Молекулярные подходы в диагностике пигментных новообразований кожи у детей: описание четырех случаев

DOI: 10.15690/onco.v4i4.1816

Г.М. Волгарева1, Л.Э. Завалишина2, Т.П. Казубская1, А.И. Сендерович1, В.Г. Поляков1, 2

1 Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина,

Москва, Российская Федерация

2 Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования,

Москва, Российская Федерация

Молекулярные подходы в диагностике пигментных новообразований кожи у детей: описание четырех случаев

В ходе традиционного морфологического анализа при дифференциальной диагностике между пигментным невусом и меланомой кожи нередко возникают затруднения. Использование молекулярных маркеров в дополнение к классическому гистологическому исследованию может способствовать минимизации этих затруднений при постановке правильного диагноза. В настоящей работе на образцах пигментных новообразований кожи от 4 детей в возрасте от 3 мес до 12 лет была проведена проверка информативности иммуногистохимического (ИГХ) анализа ряда белков в качестве маркеров при первичной диагностике меланомы кожи у педиатрических больных. Выявлены различия между меланомой и пигментными невусами. По результатам проведенного исследования, ИГХ-тест на изученные белки может рассматриваться как адекватный подход для первичной диагностики меланомы кожи у этой категории больных.

Ключевые слова: невус, меланома кожи, диагностика, иммуногистохимия, дети.

Galina M. Volgareva1, Larisa E. Zavalishina2, Tat'yana P. Kazubskaya1, Anastasiya I. Senderovich1, Vladimir G. Polyakov1' 2

1 N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Moscow, Russian Federation 2 Russian Medical Academy of Continuous Professional Education, Moscow, Russian Federation

Molecular Approaches for the Diagnostics of Pediatric Pigment Skin Malformations: Four Cases

Some difficulties are rather common in the course of traditional morphologic study when differential identification between pigment nevus and skin melanoma is conducted. To minimize these difficulties traditional histological examination can be supplemented with application of molecular markers. In the present study, the samples of pigmented skin lesions were used to assess the informative value of immunohistochemical (IHC) analysis of a number of proteins as markers in the primary diagnosis of skin melanoma in pediatric patients. Specimens of pigment skin malformations from four children aged from 3 months up to 12 years were studied. Dissimilarities were determined between melanoma and skin nevi. According to the obtained results of the conducted research, IHC-test for identified proteins can be considered as a suitable approach for primary diagnostics of skin melanoma in this category of patients.

Key words: nevus, skin melanoma, diagnostics, immunohistochemistry, children.

ВВЕДЕНИЕ

Пигментные новообразования кожи развиваются из меланоцитов — клеток, продуцирующих пигмент меланин. К этой группе новообразований относятся как разнообразные доброкачественные пигментные невусы, так и меланома кожи — высокозлокачественная опухоль с непредсказуемым течением, способная метастазировать лимфо-генным и гематогенным путем во многие органы [1]. Интерес врачей и биологов к данной группе новообразований обусловлен в первую очередь именно необходимостью более ранней первичной диагностики меланомы кожи, поскольку это решающим образом влияет на эффективность лечения больного. Пигментные невусы рассматриваются как биологически стабильные нарушения, которые являются факультативными предшественниками меланомы кожи [2]. Существует точка зрения, согласно которой около 1/3 всех случаев меланомы кожи у детей развиваются из гигантского невуса, а еще около 20% — из невусов меньшего размера [3].

Меланома кожи у детей и подростков в России является редким заболеванием. Так, в 19902009 гг. заболеваемость меланомой кожи среди пациентов моложе 20 лет составила 1,99 на 1 млн населения, а среди детей в возрасте до 14 лет — 0,64 на 1 млн; смертность от меланомы кожи на 1 млн населения составила в этих возрастных группах 0,25 и 0,09 соответственно [4]. При этом, однако, установлен весьма неблагоприятный факт — высокий индекс смертности/заболеваемости для детского населения России — 12%, что в несколько раз превышает аналогичный показатель для США, Канады, Австралии и Новой Зеландии [4]. Одной из главных причин высокой смертности детского населения России от меланомы кожи авторы считают позднее выявление этой опухоли и, как следствие, запущенность опухолевого процесса. Отечественные специалисты констатировали, что в целом недоучет онкологической заболеваемости детей и подростков в России составляет не менее 20%, а уровень их смертности от злокачественных опухолей более чем на 50% превышает смертность в развитых странах [5]. Что касается меланомы кожи, то именно редкость этой опухоли у детей и подростков может служить причиной снижения бдительности дерматологов и онкологов при ее выявлении.

