РАСТВОР ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СПАЙКООБРАЗОВАНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ СПАЙКООБРАЗОВАНИЯ
SOLUTION FOR PREVENTION OF COMMISSURE-FORMATION AND METHOD OF COMMISSURE-FORMATION PREVENTION

Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к раствору для профилактики спайкообразования и способу профилактики спайкообразования, в частности к раствору для профилактики спайкообразования, состоящему из трегалозы, и способу профилактики спайкообразования, предусматривающему использование трегалозы, что предотвращает дегидратацию и окисление при соприкосновении с воздухом во время хирургического вмешательства и может предупредить осложнения, такие как спайкообразование органов после оперативного вмешательства.
Уровень техники
Хорошо известно, что ткани, включая органы, соприкасаются с воздухом вследствие разреза при хирургическом вмешательстве, и эти ткани могут обезвоживаться и окисляться, что приводит к их повреждениям. Дегидратация и окисление тканей, включая органы, во время хирургического вмешательства приводит к их повреждениям, которые рассматриваются как причина проблем, включая послеоперационное спайкообразование и задержку выздоровления.
Поскольку спайкообразование особенно часто тормозит нормальное движение тканей, включая органы, оно рассматривается как одно из серьезных послеоперационных осложнений. Например, спайкообразование, наблюдаемое во время операции на сухожилиях, может вызывать дискинезию. В дополнение, спайкообразование органов после внутрибрюшной операции может приводить к таким осложнениям, как кишечная непроходимость, боль и стерильность, и иногда может вызывать такие проблемы, из-за которых следующая операция станет сильно затруднительной.
Примеры используемых способов профилактики послеоперационного спайкообразования и задержки выздоровления включают лечение, при котором во время операции открытые органы постоянно омываются физиологическим раствором, и лечение, в котором ткани, такие как органы, покрывают марлей, пропитанной физиологическим раствором.
Однако возникли такие проблемы, что в случае перфузии физиологическим раствором трудно сохранить достаточность покрытия органов жидким слоем физиологического раствора, предохраняющего от воздействия окружающей среды, что может вызывать окислительный стресс, а в случае покрытия марлей, пропитанной физиологическим раствором, марля может препятствовать хирургическому вмешательству. Трудно сохранить условия, в которых всю поверхность оперируемых тканей, включая органы, можно изолировать от воздуха во время операции.
Поэтому для решения этих проблем предложены средства для профилактики спайкообразования с применением хитина, средства для профилактики спайкообразования с применением связанной гиалуроновой кислоты и лекарственные средства для профилактики задержки выздоровления (например, относящиеся к патентным документам 1 и 2).
[Патентный документ 1]
Патентная публикация №2948254
[Патентный документ 2]
Патентная публикация №3420851
12
22
11
2
2
Однако предшествующим лекарственным средствам, описанным выше, не хватало такого свойства, как удобство использования, поскольку их составляющая, имеющая функцию защиты от спайкообразования, является макромолекулой и их формы, главным образом, представляют собой пленку, помещаемую на место планируемого разреза или вязкую жидкость, применяемую на месте планируемого разреза. Среди веществ, имеющих эффект предохранения от спайкообразования или профилактики задержки выздоровления, не известны такие, которые являлись бы водорастворимыми и могли легко покрывать место планируемого разреза. В то же время, было доказано, что трегалоза (СНО), один из сахаридов, который недавно использовали в различных областях, таких как пищевые продукты или косметология, имеет очень высокие гидратирующие свойства по сравнению с другими сахаридами. В дополнение, поскольку трегалоза при применении на клеточной поверхности имеет структуру, подобную кластерной структуре НО, после дегидратации она считается персистирующей в виде стеклообразного (аморфного) состояния, стабилизируя вместо НО клетки или белки и останавливая их разрушение.
Ожидается, что трегалоза, имея такие выраженные свойства, будет эффективно применяться с неизвестными показаниями, и осуществляли поиск нового показания для использования трегалозы в различных областях. Например, предложены содержащие трегалозу лекарственные препараты для применения к слизистой оболочке (такие как описанные в Патентном документе 3), питательные растворы, содержащие трегалозу в качестве сахаридного калорийного компонента (такие как описанные в Патентных документах 4 и 5), содержащие трегалозу растворы для трансплантированного органа (такие как описанные в Патентном документе 6), содержащие трегалозу средства для внутриглазной перфузии/промывки, глазные капли, глазные мази, имеющие свойства защиты роговицы (такие как описанные в Патентном документе 7), средства, формирующие связи между трегалозой и ненасыщенными компонентами, используемые для ингибирования химических изменений ненасыщенных компонентов (такие как описанные в Патентном документе 8), содержащие трегалозу ингибиторы липолитической деградации (такие как описанные в Патентном документе 9).
[Патентный документ 3]
Kokai (нерассмотренная Патентная публикация) №6-256219
[Патентный документ 4]
Kokai (нерассмотренная Патентная публикация) №6-72883
[Патентный документ 5]
Kokai (нерассмотренная Патентная публикация) №6-319486
[Патентный документ 6]
Kokai (нерассмотренная Патентная публикация) №6-40801
[Патентный документ 7]
Kokai (нерассмотренная Патентная публикация) №6-235233
[Патентный документ 8]
Saikohyo №2002-24832
[Патентный документ 9]
брошюра международной публикации WO 2004/076602
Однако до сих пор не известен тот факт, что с помощью применения защитного раствора с использованием трегалозы, применяемого на соприкасающихся с воздухом тканях, включая места разрезов и органы, из-за таких воздействий, как хирургические операции, будет предотвращено спайкообразование мест разрезов и тканей, а также задержка выздоровления.
Описание изобретения
Проблемы, решаемые изобретением
Задачей изобретения является предоставление раствора для профилактики спайкообразования и способа профилактики спайкообразования, которые применимы в общей хирургии и в которых покрытое состояние во время операции является стабильным и удобным. Другой задачей изобретения является предоставление нового раствора для профилактики спайкообразования и нового способа профилактики спайкообразования с использованием трегалозы.
Средства решения проблемы
Выбирая трегалозу и прилагая все усилия для решения описанных выше задач, авторы обнаружили, что, если во время оперативного вмешательства на поверхность органов животных разбрызгивают водный раствор трегалозы, предотвращается послеоперационное спайкообразование и что удлиняется время выживаемости клеток, даже если после разбрызгивания водного раствора трегалозы поверхность обезвоживается.
Более того, авторы обнаружили, что после разбрызгивания раствора, составленного из трегалозы и гликозил-L-аскорбиновой кислоты, и затем дегидратации, как ни удивительно, показано синергическое действие обоих веществ и более сильный защитный эффект по сравнению с использованием одной трегалозы.
Поэтому изобретение основывается на обнаружении нового эффекта трегалозы и решает описанные выше проблемы путем составления раствора для профилактики спайкообразования, в котором активным ингредиентом является трегалоза. А защитные свойства ткани дополнительно улучшаются, если раствор для профилактики спайкообразования включает гликозил-L-аскорбиновую кислоту.
