1-ГЕКСАДЕЦИЛ-4,6-ДИМЕТИЛ-2-ОКСОНИКОТИНАМИД, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И АНАЛЬГЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ
1-HEXADECYL-4,6-DIMETHYL-2-OXONICOTINAMIDE EXHIBITING ANTI-INFLAMMATORY AND ANALGESIC ACTIVITY

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к 1-гексадецил-4,6-диметил-2-оксоникотинамиду формулы
обладающему противовоспалительной и анальгетической активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с возникновением воспалительных процессов.
Ближайшим аналогом по структуре является 1-бутил-4,6-диметил-2-оксоникотинамид [Цой Н.Ф, Семякина Н.В., Залесов B.C., Конынин М.Е. Синтез и биологическая активность амидов 1-алкил(арил)-4,6-диметил-2-оксоникотиновых кислот. Деп. в ЦБНТИ Медпрома, 07.01.84, №190 МП-84], который не изучен на наличие биологической активности и токсичности.
В медицинской практике широко используется противовоспалительное средство диклофенак натрия (ортофен) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Новая волна, 2002, Т. 1, С.170], который взят нами в качестве эталона сравнения противовоспалительной, и метамизол натрия (анальгин) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Новая волна, 2002, Т. 1, С.159] - анальгетической активности.
Целью изобретения является поиск в ряду амидов никотиновой кислоты соединения, проявляющего высокую противовоспалительную активность, обладающего при этом низкой токсичностью.
Поставленная цель достигается взаимодействием гексадециламида циануксусной кислоты (I) с ацетилацетоном с образованием 1-гексадецил-4,6-диметил-2-оксоникотинонитрила (II), который при нагревании в концентрированной серной кислоте превращается в 1-гексадецил-4,6-диметил-2-оксоникотинамид (III) по следующей схеме:
Пример получения заявляемого соединения.
1-гексадецил-4,6-диметил-2-оксоникотинонитрил (II). 3,08 г (0,01 моль) гексадециламида циануксусной кислоты (I) [Удодов В.В., Михалев А.И., Вахрин М.И., Данилов Ю.Л., Томилов М.В. Синтез и свойства алкил(арил)амидов циануксусной кислоты. Деп. ВИНИТИ, 09.04.07, №392-В2007] и 1,00 г (0,01 моль) ацетилацетона, 0,5 мл катализатора - диэтиламина в 10 мл диоксана нагревают при температуре 100°С в течение 5 часов, охлаждают, остаток отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропилового спирта. Получают II.
Выход 3,26 г (80%).
24
40
2
Т. пл. 80-81°С. CHNO.
Найдено, %: С 77,30; Н 10,75; N 7,57.
Вычислено, %: С 77,36; Н 10,82; N 7,52.
1-гексадецил-4,6-диметил-2-оксоникотинамид (III). Раствор 3,72 г (0,01 моль) соединения II в 10 мл концентрированной серной кислоты нагревают на водяной бане в течение 2 часов, охлаждают, выливают в 50 мл холодной воды, нейтрализуют аммиаком. Остаток отфильтровывают и перекристаллизовывают из диоксана. Получают III.
Выход 2,83 г (76%).
24
42
2
2
Т. пл. 78-79°С. CHNO.
Найдено, %: С 73,74; Н 10,88; N 7,23.
Вычислено, %: С 73,80; Н 10,84; N 7,17.
-1
ИК-спектры II и III, ИК-спектрометр SPECORD М-80 (Германия), вазелиновое масло, υ, см: (I) 2224 (CN), 1652 (СО); (II) 1676, 1648 (СО), 3288, 3112 (NH2).
6
5
2
3
3
2
3
2
13
2
3
2
2
5
2
3
3
2
3
2
13
2
3
1H
CH
СН
СН
СН
CH
СН
1H
CH
CH
СН
СН
СН
СН
ПМР-спектры II и III (спектрометр ЯМР MERCURY-300 фирмы Varian, 300 МГц), в ДМСО-d, внутренний стандарт ГМДС, σ, м.д.: (II) 6,28 с (, С - кольца); 3,92 м (>N--); 2,44 с (3Н, 1 ); 2,29 с (3Н, 1 ); 1,55 м (СН); 1,29-1,24 м (--); 0,85 т (СН-). (III) 8,29 уш. с (1Н, CONH), 7,12 уш. с, (1H, CONH); 6,09 с (, С - кольца); 3,92 м (>N-); 2,37 с (1Н, 1 ); 2,29 с (1Н, ); 1,56 м, (-,-СН); 1,30-1,2 м (--); 0,85 т (-СН-).
Полученное соединение III представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, не растворимое в воде. При хранении на воздухе соединение устойчиво. Заявляемое соединение изучено на наличие противовоспалительной и анальгетической активности.
50
50
Острая токсичность полученных соединений II и III изучена по экспресс-методике Прозоровского В.Б. на белых мышах массой 22-24 г [Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. // Фармакол. и токсикол. - 1978. Т. 41. №4. С.497-502] при пероральном способе введения. Установлено, что ЛД соединения II больше 1000 мг/кг, а заявляемого соединения III составляет 2580 (2200-3000) мг/кг, оба соединения относятся к малотоксичным веществам. Известно, что ЛД при этом же пути введения диклофенака натрия равна 350, а метамизола натрия (анальгина) - 3300 мг/кг [Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М., Медицина, 1998, 263 с]. Апробированное соединение III в 7,4 раза менее токсично, чем препарат сравнения - диклофенак натрия.
