Изучение фенольных соединений листьев пузыреплодника калинолистного (Physocarpus opulifolius (L. ) Maxim) методом ВЭЖХ

ваются всевозможные мероприятия по восстановлению работоспособности больных -применение средств ЛФК, физических, санаторно-климатических факторов, проведение физических тренировок в течение более или менее продолжительного времени. Особенно важен психологический (психический) аспект: преодоление отрицательных реакций со стороны психики больного, возникающих в связи с болезнью и обусловленных изменением материального и социального положения. С учетом распространенности туберкулеза и его социальной значимости не менее важное значение должны иметь профессиональный и социально-экономический аспекты: приспособление больного к соответствующему виду труда по специальности или его переквалификация, что дает возможность материального самообеспечения путем самостоятельной трудовой деятельности. Эти аспекты реабилитации относятся к области, связанной с трудоспособностью, трудоустройством, взаимоотношениями больного и общества, больного и членов его семьи и т.д. Как один из критериев эффективности реабилитации по двум последним аспектам возможно рассматривать состояние качества жизни пациента, что все более применяется при других заболеваниях [1].

Итак, не вызывает сомнений, что реабилитационные мероприятия являются важнейшей составной частью всех мероприятий по предупреждению распространения инфекции. Какая же их эффективность в настоящее время? При условии стабилизации эпидемической ситуации и лишь постепенном изменении социально-экономического положения населения основным показателем остается именно эффективность медицинской реабилитации. В целом она явно неудовлетворительная - в России удалось в 2007 году достичь клинического излечения не более чем в 53,4% впервые выявленных больных [4], в случаях хронического течения показатели еще ниже. В зависимости от уровня и объема административной поддержки эти показатели могут быть различными. Так, если в Курской области указанные показатели равны 22%, то в Белгородской и Орловской соответственно 53.5% и 43.1%, хотя методики лечения практически одинаковы. Отдельные показатели эффективности медицинской реабилитации

по Белгородской области, где достигнутый уровень наиболее высокий, представлены в таблице 1.

Эффективность медицинской реабилитации в области в течение последних трех лет -одна из лучших в России, что является следствием эффективного выполнения региональной программы предупреждения распространения туберкулеза при активной поддержке областной администрации. Вместе с тем их анализ позволяет выявить несколько типичных факторов, которые влияют на достижение эффективности. Прежде всего возможности медицинской реабилитации неодинаковые в зависимости от характера и давности процесса у больных. Так, общие показатели эффективности (общий успех) статистически достоверно выше (р<0,05) среди впервые выявленных (заболевших) больных, и они постепенно повышается. В то же время эффективность клинической реабилитации у повторно заболевших (рецидив) и хронических больных, среди которых больше страдающих деструктивными, запущенными

формами, такими, как фиброзно-кавернозный туберкулез легких, бактериовыделителей и социально-дезадаптированных больных, достоверно ниже и практически мало изменяется. В этой же группе больных более высокая смертность от туберкулеза и других причин. Подтверждением влияния характера процесса является также то, что эффективность клинической реабилитации достоверно выше среди больных, страдающих недеструктивными формами туберкулеза как при впервые выявленном, так и повторном (рецидив) заболевании.

Одним из стабильно влияющих факторов является степень сотрудничества больных с медицинским персоналом, от чего зависит в конечно итоге выполнение режимов лечения и их эффективность. Анализ одного из показателей такого сотрудничества, а именно количества прервавших лечение больных (отказ от лечения) свидетельствует, что здесь отмечается положительная динамика и опять-таки влияет характер процесса. Как показатель недостаточной эффективности мероприятий по медицинской реабилитации возможно рассматривать также явно отрицательную динамику рецидивов, которые, хотя и составляет