До сих пор не известны такие области применения, как защита тканей, включая разрезы (раны) и органы, соприкасающиеся с воздухом во время хирургического вмешательства, от повреждений с помощью трегалозы и глюкозил-L-аскорбиновой кислоты в отдельности или их смеси; и изобретение представляет собой первое решение этой проблемы.
Согласно пункту 1 формулы изобретения, оно характеризуется получением раствора для профилактики спайкообразования, в котором активным ингредиентом является трегалоза.
Применение раствора, составленного таким образом для профилактики спайкообразования, предотвращает обезвоживание тканей, включая разрезы и органы, соприкасающиеся с воздухом во время хирургического вмешательства, а также останавливает окислительный стресс, предотвращая перекисное окисление липидов и деградацию липидов, и даже если место разреза и ткани соприкасаются с воздухом во время хирургического вмешательства, трегалоза образует хелат с такими металлами, как Fe, и инактивирует ион металла, который должен был бы вызывать продукцию свободных радикалов, и поэтому останавливает продукцию свободных радикалов, предотвращая спайкообразование после хирургического вмешательства и задержку заживления места разреза.
При этом приемлемо, что раствор для профилактики спайкообразования включает по меньшей мере один или более из антиоксидантов, хелатов, антисептиков, гемостатических средств, противовоспалительных средств и полисахаридов, мукополисахаридов, соли полисахаридов и соли мукополисахаридов, имеющих смазывающие свойства.
При составлении таким образом, если включены антиоксиданты, свойство трегалозы защищать ткань и свойство антиоксидантов удалять свободные радикалы действуют синергично, способствуя предотвращению и ингибированию дегидратации и окислительного стресса тканей, включая места разрезов и органы во время хирургического вмешательства и уменьшая выработку свободных радикалов. Если оно включает хелаты, становится возможным разложение путем соединения двухвалентного иона Fe с хелатами и дальнейшее уменьшение выработки свободных радикалов.
В результате становится возможным более эффективное предотвращение спайкообразования после хирургического вмешательства и задержки заживления раны.
Если раствор включает хотя бы одно или более средств из следующего списка: антисептики, гемостатические средства и противовоспалительные средства, он может быть использован в качестве антисептиков, гемостатических веществ и противовоспалительных средств во время хирургического вмешательства или лечения раны. Следовательно, раствор по изобретению для профилактики спайкообразования составляют так, что он уже включает по меньшей мере одно или более средств из следующего списка: антисептики, гемостатические вещества и противовоспалительные вещества, что является удобным, поскольку нет необходимости применять отдельно такие лекарственные средства, как антисептики, гемостатические вещества и противовоспалительные вещества.
Если раствор включает по меньшей мере одно или более средств из следующего списка: полисахариды, мукополисахариды, соли полисахаридов, соли мукополисахаридов, имеющих смазывающие свойства, при применении этого раствора для профилактики спайкообразования тканей, включая места разрезов и органы, во время хирургического вмешательства, становится возможным предотвращать не только обезвоживание, вызванное соприкосновением с воздухом, окислительный стресс, выработку свободных радикалов, но и такие механические повреждения, как микротравмы во время хирургического вмешательства.
Хорошо известно, что микротравма органов часто развивается из-за контакта органов с руками во время хирургического вмешательства. В этом изобретении составлено высокомолекулярное средство, имеющее высокую биосовместимость и смазывающие свойства, оно способно уменьшать повреждения, вызванные контактом с хирургическими перчатками или хирургическими инструментами, и уменьшать механические повреждения тканей, включая органы.
В этом случае приемлемо, что описанным выше антиоксидантом является производное аскорбиновой кислоты.
При составлении таким образом, свойство трегалозы защищать ткань и свойство производного аскорбиновой кислоты удалять свободные радикалы действуют синергически, способствуя защите и ингибированию дегидратации и окислительного стресса тканей, включая места разрезов и органы, во время хирургического вмешательства и уменьшая выработку свободных радикалов.
В результате становится возможным более эффективное предотвращение спайкообразования после хирургического вмешательства и задержки заживления раны.
В дополнение, удобно, что вязкость раствора для профилактики спайкообразования регулируется с помощью загустителей.
При составлении таким образом, если раствор для профилактики спайкообразования применяется на поверхности тканей, включая места разрезов и органы, оболочки, покрывающие места разрезов и ткани, становятся вязкими, обеспечивая достаточную толщину покрытия областей разрезов и тканей.
В дополнение, удобно, что осмолярность раствора регулируется по меньшей мере одним или более средством из следующего списка: изотоническими растворами электролитов, плазмозаменителями, жидкостями, замещающими внеклеточную жидкость, жидкостями, поддерживающими водный баланс или водой.
При составлении таким образом, раствор по изобретению для профилактики спайкообразования можно сделать изотоническим, и станет возможным вводить питательные вещества вместе с компонентами раствора для профилактики спайкообразования на тканях.
Описанный выше раствор для профилактики спайкообразования может быть представлен в виде жидкости для перфузии, спрея, раствора для разбрызгивания или вапоризации, пенообразного аэрозольного препарата, раствора для инъекции внутривенных жидкостей, жидкости для внутривенного введения.
Если раствор для профилактики спайкообразования представлен в виде жидкости для перфузии, он способен ингибировать или предотвращать поражения различных тканей, включая спайкообразование, с помощью перфузии во время или после хирургического вмешательства жидкостью для перфузии по данному изобретению.
Кроме того, если раствор для профилактики спайкообразования представлен в виде спрея, он способен доставлять раствор для профилактики спайкообразования на обширное пространство равномерно в требуемый участок во время хирургического вмешательства, а также покрывать требуемый участок, где нужно предотвратить повреждение, достаточным слоем раствора. По сравнению с традиционными областями, в которых применяется вязкий раствор с высокомолекулярными веществами в качестве активного ингредиента или образующее пленку вещество помещается в требуемый участок, раствор по изобретению способен предотвращать повреждения ткани и спайкообразование после хирургического вмешательства с достаточной степенью вероятности путем обеспечения покрытия требуемых участков.
Более того, если описанный выше раствор для профилактики спайкообразования представлен в виде раствора для разбрызгивания или ваполяризации, раствор для профилактики спайкообразования можно разбрызгивать на требуемые участки в виде аэрозоля, и это сделает возможной равномерную доставку раствора на обширное пространство в виде очищенного аэрозоля во время хирургического вмешательства, а также покрытие требуемого участка, где нужно предотвратить повреждение, слоем раствора достаточной толщины. По сравнению с традиционными областями, в которых применяется вязкий раствор с высокомолекулярными веществами в качестве активного компонента или формирующее тонкую пленку вещество помещается на требуемый участок, раствор по изобретению способен предотвращать повреждения ткани и спайкообразование после хирургического вмешательства с достаточной степенью вероятности путем обеспечения покрытия нужных участков. Если описанный выше раствор для профилактики спайкообразования представлен в виде пенообразного аэрозольного препарата, он способен равномерно и обширно доставлять раствор для профилактики спайкообразования на требуемый участок во время хирургического вмешательства, а также покрывать требуемый участок, где необходимо предотвратить повреждение, слоем раствора достаточной толщины. По сравнению с традиционными областями, в которых применяется вязкий раствор с высокомолекулярными веществами в качестве активного ингредиента или пленкообразующее вещество помещается на требуемый участок, раствор по изобретению способен предотвращать повреждения ткани и спайкообразование после хирургического вмешательства с достаточной степенью вероятности путем обеспечения покрытия требуемых участков.
