КОРРЕКТИРОВКА PH ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ РАЗМОРАЖИВАНИЯ БАНКОВ КЛЕТОК

1. Способ улучшения размораживания банков клеток, включающий замораживание клеток млекопитающего для хранения в банке в среде для замораживания, отличающийся тем, что среда для замораживания содержит буферный раствор и криопротектор, и при этом рН среды для замораживания равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5 перед замораживанием.
2. Способ замораживания клеток млекопитающего для хранения, включающий замораживание клеток млекопитающего в среде для замораживания, отличающийся тем, что среда для замораживания содержит буферный раствор и криопротектор, и при этом рН среды для замораживания равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5 перед замораживанием.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что рН среды для замораживания равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3, от приблизительно 7,2 до приблизительно 7,8, или приблизительно 7,5 перед замораживанием.
4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что pH среды для замораживания откорректирован до значения pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5.
5. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что pH среды для замораживания откорректирован до значения pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3 или от приблизительно 7,2 до приблизительно 7,8.
6. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что pH среды для замораживания откорректирован до значения pH, равного приблизительно 7,5.
7. Способ по любому из пп. 4-6, отличающийся тем, что клетки объединяют со средой для замораживания до и/или после корректировки pH.
8. Способ по любому из пп. 4-7, отличающийся тем, что откорректированный pH представляет собой целевой pH или измеренный pH.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что целевой pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что измеренный pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
11. Способ по любому из пп. 4-10, дополнительно включающий этап измерения исходного pH среды для замораживания, содержащей клетки, перед корректировкой pH среды для замораживания.
12. Способ по любому из пп. 4-11, дополнительно включающий этап измерения откорректированного pH среды для замораживания.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что если измеренный pH среды для замораживания ниже целевого pH, повторяют этап корректировки и этап измерения до достижения откорректированного pH среды для замораживания от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
14. Способ по любому из пп. 4-13, отличающийся тем, что pH корректируют путем добавления основания.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что основание выбирают из группы, состоящей из карбоната натрия, бикарбоната натрия, натриевой соли N-2-гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновой кислоты, гидроксида натрия и гидроксида калия.
base
base
p
t
i
base
base
p
t
i
16. Способ по п. 14 или 15, отличающийся тем, что pH среды для замораживания корректируют путем добавления основания в среду для замораживания в соответствии со следующей формулой V=C*V (pH - pH), где C представляет собой коэффициент, значение которого зависит от основания, V представляет собой объем основания, добавляемый в среду для замораживания, V представляет собой объем среды для замораживания, pH представляет собой целевой pH, и pH представляет собой исходный pH.
Na2CO3
p
t
i
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что pH среды для замораживания корректируют путем добавления карбонат натрия в среду для замораживания в соответствии со следующей формулой , где V представляет собой объем 1M карбоната натрия для добавления в среду для замораживания, V представляет собой объем среды для замораживания, pH представляет собой целевой pH, и pH представляет собой исходный pH.
18. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что целевой pH составляет от 6,7 до 8,3, от 7,2 до 7,8, или 7,5.
19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что клетки млекопитающего находятся в среде с pH от приблизительно 6,2 до приблизительно 6,6 перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО, глицерин, пропандиол, этиленгликоль или сахар.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО или глицерин, и концентрация ДМСО или глицерина в среде для замораживания перед замораживанием составляет от приблизительно 5% до приблизительно 12,5% по объему.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что концентрация ДМСО или глицерина в среде для замораживания перед замораживанием составляет от приблизительно 5% до приблизительно 10% по объему.
23. Способ по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что среда для замораживания, содержащая клетки млекопитающего, имеет плотность клеток, определенную как объем осажденных клеток (ООК), от приблизительно 8% до приблизительно 28% перед замораживанием.
24. Способ по любому из пп. 1-23 дополнительно включающий этап охлаждения жидкой культуры клеток в процессе сбора и концентрирования клеток перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
o
25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 20C.
o
26. Способ по п. 24, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 10C.
27. Способ замораживания клеток млекопитающего для хранения, включающий (a) корректировку pH среды для замораживания, содержащей клетки млекопитающего, до pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5, причем среда для замораживания содержит буферный раствор и криопротектор; и (b) замораживание клеток млекопитающего.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что pH корректируют до pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3 или от приблизительно 7,2 до приблизительно 7,8.