Таблица 1

Эффективность клинической реабилитации

Показатели эффективности Годы

2002 2003 2004 2005 2006 2007

Впервые выявленные больные

Общий успех 78,7 81,8 76,3 78,5 80,9 81,2

Эффективность с СУ- 85,5 84,9 78 83,5 88,4 90,8

Умерли от туберкулеза 5,5 3,8 5,7 3,0 5,3 3,8

Прервали лечение 9,6 3,5 3,5 4,3 2,5 2,2

Больные с рецидивом туберкулеза

Общий успех 93,3 60,7 56,6 62,2 68,4 61,3

Эффективность с СУ- 100 83,0 66,6 73,8 80,7 71,4

Умерли от туберкулеза - 6,25 3,8 4,9 4,7 -

Прервали лечение - 8,0 7,5 8,4 4,0 3,4

Другие больные

Общий успех 33,3 56,3 28,2 37,0 27,7 35,5

Умерли от туберкулеза - 12,7 14,5 12,6 13,0 12,9

Прервали лечение 22,2 12,7 22,2 11,8 8,7 6,4

ежегодно незначительное количество от 1,1% до 1,6%, но их частота постепенно увеличивается.

Достижение психологической реабилитации, которая во многом предопределяют эффективность медицинской, в настоящее время практически не рассматриваются, потому что психологическое состояние больных просто не диагностируется. Между тем состояние депрессии и тревоги не столь уж редкое явление у всех больных туберкулезом, а частота и выраженность таких состояний также влияют не только на психологическую, но и на медицинскую реабилитацию. В таблице 2 представлены результаты психологического тестирования, которое проводили у 213 впервые выявленных и больных с рецидивом процесса. С целью одновременной оценки личностной и ситуационной тревожности - особого эмоционального состояния с повышенной эмоциональной напряженностью, сопровождающейся страхами, беспокойством, опа-

сениями, препятствующими нормальной деятельности или общению с людьми, использовали методику, разработанную Спилбергом. Личностная тревожность, будучи индивидуальной чертой личности человека, отражает его предрасположенность к эмоционально отрицательным реакциям на различные жизненные ситуации, несущие в себе угрозу для его "Я" (самооценки, уровня притязаний, отношения к себе и т. п.). При заболевании туберкулезом состояние личностной тревожности, как реакция на подобные социальные ситуации, конечно же, может изменяться. Ситуационная тревожность, как временное состояние тревожности, порождается лишь некоторыми ситуациями и может возникать у больного туберкулезом постоянно в процессе диагностики и реабилитации. С помощью теста дифференцируют состояние очень высокой, высокой, средней, низкой и очень низкой тревожности. Результаты определения психологического состояния по уровням тревожно-

сти представлены в таблице 2. Как у впервые выявленных, так и при рецидиве во всех случаях наблюдалось состояние от среднего до очень высокого уровня ситуационной тревожности (по тесту Спилберга), низкий или очень низкий не выявлен ни у одного больного с рассматриваемыми формами. Разумеется, более высоким был уровень у больных с наличием деструктивных изменений. Но вот что характерно: у больных с фибрознокавернозным процессом достоверно реже определяли состояние выраженной ситуационной тревожности (высокий и очень высокий уровень) как раз при рецидиве. При остальных формах этой особенности не отмечалось.

Дополнительно отдельно определяли уровень депрессивных состояний и состояний, близких к депрессии, по тесту, адаптированному в отделении наркологии НИИ им. В.М. Бехтерева, Т.И. Балашовой. Опросник разработан для дифференциальной диагностики состояния депрессии и может быть использован для скрининг-диагностики при массовых исследованиях в целях предварительной, доврачебной диагностики.

Как следует из таблицы 3, состояние депрессии перед началом лечения, т.е. практически на высоте клинических проявлений, отмечалось в два раза чаще при рецидиве, при этом независимо от формы процесса, но достоверно чаще (Р<0,05) у больных с деструктивными изменениями. Практически почти в два раза чаще выявляли маскированную сравнительно с легкой депрессию у наблюдаемых больных и опять-таки при рецидивах. Полученные данные несомненно являются основанием для введения в режимы лечения больных туберкулезом методов, позволяющих достигать психологической и повышающих тем самим эффективность медицинской реабилитации. Очевидно, первоначально необходимо введение в штаты фтизиатрической службы клинических психологов.