Морфологическое исследование является обязательным при установлении диагноза меланомы кожи [6]. Однако дифференциальная диагностика между доброкачественными и злокачественными пигментными новообразованиями кожи признается специалистами одним из наиболее сложных моментов в изучении меланомы кожи у детей [7].

Преодолению этих трудностей при диагностике меланоцитарных новообразований кожи у детей и подростков можетспособствовать использование молекулярных маркеров. Ранее при анализе дан-

ных литературы мы выяснили, что меланома кожи у этой категории пациентов представляет собой весьма гетерогенную группу опухолей [8]. При сравнении с меланомой кожи у взрослых они обнаруживают как некоторое сходство, так и существенные отличия по характеру метастазирования и выживаемости больных [9, 10]. Эти различия, вероятно, свидетельствуют о неодинаковом молекулярном фенотипе меланомы кожи у больных из разных возрастных групп, поэтому при разработке комплекса маркеров для диагностики меланомы кожи у педиатрических больных представляется допустимым использовать в качестве исходных, но требующих обязательной проверки опубликованные данные, касающиеся маркеров меланомы кожи взрослых больных, детальнее изученной, чем педиатрическая, в силу ее большей распространенности [11]. Среди прочего мы предложили включить в состав такого комплекса иммуногистохимическую (ИГХ) детекцию в меланоцитарных новообразованиях кожи белков p16INK4a, циклина D1 (белок CCND1), а также антигены гистосовместимости (Human leukocyte antigens, HLA) I класса [12].

Цель настоящей работы — проверка информативности ИГХ-анализа этих белков в качестве маркеров при первичной диагностике меланомы кожи у педиатрических больных.

Для достижения этой цели было проведено сопоставление данных, полученных при традиционном микроскопическом анализе гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином-эозином, с результатами ИГХ-анализа, а также с результатами, полученными методом флуоресцентной гибридизации in situ (Fluorescent in situ hybridization, FISH).

ОПИСАНИЕ СЕРИИ СЛУЧАЕВ

Работа проведена на операционных материалах от 3 больных с гигантскими пигментными невусами (возраст 4; 9 и 12 лет), находившихся на лечении в 1-м микрохирургическом отделении Российской детской клинической больницы (РДКБ, Москва), а также на образце пигментного новообразования трехмесячного ребенка, наблюдавшегося в НИИ детской онкологии и гематологии НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина (Москва, далее НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина). Данные о пациентах, участвовавших в исследовании, представлены в табл.

Лабораторные исследования. В лабораторных тестах использовали криоконсервиро-ванные ткани невусов и фиксированный формалином образец меланомы (парафиновый блок). Гистологические препараты для ИГХ и FISH-анализов готовили на предметных стеклах HistoBond (SMT Geraetehandel GmbH, Германия). Параллельно для верификации гистологического диагноза готовили препарат на обычном предметном стекле, который затем окрашивали гематоксилином-эозином.

295

Таблица. Данные о пациентах, участвовавших в исследовании

296

№ п/п Возраст Пол Клинический диагноз Гистологический диагноз для исследуемого образца Примечания

1 9 лет М Множественные обширные пигментные невусы лица, туловища, конечностей Гигантский врожденный невус с папилломатозным характером роста Болен с рождения. Роста опухолей нет. Наблюдается в РДКБ с 2004 г. Удалены ранее: в 2004 — меланоформный невус лица, в 2007 — внутридермальный невус, в 2008 — врожденный пигментный невус, в 2009 — врожденный гигантский невус, в 2010 — врожденный гигантский невус с нейрофиброматозом

2 12 лет Ж Врожденный гигантский пигментный невус туловища, бедер Врожденный гигантский пигментный невус кожи Пигментные невусы с рождения. В РДКБ наблюдается с 2010 г. Проводили частичное иссечение пигментных невусов с гистологическим исследованием. В июне 2011 г. проведена фотовапоризация и криодеструкция мелких невусов

