СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ СТАБИЛЬНЫХ ЖИДКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ КОМПОЗИЦИИ
METHODS OF PRODUCING A STABLE LIQUID DRUGS AND COMPOSITIONS THEREOF

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка заявляет приоритет временной заявки на патент США № 61/287988, поданной 18 декабря 2009 года.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к жидким препаратам фармацевтически активных соединений. В частности, настоящее изобретение относится к жидким препаратам, полученным посредством смешивания жидкости с порошкообразной композицией. Полученный в результате жидкий препарат представляет собой стабильный раствор или дисперсию, в котором белок является связанным с фармацевтически активным соединением. Белок может быть непроцессированным или представлять собой различные гидролизованные фрагменты белка. Также, в настоящем документе предусматриваются способы получения порошкообразной композиции, а также наборы для приготовления жидкого препарата.
Хотя они охватывают только примерно 13% от всей популяции, пожилые пациенты потребляют примерно 33% всех предписываемых медицинских препаратов. Средний пожилой пациент, получающий амбулаторное лечение, принимает почти шесть медицинских препаратов одновременно, в то время как пациент из дома престарелых может принимать от семи до десяти медицинских препаратов. Как правило, стандартная лекарственная форма большего размера (например, капсула, гелевая капсула или таблетка) вызывает больше сложностей при заглатывании медицинского препарата. Для пожилых людей заглатывание медицинских препаратов может быть сложным или болезненным, это состояние обычно упоминается как дисфагия, она может приводить к плохому соблюдению режима терапии пациентом. Дисфагия также ассоциируется с несколькими хроническими заболеваниями, включая нейродегенеративные заболевания (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, и тому подобное), психиатрические заболевания, метаболические заболевания и эндокринные заболевания. Она также может представлять собой проблему для пациентов, принимающих радиационную терапию или химиотерапию.
Для пациентов, страдающих дисфагией, которые принимают медицинские препараты, распространенной практикой для пациента или профессионального медицинского работника является измельчение медицинского препарата и подмешивание его в приятную жидкую или мягкую пищу, такую как яблочный соус, для придания консистенции и маскировки вкуса. В некоторых случаях, множество медицинских препаратов может измельчаться, а затем смешиваться вместе с пищей или напитком для пациента. Хотя соблюдение режима терапии может быть улучшено с помощью этой практики, действие дозы, стабильность лекарственного средства и фармакокинетика ослабляются, отрицательно влияя на эффективность медицинского препарата.
Жидкие препараты широко используются для педиатрических медицинских препаратов с целью обеспечения более простого введения. Эти препараты хорошо известны в данной области и иллюстрируются, например, различными антибиотиками, такими как амоксициллин, аугментин и гатифлоксацин; противоастматическими средствами, такими как зафирлукаст (Accolate); и противовирусными средствами, такими как зидовудин, ламивудин, ставудин и абакавир. В противоположность этому, делается мало систематических попыток разработки жидких препаратов для гериатрических пациентов или других взрослых пациентов с проблемами с глотанием. На практике, фармацевт, приготавливающий препарат, может попытаться приготовить жидкий препарат для пожилого пациента, но не разработано никакого четкого и надежного способа для всех продуктов лекарственных средств.
Упоминаемые выше проблемы приводят к субоптимальному и/или ошибочному дозированию, которое может влиять на развитие заболевание и приводить к увеличению трудоемкости долговременного ухода за больным. Таким образом, имеется необходимость в стабильных и эффективных жидких препаратах для доставки разнообразных фармацевтических агентов.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом аспекте, настоящее изобретение описывает способ введения фармацевтически активного соединения пациенту, способ включает стадии: получения порошкообразной композиции, содержащей фармацевтически активное соединение и белок или гидролизированный белок, где белок или гидролизированный белок имеет массу от 500 Да до 10000000 Да; смешивания порошкообразной композиции с жидкостью или полутвердым продуктом с получением стабильного раствора или дисперсии, в которой белок или гидролизированный белок является связанным с фармацевтически активным соединением; и перорального введения раствора или дисперсии пациенту.
В одном из вариантов осуществления первого аспекта, способ включает фармацевтически активное соединение и белок или гидролизированный белок, присутствующие при отношении от 1:1 до 1:1000 В другом варианте осуществления, композиция содержит 1-30% (мас./мас.) фармацевтически активного соединения и 90-99% (мас./мас.) белка или гидролизованного белка. Еще в одном варианте осуществления, белок или гидролизированный белок имеет массу от 500 Да до 1000000 Да.
В другом варианте осуществления первого аспекта, настоящее изобретение описывает способ, где композиция является денатурированной или частично денатурированной. В одном из вариантов осуществления, размер частиц порошка составляет от 1 до 100 меш. Еще в одном варианте осуществления, настоящее изобретение описывает способ, где жидкость представляет собой воду или водный раствор.
В одном из вариантов осуществления первого аспекта, настоящее изобретение описывает способ, где вязкость дисперсии составляет от 1 сП до 450 сП. В другом варианте осуществления, вязкость дисперсии составляет от 50000 сП до 200000 сП.
В другом варианте осуществления первого аспекта, фармацевтически активное соединение имеет массу меньше чем 500 Да.
1A
2
В одном из конкретных вариантов осуществления, фармацевтически активное соединение представляет собой одно или несколько соединений из агонистов рецептора 5-HT, антагонистов рецептора 5-HT, агонистов α-адренергических рецепторов, антагонистов α-адренергических рецепторов, агонистов β-адренергических рецепторов, антагонистов β-адренергических рецепторов, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, анестезирующих средств, антагонистов рецепторов ангиотензина, ингибиторов ангиотензин-преобразующего фермента, антибиотиков, антихолинергических агентов, антикоагулянтов, антиконвульсантов, антидепрессантов, противодиабетических агентов, противогрибковых агентов, противовоспалительных агентов, антигистаминных средств, антипсихотических агентов, агентов против агрегации тромбоцитов, противовирусных агентов, анксиолитических агентов, лекарственных средств, понижающих уровень холестерина, агонистов допамина, антагонистов допамина, ингибиторов эйкозаноидов, глюкокортикоидов, агентов, блокирующих ионные каналы, ингибиторов моноаминоксидазы B, антагонистов рецепторов N-метил d-аспартата, ингибиторов повторного захвата норэпинефрина, простагландинов, ингибиторов протонного насоса, антагонистов ренина, серотонинэргических средств, стероидных противовоспалительных агентов, трициклических соединений, агонистов тромбоксана A2, триптанов, вазодилаторов или нутрицевтиков.
В другом варианте осуществления первого аспекта, настоящее изобретение описывает способ, где белок или гидролизированный белок представляет собой один или несколько белков из желатина (например, желатин типа A и желатин типа B), казеина, сывороточных белков (например, альфа-лактальбумин, бета-лактоглобулин, бычий сывороточный альбумин, гликомакропептид, иммуноглобулин, лактоферрин и лактопероксидазу), альбумина (например, бычий сывороточный альбумин и сывороточный альбумин человека) или белка сои (например, β-конглицинин и глицинин). В другом варианте осуществления, белок или гидролизированный белок содержит от 70% до 95% (мас./мас.) сывороточного белка или от 80% до 95% (мас./мас.) казеина.
В другом варианте осуществления первого аспекта, настоящее изобретение описывает способ, где композиция дополнительно содержит один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из агента, усиливающего поглощение (например, ахитозан, желатин типа A и желатин типа B), противомикробного агента (например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия, пропилбензоат, сорбат натрия, сорбат калия и сорбат кальция), антиоксиданта (например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия, пропилбензоат, сорбат натрия, сорбат калия и сорбат кальция), буферного агента (например, лимонную кислоту, яблочную кислоту, винную кислоту, фосфорную кислоту и их фармацевтически приемлемые соли), красителя, диспергирующего агента (например, поливинилпирролидин, алкилгидрокси целлюлозу, декстрин, циклодекстрин и полигидрокси спирт), ароматизирующего агента, консерванта (например, этилендиаминтетрауксуную кислоту и сложный 4-гидроксибензойный эфир), солюбилизирующего агента (например, полиэтиленгликоль с массой от 200 Да до 1000 Да, сорбитол, полиол гликоля и дипропиленгликоль полиэтилен), стабилизирующего агента (например, глицерин, пентаэритритол и альгинат натрия), поверхностно-активного вещества (например, полиоксиглицерид, каприлат, лаурат, олеат, простой моноэтиловый эфир, неионное поверхностно-активное вещество на основе сорбитана, поверхностно-активное вещество на основе полиоксиэтиленсорбитана, смесь эмульгаторов и токоферол полиэтиленгликоль 1000 сукцинат), подсластителя (например, сложный L-аспартилфенилаланинметиловый эфир, соль сахарина из стевии, цикламатную соль, ацефульфам-K, аспартам, сукралозу, глицирризанат, глюкозу, ксилозу, рибозу, маннозу, фруктозу, декстрозу, сорбитол, маннитол, тимидин и монеллин), агента, маскирующего вкус (например, альгинат натрия, ксантановую смолу, каррагенан, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу или натрий карбоксиметилцеллюлозу), агента, контролирующего вязкость (например, желатин, альгиновую кислоту, агарозу, агар, каррагенан, ксантановую смолу, смолу плодов рожкового дерева, гуаровую смолу, смолу трагаканта, смолу карая, природную смолу, метилцеллюлозу, глюкоманнан, галактоманнан и гуламан) и витаминов. В другом варианте осуществления, количество буферного агента приводит к получению дисперсии, имеющей pH от 6 до 8. Еще в одном варианте осуществления, pH составляет от 6,8 до 7,2.
