СПОСОБ ОБРАБОТКИ РАСТВОРА, СОДЕРЖАЩЕГО ЛАКТО-N-БИОЗУ
METHOD OF TREATING SOLUTION CONTAINING LACTO-N-BIOSE

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к способу обработки жидкой композиции, содержащей лакто-N-биозу; жидкому препарату, содержащему лакто-N-биозу, который обработали таким способом обработки, и его высушенному продукту; и способу получения продукта, содержащего лакто-N-биозу.
Испрашивается приоритет по заявке на патент Японии № 2010-024436, поданной 5 февраля 2010 года, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Лакто-N-биоза представляет собой дисахарид, в котором галактоза и N-ацетилглюкозамин связаны посредством β1,3-связи (Galβ1,3GlcNAc, далее сокращенно LNB) и который известен как один из дисахаридов, составляющих олигосахариды (олигосахариды молока), содержащиеся в грудном молоке.
В качестве способов получения LNB обычно предлагались способы с использованием микроорганизмов или ферментов (см., например, патентные документы 1-3).
Недавно сообщалось, что LNB обладает такой функцией, как эффект ускорения роста бифидобактерий (см., например, патентный документ 4). Кроме того, предполагается, что LNB также будет проявлять различные механизмы действия, которые эффективны в стимулировании и поддержании крепкого здоровья, такие как механизм регуляции кишечника и иммунорегуляторный механизм.
ДОКУМЕНТЫ, ОПИСЫВАЮЩИЕ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[Патентный документ 1]
Опубликованная заявка на патент Японии № 6-253878
[Патентный документ 2]
Опубликованная заявка на патент Японии № 2003-189891
[Патентный документ 3]
Опубликованная заявка на патент Японии № 2008-154495
[Патентный документ 4]
Опубликованная заявка на патент Японии № 2008-290972
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ЗАДАЧИ, РЕШАЕМЫЕ НАСТОЯЩИМ ИЗОБРЕТЕНИЕМ
По мере исполнения может быть рассмотрено добавление LNB к различным типам продукции, включая пищевую, фармацевтическую, косметическую продукции и корма.
При добавлении LNB в такую продукцию, в целях стерилизации или наподобие, необходима термическая обработка при температуре 65°C или выше либо LNB до добавления, либо продукта, содержащего добавленную LNB.
Однако по данным исследований, проведенных авторами настоящего изобретения, когда такой тип термической обработки проводили в жидкой композиции, содержащей LNB, LNB с жидкой композицией может претерпевать ряд проблем, включая разложение, денатурацию и потерю биологической активности. Таким образом, в случае продукта, который в процессе производства включает термообработку, ожидается, что в процессе производства будет невозможно выполнение достаточной термообработки.
В свете данных обстоятельств было разработано настоящее изобретение, целью которого является обеспечение способа обработки, позволяющего подавить термическое разложение LNB при нагревании жидкой композиции, содержащей LNB, при температуре 65°C или выше; кроме того, обеспечение жидкого препарата, содержащего LNB, которое обрабатывают с помощью данного способа обработки; высушенного продукта, полученного из такого жидкого препарата, содержащего LNB; и способ получения продукта, содержащего LNB.
СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ЗАДАЧИ
В результате трудоемких исследований авторы настоящего изобретения обнаружили, что при нагревании жидкой композиции, содержащей LNB, при температуре 65°C или выше, в качестве продуктов распада или денатурации образуются дигидрат N-ацетилглюкозамина (GlcNAc) и галактоза (Gal). На основе этого открытия авторы настоящего изобретения провели дополнительные исследования реакции термического разложения, используя эти продукты разложения или денатурации в качестве индикаторов, и обнаружили, что LNB с жидкой композицией, содержащей LNB, проявляет низкую термическую стабильность и подвергается быстрому термическому разложению при нейтральной или щелочной среде, но, когда рН находится в пределах от не более чем 5,5 до не менее чем 2,0, ход реакции термического разложения подавляется, и поэтому авторы изобретения осуществили настоящее изобретение.
