ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОСЛЕДСТВИЙ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ И СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ)
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING CONSEQUENCES OF CRANIOCEREBRAL INJURY AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF (EMBODIMENTS)

Настоящее изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к пероральным лекарственным формам, содержащим химические соединения для лечения последствий черепно-мозговой травмы (ЧМТ) и способам их получения.
Под черепно-мозговой травмой понимается комплекс контактных повреждений (мягких тканей лица и головы, костей черепа и лицевого скелета) и внутричерепных повреждений, имеющих единый механизм и давность образования (httр://ru.wikiреdiа.org/wi-ki/Черепно-мозговая_травма). ЧМТ, как правило, происходит в связи с несчастными случаями и часто приводят к развитию нарушения двигательной активности или умственных способностей, что способствует повышенной заболеваемости пациентов, выживших после аварии.
В настоящее время ЧМТ занимает первое место по наносимому суммарному медико-социальному и экономическому ущербу среди всех видов травм и является одной из главных причин инвалидизации населения. Количество лиц со стойкой нетрудоспособностью в результате перенесенной ЧМТ достигает 25-30%. При этом основной контингент пострадавших - лица трудоспособного возраста (от 20 до 50 лет). Общая летальность при ЧМТ, включая ЧМТ легкой и средней степени тяжести, составляет 5-10%, а при тяжелых формах ЧМТ возрастает до 41-85% (http://neurosklif.ru/Diseases/Head Injury). В связи с этим проблема лечения ЧМТ и ее последствий является актуальной в современной медицине и имеет большое социально-экономическое значение.

Среди зарегистрированных и разрешенных к медицинскому применению препаратов на Российском фармацевтическом рынке широкое распространение для лечения последствий ЧМТ получили Глиатилин (производитель Италфармако/Фармакор (Италия/Россия)) и его дженериковые версии - Церепро (производитель Верофарм (Россия)) и Церетон (производитель Сотекс (Россия)), содержащие в качестве действующего вещества холин альфосцерат (RU 2406506, 2010). Холин альфосцерат обладает холиномимети-ческим действием, стимулирует преимущественно центральные холиноре-цепторы. Препарат активирует церебральный кровоток, стимулирует метаболизм ЦНС, возбуждает ретикулярную формацию. У больного повышается настроение, стимулируется умственную деятельность, улучшается концентрация внимания, способность к запоминанию и воспроизведению полученной информации. Наряду с холин альфосцератом в качестве базисных средств фармакотерапии у больных с черепно-мозговой травмой используют другие производные аминоэтанола, в частности, деанолаацеглумат, а также цитиколин. (Регистр лекарственных средств России, 2007 (15). М.: «РЛС», 2007, с. 973). Эти препараты способны оптимизировать холинергическую передачу в ЦНС, снижать выраженность воспаления и окислительного стресса в поврежденных нейронах, а также стимулировать нейро- и ангиогенез. Предлагается также использовать антагонист рецептора NK-1 2-(3,5-бис-трифторметил-фенил)-N-метил-N-(6-морфолин-4-ил-4-орто-то-лилпиридин-3-ил)изо-бутирамида (RU 2304435, 2007); 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината (RU 2252023, 2004).
Так, как ЧМТ сопровождается накоплением в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) токсических для ЦНС метаболитов (средне молекулярных олигопептидов, оксигемоглобина, билирубина и серотонина), появляющихся в результате деструкции мозговой ткани и кровоизлияния в субарахноидальное пространство, то перспективным в лечении ЧМТ является детоксикация ЦСЖ. В качестве лечения применяют осмодиуретики (маннитол, рео-глюман), барбитураты (тиопентал натрия, фенобарбитал), глюкокортикоиды (дексазон). (RU 2252023, 2004). Для лечения тяжелой ЧМТ, на фоне комплексной патогенетической терапии дополнительно эндолюмбально вводят пирацетам в дозе 600-800 мг (RU 2026071, 1995).
Недостатками таких препаратов являются длительные сроки лечения, низкая эффективность и большая возможность осложнений.