Во втором аспекте, настоящее изобретение описывает порошкообразную композицию, содержащую фармацевтически активное соединение, и белок или гидролизированный белок с массой больше чем 500 кДа, где композиция, когда она смешивается с жидкостью или полутвердым продуктом, образует стабильный раствор или дисперсию, пригодную для перорального введения, в которой белок или гидролизированный белок является связанным с фармацевтически активным соединением.
В одном из вариантов осуществления второго аспекта, фармацевтически активное соединение и белок или гидролизированный белок присутствуют при отношении от 1:1 до 1:1000.
В другом варианте осуществления второго аспекта, композиция содержит 1-30% (мас./мас.) фармацевтически активного соединения и 90-99% (мас./мас.) белка или гидролизованного белка. В другом варианте осуществления, композиция является денатурированной или частично денатурированной. Еще в одном варианте осуществления, размер частиц порошка составляет от 1 до 100 меш. В одном из конкретных вариантов осуществления, жидкость представляет собой воду или водный раствор.
В одном из вариантов осуществления второго аспекта, вязкость дисперсии составляет от 1 до 450 сП. В другом варианте осуществления, вязкость дисперсии составляет от 50000 сП до 200000 сП.
1A
2
,
В одном из вариантов осуществления второго аспекта, настоящее изобретение описывает порошкообразную композицию, где фармацевтически активное соединение имеет массу больше, чем 500 Да. В другом варианте осуществления, фармацевтически активное соединение представляет собой одно или несколько соединений из агонистов рецепторов 5-HT, антагонистов рецепторов 5-HT, агонистов α-адренергических рецепторов, антагонистов α-адренергических рецепторов, агонистов β-адренергических рецепторов, антагонистов β-адренергических рецепторов, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, анестезирующих средств, антагонистов рецепторов ангиотензина, ингибиторов ангиотензин-преобразующего фермента, антибиотиков, антихолинергических агентов, антикоагулянтов, антиконвульсантов, антидепрессантов, противодиабетических агентов, противогрибковых агентов, противовоспалительных агентов, антигистаминных средств, антипсихотических агентов, агентов против агрегации тромбоцитов, противовирусных агентов, анксиолитических агентов, лекарственных средств, понижающих уровень холестерина, агонистов допамина, антагонистов допамина, ингибиторов эйкозаноидов, глюкокортикоидов, агентов, блокирующих ионные каналы, ингибиторов моноаминоксидазы B, антагонистов рецепторов N-метил d-аспартата, ингибиторов повторного захвата норэпинефрина простагландинов, ингибиторов протонного насоса, антагонистов ренина, серотонинэргических средств, стероидных противовоспалительных агентов, трициклических соединений, агонистов тромбоксана A2, триптанов, вазодилаторов или нутрицевтиков.
В другом варианте осуществления второго аспекта, белок или гидролизированный белок представляет собой один или несколько белков из желатина (например, желатина типа A и желатина типа B), казеина, сывороточных белков (например, альфа-лактальбумин, бета-лактоглобулин, бычий сывороточный альбумин, гликомакропептид, иммуноглобулин, лактоферрин и лактопероксидазу), альбумина (например, бычий сывороточный альбумин и сывороточный альбумин человека) или белка сои (например, β-конглицинин и глицинин). В другом варианте осуществления, белок или гидролизированный белок содержит от 70% до 95% (мас./мас.) сывороточного белка или от 80% до 95% (мас./мас.) казеина.
В другом варианте осуществления второго аспекта, настоящее изобретение описывает композицию, дополнительно содержащую один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из агента, усиливающего поглощение (например, ахитозан, желатин типа A и желатин типа B), противомикробных агентов (например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия, пропилбензоат, сорбат натрия, сорбат калия и сорбат кальция), антиоксидантов (например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия, пропилбензоат, сорбат натрия, сорбат калия и сорбат кальция), буферных агентов (например, лимонную кислоту, яблочную кислоту, винную кислоту, фосфорную кислоту и их фармацевтически приемлемые соли), красителей, диспергирующих агентов (например, поливинилпирролидин, алкилгидрокси целлюлозу, декстрин, циклодекстрин и полигидрокси спирт), ароматизирующих агентов, консервантов (например, этилендиаминтетрауксуную кислоту и сложный 4-гидроксибензойный эфир), солюбилизирующих агентов (например, полиэтиленгликоль с массой от 200 Да до 1000 Да, сорбитол, полиол гликоля и дипропиленгликоль полиэтилен), стабилизирующих агентов (например, глицерин, пентаэритритол и альгинат натрия), поверхностно-активных веществ (например, полиоксиглицерид, каприлат, лаурат, олеат, простой моноэтиловый эфир, неионное поверхностно-активное вещество на основе сорбитана, поверхностно-активное вещество на основе полиоксиэтилена сорбитана, смесь эмульгаторов и токоферол полиэтиленгликоль 1000 сукцинат), подсластителей (например, сложный L-аспартилфенилаланинметиловый эфир, соль сахарина из стевии, цикламатную соль, ацефульфам-K, аспартам, сукралозу, глицирризанат, глюкозу, ксилозу, рибозу, маннозу, фруктозу, декстрозу, сорбитол, маннитол, тимидин и монеллин), агентов, маскирующих вкус (например, альгинат натрия, ксантановую смолу, каррагенан, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, или натрий карбоксиметилцеллюлозу), агентов, контролирующих вязкость (например, желатин, альгиновую кислоту, агарозу, агар, каррагенан, ксантановую смолу, смолу плодов рожкового дерева, гуаровую смолу, смолу трагаканта, смолу карая, природную смолу, метилцеллюлозу, глюкоманнан, галактоманнан и гуламан) и витаминов. В другом варианте осуществления, количество буферного агента приводит к получению дисперсии, имеющей pH от 6 до 8. Еще в одном варианте осуществления, pH составляет от 6,8 до 7,2.
В третьем аспекте, настоящее изобретение описывает жидкий или полутвердый препарат, приготовленный посредством смешивания порошкообразной композиции, описанной в настоящем документе, с жидкостью или полутвердым продуктом. В одном из вариантов осуществления, жидкость представляет собой водный раствор. В другом варианте осуществления, pH находится в пределах между 6 и 8 (например, в пределах между 6,8 и 7,2). Еще в одном варианте осуществления, вязкость составляет от 1 сП до 450 сП или от 50000 сП до 200000 сП.
В четвертом аспекте, настоящее изобретение описывает способ получения порошкообразной композиции, включающий: диспергирование белка или гидролизированного белка в водном растворе при первой температуре, находящейся в пределах от 10°C до 50°C, с получением смеси белков; добавление эффективного количества фармацевтически активного соединения к смеси белков; до или после добавления соединения к смеси белков, нагревание смеси белков до второй температуры, находящейся в пределах от 23°C до 60°C, где количество белка или гидролизованного белка является избыточным по отношению к эффективному количеству соединения; охлаждение смеси до третей температуры, находящейся в пределах от 5°C до 23°C; и отделение смеси от водного раствора, с получением порошкообразной композиции.
В одном из вариантов осуществления четвертого аспекта, белок или гидролизированный белок представляет собой один или несколько белков из желатина, казеина, сывороточного белка, альбумина или белка сои.
В другом варианте осуществления, водный раствор представляет собой воду или буфер. В другом варианте осуществления, буфер имеет pH в пределах между 6 и 8.
В другом варианте осуществления четвертого аспекта, способ включает водный раствор, который дополнительно содержит один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из агентов, усиливающих поглощение, противомикробных агентов, антиоксидантов, буферных агентов, красителей, диспергирующих агентов, ароматизирующих агентов, консервантов, солюбилизирующих агентов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ, подсластителей, агентов, маскирующих вкус, агентов, контролирующих вязкость, и витаминов.
В одном из вариантов осуществления четвертого аспекта, первый диапазон температуры составляет от 20°C до 25°C. В другом варианте осуществления, второй диапазон температуры составляет от 25°C до 37°C. Еще в одном варианте осуществления, третий диапазон температуры составляет от 23°C до 37°C.
1A
2
В пятом аспекте, настоящее изобретение описывает набор, содержащий порошкообразную композицию, которая может быть смешана с жидкостью, с получением стабильного раствора или дисперсии, пригодного для перорального введения пациенту, указанная композиция содержит: 1-30% (мас./мас.) фармацевтически активного соединения и 70-99% (мас./мас.) белка или гидролизованного белка с массой больше чем 500 кДа, где указанное соединение является связанным с указанным белком; жидкость; и инструкции по смешиванию порошкообразной композиции с жидкостью. В одном из вариантов осуществления, порошкообразная композиция содержит фармацевтически активное соединение, выбранное из группы, состоящей из агонистов рецепторов 5-HT, антагонистов рецепторов 5-HT, агонистов α-адренергических рецепторов, антагонистов α-адренергических рецепторов, агонистов β-адренергических рецепторов, антагонистов β-адренергических рецепторов, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, анестезирующих средств, антагонистов рецепторов ангиотензина, ингибиторов ангиотензин-преобразующего фермента, антибиотиков, антихолинергических агентов, антикоагулянтов, антиконвульсантов, антидепрессантов, противодиабетических агентов, противогрибковых агентов, противовоспалительных агентов, антигистаминных средств, антипсихотических агентов, агентов против агрегации тромбоцитов, противовирусных агентов, анксиолитических агентов, лекарственных средств, понижающих уровень холестерина, агонистов допамина, антагонистов допамина, ингибиторов эйкозаноидов, глюкокортикоидов, агентов, блокирующих ионные каналы, ингибиторов моноаминоксидазы B, антагонист рецепторов N-метил d-аспартата, ингибиторов повторного захвата норэпинефрина, простагландинов, ингибиторов протонного насоса, антагонистов ренина, серотонинэргических средств, стероидных противовоспалительных агентов, трициклических соединений, агонистов тромбоксана A2, триптанов, вазодилаторов или нутрицевтиков. В другом варианте осуществления, порошкообразная композиция содержит белок или гидролизированный белок, выбранный из группы, состоящей из желатина, казеина, сывороточного белка, альбумина и белка сои.
