Первичные повреждения ДНК и апоптоз клеток хозяина при экспериментальном описторхозе

перезимовывать, сохраняя свои инвазионные свойства. Данную особенность необходимо учитывать при разработке мер терапии и профилактики фасциолеза в изучаемом регионе.

Литература: 1.Горохов В.В. // Ветеринария. 1990. - № 3 - С. 8 - 12. 2. Горохов В.В. // Мат. докл. научн. конф. « Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии». - М., 1997. - С. 41 - 43. З.Жадин В.И. Моллюски пресных и солоноватых вод СССР - М.Л., 1952 .- С. 166-178. 4. Круглов Н.Д., Старобогатов Я.И.//Результаты и перспективы их исследований. Л.: Наука, 1987. - Сб. 8. - С. 68-70. 4. Кузмичев В.В. //Автореф. дисс... докт. вет. наук. - Уфа. - 1997. - 39 с.

Dynamics of Distribution of Lymnaea Truncatula, Muller, 1774 and their contamination cercaria of Fastsiola in Biothopes of Pastures of The Vologda Area. Kryazhev A.L. N.A. Vereshagin Vologodsk State Academy of Dairy Husbandry.

Summary: As a result of researches it was established that the first individuals small Lymnaea truncatula in biotopes of pastures of the Vologda region start appearing in May, and cercaria of Fasciola in them found in the first decade of June. The maximum rise of an contaminationt of mollusks by cercaria falls on July-August. This fact testifies that in klimato-geographical conditions of the Vologda region of a cercaria of Fasciola hepatica, L., 1758 are capable to winter, keeping the invasive properties. This feature needs to be considered when developing measures of therapy and prevention Fascioliasis in the studied region.

ПЕРВИЧНЫЕ ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК И АПОПТОЗ КЛЕТОК ХОЗЯИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ

Кужель Д.К., Бекиш В.Я., Зорина В.В.

УО “Витебский государственный медицинский университет”, Беларусь

Введение. Впервые в 1981 году Н.Н. Ильинских показал, что инвазия метацеркариями Opisthorchis felineus вызывает в клетках костного мозга золотистых хомяков повышение количества клеток с вторичными нарушениями в структуре и числе хромосом. Наиболее значимые цитогенетические изменения отмечались на 60-й и 120-й дни инвазии и характеризовались увеличением хромосомных разрывов, транслокаций, а также уровней гипоплоидных, гиперплоидных и полиплоидных клеток. Добавление водно-солевого экстракта описторхисов в культуры лимфоцитов крови доноров приводило к нарушениям в наследственном аппарате в виде увеличения числа аберрантных и гипоплоидных клеток (Ильинских Н.Н., 1981). По мнению авторов, описторхисы могли стать фактором, способным резко усилить мутационные процессы (Ильинских Е.Н. и соавт., 2000).

188

В 2006 году была выявлена прямо пропорциональная зависимость у больных хроническим описторхозом между числом лимфоцитов периферической крови с цитогенетическими нарушениями и титрами антител к антигенам вируса Эпштейн-Барра (Ильинских Е.Н. и соавт., 2006). Наиболее значимые изменения отмечались у больных с отягощёнными формами хронического описторхоза. Изучение изменений уровней первичных повреждений ДНК соматических клеток хозяина при паразитировании кошачьих сосальщиков, а также апоптотических клеток ранее не проводились.

Цель исследования - изучить возможные гено- и цитотоксических эффекты в соматических клетках хозяина при экспериментальном описторхозе.

Материалы и методы. Исследования проводили на 40 золотистых хомяках, которых разделяли на две группы (контрольная и опытная) с одинаковым количеством животных в каждой. Контрольной группе вводили внутрижелудочно стерильный 0,9 % раствор хлорида натрия в объеме 0,5 мл. Опытную группу разделили на четыре подгруппы в зависимости от срока забоя. Всем подгруппам животных вводили внутрижелудочно жизнеспособных метацеркариев O. felineus из расчета 2 на 1 г массы тела животного по разработанному нами методу. Исследования проводили на 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни от заражения. На все сроки наблюдения хомяков умерщвляли путем декапитации под эфирным наркозом. Выделяли печень, бедренные кости. Забор периферической крови из сонной артерии производили при помощи вакутайнеров фирмы Monovette с Li-Heparin LH. Клеточные суспензии костного мозга, печени получали по разработанному методу.

