ПРОИЗВОДНЫЕ α-АМИНОАМИДА, ПОЛЕЗНЫЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ СИНДРОМА УСТАЛЫХ НОГ И ВЫЗЫВАЮЩИХ ПРИВЫКАНИЕ РАССТРОЙСТВ
α-AMINOAMIDE DERIVATIVES EFFECTIVE IN TREATING RESTLESS LEGS SYNDROME AND ADDICTIVE DISORDERS

Настоящее изобретение относится к производным α-аминоамида, составляющим химический класс ингибиторов моноаминоксидазы В (МАОВ), блокаторов натриевого канала, ингибиторов обратного поглощения допамина (или допамина) и средств, нормализующих уровни глютамина, для применения при лечении синдрома усталых ног (RLS) и вызывающих привыкание расстройств.
Синдром усталых ног (RLS) хорошо описан, изучен, клинически полностью охарактеризован ощущениями неприятных мурашек, жжения или напряжения глубоко в ногах от колен до лодыжек и реже в плечах. Симптомы присутствуют, когда конечности находятся в покое, особенно по вечерам и ночью, и обычно смягчаются при движении. Следствием является появление нарушений сна, задержка длительного сна, укороченное общее время сна с уменьшенной фазой медленного сна или с ее отсутствием и пониженной эффективностью сна.
Эпидемиологические исследования показали, что RLS является обычным заболеванием, причем со временем преобладающие данные для взрослых находятся в интервале от 9 до 15% от общей популяции (Phillips B. Epidemiology of restless legs syndrome in adults, Archives of Internal Medicine, 160(14) 2137-2141, 2000). Критерии Международной Группы по изучению RLS (1995) определяют больных RLS как имеющих в наличии следующие симптомы (Walters A.S. Toward a better definition of the Restless Legs Syndrome, Movement Disorders, 10(5) 634-642, 1995):
1. Сильное желание двигать конечностями, связанное с парестезией или дизестезией.
2. Двигательное беспокойство (при бессоннице больные двигают конечностями, пытаясь уменьшить дискомфорт).
3. Симптомы усиливаются или присутствуют исключительно в покое, по меньшей мере, с частичным или временным ослаблением за счет активности.
4. Симптомы усиливаются по вечерам или по ночам.
Другими обычными признаками являются нарушения сна, периодические движения конечностями во сне (PLMS) и аналогичные непроизвольные движения при пробуждении (Walters A.S. Toward a better definition of the Restless Legs Syndrome, Movement Disorders, 10(5) 634-642, 1995).
Ряд PLM и родственных параметров, как считается, являются показателями серьезности RLS, так как PLM часто ассоциируется с ночной бессонницей или ночными пробуждениями.
Из-за проблем во время сна и бессонницы люди с RLS могут иметь проблемы с работой, общественной жизнью и активностью при отдыхе.
18
18
Патогенез RLS остается неизвестным, но современные данные свидетельствуют о растормаживании нормального пейсмаркера центральной нервной системы, вероятно управляемого множеством воздействий. Исследования с помощью позитронной эмиссионной томографии (РЕТ) при RLS подтверждают роль допаминергической системы в патогенезе заболевания. Turjanski с соавторами установили, что поглощение F-dopa как хвостатым ядром, так и оболочкой умеренно понижено у больных RLS по сравнению с контрольными субъектами, и это достигает значимости (р=0,04) в оболочке. То же исследование показывает значительное уменьшение в связывании рецептора D2 допамина в оболочке у таких больных (Turjanski N. Neurology, 52, 932-937, 1999). Аналогично Ruottinen с соавторами изучили группу не подвергавшихся лекарственному лечению больных RLS и выявили 11%-ное снижение поглощения F-dopa в оболочке и 12%-ное в хвостатом ядре (Ruottinen H.M. Neurology, 54, 502-504, 2000). Эти данные подтверждают умеренную стриарную пресинаптическую допаминергическую дисфункцию.

Агентов, которые в настоящее время показаны для лечения RLS, в США нет, хотя в Германии недавно выпущен препарат Restex, L-dopa. Другие продукты, используемые для лечения симптомов RLS, включают опиаты, бензодиазепины и некоторые антиконвульсанты. Агонисты допамина, такие как каберголин, прамипексол и ропинирол, предложены для лечения RLS. Все указанные способы лечения имеют недостатки, такие как побочные эффекты, взаимодействия, короткая продолжительность действия и вероятность злоупотребления. Доступные данные подтверждают, что дефицит допаминергической системы играет важную роль при RLS.
Так как ингибиторы МАОВ воздействуют на метаболизм допамина, приводя к удлинению времени нахождения допамина на его рецепторе, авторами настоящего изобретения предложено применение α-аминопроизводных при лечении RLS. Другими заболеваниями, где дефицит допаминергической системы играет важную роль, являются вызывающие привыкание расстройства, которые можно определить как патологическое поведение, характеризующееся принудительным поиском и употреблением лекарственного средства. Длительное применение лекарственного средства, как полагают, вызывает затяжные функциональные изменения в нервных цепях, вовлеченных в мотивацию, которая может привести к зависимости, страстной потребности в лекарственном средстве и к рецидиву.
Обычно различные лекарственные средства, к которым развивается зависимость (амфетамин, кокаин, героин, никотин, алкоголь), даже с различными первичными молекулярными мишенями, имеют общее действие в повышении трансмиссии допамина в мезолимбической системе. Различные методики использованы при лечении вызывающих привыкание расстройств, и большинство из них направлено на модулирование допаминергической системы.
Ингибиторы МАОВ воздействуют на метаболизм допамина у человека и приматов, приводя к удлинению времени нахождения допамина на его рецепторах. Применение ингибитора МАОВ, как показано, оказывает положительный эффект при лечении патологий, когда имеет место допаминергический дефицит, как при PD (болезни Паркинсона).
Новые доказательства поддерживают гипотезу, что ингибиторы МАОВ могут оказывать положительный эффект при лечении вызывающих привыкание расстройств. Исследования, проведенные на крысах и человеке, показывают, что селегилин (специфический ингибитор МАОВ), оказывает умеренный противоподкрепляющий эффект во время кокаиновой детоксикации и может поправлять допаминовые дефициты во время абстиненции, которая, как полагают, способствует случаям рецидива (Schiffer et al., 2003, Synapse 48:35-8).
Недавно установлено, что курильщики имеют пониженную активность МАОВ в тромбоцитах и головном мозге. Выдвинута гипотеза, что пониженная активность МАОВ в головном мозге приводит к повышению проблемы привыкания к никотину. В многоцентровой фазе II изучения лазабемид, еще один ингибитор МАОВ (200 мг/день), как, оказалось, повышает процент прекращения курения (с 17 до 30%) (Berlin et al., 2002, Addiction, 97:1347-1354).
Более того, показано, что блокаторы Na-каналов также могут быть эффективны при лечении вызывающих привыкание расстройств. Действительно, недавние клинические исследования показали, что топирамат (блокатор Na-каналов) эффективен при лечении алкогольной зависимости (Johnson et al., 2003, The Lancet, 361:1677-1685).
Современные методы лечения вызывающих привыкание расстройств включают антидепрессанты, агонисты опиатных рецепторов, такие как метадон, антагонисты опиатных рецепторов и неполные агонисты, такие как налтрексон и бупренорфин, бензодиазепины и дисулфирам, для алкогольной детоксикации. Недостатками таких способов лечения являются некоторые побочные эффекты и все еще недостаточная терапевтическая эффективность.
Так как существуют доказательства, что соединения, обладающие ингибирующей МАОВ активностью, и соединения, обладающие активностью блокирования Na-каналов, могут быть эффективными при лечении вызывающих привыкание расстройств, авторами настоящего изобретения предложено применение α-аминопроизводных, химического класса ингибиторов моноаминоксидазы В (МАОВ) и блокаторов натриевых каналов настоящего изобретения при лечении вызывающих привыкание расстройств.
