ПРИМЕНЕНИЕ АКТИВНЫХ ИНГРЕДИЕНТОВ ДЛЯ БОРЬБЫ С НЕМАТОДАМИ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР, РЕЗИСТЕНТНЫХ К НЕМАТОДАМ
USE OF ACTIVE INGREDIENTS AGAINS NEMATODES IN AGRICULTURAL PLANTS, RESISTANT TO NEMATODES

Область изобретения
Настоящее изобретение относится в целом к применению N-{[3-хлор-5-(трифторметил)-2-пиридинил]-этил}-2,6-дихлорбензамида (флуопирама) для борьбы с нематодами у сельскохозяйственных культур, резистентных к нематодам, и способам, особенно применимым для борьбы с нематодами и/или увеличения урожайности у этих культур.
Описание современной технологии
Флуопирам определяют как соединение формулы (I)
а также N-оксиды его соединения.
Флуопирам представляет собой фунгицид широкого спектра действия с проникающими и трансламинарными свойствами для применений, связанных с листвой, капельным орошением, смачиванием и обработкой семян в широком диапазоне различных сельскохозяйственных культур, против многих экономически важных заболеваний растений. Он является очень эффективным при профилактических применениях против вида настоящей мучнистой росы, видов серой плесени и белой плесени. Он имеет эффективность действия против многих других заболеваний растений. Флуопирам показал активность в тестах на прорастание спор, удлинение зародышевой трубочки и проверка на задержку роста мицелия. На биохимическом уровне, флуопирам ингибирует митохондриальное дыхание посредством блокирования электронного транспорта в дыхательной цепи сукцинатдегидрогеназы (комплекс II - ингибитор СДГ).
Флуопирам и процесс его производства, начинающийся из известных и доступных на рынке соединений, описан в EP-A-1389614 и WO 2004/016088.
Общее описание нематоцидной активности производных пиридилэтилбензамида найдена в WO-A 2008/126922.
Нематоды представляют собой крошечных, червеобразных, многоклеточных животных приспособленных к проживанию в воде. Число видов нематод оценивают в полмиллиона. Важная часть фауны почвы, нематоды живут в лабиринте взаимосвязанных каналов, называемых порами, которые образуются под действием почвенных процессов. Они двигаются в пленках воды, которые плотно облегают частицы почвы. Паразитирующие на растениях нематоды, большинство которых являются корнеедами, обнаружены в ассоциации с большинством растений. Некоторые являются эндопаразитическими, проживая и питаясь внутри ткани корней, клубней, бутонов, семян, и т.д. Другие являются эктопаразитическими, питаясь внешним образом через стенки растений. Единственная эндопаразитическая нематода может уничтожить растение или снизить его продуктивность. Эндопаразитические корнееды включают таких экономически важных вредителей, как яванская галловая нематода (Meloidogyne species), почковидные нематоды (Rotylenchulus species), цистообразующие нематоды (Heterodera species) и повреждающие корень нематоды (Pratylenchus species). Непосредственное поедание нематодами может коренным образом снизить поглощение растением питательных компонентов и воды. Нематоды обладают огромным воздействием на продуктивность культуры, когда они нападают на корни рассады сразу же после прорастания семян. Поедание нематодами также создает открытые раны, которые обеспечивают вход широкому разнообразию патогенных для растений грибков и бактерий. Эти микробные инфекции часто являются более повреждающими в экономическом отношении, чем непосредственные эффекты от поедания нематодами.
В целом, резистентность к нематодам характеризуется смертью клеток растения-хозяина на участке питания паразитирующей нематоды или поблизости от него. Конкретные гены резистентности и взаимодействие с нематодами влияют на временные характеристики и локализацию резистентного ответа. Williamson et al. (Trends in Genetics, Vol.22, No.7, July 2006) описывает природу и механизмы взаимодействия растение - нематода по отношению к резистентности в растениях.
Растения, резистентные к нематодам, могут относиться к трем основным подходам, являющимися мишенями у нематод, граница между нематодой и культурой и ответ растения. Антифидинг или нематоцидные белки, дестабилизация эссенциальной генной экспрессии нематод посредством РНК-интерференции, дестабилизация сенсорной функции посредством РНК-интерференции, пептиды или растительные тельца или нематоцидные метаболиты являются примерами мишеней у нематод; дестабилизация факторов патогенности нематод, касающихся миграции и инвазии или касающихся индукции участка питания и поддержания посредством РНК-интерференции, пептиды или растительные тельца, малозаметные или невосприимчивые растения; или превращение растений-хозяев в растения-нехозяева представляют собой примеры взаимодействий на границе раздела нематода-культура, во время активации гена резистентности растения или гиперчувствительного ответа посредством инвазии нематодами; индуцированная гибель клеток или другая несовместимость на участке под действием сайт-специфичных промоторов или конверсия культур в сторону толерантности представляют собой примеры ответа растения.
Несмотря на то, что растения, резистентные к нематодам, описаны как резистентные по отношению к конкретным нематодам, все еще существуют некоторые взаимодействия между нематодой и культурой, которые, вследствие различных защитных реакций растения, могут приводить к частично поврежденному растению. Одним примером этих защитных реакций является гиперчувствительный ответ. Одно последствие может приводить в результате к поврежденным корням и потере жизненности подвергшихся воздействию растений.
Принятая в настоящее время борьба с нематодами сфокусирована по существу на предотвращении нападения нематод на растение. Как только растение паразитируется, становится практически невозможным уничтожить нематоды без разрушения также и растения. Следовательно, было бы благоприятным предоставить улучшенные соединения для борьбы с нематодами и способы обработки растений, резистентных к нематодам, для предотвращения или снижения повреждения от нематод.
Большая часть повреждений у культурных растений, которые вызывают вредители, происходит еще тогда, когда семя подвергается нападению во время хранения и после внесения семени в почву, во время и сразу же после прорастания растений. Эта фаза является особенно критической, так как корни и побеги растущего растения являются особенно чувствительными и даже небольшое повреждение может привести к смерти целого растения. Таким образом, является желательным разработать способы защиты семени и прорастающего растения, которые обходятся без дополнительного применения средств защиты культур после посева или после появления всходов растений. Кроме того является желательным оптимизировать количество используемого активного соединения таким образом, чтобы предоставить максимальную защиту для семени и прорастающего растения от нападения вредителей, но без повреждения самого растения используемым активным соединением. В частности, в способах обработки семян следует принимать во внимание характерные инсектицидные свойства трансгенных растений, чтобы достичь оптимальной защиты семени и также прорастающего растения с использованием минимума средств защиты сельскохозяйственных культур.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение сейчас предоставляет выгодные применения флуопирама для борьбы с нематодами, заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к нематодам, и/или увеличения урожайности.
Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению композиций, содержащих флуопирам для борьбы с нематодами, заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к нематодам, и/или увеличения урожайности.
Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению композиций, содержащих
A) флуопирам и
B) по меньшей мере одно агрохимически активное соединение, для борьбы с нематодами, заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к нематодам, и/или увеличения урожайности.
Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению композиций, содержащих
A) флуопирам и
B) по меньшей мере одно агрохимически активное соединение, для борьбы с нематодами, заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к насекомым.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение также относится к применению композиций, содержащих
A) флуопирам и
B) средство биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582, в частности, споры (патент США №6,406,690) для борьбы с нематодами, заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к нематодам, и/или увеличения урожайности.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение также относится к применению композиций, содержащих
A) флуопирам и
B) средство биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582, в частности споры (патент США №6,406,690) для борьбы с нематодами заражающими сельскохозяйственные культуры, резистентные к насекомым.
Иллюстративный способ по изобретению включает в себя внесение флуопирама по изобретению либо в почву или нанесение его на растение (например, семена или на листву) для борьбы с повреждением от нематод и/или увеличения урожайности.
Настоящее изобретение направлено на композиции и способы для регуляции резистентности к вредителям или толерантности у растений или растительных клеток. Под "резистентностью" подразумевают, что вредитель (например, насекомое или нематода) уничтожается при поедании или другом контакте с растением или его частями. Под "толерантностью" подразумевают нарушение или снижение движения, питания, репродукции или других функций вредителя. Способы определения пестицидной активности являются хорошо известными в данной области техники. См, например, Czapla and Lang (1990) J. Econ. Entomol. 83:2480-2485; Andrews et al. (1988) Biochem. J. 252:199-206; Marrone et al. (1985) J. of Economic Entomology 78:290-293; и патент США №5,743,477, все из которых включены в в настоящее изобретение посредством ссылки во всей полноте.
В сочетании с настоящим изобретением "борьба" обозначает профилактическое или целебное снижение заражения насекомыми или нематодами по сравнению с необработанными культурами, более предпочтительно, заражение по существу отражается, наиболее предпочтительно, заражение полностью подавляется.
Под "пестицидно-эффективным количеством" подразумевают количество пестицида, которое способно приводить к гибели по меньшей мере одного вредителя, или заметно снижать рост, питание, или нормальное физиологическое развитие вредителя. Данное количество будет варьировать в зависимости от таких факторов как, например, конкретные целевые вредители, с которыми проводится борьба, конкретное окружение, расположение, растение, культура или сельскохозяйственный участок, подлежащий обработке, условия окружающей среды и способ, степень, концентрация, стабильность и количества внесения пестицидно-эффективной полипептидной композиции.
Настоящее изобретение также относится к способу защиты семян и прорастающих растений или растения от нападения вредителей, посредством селективного нанесения пестицидных средств на семя трансгенного растения. Пестицидные средства включают химические композиции или средства биологической борьбы, наносимые на семя трансгенного растения, где средство предназначено для обеспечения защиты растения или его семян от повреждения, вызываемого одним или несколькими вредителями растений. Кроме того, изобретение относится к семени, которое было обработано пестицидным средством, как описано в настоящем изобретении. Нанесение пестицидного средства на семя трансгенного растения приводит к улучшенной резистентности или толерантности к одному или более вредителей растений и/или улучшенной урожайности или жизненности по сравнению с трансгенным растением, культивируемым из семени, необработанном пестицидным средством, как описано в настоящем изобретении, или растению того же самого вида, что и сравниваемое трансгенное растение, которое культивировали из семени, обработанного пестицидным средством, как описано в настоящем изобретении, но у которого отсутствует трансген (оба из которых могут в настоящем изобретении именоваться "контрольным" растением).
В некоторых вариантах осуществления обработка семени такими средствами не только защищает само семя, но также приводит к растениям готовым к экстренной защите от вредителей. Таким образом, можно обходиться без непосредственной обработки культуры во время засева или вскоре после него.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Было обнаружено, что способы в соответствии с настоящим изобретением обеспечивают более высокую степень жизненности растения и урожайность в окружающих условиях при заражении нематодами и грибками, чем могло бы ожидаться от внесения средства биологической или химической борьбы или присутствия по отдельности гена для борьбы с насекомым или нематодой. Было показано, что по меньшей мере некоторые из средств борьбы с насекомыми в пределах объема настоящего изобретения предоставляют увеличенную корневую массу даже в отсутствие воздействия насекомых, причем увеличенная корневая масса ведет к улучшенной приживаемости благоприятных бактерий в пределах ризосферы, которое, в свою очередь снижает общие потери в урожайности и жизненности культуры, вызываемые либо паразитирующими на растении нематодами, либо грибками. Наряду с физической комбинацией этих компонентов во время обработки растений и растительного материала в одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, композиции настоящего изобретения составляли для предоставления стабильного окружения для живых средств биологической борьбы, таких как спорообразующие, колонизирующие корни бактерии. Разнообразные добавки могут добавляться к каждой изобретательской композиции в зависимости от желательных свойств для конечного состава, который имеет необходимую физическую и химическую стабильность для производства промышленно приемлемого продукта.
Растения, резистентные к нематодам
Флуопирам является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1. флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1. флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1. Информация по нуклеотидной и аминокислотной последовательности для каждого из этих генов представлена посредством SEQ ID №, приведенной в столбцах 4 и 5 Таблицы 1 по отношению к серийному номеру патентной заявки Соединенных Штатов, приведенному в столбце 2 Таблицы 1.
НАИМЕНОВАНИЕ ГЕНА
СЕРИЙНЫЙ НОМЕР ЗАЯВКИ США
ДАТА ПОДАЧИ
SEQ ID NO НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕД.
SEQ ID NO АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕД.
axmi205
12/828,594
7-1-2010
1
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8
optaxmi205v01.03
12/828,594
7-1-2010
10
2
optaxmi205v01.02
12/828,594
7-1-2010
9
2
optaxmi205v01.04
12/828,594
7-1-2010
11
2
optaxmiR1(evo 21)
12/701,058
2-5-2010
12
13
optaxmiR1(evo 22)
12/701,058
2-5-2010
14
15
optaxmiR1(evo 23)
12/701,058
2-5-2010
16
17
optaxmiR1(evo 26)
12/701,058
2-5-2010
18
19
optaxmi115v01
12/497,221
7-2-2009
15
6
optaxmi115v02
12/497,221
7-2-2009
16
6
axmi115v02
61/471,848
4-15-2008
любой из 1-14
любой из 15-31
axmi100
12/491,396
6-25-2009
36, 282
96
axmi076
12/252,453
10-16-2008
4, 6, 11
5
axmi005
12/497,221
7-2-2009
1, 7
4, 9
optcry1Ac
12/249,016
10-10-2008
1, 2, 3, 4, 5
6
axmi031
11/762,886
6-14-2007
20
21
axn2
12/638,591
12-15-2009
7, 10
8
Флуопирам является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1. флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1. Флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1.
Флуопирам или флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов, как описано в следующих документах: WO 2009/027539 A2, WO 2009/027313 A2, WO 2008/152008 A2, WO 2008/110522 A1, WO 2008/095972 A1, WO 2008/095970 A1, WO 2008/095969 A1, WO 2008/095919 A1, WO 2008/095916 A1, WO 2008/095911 A2, WO 2008/095910 A1, WO 2008/095889 A1, WO 2008/095886 A1, WO 2008/077892 A1, WO 2008/071726 A2, WO 2006/020821 A2, WO 2005/082932 A2, WO 2009/048847 A1, WO 2007/095469 A2, WO 2005/012340 A1, WO 2007/104570 A2, 11/765,491, 11/765,494, 10/926,819, 10/782,020, 12/032,479, 10/783,417, 10/782,096, 11/657,964, 12/192,904, 11/396,808, 12/166,253, 12/166,239, 12/166,124, 12/166,209, 11/762,886, 12/364,335, 11/763,947, 12/252,453, 12/209,354, 12/491,396 или 12/497,221.
pro-1
g
Флуопирам или флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением является особенно применимым для борьбы с паразитирующими на растениях нематодами у растений, несущих один или несколько генов Hs1, Mi-1, Mi-1.2, Hero A, Gpa2, Gro1-4, Rhg1, Rhg4, Mi-3, Mi-9, Cre1, Cre3, Ma, Hsa-1, Me3, Rmc1, CLAVATA3-подобных пептидов (например, SYV46).
Предпочтительный вариант осуществления включает в себя растение, резистентное к нематодам, как описано выше, обработанное флуопирамом.
Предпочтительный вариант осуществления включает в себя растение, резистентное к нематодам, как описано выше, обработанное флуопирамом в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582.
Предпочтительный вариант осуществления включает в себя растение, резистентное к нематодам, как описано выше, обработанное флуопирамом в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением.
В разнообразных вариантах осуществления композиции и способы настоящего изобретения включают в себя обработку трансгенного растения, содержащего один или несколько генов, приведенных в Таблице 1, флуопирамом или флуопирамом в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирамом в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением. В конкретных вариантах осуществления флуопирам или флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением наносят на семя трансгенных растений, несущих один или несколько генов, приведенных в Таблице 1, включая их биологически активные варианты и фрагменты.
Иллюстративный способ по изобретению включает в себя нанесение флуопирама или флуопирама в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирама в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением по изобретению на материал для размножения (напр. семена) растения для борьбы с повреждением от нематод и/или увеличения урожайности.
Дополнительный иллюстративный способ по изобретению включает в себя внесение флуопирама или флуопирама в комбинации со средством биологической борьбы Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирама в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением либо в почву, либо нанесение на растение (например, на листву) для борьбы с повреждением от нематод и/или увеличения урожайности.
В разнообразных вариантах осуществления нематоцидным средством биологической борьбы является флуопирам, а сельскохозяйственная культура, резистентная к нематодам, содержит трансгенное растение, включающее в себя Axmi031 или Axn2 (Таблица 1).
Нуклеотидные и аминокислотные последовательности с SEQ ID NOs, приведенными в Таблице 1, являются иллюстративными последовательностями и не предназначены для ограничения объема изобретения. Изобретение охватывает растения и части растений, включая растительные клетки и семена, содержащие один или несколько генов, приведенных в столбце 1 Таблицы 1. В некоторых вариантах осуществления изобретение охватывает растения и части растений, включая растительные клетки и семена, содержащие одну или более из нуклеотидных последовательностей, приведенных в столбце 4 Таблицы 1. В некоторых вариантах осуществления изобретение охватывает растения и части растений, включая растительные клетки и семена, содержащие одну или более из нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или несколько полипептидов, приведенных в столбце 5 Таблицы 1.
В еще одном другом варианте осуществления изобретение охватывает растения и части растений, включая растительные клетки и семена, содержащие одну или более из нуклеотидных последовательностей, кодирующих биологически активный вариант или фрагмент аминокислотной(ых) последовательности(ей), приведенных в столбце 5 Таблицы 1.
Фрагмент нуклеотидной последовательности, который кодирует биологически активную часть пестицидного белка по изобретению, будет кодировать по меньшей мере около 15, 25, 30, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450 смежных аминокислот, или вплоть до полного числа аминокислот, присутствующих в непроцессированном пестицидном белке, приведенным в настоящем изобретении в Таблице 2. Такие биологически активные части могут быть получены посредством рекомбинантных методов и оценены на пестицидную активность. Способы определения пестицидной активности являются хорошо известными в данной области техники. См., например, Czapla and Lang (1990) J. Econ. Entomol. 83:2480-2485; Andrews et al. (1988) Biochem. J. 252:199-206; Marrone et al. (1985) J. of Economic Entomology 78:290-293; и патент США №5,743,477, все из которых включены в настоящее изобретение посредством ссылки во всей полноте.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент представляет собой фрагмент протеолитического расщепления. Например, фрагмент протеолитического расщепления может иметь N-концевое или C-концевое усечение из по меньшей мере около 100 аминокислот, около 120, около 130, около 140, около 150 или около 160 аминокислот по отношению к аминокислотной последовательности приведенной в Таблице 2. В некоторых вариантах осуществления фрагменты, охватываемые настоящим изобретением, являются результатом удаления C-концевого домена кристаллизации, например, посредством протеолиза или посредством введения стоп-кодона в кодирующую последовательность.
Предпочтительные пестицидные белки в соответствии с настоящим изобретением кодируются нуклеотидной последовательностью, в достаточной степени идентичной нуклеотидной(ым) последовательности(ям), приведенным в Таблице 2, или представляют собой пестицидные белки, которые являются в достаточной степени идентичными аминокислотной(ым) последовательности(ям), приведенным в Таблице 2. Под "в достаточной степени идентичной" подразумевают аминокислотную или нуклеотидную последовательность, которая имеет по меньшей мере около 60% или 65% идентичности последовательности, около 70% или 75% идентичности последовательности, около 80% или 85% идентичности последовательности, около 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичности последовательности по сравнению с референтной последовательностью с использованием одной из программ выравнивания, описанных в настоящем изобретении, с использованием стандартных параметров. Специалист в данной области техники сможет понять, что эти значения могут соответствующим образом регулироваться для определения соответствующей идентичности белков, кодируемых двумя нуклеотидными последовательностями, принимая во внимание вырожденность кодонов, сходство аминокислот, позиционирование рамки считывания и т.п.