29. Способ по п. 27, отличающийся тем, что pH корректируют до pH приблизительно 7,5.
30. Способ по любому из пп. 27-29, отличающийся тем, что откорректированный pH представляет собой целевой pH или измеренный pH.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что целевой pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
32. Способ по п. 30, отличающийся тем, что измеренный pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
33. Способ по п. 27, дополнительно включающий этап измерения исходного pH среды для замораживания, содержащей клетки, перед корректировкой pH среды для замораживания.
34. Способ по любому из пп. 27-33, дополнительно включающий этап измерения откорректированного pH среды для замораживания.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что если измеренный pH среды для замораживания ниже целевого pH, повторяют этап корректировки и этап измерения до достижения откорректированного pH среды для замораживания от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5.
36. Способ по любому из пп. 27-35, отличающийся тем, что pH корректируют путем добавления основания.
37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что основание выбирают из группы, состоящей из карбоната натрия, бикарбоната натрия, натриевой соли N-2-гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновой кислоты, гидроксид натрия и гидроксида калия.
base
base
p
t
i
base
base
p
t
i
38. Способ по п. 36 или 37, отличающийся тем, что pH среды для замораживания корректируют путем добавления основания в среду для замораживания в соответствии со следующей формулой V=C*V (pH - pH), где C представляет собой коэффициент, значение которого зависит от основания, V представляет собой объем основания, добавляемый в среду для замораживания, V представляет собой объем среды для замораживания, pH представляет собой целевой pH, и pH представляет собой исходный pH.
Na2CO3
p
t
i
39. Способ по п. 36 или 37, отличающийся тем, что pH среды для замораживания корректируют путем добавления карбоната натрия в среду для замораживания в соответствии со следующей формулой , где Vпредставляет собой объем 1M карбоната натрия для добавления в среду для замораживания, V представляет собой объем среды для замораживания, pH представляет собой целевой pH, и pH представляет собой исходный pH.
40. Способ по п. 38 или 39, отличающийся тем, что целевой pH составляет от 6,7 до 8,3, от 7,2 до 7,8, или 7,5.
41. Способ по любому из пп. 27-40, отличающийся тем, что клетки млекопитающего находятся в среде с pH от приблизительно 6,2 до приблизительно 6,6 перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
42. Способ по любому из пп. 27-41, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО, глицерин, пропандиол, этиленгликоль или сахар.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО или глицерин, и концентрация ДМСО или глицерина в среде для замораживания, содержащей клетки млекопитающего, перед замораживанием составляет от приблизительно 5% до приблизительно 12,5% по объему.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что концентрация ДМСО или глицерина в среде для замораживания, содержащей клетки млекопитающего, перед замораживанием составляет от приблизительно 5% до приблизительно 10% по объему.
45. Способ по любому из пп. 27-44, отличающийся тем, что среда для замораживания, содержащая клетки млекопитающего, имеет плотность клеток, определенную как объем осажденных клеток (ООК), от 8% до 28% перед замораживанием.
46. Способ по любому из пп. 27-45, дополнительно включающий этап охлаждения жидкой культуры клеток в процессе сбора и концентрирования клеток перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
o
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 20C.
o
48. Способ по п. 46, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 10C.
49. Способ замораживания клеток млекопитающего для хранения, включающий (a) корректировку pH среды для замораживания до pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5, причем среда для замораживания содержит буферный раствор и криопротектор; (b) объединение клеток млекопитающего со средой для замораживания с получением пула клеток; и (c) замораживание клеток млекопитающего в пуле клеток.
50. Способ по п. 49, отличающийся тем, что pH корректируют до значения pH от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3 или от приблизительно 7,2 до приблизительно 7,8.
51. Способ по п. 49, отличающийся тем, что pH корректируют до значения pH приблизительно 7,5.
52. Способ по любому из пп. 49-51, отличающийся тем, что откорректированный pH представляет собой целевой pH или измеренный pH.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что целевой pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
54. Способ по п. 52, отличающийся тем, что измеренный pH равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,3.
55. Способ по любому из пп. 49-54, дополнительно включающий этап измерения откорректированного pH среды для замораживания.