В WO90/14334, WO94/22808, WO97/05102, WO97/0511 и WO99/35215, текст которых включен в данное описание посредством ссылки, раскрыты замещенные бензиламинопропионамидные соединения, активные на центральной нервной системе и полезные в качестве противоэпилептических средств, средств против болезни Паркинсона, нейропротекторов, антидепрессантов и противоспазматических снотворных средств (см. также Pevarello P. et al. (1998), J. Med. Chemistry, 41:579-590). В публикациях WO99/35125 и WO99/35123 раскрыты замещенные бензиламинопропанамидные соединения, активные на центральной нервной системе и полезные в качестве болеутоляющих средств.
in vivo
Настоящее изобретение предлагает быстрые и высоко эффективные способы лечения RLS и вызывающих привыкание расстройств путем использования при лечении некоторых α-аминоамидных соединений, что является превосходной альтернативой существующим способам лечения.
В одном из вариантов осуществления изобретение включает применение, по меньшей мере, одного лекарственного средства, которое представляет собой α-аминоамидное соединение формулы (I):
где:
2
n
2
А представляет собой -(СН)-Х-группу, где n принимает целые значения от 0 до 5, Х представляет собой СН, -О-, -S- или -NH-;
s равно 1 или 2;
1
6
1
6
R представляет собой фурильное, тиенильное или пиридильное кольцо, необязательно замещенное одним или двумя заместителями, независимо выбранными из атома галогена, гидроксигруппы, цианогруппы, С-Салкила, С-Салкоксигруппы или трифторметила;
1
1
6
3
7
R представляет собой атом водорода или С-Салкил или С-Сциклоалкил;
2
3
1
4
1
6
1
6
2
3
3
6
R и R независимо выбраны из атома водорода; С-Салкила, необязательно замещенного гидроксигруппой или фенилом; фенила, необязательно замещенного одним или двумя заместителями, независимо выбранными из С-Салкила, атома галогена, гидроксигруппы, С-Салкоксигруппы или трифторметила; или R и R, взятые вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют С-Сциклоалкильное кольцо; и
4
5
1
6
3
7
4
5
R, R независимо представляют собой атом водорода, С-Салкил или С-Сциклоалкил; или R и R, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют насыщенное 5-7-членное гетероциклическое кольцо;
его изомеры, смеси и фармацевтически приемлемые соли,
для получения медикамента для лечения синдрома усталых ног и вызывающих привыкание расстройств.
Алкильные и алкоксигруппы могут быть разветвленными или могут быть линейными группами.
Фармацевтически приемлемые соли соединений настоящего изобретения включают, например, кислотно-аддитивные соли с неорганическими кислотами, например азотной, хлористоводородной, бромистоводородной, серной и фосфорной кислотами и др., или с органическими кислотами, например уксусной, пропионовой, гликолевой, молочной, щавелевой, малоновой, яблочной, винной, лимонной, янтарной, бензойной, коричной, миндальной, метансульфоновой, п-толуолсульфоновой и салициловой кислотами и др.
in vivo
Некоторые соединения формулы (I) могут иметь асимметричные атомы углерода и, следовательно, могут существовать в виде рацемических смесей или в виде индивидуальных оптических изомеров (энантиомеров). Соответственно, определение «фармацевтически приемлемые соли» α-аминоамида формулы (I) также подразумевает, что в его объем включены все возможные изомеры и их смеси и любой фармацевтически приемлемый метаболит, биологический предшественник и/или пролекарство, то есть соединение, которое имеет структурную формулу, отличную от формулы α-аминоамида формулы (I), и затем прямо или косвенно превращается  в соединение, имеющее формулу (I), при введении млекопитающему, в особенности человеку.
2
2
2
2
2
2
2
n
Предпочтительными соединениями формулы (I) являются соединения, где А представляет собой группу, выбранную из -СН-, -СН-СН-, -СН-S-, -СН-СН-S- и -(СН)-O-, где n принимает целые значения от 1 до 5;
s равен 1 или 2;
R представляет собой фенильное кольцо, необязательно замещенное одним или двумя заместителями, независимо выбранными из атома галогена, трифторметила, метоксигруппы или тиенильного кольца;
1
1-4
R представляет собой атом водорода или Салкил;
2
3
1
4
2
3
один из R и R представляет собой атом водорода и другой представляет собой С-Салкил, необязательно замещенный гидроксигруппой или фенилом, или фенил, необязательно замещенный одним или двумя атомами галогена, или R и R оба представляют собой метил, или вместе они могут образовывать с атомом, с которым они связаны, циклопропильное или циклопентильное кольцо;
4
5
1
6
и R, R представляют собой атом водорода или С-Салкил; или вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют пирролидиновое или пиперидиновое кольцо; и их фармацевтически приемлемые соли.
Примерами конкретных соединений формулы (I), которые могут быть использованы отдельно или в комбинации с другими соединениями формулы (I), в эффективном количестве для лечения RLS и вызывающих привыкание расстройств у больных, являются:
2-(4-бензилоксибензиламино)пропанамид;
2-[4-(2-метоксибензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид;
(S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-2-метилпропанамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-N-метилпропанамид;
N-{2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]}пропионилпирролидин;
2-[4-(3-метоксибензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-цианобензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид;
(S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-2-метилпропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-N-метилпропанамид;
N-{2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]}пропионилпирролидин;
2-[4-(4-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-2-метилпропанамид;
2-[4-(2-хлорбензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-хлорбензилокси)бензиламино]пропанамид;
2-(4-бензилоксибензиламино)-3-гидроксипропанамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-3-гидроксипропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-3-гидроксипропанамид;
2-(4-бензилоксибензиламино)-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(2-хлорбензилокси)бензиламино]-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(3-цианобензилокси)бензиламино]-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(3-цианобензилокси)бензиламино]-2-метил-3-гидрокси-N-метилпропанамид;
2-[4-(3-хлорбензилокси)фенилэтиламино]-3-гидроксипропанамид;
2-{4-[2-(3-фторфенил)этилокси]бензиламино}пропанамид;
2-{4-[2-(3-фторфенил)этил]бензиламино}пропанамид;
2-[N-(4-бензилоксибензил)-N-метиламино]пропанамид;
2-{4-[(3-хлорбензилокси)фенилэтил]амино}пропанамид;
2-[4-бензилтиобензиламино]пропанамид;
2-[4-(2-фторбензилтио)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-фторбензилтио)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(3-фенилпропилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(4-фенилбутилокси)бензиламино]пропанамид;
2-[4-(5-фенилпентилокси)бензиламино]пропанамид;
2-(4-бензилоксибензиламино)-3-фенил-N-метилпропанамид;
2-(4-бензилоксибензиламино)-3-фенил-N-метилбутанамид;
2-(4-бензилоксибензиламино)-2-фенилацетамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-2-фенилацетамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-2-фенилацетамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензил-N-метиламино]-2-фенилацетамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензил-N-метиламино]-2-фенилацетамид;
2-[4-(3-хлорбензилокси)бензиламино]-2-фенилацетамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-2-(2-фторфенил)ацетамид;
2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]-2-(3-фторфенил)ацетамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-2-(2-фторфенил)ацетамид;
2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-2-(3-фторфенил)ацетамид;
2-[4-(3-хлорбензилокси)бензиламино]-2-(3-фторфенил)ацетамид;
2-(4-(2-тиенилокси)бензиламино)пропанамид;
или их изомеры, смеси и фармацевтически приемлемые соли.
Предпочтительными соединениями формулы (I), которые могут быть использованы по отдельности или в комбинации с другими соединениями формулы (I) в эффективном количестве для лечения одного или нескольких симптомов RLS или вызывающих привыкание расстройств у больного, являются (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид или (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид.
В одном из вариантов изобретения пациентом, который подвергается лечению, является млекопитающее, включая человека, нуждающееся в ослаблении или ингибировании одного или нескольких симптомов RLS или вызывающих привыкание расстройств.
В частности, млекопитающему, нуждающемуся в указанном выше лечении, вводят дозу α-аминоамида формулы (I), как определено выше, которая находится в интервале приблизительно от 0,3 до 100 мг/кг массы тела в день. Понятие «лечение», используемое в описании, включает любой уход путем проведения процедур или аппликаций млекопитающему, в частности, человеку, которые предназначены для того, чтобы а) предупредить развитие заболевания или расстройства у субъекта, который может быть предрасположен к данному заболеванию/расстройству, но у которого пока оно не диагностируется; b) подавление заболевания/расстройства или состояния, то есть купирование их развития; или с) ослабление заболевания/расстройства или состояния, то есть вызывание регрессии в заболевании/расстройстве или состоянии.
