Иммуногистохимическая характеристика экспрессии рецептора эпидермального фактора роста при сочетании лейомиомы тела матки и аденомиоза

Иммуногистохимическая характеристика экспрессии рецептора эпидермального фактора роста при сочетании лейомиомы тела матки и аденомиоза

Давыдов Д.А.1, Мавричева Л.А.2, Черствый Е.Д.1

1Белорусский государственный медицинский университет, Минск, Беларусь 21ородская гинекологическая больница, Минск, Беларусь

Davydov D.A.1, Mavricheva L.A.2, Cherstvy E.D.1

Belarusian State Medical University, Minsk, Belarus 2Minsk City Gynecology Hospital, Belarus

Immunohistochemical characteristic of epidermal growth factor receptor expression in uterine leiomyoma combined with adenomyosis

Резюме. Исследованы операционные биоптаты 28 пациенток, которым была выполнена гистерэктомия по поводу лейомиом (Л) тела матки и/или аденомиоза (А) (группы: Л+А -13 случаев, Л -10 случаев, узловая форма А - 5 случаев). При помощи иммуногистохимического метода определялась экспрессия рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) в лейомиоматозных узлах и эутопическом эндометрии. Показатель экспрессии EGFR в субмукозных и интрамуральныхузлах был значимо выше в группе Л+А, чем в группе Л. Статистически значимые различия показателя экспрессии EGFR в эутопическом эндометрии не выявлены. Более высокий показатель экспрессии EGFR в лейомиоматозных узлах в группе Л+А, вероятно, связан с локальной гиперэстрогенией, обусловленной активностью ароматазы Р 450 в очагах аденомиоза. Ключевые слова: лейомиома, аденомиоз, рецептор эпидермального фактора роста, EGFR.

Медицинские новости. — 2015. — №12. — С. 37—39. Summary. During this study 28 operational biopsies obtained from female patients, which underwent hysterectomia due to uterine leiomyoma (L) and/or adenomyosis (A) were investigated (groups: L+A -13 cases, L -10 cases, nodular form of A - 5 cases). Epidermal growth factor receptor (EGFR) expression was determined in leiomyomas and endometrium by immunohistochemical assay EGFR expression level in submucosal and intramural leiomyomas was significantly higher in L+A group, than in L group. There was no significant difference in EGFR expression level in endometrium between groups. Higher EGFR expression level in leiomyomas of group L+A is probably associated wtth high local estrogen levels due to aromatase P 450 activity in adenomyosis foci.

Keywords: leiomyoma, adenomyosis, epidermal growth factor receptor, EGFR. Meditsinskie novosti. - 2015. - N12. - P. 37-39.

Факторы роста - один из важнейших разделов молекулярной биологии. Факторы роста представляют собой группу биологически активных полипептидных молекул, способных индуцировать синтез ДНК [5]. Факторы роста реализуют межклеточные взаимодействия, опосредуют эффекты гормонов, влияют на процессы пролиферации в ткани, образование и свойства межклеточного вещества. Установлена роль факторов роста и их рецепторов в патогенезе многих опухолей, атеросклероза, аутоиммунных процессов. Выявление рецепторов факторов роста в некоторых опухолях определяет их прогноз, а также тактику ведения пациентов. Эпидермальный фактор роста (EGF) регулирует процессы пролиферации, ангиогенеза в различных органах и тканях, реализуя свою функцию преимущественно пара- и аутокринно. Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR, ЕгЬВ1, HER1) относится к семейству тирозинкиназных трансмембранных рецепторов. Взаимодействие лиганда с внеклеточной частью рецептора приводит

к образованию димеров с последующим транс- и аутофосфорилированием за счет присущей рецептору тирозинкиназной активности. Далее сигнал через систему вторичных внутриклеточных посредников передается в ядро клетки, где происходит изменение активности генов.

Лейомиома (Л) и аденомиоз (А) являются наиболее часто встречающимися гормонзавизимыми заболеваниями матки в репродуктивном возрасте. Несмотря на их доброкачественный характер, Л и А обусловливают мено- и метроррагии, болевые ощущения, нарушение функции тазовых органов, патологическое течение беременности и родов. По данным различных авторов, 35-55% случаев Л сочетаются с А, в то время как Л выявляется в 64% случаев А [2, 7]. По данным Гуриева Т.Д. и соавт., частота сочетания Л матки и А достигает 49% [1]. Современные данные позволяют говорить о том, что воздействие половых стероидных гормонов на Л и А в значительной степени опосредовано факторами роста и их рецепторами. Подавляющее большинство современных

исследований посвящено изучению роли факторов роста и их рецепторов (в том числе EGF EGFR) в патогенезе Л матки без учета частого сочетания данных опухолей с А.

