СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНЫХ КЛЕТОК

1. Способ генной инженерии T-клеток, включающий:
(a) инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях в течение 2-6 дней, при этом указанная исходная композиция содержит популяцию T-клеток, включающую подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, способного активировать один или более внутриклеточных сигнальных доменов одного или более компонентов комплекса TCR и/или один или более внутриклеточных сигнальных доменов одной или более костимулирующих молекул, с получением стимулированной композиции, и
(b) введение нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор, в стимулированную композицию T-клеток, при этом введение проводят в течение по меньшей мере части периода инкубации.
2. Способ генной инженерии T-клеток, включающий инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях в течение 2-6 дней, при этом указанная исходная композиция содержит популяцию T-клеток, включающую подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом:
стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, способного активировать один или более внутриклеточных сигнальных доменов одного или более компонентов комплекса TCR и/или один или более внутриклеточных сигнальных доменов одной или более костимулирующих молекул, с получением стимулированной композиции; и
инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях проводят до, в процессе и/или после введения нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор.
3. Способ по п. 1 или 2, при этом инкубацию проводят в течение по меньшей мере 3 дней.
4. Способ по п. 1 или 2, при этом инкубацию проводят в течение по меньшей мере 4 дней.
5. Способ по п. 1 или 2, при этом инкубацию проводят в течение по меньшей мере 5 дней.
6. Способ по п. 1 или 2, при этом инкубацию проводят в течение по меньшей мере 6 дней.
7. Способ стимуляции T-клеток, включающий:
(a) инкубацию в стимулирующих условиях исходной композиции, содержащей T-клетки, включающие необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток, или их подмножества CD8+ T-клеток, с получением стимулированной композиции, при этом стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, способного активировать один или более внутриклеточных сигнальных доменов одного или более компонентов комплекса TCR и/или один или более внутриклеточных сигнальных доменов одной или более костимулирующих молекул, с получением стимулированной композиции; и
(b) введение в стимулированную композицию клеток нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор, с получением данным способом произведенной композиции, содержащей T-клетки, экспрессирующие генно-инженерный рекомбинантный рецептор.
8. Способ по п. 7, при этом T-клетки включают подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом стимулирующие условия предпочтительно индуцируют размножение или пролиферацию подобных «необученным» T-клеток в сравнении с не подобными «необученным» T-клетками в стимулированной композиции.
9. Способ по п. 7 или 8, при этом введение проводят в течение по меньшей мере части периода инкубации или проводят после инкубации.
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
10. Способ по любому из пп. 7-9, при этом необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток составляет от, или от примерно, 0,1×10 до 5×10, от, или от примерно, 0,1×10 до 4×10, от, или от примерно, 0,1×10 до 2×10, от, или от примерно, 0,1×10 до 1×10, от, или от примерно, 1×10 до 5×10, от, или от примерно, 1×10 до 4×10, от, или от примерно, 1×10 до 2×10, от, или от примерно, 2×10 до 5×10, от, или от примерно, 2×10 до 4×10 подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток.
8
8
8
8
8
8
11. Способ по любому из пп. 7-10, при этом необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток составляет по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или составляет, или составляет примерно, 0,5×10, 0,75×10, 1×10, 1,5×10, 2×10 или 4×10 подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток.
8
12. Способ по любому из пп. 7-11, при этом необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток составляет по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или составляет, или составляет примерно, 2×10 подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток.
8
8
13. Способ стимуляции T-клеток, включающий инкубацию в стимулирующих условиях исходной композиции, содержащей T-клетки, включающие необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток, составляющее от, или от примерно, 1×10 до 4×10 подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток, с получением стимулированной композиции, при этом стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, способного активировать один или более внутриклеточных сигнальных доменов одного или более компонентов комплекса TCR и/или один или более внутриклеточных сигнальных доменов одной или более костимулирующих молекул, с получением стимулированной композиции.
14. Способ по п. 13, при этом T-клетки включают подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом стимулирующие условия предпочтительно индуцируют размножение или пролиферацию подобных «необученным» T-клеток в сравнении с не подобными «необученным» T-клетками в стимулированной композиции.
