КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ КЛЕТОЧНЫЕ ВЕЗИКУЛЫ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Способ лечения заболевания почек у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества выделенных секретированных везикул почечных клеток, при этом везикулы вводят внутривенной инъекцией или транскатетерной доставкой.
2. Способ по п. 1, при этом везикулы вводят внутривенной инъекцией в периферический сосуд.
3. Способ по п. 1, при этом транскатетерную доставку осуществляют в левую почечную артерию или правую почечную артерию субъекта.
4. Способ по любому из пп. 1-3, при этом субъект имеет хроническое заболевание почек.
5. Способ по п. 4, при этом хроническое заболевание почек представляет собой заболевание почек стадии I, II, III, IV или V.
6. Способ по любому из пп. 1-5, при этом лечение заболевания почек включает уменьшение или предотвращение фиброза почек у субъекта.
7. Способ по любому из пп. 1-6, при этом субъект получал диализ по меньшей мере 1, 2 или 3 раза в неделю в течение по меньшей мере 1 или 2 недель.
8. Способ по любому из пп. 1-7, при этом субъект имеет диабет II типа.
9. Способ по любому из пп. 1-8, при этом субъект имеет врожденные аномалии почек и мочевыводящих путей (CAKUT).
2
10. Способ по любому из пп. 1-9, при этом субъект имеет скорость клубочковой фильтрации (GFR) менее 90 мл/мин/1,73 м, микроальбуминурию или макроальбуминурию.
11. Способ по любому из пп. 1-10, при этом клетки не вводят субъекту.
12. Способ по любому из пп. 1-11, при этом везикулы представляют собой микровезикулы.
13. Способ по любому из пп. 1-12, при этом везикулы представляют собой экзосомы, имеющие диаметр примерно 30-150 нм.
14. Способ по любому из пп. 1-13, при этом везикулы содержат соединение на их внешней поверхности, в их липидном бислое и/или в их просвете.
15. Способ по п. 14, при этом соединение ослабляет один или более клеточных путей.
16. Способ по любому из пп. 14 или 15, при этом соединение представляет собой белок, малую молекулу или полинуклеотид.
17. Способ по п. 16, при этом полинуклеотид представляет собой молекулу микроРНК.
18. Способ по любому из пп. 14-17, при этом соединение не продуцируется естественными почечными клетками.
19. Способ по любому из пп. 14-16, при этом соединение представляет собой цитокин.
20. Способ по любому из пп. 14-16, при этом соединение представляет собой искусственное соединение.
21. Способ по п. 20, при этом соединение представляет собой соединение, которое используют для лечения заболевания почек.
22. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое ослабляет сигнализацию ингибитора активации плазминогена 1 типа (PAI-1) и/или сигнализацию трансформирующего фактора роста бета (TGFβ).
23. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое ослабляет каноническую сигнализацию Wnt.
24. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое ослабляет неканоническую сигнализацию Wnt.
25. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое ослабляет CXCR4-опосредуемую сигнализацию.
26. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое снижает экспрессию воспалительного цитокина.
27. Способ по п. 26, при этом воспалительный цитокин представляет собой IL8.
28. Способ по любому из пп. 15-21, при этом везикулы содержат соединение, которое ослабляет сигнализацию Notch.
29. Способ по любому из пп. 14-16, при этом соединение представляет собой молекулу клеточной поверхности, используемую для иммунофенотипирования клеток.
30. Способ по п. 29, при этом соединение представляет собой CD9, CD63, CD81, CD133, CD146, CD326, CD40, CD42a, CD44 или CD49e.
31. Способ по п. 14, при этом соединение представляет собой белковый рецептор.
32. Способ по п. 31, при этом белковый рецептор представляет собой ретиноевый орфан-рецептор (ROR4).
33. Способ по п. 14, при этом соединение представляет собой маркер стадии развития.
34. Способ по п. 33, при этом маркер стадии развития представляет собой стадиеспецифический эмбриональный антиген 4 (SSEA-4).
35. Способ по п. 14, при этом соединение представляет собой стресс-протекторный белок.
36. Способ по п. 35, при этом стресс-протекторный белок представляет собой белок теплового шока (HSP) 70 или HSP90.
37. Способ по п. 14, при этом соединение представляет собой каркасный белок.
