КОМПОЗИЦИИ ДЕЗЭТИЛАМИОДАРОНА
DESETHYLAMIODARONE COMPOSITIONS

Изобретение относится к соединению, выбранному из группы, состоящей из дезэтиламиодарона и приемлемых с фармацевтической точки зрения солей, гидратов и сольватов этого соединения, а также к фармацевтической композиции, содержащей это соединение и приемлемый с фармацевтической точки зрения эксципиент, носитель или основу, для применения в лечении и профилактике фибрилляции предсердий.
Сердечно-сосудистые заболевания, включая внезапную смерть от сердечной недостаточности и инсульт, являются одной из ведущих причин смертности в промышленно развитых странах. Наиболее серьезная желудочковая аритмия - фибрилляция желудочков (ФЖ) - ежегодно вызывает более чем 300000 смертей в США. Фибрилляция предсердий (ФП) является одной из наиболее распространенных нозологических форм аритмий с частотой возникновения 2-5% среди пожилого (60-65 лет) населения. Кроме того, ФП часто вызывает опасные или угрожающие жизни желудочковые аритмии, включая ФЖ, а также вносит свой вклад в патогенез инсульта. В настоящее время медикаментозное лечение аритмий, включая АФ, является неудовлетворительным, так как имеющиеся препараты либо не купируют аритмии должным образом, либо вызывают серьезные побочные эффекты. Таким образом, существует растущий спрос на безопасные и эффективные новые препараты для лечения ФП и аритмий вообще.
Использование амиодарона (AM) для длительного приема является наиболее эффективным медикаментозным методом борьбы с ФП и аритмиями с меньшим проаритмическим риском, чем другие используемые в настоящее время антиаритмические средства (Shinagawa et al., 2003; Ravens, 2010). Однако AM, который имеет очень сложный механизм ингибирующего действия на потоки натрия, кальция и калия в тканях сердца и бета-адренорецепторы, также вызывает серьезные внекардиальные неблагоприятные эффекты, такие как фиброз легких, гепатотоксичность, фотодерматоз, отложения в роговице и т.д., которые в значительной степени ограничивают его клиническое применение (Tisdale et al, 1995). Токсическому эффекту AM способствует его медленное выведение (период полураспада в плазме: 40-80 дней!), приводящее к накоплению препарата в различных тканях организма. Известно, что во время длительного лечения AM в плазме крови и тканях, включая сердце, появляется дезэтиламиодарон (ДЭА), метаболит амиодарона с электрофизиологической активностью (Flanagan et al, 1982; Nattel et al, 1986). Поскольку как AM, так и ДЭА содержат йод, то вероятно, что они вмешиваются в работу и ингибируют рецепторы тиреоидных гормонов в сердце (Shi et al, 2008; van Beeren et al, 1995; van Beeren et al, 1999; Latham et al, 1987), оказывая свой антиаритмический эффект частично благодаря этому механизму. Ранее сообщалось, что ДЭА связывается с рецепторами тиреоидных гормонов в сердце с более высоким сродством, чем AM, (van Beeren et al, 1995; Latham et al, 1987).
Из ранее опубликованных работ известно, что ДЭА после однократного кратковременного применения оказывает на сердце такие же с точки зрения электрофизиологии и деятельности желудочков антиаритмические эффекты, как и AM (Nattel et al, 1986; Talajic et al, 1987; Varró et al, 1987; Nattel et al, 1988).
Понятно, что существует многолетняя потребность в более безопасном и эффективном лечении фибрилляции предсердий.
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что длительный прием ДЭА может быть использован для профилактики и/или купирования фибрилляции предсердий (ФП). Предшествующий уровень техники не показывает, что длительный прием ДЭА может быть пригоден для лечения ФП; наиболее близкими результатами из уровня техники можно считать исследование Kato (1998), показывающее, что длительный прием ДЭА вызвал в предсердиях кролика электрофизиологический эффект, подобный таковому у исходного соединения AM. Тем не менее, этот вывод не имеет никакой реальной значимости для настоящего изобретения, поскольку потенциал действия в сердце у кроликов управляется совершенно иными трансмембранными ионными каналами по сравнению с таковыми у собак и человека (Wang et al, 1995; Wang et al, 1999), поэтому специалист в данной области техники вряд ли мог бы разумно рассчитывать на успех, просто следуя этим результатам и двигаясь к настоящему изобретению. Кроме того, в том исследовании не сообщают или не предполагают, что упомянутое выше сходное электрофизиологическое поведение может привести к какому-либо значительному длительному воздействию на сердечные аритмии, включая ФП, которое является существенным признаком настоящего изобретения. С другой стороны, специалист в данной области техники не может основывать свою попытку создать настоящее изобретение на основе предшествующего уровня техники в отношении острых эффектов ДЭА, поскольку они были зарегистрированы лишь для желудочковых аритмий, но не описаны для ФП (Zhou et al, 1998).
Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение, выбранное из группы, состоящей из дезэтиламиодарона и приемлемых с фармацевтической точки зрения солей, гидратов и сольватов этого соединения, вместе с приемлемыми в фармацевтическом отношении эксципиентами, носителем и/или основой.
В другой форме своего осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для применения в лечении и профилактике фибрилляции предсердий.
Очевидно, что ни один документ из предшествующего уровня техники не раскрывает фармацевтическую композицию, содержащую ДЭА в любой форме. Аналогично, никакого применения такой композиции для лечения фибрилляции предсердий не предложено.
Bolderman с соавт. исследовали воздействие AM путем местного эпикардиального применения при послеоперационных аритмиях предсердий. В упомянутом исследовании авторы утверждают, что амиодарон имеет относительно высокую концентрацию в месте действия, то есть в предсердиях, но отсутствует в какой-либо другой части тела, включая желудочки сердца. Целью для такого применения является уменьшение системных побочных эффектов AM, но следствием является то, что образуется очень мало метаболита (ДЭА) (меньше на 3 порядка от величины AM). Это соотношение и сама задача ясно показывают, что Bolderman с соавт. даже не рассматривали возможность того, что ДЭА оказывает/может оказать существенное влияние на предсердия или весь организм, так как его концентрации в предсердии и в организме незначительны. Соответственно, исследование Bolderman с соавт. не предполагает, что ДЭА или его приемлемые в фармацевтическом отношении соли, гидраты и сольваты могут использоваться для лечения и профилактики фибрилляции предсердий при длительном приеме и явно расходится в выводах с настоящим изобретением.
Tieleman с соавт. изучали длительное применение AM у пациентов, страдающих фибрилляцией или трепетаниями предсердий, которые были невосприимчивы к другим обычными антиаритмическим препаратам. Свидетельства того, что ДЭА оказывает антиаритмическое воздействие на предсердия, отсутствуют. Действительно, его эффект даже не был изучен или предложен к изучению. Хотя авторы делают расплывчатое заявление, будто «настоящее исследование показало, что для конверсии фибрилляции предсердий концентрация дезэтиламиодарона в плазме была более важна, чем концентрация в плазме исходного соединения» (стр 56, второй абзац), это не раскрывает каких-либо подробностей о том, почему лекарственное средство, содержащее метаболит ДЭА могло бы быть более предпочтительным по сравнению с известными из уровня техники средствами, содержащими AM.
