ПЛЕНКИ НА ОСНОВЕ ПЛАЗМЫ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
PLASMA-BASED FILMS AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION AND USE

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к пленкам на основе плазмы и, в частности, к гибким пленкам на основе плазмы. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам полученияи использования гибких пленок на основе плазмы.
Варианты осуществления настоящего изобретения конкретно разработаны для получения гибких пленок на основе плазмы, пригодных для использования в качестве кровоостанавливающего средства при лечении и/или предотвращении кровотечений, от легких до тяжелых, а также артериальных кровотечений, в качестве противоспаечного слоя для уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек, в качестве ранозаживляющего пластыря, в качестве повязки на раны или в качестве пленок, пригодных для использования при пластике грыжи. Варианты осуществления настоящего изобретения будут описываться далее со ссылками на эти применения. Однако будет понятно, что настоящее изобретение не ограничивается этой конкретной областью применения.
Уровень техники
Любое обсуждение уровня техники в настоящем описании не должно ни в коем случае рассматриваться как признание того, что такой подход широко известен или составляет часть общего знания в данной области.
Пленки или листы для использования в качестве медицинских продуктов часто содержат введенный материал, такой как волокна или текстильные материалы, для изменения/улучшения механических свойств таких пленок или листов, в частности, для улучшения их стойкости к давлению. Однако в зависимости от вида используемых волокон и/или текстильных материалов, такие армированные пленки или листы, как известно, обуславливают осложнения in situ из-за только лишь частичной биодеградируемости волокон и текстильных материалов. Типичные возникающие осложнения включают развитие соединительной ткани между не связанным в ином случае тканями и/или органами, приводя к образованию послеоперационных/ вызванных хирургической операцией спаек.
Послеоперационные/вызванные хирургической операцией спайки может приводить к тяжелым клиническим осложнениям, таким как потеря чувствительности, бесплодие, кишечная непроходимость и тазовая боль. Тяжесть симптомов зависит от положения и размера спайки. Количество пациентов, страдающих от послеоперационных/вызванных хирургической операцией спаек, увеличивается, и 55%-90% пациентов, которые подвергаются гинекологическим и/или полостным операциям, сталкиваются с осложнениями, возникающими из-за спаек.
Полностью биодеградируемые фибриновые пленки известны, и описаны пленки на основе плазмы, смотри, например, заявки на патенты EP 0485210 A2 и US 8529959 B2. Как уже указано выше, фибриновые медицинские продукты, применяемые местным образом или имплантируемые, такие как пленки или листы, как правило, имеют преимущества в биосовместимости по сравнению со сходными пленками или листами, содержащими нефибриновые материалы, такие как волокна и/или текстильные материалы. В дополнение к отсутствию осложнений, описанных выше, фибриновые продукты, такие как пленки, являются пригодными для обеспечения индивидуальных пациентов имплантируемым фибриновым продуктом, генерируемым из плазмы как таковой, обеспечивая очень высокую степень биосовместимости.
Заявка на патент EP 0485210 A2 описывает способ изготовления пленок на основе плазмы крови, содержащих тромб из 50 мл цитратной плазмы с 8-10 единицами NIH тромбина, в устройстве для формования. Однако пленки на основе плазмы крови, полученные в соответствии с описанием заявки на патент EP 0485210 A2, являются хрупкими и, следовательно, негибкими, и демонстрируют только лишь плохую механическую прочность, так что пленки разрушаются при складывании, что делает их непригодными для применений, где требуетсягибкость и/или стойкость к давлению.
Заявка на патент US 8529959 B2 описывает листы, содержащие пластик, полученный из плазмы крови. Этот пластик, полученный из плазмы крови, описывается как полученный посредством свертывания крови с помощью кальция, сушки полученного тромба и измельчение высушенного тромба с получением порошка свернувшейся плазмы, который смешивается с глицерином с получением пасты, содержащей 65% порошка свернувшейся плазмы и 35% глицерина, и где паста затем формуется под давлением при повышенной температуре и при высоком давлении с формированием листов. Листы, полученные в соответствии с описанием заявки на патент US 8529959 B2, имеют очень ограниченную гибкость и плохую механическую прочность, так что листы разрушаются при складывании, что делает их непригодными для применений, где требуются гибкость и или стойкость к давлению.
Соответственно, в данной области существует необходимость в улучшенных биодеградируемых гибких пленках на основе плазмы или листов. В частности, требуются пленки или листы на основе плазмы, имеющие высокую степень гибкости, а также высокую механическую прочность.
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является преодоление или уменьшение, по меньшей мере, одного из недостатков предыдущего уровня техники или создание пригодной для использования альтернативы. В частности, целью настоящего изобретения является создание улучшенных гибких пленок на основе плазмы и создание улучшенных способов получения и использования таких пленок, например, при лечении и/или предотвращении медицинских показаний.
Настоящее изобретение, среди прочего, основано на том неожиданном открытии, что гибкость и/или эластичность и/или механическая прочность пленок на основе плазмы, когда выражается как функция числа складываний, стойкости при складываниях и/или как функция стойкости пленок на основе плазмы к разрывному давлению, могут быть улучшены посредством смешивания плазмы крови с тромбином и/или кальцием в избытке относительно количества, необходимого чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования желаемого объема и формы.
Соответственно, в первом аспекте, настоящее изобретение относится к способу получения гибкой пленки на основе плазмы, включающему стадии:
(a) смешивания плазмы крови с более чем 2 Международными единицами (IU) тромбина на миллилитр (мл) плазмы и/или примерно с 0,65-1,3 мг ионов кальция на миллилитр (мл) плазмы, чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования; и
(b) поддержания плазмы в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, где в течение этого времени или в конце его к плазме в форме для формования прикладывается давление.
Кроме того, неожиданно обнаружено, что гибкость пленок на основе плазмы может улучшаться при смешивании плазмы крови, по меньшей мере, с одним активатором системы коагуляции в форме для формования и приложения давления к плазме в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы или в его конце.
Соответственно, во втором аспекте, настоящее изобретение относится к способу получения гибкой пленки на основе плазмы, включающемустадии:
(a) смешивания плазмы крови с активатором системы коагуляции, чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования; и
(b) поддержания плазмы в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, где в течение этого времени или в конце его к плазме в форме для формования прикладывается давление в пределах примерно от 0,3 до 125 фунтов на квадратный дюйм (фунт/кв. дюйм) (7,8 кг/кв. см) для формирования пленки.
В свете рассмотренного выше, будет понятно, что настоящее изобретение, в одном или нескольких предпочтительных вариантов осуществления, относится также к способу получения гибкой пленки на основе плазмы, включающему стадии:
(a) смешивания плазмы крови примерно с более примерно, чем 2 Международными единицами (IU) тромбина на миллилитр (мл) плазмы и/или примерно с 0,65-1,3 мг ионов кальция на миллилитр (мл) плазмы, чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования; и
(b) поддержания плазмы в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, где в течение этого времени или в конце него к плазме в форме для формования прикладывается давление в пределах примерно от 0,3 до 125 фунтов на квадратный дюйм (фунт/кв. дюйм) (0,2-7,8 кг/кв. см).
В способах первого и второго аспекта, а также в вариантах осуществления, где объединяются конкретные стадии способа первых двух аспектов, плазма крови смешивается примерно с 2,9-3,1 IUтромбина на мл плазмы, чтобы вызвать свертывание в форме для формования, и затем поддерживается в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, и в течение времени необходимого для свертывания плазмы или в конце него к плазме в форме для формования прикладывается давление в пределах примерно от 40 до 45 фунт/кв. дюйм (2,5-2,8 кг/кв. см) в течение примерно 50-70 секунд.
В третьем аспекте, настоящее изобретение относится к гибкой пленке на основе плазмы, которая получена с помощью способов в соответствии с первым или вторым аспектом.
В четвертом аспекте, настоящее изобретение относится к гибкой пленке на основе плазмы, содержащей в пределах между 0,1 и 10 IU тромбина на мл плазмы и имеющей толщину в пределах примерно от 0,005 до 0,1 мм, где гибкая пленка отличается количеством складываний, по меньшей мере, 1, например, по меньшей мере, 2, например, по меньшей мере, 4, например, по меньшей мере, 5. Предпочтительно, в вариантах осуществления настоящего изобретения гибкие пленки на основе плазмы могут также отличаться: стойкостью при складываниях, по меньшей мере, 10, например, по меньшей мере, 20, например, по меньшей мере, 30, например, по меньшей мере, 40, например, по меньшей мере, 50, например, по меньшей мере, 60, например, по меньшей мере, 70, например, по меньшей мере, 80, например, по меньшей мере, 90, например, по меньшей мере, 100; и/или разрывным давлением примерно 50-1000 мм рт. ст., или примерно 100-1000 мм рт. ст., или примерно 100-800 мм рт. ст., или примерно 100-600 мм рт. ст., или примерно 100-500 мм рт. ст., или примерно 100-450 мм рт. ст., или примерно 140 мм рт. ст., или примерно 150 мм рт. ст., или примерно 175 мм рт. ст., или примерно 200 мм рт. ст., или примерно 225 мм рт. ст., или примерно 250 мм рт. ст., или примерно 275 мм рт. ст., или примерно 300 мм рт. ст., или примерно 325 мм рт. ст., или примерно 350 мм рт. ст., или примерно 375 мм рт. ст., или примерно 400 мм рт. ст.
В пятом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования в качестве кровоостанавливающего средства, предпочтительно, в качестве кровоостанавливающего средства для остановки кровотечения, от легкого до тяжелого. Соответственно, в вариантах осуществления пятого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу остановки кровотечения, от легкого до тяжелого, включающему применение гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам в качестве кровоостанавливающего средства.
В шестом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования в качестве кровоостанавливающего средства для остановки артериального кровотечения. Соответственно, в вариантах осуществления шестого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу остановки артериального кровотечения, включающему применение гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам в качестве кровоостанавливающего средства.
В седьмом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования в качестве противоспаечного слоя для уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек. Соответственно, в вариантах осуществления седьмого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек, включающему применения гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам в качестве противоспаечного слоя.
