Значение нитрооксидергических механизмов в развитии респираторного дистресс-синдрома взрослых

края в зависимости от комплекса факторов среды обитания, включающих четыре блока: климатический, естественной природной среды (ландшафт), водного бассейна, экологический. В результате анализа информации установлено, что на распространение болезней органов более всего влияет блок экологических факторов, особенно данная тенденция проявляется в городах, где отмечается значительная антропогенная нагрузка на среду обитания (рис. 1, 2). В то же время качество питьевой воды оказывает большее влияние на уровень болезней органов дыхания среди детей и подростков, проживающих в районах, в отличие от тех, кто живет в городах.

Воздействие всего комплекса факторов среды обитания на распространение заболеваний органов дыхания среди взрослых, подростков, детей более всего проявляется в городах: Владивостоке, Спасске, Уссурийске, районах - Анучинском, Кировском, Ха-санском, вместе с тем экологические факторы наибольшее влияние имеют в гг.Владивосток, Находка, Дальнегорск, районах - Ковалеровский, Лазовский, Надеждинский, Пожарский, Хасанский, Октябрьский (рис. 3).

Влияние блоков естественной природной среды и климатического особенно отмечается во г.Владивостоке, г. Спасске, Анучинском, Кировском районах, а блок качества воды в гг. Дальнереченске, Партизанске, Б-Камень, Ковалеровском, Михайловском, Ольгинском районах, к тому же необходимо отметить, что среди подростков и детей на уровни болезней органов дыхания наибольшее влияние оказывает среда обитания в Кировском, Уссурийском, Октябрьском районах (рис. 4, 5).

Таким образом проведенное статистическое исследование распространение болезней органов дыхания среди населения Приморского края выявило особенности уровня и структуры заболеваний в услови-

ях муссонного климата и экологической ситуации. Полученные результаты исследования могут быть основой для разработки медико-профилактических мероприятий с учетом влияния природноклиматических и экологических факторов окружающей среды.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гичев Ю.П. Экологическая медицина и ее основные направления // Врач.-1996.-№11.- С.28-29.

2. Государственный доклад о состоянии здоровья населения России // Здравоохр.Рос.Федерации.-1997.- №1.- С.3-10.

3. Здоровье населения Приморского края/ Под ред. Иванова Е.М.- Владивосток, 1997.- 220 с.

4. Комплексная оценка условий формирования

здоровья населения в антропоэкологической системе/ П.Ф.Кику, Т.В.Горборукова, Н.С.Журавская, Е.М. Нечухаева: Методические рекомендации.-

Владивосток, 1998.- 20 с.

5. Кику П.Ф., Вершинин Э.Н., Вербицкая Г.Н. и др. Распространение болезней органов дыхания у населения Приморского края // Бюл. физиол. и патол. дыхания. - 2000.- Вып.6.-С.46-50.

6. Косолапов А.Б. Здоровье населения Дальнего Востока (Медико-географические и социальногигиенические аспекты). Владивосток: Дальнаука.-1996.- 248 с.

7. Луценко М.Т., Гладуш Л.П. Состояние здоровья населения Дальневосточного региона.- Благовещенск: ДНЦ ФПД СО РАМН.-2000.- 148 с.

8. Мотавкина Н.С., Косолапов А.Б., Деркачева Л.Н. Медико-географические аспекты распространения бронхолегочной патологии на Дальнем Востоке.-Владивосток: ДВО АН СССР.-1991.- 128 с.

9. Чучалин А.Г. Пульмонология в России и пути ее развития // Пульмонология.-1999.- №1.- С.6-22.

УДК 612.822 : 611.24 - 018 : 616.24-001

В.Б.Шуматов, Т.А.Шуматова, Д.Г.Осипенко

ЗНАЧЕНИЕ НИТРООКСИДЕРГИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ В РАЗВИТИИ РЕСПИРАТОРНОГО ДИСТРЕСС-СИНДРОМА ВЗРОСЛЫХ

Владивостокский государственный медицинский университет, кафедра анестезиологии и реаниматологии

РЕЗЮМЕ

Проведено исследование уровня метаболитов оксида азота (NO) в легочных экспиратах у больных с РДСВ в реакции Griess. Изучена роль периферических нитрооксидергических механизмов в развитии РДСВ и при липополисахарид-

индуцированном повреждении легких у экспериментальных животных. NO-синтаза в тканях определялась гистохимическим методом по прописи Hope, Vincent (1989). Полученные данные свидетельствуют об участии NO в развитии РДСВ, а определение его уровня имеет диагностическую и прогностическую значимость.