Если описанный выше раствор для профилактики спайкообразования представлен в виде раствора для инъекции внутривенных жидкостей или в виде жидкости для внутривенного введения, становится возможным применение раствора для профилактики спайкообразования с помощью средств, включающих внутривенное введение во время по меньшей мере одного или более процессов, происходящих до, во время и после хирургического вмешательства, а также предотвращение или препятствие задержке выздоровления после хирургического вмешательства с помощью средств, включающих внутривенное введение.
Кроме того, изобретение характеризуется наличием способа профилактики спайкообразования с помощью нанесения любого вышеописанного раствора для профилактики спайкообразования на конкретную ткань.
Составив такой раствор для профилактики спайкообразования, его используют на конкретной ткани, это делает возможным предотвращение спайкообразования задействованной конкретной ткани или задержки выздоровления.
[Преимущественный эффект данного изобретения]
Согласно изобретению, оно характеризуется получением раствора для профилактики спайкообразования, в котором активным ингредиентом является трегалоза.
При составлении таким образом, раствор для профилактики спайкообразования предотвращает обезвоживание тканей, включая места разрезов и органы, соприкасающиеся с воздухом во время хирургического вмешательства, а также ингибирует окислительный стресс, предотвращая перекисное окисление липидов и деградацию липидов, и даже если место разреза и ткани соприкасаются с воздухом во время хирургического вмешательства, трегалоза образует хелат с такими металлами, как Fe, и инактивирует ион металла, который вызвал бы выработку свободных радикалов, и поэтому останавливает выработку свободных радикалов, предотвращая спайкообразование после хирургического вмешательства и задержку заживления раны.
Кроме того, поскольку раствор для профилактики спайкообразования содержит производные аскорбиновой кислоты, свойство трегалозы защищать ткань и свойство производного аскорбиновой кислоты удалять свободные радикалы действуют синергично, способствуя предотвращению и останавливая дегидратацию и окислительный стресс тканей, включая места разрезов и органы, во время хирургического вмешательства и уменьшая выработку свободных радикалов. В результате становится возможным более эффективное предотвращение спайкообразования после хирургического вмешательства и задержки заживления раны.
Краткое описание чертежей
[Фигура 1]
Это график, показывающий изменения коэффициента клеточной выживаемости, вызванные высушиванием на воздухе в Примере 1 изобретения.
[Фигура 2]
Это график, показывающий влияние каждого реагента на клетку в Примере 1 изобретения.
Лучший способ выполнения изобретения
Раствор для профилактики спайкообразования по изобретению - это раствор для профилактики спайкообразования, в котором активным ингредиентом является трегалоза. Он применяется во время хирургического вмешательства непосредственно на ткани, включая места разрезов и органы. Он относится к средству, использующемуся для предотвращения спаек, которое предотвращает спайкообразование после хирургического вмешательства, или к терапевтическим средствам, предотвращающим задержку заживления раны.
Далее в описании изобретения под «разрезом (раной)» подразумевается повреждение, под «тканью» - такая ткань организма, как кожа, орган, мышца, нерв, хрящ, кость.
Раствор для профилактики спайкообразования по изобретению можно использовать на различных животных, особенно он подходит для применения к млекопитающим, в особенности к человеку.
Далее автор подробно описывают один пример осуществления изобретения. В качестве примечания, описанная здесь далее композиция не ограничивает изобретение, а может быть модифицирована в рамках данного изобретения.
Этот пример относится к раствору для профилактики спайкообразования, применяемому как средство, покрывающее ткань или предотвращающее спайки, которое предотвращает спайкообразование после хирургического вмешательства и задержку заживления места разреза и как терапевтическое средство, ускоряющее заживление ткани и места разреза после хирургического вмешательства. Раствор для профилактики спайкообразования согласно данному примеру - это раствор, в котором активным ингредиентом является трегалоза.
Раствор для профилактики спайкообразования согласно данному примеру применяется на тканевой поверхности, открытой во время хирургического вмешательства. Для него не существует специального ограничения оперируемой области или раздела медицины, он может широко использоваться не только в лапаротомии или торакотомии, но и при нейрохирургических вмешательствах, ортопедических вмешательствах, относящихся к сухожилиям или связкам, операциях на печени, гинекологических вмешательствах и т.д.
Ткани, открытые во время хирургического вмешательства, кроме мест разрезов, вызванных операционным разрезом, включают, например, органы, открытые разрезом, мышцы, нервы, хрящ, кость. Также он применим для костного мозга, открытого посредством ортопедической остеотомии. Более того, сообщалось, что трегалоза останавливает развитие дегенеративных нарушений нервов у мышей, поэтому она применима для черепно-мозговых и периферических нервов, открытых при нейрохирургическом вмешательстве.
Трегалоза является невосстанавливающим дисахаридом, в котором две молекулы глюкозы связаны с помощью связывания 1 к 1.
Трегалоза является широко известным веществом, впервые выделенным из ржи в 1832 г. В свободном состоянии она широко распространена в природе, включая животных, растения и микроорганизмы. Она содержится в большом количестве в дрожжах, таких как хлебные дрожжи и пивные дрожжи, и она является сахаридом, часто обнаруживаемым в продуктах питания. Кроме того, этот сахарид имеется у различных организмов, и считается, что поскольку трегалоза присутствует у таких насекомых, как Macrobiotus и Brachionus, и у таких растений, как Selaginella tamariscina, они могут выживать в таких суровых условиях, как пустыня.
В этом примере можно использовать любую трегалозу из следующего списка: гидратированная кристаллическая трегалоза, безводная кристаллическая трегалоза, углеводный раствор, содержащий трегалозу, альфа, альфа-трегалоза (в узком смысле), альфа, бета-трегалоза (нео-трегалоза), бета, бета-трегалоза (изо-трегалоза), однако приемлемо, если используется гидратированная кристаллическая трегалоза или безводная кристаллическая трегалоза, в частности составленная из альфа, альфа-трегалозы (альфа-D-глюкопиранозил-альфа-D-глюкопиранозид).
Кроме того, только если это описанная выше трегалоза, то можно использовать какую-либо одну, получаемую из природной трегалозы, крахмала, мальтоолигосахаридов, глюкозы.
В дополнение, для составления раствора для профилактики спайкообразования, в котором активным ингредиентом является трегалоза, вместо трегалозы можно использовать производные, которые после введения in vivo дают трегалозу.
В качестве растворителя для растворения трегалозы можно использовать изотонические растворы электролитов, плазмозаменители или жидкость для инфузии или воду.
Под изотоническими растворами электролитов имеются в виду препараты электролитов, являющиеся изотоническими. Под изотоническими жидкостями понимается внутривенный раствор, являющийся изотоническим, то есть его осмолярность аналогична осмолярности жидкости организма. В качестве изотоничного раствора электролитов можно использовать, например, жидкость, замещающую внеклеточную.
