СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ КРИПТОЗООСПЕРМИИ И АЗООСПЕРМИИ ПО СОДЕРЖАНИЮ ОБЩЕГО БЕЛКА В СПЕРМАЛЬНОЙ ПЛАЗМЕ
METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF CRYPTOZOOSPERMIA AND AZOOSPERMIA BY CONTENT OF TOTAL PROTEIN IN SPERMAL PLASMA

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, андрологии, репродуктологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики криптозооспермии и азооспермии у мужчин.
Ведущей причиной мужского бесплодия является снижение количества и качества сперматозоидов. При проведении морфологической оценки эякулята в случаях чрезвычайно низкой концентрации половых клеток наиболее актуальной является проблема обнаружения сперматозоидов для решения вопроса о необходимости проведения тестикулярной биопсии с целью установлении возможности мужчины иметь генетическое потомство или необходимости прибегнуть к использованию сперматозоидов донора.
Классическим способом дифференциальной диагностики азооспермии и криптозооспермии является морфологическое исследование осадка эякулята согласно руководства ВОЗ (5 издание, 2010 г.) [1].
Недостатком метода является его субъективность, а также то, что разработанные и применяемые методики получения осадка эякулята не гарантируют осаждение всех имеющихся половых клеток [2].
Известен способ дифференциальной диагностики нарушений сперматогенеза по исследованию крови методом инфракрасной спектроскопии с последующей математической обработкой полученных данных [3].
Недостатком данного способа является длительная пробоподготовка, необходимость наличия специализированного оборудования (инфракрасный спектроскоп), трудоемкость математической обработки результатов.
Известен способ определения показаний для открытой биопсии яичка у больных азооспермией по определению уровня фолликулостимулирующего, лютеинизирующего гормонов, секс-стероид связывающего глобулина, свободной фракции тестостерона, пролактина, с учетом возраста пациента и рассчетом значения дискриминантной функции [4].
Недостатком данного способа является необходимость определения большого количества биомаркеров, вероятность расхождения результатов в зависимости от используемых методов определения данных аналитов, отсутствие единых единиц измерения.
Известен способ определения содержания общего белка в спермальной плазме на автоматическом биохимическом анализаторе при различных морфофункциональных состояниях эякулята. [5]. Однако в работе отсутствуют конкретные значения для интерпретации результатов при дифференциальной диагностики криптозооспермии и азооспермии. Данный способ принят за прототип.
Целью изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики криптозооспермии и азооспермии по содержанию общего белка в спермальной плазме при затрудненном поиске сперматозоидов в эякуляте в ходе морфологического исследования.
Это достигается тем, что при содержании общего белка в спермальной плазме менее 22,0 г/л подтверждают азооспермию; при содержании общего белка более или равного 22,0 г/л не исключают криптозооспермию.
Использование предлагаемого способа не требует проведения инвазивных манипуляций, исключает субъективность интерпретации результатов, позволяет пациентам с криптозооспермией избежать тестикулярной биопсии и ее осложнений и делает возможным нахождение единичных носителей генетической информации при дополнительном настойчивом морфологическом исследовании эякулята, что способствует появлению у данной группы пациентов генетического потомства.
Критериальные значения содержания общего белка в спермальной плазме определены нами при обследовании 334 пациентов; на первом этапе проводили исследование эякулята согласно руководству ВОЗ (5 издание, 2010 г.), на основании чего были сформированны две группы пациентов с азооспермией (n=23) и криптозооспермией (n=13). В дальнейшем у данных пациентов было проведено определение содержания общего белка в спермальной плазме согласно предлагаемому способу. Оказалось, что среднее содержание белка в спермальной плазме при азооспермии составляет 17,3 г/л, а при криптозооспермии - 33,9 г/л. Выявленные различия оказались достоверными (р<0,05), что может иметь решающее значение для проведения дифференциальной диагностики данных видов патоспермий, принципиальных для решения вопроса о возможности генетического отцовства.