8
15. Способ по п. 13 или 14, при этом необходимое для инициации культуры количество подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток составляет по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или составляет, или составляет примерно, 2×10 подобных «необученным» T-клеток или их подмножества CD8+ T-клеток.
16. Способ по любому из пп. 7-15, при этом необходимое для инициации культуры количество представляет собой количество подобных «необученным» CD8+ T-клеток.
17. Способ по любому из пп. 1-16, при этом подобные «необученным» T-клетки или подобные «необученным» CD8+ T-клетки:
имеют на поверхности T-клеточный маркер активации, выбранный из группы, состоящей из CD45RA, CD27, CD28 и CCR7; и/или
не имеют на поверхности маркер, выбранный из группы, состоящей из CD25, CD45RO, CD56, CD62L, KLRG1; и/или
имеют низкую экспрессию CD95; и/или
лишены внутриклеточной экспрессии цитокина, выбранного из группы, состоящей из IL-2, IFN-γ, IL-4, IL-10.
18. Способ по любому из пп. 1-16, при этом подобные «необученным» клетки или подобные «необученным» CD8+ клетки:
имеют на поверхности T-клеточный маркер активации, выбранный из группы, состоящей из CD45RA, CD27, CD28 и CCR7; и/или
не имеют на поверхности маркер, выбранный из группы, состоящей из CD45RO, CD56, KLRG1; и/или
имеют низкую экспрессию CD95.
19. Способ по любому из пп. 1-18, при этом подобные «необученным» T-клетки или подобные «необученным» CD8+ клетки представляют собой CD45RA+, CD27+, CCR7+ и/или CD45RO- клетки.
20. Способ по любому из пп. 1-7, 8-12 и 14-19, при этом не подобные «необученным» T-клетки:
не имеют на поверхности T-клеточный маркер активации, выбранный из группы, состоящей из CD45RA, CD27, CD28 и CCR7; и/или
имеют на поверхности маркер, выбранный из группы, состоящей из CD25, CD45RO, CD56, CD62L, KLRG1 и перфорина; и/или
имеют внутриклеточную экспрессию цитокина, выбранного из группы, состоящей из IL-2, IFN-γ, IL-4, IL-10; и/или
имеют высокую экспрессию CD95.
21. Способ по любому из пп. 1-7, 8-12 и 14-20, при этом не подобные «необученным» T-клетки представляют собой CD45RA-, CD27-, CCR7- и/или CD45RO+ клетки.
22. Способ по любому из пп. 1-21, при этом клетки исходной композиции не подвергали и не подвергают перед инкубацией этапу селекции, основанной на эндогенном T-клеточном поверхностном маркере, который позволяет различать подобные «необученным» и не подобные «необученным» T-клетки.
23. Способ по любому из пп. 13-22, дополнительно включающий введение генно-инженерного рекомбинантного рецептора в стимулированные клетки,
с получением данным способом произведенной композиции, содержащей T-клетки, экспрессирующие генно-инженерный рекомбинантный рецептор.
24. Способ по п. 23, при этом инкубацию композиции в стимулирующих условиях проводят до, в процессе и/или после введения нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор.
25. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-24, при этом рекомбинантный рецептор способен связывать антиген-мишень, который связан с, специфичен для, и/или экспрессируется на клетке или ткани, связанной с заболеванием, нарушением или состоянием.
26. Способ по п. 25, при этом заболевание, нарушение или состояние представляет собой инфекционное заболевание или нарушение, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание или опухоль, или рак.
27. Способ по п. 25 или 26, при этом антиген-мишень представляет собой опухолевый антиген.
