СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДОНОРСКОГО ТРАНСПЛАНТАТА БОУМЕНОВОЙ МЕМБРАНЫ
METHOD FOR OBTAINING DONOR TRANSPLANT OF BOWMAN MEMBRANE

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к способам получения донорской боуменовой мембраны для проведения трансплантации.
В современной кератотрансплантологии роговичные трансплантаты можно выкраивать как непосредственно во время оперативного вмешательства (трансплантат имеет характеристики, предпочитаемые хирургом), так и заранее, что экономит время хирурга, делает операцию прогнозируемой. Кроме того, трансплантаты можно выкраивать как мануально, что однако трудно стандартизировать, так и автоматизированно - с помощью кератома, фемтосекундного лазера, эксимерного лазера и проч. Трансплантаты роговицы отличаются составом ткани роговицы и толщиной (полнослойные, послойные, ультратонкие).
Трансплантат боуменовой мембраны представляет собой ультратонкий ацеллюлярный трансплантат, который может быть выкроен как предварительно, так и во время операции, как мануально, так и автоматизированно с помощью фемтосекундного лазера. Благодаря ацелюллюлярности проблема поддержания жизнедеятельности трансплантата неактуальна. Однако не всегда удается добиться полноценной ациллюлярности.
Ближайшим аналогом предлагаемого способа является способ того же назначения, при котором сначала донорское глазное яблоко устанавливают в фиксатор глаза донора, удаляют эпителий роговицы донора скребком либо тупфером, инсулиновой иглой 30G осуществляют пневматизацию стромы роговицы. В 1-2 мм от лимба той же иглой производят насечку роговицы на 180°. Боуменову мембрану окрашивают трипановым синим, со стороны насечки пинцетом отслаивают боуменову мембрану в направлении к центру роговицы, после чего процедуру повторяют на протяжении остальных 180°. После отслоения, боуменова мембрана сворачивается в рулон и в дальнейшем ее используют для трансплантации [LieJT, Droutsas K. Ham Letal. Isolated Bowman layer transplantation to mange persistent subepithelial haze after excimerlaser surface ablation. J Cataract Refract Surg 2010; 36(6): 1036-41]. Однако при данном способе не удается контролировать глубину и направление насечки, следовательно, толщину и форму трансплантата боуменовой мембраны, что не позволяет гарантированно получить униформный, ультратонкий симметричный трансплантат круглой формы. Кроме того, после пневматизации, строма и задние слои роговицы не пригодны для трансплантации для других случаев, что отражает нерациональное использование донорского материала.
Задачей изобретения является дальнейшее совершенствование способа получения донорской боуменовой мембраны.
Техническим результатом предлагаемого способа является формирование ультратонкого симметричного круглого трансплантата боуменовой мембраны равномерной толщины, не включающего в свой состав стромальную ткань.
Технический результат достигается за счет формирования на гипотоничном донорском глазу надреза при помощи алмазного ножа с микрометром.
Выполнение надреза роговицы на гипотоничном корнеосклеральном диске, размещенном в искусственной передней камере, позволяет минимизировать глубину надреза, обеспечивающего необходимую толщину трансплантата.
Благодаря пониженному тургору роговичной ткани в условиях пониженного давления в передней камере исключается «пролапс» («протрузия») ткани роговицы в ограничитель кератометрического ножа.
Как известно, при кератэктазии и дистрофии базальной мембраны роговицы боуменова мембрана вовлекается в патологический процесс, а при формировании хейза после фоторефракционной кератэктомии, как правило, является следствием отсутствия боуменовой мембраны. При проведении надреза роговицы инъекционной иглой 30G не представляется возможным контролировать глубину, по причине невозможности контролирования степени компрессии иглы, вследствие этого глубина насечки разная на разном протяжении, и при формировании трансплантата боуменовой мембраны волокна стромы и клеточные элементы в той или степени могут входить в состав трансплантата. Это нежелательно, поскольку в состав трансплантата будут входить слои стромы, в том числе клеточные элементы, теоретически способные инициировать реакцию отторжения; трансплантат будет не только неравномерной толщины, но и толще, что будет влиять на оптические и рефракционные показатели роговицы.