Жидкость, замещающая внеклеточную, относится к изотоническому раствору электролитов для внутривенного введения, используемому для замещения или коррекции внеклеточной жидкости в случае уменьшения внеклеточной жидкости, обусловленного такими проблемами, как геморрагия, диарея и обезвоживание. В качестве внеклеточной замещающей жидкости можно использовать, например, физиологический раствор (0,9% раствор соли), ацетат Рингера, лактат Рингера.
Кроме того, к заменителям плазмы относятся плазмозаменители, используемые в качестве внутривенной жидкости для ее замены, если такие белки плазмы, как альбумин, теряются из-за таких проблем, как геморрагия, причем они содержат высокомолекулярный компонент, такой как декстран, крахмал, рекомбинантный альбумин. В качестве плазмозаменителей можно использовать препарат декстрана 40, препарат декстрана 70, препарат гидроксиэтилового крахмала (HES), препарат модифицированного желатина.
Жидкостью для инфузионной терапии является внутривенная жидкость, используемая для замещения и инфузии воды/электролита, если введение через рот невозможно или недостаточно. В качестве жидкости для инфузии можно использовать вспомогательную жидкость, инфузионную жидкость и инфузионную жидкость, дополненную глюкозой в высокой концентрации.
Вода действует как растворитель для растворения трегалозы. В качестве воды можно использовать, например, чистую воду или дистиллированную воду. Допустимо использование стерильной дистиллированной воды.
В растворе для профилактики спайкообразования приемлема концентрация трегалозы, если она больше 10 мМ, предпочтительно от 50 до 350 мМ.
Если концентрация трегалозы меньше 10 мМ, эффект клеточной защиты может не наступить. Также, если она больше 350 мМ, раствор станет гипертоническим.
К раствору для профилактики спайкообразования можно добавить по меньшей мере одно или более средств из группы, включающей антисептики, гемостатики и противовоспалительные вещества.
В качестве антисептиков используются, например, широко известные антисептики, такие как повидон-йод, пероксомоносульфат калия, диметилдидецилхлорид аммония. В качестве гемостатиков используются, например, широко известные гемостатики, такие как тромбин, альгинат натрия, в качестве противовоспалительных веществ используются, например, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства.
Более того, к раствору для профилактики спайкообразования можно добавить антиоксиданты.
В качестве антиоксиданта можно использовать, например, водорастворимый стабильный витамин С. Водорастворимый стабильный витамин С включает производные аскорбиновой кислоты, отнесенные к провитамину С, включая гликозил-L-аскорбиновую кислоту (здесь далее называемая АА-2G) и аскорбиновую кислоту-2-фосфорную кислоту (АА-2Р).
АА-2G также обозначает аскорбиновую кислоту-2-глюкозид, который присутствует в природе и разлагается in vivo с помощью альфа-глюкозидазы до L-аскорбиновой кислоты и D-глюкозы, проявляющей физиологическую активность, аналогичную L-аскорбиновой кислоте. АА-2G даже в высокой концентрации не имеет клеточной токсичности и его стимулирующее влияние на синтез коллагена и стимулирующее влияние на клеточную пролиферацию и дифференциацию является значимым, что приводит к его частому использованию не только в продуктах питания или в области косметики, но также в культивировании такой соединительной ткани, как фибробласты.
В качестве АА-2G приемлема для использования серия 2-глюкопиранозил-L-аскорбиновой кислоты, включающая 2-О-альфа-D-моноглюкопиранозил-L-аскорбиновую кислоту, составленную посредством гликозидного соединения L-аскорбиновой кислоты в С-2 положении и одной или более молекул D-глюкозы. Кроме того, АА-2G не ограничивается гликозил-L-аскорбиновой кислотой как органической кислотой, а могут быть любые физиологически приемлемые соли неорганической кислоты и соли органической кислоты, такие как натриевая соль, калиевая соль, кальциевая соль, магниевая соль и аммонийная соль, которые в водной среде выделяют гликозил-L-аскорбиновую кислоту.
Приемлемая концентрация АА-2G в растворе для профилактики спайкообразования должна быть больше 0,01 мМ, предпочтительно от 0,1 до 200 мМ. Если она меньше 0,01 мМ, то эффект клеточной защиты может не наступить.
В качестве антиоксиданта можно использовать такие микроэлементы, как витамин С, витамин Е, селен, in vivo антиоксидантный фермент, такой как СОД (супероксиддисмутаза), каталаза, глутатионпероксидаза, антиоксиданты, получаемые из растений (вещества, подобные СОД), которые содержат каротиноиды, являющиеся жирорастворимым пигментом растений, таким как альфа-каротин, бета-каротин, гамма-каротин, ликопин, ксантофил, и полифенолы, содержащиеся в цветах, листьях, коре, стебле, такие как флавоноид, катехин, танин, антоцианин, изофлавон, кверцетин, фикоцианобилин, фикоэритробилин.
Более того, к раствору для профилактики спайкообразования можно добавить хелаты.
В качестве хелатов можно использовать DMPS (димеркаптопропанолсульфонат), DMSA (димеркаптосукцинат), ALA (альфа-липоевая кислота), EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), L-глутаминдиуксусную кислоту/тетранатриевую (GLDA/4Na), глюконат натрия. Поскольку хелаты могут метаболизироваться путем присоединения двухвалентных ионов Fe, становится возможной защита нового продукта от свободных радикалов, обусловленных ионами Fe, приводящая к дальнейшему более эффективному предотвращению спайкообразования органов после хирургического вмешательства и задержки заживления раны.
Более того, к раствору для профилактики спайкообразования можно добавить по меньшей мере один полисахарид, мукополисахарид и их соль и вещество, имеющее смазывающие свойства.
В качестве полисахаридов и их солей можно использовать, например, полисахариды, содержащие карбоксильную группу или их водорастворимые соли или полисахариды, содержащие карбоксильную группу, соединенную ионной связью, или их водорастворимые соли. В качестве полисахаридов, содержащих карбоксильную группу, можно использовать карбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилхитин, карбоксиметилхитозан, карбоксиметилкрахмал, альгиновую кислоту, пектин, карбоксиметилдекстран и т.д.
За исключением гиалуроновой кислоты (ГК), мукополисахариды включают гепарин, сульфат гепарина и сульфат хондроитина.
В качестве водорастворимой соли можно использовать соли натрия, соли щелочных металлов или соли щелочно-земельных металлов.
Кроме того, в числе полисахаридов, мукополисахаридов и их солей приемлемо использование гиалуроновой кислоты. В частности, известно, что такие мукополисахариды, как гиалуроновая кислота, должны превращать воду в гель в количестве от сотен до тысяч раз от их количества и придавать жидкости организма способность удерживать воду, вязкость, смазывающую способность. Если ее добавляют к раствору для профилактики спайкообразования по данному примеру, при покрытии поверхности таких тканей, как места разреза и органы, раствором для профилактики спайкообразования, она способна придавать смачивающую способность покрывающей пленке и получать эффект предохранения места разрезов от механических повреждений и тканей.
Раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру регулируется таким образом, что после смешивания вышеописанных веществ его осмолярность находится в пределах от 200 до 450 Осм, а рН находится в пределах от 7 до 8.
Причиной, по которой осмолярность регулируется в интервале от 200 до 450 Осм, является адаптация к осмолярности организма человека. В дополнение, причиной, по которой рН находится в пределах от 7 до 8, является предотвращение кислотного лизиса клеток тканей места разрезов или органов, на которых применяют раствор для профилактики спайкообразования.
Для регуляции осмолярности используются коллоидные регулирующие осмотическое давление вещества, такие как гидроксиэтилкрахмал, декстранкрахмал. Осмолярность корректируется по нижней границе, учитывая конденсацию из-за обезвоживания во время хирургического вмешательства.
Кроме того, раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру регулируется таким образом, что температура во время его использования должна примерно равняться температуре тела, то есть от 35 до 38°С. При этой процедуре, если раствор для профилактики спайкообразования применяется во время хирургического вмешательства, намеченные участки тканей, такие как места разрезов и органы, не должны охлаждаться, и нужно предотвратить замерзание во время хирургического вмешательства, поскольку это вызывает послеоперационную боль.
Раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру можно всегда применять непосредственно перед разрезом, хотя предпочтительно использовать его во время хирургического вмешательства или непосредственно перед наложением на место разреза шва. Кроме того, его можно непрерывно применять во время хирургического вмешательства.
В дополнение, раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру применяется непосредственно на тканевой поверхности, включая места разрезов и органы, соприкасающиеся с воздухом из-за разреза во время хирургического вмешательства. Относительно способа введения, после того, как раствором для профилактики спайкообразования пропитывают носители, такие как марля или нетканый материал, их можно накладывать на тканевую поверхность, включая места разрезов и органы. Однако более приемлемо, если раствор наливают прямо на поверхность ткани, включая места разрезов и органы, или после составления раствора для профилактики спайкообразования согласно данному примеру в виде спрея его разбрызгивают прибором для разбрызгивания.
После приготовления раствора для профилактики спайкообразования в виде спрея его можно разбрызгивать на требуемые участки, при этом раствор, который работает как средство для профилактики спайкообразования в области разрезов, можно разбрызгивать широко и равномерно на требуемые участки, а также требуемый участок, где необходимо предотвратить повреждение, можно покрыть достаточным слоем раствора.
В качестве разбрызгивателя можно использовать как спрей с двумя пневмораспылителями, в которых капли раствора переносятся воздухом или углекислым газом, так и спрей с одним пневмораспылителем, в котором раствор под давлением превращается в маленькие частицы.
Один пневмораспылитель для получения капель не использует газ. Поэтому использование одного пневмораспылителя предотвращает дегидратацию или окисление тканей, включая места разрезов и органы, или понижает температуру нагревом испаряемого. Это предпочтительно с точки зрения аспекта предотвращения повреждений областей разрезов и органов. Один пневмораспылитель включает насадку с пустым конусом и насадку с полным конусом, в которых раствор разбрызгивается в форме конуса с помощью вращающегося потока, насадку, в которой угол разбрызгиваемого конуса можно изменять, плоскую насадку, в которой капли разбрызгиваются в форме плоскости, твердую насадку, в которой капли выходят прямо вперед, частичный спрей, в котором капли становятся маленькими частицами, при этом все перечисленное может применяться.
С другой стороны, если для усиления во время хирургического вмешательства защитного эффекта от механических повреждений тканей, включая места разрезов и органы, увеличивают количество полисахаридов, мукополисахаридов и их солей, рекомендуется использовать спрей с двумя пневмораспылителями, так как это увеличивает вязкость раствора для профилактики спайкообразования. Если раствор для профилактики спайкообразования наливают прямо на поверхность ткани, включая места разрезов и органы, нужна определенная вязкость, поэтому вязкость должна регулироваться, для чего используют загустители, такие как камеди, включая мукополисахариды или гетерополисахариды, синтетическое органическое высокомолекулярное соединение, включающее поливиниловый спирт или полиакриловую кислоту, производные целлюлозы, производные крахмала.
Кроме того, раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру может быть составлен как раствор для применения в виде разбрызгивания или испарения, и этот раствор для применения в виде разбрызгивания или испарения применяют с помощью разбрызгивания атомизированного аэрозоля таким прибором, как распылитель и пульверизатор. При получении раствора для профилактики спайкообразования в виде раствора для применения в виде спрея или испарителя для разбрызгивания его на нужные участки в виде атомизированного аэрозоля раствор, который работает как раствор для профилактики спайкообразования, можно разбрызгивать широко и равномерно на требуемом участке; а требуемый участок, где необходимо предотвратить повреждение, можно покрыть слоем раствора достаточной толщины.
В качестве распылителя и испарителя можно использовать какой-либо ультразвуковой прибор, в котором раствор атомизируется ультразвуковым осциллятором путем встряхивания, образует капли, переносимые газом, безыгольно впрыскивается, под давлением превращаясь в маленькие частицы.
Например, можно использовать устройство, включающее нагреватель, ультразвуковой осциллятор, вентилятор, распылитель, в котором раствор для применения в виде разбрызгивания или испарения нагревают нагревателем до температуры, при которой он атомизируется с помощью встряхивания ультразвуковым осциллятором, и аэрозоль, полученный путем атомизации, разбрызгивается из распылителя вентилятором. Кроме того, можно использовать двухфазный испаритель с раствором для профилактики спайкообразования, состоящим из 2 растворов: воды и концентрированного раствора для профилактики спайкообразования, создавая резервуар для воды с нагревателем и резервуар для концентрированного раствора с ультразвуковым осциллятором. Если используется двухфазный испаритель, пар, получаемый нагревом нагревателем, и аэрозоль концентрированного раствора, атомизированного ультразвуковым осциллятором, сталкиваются, и аэрозоль раствора для профилактики спайкообразования, получаемый при столкновении, разбрызгивается из распылителя.
Кроме того, составив раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру в виде пенообразного аэрозольного препарата, этот пенообразный препарат можно применять, используя нагреватель, компрессор, насадку для прибора, создающего аэрозоль. Пенообразный аэрозольный препарат получают путем добавления широко известных поверхностно-активных веществ к уже описанному раствору для профилактики спайкообразования.
В эндоскопической хирургии, широко используемой в течение последних лет, возникли проблемы осложнений, вызванных обезвоживанием и окислением тканей, включая органы, во время хирургического вмешательства. Посредством применения раствора для профилактики спайкообразования и способа профилактики спайкообразования по данному примеру возможно предотвратить осложнения после эндоскопической операции. Так, используя разбрызгиватель с одним пневмораспылителем, зафиксированным сверху удлинительного тубуса, спрей, полученный из раствора для профилактики спайкообразования по данному примеру можно разбрызгивать на ткани, включая органы, задействованные в операции, во время или после эндоскопической операции. В дополнение, приемлемо, если удлинительный тубус одного пневмораспылителя и провод эндоскопической аппаратуры фиксируют друг друга, при этом облегчается функционирование разбрызгивателя, так как уплотняются материалы, введенные в организм во время эндоскопической процедуры.
