ПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИНЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНКИНАЗ
PYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINES, USED AS PROTEIN KINASE INHIBITORS

Изобретение относится к соединениям, которые полезны в качестве ингибиторов протеинкиназ, в частности киназ семейства Tec, киназ Aurora и c-Met. Изобретение также относится к фармацевтически приемлемым композициям, содержащим соединения настоящего изобретения, и к способам применения композиций при лечении различных расстройств. Изобретение также относится к способам получения соединений настоящего изобретения.
Семейство безрецепторных тирозинкиназ Tec играет основную роль в передаче сигналов через рецепторы антигенов, таких как рецепторы TCR, BCR и Fcε и являются необходимыми для активации T-клеток. Делеция Itk у мыши приводит к снижению пролиферации, опосредуемой Т-клеточным рецептором (TCR), и секреции цитокинов IL-2, IL-4, IL-5, IL-10 и IFN-γ. Itk вовлечен в патогенез астмы и атопического дерматита.
Семейство киназ Tec также необходимо для развития В-клеток и их активации. У больных с мутациями в гене Btk имеется глубокое блокирование развития В-клеток, что приводит к практически полному отсутствию B-лимфоцитов и плазмоцитов, значительному снижению уровней Ig и абсолютному ингибированию гуморального ответа на повторный антиген. Делеция Btk у мышей оказывает значительное влияние на B-клеточную пролиферацию, вызываемую анти-IgM, и ингибирует иммунные ответы на тимус-независимые антигены типа II.
Киназы Tec также играют роль в активации тучных клеток посредством высокоаффинного рецептора IgE (FcεRI). Itk и Btk экспрессируются в тучных клетках и активируются путем FcεRI перекрестного связывания. Тучные клетки с дефицитом Btk имеют сниженную дегранулиряцию и пониженную продукцию провоспалительных цитокинов, сопровождающую FcεRI перекрестное связывание. Дефицит Btk также приводит к снижению эффекторных функций макрофагов.
Белки Aurora относятся к семейству трех серин/треониновых киназ с высоким родством (обозначены Aurora-A, -B и -C), которые необходимы для прохождения клетки митотической фазы клеточного цикла. Так, Aurora-A играет основную роль в созревании центросом и разъединении, образовании митотического веретена и правильном расхождении хромосом. Aurora-B является хромосомным пассажирным белком, который играет основную роль в регуляции расположения хромосом в метафазной пластинке, в контрольной точке сборки веретена, а также в правильном завершении клеточного деления.
Сверхэкспрессия Aurora-A (Aurora-2), Aurora-B (Aurora-1) или Aurora-C наблюдается при различных злокачественных новообразованиях человека, включая колоректальный рак, рак яичников, желудка и инвазивная аденокарцинома протоков.
Большое число исследований показало, что уменьшение или ингибирование Aurora-A или -B в линиях раковых клеток человека под действием siRNA, доминантных негативных или нейтрализующих антител, прерывает прохождение митоза и прекращает накопление клеток с 4n ДНК. В некоторых случаях это приводит к эндорепликации и клеточной смерти.
Рецептор тирозинкиназы c-Met сверхэкспрессирован в значительном числе рака человека, и его количество увеличивается во время преобразования первичных опухолей в метастазы. Различные типы рака, в которых вовлечены c-Met, включают, но не ограничиваются ими, аденокарциному желудка, рак почки, мелкоклеточную карциному легких, колоректальный рак, рак толстой кишки, рак простаты, рак мозга, рак печени, рак поджелудчной железы и рак молочной железы. c-Met также вовлечен в атеросклероз, фиброз легких, аллергические расстройства, аутоиммунные расстройства и состояния, связанные с трансплантацией органов.
Таким образом, существует большая необходимость в создании соединений, которые будут полезны в качестве ингибиторов протеинкиназ. В частности, желательно найти соединения, которые эффективны в качестве ингибиторов белков семейства Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk) и семейства протеинкиназа Aurora, а также c-Met, делающих, в частности, методы лечения большого количества расстройств, связанных с их активностью, в настоящее время неэффективными.
I
I
II
III
IV
Было обнаружено, что соединения по данному изобретению и их фармацевтически приемлемые композиции являются эффективными в качестве ингибиторов протеинкиназ. В некоторых вариантах осуществления указанные соединения являются эффективными в качестве ингибиторов протеинкиназ семейства Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Auroras и/или c-Met. Указанные соединения представлены формулами , ', ,  или , как определено в данном описании, или их фармацевтически приемлемыми солями.
Указанные соединения и их фармацевтически приемлемые композиции полезны для лечения или профилактики множества заболеваний, расстройств или состояний. Также соединения по данному изобретению полезны для изучения киназ в биологических и патологических процессах; изучения путей внутриклеточной сигнальной передачи, опосредованных такими киназами; и сравнительной оценки новых ингибиторов киназы.
I
Настоящее изобретение относится к соединению формулы :
Формула I
или его фармацевтически приемлемой соли, где
2a
R представляет собой необязательно замещенный -(C=Q)R или необязательно замещенный Y;
Y представляет собой 5-10-членное моноциклическое или бициклическое гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо;
Q представляет собой гетероатом, выбранный из O, N или S; и
2a
5
5
1-6
2
R представляет собой Cалифатическую группу, арил, гетероарил, OR или N(R);
1
1-6
R представляет собой H или Cалифатическую группу;
1-6
Z представляет собой связь или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении;
3
4
1-6
1-6
2
2
m
5
R и R представляют собой, каждый независимо, H, галоген, Cалифатическую группу, Cалкокси, N(R), CN, NO или U-V, где m равно 0 или 1;
1-12
8
V представляет собой H, арил, гетероарил, циклоалифатическую группу, гетероциклил или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении; V необязательно замещен R;
1-12
2
2
2
2
2
2
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
U представляет собой Cалкилиденовую цепь, где вплоть до двух метиленовых звеньев цепи, необязательно и независимо, замещены -NR-, -O-, -S-, -CO-, -OC(O)-, -C(O)CO-, -C(O)-, -C(O)NR-, -NRCO-, -NRC(O)O-, -SONR-, -NRSO-, -C(O)NRNR-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR-, -NRNR-, -NRSONR-, -SO-, -SO-, -PO-, -PO- или -POR-, в химически стабильном положении;
5
6
6
6
6
6
1-4
2
2
0-6
0-6
0-6
0-6
1-6
R представляет собой H, Cгалогеналкил, -C(O)COR, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R), -SOR, Cалкилгетероциклил, Cалкилгетероарил, Cалкиларил, Cалкилциклоалифатическую группу или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении;
6
6
1-6
1-4
0-6
0-6
0-6
0-6
1-6
R представляет собой H, Cалкокси, Cгалогеналкил, Cалкилгетероциклил, Cалкилгетероарил, Cалкиларил, Cалкилциклоалифатическую группу или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении; или две группы R, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, необязательно соединены с образованием 5-10-членного карбоцикла или гетероцикла;
8
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-12
R представляет собой галоген, -OR, -N(R), -SR, NO, CN, -COOR, -C(O)N(R), -SOR, -SON(R), -NRC(O)R, -C(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)O-R, -NRSO-R, -C(O)NRN(R), -NRC(O)N(R), -OC(O)N(R), -NRN(R), -NRSON(R) или Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи могут быть необязательно прерваны группой -C(O)N(R)-, -NRCO(R)-, -O-, -NR- или -S-;
при условии, что
когда Z представляет собой связь, R не является 2-(фениламино)пиримидин-4-илом, где фенил необязательно замещен;
a
b
b
a
a
b
b
b
b
a
b
2
1-6
3-1
0-6
2
0-6
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
0-6
0-6
2
0-6
0-6
0-6
0-6
когда Z представляет собой связь, R не является -(C=O)N(R), -(C=O)R или -(C=O)OR, где R представляет собой H, Cалифатическую группу, Cциклоалифатическую группу, арил, гетероарил, гетероциклил, Cалкил-(C=O)N(R), Cалкил-SOR, Cалкил-SOR, Cалкил-COR, Cалкил-COH, Cалкил-OR, Cалкил-OH, Cалкил-N(R), Cалкил-(C=O)-Cалкил-OR или Cалкил-(C=O)-Cалкил-OH; и
b
1-6
,
3-10
R представляет собой Cалифатическую группу Cциклоалифатическую группу, арил, гетероарил или гетероциклил;
0-6
2
0-6
n
0-6
n
0-6
2
0-6
2
1-6
1-6
1-6
2
0-6
0-6
0-6
0-6
a
b
b
b
a
b
когда Z представляет собой связь, R не замещен группой Cалкил-(C=O)N(R), Cалкил-SOR, Cалкил-SOH, Cалкил-COR, Cалкил-COH, Cалкил-OR, Cалкил-OH, Cалкил-N(R), Cалкил-(C=O)-Cалкил-OR, Cалкил-(C=O)-Cалкил-OH;
a
b
где n равно 0, 1 или 2; и R и R являются такими, как определено выше;
3
когда Z представляет собой связь, R не является необязательно замещенным кольцом дигидропиримидинона или дигидропиридинона;
когда Z представляет собой связь, R не является необязательно замещенным фенилом.
1
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой связь. В некоторых вариантах осуществления R представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления Y представлен формулой, показанной ниже:
где
Q представляет собой гетероатом, выбранный из O, N или S;
7
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
2
2
2
2
2
2
1-12
R представляет собой галоген, -OR, -N(R), -SR, NO, CN, -COOR, -C(O)N(R), -SOR, -SON(R), -NRC(O)R, -C(O)R, -OC(O)R или Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи могут быть необязательно прерваны группой -C(O)N(R)-, -NRCO(R)-, -O-, -NR- или -S-;
----
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
2b
R представляет собой углерод или гетероатом, выбранный из O, N или S;
2b
2b
R и Q вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 3-7-членное насыщенное или ненасыщенное моноциклическое кольцо с 0-4 гетероатомами, выбранными из O, N или S; или 8-10-членное насыщенное или ненасыщенное бицикличекое кольцо с 0-6 гетероатомами, выбранными из O, N или S. В следующих вариантах осуществления R представляет собой углерод.
В других вариантах осуществления R представляет собой
.
В следующих вариантах осуществления Q представляет собой N или O.
7
7
7
6
6
6
6
6
6
6
6
2
2
2
2
2
В других вариантах осуществления R представляет собой Y. В следующих вариантах осуществления Y представляет собой 5-10-членный гетероарил или гетероциклил. В следующих вариантах осуществления Y представляет собой необязательно замещенный 5-6-членный гетероарил или гетероциклил. В следующих вариантах осуществления Y представляет собой пиридиновое кольцо, необязательно замещенное R. В дальнейших вариантах осуществления Y представляет собой 2-пиридиновое кольцо, необязательно замещенное R. В некоторых вариантах осуществления R представляет собой галоген, OR, -N(R), -SR, NO, CN, -OC(O)R, -NRC(O)R, -SON(R) или -NRSO-.
3
4
8
3
4
5
3
4
8
8
8
8
8
6
8
6
6
8
6
6
6
m
m
2
1-12
1-12
2
1-6
1-6
1-6
1-6
В других вариантах осуществления R и R представляют собой, каждый независимо, U-V. В следующих вариантах осуществления V представляет собой арил, гетероарил, циклоалифатическую группу или гетероциклил, необязательно замещенный R. В следующих вариантах осуществления R представляет собой H и R представляет собой U-V; U представляет собой -C(O)NR; и m равно 1. В других вариантах осуществления R и/или R m равно нулю и V представляет собой арил или гетероарил. В следующих вариантах осуществления V представляет собой незамещенный фенил. В других вариантах осуществления V представляет собой фенил, замещенный R. В других вариантах осуществления V представляет собой гетероарил, замещенный R. В следующих вариантах осуществления V представляет собой гетероарил, замещенный R. В следующих вариантах осуществления V представляет собой пиридил, замещенный R. В следующих вариантах осуществления R представляет собой галоген, OH, CN, NH, OR или Cалифатическую группу. В следующих вариантах осуществления R представляет собой Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи могут быть необязательно заменены -C(O)NR-, -NRCO- или гетероатомом, выбранным из O, N, и S. В следующих вариантах осуществления R представляет собой -C(O)OR или -C(O)N(R). В следующих вариантах осуществления R представляет собой H, Cалкилгетероциклил, Cалкилгетероарил, Cалкиларил, Cалкилциклоалифатическую группу.
1-6
2
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой Cалкил, где метиленовые звенья не заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S; и V представляет собой арил или гетероарил. В следующих вариантах осуществления Z представляет собой -CH-.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к соединению, выбранному из следующих соединений:
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к композиции, содержащей соединение настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В следующих вариантах осуществления композиция дополнительно содержит агент для лечения аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного, гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).
Изобретение также относится к способам ингибирования активности киназы семейства Tec у пациента или биологического образца, предусматривающих введение указанному пациенту или приведение в контакт указанного биологического образца с соединением настоящего изобретения или композиций, содержащей указанное соединение. В следующих вариантах осуществления способ включает ингибирование активности Itk. Изобретение также относится к способам лечения или ослабления тяжести болезненного состояния, выбранного из аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного или гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, при которых предусмотрено введение такому пациенту соединения по настоящему изобретению или композиции, содержащей указанное соединение. В следующих вариантах осуществления данный способ предусматривает введение указанному пациенту дополнительного терапевтического агента, выбранного из агента для лечения аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного, гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), где указанный дополнительный терапевтический агент является подходящим для подвергаемого лечению заболевания; и указанный дополнительный терапевтический агент вводят совместно с указанной композицией в виде разовой дозированной формы или отдельно от указанной композиции в виде части многократной дозированной формы.
В следующих вариантах осуществления заболевание или расстройство представляет собой астму, острый ринит, аллергический, атрофический ринит, хронический ринит, мембранозный ринит, сезонный ринит, саркоидоз, легкое фермера, пневмофиброз, идеопатическую интерстициальную пневмонию, ревматоидный артрит, серонегативную спондилоартропатию (включая алкилозирующий спондилит, псориатический артрит и болезнь Рейтера), болезнь Бехчета, синдром Шегрена, системный склероз, псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит и другие экзематозные дерматиты, себорейный дерматит, лишай Вильсона, пузырчатку, буллезную пузырчатку, буллезный эпидермолиз, крапивницу, ангиобластоз, васкулиты, эритему, кожную эозинофилию, увеит, гнездовую алопецию, весенний конъюнктивит, заболевания брюшной полости, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, панкреатит, болезнь Крона, язвенный колит, пищевую аллергию, множественный склероз, атеросклероз, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), системную красную волчанку, эритематоз, тиреоидит Хашимото, миастению гравис, диабет по типу I, нефротический синдром, фасцит с эозинофилией, гипер-IgE синдром, лепроматозный тип лепры, синдром Сезари и идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, рестиноз после ангиопластики, опухоли, атеросклероз, отторжение аллотрансплантата, включая, но без ограничения, острое и хроническое отторжение аллотрансплантата после, например, трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи и роговицы и реакцию «трансплантат против хозяина».
В других вариантах осуществления изобретение относится к соединению формулы I':
Формула I'
или его фармацевтически приемлемой соли, где
2a
R представляет собой -(C=Q)R, CN или Y; где
Y
Y представляет собой 5-10-членное моноциклическое или бициклическое гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо; каждый Y независимо и необязательно замещен 0-5 J;
Q представляет собой O, NH, NR' или S;
1-6
1-6
2
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
R' представляет собой Cалкил, необязательно замещенный 0-4 заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, Cалифатическую группу, NO, NH, -N(Cалкил), -N(Cалкил), SH, -S(Cалкил), OH, -O(Cалкил), -C(O)(Cалкил), -C(O)NH, -C(O)N(Cалкил) или -C(O)N(Cалкил);
2a
5
5
2a
2a
1-6
6-10
2
R представляет собой Cалифатическую группу, Cарил, 5-10-членный гетероарил, 5-10-членный гетероциклил, OR или N(R); каждый R, независимо и необязательно, замещен 0-5 J;
1
1
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
1-6
2
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
R представляет собой H, -C(O)(Cалкил), -C(O)O(Cалкил), -C(O)NH, -C(O)N(Cалкил), -C(O)N(Cалкил); или Cалифатическую группу; каждый R необязательно замещен 0-4 заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, Cгалогеналкил, Cалифатическую группу, NO, NH, -N(Cалкил), -N(Cалкил), SH, -S(Cалкил), OH или -O(Cалкил);
1-6
Z представляет собой связь или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении;
3
4
1-6
2
2
m
5
R и R представляют собой, каждый независимо, H, галоген, Cалкокси, N(R), CN, NO или U-V, где m равно 0 или 1;
6-10
3-10
1-12
8
V представляет собой H, Cарил, 5-10-членный гетероарил, Cциклоалифатическую группу, 5-10-членный гетероциклил или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении; V необязательно замещен 0-4 R;
1-12
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
u
U представляет собой Cалкилиденовую цепь, где вплоть до двух метиленовых звеньев цепи, необязательно и независимо, заменены -NH-, -NR-, -O-, -S-, -CO-, -OC(O)-, -C(O)CO-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NHCO-, -NRCO-, -NHC(O)O-, -NRC(O)O-, -SONH-, -SONR-, -NHSO-, -NRSO-, -NHC(O)NH-, -NRC(O)NH-, -NHC(O)NR-, -NRC(O)NR, -OC(O)NH-, -OC(O)NR-, -NHNH-, -NHNR-, -NRNR-, -NRNH-, -NHSONH-, -NRSONH-, -NHSONR-, -NRSONR-, -SO-, -SO-, -PO-, -PO- или -POR-; U необязательно замещен 0-6 J;
5
6
6
6
6
6
5
R5
5
1-4
2
2
0-6
0-6
0-6
0-6
1-6
2
2
2
2
2
2
R представляет собой Cгалогеналкил, -C(O)COR, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R), -SOR, Cалкилгетероциклил, Cалкилгетероарил, Cалкиларил, Cалкилциклоалифатическую группу или Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены -NR"-, -O-, -S-, -CO-, -OC(O)-, -C(O)CO-, -C(O)-, -C(O)NR"-, -NR"CO-, -NR"C(O)O-, -SONR"-, -NR"SO-, -C(O)NR"NR"-, -NR"C(O)NR"-, -OC(O)NR"-, -NR"NR"-, -NR"SONR"-, -SO-, -SO-, -PO-, -PO- или -POR"-, в химически стабильном положении; каждый R, независимо и необязательно, замещен 0-5 J; или две группы R, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, необязательно соединены с образованием 5-10-членного карбоциклического или гетероциклического кольца; где указанное кольцо необязательно замещено 0-4 J';
6
6
R6
6
1-6
1-4
0-6
0-6
0-6
0-6
1-6
R представляет собой H, Cалкокси, Cгалогеналкил, Cалкилгетероциклил, Cалкилгетероарил, Cалкиларил, Cалкилциклоалифатическую группу или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении; каждый R, независимо и необязательно, замещен 0-5 J; или две группы R, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, необязательно соединены с образованием 5-10-членного карбоциклического или гетероциклического кольца; где указанное кольцо необязательно замещено 0-4 J";
8
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
8
R8
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-12
R представляет собой галоген, Cгалогеналкил, фенил, 5-8-членный гетероциклил, 5-6-членный гетероарил, -OR, -N(R), -SR, NO, CN, -COOR, -C(O)N(R), -SOR, -SON(R), -NRC(O)R, -C(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)O-R, -NRSO-R, -C(O)NRN(R), -NRC(O)N(R), -OC(O)N(R), -NRN(R), -NRSON(R) или Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи могут быть необязательно прерваны группой -C(O)R, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)-, -C(O)N(R)-, -NRCO(R)-, -O-, -NR- или -S-; каждый R, независимо и необязательно, замещен 0-5 J;
Y
2a
u
R5
R6
R8
9
9
9
9
9
9
9
2
2
2
3
1-4
6-10
6-10
3-10
3-10
каждый J, J, J, J, J, J, J' и J", независимо, выбран из N(R), SR, OR, галогена, CN, NO, COOR, C(O)R, SOR, SOR, -X-CF, -X-SH, -X-OH, Cгалогеналкила, Cарила, -X-(Cарила), 5-10-членного гетероарила, -X-(5-10-членного гетероарила), Cциклоалифатической группы, -X-(Cциклоалифатической группы), 5-10-членного гетероциклила, -X-(5-10-членного гетероциклила) или X;
1-12
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-6
X представляет собой Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены -NH-, -NR"-, -O-, -S-, -CO-, -OC(O)-, -C(O)CO-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)NR"-, -C(=N-CN), -NHCO-, -NR"CO-, -NHC(O)O-, -NR"C(O)O-, -SONH-, -SONR"-, -NHSO-, -NR"SO-, -NHC(O)NH-, -NR"C(O)NH-, -NHC(O)NR"-, -NR"C(O)NR", -OC(O)NH-, -OC(O)NR"-, -NHNH-, -NHNR"-, -NR"NR"-, -NR"NH-, -NHSONH-, -NR"SONH-, -NHSONR"-, -NR"SONR"-, -SO-, -SO-, -PO-, -PO- или -POR"-; в химически стабильном положении; где R" представляет собой H или Cалифатическую группу;
Y
2a
u
R5
R6
9
9
9
9
9
9
9
2
2
2
3
1-4
6-10
6-10
3-10
3-10
каждый из J, J, J, J, J, J' и J", необязательно и независимо, замещен 0-4 заместителями, выбранными из группы, включающей N(R), SR, OR, галоген, CN, NO, COOR, C(O)R, SOR, SOR, -X-CF, -X-SH, -X-OH, Cгалогеналкил, Cарил, -X-(Cарил), 5-10-членный гетероарил, -X-(5-10-членный гетероарил), Cциклоалифатическую группу, -X-(Cциклоалифатическую группу), 5-10-членный гетероциклил, -X-(5-10-членный гетероциклил) или X;
9
9
1-6
1-4
6-10
6-10
3-10
3-10
2
1-6
2
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
2
1-6
1-6
2
1-4
6-10
6-10
3-10
3-10
R представляет собой H, Cалифатическую группу, Cгалогеналкил, Cарил, -X-(Cарил), 5-10-членный гетероарил, -X-(5-10-членный гетероарил), Cциклоалифатическую группу, -X-(Cциклоалифатическую группу), 5-10-членный гетероциклил, -X-(5-10-членный гетероциклил) или X, или где два R, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 5-10-членный гетероциклил, где указанный гетероциклил необязательно замещен 0-4 заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, CN, NO, -COOH, -COO(Cалкил), -C(O)H, SOH, SO(Cалкил), Cгалогеналифатическую группу, NH, -NH(Cалкил), -N(Cалкил), SH, -S(Cалкил), OH, -O(Cалкил), -C(O)(Cалкил), -C(O)NH, -C(O)NH(Cалкил), -C(O)N(Cалкил), -C(O)NH, -C(O)NH(Cалкил) или -C(O)N(Cалкил), Cгалогеналкил, Cарил, -X-(Cарил), 5-10-членный гетероарил, -X-(5-10-членный гетероарил), Cциклоалифатическую группу, -X-(Cциклоалифатическую группу), 5-10-членный гетероциклил, -X-(5-10-членный гетероциклил) или X.
4
3
4
3
В некоторых вариантах осуществления формулы I', если R представляет собой H, тогда R является иным, чем H. В следующих вариантах осуществления R представляет собой H и R является иным, чем H. В других вариантах осуществления Z представляет собой связь.
1
В других вариантах осуществления R представляет собой H.
2a
5
5
2
1-6
1-4
1-6
2
1-6
1-6
2
2
2
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой . В следующих вариантах осуществления Q представляет собой N или O. В следующих вариантах осуществления R представляет собой OR, N(R) или 5-8-членный гетероциклил. В следующих вариантах осуществления 5-8-членный гетероциклил содержит 1-2 атома азота. В дальнейших вариантах осуществления 5-8-членный гетероциклил необязательно замещен 0-4 заместителями, выбранными из группы, включающей Cалифатическую группу, Cгалогеналкил, CN, галоген, OH, O-(Cалифатическую группу), NH, NH(Cалифатическую группу), N(Cалифатическую группу), бензил, -CH-(пиридил) или -CH-пирролидинил.
2a
5
5
5
2
1-6
1-6
1-6
3-10
1-6
3-10
1-6
2
1-6
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой N(R). В следующих вариантах осуществления R представляет собой H или необязательно замещенную группу, выбранную из 5-8-членного гетероциклила, -(Cалкил)-(5-8-членного гетероциклила), 5-6-членный гетероарил-(Cалкил)-(5-6-членного гетероарила), фенила, -(Cалкил)(фенила), Cциклоалифатической группы, -(Cалкил)-(Cциклоалифатической группы) и Cалифатической группы, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены -NR"-, -O- или -S-, в химически стабильном положении. В дальнейших вариантах осуществления R представляет собой H или необязательно замещенную группу, выбранную из пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, -CH-(5-6-членного гетероарила), фенила, бензила и Cалифатической группы, где одно метиленовое звено алифатической цепи, необязательно и независимо, заменено -NR"-, -O- или -S-, в химически стабильном положении.