Наиболее широко в практической медицине для лечения последствий ЧМТ в качестве лекарственного препарата используют мексидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридин сукцинат). Действие мексидола заключается в антиоксидантном и мембранопротекторном эффектах. Мексидол существенно уменьшает повреждение липопротеиновых структур, восстанавливая активность эндогенной антиоксидантной системы [Смирнова И.Н., Федорова Т.Н., Танашян М.М., Суслина З.А. Клиническая эффективность и антиоксидантная активность мексидола при хронических цереброваскулярных заболеваниях // Нервные болезни. 2006. №1. - С. 33-36].
Недостатками мексидола является недостаточная эффективность и опасность его применения при отеке мозга, остром повышении внутричерепного давлении, а также при нарушении функции почек. Не следует назначать препарат внутрь одновременно с его инфузией. (Универсальный справочник лекарственных средств (http://lekarstwo.ru/preparati/ nimodipine.htm).
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является ранее синтезированное в ФГБОУ ВО СПХФА Минздрава России вещество - бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-енои-локси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата (далее - ДЭАЭ) (RU 2600315, 2015), которое обладало нейропротекторным действием при использовании в качестве активного вещества, входящего в состав лекарственного средства на модели гипоксии (RU 2588365, 2016).
Полученное вещество представляло собой бесцветную или желтоватую некристаллизующуюся жидкость, обладающую неудовлетворительными технологическими свойствами, в частности, выраженной гигроскопичностью и невысокой температурой плавления, что осложняло хранение препарата длительное время, в частности, могло приводить к изменению фармакопейных и потребительских характеристик лекарственных форм (внешний вид, прочность и т.п.). Кроме того препарат не мог использоваться в таких наиболее удобных формах для перорального применения, как таблетки, капсулы и т.п., позволяющих сочетать необходимый терапевтический эффект и высокую точность дозирования и стабильность при хранении.
Задачей решаемой авторами, являлось созданием на основе ДЭАЭ препарата, сочетающего повышенную эффективность и безопасность при лечении последствий ЧМТ с получением оптимальной лекарственной формы на основе перевода активного начала в твердое состояние.
Технический результат достигался использованием для этой цели лекарственной композиции, состоящей из ДЭАЭ и кальция гидрофосфата при содержании в смеси ДЭАЭ от 0,5 до 85% масс.
Кальция гидрофосфат в данной композиции с одной стороны, выполняя функцию влагорегулятора, обеспечивает снижение гигроскопичности массы, способствуя ее кристаллизации, а с другой стороны, в результате комбинации ДЭАЭ с частицами гидрофосфата кальция происходит активация активного начала, что влияет на скорость протекания процессов в организме.
Композиция может использоваться как самостоятельно, так и в смеси со вспомогательными веществами. Использование композиции с содержанием ДЭАЭ менее 0,5% малоэффективно, а при содержании более 85% могут возникать технологические сложности при получении твердой формы композиции.
Кальций гидрофосфат может использоваться при получении композиции, как в виде безводного порошка, так и виде кристаллогидратов, например, дигидрата. Лактоза может применяться в виде различных форм, например, безводной или дигидрата.
В качестве вспомогательных веществ для получения фармацевтической композиции ДЭАЭ возможно использование добавок, разрешенных к применению в фармацевтической практике [Фармацевтическая разработка: концепция и практические рекомендации. Научно-практическое руководство для фармацевтической отрасли / под ред. Быковского С.Н., Василенко И.А. и др. - М.: Изд-во Перо, 2015. - 472 с., Алексеев К.В., Кедик С.А., Блынская Е.В. и др. Фармацевтическая технология. Твердые лекарственные формы / под ред. С.А. Кедика. - М.: Изд-во ИФТ. - 2011. - 662 с., Алексеев К.В., Грицкова И.А., Кедик С.А. Полимеры для фармацевтической технологии / под ред. С.А. Кедика. - М.: Изд-во ИФТ. - 2011. - 511 с]. К их числу относятся, в частности, следующие группы веществ:
- наполнители: многоатомные спирты, аминокислоты, карбонаты и гидрокарбонаты щелочных и щелочноземельных металлов, органические кислоты, производные целлюлозы;
- дезинтегранты: различные крахмалы и их производные, натрия крос-кармеллоза, поливинилпирролидон;
- опудривающие: соли стеариновой кислоты, кремния диоксид (аэро-сил),
- связующие: метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, гидроксипро-пилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, сополимер винилпирролидона и винилацетата и др., спирты;
- корригирующие вещества и ароматизаторы.