Практически также обстоит дело с профессиональной и социальной реабилитацией. Качество жизни после клинического излечения или хронизации процесса пока практически не принято изучать во фтизиатрии, в то время как более 80% больных туберкулезом являются социально-дезадаптированными

Таблица 2

Результаты психологического тестирования: уровни тревожности у впервые выявленных и больных с рецидивами с различными клиническими формами

Ситуационная тревожность (уровни) СУ Диагноз

ДТЛ ИТЛ ФКТЛ Всего

р В/В Р В/В Р В/В Р В/В

Средний (1) СУ- 5.4 2.7

СУ+ 2.4 7.6 7.4 3.9

Всего 2.4 7.6 5.4 7.4 3.9 2.7

Высокий (2) СУ- 4.8 7.7 20.7 16.2 11.1 10.8

СУ+ 17.0 15.4 10.3 2.7 25.9 21.4 15.8 10.8

Всего 21.8 23.1 31.0 18.9 25.9 21.4 26.9 21.6

Очень высокий (3) СУ- 7.2 23.1 37.9 51.4 19.8 32.5

СУ+ 68.6 53.8 23.5 24.3 66.7 78.6 49.4 53.2

Всего 75.8 76.9 61.4 75.7 66.7 78.6 69.2 75.7

Примечание: здесь и в табл. 3: 1. СУ - наличие деструктивных изменений в легких; 2. ДТЛ, ИТЛ, ФКТЛ - формы процесса (диссеминированный, инфильтративный или фиброзно-кавернозный туберкулез легких).

Таблица 3

Психологическое состояние

Шкала депрессии СУ Диагноз

ДТ ГЛ И [ТЛ ФКТЛ Всего

р В/В Р В/В Р В/В Р В/В

Депрессия СУ- 14.6 26.9 22.4 31.5 15.1 50.7

отсутствует (0) СУ+ 39.0 61.7 29.3 57.1 55.5 85.8 26.2 41.5

Всего 53.6 88.6 51.7 88.6 55.5 85.8 41.3 92.2

Легкая СУ- 5.7 1.3

депрессия (1) СУ+ 17.1 7.6 17.2 18.5 17.5 2.6

Всего 17.1 7.6 17.2 5.7 18.5 17.5 3.9

Маскированная СУ- 9.7 3.8 12.1 5.7 13.4 2.6

депрессия (2) СУ+ 19.6 19.0 26.0 7.1 27.8 1.3

Всего 29.3 3.8 31.1 5.7 26.0 7.1 41.2 3.9

Всего больных 41 26 58 37 27 14 126 77

лицами. В то же время результаты довольно плачевные. Так, по данным официальной статистики, в РФ инвалидизация вследствие заболевания туберкулезом составляет до 67, а первичная до 19 на 100.000 населения. Из анализируемых нами областей Черноземья в последние три года самая высокая первичная инвалидность в Курской области - 33,6, 21,2 и 30,4.

При этом среди стойко утративших трудоспособность вследствие заболевания туберкулезом количество проживающих в городе инвалидов в 2-2,5 раза превышает количество проживающих в сельской местности, а среди всех нетрудоспособных больных более 80% являются инвалидами второй группы.

Выводы. В условиях стабилизации эпидемической ситуации реабилитация, прежде всего медицинская (клиническая), является важной составной частью противоэпидемических мероприятий при туберкулезе, ее эффективность остается недостаточной. Необходима дальнейшая интенсификация и разработка мероприятий по профессиональной и

социальной реабилитации больных и переболевших туберкулезом с учетом приоритетных факторов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гаврилов А.В. Динамика качества жизни пациентов с хронической обструктивной болезнью легких на реабилитационном этапе лечения // Здравоохранение Российской Федерации. - 2007. -№ 3. - С.37 - 39.