В противоположность этим исследованиям, следующим из уровня техники, настоящее изобретение впервые четко устанавливает, что, будучи значительно более эффективным, ДЭА кроме этого показывает заметно сниженные побочные эффекты при систематическом введении. Действительно, для достижения тех же клинических эффектов необходимо вводить половину дозы ДЭА по сравнению с AM. Эти эффекты сопровождаются такими же уровнями ДЭА в сердечной ткани, т.е. биодоступность ДЭА также выше, чем у AM. Наиболее важно то, что назначение ДЭА приводит к снижению патологических изменений в легких и печени, т.е. аналогичные антиаритмические эффекты сопровождаются более мягкими токсическими и побочными эффектами.
В следующей ниже конкретной форме осуществления настоящего изобретения композицию по настоящему изобретению вводят перорально, сублингвально, буккально или парентерально.
В другой определенной форме осуществления настоящего изобретения композицию по настоящему изобретению принимают длительно.
В еще одной определенной форме осуществления настоящего изобретения эту композицию вводят один раз в день.
В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения и профилактики фибрилляции предсердий, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей дезэтиламиодарон и приемлемые в фармацевтическом отношении соли, гидраты и сольваты дезэтиламиодарона; а также приемлемые в фармацевтическом отношении эксципиентами, носитель и/или основу.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении мы представляем новые, ранее не доступные и не опубликованные данные о воздействии кратковременного и длительного приема ДЭА:
В качестве предварительного вывода, мы установили, что кратковременное применение 5 мкМ ДЭА привело к аналогичному защитному эффекту при ФП при сравнении с 10 мкМ AM в изолированном препарате предсердий кролика. Хотя на предшествующем уровне техники острые эффекты ДЭА были изучены, описания его воздействия на фибрилляцию предсердий отсутствуют.
Длительный 3-недельный пероральный (25 мг/кг/день) прием ДЭА приводил к такой же концентрации его в сердечной ткани и антиаритмическому действию, как длительное лечение AM в двойной дозе (50 мг/кг/день) у находящихся в сознании крыс, после перевязки коронарной артерии. На предшествующем уровне техники длительное применение ДЭА также не изучалось.
Длительный 3-недельный пероральный (25 мг/кг/день) прием ДЭА приводил к такой же концентрации его в сердечной ткани и таким защитным антиаритмическим эффектам, как эффекты, измеренные после перорального лечения AM в более высокой дозе 50 мг/кг/день на модели хронической ФП, вызванной учащающей стимуляцией предсердий у собак. Что касается таких собак, то концентрация ДЭА в ткани печени и легких собак при длительном лечении AM была более чем в три раза выше по сравнению с животными, получающими длительное лечение ДЭА. Эти результаты хорошо согласуются с результатами, показывающими накопление ДЭА в клеточных линиях человека полученных из эпителия альвеол после лечения AM (Seki et al., 2008). На основании этого наблюдения можно сделать вывод, что длительное лечение AM может значительно повысить риск токсических осложнений в печени и легких по сравнению с лечением одним ДЭА.
Длительное лечение дезэтиламиодароном в дозе 30 мг/кг не подключенных к кардиостимулятору собак приводило к антиаритмическим электрофизиологическим изменениям в клетках тканей предсердий и желудочков сердца, подобным таким же изменениям при длительном лечении амиодароном в дозе 45 мг/кг. Уровни дезэтиламиодарона в тканях как предсердий, так и желудочков сердца были аналогичны. Такое же наблюдение было сделано для уровней в тканях печени, легких и почек, что может иметь важное значение для вопроса возможного органотоксического действия. Важно подчеркнуть, что при длительном лечении, амиодароном кроме депонирования в тканях метаболита (дезэтиламиодарона) наблюдалось еще более высокое депонирование амиодарона в тканях сердца, легких, печени и почек. У крыс длительный 28-дневный пероральный прием ДЭА (100 мг/кг/день) приводил к более низкому токсическому действию на легкие и печень, чем лечение AM в дозе 200 мг/кг/день. Кроме того, в этом исследовании выведение ДЭА было значительно быстрее, чем у AM.
В соответствии с данными, представленными выше и обсуждающимися более подробно ниже и в экспериментальной части, длительный прием ДЭА может быть с успехом использован для профилактики и/или купирования фибрилляции предсердий (ФП). В частности, прием ДЭА в дозе половинной от дозы AM приводит к аналогичным уровням ДЭА в ткани сердца и оказывает аналогичный защитный эффект при ФП, в отличие от исходного соединения AM. Если пациентов лечат метаболитом, т.е. ДЭА, то мы можем вывести исходное соединение AM из всех других типов тканей. Это должно служить преимуществом, поскольку AM может способствовать токсическому действию на различные органы, которое не развивается, если лечение проводится только одним ДЭА. В соответствии с настоящим изобретением, выведение ДЭА является более быстрым, чем у AM. Кроме того, выведение ДЭА происходит быстрее, если AM не присутствует в тканях.
Предполагается, что в ходе длительного лечения AM большинство благоприятных в терапевтическом отношении эффектов связано в первую очередь с ДЭА, тогда как наличие относительно высокой концентрации AM в различных тканях не является необходимым для благоприятного с терапевтической точки зрения действия, а только способствует серьезным побочным эффектам, наблюдаемым при длительном лечении AM. Поэтому, при замене длительного приема AM на длительный прием ДЭА достигается все еще достаточно сильное антиаритмическое действие со значительно меньшими побочными эффектами. Кроме того, поскольку прием AM часто вызывает взаимодействие с другими препаратами, такими как наперстянка, статины, варфарин и т.д., длительное лечение ДЭА должно также ограничить эти возможные лекарственные взаимодействия. Первая стадия деградации AM и ДЭА происходит через одну и ту же ферментативную систему, а последующие стадии происходят через разные ферментативные системы, что также свидетельствует в пользу лечения ДЭА по сравнению с его исходным соединением AM.
Наши нынешние новые и не опубликованные ранее результаты показывают, что длительное пероральное лечение ДЭА приводило к тем же уровням его в ткани сердца по сравнению с длительным лечением AM и показывало равную степень антиаритмического действия при желудочковых аритмиях, вызванных перевязкой коронарной артерии у крыс. Это является важным фактором, поскольку ФП часто вызывает желудочковые аритмии, в том числе ФЖ, которую следует лечить или предупреждать как можно более эффективно.
Таким образом, в целом можно ожидать, что длительное лечение ДЭА будет более или, по меньшей мере, одинаково эффективно, по сравнению с длительным лечением AM, сопровождаясь улучшением фармакокинетики и, что очень важно, меньшим количеством побочных эффектов и уменьшением непредвиденных взаимодействий с другими препаратами.
Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает соединение, выбранное из группы, состоящей из дезэтиламиодарона в соответствии с формулой (I), дидезэтиламиодарона в соответствии с формулой (II), и их приемлемых в фармацевтическом отношении солей, гидратов и сольватов, для применения в лечении и профилактике сердечных аритмий.
23
25
2
3
ДЭА, [(2-бутилбензофуран-3-ил)-[4-(2-этиламиноэтокси)-3,5-дийодофенил]метанон; CHINO; Регистрационный номер CAS: 83409-32-9] является метаболитом амиодарона, имеющим следующую химическую структуру:
21
21
2
3
диДЭА; ди-N-дезэтиламиодарон; [4-(2-аминоэтокси)-3,5-дийодофенил](2-бутил-3-бензофуранил)метанон; CHINO; Регистрационный номер CAS: 94317-95-0] представляет собой другой метаболит амиодарона, имеющий следующую химическую структуру:
Термин «соединение», использующийся в настоящем изобретении, означает соединения или соединение согласно формуле (I) и включает все полиморфные и кристаллические формы этого соединения, его пролекарства и изомеры (включая оптические, геометрические и таутомерные изомеры) и их смеси.
Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что соединение согласно формуле (I) может присутствовать в виде приемлемых в фармацевтическом отношении солей, например, нетоксичных солей, полученных посредством добавления кислоты, которые образуются с такими неорганическими кислотами, как соляная, бромистоводородная, серная и фосфорная кислоты, перхлоратов, солей карбоновых или сульфоновых кислот. Примеры их включают ацетаты, аспартаты, бензоаты, безилаты, бикарбонаты/карбонаты, бисульфаты/сульфаты, бораты, камсилаты, цитраты, эдисилаты, эсилаты, формиаты, фумараты, глюцептаты, глюконаты, глюкуронаты, гексафторфосфаты, гибензаты, гидрохлориды/хлориды, гидробромиды/бромиды, гидройодиды/йодиды, изотионаты, лактаты, малаты, малеаты, малонаты, мезилаты, метилсульфаты, нафтилаты, 2-напсилаты, никотинаты, нитраты, оротаты, оксалаты, пальмитаты, памоаты, фосфаты/гидрофосфаты/дигидрофосфаты, сахараты, стеараты, сукцинаты, тартраты, тозилаты, адипаты, цикламаты, таннаты, пирстлутаматы, ксинафоаты (соли 1-гидроксинафталин-2-карбоновой кислоты) и трифторацетаты.
Подходящие основные соли получают из оснований, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, диоламина, глицина, лизина, магния, меглумина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка.
Могут быть также образованы полусоли кислот и оснований, например, гемисульфаты и гемикальциевые соли.
Для обзора пригодных солей см. руководство Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
Соединение согласно формуле (I) может существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Термин «сольват» используется в настоящем изобретении для описания молекулярного комплекса, содержащего это соединение и стехиометрическое количество одного или более приемлемых в фармацевтическом отношении молекул растворителя, например, этанола. Термин «гидрат» означает комплекс, в котором растворитель представляет собой воду.
В настоящем описании все ссылки на соединение согласно формуле (I) включают ссылки на его соли, сольваты, гидраты и комплексы, а также сольваты и комплексы его солей.
В определенных обстоятельствах так называемые «пролекарства» соединения по формуле (I) также входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, некоторые производные соединения по формуле (I), которые сами по себе могут иметь малую фармакологическую активность или совсем не иметь ее, при введении в организм или при нанесении на поверхность тела могут быть превращены, например, путем гидролитического расщепления, в соединения по формуле (I), имеющие требуемую активность. Такие производные называют «пролекарствами». Дополнительная информация по использованию пролекарств может быть найдена в сборнике Pro-drugs as Novel Delivery System, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and W. Stella) и в публикации Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (ed. E.B. Roche, American Pharmaceutical Association).
Пролекарства в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены, например, путем замены соответствующих функциональных групп, присутствующих в соединении по формуле (I), на определенные группы, известные специалистам в данной области как «функциональные группы-предшественники» так, как описано, например, в публикации Design of Prodrugs by H. Bundgaard (Elsevier, 1985).
Некоторые примеры пролекарств по настоящему изобретению включают соединение, в котором один или оба атома водорода из функциональной аминогруппы соединения по формуле (I) заменен/заменены на алканоил (С1-С10).
Если соединение по настоящему изобретению присутствует в фармацевтической композиции, то оно находится в нем вместе с приемлемым в фармацевтическом отношении эксципиентом, носителем или основой. Термин «эксципиент» определяется как любой ингредиент, отличный от соединения по формуле (I). Выбор наполнителя в значительной степени зависит от таких факторов, как определенный способ введения, влияние эксципиента на растворимость и стабильность, а также тип лекарственной формы. Специалист в данной области техники может составить фармацевтическую композицию, подходящую для любого конкретного способа введения, например, согласно руководству Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995).
В другой форме своего осуществления настоящее изобретение обеспечивает соединение или композицию по настоящему изобретению для применения в лечении и профилактике сердечных аритмий, в том числе фибрилляции предсердий, желудочковых аритмий и внезапной смерти от застойной сердечной недостаточности.
Следует понимать, что все ссылки на термины «лечение», «лечить» или «подвергая лечению» включают лечебную, паллиативную и/или профилактическую медицинскую помощь.
В этом аспекте изобретение также относится к способу лечения и профилактики сердечных аритмий, в том числе фибрилляции предсердий, желудочковых аритмий и внезапной смерти от застойной сердечной недостаточности. С этой точки зрения, способ входит в объем настоящего изобретения только в том случае, если он не является способом лечения человека или животного путем хирургической операции или способом лечения и/или диагностики человека или животного, уже применяющимся на практике. Специалист в данной области техники легко сможет определить, подпадает ли способ под действие этого исключения.
Соединение по формуле (I) или лекарственные формы, содержащие его, предпочтительно могут быть введены перорально. Пероральное введение может включать проглатывание, при котором соединение поступает в желудочно-кишечный тракт, или могут быть использованы буккальный или сублингвальный способы введения, с помощью которых соединение из полости рта попадает непосредственно в кровоток.
Лекарственные формы, пригодные для перорального введения, включают твердые лекарственные формы, такие как таблетки; капсулы, содержащие частицы, жидкости или порошки; пастилки (включая наполненные жидкостью), жевательные таблетки, мульти- и наночастицы, гели, твердые растворы, липосомы, пленки, спреи и жидкие лекарственные формы.
Жидкие лекарственные формы включают суспензии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие лекарственные формы могут быть использованы в качестве наполнителей в мягких или твердых капсулах и обычно включают основу, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или более эмульгаторов и/или суспендирующих агентов. Жидкие лекарственные формы могут быть также получены путем растворения твердых лекарственных форм, например, саше.
Твердые лекарственные формы для перорального введения могут быть приготовлены с немедленным и/или модифицированным высвобождением.
Лекарственные формы с модифицированным высвобождением включают лекарственные формы с замедленным, пролонгированным, прерывистым, контролируемым, направленным и программированным высвобождением.
Кроме того, соединение по формуле (I) или лекарственные формы, содержащие его, можно также вводить непосредственно в кровоток, в мышцу или во внутренний орган. Подходящие способы парентерального введения включают внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, интратекальное, внутрижелудочковое, интрауретральное, внутригрудинное, внутричерепное, внутримышечное и подкожное введение. Пригодные устройства для парентерального введения включают игольные (в том числе микроигольные) инъекторы, безыгольные инъекторы и инфузионные методики.
Специалист в данной области техники обладает всей необходимой информацией для приготовления таких композиций.
Для целей настоящего изобретения, специально для введения больным людям, общая суточная доза соединения по настоящему изобретению находится, как правило, в любом из диапазонов примерно от 10 мг/кг до 25 мг/кг, от 25 мг/кг до 50 мг/кг, от 50 мг/кг до 100 мг/кг, от 100 мг/кг до 150 мг/кг, от 150 мг/кг до 200 мг/кг, от 200 мг/кг до 250 мг/кг или более, безусловно, в зависимости от способа введения. Например, соединение по настоящему изобретению можно вводить на уровне примерно 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг, 150 мг/кг, 200 мг/кг или 250 мг/кг.
Общая суточная доза может быть введена однократно или разделена на дозы, и может по усмотрению врача выходить за пределы типичного диапазона, приведенного в настоящем изобретении. Предпочтительным является режим дозирования один раз в день. Тем не менее, могут быть пригодны другие режимы дозирования в зависимости от того характера фармакокинетического распада, который врач желает достичь. Режим дозирования может изменяться с течением времени.
