Экспериментальное изучение перекрестного иммунного ответа на антигены штаммов вируса клещевого энцефалита разных генотипов у мышей Balb/с, иммунизированных различными вариантами вакцины клещевого энцефалита

Экспериментальное изучение перекрестного иммунного ответа на антигены штаммов вируса клещевого энцефалита разных генотипов у мышей BALB/с, иммунизированных различными вариантами вакцины клещевого энцефалита

О.С. Афонина1 (Afonina@expmed.ru), Л.Л. Терехина2, О.А. Бархалева1, И.П. Ладыженская1, К.А. Саркисян1, М.С. Воробьева1, Г.Г. Карганова2, А.В. Рукавишников1, В.А. Шевцов1, В.П. Бондарев1

1ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России, Москва

2ФГБУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАН, Москва

Резюме

Проведено экспериментальное исследование по изучению и характеристике перекрестного иммунного ответа у мышей линии BALB/c, привитых различными коммерческими вакцинами против клещевого энцефалита (КЭ), в отношении штаммов вируса КЭ дальневосточного, европейского и сибирского генотипов.

Необходимость этого исследования связана с тем, что вакцины против КЭ приготовлены с применением производственных штаммов, принадлежащих к двум генотипам вируса КЭ: дальневосточному (отечественные вакцины КЭ) и европейскому (зарубежные вакцины КЭ).

Ранее было показано при оценке иммуногенности на мышах BALB/с, что отечественные и зарубежные вакцины КЭ достаточно активны против штаммов дальневосточного и европейского генотипа вируса КЭ. В последние годы в циркуляции вируса КЭ в природных очагах инфекции доминирует сибирский генотип вируса КЭ. Для изучения гуморального иммунитета при вакцинации против КЭ использовали РТГА (ГА - антигены к четырем штаммам различных генотипов вируса КЭ) и ИФА (два различных набора реагентов для выявления антител к антигенам дальневосточного или европейского генотипов вируса КЭ). В РТГА и ИФА подтверждено наличие перекрестного иммунного ответа для отечественных и зарубежных вакцин КЭ к различным по генотипу антигенам вируса КЭ. Показано, что по уровню сероконверсии и среднему геометрическому титров антител в РТГА вакцина Энцепур уступает другим вакцинам, причем эти показатели достоверно более высокие по отношениюк гомологичному этой вакцине европейскому антигену вируса КЭ, чем к антигену сибирского генотипа, и особенно к антигену дальневосточного генотипа. В ИФА установлены высокие значения среднего геометрического титра антител и общего показателя сероконверсии к антигенам восточного и западного генотипов вируса КЭ для всех вариантов вакцины против КЭ - отечественных и зарубежных. Ключевые слова: клещевой энцефалит, вакцинация, генотипы вируса КЭ

Experimental Studies cross immune Response to Antigens of the Virus Strains of Tick-Borne Encephalitis Different Genotypes in BALB/c Mice, immunized with Various Embodiments of tick-Borne Encephalitis Vaccine

O.S. Afonina1 (Afonina@expmed.ru), L.L.Terekhina2, O.A. Barkhaleva1, I.P. Ladyzhenskaya1, K.A. Sarkisyan1, M.S. Vorobieva1, G.G. Karganova2, A.V. Rukavishnikov1, V.A. Shevtsov1, V.P. Bondarev1

1 Federal State Budgetary Institution «Scientific Centrn for Expertise of Medical Products» of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Moscow

2 M.P.Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides, Russian Academy of Sciences, Moscow Abstract

Were studied in experimental researches for characterizing the cross immune response of BALB/c-mices, immunized with various embodiments of tick-borne encephalitis vaccines, against TBE virus strains of the Far Eastern, European and Siberian genotypes. The need for this research stems from the fact, that vaccines are prepared using TBE strains belonging to two genotypes of TBE virus: Far East (domestic TBE vaccines) and European (foreign TBE vaccines).

Early was shown in the evaluation of immunogenicity on BALB^-mices, that domestic and foreign TBE vaccines are quite active against strains of the Far Eastern and European TBE virus genotype.

In recent years, in the circulation of TBE virus in natural foci of infection dominates the Siberian genotype TBE virus. For the study of humoral immunity response by vaccination against TBE used HAI (GA-antigens to four strains of different genotypes of TBE virus) and ELISA (two different sets of reagents for the detection of antibodies to the Far East or European genotypes of TBE virus). In HAI and ELISA

confirmed the presence of cross-immune response to domestic and foreign TBE vaccines to different genotype TBE virus antigens. It is shown that in terms of seroconversion and geometric mean HAI antibody titer vaccine Entsepur, Germany, inferior to other vaccines, with significantly higher rates revealed to the homologous vaccine this European TBE virus antigen than the antigen Siberian genotype, and especially to the Far East antigen genotype. In ELISA set high values of the geometric mean antibody titer and the total rate of seroconversion to antigens of the east and west of the TBE virus genotypes for all variants of TBE vaccine - domestic and foreign. Key words: tick-bone encephalitis, vaccination, genotypes of TBE virus

Введение

Клещевой энцефалит (КЭ) в течение многих лет остается серьезной проблемой отечественного здравоохранения [1 - 4] несмотря на значительные достижения в создании и применении для профилактики этой инфекции современных высокотехнологичных вакцин против КЭ. Ежегодно в России, по данным Роспотребнадзора, регистрируется более 2000 больных с диагнозом «клещевой энцефалит».

По-прежнему ограничены масштабы вакцинации населения против этой инфекции.

Вирус КЭ имеет три подтипа (генотипа): дальневосточный - генотип 1, европейский - генотип 2 и сибирский - генотип 3 [5]. На Урале, в Западной и Восточной Сибири, в некоторых регионах европейской части России в настоящее время доминирует сибирский генотип. Штаммы этого генотипа составляют более 70% среди выделенных в последние годы из природы штаммов вируса КЭ [6 - 11]. В Забайкалье выявлена и изучена группа штаммов вируса КЭ, значительно отличающихся по своим генетическим характеристикам от известных генотипов [9]. Кроме того, имеется информация о так называемых политиповых изолятах вируса КЭ, обладающих генетическими маркерами нескольких генотипов [11].