Таким образом, RLS и вызывающие привыкание расстройства у млекопитающих, включая человека, могут быть подавлены или ослаблены.
Примерами симптомов RLS являются двигательное беспокойство, ощущения неприятных мурашек, жжения или напряжения глубоко в ногах от колен до лодыжек. Сонливость и нарушения сна являются прямыми следствиями ранее описанных симптомов.
Примерами вызывающих привыкание расстройств являются лекарственная зависимость, сильный алкоголизм, синдром дефицита вознаграждения (RDS).
В соответствии с другим аспектом изобретение включает α-аминоамид формулы (I), вводимый в качестве активного агента фармацевтически приемлемой композиции, обладающий активностью при лечении RLS и вызывающих привыкание расстройств, которая может быть получена с помощью обычных способов, например, путем смешения активного агента с фармацевтически приемлемым, терапевтически инертным органическим и/или неорганическим носителем или эксципиентом.
Предпочтительными соединениями формулы (I), используемыми в эффективном количестве при лечении RLS и вызывающих привыкание расстройств у пациента, являются (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид или (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены хорошо известными способами, которые описаны в процитированных выше патентных заявках.
«Комбинированное лечение» (или «комбинированная терапия») включает введение альфа-аминоамидного соединения формулы (I) настоящего изобретения и, по меньшей мере, второго агента, например:
- агонистов допамина, таких как бромкриптин, каберголин, лизурид, перголид, ропинирол, апоморфин, суманирол, ротиготин, талипексол, дигидроэргокриптин и прамипексол;

- леводопа, леводопа плюс карбидопа (SINEMET), леводопа плюс карбидопа с контролируемым высвобождением (SINEMET-CR), леводопа плюс бензеразид (MADOPAR), леводопа плюс бензеразид с контролируемым высвобождением (MADOPAR-HBS);
- СОМТ-ингибиторов, таких как толкапон и энтакапон;

- STALEVO, амантадина;
- и антихолинергических средств,
как часть специальной схемы лечения, предназначенной для получения положительного эффекта от комбинированного действия указанных терапевтических средств. Положительные результаты от таких комбинаций включают снижение дозы обычных средств (например, отличных от средств настоящего изобретения) с последующим снижением побочных эффектов таких обычных средств. Положительный эффект от такой комбинации включает, но без ограничения, фармакокинетическое и фармакодинамическое совместное действие, получаемое от комбинации терапевтических средств. Введение указанных терапевтических средств в комбинации обычно проводят в течение определенного периода времени (обычно в течение минут, часов, дней или недель в зависимости от выбранной комбинации). «Комбинированное лечение» может подразумевать, но обычно не подразумевает, что оно включает ведение двух или более указанных терапевтических средств как часть отдельных схем монолечения, которые случайно и произвольно приводят к комбинациям, подразумеваемым настоящим изобретением. «Комбинированное лечение» подразумевает, что включено введение указанных терапевтических средств последовательно, то есть, когда каждый терапевтический агент вводится в различное время, а также введение указанных агентов или, по меньшей мере, двух терапевтических агентов по существу одновременно. По существу одновременное введение может быть осуществлено, например, путем введения субъекту одной капсулы, имеющей фиксированное соотношение каждого терапевтического агента, или в виде множества отдельных капсул для каждого из терапевтических агентов. Последовательное или по существу одновременное введение каждого терапевтического агента может быть выполнено любым подходящим способом, включая, но без ограничения, пероральные способы, внутривенные способы, внутримышечные способы и прямую абсорбцию через слизистые мембраны тканей. Терапевтические агенты могут быть введены одним и тем же способом или с помощью различных способов. Например, первый терапевтический агент выбранной комбинации может быть введен с помощью внутривенной инъекции, тогда как другие терапевтические агенты комбинации могут быть введены перорально.
Альтернативно, все терапевтические средства могут быть введены перорально или все терапевтические средства могут быть введены внутривенной инъекцией. Последовательность, в которой терапевтические средства вводятся, клинически не является строгой. «Комбинированное лечение» также может включать введение терапевтических агентов, которые описаны выше, в другой комбинации с другими активными ингредиентами и нелекарственной терапией (например, при хирургическом или радиационном лечении). Когда комбинированное лечение также включает нелекарственное лечение, последнее может быть проведено в любое подходящее время, пока достигается положительный эффект от совместного действия комбинации терапевтических агентов и нелекарственного лечения. Например, в подходящих случаях положительный эффект все еще достигается, когда нелекарственное лечение по времени сдвинуто от введения терапевтических агентов, возможно, на дни или даже недели.
Композиции α-аминоамидов настоящего изобретения могут быть введены в различных дозированных формах, например, перорально в форме таблеток, лепешек, капсул, таблеток, покрытых сахаром или пленкой, жидких растворов, эмульсий или суспензий; ректально в форме свечей; парентерально, например, путем внутримышечной или суппозиториев инъекции или вливания; и трансдермально в форме пластыря, мази, эмульсии, лосьона, раствора, геля, крема и назального спрея.
Подходящими фармацевтически приемлемыми, терапевтически инертными органическими и/или неорганическими носителями или эксципиентами, полезными при получении указанной композиции, являются, например, вода, желатин, аравийская камедь, лактоза, крахмал, целлюлоза, стеарат магния, тальк, растительные масла, циклодекстрины, полиалкиленгликоли и др. Композиции α-аминоамида формулы (I) могут быть стерилизованы и могут содержать дополнительные компоненты, хорошо известные специалистам в данной области, такие как парафиновое масло, моноолеат маннита, соль для регулирования осмотического давления, буферные агенты и др.
Кроме того, твердые пероральные формы могут содержать вместе с активным агентом разбавители, например лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; лубриканты, например, диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоли; связующие вещества, например крахмалы, аравийские камеди, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон; диспергирующие агенты, например, крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или натриевую соль гликолата крахмала; шипучие смеси; красители; подслащивающие вещества; смачивающие агенты, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты; и в целом нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, используемые в фармацевтических рецептурах. Фармацевтические препараты могут быть изготовлены любым известным способом, например, с помощью процессов смешения, гранулирования, таблетирования, нанесения покрытия из сахара или пленочного покрытия.
Пероральные рецептуры включают рецептуры с постепенным высвобождением, которые могут быть получены обычными способами, например, путем нанесения энтеросолюбильного покрытия на таблетки и гранулы.
Жидкая дисперсия для перорального введения может представлять собой, например, сиропы, эмульсии и суспензии. Сиропы могут дополнительно содержать носитель, например, сахарозу или сахарозу с глицерином и/или маннитом, и/или сорбитом.
Суспензии и эмульсии могут содержать носитель, например природную камедь, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например, стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например, пропиленгликоль, и, если это необходимо, подходящее количество лидокаин-гидрохлорида. Растворы для внутривенных инъекций и вливания могут содержать в качестве носителя, например, стерильную воду, или предпочтительно они могут находиться в форме стерильных, водных или изотоничных солевых растворов.
Суппозитории могут содержать вместе с активным ингредиентом фармацевтически приемлемый носитель, например, масло какао, полиэтиленгликоль, поверхностно-активное вещество на основе полиоксиэтиленсорбитанового эфира жирной кислоты или лецитин.
Композиции, содержащие α-аминоамиды формулы (I), обычно находятся в виде дозированной единицы, содержащей, например, от 20 до 7000 мг активного ингредиента из расчета на единичную дозированную форму. Подходящее лечение проводится 1, или 2, или 3 раза в день в зависимости от скорости клиренса. Таким образом, желаемая доза может присутствовать в разовой дозе или в виде разделенных доз, вводимых через соответствующие интервалы, например, от двух до четырех или более субдоз в день.
Фармацевтические композиции, содержащие α-аминоамид формулы (I), могут содержать из расчета на дозированную форму, например капсулу, таблетку, порошковую инъекцию, «полную чайную ложку», свечу и т.д., приблизительно от 20 до 7000 мг активного ингредиента.