Еще в одном варианте осуществления пятого аспекта, жидкость содержит один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из агентов, усиливающих поглощение, противомикробных агентов, антиоксидантов, буферных агентов, красителей, диспергирующих агентов, ароматизирующих агентов, консервантов, солюбилизирующих агентов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ, подсластителей, агентов, маскирующих вкус, агентов, контролирующих вязкость, и витаминов.
Определения
Как используют в настоящем документе, "связанный" и "связывание" относится к нековалентному или ковалентному взаимодействию, которое удерживает две молекулы вместе. Например, две таких молекулы могут представлять собой фармацевтически активное соединение и белок. Нековалентные взаимодействия включают, но, не ограничиваясь этим, водородную связь, ионные взаимодействия между заряженными группами, электростатическое связывание, Ван дер Ваальсовы взаимодействия, гидрофобные взаимодействия между неполярными группами, липофобные взаимодействия и притяжения на основе LogP.
Под "комплексом" подразумевается фармацевтическое соединение, связанное с непроцессированным белком или гидролизированным белком.
Под "белком класса лекарственных средств" подразумевается белок, который связывает некоторый класс фармацевтически активных соединений.
Как используют в настоящем документе, фраза "эффективное количество фармацевтически активного соединения" относится к доступному количеству одного или нескольких соединений в жидком препарате, которое будет обеспечивать терапевтическую выгоду для пациента.
Под "фармакофором" подразумевается функциональная группа, присутствующая в фармацевтически активном соединении, которое придает терапевтическую функцию.
Под "стабильной дисперсией" подразумевается дисперсия, которая стабилизирует фармацевтически активное соединение, которое подмешивается в жидкость или полутвердый пищевой продукт.
Под "пациентом" подразумевается млекопитающее, включая, но, не ограничиваясь этим, человека или млекопитающее, отличное от человека.
Под "гидролизированным белком" подразумевается фрагмент белка, полученный посредством разрушения одной или нескольких пептидных связей в непроцессированном белке.
Упоминание в настоящем документе численных диапазонов с помощью конечных точек, как предполагается, включает все числа, находящиеся в этом диапазоне (например, упоминание диапазона от 1 до 5 включает 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4 и 5).
Как используют в настоящем документе, упоминание единственного числа означает "по меньшей мере, один" или "один или несколько", если не указано иного. В дополнение к этому, единственное число включает упоминание множественного числа, если только контекст не диктует четко иного. Так, например, упоминание композиции, содержащей "соединение", включает смесь двух или более соединений.
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут понятными из следующего далее Подробного описания и из формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг.1A представляет собой график, показывающий антиноцицепцию (уменьшение боли) со временем у мышей, которых лечат с помощью 10 мг/кг, 3,2 мг/кг или 1 мг/кг фентанила, приготовленного в воде.
Фиг.1B представляет собой график, показывающий антиноцицепцию со временем у мышей, которых лечат с помощью 10 мг/кг, 3,2 мг/кг или 1 мг/кг фентанила, приготовленного в связанном состоянии вместе с бычьим сывороточным альбумином (BSA).
Фиг.2 представляет собой график, сравнивающий антиноцицепцию как функцию времени у мышей, которых лечат с помощью фентанила, приготовленного в воде, по сравнению с фентанилом, связанным с BSA. Данные показывают, что фентанил, связанный с BSA, дает большую анальгетическую реакцию, чем фентанил, приготовленный в воде (сравните результаты для 1 мг/кг и 3,2 мг/кг фентанила в воде по сравнению с препаратом с BSA).
Фиг.3 представляет собой график, показывающий профиль поглощения для кетопрофена, вводимого в солевом растворе или связанного с BSA.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение описывает порошкообразную композицию, которая содержит комплекс фармацевтически активного соединения и белка, как правило, гидролизированного белка. Порошкообразная композиция может смешиваться с жидкой средой и разбавляться с получением стабильного жидкого раствора или дисперсии фармацевтического агента, пригодного для перорального потребления пациентом, который имеет проблему с заглатыванием единичных стандартных лекарственных форм. Настоящее изобретение использует белки в качестве универсальных акцепторов органических молекул, таких как фармацевтически активные соединения, с молекулярными массами предпочтительно меньшими, чем 500 Дальтон (Да). Настоящее изобретение может быть применено практически ко всем фармацевтически активным соединениям, которые связывают белок плазмы. Неожиданно, это является верным независимо от того, является ли соединение липофильным, заряженным или нейтральным. Способность белков служить в качестве таких универсальных акцепторов происходит от сложной физической химии геометрии структурных белков. Белки плазмы (например, у людей и животных) и белки из других источников, синтетические или природные, имеют множество различных зон связывания, которые делают возможным прочное связывание заряженных и незаряженных молекул. Другими словами, белки имеют анионные, катионные и липофильные центры связывания, которые делают возможным связывание всех типов органических молекул и солей органических молекул с этими белками. Посредством использования этих различных зон и центров связывания, может быть сформирован комплекс между фармацевтически активным соединением и белком.
Способы получения порошкообразной композиции и жидкого препарата
В настоящем документе предусматриваются способы получения порошкообразных композиций, которые могут объединяться с жидкостью с получением стабильного раствора или дисперсии фармацевтически активного соединения. Способ по настоящему изобретению может быть использован для стабилизации разнообразных фармацевтически активных соединений, которые, как правило, считаются нестабильными в жидких средах, таких как сложные эфиры лекарственных средств. По ряду причин, получение таких соединений в виде жидкого препарата может быть сложным. Например, жидкие среды часто приводят к гидролизу лекарственного средства со временем. Настоящее изобретение решает эти проблемы посредством объединения лекарственного средства, например, с гидролизированным или частично гидролизированным белком. Связывание лекарственного средства с белком отбирает лекарственное средство из раствора и, таким образом, стабилизирует молекулу от деградации. Этот способ является применимым ко всем лекарственным средствам, нутрицевтикам или пищевым добавкам, которые могут быть заряженными (катионными или анионными), нейтральными, липофильными или цвиттерионными. Он также может применяться к гидрофобным и гидрофильным лекарственным средствам, ко всем солевым формам лекарственных средств, ко всем полиморфным формам и к другим лекарственным средствам, обычно нестабильным в жидких средах.
Как правило, способ получения порошкообразной композиции включает следующие стадии:
диспергирования гидролизированного белка в водном растворе с получением смеси белков, где эта стадия может быть осуществлена при комнатной температуре 23°C или при повышенной температуре, которая вызывает солюбилизацию без денатурации, и оптимальная температура может быть определена для каждого белка с использованием известных способов;
добавления эффективного количества фармацевтически активного соединения к смеси белков и нагревания смеси для связывания лекарственного средства с белком, где количество белка, как правило, является избыточным по отношению к эффективному количеству соединения, где эту стадию осуществляют при оптимальной температуре для солюбилизации (например, в пределах между 23°C и 60°C);
охлаждения смеси (например, до температуры в пределах между 5°C и 23°C) и
выделения смеси из водного раствора, с получением порошкообразной композиции (например, посредством фильтрования или центрифугирования).
Способ может включать дополнительные стадии и модификации. Например, после завершения выделения, полученные продукты могут дополнительно быть высушены посредством лиофилизации до получения дегидратированного порошка. Затем этот порошок может быть разбавлен в водном растворе вместе со стандартными компонентами, такими как наполнители, обычно используемые для оптимизации характеристик цвета, вязкости, вкуса, и противомикробные агенты.
В другом примере, водный раствор может содержать дополнительные компоненты, такие как агент, усиливающий поглощение, противомикробный агент, антиоксидант, буферный агент, краситель, диспергирующий агент, ароматизирующий агент, консервант, солюбилизирующий агент, стабилизирующий агент, поверхностно-активное вещество, подсластитель, агент, маскирующий вкус, агент, контролирующий вязкость, витамин или любая другая добавка или агент, описанный в настоящем документе. В дополнение к этому, в способ могут включаться дополнительные стадии для добавления других добавок или агентов.
Примеры других добавок или агентов, которые могут быть использованы в композициях по настоящему изобретению, включают, но, не ограничиваясь этим, агенты, усиливающие поглощение, вспомогательные вещества, противомикробные агенты, антиоксиданты, буферные агенты, хелатирующие агенты, средства, уменьшающие раздражение, деэмульгирующие вещества, дезодоранты, детергенты, диспергирующие агенты, эмульгаторы красителей, наполнители, гелеобразующие агенты, инертные разбавители (например, карбонат кальция, карбонат натрия, лактозу, фосфат кальция, фосфат натрия или каолин), фитомедицинские препараты, пластифицирующие агенты, консерванты, растворители, солюбилизирующие агенты, стабилизирующие агенты, поверхностно-активные вещества, загущающие агенты (например, ксантановую смолу, жирную кислоту, соль или сложный эфир жирной кислоты, жирный спирт, модифицированную целлюлозу, модифицированный минеральный материал или синтетический полимер), агенты, контролирующие вязкость, витамины или смачивающие агенты.