Для достижения описанной выше цели, настоящее изобретение содержит объекты.
<1> Способ обработки жидкой композиции, содержащей LNB, включающий: подготовку жидкой композиции, содержащей LNB, обладающий рН при 25°C не менее 2,0 и не более 5,5, и нагревание жидкой композиции при температуре 65°C или выше.
<2> Способ согласно <1>, где жидкая композиция, содержащая LNB, является пищевым, фармацевтическим, косметическим продуктом или кормом, который находится в жидкой форме.
<3> Жидкий препарат, содержащий LNB, который обрабатывается способом в соответствии с <1> или <2>.
<4> Высушенный продукт из жидкого препарата, содержащего LNB, который обрабатывается способом в соответствии с <1> или <2>.
<5> Способ получения продукта, содержащего LNB, включающий добавление жидкого препарата, содержащего LNB, который обрабатывается способом в соответствии с <1> или <2>, или их высушенного продукта, к пищевому, фармацевтическому, косметическому продуктам или корму.
ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение может обеспечить: способ обработки, который позволяет подавить термическое разложение LNB, когда жидкую композицию, содержащую LNB, нагревают при температуре 65°C или выше; жидкий препарат, содержащий LNB, который обрабатывают с помощью данного способа; высушенный продукт, полученный из такого жидкого препарата, содержащего LNB; и способ получения продукта, содержащего LNB.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг.1 представлена фотография, отображающая результаты тестового примера 1 (показано ТСХ обнаружение образцов после термической обработки при температуре 90°C в течение 60 минут для жидких композиций, содержащих LNB, с различными рН).
На Фиг.2 представлена фотография, отображающая результаты тестового примера 2 (показано ТСХ обнаружение образцов после термической обработки при различных температурах и различных периодах времени для жидкой композиции, содержащей LNB, с рН 7,0).
ЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В способе обработки настоящего изобретения в первую очередь подготавливают жидкую композицию, содержащую LNB, с pH при 25°C не менее чем 2,0 и не более чем 5,5. Предпочтительно, pH составляет не менее 2,0 и не более 5,0, и, еще более предпочтительно, не менее 2,0 и не более 4,5. Если рН жидкой композиции, содержащей LNB, более чем 5,5 или менее чем 2,0, то при термической обработке, осуществляемой при температуре 65°C или выше, в следующей стадии разложение LNB будет происходить более охотно, и если рН превышает 7,0, то LNB, как правило, подвергается полному разложению. Считается, что при рН менее 2,0, в дополнение к термическому разложению происходит кислотное разложение. При условии, что рН жидкой композиции, содержащей LNB, находится в пределах от не менее чем 2,0 до не более чем 5,0, маловероятно, что LNB подвергнется разложению, когда термообработку проводят при температуре 65°C или выше в следующей стадии.
В настоящем изобретении "жидкая композиция, содержащая LNB, обладающая рН при 25°С не менее чем 2,0 и не более чем 5,5" описывает жидкую композицию, содержащую LNB, для которой рН удовлетворяет указанному выше диапазону при стандартной температуре 25°C. Другими словами, когда температура жидкой композиции, содержащей LNB, изменяется до температуры, отличной от 25°C, рН будет скорректирован в соответствии с температурой. Подготовка жидкой композиции, содержащей LNB, имеющей такой тип установленного диапазона рН, также включена в объем настоящего изобретения.
Другими словами, подготовка жидкой композиции, содержащей LNB, для которой рН при произвольной температуре не входит в пределы от не менее чем 2,0 до не более чем 5,5, также включена в объем настоящего изобретения при условии, что рН удовлетворяет диапазону от не менее чем 2,0 до не более чем 5,5, когда температура меняется на стандартную температуру 25°C.
Например, жидкая композиция, содержащая LNB с рН 1,90 при температуре 65°C, имеет рН 2,01 при доведении температуры до стандартной температуры 25°C, и, следовательно, подготовка данной жидкой композиции, содержащей LNB, путем термической обработки при температуре 65°C или выше в последующей стадии, включена в объем настоящего изобретения.
