СПОСОБ НАРАЩИВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АДЕНОВИРУСА ЧЕЛОВЕКА

1. Способ наращивания рекомбинантного аденовируса, включающий
a. выращивание культуры клеток-хозяев в культуральной среде;
b. получение рабочего банка вирусной затравки рекомбинантного аденовируса посредством инфицирования культуры клеток-хозяев, полученной на стадии а), рекомбинантным аденовирусом из мастер-банка с последующим культивированием инфицированной культуры клеток-хозяев;
c. инфицирование культуры клеток-хозяев, выращенной, как описано на стадии a), вирусной затравкой, полученной на стадии b);
d. культивирование инфицированной культуры клеток-хозяев;
e. сбор инфицированных клеток, полученных на стадии d);
характеризующийся тем, что все стадии культивирования культуры клеток-хозяев осуществляют в многоуровневых культуральных матрасах HYPERFlask.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий выделение и очистку вируса из собранных инфицированных клеток.
3. Способ по п.2, в котором очистку проводят путем центрифугирования в градиенте плотности CsCl.
4. Способ по п.2, в котором очистку проводят путем тангенциальной ультрафильтрации - анионообменной хроматографии.
5. Способ по п.1, в котором рекомбинантным аденовирусом является аденовирус, полученный на основе аденовируса серотипа 5 (Ад5).
6. Способ по п.1, в котором рекомбинантный аденовирус экспрессирует ген, выбранный из группы, включающей ген тимидин-киназы вируса простого герпеса 1-типа, ген р53, ген α-интерферона, ген β-интерферона, ген зеленого флюоресцентного белка (GFP).
7. Способ по любому из пп.5 и 6, в котором в качестве клеток-хозяев используют клетки линии НЕK293.
8. Способ по п.7, в котором выращивание клеток-хозяев на стадии a) включает следующие стадии: выращивание клеток в культуральной среде до образования клеточного монослоя с конфлюэнтностью 100%; суспендирование клеток в культуральной среде в присутствии трипсина-ЭДТА; инокуляцию свежей культуральной среды полученной суспензией и выращивание клеток до образования клеточного монослоя с конфлюэнтностью 100%; суспендирование клеток в культуральной среде в присутствии трипсина-ЭДТА; инокуляцию свежей культуральной среды полученной суспензией и выращивание клеток до образования клеточного монослоя с конфлюэнтностью 70%.
,
9. Способ по п.7в котором получение вирусной затравки на стадии b) включает следующие стадии: инфицирование клеток, полученных, как описано в п.6, рекомбинантным Ад5, и культивирование инфицированной культуры клеток; сбор инфицированных клеток с их последующим лизисом посредством замораживания-оттаивания.
10. Препарат рекомбинантного аденовируса, полученный способом по любому из пп.1-9.
11. Препарат по п.10, в котором рекомбинантный аденовирус представляет собой рекомбинантный Ад5.
12. Препарат по п.10, в котором рекомбинантный аденовирус является аденовирусом, экспрессирующим ген, выбранный из группы, включающей ген тимидин-киназы вируса простого герпеса 1-типа, ген р53, ген α-интерферона, ген β-интерферона, ген зеленого флюоресцентного белка (GFP).