Влияние мелатонина на морфофункциональные изменения сетчатки в условиях экспериментальной модели возрастной макулярной дегенерации

марки Grade 4 показали первичную иммобилизацию отломков у большинства животных. Повышенные механические и остеоинтеграционные свойства данного материала дают предпосылки для успешного использования данного материала в хирургической стоматологии и челюстно-ли-цевой хирургии.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Горбонос, И. А. Осложнения при остеосинтезе переломов нижней челюсти и их профилактика: автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук/ Горбонос Инна Александровна; Новосибирский государственный медицинский университет. - Новосибирск, 2007. - 23 с. - Место защиты: НГМУ. - Текст : непосредственный.

2. Кашапов, М. Р. Миниатюризация пластин из титана Grade 4 за счет формирования

УДК: 612.826.34:617.735-003

субмикрокристаллической структуры / М. Р. Кашапов, Н. А. Клевцова, В. И. Иштеряков, Т. Ф. Рогова, Г. В. Клевцов : Текст : непосредственный // Вопросы фундаментальной и прикладной физики : материалы Всероссийской научно-методической конференции, Оренбург, 30 января - 1 февраля 2013. - Оренбург : ОГУ, 2013. - С. 1076-1080.

3. Копецкий, И. С. / И. С. Копецкий, А. Г. Притыко, Н. В. Полунина, А. М. Насибуллин: Текст: непосредственный // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2010. - С. 31-34.

4. Матчин, А. А. Особенностирепаративного остео-генеза при закреплении отломков нижней челюсти минипластинами и минишурупами, изготовленными из наноструктурированного титана / А. А. Матчин, А. А. Стадников, Г. В. Клевцов, Е. В. Носов, Е. Д. Мерсон : Текст : непосредственный // Морфология. - 2016. - № 3. - С. 134-135.

А. А. СТАДНИКОВ1, Н. С. ХОДЖАЕВ2, А. Д. ЧУПРОВ3, С. М. КИМ3

ВЛИЯНИЕ МЕЛАТОНИНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЕТЧАТКИ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ВОЗРАСТНОЙ МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИИ

1 - ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет» Минздрава России

2 - ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С. Н. Федорова» Минздрава России, г. Москва, Россия

3 - Оренбургский филиал ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С. Н. Федорова» Минздрава России, г. Оренбург, Россия

A. A. STADNIKOV1, N. S. KHODZHAEV2, A. D. CHUPROV3, S. M. KIM3

THE EFFECT OF MELATONIN ON MORPHOFUNCTIONAL CHANGES IN THE RETINA IN THE CONTEXT OF EXPERIMENTAL MODEL OF AGE-RELATED MACULAR DEGENERATION

1 - FSBEI HE «Orenburg State Medical University» of the Ministry of Health of Russia

2 - FSAI "NMRC"Intersectoral Scientific and Technical Complex «Eye Microsurgery» named after acad. S.N. Fedorova "Ministry of Health of the Russian Federation

3 - Orenburg branch of FSAI "NMRC" Intersectoral Scientific and Technical Complex «Eye Microsurgery» named after acad. S. N. Fedorova "Ministry of Health of the Russian Federation

РЕЗЮМЕ

В статье представлены морфофунуциональ-ные структурные изменения сетчатки в условиях экспериментальной модели возрастной макулярной дегенерации (ВМД) под влиянием

мелатонина. Исследование проводилось на 21 половозрелом кролике-самце. Проводилось хирургическое вмешательство с формированием модели ВМД. Опытной группе перорально вводился суспензированный раствор препарата

«Melaxen» до 3 месяцев с последующим выведением из эксперимента на 30, 60, 90-е сутки. Проведено гистологическое и иммуноцитохимическое исследование сетчатки глаз опытных, контрольных и 3 интактных (без формирования модели ВМД) животных, в том числе с проведением двухэтап-ныхреакций по идентификации белка - маркеров апоптозар-53 и антиапоптотического белка bcl-2.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ВОЗРАСТНАЯ МАКУЛЯРНАЯ ДЕГЕНЕРАЦИЯ, ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ВМД, СЕТЧАТКА, МЕЛАТОНИН, АПОПТОЗ, ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ, ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ABSTRACT

The article presents morphofunctional structural changes in the retina in the context of AMD experimental model under the influence of melatonin. The study was conducted on 21 sexually mature male rabbits. Surgical intervention was performed with the formation of AMD model. The experimental group was orally administered with suspended solution of Melaxen for up to 3 months, with subsequent sacrifice on the 30, 60, 90th day of the experiment. Histological and immu-nocytochemical studies of the retina of experimental, control, and 3 intact (without the formation of AMD model) animals were performed, including two-stage protein identification reactions - apoptosis markers p-53 and anti-apoptotic protein bcl-2.

