НОВАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА КОЖИ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ
NOVEL COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN QUALITY, AND METHOD OF COMPOSITION OBTAINING

Настоящее изобретение относится к новой композиции для улучшения качества кожи, предпочтительно путем воздействия на функционирование кожного барьера или на барьер кожного увлажнения, и к способу получения композиции.
Главные функции кожи заключаются в обеспечении механической защиты (от трения и нагрузки), для обеспечения химического барьера (ограничение проникновения чужеродного вещества, предотвращение потери воды или эндогенной жидкости, поддерживание постоянной температуры), для защиты против ультрафиолетового излучения и для защиты против патогенной инвазии (благодаря иммунным клеткам, расположенным в коже).
Первичный слой, который обеспечивает защиту, представляет роговой слой (SC). Этот слой предотвращает избыточную потерю воды из тела, поскольку слишком большая потеря воды является признаком дегидратации кожи.
Целью косметической и дерматологической индустрии является предотвращение дегидратации кожи, появления сухой кожи путем местного применения кремов и лосьонов, содержащих ингредиенты, которые улучшают состояние кожи. Эти эффекты, однако, представляют собой только локальные эффекты, т.е. приносят пользу только той части кожи, где применяется лосьон.
Однако тело обеспечивает кожу уникальной системой доставки, т.е. кровью и интерстициальными жидкостями, и в результате любые питательные вещества (или их метаболиты), которые потреблялись перорально, имеют возможность посредством этого пути доставки повлиять на кожу всего тела.
Таким образом, использование ингредиентов, способных обеспечить защиту кожи, предпочтительно, в композициях, которые вводятся перорально, полезно для улучшения состояния кожи всего тела.
Важность полиненасыщенных жирных кислот для функционирования кожного барьера была известна в течение десятилетий. Гамма-линоленовая кислота (GLA) может действовать на нескольких различных уровнях для улучшения функционирования кожного барьера:
- чтобы позволить осуществление нормальной дифференцировки кератиноцитов, GLA при наличии противовоспалительной активности может уменьшать гиперпролиферацию кератиноцитов, которая осуществляется при аномальных состояниях барьера;
- в качестве лиганда для рецептора, активируемого пероксисомальным пролифератором (PPAR), она может влиять на генную транскрипцию кератиноцитов и индуцировать их дифференцировку, которая непосредственно приводит к синтезу керамидов.
Было показано, что полифенолы, такие как катехины, улучшают функционирование барьера рогового слоя (SC) (Heinrich U et al., Long term ingestion of high flavanol cocoa provides photoprotection against UV-induced erythema and improves skin condition in women. J Nutr 136: 1565-9, 2006). Полифенолы зеленого чая могут влиять на клетки кожи или непосредственным образом, или, возможно, путем их превращения в короткие ароматические кислоты, которые могут затем функционировать в качестве PPAR-лигандов. Катехины обладают известным влиянием на дифференцировку кератиноцитов (Balasubramanian S et al., GTP stimulates a Ras, MEKKl, MEK3 & p38 cascade to increase activator protein 1 factor dependent involucrin gene expression in normal human keratinocytes. JBC. 2002; 277: 1828-1836; Eckert RL, Crish JF, Efimova T, Balasubramanian S. Opposing action of curcumin and green tea polyphenol in human keratinocytes. MoI Nutr Food Res. 2006 Feb;50(2): 123-9; Hsu S, Bollag WB, Lewis J et al., Green tea polyphenols induce differentiation and proliferation in epidermal keratinocytes. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Jul; 306(l):29-34, 2003).
Настоящее изобретение было получено в результате того факта, что неожиданно было обнаружено, что полиненасыщенные жирные кислоты, которые хорошо известны из области техники по их воздействию на кожу, демонстрируют увеличенную биодоступность в определенных состояниях.
Одним из аспектов изобретения является предложение новых композиций, применяемых в качестве продукта питания, напитка или дополнительной композиции для продукта питания или напитка, которые предназначены для улучшения увлажнения кожи и предотвращения дегидратации кожи.
Другой целью изобретения было предложение новой композиции, обладающей с точки зрения потребителя очень хорошим органолептическим качеством (не вяжущим, не слишком жирным, не слишком горьким) и хорошим балансом питательных веществ (т.е. низким содержанием жира <3,5% вес./вес.), причем указанная композиция также не является слишком дорогостоящей.
Другим аспектом изобретения является предложение способа получения композиций.
Настоящее изобретение относится к композиции, включающей, в качестве активного вещества, смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной полиненасыщенной жирной кислоты, отличной от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока, состоящую из полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и, причем, указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса композиции; и где указанная полиненасыщенная жирная кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной полиненасыщенной жирной кислоты.
Как хорошо понятно из области техники, термин "полиненасыщенная жирная кислота" обозначает жирные кислоты, содержащие от 1 до 26 атомов углерода, предпочтительно от 18 до 24 атомов углерода, и, более предпочтительно, 18 атомов углерода, и от 2 до 6 ненасыщенных связей, предпочтительно от 2 до 4 ненасыщенных связей и, наиболее предпочтительно, 3 ненасыщенные связи.
При использовании здесь, термин "полиненасыщенная жирная кислота" обозначает полиненасыщенные жирные кислоты, которые отличны от полиненасыщенных жирных кислот, которые обычно обнаруживаются в молоке. Выражение "полиненасыщенная жирная кислота, отличная от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока" обозначает полиненасыщенные жирные кислоты, которые могут иметь химическую структуру, отличную от структуры полиненасыщенных жирных кислот, обнаруженных в молоке, или количество которых отлично от количества кислот, обнаруженных в молоке.
Также следует понимать, что композиция по изобретению, включающая активное вещество, как определено выше, может включать полиненасыщенные жирные кислоты, которые имеют молочное происхождение вещества, причем указанное молочное вещество определяется здесь далее.
Примеры полиненасыщенных жирных кислот, выделенных из молока, представляют собой линолевую кислоту (C 18:2 ω-6), альфа-линолевую кислоту (C 18:3 ω-3) или конъюгированные линолевые кислоты (CLA). Молоко не содержит гамма-линоленовой кислоты (GLA).
Термин "молочнокислые бактерии" обозначает семейство грамм-положительных бактерий, в форме оболочек или палочек, способных ферментировать сахара в молочную кислоту.
Термин "биодоступность" обозначает способность ингредиента быть доступным в активной форме в крови, причем указанный ингредиент доступен для метаболического процесса или накопления в коже.
Термин "увеличенная биодоступность" обозначает способность улучшать биодоступность ингредиента. Она может быть измерена с помощью забора образца крови и получения дозировок ингредиента в различные моменты времени.
Термин "индивидуальная полиненасыщенная жирная кислота" обозначает полиненасыщенные жирные кислоты, которые или присутствуют в их естественной среде, или выделены из указанной среды, причем не в комбинации с элементами, подверженными воздействию их свойств.
Неожиданно было обнаружено, что полиненасыщенные жирные кислоты в комбинации с полифенолами, молочными белками и молочнокислыми бактериями демонстрируют лучшую кинетику биодоступности по сравнению с индивидуальными полиненасыщенными жирными кислотами.
Настоящее изобретение также относится к композиции, включающей в качестве активного вещества смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной гамма-линоленовой кислоты, полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и причем указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса композиции, и где указанная гамма-линоленовая кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной гамма-линоленовой кислоты.
Термин "указанная гамма-линоленовая кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной гамма-линоленовой кислоты" обозначает способность гамма-линоленовой кислоты композиции быть более доступной в активной форме в крови, чем индивидуальная гамма-линоленовая кислота. Гамма-линоленовая кислота в комбинации с полифенолами, молочными белками и молочнокислыми бактериями демонстрирует лучшую кинетику биодоступности по сравнению с индивидуальной гамма-линоленовой кислотой.