В восьмом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования в качестве ранозаживляющего пластыря. Соответственно, в вариантах осуществления восьмого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу лечения ран, включающему применение гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам в качестве ранозаживляющего пластыря.
В девятом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования в качестве повязки на раны. Соответственно, в вариантах осуществления девятого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу лечения ран, включающему применение гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам в качестве повязок на раны.
В десятом аспекте, настоящее изобретение относится к гибким пленкам на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам для использования при пластике грыжи. Соответственно, в вариантах осуществления десятого аспекта, настоящее изобретение также относится к способу лечения грыжи, включающему применение гибкой пленки на основе плазмы согласно третьему или четвертому аспектам.
Фигуры
Теперь варианты осуществления настоящего изобретения будут описываться, в качестве всего лишь примеров, со ссылками на прилагаемые чертежи, в которых:
Фиг.1 схематически показывает гибкую пленку на основе плазмы (1) согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.2 схематически иллюстрирует пленку на основе плазмы (1) подобную пленке, показанной на Фиг.1, содержащую один или несколько фармацевтически активных агентов (2).
Фиг.3 схематически иллюстрирует пленку на основе плазмы (1) подобную пленке, показанной на Фиг.1, содержащую один или несколько фармацевтически активных агентов (2), введенных в пленку, на которую два дополнительных фармацевтически активных агентов (3, 4) наносятся с помощью следующей далее сушки распылением. В некоторых вариантах осуществления эти два дополнительных фармацевтически активных агента могут представлять собой высушенную распылением плазму (3) и высушенный распылением активатор системы коагуляции (4).
Фиг.4 схематически иллюстрирует вертикальный разрез устройства, пригодного для получения пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, где (5) представляет собой поршень с усилием, направленным вниз, (6) представляет собой непористую пластину для равномерного приложения давления к плазме, свертывающейся/свернувшейся плазме (не показано) в форме для формования (7) и содержащего систему удаления жидкости из впитывающего материала (8) и вакуумного отсоса (9).
Подробное описание настоящего изобретения
Для обеспечения ясного и согласованного понимания описания и формулы изобретения, и рамок приведенных терминов, предлагаются следующие определения.
Определения
В контексте настоящей заявки, термин ʺгибкийʺ означает, что структура, такая как пленка на основе плазмы, может сгибаться, даже с малыми радиусами изгиба, без разрушения. В частности, гибкая пленка в контексте настоящей заявки может складываться без разрушения и, как таковая, степень гибкости пленки может выражаться с помощью количества складываний или стойкости при складываниях, как определено ниже. Кроме того, степень гибкости пленки может выражаться с помощью разрывного давления пленки, как также определено ниже.
В контексте настоящей заявки, термин «на основе плазмы» в целом, означает структуры и материалы, такие как пленки по настоящему изобретению, а в случае многослойных пленок, отдельные слои пленки, которые получают из плазмы крови в качестве исходных материалов. В частности, если большая часть компонентов таких структур или материалов представляет собой плазму, они представляют собой структуры или материалы на основе плазмы.
В контексте настоящей заявки, термин ʺпленкаʺ, в целом означает, тонкие, по существу, планарные мембранообразные структуры, которые могут также описываться как листы. Тем не менее, термин пленка в контексте настоящей заявки в явном виде охватывает однослойные пленки или листы, а также композитные многослойные пленки или листы. Кроме того, пленка в контексте настоящей заявки может содержать фармацевтически активные агенты, либо наносимые на пленку местным образом, либо однородно распределенные в пленке, либо инкапсулированные между слоями пленки в многослойной пленке. Термин ʺпленкаʺ также охватывает структуры, имеющие некоторую степень пористости, которая делает возможным потребление и/или высвобождение из пленки веществ, таких как фармацевтически активные агенты. Как таковой, термин ʺпленкаʺ в контексте настоящей заявки также охватывает тонкий, по существу, планарный, мембранообразный каркас, на котором или внутри которого могут содержаться фармацевтически активные агенты. Соответственно, термин пленка, когда он используется для описания вариантов осуществления настоящего изобретения, охватывает также фибриновые емкости или устройства для доставки фармацевтически активных агентов, содержащихся на пленке или в ней.
В контексте настоящей заявки, термин ʺфармацевтически активный агентʺ означает вещество, частицу и/или лекарственное средство, используемое для придания фармакологической активности или для оказания иным образом прямого воздействия при диагностике, санации, облегчении, лечении или предотвращении медицинского показания, или для оказания прямого воздействия при восстановлении, коррекции или модификации физиологических функций.
В контексте настоящей заявки, термин ʺагент, повышающий степень поперечной сшивки между фибриновыми полимерамиʺ, означает агенты, которые повышают количество связей между γ- и α-цепями молекул фибрина, тем самым стабилизируя фибриновые волокна. Такие агенты, среди прочего, включают активированный фактор коагуляции XIII (FXIIIa), хлорид кальция, модифицированные молекулы фибрина, такие как мутировавшие обрезанные молекулы фибрина, и цепе-специфичные антитела.
В контексте настоящей заявки, термин ʺколичество складыванийʺ означает количество раз, когда структура, такая как пленка на основе плазмы, может изгибаться с малым радиусом изгиба, пока пленка не разрушится. Простое исследование определения количества складываний описывается ниже.
В контексте настоящей заявки, термин ʺстойкость при складыванияхʺ означает количество раз, когда структура, такая как пленка на основе плазмы может многократно складываться с малым радиусом и опять раскладываться в свое начальное положение. Стойкость при складываниях в контексте настоящей заявки обеспечивает средство для оценки износостойкости гибкой структуры.
В контексте настоящей заявки, термин ʺразрывное давлениеʺ означает максимальное давление, которое может выдержать структура до разрыва или разрушения. В контексте настоящей заявки термин разрывное давление, в частности, означает максимальное давление, которое пленка на основе плазмы может выдержать до разрыва или разрушения.
В контексте настоящей заявки, термин ʺвремя необходимое для свертывания плазмыʺ приводится в своем прямом значении, то есть, он означает время необходимое для свертывания плазмы, используемой при получении пленок на основе плазмы, описанных в настоящем документе.
В контексте настоящей заявки, термин ʺактиватор системы коагуляцииʺ означает вещества, частицы или агенты, которые инициируют коагуляцию/свертывание. Такие активаторы могут инициировать коагуляцию на любой стадии каскада коагуляции и, как таковые, включают агенты, действующие на внутренние, внешние и совместные пути коагуляции.
В контексте настоящей заявки, термин ʺкровоостанавливающее средствоʺ означает устройства пригодные для уменьшения и, в конечном счете, остановки кровотечения. В частности, термин охватывает пленки на основе плазмы, пригодные для перекрывания кровеносных сосудов. Как таковые, кровоостанавливающие средства в контексте настоящей заявки включают пленки на основе плазмы, которые могут перекрывать кровеносные сосуды как физический барьер, пленки на основе плазмы, которые могут доставлять кровоостанавливающие агенты на место кровотечения для перекрывания кровеносного сосуда, а также их сочетания.
В дополнение к рассмотренным выше определениям, и, если контекст четко не требует иного, в описании и формуле изобретения, слова ʺсодержатьʺ, ʺсодержащийʺ, и тому подобное, должны рассматриваться в инклюзивном смысле в противоположность эксклюзивному или всеобъемлющему смыслу; то есть, так сказать, в смысле ʺвключая, но не ограничиваясь этимʺ.
Кроме того, ссылки в настоящей заявке на ʺодин из вариантов осуществленияʺ, ʺнекоторые варианты осуществленияʺ или ʺвариант осуществленияʺ означают, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с этим вариантом осуществления, включаются, по меньшей мере, в один из вариантов осуществления настоящего изобретения. Таким образом, появление фраз ʺв одном из вариантов осуществленияʺ, ʺв некоторых вариантах осуществленияʺ или ʺв варианте осуществленияʺ в различных местах настоящего описания не обязательно каждый раз относится к одному и тому же варианту осуществления, хотя это и возможно. Кроме того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут объединяться любым соответствующим образом, как будет понятно специалисту в данной области из настоящего описания, в одном или нескольких вариантах осуществления.
Как используется в настоящем документе, если не указано иного, использование прилагательных "первый", "второй", "третий", и тому подобное, для описания общего объекта, означает только, что упоминаются различные случаи сходных объектов, и оно не предназначено для указания того, что объекты, описанные таким образом, должны соответствовать данной последовательности, либо по времени, либо в пространстве, либо по рангу, либо любым другим образом.
Как используется в настоящем документе, термин ʺиллюстративныйʺ используется в смысле создания примеров, в противоположность указанию качества. То есть, ʺиллюстративный вариант осуществленияʺ представляет собой вариант осуществления, приведенный в качестве примера, в противоположность тому, чтобы он представлял собой вариант осуществления иллюстративного качества.
Гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению и способы их получения и использования
Как описано выше, гибкость, эластичность и/или механическая прочность пленок на основе плазмы являются важными для таких пленок на основе плазмы, для их эффективного и успешного использования в качестве кровоостанавливающих средств для остановки кровотечений, от легких до тяжелых, и даже для остановки артериальных кровотечений. В частности, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению обеспечивают необходимую гибкость, эластичность и механическую прочность для пленок, предназначенных для герметизации таких кровотечений, то есть, гибкость необходимую для пленки для отслеживания физиологической топологии места кровотечения и для противостояния даже артериальному давлению крови в месте кровотечения.
Подобным же образом, гибкость, эластичность и механическая прочность пленок на основе плазмы по настоящему изобретению являются важными для таких пленок на основе плазмы, для их эффективного использования в качестве адгезивных слоев для уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек.
Послеоперационные/вызванные хирургической операцией спайки возникают в результате формирования рубцовой ткани после хирургической операции. Хотя образование рубцового сращения является частью нормальной реакции заживления на травму тканей, оно может приводить к тяжелым послеоперационным осложнениям, когда возникает стабильное связывание между не связанными в ином случае тканями в результате возникновения спаек.
