ПРОДУЦИРОВАНИЕ ВЫСОКОМАННОЗНЫХ БЕЛКОВ В РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ

1. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая лизосомальный белок человека, непрерывно связанный с С-концевым вакуолярным нацеливающим сигнальным пептидом и N-концевым сигнальным пептидом для направления белка в эндоплазматическую сеть.
2. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая лизосомальный белок человека, непрерывно связанный с С-концевым сигнальным пептидом для удержания в эндоплазматической сети и N-концевым сигнальным пептидом для направления белка в эндоплазматическую сеть.
3. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанный лизосомальный белок человека представляет собой глюкоцереброзидазу.
4. Выделенная нуклеиновая кислота по п.2, где указанный лизосомальный белок человека представляет собой α-галактозидазу.
5. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанный лизосомальный белок человека представляет собой α-галактозидазу.
6. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанный вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид представляет собой вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид, полученный из основного гена хитиназы А табака.
7. Выделенная нуклеиновая кислота по п.2, где указанный вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид представляет собой вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид, полученный из основного гена хитиназы А табака.
8. Выделенная нуклеиновая кислота по п.6 или 7, где указанный вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид является таким, как указано в SEQ ID NO:2.
9. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где указанный сигнальный пептид для направления белка в эндоплазматическую сеть является таким, как указано в SEQ ID NO:1.
10. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанный лизосомальный белок человека содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:8.
11. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты является такой, как указано в SEQ ID NO:7.
12. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, дополнительно включающая промотор, который является функциональным в растительных клетках, где указанный промотор транскрипционно связан с указанной последовательностью нуклеиновой кислоты.
13. Выделенная нуклеиновая кислота по п.12, где указанная промоторная последовательность представляет собой промотор S-35 вируса мозаики цветной капусты.
14. Выделенная нуклеиновая кислота по п.12, дополнительно содержащая транскрипционно связанный терминатор, который является функциональным в растительных клетках.
15. Выделенная нуклеиновая кислота по п.14, где указанная последовательность выделенной нуклеиновой кислоты необязательно дополнительно содержит дополнительные функционально связанные контрольные, промотирующие и регулирующие элементы и/или селектируемые маркеры.
16. Выделенная нуклеиновая кислота по п.12, где указанная выделенная последовательность нуклеиновой кислоты в случае необходимости дополнительно содержит терминатор октопинсинтазы Agrobacterium tumefaciens и омега-трансляционный элемент-энхансер TMV (вируса мозаики табака).
17. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, где указанная выделенная нуклеиновая кислота содержит конструкцию нуклеиновой кислоты, способную экспрессироваться в растительной клетке.
18. Выделенная нуклеиновая кислота по п.17, где указанная конструкция нуклеиновой кислоты содержит вирусный вектор, экспрессируемый в растениях.
19. Клетка, которая содержит выделенную нуклеиновую кислоту по п.17 или 18.
20. Клетка по п.19, рекомбинантно продуцирующая лизосомальный фермент человека.
21. Клетка по п.20, где указанный лизосомальный белок человека рекомбинантно продуцируется, так что он имеет по меньшей мере один остаток ксилозы и по меньшей мере один незащищенный остаток маннозы.
22. Клетка по п.20, где указанная клетка представляет собой растительную клетку.
23. Клетка по п.22, где указанная растительная клетка представляет собой клетку корня растения, выбранную из группы, состоящей из трансформированной клетки корня Agrobacterium rihzogenes, клетки сельдерея, клетки имбиря, клетки хрена и клетки моркови.
24. Клетка по п.23, где указанная растительная клетка представляет собой клетку моркови.
25. Клетка по п.22, где указанная растительная клетка представляет собой клетку растения табака.
26. Растение, содержащее клетку по п.22.
27. Клетка по п.19, где клетка представляет собой клетку Agrobacterium tumefaciens.
28. Лизосомальный белок человека, продуцируемый клеткой по п.22, содержащий по меньшей мере один остаток ксилозы и по меньшей мере один незащищенный остаток маннозы.
29. Лизосомальный белок человека, продуцируемый клеткой по п.22, содержащий по меньшей мере один незащищенный остаток маннозы и по меньшей мере один остаток фукозы, имеющий альфа(1-3)гликозидную связь.
30. Лизосомальный белок человека по п.28, дополнительно содержащий по меньшей мере один остаток фукозы, имеющий альфа(1-3)гликозидную связь.
31. Лизосомальный белок человека по п.29, дополнительно содержащий по меньшей мере один остаток ксилозы.
32. Лизосомальный белок человека по любому из пп.28-31, где указанный лизосомальный фермент представляет собой глюкоцереброзидазу.
33. Лизосомальный белок человека по любому из пп.28-31, где указанный лизосомальный белок человека непрерывно связан с С-концевым вакуолярным нацеливающим сигнальным пептидом.
34. Лизосомальный белок человека по любому из пп.28-31, где указанный лизосомальный белок человека непрерывно связан с С-концевым вакуолярным нацеливающим сигнальным пептидом и N-концевым сигнальным пептидом для направления белка в эндоплазматическую сеть.
35. Лизосомальный белок α-галактозидаза человека, продуцируемый растительной клеткой, экспрессирующей нуклеиновую кислоту по п.4.
36. Лизосомальный белок α-галактозидаза человека, продуцируемый растительной клеткой, экспрессирующей нуклеиновую кислоту по п.5, содержащий С-концевой вакуолярный нацеливающий сигнальный пептид.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая лизосомальный белок человека по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
38. Препарат растительных клеток, содержащий лизосомальный белок человека по п.34.
39. Препарат растительных клеток по п.38, где указанный лизосомальный белок человека, имеющий по меньшей мере один незащищенный остаток маннозы, составляет основную фракцию указанного лизосомального белка при определении анализом сцепления.
40. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат растительных клеток по п.38 и фармацевтически приемлемый носитель.
41. Способ продукции лизосомального белка, включающий:
получение рекомбинантных растительных клеток, трансформированных или трансфицированных конструкцией нуклеиновой кислоты по п.18; и
выращивание указанных растительных клеток в условиях, позволяющих экспрессию указанного белка, где указанные клетки продуцируют указанный белок, имеющий по меньшей мере один остаток ксилозы.
42. Способ по п.41, где указанные растительные клетки выращивают в клеточной культуре.
43. Способ по п.41, где указанные растительные клетки выращивают в качестве частей целых растений.
44. Способ по п.42, где указанная клеточную культуру культивируют в суспензии.
45. Способ по п.42, дополнительно включающий очистку указанного белка.
46. Применение биологически активного лизосомального фермента, определенного в п.33, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Гоше.
47. Применение биологически активной α-галактозидазы по п.35 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Фабри.
48. Фармацевтическая композиция, содержащая лизосомальный белок человека по п.35 и фармацевтически приемлемый носитель.
49. Препарат растительных клеток, содержащий лизосомальный белок человека по п.35 и фармацевтически приемлемый носитель.