ИМПЛАНТИРУЕМЫЕ УСТРОЙСТВА ДЛЯ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И СООТВЕТСТВУЮЩИЕ СПОСОБЫ

1. Гидрогелевая капсула, содержащая:
(a) содержащий клетки компартмент, который содержит множество сконструированных клеток RPE, инкапсулированных в первую полимерную композицию, которая содержит альгинат, ковалентно модифицированный связывающимся с клетками пептидом (СВР) через линкер, необязательно причем линкер присоединен к аминоконцу СВР; и
(b) барьерный компартмент, окружающий связывающий клетки компартмент содержащий вторую полимерную композицию, которая содержит альгинат, ковалентно модифицированный по меньшей мере одним соединением, выбранным из группы, состоящей из соединения 101, соединения 100, соединения 110, соединения 112, соединения 113 и соединения 114, показанных в таблице 4,
причем гидрогелевая капсула характеризуется сферической формой и диаметром от 0,7 мм до 3,0 мм,
причем содержащий клетки компартмент по существу свободен от какого-либо противофибротического соединения, а барьерный компартмент по существу свободен от клеток и по существу свободен от СВР;
причем сконструированные клетки RPE содержат экзогенную нуклеотидную последовательность, кодирующую терапевтический полипептид, и
причем пептид СВР включает в себя RGD (SEQ ID NO: 43) или RGDSP (SEQ ID NO: 59), а линкер состоит по существу из одного остатка глицина, двух остатков глицина, 3 остатков глицина, одного остатка бета-аланина, двух остатков бета-аланина и трех остатков бета-аланина.
2. Гидрогелевая капсула по п. 1, в которой плотность СВР на ковалентно модифицированном альгинате представляет собой количество, эффективное для увеличения продукции терапевтического полипептида in vivo по меньшей мере в 1,25 раза через 1 неделю, 2 недели, 4 недели, 8 недель или 12 недель после имплантации капсулы мыши по сравнению с эталонной гидрогелевой капсулой СВР-null, необязательно, причем увеличение продукции составляет по меньшей мере 1,5-, 2-, 5- или более кратное.
3. Гидрогелевая капсула по п. 1 или 2, в которой плотность СВР на ковалентно модифицированном альгинате представляет собой количество, эффективное для увеличения жизнеспособности сконструированных клеток RPE по меньшей мере на 10% через 1 неделю, 2 недели, 4 недели, 8 недель или 12 недель после имплантации капсулы мышам, по сравнению с эталонной гидрогелевой капсулой СВР-null, необязательно, причем повышенная жизнеспособность клеток составляет по меньшей мере на 25%, 50% или больше.
4. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-3, в которой СВР представляет собой RGD (SEQ ID NO: 43) или RGDSP (SEQ ID NO: 59), а линкер состоит по существу из одного остатка глицина, присоединенного к аминному концу СВР.
5. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-4, в которой альгинат в первой полимерной композиции характеризуется молекулярной массой от 75 до 150 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5.
6. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-5, в которой альгинат в ковалентно модифицированном альгинате в барьерном компартменте характеризуется молекулярной массой менее чем 75 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5, а вторая полимерная композиция дополнительно содержит немодифицированный альгинат.
7. Гидрогелевая капсула по п. 6, в которой немодифицированный альгинат в барьерном компартменте характеризуется молекулярной массой от 150 кДа до 250 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5.
8. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-7, в которой соединение 101 представляет собой соединение в ковалентно модифицированном альгинате во второй полимерной композиции.
9. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-8, в которой терапевтический полипептид выбран из группы, состоящей из полипептида фактора VIII, полипептида фактора VII и полипептида FIX.
10. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-9, в которой сконструированные клетки RPE получены из клеток ARPE-19, и, необязательно, клетки ARPE-19 присутствуют в концентрации от приблизительно 25 миллионов до 35 миллионов, от приблизительно 35 миллионов до 45 миллионов или приблизительно 40 миллионов клеток на миллилитр композиции первого полимера, альгинат в ковалентно модифицированном альгинате в содержащем клетки компартменте характеризуется молекулярной массой от 75 кДа до 150 кДа, соотношение G:M больше или равно 1,5, и ковалентно модифицирован GRGDSP, и, необязательно, причем плотность GRGDSP на альгинате, как определено количественным анализом конъюгирования пептидов, составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 1,0 микромоль GRGDSP на грамм GRGDSP-альгината в физиологическом растворе с вязкостью 80-120 сП.
11. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-10, в которой терапевтический полипептид представляет собой полипептид фактора VIII-BDD, экзогенная нуклеотидная последовательность включает в себя SEQ ID NO: 15, альгинат в первой полимерной композиции характеризуется молекулярной массой от 75 кДа до 150 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5, а плотность GRGDSP на альгинате, как определено количественным анализом конъюгации пептидов, составляет от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,6 микромоль GRGDSP на грамм GRGDSP-альгината в физиологическом растворе с вязкостью 80-120 сП.
12. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-11, в которой:
вторая полимерная композиция в барьерном компартменте дополнительно содержит немодифицированный альгинат с молекулярной массой от 150 кДа до 250 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5,
альгинат в ковалентно модифицированном альгинате в барьерном компартменте характеризуется молекулярной массой менее чем 75 кДа, соотношением G:M большим или равным 1,5, и соединение представляет собой соединение 101, и
плотность конъюгации соединения 101 в ковалентно модифицированном альгинате, как определено анализом сжигания для процентного содержания азота, составляет по меньшей мере 2,0% азота и менее чем 9,0% азота, или составляет от 3,0% до 8,0%, от 4,0% до 7,0%, от 5,0% до 7,0% или от 6,0 до 7,0% азота.
13. Гидрогелевая капсула по любому из пп. 1-12, причем гидрогелевая капсула характеризуется диаметром приблизительно 1,5 мм, а толщина барьерного компартмента составляет приблизительно 180 мкм и 260 мкм или приблизительно 310 мкм и 440 мкм.
14. Гидрогелевая капсула, характеризующаяся сферической формой и диаметром приблизительно 1,5 мм, причем капсула содержит:
(a) содержащий клетки компартмент, который содержит множество сконструированных клеток RPE, инкапсулированных в альгинат, ковалентно модифицированный GRGDSP, причем сконструированные клетки RPE происходят из клеток ARPE-19 и содержат экзогенную нуклеотидную последовательность, которая включает в себя последовательность промотора, функционально связанную с кодон-оптимизированной последовательностью, кодирующей белок фактора VIII-BDD и последовательность поли А, и причем альгинат характеризуется молекулярной массой от 75 кДа до 150 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5; и
(b) барьерный компартмент, окружающий связывающий клетки компартмент и содержащий смесь альгината, ковалентно модифицированного соединением 101, показанным в таблице 4, и немодифицированного альгината, причем альгинат в ковалентно модифицированном альгинате характеризуется молекулярной массой менее чем 75 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5, а немодифицированный альгинат характеризуется молекулярной массой от 150 кДа до 250 кДа и соотношением G:M большим или равным 1,5.
15. Гидрогелевая капсула по п. 14, в которой последовательность промотора состоит по существу из SEQ ID NO: 23, кодон-оптимизированная последовательность состоит по существу из SEQ ID NO: 15, а последовательность поли А состоит по существу из SEQ ID NO: 24.
16. Гидрогелевая капсула по п. 14 или 15, в которой плотность GRGDSP на альгинате, определенная количественным анализом пептидной конъюгации, составляет от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,6 микромоль GRGDSP на грамм GRGDSP-альгината в физиологическом растворе с вязкостью 80-120 сП.
17. Устройство, содержащее:
(c) по меньшей мере один содержащий клетки компартмент, который содержит полимерную композицию, содержащую первое связывающееся с клетками вещество (CBS) и инкапсулирующую множество клеток, способных экспрессировать терапевтическое средство, когда устройство имплантируется субъекту, например, человеку, причем клетки не представляют собой островковые клетки; и
(d) средства для уменьшения реакции на инородное тело (FBR), когда устройство имплантируется субъекту.
18. Устройство, содержащее:
(a) полимерную композицию, например, полимерную матрицу, например, гидрогелевую матрицу, содержащую:
(i) первое связывающееся с клетками вещество (CBS) и
(ii) множество клеток, способных обеспечивать, например, производить, экспрессировать или высвобождать, терапевтическое средство, причем клетки не представляют собой островковые клетки;
причем устройство обладает одним из следующих свойств:
(b) оно характеризуется комбинацией сферической формы и линейного размера, например, диаметра, составляющего по меньшей мере 1,0 мм, 1,3 мм, 1,5 мм, 2,0 мм, 2,5 мм или 3,0 мм;
(c) полимерная композиция расположена внутри компартмента, например, компартмента или матрицы, содержащей биосовместимый полимер, который окружает полимерную композицию;
(d) оно содержит объект, например, соединение, которое уменьшает FBR, например, противофибротическое соединение, как определено в настоящем документе, которое согласно некоторым вариантам осуществления расположено на внешней поверхности устройства; или же
(e) устройство содержит противофибротическое соединение, например, описанное в настоящем документе противофибротическое соединение, например, противофибротическое соединение, расположенное на внешней стороне устройства.
19. Устройство по п. 17 или 18, в котором первое CBS содержит первый СВР, ковалентно связанный с первым полимером через первый линкер («первый СВР-полимер»).
20. Устройство по п. 19, в котором первый СВР содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из DGEA, FYFDLR, HAVDI, PHSRN, REDV, RGD, RGDSP, YIGSR, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58.
21. Устройство по п. 19 или 20, в котором первый линкер представляет собой линейный аминокислотный линкер, состоящий по существу из одного, двух или трех остатков глицина или одного остатка бета-аланина.
22. Устройство по п. 21, в котором первый СРВ состоит по существу из RGD или RGDSP.
23. Устройство по любому из пп. 17-22, в котором множество клеток представляют собой сконструированные клетки RPE.
24. Устройство по п. 23, в котором сконструированные клетки RPE происходят из клеток ARPE-19 и содержат последовательность экзогенной нуклеиновой кислоты, которая содержит последовательность промотора, функционально связанную с кодирующей последовательностью полипептида, причем последовательность промотора состоит по существу или состоит из SEQ ID NO: 23.
25. Устройство по п. 24, в котором кодирующая последовательность представляет собой кодон-оптимизированную кодирующую последовательность FVIII-BDD, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 и 17, или кодон-оптимизированную кодирующую последовательность FIX-padua, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19, 20 и 21.
26. Препарат устройств, причем каждое устройство в препарате представляет собой устройство по любому из пп. 17-25.
27. Препарат устройств по п. 26, которое представляет собой фармацевтическую композицию, подходящую для помещения в тело субъекта.
28. Гидрогелевая капсула, содержащая:
(c) содержащий клетки компартмент, который содержит множество клеток, инкапсулированных в первую полимерную композицию, содержащую первый RGD-полимер; и
(d) барьерный компартмент, окружающий связывающий клетки компартмент и содержащий вторую полимерную композицию, которая включает в себя смесь немодифицированного альгината и альгината, ковалентно модифицированного по меньшей мере одним соединением, выбранным из группы, состоящей из тех, что
(e) показаны в Таблице 4,
причем гидрогелевая капсула характеризуется сферической формой и диаметром от 0,5 мм до 5 мм, а клетки не представляют собой островковые клетки.
29. Гидрогелевая капсула по п. 28, в которой множество клеток представляют собой сконструированные клетки ARPE-19.
30. Гидрогелевая капсула по п. 29, в которой сконструированные клетки ARPE-19 содержат последовательность экзогенной нуклеиновой кислоты, которая включает в себя последовательность промотора, функционально связанную с кодирующей последовательностью полипептида, причем последовательность промотора состоит по существу или состоит из SEQ ID NO: 23.
31. Гидрогелевая капсула по п. 30, в которой кодирующая последовательность представляет собой кодон-оптимизированную кодирующую последовательность FVIII-BDD, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 и 17, или кодон-оптимизированную кодирующую последовательность FIX-padua, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19, 20 и 21.
32. Гидрогелевая капсула по п. 31, в которой кодирующая последовательность FVIII-BDD представляет собой SEQ ID NO: 15, а первый RGD-полимер состоит по существу из альгината, ковалентно конъюгированного с G1-3RGD или G1-3RGDSP и, необязательно, в котором концентрация множества клеток в содержащем клетки компартменте составляет от приблизительно 35 миллионов до приблизительно 45 миллионов клеток на миллилитр первой полимерной композиции.
33. Гидрогелевая капсула по п. 32, в которой альгинат конъюгирован с GRGDSP.
34. Препарат гидрогелевых капсул, причем каждая капсула в препарате представляет собой гидрогелевую капсулу по любому из пп. 1-16 или любому из пп. 28-33.
35. Препарат гидрогелевых капсул по п. 34, причем каждая капсула в препарате характеризуется диаметром от 1,4 до 1,6 мм.
36. Препарат гидрогелевых капсул по п. 34 или 35, который представляет собой фармацевтически приемлемую композицию, подходящую для помещения или имплантации в брюшную полость субъекта.
37. Композиция для применения в лечении субъекта, нуждающегося в терапевтическом средстве, включающая:
предоставление препарата устройств по п. 26 или 27 или препарата гидрогелевых капсул по любому из пп. 34-36 и
имплантацию препарата в полость тела субъекта.
38. Композиция для применения по п. 37, в которой терапевтическое средство представляет собой фактор свертывания крови.
39. Композиция для применения по п. 38, в которой фактор свертывания крови представляет собой белок фактора VIII-BDD, который по существу состоит из SEQ ID NO: 1.
40. Композиция для применения по п. 38, в которой фактор свертывания крови представляет собой белок фактора IX-padua, который содержит SEQ ID NO: 36.