Оптимальные терапевтически эффективные дозы, которые должны быть введены, могут быть легко определены специалистом в данной области, и такие дозы будут меняться, в основном, в зависимости от эффективности препарата, способа введения и успехов в лечении воспалительного состояния или заболевания. Кроме того, факторы, связанные с конкретным субъектом, получающим лечение, включая возраст субъекта, массу, питание и время введения, будут приводить к необходимости регулировать дозу до соответствующего терапевтически эффективного уровня.
Преимуществ, получаемых в результате применения и способов настоящего изобретения, описанных выше, много и они включают возможность лечения по существу всех типов симптомов RLS и вызывающих привыкание расстройств.
ПРИМЕР 1
Открытое исследование RLS
В открытом исследовании, проведенном на 10 пациентах с идиопатическим RLS, 2-х недельное введение (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамида, 100 мг/день, приводит к эффективному улучшению симптомов RLS. Пациентов включают в исследование, если они соответствуют минимальным диагностическим критериям Международной группы по исследованию RLS. Симптомы пациентов должны препятствовать наступлению сна или сохраняться в течение, по меньшей мере, 6 месяцев и, по меньшей мере, 15 ночей в течение последних 12 недель, и они должны иметь показатель IRLS 10 (Международный синдром усталых ног), равный или выше чем 15 при оценке исходного уровня. Проводят физическое освидетельствование, биохимические и гематологические тесты и получают электрокардиограмму для того, чтобы гарантировать, что выбранные критерии выполняются. Полисомнографию проводят в течение 2 ночей при исходном уровне и в течение 2 ночей в конце лечения, чтобы удостоверить влияние (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамида на сон. Эффективность измеряют по приведенным ниже шкалам оценки: международный синдром усталых ног 10 (IRLS 10), качество жизни при синдроме усталых ног (RLS-QoL), опросный лист продуктивности работы и снижения активности (WPAI RLS) и общеклиническая картина (ОКК, CGI) (ОКК, часть 1, и ОКК, часть II).
Пациенты, которых подвергали лечению с помощью (S)-(+)-2-[4-(3-фтор-бензилокси)бензиламино]пропанамида, показали значительное улучшение симптомов RLS.
Сравнение показателя после 2-недельного лечения с исходным показателем свидетельствует о тенденции снижения уровня во всех рассмотренных шкалах оценки.
В указанной группе пациентов (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид был хорошо переносим и отрицательных эффектов не зарегистрировано.
Результаты
10 пациентов, внесенных в списки участников исследования, показали значительное улучшение во всех использованных шкалах оценки.
Десять из 10 пациентов, внесенных в списки, считались пригодными для анализа эффективности; все из них выполнили запланированный период лечения 14+3 дня. Исходные данные по демографии соответствовали 70% зарегистрированных женщин, и средний возраст составлял 61,30 года, с очень небольшими сопутствующими фоновыми заболеваниями и при отсутствии отклонений от нормы при физическом освидетельствовании. Что касается основного заболевания, то оно считалось тяжелым у 70% пациентов в соответствии с критерием ОКК и подтверждалось показателем IRLS-10 при влиянии на дневную активность, которое могло быть количественно оценено (в соответствии с данными шкал WPAI-RLS и RLS-QoLQ) приблизительно в 1/3 обычных проявлений. Регистрация PSG подтвердила влияние заболевания на сон, что засвидетельствовано с помощью исходных значений показателя PLM при бессоннице 8,90, эффективности сна 72,62 и числу пробуждений во время сна.
ОКК, часть I, показала сильное улучшение болезненного положения у 60% пациентов при стабильном заболевании у других 40% (фиг. 1). Такие изменения достигали статистической значимости (Р+0,031).
ОКК, часть II, показала улучшение любого ранга у 90% пациентов и только 1 пациент (10%), как считается, не имел изменений (см. таблицу I).
<u>Таблица I</u>ОКК, часть II, изменения от предварительного посещения
Балльный показатель
Всего
Конечный:
Очень сильно улучшенный
N (%)
2(20)
Сильно улучшенный
N (%)
2(20)
Минимально улучшенный
N (%)
5(50)
Нет изменений
N (%)
1(10)
Шкала IRLS-10 показывает статистически значимое улучшение суммарного балльного показателя (р=0,002) с понижением бального показателя у всех пациентов; такое улучшение подтверждается при анализе подпунктов улучшением «диагностических признаков» (р=0,002) и «влияния заболевания» (р=0,003), достигающих статистической значимости, и улучшением «сопутствующих признаков» и «тяжести заболевания», близких к уровню значимости (таблица II).
<u>Таблица II</u>Балльный показатель IRLS-10
Параметр
Посещение
Исходный уровень
Конечныйуровень
Р(t-анализ)
Суммарный балльный показатель:
Средний
27,50
21,80
Стандартное отклонение
4,33
4,80
Изменения
-5,70
0,002
Диагностические признаки:
Средний
11,20
8,50
Стандартное отклонение
1,75
1,51
Изменения
-2,70
0,002
Сопутствующие признаки:
Средний
5,10
4,30
Стандартное отклонение
1,66
1,34
Изменения
-0,80
0,070
Тяжесть заболевания:
Средний
7,00
6,00
Стандартное отклонение
0,82
1,41
Изменения
-1,00
0,063
Влияние:
Средний
4,20
3,00
Стандартное отклонение
1,62
1,56
Изменения
-1,20
0,003
RLS-QoLQ имеет значительное уменьшение суммарного балльного показателя (р=0,002), как показано на фиг.2.
WPAI-RLS показывает улучшение в пункте 6, который дает подтверждение улучшения, наблюдаемого по способности пациентов управлять своей дневной активностью; фактически имеет место статистически значимое уменьшение (р=0,005) снижения активности от 34% до 22%, как показано на фиг.3.
Полисомнографическая регистрация (PSG) имеет статистически значимое улучшение относительно исходного уровня по показателю PLM (бодрствование+сон), показателю PLM при бодрствовании, показателю PLM во сне и за счет общей тенденции других параметров PSG в отсутствие изменения общей структуры процесса сна, как показано на фиг.4, 5 и 6.
Таким образом, описанное испытание обнаруживает, что (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид имеет хороший профиль безопасности и доказывает улучшения, наблюдаемые в ходе заболевания и его клинических проявлениях. Это доказательство подкрепляется объективным инструментальным измерением относительных болезненных ощущений (то есть данными PSG).
Для изучения пагубной зависимости используют некоторые животные модели, чтобы оценить эффективность испытуемых соединений. В частности, проведены описанные ниже испытания. Испытуемые соединения, как установлено, понижают поведенческое воздействие определенного средства, вызывающего зависимость, на различных животных моделях, демонстрируя потенциальный терапевтический эффект при вызывающих привыкание расстройствах.
ПРИМЕР 2
Изучение кокаинового взаимодействия у мышей
Обычно психостимулирующие вызывающие привыкание лекарственные средства, такие как амфетамин и кокаин, индуцируют повышение двигательной активности у грызунов и приматов. Некоторые соединения с потенциальными антинаркотическими свойствами могут предупреждать повышение двигательной активности, вызванное психостимулирующими лекарственными средствами (Katz J.L., Kopajtic T.A., Myers K.A., Mitkus R.J., Chider M. Behavioral effects of cocaine: interactions with D1 dopaminergic antagonists and agonists in mice and squirrel monkeys., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1999, Oct.; 291(1):265-79).
Влияние испытуемых соединений оценивают на мышиной модели вызванного кокаином повышения двигательной активности.
Метод
Объекты
: Мыши Swiss-Webster, самцы.
Устройство
: автоматизированные фотоэлементные камеры.
Лекарственные средства
: Кокаин 20 мг/кг вводят в/б, испытуемые соединения, растворенные в растворителе, вводят в/б в различных дозах (10-100 мг/кг) непосредственно перед кокаином.
Поведенческий тест
: Животным (8 на экспериментальную группу) вводят в/б инъекцию кокаина (20 мг/кг) или физиологического раствора, и/или испытуемых соединений (10-100 мг/кг в/б) или их растворителя, и в течение часа регистрируют двигательную активность.
Данные анализа
Время курса: Для растворителя кокаина отдельно и каждой дозы испытуемого соединения отдельно+кокаин наносят на график среднее значение активности (+среднеквадратичная ошибка) для каждого 10-минутного периода.