Иллюстративные агенты, усиливающие поглощение, например, для полярных молекул, включают, но, не ограничиваясь этим, хитозан, желатин типа A и желатин типа B.
Иллюстративные противомикробные агенты включают парабены (например, метилпарабен и пропилпарабен), бензоаты (например, бензоат натрия и пропилбензоат) и сорбаты (например, сорбат натрия, сорбат калия и сорбат кальция).
Иллюстративные антиоксиданты включают, но, не ограничиваясь этим, витамин C, витамин E или смеси природных токоферолов.
Иллюстративные буферные агенты включают, но, не ограничиваясь этим, лимонную кислоту, яблочную кислоту, винную кислоту, фосфорную кислоту или их солевые формы, которые, когда используются вместе с другими агентами или соединениями, обеспечивают стабильный pH в пределах между 6 и 8, а наиболее предпочтительно, в пределах между 6,8 и 7,2.
Иллюстративные диспергирующие агенты включают, но, не ограничиваясь этим, диспергирующие агенты на основе полимеров, такие как поливинилпирролидин (PVD); алкилгидроксицеллюлозы, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза; различные декстрины и циклодекстрины, такие как гидроксипропил-бета-циклодекстрин и гидроксипропил-гамма-циклодекстрин; и все полигидрокси спирты GRAS.
Иллюстративные консерванты включают, но, не ограничиваясь этим, этилендиаминтетрауксуную кислоту или один или несколько сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты, такие как метиловый, этиловый, пропиловый и бутиловый аналоги.
Иллюстративные солюбилизирующие агенты включают, но, не ограничиваясь этим, многоатомные спирты, такие как полиэтиленгликоль, с массами, находящимися в пределах между 200 и 1000 Да, а наиболее предпочтительно, PEG 200, 400 и 600, сами по себе или в сочетание с сорбитолом, дипропиленгликоль полиэтилен, другие полиолы гликолей, этанол и этилендиаминтетрауксуную кислоту (EDTA). Иллюстративные стабилизирующие агенты включают, но, не ограничиваясь этим, глицерин, пентаэритритол или альгинат натрия.
Иллюстративные поверхностно-активные вещества включают, но, не ограничиваясь этим, полиоксилглицериды, такие как LabrafrilM 1944 CS (олеоил макрогольглицериды), LabrafrilM 2125 CS (линолеоил макрогольглицериды), Labrasol (каприлокапроил макрогольглицериды); каприлаты, такие как Capryol™ 90 (пропиленгликоль монокаприлат) и Capryol™ PGMC (пропиленгликоль каприлат); лаураты, такие как Lauroglycol™ 90 (пропиленгликоль монолаурат) и Lauroglycol™ FCC (пропиленгликоль лаурат); олеаты, такие как Plurol Oleique CC497 (полиглицерил олеат); простые моноэтиловые эфиры, такие как Transcutol HP (простой моноэтиловый эфир диэтиленгликоля); неионные поверхностно-активные вещества на основе сорбитана, такие как Span 20 (сорбитан монолаурат), Span 80 (сорбитан олеат) и Span 85 (сорбитан триолеат), включая поверхностно-активные вещества на основе полиоксиэтилена сорбитана, такие как Tween 60 (полисорбат 60) и Tween 80 (полисорбат 80); смеси эмульгаторов, такие как Tandem 552/522 K (монодиглицериды и полисорбат 60) и Atmos 300K (монодиглицериды и пропиленгликоль); и токоферол полиэтиленгликоль 1000 сукцинат.
Иллюстративные агенты, контролирующие вязкость, включают желатин, альгиновую кислоту, агарозу, агар, каррагенан, смолы (например, ксантановую смолу, смолу плодов рожкового дерева, гуаровую смолу, смолу трагаканта, смолу карая и природную смолу) и полисахариды (например, метилцеллюлозу, глюкоманнан, галактоманнан и гуламан).
Иллюстративные витамины включают, но, не ограничиваясь этим, водорастворимые витамины (например, витамины B 1-5, 6, 7, 9 и 12 и C) и жирорастворимые витамины (например, витамины A, D, E или K).
Для пациента с дисфагией, вязкость раствора или дисперсии может быть важным фактором. Пациенты с дисфагией, как правило, требуют ограничения их диеты пищевыми продуктами с соответствующей вязкостью. В соответствии с National Dysphagia Diet, диеты могут включать жидкости или полутвердые продуты, которые разделяются на жидкие (1-50 сП), нектарообразные (51-350 сП), медообразные (351-1750 сП), или не стекающие с ложки (>1751 сП) (The National Dysphagia Diet Task Force, National Dysphagia Diet: Standardization for Optimal Care. Chicago, IL, American Dietetic Association; 2002). Вязкость раствора или дисперсии в настоящем документе может находиться в любом пригодном для использования диапазоне (например, 1-450 сП, 1-1000 сП, 1-2000 сП, 1-200000 сП, 50-1000 сП, 50-2000 сП, 500-100000 сП, 1000-200000 сП или 50000-200000 сП). В одном из примеров, вязкость раствора или дисперсии составляет от 1 до 450 сП. В другом примере, вязкость раствора или дисперсии составляет от 50000 до 200000 сП.
Композиции могут необязательно содержать красители, ароматизирующие агенты, подсластители или агенты, маскирующие вкус, для получения более приятного на вкус препарата. Иллюстративные красители включают диоксид титана и красители, которые можно найти в Kirk Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, Vol 5, Fourth edition, August 2009, pages 837-884. Иллюстративные ароматизирующие агенты включают мяту перечную, ментол, апельсин, лимон, мяту обыкновенную, корицу, вишню, лайм, ваниль, мандарин и включают другие ароматизаторы, описанные в National Academy of Sciences-National Research Council, "Chemicals Used in Food Processing," Publication 1274, pp. 63-258 (1965). Иллюстративные подсластители включают пептиды сложного L-аспартилфенилаланинметилового эфира; водорастворимые подсластители, включая соли сахарина из стевии (например, стевиол гликозиды, такие как Rebiana, который содержит в основном ребаудиозид A), цикламатные соли, ацефульфам-K, аспартам, сукралозу и глицирризанаты; природные подсластители, включая глюкозу, ксилозу, рибозу, маннозу, фруктозу, декстрозу, сорбитол и маннитол; и подсластители на основе белков, такие как тимидин и монеллин. Иллюстративные агенты, маскирующие вкус, включают коллоидные полисахариды, включая альгинат натрия; и другие агенты, маскирующие вкус, такие как ксантановая смола, каррагенан, гидроксипропилметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза и натрий карбоксиметилцеллюлоза.
Способ может включать ряд стадий последующей обработки. Например, порошкообразную композицию могут дополнительно стерилизовать, например, посредством обработки теплом, с помощью автоклава или плазменного окисления; измельчать, например, с использованием измельчителя или мельницы; лиофилизировать.
Дополнительные модификации способов, описанных в настоящем документе, могут включать любой способ, хорошо известный в области фармации, например, как описано в "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20th ed., ed. A. R. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins).
Порошкообразная композиция может быть характеризована с использованием различных способов, известных специалисту в данной области. Характеристика порошка в порошкообразной композиции может быть легко определена с использованием любого количества способов, включая дифракцию рентгеновского излучения на порошках, рассеяние света и микроскопию (такую как атомно-силовая микроскопия и сканирующая туннельная микроскопия). Размер частиц порошка может определяться с помощью любого пригодного для использования способа, включая определение размера на сите. Вязкость может определяться с помощью любого пригодного для использования способа, включая реометр или вискозиметр.
Кроме того, для определения количества фармацевтически активного соединения, связанного с пептидом, пептид может перевариваться вместе с соединением для определения точной композиции с помощью любого пригодного для использования способа (например, способа ВЭЖХ; масс-спектрометрии, такой как масс-спектрометрия с электрораспылением; или других аналитических способов, обычно используемых в фармацевтической промышленности).
Концентрация одного или нескольких соединений в препарате будет изменяться в зависимости от ряда факторов, включая дозировку лекарственного средства, которое должно вводиться, и способ введения. Оптимизация соответствующих дозировок может легко быть осуществлена специалистом в данной области в свете фармакокинетики соединения или сочетания соединений, используемых в композиции. Факторы, которые должны учитываться при установлении дозировок, включают удельную активность соединения; тяжесть состояния или симптомов пациента; возраст, состояние, массу тела, пол и диету пациента; использование (или отсутствие) других видов терапии и другие клинические факторы.
Введение может осуществляться один или несколько раз в день, в неделю (или через некоторый другой интервал в несколько дней) или по чередующемуся графику, так что цикл повторяется заданное количество раз (например, 2-10 циклов), или без определения.
Альтернативно, композиции могут вводиться, когда появляются симптомы.
Как правило, композиции вводятся ежедневно. В одном из вариантов осуществления, композиция содержит в пределах между 1-30% (мас./мас.) одного или нескольких соединений и 90-99% (мас./мас.) белка. В другом варианте осуществления, композиция дополнительно содержит белок или гидролизированный белок, который составляет от 500 Да до 1000000 Да. В предпочтительном варианте осуществления, белок или гидролизированный белок имеет массу больше чем 500 кДа.
