Изменение показателей цитокинов при дисбиотических состояниях во время беременности

ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЦИТОКИНОВ ПРИ ДИСБИОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ

И.О. Макаров, С.М. Воеводин, Т.В. Шеманаева, А.Ю. Муравей

Кафедра акушерства и гинекологии ФППОВ ГОУ ВПО Первый московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Россия, 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8-2

В исследование были включены 50 беременных. Основную группу составили 30 беременные, у которых был верифицирован диагноз БВ, группу сравнения - 20 беременных с нормальным микробиоценозом влагалища. В слизи из цервикалъного канала определяли содержание провоспалителъных цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10). Показатель местного иммунитета до лечения беременных с БВ характеризовался достоверным повышением уровня про- и противовоспалительных цитокинов по отношению к их продукции у беременных с нормальным вагинальным микроценозом. После лечения БВ уровни ци-токинов приближались к показателям здоровых беременных. Качественные и количественные изменения в уровнях цитокинов отражают степень активации иммунокомпетентных клеток при патологическом процессе.

Ключевые слова: бактериальный вагиноз, беременность, цитокины.

В настоящее время отмечается рост вагинальных инфекций, бактериальные вагиниты и вагинозы продолжают занимать ведущее место в структуре акушер-ско-гинекологических заболеваний, повышая частоту гнойно-септических осложнений в послеродовом периоде [1, 2, 3]. Нарушение микроциноза влагалища - бактериальный вагиноз (БВ) - имеет широкое распространение у женщин репродуктивного возраста (до 84%), среди беременных его частота составляет от 10 до 27% [1, 2, 6, 7].

Первичная защита слизистых оболочек женских половых органов от патогенов осуществляется за счет иммунных механизмов (лимфоциты, нейтрофилы, макрофаги слизистой оболочки синтезируют цитокины, секреторные иммуноглобулины, поступающие в цервикальную слизь). Поэтому исследование цер-викальной слизи можно использовать в качестве неинвазивной диагностики у беременных женщину для верификации различных осложнений [4, 5, 8, 9, 10]. При дисбактериозе происходит вытесненение лактобактерий с развитием среды с более высокой вирулентностью, приводящее к неблагоприятному течению беременности и родов. У беременных с привычным невынашиванием развитие дисбиотических процессов в микрофлоре влагалища и перситенция микроорганизмов в цервикальном канале приводят к достоверному превышению провос-палительных цитокинов ФНО, ИФН, ИЛ-6 над регуляторными ИЛ-4, ИЛ-10 в отличие от здоровых беременных [10, 11]. Следовательно, изучение местного иммунитета у беременных имеет важное значение для осуществления профилактики и лечения дисбиотических процессов нижних отделов половых путей женщины.

Целью настоящего исследования явилось определение показателей состояния местного иммунитета (содержания провоспалительных и противовоспалительных цитокинов) в отделяемом цервикального канала у беременных с дисбиотическими процессами.

Материал и методы. В исследование были включены 50 беременных. Основную группу составили 30 беременных с диагнозтированным у них БВ, контрольную группу - 20 беременных с нормальным микробиоценозом влагалища. Уровень цитокинов в отделяемом цервикального канала определяли в I триместре беременности до лечения БВ, затем повторяли после лечения в 20-21 неделю и в 37-38 недель гестации. В указанные сроки определяли содержание цито-кинов в отделяемом цервикального канала у пациенток контрольной группы.

Оценку состояния микробиоценоза влагалища проводили на основании микроскопии вагинальных мазков, окрашенных по Граму, и культурального исследования вагинального содержимого. Диагностика БВ основывалась на определении G. vaginalis и Lactobacillis spp. во влагалищном секрете методом количественной полимеразной цепной и микроскопии мазка (обнаружение ключевых клеток).

Забор слизи из цервикального канала осуществляли по известной методике и помещали в пробирку типа Эппендорф, проводили экстракцию встряхиванием на вортексе в течение 1 мин., смесь центрифугировали в течение 5 мин. при 900 g и отбирали надосадочную жидкость, которую сразу замораживали и хранили до анализа при - 80 öC. В слизи цервикального канала определяли содержание провоспалительных (ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8) и цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10) методом иммуноферментного анализа (ELISA), наборами фирмы «Цитокин» (Санкт-Петербург). Оптическую плотность определяли на планшетном анализаторе фирмы BioTek (США) при длине волны 450 нм. Количественное содержание цитокинов в цервикальной слизи нормировали путем пересчета на общий белок в пробах, определение которого проводили колориметрическим методом с помощью бицинхониновой кислоты (Sigma, США). Статистическую обработку данных проводили по общепринятым методам вариационной статистики (с помощью ¿-критерия Стьюдента).