Вышеупомянутые дозы рассчитаны на среднестатистического человека, имеющего массу примерно от 65 кг до 70 кг. Врач легко сможет сам определить дозы для пациентов, масса которых находится за пределами этого диапазона.
В другой конкретной форме осуществления настоящего изобретения соединение или композицию по настоящему изобретению принимают длительно. Термин «длительный прием» понимается как продолжение режима дозирования в течение длительного периода времени, например, когда введение препарата продолжается более трех месяцев, предпочтительно более чем 6 месяцев, 9 месяцев, год или более.
В другом своем аспекте настоящее изобретение представляет собой комплект, включающий: (i) соединение по формуле (I), или его соли и/или сольваты, (ii) инструкции для лечения сердечных аритмий, в том числе фибрилляции предсердий, желудочковых аритмий и внезапной смерти от застойной сердечной недостаточности, и (iii) упаковку для помещения в нее (i) и (ii).
В еще одном аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ для лечения и профилактики сердечной аритмии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества композиции, выбранной из группы, содержащей:
(I) соединение, выбранное из группы, состоящей из дезэтиламиодарона и приемлемых с фармацевтической точки зрения солей и гидратов и сольватов дезэтиламиодарона; и
(II) фармацевтическую композицию, содержащую упомянутое выше соединение вместе с приемлемым в фармацевтическом отношении эксципиентом, носителем или основой.
Следующие ниже неограничивающие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение со ссылками на чертежи.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Исходная запись поверхностных электрограмм и оптическая регистрация потенциалов действия после перфузии сердца 1 мкМ карбахола.
Фиг. 2. Средние продолжительности приступов фибрилляции предсердий. Во втором испытании продолжительность фибрилляции предсердий в контрольной группе не уменьшилась, в то время как ДЭА полностью предотвратил возникновение фибрилляции предсердий.
2
Фиг. 3. Воздействие предварительного лечения в течение 1 месяца амиодароном (30 мг/кг/день = AM 30; 100 мг/кг/день = AM 100) или дезэтиламиодаррном (15 мг/кг/день = ДЭА 15; 50 мг/кг/день = ДЭА 50) на выживаемость и частоту аритмий в течение первых 15 мин после окклюзии коронарной артерии у крыс, находящихся в сознании. НФЖ = необратимая фибрилляция желудочков; ОФЖ = обратимая фибрилляция желудочков; ЖТ = желудочковая тахикардия; ЭБС = экстрасистолия, бигеминия, групповые экстрасистолы «salvo»; НЕТ = животные, у которых не развивались аритмии. Звездочки означают статистически значимую разницу (критерий X) по сравнению с контрольной группой: *Р<0,05 **Р<0,01 ***Р<0,001.
Фиг. 4. Репрезентативный ЭКГ комплекс у постоянно подключенных к кардиостимулятору собак до операции, при последующем удалении атриовентрикулярного узла и во время стимуляции правого предсердия с частотой 400 в минуту. ЧСС = частота сердечных сокращений; РЧ = радиочастота; ПП = правое предсердие; ПЖ = правый желудочек.
Фиг. 5. Репрезентативный ЭКГ комплекс, показывающий индукцию экспериментальной фибрилляции предсердий с использованием в качестве стимулов 10-секундных пакетов импульсов частотой 800 в мин у находящейся в сознании собаки с ремоделированием предсердий, вызванным хронической стимуляцией правого предсердия. ФП = фибрилляция предсердий.
Фиг. 6. Еженедельно измеряемые уровни дезэтиламиодарона в плазме (мкг/мл) при длительном (4 недели) пероральном лечении дезэтиламиодароном (25 мг/кг/день) собак, со структурным ремоделированием и фибрилляцией предсердий (n=3). ДЭА = дезэтиламиодарон.
Фиг. 7. (А) Еженедельно измеряемые уровни амиодарона в плазме и (В) уровни дезэтиламиодарона (мкг/мл) при длительном (4 недели) пероральном приеме (50 мг/кг/день) амиодарона (AM) у собак со структурным ремоделированием и фибрилляцией предсердий (n=3). AM = амиодарон; ДЭА = дезэтиламиодарон.
Фиг. 8. Воздействие длительного (4 недели) перорального лечения ДЭА (30 мг/кг/день) и AM (45 мг/кг/день) на параметры предсердных и желудочковых потенциалов действия у собак, не подключенных к кардиостимулятору и не перенесших структурного ремоделирования предсердий.
Фиг. 9. Воздействие 28-дневного приема AM и ДЭА на (А) общий холестерин и (В) уровень щелочной фосфатазы (ЩФ) у крыс. Выборка n=3 в каждой группе; *p<0,05.
Фиг. 10. Исходная масса тела (А) и масса тела после 28-дневного назначения AM и ДЭА (В) у крыс. Выборка n=3 в каждой группе; *p<0,05.
Фиг. 11. Воздействие 28-дневного приема AM и ДЭА на (А) массу легких по отношению к 100 г массы тела, (В) на массу легких по отношению к массе головного мозга, (С) на массу печени по отношению к 100 г массы тела, и (D) на массу печени по отношению к массе головного мозга у крыс. Выборка n=7-10 особей на группу; *p<0,05.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Дезэтиламиодарон снижает частоту случаев фибрилляции предсердий в изолированном сердце кролика
Приготовление препарата изолированного сердца
2
4
4
3
2
2
2
В экспериментах были использованы сердца из новозеландских белых кроликов (1-2 кг). Животных подвергали внутривенной инъекции 400 МЕ/кг гепарина и анестезировали путем внутривенного вливания 30 мг/кг пентобарбитала, а затем умерщвляли путем цервикальной дислокации (смещение шейных позвонков). Протоколы были утверждены Департаментом по охране здоровья животных и безопасности пищевых продуктов Министерства сельского хозяйства и регионального развития Венгрии (Department of Animal Health and Food Control of the Ministry of Agriculture and Rural Development, Hungary; XIII/01031/000/2008) и Этическим комитетом по защите животных, используемых в научных исследованиях, Университета Сегеда (Ethical Committee for the Protection of Animals in Research of the University of Szeged, Szeged, Hungary, approval number I-74-125-2007). После срединной торакотомии сердце быстро извлекали и помещали в холодный (4°С) раствор Кребса-Хенселейта (РКХ), содержащий (в мМ): NaCl 118, KCl 4,3, KHPO 1,2, MgSO 1,2, натрия пирувата 5, NaHCO 25, глюкозы 11, CaCl 1,8, с уровнем pH 7,4, который насыщался газовой смесью 95% O и 5% CO. Затем сердце помещали в модифицированный аппарат Лангендорфа и перфузировали ретроградно через аорту кислородсодержащим РКХ, подогретым до 37°С. В легочную вену также вводили канюлю для перфузирования камеры левого предсердия. Для того, чтобы произвести оптическую регистрацию монофазных потенциалов действия, эти сердца также насыщали потенциал-зависимым флуоресцентным красителем di-4-ANEPPS в течение 5 мин. Для того, чтобы устранить сокращения сердца и избежать артефактов его движения во время получения оптического изображения, сопряжение электрической и механической деятельности сердца разобщали, добавляя в перфузат 11 мМ 2,3-бутандион моноксима.