Для вакцинации населения против клещевого энцефалита в России применяются четыре отечественные и зарубежные вакцины против КЭ, сходные по показателям безопасности и иммунологической эффективности [3, 12 - 20]. Для производства отечественных вакцин КЭ применяются штаммы вируса КЭ дальневосточного подтипа (генотип 1 - штаммы Софьин, № 205), для зарубежных - штаммы вируса КЭ европейского подтипа (генотип 2 - штаммы Ней-дорфл, К-23) (табл. 1).

В отечественной и зарубежной литературе появились публикации о выявлении лабораторно подтвержденных случаев заболевания КЭ привитых лиц [16, 21, 22]. Среди заболевших преобладают легкие лихорадочные формы КЭ, однако регистрируются и тяжелые очаговые формы, которые приводят в ряде случаев к летальному исходу, особенно у пациентов среднего и пожилого возраста [16]. Важно подчеркнуть, что при исследовании аутопсийного материала ЦНС у некоторых вакцинированных пациентов с диагнозом «КЭ», чье заболевание закончилось летальным исходом, были выделены штаммы вируса КЭ, относящиеся к сибирскому подтипу (генотип 3) [21].

Следует отметить, что случаи заболевания КЭ среди вакцинированных регистрируются как на тер-

риториях, где, по мнению специалистов, преобладают штаммы вируса КЭ сибирского генотипа, гетеро-логичного вакцинным штаммам, так и в Европе и на Дальнем Востоке, где для иммунизации населения используются в основном вакцины из штаммов, гомологичных циркулирующему генотипу вируса.

Ряд авторов поднимают вопрос о том, что существующие вакцины КЭ являются гетерологичны-ми по генотипу штамма вируса КЭ, применяемого в производстве вакцин, по отношению к циркулирующим штаммам КЭ в природных очагах и высказывают противоречивые мнения по поводу эффективности современных вакцин КЭ для профилактики инфекции, особенно в тех случаях, когда причиной инфекции может быть вирус КЭ сибирского генотипа [16, 20, 21, 23].

Следовательно, проблема генетической гетеро-логичности вакцинных штаммов вируса КЭ по отношению к штаммам, циркулирующим в последние годы в природе, требует дополнительного изучения.

Цель работы - изучение серологической характеристики иммунного ответа у мышей линии BALB/c, иммунизированных против штаммов вируса КЭ трех генотипов.

Материалы и методы

Вакцины КЭ. Для иммунизации животных использовали по две серии каждой вакцины против КЭ, поступившие на сертификационный контроль в Центр экспертизы и контроля ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» в 2010 - 2011 годах и по качеству соответствовавшие требованиям нормативной документации (НД) на эти препараты: ПИПВЭ-Москва, ЭнцеВир, ФСМЕ-Иммун, Энцепур Взрослый. Характеристика вакцин против КЭ по средним показателям результатов многолетнего контроля качества серий в соответствии с требованиями НД дана в таблице 1.

Вакцины (каждую серию препарата - отдельно) вводили животным неразведенную (н/р) и в следующих разведениях: 1:5; 1:10; 1:25. В итоге для каждой серии вакцин на каждое разведение были сформированы группы по 10 животных, всего в опыте использовали 320 особей.

Штаммы вируса КЭ и антигены для реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В экспериментах использовали инактивированные антигены четырех штаммов вируса КЭ трех генотипов. Характеристика штаммов представлена в таблице 2.

Таблица 1.

Характеристика вакцин против КЭ отечественного и зарубежного производства, применяемых в России для вакцинации населения

Название препарата ПИПВЭ-Москва Культуральная инактивированная очищенная концентрированная сухая вакцина клещевого энцефалита ЭнцеВир Культуральная инактивированная очищенная концентрированная сорбированная вакцина клещевого энцефалита ФСМЕ-Иммун Культуральная инактивированная очищенная концентрированная с адъювантом вакцина клещевого энцефалита Энцепур взрослый Культуральная инактивированная очищенная цельновирионная, сорбированная вакцина клещевого энцефалита

Учреждение-изготовитель ФГУП «Предприятие ИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАН,Россия НПО «Вирион» -филиал ФГУП «Микроген» Минздрава России Компания «Бакстер-вакцины», Австрия - США Компания «Новартис Вакцины», Германия

Штамм вируса КЭ, генотип Софьин -дальневосточный генотип № 205 -дальневосточный генотип Нейдорфл -европейский генотип К-23 - европейский генотип

Показатели качества в соответствии с требованиями действующей НД на вакцины против КЭ

Антиген ВКЭ (вирус клещевого энцефалита), активный компонент Титр в ИФА не менее 1:1281 Титр в ИФА не менее 1:1281 2,38 мкг/0,5 мл 1,5 мкг/0,5 мл

Альбумин человека -стабилизатор (мг/0,5 мл) 0,20 - 0,30 0,5 0,5 Не применяется в производстве вакцины

Алюминия гидроксид -адъювант (мг/0,5мл) 0,27 - 0,53 0,30 - 0,50 1,00 1,00

Формальдегид -инактиватор (менее 20 мкг/мл) < 20,0 мкг/мл < 20 мкг/мл < 20 мкг/мл < 20 мкг/мл

Сахароза стабилизатор (мг/0,5 мл) 37,0 - 38,0 20 - 30 20 20 - 30

БСА (бычий сывороточный альбумин) (мкг/0,5 мл) < 0,5 Не применяется в производстве вакцины Не применяется в производстве вакцины Не применяется в производстве вакцины

Белок куриного эмбриона (мкг/0,5 мл) Не определяется в готовой форме вакцины < 0,5 Не определяется в готовой форме вакцины Не определяется в готовой форме вакцины

Протамин-сульфат (мкг/0,5 мл) < 5,0 < 10,0 Не определяется в готовой форме вакцины Не применяется в производстве вакцины

Специфическая активность (иммуногенность) МИД50: от 0,001 до 0,017 мл) 0,006 ± 0,001 0,005 ± 0,01 0,003 ± 0,001 0,01 ± 0,02

Примечание:

'Количественное определение вакцинного антигена вируса КЭ (в мкг/0,5 мл) предусмотрено действующей НД (регламентом производства) на зарубежные вакцины и указывается в сертификатах на выпускаемые серии.