Фактически, у более 90% пациентов развиваются перитонеальные спайки после хирургической операции в брюшной полости или в области таза. У большинства пациентов спаечная ткань впоследствии восстанавливается и, в конечном счете, растворяется. Однако у миллионов пациентов образуются спайки между органами и/или тканями, которые в нормальном состоянии разделены, такими как кишки, желудок, матка, яичники и другие органы, вызывая дисфункцию и другие, возможно, тяжелые осложнения. Например, в брюшной полости спайки могут приводить к непроходимости тонкого кишечника, к женскому бесплодию и к боли. В дополнение к этому, спайки часто делают последующую операцию более сложной и ограничивают возможности последующего лечения. Например, спайки часто влияют на последующую минимально инвазивную операцию.
Пленки на основе плазмы по настоящему изобретению являются пригодными для создания противоспаечных барьерных слоев, предназначенных для действия в качестве физического экрана, поддерживающего поврежденную ткань, отдельно от окружающих тканей, предотвращая тем самым образование нежелательных спаек. Пленка на основе плазмы, при использовании в качестве противоспаечного слоя, отделяет травмированную ткань во время начального заживления, но в конечном счете будет полностью разрушаться благодаря ее биодеградаци. В этом отношении, известно, что рост спаек начинается в пределах первых 3-5 дней после хирургической операции. Как таковые, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению являются особенно пригодными для использования в качестве противоспаечных слоев, делая возможным отделение травмированной ткани от окружающей ткани в течение этих первых дней послеоперационного заживления, тем самым уменьшая или предотвращая развитие вызванных хирургической операцией спаек и, в конечном счете, уменьшая или предотвращая возникновение риска осложнений, возникающих из-за образования вызванных хирургической операцией спаек. Как будет понятно, гибкость пленок на основе плазмы по настоящему изобретению дает значительное преимущество, когда такие пленки используют в качестве противоспаечных слоев, благодаря их способности воспроизводить физиологическую топологию травмированной ткани, обеспечивая тем самым эффективный противоспаечный барьер между травмированной тканью и окружающими тканями.
Благодаря их биосовместимости и полной биодеградации со временем, гибкие пленки на основе плазмы, такие как пленка (1), схематически показанная на Фигуре 1, также являются особенно пригодными для использования в качестве повязок на раны, ранозаживляющих пластырей или для использования при пластике грыж или сосудистыхповреждений. В этой связи, примечательно, что пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, являются нетоксичными, не влияют отрицательно на нормальное заживление, не влияют отрицательно на иммунологические функции, могут применяться в различных условиях, таких как кровотечение, инфекции и анастомотическая хирургия, и благодаря их гибкости, эластичности и высокой механической прочности являются простыми при манипуляциях и простыми в применении.
Кроме того, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению могут служить в качестве носителей, емкостей и/или устройств доставки для фармацевтически активных агентов, например, для агентов пригодных для использования при лечении рассмотренных выше медицинских осложнений. Например, если пленку используют в качестве ранозаживляющего пластыря, пленка может нести один или несколько фармацевтически активных ранозаживляющих агентов, то есть, агентов, поддерживающих заживление ран. Альтернативно, пленки по настоящему изобретению могут использовать просто как повязки на раны.
Как таковые, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, такие как пленка (1), схематически иллюстрируемые на Фигуре 2, могут содержать, по меньшей мере, один фармацевтически активный агент (2). Предпочтительно, по меньшей мере, этот один фармацевтически активный агент выбирается из группы, состоящей из: антибиотических агентов; противовоспалительных агентов; противоинфекционных агентов; факторов роста; хемокинов; иммуномодуляторов; ранозаживляющих агентов; активаторов системы коагуляции; антикоагуляционных агентов; противоспаечнных агентов; антифибринолитических агентов; пенициллина; серебра; хлоргексидина; клеток; хемокинов, полученных из стромальных клеток; фактора 1 альфа, полученного из стромальных клеток; фактора 1 бета, полученного из стромальных клеток; фибриногена; фактора VIIa; CXCL-12; гепарина; апротинина; транексамовой кислоты; не-ионных поверхностно-активных веществ; Pluronic F68; TWEEN 80; ингибиторов COX-2 и нимесулида.
Пленки по настоящему изобретению могут конкретно разрабатываться в качестве устройств доставки для перечисленных выше фармацевтически активных агентов. В частности, имеется необходимость в наносимых местным образом или имплантируемых гибких пленках на основе плазмы, которые могут содержать фармацевтически активные агенты и/или доставлять их в место лечения.

Неионные поверхностно-активные вещества, такие как сложные сорбитановые эфиры полиоксиэтилена, в частности, сорбитанмоноолеат полиоксиэтилена (20) (TWEEN-80), блок-сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен, в частности, Pluronic F68, или ингибиторы COX-2, в частности, N-(4-нитро-2-феноксифенил)метансульфонамид (Nimesulide), или их сочетания являются особенно полезными, когда необходимо получать пленки на основе плазмы для использования в качестве противоспаечных слоев для уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек. В таких пленках, эти агенты могут однородно распределяться в пленке, или они могут наноситься местным образом на пленку, либо отдельно, либо как сочетание агентов.
В некоторых вариантах осуществления агент однородно распределяется в пленке. В других вариантах осуществления агент наносится на пленку местным образом. В других вариантах осуществления настоящего изобретения, пленка на основе плазмы может содержать фармацевтически активный агент, однородно распределенный в пленке, и дополнительно содержать такой же или другой фармацевтически активный агент, нанесенный местным образом на поверхность пленки.
В вариантах осуществления, где агенты однородно распределяются в пленке, агенты ʺзахватываютсяʺ в пленке в ходе формирования пленок на основе плазмы из-за свертывания плазмы. После имплантации, пленка на основе плазмы будет деградировать (в основном из-за литических факторов, гидратирования и механического износа), постепенно высвобождая при этом фармацевтически активные агенты, распределенные в ней.
Когда агент наносится на пленку по настоящему изобретению местным образом, агент может наноситься посредством нанесения покрытия распылением, сушки распылением, с помощью кисти и/или пропитки.
Хемокины, полученные из стромальных клеток, представляют интерес для использования с пленками по настоящему изобретению. Полученные из стромальных клеток факторы 1-альфа и 1-бета представляют собой малые цитокины, которые принадлежат к семейству хемокинов, члены которого активируют лейкоциты и часто индуцируются в ответ на провоспалительные стимулы, такие как липополисахариды, фактор некроза опухоли (TNF) или интерлейкин-1 (IL1). Хемокины, такие как CXCL-12, ингибируют формирование соединительной ткани и поэтому являются агентами, полезными для нанесения на пленки по настоящему изобретению, когда они используются в качестве адгезивных слоев или для распределения в них.
После того как пленки получены, в пленки на основе плазмы для использования в качестве адгезивных слоев также могут добавляться агенты, например, посредством нанесения местным образом агентов, которые ингибируют дополнительное образование фибрина, такие как гепарин, апротинин, транексамовая кислота или другие антифибринолитики.
В некоторых вариантах осуществления, агент может представлять собой отдельный агент, или он может представлять собой смесь агентов, таких как белки, например, содержащую смесь активаторов системы коагуляции, такую как сама плазма.
В некоторых вариантах осуществления, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению могут содержать несколько фармацевтически активных агентов, однородно распределенных в пленке, и/или несколько фармацевтически активных агентов, нанесенных местным образом на пленку.
В одном или нескольких предпочтительных вариантах осуществления
(i) первый фармацевтически активный агент наносится местным образом на пленку, необязательно, посредством сушки распылением,
(ii) затем разделительный слой наносится на нанесенный местным образом первый агент, и
(iii) второй фармацевтически активный агент наносится местным образом на разделительный слой.
В таких вариантах осуществления первый фармацевтически активный агент может представлять собой фибриноген, разделительный слой может содержать крахмал, необязательно желатинизированный крахмал, а второй фармацевтически активный агент может представлять собой тромбин. Предпочтительно, фибриноген наносится посредством сушки распылением на слой пленки, нанесения кубового желатинизированного крахмала (приготовленного, например, посредством желатинизирования 2,5 г крахмала в 50 мл воды посредством нагрева до 125°C) поверх слоя фибриногена и приложения к пленке давления примерно 15,5 фунт/кв. дюйм (105 кПа). Как правило, 2 мл желатинизированного крахмала достаточно для покрытия пленки 4 дюйма × 4 дюйма (10 см × 10 см) разделительным слоем. Затем, на разделительный слой наносится тромбин. Сушка распылением примерно 5 мл раствора 300 IU/мл тромбина на пленке 4 дюйма х 4 дюйма (10 см × 10 см), как показано, является наиболее эффективной.
В альтернативных вариантах осуществления, пленка по настоящему изобретению может содержать нанесенный местным образом фармацевтически активный агент для использования в качестве кровоостанавливающего средства только на одной наружной поверхности слоистой пленки, в то время как один из внутренних слоев содержит другой агент, например, антибиотик. Нанесенный местным образом гемостатический агент на поверхности пленки может высвобождаться и действовать непосредственно при нанесении пленки на рану, обеспечивая тем самым непосредственное полезное кровоостанавливающее воздействие, в то время как агент антибиотик из внутреннего слоя (слоев) пленки высвобождается только после непосредственного кровоостанавливающего воздействия, обеспечивая тем самым антибиотическое воздействие в течение последующих стадий заживления. Как таковое, в таких вариантах осуществления, местное нанесение может обеспечить воздействие немедленного высвобождения агента, при этом однородное распределение в пленке может сделать возможным воздействие высвобождения с задержкой по времени или медленного высвобождения агента.