Для определения процентной идентичности двух аминокислотных последовательностей или двух нуклеотидных последовательностей, последовательности выравнивают с целью оптимального сравнения. Процентная идентичность между двумя последовательностями является функцией числа идентичных положений, сравниваемых последовательностей (т.е. процентная идентичность = число идентичных положений/общее число положений (например, перекрывающихся положений) × 100). В одном варианте осуществления две последовательности имеют одну и ту же длину. В еще одном варианте осуществления процентную идентичность рассчитывают на протяжении всей полноты референтной последовательности (например, последовательности, приведенной в Таблице 2). Процентная идентичность между двумя последовательностями может определяться с использованием методов, аналогичных тем, что описаны ниже, с разрешенными разрывами или без них. При расчете процентной идентичности производят подсчет, как правило, точных совпадений. Разрыв, т.е. положение при выравнивании, где остаток присутствует в одной последовательности, но отсутствует в другой, считают положением с неидентичными остатками.
Определение процентной идентичности между двумя последовательностями может осуществляться с использованием математического алгоритма. Неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Karlin и Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264, модифицированный, как у Karlin и Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Такой алгоритм включен в программы BLASTN и BLASTX из Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403. Нуклеотидный поиск BLAST может осуществляться с помощью программы BLASTN, балльная оценка = 100, длина слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей гомологичных пестицидно-подобных молекул нуклеиновой кислоты по изобретению. Поиск белка BLAST может осуществляться с помощью программы BLASTX, балльная оценка = 50, длина слова = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных пестицидным молекулам по изобретению. Для получения содержащих разрывы выравниваний с целью сравнения, BLAST с разрывами (в BLAST 2.0) могут использоваться, как описано у Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389. Альтернативно, PSI-Blast может применяться для проведения итерационного поиска, который обнаруживает дальнее родство между молекулами. См., Altschul et al. (1997) supra. При использовании программ BLAST, BLAST с разрывами и PSI-Blast могут применяться параметры по умолчанию соответствующих программ (например, BLASTX и BLASTN). Выравнивание может также проводиться вручную посредством проверки.
Еще один неограничивающий пример математического алгоритма, используемый для сравнения последовательностей, представляет собой алгоритм ClustalW (Higgins et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22:4673-4680). ClustalW сравнивает последовательности и выравнивает полные аминокислотные или ДНК последовательности, и, таким образом, может предоставить данные о сохранении последовательности целой аминокислотной последовательности. Алгоритм ClustalW применяют в нескольких доступных для приобретения пакетах программного обеспечения анализа ДНК/аминокислоты, таких как модуль ALIGNX программного пакета Vector NTI Program Suite (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). После выравнивания аминокислотных последовательностей с помощью ClustalW, можно оценить процент аминокислотной идентичности. Неограничивающим примером программного обеспечения, применимого для анализа выравниваний ClustalW является GENEDOC™. GENEDOC™ (Karl Nicholas), который позволяет проводить оценку аминокислотного (или ДНК) сходства и идентичности между множеством белков. Еще одним неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения последовательностей, является алгоритм Myers и Miller (1988) CABIOS 4:11-17. Такой алгоритм введен в программу ALIGN (версия 2.0), которая является частью пакета программного обеспечения GCG Wisconsin Genetics Software Package, Версия 10 (доступного от Accelrys, Inc., 9685 Scranton Rd., San Diego, CA, USA). При использовании программы ALIGN для сравнения аминокислотных последовательностей, может применяться таблица веса остатков РАМ120, штраф за длину пропуска, равный 12, и штраф за пропуск в последовательности, равный 4.
Если не утверждается иначе, GAP Version 10, в которой используют алгоритм Needleman и Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48(3):443-453, будет применяться для определения идентичности последовательности или сходства, с использованием следующих параметров: % идентичности и % сходства для нуклеотидной последовательности с использованием веса гэпа, равной 50, и веса длины, равной 3, и матрица балльной оценки nwsgapdna.cmp; % идентичности или % сходства для аминокислотной последовательности с использованием веса гэпа, равной 8 и веса длины, равной 2, и программы подсчета балльной оценки BLOSUM62. Могут также применяться эквивалентные программы. Под "эквивалентной программой" подразумевают любую программу сравнения последовательности, которая для любых двух запрашиваемых последовательностей генерирует выравнивание, имеющее идентичное совпадение нуклеотидного остатка, и идентичный процент идентичности последовательности при сравнении с соответствующим выравнивании, генерируемым GAP Версия 10.
"Варианты" аминокислотных последовательностей, приведенные в Таблице 2, включают те последовательности, которые кодируют пестицидные белки, раскрытые в настоящем изобретении, но которые отличаются консервативно, вследствие вырожденности генетического кода, а также те, которые являются достаточно идентичными, как обсуждается выше. Природные аллельные варианты могут быть идентифицированы с применением хорошо известных методов молекулярной биологии, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и методов гибридизации, как изложено ниже. Вариантные нуклеотидные последовательности также включают синтетически полученные нуклеотидные последовательности, которые были генерированы, например, посредством применения сайт-направленного мутагенеза, но которые все еще кодируют пестицидные белки, раскрытые в настоящем изобретении, как обсуждается ниже.
Специалист в данной области техники сможет дополнительно понять, что изменения могут вводиться посредством мутации нуклеотидных последовательностей по изобретению, что приводит к изменениям в аминокислотной последовательности кодируемых пестицидных белков, без изменения биологической активности белков. Таким образом, вариантные изолированные молекулы нуклеиновой кислоты могут быть созданы посредством введения одной или нескольких нуклеотидных замен, вставок или делеций в соответствующую нуклеотидную последовательность, раскрытую в настоящем изобретении, таким образом, что одна или несколько аминокислотных замен, вставок или делеций вводятся в кодируемый белок. Мутации могут вводиться посредством стандартных методов, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Такие вариантные нуклеотидные последовательности также охватываются настоящим изобретением.
Например, консервативные аминокислотные замены могут быть проведены по одному или нескольким, предсказанным, несущественным аминокислотным остаткам. "Несущественный" аминокислотный остаток представляет собой остаток, который может быть изменен из последовательности дикого типа пестицидного белка без изменения биологической активности, в то время как "существенный" аминокислотный остаток требуется для биологической активности. "Консервативная аминокислотная замена" представляет собой замену, в которой аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, имеющий сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющих сходные боковые цепи, были определены в данной области техники. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвлеными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин).
Аминокислотные замены могут быть проведены в неконсервативных областях, которые сохраняют функцию. Как правило, такие замены не могут быть проведены для консервативных аминокислотных остатков, или для аминокислотных остатков, располагающихся в пределах консервативного мотива, где такие остатки являются существенными для активности белка.
Примеры остатков, которые являются консервативными, и которые могут быть существенными для активности белка, включают, например, остатки, которые являются идентичными между всеми белками, содержащимися при выравнивании сходных или родственных токсинов с последовательностями изобретения (например, остатки, которые являются идентичными при выравнивании гомологичных белков). Примеры остатков, которые являются консервативными, но которые могут обеспечить замены консервативных аминокислот и все еще сохраняют активность, включают, например, остатки, которые имеют только консервативные замены между всеми белками, содержащимися при выравнивании сходных или родственных токсинов с последовательностями изобретения (например, остатки, которые имеют только консервативные замены между всеми белками, содержащимися при выравнивании гомологичных белков). Однако, специалист в данной области техники сможет понять, что функциональные варианты могут иметь минорные консервативные или неконсервативные изменения в консервативных остатках.
Альтернативно, вариантные нуклеотидные последовательности могут быть получены посредством введения мутаций случайным образом вдоль всей кодирующей последовательности или ее части, таким образом, как посредством насыщающего мутагенеза, и полученные в результате мутанты могут подвергаться скринингу на способность придавать пестицидную активность для идентификации мутантов, которые сохраняют активность. После мутагенеза, кодируемый белок может экспрессироваться рекомбинантно, и активность белка может быть определена с использованием стандартных аналитических методов.
С использованием методов, таких как ПЦР, гибридизация и т.п., соответствующие пестицидные последовательности могут быть идентифицированы, причем такие последовательности имеют значительную идентичность с последовательностями по изобретению. См., например, Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) и Innis, el al. (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press, NY).
Вариантные нуклеотидные и аминокислотные последовательности в соответствии с настоящим изобретением также охватывают последовательности, полученные в результате мутагенных и рекомбиногенных методик, таких как перестановка в ДНК. С помощью такой методики, различные одна или несколько областей, кодирующих пестицидный белок, могут применяться для создания нового пестицидного белка, обладающего желательными свойствами. Таким образом, библиотеки рекомбинантных полинуклеотидов генерируют из популяции родственных последовательностей полинуклеотидов, содержащих области последовательности, которые имеют существенную идентичность последовательностей и могут быть гомологично рекомбинированы in vitro или in vivo. Например, при использовании этого подхода, мотивы последовательностей, кодирующих домен, представляющий интерес, могут быть перетасованы между пестицидным геном по изобретению и другими известными пестицидными генами, чтобы получить новый ген, кодирующий белок с улучшенными свойствами, представляющий интерес, такими как увеличенная инсектицидная активность. Стратегии для такой перестановки в ДНК являются известными в данной области техники. См., например, Stemmer (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:10747-10751; Stemmer (1994) Nature 370:389-391; Crameri et al. (1997) Nature Biotech. 15:436-438; Moore et al. (1997) J. Mol. Biol. 272:336-347; Zhang et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:4504-4509; Crameri et al. (1998) Nature 391:288-291; и патенты США №№5,605,793 и 5,837,458.
Перестановка или перетасовка доменов представляет собой еще один механизм для генерации измененных пестицидных белков. Домены могут быть перетасованы между пестицидными белками, что приводит в результате к гибридным или химерным токсинам с улучшенной пестицидной активностью или целевым спектром действия. Способы генерации рекомбинантных белков и тестирование их на пестицидную активность являются хорошо известными в данной области техники (см., например, Naimov et al. (2001) Appl. Environ. Microbiol. 67:5328-5330; de Maagd et al. (1996) Appl. Environ. Microbiol. 62:1537-1543; Ge et al. (1991) J. Biol. Chem. 266:17954-17958; Schnepf et al. (1990) J. Biol. Chem. 265:20923-20930; Rang et al. 91999) Appl. Environ. Microbiol. 65:2918-2925).
Варианты и фрагменты белков, охватываемые настоящим изобретением, являются биологически активными, то есть, они продолжают обладать желательной биологической активностью природного белка, иначе говоря, пестицидной активностью. Под "сохраняет активность" подразумевают, что вариант будет иметь по меньшей мере около 30% по меньшей мере около 50% по меньшей мере около 70%, или по меньшей мере около 80% пестицидной активности природного белка. Способы определения пестицидной активности являются хорошо известными в данной области техники. См., например, Czapla and Lang (1990) J. Econ. Entomol. 83:2480-2485; Andrews et al. (1988) Biochem. J. 252:199-206; Manrrone et al. (1985) J. of Economic Entomology 78:290-293; и патент США №5,743,477, все из которых включены в настоящее изобретение посредством ссылки во всей полноте.
В настоящем контексте, агрохимически активные соединения следует понимать как означающие все вещества, которые используются или могут использоваться обычным образом для обработки растений. Фунгициды, бактерициды, инсектициды, акарициды, нематоциды, моллюскоциды, антидоты, регуляторы роста растений и питательные вещества для растений, а также средства биологической борьбы могут быть указаны, как являющиеся предпочтительными.
Партнеры для смешивания
Агрохимически активные соединения, описанные под обозначением B), являются активными ингредиентами, являющиеся фунгицидами, которые могут быть указаны следующим образом:
(1) Ингибиторы биосинтеза эргостеринов, например (1.1) алдиморф (1704-28-5), (1.2) азаконазол (60207-31-0), (1.3) битертанол (55179-31-2), (1.4) бромуконазол (116255-48-2), (1.5) ципроконазол (113096-99-4), (1.6) диклобутразол (75736-33-3), (1.7) дифеноконазол (119446-68-3), (1.8) диниконазол (83657-24-3), (1.9) диниконазол-M (83657-18-5), (1.10) додеморф (1593-77-7), (1.11) додеморфа ацетат (31717-87-0), (1.12) эпоксиконазол (106325-08-0), (1.13) этаконазол (60207-93-4), (1.14) фенаримол (60168-88-9), (1.15) фенбуконазол (114369-43-6), (1.16) фенгексамид (126833-17-8), (1.17) фенпропидин (67306-00-7), (1.18) фенпропиморф (67306-03-0), (1.19) флуквинконазол (136426-54-5), (1.20) флурпримидол (56425-91-3), (1.21) флусилазол (85509-19-9), (1.22) флутриафол (76674-21-0), (1.23) фурконазол (112839-33-5), (1.24) фурконазол-цис (112839-32-4), (1.25) гексаконазол (79983-71-4), (1.26) имазалил (60534-80-7), (1.27) имазалила сульфат (58594-72-2), (1.28) имибенконазол (86598-92-7), (1.29) ипконазол (125225-28-7), (1.30) метконазол (125116-23-6), (1.31) миклобутанил (88671-89-0), (1.32) нафтифин (65472-88-0), (1.33) нуаримол (63284-71-9), (1.34) окспоконазол (174212-12-5), (1.35) паклобутразол (76738-62-0), (1.36) пефуразоат (101903-30-4), (1.37) пенконазол (66246-88-6), (1.38) пипералин (3478-94-2), (1.39) прохлораз (67747-09-5), (1.40) пропиконазол (60207-90-1), (1.41) протиоконазол (178928-70-6), (1.42) пирибутикарб (88678-67-5), (1.43) пирифенокс (88283-41-4), (1.44) квинконазол (103970-75-8), (1.45) симеконазол (149508-90-7), (1.46) спироксамин (118134-30-8), (1.47) тебуконазол (107534-96-3), (1.48) тербинафин (91161-71-6), (1.49) тетраконазол (112281-77-3), (1.50) триадимефон (43121-43-3), (1.51) триадименол (89482-17-7), (1.52) тридеморф (81412-43-3), (1.53) трифлумизол (68694-11-1), (1.54) трифорин (26644-46-2), (1.55) тритиконазол (131983-72-7), (1.56) униконазол (83657-22-1), (1.57) униконазол-p (83657-17-4), (1.58) виниконазол (77174-66-4), (1.59) вориконазол (137234-62-9), (1.60) 1-(4-хлорфенил)-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)циклогептанол (129586-32-9), (1.61) метил 1-(2,2-диметил-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил)-1H-имидазол-5-карбоксилат (110323-95-0), (1.62) N’-{5-(дифторметил)-2-метил-4-[3-(триметилсилил)пропокси]фенил}-N-этил-N-метилимидоформамид, (1.63) N-этил-N-метил-N’-{2-метил-5-(трифторметил)-4-[3-(триметилсилил)пропокси]фенил}имидоформамид и (1.64) O-[1-(4-метоксифенокси)-3,3-диметилбутан-2-ил] 1H-имидазол-1-карботиоат (111226-71-2).
(2) ингибиторы комплекса I или II дыхательной цепи, например (2.1) биксафен (581809-46-3), (2.2) боскалид (188425-85-6), (2.3) карбоксин (5234-68-4), (2.4) дифлуметорим (130339-07-0), (2.5) фенфурам (24691-80-3), (2.6) флуопирам (658066-35-4), (2.7) флутоланил (66332-96-5), (2.8) флаксапироксад (907204-31-3), (2.9) фураметпир (123572-88-3), (2.10) фурмециклокс (60568-05-0), (2.11) изопиразам (смесь син-эпимерного рацемата 1RS, 4SR, 9RS и анти-эпимерного рацемата 1RS, 4SR, 9SR) (881685-58-1), (2.12) изопиразам (анти-эпимерный рацемат 1RS, 4SR, 9SR), (2.13) изопиразам (анти-эпимерный энантиомер 1R, 4S, 9S), (2.14) изопиразам (анти-эпимерный энантиомер 1S, 4R, 9R), (2.15) изопиразам (син-эпимерный рацемат 1RS, 4SR, 9RS), (2.16) изопиразам (син-эпимерный энантиомер 1R, 4S, 9R), (2.17) изопиразам (син-эпимерный энантиомер 1S, 4R, 9S), (2.18) мепронил (55814-41-0), (2.19) оксикарбоксин (5259-88-1), (2.20) пенфлуфен (494793-67-8), (2.21) пентиопирад (183675-82-3), (2.22) седаксан (874967-67-6), (2.23) тифлузамид (130000-40-7), (2.24) 1-метил-N-[2-(1,1,2,2-тетрафторэтокси)фенил]-3-(трифторметил)-1H-пиразол-4-карбоксамид, (2.25) 3-(дифторметил)-1-метил-N-[2-(1,1,2,2-тетрафторэтокси)фенил]-1H-пиразол-4-карбоксамид, (2.26) 3-(дифторметил)-N-[4-фтор-2-(1,1,2,3,3,3-гексафторпропокси)фенил]-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид, (2.27) N-[1-(2,4-дихлорфенил)-1-метоксипропан-2-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид (1092400-95-7) (WO 2008148570), (2.28) 5,8-дифтор-N-[2-(2-фтор-4-{[4-(трифторметил)пиридин-2-ил]окси}фенил)этил]хиназолин-4-амин (1210070-84-0) (WO 2010025451), (2.29) N-[9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метаннафталин-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид, (2.30) N-[(1S,4R)-9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метаннафталин-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид и (2.31) N-[(1R,4S)-9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метаннафталин-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид.