SUMMARY

V.B.Shumatov, T.A.Shumatova, D.G.Osipenko

INVESTIGATE THE LEVELS OF NITRIC OXIDE IN THE LUNG OF PATIENTS WITH ADULT RESPIRATORY DISTRESS SYNDROME

The objective of our research was to study ni-trite-ion with Griess reaction in patients with ARDS. We studied the role of peripheral nitro-oxidergic mechanisms in pathogenesis of LPS-induced lung injury. NOS was studied using Hope, Vincent methods (1989). Our study showed that the nitrite levels might play pivotal role in pathogenesis of acute lung injury and be useful for monitoring disorders in the lung in such conditions.

Одним из наиболее ярких открытий последних лет, имеющих фундаментальное значение и позволяющих по-новому подойти к пониманию ряда физиологических и патологических процессов, является определение роли оксида азота (NO) как универсального внутриклеточного мессенджера. Установлено, что синтез NO является частью локальных и системных воспалительных реакций, его молекула может оказывать аутокринное и паракринное действие [10]. В современной литературе содержится достаточно противоречивая информация о характере нарушений метаболизма эндогенного NO при респираторном дистресс-синдроме взрослых (РДСВ), что не позволяет составить целостное представление об его патогенезе. Остаются неясными механизмы, в результате которых в органах дыхания роль NO меняется от защитной на повреждающую. Учитывая, что традиционная терапия в поздних стадиях РДСВ неэффективна и сопровождается высокой (до 50-60%) летальностью, с целью максимального ослабления ответа на повреждение оправдана разработка новой стратегии терапии, направленной, как на весь комплекс компонентов медиаторного каскада, так и на отдельные его звенья. В связи с этим, изучение состояния нитрооксидергических механизмов органов дыхания и процессов, лежащих в основе развития респираторного дистресс-синдрома, актуально.

Цель нашей работы состояла в изучении роли NO-ергических механизмов легких в развитии РДСВ.

РДСВ диагностировали у больных на 2-5 сутки после тяжелой травмы, обильной кровопотери, на фоне сепсиса, перитонита на основании клинической картины острой дыхательной недостаточности, функциональных, лабораторных и рентгенологических методов исследования (Американо-Европейская согласительная конференция по РДСВ, 1994).

О синтезе NO в организме судили косвенным методом, определяя стабильные продукты его аэробного окисления - нитрит-ион в экспиратах у больных с различными стадиями РДСВ. Экспираты (конденсат паров выдыхаемого воздуха) в качестве материала для исследования были выбраны в связи с простотой их сбора как у пациентов с самостоятельным дыха-

нием, так и у находящихся на искусственной вентиляции легких. Для детальной оценки состояния нитрооксидергических механизмов при остром повреждении легких также изучали аутопсийный материал погибших от РДСВ и ткань легкого животных с моделью синдрома.

Содержание нитрит-аниона ^О2-) определяли колориметрическим методом при помощи реактива Griess [12]. Экспираты собирали методом Г.И. Сидоренко и соавт. (1980). Количественную оценку проводили при 540 нм на спектрофотометре «Microplate Reader MR 600».

Уровень образования NO клеточными структурами легких оценивали по содержанию в них фермента - NO-синтазы (NOS). Изучались легкие плодов человека, не подвергавшиеся воздействию окружающей среды; людей, погибших от несчастного случая и не имевших патологии органов дыхания, а также здоровые участки ткани, полученной при оперативных вмешательствах на органе. Локализация и активность NOS определялась гистохимическим методом по прописи Hope, Vincent (1989) [8].

Наши исследования показали наличие NO-синтазы в клетках эпителиального пласта главных и крупных бронхов у плодов человека и у взрослых людей, достоверных различий в содержании фермента не обнаружено. Следует отметить, что у плодов человека эпителий хрящевых бронхов обладал более выраженной NO-продуцирующей способностью, чем в мелких бронхах. Высокий уровень образования эндогенного NO в крупных бронхах у плодов человека, вероятно, необходим для обеспечения низкой резистентности легочных сосудов при функционировании легких в постнатальном периоде.

