УЛУЧШЕННЫЕ ВАРИАБЕЛЬНЫЕ ДОМЕНЫ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Одиночный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD) тяжелой цепи, в котором аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой K или Q, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
2. ISVD тяжелой цепи по п. 1, который имеет С-концевую последовательность (положения 109-113 по Kabat), которая представляет собой VTVKS (SEQ ID NO: 1) или VTVQS (SEQ ID NO: 2), или последовательность, которая имеет одно аминокислотное различие (то есть в одном из положений 109, 110, 111 или 113) с последовательностью VTVKS и/или VTVQS и все еще имеет либо аминокислотный остаток K, либо Q в положении 112.
3. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1 или 2, который содержит аминокислотный остаток в положении 11, который выбран из L, E, K, V и Y, при этом положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
4. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-3, в котором аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой E, а аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой K, при этом положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
5. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-3, в котором аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой V, а аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой K, при этом положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
6. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-5, который содержит аминокислотный остаток в положении 89, выбранный из L, T и V, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
7. ISVD тяжелой цепи по п. 6, который содержит аминокислотный остаток в положении 89, выбранный из L и T, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
8. ISVD тяжелой цепи по п. 7, который содержит аминокислотный остаток в положении 89, который представляет собой L, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
9. ISVD тяжелой цепи по п. 7, который содержит аминокислотный остаток в положении 89, который представляет собой Т, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
10. ISVD тяжелой цепи по п. 8, в котором аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой L и/или аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой V, при этом положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
11. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-10, в котором аминокислотный остаток в положении 110 выбран из T, K и Q, где положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
12. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-11, в котором аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой L, при этом положения аминокислотных остатков в ISVD тяжелой цепи указаны с нумерацией по Kabat.
13. ISVD тяжелой цепи по п.1, в котором:
- аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой один из K, L и V; и
- аминокислотный остаток в положении 14 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 41 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой один из L, M, T и V; и
- аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой один из Q и L; и
- аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой один из Т, К и Q; и
- аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой один из K и Q.
14. ISVD тяжелой цепи по п. 13, в котором:
- аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой один из L и V; и
- аминокислотный остаток в положении 14 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 41 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой один из L, T и V; и
- аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой один из Q и L; и
- аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой Т;
- аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой один из K и Q.
15. ISVD тяжелой цепи по п. 13, в котором:
- аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой V; и
- аминокислотный остаток в положении 14 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 41 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой L; и
- аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой один из Q и L; и
- аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой Т;
- аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой один из K и Q.
16. ISVD тяжелой цепи по п. 13, в котором:
- аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой один из L и V; и
- аминокислотный остаток в положении 14 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 41 представляет собой один из A и P; и
- аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой Т; и
- аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой один из Q и L; и
- аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой Т;
- аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой один из K и Q.
17. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-16, который имеет каркас 4 (последовательность FW4), который является либо:
- одной из последовательностей FW4 с SEQ ID NO: 3-5, 7-14, 16-20;
- последовательностью, которая имеет не более трех, предпочтительно не более двух аминокислотных различий, по меньшей мере, с одной из последовательностей FW4 из SEQ ID NOs 3–5, 7–14, 16–20, в которой (i) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 112 нумерации по Kabat, представляет собой либо K, либо Q; и в которой (ii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 103 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой W или R; (iii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 104 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой G; (iv) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 106 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой G; (v) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 107 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Т; (vi) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 108 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Q или L (а в гуманизированных иммуноглобулиновых одиночных вариабельных доменах тяжелой цепи - предпочтительно L); (vii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 109 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой V; (viii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 110 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Т; (ix) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 111 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой V.