В других вариантах осуществления и, если обратиться к Фигуре 3, пленка на основе плазмы (1), необязательно содержащая фармацевтически активный агент (2), однородно распределенный в ней, может также покрываться высушенной распылением плазмой (3) для получения слоя белков плазмы на наружной поверхности пленки. Распыление с помощью распылителя можно использовать для местного нанесения плазмы, поскольку оно сохраняет активность белков плазмы после сушки. В результате, это местное нанесение с помощью сушки распылением дает пленку на основе плазмы, содержащую белки для активной коагуляции на ее наружной поверхности. Активности фибриногена и FXa системы свертывания остаются интактными, так что пленку можно использовать в качестве кровоостанавливающей повязки с полученным сушкой распылением слоем активных белков коагуляции. В дополнение к этому, конечный слой активатора системы коагуляции (4), такого как преобразователь тромбина, может распыляться поверх полученной сушкой распылением плазмы. Например, преобразователь тромбина может выбираться из: тканевого фактора, рекомбинантного тканевого фактора, тромбина, каолина, диатомовой земли и активаторов системы коагуляции. Модифицированная таким образом пленка на основе плазмы может использоваться в качестве кровоостанавливающего средства для легких, умеренных или тяжелых кровотечений.
Кроме того, гибкая пленка на основе плазмы по настоящему изобретению может представлять собой композитную пленку, содержащую несколько слоев пленок на основе плазмы, то есть, многослойную пленку на основе плазмы. В некоторых многослойных пленках на основе плазмы каждые отдельные слои пленки могут не содержать или содержать одинаковые или различные фармацевтически активные агенты.
Степень поперечной сшивки между фибриновыми полимерами гибкой пленки на основе плазмы влияет на скорость деградации пленки, при этом высокая степень поперечной сшивки коррелирует с медленной деградацией, и при этом низкая степень поперечной сшивки коррелирует с быстрой деградацией. Соответственно, контроль степень поперечной сшивки делает возможным контроль скорости или быстроты деградации и, следовательно, позволяет приспосабливать пленку в соответствии с ее применением.
Например, если пленка должна использоваться в качестве противоспаечного слоя, пленка должна деградировать в пределах одной-двух недель имплантации. В противоположность этому, пленки, используемые для пластики грыжи, должны иметь гораздо меньшую скорость деградации, приводящую к получению почти постоянного импланта, предпочтительно требующего от нескольких недель до месяцев или, в отдельных случаях, даже от нескольких месяцев до лет, до полной деградации пленки. Как правило, скорость деградации может оптимизироваться для соответствия конкретной функции пленки, то есть, для ускорения заживления, для обеспечения механической стабильности относительно разрыва для перфорации или раны, покрытой этой пленкой, и тому подобное.
Подобным же образом, степень поперечной сшивки между фибриновыми полимерами пленки влияет на время высвобождения фармацевтически активного агента, однородно распределенного внутри пленки, при этом высокая степень поперечной сшивки коррелирует с более продолжительными временами высвобождения, и при этом низкая степень поперечной сшивки коррелирует с меньшими временами высвобождения. Соответственно, контроль степени поперечной сшивки дает возможность для контроля скорости высвобождения фармацевтически активного агента, однородно распределенного в пленках по настоящему изобретению.
Сочетание различных признаков пленки, описанных в настоящем документе, то есть, однослойных пленок, многослойных пленок, различных агентов, либо нанесенных местным образом, либо распределенных в пленке, делает возможным получение пленок, приспособленных для конкретных применений и даже для отдельных пациентов.
Гибкая пленка на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, получается из жидкой плазмы, где плазма может представлять собой плазму человека или животного. Например, плазма представляет собой свежезамороженную плазму (FFP) или плазму,не содержащую патогенов. FFP можно получать из банка крови. Однако плазма, получаемая от профессионального производителя плазмы, такого как CLS Behring, Baxter или Octapharma, как правило, является предпочтительной, поскольку она обеспечивает гораздо более высокую патогенную безвредность благодаря методам удаления и дезактивации патогенов, включенным в их производственные процессы. Плазма от производителей плазмы, как правило, представляет собой пулированную и не содержащую патогенов плазму.
В вариантах осуществления, где не содержащая патогенов плазма используется в качестве исходных материалов для пленок на основе плазмы по настоящему изобретению, плазму предпочтительно подвергают обработке дезактивации вирусов, ее пастеризуют, облучают и/или подвергают нанофильтрации. Как правило, не содержащая патогенов плазма, используемая в качестве исходных материалов для пленок по настоящему изобретению, подвергается обработке растворителем/детергентом (S/D обработке) для дезактивации любых вирусных патогенов, возможно, содержащихся в ней.
В одном или нескольких предпочтительных вариантах осуществления, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению имеют толщину в пределах примерно от 0,005 до 0,1 мм или примерно от 0,005 до 0,09 мм, или примерно от 0,0075 до 0,08 мм, или примерно от 0,01 до 0,08 мм, или примерно от 0,01 до 0,07 мм, или примерно от 0,015 до 0,065 мм, или примерно от 0,02 до 0,06 мм, или примерно от 0,02 до 0,055 мм, или примерно от 0,02 до 0,05 мм, или примерно от 0,02 до 0,04 мм, или примерно от 0,02 до 0,03 мм, или примерно 0,01 мм, или примерно 0,02 мм, или примерно 0,03 мм, или примерно 0,04 мм, или примерно 0,05 мм, или примерно 0,06 мм.
Как уже указано выше, особенно преимущественную гибкость, эластичность и механическую прочность гибких пленок на основе плазмы по настоящему изобретению можно выразить с помощью количества складываний, стойкости при складываниях и разрывного давления пленок.
Простое исследование для определения гибкости пленки представляет собой оценку количества складываний пленки. Такое определение осуществляют посредством складывания одной половины пленки поверх другой половины, поворота складки на 90° и повторного складывания одной половины складки поверх другой, и так далее, пока пленка не разрушится или не разорвется. Каждое складывание, не вызывающее разрыва пленки, увеличивает количество складываний на 1. Это исследование является особенно полезным для оценки способности пленки на основе плазмы к сохранению целостности при изгибе с малым радиусом изгиба. Гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, отличаются количеством складываний, по меньшей мере, 1, например, по меньшей мере, 2, например, по меньшей мере, 3, например, по меньшей мере, 4, например, по меньшей мере, 5.
Другое исследование для определения гибкости пленки представляет собой оценку стойкости при складываниях. Такое определение осуществляют посредством многократного складывания одной половины пленки поверх другой половины и раскладывания ее до исходного положения. Стойкость при складываниях выражается с помощью количества таких повторений складывания/раскладывания и дает средства для оценки износостойкости. Гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, отличаются стойкостью при складываниях, по меньшей мере, 10, например, по меньшей мере, 20, например, по меньшей мере, 30, например, по меньшей мере, 40, например, по меньшей мере, 50, например, по меньшей мере, 60, например, по меньшей мере, 70, например, по меньшей мере, 80, например, по меньшей мере, 90, например, по меньшей мере, 100.
Еще один метод определения гибкости пленки представляет собой определение разрывного давления согласно Standard Test Method for Burst Strength of Surgical Sealants (ASTM-F 2392-04). Пленку закрепляют в зажиме согласно ASTM-F 2392-04, и зажим соединяют с насосом с преобразователем давления, установленным inline между насосом и зажимом, для измерения разрывного давления. Закачка текучей среды в систему повышает давление, пока пленка не разрывается. Полученное таким образом разрывное давление указывается как [мм рт. ст.]. Гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, отличаются разрывным давлением примерно от 50 до 1000 мм рт. ст. или примерно от 100 до 1000 мм рт. ст., или примерно от 100 до 800 мм рт. ст., или примерно от 100 до 600 мм рт. ст., или примерно от 100 до 500 мм рт. ст., или примерно от 100 до 450 мм рт. ст., или примерно 140 мм рт. ст., или примерно 150 мм рт. ст., или примерно 175 мм рт. ст., или примерно 200 мм рт. ст., или примерно 225 мм рт. ст., или примерно 250 мм рт. ст., или примерно 275 мм рт. ст., или примерно 300 мм рт. ст., или примерно 325 мм рт. ст., или примерно 350 мм рт. ст., или примерно 375 мм рт. ст., или примерно 400 мм рт. ст.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения получается гибкая пленка на основе плазмы, отличающаяся разрывным давлением, по меньшей мере, от 130 до 240 мм рт. ст., когда сухая пленка (примерно с 4% остаточной воды) имеет толщину пленки 0,03 мм, в частности, разрывным давлением от 170 до 240 мм рт. ст. для 0,03-мм пленки в сухом состоянии, или от 130 до 180 мм рт. ст. для 0,03-мм пленки (толщина пленки в сухом состоянии) после пропитки в течение 10 минут в водном растворе, содержащем 10% глицерина.
В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения получается гибкая пленка на основе плазмы, отличающаяся разрывным давлением, по меньшей мере, от 190 до 450 мм рт. ст., когда сухая пленка (примерно с 4% остаточной воды) имеет толщину пленки от 0,05 до 0,06 мм, в частности, разрывным давлением от 300 до 450 мм рт. ст. для 0,05-0,06-мм пленки в сухом состоянии или от 190 до 400 мм рт. ст. для 0,05-0,06-мм пленки (толщина пленки в сухом состоянии) после пропитки в течение 10 минут в водном растворе, содержащем 10% глицерина.
Прочность на разрыв определяют согласно с Standard Test Method for Strength Properties of Tissue Adhesives in Lap-Shear by Tension Loading (ASTM F2255-05) посредством измерения с помощью Instron Model 58R4505 Mechanical Test System с использованием динамометрического датчика с 50 Н (~ №10) и скорости траверсной головки 1,0 дюйм в минуту (2,5 см/мин). Образцы имеют форму гантели с узкой областью 0,25 дюйма (0,6 см) и помещаются в инструмент с проложенными каучуком пневматическими захватами с давлением, установленным при 20 фунт/кв. дюйм (1,2 кг/кв. см). Полученная прочность на разрыв приводится как фунт силы [lbf]. Гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, как правило, отличаются прочностью на разрыв, по меньшей мере, 0,25 lbf (приблизительно 1,1 Н), например, по меньшей мере, 0,5 lbf (приблизительно 2,2 Н), например, по меньшей мере, 0,75 lbf (приблизительно 3,3 Н), например, по меньшей мере, 1 lbf (приблизительно 4,4 Н), например, по меньшей мере, 1,2 lbf (приблизительно 5,28 Н), или прочностью на разрыв в пределах примерно от 0,25 lbf (приблизительно 1,1 Н) до 1,5 lbf (приблизительно 6,6 Н), например примерно от 0,5 lbf (приблизительно 2,2 Н) до 1,5 lbf (приблизительно 6,6 Н), например примерно от 0,7 lbf (приблизительно 3,08 Н) до 1,5 (приблизительно 6,6 Н), например примерно от 0,8 lbf (приблизительно 3,52 Н) до 1,5 lbf (приблизительно 6,6 Н), например примерно от 0,9 lbf (приблизительно 3,96 Н) до 1,5 lbf (приблизительно 6,6 Н), например примерно от 1 lbf (приблизительно 4,4 Н) до 1,5 lbf (приблизительно 6,6 Н).