R5
R5
1-4
2
2
1-6
2
2
2
1-6
В некоторых вариантах осуществления формулы I' J представляет собой галоген, CN, Cгалогеналкил или необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, бензила, 5-8-членного гетероциклила, 5-6-членного гетероарила, CH-(5-6-членного гетероарила), CH-(5-8-членного гетероциклила) и Cалифатической группы, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены -NR"-, -O-, -S-, -C(O)-, -SO- или -SO-, в химически стабильном положении. В следующих вариантах осуществления J представляет собой галоген, CN, фенил, бензил, CH-(пиридил), CH-(пирролидинил) или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены -NR"-, -O- или -S-.
Y
Y
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой Y. В следующих вариантах осуществления Y представляет собой необязательно замещенный 5-10-членный гетероарил или гетероциклил. В дальнейших вариантах осуществления Y представляет собой необязательно замещенный 5-6-членный гетероарил или 5-8-членный гетероциклил. В дальнейших вариантах осуществления Y представляет собой пиридиновое кольцо, необязательно замещенное 0-4 J. В следующих вариантах осуществления Y представляет собой 2-пиридиновое кольцо, необязательно замещенное 0-4 J.
Y
Y
2
1-6
1-6
3-10
1-6
3-10
1-6
1-12
2
2
3
1-6
1-6
1-6
1-6
2
В некоторых вариантах осуществления формулы I' J представляет собой галоген, CN, NO, Cгалогеналифатическую группу, фенил, бензил, 5-6-членный гетероарил, Cалкил-(5-6-членный гетероарил), Cциклоалифатическую группу, (Cалкил)-(Cциклоалифатическую группу), 5-8-членный гетероциклил, Cалкил-(5-8-членный гетероциклил) или Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены -NR-, -O-, -S-, -C(O)-, -SO- или -SO-, в химически стабильном положении. В следующих вариантах осуществления J представляет собой галоген, CN, NO, CF, Cалифатическую группу, фенил, бензил, -O-бензил, пиперидинил, пирролидинил, -NR(Cалкил), -O(Cалкил), -S(Cалкил), OH, SH или NH.
3
4
8
m
6-10
3-10
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R и R представляют собой, каждый независимо, U-V. В следующих вариантах осуществления V представляет собой H, Cарил, 5-10-членный гетероарил, Cциклоалифатическую группу или 5-10-членный гетероциклил, необязательно замещенный 0-4 R. В следующих вариантах осуществления V представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, 5-6-членного гетероарила или 5-8-членного гетероциклила. В дальнейших вариантах осуществления V представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из фенила, пиразолила, пиридила, пиримидила, пиразинила, пиридизинила, пирролидинила, пиперидинила или морфолинила. В дальнейших вариантах осуществления V представляет собой необязательно замещенный фенил.
3
5
5
m
1-6
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой U-V; m равно 1, и U представляет собой Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены -C(O)-, -C(O)NR- или -C(O)O-. В следующих вариантах осуществления U представляет собой -C(O)NR-. В дальнейших вариантах осуществления V представляет собой необязательно замещенный фенил или необязательно замещенный пиридил.
3
m
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой U-V, m равно нулю, и V представляет собой арил или гетероарил.
8
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
6
8
6
6
6
6
8
6
6
1-4
2
2
2
2
2
2
2
2
1-12
2
2
2
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой галоген, Cгалогеналкил, фенил, 5-8-членный гетероциклил, 5-6-членный гетероарил, -OR, -N(R), -SR, NO, CN, -COOR, -C(O)N(R), -SOR, -SON(R), -NRC(O)R, -C(O)R, -NRSO-R, -C(O)NRN(R) или Cалифатическую группу, где вплоть до трех метиленовых звеньев алифатической цепи могут быть необязательно прерваны группой -C(O)R, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)-, -C(O)N(R)-, -NRCO(R)-, -О-, -NR- или -S-. В следующих вариантах осуществления R представляет собой -OR, -N(R), C(O)R, -C(O)N(R) или 5-7-членный гетероциклил. В дальнейших вариантах осуществления R представляет собой -C(O)N(R) или C(O)R.
6
6
1-6
1-6
1-6
1-6
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R представляет собой H или необязательно замещенную группу, выбранную из 5-8-членного гетероциклила, -(Cалкил)-(5-8-членного гетероциклила), бензила, -(Cалкил)-(5-8-членного гетероарила) и Cалифатической группы, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении. В следующих вариантах осуществления R представляет собой H или необязательно замещенную группу, выбранную из 5-8-членного гетероциклила и Cалифатической группы, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении.
R6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
1-6
1-6
2
1-6
2
2
1-6
В некоторых вариантах осуществления формулы I' J выбран из Cалкила, галогена, CN, OH, -O(Cалкила), NH, -N(Cалкила) и -N(Cалкила). В некоторых вариантах осуществления формулы I' J" выбран из Cалифатической группы, галогена, CN, OH, -O(Cалкила), NH, -N(Cалкила), -N(Cалкила), -C(O)OH, -C(O)O(Cалкила), 5-6-членного гетероарила, -CH-(5-6-членного гетероарила), 5-6-членного гетероциклила, -CH-(5-6-членного гетероциклила) и Cалифатической группы, где вплоть до двух метиленовых звеньев алифатической цепи, необязательно и независимо, заменены гетероатомом, выбранным из O, N или S, в химически стабильном положении.
В некоторых вариантах осуществления формулы I' Z представляет собой связь и R выбран из
В некоторых вариантах осуществления R выбран из
В следующих вариантах осуществления R представляет собой
Y
6-10
3-10
1-12
2
1-12
В некоторых вариантах осуществления формулы I' J выбран из -X-(Cарила), -X-(5-10-членного гетероарила), -X-(Cциклоалифатической группы), -X-(5-10-членного гетероциклила) или X. В некоторых вариантах осуществления X представляет собой Cалифатическую группу, где вплоть до двух метиленовых звеньев алкилиденовой цепи, необязательно и независимо, заменены -NR"-, -O-, -S-, -C(O)-, -SO- или -SO-. В следующих вариантах осуществления X представляет собой Cалифатическую группу, где одно метиленовое звено, необязательно и независимо, заменено -NR"-. В дальнейших вариантах осуществления по крайней мере один -NR"- непосредственно присоединен к R.
Y
Y
6-10
3-10
2
3
2
В других вариантах осуществления формулы I' J представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из Cарила, 5-10-членного гетероарила, Cциклоалифатической группы и 5-10-членного гетероциклила. В других вариантах осуществления J представляет собой галоген, CN, NO, CF, OR", SR" или N(R").
Y
Y
Y
Y
Y
Y
6-10
3-10
2
3
2
6-10
3-10
2
3
2
В некоторых вариантах осуществления формулы I' R замещен 2 заместителями, выбранными из группы, включающей J, где один из J выбран из -X-(Cарила), -X-(5-10-членного гетероарила), -X-(Cциклоалифатической группы), -X-(5-10-членного гетероциклила) или X и другой J выбран из H, галогена, CN, NO, CF, OR", SR", N(R"), Cарила, 5-10-членного гетероарила, Cциклоалифатической группы или 5-10-членного гетероциклила. В следующих вариантах осуществления R замещен 2 заместителями, выбранными из группы, включающей J, где один J выбран из X и другой J выбран из H, галогена, CN, NO, CF, OR", SR" или N(R").
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к соединению формулы II:
или его фармацевтически приемлемой соли, где кольцо A представляет собой Y.
4
3
4
3
В следующих вариантах осуществления формулы II, если R представляет собой H, тогда R является иным, чем H. В следующих вариантах осуществления R представляет собой H и R является иным, чем H.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к соединению формулы III:
или его фармацевтически приемлемой соли, где
3
5
1-6
1-6
2
2
m
R представляет собой галоген, Cалифатическую группу, Cалкокси, N(R), CN, NO или U-V; кольцо A представляет собой 5-8-членное моноциклическое гетероарильное кольцо.
В некоторых вариантах осуществления формулы III кольцо A имеет формулу
В следующих вариантах осуществления кольцо A имеет формулу, выбранную из группы, состоящей из:
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к соединению формулы IV:
1
2
3
где каждый из Z и Z представляет собой CH или N и R является таким, как определено для формулы III.
2
1
1
2
1
2
В некоторых вариантах осуществления формулы IV Z представляет собой CH. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой N или CH. В следующих вариантах осуществления Z представляет собой N и Z представляет собой CH. В следующих вариантах осуществления Z и Z оба представляют собой CH.
3
3
1-6
1-3
В некоторых вариантах осуществления формулы IV R представляет собой Cалифатическую группу. В следующих вариантах осуществления R представляет собой Cалкил.
Y
9
Y
9
Y
9
9
2
2
В некоторых вариантах осуществления формулы IV J представляет собой необязательно замещенный -N(R). В следующих вариантах осуществления J представляет собой необязательно замещенный -NHR. В следующих вариантах осуществления J представляет собой необязательно замещенный -N(R), где указанные два R образуют необязательно замещенный 5-8-членный гетероциклил.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к соединению, выбранному из таблицы 5.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к композиции, содержащей соединение формул I', II, III или IV или их фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В следующих вариантах осуществления композиция содержит дополнительный терапевтический агент, выбранный из агента для лечения аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного, гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности киназы семейства Tec у пациента или биологического образца, который заключается во введении указанному пациенту или включает взаимодействие с указанным биологическим образцом соединения формулы I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей указанное соединение. В других вариантах осуществления способ содержит ингибирование активности Itk.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести болезненного состояния у пациента, где указанное заболевание или состояние выбрано из аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного или гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, способу, в котором предусмотрено введение указанному пациенту соединения формулы I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей указанное соединение. В следующих вариантах осуществления способ содержит введение указанному пациенту дополнительного терапевтического агента, выбранного из агента для лечения аутоиммунного, воспалительного, пролиферативного, гиперпролиферативного заболевания или иммунологически обусловленного заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), где указанный дополнительный терапевтический агент является подходящим для лечения такого заболевания; и указанный дополнительный терапевтический агент вводят совместно с указанной композицией в виде разовой дозированной формы или отдельно от указанной композиции в виде части многократной дозированной формы.
В некоторых вариантах осуществления заболевание или расстройство, на которое направлено лечение, представляет собой астму, острый ринит, аллергический, атрофический ринит, хронический ринит, мембранозный ринит, сезонный ринит, саркоидоз, легкое фермера, пневмофиброз, идеопатическую интерстициальную пневмонию, ревматоидный артрит, серонегативную спондилоартропатию (включая алкилозирующий спондилит, псориатический артрит и болезнь Рейтера), болезнь Бехчета, синдром Шегрена, системный склероз, псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит и другие экзематозные дерматиты, себорейный дерматит, лишай Вильсона, пузырчатку, буллезную пузырчатку, буллезный эпидермолиз, крапивницу, ангиобластоз, васкулиты, эритему, кожную эозинофилию, увеит, гнездовую алопецию, весенний конъюнктивит, заболевания брюшной полости, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, панкреатит, болезнь Крона, язвенный колит, пищевую аллергию, множественный склероз, атеросклероз, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), системную красную волчанку, эритематоз, тиреоидит Хашимото, миастению гравис, диабет по типу I, нефротический синдром, фасцит с эозинофилией, гипер-IgE синдром, лепроматозный тип лепры, синдром Сезари и идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, рестиноз после ангиопластики, опухоли, атеросклероз, отторжение аллотрансплантата, включая, но без ограничения, острое и хроническое отторжение аллотрансплантата после, например, трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи и роговицы; и реакцию «трансплантат против хозяина».
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности киназы с-Met у пациента или биологического образца, который содержит введение указанному пациенту или приведение в контакт указанного биологического образца с соединением формулы I, I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой солью или композицией, содержащей указанное соединение.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести рака у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему стадию введения указанному пациенту, которая содержит введение указанному пациенту соединения формулы I, I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей указанное соединение. В следующих вариантах осуществления способ дополнительно содержит введение указанному пациенту химиотерапевтического агента, где химиотерапевтический агент вводят совместно с указанной композицией в виде разовой дозированной формы или отдельно от указанной композиции в виде части многократной дозированной формы.
В следующих вариантах осуществления рак представляет собой рак почки. В других вариантах осуществления рак выбран из глиобластомы, рака желудка или рака, выбранного из рака толстой кишки, молочной железы, простаты, головного мозга, печени, поджелудочной железы или легкого. В следующих вариантах осуществления рак представляет собой рак желудка. В других вариантах осуществления рак представляет собой глиобластому или рак, выбранный из рака молочной железы, толстой кишки или печени.
В других вариантах осуществления изобретение относится к способу ингибирования или снижения тяжести опухолевых метастазов у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту, которая предусматривает введение указанному пациенту соединения формулы I, I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей указанное соединение.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности киназы Aurora у пациента или биологического образца, предусматривающему введение указанному пациенту или приведение в контакт указанного биологического образца с соединением формулы I, I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой солью или композицией, содержащей указанное соединение.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести заболевания меланомой, миеломой, лейкозом, лимфомой, нейробластомой или раком, выбранным из рака толстой кишки, молочной железы, желудка, яичников, шейки матки, легкого, центральной нервной системы (ЦНС), почек, простаты, мочевого пузыря или поджелудочной железы, у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему стадию введения указанному пациенту, которая предусматривает введение указанному пациенту соединения формулы I, I', II, III или IV или его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей указанное соединение.
th
th
Соединения по настоящему изобретению включают описанные в основном выше соединения и дополнительно проиллюстрированы описанными в данном описании классами, подклассами и видами. Как используется в данном описании, если не указано иное, могут быть использованы следующие определения. Для задач настоящего изобретения, химические элементы идентифицируются в соответствии с периодической таблицей элементов, версия CAS, Handbook of Chemistry и Physics, 75 Ed. Кроме того, общие принципы органической химии описаны в "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, и "March's Advanced Organic Chemistry", 5 Ed., Ed.: Smith, M.B. и March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, полное содержание которых включено в данное описание посредством ссылок.
Как описано в данном описании, соединения настоящего изобретения могут быть необязательно замещены одним или несколькими заместителями, например заместителями, описанными в основном выше, или, например, конкретными классами, подклассами и видами настоящего изобретения. Следует учитывать тот факт, что выражение "необязательно замещенный" используется эквивалентно выражению "замещенный или незамещенный." Обычно термин "замещенный" с предшествующим термином "необязательно" или без него относится к замещению радикалов водорода в данной структуре радикалом конкретного заместителя. Если не указано иное, необязательно замещенная группа может иметь заместитель в каждом замещаемом положении группы, и когда более чем одно положение в любой данной структуре может быть замещено более чем одним заместителем, выбранным из конкретной группы, заместитель может быть таким же или другим в каждом положении. Сочетания заместителей по данному изобретению являются предпочтительно такими, которые приводят к образованию стабильных или химически возможных соединений. Используемый в данном описании термин "стабильный" относится к соединениям, которые по существу не изменяются при воздействии условий, допускаемых при их получении, обнаружении и, предпочтительно, их выделении, очистке и применении с одной или несколькими целями, описанными в данном описании. В некоторых вариантах осуществления стабильным соединением или химически возможным соединением является соединение, которое по существу не изменяется при хранении при температуре, равной 40°C или меньше, в отсутствие влажности или химически активных условиях в течение по крайней мере одной недели.
1-3
2
3
2
3
2
2
Термин "необязательно прерваны группой" относится к замене одного атома в алкилиденовой цепи другим атомом. Если не указано иное, второй атом может заменить первый атом в любом положении, включая концевые атомы. Например, Cалкильная цепь, необязательно прерванная -O-, может образовывать -OCHCH, -CH-OCH или CHCHOH. Если не указано иное, концевые группы связаны с атомом водорода на концевом участке.
3
8
8
12
Используемый в данном описании термин "алифатический" или "алифатическая группа", означает прямую цепь (то есть неразветвленную) или разветвленную, замещенную или незамещенную углеводородную цепь, которая полностью насыщена или которая содержит одно или несколько звеньев ненасыщенности, или моноциклический углеводород или бициклический углеводород, который полностью насыщен или который содержит одно или несколько звеньев ненасыщенности, но который не является ароматическим (также обозначается в данном описании как "карбоцикл", "циклоалифатическая группа" или "циклоалкил"), который имеет одну точку присоединения к остатку молекулы. Если не указано иное, алифатические группы содержат 1-20 алифатических атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-10 алифатических атомов углерода. В других вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-8 алифатических атомов углерода. В дальнейших вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-6 алифатических атомов углерода, и в других вариантах осуществления алифатические группы содержат 1-4 алифатических атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления "циклоалифатическая группа" (или "карбоцикл", или "циклоалкил") относится к моноциклическому C-C углеводороду или бициклическому C-C углеводороду, который полностью насыщен или который содержит одно или несколько звеньев ненасыщенности, но который не является ароматическим, который имеет одну точку присоединения к остатку молекулы, где любое отдельное кольцо в указанной бициклической кольцевой системе содержит 3-7 членов. Подходящие алифатические группы включают, но не ограничиваются ими, линейные или разветвленные, замещенные или незамещенные алкильные, алкенильные, алкинильные группы и их гибриды, такие как (циклоалкил)алкил, (циклоалкенил)алкил или (циклоалкил)алкенил.
Используемый в данном описании термин "гетероалифатическая группа" означает алифатические группы, в которых один или два атома углерода, независимо, заменены одним или несколькими атомами кислорода, серы, азота, фосфора или кремния. Гетероалифатические группы могут быть замещенными или незамещенными, разветвленными или неразветвленными, циклическими или ациклическими и включают "гетероцикл", "гетероциклил", "гетероциклоалифатические" или "гетероциклические" группы.
Используемый в данном описании термин "гетероцикл", "гетероциклил", "гетероциклоалифатическая группа" или "гетероциклический" означает неароматические, моноциклические, бициклические или трициклические кольцевые системы, в которых один или несколько членов кольца представляют собой, независимо, выбранный гетероатом. В некоторых вариантах осуществления "гетероцикл", "гетероциклил", "гетероциклоалифатическая" или "гетероциклическая" группа имеет от трех до четырнадцати членов кольца, где один или несколько членов кольца представляют собой гетероатом, независимо выбранный из кислорода, серы, азота или фосфора, и каждое кольцо в системе содержит от 3 до 7 членов кольца.
+
Термин "гетероатом" означает один или несколько атомов кислорода, серы, азота, фосфора или кремния (включая любую окисленную форму азота, серы, фосфора или кремния; кватернизированную форму любого азотистого основания или замещаемый азот гетероциклического кольца, например N (как в 3,4-дигидро-2H-пирролиле), NH (как в пирролидиниле) или NR (как в N-замещенном пирролидиниле)).
Используемый в данном описании термин "ненасыщенный" означает, что группа имеет одно или несколько звеньев ненасыщенности.
Используемый в данном описании термин "алкокси" или "тиоалкил" относится к алкильной группе, как определено выше, присоединенной к главной углеродной цепи через атом кислорода ("алкокси") или серы ("тиоалкил").
Термины "галогеналкил", "галогеналкенил" и "галогеналкокси" обозначают алкил, алкенил или алкокси в зависимости от обстоятельств, замещенный одним или несколькими атомами галогена. Термин "галоген" означает F, Cl, Br или I.
Термин "арил", используемый самостоятельно или как часть более обширной группы, например, в "аралкил", "аралкокси" или "арилоксиалкил", относится к моноциклической, бициклической и трициклической кольцевой системе, содержащей в совокупности от пяти до четырнадцати членов кольца, где по крайней мере одно кольцо в системе является ароматическим и где каждое кольцо в системе содержит от 3 до 7 членов кольца. Термин "арил" может использоваться взаимозаменяемо с термином "арильное кольцо".
Термин "гетероарил", используемый самостоятельно или как часть более обширной группы, например, в "гетероаралкил" или "гетероарилалкокси", относится к моноциклическим, бициклическим и трициклическим кольцевым системам, содержащим в совокупности от пяти до четырнадцати членов кольца, где по крайней мере одно кольцо в системе является ароматическим, по крайней мере одно кольцо в системе содержит одно или несколько гетероатомов и где каждое кольцо в системе содержит от 3 до 7 членов кольца. Термин "гетероарил" может использоваться взаимозаменяемо с термином "гетероарильное кольцо" или "гетероароматический".
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
2
1-2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
2
2
0-2
1-6
2
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Арильная (включая аралкил, аралкокси, арилоксиалкил и тому подобное) или гетероарильная (включая гетероаралкил и гетероарилалкокси и тому подобное) группа может содержать один или несколько заместителей. Подходящие заместители ненасыщенного атома углерода арильной или гетероарильной группы выбраны из галогена; -R; -OR; -SR; 1,2-метилендиокси; 1,2-этилендиокси; фенила (Ph), необязательно замещенного R; -O(Ph), необязательно замещенного R; -(CH)(Ph), необязательно замещенного R; -CH=CH(Ph), необязательно замещенного R; -NO; -CN; -N(R); -NRC(O)R; -NRC(S)R; -NRC(O)N(R); -NRC(S)N(R); -NRCOR; -NRNRC(O)R; -NRNRC(O)N(R); -NRNRCOR; -C(O)C(O)R; -C(O)CHC(O)R; -COR; -C(O)R; -C(S)R; -C(O)N(R); -C(S)N(R); -OC(O)N(R); -OC(O)R; -C(O)N(OR)R; -C(NOR)R; -S(O)R; -S(O)R; -SON(R); -S(O)R; -NRSON(R); -NRSOR; -N(OR)R; -C(=NH)-N(R) или -(CH)NHC(O)R, где каждый независимый заместитель R выбран из водорода, необязательно замещенной Cалифатической группы, незамещенного 5-6-членного гетероарильного или гетероциклического кольца, фенила, -O(Ph) или -CH(Ph), или несмотря на вышеуказанное определение два независимых заместителя R в отношении такого же заместителя или других заместителей, взятых вместе с атомом(ами), к которому каждая группа R присоединена, образуют 5-8-членный гетероциклил, арил или гетероарильное кольцо или 3-8-членное циклоалкильное кольцо, содержащее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Необязательные заместители на алифатической группе R выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, O(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галогенCалифатической группы, где каждая вышеуказанная Cалифатическая группа R является незамещенной.
*
*
*
*
*
*
*
2
2
2
1-6
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Алифатическая или гетероалифатическая группа или неароматическое гетероциклическое кольцо могут содержать один или несколько заместителей. Подходящие заместители насыщенного атома углерода алифатической или гетероалифатической группы или неароматического гетероциклического кольца выбраны из вышеперечисленных для ненасыщенного углерода арильной или гетероарильной группы и дополнительно включают следующие: =O, =S, =NNHR, =NN(R), =NNHC(O)R, =NNHCO(алкил), =NNHSO(алкил) или =NR, где каждый R, независимо, выбран из водорода или необязательно замещенной Cалифатической группы. Необязательные заместители на алифатической группе R выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, O(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галоген(Cалифатической группы), где каждая из вышеуказанных Cалифатических групп R является незамещенной.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
o
+
+
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-6
2
2
1-2
2
1-4
1-4
2
1-4
1-4
2
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
Необязательные заместители на азоте неароматического гетероциклического кольца выбраны из -R, -N(R), -C(O)R, -COR, -C(O)C(O)R, -C(O)CHC(O)R, -SOR, -SON(R), -C(=S)N(R), -C(=NH)-N(R) или -NRSOR; где R представляет собой водород, необязательно замещенную Cалифатическую группу, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный -O(Ph), необязательно замещенный -CH(Ph), необязательно замещенный -(CH)(Ph); необязательно замещенный -CH=CH(Ph) или незамещенное 5-6-членное гетероарильное или гетероциклическое кольцо, содержащее от одного до четырех гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, азота или серы, или несмотря на вышеприведенное определение два независимых заместителя R в отношении такого же заместителя или других заместителей, взятых вместе с атомом(ами), к которому каждая группа R присоединена, образуют 5-8-членное гетероциклильное, арильное или гетероарильное кольцо или 3-8-членное циклоалкильное кольцо, содержащее 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Необязательные заместители на алифатической группе или фенильном кольце R выбраны из NH, NH(Cалифатической группы), N(Cалифатической группы), галогена, Cалифатической группы, OH, O(Cалифатической группы), NO, CN, COH, CO(Cалифатической группы), O(галогенCалифатической группы) или галоген(Cалифатической группы), где каждая из вышеуказанных Cалифатических групп R является незамещенной.