3 4 года Ж Гигантский пигментный невус туловища, нижних конечностей Гигантский пигментный невус Пигментное образование с рождения. До 1,5 лет — заметный рост образования в толщину на промежности. Наблюдается в РДКБ с 2008 г. В 2008 — термография в РОНЦ: углеводный тест положительный в области половых губ 0=2) и ягодиц. В 2009 — повторная консультация: углеводный тест в области половых губ положительный 0=2,9), в области ягодиц слабоположительный 0=0,9). В 2009 — частичное иссечение невуса половых губ с 2 сторон, пластика. В 2010 — частичное иссечение пигментного невуса в подвздошно-паховых областях справа и слева

4 3 мес Ж Образование багрового цвета в области лучезапястного сустава. Эпителиоидная пигментная меланома кожи на фоне врожденного пигментного невуса. Толщина узла по Бреслоу на препаратах — не менее 0,5 см (по данным МРТ — 2,6 см). Уровень инвазии по Кларку — не менее 4 Злокачественная меланома С рождения: образование багрового цвета в области лучезапястного сустава с тенденцией к росту. После комплексного обследования — необходимость дифференцировать между дерматофибросаркомой и сосудистой мальформацией. Цитологическое исследование: опухоль из пигментной ткани, вероятнее всего, — невус с выраженной пролиферацией и атипией клеток

Для детекции белка p16INK4a использовали моноклональные антитела CINtec p16 Histology, для детекции циклина D1 — моноклональные антитела VENTANA Anti-Cyclin D1, SP4-R (оба реагента — Roche Diagnostics GmbH, Германия). Для обнаружения HLA-антигенов I класса использовали моноклональные антитела ИКО 53, полученные в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина [13]. ИГХ-исследование проводили на иммуностейнере Bench Mark Ultra (Ventana, США), в качестве системы визуализации использовали систему Ultra View (Ventana, США). Во всех случаях процедура окрашивания не отличалась от рекомендованной производителями антител. Учет результатов ИГХ-окрашивания проводили под микроскопом Leica DMRB (Германия) с объективом х20. При постановке FISH-теста использовали коммерческий зонд LSI RREB1/LSI CCND1/CEP6 (Vysis, Downers Grove, США), содержащий 4 цветные флуоресцентные метки: SpectrumGreen (помечен участок CCND1,

кодирующий циклин D1), SpectrumOrange (помечен участок RREB1), SpectrumGold (помечен участок MYB) и SpectrumAqua (помечен центромерный участок хромосомы 6). Подробное описание этого диагностического реагента и процедура его применения представлены нами ранее [14].

Микрофотографии одного из изученных пигментных невусов (больной № 1 в табл.), а также образца меланомы кожи (больная № 4 в табл.), полученные в ходе традиционного патоморфологи-ческого анализа,представлены на рис.1.

Циклин D1 в образце меланомы кожи экспрес-сировался в подавляющем большинстве клеточных ядер (рис. 2, А). Белок р16|МК4а присутствовал в цитоплазме подавляющего большинства клеток этого новообразования, однако ядерная локализация данного белка здесь оказалась весьма редкой (рис. 3, А). HLA-антигены I класса обнаруживались в большинстве ядер, а также в цитоплазме (во многих случаях), но не на мембранах клеток (рис. 4, А).

Рис. 1. Пигментные новообразования, окраска гематоксилином-эозином, х200

Примечание. А — меланома, Б — гигантский врожденный невус.

Рис. 5. Пигментные новообразования, FISH с зондом LSI RREB1/LSI CCND1/CEP6, х200

Примечание. А — меланома, Б — гигантский врожденный невус.

A

\ •, '

Л

ГШ

•.VV

Рис. 2. Пигментные новообразования, иммуногистохимическая

реакция с антителами к циклину D1, х200

Примечание. А — меланома, Б — гигантский врожденный

невус.

Рис. 3. Пигментные новообразования, иммуногистохимическая реакция с антителами к белку р16|МК4а, х200 Примечание. А — меланома, Б — гигантский врожденный невус.

