СЛИТЫЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ GITRL И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенная одноцепочечная полипептидная субъединица, содержащая Fc-домен IgG; функциональный мультимеризационный домен и рецепторсвязывающий домен лиганда рецептора TNF, индуцируемого глюкокортикоидами (GITRL), где полипептидная субъединица может самособираться в тримерный или гексамерный белок.
2. Полипептидная субъединица по п. 1, где мультимеризационный домен представляет собой тримеризационный домен.
3. Полипептидная субъединица по п. 1 или 2, содержащая, в направлении от амино-конца к карбокси-концу, Fc-домен IgG, за которым расположен мультимеризационный или тримеризационный домен, за которым расположен рецепторсвязывающий домен GITRL.
4. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-3, где карбокси-конец Fc-домена IgG слит с амино-концом мультимеризационного или тримеризационного домена посредством первой линкерной области.
5. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-4, где карбокси-конец мультимеризационного или тримеризационного домена слит с амино-концом рецепторсвязывающего домена GITRL посредством второй линкерной области.
6. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-4, где карбокси-конец Fc-домена IgG непосредственно слит с амино-концом мультимеризационного или тримеризационного домена.
7. Полипептидная субъединица по п. 5 или 6, где Fc-домен IgG содержит шарнирную область IgG на своем амино-конце.
8. Полипептидная субъединица по п. 5 или 6, где шарнирная область IgG содержит мутацию, которая обеспечивает образование полных дисульфидных связей между тяжелыми цепями.
9. Полипептидная субъединица по п. 7 или 8, где шарнирная область IgG включает в себя шарнирную область IgG1, шарнирную область IgG4 или их варианты.
10. Полипептидная субъединица по п. 9, где шарнирная область IgG4 имеет мутацию по типу замены серина на пролин в положении 228 (S228P) согласно EU-нумерации (IgG4P).
11. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-10, где Fc-домен IgG представляет собой Fc-домен IgG человека.
12. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-4 или пп. 6-10, где карбокси-конец мультимеризационного или тримеризационного домена непосредственно слит с амино-концом рецепторсвязывающего домена GITRL.
4
4
4
13. Полипептидная субъединица по любому из пп. 5-12, где первая линкерная область, вторая линкерная область или первая и вторая линкерные области, если они присутствуют, независимо выбраны из группы, состоящей из линкерной области, содержащей мотив (Gly)n, мотив (GlySer)n (SEQ ID NO: 19), мотив Ser(GlySer)n (SEQ ID NO: 22), GGGGSGGGGSGGGGSAL (SEQ ID NO: 23), GGGGSGGGGSGGGGSA (SEQ ID NO: 24) и их комбинации, где n представляет собой положительное целое число, выбранное из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10.
14. Полипептидная субъединица по п. 13, где первая и вторая линкерные области независимо выбраны из группы, состоящей из GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 25) и GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 26).
4
15. Полипептидная субъединица по п. 13 или 14, где первая линкерная область представляет собой GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 20), а вторая линкерная область представляет собой мотив (Gly).
16. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-15, где Fc-домен IgG включает в себя Fc-домен IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IG4P или их варианты.
17. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-16, где Fc-домен IgG содержит одну или несколько замен аминокислотных остатков, выбранных из группы, состоящей из 252Y, 254T, 256E и их комбинаций, где остатки пронумерованы согласно EU-нумерации.
18. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-17, где Fc-домен IgG содержит CH2-область.
19. Полипептидная субъединица по п. 18, где Fc-домен IgG дополнительно содержит CH3-область.
20. Полипептидная субъединица по п. 19, где Fc-домен IgG содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21.
21. Полипептидная субъединица по п. 19, где Fc-домен IgG содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 21.
22. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-21, где тримеризационный домен включает в себя биспиральный альфа-спиральный домен, домен "лейциновая застежка" или их комбинацию.
23. Полипептидная субъединица по п. 22, где тримеризационный домен получен из матрилина-1, коронина-1a, протеинкиназы миотонической дистрофии (DMPK), лангерина или их комбинации.
24. Полипептидная субъединица по п. 23, где тримеризационный домен получен из матрилина-1 или коронина-1a.
25. Полипептидная субъединица по п. 24, где тримеризационный домен получен из коронина-1a.
26. Полипептидная субъединица по п. 25, где тримеризационный домен включает в себя тримеризационный домен коронина-1a, характеризующийся по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11.
27. Полипептидная субъединица по п. 26, где тримеризационный домен коронина-1a содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 11.
28. Полипептидная субъединица по п. 26, где тримеризационный домен включает в себя тримеризационный домен коронина-1a с SEQ ID NO: 10.