Цель исследования - охарактеризовать особенности экспрессии EGFR в узлах лейомиом и эутопическом эндометрии у пациенток с сочетанием лейомиомы тела матки и аденомиоза.

Материалы и методы

Материал исследования: операционные биоптаты 28 пациенток, которым выполнена гистерэктомия по поводу Л тела матки и/или А в гинекологическом отделении №3 УЗ «Городская гинекологическая больница» Минска.

Критерии включения в исследование: морфологическая верификация диагноза Л и/или А, отсутствие у пациенток злокачественных ново-образований половых органов, молочных желез, отсутствие в медицин-ской документации указаний на предшествующую гормональную терапию в течение 1 месяца перед операцией.

Р :унок

| Периваскулярная мембранная и цитоплазматическая экспрессия EGFR в лейомиоме. Окраска: первичное антитело против EGFR, хромоген: диаминбензидин

Исследованные группы: Л + А -13 случаев сочетания Л с диффузным и/или очаговым А (средний возраст женщин - 49,2±2,3 года), Л - 10 случаев изолированной лейомиомы тела матки (средний возраст - 47,4±3,4 лет), УФА -5 случаев узловой формы А (средний возраст - 50,3±2,2 года). Значимых различий между группами по фазе менструального цикла на момент выполнения операции не наблюдалось (р >0,05 для всех сравнений).

Иммуногистохимическое исследование проведено на серийных срезах парафиновых блоков ткани тела матки. В качестве первичного антитела использовали поликлональное кроличье антитело к EGFR (Biogenex) в разведении 1:200. Результат реакции визуализировался при помощи универсальной системы детекции (Thermo Scientific). В качестве положительного контроля использована ткань плоскоклеточного рака кожи. Отрицательный контроль - исключение стадии нанесения первичного антитела из процесса изготовления микропрепарата.

Результаты иммуногистохимической реакции оценивали при помощи программы AperioImageScope v11.2.0.780. Для этого производилось фотографирование 6 случайных полей зрения каждого исследуемого гистологического препарата при увеличении х200, после чего при помощи программы автоматически распознавались пиксели, имеющие различный цвет. Учитывалось отношение пикселей, имеющих коричневое (то есть положительное) окрашивание к общему количеству пикселей, составляющих данное изображение, - показатель экспрессии (positivity).

Рисунок 2

Статистическая обработка полученных данных выполнялась при помощи программного модуля Statistica 10.0. Для проверки значимости различий между исследуемыми группами использованы и-критерий Манна - Уитни и Н-критерий Краскелла - Уоллиса.

Результаты и обсуждение

Узлы лейомиомы

Экспрессия EGFR в Л выявлялась, главным образом, в цитоплазме и на мембране клеток периваскулярных зон (рис. 1). Периваскулярные зоны представляли собой группы клеток преимущественно веретеновидной формы (лейомиоциты, фи-бробласты, перициты), окружающие сосуд микроциркуляторного русла. Таким образом, экспрессия EGFR в узлах Л имеет очаговый характер.

Между группами Л+А и Л выявлены статистически значимые различия показателя экспрессии EGFR в субмукозных (и=245,0; р=0,0311) (рис. 2) и интрамуральных (и=947,0; р=0,002) узлах (рис. 3). Значимых различий показателя экспрессии EGFR в субсерозных лейомиомах не наблюдалось (и=369,0; р=0,056) (рис. 4). Наибольший уровень экспрессии наблюдался в интрамуральных узлах при сочетании Л и А. При изолированной Л максимальный показатель экспрессии EGFR отмечен в субмукозных узлах, однако различия между субмукозными и интрамуральными узлами внутри исследуемых групп статистически не значимы (р>0,05 для всех сравнений). В субсерозных узлах показатель экспрессии EGFR был минимальным в обеих группах.