KEY WORDS: AGE-RELATED MACULAR DEGENERATION, AMD EXPERIMENTAL MODEL, RETINA, MELATONIN, APOPTOSIS, HISTOLOGICAL, IMMUNOCYTOCHEMICAL EXAMINATION.

ВВЕДЕНИЕ

Частота распространенности возрастной ма-кулярной дегенерации остается высокой [14]. Данное заболевание характеризуется локализацией дистрофических процессов в центральной зоне сетчатки глаза, двусторонним характером поражения и хроническим прогрессирующим течением. По мнению ряда исследователей, к 2020 году количество людей с признаками ВМД достигнет

200 миллионов человек [7, 15, 16]. На развитие ВМД влияют многие факторы: оксидативный стресс, ишемия, местная воспалительная реакция, апоптотическая гибель клеток, снижение транспортной проводимости мембраны Бруха [5, 12].

Имеются данные, что кроме апоптоза в развитии ВМД играют роль другие типы клеточной смерти, такие как пироптоз, некроптоз и аутофагия [6, 10, 19]. В последние годы внимание исследователей привлечено к потенциальным возможностям мелатонина профилактировать развитие и прогрессирование ВМД [17]. Мелато-нин может воздействовать на внутриклеточные процессы как минуя систему рецепторов и сигнальных молекул, так и путем взаимодействия с ядерными и мембранными рецепторами [3, 4, 9, 20].

Механизм антиоксидантного действия мела-тонина связан с его выраженной способностью нейтрализовать свободные радикалы, в том числе образующиеся при перекисном окислении липи-дов, а также с активизацией в его присутствии глутатионпероксидазы - мощного эндогенного фактора ферментативной защиты от радикального окисления, снижает апоптоз в клетках пигментного эпителия сетчатки [1, 2, 21, 11, 13]. Тем не менее механизмы воздействия мелатонина на процессы репаративных гистогенезов, особенно в аспектах офтальмохирургии, нуждаются в дальнейшем изучении.

ЦЕЛЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ явилась оценка мор-фофункциональных изменений сетчатки кроликов в условиях экспериментальной модели ВМД под влиянием мелатонина.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проводилось на 21 половозрелом кролике-самце (42 глаза) массой от 2800 до 3300 г породы Шиншилла. Все животные были разделены на 3 группы: 1-я (опытная) группа - 9 кроликов (18 глаз), 2-я (контрольная) группа - 9 кроликов (18 глаз), 3-я (интактная) группа - 3 кролика (6 глаз).

Животным 1-й и 2-й групп хирургическим путем была сформирована модель макуляр-ной дегенерации. Подопытным животным 1-й (опытной) и 2-й (контрольной) групп проводилось хирургическое вмешательство в стерильных условиях под операционным микроскопом

Opton (Германия). За 10-15 минут перед началом оперативного вмешательства выполнялись трехкратные инстилляции мидримакса. Операцию выполняли под местной анестезией (инстилляции в конъюнктивальную полость 0,4 % раствора инокаина) и наркозом. Животных вводили в наркоз растворами «Золетил 100» (Франция) в дозе 10 мг/кг и «Ксилазин» (Нидерланды) в дозе 5 мг/ кг внутримышечно. Через установленные порты калибром 25 G на 10 и 2 часах в 4 мм от лимба канюлей с силиконовым наконечником, отступя 1 диаметр диска зрительного нерва от диска зрительного нерва, проводили массаж сетчатки под визуальным контролем до разрушения (дисперсии) пигментного эпителия. Размер повреждения составлял 3 мм в соответствии с методикой Р. Р. Файзрахманова с соавт. «Способ моделирования возрастной макулярной дегенерации» (Патент РФ на изобретение № 2480844, 2011) [8].

Для предупреждения инфицирования послеоперационной раны после хирургического вмешательства всем кроликам субконъюнктивально вводили раствор гентамицина и дексаметазона в дозе 3 мг/кг и 0,2 мг/кг соответственно. В последующие 10 дней в конъюнктивальную полость закапывали раствор ципрофлоксацина 0,3 % и дексаметазон 0,1 % 4 раза в день.

