеплеции и одного периода лечения.
[00407] Скрининг будет начинаться после подписания формы информированного согласия. Пациент будет подвергаться проверке по критериям соответствия. Период скрининга будет составлять не более 28 дней. Пациенты, которые подходят по всем критериям соответствия, в конце периода скрининга переходят на период лимфодеплеции.
2
2
[00408] Лимфодеплеция будет начинаться в день -5 и завершаться инфузией UCART19 в день 0. Перед лечением с помощью UCART19 все пациенты будут получать внутривенно схему для лимфодеплеции с помощью флударабина (30 мг/м/день), циклофосфамида (300 мг/м/день) и антитела к CD52 (13 мг/день) в амбулаторных условиях в день -5, день -4 и день -3. Антитело к CD52 будут вводить в течение примерно 4 часов, и при этом пациенты должны подвергаться тщательному наблюдению в течение не более 2 часов после завершения инфузии. Перед введением антитела к CD52 необходима премедикация, включающая высокие дозы кортикостероидов. Если на начальном уровне дозы наблюдаются дозозависимые токсические эффекты (DLT), связанные с антителами к CD52, то будут оценивать более низкую дозу 30 мг общего количества клеток (10 мг/день в течение 3 дней). В конце периода лимфодеплеции необходимо оценивать критерии соответствия, позволяющие применять UCART19, для обеспечения безопасности пациентов.
[00409] Период лечения, начиная с дня 0, будет заканчиваться в день 56 после инфузии UCART19. Пациенты будут получать UCART19 в виде внутривенной инфузии в день 0 в течение примерно 5 минут. Для тщательного контроля токсичности, ассоциированной с UCART19, пациенты должны быть госпитализированы на срок минимум 5 дней с дня 0 или до возвращения негематологической токсичности, связанной с UCART19, к степени ≤1, или получать UCART19 в амбулаторных условиях в тех местах исследования, где возможен непосредственный прием пациента.
[00410] Будет реализована стратегия введения доз UCART19 с использованием двух разных привязок по весу, как показано ниже в таблице 13.
[00411] Последующее наблюдение продлится от дня 56 до месяца 9. Пациенты будут находиться под наблюдением в течение периода последующего наблюдения до визита EOS в месяц 9 после первой инфузии UCART19 или до их досрочного прекращения участия в исследовании. Затем пациентов будут немедленно направлять на 15-летнее долгосрочное последующее наблюдение в соответствии с отдельным протоколом долгосрочного последующего наблюдения (LTFU).
[00412] После оценки клеточной кинетики и/или заболевания пациентам может быть назначено одно необязательное повторное лечение с помощью UCART19. Повторное лечение с помощью UCART19 можно вводить при самом высоком уровне дозы, который считается безопасным в фазе 1, или при RP2D в фазе 2. Для повторного лечения может использоваться партия и/или донор, отличные от таковых в исходной дозе. Каждое повторное лечение с помощью UCART19 должно проводиться с интервалом по меньшей мере 4 недели от исходной дозы после плановой оценки опухолей в день 56, месяц 4 и месяц 6 и должно проводиться после лимфодеплеции с помощью Flu/Су или Flu/Су и антитела к CD52. Пациенты с невыявляемым UCART19 в цельной крови в Д. 14 могут быть подвергнуты повторному лечению с последующей лимфодеплецией с началом после завершения окна наблюдения DLT в фазе 1 или в день 28 в фазе 2. Пациенты, которые подходят для повторного лечения, будут подвергаться новому циклу, начиная с лимфодеплеции (день -5), до месяца 2 после повторного введения дозы (день 56) и будут следовать тому же графику визитов и оценок, как описано для исходной инфузии UCART19. В конце периода лечения (день 56) после последней инфузии UCART19 пациент продолжит период наблюдения, как запланировано в плане исследования. Повторное лечение не может выполняться после месяца 6 (6 месяцев после исходного дня 0).