(3) ингибиторы комплекса III дыхательной цепи, например (3.1) аметокрадин (865318-97-4), (3.2) амисулбром (348635-87-0), (3.3) азоксистробин (131860-33-8), (3.4) циазофамид (120116-88-3), (3.5) куметоксистробин (850881-30-0), (3.6) кумоксистробин (850881-70-8), (3.7) димоксистробин (141600-52-4), (3.8) энестробурин (238410-11-2) (WO 2004/058723), (3.9) фамоксадон (131807-57-3) (WO 2004/058723), (3.10) фенамидон (161326-34-7) (WO 2004/058723), (3.11) феноксистробин (918162-02-4), (3.12) флуоксастробин (361377-29-9) (WO 2004/058723), (3.13) крезоксим-метил (143390-89-0) (WO 2004/058723), (3.14) метоминостробин (133408-50-1) (WO 2004/058723), (3.15) орисастробин (189892-69-1) (WO 2004/058723), (3.16) рицоксистробин (117428-22-5) (WO 2004/058723), (3.17) пираклостробин (175013-18-0) (WO 2004/058723), (3.18) пираметостробин (915410-70-7) (WO 2004/058723), (3.19) пираоксистробин (862588-11-2) (WO 2004/058723), (3.20) пирибенкарб (799247-52-2) (WO 2004/058723), (3.21) триклопирикарб (902760-40-1), (3.22) трифлоксистробин (141517-21-7) (WO 2004/058723), (3.23) (2E)-2-(2-{[6-(3-хлор-2-метилфенокси)-5-фторпиримидин-4-ил]окси}фенил)-2-(метоксиимино)-N-метилэтанамид (WO 2004/058723), (3.24) (2E)-2-(метоксиимино)-N-метил-2-(2-{[({(1E)-1-[3-(трифторметил)фенил]этилиден}амино)окси]метил}фенил)этанамид (WO 2004/058723), (3.25) (2E)-2-(метоксиимино)-N-метил-2-{2-[(E)-({1-[3-(трифторметил)фенил]этокси}имино)метил]фенил}этанамид (158169-73-4), (3.26) (2E)-2-{2-[({[(1E)-1-(3-{[(E)-1-фтор-2-фенилэтенил]окси}фенил)этилиден]амино}окси)метил]фенил}-2-(метоксиимино)-N-метилэтанамид (326896-28-0), (3.27) (2Е)-2-{2-[({[(2E,3E)-4-(2,6-дихлорфенил)бут-3-ен-2-илиден]амино}окси)метил]фенил}-2-(метоксиимино)-N-метилэтанамид, (3.28) 2-хлор-N-(1,1,3-триметил-2,3-дигидро-1H-инден-4-ил)пиридин-3-карбоксамид (119899-14-8), (3.29) 5-метокси-2-метил-4-(2-{[({(1E)-1-[3-(трифторметил)фенил]этилиден}амино)окси]метил}фенил)-2,4-дигидро-3H-1,2,4-триазол-3-он, (3.30) метил (2E)-2-{2-[({циклопропил[(4-метоксифенил)имино]метил}сульфанил)метил]фенил}-3-метоксипроп-2-еноат (149601-03-6), (3.31) N-(3-этил-3,5,5-триметилциклогексил)-3-(формиламино)-2-гидроксибензамид (226551-21-9), (3.32) 2-{2-[(2,5-диметилфенокси)метил]фенил}-2-метокси-N-метилацетамид (173662-97-0) и (3.33) (2R)-2-{2-[(2,5-диметилфенокси)метил]фенил}-2-метокси-N-метилацетамид (394657-24-0).
(4) Ингибиторы митоза и деления клетки, например (4.1) беномил (17804-35-2), (4.2) карбендазим (10605-21-7), (4.3) хлорфеназол (3574-96-7), (4.4) диэтофенкарб (87130-20-9), (4.5) этабоксам (162650-77-3), (4.6) флуопиколид (239110-15-7), (4.7) фуберидазол (3878-19-1), (4.8) пенцикурон (66063-05-6), (4.9) тиабендазол (148-79-8), (4.10) тиофанат-метил (23564-05-8), (4.11) тиофанат (23564-06-9), (4.12) зоксамид (156052-68-5), (4.13) 5-хлор-7-(4-метилпиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)[1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин (214706-53-3) и (4.14) 3-хлор-5-(6-хлорпиридин-3-ил)-6-метил-4-(2,4,6-трифторфенил)пиридазин (1002756-87-7).
(5) Соединения, способные иметь многоцентровое действие, как например (5.1) бордосская смесь (8011-63-0), (5.2) каптафол (2425-06-1), (5.3) каптан (133-06-2) (WO 02/12172), (5.4) хлорталонил (1897-45-6), (5.5) гидроксид меди (20427-59-2), (5.6) нафтенат меди (1338-02-9), (5.7) оксид меди (1317-39-1), (5.8) оксихлорид меди (1332-40-7), (5.9) меди(2+) сульфат (7758-98-7), (5.10) дихлофлуанид (1085-98-9), (5.11) дитианон (3347-22-6), (5.12) додин (2439-10-3), (5.13) додин в виде свободного основания, (5.14) фербам (14484-64-1), (5.15) фторфолпет (719-96-0), (5.16) фолпет (133-07-3), (5.17) гуазатин (108173-90-6), (5.18) гуазатина ацетат, (5.19) иминоктадин (13516-27-3), (5.20) иминоктадина албесилат (169202-06-6), (5.21) иминоктадина триацетат (57520-17-9), (5.22) манкоппер (53988-93-5), (5.23) манкозеб (8018-01-7), (5.24) манеб (12427-38-2), (5.25) метирам (9006-42-2), (5.26) метирама цинк (9006-42-2), (5.27) оксин-медь (10380-28-6), (5.28) пропамидин (104-32-5), (5.29) пропинеб (12071-83-9), (5.30) сера и препараты серы, включая полисульфид кальция (7704-34-9), (5.31) тирам (137-26-8), (5.32) толилфлуанид (731-27-1), (5.33) зинеб (12122-67-7) и (5.34) зирам (137-30-4).
(6) Соединения, способные индуцировать иммунологическую защиту, например (6.1) ацибензолар-S-метил (135158-54-2), (6.2) изотианил (224049-04-1), (6.3) пробеназол (27605-76-1) и (6.4) тиадинил (223580-51-6).
(7) Ингибиторы аминокислотного и/или белкового биосинтеза, например (7.1) эндоприм (23951-85-1), (7.2) бластицидин-S (2079-00-7), (7.3) ципродинил (121552-61-2), (7.4) касугамицин (6980-18-3), (7.5) касугамицина гидрохлорида гидрат (19408-46-9), (7.6) мепанипирим (110235-47-7), (7.7) пириметанил (53112-28-0) и (7.8) 3-(5-фтор-3,3,4,4-тетраметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин (861647-32-7) (WO 2005070917).
(8) Ингибиторы продуцирования АТФ, например (8.1) фентина ацетат (900-95-8), (8.2) фентина хлорид (639-58-7), (8.3) фентина гидроксид (76-87-9) и (8.4) силтиофам (175217-20-6).
(9) Ингибиторы синтеза клеточной стенки, например (9.1) бентиаваликарб (177406-68-7), (9.2) диметоморф (110488-70-5), (9.3) флуморф (211867-47-9), (9.4) ипроваликарб (140923-17-7), (9.5) мандипропамид (374726-62-2), (9.6) полиоксины (11113-80-7), (9.7) полиоксорим (22976-86-9), (9.8) валидамицин A (37248-47-8) и (9.9) валифеналат (283159-94-4; 283159-90-0).
(10) Ингибиторы липидного и мембранного синтеза, например (10.1) бифенил (92-52-4), (10.2) хлорнеб (2675-77-6), (10.3) диклоран (99-30-9), (10.4) эдифенфос (17109-49-8), (10.5) этридиазол (2593-15-9), (10.6) йодокарб (55406-53-6), (10.7) ипробенфос (26087-47-8), (10.8) изопротиолан (50512-35-1), (10.9) пропамокарб (25606-41-1), (10.10) пропамокарба гидрохлорид (25606-41-1), (10.11) ппротиокарб (19622-08-3), (10.12) пиразофос (13457-18-6), (10.13) хинтозен (82-68-8), (10.14) текназен (117-18-0) и (10.15) толклофос-метил (57018-04-9).
(11) Ингибиторы биосинтеза меланинов, например (11.1) карпропамид (104030-54-8), (11.2) диклоцимет (139920-32-4), (11.3) феноксанил (115852-48-7), (11.4) фталид (27355-22-2), (11.5) пирохилон (57369-32-1), (11.6) трициклазол (41814-78-2) и (11.7) 2,2,2-трифторэтил {3-метил-1-[(4-метилбензоил)амино]бутан-2-ил}карбамат (851524-22-6) (WO 2005042474).
(12) Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот, например (12.1) беналаксил (71626-11-4), (12.2) беналаксил-M (киралаксил) (98243-83-5), (12.3) бупиримат (41483-43-6), (12.4) клозилакон (67932-85-8), (12.5) диметиромол (5221-53-4), (12.6) этиримол (23947-60-6), (12.7) фуралаксил (57646-30-7), (12.8) гимексазол (10004-44-1), (12.9) металаксил (57837-19-1), (12.10) металаксил-М (мефеноксам) (70630-17-0), (12.11) офурац (58810-48-3), (12.12) оксадиксил (77732-09-3) и (12.13) оксолиновая кислота (14698-29-4).
(13) Ингибиторы сигнальной трансдукции, например (13.1) хлозолинат (84332-86-5), (13.2) фенпиклонил (74738-17-3), (13.3) флудиоксонил (131341-86-1), (13.4) ипродион (36734-19-7), (13.5) процимодон (32809-16-8), (13.6) хиноксифен (124495-18-7) и (13.7) винклозолин (50471-44-8).
(14) Соединения, способные действовать в качестве разобщающего агента, например (14.1) бинапакрил (485-31-4), (14.2) динокап (131-72-6), (14.3) феримзон (89269-64-7), (14.4) флуазинам (79622-59-6) и (14.5) мептилдинокап (131-72-6).
(15) Дополнительные соединения, например (15.1) бентиазол (21564-17-0), (15.2) бетоксазин (163269-30-5), (15.3) капсимицин (70694-08-5), (15.4) карвон (99-49-0), (15.5) хинометионат (2439-01-2), (15.6) пириофенон (хлазафенон) (688046-61-9), (15.7) куфранеб (11096-18-7), (15.8) цифлуфенамид (180409-60-3), (15.9) цимоксанил (57966-95-7), (15.10) ципросульфамид (221667-31-8), (15.11) дазомет (533-74-4), (15.12) дебакарб (62732-91-6), (15.13) дихлорфен (97-23-4), (15.14) дикломезин (62865-36-5), (15.15) дифензокват (49866-87-7), (15.16) дифензоквата метилсульфат (43222-48-6), (15.17) дифениламин (122-39-4), (15.18) экомат, (15.19) фенпиразамин (473798-59-3), (15.20) флуметовер (154025-04-4), (15.21) фторимид (41205-21-4), (15.22) флусульфамид (106917-52-6), (15.23) флутианил (304900-25-2), (15.24) фосетил-алюминий (39148-24-8), (15.25) фосетил-кальций, (15.26) фосетил-натрий (39148-16-8), (15.27) гексахлорбензол (118-74-1), (15.28) ирумамицин (81604-73-1), (15.29) метасульфокарб (66952-49-6), (15.30) метилизотиоцианат (556-61-6), (15.31) метрафенон (220899-03-6), (15.32) милдиомицин (67527-71-3), (15.33) натамицин (7681-93-8), (15.34) никеля диметилдитиокарбамат (15521-65-0), (15.35) нитротал-изопропил (10552-74-6), (15.36) октилинон (26530-20-1), (15.37) оксамокарб (917242-12-7), (15.38) оксифентиин (34407-87-9), (15.39) пентахлорфенол и соли (87-86-5), (15.40) фенотрин, (15.41) фосфорная кислота и ее соли (13598-36-2), (15.42) пропамокарб-фосетилат, (15.43) пропаносин-натрий (88498-02-6), (15.44) прохиназид (189278-12-4), (15.45) пириморф (868390-90-3), (15.45е) (2E)-3-(4-трет-бутилфенил)-3-(2-хлорпиридин-4-ил)-1-(морфолин-4-ил)проп-2-ен-1-он (1231776-28-5), (15.45z) (2Z)-3-(4-трет-бутилфенил)-3-(2-хлорпиридин-4-ил)-1-(морфолин-4-ил)проп-2-ен-1-он (1231776-29-6), (15.46) пирролнитрин (1018-71-9) (EP-A 1559320), (15.47) тебуфлохин (376645-78-2), (15.48) теклофталам (76280-91-6), (15.49) толнифанид (304911-98-6), (15.50) триазоксид (72459-58-6), (15.51) трихламид (70193-21-4), (15.52) зариламид (84527-51-5), (15.53) (3S,6S,7R,8R)-8-бензил-3-[({3-[(изобутирилокси)метокси]-4-метоксипиридин-2-ил}карбонил)амино]-6-метил-4,9-диоксо-1,5-диоксонан-7-ил 2-метилпропаноат (517875-34-2) (WO 2003035617), (15.54) 1-(4-{4-[(5R)-5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]этанон (1003319-79-6) (WO 2008013622), (15.55) 1-(4-{4-[(5S)-5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]этанон (1003319-80-9) (WO 2008013622), (15.56) 1-(4-{4-[5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]этанон (1003318-67-9) (WO 2008013622), (15.57) 1-(4-метоксифенокси)-3,3-диметилбутан-2-ил 1H-имидазол-1-карбоксилат (111227-17-9), (15.58) 2,3,5,6-тетрахлор-4-(метилсульфонил)пиридин (13108-52-6), (15.59) 2,3-дибутил-6-хлортиено[2,3-d]пиримидин-4(3H)-он (221451-58-7), (15.60) 2,6-диметил-1H,5H-[1,4]дитиино[2,3-c:5,6-c’]дипиррол-1,3,5,7(2H,6H)-тетрон, (15.61) 2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-(4-{4-[(5R)-5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)этанон (1003316-53-7) (WO 2008013622), (15.62) 2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-(4-{4-[(5S)-5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)этанон (1003316-54-8) (WO 2008013622), (15.63) 2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-{4-[4-(5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил)-1,3-тиазол-2-ил]пиперидин-1-ил}этанон (1003316-51-5) (WO 2008013622), (15.64) 2-бутокси-6-йод-3-пропил-4Н-хромен-4-он, (15.65) 2-хлор-5-[2-хлор-1-(2,6-дифтор-4-метоксифенил)-4-метил-1H-имидазол-5-ил]пиридин, (15.66) 2-фенилфенол и соли (90-43-7), (15.67) 3-(4,4,5-трифтор-3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин (861647-85-0) (WO 2005070917), (15.68) 3,4,5-трихлорпиридин-2,6-дикарбонитрил (17824-85-0), (15.69) 3-[5-(4-хлорфенил)-2,3-диметил-1,2-оксазолидин-3-ил]пиридин, (15.70) 3-хлор-5-(4-хлорфенил)-4-(2,6-дифторфенил)-6-метилпиридазин, (15.71) 4-(4-хлорфенил)-5-(2,6-дифторфенил)-3,6-диметилпиридазин, (15.72) 5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-тиол, (15.73) 5-хлор-N’-фенил-N’-(проп-2-ин-1-ил)тиофен-2-сульфоногидразид (134-31-6), (15.74) 5-фтор-2-[(4-фторбензил)окси]пиримидин-4-амин (1174376-11-4) (WO 2009094442), (15.75) 5-фтор-2-[(4-метилбензил)окси]пиримидин-4-амин (1174376-25-0) (WO 2009094442), (15.76) 5-метил-6-октил[1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин-7-амин, (15.77) этил (2Z)-3-амино-2-циано-3-фенилпроп-2-еноат, (15.78) N’-(4-{[3-(4-хлорбензил)-1,2,4-тиадиазол-5-ил]окси}-2,5-диметилфенил)-N-этил-N-метилимидоформамид, (15.79) N-(4-хлорбензил)-3-[3-метокси-4-(проп-2-ин-1-илокси)фенил]пропанамид, (15.80) N-[(4-хлорфенил)(циано)метил]-3-[3-метокси-4-(проп-2-ин-1-илокси)фенил]пропанамид, (15.81) N-[(5-бром-3-хлорпиридин-2-ил)метил]-2,4-дихлорпиридин-3-карбоксамид, (15.82) N-[1-(5-бром-3-хлорпиридин-2-ил)этил]-2,4-дихлорпиридин-3-карбоксамид, (15.83) N-[1-(5-бром-3-хлорпиридин-2-ил)этил]-2-фтор-4-йодпиридин-3-карбоксамид, (15.84) N-{(E)-[(циклопропилметокси)имино][6-(дифторметокси)-2,3-дифторфенил]метил}-2-фенилацетамид (221201-92-9), (15.85) N-{(Z)-[(циклопропилметокси)имино][6-(дифторметокси)-2,3-дифторфенил]метил}-2-фенилацетамид (221201-92-9), (15.86) N’-{4-[(3-трет-бутил-4-циано-1,2-тиазол-5-ил)окси]-2-хлор-5-метилфенил}-N-этил-N-метилимидоформамид, (15.87) N-метил-2-(1-{[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-N-(1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил)-1,3-тиазол-4-карбоксамид (922514-49-6) (WO 2007014290), (15.88) N-метил-2-(1-{[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-N-[(1R)-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил]-1,3-тиазол-4-карбоксамид (922514-07-6) (WO 2007014290), (15.89) N-метил-2-(1-{[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-N-[(1S)-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил]-1,3-тиазол-4-карбоксамид (922514-48-5) (WO 2007014290), (15.90) пентил {6-[({[(1-метил-1H-тетразол-5-ил)(фенил)метилиден]амино}окси)метил]пиридин-2-ил}карбамат, (15.91) феназин-1-карбоновая кислота, (15.92) хинолин-8-ол (134-31-6), (15.93) хинолин-8-ол сульфат (2:1) (134-31-6) и (15.94) трет-бутил {6-[({[(1-метил-1H-тетразол-5-ил)(фенил)метилен]амино}окси)метил]пиридин-2-ил}карбамат.
(16) Дополнительные соединения, например (16.1) 1-метил-3-(трифторметил)-N-[2’-(трифторметил)бифенил-2-ил]-1H-пиразол-4-карбоксамид, (16.2) N-(4’-хлорбифенил-2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид, (16.3) N-(2’,4’-дихлорбифенил-2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид, (16.4) 3-(дифторметил)-1-метил-N-[4’-(трифторметил)бифенил-2-ил]-1H-пиразол-4-карбоксамид, (16.5) N-(2’,5’-дифторбифенил-2-ил)-1-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-4-карбоксамид, (16.6) 3-(дифторметил)-1-метил-N-[4’-(проп-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.7) 5-фтор-1,3-диметил-N-[4’(проп-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.8) 2-хлор-N-[4’-(проп-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]пиридин-3-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.9) 3-(дифторметил)-N-[4’-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.10) N-[4’-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-5-фтор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.11) 3-(дифторметил)-N-(4’-этинилбифенил-2-ил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/05 8723), (16.12) N-(4’-этинилбифенил-2-ил)-5-фтор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.13) 2-хлор-N-(4’-этинилбифенил-2-ил)пиридин-3-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.14) 2-хлор-N-[4’-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]пиридин-3-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.15) 4-(дифторметил)-2-метил-N-[4’-(трифторметил)бифенил-2-ил]-1,3-тиазол-5-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.16) 5-фтор-N-[4’-(3-гидрокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1,3-диметил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.17) 2-хлор-N-[4’-(3-гидрокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]пиридин-3-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.18) 3-(дифторметил)-N-[4’-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.19) 5-фтор-N-[4’-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1,3-диметил-1H-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.20) 2-хлор-N-[4’-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]пиридин-3-карбоксамид (известный из WO 2004/058723), (16.21) (5-бром-2-метокси-4-метилпиридин-3-ил)(2,3,4-триметокси-6-метилфенил)тэтанон (известный из EP-A 1559320), (16.22) N-[2-(4-{[3-(4-хлорфенил)проп-2-ин-1-ил]окси}-3-метоксифенил)этил]-N2-(метилсульфонил)валинамид (220706-93-4), (16.23) 4-оксо-4-[(2-фенилэтил)амино]бутановая кислота и (16.24) бут-3-ин-1-ил{6-[({[(Z)-(1-метил-1H-тетразол-5- ил)(фенил)метилен]амино}окси)метил]пири-дин-2-ил}карбамат, N-[9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метаннафталин-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-1H-пиразол-4-карбоксамид и 3-дифторметил-1-метил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота [2-(2,4-дихлорфенил)-2-метокси-1-метил-этил]-амид.
Там, где все названные партнеры смешивания классов (1)-(16) могут, если их функциональные группы способны на это, при необходимости образовывать соли с подходящими основаниями или кислотами;
Являющиеся бактерицидами, которые могут быть указаны, представляют собой:
бронопол, дихлорфен, нитрапирин, никеля диметилдитиокарбамат, касугамицин, октилинон, фуранкарбоновая кислота, окситетрациклин, пробеназол, стрептомицин, теклофталам, сульфат меди и другие препараты меди.