28. Способ по любому из пп. 25-27, при этом антиген-мишень выбирают из интегрина αvβ6 (интегрина avb6), антигена созревания В-клеток (BCMA), карбоангидразы 9 (CAIX), Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, B7-H3, B7-H6, карбоангидразы 9 (CA9, также известной как CAIX или G250), раково-тестикулярного антигена, раково-тестикулярного антигена 1B (CTAG, также известного как NY-ESO-1 и LAGE-2), карциноэмбрионального антигена (CEA) и поверхностного антигена вируса гепатита B, антифолатного рецептора, циклина, циклина A2, лиганда 1 хемокина с мотивом C-C (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, хондроитинсульфат протеогликана 4 (CSPG4), белка эпидермального фактора роста (EGFR), эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), эфрина B2, рецептора эфрина A2 (EPHa2), erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, мутантного рецептора эпидермального фактора роста III типа (EGFR vIII), фолат-связывающего белка (FBP), подобного Fc-рецептору белка 5 (FCRL5; также известного как гомолог Fc-рецептора 5 или FCRH5), эмбрионального ацетилхолинового рецептора (эмбрионального AchR), фолат-связывающего белка (FBP), фолатного рецептора альфа, ганглиозида GD2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), ганглиозида GD3, глипикана-3 (GPC3), связанного с G-белками рецептора 5D (GPRC5D), Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), димеров erbB, человеческого высокомолекулярного антигена, связанного с меланомой (HMW-MAA), поверхностного антигена вируса гепатита B, человеческого лейкоцитарного антигена A1 (HLA-A1), человеческого лейкоцитарного антигена A2 (HLA-A2), рецептора альфа IL-22 (IL-22R-альфа), IL-13R-альфа2 (IL-13Rα2), рецептора домена киназной вставки (kdr), легкой цепи каппа, Lewis Y, L1-молекулы клеточной адгезии (L1-CAM), CE7 эпитопа L1-CAM, представителя A семейства 8 белков, содержащих богатые лейцином повторы (LRRC8A), Lewis Y, меланома-ассоциированного антигена (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, мезотелина (MSLN), c-Met, мышиного цитомегаловируса (CMV), муцина 1 (MUC1), MUC16, лигандов представителя D группы 2 естественных киллеров (NKG2D), мелана A (MART-1), молекулы нейрональной клеточной адгезии (NCAM), онкоэмбрионального антигена, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), рецептора прогестерона, простатического специфического антигена, антигена простатических стволовых клеток (PSCA), простатического специфического мембранного антигена (PSMA), подобного тирозинкиназному рецептору рецептора-сироты 1 (ROR1), сурвивина, трофобластного гликопротеина (TPBG, также известного как 5T4), опухоль-ассоциированного гликопротеина 72 (TAG72), тирозиназа-зависимого белка 1 (TRP1, также известного как TYRP1 или gp75), тирозиназа-зависимого белка 2 (TRP2, также известного как допахром таутомераза, допахром дельта-изомераза или DCT), фолатного рецептора-α, 8H9, двойного антигена, гликопротеина 100 (gp100), рецептора фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR), рецептора фактора роста эндотелия сосудов 2 (VEGF-R2), рецептора эстрогена, рецептора прогестерона, антигена опухоли Вильмса 1 (WT-1), специфического для патогена или экспрессируемого патогеном антигена, и антигена, связанного с универсальным маркером.
29. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-28, при этом рекомбинантный рецептор представляет собой, или содержит, функциональный не-TCR антигенный рецептор или TCR, или его антигенсвязывающий фрагмент.
30. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-29, при этом рекомбинантный рецептор представляет собой химерный антигенный рецептор (CAR).
31. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-30, при этом рекомбинантный рецептор содержит внеклеточный домен, содержащий антигенсвязывающий домен, который специфически связывает антиген-мишень, и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий ITAM.
32. Способ по п. 31, при этом антигенсвязывающий домен представляет собой, или содержит, антитело, или фрагмент антитела, который, необязательно, представляет собой одноцепочечный фрагмент.
33. Способ по п. 31 или 32, при этом внутриклеточный сигнальный домен представляет собой, или содержит, внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, дзета-цепи CD3 (CD3ζ), или его сигнальный фрагмент.
34. Способ по любому из пп. 31-33, при этом внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимулирующую сигнальную область.
35. Способ по п. 34, при этом костимулирующая сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен T-клеточной костимулирующей молекулы или его сигнальный фрагмент.
36. Способ по п. 34 или 35, при этом костимулирующая сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS, или его сигнальный фрагмент.