38. Способ по п. 37, при этом каркасный белок представляет собой TST101.
39. Способ по любому из пп. 14-17, при этом соединение представляет собой микроРНК и находится в просветах везикул.
40. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой регулирующую клеточный цикл микроРНК.
41. Способ по п. 40, при этом регулирующая клеточный цикл микроРНК представляет собой let7a, miR-143 или miR22.
42. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую клеточное старение микроРНК.
43. Способ по п. 42, при этом модулирующая клеточное старение микроРНК представляет собой miR-34.
44. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую клеточную миграцию микроРНК.
45. Способ по п. 44, при этом модулирующая клеточную миграцию микроРНК представляет собой miR30-C.
46. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой регулирующую клеточный рост микроРНК.
47. Способ по п. 46, при этом регулирующая клеточный рост микроРНК представляет собой miR194-2.
48. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую клеточную сигнализацию микроРНК.
49. Способ по п. 48, при этом модулирующая клеточную сигнализацию микроРНК представляет собой miR-142.
50. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую воспаление микроРНК.
51. Способ по п. 50, при этом модулирующая воспаление микроРНК представляет собой miR-10a.
52. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую ангиогенез микроРНК.
53. Способ по п. 52, при этом модулирующая ангиогенез микроРНК представляет собой miR-296 и/или miR-146a.
54. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом микроРНК представляет собой модулирующую киназную активность микроРНК.
55. Способ по п. 54, при этом модулирующая киназную активность микроРНК представляет собой miR-83.
56. Способ по любому из пп. 14-17 или 39, при этом соединение представляет собой микроРНК, которая ингибирует PAI-1, TGFβ, каноническую сигнализацию Wnt, неканоническую сигнализацию Wnt, CXCR4-опосредуемую сигнализацию и/или сигнализацию Notch.
57. Способ по любому из пп. 6-56, при этом фиброз почек уменьшается или предотвращается путем ингибирования эпителиально-мезенхимального перехода (EMT).
58. Способ по любому из пп. 1-57, при этом везикулы содержат miR-145, miR-22, miR-7, miR-10a, miR-143 и/или let7b.
59. Способ по любому из пп. 1-58, при этом везикулы содержат miR-1248, miR-3168, miR-7113-5p, miR-758-3p, miR-937-3p, miR-4455, miR-4521, miR-203a-3p, miR-22-3p, miR-574-3p, miR-181b-5p, miR-1260b и/или miR-181b-5p.
60. Способ по любому из пп. 1-59, при этом везикулы содержат CD9, CD63, CD81, CD133, CD146, CD326, CD40, CD42a, CD44, CD49e и/или SSEA-4.
61. Способ по п. 60, при этом везикулы содержат CD63, CD9 и/или CD81 и CD63, CD9 и/или CD81 на внешней поверхности везикул.
62. Способ по п. 60, при этом везикулы содержат CD133, CD326 и/или CD49e и CD133, CD326 и/или CD49e на внешней поверхности везикул.
63. Способ по любому из пп. 1-62, при этом пролиферация почечных клеток, которые находились в контакте с везикулами, возрастает в сравнении с почечными клетками, которые не находились в контакте с везикулами.
64. Способ по любому из пп. 1-63, при этом образование сосудов эндотелиальными клетками, которые находились в контакте с везикулами, возрастает в сравнении с эндотелиальными клетками, которые не находились в контакте с везикулами.
65. Способ по любому из пп. 1-64, при этом образование канальцев нефрона почечными клетками, которые находились в контакте с везикулами, возрастает в сравнении с почечными клетками, которые не находились в контакте с везикулами.
66. Способ по любому из пп. 1-65, при этом везикулы содержат фосфолипид, сфинголипид, холестерин, церамид и/или фосфатидилхолин.
67. Способ по любому из пп. 1-66, при этом везикулы находятся в композиции, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель.
68. Способ по п. 67, при этом фармацевтически приемлемый носитель представляет собой водный раствор.
69. Способ по любому из пп. 1-68, при этом везикулы были секретированы первичной популяцией почечных клеток.
70. Способ по п. 69, при этом клетки были пересеяны 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз.
71. Способ по любому из пп. 1-70, при этом везикулы были секретированы обогащенной популяцией почечных клеток, при этом обогащенная популяция почечных клеток содержит биоактивные почечные клетки.