Примеры жидкой композиции, содержащей LNB, включают растворы, приготовленные путем растворения LNB в растворителе, таком как вода (в дальнейшем именуемый "растворы LNB"), жидкие соединения, получаемые путем добавления LNB или раствора LNB в жидкий продукт (такой, как пищевой, фармацевтический, косметический продукты или корм, который находится в жидкой форме) (далее именуемые "жидкие продукты с добавленной LNB"), и жидкие продукты (такие, как пищевой, фармацевтический, косметический продукты или корм, который находится в жидкой форме), которые естественным образом содержат LNB в качестве компонента (далее именуемые "жидкие продукты, содержащие естественную LNB").
Нет никаких конкретных ограничений для способа, используемого для подготовки жидкой композиции, содержащей LNB, с рН не менее чем 2,0 и не более чем 5,5, и примеры, включающие способы (1) и (2), описаны ниже.
(1) Способ, в котором рН жидкой композиции, содержащей LNB, и обладающей значением рН, превышающим 5,5 (именуемой в дальнейшем "жидкая композиция, содержащая LNB, с высоким значением рН"), доводят до значения не менее чем 2,0 и не более чем 5,5.
(2) Способ растворения LNB в жидкой композиции, обладающей рН не менее чем 2,0 и не более чем 5,5.
В способе (1) жидкой композицией, содержащей LNB, обладающей высоким значением рН, может быть любой из вышеупомянутых растворов LNB, жидких продуктов с добавленной LNB или жидких продуктов, содержащих естественную LNB.
Значение pH жидкой композиции, обладающей высоким значением рН, содержащей LNB, можно регулировать путем добавления кислоты. Кислота может быть выбрана подходящим образом из таких кислот, которые обычно используются для регулирования рН; и одна кислота или комбинация двух или более кислот может быть выбрана из неорганических кислот, таких как соляная кислота и фосфорная кислота, и органических кислот, таких как лимонная кислота и уксусная кислота.
Примеры жидкой композиции, обладающей рН не менее чем 2,0 и не более чем 5,5, используемой в способе (2), включают жидкости, в которых значение рН жидкости, обладающей значением рН, превышающим 5,5 (такие как вода или буферный раствор), регулировалось с помощью того же способа, как описано в способе (1), и жидкие продукты, обладающие рН не менее чем 2,0 и не более чем 5,5 (такие, как фруктовые соки цитрусовых фруктов, таких как апельсины).
Bacillus circulans
Нет никаких особых ограничений в способе, используемом для получения LNB, который может быть выбран соответствующим образом из стандартных способов. Примеры включают в себя способ, в котором субстрат, содержащий лактозу и N-ацетилглюкозамин, используется в качестве исходного вещества, и это исходное вещество вступает в реакцию последовательно с Р-галактозидазой, полученной из семенников свиней, и р-галактозидазой, полученной  (см. опубликованную заявку на патент Японии № 06-253878); способ, который использует микроорганизмы, клетки животных или клетки насекомых, способные производить сложные углеводы из сахарного нуклеотида и сложного предшественника углеводов (см. опубликованную заявку на патент Японии № 2003-189891); и способ получения LNB, основанный на ферментном методе (см. опубликованную заявку на патент Японии № 2008-154495). Среди этих способов способ, описанный ниже и раскрытый в опубликованной заявке на патент Японии № 2008-154495, является предпочтительным с точки зрения обеспечения более высокой простоты.