Медианы показателя экспрессии EGFR в субмукозных, интрамуральных и субсерозных узлах в группах Л+А и Л

составили соответственно 1,57 х10-3, 1,81 х 10-3, 0,37х 10-3 и 0,84х 10-3, 0,77х 10-3, 0,83х 10-3 (25%, 75% квартили графически представлены на рис. 2-4). Таким образом, различия медиан показателя экспрессии между субмукозными, интрамуральными и субсерозными узлами в группах Л+А и Л составили, соответственно 87%, 135% и -55% (таблица).

Эутопический эндометрий

При иммуногистохимическом исследовании выявлена мембранная и цитоплазматическая экспрессия EGFR в клетках эпителия желез эндометрия (Э), а также в клетках стромы Э. В базальном слое Э, как правило, наблюдалась более выраженная экспрессия EGFR, чем в

Показатели экспрессии EGFR в субмукозных узлах

Группы: 0 - Л, 1 - Л+А; ° - медиана, п - 25-75%, т - max., ± - min

Рисунок 3

Показатели экспрессии EGFR в интрамуральных узлах

Группы: 0 - Л, 1 - Л+А; ° - медиана, п - 25-75%, т - max., х - min

МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ

№ 12 •2015

38

ЛИЦН Медианы показателя экспрессии EGFR в лейомиомах различной локализации в двух исследованных группах и относительная величина различия между ними

1руппа Локализация лейомиом

субмукозные интрамуральные субсерозные

Лейомиома + аденомиоз 1,57 х 10-3 1,81 х 10-3 0,37 х 10-3

Лейомиома 0,84 х 10-3 0,77 х 10-3 0,83 х 10-3

Различие 88%; р<0,05 135%; р<0,05 -55%

функциональном слое. Между тремя исследованными группами не выявлено статистически значимых различий по уровню экспрессии EGFR в эутопическом Э (н=3,598; p=0,1655).

В настоящем исследовании наглядно продемонстрировано, что клетки лейомиоматозных узлов, экспрессирующие EGFR, локализованы преимущественно периваскулярно. Показатель экспрессии EGFR в субмукозных и интрамуральных лейомиоматозных узлах значимо выше при сочетании Л и А, чем при изолированной Л. Полученные нами данные в целом соотносятся с результатами исследования Dixon D. и соавт., которые наблюдали цитоплазматическую и мембранную экспрессию EGFR в периваскулярных гладкомышечных клетках. Авторы также отмечают вариабельность уровня экспрессии EGFR в различных Л [4]. В свою очередь, Shimomura Y и соавт., Mat-suo Н. и соавт. показали, что воздействие эстрадиолы уменьшает экспрессию EGF но увеличивает экспрессию EGFR и PCNA (маркёр пролиферации) в клетках Л [9, 11]. Воздействие прогестерона увеличивает экспрессию EGF. Учитывая вышеизложенное, вероятной причиной более высоких уровней экспрессии EGFR в Л при сочетании с А является способность очагов аденомиоза к самостоятельному синтезу эстрогенов, которые, в свою очередь, увеличивают экспрессию EGFR. Ранее установлено, что в очагах А определяется активность ароматазы - ключевого фермента синтеза эстрогенов. Ароматаза Р 450 конвертирует андрогены в эстрогены и в физиологических условиях экспрессируется в различных тканях: в яичнике, плаценте,

коже, жировой ткани и головном мозге [12]. Urabe M. и соавт. показали, что ароматаз-ная активность гомогенатов ткани очагов аденомиоза была выше по сравнению с нормальным эндометрием или миоме-трием. По мнению авторов, ароматазная активность очагов аденомиоза может обусловливать рост эктопического эндометрия [13]. Экспрессия ароматазы Р 450 в эндометрии наблюдается только у женщин с пролиферативными заболеваниями половой системы, такими как эндометриоз, лейомиомы и аденомиоз [3, 10]. Локальный биосинтез эстрогенов, по-видимому, может рассматриваться как общее звено в патогенезе ряда заболеваний матки: аденомиоза, лейомиом и эндометриоза [8]. Более высокие показатели экспрессии EGFR в Л при А могут быть проявлением феномена локальной гиперэстрогении, обусловленной ароматазной активностью очагов аденомиоза.