Максимальный эффект
: Временной период в 30 минут, в течение которого кокаин (20 мг/кг) вызывает максимальную активность, используют для определения влияния испытуемого соединения. Проводят log10 трансформацию средних итогов 30-ти минутного периода для отдельных объектов, чтобы гомогенизировать вариации для последующего анализа. Проводят статистический дисперсионный анализ ANOVA и сравнивают растворитель и каждую дозу испытуемого соединения + кокаин с кокаином отдельно для определения значимости (p<0,05) влияния дозы. Проводят анализ методом наименьших квадратов; средние итоги 30-минутного периода убывают среди всех субъектов по убывающей части кривой относительно log10 дозы испытуемого соединения. Из анализа линейной регрессии определяют значение AD50 (дозы, которая смягчает вызванную кокаином стимуляцию на 50%).
ПРИМЕР 3
Анализ на оценку лекарственного различения крысами
Задания по лекарственному различению (DD, Drug Discrimination) представляют собой методику оценки способности соединения замещать психотропное лекарственное средство (такое как лекарство, вызывающее зависимость). Крысу обучают использовать интероцептивные лекарственные раздражители, чтобы подавать сигнал, на который два или три манипулятора будут производить выдачу пищи (определяемое состоянием обучение). Такие задания составляют наиболее хорошую животную модель для оценки «субъективных» лекарственных эффектов. Кроме того, методика DD в некоторых случаях может давать возможность независимого измерения некоторых различных субъективных эффектов лекарственного средства, включая некоторые эффекты, которые способствуют лекарственной зависимости (вызывающих эйфорию), и другие, которые удерживают лекарственную зависимость (ноцицептивные).
Потенцирующие или предупреждающие лекарственную зависимость эффекты испытуемых соединений оценивают на модели испытания кокаинового различения на крысах.
(Colpaert F.C. (1986), Drug discrimination: behavioral, pharmacological and molecular mechanisms of discriminative drug effects in behavioral Analysis of Drug Dependence, Goldberg S.R. and Stolerman I.P. eds., pp. 161-193, Academic Press, Orlando).
Методы
Объекты
. Исследования проводят на самцах крыс Sprague-Dawley. Всех животных размещают в виварии с контролируемой температурой и контролируемой влажностью с 12-часовым циклом чередования свет/темнота (дневное освещение включают в 7:00 утра). Все опыты проводят во время светлой фазы цикла чередования свет/темнота, от 8:00 до 15:00. Крыс поддерживают по усмотрению приблизительно при 80-85% массы тела.
Кокаиновое различение
. Крыс кормят ежедневно приблизительно 15 г стандартного лабораторного корма, по меньшей мере, через 30 минут после испытания, что поддерживает их при их индивидуальных массах во время всего исследования. Объекты испытывают ежедневно в двурычаговых камерах для обучения методом реакций и подкреплений, которые содержатся в огороженных местах, смягчающих свет и звук. Белый шум присутствует во всех испытаниях для маскировки внешних звуков. Окружающее освещение представляет собой лампу вверху в центре фронтальной панели (общее освещение). Рычаги установлены на расстоянии 17 см друг от друга с парами ламп (светоизлучающие диоды, СИД) над каждым из рычагов также на фронтальной панели. Подкрепляющие реакции выдают одну пеллету массой 45 мг в пищевой поддон, размещенный в центре между рычагами на фронтальной панели камеры. Крыс сначала обучают нажимать оба рычага при режиме обучения с фиксированным отношением числа реакций и подкреплений и различать в/б инъекции 29 мкмоль/кг кокаина (10 мг/кг) от в/б инъекций физиологического раствора. После кокаиновой инъекции подкрепляются реакции только на один рычаг; после инъекции физиологического раствора подкрепляются реакции на другой рычаг. Приписка соответствующих кокаину и физиологическому раствору рычагов среди крыс уравновешивается. Сразу же после инъекции крыс помещают внутрь экспериментальных камер. Период простоя 5 минут, в течение которого верхнее освещение и СИД выключены, и реагирование не имеет запрограммированных последствий, предшествует освещению верхним светом и СИД. Подкрепляются реакции только на соответствующий рычаг, и реакции на несоответствующий рычаг возвращаются к требованию FR-реакции. Каждая подача пищи следует после 20-секундного периода простоя, во время которого весь свет выключается, и реагирование не имеет запрограммированных последствий. Сеансы заканчиваются через 20 подач пищи или через 20 минут, чтобы не произошло первым. Обучающие сеансы с кокаином (К) и физиологическим раствором (ФР) проводят ежедневно 5 дней в неделю и в двойной чередующейся последовательности (например, ФР/К/К/ФР).
Испытания начинают, когда эффективность достигает критерия, по меньшей мере, 85% от соответствующего реагирования от начала до конца и во время первого сеанса режима FR10 в течение четырех последовательных сеансов. Выбранные дозы испытуемых соединений вводят перорально в различное время до 360 минут после инъекции, чтобы оценить временной курс эффектов различительных стимулов. После сеанса испытания требуется, чтобы объект соответствовал указанным выше критериям эффективности в течение двух последовательных (кокаин и физиологический раствор) обучающих сеансов, чтобы снова начать испытания. Проводят повторные сеансы испытания, по меньшей мере, с двумя обучающими сеансами между испытаниями, пока не будет определена вся зависимость доза-эффекты для каждого объекта. Сеансы испытания идентичны обучающим сеансам за исключением того, что подкрепляются 20 последовательных реакций на любом из двух рычагов.
Для каждой из крыс, изученных в методике кокаинового различения, рассчитывают общий показатель реакции и процент реакций, производимых на соответствующем кокаину рычаге. Средние значения рассчитывают для каждого измерения при каждой испытанной дозе лекарственного средства. Если менее чем половина крыс реагирует при конкретной дозе, то при указанной дозе среднее значение для процента соответствующего кокаину реагирования не рассчитывается. По меньшей мере, 20% соответствующего кокаину реагирования принимают как консервативный критерий, при котором допускается значительное отличие от физиологического раствора; 80% или выше соответствующего кокаину реагирования принимают подобным обучающей дозе кокаина, и промежуточные уровни соответствующего кокаину реагирования рассматриваются как частичная замена.
Результаты анализа
. Результаты исследований кокаинового различения оценивают с помощью данных, собранных во время всего сеанса, который длится максимум 20 минут.
Если отдельный объект не выполняет один режим обучения с фиксированным отношением числа реакций и подкреплений, его данные включают в среднее значение показателя реакции, но не включают в среднее значение процента реагирования кокаинового рычага. Рассчитывают значение ED50 с использованием линейного регрессионного анализа для тех испытуемых соединений, которые замещают кокаин (>80% соответствующего лекарству реагирования). Для тех испытуемых соединений, которые замещают кокаин частично (>20% и <80% соответствующего лекарству реагирования), приводится самая низкая доза, которая продуцирует максимальное замещение и сколько процентов. Для тех соединений, которые не замещают кокаин (<20% соответствующего лекарству реагирования), рассчитывают наиболее высокие испытанные дозы.
ПРИМЕР 4
Тест на самостоятельное введение лекарственного средства на крысах
Тест на самостоятельное введение (самолечение) лекарственного средства представляет собой широко используемый способ изучения подкрепляющих свойств лекарственного средства (таких как кокаин) и влияний различных соединений на такие вознаграждающие свойства. В указанном тесте крысу обучают «работать», чтобы получить пероральное или внутривенное введение лекарственных средств. Такой поведенческий метод дает возможность оценивать, оказывает ли испытуемое соединение влияние на подкрепляющие свойства вызывающего привыкание лекарственного средства (Caine S.B., Lintz R., Koob G.F. Intravenous drug self-administration techniques in animals. In: Behavioral Neuroscience: A Practical Approach. Ed. A. Sahgal, pp. 117-143, Oxford University Press, New York, 1993; Fischman M.W. Behavioral Pharmacology of cocaine. J. Clin. Psychiatry. 1988 Feb. 49; Suppl.: 7-10).
Метод
Объекты
Самцов крыс Sprague-Dawely весом 350-400 г помещают в клетку, обеспечивают свободный доступ к пище и воде и содержат при 12-часовом цикле чередования свет/темнота (освещение с 7:00 до 19:00).