2МИД5о0 - минимальная иммунизирующая доза вакцины, вычисляемая по соотношению объема дозы (0,5 мл), введенной мышам (по регламентированной схеме иммунизации) к ПР50 (протективное разведение вакцины, защищающее 50% иммунизированных животных от летальной дозы тест-штамма вируса КЭ; расчет ПР0 проводится по методу Рида и Менча). Чем выше значение показателя МИД0 тем меньше иммуногенная активность серии вакцины.

Антигены из штаммов вируса КЭ трех генотипов для РТГА были получены из лаборатории арбовиру-сов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова.

Антигены для РТГА получали методом бо-ратно-солевой экстракции, инактивировали бетапропиолактоном, очищали фреоном-113 по стандартной методике [17] из мозговых су-

спензий инфицированных вирусом КЭ штаммов разных генотипов нелинейных белых мышей массой 7 - 8 г. После получения и контроля инактивации вируса в лаборатории арбовиру-сов Института полиомиелита инактивированные антигены для РТГА были переданы в лабораторию вирусных вакцин Научного центра экспертизы средств медицинского применения.

Таблица 2.

Использованные в работе штаммы вируса КЭ

Вирус/штамм Место и год выделения Источник выделения номер в ГенБанке Генотип

Софьин КГГ Приморский край, Россия, 1937 г. Мозг погибшего от КЭ, клонированный GU121963 Дальневосточный

Абсеттаров Ленинградская обл., 1951 г Кровь больного КЭ AF091005 Европейский

Лесопарк г. Новосибирск, 1986 г. I. persulcatus GU121966 Сибирский

ЭК-328 Эстония, 1972 г I. persulcatus DQ486861 Сибирский

Лабораторные животные. В экспериментах использовали мышей линии BALB/c массой 16 -18 г (питомник: филиал «Столбовая» Научного центра биомедицинских технологий). Животных содержали на стандартном рационе с достаточным количеством воды.

Мыши линии BALB/c - классическая модель для изучения гуморального иммунитета и защитных свойств вакцин против КЭ - обладают высоким уровнем иммунологической реактивности и высокочувствительны к заражению различными штаммами вируса КЭ.

Схемы иммунизации животных. Основная схема - № 1: животных иммунизировали двукратно, подкожно, в дозе 0,2 мл с интервалом в семь суток. Взятие (тотально и индивидуально) крови у мышей проводили на 14-е сутки после второй иммунизации. Дополнительная схема иммунизации - № 2: трехкратно, подкожно, в дозе 0,2 мл с интервалами в семь суток. Взятие (тотально и индивидуально) крови проводили через 14 суток после третьей иммунизации.

Сыворотки крови мышей получали по общепринятой методике [17, 24]. Исследовали образцы сывороток в РТГА и методом иммуноферментного анализа (ИФА). До исследования сыворотки мышей хранили при температуре -70 0С.

РТГА проводили по регламентированной методике в соответствии с Инструкцией по применению диагностикума КЭ для РТГА [24]. Каждый антиген из штаммов вируса КЭ трех генотипов использовали в РТГА в дозе 8 ГАЕ (гемагглютинирующих единиц).

ИФА. Для выявления и титрования специфических антител (иммуноглобулины - IgG) к антигенам вируса КЭ применяли коммерческий набор реагентов для ИФА - «ВектоВКЭ-IgG» (ЗАО «ВекторБест», г. Новосибирск), модифицированный специально для выявления антител к вирусу КЭ в мышиных сыворотках: античеловеческий пероксидазный конъюгат из набора реагентов был заменен на антимышиный пероксидазный конъюгат в соответствующей концентрации. В данном наборе реагентов для сорбции на планшете-иммуносорбенте используется антиген вируса КЭ из штамма № 139 дальневосточного генотипа вируса КЭ.

В качестве второго коммерческого набора реагентов для ИФА был применен набор реагентов TBE/FSME IgG-ELISA (NovaTec Immunodiagnostica

GmbH, Германия), который также предназначен для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ. Для сорбции на планшете-иммуносорбента в этом наборе используется антиген вируса КЭ европейского генотипа. Для исследования мышиных сывороток набор реагентов был нами модифицирован - античеловеческий конъюгат заменен антимышиным конъюгатом (SIGMA, США) с предварительно подобранным разведением.

Коммерческие наборы реагентов для ИФА, в которых антигены и соответствующие реагенты были бы приготовлены с использованием штамма вируса КЭ сибирского генотипа, в настоящее время отсутствуют.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, рассчитывая значение среднего геометрического титров (СГТ) каждой сыворотки в десятичных логарифмах (lg), затем - значение СГТ в lg +/- стандартное отклонение с указанием разброса от наименьшего титра к наибольшему для сывороток мышей в каждой группе. Для расчета СГТ (в lg) значения титра антител для каждой сыворотки мышей, иммунизированных двумя сериями каждой из вакцин КЭ, объединяли.

Статистическую оценку достоверности рассчитывали по формуле:

Х1 - Х2 > Т V( Syn1 + S22/n2),

где

Х1 и Х2 - среднее значение титров антигемагглюти-

нирущих антител (в lg); S - стандартное отклонение; Т - критерий Стьюдента для р = 0,05 n = n1 + n2 - 2

n - количество сывороток в каждой группе (от 12 до 16).

Кроме того, для каждого варианта вакцины КЭ рассчитывали показатели сероконверсии антител (в %) в сыворотках иммунизированных мышей. При исследовании сывороток в РТГА за положительную принимали сыворотку с титром противовирусных антител 1:20 и выше, а при анализе в ИФА - 1:100 и выше. Показатель сероконверсии в %: отношение количества сывороток с активностью 1:20 и выше (РТГА) или 1:100 и выше (ИФА) к общему количеству сывороток в группах иммунизированных мышей.