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления гибкая пленка на основе плазмы по настоящему изобретению содержит один или несколько увлажнителей. В частности, пленка может покрываться такими увлажнителями, как глицерин, например, посредством пропитки в 10% растворе глицерина в течение 10-15 минут, для предотвращения возникновения хрупкости пленки при хранении. Можно также подмешивать увлажнитель во время свертывания плазмы, когда получают пленку. В таких вариантах осуществления, подмешивание 1-2% глицерина, по отношению к общей массе смеси для свертывания, как правило, достаточно для предотвращения появления хрупкости пленок во время хранения.
Альтернативно, пленка может упаковываться или пакетироваться после получения в контейнере с контролируемой влажностью для сохранения гибкости пленки. Пакет или контейнер может представлять собой пакет из фольги или другой контейнер для стерилизации. Как правило, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению предпочтительно стерилизуются с помощью гамма стерилизации, стерилизации электронным пучком и/или УФ стерилизации.
На пленку может наноситься адгезивная подкладка для обеспечения дополнительной адгезии пленки на ткани, если это желательно. Тем не менее, как правило, пленки на основе плазмы по настоящему изобретению и без адгезивной подкладки приклеиваются к тканям, на которые они наносятся, так что фиксирующие швы при исследовании in situ на животных, как правило, не требуются.
Как показано выше, неожиданно обнаружено, что гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению, имеющие описанные выше характеристики и признаки, могут с преимуществами получаться с помощью способов первого и второго аспектов настоящего изобретения, рассмотренных выше, то есть, что гибкость, эластичность и механическая прочность пленок на основе плазмы может быть улучшена с помощью конкретных способов получения.
А именно, в первом аспекте, настоящее изобретение относится к способу получения гибкой пленки на основе плазмы, включающему стадии:
(a) смешивания плазмы крови с более чем 2 Международными единицами (IU) тромбина на миллилитр (мл) плазмы и/или примерно с 0,65-1,3 мг ионов кальция на миллилитр (мл) плазмы чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования; и
(b) поддержания плазмы в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, при этом к плазме в форме для формования в течение этого времени или в конце его необязательно прикладывается давление.
Кроме того, неожиданно обнаружено, что гибкость пленок на основе плазмы можно улучшить посредством смешивания в форме для формования плазмы крови, по меньшей мере, с одним активатором системы коагуляции и приложения к плазме в форме для формования давления в течение времени необходимого для свертывания плазмы или в конце его. Форма для формования предпочтительно имеет объем и форму, пригодные при получении пленок по настоящему изобретению.
Как таковое, и согласно второму аспекту, настоящее изобретение относится к способу получения гибкой пленки на основе плазмы, включающему стадии:
(a) смешивания плазмы крови с активатором системы коагуляции, чтобы вызвать свертывание плазмы, где плазма содержится в форме для формования; и
(b) поддержания плазмы в форме для формования в течение времени необходимого для свертывания плазмы и формирования пленки, при этом к плазме в форме для формирования формования прикладывается давление примерно от 0,3 до 125 фунтов на квадратный дюйм (фунт/кв. дюйм) (0,2-7,8 кг/кв. см)в течение этого времени или в конце его.
В одном или нескольких предпочтительных вариантах осуществления, давление находится в пределах примерно от 30 до 95 фунт/кв. дюйм (1,9-5,9 кг/кв. см), или от 30 до 56 фунт/кв. дюйм (1,9-3,5 кг/кв. см), или от 40 до 50 фунт/кв. дюйм (2,5-3,1 кг/кв. см), или от 40 до 45 фунт/кв. дюйм (2,5-2,8 кг/кв. см), или составляет 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см). Предпочтительно, давление прикладывается только в течение части времени необходимого для плазмы, например, в течение 30-120 секунд, например, в течение 45-85 секунд, например, в течение 50-70 секунд, например, в течение 60 секунд.
Как правило, тромбин в способе по первому аспекту или активатор системы коагуляции в способе по второму аспекту присутствует в избытке, так что время необходимое для свертывания плазмы является относительно коротким, оно находится в пределах примерно от 5 до 20 минут от смешивания тромбина или активатора системы коагуляции с плазмой или примерно от 10 до 20 минут, или примерно от 12 до 18 минут. В некоторых вариантах осуществления время необходимое для свертывания плазмы составляет 15 минут. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления давление прикладывается примерно через 5-20 минут после смешивания тромбина или активатора системы коагуляции с плазмой или примерно через 10-20 минут, или примерно через 12-18 минут, или примерно через 15 минут.
В этом отношении, примечательно, что индуцирование свертывания может достигаться в некоторых случаях просто посредством рекальцификации плазмы. Альтернативно, свертывание может вызываться добавлением агентов, которые преобразуют фибриноген в плазме в фибрин, таких как тромбин и тромбиноподобные активаторы коагуляции. В дополнение к этому, чтобы вызвать свертывание плазмы, может активироваться внешний путь системы коагуляции. Такие внешние активаторы представляют собой фосфолипиды, фосфолипиды, содержащие фосфатидилсерин и фосфатидилхолин, тканевый фактор, рекомбинантный тканевый фактор, такой как Dade Innovin, диатомовую землю или другие обычные активаторы внешнего пути.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления способов по второму аспекту, активатор системы коагуляции предпочтительно выбирается из одного или нескольких элементов группы, состоящей из: тромбина и тромбиноподобных активаторов коагуляции; кальция; преобразователей фибриногена в фибрин; фосфолипидов; фосфатидилхолина; тканевого фактора ; диатомовой земли; цеолитов; каолина; Фактора VIIa и Фактора Xa. В некоторых вариантах осуществления способов по второму аспекту активатор системы коагуляции представляет собой тромбин и/или кальций.
В некоторых вариантах осуществления способов по первому или второму аспекту, плазму смешивают примерно с 0,1-10 Международными единицами (IU) тромбина на миллилитр (мл) плазмы и/или примерно с 0,65-1,3 мг ионов кальция на миллилитр (мл) плазмы. Предпочтительно, плазму смешивают примерно с 0,1-7 IU тромбина на мл плазмы или примерно с 0,15-6 IU тромбина на мл плазмы, или примерно с 1-5 IU тромбина на мл плазмы, или примерно с 2-4 IU тромбина на мл плазмы, или примерно с 2,5-3,5 IU тромбина на мл плазмы, или примерно с 2,9-3,1 IU тромбина на мл плазмы, или плазму смешивают с более чем 2 IU тромбина на мл плазмы, например, более чем 2,5 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 2,75 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 3 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 3,25 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 3,5 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 3,75 IU тромбина на мл плазмы, например, с более чем 4 IU тромбина на мл плазмы и/или примерно с 0,65-1,3 мг ионов кальция на миллилитр (мл) плазмы.
В некоторых вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, стадии смешивания и поддержания плазмы осуществляются в диапазоне температур от комнатной температуры примерно до 40°C или от 36 до 38°C, или при 37°C.
Кроме того, в некоторых других вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, к плазме в форме для формования прикладывается давление с помощью пластины для формирования пленки, предпочтительно, пластина прижимается к плазме в форме для формования с помощью пневматического пресса.
В некоторых вариантах осуществления, способы по первому или второму аспекту дополнительно включают стадию:
(c) удаления избытка жидкости из формы для формования.
В ходе этой дополнительной стадии, избыточная жидкость, как правило, экструдируется из свернувшейся или сворачивающейся плазмы, когда прикладывается давление. Предпочтительно, избыточная жидкость удаляется с помощью системы удаления жидкости, необязательно выбранной из: системы отсоса, такой как система вакуумного отсоса; и системы, содержащей материалы адсорбенты, такие как впитывающие ткани, полотенца, мембраны или гели.
Например, и обращаясь к Фигуре 4, здесь, давление может прикладываться к сворачивающейся смеси (5) с помощью твердой непористой пластины (6), которая чуть меньше, чем наружный периметр формы для формования (7). Затем пластина помещается в систему удаления жидкости (8), которая удалит избыточную водную часть пленки на основе плазмы в ходе сжатия. Когда система удаления водной части (8) находится на месте к пластине (6) прикладывается равномерное усилие, например, с помощью поршня (9) с усилием, направленным вниз пневматического пресса. Усилие на пластине, придавливающее вниз образующуюся смесь для свертывания в форме для формования, может быть очень низким, например, достигать 5 фунтов (2 кг), или усилие может быть высоким, например, 2000 фунтов (800 кг). В ходе приложения давления избыточная водная часть пленки на основе плазмы, которая содержит в основном сыворотку крови и избыточную воду, экструдируется или ʺвыжимаетсяʺ, так что избыточная водная часть пленки на основе плазмы вытесняется к наружному периметру пластины (6). В ходе этой стадии вытеснения водная фаза удаляется с помощью системы удаления жидкости (8) посредством вакуумного отсоса и может также собираться с помощью впитывающего материала (10). В конце сжатия, ʺвыжатаяʺ пленка может удаляться из контейнера как плоская, сильно спрессованная, имеющая низкое содержание воды пленка высокой прочности.
В некоторых вариантах осуществления, способы по первому или второму аспектам дополнительно включают стадию:
(d) сушки пленки на основе плазмы.
