КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АРОМАТИЧЕСКИЙ СПИРТ И АНТАГОНИСТ TRPV-1, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
COMPOSITIONS COMPRISING AROMATIC ALCOHOL AND TRPV-1 ANTAGONIST AND USES THEREOF

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СМЕЖНУЮ ЗАЯВКУ
Настоящая заявка представляет собой частичное продолжение заявки на патент с серийным номером 13/911,492 от 6 июня 2013 г., описание которой включено в настоящий документ путем ссылки.
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей ароматический спирт и антагонист TRPV-1, и способам их применения.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Contact Dermatitis
in vivo
Toxicol In Vitro
Феноксиэтанол представляет собой распространенный ингредиент, который используют для сохранения косметических и фармацевтических композиций для местного применения. Феноксиэтанол, иногда называемый 2-фенокси-1-этанолом или монофениловым эфиром этиленгликоля, представляет собой консервант, который используют для обеспечения биоцидной активности в отношении различных микроорганизмов. К сожалению, феноксиэтанол также является раздражителем для кожи (см., например, Lee E et al., . 2007 Mar:56(3): 131-6). Аналогичным образом, также известно, что бензиловый спирт также вызывает раздражение кожи  (Bagley, D. M. et al. (1996)  10(1): 1-6).
2+
2+
J Pharmacol Exp Ther
TRPV-1 (рецептор транзиторного потенциала ванилоидных ионных каналов, подсемейство V, рецептор 1) представляет собой протеин, кодируемый геном TRPV-1. TRPV-1 представляет собой неселективный, управляемый лигандом катионный канал, который активируется в ответ на повышение температуры и механический или химический стимул. Этот рецептор встречается в центральной нервной системе, а также в клетках, отличных от нервных клеток, например кератиноцитах. Активация TRPV-1 обеспечивает временный поток катионов, особенно Ca, в клетку. Этот приток Ca стимулирует ощущение боли и связан с наступлением различных клеточных явлений, таких как воспаление. Известно, что активация TRPV-1 индуцирует высвобождение провоспалительных медиаторов в кератиноцитах человека (Southall, M. D. et al. (2003) " 304(1): 217-222).
Br J Pharmacol
J Pharmacol Exp Ther 3
Exp Dermatol
Известно, что TRPV-1 активируется капсаицином - соединением, присутствующим в перце чили, и что капсазепин является антагонистом TRPV-1 (Bevan, S. et al.,  107(2): 544-552). Другие соединения, которые, как известно, являются антагонистами TRPV-1, представляют собой (Е)-3-(4-трет-бутилфенил)-N-(2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)акриламид (Gavva, N. R. et al. (2005) 13(1): 474-484), имеющийся в продаже под названием AMG9810 производства Tocris Bioscience, г. Бристоль, Великобритания, и 4-трет-бутилциклогексанол (Kueper, T. et al. (2010)  19(11): 980-986), имеющийся в продаже под названием SYMSITIVE 1609 производства Symrise GmbH, г. Хольцминден, Германия.
В настоящее время заявители обнаружили, что некоторые ароматические спирты, включая феноксиэтанол, активируют TRPV-1. Это неожиданно, поскольку заявители также установили, что не все раздражители кожи активируют TRPV-1 и не все местные противовоспалительные соединения или анальгетики ингибируют активацию TRPV-1. Таким образом, обнаружение связи между ароматическими спиртами, их раздражающими свойствами и TRPV-1 является непредвиденным.
В данном документе приведены композиции для местного нанесения с низкой раздражающей способностью, содержащие ароматические спирты. Преимуществом является то, что они не требуют наличия парабенов (сложных эфиров пара-гидроксибензойной кислоты), эффекты которых могут беспокоить многих потребителей. Дополнительно приведены способы их применения.
ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В изобретении предложена композиция, содержащая ароматический спирт, имеющий формулу:
Формула 1,
где X представляет собой атом кислорода или отсутствует, а Y представляет собой C1-C2 алкил; и антагонист TRPV-1, причем упомянутая композиция по существу не содержит сложных эфиров пара-гидроксибензойной кислоты.
В изобретении также предложен способ очищения кожи, включающий нанесение вышеупомянутой композиции на кожу и смывание композиции с кожи.
В настоящем изобретении дополнительно предложен способ снижения раздражения, вызванного местным нанесением ароматического спирта, имеющего формулу:
Формула 1,
где X представляет собой атом кислорода или отсутствует, а Y представляет собой C1-C2 алкил; упомянутый способ включает местное нанесение упомянутого ароматического спирта с антагонистом TRPV-1.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Если не указано другое, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют общепринятое значение, понятное любому среднему специалисту в данной области, к которой имеет отношение настоящее изобретение. Кроме того, все публикации, заявки на патенты, патенты и другие материалы, упомянутые в настоящем документе, включены в настоящий документ путем ссылки. Если не указано иное, процентные содержания даны в процентах по массе (т. е. % мас.).
В настоящем документе «по существу не содержащий» ингредиент означает содержание такого ингредиента меньше чем приблизительно 1% мас., например, меньше чем приблизительно 0,5% мас., например, меньше чем приблизительно 0,25% мас., например, меньше чем приблизительно 0,1% мас. В одном варианте осуществления «по существу не содержащий» означает полное отсутствие такого ингредиента.
Считается, что специалист в данной области, основываясь на представленном в настоящем документе описании, сможет использовать настоящее изобретение в самом полном объеме. Представленные ниже конкретные варианты осуществления следует рассматривать лишь в качестве примеров, которые ни в коей мере не ограничивают остальную часть описания.
Ароматический спирт
Композиция изобретения содержит ароматический спирт формулы 1:
Формула 1,
где X представляет собой атом кислорода или отсутствует, а Y представляет собой C1-C2 алкил.