Достоверность различий определяли с помощью точного критерия Фишера [30]. Результаты и обсуждение

I. Определение в РТГА среднего геометрического титров (в ^) антител и показателей сероконверсии к антигенам четырех штаммов различных генотипов вируса КЭ в сыворотках мышей BALB/с, иммунизированных различными вакцинами против КЭ Мышей линии BALB/c двукратно или трехкратно иммунизировали (по две серии) вакцинами против КЭ разных производителей по схемам, приведенным в разделе «Материалы и методы». Для иммунизации использовали вакцины без разведения и в разведениях 1:5, 1:10 и 1:25. Через две недели после последней иммунизации у животных брали кровь и сыворотку крови каждого животного исследовали в РТГА. Используя антигены для РТГА вируса КЭ трех генотипов (штамм Софьин - генотип 1; штамм Абсеттаров - генотип 2; штамм Лесопарк - генотип 3; штамм ЭК-328 - генотип 3), оценивали показатель сероконверсии и определяли СГТ антител к каждому из антигенов трех генотипов вируса КЭ.

При анализе результатов индивидуального исследования сывороток (320 образцов) в РТГА было установлено следующее: иммунизация животных всеми использованными нами сериями разных вакцин против КЭ в разведениях: 1:5, 1:10 и 1:25 приводила к тому, что в индивидуальных сыворотках иммунизированных мышей антитела к антигенам вируса КЭ либо отсутствовали, либо были в очень низких титрах (менее 1:20). Это было не-

приемлемо для сравнительного статистического анализа иммунного ответа в отношении антигенов различных генотипов вируса КЭ (данные не приводятся).

В дальнейшем для оценки иммунного ответа использовали только результаты исследования в РТГА сывороток мышей, иммунизированных вакцинными препаратами без предварительного разведения, - всего около 60 образцов. Полученные данные представлены в таблицах 3 и 4.

Было показано, что трехкратная иммунизация всеми использованными вакцинами против КЭ по уровню сероконверсии и значениям среднего геометрического титров антител была более эффективна, чем двукратная иммунизация.

Статистически достоверное повышение показателя сероконверсии (р < 0,05) наблюдали при трехкратной иммунизации:

ЭнцеВир - против антигенов всех генотипов.

ФСМЕ-Иммун - против антигенов штаммов сибирского генотипа.

ПИПВЭ-Москва - против гомологичного вакцине антигена штамма Софьин и против антигенов штаммов сибирского генотипа.

Энцепур - только против антигена из штамма Абсеттаров.

СГТ противовирусных антител при трехкратной иммунизации возрастало во всех случаях, но прирост был статистически недостоверным из-за достаточно большого разброса внутри каждой из групп мышей.

При двукратной или трехкратной иммунизации

Таблица 3.

Титр антител

Штаммы ВКЭ, использованные для приготовления антигенов для РТГА

Софьин -дальневосточный генотип Абсеттаров -европейский генотип Лесопарк -сибирский генотип Эк-328 -сибирский генотип

Наименование вакцины и генотип производственного штамма вируса КЭ СГТ (в lg) антител -антигемаг-глютининов Серокон-версия СГТ (в lg) антител -антигемаг-глютининов Серокон-версия СГТ (в lg) антител -антигемаг-глютининов Серокон-версия СГТ (в lg) антител -антигемаг-глютининов Серокон-версия

>S .fl I т о с ЭнцеВир 1,9 ± 0,23 (1,7 - 2,1) 100% 14/14 1,7 ± 0,27 (1,43 - 1,9) 100% 14/14 1,0 ± 0,59 (0 - 1,59) 77% 10/13 0,8 ± 0,68 (0 - 1,48) 62% 8/13

о Ь о 5 СО X ф ф .й ПИПВЭ-Москва 0,5 ± 0,77 (0 - 1,27) 36% 6/17 0,7 ± 0,8 (0 - 1,5) 48% 8/17 0,4 ± 0,65 (0 - 1,0) 25% 4/16 0,6 ± 0,78 (0 - 1,38) 41% 7/17

о ф ФСМЕ-Иммун 1,2 ± 0,92 (0 - 2,1) 66% 10/15 1,2 ± 0,94 (0 - 2,1) 66% 10/15 1,1 ± 1,0 (0 - 2,1) 60% 9/15 1,2 ± 0,95 (0 - 2,1) 66% 10/15

о CL ш ш Энцепур Врослый 0 0% 0,6 ± 0,71 (0 -1,3) 42% 5/12 0,4 ± 0,64 (0 - 1,04) 33% 4/12 0,1 ± 0,38 (0 - 0,48) 8% 1/12

Примечание: В скобках указаны максимальные и минимальные значения титров антител в lg.

Таблица 4.

Титр антител

Штаммы ВКЭ, использованные для приготовления антигенов для РТГА

Софьин - Абсеттаров - Лесопарк - ЭК-328 -

дальневосточный генотип европейский генотип сибирский генотип сибирский генотип

Наименование вакцины и генотип производственного штамма вируса КЭ СГТ (в lg) антител -антигемагглютининов Серокон-версия СГТ (в lg) антител -антигемагглютининов Серокон-версия СГТ (в lg) антител -антигемаг-глютининов Серокон-версия СГТ (в lg) Антител -антигемагглютининов Серокон-версия

X ЭнцеВир 2,0 ± 0,39 100% 2,1 ± 0,33 100% 1,6 ± 0,49 94% 1,6 ± 0,47 94%

h- о S >s (1,71 - 2,39) 16/16 (1,7 - 2,43) 16/16 (0 - 2,1) 15/16 (0 - 2,0) 15/16

.а сс ПИПВЭ-Москва 1,6 ± 0,7 (0 - 2,3) 87% 14/12 1,4 ± 0,7 (0 - 2,1) 82% 13/16 1,4 ± 0,6 (0 - 2,0) 87% 14/16 1,5 ± 0,64 (0 - 2,14) 87% 14/16

s ^ о ф ФСМЕ-Иммун 1,9 ± 0,7 (0 - 2,6) 91% 11/12 1,8 ± 0,65 (0 - 2,45) 91% 11/12 1,9 ± 0,4 (1,5 - 2,3) 100% 12/12 1,8 ± 0,4 (1,4 - 2,2) 100% 12/12

о ср ш ш Энцепур Взрослый 0,4 ± 0,6 31% 1,2 ± 0,6 81% 0,9 ± 0,7 62% 0,8 ± 0,65 62%

(0 - 1,0) 5/16 (0 - 1,8) 13/16 (0 - 1,6) 10/16 (0 - 1,45) 10/16

Примечание: В скобках указаны максимальные и минимальные значения титров антител в 1д.

