АНТИНЕЙТРОФИЛЬНОЕ СРЕДСТВО
ANTINEUTROPHILIC AGENT

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к антинейтрофильному средству, содержающему соединение пиридазинона или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В высокой степени безопасные лекарственные средства, селективно снижающие уровень нейтрофилов, весьма перспективны как профилактические или терапевтические средства в случае некоторых заболеваний, для которых в настоящее время медицински пригодными являются немногие лекарственные средства. А именно нейтрофилия предполагает заболевания, сопровождающиеся повышенным по сравнению с нормой содержанием нейтрофилов. В качестве конкретных примеров могут быть упомянуты заболевания, развивающиеся и прогрессирующие с вовлечением нейтрофилов, такие как острые инфекции (бактериальные, грибковые, спирохетные, паразитарные, риккетсиозные и вирусные инфекции), диффузные болезни соединительной ткани (хронический ревматоидный артрит, гранулематоз Вегенера и заболевание Бехчета), хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), хронические бронхиты, эмфизема легких, легкие заболевания дыхательных путей, подагра, синдром Кушинга, миелофиброзы, неопластическая нейтрофилия, истинная полицитемия и заболевания, вызванные применением стероидных лекарственных средств.
Соединения пиридазинона или их соли известны как вещества, имеющие превосходное антитромботическое действие, кардиотоническое действие, сосудорасширяющее действие, анти-МРВ-А действие (действие против медленно реагирующих веществ при анафилаксии), ингибирующее действие на тромбоксан А2 - синтетазу, терапевтическое действие на стеноз спинальных каналов и эректильную дисфункцию, и действия, стимулирующие и улучшающее ангиогенез, и они также весьма перспективны как антитромбоцитарные средства (патентные документы 1-6).
Однако до сих пор не было известно, какое действие эти соединения пиридазинона оказывают на нейтрофилию. С другой стороны, среди различных способов лечения нейтрофилии одним из общепризнанных является химиотерапия, и требуется усовершенствование химиотерапии.
Патентный документ 1: JP-B-7-107055
Патентный документ 2: JP-A-7-252237
Патентный документ 3: JP-A-7-285869
Патентный документ 4: WO99/11268
Патентный документ 5: WO00/12091
Патентный документ 6: WO00/33845
РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ЗАДАЧИ, КОТОРЫЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ ПРИЗВАНО РЕШАТЬ
Предметом настоящего изобретения является предоставление превосходного антинейтрофильного средства.
СПОСОБЫ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ
В результате обширных исследований авторы настоящего изобретения установили, что соединения пиридазинона, представленные формулой (I), или их фармацевтически приемлемые соли имеют превосходное антинейтрофильное действие и составляют настоящее изобретение.
А именно, настоящее изобретение обеспечивает:
(1) Антинейтрофильное средство, содержащее соединение 3(2Н)-пиридазинона, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль[1]:
1
2
3
1-6
1-8
(где R, R и R могут быть различными, независимо друг от друга, и могут быть представлены атомом водорода или С алкильной группой, Х является атомом галогена, циано или атомом водорода, Y является атомом галогена, трифторметилом или атомом водорода и А является С алкиленом, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа).
1
2
3
1-4
1-5
(2) Антинейтрофильное средство по пункту (1), где в формуле (I) R и R являются атомами водорода, R является атомом водорода или С алкильной группой, Х является атомом галогена, Y является атомом галогена или атомом водорода, и А является С алкиленом, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа.
(3) Антинейтрофильное средство по пункту (1), в котором соединение, представленное формулой (I), представляет собой 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)пропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон или 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)-3-гидроксипропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон.
(4) Антинейтрофильное средство по пункту (1), в котором фармацевтически приемлемой солью является соль органической кислоты или соль неорганической кислоты.
(5) Антинейтрофильное средство по какому-либо из пунктов (1)-(4), которое является профилактическим или терапевтическим средством в случае хронического обструктивного заболевания легких.
