Особенности морфологии и иммунофенотипа опухолевых клеток лимфомы из клеток маргинальной зоны селезенки (исследование с помощью клеточного биочипа)

Особенности морфологии и иммунофенотипа опухолевых клеток лимфомы из клеток маргинальной зоны селезенки

CV

А.Н. Хвастунова1, 2, Л.С. Аль-Ради3, О.С. Федянина1, 2, У. Л. Джулакян3, Н.М. Капранов2, 3, А.О. Закирова1, 2, С.А. Луговская4, Е.В. Наумова4, Ф.И. Атауллаханов1, 2, С.А. Кузнецова1, 2

1Лаборатория биофизики ФГБУ«Национальный научно-практический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России; Россия, 117997Москва, ул. Саморы Машела, 1; 2Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН; Россия, 119991 Москва, ул. Косыгина, 4; ФГБУ«Гематологический научный центр» Минздрава России; Россия, 125167Москва, Новый Зыковский проезд, 4а; 4ФГБОУДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России;

Россия, 125993 Москва, ул. Баррикадная, 2/1, стр. 1

Контакты: Алина Николаевна Хвастунова alina_shunina@mail.ru

В работе исследованы морфология и иммунофенотип циркулирующих опухолевых клеток, выделенных из периферической крови о 22 пациентов с лимфомой из клеток маргинальной зоны селезенки, и показана их морфологическая и иммунофенотипическая гетерогенность. С помощью клеточного биочипа показано, что опухолевые клетки положительны по CD19 (100 %), CD20 (100 %), <— CD22 (100 %), поверхностному IgM (73 %), CD38 (23 %), CD5 (9 %), CD11c (36 %), CD103 (5 %), CD25 (32 %), CD23 (23 %), g и полученные иммунофенотипы подтверждены результатами проточной цитометрии для каждого из пациентов. Высокая плотность связывания лимфоцитов на клеточном биочипе по сравнению с мазком позволяет выявить клетки с патологической морфологией даже при глубокой лейкопении. ж

Ключевые слова: клеточный биочип, лимфома из клеток маргинальной зоны селезенки, морфологический анализ, иммунофенотип,

маркеры CD5, CD11c, CD23, CD25, CD103 о

t—

- ei

DOI: 10.17650/1818-8346-2017-12-1-71-77 ш

Determination of morphology and immunophenotype of circulating lymphoma cells in patients ac

with splenic marginal zone lymphoma using an anti-CD antibody microarray о

A.N. Khvastunova1,2, L.S. Al-Radi3, O.S. Fedyanina1,2, U.L. Julhakyan3, N.M. Kapranov2,3, A.O. Zakirova1,2, S.A. Lugovskaya4, E.V. Naumova4, F.I. Ataullakhanov1,2, S.A. Kuznetsova1, 2

Laboratory of Biophysics, National Scientific and Practical Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunnology named after Dmitry Rogachev, Ministry of Health of Russia; 1 Samory Mashela St., Moscow 117997, Russia; 2Theoretical Problems Center of Physical and Chemical Pharmacology RAS; 4 Kosygina St., Moscow 119991, Russia; 3Hematological Research Center; 4A, Noviy Zykovsky Proezd, Moscow, Russia, 125167 4Russian Medical Academy of Continuous Professional Education, Ministry of Health of Russia; 2/1 Bild. 1 Barrikadnaya St., Moscow 125993, Russia

We have studied the morphology and immunophenotype of circulating tumor cells isolated from peripheral blood of 22 patients with splenic marginal zone lymphoma and show that both of them are highly heterogeneous. Using a cell-binding microarray we have demonstrated that the circulating lymphoma cells are positive for CD19 (100 %), CD20 (100 %), CD22 (100 %), surface IgM (73 %), CD38 (23 %), CD5 (9 %), CD11c (36 %), CD103 (5 %), CD25 (32 %), CD23 (23 %) and these immunophenotypes are confirmed in all cases by flow cytometry. Higher surface density of lymphocyte binding onto anti-CD antibody microarray spots compared to blood smears permits to find circulating lymphoma cells even in leukopenic patients.