В ходе этой дополнительной стадии, пленку, как правило, сушат при комнатной температуре и/или в условиях отрицательного давления, например, в ламинарном боксе или вакуумной установке, или при повышенной температуре, например, в печи.
В некоторых вариантах осуществления полученная пленка дополнительно содержит, по меньшей мере, один фармацевтически активный агент, предпочтительно, агент однородно распределяется в пленке или наносится на пленку местным образом и может выбираться из группы, состоящей из: антибиотических агентов; противовоспалительных агентов; противоинфекционных агентов; факторов роста; хемокинов; иммуномодуляторов; ранозаживляющих агентов; активаторов системы коагуляции; антикоагуляционных агентов; противоспаечных агентов; антифибринолитических агентов; пенициллина; серебра; хлоргексидина; хемокинов, полученных из стромальных клеток; фактора 1 альфа, полученного из стромальных клеток; фактора 1 бета, полученного из стромальных клеток; фибриногена; Фактора VIIa; CXCL-12; гепарина; апротинина; транексамовой кислоты; неионных поверхностно-активных веществ; Pluronic F68; TWEEN 80; ингибиторов COX-2 и нимесулида.
В некоторых других вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, по меньшей мере, один фармацевтически активный агент однородно распределяется в пленке. В таких вариантах осуществления, стадия смешивания плазмы крови с тромбином и/или с кальцием или с активатором системы коагуляции также включает смешивание плазмы, по меньшей мере, с одним фармацевтически активным агентом с получением смеси для свертывания при условии, что этот агент не может представлять собой антикоагуляционный агент. Как правило, по меньшей мере, один фармацевтически активный агент может составлять до 5% от общей массы смеси для свертывания, например, до 2%, предпочтительно, его содержание находится в пределах между 1 и 2%.
В этом отношении, примечательно, что подмешивание агентов до 5% от общей массы смеси для свертывания не ослабляет механической стабильности полученных пленок. Как показано более подробно в Примерах, ниже, добавление 1-2% противоспаечных агентов достаточно, чтобы пленки демонстрировали отсутствие спаек или очень слабые спайки в исследованиях на животных. Для животной модели развития спаек, противоспаечные слои по настоящему изобретению приводят к тому, что меньше 25% от поверхности изначально наносимой раны покрыто спайками, в частности, они демонстрируют 0-15% покрытия поверхности раны. В противоположность этому, наилучшая коммерчески доступная противоспаечная пленка, исследуемая на этой же животной модели, относительно развития спаек, приводит к покрытию поверхности раны, по меньшей мере, 40%.
В некоторых других вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, по меньшей мере, один фармацевтически активный агент наносится местным образом на пленку, агент необязательно может наноситься с помощью нанесения покрытия распылением, сушки распылением, нанесения кистью и/или пропитки. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, агент может представлять собой смесь белков, содержащую активаторы системы коагуляции, такую как плазма.
В некоторых других вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, пленка может содержать несколько слоев пленки, полученных посредством последовательного повторения стадий способов по настоящему изобретению в форме для формования, с формированием многослойной пленки на основе плазмы, где каждый отдельный слой пленки необязательно может не содержать фармацевтически активных агентов или содержать одинаковые или различные фармацевтически активные агенты. Предпочтительно, несколько фармацевтически активных агентов могут наноситься местным образом одновременно или последовательно.
В некоторых других вариантах осуществления способов по первому и второму аспекту, стадия смешивания плазмы крови с тромбином и/или кальцием или с активатором системы коагуляции также включает смешивание плазмы с агентом, повышающим степень поперечной сшивки между фибриновыми полимерами, генерируемую в ходе свертывания плазмы, предпочтительно, агент представляет собой хлорид кальция.
Смешивание с дополнительным хлоридом кальция приводит к формированию сильно поперечно сшитых пленок на основе плазмы, которые являются стойкими к деградации в 8M растворе мочевины в течение дней, недель, месяцев. Как таковой, хлорид кальция не должен добавляться если пленка на основе плазмы, которая должна быть получена, должна представлять собой пленку, деградирующую быстрее. В отсутствие хлорида кальция фибрин в пленке на основе плазмы имеет очень низкую степень поперечной сшивки и быстро деградирует. Например, пленка с низкой степенью поперечной сшивки растворяется в 8M растворе мочевины в пределах примерно 4 часов. Несмотря на то, что сказано выше, даже если они имеют высокую степень поперечной сшивки, пленки по настоящему изобретению являются полностью биодеградируемыми.
Плазма крови, пригодная для применения в способах по первому и второму аспекту может представлять собой плазму крови животного или человека. Как правило, плазма представляет собой свежезамороженную плазму (FFP) или представляет собой плазму,не содержащую патогенов. В способах, где используют плазму, не содержащую патогенов, плазму подвергают обработке для дезактивации вирусов, предпочтительно, обработке растворителем/детергентом (S/D обработке), и/или пастеризуют, и/или облучают, и/или подвергают нанофильтрации.
В некоторых вариантах осуществления, пленка на основе плазмы по настоящему изобретению имеет содержание воды примерно 3-6% масс. или примерно 4-5% масс., или примерно 4% масс. Остаточное содержание воды определяется посредством оценки массы пленки до определения (общая масса) и после сушки в печи при 105°C до постоянной массы. Разница масс представляет собой массу остаточной воды (до сушки в печи) и приводится как % остаточной воды, по отношению к общей массе до сушки в печи. Пленки по настоящему изобретению, имеющие остаточное содержание воды примерно 4%, упоминаются как в Примерах, ниже, как ʺсухиеʺ пленки, при этом такие пленки после пропитки в течение 10 минут в водном растворе, содержащем 10% глицерина, упоминаются как ʺпропитанныеʺ пленки.
Способы по первому и второму аспектам являются пригодными для получения гибких пленок на основе плазмы, имеющих толщину в пределах примерно от 0,005 до 0,1 мм или примерно от 0,005 до 0,09 мм, или примерно от 0,0075 до 0,08 мм, или примерно от 0,01 до 0,08 мм, или примерно от 0,01 до 0,07 мм, или примерно от 0,015 до 0,065 мм, или примерно от 0,02 до 0,06 мм, или примерно от 0,02 до 0,055 мм, или примерно от 0,02 до 0,05 мм, или примерно от 0,02 до 0,04 мм, или примерно от 0,02 до 0,03 мм, или примерно 0,01 мм, или примерно 0,02 мм, или примерно 0,03 мм, или примерно 0,04 мм, или примерно 0,05 мм, или примерно 0,06 мм. Несмотря на это, пленки с другой толщиной также могут быть получены простого ап- или даун-масштабирования объемов компонентов, используемых в способах первого и второго аспекта.
Кроме того, толщина и прочность пленки соответствуют величине давления, приложенного к верхней пластине, и количеству используемой плазмы. Пленки, полученные в форме для формования 4 дюйма х 4 дюйма (10 см × 10 см), находятся под давлением в течение 30-120 секунд под действием силы 700 фунтов, то есть, примерно 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см)или 300 кПа, имеют толщину примерно 0,02 мм, когда их получают из 30 мл смеси для свертывания (такие пленки упоминаются ниже как ʺSUBC 30ʺ). Пленки, полученные соответствующим образом, но из 60 мл смеси для свертывания имеют толщину примерно 0,03 мм (такие пленки упоминаются ниже, как ʺSUBC 60ʺ), и пленки, полученные соответствующим образом, но из 120 мл смеси для свертывания, имеют толщину 0,05-0,06 мм (такие пленки упоминаются ниже, как ʺSUBC 120ʺ).
Как уже описано выше, пленки по настоящему изобретению, то есть, пленки, полученные с помощью способов по первому и второму аспекту, отличаются преимущественной гибкостью и, следовательно: количеством складываний, по меньшей мере, 1, например, по меньшей мере, 2, например, по меньшей мере, 3, например, по меньшей мере, 4, например, по меньшей мере, 5; стойкостью при складываниях, по меньшей мере, 10, например, по меньшей мере, 20, например, по меньшей мере, 30, например, по меньшей мере, 40, например, по меньшей мере, 50, например, по меньшей мере, 60, например, по меньшей мере, 70, например, по меньшей мере, 80, например, по меньшей мере, 90, например, по меньшей мере, 100; и/или разрывным давлением примерно от 50 до 1000 мм рт. ст. или примерно от 100 до 1000 мм рт. ст., или примерно от 100 до 800 мм рт. ст., или примерно от 100 до 600 мм рт. ст., или примерно от 100 до500 мм рт. ст., или примерно от 100 до 450 мм рт. ст., или примерно 140 мм рт. ст., или примерно 150 мм рт. ст., или примерно 175 мм рт. ст., или примерно 200 мм рт. ст., или примерно 225 мм рт. ст., или примерно 250 мм рт. ст., или примерно 275 мм рт. ст., или примерно 300 мм рт. ст., или примерно 325 мм рт. ст., или примерно 350 мм рт. ст., или примерно 375 мм рт. ст., или примерно 400 мм рт. ст.
В другом предпочтительном варианте осуществления гибкие пленки на основе плазмы отличаются уменьшенным разрывным давлением после пропитки в водном растворе, содержащем 10% глицерина, в течение 10 минут. В частности, такие пропитанные пленки отличаются разрывным давлением, составляющим 75% - 80% от давления соответствующей ʺсухойʺ пленки, то есть, пленки, имеющей остаточное содержание воды примерно 4% и имеющей такую же толщину в сухом состоянии.
В другом предпочтительном варианте осуществления, гибкая пленка на основе плазмы отличается отношением разрывное давление/толщина пленки от 5000 до 9000 мм рт. ст./мм толщины пленки в сухом состоянии (то есть, имея остаточное содержание воды примерно 4%), имея толщину пленки от 0,05 до 0,06 мм, или отношением разрывное давление/толщина пленки от 6000 до 7500 мм рт. ст./мм толщины пленки в сухом состоянии (то есть, имея остаточное содержание воды примерно 4%), имея толщину пленки 0,03 мм.