В 1-й (опытной) группе на 1-е сутки после вмешательства было начато пероральное введение суспензированного раствора препарата «Melaxen» (Melaxen - код АТХ: N05CH01, действующее вещество: Мелатонин (Melatonin)), производитель: Unipharm, Inc. (США), в дозе 10 мл/кг ежедневно 1 раз в день с 21:00 до 22:00 в течение 3 месяцев.

Экспериментальные животные выводились из эксперимента через 30, 60, 90 сут. в следующем порядке: по 3 кролика из опытной и контрольной групп, 1 кролик из интактной группы.

Животные выводились из эксперимента методом воздушной эмболии после введения кролика в наркоз. Все манипуляции с животными проводили в соответствии с требованиями «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 1986) и «Правил проведения работ с использованием

экспериментальных животных» (согласно приказу Минздрава СССР № 742 от 13.11.1984 «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных»). Энуклеированные глазные яблоки фиксировали в забуференном 10 % формалине, выделенную центральную часть сетчатки готовили для морфологического исследования.

Парафиновые гистопрепараты окрашивали гематоксилином Майера и эозином, а также пикрофуксином по Ван Гизону. Изучение полученных тканей сетчатки осуществлялось на све-тооптическом уровне с последующим анализом и микрофотографированием при помощи цифровой фотокамеры Canon IXUS 800 IS (Япония).

Для гистологической оценки про- и антиапопто-тической характеристик клеток сетчатки проведено иммуноцитохимическое исследование сетчатки глаз экспериментальных животных с проведением двухэтапных реакций по идентификации белка -маркеров апоптоза р-53 и антиапоптотического белка bcl-2 при помощи реактивов: система детекции РИВИАЛ поливалентная безбиотиновая ДАБ, 60 мл (D&A, REVEAL - Biotin-Free Polyvalent DAB, 60 ml, RTU), производитель - Spring Bioscience Corporation (США); мышиные моноклональные антитела к bcl-2-bcl-2 Mouse Monoclonal Antibody -фл., конц. (мл) 0,1, производитель - Cell Marque Corporation (США); мышиные моноклональные антитела к р53-р53 Mouse Monoclonal Antibody -фл., конц. (мл) 0,1, производитель - Cell Marque Corporation (США).

Морфометрические показатели структурных элементов сетчатки глаза кроликов в условиях эксперимента (моделирование возрастной макулярной дегенерации) получены с использованием винтового окуляра-микрометра MOB 4У (об. 40, ок. 10) в условных полях зрения (окулярная вставка 0,25 мм2). Обработка полученных данных проводилась при помощи методов вариационной статистики с использованием статистического пакета Statis-tica 6.1.478 («Stat Soft Inc.», США). Хранение полученных результатов исследования и первичная обработка материала проводились в оригинальной базе данных «Excel» (Microsoft). Проверка соответствия полученных данных нормальному

закону распределения определялась при помощи критерия согласия Колмогорова. Гипотеза о принадлежности данных нормальному распределению подтверждена во всех случаях с вероятностью 95 %, что дает обоснование применять параметрические процедуры обработки статистических совокупностей ^-критерий Стьюдента).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспериментально-гистологические исследования позволили получить модель ВМД, которая укладывалась в морфологическую картину экссу-дативной формы хориоретинальной дистрофии и деструкции с преимущественным поражением хориокапиллярного слоя увеального тракта, стекловидной мембраны Бруха, всех слоев сетчатки вплоть до ее отслойки и ретиношизиса (рис. 1).

На 60-е и особенно на 90-е сутки эксперимента нарастали пигментная дистрофия и деструкция палочек и колбочек (рис. 2).

Имели место набухание, десквамация и смещение во внутренние слои сетчатки клеток пигментного эпителия, исчезновение ядерных и плексиформных слоев. Отмечались гиалиноз и фиброз ретинальных и хориоидальных сосудов (особенно вокруг места выхода зрительного нерва). В своей совокупности данные морфологические изменения свидетельствовали о существенной хориоретинальной дистрофии неоваскулярной формы.