Более того, раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру можно получить в виде жидкости для перфузии, жидкости для внутривенного введения, раствора для инъекции внутривенных жидкостей.
Жидкость для перфузии составляется как водный раствор растворенной трегалозы и АА-2G в широко известной внутривенной жидкости, такой как физиологический раствор и раствор Рингера, и помещается в емкость для внутривенной жидкости. Жидкость для перфузии используется путем замещения и перфузирования операционного поля во время или после хирургического вмешательства.
Препараты внутривенной жидкости готовят посредством растворения трегалозы с широко известными веществами, создающими тонус, такими как хлорид натрия, глицерин и широко известным буфером, таким как фосфат и ацетат в широко известных растворителях, таких как физиологический раствор и раствор Рингера, и помещают в емкости для внутривенной жидкости. Препараты жидкости для внутривенного введения используют как минимум в одном или более процессах, а именно до, во время и после хирургического вмешательства, используя такой способ, как капельное внутривенное вливание.
Раствор для инъекции внутривенных жидкостей готовят посредством растворения трегалозы и АА-2G с широко известными средствами, повышающими тоничность, такими как хлорид натрия, глицерин и широко известным буфером, таким как фосфат и ацетат в широко известных растворителях, таких как физиологический раствор и раствор Рингера.
Этот раствор для инъекции используют в виде смешанного раствора с широко известной жидкостью для внутривенного введения, такой как глюкоза для инъекций, ксилит для инъекций, физиологический раствор, декстран 40 для инъекций, аминокислота для инъекций, раствор Рингера.
Растворы для инъекций используют по меньшей мере в одном или более процессах, а именно до, во время и после хирургического вмешательства, используя такой способ, как капельное внутривенное вливание, путем введения в жидкость для внутривенного введения.
Обнаружено, что во время хирургического вмешательства, если такие ткани, как органы и места разрезов, соприкасаются с кислородом воздуха, то происходят обезвоживание, окислительный стресс и появляются свободные радикалы, приводя к окислительному повреждению, такому как повреждение фосфолипидов мембраны, повреждение белков и ДНК.
В этом примере, путем применения во время операции раствора для профилактики спайкообразования по данному примеру непосредственно на тканях, включая органы и места разрезов, трегалоза предотвращает дегидратацию тканей и участков разреза, а также предотвращает окислительные повреждения, обусловленные окислительным стрессом во время операции. Кроме того, трегалоза образует хелаты с такими металлами, как Fe, инактивирует ионы металла, вызывающие появление свободных радикалов, ингибирует выработку свободных радикалов. Посредством предотвращения обезвоживания, окислительного повреждения, обусловленного окислительным стрессом и выработкой свободных радикалов, становится возможным предотвращение спайкообразования и задержки выздоровления, вызванной окислительными повреждениями после хирургического вмешательства. В дополнение, поскольку раствор для профилактики спайкообразования по данному примеру содержит АА-2G, являющийся антиоксидантом, при добавлении радикалов он обеспечивает синергический эффект таким образом, что места разрезов и открытые ткани можно защитить более эффективно посредством сочетания трегалозы и АА-2G, имеющего другие механизмы действия.
[Пример]
Далее авторы подробно описывают конкретный пример осуществления изобретения. Следующие примеры нужны для описания изобретения, но они не ограничивают собой изобретение.
(Пример 1)
В качестве клеток использовали клетки HepG2 (клеточные линии - производные гепатомы человека).
Для всех реагентов, кроме клеток HepG2, АА-2G, трегалозы, среды DMEM, FCS, нейтрального красного, использовали химически чистые реактивы. В дополнение, в качестве раствора образца, в котором активировали клетки HepG2, готовили 4 вида растворов: PBS (+) раствор, 2,5 мМ АА-2G раствор, 132 мМ раствор трегалозы, 2,5 мМ АА-2G+132 мМ смешанный раствор трегалозы.
Для получения 2,5 мМ раствора АА-2G в дистиллированной воде растворяли реактив аскорбиновая кислота-2-глюкозид (AA2G; Hayashihara Biochemical Labs., Inc.). А для получения 132 мМ раствора трегалозы в дистиллированной воде растворяли порошок высокоочищенной гидратированной кристаллической трегалозы. Для получения смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза в дистиллированной воде растворяли реагенты: аскорбиновую кислоту-2-глюкозид и порошок высокоочищенной гидратированной кристаллической трегалозы. Затем регулировали рН и осмолярность этих 4 видов растворов образцов. Осмолярность 2,5 мМ раствора АА-2G, 132 мМ раствора трегалозы, смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза регулировали путем получения изотоничности хлоридом натрия PBS (+).
рН и осмолярность каждого образца после регулирования имели следующие значения: рН 7,2 и 279 мОсм для раствора PBS (+), рН 6,8 и 265 мОсм для 2,5 мМ раствора АА-2G, рН 7,2 и 283 мОсм для 132 мМ раствора трегалозы и рН 7,0 и 282 мОсм для смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза.
4
Затем высевали клетки HepG2 в концентрации 4×10 клеток/лунка в четыре 12-луночных плашки и инкубировали 4 дня в среде DMEM (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd), содержавшей 10% FCS (Gibco). Затем среду DMEM, содержавшую 10% FCS, помещали в 4 вида растворов образцов: раствор PBS (+), 2,5 мМ раствор АА-2G, 132 мМ раствор трегалозы, смешанный раствор 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза и активировали при 37°С 1 час.
Для клеток, активированных 4 видами растворов образцов, готовили две контрольные плашки и две тестируемые плашки, соответственно. Для каждой из двух тестируемых плашек одна плашка была высушена воздухом в течение 5 минут, а другую плашку высушивали воздухом 3 минуты. Две контрольные плашки не высушивали воздухом.
Затем клетки каждой плашки помещали в бессывороточную среду DMEM и инкубировали при 37°С 1 час. После добавления 0,02% нейтрального красного (Wako Pure Chemical Industries, Ltd, здесь далее называемого NR) их активировали при 37°С 40 минут. После удаления раствора NR и добавления PBS (+) их оставляли на 40 минут при 37°С, PBS (+) удаляли и высушивали их воздухом в течение 5 минут. К ним добавляли NR экстракты и оставляли на 10 минут при 37°С, затем каждый образец помещали в 96-луночную плашку и измеряли поглощение на длине волны 570 нм.
Поглощение не высушенных воздухом контрольных плашек рассчитывали как коэффициент клеточной выживаемости к 100%, и рассчитывали коэффициент клеточной выживаемости тестируемых плашек, высушенных воздухом в течение 3 минут. Результаты представлены графически на Фиг.1, где показаны изменения коэффициента клеточной выживаемости при высушивании воздухом.
