КОМПОЗИЦИИ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ
COMPOSITIONS USEFUL AS INHIBITORS OF VOLTAGE-GATED SODIUM CHANNELS

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к соединениям, полезным в качестве ингибиторов потенциалзависимых натриевых каналов. Изобретение также предлагает фармацевтически приемлемые композиции, содержащие соединения изобретения, и способы применения таких композиций для лечения различных заболеваний.
Уровень техники изобретения
Натриевые каналы занимают центральное место в генерировании потенциалов действия во всех возбудимых клетках типа нейронов и миоцитов. Они играют ключевую роль в возбудимых тканях, включая головной мозг, гладкую мускулатуру желудочно-кишечного тракта, скелетные мышцы, периферическую нервную систему, спинной мозг и дыхательные пути. Как таковые они играют ключевую роль при разных болезненных состояниях, например при эпилепсии (см. Moulard, B. and D. Bertrand (2002) "Epilepsy and sodium channel blockers" Expert Qpin. Ther. Patents 12(1):85-91)), при боли (см. Waxman, S.G., S. Dib-Hajj, et al. (1999) "Sodium channels and pain" Proc Natl. Acad. Sci USA 96(14):7635-9 и Waxman, S.G., T.R. Cummins, et al. (2000) "Voltage-gated sodium channels and the molecular pathogenesis of pain: a review" J Rehabil Res Dev 37(5): 517-28), при миотонии (см. Meola, G. and V. Sansone (2000) "Therapy in myotonic disorders and in muscle channelopathies" Neurol Sci 21(5):S953-61 и Mankodi, A. and C. A. Thornton (2002) "Myotonic syndromes" Curr Opin Neurol 15(5): 545-52), при атаксии (см. Meisler, M.H., J.A. Kearney, et al. (2002) "Mutations of voltage-gated sodium channels in movement disorders and epilepsy" Novartis Found Symp 241:72-81), при рассеянном склерозе (см. Black, J.A., S. Dib-Hajj, et al. (2000) "Sensory neuron-specific sodium channel SNS is abnormally expressed in the brains of mice with experimental allergic encephalomyelitis and humans with multiple sclerosis" Proc Natl. Acad. Sci USA 97(21):11598-602, и Renganathan, M., M. Gelderblom, et al. (2003) "Expression of Na(v)1.8 sodium channels perturbs the firing patterns of cerebellar purkinje cells" Brain Res 959(2):235-42), при раздраженном кишечнике (см. Su, X., R.E. Wachtel, et al. (1999) "Capsaicin sensitivity and voltage-gated sodium currents in colon sensory neurons from rat dorsal root ganglia" Am J Physiol. 277(6 Pt 1): G11180-8, и Laird, J.M., V. Souslova, et al. (2002) "Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Navl.8 (SNS/PN3)-null mice" J Neurosci 22(19):8352-6), при недержании мочи и болях во внутренних органах (см. Yoshimura, N., S. Seki, et al. (2001) "The involvement of the tetrodotoxin-resistant sodium channel Na(v)1.8 (PN3/SNS) in a rat model of visceral pain" J Neurosci 21(21):8690-6), а также при ряде психиатрических дисфункций, например при страхе и депрессии (см. Hurley, S.C. (2002) "Lamotrigine update and its use in mood disorders" Ann Pharmacother 36(5):860-73).
Потенциалзависимые натриевые каналы включают семейство генов, состоящее из девяти различных подтипов (NaV1.1-NaV1.9). Как показано в таблице 1, эти подтипы демонстрируют тканеспецифическую локализацию и функциональные различия (см. Goldin, A.L. (2001) "Resurgence of sodium channel research" Annu Rev Physiol 63:871-94). Три члена этого генного семейства (NaVl.8, 1.9, 1.5) устойчивы к блокирующему воздействию хорошо известного блокатора натриевых каналов TTX (тетродототоксина), демонстрируя специфичность подтипов в пределах этого семейства генов. Мутационный анализ позволил идентифицировать глутамат 387 как критический остаток для связывания TTX (см. Noda, M., H. Suzuki, et al. (1989) "A single point mutation confers tetrodotoxin and saxitoxin insensitivity on the sodium channel II" FEBS Lett 259(1):213-6).
<b>Таблица 1</b>
<b>Изоформа натрия</b>
<b>Ткань</b>
<b>IC50 для TTX</b>
<b>Показания</b>
NaV1.1
CNS, PNS, сома нейронов
10 нМ
Боль, эпилепсия, нейродегенерация
NaV1.2
CNS, высокое содержание в аксонах
10 нМ
Нейродегенерация, эпилепсия
NaV1.3
CNS, эмбриональная, поврежденные нервы
15 нМ
Боль
NaV1.4
Скелетные мышцы
25 нМ
Миотония
NaV1.5
Сердце
2 мкМ
Аритмия, удлинение интервала QT
NaV1.6
CNS, широкое распространение, в основном обильное содержание
6 нМ
Боль, двигательные расстройства
NaV1.7
PNS, DRG, нейроэндокринные окончания
25 нМ
Боль, нейроэндокринные расстройства
NaV1.8
PNS, мелкие нейроны в DRG и TG
>50 мкМ
Боль
NaV1.9
PNS, мелкие нейроны в DRG и TG
1 мкМ
Боль
CNS = центральная нервная система, PNS = периферическая нервная система, DRG = ганглий дорсального корешка, TG = ганглий тройничного нерва)
Как правило, потенциалзависимые натриевые каналы (NaV) ответственны за инициацию и быстрый подъем потенциалов действия в возбудимой ткани нейронной системы, которая передает электрические сигналы, компонующие и кодирующие нормальные и аномальные болевые ощущения. Антагонисты каналов NaV могут ослаблять эти болевые сигналы, что делает их полезными для лечения разнообразных болевых состояний, включая, но не ограничиваясь ими, острую, хроническую, воспалительную и невропатическую боль. На человеке и животных моделях была продемонстрирована польза в ослаблении болей таких известных антагонистов NaV, как TTX, лидокаин (см. Mao, J. and L. L. Chen (2000) "Systemic lidocaine for neuropathic pain relief Pain 87(1):7-17.), бупивакаин, фенитоин (см. Jensen, T.S. (2002) "Anticonvulsants in neuropathic pain: rationale and clinical evidence" Eur J Pain 6 (Suppl A):61-8), ламотригин (см. Rozen, T.D. (2001) "Antiepileptic drugs in the management of cluster headache and trigeminal neuralgia" Headache 41 Suppl 1: S25-32 и Jensen, T.S. (2002) "Anticonvulsants in neuropathic pain: rationale and clinical evidence" Eur J Pain 6 (Suppl A):61-8.), а также карбамазепин (см. Backonja, M.M. (2002) "Use of anticonvulsants for treatment of neuropathic pain" Neurology 59(5 Suppl 2): S 14-7).
Гипералгезия (повышенная чувствительность к болевым стимулам), которая развивается при повреждении тканей или воспалении, отражает, по меньшей мере, отчасти, увеличение возбудимости первичных высокопороговых афферентных нейронов, иннервирующих участок повреждения. Активация потенциалзависимых натриевых каналов критически важна для генерирования и распространения нейронных потенциалов действия. Появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что модуляция потоков NaV представляет собой эндогенный механизм, роль которого заключается в управлении нейронной возбудимостью (см. Goldin, A.L. (2001) "Resurgence of sodium channel research" Annu Rev Physiol. 63:871-94). В нейронах ганглия дорсального корешка (DRG) найдено несколько кинетически и фармакологически различных потенциалзависимых натриевых каналов. TTX-резистентный поток нечувствителен к микромолярным концентрациям тетродототоксина, демонстрируя медленную кинетику активации и инактивации, а также более высокий порог деполяризованной активации по сравнению с другими потенциалзависимыми каналами натрия. TTX-резистентные потоки натрия, прежде всего, ограничены субпопуляцией сенсорных нейронов, по-видимому, вовлеченных в ноцицепцию. Говоря более конкретно, TTX-резистентные потоки натрия экспрессируются почти исключительно в нейронах, имеющих малый диаметр клеточного тела, и дают начало аксонам небольшого диаметра с медленным проведением, которые чувствительны к капсаицину. Больной массив экспериментальных данных свидетельствует о том, что TTX-резистентные натриевые каналы экспрессируются на C-волокнах и для проведения ноцицептивной информации в спинной мозг.
2
Интратекальное введение антисмысловых олигодезоксинуклеотидов, нацеленных на уникальный регион TTX-резистентного канала натрия (NaV 1.8) приводило к значительному ослаблению PGE-индуцированной гипералгезии (см. Khasar, S.G., M.S. Gold, et al. (1998) "A tetrodotoxin-resistant sodium current mediates inflammatory pain in the rat" Neurosci Lett 256(1):17-20). Относительно недавно группой исследователей Wood с соавторами была создана линия нокаутных мышей с утратой функционального канала NaV1.8. Такая мутация проявляет обезболивающий эффект в тестах, оценивающих реакцию животных на воспалительный агент каррагенан (см. Akopian, A.N., V. Souslova, et al. (1999) "The tetrodotoxin-resistant sodium channel SNS has a specialized function in pain pathways" Nat Neurosci 2(6):541-8). В дополнение, у таких животных наблюдается дефицит как механо-, так и терморецепции. Анальгезия, продемонстрированная нокаутными мутантами Nav1.8, согласуется с наблюдениями, свидетельствующими о роли TTX-резистентных потоков в ноцицепции.
Иммуногистохимическая гибридизация in-situ и электрофизиологические эксперименты in-vitro согласованно показали, что канал натрия NaV1.8 избирательно локализован в мелких сенсорных нейронах ганглия дорсального корешка и ганглия тройничного нерва (см. Akopian, A.N., V. Souslova, et al. (1996) "A tetrodotoxin-resistant voltage-gated sodium channel expressed by sensory neurons" Nature 379(6562):257-62). Основной ролью этих нейронов является обнаружение и проведение ноцицептивных стимулов. Антисмысловые и иммуногистохимические данные также подтверждают роль NaV1.8 в невропатической боли (см. Lai, J., M.S. Gold, et al. (2002) "Inhibition of neuropathic pain by decreased expression of the tetrodotoxin-resistant sodium channel, NaV1.8" Pain 95(1-2):143-52, а также Lai, J., J.C. Hunter, et al. (2000) "Blockade of neuropathic pain by antisense targeting of tetrodotoxin-resistant sodium channels in sensory neurons" Methods Enzymol. 314:201-13). В неповрежденных C-волокнах, прилегающих к участку нервного повреждения, белок NaV1.8 активируется (регулируется повышающим образом). Антисмысловое лечение предупреждает перераспределение NaV1.8 вдоль нерва и способствует обратному развитию невропатической боли. Взятые вместе данные о генетическом нокауте и антисмысловой терапии подтверждают роль NaV1.8 в обнаружении и проведении сигналов воспалительной и невропатической боли.
При невропатических болевых состояниях происходит трансформация распределения и подтипов натриевых каналов. В поврежденном нерве экспрессия NaV1.8 и NaV1.9 весьма ограничена, тогда как экспрессия TTX-чувствительной субъединицы NaV1.3 регуляторно повышена в 5-10 раз (см. Dib-Hajj, S.D., J. Fjell, et al. (1999) "Plasticity of sodium channel expression in DRG neurons in the chronic constriction injury model of neuropathic pain." Pain 83(3):591-600). Зависимость повышения NaV1.3 от времени ведет себя параллельно с появлением аллодинии в животных моделях последствий нервного повреждения. Биофизика канала NaV1.3 имеет характерную особенность, которая состоит в том, что здесь наблюдается очень быстрое возобновление функции после инактивации, следующей за потенциалом действия. Это учитывает установившуюся скорость передачи высоких возбуждающих импульсов, что часто наблюдается в поврежденном нерве (см. Cummins, T.R., F. Aglieco, et al. (2001) "Nav1.3 sodium channels: rapid repriming and slow closed-state inactivation display quantitative differences after expression in a mammalian cell line and in spinal sensory neurons" J Neurosci 21(16):5952-61). Канал NaV1.3 экспрессируется в центральной и периферической нервной системе человека. Канал NaV1.9 похож на NaV1.8 тем, что он избирательно локализован в мелких сенсорных нейронах ганглия дорсального корешка и ганглия тройничного нерва (см. Akopian, A.N., V. Souslova, et al. (2002). "The presence and role of the tetrodotoxin-resistant sodium channel Na(v)1.9 (NaN) in nociceptive primary afferent neurons". J Neurosci 22(17):7425-33). Он имеет небольшую скорость инактивации и зависимость активации от потенциала со сдвигом влево (см. Dib-Hajj, S., J.A. Black, et al. (2002) "Nav1.3 sodium channels: a sodium channel with unique properties" Trends Neurosci 25(5):253-9). Эти две биофизические особенности дают возможность каналу NaV1.9 играть роль в установлении мембранного потенциала покоя для ноцицептивных нейронов. Потенциал мембранного покоя для клеток, экспрессирующих NaV1.9, находится в диапазоне от -55 до -50 мВ по сравнению с потенциалом -65 мВ для большинства других периферических и центральных нейронов. Эта персистирующая деполяризация, по большей части, обусловлена длительной низкоуровневой активацией каналов NaV1.9. Такая деполяризация позволяет нейронам проще и быстрее достигать порога для генерирования потенциалов действия в ответ на ноцицептивные стимулы. Соединения, способные блокировать канал NaV1.9, могут играть существенную роль в установлении заданного значения для обнаружения болевых стимулов. При хронических болевых состояниях нервы и нервные окончания могут становиться припухлыми и гиперчувствительными, с высокой частотой генерируя потенциалы действия при незначительной стимуляции или полном отсутствии стимуляции. Такие патологические припухлости нервов называются невромами, причем в невромах, прежде всего, экспрессируются такие натриевые каналы, как NaV1.8 и NaV1.7 (см. Kretschmer, T., L.T. Happel, et al. (2002) "Accumulation of PN1 and PN3 sodium channels in painful human neuroma-evidence from immunocytochemistry" Acta Neurochir (Wien) 144(8):803-10; обсуждение 810). Каналы NaV1.6 и NaV1.7 также экспрессируются в нейронах ганглия дорсального корешка и вносят вклад в небольшой компонент чувствительности к TTX, наблюдаемый в этих клетках. Следовательно, канал NaV1.7, в частности, может быть потенциальным целевым каналом боли в дополнение к его роли в нейроэндокринной возбудимости (см. Klugbauer, N., L. Lacinova, et al. (1995) "Structure and functional expression of a new member of the tetrodotoxin-sensitive voltage-activated sodium channel family from human neuroendocrine cells" Embo J 14(6): 1084-90).
Каналы NaV1.1 (см. Sugawara, T., E. Mazaki-Miyazaki, et al. (2001) "Nav1.1 mutations cause febrile seizures associated with afebrile partial seizures." Neurology 57(4):703-5.) и NaV1.2 (см. Sugawara, T., Y. Tsurubuchi, et al. (2001) "A missense mutation of the Na+ channel alpha II subunit gene Na(v)1.2 in a patient with febrile and afebrile seizures causes channel dysfunction" Proc Natl Acad Sci USA 98(11):6384-9) были связаны с эпилептическими состояниями, включая фебрильные судороги. Известно более 9 генетических мутаций в NaV1.1, ассоциированных с фебрильными судорогами (см. Meisler, M.H., J.A. Kearney, et al. (2002) "Mutations of voltage-gated sodium channels in movement disorders and epilepsy" Novartis Found Symp 241:72-81).