2
2
2
2
2
2
Термин "алкилиденовая цепь" относится к прямой или разветвленной углеродной цепи, которая может быть полностью насыщенной или содержать одно или несколько звеньев ненасыщенности и иметь две точки присоединения к остатку молекулы, где одно или несколько метиленовых звеньев, необязательно и независимо, могут быть заменены группой, включающей, но не ограничивающейся ими, CO, CO, COCO, CONR, OCONR, NRNR, NRNRCO, NRCO, NRCO, NRCONR, SO, SO, NRSO, SONR, NRSONR, O, S или NR.
o
+
o
+
o
+
o
o
o
+
o
o
o
+
2
,
.
Как подробно описано выше, в некоторых вариантах осуществления два независимых заместителя R (или R, или любая другая переменная, аналогичным образом определенная в данном описании) взяты вместе с атомом(ами), к которому каждая переменная присоединена, с образованием 5-8-членного гетероциклильного, арильного или гетероарильного кольца или 3-8-членного циклоалкильного кольца, содержащего 0-3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Типичные кольца, образованные, когда два независимых заместителя R (или R, или любая другая переменная, аналогичным образом определенная в данном описании) взяты вместе с атомом(ами), к которому каждая переменная присоединена, включают, но не ограничиваются ими, следующее: a) два независимых заместителя R (или R, или любую другую переменную, аналогичным образом определенную в данном описании), которые связаны с таким же атомом и взяты вместе с этим атомом с образованием кольца, например, N(R), где оба заместителя R взяты вместе с атомом азота с образованием пиперидин-1-ильной, пиперазин-1-ильной или морфолин-4-ильной группы; и b) два независимых заместителя R (или R, или любую другую переменную, аналогичным образом определенную в данном описании), которые связаны с другими атомами и взяты вместе с двумя указанными атомами с образованием кольца, например, где фенильная группа замещена двумя заместителями ORтакие два заместителя R взяты вместе с атомом кислорода, с которым они связаны, с образованием конденсированного 6-членного содержащего кислород кольца: Следует учитывать тот факт, что ряд других колец может быть образован, когда два независимых заместителя R (или R, или любая другая переменная, аналогичным образом определенная в данном описании) взяты вместе с атомом(ами), к которому каждая переменная присоединена и что примеры, подробно описанные выше, не являются ограничивающими.
a
b
Как описано в данном описании, связь, обозначенная от заместителя к центру одного кольца в поликольцевой системе (как показано ниже), показывает замещение заместителя в любом замещаемом положении в любых кольцах в поликольцевой системе. Например, на фигуре  показано возможное замещение в любых положениях, показанных на фигуре .
c
Это также применимо к поликольцевым системам, конденсированным с необязательными кольцевыми системами (которые могут быть обозначены пунктирными линиями). Например, на фигуре  X представляет собой необязательный заместитель как для кольца A, так и для кольца B.
d
Тем не менее, если каждое из двух колец в поликольцевой системе имеет различные заместители, обозначенные от центра каждого кольца, то, если не указано иное, каждый заместитель является замещением только на кольце, к которому он присоединен. Например, на фигуре  Y представляет собой необязательный заместитель только для кольца A, и X представляет собой необязательный заместитель только для кольца B.
13
14
Если не указано иное, структуры, представленные в данном описании, включают также все изомерные (например, энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные)) формы структуры; например R и S конфигурации для каждого центра асимметрии, изомеры по двойной связи (Z) и (E) и конформационные изомеры (Z) и (E). Следовательно, отдельные стереохимические изомеры, а также энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные) смеси представленных соединений включены в объем настоящего изобретения. Если не указано иное, все таутомерные формы соединений настоящего изобретения включены в объем настоящего изобретения. Кроме того, если не указано иное, структуры, представленные в данном описании, также включают соединения, которые отличаются только в присутствии одного или нескольких изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие представленные структуры, за исключением замены водорода дейтерием или тритием или замены углерода C- или C-обогащенным углеродом, включены в объем данного изобретения. Такие соединения используют, например, в качестве аналитических средств или образцов в биологических исследованиях.
Соединения по данному изобретению могут быть получены обычными способами, известными специалистам в данной области для аналогичных соединений, как показано на общей схеме ниже и в следующих препаративных примерах.
Схема I
Реагенты и условия
4
6
2
2
4
2
: (a) i) LDA, толуол, ii) o-ClCHCHSCN, толуол, 2 часа; (b) NH-HO, EtOH, нагревание при кипении с обратным холодильником, 16 часов.
2
1983
2
3
J. Org. Chem.
На схеме I выше показан общий способ синтеза, который используют для получения соединения 3 по данному изобретению, когда R и Z являются такими, как описано в данном описании. Промежуточные соединения  могут быть получены способами аналогично описанным в литературе Davis и Cava , 48, 2774. Циклизация малононитрила  с помощью гидрата гидразина дает желаемые диаминопиразолы .
Схема II
Реагенты и условия
i
кат
: (a) EtOH (в случае 4), PrOH (в случае 5), AcOH, микроволновое облучение, 180°C, 15 минут.
6
6
3
4,
5
5
1974
3
J. Het. Chem
На схеме II выше показан общий способ синтеза, который используют для получения соединения  по данному изобретению, когда Z, R и R являются такими, как описано в данном описании. Пиразоло[1,5-a]пиримидины  получают циклизацией при нагревании в микроволоновой печи диаминопиразолов  либо с коммерчески доступным малоноальдегидом  либо с его эквивалентом . Производное  может быть получено способами, описанными Coppola, et al., . , 44, 51.
В таблице 1 ниже представлены примеры соединений, полученных в соответствии с общими способами, показанными на схемах I и II.
Таблица 1
Схема III
Реагенты и условия
кат
2
2
2
2
3
: (a) EtOH, AcOH, нагревание при кипении с обратным холодильником, 3 часа; (b) ArB(OH), Pd(dppf)Cl, 2M NaCO, микроволновое облучение, 120°C, 20 минут.
9
8
3
7
9
8
На схеме III выше показан общий способ синтеза, используемый для получения соединения  по данному изобретению, когда Z, R и Ar являются такими, как описано в данном описании. Пиразоло[1,5-a]пиримидины  получали циклизацией диаминопиразолов  с коммерчески доступным 2-бром-малональдегидом . И наконец, образование биарильного связывания производных  достигали путем обработки бромидов  желаемым производным бороновой кислоты в присутствии палладия(0) в качестве катализатора, используя способы сочетания по Сузуки при микроволновом нагревании, которые хорошо известны в данной области. Взаимодействие можно осуществлять с различными замещенными арил- или гетероарилбороновыми кислотами.
В таблице 2 ниже представлены примеры соединений, полученных в соответствии с общими способами, описанными на схеме III.
Таблица 2
Схема IV
Реагенты и условия
: (a) ДМФА, 160°C, 10 часов; (b) DDQ, 1,4-диоксан, нагревание при кипении с обратным холодильником, 2-3 часа.
12
3
10
1990
3
10
11
4
Bull. Chem. Soc. Jpn
На схеме IV выше показан общий способ синтеза, который использовали для получения соединения  по данному изобретению, когда Z, R и R являются такими, как описано в данном описании. Циклизацию диаминопиразолов  в присутствии β-диметиламинокетонов  выполняли способами аналогично описанным в литературе Elnagdi и Erian , 63, 1854. Взаимодействие можно осуществлять с различными диаминопиразолами  и β-диметиламинокетонами . Промежуточные соединения  окисляли с помощью DDQ в соответствии со стадией (b) схемы IV.
В таблице 3 ниже представлены примеры соединений, полученных в соответствии с общими способами, показанными на схеме IV.
Таблица 3
Схема V
Реагенты и условия
3
2
: (a) AcOH, нагревание при кипении с обратным холодильником; (b) i) условия присоединения защитной группы, ii) POCl, 90°C; (c) i) H, Pd/C, NaOAc, EtOH, ii) условия удаления защитной группы.
16
14
1994
1995
14
15
15
16
3
4
et al., Pharmazie
49
et al., Indian J. Chem. Sect. B
На схеме V выше показан общий способ синтеза, который использовали для получения соединения  по данному изобретению, когда Z, R, R и R являются такими, как описано в данном описании. Промежуточное соединение может быть получено способами, описанными Sofon, , , 482 и Ram, , 34, 514. После присоединения защитной группы к аминам формулы  производные  получали способом, хорошо известным специалисту в данной области. Наконец, хлорпроизводные  восстанавливали в соответствии со схемой V, стадия (c) i), и у аминогруппы удаляли защитную группу с получением соединения структуры .
Схема VI
Реагенты и условия:
5
(a) 1 н. NaOH, MeOH; (b) EDC, HOBt, DCM/ДМФА, HNRV.
19
5
На схеме VI выше показан общий способ получения соединения формулы  по данному изобретению, когда Z, R, R и V являются такими, как описано в данном описании. Каждая из вышеуказанных стадий хорошо известна специалисту в данной области.
В таблице 4 ниже представлены примеры соединений, полученных в соответствии с общими способами, показанными на схемах VI.
Таблица 4
Другие соединения, полученные в соответствии со схемами и примерами, описанными в данном описании, представлены в таблице 5:
<b>Таблица 5</b>
<b>Соед. №(v-)</b>
<b>Соединение</b>
1
<img file="00000043.tif" he="29" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
2
<img file="00000044.tif" he="35" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
3
<img file="00000045.tif" he="44" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
4
<img file="00000046.tif" he="44" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
5
<img file="00000047.tif" he="43" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
6
<img file="00000048.tif" he="44" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
7
<img file="00000049.tif" he="43" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
8
<img file="00000050.tif" he="44" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
9
<img file="00000051.tif" he="44" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
10
<img file="00000052.tif" he="43" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
11
<img file="00000053.tif" he="43" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
12
<img file="00000054.tif" he="44" wi="27" img-content="undefined" img-format="tif" />
13
<img file="00000055.tif" he="43" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
14
<img file="00000056.tif" he="44" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
15
<img file="00000057.tif" he="44" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
16
<img file="00000058.tif" he="43" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
17
<img file="00000059.tif" he="43" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
18
<img file="00000060.tif" he="46" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
19
<img file="00000061.tif" he="43" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
20
<img file="00000062.tif" he="43" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
21
<img file="00000063.tif" he="43" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
22
<img file="00000064.tif" he="43" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
23
<img file="00000065.tif" he="43" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
24
<img file="00000066.tif" he="41" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
25
<img file="00000067.tif" he="37" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
26
<img file="00000068.tif" he="37" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
27
<img file="00000069.tif" he="37" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
28
<img file="00000070.tif" he="36" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
29
<img file="00000071.tif" he="54" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
30
<img file="00000072.tif" he="54" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
31
<img file="00000073.tif" he="50" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
32
<img file="00000074.tif" he="41" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
33
<img file="00000075.tif" he="41" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
34
<img file="00000076.tif" he="48" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
35
<img file="00000077.tif" he="47" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
36
<img file="00000078.tif" he="39" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
37
<img file="00000079.tif" he="42" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
38
<img file="00000080.tif" he="44" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
39
<img file="00000081.tif" he="43" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
40
<img file="00000082.tif" he="44" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
41
<img file="00000083.tif" he="49" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
42
<img file="00000084.tif" he="49" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
43
<img file="00000085.tif" he="57" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
44
<img file="00000086.tif" he="39" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
45
<img file="00000087.tif" he="39" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
46
<img file="00000088.tif" he="47" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
47
<img file="00000089.tif" he="40" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
48
<img file="00000090.tif" he="34" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
49
<img file="00000091.tif" he="44" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
50
<img file="00000092.tif" he="52" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
51
<img file="00000093.tif" he="68" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
52
<img file="00000094.tif" he="43" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
53
<img file="00000095.tif" he="43" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
54
<img file="00000096.tif" he="51" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
55
<img file="00000097.tif" he="49" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
56
<img file="00000098.tif" he="43" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
57
<img file="00000099.tif" he="43" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
58
<img file="00000100.tif" he="41" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
59
<img file="00000101.tif" he="43" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
60
<img file="00000102.tif" he="73" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
61
<img file="00000103.tif" he="72" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
62
<img file="00000104.tif" he="60" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
63
<img file="00000105.tif" he="64" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
64
<img file="00000106.tif" he="67" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
65
<img file="00000107.tif" he="66" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
66
<img file="00000108.tif" he="69" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
67
<img file="00000109.tif" he="56" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
68
<img file="00000110.tif" he="72" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
69
<img file="00000111.tif" he="60" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
70
<img file="00000112.tif" he="63" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
71
<img file="00000113.tif" he="58" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
72
<img file="00000114.tif" he="63" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
73
<img file="00000115.tif" he="63" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
74
<img file="00000116.tif" he="72" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
75
<img file="00000117.tif" he="66" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
76
<img file="00000118.tif" he="72" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
77
<img file="00000119.tif" he="66" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
78
<img file="00000120.tif" he="59" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
79
<img file="00000121.tif" he="64" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
80
<img file="00000122.tif" he="67" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
81
<img file="00000123.tif" he="63" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
82
<img file="00000124.tif" he="65" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
83
<img file="00000125.tif" he="59" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
84
<img file="00000126.tif" he="70" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
85
<img file="00000127.tif" he="69" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
86
<img file="00000128.tif" he="55" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
87
<img file="00000129.tif" he="59" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
88
<img file="00000130.tif" he="72" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
89
<img file="00000131.tif" he="57" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
90
<img file="00000132.tif" he="64" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
91
<img file="00000133.tif" he="58" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
92
<img file="00000134.tif" he="64" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
93
<img file="00000135.tif" he="64" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
94
<img file="00000136.tif" he="64" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
95
<img file="00000137.tif" he="64" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
96
<img file="00000138.tif" he="64" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
97
<img file="00000139.tif" he="64" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
98
<img file="00000140.tif" he="58" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
99
<img file="00000141.tif" he="64" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
100
<img file="00000142.tif" he="51" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
101
<img file="00000143.tif" he="51" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
102
<img file="00000144.tif" he="49" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
103
<img file="00000145.tif" he="48" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
104
<img file="00000146.tif" he="49" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
105
<img file="00000147.tif" he="48" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
106
<img file="00000148.tif" he="49" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
107
<img file="00000149.tif" he="51" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
108
<img file="00000150.tif" he="48" wi="52" img-content="undefined" img-format="tif" />
109
<img file="00000151.tif" he="48" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
110
<img file="00000152.tif" he="59" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
111
<img file="00000153.tif" he="48" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
112
<img file="00000154.tif" he="49" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
113
<img file="00000155.tif" he="49" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
114
<img file="00000156.tif" he="48" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
115
<img file="00000157.tif" he="49" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
116
<img file="00000158.tif" he="49" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
117
<img file="00000159.tif" he="48" wi="52" img-content="undefined" img-format="tif" />
118
<img file="00000160.tif" he="49" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
119
<img file="00000161.tif" he="48" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
120
<img file="00000162.tif" he="49" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
121
<img file="00000163.tif" he="48" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
122
<img file="00000164.tif" he="48" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
123
<img file="00000165.tif" he="48" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
124
<img file="00000166.tif" he="49" wi="52" img-content="undefined" img-format="tif" />
125
<img file="00000167.tif" he="48" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
126
<img file="00000168.tif" he="49" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
127
<img file="00000169.tif" he="48" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
128
<img file="00000170.tif" he="48" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
129
<img file="00000171.tif" he="74" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
130
<img file="00000172.tif" he="71" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
131
<img file="00000173.tif" he="37" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
132
<img file="00000174.tif" he="37" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
133
<img file="00000175.tif" he="37" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
134
<img file="00000176.tif" he="37" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
135
<img file="00000177.tif" he="37" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
136
<img file="00000178.tif" he="43" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
137
<img file="00000179.tif" he="49" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
138
<img file="00000180.tif" he="71" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
139
<img file="00000181.tif" he="58" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
140
<img file="00000182.tif" he="49" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
141
<img file="00000183.tif" he="49" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
142
<img file="00000184.tif" he="49" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
143
<img file="00000185.tif" he="56" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
144
<img file="00000186.tif" he="59" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
145
<img file="00000187.tif" he="65" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
146
<img file="00000188.tif" he="68" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
147
<img file="00000189.tif" he="58" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
148
<img file="00000190.tif" he="72" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
149
<img file="00000191.tif" he="67" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
150
<img file="00000192.tif" he="83" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
151
<img file="00000193.tif" he="61" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
152
<img file="00000194.tif" he="56" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
153
<img file="00000195.tif" he="71" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
154
<img file="00000196.tif" he="51" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
155
<img file="00000197.tif" he="49" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
156
<img file="00000198.tif" he="65" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
157
<img file="00000199.tif" he="59" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
158
<img file="00000200.tif" he="59" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
159
<img file="00000201.tif" he="64" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
160
<img file="00000202.tif" he="65" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
161
<img file="00000203.tif" he="71" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
162
<img file="00000204.tif" he="74" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
163
<img file="00000205.tif" he="73" wi="27" img-content="undefined" img-format="tif" />
164
<img file="00000206.tif" he="72" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
165
<img file="00000207.tif" he="64" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
166
<img file="00000208.tif" he="67" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
167
<img file="00000209.tif" he="72" wi="27" img-content="undefined" img-format="tif" />
168
<img file="00000210.tif" he="66" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
169
<img file="00000211.tif" he="69" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
170
<img file="00000212.tif" he="58" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
171
<img file="00000213.tif" he="56" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
172
<img file="00000214.tif" he="60" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
173
<img file="00000215.tif" he="66" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
174
<img file="00000216.tif" he="73" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
175
<img file="00000217.tif" he="51" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
176
<img file="00000218.tif" he="56" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
177
<img file="00000219.tif" he="71" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
178
<img file="00000220.tif" he="43" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
179
<img file="00000221.tif" he="37" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
180
<img file="00000222.tif" he="42" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
181
<img file="00000223.tif" he="44" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
182
<img file="00000224.tif" he="45" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
183
<img file="00000225.tif" he="48" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
184
<img file="00000226.tif" he="43" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
185
<img file="00000227.tif" he="43" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
186
<img file="00000228.tif" he="51" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
187
<img file="00000229.tif" he="41" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
188
<img file="00000230.tif" he="56" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
189
<img file="00000231.tif" he="48" wi="51" img-content="undefined" img-format="tif" />
190
<img file="00000232.tif" he="48" wi="55" img-content="undefined" img-format="tif" />
191
<img file="00000233.tif" he="56" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
192
<img file="00000234.tif" he="53" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
193
<img file="00000235.tif" he="50" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
194
<img file="00000236.tif" he="50" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
195
<img file="00000237.tif" he="51" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
196
<img file="00000238.tif" he="51" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
197
<img file="00000239.tif" he="44" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
198
<img file="00000240.tif" he="58" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
199
<img file="00000241.tif" he="51" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
200
<img file="00000242.tif" he="51" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
201
<img file="00000243.tif" he="63" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
202
<img file="00000244.tif" he="42" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
203
<img file="00000245.tif" he="50" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
204
<img file="00000246.tif" he="41" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
205
<img file="00000247.tif" he="47" wi="27" img-content="undefined" img-format="tif" />
206
<img file="00000248.tif" he="50" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
207
<img file="00000249.tif" he="50" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
208
<img file="00000250.tif" he="57" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
209
<img file="00000251.tif" he="48" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
210
<img file="00000252.tif" he="42" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
211
<img file="00000253.tif" he="56" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
212
<img file="00000254.tif" he="49" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
213
<img file="00000255.tif" he="49" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
214
<img file="00000256.tif" he="56" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
215
<img file="00000257.tif" he="44" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
216
<img file="00000258.tif" he="50" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
217
<img file="00000259.tif" he="58" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
218
<img file="00000260.tif" he="50" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
219
<img file="00000261.tif" he="49" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
220
<img file="00000262.tif" he="52" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
221
<img file="00000263.tif" he="42" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
222
<img file="00000264.tif" he="49" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
223
<img file="00000265.tif" he="43" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
224
<img file="00000266.tif" he="57" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
225
<img file="00000267.tif" he="42" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
226
<img file="00000268.tif" he="39" wi="54" img-content="undefined" img-format="tif" />
227
<img file="00000269.tif" he="38" wi="54" img-content="undefined" img-format="tif" />
228
<img file="00000270.tif" he="38" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
229
<img file="00000271.tif" he="38" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
230
<img file="00000272.tif" he="56" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
231
<img file="00000273.tif" he="55" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
232
<img file="00000274.tif" he="52" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
233
<img file="00000275.tif" he="56" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
234
<img file="00000276.tif" he="59" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
235
<img file="00000277.tif" he="40" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
236
<img file="00000278.tif" he="56" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
237
<img file="00000279.tif" he="48" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
238
<img file="00000280.tif" he="46" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
239
<img file="00000281.tif" he="50" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
240
<img file="00000282.tif" he="45" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
241
<img file="00000283.tif" he="42" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
242
<img file="00000284.tif" he="43" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
243
<img file="00000285.tif" he="43" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
244
<img file="00000286.tif" he="42" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
245
<img file="00000287.tif" he="59" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
246
<img file="00000288.tif" he="60" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
247
<img file="00000289.tif" he="51" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
248
<img file="00000290.tif" he="52" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
249
<img file="00000291.tif" he="74" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
250
<img file="00000292.tif" he="65" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
251
<img file="00000293.tif" he="50" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
252
<img file="00000294.tif" he="52" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
253
<img file="00000295.tif" he="63" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
254
<img file="00000296.tif" he="51" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
255
<img file="00000297.tif" he="59" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
256
<img file="00000298.tif" he="58" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
257
<img file="00000299.tif" he="44" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
258
<img file="00000300.tif" he="44" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
259
<img file="00000301.tif" he="43" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
260
<img file="00000302.tif" he="44" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
261
<img file="00000303.tif" he="44" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
262
<img file="00000304.tif" he="44" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
263
<img file="00000305.tif" he="43" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
264
<img file="00000306.tif" he="43" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
265
<img file="00000307.tif" he="43" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
266
<img file="00000308.tif" he="43" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
267
<img file="00000309.tif" he="44" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
268
<img file="00000310.tif" he="44" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
269
<img file="00000311.tif" he="43" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
270
<img file="00000312.tif" he="43" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
271
<img file="00000313.tif" he="44" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
272
<img file="00000314.tif" he="46" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
273
<img file="00000315.tif" he="29" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
274
<img file="00000316.tif" he="29" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
275
<img file="00000317.tif" he="30" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
276
<img file="00000318.tif" he="29" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
277
<img file="00000319.tif" he="30" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
278
<img file="00000320.tif" he="29" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
279
<img file="00000321.tif" he="29" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
280
<img file="00000322.tif" he="35" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
281
<img file="00000323.tif" he="34" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
282
<img file="00000324.tif" he="35" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
283
<img file="00000325.tif" he="35" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
284
<img file="00000326.tif" he="35" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
285
<img file="00000327.tif" he="39" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
286
<img file="00000328.tif" he="38" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
287
<img file="00000329.tif" he="35" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
288
<img file="00000330.tif" he="34" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
289
<img file="00000331.tif" he="29" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
290
<img file="00000332.tif" he="29" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
291
<img file="00000333.tif" he="29" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
292
<img file="00000334.tif" he="29" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
293
<img file="00000335.tif" he="29" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
294
<img file="00000336.tif" he="29" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
295
<img file="00000337.tif" he="28" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
296
<img file="00000338.tif" he="30" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
297
<img file="00000339.tif" he="29" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
298
<img file="00000340.tif" he="29" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
299
<img file="00000341.tif" he="29" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
300
<img file="00000342.tif" he="37" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
301
<img file="00000343.tif" he="38" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
302
<img file="00000344.tif" he="29" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
303
<img file="00000345.tif" he="29" wi="53" img-content="undefined" img-format="tif" />
304
<img file="00000346.tif" he="28" wi="61" img-content="undefined" img-format="tif" />
305
<img file="00000347.tif" he="29" wi="51" img-content="undefined" img-format="tif" />
306
<img file="00000348.tif" he="29" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
307
<img file="00000349.tif" he="37" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
308
<img file="00000350.tif" he="29" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
309
<img file="00000351.tif" he="29" wi="51" img-content="undefined" img-format="tif" />
310
<img file="00000352.tif" he="40" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
311
<img file="00000353.tif" he="45" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
312
<img file="00000354.tif" he="47" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
313
<img file="00000355.tif" he="47" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
314
<img file="00000356.tif" he="50" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
315
<img file="00000357.tif" he="56" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
316
<img file="00000358.tif" he="41" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
317
<img file="00000359.tif" he="48" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
318
<img file="00000360.tif" he="46" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
319
<img file="00000361.tif" he="45" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
320
<img file="00000362.tif" he="46" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
321
<img file="00000363.tif" he="55" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
322
<img file="00000364.tif" he="44" wi="44" img-content="undefined" img-format="tif" />
323
<img file="00000365.tif" he="47" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
324
<img file="00000366.tif" he="45" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
325
<img file="00000367.tif" he="49" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
326
<img file="00000368.tif" he="48" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
327
<img file="00000369.tif" he="45" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
328
<img file="00000370.tif" he="48" wi="40" img-content="undefined" img-format="tif" />
329
<img file="00000371.tif" he="53" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
330
<img file="00000372.tif" he="61" wi="51" img-content="undefined" img-format="tif" />
331
<img file="00000373.tif" he="55" wi="42" img-content="undefined" img-format="tif" />
332
<img file="00000374.tif" he="29" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
333
<img file="00000375.tif" he="31" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
334
<img file="00000376.tif" he="31" wi="55" img-content="undefined" img-format="tif" />
335
<img file="00000377.tif" he="33" wi="50" img-content="undefined" img-format="tif" />
336
<img file="00000378.tif" he="32" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
337
<img file="00000379.tif" he="29" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
338
<img file="00000380.tif" he="29" wi="60" img-content="undefined" img-format="tif" />
339
<img file="00000381.tif" he="29" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
340
<img file="00000382.tif" he="29" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
341
<img file="00000383.tif" he="31" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
342
<img file="00000384.tif" he="29" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
343
<img file="00000385.tif" he="30" wi="54" img-content="undefined" img-format="tif" />
344
<img file="00000386.tif" he="29" wi="52" img-content="undefined" img-format="tif" />
345
<img file="00000387.tif" he="31" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
346
<img file="00000388.tif" he="44" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
347
<img file="00000389.tif" he="28" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
348
<img file="00000390.tif" he="54" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
349
<img file="00000391.tif" he="27" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
350
<img file="00000392.tif" he="45" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
351
<img file="00000393.tif" he="28" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
352
<img file="00000394.tif" he="55" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
353
<img file="00000395.tif" he="45" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
Как отмечалось выше, настоящее изобретение относится к соединениям, которые представляют собой ингибиторы протеинкиназ, и, таким образом, представленные соединения полезны при лечении заболеваний, расстройств и состояний, которые включают, но не ограничиваются ими, аутоиммунные, воспалительные, пролиферативные или гиперпролиферативные заболевания или иммунологически опосредованные заболевания. Соответственно в другом аспекте настоящего изобретения предложены фармацевтически приемлемые композиции, где указанные композиции содержат любое из соединений, описанных в данном описании, и необязательно содержат фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или наполнитель. В некоторых вариантах осуществления такие композиции, необязательно, дополнительно содержат один или несколько дополнительных терапевтических агентов.