В поздние сроки наблюдений (60-е, 90-е сут.) мы обнаружили друзы, формирование которых было связано с пигментным эпителием. Друзы представляли собой отложения аморфного материала между мембраной Бруха и пигментным эпителием. Этот материал содержал несульфа-тированные и сульфатированные гликозами-ногликаны и липопротеиды. В данных участках сетчатки дегенерирующие пигментные клетки сливались с этим материалом. Здесь же обнаруживались кровоизлияния в хориокапиллярном слое увеального тракта, тромбозы сосудов ми-кроциркуляторного русла, а в последующем (90-е сут.) очаги рубцевания сетчатки.

Мы обратили особое внимание на состояние нейронов сетчатки (фоторецепторов, нейронов второго уровня и ганглионарных клеток). Это было продиктовано тем обстоятельством, что,

Рисунок 1 - Фрагмент макулярной области сетчатки глаза кролика через 2 месяца эксперимента (модель ВМД, без применениямелатонина). Фиксация: 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув. об. 10; ок. 40; а - формирующиеся друзы

Рисунок 2 - Гистологическое исследование макулярной области сетчатки глаза кролика через 60 суток эксперимента (модель ВМД без применения мелатонина). Фиксация: 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув. об. 10; ок. 60. Стрелкой указан слой палочек и колбочек с поврежденными дендритами фоторецепторных клеток

по данным научной литературы (Н. Stimada е! а1., 2003), дегенеративные и некротические процесы в сетчатке глаза неминуемо приводят к разрушению мелатониновых рецепторов, что и усугубляет гибель нейроцитов [18].

По нашим данным (табл.), при моделировании ВМД значительно снижается протяженность ганглионарного и внутреннего сетчатого слоев. Это происходит на фоне резкого понижения

Таблица - Морфометрические показатели сетчатки глаза кроликов в условиях эксперимента

Показатели Контроль (интактные кролики), n = 3 Опыт

Без лечения, n = 9 Введение мелатонина, n = 9

30-е сут. 60-е сут. 30-е сут. 60-е сут.

Количество фоторецепторных клеток (в условных полях зрения), ед. 194,7 ± 12,1 99,6 ± 6,2* 83,7 ± 4,4* 118,5 ± 6,6 93,4 ± 3,7*

Толщина слоя ганглионарных клеток, мкм 80,9 ± 4,7 41,4 ± 2,2 33,1 ± 2,7* 55,1 ± 4,4 49,1 ± 2,1*

Толщина слоя нервных волокон, мкм 210,6 ± 6,5 130,1 ± 5,5* 91,4 ± 6,7* 161,4 ± 2,9 116,7 ± 4,1*

р53 позитивные ганглионарные клетки, %о — 0,14 ± 0,1 2,9 ± 0,2 0,04 ± 0,01 —

Ьс1-2 позитивные ганглионарные клетки, % — — — 1,6 ± 0,4 —

р53 позитивные мюллеровы клетки, % — 0,29 ± 0,2 3,1 ± 0,1* — —

Ьс1-2 позитивные мюллеровы клетки, % — — — 2,9 ± 0,3 2,6 ± 0,2

Примечание - * - р < 0,05 при сравнении опытных групп с контрольной.

численности фоторецепторных клеток, особенно через 60 суток опыта. В опытной группе на фоне приема мелатонина количество фоторецепторных клеток сохранилось больше по сравнению с контрольной, что можно предположить реализацию свойства резистентной адаптации гормона мелатонина на нейроны сетчатки.

В условиях перорального введения мелатонина происходит постепенное (через 1-3 мес.) восстановление формы пигментных клеток до кубической или призматической с накоплением гранул меланина в их цитоплазме. Тем не менее клетки пигментного слоя сетчатки были дистрофически изменены (рис. 3).

Локальная сохранность мембраны Бруха и уменьшение в ней дефектов, равно как и понижение проапоптотической доминанты у клеток Мюллера (глиоцитов) можно расценить как позитивное влияние экзогенно вводимого мелато-нина (рис. 4).

Это в свою очередь указывает на важную роль мелатонина в реализации и оптимизации фаз воспаления в субретинальном пространстве. Полученные нами сведения можно рассматривать в патогенетическом аспекте, включая уточнение механизмов дисфункции хориокапиллярного слоя и неоваскуляризации при травматическом

повреждении (М. М. Бикбов, Р. Р. Файзрахманов, А. Л. Ярмухаметова, 2013).

Следует особо подчеркнуть, что как в ранние, так и в поздние сроки наблюдений мы не обнаружили достоверных признаков апоптоза у фоторецепторов. У контрольных животных не регистрировалась экспрессия синтеза про- и ан-тиапоптотических протеинов. Незначительное число р53 позитивных ганглионарных нейронов и мюллеровых глиоцитов мы идентифицировали с небольшим их увеличением к 90-м суткам. Вс1-2 позитивного окрашивания у подобных клеток не было.