Рис. 4. Пигментные новообразования, иммуногистохимическая реакция с антителами к HLA-антигенам I класса, х200 Примечание. А — меланома, Б — гигантский врожденный невус.

Во всех образцах невусов (больные №№ 1, 2, 3 в табл.) характер экспрессии трех изучаемых белков оказался сходным: на рис. 2-4 (Б) представлены типичные картины (препараты из невуса больного № 1). Ядерная экспрессия циклина 01

имела место в единичных ядрах (см. рис. 2, Б). Белок р16|МК4а практически отсутствовал во всех клетках новообразования (см. рис. 3, Б). Н1.А-антигены I класса в части клеток этих пигментных невусов присутствовали на клеточных мембранах (см. рис. 4, Б).

В результате проведенного FISH-исследования, результаты которого оценивали по критериям, приведенным ранее [14], выявлены генетические нарушения в образце меланомы кожи, отсутствовавшие или встречавшиеся крайне редко в пигментных невусах (рис. 5). В препаратах меланомы кожи была обнаружена амплификация гена RREB1 в 87% клеток опухоли, при этом в образцах невусов данное нарушение мы отмечали в среднем в 7% клеток. Амплификация гена MYB отмечалась в 45% клеток меланомы и была обнаружена в единичных клетках одного образца невуса (в 2 образцах невусов амплификация гена MYB отсутствовала). В образце меланомы мы обнаружили амплификацию гена CCND1 в 70% опухолевых клеток и потерю этого маркера — в 20%. Количественные нарушения по гену CCND1 наблюдались только в единичных клетках всех образцов пигментных невусов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Аргументы в пользу вероятной целесообразности включения ИГХ-тестов на белок р16|МК4а, циклин 01 и Н1_А-антигены I класса в комплекс методов для первичной диагностики меланомы кожи у детей и подростков мы представили ранее [12]. Результаты настоящего работы оказались в значительной степени ожидаемыми.

Так, белок р16|МК4а — супрессор опухолевого роста — является ингибитором циклин-0-зави-симых киназ; он принадлежит семейству INК-белков, функция которых заключается в задержке клетки в G1-стадии клеточного цикла, эту функцию данные белки реализуют в ядре клетки [15-17]. Согласно полученным нами результатам, р16|МК4а был представлен в цитоплазме подавляющего большинства клеток меланомы кожи, однако в ядрах меланомы белок, как правило, не обнаруживался. Что касается невусов, то в этих образцах р16|МК4а практически не экспресси-

Б

ровался ни в ядрах, ни в цитоплазме клеток. По-видимому, в последнем случае функцию ингибиторов циклин^-зависимых киназ осуществляют другие белки-ингибиторы семейства INK. Ранее данные, свидетельствующие о возможности использования p16INK4a при первичной диагностике меланомы кожи у взрослых больных, сообщали V. Gray-Schopfer и соавт. [18].

Циклин D1 является активатором циклин^-зависимых киназ: после воссоединения с молекулами этих киназ он содействует продвижению клетки из стадии G1 в стадию S клеточного цикла. Как и p16INK4a, циклин D1 реализует свою активность в ядре клетки, но в противоположность p16INK4a является протоонкогеном [19]. Неоднократно сообщалось об увеличении числа копий гена, кодирующего данный белок, в клетках меланомы кожи взрослых больных [20, 21]; увеличение содержания этого белка в клетках меланомы позволило J. Oba и соавт. отличать ее от невусов [22]. В связи с этим отмеченная нами методом FISH амплификация гена CCND1 в большинстве клеток меланомы, отсутствовавшая в невусах, а также выраженная экспрессия циклина D1 в ядрах меланомы и многократно более слабая в ядрах пигментных невусов также явились ожидаемыми результатами.