Использование в настоящей фармацевтической композиции лактозы и крахмала в качестве наполнителей обеспечивает лекарственной форме получение необходимой массы и требуемых технологических свойств, в частности, увеличения сыпучести порошка и улучшения смачиваемости таблетки.
Использование в качестве лубриканта магния стеарата в количестве до 1,0% уменьшает трение на контактных участках при прессовании таблеток. Вместо магния стеарата могут также применяться тальк, кальция стеарат, кислота стеариновая и любые другие антифрикционные вещества, приемлемые для этих целей.
При этом наилучшие результаты достигались при использовании композиции следующего состава (% масс.): ДЭАЭ - 10-20; лактоза - 5-20; крахмал - 15-25; магния стеарат - 0,5-1,0; кальция гидрофосфат - остальное.
Данная композиция позволяет получить сухую смесь с отличной сыпучестью, высокой прочностью, низким влагопоглощением и незначительным образованием пылевидной фракции в процессе производства и лекарственные формы на ее основе с необходимой распадаемостью, растворением, прочностью и приемлемым внешним видом.
Заявляемый способ получения лекарственного средства по первому варианту включает в себя смешение жидкого ДЭАЭ, полученного по патенту RU 2600315, с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами при перемешивании, отделение выпавших кристаллов фильтрованием и их сушкой под вакуумом. Способ позволяет получить порошкообразный продукт, обладающий высокой активностью при лечении последствий ЧМТ.
По второму варианту в жидкий ДЭАЭ вводят качестве затравки кристаллы, полученные путем выдерживания жидкого ДЭАЭ при температуре 0±1°С в течение 2-3 месяцев. Выпадающие при этом кристаллы перекристаллизовывают, смешивают с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами, выбранными из группы, включающей микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, крахмал, манит, натрия крахмал гликолят, натрия кросс-кармеллозу, поливинилпирролидон, магния стеарат и кальция стеарат и далее используют для получения пероральной лекарственной формы.
Полученный целевой продукт представляет собой белый аморфный порошок, очень легко растворимый в воде, легко растворимый в спирте этиловом, практически нерастворимый в этилацетате.
1
13
При этом проведенные исследования методами Н- и С-ЯМР-спектроскопии показали, что химическая структура ДЭАЭ остается неизменной. В то же время предварительное смешение ДЭАЭ с кальция гидрофосфатом (вариант 1) придает лекарственному средству большую стабильность и меньшую гигроскопичность, что обеспечивает соответствие фармакопейным требованиям и его большую эффективность при лечении последствий ЧМТ.
Сущность и преимущества заявляемого изобретения иллюстрируются следующими примерами.
Пример 1. ДЭАЭ - содержащую жидкость, полученную по RU 2600315, выдерживали при температуре 0±1°С в течение 2 месяцев. Выпавшие при этом кристаллы сушили и вносили в качестве затравки в исходную ДЭАЭ - содержащую жидкость, после чего проводили ее кристаллизацию при перемешивании реакционной массы в течение 180±30 минут. Полученные кристаллы отфильтровывали в вакууме водоструйного насоса. Осадок промывали на фильтре дихлорметаном, сушили в сушилке полочного типа при температуре 45-50°С в течение 4-5 часов и использовали для дальнейших экспериментов 0,5 г ДЭАЭ-содержащей жидкости, полученной по патенту RU 2600315, тщательно смешивали с 0,05 г затравки, полученной по примеру 1, 82,5 г кальция гидрофосфата дигидратом и 15 г крахмала прежелатинизированного. Полученную композицию 1, содержащую 0,5% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.