Также следует учитывать тот факт, что некоторые соединения по настоящему изобретению могут находиться в свободной форме для лечения или, когда это уместно, в виде его фармацевтически приемлемого производного. В соответствии с настоящим изобретением фармацевтически приемлемое производное включает, но не ограничивается ими, фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, соли таких сложных эфиров или любой другой аддукт или производное, которое при введении нуждающемуся в лечении пациенту способно предоставить, прямо или косвенно, соединение, описанное в данном описании, или его метаболит или остаток.
Используемый в данном описании термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, которые являются, в рамках врачебного решения, приемлемыми для применения в контакте с тканями человека и низших животных без повышенной токсичности, раздражения, аллергической реакции и подобного и соответствуют разумному соотношению польза/риск. Термин "фармацевтически приемлемая соль" означает любую нетоксичную соль или соль сложного эфира соединения по данному изобретению, которая при введении реципиенту способна предоставить, либо прямо, либо опосредованно, соединение по данному изобретению или его ингибиторно активный метаболит или остаток. Используемый в данном описании термин "его ингибиторно активный метаболит или остаток" означает, что его метаболит или остаток также являются ингибиторами семейства протеинкиназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met.
J. Pharmaceutical Sciences,
1977
+
1-4
4
Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Например, S.M.Berge et al. подробно описывают фармацевтически приемлемые соли в статье , 66, 1-19, включенной в данное описание посредством ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению включают соли, полученные из приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных кислотно-аддитивных солей являются соли, образуемые аминогруппами с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и перхлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или применяя другие способы, используемые в данной области, такие как, например, ионообменный способ. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, йодгидрат, 2-гидроксиэтансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоционат, п-толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и так далее. Соли, образуемые с соответствующими основаниями, включают соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов, аммония и N(Cалкил). Также данное изобретение относится к кватернизации любых содержащих азотистое основание групп соединений, описанных в данном описании. При такой кватернизации могут использоваться водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и так далее. Другие фармацевтически приемлемые соли включают, когда это целесообразно, нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, образованные с противоионами, такими как галлогенид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, низший алкилсульфонат и арилсульфонат.
Как описано выше, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или наполнитель, который, как используется в данном описании, включает любой и все растворители, разбавители или другие жидкие наполнители, дисперсии или суспендирующие адъюванты, поверхностно-активные агенты, изотонические агенты, загустители или эмульгаторы, консерванты, твердые связующие вещества, лубриканты и так далее, которые подходят для конкретной желаемой дозированной формы. В Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E.W.Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980), описаны различные носители, используемые при получении фармацевтически приемлемых композиций, и известные способы для их получения. За исключением случаев, когда любая обычная среда носителя является несовместимой с соединениями настоящего изобретения, например при получении любого нежелательного биологического эффекта или обратного взаимодействия неблагоприятным образом с любым другим компонентом(ами) фармацевтически приемлемой композиции, его использование предполагается в рамках данного изобретения. Некоторые примеры веществ, которые могут использоваться в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают, но не ограничиваются ими, ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферирующие вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота или сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, динатрийфосфат, дикалийфосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный оксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, полиакрилаты, воски, блокполимеры полиэтилена-полиоксипропилена, ланолин, сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлоза; порошкообразный трагакант; солод; желатин; тальк; эксципиенты, такие как масло какао и воски для свечей; масла, такие как ореховое масло, хлопковое масло; сафлоровое масло; кунжутное масло; оливковое масло; кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы, а также другие нетоксичные совместимые лубриканты, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, агенты высвобождения, агенты для покрытия, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты также могут быть представлены в композиции в соответствии с решением разработчика композиции.
В другом аспекте способ лечения или ослабления тяжести заболевания, вызванного семейством Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), заболевания, вызванного семейством Aurora, или заболевания, вызванного c-Met, включает введение эффективного количества соединения или фармацевтически приемлемой композиции, содержащей соединение, нуждающемуся в лечении субъекту. В некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению "эффективное количество" соединения или фармацевтически приемлемой композиции равно количеству, эффективному в отношении заболевания, вызванного семейством Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), заболевания, вызванного семейством Aurora, или заболевания, вызванного c-Met. Соединения и композиции в соответствии со способом по настоящему изобретению могут вводиться, используя любое количество и любой способ введения, эффективный для лечения или ослабления тяжести заболевания, вызванного семейством Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), заболевания вызванного семейством Aurora, или заболевания, вызванного c-Met. Необходимое точное количество будет изменяться от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния субъекта, тяжести инфекции, конкретного агента, его способа введения и так далее. Соединения настоящего изобретения предпочтительно получают в единичной дозированной форме для простоты введения и единообразия дозы. Используемое в данном описании выражение "единичная дозированная форма" относится к физически дискретному компоненту вещества, необходимому для лечения пациента. Тем не менее, будет очевидно, что суммарное суточное применение соединения и композиции по настоящему изобретению будет определяться лечащим врачом в рамках правильного врачебного заключения. Уровень конкретной эффективной дозы для любого конкретного пациента или организма будет зависеть от ряда факторов, включая заболевание, которое подвергают лечению, и тяжесть заболевания; от активности конкретного применяемого соединения; конкретной применяемой композиции; возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и питания пациента; времени введения, способа введения и скорости выведения конкретного применяемого соединения; продолжительности лечения; лекарственных препаратов, применяемых в сочетании или одновременно с конкретным используемым соединением, и подобных факторов, хорошо известных в областях медицины. Используемый в данном описании термин "пациент" означает животное, предпочтительно млекопитающее, наиболее предпочтительно человека.
Фармацевтически приемлемые композиции по данному изобретению могут вводиться человеку и другим животным перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, интравагинально, интраперитонеально, местно (в виде порошков, мазей или капель), буккально, в виде спрея для перорального или назального способа введения и так далее в зависимости от тяжести инфекции, которую подвергают лечению. В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения могут вводиться перорально или парентерально с уровнем дозы приблизительно от 0,01 до приблизительно 50 мг/кг и, предпочтительно, приблизительно от 1 до приблизительно 25 мг/кг массы тела объекта в сутки один или несколько раз в сутки для получения желаемого терапевтического эффекта.
Жидкие дозированные формы для перорального способа введения включают, но не ограничиваются ими, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Кроме активных соединений, жидкие дозированные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульсификаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, пшеничное, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. Кроме инертных разбавителей, композиции для перорального введения также могут включать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые вещества и ароматизаторы.
Вводимые путем инъекции лекарственные препараты, например стерильные вводимые путем инъекции водные или масляные суспензии, могут быть получены в соответствии со способами, известными в данной области, используя приемлемые диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты. Стерильное вводимое путем инъекции лекарственное средство также может представлять собой вводимый путем инъекции стерильный раствор, суспензию или эмульсию в нетоксичных парентерально приемлемых разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых наполнителей и растворителей, которые могут использоваться, можно указать воду, раствор Рингера, U.S.P. и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла обычно используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью можно использовать любое мягкое твердое масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Вместе с тем, в препарате для инъекций могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Вводимые путем инъекции препараты могут быть стерилизованы, например, фильтрованием через фильтр, задерживающий бактерии, или путем включения стерилизующих агентов в виде стерильных твердых композиций, которые перед применением могут быть растворены или диспергированы в стерильной воде или другой стерильной среде для инъекции.
Для пролонгирования действия соединения по настоящему изобретению часто может быть желательным замедлить абсорбцию соединения из подкожной или внутримышечной инъекции. Это может быть достигнуто путем применения жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества со слабой водной растворимостью. Таким образом, скорость абсорбции соединения зависит от скорости его растворения, которая в свою очередь может зависеть от размера кристаллов и кристаллической формы. Альтернативно, замедленной абсорбции формы парентерально вводимого соединения достигают растворением или суспендированием соединения в масляном наполнителе. Вводимые путем инъекции формы замедленного всасывания получают путем образования микрокапсульных матриц соединения в биоразлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения соединения и полимера и природы конкретно используемого полимера можно контролировать скорость высвобождения соединения. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Также композиции замедленного всасывания, вводимые путем инъекции, получают путем включения соединения в липосомы или микроэмульсии, которые совместимы с тканями организма.
Композиции для ректального или вагинального введения, предпочтительно, представляют собой свечи, которые могут быть получены смешиванием соединения по данному изобретению с приемлемыми, не вызывающими раздражение эксципиентами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или воск для суппозиториев, которые сохраняют твердую форму при комнатной температуре, но становятся жидкими при температуре тела и, следовательно, становятся жидкими в ректальной или вагинальной полости и высвобождают активное соединение.
Твердые дозированные формы для перорального способа введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах активное соединение смешано по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или a) наполнителями или экстендерами, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, b) связующими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидинон, сахароза и гуммиарабик, c) смачивающими веществами, такими как глицерин, d) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия, e) замедлителями растворения, такими как парафин, f) ускорителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония, g) смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт и глицерин моностеарат, h) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) лубрикантами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия их и смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль дозированная форма также может содержать буферирующие агенты.
Твердые композиции подобного типа также могут применяться в качестве наполнителей в мягких и твердых наполненных желатиновых капсулах, используя такие эксципиенты, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное. Твердые дозированные формы таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут быть получены с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области получения фармацевтических препаратов. Они могут необязательно содержать опалесцирующие агенты, а также могут представлять собой композицию, которая высвобождает активный компонент(ы) только или, предпочтительно, в определенной части кишечного тракта, необязательно, замедленным способом высвобождения. Примеры композиций включения, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воски. Твердые композиции аналогичного типа также могут применяться в качестве наполнителей в мягких и твердых наполненных желатиновых капсулах, используя такие эксципиенты, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное.
Как указано выше, активные соединения также могут быть в микроинкапсулированной форме с одним или несколькими эксципиентами. Твердые дозированные формы таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут быть получены с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия, покрытиями, контролирующими высвобождение, и другими покрытиями, хорошо известными в области получения лекарственных препаратов. С такими твердыми дозированными формами активного соединения может быть смешан по меньшей мере один инертный разбавитель, такой как сахароза, лактоза или крахмал. Такие дозированные формы могут также содержать, как принято в нормальной практике, дополнительные вещества, иные, чем инертные разбавители, например лубриканты и другие добавки для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль дозированные формы также могут содержать буферирующие агенты. Они могут необязательно содержать опалесцирующие агенты, а также быть в виде композиции, которая высвобождает активный компонент(ы) только или, предпочтительно, в определенной части кишечного тракта, необязательно, замедленным способом высвобождения. Примеры композиций включения, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воски.
Дозированные формы для местного или чрескожного введения соединения по данному изобретению включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, ингаляторы или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервантами или буферами, при необходимости. В объем данного изобретения также предусматриваются офтальмологическая композиция, ушные капли и глазные капли. Кроме того, настоящее изобретение предусматривает применение кожных пластырей, которые обладают дополнительным преимуществом, обеспечивающим контролируемую доставку соединения организму. Такие дозированные формы могут быть получены путем растворения или диспергирования соединения в соответствующей среде. Также для усиления проникновения соединения через кожный покров могут использоваться усилители абсорбции. Скорость может регулироваться либо с помощью контролирующей скорость мембраны, либо диспергированием соединения в полимерной матрице или геле.
Как описано выше в общих чертах, соединения настоящего изобретения применяют в качестве ингибиторов протеинкиназ. В одном из вариантов осуществления соединения и композиции настоящего изобретения представляют собой ингибиторы одного или нескольких семейства киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или семейства киназы c-Met, и, таким образом, не связываясь с какой-либо конкретной теорией, соединения и композиции используются, в частности, для лечения или ослабления тяжести заболевания, состояния или расстройства, в котором активация одного или нескольких семейств киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met вовлечена в заболевание, состояние или расстройство. Когда активация семейства киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met вовлечена в конкретное заболевание, состояние или расстройство, то заболевание, состояние или расстройство также могут указываться как "заболевание, опосредованное семейством Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), "заболевание, опосредованное семейством Aurora" или "заболевание, опосредованное c-Met" или симптом заболевания. Соответственно в другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести заболевания, состояния или расстройства, в котором активация или одного или нескольких семейств киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met связана с болезненным состоянием.
Активность соединения, используемого в данном изобретении в качестве ингибитора семейства киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met, может исследоваться in vitro, in vivo или в клеточной линии. Исследования in vitro включают исследования, которые оценивают ингибирование, или активности фосфорилирования, или активности АТФазы активированного семейства киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейства киназы Aurora или c-Met. Альтернативно, in vitro исследуют количественно способность ингибитора связываться с семейством киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейством киназы Aurora или c-Met. Ингибиторное связывание может быть измерено мечением радиоактивными изотопами ингибитора перед связыванием, выделением комплекса ингибитор/киназа и определением количества радиомеченных связей. Альтернативно, ингибиторное связывание может быть определено проведением сравнительного эксперимента, в котором новые ингибиторы инкубируют с семейством киназы Tec (например, Tec, Btk, Itk/Emt/Tsk, Bmx, Txk/Rlk), семейством киназы Aurora или c-Met, связанным с известными радиолигандами.
Используемый в данном описании термин "измеряемое ингибирование" означает измеряемое изменение активности киназы между образцом, содержащим соединение настоящего изобретения и представляющую интерес киназу, и эквивалентным образцом, содержащим киназу без указанного соединения.
Используемый в данном описании термин "состояние, опосредованное семейством тирозинкиназы Tec" означает любое заболевание или другое болезненное состояние, в котором семейство киназы Tec, как известно, играет определенную роль. Такие состояния включают, но без ограничения, аутоиммунные, воспалительные, пролиферативные и гиперпролиферативные заболевания и иммунологически опосредованные заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).
Например, состояния, опосредованные семейством тирозинкиназы Tec, включают заболевания дыхательных путей, включая, но без ограничения, абструктивные двусторонние заболевания дыхательных путей, включая астму, такую как бронхиальная, аллергическая, врожденная, приобретенная и астма на пыль, в частности хроническую или запущенную астму (например, поздняя астматическая гиперчувствительность дыхательных путей) и бронхит. Кроме того, заболевания, связанные с семейством тирозинкиназы Tec, включают, но без ограничения, состояния, характеризуемые воспалением слизистой мембраны носа, включая острый ринит, аллергический, атрофический ринит и хронический ринит, включая ринит с образованием казеозных масс, гипертрофический ринит, гнойный ринит, сухой ринит и медикаментозный ринит; мембранозный ринит, включая крупозный, фибринозный и псевдомембранозный ринит и скрофулезный ринит, сезонный ринит, включая ринит nervosa (сенная лихорадка) и вазомоторный ринит, саркоидоз, аллергический альвеолит у сельскохозяйственных рабочих и связанные заболевания, пневмофиброз и идеопатическая интерстициальная пневмония.
Также состояния, вызванные семейством тирозинкиназы Tec, включают заболевания костей и суставов, включая, но без ограничения, (образование паннуса при) ревматоидный артрит, серонегативная спондилоартропатия (включая алкилозирующий спондилит, псориатический артрит и болезнь Рейтера), болезнь Бехчета, болезнь Шегрена и системный склероз.
Также состояния вызванные семейством киназы Tec, включают кожные заболевания и расстройства, включая, но без ограничения, псориаз, системный склероз, атопический дерматит, контактный дерматит и другие экзематозные дерматиты, себорейный дерматит, лишай Вильсона, пузырчатку, буллезную пузырчатку, буллезный эпидермолиз, крапивницу, ангиобластоз, васкулиты, эритему, кожную эозинофилию, увеит, гнездовую алопецию и весенний конъюнктивит.
Также состояния, вызванные семейством тирозинкиназы Tec, включают заболевания и расстройства желудочно-кишечного тракта, включая, но без ограничения, брюшно-полостное заболевание, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, панкреатит, болезнь Крона, язвенный колит, пищевую аллергию, которая имеет действия, отдаленные от пищеварительного канала, например мигрень, ринит и экзему.
Также состояния, вызванные семейством тирозинкиназы Tec, включают заболевания и расстройства других тканей и системное заболевание, включая, но без ограничения, множественный склероз, атеросклероз, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), красную волчанку, системную волчанку, эритематоз, тиреоидит Хашимото, миастению гравис, диабет по типу I, нефротический синдром, фасцит с эозинофилией, гипер-IgE-синдром, лепроматозный тип лепры, синдром Сезари и идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, рестиноз после ангиопластики, опухоли (например лейкоз, лимфома), атеросклероз и системную красную волчанку.
Также состояния, вызванные семейством тирозинкиназы Tec, включают отторжение аллотрансплантата, включая, но без ограничения, острое и хроническое отторжение аллотрансплантата после, например, трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи и роговицы и реакцию «трансплантат против хозяина».
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение относится к способам лечения или профилактики состояния, вызванного Aurora, включающим стадию введения пациенту одной из вышеописанных фармацевтических композиций.
Предпочтительно, этот способ применяют для лечения или профилактики состояния, выбранного из рака, такого как рак молочной железы, толстой кишки, простаты, кожи, поджелудочной железы, головного мозга, мочеполового тракта, лимфатической системы, желудка, гортани и легкого, включая аденокарциному легкого и мелкоклеточный рак легкого; инсульта, диабета, миеломы, гепатомегалии, кардиомегалии, болезни Альцгеймера, кистозного фиброза и вирусного заболевания или любого конкретного заболевания или расстройства, описанного выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности киназы с-Met в биологическом образце, включающему стадию контакта указанного биологического образца с соединением по данному изобретению или композицией, содержащей указанное соединение.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности киназы с-Met у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или композиции, содержащей указанное соединение.
Используемый в данном описании термин "заболевание, вызванное c-Met" или "состояние, вызванное c-Met" означает любое состояние заболевания или другое болезненное состояние, в котором c-Met, как известно, играет определенную роль. Термины "заболевание, вызванное c-Met" или "состояние, вызванное c-Met" также означает заболевания или состояния, которые улучшаются лечением с помощью ингибитора c-Met.
Такие состояния включают, но без ограничения, рак почек, желудка, толстой кишки, головного мозга, молочной железы, простаты и легкого, глиобластому, атеросклероз, фиброз легкого, состояния, связанные с трансплантацией органов, аллергическими расстройствами и аутоиммунными расстройствами.
Термин "c-Met" является синонимом "cMet", "MET", "Met" или других обозначений, известных специалисту в данной области.
В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести рака почек, желудка, толстой кишки, головного мозга, молочной железы, простаты и легкого, глиобластомы, атеросклероза, фиброза легкого, состояний, связанных с трансплантацией органов, аллергическими расстройствами или аутоиммунными расстройствами у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или его композиции.
В альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести проявления симптомов рака желудка или головного мозга у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или его композиции.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести проявления симптомов рака почек у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или его композиции.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести проявления симптомов рака у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или его композиции.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу ингибирования метастазов опухоли у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или его композиции.
Используемый в данном описании термин "биологический образец" означает образец вне живого организма и включает, но без ограничения, клеточные культуры или их экстракты материал биопсии, взятый у млекопитающего, или его экстракты и кровь, слюну, мочу, кал, семенную жидкость, слезы или другие жидкости организма или их экстракты.
Ингибирование активности протеинкиназы, например ингибирование c-Met, в биологическом образце применяют для решения ряда задач, хорошо известных специалисту в данной области. Примеры таких задач включают, но не ограничиваются ими, переливание крови, трансплантацию органов, хранение биологических образцов и биологические исследования.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу ингибирования активности протеинкиназа у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения по настоящему изобретению или композиции, содержащей указанное соединение. Указанные протеинкиназы включают, но не ограничиваются ими, перечисленные выше протеинкиназы.
Также следует принимать во внимание тот факт, что соединения и фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению могут применяться в комбинированных терапиях, то есть соединения и фармацевтически приемлемые композиции могут вводиться одновременно с, до или после одной или нескольких других необходимых терапий или медицинских процедур. Конкретная комбинация терапий (терапевтика или процедуры) для применения в режиме комбинации будет учитывать совместимость желаемой терапии и/или процедур и желаемого терапевтического эффекта, который будет достигнут.
Также следует принимать во внимание тот факт, что применяемые способы лечения могут достигать желаемого эффекта для некоторых расстройств (например, соединение настоящего изобретения может вводиться одновременно с другим агентом, применяемым для лечения аналогичного расстройства) или они могут достигать других эффектов (например, контроль за любыми нежелательными эффектами). Как используется в данном описании, дополнительные терапевтические агенты, которые обычно вводят для лечения или профилактики конкретного заболевания или состояния, известны как "соответствующие заболеванию или состоянию, которое подвергают лечению".
Например, химиотерапевтические агенты или другие антипролиферативные агенты могут быть объединены с соединениями по данному изобретению для лечения пролиферативных заболеваний и рака. Примеры известных химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются ими, например, другие способы лечения или противораковые агенты, которые могут применяться в сочетании с противораковыми агентами настоящего изобретения, включают хирургию, радиотерапию (некоторыми примерами которых являются гамма-облучение, радиотерапия нейтронным пучком, радиотерапия пучком электронов, протонная терапия, брахитерапия и системные радиоизотопы), эндокринную терапию, модификаторы биологического ответа (некоторыми примерами которых являются интерфероны, интерлейкины и фактор некроза опухоли (TNF)), гипертермию и криотерапию, агенты для ослабления любых неблагоприятных эффектов (например, противорвотные средства) и другие одобренные химиотерапевтические лекарственные препараты, включая, но не ограничиваясь ими, алкилирующие лекарственные препараты (мехлорэтамин, хлорамбуцил, циклофосфамид, мелфалан, изосфамид), антиметаболиты (метотрексат), пуриновые антагонисты и пиримидиновые антагонисты (6-меркаптопурин, 5-фторурацил, цитарабил, гемцитабин), яды веретена (винбластин, винкристин, винорелбин, паклитаксел), подофиллотоксины (этопозид, иринотекан, топотекан), антибиотики (доксорубицин, блеомицин, митомицин), нитрозомочнвины (кармустин, ломустин), неорганические ионы (цисплатин, карбоплатин), ферменты (аспарагиназа) и гормоны (тамоксифен, лейпролид, флутамид и мегестрол), гливек™, адриамицин, дексаметазон и циклофосфамид. Для более подробного рассмотрения усовершенствованных способов лечения рака см. http://www.nci.nih.gov/, перечень лекарственных препаратов для лечения онкологических заболеваний, одобренных FDA (Федеральное управление по лекарственным средствам (США)), http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm, и The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999, полное содержание которого включено в данное описание посредством ссылки.