72. Способ по п. 71, при этом популяция включает:
(a) обогащенную популяцию клеток почечных канальцев; или
(b) обогащенную популяцию клеток почечных канальцев и одно или более из гломерулярных клеток и сосудистых клеток.
73. Способ по п. 71 или 72, при этом популяция получена из исходной популяции почечных клеток и содержит большую процентную долю клеток почечных канальцев в сравнении с исходной популяцией.
74. Способ по п. 73, при этом популяция содержит гломерулярные клетки.
75. Способ по п. 74, при этом популяция содержит сосудистые клетки.
76. Способ по любому из пп. 69-75, при этом популяция является не аутологичной для субъекта.
77. Способ по любому из пп. 69-75, при этом популяция является аутологичной для субъекта.
78. Способ по любому из пп. 69-75, при этом популяция является аллогенной.
79. Способ по любому из пп. 70-78, при этом клетки популяции являются устойчивыми к гипоксии и/или йодиксанолу.
80. Способ по любому из пп. 70-79, при этом клетки в популяции экспрессируют CK18 и/или GGT1.
81. Способ по любому из пп. 70-80, при этом клетки популяции имеют ферментативную активность LAP и/или GGT.
82. Способ по любому из пп. 70-81, при этом по меньшей мере 80% клеток в популяции экспрессируют GGT-1.
83. Способ по любому из пп. 70-82, при этом клетки популяции экспрессируют VEGF и/или KIM-1.
84. Способ по любому из пп. 70-83, при этом от 4,5% до 81,2% клеток в популяции экспрессируют GGT-1, от 3,0% до 53,7% клеток в популяции экспрессируют AQP2, и от 81,1% до 99,7% клеток в популяции экспрессируют CK18.
in vitro
in vivo
85. Способ по любому из пп. 70-84, при этом популяция обогащена по клеткам почечных канальцев в сравнении с первичной культурой почечных клеток, полученной из биопсийного образца почки, и клетки почечных канальцев экспрессируют более высокомолекулярные формы гиалуроновой кислоты (HA) как , так и , за счет действия синтазы гиалуроновой кислоты 2 (HAS-2).
86. Способ по любому из пп. 70-85, при этом популяция биоактивных почечных клеток содержит меньшую относительную долю клеток дистальных почечных канальцев, клеток собирающих протоков, эндокринных клеток, сосудистых клеток и/или клеток, подобных предшественникам, в сравнении с первичной культурой почечных клеток, полученной из биопсийного образца почки.
87. Способ по любому из пп. 1-68 или 70-86, дополнительно включающий введение субъекту везикул, секретированных первичными почечными клетками.
88. Способ по любому из пп. 1-87, дополнительно включающий введение субъекту везикул, секретированных эндотелиальными клетками или мезенхимальными стволовыми клетками.
89. Способ по любому из пп. 1-88, дополнительно включающий введение субъекту везикул не почечных клеток.
90. Способ по п. 89, при этом везикула не почечной клетки была секретирована не почечной эндотелиальной клеткой-предшественником, не почечной мезенхимальной стволовой клеткой или не почечной адипозной клеткой-предшественником.
91. Способ обнаружения по меньшей мере одного соединения в везикуле, включающий получение везикулы и определение того, присутствует ли в везикуле по меньшей мере одно соединение, при этом
(i) по меньшей мере одно соединение представляет собой белок, и белок представляет собой CD9, CD81, CD146, CD326, CD40, CD42a, CD44, CD49e и/или SSEA-4;
(ii) по меньшей мере одно соединение представляет собой микроРНК, при этом микроРНК включает по меньшей мере две из miR-145, miR-22, miR-7, miR-10a, miR-143 и/или let7b; и/или
(iii) по меньшей мере одно соединение не экспрессируется или не продуцируется почечными клетками в естественной почке.
92. Способ по п. 91, при этом везикулу получают в, или из биологического образца от субъекта.
93. Способ по п. 92, при этом биологический образец представляет собой мочу.
94. Способ по п. 91, при этом везикулу получают в, или из супернатанта культуры почечных клеток.
95. Способ по любому из пп. 91-94, при этом везикула была секретирована почечной клеткой.