Настоящее изобретение также относится к композиции, включающей в качестве активного вещества смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной гамма-линоленовой кислоты, полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и причем указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса композиции, и где концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет примерно от 0,02% примерно до 1%, предпочтительно примерно от 0,04% примерно до 0,6%, и, более предпочтительно, примерно от 0,1% примерно до 0,2% от веса композиции, и где указанная гамма-линоленовая кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной гамма-линоленовой кислоты.
Настоящее изобретение также относится к композиции, включающей в качестве активного вещества смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной гамма-линоленовой кислоты, полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и причем указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса композиции, и где концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет примерно от 0,02% примерно до 1%, предпочтительно примерно от 0,04% примерно до 0,6%, и, более предпочтительно, примерно от 0,1% примерно до 0,2% от веса композиции, и концентрация полифенолов составляет примерно 0,13%-18,7%, предпочтительно примерно 0,15%-15%, и, более предпочтительно, примерно 0,16%-13% от общего веса активного вещества, и где указанная гамма-линоленовая кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной гамма-линоленовой кислоты.
Настоящее изобретение относится к композиции, включающей в качестве активного вещества, смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной полиненасыщенной жирной кислоты, отличной от выделенной из молока полиненасыщенной жирной кислоты, полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и причем указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса композиции, и где концентрация полифенолов составляет примерно 0,13%-18,7%, предпочтительно примерно 0,15%-15%, и, более предпочтительно, примерно 0,16%-13% от общего веса активного вещества, и где указанная полиненасыщенная жирная кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной полиненасыщенной жирной кислоты.
В преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению полиненасыщенная жирная кислота содержится, по меньшей мере, в одном из следующих растительных масел: в масле бурачника, масле примулы, масле черной смородины, масле камелии, конопляном масле, масле семени киви, льняном масле, рапсовом масле и масле микроскопических морских водорослей, или полиненасыщенную жирную кислоту получают с помощью ферментативного способа.
При использовании здесь, выражение "ферментативный способ" обозначает каталитическое действие определенных белков, которые могут химически трансформировать некоторые жирные кислоты. В другом преимущественном воплощении в активном веществе композиции по настоящему изобретению полиненасыщенную жирную кислоту выбирают из линоленовых кислот, их производных и их предшественников, и, предпочительно, полиненасыщенная жирная кислота представляет собой гамма-линоленовую кислоту.
Термин "предшественники" обозначает молекулы, которые могут производить гамма-линоленовую кислоту после определенной обработки, такой как ферментативная, химическая или физическая обработка.
Термин "производные" обозначает молекулы, которые могут быть получены с использованием гамма-линоленовой кислоты посредством ферментативной, химической или физической обработки.
В преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению полифенолы содержатся в растительном экстракте, таком как экстракт зеленого чая, экстракт семени винограда, экстракт кожицы винограда, экстракт грейпфрута, экстракт апельсина (красного), экстракт сосновой коры (пикногенол), экстракт красного вина, экстракт томата, экстракт гингко билоба, экстракт клюквы, соевый экстракт, экстракт соевых изофлавонов, экстракт черники, малины, ягода бузины, граната, яблока, сидра, какао, зеленого кофе, манго, грушевидного кактуса, черной смородины, морских водорослей, маслины, корицы, имбиря, женьшеня, алоэ вера, брокколи, гибискуса.
Более предпочтительно растительный экстракт включает, по меньшей мере, 70% полифенолов от веса растительного экстракта, предпочтительно, по меньшей мере, 80%.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению полифенолы выбирают из фенольных кислот, таких как оксикоричная кислота, оксибензойная кислота; флавоноидов, таких как флавонолы, флавоны, изофлавоны, флавононы, антоцианидины, проантоцианидины; гидролизуемых танинов, таких как галлотаннины, эллагитаннины и, предпочтительно, выбирают из катехинов чая, ресвератрола, виниферинов, кофеиновой кислоты, галловой кислоты, эллаговой кислоты, феруловой кислоты, хлорогеновой кислоты, кверцетина, кемпферола, апигенина, даидзеина, генистеина, нарингенина, гесперидина, антоцианина, катехина, эпикатехина и галлокатехина.
В другом преимущественном воплощении в активном веществе композиции полифенолы выбирают из катехинов чая.
Более предпочтительно полифенолы включают, по меньшей мере, 70% катехинов по весу от общего содержания полифенолов растительного экстракта, предпочтительно, по меньшей мере, 80% катехинов.
В другом преимущественном воплощении в активном веществе композиции, по меньшей мере, 50%, более предпочтительно, по меньшей мере, 60% катехинов чая выбирают из эпикатехина, эпигаллокатехина и эпигаллокатехин галлата.
В преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению молочные белки содержатся, по меньшей мере, в одном из следующих молочных веществ: в молоке, обезжиренном молоке, молочном порошке, в порошке обезжиренного молока, в сливках, в концентрате молочного белка, сыворотке, в концентрате сывороточного белка и в казеинате.
Выражение "молочное вещество" применяется для обозначения исходной композиции с молочной основой, которая подверглась обработке, предпочтительно обработке нагреванием. Выражение "исходная композиция с молочной основой" обозначает стартовую молочную композицию перед любой обработкой.
Молочное вещество, как правило, содержит полиненасыщенные жирные кислоты, количества которых недостаточно для придания свойств композиции. Поэтому необходимо добавить дополнительные полиненасыщенные жирные кислоты для увеличения их общего количества, причем одна из них отлична от полиненасыщенных жирных кислот, содержащихся в молочном веществе.
Выражение "концентрат молочного белка" обозначает молочный белок, полученный посредством ультрафильтрации молока или с помощью других способов, таких, при которых уменьшается содержание лактозы или соли, посредством чего увеличивается белковое содержание. Этот концентрат может содержать от 42 до 85% белков.
Выражение "концентрат сывороточного белка" обозначает сывороточный белок, полученный посредством способа, описанного выше. Этот концентрат может содержать от 35 до 89% белков.
Содержания некоторых белков других молочных веществ приведены ниже в Таблице 1.
Таблица 1Концентрации белков других молочных веществ
Молочные вещества
Концентрации белков
Цельное молоко
3,2%
Обезжиренное молоко
3,3-3,6%
Порошок цельного молока (с содержанием жира 27%)
27%
Порошок обезжиренного молока
35-37%
Сливки (40% жира)
1,85%-2,1%
Казеинат
>80%
В другом преимущественном воплощении, в активном веществе композиции по настоящему изобретению молочнокислые бактерии выбирают из, по меньшей мере, одного из следующих видов бактерий: Streptococcus thermophilics, Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus kefiranofaciens, Bifidobacterium lactis ssp. animalis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve, Lactococcus lactis ssp. cremoris, Lactococcus lactis ssp. lactis и Leuconostoc.
В предпочтительном преимущественном воплощении в активном веществе композиции по настоящему изобретению молочнокислые бактерии представляют собой бактерии Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus и Lactobacillus casei. Более предпочтительно бактерии Lactobacillus casei представляют собой штамм CNCM-1518.
Другие примеры штаммов, которые могут использоваться, представляют собой следующие штаммы: 1-2116, ATCC 53103, CRL 431 и 1-1225.
В другом предпочтительном воплощении в композиции по настоящему изобретению содержание воды составляет от 70% до 90% от веса композиции, предпочтительно 75%-85%, более предпочтительно 80%.