Запись электрофизиологических параметров и получение флуоресцентных изображений
Эпикардиальные электрограммы стенок левого предсердия и левого желудочка амплифицировали при помощи электродного усилителя для снятия поверхностных биопотенциалов (Experimetria, Венгрия) и визуально наблюдали, используя высокочастотный осциллограф (Leader Electronics Corporation, Корея). Для достижения быстрой электрической стимуляции предсердий в верхней передней части верхней полой вены были помещены сделанные на заказ электроды (Eltron, Венгрия). Система оптического картирования потенциала действия с высоким разрешением состояла из светоизлучающих диодных ламп (LED) в качестве источника возбуждения света на длине волны 527 нм и высокоскоростной камеры (MiCam02, тип МС02С4) высокого разрешения на основе металл-оксид-полупроводников (КМОП), оснащенной фильтром нижних частот на 580 нм для получения флуоресцентного изображения с поверхности сердца на частоте 833 Гц. Флуоресцентные изображения были проанализированы с использованием программного обеспечения Brainvison Analyze software (Brainvision Inc, Токио, Япония).
Экспериментальный протокол
По прошествии периода в 15 мин, в течение которого стабилизировалась деятельность сердец, индуцировали острые приступы фибрилляции предсердий с помощью быстрой электрической стимуляции предсердий со скоростью 50 Гц в течение 10 сек в присутствии 1 мкМ карбахола в перфузате. Продолжительность приступов фибрилляции была измерена до и после введения AM, ДЭА или носителя. Все данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего.
Медикаменты
Все химикаты были приобретены в фирме Sigma-Aldrich (St. Louis, МО, USA) за исключением ДЭА и di-4-Anneps. Краситель di-4-Anneps был приобретен в фирме Molecular Probes Inc. (Eugene, Oregon, USA). ДЭА синтезировали на кафедре фармацевтической химии (Szintekon Kft., Мишкольц, Венгрия). ДЭА растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и его конечная концентрация при разведении в Кребса-Хенселейта составляла 5 мкМ.
Результаты
Перфузия сердца 1 мкМ карбахола заметно замедляла ритм сокращения предсердий и, следовательно, повышала чувствительность предсердий к фибрилляции (Фиг. 1.). В исходных условиях при перфузии карбахолом, фибрилляция предсердий в ответ на 10-секундную быструю стимуляцию предсердий развивалась в 13 из 13 сердец в контрольной группе и в 5 из 5 сердец в группе, получающей ДЭА, что показывает обоснованность нашей модели острой фибрилляции предсердий. Во втором испытании по развитию фибрилляции предсердий фибрилляция в контрольной группе происходила в 10 из 13 случаев. В противоположность этому, перфузия сердца ДЭА в группе, получающей ДЭА, полностью предотвращала развитие фибрилляции предсердий (0 из 5, Таблица 1).
Средняя продолжительность приступов фибрилляции предсердий в контрольной группе и группе, получающей лечение ДЭА, приведена в Таблице 2 и на Фиг. 2.
Выводы
Эти результаты свидетельствуют о том, что ДЭА может быть перспективен как препарат для лечения и/или профилактики фибрилляции предсердий.
Пример 2: Исследование антиаритмического эффекта при остром инфаркте миокарда у находящихся в сознании крыс
Аритмии, индуцированные перевязкой коронарной артерии у находящихся в сознании крыс
В экспериментальных методах, применяемых для исследования острой фазы инфаркта миокарда, часто используют наркотизированных животных и острые хирургические вмешательства. В таких условиях анестетик, искусственное дыхание и острое хирургическое вмешательство могут значительно и разнообразно влиять на события (Baczkó et al., 1997). Следовательно, особенно важно использовать такие экспериментальные условия, при которых острая фаза инфаркта миокарда развивается у находящихся в сознании животных.
Настоящие эксперименты проводились на самцах крыс линии Sprague-Dawley CFY массой 260-300 г. В ходе предварительной операции со вскрытием грудной клетки мы накладывали свободную шелковую петлю вокруг левой главной коронарной артерии, после чего грудную клетку закрывали (Leprán et al., 1983). Через семь-восемь дней после предварительной операции, т.е., после. полного выздоровления и заживления, свободная шелковая петля затягивалась, создавая окклюзию коронарной артерии у находящихся в сознании, свободно двигающихся животных. В течение первых 15 мин развития инфаркта миокарда непрерывно записывали биполярную ЭКГ (PowerLab 8SP, ADInstruments, Великобритания).
Измеряемые параметры
За выживаемостью наблюдали в острой фазе (первые 15 мин) и в течение последующих 16 часов после окклюзии коронарной артерии. Частоту случаев и продолжительность аритмий в острой фазе, т.е. фибрилляции желудочков, желудочковой тахикардии и других видов аритмий, в том числе желудочковых экстрасистол, бигеминии и групповые экстрасистол «salvo», оценивали в соответствии с международным соглашением Lambeth Conventions (Walker и др., 1988). Размеры инфаркта миокарда измеряли у животных, выживших в течение 16 ч после окклюзии коронарной артерии, с помощью окрашивания красителем нитротетразолий синий.
Предварительное лечение
Длительное пероральное предварительное лечение применяли в течение 1 месяца перед окклюзией коронарной артерии. Использовали следующие дозы: AM 30 мг/кг/день или 100 мг/кг/день (нагрузочная доза 100 мг/кг или 300 мг/кг в течение 3 дней); ДЭА 15 мг/кг/день или 50 мг/кг/день (нагрузочная доза 100 мг/кг или 300 мг/кг в течение 3-х дней). Контрольные животные получали носитель в объеме 5 мл/кг.
Результаты
Ни AM, ни ДЭА не вызывали каких-либо изменений в поведении животных или изменений массы тела. В течение 1 месяца лечения животных никаких смертей не произошло. Частота сердечных сокращений, измеренная до окклюзии коронарной артерии, не отличалась у разных групп, получавших лечение.
Окклюзия коронарной артерии у находящихся в сознании крыс в течение 4-6 мин имела своим результатом различные аритмии, часто приводящие к необратимой фибрилляции желудочков. Частота случаев фибрилляции желудочков значительно снижалась с помощью как предварительного лечения большими дозами AM, так и предварительного лечения большими дозами ДЭА (Фиг. 3). Оба вида предварительного лечения значительно улучшали выживаемость в острой фазе экспериментального инфаркта миокарда. Индекс аритмии, представляющий частоту случаев и продолжительность различных аритмий и выживание в виде одного числа, также значительно снижался (2,05±0,52 и 3,27±0,56 после предварительного лечения AM в дозе 100 мг/кг/день и ДЭА в дозе 50 мг/кг/день, соответственно) по сравнению с контролем (4,77±0,33).
В конце предварительного лечения также определяли концентрацию AM и ДЭА в плазме и миокарде (Таблица 3). После предварительного лечения AM концентрация в плазме его метаболита (т.е. ДЭА) составляла примерно 1/4 от концентрации исходной молекулы (AM). Концентрация амиодарона в ткани миокарда была значительно, примерно в 10 раз, больше чем в плазме, и концентрация ДЭА была такой же высокой. Предварительное лечение ДЭА давало такие же концентрации в плазме и миокарде, как те концентрации, которые были измерены после предварительного лечения амиодароном.
