СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА ИЗ ПЛАЦЕНТЫ КОРОВ
METHOD FOR PRODUCTION OF BIOSTIMULANT FROM COW PLACENTA

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к технологии получения препаратов, используемых для профилактики и лечения нарушений репродуктивной функции коров.
Известен способ получения биостимулятора «ПОМ» из плаценты коров. Плаценту охлаждают, гомогенизируют и экстрагируют метиломочевиной при соотношении мочевины и формальдегида 4:2, взяв 40-50% фарша плаценты от веса мочевины. Компоненты смешивают, нагревают до 100°С, доводят рН до 8,0-10,0, охлаждают до 60-70°С, добавляют дистиллированную воду до 1 л и отстаивают. Способ профилактирует задержание последа на 66,4% и заболеваемость эндометритом на 48,6% больше, чем в контроле (SU 1730762 A1, A61K 35/12, 20.07.1996). Однако полученный по данной технологии препарат содержит значительное количество продуктов азотистого обмена (мочевины), которые оказывают токсичное воздействие на ткани животного как в месте введения, так и на весь организм в целом.
Известен способ получения противовоспалительного средства из плаценты первой половины стельности коров. Плаценту размельчают, гомогенизируют, подвергают избирательной экстракции, далее осуществляют обеззараживание экстракта, аутолиз, асептическое фильтрование. В результате получают препарат, который не оказывает побочных действий и аллергических проявлений при его лечебном использовании (RU 2128514 С1, А61К 35/50, 1999). Однако получение данного препарата связано с использованием плаценты ранней стельности, что на практике часто неосуществимо.
Известен способ получения биостимулятора из плаценты коров, согласно которому жидкую составляющую из плаценты отделяют путем нагрева в микроволновой печи при частоте излучения 2450±50 МГц в специальной посуде с перфорированным дном, при этом жидкая составляющая отделяется самотеком, а нагрев производят не выше 60°С, причем в качестве разбавляющей среды для жидкой фракции используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида. Способ позволяет сократить количество технологических операций и общее время получения препарата при сохранении его качества (RU 2138273 С1, А61К 35/50, 1999).
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является технология получения препарата Биостимульгина - СВЧ, предназначенная для профилактики фитоплацентарной недостаточности у коров (Колчина А.Ф. Болезни беременных и перинатальная патология у животных / Монография. - Екатеринбург, УрГСХА. - Екатеринбург, 1999. - С.144).
Послед коров 2-4 отелов выдерживали четверо суток при 2-4°С, после чего подвергали обработке микроволновым излучением с частотой 2450±50 МГц в СВЧ-печи при нагреве сырья не выше 60°С. В результате получали от 30 до 60% жидкой фракции от массы последа. Прогрев производили циклами по 15-20 минут. Объединенные фракции разбавляли 0,9%-ным раствором натрия хлорида в соотношении 1:4 и тщательно перемешивали. рН полученного раствора доводили до 7,75-8,40 и кипятили 10 минут. Остывшую взвесь центрифугировали, фильтровали, расфасовывали во флаконы по 100-200 мл, стерилизовали автоклавированием при 1,5 атм в течение одного часа.
У коров, обработанных препаратом Биостимульгин - СВЧ подкожно в дозе 20 мл двукратно за 10 дней до отела и в первые часы после родов, оплодотворяемость от первого осеменения в опытной группе составляла 38,2%, в контрольной - 52,9%. Индекс осеменения у коров опытной группы составлял 1,58 и был ниже, чем в контроле на 0,18, то есть был предпочтительным, сервис-период оказался короче на 15,42 дня. Однако согласно прототипу оплодотворяемость коров от первого осеменения в опытной группе была ниже, чем в контроле на 14%. При индексе первого осеменения 1,58 следует, что результативность последующих осеменений, составившая 58,82%, была более эффективной, чем непосредственно после использования препарата. Практика показывает, что первое осеменение более эффективное, чем последующие. Способ недостаточно эффективен при применении его на высокопродуктивных животных. Кроме того, в месте введения препарата у коров возникают воспалительные процессы.
Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение результативности первого после отела осеменения. Технический результат изобретения достигается тем, что предложен способ получения биостимулятора из плаценты коров, предусматривающий охлаждение последа коров, обработку последа в микроволновой печи при частоте излучения 2450±50 МГц, нагрев сырья при температуре не более 60°С, смешивание выделившейся из сырья жидкости (продукта) с разбавителем в соотношении 1:4, кипячение в течение 10 минут, охлаждение, последующее центрифугирование полученной жидкости, ее фильтрование и автоклавирование, отличающийся тем, что перед обработкой последа коров в микроволновой печи его гомогенизируют, в качестве разбавителя используют дистиллированную воду, после фильтрования продукт смешивают с АСД фракции 2, доводя концентрацию АСД фракции 2 до 4% от общего объема жидкости, добавляют 20%-ный спиртовый раствор тимола в количестве 0,1% от общего объема жидкости.
Полученный препарат назван «Плацентин-А».
Пример 1. «Плацентин-А» готовили следующим образом:
сырьем для изготовления препарата служил отделившийся в течение 4-6 часов после отела чистый послед (плацента) без видимых патологических изменений тканей, взятый от здоровых коров 2-4 отелов;
сырье помещали в холодильник на 48-72 часа при 4-5°С;
после этого сырье гомогенизировали и подвергали микроволновому воздействию с частотой излучения 2450±50 МГц при нагреве сырья не выше 60°С для отделения жидкой составляющей;
полученную жидкость смешивали с дистиллированной водой в
пропорции 1:4 и кипятили в течении 10 минут для денатурации белков;
после остывания полученную взвесь центрифугировали, фильтровали, смешивали с АСД фракции 2, доводя концентрацию АСД фракции 2 до 4% от общего объема жидкости;
к полученной смеси добавляли 20%-ный спиртовый раствор тимола в количестве 0,1% от общего объема жидкости. Введение тимола обеспечивает увеличение продолжительности хранения препарата в связи с его бактериостатическим действием и предупреждает возникновение воспалительного процесса в месте его введения;
полученный препарат разливали во флаконы и автоклавировали при давлении 2 атмосферы в течении 15 минут.
Действие препарата основано на комплексном воздействии низкомолекулярных пептидов и свободных нуклеотидов, способных стимулировать обменные процессы и общую резистентность организма. Кроме того, плацента содержит целый ряд биологически активных веществ, в том числе прогестерон, эстрадиол и его производные - эстрол и эстриол, которые активно влияют на пролиферативные процессы в эндометрии и тонус гладкой мускулатуры матки.
Входящий в состав «Плацентина-А» препарат АСД фракции 2 представляет собой продукт сухой перегонки сырья животного происхождения. Содержит в своем составе соединения с активной сульфгидрильной группой, производные алифатических аминов, карбоновые кислоты, алифатические и циклические углеводы, производные амидов и воду. АСД фракции 2 является мощным иммуномодулятором, что позволяет нормализовать иммунную реакцию организма матери. Кроме того, данный препарат обладает антисептическим действием, что увеличивает срок годности «Плацентина-А».
