ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
DRUG WITH ANTI-INFLAMMATORY ACTION

Изобретение относится к области фармации и касается получения средства из растительного сырья, обладающего противовоспалительной активностью.
В настоящее время уделяется большое внимание изучению, разработке и внедрению в практику лекарственных препаратов для лечения и профилактики воспалительных заболеваний, поскольку воспалительные заболевания широко распространены, страдают ими лица различного возраста, нередко они сопровождаются тяжелыми клиническими проявлениями и являются причиной частичной или полной утраты трудоспособности больших контингентов населения.
Несмотря на то, что современный арсенал противовоспалительных лекарственных препаратов насчитывает значительное число, вопрос изыскания новых высокоэффективных противовоспалительных средств, не оказывающих побочного действия, остается весьма актуальным. Это связано с тем, что нет "идеальных" лекарств, не все препараты противовоспалительного действия отвечают высоким требованиям эффективности и безопасности.
Известен экстракт солодкового корня сухой, применяемый как противовоспалительное средство [4]. Однако недостатком указанного способа является также недостаточная фармакологическая активность. Преимущество отдается комплексным растительным препаратам, в которых лекарственные растения хорошо сочетаются друг с другом, отличаются широтой терапевтического действия, низкой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного применения без развития существенных побочных действий. В этой связи поиск и создание новых эффективных средств, получаемых из растительного сырья и предназначенных для профилактики и лечения воспалительных заболеваний, является актуальной задачей фармации.
Нами разработано комплексное средство растительного происхождения в виде сухого экстракта, обладающее выраженным противовоспалительным действием, состоящее из пяти лекарственных растений. Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих противовоспалительным действием, за счет использования широко распространенного растительного сырья, имеющего надежную и обеспеченную сырьевую базу, повышение фармакологической активности за счет многокомпонентности лекарственного средства.
Технический результат достигается тем, что заявляемое лекарственное средство включает высушенные измельченные экстракты из следующих растений: облепихи крушиновидной (плодов), перца длинного (плодов), солодки уральской (корни), мордовника широколистного (корни), яблони ягодной (плодов)
Плоды облепихи крушиновидной экстрагируют трехкратно в соотношении сырье : экстрагент 1:(10) 40%-ным этанолом. Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 16% от массы растительного сырья.
Плоды перца длинного экстрагируют трехкратно в соотношении сырье : экстрагент 1:(10) 70%-ным этанолом. Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 30% от массы растительного сырья.
Корни солодки экстрагируют трехкратно в соотношении сырье : экстрагент 1:(10), 1-ю экстракцию выполняют 70%-ным этанолом, 2-ю экстракцию выполняют 40%-ным этанолом и 3-ю очищенной водой. 1-е и 2-е извлечения объединяют, фильтруют, упаривают до 1/15 первоначального объема. 3-е извлечение фильтруют, упаривают до 1/15 первоначального объема, объединяют с упаренными 1-м, 2-м извлечениями. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 29% от массы растительного сырья.
Корни мордовника широколистного экстрагируют трехкратно в соотношении сырье : экстрагент 1:(10) 70%-ным этанолом. Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 12% от массы растительного сырья.
Плоды яблони ягодной лекарственной экстрагируют трехкратно в соотношении сырье : экстрагент 1:(10), 1-ю экстракцию выполняют 70%-ным этанолом, 2-ю и 3-ю 50%-ным этанолом. Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 28% от массы растительного сырья.
Полученные экстракты облепихи крушиновидной, перца длинного, солодки уральской, мордовника широколистного, яблони ягодной, взятых в соотношении, мас.ч.: 2:2:1:1:1 смешивают и получают продукт (полиэкстракт), представляющий собой мелкодисперсный аморфный гигроскопичный порошок со специфическим запахом, с содержанием глицирризиновой кислоты не менее 20,0%.
Полученный нами продукт характеризуется как средство, обладающее выраженным противовоспалительным действием.