Key words: anti-CD antibody microarray, splenic marginal zone lymphoma, morphology, immunophenotype, CD5, CD11c, CD23, CD25, CD103

Введение

Лимфома из В-клеток маргинальной зоны селезенки (ЛКМЗС) составляет около 1 % всех лимфоид-ных опухолей. Впервые это заболевание было описано R.A. Hickling в 1961 г. и G. Duhamel и соавт. в 1978 г. В 1982 г. А.И. Воробьев и М.Д. Бриллиант выделили ЛКМЗС как самостоятельную нозологическую фор-

му [1]. Заболевание чаще всего возникает у больных в возрасте старше 50 лет и характеризуется опухолевой пролиферацией В-лимфоцитов в зародышевых центрах белой пульпы селезенки. Ведущими симптомами являются выраженная спленомегалия и поражение костного мозга и крови без вовлечения перифериче-

cv

ев

N

ских лимфатических узлов. У 50 % больных ЛКМЗС в периферической крови наблюдаются умеренная анемия, тромбоцитопения и лейкоцитоз, редко превышающий 25 х 109/л [2].

Обычно опухолевые клетки представлены атипичными лимфоцитами среднего и большого размера, имеющими округлое ядро, часто с вмятинами, расщепленное, с глыбчатой или сглаженной структурой хроматина, возможно, с наличием ядрышек. Цитоплазма этих клеток широкая, голубого цвета с пери-нуклеарным просветлением, может иметь тонкие короткие выросты, часто локализованные на одном из полюсов клетки, или широкие выпячивания цитоплазмы на противоположных полюсах клетки [2—4]. В цитоплазме может наблюдаться вакуолизация. Если в крови более 20 % лимфоцитов имеют выросты цитоплазмы, то речь идет о ЛКМЗС с ворсинчатыми клетками [2]. Однако наличие лимфоцитов с выростами цитоплазмы свойственно также волосатоклеточно-му лейкозу (ВКЛ), его вариантной форме ВКЛ-В [5, 6] и мелкоклеточной лимфоме из клеток красной пульпы селезенки (ЛКПС) [7-10].

Для опухолевых клеток ЛКМЗС характерна экспрессия поверхностных иммуноглобулинов классов ^М+, ^Б+/-, экспрессия маркеров СБ19+, СБ20+, СБ22+, СБ24+, СБ79а+, БМС7+ [2, 11-13]. Как правило, опухолевые клетки не экспрессируют СБ5, СБ 10, СБ23, СБ43 и СБ 103 [11]. Активационные

маркеры CD25 и CD38 либо не экспрессируются, либо определяются в небольшом числе клеток [12]. Может встречаться экспрессия маркера CD5 (у 12— 50 % пациентов, по данным F. Berger и соавт. [11]). Известны случаи, когда опухолевые клетки экспрес-сировали маркер CD103 [14], CD23 (в 10-31 % случаев) [11], а в работе E. Matutes и соавт. [12] указано, что экспрессия CD11c может встречаться в 50 % случаев и более.

Таким образом, необходимо отличать ЛКМЗС от хронического В-клеточного лимфолейкоза (В-ХЛЛ), лимфомы из клеток мантийной зоны, ВКЛ и ВКЛ-В, ЛКПС и др. Морфологическое и иммунофенотипиче-ское сходство ЛКМЗС с указанными лимфопролифе-ративными заболеваниями, протекающими с преимущественной спленомегалией, создает трудности в ее диагностике.

Ранее мы показали, что клеточный биочип дает заметное преимущество в диагностике гемобластозов, сопровождающихся лейкопенией [15, 16]. На биочипе достигается высокая, по сравнению с мазком, поверхностная концентрация клеток (рис. 1в), что дает возможность обнаружить даже редкие опухолевые клетки. Кроме того, биочип позволяет «сортировать» клетки по их поверхностным антигенам (рис. 1а, б), благодаря чему можно провести корреляцию морфологии опухолевых клеток с иммунофенотипом (рис. 1е) [15, 16]. Таким образом, биочип оказывается чрезвычайно

Схема биочипа / Microarray diagram

Здоровый донор / Healthy donor

2 3 4 5 7 8

10 11с 13 14 15 16

19 20 21 22 23 25

33 38 43 45 45ra 45го

235а 41 56 IgM 103 123

85j к X HLA -DR 200 mlgG

Рис. 1. Принцип работы биочипа: а — схема расположения пятен антител на биочипе; б — биочип со связавшимися мононуклеарами периферической крови здорового донора; в, г — морфология клеток, связавшихся с иммобилизованным антителом к CD3, при х40(в), х200(г); д, е — морфология клеток, связавшихся с антителами к CD19 (при х 1000), у здорового донора (д), у пациента с лимфомой из В-клеток маргинальной зоны селезенки (е). Окрашивание по Паппенгейму

Fig. 1. Microarray design: a — diagram of antibody spots on the microarray; б — microarray with bound peripheral blood mononuclear cells of a healthy donor; в, г — morphology of cells bound to immobilized CD3 antibodies at magnification х40 (в), х200 (г); д, е — morphology of cells bound to CD19 antibodies (at х 1000), in a healthy donor (д), in patient with splenic marginal zone lymphoma (е). Pappenheim stain

б

а

д

г

удобным инструментом для исследования опухолевой популяции клеток, имеющей определенный иммуно-фенотип, а следовательно, и для проведения дифференциальной диагностики заболеваний со схожей морфологией опухолевых клеток.