Полученные результаты. Пациентки обеих групп были сопоставимы по возрасту, началу менархе и половой жизни. Так, средний возраст обследуемых групп составил 30,2±2,18 года в основной группе и 27,4±3,1 года - в контрольной группе. Соответственно начало менархе в 13,6±1,2 года в основной группе и 13,3±1,1 года - в контрольной группе. Начало половой жизни у женщин основной группы отмечено с 17,5±1,6 года и в контрольной группе начало половой жизни с 17,6±1,6 года.

При изучении репродуктивного анамнеза в основной группе 20% женщин были первобеременными, 80% — повторнобеременными. Среди повторнобере-менных 62,5% в анамнезе имели медицинские аборты, а 37,5% - самопроизвольные выкидыши в разные сроки беременности. В контрольной группе пер-вобеременные составили 90%, имевшие медицинские аборты - 6%, самопроизвольные аборты -у 4% женщин.

При оценке соматической заболеваемости достоверно чаще в основной группе отмечены заболевания желудочно-кишечного тракта у 9 (30%), по сравнению с контрольной группой - у 2 (10%), а также заболевания мочевыдели-тельной системы - у 8 (26,7%) женщин основной группы и у 1 (5%) - контрольной группы (р<0,05), что свидетельствует о наличии факторов риска развития дисбактериотических процессах в организме беременной женщины основной группы. При анализе гинекологических заболеваний выявлен высокий процент распространенности воспалительных и фоновых заболеваний шейки матки в основной группе - 60% и 10% - в группе сравнения (р<0,05). Воспалительные заболевания придатков матки в анамнезе отмечены у 40% и 5% беременных соответственно группам (р<0,05).

В обеих группах произошли срочные роды. В основной группе 9 (30%) и контрольной группе 3 (15%) беременных были родоразрешены путем операции кесарева сечения по различным показаниям. Преждевременное излитие околоплодных вод отмечено у 7 (23,3%) беременных основной группы и у 2 (10%) -в контрольной группе. Разрывы мягких тканей родовых путей наблюдались у 12 (40%) беременных основной группы и у 4 (20%) беременных - в контрольной группе. Таким образом, родовой травматизм матери был достоверно ниже в контрольной группе по сравнению с основной группой (р<0,05).

Послеродовой период у пациенток обеих групп протекал без осложнений, средняя продолжительность госпитализации составила 6,5±0,85 суток в основной группе и 6,1±0,7 суток - в контрольной группе. Признаков внутриутробного инфицирования плода не выявлено в обеих группах.

В результате проведенного исследования выявлены достоверные различия в содержании цитокинов в отделяемом цервикального канала в I триместре у беременных с БВ и у беременных с нормальным микробиоценозом влагалища: уровни как про-, так и противовоспалительных цитокинов в основной группе в 2 раза и более превышали аналогичные показатели в контрольной группе (табл. 1).

Таблица 1

Уровни цитокинов

Цитокин Триместр беременности Основная группа

ИЛ-6 I 2322±313,2 321±14,2

II 1081±148,1 181±44,2

III 428±73,2 124±34,2

ИЛ-10 I 58,1±5,2 8,1±2,2

28,6±3,2 18,9±10,2

III 29,8±4,2 27,8±14,2

ИЛ-8 I 1321±124,2 621±114,2

1226±108,3 821±110,2

III 1521±214,1 1321±314,2

ИЛ-2 I 297,1±14,9 7,1±4,7

86,5±11,5 6,5±0,5

III 29,3±6,2 78,8±34,2

ИЛ-4 I 36,1±3,9 20,6±14,9

II 4,2±0,8 112± 104,2

III 3,1±0,3 2,1±0,2

Анализируя характер содержания цитокинов в цервикальной слизи в контрольной группе выявлено, что в I триместре беременности практически все исследованные цитокины количественно характеризуются минимальными значениями (за исключением ИЛ-10, уровень которого достоверно повышается в III триместре по сравнению с содержанием в I триместре), что обусловлено адекватным функционированием гистогематического барьера и как следствие созданием наиболее благоприятных условий для развивающейся беременности.

После лечения БВ микрофлора влагалища у беременных основной группы, по данным микробиологического обследования, соответствовала показателям у здоровых беременных. Достоверное снижение уровня ряда цитокинов у беременных основной группы в динамике беременности, за исключением уровней ИЛ-8, связано с отсутствием выраженного воспаления слизистой влагалища при БВ, снижением киллерной активности фагоцитирующих клеток.

В основной группе отмечено снижение содержания ^-8 и ИЛ-10 во II триместре (после лечения) и вновь повышение содержания в цервикальной слизи в III триместре беременности. Однако при достоверном снижении их концентрации после лечения средние значения содержания ИЛ-8, ИЛ-10 во II триместре беременности остаются повышенными по сравнению с контрольной группой. Средние показатели содержания исследуемых цитокинов в III триместре беременности в основной группе максимально приближены к значениям в группе сравнения.