В одном варианте осуществления ароматический спирт выбирают из группы, состоящей из феноксиэтанола, бензилового спирта, фенилэтилового спирта и их смесей.
Феноксиэтанол
Бензиловый спирт
Фенилэтиловый спирт
Количество ароматического спирта в композиции можно варьировать в зависимости от конкретных биоцидных требований к ней или от того, является ли композиция «готовой к применению», требуется ли разведение водой или находится ли она в виде концентрата, который будет добавлен к отдельной композиции.
В широком смысле композиция может содержать количество ароматического спирта в диапазоне от приблизительно 0,1% до приблизительно 80% или от 0,1% до приблизительно 66%, например от 0,1% до приблизительно 50% мас. композиции.
Антагонист TRPV-1
Композиция также включает в себя антагонист TRPV-1.
В одном варианте осуществления антагонист TRPV-1 ингибирует поток кальция от ароматического спирта на, по меньшей мере, приблизительно 12% или, по меньшей мере, приблизительно 20%, предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно 50%, например от приблизительно 50% до приблизительно 80%, по данным теста потока кальция.
2
2+
Тест потока кальция выполняют следующим образом. Рекомбинантные клетки HEK293, экспрессирующие ванилоидный рецептор-1 человека (TRPV-1; учетный номер AF196175, EMD Millipore, г. Биллерика, штат Массачусетс, США), выращивают в среде D-MEM/F-12 (Life Technologies, г. Гранд Айленд, штат Нью-Йорк, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% заменимых аминокислот и 400 мкг/мл генетицина (Gibco, Life Technologies). Клетки высевают в концентрации 15 000 клеток на лунку на покрытые поли-D-лизином 384-луночные планшеты и инкубируют в течение ночи с 5% COи при 37°C. После инкубации культуральную среду удаляют из лунок и заменяют на 50 мкл на лунку раствора красителя Fluo-8 No Wash (№ 36315, AAT Bioquest, г. Саннивейл, штат Калифорния, США). Раствор красителя Fluo-8 получают путем смешивания 20 мкл Fluo-8 NW с 30 мл 0,33X Pluronic F127 Plus (BASF, г. Людвигсхафен, Германия) в буфере для анализа (1X HBSS+2% HEPES). Краситель Fluo-8 инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. Поток внутриклеточного кальция (Ca) отслеживают после обработки ароматическим спиртом в носителе ДМСО посредством измерения интенсивности флуоресценции на длине волны возбуждения/излучения 490/525 на функциональной системе скрининга лекарственных средств (FDSS; Hamamatsu, Германия). Измерения записывают каждую секунду в течение 4 минут. Результаты представлены в виде среднего ± стандартное отклонение максимальных относительных единиц флуоресценции (ОЕФ) за 4-минутный период. Статистические различия получили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с апостериорным критерием Тьюки; статистическую значимость установили на уровне Р≤0,05.
Максимальные ОЕФ, полученные для данной концентрации ароматического спирта, сравнивали с максимальными ОЕФ, полученными для такой же концентрации ароматического спирта, но с предварительной обработкой антагонистом TRPV-1 в течение 5 минут после инкубации с красителем. Процент ингибирования, достигнутый с антагонистом TRPV-1, рассчитывали следующим образом: 100 * ((максимальная ОЕФ ароматического спирта ― максимальная ОЕФ ароматического спирта, предварительно обработанного антагонистом TRPV-1)/максимальная ОЕФ ароматического спирта).
Примеры антагонистов TRPV-1 включают капсазепин, (Е)-3-(4-трет-бутилфенил)-N-(2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)акриламид (имеющийся в продаже, например, под названием AMG9810 производства Tocris Bioscience, г. Бристоль, Великобритания) и 4-третбутилциклогексанол (имеющийся в продаже под названием SYMSITIVE 1609 производства Symrise GmbH, г. Хольцминден, Германия).
Предпочтительно, антагонист TRPV-1 представляет собой 4-трет-бутилциклогексан.
Количество антагониста TRPV-1 в композиции может варьироваться. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления антагонист TRPV-1 присутствует в количестве от приблизительно 0,05% до приблизительно 5%, таком как от приблизительно 0,1% до приблизительно 2%, таком как от приблизительно 0,2% до приблизительно 1%, таком как от приблизительно 0,2% до приблизительно 0,5% мас. композиции.
Изобретатели неожиданно обнаружили, что антагонисты TRPV-1, такие как 4-трет-бутилциклогексанол, являются особенно эффективными в снижении потока кальция, вызванного ароматическими спиртами формулы 1. Соответственно, в композиции могут использоваться малые количества антагонистов TRPV-1 относительно количества ароматических спиртов в композиции.
Например, в некоторых вариантах осуществления при использовании феноксиэтанола массовое соотношение антагониста TRPV-1 к ароматическому спирту в композиции может быть от приблизительно 1:24 до приблизительно 1:2,7, например, от приблизительно 1:6 до приблизительно 1:2,7, например, от приблизительно 1:5,4 до приблизительно 1:2,7. При использовании бензилового спирта массовое соотношение антагониста TRPV-1 к ароматическому спирту в композиции может быть от приблизительно 1:0,08 до приблизительно 1:0,9. При использовании фенилэтилового спирта массовое соотношение антагониста TRPV-1 к ароматическому спирту в композиции может быть от приблизительно 1:0,09 до приблизительно 1:3.
Поскольку количество 4-трет-бутилциклогексанола в SYMSITIVE 1609 составляет, как полагают, от приблизительно 40% до приблизительно 60% (разбавленного в пропиленгликоле), при использовании SYMSITIVE 1609 и феноксиэтанола, например, массовое соотношение 4-трет-бутилциклогексанола к ароматическому спирту должно составлять от 0,4 до 0,6 соотношения масс выше (т. е. от 0,4:24 до 0,6:24 вместо 1:24; от 0,4:2,7 до 0,6:2,7 вместо 1:2,7; и т. д.).