29. Полипептидная субъединица по п. 26, где тримеризационный домен коронина-1a содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или любую их комбинацию или вариант.
30. Полипептидная субъединица по п. 24, где тримеризационный домен включает в себя тримеризационный домен матрилина-1, характеризующийся по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 28.
31. Полипептидная субъединица по п. 23, где тримеризационный домен включает в себя тримеризационный домен DMPK, характеризующийся по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 30.
32. Полипептидная субъединица по п. 23, где тримеризационный домен включает в себя тримеризационный домен лангерина, характеризующийся по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 32.
33. Полипептидная субъединица по п. 23, где тримеризационный домен содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33.
34. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-33, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 34.
35. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-33, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 37, где остаток 161 не является аспарагиловым остатком.
36. Полипептидная субъединица по п. 35, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35.
37. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-33, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 35, где остаток 161 является аспартиловым остатком.
38. Полипептидная субъединица по п. 37, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 36.
39. Полипептидная субъединица по п. 38, где рецепторсвязывающий домен GITRL содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 37.
40. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-39, где гексамерный белок, собранный из шести полипептидных субъединиц, может специфично связываться с GITR человека.
41. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-40, где белок является негликозилированным.
42. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-41, содержащая аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6.
43. Полипептидная субъединица по п. 42, содержащая аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 6.
44. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-43, где субъединица обладает агонистической активностью.
45. Полипептидная субъединица по любому из пп. 1-44, дополнительно содержащая связанное гетерологичное средство.
46. Полипептидная субъединица по п. 45, где гетерологичное средство представляет собой гетерологичный полипептид и является слитым с полипептидной субъединицей посредством пептидной связи.
47. Полипептидная субъединица по п. 46, где гетерологичный полипептид слит с N-концом Fc-домена IgG, слит с C-концом рецепторсвязывающего домена GITRL, слит с C-концом Fc-домена IgG и с N-концом тримеризационного домена или слит с C-концом тримеризационного домена и с N-концом рецепторсвязывающего домена GITRL.
48. Полипептидная субъединица по п. 45, где гетерологичное средство химически конъюгировано с полипептидной субъединицей.
49. Полипептидная субъединица по любому из пп. 45-48, где гетерологичное средство включает в себя цитотоксическую молекулу, стабилизирующее средство, модификатор иммунного ответа или детектируемое средство.
50. Тримерный белок, содержащий три полипептидные субъединицы по любому из пп. 1-49.
51. Гексамерный белок, содержащий шесть полипептидных субъединиц по любому из пп. 1-49.
+
+
+
+
52. Гексамерный белок по п. 51, который может специфично связываться с рецептором TNF, индуцируемым глюкокортикоидами (GITR), экспрессируемым на CD4 или CD8 Т-клетках, B-клетках или NK-клетках, где CD4 или CD8 Т-клетки или B-клетки необязательно являются "обученными" антигеном, или NK-клетки необязательно являются активированными, полученных от человека или отличного от человека примата, необязательно макака-крабоеда, макака-резуса, или любой их комбинации.
+
+
53. Гексамерный белок по п. 52, который может специфично связываться с GITR, экспрессируемым на первичных CD4 или CD8 Т-клетках, полученных от человека или отличного от человека примата, необязательно макака-крабоеда, макака-резуса, или любой их комбинации.
+
+
54. Гексамерный белок по любому из пп. 52 или 53, где CD4 или CD8 Т-клетки являются "обученными" антигеном.
55. Гексамерный белок по п. 51 или 54, где аффинность связывания с GITR человека составляет от приблизительно 54 нМ до приблизительно 111 нМ согласно измерению с помощью анализа кинетического исключения.
56. Гексамерный белок по п. 55, где аффинность связывания составляет приблизительно 82 нМ согласно измерению в анализе кинетического исключения (KinExA).
57. Гексамерный белок по любому из пп. 51-56, который может индуцировать дозозависимую пролиферацию GITR-положительных иммунных клеток и дозозависимое высвобождение цитокинов из них.
58. Гексамерный белок по п. 57, где GITR-положительные иммунные клетки представляют собой Т-клетки в анализе с применением планшетов.
+
+
59. Гексамерный белок по любому из пп. 52-58, где клетки представляют собой CD4, CD8, NK- или B-клетки.
+
+
60. Гексамерный белок по любому из пп. 57-59, где GITR-положительные иммунные клетки, Т-клетки, CD4, CD8 или B-клетки являются "обученными" антигеном, и/или NK-клетки являются активированными.
50
61. Гексамерный белок по п. 60, который может стимулировать пролиферацию первичных "обученных" антигеном T-клеток человека при EC, составляющей от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,7 нМ согласно измерению по включению тимидина.