Методом ТСХ [1, 12] проанализированы этилацетатные извлечения из полиэкстракта. Неподвижная фаза: пластинки «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». Подвижная фаза, смесь растворителей: этилацетат-метилэтилкетон-муравьиная кислота-вода (50:30:10:10), время насыщения камеры 2 ч. На линию старта хроматографической пластинки наносили по 30 мкл испытуемых растворов и 20 мкл рабочих стандартных образцов растворов. Пластинки с нанесенными пробами помещали в камеру для хроматографирования и хроматографировали восходящим способом. Длина пробега 18 см. После чего хроматограмму вынимали из камеры и сушили до полного, удаления растворителей, затем проявляли ее 5%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в 95%-ном этаноле с нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 5 минут. Обнаружено не менее 8 зон, окрашенных в синий цвет с Rf~0,29, соответствовавший рутину, с Rf~0,36 - хлорогеновой кислоте, Rf~0,55 - арбутину; с Rf~0,72 - галловой кислоте и Rf~0,82 - кверцетину.
При использовании пластинок «Сорбфил ПГСХ-АФ-А-УФ» (система растворителей хлороформ - метанол - вода, 26:14:3) на хроматограмме обнаруживается ликуразид в виде доминирующего желтого или желтовато-оранжевого пятна с величиной Rf около 0,5, а глицирризиновая кислота - в виде фиолетового флуоресцирующего пятна (254 нм) с величиной Rf около 0,3 (на уровне ГСО глицирама). При этом обнаруживаются также пятна ликвиритина (Rf около 0,6), ононина (Rf около 0,7), ликвиритигенина и изоликвиритигенина (Rf около 0,8), а также формононетин.
Для количественного анализа полиэкстракта предложено использование содержания глицирризиновой кислоты [2, 3]. Предложено использовать государственные стандартные образцы глицирама (моноаммониевая соль глицирризиновой кислоты) поскольку глицирризиновая кислота вещество нестабильное, что препятствует использованию данного соединения в качестве государственного стандартного образца.
При количественном определении содержания глицирризиновой кислоты в электронном спектре полиэкстракта содержится один интенсивный максимум поглощения при длине волны 258±2 нм (фиг. 1), коррелирующий с таковым глицирризиновой кислоты и глицирама [2].
Электронный спектр полиэкстракта. По оси абсцисс - оптическая плотность (у.е), по оси ординат - длина волны (нм).
Методика количественного определения содержания глицирризиновой кислоты в полиэкстракте сухом.
0.5 г (точная навеска) полиэкстракта помещают в колбу коническую со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 20 мл спирта 95%-ного и перемешивают. Далее добавляют 50 мл 3%-ного ацетонового раствора кислоты трихлоруксусной и нагревают в течение 10 мин. После охлаждения полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, колбу промывают двумя порциями 3%-ного ацетонового раствора кислоты трихлоруксусной по 10 мл, фильтруя через тот же фильтр. К полученному фильтрату прибавляют по каплям раствор аммиака, концентрированный до появления обильного осадка (рН от 8,3 до 8,6 по универсальному индикатору). Раствор с осадком переносят на беззольный фильтр, помещенный в воронку Бюхнера. Колбу и фильтр промывают 50 мл ацетона в три приема. Осадок с фильтром переносят в колбу, в которой проводилось осаждение, растворяют в 50 мл воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят объем раствора водой до метки (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 258 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б ГСО глицирама. Содержание глицирризиновой кислоты в полиэкстракте в пересчете на глицирам в процентах (X) рассчитывают по формуле: где D - оптическая плотность испытуемого раствора (Б) при длине волны 258 нм; DO - оптическая плотность раствора ГСО глицирама (Б) при длине волны 258 нм; V - объем препарата, в мл; mo - масса ГСО глицирама в граммах.
Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 4,78% (табл. 1).
Фармакологические испытания на экспериментальных моделях у лабораторных животных установили выраженную противовоспалительную активность полученного средства.
Пример конкретного выполнения
3
3
3
Измельченные и просеянные плоды облепихи крушиновидной - 100,0 г экстрагируют 1300 мл 40%-ным этанолом при комнатной температуре в соотношении сырья и экстрагента 1:10 с учетом коэффициента водопоглощения (k=1,3). Кратность экстракции 3. По окончании экстракции получают водно-спиртовой экстракт в количестве 850 мл (плотность 0,952 г/см). Аналогичным образом проводят еще две экстракции действующих веществ из сырья 40%-ным спиртом этиловым, подавая каждый раз в экстрактор количество растворителя, равное объему слитого экстракта. Получают 750 мл второго экстракта (плотность 0,952 г/см) и 740 мл третьего экстракта (плотность 0,956 г/см). Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения фильтруют через серошинельное сукно в сборник и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке в течение 12 часов и измельчают на мельнице. Получают 20,0 г сухого экстракта облепихи, что составляет 20% от веса исходного растительного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок оранжевого цвета с приятным запахом. Гигроскопичен, слегка комкуется. Содержание влаги - 2,4%.
