Определение оптимального содержания криопротектора при лиофилизации липосомальной лекарственной формы производного индолокарбазола - ЛХС-1208

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Результаты. Молекулярное моделирование определило связывание предполагаемого продукта с белком-мишенью AR. На основании этого модификация арильным или ге-тарильным заместителем тионового фрагмента исходной молекулы улучшит ингибирование. Далее была применена медькатализируемая реакция арилборных кислот с 2-тиогидантоином в присутствии соли меди (II) и органического основания. В ходе выполнения работы были синтезированы и охарактеризованы около 50 соединений. Все полученные соединения были протестированы in vitro с использованием МТТ- и MTS-тестов на клеточных линиях рака ПЖ LNCaP (p53+, AR+), РС-3 (p53-, AR-), ЛЭЧ-4.

Заключение. В результате выполнения работы выявлены соединения-лидеры, которые дополнительно тестировались in vitro на клеточных линиях Hek293, VA13, MCF-7 и A549. Определена цитотоксичность для соединений-лидеров: значения параметра IC50 для замещенного по 3-му положению продукта арилирования, который ориентирован на ингибирование MDM2 и реакцию белка p53, равна 2 ^М (LNCaP) и 8 ^м (PC-3). В то же время активность незамещенного по 3-му положению продукта, ориентированного на ингибирование андрогенового рецептора, составила 70 нМ (LNCaP); на клеточной линии PC-3 цито-токсичность отсутствует. Таким образом были получены соединения с высокой потенциальной противоопухолевой активностью и селективным действием по отношению к AR или P53-MDM2 взаимодействию.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (РНФ № 14—34—00017), Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ № 16-33-60166) и программы УМНИК (договор № 8981ГУ/2015).

Ю.В. Алексеев1, Г.В. Пономарев2, Е.В. Давыдов3, В.М. Мкртчян4, Н.К. Иоаниди1 ПРИРОДНЫЙ КОМПЛЕКС ХЛОРИНА Е6 КАК ОСНОВА ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ НОВОГО ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

1ФГБУ«ГНЦ лазерной медицины ФМБА России», Москва, Россия;

2ФГБНУ«НИИбиомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», Москва, Россия;

3Ветеринарная клиника «Велес-Текстильщики», ФГБОУ ВПО МГУПП, Москва, Россия; 4ООО «Ареал», Москва, Россия

Введение. Ранее показано, что гель «Сигринол» (ТС № RU Д-RU. АЮ18. В. 05307) производства ООО «Ареал» является эффективным фотосенсибилизатором (ФС) для наружного применения в комплексной терапии у пациентов с рядом дерматологических заболеваний. Активное вещество (АВ) данного ФС получено из биокрасителя, выделенного из люцерны (Medicago sativa, L.), и представляет собой полисахаридный комплекс хлорина Е6. При определении порога гемолиза эритроцитов крыс эффективность АВ и его компонентов оказалась сопоставимой с активностью хлорина Е6.

Цель исследования — изучить факторы, определяющие фотодинамический эффект ФС «Сигринол».

Материалы и методы. Метод — высокоэффективная жидкостная хроматография (хроматограф LC-20, Prominence, Япония, хроматографическая колонка PR-18 фирмы «HP», размер 4x250 мм, подвижная фаза — МеОН-Н2О-CF3COOH (90:10:0,01 о/о), детектор-спектрофотометри-ческий SPD-20A, длина волны — 405 нм). Материалы — биокраситель Green C3 фирмы «FMC» (пищевая добавка Е140). Исследуемое вещество растворяли в воде и добавляли хлористоводородную кислоту до значения рН 3,5—4,5. Выпавший осадок хлорина Е6 промывали водой для удаления остатков хлористоводородной кислоты, высушивали, затем растворяли в растворе меглумина (рН около 9) и хро-матографировали. Хроматограмму полученного раствора сравнивали с хроматограммой раствора стандартного образца хлорина Е6 по времени удерживания основных пиков для подтверждения идентичности двух образцов. Дополнительным аргументом для утверждения об идентичности исследуемого соединения и хлорина Е6 являлся электронный спектр поглощения.