Композиция может содержать фармацевтически активное соединение и белок или гидролизированный белок при пригодном для использования массовом отношении, например, от 1:1 до 1:1000 (например, 1:1, 1:2, 1:5, 1:10, 1:25, 1:50, 1:100, 1:500, 1:750, 1:1000 и другие отношения между ними). Предпочтительные массовые отношения включают отношения от 1:10 до 1:100 (например, 1:10-1:20, 1:10-1:50, 1:20-1:100). Эти массовые отношения могут также быть выражены как проценты, где процент соединения по отношению к белку находился бы в пределах между 1% и 10% масс. Чаще всего, процент соединения по отношению к белку находился бы в пределах 1-5%.
Отношение фармацевтически активного соединения к белку может также быть выражено в терминах доступных центров связывания белка. Как правило, доступные центры связывания в белке по сравнению с количеством соединения присутствуют в большом избытке, где диапазон избыточных центров связывания может находиться в диапазоне от 1000 до более, чем 10000000 (например, 5000-10000000; 5000-100000000 или 1000-100000000).
Как правило, композиции по настоящему изобретению сохраняются в форме порошка до наступления времени введения пациенту, в этот момент порошок смешивают с жидким носителем с получением стабильного жидкого препарата. Например, порошкообразная композиция может подмешиваться в любую из разнообразных жидкостей, таких как вода или молоко, с образованием жидкого раствора или дисперсии (например, суспензии, коллоидного раствора, эмульсии, и тому подобное). В другом примере, композиция может подмешиваться в полутвердый или мягкий пищевой продукт, такой как пудинг или яблочный соус.
Стабильность дисперсии может легко определяться специалистом в области фармации или химии. Например, продукты деградации фармацевтически активного соединения в дисперсии могут измеряться в зависимости от времени. В другом примере, может определяться скорость седиментации при условиях равновесия.
Также, в настоящем документе предусматриваются наборы, содержащие порошкообразную композицию. Например, наборы содержат порошкообразную композицию, как описано в настоящем документе, жидкость, и инструкции по смешиванию порошкообразной композиции с жидкостью. Набор может дополнительно содержать контейнер, который может быть использован для смешивания порошкообразной композиции с жидкостью.
Жидкость из набора может представлять собой любой водный раствор, такой как вода или буфер. Жидкость может также включать один или несколько из агентов, описанных в настоящем документе. Иллюстративные агенты включают солюбилизирующие агенты, стабилизирующие агенты, поверхностно-активные вещества, консерванты, агенты, маскирующие вкус, подсластители, ароматизирующие агенты, диспергирующие агенты, красители, буферные агенты, агенты, усиливающие поглощение, антиоксиданты или витамины.
Как обсуждалось выше, порошкообразные композиции по настоящему изобретению содержат одно или несколько фармацевтически активных соединений и белок. Белок может представлять собой либо отдельный хорошо характеризуемый белок, либо сочетание белков со сходными молекулярными массами или с различными молекулярными массами, так, что получают приемлемые и медицински одобренные фармакокинетические параметры.
Фармакокинетические параметры могут легко быть определены специалистами в данной области. Фармакокинетический (PK) анализ может быть осуществлен с помощью некомпартментального (независимого от модели) или компартментального способа. Некомпартментальные способы оценивают экспонирование для лекарственного средства посредством оценки площади под кривой для графика концентрация - время. Компартментальные способы оценивают график концентрация - время с использованием кинетических моделей. Некомпартментальные способы часто являются более универсальными в том, что они не предполагают никакой конкретной компартментальной модели и дают точные результаты, приемлемые также для исследований биоэквивалентности.
Некомпартментальный PK анализ сильно зависит от оценок общего экспонирования для лекарственного средства. Общее экспонирование для лекарственного средства чаще всего оценивают с помощью способов с использованием площади под кривой ("AUC"), при этом интегрирование (численных дифференциальных уравнений) по формуле прямоугольников является наиболее распространенным способом оценки площади. Из-за зависимости от длины 'x' при интегрировании по формуле прямоугольников, оценка площади сильно зависит от временного графика отбора образцов крови/плазмы. Например, более близкие временные точки дают прямоугольники, которые ближе к реальной форме кривой концентрация - время.
Компартментальный PK анализ использует кинетические модели для описания и предсказания кривой концентрация - время. Компартментальные PK модели часто являются сходными с кинетическими моделями, используемыми в других научных дисциплинах, таких как химическая кинетика и термодинамика. Преимущество компартментальных анализов по сравнению с некоторыми некомпартментальными представляет собой возможность предсказания концентрации в любой момент времени. Однако их недостатки включают сложность разработки и оценки соответствующей модели. Моделирование, не включающие компартментизации, на основе фрагментирования кривых, не страдает от этого ограничения. Простейшая PK компартментальная модель представляет собой однокомпартментальную PK модель с внутривенным введением болюса и выведением по кинетике первого порядка. Наиболее сложные PK модели (называемые PBPK модели) основываются на использовании физиологической информации для простоты разработки и оценки.
Профиль концентрация - время может быть построен с помощью любых пригодных для использования биоаналитических методик, где соответствующие биоаналитические методы должны быть селективными и чувствительными. Примеры таких методов включают химические методики для измерения концентрации лекарственных средств в биологической матрице (например, в плазме) и масс-спектрометрию для наблюдения точек данных, соответствующих низким дозам и большим временам в биологической матрице (например, в крови или моче) с высокой чувствительностью, например, LC-MS (жидкостную хроматографию - масс-спектрометрию) с тройным квадрупольным масс-спектрометром и/или тандемную масс-спектрометрию.
Определенный белок (белки) может действовать как белок класса лекарственных средств, который связывает целый класс фармацевтически активных соединений. Примеры классов фармацевтически активных соединений включают статины, класс агентов, понижающих уровень липидов, который, как правило, содержит фармакофор из компонента модифицированной гидроксиглутаровой кислоты; дигидропиридины, класс агентов, блокирующих кальциевые каналы; ингибиторы ангиотензин-преобразующего фермента, класс молекул, используемых для лечения высокого кровяного давления и сердечной недостаточности; или определенные типы ингибиторов протеаз, класс молекул, используемых для лечения заболеваний, связанных со СПИД.
Белок класса лекарственных средств может быть определен с использованием различных методов. Например, может быть выбран определенный белок для связывания определенного фармакофора, присутствующего в классе фармацевтически активных соединений. Поскольку статины, как правило, имеют фармакофор из компонента модифицированной гидроксиглутаровой кислоты, белок класса лекарственных средств мог бы содержать положительно заряженные аминокислоты, которые образовывали бы ионную связь с компонентом гидроксиглутаровой кислоты. Таким образом, каждый химический класс лекарственных средств может иметь конкретный белок класса лекарственных средств в качестве предпочтительного партнера по связыванию в комплексе.
Однако конкретные белки класса лекарственных средств необходимы не всегда.
Белки включают белки из любых источников (например, природные или синтетические); белки с множеством центров связывания для катионных взаимодействий, анионных взаимодействий или других нейтральных взаимодействий прочного связывания или белки с карманами липофильных аминокислот (например, глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, метионина, пролина, фенилаланина, тирозина или триптофана) или гидрофильных аминокислот (например, серина, треонина, аспарагиновой кислоты, глютаминовой кислоты, лизина, аргинина, гистидина, аспарагина или глютамина). Например, некоторые белки содержат центры связывания, которые делают возможным неспецифичное связывание всех типов соединений. Предпочтительно, взаимодействие между белком и терапевтическим агентом представляет собой нековалентное взаимодействие. Примеры таких белков включают желатин, казеин, сывороточный белок, альбумин и белок сои.
Белки, представляющие особенный интерес для настоящего способа, представляют собой желатин, такой как желатин типа A и желатин типа B. Примеры композиций на основе желатина включают Jell-O, который может быть получен с различной вязкостью. Другой белок представляет собой сывороточный белок, который может представлять собой один или несколько белков, находящихся в сыворотке, включая альфа-лактальбумин, бета-лактоглобулин, бычий сывороточный альбумин, гликомакропептид (белок, получаемый из казеина), иммуноглобулины (например, IgGl, IgG2, IgGA и IgM), лактоферрин и лактопероксидазу. Сывороточный белок может также включать другие агенты, такие как лактоза, кальций или липиды (например, сфинголипиды или конъюгированную линолевую кислоту). Сыворотка дополнительно может быть определена как концентрат или изолят. Другой конкретный белок представляет собой альбумин, такой как бычий сывороточный альбумин или сывороточный альбумин человека. Альбумин может присутствовать как концентрат или изолят. В дополнение к этому, альбумин может поставляться в любой форме, например, как обезжиренное порошкообразное сухое молоко. Другой белок, представляющий особенный интерес, представляет собой белок сои, который может представлять собой один или несколько белков, находящихся в сое, включая β-конглицинин (или форму 7S) или глицинин (форму 11S).
Композиция может включать любое сочетание из одного или нескольких белков или гидролизованных белков. Например, композиция включает как сывороточный белок, так и казеин, как белок сои, так и казеин, как сывороточный белок, так и альбумин, или как сывороточный белок, так и белок сои.
Для контролируемого высвобождения соединения, казеин может быть использован как белок или как один из белков в сочетании белков. Казеин имеет тенденцию к образованию геля в желудке и может быть использован для медленного высвобождения соединения в течение некоторого времени.
