Исследование физико-химических характеристик и регенерирующей активности масляного экстракта тыквы

ИССЛЕДОВАНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК И РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ МАСЛЯНОГО ЭКСТРАКТА ТЫКВЫ

Н.Н. ГЛУЩЕНКО, КАБЛИ НАДЯ, Т.А. ЛОБАЕВА

Кафедра фармацевтической и токсикологической химии РУДН. Москва, 117198, ул. Миклухо-Маклая, д. 8. Медицинский факультет О.А. БОГОСЛОВСКАЯ, И.П- ОЛЬХОВСКАЯ.

Институт энергетических проблем химической физики РАН. Москва 117334, Ленинский

проспект, д. 38, корп.2

Исследованы показатели качества, состав липидов, антиокислительная активность (АОА) и регенерирующие свойства масляного экстракта тыквы. Показано, что количество токоферолов в масляном экстракте тыквы составляет 34,7 мг%, каротиноидов - 78,2 мг%. Величина антиокислительной активности масляного экстракта тыквы составляет 540 час мл/г, что в 4 раза выше АОА минерального (вазелинового) масла. По показателю значения времени полузаживления ран наибольшей активностью обладает композиция, содержащая 50% масляного экстракта тыквы: при ежедневном лечении время полузаживления ран на 22% меньше времени полузаживления ран нелеченых животных.

Ключевые слова: масляный экстракт тыквы, регенерация, антиоксиданты, токоферол, каротиноиды, показатели качества.

Несмотря на значительные успехи, достигнутые за последние годы в области синтеза новых препаратов, обладающих регенерирующей активностью, противовоспалительным и антимикробным действием, создание новых препаратов на основе природных компонентов из лекарственных растений, обладающих многофакторным действием, остается важной и актуальной задачей [5,7].

В настоящее время широко используются масла, выделенные из семян тыквы, сок и мякоть плодов тыквы, в связи с комплексом свойств, необходимых в комплексной терапии для лечения ряда заболеваний в стоматологии, гастроэнторологии, отоларингологии, акушерстве и гинекологии, урологии, онкологии, проктологии, дерматологии и т.д. Использование тыквенного масла в клинике столь разных заболеваний связано с тем, что в его состав входят биологически активные компоненты, обеспечивающие противовоспалительное, антиоксидантное, метаболическое, антибактериальное, репаративное, иммуномодулирующее, поливитаминное действие. Наше внимание тыквенное масло привлекло в связи с его регенерирующей активностью, благодаря которой оно может быть использовано для лечения ран, язв, свищей и т.д. разной этиологии.

Нами исследован масляный экстракт, полученный из целого плода тыквы (фирма-производитель «Кызыл-май»). Проводя анализ результатов применения тыквенного масла в клинике, мы обратили внимание на тот факт, что в зависимости от заболевания, сроков его течения и т.д. врачи, обычно, используют неразведенное масло, или в виде свечей, или желатиновых капсул. В связи с этим, целью нашей работы является исследование физико-химических характеристик масляного экстракта тыквы, изучение его ранозаживляющего действия и выяснение эффективной концентрации масла для лечения экспериментальных открытых ран.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Масляный экстракт тыквы для исследований был любезно предоставлено фирмой-производителем «Кызылмай» АО «Фармация».

В работе использовали мышей линии СНК, массой 18-20 г, содержащихся на обще-виварийном рационе. Все работы с животными проводили в соответствии с “Правилами использования лабораторных экспериментальных животных”, 1984 года, приложение №>4.

Для изучения скорости заживления ран при лечении масляным экстрактом тыквы проводили операцию на животных под наркозом. На освобожденной от шерсти спинке животного по трафаретке рисовали контур раны и наносили ее с помощью ножниц.

Площадь нанесенной полнослойной раны составляла 0,5-1,0 см2. Лечение ран проводили сразу после проведения операции, каждый день вплоть до полного выздоровления животных. Приготовленные препараты масляного экстракта тыквы в вазелиновом масле в количестве 0,2 мл капали на раневую поверхность. Контуры ран переносили на миллиметровую бумагу и рассчитывали площадь раны. Результаты полученных площадей ран обрабатывали статистически. Рассчитывали значение времени полного заживления и время полузаживления.

Одномерную хроматографию липидов масляного экстракта тыквы для качественного и количественного анализа нейтральных липидов проводили по методу [10]. Абсолютное количество веществ в пятне определяли по интегральной интенсивности поглощения в видимой области на автоматическом денситометре фирмы ’Моусе”(Англия) с помощью предварительно полученных кривых для индивидуальных фракций. Содержание фракций нейтральных липидов выражали в процентах от общего количество нейтральных липидов.