Анализ активности NOS в эндотелиальной выстилке сосудов бронхов установил, что бронхиальные артерии содержат большее количество фермента, чем бронхиальные вены. Низкой активностью обладают мастоциты и макрофаги.

При исследовании NO-образования в клеточных структурах органов дыхания у людей, умерших от РДСВ, отмечали прямую зависимость между степенью морфологических изменений и активностью в них NO-синтазы. Содержали фермент все эпителиальные клетки, в том числе и десквамированные. Практически во всех бронхах наблюдали гиперплазию и гиперсекрецию бокаловидных клеток, уменьшение количества реснитчатых клеток с частичной утратой ими мерцательного аппарата. Активность фермента определялась на более высоком уровне в мелких бронхах, среди них преобладали - на 61% бронхи, эпителиоциты которых экспрессировали высоко активный энзим. Высокий уровень МО-синтазы регистрировали в миоцитах бронхов, большинство которых было гипертрофировано. Активно синтезировали NO макрофаги, тучные клетки, альвеолоциты. Обнаружено, что более высокой способностью продуцировать NO обладают миоциты артерий, чем вен.

Образование эндогенного NO может рассматриваться в качестве механизма, поддерживающего постоянство состояния гладких миоцитов в легочной

циркуляции, а, как считает V.C. Gard с соавт. (1992), недостаточность синтеза или высвобождения NO может приводить к избыточной пролиферации гладких миоцитов легочных артерий. П.А. Мотавкин с соавт. (1992) пришли к заключению, что в нормальном легочном русле NO, синтезируемый эндотелио-цитами, не только способствует адекватной вазоди-лятации, но и противостоит вазоконстрикторному действию гипоксии и эндотелина. Способность NO высвобождаться как в просвет сосуда (для предотвращения агрегации тромбоцитов и эритроцитов), так и интрамурально (для расслабления гладкой мускулатуры), подтверждает его защитное действие от тромбозов и вазоспазмов. Следовательно, способность МО тормозить пролиферацию гладких миоцитов является также защитной реакцией. Потеря эндо-телиозависимой релаксации сосудами во время гипоксии способствует повышению их тонуса, образованию тромбов, нарушению микроциркуляции и приводит к пролиферации гладких миоцитов.

Мы оценили активность МО-продукции in vivo у пациентов с различной тяжестью синдрома. Установили, что появление первых симптомов дыхательной недостаточности у больных из группы риска по развитию РДСВ сопровождается увеличением уровня нитрит-иона в экспиратах. Продукция газа увеличена в 2 и 2,1 раза, соответственно, у пациентов с I и II стадиями синдрома. При прогрессировании дыхательной недостаточности и переходе процесса в III стадию наблюдалось уменьшение образования нитрит-иона, и его содержание падало до уровня, регистрируемого у здоровых людей. У больных с IV стадией РДСВ содержание метаболитов NO в экспирате достоверно ниже этого уровня.

Проведенные исследования свидетельствуют, что развитие респираторного дистресс-синдрома сопровождается фазовым изменением генерации NO. Очевидно, этим можно объяснить противоречивость результатов, получаемых разными авторами, при изучении данной проблемы.

При индукции острого повреждения легких введением липополисахарида (LPS) нами установлена нитрооксидсинтазная активность клеточных структур респираторного отдела легких: эпителиоцитов

средних и мелких бронхов, гладкомышечного слоя бронхов, альвеолоцитов, эндотелия и гладких мио-цитов сосудов, макрофагов и тучных клеток. В эпи-телиоцитах бронхов, в эндотелиоцитах сосудов, аль-веолоцитах активность фермента носила фазовый характер: нарастала через 24 часа от введения LPS, снижалась через 48 часов, затем опять возрастала и сохранялась на достаточно высоком уровне до 7 дня от начала эксперимента. Активность фермента находилась в прямой зависимости от выраженности изменений в паренхиме органа и усиливалась при нарастании степени повреждения легких.