Результаты. В процессе хроматографирования исследуемого вещества выделены фракции, содержащие « 10— 15 % хлорина Е6 и до 20 % его полисахаридного производного, а также мальтодекстрин. Электронные спектры поглощения хлорина Е6 и его производного совпадали.

Заключение. Установлено, что основными факторами, определяющими фотодинамическую активность действующего вещества препарата «Сигринол» и, соответственно, его эффективность в клинической практике, являются хлорин Е6 и полисахарид хлорина Е6 практически одинаковые по эффективности. Перспективы применения «Сиг-ринола» для флюоресцентной диагностики и, возможно, для фотодинамической терапии в дерматоонкологии требуют дальнейшего изучения.

Али Хашем1, И.Д. Гулякин2, Л.Л. Николаева12, М.В. Дмитриева2, Л.А. Король1, А.П. Полозкова2, О.Л. Орлова2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОПТИМАЛЬНОГО СОДЕРЖАНИЯ КРИОПРОТЕКТОРА ПРИ ЛИОФИЛИЗАЦИИ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ПРОИЗВОДНОГО ИНДОЛОКАРБАЗОЛА - ЛХС-1208

1ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия;

2ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России создана липосомальная лекарственная форма (ЛЛФ) ЛХС-1208. По сравнению с лекарственной формой ЛХС-1208 «лиофили-зат для приготовления раствора для инъекций 9 мг» ЛЛФ ЛХС-1208 обладает большей направленностью и оказывает меньший токсический эффект. Однако ЛЛФ ЛХС-1208 стабильна на протяжении непродолжительного периода времени — в течение 5—6 сут. В связи с этим для увеличения устойчивости и продления срока годности препарата целесообразно применение метода лиофилизации.

Цель исследования — определить оптимальное содержание криопротектора в дисперсии при лиофилизации ЛЛФ ЛХС-1208.