Другие примеры агентов ингибиторов по данному изобретению могут также быть объединены, включая, но без ограничения, для лечения болезни Альцгеймера, такие как Aricept и Excelon; для лечения болезни Паркинсона, такие как L-DOP A/карбидопа, энтакапон, ропинрол, прамипексол, бромокрипттин, перголид, тригексефендил и амантадин; агенты для лечения множественного склероза (MS), такие как бета-интерферон (например, Avonex и Rebif), Copaxone и митоксантрон; для лечения астмы, такие как альбутерол и сингуляр; агенты для лечения шизофрении, такие как зипрекса, риспердаль, сероквель и галоперидол; противовоспалительные агенты, такие как кортикостероиды, блокаторы фактора некроза опухоли, IL-I RA, азатиоприн, циклофосфамид и сульфасалазин; иммуномодуляторы и иммуносупрессоры, такие как циклоспорин, такролимус, рапамицин, микофенолат мофетил, интерфероны, кортикостероиды, циклофосфамид, азатиоприн и сульфасалазин; нейротрофические факторы, такие как ингибиторы ацетилхолинэстеразы, ингибиторы MAO, интерфероны, противосудорожные вещества, блокаторы ионных каналов, рилузол и агенты для лечения паркинсонизма; агенты для лечения сердечно-сосудистого заболевания, такие как бета-блокаторы, ингибиторы ACE, диуретики, нитраты, блокаторы кальциевых каналов и статины; агенты для лечения заболевания печени, такие как кортикостероиды, холестирамин, интерфероны и противовирусные агенты; агенты для лечения заболеваний крови, такие как кортикостероиды, противолейкемические агенты и факторы роста; и агенты для лечения иммуннодефицитных расстройств, такие как гамма-глобулин.
Количество дополнительного терапевтического агента, присутствующего в композиции по данному изобретению, будет не больше, чем количество, которое обычно вводят в композицию, содержащую терапевтический агент, в качестве единственного активного агента. Предпочтительно, количество дополнительного терапевтического агента в описываемой композиции будет составлять приблизительно от 50% до 100% от количества обычно присутствующего в композиции, содержащей указанный агент в качестве единственного терапевтически активного агента.
Соединения по данному изобретению или их фармацевтически приемлемые композиции могут также быть включены в композиции для покрытия имплантируемых медицинских устройств, таких как протезы, искусственных клапанов, сосудистых трансплантатов, стентов и катетеров. Соответственно настоящее изобретение в другом аспекте включает композицию для покрытия имплантируемого устройства, содержащую соединение по настоящему изобретению, как описано в общих чертах выше и в классах и подклассах в данном описании, и носитель, приемлемый для покрытия указанного имплантируемого устройства. В другом аспекте настоящее изобретение включает имплантируемое устройство, покрытое композицией, содержащей соединение по настоящему изобретению, как описано в общих чертах выше, и в классах и подклассах в данном описании, и носитель, приемлемый для покрытия указанного имплантируемого устройства.
Сосудистые стенты, например, применяли для устранения рестеноза (повторного сужения просвета сосуда после травмы). Однако пациенты, использующие стенты или другие имплантируемые устройства, имели риск образования свертывания или активации тромбоцитов. Эти нежелательные эффекты можно предотвратить или ослабить путем предварительного покрытия устройства фармацевтически приемлемой композицией, содержащей ингибитор киназы. Приемлемые покрытия и общий способ получения имплантируемых устройств описаны в патентах США №6099562; 5886026 и 5304121. Покрытия представляют собой обычно биосовместимые полимерные вещества, такие как гидрогелевый полимер, полиметилдисилоксан, поликапролактон, полиэтиленгликоль, полимолочная кислота, этиленвинилацетат и их смеси. Покрытия могут быть необязательно покрыты приемлемым верхним слоем фторсиликона, полисахаридами, полиэтиленгликолем, фосфолипидами или их комбинациями для придания характеристик контролируемого высвобождения в композиции.
ПРИМЕРЫ
Используемый в данном описании термин "Rt (мин)" относится к времени удерживания при проведении ВЭЖХ в минутах, относящегося к соединению. Если не указано иное, метод ВЭЖХ, используемый для определения времени удерживания, имеет следующие характеристики:
колонка: Ace 5 C8, 15 см × 4,6 мм, внутренний диаметр;
градиент: 0-100% ацетонитрил + метанол (50:50) (20 мМ трисфосфат при pH 7,0);
скорость потока: 1,5 мл/мин;
определение при: 225 нм.
Пример 1
2-Пиридин-2-илмалононитрил
J. Am. Chem. Soc
1954
6
К диизопропиламину (15,3 мл, 109 ммоль) в толуоле (500 мл), при 0-5°C, в атмосфере азота добавляли по каплям в течение ~ 1/2 часов 1,6M н-BuLi/ТГФ (68,5 мл, 109 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение еще 15 минут, затем добавляли по каплям 2-пиридилацетонитрил (5,55 мл, 49,6 ммоль) в течение 1 часа. Затем добавляли в течение 1 часа 2-хлорбензилтиоционат (20,0 г, 109 ммоль), описанный в литературе Schlesinger . , 76, 585, в растворе в толуоле (100 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 часов. Добавляли воду и слои разделяли. Органическую фазу экстрагировали дважды 200 мл 2 н. NaOH. Объединенные водные фазы охлаждали до 0°C и подкисляли до pH ~1. Полученный осадок отфильтровывали и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого твердого вещества (4,50 г, 63% выход). δH (ДМСО-d) 6,79 (1H, т), 7,09 (1H, д), 7,73 (1H, т), 7,79 (1H, дд), 12,95 (1H, шир.с).
Пример 2
4-Пиридин-2-ил-1H-пиразол-3,5-диамин
2
4
2
2
6
+
Смесь 2-пиридин-2-илмалононитрила (0,65 г, 4,59 ммоль) и гидрата гидразина (225 мкл, 4,59 ммоль) в EtOH (5 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником и перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Полученное твердое вещество промывали EtO с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого твердого вещества (0,42 г, 52%). Фильтрат упаривали досуха и очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью NHOH:MeOH:CHCl (0,5:5:95) с получением дополнительных 63,3 мг (8%) желаемого продукта. МС (ES) 176, (ES-) 174. δH (ДМСО-d) 5,45 (4H, шир.с), 6,98 (1H, т), 7,57 (1H, д), 7,69 (1H, т), 8,46 (1H, д), 10,55 (1H, шир.с).
Пример 3
3-Пиридин-2-ил-6-пиридин-4-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-иламин I-1
+
6
Смесь 4-пиридин-2-ил-1H-пиразол-3,5-диамина (290 мг, 1,66 ммоль) и 2-пиридин-4-илмалональдегида (247 мг, 1,66 ммоль) помещали в этанол (5 мл) с каталитическим количеством уксусной кислоты (6 капель). Реакционную смесь нагревали в микроволновой печи при 140°C в течение 15 минут. Неочищенную смесь охлаждали до комнатной температуры, полученный остаток фильтровали и промывали дополнительным количеством этанола с получением указанного в заголовке соединения в виде золотисто-желтого твердого вещества (295 мг, 62%). МС (ES) 289, (ES-) 287. δH (ДМСО-d) 7,16 (1H, дд), 7,21 (2H, м), 7,84 (1H, м), 7,89 (2H, м), 8,57 (2H, шир.м), 8,65 (2H, д), 8,98 (1H, д), 9,44 (1H, д).
1
Ряд других соединений получали способами, аналогичными описанным выше в примере 3. Данные исследований для некоторых из указанных соединений представлены в таблице 4 ниже и включают ВЭЖХ, ЖХ/МС (измеренные) и данные H ЯМР.
1
1
Данные H ЯМР приведены в таблице 6 ниже, где данные H ЯМР получали при 400 МГц в дейтерированном ДМСО, если не указано иное, и находили согласующимися со структурой. Номера соединений соответствуют номерам соединений, перечисленным в таблице 1.
<b>Таблица 6</b><b>Данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед. № (I-)</b>
<b>M+1 (наблюд.)</b>
<b>Rt (мин)</b>
<sup>X</sup><b>H-ЯМР</b>
2
318
9,68
3,81 (3H, с), 7,07 (4H, м), 7,12 (1H, м), 7,75 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,54 (1H, м), 8,58 (1H, м), 8,82 (1H, д), 9,15 (1H, д)
3
366
/
(500 МГц), 7,14 (м, 3H), 7,46 (т, 1H), 7,60 (дд, 1H), 7,85 (м, 2H), 8,06 (м, 1H), 8,56 (м, 2H), 8,86 (д, 1H), 9,27 (д, 1H)
4
318
/
(500 МГц), 3,86 (с, 3H), 6,97 (м, 1H), 7,09 (с, 2H), 7,13 (м, 1H), 7,39 (м, 3H), 7,84 (м, 1H), 8,55 (м, 1H), 8,58 (д, 1H), 8,86 (д, 1H), 9,23 (д, 1H)
5
302
10,12
2,40 (3H, с), 7,15 (3H, м), 7,35 (2H, д), 7,75 (2H, д), 7,90 (1H, т), 8,60 (2H, м), 8,90 (1H, с), 9,20 (1H, д)
6
411
8,74
3,45 (3H, с), 7,20 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,90 (1H, т), 8,15 (1H, д), 8,35 (1H, д), 8,50 (1H, с), 8,55 (2H, м), 8,70 (1H, с), 9,20 (1H, д)
7
289
8,76
7,20 (3H, м), 7,45 (1H, м), 7,90 (1H, т), 8,00 (1H, т), 8,15 (1H, д), 8,60 (2H, м), 8,70 (1H, м), 9,20 (1H, с), 9,45 (1H, с)
8
290
8,29
7,20 (1H, м), 7,35 (2H, с), 7,90 (1H, т), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 8,90 (1H, д), 9,25 (2H, дд), 9,65 (1H, с)
9
290
8,44
7,20 (1H, м), 7,30 (2H, с), 7,95 (1H, т), 8,70 (3H, м), 8,80 (1H, с), 9,30 (1H.с), 9,45 (1H, с), 9,60 (1H, с)
10
333
6,64
7,15 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,95 (1H, т), 8,05 (1H, д), 8,15 (1H, т), 8,40 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,30 (1H, с), 9,80 (1H, с)
11
333
6,65
7,15 (1H, м), 7,25 (2H, д), 7,90 (1H, т), 8,25 (1H, д), 8,35 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,15 (1H, с), 9,25 (1H, с), 9,55 (1H, с)
12
360
8,34
3,10 (6H, с), 7,15 (1H, м), 7,20 (1H, д), 7,55 (1H, д), 7,90 (1H, т), 8,05 (1H, т), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,20 (1H, с), 9,45 (1H, с)
13
402
8,26
3,60 (4H, м), 3,75 (4H, м), 7,15 (1H, м), 7,20 (1H, д), 7,60 (1H, д), 7,90 (1H, т), 8,00 (1H, т), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,20 (1H, с), 9,45 (1H, с)
14
360
8,08
3,05 (6H, с), 7,15 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,55 (1H, д), 7,90 (1H, т), 8,00 (1H, д), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 8,75 (1H, с), 9,25 (1H, с), 9,50 (1H, с)
15
402
8,06
3,65 (8H, м), 7,15 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,90 (1H, т), 8,00 (1H, д), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 8,75 (1H, с), 9,20 (1H, с), 9,50 (1H, с)
16
403
7,78
2,20 (6H, с), 2,45 (2H, м), 3,50 (2H, м), 7,15 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,50 (1H, т), 8,00 (1H, д), 8,10 (1H, т), 8,30 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,15 (1H, с), 9,45 (1H, с), 9,90 (1H, с)
17
401
7,27
2,80 (4H, м), 3,40 (2H, м), 3,60 (2H, м), 7,15 (1H, м), 7,20 (2H, с), 7,50 (1H, д), 7,85 (1H, т), 8,05 (1H, т), 8,20 (1H, д), 8,60 (2H, м), 9,20 (1H, с), 9,45 (1H, с)
18
401
7,22
3,30 (8H, м), 7,15 (1H, м), 7,20 (2H, ушир.с), 7,90 (1H, т), 8,10 (1H, дд), 8,25 (1H, д), 8,65 (2H, м), 8,80 (1H, с), 9,30 (1H, с), 9,55 (1H, с)
19
417
7,62
2,00 (3H, с), 2,20 (3H, с), 2,40 (2H, м), 3,00 (3H, с), 3,60 (2H, м), 7,15 (1H, м), 7,25 (2H, с), 7,90 (2H, м), 8,15 (1H, м), 8,55 (2H, м), 8,70 (1H, с), 9,20 (1H, с), 9,50 (1H, с)
20
322
/
(500 МГц), 7,11 (с, 2H), 7,14 (м, 1H), 7,56 (д, 2H), 7,83 (м, 1H), 7,86 (д, 2H), 8,55 (м, 1H), 8,57 (д, 1H), 8,85 (д, 1H), 9,24 (д, 1H)
21
340
/
(500 МГц), 7,18 (м, 1H), 7,28 (с, 2H), 7,85 (м, 1H), 7,89 (м, 2H), 8,15 (м, 2H), 8,59 (м, 1H), 8,63 (д, 1H), 9,40 (д, 1H), 9,69 (с, 1H), 9,78 (с, 1H)
22
417
/
(500 МГц), 3,25 (м, 2H), 3,55 (м, 2H), 3,62 (м, 2H), 3,8 (ушир., 2H), 4,05 (м, 2H), 4,43 (м, 2H), 7,16 (м, 3H), 7,80 (д, 2H), 7,85 (т, 1H), 8,56 (м, 2H), 8,83 (д, 1H), 9,16 (д, 1H)
23
331
9,14
3,79 (3H, с), 3,97 (2H, с), 5,72 (2H, с), 7,02-7,04 (2H, м), 7,13 (1H, м), 7,21-7,25 (2H, м), 7,30-7,32 (2H, м), 7,66 (2H, д), 8,55 (1H, с), 8,95 (1H, с)
24
302
8,17
3,96 (2H, с), 5,89 (2H, с), 7,15 (1H, м), 7,22-7,25 (2H, м), 7,31-7,32 (3H, м), 7,90 (1H, т), 8,00 (1H, м), 8,65 (1H, д), 8,97 (1H, с), 9,25 (1H, с)
25
302
7,87
3,95 (2H, с), 5,94 (2H, с), 7,13 (1H, м), 7,21-7,25 (2H, м), 7,30-7,32 (2H, м), 7,81 (2H, д), 8,60 (2H, д), 8,73 (1H, с), 9,23 (1H, с)
Пример 4
a
6-Бром-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-]пиримидин-2-иламин II-2
3(водный)
6
+
4-(Пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3,5-диамин (2,54 г, 14,51 ммоль) и 2-броммалональдегид (2,41 г, 15,97 ммоль) суспендировали в сухом этаноле (35 мл). Добавляли небольшое количество ледяной уксусной кислоты (30 капель) и смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя EtOAc, содержащим 2% раствор NH, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (0,82 г, 19% выход). МС (ES) 290/292. δH (ДМСО-d) 7,2 (3H, м), 7,9 (1H, т), 8,5 (1H, д), 8,6 (2H, м), 9,3 (1H, с).
Пример 5
4-(2-Амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-ил)-фенол II-6
2
3
6
+
6-Бром-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-иламин (50 мг, 0,17 ммоль) и 4-гидроксифенилбороновую кислоту (48 мг, 0,35 ммоль) суспендировали в сухом ДМФА (1,4 мл). Добавляли водный 2M NaCO (0,346 мл, 0,69 ммоль) и реакционную смесь дегазировали. Добавляли комплекс [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) в дихлорметане (1:1 соотношение, 8 мг, 0,010 ммоль) и смесь нагревали в микроволновой печи при 120°C в течение 20 минут. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя EtOAc, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (35 мг, 67% выход). МС (ES) 304. δH (ДМСО-d) 6,8 (1H, д), 7,1 (3H, м), 7,2 (1H, д), 7,3 (1H, т), 7,9 (1H, т), 8,6 (2H, м), 8,8 (1H, с), 9,2 (1H, с), 9,7 (1H, с).
1
Ряд других соединений получали способами, аналогичными описанным выше в примере 5. Данные исследований для некоторых из указанных соединений приведены в таблице 5 ниже и включают ВЭЖХ, ЖХ/МС (наблюдаемое) и данные H ЯМР.
1
1
Данные H ЯМР приведены в таблице 7 ниже, где данные H ЯМР получали при 400 мГц в дейтерированном ДМСО, если не указано иное, и находили соответствующими структуре. Номера соединений соответствуют номерам соединений, перечисленных в таблице 2.
<b>Таблица 7</b><b>Данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед. № (II-)</b>
<b>M+1 (наблюд.)</b>
<b>Rt (мин)</b>
<sup>X</sup><b>H-ЯМР</b>
3
322
10,14
7,15 (3H, м), 7,50 (1H, м), 7,65 (1H, м), 7,90 (1H, т), 8,60 (3H, м), 9,05 (1H, с)
4
359
8,63
3,05 (6H, м), 7,15 (3H, м), 7,55 (1H, д), 7,90 (3H, м), 8,60 (2H, м), 8,90 (1H, с), 9,30 (1H, с)
5
401
8,06
2,40 (4H, м), 3,20 (4H, м), 7,15 (2H, т), 7,70 (1H, д), 7,90 (3H, м), 8,60 (2H, м), 8,85 (2H, м), 8,90 (1H, с), 9,30 (1H, с)
7
303
8,75
5,25 (2H, с), 6,60 (1H, д), 6,90 (2H, м), 7,10 (4H, м), 7,85 (1H, т), 8,55 (2H, м), 8,75 (1H, с), 9,05 (1H, с)
8
402
8,60
2,20 (6H, с), 2,45 (2H, м), 3,40 (2H, м), 7,15 (3H, м), 7,85 (1H, т), 7,95 (4H, м), 8,60 (3H, м), 8,95 (1H, с), 9,30 (1H, с)
9
416
8,71
2,00 (3H, с), 2,25 (3H, с), 2,40 (2H, м), 3,00 (4H, м), 3,55 (1H, м), 7,15 (3H, м), 7,50 (2H, д), 7,90 (3H, м), 8,60 (3H, м), 8,90 (1H, с), 9,30 (1H, с)
Пример 6
5-Фенил-3-пиридин-2-ил-6,7-дигидропиразоло[1,5-a]пиримидин-2-иламин
+
6
6-Бром-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-иламин (0,52 г, 3,01 ммоль) и гидрохлорид 3-диметиламино-1-фенилпропан-l-она (0,64 г, 3,01 ммоль) суспендировали в сухом ДМФА (10 мл). Смесь нагревали при 160°C в течение 3 часов при перемешивании. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры смесь выливали в холодную воду. Полученный остаток фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (0,79 г, 93% выход). МС (ES) 290. δH (ДМСО-d) 3,3 (2H, м), 4,1 (2H, м), 6,1 (2H, с), 7,2 (1H, м), 7,7 (4H, м), 7,9 (1H, т), 8,2 (1H, м), 8,4 (1H, д), 8,6 (1H, д).
Пример 7
5-Фенил-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-α]пиримидин-2-иламин III-1
2
3
2
3
2
2
4
6
+
5-Фенил-3-пиридин-2-ил-6,7-дигидропиразоло[1,5-a]пиримидин-2-иламин (0,297 г, 1,03 ммоль) и 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинон (0,256 г, 1,13 ммоль) суспендировали в сухом 1,4-диоксане (10 мл). Смесь нагревали при 110°C в течение 90 минут. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество распределяли между этилацетатом и 2M водным раствором NaCO. Органический слой промывали дополнительными частями 2M водного раствора NaCO (2×20 мл), HO (1×20), сушили над NaSO и фильтровали. Очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью EtOAc/петролейный эфир (1/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (0,15 г, 51% выход). МС (ES) 288. δH (ДМСО-d) 7,1 (3H, м), 7,6 (4H, м), 8,0 (1H, с), 8,4 (2H, д), 8,6 (1H, м), 8,8 (1H, д), 9,0 (1H, д).
1
Ряд других соединений получали способами, аналогичными описанным выше в примере 7. Данные исследования для некоторых из указанных соединений приведены в таблице 6 ниже и включают ВЭЖХ, ЖХ/МС (полученные) и данные H ЯМР.
1
1
Данные H ЯМР приведены в таблице 8 ниже, где данные H ЯМР получали при 400 МГц в дейтерированном ДМСО, если не указано иное, и находили соответствующими структуре. Номера соединений соответствуют номерам соединений, перечисленных в таблице 3.
<b>Таблица 8</b><b>Данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед.№ (III-)</b>
<b>M+1 (наблюд.)</b>
<b>Rt (мин)</b>
<sup>X</sup><b>H-ЯМР</b>
2
318
9,82
3,90 (3H, с), 7,05 (2H, м), 7,20 (3H, м), 7,50 (1H, д), 7,95 (1H, т), 8,30 (2H, д), 8,60 (1H, м), 8,80 (1H, д), 8,90 (1H, д)
Пример 8
Этиловый эфир 2-амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-карбоновой кислоты IV-1
+
6
Смесь 4-(пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3,5-диамина (0,10 г, 0,57 ммоль), (этоксикарбонил)малондиальдегида (0,084 г, 0,57 ммоль) и 2 капли уксусной кислоты в 1-пропаноле (3 мл) нагревали в микроволновой печи в течение 15 минут при 180°C при перемешивании. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, промывали этанолом и сушили в вакууме при 60°C в течение 3 дней с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого твердого вещества (0,098 г, 61% выход). МС (ES) 284. δH (500 МГц, ДМСО-d) 1,35 (3H, т), 4,36 (2H, кв), 7,19 (1H, м), 7,36 (2H, с), 7,87 (1H, дт), 8,58 (2H, м), 8,82 (1H, д), 9,18 (1H, д).
Пример 9
2-Амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-карбоновая кислота IV-3
+
6
Раствор этилового эфира 2-амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-карбоновой кислоты (1,58 г, 5,58 ммоль) и гидроксида калия (0,95 г, 16,7 ммоль) в этаноле (30 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 часов, затем охлаждали до комнатной температуры. Осадок отфильтровывали, промывали эфиром, суспендировали в эфире, обрабатывали смесью 2M HCl/Et2O (15 мл, 30 ммоль), перемешивали 0,5 часа, фильтровали и промывали эфиром с получением HCl соли указанного в заголовке соединения в виде коричневого твердого вещества (0,88 г, 54% выход). МС (ES) 256. δH (500 МГц, ДМСО-d) 7,25 (1H, м), 7,94 (1H, т), 8,56 (1H, д), 8,60 (1H, д), 8,83 (1H, д), 9,16 (1H, д).
Пример 10
(2-Амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-ил)морфолин-4-илметанон (IV-12)
4
6
+
Смесь 2-амино-3-пиридин-2-илпиразоло[1,5-a]пиримидин-6-карбоновой кислоты (0,06 г, 0,20 ммоль), морфолина (0,02 мл, 0,25 ммоль) и HBTU (0,09 г, 0,25 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 24 часов. Осадок отфильтровывали и очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью NHOH:метанол:дихлорметан (0,5:5:95), с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г, 35% выход). МС (ES) 325. δH (500 МГц, ДМСО-d) 3,63 (8H, м), 7,17 (3H, м), 7,85 (1H, м), 8,52 (1H, с), 8,56 (2H, м), 8,99 (1H, с).
1
Ряд других соединений получали способами, аналогичными описанным выше. Данные исследования для некоторых из указанных соединений приведены в таблице 7 ниже и включают ВЭЖХ, ЖХ/МС (наблюдаемое) и данные H ЯМР.
1
1
Данные H ЯМР приведены в таблице 9 ниже, где данные H ЯМР получали при 500 МГц в дейтерированном ДМСО, если не указано иное, и находили соответствующими структуре. Номера соединений соответствуют номерам соединений, перечисленным в таблице 5.