А именно способ, в котором:
(i) комбинация углеводного сырья и фермента, который производит α-глюкозо-1-фосфат путем фосфоролиза углеводного сырья, и
(ii) комбинация фермента, который превращает α-глюкозо-1-фосфат в УДФ-галактозу, фермента, который превращает УДФ-галактозу в галактозо-1-фосфат, а также их кофакторов, и/или комбинация фермента (УДФ-Gly продуцирующий фермент), который преобразуют α-глюкозо-1-фосфат и УДФ-галактозу в УДФ-глюкозу и α-галактозо-1-фосфат соответственно, и его кофактора взаимодействуют в присутствии N-ацетилглюкозамина, фосфорной кислоты, LNB фосфорилазы (EC 2.4.1.211) и УДФ-глюкозо-4-эпимеразы (EC 5.1.3.2). Реакцию синтеза LNB с использованием вышеупомянутых микроорганизмов или ферментов, как правило, проводят в жидкости, обладающей рН примерно от 7,0 до 7,5, и установленной температурой реакции около 37°C. Содержание LNB в полученной реакцией жидкой композиции может быть восстановлено с использованием стандартных методов, таких как колоночная хроматография.
Термическая обработка жидкой композиции, содержащей LNB со значением рН не менее чем 2,0 и не более чем 5,5, производится при температуре 65°C или выше.
В целях обеспечения достаточного подавления термического разложения LNB, верхний предел температуры термической обработки, как правило, не превышает 140°C.
Предпочтительная температура термообработки может быть установлена в соответствии с вышеуказанным диапазоном, согласно намеченной цели термической обработки. Например, когда основной целью является тепловая стерилизация, температура термической обработки предпочтительно находится в диапазоне от 65 до 140°C, и более предпочтительно - от 80 до 140°C.
Кроме того, в случаях процесса обработки пищи и т.п., где целью термической обработки является не тепловая стерилизация (например, термическая обработка для таких целей, как денатурации белка), температура термической обработки предпочтительно находится в диапазоне от 70 до 120°C, и более предпочтительно - от 80 до 100°C.
Время нагрева зависит от температуры термической обработки, но, как правило, находится в диапазоне от 2 секунд до 60 минут, и предпочтительно - от 2 секунд до 10 минут.
После охлаждения стандартными методами нагретый жидкий продукт, содержащий LNB, может при необходимости быть герметично закрыт внутри контейнера для производства упакованных в контейнер жидких продуктов, содержащих LNB.
Нагретый жидкий препарат, содержащий LNB, может также быть высушен для получения высушенного продукта. Например, жидкий препарат, содержащий LNB, подготовленный термической обработкой раствора LNB, содержащего только LNB, используя термическую обработку по настоящему изобретению, может быть высушен для получения порошка LNB. Сублимационная сушка предпочтительна в качестве способа сушки жидких препаратов, содержащих LNB, поскольку она обеспечивает отличную устойчивость LNB.
Ни нагретый жидкий продукт, содержащий LNB, полученный вышеописанным способом, ни его высушенный продукт не содержит продукты разложения или денатурации LNB, или содержит очень мало таких продуктов.
В соответствии со способом обработки по настоящему изобретению, жидкая композиция, содержащая LNB, содержит такую LNB, которая, как ожидается, проявляет различные виды биологической активности, может быть нагрета с целью тепловой стерилизации или других целей обработки, без потери биологической активности.
В результате способ обработки по настоящему изобретению можно использовать в любом процессе и обработке, которые включают в себя этап термической обработки во время производства различных продуктов, таких как пищевые, фармацевтические, косметические продукты и корма.
Например, используя жидкий продукт (такой как пищевой, фармацевтический, косметический продукты или корм, который находится в жидкой форме) в качестве жидкой композиции, содержащей LNB, которая подвергается термической обработке, нагретый продукт, содержащий LNB (такой как пищевой, содержащий LNB, фармацевтический, содержащий LNB, косметический, содержащий LNB или корм, содержащий LNB) может быть получен без потери активности LNB.
Кроме того, путем добавления жидких продуктов, содержащих LNB, которые нагревали, как описано выше, или их высушенного продукта к любому из различных продуктов (например, пищевому, фармацевтическому, косметическому продуктам или корму), может быть получен продукт, содержащий LNB.