Самостоятельное введение
Всем животным под анестезией кетамином (60 мг/кг в/б) и пентобарбитуратом натрия (20 мг/кг, в/б) хирургически имплантируют постоянный силиконовый катетер в яремную вену. Катетер пропускают подкожно к открытой части черепа, где его прикрепляют с помощью зубных зажимов к четырем болтам из нержавеющей стали, вставленным в череп. Во время сеанса самостоятельного введения (обычно 6 дней в неделю) катетер присоединен к поворотной системе через металлическую пружину, которая, в свою очередь, соединена с инфузионным насосом.
Через семь дней после операции животным обеспечивают 2-часовой подход каждый день к металлическому рычагу, смонтированному на боковой стенке стандартной клетки для обучения методом реакций и подкреплений на 3 см от пола клетки. Усилие, требуемое для нажатия на рычаг, составляет в среднем 30 г (в интервале от 25 до 35 г в различных клетках). Сами клетки располагают внутри камер, смягчающих звуки. Два рычага присутствуют в каждой клетке камеры для обучения методом реакций и подкреплений, причем один рычаг приводит к вливанию лекарственного средства, тогда как другой остается неактивным в течение всех сеансов. Нажим на активный рычаг приводит к внутривенной инъекции 0,1 мл гидрохлорида кокаина (0,50 мг/кг/инъекция), растворенного в 0,50% физиологическом растворе и высвобождаемого в течение 4 секунд. Поворотная система обеспечивает свободное движение животного в клетке. Совместно с началом инъекции стимулирующий свет, расположенный на 1 см выше рычага на той же боковой стороне камеры для обучения, включается на 20 секунд, в течение которых рычаг становится неактивным. Надавливания на рычаг в течение периода, когда сигнальный свет не светит, подкрепляются при режиме непрерывного подкрепления (фиксированное отношение 1, FR-1). Как только животные показывают стабильное потребление лекарственного средства в течение трех дней (норма менее чем 15% от ежедневного потребления лекарственного средства в течение трех дней), запускают режим самостоятельного введения к FR10 до стабилизации (15-20 дней) и затем начинают исследование. На день испытания животных предварительно обрабатывают в/б испытуемым соединением непосредственно перед началом сеанса. Используют различные дозы испытуемого соединения. Каждую дозу испытывают только один раз для каждого животного с использованием плана опыта по схеме латинского квадрата. По меньшей мере, два дня исходного самостоятельного введения отделяет от дней проведения испытания лекарственного средства.
Данные эксперимента
Записывают суммарное количество подкреплений, полученных в течение 120-минутного сеанса, и статистический анализ данных проводят на компьютере с использованием одномоментного факториального дисперсионного анализа с повторными измерениями (ANOVA) или критерия достоверности Стьюдента, когда это приемлемо. Сравнения индивидуальных средних значений проводят с использованием теста последующей очередности Ньюмана-Кейлса.
ПРИМЕР 5
Индуцированная кокаином сенсибилизация поведения у крыс
Лекарственная зависимость представляет собой патологическое поведение, характеризующееся принудительным поиском и потреблением лекарственного средства. Одной из животных моделей таких поведенческих изменений является долговременное повышение двигательной активности, вызванное повторным введением психостимулирующего лекарственного средства грызунам (Robinson et al., 1993), известное как индуцированная лекарством сенсибилизация поведения. Влияние испытуемых соединений оценивают на модели индуцированной кокаином сенсибилизации поведения у крыс.
Метод
Объекты.
Используют самцов крыс Wistar, весящих по прибытии 200-250 г.
Устройство для измерения двигательной активности
. Двигательную активность измеряют в шестнадцати одинаковых подвешенных клетках из металлической проволоки, каждая размером 36 см(Д)×25 см(Ш)×20 см(В). Каждая клетка содержит два комплекта фотоэлементов с инфракрасным детектором, расположенных вдоль длинной оси на 1 см выше решетчатого пола и на 8 см от передней стороны и задней стороны клетки. Фоновый шум создают с помощью генератора белого шума. Движения в пределах клетки производят размыкание фотоэлементов, что автоматически регистрируется с помощью совместимого с IBM компьютера.
Метод сенсибилизации и лечение
. Животных приучают к камерам двигательной активности в течение 2-3 последовательных дней перед проведением опыта. Крысы получают 5 ежедневных в/б инъекций кокаина (15 мг/кг) или физиологического раствора и/или любого испытуемого соединения (40-100 мг/кг в/б) или его растворителя, и двигательную активность записывают в течение 3 часов. Через 10 дней после последней инъекции кокаина или физиологического раствора (15 день) животных провоцируют 15 мг/кг кокаина в отсутствие испытуемого соединения и снова в течение 3 часов наблюдают за двигательной активностью.
На пятый день обработки кокаином животные, предварительно обработанные в/б растворителем, проявляют повышенную двигательную реакцию (на 20% выше, чем в первый день, р<0,05). На десятый день после последней инъекции кокаина или физиологического раствора животных провоцируют 15 мг/кг кокаина в отсутствие испытуемого соединения и снова в течение 3 часов наблюдают за двигательной активностью. Крысы, предварительно обработанные кокаином и не получавшие испытуемое соединение, как ожидается, показывают повышенную двигательную реакцию на кокаин (на 30% выше, чем в первый день, р<0,05). Если крысы, которые предварительно обрабатывались испытуемым соединением в течение 5-дневной кокаиновой обработки, не показывают повышенную двигательную активность, то считается, что испытуемые соединения оказывают эффект при профилактике привыкания к психостимулирующим лекарствам (Koob G.F., Sanna P.P., Bloom F.E., Neuron 21, 467-476, 1998; Robinson T.E., Berridge K.C. The neural basis of drug craving: an incentive-sensitization theory of addiction. Brain Res. Brain Res Rev., 18, 247-91, 1993).
Результаты анализа
. Данные (суммарное число прерываний луча в течение 3 часов) анализируют с использованием двухстороннего дисперсионного анализа ANOVA с повторными измерениями по одному фактору, включая четыре экспериментальные группы (то есть физиологический раствор/растворитель, физиологический раствор/испытуемое соединение, кокаин/растворитель и кокаин/испытуемое соединение) и две временные точки (день 1 и день 5), после чего следует анализ простых эффектов. Второй двухсторонний дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями по одному фактору используют для сравнения дня 1 и дня с провокациями, после чего следует post-hoc тест по Ньюману-Кейлесу.
ПРИМЕР 6
Оценки лекарственного различения у обезьян
Различение кокаина представляет собой оценку поведения, широко используемую для проверки кандидатов для медикаментозного лечения. По этой методике определяют эффективность и продолжительность поведенческих эффектов, подобных кокаину, полученных путем экстренного введения испытуемого соединения. Конкретно, испытуемое соединение вводят или отдельно, или в качестве предварительной обработки перед кокаином макакам резус, обученным различать 0,4 мг/кг кокаина и физиологический раствор.
Метод
Объекты
Macaca mulatta
. Объектами являются взрослые самцы макак резус (). Обезьян выдерживают на диете из 3-4 сухих печений для обезьян (Puruna Monkey Chow Jumbo # 5037) и одного куска свежего фрукта в день помимо пеллет с фруктовым вкусом, высвобождаемых во время сеансов обучения методом реакций и подкреплений. Вода находится в свободном доступе для всех обезьян все время. Обезьян содержат в комнате с контролируемой температурой и контролируемой влажностью с 12-часовым циклом чередования свет/темнота (свет включен с 7 до 19).
Устройство
. Каждую обезьяну содержат отдельно в хорошо вентилируемой камере из нержавеющей стали (56×71×69 см). Собственные клетки всех обезьян модифицируют так, чтобы ввести панель обучения методом реакций и подкреплений (28×28 см), располагаемую на передней стенке. Три квадратных полупрозрачных ответных кнопки (6,4×6,4 см) расположены в горизонтальный ряд на расстоянии 2,54 см друг от друга в 3,2 см от верха обучающей панели. Каждая кнопка может иметь сквозное освещение красным или зеленым стимулирующим светом (сверхъяркие СИД). Обучающая панель также служит опорой для смонтированного снаружи раздаточного устройства для пеллет (Gerbrands, Model G5210), которое выдает 1-г пищевые пеллеты в приемник пищи, установленный в клетке под обучающей панелью. Работа обучающей панели и собранные данные записывают с помощью компьютера, расположенного в отдельной комнате.
