ФОСФОЛИПАЗА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ

1. Способ получения фосфолипазы, который включает процессинг экспрессированного грибного пептида, так что достигается отщепление пептида от С-терминального конца и/или пептида от N-терминального конца с образованием корового пептида, обладающего фосфолипазной активностью, где указанный коровый пептид включает:
а) аминокислотную последовательность, представленную аминокислотами 146-153 в SEQ ID NO: 1, аминокислотами 87-94 в SEQ ID NO: 3, или аминокислотами 79-86 в SEQ ID NO: 12; или последовательность, идентичную любой из указанных аминокислотных последовательностей, за исключением замещения одной аминокислоты другой аминокислотой; и
b) по меньшей мере два цистеиновых остатка, расположенных на N-концевом участке последовательности, приведенной в а); и
с) по меньшей мере два цистеиновых остатка, расположенных на С-концевом участке последовательности, приведенной в а).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспрессированный пептид экспрессируется в клетке-хозяине нитевидного гриба, трансформированной ДНК, кодирующей экспрессированный пептид.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что клетка-хозяин представляет собой Aspergillus, Fusarium или Trichoderma, предпочтиетльно A. oryzae, A. niger, F. venenatum или T. reesei.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что экспрессированный пептид подвергается процессированию in vivo в клетке-хозяине.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что коровый пептид имеет длину из 100-150 аминокислот.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная фосфолипаза обладает удельной фосфолипазной активностью, которая по меньшей мере в два раза превышает активность экспрессированного пептида до процессинга.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспрессированный пептид получают из Tuber, Verticillium, Neurospora, Aspergillus или Helicosporum, в частности T. borchii, T. albidum, V. dahliae, V. tenerum, N. crassa, A. oryzae или Helicosporum sp. HN1.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспрессируемый пептид расщепляют в пределах участка 0-18 аминокислоты на N-концевом участке последовательности, сравнимом с участком 97-101 аминокислот в SEQ ID NO: 1, когда полную последовательность экспрессированного пептида сравнивают одновременно с последовательностями, приведенными в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 12.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспрессированный пептид расщепляют в пределах участка 0-11 аминокислоты на С-концевом участке последовательности, выровненном по аминокислотам 204-209 в SEQ ID NO: 1, когда полную последовательность экспрессированного пептида сравнивают одновременно с последовательностями, приведенными SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 12.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспресированный пептид расщепляют в пределах участка из 10 аминокислот, входящего в сайт процессинга Kex2, или внутри участка из 11 аминокислот в последовательности FG или на обоих указанных участках.
11. Способ гидролиза фосфолипида, включающий взаимодействие фосфолипида с фосфолипазой, получаемой согласно способу по любому из пп.1-10.
12. Способ изготовления сыра, включающий взаимодействие молока для сыроделия или фракции молока для сыроделия с фосфолипазой, где указанная фосфолипаза включает:
а) последовательность, представленную аминокислотами 146-153 аминокислоты в SEQ ID NO: 1, аминокислотами 87-94 в SEQ ID NO: 3, или аминокислотами 79-86 в SEQ ID NO: 12; или последовательность, идентичную любой из указанных аминокислотных последовательностей, за исключением замещения одной аминокислоты другой аминокислотой; и
b) два цистеиновых остатка, расположенных на N-концевом участке последовательности, приведенной в а); и
с) два цистеиновых остатка, расположенных на С-концевом участке последовательности, приведенной в а).
13. Способ изготовления сыра, включающий взаимодействие молока для сыроделия или фракции молока для сыроделия с фосфолипазой, получаемой согласно способу по любому из пп. 1-10.