Являющиеся инсектицидами, акарицидами и нематоцидами, которые могут быть указаны, представляют собой:
(1) Ингибиторы ацетилхолинэстеразы (AChE), например карбаматы, например, аланикарб, алдикарб, альдоксикарб, алликсикарб, аминокарб, бендиокарб, бенфуракарб, буфенкарб, бутакарб, бутокарбоксим, бутоксикарбоксим, карбарил, карбофуран, карбосульфан, клоэтокарб, диметилан, етиофенкарб, фенобукарб, фенотиокарб, форметанат, фуратиокарб, изопрокарб, метам-натрий, метиокарб, метомил, металкарб, оксамил, пиримикарб, промекарб, пропоксур, тиодикарб, тиофанокс, триметакарб, ХМС, и хилилкарб; или органофосфаты, например, ацефат, азаметифос, азинфос (-метил, -этил), бромофос-этил, бромфенвинфос (-метил), бутатиофос, кадусафос, карбофенотион, хлорэтоксифос, хлорфенвинфос, хлормефос, хлорпирифос (-метил/-этил), кумафос, цианофенфос, цианофос, хлорфенвинфос, деметон-S-метил, деметон-S-метил-сульфон, диалифос, диазинон, дихлофентион, дихлорвос/DDVP, дикротофос, диметоат, диметилвинфос, диоксабензофос, дисульфотон, EPN, етион, этопрофос, этримфос, фамфур, фенамифос, фенитротион, фенсульфотион, фентион, флупиразофос, фонофос, формотион, фосметилан, фостиазат, гептенофос, йодфенфос, ипробенфос, исазофос, изофенфос, изопропил, O-салицила, изохатион, малатион, мекарбам, метакрифос, метамидофос, метидатион, мевинфос, монокротофос, налед, ометоат, оксидеметон-метил, паратион (-метил/-этил), фентоат, форат, фокалон, фосмет, фосфамидон, фосфокарб, фоксим, пиримифос (-метил/-этил), профенофос, пропафос, пропетамфос, протиофос, протоат, пираклофос, пиридафентион, пиридатион, хиналфос, себуфос, сульфотеп, сулпрофос, тебупиримфос, темефос, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиометон, триазофос, триклорфон, вамидотион и имициафос.
(2) Антагонисты ГАМК-зависимого хлоридного канала, например органохлорины, например, камфехлор, хлордан, эндосульфан, гамма-НСН, НСН, гептахлор, линдан, и метоксихлор; или фипролы (фенилпиразолы), например, ацетопрол, этипрол, фипронил, пирафлупрол, пирипрол и ванилипрол.
(3) Модуляторы натриевого канала/зависимые от напряжения блокаторы натриевого канала, например пиретроиды, например, акринатрин, аллетрин (d-цис-транс, d-транс), бета-цифлутрин, бифентрин, биоаллетрин, биоаллентрина S-циклопентила изомер, биоэтанометрин, биоперметрин, биоресметрин, хловапотрин, цис-суперметрин, цис-ресметрин, цис-перметрин, клоцитрин, циклопротрин, цифлутрин, цигалотрин, суперметрин (альфа-, бета-, тета-, дзета-), цифенотрин, дельтаметрин, эмпентрин (1R изомер), эсфенвалерат, этофенпрокс, фенфлутрин, фенпропатрин, фенпиритрин, фенвалерат, флуброцитринат, флуцитринат, флуфенпрокс, флуметрин, флувалинат, фубфенпрокс, гамма-цигалотрин, имипротрин, кадетрин, лямбда-цигалотрин, метофлутрин, перметрин (цис-, транс-), фенотрин (1R транс-изомер), праллетрин, профлутрин, протрифенбут, пиресметрин, ресметрин, RU 15525, силафлуофен, тау-флувалинат, тефлутрин, тераллетрин, тетраметрин (-1R- изомер), тралометрин, транс-флутрин, ZXI 8901, пиретрин (пиретрум), эфлусиланат; ДЦТ; или метоксихлор.
(4) Агонисты/антагонисты никотинэргического ацетилхолинового рецептора, например хлорникотинилы, например, ацетамиприд, клотианидин, динотефуран, имидаклоприд, имидаклотиз, нитенпирам, нитиазин, тиаклоприд, тиаметоксам, AKD-1022; или никотин, бенсультап, картап, тиосультап-натрий и тиосилам.
(5) Модуляторы (агонисты) аллостерического ацетилхолинового рецептора, например, спиносины, например, спиносад и спинеторам.
(6) Активаторы хлоридного канала, например, мектины/макролиды, например, абамектин, эмамектин, эмамектина бензоат, ивермектин, лепимектин и милбемектин; или аналоги ювенильного гормона, например, гидропрен, кинопрен, метопрен, эпофенонан, трипрен, феноксикарб, пирипроксифен и диофенолан.
(7) Активные ингредиенты с неизвестными или неспецифическими механизмами действия, например, газообразователи, например, метилбромид, хлорпикрин и сульфурилфторид; селективные антифидинги, например, криолит, пиметрозин, пирифлухиназон и флоникамид; или ингибиторы роста клещей, например, клофентезин, гекситиазокс, этоксазол.
(8) Ингибиторы окислительного фосфорилирования, деструкторы АТФ, например диафентиурон; оловоорганические соединения, например, азоциклоолово, цигексаолово и фенбутаолова оксид; или пропаргит, тетрадифон.
(9) Разобщители окислительного фосфорилирования, действующие посредством прерывания H-протонного градиента, например, хлорфенапир, бинапакрил, динобутон, динокап и DNOC.
(10) Миккробные разрушители мембраны кишечника насекомых, например, штаммы Bacillus thuringiensis.
(11) Ингибиторы биосинтеза хитина, например бензоилмочевины, например, бистрифлурон, хлорфлуазурон, дифлубензурон, флуазурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, новалурон, новифлумурон, пенфлурон, тефлубензурон или трифлумурон.
(12) Бупрофезин.
(13) Вещества, нарушающие линьку, например циромазин.
(14) Агонисты/разрушители экдизона, например диасилгидразины, например, хромафенозид, галофенозид, метоксифенозид, тебуфенозид и Фуфенозид (JS118); или азадирахтин.
(15) Октопаминэргические агонисты, например, амитраз.
(16) Ингибиторы транспорта электронов сайта III/ингибиторы транспорта электронов сайта II, например гидраметилнон; ацехиносил; флуакрипирим; или цифлуметофен и циенопирафен.
(17) Ингибиторы транспорта электронов, например, ингибиторы транспорта электронов сайта I, из группы METI акарицидов, например, феназахин, фенпироксимат, пиримидифен, пиридабен, тебуфенпирад, толфенпирад и ротенон; или блокаторы зависимого от напряжения натриевого канала, например, индоксакарб и метафлумизон.
(18) Ингибиторы биосинтеза жирных кислот, например, производные тетроновой кислоты, например, спиродиклофен и спиромезифен; или производные тетраминовой кислоты, например, спиротетрамат.
(19) Нейрональные ингибиторы с неизвестным механизмом действия, например, бифеназат.
1
2
(20) Эффекторы рианодинового рецептора, например, диамиды, например, флубендиамид, (R),(S)-3-хлор-N-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил}-N-(1-метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид, хлорантранилипрол (Ринаксипир), или Циантранилипрол (Циазапир).
4
4
(21) Дополнительные активные ингредиенты с неизвестным механизмом действия, например амидофлумет, бенклотиаз, бензоксимат, бромпропилат, бупрофезин, хинометионат, хлордимеформ, хлорбензилат, клотиазобен, циклопрен, дикофол, дицикланил, феноксакрим, фентрифанил, флубензимин, флуфенерим, флутензин, госсиплур, японилур, метоксадиазон, петролеум, олеат калия, пиридалил, сульфурамид, тетрасул, триаратен или вербутин; или одно из следующих известных активных соединений 4-{[(6-бромпирид-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(6-фторпирид-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(2-хлор-1,3-тиазол-5-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(6-хлорпирид-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(6-хлорпирид-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино}фуран-2(5H)-он (все известны из WO 2007/115644), 4-{[(5,6-дихлорпирид-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5H)-он (известный из WO 2007/115646), 4-{[(6-хлор-5-фторпирид-3-ил)метил](метил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(6-хлор-5-фторпирид-3-ил)метил](циклопропил)амино}фуран-2(5H)-он (оба из WO 2007/115643), 4-{[(6-хлорпирид-3-ил)метил](циклопропил)амино}фуран-2(5H)-он, 4-{[(6-хлорпирид-3-ил)метил](метил)амино}фуран-2(5H)-он (оба из EP-A-0539588), [(6-хлорпиридин-3-ил)метил](метил)оксидо-λ-сульфанилиден цианамид, [1-(6-хлорпиридин-3-ил)этил](метил)оксидо-λ-сульфанилиден цианамид (оба из WO 2007/149134) и его диастереомеры (A) и (B)
4
4
(также известные из WO 2007/149134), [(6-трифторметилпиридин-3-ил)метил](метил)оксидо-λ-сульфанилиден цианамид (известный из WO 2007/095229), или [1-(6-трифторметилпиридин-3-ил)этил](метил)оксидо-λ-сульфанилиден цианамид (известный из WO 2007/149134) и его диастереомеры (C) и (D), а именно сульфоксафлор (также известный из WO 2007/149134)
являясь моллюскоцидами, которые могут быть указаны, представляют собой метальдегид и метиокарб.
являясь антидотами, которые могут быть указаны, представляют собой:
(1) Производные гетероциклической карбоновой кислоты, например, производные дихлорфенилпиразолин-3-карбоновой кислоты, например, 1-(2,4-дихлорфенил)-5-(этоксикарбонил)-5-метил-4,5-дигидро-1H-пиразол-3-карбоновая кислоты, диэтил 1-(2,4-дихлорфенил)-4,5-дигидро-5-метил-1H-пиразол-3,5-дикарбоксилат ("мефенпир-диэтил"), и аналогичные соединения, известные из WO 91/07874; например производные дихлорфенилпиразолкарбоновой кислоты, например, этил 1-(2,4-дихлорфенил)-5-метил-1H-пиразол-3-карбоксилат, этил 1-(2,4-дихлорфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-3-карбоксилат, этил 5-трет-бутил-1-(2,4-дихлорфенил)-1H-пиразол-3-карбоксилат и аналогичные соединения, известные из EP-A 0333131 и EP-A 0269806; например производные 1,5-дифенилпиразол-3-карбоновой кислоты, например, этил 1-(2,4-дихлорфенил)-5-фенил-1H-пиразол-3-карбоксилат, метил 1-(2-хлорфенил)-5-фенил-1H-пиразол-3-карбоксилат, и аналогичные соединения известные из EP-A 0268554; например, производные триазолкарбоновой кислоты, например, фенхлоразол, фенхлоразол-этил, и аналогичные соединения, известные из EP-A 0174562 и EP-A 0346620; например, производные 2-изохазолин-3-карбоновой кислоты, например, этил 5-(2,4-дихлорбензил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоксилат, этил 5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоксилат и аналогичные соединения, известные из WO 91/08202, или 5,5-дифенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоновая кислота, этил 5,5-дифенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоксилат ("изоксадифен-этил"), пропил 5,5-дифенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоксилат, этил 5-(4-фторфенил)-5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-карбоксилат, известные из WO 95/07897.
(2) Производные 8-хинолинола, например производные (хинолин-8-илокси)уксусной кислоты, например, гептан-2-ил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат ("клохинтоцет-мексил"), 4-метилпентан-2-ил[(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, 4-(аллилокси)бутил[(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, 1-(аллилокси)пропан-2-ил[(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, этил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, метил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, аллил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, 2-{[пропилиденамино]окси}этил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, 2-оксопропил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]ацетат, и аналогичные соединения, известные из EP-A 0086750, EP-A 0094349, EP-A 0191736 или EP-A 0492366, а также [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]уксусная кислота, ее гидраты и соли, например, лития, натрия, калия, кальция, магния, алюминия, железа, аммония, четвертичного аммония, сульфониевые или фосфониевые соли, как известно из WO 02/34048; например производные [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]малоновой кислоты, напр., диэтил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]малонат, диаллил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]малонат, этил метил [(5-хлорхинолин-8-ил)окси]малонат и аналогичные соединения, известные из EP-A 0582198.
(3) Дихлорацетамиды, которые часто применяют как предвсходовые антидоты (почвенные активные антидоты), например, "дихлормид" (N,N-диаллил-2,2-дихлорацетамид), "R-29148" (3-дихлорацетил-2,2,5-триметил-1,3-оксазолидин) и "R-28725" (3-дихлорацетил-2,2,-диметил-1,3-оксазолидин), оба от компании Stauffer, "беноксакор" (4-дихлорацетил-3,4-дигидро-3-метил-2H-1,4-бензоксазин), "PPG-1292" (N-аллил-N-[(1,3-диоксолан-2-ил)-метил]-дихлорацетамид) от PPG Industries, "DKA-24" (N-аллил-N-[(аллиламинокарбонил)метил]-дихлорацетамид) от Sagro-Chem, "AD-67" или "MON 4660" (3-дихлорацетил-1-окса-3-аза-спиро[4,5]декан) от Nitrokemia и Monsanto, "TI-35" (1-дихлорацетил-азепан) от TRI-Chemical RT, "диклонон" (дипиклонон) или "BAS145138" или "LAB 14513 8" (3-дихлорацетил-2,5,5-триметил-1,3-диазабицикло[4.3.0]нонан) от BASF, "фурилазол" или "MON 13900" [(RS)-3-дихлорацетил-5-(2-фурил)-2,2-диметилоксазолидин], а также его (R)-изомер.
(4) Ацилсульфонамиды, например N-ацилсульфонамид формулы (II)
или его соли (известные из WO 97/45016), где
1
1
6
1
4
1
6
1
4
R представляет собой (C-C)алкил, который является незамещенным или от моно- до тризамещенным посредством заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, (C-C)алкокси, (C-C)галогеналкокси и (C-C)алкилтио;
2
1
4
1
4
3
R представляет собой галоген, (C-C)алкил, (C-C)алкокси, CF;
m равно 1 или 2;
или например 4-(бензоилсульфамоил)бензамиды формулы (III)
или их соли (известные из WO 99/16744), где
3
4
1
6
3
6
3
6
3
6
R, R независимо один от другого представляет собой водород, (C-C)алкил, (C-C)алкенил, (C-C)алкинил, (C-C)циклоалкил,
5
1
4
1
4
1
4
R представляет собой галоген, (C-C)алкил, (C-C)галогеналкил или (C-C)алкокси
n равен 1 или 2,
в частности, соединения формулы (III), где
3
4
5
n
R = циклопропил, R = водород и R=2-OMe, ("ципросульфамид"),
3
4
5
n
R = циклопропил, R = водород и R=5-Cl-2-OMe,
3
4
5
n
R = этил, R = водород и R=2-OMe,
3
4
5
n
R = изопропил, R = водород и R=5-Cl-2-OMe,
3
4
5
n
R = изопропил, R = водород и R=2-OMe.
или, например бензоилсульфамоилфенилмочевины формулы (IV)
(известные из EP-A 0365484), где
6
7
1
8
3
6
3
6
R, R независимо один от другого представляет собой водород, (C-C)алкил, (C-C)алкенил, (C-C)алкинил,
8
1
4
1
4
3
R представляет собой галоген, (C-C)алкил, (C-C)алкокси, CF
r равен 1 или 2;
в частности,
1-[4-(N-2-метоксибензоилсульфамоил)фенил]-3-метилмочевина,
1-[4-(N-2-метоксибензоилсульфамоил)фенил]-3,3-диметилмочевина,
1-[4-(N-4,5-диметилбензоилсульфамоил)фенил]-3-метилмочевина.
(5) Гидроксиароматические соединения и производные ароматической-алифатической карбоновой кислоты, например, этил-3,4,5-триацетоксибензоат, 4-гидрокси-3,5-диметоксибензойная кислота, 3,5-дигидрокибензойная кислота, 2,4-дигидрокибензойная кислота, 4-фтор-2-гидроксибензойная кислота, 2-гидроксикоричная кислота, 2,4-дихлоркоричная кислота (см. WO 2004/084631, WO 2005/015994, WO 2005/016001).
(6) 1,2-Дигидрохиноксалин-2-оны, например, 1-метил-3-(2-тиенил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он, 1-метил-3-(2-тиенил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-тион, 1-(2-аминоэтил)-3-(2-тиенил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он гидрохлорид, 1-(2-метилсульфониламиноэтил)-3-(2-тиенил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он (см. WO 2005/112630).
(7) Производные дифенилметоксиуксусной кислоты, например, метил (дифенилметокси)ацетат (CAS-Reg. No. 41858-19-9), этил (дифенилметокси)ацетат или (дифенилметокси)уксусная кислота (см. WO 98/38856).
(8) Соединения формулы (V)
или их соли (известные из WO 98/27049), где
9
1
4
1
4
1
4
1
4
R представляет собой галоген, (C-C)алкил, (C-C)галогеналкил, (C-C)алкокси, (C-C)галогеналкокси,
10
1
4
R представляет водород или (C-C)алкил,
10
1
8
2
4
2
4
1
8
R представляет собой водород, в каждом случае незамещенный или от моно- до тризамещенного (C-C)алкила, (C-C)алкенила, (C-C)алкинила или арила, где заместители выбираются из группы, состоящей из галогена и (C-C)алкокси,
s равен 0, 1 или 2.
(9) 3-(5-Тетразолилкарбонил)-2-хинолоны, например, 1,2-дигидро-4-гидрокси-1-этил-3-(5-тетразолилкарбонил)-2-хинолон (CAS-Reg. No. 219479-18-2), 1,2-дигидро-4-гидрокси-1-метил-3-(5-тетразолил-карбонил)-2-хинолон (CAS Reg. No. 95855-00-8) (см. WO 99/00020).
(10) Соединения формул (VI-a) и (VI-b)
(известные из WO 2007/023719 и WO 2007/023764), где
12
1
4
3
3
R представляет собой галоген, (C-C)алкил, метокси, нитро, циано, CF, OCF,
Y, Z независимо представляет собой O или S,
t равен 0, 1, 2, 3 или 4,
13
1
16
2
6
R представляет собой (C-C)алкил, (C-C)алкенил, арил, бензил, галогенбензил,
14
1
6
R представляет собой водород или (C-C)алкил.
(11) Оксииминосоединения, известные как средства для обработки семян, например, "оксабетринил" [(Z)-1,3-диоксолан-2-илметоксиимино(фенил)ацетонитрил], "флуксофеним" [1-(4-хлорфенил)-2,2,2-трифтор-1-этанон-O-(1,3-диоксолан-2-илметил)-оксим] и "циометринил" или "CGA-43089" [(2)-цианометоксиимино(фенил)ацетонитрил], все известные как антидоты при обработке семян сорго против повреждения от метолахлора.
(12) Изотиохроманоны, например, метил [(3-оксо-1H-2-бензотиопиран-4(3H)-илиден)метокси]ацетат (CAS-Reg. No. 205121-04-6) и аналогичные соединения известны из WO 98/13361.