Обучение различения
. Методики лекарственного различения аналогичны методикам, используемым в других исследованиях (Lamas X., Negus S.S., Hall E. and Mello N.K. (1995) relationship between the discriminative stimulus effects and plasma concentrations of intramuscular cocaine in rhesus monkeys. Psychopharmacology 121:331-338; Negus S.S., Mello N.K., Portoghese P.S., Lukas S.E. and Mendelson J.H. (1995) Role of delta opioid receptors in the reinforcing and discriminative stimulus effects of cocaine in rhesus monkeys. J Pharmacol Exp Ther 273:1245-1256.; Negus S.S., Mello N.K., Lamas X. and Mendelson J.H. (1996) Acute and chronic effects of flupenthixol on the discriminative stimulus and reinforcing effects of cocaine in rhesus monkeys. J Pharmacol Exp Ther 278:879-890).
Сеансы различения состоят из множества циклов и проводятся 5 дней в неделю. Каждый цикл состоит из 15-минутного периода простоя, за которым следует 5-минутный период реакций. Во время периода простоя все стимулирующие источники света выключены, и реагирование не имеет запрограммированных последствий. Во время периода реакции правая и левая ответные кнопки имеют сквозное освещение красным или зеленым, и обезьяны могут получать до 10 пищевых пеллет за счет реагирования при режиме обучения с фиксированным отношением (FR) 30 числа реакций и подкреплений подачей пищи. Для одной группы обезьян левая кнопка освещена зеленым, и правая кнопка освещена красным. Для другой группы обезьян цвета ответных кнопок установлены наоборот. Центральная кнопка не освещена в любое время и реагирование на центральную кнопку не имеет запрограммированных последствий. Если все доступные пеллеты выпущены до окончания 5-минутного периода реакций, стимулирующий свет имеющих сквозное освещение ответных кнопок выключается, и для остального времени данного периода реакции реагирование не имеет запрограммированных последствий. В обучающие дни обезьяны получают в/м инъекцию или физиологического раствора или 0,40 мг/кг кокаина через 5 минут после начала каждого периода простоя (то есть за 10 минут до периода реакций). После введения физиологического раствора реагирование только на зеленую кнопку (кнопка, соответствующая физиологическому раствору) дает пищу, тогда как после введения 0,40 мг/кг кокаина, только реагирование на красную кнопку (кнопка, соответствующая лекарству) дает пищу. Реакции на несоответствующие кнопки возвращают требование FR на соответствующую кнопку. Ежедневные сеансы состоят из пяти циклов и, если вводится обучающая доза кокаина, то ее вводят только во время последнего цикла. Таким образом, обучающие дни состоят из 0-5 циклов физиологического раствора, после которых следует 0-1 лекарственный цикл.
Во время периода реакции каждого цикла определяют три зависимые переменные: 1) процент соответствующего инъекции реагирования до выдачи первого подкрепляющего стимула [(соответствующие инъекции реакции, произведенные до 1-ого подкрепляющего стимула/суммарное число реакций, произведенных до 1-ого подкрепляющего стимула)×100]; 2) процент соответствующего инъекции реагирования для всего периода реакции [(соответствующие инъекции реакции, произведенные во время периода реакций/суммарное число реакций, произведенных во время периода реакций)×100]; и 3) показатель реакции (суммарное число реакций, произведенных во время периода реакций/общее время подсветки стимулирующего света). Считается, что обезьяны имеют приобретенное кокаиновое различение, когда удовлетворяются приведенные ниже три критерия в случае семи из восьми последовательных обучающих сеансов: 1) процент соответствующего инъекции реагирования до выдачи первого подкрепляющего стимула больше или равен 80% для всех циклов; 2) процент соответствующего инъекции реагирования для всего цикла больше или равен 90% для всех циклов; и 3) по меньшей мере, заработана одна пеллета во время всех обучающих сеансов.
Оценка различения
. Как только обезьяны удовлетворяют уровням критерия кокаинового различения, начинают испытания. Сеансы испытания идентичны обучающим сеансам за исключением того, что реагирование на любую кнопку дает пищу, и кокаин или испытуемые соединения вводят так, как описано ниже. Проводят две серии экспериментов, чтобы охарактеризовать эффекты испытуемого соединения, введенного отдельно или в качестве предварительной обработки перед кокаином. В первой серии экспериментов определяют продолжительность эффектов испытуемого соединения отдельно. В начале сеанса испытания вводят разовую дозу испытуемого соединения (1-100 мг/кг), и 5-минутный период реакции начинают через 10, 30, 100 и 300 минут. Во второй серии экспериментов определяют влияния предварительной обработки испытуемым соединением на кокаиновое различение. Разовую дозу испытуемого соединения вводили в подходящее время перед проведением сеанса испытания, в течение которого определяют кривую доза накопления кокаина-эффект (0,013-1,3 мг/кг). В основном, испытуемое лекарственное средство оценивают вплоть до дозы, которая или приводит к существенному изменению кривой доза кокаина-эффект, или снижает показатель реакций в среднем до менее чем 0,1 реакция/сек на протяжении всего указанного сеанса.
Результаты анализа
. Процент соответствующего кокаину реагирования (для всего периода реакций) и показатели реакции наносят на график в виде функции всего времени после введения испытуемого соединения (для исследований продолжительности) или суммарной дозы кокаина (для исследований предварительной обработки испытуемым соединением). Процент соответствующего кокаину реагирования для данного цикла включают в анализ только, если обезьяны дают, по меньшей мере, 30 реакций во время цикла (то есть достаточное количество реакций, чтобы привести к выдаче одного подкрепляющего стимула). Значение ED50 определяют как дозу испытуемого соединения или кокаина, которая дает 50% соответствующего кокаину реагирования, и рассчитывают путем линейной интерполяции от кривых доза-эффект отдельного субъекта. Для каждого испытуемого соединения значения ED50 рассчитывают из данных, полученных при приблизительном времени максимального эффекта.
ПРИМЕР 7
Тест на самостоятельное введение лекарственного средства на обезьянах
Методики самостоятельного введения на лабораторных животных часто используют для оценки медикаментов, кандидатов на оказание помощи при привыкании к кокаину и к аналогичным лекарственным средствам, психомоторным стимуляторам. Обычно такие эксперименты проводят, чтобы определить, как лекарственное средство меняет показатели реакции или число в/в инъекций при отдельном режиме с подкрепляющим следствием к фиксированному или прогрессивно растущему числу реакций, то есть режимы с фиксированным отношением (FR) или прогрессивным отношением числа реакций и подкреплений (Mello N.K., Negus S.S., 1996, Preclinical evaluation of pharmacotherapies for treatment of cocaine and opioid abuse using drug self administration procedures. Neuropsychopharmacology, 14:375-424). В таком исследовании сравнение изменений в поведении при в/в самостоятельном введении и эффективности, сохраняемой с помощью других подкрепляющих стимулов, таких как выдача пищи, может обеспечить измерение поведенческой селективности в эффектах медикамента-кандидата (Woolverton W.L. (1996) Intravenous self-administration of cocaine under concurrent VI schedules of reinforcement. Psychopharmacology 127:195-203.; Negus S.S., Brandt M.R., and Mello N.K. (1999) Effects of the long-acting monoamine reuptake inhibitor indatraline on cocaine self-administration in rhesus monkeys. J Pharmacol Exp Ther 291:60-69; Caine S.B., Negus S.S., and Mello N.K. (2000) Effects of dopamine Dl-like and D2-like agonists on cocaine self-administration in rhesus monkeys: rapid assessment of cocaine dose-effect functions. Psychopharmacology 148:41-51).
Метод
Объекты
Macaca mulatta
. Объектами являются взрослые самцы резус-макак (). Обезьян выдерживают на диете из 3-4 сухих печений для обезьян (Purina Monkey Chow Jumbo # 5037) и одного куска свежего фрукта в день помимо пеллет с фруктовым вкусом, высвобождаемых во время сеансов обучения методом реакций и подкреплений. Вода находится в свободном доступе для всех обезьян все время. Обезьян содержат в комнате с контролируемой температурой и контролируемой влажностью с 12-часовым циклом чередования свет/темнота (свет включен с 7 до 19).