Кроме того, поскольку LNB, содержащаяся в жидком препарате, содержащем LNB, или его высушенном продукте, полученная с использованием способа обработки по настоящему изобретению, является одним из дисахаридов, составляющих природные олигосахариды (олигосахариды молока) в грудном молоке, то добавление LNB в пищевые, фармацевтические, косметические продукты и т.п. является безопасным.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение описано более подробно ниже с помощью серии тестовых примеров и примеров, но настоящее изобретение следующими примерами никоим образом не ограничивается.
В примерах, представленных ниже, все значения рН относятся к значениям рН при 25°C, и были измерены с помощью Horiba Navi F-25 (производства Horiba, Ltd.).
<Пример получения 1: Получение порошка LNB>
В соответствии со способом получения LNB с использованием ферментного метода, описанного в опубликованной заявке на патент Японии № 2008-154495, порошок LNB получали путем нижеописанного алгоритма.
Реакцию проводили в соответствии с описанием примера 8 в опубликованной заявке на патент Японии № 2008-154495 и получали жидкую реакционную композицию с концентрацией LNB 50 мМ.
После деминерализации полученную реакционную жидкую композицию подавали в хроматографическую колонку, заполненную Toyopearl HW40F (производства Tosoh Corporation) в качестве наполнителя, выделяли дисахаридную фракцию и лиофилизировали, получая на выходе 1 кг порошка LNB с чистотой 95%.
<Тестовый пример 1>
Целью данного теста являлась оценка влияния рН жидкой композиции, содержащей LNB, на стабильность LNB при нагревании.
1) Методика теста:
Образцы порошка LNB, полученного в приведенном выше примере получения 1, растворяли в концентрации 2% (по массе, это также относится и ко всем последующим значениям концентрации) в 0,1 М цитратно-буферного раствора (рН от 3,0 до 6,0), 0,1 M фосфатно-буферного раствора (рН от 6,0 до 8,0) или 0,1 М буферном растворе, содержащем глицин (рН от 8,5 до 10,5), таким образом, полученные образцы (жидкие композиции, содержащие LNB) с 1 по 16, обладали значениями рН с интервалами в 0,5 во всем указанном выше диапазоне значений рН.
5 мл образца каждого из полученных с 1 по 16 образцов помещали в пробирку и нагревали при 90°C в течение 60 минут.
Каждый из нагретых образцов охлаждали до 15°C, и затем капали 1 мкл на пластину силикагеля для тонкослойной хроматографии (ТСХ). Пластину получали, используя 80% раствор ацетонитрила, а затем погружали в 5% раствор серной кислоты и окрашивали путем нагревания в печи. Наличие или отсутствие продуктов разложения или денатурации (денатурата N-ацетилглюкозамина и галактозы) и количество этих продуктов разложения или денатурации оценивали, определяя, действительно ли произошло разложение, и если это так, то определяли степень этого разложения.
2) Результаты теста:
Результаты теста показаны на Фиг.1. Фиг.1 представляет собой фотографию, показывающую ТСХ обнаружение образцов для каждого из образцов с различными значениями pH после термической обработки при температуре 90°C в течение 60 минут. На фиг.1 Gal представляет собой галактозу и GlcNAc представляет N-ацетилглюкозамин.
Как видно из Фиг.1, при условиях термической обработки, описанных выше, LNB был стабильным и практически не претерпевал разложение при рН 5,5 или меньше, и, в частности, 5,0 или меньше. В противоположность этому, при рН 6,0 или выше, и, в особенности, 7,0 или выше, наблюдалось значительное количество продуктов разложения или денатурации, что свидетельствует о том, что LNB была нестабильной.
<Тестовый пример 2>
Целью настоящего теста была оценка влияния температуры нагрева и времени на стабильность LNB в рамках нейтральной жидкой композиции, содержащей LNB.
1) Методика теста:
Порошок LNB, полученный в приведенном выше примере получения 1, растворяли в концентрации 2% в 0,1 М фосфатного буфера со значением рН 7,0 для подготовки образца (жидкой композиции, содержащей LNB).