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» s

Материалы и методы. Субстанция ЛХС-1208, синтези- Н.В. Андронова, Е.М. Трещалина, Ю.А. Борисова, рованная в лаборатории химического синтеза ФГБУ Г.Б. Смирнова, И.Н. Михайлова, С.М. Ситдикова, «РОHЦ им. H.H. Блохина» Минздрава России. Компонен- Н. Т. Райхлин, Е.А. Смирнова, A.A. Лушникова, ты липосомальной мембраны: яичный фосфатидилхолин Д.А. Понкратова Е РС S (лецитин) (Lipoid, Германия), холестерин (Sigma, НОВЫЕ МОДЕЛИ ПИГМЕНТИРОВАННОЙ Германия), PEG-2000-DSPE 18:0 (Lipoid, Германия); кри- И БЕСПИГМЕНТНОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ опротектор — сахароза ГОСТ 5833-75 (Химмед, Россия). ЧЕЛОВЕКА С МУТАЦИЯМИ BRAF V600E И NRAS Для оценки влияния концентрации криопротектора в ли- ДЛЯ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ТАРГЕТНЫХ посомальной дисперсии на качество лиофилизированной ПРОТИВОМЕЛАНОМНЫХ СРЕДСТВ ЛЛФ ЛХС-1208 в воду для инъекций, предназначенную И КОМБИНАЦИЙ НА ИХ ОСНОВЕ для гидратации липидной пленки, добавляли навески са- ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, харозы в молярных соотношениях лецитин: сахароза — Москва, Россия 1/2, 1/3, 1/5, 1/7,5 и 1/10. Полученными водными раство- Введение. Разработка новых моделей диссеминирован-рами сахарозы гидратировали липидные пленки на 4 ной меланомы кожи человека с молекулярно-генетической разных колбах; образовавшиеся липосомальные дисперсии мишенью (мутации V600E BRAF и NRAS) для таргетной последовательно пропускали через нейлоновые мембран- терапии повышает результативность доклинических иссле-ные фильтры «Pall» N66 с размером пор 1,2, 0,45 и 0,22 мкм дований in vivo новых антимеланомных средств и их ком-(ООО «Палл Евразия», Россия) на экструдере LipexTM бинаций. Такая возможность реализована благодаря нали-Thermobarrel Extruder 10 мл, дозировали во флаконы чию в банке ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» Минздрава по 6 мл и лиофилизировали в камере сублимационной России оригинальных линий клеток пигментированной сушки «Edwards Minifast DO. 2» (Ero Electronic S. p. A., Ита- меланомы кожи человека mel Cher с мутацией BRAF V600E лия). Для ЛЛФ ЛХС-1208 применяли следующий режим и беспигментной mel Rac c мутацией NRAS, адекватных лиофилизации липосомальных препаратов: быстрое замо- для получения подкожных (п/к) ксенографтов под контр-раживание на полках сублимационной сушки до темпера- олем трансплантационных, морфологических, молекуляр-туры -45 °С с последующей подачей вакуума и постепен- но-генетических и химиотерапевтических (чувствительным нагревом полок до температуры +20 °С и 3-часовым ность к вемурафенибу и траметинибу) характеристик. досушиванием после достижения препаратом температуры Цель исследования — получить чувствительные к спе-+20 °С. После лиофилизации содержимое флаконов реги- цифической таргетной терапии п/к ксенографтов мелано-дратировали очищенной водой, проводили количественное мы кожи человека с терапевтически значимыми мутация-определение содержания препарата на спектрофотометре ми из линий клеток mel Cher и mel Rac. Cary 100 (Agilent Technologies, Австралия) при длине волны Материалы и методы. Линии клеток меланомы кожи 320 ± 2 нм, анализ среднего диаметра везикул — на прибо- человека mel Cher и беспигментной меланомы mel Rac поре Submicron Particle Sizer Nicomp-380 (Particle Sizing Sys- лучены из коллекции ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» tems, США) и pH дисперсии — на pH-метре HANNA HI Минздрава России, иммунодефицитные мыши-самки 2211 (Hanna Instruments, Румыния). Balb/c nude — из банка ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» Результаты. Проведенные исследования показали, Минздрава России. Искомые характеристики моделей что по внешнему виду лиофилизаты ЛЛФ ЛХС-1208 с раз- in vivo определены с помощью методов трансплантацион-личным содержанием сахарозы отличались друг от друга. ной биологии, световой микроскопии, молекулярной ге-После регидратации лиофилизатов с содержанием крио- нетики и экспериментальной химиотерапии. Чувствитель-протектора в соотношениях лецитин: сахароза 1/3 и 1/5 ность к ингибитору BRAF-киназы вемурафенибу образовалась светло-желтая гомогенная липосомальная и к ингибитору NRAS траметинибу оценена под контролем дисперсия, без осадка и признаков расслоения, с прием- скорости роста опухоли (V;/ V0) по значимым для клиники лемым размером везикул (185 ± 10 нм), pH 7,0±0,5 и со- показателям: наличие полной ремиссии (ПР) под контрхранением после лиофилизации исходного количествен- олем рецидивирования. ного содержания ЛХС-1208 в ЛЛФ. При добавлении воды Результаты. При п/к трансплантации 1,0 х 107 клеток к образцам лиофилизатов ЛЛФ ЛХС-1208, содержащих получены цитологически идентичные с устойчивой кине-криопротектор в соотношениях лецитин: сахароза 1/2, тикой роста в течение 4-9-го пассажей п/к ксенографты 1/7,5 и 1/10, отмечалось нарушение процесса регидрата- пигментированной меланомы mel Cher и беспигментной ции с образованием густой вязкой массы. mel Rac. Латентная фаза составила для mel Cher 8 дней, Заключение. Таким образом, для лиофилизации ЛЛФ для mel Rac — 11 дней, экспоненциальная фаза обоих мо-ЛХС-1208 эффективным криопротектором является саха- делей — 14 дней, стационарная — 24 дня. Чувствительность роза, вводимая на стадии гидратации липидной пленки mel Cher к вемурафенибу в разовой дозе 75 мг/кг 15-днев-в молярных соотношениях лецитин: сахароза 1/3. ным курсом доказана короткой ПР с развитием рецидива через 7 дней после отмены. Чувствительность к трамети-нибу в разовой дозе 0,3 мг/кг 14-кратным курсом доказана длительной ПР в течение 28 дней без развития рецидива. Заключение. Подкожные ксенографты меланомы кожи человека, полученные из линий клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF

Спецвыпуск/ том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