По существу не содержит парабенов
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции настоящего изобретения по существу не содержат сложных эфиров пара-гидроксибензойной кислоты (парабенов). Примеры сложных эфиров пара-гидроксибензойной кислоты включают те, которые имеют структуру, указанную ниже, в которой R представляет собой алкильную группу:
Примеры сложных эфиров пара-гидроксибензойной кислоты включают метилпарабен, этилпарабен, бутилпарабен, пропилпарабен, изобутилпарабен, гептилпарабен и их соли.
Композиции для местного нанесения
Композиции настоящего изобретения могут включать в себя косметически приемлемый носитель для местного применения. Косметически приемлемый носитель для местного применения может содержать обычно используемые ингредиенты, например воду, моноспирты (такие как этанол и изопропанол); гликоли и полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, пропандиол, 1,4-бутандиол, 1,3-бутандиол, 1,2-бутандиол, гидроксиэтилмочевина, сорбит, сорбитан, ксилит и полиглицерины); глицерин и их комбинации. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления носитель может включать в себя воду.
Количество косметически приемлемого носителя для местного применения в композиции может составлять от приблизительно 30% до приблизительно 99%, например, от приблизительно 40% до приблизительно 95%, например, от приблизительно 50% до приблизительно 95%, например, от приблизительно 60% до приблизительно 90% мас. композиции.
В вариантах осуществления, в которых композиция включает в себя косметически приемлемый носитель для местного применения, количество ароматического спирта в такой композиции может составлять от приблизительно 0,1% до приблизительно 5%, например, от приблизительно 0,2% до приблизительно 2,5%, например, от приблизительно 0,3% до приблизительно 2% мас. композиции.
В соответствии с другими вариантами осуществления композиция имеет форму концентрата. В таком виде композиция может состоять по существу из ароматических спиртов формулы 1 и антагониста TRPV-1. Например, количество ароматического спирта в композиции может составлять от приблизительно 55% до приблизительно 90%, например, от приблизительно 60% до приблизительно 85%, например, приблизительно 70% до приблизительно 85% мас. композиции, причем оставшаяся часть представляет собой антагонист TRPV-1 и необязательно до приблизительно 20% разбавителя, такого как вода, моноспирт, гликоль/полиол или их комбинации.
Композиция настоящего изобретения может включать в себя дополнительные ингредиенты, обычно использующиеся в композициях для местного нанесения. Примеры дополнительных ингредиентов включают, без ограничений, поверхностно-активные вещества/эмульгаторы (катионные, анионные, неионные и цвиттер-ионные), увлажнители, смягчающие и гидрофобные соединения, кондиционирующие средства, замутняющие средства, хелатирующие средства, кондиционирующие средства, дополнительные консерванты, полезные для кожи средства, ароматизаторы, водорастворимые или диспергируемые полимеры и активные компоненты (например, солнцезащитные, замедляющие старение активные вещества, средства против угрей и т. п.).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция является водной, и pH композиции составляет приблизительно 6,5 или выше, например, от приблизительно 6,5 до приблизительно 8,5, например, от приблизительно 7,5 до приблизительно 8,5.
Композиции настоящего изобретения особенно подходят для местного нанесения на кожу или слизистую. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции используются для очистки кожи или слизистой и могут быть смыты с них. Композиция может находиться в пределах или в сообщении по текучей среде с аппликатором, который подходит для ее выдачи.
В соответствии с другими вариантами осуществления изобретение также предоставляет способ снижения раздражения, индуцированного местным нанесением ароматических спиртов формулы 1, упомянутый метод включает местное нанесение упомянутого ароматического спирта с антагонистом TRPV-1, как описано выше.
Пример 1. Феноксиэтанол индуцирует поток кальция через рецептор TRPV-1
Активность феноксиэтанола в качестве агониста TRPV-1 испытывали на серии концентраций в ДМСО в соответствии с тестом потока кальция, описанным выше. В качестве положительного контроля использовали капсаицин.
Максимальные значения ОЕФ для обработки феноксиэтанолом или капсаицином сравнивали с максимальными ОЕФ для чистого носителя ДМСО. Результаты для феноксиэтанола показаны в таблице 1. Результаты для капсаицина показаны в таблице 2. Концентрации феноксиэтанола и капсаицина приведены в миллимолях (ммоль/л) и наномолях (нмоль/л) соответственно.
Как капсаицин, так и феноксиэтанол продемонстрировали дозозависимое увеличение внутриклеточного потока кальция в TRPV-1-трансфицированных клетках НЕК. Для феноксиэтанола увеличение максимальных значений ОЕФ по сравнению с контрольным носителем было статистически значимым в широком диапазоне количеств и увеличилось в тридцать-сорок раз по сравнению с чистым носителем. Эти результаты показывают активацию рецептора TRPV-1 феноксиэтанолом.
Таблица 1
Феноксиэтанол (ммоль/л)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
4
453,25±34,18
**
3,5
404,21±42,32
**
3
401,68±26,58
**
2,5
363,73±44,11
**
2
357,37±44,88
**
1,5
304,41±70,10
**
1
200,28±76,93
**
0,75
124,81±37,58
с/н
0,5
96,96±61,20
с/н
Носитель
13,88±2,95
-
<i>с/н: статистически незначимо</i><i>** статистически значимо</i>
Таблица 2
Концентрация капсаицина (нмоль/л)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
10 000
698,83±30,57
**
2500
617,87±34,14
**
625
604,13±32,46
**
156
491,07±21,10
**
39
405,53±11,25
**
10
348,17±5,56
**
2
253,47±24,63
**
0,6104
121,32±46,41
**
0,1526
29,34±8,18
с/н
0,0381
10,19±2,94
с/н
Носитель
16,23±2,95
-
<i>с/н: статистически незначимо</i><i>** статистически значимо</i>
2+
Пример 2. Антагонисты TRPV-1 снижают поток Ca, индуцированный феноксиэтанолом или капсаицином
Активность капсазепина и AMG9810 в качестве антагонистов TRPV-1 испытывали с использованием двух разных концентраций феноксиэтанола в ДМСО с использованием теста потока кальция. Их также испытывали с использованием теста потока кальция, в котором феноксиэтанол был заменен на капсаицин.