37. Способ по любому из пп. 30-36, при этом:
CAR содержит scFv, специфический для антигена, трансмембранный домен, цитоплазматический сигнальный домен из костимулирующей молекулы, который, необязательно, представляет собой, или содержит, 4-1BB, и цитоплазматический сигнальный домен из основной сигнальной ITAM-содержащей молекулы, который, необязательно, представляет собой, или содержит, сигнальный домен CD3-дзета, и, необязательно, также содержит спейсер между трансмембранным доменом и scFv;
CAR содержит, в следующем порядке, scFv, специфический для антигена, трансмембранный домен, цитоплазматический сигнальный домен из костимулирующей молекулы, который, необязательно, представляет собой, или содержит, сигнальный домен 4-1BB, и цитоплазматический сигнальный домен из основной сигнальной ITAM-содержащей молекулы, который, необязательно, представляет собой сигнальный домен CD3-дзета; или
CAR содержит, в следующем порядке, scFv, специфический для антигена, спейсер, трансмембранный домен, цитоплазматический сигнальный домен из костимулирующей молекулы, который, необязательно, представляет собой, или содержит, сигнальный домен 4-1BB, и цитоплазматический сигнальный домен из основной сигнальной ITAM-содержащей молекулы, который, необязательно, представляет собой, или содержит, сигнальный домен CD3-дзета.
38. Способ по любому из пп. 1-37, при этом стимулирующий реагент включает основное средство, которое специфически связывает компонент комплекса TCR.
39. Способ по любому из пп. 1-38, при этом стимулирующий реагент включает основное средство, которое специфически связывает CD3.
40. Способ по п. 38 или 39, при этом основное средство представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент.
41. Способ по п. 38 или 39, при этом стимулирующее средство дополнительно включает вспомогательное средство, которое специфически связывает T-клеточную костимулирующую молекулу, необязательно, при этом костимулирующую молекулу выбирают из группы, состоящей из CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 или ICOS.
42. Способ по п. 41, при этом основное средство представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент.
43. Способ по любому из пп. 1-40, при этом стимулирующий реагент включает основное средство, которое представляет собой анти-CD3 антитело, и вспомогательное средство, которое представляет собой анти-CD28 антитело.
44. Способ по любому из пп. 38-43, при этом основное и/или вспомогательное средства находятся на поверхности твердой подложки.
45. Способ по п. 44, при этом твердая подложка представляет собой, или содержит, гранулу.
46. Способ по п. 45, при этом гранула имеет диаметр, превышающий, или превышающий примерно, 3,5 мкм, но не более, чем примерно 9 мкм, или не более, чем примерно 8 мкм, или не более, чем примерно 7 мкм, или не более, чем примерно 6 мкм, или не более, чем примерно 5 мкм.
47. Способ по п. 45 или 46, при этом гранула имеет диаметр, составляющий, или составляющий примерно, 4,5 мкм.
48. Способ по любому из пп. 45-47, при этом гранула имеет диаметр, такого, или примерно такого, размера, как лимфоцит или антигенпредставляющая клетка.
49. Способ по любому из пп. 45-48, при этом гранула является инертной.
50. Способ по любому из пп. 45-49, при этом гранула представляет собой, или имеет, полистирольную поверхность.
51. Способ по любому из пп. 45-50, при этом гранула имеет магнитное или суперпарамагнитное ядро.
52. Способ по любому из пп. 45-51, при этом стимулирующее условие включает инкубацию клеток при соотношении гранул и клеток, составляющем от, или от примерно, 1:1 до 10:1, от, или от примерно, 1:1 до 8:1, от, или от примерно, 1:1 до 6:1, от, или от примерно, 1:1 до 4:1, от, или от примерно, 1:1 до 3:1, от, или от примерно, 2:1 до 4:1, от, или от примерно, 2:1 до 3:1, от, или от примерно, 1:1 до 2:1, от, или от примерно, 4:1 до 10:1, от, или от примерно, 4:1 до 8:1, от, или от примерно, 4:1 до 6:1, от, или от примерно, 6:1 до 10:1, от, или от примерно, 6:1 до 8:1, от, или от примерно, 8:1 до 10:1, от, или от примерно, 1:1 до 1:10, от, или от примерно, 1:1 до 1:8, от, или от примерно, 1:1 до 1:6, от, или от примерно, 1:1 до 1:4, от, или от примерно, 1:2 до 1:3.