50
62. Гексамерный белок по п. 61, где EC составляет приблизительно 0,5 нМ.
63. Гексамерный белок по п. 57, где цитокин представляет собой IFNγ, TNFα, IL-5, IL-10, IL-2, IL-4, IL-13, IL-8, IL-12 p70, IL-1β или любую их комбинацию.
64. Гексамерный белок по любому из пп. 51-63, который может активировать нисходящие сигнальные пути в клетках, экспрессирующих GITR, где нисходящий сигнальный путь необязательно представляет собой сигнальный путь NFκB или сигнальный путь MAPK.
65. Гексамерный белок по п. 64, где клетки, экспрессирующие GITR, представляют собой Т-клетки.
66. Гексамерный белок по п. 64, где Т-клетки, экспрессирующие GITR, представляют собой клетки Jurkat с репортерной конструкцией NFκB-люцифераза, экспрессирующие GITR, которые вырабатывают люциферазу в ответ на стимуляцию сигнального пути NFκB.
67. Гексамерный белок по любому из пп. 51-66, где посредством введения эффективной дозы субъекту, нуждающемуся в лечении рака, можно ингибировать рост опухоли у субъекта.
68. Гексамерный белок по п. 67, где ингибирование роста опухоли достигается в присутствии GITR-положительных иммунных клеток, необязательно T-клеток или NK-клеток.
69. Гексамерный белок по п. 67 или 68, где рост опухоли ингибируется по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 100% по сравнению с введением изотипически сходного контроля.
+
+
+
+
70. Гексамерный белок по любому из пп. 51-69, где полипептидная субъединица содержит Fc-домен IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgG4P и может индуцировать активацию цитокинов и пролиферацию CD4 или CD8 Т-клеток, экспрессирующих GITR, посредством связывания с GITR, но практически не запускает комплементзависимую или антителозависимую цитотоксичность в отношении CD4 или CD8 Т-клеток.
71. Гексамерный белок по любому из пп. 51-69, где полипептидная субъединица содержит Fc-домен IgG1 и запускает Fc-рецепторзависимую цитотоксичность в отношении клеток, экспрессирующих GITR на высоких уровнях.
72. Гексамерный белок по любому из пп. 51-69, где полипептидная субъединица содержит Fc-домен IgG2,IgG3, IgG4 или IG4P и может индуцировать пролиферацию клеток, экспрессирующих GITR, посредством связывания с GITR.
73. Гексамерный белок по п. 71, где Fc-рецепторзависимая цитотоксичность представляет собой антителозависимую клеточную цитотоксичность или антителозависимый фагоцитоз.
74. Гексамерный белок по п. 71, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой опухолевые клетки.
+
+
+
-
75. Гексамерный белок по п. 71, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой CD4 FOXP3 Т-клетки или "обученные" антигеном CD4 FOXP3 Т-клетки.
+
+
76. Гексамерный белок по п. 71, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток по сравнению с контролем.
+
+
77. Гексамерный белок по п. 71, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток в опухоли по сравнению с контролем.
78. Композиция, содержащая гексамерный белок по любому из пп. 51-77 и носитель.
79. Полинуклеотид, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептидную субъединицу по любому из пп. 1-49 или гексамерный белок по любому из пп. 51-78.
80. Полинуклеотид по п. 79, где полинуклеотид дополнительно содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальный пептид, функционально связанный с полипептидной субъединицей.
81. Полинуклеотид по п. 80, где нуклеиновая кислота, кодирующая сигнальный пептид, функционально связана с нуклеиновой кислотой, кодирующей амино-конец Fc-домена IgG полипептидной субъединицы.
82. Полинуклеотид по п. 79, содержащий SEQ ID NO: 5.
83. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 79-82.
84. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 79-82 или вектор по п. 83.
85. Способ получения полипептидной субъединицы по любому из пп. 1-49 или гексамерного белка по любому из пп. 51-77, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 84 в условиях, при которых экспрессируются полипептидная субъединица или гексамерный белок, кодируемые полинуклеотидом или вектором, и извлечение полипептидной субъединицы или гексамерного белка.
86. Способ содействия выживанию или пролиферации "обученных" антигеном Т-клеток и/или NK-клеток, включающий приведение "обученных" антигеном Т-клеток и/или NK-клеток в контакт с гексамерным белком по любому из пп. 51-77 или композицией по п. 78, где гексамерный белок может специфично связываться с GITR на поверхности Т-клеток и/или NK-клеток.