(13) Соединения из группы, состоящей из "нафтойного ангидрида" (ангидрида 1,8-нафталиндикарбоновой кислоты), который известен как антидот при обработке семян для кукурузы (маиса) против повреждения от тиокарбаматных гербицидов, "фенклорим" (4,6-дихлор-2-фенилпиримидин), который известен как антидот при обработке семян у посеянного риса против повреждения от претилахлора, "флуразол" (бензил-2-хлор-4-трифторметил-1,3-тиазол-5-карбоксилат), который известен как антидот при обработке семян для сорго против повреждения от алахлора и метолахлора, "CL 304415" (CAS-Reg. No. 31541-57-8), (4-карбокси-3,4-дигидро-2H-1-бензопиран-4-уксусная кислота) от American Cyanamid, который известен как антидот для кукурузы (маиса) против повреждения от имидазолинонов, "MG 191" (CAS-Reg. No. 96420-72-3) (2-дихлорметил-2-метил-1,3-диоксолан) от Nitrokemia, известный как антидот для кукурузы (маиса), "MG-838" (CAS-Reg. No. 133993-74-5), (2-пропенил 1-окса-4-азаспиро[4.5]декан-4-карбодитиоат) от Nitrokemia, "Дисульфотон" (O,O-диэтил-S-2-этилтиоэтилфосфородитиоат), "диэтолат" (O,O-диэтил-O-фенилфосфоротиоат), "мефенат" (4-хлорфенил-метилкарбамат).
(14) Соединения, которые помимо гербицидной активности также проявляют антидотную активность у культур, подобных рису, например, "Димепиперат" или "MY-93" (S-1-метил-1-фенилэтил-пиперидин-1-карботиоат), который известен как антидот для риса против повреждения от молината, "даимурон" или "SK 23" [1-(1-метил-1-фенилэтил)-3-p-толил-мочевина], который известен как антидот для риса против повреждения от имазосульфурона, "кумилурон" = "JC-940" [3-(2-хлорфенилметил)-1-(1-метил-1-фенил-этил)мочевина] (см. JP-A 60-087254), который известен как антидот для риса против повреждения от некоторых гербицидов, "метоксифенон" или "NK 049" (3,3’-диметил-4-метокси-бензофенон), который известен как антидот для риса против повреждения от некоторых гербицидов, "CSB" [1-бром-4-(хлорметилсульфонил)бензол] от Kumiai (CAS-Reg. No. 54091-06-4), который известен как антидот для риса против повреждения от некоторых гербицидов.
(15) Соединения, которые в основном применяют как гербициды, но которые проявляют также антидотную активность на некоторых культурах, например, (2,4-дихлорфенокси)уксусная кислота (2,4-D), (4-хлорфенокси)уксусная кислота, (R,S)-2-(4-хлор-o-толилокси)пропионовая кислота (мекопроп), 4-(2,4-дихлорфенокси)масляная кислота (2,4-DB), (4-хлор-o-толилокси)уксусная кислота (МСРА), 4-(4-хлор-o-тоилокси)масляная кислота, 4-(4-хлорфенокси)масляная кислота, 3,6-дихлор-2-метоксибензойная кислота (дикамба), 1-(этоксикарбонил)этил-3,6-дихлор-2-метоксибензоат (лактидихлор-этил).
Являясь регуляторами роста растений, которые могут быть указаны, представляют собой хлорид хлорхолина и этефон.
Примерами питательных веществ для растений, которые могут быть указаны, являются обычные неорганические или органические удобрения для снабжения растений макро- и/или микропитательными компонентами.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей A) флуопирам и B) один или несколько из следующих инсектицидов:
Хлорникотинилы, предпочтительно Имидаклоприд, Клотианидин, Тиаклоприд и Тиаметоксам
Пиретроиды, предпочтительно Лямбда-Цигалотрин, β-Цифлутрин, Тефлутрин, Трансфлутрин, Дельтаметрин
Карбаматы, предпочтительно Метиокарб, Тиодикарб и Алдикарб
Фосфорорганические соединения, предпочтительно Фенамифос, Фостиазат, Этопрофос.
Антраниламиды, предпочтительно Ринаксипир, Цизазипир
Макролиды, предпочтительно Абамектин, Спиносад, Спинеторам
Фипролы, предпочтительно Фипронил и Этипрол
Дополнительные нематоциды, предпочтительно Оксамил
Кетоенолы, предпочтительно, Спиротетрамат, Спиродиклофен и Спиромезифен
4-[(2,2-Дифторэтил)амино]фуран-2(5H)-он-2-хлор-5-Этилпиридин (1:1), Сульфоксафлор, Флоникамид, флупирадифурон
Фумигаторы и средства биологической борьбы, предпочтительно Pasteuria.
Нематоды
Флуопирам или флуопирам в комбинации со средством биологической борьбы, Bacillus firmus штамм CNCM I-1582 или флуопирам в комбинации с по меньшей мере одним агрохимически активным соединением является особенно применимым при борьбе с паразитирующими на растениях нематодами у растений, резистентным к нематодам, где нематоды являются представителями следующих видов:
Aphelenchoides spp., Bursaphelenchus spp., Ditylenchus spp., Globodera spp., Heterodera spp., Longidorus spp., Meloidogyne spp., Pratylenchus spp., Radopholus spp., Tpuchodorus spp., Tylenchulus spp, Xiphinema spp., Helicotylenchus spp., Tylenchorhynchus spp., Scutellonema spp., Paratrichodorus spp., Meloinema spp., Paraphelenchus spp., Aglenchus spp., Belonolaimus spp., Nacobbus spp, Rotylenchulus spp., Rotylenchus spp., Neotylenchus spp., Paraphelenchus spp., Dolichodorus spp., Hoplolaimus spp., Punctodera spp., Criconemella spp., Quinisulcius spp., Hemicycliophora spp., Anguina spp., Subanguina spp., Hemicriconemoides spp., Psilenchus spp., Pseudohalenchus spp., Criconemoides spp., Cacopaurus spp, Aglenchus agricola, Anguina tritici, Aphelenchoides arachidis, Aphelenchoides fragariae, Belonolaimus gracilis, Belonolaimus longicaudatus, Belonolaimus nortoni, Cacopaurus pestis, Criconemella curvata, Criconemella onoensis, Criconemella ornata, Criconemella rusium, Criconemella xenoplax (= Mesocriconema xenoplax) и Criconemella spp., как правило, Criconemoides ferniae, Criconemoides onoense, Criconemoides ornatum и Criconemoides spp. как правило, Ditylenchus destructor, Ditylenchus dipsaci, Ditylenchus myceliophagus и Ditylenchus spp., как правило, Dolichodorus heterocephalus, Globodera pallida (= Heterodera pallida), Globodera rostochiensis, Globodera solanacearum, Globodera tabacum, Globodera virginiae, Helicotylenchus digonicus, Helicotylenchus dihystera, Helicotylenchus erytrine, Helicotylenchus multicinctus, Helicotylenchus nannus, Helicotylenchus pseudorobustus и Helicotylenchus spp., как правило, Hemicriconemoides, Hemicycliophora arenaria, Hemicycliophora nudata, Hemicycliophora parvana, Heterodera avenae, Heterodera cruciferae, Heterodera glycines, Heterodera oryzae, Heterodera schachtii, Heterodera zeae и Heterodera spp., как правило, Hoplolaimus aegyptii, Hoplolaimus californicus, Hoplolaimus columbus, Hoplolaimus galeatus, Hoplolaimus indicus, Hoplolaimus magnistylus, Hoplolaimus pararobustus, Longidorus africanus, Longidorus breviannulatus, Longidorus elongatus, Longidorus laevicapitatus, Longidorus vineacola и Longidorus spp., как правило, Meloidogyne acronea, Meloidogyne africana, Meloidogyne arenaria, Meloidogyne arenaria thamesi, Meloidogyne artiella, Meloidogyne chitwoodi, Meloidogyne coffeicola, Meloidogyne ethyopica, Meloidogyne exigua, Meloidogyne graminicola, Meloidogyne graminis, Meloidogyne hapla, Meloidogyne incognita, Meloidogyne incognita acrita, Meloidogyne javanica, Meloidogyne kikuyensis, Meloidogyne naasi, Meloidogyne paranaensis, Meloidogyne thamesi и Meloidogyne spp., как правило, Meloinema spp., Nacobbus aberrans, Neotylenchus vigissi, Paraphelenchus pseudoparietinus, Paratrichodorus allius, Paratrichodorus lobatus, Paratrichodorus minor, Paratrichodorus nanus, Paratrichodorus porosus, Paratrichodorus teres и Paratrichodorus spp. как правило, Paratylenchus hamatus, Paratylenchus minutus, Paratylenchus projectus и Paratylenchus spp., как правило, Pratylenchus agilis, Pratylenchus alleni, Pratylenchus uinus, Pratylenchus brachyurus, Pratylenchus cerealis, Pratylenchus coffeae, Pratylenchus crenatus, Pratylenchus delattrei, Pratylenchus giibbicaudatus, Pratylenchus goodeyi, Pratylenchus hamatus, Pratylenchus hexincisus, Pratylenchus loosi, Pratylenchus neglectus, Pratylenchus penetrans, Pratylenchus pratensis, Pratylenchus scribneri, Pratylenchus teres, Pratylenchus thornei, Pratylenchus vulnus, Pratylenchus zeae и Pratylenchus spp., как правило, Pseudohalenchus minutus, Psilenchus magnidens, Psilenchus tumidus, Punctodera chalcoensis, Quinisulcius acutus, Radopholus citrophilus, Radopholus similis, Rotylenchulus borealis, Rotylenchulus parvus, Rotylenchulus reniformis и Rotylenchulus spp., как правило, Rotylenchus laurentinus, Rotylenchus macrodoratus, Rotylenchus robustus, Rotylenchus uniformis и Rotylenchus spp., как правило, Scutellonema brachyurum, Scutellonema bradys, Scutellonema clathricaudatum и Scutellonema spp., как правило, Subanguina radiciola, Tetylenchus nicotianae, Trichodorus silindricus, Trichodorus minor, Trichodorus primitivus, Trichodorus proximus, Trichodorus similis, Trichodorus sparsus и Trichodorus spp., как правило, Tylenchorhynchus agri, Tylenchorhynchus brassicae, Tylenchorhynchus clarus, Tylenchorhynchus claytoni, Tylenchorhynchus digitatus, Tylenchorhynchus ebriensis, Tylenchorhynchus maximus, Tylenchorhynchus nudus, Tylenchorhynchus vulgaris и Tylenchorhynchus spp., как правило, Tylenchulus semipenetrans, Xiphinema americanum, Xiphinema brevicolle, Xiphinema dimorphicaudatum, Xiphinema index и Xiphinema spp.
Определение частей растений
В соответствии с настоящим изобретением могут быть обработаны все растение и части растений. Под растениями подразумевают все растения и растительные популяции, такие как желательные и нежелательные дикие растения, сорта и разновидности растений (охраняемый сорт растений или вне зависимости, защищены или незащищены разновидности растения или права селекционеров). Сорта и разновидности растений могут быть растениями, полученными посредством общепринятых методов размножения и скрещивания, которые могут быть поддержаны или дополнены одним или несколькими биотехнологическими методами, такими как применение двойных гаплоидов, слияние протопластов, случайный и направленный мутагенез, молекулярные или генетические маркеры или посредством методов биоинженерии и генетической инженерии. Под частями растений подразумевают все надземные и подземные части и органы растений, такие как побег, лист, цветок и корень, посредством чего приводятся, например, листья, хвоя, стебли, ветки, цветки, плодовые тела, фрукты и семена, а также корни, клубни, луковицы и корневища. Культуры и вегетативный и генеративный материал для размножения, например черенки, луковицы, ризомы, клубни, усы и семена также принадлежат частям растений.
Как уже упоминалось выше, возможно обрабатывать все растения и их части в соответствии с настоящим изобретением. В одном варианте осуществления дикие виды растений и сорта растений, или те из них, что получены общепринятым биологическим скрещиванием, таким как однократное скрещивание или слияние протопластов, и их части, подвергают обработке. В дополнительном варианте осуществления обрабатывают трансгенные растения и сорта растений, полученные посредством генетической инженерией, если целесообразно, в комбинации с общепринятыми методами (Генетически Модифицированные Организмы), и их части. Термин "части" или "части растений" или "растительные части" был объяснен выше.
ГМО
Сорта растений, которые в каждом случае являются доступными для приобретения или применения, могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением. Сорта растений следует понимать, как означающие растения, имеющие новые свойства ("признаки"), которые могут быть получены посредством общепринятого скрещивания, посредством мутагенеза или методами рекомбинантных ДНК. Они могут представлять собой разновидности, био- и генотипы.
Трансгенные растения или сорта растений (т.е. те, которые получены посредством генетической инженерии), которые могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, включают все растения, которые, при генетической модификации получили генетический материал, который придал особенно преимущественные полезные признаки этим растениям. Примерами таких свойств являются лучший рост растения, увеличенная толерантность к высоким или низким температурам, увеличенная толерантность к засухе или воде или содержанию соли в почве, увеличенная эффективность цветения, более простой сбор урожая, ускоренное созревание, более высокие показатели урожайности, лучшее качество и/или более высокая питательная ценность собираемых в виде урожая продуктов, лучшая стабильность при хранении и/или перерабатываемость собираемых продуктов. Дополнительными и особенно акцентируемыми примерами таких свойств являются лучшая защита растений против животных и микробных вредителей, такая как против нематод, насекомых, клещей, фитопатогенных грибков, бактерий и/или вирусов, и также увеличенная толерантность растений к некоторым гербицидным активным соединениям. Особенный акцент делается на овощи, картофель, кукурузу, сою, хлопок и бананы.
Способ обработки в соответствии с настоящим изобретением может применяться при обработке генетически модифицированных организмов (ГМО), например, растений или семян. Генетически модифицированные растения (или трансгенные растения) являются растениями, в которые гетерологичный ген был стабильно интегрирован в геном. Выражение "гетерологичный ген" по существу означает ген, который предоставляется или собирается вне растения, и когда его вводят в ядерный, хлоропластный или митохондриальный геном, придает трансформированному растению новые или улучшенные агрономические или другие свойства посредством экспрессии белка или полипептида, представляющих интерес, или посредством понижающей регуляции или сайленсинга других гена(ов), которые присутствуют в растении (с использованием, например, антисмысловой технологии, технологии косупрессии или РНК-интерференции - РНКи-технологии). Гетерологичный ген, который расположен в геноме, также называют трансгеном. Трансген, который определяется по его конкретному расположению в растительном геноме, называют трансформацией или трансгенным событием.
В зависимости от видов растений или сортов растений, их расположения и условий роста (почвы, климата, вегетационного периода, питания) обработка в соответствии с настоящим изобретением может также приводить к супераддитивным ("синергистическим") эффектам. Таким образом, например, сниженные нормы внесения и/или расширение спектра активности и/или увеличение активности активного соединения и композиции, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, лучший рост растения, увеличенная толерантность к высоким или низким температурам, увеличенная толерантность к засухе или воде или содержанию солей в почве, увеличенная эффективность цветения, более простой сбор урожая, ускоренное созревание, более высокие показатели урожайности, большие фрукты, большая масса растений, более зеленый цвет листьев, более простое цветение, более высокое качество и/или более высокая питательная ценность собираемых в виде урожая продуктов, более высокая концентрация сахара внутри фруктов, лучшая стабильность при хранении и/или перерабатываемость собранных продуктов являются возможными, которые превышают эффекты, которые действительно ожидались.
При некоторых нормах внесения, комбинации активного соединения в соответствии с настоящим изобретением могут также иметь усиливающий эффект в растениях. Соответственно, они также являются пригодными для мобилизации защитной системы растения против нападения нежелательных микроорганизмов. Это может быть, если целесообразно, одной из причин увеличенной активности комбинаций в соответствии с настоящим изобретением, например, против грибков. Усиливающие растения (индуцирующие резистентность) вещества следует понимать, как означающие в настоящем контексте, те вещества или комбинации веществ, которые являются способными к стимуляции защитной системы растений таким образом, что когда впоследствии проводят их инокуляцию с нежелательными микроорганизмами, обработанные растения проявляют существенную степень резистентности к этим микроорганизм. В данном случае, нежелательные микроорганизмы следует понимать как означающие фитопатогенные грибки, бактерии и вирусы. Таким образом, вещества в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться для защиты растений против нападения вышеуказанных патогенов в пределах определенного периода времени после обработки. Период времени, в пределах которого воздействуют на защиту, обычно распространяется от 1 до 10 дней, предпочтительно от 1 до 7 дней после обработки растений активными соединениями.
Растения и культивары растений, которые предпочтительно подлежат обработке в соответствии с настоящим изобретением, включают все растения, которые имеют генетический материал, который придает особенно преимущественные, полезные признаки этим растениям (независимо от того, получены ли они скрещиванием и/или биотехнологическими средствами).
Растения и культивары растений, которые также предпочтительно подлежат обработке в соответствии с настоящим изобретением, являются резистентными против одного или нескольких биотических стрессов, т.е. указанные растения показывают лучшую защиту против животных и микробных вредителей, как против нематод, насекомых, клещей, фитопатогенных грибков, бактерий, вирусов и/или вироидов.
Растения и культивары растений, которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой такие растения, которые являются резистентными к одному или нескольким абиотическим стрессам. Условия абиотического стресса могут включать, например, засуху, воздействие холодной температуры, воздействие тепла, осмотический стресс, затопление, увеличенная соленость почвы, увеличенное минеральное воздействие, воздействие озона, воздействие высокой освещенности, ограниченная доступность азотных питательных компонентов, ограниченная доступность фосфорных питательных компонентов, избегание затененности.
Растения и культивары растений, которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой растения, характеризующиеся повышенными характеристиками урожайности. Повышенная урожайность у указанных растений может быть результатом, например, улучшенных физиологии растения, роста и развития, таких как эффективность использования воды, эффективность удерживания воды, улучшенного использования азота, повышенной ассимиляции углерода, улучшенного фотосинтеза, повышенной эффективности прорастания и ускоренного созревания. На урожайность, кроме того, можно воздействовать посредством улучшенной архитектуры растения (в условиях стресса и отсутствия стресса), включающих, но не ограниченных лишь ими, раннее цветение, контроль цветения для получения гибридных семян, мощность проростков, размер растения, число междоузлий и расстояние, рост корня, размер семян, размер плодов, размер стручков, число стручков или колосков, число семян на стручок или колосок, масса семян, повышенное заполнение семенами, сниженный разброс семян, сниженное раскрывание стручка и резистентность к полеганию. Дополнительные признаки урожайности включают состав семян, такой как содержание углеводов, содержание белка, содержание и состав масла, пищевая ценность, снижение антипищевых соединений, улучшенная перерабатываемость и лучшая стабильность при хранении.
Растения, которые могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой гибридные растения, которые уже экспрессируют характеристику гетерозиса или гибридную мощность, что приводит, в целом, к более высокой урожайности, жизненности, здоровью и резистентности к биотическим и абиотическим стрессам). Такие растения обычно получают посредством скрещивания инбредной обладающей мужской стерильностью родительской линии (родитель женского пола) с еще одной инбредной родительской линией с мужской фертильностью (родитель мужского пола). Гибридное семя обычно собирают у растений с мужской стерильностью и продают растениеводам. Растения с мужской стерильностью могут быть иногда (например, у кукурузы) получены посредством обрезки метелок, т.е. механического удаления мужских репродуктивных органов (или цветков мужского рода) но, более обычно, мужская стерильность является результатом генетических детерминант в растительном геноме. В таком случае, и особенно, когда семя является желательным продуктом для сбора с гибридных растений, обычно является полезным подтвердить, что мужская плодовитость в гибридных растениях является полностью восстановленной. Это может выполняться посредством подтверждения того, что родители мужского пола имеют гены соответствующего восстановителя плодовитости, которые способны к восстановлению мужской плодовитости в гибридных растениях, которые содержат генетические детерминанты, ответственные за мужскую стерильность. Генетические детерминанты для мужской стерильности могут быть расположены в цитоплазме. Примеры цитоплазматической мужской стерильности (ЦМС) были, например, описаны у видов Brassica (WO 92/05251, WO 95/09910, WO 98/27806, WO 05/002324, WO 06/021972 и US 6,229,072). Однако генетические детерминанты для мужской стерильности могут также быть расположены в ядерном геноме. Мужские стерильные растения могут также быть получены посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия. Особенно применимые средства получения растений с мужской стерильностью описаны в WO 89/10396, в которой, например, рибонуклеаза, такая как барназа, селективно экспрессируется в клетках выстилающего слоя в тычинках. Плодовитость затем может быть восстановлена посредством экспрессии в клетках тапетума (выстилающего слоя) ингибитора рибонуклеазы, такого как барстар (например, WO 91/02069).