53. Способ генной инженерии T-клеток, включающий:
(a) инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях в течение 2-6 дней, при этом указанная исходная композиция содержит популяцию T-клеток, включающую подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, включающего анти-CD3 антитело и вспомогательное средство, представляющее собой анти-CD28 антитело, которые присоединены к грануле, при этом соотношение гранул и клеток в процессе инкубации составляет от, или от примерно, 1:1 до 4:1; и
(b) введение нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор, в стимулированную композицию T-клеток, при этом введение производят в течение по меньшей мере части периода инкубации.
54. Способ генной инженерии T-клеток, включающий инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях в течение 2-6 дней, при этом указанная исходная композиция содержит популяцию T-клеток, включающую подобные «необученным» T-клетки и не подобные «необученным» T-клетки, при этом:
стимулирующие условия включают присутствие стимулирующего реагента, включающего анти-CD3 антитело и вспомогательное средство, представляющее собой анти-CD28 антитело, которые присоединены к грануле, при этом соотношение гранул и клеток в процессе инкубации составляет от, или от примерно, 1:1 до 4:1; и
инкубацию исходной композиции в стимулирующих условиях проводят до, в процессе и/или после введения нуклеиновой кислоты, кодирующей генно-инженерный рекомбинантный рецептор.
55. Способ по любому из пп. 52-54, при этом соотношение гранул и клеток составляет, или составляет примерно, 3:1.
56. Способ по любому из пп. 52-54, при этом соотношение гранул и клеток составляет, или составляет примерно, 1:1.
57. Способ по любому из пп. 1-56, при этом T-клетки получены из биологического образца, необязательно, при этом биологический образец получен от субъекта-человека.
58. Способ по п. 57, при этом биологический образец представляет собой, или содержит, образец цельной крови, образец лейкоцитарной пленки, образец мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), образец не фракционированных T-клеток, образец лимфоцитов, образец белых клеток крови, продукт афереза или продукт лейкафереза.
59. Способ по любому из пп. 1-58, при этом T-клетки включают CD4+ и/или CD8+ клетки.
60. Способ по любому из пп. 1-59, при этом T-клетки включают CD4+ и CD8+ T-клетки, и соотношение CD4+ и CD8+ T-клеток составляет от, или от примерно, 2:1 до, или до примерно, 1:5.
61. Способ по любому из пп. 1-60, при этом T-клетки включают CD4+ и CD8+ T-клетки, и соотношение CD4+ и CD8+ T-клеток составляет, или составляет примерно, 1:1, 1:2, 2:1, 1:3, или 3:1.
62. Способ по любому из пп. 1-61, при этом подобные «необученным» T-клетки включают подобные «необученным» CD4+ T-клетки и/или подобные «необученным» CD8+ T-клетки.
63. Способ по любому из пп. 1-62, при этом подобные «необученным» T-клетки являются поликлональными.
64. Способ по любому из пп. 1-63, при этом стимулирующее условие не включает N-ацетилцистеин (NAC).
65. Способ по любому из пп. 1-63, при этом стимулирующее условие не включает IL-15 и/или IL-7.
66. Способ по любому из пп. 1-65, при этом стимулирующее условие приводит к, или индуцирует гибель не подобных «необученным» T-клеток или их субпопуляции.
67. Способ по любому из пп. 1-66, при этом стимулирующее условие приводит к индуцируемой активацией клеточной гибели (AICD) не подобных «необученным» T-клеток или их субпопуляции.
68. Способ по любому из пп. 1-67, дополнительно включающий добавление ДНКазы во время инкубации и/или к стимулированной композиции.
69. Способ по любому из пп. 7-65, при этом инкубацию проводят в течение более чем, или примерно, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 дней.
70. Способ по любому из пп. 1-69, при этом процентная доля клеток в стимулированной композиции, происходящих от подобных «необученным» T-клеток, возрастает более чем, или более чем примерно, в 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз в сравнении с процентной долей подобных «необученным» клеток в исходной композиции.