87. Способ индукции высвобождения цитокинов из активированных иммунных клеток, экспрессирующих GITR, включающий приведение этих клеток в контакт с гексамерным белком по любому из пп. 51-77 или композицией по п. 78, где гексамерный белок может специфично связываться с GITR на поверхности этих клеток.
88. Способ по п. 87, где цитокин представляет собой IFNγ, TNFα, IL-10, GM-CSF или любую их комбинацию.
+
+
89. Способ по любому из пп. 87 или 88, где иммунные клетки, экспрессирующие GITR, представляют собой "обученные" антигеном CD4 Т-клетки, "обученные" антигеном CD8 Т-клетки, активированные NK-клетки или их комбинацию.
+
+
+
+
+
+
+
+
90. Способ по любому из пп. 86-89, где активированные NK-клетки, "обученные" антигеном CD4 или "обученные" антигеном CD8 Т-клетки представляют собой NK-клетки, CD4 или CD8 Т-клетки человека, NK-клетки, CD4 или CD8 Т-клетки макака-крабоеда, NK-клетки, CD4 или CD8 Т-клетки макака-резуса или их комбинацию.
91. Способ содействия активации Т-клеток или NK-клеток, включающий приведение Т-клеток или NK-клеток в контакт с гексамерным белком по любому из пп. 51-77 или композицией по п. 78, где гексамерный белок может специфично связываться с GITR на поверхности Т-клеток или NK-клеток.
92. Способ по п. 91, дополнительно включающий перекрестное связывание гексамерного белка посредством взаимодействия Fc-домена с клеткой, экспрессирующей FcγR.
+
+
93. Способ по п. 92, где клетка, экспрессирующая FcγR, представляет собой B-клетку, моноцит, макрофаг, миелоидную или плазмацитоидную дендритную клетку, фолликулярную дендритную клетку, клетку Лангерганса, эндотелиальную клетку, NK-клетку, нейтрофил, эозинофил, тромбоцит, тучную клетку, CD45 клетку из первичной опухоли человека или дренирующего или не дренирующего опухоль лимфатического узла, CD45 клетку из других вторичных или третичных лимфоидных структур или их комбинацию.
94. Способ по любому из пп. 91-93, где активацию NK-клеток или T-клеток могут измерять посредством стимуляции пути передачи сигнала с помощью NFκB или MAPK.
+
+
95. Способ по любому из пп. 91-94, где NK- или T-клетки представляют собой активированные NK-клетки, "обученные" антигеном CD4 Т-клетки, "обученные" антигеном CD8 Т-клетки или их комбинацию.
+
+
+
+
96. Способ по п. 95, где NK-клетки, CD4 или CD8+ Т-клетки представляют собой первичные NK-клетки, CD4 или CD8+ Т-клетки человека, NK-клетки, CD4 или CD8+ Т-клетки макака-крабоеда, NK-клетки, CD4 или CD8+ Т-клетки макака-резуса или их комбинацию.
97. Способ по любому из пп. 86-96, где приведение в контакт включает введение субъекту эффективного количества гексамерного белка или композиции, содержащей гексамерный белок.
98. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества гексамерного белка по любому из пп. 51-77 или композиции по п. 78.
99. Способ по п. 98, где субъект является субъектом-человеком или субъектом из семейства псовых.
100. Способ по п. 98, где рак представляет собой солидную опухоль.
101. Способ по п. 100, где солидная опухоль ассоциирована с раком, выбранным из группы, состоящей из колоректального рака, рака молочной железы, гепатоцеллюлярного рака, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, мезотелиомы, рака головы и шеи, рака желудка, рака поджелудочной железы, меланомы, увеальной меланомы, рака почки, рака яичника, рака шейки матки, глиобластомы, рака яичка, рака щитовидной железы, рака предстательной железы и рака пищевода.
102. Способ по п. 98, где рак представляет собой гемобластоз.
103. Способ по п. 102, где гемобластоз выбран из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, множественной миеломы, острого лимфобластного лейкоза, острого миелогенного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза и хронического миелогенного лейкоза.
104. Способ по любому из пп. 98-103, где введение гексамерного белка или композиции может ингибировать рост опухоли, может содействовать уменьшению размера опухоли или как то, так и другое.
105. Способ по любому из пп. 98-104, где ингибирования роста опухоли достигают в присутствии NK-клеток или T-клеток.
106. Способ по п. 104 или 105, где рост опухоли ингибируют по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или на 100% по сравнению с введением изотипически сходного контроля, у которого отсутствует рецепторсвязывающий домен GITRL.
107. Способ по любому из пп. 98-106, где гексамерный белок содержит Fc-домен IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgG4P и может индуцировать пролиферацию "обученных" антигеном иммунных клеток, экспрессирующих GITR, посредством связывания с GITR, но практически не запускает комплементзависимую или антителозависимую цитотоксичность в отношении активированных иммунных клеток.