Противовоспалительная активность (ПВА) соединений II и III изучена на белых крысах обоего пола массой 180 - 220 г. на каррагениновой модели воспаления, создаваемой субплантарным введением в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1%-ного водного раствора каррагенина. Предварительно измеряли исходный объем (мл) задней лапы опытных и контрольных крыс с помощью онкометра. Полученные результаты сравнивали с литературными данными по противовоспалительному и анальгетическому действию диклофенака натрия в дозе 25 мг/кг (таблица) на каррагениновой модели воспаления [Павлова М.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е. и др. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты. Хим.-фарм. журн., 1999, Т. 33, №8, С.18-19]. Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг в 2%-ной крахмальной слизи за один час до моделирования воспаления. Прирост объема воспаленной стопы оценивали онкометрически через 1, 3, 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отека к контролю [Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Кондратюк В.И. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М., Минздрав СССР, 1983, С.16]. Проведено 5 опытов. Результаты обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента, результаты считали достоверными при р<0,05 [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд. Ленинград, Медгиз,1963, С.81-106].
Исследования показали, что соединение II при внутрибрюшинном пути введения в дозе 25 мг/кг после введения флогогенного агента тормозит развитие отека через 1 час на 57,9; 3 ч - 54,6 и 5 ч - 47,4%, а заявляемое соединение III оказывает аналогичное действие через 1 час на 92,4; 3 часа - 43,8 и 5 часов - 45,5%. В целом, соединение III уступает по противовоспалительной активности диклофенаку натрия в этой же дозе (таблица).
Таблица
Соединение/ препарат-эталон
ЛД<sub>50</sub>, мг/кг п/о
Противовоспалительная активность (ПВА), % торможения отека к контролю после введения флогогенного агента через
Анальгетическая активность (АА)
Доза, мг/кг
1 ч
3 ч
5 ч
Доза, мг/кг
% торможения «уксусных корчей»
Соед. II.
>1000
25
57,9**
54,6***
47,4***
50
9,0
Заявляемое соед. III
2580
25
92,4***
43,8***
45,5***
50
86,0*
Диклофенак натрия (ортофен)
350
25
69,4***
72,2***
25
50,0*
Метамизол натрия (анальгин)
3300
55
61,0*
* - р≤0,05; ** - р<0,02; *** - р<0,01 по сравнению с контролем
50
Анальгетическую активность (АА) соединений II и III изучена на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах-самцах массой 22-24 г. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75%-ный водный раствор уксусной кислоты из расчета 0,25 мг на 10 г массы животного и подсчитывали количество корчей в течение 10 минут [R.Koster, М.Anderson, Е.J. de Beer.-Federation Proceedinys, 1959, vol. 18, part 1, p.412. Acetic acid for analgetic screening.]. Исследуемые вещества вводили перорально в виде водной суспензии с твином - 80 в дозе 50 мг/кг за 1 час до введения уксусной кислоты, а препарат сравнения анальгин - в дозе 55 мг/кг, соответствующей ED по тесту «уксусных корчей» [Сюбаев Р.Ф., Машковский М.Д., Шварц Г.Я., Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов. // Хим.-фарм. журн., 1986, Т. 20, №1, С.33-39]. Результаты оценивали по способности тормозить количество корчей по сравнению с контрольными животными, получавшими растворитель. В каждой группе было по 5 мышей. Данные опытов обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности. Разницу считали достоверной при р≤0,05 [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд. Ленинград, Медгиз, 1963, С.81-106].
Установлено, что апробированное соединение II не обладает анальгетической активностью в дозе 50 мг/кг. По анальгетическому действию исследованное соединение III в дозе 50 мг/кг вызывает уменьшение «уксусных корчей» на 86,0% и несколько уступает активности диклофенака в дозе 25 мг/кг, но проявляет более сильное анальгезирующее действие, чем анальгин - 61,0% в дозе 55 мг/кг (таблица).
Положительным отличием заявляемого соединения III от применяемого в медицине противовоспалительного средства - диклофенака натрия является меньшая токсичность, большая условная широта фармакологического действия, которая у заявляемого соединения составляет 103,2, а у диклофенака только 14, доступность получения, устойчивость вещества при хранении на воздухе, а отличием от метамизола натрия (анальгина) является более высокое анальгезирующее действие.
Источники информации
1. Цой Н.Ф., Семякина Н.В., Залесов B.C., Коньшин М.Е. Синтез и биологическая активность амидов 1-алкил(арил)-4,6-диметил-2-оксоникотиновых кислот. Деп. в ЦБНТИ Медпрома, 07.01.84, №190 МП-84.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. Новая волна, 2002, Т.1, С.170, 159.
3. Удодов В.В., Михалев А.И., Вахрин М.И., Данилов Ю.Л., Томилов М.В. Синтез и свойства алкил(арил)амидов циануксусной кислоты. Деп. ВИНИТИ, 09.04.07, №392-В2007.
4. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. // Фармакол. и токсикол. - 1978. №4. Т.41. С.497-502.
5. Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М., Медицина, 1983, 263 с.
6. Павлова М.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е. и др. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты. Хим.-фарм. журн., 1999, Т. 33, №8, С.18-19.
7. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Кондратюк В.И. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М., Минздрав СССР, 1983, С.16.
8. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд. Ленинград, Медгиз, 1963, С.81-106.
9. R.Koster, М.Anderson, Е.J. de Beer.-Federation Proceedinys, 1959, vol. 18, part 1, p.412. Acetic acid for analgetic screening.
10. Сюбаев Р.Ф., Машковский М.Д., Шварц Г.Я., Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов. Хим.-фарм. журн. 1986, Т. 20, №1, С.33-39.