Маркировка анатомического центра роговицы медицинским маркером и границы трансплантата циркулярным маркером необходимы для формирования пространственного представления о диаметре выкраиваемого трансплантата (чтобы трансплантат запланированного размера не оказался меньше, либо диаметр роговицы донора не оказался меньше запланированного диаметра трансплантата). Маркировка также позволяет исключить включение в состав трансплантата зоны arcus senilis (при его наличии).
Для того чтобы получать трансплантат необходимой толщины и без волокон стромальной ткани и клеточных элементов, в предложенном способе осуществляется контроль глубины надреза с помощью алмазного ножа с микрометром, преимущественно с величиной на 20 мкм меньше нулевой отметки.
Размещение сформированного трансплантата боуменовой мембраны между двумя мягкими контактными линзами и дальнейшее помещение в консервирующий раствор либо в контейнер с адсорбентом (силикагель) с целью консервации и отсроченного использования позволяет хранить трансплантат в расправленном состоянии (физиологический статус), исключить потерю ультратонкого прозрачного трансплантата в контейнере с консервирующим раствором или силикагелем, а также минимизировать либо исключить травматизацию трансплантата при манипуляциях с ним на этапе его извлечения из контейнера.
Способ осуществляют следующим образом.
В качестве донорского материала используют нативное глазное яблоко с поверхности которого полностью удаляют эпителий роговицы микрохирургическим скребком. Формируют корнеосклеральный диск диаметром 14-17 мм и устанавливают его в искусственную переднюю камеру. С помощью ограниченной подачи раствора BSS создается гипотония. Маркируют анатомический центр роговицы. Циркулярным разметчиком роговицы нужного диаметра производят маркировку с помощью трипанового синего. На шкале кератометрического алмазного ножа, устанавливают преимущественно величину на 20 мкм меньше нулевой отметки и проводят надрез боуменовой мембраны. Боуменову мембрану отслаивают и помещают эпителиальной стороной на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы, расправляют, прижимают выпуклой поверхностью второй мягкой контактной линзы и помещают мембрану, расположенную между линзами, в контейнер с консервирующим раствором или с силикагелем для последующего хранения.
Пример.
С поверхности нативного глазного яблока полностью удалили эпителий роговицы микрохирургическим скребком. Сформировали корнеосклеральный диск диаметром 14 мм и установили его в искусственную переднюю камеру. С помощью ограниченной подачи раствора BSS создали гипотонию. Промаркировали анатомический центр роговицы. Циркулярным разметчиком роговицы соответствующего диаметра провели циркулярную маркировку с помощью трипанового синего. На шкале кератометрического алмазного ножа установили величину на 20 мкм меньше нулевой отметки и провели надрез боуменовой мембраны на 1 мм периферичнее циркулярной разметки. Пинцетом отслоили периферию боуменовой мембраны на протяжении 360° и далее в направлении от периферии к центру роговицы. Боуменову мембрану погрузили в 70% спирт на 30 сек для элиминации остаточных клеток эпителия, далее погрузили в раствор BSS (сбалансированный солевой раствор) на 30 сек, далее на 30 сек в 0,06% раствор трипанового синего для окрашивания и снова в раствор BSS на 30 сек для удаления излишка красителя. Трансплантат разместили между двумя мягкими контактными линзами для последующего трепанирования нужного диаметра, либо хранения в расправленном состоянии в контейнере с консервирующим раствором либо силикагелем.
Таким образом, предложенный способ обеспечивает формирование боуменовой мембраны со стандартизированными параметрами, без примесей стромальной ткани, а также удобное щадящее хранение для последующей трансплантации.