вакцинами ПИПВЭ-Москва и ФСМЕ-Иммун достоверных отличий по уровню сероконверсии и СГТ в РТГА против всех использованных антигенов выявлено не было. Уровень сероконверсии сывороток мышей, двукратно иммунизированных вакциной Эн-цеВир при использовании в РТГА антигена штамма ЭК-328, был достоверно ниже (р < 0,05), чем при использовании антигенов других штаммов. При трехкратной иммунизации таких разтличий не наблюдали.

Вакцина Энцепур как после двукратного, так и после трехкратного введения по уровню серо-конверсии индуцировала антигемагглютинины достоверно в более высоких титрах против антигена гомологичного штамма Абсеттаров (р < 0,05), чем против антигена дальневосточного штамма Софьин и антигенов двух штаммов сибирского генотипа.

Уровни сероконверсии против антигена дальневосточного штамма Софьин после трехкратной иммунизации вакцинами ЭнцеВир, ПИПВЭ-Москва и ФСМЕ-Иммун были примерно равны между собой и достоверно выше, чем при иммунизации вакциной Энцепур (р < 0,05).

После двукратной иммунизации лучшие показатели - по сравнению со всеми другими вакцинами - были отмечены после использования вакцины ЭнцеВир (р < 0,05). Уровень сероконверсии против антигена дальневосточного штамма после двукратной иммунизации вакцинами ПИПВЭ-Мо-сква и ФСМЕ-Иммун был также достоверно выше по сравнению с соответствующим показателем для вакцины Энцепур (Р < 0,05). Обращает на себя внимание тот факт, что после трехкратной иммунизации вакциной Энцепур только треть животных имела в сыворотках антитела против антигена

дальневосточного штамма вируса КЭ, а после двукратной вообще ни у одного животного не выявляли антигемагглютининов против этого антигена.

Показатели сероконверсии против штамма Абсеттаров европейского генотипа в группах мышей, трехкратно иммунизированных всеми вакцинами, были примерно одинаковыми, а после двукратной иммунизации вакциной ЭнцеВир - достоверно выше, чем после иммунизации остальными вакцинами (р < 0,05). Для вакцины ФСМЕ-Иммун показатель сероконверсии был достоверно выше, чем для вакцин ПИПВЭ-Москва и Энцепур (р < 0,05).

По оценке уровня сероконверсии против антигенов сибирских штаммов вируса КЭ вакцина Эн-цеВир продемонстрировала наиболее высокие (р < 0,05), а вакцина Энцепур - самые низкие (р < 0,05) результаты по этому показателю.

При анализе значений СГТ антител против штаммов КЭ трех генотипов в сыворотках мышей, иммунизированных вакцинами КЭ, видно, что наиболее высокий титр в РТГА наблюдался после иммунизации вакциной ЭнцеВир, а наименьший - после иммунизации вакциной Энцепур, однако из-за большого разброса значений титров внутри групп различия были статистически недостоверны.

II. Определение в ИФА среднего геометрического титров антител и показателей сероконверсии к двум генотипам вируса КЭ в сыворотках мышей, иммунизированных четырьмя различными вакцинами против КЭ

Известно, что метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью - он выявляет как нейтрализующие, так и ненейтрализующие ан-

Таблица 5.

Сравнительное изучение иммунного ответа у мышей после иммунизации различными вакцинами против КЭ методом ИФА с использованием модифицированного набора реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ в сыворотках крови мышей «ВектоВКЭ-IgG» производства ЗАО «Вектор-Бест», Россия

Наименование вакцин и генотип производственного штамма вируса КЭ ЭнцеВир -дальневосточный генотип ПИПВЭ-Москва -дальневосточный генотип ФСМЕ-Иммун -европейский генотип Энцепур -европейский генотип

Схемы иммунизации мышей BALB/с 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема

СГТ

Сероконверсия 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100%

Примечание: В скобках указаны максимальные и минимальные значения титров антител в lg.

Таблица 6.

Сравнительное изучение иммунного ответа у мышей после иммунизации различными вакцинами против КЭ методом ИФА с использованием набора реагентов TBE/FSME IgG-ELISA (модифицированный) для выявления специфических антител класса G производства NovaTec Immundiagnostica GmbH, Германия

наименование вакцин и генотип производственного штамма вируса КЭ ЭнцеВир -дальневосточный генотип ПИПВЭ-Москва -дальневосточный генотип фСМЕ-Иммун -европейский генотип Энцепур -европейский генотип

Схемы иммунизации 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема 1-я схема 2-я схема

СГТ

Сероконверсия 100% 100% 90% 100% 100% 100% 100% 100%

Примечание: В скобках указаны максимальные и минимальные значения титров антител в lg.

титела. Это свойство определяется наличием в составе наборов реагентов высокоочищенных, специфичных моноклональных антител и конъюгатов, в также особенностями механизма прохождения иммунохимических реакций этих реагентов с испытуемыми антителами.

При исследовании сывороток мышей, иммунизированных различными вакцинами против КЭ, определяли два показателя: среднее геометрическое титров антител ^ в ^ общий уровень серо-конверсии (процент сывороток с титром антител от 1:100 и выше) (табл. 5 и 6).

Было установлено, что при двукратной и трехкратной иммунизациях мышей показатель общей сероконверсии составил 100% для всех сывороток мышей, иммунизированных разными вакцинами; через две недели после последней иммунизации титр антител ^ составлял 1:100 - 1:1000 и выше при использовании набора реагентов для ИФА «ВектоВКЭ-^» на основе дальневосточного штамма вируса КЭ.

