Изучение действия препарата дикарбамин на кинетику популяции опухолевых клеток

34

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ

ИК-область на 30-40 нм.

Изучена фото- и цитотоксичность синтезированных производных бактериохлорофилла на культуре аденокарциномы легкого человека А 549. В зависимости от характера заместителей и их взаимного расположения полученные соединения могут быть разделены на три группы.

В первую группу включены вещества, в которых можно четко выделить гидрофильную (обычно гидроксилсодержащие заместители) и гидрофобную части молекулы, причем указанные участки располагаются на наибольшем удалении друг от друга. Для данных соединений характерна очень высокая фототоксичность (ИК50 0,041-0,077 мкМ) в сочетании с низкой темновой токсичностью (>> 3-5 мкМ).

Вторая группа веществ сохраняет основные структурные особенности первой, но гидроксилсодержащие заместители в этом случае заменены на менее полярные группы, такие, например, как ацетильная. Фототоксичность подоб-

ных соединений лежит в пределах ИК50 0,11-0,40 мкМ, тем-новая 4-5 мкМ, а их соотношение составляет примерно 1/10.

Третью группу представляют гидрофобные соединения, в которых нельзя выделить полярные участки молекулы. Например, это могут быть производные бактериохлорофилла, в которых ацетильная группа замещена на ви-нильную. Соединения характеризуются низкой фототоксичностью и сравнительно высокой цитотоксичностью, причем их соотношение может достигать 0,3-0,5.

Методом конфокальной флуоресцентной микроскопии показано, что синтезированные циклоимиды бактериохлорофилла имеют смешанное диффузно-гранулярное распределение в цитоплазме клеток.

Порученные результаты свидетельствуют о высокой перспективности циклоимидов бактериохлорофилла в качестве новой группы эффективных фотосенсибилизаторов для ФДТ рака.

ПРОТИВОБАКТЕРИАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ АСКОРБИГЕНА И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА АЛОПЕЦИЮ МЫШЕЙ, ВЫЗВАННУЮ ПРИМЕНЕНИЕМ ЦИКЛОФОСФАМИДА

Е.П. Мирчинк, Е.Б. Исакова, Э.Р. Переверзева, В. М. Бухман ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе, РАМН, Москва

Цель работы. Выявление некоторых биологических свойств аскорбигена.

Методы. Моделирование стафилококкового сепсиса и экспериментальной алопеции у новорожденных мышат.

Результаты. В результате орального заражения 7-8 дневных мышат Staphylococcus aureus в дозе 5x106 КОЕ отмечалась гибель 30% животных. Предварительное введение аскорбигена внутрь в дозе 100 мг/кг течение 5 дней предотвращало гибель животных и сопровождалось снижением интенсивности высева стафилококка их внутренних органов в 2 раза, а из крови в 3 раза по сравнению с контролем.

Однократное внутрибрюшинное введение мышатам циклофосфамида в дозе 200 мг/кг приводило к полной потере волосяного покрова. Предварительное введение аскорбигена в дозе 100 мг/кг в течение 5 дней до инъекции цитостатика снижало интенсивность алопеции, а последующее введение аскорбигена приводило к восстановлению волосяного покрова на 3-4 дня раньше животных контрольной группы. Это подтверждено морфологическими

исследованиями. В группе положительного контроля (мыши, получившие циклофосфамид без аскорбигена) в коже было найдено истончение слоя эпидермиса, умеренный отек и фрагментации коллегановых волокон дермы. В части волосяных фолликулов волос отсутствовал. При этом отдельные клетки камбиального слоя и мышца, поднимающая волос, находились в состоянии атрофии. У мышей, получавших аскорбиген, структура кожи не отличалась от нормы.

Выводы. Так как в эксперименте на мышатах показано, что аскорбиген снижает обсемененность внутренних органов стафилококком, он может быть рекомендован для клинического изучения в терапии стафилококкового сепсиса.

Способность аскорбигена снижать выраженность алопеции и стимулировать восстановление волосяного покрова на фоне применения циклофосфамида может быть использована в онкологической клинике для реабилитации пациентов, получающих интенсивную химиотерапию, и улучшения их качества жизни.

ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ДИКАРБАМИН НА КИНЕТИКУ ПОПУЛЯЦИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

Т. Г. Николаева, Я.В. Добрынин, И. П. Брызгалов, Е.М. Трещалина Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей, лаборатория фармакоцитокинетики

Задачей исследования было изучить влияние дикарба-мина на популяционный состав и кинетику клеточного цикла опухолевых клеток в перевиваемой опухоли животных и гетеротрансплантируемой меланоме человека. Изучить комбинированное действие дикарбамина, циклофос-фана и цисплатина на популяцию опухолевых клеток в перевиваемой опухоли.

Опыты ставили на перевиваемой опухоли легких Льюис (ЬЬС) мышей и перевиваемой на бестимусных мышах меланоме человека (штамм-6).

