Разработка технологии и фармакологические исследования пластырей с фитокомпозициями

УДК 615.454811.014.015

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЛАСТЫРЕЙ С ФИТОКОМПОЗИЦИЯМИ

© 2006 г. О.Э. Оганесян, А.В. Крикова, Э.Ф. Степанова

The structure is developed and biopharmaceutical researches of the

researches are lead and is proved it pharmacological activity.

Проблема патогенеза и лечения ран относится к числу наиболее старых разделов медицины и имеет многовековую историю. Существует множество разнообразных методов и способов лечения ран, поэтому поток новых предложений не убывает, и до сих пор вопросы лечения ран и раневой инфекции продолжают занимать умы практических врачей и ученых. Интерес и постоянное внимание к этой, казалось бы старой, проблеме объясняются прежде всего тем, что представления о раневом процессе постоянно меняются вместе с развитием различных отраслей медицины, биологии и технических наук. Сегодня довольно актуальна транс-дермальная лекарственная форма - пластыри. Наиболее эффективны пластыри, содержащие лекарственные вещества, которые постоянно диффундируют сквозь микроскопические промежутки между клетками и сквозь поры кожи. Основная проблема состоит в том, чтобы создать клейкий полимер, способный одновременно удерживать молекулы лекарственного средства и позволять им достигать цели.

Целью настоящей работы являлась разработка состава, технология и сравнительное изучение биологической активности разработанных накожных композиций в сравнении с официнальным лекарственным средством, обладающим ранозаживляющим действием.

Материалы и методы исследования

Пластырь готовили с фитокомпозициями из: цветков ромашки, цветков календулы, плодов тмина, почек сосны, травы тысячелистника, листьев мяты, плодов шиповника, плодов фенхеля, корня солодки, травы полыни горькой, травы чабреца, травы чистотела, травы зверобоя.

При изучении раздражающего действия по методу Драйза лекарственные формы наклеивали на выстриженные участки кожи на боках крыс площадью 7 см2. Один бок скарифицировали скальпелем, а другой был интактен. Исследуемые участки кожи покрывали марлей, приклеивая ее лейкопластырем, оставляли на 24 ч. Реакцию кожи регистрировали через 30 мин после снятия марли и через 72 ч после этого повторно. Результаты регистрировали в баллах по шкале.

Опыты проводили на 30 белых крысах - самцах линии Вистар массой 180-200 г, находящихся на стандартном рационе питания вивария. На предварительно депеллированные и тщательно дезинфицированные этиловым спиртом участки кожи спины крыс площадью 4 х 4 см при помощи специального приспособления наносились линейные раны кожи длиной 25 мм до собственной фасции, на кожные раны накладывали по три шва, которые снимали на 5-е сут. Для удобства последующего измерения размеров ран швы накладывались с

plaster received on the basis of complex structure are lead. Pharmacological

таким расчетом, чтобы эпителий боковых краев раны не соприкасался, и в этом случае эпителизация происходила от конечных краев раны [1].

Животных разбивали на 3 группы по 10 особей в каждой: 1-я - контрольная; 2-я - животным наносили 10%-ю метилурациловую мазь; 3-я - животным наносили пластырь с фитокомпозицией.

Результаты исследований

Оценка местнораздражающего действия. Под влиянием разработанных накожных пластырей с фитоком-плексами в опыте при изучении местнораздражающего действия не наблюдали образование эритемы, струпа, отека тканей, что позволяет сделать вывод о том, что разработанные композиции не обладают раздражающим действием на кожу теплокровных.

Изучение действия накожного пластыря с фитокомпозицией на заживление линейных ран кожи. Наблюдение за процессом заживления и измерение размеров кожной раны осуществляли в течение 21 дня. Результаты экспериментов представлены в таблице.

Как видно из таблицы, процесс заживления ран в контрольной группе был достоверно продолжительнее (Р < 0,05) во все сроки измерений. Полное заживление в контрольной группе происходило к 20 дню.

Препарат сравнения (10%-я мазь метилурациловая) достоверно уменьшал заживление линейной раны, полное заживление происходило к 15-16 дню. Достоверных различий в сроках заживления между препаратом сравнения и исследуемой композиции не наблюдалось (Р < 0,05), но под влиянием композиции с фитокомп-лексами заживление происходило на 1-2 дня раньше и полное заживление наблюдали к 14-15 сут.

При изучении процесса заживления линейных ран кожи под влиянием композиционного пластыря обнаружено, что оно происходит на 5 дней раньше, чем для контрольных ран. Сопоставление с контролем дало возможность отметить более активную эпителизацию ран у подопытных животных.

Большое количество дополнительных данных о скорости и механизмах процессов репарации дает изучение клеточного состава раневого отделяемого, а также оценки функциональной и метаболической активности выявленных клеток. Это и составляет суть цитологического исследования ран.