Применение с лечебной целью мелатонина приводило к уменьшению пигментной дистрофии и кровоизлияний, деструкции и понижению апоптозной доминанты и плексиформных слоев сетчатой оболочки. При этом уменьшались признаки деструкции пигментного эпителия и фоторецепторных клеток, выраженность повреждений аксонов ганглионарных нейронов. Наблюдалось понижение апоптотической доминанты у ганглионарных и мюллеровых клеток за счет экспрессии синтеза антиапоптотического белка Ьс1-2.

Тем не менее в отдаленные сроки наблюдений (90-е сут.) имели место гиалиноз и фиброз рети-нальных и хориоидальных сосудов.

Рисунок 3 - Фрагмент макулярной области сетчатки глаза кролика через 60 суток эксперимента (модель ВМД, применение мелатонина).

Фиксация: 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин.

Ув. об. 10; ок. 60.

Стрелкой показаны пигментные клетки

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Экспериментально-гистологические исследования позволили получить модель ВМД, которая укладывалась в морфологическую картину экссу-дативной формы хориоретинальной дистрофии и деструкции.

Как в ранние, так и в поздние сроки наблюдений не было обнаружено достоверных признаков апоптоза у фоторецепторов, что возможно предположить отсутствие запрограммированного апоптоза в этих нейронах.

Незначительное число проапоптотического белка р53 в ганглионарных нейронах и мюллеро-вых глиоцитах идентифицировано с небольшим их увеличением к 90-м суткам, тогда как позитивного окрашивания антиапоптотического белка Ье1-2 у подобных клеток не было?

Применение с лечебной целью мелатонина приводило к уменьшению признаков экссудатив-ной формы ВМД за счет уменьшения пигментной дистрофии и кровоизлияний, деструкции

Рисунок 4 - Гистологическое исследование макулярной области сетчатки глаза кролика через 60 суток эксперимента.

Фиксация: 10 % раствор нейтрального формалина.

Окраска: иммунная гистохимия, маркер: моноклональные антитела Ьс1-2, ув. об. 10; ок. 60.

Стрелкой показана мембрана Бруха и Ьс1-2 позитивные глиоциты

и понижению апоптозной доминанты и плек-сиформных слоев сетчатой оболочки. При этом уменьшались признаки деструкции пигментного эпителия, глиальных клеток и мембраны Бруха, выраженность повреждений аксонов ганглионарных нейронов. Вышеперечисленные положительные изменения возможно реализованы за счет свойства резистентной адаптации мела-тонина на структуры сетчатки, что может иметь существенное значение как основа адаптации к старению сетчатки.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Анисимов, В. Н. Мелатонин: роль в организме, применение в клинике / В. Н. Анисимов. -Санкт-Петербург: Система, 2007. - 40 с. - Текст: непосредственный.

2. Арушанян, Э. Б. Противовоспалительные возможности мелатонина / Э. Б. Арушанян, С. С. Наумов: Текст : непосредственный // Клиническая медицина. - 2013. - № 7. - С. 18-22.

3. Арушанян, Э. Б. Значение мелатонина для физиологии и патологии глаза / Э. Б. Арушанян, К. Б. Ованесов: Текст: непосредственный // Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2016. - Т. 11, № 1. - С. 126-133.

4. Беспятых, А. Ю. Мелатонин: теория и практика /

A. Ю. Беспятых, В. Я. Бродский, О. В. Бурлакова,

B. А. Голиченков, Л. А. Вознесенская, Д. Б. Колесников, А. Ю. Молчанов, С. И. Рапопорт. - Москва : Мед-практика-М, 2009. -100 с. - ISBN 978-5-98803-1635. - Текст : непосредственный.

5. Бикбов, М. М. Возрастная макулярная дегенерация / М. М. Бикбов, Р. Р. Файзрахманов,

A. Л. Ярмухаметова. - Москва: Апрель, 2013. -196с. -ISBN978-5-905212-24-6. - Текст: непосредственный

6. Ермилов, В. В. Корреляция метаболических нарушений в структурах глаза со старением, апопто-зом и зависимыми от возраста заболеваниями /

B. В. Ермилов, О. В. Махонина : Текст : непосредственный // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2011. - Т. 37, № 1. - С. 67-70.