Были разработаны антагонисты NaV1.5, которые нашли применение в лечении сердечных аритмий. Генный дефект в канале NaV1.5, который приводит к выработке большого неактивирующего компонента потока, был связан с удлинением интервала QT у человека, а для лечения этого состояния был использован пероральный анестетик местного действия мексилитин (см. Wang, D.W., K. Yazawa, et al. (1997) "Pharmacological targeting of long QT mutant sodium channels." J Clin Invest 99(7):1714-20).
В настоящее время несколько блокаторов каналов Na уже применяются или проходят клинические испытания для лечения эпилепсии (см. Moulard, B. and D. Bertrand (2002) "Epilepsy and sodium channel blockers" Expert Opin. Ther. Patents 12(1):85-91.), острой боли (см. Wiffen, P., S. Collins, et al. (2000) "Anticonvulsant drugs for acute and chronic pain" Cochrane Database Syst Rev 3), хронической боли (см. Wiffen, P., S. Collins, et al. (2000) "Anticonvulsant drugs for acute and chronic pain" Cochrane Database Syst Rev 3, and Guay, D.R. (2001) "Adjunctive agents in the management of chronic pain" Pharmacotherapy 21(9):1070-81), воспалительной боли (см. Gold, M.S. (1999) "Tetrodotoxin-resistant Na+ currents and inflammatory hyperalgesia." (1999) "Sodium channels and pain" Proc Natl Acad Sci USA 96(14):7645-9) и невропатической боли (см. Strichartz, G.R., Z. Zhou, et al. (2002) "Therapeutic concentrations of local anaesthetics unveil the potential role of sodium channels in neuropathic pain" Novartis Found Symp 241:189-201, а также Sandner-Kiesling, A., G. Rumpold Seitlinger, et al. (2002) "Lamotrigine monotherapy for control of neuralgia after nerve section" Acta Anaesthesiol Scand 46(10):1261-4); при сердечных аритмиях (см. An, R.H., R. Bangalore, et al. (1996) "Lidocaine block of LQT-3 mutant human Na+ channels" Circ Res 79(1):103-8, а также Wang, D.W., K. Yazawa, et al. (1997) "Pharmacological targeting of long QT mutant sodium channels" J Clin Invest 99(7):1714-20), в качестве нейропротекторов (см. Taylor, C.P. and L.S. Narasimhan (1997) "Sodium channels and therapy of central nervous system diseases" Adv Pharmacol 39:47-98) и анестетиков (см. Strichartz. G.R., Z. Zhou, et al. (2002) "Therapeutic concentrations of local anaesthetics unveil the potential role of sodium channels in neuropathic pain" Novartis Found Symp 241:189-201).
Для изучения модуляторов натриевых каналов при многих и разнообразных болевых состояниях были разработаны различные животные модели, имеющие клиническую значимость. В качестве примеров можно привести хроническую боль при злокачественных процессах (см. Kohase, H., et al., Acta Anaesthesiol Scand. 2004; 48(3):382-3), боль при раке бедра (см. Kohase, H., et al., Acta Anaesthesiol Scand. 2004; 48(3):382-3), хроническую костную боль, не связанную со злокачественными заболеваниями (см. Ciocon, J.O. et al., J Am Geriatr Soc. 1994; 42(6):593-6), ревматоидный артрит (см. Calvino, B. et al., Behav Brain Res. 1987; 24(1):11-29), остеоартрит (см. Guzman, R.E., et al., Toxicol Pathol. 2003; 31(6):619-24), спинальный стеноз (см. Takenobu, Y. et al., J Neurosci Methods. 2001; 104(2):191-8), невропатическую боль в нижней части спины (см. Hines, R., et al., Pain Med. 2002; 3(4):361-5; Massie, J.B., et al., J Neurosci Methods. 2004; 137(2):283-9), миофасциальный болевой синдром (см. Dalpiaz & Dodds, J Pain Palliat Care Pharmacother. 2002; 16(1):99-104; Sluka K.A. et al., Muscle Nerve. 2001; 24(1):37-46), фибромиалгию (см. Bennet & Tai, Int J Clin. Pharmacol. Res. 1995; 15(3):115-9), боль в височно-нижнечелюстном суставе (см. Ime H, Ren K, Brain Res Mol Brain Res. 1999; 67(1):87-97), хроническую висцеральную боль, включая абдоминальную (см. Al-Chaer, E.D., et al., Gastroenterology. 2000; 119(5):1276-85), тазовую/промежностную боль (см. Wesselmann et al., Neurosci Lett. 1998; 246(2):73-6), панкреатическую боль (см. Vera-Portocarrero, L.B., et al., Anesthesiology. 2003; 98(2):474-84); боль при синдроме раздраженного кишечника (см. Verne, G.N., et al., Pain. 2003; 105(1-2):223-30; La J.H. et al., World Gastroenterol. 2003; 9(12):2791-5), хроническую головную боль (см. Willimas & Stark, Cephalalgia. 2003; 23(10):963-71), мигрень (см. Yamamura, H., et al., J Neurophysiol. 1999; 81(2):479-93), тензионную головную боль, включая сильную кластерную головную боль с периодическими рецидивами (см. Costa, A., et al., Cephalalgia. 2000; 20(2):85-91), хроническую невропатическую боль, включая постгерпетическую невралгию (см. Attal, N., et al., Neurology. 2004; 62(2):218-25; Kim & Chung 1992, Pain 50:355), диабетическую невропатию (см. Beidoun A et al., Clin J Pain. 2004; 20(3): 174-8; Courteix, C, et al., Pain. 1993; 53(1):81-8), ВИЧ-ассоциированную невропатию (см. Portegies & Rosenberg, Ned Tijdschr Geneeskd. 2001; 145(15):731-5; Joseph E.K. et al., Pain. 2004; 107(1-2):147-58; Oh, S.B., et al., J Neurosci. 2001; 21(14):5027-35), невралгию тройничного нерва (см. Sato, J., et al., Oral Surg Oral Med Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 2004; 97(1):18-22; Imamura Y et al., Exp Brain Res. 1997; 116(1):97-103), невропатию при синдроме Charcot-Marie Tooth (см. Sereda, M., et al., Neuron. 1996; 16(5):1049-60), наследственные сенсорные невропатии (см. Lee, M.J., et al., Hum Mol. Genet. 2003; 12(15):1917-25), повреждения периферических нервов (см. Attal, N., et al., Neurology. 2004; 62(2):218-25; Kim & Chung 1992, Pain 50:355; Bennett & Xie, 1988, Pain 33:87; Decostered, I. & Woolf, C.J., 2000, Pain 87:149; Shir, Y. & Seltzer, Z. 1990; Neurosci Lett 115:62), болезненные невромы (см. Nahabedian & Johnson, Ann Plast Surg. 2001; 46(1):15-22; Devor & Raber, Behav Neural Biol. 1983; 37(2):276-83), эктопические проксимальные и дистальные разряды (см. Liu, X. et al., Brain Res. 2001; 900(1):119-27), радикулопатию (см. Devers & Galer, Clin J Pain. 2000; 16(3):205-8; Hayashi N et al., Spine. 1998; 23(8):877-85), невропатическую боль, индуцированную химиотерапией (см. Aley, K.O., et al., Neuroscience. 1996; 73(1):259-65), невропатическую боль, индуцированную лучевой терапией, боль после мастэктомии (см. Devers & Galer, Clin J Pain. 2000; 16(3):205-8), центральную боль (Cahana, A., et al., Anesth Analg. 2004; 98(6):1581-4), боль при повреждении спинного мозга (см. Hains, B.C, et al., Exp Neurol. 2000; 164(2):426-37), боль после удара, таламическую боль (см. LaBuda, C.J., et al., Neurosci Lett. 2000; 290(1):79-83), синдром сложной региональной боли (см. Wallace, M.S., et al., Anesthesiology. 2000; 92(1):75-83; Xantos D et al., J Pain. 2004; 5(3 Suppl 2):S1), фантомную боль (см. Weber, W.E., Ned Tijdschr Geneeskd. 2001; 145(17):813-7; Levitt & Heyback, Pain. 1981; 10(1):67-73), неустранимую боль (см. Yokoyama, M., et al., Can J Anaesth. 2002; 49(8):810-3); острую боль, острую послеоперационную боль (см. Koppert, W., et al., Anesth Analg. 2004; 98(4):1050-5; Brennan, T.J., et al., Pain. 1996; 64(3):493-501), острую мышечно-скелетную боль, суставную боль (см. Gotoh, S., et al., Ann Rheum Dis. 1993; 52(11):817-22), механическую боль в нижней части спины (см. Kehl, L.J., et al., Pain. 2000; 85(3):333-43), боль в шее, тендинит, боль при травмах/физической нагрузке (см. Sesay, M., et al., Can J Anaesth. 2002; 49(2):137-43), острую висцеральную боль, включая абдоминальную боль, пиелонефрит, аппендицит, холецистит, кишечную непроходимость, грыжи и т.д. (см. Giambernardino, M.A., et al., Pain. 1995; 61(3):459-69), боль в груди, включая сердечную боль (см. Vergona, R.A., et al., Life Sci. 1984; 35(18): 1877-84), тазовую боль, боль при почечной колике, острую акушерскую боль, включая боль при родах (см. Segal, S., et al., Anesth Analg. 1998; 87(4):864-9), боль в связи с кесаревым сечением, острую воспалительную и травматическую боль в области ягодиц и заднего прохода, острую перемежающуюся боль, включая эндометриоз (см. Cason, A.M., et al., Horm Behav. 2003; 44(2): 123-31), острую боль при опоясывающем лишае, серповидно-клеточной анемии, остром панкреатите (см. Toma, H; Gastroenterology. 2000; 119(5):1373-81), прорывающуюся боль, орофациальную боль, включая боль при синусите, зубную боль (см. Nusstein, J., et al., J Endod. 1998; 24(7):487-91; Chidiac, J.J., et al., Eur J Pain. 2002; 6(1):55-67), боль при рассеянном склерозе (MS) (см. Sakurai & Kanazawa, J Neurol Sci. 1999; 162(2):162-8), боль при депрессии (см. Greene B, Curr Med Res Opin. 2003; 19(4):272-7), боль при проказе, боль при болезни Бехчета, адипозалгию (см. Devillers & Oranje, Clin. Exp. Dermatol. 1999; 24(3):240-1), боль при флебите, боль при синдроме Гийена-Барре (Guillain-Barre), болезненные движения ног и пальцев, синдром Хоглунда (Haglund), боль при эритромелагии (см. Legroux-Crespel, E., et al., Ann Dermatol. Venereol. 2003; 130(4):429-33), боль при болезни Фабри (Fabry) (см. Germain, D.P., J Soc Biol. 2002; 196(2):183-90), боль при заболеваниях мочевого пузыря и мочеполовых расстройствах, включая недержание мочи (см. Berggren, T., et al., J Urol. 1993; 150(5 Pt 1):1540-3), гиперактивность мочевого пузыря (см. Chuang, Y.C, et al., Urology. 2003; 61(3):664-70), синдром болезненного мочевого пузыря (см. Yoshimura, N., et al., J Neurosci. 2001; 21(21):8690-6), интерстициальный цистит (IC) (см. Giannakopoulos& Campilomatos, Arch Ital Urol Nefrol Androl. 1992; 64(4):337-9; Boucher, M., et al., J Urol. 2000; 164(1):203-8), а также простатит (см. Mayersak, J.S., Int Surg. 1998; 83(4):347-9; Keith I.M., et al., J Urol. 2001; 166(1):323-8).
К сожалению, как описано выше, эффективность используемых в настоящее время блокаторов натриевых каналов при указанных выше болезненных состояниях в значительной мере ограничена множеством побочных эффектов. Такие побочные эффекты включают различные нарушения в ЦНС, например затуманенное зрение, головокружение, тошноту и седативный эффект, а также такие осложнения, потенциально угрожающие жизни пациента, как сердечные аритмии и сердечная недостаточность. Таких нежелательных побочных эффектов можно избежать, применяя блокатор канала Na, который проявляет определенную степень избирательности в своей активности против того или иного подтипа каналов Na. Однако выпускаемые в настоящее время на фармацевтический рынок блокаторы каналов Na не обладают такой избирательностью. По-видимому, в связи с отсутствием такой молекулярной избирательности лекарственные средства, поступающие в настоящее в продажу, проявляют блокаду, зависящую от обстоятельств применения и, как правило, демонстрируют более высокую аффинность при деполяризации потенциалов, что приводит к их преимущественному нацеливанию на активно возбужденные нейроны, и это считается ключевым фактором в терапевтических рамках применения современных лекарственных средств, блокирующих каналы Na. Хотя каждое лекарство обладает собственным уникальным терапевтическим профилем, современные блокаторы каналов Na, обычно, ассоциированы с побочными эффектами в центральной нервной системе (ЦНС) и сердечно-сосудистой системе, включая изменения кровяного давления, что часто приводит к необходимости ограничения дозы. Головокружение, седативный эффект, тошнота, атаксия и затуманенное сознание, это лишь некоторые из специфических побочных эффектов, наблюдаемых при лечении фенитоином (phenytoin™), мексилетином (mexiletine™) и лидокаином (lidocaine™).
В связи с этим сохраняется потребность в разработке дополнительных антагонистов каналов Na, предпочтительно, с большей эффективностью и менее выраженными побочными эффектами.
Сущность изобретения
Недавно было обнаружено, что соединения настоящего изобретения и их фармацевтически приемлемые композиции полезны в качестве ингибиторов потенциалзависимых натриевых каналов. Такие соединения имеют общую формулу I:
или их фармацевтически приемлемые производные.
Такие соединения и фармацевтически приемлемые композиции на их основе полезны для лечения или уменьшения тяжести заболеваний, расстройств или болезненных состояний, включая, но не ограничиваясь ими, острую, хроническую, невропатическую или воспалительную боль, артрит, мигрень, кластерную головную боль, невралгию тройничного нерва, герпетическую невралгию, общие невралгии, эпилепсию или эпилептические состояния, нейродегенеративные заболевания, психиатрические расстройства, такие как тревога и депрессия, миотонию, аритмию, двигательные расстройства, нейроэндокринные расстройства, атаксию, рассеянный склероз, синдром раздраженного кишечника и недержание.
Подробное описание изобретения
I. Общее описание соединений изобретения:
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I:
или к их фармацевтически приемлемым солям, где
2
X представляет O, S, NR, C(O) или C(R);
5
кольцо A представляет собой фенильное или 5-7-членное гетероарильное кольцо, где кольцо A необязательно замещено до y заместителями R;
1
2
1-6
R и R, каждый независимо, представляет собой водород или Cалифатическую группу, где до двух атомов углерода, несвязанных с атомом азота, необязательно заменены на O, S, NR или C(O);
x равен 0-4;
y равен 0-4;
z равен 0-4;
3
4
5
x
каждый из R, R и R независимо представляет собой Q-R;
1-6
2
2
2
2
2
2
Q представляет собой связь или Cалифатическую цепь, где до двух не прилегающих друг к другу метиленовых звеньев Q необязательно заменены на CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR;
x
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
каждый из R независимо выбран из R', галогена, NO, CN, OR', SR', N(R'), NR'C(O)R', NR'C(O)N(R'), NR'COR', C(O)R', COR', OC(O)R', C(O)N(R'), OC(O)N(R'), SOR', SOR', SON(R'), NR'SOR', NR'SON(R'), C(O)C(O)R' или C(O)CHC(O)R';
1-6
каждый R независимо выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы, и
1-8
6-10
каждый R' независимо выбран из водорода или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, Cарила, гетероарильного кольца, имеющего 5-10 атомов в кольце, или гетероциклильного кольца, имеющего 3-10 атомов в кольце, либо R и R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, или два R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, образуют 5-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы.