В другой группе животных мы исследовали возможные неблагоприятные эффекты длительного предварительного лечения. Для этих экспериментов мы использовали самок крыс линии Wistar, как известно, имеющих более высокую чувствительность в токсикологических исследованиях. Предварительное лечение амиодароном (200 мг/кг/сут в течение 1 мес) приводило к значительному уменьшению частоты сердечных сокращений (376±7,8 по сравнению с 411±14,6 уд/мин, n=10) и удлинению интервала PR (50±1,3 по сравнению с 46±1,0 мс, n=10) у находящихся в сознании крыс. В свою очередь, предварительное лечение ДЭА (100 мг/кг/день в течение 1 месяца) значительно увеличивало частоту сердечных сокращений (437±7,3 уд/мин), в то время как интервал PR не изменялся (45±1,1 мс, n=10) при сравнении с контрольными животными.
Выводы
Длительное пероральное предварительное лечение AM или ДЭА обеспечивало значительную защиту от опасных для жизни аритмий и повышало шансы на выживание в острую фазу экспериментального инфаркта миокарда. Этот защитный эффект был получен за счет одинаковых концентраций ДЭА в плазме или миокарде. Однако такая эффективная концентрация могла быть достигнута путем применения небольших доз ДЭА;
Пример 3: Исследование антиаритмического эффекта дезэтиламиодарона и амиодарона у находящихся в сознании собак с ремоделированием и фибрилляцией предсердий, индуцированными хронической быстрой стимуляцией предсердий
Животные и оперативное вмешательство
Эксперименты проводили на постоянно подключенных к кардиостимулятору собаках породы бигль обоих полов массой 12-13 кг. Животных подвергали следующей операции под общим наркозом: им имплантировали кардиостимуляторы в двусторонние подкожные карманы в области шеи (Logos, Karios; Biotronik Hungaria Ltd.) и прикрепляли к кардиостимуляторам электроды, вживленные в правый желудочек и правое предсердие. Для достижения третьей степени атриовентрикулярной блокады (АВБ) каждому животному проводили радиочастотную катетерную абляцию так, чтобы при последующей быстрой стимуляции предсердий (с частотой 400 в мин) желудочки были защищены от высокой частоты сердечных сокращений. Частота сердечных сокращений желудочкового кардиостимулятора был установлена по базальному уровню ЧСС, измеренному перед операцией (в среднем 80-90 в мин). По нашему прошлому опыту, эта частота сердечных сокращений была адекватна обычной повседневной деятельности этих животных. На седьмой день после операции, после измерения эффективного рефрактерного периода правого предсердия, предсердный кардиостимулятор был установлен на частоте 400 в мин для достижения электрического и структурного ремоделирования предсердий. Быструю стимуляцию правого предсердия необходимо поддерживать в этой модели на протяжении 3 месяцев для того, чтобы получить полное ремоделирование предсердий, в качестве сигнала которого служит снижение эффективного рефрактерного периода правого предсердия ниже 80 мс. Репрезентативные ЭКГ комплексы, иллюстрирующие нашу модель на собаках, показаны на Фиг. 4 и Фиг. 5.
Применение препарата
Дезэтиламиодарон вводили в дозе 25 мг/кг, тогда как амиодарон вводили в дозе 50 мг/кг (у разных животных) перорально каждое утро в 7 часов, в предварительно подготовленных капсулах в течение 4 недель. Для точного соблюдения требуемой дозы следили за массой тела животных.
Измеряемые параметры
Эффективный рефрактерный период (ЭРП) правого предсердия измеряли, используя протокол стимуляции одиночными преждевременными стимулами (метод S1-S2) при продолжительности сердечных циклов 150 и 300 мс. В дополнение к мониторингу ЭРП применяли 10-секундные пакеты импульсов частотой 800 в мин для того, чтобы вызвать фибрилляцию предсердий и измеряли частоту случаев ФП и продолжительность приступов ФП до начала пероральной лекарственной терапии, а затем после начала терапии каждые 4 дня. Образцы крови брали у каждого животного до начала лечения и один раз в неделю во время лечения, центрифугированую плазму хранили при -20°С для последующих измерений уровеней дезэтиламиодарона и амиодарона.
Результаты
4-недельный пероральный прием дезэтиламиодарона не вызывает никаких видимых изменений ни в настроении, ни в поведении животных, а также не снижает массу их тела.
Уровни дезэтиламиодарона и амиодарона в плазме и тканях у собак
Уровни лекарств в ткани сердца измеряли в образцах ткани из правого предсердия, левого предсердия, правого желудочка и левого желудочка. После умерщвления животных (на следующий день после окончания 4-недельного лечения), брали образцы тканей перед тем, как были выделены тканевые препараты для исследований in vitro. Результаты, описывающие уровни препарата в тканях приведены в Таблице 4. Очевидно, что у всех 3 собак с фибрилляцией предсердий пероральное лечение было успешным, обеспечивая соответствующие уровни дезэтиламиодарона в сердце. Эти результаты в дальнейшем были подтверждены измерениями уровня ДЭА в плазме этих 3 собак (Фиг. 6).
У трех животных, получавших длительное пероральное лечение амиодароном (50 мг/кг/день), отмечали потерю аппетита с последующим снижением массы тела. Первое животное потеряло 4 кг, а два других 1 кг в конце лечения. У животных, получавших лечение дезэтиламиодароном, потерю аппетита и снижение массы тела не наблюдали.
Воздействие 4-недельного перорального лечения дезэтиламиодароном на частоту случаев фибрилляции предсердий, продолжительность фибрилляции предсердий и эффективный рефрактерный период (ЭРП) предсердий у находящихся в сознании собак со структурным ремоделированием предсердий приведены в Таблице 5. У трех животных частота случаев фибрилляции предсердий и их продолжительность заметно и значительно снижалась, сопровождаясь увеличением продолжительности ЭРП.
Воздействие 4-недельного перорального лечения амиодароном на частоту случаев фибрилляции предсердий, продолжительность фибрилляции предсердий и эффективный рефрактерный период (ЭРП) у находящихся в сознании собак со структурным ремоделированием предсердий суммированы в Таблице 6. У трех животных частота случаев и продолжительность фибрилляции предсердий показывали тенденцию к снижению, сопровождаясь увеличением продолжительности ЭРП.
Таким образом, длительное пероральное лечение амиодароном (50 мг/кг/день) и дезэтиламиодароном (25 мг/кг/день) эффективно и одинаково снижает частоту случаев фибрилляции предсердий, продолжительность приступов фибрилляции предсердий и увеличение эффективного рефрактерного периода у находящихся в сознании и постоянно подключенных к кардиостимулятору собак породы бигль.
Лечение двумя этими медикаментами создавало заметно отличающиеся уровни дезэтиламиодарона в плазме (фигуры 6-7), но сходные уровни ДЭА в ткани сердца (Таблица 4). С другой стороны, как показано в Таблице 7, уровни ДЭА в ткани печени и легких были значительно и существенно выше после лечения AM, чем после лечения ДЭА. Эти результаты хорошо согласуются с результатами, показывающими накопление ДЭА в клеточных линиях, полученных из эпителия альвеол человека после лечения AM (Seki et al., 2008). Эти результаты позволяют предположить, что сходные терапевтические антиаритмические эффекты связаны с одинаковыми концентрациями препаратов в ткани сердца после лечения AM и ДЭА, однако, эти два виды лечения приводят к совершенно разным концентрациям ДЭА и AM в тканях печени и легких. На основании этого наблюдения можно сделать вывод, что длительное лечение AM могло бы значительно повысить риск токсических осложнений в печени и легких по сравнению с лечением одним ДЭА.
max
В дополнительных хронических экспериментах на неподключенных к кардиостимулятору собаках породы бигль двух животных лечили 45 мг/кг/день амиодарона, а других двух животных лечили 30 мг/кг/день дезэтиламиодарона перорально в течение 4 недель. Как показывают Таблица 8 и Фиг. 8, длительное лечение дезэтиламиодароном (метаболитом) вызывало сходные или даже более выраженные электрофизиологические изменения в сердце по сравнению с исходным соединением амиодароном; т.е. удлинение продолжительности потенциала действия (ППД) предсердий и желудочков, являющееся по определению особенностью антиаритмических препаратов III класса, а также снижение максимальной скорости деполяризации (V), определяющееся как механизм действия антиаритмических препаратов I класса.