Результаты представлены в таблицах 3-6. Концентрации капсазепина и AMG9810 приведены в наномолях (нмоль/л).
Результаты показывают, что обработка антагонистами TRPV-1 снижает индуцированный феноксиэтанолом поток кальция и индуцированный капсаицином поток кальция.
Таблица 3
Феноксиэтанол, 3 ммоль/л
Феноксиэтанол, 2 ммоль/л
Капсазепин (нмоль/л)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
% ингибирования
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
10 000
106,49±4,15
75,89
79,39±2,79
72,34
2500
99,71±6,08
77,43
84,79±2,68
70,46
625
75,71±3,39
82,86
57,76±2,15
79,88
156
101,59±2,44
77,00
87,54±8,38
69,50
39
176,52±75,37
60,04
75,06±6,64
73,85
10
340,96±12,96
22,82
154,95±19,56
46,01
2
486,75±153,02
-
236,10±8,91
17,73
0,6104
351,36±32,21
20,46
210,03±46,34
26,82
0,1526
508,45±81,79
-
319,33±77,43
-
0
441,76±36,68
-
287,00±25,75
-
Таблица 4
Капсаицин, 300 нмоль/л
Капсаицин, 100 нмоль/л
Капсазепин (нмоль/л)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
10 000
58,73±4,40
93,18
45,31±14,17
93,00
2500
31,08±3,44
96,39
27,61±4,95
95,73
625
28,36±3,16
96,71
24,39±5,19
96,23
156
51,20±14,34
94,05
29,36±6,46
95,46
39
557,38±79,48
35,26
187,95±177,88
70,95
10
771,64±25,92
10,37
461,29±221,27
28,71
2
850,93±28,65
1,16
665,83±90,25
-
0
860,95±33,14
-
647,05±33,18
-
Таблица 5
Феноксиэтанол, 3 ммоль/л
Феноксиэтанол, 2 ммоль/л
AMG9810 (нмоль/л)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
10 000
65,74±4,33
70,69
59,78±3,84
72,37
2500
68,59±4,15
69,42
58,00±5,34
73,19
625
58,16±1,97
74,07
55,53±8,48
74,34
156
75,59±10,97
66,29
58,21±5,97
73,10
39
98,74±23,34
55,97
165,37±162,35
23,57
10
315,60±125,77
-
110,26±27,80
49,05
2
265,02±52,11
-
202,96±18,01
6,20
0,6104
405,29±152,93
-
189,72±34,94
12,32
0,1526
412,30±110,68
-
261,54±114,76
-
0
224,26±42,60
-
216,39±45,19
-
Таблица 6
Капсаицин, 300 нмоль/л
Капсаицин, 100 нмоль/л
AMG9810 (нмоль/л)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
10 000
44,15±2,20
94,95
47,00±11,29
94,47
2500
78,33±46,56
91,05
85,41±20,60
89,95
625
747,36±77,35
14,59
735,36±114,75
13,45
156
958,56±16,66
-
916,79±31,53
-
39
975,35±32,01
-
942,69±88,43
-
0
875,05±55,11
-
849,62±7,02
-
2+
Пример 3. SYMSITIVE 1609 снижает поток Ca, индуцированный феноксиэтанолом или капсаицином
Активность SYMSITIVE 1609 в качестве антагониста TRPV-1 испытывали с использованием двух разных концентраций феноксиэтанола в ДМСО с использованием теста потока кальция. Ее также испытывали с использованием теста потока кальция, в котором феноксиэтанол был заменен на капсаицин. Результаты представлены в таблицах 7 и 8 соответственно. Концентрации феноксиэтанола и капсаицина приведены в миллимолях (ммоль/л) и наномолях (нмоль/л) соответственно, но концентрации SYMSITIVE 1609 приведены в % об./об. В таблице 7 также приведены массовые соотношения SYMSITIVE 1609 к феноксиэтанолу (молекулярная масса феноксиэтанола - 138,16 г/моль, плотность феноксиэтанола - 1,1 г/мл, плотность SYMSITIVE 1609-0,95 г/мл).
Эти результаты показывают, что обработка SYMSITIVE 1609 не только снижает индуцированный феноксиэтанолом поток кальция, но и способна снизить этот поток при низких соотношениях SYMSITIVE 1609 к феноксиэтанолу.
Таблица 7
Феноксиэтанол, 3 ммоль/л
Феноксиэтанол, 2 ммоль/л
SYMSITIVE 1609(% об./об.)
Макс. ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
Соотношение (вес./вес.)SYMSITIVE: Феноксиэтанол
Макс. ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
Массовое соотношениеSYMSITIVE: Феноксиэтанол
0,04839
52,56±6,41
79,62
1:0,9
48,89±4,25
72,44
1:0,6
0,01613
49,86±5,59
80,67
1:2,7
52,45±2,42
70,44
1:1,8
0,00538
73,49±11,30
71,51
1:8
55,66±2,52
68,63
1:5,4
0,00179
200,63±15,30
22,22
1:24
137,07±9,64
22,75
1:16
0,00060
263,43±3,66
-
1:73
190,00±48,44
-
1:48,7
0
257,93±39,06
-
-
177,43±19,36
-
-
Таблица 8
Капсаицин, 100 нмоль/л
SYMSITIVE 1609 (% об./об.)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
0,04839
707,54±269,73
29,73
0,01613
713,35±621,33
29,15
0,00538
1119,65±140,29
-
0,00179
1293,49±40,06
-
0,00060
1305,23±33,35
-
0
1006,91±74,51
-
Пример 4. Получение составленных очищающих композиций
Сравнительная очищающая композиция (сравнительный пример C1) была приготовлена с использованием ингредиентов, приведенных в таблице 9.