3
3
3
Измельченные и просеянные плоды перца длинного - 100,0 экстрагируют 1300 мл 70%-ным этанолом при комнатной температуре в соотношении сырья и экстрагента 1:10 с учетом коэффициента водопоглощения (k=1,3). Кратность экстракции 3. По окончании экстракции получают водно-спиртовой экстракт в количестве 1170 мл (плотность 0,869 г/см). Аналогичным образом проводят еще две экстракции действующих веществ из сырья 50%-ным спиртом этиловым, подавая каждый раз в экстрактор количество растворителя, равное объему слитого экстракта. Получают 1150 мл второго экстракта (плотность 0,930 г/см) и 1160 мл третьего экстракта (плотность 0,940 г/см). Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения, фильтруют через серошинельное сукно в сборник и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке в течение 12 часов и измельчают на мельнице. Получают 15,0 г сухого экстракта перца, что составляет 15,0% от веса исходного растительного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок черного цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен, слегка комкуется. Содержание влаги - 2,2%.
3
3
3
Измельченные и просеянные корни солодки уральской - 100,0 экстрагируют при комнатной температуре в соотношении сырья и экстрагента 1:10 с учетом коэффициента водопоглощения (k=1,3). Кратность экстракции 3. Первая экстракция выполняется 70%-ным этанолом 1300 мл, вторая экстракция 40%-ным этанолом и третья экстракция водой очищенной. Объем экстрагента равен количеству экстракта, полученному при предыдущей экстракции. По окончании первой экстракции получают первый водно-этанольный экстракт в количестве 960,0 мл (плотность 0,888 г/см). Экстрагируют шрот еще два раза, 2-й слив - 970,0 мл (плотность 0,952 г/см), 3-й слив - 890,0 мл (плотность 0,982 г/см). Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения, фильтруют через серошинельное сукно в сборник и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке в течение 12 часов и измельчают на мельнице. Получают 29,5 г экстракта солодки, что составляет 29,5% от веса исходного растительного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен, слегка комкуется. Содержание влаги - 3,5%.
3
3
3
Измельченные и просеянные корни мордовника широколистного - 100,0 экстрагируют 1300 мл 70%-ным этанолом при комнатной температуре в соотношении сырья и экстрагента 1: 10 с учетом коэффициента водопоглощения (k=1,3). Кратность экстракции 3. По окончании первой экстракции получают водно-спиртовой экстракт в количестве 940 мл (плотность 0,895 г/см). Аналогичным образом проводят еще две экстракции действующих веществ из сырья 40%-ным спиртом этиловым, подавая каждый раз в экстрактор количество растворителя, равное объему слитого экстракта. Получают 930 мл второго экстракта (плотность 0,935 г/см) и 920 мл третьего экстракта (плотность 0,940 г/см). Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения, фильтруют через серошинельное сукно в сборник и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке в течение 12 часов и измельчают на мельнице. Получают 18,0 г сухого экстракта мордовника, что составляет 18,0% от веса исходного растительного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен, слегка комкуется. Содержание влаги - 1,74%.
3
3
3
Измельченные и просеянные плоды яблони ягодной - 100,0 экстрагируют при комнатной температуре в соотношении сырья и экстрагента 1:10 с учетом коэффициента водопоглощения (k=1,3). Кратность экстракции 3. Первая вторая и третья экстракция выполняется 40%-ным этанолом. Первая экстракция выполняется 1300 мл этанола. По окончании первой экстракции получают первый водно-этанольный экстракт в количестве 990,0 мл (плотность 0,945 г/см). Экстрагируют шрот еще два раза, подавая каждый раз в экстрактор 40%-ный этанол в количестве, равном объему слитого извлечения, 2-й слив - 990,0 мл (плотность 0,950 г/см), 3-й слив - 980,0 мл (плотность 0,945 г/см). Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения фильтруют через серошинельное сукно в сборник и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, сушат в вакуумной сушилке в течение 12 часов и измельчают на мельнице. Получают 28,6 г экстракта яблони, что составляет 28,6% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета со сладковатым запахом. Гигроскопичен, комкуется. Содержание влаги - 2,5%.