18. ISVD тяжелой цепи по п. 17, который имеет каркас 4 (последовательность FW4), который представляет собой либо:
- WGQGTQVTVKS (SEQ ID NO: 3) или WGQGTQVTVQS (SEQ ID NO: 12); или
- последовательность, которая имеет не более трех, предпочтительно не более двух аминокислотных различий (например, только одно аминокислотное различие) с SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 12, в которой (i) аминокислотный остаток в позиции, соответствующего положения 112 нумерации Kabat, стоит либо K, либо Q; и в которой (ii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 103 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой W или R; (iii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 104 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой G; (iv) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 106 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой G; (v) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 107 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Т; (vi) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 108 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Q или L (а в гуманизированных иммуноглобулиновых одиночных вариабельных доменах тяжелой цепи - предпочтительно L); (vii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 109 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой V; (viii) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 110 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой Т; (ix) аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 111 нумерации по Kabat, предпочтительно представляет собой V.
19. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что аминокислотный остаток в положении 113 выбран из S, T, A, L, P, F, E, V, причем положения аминокислотных остатков в тяжелой цепи цепи ISVD указаны с нумерацией по Kabat.
20. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-19, который представляет собой домен VHH, гуманизированный домен VHH или домен VH камелизированного типа.
21. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-20, который направлен против Kv1.3, IL-23, OX40L, IgE, CXCR4, HER3, TNF, c-Met, RANKL, CXCR7 или A-бета.
22. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-20, который может специфически связываться с сывороточным альбумином человека.
23. ISVD тяжелой цепи по п. 22, в котором:
 CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность SFGMS (SEQ ID NO: 41);
 CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO: 42); и
 CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность GGSLSR (SEQ ID NO: 43);
24. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 22 или 23, который имеет по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95% идентичности последовательности по меньшей мере с одним из числа Alb-1 (SEQ ID NO: 52 в WO 2006/122787), Alb-8 (SEQ ID NO: 46) и/или Alb-23 (SEQ ID NO: 61).
25. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 22-24, который содержит или состоит из одной из SEQ ID NO: 47-60, 62-75, 503-504, 512-513.
26. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-25, который связан на своем С-конце с другой аминокислотной последовательностью, фрагментом, доменом или связывающей единицей, необязательно через подходящий линкер.
27. ISVD тяжелой цепи по п. 26, который связан на своем С-конце с другим иммуноглобулиновым одиночным вариабельным доменом, необязательно через подходящий линкер.
28. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-25, который связан, на своем С-конце, с С-концевым удлинением (X)n, в котором n равно от 1 до 5, например 1, 2, 3, 4 или 5 (а лучше 1 или 2, например 1); и каждый X представляет собой (предпочтительно встречающийся в природе) аминокислотный остаток, который независимо выбран и предпочтительно независимо выбран из группы, состоящей из аланина (A), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).
29. Библиотека ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-20.
30. Библиотека остатков нуклеиновых кислот, кодирующих ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-20.
31. Библиотека по п.30, которая представляет собой экспрессирующую библиотеку.
32. Библиотека по любому из пп.29-31, которая представляет собой синтетическую библиотеку.
33. Библиотека по любому из пп. 29-21, которая содержит по меньшей мере 100 различных последовательностей, например по меньшей мере 1000 различных последовательностей, в частности более 105 различных последовательностей, более конкретно более 106 различных последовательностей, например от 108 до 1010 или более различных последовательностей.
34. Белок, полипептид, конструкция, соединение или другой химический структурный элемент, которые содержат по меньшей мере один ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-28.
35. Белок, полипептид или соединение по п. 34, которые содержат по меньшей мере два ISVD тяжелой цепи, связанные либо напрямую, либо через подходящий линкер.
36. Нуклеиновая кислота, которая кодирует ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-28, или белок, полипептид или соединение по п. 34 или 35.
37. Способ получения ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-28 или белка, полипептида, конструкции, соединения или химического структурного элемента по п. 34 или 35, необязательно включающий экспрессию нуклеиновой кислоты по п. 36 в подходящем организме-хозяине.
38. Композиция, содержащая ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-28, белок, полипептид, конструкцию, соединение или химический структурный элемент по п. 34 или 35 или нуклеиновую кислоту по п. 36, где композиция необязательно представляет собой фармацевтическую композицию.
39. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-28, белок, полипептид, конструкция, соединение или другой химический структурный элемент по любому из пп. 34 или 35, или композиция по п. 38 для применения в терапии.