1
2
3
1-4
1-5
Антинейтрофильным средством по настоящему изобретению предпочтительно является соединение пиридазинона согласно формуле (I), где R и R являются атомами водорода, R является атомом водорода или С алкильной группой, X является атомом галогена, Y является атомом галогена или атомом водорода и А является С алкиленом, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа, или его фармацевтически приемлемая соль.
Соединением пиридазинона, представленным формулой (I), в антинейтрофильном средстве по настоящему изобретению особенно предпочтительно является 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)пропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон или 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)-3-гидроксипропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон.
РЕЗУЛЬТАТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение обеспечивает новое антинейтрофильное средство, содержащее соединение пиридазинона (I) или его фармацевтически приемлемую соль.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На чертеже показано количество нейтрофилов в бронхоальвеолярных смывах после назначения перорального приема соединения А в дозах 1 мг/кг, 3 мг/кг и 10 мг/кг в экспериментальном примере 1. * указывает на то, что различия были значительными с р <0,05 при сравнении по критерию Дуннетта с группой, принимавшей растворитель.
НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Здесь будет описано соединение пиридазинона, представленное вышеприведенной формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль в антинейтрофильном средстве по настоящему изобретению.
1-6
1
2
3
В формуле (I) С алкильные группы, такие как R, R и R, могут быть линейными или разветвленными и могут быть, например, метилом, этилом, н-пропилом, изопропилом, н-бутилом, изобутилом, втор-бутилом, трет-бутилом, пентилом, гексилом или им подобными.
1
2
3
1-4
R и R предпочтительно являются атомами водорода, и R предпочтительно является атомом водорода или С алкильной группой.
1-4
3
3
С алкильная группа, такая как R, может, например, быть метилом, этилом, н-пропилом, изопропилом, н-бутилом, изобутилом, втор-бутилом, трет-бутилом или им подобными. Особенно предпочтительно, если R является атомом водорода.
Атомы галогенов, такие как X и Y, являются атомами фтора, атомами хлора, атомами брома или атомами йода. X предпочтительно является атомом галогена, а Y предпочтительно является атомом галогена или атомом водорода.
1-8
С алкилен, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа так же, как А может быть линейным или разветвленным и может, например, быть метиленом, этиленом, пропиленом, бутиленом, пентиленом, гексиленом, гептиленом, октиленом, 2,2-диметилэтиленом, 2,2-диэтилэтиленом, 2,2-ди-н-пропилэтиленом, гидроксиметиленом, 1-гидроксиэтиленом, 2-гидроксиэтиленом, 3-гидроксипропиленом или им подобными.
1-5
А предпочтительно является С алкиленом, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа.
В формуле (I) метиленовая группа может быть присоединена к любому положению пиридинового кольца без особых ограничений, но предпочтительно присоединена в 3-положении по отношению к атому азота пиридинового кольца.
Кроме того, заместитель Y может быть в любом положении в бензольном кольце, но предпочтительно в 4-положении.
1
2
3
1-4
1-5
Особенно предпочтительны соединения пиридазинона формулы (I), в которых R и R являются атомами водорода, R является атомом водорода или С алкилом, Х является атомом галогена, Y является атомом галогена или атомом водорода и А является С алкиленом, в котором в качестве заместителя может присутствовать гидроксильная группа.
В качестве предпочтительных соединений указаны 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)пропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон, 4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)-3-гидроксипропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон и их фармацевтически приемлемые соли.
В настоящем изобретении фармацевтически приемлемые соли соединений пиридазинона (I) включают, например, соли неорганических кислот (такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты и сульфаты), соли органических кислот (такие как ацетаты, сукцинаты, малеаты, фумараты, малаты и тартраты). Эти соли могут быть получены из соединений пиридазинона (I) известными методами.