В одном из вариантов осуществления следующие соединения исключены из соединений формулы I:
2
5
3
2
(i) если R означает водород, X означает O, y равен 1, R представляет собой OMe, то R не может представлять собой NO; и
2
5
2
(ii) если R означает водород или этил, X означает C(O), x равен 0, то R не может представлять собой NO.
В другом варианте осуществления следующие соединения исключены из соединений формулы I:
2
5
3
2
(i) если R означает водород, X означает O, y равен 1, R представляет собой OMe, то R не может представлять собой NO;
2
5
2
(ii) если R означает водород или этил, X означает C(O), x равен 0, то R не может представлять собой NO;
2
(iii) если R означает водород, X означает C(O), x равен 0, y равен 0, то кольцо A не может быть фенилом; и
(iv) N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[[(3,4-дигидро-2H-пиррол-5-ил)амино]сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[(диметиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-(аминосульфонил)фенил]-2-(4-фетоксифенокси)-5-нитробензамид;
N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-(фенилметил)бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-(фенрилметил)бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-[[2-нитро-4-(трифторметил)фенил]тио]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид;
N-[3-(аминосульфонил)-4-метоксифенил]-2-[4-(метилтио)-3-нитробензоил]бензамид;
2-(4-хлор-3-нитробензоил)-N-[5-[(этиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид и
2-[[4-[(дифторметил)тио]фенил]амино]-N-[3-[[(2-фуранилметил)амино]сульфонил]фенил]бензамид.
2. Соединения и определения:
th
Соединения данного изобретения включают соединения, в целом подробно описанные выше, которые далее будут проиллюстрированы классами, подклассами и конкретными соединениями, раскрытыми в данном описании. Как использовано в данном описании, будут применимы следующие определения, если специально не указано иное. В целях настоящего изобретения химические элементы идентифицированы в соответствии с периодической системой элементов, версия CAS, руководство по химии и физике, издание 75-е. Общие принципы органической химии дополнительно описаны в "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, и "March's Advanced Organic Chemistry", 5 Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.
Как описано в данном описании, соединения изобретения необязательно замещены одним или более заместителями, такими как в целом проиллюстрировано выше или разъясняется на примерах конкретных классов, подклассов и представителей изобретения. Необходимо принять во внимание, что фраза "необязательно замещенный" может быть использована взаимозаменяемо с фразой "замещенный или незамещенный". Как правило, термин "замещенный", независимо от того, предшествует ли ему термин "необязательно", относится к замене водородных радикалов в данной структуре радикалами указанного заместителя. Если не указано иное, необязательно замещенная группа может содержать заместитель в каждом замещаемом положении группы, и если в любой данной структуре замещено более одного положения более чем одним заместителем, выбранным из указанной группы, то заместитель в каждом положении может быть или одним и тем же, или другим. Предпочтительные комбинации заместителей, предусматриваемые данным изобретением, приводят к образованию стабильных или химически осуществимых соединений. Термин "стабильный", как использовано в данном описании, относится к соединениям, которые не подвергаются существенным изменениям, если попадают в условия, способствующие их получению, выявлению и, предпочтительно, их выделению, очистке и применению с одной или более целей, раскрытых в данном изобретении. В некоторых вариантах осуществления стабильное соединение или химически осуществимое соединение является таким соединением, которое не подвергается существенным изменениям, если хранится при температуре 40°C или менее при отсутствии влаги или других химически реактивных условий по меньшей мере в течение недели.
3
8
8
12
Термин "алифатический" или "алифатическая группа", как использовано в данном описании, означает прямую (то есть неразветвленную) или разветвленную, замещенную или незамещенную углеводородную цепь, которая полностью насыщена, либо содержит один или более звеньев ненасыщенности, или моноциклический углеводород, или бициклический углеводород, который полностью насыщен, либо содержит один или более звеньев ненасыщенности, но при этом не является ароматическим (что также может приводиться в данном описании как "карбоциклический", "циклоалифатический" или "циклоалкильный"), который имеет одну точку присоединения к остальной части молекулы. Если не указано иное, алифатические группы содержат 1-20 алифатических атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-10 алифатических атомов углерода. В других вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-8 алифатических атомов углерода. Есть такие варианты осуществления, в которых алифатические группы содержат 1-6 алифатических атомов углерода, и такие варианты, в которых алифатические группы содержат 1-4 алифатических атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления понятие "циклоалифатический" (или "карбоциклический" или "циклоалкильный") относится к моноциклическому C-C углеводороду или бициклическому C-C углеводороду, который полностью насыщен, либо содержит один или более звеньев ненасыщенности, но не является ароматическим, который имеет одну точку присоединения к остальной части молекулы, причем любое индивидуальной кольцо в указанной бициклической кольцевой системе состоит из 3-7 членов. Подходящие алифатические группы включают, но не ограничиваясь ими, линейные или разветвленные, замещенные или незамещенные алкильные, алкенильные, алкинильные группы и их гибриды, например (циклоалкил)алкилы, (циколалкенил)алкилы или (циклоалкил)алкенилы.
Термин "гетероалифатический", как использовано в данном описании, означает алифатические группы, в которых один или два атома углерода независимо друг от друга заменены одним или более атомом кислорода, серы, азота, фосфора или кремния. Гетероалифатические группы могут быть замещенными или незамещенными, разветвленными или неразветвленными, циклическими или ациклическими и могут включать "гетероциклы", "гетероциклильные", "гетероциклоалифатические" или "гетероциклические" группы.
Термин "гетероцикл", "гетероциклильный", "гетероциклоалифатический" или "гетероциклический", как использовано в данном описании, означает неароматические, моноциклические, бициклические или трициклические кольцевые системы, в которых один или более членов кольца являются независимо выбранными гетероатомами. В некоторых вариантах осуществления "гетероцикл", "гетероциклильная", "гетероциклоалифатическая" или "гетероциклическая" группа имеет от трех до четырнадцати членов кольца, в которой один или более членов кольца являются гетероатомами, независимо выбираемыми из кислорода, серы, азота или фосфора, и каждое кольцо в системе содержит от трех до семи членов в кольце.
H
+
Термин "гетероатом" означает один или более из кислорода, серы, азота, фосфора или кремния (включая любую окисленную форму азота, серы, фосфора или кремния, четвертичную форму любого азотистого основания или замещаемый азот в гетероциклическом кольце, например N (как в 3,4-дигидро-2-пирролиле), NH (как в пирролидиниле) или NR (как в N-замещенном пирролидиниле)).
Термин "ненасыщенный", как использовано в данном описании, означает, что фрагмент имеет один или более звеньев ненасыщенности.
Термин "алкокси" или "тиоалкил", как использовано в данном описании, относится к алкильной группе, как определено выше, присоединенной к основной углеродной цепи через атом кислорода ("алкокси") или серы ("тиоалкил").
Термины "галоалкил", "галоалкенил" и "галоалкокси" в зависимости от обстоятельств означают алкил, алкенил или алкокси, замещенные одним или более атомами галогена. Термин "галоген" означает F, Cl, Br или I.
Термин "арил", используемый самостоятельно или как часть более крупного фрагмента, например такого как "аралкил", "аралкокси" или "арилоксиалкил", относится к моноциклическим, бициклическим и трициклическим кольцевым системам, имеющим, в общей сложности, от пяти до четырнадцати членов кольца, где по меньшей мере одно кольцо в системе ароматическое, и каждое кольцо в системе содержит от 3 до 7 членов кольца. Термин "арил" может быть использован взаимозаменяемо с термином "арильное кольцо". Термин "арил" также относится к гетероарильным кольцевым системам, определение которых будет дано ниже.
Термин "гетероарил", используемый самостоятельно или как часть более крупного фрагмента, например такого, как "гетероаралкил" или "гетероарилалкокси", относится к моноциклическим, бициклическим и трициклическим кольцевым системам, имеющим, в общей сложности, от пяти до четырнадцати членов кольца, где по меньшей мере одно кольцо в системе ароматическое, по меньшей мере одно кольцо в системе содержит один или более гетероатомов, и каждое кольцо в системе содержит от 3 до 7 членов кольца. Термин "гетероарил" может использоваться взаимозаменяемо с термином "гетероарильное кольцо" или с термином "гетероатоматический".
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
1-2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
O-2
1-6
2
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Арил (включая аралкил, аралкокси, арилоксиалкил и т.п.) или гетероарил (включая гетероаралкил, гетероарилалкокси и т.п.) может содержать один или более заместителей. Подходящие заместители в арильной или гетероарильной группе для атома ненасыщенного углерода могут быть выбраны из галогена; -R; -OR; -SR; 1,2-метилендиокси; 1,2-этилендилокси; фенила (Ph), необязательно замещенного R; -O(Ph), необязательно замещенного R; -(CH)(Ph), необязательно замещенного R; -CH=CH(Ph), необязательно замещенного R; -NO; -CN; -N(R); -NRC(O)R; -NRC(O)N(R); -NRCOR; -NRNRC(O)R; -NRNRC(О)N(R); -NRNRCOR; -C(O)C(O)R; -C(O)CHC(O)R; -COR; -C(O)R; -C(O)N(R); -OC(O)N(R); -S(O)R; -SON(R); -S(O)R; -NRSON(R); -NRSOR; -C(=S)N(R); -C(=NH)-N(R) или -(CH)NHC(O)R, где каждый независимый R выбран из водорода, необязательно замещенного Cалифатической группой, незамещенного 5-6-членного гетероарильного или гетероциклического кольца, фенила, -O(Ph) или -CH(Ph) или несмотря на вышеуказанные определения два независимых R на том же заместителе или на разных заместителях, взятые вместе с атомом(ами), к которым присоединена каждая группа R, образуют 3-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Необязательные заместители для алифатической группы R выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, O(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галогенCалифатической группы, где каждая из предшествующих Cалифатических групп группы R является незамещенной.
*
*
*
2
2
2
1-6
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Алифатическая или гетероалифатическая группа или неароматическое гетероциклическое кольцо могут содержать один или более заместителей. Подходящие заместители на насыщенном углероде в алифатической или гетероалифатической группе или в неароматическом гетероциклическом кольце выбраны из таких заместителей, которые перечислены выше для ненасыщенного углерода в арильной или гетероарильной группе, и дополнительно включают следующие: =O, =S, =NNHR, =NN(R), =NNHC(O)R, =NNHCO(алкил), =NNHSO(алкил) или =NR*, где каждый R* независимо выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы. Необязательные заместители для алифатической группы в R* выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, О(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галоген(Cалифатической группы), где каждая из предшествующих Салифатических групп в R* является незамещенной.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-6
2
2
1-2
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Необязательные заместители на азоте в неароматическом гетероциклическом кольце выбраны из -R, -N(R), -C(O)R, -COR, -C(O)C(O)R, -C(O)CHC(O)R, -SOR, -SON(R), -C(=S)N(R), -C(=NH)-N(R) или -NRSOR, где R представляет водород, необязательно замещенную Cалифатическую группу, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный -O(Ph), необязательно замещенный -CH(Ph), необязательно замещенный -(CH)(Ph), необязательно замещенный -CH=CH(Ph) или незамещенное 5-6-членное гетероалкильное или гетероциклическое кольцо, имеющее от одного до четырех гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, азота или серы, либо несмотря на данные выше определения два независимых R на одном и том же заместителе или на разных заместителях, взятые вместе с атомом(ами), с которыми связана каждая группа R, образуют 3-8-членное циклоалкильное, гетероциклическое, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Необязательные заместители в алифатической группе или фенильном кольце R выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, О(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галоген(Cалифатической группы), где каждая из предшествующих Cалифатических групп в R является незамещенной.
0
+
0
+
0
+
0
0
0
+
0
0
0
+
2
Как подробно описано выше, в некоторых вариантах осуществления два независимых R (или R или любые другие переменные, определенные в данном описании сходным образом), взятые вместе с атомом(ами), к которым каждая переменная присоединена, образуют 3-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероалильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Примеры колец, которые образуются, когда два независимых R (или R или любые другие переменные, определенные в данном описании сходным образом) взяты вместе с атомом(ами), к которым присоединена каждая переменная, включают, но не ограничиваясь ими, следующие: a) два независимых R (или R или любые другие переменные, определенные в данном описании сходным образом), связанные с одним и тем же атомом и взятые вместе с этим атомом, образуют кольцо, например N(R), где оба R, взятые вместе с атомом азота, образуют группу пиперидин-1-ила, пиперазин-1-ила или морфолин-4-ила, и b) два независимых R (или R или любые другие переменные, определенные в данном описании сходным образом), связанные с разными атомами и взятые вместе с этими (обоими) атомами, образуют кольцо, например, где фенильная группа замещена двумя OR, где указанные два R, взятые вместе с атомами кислорода, с которыми они связаны, образуют конденсированное 6-членное кольцо, содержащее кислород: . Следует понимать, что может образоваться множество других колец, когда два независимых R (или R или любых других переменных, определенных в данном описании сходным образом) взяты вместе с атомом(ами), с которыми связана каждая переменная, и приведенные выше примеры не являются ограничениями.
13
14
Если специально не указано иное, то подразумевается, что отображенные выше структуры также могут включать все изомерные (например, энантиомерные, диастереомерные и геометрические или конформационные) формы структуры; например конфигурации R и S для каждого асимметричного центра, изомеры (Z) и (E) по двойным связям, а также конформационные изомеры (Z) и (E). Таким образом, отдельные стереохимические изомеры, а также энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные) смеси представленных соединений попадают в объем настоящего изобретения. Если специально не указано иное, все таутомерные формы соединений изобретения также попадают в объем настоящего изобретения. Дополнительно следует отметить, что, если не указано иное, отображенные выше структуры также могут включать соединения, которые отличаются только по наличию одного или более изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие представленные в данном описании структуры, за исключением замены водорода дейтерием или тритием, либо замены углерода C- или C-обогащенным углеродом, входят в объем настоящего изобретения. Такие соединения полезны, например, в качестве аналитических инструментов, зондов в биологических анализах или блокаторов натриевых каналов с улучшенным терапевтическим профилем.
3. Описание примеров соединений
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение предлагает способ модулирования натриевых каналов, включающий стадию контактирования указанного канала с соединением формулы I':
или его фармацевтически приемлемой солью, где:
1
2
1
2
1-8
6-10
2
2
2
2
2
2
один из R и R является водородом, и другой из R и R выбран из водорода, Cалифатической группы, Cарила, гетероарильного кольца, имеющего 5-10 атомов в кольце, или гетероциклильного кольца, имеющего 3-10 атомов в кольце, где до двух атомов углерода в указанной алифатической группе необязательно заменены на CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR;
x равен 0-4;
z равен 0-5;
3
4
x
каждый из R и R независимо представляет собой Q-R;
1-6
2
2
2
2
2
2
Q представляет собой связь или Cалифатическую цепь, где до двух не прилегающих друг к другу метиленовых звеньев Q необязательно заменены на CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR;
x
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
каждый R независимо выбран из R', галогена, NO, CN, OR', SR', N(R'), NR'C(O)R', NR'C(O)N(R'), NR'COR', C(O)R', COR', OC(O)R', C(O)N(R'), OC(O)N(R'), SOR', SOR', SON(R'), NR'SOR', NR'SON(R'), C(O)C(O)R' или C(O)CHC(O)R';
1-6
каждый R независимо выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы, и
1-8
6-10
каждый R' независимо выбран из водорода или необязательно замещенной группы, выбранной из Салифатической группы, Cарила, гетероарильного кольца, имеющего 5-10 атомов в кольце, или гетероциклильного кольца, имеющего 3-10 атомов в кольце, либо R и R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, или два R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, образуют 5-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы.
3
3
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I', x равно по меньшей мере 2, и, если R в положении 3 является 1-пиперидилметилом, то R в положении 4 не является необязательно замещенным фенилом.