[00413] Хотя раскрытые идеи были описаны со ссылкой на различные варианты применения, способы и композиции, следует понимать, что различные изменения и модификации могут быть сделаны без отклонения от идей данного документа и формулы изобретения, представленной ниже. Вышеприведенные примеры предусмотрены для лучшего иллюстрирования раскрытых идей и не предназначены для ограничения объема идей, представленных в данном документе. Хотя настоящие идеи были описаны в определениях этих иллюстративных вариантов осуществления, специалист в данной области техники легко поймет, что многочисленные вариации и модификации этих иллюстративных вариантов осуществления возможны без чрезмерных экспериментов. Все такие вариации и модификации находятся в рамках действующих идей.
[00414] Все ссылки, цитируемые в данном документе, в том числе патенты, заявки на патенты, статьи, учебники и т.п., а также ссылки, цитируемые в данном документе, в той степени, в которой они уже не являются таковыми, включены в данный документ с помощью ссылки в их полном объеме. В случае, если одна или более из ссылок на литературные источники и аналогичные материалы отличаются или противоречат данной заявке, в том числе без ограничения определенные термины, термины относительно использования, описанные методики и т.п., в данной заявке будут иметь преимущественную силу.
[00415] B изложенных выше описании и примерах подробно определены конкретные варианты осуществления настоящего изобретения и описан наилучший способ осуществления, предполагаемый авторами настоящего изобретения. Однако будет понятно, что независимо от того, насколько подробно изложенное выше может быть представлено в тексте, настоящее изобретение может быть реализовано на практике посредством многих способов, и настоящее изобретение следует истолковывать в соответствии с прилагаемой формулой изобретения и любыми ее эквивалентами.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  АЛЛОГЕНЕ ТЕРАПЕВТИКС, ИНК.
LES LABORATOIRES SERVIER
<120>  СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ ДОЗ АЛЛОГЕННЫХ T-КЛЕТОК
С ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ
<130>  ALGN-012/03WO 333466-2218
<150>  US 62/750,215
<151>  2018-10-24
<150>  US 62/716,898
<151>  2018-08-09
<150>  US 62/579,426
<151>  2017-10-31
<160>  35
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  495
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Полноразмерная аминокислотная последовательность CAR (версия 2)
<400>  1
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Ile
20                  25                  30
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35                  40                  45
Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly
50                  55                  60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser
85                  90                  95
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
100                 105                 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Phe
115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met
145                 150                 155                 160
Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser
165                 170                 175
Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asn Gly Asn Thr
180                 185                 190
Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu
195                 200                 205
Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
210                 215                 220
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu
225                 230                 235                 240
Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro
245                 250                 255
Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ser Asp Pro
260                 265                 270
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
275                 280                 285
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
290                 295                 300
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
305                 310                 315                 320
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
325                 330                 335
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
340                 345                 350
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
355                 360                 365
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
370                 375                 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385                 390                 395                 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405                 410                 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420                 425                 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435                 440                 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450                 455                 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465                 470                 475                 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485                 490                 495
<210>  2
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  HCDR1 антитела CD52
<400>  2
Asp Phe Tyr Met Asn
1               5
<210>  3
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  HCDR2 антитела CD52
<400>  3
Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  4
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  HCDR3 антитела CD52
<400>  4
Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>  5
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  LCDR1 антитела CD52
<400>  5
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asp Lys Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>  6
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  LCDR2 антитела CD52
<400>  6
Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr
1               5
<210>  7
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  LCDR3 антитела CD52
<400>  7
Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg Thr
1               5
<210>  8
<211>  451
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  VH антитела CD52
<400>  8
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20                  25                  30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
65                  70                  75                  80
Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115                 120                 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130                 135                 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165                 170                 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180                 185                 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195                 200                 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210                 215                 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245                 250                 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260                 265                 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275                 280                 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305                 310                 315                 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325                 330                 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340                 345                 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355                 360                 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370                 375                 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385                 390                 395                 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405                 410                 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420                 425                 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435                 440                 445
Pro Gly Lys
450
<210>  9
<211>  1353
<212>  DNA
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  VH антитела CD52
<400>  9
caagtgcagc ttcaagaatc cggccctggt ctggtccgcc cctcccaaac cctctccctg       60
acatgcaccg tgtcgggatt cacctttacc gatttctaca tgaactgggt ccggcagccg      120
cccggaagag gtctggagtg gatcggcttc attcgggaca aagccaaggg gtacaccacc      180
gagtacaacc cgtccgtgaa gggacgcgtg actatgctcg tggacacgtc caagaaccag      240
ttcagcttga ggctgagcag cgtgactgcc gcggataccg cagtgtacta ctgtgcccgg      300
gaagggcaca ctgccgctcc attcgactat tggggccagg gatcactggt cactgtgtcg      360
tccgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct      420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg      480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc      540