Цель данной экспериментальной исследовательской работы — детальное изучение морфологических характеристик и иммунофенотипа опухолевых клеток при ЛКМЗС с помощью разработанного в нашей группе клеточного биочипа.

Материалы и методы

Исследование проводилось на базе лаборатории биофизики на базе ФГБУ «Национальный научно-практический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачева» Минздрава России. Исследование с помощью биочипа выполняли А.Н. Хвастунова, С. А. Кузнецова, О. С. Федянина, Н.М. Капранов, А. О. Закирова. Ф.И. Атауллаханов и С.А. Кузнецова — руководители работы.

Кровь пациентов поступила из ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России при участии врачей Л. С. Аль-Ради и У. Л. Джулакяна.

Иммунофенотипы опухолевых лимфоцитов всех исследованных пациентов подтверждены результатами проточной цитометрии, которые предоставили С.А. Луговская и Е.В. Наумова (ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России).

Пациенты. В работе исследованы образцы периферической крови 22 пациентов с диагнозом ЛКМЗС. Медиана возраста больных составила 64 года (51— 78 лет). Наблюдалось преобладание лиц женского пола с соотношением 1 : 2. Во всех случаях были выявлены спленомегалия, лимфоцитоз. Лейкопения встречалась в 2/3 случаев, медиана количества лейкоцитов в общем анализе крови составляла 7,3 х 109/л (с разбросом от 2 х 109/л до 28 х 109/л).

Анализ лимфоцитов с помощью клеточного биочипа. Клеточный биочип — прозрачная пластиковая подложка размером 22 х 22 мм из пластифицированного поли-винилхлорида (Fisher Scientific, США), на которой иммобилизованы антитела к следующим CD-антигенам лейкоцитов: CD2, CD3, CD5, CD7, CD10, CD16, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD38, CD45, CD56 (ООО «Сорбент», Москва), CD4, CD8, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD25, CD33, CD41a, CD43, CD45RA, CD45R0, CD64, CD85j, CD103, CD123, CD200, CD235a, HLA-DR, IgM, к и X легким цепям Ig, а также смесь мышиных IgG (eBioscience, США) (см. рис. 1а).

Биочип инкубировался 30 мин при 4 °C с суспензией мононуклеарных клеток, полученной путем центрифугирования в градиенте плотности Histo-paque-1077 из периферической крови: 5 х 106 клеток/мл в фосфатном буфере (PBS) с 1 % бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 20 % эмбриональной телячьей сыворотки. Лимфоциты, несущие опре-

CS

деленный поверхностный антиген, связывались с иммобилизованными на биочипе антителами. Далее биочип отмывали от неспецифически связавшихся клеток, высушивали и окрашивали по Паппенгейму (см. рис. 1б).

Морфологическое исследование клеток проводили с помощью микроскопа Olympus BX45 с фотокамерой SP10.0238 Moticam 1300. При этом исследовали от 200 до 500 клеток, связавшихся с каждым из антител, им- о мобилизованных на биочипе.

Определение иммунофенотипа клеток с патологической морфологией. Поскольку маркер CD19 присутствует на поверхности всех В-лимфоцитов, то клетки,  связавшиеся с антителом к CD19, представляли собой z чистую популяцию В-клеток, значительно обогащенную опухолевыми лимфоцитами. Поэтому морфологи- см ческое исследование опухолевых клеток и определение Е размера опухолевой популяции проводили для лимфоцитов, связавшихся на биочипе с анти-CD19. Опухоле- г« вые клетки считали положительными по маркеру CDх, о если плотность клеток с патологической морфологией, Г^ связавшихся с анти-CDх, превышала 75 % от плотности данных клеток на анти-CD19. Клональность определяли по связыванию опухолевых клеток с антителами «— к легким к- и Х-цепям Ig. ^

Результаты и обсуждение ^

Морфологические характеристики опухолевых кле- ш ток. В периферической крови всех 22 пациентов с ЛКМ- о ЗС были обнаружены опухолевые клетки в количестве JE от 22 до 96 % (медиана 66 %) от всех лимфоцитов. о

У 11 пациентов (50 %) морфология опухолевых клеток была представлена лимфоцитами малых и средних размеров диаметром 8—12 мкм, со зрелой глыбчатой или сглаженной структурой хроматина, округлой или овальной формой ядра (рис. 2а, б), а также пролимфоцитами, которые составляли от 6 до 25 % от всех В-клеток. У других 11 пациентов (50 %) опухолевые клетки имели морфологию широкоплазменных лимфоцитов диаметром 12—18 мкм, с округлой или овальной формой ядра, рыхлой или сглаженной структурой хроматина, светло-голубой цитоплазмой и перинуклеарным просветлением (рис. 2в, г).

