ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ИЗ ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК, ОБЛАДАЮЩИЙ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ
THERAPEUTIC PREPARATION OF MALE LARVAL BEES HAVING IMMUNOMODULATORY ACTION

Изобретение относится к области продуктов пчеловодства, обладающих иммуномодулирующим действием, к получению лечебно-профилактического препарата из трутневых личинок, который представляет собою порошок желтого цвета, полученный путем измельчения трутневых личинок до однородной биомассы, добавления в полученную биомассу водно-спиртового экстракта прополиса в количестве 0,06% на сухое вещество, замораживания при температуре минус 20°C и далее в полученную пасту добавляют тонкоизмельченную цветочную пыльцу с массовой долей влаги 7% в количестве 0,1% на сухое вещество, и проводят сублимационное высушивание пасты в вакуумной камере при температуре не выше 40°C до остаточной влажности 5% в течение 50 часов. Изобретение относится к продуктам повышенной биологической активности, изготовленным на основе продуктов пчеловодства и сырья растительного происхождения.
Прототипом заявленного решения явился порошок Билар из трутневых, маточных и пчелиных личинок (см. автореферат дис. … д.с.х..н. / И.А.Прохода. - Смоленская гос. с.х. академия. - Смоленск, 2009. - 32 с.).
Проводят измельчение личинок до пастообразного (паста) состояния с использованием лабораторного измельчителя ткани или миксера, добавляют в нее водно-спиртовой экстракт прополиса в количестве 0,06% на с.в. Далее сублимационное высушивание пасты при температуре не выше 40°C в условиях вакуума до остаточной влажности 5% в течение 50 часов. Перед начальной осушкой в вакуумной камере продукт замораживают при температуре минус 20°C. Скорость сушки замедляется до 2% влаги в час за счет добавленного водно-спиртового экстракта. Полученное сырье выдерживают дополнительно один час до стабилизации и упаковывают в герметический полимерный материал или стеклотару.
Недостатком данного порошка Билар является то, что в сырье, которым может быть биомасса трутневых, маточных и пчелиных личинок, добавляется водно-спиртовой экстракт прополиса для консервации и стабилизации. Добавление спирта ограничивает использование препарата (напр., нельзя применять детям) и увеличивает время сублимационной сушки до 50 часов, что менее экономично и снижает биологическую активность препарата до 69,7%. Готовый продукт фасуется в виде порошка, что затрудняет его использование в дозированном виде и вызывает неудобство и опасение при употреблении.
Задачей настоящего изобретения является обогащение биомассы из трутневых личинок цветочной пыльцой, максимальное сохранение биологической активности используемой продукции пчеловодства при снижении стоимости ее изготовления, а также придание выраженных иммуномодулирующих свойств.
Техническим результатом, достигаемым при решении настоящей задачи, является то, что данный препарат обладает иммуностимулирующим эффектом на Т-клеточные реакции иммунитета и выработку антителопродуцентов селезенки при введении препарата в дозе 100 мг/кг массы тела. Стимулирующее действие связано с многообразием соединений трутневых личинок и цветочной пыльцы, являющихся составными компонентами препарата, которые проявляют подобный эффект только в сочетанном виде. Сохранение свойств ингредиентов и повышение иммуномодулирующего эффекта происходит за счет дополнительного введения цветочной пыльцы и сокращения периода сушки ингредиентов лечебно-профилактического препарата.
Указанный технический результат достигается за счет того, что лечебно-профилактический препарат получают следующим способом. Трутневые личинки измельчают с помощью измельчителя тканей до однородной биомассы, в полученную трутневую биомассу добавляют водно-спиртовой экстракт прополиса в количестве 0,06% на сухое вещество. Далее в полученную пасту добавляют тонкоизмельченную цветочную пыльцу, которая должна отвечать параметрам чистоты и влажностью 7% в количестве 0,1% на сухое вещество. Полученный продукт хорошо перемешивают и замораживают при температуре минус 20°C и в таком виде проводят сублимационное высушивание пасты в вакуумной камере при температуре не выше 40°C до остаточной влажности 5% в течение 50 часов.
Введение тонкоизмельченной цветочной пыльцы перед стадией сублимационного высушивания пасты позволяет дополнительно увеличить выход фенольных соединений до 4,5% за счет разрыва инзимы клетки пыльцы, а гомогенизация полученной пасты способствует равномерному распределению дополнительных фенольных соединений. Кроме фенольных соединений препарат обогащается витамином С и каротинами всех видов, что на 14% повышает антиокислительные свойства препарата и позволяет его хранить на протяжении 6 месяцев без изменения качественных показателей за счет повышенного содержания фенольных соединений, витаминов, ароматических веществ, обладающих стабилизирующими антиоксидантными и консервирующими свойствами.
Полученный препарат представляет из себя порошок желтого цвета, который кроме белка, витаминов группы B, β-каротина, α-токоферола дополнительно обогащен биотином, каротином всех видов, РР, 28 макро- и микроэлементами, ненасыщенными жирными кислотами (линолевая, линоленовая и арахидоновая), фенольными соединениями с Р-витаминной активностью, где массовая доля рутина составляет 17 мг%, 80 ферментами, биополимерами, фактором роста и др.