Пример 2. В ГПЗ им. Фрунзе Белгородской области на молочном комплексе «Бессоновский» была изучена эффективность применения «Плацентина-А» для повышения репродуктивной функции коров черно-пестрой породы различной продуктивности в послеродовой период. С этой целью по принципу аналогов было создано четыре опытных группы по 20 голов в каждой. Группу № 1 формировали из коров с продуктивностью 3500-4000 кг молока за лактацию, группу № 2 - 4000-4500 кг, группу № 3 - 4500-5000 кг, группу № 4 - 5000-5500 кг. Коровам всех опытных групп за 20-25 дней до отела и непосредственно после отела однократно подкожно вводили «Плацентин-А» в дозе 20 мл. Применение «Плацентина-А» за 20-25 дней до отела обусловлено тем, что это позволяет усилить хемотаксис в плацентомах и тем самым создать условия для более быстрого созревания и последующего выведения последа. А содержащиеся в экстракте эстрогены усиливают сократительную способность гладкой мускулатуры матки. Применение «Плацентина-А» непосредственно после отела также обусловлено специфическим действием эстрогенов, что позволяет сократить сроки инволюции матки и предупреждает развитие послеродовых эндометритов. Для каждой опытной группы была отобрана контрольная из животных с идентичной продуктивностью, не подвергавшихся обработке, аналогичных по возрасту и условиям содержания. Состояние матки и яичников определяли методом ректального исследования. Кроме сроков инволюции матки учитывали такие показатели, как срок наступления первой после отела охоты, уровень стельности после первого осеменения, продолжительность сервис-периода и индекс осеменения. Результаты представлены в таблице.
ТаблицаВлияние «Плацентина-А» на сроки инволюции матки и восстановление половой цикличности у коров при различных уровнях продуктивности
Группы
Число животныхв группе
Средние сроки первой инволюции матки, дней
Средние сроки наступления первой охоты, дней
Стельных после первого осеменения
Сервис-период, дней
Индексосеменения
голов
%, M±m
Группа № 1 - 3500-4000 кг
20
22,4±0,90*
22,3±1,89
15
75±11,1
84,5±1,98
2,1
Контрольная группа
20
28,3±0,87
26,4±2,76
12
60±14,1
81,0±2,43
2,7
Группа № 2 - 4000-4500 кг
20
25,5±1,11*
27,2±1,94
12
60±14,1
75,6±1,87*
1,9
Контрольная группа
20
38,8±0,76
30,0±1,90
11
55±15,0
87,9±2,20
2,5
Группа № 3 - 4500-5000 кг
20
31,2±0,92*
27,5±1,00**
14
70±12,2
88,5±2,82
1,9
Контрольная группа
20
46,7±1,43
31,5±1,87
9
45±16,5
93,3±2,51
2,9
Группа № 4 - 5000-5500 кг
20
33,6±0,85*
33,7±2,81
13
65±13,2
89,0±1,95*
2,2
Контрольная группа
20
51,3±1,37
38,5±2,97
9
45±16,5
115,2±2,54
3,1
*Р<0,001; **Р<0,05
Как видно из приведенных в таблице данных, во всех опытных группах сроки инволюции матки были ниже, чем в контроле (Р<0,001). Первая охота в опытных группах наступала на 2,8-4,8 дней раньше, чем в контрольных. Уровень стельности после введения «Плацентина-А» был выше, чем в контрольных группах на 5-25%. Средний сервис-период в опытных группах был на 12,3-26,2 дня короче, чем в контроле. Разница между продолжительностью сервис-периода опытных групп №2, №4 и контролем была достоверна (Р<0,001). Исключение составляет группа №1, где сервис-период был на 3,5 дня продолжительнее, чем в контроле, но разница не достоверна. Индекс осеменения в опытных группах был также ниже контрольного. Следует отметить, что с увеличением продуктивности как в опытных, так и в контрольных группах увеличивались сроки инволюции матки, время проявления первой после отела охоты, сервис-период и индекс осеменения. Одновременно происходило снижение уровня стельных после первого осеменения животных. Но во всех случаях показатели опытных групп были лучше контрольных.
В месте введения препарата воспалительных процессов не выявлено. По сравнению с прототипом применение «Плацентина-А» обеспечивает более высокую результативность первого осеменения, которая в зависимости от продуктивности коров колебалась от 55 до 75% в опытных группах, что на 5-25% больше, чем в контрольных. В прототипе оплодотворяемость коров после первого осеменения в опытной группе составляла 38,2%, в контрольной - 52,9%.
Изобретение применимо на предприятиях по разведению стад коров молочных и молочно-мясных пород.