56. Способ по п. 49, отличающийся тем, что если измеренный pH среды для замораживания ниже целевого pH, этап корректировки и этап измерения повторяют до достижения откорректированного pH среды для замораживания от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5.
57. Способ по любому из пп. 49-56, отличающийся тем, что pH корректируют путем добавления основания.
58. Способ по п. 57, отличающийся тем, что основание выбирают из группы, состоящей из карбоната натрия, бикарбоната натрия, натриевой соли N-2-гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновой кислоты, гидроксида натрия и гидроксид калия.
59. Способ по любому из пп. 49-58, отличающийся тем, что клетки млекопитающего находятся в среде с pH от приблизительно 6,2 до приблизительно 6,6 перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
60. Способ по любому из пп. 49-59, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО, глицерин, пропандиол, этиленгликоль или сахар.
61. Способ по п. 60, отличающийся тем, что криопротектор представляет собой ДМСО или глицерин и концентрация ДМСО или глицерина в пуле клеток составляет от приблизительно 5% до приблизительно 12,5% по объему.
62. Способ по п. 61, отличающийся тем, что концентрация ДМСО или глицерина в пуле клеток составляет от приблизительно 5% до приблизительно 10% по объему.
63. Способ по любому из пп. 49-62, отличающийся тем, что пул клеток содержит клетки млекопитающего при плотности клеток, определенной как объем осажденных клеток (ООК), от приблизительно 8% до приблизительно 28%.
64. Способ по любому из пп. 49-63, дополнительно включающий этап охлаждения жидкой культуры клеток в процессе сбора и концентрирования клеток перед объединением клеток млекопитающего со средой для замораживания.
o
65. Способ по п. 64, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 20C.
o
66. Способ по п. 64, отличающийся тем, что жидкую культуру клеток охлаждают до температуры, равной или более низкой чем приблизительно 10C.
67. Способ по любому из пп. 1-66, отличающийся тем, что клетки млекопитающего представляют собой клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки миеломы мыши NS0, клетки человека PER.C6 или гибридомы.
68. Способ по любому из пп. 1-67, отличающийся тем, что клетки млекопитающего содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид.
69. Способ по п. 68, отличающийся тем, что полипептид представляет собой терапевтический белок.
70. Способ по п. 69, отличающийся тем, что терапевтический белок выбран из группы, состоящей из антитела, фрагмента антитела, фермента и рецепторного белка слияния.
71. Пул клеток млекопитающего для замораживания клеток млекопитающего, содержащий буферный раствор, криопротектор, и клетки млекопитающего, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, отличающийся тем, что pH среды равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5 перед замораживанием клеток.
72. Пул клеток по п. 71, отличающийся тем, что клетки млекопитающего представляют собой клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки миеломы мыши NS0, клетки человека PER.C6 или гибридомы.
73. Пул клеток по п. 71 или 72, отличающийся тем, что клетки млекопитающего содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид.
74. Пул клеток по п. 73, отличающийся тем, что полипептид представляет собой терапевтический белок.
75. Пул клеток по п. 74, отличающийся тем, что терапевтический белок выбран из группы, состоящей из антитела, фрагмента антитела, фермента и рецепторного белка слияния.
76. Банк клеток, содержащий множество контейнеров, причем каждый контейнер содержит (a), среду для замораживания, содержащую буферный раствор и криопротектор, и (b) клетки млекопитающего, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, причем рН среды для замораживания равен от приблизительно 6,7 до приблизительно 8,5 перед замораживанием клеток.
77. Банк клеток по п. 76, отличающийся тем, что контейнеры представляют собой ампулы.
78. Банк клеток по п. 76 или 77, отличающийся тем, что клетки млекопитающего представляют собой клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки миеломы мыши NS0, клетки человека PER.C6 или гибридомы.
79. Банк клеток по любому из пп. 76-78, отличающийся тем, что клетки млекопитающего содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид.
80. Банк клеток по п. 79, отличающийся тем, что полипептид представляет собой терапевтический белок.
81. Банк клеток по п. 80, отличающийся тем, что терапевтический белок выбран из группы, состоящей из антитела, фрагмента антитела, фермента и рецепторного белка слияния.