Таким образом, предлагаемый лечебно-профилактический препарат из трутневых личинок, обладающий иммуномодулирующим действием, позволяет получать готовый дозированный к применению препарат для всех возрастных категорий с заданными биологическими иммуномодулирующими свойствами, пригодный к длительному хранению.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- препарат обладает высокой биологической активностью;
- обладает иммуностимулирующим эффектом на Т-клеточные реакции иммунитета;
- упрощен в способе изготовления;
- более дешев в изготовлении;
- имеет удобную дозированную форму потребления;
- имеет срок хранения 6 месяцев.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами получения препарата с иммуномодулирующими свойствами.
Опыт №1. Приготовление лечебно-профилактического препарата, содержащего нативные трутневые, маточные и пчелиные личинки и водно-спиртовой экстракт прополиса:
Проводят измельчение трутневых, маточных и пчелиных личинок до пастообразного (паста) состояния с использованием лабораторного измельчителя ткани или миксера, добавляют в нее водно-спиртовой экстракт прополиса в количестве 0,06% на с.в. Далее сублимационное высушивание пасты при температуре не выше 40°C в условиях вакуума до остаточной влажности 5% в течение 50 часов. Перед начальной осушкой в вакуумной камере продукт замораживают при температуре минус 20°C. Скорость сушки замедляется до 2% влаги в час за счет добавленного водно-спиртового экстракта. Полученное сырье выдерживают дополнительно один час до стабилизации и упаковывают в герметический полимерный материал или стеклотару.
Полученный препарат имеет длительный период сушки до 50 часов, не выдерживает установленного срока хранения - 1 года, при изучении биологической активности не дает высокого эффекта повышения общей и специфической стимуляции организма.
Опыт №2. Полученный препарат представляет собой порошок желтого цвета с приятным цветочным запахом, с менее длительным периодом сушки до 24 часов, более продолжительным сроком хранения и высокими показателями биологической активности до 98,8%. Дает высокий эффект повышения общей и специфической стимуляции организма.
Исследование эффективности заявленного препарата на клеточный иммунный ответ было проведено с использованием реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) по методу Kitamura. Реакция нацелена на определение способности препарата влиять на продукцию сенсибилизированными лимфоцитами-эффекторами медиаторов, приводящих к инфильтрации ткани клеточными элементами и локальному отеку.
7
Тест проведен на белых беспородных мышах обоего пола массой 17-23 г. Иммунизацию животных осуществляли путем однократного внутрибрюшинного введения суспензии эритроцитов баранов 10. В данном эксперименте были изучены заявленный препарат и порошок Билар в дозе 100 мг/кг животных.
Установлено, что заявленный препарат и порошок Билар оказывают стимулирующее действие на функциональную активность Т-лимфоцитов, усиливая продукцию сенсибилизированными лимфоцитами медиаторов, сопровождающих клеточные реакции замедленного типа.
С целью выявления действия заявленного препарата на гуморальное звено иммунитета изучали следующие показатели функциональной активности В-системы: число антителообразующих клеток селезенки белых беспородных мышей и титр антител сыворотки.
8
Количество антителопродуцентов селезенки определяли методом локального гемолиза в геле. Данный метод основан на способности антиэритроцитарных антител, секретируемых антителообразующими клетками (АОК) в гель агарозы. Мышей иммунизировали однократным введением внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии свежих отмытых эритроцитов баранов (10).
Водную суспензию заявленного препарата и порошка Билар вводили внутрижелудочно в дозах 100 мг/кг за 1 час до иммунизации и далее ежедневно одноразово до дня учета результатов. На четвертые сутки после иммунизации подсчитывали количество продуцентов антител на лимфоидный орган по числу макроскопически видимых зон гемолиза вокруг антителообразующих клеток (табл.1).
Таблица 1
Влияние заявленного препарата и порошка Билар на количество антителообразующих клеток (АОК) селезенки мышей
Препарат
Доза, мг/кг
Условия опыта
n, шт
АОК
Контроль
-
-
9
7600±1952
Билар
100
Внутрижелудочно
8
14660±4007
Заявленный препарат
100
Внутрижелудочно
10
18528±3753*
* Примечание: отклонение статистически достоверно по отношению к контролю, P≤0,05
В результате проведенного эксперимента установлен более выраженный иммуностимулирующий эффект при введении заявленного препарата. Стимулирующее действие может быть связано с многообразием соединений, находящихся в цветочной пыльце, - биотином, каротином всех видов, РР, 28 макро- и микроэлементами, ненасыщенными жирными кислотами (линолевая, линоленовая и арахидоновая), фенольными соединениями с Р-витаминной активностью, где массовая доля рутина составляет 17 мг%, 80 ферментами, биополимерами, фактором роста и др. и проявляющихся именно в сочетанном применении с трутневыми личинками, что обуславливает его действие на иммунную систему, и результаты достовернее по сравнению с прототипом - порошком Билар.
Определение антител в сыворотке крови основывается на способности антител (агглютининов), содержащихся в сыворотки крови иммунизированных животных, склеивать в изотоническом растворе хлористого натрия эритроциты барана, используемые в качестве антигена.
Титры гемагглютининов в сыворотке крови определяли на пятые сутки после иммунизации методом серийных разведений в полистироловых планшетах. Результаты исследований показали, что уровень циркулирующих антител в сыворотке крови опытных животных, получавших заявленный препарат и порошок Билар в дозах 100 мг/кг, существенно не изменялся и оказывал стимулирующее действие на Т-клеточные реакции иммунитета и выработку антителопродуцентов селезенки мышей.
Установленные свойства заявленного препарата могут быть использованы для повышения иммунной защиты организма как профилактически, так и в комплексном лечении различных хронических заболеваний, в патогенезе которых имеет место снижение функции клеточного и гуморального звена иммунной системы.