Определение йодного и кислотного чисел проводили по методу, описанному в XI Государственной фармакопеи СССР. Вып. 1,2 [3].

Перекисное число определяли по методу [9].

Определение антиокислительной активности масляного экстракта тыквы проводили по методу [9].

Индекс окисленности определяли и рассчитывали по методу, описанному в XI Государственной фармакопеи СССР. Вып. 1,2 [3].

Содержание каротиноидов определяли спектрофотометрически при длине волны 232 нм, а каротиноидов - при длине волны 820 нм [ 3].

Результаты исследований обрабатывали статистически. Рассчитывали среднее значение полученных результатов , 8 - среднеквадратичное отклонение. Достоверность полученных результатов оценивали по критерию Стьюдента. Достоверными считали результаты при значении Р ^ 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Мы исследовали показатели качества масляного экстракта, полученного из целого плода тыквы (табл.1). Полученные нами данные (количество перекисей, кислотное число, йодное число, индекс окисленности) исследуемого масляного экстракта тыквы соответствуют требованиям, предъявляемым к масляным препаратам [8].

Таблица 1

Показатели качества масляного экстракта тыквы

Показатель Значение

Йодное число Кислотное число, мг КОН/г Перекисное число, ммоль/г Индекс окисленности 115,4 ±9,5 1,12 ±0,11 (1,2 ±0,06)х10'2 7,84

Исследование липидного состава масляного экстракта тыквы показало, что на долю фосфолипидов приходится 2% , содержание нейтральных липидов составляет 98 %. В состав нейтральных липидов входит 5 фракций: моно-, ди-, триглицериды, свободные жирные кислоты и холестерин (табл.2).

При изучении витаминного состава масляного экстракта тыквы установлено наличие в нем каротиноидов и токоферолов. Содержание токоферолов составляет 34,7 мг%, каротиноидов — 78,2 мг%. Известно, что и токоферолы, и каротиноиды являются важными

Таблица 2

Значение Ш" индивидуальных фракций, качественный и количественный состав нейтральных липидов масляного экстракта тыквы

№ пятна на хроматограмме от старта 1 2 3 4 5

Качественный состав Моноглице- риды Диглицервды Холестерин Свободные жирные кислоты Триглице- риды

Среднее значение М 0,15±0,01 0,20±0,02 0,24+0,01 0,34+0,01 0,61±0,02

Среднее содержание фракций (%) 3,66±1,3 8,18±1,9 6,49±2,3 8,88±3,6 72,78±4,4

компонентами антиоксидантной системы клетки. Будучи жирорастворимым соединением, а-токоферол способен в липидной фазе мембран вступать в окислительновосстановительные реакции и обрывать цепные процессы свободнорадикального окисления [1,2]. При этом эндогенно образующиеся этанол, метанол, муравьиная кислота являются ловушками гидроксильных радикалов. Насыщенные жирные кислоты способны весьма эффективно гасить синглетный кислород, распределяя его энергию по длине своей цепи. (З-каротин является также одним из наиболее эффективных тушителей синг-летного кислорода. Кроме того, он способен взаимодействовать с перекисными радикалами, выступая в роли синергиста а-токоферола [1].

Высокое содержание антиоксидантных веществ (токоферолов и каротиноидов) в масляном экстракте тыквы определяет повышенный уровень его антиокислительной активности. Оказалось, что антиокислительная активностью масляного экстракта тыквы равна 540 час мл/г, что в 4 раза выше АОА минерального (вазелинового) масла [4].

Учитывая, что раневой процесс характеризуется повышением свободнорадикального окисления липидов в организме, уровень которого регулируется содержанием природных антиоксидантов, мы предположили, что масляный экстракт тыквы, обладающий высокой АОА и количеством токоферолов и каротиноидов, будет активно влиять на заживление полнослойных ран. Проводя оценку скорости заживления ран по изменению площади ран, показателю времени полузаживления и полного заживления ран при использовании неразведанного масляного экстракта тыквы, мы установили, что неразведанный масляный экстракт тыквы увеличивает время полузаживления ран на 58% по сравнению с временем полузаживления ран нелеченных животных. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости определить оптимальную концентрацию масляного экстракта тыквы для лечения полнослойных ран.

Для решения этой задачи мы изучили воздействие на раны масла, взятого в концентрациях 10%, 30%, 50% в сравнении с неразведенным масляным экстрактом. При приготовлении препаратов, содержащих разную концентрацию масляного экстракта тыквы, в качестве основы мы остановились на минеральном масле - вазелиновом, физикохимические характеристики которого были изучены в предыдущих работах [4]. Было показано, что кислотное число вазелинового масла практически равно нулю, величина йодного числа не превышает 1,5 г 12 на 100 г масла, концентрация перекисей очень низка, а величина антиокислительной активности не превышает 135 час мл/г. Известно, что низкие показатели кислотного, йодного чисел, пониженное количество перекисей в масляной основе позволяют получать более стабильные препараты, в которых снижена способность развития гидролитических процессов и окисления лабильных компонентов [6].