ДНК-цитометрический анализ проводили на проточном цитофлуориметре ІСР-22 (Германия). ДНК окрашивали специфическим флуоресцентным красителем этидиум-бромидом и антибиотиком митрамицином. Уровень лю-

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

№1/том1/2003

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРА ТОВ

3

1

минесценции окрашенных клеток (ядер) был пропорционален содержанию ДНК.

Сравнивая результаты опытов можно отметить следующее. Дикарбамин в дозе 0,5-1,0 мг/кг при 5-10-дневном курсе обладает способностью задерживать опухолевые клетки в стационарной фазе клеточного цикла. Эта способность, возможно, не является специфичной для конкретного вида опухолей. Способность влиять на фракцию пролиферирующих клеток, вероятно, связана с величиной пролиферативной активности популяции и достоверно не проявляется при медленнорастущих опухолях. Отмеченное под воздействием дикарбамина замедление прохождения опухолевых клеток по фазам клеточного цикла с обеднением доли делящихся клеток можно рассматривать как нетоксичный дифференциирующий эффект, способствующий созреванию отдельных клеток и повышению уровня дифференцировки популяции в целом. Указанный эффект препарата после 5-кратного введения сохраняется по крайней мере в течение 48 часов после прекращения его введения.

При введении цитостатиков (циклофосфан + цисп-латин) на фоне 5-10-дневного курса дикарбамина отме-

чается некоторое кратковременное обратимое снижение их цитотоксического эффекта. Последнее, видимо, связано со снижением доли пролиферирующих клеток, наиболее уязвимых для действия цитостатиков. Предположение о дифференцирующем действии дикарбамина требует подтверждения в специальных опытах, позволяющих доказательно регистрировать проявления специфической дифференцировки клеток (например, меланино-образование и др.).

Заключение. Препарат дикарбамин при однократной дозе 0,5-1,0 мг/кг и 5-10-дневном курсе вызывает в перевиваемой опухоли мышей 1ХС и гетеротрансплантируемой меланоме-б человека задержку опухолевых клеток в стационарной фазе (О^ клеточного цикла. Одновременно в быстрорастущих опухолях наблюдается накопление ДНК-син-тезирующих клеток и обеднение фракции делящихся клеток. Указанные изменения цитокинетики наблюдаются по крайней мере в течение 48 часов после прекращения введения дикарбамина. Дикарбамин кратковременно и обратимо снижает цитотоксический эффект цитостатиков цикло-фосфана и цисплатина.

РАЗРАБОТКА БЕЛКОВЫХ МИКРОЧИПОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ БИОЧИП НА ПРОСТАТА-СПЕЦИФИЧЕСКИЙ АНТИГЕН

Т. Осипова* Т. Рябых* Е. Дементьева**, Е. Дарии**, А. Рубина**, А. Заседателев**, А. Барышников* А. Мирзабеков** Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва, Россия

Цели и задачи. Различные опухолеассоциированные антигены играют существенную роль в своевременной диагностике и мониторинге злокачественных заболеваний. Разработанная в Институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН технология изготовления биологических микрочипов позволяет проводить одновременный анализ большого количества образцов по многим параметрам. Целью настоящей работы являлась разработка микрочипа для измерения уровня опухолеассоциированных антигенов, в частности, - простата-специфичес-кого антигена (ПСА), - в сыворотке крови онкологических больных. Методы. Биочип на ПСА представлял собой массив трехмерных гидрофильных ячеек геля с иммобилизованными моноклональными антителами к ПСА. Иммобилизацию антител в гидрогель производили методом сополимеризации, при этом моноклональные антитела сохраняли свою иммунологическую активность. ПСА, выделенный из спермы здорового человека, и два моноклональных антитела, специфичных к ПСА, направленных к разным антигенным детерминантам, были использованы для проведения “сэндвич”-анализа -в условиях геля. В ячейки геля с иммобилизованными моноклональными антителами вносили антиген (раствор ПСА) в различных концентрациях или сыворотки крови онкологических

больных. После инкубации и отмывки вносили вторые антитела, меченые флуоресцентным красителем СуЗ. Интенсивность сигнала измеряли с помощью флуоресцентного микроскопа. Полученные значения концентрации ПСА сравнивали с результатами стандартного иммуно-ферментного анализа, проводимого в 96-луночных платах. Результаты. Показана возможность определения малых концентраций ПСА с помощью флуоресцентного иммуноанализа в условиях геля. Минимальные концентрации антигена, определяемые в непрямом иммуноанализе, составляли ~1,0 нг/мл. Коэффициент корреляции результатов анализа сывороток больных раком простаты, полученных с помощью нового белкового микрочипа, и данных, полученных с помощью коммерческого набора PSA/Total EIA II Cobas Core (Швейцария), составлял 0,98 (р<0,01).

Заключение. Представленные данные свидетельствуют о принципиальной возможности применения новой технологии - технологии белковых микрочипов - для диагностики злокачественных новообразований. Дальнейшая разработка онкодиагностического чипа на различные опухолеассоциированные антигены позволит анализировать множество образцов сывороток больных с помощью всей панели опухолевых маркеров.

№1/том1/2003

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