Соединения пиридазинона (I) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли охватывают и их стереоизомеры, и их оптические изомеры. Соединения пиридазинона (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются известными соединениями, для которых зафиксирована низкая токсичность. Их можно получить способами, раскрытыми в патентах JP-B-7-107055, USP 5314883, EP-A-482208, JP-A-7-252237, USP 5750523 и EP-A-742211.
Соединения пиридазинона (I) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли проявляют превосходное антинейтрофильное действие на млекопитающих, таких как люди, собаки, крупный рогатый скот, лошади, кролики, мыши и крысы.
Соединения пиридазинона (I) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли назначаются в адекватных дозах, выбираемых в зависимости от возраста, веса и состояния пациента, и обычно назначаются взрослым людям в количествах от 0,001 мг до 5 г в день, предпочтительно от 0,005 до 1000 мг в день, от одной до нескольких доз в день.
Соединения пиридазинона (I) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут вводиться парентерально в форме инъекций (для подкожного, внутривенного, внутримышечного или внутрибрюшинного введения), мазей, суппозиториев, аэрозолей, глазных капель или назальных капель, перорально в форме таблеток, капсул, гранул, пилюль, порошков, лечебных леденцов, жвачек, сиропов, растворов, эмульсий или суспензий. Пероральное введение является предпочтительным.
Соединения пиридазинона (I) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены в виде различных дозированных форм в соответствии с общепринятыми методами, обычно применяемыми для приготовления фармацевтических препаратов.
Например, таблетки, капсулы, гранулы, пилюли, порошки, лечебные леденцы или жвачки для перорального введения могут быть приготовлены известными способами с использованием наполнителя (такого как сахар, лактоза, глюкоза, крахмал или маннит), связующего агента (такого как сиропы, аравийская камедь, желатин, сорбитол, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза или поливинилпирролидон), дезинтегрирующего агента (такого как крахмал, карбоксиметилцеллюлоза или ее кальциевые соли, микрокристаллическая целлюлоза или полиэтиленгликоль), добавки для придания блеска (такой как тальк, стеарат магния, стеарат кальция или диоксид кремния) или смягчающей добавки (такой как лаурат натрия или глицерин).
В случае рецептуры для перорального введения могут быть добавлены органические кислоты, такие как лимонная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, яблочная кислота и виноградная кислота с целью улучшения растворимости и абсорбируемости.
Инъекционные формы, аэрозоли, сиропы, растворы, эмульсии, суспензии, глазные капли и назальные капли могут быть приготовлены обычными методами с использованием растворителя, подходящего для активного ингредиента (такого как вода, этиловый спирт, изопропиловый спирт, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль или полиэтиленгликоль), поверхностно-активного вещества (такого как сложный эфир жирной кислоты и сорбита, сложный эфир жирной кислоты с полиоксиэтиленсорбитом, полиоксиэтиленовый сложный эфир жирной кислоты, полиоксиэтиленовый эфир гидрогенизированного касторового масла или лецитина), суспендирующего агента (такого как производное целлюлозы, подобное натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы или метилцеллюлозе, или природный каучук, подобный трагакантовой камеди или аравийской камеди) или консервирующего вещества (такого как сложный эфир пара-гидроксибензойной кислоты, бензалкониум хлорид или соль сорбиновой кислоты). Суппозитории могут быть приготовлены известными методами с использованием, например, какао-масла, полиэтиленгликоля, ланолина, триглицеридов жирных кислот или кокосового масла.
Мази, абсорбируемые через кожу, могут быть приготовлены с использованием, например, медицинского вазелина, жидкого парафина, высших спиртов, макроструктурных мазей, гидрофильных мазей или на основе водного геля.
ПРИМЕРЫ
Здесь будет дано дополнительное детальное описание настоящего изобретения со ссылками на экспериментальные примеры и примеры. Однако следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается этими специальными примерами.
В нижеследующих экспериментальных примерах и примерах применяли полученное обычным способом соединение А (4-бром-6-[3-(4-хлорфенил)пропокси]-5-(3-пиридилметиламино)-3(2Н)-пиридазинон гидрохлорид). Другие реагенты были купленные.