Растения или сорта растений (полученные посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой гербицидостойкие растения, т.е. растения, сделанные толерантными к одному или нескольким данным гербицидам. Такие растения могут быть получены либо посредством генетической трансформации, либо посредством селекции растений, содержащих приданную мутацию, такую как гербицидостойкость.
Гербицид-резистентные растения представляют собой, например, глифосат-толерантные растения, т.е. растения, сделанные толерантными к гербициду глифосату или его солям. Растения могут быть получены толерантными к глифосату различными средствами. Например, глифосат-толерантные растения могут быть получены посредством трансформации растения с помощью гена, кодирующего фермент 5-енолпирувилшикимат-3-фосфат синтазу (EPSPS). Примерами таких EPSPS генов являются ген AroA (мутант СТ7) бактерий Salmonella typhimurium (Comai et al., 1983, Science 221, 370-371), ген СР4 бактерии Agrobacterium sp. (Barry et al., 1992, Curr. Topics Plant Physiol. 7, 139-145), гены, кодирующие EPSPS петунии (Shah et al., 1986, Science 233, 478-481), EPSPS томата (Gasser et al., 1988, J. Biol. Chem. 263, 4280-4289), или EPSPS коракана (WO 01/66704). Им может также быть мутированный EPSPS, как описано например, в EP 0837944, WO 00/66746, WO 00/66747 или WO 02/26995. Глифосат-толерантные растения могут также быть получены посредством экспрессии гена, который кодирует фермент глифосат-оксидо-редуктазу, как описано в патентах США №№5,776,760 и 5,463,175. Глифосат-толерантные растения могут также быть получены посредством экспрессии гена, который кодирует фермент глифосат-ацетилтрансферазу, как описано, например, в WO 02/36782, WO 03/092360, WO 05/012515 и WO 07/024782. Глифосат-толерантные растения могут также быть получены посредством селекции растений, содержащих природные мутации указанных выше генов, как описано в, например, WO 01/024615 или WO 03/013226. Растения, экспрессирующие гены EPSPS, которые придают толерантность к глифосату, описаны, например, в патентных заявках США №№11/517,991, 10/739,610, 12/139,408, 12/352,532, 11/312,866, 11/315,678, 12/421,292, 11/400,598, 11/651,752, 11/681,285, 11/605,824, 12/468,205, 11/760,570, 11/762,526, 11/769,327, 11/769,255, 11/943801 или 12/362,774. Растения, содержащих гены, отличные от тех, что придают толерантность к глифосату, такие как гены декарбоксилазы, описаны, в, например, патентных заявках США 11/588,811, 11/185,342, 12/364,724, 11/185,560 или 12/423,926.
Другие растения, резистентные к гербицидам, представляют собой, например, растения, которые сделаны толерантными к гербицидам, ингибирующим фермент глутаминсинтазу, таким как биалафос, фосфинотрицин или глуфоцинат. Такие растения могут быть получены посредством экспрессии фермента, детоксифицирующего гербицид или мутантный фермент глутаминсинтазу, который является резистентным к ингибированию, например, описано в патентной заявке США №11/760,602. Один такой эффективный детоксифицирующий фермент представляет собой фермент, кодирующий фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (такой как bar или pat белок из вида Streptomyces species). Растения, экспрессирующие экзогенную фосфинотрицин-ацетилтрансферазу, описаны, например в патентах США №№5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 5,273,894; 5,637,489; 5,276,268; 5,739,082; 5,908,810 и 7,112,665.
Дополнительные гербицидостойкие растения также являются растениями, которые сделаны толерантными к гербицидам, ингибирующим фермент гидроксифенилпируватдиоксигеназу (HPPD). Гидроксифенилпируватдиоксигеназы HPPD являются ферментами, которые катализируют реакцию, в которой пара-гидроксифенилпируват (НРР) превращается в гомогентизат. Растения, толерантные к HPPD-ингибиторам, могут быть трансформированы с помощью гена, кодирующего природный резистентный фермент HPPD, или гена, кодирующего мутировавший или химерный фермент HPPD, как описано в WO 96/38567, WO 99/24585, и WO 99/24586, WO 2009/144079, WO 2002/046387 или US 6,768,044. Толерантность к HPPD-ингибиторам может также быть получена посредством трансформации растений генами, кодирующими определенные ферменты, обеспечивающие образование гомогентизата, несмотря на ингибирование нативного фермента HPPD HPPD-ингибитором. Такие растения и гены описаны в WO 99/34008 и WO 02/36787. Толерантность растений к HPPD-ингибиторам может также быть улучшена посредством трансформации растений геном, кодирующим фермент, имеющий активность префенатдегидрогеназы (PDH) в дополнение к гену, кодирующему HPPD-толерантный фермент, как описано в WO 2004/024928. Дополнительно, растения могут быть сделаны более толерантными к HPPD-ингибиторным гербицидам посредством добавления в их геном гена, кодирующего фермент, способный к метаболизации или разрушению HPPD-ингибиторов, таких как ферменты CYP450 показанные в WO 2007/103567 и WO 2008/150473.
Еще дополнительные растения, резистентные к гербицидам, представляют собой растения, которые сделаны толерантными к ингибиторам ацетолактатсинтазы (ALS). Известные ALS-ингибиторы включают, например, сульфонилмочевину, имидазолинон, триазолопиримидины, пиримидинокси(тио)бензоаты и/или сульфониламинокарбонилтриазолиноновые гербициды. Известно, что различные мутации в ферменте ALS (также известном как синтаза ацетогидроксикислоты, AHAS) придают толерантность различным гербицидам и группам гербицидов, как описано, например, у Tranel и Wright (2002, Weed Science 50:700-712), но также и в патентах США №№5,605,011, 5,378,824, 5,141,870, и 5,013,659. Получение сульфонилмочевина-толерантных растений и имидазолинон-толерантных растений описано в патентах США №№5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,731,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,331,107; 5,928,937; и 5,378,824; и публикации международной заявки WO 96/33270. Другие имидазолинон-толерантные растения также описаны, в, например, WO 2004/040012, WO 2004/106529, WO 2005/020673, WO 2005/093093, WO 2006/007373, WO 2006/015376, WO 2006/024351 и WO 2006/060634. Дополнительные сульфонилмочевина- и имидазолинон-толерантные растения также описаны в, например, WO 07/024782 и патентной заявке США №61/288958.
Другие растения, толерантные к имидазолинону и/или сульфонилмочевине могут быть получены посредством индуцированного мутагенеза, селекции в клеточных культурах в присутствии гербицида или мутационным скрещиванием, как описано, например, для соевых в патенте США 5,084,082, для риса в WO 97/41218, для сахарной свеклы в патенте США 5,773,702 и WO 99/057965, для салата в патенте США 5,198,599, или для подсолнечника в WO 01/065922.
Растения или культивары растений (полученные посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой резистентные к насекомым трансгенные растения, т.е. растения, сделанные резистентными к нападению некоторых целевых насекомых. Такие растения могут быть получены посредством генетической трансформации, или посредством селекции растений, содержащих мутацию, придающую такую резистентность к насекомым.
"Резистентные к насекомым трансгенные растения", как применяют в настоящем изобретении, включает любое растение, содержащее по меньшей мере один трансген, содержащий кодирующую последовательность, кодирующую:
1) инсектицидный кристаллический белок из Bacillus thuringiensis или его инсектицидную часть, такую как инсектицидные кристаллические белки, приведенные у Crickmore et al. (1998, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 62:807-813), с последней редакцией Crickmore et al. (2005) по номенклатуре токсина Bacillus thuringiensis, в сети на сайте: http://www.lifesci.sussex.ac.uk/Home/Neil_Crickmore/Bt/), или их инсектицидные части, например, белки из белковых классов Cry, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1B, Cry1C, Cry1D, Cry1F, Cry2Ab, Cry3Aa или Cry3Bb или их инсектицидные части (например, ЕР 1999141 и WO 2007/107302), или такие белки, кодируемые синтетическими генами, как например, описано и в патентной заявке США №12/249,016; или
2) кристаллический белок из Bacillus thuringiensis или его часть, который является инсектицидным в присутствии другого кристаллического белка из Bacillus thuringiensis или его части, такой как бинарный токсин, полученный из кристаллических белков Cry34 и Cry35 (Moellenbeck et al. 2001, Nat. Biotechnol. 19:668-72; Schnepf et al. 2006, Applied Environm. Microbiol. 71, 1765-1774) или бинарный токсин, полученный из белков Cry1A или Cry1F и белков Cry2Aa или Cry2Ab или Cry2Ae (патентная заявка США 12/214,022 и EP 08010791.5); или
3) гибридный инсектицидный белок, содержащий части различных инсектицидных кристаллических белков из Bacillus thuringiensis, таких как гибридные белки из п.1), приведенного выше, или гибридных белков из п.2), приведенного выше, например, белок Cry1A. 105, продуцируемый кукурузным объектом MON89034 (WO 2007/027777); или
4) белок из любого пункта от 1) до 3), приведенных выше, где некоторые, особенно, от 1 до 10 аминокислот были заменены на другую аминокислоту для получения более высокой инсектицидной активности по отношению к целевым видам насекомым и/или для расширения диапазона видов целевых насекомых, подвергаемых воздействию, и/или вследствие изменений, вводимых в кодирующую ДНК во время клонирования или трансформации, такой как белок Cry3Bb1 в кукурузных объектах MON863 или MON88017, или белок Cry3A в кукурузном объекте MIR604; или
5) инсектицидный секретируемый белок из Bacillus thuringiensis или Bacillus cereus или его инсектицидная часть, такие как вегетативные инсектицидные (ВИБ) белки, приведенные на сайте: http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html, например, белки из белкового класса VIP3Aa; или
6) секретируемый белок из Bacillus thuringiensis или Bacillus cereus, который является инсектицидным в присутствии второго секретируемого белка из Bacillus thuringiensis или В. cereus, такой как бинарный токсин, полученный из белков VIP1A и VIP2A (WO 94/21795); или
7) гибридный инсектицидный белок, содержащий части из различных секретируемых белков из Bacillus thuringiensis или Bacillus cereus, таких как гибридные белки в приведенном выше п.1), или гибридных белков в приведенном выше п.2); или
8) белок из любого из приведенных выше пп. от 5) до 7), где некоторые, особенно, от 1 до 10, аминокислот были заменены на другую аминокислоту для получения более высокой инсектицидной активности по отношению к целевым видам насекомым и/или для расширения диапазона видов целевых насекомых, подвергаемых воздействию, и/или вследствие изменений, вводимых в кодирующую ДНК во время клонирования или трансформации (в то же время еще кодирующую инсектицидный белок), такие как белок VIP3Aa в хлопковом объекте COT102; или
9) секретируемый белок из Bacillus thuringiensis или Bacillus cereus, который является инсектицидным в присутствии кристаллического белка из Bacillus thuringiensis, такой как бинарный токсин, полученный из VIP3 и Cry1A или Cry1F (патентные заявки США №61/126083 и 61/195019), или бинарный токсин, полученный из белка VIP3 и Cry2Aa или Cry2Ab или белков Cry2Ae (патентная заявка США №12/214,022 и EP 08010791.5).
10) белок из в приведенного выше п.9), где некоторые, особенно, от 1 до 10, аминокислот были заменены на другую аминокислоту для получения более высокой инсектицидной активности по отношению к целевым видам насекомым и/или для расширения диапазона видов целевых насекомых, подвергаемых воздействию, и/или вследствие изменений, вводимых в кодирующую ДНК во время клонирования или трансформации, (в то же время еще кодирующую инсектицидный белок).
Безусловно, резистентное к насекомым трансгенное растение, как применяется в настоящем изобретении, также включает в себя любое растение, содержащее комбинацию генов, кодирующих белки любого одного из классов 1-10, приведенных выше. В одном варианте осуществления резистентное к насекомым растение содержит более одного из трансгенов, кодирующих белок любого одного из классов 1-10, приведенных выше, для расширения диапазона видов целевых насекомых, подвергаемых воздействию, при использовании различных белков, направленных на различные виды целевых насекомых, или для задержки развития резистентности к насекомым у растений, используя различные белки, инсектицидные к таким же видам целевых насекомых, но имеющих различный характер действия, такой как связывание с различными участками связывания рецептора у насекомого.
"Резистентное к насекомым трансгенное растение", как используют в настоящем изобретении, дополнительно включает любое растение, содержащее по меньшей мере один трансген, содержащий последовательность продуцируемую при экспрессии двухцепочечной РНК, которая при поглощении растения насекомым-вредителем ингибирует рост этого насекомого-вредителя, как описано, например, в WO 2007/080126, WO 2006/129204, WO 2007/074405, WO 2007/080127 и WO 2007/035650.
Растения или культивары растений (полученные методами биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, являются толерантными к абиотическим стрессам. Такие растения могут быть получены посредством генетической трансформации или посредством селекции растений, содержащих мутацию, придающую такую резистентность к стрессу. Особенно применимые растения с толерантностью к стрессу включают:
1) растения, которые содержат трансген, способный к снижению экспрессии и/или активности гена поли(АДФ-рибоза)полимеразы (PARP) в клетках растений или растений, как описано в WO 00/04173, WO/2006/045633, EP 04077984.5 или ЕР 06009836.5.
2) растения, которые содержат трансген, усиливающий толерантность к стрессу, способный к снижению экспрессии и/или активности кодирующих PARG генов растений или клеток растений, как описано, например, в WO 2004/090140.
3) растения, которые содержат трансген, усиливающий толерантность к стрессу, кодирующий функциональный для растения фермент пути биосинтеза с резервированием никотинамидадениндинуклеотида, включающий никотинамидазу, никотинатфосфосфорибозилтрансферазу, никотиновой кислоты мононуклеотидаденилтрансферазу, никотинамидадениндинуклеотидсинтетазу или никотинамидфосфосфорибозилтрансферазу, как описано, например, в EP 04077624.7, WO 2006/133827, РСТ/EP07/002433, EP 1999263 или WO 2007/107326.
Растения или культивары растений (полученные посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением показывают измененное количество, качество и/или стабильность при хранении собираемого продукта и/или измененные свойства конкретных ингредиентов собираемого продукта, такие как:
1) трансгенные растения, которые синтезируют модифицированный крахмал, который по своим физико-химическим характеристикам, конкретно, содержанию амилозы или отношению амилоза/амилопектин, степени разветвления, средней длине цепи, распределению боковой цепи, поведению вязкости, гелеобразующей силе, размеру зерн крахмала и/или морфологии зерн крахмала, изменяются в сравнении с синтезированным крахмалом в клетках растений дикого типа или растений, таким образом, что они являются лучше приспособленными для специальных применений. Указанные трансгенные растения, синтезирующие модифицированный крахмал раскрыты, например, в EP 0571427, WO 95/04826, EP 0719338, WO 96/15248, WO 96/19581, WO 96/27674, WO 97/11188, WO 97/26362, WO 97/32985, WO 97/42328, WO 97/44472, WO 97/45545, WO 98/27212, WO 98/40503, WO 99/58688, WO 99/58690, WO 99/58654, WO 00/08184, WO 00/08185, WO 00/08175, WO 00/28052, WO 00/77229, WO 01/12782, WO 01/12826, WO 02/101059, WO 03/071860, WO 2004/056999, WO 2005/030942, WO 2005/030941, WO 2005/095632, WO 2005/095617, WO 2005/095619, WO 2005/095618, WO 2005/123927, WO 2006/018319, WO 2006/103107, WO 2006/108702, WO 2007/009823, WO 00/22140, WO 2006/063862, WO 2006/072603, WO 02/034923, EP 06090134.5, EP 06090228.5, EP 06090227.7, EP 07090007.1, EP 07090009.7, WO 01/14569, WO 02/79410, WO 03/33540, WO 2004/078983, WO 01/19975, WO 95/26407, WO 96/34968, WO 98/20145, WO 99/12950, WO 99/66050, WO 99/53072, US 6,734,341, WO 00/11192, WO 98/22604, WO 98/32326, WO 01/98509, WO 01/98509, WO 2005/002359, US 5,824,790, US 6,013,861, WO 94/04693, WO 94/09144, WO 94/11520, WO 95/35026, WO 97/20936
2) трансгенные растения, которые синтезируют некрахмальные углеводные полимеры или которые синтезируют некрахмальные углеводные полимеры с измененными свойствами в сравнении с растениями дикого типа без генетической модификации. Примерами являются растения, продуцирующие полифруктозу, особенно, из инулина и леван-типа, как раскрыто в EP 0663956, WO 96/01904, WO 96/21023, WO 98/39460 и WO 99/24593, растения, продуцирующие альфа-1,4-глюканы, как раскрыто в WO 95/31553, US 2002031826, US 6,284,479, US 5,712,107, WO 97/47806, WO 97/47807, WO 97/47808 и WO 00/14249, растения, продуцирующие альфа-1,6 разветвленные альфа-1,4-глюканы, как раскрыто в WO 00/73422, растения, продуцирующие альтернан, как раскрыто в, например, WO 00/47727, WO 00/73422, EP 06077301.7, US 5,908,975 и EP 0728213,
3) трансгенные растения, которые продуцируют гиалуронан, как, например, раскрыто в WO 2006/032538, WO 2007/039314, WO 2007/039315, WO 2007/039316, JP 2006304779 и WO 2005/012529.
4) трансгенные растения или гибридные растения, такие как луковые, с характеристиками, такими как ‘высокое содержание растворимых твердых веществ’, ‘низкая жгучесть’ (LP) и/или ‘длительное хранение’ (LS), как описано в патентных заявках США №12/020,360 и 61/054,026.