У 5 пациентов (23 %) были также обнаружены клетки с фестончатым краем цитоплазмы (рис. 2д) или с короткими цитоплазматическими выростами или выпячиваниями, часто расположенными неравномерно по контуру клетки (рис. 2е). Данная морфология клеток больше характерна для ВКЛ, ВКЛ-В или ЛК-ПС. Однако ворсинчатые клетки были обнаружены в небольшом количестве (от 6 до 33 % всех CD19+ В-лимфоцитов), и только у 2 из 5 пациентов они были найдены среди клеток, связавшихся с антителами к CD11c, CD25.

У 9 пациентов (41 %) примерно в трети опухолевых клеток (медиана 30 %) отмечена вакуолизация цитоплазмы (см. рис. 2г).

cv

ев

N

Рис. 2. Морфологические варианты опухолевых клеток, связавшихся в пятнах биочипа анти-CDK при лимфоме из В-клеток маргинальной зоны селезенки. Окрашивание по Паппенгейму, х 1000: а — малые зрелые лимфоциты

Fig. 2. Morphological variants of tumor cells bound to anti-CD19 microarray spots in splenic marginal zone lymphoma. Pappenheim stain, х 1000: a — small mature lymphocytes

У 7 пациентов (32 %) в среднем в 20 % СБ19+ клеток визуализировалось 1 округлое ядрышко (рис. 2з), и у 2 из этих пациентов среди циркулирующих опухолевых клеток присутствовали лимфоциты с базофиль-ной цитоплазмой, волокнистым или в виде толстых нитей хроматином и крупными светлыми округлыми ядрышками (от 1 до 4 в ядре) (рис. 2и). У 2 пациентов наблюдались клетки с омоложенной, бластоподобной структурой хроматина. Среди клеток, содержащих четкие, видимые ядрышки, встречались двуядерные лимфоциты, клетки с дольчатой, бобовидной, ганте-левидной формой ядра или с тонкими расщелинами в ядре (рис. 2ж).

В целом данные о морфологической разнородности опухолевых клеток при ЛКМЗС на биочипе

хорошо согласуются с литературой [3, 17, 18]. Использование клеточного биочипа значительно упрощает поиск опухолевых клеток за счет их концентрирования в пятнах антител, облегчая подсчет и морфологический анализ.

Иммунофенотип опухолевых клеток. В работе была использована достаточно широкая панель антител, включающая в себя антитела к В- и Т-клеточным маркерам и маркерам, используемым при дифференциальной диагностике ЛКМЗС: СБ5, СБ11е, СБ23, СБ25, СБ103 и др. (см. рис. 1а). Иммунофенотип клеток с патологической морфологией определяли на биочипе по их присутствию в пятнах соответствующих антител.

Результаты исследования особенностей иммуно-фенотипа опухолевых лимфоцитов представлены в таблице. Во всех 22 случаях ЛКМЗС опухолевые клетки экспрессировали СБ19 (100 %), СБ20 (100 %), СБ22 (100 %) и были отрицательны по СБ2, СБ10, СБ123, у части пациентов было показано связывание опухолевых клеток с анти-^М (73 %), анти-СБ38 (23 %). При определении клональности соотношение к и X клонов составило 55 и 45 % соответственно. У некоторых пациентов было обнаружено связывание опухолевых клеток с антителами к СБ5 (9 %), СБ11е (36 %), СБ103 (5 %), СБ25 (32 %), СБ23 (23 %). Им-мунофенотипы опухолевых клеток всех пациентов с ЛКМЗС, полученные при исследовании на клеточном биочипе, включая аберрантную экспрессию маркеров, были подтверждены результатами проточной цитометрии.