Щелочной гель-электрофорез изолированных клеток (метод «ДНК-комет») проводили по N.P. Singh et al. в нашей модификации. Повреждения молекулы ДНК определяли при помощи автоматической программы “CASP v. 1.2.2”. В микропрепаратах ДНК-комет всех трех типов клеток подсчитывали по 50 клеток, где учитывался основной показатель генотоксичности: «момент хвоста», вычисленный программой из «длины хвоста», умноженного на процент ДНК в «хвосте кометы». Для оценки цитотоксического воздействия в 100 случайно выбранных клетках определяли процент апоптотических. Полученные данные от опытных животных сравнивались с показателями контрольной группы. Результаты обрабатывались статистически с использованием программы Ехсе1 2007. Рассчитывали среднюю арифметическую и ее стандартное отклонение (M+SD). Достоверность выявленных различий определяли по t-критерию Стьюдента.

Результаты. Установлено, что мариты кошачьего сосальщика обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки организма хозяина на 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни инвазии, которое характеризуется увеличением количества одноцепочечных разрывов и щелочно-лабильных сайтов ядерной ДНК в клетках крови, костного мозга и печени in vivo. Рост уровня первичных повреждений ДНК в клетках хозяина был обусловлен повышением числа мелких разрывов ДНК (рост «длины хвостов комет»), процента поврежденной ДНК и основного показателя генотоксичности - «момента хвоста».

189

«Длина хвостов комет» при инвазии достоверно повышалась в среднем в 1,2-2,5 раза в клетках крови на 7-й, 21-й и 28-й дни инвазии, а процент ДНК в «хвостах комет» в 1,8-3,1 раза на 7-й, 14-й, 21-й дни наблюдения. Основной показатель генотоксичности возрастал в 2,7-8,2 раза, а цитотоксичности - в 2,68,3 раза. В клетках костного мозга «длина хвостов комет» и процент ДНК в «хвостах комет» возрастали в 1,8-2,9 и 1,9-6,3 раза соответственно, основной показатель генотоксичности («момент хвоста») - в 1,9-6,5 раз, а процент апоптотических клеток в 5,3-10,5 раз. В клетках печени «длина хвостов комет» и процент ДНК в «хвостах комет» увеличивались в 1,6-2,7 и 1,8-3,6 раза по отношению к контролю. Основной показатель генотоксичности превышал контрольные уровни на всех сроках наблюдения в 3,5-7,1 раза, а цитотоксичности - в 2,3-6,2 раза.

Наиболее выраженные генотоксические эффекты во всех исследуемых типах клеток наблюдались на 7-й и 14-й дни наблюдения, а цитотоксический эффект - на 21-й и 28-й дни инвазии. Суммарно генотоксический и цитотоксический эффекты инвазии кошачьими сосальщиками раньше проявлялись в клетках крови и костного мозга и позднее наблюдались в клетках печени золотистых хомяков.