Растения или культивары растений (которые могут быть получены посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой растения, такие как хлопчатники, с измененными волокнистыми характеристиками. Такие растения могут быть получены посредством генетической трансформации или посредством селекции растений и содержат мутацию, придающую такую измененную волокнистую характеристику, и включают:
a) Растения, такие как хлопчатники, содержащие измененную форму целлюлозосинтазы, как описано в WO 98/00549
b) Растения, такие как хлопчатники, содержащие измененную форму гомологичных нуклеиновых кислот rsw2 или rsw3, как описано в WO 2004/053219
c) Растения, такие как хлопчатники, с увеличенной экспрессией сахарозофосфатсинтазы, как описано в WO 01/17333
d) Растения, такие как хлопчатники, с увеличенной экспрессией сахарозосинтазы, как описано в WO 02/45485
e) Растения, такие как хлопчатники, где изменена временная регуляция плазмодезматальной синхронизации в основании волоконной клетки, например, посредством понижающей регуляции волоконно-селективной β-1,3-глюканазы, как описано в WO 2005/017157, или как описано в EP 08075514.3 или патентной заявке США №61/128,938
f) Растения, такие как хлопчатники, имеющие волокна с измененной реакционноспособностью, например, посредством экспрессии гена N-ацетилглюкозаминтрансферазы, включающего гены nodC и хитинсинтазы, как описано в WO 2006/136351
Растения или культивары растений (которые могут быть получены посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой растения, такие как масличные рапсовые или родственные растения Brassica, с измененными характеристиками масличного профиля. Такие растения могут быть получены посредством генетической трансформации, или посредством селекции растений, содержащих мутацию, придающую такие измененные характеристики масличного профиля, и включают:
a) Растения, такие как масличные рапсовые растения, продуцирующие масло, имеющее высокое содержание олеиновой кислоты, как описано, например, в патентах США 5,969,169, 5,840,946 или 6,323,392 или 6,063,947
b) Растения, такие как масличные рапсовые растения, продуцирующие масло, имеющее низкое содержание линоленовой кислоты, как описано в патентах США 6,270,828, 6,169,190 или 5,965,755
c) Растения, такие как масличные рапсовые растения, продуцирующие масло, имеющее низкий уровень насыщенных жирных кислот, как описано, например, в патенте США №5,434,283 или патентной заявке США №12/668303.
Растения или культивары растений (которые могут быть получены посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой растения, такие как картофельные, которые являются резистентными к вирусам, например, против вируса Y картофеля (объект SY230 и SY233 от Tecnoplant, Argentina), которые являются резистентными к заболеваниям, например, против фитофтороза картофеля (например, ген RB), которые показывают снижение индуцированного холодом подслащивания (несущие ген Nt-Inhh, IIR-INV) или которые обладают карликовым фенотипом (Ген A-20 оксидазы).
Растения или культивары растений (которые могут быть получены посредством методов биотехнологии растений, таких как генетическая инженерия), которые также могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой растения, такие как масличные рапсовые или родственные растения Brassica, с измененными характеристиками растрескивания семян. Такие растения могут быть получены посредством генетической трансформации, или посредством селекции растений, которые содержат мутацию, придающую такие измененные характеристики растрескивания семян, и включают растения, такие как масличные рапсовые растения с замедленным или сниженным растрескиванием семян, как описано в патентных заявках США №61/135,230, и EP 08075648.9, WO 09/068313 и WO 10/006732.
Конкретно применимые трансгенные растения, которые могут быть обработаны в соответствии с настоящим изобретением, представляют растения, содержащие объекты трансформации или комбинацию объектов трансформации, которые являются предметом ходатайств о нерегулируемом статусе, в Соединенных Штатах Америки, в Службу инспекции здоровья животных и растений, USDA (APHIS) Министерства сельского хозяйства США (USDA), в то время как такие заявки выдаются или все еще рассматриваются. В любое время эта информация является легкодоступной от APHIS (4700 River Road Riverdale, MD 20737, USA), например, с его интернет-сайта (URL http://www.aphis.usda.gov/brs/not_reg.html). На дату подачи этой заявки ходатайствами на нерегулируемый статус, которые рассматривались APHIS или имели разрешение от APHIS, являлись приведенные в Таблице B, которая содержит следующую информацию:
- Ходатайство: идентификационный номер ходатайства. Технические описания объектов трансформации можно найти в индивидуальных документах по ходатайству, которые можно получить от APHIS, например на веб-сайте APHIS, по ссылке на этот номер ходатайства. Эти описания включены в настоящем изобретении посредством ссылки.
- Продление ходатайства: ссылка на предыдущее ходатайство, по которому запрашивается продление.
- Организация: название предприятия, представляющего ходатайство.
- Регулируемое изделие: рассматриваемые виды растений.
- Трансгенный фенотип: признак, придаваемый растениям обектом трансформации.
- Объект или линия трансформации: название объекта или объектов (иногда также обозначаемых как линия или линии), по которым запрашивается нерегулируемый статус.
- Документы APHIS: разнообразные документы, опубликованные APHIS в отношении ходатайства, и, которые могут быть затребованы APHIS.
Составы
Подходящие наполнители и/или поверхностно-активные вещества, которые могут содержаться в композициях в соответствии с настоящим изобретением, все представляют собой вспомогательные средства для состава, которые обычно могут применяться в композициях для обработки растений.
В композициях в соответствии с настоящим изобретением отношение флуопирама к агрохимически активному соединению группы (B) могут изменяться в пределах относительно широкого интервала. Обычно используют между 0,02 и 2,0 массовых частей, предпочтительно между 0,05 и 1,0 массовых частей флуопирама на массовую часть агрохимически активного соединения.
При использовании активного соединения формулы (I), которое может применяться в соответствии с настоящим изобретением, нормы внесения могут изменяться в пределах определенного интервала, в зависимости от типа внесения. При обработке семян, нормы внесения активного соединения формулы (I) составляют, в целом, между 10 и 10000 мг на килограмм семян, предпочтительно между 10 и 300 мг на килограмм семян. При использовании в твердых составах, нормы внесения активного соединения формулы (I) составляют, в целом, между 20 и 800 мг на килограмм состава, предпочтительно между 30 и 700 мг на килограмм состава.
В соответствии с настоящим изобретением, следует понимать, что носитель обозначает природное или синтетическое, органическое или неорганическое вещество, которое смешивают или комбинируют с активными соединениями для лучшей вносимости, особенно, для внесения (нанесения) в (на) растения или части растений или семена. Носитель, который может быть твердым или жидким, как правило, является инертным и должен быть пригодным для применения в сельском хозяйстве.
Подходящие твердые носители представляют собой: например, аммониевые соли и природные измельченные минералы, такие как каолины, глины, тальк, мел, кварц, аттапульгит, монтмориллонит или диатомитовую землю, и измельченные синтетические минералы, такие как мелкоизмельченные оксид кремния, оксид алюминия и природные или синтетические силикаты, смолы, воска, твердые удобрения, воду, спирты, особенно, бутанол, органические растворители, минеральные масла и растительные масла, и также их производные. Также возможно применять смеси таких носителей. Твердые носители, подходящие для гранул, представляют собой: например, раздробленные и фракционированные природные минералы, такие как кальцит, мрамор, пемза, сепиолит, доломит, а также синтетические гранулы из неорганических и органических перемолотых материалов, а также гранул из органического материала, такого как опилки, скорлупа кокосового ореха, кукурузные початки и стебли табака. Подходящими эмульгаторами и/или пенообразователями являются: например неионные и анионные эмульгаторы, такие как полиоксиэтиленовые эфиры жирных кислот, полиоксиэтиленовые эфиры жирных спиртов, например алкиларилполигликолевые эфиры, алкилсульфонаты, алкилсульфаты, арилсульфонаты, а также белковые гидролизаты. Подходящими диспергаторами являются: например, отработанные лигносульфитные щелоки и метилцеллюлоза.
Подходящие ожиженные газообразные наполнители или носители представляют собой жидкости, которые являются газообразными при температуре окружающей среды и при атмосферном давлении, например, аэрозольные пропелленты, такие как бутан, пропан, азот и диоксид углерода.
Реагенты, придающие клейкость, такие как карбоксиметилцеллюлоза и природные и синтетические полимеры в форме порошков, гранул и латексов, таких как аравийская камедь, поливиниловый спирт, поливинилацетат, или еще природные фосфолипиды, такие как кефалины и лецитины, и синтетические фосфолипиды могут применяться в составах. Другими возможными добавками являются минеральные и растительные масла.
Если используемый наполнитель является водой, также возможно, например, применять органические растворители в качестве вспомогательных растворителей. Подходящие жидкие растворители представляют собой по существу: ароматические соединения, такие как ксилол, толуол или алкилнафталины, хлорированные ароматические соединения или хлорированные алифатические углеводороды, такие как хлорбензолы, хлорэтилены или метиленхлорид, алифатические углеводороды, такие как циклогексан или парафины, например фракции минерального масла, минеральные и растительные масла, спирты, такие как бутанол или гликоль, а также их простые эфиры и сложные эфиры, кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон, метилизобутилкетон или циклогексанон, сильнополярные растворители, такие как диметилформамид и диметилсульфоксид, а также воду.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут содержать дополнительные дальнейшие компоненты, такие как, например, поверхностно-активные вещества. Подходящие поверхностно-активные вещества представляют собой эмульгаторы, диспергаторы или увлажнители, имеющие ионные или неионные свойства, или смеси этих поверхностно-активных веществ. Примерами таких являются соли полиакриловой кислоты, соли лигносульфоновой кислоты, соли фенолсульфоновой кислоты или нафталинсульфоновой кислоты, поликонденсаты этиленоксида с жирными спиртами или с жирными кислотами или с жирными аминами, замещенные фенолы (предпочтительно, алкилфенолы или арилфенолы), соли сложных эфиров сульфоянтарной кислоты, производные таурина (предпочтительно, алкилтаураты), сложные фосфоэфиры полиэтоксилированных спиртов или фенолов, полиоловые сложные эфиры жирных кислот и производные соединений, содержащих сульфаты, сульфонаты и фосфаты. Присутствие поверхностно-активного вещества требуется, если одно из активных соединений и/или один из инертных носителей является нерастворимым в воде, и, когда внесение производят в воде. Доля поверхностно-активных веществ составляет между 5 и 40 массовыми процентами от композиции в соответствии с настоящим изобретением.
Возможно применять красители, такие как неорганические пигменты, например, оксид железа, оксид титана, прусскую синь, и органические красители, такие как ализариновые красители, азокрасители и металлфталоцианиновые красители, и следовые питательные компоненты, такие как соли железа, марганца, бора, меди, кобальта, молибдена и цинка.
Если целесообразно, могут также присутствовать другие дополнительные компоненты, например защитные коллоиды, связующие, адгезивы, загустители, тиксотропные вещества, пенетранты, стабилизаторы, секвестранты, комплексообразователи. Обычно активные соединения могут комбинироваться с любой твердой или жидкой добавкой, обычно применяемой для целей составления.
Обычно композиции в соответствии с настоящим изобретением содержат между 0,05 и 99 массовых процентов комбинации активного соединения в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно между 10 и 70 массовых процентов, особенно предпочтительно между 20 и 50 массовых процентов, наиболее предпочтительно 25 массовых процентов.
Комбинации активного соединения или композиции в соответствии с настоящим изобретением могут применяться сами по себе или, в зависимости от их соответствующих физических и/или химических свойств, в форме их составов или форм применения, полученных из них, таких как аэрозоли, капсульные суспензии, концентраты холодного орошения, концентраты теплого орошения, инкапсулированные гранулы, мелкие гранулы, текучие концентраты для обработки семян, готовые к применению растворы, распыляемые порошки, эмульгируемые концентраты, эмульсии типа масло-в-воде, эмульсии типа вода-в-масле, макрогранулы, микрогранулы, диспергируемые в масле порошки, смешиваемые с маслом текучие концентраты, смешиваемые с маслом жидкости, пены, пасты, семена, покрытые пестицидами, суспензионные концентраты, суспоэмульсионные концентраты, растворимые концентраты, суспензии, увлажняемые порошки, растворимые порошки, дусты и гранулы, водорастворимые гранулы или таблетки, водорастворимые порошки для обработки семян, увлажняемые порошки, природные продукты и синтетические вещества, импрегнированные активными соединениями, а также микроинкапсуляты в полимерных веществах и в покровных материалах для семян, а также холодное орошение ULV и составы для теплого орошения.
Указанные составы могут быть получены способом, известным по сути, например, посредством смешивания активных соединений или комбинаций активного соединения с по меньшей мере одной добавкой. Подходящие добавки все представляют собой обычные вспомогательные средства для составов, такие как, например, органические растворители, наполнители, растворители или разбавители, твердые носители и заполнители, поверхностно-активные вещества (такие как адьюванты, эмульгаторы, диспергаторы, защитные коллоиды, увлажнители и средства, придающие клейкость), диспергаторы и/или связующие или фиксаторы, консерванты, красители и пигменты, пеногасители, неорганические и органические загустители, водные репелленты, если целесообразно, сиккативы и УФ-стабилизаторы, гиббереллины, а также вода и дополнительные вспомогательные средства для обработки. В зависимости от типа состава, подлежащего получению в каждом случае, могут потребоваться дополнительные стадии обработки, такие как, например, влажное измельчение, сухое измельчение или гранулирование.
Органические разбавители, которые могут присутствовать, все представляют собой полярные и неполярные органические растворители, которые обычно применяют для таких целей. Предпочтительными являются кетоны, такие как метилизобутилкетон и циклогексанон, кроме того амиды, такие как диметилформамид и алканкарбоксамиды, такие как N,N-диметилдеканамид и N,N-диметилоктанамид, кроме того циклические соединения, такие как N-метилпирролидон, N-октилпирролидон, N-додецилпирролидон, N-октилкапролактам, N-додецилкапролактам и бутиролактон, дополнительно сильно полярные растворители, такие как диметилсульфоксид, кроме того, ароматические углеводороды, такие как ксилол, Solvesso™, минеральные масла, такие как уайт-спирит, петролеум, алкилбензолы и веретенное масло, более того, сложные эфиры, такие как ацетат монометилового эфира пропиленгликоля, дибутиладипат, гексилацетат, гептилацетат, три-н-бутилцитрат и ди-н-бутилфталат, и кроме того спирты, такие как, например, бензиловый спирт и 1-метокси-2-пропанол.
Твердые носители, подходящие для гранул, представляют собой: например, раздробленные и фракционированные природные минералы, такие как кальцит, мрамор, пемза, сепиолит, доломит, а также синтетические гранулы неорганических и органических размолотых материалов, а также гранулы из органического материала, такие как опилки, скорлупа кокосового ореха, кукурузные початки и стебли табака.
Подходящие поверхностно-активные вещества (адъюванты, эмульгаторы, диспергаторы, защитные коллоиды, увлажнители и средства для придания клейкости) обычно представляют собой ионные и неионные вещества. Примерами, которые могут быть указаны, являются этоксилированные нонилфенолы, простые эфиры полиалкиленгликоля и прямоцепочечных или разветвленных спиртов, продукты реакций алкилфенолов с этиленоксидами и/или пропиленоксидами, продукты реакций жирных аминов с этиленоксидом и/или пропиленоксидом, кроме того жирные сложные эфиры, алкилсульфонаты, алкилсульфаты, алкилэфирсульфаты, алкилэфирфосфаты, арилсульфаты, этоксилированные арилалкилфенолы, такие как, например, тристирилфенолэтоксилаты, кроме того, этоксилированные и пропоксилированные арилалкилфенолы, а также сульфатированные или фосфатированные арилалкилфенолэтоксилаты или этокси- и пропоксилаты. Кроме того, можно упомянуть природные и синтетические водорастворимые полимеры, такие как лигносульфонаты, желатин, аравийская камедь, фосфолипиды, крахмал, гидрофобно модифицированный крахмал и производные целлюлозы, в частности, сложные эфиры целлюлозы и простые эфиры целлюлозы, кроме того, поливиниловый спирт, поливинилацетат, поливинилпирролидон, полиакриловая кислота, полиметакриловая кислота и сополимеры (мет)акриловой кислоты и сложных эфиров (мет)акриловой кислот, и, более того, также нейтрализованные гидроксидом щелочного металла сополимеры метакриловой кислоты и сложного эфира метакриловой кислоты и конденсаты необязательно замещенной формальдегидом соли нафталинсульфоновой кислоты соли.
Подходящие твердые наполнители и носители все представляют собой вещества, обычно применяемые для данной цели в композициях для защиты культуры. Неорганические частицы, такие как карбонаты, силикаты, сульфаты и оксиды, имеющие средний размер частиц от 0,005 до 20 мкм, особенно предпочтительно от 0,02 до 10 мкм, можно упомянуть как являющиеся предпочтительными. Примеры, которые могут быть указаны, представляют собой сульфат аммония, фосфат аммония, мочевину, карбонат кальция, сульфат кальция, сульфат магния, оксид магния, оксид алюминия, диоксид кремния, мелкоизмельченная кремниевая кислота, силикагели, природные и синтетические силикаты и алюмосиликаты и растительные продукты, такие как зерновая мука, древесный порошок и порошок целлюлозы.
Подходящие красители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все красители, обычные для таких целей. Могут применяться как пигменты, имеющие слабую растворимость в воде, красители, которые являются растворимыми в воде. Примеры, которые можно упомянуть, включают красители, известные под обозначениями Родамин B, C.I. Пигмент Красный 112 и C.I. Растворитель Красный 1. Применяемые красители могут представлять собой неорганические пигменты, например оксид железа, оксид титана, прусскую синь и органические красители, такие как ализариновые, азо и металлфталоцианиновые красители, и следовые питательные компоненты, такие как соли железа, марганца, бора, меди, кобальта, молибдена и цинка.
Подходящие увлажнители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все вещества, которые инициируют увлажнение и являются обычными при комбинировании агрохимически активных соединений. Предпочтение отдается использованию алкилнафталинсульфонатов, таких как диизопропил- или диизобутилнафталинсульфонатов.
Подходящие диспергаторы и/или эмульгаторы, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все неионные, анионные и катионные диспергаторы, которые являются обычными при комбинировании агрохимически активных соединений. Предпочтение отдается использованию неионных или анионных диспергаторов или смесям неионных или анионных диспергаторов. Особенно подходящими неионными диспергаторами являются блок-полимеры этиленоксида/пропиленоксида, алкилфенольные эфиры полигликоля, а также тристерилфенольные эфиры полигликоля и их фосфатированные или сульфатированные производные. Особенно подходящими анионными диспергаторами являются лигносульфонаты, соли полиакриловой кислоты и конденсаты арилсульфоната/формальдегида.
Пеногасители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, все включают пеноингибирующие соединения, которые являются обычными при комбинировании агрохимически активных соединений. Предпочтение отдается использованию силиконовых пеногасителей, стеарата магния, силиконовых эмульсий, спиртов с длинной цепью, жирных кислот и их солей, а также фторорганических соединений и их смесей.
Консерванты, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, все включают соединения, которые могут применяться для таких целей в агрохимических композициях. Посредством примера можно упомянуть дихлорфен и гемиформаль бензилового спирта.
Вторичные загустители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, все включают соединения, которые могут применяться для таких целей в агрохимических композициях. Предпочтение отдается производным целлюлозы, производным акриловой кислоты, полисахаридам, таким как ксантановая камедь или вигум, модифицированным глинам, филлосиликатам, таким как аттапульгит и бентонит, а также мелкоизмельченным кремниевым кислотам.
Подходящие адгезивы, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, все включают обычные связующие, которые могут применяться при обеззараживании семян. Поливинилпирролидон, поливинилацетат, поливиниловый спирт и тилоза могут быть упомянуты, как являющиеся предпочтительными.
Подходящие гиббереллины, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, являются, предпочтительно, гиббереллинами A1, A3 (= гиббереллиновая кислота), A4 и A7; конкретное предпочтение отдается применению гиббереллиновой кислоты. Гиббереллины являются известными в данной области техники (см. R. Wegler "Chemie der Pflanzenschutz- и Schadlingsbekampfungsmittel" [Chemistry of Crop Protection Agents и Pesticides], Vol.2, Springer Verlag, 1970, pp.401-412).
Составы обычно содержат между 0,1 и 95% масс. активного соединения, предпочтительно между 0,5 и 90%.
Комбинации активного соединения в соответствии с настоящим изобретением могут присутствовать в промышленных составах и в формах для применения, полученных из этих составов, в виде смеси с другими активными соединениями, такими как инсектициды, аттрактанты, стерилизаторы, бактерициды, акарициды, нематоциды, фунгициды, регуляторы роста или гербициды. Смесь с удобрениями также является возможной.