Проведенный корелляционный анализ выявил достоверные корелляционные связи между содержанием общего белка в спермальной плазме с концентрацией сперматозоидов в эякуляте (коэффициент корреляции Спирмена составил 0,247; р<0,05).
Проведенный ROC-анализ продемонстрировал высокую прогностическую способность определения общего белка в спермальной плазме для дифференциальной диагностики азооспермии и криптозооспермии (AUC=0,889, р=0,001); позволил установить оптимальное пороговое значение данного аналита (22,0 г/л) и приемлемые уровни чувствительности (100%) и специфичности (66,7%) для выбранного порогового значения.
Сущность предложенного метода заключается в следующем: при установлении отсутствия сперматозоидов при проведении морфологического исследования эякулята проводят определение содержания общего белка на автоматическом биохимическом анализаторе биуретовым методом в образце спермальной плазмы: при содержании общего белка менее 22,0 г/л подтверждают азооспермию; при содержании общего белка более или равного 22,0 г/л не исключают криптозооспермию.
Предлагаемый способ позволяет получить данные о наличии единичных сперматозоидов в эякуляте у мужчин по содержанию общего белка в спермальной плазме.
Способ поясняется следующими клиническими примерами:
Пример 1. Пациент К., 39 лет. Детей не имеет. Обратился в связи с безуспешными попытками зачатия в течение 5 лет. Клинический диагноз: Первичное бесплодие. При первичном морфологическом исследовании эякулята сперматозоиды не найдены. Предлагаемым способом определено содержание общего белка в спермальной плазме - 12,5 г/л, что меньше 22,0 г/л, что подтверждает морфологически установленную азооспермию. Пациент направлен на тестикулярную биопсию. Результаты исследования биоптатов подтверждают полученные с помощью предлагаемого способа данные - сперматозоиды в биоптатах не обнаружены, рекомендовано использование донорской спермы при проведении процедуры вспомогательных репродуктивных технологий.
Результаты исследования спермограммы и биопсии подтверждают полученные с помощью предлагаемого способа данные - у пациента выявлена азооспермия.
Пример 2. Пациент С., 37 лет. Имеет 1 ребенка. Обратился в связи с безуспешными попытками зачатия в течение 2 лет. При первичном морфологическом исследовании эякулята сперматозоиды не найдены. Предлагаемым способом определено содержание общего белка в спермальной плазме - 34,9 г/л, что больше 22,0 г/л, в данном случае не исключается криптозооспермия. При дополнительном настойчивом поиске обнаружены единичные сперматозоиды в эякуляте, что соответствует криптозооспермии, следовательно, полученные с помощью предлагаемого способа данные подтверждены. Наличие единичных сперматозоидов позволило провести их криоконсервацию и дальнейшего проведения процедуры вспомогательных репродуктивных технологий.
Способ может применяться в центрах планирования семьи и репродукции.
Список используемой литературы:
1. World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination and processing of human semen. 5th ed. Prepublication version. 2010.
2. Андреева M.B., Хаят С.Ш., Шилейко Л.В., Черных В.Б., Штаут М.И., Остроумова Т.В., Сорокина Т.М., Курило Л.Ф. Количественный кариологический анализ незрелых половых клеток из эякулята как часть протокола обследования мужчин с бесплодием в браке. Андрология и генитальная хирургия. 2017. Т. 18. №1. С. 62-69.
3. Светозарский Н.Л., Гамаюнов С.В., Гордецов А.С., Березкина Г.А., Артифексова А.А., Артифексов С.Б., Крупин В.Н. Способ дифференциальной диагностики нарушений сперматогенеза. Патент RU 2367957 С2, 2009.
4. Торопов В.А., Гзгзян A.M., Боровец С.Ю., Тишков А.В., Аль-Шукри С.Х. Способ определения показаний для открытой биопсии яичка у больных азооспермией. Патент RU 2655776 С1, 2018.
5. Гусякова О.А., Мурский С.И., Тукманов Г.В., Комарова М.В. Особенности метаболического состава спермальной плазмы при различных морфофункциональных патологиях эякулята. Клиническая лабораторная диагностика. 2019; 64 (8): 469-476.