Как описано в настоящем документе, белки могут гидролизироваться с образованием меньшего гидролизированного белка с большей водорастворимостью и с большей специфичностью по отношению к лекарственному средству или классу лекарственных средств. Гидролизированный белок содержит любой фрагмент белка, который короче, чем непроцессированный белок, такой как фрагмент, содержащий в пределах 1-99% аминокислот непроцессированного белка (например, в пределах 10-95%, 10-75%, 10-50%, 20-95%, 20-75%, 20-50%, 30-95%, 40-95% или 50-95%). Меньшие фрагменты также будут с меньшей вероятностью вызывать антигенные реакции. В дополнение к этому, гидролизированные белки с большей вероятностью будут иметь водорастворимые характеристики диспергирования. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления белок может быть денатурированным или частично денатурированным.
Белок или гидролизированный белок может иметь любой пригодный для использования размер, такой как от 500 до 10000000 Да (например, 500 Да - 100000 Да, 500 Да - 500000 Да, 500 Да - 10000000 Да, 1000 Да - 100000 Да, 1000 Да - 500000 Да и 1000 Да - 10000000 Да). Во всех случаях, размер белка изменяется от непроцессированного белка до гидролизированного белка. Гидролизированный белок может быть получен с помощью любого способа, который разрушает одну или несколько пептидных связей (или амидных связей) в непроцессированном белке. Пептидные связи могут разрушаться с помощью гидролиза (например, обработки с помощью одной или нескольких кислот, оснований, тепла или бактериального экстракта в воде или буфере); с помощью полного или ограниченного протеолиза, например, посредством использования фермента (например, пепсина, трипсина, папаина, бромелаина, фицина, термолизина, реннета, Alcalase, Neutrase, Protamex, Novo-Pro™ D или Flavourzyme) или любого их сочетания. Уровень гидролиза может определяться с помощью любого способа, такого как колоночная хроматография, молекулярные сита или прямое секвенирование пептида или гидролизированного пептида.
Чаще всего, гидролизированные белки получают посредством частичного ферментативного гидролиза. Таким образом, гидролизированный белок может иметь фрагменты, не превышающие 5 аминокислот, с молекулярной массой не превышающей 500 Да. Наиболее предпочтительным размером для белка будет размер, который делает возможной хорошую солюбилизацию в растворе или дисперсии или который будет образовывать гомогенную суспензию в растворе или дисперсии. Белок может изменяться по размерам на основе критериев растворимости и общей поверхностной плотности заряда белка.
Белок также может иметь больший размер и использоваться как в суспензии (например, в полутвердом пищевом продукте). Когда используют белки больших размеров, эти белки могут быть гидролизованы с использованием кислых условий или посредством использования тепла. Например, условия нагрева или кислотные условия могут быть использованы для казеина с целью определения того, какая именно форма казеината будет связывать и захватывать фармацевтически активное соединение. При использовании казеина, композиция будет, как правило, давать препарат соединения с медленным высвобождением. Таким образом, природа белка может сделать возможными формы с быстрым высвобождением, которые могут быть изменены с получением форм с медленным высвобождением.
В дополнение к размерам, могут быть рассмотрены и другие физические характеристики белка. В идеале, фармацевтически активное соединение прочно связывается с белком. Связь между соединением и белком может быть ковалентной, а более предпочтительно, нековалентной (например, с помощью электростатической связи, с помощью Ван дер Ваальсовых взаимодействий, с помощью множества областей нековалентного связывания, с помощью липофильного взаимодействия или с помощью притяжений на основе LogP). В некоторых случаях, конкретное соединение, имеющее свободный гидроксил, может быть связано ковалентно со свободной карбоксильной функциональной группой на пептиде, тем самым образуя сложноэфирную связь между соединением и пептидом. Возможно, чтобы сложноэфирная связь гидролизировалась, когда комплекс соединение - белок экспонируется для кислой окружающей среды желудка. В дополнение к этому, пептид будет перевариваться в желудке с помощью желудочных протеаз и до некоторой степени с помощью кишечных протеаз. Это действие будет высвобождать связанное соединение и делать возможным его нормальное поглощение в желудочно-кишечном тракте.
Фармацевтически активные соединения
Пригодные для использования фармацевтически активные соединения или их сочетания для использования в композициях и способах по настоящему изобретению, как правило, включают, как правило, соединения, у которых масса меньше чем 500 Да. Соответствующие соединения включают соединения из последних изданий the Physician's Desk Reference (PDR), the Merck Manual, or medical text book, Goodman and Gilman.
Соединения могут необязательно вводиться как фармацевтически приемлемая соль, такая как нетоксичные кислотно-аддитивные соли, или как комплексы металлов, которые широко используются в фармацевтической промышленности. Примеры кислотно-аддитивных солей включают соли органических кислот, таких как уксусная, молочная, памовая, малеиновая, лимонная, яблочная, аскорбиновая, янтарная, бензойная, пальмитиновая, субериновая, салициловая, винная, метансульфоновая, толуолсульфоновая или трифторуксусная кислота, или что-либо подобное; полимерных кислот, таких как дубильная кислота, карбоксиметилцеллюлоза или что-либо подобное; и неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, или что-либо подобное. Комплексы металлов включают комплексы цинка, железа, и тому подобное.
Примеры соединений или их сочетаний включают:
1A
агонисты рецепторов 5-HT (например, буспирон и тандоспирон);
2
2A
2B
2C
антагонисты рецепторов 5-HT, такие как антагонисты рецепторов 5-HT, 5-HT и 5-HT (например, сарпогрелат, азенапин, клозапин и оланзапин);
агонисты α-адренергических рецепторов (например, фенилэфрин, псевдоэфедрин и оксиметазолин);
антагонисты α-адренергических рецепторов, также известные как альфа-адренорецепторы или α-блокаторы (например, феноксибензамин, фентоламин, празосин и доксазосин); агонисты β-адренергических рецепторов (например, сальбутамол, альбутерол, левалбутерол, тербуталин, битолтерол, салметерол, формотерол и бамбутерол);
антагонисты β-адренергических рецепторов, также известные как бета-адреноцепторы или β-блокаторы (например, карведиол, пропранолол, надолол, тимолол, пиндолол, лабеталол, метрорпролол, атенолол, эсмолол и ацебутолол);
ингибиторы ацетилхолинэстеразы (например, донепезил, галантамин, ривастигмин и такрин);
анестезирующие средства (например, физостигмин, неостигмин и прокаин);
антагонисты рецепторов ангиотензина (например, валсартан, лосартан, олмесартан и ирбесартан);
ингибиторы ангиотензин-преобразующего фермента (например, каптоприл, эналаприл, лизиноприл и рамиприл);
антибиотики, включая пенициллины (например, амоксициллин, ампицилин и клоксициллин), цефалоспорины (например, цефазолин, цефиксим, цефтазидим и цефтриаксон), полимиксины, хинолоны (например, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, гатифлоксацин и гемифлоксацин), сульфонамиды (например, сульфаизодимидин, сульфаниламиды, сульфадиазин, сульфаметоксазол, сульфадиметоксин и сульфаметоксипиридазин), гликопептиды (например, ванкомицин), аминогликозиды (например, стрептомицин, неомицин, спектиномицин, гентамицин и канамицин), макролиды (например, эритромицин, азитрормицин и кетолид), тетрациклины (например, доксициклин, хлортетрациклин, мециклин и тигециклин), циклические липопептиды (например, даптомицин), оксазолидиноны (например, линезолид и торезолид) и их сочетания с другими терапевтическими агентами (например, амоксициллин с клавуланатом);
антихолинергические агенты (например, ипратропий бромид, окситропий бромид и тиотропий);
антикоагулянты (например, гепарин, кумадин, эпоксапарин, варфарин, апиксабан и ривароксабан);
антиконвульсанты (например, габапентин, топирамат, гидантоин, бензодиазепины, зонисамид, вальпроевую кислоту, этосуксимид, карбамазепин, примидон, ламотригин, фелбамат, леветирацетам и тиагабин);
антидепрессанты (например, флувоксамин, пароксетин, сертралин, десвенлафаксин, дулоксетин, милнаципран, венлафаксин, бупропион и атомоксетин);
противодиабетические агенты (например, инсулин, метформин, глипизид, глибурид, глимепирид, гликлазид, репаглинид, натеглинид, розиглитазон, пиоглитазон, миглитол, акарбоз, лираглутид, вилдаглиптин и ситаглиптин);
противогрибковые агенты (например, клотримазол, циклопирокс, кетоконазол, итраконазол, флуконазол, абафунгин, тербинафин гидрохлорид, аморолфин, нафтифин и бутенафин);
противовоспалительные агентов (например, аспирин, диклофенак и ингибиторы циклооксигеназ, такие как ибупрофен, кетопрофен и напроксен);
антигистаминные средства (например, карбиноксамин, клемастин, дименгидринат, пириламин, трипеленнамин, хлорфенирамин, бромфенирамин, гидроксизин, циклизин, акривастин, цетриризин, азеластин, лоратадин, фексофенадин, доксепин, дифенгидрамин, и все трициклические соединения, которые имеют антигистаминную активность, такие как амитриптилин, имипрамин, прометазин, хлорпромазин и нортриптилин);