Соответствующие уровни лекарств в плазме и тканях этих собак приведены в Таблице 9.
Выводы
Эти новые и неопубликованные экспериментальные данные показывают, что длительное лечение 30 мг/кг дезэтиламиодарона приводило к таким же антиаритмическим электрофизиологическим изменениям в клетках тканей предсердий и желудочков сердца, как и длительное лечение 45 мг/кг амиодарона. Уровни дезэтиламиодарона в ткани предсердий и желудочков сердца были сходны. То же самое представляется справедливым для уровней в тканях печени, легких и почек, что может быть значимо для вопросов возможного органотоксического действия. Важно подчеркнуть, что при длительном лечении амиодароном в дополнение к депонированию метаболита (дезэтиламиодарона) наблюдали еще более высокое депонирование амиодарона в тканях сердца, легких, печени и почек. Поскольку после длительного лечения дезэтиламиодароном никакого депонирования амиодарона в тканях не бывает, можно предположить, что при длительном лечении дезэтиламиодароном исключено, будто сходные терапевтические электрофизиологические эффекты в сердце могут быть связаны только с лечением исходным соединением (амиодароном); однако, органотоксическое действие на легкие, печень и почки будет более выраженным после длительного лечения амиодароном по сравнению с длительным лечением дезэтиламиодароном. Последнее свидетельствует в пользу большей терапевтической ценности дезэтиламиодарона по сравнению с амиодароном. Кроме того, заметно более низкие концентрации препарата в плазме после длительного лечения дезэтиламиодароном должны вызывать меньше возможных фармакокинетических взаимодействий с другими препаратами, чем после длительного лечения амиодароном.
Пример 4: Подведение результатов не предусматривающего применение требований стандарта GLP (стандарта надлежащей лабораторной практики) хронического 28-дневного токсикологического исследования на крысах
Данные предварительных 28-дневных токсикологических исследований, не предусматривающих применение требований стандарта GLP, позволяют предположить, что пероральное лечение 200 мг/кг/день амиодарона (AM; n=9) давало заметно отличающиеся результаты при сравнении их с результатами лечения животных, получавших носитель (n=10), и животных, получавших 100 мг/кг/день дезэтиламиодарона (ДЭА; n=7). Выбор дозы был основан на том, что в предыдущих исследованиях эффективности у крыс доза AM, необходимая для достижения определенных уровней ДЭА в ткани сердца, которые вызывали сходный антиаритмический эффект (8,9±2,1 мкг/г в левой части миокарда, n=30; 6,8±1,9 мкг/г в правой части миокарда, n=24) была в два раза выше (100 мг/кг/день), чем требуемая доза ДЭА (50 мг/кг/день). После 21-дневного перорального приема ДЭА в ткани миокарда левого желудочка определяли уровень ДЭА равный 7,3±0,7 мкг/г (n=27), а в миокарде правого желудочка обнаруживали концентрацию ДЭА равную 8,6±1,1 мкг/г (n=16).
Во второй серии экспериментов пероральное лечение 45 мг/кг амиодарона (AM) 11 собак в течение 4 недель значительно снижало частоту сердечных сокращений (брадикардия), что проявлялось как увеличение на электрокардиограмме интервала RR от 590,4 мс (стандартная ошибка = 15,1) до 823,2 мс (стандартная ошибка = 48,5), тогда как пероральное лечение 30 мг/кг ДЭА в течение 4 недель увеличивало этот интервал лишь от 596,3 мс (стандартная ошибка = 29,9) до 675,8 мс (стандартная ошибка = 36,8). Соответствующий интервал QTc на ЭКГ, отражающий терапевтическое действие соединений, изменялся аналогично как для исходного соединения (AM), так и для метаболита (ДЭА), от 243,2 мс (стандартная ошибка = 6,1) до 270,8 мс (стандартная ошибка = 9,7) и от 243,6 мс (стандартная ошибка = 3,3) до 266,9 мс (стандартная ошибка = 7,3), соответственно. Меньшая степень брадикардии после хронического перорального лечения ДЭА по сравнению с таким же лечением AM представляет собой новое терапевтическое преимущество, так как высокая степень замедления сердечного ритма увеличивает риск пируэтной тахикардии.
Соответствующий уровень ДЭА в ткани левого предсердия после лечения AM составлял 11,6 мкг/г (стандартная ошибка = 2,9), а после лечения ДЭА был равен 8,1 мкг/г (стандартная ошибка = 2,1), т.е. был очень похож между двумя группами. Следует отметить, что после лечения AM мы определяли уровень AM в ткани предсердий равный 33,1 мкг/г (стандартная ошибка = 19,1), который, что очевидно, совсем не обнаруживался у собак, получавших лечение ДЭА.
Наиболее важно то, что в местах развития побочного эффекта в печени, легких и почках лечение ДЭА дает аналогичные или значительно меньшие уровни ДЭА, равные 66,6 мкг/г (стандартная ошибка = 16,6), 66,9 мкг/г (стандартная ошибка = 11,9) и 20,1 мкг/г (стандартная ошибка = 5,6), чем уровни ДЭА после лечения AM, равные 58,1 мкг/г (стандартная ошибка = 13,8), 123,9 мкг/г (стандартная ошибка = 25,9) и 41,8 мкг/г (стандартная ошибка = 8,3), соответственно. Кроме того, после лечения AM существовала относительно высокая концентрация исходного соединения в ткани этих органов, которая составляла в печени = 77,4 мкг/г (стандартная ошибка = 19,4), в легких = 104,7 мкг/г (стандартная ошибка = 20,1) и в почках = 57,2 мкг/г (стандартная ошибка = 13,8) и не отмечалась после обработки ДЭА. На основании данных о концентрации лекарственного средства в тканях можно сделать вывод, что для ДЭА можно ожидать терапевтические результаты такие же, как для AM, но с гораздо меньшим токсическим эффектом в печени, легких и в почках.
Наиболее важные различия после лечения ДЭА и AM можно суммировать следующим образом:
1. Через 14 дней после завершения приема AM в дозе 200 мг/кг/день AM может быть обнаружен в образцах плазмы, тогда как после лечения ДЭА в дозе 100 мг/кг/день ДЭА не обнаруживали в образцах плазмы или ткани сердца. Эти результаты показывают, что выведение ДЭА происходит быстрее, чем выведение AM, что является благоприятной фармакокинетической особенностью, т.к. при длительном назначении этого препарата его накопление и токсические побочные эффекты снижаются.
2. Как показывает Фиг. 9, изменения функции печени (общий холестерин, щелочная фосфатаза [ЩФ]) у животных, получавших 200 мг/кг/день AM, были более выраженными по сравнению с этими изменениями у животных, получавших лечение 100 мг/кг/день ДЭА. По этим результатам можно предположить, что лечение метаболитом (ДЭА) приводит к снижению гепатотоксических побочных эффектов по сравнению с лечением амиодароном (AM).