HLA-антигены I класса в норме экспресси-руются на поверхности многих типов клеток, а нарушения их, обусловленные различными механизмами, играют важную роль в процессе «ускользания» опухоли от иммунологического надзора организма [23, 24]. Несмотря на то, что единой тенденции в изменении характера экспрессии этих белков на мембранах клеток пигментных новообразований кожи до настоящего времени не установлено, ряд авторов сообщали о существовании корреляций между их присутствием на мембранах и степенью атипии клеток невусов, а также между их присутствием на мембранах и длительностью безрецидивного периода с выживаемостью больных мелано-мой кожи [25-27]. Полученные нами данные не противоречат мнению о том, что иммуногистохи-мический тест на HLA-антигены I класса может быть полезен в диагностике меланомы кожи у детей: нами зарегистрировано полное отсутствие этих антигенов на мембранах клеток меланомы, тогда как во всех трех пигментных невусах они частично присутствовали на поверхности клеток. Цитоплазматическая локализация HLA-антигенов I класса во многих клетках всех четырех пигментных новообразований при нередком отсутствии этих молекул на клеточных мембранах, вероятно, свидетельствует о продолжающемся синтезе этих молекул, сопровождаемом какими-то нарушениями их мембранной экспрессии. Согласно полученным нами результатам, эти нарушения могут начинаться в невусах и усиливаются в клетках меланомы.

В целом результаты FISH и традиционного гистологического анализа хорошо коррелируют с данными по экспрессии исследованных нами белков, полученными методом ИГХ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При исследовании 4 образцов пигментных новообразований кожи у детей методом ИГХ-окрашивания на белок p16INK4a, циклин D1 и HLA-антигены I класса получены результаты, ставшие основанием к продолжению работы в данном направлении для определения целесообразности включения этого метода в диагностический комплекс в случае подозрения на меланому.

ВЫРАЖЕНИЕ ПРИЗНАТЕЛЬНОСТИ

Авторы выражают признательность:

канд. мед. наук А.В. Быстрову, зав. 1-м микрохирургическим отделением ФГБУ «РДКБ» Минздрава России, а также врачу этого отделения Е.Ю. Соболевой за предоставленные операционные материалы и данные из историй болезни;

Г.С. Васильевой и И.А. Минееву, патологоанатомам ФГБУ «РДКБ» Минздрава России, а также канд. мед. наук Я.В. Вишневской и докт. мед. наук О.П. Близнюкову, научным сотрудникам ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, за выполнение морфологических исследований опухолевых образцов;

канд. биол. наук О.С. Буровой, старшему научному сотруднику лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, за предоставление монокло-нальных антител ИКО 53;

канд. биол. наук И.В. Ботезату, научному сотруднику лаборатории молекулярной эндокринологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, за постановку ИГХ-тестов;

докт. мед. наук Ю.Ю. Андреевой, профессору кафедры патологической анатомии ФГБОУ ДПО «РМАНПО» Минздрава России, за консультации по морфологическому анализу при постановке ИГХ-и FISH-тестов, а также за участие в обсуждении рукописи;

докт. мед. наук, проф., акад. РАН Г.А. Франку, зав. кафедрой патологической анатомии ФГБОУ ДПО «РМАНПО» Минздрава России, за прочтение рукописи, обсуждение полученных данных и высказанные критические замечания.

ИСТОЧНИК ФИНАНСИРОВАНИЯ

Не указан.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы статьи подтвердили отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.

ЛИТЕРАТУРА

1. Sekulic A, Haluska P Jr, Miller AJ, et al. Malignant melanoma in the 21st century: the emerging molecular landscape. Mayo Clin Proc. 2008;83(7):825-846. doi: 10.4065/83.7.825.

2. Miller AJ, Mihm MC Jr. Melanoma. N Engl J Med. 2006;355(1):51-65. doi: 10.1056/NEJMra052166.

3. Jen M, Murphy M, Grant-Kels JM. Childhood melanoma. Clin Dermatol. 2009;27(6):529-536. doi: 10.1016/j.clindermatol.2008.09.011.

4. Мень Т.Х., Дорошенко М.Б., Алиев М.Д. Злокачественная меланома кожи у детей и подростков в России: популяционное эпидемиологическое исследование // Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи. — 2011. — №2 — С. 55-60. [Men TKh, Doroshenko MB, Aliev MD. Cutaneous malignant melanoma in children and adolescents in russia: population-based epidemiological study. Bone and soft tissue sarcomas and tumors of the skin. 2011;(2):55-60. (In Russ).]

5. Мень Т.Х., Рыков М.Ю., Поляков В.Г. Злокачественные новообразования у детей в России: основные показатели и тенденции // Российский онкологический журнал. — 2015. — Т. 20. — №2 — С. 43-47. [Men' TKh, Rykov MYu, Polyakov VG. Malignancies in children in Russia: trends and highlights. Russian journal of oncology. 2015;20(2):43-47. (In Russ).]