В мазке-отпечатке клетки из живой ткани, прилипая к стеклу, быстро высыхают и в какой-то степени уже фиксируются. Последующая фиксация этанолом приставших клеток не изменяет значительно их объема, поэтому в препаратах-отпечатках клетки выглядят более крупными, чем в гистологических срезах. Метод «раневых отпечатков» не конкурирует с гистологическим

методом исследования раневого процесса. В цитологическом препарате-отпечатке топографических соотношений почти нет, в нем элементы тканей располагаются отдельно и только иногда в виде комплекса симпласта клеток. Ценность цитологического препарата-отпечатка из раны состоит в том, что с его помощью можно от-

бирать на стекло наименее зрелые клетки регенерата, не связанные еще прочно между собой и с основным веществом соединительной ткани. Это позволяет производить изучение самых молодых клеток верхнего слоя раны, за счет которых наращивается новая ткань на месте ее дефекта.

Влияние пластыря с фитокомпозицией на процесс заживления линейной раны

Препарат Средний линейный размер раны, мм

на 5 день на 10 день на 15 день на 20 день

Контроль 20,0 ± 0,25 14,1 ± 0,16 5,3 ± 0,31 0

Метилурациловая мазь 10%-я 19,0 ± 0,63 9,0 ± 0,28 2,5 ± 0,52 0

Пластырь с фитокомпозицией 20,0 ± 0,36 8,4 ± 0,21 0

Нами этот метод был использован для изучения ра-нозаживляющего действия пластыря. Мазки-отпечатки делали один раз в три дня.

При помощи стерильного ватного шарика с поверхности раны предварительно удаляли гной и остатки препарата (до верхнего лейкоцитарного слоя). Подготовленным стеклом прикасались к ране, после этого на стекле остаются отпечатки приставших к нему клеток. С целью фиксации препарат погружали в 96%-й этиловый спирт, а затем окрашивали по Романовскому -Гымзе. В препарат-отпечаток попадают клеточные элементы из двух верхних слоев раны (лейкоцитарного, сосудистого), в которых находятся недифференцированные элементы соединительной ткани в виде различных переходных форм своего развития, адекватно отражающих динамику репаративной регенерации в опытных группах. В контрольных группах данные процессы замедлены.

Таким образом, изучение процесса заживления линейных ран кожи в эксперименте показало, что применение пластырей с разработанной композицией ускоряет этот процесс, что подтверждено опытом и мазками-отпечатками.

Технологические исследования и конструирование пластыря проводили в отношении выбора материалов для нанесения пластырной массы.

Наиболее крупную ассортиментную группу этих материалов составляют полотна санитарно-гигиенического назначения; несколько меньшую в количественном отношении группу составляют нетканые материалы для халатов, изделий для операционных и другие варианты. Очень перспективно выглядят нетканые материалы разового пользования, которые снижают уровень инфекции и предусматривают экономию средств. Интересны в качестве возможных объектов исследования вискозные волокна.

В производстве влагопоглощающих изделий большое значение уделяется материалам на базе полиакри-латов. Эти волокна могут пропитываться различными составами, обеспечивать требуемую пролонгацию действия компонентов, а главное они обладают влагопогло-щающими свойствами.

Наиболее интересен в настоящее время материал спамбонд. Он обладает значительной поверхностной плотностью, продольной и поперечной плотностью на разрыв, минимальной воздухопроницаемостью.

Привлекает внимание также использование перевязочных материалов, содержащих активированные углеродные волокна, полипропиленовые, полиамидные сетчатые, трикотажные полотна, т.е. текстильные носители имеют большие возможности для использования их в качестве покрытий в косметике и медицинской практике.

Учитывая вышеуказанное, мы предлагаем в качестве носителей для разрабатываемых пластырей - нетканые носители, в основном на вискозных волокнах.

В качестве модельного материала для пропитки носителей использовали известный дезинфектант - клат-рат карбамида.

Для проведения биофармацевтических исследований in vitro: в качестве модельной системы для биофармацевтических исследований использовали приготовленный на стандартном растворителе - 8,9 г натрия хлорида, 0,3 г калия хлорида, 0,39 г кальция хлорида, вода очищенная до 1000 мл - желатиновый гель, который разливали в чашки Петри и давали сформироваться в течение 24 ч.

Так как клатрат карбамида ДДАБ является производным четвертичного аммониевого основания, в качестве индикатора использовали реактив Драгендорфа. Индикатор вводили в процессе приготовления геля. Определяли размеры окрашенных в интенсивно коричневый цвет зон вокруг каждой лунки, в которую помещен пропитанный носитель, с помощью миллиметровой бумаги. Результат представлен на рисунке [2].