А именно, коэффициенты клеточной выживаемости тестируемых плашек, высушенных воздухом в течение 3 минут, равнялись 60,4%, 61,8%, 70,7% и 72,3% для раствора PBS (+), 2,5 мМ раствора АА-2G, 132 мМ раствора трегалозы и смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза, соответственно.
Кроме того, коэффициент клеточной выживаемости тестируемой плашки, высушенной воздухом в течение 5 минут, для раствора PBS (+) равнялся 54,9%. Как упомянуто выше, эффект клеточной защиты рассчитывали для каждого раствора образцов, считая коэффициент клеточной выживаемости контрольной плашки 100%; при этом эффект клеточной защиты не обнаружили у раствора 2,5 мМ АА-2G, но обнаружили у 132 мМ раствора трегалозы и смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза, если плашки высушивали воздухом в течение 3 минут.
Поэтому эффект клеточной защиты высушенных воздухом реагентов считается эффективным для незначительного обезвоживания примерно в течение 3 минут.
Кроме того, рассчитывали коэффициент клеточной выживаемости контрольных плашек для каждого не высушенного воздухом раствора образцов. Результаты представлены графически на Фиг.2, показывая влияние на клетки каждого реагента.
А именно, коэффициенты клеточной выживаемости в контрольных плашках, если коэффициент клеточной выживаемости контрольной плашки для PBS (+) считался равным 100%, составляли 101,6%, 97,6% и 89,6% для 2,5 мМ раствора АА-2G, 132 мМ раствора трегалозы и смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза, соответственно.
Кроме того, если коэффициент клеточной выживаемости контрольной плашки с PBS (+) считался равным 100%, рассчитывали влияние на клетки 2,5 мМ раствора АА-2G, 132 мМ раствора трегалозы и смешанного раствора 2,5 мМ АА-2G+132 мМ трегалоза. Каждый коэффициент клеточной выживаемости равнялся 101,5%, 97,7% и 89,7%, соответственно, и обнаружено, что регулировка рН и осмолярности уменьшала воздействие на клетки.
Поскольку известно, что механизм защиты клеток от дегидратации и окисления подобен механизму защиты от дегидратации и окисления ткани организма, с помощью данного примера 1 было доказано, что водный раствор, содержащий в качестве активных ингредиентов трегалозу и антиоксидант, действует как раствор для профилактики спайкообразования.
(Пример 2)
В этом примере, используя кроликов, создали модель абдоминальных спаек путем обезвоживания поверхности кишечника во время внутрибрюшной операции и обсуждали эффект предотвращения спаек кишечника с помощью трегалозы.
+
В качестве трегалозы в стерильной дистиллированной воде, взятой в объеме 250 мл, растворяли порошкообразную трегалозу (реагент трегалоза; Hayashihara Biochemical Labs., Inc.) и NaCl в количестве, необходимом для получения 2% раствора, стерилизовали путем фильтрации через фильтр (Millex; Millpore Co., Bedford), помещали в стерильный контейнер и хранили при комнатной температуре. В качестве подопытных животных использовали пять самок кроликов New Zealand White весом от 2,85 до 3,2 кг в возрасте 14 недель (Std:NZW, Japan SLC, Inc., Shizuoka). Кроликов содержали в виварии (комнатная температура 24+/-1°С, влажность от 30 до 70%) в University of Tokyo, Graduate School of Agricultural и Life Sciences Veterinary Medical Center. В течение 1 недели со дня покупки кролики привыкали к данным условиям, и во время этого периода выполнили анализ крови (клинический анализ крови, азот мочевины крови, креатинин, АЛТ, ЩФ) и общий рентгеновский снимок для подтверждения отсутствия отклонения от нормы. Эксперимент по данному примеру выполняли согласно Руководству по проведению эксперимента на животных Университета Токио.
2
2
Эксперимент по данному примеру выполняли в соответствии со следующим. В качестве премедикации внутримышечно вводили 5 мг/кг кетамина (Ketalal 50; Sankyo Lifetech Co., Ltd., Tokyo) и 0,1 мг/кг медетомидина (Domitol; Meiji Seiyaku Co., Ltd., Tokyo) и после интубации оставляли изофлюран (Isoflu; Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka). Перед операцией в качестве антибиотиков подкожно вводили 10 мг/кг энрофлоксацина (Baytril; Bayer Medical Ltd., Tokyo) и во время операции внутривенно вводили 10 мл/кг/час молочно-кислого раствора Рингера (Fuso; Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd., Osaka). После операции в качестве анальгетика однократно подкожно вводили 20 мкг/кг бупренорфина (Lepetan; Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Tokyo). Во время анестезии проводили мониторинг ЭКГ, ЕТСО и SpO и оставляли животных с нормальными вариациями.
В контрольную группу случайным образом отбирали трех из пяти кроликов, а двух других кроликов относили к трегалозной группе. Пяти кроликам после дезинфекции операционного поля выполняли разрез живота по средней линии, вынимали кишечник насколько это возможно и марлевым тампоном удаляли серозный экссудат. Контрольную группу (три кролика) оставляли обезвоженной, а трегалозной группе (два кролика) весь кишечник несколько раз обрызгивали трегалозой. Во время этого периода выполняли овариогистеректомию согласно установленному способу. Для обеих групп время лапаротомии составило от 30 до 60 минут. Для овариогистеректомии и закрытия брюшной стенки использовали 3-0 одноволоконную нейлоновую нить (Bear surgical suture; Bear Medic Corporation, Chiba), для подкожных тканей использовали 4-0 одноволоконную полиглюконатную нить (MAXON; Syneture Co., Ltd., Connecticut) и для зашивания кожи использовали сшивающий аппарат (Manipler AZ-35W; Mani Inc., Tochigi). После операции наблюдали общее состояние и места разрезов и через 2 недели усыпляли с помощью смертельной дозы пентобарбитала. Макроскопически наблюдали и учитывали спайкообразование в брюшной полости, а также в качестве патогистологического изучаемого материала удаляли ткани участков спайкообразования и фиксировали в формалине.
Клинические данные после 2 недель и макроскопические данные спайкообразования после лапаротомии для каждого случая представлены в Таблице 1.
[Таблица 1]Клинические данные после 2 недель и макроскопические данные после лапаротомии
№ кролика
Клинические данные
Данные после лапаротомии
Контрольная группа
Спайкообразо-вание в кишечнике
Спайкообразованиекульти матки
1.2.3.
Без патологииБез патологииПодкожная серома
3 участка спаек5 участков спаекНе менее 5 участков спаек
ПрисутствуетПрисутствуетПрисутствует
Трегалозная группа
1.2.
Частичное расхождение кожного шваБез патологии
2 участка спаек (предполагаемых)Нет существенных участков спаек
ПрисутствуетПрисутствует
Во всех случаях через 2 недели после операции показано отсутствие клинической патологии. Однако, в 1 случае в контрольной группе имелась умеренная подкожная задержка экссудата непосредственно под местом хирургического разреза. Результат бактериального посева этого экссудата оказался отрицательным. Кроме того, удалили часть области кожного шва и в 1 случае в трегалозной группе обнаружили язву.