Хирургические процедуры
. Двухпросветные силиконовые катетеры (внутренний диаметр 0,7 мм; наружный диаметр 2,0 мм) имплантируют в яремную или бедренную вену и выводят в межлопаточной области. Все хирургические процедуры проводят при асептических условиях. Обезьян сначала успокаивают кетамином (5 мг/кг), и анестезию вызывают с помощью тиопентала натрия (10 мг/кг, в/в). Кроме того, обезьян обрабатывают 0,05 мг/кг атропина для уменьшения слюноотделения. После вставки трахеальной трубки анестезию поддерживают с помощью изофлурана (1-1,5% в кислороде). После хирургической процедуры в течение 3 дней вводят аспирин или ацетаминофен (80-160 мг/день, п/о). Антибиотик, прокаин-пенициллин G (300000 ед/день, в/м), вводят каждый день в течение 5 дней. В/в катетер защищен страховочной системой, состоящей из специально подогнанного нейлонового жилета, присоединенного к гибкому тросу из нержавеющей стали и жидкостному шарнирному устройству (Lomir Biomedical, Malone, NY). Такая гибкая страховочная система позволяет обезьянам свободно двигаться. Эффективность катетера периодически оценивают путем в/в введения короткодействующего барбитурата, метогекситала (3 мг/кг, в/в). Катетер считается проходимым, если в/в введение метогекситала вызывает потерю мышечного тонуса в течение 10 сек.
Устройство для оценки поведения
. Каждую обезьяну содержат отдельно в хорошо вентилируемой камере из нержавеющей стали (64×64×79 см). Собственные клетки всех обезьян модифицируют так, чтобы ввести панель для обучения методом реакций и подкреплений (28×28 см), располагаемую на передней стенке. Три квадратных полупрозрачных ответных кнопки (6,4×6,4 см) расположены в горизонтальный ряд на расстоянии 2,54 см друг от друга в 3,2 см от верха обучающей панели. Каждая кнопка может иметь сквозное освещение красным или зеленым стимулирующим светом (сверхъяркие СИД). Обучающая панель также служит опорой для смонтированного снаружи раздаточного устройства для пеллет, которое выдает 1-г пищевые пеллеты с фруктовой отдушкой в приемник пищи, установленный в клетке под обучающей панелью. Кроме того, два шприцевых насоса (модель B5P-1E; Braintree Scientific, Braintree, MA или модель 980210; Harvard Apparatus, South Natick, MA) смонтированы над каждой клеткой для высвобождения физиологического раствора или растворов лекарственного средства через двухпросветные в/в катетеры. Работа обучающей панели и собранные данные записывают с помощью компьютера, расположенного в отдельной комнате.
Методики начального обучения
. Методики оценки реагирования, подкрепляющего введение кокаина и пищи, аналогичны методикам, используемым в других исследованиях (Negus S.S., Mello N.K., Portoghese P.S. and Lin C.E. (1997) Effects of kappa opioids on cocaine self-administration by rhesus monkeys. J Pharmacol Exp Ther 282: 44-55; Negus S.S., Mello N.K., Portoghese P.S., Lukas S.E. and Mendelson J.H. (1995) Role of delta opioid receptors in the reinforcing and discriminative stimulus effects of cocaine in rhesus monkeys. J Pharmacol Exp Ther 273:1245-1256). По основному протоколу пища и в/в инъекции доступны в течение трех чередующихся составных частей. Как пища, так и в/в инъекции доступны при режиме подкрепления с FR30. Красный свет ассоциируется с выдачей пищи и зеленый свет ассоциируется с инъекцией лекарственного средства. Пищевая и лекарственная составляющие части отделены 5-минутным простоем. Весь сеанс пища-лекарство-пища длится 120 минут и проводится ежедневно с 3 до 5 часов после полудня. При обучении раствор, доступный для самостоятельного введения во время лекарственной составляющей части, чередуется между 0,032 мг/кг/инъекция кокаина и физиологическим раствором. Обезьян обучают до тех пор, пока они не станут удовлетворять следующим критериям стабильного самостоятельного введения кокаина: 1) 3 последовательных дня, в которые показатель реакции во время лекарственной составляющей части каждого сеанса отличается не более чем на 20% от среднего показателя реакции лекарственной составляющей части; 2) быстрое прекращение приема физиологического раствора, на которое указывает снижение показателей реакции в лекарственной составляющей части в первый день замещения физиологического раствора.
Испытание самостоятельного введения лекарственного средства
. Как только обезьяны достигают соответствия критериям стабильных уровней самостоятельного введения кокаина и самостоятельного введения пищи, начинают испытания с использованием сеансов замещения, при которых различные дозы кокаина (0,00032-0,1 мг/кг/инъекция) замещают условиями обучающих доз физиологический раствор/кокаин. Поддерживающая доза кокаина восстанавливается после каждого замещающего испытания в течение периода, по меньшей мере, 4 дня и до тех пор, пока число подкреплений в день, поддерживаемых кокаином и пищей, не вернется к исходным уровням.
Оценка испытуемых соединений
. Испытуемые соединения оценивают с использованием методики теста с предварительной обработкой. Первый эксперимент оценивает влияния не зависящей от обстоятельств обработки физиологическим раствором или испытуемым соединением на пищевое и кокаиновое реагирование. Испытуемые соединения вводят в/м (или в/б или п/о) перед сеансом. Испытуемые соединения вводят до доз, которые дают или статистически значимый сдвиг в восходящей части кривой (доза самостоятельного введения кокаина)-эффект или устраняет реагирование во время первой пищевой составляющей части. Во втором эксперименте, по меньшей мере, три дозы испытуемых соединений оценивают в качестве предварительных обработок перед стандартной дозой кокаина при максимуме кривой зависимости доза кокаина-эффект. Такие начальные исследования используют для того, чтобы установить дозу испытуемого соединения, которая активно влияет на поведение в методике самостоятельного введения лекарственного средства. После определения поведенчески активной дозы испытуемого лекарственного средства указанную дозу вводят в качестве предварительной обработки перед введением интервала различных стандартных доз кокаина. Таким образом, можно определить влияние поведенчески активной дозы испытуемого лекарственного средства на всю кривую зависимости доза кокаина-эффект. Другие дозы испытуемого соединения также могут быть испытаны.
Анализ результатов
. Суммарное число инъекций или пищевых пеллет, выданных в день, определяют в качестве показателя реакции. Данные по эффектам испытуемого соединения на самостоятельное введение кокаина оценивают с использованием однофакторного или двухфакторного дисперсионного анализа ANOVA. За анализом значимости по ANOVA следует сравнение индивидуальных средних значений с использованием post hoc теста Дункана. Критерии значимости устанавливают при р≤0,5.
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИМЕРЫ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
Композиция 50 мг сафинамида в форме покрытой оболочкой таблетки
Таблица 3
Ингредиенты
Доза (мг)
Функции
Активный компонент
Сафинамид (как
65,88*
метансульфонат)
Наполнители
Микрокристаллическая
Разбавитель-
целлюлоза
50,12
связующее
Кросповидон
6,25
Связующий агент
Стеарат магния
2,50
Лубрикант
Коллоидный диоксид кремния
0,25
Глидант
Ядро таблетки, вес.
125,00
Гидроксипропилметилцеллюлоза
3,5
Пленкообразователь
Диоксид титана
1,00
Краситель
Полиэтиленгликоль 6000
Смягчитель
Оболочка таблетки, вес.
130,00
* Эквивалент 50 мг свободного основания
Композиция 100 мг сафинамида в форме таблетки
Таблица 4
Ингредиенты
Доза (мг)
Функции
Активный компонент
Сафинамид (как метансульфонат)
131,76*
Наполнители
Микрокристаллическая
100,24
Разбавитель-
целлюлоза
связующее
Кросповидон
12,50
Связующий агент
Стеарат магния
5,00
Лубрикант
Коллоидный диоксид кремния
0,50
Глидант
Ядро таблетки, вес.
250,00
Гидроксипропилметилцеллюлоза
7,00
Пленкообразователь
Диоксид титана
2,00
Краситель
Полиэтиленгликоль 6000
1,00
Смягчитель
Оболочка таблетки, вес.
260,00
* Эквивалент 100 мг свободного основания