Мы считаем, что общее увеличение активности фермента вызвано экспрессией индуцированной его формы. Причем, как показали наши исследования, синтез фермента в клеточных структурах респираторного отдела органов дыхания при введении LPS увеличивается в несколько (от 2 до 5) раз. Глубокие

морфологические изменения в легких изменяют функционирование альвеоло-капиллярной мембраны, уменьшают легочную вентиляцию и, как следствие, аэрацию крови. Недостаток кислорода нарушает работу митохондрий, снижает эффективность окислительного фосфорилирования, и клетка переходит на более древний способ образования энергии с участием NOS, при котором акцептором становится азот [4].

Обширные деструктивные изменения в бронхах и в альвеолярной ткани, возникающие при экспериментальном РДС вследствие высвобождения разнообразных цитокинов - гамма-интерферона, интерлейкинов, фактора некроза опухоли, липополисахаридных комплексов, также являются факторами, способствующими повышению активности фермента [5, 6]. Избыточное количество NOS приводит к гиперпродукции NO и к накоплению в очаге токсических продуктов его метаболизма, повреждающих ткани и вызывающих прогрессирование патологического процесса.

Снижение активности фермента через 48 часов после введения крысам LPS, вероятно, связано с усилением реакции между супероксидным анионом и NO с образованием пероксинитрита, что способствует удалению NО с поверхности сосудистой и бронхиальной стенки, с поверхности альвеолоцитов, и, как следствие, уменьшает нитрооксидсинтазную активность.. Уменьшение общей активности NOS можно объяснить также супрессивным влиянием избытка NO и на конститутивную форму энзима [11].

Мы установили, что при введении LPS NО-синтаза начинает регистрироваться в гладких мио-цитах бронхов и сосудов, которые у здоровых животных не обладают способностью синтезировать NO. Таким образом, острая гипоксия стимулирует образование гладкомышечной индуцированной NO-синтазы, чрезмерная экспрессия которой угнетает вазодилятирующее действие эндотелиозависимых субстанций и способствует нарушению гемодинамики в легких, тромбообразованию, повышению проницаемости сосудистой стенки, пропотеванию жидкости из сосуда в окружающие ткани и прогрессированию патологического процесса.

Увеличение нитрооксидсинтазной активности макрофагов в ходе эксперимента свидетельствует об их участии в развитии острого повреждения легочной ткани. Макрофаги выделяют цитокины, вовлекающие и другие клеточные структуры в активное образование медиаторов воспаления [9], что приводит к синтезу индуцированной NOS и обеспечивает прогрессирование патологического процесса.

Повышение NO-образующей способности тучных клеток при моделировании синдрома в 10-15 раз, с одновременным увеличением числа клеток и экзоци-тоза ими биологически активных веществ свидетельствует об их высокой функциональной активности при РДСВ. Воспалительные медиаторы, выделяемые мастоцитами, и гиперпродукция NO способствуют повышению проницаемости сосудистой стенки c формированием интерстициального и альвеолярного отека.

При сопоставлении изменений продукции NO, установленных в организме больных с РДСВ и в модели данного синдрома у животных, обращают на себя некоторые закономерности. Так, нарастание нитро-оксидсинтазной активности клеточных структур легкого в эксперименте мы регистрировали у животных, выживших на фоне развития респираторного дистресс-синдрома. При этом у всех крыс после введения липополисахарида в течение 24 часов NO-образующая способность клеток увеличивалась по сравнению с нормой в 2-5 раз, через 48 часов экспрессия фермента значительно снижалась, но оставалась выше уровня здоровых животных в 1,5-2 раза. При дальнейшем наблюдении у выживших крыс содержание NOS в клеточных структурах органов дыхания было повышенным, но в меньшей степени, чем сразу после введения эндотоксина. Максимальная гибель животных с моделью острого повреждения легких отмечалась на 2-3 день от начала эксперимента и, как правило, совпадала с уменьшением NO-образующей активности клеток органов дыхания.

При исследовании экспиратов у больных с РДСВ нами установлено, что прогрессирование процесса сопровождается понижением содержания метаболитов NO и, следовательно, самого газа в конденсате паров выдыхаемого воздуха, а при неблагоприятном исходе заболевания интенсивность образования NO становится ниже уровня, характерного для здоровых людей.