2. Лисицин Ю.П., Стаханов В.А., Оприщен-ко Д.С. Роль реабилитационных мероприятий в улучшении показателей здоровья лиц, больных туберкулезом // ГлаВрач. - 2006. - № 9. -С.25-30.

3. Романов А.И. Теория и практика медицинской реабилитации (к 60-летию Центра реабилитации Управления делами Президента РФ) // Здравоохранение Российской Федерации. -2007. - № 3. - С. 9-13.

4. Шилова М.В. Туберкулез в России в 2007 году: монография. - М., 2008. - 152 с.

УДК 615.322:547.56

ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИСТЬЕВ ПУЗЫРЕПЛОДНИКА КАЛИНОЛИСТНОГО (PHYSOCARPUS OPULIFOLIUS (L.) MAXIM) МЕТОДОМ ВЭЖХ

© Сафонова И.А., Яцюк В.Я., Кузьминова А.В.

Кафедра биоорганической химии Курского государственного медицинского университета, Курск

E-mail: ISafon@yandex.ru

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проведен качественный и количественный анализ фенольных соединений листьев пузыреплодника калинолистного. В спиртовом извлечении, полученном методом мацерации, найдено 77 веществ; в спиртовом извлечении, полученном методом термической экстракции, найдено 57 веществ. 20 веществ идентифицировано. Среди них: фенолкарбоно-вые кислоты (хлорогеновая, кофейная, розмариновая, салициловая), производное оксистильбена (резвера-трол), кумарины (герниарин, эскулетин, эскулин), флавоны и их производные (лютеолин, витексин-О-рамнозид, цинарозид, байкалин), флавонолы и их производные (кверцетин, 3,4-изорамнетина диглюкозид, робинин, рутин, гиперозид, астрагалин), флаванон (нарингенин), изофлавоноид (софорикозид). Все соединения в данном растении идентифицированы впервые.

Ключевые слова: фенольные соединения, пузыреплодник калинолистный, розоцветные, ВЭЖХ.

STUDYING OF PHENOLIC COMPOUNDS OF PHYSOCARPUS OPULIFOLIUS

LEAVES BY HPLC-METHOD Safonova I.A., Yatsuk V.Ya., Kuzminova A.V.

Bioorganic Chemistry Department of the Kursk State Medical University, Kursk

The qualitative and quantitative analysis of phenol compounds of Physocarpus opulifolius leaves was made by the HPLC method. 77 compounds are determined in the alcohol extract, received by maceration, 57 compounds are determined in the alcohol extract, received by extraction with heating. 20 compounds are identified. Among them there are phenolcarbonic acids (chlorogenic, coffeic, rosmarinic, salicylic, oxystilbener derivatives (luteoline, vitex-ine-O-rhamnoside, cinaroside, baicaline), flavonoles and their derivatives (quercetine, 3,4-isorhamnetine digluco-side, robinine, rutine, hyperoside, astragaline), flavanone (naringenine), isoflavone (soforicoside). All compounds in this plant have been identified for the first time.

Keywords: phenol compounds, Physocarpus opulifolius, Rosaceae, HPLC.

В настоящее время в медицинской практике активно применяются фармацевтические препараты, полученные из лекарственного растительного сырья. Это связано с рядом преимуществ средств природного происхождения перед синтетическими, в частности, с широким спектром терапевтического действия и низкой токсичностью. Поиск новых растительных источников фармакологически активных веществ с целью создания на их основе оригинальных современных лекарственных средств является актуальной задачей ведущих фармацевтических фирм. Среди разнообразия флоры Центральной России растения семейства Яовасеае занимают особое место в официнальной и народной медицине, так как спектр их терапевтического воздействия весьма разнообразен.

Одним из родов семейства Rosaceae, причем наименее изученным, является род Пузыреплодник Physocarpus (Cambess.) Maxim. Род включает около 10 видов, распространенных в Восточной Азии и Северной Америке. В России встречаются 2 дикорастущих и 4 интродуцированных вида [7, 11]. Фитохимические исследования растений этого рода практически не проводились, и сведения об их химическом составе отсутствуют: лишь в Physocarpus ribesifolius (пузыреплоднике смородинолистном) в 1964 году обнаружены алкалоиды [6, 10]. В связи с этим фитохимическое исследование растений рода пузыре-плодник является актуальным.