Экспрессия маркера СБ5 является типичной для В-ХЛЛ и лимфомы из клеток мантийной зоны. Тем не менее она может встречаться и при ЛКМЗС с частотой от 12 до 50 % случаев, по данным различных исследований [5, 11]. В некоторых наблюдениях наличие СБ5 коррелировало с плохим прогнозом, таким как бластная трансформация [21], резистентность к терапии [22] и присутствие деле-ции в коротком плече хромосомы 17 [23]. В некоторых случаях сообщалось о коэкспрессии СБ5, СБ23 и СБ43 в опухолевых клетках при ЛКМЗС, что имитирует классический иммунофенотип опухоли при В-ХЛЛ [11].

В нашей работе опухолевые клетки, положительные по СБ5, были найдены у 2 пациентов. Приведем данные исследования одной из них.

Больная Ш., 52 года, с ЛКМЗС с трансформацией в диффузную В-клеточную крупноклеточную лимфому с вовлечением висцеральных и периферических лимфоузлов, костного мозга с лейкемизацией. Общий анализ крови: гемоглобин — 148 г/л, эритроциты — 5 х 1012/л, тромбоциты — 344 х 10>/л, лейкоциты — 20 х 109/л, лимфоидные клетки — 50 %. В периферической крови популяция опухолевых В-клеток с иммунофенотипом СБ5+, СБ19+, СБ20+, СБ22+, СБ25+/-, СБ38+, СШ1с-, СБ23-, СБ103- составляла 88 %. Клеточный состав был

полиморфен. Наряду со зрелыми лимфоцитами малых размеров и пролимфоцитами присутствовало 20 % клеток с омоложенным хроматином бластоподобной структуры (см. рис. 2и).

L. Baseggio и соавт. показали, что пациенты с CD5+-опухолевыми клетками составляют подгруппу ЛКМЗС с более высоким лимфоцитозом и большим количеством клональных В-лимфоцитов в периферической крови [24]. Циркулирующий в периферической крови субстрат опухоли у данной подгруппы пациентов морфологически разнороден и представлен малыми лимфоцитами, центроцитоподобными и лимфоплазмо-цитоидными клетками, лимфоцитами с короткими выростами цитоплазмы на одном из полюсов клетки и крупными лимфоцитами с широкой бледно окрашенной цитоплазмой и омоложенным хроматином (схожие с показанными на рис. 2в, г) [24], что хорошо согласуется с нашими данными. Клетки с ядрышками, обнаруженные у пациентки Ш. (см. рис. 2и), в работе L. Baseggio и соавт. [24] не были обнаружены.

В нашем исследовании антигены CD10 и CD123 не были выявлены ни у одного из пациентов. В литературе описаны единичные случаи CD10+ ЛКМЗС [11] и показано, что при ЛКМЗС опухолевые клетки могут быть положительными по CD123 менее чем в 25 % случаев, но всегда с низким уровнем экспрессии [5, 25].

Ранее было показано, что маркер CD11c всегда присутствует на опухолевых клетках при ВКЛ и ВКЛ-В [3, 5], в большинстве случаев (до 50 %) — при ЛКМЗС [12, 19] и изредка экспрессируется на поверхности опухолевых клеток при В-ХЛЛ и лимфоме из клеток мантийной зоны [26]. В нашей работе у 36 % пациентов с ЛКМЗС опухолевые клетки экспрессировали CD11a Одновременное связывание опухолевых клеток с антителами к CD11c и CD103 не наблюдалось ни у одного из пациентов.

Маркер CD23, как правило, используется в дифференциальной диагностике В-ХЛЛ с лимфомой из клеток мантийной зоны, но при ЛКМЗС опухолевые клетки также могут экспрессировать данный антиген в 10—31 % случаев [11, 12], что коррелирует с отсутствием del7q31 [27]. В данном исследовании опухолевые клетки CD23+ были найдены в 23 % случаев (у 5 пациентов из 22), что хорошо согласуется с данными F. Berger и соавт. и E. Matutes и со-авт. [11, 12].

При ЛКМЗС с ворсинчатыми лимфоцитами экспрессия маркеров CD23 и CD11c является взаимоисключающей, что было показано D. Treton и соавт. [28]. В нашем исследовании также ни у одного из пациентов опухолевые клетки не связывались одновременно с антителами к CD23 и CD11c.

В публикациях показано, что антиген CD25 всегда обнаруживают на поверхности опухолевых клеток при ВКЛ и никогда при ВКЛ-В [3, 5] или ЛКПС [7, 10], а при ЛКМЗС маркер CD25 выявляется в 25 % случаев [12]. В данном исследовании экспрессия CD25

на опухолевых клетках при ЛКМЗС была обнаружена в 32 % (7/22) случаев, что хорошо согласуется с результатами E. Matutes и соавт. [12].