Следовательно, динамика NO-продукции может характеризовать особенности развития патологического процесса. Снижение уровня NO на фоне усиления дыхательной недостаточности можно расценить как проявление процесса дисадаптации, который по времени совпадает с фазой истощения в результате чрезмерной стресс-реакции [2].

Проведенный анализ состояния нитроооксидерги-ческих механизмов органов дыхания при РДСВ у больных и в его экспериментальной модели убедительно подтверждает роль NО как патогенетического регулирующего фактора. Мы зарегистрировали значительное нарастание активности фермента во всех нитрооксидпозитивных структурах, что вызвано увеличением синтеза уже имеющегося конститутивного фермента и экспрессией индуцированной его формы. На начальных этапах процесса, учитывая свойства NO, его продукция связана с защитными механизмами, При этом происходит активация стресс-лимитирующих систем, мобилизация энергетических и структурных ресурсов и их направленная передача в функциональные системы, осуществляющие адаптационную реакцию [1]. Мы считаем, что на этом этапе образование NО может оказывать защитное действие, так как оно направлено на подавление эффекта стрессорного выброса катехоламинов, действия воспалительных медиаторов, экзоцитируемых тучными клетками, цитокинов, выделяемых макрофагами и другими клетками, способствует расширению сосудов, перераспределяя кислород в тканях и

улучшая их оксигенациию, тормозит агрегацию тромбоцитов в сосудах, поддерживает тонус воздухопроводящих путей, мобилизует иммунную систему

[5, 6, 10].

По мере прогрессирования патологического процесса у пациентов с РДСВ в легочных экспиратах падала концентрация нитрит-иона. В этот период в экспериментальном материале наблюдалось снижение активности NOS во всех клеточных структурах, за исключением макрофагов и тучных клеток. Ослабление синтеза NO в эту фазу имеет, на наш взгляд, неблагоприятные последствия для организма, так как, с одной стороны, свидетельствует об истощении механизмов защиты, а, с другой, начинающаяся экспрессия индуцированного фермента способствует гиперпродукции NO, и он из защитной молекулы превращается в токсическую.

При прогрессировании РДСВ до IV стадии наблюдали декомпенсацию сердечной и дыхательной деятельности, развитие процесса диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, падение артериального давления. Содержание нитрит-иона в конденсате паров выдыхаемого воздуха уменьшалось ниже уровня, характерного для здоровых людей. Для погибших от РДСВ кроме диффузного альвеолита и отека одним из характерных признаков были нарушения соотношения воздушности легких и кровенаполнения, что проявлялось мозаичным чередованием участков ателектаза и эмфиземы. Ухудшение бронхиальной проходимости способствовало появлению участков гиповентиляции и развитию артериовеноз-ного шунта, что при прогрессировании гипоксии приводило к локальной бронхоконстрикции, усугубляющей бронхиальную обструкцию. В то же время регистровали дистонию стенок части бронхов. В бронхиальных артериях наблюдали гиперплазию гладких миоцитов. Гиперпродукция NO вызывала структурные изменения эпителия воздухоносных путей, гиперсекрецию и гиперплазию бокаловидных клеток, уменьшала количество реснитчатых клеток, способствовала утрате ими мерцательного аппарата. Глубокие морфологические изменения в органах дыхания при РДСВ, вызванные перестройкой нитроок-сидергических механизмов, нарушали работу альвео-ло-капиллярной мембраны, уменьшали легочную вентиляцию, насыщение крови кислородом, способствовали прогрессированию процесса и его необратимости.

Проведенное исследование показало, что изменение интенсивности Ж)-образования опережает клинические проявления синдрома и нарушение основных параметров, традиционно используемых для его диагностики, поэтому контроль за уровнем продукции NO может быть использован для мониторинга процесса. Патогенетическое значение зарегистрированного фазового изменения активности нитрооксид-синтазы при РДСВ определяется возможностью разработки новой стратегии терапии синдрома.

ЛИТЕРАТУРА

1. Малышев И.Ю., Манухин Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота // Биохимия.- 1998.- Т.63.- С.992-1006.

2. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессовым ситуациям и физическим нагрузкам.- М.: Медицина, 1988.- 253 с.

3. Мотавкин П.А., Гельцер Б.И. Клиническая и экспериментальная патофизиология легких.- М.: Наука, 1998.- 336с.