По 5 мл подготовленного образца разливали в пробирки, которые нагревали при 90°C в течение 0, 10, 20, 30, 40, 50 или 60 минут, или нагревали при 65, 67, 70, 75, 80, 85 или 88°C в течение 60 минут.
Каждый из нагретых образцов охлаждали до 15°C, и тем же способом, как описано в Тестовом примере 1, определяли, действительно ли произошло разложение, и если это так, то определяли степень этого разложения.
2) Результаты теста:
Результаты теста показаны на Фиг.2. Фиг.2 представляет собой фотографию, показывающую ТСХ обнаружение образцов для каждой из жидких композиций, содержащих LNB, при значении pH 7,0 после термической обработки при различных температурах и различных периодах времени.
Как видно из Фиг.2, продукты разложения или денатурации были обнаружены при всех различных условиях термической обработки, и количество этих продуктов разложения увеличилось при продлении времени нагрева, и увеличении температуры нагрева. Эти результаты подтвердили, что LNB разлагается при любых условиях нагрева при нейтральном диапазоне, и степень разложения была прямо пропорциональна времени нагрева и температуры.
<Тестовый пример 3>
Целью этого теста являлась оценка влияния температуры нагрева и времени на стабильность LNB в жидкой композиции, содержащей LNB, со значением рН 5,5 или ниже.
1) Методика теста:
Образцы порошка LNB, полученного в приведенном выше тестовом примере 1, растворяли в концентрации 2% в 0,1 М цитратно-буферном растворе (рН: 5,5, 5,0, 4,0, 3,0) для подготовки ряда жидких композиций, содержащих LNB. Кроме того, часть LNB раствора, обладающего рН 3,0, использовали для приготовления растворов, обладающих рН 2,0 или 1,0, путем добавления 1 М соляной кислоты.
В отдельности полученный образец порошка LNB растворяли в концентрации 2% в 0,1 М фосфатного буфера, обладающего рН 7,0, для подготовки жидкой композиции, содержащей LNB.
Наборы, включающие жидкие композиции, содержащие LNB, при каждом значении рН нагревали при заданной температуре (65, 70, 80, 90, 100 или 120°C) в течение определенного периода времени (5, 10, 20, 30 или 60 минут).
Каждую из нагретых жидких композиций, содержащих LNB, охлаждали, и тем же способом, описанным в тестовом примере 1, определяли, действительно ли произошло разложение, и если это так, то определяли степень этого разложения. Основываясь на результатах, степень разложения оценивали по критериям, перечисленным ниже.
(Критерии оценки):
«-» нет разложения;
«±» небольшое разложение;
«+» частичное разложение;
«+ +» обильное разложение;
«+ + +» почти полное разложение.
Результаты теста
Результаты теста приведены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, в диапазоне рН от не менее чем 2,0 до не более чем 5,5, LNB обладал стабильностью и практически не претерпевал разложение. Этот эффект был в особенности более высоким для значений рН не менее 2,0 и не более 5,0, и даже более высоким для значений рН не менее 2,0 и не более 4,0. В противоположность этому, в случае жидкой композиции, содержащей LNB, со значением рН 7,0 или 1,0, разложение происходило даже после нагрева в течение 5 минут, и степень разложения была прямо пропорциональна времени нагрева и температуре.
