ДИЗАЙН УСТОЙЧИВОГО ГЕТЕРОДИМЕРНОГО АНТИТЕЛА С МУТАЦИЯМИ В FC ДОМЕНЕ

1. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает вариантный СН3 домен, содержащий аминокислотные мутации, стимулирующее образование гетеродимерная Fc области с повышенной устойчивостью по сравнению с СН2 доменом, который не содержит аминокислотные мутации, и где вариантный СН3 домен имеет температуру плавления (Tm) около 70°С или выше.
2. Выделенный гетеромультимер по п.1, где гетеродимерная Fc область дополнительно включает вариантный СН2 домен, содержащий асимметричные аминокислотные модификации, для стимулирующее селективное связывание Fc гамма рецептора.
3. Выделенный гетеромультимер по п.2, в котором вариантный СН2 домен селективно связывает Fc гамма IIIa рецептор по сравнению с СН2 доменом дикого типа.
4. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc не содержит дополнительную дисульфидную связь в СН3 домене по сравнению с Fc областью дикого типа.
5. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc содержит дополнительную дисульфидную связь в вариантном СН3 домене по сравнению с Fc областью дикого типа, при условии, что температура плавления (Tm) около 70°С или выше наблюдается в отсутствие дополнительной дисульфидной связи.
6. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc содержит дополнительную дисульфидную связь в вариантном СН3 домене по сравнению с Fc областью дикого типа, а вариантный СН3 имеет температуру плавления (Тт) около 77.5°С или выше.
7. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc имеет чистоту выше, примерно, 90%.
8. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc имеет чистоту около 95% или выше.
9. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная область Fc имеет чистоту около 98% или выше.
10. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, где Tm равна около 71°С или выше.
11. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, где Tm равна около 74°С или выше.
12. Гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная Fc область имеет чистоту около 98% или выше, а Tm равна около 73°С.
13. Гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором гетеродимерная Fc область имеет чистоту около 90% или выше, а Tm равна около 75°С.
14. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации L351Y и Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации Т366А и K409F.
15. Выделенный гетеромультимер по п.14, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит дополнительную аминокислотную модификацию в положении Т411, D399, S400, F405, N390 или K392.
16. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении Т411 выбрана из T411N, T411R, T411Q, T411K, Т4110, Т411Е или T41W.
17. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении D399 выбрана из D399R, D399W, D399Y или D399K.
18. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении S400 выбрана из S400E, S400D, S400R или S400K.
19. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении F405 выбрана из F405I, F405M, F405T, F405S, F405V или F405W.
20. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении N390 выбрана из N390R, N390K или N390D.
21. Выделенный гетеромультимер по п.15, в котором аминокислотная модификация в положении K392 выбрана из K392V, K392M, K392R, K392L, K392F или K392E.
22. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации L351Y и Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366V и K409F.
23. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации Т366А и K409F.
24. Выделенный гетеромультимер по п.23, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит дополнительные аминокислотные модификации K392E, T411E, D399R и S400R.
25. Выделенный гетеромультимер по п.23, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию D399R, S400R и Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию Т366А, K409F, K392E и Т411Е.
26. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.23-25, в котором вариантный СН3 домен имеет температуру плавления (Tm) около 74°С или выше, а гетеродимер имеет чистоту около 95% или выше.
27. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положениях L351 и Y407, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положении Т366 и аминокислотную модификацию K409F.
28. Выделенный гетеромультимер по п.27, в котором аминокислотная модификация в положении L351 выбрана из L351Y, L351I, L351D, L351R или L351F.
29. Выделенный гетеромультимер по п.27, в котором аминокислотная модификация в положении Y407 выбрана из Y407A, Y407V или Y407S.
30. Выделенный гетеромультимер по п.27, в котором аминокислотная модификация в положении Т366 выбрана из Т366А, T366I, T366L, Т366М, T366Y, T366S, Т366С, T366V или T366W.
31. Выделенный гетеромультимер по любому из п.п.27-30, в котором вариантный СН3 домен имеет температуру плавления (Tm) около 75°С или выше, а гетеродимер имеет чистоту около 90% или выше.
32. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положении F405 и аминокислотные модификации L351Y и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T394W.
33. Выделенный гетеромультимер по п.32, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положениях K392, Т411, Т366, L368 или S400.
34. Выделенный гетеромультимер по п.32, в котором аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A, F405I, F405M, F405T, F405S, F405V или F405W.
35. Выделенный гетеромультимер по п.33, в котором аминокислотная модификация в положении K392 представляет собой K392V, K392M, K392R, K392L, K392F или K392E.
36. Выделенный гетеромультимер по п.33, в котором аминокислотная модификация в положении Т411 представляет собой T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, Т411Е или T411W.
37. Выделенный гетеромультимер по п.33, в котором аминокислотная модификация в положении S400 представляет собой S400E, S400D, S400R или S400K.
38. Выделенный гетеромультимер по п.33, в котором аминокислотная модификация в положении Т366 представляет собой Т366А, T366I, T366L, Т366М, T366Y, T366S, Т366С, T366V или T366W.