Пример 2. 25 г кальция гидрофосфата моногидрата, 6 г ДЭАЭ, синтезированного по RU 2600315, 5 г поливинилпирролидона поперечно сшитого, 7,7 г крахмала картофельного тщательно перемешивали, увлажняли достаточным количеством 5% раствором картофельного клейстера и гранулировали, после чего опудривали 0,45 г магния стеарата. Полученную композицию 2, содержащую 13,3% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.
Пример 3. 7 г кальция гидрофосфата дигидрата, тщательно перемешивали, добавляли 3 г целлюлозы микрокристаллической, 3 г лактозы моногидрата, 7,7 г крахмала картофельного, 2 г натрия кроскармеллозы, увлажняли достаточным количеством 7% раствором картофельного клейстера и гранулировали. Полученный гранулят смешивали с 36 г ДЭАЭ, полученной по примеру 1, опудривали 0,6 г кальция стеарата. Полученную композицию 3, содержащую 60% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.
Пример 4. Для оценки нейропротекторной и нейрореабилитационной активности новых композиций при черепно-мозговой травме использовалась модель контролируемого кортикального ушиба (Controlled cortical impact injury model, CCI) у крыс. Все эксперименты проводили в соответствии с Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики», Приказом Минздрава РФ от 01.04.16 г. №199н "Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики". Крыс содержали в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе, со свободным доступом к воде. Все опытные и контрольные животные были взяты из одного привоза и прошли карантин в течение 14 суток.
Исследования были выполнены на белых беспородных крысах самцах весом 250-300 г, полученных из питомника «Рапполово» (Ленинградская область). В контрольной группе было 20 крыс, по 10 в опытных группах, 15 - в группе интактных животных. Все манипуляции, проводимые на животных, были рассмотрены и одобрены на заседании биоэтической комиссии СПХ-ФА.
th
ЧМТ моделировали путем нанесения удара по участку сенсомоторной коры. Локализацию зоны сенсомоторной коры определяли по атласу стерео-таксических координат Paxinos G. и Watson С. [Paxinos G., Watson С. The rat brain in stereotaxic coordinates. 7 edition. - Academic press. - 2013.- P. 12]. Для создания травмы, животных наркотизировали внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата (400 мг/кг), после чего проводили трепанацию в левой лобной части черепа над зоной моторной коры. Центр трепанационного отверстия находился на 5,0 мм ростральнее и 2,5 мм медиальнее брегмы. После этого в трепанационное отверстие, помещали подвижный стальной поршень диаметром 3 мм с ходом 4 мм, по которому с высоты 10 см ударял скользящий в стальной трубке груз весом 50 г. Высверленную пластину возвращали на место и зашивали разрез кожи [Isaev N.K., Novikova S.V., Stelmashook E.V. et al. Mitochondria-targeted plastoquinone antioxidant skqrl detrauma-induced trauma-induced neurological deficit in rat //Biochemistry (Moscow). - 2012. -Vol. 77, №9. - P. 996-999].
Пример 5. 54 г кальция гидрофосфата, 10 г лактозы моногидрата, 20 г крахмала картофельного просеивали через сито с диаметром отверстий 0,5 мм и помещали в смеситель трехнаправленного действия. Постепенно при перемешивании добавляли необходимое количество увлажнителя - 10% крахмального клейстера до получения увлажненной, но сыпучей массы. Смесь тщательно перемешивали до равномерного распределения увлажнителя и протирали через сито-гранулятор с диаметром отверстий приблизительно 1,4 мм, после чего высушивали при температуре 65-75°С до остаточного содержания влаги не более 3%, затем добавляли 15 г ДЭАЭ, полученного по примеру 1. После этого в аппарат вносили необходимое количество магния стеарата и опудривали в течение 20 мин. Таблетную массу (далее композиция 4) прессовали с помощью таблетного пресса эксцентрикового или роторного типа (свойства таблетной массы приведены в таблице 1)
Пример 6. В условиях примера 5 получали композицию 5, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 13, лактозы моногидрат - 20; крахмал картофельный - 20; маннит - 5, натрия крахмал гликолят - 2, магния стеарат - 0,5; кальция гидрофосфата дигидрат - 39,5. Полученную композицию 5 помещали в капсулы, направляли на биологические испытания.