СГТ антител с использованием наборов реагентов для ИФА отечественного и зарубежного производства было достоверно выше в сыворотках мышей после трехкратной иммунизации, чем после двукратной.

СГТ антител в сыворотках мышей, привитых вакциной ЭнцеВир, было достоверно выше, чем при иммунизации вакцинами ПИПВЭ-Москва,

ФСМЕ-Иммун и Энцепур. Достоверных различий СГТ антител при двукратной иммунизации (схема № 1) между ПИПВЭ-Москва, ФСМЕ-Иммун и Энцепур выявлено не было. При трехкратной иммунизации (схема № 2) титр антител был достоверно выше после использования вакцин ПИПВЭ-Москва и ФСМЕ-Иммун, чем после использования вакцины Энцепур.

В наборе реагентов для ИФА зарубежного производства достоверных различий в СГТ антител при двукратной иммунизации между вакцинами против КЭ выявлено не было, но при трехкратной иммунизации титры антител были достоверно выше в сыворотках мышей, иммунизированных вакциной ЭнцеВир, чем в случае иммунизации вакцинами ПИПВЭ-Москва, ФСМЕ-Иммун и Энцепур.

Выводы

1. При экспериментальном изучении гуморального иммунного ответа у мышей линии BALB/с, иммунизированных различными по генотипу производственного штамма вируса КЭ вакцинами против антигенов трех генотипов вируса КЭ, установлено наличие перекрестного иммунного ответа ко всем трем генотипам.

2. Уровень иммунного перекрестного ответа, по результатам РТГА и ИФА, зависит от кратности иммунизации животных и, по-видимому, от концентрации антигена вируса КЭ в сериях вакцин (см.

раздел «Специфическая активность...» в табл. 1). отечественного производства и более высокие и

Вакцина Энцепур, с наименьшей концентрацией сходные средние значения - в наборе реагентов

специфического антигена (1,5 мкг/0,5 мл), инду- зарубежного производства. цировала у мышей более слабый иммунный от- 4. Показатель общей сероконверсии для всех ис-

вет как к гомологичному, так и к гетерологичным следованных в ИФА сывороток достигал 100%. антигенам. 5. Исследования иммунного ответа у мышей, им-

3. При исследовании в ИФА сывороток крови мы- мунизированных различными вакцинами против

шей линии BALB/с, иммунизированных различ- КЭ, в отношении штаммов вируса КЭ трех гено-

ными вакцинами против КЭ, выявлено различие типов будут продолжены с целью определения

показателей СГТ антител в зависимости от гено- вируснейтрализующей активности сывороток

типической характеристики антигена в наборе крови иммунизированных животных и защитных

реагентов, использованного для ИФА. СГТ анти- свойств вакцин против вирулентных штаммов

тел имело сходные показатели для всех исследо- вируса КЭ трех генотипов. ванных сывороток в наборе реагентов для ИФА

Литература

1. Воробьева М.С. Современная стратегия вакцинопрофилактики клещевого энцефалита. Медицинская вирусология; 2009; 26: 73, 74.

2. Воробьева М.С. Современное состояние вакцинопрофилактики клещевого энцефалита. В кн.: Клещевой энцефалит. Владивосток: ГУП «Полиграф-комбинат»; 2002: 166 - 169.

3. Воробьева М.С. Вакцины для специфической профилактики клещевого энцефалита. Дезинфекционное дело. 2007; 1: 45 - 47.

4. Злобин В.И. Современные проблемы эпидемиологии и профилактики клещевого энцефалита в Российской Федерации. Биопрепараты. 2004; 2 (14): 4 - 7.

5. Злобин В.И., Мамаев Л.В., Джиоев Ю.П. Козлова И.В. Генетические типы вируса клещевого энцефалита. Журнал инфекц. патол. Иркутск) 1996; 3: (4): 13 - 17.

6. Андаев Е.И., Борисова Т.И., Трухина А.Г., Сидорова Е.А., Карань Л.С., Погодина В.В. и др. Структура популяции вируса клещевого энцефалита в Забайкальском крае. Молекулярная диагностика-2010. Москва; 2010; 2: 206 - 208.

7. Андаев Е.И., Трухина А.Г., Карань Л.С., Погодина В.В., Гамова Е.Г., Бочкова Н.Г. и др. Клещевой энцефалит в Читинской области и этиология очаговых форм с летальным исходом. Бюллетень СО РАМН. 2007; 4 (126): 60 - 65.

8. Верхозина М.М., Козлова И.В., Дорощенко Е.К., Лисак О.В., Демина Т.В., Джиоев Ю.П. Биологические свойства и генетическая структура оригинальной группы штаммов вируса клещевого энцефалита, изолированных на территории Предбайкалья и Забайкалья. Журнал инфекционной патологии. (Иркутск). 2009; 16 (3): 83 - 84.

9. Козлова И.В., Верхозина М.М., Демина Т.В., Джиоев Ю.П., Ткачев С.Е., Карань Л.С. Генетические и биологические свойства оригинальной группы штаммов вируса клещевого энцефалита, циркулирующей в Восточной Сибири. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2012; 3 (64): 14 - 25.

10. Колясникова Н.М. Мониторинг структуры популяции вируса клещевого энцефалита в Уральском, Западно-Сибирском и Северо-Западном регионах России (вирусологические и молекулярно-биологические исследования): Дис. ... канд. мед. наук. Москва; 2008.

11. Погодина В.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Герасимов С.Г., Левина Л.С., Бочкова Н.Г., Андаев Е.И. Политиповые штаммы в генофонде вируса клещевого энцефалита. Вопросы вирусологии. 2012; 3: 30 - 36.

12. Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Ладыженская И.П. Вакцины, иммуноглобулины и тест-системы для профилактики и диагностики клещевого энцефалита. Вопросы вирусологии. 2007; 52: 30 - 36.

13. Горбунов М.А. Результаты клинического исследования вакцины против клещевого энцефалита ЭнцеВир. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2002; 5: 49.

14. Павлова Л.И., Горбунов М.А., Воробьева М.С. Изучение культуральной концентрированной инактивированной вакцины против КЭ при иммунизации детей и подростков. Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1999; 6: 50 - 54.