2A
антипсихотические агенты (например, антагонисты рецепторов 5-HT, антагонисты допамина, галоперидол, дроперидол, хлорпромазин, флуфеназин, перфеназин, прохлорперазин, тиоридазин, арипипразол, трифлуперазин, мезоридазин, перициазин, промазин, трифлупромазин, прометазин, хлорпротиксен, флупентиксол, тиотиксен, зуклопентиксол, клозапин, оланзапин, рисперидон, кветиапин, зипразидон и зотепин);
агенты против агрегации тромбоцитов (например, абциксимаб, эптифибатид, тирофибан, клопидогрель, тиклопидин, прасугрель, берапрост, простациклин, илопрост, трепростинил, аспирин, дитазол, клорикромен, дипиридамол и трифлузаль);
антитромботические агенты (например, аспирин, дипиридамол, клопидогрель, прасугель и кангрелор);
противовирусные агенты, включая противовирусные ДНК (например, ацикловир, валацикловир, ганцикловир, фамцикловир, видарабин, фоскарнет, тромантадин, рифампицин, энтекавир, ламивудин, тельбивудин, адефовир, ставудин, зидовудин, абакавир, и тенофовир), общие ингибиторы нуклеиновых кислот (например, цидофовир, интерферон альфа-2b, пегинтерферон альфа-2a, рибавирин и тарибавирин) и противовирусные РНК (например, бокепревир, телапревир, преконарил, арбидол, амантадин, римантадин, озельтамивир, занамивир, перамивир и ланинамивир);
1A
анксиолитические агенты (например, альпразолам, хлордиазепоксид, клоназепам, диазепем, лоразепам, бензодиазепины и агонисты рецепторов 5-HT);
лекарственные средства, понижающие уровень холестерина, такие как статины (например, аторвастатин, правастатин, симвастатин, и рузовастатин);
агонисты допамина (например, апоморфин, бромокриптин, каберголин, лисурид, перголид, пирибедил, прамипексол и ропинирол);
антагонисты допамина (например, амисульприд и сертиндол);
ингибиторы эйкозаноидов (например, зафирлукаст, зилеутон и монтелюкаст);
глюкокортикоиды (например, беклометазон, гидрокортизон, кортизон ацетат, преднизон, преднизолон, метилпреднизолон, дексаметазон, бетаметазон, триамцинолон, флюдрокортизон ацетат, деоксикортикостерон ацетат и альдостерон);
,
агенты, блокирующие ионные каналы, такие как блокаторыкальциевых каналов (например, нифедипин, амлодипин, фелодипин, флунаризин, дилтиазем, верапамил, нифедипин и нимодипин) или блокаторы натриевых каналов (например, прокаинамид, хинидин, аймалин, дизопирамид, праймалин спартеин, лидокаин, мексилетин, токаинид, априндин, энкаинид, флекаинид, лоркаинид, морицизин и пропафенон);
ингибиторы моноаминоксидазы B (например, селегилин и разагилин);
антагонисты рецепторов N-метил d-аспартата (NMDA) (например, декстрометорфан и мемантин);
ингибиторы повторного захвата норэпинефрина (например, ребоксетин, дулоксетин и амитриптилин);
опиоиды (например, морфин, кодеин, меперидин и оксикодон);
простагландины (например, эпопростенол и альпростадил);
ингибиторы протонного насоса (например, омепразол, эзомепразол, пантопразол, лансопразол и рабепразол);
антагонисты ренина (например, алискирен и антидепрессанты с антагонистической активностью по отношению к ренину, такие как циталопрам, эсциталопрам и флюоксетин);
серотонинэргические средства (например, селективный ингибитор повторного захвата серотонина, агонист серотонина и частичный агонист серотонина);
стероидные противовоспалительные агенты (например, гидрокортизон, кортизон ацетат, флудрокортизон ацетат, деоксикортикостерон ацетат, преднизон, преднизолон, метилпреднизолон, дексаметазон, бетаметазон, триамцинолон, беклометазон и альдостерон);
трициклические соединения (например, амитриптилин и имипрамин);
агонисты тромбоксана A2 (например, раматробан и сератродаст); и
триптаны (например, алмотриптан, элетриптан, фроватриптан, наратриптан, ризатриптан, суматриптан и золмитриптан);
вазодилаторы (например, глицерил тринитрат, изосорбид динитрат, изосорбид мононитрат, линсидомин, молсидоимин, пентаэритритол тетранитрат и флозехинан) и
разнообразные лекарственные средства, такие как пнтоксифиллин и цилостазол.
Особенно благоприятные соединения или их сочетания включают те, которые, как правило, принимаются пожилыми людьми или пациентами с дисфагией. Примеры соединений, принимаемых пожилыми людьми, включают лекарственные средства для лечения расстройств CNS (центральной нервной системы), таких как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, деменция, хорея Хантингтона и эндогенная депрессия; сердечнососудистое заболевание, такое как застойная сердечная недостаточность, заболевание периферических артерий, аритмии и гипертония; легочные заболевания, такие как астма и хроническое обструктивное заболевание; инфекции вирусной бактериальной или грибковой природы; желудочно-кишечные заболевания, такие как заболевание желчного пузыря, дивертикулит, воспалительное заболевание желудка, гастроэзофагеальный рефлюкс и язвы желудка и кишечника; урологическое заболевание, такое как недержание мочи, проблемы с женским здоровьем, такие как остеоартритическое состояние; проблемы с мужским здоровьем, такие как доброкачественная гиперплазия простаты; раковые заболевания, такие как рак головы и шеи, легких, груди и толстой кишки; и эндокринные расстройства, связанные с функцией гипофиза и надпочечников.
Фармацевтически активные соединения включают любой тип соединений или их сочетания для лечения одного или нескольких распространенных заболеваний различной или одинаковой этиологии. Эти соединения и сочетания включают соединения для лечения расстройств CNS; одно или несколько лекарственных средств для лечения сердечнососудистого заболевания; одно или несколько лекарственных средств для лечения боли и воспаления; одно или несколько лекарственных средств для лечения желудочно-кишечного заболевания; один или несколько антибиотиков, противовирусных агентов или противогрибковых агентов для лечения инфекций или одно или несколько соединений для лечения комплекса множества независимых болезненных состояний.
Примеры соединений для лечения расстройств CNS (например, болезни Альцгеймера, деменции и болезни Паркинсона) включают ингибиторы ацетилхолинэстеразы, антагонисты рецепторов NMDA, антипсихотические агенты, анксиолитические агенты, леводопа, агонисты допамина, ингибиторы моноаминоксидазы B; соединения для лечения легочных заболеваний (например, астмы) включают агонисты β-адренергических рецепторов, антихолинергические агенты, ингибиторы эйкозаноидов и вдыхаемые или пероральные глюкокортикоиды; соединения для лечения сердечнососудистого заболевания (например, сердечной недостаточности) включают антагонисты β-адренергических рецепторов, ингибиторы ацетилхолинэстеразы, антагонисты рецепторов ангиотензина и вазодилаторы; соединения для лечения боли и воспаления включают противовоспалительные агенты, анестезирующие средства и опиоиды; соединения для лечения желудочно-кишечных заболеваний (например, воспалительного заболевания желудка, гастроэзофагеального рефлюкса или язв желудка и кишечника) включают серотонинэргические средства, трициклические соединения, антихолинергические агенты, опиаты, ингибиторы протонного насоса и антагонисты рецепторов H2 (например, циметидин); и соединения для лечения сосудистых заболеваний включают антитромботические агенты, антикоагулянты, лекарственные средства, понижающие уровень холестерина, или агенты против агрегации тромбоцитов, где примеры этих соединений приводятся в настоящем документе.
Другие пригодные для использования соединения или их сочетания включают соединения, принимаемые часто, например, по меньшей мере, один раз в день. Примеры таких соединений включают агонист альфа-адренорецепторов (например, фенилэфрин или псевдоэфедрин); анальгетическое средство (например, физостигмин, неостигмин или прокаин); анестезирующие средства; антиконвульсант (например, габапентин); антихолинергическое соединение; антигистаминное средство (например, дифенгидрамин); противовоспалительное соединение, такое как нестероидное противовоспалительное лекарственное средство; антагонист бета 2 рецептора (например, пропранолол); ингибитор циклооксигеназы (например, ибупрофен, кетопрофен или напроксен); соединение, блокирующее ионные каналы, такое как блокатор натриевых каналов или блокатор кальциевых каналов; антагонист рецепторов N-метил d-аспартата (NMDA) (например, декстрометорфан); ингибитор повторного захвата норэпинефрина; селективный ингибитор повторного захвата серотонина; агонист серотонина; частичный агонист серотонина; трициклическое соединение (например, амитриптилин или имипрамин) и/или триптан (например, алмотриптан, элетриптан, фроватриптан, наратриптан, ризатриптан, суматриптан или золмитриптан).
Пациенту могут вводиться сочетания двух или более соединений. Иллюстративные сочетания включают сочетание соединений для лечения сердечной недостаточности или сосудистого заболевания; двух антибиотиков или двух соединений для лечения смешанных терапевтических потребностей, таких как при гипертонии и сердечной недостаточности или при астме и сосудистом заболевании.
Фармацевтически активные соединения также охватывают любой нутрицевтик и сочетания веществ, которые имеют терапевтические или профилактические цели. Примеры нутрицевтиков включают ниацин, карнитин, ацетил карнитин, кофермент Q-10, поликозанол, витамины и природные антиоксиданты, такие как липоевая кислота, витамин E и витамин C.