В преимущественном воплощении в активном веществе композиции по настоящему изобретению
- полиненасыщенные жирные кислоты составляют примерно 2,3%-1,5% от общего веса активного вещества, предпочтительно примерно 2,3%-70%, и, более предпочтительно, примерно 2,3%-65% от общего веса активного вещества;
- полифенолы составляют примерно 0,13%-18,7 от общего веса активного вещества, предпочтительно примерно 0,15%-15%, и, более предпочтительно, примерно 0,16%-13% от общего веса активного вещества;
- молочные белки составляют примерно 8%-97,6% от общего веса активного вещества, предпочтительно 15%-97,6%, и, более предпочтительно, примерно 30%-97,4% от общего веса активного вещества;
6
10
7
9
- молочнокислые бактерии представлены в активном веществе в количестве, составляющем примерно 10-10 КОЕ/мг, предпочтительно 10-10 КОЕ/мг.
В преимущественном воплощении в активном веществе композиции по настоящему изобретению,
- полиненасыщенные кислоты включают гамма-линоленовую кислоту, которая составляет примерно 0,64%-28% от общего веса активного вещества, предпочтительно примерно 1%-10%, и, более предпочтительно, примерно 2%-4% от общего веса активного вещества;
- полифенолы включают катехины чая, которые составляют примерно 0,15%-11,5% от общего веса активного вещества, предпочтительно примерно 0,5%-5%, и, более предпочтительно, примерно 1%-2% от общего веса активного вещества;
- молочные белки составляют примерно 65%-99% от общего веса активного вещества, предпочтительно 80%-97%, и, более предпочтительно, примерно 90%-95% от общего веса активного вещества;
6
10
7
9
- молочнокислые бактерии представлены в активном веществе в количестве, составляющем примерно 10-10 КОЕ/мг, предпочтительно 10-10 КОЕ/мг.
В случае использования масел с низкой концентрацией GLA (например, конопляного масла, содержащего 76,5% PUFA, включающей 2,7% GLA) и низко концентрированных растительных экстрактов (например, экстракта зеленого чая, содержащего 90% полифенолов, включающих 30% катехинов), активное вещество композиции включает:
- концентрацию полиненасыщенных жирных кислот, составляющую примерно от 14 примерно до 91,5% от общего веса активного вещества;
- концентрацию полифенолов, составляющую примерно от 0,13% примерно до 18,7% от общего веса активного вещества;
- концентрацию молочных белков, составляющую примерно от 8% примерно до 84% от общего веса активного вещества; и
6
10
7
9
- количество молочнокислых бактерий, составляющее примерно 10-10 КОЕ/мг, предпочтительно 10-10 КОЕ/мг.
В случае использования масел с высокой концентрацией GLA (например, масла бурачника, масла энотеры, включающих 10% GLA, масла черной смородины, включающего 17% GLA) и очень концентрированных растительных экстрактов (например, экстракта зеленого чая, содержащего 90% полифенолов, включающих 80% катехинов), активное вещество композиции включает:
- концентрацию полиненасыщенных жирных кислот, составляющую примерно от 2,3 примерно до 60% от общего веса активного вещества;
- концентрацию полифенолов, составляющую примерно от 0,16% примерно до 12,3% от общего веса активного вещества;
- концентрацию молочных белков, составляющую примерно от 37,6% примерно до 97,4% от общего веса активного вещества; и
6
10
7
9
- количество молочнокислых бактерий, составляющее примерно 10-10 КОЕ/мг, предпочтительно 10-10 КОЕ/мг.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению концентрация полиненасыщенных жирных кислот составляет примерно от 0,15% примерно до 16,6%, предпочтительно примерно от 0,2% примерно до 10%, и, более предпочтительно, примерно от 0,4% примерно до 5% от веса композиции.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет примерно от 0,02% примерно до 1%, предпочтительно примерно от 0,04% примерно до 0,6%, и, более предпочтительно, примерно от 0,1% примерно до 0,2% от веса композиции.
Если концентрация гамма-линоленовой кислоты ниже чем 0,02% от веса композиции, то не наблюдается никакого значительного эффекта, и если концентрация гамма-линоленовой кислоты выше чем 1% от веса композиции, то продукт не имеет требуемого органолептического качества. В другом преимущественном воплощении, в композиции по настоящему изобретению соотношение гамма-линоленовой кислоты/катехинов чая составляет примерно 2-10, предпочтительно примерно 3-5, и, более предпочтительно, примерно 3,4.
Если соотношение гамма-линоленовой кислоты/катехинов чая менее чем 2, то никакого значительного эффекта не наблюдается, и если соотношение гамма-линоленовой кислоты/катехинов чая более чем 10, то продукт не имеет требуемого органолептического качества.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению концентрация молочных белков составляет примерно от 1,5% примерно до 6% от веса композиции, предпочтительно примерно от 2,5% примерно до 5% от веса композиции.
Если концентрация молочных белков менее чем 1,5% от веса композиции, то композиция обладает плохим пищевым профилем с плохим органолептическим качеством (очень водянистая), и если концентрация молочных белков более чем 6% от веса композиции, то композиция очень жирная и слишком вяжущая.
6
10
7
9
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению количество молочнокислых бактерий составляет более чем 10, достигая 10 КОЕ/мг, предпочтительно 10-10 КОЕ/мг.
0
Количество молочнокислых бактерий может быть измерено через 28 дней после кондиционирования и хранения при температуре от 4 до 10C.
6
10
Если количество молочнокислых бактерий менее чем 10КОЕ/мг, то композиция не обладает оптимальным требуемым эффектом, и если количество молочнокислых бактерий более чем 10 КОЕ/мг, то композиция будет технически сложной для производства и, следовательно, слишком дорогостоящей.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению концентрация растительного масла, предпочтительно масла бурачника, составляет примерно от 0,2 примерно до 3% от веса композиции.
Если концентрация растительного масла менее чем 0,2% от веса композиции, то композиция не будет иметь требуемого оптимального эффекта, так как она не будет содержать достаточного количества активного ингредиента, и если концентрация растительного масла более чем 3% от веса композиции, то композиция будет обладать слишком высоким содержанием жира, будет обладать некоторыми вкусовыми качествами и будет очень дорогостоящей.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению концентрация растительного экстракта, предпочтительно экстракта зеленого чая, составляет примерно от 0,01% примерно до 1% от веса композиции.
Если концентрация растительного экстракта менее чем 0,01% от веса композиции, то композиция не будет иметь требуемого оптимального эффекта, и если концентрация растительного экстракта более чем 1% от веса композиции, то композиция будет обладать некоторыми вкусовыми качествами и будет очень дорогостоящей.
В типичном воплощении настоящего изобретения композиция включает масло бурачника, экстракт зеленого чая, молоко и молочнокислые бактерии, и обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса, и где полиненасыщенная жирная кислота, которая содержится в масле бурачника, демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной полиненасыщенной жирной кислоты.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению масло бурачника включает примерно от 16% примерно до 25% гамма-линоленовой кислоты от веса масла бурачника, и, предпочтительно, примерно 20%.
Масло бурачника представляет собой выбранный источник гамма-линоленовой кислоты или GLA, поскольку он обладает наибольшим содержанием GLA из всех доступных масличных семян. Также он представляет собой существенный источник незаменимой линолевой кислоты (C 18:2 ω-6). Результаты тестирования аналитического контроля качества его композиции показали, что используемое масло бурачника удовлетворяет не только спецификации продукта, но также регулирующим требованиям относительно микробиологических и токсикологических примесей, таких как пестициды, полициклические ароматические соединения и тяжелые металлы.