ТАБЛИЦА 9Сравнительный пример, C1
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Деионизированная вода
Вода
79,9
Texapon N70A
Лаурилсульфат натрия
3,7
Tween 28-LQ
Сорбитанлаурат ПЭГ-80
5,0
Миранол HMD
Лауроамфоацетат натрия
2,0
Тегобетаин L7V
Кокамидопропилбетаин
6,4
Феноксетол
Феноксиэтанол
2,0
Гидролит CG
Каприлилгликоль
1,0
Лимонная кислота (50%-ный раствор)
Лимонная кислота
дост. кол-во
Композицию, представленную в таблице 9 выше, готовили следующим образом. Воду добавляли в стеклянный лабораторный стакан и нагревали до 60°C. Добавляли Texapon N70A и перемешивали до полного растворения. Во время перемешивания добавляли Tween 28-LQ, Миранол HMD и Тегобетаин L7V и продолжали перемешивание до получения прозрачной смеси. Одновременно добавляли гидролит CG и феноксетол, продолжали перемешивание, медленно снижая температуру до комнатной температуры. pH доводили до целевого 5,6 с использованием лимонной кислоты.
Другая сравнительная очищающая композиция, сравнительный пример C2, была приготовлена с использованием ингредиентов, приведенных в таблице 10.
ТАБЛИЦА 10Сравнительный пример, C2
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Деионизированная вода
Вода
80,9
Texapon N70A
Лаурилсульфат натрия
3,7
Tween 28-LQ
Сорбитанлаурат ПЭГ-80
5,0
Миранол HMD
Лауроамфоацетат натрия
2,0
Тегобетаин L7V
Кокамидопропилбетаин
6,4
Феноксетол
Феноксиэтанол
2,0
Лимонная кислота (50%-ный раствор)
Лимонная кислота
дост. кол-во - регулятор кислотности
Композицию, представленную в таблице 10, готовили следующим образом. Воду добавляли в стеклянный лабораторный стакан и нагревали до 60°C. Добавляли Texapon N70A и перемешивали до полного растворения. Во время перемешивания добавляли Tween 28-LQ, Миранол HMD и Тегобетаин L7V и продолжали перемешивание до получения прозрачной смеси. Одновременно добавляли феноксетол, продолжали перемешивание, медленно снижая температуру до комнатной температуры. pH доводили до целевого 5,6 с использованием лимонной кислоты.
Композицию настоящего изобретения (композицию E1) готовили из компонентов, перечисленных в таблице 11.
ТАБЛИЦА 11Обладающий признаками изобретения пример, E1
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Деионизированная вода
Вода
81,9
Texapon N70A
Лаурилсульфат натрия
3,7
Tween 28-LQ
Сорбитанлаурат ПЭГ-80
5,0
Миранол HMD
Лауроамфоацетат натрия
2,0
Тегобетаин L7V
Кокамидопропилбетаин
6,4
Феноксетол
Феноксиэтанол
2,0
Гидролит CG
Каприлилгликоль
1,0
SymSitive 1609
транс-4-трет-бутилциклогексанол
1,0
Лимонная кислота (50%-ный раствор)
Лимонная кислота
дост. кол-во
Композицию, представленную в таблице 11, готовили следующим образом. Воду добавляли в стеклянный лабораторный стакан и нагревали до 60°C. Добавляли Texapon N70A и перемешивали до полного растворения. Во время перемешивания добавляли Tween 28-LQ, Миранол HMD и Тегобетаин L7V и продолжали перемешивание до получения прозрачной смеси. Одновременно добавляли гидролит CG, феноксетол и SYMSITIVE 1609 и продолжали перемешивание, медленно снижая температуру до комнатной температуры. pH доводили до целевого 5,6 с использованием лимонной кислоты.
2+
Пример 5. Обладающий признаками изобретения пример, E1, снижает поток Ca по сравнению со сравнительным примером, C1
Композиции сравнительных примеров C1 и C2 испытывали на уровни потока кальция с использованием теста потока кальция. Результаты приведены в таблице 12 и показывают, что составленная очищающая композиция, включающая в себя феноксиэтанол (с дополнительным консервантом каприлилгликолем или без), индуцирует поток кальция.
Таблица 12
Сравнительный пример, C1
Сравнительный пример, C2
Очищающее средство (% об./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
0,125
129,62±29,43
**
146,97±23,41
**
0,0625
80,34±14,75
**
72,05±8,81
**
0,0313
40,66±7,89
с/н
33,42±8,32
с/н
0,0156
27,36±4,73
с/н
18,51±1,09
с/н
Носитель(Очищающее средство без фенокси-этанола)
34,60±5,58
-
-
-
<i>с/н: статистически незначимо</i><i>** статистически значимо</i>
Обладающий признаками изобретения пример E1 также испытывали с использованием теста потока кальция. Результаты приведены в таблице 13 и сравниваются с результатами для сравнительного примера C1, воспроизведенными из таблицы 12.
Эти результаты показывают, что включение SYMSITIVE 1609 в очищающую композицию с феноксиэтанолом ингибирует поток кальция, вызванный феноксиэтанолом, способом, который усиливается с количеством очищающей композиции.