3. В легких после лечения 200 мг/кг/день AM обнаруживали альвеолярный гистиоцитоз, тогда как после лечения 100 мг/кг/день ДЭА ни одного из подобных наблюдений не было сделано. Этот патологический результат позволяет предположить, что лечение ДЭА может быть более благоприятным, учитывая, что одним из самых серьезных побочных эффектов длительного лечения AM является развитие легочного фиброза.
4. Как показано на Фиг. 10, после 28-дневного лечения 200 мг/кг/день AM нормальное увеличение массы тела (44 г) отсутствовало (13 г). После лечения 100 мг/кг/день ДЭА снижение массы тела не наблюдалось (34 г). Этот результат может быть связан с наблюдением, что в течение первых 3 недель лечения 200 мг/кг/день AM потребление пищи и аппетит животных были снижены по сравнению с контролем и животными, получавшими лечение 100 мг/кг/день ДЭА.
5. После лечения 200 мг/кг/день AM, масса печени значительно увеличивалась, при нормировании ее как по отношению к массе тела, так и по отношению к массе головного мозга. Соответствующие измерения после лечения 100 мг/кг/день ДЭА не дали никаких значимых различий (Фиг. 11). Эти результаты позволяют предположить увеличение токсических побочных эффектов в печени и легких после лечения AM в отличие от лечения метаболитом, ДЭА.
Наши собственные экспериментальные результаты, которые являются уникальными в научной литературе, впервые показали, что для того, чтобы достичь сходного антиаритмического действия, как при фибрилляции предсердий, так и при желудочковых аритмиях у крыс, кроликов и собак, необходимо вводить дозу ДЭА, равную половине от дозы AM. Эти эффекты сопровождаются аналогичными уровнями ДЭА в ткани сердца как после лечения ДЭА, так и после лечения AM (при дозе в два раза выше). Важно отметить, что в соответствии с данными хронических токсикологических исследований у крыс, проведенных после 28-дневного перорального лечения, назначение ДЭА в дозе (50 мг/кг/день), равной половине от дозы AM (100 мг/кг/день), приводило к снижению патологических изменений в легких и печени; т.е., меньшие дозы ДЭА оказывают аналогичное антиаритмическое воздействие, вызывая более мягкие токсические и побочные эффекты.
Ссылки
Baczkó I, Leprán I, Рарр JGy: Influence of anaesthetics on sudden death and the incidence and duration of reperfusion-induced arrhythmias in rats. J. Cardiovasc. Pharmacol. 29: 196-201. 1997.
Bolderman R W et al: „Atrium-targeted drug delivery through an amiodarone-eluting bilayered patch", Journal of thoracic and cardiovascular surgery, Mosby-Year Book, Inc., St. Louis, MO, US, vol. 140(4), 904-910, 2010.
Flanagan RJ, Storey GC, Holt DW, Farmer PB. Identification and measurement of desethymamiodarone in blood plasma specimens from amiodarone-treated patients. J. Pharm. Pharmacol. 34: 638-643, 1982.
Kato R, Van Ketesh N, Kamiya K, Yabek S, Kannan R, Singh BN. Electrophysiologic effects of дезэтиламиодарон, an active metabolite of amiodarone: comparison with amiodarone during chronic administration in rabbits. Am. Heart J. 9: 106.9; 1988.
Latham KR, Sellitti DF, Goldstein RE: Interaction of amiodarone and дезэтиламиодарон with solubolozed nuclear thyroid hormone receptors. J Am Cardiol. 9:972-876; 1987.
Leprán I, Koltai M, Siegmund W, Szekeres L: Coronary artery ligation, early arrhythmias, and determination of the ischemic area in conscious rats. J. Pharmacol. Meth. 9: 219-230. 1983.
Nattel S, Davies M, Quantz M. The antiarrhythmic effect of amiodarone and дезэтиламиодарон, alone and in combination, in dog with acute myocardiac infarction. Circulation. 77:200-8; 1988.
Nattel S: Pharmacodynamic Studies of Amiodarone and Its Active N-Desetyl Metabolite. J. Cardiocvasc. Pharmacol. 8:771-777; 1986.
Ravens U: Antiarrhythmic therapy in atrial fibrillation. Pharmacol. & Ther. 128: 129-145, 2010.
Seki S, Itagaki S, Kobayashi M, Hirano T, Iseki K. Amiodarone Increases the Accumulation of ДЭА in a Human Alveolar Epithelium-Derived Cell Line. Biol. Pharm. Bull. 31:1449-52; 2008.
Shi RO, Lee JK, Hayashi Y, Takeuchi Y, Kambe F, Futaki S, Seo H, Murata Y, Kodama I. Long-term amiodarone treatment causes cardioselective hypothyroid-like alteration in gene expression profile. Eur J Pharmacol. 578:270-8; 2008.
Shinagawa K, Shiroshita-Takeshita A, Schram G, Nattel S. Effects of antiarrhythmic drugs on fibrillation in the remodelled atrium: insights into the mechanism of the superior efficacy of amiodarone. Circulation. 107:1440-6; 2003.
Talajic M. De Roode MR, Nattel S. Comparative electrophysiologic effects of intravenous amiodarone and desethylamiodaropne in dogs: evidence for clinically relevant activity of the metabolite. Circulation. 75:265-71; 1987.
Robert G. Tieleman et al: "Efficacy, safety, and determinants of conversion of atrial fibrillation and flutter with oral amiodarone", Re American Journal of Cardiology, 79(1), 53-57, 1997.
Tisdale JE, Follin SL, Ordelova A, Webb CR: Risk factors for the development of specific noncardiovascular adverse effects associated with amiodarone. J. Clin. Pharmacol. 35: 351-356, 1995.
van Beeren HC, Bakker O, Wiersinga WM. Desthylamiodarone is a competitive inhibitor of the binding of thyroid hormone to the thyroid hormone alpha 1-receptor protein. Mol Cell Endocrinol. 112:15-9; 1995.
van Beeren HC, BakkerO, Wiereinga WM. Дезэтиламиодарон interferes with the binding of co-activator GRIP-1 to beta 1-thyroid hormone receptor. FEBS Lett. 450:35-8; 1999.
Varró A, Bódi I, Rabloczky G: Antiarrhythmic effect of дезэтиламиодарон in conscious rats. J. Pharm. Pharmacol. 39:483-484; 1987.
Walker MJA, Curtis MJ, Hearse DJ, Campbell RWF, Janse MJ, Yellon DM, Cobbe SM, Coker SJ, Harness JB, Harron DWG, Higgins AJ, Julian DG, Lab MJ, Manning AS, Northover BJ, Parratt JR, Riemersma RA, Riva Ε, Russell DC, Sheridan DJ, Winslow E, Woodward B: The Lambeth Conventions: guidelines for the study of arrhythmias in ischemia, infarction, and reperfusion. Cardiovasc. Res. 22: 447-455; 1988.
Wang Z, Feng J, Shi H, Pond A, Nerbonne JM, and Nattel S. Potential molecular basis of different physiological properties of the transient outward K+ current in rabbit and human atrial myocytes. Circ Res 84: 551-561; 1999.
Wang Z, Fermini B, Feng J, Nattel S. Role of chloride currents in repolarizing rabbit atrial myocytes. Am J Physiol 268(5 Pt 2): H1992-H2002; 1995.
Zhou L, Chen BP, Kluger J, Fan C, Chow MS. Effects of amiodarone and its active metabolite дезэтиламиодарон on the ventricular defibrillation threshold. J Am Coll Cardiol. 31 (7): 1672-1678; 1998.