4. Реутов В.П., Сорокина Е.Г. NO-синтазная и нитроредуктазная компоненты цикла оксида азота // Биохимия. - 1998. - Т.63. - С.1029-1040.

5. Bames P.J. Nitric oxide and airway disease // Ann. Med. - 1995. -Vol.27, N3. - P.389-393.

6. Brett S.J., Evans T.W. Measurement of endoge-

nous nitric oxide in lungs of patients with the acute respiratory syndrome // AmerJ.Resp.Crit.Care.-1998.-

Vol.157, №3.- P.993-997.

7. Gard V.C., Hassid A. Nitric oxide-generating vasodilators and 8-bromocyclic guanosinemonophos-phate inhibit mitogenesis and proliferation of cultured rat

vascular smooth muscle cells // J.Clin.Invest.-1989.-Vol.83.- P.1774-1777.

8. Hope B.T., Vincent S.R. Histochemical characterization of neuronal NADPH-diaphorase // J.Histochem. Cytochem. - 1989. - Vol.37. - P.653-661.

9. Kobayashi A., Hashimoto S., Kooguchi K. et al. Nitric oxide in lung disease// Chest.-1998.- Vol. 113, №6.- P.1632-1639.

10. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs A. Nitric oxide: Physiology, pathophysiology and pharmacology // Pharmacol.Rev.- 1991.- Vol.43.- P.109-142.

11. Rogers N.E., Ignaro L.J. Constutive nitric oxide synthase from cerebellum is reversibly inhibited by nitric oxide formed from L-arginine // Biochem.Biophys.Res. Commun-1992 - Vol.189.- P.242-249.

12. Sadhu M., Datta U.K., Mukherjee S. et al. Role of nitric oxide in health and disease // J.Indian Med. Assoc.- 1997.- Vol.95, №10.- P.561-563.

13. Zhang Z., Gao L., Zhang H., Liy Q. Catalytic simultaneous spectrophotometric determination of nintrite and nitrate with a flow injection system // Analytica ^mica Acta.- 1998.-Vol.370.- P.59-63.

УДК 611.2.018.6 - 092.9 : 577.175.82 : 577.95

С.С.Тимошин, О.А.Лебедько

ВЛИЯНИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ НА СТАНОВЛЕНИЕ СТРУКТУРНОГО ГОМЕОСТАЗА ТРАХЕИ БЕЛЫХ КРЫС В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ

Хабаровский филиал ДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства, Дальневосточный государственный медицинский университет, Хабаровск

РЕЗЮМЕ

SUMMARY

Методом авторадиографии с Н-тимидином исследовали влияние вазоактивных и опиоидных пептидов, а также пептидного морфогена гидры и его фрагментов на синтез ДНК в эпителиоцитах и гладких миоцитах трахеи новорожденных белых крыс. Эндотелин I (5' 10-8 М/кг), ангиотензин II ( 5' 10-8 М/кг), аналог дерморфина А10 ( 10-7 М/кг), динорфин А(1-13) (10-7 М/кг), даларгин (10-7 М/кг), пептидный морфоген гидры и его фрагменты 6С и 5N (10-7 М/кг) вводили новорожденным белым крысам пятикратно, внутрибрюшинно, с 2 по 6 сутки жизни. Получены данные об участии исследуемых пептидов в регуляции активности ДНК-синтетических процессов эпителиоцитов и гладкомышечных клеток трахеи белых крыс в раннем постнатальном периоде.

S.S.Timoshin, O.A.Lebedko

EFFECT OF REGULATORY PEPTIDES ON FORMATION OF STRUCTURE HOMEOSTASIS IN TRACHEA OF WHITE RATS DURING EARLY POSTNATAL PERIOD

Using a method of autoradiography with H-thymidine, we studied the effects of vasoactive and opiods peptides, peptide morphogen of hydra and his fragments on DNA synthesis in tracheal epithelium and smooth muscle cells in neonate white rats. Endothelin I (5' 10-8 М/kg) or angiotensin II ( 5' 10-8 М/kg), or analog of dermorphine А10 ( 10-7 М/kg), or dinorphine А(1-13) (10-7 М/кг), or dalargine (10-7 М/kg), or peptide morphogen of hydra, or his fragments 6C and 5N ( 10-7 М/kg) were daily intraperitonealy