Экспериментальный пример 1
Действие соединения А на нейтрофилию дыхательных путей у крыс
E. coli
Самцов крыс Wister массой от 100 до 200 г помещали в прозрачный пластиковый ингаляционный контейнер для маленьких животных (ширина 30 × высота 30 × длина 30 см) и 30 мл липополисахаридного раствора (ЛПС  0,3 мг/мл физиологического раствора), распыленного в виде частичек размером 2,0-6,0 мкм, применяли для ингаляции с помощью ультразвукового аэрозольного аппарата (TUR-3200, NIHON KOHDEN) в течение 30 минут.
Липополисахаридную ингаляцию осуществляли заблаговременно, за 30 минут до перорального введения соединения А, суспендированного в 0,5% метилцеллюлозе (МЦ) в дозах 1 мг/4 мл/кг, 3 мг/4 мл/кг и 10 мг/4 мл/кг, или перорального введения 0,5% МЦ в дозе 2 мл/кг для группы, получавшей растворитель. Для не получавшей лечение группы перорально вводили 0,5% МЦ в дозе 2 мл/кг, за 30 минут до ингаляции физиологическим раствором. Каждая группа состояла из 6 крыс.
2
Через примерно 5 часов после липополисахаридной ингаляции собирали бронхоальвеолярные смывы. А именно, крысам внутрибрюшинно вводили уретановую инъекцию, и затем дыхательные пути спринцевали 5 мл физиологического раствора через трахейный катетер, вставленный в сделанный в трахее разрез, с двухкратным повтором инфузии и отсасывания. Спринцевание повторяли дважды для сбора 10 мл бронхоальвеолярных смывов. Бронхоальвеолярные смывы немедленно центрифугировали при 4ºС, при 1471 м/с в течение 10 минут. Осадок клеток суспендировали в 0,5 мл 0,2% физиологического раствора, и через 1 минуту добавляли 1,6% физиологический раствор. Общее число лейкоцитов в суспензии подсчитывали с помощью многоканального счетчика кровяных клеток и обозначали как общее количество лейкоцитов.
6
Далее, после того, как для клеточной суспензии было установлено общее количество лейкоцитов 1×10 клеток/мл, 100 мл суспензии центрифугировали при комнатной температуре, при 400 оборотах в минуту, в течение 4 минут в цитоцентрифуге (Thermo Shandon) и брали мазки. Мазки окрашивали быстрым контрастным способом с помощью Diff-Quick (International Reagents Co., Ltd.) и подсчитывали моноциты, эузинофилы и нейтрофилы с помощью инвертированного микроскопа (×400) приблизительно для 500 клеток. Число лейкоцитов каждого типа подсчитывали из соотношения к общему количеству лейкоцитов по нижеприведенной формуле.
Число лейкоцитов каждого типа = общее количество лейкоцитов × доля лейкоцитов каждого типа (число подсчитанных лейкоцитов каждого типа/общее число подсчитанных клеток).
Статистический анализ был сделан с использованием компьютерного программного обеспечения SAS Preclinical Package V5. Применяли для определения «t-тест между двумя группами» для анализа однократных экспериментальных данных в том случае, если обнаруживали значительные различия между отрицательной контрольной группой и липополисахаридной группой с растворителем, и применяли «параметрический мультиплетный сравнительный тест Дуннетта» для анализа однофакторных экспериментальных данных в том случае, если обнаруживали значительные различия между контрольной группой и получавшей лечение группой. Различия между группами рассматривались как значительные в случае, если р <0,05 (двухсторонний).
Результаты
Результаты показаны на чертеже. Было видно, что ингаляция эндотоксина вызывает накопление нейтрофилов в дыхательных путях крыс Wister. Соединение А проявляло антинейтрофильное действие в дыхательных путях крыс при назначении перорального приема в дозах 1 мг/кг, 3 мг/кг и 10 мг/кг.