Соответственно и как уже указано выше, гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению получают с помощью способов первого и второго аспекта. Несмотря на это, гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению могут также отличаться их конкретными признаками, уже указанными выше.
В четвертом аспекте, настоящее изобретение как таковое относится к гибкой пленке на основе плазмы, содержащей в пределах между 0,1 и 10 IU тромбина на мл плазмы и имеющей толщину в пределах примерно от 0,005 до 0,1 мм, где гибкая пленка отличаются количеством складываний, по меньшей мере, 1, например, по меньшей мере, 2, например, по меньшей мере, 4, например, по меньшей мере, 5. Предпочтительно, гибкая пленка на основе плазмы отличаются стойкостью при складываниях, по меньшей мере, 10, например, по меньшей мере, 20, например, по меньшей мере, 30, например, по меньшей мере, 40, например, по меньшей мере, 50, например, по меньшей мере, 60, например, по меньшей мере, 70, например, по меньшей мере, 80, например, по меньшей мере, 90, например, по меньшей мере, 100 и/или разрывным давлением примерно 50-1000 мм рт. ст. или примерно 100-1000 мм рт. ст., или примерно 100-800 мм рт. ст., или примерно 100-600 мм рт. ст., или примерно 100-500 мм рт. ст., или примерно 100-450 мм рт. ст., или примерно 140 мм рт. ст., или примерно 150 мм рт. ст., или примерно 175 мм рт. ст., или примерно 200 мм рт. ст., или примерно 225 мм рт. ст., или примерно 250 мм рт. ст., или примерно 275 мм рт. ст., или примерно 300 мм рт. ст., или примерно 325 мм рт. ст., или примерно 350 мм рт. ст., или примерно 375 мм рт. ст., или примерно 400 мм рт. ст.
В частности, гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению являются пригодными для применения в качестве кровоостанавливающего средства, предпочтительно, в качестве кровоостанавливающего средства для остановки кровотечения, от легкого до тяжелого, и/или для остановки артериального кровотечения. Предпочтительно, пленки являются также пригодными: для применения в качестве противоспаечного слоя для уменьшения или предотвращения развития вызванных хирургической операцией спаек; для применения в качестве ранозаживляющего пластыря; для применения в качестве повязки на раны или для применения при пластике грыжи.
Примеры
Настоящее изобретение далее описывается с помощью следующих далее неограничивающих Примеров.
Пленки SUBC
SUBC 30
2+
2+
Пленку на основе плазмы высокой гибкости получают посредством смешивания 30 мл плазмы либо с 280-320 мкл тромбина (300 IU/мл), либо с 280-320 мкл раствора кальция (2 M Ca), либо с 280-320 мкл тромбина (300 IU/мл) вместе примерно с 280-320 мкл раствора кальция (2M Ca), последующего инкубирования смеси при 25-37°C в течение примерно 15 минут в форме для формования 4 дюйма х 4 дюйма (10 см × 10 см) и приложения давления к полученной свернувшейся плазме в форме для формования с помощью давления примерно 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см) в течение примерно 60 секунд.
Наконец, полученную пленку сушат в ламинарном вытяжном боксе в течение ночи до остаточного содержания влажности примерно 4%. Эта пленка указывается в Таблицах 3 и 4, ниже, как ʺSUBC 30 (сухая)ʺ.
SUBC 60
2+
2+
Пленку на основе плазмы высокой гибкости получают посредством смешивания 60 мл плазмы либо с 580-620 мкл тромбина (300 IU/мл), либо с 580-620 мкл раствора кальция (2 M Ca), либо с 580-620 мкл тромбина (300 IU/мл) вместе примерно с 580-620 мкл раствора кальция (2 M Ca), последующего инкубирования смеси при 25-37°C в течение примерно 15 минут в форме для формования 4 дюйма × 4 дюйма (10 см × 10 см) и приложения давления к полученной свернувшейся плазме в форме для формования с помощью давления примерно 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см) в течение примерно 60 секунд.
Наконец, полученную пленку сушат в ламинарном вытяжном боксе в течение ночи до остаточного содержания влажности примерно 4%. Эта пленка указывается в Таблицах 3 и 4, ниже, как ʺSUBC 60 (сухая)ʺ.
Некоторые пленки SUBC 60 (сухие) затем пропитывают в 10% растворе глицерина в течение 10 минут. Такие пленки указаны как ʺSUBC 60 (пропитанные)ʺ.
SUBC 120
2+
2+
Пленку на основе плазмы высокой гибкости получают посредством смешивания 120 мл плазмы либо с 1180-1220 мкл тромбина (300 IU/мл), либо с 1180-1220 мкл раствора кальция (2 M Ca), либо с 1180-1220 мкл тромбина (300 IU/мл) вместе примерно с 1180-1220 мкл раствора кальция (2 M Ca), последующего инкубирования смеси при 25-37°C в течение примерно 15 минут в форме для формования 4 дюйма × 4 дюйма (10 см × 10 см) и приложения давления к полученной свернувшейся плазме в форме для формования с помощью давления примерно 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см) в течение примерно 60 секунд.
Наконец, полученную пленку сушат в ламинарном вытяжном боксе в течение ночи до остаточного содержания влажности примерно 4%. Эта пленка указывается в Таблицах 3 и 4, ниже, как ʺSUBC 120 (сухая)ʺ.
Затем некоторые SUBC 120 (сухие) пленки пропитывают в 10% растворе глицерина в течение 10 минут. Такие пленки указаны как ʺSUBC 120 (пропитанные)ʺ.
CE пленки
Сравнительный пример 1 - CE-1
Одна из пленок на основе плазмы крови известна из EP 0485210 A2. Способ получения ʺ4. Мембрана на основе плазмыʺ говорит о смешивании 50 мл цитратной плазмы с 8-10 единицами NIH тромбина в устройстве для формования при 4°C и о нагреве до комнатной температуры или 37°C. Полученные пленки могут в принципе сушиться в течение ночи в ламинарном вытяжном боксе, прессоваться или обезвоживаться. Для получения наиболее сравнимых результатов смесь ап-масштабируют до 60 мл. В частности, 60 мл плазмы смешивают с 12 единицами NIH тромбина. Смесь нагревают до 37°C в форме для формования 4 дюйма × 4 дюйма (10 см × 10 см) и выдерживают в течение 2 часов при этой температуре. Наконец пленки прессуют с помощью давления 44 фунт/кв. дюйм (2,7 кг/кв. см) в течение 60 секунд, удаляют избыточную воду и сыворотку, и пленки сушат в течение ночи в ламинарном вытяжном боксе.
Полученные таким образом пленки показаны в Таблицах 1 и 2 как ʺCE-1 60 (сухие)ʺ, и пленки, которые дополнительно пропитывают в 10% растворе глицерина в течение 10 минут, указаны как ʺCE-1 60 (пропитанные)ʺ.
Сравнительный пример 2 - CE-2
Заявка на патент US 8529959 B2 описывает лист, содержащий пластик, полученный из плазмы крови, который является пластичным, эластичным или и тем, и этим.
Исходные материалы (порошок свернувшейся плазмы) получают, как описано в Примере 11, посредством свертывания 52,6 части плазмы при добавлении 1 части 1M раствора хлорида кальция в воде и лиофилизации свернувшейся плазмы в течение 72 часов при пониженном давлении 6 мТорр. Порошок плазмы получают посредством измельчения высушенного материала в механическом измельчителе, просеивая затем через 150-мкм сито. Другие процедуры для приготовления и формирования полученного из плазмы пластика являются следующими. Для приготовления пластика, 650 мг порошка плазмы и 350 мг глицерина (в качестве пластификатора) добавляют в малый химический стакан. Компоненты перемешивают до гомогенности и дают им возможность для инкубирования при комнатной температуре в замкнутом контейнере в течение приблизительно 21 часов. Полученную в результате "пасту" формуют в прессе при 59°C. Реального описания формирования листа или пленки не приводится, но заявка на патент US 8529959 B2 ссылается на заявку на патент США, серийный № 11/495115 (US 11/495115), относительно обработки эластичных листов.
Указанная заявка на патент, к сожалению, содержит информацию только о получении фибриногеновых и желатиновых пленок. Посредством объединения концепций, описанных в Примерах 24, 16, 2 и 1, можно представить себе общий способ смешивания порошка (измельченный фибрин, измельченная свернувшаяся плазма, измельченный желатин или неполимеризованный фибриноген) с различными количествами пластификатора (глицерина) с получением ʺпастыʺ и формования пасты в нагретом прессе. Указано также, что пленки, полученные из пасты, содержащей 12,5% глицерина, являются наиболее гибкими, и что пленки могут быть получены при любом давлении от 1000 до 8000 фунтов (400-3200 кг).
Таким образом, решено предпринять эксперименты с неполимеризованным фибриногеном и порошком свернувшейся плазмы, приготовленным, как в заявке на патент US 8529959 B2, с подмешиванием 12,5% глицерина, как рассмотрено в US 11/495115, или 35% как рассмотрено в заявке на патент US 8529959 B2, и завершения процесса получения посредством формования под давлением в даун-масштабированной форме для формования 2 дюйма × 1,6 дюйма (5×4 см) при 59°C и 5000 фунтах (2000 кг). Начальные эксперименты с пастами, содержащими 35% глицерина, показали, что полученные пленки являются очень жесткими, очень малогибкими, и что с такой пленкой невозможно получить даже одного складывания. Пленки, полученные с 12,5% глицерина, являются до некоторой степени гибкими, и этот подход исследуется дальше. Пленки, полученные с 12,5% воды, которые также рассматриваются в патенте (заявке) как пластификатор, но без глицерина, показывают практическое отсутствие когезии.