Пример 7. В условиях примера 5 получали композицию 6, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 15; целлюлоза микрокристаллическая - 13, лактозы моногидрат - 22; крахмал картофельный - 20; кальция стеарат - 0,8; кальций гидрофосфат - 29,2. Полученной композицией наполняли капсулы и направляли на биологические испытания.
Пример 8. Получали композицию, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 20; кальция гидрофосфат - 10, целлюлоза микрокристаллическая - 27; лактоза безводная - 30, крахмал прежелатинизированный - 12; кальция стеарат - 1. Полученную композицию таблетировали, после чего направляли на биологические испытания.
Пример 9. Для оценки нейропротекторной и нейрореабилитационной активности новых композиций при черепно-мозговой травме использовалась модель контролируемого кортикального ушиба (Controlled cortical impact injury model, CCI) у крыс, описанная в примере 5.
9.1. Влияние состава композиции на ответ задних и передних конечностей животных на тактильную и проприоцептивную стимуляцию
На 1-е, 3-е и 7-е сутки после операции у животных оценивали выраженность неврологического дефицита в тесте «Стимулирование конечностей». Тест заключался в ответе задних и передних конечностей на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Процесс тестирования состоял из 7 различных испытаний, результаты выражали в сумме баллов. Для оценки нарушений в работе конечностей использовалась следующая система подсчета: 2 балла - крыса полностью выполняла испытание; 1 балл - крыса выполняла испытание с задержкой в более чем 2 с и/или не полностью; 0 баллов - крыса не отвечала на стимулирование конечности. Максимально возможное суммарное количество баллов было равно 14 [Силачев Д.Н. Изучение новых нейропротекторов на модели фокальной ишемии головного мозга: дис. канд. биол. наук. Моск. гос. университет им. М.В. Ломоносова, Москва, 2009]. Все испытуемые лекарственные средства на 7-е сутки давали достоверное улучшение функции передних и задних конечностей в тесте «Стимулирование конечностей». Результаты исследований представлены в таблице 2.
Наиболее высокий результат показали крысы, получавшие композиции 1 и 4, у которых были менее выраженные двигательные нарушения передних и задних лап, что позволило им набрать большее количество баллов, чем животным контрольной группы соответственно в 1,7 и 1,4 раза на 3-й и 7-й день после травмы. Индивидуальный ЭДЭС, вводимый в дозах 10 мг/кг, также достоверно ускорял восстановление двигательной функции конечностей по сравнению с контролем.
9.2. Влияние заявляемых средств на поведение лабораторных животных после перенесенной ЧМТ
На 3-е сутки после травмы у крыс оценивали общую двигательную активность (ОДА) и поисково-исследовательскую активность (ПИА). ОДА складывалась из горизонтальных и вертикальных перемещений, груминга и заглядываний в норки, а ПИА рассчитывали как сумму вертикальных перемещений и заглядываний.
В тесте «Открытое поле» группа, получавшая ЭДЭС в дозе 10 мг/кг, а также композиции 1, 4-7 имела достоверно более высокие значения ОДА и ПИА по сравнению с контролем
Кроме того, результаты данных животных были достоверно выше, чем у крыс, получавших холина альфосцерат. Клонидин давал увеличение показателя ОДА по сравнению контроля, однако не превосходил заявляемые композиции.
9.3 Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт», (ПКЛ)
Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» проводили на седьмые сутки после травмы. У крыс оценивали время нахождения в открытых (ОР) и закрытых рукавах (ЗР), а также ОДА, складывающуюся из количества заходов в темные/светлые рукава, стоек, выглядываний из темных рукавов, свисаний и грумингов.
