СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОФИЛИИ В

1. Белок, включающий генно-инженерный ДНК-связующий домен белка типа «цинкового пальца», где ДНК-связующий домен содержит четыре или пять областей распознавания «цинковый палец», обозначенных от F1 до F4 или от F1 до F5 от N-конца к С-концу, и где
(i) если ДНК-связующий домен содержит пять областей распознавания «цинковый палец», то F1-F5 содержат следующие аминокислотные последовательности:
F1: QSGDLTR (SEQ ID NO:4)
F2: RSDVLSE (SEQ ID NO:5)
F3: DRSNRIK (SEQ ID NO:6)
F4: RSDNLSE (SEQ ID NO:7)
F5: QNATRIN (SEQ ID NO:8);
(ii) если ДНК-связующий домен содержит четыре области распознавания «цинковый палец», то F1-F4 содержат следующие аминокислотные последовательности:
F1: RSDSLSV (SEQ ID NO:10)
F2: TSGHLSR (SEQ ID NO:11)
F3: RSDHLSQ (SEQ ID NO:12)
F4: HASTRHC (SEQ ID NO:13).
2. Белок по п.1, дополнительно содержащий расщепляющий домен или расщепляющий полудомен дикого типа или генно-инженерный.
3. Полинуклеотид, кодирующий белок по п.1 или 2.
4. Выделенная клетка, содержащая белок по п.1 или 2 или полинуклеотид по п.3.
5. Способ лечения гемофилии B у субъекта, причем указанный способ включает интеграцию последовательности, кодирующей функциональный белок фактор IX (FIX), в геном клетки, используя по меньшей мере одну цинк-пальцевую нуклеазу, где субъект содержит данную клетку.
6. Способ по п. 5, где последовательность интегрируют в эндогенный ген.
7. Способ по п. 5 или 6, где эндогенный ген выбран из группы, включающей FIX ген и ген «безопасную гавань».
8. Способ по п. 5, где клетка является печеночной клеткой и последовательность доставляют в клетку посредством внутривенного введения в печень интактного животного, внутрибрюшинного введения, прямой инъекции в паренхиму печени, инъекции в печеночную артерию или ретроградной инъекции через билиарное дерево.
9. Способ по п. 5, дополнительно включающий стадию проведения частичной гепатэктомии у субъекта и/или дополнительно включающий стадию лечения субъекта, по меньшей мере, одним вспомогательным агентом.
10. Способ по п.9, где вспомогательный агент выбран из группы, включающей гамма-облучение, УФ-облучение, меченные тритием нуклеотиды, цис-платину, этопозид, гидроксимочевину, афидиколин, преднизолон, аденовирус и их комбинации.
11. Способ по п. 5, где клетка представляет собой выделенную клетку и способ дополнительно включает введение субъекту выделенной клетки.
12. Способ по п. 5, где субъект выбран из группы, включающей эмбрион, плод, новорожденного, инфантильного, ювенильного или взрослого субъекта.
13. Способ по п. 5, дополнительно включающий объединение последовательности, цинк-пальцевой нуклеазы, полинуклеотида, кодирующего цинк-пальцевую нуклеазу, или их комбинации с хоминг-агентом, который специфически связывается с поверхностным рецептором клетки.
14. Способ по п. 13, где хоминг-агент включает галактозу или гибрид белка оболочки AAV и галактозу.
15. Способ по любому из п.п. 8-14, где клетка выбрана из группы, включающей человеческую клетку, клетку примата, отличного от человека, клетку грызуна, клетку зайцеобразного животного, клетку плотоядного животного и клетку парнокопытного животного и стволовую клетку, например эмбриональную стволовую клетку, гемопоэтическую стволовую клетку, индуцированную плюрипотенциальную стволовую клетку, гепатоцит или печеночную стволовую клетку.