На основе начального эксперимента с пленками с относительно плохими свойствами решено получать пленки, сравнимые по содержанию плазмы с 120-мл пленками по настоящему изобретению. Для получения наиболее сравнимых результатов, часть, эквивалентная по площади форме для формования 4 дюйма × 4 дюйма (10 см × 10 см), уменьшенная пропорционально площади даун-масштабированной формы для формования, из 120 мл плазмы, свертывается и лиофилизируется, как рассмотрено в заявке на патент US 8529959 B2. Масса этого сгустка, то есть, 88-92 мг, в частности, примерно 90 мг, определяется и служит в качестве массы порошкообразной свернувшейся плазмы для использования в экспериментах, соответствующих 120-мл пленке. Пленки являются до некоторой степени пластичными, гибкими и почти подходят для того, чтобы пережить одно складывание в исследовании количества складываний, но в конечном счете, они не могут достичь количества складываний 1. Можно определить разрывное давление, но результаты для сухих пленок настолько плохие, что они не исследуются в качестве пропитанных пленок. Сравнительные пленки, соответствующие 120-мл пленке, показаны в Таблицах 1 и 2 как ʺCE-2 120 (сухие)ʺ.
Сравнительный пример 3 (CE-3)
CE-3 представляет собой коммерчески доступную противоспаечную пленку, используемую в противоспаечном исследовании на животных.
Сравнительный пример 4 (CE-4)
CE-4 представляет собой коммерчески доступную противоспаечную пленку, используемую в противоспаечном исследовании на животных.
Противоспаечные пленки 1-4
Пленка 1
Сначала получают пленку согласно приготовлению пленки SUBC 120 (сухой), описанной выше.

Затем пленку пропитывают перед использованием в растворе противоспаечного агента. В частности, пленку SUBC 120 (сухую) пропитывают в 7,5 мл раствора, состоящего из 0,5 мл Tween-80, 0,25 мл глицерина, 15 мг гепарина и 6,75 мл воды. Пропитанные таким образом пленки Tween-80 используют в противоспаечном исследовании на животных, и результаты проводятся в Таблице 2, указанные как ʺПленка 1ʺ.
Пленка 2
Сначала получают пленку согласно приготовлению пленки SUBC 120 (сухой), описанной выше.

Однако, в ходе получения пленки SUBC 120 (сухой) к плазме подмешивают 1-2% противоспаечного агента, например, Pluronic F68. Эта пленка может использоваться либо как сухая пленка, либо как пропитанная пленка после пропитки. Пропитка 120-мл пленки на основе плазмы, содержащей Pluronic F68 в 7,5 мл раствора, состоящего из 0,75 мл глицерина, 15 мг гепарина и 6,75 мл воды, дает хороший противоспаечный барьер.
Таким образом пропитанные плюроником пленки используют в противоспаечном исследовании на животных, и результаты приведены в Таблице 2, указанные как ʺПленка 2ʺ.
Пленка 3
Сначала получают пленку согласно приготовлению пленки SUBC 120 (сухой), описанной выше.

Однако в ходе приготовления пленки SUBC 120 (сухой) к плазме подмешивают 1-2% двух противоспаечных агентов с одинаковой массой. А именно, к плазме подмешивают равные массовые количества Tween-80 и Pluronic F68.
Такие пленки используют в противоспаечном исследовании на животных, и результаты, приведены в Таблице 2, указанные как ʺПленка 3ʺ.
Пленка 4
Сначала получают пленку согласно приготовлению пленки SUBC 120 (сухой), описанной выше.
2
Затем, на пленку наносятся местным образом противоспаечные агенты. А именно, ингибитор COX-2, такой как Nimesulide, наносят при 1 мг/см посредством сушки распылением, и эту пленку используют как сухую пленку.
2
Такие пленки с Nimesulide, который наносят местным образом при 1 мг/см, используют в противоспаечном исследовании на животных, и результаты приведены в Таблице 2, указанные как ʺПленка 4ʺ.
Пример 1
Кровоостанавливающие пленки - исследование на животных для определения эффективности.
Получают пленки на основе плазмы высокой гибкости для использования в качестве кровоостанавливающих средств согласно приготовлению пленки SUBC 120 (сухой), описанной выше.
Затем пленки модифицируют посредством нанесения местным образом тромбином для быстрого кровоостанавливающего действия. Также получают сходные пленки с фибриногеном, высушенным распылением, на одной стороне пленки, с последующим покрытием фибриногена слоем крахмала, и наконец, сушки распылением тромбина поверх крахмала.
Эффективность кровоостанавливающих пленок оценивают на животной модели свиней посредством индуцирования повреждения селезенки, почек или печени с использованием шаблонного устройства, вызывающего кровотечение, которое создает мелкие раны, диаметром приблизительно 1 см.
Оценку эффективности осуществляют после того, как пленка прижимается вручную на ране на 3 минуты, и ожидая в течение 15 минут после этого без прижима. Исследуемые гибкие пленки на основе плазмы по настоящему изобретению содержат кровоостанавливающий фармацевтически активный агент, нанесенный местным образом. А именно, исследуют кровоостанавливающие средства, содержащие нанесенные местным образом тромбин, активированный фактор коагуляции VII (FVIIa) или сочетание тромбина и фибриногена.
Кровоостанавливающие пленки с тромбином или с сочетанием тромбина и фибриногена являются наиболее эффективными, и они останавливают кровотечения в пределах 3 минут. Пленки с FVIIa являются чуть менее эффективными, поскольку особенно сильное артериальное кровотечение нельзя полностью остановить с помощью пленки FVIIa через несколько минут, для остановки этого кровотечения, в конечном счете, используют пленку, покрытую тромбином, по настоящему изобретению, которая останавливает это артериальное кровотечение.
Пример 2
Противоспаечные слои - исследование на животных для определения эффективности.
Оценивают эффективность противоспаечных слоев по настоящему изобретению на животной модели крыс. Для каждого животного, наносятся стандартные хирургические повреждения (площадью 2,0 × 2,5 см) как на правую, так и на левую боковую стенку брюшной полости и рогов матки с использованием цитощетки пока не появится точечное кровотечение.
Листы, предназначенные для исследования или контроля, применяются для перекрывания царапины на каждом роге матки и пришиваются по месту. Контрольные пленки представляют собой коммерчески доступные импланты со специальной противоспаечной функцией. В день 7 после хирургической операции все животные гуманно эвтаназируются и подвергаются некропсии для общей оценки спаек.
Качество и количество спаек оценивают следующим образом:
Количество: количество оценивают согласно частоте появления травмированных участков со спайками и относительной площади спаек (которая вычисляется как доля спаек и переводится в процент от травмированной площади).
Качество: качество вызываемых спаек оценивают согласно Таблице 1. Результаты по качеству и количеству представлены в Таблице 2. Качество спайки считается ʺпленочнымʺ, если масштаб линейки виден сквозь ткань, а в ином случае считается ʺплотнымʺ.
Таблица 1 (Оценки качества спаек)
Баллы
Описание
0
Спаек нет
1
Сосудистая спайка
2
Пленочная сосудистая спайка
3
Плотная, сосудистая спайка, рог матки не виден из-за адгезиогенеза
Таблица 2 (Качество и количество противоспаечных результатов)
Противоспаечная пленка
Качество
Количество [% площади поверхности, покрытой спайками]
Пленка 1
0
0
Пленка 2
1
10-15
Пленка 3
0-1
0-15
Пленка 4
0-1
0-10
CE-3
2-3
70-100
CE-4
2
40
Пленки 1-4 по настоящему изобретению работают значительно лучше, чем коммерчески доступные противоспаечные пленки.
Пример 3
Оценка гибкости пленки.
Гибкость пленок на основе плазмы по настоящему изобретению, а именно пленок SUBC 30 (сухих), SUBC 60 (сухих) и (пропитанных), SUBC 120 (сухих) и (пропитанных) и сравнительных пленок CE-1 60 (сухих) и (пропитанных) и CE-2 120 (сухих) оценивают посредством определения количества складываний, стойкости при складываниях и разрывных давлений, как описано выше.
Результаты
Таблица 3 (количество складываний, стойкость при складываниях)
Пленка - мл
Количество складываний
Стойкость при складываниях
SUBC 30 (сухая)
5
100
SUBC 60 (сухая)
5
100
SUBC 60 (пропитанная)
5
100
SUBC 120 (сухая)
5
100
SUBC 120 (пропитанная)
5
100
CE-1 60 (сухая)
0
0
CE-1 60 (пропитанная)
0
0
CE-2 120 (сухая)
0
0
Поскольку ни одна из сравнительных пленок CE-1 и CE-2 не переживает одного складывания без разрушения, стойкость при складываниях определить невозможно.
Таблица 4 (Разрывное давление)
Пленка - мл
Толщина [мм]
Разрывное давление [мм рт. ст.]
Среднее разрывное давление [мм рт. ст.]
Разрывное давление/мм толщины
SUBC 30 (сухая)
0,02
SUBC 60 (сухая)
0,03
186-218
198
6200-7267
SUBC 60 (пропитанная)
149-162
156
SUBC 120 (сухая)
0,05-0,06
318-441
404
5300-8820
SUBC 120 (пропитанная)
194-400
314
CE-1 60 (сухая)
0
CE-1 60 (пропитанная)
10-33
CE-2 120 (сухая)
20-25
Пленки CE-1 (сухие) являются настолько хрупкими и негибкими, что они не могут быть помещены в зажим без их разрушения. Таким образом, определить разрывное давление для этих пленок невозможно.
Специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение, имеющему преимущество концепций, представленных в приведенном выше описании и в прилагаемых чертежах, придет в голову множество модификаций и других вариантов осуществления настоящего изобретения, приведенного в настоящем описании. Следовательно, необходимо понять, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными вариантами осуществления и что модификации и другие варианты осуществления, как предполагается, должны заключаться в рамках прилагаемой формулы изобретения. Хотя в настоящем документе используются конкретные термины, они используются только в общем и описательном смысле, а не для целей ограничения.
Список ссылочных обозначений
1
Пленка на основе плазмы
2
Фармацевтически активный агент
3
Дополнительный фармацевтически активный агент - высушенная распылением плазма
4
Дополнительный фармацевтически активный агент - высушенный распылением активатор системы коагуляции
5
Смесь для свертывания
6
Твердая непористая пластина
7
Форма для формования
8
Система удаления жидкости, такая как вакуумный отсос
9
Поршень с усилием, направленным вниз
10
Впитывающий материал