39. Выделенный гетеромультимер по п.33, в котором аминокислотная модификация в положении L368 представляет собой L368D, L368R, L368T, L368M, L368V, L368F, L368S и L368A.
40. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T394W.
41. Выделенный гетеромультимер по п.40, в котором полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T366L или T366I.
42. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366I, K392M и T394W.
43. Выделенный гетеромультимер по любому из п.п.1-3, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366L, K392M и T394W.
44. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366L и T394W.
45. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366I и T394W.
46. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации L351Y и Y407A, и полипептид второго СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации Т366А и K409F.
47. Выделенный гетеромультимер по п.46, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит дополнительную аминокислотную модификацию в положении Т411, D399, S400, F405, N390 или K392.
48. Выделенный гетеромультимер по п.47 в котором аминокислотная модификация в положении Т411 выбрана из T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, Т411Е или T411W.
49. Выделенный гетеромультимер по п.47, в котором аминокислотная модификация в положении D399 выбрана из D399R, D399W, D399Y или D399K.
50. Выделенный гетеромультимер по п.47, в котором аминокислотная модификация в положении S400 выбрана из S400E, S400D, S400R или S400K.
51. Выделенный гетеромультимер по п.47, в котором аминокислотная модификация в положении F405 выбрана из F405I, F405M, F405T, F405S, F405V или F405W.
52. Выделенный гетеромультимер по п.47, в котором аминокислотная модификация в положении N390 выбрана из N390R, N390K или N390D.
53. Выделенный гетеромультимер по п.47, в котором аминокислотная модификация в положении K392 выбрана из K392V, K392M, K392R, K392L, K392F или K392E.
54. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации L351Y и Y407A, и полипептид второго СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации T366V и K409F.
55. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотную модификацию Y407A, и полипептид второго СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации Т366А и K409F.
56. Выделенный гетеромультимер по п.55, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит дополнительные аминокислотные модификации K392E, T411E, D399R и S400R.
57. Выделенный гетеромультимер по п.55, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию D399R, S400R и Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию Т366А, K409F, K392E и Т411Е.
58. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.55-57, в котором вариантный СН3 домен имеет температуру плавления (Tm) около 74°С или выше, а гетеродимер имеет чистоту около 95% или выше.
59. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотную модификацию в положении L351 и аминокислотную модификацию Y407A, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положении Т366 и аминокислотную модификацию K409F.
60. Выделенный гетеромультимер по п.59, в котором аминокислотная модификация в положении L351 выбрана из L351Y, L351I, L351D, L351R или L351F.
61. Выделенный гетеромультимер по п.59, в котором аминокислотная модификация в положении Y407 выбрана из Y407A, Y407V или Y407S.
62. Выделенный гетеромультимер по п.59, в котором аминокислотная модификация в положении Т366 выбрана из Т366А, T366I, T366L, Т366М, T366Y, T366S, Т366С, T366V или T366W.
63. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.59-62, в котором вариантный СН3 домен имеет температуру плавления (Tm) около 75°С или выше, а гетеродимер имеет чистоту около 90% или выше.
64. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотную модификацию в положении F405 и аминокислотные модификации L351Y и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T394W.
65. Выделенный гетеромультимер по п.64, в котором полипептид первого СН3 домена или полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положениях K392, Т411, Т366, L368 или S400.
66. Выделенный гетеромультимер по п.64, в котором аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A, F405I, F405M, F405T, F405S, F405V или F405W.
67. Выделенный гетеромультимер по п.65, в котором аминокислотная модификация в положении K392 представляет собой K392V, K392M, K392R, K392L, K392F или K392E.
68. Выделенный гетеромультимер по п.65, в котором аминокислотная модификация в положении Т411 представляет собой T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, Т411Е или T411W.
69. Выделенный гетеромультимер по п.65, в котором аминокислотная модификация в положении S400 представляет собой S400E, S400D, S400R или S400K.
70. Выделенный гетеромультимер по п.65, в котором аминокислотная модификация в положении Т366 представляет собой Т366А, T366I, T366L, Т366М, T366Y, T366S, Т366С, T366V или T366W.
71. Выделенный гетеромультимер по п.65, в котором аминокислотная модификация в положении L368 представляет собой L368D, L368R, L368T, L368M, L368V, L368F, L368S и L368A.
72. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T394W.
73. Выделенный гетеромультимер по п.72, в котором полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию T366L или T366I.
74. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366I, K392M и T394W.
75. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366L, K392M и T394W.
76. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366L и T394W.
77. Выделенный гетеромультимер, содержащий гетеродимерную Fc область, которая включает полипептид первого СН3 домена, содержащий аминокислотные модификации F405A и Y407V, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотные модификации T366I и T394W.
78. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.1-3, 46, 54, 55, 59, 64, 72, 74, 75, 76 или 77, который представляет собой биспецифическое антитело.
79. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.46, 54, 55, 59, 64, 72, 74, 75, 76 или 77, который представляет собой мультиспецифическое антитело.
