НАЦЕЛЕННЫЙ МУТАГЕНЕЗ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ, ПОХОЖИХ НА ФЕРМЕНТЫ БЕРБЕРИНОВЫХ МОСТОВ ТАБАКА

1. Табачный продукт, включающий табак из растения Nicotiana, в котором:
(А) растение подвергают модификации для снижения активности по меньшей мере одного из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере один из BBLa, BBLb и BBLc; и
(Б) растение включает мутацию в по меньшей мере одном эндогенном полинуклеотиде, который выбирают из группы, к которой относятся:
(I) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 1;
(II) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2; и
(III) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 3,
таким образом, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
2. Табачный продукт по п. 1, отличающийся тем, что растение Nicotiana подвергают модификации для снижения активности по меньшей мере двух из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере два из BBLa, BBLb и BBLc.
3. Табачный продукт по п. 2, отличающийся тем, что растение Nicotiana подвергают модификации для снижения активности каждого из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей каждый из BBLa, BBLb и BBLc.
4. Табачный продукт по п. 3, отличающийся тем, что растение Nicotiana включает мутацию в каждом из по меньшей мере двух полинуклеотидов (I)-(III).
5. Табачный продукт по п. 4, отличающийся тем, что растение Nicotiana включает мутацию в каждом из полинуклеотидов (I)-(III).
6. Табачный продукт по любому из пп. 3-5, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 90% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
7. Табачный продукт по п. 6, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 95% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
8. Табачный продукт по п. 6, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 97% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
9. Табачный продукт по п. 1, отличающийся тем, что:
(А) растение Nicotiana подвергают модификации для снижения активности каждого из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей каждый из BBLa, BBLb и BBLc, и
(Б) растение Nicotiana включает мутацию в по меньшей мере полинуклеотиде (III), и
отличающийся тем, что содержание никотинового алкалоида растения Nicotiana снижено по меньшей мере на 90% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
10. Табачный продукт по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что табак выбирают из группы, к которой относятся листовой табак, скрошенный табак, резанный табак, перемолотый табак, порошковый табак, экстракт табака, бездымный табак, табак для закладывания за губу или нюхания, трубочный табак, сигарный табак, табак для сигарилл, сигаретный табак и жевательный табак.
11. Табачный продукт по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что продукт выбирают из группы, к которой относятся сигарилла, сигарета кретек, сигарета с невентилируемым фильтром, сигарета с вентилируемым фильтром, сигара, нюхательный табак, табакосодержащая жевательная резинка, табакосодержащие жевательные пастилки и жевательный табак.
12. Табачный продукт по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что никотиновый алкалоид представляет собой никотин.
13. Способ выращивания растения Nicotiana, имеющего сниженное содержание никотинового алкалоида, который включает сочетание в растении Nicotiana:
(А) модификации для снижения активности по меньшей мере одного из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере один из BBLa, BBLb и BBLc; и
(Б) мутации в по меньшей мере одном эндогенном полинуклеотиде, который выбирают из группы, к которой относятся:
(I) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 1;
(II) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 2; и
(III) полинуклеотид, который имеет от приблизительно 97% до приблизительно 100% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 3,
таким образом, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что растение Nicotiana подвергают модификации для снижения активности по меньшей мере двух из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере два из BBLa, BBLb и BBLc.
15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что растение Nicotiana подвергают модификации для снижения активности каждого из BBLa, BBLb и BBLc или для снижения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей каждый из BBLa, BBLb и BBLc.
16. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что генерирование мутации включает введение в растение по меньшей мере одной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей нуклеазу, направленную на по меньшей мере два из полинуклеотидов (I)-(III).
17. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что генерирование мутации включает введение в растение по меньшей мере одной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей нуклеазу, направленную на каждый из полинуклеотидов (I)-(III).
18. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что нуклеаза включает мегануклеазу, нуклеазу цинковых пальцев (ZFN), эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), и/или ассоциированную с регулярно расположенными группами короткими палиндромными повторами (CRISPR) (Cas) нуклеазу.
19. Способ по любому из пп. 13-18, отличающийся тем, что мутация представляет собой делецию или инсерцию.
20. Способ по любому из пп. 13-19, отличающийся тем, что способ также включает снижение экспрессии полинуклеотида, кодирующего дополнительный биосинтетический фермент никотинового алкалоида, который выбирают из группы, к которой относятся аспартатоксидаза, хинолинатсинтаза, хинолатфосфорибозилтрансфераза, орнитиндекарбоксилаза, путресцин N-метилтрансфераза, метилпутресциноксидаза и А622.
21. Способ по любому из пп. 13-20, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 90% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 95% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).
23. Способ по п. 21, отличающийся тем, что растение Nicotiana имеет содержание никотинового алкалоида, сниженное по меньшей мере на 97% по сравнению с растением, которое не модифицировано согласно подпункту (А) и не включает мутации согласно подпункту (Б).