В данном тесте холина альфосцерат и цитиколин достоверно снижали время в ОР по сравнению с контролем. При этом они также как и ЭДЭС в дозе 10 мг/кг несколько увеличивали продолжительность нахождения в ЗР, но отличия были недостоверными по сравнению с контролем. У крыс, получавших холина альфосцерат и цитиколин, происходило достоверное снижение показателя ОДА по сравнению с контрольными животными. ЭДЭС и композиции 1, 2, снижал данный показатель, но отличия от контроля не были статистически значимы
9.4. Влияние заявляемых композиций на двигательную функцию передних и задних конечностей животных после ЧМТ
На седьмые сутки после травмы у животных проводили тесты «Цилиндр» и «Сужающаяся дорожка».
В тесте «Цилиндр» оценивали асимметрию использования животным передних конечностей в процессе исследования стенок цилиндра. Для тестирования крысу помещали в цилиндр и проводили видео регистрацию движений животного в течение 8-10 минут. Просмотр видеозаписи проводили в покадровом режиме, подсчитывая количество независимого использования латеральной и контралатеральной к месту повреждения конечностей во время исследования стенки цилиндра после подъема на задние лапы, а также одновременное (совместное) использование обеих лап. Данные представляли как процент использования контралатеральной конечности от общего числа поведенческих актов по формуле:
(контр+1/2ходновр)/(ипси+контр+одновр)×100,
где контр - контралатеральная к месту повреждения конечность, одновр - одновременное использование передних конечностей, ипси - ипсилатеральная к месту повреждения конечность [Силачев Д.Н. Изучение новых нейропротекторов на модели фокальной ишемии головного мозга: дис. канд. биол. наук. Моск. гос. университет им. М.В. Ломоносова, Москва, 2009].
В тесте «Цилиндр» достоверное улучшение по сравнению с контрольной группой наблюдалось у крыс, получавших ЭДЭС в дозе 10 мг/кг (в 1,8 раза) и композиций 1, 2, 4. Другие ЛС, вводимые травмированным животным не давали увеличения частоты использования контралатеральной конечности
9.5. Тест «Сужающаяся дорожка.
Тест «Сужающаяся дорожка» использовался для оценки сенсомоторной функции передних и задних конечностей. Установка представляет собой две сужающиеся дорожки длиной 165 см, расположенные друг под другом, причем нижняя имеет бортики для расположения конечностей животного во время соскальзывания с верхней доски. В конце установки располагается черная коробка, являющаяся конечной целью перемещения животного. Точка старта освещается ярким светом, мотивируя крыс бежать к концу доски в черную коробку. Перед моделированием черепно-мозговой травмы животных в течение 3 дней приучали пересекать «сужающуюся дорожку». Во время тестирования движения крыс записывались на видеокамеру. В покадровом режиме просмотра видео для каждой конечности отдельно подсчитывали количество постановок конечности на нижнюю доску (ошибок), количество соскальзываний с верхней доски на нижнюю, а также общее количество шагов. Полученные по трем попыткам данные усреднялись, степень выраженности сенсомоторного дефицита рассчитывалась по формуле в процентах:
Ошибки+0,5×Соскальзывания/Общее кол-во шагов×100
Заявляемые композиции давали статистически значимое улучшение состояния двигательной функции конечностей в тесте «Стимулирование конечностей». Цитиколин достоверно улучшал моторику передней контралатеральной конечности по сравнению с контролем, однако, не превосходил ДЭ-АЭ. Клонидин давал достоверное улучшение функции передней и задней конечностей, однако, его эффективность была ниже.
Таким образом, применение заявляемых композиций у животных после черепно-мозговой травмы позволило достичь улучшения состояния моторной функции передней и задней конечностей, расположенных контролатерально к месту повреждения, а также к увеличению показателей общей двигательной (ОДА) и поисково-исследовательской активности (ПИА).
Анализ полученных результатов показал, что заявляемая композиция сочетает в себе эффективность при использовании для лечения последствий ЧМТ с удобством использования препарата в твердой лекарственной форме при пероральном применении.