Дополнительные особенности и преимущества настоящего изобретения дополнительно иллюстрируются с помощью следующих далее примеров, которые ни в коем случае не рассматриваются как его ограничение.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Общее приготовление жидкого препарата
В емкости, белок с характеристикой водорастворимого диспергирования, такой как гидролизированный сывороточный белок, вводят в раствор или суспензию с водным растворителем, таким как вода или буфер. Затем приготавливают концентрат лекарственного средства, используя стандартные и конкретные известные способы для введения лекарственного средства в раствор. Раствор белка нагревают приблизительно до 37°C и при постоянном перемешивании медленно добавляют концентрат лекарственного средства. Лекарственному средству позволяют связываться до наступления равновесия с белком. Белок присутствует в большом избытке по отношению к продукту лекарственного средства, заставляя, таким образом, продукт лекарственного средства по большей части осуществлять равновесное связывание. Как правило, доступные центры связывания белка присутствуют в большом избытке по сравнению с количеством лекарственного средства, которое должно быть связано, где диапазон избытка центров связывания может находиться в пределах от 1000 до более, чем 10000000. В терминах рассматриваемой массы, процент лекарственного средства по отношению к белку находится в диапазоне между 1% и 10% масс. Чаще всего, отношение продукта лекарственного средства к продукту белка находилось бы в диапазоне 1-5%. После достижения равновесия, комплекс белок: лекарственное средство охлаждают как минимум до комнатной температуры или до 23°C, фильтруют и повторно суспендируют в водном растворе. Красители, консерванты, агенты, маскирующие вкус, и другие агенты могут быть добавлены в водный раствор для получения оптимальной вязкости.
Пример 2: Связывание фентанила с бычьим сывороточным альбумином (BSA), как измерено с помощью равновесного диализа
Стандартный метод равновесного диализа с использованием двух камер используют для измерения связывания фентанила с BSA. В камеру "A" помещают 0,78 мМ раствор фентанила и 95 мг/мл BSA в 25 мМ фосфатном буфере при pH 7. В камеру "B" помещают 25 мМ фосфатный буфер при pH 7. Камеры A и B получают возможность для того, чтобы прийти в равновесие, в течение четырехдневного периода при комнатной температуре. Концентрации фентанила измеряют после разбавления образцов 1/10000 с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Agilent 6460 (Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA) с использованием следующего далее протокола, и результаты приведены в Таблице 3, ниже:
Приготовление образца.
Образцы плазмы (50 мкл) смешивают с ацетоном, содержащим 1% пиридина (200 мкл), в предварительно тарированной центрифужной пробирке. Все образцы центрифугируют при 4°C в течение 10 минут, при 15000 об/мин. После регистрации масс образцов, супернатанты переносят во вторую предварительно тарированную центрифужную пробирку, и объем уменьшают в вакууме с помощью использования концентратора SpeedVac. Остаточные объемы образцов, не содержащих ацетона, определяют по массе. Средние объемы образцов после концентрирования составляют приблизительно 40 мкл.
Анализ с помощью LC-MS/MS.
5 мкл аликвоту каждого обработанного образца подвергают воздействию жидкостной хроматографии на жидкостном хроматографе Agilent 1200 series, соединенном с Agilent 6460 Triple Quad LC/MS. Хроматографические условия приведены в Таблице 1. Детектирование либо фентанила, либо кетопрофена осуществляют с помощью MRM. Ион предшественник для фентанила имеет m/z 337, и ионы продуктов имеют m/z (m+1) 188 и 105. Ион предшественник для кетопрофена имеет m/z 255, и ионы продуктов имеют m/z (m+1) 209 и 105. Масс-спектроскопические условия приведены в Таблице 2.
Таблица 1
Условия анализа с помощью ВЭЖХ
Инжектируемый объем
5 мкл
Время опыта
4 мин
Подвижные фазы
"A" 0,1% муравьиная кислота в воде,"B" 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле
Градиент
0-0,5 мин 2% "B",0,51-2,5 мин 70% "B",2,51-4 мин 2% "B"
Скорость потока
0,8 мл/мин
Колонка
Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 Rapid Resolution HT, 4,6×50 мм, 1,8 микрона, 600 бар, PN 927975-902
Темп. колонки
60°C
Таблица 2
Масс-спектроскопические условия
Источник ионов
ESI+Agilent Jet Stream
Тип сканирования
MRM
Полярность
Положительная
Сегменты сканирования
ФентанилИон предшественник 337,2, ион продукта 188,1 Frag 136 В CE 18 В (Qual Prod 105, CE 38 В)КетопрофенИон предшественник 255 ион продукта 104,9 Frag 100 CE 10 (Qual Prod 209, CE 20)
Темп. газа
300°C
Поток газа
5 л/мин
Небулайзер
45 фунт/кв. дюйм (2,8 кг/кв. см)
Температура газа в кожухе
250°C
Поток газа в кожухе
11 л/мин
Капилляр
3500 В
Напряжение сопла
500 В
Результаты, приведенные в Таблице 3, ниже, показывают, что следуя трем отдельным определениям, фентанил, как показано, связывается с белком BSA.
Таблица 3
Связывание фентанила с белком BSA
Образец
Отделение
Фентанил(мкМ)
BSA(мг/мл)
Предпочтительность связывания A/B
Контроль (без BSA)
A
391
95
0,95
B
410
0
Определение 1
A
544
95
4,0
B
136
0
Определение 2
A
639
95
4,4
B
145
0
Определение 3
A
552
95
2,45
B
225
0
Пример 3: Антиноцицепция (анальгезия) у мышей, получающих фентанил, приготовленный в воде или связанный с BSA
Мышам, весящим в среднем 32 грамма, вводят с помощью зонда (перорально) фентанил, либо приготовленный в водном растворе, либо после связывания с BSA.
В каждом препарате используют эквимолярные количества основы фентанила. Анальгезию оценивают с помощью рефлекса отдергивания хвоста с использованием стимула в виде воды при 55°C. Результаты приведены на Фиг.1A, 1B и 2.
Данные, приведенные на Фиг.1A и 1B, демонстрируют, что фентанил, как приготовленный в воде, так и приготовленный в связанном состоянии с BSA, является одинаково сильнодействующим при индуцировании анальгезии при некотором отношении доза - реакция (каждая точка данных, приведенная на Фиг.1A и 1B, представляет три отдельных определения). Фиг.2 представляет собой прямое сравнение фентанила, приготовленного в воде, с фентанилом, связанным с BSA (как приведено на Фиг.1A и 1B). В этих экспериментах, фентанил, связанный с BSA, производит большую анальгетическую реакцию (смотри данные для 1 и 3,2 мг/кг фентанила в воде по сравнению с препаратом BSA).
Пример 4: Связывание кетопрофена с бычьим сывороточным альбумином (BSA), как измерено с помощью равновесного диализа
Стандартный метод равновесного диализа с двумя камерами используют для измерения связывания кетопрофена с BSA. В камеру "A" помещают 0,608 мМ раствор кетопрофена с 143 мг/мл BSA в 0,9% NaCl. В камеру "B" помещают 0,9% NaCl. Камеры A и B получают возможность для того, чтобы прийти в равновесие, в течение трехдневного периода при комнатной температуре. Концентрации кетопрофена измеряют после разбавления образцов 1/10000 с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Agilent 6460 (Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA) (смотри протокол, описанный выше). Результаты для четырех определений приведены в Таблице 4, ниже.
Таблица 4
Связывание кетопрофена с белком BSA
Образец
Отделение
Кетопрофен(мкМ)
BSA(мг/мл)
Предпочтительность связыванияA/B
Контроль (без BSA)
A
280
0
Без связывания
B
325
0
Определение 1
A
515
143
100% Связывание
B
0
0
Определение 2
A
696
143
100% Связывание
B
0
0
Определение 3
A
481
143
100% Связывание
B
0
0
Определение 4
A
532
143
100% Связывание
B
0
0
Пример 5: Сравнение фармакокинетического профиля поглощения для кетопрофена, приготовленного в 0,9% NaCl, и кетопрофена, связанного с раствором BSA
Мышам, весящим в среднем 32 грамма, вводят с помощью зонда перорально 1, 3, 2 или 10 мг/кг кетопрофена, либо приготовленного в 0,9% NaCl, либо связанного с BSA, при 143 мг/мл. Через 30 минут после дозирования кетопрофена, мышей анестезируют с помощью изофлурана, грудную клетку вскрывают, и отбирают кровь с помощью пунктуры сердца из левого вентрикула с использованием 1-мл шприца (игла 22G, 1 дюйм (2,54 см)).
Кровь помещают в 1 мл EDTA в обработанных микроконтейнерах и хранят на льду. Плазму отделяют от цельной крови с использованием центрифугирования при 1500 об/мин в течение 15 минут. Выделенную плазму хранят на льду и анализируют на присутствие кетопрофена с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Agilent 6460 (Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA). Определяют профили поглощения для кетопрофена, введенного в солевом растворе, и для кетопрофена, связанного с BSA, и они приведены на Фиг.3. Каждая точка данных представляет собой среднее значение для трех различных определений. При 1 мг/кг и 3,2 мг/кг нет никакого различия между поглощением кетопрофена, связанного с BSA, и кетопрофена, вводимого в солевом растворе. Данные для высоких доз кетопрофена (10 мг/кг) показывают, что BSA облегчает поглощение кетопрофена и может повысить биологическую доступность лекарственного средства.
Все публикации, заявки на патенты и патенты, рассмотренные в настоящем описании, включаются в настоящий документ в качестве ссылок.
Различные модификации и варианты описанного способа и система по настоящему изобретению будут очевидны специалистам в данной области, без отклонения от рамок и духа настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение описывается в связи с конкретными желательными вариантами осуществления, должно быть понятно, что настоящее изобретение, как оно заявляется, не должно излишне ограничиваться такими конкретными вариантами осуществления. В самом деле, различные модификации описанных режимов осуществления настоящего изобретения, которые являются очевидными для специалистов в области медицины, фармакологии или в смежных областях, как предполагается, находятся в рамках настоящего изобретения.