Выбрав в качестве основы вазелиновое масло, мы приготовили композиции, содержащие разную концентрацию масляного экстракта тыквы: 10%, 30%, 50%.

ОТ,1/2 ЕЗТ,заживл.

Время, сутки

О 10% 30% 50% 100%

Концентрация масляного экстракта тыквы

Рис. 1 Изменение значений времени полузаживления

Изучение влияния композиций на скорость заживления экспериментальных полно-слойных ран позволило установить, что наибольшей активностью по показателю значения времени полузаживления ран обладает препарат, содержащий 50% масляного экстракта тыквы (рис.1) Причем, при ежедневном лечении этим препаратом время полузаживления было на 22% меньше по сравнению со временем заживления нелеченных животных, а полное заживление ран происходило незначительно быстрее, чем у нелеченных животных контрольной группы. Высокой регенерирующей активностью обладает также композиция, содержащая 10% масляный экстракт тыквы. Так, время полузаживления и полного заживления полнослойных ран при лечении этой композицией на 14% меньше, чем в контрольной группе. Ряд активности композиций, приготовленных на вазелиновом масле и содержащих масляный экстракт тыквы, в порядке усиления терапевтического действия по показателям времени полузаживления и полного заживления выглядит следующим образом:

Тп

50% >10% > 0%>30%>100%

10% > 30% > 50% = 100% > 0%,

где 0% - нелеченная группа животных.

Полученные данные свидетельствуют о высокой регенерирующей активности масляного экстракта тыквы в составе композиций, приготовленных на основе вазелинового масла.

Таким образом, показано, что по показателям качества масляный экстракт, полученный из целого плода тыквы, отвечает требованиям, предъявляемым к препаратам фитомасел, содержит высокое содержание жирорастворимых витаминов, обладает высокой АОА. Наибольшим регенерирующим эффектом обладает масляный экстракт тыквы в концентрациях 50% и 10%, наименьшим - неразведенный масляный экстракт тыквы.

Литература

1. Абрамченко В.В.. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. - C-Пб.: ДЕАН, 2001, - 400 с.

2. Бурлакова Е.Б., Алесенко А.В., Молочкина Е.М. и др. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росе. -М.: Наука, 1975. -211с.

3. XI Государственная фармакопея СССР. Вып. 1,2.- М., 1998, - 398 с.

4. Лобаева Т.А., Богословская О.А., Володина Л.А. и др. Изучение биологической активности природных адаптогенов - фитомасел и микрэлементов в виде наночастиц. Матер. X Межд. симпоз., посвященного проблеме адаптации. - М.: Йзд-во РУДН, 2000, с. 60-63.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух частях. 12-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1993,-688с.

6. Привалова Э.Г., Никитюк В.Г. // Провизор. 1999; 11 с. 43-45.

7. Современная фитотерапия. / Под ред. В. Петкова. София, 1988. 504с.

8. Фармакопейная статья. Тыквеол (масло семян тыквы) ФС 42-3651-98 взамен ВФС 42-2405-94.

9. Шишкина Л.Н. / В сб.: Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vivo и in vitro. -М. 1992,-26-30.

10. Шталь Е. Хроматография в тонких слоях. - М.: Мир. 1965, - 300с.

STUDY OF PHYSICO-CHEMICAL CHARACTERISTICS AND REGENERATIVE ACTIVITY OF

PUMPKIN OIL EXTRACT

N.N. GLUCHSHENKO, KABLY NADJA, T.A. LOBAEVA

Department of pharmaceutical and toxicology chemistry RPFU. Moscow, 117198, Miklukho-Maklaya

8, Medical faculty OA. BOGOSLOVSKAJ, LP. OLHOVSKAJ Institute for Energy Problems of Chemical Physics RAS. Moscow, 117334,

Leninski prospect 38, Bid 2

The quality, the lipid composition, antioxidative and regenerative activities of the pumpkin oil extract was studied. It is shown there are 34,7 mg% tocopherols and 78,2 mg% carotinoids concentration in the pumpkin oil extract. The data of the antioxidative activity (AOA) of the pumpkin oil extract is 450 hour ml/g and more in 4 times than AOA of mineral (vaseline) oil. The significance of the half-time of wound regenerate by the composition with 50% pumpkin oil extract is less on 22% than this data of an-treat animals.

Kay words: pumkin oil extract, regeneration, antioxidants, tocoferol, carotinids, quality indexes.