СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕСТНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА
METHOD OF PREDICTING EFFICIENCY OF LOCAL CHEMICAL THERAPY IN TREATMENT OF PATIENTS WITH MALIGNANT TUMOURS OF BRAIN

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для оценки эффективности местной химиотерапии головного мозга у больных со злокачественными опухолями центральной нервной системы.
Известен способ оценки ответа на лечение химиопрепаратом, в котором используются биохимические показатели, такие как
концентрация ФНО-α, ИЛ-1, ИЛ-6 в сыворотке крови (Орлов В.Н., Гусева С.А., Гончаров Я.П. Влияние химиотерапии на концентрацию в сыворотке крови пациентов с множественной миеломой интерлейкина-1, интерлейкина-6 и фактора некроза опухоли. Укр. ж. гематол. та трансфузioл. 2007, N 3, с.17-20.).
Однако такой анализ не проводился при злокачественных новообразованиях головного мозга, а определение ФНО-α и интерлейкинов в сыворотке крови информативно, но не является специфичным для оперируемого органа и не дает возможности прогнозировать лечебный эффект при интракраниальных глиомах.
Известен способ определения экспрессии Р-гликопротеина в нормальных, околоопухолевых и раковых тканях (Chen Chun-Yan, Zhu Zhao-Hua \\ Shiyie huaren xiaohua zazhi=World Chin. J. Dig. - 2003. - 11, N 1. - С.36-38;). Уровень Р-гликопротеина был различен в нормальной, околоопухолевой и раковой тканях при раке желудка: 13, 22 и 43%% соответственно от нормы и коррелировал с количеством выживших больных.
Авторы используют этот показатель для подтверждения эффективности проводимой химиотерапии, но главным ориентиром становятся клинические признаки состояния пациентов, продолжительность и качество их жизни.
Воспроизведение перечисленных методов не используется для прогноза эффективности химиотерапии при выборе химиопрепарата еще во время операции.
Известен способ оценки эффективности химиотерапии (Кайряк О.В., Лисовская Н.Ю. Критерии эффективности эндолимфатической химиотерапии у больных с распространенным раком молочной железы и яичников. Укр. хiмioтерапевт. ж., 2000. N 4, С.17-21.), выбранный в качестве прототипа. Суть метода заключается в том, что до начала лечения из периферической крови онкологических больных выделяют лимфоциты и лейкоциты, регистрируют в лимфоцитах однонитиевые фрагменты ДНК в гель-электрофорезе, затем исследуют изменения индекса аффинности лейкоцитов к антигенам первичной опухоли и плаценты в LAI-тесте. Регистрация однонитиевых фрагментов ДНК в мононуклеарах периферической крови до проведения лечения и снижение аффинитета лейкоцитов к антигену первичной опухоли с одновременным его повышением к антигену плаценты в перид лечения коррелировали с выраженным клиническим эффектом химиотерапии.
Однако недостатками данного метода являются, с одной стороны, его длительность (2-3 дня), связанная с выделением лимфоцитов и лейкоцитов, осуществлением реакции с антигенами и необходимость проведения повторных исследований после введения химиопрепарата, что замедляет получение и анализ результатов, с другой стороны, невозможность своевременной отмены или замены химиопрепарата в случае резистентности исследуемых тканей к ранее выбранному до введения препарата больному. Кроме того, этот способ не применяется у больных со злокачественными новообразованиями головного мозга.
Целью изобретения является возможность прогноза эффективности воздействия химиопрепарата непосредственно на орган - мишень злокачественного процесса.
Поставленная цель достигается тем, что во время оперативного вмешательства, удаления опухоли головного мозга из перифокальной зоны опухоли берут ткань головного мозга, делят на пробы по 100 мг каждая; количество проб ограничивается количеством химиопрепаратов плюс одна проба, которую оставляют интактной; к другим пробам добавляют химиопрепараты в дозе по 0,2 мг на каждую пробу, инкубируют в течение 30 мин при 37°С, после инкубации определяют активность ингибитора альфа-2-макроглобулина во всех пробах, включая интактную (до инкубации); при увеличении показателя на 40% и более по сравнению со значением до инкубации прогнозируют эффективность химиопрепаратов.
Изобретение «Способ прогнозирования эффективности местной химиотерапии при лечении больных злокачественными опухолями головного мозга» является новым, так как оно неизвестно из уровня достижений медицины в области прогнозирования эффективности химиопрепарата и резистентности к химиопрепарату.
Новизна изобретения заключается в том, что в перифокальной ткани определяют активность универсального ингибитора протеолиза альфа-2-макроглобулина до и после инкубации с химиопрепаратом и при ее повышении на 40% и более после инкубации прогнозируют положительный клинический эффект. При повышении активности альфа-2-макроглобулина менее 40% прогнозируют резистентность ткани перифокальной зоны опухоли к используемому химиопрепарату, что дает возможность принятия адекватного решения о выборе химиопрепарата еще во время операции. Такой способ прогнозирования является новым и дает возможность индивидуального подбора химиопрепарата во время операции, а также своевременного принятия мер для предотвращения неблагоприятных последствий.
В открытых источниках информации России, стран СНГ и зарубежья указаний на аналогичный способ прогнозирования эффективности химиопрепарата нами не обнаружено.
Изобретение является промышленно применимым, так как может быть воспроизведено и многократно повторено в любой клинической лаборатории лечебных учреждений системы здравоохранения.