96. Способ по любому из пп. 91-95, при этом определение того, присутствует ли белок в везикуле, включает иммуноанализ.
97. Способ по любому из пп. 91-96, при этом определение того, присутствуют ли микроРНК в везикуле, включает создание контакта везикулы или обработанного образца, предположительно содержащего нуклеиновые кислоты из везикулы, с зондами или праймерами, которые комплементарны микроРНК.
98. Способ по любому из пп. 91-97, при этом определение того, присутствуют ли микроРНК в везикуле, не включает микроматричный анализ.
99. Способ по любому из пп. 91-97, при этом определение того, присутствуют ли микроРНК в везикуле, включает микроматричный анализ с микрочипом, при этом микрочип содержит зонды для менее чем 1000, 500 или 100 разных микроРНК.
100. Способ по любому из пп. 91-99, при этом определение того, присутствуют ли микроРНК в везикуле, включает полимеразную цепную реакцию.
101. Способ по любому из пп. 91-100, при этом соединение представляет собой малую молекулу.
102. Способ по любому из пп. 91-101, при этом соединение представляет собой соединение, которое используют для лечения заболевания почек.
103. Способ мониторинга лечения популяцией биоактивных почечных клеток у субъекта, которому была введена популяция биоактивных почечных клеток, включающий определение того, присутствует ли по меньшей мере одно соединение в везикуле от субъекта, способом по любому из пп. 91-102.
104. Способ по п. 103, включающий определение того, присутствует ли по меньшей мере одно соединение в везикуле от субъекта, способом по любому из пп. 91-102 в первый момент времени и во второй момент времени.
105. Способ по п. 104, при этом первый момент времени соответствует моменту до введения субъекту популяции биоактивных почечных клеток, и второй момент времени соответствует моменту после введения субъекту популяции биоактивных почечных клеток.
106. Способ по п. 104, при этом первый момент времени и второй момент времени соответствуют моментам после введения субъекту популяции биоактивных почечных клеток.
107. Способ по любому из пп. 104-106, дополнительно включающий определение регенеративного эффекта у субъекта, если уровень соединения выше в первый момент времени, чем во второй момент времени.
108. Способ по любому из пп. 104-106, дополнительно включающий определение регенеративного эффекта у субъекта, если уровень соединения выше, чем в контроле.
109. Способ по п. 108, при этом контроль представляет собой уровень у соответствующего субъекта, которому не была введена популяция биоактивных почечных клеток.
110. Способ определения того, является ли везикула регенеративной, включающий
(i) определение того, присутствует ли белок и/или микроРНК в везикуле по любому из пп. 49-58; и
(ii) идентификацию везикулы как регенеративной, если белок и/или микроРНК обнаружены в везикуле.
111. Способ определения уровня по меньшей мере одной микроРНК в везикулах из популяции биоактивных почечных клеток, включающий
(i) определение того, повышено ли содержание одной или более из следующих молекул микроРНК в везикулах в сравнении с контролем: miR-1248, miR-3168, miR-362-5p, miR-7113-5p, miR-758-3p, miR-937-3p, miR-4455, miR-4521, miR-203a-3p, miR-22-3p, miR-574-3p, miR-181b-5p, miR-1260b и/или miR-181b-5p; и
(ii) определение того, снижено ли содержание одной или более из следующих молекул микроРНК в везикулах в сравнении с контролем: miR-1-3p, miR-1-3p, miR-143-3p, miR-150-5p, miR-509-3p, miR-653-5p, miR-204-5p, miR-192-5p и/или miR-363-3p.
112. Способ по п. 111, при этом биоактивная почечная клетка представляет собой селективную почечную клетку.
113. Способ по п. 111 или 112, при этом контроль представляет собой уровень одной или более молекул микроРНК везикул из популяции первичных почечных клеток.
114. Способ по п. 111 или 112, при этом контроль представляет собой уровень одной или более молекул микроРНК везикул из другой популяции биоактивных почечных клеток.
115. Способ лечения заболевания почек у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества везикул из препарата везикул, при этом везикула из препарата везикул была идентифицирована как регенеративная способом по п. 110.
116. Способ лечения заболевания почек у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей популяцию биоактивных почечных клеток с добавлением везикул почечных клеток, которые не были секретированы популяцией биоактивных почечных клеток.