Таблица 13
Сравнительный пример, C1
Обладающий признаками изобретения пример, E1
Очищающее средство (% об./об.)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
% ингибирования
0,0625
80,34±14,75
29,23±5,77
63,62
0,03125
40,66±7,89
17,67±4,68
56,54
0,01563
27,36±4,73
12,44±2,63
54,54
0,00781
19,04±11,59
13,72±2,29
27,94
0,00391
22,35±3,21
13,85±2,96
38,04
0,00195
34,38±4,23
31,02±4,57
9,76
0,00098
39,83±1,83
45,16±1,95
-
Пример 6. Гидрокортизон, дифенгидрамин или лидокаин не снижают индуцированный феноксиэтанолом поток кальция в TRPV-1- экспрессирующих клетках
J Invest Dermatol
Lancet
Clin Cosmet Investig Dermatol
Анальгетики гидрокортизон, дифенгидрамин и лидокаин, для каждого из которых была показана эффективность в снижении нейросенсорных ответов, таких как зуд и жжение (см. Lin, T. K. et al. (2013)  133(2): 469-478; Yosipovitch, G. et al. (2003)  361(9358): 690-694; и Walling, H. W. et al. (2010)  3: 99-117), испытывали с использованием теста потока кальция. Результаты представлены в таблице 14.
Таблица 14
Феноксиэтанол, 3 ммоль/л
Феноксиэтанол, 2 ммоль/л
Капсаицин, 300 нмоль/л
Соединение
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
Гидрокортизон, 100 мкмоль/л
225,19±38,09
160,66±30,14
963,83±65,21
Гидрокортизон, 25 мкмоль/л
309,90±40,00
171,65±83,27
950,97±49,52
Дифенгидрамин, 100 мкмоль/л
195,47±53,34
141,61±33,91
825,37±9,95
Дифенгидрамин, 25 мкмоль/л
312,62±67,77
158,25±0,69
899,35±10,60
Лидокаин, 100 мкмоль/л
205,92±16,97
116,25±25,92
н/у
Лидокаин, 25 мкмоль/л
197,45±41,14
124,96±22,24
н/у
Носитель
216,86±36,93
155,87±46,55
896,85±16,71
н/у = не установлено
Результаты показывают, что ни один из гидрокортизона, дифенгидрамина или лидокаина не был эффективным в снижении вызванного феноксиэтанолом потока кальция в TRPV-1-экспрессирующих клетках НЕК293. Таким образом, не все обезболивающие средства являются антагонистами TRPV-1.
Пример 7. Раздражители, такие как бикарбонат натрия, не индуцируют поток кальция в TRPV-1-экспрессирующих клетках
Toxicol In Vitro
Бензиловый спирт и бикарбонат натрия испытывали с использованием теста потока кальция. Известно, что оба эти соединения индуцируют раздражение кожи in vivo (Bagley, D. M. et al. (1996)  10(1): 1-6). Результаты представлены в таблице 15.
Таблица 15
Бензиловый спирт (ммоль/л)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
Бикарбонат натрия (ммоль/л)
Максимальные ОЕФ(среднее ± СО)
** P<0,05 по сравнению с носителем
4
362,51±126,09
**
0,5
3,39±2,66
с/н
2
135,45±12,15
с/н
0,25
124,90±8,41
**
1
113,51±4,70
с/н
0,125
114,34±6,46
с/н
0,5
104,45±12,50
с/н
0,0625
102,15±4,19
с/н
0,25
64,45±28,15
с/н
0,03125
109,99±1,37
с/н
Носитель
101,19±2,56
-
Носитель
98,80±12,93
-
<i>с/н: статистически незначимо</i><i>** статистически значимо</i>
В этом тесте бензиловый спирт не продемонстрировал статистически значимой активности в отношении активации TRPV-1 в дозах 2 ммоль/л и ниже. Однако, как представлено в примере 9, бензиловый спирт показывает такую активность и при более низких дозах. Разница в результатах может возникнуть в связи с оптимизацией способа испытания для снижения фоновых значений (чистый носитель давал приблизительно 9 ОЕФ в примере 9, в таблице 19 по сравнению с приблизительно 101 ОЕФ в таблице 15 выше), что приводит к более высокой чувствительности анализа, демонстрирующей статистически значимые изменения для более низких доз бензилового спирта.
Эти результаты также показывают, что не все раздражители кожи, т. е. бикарбонат натрия, активируют TRPV-1.
Пример 8. Дополнительные обладающие признаками изобретения примеры
Композицию в соответствии с настоящим изобретением (композицию E2) готовят путем смешивания ингредиентов, приведенных в таблице 16.
ТАБЛИЦА 16Обладающий признаками изобретения пример, E2
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Деионизированная вода
Вода
82,8
Texapon N70A
Лаурилсульфат натрия
3,7
Tween 28-LQ
Сорбитанлаурат ПЭГ-80
5,0
Миранол HMD
Лауроамфоацетат натрия
2,0
Тегобетаин L7V
Кокамидопропилбетаин
6,4
Феноксетол
Феноксиэтанол
2,0
Гидролит CG
Каприлилгликоль
1,0
SymSitive 1609
транс-4-трет-бутилциклогексанол
0,1
Лимонная кислота (50%-ный раствор)
Лимонная кислота
дост. кол-во
Композицию, представленную в таблице 16 выше, готовят следующим образом. Воду добавляют в стеклянный лабораторный стакан и нагревают до 60°C. Добавляют Texapon N70A и перемешивают до полного растворения. Во время перемешивания добавляют Tween 28-LQ, Миранол HMD и Тегобетаин L7V и продолжают перемешивание до получения прозрачной смеси. Одновременно добавляют гидролит CG, феноксетол и SYMSITIVE 1609 и продолжают перемешивание, медленно снижая температуру до комнатной температуры. pH доводят до целевого 5,6 с использованием лимонной кислоты.
Композицию в соответствии с настоящим изобретением (композицию E3) готовят путем смешивания ингредиентов, приведенных в таблице 17.