7. Сережникова, Н. Б. Возрастные адаптивные перестройки митохондрийретинального пигментного эпителия при повседневном синем светодиодном освещении / Н. Б. Сережникова, Л. С. Погодина, Т. В. Липина, Н. Н. Трофимова, Т. С. Гурьева, П. П. Зак : Текст : непосредственный // ДАН. -2017. - Т. 475, № 2. - С. 231-233.

8. Патент № 2480844 Российская Федерация. Способ моделирования возрастной макулярной дегенерации : 2011 / Бикбов М. М., Файзрахманов Р. Р. [и др.]. - Текст : непосредственный.

9. Alarma-Estrany, P. Melatonin receptors in the eye: location, second messengers and role in ocular physiology : Text: immediate /P. Alarma-Estrany, J. Pintor// Pharmacology&Therapeutics. - 2007. - № 3. - Vol 113. - P. 507-522.

10. Ardeljan, C. P. Inflammation and Cell Death in Age-Related Macular Degeneration: An Immunopathological and Ultrastructural Model/ C. P. Ardeljan, D. Ardeljan, M. Abu-Asab, Chan Chi-Chao : Text: immediate // Journal of Clinical Medicine. - 2014. - № 3. - Vol. 4. -P. 1542-1560.

11. Blasiak, J. Melatonin in Retinal Physiology and Pathology: The Case of Age-Related Macular Degeneration / J. Blasiak, R. J. Reiter, K. Kaarniranta : Text: immediate // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2016. - P. 1-12.

12. Coleman, H. R. Age-related macular degeneration / H. R. Coleman, C. C. Chan, F. L. III Ferris, E. Y. Chew:

Text: immediate // The Lancet. - 2000. - № 372. -Vol. 9652. - P. 1835-1845.

13. Chang, Chih-Chao. Protective Effect of Melatonin against Oxidative Stress-Induced Apoptosis and Enhanced Autophagy in Human Retinal Pigment Epithelium Cells / Chang Chih-Chao, Huang Tien-Yi, Chen Hsin-Yuan, Huang Tsui-Chin, Lin Li-Chun, Chang Yen-Jui, Hsia Shih-Min: Text: immediate // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2018. - P. 1-12.

14. Flaxman, S. R. Global causes of blindness and distance vision impairment 1990-2020: a systematic review and meta-analysis / S. R. Flaxman, R. R. Bourne, S. Resnikoff [et al.]: Text: immediate // Lancet Global Health. - 2017. - № 12. - Vol. 5. - Vol. 1221-1234.

15. Gheorghe, A. Age-related macular degeneration / A. Gheorghe, L. Mahdi, O. Musat: Text: immediate // Romanian Journal of Ophthalmology. - 2015. - № 2. -Vol. 59. - P. 74-77.

16. Iroku-Malize, T. Eye Conditions in Older Adults: Age-Related Macular Degeneration / T. Iroku-Malize, S. Kirsch : Text: immediate // FP Essent. - 2016. -№ 445. - P. 24-28.

17. Stefanova, N. A. Potential of melatonin for prevention of age-related macular degeneration: experimental study /N. A. Stefanova, A. A. Zhdankina, A. Z. Fursova [et al]: Text: immediate//Advances in Gerontology. -2013. - № 1. - Vol. 26. - P. 122-129.

18. Stimada, H. Surgical excision of type 2 choroidal neovascularization in age-related macular degeneration / H. Stimada, K. Fujita, Y. Matsumoto [et al.] : Text: immediate // Japanese Journal of Ophthalmology. -2005. - № 4. - Vol. 49. - P. 321-323.

19. Telegina, D. V. Molecular mechanisms of cell death in the retina during the development of age-related macular degeneration / D. V. Telegina, O. S. Kozhevnikova, N. G. Kolosova: Text: immediate // Advances in Gerontology. - 2016. - № 3. - Vol. 29. - P. 424-432.

20. Wiechmann, A. F. Circadian rhythms in the eye: the physiological significance of melatonin receptors in ocular tissues / A. F. Wiechmann, J. A. Summers: Text: immediate // Progress in Retinal and Eye Research. -2008. - № 2. - Vol. 27. - P. 137-160.

21. Yi, C. Effects of melatonin in age-related macular degeneration / C. Yi, X. Pan, H. Yan [et al.] : Text: immediate // Annals of the New York Academy of Sciences. - 2005. - № 1057. - P. 384-392.