15. Павлова Л.И., Ставицкая Н.Х., Горбунов М.А. Характеристика отечественных концентрированных вакцин против КЭ при иммунизации детей и подростков. Биопрепараты. 2003; 1: 24 - 28.

16. Романенко В.В., Анкудинова А.В., Килячина А.С. Эффективность программы массовой вакцинопрофилактики клещевого энцефалита в Свердловской области. Вестник УГМА. 2010; 21: 121 - 132.

17. Clarke D.H., Сasals J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination - inhibition with arthropod-borne viruses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1958; 7 (5): 561 - 573.

18. Heinz F.X. Field effectiveness of vaccination against tick-borne encephalitis. Vaccine. 2007; 25: 7559 - 7567.

19. Klockmann U., Krivanec K., Stephenson J.R., Hilfenhaus J. Protection against European isolates of tick-borne encephalitis virus after vaccination with new tick-borne encephalitis vaccine. Vaccine. 1991; 9: 210 - 212.

20. Kunz C. TBE vaccination and Austrian experience. Vaccine. 2003; 21: 50 - 55.

21. Погодина В.В., Левина Л.С., Скрынник С.М., Травина Н.С., Карань Л.С., Колясникова Н.М. Клещевой энцефалит с молниеносным течением и летальным исходом у многократно вакцинированного пациента. Вопросы вирусологии. 2013; 2: 33 - 37.

22. Andersson CR., Vene S., Insulander M., Lindquist L., Lundkvist A., Gunther G. Vaccine failures after active immunization against tick-borne encephalitis. Vaccine. 2010; 28: 2827 - 2831.

23. Терехина Л.Л., Рогова Ю.В., Романова Л.Ю. Протективные свойства вакцинных препаратов против клещевого энцефалита для защиты от разных подтипов вируса клещевого энцефалита. В кн.: Материалы IV Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. Москва; 2012: 373, 374.

24. Инструкция по применению набора реагентов «Диагностикум клещевого энцефалита сухой для РТГА, РСК, РРГ» (утверждена Приказом Росздравнад-зора от 03.08.2011 г. № 4750-пр/11).

25. Морозова О.В., Бахвалова В.Н., Потапова О.Ф. Гришечкин А.Е., Исаева Е.И. Анализ соответствия четырех вакцинных штаммов современным изо-лятам вируса клещевого энцефалита сибирского типа. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2012; 5 (66): 3 - 10.

26. Хайнц Ф.Х. Экспертное заключение относительно вариабельности вируса клещевого энцефалита и ожидаемой перекрестной защиты против различных подтипов вируса КЭ после иммунизации вакциной ФСМЕ-Иммун Джуниор 0,25 мл.

27. Holzmann H., Kundi M., Stiasny K., Clement J., McKenna P, Kunz C., Heinz F.X. Correlation between ELISA, hemagglutination inhibition, аnd neutralization tests after vaccination against tick-borne encephalitis. Journal оf Medical Virology. 1996; 48: 102 - 107.

28. Reed L., Mench H.A. A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am. J. Hyg. 1938; 27: 493 - 497.

29. Orlinger K.K., Hofmeister Y., Fritz R., Holzer G.W., Falkner F.G., Unger B. et al. A tick-borne encephalitis vaccine based on the European prototype strain induces broadly reactive cross-neutralizing antibodies in humans. Journal of infectious Disease. 2011; 203: 1556 - 1564.

30. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Москва: Практика; 1999: 60, 61.

References

1. Vorobyeva M.S. The current strategy of vaccinal encephalitis. Medical virology; 2009; 26: 73, 74 (in Russian).

2. Vorobyeva M.S. The current state of vaccine prevention of tick-borne encephalitis. In: Tick-borne encephalitis. Vladivostok: SUE «Polygraph»; 2002: 166 -169 (in Russian).

3. Vorobyeva M.S. Vaccine for specific prophylactic of tick-borne encephalitis. Disinfection deal. 2007; 1: 45 - 47 (in Russian).

4. Zlobin V.I. Modern problems of epidemiology and prevention of tick-borne encephalitis in the Russian Federation. Biopreparaty. 2004; 2 (14): 4 - 7 (in Russian).

5.

6.

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18. 19.

20. 21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

28. 29.

30.

Zlobin V.I., Mamaev L.V., Dzhioev Yu.P. Journal of infectious diseases. Irkutsk: 1996; 3: (4): 13 - 17 (in Russian).

Andaev E.I., Borisova T.I., Trukhina A.G., Sidorova E.A., Karan L.S., Pogodina V.V. Population structure borne encephalitis virus in the Trans-Baikal region. Molecular Diagnostics - 2010. Moscow. 2010. 2: 206 - 208 (in Russian).

Andaev E.I., Trukhina A.G., Karan L.S., Pogodina V.V., Gamova E.G., Bochkova N.G. et al. Tick-borne encephalitis it Chita region and etiology of local forms with lethal outcome. Bulletin SB RAMS. 2007; 4 (126): 60 - 65 (in Russian).

Verkhozina M.M., Kozlova I.V., Doroshchenko E.K., Lisak O.V., Demina T.V., Dzhioev Yu.P Biological properties and genetic structure of the original group of tick-borne encephalitis virus strains isolated in the territory of Cis-Baikal and Transbaikalia. Journal of infectious diseases. Irkutsk. 2009; 16 (3): 83 - 84 (in Russian).

Kozlova I.V., Verhozina M.M., Demina T.V., Dzhioev Yu.P, Tkachev S.E., Karan L.S. Genetic and biological properties of the original group of tick-borne encephalitis virus strains circulating in Eastern Siberia. Epidemiology & Vaccinal Prevention. 2012; 3 (64): 14 - 25 (in Russian).

Kolyasnikova N.M. Monitoring of the population structure of the virus of tick-borne encephalitis in the Urals, Western Siberia and North-West regions of Russia (virological and molecular biological studies): Doctorate of Medical Sciences. Moscow; 2008 (in Russian).

Pogodina V.V., Karan L.S., Kolyasnikova N.M.,Gerasimov S.G., Levina L.S., Bochkova N.G. et al. Polytypic strains in the genofund of tick-borne encephalitis virus. Voprosy virology. 2012; 3: 30 - 36 (in Russian).