Таблица 17Обладающий признаками изобретения пример, E3
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Очищенная вода
Вода
86,95
Карбомер
Поперечносшитая полиакриловая кислота
0,60
VERSENE NA
Динатриевая ЭДТА
0,20
Диметикон
Силиконовая жидкость Dow Corning Q7-9120
5,0
Brij 72
Стеарет-2
0,75
Brij 721
Стеарет-21
1,50
Finsolv TN
C12-15 алкилбензоат
2,0
Феноксетол
Феноксиэтанол
2,0
SymSitive 1609
транс-4-трет-бутилциклогексанол
1,0
Композицию, представленную в таблице 17, готовят следующим образом. Масляную фазу получают путем добавления C12-15 алкилбензоата в чистый стеклянный лабораторный стакан. Начинают перемешивание и сосуд нагревают до 55-60°C. Когда масляная фаза достигает 55°C или выше, добавляют Brij 72, Brij 721 и SYMSITIVE 1609. Когда масляная фаза достигает температуры 55-60°C, ее продолжают выдерживать при данной температуре и перемешивают в течение 15 минут (или до достижения однородности). Затем температуру поддерживают в диапазоне 55-60°C, продолжая перемешивание, до добавления к водной фазе.
Водную фазу получают путем добавления воды в чистый стеклянный лабораторный стакан. Начинают перемешивание и нагревают сосуд до температуры 55-60°C. Добавляют динатриевую ЭДТА. При температуре 55-60°C ингредиенты перемешивают в течение 15 минут или до достижения однородности. Затем температуру поддерживают в диапазоне 55-60°C, продолжая перемешивание для смешивания фаз. Масляную фазу добавляют в водную фазу с усилением перемешивания, затем смешивают их при высокой скорости в течение 10-20 минут. При температуре 50°C или ниже добавляют диметикон. При температуре 40°C или ниже добавляют феноксетол. Затем фазы перемешивают в течение 10 минут или до достижения однородности. Добавляют гидроксид натрия (целевой pH составлял 5,4). Затем композицию перемешивают в течение 10 минут или до достижения однородности. Смесь перемешивают до достижения однородности. Затем добавляют воду в достаточном количестве и перемешивают композицию в течение 10 минут.
Композицию в соответствии с настоящим изобретением готовят путем смешивания ингредиентов, перечисленных в таблице 18.
ТАБЛИЦА 18Обладающий признаками изобретения пример, E4
Торговое название
Название по INCI
% вес.
Деионизированная вода
Вода
69,04
Натрия хлорид
Натрия хлорид
0,01
Гидролит CG
Каприлилгликоль
1,0
SymSitive 1609
транс-4-трет-бутилциклогексанол
1,0
Снежно-белый вазелин
Вазелин
4,00
Isofol 28
Додецилгексадеканол
2,50
DOW CORNING Q7-9120 (20 сСт)
Диметикон
1,25
Kessco IPP
Изопропилпальмитат
3,00
Varisoft TA-100
Хлорид дистеарилдимония
5,00
Глицерин
Глицерин
12,00
Феноксетол
Феноксиэтанол
1,0
Композицию, представленную в таблице 8, готовят следующим образом. В реакционный сосуд добавляют воду. Начинают перемешивание и добавляют соль, перемешивание продолжают до растворения. Включают нагрев и продолжают перемешивание до достижения 85°C. Добавляют Varisoft TA-100, вазелин и Isofol 28, DC Q7-9120 (20 сСт), а также изопропилпальмитат. Композицию перемешивают при 85°C в течение дополнительных 10-15 минут. Затем убирают нагрев композиции, снова перемешивают и охлаждают. При 40°C добавляют феноксетол и SYMSITIVE 1609, и затем образец разбавляют водой до нужного объема и продолжают перемешивать и охлаждать до 30-35°C.
Пример 9. Бензиловый спирт и фенилэтиловый спирт индуцируют поток кальция через рецептор TRPV-1
Бензиловый спирт и фенилэтиловый спирт испытывали при серии концентраций в ДМСО на активность в качестве агониста TRPV-1, как описано в примере 1. Результаты представлены в таблице 19. Концентрации бензилового спирта и фенилэтилового спирта приведены в виде % вес./об.
Как бензиловый спирт, так и фенилэтиловый спирт продемонстрировали дозозависимое увеличение внутриклеточного потока кальция в TRPV-1-трансфицированных клетках НЕК. Для обоих соединений увеличение максимальных значений ОЕФ по сравнению с контрольным носителем было статистически значимым в широком диапазоне количеств. Эти результаты показывают активацию рецептора TRPV-1 бензиловым спиртом и фенилэтиловым спиртом.
Таблица 19
Бензиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
0,04
608,23±10,21
0,013072
160,8±12,61
0,004357
43,91±3,74
0,001452
19,94±3,08
0,000484
15,75±1,8
0,000161
10,95±0,23
5,38E-05
13,23±6,33
1,79E-05
10,17±1,19
5,98E-06
7,25±0,71
1,99E-06
9,36±0,52
6,64E-07
9,37±1,66
0
9,54±1,6
Таблица 20
Фенилэтиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
0,12
755,2±12,89
0,04
548,5±37,22
0,013
185,92±28,6
0,0044
70,4±31,61
0,0015
25,95±0,85
0,00048
14,41±3,06
0,00016
10,14±4,39
0,000054
8,66±0,82
0,000018
10,71±2,34
0,000006
7,99±1,93
0,000002
12,8±1,35
0
12,89±1,79
2+
Пример 10. Капсазепин снижает поток Ca, индуцированный бензиловым спиртом
Капсазепин испытывали на активность в качестве антагониста TRPV-1 при различных концентрациях бензилового спирта в ДМСО, как описано в примере 2.
Полученные результаты представлены в таблицах 21 и 22.
Полученные результаты показывают, что обработка антагонистом TRPV-1 снижает индуцированный бензиловым спиртом поток кальция.
Таблица 21
10 мкмоль/л капсазепина
Без капсазепина
Бензиловый спирт (% вес./об.)