80. Композиция, содержащая выделенный гетеромультимер по любому из п.п.46, 54, 55, 59, 64, 72, 74, 75, 76 или 77 и фармацевтически приемлемый носитель.
81. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую выделенный гетеромультимер по любому из пп.46, 54, 55, 59, 64, 72, 74, 75, 76 или 77.
82. Выделенный гетеромультимер по любому из пп.46, 54, 55, 59, 64, 72, 74, 75, 76 или 77, который содержит по меньшей мере одно терапевтическое антитело.
83. Выделенный гетеромультимер по п.1, который содержит по меньшей мере одно терапевтическое антитело, выбранное из группы, состоящей из абаговомаба, адалимумаба, алемтузумаба, аурограба, бапинеузумаба, базиликсимаба, белимумаба, бевацизумаба, бриакинумаба, канакинумаба, катумаксомаба, цертолизумаба пегол, цетуксимаба, даклизумаба, деносумаба, эфализумаба, галиксимаба, гемтузумаба озогамицина, голимумаба, ибритумомаба тиуксетана, инфликсимаба, ипилимумаба, лумиликсимаба, меполизумаба, мотавизумаба, муромонаба, микограба, натализумаба, нимотузумаба, окрелизумаба, офатумумаба, омализумаба, паливизумаба, панитумумаба, пертузумаба, ранибизумаба, реслизумаба, ритуксимаба, теплизумаба, тоцилизумаба/атализумаба, тозитумомаба, трастузумаба, ProxiniumTM, RencarexTM, устекинумаба и залутумумаба.
84. Способ лечения рака у пациента, больного раком, характеризующимся раковым антигеном, который включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества выделенного гетеромультимера по п.82.
85. Способ лечения иммунных расстройств у пациента, страдающего иммунным расстройством, характеризующимся иммунным антигеном, который включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества выделенного гетеромультимера по п.82.
86. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого СН3 домена содержит аминокислотные модификации F405 и Y407, а полипептид второго СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положении Т394.
87. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором один из полипептидов первого или второго СН3 домена содержит дополнительную аминокислотную модификацию в положении Q347 и полипептид другого СН3 домена содержит аминокислотную модификацию в положении K360.
88. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором по меньшей мере один полипептид СН3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в по меньшей мере в одном из положений N390 и S400.
89. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором один из полипептидов первого или второго СН3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении T350V.
90. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором вариантный СН2 домен имеет температуру плавления Tm около 74°С чистоту или выше и гетеромультимер имеет чистоту около 95% или выше.
91. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором полипептид первого СН3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении L351.
92. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором полипептид второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию по меньшей мере в одном изположений Т366 и K392.
93. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором один из полипептидов первого или второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении D399R или D399K и полипептид другого CH3 домена одну или более в положениях Т411Е, T411D, K409E, K409D, K392E и K392D.
94. Выделенный гетеромультимер по п.93, в котором один из полипептидов первого или второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении T350V.
95. Выделенный гетеромультимер по п.86, в котором полипептид первого CH3 домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из L351Y, F405A и Y407V, и полипептид второго CH3 домена домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из T366L, T366I, K392L, K392M и T394W.
96. Выделенный гетеромультимер по п.95, в котором один из полипептидов первого или второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении T350V.
97. Выделенный гетеромультимер по п.93, в котором полипептид первого CH3 домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из L351Y, F405A и Y407V, и полипептид второго CH3 домена домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из T366L, T366I, K392L, K392M и T394W.
98. Выделенный гетеромультимер по п.1, в котором полипептид первого CH3 домена содержит аминокислотные модификации в положениях D399 и Y407, и полипептид второго CH3 домена содержит аминокислотные модификации в положениях K409 и Т411.
99. Выделенный гетеромультимер по п.98, в котором один из полипептидов первого или второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении T350V.
100. Выделенный гетеромультимер по п.98, в котором полипептид первого CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении L351, и полипептид второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотные модификации в положениях Т366 и K392.
101. Выделенный гетеромультимер по п.98, в котором полипептид первого CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении S400, и полипептид второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении N390.
102. Выделенный гетеромультимер по п.98, в котором вариантный СН2 домен имеет температуру плавления Tm около 74°С чистоту или выше и гетеромультимер имеет чистоту около 95% или выше.
103. Выделенный гетеромультимер по п.98, в котором полипептид первого CH3 домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из L351Y, D399R, D399K, S400K, S400R, Y407A, Y407I и Y407V, и полипептид второго CH3 домена домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из T366V, T366I, T366L, Т366М, N390D, N390E, K392L, K392I, K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и Т411Е.
104. Выделенный гетеромультимер по п.100, в котором полипептид первого CH3 домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из L351Y, D399R, D399K, Y407A, Y407I и Y407V, и полипептид второго CH3 домена домена содержит одну или более аминокислотных модификаций выбранных из T366V, T366I, T366L, Т366М, K392L, K392I, K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и Т411Е.
105. Выделенный гетеромультимер по п.100, в котором один из полипептидов первого или второго CH3 домена дополнительно содержит аминокислотную модификацию в положении T350V.