Полученные экстракты плодов облепихи крушиновидной, плодов перца длинного, корней солодки уральской, корней мордовника широколистного, плодов яблони ягодной, смешивают в соотношении, мас.ч.: 2:2:1:1:1. Получают суммарный полиэкстракт, обладающий выраженным противовоспалительным действием.
Острая токсичность сухого экстракта определялась на белых беспородных мышах-самцах с исходной массой 20.0±1.0 г при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введениях растворенного в воде экстракта. Каждую дозу экстракта испытывали на 10 животных. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней. Регистрировали наблюдаемые признаки интоксикации, проводили вскрытие и осмотр погибших животных. Результаты исследований показали, что при внутрибрюшинном введении больших доз сухого полиэкстракта белым мышам наблюдаются признаки интоксикации, выражающиеся в замедлении ориентировочной реакции, резких движениях, появлением тонических, а затем тонико-клонических судорог. Животные погибали при явлениях сердечно-сосудистой недостаточности преимущественно в течение суток от введения экстракта. LD50 по Керберу при внутрибрюшинном введении полиэкстракта 1960±60.76 мг/кг. При внутрижелудочном введении данного средства в максимально возможной дозе гибели животных не регистрировали и не наблюдалось явных признаков интоксикации. Эти данные позволяют отнести испытуемый полиэкстракт к группе малотоксичных веществ по классификации Сидорова [10].
В дальнейшем было исследовано влияние сухого полиэкстракта на основные фазы воспалительного процесса.
Влияние сухого экстракта «Панкафит» на альтернативную стадию воспаления
Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария.
При определении противовоспалительной активности данного средства использовали классические модели асептического воспаления, позволяющие оценить влияние сухого полиэкстракта на основные стадии процесса, а также выявить некоторые аспекты механизма его противовоспалительного действия. О характере влияния испытуемого средства на альтерацию тканей и интенсивность процессов регенерации судили по динамике заживления кожно-мышечного дефекта у крыс, индуцированного подкожным введением 0,5 мл 9%-ной уксусной кислоты с одновременным введением раствора декстрана в дозе 300 мг/кг массы животного [6].
Первое введение водного раствора полиэкстракта сухого в дозе 100 мг/кг осуществляли внутрижелудочно за 1 час до введения флогогенных агентов, а затем ежедневно 1 раз в сутки на протяжении всего эксперимента (29 дней). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме.
В качестве препарата сравнения другой группе крыс вводили водный раствор экстракта солодкового корня. Экстракт солодки вводили в изоэффективной дозе 100 мг/кг массы животного. Площадь некротизированной ткани оценивали планиметрическим методом на 9- и 29-е сутки эксперимента. Планиметрию зоны деструкции ткани проводили на 7-е, 14-е и 21-е сутки от начала эксперимента.
Как следует из данных, проведенных в таблице 2, полиэкстракт сухой в указанном объеме оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствуют уменьшение степени альтерации тканей и повышение интенсивности регенераторных процессов в очаге воспаления. Введение белым крысам полиэкстракта оказывает антиальтеративное действие, снижая степень деструкции ткани при воздействии флогогенного агента. Так, на 9-е и 29-е сутки эксперимента площадь повреждения тканей снижается на 32% и 46% соответственно по сравнению с контролем (табл. 1).
Влияние сухого экстракта «Панкафит» на экссудативную стадию воспаления.
Опыты проведены на 62 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, у которых воспроизводили острое асептическое воспаление путем субплантарного введения в правую заднюю лапку 0,1 мл 2%-ного раствора формалина [5].
3
Оценку влияния «Панкафита» на экссудативную фазу воспалительной реакции проводили на моделях острого асептического воспаления у животных с использованием флогогенных агентов с различными механизмами противовоспалительного действия (формалин, декстран (СНCООН), гистамин). Асептическое воспаление у крыс в соответствующих группах вызывали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3%-ного раствора формалина [11], 6%-ного водного раствора декстрана в объеме 0,1 мл [1] и 0,1%-ного раствора гистамина гидрохлорида в объеме 0,1 мл [6]. Водные растворы полиэкстракта и экстракта солодкового корня сухого в соответствующих группах животных вводили внутрижелудочно за 1 час до инъекции, а затем через 5 и 18 часов. Оценку антиэкссудативного действия вычисляли, рассчитывая процент угнетения отека по отношению к контролю.