<b>Таблица 9</b><b>Данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед. № (IV-)</b>
<b>M+1 (наблюд.)</b>
<b>Rt (мин)</b>
<sup>X</sup><b>H-ЯМР</b>
2
366
/
(500 МГц), 1,70 (6H, м), 2,50 (6H, м), 3,34 (2H, м), 7,16 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,86 (1H, дт), 8,56 (2H, м), 8,61 (1H, т), 8,84 (1H, д), 9,19 (1H, д)
4
382
/
(500 МГц), 1,71 (2H, м), 2,35 (6H, м), 3,33 (2H, м), 3,58 (4H, м), 7,16 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,86 (1H, дт), 8,56 (3H, м), 8,85 (1H, д), 9,20 (1H, д)
5
366
/
(500 МГц), 1,49 (2H, м), 1,67 (2H, м), 1,92 (1H, м), 1,98 (1H, м), 2,15 (2H, м), 2,29 (3H, м), 3,00 (1H, м), 3,34 (2H, м), 7,16 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,86 (1H, дт), 8,57 (3H, м), 8,84 (1H, д), 9,19 (1H, д)
6
368
/
(500 МГц), 1,2 (6H, м), 2,50 (4H, м), 3,12 (5H, м), 3,75 (2H, м), 7,18 (3H, м), 7,85 (1H, м), 8,56 (3H, м), 9,05 (1H, м)
7
326
/
(500 МГц), 2,26 (3H, ушир.с), 2,70 (2H, м), 3,05 (3H, ушир.с), 3,49 (2H, м), 7,16 (3H, м), 7,84 (1H, дт), 8,54 (4H, м), 9,10 (1H, м)
8
352
/
(500 МГц), 1,07 (2H, м), 1,65 (3H, м), 2,46 (2H, м), 2,97 (2H, м), 3,17 (2H, м), 7,16, (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,86 (1H, дт), 8,56 (3H, м), 8,86 (1H, д), 9,23 (1H, д)
9
340
/
(500 МГц), 1,72 (2H, м), 2,24 (6H, с), 2,41 (2H, т), 3,33 (2H, м), 7,17 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,86 (1H, дт), 8,56 (2H, м), 8,60 (1H, т), 8,84 (1H, д), 9,20 (1H, д)
10
395
/
(500 МГц), 1,70 (2H, м), 2,17 (3H, с), 2,36 (10H, м), 3,33 (2H, м), 7,16 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,56 (1H, дт), 8,56 (3H, м), 8,84 (1H, д), 9,20 (1H, д)
11
338
/
(500 МГц), 2,21 (3H, с), 2,36 (4H, м), 3,59 (4H, м), 7,16 (3H, м), 7,84 (1H, дт), 8,50 (1H, д), 8,55 (2H, м), 8,96 (1H, д)
13
295
/
(500 МГц,), 0,60 (2H, м), 0,74 (2H, м), 2,86 (1H, м), 7,16 (1H, м), 7,23 (2H, с), 7,85 (1H, дт), 8,55 (3H, м), 8,82 (1H, д), 9,18 (1H, д)
Пример 11: Синтез соединений в соответствии со схемой VII
Реагенты и условия
: (a) ДМФА-DMA, 85°C, 16 часов; (b) EtOH, AcOH, микроволновое облучение, 120°C, 30 минут.
D
B
3
4
На схеме VII выше показан другой общий способ синтеза, который использовали для получения соединений  по данному изобретению, когда Z, R, R и R являются такими, как описано в данном описании. Промежуточное соединение  получали в соответствии со схемой VII, стадия (a), из соединения A.
C
B
Пиразоло[1,5-a]пиримидины (D) получали циклизацией в микроволновой печи диаминопиразолов  с энаминонами .
Типичные соединения, полученные в соответствии с общими способами, показанными на схемах VI и VII, показаны ниже:
Пример 12: Синтез 6-метил-3-(6-(метилсульфинил)пиримидин-4-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-амина
Синтез 4-хлор-6-(метилтио)пиримидина
3
4,6-Дихлорпиримидин (15,4 г, 0,10 моль) растворяли в ТГФ (120 мл) при комнатной температуре и добавляли NaSMe (8,5 г, 0,12 моль) в виде твердого вещества. Реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 16 часов, затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли этилацетатом (300 мл) и водой (300 мл). Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до оранжевого масла, которое повторно кристаллизовали из гексана с получением светло-желтого твердого вещества, 9,85 г, 0,061 моль, 61%. H NMR (500 МГц, CDCl) 8,74 (с, 1H), 7,23 (с, 1H), 2,58 (с, 3H).
Синтез 2-(6-(метилтио)пиримидин-4-ил)малононитрила
3
4
Гидрид натрия (10,8 г, 0,27 моль) суспендировали в ТГФ (100 мл) при 0°C. К полученной суспензии по каплям добавляли раствор малонитрила (8,0 г, 0,122 моль) в 50 мл ТГФ. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали еще 10 минут и затем добавляли 4-хлор-6-(метилтио)пиримидин (9,85 г, 0,61 моль) в 50 мл ТГФ. Азот барботировали в реакционную смесь в течение 10 минут, добавляли Pd(PPh) (3,3 г, 3,0 ммоль) в виде твердого вещества и реакционную смесь нагревали до 60°C. После нагревания в течение 4 часов реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и осторожно гасили водой. Затем реакционную смесь концентрировали до получения остатка и добавляли 100 мл воды, затем 6 н. HCl до pH 1. Полученный после фильтрования осадок промывали водой и диэтиловым эфиром, суспендировали в этилацетате (100 мл) и вновь фильтровали. Полученное твердое вещество сушили с получением 11,4 г, 0,06 моль, 98%. H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) 8,28 (с, 1H), 6,47 (с, 1H), 2,58 (с, 3H).
Синтез 4-(6-(метилтио)пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-3,5-диамина
2-(6-(Метилтио)пиримидин-4-ил)малононитрил (11,4 г, 0,06 моль) суспендировали в 150 мл EtOH и добавляли гидразингидрат (3 мл, 0,06 моль). Реакционную смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 дней. Реакционную смесь концентрировали до твердого вещества, которое суспендировали в этилацетате (100 мл) и фильтровали. Полученное твердое вещество сушили с получением продукта, 10,4 г, 46,8 ммоль, 78%, приблизительно 80%-ной чистоты).
Синтез 6-метил-3-(6-(метилсульфинил)пиримидин-4-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-амина
4-(6-(Метилтио)пиримидин-4-ил)-1H-пиразол-3,5-диамин (1,0 г, 4,5 ммоль) объединяли с 3-этокси-2-метилакрилальдегидом (0,63 г, 5,3 ммоль) в изопропаноле (12 мл). К реакционной смеси, которую затем герметично закрывали в сосуде для микроволновой печи и нагревали до 160°C в течение 15 минут, добавляли уксусную кислоту (0,1 мл). Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (200 мл) и 1 н. NaOH (60 мл), слои разделяли и органический слой концентрировали до 60 мл. Полученный раствор охлаждали до 0°C и добавляли 77% м-хлорпербензойной кислоты (1,9 г, 8,5 ммоль). Через 1 час образовывался желтый осадок, который отфильтровывали, промывали этилацетатом и сушили с получением продукта, 0,39 г, 30% выход. ЖХМС MH+ 289,29. H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) 9,02 (с, 1H) 8,91 (с, 1H), 8,88 (с, 1H), 8,54 (с, 1H), 7,14 (с, 2H), 2,91 (с, 3H), 2,34 (с, 3H).
Синтез 1-(6-(2-амино-6-метилпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-ил)пиримидин-4-ил)пиперидин-3-карбоксамида
3
2
6-Метил-3-(6-(метилсульфинил)пиримидин-4-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-амин (60 мг, 0,21 ммоль) растворяли в NMP с нипекотамидом (100 мг, 0,78 ммоль) и нагревали до 200°C в микроволоновой печи в течение 20 минут. Реакционную смесь очищали ОФ-ВЭЖХ (C18, CHCN/HO 0,1% ТФУ) и чистые фракции выливали в смесь этилацетат/0,5 н. NaOH. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали до желтого твердого вещества, которое растворяли в 1 н. HCl в MeOH и концентрировали с получением соли HCl в виде желтого твердого вещества, 20 мг, 0,052 ммоль, 26%. ЖХ/МС MH+353,4.
1
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) 8,93 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,54 (д, J=1,9 Гц, 1H), 7,48 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 3,32-3,25 (м, 2H), 2,47 (м, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,00-1,96 (м, 1H), 1,88-1,83 (м, 2H), 1,72 (м, 1H), 1,52 (с, 1H).
1
1
Данные H ЯМР приведены в таблице 10 ниже, где данные H ЯМР получали при 500 МГц в дейтерированном ДМСО, если не указано иное, и находили соответствующими структуре. Номера соединений соответствуют номерам соединений, перечисленным в таблице 5.
<b>Таблица 10</b><b>Данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед. № (V-)</b>
<b>M+1 (наблюд.)</b>
<b>Rt (мин)</b>
<sup>X</sup><b>H-ЯМР</b>
1
225,10
2,60
(500 МГц, ДМСО-d6), 8,59 (д, 1H), 7,81 (д, 2H), 7,40 (т, 2H), 7,19 (т, 1H), 6,65 (д, 1H), 2,45 (с, 3H), м.д.
2
265,90
2,62
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,20 (1H, с), 8,81 (1H, с), 7,72 (2H, д), 7,05 (2H, д), 6,70 (2H, ушир.с), 3,80 (3H, с), м.д.
3
348,20
2,10
4
316,20
2,30
5
356,10
2,30
6
330,20
1,90
7
302,20
2,20
8
304,20
1,90
9
316,20
2,30
10
313,10
2,00
11
332,10
1,80
12
316,20
2,30
13
306,10
2,10
14
318,20
2,10
15
364,10
2,50
16
381,20
1,80
17
372,10
2,20
18
380,10
1,90
19
372,10
2,40
20
303,20
1,70
21
333,10
2,00
22
319,10
1,80
23
345,20
1,50
24
317,00
3,00
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,22 (1H, с), 8,90 (1H, с), 7,85 (2H, д), 7,59 (2H, д), 6,50 (2H, ушир.с), 4,30 (2H, кв), 1,30 (3H, т), м.д.
25
284,00
2,10
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,40 (1H, с), 9,22 (1H, с), 8,70 (1H, д), 8,10 (1H, д), 7,91 (1H, дд), 7,40 (1H, дд), 6,55 (2H, ушир.с), 4,30 (2H, кв), 1,30 (3H, т), м.д.
26
285,00
2,00
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,50 (1H, с), 9,35 (1H, с), 9,22 (1H, с), 8,85 (1H, д), 8,65 (1H, д), 6,60 (2H, ушир.с), 4,30 (2H, кв), 1,30 (3H, т) м.д.
27
285,00
1,90
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,55 (1H, с), 9,30 (1H, с), 9,25 (1H, с), 8,90 (1H, д), 8,21 (1H, д), 6,62 (2H, ушир.с), 4,30 (2H, кв), 1,30 (3H, т), м.д.
28
257,00
1,50
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,55 (1H, с), 9,20 (1H, с), 9,00 (1H, с), 8,80 (1H, д), 8,15 (1H, д), 6,8 (2H, ушир.с), м.д.
29
330,60
3,41
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,03 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,67 (д, J=2,3 Гц, 1H), 7,76 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,66 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,30 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,01 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,71 (с, 2H), 3,79 (с, 3H), 2,36 (с, 3H)
30
378,70
3,90
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,09 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,73 (д, J=2,3 Гц, 1H), 7,85 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,67 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,60 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,30 (д, J=7,9 Гц, 2H), 5,90 (с, 2H), 2,36 (с, 3H)
31
378,60
3,41
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,03 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,75 (д, J=2,2 Гц, 1H), 6,97 (д, J=8,0 Гц, 1H), 6,76 (д, J=8,1 Гц, 2H), 6,67 (м, 2H), 6,52 (м, 3H), 1,60 (с, 3H)
32
382,30
2,50
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,65 (1H, с), 9,25 (2H, м), 8,9 (1H, д), 8,20 (2H, м), 7,45 (1H, м), 7,20 (1H, м), 7,05 (1H, м), 6,70 (2H, м), 4,60 (2H, с), м.д.
33
325,20
1,90
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,50 (1H, с), 9,20 (1H, м), 9,15 (1H, с), 8,85 (1H, д), 8,20 (1H, м), 7,45 (1H, м), 3,4 (3H, м), 1,20 (6H, д), 1,1 (3H, м), м.д.
34
393,40
1,40
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,60 (1H, с), 9,25 (1H, м), 9,20 (1H, с), 8,85 (1H, д), 8,20 (1H, м),4,5 (1H, м), 3,90 (1H, м), 3,80 (1H, м), 3,60 (2H, м), 3,45 (1H, м), 3,30 (1H, м), 3,15 (1H, м), 3,05 (1H, м), 2,15 (1H, м), 1,95 (2H, м), 1,90 (4H, м), 1,75 (2H, м), м.д.
35
417,40
1,60
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,60 (1H, с), 9,21 (2H, м), 8,89 (1H, д), 8,20 (1H, м), 7,35 (*3H, м), 7,29 (2H, м), 4,85 (2H, с), 3,74 (2H, м), 3,35 (2H, м), 2,80 (6H, с), м.д.
36
375,40
1,30
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,55 (1H, с), 9,21 (1H, м), 8,89 (1H, д), 8,80 (2H, м), 8,20 (1H, м),7,80 (2H, м), 4,97 (2H, с), 3,55 (2H, м), 1,15 (3H, т), м.д.
37
390,40
1,90
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,55 (1H, с), 9,21 (2H, м), 8,85 (1H, д), 8,20 (1H, м), 7,30 (5H, м), 4,80 (2H, с), 4,0 (2H, м), 3,50 (2H, м), м.д.
38
399,40
2,20
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), δ 9,55 (1H, с), 9,21 (2H, м), 8,85 (1H, д), 8,20 (1H, м), 7,25 (5H, м), 4,80 (2H, с), 3,70 (2H, м), 2,85 (2H, м), м.д.
53
306,20
1,30
54
402,40
1,40
55
414,40
1,30
56
394,10
2,50
57
296,70
2,62
58
280,90
3,22
59
294,00
3,36
60
451,40
0,80
61
443,50
1,30
62
403,40; 401,20
1,30; 1,90
63
429,00
1,30
64
458,40
1,80
65
403,40
1,30
66
444,40
1,70
67
388,40
1,70
68
459,40
1,30
69
415,50
1,30
70
429,40
1,30
71
430,40
1,50
72
384,40
1,70
73
378,40
1,70
74
430,20
1,50
75
404,40
1,60
76
472,50; 473,50
1,90; 1,30
77
388,40
1,90
78
445,40
1,30
79
416,40
1,50
80
431,50
1,50
81
401,40
1,20
82
444,40
1,60
83
444,40
1,60
84
469,50
1,30
85
431,40
1,40
86
372,30
1,60
87
418,40
1,80
88
445,50
1,40
89
374,40
1,60
90
413,40
1,70
91
400,40
1,80
92
418,40
1,60
93
415,20
1,50
94
389,40
0,80
95
432,40
1,60
96
402,40
1,50
97
402,40
1,90
98
388,40
1,70
99
404,40
1,50
100
451,40
1,40
101
443,50
1,30
102
429,40
1,30
103
388,40
1,78
104
415,40
1,30
105
429,40
1,30
106
384,40
1,80
107
378,30
1,80
108
404,40
1,80
109
388,40
2,10
110
431,50
1,60
111
418,40
1,60
112
416,40
1,60
113
431,50
1,60
114
399,40
1,60
115
373,20
1,70
116
413,40
1,70
117
473,50
1,40
118
345,90
2,09
119
401,40
1,30
120
389,40
1,40
121
469,50
1,40
122
431,50
1,50
123
372,40
1,70
124
445,50
1,40
125
402,40
2,00
126
402,40
2,00
127
388,40
1,80
128
404,40
1,50
129
473,50
1,30
130
403,40
1,30
131
315,70
1,61
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,61 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,95 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,78 (дд, J=5,1, 1,4 Гц, 2H), 8,13 (д, J=6,3 Гц, 2H), 7,76 (д, J=7,0 Гц, 2H), 7,57 (м, 1H), 7,47 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,09 (ушир.с, 2H).
132
302,80
1,62
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,56 (д, J=2,3 Гц, 1H), 9,04 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,79 (м, 2H), 8,49 (д, J=8,3 Гц, 1H), 8,43 (д, J=2,0 Гц, 1H), 8,19 (д, J=6,1 Гц, 2H), 7,72 (дд, J=8,4, 2,1 Гц, 1H), 2,33 (с, 3H).
133
302,80
1,90
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,63 (д, J=2,1 Гц, 1H), 9,13 (д, J=2,1 Гц, 1H), 8,85 (д, J=6,4 Гц, 2H), 8,46 (д, J=5,1 Гц, 1H), 8,42 (с, 1H), 8,30 (д, J=6,1 Гц, 2H), 7,08 (д, J=4,5 Гц, 1H), 2,42 (с, 3H).
134
395,00
1,67
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,60 (д, J=2,2 Гц, 1H), 9,00 (д, J=2,2 Гц, 1H), 8,85 (д, J=6,6 Гц, 2H), 8,41 (д, J=4,8 Гц, 1H), 8,30 (д, J=6,5 Гц, 2H), 8,00 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,67 (дд, J=8,3, 5,3 Гц, 1H), 7,49 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,33 (м, 3H), 5,30 (с, 2H).
135
302,80
0,37
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,62 (д, J=2,0 Гц, 1H), 9,00 (д, J=2,0 Гц, 1H), 8,80 (д, J=6,2 Гц, 2H), 8,70 (д, J=5,1 Гц, 1H), 8,30 (д, J=6,9 Гц, 1H), 8,18 (д, J=5,1 Гц, 2H), 7,74 (м, 1H), 2,43 (с, 3H).
136
438,10
2,46
1H ЯМР (500 МГц, CDCl<sub>3</sub>), δ 9,25 (2H, м), 8,99 (1H, с), 8,83 (1H, д), 8,20 (1H, с), 7,38 (1H, д), 6,95 (1H, д), 5,91 (2H, с), м.д.
137
367,20
2,00
500 МГц, MeOD, 7,82 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 7,25 (д, 2H), 7,11 (д, 1H), 7,78 (д, 2H), 6,18 (т, 1H), 5,80 (д, 1H)
138
412,00
1,82
139
444,40
1,80
140
416,40
1,50
141
444,50
1,60
142
432,40
1,70
143
358,40
1,40
144
374,40
1,30
145
387,50
1,30
146
415,50
1,30
147
371,20
1,50
148
417,50
1,20
149
415,50
1,30
150
461,50
1,30
151
373,40
1,20
152
441,50
1,40
153
469,50
1,40
154
469,50
1,40
155
403,40
1,40
156
362,00
1,30
157
375,40
1,10
158
389,20
1,40
159
375,40
1,20
160
401,50
1,20
161
412,50
1,10
162
451,50
1,50
163
464,20
1,20
164
441,50
1,20
165
387,40
1,10
166
401,50
1,30
167
444,20
1,60
168
423,40
1,30
169
415,50
1,10
170
390,40
1,50
171
346,30
1,30
172
374,40
1,50
173
417,50
1,40
174
445,50
1,60
175
469,50
1,50
176
441,50
1,40
177
469,50
1,40
178
302,80
1,21
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,70 (д, J=2,3 Гц, 1H), 9,13 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,93 (д, J=6,8 Гц, 2H), 8,50 (д, J=6,8 Гц, 2H), 8,37 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,83 (т, J=7,8 Гц, 1H), 7,12 (д, J=7,5 Гц, 1H), 2,56 (с, 3H)
179
373,00
1,46
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 9,64 (с, 1H), 9,16 (с, 1H), 8,84 (д, J=5,1 Гц, 2H), 8,58 (с, 1H), 8,27 (д, J=5,1 Гц, 2H), 7,59 (с, 1H), 3,73 (м, 4H), 1,65 (м, 6H)
180
361,00
1,35
500 МГц, MeOD, 8,12 (д, 1H), 7,77 (д, 1H), 7,51 (д, 2H), 7,28 (с, 1H), 6,88 (д, 2H), 5,89 (с, 1H), 2,47 (м, 4H), 1,01 (т, 6H)
181
319,30
1,19
ДМСО, 500 МГц, 9,61 (с, 1H), 9,052 (с, 1H), 8,80 (д, 2H), 8,55 (с, 1H), 8,14 (д, 2H), 7,47 (с, 1H), 2,93 (с, 3H)
182
347,30
1,37
ДМСО, 500 МГц, 9,58 (с, 1H), 9,01 (с, 1H), 8,79 (д, 2H), 8,52 (с, 1H), 8,08 (д, 2H), 7,46 (с, 1H), 4,15 (м, 1H), 1,19 (д, 6H)
183
387,40
1,64
ДМСО, 500 МГц, 9,56 (с, 1H), 9,01 (с, 1H), 8,78 (д, 2H), 8,51 (с, 1H), 8,10 (д, 2H), 7,47 (с, 1H), 1,91 (м, 2H), 1,86 (м, 2H), 1,62 (м, 1H), 1,30 (м, 6H)
184
401,40
1,76
ДМСО, 500 МГц, 9,58 (с, 1H), 9,01 (с, 1H), 8,77 (д, 2H), 8,50 (с, 1H), 8,11 (д, 2H), 7,48 (с, 1H), 3,20 (с, 2H), 1,69 (м, 6H), 1,18 (м, 3H), 0,96 (кв, 2H)
185
361,40
1,50
ДМСО, 500 МГц, 9,59 (с, 1H), 9,13 (с, 1H), 8,81 (д, 2H), 8,56 (с, 1H), 8,18 (д, 2H), 7,50 (с, 1H), 3,21 (с, 2H), 1,89 (м, 1H), 0,94 (д, 6H)
186
(400 МГц, ДМСО-d6), 3,81 (3H, с), 5,83 (2H, ушир.с), 7,05 (2H, д), 7,21 (1H, м), 7,43 (2H, т), 7,71 (2H, д), 7,86 (2H, д), 8,69 (1H, с) и 9,05 (1H, с).
187
(ДМСО), 6,05 (2H, м, NH2), 7,25 (1H, м, ArH), 7,50 (2H, м, 4×ArH), 7,90 (4H, м, 4×ArH), 8,70 (2H, д, ArH×2), 8,85 (1H, с, ArH), 9,40 (1H, с, ArH).
188
(ДМСО), 2,65 (1H, м), 2,91 (6H, ушир.с), 2,97 (3H, с), 3,63 (1H, м), 3,80 (2H, м), 7,15 (1H, т), 7,60 (2H, д), 7,87 (1H, т), 7,92 (2H, д), 8,53-8,60 (2H, м), 8,92 (1H, с), 9,32 (1H, с), 9,40 (2H, ушир.с).
189
(ДМСО), 2,69 (3H, с), 2,97 (3H, с), 3,54-3,80 (4H, м), 7,20 (1H, м), 7,48-7,61 (2H, м), 7,80-7,94 (3H, м), 8,45 (2H, ушир.с), 8,54-8,58 (2H, м), 8,88 (1H, с), 9,28 (1H, с)
190
416,60
3,73
191
416,61
3,79
(ДМСО), 1,91 (2H, м), 2,61 (2H, м), 2,96 (6H, м), 3,52 (2H, м), 7,15 (1H, т), 7,55 (2H, д), 7,86 (1H, т), 7,90 (2H, д), 8,39 (2H, ушир.с), 8,57 (2H, м), 8,91 (1H, с), 9,32 (1H, с). (ДМСО), 1,91-2,00 (2H, м), 2,58-2,64 (2H, м), 2,95-2,99 (3H, м), 3,49-3,54 (3H, ушир.с), 3,64-3,74 (2H, м), 7,15 (1H, т), 7,55 (2H, д), 7,86 (1H, т), 7,90 (2H, д), 8,39 (2H, ушир.с), 8,57 (2H, м), 8,91 (1H, с), 9,32 (1H, с); (ДМСО), 1,91 (2H, м), 2,61 (2H, м), 2,96 (6H, м), 3,52 (2H, м), 7,15 (1H, т), 7,55 (2H, д), 7,86 (1H, т), 7,90 (2H, д), 8,39 (2H, ушир.с), 8,57 (2H, м), 8,91 (1H, с), 9,32 (1H, с)
192
(ДМСО), 1,38 (9H, с), 4,17 (2H, м), 7,08-7,15 (3H, м), 7,34 (2H, д), 7,48 (1H, м), 7,78 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,52-8,58 (2H, м), 8,85 (1H, с), 9,21 (1H, с)
193
316,40
4,42
(ДМСО), 7,16 (1H, т), 7,21 (2H, ушир.с), 7,88 (1H, т), 8,01 (2H, д), 8,10 (2H, д), 8,56-8,60 (2H, м), 8,98 (1H, с), 9,40 (1H, с), 10,09 (1H, с).
194
4,14
(ДМСО), 4,55 (2H, д), 5,27 (1H, т), 7,10-7,18 (3H, м), 7,45 (2H, д), 7,79 (2H, д), 7,86 (1H, т), 8,54-8,60 (2H, м), 8,89 (1H, с), 9,23 (1H, с)
195
317,44
3,72
(ДМСО), 4,09 (2H, м), 7,19 (1H, т), 7,60 (2H, д), 7,88-7,92 (3H, м), 8,28 (2H, ушир.с), 8,55-8,59 (2H, м), 8,92 (1H, с), 9,32 (1H, с).
196
ДМСО 7,15 (1H, т, ArH), 7,20 (2H, ушир.с, NH2), 7,70 (1H, т, ArH), 7,90 (2H, д, ArH×2), 8,20 (2H, д, ArH×2), 8,60 (2H, м, ArH×2), 8,95 (1H, с, ArH), 9,40 (1H, с, ArH).