В масле бурачника GLA концентрируется в положении sn-2 в триглицеридах и является более доступной, чем в масле энотеры, в которой GLA концентрируется в положениях sn-1 и sn-3 в триглицеридах. Стереоспецифичная структура триацилглицерина этих масел отличается друг от друга. Различие положения влияет на биодоступность GLA.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению экстракт зеленого чая включает примерно от 50% примерно до 90% катехина от веса экстракта зеленого чая, и, предпочтительно, примерно 80%.
Экстракт зеленого чая получают из листьев высококачественного зеленого чая из растения Camellia sinensis. Экстракт, главным образом, состоит из полифенолов, предпочтительно катехинов. Три следующих производных являются главными компонентами: эпигаллокатехин галлат (>40%), эпигаллокатехин (>18%) и эпикатехин (>8%). Также представлены другие минорные катехины: катехин, галлокатехин, эпикатехин галлат и галлокатехин галлат. Кроме того, аналитические измерения, проводимые регулярно аккредитованными лабораториями, показали, что экстракт зеленого чая удовлетворяет микробиологическим и токсикологическим требованиям.
В другом преимущественном воплощении в композиции по настоящему изобретению молочное вещество включает примерно от 1,5% примерно до 6% молочных белков от веса молочного вещества, и, предпочтительно, примерно от 2,5% примерно до 5% молочных белков от веса молочного вещества. В типичном воплощении настоящего изобретения композиция представляет собой продукт питания или напиток, или вспомогательную композицию для продукта питания или напитка.
В предпочтительном воплощении продукт питания выбирают из ферментированного молочного продукта, содержащего, по меньшей мере, 50% ферментированного продукта, выделенного из молочного вещества, йогурта и фруктового йогурта.
Выражение "ферментированный молочный продукт" обозначает продукт, содержащий молоко, который ферментирован с помощью молочнокислых бактерий. Например, ферментированные молочные продукты, которые можно привести в пример, представляют собой следующие продукты: йогурты, такие как йогурты термостатного способа производства или перемешанные йогурты, простые или ароматизированные йогурты или йогурты с фруктами, ферментированное молок, свежий творог, такой как простой или ароматизированный свежий творог или свежий творог с фруктами, и десерты.
Выражение "ферментированное молоко" и "йогурты" следует понимать, как установлено в соответствии с официальными стандартами Кодекса по Продуктам Питания (особенно том 12 и стандарт "Кодекс Стандартов 1-11 (a)-1975) или Французский декрет nº88-1203 от 31.12.1988.
В преимущественном воплощении настоящего изобретения композиция предназначена для улучшения качества кожи путем воздействия на функционирование кожного барьера или на барьер увлажнения кожи.
Композиция дает возможность улучшить увлажнение кожи. Более предпочтительно композиция предназначена для уменьшения потери влаги кожи и для улучшения качества кожи.
Потеря влаги происходит из-за испарения, которое рассчитывается определением градиента давления слоя испарений воды, окружающих кожу. Более конкретно, этот метод дает возможность оценки эффекта барьера рогового слоя и гидролипидной пленки.

2
Измерения трансэпидермальной потери влаги (TEWL) проводят с помощью SERVOMED EP2 "EVAPORIMETER". Поток испарений воды проходит сквозь зонд, составленный из двух перехватчиков. Различие парциального давления измеряется между двумя перехватчиками. Эта величина соответствует скорости испарения летучего вещества (в этом случае, воды). Проводят одно измерение на зону, и результаты измерений TEWL представляют в виде г/м/ч. Этот метод хорошо известен специалисту в данной области.
Настоящее изобретение также относится к способу получения композиции, включающей в качестве активного вещества смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной полиненасыщенной жирной кислоты, отличной от выделенной из молока полиненасыщенной жирной кислоты, полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и обладающей содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса; и где указанная полиненасыщенная жирная кислота демонстрирует увеличенную биодоступность по сравнению с биодоступностью индивидуальной полиненасыщенной жирной кислоты, причем указанный способ включает добавку растительного экстракта, содержащего полифенолы, к ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенные полиненасыщенные жирные кислоты и молочного вещества, содержащего молочные белки.
Выражение "ферментативно выделенные полиненасыщенные жирные кислоты" обозначает полиненасыщенные жирные кислоты, полученные ферментативным способом.
В преимущественном воплощении настоящего изобретения способ включает получение ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества, содержащего молочные белки, с помощью:
- стадии введения растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот в молочное вещество с получением смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- стадии гомогенизации вышеуказанной смеси с получением гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- стадии ферментации вышеуказанной гомогенизированной смеси с получением ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества.
Настоящее изобретение также относится к композиции, такой как композиция, полученная с помощью способа, описанного выше.
Настоящее изобретение также относится к способу получения композиции, такой как композиция, описанная выше, причем указанный способ включает добавку растительного экстракта, содержащего полифенолы, к ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества, содержащего молочные белки.
Настоящее изобретение также относится к способу получения композиции, такой как композиция, описанная выше, причем указанный способ включает добавку растительного экстракта, содержащего полифенолы, к ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества, содержащего молочные белки, и причем указанный способ включает получение ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества, содержащего молочные белки, с помощью:
- стадии введения растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот в молочное вещество с получением смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- стадии гомогенизации вышеуказанной смеси с получением гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- стадии ферментации вышеуказанной гомогенизированной смеси с получением ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества.
В преимущественном воплощении в способе по настоящему изобретению молочное вещество получают путем смешивания обезжиренного молока с молочным порошком или с концентрированным молоком, с последующей обработкой, которая предназначена для исключения бактериологических примесей, предпочтительно с помощью обработки нагреванием, предпочтительно с помощью нагервания при 95ºC в течение 4-8 мин.
В другом воплощении настоящего изобретения способ включает:
- получение ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла, содержащего полиненасыщенные жирные кислоты, или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества, содержащего молочные белки, с помощью:
- стадии введения линии растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот в молочное вещество, причем указанное молочное вещество получают путем смешивания обезжиренного молока с молочным порошком или с концентрированным молоком, с последующей обработкой, которая предназначена для исключения бактериологических примесей, предпочтительно с помощью обработки нагреванием, предпочтительно с помощью нагервания при 95ºC в течение 4-8 мин, с получением смеси растительного масла и молочного вещества;
- стадии гомогенизации при 50-300 бар при 40-95ºC вышеуказанной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- стадии ферментации вышеуказанной гомогенизированной смеси, причем указанная ферментация включает введение ферментов при 30-45ºC в течение 5-10 ч с получением ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества;
- добавки растительного экстракта, содержащего полифенолы, инфузированного посредством фруктового препарата или сахарной кашицы, или чая на водной основе, к ферментированной гомогенизированной смеси растительного масла или ферментативно выделенных полиненасыщенных жирных кислот и молочного вещества.
Настоящее изобретение также относится к композиции, такой как композиция, описанная выше, включающей эмульсию, которая содержит полиненасыщенные жирные кислоты, отличные от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока, и молочные белки, причем 90% частиц жира этой эмульсии имеют максимальный диаметр, составляющий примерно 1,15 мкм, 50% частиц жира этой эмульсии имеют максимальный диаметр, составляющий 0,5 мкм, и 10% частиц жира этой эмульсии имеют максимальный диаметр, составляющий 0,21 мкм.
Термин "эмульсия" обозначает смесь из двух несмешиваемых (несмешивающихся) жидких веществ. Одно вещество (дисперсная фаза) диспергируется в другом (дисперсионная фаза). Эмульсии нестабильны и, таким образом, не образуются спонтанно. Потребляемая энергия во время процессов взбалтывания, смешивания, гомогенизации или распыления необходима для образования эмульсии. Со временем эмульсии имеют тенденцию возвращаться к стабильному состоянию, когда жидкая часть отделена от водной части. Поверхностно активные вещества (ПВА) могут увеличивать кинетическую стабильность.