Полученные нами данные характеризующие рост первичных повреждений ДНК и апоптоза соматических клеток хозяина согласуются с результатами проведенных ранее исследований при других трематодозах. O.O. Motoma et al. (2001) была изучена способность метаболитов Fasciola hepatica вызывать генные мутации в соматических клетках инвазированных млекопитающих. Исследования были проведены на трансгенных мышах -самцах линии C57BL/6 Big Blue, которых заражали в дозе 2 метацеркария печеночного сосальщика на особь. К 15-му дню после заражения был установлен рост генных lacI мутаций в гепатоцитах зараженных животных по сравнению с контрольными. У инвазированных мышей в спектре мутаций значительно повышалось число lacI спонтанных и многократных мутаций (18,2 %) по сравнению с незараженными животными (2,8 %). S.K. Lundy et al. (2001) изучили апоптоз CD4+ Т лимфоцитов в течение шистосомозной инвазии у мышей-самок линии CBA/Jk. Животных заражали в дозе 25 церкариев Schistosoma mansoni и исследовали ранний апопотоз T-лимфоцитов селезенки и клеток шистососмозных гранулем. Авторы показали, что в течение созревания личинок (4 недели после заражения) апоптоз в селезеночных CD4+ Т-лимфоцитах не повышался, но многократно возрастал к 6-ой неделе инвазии и коррелировал с временем попадания яиц в печень.

Выводы. 1. Метаболиты марит кошачьего сосальщика обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки золотистых хомяков. Генотоксическое воздействие в клетках крови животных наблюдается на 7-й, 14-й, 21 -й и 28-й дни инвазии с максимальной выраженностью в 8,2 раза на 14й день инвазии. В клетках костного мозга показатель «момента хвоста комет» в 1,9-6,5 раза превышал контрольные величины с максимальной выраженностью на 21-й день инвазии. В печени максимальный генотоксический эффект в 7,1 раза наблюдался на 14-й день инвазии. 2. В клетках крови, костного мозга и

190

печени животных при экспериментальном описторхозе повышается уровень апоптотических клеток, обусловленный цитотоксическим эффектом инвазии. Цитотоксическое воздействие метаболитов марит кошачьего сосальщика наблюдается на 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни инвазии в крови с максимальной выраженностью этих изменений на 21-й день в 8,3 раза. В костном мозге максимальная степень апоптоза клеток в 10,5 раз наблюдалась на 14-й и 28-й дни инвазии. Апоптоз клеток печени у зараженных животных превышал в 2,3-

6,2 раза уровни контроля с максимальной выраженностью этих изменений на 28-й день наблюдения.

Geno-, cytotoxical influences of cat fluke on host cells at experimental opisthorchosis. Kuzhel D.C., Bekish V.J., Zorina V.V. Vitebsk State Medical University.

Summary. Metabolites marits of the cat's fluke have genotoxic influence on somatic cells of golden hamsters, which is established at the application of alkaline single cells gel-electrophoresis. Genotoxic influence is observed in blood cells of animals for 7th, 14th, 21st and 28th days of invasion with the maximum expression in

8,2 times for 14th day of invasion. The indicator of "the tail moment» of comets in bone marrow cells in 1,9-6,5 times increased control sizes with the maximum expression for 21st day of an invasion. Maximum genotoxic effect in a liver in 7,1 times was observed for 14th day of invasion. The level of apoptotic cells in blood, bone marrow and liver of animals at experimental opistorchosis caused by cytotoxic effect of invasion raises. Invasion in blood with cytotoxic influence of metabolites marits of the cat's fluke is observed for 7th, 14th, 21st and 28th days of the maximum expression of these changes for 21st day in 8,3 times. In bone marrow the maximum degree of cells apoptosis in 10,5 times was observed for 14th and 28th days of an invasion. The cells apoptosis of a liver at the infected animals exceeded in 2,3-6,2 times levels of control with the maximum expression of these changes for 28th day of observation.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВИДОВОГО СОСТАВА ГАСТРОИНТЕСТИНАЛЬНЫХ НЕМАТОД КОСУЛИ В РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ

Кузнецов Д.Н.

Центр паразитологии

Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН

Введение. Популяции нематод, обитающих в сычуге и тонком кишечнике жвачных, часто отличаются высоким уровнем таксономического разнообразия. Согласно классификации К.И. Скрябина с соавторами (1954), практически всех этих нематод причисляли к семейству Trichostrongylidae, однако результаты более поздних сравнительно-филогенетических исследований показали, что нематоды, совместно паразитирующие в сычуге и тонком кишечнике, представляют несколько достаточно далеких друг от друга семейств и даже

191