tcaggactct actccctcag cagcgtagtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag      600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag      660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg      720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc      780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac      840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac      900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc      960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc     1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggac     1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac     1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc     1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg     1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac     1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccggga aaa                                  1353
<210>  10
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  VL антитела CD52
<400>  10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asp Lys Tyr
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  11
<211>  699
<212>  DNA
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  VL антитела CD52
<400>  11
atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgt gcactccgac       60
atccaaatga cccaatcccc atcctcactt tccgcctccg tgggcgaccg cgtgactatt      120
acctgtaaag cgtcacagaa tatcgacaag tacctgaact ggtaccagca gaagcctgga      180
aaggccccca agctcctgat ctacaacacc aacaacttgc agactggagt gccgagcaga      240
ttttccggct ccggctcggg gactgatttc accttcacca tctcgagcct gcagccggag      300
gatattgcta cctattactg cctgcaacac attagccggc ccaggacgtt cggacagggt      360
accaaggtcg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct      420
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc      480
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag      540
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg      600
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg      660
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt                             699
<210>  12
<211>  177
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Полноразмерный переключатель безопасности RQR8
<400>  12
Met Leu Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1               5                   10                  15
Asp His Ala Asp Ala Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys Ser Gly
20                  25                  30
Gly Gly Gly Ser Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser
35                  40                  45
Thr Asn Val Ser Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala Cys Pro Tyr Ser
50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ala Pro Arg Pro
65                  70                  75                  80
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
85                  90                  95
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
100                 105                 110
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
115                 120                 125
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg
130                 135                 140
Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Arg Ala Glu
145                 150                 155                 160
Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
165                 170                 175
Pro
<210>  13
<211>  21
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Лидерная последовательность TCR-бета человека (с заменой G на L)
<400>  13
Met Leu Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1               5                   10                  15
Asp His Ala Asp Ala
20
<210>  14
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Эпитоп ритуксимаба
<400>  14
Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys
1               5
<210>  15
<211>  6
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  глицин-сериновый линкер
<400>  15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1               5
<210>  16
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  16
Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser
1               5                   10                  15
<210>  17
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  17
Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr
1               5
<210>  18
<211>  42
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  18
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
1               5                   10                  15
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
20                  25                  30
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35                  40
<210>  19
<211>  21
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  19
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Val Ile Thr
20
<210>  20
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  20
Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg
1               5                   10                  15
Pro Val Val
<210>  21
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Вирус Thosea asigna
<400>  21
Arg Ala Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu
1               5                   10                  15
Asn Pro Gly
<210>  22
<211>  495
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Полноразмерная аминокислотная последовательность CAR (версия 1)
<400>  22
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu
20                  25                  30
Ile Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
35                  40                  45
Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln
50                  55                  60
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser
85                  90                  95
Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser
100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val
115                 120                 125
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly
130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
145                 150                 155                 160
Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val
165                 170                 175
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asn Gly Asn
180                 185                 190
Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu
195                 200                 205
Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
210                 215                 220
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val
225                 230                 235                 240
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr
245                 250                 255
Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp
260                 265                 270
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
275                 280                 285
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
290                 295                 300
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
305                 310                 315                 320
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
325                 330                 335
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
340                 345                 350
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
355                 360                 365
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
370                 375                 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385                 390                 395                 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405                 410                 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420                 425                 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435                 440                 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450                 455                 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465                 470                 475                 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485                 490                 495
<210>  23
<211>  672
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Полноразмерная аминокислотная последовательность CAR UCART19
с переключателем безопасности RQR8
<400>  23
Met Leu Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1               5                   10                  15
Asp His Ala Asp Ala Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys Ser Gly
20                  25                  30
Gly Gly Gly Ser Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser
35                  40                  45
Thr Asn Val Ser Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala Cys Pro Tyr Ser
50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ala Pro Arg Pro
65                  70                  75                  80
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
85                  90                  95
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