Достоверное повышение концентрации ИЛ-10 у здоровых беременных в поздние сроки гестации обусловлено изменением состояния иммунной системы организма перед родами, а высокое содержание ИЛ-10 при БВ в I триместре беременности связано с реализацией регуляторной функции на фоне активной продукции провоспалительных цитокинов.

Отмечено достоверное снижение ИЛ-2 и ИЛ-4 в цервикальной слизи при БВ после лечения с сохранением минимальных концентраций к родам.

Выводы и обсуждения. Таким образом, до проведенной медикаментозной терапии содержание про- и противовоспалительных цитокинов в отделяемом цервикального канала у беременных с БВ дотоверно выше, чем в контрольной группе. При БВ отмечается снижение лактобактерий, что способствует несбалансированной продукции цитокинов, изменению микросреды, влияя на качество и состав выделяемой слизи. Дисбиотические нарушения во влагалище приводят к изменению местного иммунитета, снижают функциональный резерв клеток, изменяя их метаболическую активность (изменение синтеза белка клетками эндоцервикса), в конечном итоге ухудшая биомеханические свойства шейки матки. Качественные и количественные изменения в уровнях цитокинов отражают степень активации иммунокомпетентных клеток при БВ.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Акушерство: Национальное руководство / Под ред. Э.К. Айламазяна, В.И. Кулакова, В.Е. Радзинского, Г.М. Савельевой. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.

[2] Макаров О.В., Озолиня Л.А., Сумеди Т.Н. Изменение показателей иммунитета у пациенток с невынашиванием беременности инфекционного генеза в I триместре // Рос. вест, акуш.-гин. - 2008. - № 6. - С. 28-32.

[3] Радзинский В.Е., Оразмурадов А.А. Ранние сроки беременности // Status praesens. -2009. - С. 136-151.

[4] Радзинский В.Е. Рук-во к практическим занятиям по акушерству. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.

[5] Радзинский В.Е., Ордиянц И.М., Оразмурадов А.А. Женская консультация. - 3-е изд. - М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2009.

[6] Репродуктивное здоровье: Учеб. пособ. / Под ред. В.Е. Радзинского. - М.: РУДН, 2011.

[7] Саркисов С.Э., Емец Р.Н., Куранов И.И., Луговая А.В., Барсегян Г.О. Немедикаментозный метод коррекции дисбиоза влагалища как профилактика инфекционно-воспалительных осложнений гистероскопии // Вестник РУДН. Сер. «Медицина. Акушерство и гинекология». - 2011. - № 6. - С. 205-212.

[8] Муллагалина А.З. Бактериальный вагиноз у женщин, страдающих неспецифическим язвенным колитом // Вестник РУДН. Сер. «Медицина. Акушерство и гинекология». - 2011. - № 6. - С. 212-219.

[9] Bates M.D., Quenby S., Takakuwa К. et al. Abberant cytokine production by peripheral blood mononuclear cells in reccurent pregnancy loss? // Hum. Reprod. - 2002. - Vol. 17. -№ 9. - P. 2439-2444.

[10] Beigi R.H., Yudin M.H., Cosentino L. et al. Cytokines, pregnancy, and bacterial vaginosis: comparison of levels of cytokines in pregnant and nonpregnant women with bacterial vaginosis // J. Infect. Dis. - 2007. - Vol. 196. - № 9. - P. 1355-1360.

[11] Geisler W.M., Venglarik S.Y.M., Schwebke J.R. Vaginal leucocyte counts in women with bacterial vaginosis: relation to vaginal and cervical infections // Sex. Transmit. Infect. -2004. - Vol. 80. - P. 401-405.

CHANGE OF INDICATORS CYTOKINES AT DISBIOTICHESKY CONDITIONS DURING PREGNANCY

I.O. Makarov, S.M. Voevodin, T.V. Shemanaeva, A.Y. Muravey

First Moscow State Medical University Department of Obstetrics and Gynecology FPGPAM.

8-2, Trubetskaya street, Moscow, 119991, Russia

The study enrolled 50 pregnant. A study group included 30 pregnant women with the verified diagnosis of BV; a comparison group consisted of 20 pregnant women with normal vaginal microbio-cenosis. The levels of pro- (IL-2, IL-6, and IL-8) and anti-inflammatory (IL-4 and IL-10) cytokines were measured in the cervical canal mucus. Pretreatment local immunity in pregnant women with BV showed a significant increase in the levels of pro- and anti-inflammatory cytokines in reference to their production in pregnant women with normal vaginal microcenosis. After BV treatment, the content of cytokines approximated those in healthy pregnant women. Conclusion. Qualitative and quantitative changes in the levels of cytokines reflect the activation of immunocompetent cells during pathological process.

Key words: bacterial vaginosis, pregnancy, cytokines.