6. Вишневская Я.В., Машенкина Я.А., Сендерович А.И., и др. Современная морфологическая, иммуноги-стохимическая и молекулярно-генетическая диагностика меланомы кожи // Вестник Московского Онкологического Общества. — 2011. — №9 — С. 2-4. [Vishnevskaya JaB, Mashenkina YaA, Senderovich AI, et al. Current status in pathology, immunohistochemistry, molecular-genetic aspects of melanoma. Proceedings of the Moscow Cancer Society. 2011;(9):2-4. (In Russ).]

7. Wechsler J, Bastuji-Garin S, Spatz A, et al. Reliability of the histopathologic diagnosis of malignant melanoma in childhood. Arch Dermatol. 2002;138(5):625-628. doi: 10.1001/archderm.138.5.625.

8. Bastian BC. The molecular pathology of melanoma: an integrated taxonomy of melanocytic neoplasia. Annu Rev Pathol. 2014;9:239-271. doi: 10.1146/ annurev-pathol-012513-104658.

9. Livestro DP, Kaine EM, Michaelson JS, et al. Melanoma in the young: differences and similarities with adult melanoma — a case-matched controlled analysis. Cancer. 2007;110(3):614-624. doi: 10.1002/ cncr.22818.

10. Averbook BJ, Lee SJ, Delman KA, et al. Pediatric melanoma: analysis of an international registry. Cancer. 2013;119(22):4012-4019. doi: 10.1002/ cncr.28289.

11. Давыдов М.М., Аксель Е.М. Стандартизованные показатели онкоэпидемиологической ситуации 2015 г. // Евразийский онкологический журнал. — 2017. — Т. 5. — №2 — С. 298-317. [Davydov MM,

Aksel' EM. Standardized indicators of the oncological epidemiological situation in 2015. Eurasian journal of oncology. 2017;5(2):298-317. (In Russ).]

12. Волгарева Г.М., Лебедева А.В., Поляков В.Г. Пигментные новообразования кожи у детей и подростков: в поисках диагностических маркеров меланомы кожи // Онкопедиатрия. — 2016. — Т. 3. — №1 — С. 16-23. [Volgareva GM, Lebedeva AV, Polyakov VG. Pigment cell skin neoplasms in children and adolescents: searching skin melanoma diagnostic markers. Oncopediatrics. 2016;3(1):16-23. (In Russ).]. doi: 10.15690/nco.v3i1.1525.

13. Барышников А.Ю., Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. — М.: Медицина; 1997. — С. 110-112. [Baryshnikov AYu, Tonevitskii AG. Monoklonal'nye antitela v laboratorii i klinike. Moscow: Meditsina; 1997. pp. 110-112. (In Russ).]

14. Рязанцева А.А., Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Франк Г.А. Молекулярно-биологические подходы к дифференциальной диагностике меланомы кожи // Архив патологии. — 2009. — Т. 71. — №5 — С. 23-27. [Ryazantseva AA, Zavalishina LE, Andreeva YuYu, Frank GA. Molekulyarno-biologicheskie podkhody k differentsial'noi diagnostike melanomy kozhi. Arkh Patol. 2009;71(5):23-27. (In Russ).]

15. Serrano M, Hannon GJ, Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature. 1993;366(6456):704-707. doi: 10.1038/366704a0.

16. Sherr CJ, Roberts JM. CDK inhibitors: positive and negative regulators of G1-phase progression. Genes Dev. 1999; 13(12): 1501-1512. doi: 10.1101/ gad.13.12.1501.

17. Sharpless NE. INK4a/ARF: a multifunctional tumor suppressor locus. Mutat Res. 2005;576(1-2):22-38. doi: 10.1016/j.mrfmmm.2004.08.021.

18. Gray-Schopfer VC, Cheong SC, Chong H, et al. Cellular senescence in naevi and immortalisation in melanoma: a role for p16? Br J Cancer. 2006;95(4):496-505. doi: 10.1038/sj.bjc.6603283.