Экспериментальный пример 2
Действие соединения А на модели респираторной дисфункции у морских свинок с нейтрофилией дыхательных путей, вызванной воздействием табачного дыма
Методы
Морских свинок Hartley массой от 350 до 450 г подвергали воздействию сигаретного дыма на протяжении часа в день, в течение пяти дней в неделю, три недели, при этом применяли установку экспонирования табачного дыма и экспозиционную камеру (ингаляционная камера типа обтекания только носовой части, Muenster).
Воздействие табачным дымом осуществляли заблаговременно, за 15-45 минут до перорального введения соединения, суспендированного в 0,5% метилцеллюлозе (МЦ), в дозе 10 мг/2 мл/кг, или до преорального введения 0,5% МЦ в дозе 2 мл/кг для группы, получающей растворитель. Для не получавшей лечение группы назначали пероральное введение 0,5% МЦ в дозе 2 мл/кг при предшествовавшем за 15-45 минут воздействии воздуха. Каждая группа состояла из 4-6 крыс. Резистентность дыхательных путей и количество нейтрофилов оценивали через день после трехнедельного воздействия табачного дыма. Резистентность дыхательных путей оценивали с помощью двухкамерного плетизмографа с измерителем респираторной функции (Puloms-1, M.I.P.S.) во время бодрствования. Количество нейтрофилов оценивали так же, как в экспериментальном примере 1. Действие соединения А количественно определяли посредством подсчета степени супрессии (%) по нижеприведенной формуле:
Степень супрессии = ((измеренная величина для контрольной группы - измеренная нормальная величина) - (измеренная величина для группы, получавшей соединение А - измеренная величина для нормальной группы)) × 100/(измеренная величина для контрольной группы - измеренная нормальная величина)
Результаты
Соединение А подавляло нейтрофилию на 73% и способствовало повышению резистентности дыхательных путей на 100%.
Очевидно, что соединение А эффективно против респираторной дисфункции, связанной с нейтрофилией, обусловленной воздействием табачного дыма на морских свинок.
ПРИМЕР 1 (Таблетки)
10 г соединения А, 20 г лактозы, 5 г крахмала, 0,1 г стеарата магния и 7 г кальциевой соли карбоксиметилцеллюлозы, в итоге 42,1 г, перемешивали обычным способом и изготавливали покрытые сахарной оболочкой таблетки, каждая их которых содержала 50 мг соединения А.
ПРИМЕР 2 (Таблетки)
Были приготовлены таблетки, содержащие 10,0 мг соединения А в качестве основного компонента, 5,0 мг лимонной кислоты в качестве органической кислоты, 123,0 мг лактозы в качестве формообразующего вещества, 4,0 мг гидроксипропилцеллюлозы в качестве связующего вещества, 7,0 мг натриевой соли кроскармеллозы в качестве дезинтегратора и 1,0 мг стеарата магния в качестве добавки для придания блеска.
ПРИМЕР 3 (Капсулы)
10 г соединения А, 20 г лактозы, 10 г микрокристаллической целлюлозы и 1 г стеарата магния, в итоге 41 г, перемешивали обычным способом и помещали в желатиновые капсулы для получения капсул, каждая из которых содержала 50 мг соединения А.
ПРИМЕР 4 (Аэрозольная суспензия)
2
Нижеперечисленные ингредиенты (А) перемешивали и получившуюся в результате жидкую смесь загружали в оснащенный клапаном сосуд. Пропеллент (В) инжектировали через форсунку клапана при 20ºС при уровне давления приблизительно 2,46-2,81 мг/см с получением аэрозольной суспензии.
(А): Соединение А 0,25 масс.%, изопропилмиристат 0,10 масс.%, этанол 26,40 масс.%.
(В): Смесь, содержащая 60-40 масс.% 1,2-дихлортетрафторэтана и 1-хлорпентафторэтана : 73,25 масс.%.