Казуистические случаи в судебноэкспертной практике, обусловленные контаминационной природой исследованной ДНК

Казуистические случаи в судебно-экспертной практике, обусловленные контаминационной природой исследованной АНК

• к.м.н. Е. Ю. Земскова, д.б.н., проф. П. Л. Иванов

ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Министерства здравоохранения Российской Федерации Аннотация: В докладе рассмотрен ряд примечательных артефактов из практики судебно-медицинской молекулярно-генетической экспертизы, причиной которых является то казуистическое обстоятельство, что исследованная при экспертизе ДНК оказалась контаминационной природы. Цель этого обзора — проиллюстрировать целесообразность комплексного подхода к оценке получаемых при экспертизе результатов, и важность объективного и ответственного отношения к интерпретации этих результатов как к средству доказывания.

Ключевые слова: судебно-медицинская молекулярно-генетическая экспертиза, контаминация ДНК

Casuistic cases in forensic practice caused by the mixed nature of the investigated DMA

• E. Yu. Zemskova, P. L. Ivanov

Abstract: The article reviews a number of remarkable artifacts from the practice of forensic molecular and genetic examination caused by the casuistic fact that the investigated DNA was mixed nature. The goal of this review is to illustrate the advisability of an integrated approach to the assessment of the results obtained in the examination, and the importance of objective and responsible attitude to the interpretation of these results as a means of proof. Keywords: forensic molecular and genetic examination, DNA contamination

В судебно-экспертной практике анализ ДНК применяется для получения значимой для следствия и суда информации в случаях, связанных с гражданско-правовыми отношениями, уголовно-наказуемыми деяниями, установлением жертв чрезвычайных ситуаций (природных, техногенных или иной природы). Объективная ценность молекулярно-генетических данных и возрастающая сложность экспертных задач стимулирует динамичный рост специализированных высоких технологий, которые, в свою очередь, призваны удовлетворить стремление экспертов к извлечению нужного объема генетической информации из как можно меньшего исходного количества ДНК.

Действительно, внедрение в экспертную практику новых высокотехнологичных решений объективно повышает информативность молекулярно-генетического анализа и в целом обеспечивает тенденцию к существенному увеличению доказательного значения получаемых результатов.

Однако надо отдавать себе отчет в том, что ситуации, когда экспертные задачи решаются на пределе чувствительности используемых аналитических методов, представляют собой определенную опасность.

Ранее нами был опубликован ряд работ, целью которых было создание методических подходов для судебно-медицинского молекулярно-генетического

исследования сверхмалых количеств биологического материала — вплоть до одной-единственной клетки.

В процессе отработки технологии лазерной диссек-ции LCM (англ.— Laser Сapture Microdissection — лазерная микродиссекция с последующим захватом диссекти-рованных образцов) нами было показано, что одним из принципиальных вопросов исследования биологических объектов, требующих анализа минимальных количеств ДНК, является вопрос достоверности и относимости полученного результата к исследованному объекту. Речь идет о возможности контаминации (контаминация трактуется как загрязнение исследуемого биологического объекта посторонней ДНК). В данном контексте, контаминация — это, по существу, артефакт, ложный результат.

Поэтому с развитием молекулярно-генетических экспертных технологий тема контаминационной опасности приобретает возрастающую значимость.

В этом плане хотелось бы отметить, что, приветствуя современные высокотехнологичные исследования «высоких достижений», следует понимать: во многих случаях эти достижения носят демонстрационный характер и осуществляются в заранее подготовленных модельных условиях. В условиях же реальной практики для работы на пределе чувствительности используемых аналитических методов требуется строгое соблюдение целого ряда дополнительных контрольных мер, чтобы избежать описанных в настоящей работе случаев получения ложных, артефакт-ных результатов, обусловленных контаминационной природой исследованной ДНК.

Молекулярно-генетическое исследование абортивного материала — случай из практики

• А. А. Комарова, М. А. Игнашкин., С. А. Фролова, к.м.н. А. С. Абрамов

Отдел медико-биологических исследований управления организации экспертно-криминалистической деятельности Главного управления криминалистики Следственного комитета Российской Федерации. Аннотация: Статья посвящена практическому случаю проведения экспертизы по факту изнасилования. В качестве сравнительных материалов поступили биоматериалы после медицинского аборта, установленный срок беременности 5 недель. Ключевые слова: изнасилование, молеку-лярно-генетическое исследования, абортивный материал

Molecular genetic study of abortive material — practical case

• A. A. Komarova, M. A. Ignashkin, S. A. Frolova, A. S. Abramov

Abstract: The article is dedicated to a practical case of rape examination. For examination biomaterial after medical abortion of 5 week pregnancy was received. Keywords: rape, molecular genetic study, abortive material

ВВЕДЕНИЕ

Молекулярно-генетический метод исследования на сегодняшний день является одним из наиболее эффективных в случаях идентификации личности лиц, причастных к совершению насильственных действий сексуального характера.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Для проведения молекулярно-генетической экспертизы по факту изнасилования в лабораторию поступили биоматериалы после проведенного медицинского аборта, установленный срок беременности 5 недель, а также образцы буккального эпителия потерпевшей и подозреваемого. Анализ отцовства усложнялся тем, что, согласно следственной версии, подозреваемый являлся биологическим отцом потерпевшей. В генетическом профиле эмбриона в данном случае предполагаются присутствие большого числа гомозиготных аллельных комбинаций. Также возможны гетерозиготные аллельные комбинации, совпадающие с аллельными комбинациями матери или отца.