В изобретении термин "частицы жира" обозначает жир, диспергированный в водной фазе, окруженной молочными белками. Частицы жира содержат PUFA и все другие жирные кислоты.
Настоящее изобретение также касается композиции, такой как композиция, описанная выше, включающей эмульсию, которая содержит полиненасыщенные жирные кислоты, отличные от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока, и молочные белки, причем в эмульсии большинство частиц жира полиненасыщенных жирных кислот имеют диаметр, составляющий примерно от 0,21 мкм примерно до 3 мкм, предпочтительно примерно от 0,25 мкм примерно до 3 мкм.
4
4
4
3
3
3
Диаметр может выражаться с использованием теории Лоренца-Ми. "Ми-диаметр" или Д(4,3) представляет собой объем, обозначающую диаметр. Это значение диаметров сфер, имеющих такой же объем, что и реальные частицы композиции по изобретению. Это значение аналогично моментам инерции и вводит другой линейный член в диаметре (т.е. площадь поверхности имеет 3D-зависимость, и объем или масса имеют D4-зависимость, как приведено ниже): D(4,3):(I+2+3)/(I+2+3)=2,72.
В настоящем изобретении композиция, такая как композиция, описанная выше, включает эмульсию, которая содержит полиненасыщенные жирные кислоты, отличные от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока, и молочные белки, причем в эмульсии частицы жира имеют Ми-диаметр, составляющий 0,61 мкм.
Композиция по изобретению может подходящим образом содержать витамин E в концентрации примерно от 1,5 примерно до 600 мг/100 г.
Витамин E является наиболее важным липидорастворимым мембраносвязанным антиоксидантом в теле, и экспериментальные факты предполагают, что местно и перорально введенный витамин E обладает фотозащитными и стабилизирующими кожный барьер свойствами (Packer et al., "Molecular aspects of alpha-tocotrienol antioxidant action and cell signalling. J Nutr 2001:11:369S-373S). Композиция по изобретению также представляет собой стабильную эмульсию масло в воде, включающую полиненасыщенные жирные кислоты и молочные белки в дисперсионной водной фазе, содержащей другие активные вещества, такие как ферменты и зеленый чай.
Рекомендация по ежедневному приему этой композиции составляет 1 или 2 порции в зависимости от выбора концентраций активных ингредиентов.
ЧЕРТЕЖИ
Фиг. 1: Фиг. 1 демонстрирует среднюю хиломикронную концентрацию GLA через 6 часов после потребления молочных продуктов, содержащих масло бурачника, или индивидуально масла бурачника. Ордината соответствует средней хиломикронной концентрации (в мкг/мл), и абсцисса соответствует времени (в часах). Линия с ромбами (♦) соответствует молочному продукту 1 (GLA 300 мг). Линия с квадратами () соответствует молочному продукту 2 (GLA 150 мг). Линия с треугольниками () соответствует индивидуальному маслу бурачника.
Фиг. 2: Фиг. 2 демонстрирует плазменную концентрацию катехинов через 6 часов после потребления молочных продуктов, содержащих экстракт зеленого чая, или индивидуально экстракта зеленого чая, растворенного в 125 мл воды. Ордината соответствует плазменную концентрации катехинов (в мкмоль/л), и абсцисса соответствует времени (в часах). Линия с ромбами (♦) соответствует молочному продукту 1 (катехины 45 мг+GLA 300 мг в составе ферментированного молока). Линия с треугольниками () соответствует индивидуальному экстракту зеленого чая, продукт 3 (см. табл.5).
Фиг. 3: Фиг. 3 демонстрирует концентрацию GLA в липидах эритроцитов (RBCL) через 24 недели после потребления продукта A, соответствующего ферментированному молочному продукту, содержащему пробиотики, 30 мг GLA, 90 мг катехинов и 4 мг витамина E, или после потребления контрольного продукта (сквашенного молока). Ордината соответствует плазменной концентрации GLA в эритроцитах (в мкг/мл), и абсцисса соответствует времени (в неделях). Линия с квадратами () соответствует молочному продукту A. Линия с ромбами (♦) соответствует контрольному продукту.
2
Фиг. 4: Фиг. 4 демонстрирует транэпидермальную потерю влаги (TEWL) в совокупности из двух групп с учётом назначенной обработки (ITT-совокупность) в каждый момент времени (6, 12, 18, и 24 недели). Ордината соответствует TEWL-величинам (в г/м/ч), и абсцисса соответствует времени (в неделях). Линия с треугольниками () соответствует тестируемому продукту. Линия с квадратами () соответствует контрольному продукту.
Фиг. 5: Фиг. 5 демонстрирует процент увеличения TEWL-величин в ITT-совокупности из двух групп в каждый момент времени (6, 12, 18 и 24 недели). Ордината соответствует проценту увеличения TEWL-величин (% улучшения функционирования кожного барьера) по сравнению с базовой линией, и абсцисса соответствует времени потребления (в неделях).
2
2
Фиг. 6: Фиг. 6 демонстрирует транэпидермальную потерю влаги (TEWL) в подгруппе BMI<25 (BMI обозначает Индекс Массы Тела, выраженный в весе (в кг)/рост(в см)) двух групп в каждый момент времени (6, 12, 18 и 24 недели). Ордината соответствует TEWL-величинам (в г/м/ч), и абсцисса соответствует времени (в неделях). Линия с треугольниками () соответствует тестируемому продукту. Линия с квадратами () соответствует контрольному продукту.
Фиг. 7: Фиг. 7 демонстрирует процент увеличения TEWL-величин в подгруппе BMI<25 из двух групп в каждый момент времени (6, 12, 18 и 24 недели). Ордината соответствует проценту увеличения TEWL-величин (% улучшения функционирования кожного барьера) по сравнению с базовой линией, и абсцисса соответствует времени потребления (в неделях).
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Спецификация активных ингредиентов
Спецификация масла бурачника
Растение бурачника представляет собой относительно большое растение с яркими синими цветками в форме звезд, и оно широко распространено почти во всех частях света (синоним седмичника). Оно растет в Южной и Центральной Европе и культивируется повсеместно. Пригодными для пищи частями растения бурачник являются листья, цветки и семена. Это хорошо известная трава, которая распознается и используется в продуктах питание около 1500 лет. Масло бурачника получают из семян borago officianalis. Это масло уже используется в Европе в качестве продукта питания, ингредиента продуктов питания (для приправ и салатов, в качестве ингредиента продуктов питания в детских смесях), и также в качестве ингредиента для пищевых добавок.
Масло бурачника получают с помощью механического сжатия способом, очень похожим на установившиеся способы производства пригодного для пищи растительного масла. Его полностью очищают (нейтрализуют, обесцвечивают, дезодорируют) с использованием активированного угля. Это способ без использования растворителей и в отсутствии температурной обработки выше 190ºC на любой стадии процесса.
Масло бурачника является существенным источником Гамма-Линоленовой Кислоты или GLA, обладающим наибольшим содержанием GLA среди любых доступных масленичных семян. Оно также является существенным источником незаменимой линолевой кислоты (C18:2 ω-6).