197
ДМСО 7,15 (1H, т, ArH), 7,70 (1H, т, ArH), 7,90 (2H, д, ArH×2), 8,20 (1H, д, ArH), 8,35 (1H, с, ArH), 8,60 (2H, м, ArH×2), 8,95 (1H, с, ArH), 9,40 (1H, с, ArH).
198
359,80
4,42
(ДМСО), 2,9 (2H, т), 3,6 (2H, т), 7,1-7,3 (6H, м), 7,9 (1H, т), 8,5 (2H, м), 8,8 (1H, м), 8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
199
360,80
3,80
(ДМСО), 4,3 (2H, д), 5,0 (NH2), 6,5 (2H, д), 7,1 (2H, д), 7,2 (1H, м), 7,3 (NH2), 7,9 (1H, м), 8,5 (2H, м), 8,9 (NH), 9,0 (1H, м), 9,3 (1H, с)
200
346,70
3,75
(ДМСО), 4,6 (2H, м), 7,2 (1H, м), 7,3 (NH2), 7,4 (1H, м), 7,8 (1H, м), 7,9 (1H, м), 8,4-8,7 (4H, м), 8,9 (1H, с), 9,2 (1H, м), 9,3 (NH)
201
452,90
4,65
(ДМСО), 1,1 (2H, м), 1,4 (9H, м), 1,7 (3H, м), 2,7 (2H, м), 4,0 (2H, м), 7,1 (1H, м), 7,3 (NH2), 7,9 (1H, м), 8,4-8,6 (3H, м), 8,9 (1H, с), 9,3 (1H, с)
202
317,44
3,82
(ДМСО), 4,09-4,17 (2H, м), 7,20 (1H, т), 7,50 (1H, д), 7,58 (1H, т), 7,88 (1H, д), 7,91 (1H, т), 8,02 (1H, с), 8,40 (2H, ушир.с), 8,58-8,62 (2H, м), 8,92 (1H, с), 9,29 (1H, с).
203
336,44
4,85
(ДМСО), 4,84 (2H, с), 7,11-7,17 (3H, м), 7,58 (2H, д), 7,82-7,86 (3H, м), 8,53-8,56 (1H, м), 8,58 (1H, д), 8,89 (1H, с), 9,27 (1H, с)
204
269,70
3,50
(ДМСО), 2,8 (3H, д), 7,1 (1H, м), 7,3 (2H, ушир.с), 7,9 (1H, м), 8,5-8,7 (3H, м), 8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
205
311,74
4,24
(ДМСО), 0,9 (6H, м), 1,9 (1H, м), 3,1 (2H, м), 7,1 (1H, м), 7,2 (NH2), 7,9 (1H, т), 8,5-8,6 (3H, м), 8,9 (1H, с), 9,3 (1H, с)
206
338,75
3,30
(ДМСО), 0,8 (2H, м), 1,6 (1H, м), 2,0 (2H, м), 2,9 (2H, м), 3,1-3,3 (2H, м), 7,2 (1H, м), 8,0 (1H, м), 8,4 (1H, м), 8,6 (1H, м), 8,7 (NH2), 8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
207
345,75
4,30
(ДМСО), 4,6 (2H, д), 7,2 (1H, м), (7,3,2H, с), 7,4 (3H, м), 7,9 (1H, м), 8,5 (2H, м), 8,9 (1H, с), 9,2 (1H, м), 9,3 (NH, с)
208
387,54
4,59
(ДМСО), 2,40 (4H, м), 3,52 (2H, с), 3,59 (4H, т), 7,09-7,15 (3H, м), 7,45 (2H, д), 7,78 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,55 (1H, д), 8,59 (1H, д), 8,86 (1H, с), 9,22 (1H, с).
209
(ДМСО), 7,10 (3H, м, ARH, NH2), 7,25 (2H, м, ArH×2), 7,40 (3H, м, ArH×3), 7,60 (2H, м, ArH×2), 7,85 (1H, т, ArH), 8,55 (2H, м, ArH×2), 8,85 (1H, с, ArH), 9,10 (1H, с, ArH).
210
336,42
4,85
(ДМСО), 4,84 (2H, с), 7,12-7,17 (3H, м), 7,47-7,56 (2H, м), 7,81 (1H, д), 7,86 (1H, т), 7,91 (1H, с), 8,56 (1H, д), 8,59 (1H, д), 8,86 (1H, с), 9,24 (1H, с).
211
1H ЯМР (ДМСО), 2,55 (1H, м), 2,89 (4H, м), 3,02 (6H, ушир.с), 3,82 (2H, ушир.с), 3,96 (2H, с), 5,98 (2H, с), 7,14 (1H, м), 7,22-7,26 (2H, м), 7,31-7,32 (2H, м), 7,98 (1H, м), 8,14 (1H, м), 8,73 (1H, м), 9,01 (1H, м), 9,32 (1H, с). 1H ЯМР (ДМСО), 2,55 (1H, м), 2,89 (4H, м), 3,02 (6H, ушир.с), 3,82 (2H, ушир.с), 3,96 (2H, с), 5,98 (2H, с), 7,14 (1H, м), 7,22-7,26 (2H, м), 7,31-7,32 (2H, м), 7,98 (1H, м), 8,14 (1H, м), 8,73 (1H, м), 9,01 (1H, м), 9,32 (1H, с)
212
ДМСО 6,50 (1H, с, ArH), 7,10 (2H, с, NH2), 7,15 (1H, т, ArH), 7,40 (1H, д, ArH), 7,55 (2H, дд, ArH×2), 7,85 (1H, т, ArH), 8,00 (1H, с, ArH), 8,50 (1H, м, ArH), 8,60 (1H, д, ArH), 8,90 (1H, с, ArH), 9,15 (1H, с, ArH).
213
(ДМСО), 3,00 (2H, с, CH2), 3,30 (2H, д, CH2), 6,95 (2H, с, NH2), 7,10 (1H, т, ArH), 7,30 (5H, м, ArH×5), 7,80 (1H, т, ArH), 8,40 (1H, с, ArH), 8,50 (2H, м, ArH×2), 8,70 (1H, с, ArH).
214
345,52
4,30
(ДМСО), 2,75 (6H, с), 4,32 (2H, с), 7,18 (1H, т), 7,68 (2H, д), 7,87-7,98 (3H, м), 8,55-8,60 (2H, м), 8,93 (1H, с), 9,34 (1H, с), 10,40 (2H, м).
215
345,52
4,32
(ДМСО), 2,75 (6H, д), 4,36 (2H, д), 7,25 (1H, т), 7,59 (1H, т), 7,61 (1H, т), 7,92-8,00 (2H, м), 8,13 (1H, с), 8,57 (1H, д), 8,60 (1H, д), 8,99 (1H, с), 9,38 (1H, с), 10,83 (2H, м).
216
(ДМСО), 2,65 (3H, с, CH3), 3,85 (3H, с, CH3), 7,10 (5H, м, ArH×3, NH2), 7,50 (2H, д, ArH×2), 7,85 (1H, т, ArH), 8,40 (1H, с, ArH), 8,55 (1H, д, ArH), 8,65 (1H, д, ArH).
217
386,56
2,97
(ДМСО), 2,56-2,65 (4H, м), 3,09-3,14 (4H, м), 3,61 (2H, с), 7,10-7,18 (2H, м), 7,43 (2H, д), 7,81 (2H, д), 7,85 (1H, т), 8,53-8,61 (3H, м), 8,88 (1H, с), 9,22 (1H, с).
218
(ДМСО), 3,85 (3H, с, CH3), 7,10 (2H, д, ArH×2), 7,20 (1H, т, ArH), 7,40 (4H, м, ArH×2, NH2), 7,90 (1H, т, ArH), 8,50 (1H, с, ArH), 8,60 (2H, м, ArH×2).
219
1H ЯМР (ДМСО), 3,81 (3H, с), 6,14 (2H, ушир.с), 7,07 (2H, д), 7,74 (2H, д), 7,96 (2H, д), 8,53 (2H, д), 8,81 (1H, с), 9,14 (1H, с)
220
332,73
3,73
(ДМСО), 2,3 (3H, с), 3,9 (3H, с), 7,0 (NH2), 7,1 (2H, м), 7,6-7,8 (3H, м), 8,3 (1H, с), 8,4 (1H, м), 8,8 (1H, с), 9,2 (1H, с).
221
318,42
3,22
4,60 (2H, с), 7,10-7,16 (3H, м), 7,38 (1H, д), 7,49 (1H, т), 7,68 (1H, д), 7,71 (1H, с), 7,85 (1H, т), 8,53-8,57 (1H, м), 8,59 (1H, д), 8,85 (1H, С), 9,19 (1H, С)
222
(ДМСО), 3,30 (4H, с, CH2×2), 3,50 (4H, с, CH2×2), 7,05 (1H, д, ArH), 7,15 (1H, д, ArH), 7,30 (1H, д, ArH), 7,40 (2H, м, ArH×2), 7,90 (1H, т, ArH), 8,55 (2H, м, ArH×2), 8,75 (2H, с, NH2), 8,90 (1H, с, ArH), 9,25 (1H, с,ArH).
223
386,52
3,05
(ДМСО), 2,31-2,37 (4H, м), 2,70 (4H, т), 3,50 (2H, с), 7,08-7,13 (3H, м), 7,33 (1H, д), 7,46 (1H, т), 7,68-7,71 (2H, м), 7,83 (1H, т), 8,54-8,60 (2H, м), 8,83 (1H, с), 9,20 (1H, с).
224
400,54
3,15
(ДМСО), 1,68 (2H, м), 2,58 (2H, м), 2,64 (2H, м), 2,75 (2H, м), 2,80 (2H, м), 3,68 (2H, с), 7,10 (3H, м), 7,46 (2H, д), 7,76 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,54 (1H, д), 8,57 (1H, д), 8,86 (1H, с), 9,20 (1H, с)
225
387,50
3,50
(ДМСО), 2,39-2,43 (4H, м), 3,54 (2H, с), 3,59 (4H, т), 7,09-7,16 (3H, м), 7,37 (1H, д), 7,48 (1H, т), 7,68-7,73 (2H, м), 7,85 (1H, т), 8,56-8,60 (2H, м), 8,87 (1H, с), 9,22 (1H, с).
226
(ДМСО), 1,3-1,4 (1H, м), 1,9-2,3 (3H, м), 2,5-2,6 (1H, м), 2,6-2,7 (1H, м), 3,6-3,7 (2H, м), 7,0-7,2 (2,5H, м), 7,3-7,4 (1H, м), 7,4-7,5 (1H, м), 7,6-7,7 (2H, м), 7,8-7,9 (1H, м), 8,5-8,6 (2H, м), 8,8-8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
227
(ДМСО), 1,3-1,4 (1H, м), 1,6-2,2 (3H, м), 2,5-2,6 (1H, м), 2,6-2,7 (1H, м), 3,6-3,7 (2H, м), 7,0-7,2 (2,5H, м), 7,3-7,4 (1H, м), 7,4-7,5 (1H, м), 7,6-7,7 (2H, м), 7,8-7,9 (1H, м), 8,5-8,6 (2H, м), 8,8-8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
228
(ДМСО), 1,6-1,7 (2H, м), 2,5-2,9 (8H, м), 3,7 (2H, м), 7,0-7,2 (2,8H, м), 7,3-7,4 (1H, м), 7,4-7,5 (1H, м), 7,7 (2H, м), 7,8-7,9 (1H, м), 8,5-8,6 (2H, м), 8,8-8,9 (1H, с), 9,2 (1H, с)
229
(ДМСО), 1,2-1,3 (2H, м), 1,6-1,7 (2H, м), 1,9-2,0 (2H, м), 2,4-2,6 (1H, м), 2,7-2,9 (2H, м), 3,5-3,6 (2H, м), 7,0-7,2 (3H, м), 7,3 (1H, м), 7,4-7,5 (1H, м), 7,7-7,8 (2H, м), 7,8-7,9 (1H, м), 8,5-8,6 (2H, м), 8,8 (1H, м), 9,2 (1H, м)
230
(ДМСО), 1,60 (2H, квин.), 2,12 (3H, с), 2,27 (2H, ушир.с), 2,38 (2H, т), 2,50 (3H, м), 3,49 (2H, с), 7,08-7,14 (3H, м), 7,40 (2H, д), 7,77 (2H, д), 7,85 (1H, т), 8,54-8,59 (2H, м), 8,86 (1H, с), 9,20 (1H, с).
231
(ДМСО), 1,40-1,48 (1H, м), 2,00-2,10 (1H, м), 2,22 (дд), 2,41-2,49 (2H, м), 2,58-2,69 (2H, м), 3,37-3,43 (2H, м), 3,58 (2H, д), 3,64 (2H, д), 7,09-7,15 (3H, м), 7,42 (2H, д), 7,75 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,53-8,59 (2H, м), 8,86 (1H, с), 9,21 (1H, с).
232
(ДМСО), 1,74-1,79 (2H, м), 2,22-2,28 (2H, м), 2,95 (2H, т), 3,36-3,40 (2H, м), 4,18-4,24 (2H, м), 7,09-7,20 (2H, м), 7,14 (1H, т), 7,62 (2H, д), 7,86 (1H, т), 8,93 (2H, д), 8,53-8,58 (2H, м), 8,89 (1H, с), 9,29 (1H, с).
233
(ДМСО), 1,40-1,48 (1H, м), 2,00-2,10 (1H, м), 2,22 (дд), 2,41-2,49 (2H, м), 2,58-2,69 (2H, м), 3,37-3,43 (2H, м), 3,58 (2H, д), 3,64 (2H, д), 7,09-7,15 (3H, м), 7,42 (2H, д), 7,75 (2H, д), 7,84 (1H, т), 8,53-8,59 (2H, м), 8,86 (1H, С), 9,21 (1H, С).
234
(ДМСО), 1,48-1,60 (2H, м), 1,81-1,92 (2H, м), 1,97-2,08 (2H, м), 2,81-2,90 (1H, м), 2,95-3,09 (1H, м), 3,48-3,59 (2H, м), 7,10-7,18 (3H, м), 7,38-7,44 (2H, м), 7,75-7,89 (3H, м), 8,54-8,60 (2H, м), 8,88 (1H, ушир.с), 9,22 (1H, ушир.с).
235
331,80
3,23
(ДМСО), 7,0 (NH2), 7,1 (1H, м), 7,5-7,7 (3H, м), 7,9 (H, м), 8,0 (2H, м), 8,5 (2H, м), 8,7 (1H, с), 9,4 (1H, с), 10,7 (NH)
236
331,84
2,96
(ДМСО), 1,37 (1H, с), 2,29 (3H, с), 3,70 (2H, с), 7,08-7,14 (3H, м), 7,43 (2H, д), 7,75 (2H, д), 7,85 (1H, т), 8,55 (1H, д), 8,58 (1H, д), 8,88 (1H, с), 9,20 (1H, с).
237
294,73
3,22
(ДМСО), 1,49 (6H, с), 5,54 (1H, с), 7,12-7,19 (3H, м), 7,85 (1H, т), 8,44 (1H, с), 8,50 (1H, д), 8,56 (1H, д), 9,01 (1H, с).
238
266,63
2,95
(ДМСО), 4,33 (2H, д), 5,43 (1H, т), 7,10-7,20 (3H, м), 7,82 (1H, т), 8,47-8,60 (3H, м), 9,09 (1H, с).
239
286,69
2,69
(ДМСО), 3,83 (3H, с), 7,08 (2H, д), 7,34 (2H, ушир.с), 7,80 (2H, д), 9,08 (1H, с), 9,37 (1H, с)
240
256,68
2,54
(ДМСО), 3,79 (3H, с), 7,02 (2H, д), 7,64 (2H, д), 8,49 (1H, с), 8,84 (1H, с)
241
381,40
1,59
ДМСО, 500 МГц, 9,73 (с, 1H), 9,45 (с, 1H), 9,101 (с, 1H), 8,82 (д, 2H), 8,66 (с, 1H), 8,15 (д, 2H), 7,93 (с, 1H), 7,73 (д, 2H), 7,38 (т, 2H), 7,14 (т, 1H)
242
411,40
1,56
ДМСО, 500 МГц, 9,61 (с, 1H), 9,02 (с, 1H), 8,84 (д, 2H), 8,58 (с, 1H), 8,24 (д, 2H), 7,81 (с, 1H), 7,77 (д, 1H), 7,19 (т, 1H), 7,14 (д, 1H), 7,00 (т, 1H), 3,86 (с, 3H)
243
375,40
1,56
ДМСО, 500 МГц 9,61 (с, 1H), 9,12 (с, 1H), 8,80 (д, 2H), 8,55 (с, 1H), 8,19 (д, 2H), 7,58 (с, 1H), 3,51 (м, 2H), 3,18 (с, 3H), 2,11 (м, 1H), 0,96 (д, 6H)
244
375,40
1,52
ДМСО, 500 МГц, 9,63 (с, 1H), 9,12 (с, 1H), 8,79 (д, 2H), 8,57 (с, 1H), 8,21 (д, 2H), 7,58 (с, 1H), 3,66 (м, 2H), 3,50 (м, 2H), 1,68 (кв, 2H), 1,21 (т,3H), 0,96 (т, 3H)
245
362,40
1,40
246
375,40
1,20
247
463,20
1,30
248
417,00
1,20
249
461,50
1,20
250
412,50
1,30
251
388,40
1,40
252
409,40
1,20
253
444,50
1,60
254
401,50
1,10
255
451,50
1,40
256
441,50
1,20
257
374,40
1,30
258
358,40
1,30
259
372,20
1,40
260
430,50
1,40
261
441,50
1,50
262
388,40
0,70
263
423,20
1,30
264
464,20
1,30
265
441,50
1,20
266
417,20
1,30
267
401,50
1,20
268
386,20
1,30
269
415,50
1,30
270
402,50
1,30
271
416,50
1,30
272
364,50
1,30
273
284,30; 284,40
1,61; 1,53
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,71 (с, 1H), 8,37 (д, J=1,6 Гц, 2H), 7,45 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 6,89 (с, 2H), 4,10-4,07 (м, 1H), 2,30 (с, 3H), 1,16 (д, J=6,4 Гц, 3H).
274
347,80
2,55
275
399,70
2,86
276
310,30; 310,44
1,80
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,90 (м, 2H), 8,65 (с, 1H), 8,52 (д, J=1,7 Гц, 1H), 3,81 (м, 4H), 2,35 (с, 3H), 1,69 (м, 2H), 1,63 (м, 4H).
277
296,30
1,80
278
326,30
1,60
279
318,30
1,90
280
245,70
2,20
281
273,40
2,73
ДМСО, 500 МГц, 8,70 (с, 2H), 8,48 (д, 1H), 8,31 (с, 1H), 2,59 (с, 3H), 2,31 (с, 3H)
282
298,50
1,95
H ЯМР (500 МГц, CDCl<sub>3</sub>), 9,93 (ушир.с, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,29 (с, 1H), 7,86 (с, 1H), 3,69-3,67 (м, 1H), 2,43 (с, 3H), 1,85-1,68 (м, 2H), 1,40 (д, J=6,5 Гц, 3H), 1,05 (т, J=7,4 Гц, 3H),
283
300,28
1,41
H ЯМР (500 МГц, MeOD), 8,65 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,48 (с, 1H), 7,15 (ушир.с, 1H), 4,29 (ушир.с, 1H), 3,67-3,60 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 1,29 (д, J=6,7 Гц, 3H)
284
339,36
1,19
285
415,44
1,51
H ЯМР (500 МГц, MeOD), 8,67 (с, 1H), 8,63 (с, H), 8,52 (с, 1H),), 7,54-7,50 (м, 5H), 7,07 (с, 1H), 4,34 (с, 2H), 3,61 (м, 2H), 3,33-3,30 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 2,33 (м, 2H), 2,31 (м, 1H), 1,91 (м, 2H)
286
401,44
1,48
H ЯМР (500 МГц, MeOD), 8,67 (с, 1H), 8,63 (с, H), 8,52 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 7,54-7,50 (м, 5H), 7,07 (с, 1H), 3,61 (м, 2H), 3,33-3,30 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 2,33 (м, 2H), 2,31 (м, 1H), 1,91 (м, 2H)
287
314,13
1,52
H ЯМР (500 МГц, MeOD), 8,66 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,51 (1H), 7,27 (с, 1H), 4,38 (м, 1H), 3,71-3,62 (м, 2H), 2,65 (с, 3H), 1,62-1,59 (м, 2H), 1,02 (т, J=7,4 Гц, 3H)
288
314,40
1,69
H ЯМР (500 МГц, MeOD), 8,65 (с, 1H), 8,54 (с, 1H), 8,50 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 3,72-3,62 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 2,02 (д, J=10,5 Гц, 1H), 1,80-1,75 (м, 1H), 1,64-1,58 (м, 1H), 1,02 (т, J=7,4 Гц, 3H)
289
282,30
1,60
290
296,30
1,70
291
324,30
2,00
292
314,30
1,60
293
300,30
1,40
294
298,30
1,80
295
300,30
1,40
296
312,30
2,00
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,84 (с, 2H), 8,53 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 2,34 (м, 4H), 1,81 (д, J=6,6 Гц, 1H), 1,14-1,11 (м, 3H), 0,90 (м, 6H).
297
352,40
2,30
298
342,30
1,80
299
310,40
1,73
300
346,40
2,17
301
346,40
2,21
302
340,30
2,70
303
372,40
3,30
304
400,40
3,70
305
379,40
2,70
306
326,30
2,20
307
390,40
3,20
308
374,30
1,90
309
353,40
1,90; 1,40
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,93 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,54 (д, J=1,9 Гц, 1H), 7,48 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 3,32-3,25 (м, 2H), 2,47 (м, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,00-1,96 (м, 1H), 1,88-1,83 (м, 2H), 1,72 (м, 1H), 1,52 (с, 1H).
310
270,10
1,30
311
323,40
1,12
312
337,20
1,20
313
339,40
0,90
314
337,42
0,90
315
366,50
1,00
316
297,30
1,00
317
339,40
1,30
318
311,40
1,10
319
325,40
1,20
320
353,50
1,30
321
382,50
1,10
322
309,20
1,20
323
351,50
1,40
324
323,20
1,30
325
339,40
1,00
326
327,40
1,10
327
311,40
1,90
328
355,40
1,20
329
353,40
1,20
330
409,50
1,40
331
380,50
1,10
332
310,30
1,90
333
336,40
2,10
334
416,50
2,20
335
312,30
1,50
336
416,50
2,20
337
311,43
1,48
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6), 8,80 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,44 (д, J=1,8 Гц, 1H), 8,09 (м, 3H), 7,35 (с, 1H), 3,99 (м, 1H), 3,81 (м, 1H), 3,79-3,58 (м, 2H), 2,32 (с, 3H), 2,19-2,13 (м, 1H), 1,93-1,87 (м, 1H).
338
409,50
1,80
339
324,30
2,00
340
340,30
1,60
341
353,40
1,40
342
326,30
1,50
343
407,40
1,68
344
353,40
1,50
345
270,30
1,50
346
339,30
1,30
347
312,30
1,40
348
395,10
1,70
349
296,30
1,70
350
373,30
1,50
351
346,20
1,50
352
429,40
1,90
353
373,30
1,50
Пример 13: Исследование ингибирования ITK (радиометрическое)
2
Проводили скрининг соединений по их способности ингибировать Itk, используя анализ встраивания радиоактивного фосфата. Анализы осуществляли в смеси 100 мМ HEPES (pH 7,5), 10 мМ MgCl, 25 мМ NaCl, 0,01% BSA и 1 мМ DTT. Окончательная концентрация субстратов составляла 15 мкМ [γ-33P]ATP (400 мКи 33P ATP/ммоль ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals) и 2 мкМ пептида (белок SAM68 D332-443). Анализы осуществляли при 25°C в присутствии 30 нМ Itk. Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 50 мкл основного раствора и затем добавляли 1,5 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 15 мкМ с 2-кратными серийными разведениями) (конечная концентрация ДМСО составляла 1,5%). Планшет заранее инкубировали в течение 10 минут при 25°C и реакцию начинали, добавляя 50 мкл [γ-33P]ATP (конечная концентрация 15 мкМ).
Реакцию останавливали через 10 минут, добавляя 50 мкл смесь TCA/ATP (20% TCA, 0,4 мМ ATP). 96-луночный планшет с фильтром Unifilter GF/C (Perkin Elmer Life Sciences, Cat no. 6005174) обрабатывали 50 мкл водой Milli Q и затем добавляли всю реакционную смесь (150 мкл). Планшет промывали 200 мкл воды Milli Q и затем 200 мл смеси TCA/ATP (5% TCA, 1 мМ ATP). Этот цикл повторяли еще 2 раза. После сушки в лунки добавляли 30 мкл коктейля для жидкой сцинтилляции Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) и затем проводили сцинтилляционный анализ (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).