Vorobyeva M.S., Rasshchepkina M.N., Ladyzhenskaya L.P Vaccines, immunoglobulins, and test systems for the prevention and diagnosis of tick-borne encephalitis. Voprosy virusologii. 2007; 52: 30 - 36 (in Russian).

Gorbunov M.A. A clinical study of a vaccine against tick-borne encephalitis EntseVir. Epidemiology & Vaccinal Prevention. 2002; 5: 49 (in Russian). Pavlova L.I., Gorbunov M.A., Vorobyova M.S. A study of the culture of concentrated inactivated vaccine against TBE in immunization of children and adolescents. Microbiology, epidemiology and immunology. 1999; 6: 50 - 54 (in Russian).

Pavlova L.I., Stavitskaya N.H., Gorbunov M.A. Characteristics of domestic concentrated TBE vaccines in immunization of children and adolescents. Biopreparaty. 2003; 1: 24 - 28 (in Russian).

Romanenko V.V., Ankudinova A.V., Kilyachina A.S. The effectiveness of a mass vaccinal encephalitis in the Sverdlovsk region. Herald UGMA. 2010; 21: 121 - 132 (in Russian).

Clarke D.H., Casals J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination - inhibition with arthropod-borne viruses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1958; 7 (5): 561 - 573.

Heinz F.X. Field effectiveness of vaccination against tick-borne encephalitis. Vaccine. 2007; 25: 7559 - 7567.

Klockmann U., Krivanec K., Stephenson J.R., Hilfenhaus J. Protection against European isolates of tick-borne encephalitis virus after vaccination with new

tick-borne encephalitis vaccine. Vaccine. 1991; 9: 210 - 212.

Kunz C. TBE vaccination and Austrian experience. Vaccine. 2003; 21: 50 - 55.

Pogodina V.V., Levina L.S., Skrynnik S.M., Travina N.S., Karan L.S., Kolyasnikova N.M. Tick-borne Encephalitis with fulminant course and lethal outcome in patients after plural vaccination. Voprosy virusologii. 2013; 2: 33 - 37 (in Russian).

Andersson CR., Vene S., Insulander M. Lindquist L., Lundkvist A., Gunther G. Vaccine failures after active immunization against tick-borne encephalitis. Vaccine. 2010; 28: 2827 - 2831.

Terekhina L.L., Rogova J.V., Romanova L.Yu. Protective properties of vaccines against tick-borne encephalitis virus to protect against different subtypes of the virus of tick-borne encephalitis. In: Annual Proceedings of the IV All-Russian congress on infectious diseases. Moscow; 2012: 373, 374 (in Russian). Instructions for using the kit reagents «Diagnostikum encephalitis dry for HI, CFT, RWG» (approved by the Order of Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance, N 4750-pr/11 of 03.08.2011) (in Russian).

Morozova O.V., Bakhvalova V.N., Potapova O.F., Grishechkin A.E., Isaeva E.I. Analysis of adequacy of the four vaccines with modern tick-borne encephalitis virus isolates of the Siberian type. Epidemiology & Vaccinal Prevention. 2012; 5 (66): 3 - 10 (in Russian).

Heinz F.H. Expert advice on the variability of tick-borne encephalitis virus and the expected cross-protection against different subtypes of TBE virus after immunization with FSME-immune Junior 0.25 ml.

Holzmann H., Kundi M., Stiasny K., Clement J., McKenna P., Kunz C. et al. Correlation between ELISA, hemagglutination inhibition, and neutralization tests

after vaccination against tick-borne encephalitis. Journal of Medical Virology. 1996; 48: 102 - 107.

Reed L., Mench H.A. A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am. J. Hyg. 1938; 27: 493 - 497.

Orlinger K.K., Hofmeister Y., Fritz R., Holzer G.W., Falkner F.G., Unger B. et al. A tick-borne encephalitis vaccine based on the European prototype strain induces broadly reactive cross-neutralizing antibodies in humans. Journal of infectious Disease. 2011; 203: 1556 - 1564. Glantz S. Biomedical Statistics. Moscow; 1999: 60, 61.

Вакцины против ветряной оспы и герпеса зостер

Varicella and herpes zoster vaccines: WHO position paper, June 2014

Всемирной организацией здравоохранения издан документ (Вакцины против ветряной оспы и опоясывающего лишая: позиция ВОЗ - Varicella and herpes zoster vaccines: WHO position paper), определяющий позицию ВОЗ по вакцинам против ветряной оспы и герпес-зостерной инфекции. Данный документ заменил предыдущий, изданный в 1998 году. Он включает разделы: «Введение», «Эпидемиология», «Возбудитель», «Клиника», «Диагностика», «Лечение», «Вакцины», «Иммуноген-ность и эффективность вакцин», «Продолжительность иммунитета», «Безопасность», «Совместное применение с другими вакцинами», «Использование у иммунокомпроментированных пациентов и в группах риска», «Влияние на эпидемический процесс», «Экономическая рентабельность», «Позиция ВОЗ».

Основные положения документа были обсуждены и одобрены на совещании Стратегической кон-

сультативной группы экспертов по иммунизации (SAGE, апрель 2014 г.), которое констатировало, что в настоящее время в мире ежегодно регистрируется 4,2 млн случаев тяжелых осложнений ветряной оспы, требующих госпитализации (мозжечковая атаксия - 1 на 4000, энцефалит - 1 на 33 000 -50 000 случаев заболевания), 4200 из которых имеют летальный исход. Показатель смертности в довакцинальный период в развитых странах составлял 3 на 100 тыс. населения.

Частота герпетической инфекции и тяжесть заболевания увеличиваются по достижении 50-летнего возраста. По данным наблюдений, проведенных в Канаде, Израиле, Японии, на Тайване и в США, у людей в возрасте 65 лет заболеваемость составляет 8 - 11 на 1000 населения в год.

Для производства вакцин против ветряной оспы (ВВО) и опоясывающего лишая используют аттенуи-рованный штамм Ока. В настоящее время лицензи-