Таблица 2
Природа жирных кислот
Спецификация (%)
Аналитический метод
Пальмитиновая кислота (C 16:0)
9-12
ISO 11885
Гексадециновая кислота (C 16:1)
<0,6
ISO 11885
Стеариновая кислота (C18:0)
2-6
ISO 11885
Олеиновая кислота (C18:1)
12-22
ISO 11885
Линолевая кислота (C18:2 ω-6)
30-41
ISO 11885
<b>Гамма-линоленовая кислота (GLA)(C 18:3 ω-6)</b>
<b>20-25</b>
ISO 11885
Альфа-линоленовая кислота(GLA) (C 18:3 ω-6)
<0,5
ISO 11885
Арахидоновая кислота (C20:0)
<0,5
ISO 11885
Эйкозеновая кислота (C20:l)
2,8-4,4
ISO 11885
Эруковая кислота (C22:l)
<3
ISO 11885
Ацетэруковая кислота (C24:l)
<4,5
ISO 11885
Спецификация экстракта зеленого чая
Экстракт зеленого чая получают из листьев высококачественного зеленого чая растения Camellia sinensis. Способ производства соответствует обычному способу, используемому для экстрактов чая, которые уже используются в качестве вкусовых экстрактов в Европе (в качестве примера - в чае, готовом для питья). Его получают с помощью водной инфузии листьев. Экстрагированный раствор фильтруют, концентрируют, очищают, декофеинируют с использованием растворителя класса пищевых продуктов, разрешенного в Европе (например, этилацетата - Директива Совета 88/344/CEE от 13.06.1988), и сушат с использованием распылительной сушки.
Экстракт зеленого чая, главным образом, состоит из полифенолов и определенных катехинов, которые принадлежат к классу флаван-3-олов флаваноидов.
Содержание катехинов составляет, по меньшей мере, 80% экстракта.
Среди катехинов главными компонентами являются следующие три производных: (-)эпигаллокатехин галлат (EGCg), (-)-эпигаллокатехин (EGC) и (-)-эпикатехин (EC), и содержат также другие катехины, такие как (+)-катехин (C), (+)-галлокатехин (GC), эпикатехин галлат (ECg), галлокатехин галлат (GCg).
Экстракт зеленого чая, используемый в молочных продуктах, соответствует спецификациям в табл.3.
Таблица 3
Тест
Спецификация
Аналитический метод
EGCg (%)
>40
ISO 14502-2
EGC (%)
>18
ISO 14502-2
EC (%)
>8
ISO 14502-2
Общее содержание катехинов (%)
80
ISO 14502-2
Общее содержание полифенолов (%)
>80
ISO 14502-2
Кофеин (%)
<1
ISO 14502-2
Пример 2: Характеристика эмульсии (размер и структура)
Для измерения параметров эмульсии, используемое оборудование представляет собой MASTERSIZER S (MSS) (Malvern). Гранулометрию проводили на эмульсии после гомогенизации и тепловой обработки. Гранулометрию проводили с помощью разведения с 1% SDS. Этот технический анализ дает возможность оценки среднего диаметра частиц путем распределения в объеме по диаметру частиц.
Трансмиссионная электронная микроскопия (TEM) дает возможность структурного анализа эмульсии и наблюдения частиц жира. Этот метод хорошо известен специалисту в данной области.
Диаметр большинства частиц жира полиненасыщенных жирных кислот составляет от 250 до 3000 нм, с двумя главными популяциями частиц с диаметром от 500 до 600 нм и с диаметром от 1000 до 3000 нм. Липопротеиновые взаимодействия являются сильными; частицы жира связываются с молочными белками, и эти белки окружают частицы жира.
Пример 3: Исследование биодоступности GLA (гамма-линоленовой кислоты), которая содержится в масле бурачника, и катехинов зеленого чая
.
Исследование было продумано для того, чтобы оценить в ферментированном молочном продукте биодоступность GLA, которая содержится в масле бурачника, и катехинов зеленого чая с помощью измерения их уровня в плазме крови после разовой болюсной дозы. Плазменные концентрации GLA и катехинов исследовали в различные моменты времени после приема внутрь.
Тестируемые продукты
3 вида продуктов было разработано и протестировано:
Продукт 1
-  : ферментированный молочный продукт (1 порция), содержащий 3 штамма пробиотиков, GLA (300 мг на порцию), катехины (45 мг на порцию).
Продукт 2
- : ферментированный молочный продукт (1 порция), содержащий 3 штамма пробиотиков, GLA (150 мг на порцию), катехины (45 мг на порцию).
Продукты 1 и 2 получали, следуя способу производства, описанному в изобретении. Они не очень кислые (pH 4,52), густые и однородные во рту. Два продукта были ароматизированы с помощью фруктового препарата.
Продукт 3
-  (только соединения): GLA (300 мг), катехины (45 мг). Масло бурачника давали непосредственно субъектам в форме масла, тогда как экстракт зеленого чая растворяли в 125 мл воды.
Общий план исследования
Это исследование было моноцентрическим, случайным, открытым, перекрестным исследованием, проведенным с 12 здоровыми женщинами-волонтерами. Средний возраст совокупной популяции составил 30,8 лет, и средний Индекс Массы Тела (BMI) составил 21,4. Общая продолжительность исследования составила около 2-3 недель для каждого субъекта.
Каждый субъект наносил 4 визита, приблизительно 24 часа каждый, как представлено в стадии планирования ниже:
- вводный визит (Vl) за одну неделю перед первым оценочным визитом,
- и три оценочных визита: первый визит в момент J0 (V2), второй в момент J+4 (V3), третий в момент J+8 (V4).
Каждый визит включает клиническое исследование. В каждый из этих визитов субъект сдавал кровь для измерения уровней GLA и катехинов и для исследования кинетики абсорбции.
После вводного визита (Vl), первая неделя была посвящена применению на практике пищевых рекомендаций с целью уменьшения потребления пищевых продуктов, богатых исследуемыми соединениями, для того чтобы ограничить любое взаимное влияние с тестируемыми соединениями. Для каждого субъекта три оценочных визита были разделены минимальным сроком в 4 дня и максимальным сроком в 7 дней, чтобы был период вымывания.
План оценочного визита
Во время каждого визита (V2, V3, V4), субъект потреблял один из продуктов случайным образом, более того, в конце V4 субъекты потребляли 3 тестируемых продукта (продукт 1, 2 и 3, представленные выше).
Каждый визит происходил, как изложено и как описано в схеме ниже:
> За день до тест-визита, по прибытии в центр в конце дня, субъекты потребляли обед, заказанный для них, в течение максимального времени, составляющего 30 минут. Состав обеда был идентичен для всех субъектов. Обед был съеден примерно в 20:00 ч.
> В день тест-визита для волонтеров был накрыт завтрак примерно в 08:00 ч, который потребляли в течение максимального времени, составляющего 20 минут. Четырьмя часами и 30 минутами позже для волонтеров был накрыт тест-ланч. Он был поглощен в течение менее чем 25 минут. Через 25 минут после начала ланча волонтеры поглощали тестируемый продукт менее чем за одну минуту. Время начала поглощения составляло T0 для кинетики. В конце кинетики для субъектов был заказан обед.
Субъекты имели 7 образцов крови, взятых через 6 часов после поглощения продукта согласно вышеописанному плану. Шесть моментов времени для образцов (T0, Т1ч, Т2ч, Т3ч, Т4ч, Т6ч) использовали для определения кинетики в плазме обоих типов соединений - GLA и катехинов зеленого чая. На основе различия абсорбции ингредиентов были определены моменты времени:
- один момент времени (T0,5ч) использовали только для определения биодоступности в плазме катехинов,
- один момент времени (Т5ч) использовали только для определения биодоступности в плазме GLA.
Анализ плазмы
Катехины анализировали непосредственно в плазме, тогда как измерения GLA проводили из хиломикронной фракции, выделенной с помощью ультрацентрифугирования. Оценивали уровень в плазме GLA и 3 главных катехинов зеленого чая (эпикатехина (EC), эпигаллокатехина (EGC) и эпигаллокатехин галлата (EGCg)).
Липидную экстракцию хиломикронов проводили на основе протокола от Moilanen et al. (Moilanen T., Nikkari T. The effect of storage on the fatty acid composition of human serum. Clin Chim Acta. 1981; 114:111-6). Измерения проводили с помощью газовой хроматографии. Идентификацию GLA проводили путем соотнесения с внутренними стандартами. Результаты выражали в мкг/л.