50
Данные IC рассчитывали с помощью нелинейного анализа регрессии начальной скорости реакции, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).
2
Анализы проводили в смеси 20 мМ MOPS (pH 7,0), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA и 1 мМ DTT. Конечные концентрации в анализе составляли 7,5 мкМ [γ-33P]ATP (400 мКи 33P ATP/ммоль ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals) и 3 мкМ пептидов (белок SAM68 D332-443). Анализы осуществляли при 25°C в присутствии 50 нМ Itk. Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 50 мкл основного раствора и затем добавляли 2 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 50 мкМ с 2-кратными серийными разведениями) (конечная концентрация ДМСО составляла 2%). Планшет заранее инкубировали в течение 10 минут при 25°C и реакцию начинали, добавляя 50 мкл [γ-33P]ATP (конечная концентрация 7,5 мкМ).
Реакцию останавливали через 10 минут, добавляя 100 мл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20. 96-луночный планшет с фосфоцеллюлозным фильтром для мультискрининга (Millipore, Cat no. MAPHN0B50) обрабатывали 100 мкл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20, затем добавляли 170 мл смеси, останавливающей реакцию. Планшет промывали 4×200 мкл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20. После сушки в лунки добавляли 30 мкл коктейля для жидкой сцинтилляции Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) и затем проводили сцинтилляционный анализ (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).
Данные Ki(app) рассчитывали с помощью нелинейного анализа регрессии начальной скорости реакции, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
Пример 14: Анализ ингибирования ITK (UV)
Проводили скрининг соединений по их способности ингибировать Itk, используя стандартный анализ связывания с ферментом (Fox et al., Protein SdL, (1998) 7, 2249).
2
Анализы осуществляли в смеси 20 мМ MOPS (pH 7,0), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA, 1 мМ DTT, 2,5 мМ фосфоенолпирувата, 300 мкМ NADH, 30 мкг/мл пируваткиназы и 10 мкг/мл лактатдегидрогеназы. Окончательная концентрация субстратов в анализе составляла 100 мкМ ATP (Sigma Chemicals) и 3 мкМ пептида (Biotinylated SAM68 D332-443). Анализы осуществляли при 25°C в присутствии 100 нМ Itk.
Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 60 мкл основного раствора и затем добавляли 2 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 15 мкМ). Планшет заранее инкубировали в течение 10 минут при 25°C и реакцию начинали, добавляя 50 мкл ATP. Исходную скорость реакции определяли с помощью планшет-ридера Molecular Devices SpectraMax Plus в течение 10 минут. Данные IC50 и Ki рассчитывали с помощью нелинейного анализа регрессии начальной скорости реакции, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
Обычно соединения настоящего изобретения, включая соединения, перечисленные в таблице 1, эффективны для ингибирования ITK.
Пример 15: Анализ ингибирования BTK
2
Проводили скрининг соединений по их способности ингибировать Btk, используя анализ встраивания радиоактивного фосфата Vertex Pharmaceuticals. Анализы осуществляли в смеси 20 мМ MOPS (pH 7,0), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA и 1 мМ DTT. Окончательная концентрация субстратов в анализе составляла 50 мкМ [γ-33P]ATP (200 мКи 33P ATP/ммоль ATP, Amersham Pharmacia Biotech, Amersham, UK/Sigma Chemicals) и 2 мкМ пептида (SAM68 D332-443). Анализы осуществляли при 25°C в присутствии 25 нМ Btk. Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 75 мкл основного раствора и затем добавляли 2 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 15 мкМ) (конечная концентрация ДМСО составляла 2%). Планшет заранее инкубировали в течение 15 минут при 25°C и реакцию начинали, добавляя 25 мкл пептида (конечная концентрация 2 мкМ). Перед добавлением пептида определяли показатели фона, добавляя 100 мл 0,2М фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN в контрольные лунки, содержащие основной буфер для анализа и ДМСО.
Реакцию останавливали через 10 минут, добавляя 100 мл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20. 96-луночный планшет с фосфоцеллюлозным фильтром для мультискрининга (Millipore, Cat no. MAPHN0B50) обрабатывали 100 мкл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20, затем добавляли 170 мл смеси, останавливающей реакцию. Планшет промывали 4×200 мкл 0,2M фосфорной кислоты + 0,01% TWEEN 20. После сушки в лунки добавляли 30 мкл коктейля для жидкой сцинтилляции Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) и затем проводили сцинтилляционный анализ (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).
После удаления среднего значения фона для всех результатов данные Ki(app) рассчитывали с помощью нелинейного анализа регрессии начальной скорости реакции, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
2
Проводили скрининг соединений по их способности ингибировать Btk, используя анализ с фосфотирозином AlphaScreen™, Vertex Pharmaceuticals. Анализы осуществляли в смеси 20 мМ MOPS (pH 7,0), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA и 1 мМ DTT. Окончательная концентрация субстратов в анализе составляла 50 мкМ ATP (Sigma Chemicals) и 2 мкМ пептида (биотинилированный SAM68 D332-443). Анализы осуществляли при 25°C в присутствии 25 нМ Btk. Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 37,5 мкл основного раствора и затем добавляли 1 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 15 мкМ) (конечная концентрация ДМСО составляла 2%). Планшет заранее инкубировали в течение 15 минут при 25°C и реакцию начинали, добавляя 12,5 мкл пептида (конечная концентрация 2 мкМ). Перед инициированием реакции Biotin-SAM68 определяли показатели фона, добавляя 5 мкл 500 мМ EDTA в контрольные лунки, содержащие основной буфер для анализа и ДМСО.
2
Реакцию останавливали через 30 минут, разбавляя реакционную среду в 225 раз в буфере MOPS (20 мМ MOPS (pH 7,0), 1 мМ DTT, 10 мМ MgCl, 0,1% BSA), содержащем 50 мМ EDTA для доведения конечной концентрации пептида до 9 нМ.
AlphaScreen™ реагенты получали в соответствии с инструкцией производителя (AlphaScreen™ набор для анализа с фосфотирозином (P-Tyr-100), PerkinElmer, номер в каталоге 6760620C). В затемненном помещении в каждую лунку 96-луночной белой планшеты половинного размера (Corning Inc. - COSTAR 3693) помещали 20 мкл AlphaScreen™ реагентов вместе с 30 мкл буфера для остановки реакции, разводя киназную реакцию. Планшеты инкубировали в темноте в течение 60 минут и затем считывали с помощью планшет-ридера Fusion Alpha (Perkin Elmer).
После вычитания средних значений фона из данных всех результатов данные
Ki(app) рассчитывали на основании нелинейного анализа регрессии, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
Обычно соединения настоящего изобретения, включая соединения, перечисленные в таблице 1, эффективны для ингибирования Btk.
Пример 16: Анализ ингибирования RLK
2
Проводили скрининг соединений по их способности ингибировать Rlk, используя стандартный анализ связывания с ферментом (Fox et al., Protein Sci., (1998) 7, 2249). Анализы осуществляли в смеси 20 мМ MOPS (pH 7,0), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA и 1 мМ DTT. Окончательная концентрация субстратов в анализе составляла 100 мкМ ATP (Sigma Chemicals) и 10 мкМ пептида (Poly Glu:Tyr 4:1). Анализы осуществляли при 30°C в присутствии 40 нМ Rlk. Конечные концентрации компонентов анализа связывания фермента составляли 2,5 мМ фосфоенолпирувата, 300 мкМ NADH, 30 мкг/мл пируваткиназы и 10 мкг/мл лактатдегидрогиназы.
Основной буферный раствор для анализа готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое соединение, представляющее интерес. В 96-луночный планшет помещали 60 мкл основного раствора и затем добавляли 2 мкл основного раствора ДМСО, содержащего дублированные серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 7,5 мкМ). Планшет заранее инкубировали в течение 10 минут при 30°C и реакцию начинали, добавляя 50 мкл ATP. Исходную скорость реакции определяли с помощью планшет-ридера Molecular Devices SpectraMax Plus в течение 10 минут. Данные IC50 и Ki рассчитывали с помощью нелинейного анализа регрессии начальной скорости реакции, используя программный пакет Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
Обычно соединения настоящего изобретения, включая соединения, перечисленные в таблице 1, эффективны для ингибирования RLK.
Пример 17: Анализы ингибирования JAK3
2
Ингибирование соединений JAK анализировали с помощью способа, описанного G.R.Brown, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, vol.10, pp 575-579, следующим образом. В планшеты Maxisorb, заранее покрытые при 4°C Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1, затем промытые забуференным фосфатом солевым раствором 0,05% и Tween (PBST), добавляли 2 мкМ ATP, 5 мМ MgCl и раствор соединения в ДМСО. Реакцию начинали с помощью фермента JAK и планшеты инкубировали в течение 60 минут при 30°C. Планшеты затем промывали PBST, добавляли 100 мкл HRP-конъюгированного 4G10 антитела и планшет инкубировали в течение 90 минут при 30°C. Планшет снова промывали PBST, добавляли 100 мкл раствора TMB и планшеты инкубировали еще 30 минут при 30°C. Для остановки реакции добавляли серную кислоту (100 мкл IM) и планшет считывали при 450 нм с получением оптической плотности для определения значений Ki.
2
4
4
33
Ингибирование соединения JAK также может быть проанализировано следующим образом. Проводили скрининг соединений на их способность ингибировать JAK3, используя анализ, описанный ниже. Реакции осуществляли в киназном буфере, содержащем 100 мМ HEPES (pH 7,4), 1 мМ DTT, 10 мМ MgCl, 25 мМ NaCl и 0,01% BSA. Концентрации субстрата в анализе составляли 5 мкМ ATP (200 мкКи/мкмоль ATP) и 1 мкМ поли(Glu)Tyr. Реакции проводили при 25°C и 1 нМ JAK3. В каждую лунку поликарбонатной 96-луночной планшеты добавляли 1,5 мкл вероятного ингибитора JAK3 наряду с 50 мкл киназного буфера, содержащего 2 мкМ поли(Glu)Tyr и 10 мкМ ATP. Смесь перемешивали и для начала реакции добавляли 50 мкл киназного буфера, содержащего 2 нМ JAK3. Через 20 минут при комнатной температуре (25°C) реакцию останавливали с помощью 50 мкл 20% трихлоруксусной кислоты (TCA), которая также содержала 0,4 мМ ATP. Все содержимое каждой лунки затем переносили в 96-луночный планшет со стекловолоконным фильтром, используя коллектор клеток TomTek. После промывки добавляли 60 мкл сцинтилляционной жидкости и встраивание P обнаружили на Perkin Elmer TopCount.
Обычно соединения настоящего изобретения, включая соединения, перечисленные в таблице 1, эффективны для ингибирования JAK (например, JAK3).
Пример 18: Анализ ингибирования Aurora-B (Aurora-1)
2
33
33
Раствор аналитического буфера готовили из 25 мМ HEPES (pH 7,5), 10 мМ MgCl, 0,1% BSA и 10% глицерина. В аналитическом буфере готовили раствор 22 нМ Aurora-B, также содержащий 1,7 мМ DTT и 1,5 мМ Kemptide (LRRASLG). К 22 мкл раствора Aurora-B в 96-луночные планшеты добавляли 2 мкл основного раствора соединения в ДМСО и смесь останавливали уравновешиваться на 10 минут при 25°C. Ферментативную реакцию начинали, добавляя 16 мкл основного раствора [γ-P]-ATP (~20 нКи/мкл), полученного в аналитическом буфере, до конечной концентрации 800 мкМ. Реакцию останавливали через 3 часа, добавляя 16 мкл 500 мМ фосфорной кислоты, и уровни встраивания P в пептидный субстрат определяли следующим способом.
33
33
Фосфоцеллюлозный 96-луночный планшет (Millipore, Cat no. MAPHNOB50) заранее обрабатывали 100 мкл 100 мМ фосфорной кислоты и затем добавляли ферментативную реакционную смесь (40 мкл). Раствор оставляли для пропитки на фосфоцеллюлозной мембране в течение 30 минут и планшет затем промывали четыре раза 200 мкл 100 мМ фосфорной кислотой. К каждой лунке сухого планшета добавляли 30 мкл коктейля для жидкой сцинтилляции Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) перед проведением сцинтилляционного анализа (сцинтилляционный счетчик 1450 Microbeta, Wallac). Уровни фона радиоактивности неферментного катализа определяли, добавляя 16 мкл 500 мМ фосфорной кислоты к контрольным лункам, содержащим все компоненты анализа (для денатурации фермента) и затем добавляя раствор [γ-P]-ATP. Уровни встраивания P, катализируемого ферментом, рассчитывали, вычитая средние значения фона из результатов для каждой концентрации ингибитора. Для каждого Ki получали 8 дублированных результатов, обычно охватывающих концентрации соединения в области от 0 до 10 мкМ (основной раствор ДМСО получали из начального основного раствора соединений 10 мМ с последующими 1:2,5 серийными разведениями). Значения Ki рассчитывали из данных первоначальной скорости, используя нелинейную регрессию, применяя программное обеспечение Prism (Prism 3,0, Graphpad Software, San Diego, CA).
Пример 19: Анализ ингибирования Aurora-A (Aurora-2)
2
Соединения скринировали на их способность ингибировать Aurora-2, используя стандартный способ связывания с ферментом (Fox et al., Protein ScL, (1998) 7, 2249). Анализ осуществляли в смеси 100 мМ Hepes (pH 7,5), 10 мМ MgCl, 1 мМ DTT, 25 мМ NaCl, 2,5 мМ фосфоенолпируват, 300 мкМ NADH, 30 мкг/мл пируваткиназы и 10 мкг/мл лактатдегидрогеназы. Конечные концентрации субстрата в анализе составляли 400 мкМ ATP (Sigma Chemicals) и 570 мкМ пептида (Kemptide, American Peptide, Sunnyvale, CA). Анализ проводили при 30°C и в присутствии 40 нМ Aurora-2.
Основной раствор аналитического буфера готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая Aurora-2 и исследуемое интересующее соединение. 55 мкл основного раствора помещали в 96-луночный планшет и затем добавляли 2 мкл основного раствора ДМСО, содержащего серийные разведения исследуемого соединения (обычно начиная с конечной концентрации 7,5 мкМ). Планшет предварительно инкубировали в течение 10 минут при 30°C и реакцию начинали, добавляя 10 мкл Aurora-2. Первоначальные скорости реакции определяли с помощью планшет-ридера Molecular Devices SpectraMax Plus в течение 10 минут. Данные IC50 и Ki рассчитывали на основании анализа нелинейной регрессии, используя программное обеспечение Prism (GraphPad Prism, версия 3,0cx для Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).
Пример 20: Анализ ингибирования c-Met
2
Соединения скринировали на их способность ингибировать активность киназы с-Met, используя стандартную систему связывания с ферментом (Fox et al., Protein Sci. 1998, 7, 2249). Реакцию проводили в растворе, содержащем 100 мМ Hepes (pH 7,5), 10 мМ MgCl, 25 мМ NaCl, 300 мкМ NADH, 1 мМ DTT и 1,5% ДМСО. Конечные концентрации субстрата в анализе составляли 200 мкМ ATP (Sigma Chemicals, St Louis, MO) и 10 мкМ полиGluTyr (Sigma Chemicals, St Louis). Реакции осуществляли при 30°C и в присутствии 80 нМ c-Met. Конечные концентрации компонентов системы связывания с ферментом составляли 2,5 мМ фосфоенолпирувата, 300 мкМ NADH, 30 мкг/мл пируваткиназы и 10 мкг/мл лактатдегидрогеназы.
Основной раствор аналитического буфера готовили из реагентов, перечисленных выше, исключая ATP и исследуемое интересующее соединение. Основной раствор аналитического буфера (175 мкл) инкубировали в 96-луночном планшете вместе с 5 мкл исследуемого соединения по настоящему изобретению при конечных концентрациях от 0,006 мкМ до 12,5 мкМ при 30°C в течение 10 минут. Обычно 12-точковое титрование проводили, получая серийные разведения (от 10 мМ соединения в основном растворе) с ДМСО исследуемого соединения по настоящему изобретению в дочерних планшетах. Реакцию начинали, добавляя 20 мкл ATP (конечная концентрация 200 мкМ). Скорость реакции определяли с помощью планшет-ридера Molecular Devices Spectramax (Sunnyvale, CA) в течение 10 минут при 30°C. Значения Ki определяли на основании данных скорости как функцию концентрации ингибитора.
i
i
i
В таблице 11 представлены данные ингибирования фермента (Ki) для некоторых характерных соединений. Номера соединений в таблице 11 соответствуют соединениям, изображенным в таблице 5. В таблице 11 "A" равно K менее 0,5 мкМ, "B" равно K от 0,5 до менее 5,0 мкМ, и "C" равно K больше или равному 5,0 мкМ для индикативного фермента.
<b>Таблица 11</b><b>Биологические данные исследований для выбранных соединений</b>
<b>Соед. №(V-)</b>
<b>AurA</b>
<b>AurB</b>
<b>ITK</b>
<b>JAK3</b>
<b>Met</b>
<b>RLK</b>
1
C
2
B
B
C
B
3
B
C
B
4
B
C
B
5
B
C
B
6
B
B
B
7
B
C
B
8
B
C
B
9
B
C
B
10
B
C
B
11
B
C
B
12
B
C
B
13
B
C
B
14
B
B
C
B
15
B
C
B
16
B
C
B
17
B
C
B
18
A
A
С
A
19
B
C
B
20
B
C
B
21
B
C
B
22
B
B
C
A
23
B
C
B
24
B
B
C
B
25
B
C
B
26
B
C
B
*
27
B
C
B
28
B
C
B
29
B
C
B
30
B
C
B
31
B
C
B
32
B
C
B
33
B
B
C
B
34
B
C
B
35
B
C
B
36
B
C
B
37
B
C
B
38
B
C
B
39
B
C
B
40
B
C
B
41
B
C
B
42
B
C
B
43
B
C
B
44
B
C
B
45
B
C
B
46
B
C
B
47
B
С
B
48
B
C
B
49
B
C
B
50
B
C
A
51
B
A
B
A
52
B
C
B
53
B
C
A
54
B
B
C
A
55
B
B
C
A
56
B
C
B
57
B
B
C
A
58
B
C
A
59
B
C
B
60
B
B
A
61
A
B
A
62
B
A
B
A
63
A
A
B
A
64
A
A
B
A
65
B
A
B
A
66
B
B
A
67
A
B
B
A
68
A
A
B
A
69
A
B
A
70
A
A
B
A
71
A
A
B
A
72
A
A
B
A
73
B
B
C
A
74
B
A
B
A
75
A
B
C
A
76
A
A
B
A
77
B
C
B
78
A
A
B
A
79
A
A
B
A
80
A
C
A
81
A
A
B
A
82
B
A
C
A
83
A
A
B
A
84
A
B
A
85
B
A
B
A
86
B
B
C
A
87
A
A
B
A
88
A
B
A
89
A
A
B
A
90
A
A
B
A
91
A
A
A
92
A
A
B
A
93
A
A
B
A
94
B
A
C
A
95
A
B
A
96
B
B
C
A
97
A
A
B
A
98
A
A
B
A
99
A
B
A
100
B
C
A
101
B
B
C
A
102
B
B
C
A
103
B
C
A
104
B
B
C
A
105
B
C
A
106
B
B
C
A
107
B
B
A
108
B
C
A
109
B
C
A
110
A
B
A
111
B
C
A
112
B
B
C
A
113
A
B
A
114
B
B
C
A
115
B
B
C
A
*
116
B
B
C
A
117
B
C
A
118
B
C
A
119
B
B
A
120
A
B
A
121
B
C
A
122
A
B
A
123
B
C
A
124
B
B
C
A
125
B
C
A
126
B
C
A
127
B
B
C
A
128
B
C
A
129
A
A
B
A
130
B
A
C
A
131
B
B
B
132
B
B
B
C
A
133
A
B
B
B
A
134
B
B
B
C
B
135
B
B
B
C
B
136
B
C
B
137
B
C
B
138
B
C
B
139
B
B
C
A
140
B
C
A
141
B
C
A
142
B
B
A
143
B
C
144
B
C
A
145
A
С
A
146
B
A
C
A
147
B
C
B
148
A
B
A
149
B
B
A
150
A
C
A
151
B
A
C
A
152
B
A
C
A
153
A
B
A
154
B
B
C
A
155
B
A
B
A
156
B
B
C
A
157
A
C
A
158
B
C
A
159
B
A
B
A
160
B
B
C
A
161
B
C
A
162
B
C
B
163
B
C
A
164
A
C
A
165
A
A
C
A
166
B
A
C
A
167
B
C
A
168
B
С
B
169
A
C
A
170
B
C
B
171
B
C
A
172
B
C
B
173
B
A
B
A
174
B
C
B
175
B
B
B
A
176
B
A
B
A
177
A
A
B
A
178
A
B
A
C
B
179
A
A
A
A
A
180
A
A
A
A
181
A
A
A
A
182
A
A
A
A
183
A
A
B
A
184
A
A
B
A
185
A
A
A
A
186
A
C
B
187
B
C
A
188
A
A
B
A
A
189
B
A
B
A
190
B
A
B
A
191
A
A
B
A
A
192
A
A
193
A
194
A
A
B
A
195
A
A
B
A
B
196
A
197
A
C
A
198
B
C
B
199
B
C
B
200
B
C
B
201
B
C
B
202
B
A
C
A
B
203
A
204
B
B
C
B
205
B
C
B
206
B
B
C
B
207
B
C
B
208
A
A
B
B
209
A
C
B
210
A
211
B
C
B
212
A
A
C
A
213
B
C
B
214
A
A
B
A
B
215
B
A
C
A
B
216
B
B
C
B
217
A
A
B
A
A
218
B
219
B
B
C
B
220
B
221
8
B
B
A
222
A
A
B
A
B
223
B
A
B
A
B
224
A
A
N
A
225
B
B
C
A
226
B
A
C
A
227
B
A
C
A
B
228
B
A
С
A
B
229
B
A
C
A
B
230
A
A
B
A
A
231
A
A
B
A
B
232
B
A
C
A
B
233
A
A
B
A
B
234
A
A
B
A
B
235
B
C
B
236
A
A
B
A
B
237
B
A
B
A
238
B
B
B
A
239
B
C
B
240
B
C
B
241
A
A
A
A
242
A
A
A
A
243
A
A
A
A
244
A
A
A
A
245
B
C
A
246
B
C
A
247
B
С
A
248
B
B
A
249
B
B
A
250
A
B
A
251
B
C
A
252
B
C
B
253
B
C
B
254
B
C
B
255
B
C
B
256
B
C
B
257
B
C
B
258
B
C
B
259
B
C
B
260
B
C
B
261
B
C
B
262
B
C
B
263
B
C
B
264
B
C
B
265
B
C
B
266
B
C
B
267
B
C
B
268
B
С
B
269
B
C
B
270
B
C
B
271
B
C
B
272
B
C
B
273
B
B
B
B
A
274
B
B
A
B
A
275
B
C
B
276
B
A
B
A
277
B
B
B
A
278
B
B
B
A
279
A
A
A
A
280
A
B
C
B
281
B
B
B
A
282
B
B
A
283
B
B
B
284
B
B
A
285
B
B
B
A
286
B
B
B
A
287
B
B
A
288
A
B
A
289
B
B
B
A
290
B
B
B
A
291
B
B
B
A
292
B
B
A
293
B
B
B
A
294
B
B
B
A
295
B
B
B
A
296
A
B
A
297
B
B
A
298
A
B
A
299
A
A
A
300
B
A
A
301
B
C
B
302
A
B
A
303
B
B
B
304
B
C
B
305
B
C
B
306
B
B
A
307
B
B
A
308
A
A
A
309
B
A
A
310
B
C
B
311
B
C
A
312
B
C
B
313
B
С
B
314
B
C
B
315
B
C
B
316
B
C
B
317
B
С
B
318
B
C
B
319
B
C
A
320
B
C
B
321
B
C
B
322
B
C
B
323
B
C
B
324
B
C
A
325
B
C
B
326
B
C
B
327
B
C
B
328
B
C
B
329
B
C
A
330
B
C
B
331
B
C
B
332
A
B
A
333
A
B
A
334
B
B
A
335
B
B
A
336
B
B
A
337
A
A
A
338
B
B
A
339
A
A
A
340
B
B
A
*
341
B
B
B
342
B
B
A
343
B
B
B
Не смотря на то что в описании было приведено большое число вариантов осуществления настоящего изобретения, понятно, что основные примеры могут быть изменены с получением других вариантов осуществления, в которых можно использовать соединения и способы настоящего изобретения. Следовательно, следует принять во внимание, что объем настоящего изобретения определен формулой изобретения, а не специфическими вариантами осуществления, представленными в качестве примера выше.