71. Способ по любому из пп. 1-70, при этом содержание в стимулированной композиции клеток, происходящих от подобных «необученным» T-клеток, относительно клеток, происходящих от не подобных «необученным» T-клеток, увеличивается более чем, или более чем примерно, в 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз в сравнении с содержанием подобных «необученным» T-клеток относительно не подобных «необученным» T-клеток в исходной композиции.
72. Способ по любому из пп. 1-71, при этом стимулированная композиция содержит более 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% клеток, которые произошли от подобных «необученным» T-клеток исходной композиции.
73. Способ по любому из пп. 1-72, при этом стимулированная композиция содержит менее 10% клеток, произошедших от не подобных «необученным» T-клеток.
74. Способ по любому из пп. 1-73, при этом стимулированная композиция содержит менее 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% клеток, произошедших от не подобных «необученным» T-клеток.
75. Способ по любому из пп. 1-74, при этом из клеток в исходной композиции большая процентная доля подобных «необученным» T-клеток, в сравнении с не подобными «необученным» T-клетками, индуцируются к пролиферации и/или становятся активированными.
76. Способ по любому из пп. 1-75, при этом большая процентная доля T-клеток, которые были подобными «необученным» в исходной композиции, в сравнении с процентной долей T-клеток, которые были не подобными «необученным» в исходной композиции, делятся в день 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 после начала указанной инкубации.
77. Способ по любому из пп. 1-76, при этом стимулирующие условия способны индуцировать пролиферацию большей процентной доли клеток популяции подобных «необученным» T-клеток человека, в сравнении с не подобными «необученным» T-клетками человека, в день 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 после начала инкубации в данных условиях.
EFF
CM
EM
EFF
CM
EM
78. Способ по любому из пп. 1-77, при этом: (i) не подобные «необученным» T-клетки выбирают из группы, состоящей из эффекторных T-клеток (T), T-клеток памяти, центральных T-клеток памяти (T), эффекторных T-клеток памяти (T), а также их сочетаний; или (ii) не подобные «необученным» T-клетки представляют собой множество T-клеток, включающее или состоящее из эффекторных T-клеток (T) и/или T-клеток памяти, при этом T-клетки памяти, необязательно, включают центральные T-клетки памяти (T) и/или эффекторные T-клетки памяти (T).
79. Способ по любому из пп. 1-78, при этом:
процентная доля подобных «необученным» T-клеток в исходной композиции меньше, чем процентная доля сконструированных клеток в стимулированной композиции, происходящих от подобных «необученным» T-клеток в исходной композиции.
80. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-79, при этом большая процентная доля клеток с введенной нуклеиновой кислотой представляют собой, или получены в результате пролиферации подобных «необученным» T-клеток в исходной композиции, в сравнении с не подобными «необученным» T-клетками в исходной композиции.
81. Способ по любому из пп. 1-12 и 23-80, при этом введение выполняют путем трансдукции вирусным вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный рецептор.
82. Способ по п. 81, при этом вирусный вектор представляет собой ретровирусный вектор.
83. Способ по п. 81 или 82, при этом вирусный вектор представляет собой лентивирусный вектор или гамма-ретровирусный вектор.
84. Способ по пп. 1-83, при этом соотношение подобных «необученным» T-клеток и не подобных «необученным» T-клеток в стимулированной композиции возрастает более чем, или более чем примерно, в 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз в сравнении с соотношением подобных «необученным» T-клеток и не подобных «необученным» T-клеток в исходной композиции.
85. Способ по любому из пп. 1-84, при этом стимулированная композиция является более поликлональной или мультиклональной в сравнении с исходной композицией.
in vitro
ex vivo
86. Способ по любому из пп. 1-85, который применяют  или .
87. Произведенная композиция, полученная способом по любому из пп. 1-86.
88. Фармацевтическая композиция, содержащая произведенную композицию по п. 87.
89. Фармацевтическая композиция по п. 88, дополнительно содержащая фармацевтический носитель.
90. Способ лечения, включающий введение субъекту-млекопитающему произведенной композиции, полученной способом по любому из пп. 1-6, или фармацевтической композиции по п. 88 или 89.
91. Способ по п. 90, при этом клетки получают от субъекта, которому клетки будут введены.