100                 105                 110
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
115                 120                 125
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg
130                 135                 140
Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Arg Ala Glu
145                 150                 155                 160
Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
165                 170                 175
Pro Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val
180                 185                 190
Pro Gly Ser Thr Gly Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu
195                 200                 205
Ile Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
210                 215                 220
Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln
225                 230                 235                 240
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys
245                 250                 255
Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser
260                 265                 270
Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser
275                 280                 285
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val
290                 295                 300
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly
305                 310                 315                 320
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
325                 330                 335
Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val
340                 345                 350
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asn Gly Asn
355                 360                 365
Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu
370                 375                 380
Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
385                 390                 395                 400
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val
405                 410                 415
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr
420                 425                 430
Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ser Asp
435                 440                 445
Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
450                 455                 460
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
465                 470                 475                 480
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
485                 490                 495
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu
500                 505                 510
Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile
515                 520                 525
Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp
530                 535                 540
Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
545                 550                 555                 560
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
565                 570                 575
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
580                 585                 590
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
595                 600                 605
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
610                 615                 620
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
625                 630                 635                 640
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
645                 650                 655
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
660                 665                 670
<210>  24
<211>  20
<212>  БЕЛОК
<213>  Mus musculus
<400>  24
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly
20
<210>  25
<211>  121
<212>  БЕЛОК
<213>  Mus musculus
<400>  25
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Ile Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  26
<211>  15
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Глицин-сериновый линкер
<400>  26
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1               5                   10                  15
<210>  27
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Легкая цепь каппа (4G7) мыши для CD19 человека (с замещением A на S) (CDR)
<400>  27
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His
85                  90                  95
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100                 105                 110
Arg Ser Asp
115
<210>  28
<211>  252
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Внеклеточный связывающий домен (версия 2)
<400>  28
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Ile Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115                 120                 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala
130                 135                 140
Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg
145                 150                 155                 160
Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp
165                 170                 175
Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met
180                 185                 190
Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195                 200                 205
Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val
210                 215                 220
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly
225                 230                 235                 240
Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ser Asp Pro
245                 250
<210>  29
<211>  251
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Внеклеточный связывающий домен (версия 1)
<400>  29
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Ile Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115                 120                 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala
130                 135                 140
Pro Ser Ile Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg
145                 150                 155                 160
Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp
165                 170                 175
Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met
180                 185                 190
Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195                 200                 205
Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val
210                 215                 220
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly
225                 230                 235                 240
Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp
245                 250
<210>  30
<211>  46
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  30
Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
1               5                   10                  15
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
20                  25                  30
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35                  40                  45
<210>  31
<211>  21
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  31
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Val Ile Thr
20
<210>  32
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Фрагмент предшественника изоформы 1 альфа-цепи CD8
гликопротеина поверхности Т-клеток (остатки 138-206)
<400>  32
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1               5                   10                  15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20                  25                  30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
35                  40                  45
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
50                  55                  60
Ile Thr Leu Tyr Cys
65
<210>  33
<211>  3
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  33
Leu Tyr Cys
1
<210>  34
<211>  42
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  34
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1               5                   10                  15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20                  25                  30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35                  40
<210>  35
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  35
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1               5                   10                  15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20                  25                  30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35                  40                  45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50                  55                  60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65                  70                  75                  80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85                  90                  95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100                 105                 110
<---