Концентрации в плазме для EC, EGC и EGCg определяли с помощью HPLC, как описано у Lee et al. (Lee MJ, Prabhu S, Meng X, Li C, Yang CS. An improved method for the determination of green and black tea polyphenols in bio matrices by high- performance liquid chromatography with colorimetric array detection. Anal Biochem. 2000; 279:164-9), и путем соотнесения с внутренними стандартами результаты выражали в мкмоль/л.
Статистический анализ
Анализируемые параметры с целью мониторинга биодоступности GLA и катехинов представляли собой:
- "площадь под кривой" (ППК), которая дает информацию кинетики биодоступности (мкг/мл×ч)
- максимальную концентрацию во время кинетики (Cmax) (мкг/мл)
- время, когда концентрация является максимальной (Tmax) (ч)
Статистическую достоверность определяли с использованием Т-теста Стъюдента. Анализ проводили на PP-совокупности (на протокол, n=11), так как один из 12 включенных субъектов не завершил всех визитов.
Результаты для биодоступности GLA
Осуществляли два пути презентации и анализа результатов:
a) ППК, Cmax и Tmax: Площадь под кривой кинетики абсорбции предоставляет информацию по всей биодоступности ингредиентов, в то время как Cmax дает максимальную концентрацию, и Tmax описывает время, когда концентрация ингредиента является максимальной. Следующая таблица суммирует данные по ППК, Cmax и Tmax для каждого продукта.
b) Кинетика GLA через 6 часов после потребления для 11 субъектов.
a) Анализ ППК, Cmax и Tmax иллюстрируется с помощью табл. 4.
Таблица 4
ППК<sup>0-6ч</sup>(мкг/мл/ч)
Cmax(мкг/мл)
Tmax(ч)
Молочный продукт 1 (GLA 300 мг+Катехины 45 мг в ферментированной молочной основе)
27,9±9,1<sup>а</sup>
12,1±7,03<sup>b</sup>
2,00±1,00<sup>с</sup>
Молочный продукт 2 (GLA 150 мг+Катехины 45 мг в ферментированной молочной основе)
12,3±3,1
6,5±2,7
1,91±1,58<sup>с</sup>
Молочный продукт 3 (индивидуально GLA 300 мг)
15,20±10,50
9,4±5,2
4,55±1,29
Результаты представляют собой значения±Стандартное отклонение
а
b
с
статистически отличается от продуктов 2 и 3 (p<0,001);  статистически отличается от продукта 2 (p<0,01);  статистически отличается от продукта 3 (p<0,01);
> Продукт 1 против 3
Статистический анализ показывает важные различия между продуктами 1 и 3 (одинаковое количество GLA, каждый с ферментированным молочным продуктом (1) или индивидуально в виде (3)). ППК значительно выше у продукта 1, чем у продукта 3, в то время как Cmax не имеет значительных отличий. Tmax значительно отстает у продукта 3, указывая на более медленную абсорбцию.
> Продукт 1 против 2
Результаты указывают на то, что количество абсорбированной GLA приблизительно в два раза выше у продукта 1 по сравнению с продуктом 2. Это отражено одновременно с помощью ППК и Cmax, которые значительно ниже у продукта 2.
> Продукт 2 против 3
Статистический анализ, проведенный следуя этим наблюдениям, не показал значительного различия между продуктами 2 и 3, хотя поглощенное количество GLA в два раза ниже у продукта 2, чем у продукта 3. Только Tmax значительно отстает у продукта 3 по сравнению с продуктом 2.
b) Анализ кинетики GLA через 6 часов
Проводили вторичный анализ, который сравнивал в каждый момент времени концентрации GLA в плазме после поглощения различных продуктов. Фиг. 1 суммирует данные для кинетики каждого субъекта.
Статистический анализ показывает значительное различие между продуктами 1 и 2, от T 2ч до T 3ч.
Различие показано между продуктами 1 и 3, как только время соответствует T 1ч. Оно сохраняется до тех пор, пока не достигнет T 2ч. ППК значительно выше у продукта 1, чем у продукта 3, в то время как Cmax не имеет значительных отличий. Tmax значительно отстает у продукта 3. Поглощенное количество GLA является одинаковым в обоих продуктах: эти результаты могут отражать лучшую биодоступность, когда GLA поглощается в ферментированном молочном продукте, чем когда она поглощается индивидуально.
Не существует различия между продуктами 2 и 3, хотя поглощенное количество GLA в два раза меньше у продукта 2, чем у продукта 3. Это подтверждает предыдущее наблюдение.
c) Анализ кинетики GLA в липидах эритроцитов
Концентрацию GLA в липидах эритроцитов (RBCL) оценивали во время исследования после потребления продукта A, соответствующего ферментированному молочному продукту, содержащему пробиотики, 30 мг GLA, 90 мг катехинов и 4 мг витамина E. Результаты демонстрируют, что GLA накапливается в RBCL после потребления тестируемого продукта A. Увеличение GLA в RBCL было отмечено в тестируемой группе (продукт A) против контрольной группы (контрольный продукт, который включает сквашенное молоко без GLA, катехинов, витамина E и пробиотиков) как через 12 недель (p=0,0047), так и после продолжительного потребления в течение 24 недель (p=0,0001). Результаты представлены на Фиг. 3. Подобные результаты были получены для BMK25-совокупности, с p=0,0003 после 12 недель, и p=0,0005 после 24 недель после потребления продукта (не показано).
Накопление GLA в RBCL является хорошим признаком доставки GLA в ткани тела, предпочтительно в кожу.
Результаты для биодоступности катехина
Анализ ППК, Cmax и Tmax иллюстрируется с помощью табл.5
.
Таблица 5
ППК<sup>0-6ч</sup>(мкг/мл/ч)
Cmax(мкг/мл)
Tmax(ч)
Молочный продукт 1 (GLA 300 мг+Катехины 45 мг в ферментированной молочной основе)
0,248±0,047
0,098±0,015
2,00±1,00
Молочный продукт 3 (индивидуально катехины 45 мг)
0,310±0,026
0,088±0,006
4,55±1,29
В плазме измеряли 3 главных катехина в различные моменты времени после поглощения. Концентрации в моменты времени T0, Т2ч, Т3ч и Т6ч анализировали в первую очередь. Фиг. 2 суммирует данные. Небольшое количество потребленных катехинов (45 мг от общего количества катехинов) приводит к небольшим концентрациям в плазме (0,02-0,20 мкмоль/л) индивидуальных катехинов (EC, EGC, EGCG), какой бы продукт не потреблялся (катехин индивидуально или в ферментированном продукте). Эти концентрации представляли собой пороговые значения количественной оценки с помощью HPLC. Определение общей концентрации катехинов не показало каких-либо еще существенных изменений. Другие моменты времени не анализировались.
Заключение:
Фармакокинетические параметры в хиломикронах показали, что GLA из масла бурачника, содержащаяся в тестируемых ферментированных молочных продуктах, обнаружена в плазме в концентрации 150 и 300 мг на дозу.
Значительно отличающиеся реакции для ППК и Cmax для GLA в хиломикронах наблюдали после потребления двух молочных продуктов. Абсорбированное количество (например, ППК и Cmax) было в два раза выше для молочного продукта, содержащего 300 мг GLA, чем для молочного продукта, содержащего 150 мг GLA. Дозозависимый эффект обнаружен для этих концентраций GLA.