Таблица 1
Время нагрева (минут)
pH
Температура нагрева
5
10
20
30
60
(°C)
7,0
65
-
-
-
±
+
70
-
-
±
+
+
80
-
±
+
+
++
90
±
+
++
++
+++
100
+
+
++
++
+++
120
++
+++
+++
+++
+++
5,5
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
-
-
90
-
-
-
-
±
100
-
-
-
±
+
120
-
±
+
+
+
5,0
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
-
-
90
-
-
-
-
-
100
-
-
-
-
±
120
-
-
±
±
±
4,0
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
-
-
90
-
-
-
-
-
100
-
-
-
-
-
120
-
-
-
-
-
3,0
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
-
-
90
-
-
-
-
-
100
-
-
-
-
-
120
-
-
-
-
-
2,0
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
-
90
-
-
-
-
-
100
-
-
-
-
-
120
-
-
-
-
±
1,0
65
-
-
-
-
-
70
-
-
-
-
-
80
-
-
-
±
+
90
-
±
±
+
++
100
±
±
+
++
++
120
++
++
+++
+++
+++
<Пример 1>
100 г LNB порошка, полученного в приведенном выше примере получения 1, растворяли в 9,9 кг очищенной воды и добавляли к раствору 0,1 М соляной кислоты для доведения рН до 4,5. Полученный водный раствор предварительно нагревали в течение 3 минут при 70°C с использованием УВТ стерилизатора (производство Morinaga Engineering Co., Ltd.), затем стерилизовали при 130°C в течение 2 секунд, а затем охлаждали до 15°C, и получали на выходе 10 кг жидкого препарата, содержащего LNB.
Этот жидкий препарат, содержащий LNB, анализировали с использованием того же метода ТСХ, как описано в тестовом примере 1, и результаты подтвердили, что LNB не разлагалась.
<Пример 2>
100 г LNB порошка, полученного в приведенном выше примере получения 1, добавляли в 9,9 кг коммерчески доступный апельсиновый сок (производство Morinaga Milk Industry Co., Ltd.), и полученную смесь нагревали при 80°C в течение 15 минут, и затем охлаждали до 15°C. 100 мл аликвоты сока использовали для заполнения стеклянных бутылок, которые затем запечатывали, получая на выходе 100 бутылок апельсинового сока, содержащего LNB.
Значение pH полученного апельсинового сока составлял 4,51, и анализ апельсинового сока, используя тот же метод ТСХ, как описано в тестовом примере 1, подтвердил, что LNB не разлагалась.
<Пример 3>
100 г LNB порошка, полученного в приведенном выше примере получения 1, растворяли в 9,9 кг очищенной воды, и к раствору добавляли 0,1 М лимонной кислоты для доведения рН до 5,0. Полученный водный раствор нагревали при 90°C в течение 30 минут, а затем охлаждали до 15°C, получая на выходе 10 кг жидкого препарата, содержащего LNB.
Этот жидкий препарат, содержащий LNB (подогретая жидкая композиция), анализировали с использованием того же метода ТСХ, как описано в тестовом примере 1, и результаты подтвердили, что LNB не разлагалась.
Лиофилизация нагретого жидкого препарата давала на выходе 100 г порошка.
<Пример 4>
10 г порошка (нагретого порошка LNB), полученного в Примере 3, добавляли в состав компонентов, перечисленных в таблице ниже, и добавляли деминерализованную ионообменным обменом воду до общего объема 300 мл, получая таким образом жидкий препарат для перорального введения, содержащий лакто-N-биозу. В таблице 2 "необходимое количество" цитратного буфера означает количество, достаточное для доведения значения рН до 5,0.
Таблица 2
Высушенный экстракт моркови
214 мг
Высушенный экстракт Epimedium grandiflorum
50 мг
Урсодезоксихолевая кислота
25 мг
D-сорбит
50 г
Сахароза
25 г
Касторовое масло, укрепленное полиэтиленом
3 г
Пропиленгликоль
5 мл
Бензонат натрия
600 мг
Бутилкаучук
10 мг
Цитратный буфер
необходимое количество
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
Настоящее изобретение способно обеспечить способ обработки, который способствует подавлению термического разложения LNB, когда жидкую композицию, содержащую LNB, нагревают при температуре 65°C или выше; жидкий препарат, содержащий LNB, который обрабатывают, используя данный способ обработки; сушеный продукт, произведенный из такого жидкого препарата, содержащего LNB; и способ получения продукта, содержащего LNB, и поэтому пригодного при производстве пищевых, фармацевтических, косметических продуктов, кормов и подобных.