Для исследования был представлен флакон, содержащий кашеобразный субстрат из крови с фрагментами мягких тканей. Содержимое банки было отфильтровано, промыто дистиллированной водой и помещено в чашку Петри. С учетом малых физических размеров эмбриона на ранних стадиях внутриутробного развития был проведен визуальный осмотр содержимого флакона для поиска фрагментов пуповины или зародышевых оболочек эмбриона. В результате визуального осмотра были выявлены два фрагмента тканевой структуры красного цвета, неравномерной окраски, в виде расслаивающихся тяжей около 2 мм в диаметре, длиной до 3—4 мм, которые могли являться фрагментами пуповины (объекты № № 1,2), и один фрагмент, имеющий вид полупрозрачной пленки 4х5 мм, который может являться фрагментом зародышевой оболочки эмбриона (объект № 3). Из обнаруженных фрагментов были сделаны вырезки. Остальные фрагменты по своему виду и структуре, вероятно, являлись свертками крови и фрагментами эндометрия.

ДНК из объектов выделяли с использованием набора PrepFiler ТМ Automated Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems, США), на автоматической станции для выделения ДНК «AutoMate Express™ Forensic DNA Extraction System» (Applied Biosystems, США).

Анализ матричной активности ДНК из объектов проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием системы количественной энзиматической амплификации Quantifiler Human DNA Quantification Kit (Applied Biosystems, США).

Продуктивность полимеразной цепной реакции регистрировали в режиме реального времени с использованием амплификатора ABI PRISM 7500 Sequence Detection System и программного обеспечения SDS software v.1.1 (Applied Biosystems, США).

Концентрация ДНК в препаратах из объектов № № 1,2 составила 82,8 и 46,6 нг/мкл, в препарате из объекта № 3—92,5 нг/мкл. Препараты ДНК были разведены до «рабочей» концентрации 0,1 нг/мкл.

Типирование полиморфных STR-локусов ядерной ДНК из объектов проводили с помощью полимеразной цепной реакции, используя наборы реагентов «AmpFlSTR Identifiler Plus' и «Globalfiler», производства фирмы «Applied Biosystems», США, в соответствии с прилагаемыми к наборам инструкциями. Реакцию амплификации проводили с помощью прибора «GeneAmp PCR system 9700» фирмы «Applied Biosystems», США. Разделение и детекцию флуоресцентно меченых амплифицированных фрагментов проводили с использованием прибора ABI PRISM 3500 Genetic Analyzer и программного обеспечения производства фирмы «Applied Biosystems». Определение длин амплифицированных фрагментов и установление номеров аллелей проводили на основе внутренних стандартов длины (Size Standard GeneScan-600 LIZ) и входя-

щих в набор реагентов аллельных леддеров с помощью программного комплекса GeneMapper ID-Х.

В препаратах ДНК из объектов № № 1, 2 установлены генетические признаки потерпевшей.

В препарате ДНК из объекта № 3 установлен смешанный генетический профиль с доминированием генетических признаков потерпевшей. Минорный генетический компонент был представлен генетическим профилем эмбриона мужского генетического пола.

Нематеринские аллели в суммарном ДНК-профиле совпали с аллелями соответствующих локусов в генотипе подозреваемого. Наличие нематеринских аллелей только в 4 локусах из 21 связано с присутствием в генотипе эмбриона гомозиготных аллельных комбинаций и гетерозиготных аллельных комбинации, совпадающих с аллельными комбинациями матери. Такие данные подтверждают следственную версию о родстве на уровне родитель-ребенок между потерпевшей и подозреваемым.

Для подтверждения выявленного родства проводился анализ STR-маркеров Y-хромосомы (набор реагентов «AmpFISTR Y-Filer PCR AmplificationKit», производства фирмы «Applied Biosystems», США).

Гаплотип Y-хромосомы, выявленный в препарате ДНК из объекта № 3, полностью совпадает с гаплотипом Y-хро-мосомы подозреваемого.

ВЫВОДЫ

Таким образом, проведение молекулярно-генетиче-ской экспертизы абортивного материала, полученного на ранних сроках беременности (5 недель), возможно, хотя и сопряжено с определенными сложностями (сложность хранения биологического материала, необходимость дифференциально-морфологического анализа абортивного материала, отбор большого числа проб, анализ смешанных генетических профилей).

Возможности применения технологии лазерной микродиссекции биологических препаратов для молекулярно-генетического анализа хромосомной ДНК, методом электрофореза в пластинах полиакриламидного геля

• В. В. Рындин1, Т. А. Смагина1, к.б.н. А. Г. Кобылянский2, Д. Д. Марков2, д.м.н., проф. В. А. Клевно1

ТБУЗ МО «Бюро СМЭ»

2Центр клеточных и генных технологий федерального государственного бюджетного учреждения науки институт молекулярной генетики Российской академии

Аннотация: Статья посвящена изучению возможности типирования хромосомной ДНК по максимальному количеству STR-локусов в определенном количестве клеток, выделенных из биологических препаратов, методом лазерной микродиссекции. Определялась возможность применения этого метода для электрофореза в пластинах полиакриламидного геля. Установлено, что в виду недостаточной чувствительности использованного метода, он не может быть рекомендован к применению в молекулярно-ге-нетических лабораториях судебно-медицинских учреждений.

Ключевые слова: биологический препарат, лазерная микродиссекция, анализ хромосомной