В отношении спаек, во всех случаях в обеих группах после овариогистеректомии обнаружена значительная спайка с окружающей тканью на шве культи матки. В отношении спаек кишечника, у всех 3 кроликов контрольной группы подтверждены множественные спайки (более 3 участков) от легкой до умеренной степени. В трегалозной группе 2 участка незначительных спаек подозревались у 1 кролика, однако их можно рассматривать как нормальное соединение кишечника. У последнего кролика макроскопически не обнаружено значительных спаек.
Этот пример показывает, что спрей трегалозы должен быть эффективным для предотвращения внутрибрюшных спаек, обусловленных обезвоживанием. Трегалоза имеет свойство аккумулирования большого количества воды, а трегалоза в аморфном состоянии считается предотвращающей спайки посредством покрытия серозной мембраны кишечника и стабилизации клеток.
(Пример 3)
В этом примере, используя кроликов, готовили модель внутрибрюшной спайки путем высушивания поверхности кишечника во время внутрибрюшного хирургического вмешательства и обсуждали предохраняющий эффект трегалозы на кишечную спайку.
В качестве трегалозы в стерильной дистиллированной воде растворяли порошок трегалозы (Reagent trehalose; Hayashihara Biochemical Labs., Inc.) для получения 250 мл 7% раствора, стерилизовали путем фильтрации на фильтре (Millex; Millpore Co., Bed ford), наливали в стерильный контейнер и хранили при комнатной температуре.
В качестве подопытных животных использовали 20 самок кроликов New Zealand White весом от 2,6 до 3,2 кг в возрасте 14 недель (Std:NZW, Japan SLC, Inc., Shizuoka). Кроликов содержали в виварии (комнатная температура 24+/-1°С, влажность от 30 до 70%) в University of Tokyo, Graduate School of Agricultural и Life Sciences Veterinary Medical Center. В течение 1 недели со дня покупки кролики привыкали к данным условиям, и во время этого периода выполнили анализ крови (клинический анализ крови, азот мочевины крови, креатинин, АЛТ, ЩФ) и общий рентгеновский снимок для подтверждения отсутствия отклонения от нормы. Эксперимент по данному примеру выполняли согласно Руководству по проведению эксперимента на животных Университета Токио.
Эксперимент по данному примеру выполняли в соответствии со следующим. В качестве премедикации внутримышечно вводили 5 мг/кг кетамина (Ketalal 50; Sankyo Lifetech Co., Ltd., Tokyo) и 0.1 мг/кг медетомидина (Domitol; Meiji Seiyaku Co., Ltd., Tokyo), и после интубации оставляли изофлюран (Isoflu; Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka). Перед операцией в качестве антибиотиков подкожно вводили 10 мг/кг энрофлоксацина (Baytril; Bayer Medical Ltd., Tokyo) и во время операции внутривенно вводили 10 мл/кг/час молочно-кислого раствора Рингера (Fuso; Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd., Osaka). После операции в качестве анальгетика однократно подкожно вводили 20 мкг/кг бупренорфина (Lepetan; Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Tokyo).
2
2
Во время анестезии проводили мониторинг ЭКГ, ЕТСО и SpO и оставляли животных с нормальными вариациями.
20 кроликам после дезинфекции операционного поля выполняли разрез живота по средней линии, вынимали кишечник насколько это возможно и марлевым тампоном удаляли серозный экссудат. Согласно установленному способу выполняли тотальную овариогистеректомию. После лигирования 4-0 одноволоконной полиглюконатной нитью (MAXON; Syneture Co., Ltd., Connecticut) разрезали четырьмя разрезами артерии и вены яичника. Для сшивания маточно-вагинальной культи использовали 5-0 одноволоконную полиглюконатную нить (MAXON; Syneture Co., Ltd., Connecticut), для закрытия брюшной стенки использовали 3-0 одноволоконную полиглюконатную нить (MAXON; Syneture Co., Ltd., Connecticut), для подкожных тканей использовали 4-0 одноволоконную полиглюконатную нить (MAXON; Syneture Co., Ltd., Connecticut) и для зашивания кожи использовали сшивающий аппарат (Manipler AZ-35W; Mani Inc., Tochigi).
Десять из двадцати кроликов случайным образом относили к контрольной группе, а десять других кроликов относили к трегалозной группе.
Контрольную группу (10 кроликов) оставляли для высушивания. Время лапаротомии составило 60 минут.
Для трегалозной группы раствор трегалозы разбрызгивали по всей брюшной полости каждые 15 минут (0 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 60 минут после начала операции). Время лапаротомии составило 60 минут.
После операции наблюдали общее состояние и места разрезов и через 2 недели после операции усыпляли кроликов с помощью смертельной дозы пентобарбитала. Макроскопически наблюдали и учитывали спайкообразование в брюшной полости, а также в качестве патогистологического изучаемого материала удаляли ткани участков спайкообразования и фиксировали в формалине. Клинические данные после 2 недель и макроскопические данные спайкообразования после лапаротомии для каждого случая представлены в Таблице 2.
[Таблица 2]Клинические данные после 2 недель и макроскопические данные спайкообразования после лапаротомии
Контрольная группа
Трегалозная группа
№ кроликов
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Участки спайко-образо-вания
тощая кишка-брюшная стенка
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
слепая кишка-толстая кишка
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
большой сальник-прямая кишка
-
-
-
-
-
-
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
большой сальник- желудок
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
большой сальник-тонкая кишка
-
-
-
-
-
-
++
-
-
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
тонкая кишка-прямая кишка
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
++
-
-
-
-
-
брюшная стенка-полость
-
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
брюшная стенка-жировая клетчат-ка
-
+
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
прямая кишка-жировая клетчат-ка
-
-
-
-
-
-
-
++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Суммарный показатель
4
3
0
1
0
0
4
2
0
2
1
0
0
0
2
0
0
0
0
0
«нет спаек: -»
«спайки легкой степени (возможно отделение): +»
«спайки тяжелой степени (отделение невозможно): ++»
Во всех случаях через 2 недели после операции не обнаружено клинической патологии.
В отношении спаек, в контрольной группе во всех случаях обнаружены явные спайки с окружающими тканями на шве маточно-вагинальных культей, являющихся оперированными участками овариогистерэктомии, и на лигатурах сосудов. В отношении спаек между внутрибрюшными органами обезвоженных поверхностей кишечника, в группе контроля подтверждены спайки легкой и тяжелой степени в 6 из 10 случаев, а в трегалозной группе в 2 из 10 случаев. В отношении оценки спайкообразования между органами, для трегалозной группы она равнялась +3, тогда как для контрольной группы +16. Степень предотвращения составляла 81% (критерий суммы рангов Вилкоксона: при р<0.05).
Этот пример показывает, что трегалоза, безусловно, может предотвращать и уменьшать спайки и должна быть эффективна для профилактики внутрибрюшного спайкообразования, обусловленного высыханием.
Трегалоза имеет свойства аккумулирования большого количества воды и считается предотвращающей спайки путем покрытия серозной мембраны кишечника и стабилизации клеток.
Поскольку спрей раствора сделан так, чтобы была возможна диффузия и пенетрация серозных мембран органа, целые органы можно покрыть трегалозой.