Макс. ОЕФ
Макс. ОЕФ
% ингибирования
0,04
18,82
410,41
95,41%
0,013072
10,48
93,35
88,78%
0,004357
8,14
31,54
74,18%
0,001452
11,63
14,03
-
0,000484
8,17
11,38
-
0,000161
7,95
8,44
-
0,0000538
10,90
5,38
-
0,0000179
8,92
4,38
-
0,00000598
9,46
4,25
-
0,00000199
11,32
3,07
-
6,64E-07
11,79
7,66
-
0
13,30
3,65
-
Таблица 22
10 мкмоль/л капсазепина
Без капсазепина
Бензиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
% ингибирования
0,04
28,72±1,5
424,01±2,92
93,23%
0,013072
21,7±0,2
124,54±13,18
82,58%
0,004357
15,33±1
55,75±2,68
72,51%
0,001452
15,7±2,1
30,81±0,98
-
0,000484
17,15±1,46
25,83±5,34
-
0,000161
19,83±3,44
16,17±1,16
-
0,0000538
18,44±0,07
17,1±3,42
-
0,0000179
18,21±2,76
17,05±0,19
-
0,00000598
16,77±1,48
17,82±0,88
-
0,00000199
18,74±2,18
18±3,24
-
6,64E-07
18,24±2,53
13,85±1,83
-
0
18,24±1,3
16,68±0,16
-
2+
Пример 11. Капсазепин снижает поток Ca, индуцированный фенилэтиловым спиртом
Капсазепин испытывали на активность в качестве антагониста TRPV-1 при различных концентрациях фенилэтилового спирта в ДМСО, как описано в примере 2.
Полученные результаты показаны в таблицах 23 и 24.
Полученные результаты показывают, что обработка антагонистом TRPV-1 снижает индуцированный фенилэтиловым спиртом поток кальция.
Таблица 23
10 мкмоль/л капсазепина
Без капсазепина
Фенилэтиловый спирт (% вес./об.)
Макс. ОЕФ
Макс. ОЕФ
0,12
345,95
605,31
42,85%
0,04
26,42
441,18
94,01%
0,013
4,56
123,10
96,30%
0,0044
11,56
26,36
56,15%
0,0015
11,68
8,68
-
0,00048
11,71
10,59
-
0,00016
11,64
7,21
-
0,000054
6,90
7,70
-
0,000018
13,60
5,43
-
0,000006
13,70
5,48
-
0,000002
12,76
6,43
-
0
13,44
11,50
-
Таблица 24
10 мкмоль/л капсазепина
Без капсазепина
Фенилэтиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
0,12
364,66±13,76
580,44±3,06
37,18%
0,04
39,89±5,81
470,23±7,11
91,52%
0,013
12,32±3,27
200,02±6,15
93,84%
0,0044
15,66±0,4
79,18±0,23
80,22%
0,0015
18,5±0,5
40,5±0,05
54,32%
0,00048
20,58±0,6
31,36±3,52
-
0,00016
19,48±0,51
22,15±0,76
-
0,000054
21,47±3,93
21,75±4,01
-
0,000018
18,18±0,59
17,58±0,7
-
0,000006
18±0,75
17,74±1,46
-
0,000002
18,03±3,35
12,28±3,52
-
0
17,46±0,4
17,98±0,83
-
2+
Пример 12. SYMSITIVE 1609 снижает поток Ca, индуцированный бензиловым спиртом
SYMSITIVE 1609 испытывали на активность в качестве антагониста TRPV-1, как описано в примере 3, с различными концентрациями бензилового спирта в ДМСО. Результаты представлены в таблице 25. Концентрации бензилового спирта приведены в виде % вес./об., но концентрации SYMSITIVE 1609 приведены в виде % об./об.
Таблица 25
0,05% об./об. SymSitive
Без SymSitive
Бензиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
% ингибирования
0,04
76,89±8,55
608,23±10,21
87,36%
0,013072
33,14±3,51
160,8±12,61
79,39%
0,004357
29,71±0,46
43,91±3,74
32,33%
0,001452
24,12±2,33
19,94±3,08
-
0,000484
25,7±1,62
15,75±1,8
-
0,000161
30,72±1,65
10,95±0,23
-
0,0000538
27,91±0,47
13,23±6,33
-
0,0000179
25,07±1,14
10,17±1,19
-
5,98E-06
25,56±1,86
7,25±0,71
-
1,99E-06
20,27±6,14
9,36±0,52
-
6,64E-07
24,22±2,38
9,37±1,66
-
0
23,1±1,61
9,54±1,6
-
2+
Пример 13. SYMSITIVE 1609 снижает поток Ca, индуцированный фенилэтиловым спиртом
SYMSITIVE 1609 испытывали на активность в качестве антагониста TRPV-1, как описано в примере 3, с различными концентрациями фенилэтилового спирта в ДМСО. Результаты представлены в таблице 26. Концентрации фенилэтилового спирта приведены в виде % вес./об., но концентрации SYMSITIVE 1609 приведены в виде % об./об.
Таблица 26
0,05% об./об. SymSitive
Без SymSitive
Фенилэтиловый спирт (% вес./об.)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
Максимальные ОЕФ (среднее ± СО)
% ингибирования
0,12
464,85±56,24
755,2±12,89
38,45%
0,04
92,46±21,67
548,5±37,22
83,14%
0,013
19±2,48
185,92±28,6
89,78%
0,0044
25,22±2,31
70,4±31,61
64,17%
0,0015
27,46±5,12
25,95±0,85
-
0,00048
27,05±1,28
14,41±3,06
-
0,00016
25,21±1,56
10,14±4,39
-
0,000054
26,05±0,64
8,66±0,82
-
0,000018
21,02±0,79
10,71±2,34
-
0,000006
17,15±5,43
7,99±1,93
-
0,000002
18,15±2,97
12,8±1,35
-
0
21,77±1,8
12,89±1,79
-