В другом варианте осуществления для соединений формулы I' исключаются следующие соединения:
2
5
3
2
(i) если R означает водород, X означает O, y равен 1, R представляет собой OMe, то R не может представлять собой NO,
2
5
2
(ii) если R означает водород или этил, X означает C(O), x равен 0, то R не может представлять собой NO;
2
(iii) если R означает водород, X означает C(O), x равен 0, y равен 0, то кольцо A не может быть фенилом, и
(iv) N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[[(3,4-дигидро-2H-пиррол-5-ил)амино]сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[(диметиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-(аминосульфонил)фенил]-2-(4-фетоксифенокси)-5-нитробензамид;
N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-(фенилметил)бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-(фенилметил)бензамид;,
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-[[2-нитро-4-(трифторметил)фенил]тио]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид;
N-[3-(аминосульфонил)-4-метоксифенил]-2-[4-(метилтио)-3-нитробензоил]бензамид;
2-(4-хлор-3-нитробензоил)-N-[5-[(этиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид и
2-[[4-[(дифторметил)тио]фенил]амино]-N-[3-[[(2-фуранилметил)амино]сульфонил]фенил]бензамид.
1
6
2
1
6
2
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' X означает O. В другом варианте осуществления X означает S. Еще в одном варианте осуществления X означает NR, где R означает водород или C-Cалкил. В одном из вариантов осуществления X означает NH. В одном из вариантов осуществления X означает C(O). Еще в одном варианте осуществления X означает C(R), где каждый R независимо является водородом или C-Cалкилом. В одном из вариантов осуществления X означает CH.
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' x равен 0-3 или x равен 0-2. В другом варианте осуществления x равен 1 или x равен 2.
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' R выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
В другом варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой C1-C6алкильную группу. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил или втор-бутил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил или морфолинил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой необязательно замещенный фенил, бензил, фенилокси или бензилокси.
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' z равен 0-3 или z равен 0-2. В другом варианте осуществления z равен 0.
4
4
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' z равен 1-3, и каждый R выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
4
1
6
В другом варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой C-Cалкильную группу.
Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил или втор-бутил.
4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил или морфолинил.
4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I' R представляет собой необязательно замещенный фенил, бензил, фенилокси или бензилокси.
5
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' группы R, если они присутствуют, являются галогеном, CN, NO или необязательно замещенной группой, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры групп R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинил, пиперазинил, морфолино или необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' группы R включают галоген, CN, NO или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примерные группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение предлагает соединения формулы I:
или его фармацевтически приемлемую соль, где:
2
X представляет собой O, S, NR, C(O) или C(R);
5
кольцо A представляет собой фенильное или 5-7-членное гетероарильное кольцо, где кольцо A необязательно замещено до y заместителями R;
1
2
1-6
R и R, каждый независимо является водородом или Cалифатической группой, где до двух атомов углерода, не присоединенных к атому азота, необязательно заменены на O, S, NR или C(O);
X равен 0-4;
y равен 0-4;
z равен 0-4;
3
4
5
x
каждый из R, R и R независимо представляет собой Q-R;
1-6
2
2
2
2
2
2
Q представляет собой связь или Cалифатическую цепь, где до двух не прилегающих друг к другу метиленовых звеньев Q необязательно заменены на CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR;
x
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
каждый R независимо выбран из R', галогена, NO, CN, OR', SR', N(R'), NR'C(O)R', NR'C(O)N(R'), NR'COR', C(O)R', COR', OC(O)R', C(O)N(R'), OC(O)N(R'), SOR', SOR', SON(R'), NR'SOR', NR'SON(R'), C(O)C(O)R' или C(O)CHC(O)R';
1-6
каждый R независимо выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы, и
1-8
6-10
каждый R' независимо выбран из водорода или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, Cарила, гетероарильного кольца, имеющего 5-10 атомов в кольце, или гетероциклильного кольца, имеющего 3-10 атомов в кольце, либо R и R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, или два R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, образуют 5-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы.
Еще в одном варианте осуществления следующие соединения исключаются из соединений формулы I:
2
5
3
2
(i) если R означает водород, X означает O, y равен 1, R представляет собой OMe, то R не представляет собой NO, и
2
5
2
(ii) если R означает водород или этил, X означает C(O), x равен 0, то R не представляет собой NO.
Еще в одном варианте осуществления следующие соединения исключаются из соединений формулы I:
2
5
3
2
(i) если R означает водород, X означает O, y равен 1, R представляет собой OMe, то R не представляет собой NO,
2
5
2
(ii) если R означает водород или этил, X означает C(O), x равен 0, то R не представляет собой NO;
2
(iii) если R означает водород, X означает C(O), x равен 0 и y равен 0, то кольцо A не является фенилом;
(iv) и при условии, что исключаются следующие соединения:
N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[[(3,4-дигидро-2H-пиррол-5-ил)амино]сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-[(диметиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]-2-феноксибензамид;
N-[3-(аминосульфонил)фенил]-2-(4-фетокифенокси)-5-нитробензамид;
N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-(фенилметил)бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2,3-диметилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-(фенилметил)бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метилфенил]бензамид;
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метилфенил]-2-[[2-нитро-4-(трифторметил)фенил]тио]бензамид;
2-[(2-цианофенил)тио]-N-[5-[(диэтиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид;
N-[3-(аминосульфонил)-4-метоксифенил]-2-[4-(метилтио)-3-нитробензоил]бензамид;
2-(4-хлор-3-нитробензоил)-N-[5-[(этиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]бензамид и
2-[[4-[(дифторметил)тио]фенил]амино]-N-[3-[[(2-фуранилметил)амино]сульфонил]фенил]бензамид.
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I кольцо A является необязательно замещенным фенилом.
В другом варианте осуществления для соединений формулы I кольцо A является необязательно замещенным 5-7-членным гетероарильным кольцом. Примеры таких колец показаны ниже:
2
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I X представляет собой O, S, NH, C(O) или CH.
1
6
1
6
2
1
6
2
В другом варианте осуществления для соединений формулы I X представляет O. Еще в одном варианте осуществления X представляет S. В следующем варианте осуществления X представляет собой NR, и R представляет водород или C-Cалкил. В одном из вариантов осуществления X представляет NH. В другом варианте осуществления X представляет NR, и R представляет C-Cалкил. В одном из вариантов осуществления X представляет C(O). Еще в одном варианте осуществления X представляет C(R), где каждый R независимо является водородом или C-Cалкилом. В одном из вариантов осуществления X представляет CH.
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I, x равен 0-3 или x равен 0-2. В другом варианте осуществления x равен 1 или x равен 2.
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I, x равен 1-3, и каждый R независимо выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры групп R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
3
2
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
2
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I x равен 1-3, и каждый R независимо выбран из Cl, Br, F, CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, CN, NO, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкила), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, -SOCH, метилендиокси, этилендиокси или необязательно замещенной группы, выбранной из пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, 2-оксо-имидазолидила, Cалкокси, фенила, фенилэтила, фенилокси, фенилоксиметила, фенилформила, бензила, бензиламино или бензилокси.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I R представляет собой C1-C6алкильную группу. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил и втор-бутил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I R представляет собой необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил или морфолинил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I R представляет собой необязательно замещенный фенил, бензил, фенилокси или бензилокси.
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I z равен 0-3 или z равен 0-2. В другом варианте осуществления z равен 1-3.
4
4
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I' z равен 1-3, и каждый R независимо выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
4
4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I R представляет собой C1-C6алкильную группу. В другом варианте осуществления z равен 1-3, и каждый R независимо выбран из метила, этила, изопропила, трет-бутила или втор-бутила. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил и втор-бутил.
4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I z равен 1-3, и каждый R независимо выбран из необязательно замещенного пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила или морфолинила.
4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I z равен 1-3, и каждый R независимо выбран из необязательно замещенного фенила, бензила, фенилокси или бензилокси.
5
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
В одном из вариантов осуществления для соединений формулы I группы R, если они присутствуют, являются галогеном, CN, NO или необязательно замещенной группой, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры групп R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинил, пиперизинил, морфолино или необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R').
5
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из Cl, Br, F, CF, метила, этила, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинила, пиперизинила, морфолино или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
Еще в одном варианте осуществления соединения имеют структуру формулы I-A:
2
2
1-6
В некоторых вариантах осуществления для соединений общей формулы I-A R является водородом. В других вариантах осуществления R является Cалифатической группой, где до двух атомов углерода, не присоединенных к атому азота, необязательно заменены на O, S, NR или C(O).
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O, S, NH, C(O) или CH. В другом варианте осуществления X представляет NR, и R представляет C1-C6алкил. Еще в одном варианте осуществления X представляет NR, и R представляет водород. Еще в одном варианте осуществления X представляет C(R), где каждый R независимо является водородом или C1-C6алкилом. Еще в одном варианте осуществления X представляет O.
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A x равен 0-3 или x равен 0-2. В другом варианте осуществления x равен 1 или x равен 2.
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A x равен 1-3, и каждый R независимо выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). В другом варианте осуществления группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
3
2
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
2
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A x равен 1-3, и каждый R независимо выбран из Cl, Br, F, CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, CN, NO, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкила), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, -SOCH, метилендиокси, этилендиокси или необязательно замещенной группы, выбранной из пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, 2-оксоимидазолидила, Cалкокси, фенила, фенилэтила, фенилокси, фенилоксиметила, фенилформила, бензила, бензиламино или бензилокси.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A R является C1-C6алкильной группой. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил и втор-бутил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A R выбран из необязательно замещенного пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила или морфолинила.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A R выбран из необязательно замещенного фенила, бензила, фенилокси или бензилокси.
5
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A группы R, если они присутствуют, являются галогеном, CN, NO или необязательно замещенной группой, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). В другом варианте осуществления группы R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинил, пиперазинил, морфолино или необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R').
5
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из Cl, Br, F, CF, метила, этила, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинила, пиперазинила, морфолино или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
2
3
5
1-6
3
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O или S, R представляет водород, x равен 1, и R выбран из необязательно замещенной Cалифатической группы или CF, y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из CN, CF, -C(O)R', -OR', галогена, необязательно замещенной Cалифатической группы, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила.
2
3
5
3
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O или S, R представляет водород, x равен 1, и R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, y равен 1, и R выбран из CN, CF, -C(O)R', -COOR', -OR', галогена, необязательно замещенной Cалифатической группы, 5-6-членного гетероарила или 4-7-членного гетероциклила.
2
3
5
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O или S, R представляет водород, x равен 1, и R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, y равен 1, и R выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пиразинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
2
3
5
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O, R представляет водород, x равен 1, и R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, y равен 1, и R выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пиразинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
2
3
5
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O, R представляет водород, x равен 1, и R выбран из CF или трет-бутила, y равен 1, и R выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиперидинила или морфолинила.
Еще в одном варианте осуществления соединения имеют структуру формулы II-A:
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В некоторых вариантах осуществления для соединений формулы II-A R выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, гетероарила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры групп R включают Cl, Br, F, CF, Me, Et, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A R является C1-C6алкильной группой. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил или втор-бутил. Еще в одном варианте осуществления R выбран из изопропила, трет-бутила или втор-бутила.
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A R выбран из необязательно замещенного пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила или морфолинила. Еще в одном варианте осуществления R выбран из необязательно замещенного пиридила, пиразолила, пиперидинила или морфолинила.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A R выбран из необязательно замещенного фенила, бензила, фенилокси или бензилокси.
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A R выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R').
5
3
3
2
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A R выбран из Cl, Br, F, CF, метила, этила, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COOCH, -OH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, метилендиокси, этилендиокси, пиперидинила, пиперазинила, морфолино или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
5
1-6
3
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A X представляет O или S, R выбран из необязательно замещенной Cалифатической группы или CF, и R выбран из CN, CF, -C(O)R', -COOR', -OR', галогена, необязательно замещенной Cалифатической группы, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила.
3
5
3
3
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы I-A X представляет O или S, R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, и R выбран из CN, CF, -C(O)R', -COOR', -OR', галогена, необязательно замещенной Cалифатической группы, 5-6-членного гетероарила или 4-7-членного гетероциклила.
3
5
3
3
1-4
1-4
1-4
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A X представляет O или S, R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, и R выбран из CN, CF, -C(O)(Cалкила), -COO(Cалкила), -O(Cалкила), -CONH, F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пиразанила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
3
5
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A X представляет O, R выбран из CF, метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила или втор-бутила, и R выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
3
5
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы II-A X представляет O, R выбран из CF или трет-бутила, и R выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиперидинила или морфолинила.
Еще в одном варианте осуществления соединения настоящего изобретении имеют структуру формулы III-A:
или их фармацевтически приемлемая соль, где:
3
5
x
R и каждый R независимо представляет собой Q-R;
y равен 0-4;
1-6
2
2
2
2
2
2
Q представляет собой связь или Cалифатическую цепь, где до двух не прилегающих друг к другу метиленовых звеньев Q необязательно заменены на CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR;
x
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
каждый R независимо выбран из R', галогена, NO, CN, OR', SR', N(R'), NR'C(O)R', NR'C(O)N(R'), NR'COR', C(O)R', COR', OC(O)R', C(O)N(R'), OC(O)N(R'), SOR', SOR', SON(R'), NR'SOR', NR'SON(R'), C(O)C(O)R' или C(O)CHC(O)R';
1-6
каждый R независимо выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы, и
1-8
6-10
каждый R' независимо выбран из водорода или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, Cарила, гетероарильного кольца, имеющего 5-10 атомов в кольце, или гетероциклильного кольца, имеющего 3-10 атомов в кольце, либо R и R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, или два R', взятые вместе с атомом(ами), с которыми они связаны, образуют 5-8-членное циклоалкильное, гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо, имеющее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, а также при том условии, что исключаются следующие соединения:
(i) N-[3-(аминосульфонил)фенил]-2-(4-метоксифенокси)-5-нитробензамид,
N-[3-[(циклопропиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид,
N-[3-[[(3,4-дигидро-2H-пиррол-5-ил)амино]сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид,
N-[3-[(диметиламино)сульфонил]фенил]-2-феноксибензамид,
N-[5-[(диметиламино)сульфонил]-2-метоксифенил]-2-феноксибензамид и
N-[3-(аминосульфонил)фенил]-2-(4-метоксифенокси)-5-нитробензамид.
3
3
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
2
1-6
3
3
3
2
3
2
2
1-4
В некоторых вариантах осуществления для соединений формулы III-A R выбран из галогена, CN, NO или необязательно замещенной группы, выбранной из Cалифатической группы, арила, гетероарила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -C(O)R', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R'). Примеры групп R включают Cl, Br, F, CF, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, CN, -COOH, -N(CH), -N(Et), -N(iPr), -O(CH)OCH, -CONH, -COO(Cалкил), -OH, -OCF, -SCF, -OCH, -CHOH, -NHCOCH, -SONH, необязательно замещенный пирролил, тиадиазолил, пиридил, имидазолил, пиразолил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или необязательно замещенную группу, выбранную из Cалкокси, фенила, фенилокси, бензила или бензилокси.
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A R является C1-C6алкильной группой. Примеры таких групп включают метил, этил, изопропил, трет-бутил или втор-бутил. Еще в одном варианте осуществления R представляет собой изопропил, трет-бутил или втор-бутил.
3
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A R выбран из необязательно замещенного пирролила, тиадиазолила, пиридила, имидазолила, пиразолила, пиперидинила, пиперазинила или морфолинила. Еще в одном варианте осуществления R представляет собой необязательно замещенный пиридил, пиразолил, пиперидинил или морфолинил.
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A R выбран из необязательно замещенного фенила, бензила, фенилокси или бензилокси.