Обработка в соответствии с настоящим изобретением растений и частей растений комбинациями активного соединения или композициями осуществляют непосредственно или действием на их окружение, пространство обитания или хранения, используя обычные способы обработки, например, посредством погружения, распыления, атомизации, орошения, испарения, напыления, аэрозольного орошения, разбрасывания, вспенивания, окрашивания, распространения, полива (промачивания), капельного орошения и, в случае материала для размножения, особенно, в случае семян, кроме того, в виде порошка для сухой обработки семян, раствора для обработки семян, водорастворимого порошка для обработки взвесью, посредством инкрустирования, посредством покрытия одним или несколькими покрытиями и т.д. Предпочтение отдается нанесению посредством погружения, распыления, атомизации, орошения, испарения, напыления, аэрозольного орошения, разбрасывания, вспенивания, окрашивания, распространения, полива (промачивания), капельного орошения. Нанесение составов осуществляют в соответствии с общепринятой сельскохозяйственной практикой способом, адаптированным для форм нанесения. Обычные способы нанесения представляют собой, например, разбавление водой и распыление полученной жидкости для обрызгивания, внесение после разбавления маслом, непосредственное нанесение без разбавления, обеззараживание семян или внесение в почву гранул-носителей.
Содержание активного соединения в формах для нанесения, полученных из промышленных составов, может изменяться в широких пределах. Концентрация активного соединения в формах для нанесения может составлять от 0,0000001 до 95% масс. активного соединения, предпочтительно между 0,0001 и 2% масс.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением не только содержат готовые для применения композиции, которые могут быть внесены с помощью подходящего устройства в растение или семена, но также промышленные концентраты, которые должны быть разбавлены водой перед использованием.
Способы нанесения
Обработку в соответствии с настоящим изобретением растений и частей растений флуопирамом или композициями осуществляют непосредственно или посредством действия на их окружение, пространство обитания или хранения, используя общепринятые способы обработки, например, погружения, распыления, атомизации, орошения, инъекции в стебель, внесения в борозды, испарения, напыления, аэрозольного орошения, разбрасывания, вспенивания, окрашивания, распространения, полива (промачивания), капельного орошения и, в случае материала для размножения, особенно, в случае семян, кроме того, в виде порошка для сухой обработки семян, раствора для обработки семян, водорастворимого порошка для обработки взвесью, посредством инкрустирования, посредством покрытия одним или несколькими слоями, и т.д. Кроме того, возможно вносить активные соединения посредством способа сверхнизкого объема, или инжектировать препарат активного соединения или само активное соединение в почву.
Как правило, флуопирам вносят при норме, равной от 10 г до 20 кг на гектар, предпочтительно, от 50 г до 10 кг на гектар, наиболее предпочтительно от 100 г до 5 кг на гектар.
Изобретение кроме того включает в себя способ обработки семян. Изобретение, кроме того, относится к семенам, обработанным в соответствии с одним из способов, описанных в предыдущем параграфе.
Флуопирам или композиции, содержащие флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, являются особенно подходящими для обработки семян. Значительная часть повреждений у сельскохозяйственных растений, вызываемых вредными организмами, вызывается инфекцией семян во время хранения или после посева, а также во время и после прорастания растения. Эта фаза является особенно критической, поскольку корни и побеги растущего растения являются особенно чувствительными, и даже небольшое повреждение может приводить к гибели растений. Соответственно, большой интерес вызывает защита семян и прорастающего растения посредством использования соответствующих композиций.
Борьба с нематодами посредством обработки семян растений известна в течение долгого времени и является предметом непрерывных усовершенствований. Однако обработка семян влечет за собой ряд проблем, которые не всегда могут быть решены удовлетворительным образом. Таким образом, желательно разработать способы защиты семян и прорастающих растений, которые позволят обойтись без дополнительного внесения средств защиты культур после сева или после прорастания растений, или которые по меньшей мере значительно снижают дополнительное внесение. Кроме того, желательно оптимизировать количество используемого активного соединения таким образом, чтобы обеспечить максимальную защиту для семян и прорастающего растения от нападения нематод, но без повреждения самого растения используемым активным соединением. В частности, способы обработки семян должны применяться с учетом характерных нематоцидных свойств трансгенных растений, чтобы достичь оптимальной защиты семян и прорастающих растений с минимальным использованием средств защиты культур.
Соответственно, настоящее изобретение также относится конкретно к способу зашиты семян и прорастающих растений против нападения нематод посредством обработки семян флуопирамом или композицией, содержащей флуопирам в соответствии с настоящим изобретением. Изобретение также относится к применению композиции для обработки семян в соответствии с настоящим изобретением для защиты семян и прорастающих растений против нематод. Кроме того, изобретение относится к семенам, обработанным композицией в соответствии с настоящим изобретением для защиты от нематод.
Борьбу с нематодами, которые повреждают растения в период после появления всходов, осуществляют, прежде всего, посредством обработки почвы и поверхностных частей растений композициями для защиты культуры. Вследствие соображений, касающихся возможного воздействия композиций для защиты культур на окружающую среду и здоровье людей и животных, приняты усилия для снижения количества вносимого активного соединения.
Одно из преимуществ настоящего изобретения состоит в том, что, вследствие особенных системных свойств флуопирама или композиции, содержащей флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, обработка семян флуопирамом или этими композициями не только защищает сами семена, но также полученные растения в период после появления всходов от нематод. Таким образом, можно обойтись без немедленной обработки культуры во время сева или вскоре после него.
Флуопирам или композиции, содержащие флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой подходящую защиту семян овощных культур, конкретно томатов и бахчевых культур, картофеля, кукурузы, сои, хлопка, табака, кофе, фруктов, в особенности, цитрусовых фруктов, ананасов и бананов и винограда.
Как описано также далее ниже, обработка трансгенных семян флуопирамом или композициями в соответствии с настоящим изобретением имеет особенную важность. Это касается семян растений, содержащих по меньшей мере один гетерологичный ген, который обеспечивает экспрессию полипептида или белка, имеющих инсектицидные свойства. Гетерологичный ген у трансгенного семени может иметь происхождение, например, от микроорганизмов видов Bacillus, Rhizobium, Pseudomonas, Serratia, Trichoderma, Clavibacter, Glomus или Gliocladium. Предпочтительно, этот гетерологичный ген берется от Bacillus sp., причем генный продукт имеет активность против мотылька кукурузного и/или западного кукурузного жука. Особенно предпочтительно, гетерологичный ген имеет происхождение от Bacillus thuringiensis.
В контексте настоящего изобретения, флуопирам или композиция, содержащая флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, вносят (наносят) как таковые или в подходящем составе в(на) семена. Предпочтительно, семена обрабатывают в состоянии, в котором они являются достаточно стабильными, так, чтобы обработка не вызывала какого либо повреждения. В целом, обработка семян может производиться в любой момент времени между сбором урожая и севом. Обычно, используемые семена отделяют от растения и освобождают от початков, оболочек, стеблей, покровов, волосков или фруктовой мякоти. Таким образом, возможно применять, например, семена, которые были собраны, очищены и высушены до содержания влаги, меньшего, чем 15 масс.%. Альтернативно, является также возможным использовать семена, которые после сушки, были обработаны, например, водой и затем снова высушены.
При обработке семян, в целом, необходимо принять меры, чтобы количество флуопирама или композиции, содержащей флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, наносимой на семена, и/или количество дополнительных добавок было выбрано таким образом, чтобы на прорастание семян не оказывалось неблагоприятного воздействия, или, чтобы полученное в результате растение не было повреждено. Следует иметь это ввиду, особенно, в случае активных соединений, которые могут иметь фитотоксические эффекты при некоторых нормах внесения.
Флуопирам или композиция, содержащая флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, могут быть внесены непосредственно, другими словами, не содержащими дополнительных компонентов и без разбавления. В целом, предпочтительно наносить композиции на семена в форме подходящего состава. Подходящие составы и способы для обработки семян являются известными специалисту в области техники, и описаны, например, в следующих документах: US 4,272,417 A, US 4,245,432 A, US 4,808,430 A, US 5,876,739 A, US 2003/0176428 A1, WO 2002/080675 A1, WO 2002/028186 A2.
Флуопирам или композиция, содержащая флуопирам, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, могут быть преобразованы в общепринятые составы для обеззараживания семян, такие как растворы, эмульсии, суспензии, порошки, пены, суспензии или другие материалы покрытий для семян, а также составы ULV.
Эти составы получают известным образом посредством смешивания комбинаций активного соединения или активного соединения с общепринятыми добавками, такими как, например, общепринятые наполнители, а также растворители или разбавители, красители, увлажнители, диспергаторы, эмульгаторы, пеногасители, консерванты, вторичные загустители, адгезивы, гиббереллины, а также вода.
Подходящие красители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, включают все красители, общепринятые для таких целей. Могут применяться как пигменты, слаборастворимые в воде, и красители, которые являются растворимыми в воде. Примеры, которые можно упомянуть, включают красители, известные под обозначениями Родамин B, C.I. Пигмент Красный 112, и C.I. Растворитель Красный 1.
Подходящие увлажнители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, включают все вещества, которые способствуют увлажнению и являются общепринятыми в составе активного агрохимического вещества. Предпочтительно возможно применять алкилнафталин-сульфонаты, такие как диизопропил- или диизобутилнафталин-сульфонаты.
Подходящие диспергаторы и/или эмульгаторы, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, включают все неионные, анионные, и катионные диспергаторы, которые являются обычными при составлении активных агрохимических веществ. С предпочтением, возможно применять неионные или анионные диспергаторы или смеси неионных или анионных диспергаторов. Особенно подходящими неионными диспергаторами являются блок-сополимеры этиленоксида-пропиленоксида, алкилфенольные эфиры полигликоля и тристирилфенольные эфиры полигликоля и их фосфатированные или сульфатированные производные. Особенно подходящие анионные диспергаторы представляют собой лигносульфонаты, соли полиакриловой кислоты и конденсаты арилсульфонат-формальдегида.
Пеногасители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все пеноингибирующие соединения, которые являются обычными при составлении агрохимически активного соединения. Предпочтение отдается использованию силиконовых пеногасителей, стеарата магния, силиконовых эмульсий, длинноцепочечных спиртов, жирных кислот и их солей, а также фторорганических соединений и их смесей.
Консерванты, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все соединения, которые могут применяться для таких целей в агрохимических композициях. Посредством примера, можно упомянуть дихлорфен и гемиформаль бензилового спирта.
Вторичные загустители, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все соединения, которые могут применяться для таких целей в агрохимических композициях. Предпочтение отдается производным целлюлозы, производным акриловой кислоты, полисахаридам, таким как ксантановая камедь или Вигум, модифицированным глинам, филлосиликатам, таким как аттапульгит и бентонит, а также мелкоизмельченным кремниевым кислотам.
Подходящие адгезивы, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают все общепринятые связующие, которые могут применяться при обеззараживании семян. Поливинилпирролидон, поливинилацетат, поливиниловый спирт и тилоза могут быть упомянуты, как являющиеся предпочтительными.
Подходящие гиббереллины, которые могут присутствовать в составах для обеззараживания семян для применения в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой предпочтительно гиббереллины A1, A3 (= гиббереллиновая кислота), A4 и A7; особенное предпочтение отдается использованию гиббереллиновой кислоты. Гиббереллины являются известными (см. R. Wegler "Chemie der Pflanzenschutz- und Schadlingsbekampfungsmittel" [Chemistry of Crop Protection Agents and Pesticides], Vol.2, Springer Verlag, 1970, pp.401-412).
Составы для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, могут применяться непосредственно или после разбавления водой, перед обработкой семян любого очень широкого разнообразия типов. Составы для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, или их разбавленные препараты могут также применяться для покрытия семян трансгенных растений. В данном контексте, могут также возникать синергистические эффекты при взаимодействии с веществами, образованными посредством экспрессии.
Подходящие смешивающее оборудование для обработки семян составами для обеззараживания семян, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, или препаратами, полученными из них посредством добавления воды, включает все смешивающее оборудование, которое может обычно применяться для обеззараживания. Конкретная методика, принятая при обеззараживании, включает в себя внесение семян в смеситель, добавление конкретного желательного количества состава для обеззараживания семян, либо самого по себе или после предварительного разбавления водой и осуществление смешивания пока состав не будет однородно распределен на семенах. При необходимости за этим следует операция сушки.
Нематоцидные композиции в соответствии с настоящим изобретением могут применяться для радикальной или защитной борьбе с нематодами. Соответственно, изобретение также относится к радикальным и защитным способам борьбы с нематодами с использованием флуопирама и композиций, содержащих флуопирам в соответствии с настоящим изобретением, которые наносят на семена, растения или части растений, фрукты или почву, в которой растут растения. Предпочтение отдается нанесению(внесению) на(в) растение или части растений, фрукты или почву.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением для борьбы с нематодами при защите культур содержат активное, но нефитотоксичное количество соединения в соответствии с настоящим изобретением. "Активное, но нефитотоксичное количество" будет означать количество композиции в соответствии с настоящим изобретением, которое является достаточным для борьбы с нематодами или для полного устранения заболевания растения, вызываемого нематодами, причем это количество в то же время не проявляет заслуживающих внимания симптомов фитотоксичности. Эти нормы внесения, как правило, могут изменяться в широком интервале, причем норма зависит от нескольких факторов, например, нематод, растения или культуры, климатических условий и ингредиентов композиции в соответствии с настоящим изобретением.
Тот факт, что активные соединения при концентрациях, требуемых для борьбы с заболеваниями растений, хорошо переносятся растениями, позволяет проводить обработку надземных частей растений, растительного материала для размножения и семян и почвы.
В типичном способе обработки семян водная композиция, содержащая флуопирам, может наноситься при норме для предоставления в интервале от 0,5 г до 10 кг, предпочтительно от 0,8 г до 5 кг, наиболее предпочтительно от 1 г до 1 кг флуопирама на 100 кг (центнер) семян.
11
В типичном способе обработки семян, водная композиция, содержащая средство биологической борьбы, конкретно, споры Bacillus firmus CNCM I-1582 может наноситься при норме для предоставления в интервале от 0,1 г до 20 г, предпочтительно от 1 г до 10 г, особенно предпочтительно от 2,5 г до 7,5 г, и наиболее предпочтительно приблизительно 5 г спор Bacillus firmus CNCM I-1582 на гектар или 100000 зерен семян. Указанные выше интервалы относятся к составу спор или суспензии, содержащей 10 спор/г.
5
8
5
6
7
8
5
7
5
6
6
8
6
7
7
8
В разнообразных вариантах осуществления, средство биологической борьбы добавляют к семенам при норме, равной приблизительно от 1×10 до 1×10колониеобразующих единиц (кое) на семя, включая приблизительно 1×10кое/семя или приблизительно 1×10 кое/семя, или приблизительно 1×10кое/семя, или приблизительно 1×10 кое/семя, включая приблизительно от 1×10до 1×10 кое/на семя, приблизительно от 1×10 до 1×10 кое/на семя, приблизительно от 1×10 до 1×10 кое/на семя, приблизительно от 1×10 до 1×10 кое/на семя и приблизительно от 1×10 до 1×10 кое/на семя.
Общие идеи изобретения описаны в следующих примерах, которые не должны рассматриваться как ограничивающие.
Экспериментальные примеры
Пример 1
Два теста включали посадку Канавалии (SCN-резистентного вариетета сои с резистентностью к PI 88788) и двух генетически модифицированных вариетета Канавалии (AXN2 и AXMI031), известных, как продуцирующие нематоцидный белок. Семена были обработаны материалом покровной основы или той же основой плюс одна из двух различных норм внесения флуопирама (в эксперименте 1 применяли 0,075 мг флуопирама/семя и в эксперименте 2 применяли 0,15 мг флуопирама/семя). SCN, применяемые для инокуляции обоих тестов собирали из инбредной колонии (OP50) со способностью к преодолению резистентности к PI 88788.
Тесты проводили в виде нерандомизированных блоков с минимально 10 повторами. Семена высаживали в индивидуальных 4” глиняных горшочках с крупнодисперсным песком и инокулировали с приблизительно 20000 молодых особей OP50 при десяти равных инокуляциях, начинающихся при высаживании, и повторно, приблизительно на каждый третий день. Растения поддерживали камере для прорастания. Блоки вращали приблизительно каждый третий день для минимизации потенциального влияния изменчивости окружающей среды. Через два месяца после высаживания, собирали урожай растений, и цисты собирали и подсчитывали для оценки эффективности действия нематоцида и признаков, как индивидуально, так и в комбинации друг с другом.
В случае обработки основой (нанесение покрытия), в течение приблизительно половины периода проекта регистрировали снижение высоты у обеих генетически модифицированных вариететов в сравнении с нетрансформированными растениями.
Для флуопирама (AR83685) не было продемонстрировано обеспечение положительного ответа по росту, который также наблюдали у трансгенных растениях Канавалия в данном эксперименте. Однако флуопирам увеличивал среднюю высоту растений у обоих генетически модифицированных вариететов в обоих экспериментах, в то же время, не обладая эффектом на нетрансгенные контрольные растения. Таким образом, не будучи связанным с какими-либо теорией или механизмом, по-видимому, внесение флуопирама к трансгенным растениям Axn2 и Axmi031 позволило преодолеть ингибиторные эффекты на рост, являющиеся результатом присутствия трансгена. Не было отмечено никаких эффектов, способствующих росту, ни у нетрансгенного контроля, ни у необработанных трансгенных растений.
В обоих экспериментах (0,075 мг флуопирама/семя и 0,15 мг флуопирама/семя), среднее количество цист, собранных с растений Канавалия, в случае обработки основой (нанесение покрытия) было относительно совпадающим (1310 и 1190 цист). При сравнении этих средних значений со значениями у растений AXMI031 (также в случае обработки основой), значения процентного снижения были также близко совпадающими (92% и 88%). Что касается растений AXN2 (снова в случае обработки основой), индивидуальные результаты во втором эксперименте были в высокой степени изменчивыми и конечный общий процент снижения (по сравнению с Канавалией) был существенно выше (43%) по сравнению с первым экспериментом (20%). См. Фиг.1.
В первом эксперименте флуопирам (0,075 мг/семя) снижал популяции SCN на 26% у нетрансгенных растений Канавалии. Когда норма химиката была удвоена во втором эксперименте (0,15 мг флуопирама/семя), снижение также почти удваивалось (43%). Принимая это во внимание, лимитирующий фактор для экспериментального нематоцида, вероятно, состоял не в невосприимчивости SCN к эффектам химиката, но более вероятно, в ее распределении в пределах ризосферы и числе SCN, которые были подвергнуты воздействию летальной концентрации.
Основываясь на этом допущении, процент борьбы, отнесенный насчет флуопирама, мог бы ожидаться меньше с трансгенными семенами вследствие потенциального перекрывания (например, меньшего количества нематод, доступных для направленного действия от флуопирама). Однако, достигнутые показатели борьбы по признакам (20/43% - AXN2; 92/88% - AXMI31) не уменьшали эффекты флуопирама. Флуопирам обеспечивал приблизительное снижение, равное 20%, при низкой норме и приблизительное снижение, равное 40% при высокой норме для обоих Axmi031 и Axn2. Таким образом, флуопирам приводил к совпадающему уровню борьбы с нематодами, несмотря на значительно более низкое давление нематод, являющееся результатом присутствия трансгена (Фиг.2).