В ходе настоящего исследования не выявлено значимых различий показателей экспрессии EGFR в эутопическом эндометрии, при изолированной Л, при сочетании Л с А и при УФА. Zhang H. и соавт. выявили экспрессию EGFR в эутопическом Э, очагах А во всех случаях изолированного А и сочетанной патологии. Авторы указывают на отсутствие значимых различий между исследованными группами [14]. Heiner J. S. и соавт. изучали зависимость экспрессии мРНК EGFR в Э пациенток с Л матки и без патологии в зависимости от фазы менструального цикла. Максимальные уровни экспрессии мРНК зарегистрированы в Э фазы пролиферации как у пациенток с лейомиомой матки, так и в контрольной группе [6].

Выводы:

1. Установлено, что при сочетании лейомиом (Л) и аденомиоза (А) показатель экспрессии EGFR в субмукозных и интрамуральных лейомиоматозных узлах значимо выше, чем в лейомиомах соответствующих локализаций при отсутствии аденомиоза. В то же время статистически значимых различий показателя экспрессии EGFR в эутопическом эндометрии между исследованными группами (Л, Л+А, узловая форма А) не выявлено.

2. Высокий уровень экспрессии EGFR в лейомиоматозных узлах, вероятно, связанный с феноменом локальной гипер-эстрогении, может косвенно указывать на наличие у пациентки аденомиоза.

3. Для определения диагностической ценности выявления экспрессии EGFR в лейомиоматозных узлах (например, в материале органосохраняющих миомэктомий) необходимы дальнейшие исследования. Представляется перспективным изучение возможной связи пролиферативной активности лейомиом и уровня экспрессии EGFR.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. ¡уриев Т.Д., Сидорова И.С., Унанян А.Л. Сочетание миомы матки и аденомиоза. - М.: Мед. информ. агентство, 2012. - 256 с.

2. Azzz R. // Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. -1989. - Vol.16 - P.221-235.

3. Dheenadayalu K, Mak I, Gordts S. et al. // Fertil. Steril. - 2002. - Vol.78 - P.825-829.

4. Dixon D, HeH, Haseman J.K. // Environment. Health Perspectives. - 2000. - Vol.108 (5). - P.795-802.

5. Goustin A. S, Leof E. B, Shipley G. D. et al. // Cancer Res. - 1986. - Vol.46. - P.1015-1029.

6. Heiner J.S., Wang L, Rutgers J.K. et al. // Am. J. Reprod. Immunol. - 1993. - Vol.30 (2-3). - P.68-73.

7. Kairi-Vassilatou E, Kontogianni K, Salamalekis M. et al. // Eur. J. Gynaecol. Oncol. - 2004. - Vol.25. -P.222-224.

8. Kitawaki J, KusukiI., Koshiba H. et al. // Fertil. Steril. - 1999. - Vol.72 (6). - P.1100-1106.

9. Matsuo H, Kurachi O, Shimomura Y. et al. // Oncology. - 1999. - Vol.57 (2), P.49-58.

10. Noble L.S., Simpson E.R., Johns A.. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1996. - Vol.81 (1). - P.174-179.

11. Shimomura Y, Matsuo H, Samoto T. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1998. - Vol.83. - P.2192-2198.

12. Simpson E.R., Clyne C, Rubin G., et al. // Ann. Rev. Physiol. - 2002. - Vol.64. - P.93-127.

13. Urabe M, Yamamoto T., Kttawaki J. et al. // Acta Endocrinol. (Copenh). - 1989. - Vol.121 (2). - P.259-264.

14. Zhang H, Gu M, Wang C. // Zhonghua Fu Chan KeZaZhi. - 1999. - Vol.34 (4). - P.210-213.

Поступила 05.05.2015 г.

МОЖНО ЛИ ПОЛЬЗОВАТЬСЯ ТАМПОНАМИ

Тампоны и другие подобные изделия часто содержат добавки, синтетические волокна и диоксин - продукт производства бумаги, по сути своей, яд. Древесную целлюлозу и вискозу (искусственный шелк), которые используют почти во всех тампонах, отбеливают. Обычно это делают с помощью хлора. В результате в них образуются следовые количества диоксина. Многие медики уверены, что использование

тампонов с диоксином может привести к развитию раковых заболеваний яичников, цервикального канала шейки матки, груди, эндометриозу, бесплодию, угнетению иммунитета, воспалению органов таза. Из всех средств гигиены тампоны считаются самыми опасными, потому что входят в тесный контакт с телом, что создает условия для проникновения вредных компонентов в организм.

НеаМ.таНш

'J