5
2
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A группы R, если они присутствуют, являются галогеном, CN, NO или необязательно замещенной группой, выбранной из Cалифатической группы, арила, 5-6-членного гетероарила, 4-7-членного гетероциклила, аралкила, -N(R'), -CHN(R'), -OR', -CHOR', -SR', -CHSR', -COOR', -NRCOR', -CON(R') или -S(O)N(R').
5
3
2
1-4
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из CN, CF, -C(O)R', -COOR', -OR', -CON(R'), галогена, необязательно замещенной Cалифатической группы, 5-6-членного гетероарила или 4-7-членного гетероциклила.
5
3
1-4
1-4
1-4
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из CN, CF, -C(O)(Cалкила), -COO(Cалкила), -О(Cалкила), -CON(R'), F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразанила, пиридазинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
5
3
2
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, -CONH, F, Cl, Br, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, пирролидинила или азетидинила.
5
3
Еще в одном варианте осуществления для соединений формулы III-A y равен 1-3, и каждый R независимо выбран из CN, CF, -C(O)Me, -COOMe, -OMe, F, Cl, Br, изопропила, трет-бутила, изобутила, втор-бутила, необязательно замещенного пиридила, пиперидинила или морфолинила.
Примерные варианты осуществления соединений, предлагаемых настоящим изобретением, представлены ниже в таблице 1.
Соединения настоящего изобретения легко можно получить способами, известными в данной области. Примеры синтетических подходов к созданию соединений настоящего изобретения показаны ниже. В каждом случае исходные соединения и реагенты коммерчески доступны или могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в данной области.
На схемах IA и IB, представленных ниже, проиллюстрированы типичные способы получения соединений формулы I'. Схема IA или схема IB были использованы при получении соединений №№ 2-5, 7-16, 18-25, 28-35, 37-44, 46-47, 49-54, 56-60, 62-75, 77, 79-81, 83-87, 89, 91-96, 100, 103, 106, 117, 120, 122-123, 126-127, 131, 133, 137 и 140-142 настоящего изобретения.
Схема IA
2
2
2
3
Условия: (a) i. SOCl, CHCl; ii - пиридин; (b) HATU, EtN, ДМФА
Схема IB
На приведенной ниже схеме II проиллюстрированы типичные способы получения соединений формулы I. Схема II была использована при получении соединений №№ 1, 6, 17, 26-27, 36, 48, 55, 61, 78, 82, 88, 97-99, 101-102, 104-105, 107-109, 111, 13-116, 118-119, 121, 124-125, 128-130, 132, 134-136, 139 и 143-144 настоящего изобретения.
Схема II
3
2
2
2
2
2
2
3
2
2
2
3
3
4
2
Условия: (a) AlCl, AcCl, CHCl; (b) NaOH, HO, Br, диоксан; (c) (CuOTf)-PhH, CsCO, 1-нафтойная кислота, 4Å MS, толуол, EtOAc, кольцо A-XH; (d) i. SOCl, CHCl; ii. пиридин; (e) HATU, EtN, ДМФА; (f) CuI, KPO, ДМФА, HO, кольцо A-XH
3
На представленной ниже схеме III проиллюстрирован типичный способ получения соединений формулы I', где x равен 1, и R означает гетероцикл, содержащий в кольцевой структуре по меньшей мере один атом азота (отображено как кольцо B на схеме III ниже). Схема III была использована при получении соединений №№ 45 и 76 настоящего изобретения.
Схема III
3
4
2
Условия: CuI, KPO, ДМФА, HO, кольцо B-NH
На представленной ниже схеме IV проиллюстрирован еще один типичный способ получения соединений формулы I'. Схема IV была использована при получении соединений №№ 90 и 112 настоящего изобретения.
Схема IV
3
1
2
Условия: (a) пиридин; (b) NaH, RX, ТГФ; (c) i. цианурхлорид, EtN, ацетон; ii. HNRR
На представленной ниже схеме V проиллюстрирован типичный способ получения соединений формулы I. Схема V была использована при получении соединения № 138 настоящего изобретения.
Схема V
2
3
1
2
2
2
2
3
1
Условия: (a) CsCO, ДМФА, кольцо A-XH; (b) NaOH, HO, EtOH; (c) i. SOCl, CHCl; ii. пиридин; (d) HATU, EtN, ДМФА
3
3
2
На представленной ниже схеме VI проиллюстрирован типичный способ получения соединений формулы I', где один из R представляет либо -SOPh, либо -SOPh, и другой R, если он присутствует, выбран из любого варианта осуществления, которые описаны выше. Схема VI была использована при получении соединений №№ 110 и 112 настоящего изобретения.
Схема VI
2
2
2
2
Условия: (a) 30% водный раствор HO, гексафторпропан-2-ол; (b) mCPBA, CHCl
Некоторые дополнительные примеры осуществления соединений, в общем виде описанные выше, с дополнительными подробностями будут описаны ниже.
5. Способы применения, композиции и введение
Фармацевтически приемлемые композиции
Как обсуждалось выше, настоящее изобретение предлагает соединения, которые ингибируют потенциалзависимые каналы натриевых ионов, то есть представленные в данном описании соединения полезны для лечения заболеваний, расстройств и патологических состояний, включая, но не ограничиваясь ими, острую, хроническую, невропатическую или воспалительную боль, артрит, мигрень, кластерные головные боли, невралгию тройничного нерва, герпетическую невралгию, генерализованные невралгии, эпилепсию иди эпилептические состояния, нейродегенеративные заболевания, психиатрические расстройства, такие как тревога и депрессия, миотонию, аритмию, двигательные расстройства, нейроэндокринные заболевания, атаксию, рассеянный склероз, синдром раздраженного кишечника и недержание. В соответствии с этим в другом аспекте настоящего изобретения предлагаются фармацевтически приемлемые композиции, содержащие любое из описанных выше соединений, а также необязательно фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или наполнитель. В некоторых вариантах осуществления такие композиции необязательно дополнительно содержат одно или более дополнительных терапевтических средств.
Также следует понимать, что некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в свободной форме для лечения или там, где это необходимо, в виде их фармацевтически приемлемых производных. В соответствии с настоящим изобретением фармацевтически приемлемые производные включают, но не ограничиваясь ими, фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, соли таких эфиров или любые другие продукты присоединения/производные, которые при введении пациенту, нуждающемуся в лечении, способны, прямо или косвенно, давать соединения, описанные выше в других отношениях, или их метаболиты, или их остатки.
Как использовано в данном описании, термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к таким солям, которые в рамках известных медицинских критериев считаются пригодными для применения в условиях контакта с тканями человека и низших животных, не создавая при этом ненужных явлений токсичности, раздражения, аллергических реакций и т.п., а также соизмеримы с разумным соотношением польза-риск. Понятие "фармацевтически приемлемая соль" означает любую нетоксичную соль или соль сложного эфира соединения настоящего изобретения, которая при введении реципиенту способна, прямо или косвенно, давать указанное соединение или его метаболиты/остатки, обладающие ингибирующей активностью. Как использовано в данном описании, термин "метаболит, обладающий ингибирующей активностью, или его остаток" означает, что метаболит или его остаток также является ингибитором потенциалзависимых натриевых каналов.
+
1-4
4
Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Например, S.M. Berge, et al. подробно описывают фармацевтически приемлемые соли в своей публикации в J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, включенной в данное описание посредством ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений настоящего изобретения включают соли, полученные из подходящих неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых, нетоксичных кислотно-аддитивных солей являются соли аминогруппы, образованные неорганическими кислотами, в частности хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, фосфорной кислотой, серной кислотой и хлорной кислотой, или органическими кислотами, в частности уксусной кислотой, щавелевой кислотой, малеиновой кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, янтарной кислотой или малоновой кислотой, либо полученные другими способами, известными в данной области, например ионным обменом. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипаты, альгинаты, аскорбаты, аспартаты, бензолсульфонаты, бензоаты, бисульфаты, бораты, бутираты, камфораты, камфорсульфонаты, цитраты, циклопентанпропионаты, диглюконаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, формиаты, фумараты, глюкогептонаты, глицеросульфаты, глюконаты, гемисульфаты, гептаноаты, гексаноаты, гидроиодиды, 2-гидроксиэтансульфонаты, лактобионаты, лактаты, лаураты, лаурилсульфаты, малаты, малеаты, малонаты, метансульфонаты, 2-нафталинсульфонаты, никотинаты, нитраты, олеаты, оксалаты, пальмитаты, памоаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, фосфаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, стеараты, сукцинаты, сульфаты, тартраты, тиоцианаты, п-толуолсульфонаты, ундеканоаты, валераты и подобные соли. Соли, полученные из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов, соли аммония и N(Cалкил) соли. Настоящее изобретение также предусматривает кватернизацию любых основных азотсодержащих групп раскрываемых соединений. Посредством такой кватернизации можно получить водорастворимые или маслорастворимые, а также дисперсные продукты. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п. Дополнительные фармацевтически приемлемые соли включают, когда это целесообразно, нетоксичные соли аммония, четвертичные соли аммония и соли аминных катионов, полученные при использовании таких противоионов, как галоиды, гидроксиды, карбоксилаты, сульфаты, фосфаты, нитраты, низшие алкилсульфонаты и арилсульфонаты.
Как описано выше, фармацевтически приемлемые композиции настоящего изобретения дополнительно содержат фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или наполнитель, которые, как использовано в данном описании, включают любые растворители, разбавители или другие жидкие наполнители, диспергирующие и суспендирующие вспомогательные средства, поверхностно активные агенты, изотонические агенты, загустители или эмульгирующие агенты, консерванты, твердые связующие вещества, лубриканты и т.п. в зависимости от конкретной и необходимой дозированной формы. В ссылке Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) раскрыты различные носители, применяемые при составлении фармацевтически приемлемых композиций, и известные методики получения таких композиций. За исключением тех случаев, когда какая-либо традиционная среда-носитель несовместима с соединениями настоящего изобретения, например в связи с нежелательным биологическим эффектом или с другими вредоносными взаимодействиями с каким-либо иным компонентом(ами) фармацевтически приемлемой композиции, ее применение может рассматриваться в объеме действия настоящего изобретения. Некоторые примеры материалов, которые могут быть использованы в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают, но не ограничиваясь ими, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки, например сывороточный альбумин человека, буферные вещества, например фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту или сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, например протаминсульфат, дигидрофосфат натрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный оксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, полиакрилаты, воски, блок-полимеры полиэтилена-полиоксипропилена, шерстный жир (ланолин), сахара, например лактозу, глюкозу и сахарозу, крахмалы, например кукурузный крахмал и картофельный крахмал, целлюлозу и ее производные, например натрийкарбоксиметилцеллюлозу, этилцеллюлозу и ацетат целлюлозы, порошковый трагакант, солод, желатин, тальк, эксципиенты, например масло какао и воски для суппозиториев, масла, например арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло, гликоли, например пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, сложные эфиры, например этилолеат и этиллаурат, агар, буферные агенты, например гидроксид магния и гидроксид алюминия, альгиновую кислоту, апирогенную воду, изотонический солевой раствор, раствор Рингера, этиловый спирт и фосфатные буферные растворы, а также другие нетоксичные совместимые лубриканты, например лаурилсульфат натрия и стеарат магния, красящие агенты, высвобождающие агенты, агенты для покрытий, подсластители, вкусовые и ароматизирующие агенты, консерванты и антиоксиданты, причем указанные вещества могут быть введены в состав композиции по усмотрению составителя рецептуры.
Применение соединений и фармацевтически приемлемых композиций
Еще в одном аспекте настоящее изобретение предлагает способ лечения или облегчения тяжести острой, хронической, невропатической боли или боли при воспалении, артрита, мигрени, кластерных головных болей, невралгии тройничного нерва, герпетической невралгии, генерализованных невралгий, эпилепсии или эпилептических состояний, нейродегенеративных заболеваний, психиатрических расстройств, например тревоги и депрессии, миотонии, аритмии, двигательных расстройств, нейроэндокринных заболеваний, атаксии, рассеянного склероза, синдрома раздраженного кишечника или недержания, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения или фармацевтически приемлемой композиции, содержащей такое соединение. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления предлагается способ лечения или облегчения тяжести острой, хронической, невропатической боли или боли при воспалении, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или фармацевтически приемлемой композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения под "эффективным количеством" соединения или фармацевтически приемлемой композиции подразумевается такое количество, которое эффективно для лечения или облегчения тяжести одного или более заболеваний/состояний, включая острую, хроническую, невропатическую боль или боль при воспалении, эпилепсию или эпилептические состояния, нейродегенеративные заболевания, психиатрические расстройства, например тревогу и депрессию, миотонию, аритмию, двигательные расстройства, нейроэндокринные заболевания, атаксию, рассеянный склероз, синдром раздраженного кишечника или недержание.
В соответствии со способом настоящего изобретения соединения и композиции можно вводить пациенту в любом количестве и любым способом введения, эффективным для лечения или облегчения тяжести одного или более заболеваний/состояний, включая острую, хроническую, невропатическую боль или боль при воспалении, эпилепсию или эпилептические состояния, нейродегенеративные заболевания, психиатрические расстройства, например тревогу и депрессию, миотонию, аритмию, двигательные расстройства, нейроэндокринные заболевания, атаксию, рассеянный склероз, синдром раздраженного кишечника или недержание. Точное количество, необходимое в конкретной ситуации, будет варьироваться от субъекта к субъекту в зависимости от биологического вида, возраста и общего состояния субъекта, тяжести инфекции, от конкретного лекарственного средства, способа его введения и т.п. Предпочтительно, чтобы соединения изобретения были представлены в единичной дозированной форме, что важно для простоты их введения и единообразия дозировки. Выражение "единичная дозированная форма", как использовано в данном описании, относится к физически дискретной единице средства, соответствующей тому пациенту, который получает лечение. Однако необходимо понимать, что суммарную ежедневную дозу соединений или композиций, вводимых пациентам, в каждом конкретном случае, будет определять лечащий врач исходя из общеизвестных установленных медицинских критериев. Специфический эффективный уровень доз для каждого конкретного пациента или организма будет зависеть от множества факторов, включая заболевание, подлежащее лечению, и тяжесть этого заболевания, активность применяемого конкретного соединения, специфику применяемой композиции, возраст пациента, его/ее массу тела, общее состояние здоровья, половую принадлежность и питание (диету), время введения лекарственного средства, способ введения лекарственного средства, скорость выведения из организма конкретного применяемого соединения, продолжительность лечения, другие лекарственные средства, используемые в комбинации или одновременно с конкретным применяемым соединением, и многие другие факторы подобного рода, которые хорошо известны в медицине. Термин "субъект", как использовано в данном описании, означает животное, предпочтительно, млекопитающее и, наиболее предпочтительно, человека.
Фармацевтически приемлемые композиции настоящего изобретения можно вводить человеку и другим животным орально, ректально, парентерально, интрацистернально, интравагинально, интраперитонеально, местно (в виде порошков, мазей или капель), буккально (в виде орального или назального спрея и т.п.) в зависимости от тяжести инфекции, подлежащей лечению. В некоторых вариантах осуществления предлагаемые соединения можно вводить орально или парентерально на уровне доз приблизительно от 0,01 мг/кг до 50 мг/кг, предпочтительно, приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта в день, причем для получения желаемого терапевтического эффекта лекарственное средство можно вводить один или несколько раз в день.
Жидкие дозированные формы для перорального введения включают, но не ограничиваясь ими, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям жидкие дозированные формы могут содержать инертные разбавители, часто применяемые в данной области, например воду или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, например этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое (из ростков), оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сорбитановые эфиры жирных кислот, а также их смеси. Помимо инертных разбавителей пероральные композиции могут также включать адъюванты, например смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые и ароматизирующие добавки.