117. Способ по п. 116, при этом популяция биоактивных почечных клеток представляет собой популяцию селективных почечных клеток.
118. Способ по п. 116 или 117, при этом везикулы почечных клеток были секретированы популяцией биоактивных почечных клеток, которая имеет то же происхождение, и/или содержит клетки тех же типов, что и популяция биоактивных почечных клеток в композиции.
119. Способ изменения уровня по меньшей мере одной микроРНК и/или белка в везикулах, продуцируемых популяцией биоактивных почечных клеток, включающий культивирование популяции в гипоксических условиях.
120. Способ по п. 119, при этом культивирование популяции в гипоксических условиях представляет собой культивирование популяции в присутствии менее 5% кислорода в течение по меньшей мере примерно 8, 12, 16, 20, 24 или 48 часов.
121. Способ по п. 119 или 120, дополнительно включающий пересев биоактивных почечных клеток по меньшей мере примерно 1, 2 или 3 раза перед культивированием популяции в гипоксических условиях.
122. Способ по любому из пп. 119-120, при этом
(a) по меньшей мере одна микроРНК представляет собой miR-145, miR-22, miR-7, miR-10a, miR-143, let7b, miR-1248, miR-3168, miR-7113-5p, miR-758-3p, miR-937-3p, miR-4455, miR-4521, miR-203a-3p, miR-22-3p, miR-574-3p, miR-181b-5p, miR-1260b и/или miR-181b-5p; и/или
(b) по меньшей мере один белок представляет собой CD9, CD63, CD81, CD133, CD146, CD326, CD40, CD42a, CD44, CD49e, SSEA-4, TST101, HSP70, HSP90 и/или ROR4.
123. Везикула, содержащая соединение, которое не продуцируется почечными клетками в естественной почке.
124. Везикула по п. 123, при этом соединение представляет собой белок, малую молекулу или полинуклеотид.
125. Везикула по п. 123 или 124, при этом соединение не экспрессируется или не продуцируется первичными почечными клетками, которые культивируют в отсутствие соединения.
126. Везикула по п. 125, при этом соединение представляет собой искусственное соединение.
127. Везикула по любому из пп. 123-126, при этом соединение представляет собой соединение, которое используют для лечения заболевания почек.
128. Везикула по любому из пп. 123-127, которая представляет собой микровезикулу.
129. Везикула по п. 128, которая представляет собой экзосому.
130. Везикула по любому из пп. 123-129, которая находится в композиции, содержащей клетки, которые продуцировали везикулу.
131. Везикула по любому из пп. 123-129, которая была выделена из клеток, продуцировавших ее.
132. Везикула по любому из пп. 123-131, представляющая собой почечную везикулу.
133. Везикула по любому из пп. 123-132, которая была продуцирована биоактивной почечной клеткой.
134. Композиция, содержащая везикулу по любому из пп. 123-133 и фармацевтически приемлемый носитель.
135. Композиция, содержащая везикулу почечной клетки и везикулу не почечной клетки.
136. Композиция по п. 135, при этом везикула почечной клетки была секретирована биоактивной почечной клеткой.
137. Композиция по п. 135 или 136, при этом везикула не почечной клетки была секретирована не почечной эндотелиальной клеткой-предшественником, не почечной мезенхимальной стволовой клеткой или не почечной адипозной клеткой-предшественником.
138. Композиция, содержащая везикулу, продуцированную первичной почечной клеткой, и везикулу, продуцированную селективной почечной клеткой.
139. Способ лечения заболевания почек у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции по любому из пп. 134-138.
140. Способ получения экзосомы из клеток, при этом экзосома содержит соединение, которое не продуцируется клетками, включающий выделение экзосомы из супернатанта культуры клеток, при этом супернатант культуры клеток получен от культуры клеток, которые были в контакте с соединением.
141. Способ получения почечной экзосомы, при этом экзосома содержит соединение, которое не продуцируется почечными клетками в естественной почке, включающий выделение везикулы из супернатанта культуры почечных клеток, при этом супернатант культуры почечных клеток получен от культуры почечных клеток, содержащей популяцию биоактивных почечных клеток, которые находились в контакте с соединением.
142. Способ по п. 140 или 141, при этом соединение представляет собой искусственное соединение.