СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕТОКСИКАЦИОННОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ОЖОГАХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
DIAGNOSTIC METHOD FOR DETOXIFICATION FUNCTION OF LIVER AT BURNS IN EXPERIMENT

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
В качестве прототипа выбран способ оценки функционального состояния печени, заключающийся в определении в крови количества альфа-глобулинов (А), альбуминов (В), бета-глобулинов (С) и определении по формуле диагностического критерия - коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота по формуле: Кфсп=А / (А+В+С) (см. патент РФ №2305844, G01N 33/68, 2007 г.).
Однако известный способ является длительным, субъективным и не дает возможности ранней диагностики снижения детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
Задача предлагаемого изобретения - раннее выявление нарушения детоксикационной функции печени при ожогах.
a
a
a
2
Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови, в гемолизате эритроцитов измеряют оптическую плотность в течение 1 минуты при длине волны 340 нм и вычисляют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K (мкмоль/мин) и, если показатель K у крыс с ожогом ниже величины K здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.
a
2
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте осуществляют следующим образом. Исследования выполнены на 15 половозрелых крысах линии Вистар - самцах массой 180 - 200 г. Контрольная группа представлена животными, не подвергшимися ожогу. Животным опытной группы под тиопенталовым наркозом (30 мг/кг массы) наносят ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час после ожога после декапитации собирают вытекающую из шейных сосудов кровь, стабилизируют ее цитратом натрия (3,8%) в соотношении 9:1, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, отделяют плазму от эритроцитов. Эритроцитарную массу промывают в 5 мл физиологического раствора. После осаждения (10 мин при 3000 об/мин) удаляют физиологический раствор с 10-15% поверхностно расположенных эритроцитов. Отмытые эритроциты гемолизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:40. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 сек в течение 1 минуты и определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K (мкмоль/мин) по формуле:
, где
3 - объем пробы в кювете в мл;
6
10 - коэффициент пересчета моль в мкмоль;
60 - 60 секунд;
6
6,22×10 - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного НАД;
t - время измерения, мин;
1
ΔE - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек.;
2
ΔE - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин;
a
a
a
2
K эритроцитов крови интактных животных принимают за норму, которая составляет 1,70±0,01 мкмоль/мин. Если показатель K у животных с ожогом ниже величины K здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени при ожогах.
Результаты исследования коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции в гемолизате эритроцитов и печени представлены в таблице.
Таблица
Коэффициент каталитической эффективности (K<sub>a</sub>; мкмоль/мин<sup>2</sup>) альдегиддегидрогеназной реакции в эритроцитах и печени в норме и при ожоге
№ животного
Интактные животные
Опытная группа животных, подвергшихся ожогу
Эритроциты
Печень
Эритроциты
Печень
1
1,65
1,98
1,38
1,23
2
1,77
1,87
1,37
1,25
3
1,69
1,81
1,38
1,19
4
1,71
1,86
1,35
1,15
5
1,67
1,75
1,32
1,27
6
1,64
1,76
1,35
1,25
7
1,76
1,78
1,34
1,30
8
1,68
1,83
1,31
1,24
9
1,68
1,79
1,33
1,25
10
1,60
1,71
1,34
1,19
11
1,79
1,75
1,33
1,19
12
1,68
1,69
1,36
1,26
13
1,67
1,78
1,37
1,19
14
1,76
1,65
1,30
1,19
15
1,69
1,77
1,32
1,22
M±m
1,70±0,01
1,79±0,02
1,34±0,01*
1,23±0,01*
Примечание: * - различия достоверны по сравнению с интактными животными (р<0,01)
a
a
a
a
2
2
2
2
Из таблицы видно, что коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции K в эритроцитах здоровых крыс составил 1,70±0,01 мкмоль/мин и идентичен K печени интактных крыс. K в печени интактных крыс равен 1,79:1:0,02 мкмоль/мин. При термической травме коэффициент каталитической эффективности эритроцитов снижен и составил 1,34±0,01 мкмоль/мин, в печени K соответственно тоже понижен и равен 1,23±0,01 мкмоль/мин. Поэтому на основании изучения коэффициента каталитической эффективности эритроцитов можно судить о коэффициенте каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции и соответственно о детоксикационной функции печени животных.
Пример конкретного выполнения исследования.
340
Беспородной белой крысе (самец массой 200 г., в таблице №5) наносят под тиопенталовым наркозом ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час собирают кровь из шейных сосудов и готовят гемолизат эритроцитов, 0,05 мл которого помещают в спектрофотометрическую кювету и измеряют величину оптической плотности при длине волны 340 нм (E) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:
Время
0
15 сек
30 сек
45 сек
1 мин
E<sub>340</sub>
0,100
0,114
0,125
0,142
0,155
1
2
Рассчитывают величину оптической плотности при 340 нм: ΔE - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек, ΔЕ - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин.
После этого рассчитывают коэффициент каталитической эффективности альдегид дегидрогеназной реакции по формуле:
Таким образом,
что свидетельствует о снижении детоксикационной функции печени.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.