Инъецируемые препараты, например стерильные водные или маслянистые суспензии для инъекций, можно получить по известным методикам с использованием подходящих дисперсионных или смачивающих агентов, а также суспендирующих агентов. Стерильный инъецируемый препарат может также представлять собой стерильный инъецируемый раствор, суспензию или эмульсию в нетоксичном, парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых наполнителей и растворителей, которые можно применять в настоящем изобретении, относятся вода, раствор Рингера (U.S.P.) и изотонический раствор хлорида натрия. В дополнение, в качестве растворителей или суспендирующих сред можно условно использовать стерильные нелетучие масла. С этой целью можно использовать любое легкое нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. В дополнение, для получения инъецируемых препаратов можно использовать жирные кислоты, например олеиновую кислоту.
Инъецируемые препараты могут быть стерилизованы, например посредством фильтрации через фильтр, не пропускающий бактерии, или встраивания стерилизующих агентов в стерильные твердые композиции, которые перед применением можно растворять или диспергировать в стерильной воде, либо в другой стерильной инъецируемой среде.
Для того чтобы пролонгировать эффект соединения настоящего изобретения, часто бывает желательно замедлить абсорбцию соединения, введенного посредством внутримышечной или подкожной инъекции. Этого можно достичь, применяя жидкую суспензию кристаллического или аморфного материала, обладающего плохой растворимостью в воде. В таком случае скорость абсорбции соединения будет зависеть от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера и формы кристаллов. Альтернативно, замедленная абсорбция парентерально введенной формы соединения достигается растворением или суспендированием соединения в масляном носителе. Инъецируемые формы депо получают посредством формирования матриц микрокапсул соединения в биоразлагаемых полимерах, например в полилактиде-полигликолиде. Скорость высвобождения соединения поддается управлению в зависимости от соотношения между соединением и полимером и от природы конкретного используемого полимера. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Депо инъецируемые препараты также получают путем захвата соединения липосомами или микроэмульсиями, которые совместимы с тканями организма.
Композиции для ректального или вагинального введения представляют собой предпочтительно суппозитории, которые можно получить, смешивая соединения настоящего изобретения с подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, например с маслом какао, полиэтиленгликолем или воском для суппозиториев, которые остаются твердыми при обычной температуре окружающей среды, но разжижаются при температуре тела и, следовательно, плавятся в полости прямой кишки или влагалища, высвобождая активное соединение.
Твердые дозированные формы для орального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах активное соединение смешано по меньшей мере с одним инертным, фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, например с цитратом натрия, дикальцийфосфатом и/или a) с наполнителями или инертными веществами, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, b) со связующими веществами, например с карбоксиметилцеллюлозой, альгинатами, желатином, поливинилпирролидоном, сахарозой и гуммиарабиком, c) с увлажнителями, например с глицерином, d) с дезинтегрирующими агентами, например с агар-агаром, карбонатом кальция, картофельным или маниоковым крахмалом, альгиновой кислотой, некоторыми силикатами и карбонатом кальция, e) с агентами, замедляющими растворение, например с парафином, f) с ускорителями всасывания, например с четвертичными соединениями аммония, g) со смачивающими агентами, например с цетиловым спиртом и глицеринмоностеаратом, h) с абсорбентами, например с каолином и бентонитовой глиной, i) с лубрикантами, например с тальком, стеаратом кальция, стеаратом магния, твердыми полиэтиленгликолями, лаурилсульфатом натрия и их смесями. При использовании капсул, таблеток и пилюль дозированная форма может также включать буферные агенты.
Твердые композиции сходного типа можно также использовать как наполнители в мягких и твердых капсулах из желатина с использованием таких эксципиентов, как лактоза (или молочный сахар), полиэтиленгликоли высокого молекулярного веса и т.п. Твердые дозированные формы типа таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получить с покрытиями и оболочками, например энтеросолюбильными и другими покрытиями, хорошо известными в фармацевтической практике. Такие покрытия могут содержать опалесцирующие компоненты, а также композиции, способствующие высвобождению активного ингредиента(ов), исключительно или преимущественно, в определенном отделе кишечного тракта, необязательно отсроченным образом. Примеры встраиваемых композиций, пригодных для применения в указанном аспекте, включают полимерные вещества и воски. Твердые композиции сходного типа можно также использовать как наполнители в мягких и твердых капсулах из желатина с использованием таких эксципиентов, как лактоза (или молочный сахар), полиэтиленгликоли высокой молекулярной массы и т.п.
Активные соединения также могут быть представлены в микроинкапсулированной форме с одним или более эксципиентами, как отмечалось выше. Твердые дозированные формы типа таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получить с покрытиями и оболочками, например энтеросолюбильными, контролирующими высвобождение, и покрытиями другого типа, хорошо известными в фармацевтической практике. В таких твердых дозированных формах активное соединение может быть смешано по меньшей мере с одним инертным разбавителем, например с сахарозой, лактозой или крахмалом. Такие дозированные формы могут также включать, как в обычной практике, дополнительные вещества, не являющиеся инертными разбавителями, например лубриканты для таблетирования, и другие вспомогательные вещества для таблетирования, например стеарат магния и микрокристаллическую целлюлозу. При использовании капсул, таблеток и пилюль дозированные формы могут также включать буферные агенты. Они могут необязательно содержать опалесцирующие компоненты, а также композиции, способствующие высвобождению активного ингредиента(ов), исключительно или преимущественно, в определенном отделе кишечного тракта, необязательно отсроченным образом. Примеры встраиваемых композиций, пригодных для применения в указанном аспекте, включают полимерные вещества и воски.
Дозированные формы для местного или трансдермального (чрескожного) введения соединений настоящего изобретения включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, пудры, растворы, спреи, ингаляторы и пластыри. Активный компонент в стерильных условиях смешивают с фармацевтически приемлемым носителем и, при необходимости, с консервантами или буферными веществами. Дозированные формы для глазного введения, ушные капли и глазные капли также рассматриваются как относящиеся к данному изобретению. Настоящее изобретение дополнительно рассматривает применение трансдермальных пластырей, дополнительное преимущество которых связано с возможностью управляемой доставки соединения в организм. Такие дозированные формы получают, растворяя или диспергируя соединение в подходящей среде. Для увеличения потока соединения через кожу можно также использовать усилители абсорбции. Скоростью поступления соединения в организм можно управлять либо применяя мембрану, контролирующую скорость абсорбции, либо распределяя соединение в полимерной матрице или геле.
Как в целом описано выше, соединения настоящего изобретения полезны в качестве ингибиторов потенциалзависимых натриевых каналов. В одном из вариантов осуществления предлагаемые соединения и композиции являются ингибиторами одного или более каналов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9, то есть, без намерения связываться с какой-либо конкретной теорией, считают, что указанные соединения и композиции особенно полезны для лечения или облегчения тяжести заболеваний, болезненных состояний или расстройств, в развитие которых вовлечена активация или гиперактивность одного или более каналов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9. В тех случаях, когда в развитие конкретного заболевания, болезненного состояния или расстройства вовлечена активация или гиперактивность NaV1.1, NaV 1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9, такое заболевание, болезненное состояние или расстройство можно также называть "заболевание, болезненное состояние или расстройство, опосредованное NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9". В соответствии с этим еще в одном аспекте настоящее изобретение предлагает способ лечения или облегчения тяжести заболеваний, болезненных состояний или расстройств, в развитие которых вовлечена активация или гиперактивность одного или более каналов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9.
Активность соединений, используемых в качестве ингибиторов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9, можно оценивать в соответствии со способами, которые в общих чертах описаны в приведенных ниже примерах, или такими способами, которые доступны специалисту в данной области.
В некоторых типичных вариантах осуществления предлагаемые соединения полезны в качестве ингибиторов канала NaV1.8.
Также следует понимать, что соединения и фармацевтически приемлемые композиции настоящего изобретения могут быть использованы в комбинированной терапии, то есть указанные соединения и фармацевтически приемлемые композиции можно вводить одновременно с одним или более желательными лекарственными средствами/медицинскими процедурами, до или после них. При рассмотрении конкретных терапевтических комбинаций (лекарственных средств или процедур), которые можно задействовать в комбинированной схеме лечения, необходимо принимать во внимание совместимость желаемых лекарственных средств и/или процедур, а также иметь в виду желаемый лечебный эффект, который планируется получить. Также необходимо учитывать, что применяемые методы лечения могут быть рассчитаны на достижение желаемого лечебного эффекта при каком-либо заболевании (например, соединение изобретения можно вводить одновременно с другим средством, направленным на лечение того же заболевания) или на достижение разных эффектов (например, на подавление каких-либо неблагоприятных побочных эффектов). Как использовано в данном описании, под дополнительными терапевтическими средствами, которые обычно вводят пациенту для лечения или предупреждения конкретного заболевания или болезненного состояния, подразумевают "подходящие для заболевания или болезненного состояния, подлежащего лечению". Например, типичные дополнительные терапевтические средства включают, но не ограничиваясь ими: неопиоидные анальгетики (индолы, в частности, этодолак, индометацин, сулиндак, толметин, нафтилалканоны, в частности, набуметон, оксикамы, в частности, пироксикам, производные пара-аминофенола, в частности, ацетаминофен, пропионовых кислот, в частности, фенопрофен, флурбипрофен, ибупрофен, кетопрофен, напроксен, напроксен-натрий, оксапрозин, салицилаты, в частности, аспирин, холина магния трисалицилат, дифлунисал, фенаматы, в частности, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, и пиразолы, в частности, фенилбутазон), либо опиодные (наркотические) агонисты (например, кодеин, фентанил, гидроморфон, леворфанол, меперидин, метадон, морфин, оксикодон, оксиморфон, пропоксифен, бупренорфин, буторфанол, дезоцин, налбуфин и пентазоцин). В дополнение, можно использовать нелекарственные подходы к обезболиванию в сочетании с введением одного или более соединений настоящего изобретения. Например, с этой целью можно использовать следующие подходы: анестезиологические (спинномозговое вливание, нервная блокада), нейрохирургические (невролиз путей в ЦНС), нейростимулирующие (чрескожная электростимуляция нервов, стимуляция заднего столба спинного мозга), физиатрические (физикальная терапия, ортопедические устройства, диатермия) или физиологические (когнитивные методы - гипноз, биологическую обратную связь, или поведенческие воздействия). Подходящие дополнительные терапевтические средства или подходы в общих чертах описаны в монографии The Merck Manual, Seventeenth Edition, Ed. Mark H. Beers and Robert Berkow, Merck Research Laboratories, 1999, а также на веб-сайте Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (США), www.fda.gov, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.
Количество дополнительного терапевтического средства, представленного в композициях настоящего изобретения, не должно превышать того количества, которое обычно вводят в композиции, включающие данное терапевтическое средство в качестве единственного активного ингредиента. Предпочтительное количество дополнительного терапевтического средства в раскрываемых композициях будет варьироваться в диапазоне приблизительно от 50% до 100% того количества, которое обычно вводят в композиции, включающие данное терапевтическое средство в качестве единственного активного ингредиента.
Соединения настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемые композиции можно также встраивать в композиции для покрытия или в имплантируемые медицинские устройства, например в протезы, искусственные клапаны, сосудистые трансплантаты, стенты и катетеры. В соответствии с этим настоящее изобретение в одном из аспектов включает композицию для покрытия имплантируемого устройства, которая содержит соединение настоящего изобретения, как описано выше с учетом перечисленных классов и подклассов, а также носитель, пригодный для покрытия указанного имплантируемого устройства. Еще в одном аспекте настоящее изобретение включает имплантируемое устройство, которое покрыто композицией, содержащей соединение настоящего изобретения, как описано выше с учетом перечисленных классов и подклассов, а также носитель, пригодный для покрытия указанного имплантируемого устройства. Пригодные покрытия и общие принципы изготовления имплантируемых устройств с покрытиями описаны в патентах США 6099562, 5886026 и 5304121. Типичные покрытия представляют собой биосовместимые полимерные материалы, например полимерный гидрогель, полиметилдисилоксан, поликапролактон, полипропиленгликоль, полимолочную кислоту, этиленвинилацетат и их смеси. Покрытия могут быть необязательно дополнительно покрыты подходящим наружным слоем из фторсиликона, полисахаридов, полиэтиленгликоля, фосфолипидов или их комбинаций, улучшающих управляемые характеристики высвобождения активных ингредиентов композиции.
Еще один аспект изобретения относится к способу подавления активности каналов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9 в биологическом образце или в организме пациента, причем указанный способ включает введение пациенту соединения формулы I (композиции, содержащей указанное соединение) или контакирование указанного биологического образца с данным соединением/композицией. Термин "биологический образец", как использовано в данном описании, включает, но без ограничений, клеточные культуры или их экстракты, биопсийный материал, полученный от млекопитающего, или его экстракт, а также кровь, слюну, мочу, фекалии, семенную жидкость, слезы или другие биологические жидкости, либо их экстракты.
Подавление активности каналов NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3, NaV1.4, NaV1.5, NaV1.6, NaV1.7, NaV1.8 или NaV1.9 в биологическом образце полезно в отношении многих целей, которые известны специалистам в данной области. Примеры таких целей включают, но не ограничиваются ими, изучение роли каналов ионов натрия в биологических и патологических феноменах, а также сравнительную оценку новых ингибиторов каналов ионов натрия.
Для того чтобы раскрываемое изобретение можно было понять более глубоко, будут приведены следующие примеры. Следует понимать, что эти примеры даны только в иллюстративных целях, и их не следует истолковывать в качестве каких-либо ограничений настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Общие методы
1
13
3
6
3
2
2
2
Спектры H ЯМР (400 МГц) и C ЯМР (100 МГц) были получены через растворы в дейтерохлороформе (CDCl) или в диметилсульфоксиде-D (ДМСО). Данные ЖХ/МС были получены с использованием насосов PESciex API-150-EX LC/MS, Shimadzu LC-8A, автоматического пробоотборника Gilson 215, инъекционного модуля Gilson 819 со скоростью потока 3,0 мл/мин и градиентом 10-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), колонки Phenomenex Luna 5 мкм C 18 (50×4,60 мм), детектора Shimadzu SPD-IOA UV/Vis, детектора Cedex 75 ELSD. Хроматографию в силикагеле проводили с использованием силикагеля-60 с размером частиц 230-400 меш. Пиридин, дихлорметан (CHCl), тетрагидрофуран (ТГФ), полученные от Aldrich Sure-Seal, хранили в бутылках в сухом азоте. Все реакции проводили при перемешивании магнитной мешалкой, если специально не указано иное. Если специально не указано иное, все температуры соответствовали внутренним температурам реакций.
1-(4-трет-бутил-2-бромфенил)этанон
2
2
2
2
2
2
3
2
4
2
2
3
трет
J
J
J
1
Хлорид алюминия (8,0 г, 60 ммоль) перемешивали в CHCl (200 мл) и медленно добавляли ацетилхлорид (8,5 мл, 120 ммоль), получая гомогенный раствор. Затем медленно добавляли раствор 3-бром-трет-бутилбензола (11 г, 50 ммоль) в CHCl (20 мл) и продолжали перемешивание компонентов реакции при комнатной температуре в течение 16 часов. После разбавления CHCl реакционную смесь промывали водой, насыщенным водным NaHCO и снова водой. Органический раствор сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Хроматографическая очистка в силикагеле (0%-50% CHCl-гексаны) давала 1-(4--бутил-2-бромфенил)этанон (выход 3,1 г, 24%) в виде светло-желтого масла. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7,61 (д, =1,8 Гц, 1H), 7,46 (д, =8,1 Гц, 1H), 7,37 (дд, =8,1, 1,8 Гц, 1H), 2,63 (с, 3H), 1,32 (с, 9H) м.д.
