СПОСОБ МАЦЕРАЦИИ ТКАНЕЙ ЛИСТА ЛИПЫ МЕЛКОЛИСТНОЙ TILIA CORDATA MILL
METHOD OF TILIA CORDATA MILL TILLET LEAF TISSUES MACERATION

Изобретение относится к ботанике, в частности к анатомическому строению ассимиляционного аппарата растений. Описанный способ мацерации тканей может быть использован при изучении особенностей строения листовых пластинок. Методика позволяет провести мацерацию ассимиляционной ткани для изучения анатомических особенностей клеток палисадной и губчатой паренхимы, хлоропластов липы мелколистной.
Известен способ мацерации горячей соляной кислотой (см. Мокроносов А.Т. Мезоструктура и функциональная активность фотосинтетического аппарата // Мезоструктура и функциональная активность фотосинтетического аппарата. - Свердловск, 1978. - С. 7).
2
3
Способ заключается в помещении фиксированных этанолом дисков растительных тканей с известной площадью в горячий раствор соляной кислоты (концентрацией от 0,5 до 3 М раствора соляной кислоты в зависимости от объекта). После образования гомогенной суспензии клеток, ее доводят до определенного объема (обычно 1 см листьев в 1,5-2 см).
Недостатком способа является широкий диапазон предлагаемых условий проведения мацерации тканей растений, то есть для проведения мацерации растительных тканей определенного объекта необходима предварительная подготовка, заключающаяся в подборе условий проведения мацерации.
2
Наиболее близким к заявляемому способу по максимальному количеству сходных признаков является способ мацерации горячей соляной кислотой (см. Борзенкова Р.А., Храмцова Е.В. Определение мезоструктурных характеристик фотосинтетического аппарата растений. - Екатеринбург: Изд-во Уральского университета, 2006. - С. 16), который выбран в качестве прототипа. Способ заключается в помещении дисков с известной площадью в мерную пробирку со шлифом (ориентировочно 2 см листьев в 1 мл соляной кислоты), куда приливают 0,5-1,0 N соляной кислоты. Затем пробирку помещают на водяную баню с температурой 80-100°С на 10-30 минут (в зависимости от объекта), при этом диски тщательно растирают стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. После охлаждения пробирок объем жидкости доводят водой до 5-10 мл (в зависимости от количества клеток в суспензии), закрывают стеклянными пробками, взбалтывают для получения однородной суспензии клеток.
Недостатком прототипа является то, что он имеет ряд трудоемких и длительных по времени подготовительных операций: подбор концентрации соляной кислоты, ее температуры, времени протекания мацерации для каждого объекта.
Технической задачей изобретения является создание способа мацерации тканей ассимиляционного аппарата липы мелколистной, обладающего определенными условиями мацерации тканей.
Технический результат достигается тем, что в способе, согласно изобретению, мацерацию проводят растворами соляной кислоты разной концентрации при высокой температуре в течение ограниченного времени. Подобрана определенная концентрация растворов HCl (0,8-1,2 N растворы), температура соляной кислоты (90°С) и время проведения (25-30 минут) мацерации тканей листьев липы мелколистной Tilia cordata Mill, в зависимости от времени сбора образцов.
Заявленные условия проведения мацерации позволяют получить гомогенную суспензию, содержащую столбчатые и губчатые клетки мезофилла липы мелколистной.
2
Предлагаемый способ реализуется следующим образом. В пробирку помещают 5 дисков площадью 3,8 см, вырезанных сверлом №4 из ткани ассимиляционного аппарата липы мелколистной, на 1 мл раствора соляной кислоты. Приливают 1 мл соляной кислоты определенной концентрации в зависимости от времени и места сбора образцов: 0,8-0,9 N раствор HCl - для листьев, собранных в июне, 1,0-1,1 N раствор HCl - для листьев, собранных в июле, 1,1-1,2 N раствор HCl - для листьев, собранных в августе. Для образцов из экологически чистых районов выбирают меньшую концентрацию из представленного диапазона, для образцов из промышленных районов и магистралей - большую концентрацию. При использовании растворов соляной кислоты меньшей концентрации эффект мацерации не достигается, так как ткани не распадаются на клетки. При использовании растворов более высокой концентрации разрушаются клетки фотосинтетического аппарата, а также проявляется дубящее действие соляной кислоты на растительные ткани липы мелколистной (в растворе HCl плавают кусочки ткани листа, не распавшиеся на клетки).
Пробирки с дисками помещают на водяную баню с температурой 90°С на 25-30 минут. При этом постоянно тщательно растирают диски стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Пробирку охлаждают, объем жидкости доводят водой до 5 мл, закрывают стеклянной пробкой и взбалтывают для получения однородной суспензии клеток.
Пример осуществления изобретения:
Для изучения анатомических особенностей ассимиляционного аппарата липы мелколистной Tilia cordata Mill, (подсчет количества, определения формы, площади, объема клеток мезофилла) в июле собранны образцы листьев из промышленной зоны города. Для проведения исследований необходимо провести мацерацию тканей взятых образцов.
2
В пробирку помещают 5 дисков площадью 3,8 см на 1 мл раствора соляной кислоты, вырезанных из ткани ассимиляционного аппарата липы мелколистной сверлом №4. Приливают 1 мл 1,1 N раствор HCl. Пробирки с дисками помещают на водяную баню с температурой 90°С на 30 минут. При этом постоянно тщательно растирают диски стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Пробирку охлаждают, объем жидкости доводят водой до 5 мл, закрывают стеклянной пробкой и взбалтывают для получения однородной суспензии клеток. В результате мацерации в растворе содержатся свободные клетки столбчатого и губчатого мезофилла, что позволяет изучать под микроскопом анатомические особенности клеток фотосинтезирующего аппарата липы мелколистной.
Источники информации
1. Мокроносов А.Т. Мезоструктура и функциональная активность фотосинтетического аппарата // Мезоструктура и функциональная активность фотосинтетического аппарата. - Свердловск, 1978. - С. 7.
2. Борзенкова Р.А., Храмцова Е.В. Определение мезоструктурных характеристик фотосинтетического аппарата растений. - Екатеринбург: Изд-во Уральского университета, 2006. - С. 16.