По данным литературы, CD38 экспрессируется на поверхности опухолевых клеток при ЛКМЗС в 22— 30 % случаев [5, 12], и его наличие на опухолевых клетках характеризует подгруппу ЛКМЗС с более агрессивным течением [29]. Среди исследованных нами пациентов маркер CD38 на опухолевых клетках встречался с частотой 23 % (5/22).

CD103 является высокоспецифичным маркером типичной формы ВКЛ и в меньшей степени — ВКЛ-В [3, 5, 14, 26], но может встречаться и при других лим-фопролиферативных заболеваниях [14]. По данным литературы [12, 20], экспрессия CD103 на опухолевых клетках обнаружена у 15 и 40 % пациентов с ЛКМЗС соответственно. В нашем исследовании экспрессия CD103 на опухолевых клетках присутствовала у 1 из 22 пациентов.

Заключение

Морфологические особенности циркулирующих опухолевых клеток при лимфоме из клеток маргинальной зоны селезенки до сих пор изучены мало, прежде всего в связи с невысокой частотой данного заболевания и низкой концентрацией опухолевых клеток в периферической крови. Хотя все источники указывают на морфологическую разнородность опухолевых клеток при ЛКМЗС, подробное описание

Частота выявления иммунофенотипов опухолевых лимфоцитов при лимфоме из клеток маргинальной зоны селезенки по данным собственного исследования и литературных публикаций [5, 11, 12, 19, 20]

Frequency of identification of tumor lymphocyte immunophenotypes from splenic marginal zone lymphoma according to our data and literature [5, 11, 12, 19, 20]

Маркер Собственные данные, % (n/N) Authors' datа, % (n/N) Данные публикаций, % Literature йа!а, %

CD19 100 (22/22) 100

CD20 100 (22/22) 89-100

CD22 100 (22/22) 100

CD11c 36 (8/22) 50-67

CD103 5(1/22) 15-40

CD123 0(0/18) 0-25

CD5 9 (2/22) 12-50

CD10 0 (0/22) 0

CD23 23(5/22) 10-38

CD38 23 (5/22) 22-30

CD25 32 (7/22) 22-25

cv

CS

N

cv

ев

возможных морфологических типов клеток при данном заболевании в литературе не встречается, что может затруднить диагностику ЛКМЗС [30]. Наиболее полное сравнительное описание морфологии и имму-нофенотипа циркулирующих опухолевых клеток при ЛКМЗС, ВКЛ и ВКЛ-В содержится в работе Н. БИао и соавт. [5], однако в нее включены лишь 6 пациентов с ЛКМЗС. Использование клеточного биочипа, сортирующего клетки по поверхностным СБ-антигенам, позволяет исследовать чистую популяцию В-лимфоцитов и получить более подробную картину морфологического разнообразия циркулирующих опухолевых клеток при ЛКМЗС. Выделенные в данной работе морфологические варианты циркулирующих опухолевых клеток при ЛКМЗС в целом

хорошо согласуются с данными других авторов [5, 24]. Полученные результаты по иммунофенотипу опухолевых клеток во всех случаях совпадают с результатами проточной цитометрии и хорошо соответствуют литературным данным (см. таблицу).

Инфильтрация костного мозга опухолевыми лимфоцитами и присутствие в периферической крови циркулирующих опухолевых клеток наблюдается практически у всех пациентов с ЛКМЗС на момент постановки диагноза [31]. Исследование лимфоцитов периферической крови с помощью биочипа позволяет обнаружить опухолевые клетки при ЛКМЗС, определить их иммунофенотип и выявить аберрантную экспрессию маркеров на их поверхности, что облегчает дифференциальную диагностику ЛКМЗС.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

N

1. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д. Лимфо-цитома селезенки и классификация лимфоцитом. Терапевтический архив 1982;8:8-14. [Vorob'ev A.I., Brilliant M.D. Spleen lymphocytoma and Lymphocyto-mas classification. Terapevticheskiy arkhiv = Therapeutic ^chive 1982;8:8-14.

(In Russ.)].

2. Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. М. — Тверь: Триада, 2011. [Lugovskaya S.A., Pochtar' M.E. Hematologic Atlas. Moscow — Tver: Triada, 2011 (In Russ.)].

3. Bain B.J. Leukemia Diagnosis. 4th Ed. Singapore: Wiley-Blackwell, 2010.

4. Julhakyan U., Magomedova A., Kravchenko S. et al. Splenic marginal zone lymphoma: characteristics and treatment. Haematologica 2011;96(S2):393—4.