4-трет-бутил-2-бромбензойная кислота
трет
трет
J
J
J
2
4
3
1
Раствор NaOH (7,8 г, 190 ммоль) в воде (60 мл) охлаждали на ледяной бане и медленно добавляли бром (2,51 мл, 49 ммоль). Затем медленно добавляли раствор 1-(4--бутил-2- бромфенил)этанона (3,1 г, 12 ммоль) в диоксане (60 мл) и ледяную баню удаляли. После перемешивания при комнатной температуре в течение 3 часов реакционную смесь подкисляли концентрированной хлористоводородной кислотой. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные экстракты промывали водой, сушили над NaSO и концентрировали в вакууме, получая 4--бутил-2-бромбензойную кислоту (выход 3,1 г, 100%) в виде сухого вещества желто-коричневого цвета. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7,97 (д, =8,3 Гц, 1H), 7,71 (д, =1,9 Гц, 1H), 7,41 (дд, =8,3, 1,9 Гц, 1Н), 1,34 (с, 9H) м.д.
трет
2-(4-фторфенокси)-4--бутилбензойная кислота
трет
трет
J
J
J
2
2
3
2
3
+
1
Перемешиваемую суспензию 4--бутил-2-бромбензойной кислоты (0,26 г, 1,0 ммоль), 4-фторфенола (0,22 г, 2,0 ммоль), карбоната цезия (0,65 г, 2,0 ммоль), комплекса меди и трифторметансульфонатбензола (13 мг, 25 мкмоль), 1-нафтойной кислоты (0,34 г, 2,0 ммоль) и молекулярного сита 4Å (0,25 г) в толуоле (10 мл) и EtOAc (5 мкл) нагревали при 110°C в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали хроматографией на силикагеле (0%-5% MeOH-CHCl), получая 2-(4-фторфенокси)-4--бутилбензойную кислоту (выход 0,11 г, 39%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z 289,0 (M+H), 3,58 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)). H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,12 (д, =8,3 Гц, 1H), 7,24 (д, =1,7 Гц, 1H), 7,14-7,05 (м, 4H), 6,84 (д, =1,6 Гц, 1H), 1,23 (с, 9H) м.д.
трет
2-(4-фторфенокси)-4--бутил-N-(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид (соединение 78)
трет
трет
2
2
2
4
3
2
+
Раствор 2-(4-фторфенокси)-4--бутилбензойной кислоты (0,11 г, 0,39 ммоль) и тионилхлорида (0,28 мл, 3,9 ммоль) в CHCl (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и к полученному в результате маслу добавляли раствор 3-аминобензолсульфонамида (73 мг, 0,42 ммоль) в пиридине (4 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные экстракты промывали водой, сушили над NaSO и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (0%-50% EtOAc-гексаны), получая белое твердое вещество, которое перекристаллизовывали из EtOAc и гексанов. 2-(4-фторфенокси)-4--бутил-N-(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид (выход 85 мг, 50%) получали в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z 443,3 (M+H), 3,49 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
N-(3-(аминосульфонил)фенил)-4-(трифторметокси)бензамид (соединение 34)
3
2
3
2
+
К раствору 3-аминобензолсульфонамида (17 мг, 0,10 ммоль) в пиридине (1 мл) добавляли 4-трифторметоксибензоилхлорид (16 мкл, 0,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, используя 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0.05% ТФУК) и получая N-(3-(аминосульфонил)фенил)-4-(трифторметокси)бензамид. ЖХ/МС: m/z 360,9 (M+H), 3,02 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
N
2-циклогексил--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид (соединение 83)
3
2
3
2
N
+
Раствор 2-циклогексилбензойной кислоты (20 мг, 0,10 ммоль) и HATU (38 мг, 0,10 ммоль) в ДМФА (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 минут. К полученному раствору добавляли 3-аминобензолсульфонамид (17 мг, 0,10 ммоль) и триэтиламин (14 мкл, 0,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), получая 2-циклогексил--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 359,1 (M+H), 3,85 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
N
2-(2-(пиперидинил-1-ил)фенокси)--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид (соединение 53)
N
3
4
3
2
3
2
+
Суспензию 2-бром--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамида (0,10 г, 0,28 ммоль), 2-(пиперидин-1-ил)фенола (74 мг, 0,28 ммоль), KPO (0,12 г, 0,56 ммоль) и CuI (53 мг, 0,28 ммоль) в ДМФА (1 мл) и воде (20 мкл) герметично закрывали в стеклянной пробирке и нагревали в микроволновой печи при 150°C в течение 15 минут. Реакционную смесь фильтровали и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), получая 2-(2-(пиперидин-1-ил)фенокси)-N-(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 452,0 (M+H), 2,31 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
трет
3-(4--бутилбензамид)бензолсульфоновая кислота
трет
трет-
2
4
2
2
3
2
+
К раствору 3-аминобензолсульфоновой кислоты (1,7 г, 10 ммоль) в пиридине (100 мл) добавляли 4--бутилбензоилхлорид (2,0 мл, 0,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток растворяли в EtOAc и промывали 1M водной хлористоводородной кислотой. Водные смывы экстрагировали EtOAc. Объединенные органические экстракты сушили над NaSO и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (10%-20% MeOH-CHCl), получая 3-(4-бутилбензамид)бензолсульфоновую кислоту (выход 2,1 г, 63%). ЖХ/МС: m/z 334,3 (M+H), 2,799 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
трет
N
3-(4--бутил--метилбензамид)бензолсульфоновая кислота
трет
трет
N
3
2
3
2
+
Гидрид натрия (26 мг, 0,66 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 3-(4--бутилбензамид)бензолсульфоновой кислоты (0,10 г, 0,30 ммоль) в ТГФ (5 мл) и через 30 минут добавляли иодометан (37 мкл, 0,60 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 17 часов и добавляли 1М водную хлористоводородную кислоту (1 мл). Растворитель выпаривали в вакууме и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO(0,05% ТФУК), получая 3-(4--бутил--метилбензамид)бензолсульфоновую кислоту (выход 24 мг, 23%). ЖХ/МС: m/z 348,3 (M+H), 3,82 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
трет
N
N
4--бутил--метил--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид (соединение 90)
трет
N
трет
N
N
3
2
3
2
+
Раствор 3-(4--бутил--метилбензамид)бензолсульфоновой кислоты (12 мг, 35 мкмоль), цианурхлорида (7,0 мг, 40 мкмоль) и триэтиламина (6,0 мкл, 40 мкмоль) в ацетоне (0,5 мл) герметично закрывали в стеклянной пробирке и нагревали в микроволновой печи при 120°C в течение 10 минут. Затем добавляли концентрированный гидроксид аммония (150 мкл) и перемешивали реакционную смесь в течение 6 часов. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), получая 4--бутил--метил--(3-(аминосульфонил)фенил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 347,3 (M+H), 2,86 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
2-(2-метилпиридинил-3-илокси)-4-(трифторметил)бензонитрил
2
4
3
1
J
J
J
J
Смесь 2-фтор-4-(трифторметил)бензонитрила (0,19 г, 1,0 ммоль), 2-метилпиридин-3-ола (0,11 г, 1,0 ммоль) и карбоната цезия (0,33 г, 1,0 ммоль) в безводном ДМФА (5 мл) нагревали при 50°C в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные экстракты промывали водой, сушили над NaSO и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (0%-30% EtOAc-гексаны), получая 2-(2-метилпиридинил-3-илокси)-4-(трифторметил)бензонитрил (выход 0,26 г, 94%). H ЯМР (400 МГц, CDCl)δ 8,50 (дд, =4,7, 1,4 Гц, 1H), 7,85 (д, =8,0 Гц, 1H), 7,44 (дд, =8,1, 0,7 Гц, 1H), 7,35 (дд, =8,1, 1,4 Гц, 1H), 7,28-7,25 (м, 1H), 6,87 (с, 1H), 2,50 (с, 3H) м.д.
2-(2-метилапиридин-3-илокси)-4-(трифторметил)бензойная кислота
3
2
3
1
J
J
J
J
Смесь 2-(2-метилпиридин-3-илокси)-4-(трифторметил)бензонитрила (56 мг, 0,20 ммоль), 1М раствора гидроокиси натрия (1 мл, 1 ммоль) и EtOH (1 мл) нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 17 часов. Растворитель удаляли в вакууме и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), получая 2-(2-метилпиридин-3-илокси)-4-(трифторметил)бензойную кислоту в виде соли ТФУК. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,36 (д, =5,6 Гц, 1H), 8,32 (д, =8,1 Гц, 1H), 7,72 (д, =8,1 Гц, 1H), 7,51-7,47 (м, 2H), 7,30 (д, =8,3 Гц, 1H), 2,81 (с, 3H) м.д.
N
2-(2-метилпиридин-3-илокси)--(3-сульфамоилфенил)(трифторметил)бензамид (соединение 138)
3
2
3
2
N
+
Раствор соли ТФУК 2-(2-метилпиридин-3-илокси)-4-(трифторметил)бензойной кислоты (54 мг, 0,13 ммоль) и HATU (50 мг, 0,13 ммоль) в ДМФА (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 минут. К полученному раствору добавляли 3-аминобензолсульфонамид (23 мг, 0,13 ммоль) и триэтиламин (46 мкл, 0,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, с использованием 10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК), получая 2-(2-метилпиридин-3-илокси)--(3-сульфамоилфенил)-4-(трифторметил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 452,3 (M+H), 1,07 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
трет
N
4--бутил-2-(фенилсульфинил)--(3-сульфамоилфенил)бензамид (соединение 110)
трет
N
трет
N
2
2
3(водн.)
2
2
2
4
3
2
3
2
+
К раствору 4--бутил-2-(фенилтио)--(3-сульфамоилфенил)бензамида (15,4 мг, 0,035 ммоль) в 1,1,1,3,3,3-гексафторпропан-2-оле (0,3 мл) добавляли HO (30% по массе в воде, 0,01 мл, 0,07 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут и добавляли насыщенный NaHCO и CHCl (по 1 мл каждого). Органический слой фильтровали через рыхлый слой NaSO и концентрировали. Продукт очищали ВЭЖХ с обращенной фазой (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)), получая 4--бутил-2-(фенилсульфинил)--(3-сульфамоилфенил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 457,4 (M+H), 1,54 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
трет
N
4--бутил-2-(фенилсульфонил)--(3-сульфамоилфенил)бензамид (соединение 112)
трет
N
трет
N
2
2
3(водн.)
2
4
3
2
3
2
+
К раствору 4--бутил-2-(фенилтио)--(3-сульфамоилфенил)бензамида (15,4 мг, 0,035 ммоль) в CHCl (0,5 мл) добавляли mCPBA (12 мг, 0,053 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут и добавляли насыщенный NaHCO (0,5 мл). Органический слой фильтровали через рыхлый слой NaSO и концентрировали. Продукт очищали ВЭЖХ с обращенной фазой (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)), получая 4--бутил-2-(фенилсульфонил)--(3-сульфамоилфенил)бензамид. ЖХ/МС: m/z 473,2 (M+H), 1,70 мин (10%-99% CHCN (0,035% ТФУК)/HO (0,05% ТФУК)).
Аналитические данные для соединений из таблицы 1 показаны ниже в таблице 2:
<b>Таблица 2</b>
<b>№ соед.</b>
<b>ЖХ-</b>МС<b> M+1</b>
<b>LC-RT мин</b>
1
425,3
3,45
2
369,1
2,68
3
344,9
3,03
4
342,3
2,57
5
367
2,97
6
386
3,18
7
367
3,07
8
345,2
2,66
9
337,1
2,4
10
319,2
2,76
11
354,3
1,32
12
383,1
3,72
13
354,9
2,83
14
347,2
3,18
15
369,1
2,93
16
437,3
3,06
17
460,3
3,63
18
381,3
2,73
19
343,2
2,59
20
397
2,67
21
403,3
2,91
22
307,1
2,5
23
399,1
2,87
24
381,3
3,42
25
361,3
3,13
26
424,3
3,55
27
369
1,76
28
305,4
2,58
29
325,3
2,62
30
360,9
2,54
31
311,1
2,78
32
321,1
2,46
33
320,3
2,41
34
360,9
3,02
35
345
2,79
36
410,1
2,78
37
335
2,23
38
291,2
2,33
39
321,3
2,59
40
354,8
2,79
42
375,1
2,97
43
377,5
3,32
44
320,3
1,7
45
461,2
3,22
46
381,1
3,29
47
344,9
2,42
48
459,3
3,52
49
361,1
2,38
50
399,3
2,85
51
383
3,16
52
302,3
2,27
53
452
2,31
54
334
1,76
55
439,3
3,58
56
355
1,87
57
349,1
3,18
58
353,2
2,89
59
383,1
3,03
60
377,1
3,15
61
425,9
2,37
62
327,3
2,92
63
369,1
3,05
64
321,2
2,43
65
381,2
3,26
66
319,2
2,81
67
333,2
3,35
68
382,2
3,19
69
291,1
2,26
70
389,1
2,63
71
381,1
3,82
72
360,9
3,58
73
343,2
2,28
74
360,9
3,02
75
367,1
3,7
76
475,2
2,9
77
321
2,78
78
443,3
3,49
79
367,3
3,2
80
333,3
3,15
81
413,3
2,9
82
436,2
2,71
83
359,1
3,85
84
399,3
2,83
85
307,1
2,36
86
361,4
1,86
87
367,1
3,25
88
455,3
3,48
89
454,2
2,91
90
347,3
2,86
91
383,3
2,98
92
362,1
2,44
93
411,1
3,03
94
353,1
3,96
95
387,1
2,85
96
333,2
3,06
97
508,5
1,54
98
510,4
1,91
99
454,2
1,28
100
361,1
1,5
101
477,2
2,06
102
467,4
1,73
103
377,5
1,77
104
493,2
2,09
105
441,4
1,97
106
363,5
1,65
107
461,4
1,98
108
457,4
2,09
109
453,2
2,21
110
457,4
1,54
111
450,2
1,66
112
473,2
1,7
113
493,2
2,18
114
440,3
1,28
115
494,3
1,92
116
527,2
2,05
117
365,1
2,86
118
468,5
1,51
119
439,4
2,11
120
345,1
2,6
121
505,2
2,37
122
319,1
3,09
123
337,1
2,46
124
454,3
1,23
125
483,7
1,87
126
469,3
1,98
127
389,1
2,1
128
467,4
1,79
129
495,4
1,68
130
450,3
1,8
131
335,3
3,63
132
443,4
1,97
133
375,3
2,55
134
493,3
2,06
135
467,2
1,81
136
510,4
1,94
137
305,3
3,45
138
452,3
1,07
139
455,5
1,93
140
340,9
2,69
141
321,1
2,35
142
368,9
2,52
143
484,4
1,97
144
440,4
1,25
Анализы для выявления и измерения ингибирующих свойств соединений в отношении каналов NaV
Оптические методы анализа ингибирующих свойств соединений в отношении каналов
A)  NaV

Соединения настоящего изобретения полезны в качестве антагонистов потенциалзависимых каналов ионов натрия. Антагонистические свойства испытуемых соединений были проанализированы следующим образом. Клетки, экспрессирующие исследуемые каналы NaV, помещали на титрационные микропланшеты. После периода инкубации клетки окрашивали флуоресцентными красителями, чувствительными к трансмембранному потенциалу. В титрационный микропланшет добавляли испытуемые соединения. Клетки стимулировали химическими или электрическими средствами, чтобы вызвать изменение NaV-зависимого мембранного потенциала за счет незаблокированных каналов, которые определяли и измеряли красителями, чувствительными к трансмембранному потенциалу. Антагонисты определяли по снижению ответа мембранного потенциала на стимул. Оптический анализ мембранного потенциала был основан на использовании потенциалзависимых сенсоров FRET, описанных Gonzalez и Tsien (см. Gonzalez, J.E. and R.Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells" Biophys J 69(4):1272-80, а также Gonzalez, J.E. and R.Y. Tsien (1997) "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4):269-77), в сочетании с инструментарием для измерения сдвигов флуоресценции, например считывающим устройством типа Voltage/Ion Probe Reader (VIPR) (см. Gonzalez, J.E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9):431-439).