+
+
108. Способ по п. 107, где иммунные клетки, экспрессирующие GITR, представляют собой CD4 Т-клетки, NK-клетки или CD8 Т-клетки.
109. Способ по любому из пп. 98-106, где гексамерный белок содержит Fc-домен IgG1 и запускает опосредованную NK-клетками и/или макрофагами антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) или антителозависимый клеточный фагоцитоз в отношении клеток, экспрессирующих GITR на высоких уровнях.
110. Способ по п. 109, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой опухолевые клетки.
+
+
111. Способ по п. 109, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой CD4 FOXP3 T-клетки.
+
+
112. Способ по п. 111, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток по сравнению с контролем.
+
+
113. Способ по п. 111, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток в опухоли по сравнению с контролем.
114. Способ усиления иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества гексамерного белка по любому из пп. 51-77 или композиции по п. 78.
115. Способ по п. 114, где субъектом является субъект-человек или субъект из семейства псовых.
116. Способ по п. 115, где субъект, нуждающийся в этом, имеет рак.
117. Способ по п. 116, где рак представляет собой солидную опухоль.
118. Способ по любому из пп. 114-117, где субъект имеет колоректальный рак, рак молочной железы, гепатоцеллюлярный рак, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), мелкоклеточный рак легкого, мезотелиому, рак головы и шеи, рак желудка, рак поджелудочной железы, меланому, увеальную меланому, рак почки, рак яичника, рак шейки матки, глиобластому, рак яичка, рак щитовидной железы, рак предстательной железы, рак пищевода, рак мочевого пузыря, плоскоклеточную карциному головы и шеи (SCCHN), колоректальный рак (CRC), гемобластоз или их комбинацию.
119. Способ по п. 118, где рак представляет собой гемобластоз.
120. Способ по п. 119, где гемобластоз выбран из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, множественной миеломы, острого лимфобластного лейкоза, острого миелогенного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза и хронического миелогенного лейкоза.
121. Способ по любому из пп. 114-120, где введение гексамерного белка или композиции может ингибировать рост опухоли, может содействовать уменьшению размера опухоли или как то, так и другое.
122. Способ по любому из пп. 114-121, где ингибирования роста опухоли достигают в присутствии NK-клеток или T-клеток.
123. Способ по любому из пп. 121 или 122, где рост опухоли ингибируют по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или на 100% по сравнению с введением изотипически сходного контроля, у которого отсутствует рецепторсвязывающий домен GITRL.
124. Способ по любому из пп. 114-123, где гексамерный белок содержит Fc-домен IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgG4P и может индуцировать пролиферацию активированных иммунных клеток, экспрессирующих GITR, посредством связывания с GITR, но практически не запускает комплементзависимую или антителозависимую цитотоксичность в отношении активированных иммунных клеток.
+
+
125. Способ по п. 124, где иммунные клетки, экспрессирующие GITR, представляют собой CD4 Т-клетки, NK-клетки или CD8 Т-клетки.
126. Способ по любому из пп. 114-123, где гексамерный белок содержит Fc-домен IgG1 и запускает опосредованную NK-клетками и/или макрофагами антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) или антителозависимый клеточный фагоцитоз в отношении клеток, экспрессирующих GITR на высоких уровнях.
127. Способ по п. 126, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой опухолевые клетки.
+
+
128. Способ по п. 126, где клетки, экспрессирующие GITR на высоких уровнях, представляют собой CD4 FOXP3 T-клетки.
+
+
129. Способ по п. 126, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток по сравнению с контролем.
+
+
130. Способ по п. 126, где гексамерный белок обеспечивает уменьшение частоты встречаемости CD4 FOXP3 регуляторных Т-клеток в опухоли по сравнению с контролем.
131. Способ лечения солидной опухоли у субъекта, включающий введение субъекту выделенной одноцепочечной полипептидной субъединицы по п. 1 и агониста OX40.
132. Способ по п. 131, где агонист OX40 представляет собой одно или несколько из слитого белка на основе лиганда OX40 или антитела к OX40.
133. Способ по п. 132, где слитый белок на основе лиганда OX40 представляет собой MEDI6383.
134. Способ по п. 132, где антитело к OX40 представляет собой MEDI0562.
135. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества гексамерного белка по любому из пп. 51-77 или композиции по п. 78 в комбинации со средством для примирования T-клеток.
136. Способ по п. 136, где средство для примирования T-клеток представляет собой синтетический длинный пептид (SLP) E7 и CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид.