Особенности заживления дырчатых дефектов угла челюсти кролика при введении 100 тыс. Аутологичных ск костного мозга и жировой ткани

препаратов, содержащих про- и пребиотики, иммуностимуляторы и адаптогены.

Выводы. 1. Воспроизведение кишечного дисбиоза на фоне ВЖР вызывает развитие воспаления в тканях полости рта, снижение индекса АПИ, усиление рецессии тканей пародонта и кариозного процесса.

2. Оральные аппликации антидисбиотических гелей оказывают противовоспалительное, паро-донтопротекторное и кариеспрофилактическое действие.

Список литературы

1. Velichko V. I. Development of dysbiosis in tissues of rats fed with a high fat food / V. I. Velichko, V. V. Tkachuk, A. P. Levitsky. Journal of Health Sciences. - 2014. - № 4(12). -84-92.

2. Левицкий А. П. Гиперлипидемическое и продисби-отическое действие сливочного масла / А. П. Левицкий, Е. М. Левченко, С. И. Конкин / Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2014. - т. 2, № 4 (38-II). - С. 127-131.

3. Сравнительная лечебная эффективность оральных аппликаций мукозальных гелей с про- и пребиотиками у крыс с экспериментальным дисбиозом / А. П. Левицкий, И. А. Селиванская, А. В. Воронкова [и др.] // Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2013. - № 4 (34). - С. 118123.

4. Левицкий А. П. Применение антидисбиотических средств в стоматологии / А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. - 2014. - № 4. - С. 80-88.

5. Воронкова А. В. Лечебно-профилактическое действие симбиотика «Симбитер» при экспериментальном стоматите / А. В. Воронкова, Л. В. Смаглюк, А. П. Левицкий // Укр. стомат. альманах. - 2013. - № 1. - С. 5-7.

6. Томилина Т. В. Кверцетин повышает неспецифический иммунитет и снижает дисбиоз и воспаление в пародо-

нте крыс, получавших антихеликобактерную терапию / Т. В. Томилина // Вюник стоматологи. - 2014. - № 2. - С. 1923.

7. Декларацшний патент на корисну модель № 31012. Споаб моделювання дисбюзу (дисбактерюзу) / Левицький А. П., Селiванська 1.О., Щсельський Ю.В. [та in.] - № u 200711609; заявл. 22.10.2007; опубл. 25.03.2008. Бюл. № 6.

8. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации // А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса: КП ОГТ, 2010 -16 с.

9. Стальная И. Д. Метод определения малонового ди-альдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М. : Медицина, 1977. - С. 66-68.

10. Левицкий А. П. Методы определения активности эластазы и ее ингибиторов: методические рекомендации / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - К.: ГФЦ, 2002. - 15 с.

11. Гирин С. В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах / С. В. Ги-рин // Лабораторная диагностика. - 1999. - № 4. - С. 45-46.

12. Асатиани В. С. Новые методы биохимической фотометрии / Асатиани В. С. - М.: Наука, 1965. - С. 298.

13. Николаева А. В. Экспериментальные дистрофии тканей пародонта / А. В. Николаева, Е. С. Розовская // БЭ-БИМ. - 1965. - т. 60, № 7. - С. 46-49.

14. Експериментальне вивчення токсично! ди та спе-цифiчноi ефективносл засоб1в для догляду за порожниною рота: метод. рекомендацп / Т. П. Терешина, К. М. Косенко, А. П. Левицький [та ш.]. - К.: ДФЦ, 2003. - 42 с.

15. Лапач О. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / Лапач О. Н., Чубенко А. В., Бабич П. Н.. - К.: Морион, 2000. -320 с.

Поступила 03.08.15

УДК [616.314.18-002.4-003.93:612.112]-089-092.9

В. Ф. Куцевляк, д. мед. н., В. И. Куцевляк, д. мед. н., И. В. Цыганова

Харьковская медицинская академия последипломного образования

ОСОБЕННОСТИ ЗАЖИВЛЕНИЯ ДЫРЧАТЫХ ДЕФЕКТОВ УГЛА ЧЕЛЮСТИ КРОЛИКА ПРИ ВВЕДЕНИИ 100 ТЫС. АУТОЛОГИЧНЫХ СК КОСТНОГО МОЗГА

И ЖИРОВОЙ ТКАНИ

Проведен сравнительный анализ процессов регенерации костных дефектов угла челюсти у 32 экспериментальных животных при введении в костный дефект 100 тысяч аутологичных стволовых клеток, полученных из костного мозга (СККМ) и жировой ткани (СКЖТ) на коллапановой подложке. Тканей, обладающих ос-теогенными свойствами в группе с введением СККМ, было обнаружено вдвое больше, чем в группе сравнения. Однако грануляционная ткань в группе с введением СКЖТ к 90-м суткам была замещена клеточно-волокнистой тканью, которая также имела остеогенные свойства.

Ключевые слова: дырчатый дефект, стволовые клетки, остеогенез.

© Куцевляк В. Ф., Куцевляк В. И., Цыганова И. В., 2015.

«1нноваци в стоматологи», № 3, 2015 В. Ф. Куцевляк, д. мед. н., В. I. Куцевляк, д. мед. н., I. В. Циганова

Харшвська медична академия шслядипломно! освгги

ОСОБЛИВОСТ1 ЗАГОеННЯ Д1РЧАСТИХ ДЕФЕКТ1В КУТА ЩЕЛЕПИ КРОЛИКА ПРИ ВВЕДЕНН1 100 ТИС АУТОЛОГ1ЧНИХ СК К1СТКОВОГО МОЗКУ

I ЖИРОВО1 ТКАНИНИ

Проведено поргвняльний анализ процеав регенерацИ юсткових дефект1в кута щелепи у 32 експериментальних тварин при введены в юстковий дефект 100000 аутологгчних стовбурових клтин, отриманих з юсткового мо-зку (СККМ) i жирово'1 тканини (СКЖТ) на коллапановой тдкладщ. Тканин, що володтть остеогенними влас-тивостями в групi з введенням СККМ, було виявлено вдвiчi бтьше, тж у групi порiвняння. Однак грануляцтна тканина в гр^ з введенням СКЖТ до 90-i доби була замщена клтинно-волокнисто'1 тканиною, яка також мала остеогеннi властивостi.

Ключовi слова: дiрчастий дефект, стовбуровi клтини, остеогенез.

V. F. Kutsevlyak, V. I. Kutsevlyak, I. V. Tsyganova

Kharkiv Medical Academy of Postgraduate Education

FEATURES WOUND PERFORATED ANGLE OF THE JAW RABBIT DEFECTS WHEN ADMINISTERED SC 100 THOUSAND AUTOLOGOUS BONE MARROW

AND ADIPOSE TISSUE

The rapid development of cell therapy and regenerative medicine in the past decade has led to increased scientific and clinical interest multipotent mesenchymal stromal cells.

Introduction stromal cells allows you to restore the structure and function of the affected organs and tissues.

In recent years there have been studies in which were presented materials on the successful use of a cell culture of stem cells, obtained from adipose tissue and bone marrow for the reconstruction of the soft palate, defects of mandible, prove their positive effects. However, such works are rare, in dentistry are limited experimental studies. Replacement of bone defects with full restoration of bone remains an acute problem dentistry.

A comparative analysis of the processes of regeneration of bone defects of the jaw in 32 experimental animals, upon introduction into a bone defect 100 000 autologous stem cells, derived from bone marrow (BMSC) and adipose tissue (ADSC) with kollapan. Tissues having osteogenic properties BMSC administration group, it was found twice, than in the control group. However, granulation tissue in the group with the introduction of ADSC to 90 th day was replaced by fibrous tissue cell, which also had osteogenic properties.

Keywords: perforated defect, stromal cells, bone formation.

Стремительное развитие клеточной терапии и регенеративной медицины в последнее десятилетие привело к возрастанию научного и клинического интереса к мультипотентным мезенхи-мальным стромальным клеткам [1,2].

Введение СК позволяет восстанавливать структуру и функцию пораженных органов и тканей [3].

В последние годы появились работы, в которых презентовались материалы по успешному использованию клеточной культуры стволовых клеток (СК), полученных из жировой ткани и костного мозга для реконструкции мягкого неба, дефектов нижней челюсти, убедительно доказаны их положительные эффекты. Однако, такие работы единичны, в стоматологии они ограничены проведением экспериментальных исследований. Несомненно, имеющиеся в настоящее время данные позволяют использовать СК для регенерации тканей пародонта, а также для замещения костных дефектов черепа и челюстей. В то же время, замещение дефектов костной ткани с полным

восстановлением кости остается острейшей проблемой стоматологии [4].

Цель исследования. Сравнить остеогенный потенциал 100тыс. аутологичных СК костного мозга и жировой ткани, введенных в дырчатый дефект угла челюсти кролика в различные сроки заживления.

Материалы и методы исследования. Проведен сравнительный анализ процессов регенерации костных дефектов угла челюсти у 32 кро-лей породы Шиншилла при введении в костный дефект 100 тысяч аутологичных стволовых клеток, полученных из костного мозга и жировой ткани с коллапаном.

Результаты исследования. На 42 сутки после введения 100 тысяч аутологичных СКЖТ с коллапаном в костный дефект, на гистотопо-граммах нижней челюсти, согласно морфомет-рическим данным, некротические участки занимали 6 %, гематома 8 %, грануляционная ткань 54 %, остеоидная 20 %, мелкопетлистая сеть костных трабекул 12 %.Микроскопически на 42 су-

тки после введения 100 тысяч аутологичных СКЖТ с коллапаном зона дефекта расширилась, образуя в кости дефект с относительно ровными краями.

Отмечалась так же значительная резорбция альвеолярного отростка. На отдельных участках определялась выраженная лакунарная резорбция фрагментов кости, очагово и диффузно инфильтрированной лейкоцитами.

Участки новообразованной костной ткани образовывались в толще грануляционной ткани, разделяющей поле некроза. В межблочных пространствах таких полей определялась хорошо васкуляризованная клеточно-волокнистая ткань почти без лейкоцитарной инфильтрации, которая была наиболее выражена на границе некроза и грануляционной ткани (рис. 1).

Рис. 1. Формирование новооб-разованной костной ткани в толще грануляционной ткани на 42 сутки после введения 100 тыс. СКЖТ с коллапаном. Окрашивание гематок-силин-эозин х 100.

Рис. 2. Введение 100 тыс. СК из костного мозга с коллапаном на 42 сутки. Выраженный остеогенез с трансформацией в мелкопетлистую сеть костных балочек. Окрашивание Ван-Гизон х100.

Таким образом, после введения 100 тысяч аутологичных СКЖТ в структуре регенерата на 42 сутки преобладала клеточно-волокнистая ткань с остеогенными потенциями, составившая 32 % и участками остеогенеза, которые обнаруживались по периферии регенерата, где сохранилось микроциркуляционное русло.

На 42 сутки после введения 100 тысяч ауто-логичных СККМ с коллапаном на гистотопо-граммах 5% общей площади регенерата занимают некротические ткани, 35 % - грануляционная ткань, 28 % - остеоидная ткань, мелкопетлистая сеть костных трабекул - 32 %.Микроскопически на 42 сутки после введения 100 тысяч аутоло-гичных СККМ с коллапаном определялись небольшие ограниченные участки некроза, отделенные зонами грануляционной ткани от полей из сети новообразованных костных балочек.

На отдельных участках (рис. 2) обнаруживались выраженные проявления остеогенеза с трансформацией в мелкопетлистую сеть костных балочек. Фрагменты из компактной костной ткани в некоторых участках подвергались выраженному разрежению и срастались с полями новообразованных костных балочек по поверхности разряжения фрагментов.

Таким образом, в структуре регенерата начинали преобладать дифференцированные компоненты, а узкие участки некротически измененной ткани определялись, скорее всего, как следствие недостаточного формирования микроцир-куляторного русла.

На 42 сутки после образования дырчатого дефекта нижней челюсти и введения в него по 100 тысяч СКЖТ и СККМ соответственно, на коллапановой подложке, у двух групп экспериментальных животных, гистото-пографически определялись различные варианты заживления дефекта. В группе с введением СКЖТ некротические ткани и гематомы были выражены в 3 раза интенсивнее, а также объем грануляционной ткани превалировал в 1,5 раза, чем у животных группы с введением СККМ. При этом развитие новообразованных остеогенных тканей было в 2 раза меньше, чем в группе с введением СККМ (рис. 3).

зона некроза  гематома

грануляционная ткань  клеточно-волокнистая ткань

остеоидная ткань  мелкие костныетрабекулы

крупные костныетрабекулы  кортикальный слой

жировая ткань костный мозг

Рис. 3. Графическое изображение сравнительной характеристики репаративного остеогенеза 42 сутки 100 тыс. СКЖТ - СККМ

Таким образом, развитие репаративного остеогенеза имело место в обеих группах, однако введение СККМ в количестве 100 тысяч в зону дырчатого дефекта стимулировало остеогенез значительно интенсивнее, чем введение такого же количества СКЖТ.

На 90 сутки после введения 100 тысяч ауто-логичных СК с коллапаном на гистотопограммах остатки гематомы и некротических участков занимали 4 % общей площади регенерата, клеточ-но-волокнистая ткань 66%, мелко и крупнопетлистая сеть новообразованных костных трабекул - 30%.

Микроскопически на 90 сутки после введения 100 тысяч аутологичных СККМ с коллапа-ном (рис. 5.) обнаруживалось преобладание полей новообразованной костной ткани, за счет которой формировался компактный слой, хотя между этими полями и определялись небольшие участки некроза, а также подвергающиеся резорбции секвестры.

Рис. 5. Введение 100 тыс. СК из костного мозга с коллапа-ном на 90 сутки. Формирование крупно петлистой сети трабекул четко отграниченных плотно прилегающей грануляционной ткани в зоне дефекта. Окрашивание Ван-Гизон х100.

Рис. 4. Введение 100 тыс. СК из жировой ткани с коллапа-ном на 90 сутки. Формирование полей грану-ляционной ткани с выраженной лейкоцитарной инфильтрацией в зоне костного дефекта. Окраши-вание гематоксилин-эозин х 100.

Микроскопически (рис. 4) на 90 сутки в зонах некроза наблюдались узкие поля грануляционной ткани в незначительном количестве, которые чередовались с полями выраженной лейкоцитарной инфильтрации.

На отдельных участках, преимущественно вокруг фрагментов из пластинчатой кости, определялась лакунарная резорбция. Наблюдались напластования новообразованной костной ткани по перистальной и эндостальной поверхности и очаговой лейкоцитарной инфильтрацией грануляционной ткани, окружающей эти поля.

Таким образом, морфологические исследования показали, что на 90 сутки в структуре регенерата кости преобладала клеточно-волокнистая ткань с многочисленными капиллярами, а количество крупно - и мелкотрабекуляр-ной новообразованной костной ткани достигло 30 %.

На 90 сутки после введения 100 тысяч ауто-логичных СККМ с коллапаном на гистотопо-граммах 3% общей площади занимали некротически измененные ткани, в основном в интерме-диарной зоне, 32 % представлены остеоидной тканью, 32 % составила мелкопетлистая сеть костных балочек, 21 % - крупнопетлистая сеть костных балочек, 12 % - грануляционная ткань.

В других участках, наряду с выраженным остеогенезом, обнаруживалась резорбция фрагментов костной ткани с образованием массивных внутрифрагментарных полостей. На отдельных участках определялись поля из крупнопетлистой сети костных балочек, четко отграниченные от прилегающей грануляционной ткани, богатой пучками коллагеновых волокон.

Таким образом, на 90 сутки гистологические исследования свидетельствуют об увеличении объема пролиферирующей ткани с преобладанием в составе регенерата остеогенных клеточных элементов.

На 90 сутки после образования дырчатого дефекта нижней челюсти и введения в него по 100 тысяч СКЖТ и СККМ соответственно, на коллапановой подложке, у двух групп экспериментальных животных, гистотопо-графическая картина заживления дефекта также была различной. В обеих группах некротические ткани и гематомы были обнаружены в приблизительно равных количествах - от3 до 4 %. Тканей, обладающих остеогенными свойствами в группе с введением СККМ, было обнаружено вдвое больше, чем в группе сравнения. Однако грануляционная ткань в группе с введением СКЖТ к 90-м суткам была замещена клеточно - волокнистой тканью, которая также имела остеогенные свойства (рис. 6).

зона некроза грануляционная ткань

остеоидная ткань

жировая ткань

Рис. 6. Графическое изображение сравнительной характер! СККМ.

Выводы. Таким образом, развитие репаративного остеогенеза происходило в обеих группах, однако темпы его значительно отличались. В группе с введением 100 тысяч СКЖТ в зону дырчатого дефекта, в регенерате превалировала клеточно-волокнистая ткань, новообразованная костная ткань составила всего 33%, процессы костеобразования в группе с введением 100 тысяч СККМ происходили значительно интенсивнее, 85 % новообразованной ткани обладали остеогенными свойствами.

Список литературы

1. Volozhin A.A. Kiseleva E.V., Kalashnikova T.G.

Multipotentnyie kletki zhirovoy tkani: perspektivyi ispolzovaniya v chelyustno-litsevoy hirurgii [Multipotent adipose tissue cells: prospects for use in oral and maxillofacial surgery]. Department, 2007;6:20-25.

2. Karpyuk V. B., Perova M.D., Shubich M.G. K izucheniyu svezhevyidelennyih - autologichnyih stromalnyih kletok podkozhnoy zhirovoy kletchatki dlya regeneratsii

гематома

клеточно-волокнистая ткань

мелкие костныетрабекулы

32 32

костный мозг

репаративного остеогенеза 9O сутки lOO тыс. ЖЖГ -

biologicheskih tkaney. [By studying the freshly - autologous stromal cells of subcutaneous fat for regeneration of biological tissues]. Institute of Stomatology, 2009;6:20-25.

3. Petrenko A. Yu., Petrenko Yu. A., Skorobogatova N. G. Stromalnyie kletki kostnogo mozga, zhirovoy tkani i kozhi cheloveka v hode ekspansii, immunofenotip i differentsirovochnyiy potentsial mezenhimalnyih stvolovyih kletok [Bone marrow stromal cells, adipose tissue and skin of the person in the course of expansion, the immunophenotype and differentiation potential of mesenchymal stem cells]. Transplantology, 2008;10(1):84-86.

4. Savchenkova I.P., Rostovskaya M.S., Chupikova N.I., Sharifullina S.Z. Differentsirovka multipotentnyih mezenhimalnyih stromalnyih kletok, vyidelennyih iz kostnogo mozga i podkozhno zhirovoy kletchatki, v kletki kostnoy tkani. [Differentiation of multipotent mesenchymal stromal cells isolated from the bone marrow and subcutaneous adipose tissue in bone cells]. Cytology, 2008;5(10):855-860.

nocrynu^a 18.08.15

УДК 577.15.016+616.31:599.323

С. А. Шнайдер, д. мед. н., Е. К. Ткаченко, к. биол.н.

Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»

ЗАЩИТНЫЕ АДАПТАЦИОННЫЕ АНТИОКСИДАНТНЫЕ ЭФФЕКТЫ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ЭЛЛАГОТАНИНОВ

В опытах на 21 белой крысе изучены защитные эффекты эллаготанинов (полифенольного комплекса «Альтан») из соплодий 2-х видов ольхи (Alnus glutinosa и Alnus incаna) в условиях сочетанного воздействия ге-нотоксиканта делагила, хронического эмоционально-болевого стресса тревожного ожидания и алиментарной

© Шнайдер С. А., Ткаченко Е. К., 2015.