Объектом исследования был выбран пу-зыреплодник калинолистный Physocarpus opulifolius, введенный в культуру в России

как декоративное растение с 1854 года и широко распространенный на территории Курской области в культуре как объект озеленения [3, 5, 12]. Пузыреплодник калинолистный - это кустарник высотой до 1,5-3 м с поникающими ветвями. Кора отслаивается от стебля длинными полосками, из-за этого в народе растение называется бесстыдница. [9] Плод — многолистовка (из 3-4 листовок), в большей или меньшей степени вздута, что и отражено в латинском и русском названии рода (от греческого 'physo' — пузырь, 'carpos' — плод.) Плоды созревают в сентябре-октябре. Цветки белые или розовые собраны в выпуклые щитковидные соцветия. Веточки соцветия, цветоножки и чашелистики, как и листовки, голые или рассеянно покрыты короткими волосками. Цветет в июне-июле. Листья округло-яйцевидные или округло-эллиптические, длиной до 4 см, с 3-5 тупыми лопастями, из которых средняя — более крупная. Края пильчато-зубчатые. Листовые пластинки сверху — зеленые, а снизу — более светлые, с обеих сторон голые или почти голые [2, 4, 11, 12].

Целью нашей работы было изучение фенольного состава листьев пузыреплодника калинолистного методом ВЭЖХ. Этот метод отличается высокой чувствительностью и точностью и позволяет достоверно судить о качественном составе изучаемой группы биологически активных веществ [1]. Для фитохимического исследования использовали листья, собранные в фазу начала плодоношения на территории Курской области в 2008 году.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение фенольных соединений листьев пузыреплодника калинолистного проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "Waters" с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы "Мультихром" для "Windous".

Для разделения компонентов была использована колонка INERTSILODS-2.5 mkm 150x4,6 мм; метод - градиентного элюирования. В качестве подвижной фазы - система растворителей ацетонитрил-водаортофосфор-

ная кислота. Градиент: от 8% до 40% ацетонитрила в 0,1% растворе кислоты фосфорной. Скорость подвижной фазы 1 мл/мин. Объем вводимой пробы - 10 мкл. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 254 нм. Продолжительность анализа 64 мин.

Для исследования получали спиртоводные извлечения методом мацерации и экстракции при нагревании. Воздушно-сухое сырье измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1мм. В две колбы объемом 250 мл помещали по 10,0 г измельченного сырья и прибавляли по 100 мл 70% спирта этилового. Одну колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 ч. от момента закипания спирто-водной смеси, вторую оставляли в темном месте на 10 суток. Извлечение, полученное методом мацерации, и извлечение, полученное термической экстракцией, после охлаждения фильтровали через бумажный фильтр в мерные колбы вместимостью 100 мл и доводили объем 70% спиртом этиловым до метки.

Параллельно готовили серию 0,05% растворов стандартных образцов (РСО): кверце-тина, лютеолина, апигенина, нарингенина, байкалеина, гиперозида, цинарозида, байка-лина, астрагалина, витексина-О-рамнозида, рутина, 3,4-изорамнетина диглюкозида, 3,7-изорамнетина диглюкозида, робинина, софо-рикозида, герниарина, эскулина, эскулетина, хлорогеновой, галловой, кофейной, розмариновой, салициловой кислот, резвератрола. Время удерживания определяли для каждого вещества в отдельности и на модельных смесях. По 10 мкл исследуемого раствора и РСО вводили в хроматограф и хроматографировали по вышеприведенной методике.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Данные, полученные при помощи ВЭЖХ, свидетельствуют о том, что листья пузыреплодника калинолистного содержат разнообразный набор фенольных соединений: производные фенилбензо-у-пирана (флаваноны, флавоны, флавонолы, изофлавоноиды, их