Полиэкстракт оказывает существенное антиэкссудативное действие, о чем свидетельствуют уменьшение выраженности отека конечности животных при асептическом воспалении, индуцированном формалином - на 47%, декстраном и гистамином - на 22% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 3). При этом антиэкссудативная активность полиэкстракта превосходит таковую у препарата сравнения - экстракта солодкового корня сухого.
Влияние сухого экстракта «Панкафит» на пролиферативную стадию воспаления
Влияние «Панкафита» на образование фиброзно-грануляционной ткани
Исследования проведены на 48 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 180-200 г, путем подкожной имплантации в область спинки стерильных ватных шариков массой 15 мг в асептических условиях по методу Ф.П. Тринуса. Исследуемые средства вводили в таких же дозах, как и в предыдущих опытах, внутрижелудочно один раз в сутки в течение 7 дней. На 8-е сутки животных эвтаназировали методом декапитации и осторожно извлекали ватные шарики с гранулемами и сразу же взвешивали их в сыром виде и после высушивания при температуре 60°С в течение 24 часов (до постоянной массы). О влиянии исследуемых средств на процессы пролиферации судили по разности масс гранулем у крыс опытной и контрольной групп, таблица 3.
При определении влияния исследуемого средства на пролиферативную стадию воспаления установлено, что средняя масса соединительнотканной капсулы в очаге воспаления возрастает на 7,8% по сравнению с показателями у животных с контрольной группы (табл. 4), т.е. обладает умеренным пролиферативным действием.
Таким образом, внутрижелудочное введение полиэкстракта сухого в дозе 100 мг/кг массы крысам при остром асептическом воспалении оказывает антиальтернативное и антиэкссудативное действие, а также способствует ускорению регенерации, в результате чего наблюдается заживление ткани на более ранних сроках патологического процесса. Указанные эффекты подтверждают наличие у испытуемого средства выраженной противовоспалительной активности.
Очевидно, что реализация указанного действия полиэкстракта сухого обеспечивается высоким содержанием в нем биологически активных веществ, таких как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, органические кислоты, тритерпеноиды, антоцианы, полисахариды и др. водорастворимые вещества [7, 8, 9]. Известно, что указанные вещества оказывают антиоксидантное, мембраностабилизирующее, противовоспалительное действие. Этим можно объяснить выраженное противовоспалительное действие полиэкстракта сухого. По фармакологической эффективности полиэкстракт сухой превосходит действие препарата сравнения - экстракт солодкового корня сухой.
Источники информации
1. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.
2. Егоров М.В., Куркин В.А. Совершенствование методов стандартизации корней солодки // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2011. - Т. 13, №1(8). - С. 1992-1995.
3. Егоров М.В., Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Быков В.А. Валидация методик качественного анализа сырья и препаратов солодки // Фармация. - 2005. - Т. 53, №1. - С. 9-12.
4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб.. испр. и доп. - М., 2008 - С. 359.
5. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статические методы в медицинской исследовательской работе // Патол. физиол. и экспер. Терапия. 1964. - №4. -С. 71-78.
6. Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. - Душанбе. 1961. - №5. - С. 167-173.
7. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 2. Семейства Actinidiaceae-Malvaceae, Euphorbiaceae-Haloragacea / сост. Л.М. Беленовская, Е.Е. Лесиовская, Н.С. Бобылева. - СПб., М., 2009. - 513 с.
8. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 3. Семейства Fabaceae-Apiaceae. / сост. Л.М. Беленовская, Е.Е. Лесиовская, Н.С. Бобылева - СПб., М, 2010. - 601 с.
9. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 5. 2. Семейства Asteraceae (Compositae). Часть 1. Роды Achillea-Youngia / сост. Беленовская Л.М., Лесиовская Е.Е., Бобылева Н.С. - СПб., М., 2013. - 312 с.
10. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах ведения // Токсикология новых промышленных химических веществ. - М., - 1973. - Вып. 13. - С. 47-51.
11. Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. - Киев. - 1975. - 56 с.
12. Химический анализ лекарственных растений. Учебное пособие для фарм. ВУЗов. / Под ред. проф. Н.И. Гринкевич. - М., 1983. - 176 с.