СРЕДСТВО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ГЕНТИНГТОНА НА ОСНОВЕ AAV

1. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая
(i) первый участок, содержащий первый инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) или его вариант; и
(ii) второй участок, содержащий трансген, кодирующий одну или несколько микроРНК, причем каждая микроРНК содержит затравочную последовательность, комплементарную SEQ ID NO: 1.
2. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая
(i) первый участок, содержащий первый инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) или его вариант; и
(ii) второй участок, содержащий трансген, кодирующий одну или несколько микроРНК, причем каждая микроРНК кодируется последовательностью, содержащей последовательность, указанную под любым из SEQ ID NO: 2-10, фланкированную остовной последовательностью микроРНК.
3. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая
(i) первый участок, который кодирует первый инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) или его вариант; и
(ii) второй участок, содержащий трансген, кодирующий одну или несколько микроРНК, причем каждая микроРНК содержит последовательность, комплементарную по меньшей мере двум (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25) смежным основаниям последовательности, указанной под SEQ ID NO: 1, фланкированную остовной последовательностью микроРНК.
4. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 2 или 3, причем каждая остовная последовательность микроРНК представляет собой остовную последовательность mir-155, остовную последовательность mir-30 или остовную последовательность mir-64.
5. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-4, причем трансген содержит промотор.
6. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 5, причем промотор представляет собой промотор гена куриного бета-актина (CBA) или промотор U6.
7. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-6, причем трансген дополнительно кодирует белок.
8. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-7, причем одна или несколько микроРНК локализованы в нетранслируемой части трансгена.
9. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 7, причем нетранслируемая часть представляет собой интрон.
10. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 8, причем нетранслируемая часть находится между последним кодоном последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, и последовательностью поли-А хвоста, или между последним нуклеотидным основанием последовательности промотора и последовательностью поли-А хвоста.
11. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-10, дополнительно содержащая третий участок, содержащий второй инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) или его вариант.
12. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-11, причем в варианте ITR отсутствует функциональный сайт концевого разрешения (TRS), необязательно причем вариант ITR представляет собой ITR ΔTRS.
13. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-12, причем по меньшей мере одна из микроРНК гибридизируется и ингибирует экспрессию гентингтина человека (например, SEQ ID NO: 1).
14. Вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-13.
15. Вектор по п. 14, причем вектор представляет собой плазмиду.
16. Клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-13 или вектор по п. 14 или 15.
17. Рекомбинантный AAV (rAAV), содержащий
(i) капсидный белок; и
(ii) выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-13.
18. rAAV по п.17, причем капсидный белок представляет собой капсидный белок AAV9.
19. rAAV по п. 17 или 18, причем капсидный белок содержит последовательность, указанную под SEQ ID NO: 20.
20. rAAV по любому из пп. 17-19, причем rAAV является самокомплементарным AAV (scAAV).
21. rAAV по любому из пп. 17-20, причем rAAV составлен для доставки в центральную нервную систему (ЦНС).
22. Способ лечения болезни Гентингтона у нуждающегося в том субъекта, причем способ предусматривает введение субъекту, имеющему или подверженному риску развития болезни Гентингтона, терапевтически эффективного количества выделенной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13 или rAAV по любому из пп. 17-21.
23. Способ по п. 22, причем субъект содержит ген гентингтина, имеющий более 36 повторов CAG, более 40 повторов или более 100 повторов.
24. Способ по п. 22 или 23, причем возраст субъекта составляет менее 20 лет.
25. Способ по любому из пп. 22-24, причем введение приводит в результате к доставке выделенной нуклеиновой кислоты или rAAV в центральную нервную систему (ЦНС) субъекта.
26. Способ по любому из пп. 22-25, причем введение производят посредством инъекции, необязательно внутривенной инъекции или интрастриатальной инъекции.
27. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая последовательность, изложенную под любым из SEQ ID NO: 2-10 или 21-22.