5. Shao H., Calvo K.R., Gronborg M. et al. Distinguishing hairy cell leukemia variant from hairy cell leukemia: Development and validation of diagnostic criteria. Leuk Res 2013;37:401-9.

DOI: 10.1016/j.leukres.2012.11.021. PMID: 23347903.

6. Robak T. Hairy-cell leukemia variant: recent view on diagnosis, biology and treatment. Cancer Treat Rev 2011;37(1): 3—10. DOI: 10.1016/j.ctrv.2010.05.003. PMID: 20558005.

7. Traverse-Glehen A., Baseggio L., Callet-Bauchu E. et al. Splenic red pulp lymphoma with numerous basophilic villous lymphocytes: a distinct clinicopathologic and molecular entity? Blood 2008;111:2253-60.

DOI: 10.1182/blood-2007-07-098848. PMID: 18042795.

8. Ковригина А.М., Коржова С.М., Аль-Ради Л.С. и др. Патоморфологическая диагностика диффузной мелкоклеточной В-клеточной лимфомы красной

пульпы селезенки. Клиническая онко-гематология 2016;9(3):287-95. [Kovri-gina A.M., Korzhova S.M., Al-Radi L.S. et al. Pathomorphological diagnosis of splenic diffuse red pulp small B-cell lymphoma. Klinicheskaya onkogema-tologiya = Clinical Oncohematology 2016;9(3):287-95. (In Russ.)]. DOI: 10.21320/2500-2139-2016-9-3-287-295.

9. Аль-Ради Л.С., Моисеева Т.Н., Джула-кян У.Л. и др. Опыт изучения лимфомы красной пульпы селезенки. Терапевтический архив 2016;88(2):78-80. [Al-Radi L.S., Moiseeva T.N., Julhakyan U.L. et al. Experience in investigating splenic red pulp lymphoma. Terapevticheskiy Аг1Лгу = Therapeutic Агскте 2016;88(2):78-80. (In Russ.)].

DOI: 10.17116/terarkh201688453-60. PMID: 27070164.

10. Julhakyan H.L., Al-Radi L.S., Moiseeva T.N. et al. A single-center experience in splenic diffuse red pulp lymphoma diagnosis. Clin. Lymphoma Myeloma Leuk 2016;

16 (S1):166-9.

DOI: 10.1016/j.clml.2016.03.011. PMID: 27131623.

11. Berger F., Felman P., Thieblemont C. et al. Non-MALT marginal zone B-cell lymphomas: a description of clinical presentation and outcome in 124 patients. Blood 2000;95(6):1950-6. PMID: 10706860.

12. Matutes E., Morilla R, Owusu-Ankomah K. et al. The immunophenotype of splenic lymphoma with villous lymphocytes and its relevance to the differential diagnosis with other B-cell disorders. Blood 1994; 83(6):1558-62. PMID: 8123845.

13. Джулакян У.Л., Гриншпун Л.Д. Селезеночная лимфома из клеток маргинальной зоны (лимфомоцитома селезенки) у пожилых пациентов: клиника, диагностика, лечение. В кн.: Гериатриче-

ская гематология. Заболевания системы крови в старших возрастных группах. Т. 2. Под ред. Л.Д. Гриншпун, А.В. Пивника. М.: Медиум, 2012. С. 237-44. [Julhakyan U.L., Grinshpun L.D. Splenic lymphoma from marginal zone cells (spleen lymphocytoma) in elderly patients: symptoms, diagnosis, treatment. In: Geriatric hematology. Blood diseases in elderly patients. Eds.: L.D. Grinshpun, A.V. Pivnik. Moscow: Medium, 2012. Vol. 2. Рp. 237-44. (In Russ.)].

14. Dong H.Y., Weisberger J., Liu Z. et al. Immunophenotypic analysis of CD103+ B-lymphoproliferative disorders:

hairy cell leukemia and its mimics. Am J Clin Pathol 2009;131(4):586-95. DOI: 10.1309/AJCPL13YDUHFKPJU. PMID: 19289595.

15. Khvastunova A.N., Kuznetsova S.A., Al-Radi L.S. et al. Anti-CD antibody mi-croarray for human leukocyte morphology examination allows analyzing rare cell populations and suggesting preliminary diagnosis in leukemia. Sci Rep 2015;5:12573. DOI: 10.1038/srep12573.

PMID: 26212756.