B) Метод оптического анализа мембранного потенциала VIPR
с химической стимуляцией

Манипуляции с клетками и загрузка красителя
1) За 24 часа до анализа с VIPR, клетки CHO, эндогенно экспрессирующие потенциалзависимый канал NaV типа NaV1.2, высевали в 96-луночные планшеты, покрытые полилизином из расчета 60000 клеток на лунку.
2) В день проведения анализа среду аспирировали и клетки дважды промывали 225 мкл промывной жидкости #2 (BS#2).
3) 15 мкМ раствор CC2-DMPE готовили, смешивая 5 мМ исходный раствор кумарина с 10% поверхностно-активным веществом Pluronic 127 в соотношении 1:1, и затем растворяя смесь в соответствующем объеме BS#2.
4) После удаления промывающей жидкости из 96-луночных планшетов клетки нагружали 80 мкл раствора CC2-DMPE. Планшеты инкубировали в темноте 30 минут при комнатной температуре.
2
5) Пока клетки окрашивались кумарином, готовили 15 мкл раствора оксонола в BS#2. В дополнение к DiSBAC(3) раствор обязательно содержал 0,75 мМ ABSC1 и 30 мкл вератридина (приготовленного из исходного продукта 10 мМ EtOH, Sigma #V-5754).
6) Спустя 30 минут CC2-DMPE удаляли и клетки дважды промывали 225 мкл BS#2. Как и ранее, остаточный объем составлял 40 мкл.
2
7) После удаления промывочной жидкости клетки нагружали 80 мкл раствора DiSB AC(S) и затем добавляли испытуемое соединение, растворенное в ДМСО, для достижения в каждой лунке желаемой концентрации, и тщательно перемешивали материал. Приблизительный объем жидкости в лунке составлял 121 мкл. После этого клетки инкубировали 20-30 минут.

8) По окончании инкубации клетки были готовы к анализу при помощи VIPR по протоколу присоединения натрия. Затем добавляли 120 мкл промывочной жидкости #1 для стимуляции NaV-зависимой деполяризации. В качестве положительного контроля полной блокады канала NaV использовали 200 мкл тетракаина.
Анализ данных VIPR
:

+
Аналитические окна присоединения Na: Исходный показатель 2-7 сек, конечный показатель 15-24 сек.
Растворы [мМ]
Промывочная жидкость #1:
NaCl 160, KCl 4,5, CaCl<sub>2</sub> 2, MgCl<sub>2</sub> 1, HEPES 10, pH 7,4 с NaOH
Промывочная жидкость #2:
TMA-Cl 160, CaCl<sub>2</sub> 0,1, MgCl<sub>2</sub> 1, HEPES 10, pH 7,4 KOH (конечная концентрация K~5 <u>мМ</u>)
CC2-DMPE:
получен как 5 мМ маточный раствор в ДМСО и хранится при -20°C
DiSBAC<sub>2</sub>(3):
получен как 12 мМ маточный раствор в ДМСО и хранится при -20°C
ABSC1:
получен как 200 мМ маточный раствор в дистиллированной H<sub>2</sub>O и хранится при комнатной температуре
Клеточная культура
2
Клетки CHO выращивали в DMEM (среда Игла в модификации Дульбекко, GibcoBRL #10569-010) с добавками 10% FBS (фетальная телячья сыворотка, аттестованная, GibcoBRL #16140-071) и 1% Pen-Strep (пенициллин-стрептомицин, GibcoBRL #15140-122). Клетки выращивали во флаконах с вентилируемой крышкой при уровне влажности 90% и содержании CO 10% до 100% слияния. Их расщепление обычно проводили трипсинизацией 1:10 или 1:20 в зависимости от плановых потребностей, и перед следующим расщеплением выращивали еще 2-3 дня.
C) Метод оптического анализа мембранного потенциала VIPR
с электрической стимуляцией

Далее приводится пример измерения ингибирования активности канала NaV1.3 при использовании метода #2 исследования мембранного потенциала. Анализ других подтипов проводится аналогичным образом в клеточных линиях, экспрессирующих NaV, представляющий интерес.
Клетки HEK293, стабильно экспрессирующие NaV1.3, наносили в 96-луночные титрационные микропланшеты.
2
После соответствующего периода инкубации клетки окрашивали потенциалчувствительным красителем CC2-DMPE/DiSBAC(3) следующим образом.
Реагенты:
Поверхностно-активное вещество Pluronic F-127 100 мг/мл (Sigma #P2443) в сухом ДМСО.
2
10 мМ DiSBAC(3) (Aurora #00-100-010) в сухом ДМСО.
10 мМ CC2-DMPE (Aurora #00-100-008) в сухом ДМСО.
2
200 мМ ABSC1 в HO.
Сбалансированный солевой раствор Хэнка (Hyclone #SH30268.02) с добавкой 10 мМ HEPES (Gibco #15630-080).
Протокол загрузки:
2× CC2-DMPE=20 мкМ CC2-DMPE
: 10 мМ CC2-DMPE перемешивали при встряхивании с эквивалентным количеством 10% ПАВ pluronic, с последующим встряхиванием в необходимом количестве HBSS, содержащим 10 мМ HEPES. На каждый планшет с клетками требовалось 5 мл 2× CC2-DMPE. Добавление 50 мкл 2× CC2-DMPE в лунки, содержащие промытые клетки, приводит к конечной концентрации окрашивания 10 мкМ. Клетки окрашивали 30 минут в темноте при комнатной температуре.
2× DISBAC
(3) с ABSC1=6 мкМ DISBAC
(3) и 1
ABSC1
2
2
2
мМ : Необходимое количество 10 мМ DISBAC(3) добавляли в коническую пробирку объемом 50 мл, перемешивали с 1 мкл 10% ПАВ pluronic на каждый миллилитр приготовленного раствора и вместе встряхивали. Затем добавляли HBSS/HEPES, для 2× обработки раствора. Наконец, добавляли ABSC1.
2
2
Раствор 2× DiSBAC(3) можно использовать как сольват для планшетов с изучаемым соединением. Обратите внимание на то, что планшеты с соединением готовят при 2× концентрации лекарственного средства. Повторное промывание окрашенного планшета дает остаточный объем 50 мкл. Затем добавляют 50 мкл на лунку 2× раствора DiSBAC(3)w/ABSC1. Окрашивание проводят при комнатной температуре в течение 30 минут.
Инструмент для электростимуляции и способ его применения описаны в ION Channel Assay Methods PCT/US01/21652, который включен в данное описание посредством ссылки. Инструмент включает держатель титрационного микропланшета, оптическую систему для возбуждения кумаринового красителя при одновременной регистрации эмиссии кумарина и оксонола, генератор волновых сигналов, управляемый усилитель тока или потенциала и приспособление для вставления электродов в лунку. Под интегральным контролем компьютера данное устройство осуществляет запрограммированную пользователем по протоколу электрическую стимуляцию клеток в лунках титрационного микропланшета.
Реагенты
Аналитический буфер #1
2
2
140 мМ NaCl, 4,5 мМ KCl, 2 мМ CaCl, 1 мМ MgCl, 10 мМ HEPES, 10 мМ глюкоза, pH 7,40, 330 мОсм.
Исходный раствор ПАВ Pluronic (1000×): 100 мг/мл ПАВ pluronic 127 в сухом ДМСО.
2
Исходный раствор оксонола (3333×): 10 мМ DiSBAC(3) в сухом ДМСО.
Исходный раствор кумарина (1000×): 10 мМ CC2-DMPE в сухом ДМСО.
Маточный раствор ABSC1 (400×): 200 мМ ABSC1 в воде.
Протокол анализа
1. Вставить или использовать электроды в каждой лунке, подлежащей анализу.
2. Использовать управляемый усилитель тока для доставки стимулирующих волновых импульсов в течение 3 секунд. Для того чтобы получить интенсивность сигнала при отсутствии стимуляции проводят двухсекундную запись еще до подачи стимулирующих импульсов. Для исследования релаксации клеток в состоянии покоя проводят пятисекундную запись после стимуляции.
Анализ данных
Данные анализируют и регистрируют в виде нормализованных соотношений интенсивности (с вычитанием фона), измеренной в каналах 460 нм и 580 нм. Фоновую интенсивность вычитают из каждого анализируемого канала. Фоновую интенсивность получают, измеряя интенсивность эмиссии в одни и те же периоды времени из идентично обработанных лунок, не содержащих клеток. Ответ (как функцию времени) регистрируют в виде соотношений, вычисленных по следующей формуле:
i
f
Данные дополнительно минимизируют, вычисляя соотношения начальных показателей (R) и конечных показателей (R). Они представляют собой средние значения соотношений во время частичного или полного периода перед стимуляцией и во временных точках отбора проб в период стимуляции. Затем вычисляют ответ на стимул ρ=Rf/Ri.
Контрольные значения ответа получают, проводя анализы в присутствии соединения с желаемыми свойствами (положительный контроль) и при отсутствии фармакологических агентов (отрицательный контроль). Ответную реакцию в отрицательном (N) и положительном (P) контроле вычисляют так, как указано выше. Показатель активности (A) анализируемой лунки по отношению к положительному и отрицательному контролю определяют как:
Электрофизиологические анализы для определения активности каналов NaV и ингибирующей активности испытуемых соединений
Для оценки эффективности и селективности блокаторов натриевых каналов в нейронах ганглиев дорсального корешка был применен электрофизиологический метод фиксации потенциала. Нейроны крысы выделяли из ганглиев дорсального корешка и выдерживали в культуре от 2 до 10 дней в присутствии NGF (50 нг/мл) (питательная среда для культивирования состояла из NeurobasalA с добавками B27, глутамина и антибиотиков). Нейроны малого диаметра (ноцицепторы диаметром 8-12 мкм) идентифицировали визуально и зондировали тонкими наконечниками стеклянных электродов, соединенных с усилителем (Axon Instruments). Для оценки показателя IC50 соединений при удержании клеток на уровне потенциала 60 мВ использовали режим фиксации напряжения. В дополнение, применяли режим фиксации тока для проверки того, насколько испытуемые соединения эффективны в блокировании потенциалов действия, возникающих в ответ на стимуляцию током. Результаты экспериментов внесли свой вклад в выяснение профиля эффективности соединений.
Анализ по типу VOLTAGE-CLAMP (фиксации напряжения) в нейронах DRG (ганглиев дорсального корешка)
Потоки ионов натрия, резистентные к TTX, записывали из сомы DRG с применением клеточного варианта методики фиксации потенциала. Записи делали при комнатной температуре (~22°C) с толстостенными боросиликатными стеклянными электродами (WPI, сопротивление 3-4 MΩ) при помощи усилителя Axopatch 200B (Axon Instruments). После установления цельноклеточной конфигурации в течение приблизительно 15 минут перед началом записи пипетировали раствор для создания равновесия внутри клетки. Токи отфильтровывали по низким частотам (2-5 кГц) и отбирали с оцифровкой на частоте 10 кГц. Последовательное сопротивление компенсировали на 60-70% и непрерывно подвергали мониторингу по ходу всего эксперимента. Потенциал жидкостной границы (-7 мВ) между внутриклеточным пипетированным раствором и внешним записывающим раствором при анализе данных не учитывали и специальной поправки на него не вводили. Испытуемые растворы подавали на клетки при помощи гравитационной системы быстрой перфузии (SF-77; Warner Instruments).
Взаимосвязь по типу дозовой зависимости определяли в режиме фиксации напряжения посредством повторной деполяризации клетки со снятием специфического исходного потенциала эксперимента для однократного тестирования потенциала +10 мВ через каждые 60 секунд. Перед выполнением эксперимента со следующей испытуемой концентрацией эффектам блокирования давали возможность выйти на уровень плато.
Растворы
мМ
2
2
Внутриклеточный раствор (в ): Cs-F (130), NaCl (10), MgCl (1), EGTA (1,5), CaCl (0,1), HEPES (10), глюкоза (2), pH=7,42, 290 мОсм.
мМ
2
2
4
2
4
3
2
4
2
2
-3
Внеклеточный раствор (в ): NaCl (138), CaCl (1,26), KCl (5,33), KHPO (0,44), MgCl (0,5), MgSO (0,41), NaHCO (4), NaHPO (0,3), глюкоза (5,6), HEPES (10), CdCl (0,4), NiCl (0,1), TTX (0,25×10).
Анализ по типу CURRENT-CLAMP (фиксации тока) для выявления ингибирующей активности соединений в отношении каналов NaV
мМ
мМ
2
2
2
Клетки фиксировали по токам в цельноклеточной конфигурации при помощи усилителя Multiplamp 700A (Axon Inst). Боросиликатные пипетки (4-5 МОм) наполняли раствором, содержащим (в ): 150 K-глюконата, 10 NaCl, 0,1 EGTA, 10 Hepes, 2 MgCl, (забуференным KOH до pH 7,34). Клетки полоскали в растворе, содержащем (в ): 140 NaCl, 3 KCl, 1 MgCl, 1 CaCl и 10 Hepes. Потенциал пипетки обнуляли до образования изолирующей перемычки, поправку на потенциалы жидкостной границы во время получения данных не вводили.
Записи осуществляли при комнатной температуре.
Соединения, проиллюстрированные в таблице 1, активны против одного или более натриевых каналов, о чем могут свидетельствовать измерения, проведенные в ходе описанных выше анализов.
Соединения настоящего изобретения проявляли активность против канала NaV1.8.
мкМ
Активность отобранных соединений настоящего изобретения против канала NaV1.8 показана ниже в таблице 3. Буквенные обозначения в таблице 3, имеют следующие значения: "A" означает <2 мкМ, "B" означает от 2 до 10 мкМ, "C" означает >10 мкМ.
<b>Таблица 3</b>
<b>№ соед.</b>
<b>IC</b><sub>50</sub>
1
A
2
C
3
C
4
C
5
C
6
C
7
A
8
C
9
C
10
B
11
C
12
B
13
С
14
B
15
B
16
A
17
C
18
C
19
C
20
C
21
A
22
C
23
A
24
C
25
C
26
C
27
B
28
C
29
C
30
C
31
C
32
C
33
C
34
C
35
C
36
С
37
C
38
C
40
C
41
C
42
C
43
С
44
C
45
C
46
C
47
C
48
A
49
C
50
B
51
C
52
C
53
A
54
C
55
A
56
C
57
C
58
C
59
B
60
С
61
A
62
C
63
B
64
C
65
C
66
С
67
A
68
C
69
C
70
C
71
B
72
C
73
C
74
C
75
B
76
C
77
C
78
A
80
A
81
C
82
C
83
A
84
B
85
C
86
C
87
C
88
A
89
C
90
C
91
A
92
C
93
A
94
C
95
A
96
C
97
A
98
A
99
A
100
C
101
A
102
B
103
A
104
A
105
A
106
A
107
A
108
A
109
A
110
B
111
B
112
B
113
A
114
A
115
A
116
B
117
C
118
C
119
A
120
C
121
A
122
C
123
C
124
C
125
A
126
B
127
C
128
A
129
C
130
A
131
C
132
A
133
C
134
A
135
A
136
C
137
C
138
A
139
B
140
C
141
C
142
C
143
A
144
A