мм 25

20

15

10

12 3 4

Диаграмма степени высвобождения клатрата карбамида ДДАБ из салфеток с разными основами-носителями: 1 — марля медицинская; 2 — ткань хлопчатобумажная; 3 — нетканый материал спамбонд; 4 — бумажное волокно

Технология пластырей всех предлагаемых типов несложна и состоит из следующих этапов.

1. Получение промежуточного продукта - комплексного экстракта.

2. Сплавление компонентов пластырной массы и фильтрация сплава.

3. Внесение в сплав суммы действующих компонентов или каждого компонента в отдельности (можно с помощью создания предварительного концентрата) части пластырной основы + суммы действующих компонентов.

Технологическая схема производства была разработана в соответствии с перечисленными этапами.

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Таким образом, разработан состав, сделан выбор основы для пластыря, содержащего сложную фитокомпо-зицию, и проведены фармакологические исследования по его специфической активности.

Литература

1. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. В.П. Фисенко. М., 2000.

2. ГудзьО.В.,ХузайкуловаО.И., ЯковенкоЕ.И., СавковаИ.К. // Провизор. 2000. № 12. С. 42-43.

3. Дьяченко Н.В. // Традиционные методы лечения в геронтологии: Материалы науч.-практ. конф. М., 2001. С. 109-110.

26 мая 2006 г.

УДК 615.451.16.012.015.543.553

АМПЕРОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ФЛАВОНОИДОВ В РАЗЛИЧНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЯХ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ПЛОДОВ СОФОРЫ ЯПОНСКОЙ

© 2006 г. О.С. Охременко, В.В. Верещагина, И.И. Павлюченко, А. А. Басов, А.Э. Моргоев

The antioxidant activity obtained showed the Sophora japonica fruits extracts with sodium oleate solutions to be much superior on antioxidant activity than those with the alcohol solutions. So, they can be applied for the development of soft dosage forms.

Эффективность лечебного действия многих суммарных фитопрепаратов прямо зависит от содержания в них отдельных представителей природных антиоксидантов, поэтому для объективной оценки потенциальной фармакологической активности при разработке подобных препаратов большой интерес представляет оценка их антиоксидантных свойств.

Флавоноиды обладают выраженной антиоксидан-тной активностью (АОА), оказывая как прямой, так и косвенный антиоксидантный эффект при их применении. Прямой антиоксидантный эффект связан с их химической структурой, а косвенный - с высокой их метаболической активностью и способностью влиять на многие биохимические и физиологические процессы в организме человека, нормализация которых при патологии способствует достижению баланса в системе про /антиоксиданты.

Объектом нашего исследования являются плоды софоры японской, основные биологически активные вещества которых (флавоноиды - производные квер-цетина, кемпферола, генистеина) содержатся в зрелых плодах в количестве до 8 % [1].

С целью получения на основе плодов софоры японской мягких лекарственных форм, обладающих противовоспалительной и ранозаживляющей активностью, нами были предложены в качестве экстрагента водные растворы ионогенных поверхностно активных веществ (ПАВ) (натрия олеата, триэтаноламина и др.) [2]. Использование данного экстрагента позволяет достаточно полно извлекать из лекарственного растительного сырья комплекс флавоноидов без применения летучих и пожароопасных растворителей [2].

Для более объективной оценки эффективности предлагаемого способа экстракции нами была проведена

сравнительная оценка антиоксидантной активности извлечений из плодов софоры японской, полученными различными экстрагентами, амперометрическим способом.

Сущность данного метода заключается в измерении электрического тока, возникающего при окислении исследуемого вещества (или смеси веществ) на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале и сравнении полученного сигнала с сигналом антиоксидантного стандарта, измеренного в тех же условиях. Такой подход позволяет непосредственно определять антиоксидантный потенциал и антиоксидантную емкость изучаемого вещества, суммарно оценивая количество легко окисляемых групп (-OH, -SH, -NH2), что важно для последующего прогнозирования антиоксидантного эффекта iv vivo.

Проводили сравнительные исследования антиоксидантной активности извлечений из плодов софоры японской с применением различных экстрагентов (таблица). Были получены настойки из софоры японской на 50%-м спирте этиловом в соотношении 1:2 [3] и 1:5 методом ре-мацерации в модификации ВНИИФ, а также извлечения с использованием 0,5 и 2,5 % раствора натрия олеата с гидромодулем 1:10 при температуре 50 °С. Для определения антиоксидантной активности все полученные извлечения дополнительно разводили водой, очищенной 1:50.

Показатели антиоксидантной активности извлечений из плодов софоры японской, полученных при использовании различных экстрагентов

Экстрагент АОА, S, нА-с Кверцетин, мг/л

Настойка (1:2) 561,3 0,28

Настойка (1:5) 693,9 0,35

Водный раствор натрия олеата 0,5 % 456,7 0,23

Водный раствор натрия олеата 2,5 % 604,8 0,30