19. Sherr CJ. D-type cyclins. Trends Biochem Sci. 1995;20(5):187-190. doi: 10.1016/S0968-0004(00)89005-2.

20. Bastian BC, LeBoit PE, Hamm H, et al. Chromosomal gains and losses in primary cutaneous melanomas detected by comparative genomic hybridization. Cancer Res. 1998;58(10):2170-2175.

21. Gerami P, Jewell SS, Pouryazdanparast P, et al. Copy number gains in 11q13 and 8q24 [corrected] are highly linked to prognosis in cutaneous malignant melanoma. J Mol Diagn. 2011;13(3):352-358. doi: 10.1016/j.jmoldx.2011.01.011.

22. Oba J, Nakahara T, Abe T, et al. Expression of c-Kit, p-ERK and cyclin D1 in malignant melanoma: an immunohistochemical study and analysis of prognostic value. J Dermatol Sci. 2011;62(2):116-123. doi: 10.1016/j.jdermsci.2011.02.011.

23. Garrido F, Cabrera T, Aptsiauri N. «Hard» and «soft» lesions underlying the HLA Class I alterations in cancer cells: implications for immunotherapy. Int J Cancer. 2010;127(2):249-256. doi: 10.1002/ ijc.25270.

24. del Campo AB, Kyte JA, Carretero J, et al. Immune escape of cancer cells with beta2-microglobulin loss over the course of metastatic melanoma. Int J Cancer. 2014;134(1):102-113. doi: 10.1002/ijc.28338.

25. Campoli M, Ferrone S. HLA antigen and NK cell activating ligand expression in malignant cells: a story of loss or acquisition. Semin Immunopathol.

2011;33(4):321-334. doi: 10.1007/s00281-011-0270-z.

26. Carretero R, Wang E, Rodriguez AI, et al. Regression of melanoma metastases after immunotherapy is associated with activation of antigen presentation and interferon-mediated rejection genes. Int J Cancer. 2012;131(2):387-395. doi: 10.1002/ijc.26471.

27. Ruiter DJ, Bhan AK, Harrist TJ, et al. Major histocompatibility antigens and mononuclear inflammatory infiltrate in benign nevomelanocytic proliferations and malignant melanoma. J Immunol. 1982;129(6):2808-2815.

300

КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Волгарева Галина Михайловна, доктор биологических наук, доцент по кафедре медицинской генетики (звание, присужденное ВАК РФ), ведущий научный сотрудник лаборатории механизмов гибели опухолевых клеток НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Адрес: 115201, Москва, Каширское шоссе, д. 24, тел.: +7 (499) 324-13-35,

e-mail: galina.volgareva@ronc.ru, SPIN-код: 5151-9032, ORCID: http://orcid.org/0000-0002-6817-2103

Завалишина Лариса Эдуардовна, доктор биологических наук, профессор кафедры патологической анатомии РМАНПО

Адрес: 125284, Москва, ул. Поликарпова, д. 16, тел.: +7 (495) 946-01-44,

e-mail: pat.rmapo@gmail.com, SPIN-код: 8780-4851, ORCID: http://orcid.org/0000-0002-0677-7991

Казубская Татьяна Павловна, доктор медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории

клинической онкогенетики НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина

Адрес: 115201, Москва, Каширское шоссе, д. 24, тел.: +7 (499)324-26-85,

e-mail: kazubskaya@yahoo.com, тел.: +7 (499) 324-26-85, SPIN-код: 5224-5820,

ORCID: http://orcid.org/000-0001-5856-0017

Сендерович Анастасия Ильинична, кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории

молекулярной патологии НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина

Адрес: 115201, Москва, Каширское шоссе, д. 24, тел.: +7 (499) 324-17-49,

e-mail: a.senderovich@mail.ru, SPIN-код: 4602-7378, ORCID: http://orcid.org/0000-0003-2213-5785

Поляков Владимир Георгиевич, доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, заместитель директора, заведующий отделением опухолей головы и шеи НИИ ДОГ НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина, заведующий кафедрой детской онкологии ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России Адрес: 115201, Москва, Каширское шоссе, д. 24, тел.: +7 (499) 324-44-88, e-mail: vgp-04@mail.ru, SPIN-код: 8606-3120, ORCID: http://orcid.org/0000-0002-8096-0874