16. Хвастунова А.Н., Аль-Ради Л.С., Капранов Н.М. и др. Использование клеточного биочипа в диагностике волосатоклеточного лейкоза. Онко-гематология 2015;1:37-45. [Khvastunova A.N., Al-Radi L.S., Kapranov N.M. et al. Cell-binding microarray application in diagnosis of hairy cell leukemia. Onkogematologiya = Oncohematology 2015;1:37-45. (In Russ.)].

DOI: 10.17650/1818-8346-2015-1-37-45.

17. Thieblemont C., Felman P., Callet-Bauchu E. et al. Splenic marginal-zone lymphoma: a distinct clinical and pathological entity. Lancet

Oncol 2003;4:95-103.

DOI: 10.1016/S1470-2045(03)00981-1. PMID: 12573351.

18. Oscier D., Owen R., Johnson S. Splenic marginal zone lymphoma. Blood Rev 2005;19:39-51.

DOI: 10.1016/j.blre.2004.03.002. PMID: 15572216.

19. Kost C., Holden J., Mann K. Marginal zone B-cell lymphoma: A retrospective immunophenotypic analysis. Cytometry B Clin Cytom 2008;74B(5):282-6.

DOI: 10.1002/cyto.b.20426. PMID: 18500740.

20. Ocio E., Hernandez J.M., Mateo G. et al. Immunophenotypic and cytogenetic comparison of Waldenstrom's macroglobulinemia with splenic marginal zone lymphoma. Clin Lymphoma 2005;5(4):241-5. PMID: 15794856.

21. Kuwayama M., Machii T., Yamaguchi M. et al. Blastic transformation of splenic lymphoma with villous lymphocytes after a well-controlled chronic phase of more than 10 years. Int J Hematol 2000;71(2):167-71.

PMID: 10745627.

22. Giannouli S., Paterakis G., Ziakas P.D. et al. Splenic marginal zone lymphomas with peripheral CD5 expression. Haematologica 2004;89(1):113-4. PMID: 14754618.

23. Gimeno E., Salido M., Solé F. et al. CD5 negative and CD5 positive splenic marginal B-cell lymphomas have differential cytogenetic patterns. Leuk Res 2005;29(8):981-2.

DOI: 10.1016/j.leukres.2005.02.001. PMID: 15978952.

24. Baseggio L., Traverse-Glehen A., Petinataud F. et al. CD5 expression identifies a subset of splenic marginal zone lymphomas with higher lymphocytosis:

a clinico-pathological, cytogenetic and molecular study of 24 cases. Haematologica 2010;95(4):604-12. DOI: 10.3324/haematol.2009.011049. PMID: 20015887.

25. Venkataraman G., Aguhar C., Kreitman R.J. et al. Characteristic CD103 and CD123 Expression Pattern Defines Hairy Cell Leukemia Usefulness of CD123 and CD103 in the Diagnosis of Mature B-Cell Lymphoproliferative Disorders.

Am J Clin Pathol 2011;136:625-30. DOI: 10.1309/AJCPKUM9J4IXCWEU. PMID: 21917686.

26. Ortolani C. Flow cytometry of hematological malignancies. John Wiley & Sons, 2011.

27. Boonstra R., Bosga-Bouwer A., van Im-hoff G.W. et al. Splenic marginal zone lymphomas presenting with splenomegaly and typical immunophenotype are charac-

terized by allelic loss in 7q31-32. Mod Pathol 2003;16(12):1210-17. DOI: 10.1097/01.MP.0000095895.19756.77. PMID: 14681321.

28. Treton D., Valensi F., Troussard X. et al. Cytokine response of B lymphocytes from splenic lymphoma with villous lymphocytes: correlation with TNF-RII (p75) and CD11c expression. Hematol Cell Ther 1996;38(4):345-52.

PMID: 8891726.

29. Ruiz-Ballesteros E., Mollejo M., Rodriguez A. et al. Splenic marginal zone lymphoma. Proposal of new diagnostic and prognostic markers identified after tissue and cDNA microarray analysis. Blood 2005;106(5):1831-8.

DOI: 10.1182/blood-2004-10-3898. PMID: 15914563.

30. Sorigue M., Junca J., Gassiot S. et al.

A case of splenic marginal zone lymphoma with mismatched morphology and pheno-type, karyotype and clinical course. Ann Hematol Oncol 2015;2(1):id1016. Available at: http://austinpublishinggroup.com/ hematology/fulltext/hematology-v2-id1016.php.

31. Pins M.A., Onaindia A., Mollejo M. Splenic marginal zone lymphoma. Best Pract Res Clin Haematol 2017;30(1-2):56-64. DOI: 10.1016/j.beha.2016.09.005.

cv

ев

N