ЖИВОЙ АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ ВИРУСА ЖЕЛТОЙ ЛИХОРАДКИ, АДАПТИРОВАННЫЙ К РОСТУ В КЛЕТКАХ VERO, И ВАКЦИННАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО

1. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в клетках Vero, полученный из исходного субштамма вируса желтой лихорадки 17D, который не адаптирован к росту в клетках Vero, где указанный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки является менее нейровирулентным, чем указанный исходный субштамм 17D вируса желтой лихорадки.
2. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 1, где исходный штамм вируса желтой лихорадки представляет собой живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в яйцах.
3. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 1 или 2, где исходный штамм вируса желтой лихорадки представляет собой субштамм вируса желтой лихорадки 17D-204.
4. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-3, где исходный субштамм вируса желтой лихорадки 17D содержит последовательность РНК под SEQ ID NO. 2.
50
5. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-4, где указанный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки является менее нейровирулентным, чем исходный субштамм вируса желтой лихорадки 17D, согласно тесту с определением дозы, летальной для 50% мышей (MLD).
6. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, содержащий нуклеиновую кислоту, содержащую:
i) мутацию в кодоне аминокислоты в положении 480 оболочечного белка (E), которая приводит в результате к замене аминокислоты валина на лейцин, или
ii) мутацию в кодоне аминокислоты в положении 65 неструктурного белка 2A (NS2a), которая приводит в результате к замене аминокислоты метионина на валин.
7. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 6, содержащий нуклеиновую кислоту, содержащую:
i) мутацию в кодоне аминокислоты в положении 480 оболочечного белка (E), которая приводит в результате к замене аминокислоты валина на лейцин, и
ii) мутацию в кодоне аминокислоты в положении 65 неструктурного белка 2A (NS2a), которая приводит в результате к замене аминокислоты метионина на валин.
8. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 6 или 7, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в кодоне аминокислоты в положении 19 неструктурного белка 4A (NS4a), которая приводит в результате к замене кодона AAA на AAG.
9. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 6-8, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в кодоне аминокислоты в положении 145 оболочечного белка (Е), которая приводит в результате к замене кодона GUA на GUU.
10. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, который содержит оболочечный белок, содержащий мутацию в положении 480, которая приводит в результате к замене аминокислоты валина на лейцин.
11. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, который содержит оболочечный белок, содержащий остаток лейцина в положении в белке, которое соответствует положению 480 в SEQ ID NO. 15.
12. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 11, где указанный оболочечный белок содержит последовательность, на по меньшей мере 90%, 95%, 98% или 100% идентичную последовательности под SEQ ID NO. 15.
13. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую:
(i) оболочечный белок, содержащий мутацию в положении 480, которая приводит в результате к замене аминокислоты валина на лейцин, и
(ii) белок NS2a, содержащий мутацию в положении 65, которая приводит в результате к замене аминокислоты метионина на валин.
14. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 13, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в кодоне аминокислоты в положении 19 неструктурного белка 4A (NS4a), которая приводит в результате к замене кодона AAA на AAG.
15. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 13 или 14, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в кодоне аминокислоты в положении 145 оболочечного белка (Е), которая приводит в результате к замене кодона GUA на GUU.
16. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую:
(i) оболочечный белок, который содержит остаток лейцина в положении в белке, которое соответствует положению 480 в SEQ ID NO. 15; и
(ii) белок NS2a, который содержит остаток валина в положении в белке, которое соответствует положению 65 в SEQ ID NO. 16.
17. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 16, где указанный оболочечный белок содержит последовательность, на по меньшей мере 90%, 95%, 98% или 100% идентичную последовательности под SEQ ID NO. 15, и указанный белок NS2a содержит последовательность, на по меньшей мере 90%, 95%, 98% или 100% идентичную последовательности под SEQ ID NO. 16.
18. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п. 16 или 17, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит нуклеотид G в положении в нуклеиновой кислоте, кодирующей неструктурный белок 4A (NS4a), которое соответствует положению 57 в SEQ ID NO. 17.
19. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 16-18, где нуклеиновая кислота дополнительно содержит нуклеотид U в положении в нуклеиновой кислоте, кодирующей оболочечный белок (Е), которое соответствует положению 435 в SEQ ID NO. 18.
20. Иммуногенная композиция, содержащая живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-19 и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Способ получения живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки, адаптированного к росту в клетках Vero, включающий стадии:
а) очистки вирусной геномной РНК исходного живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки, который не адаптирован к росту в клетках Vero и который необязательно адаптирован к росту в яйцах;
b) трансфекции клеток Vero вирусной геномной РНК, очищенной на стадии а), в результате чего получают трансфицированные клетки Vero;
c) выращивания трансфицированных клеток Vero, полученных на стадии b), в культуральной среде, в результате чего получают, а затем выделяют первую популяцию вируса желтой лихорадки;
d) амплификации выделенной первой популяции вируса желтой лихорадки, полученной в конце стадии c), в 2 раза или больше в свежих клетках Vero, в результате чего получают вторую популяцию вируса желтой лихорадки;
e) клонирования второй популяции вируса желтой лихорадки, полученной на стадии d), посредством двух или больше последовательных клонирований методом бляшкообразования с использованием клеток Vero, в результате чего получают множество клонов вируса желтой лихорадки;
f) амплификации отдельно каждого из выделенных клонов вируса желтой лихорадки, полученных в конце стадии e), в 2 раза или больше в свежих клетках Vero, в результате чего получают множество штаммов вируса желтой лихорадки; и
50
g) отбора из указанного множества штаммов вируса желтой лихорадки, выделенных на стадии f), одного или нескольких живых аттенуированных штаммов вируса желтой лихорадки, которые являются менее нейровирулентными, чем исходный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, согласно тесту с определением дозы, летальной для 50% мышей (MLD).
22. Способ по п. 21, где указанная культуральная среда является бессывороточной и необязательно не содержит какого-либо вещества человеческого или животного происхождения.
23. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, который может быть получен способом по любому из пп. 21 или 22.
24. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-19 или 23 для применения в получении вакцины.
25. Вакцина, содержащая живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-19 или 23, для применения в профилактике инфекции, вызываемой вирусом желтой лихорадки.