Способ осуществляется следующим образом. Во время операции удаляли опухоль и необходимое количество перифокальной мозговой ткани, которую использовали для определения. Ткань перифокальной зоны делили на несколько проб, по 100 мг каждая (2-3, в зависимости от количества тестируемых химиопрепаратов). Одну из проб оставляли интактной, к другим добавляли химиопрепараты в дозе по 0,2 мг в каждую и инкубировали 30 минут при температуре 37°C. После инкубации в каждой пробе проводили определение альфа-2-макроглобулина. Ткань измельчали в гомогенизаторе с 1 мл физиологического раствора. Осмотический шок вызывали добавлением 1 мл бидистиллированной воды и после 10 минутной экспозиции полученный гомогенат центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин. Осадок отбрасывали, а в супернатанте определяли активность альфа-2-макроглбулина. Определение проводили унифицированным кинетическим методом по скорости расщепления синтетического субстрата БАЭЭ (Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С., ж. Вопр. мед. химии, 1979, т.25, вып.4). Активность альфа-2-макроглобулина рассчитывали по приросту оптической плотности исследуемого раствора в кювете спектрофотометра в течение 10 мин против контроля на реактивы. Пересчет в ИЕ\г ткани осуществляли с помощью пересчетного коэффициента, предложенного авторами метода, с поправкой на 1 г свежей ткани. Продолжительность определения 2 часа, что позволяет выполнять анализ в тот же день.
Примером применения способа могут служить выписки из историй болезни.
1. Больной К., 1958 г. рожд., История болезни №С-726/ц, поступил в отделение опухолей центральной нервной системы ФГУ РНИОИ Росмедтехнологий 15.10.2007 и находился в стационаре по 30.10.2007.
Диагноз (основной, сопутствующий, осложнения): глиобластома левой лобно-теменной области головного мозга; эписиндром.
Г/а №974384-389 - изоморфноклеточная глиобластома с диффузным инфильтративным ростом, обширными кровоизлияниями.
17.10.2007 больному выполнена операция - декомпрессивная краниотомия с удалением опухоли левой лобно-теменной области головного мозга. Во время операции после удаления опухоли готовили 4 образца перифокальной мозговой ткани по 100 мг. Один образец оставляли для сравнения как исходный, в остальные добавляли по 0,2 мг химиопрепаратов в каждый (в 1 - циклофосфан, во 2 - метотрексат, в 3 - карбоплатин) и инкубировали при температуре 37°C в течение 30 минут. Альфа-2-макроглобулин определяли в исходном образце и в пробах после инкубации. Прирост активности альфа-2-макроглобулина после инкубации с карбоплатином составил 62,8% от исходной. Препарат считали эффективным, что было подтверждено последующей динамикой состояния больного. В настоящее время (в течение 2 лет) больной находится под наблюдением, данных в пользу рецидива нет.
2. Больной Б., 1939 г. рожд., История болезни №С-8235/ц, находился в стационаре с 19.06.2008 по 04.07.2008.
Диагноз (основной, сопутствующий, осложнения): глиобластома правой височной доли головного мозга; эписиндром.
Г/а №36957-962 - глиобластома с инфильтративным ростом, очагами некроза.
10.12.2007 больному выполнена операция - костно-пластическая краниотомия с удалением опухоли правой височной области головного мозга. Во время операции после удаления опухоли готовили 4 образца перифокальной мозговой ткани по 100 мг. Один образец оставляли для сравнения как исходный, в остальные добавляли по 0,2 мг химиопрепаратов в каждый (в 1 - циклофосфан, во 2 - метотрексат, в 3 - карбоплатин) и инкубировали при температуре 37°C в течение 30 минут. Альфа-2-макроглобулин определяли в исходном образце и в пробах после инкубации. Прирост активности альфа-2-макроглобулина после инкубации с химиопрепаратами составил менее 27% во всех пробах. Препараты считали неэффективными, что было подтверждено последующей динамикой состояния больного.
В мае 2008 года (через 5 месяцев после химиотерапии и определения активности ингибитора) у больного обнаружен рецидив опухоли, состояние его ухудшилось; 23.06.08 выполнена повторная операция - рекраниотомия с субтотальным удалением рецидива опухоли. Больной умер в августе 2008 года.
Были обследованы 7 больных с опухолями головного мозга, находившихся на лечении в отделении опухолей ЦНС РНИОИ и подвергнутых операции с применением местной химиотерапии.
Обнаружено, что у 5 больных с благоприятным клиническим эффектом после интраоперационного введения химиопрепарата величина показателя альфа-2-макроглобулина в ткани перифокальной зоны опухоли, инкубированной с химиопрепаратом, варьировала в пределах 13,65 ингибиторных единиц (ИЕ)\г. ткани - 19,11 ИЕ\г ткани, что превышало исходные значения на 44-76%%. У 2 больных с развившимся рецидивом и скончавшихся впоследствии активность альфа-2-макроглобулина, определенного в аналогичной ткани, в тех же условиях, составила от 10,37 ИЕ\г ткани до 13,65 ИЕ\г ткани (повышение до 27% от исходной), что связано, очевидно, с резистентностью ткани перифокальной зоны опухоли мозга к используемым химиопрепаратам. Исходной считали величину активности альфа-2-макроглобулина в той же перифокальной ткани до инкубации. У всех больных исходная активность альфа-2-макроглобулина колебалась в пределах от 8,19 ИЕ\г ткани до 13,92 ИЕ\г ткани.
Технико-экономическая эффективность способа заключается в его высокой специфичности, возможности объективной оценки эффективности воздействия химиопрепарата непосредственно на пораженный орган, проведения анализа в тот же день, что позволяло своевременно назначить адекватные лечебные мероприятия, отменить или заменить химиопрепарат.