Кинетика абсорбции GLA отличалась у молочных продуктов и индивидуального масла бурачника (Tmax короче у молочных продуктов). ППК после потребления молочного продукта, содержащего 300 мг GLA, значительно выше, чем у индивидуального масла бурачника, также содержащего 300 мг GLA. Количества GLA, обнаруженные в плазме (например, ППК и Cmax) после приема молочного продукта (содержащего 150 мг GLA) или после приема индивидуального масла бурачника (300 мг GLA), были сходными. Введение масла бурачника в молочное вещество приводит к положительному эффекту, оказываемому на абсорбцию GLA путем увеличения уровня GLA в хиломикронной фракции липопротеинов плазмы. Это может объяснить то, что более высокие концентрации GLA могут достигать кожи, оказывая на нее полезный эффект.
Результаты, полученные для катехинов, показывают, что потребление 45 мг катехинов из экстракта зеленого чая или в ферментированном молочном продукте или индивидуально приводят к небольшим увеличениям концентраций в плазме некоторых индивидуальных катехинов. Отсутствие отличий в кинетике абсорбции катехинов детектировали после потребления двух молочных продуктов или индивидуально экстракта зеленого чая. Представляется, что низкие концентрации в плазме соответствуют литературным данным. Кроме того, известно, что некоторые метаболиты катехинов могут действовать на кожу, но их точная природа/функция не описана в литературе. На основе этого утверждения, катехины поддерживаются на одинаковом уровне в нашем продукте с условием дополнительного эффекта от других ингредиентов.
Пример 4: Клиническое исследование
Это исследование было моноцентрическим, случайным, с двойной анонимностью, с проведением параллельного исследования, проведенном на здоровых женщинах-волонтерах с сухой и чувствительной кожей. Были женщины, поскольку они представляют собой целевую совокупность населения, и фактически все косметические продукты тестируют на женщинах. 72 субъекта были разделены на 2 сбалансированные группы из 36 субъектов со средним возрастом 29,4±7,9 лет и со значением BMI 22,43±2,8. Субъекты получили пищевые рекомендации, и не использовали никаких косметических средств перед началом исследования и на протяжении всего исследования.
Одна группа получала тестируемый продукт, который включает 150 мг GLA, 47 мг катехинов и 2 мг витамина E, смешанных в молочной основе, содержащей пробиотик (Lactobacillus casei, bulgaricus и Streptococcus thermophilus) (тестируемая группа), и другие получали контрольный продукт, который включает сквашенное молоко без GLA, катехинов, витамина E и пробиотиков (контрольная группа). Исследование разделяли на две части, включающие фазу селекции (4 недели) и фазу потребления продукта (24 недели). Субъекты, наносившие 4 оценочных визита с интервалом в 6 недель во время периода потребления продукта (потребление продукта (тестируемого или контрольного) за две дозы в день). Период тестирования в шесть месяцев дал возможность сравнения эффекта продукта в течение продолжительного периода времени и дал возможность оценки его эффекта в различные времена года.

Тестируемый продукт сравнивали с контрольным продуктом без пробиотика, масла бурачника и катехинов, чтобы была возможность сравнения эффектов этих ингредиентов на функциональность кожи. Функционирование кожного барьера оценивали с помощью метода трансэпидермальной потери влаги (TEWL), который является общепринятым методом измерения функционирования барьера рогового слоя (SC). TEWL измеряли на внутренней стороне предплечья с помощью "Эвапорометра" Servomed EP2. Исследование начинали осенью и проводили до весны для сравнения эффектов от продукта на функционирование кожи в различные времена года; известно, что функционирование кожного барьера ухудшается в зимние месяцы года. Анализ данных проводили на основе данных от всех субъектов, а также на основе данных от различных подгрупп, определенных в начале исследования, и на основе критерия включения в группы (BMI и уровень гидратации). Заявители настоящего изобретения проводили анализ данных двумя путями:
- путем сравнения между 2 группами в каждый момент времени (6, 12, 18 и 24 недель заявители настоящего изобретения проводили анализ с помощью анализа ковариации чувствительных изменений;
- путем сравнения "эволюции" эффекта с течением времени; этот более глобальный анализ кинетики реакции дает возможность принимать во внимание различие между двумя продуктами и вариации, происходящие из-за окружающей среды, заявители настоящего изобретения использовали смешанную модель на основе повторных измерений в течение 2 периодов времени: исследование в целом (24 недели) и до 12 недель (первичный критерий исследования).
Эти анализы принимали во внимание базисный уровень в каждом случае.
Результаты для ITT-совокупности
2
Заявители настоящего изобретения проводили анализ ITT-совокупности (совокупность с учетом назначенного лечения, n=67). Как можно наблюдать на Фиг. 4, существует улучшение функционирования кожного барьера относительно контроля (меньшее значение TEWL в группе потребления продукта) в каждый момент времени после потребления продукта. Анализ оценки с течением времени обнаружил, что тестируемый продукт значительно уменьшает TEWL на протяжении всего исследования (24 недели потребления продукта (p=0,026)), но также в фазе до 12 недель потребления продукта (p=0,036). Кроме того, в течение всего периода исследования (24 недели), скорректированное среднее различие величин TEWL между группами составило 0,68 г/м/ч.
Существует естественная вариация функционирования кожного барьера (т.е. небольшое ухудшение зимой, которое отражается увеличением величины TEWL), но использование активного продукта показало тенденцию преимущества контроля через 6 недель и через 18 недель, когда различия статистически значимы.
Если мы сравниваем относительный процент увеличения величин TEWL в двух группах (см. Фиг. 5), мы можем заметить, что наибольшее различие наблюдается через 18 недель, составляющее 19,3% между двумя группами относительно базиса.
В среднем, в течение всего периода исследования различие TEWL между двумя группами составило 13,25%. Это означает, что продукт сохраняет примерно на 14% больше воды, чем контроль.
Результаты для подгруппы BMI<25
Классификация по BMI дала интересные результаты. Анализ в подгруппе "BMK25" (n=53) обнаружил более сильный эффект от продукта.
Когда заявители настоящего изобретения сравнивали эволюцию 2 групп во время исследования, они увидели, что существует значительное различие при потреблении продукта в течение периода времени до 24 недель (p=0,005) (см. Фиг. 6).
В этой совокупности также существует нарушение функционирования эпидермального кожного барьера из-за зимы (отраженное увеличением величин TEWL), но продукт показал значительное преимущество для контроля на всем протяжении исследования (p=0,005) во избежание потери влаги.
2
Кроме того, в течение всего периода исследования (24 недели), среднее различие величин TEWL между группами составило 0,95 г/м/ч.
Когда заявители настоящего изобретения сравнили процент увеличения TEWL между двумя группами (см. Фиг. 7), они показали улучшения функционирования кожного барьера относительно контроля на 15,7% и 17,5%, соответственно, настолько быстро, как через 6 недель потребления продукта и через 18 недель.
В среднем, в течение всего периода исследования различие TEWL между двумя группами составило 14,9%. Это означает, что продукт сохраняет примерно на 15% больше воды, чем контроль.
Заключение
:
Относительно контроля функционирование кожного барьера значительно улучшалось после потребления композиции, включающей в качестве активного вещества смесь, состоящую из, по меньшей мере, одной полиненасыщенной жирной кислоты, отличной от полиненасыщенной жирной кислоты, выделенной из молока, состоящую из полифенолов, молочных белков и молочнокислых бактерий, и причем указанная композиция обладает содержанием воды, составляющим, по меньшей мере, 50% от веса. Кожа была способна лучше сопротивляться воздействию окружающей среды на функционирование кожного барьера преимущественно благодаря изменениям в составе рогового слоя. Усиление функционирования кожного барьера происходило, возможно, благодаря комбинированным эффектам от GLA, катехинов, пробиотиков и необязательно витамина E на дифференцировку эпидермиса.