Определение глицирризиновой кислоты в сырье и препаратах солодки голой методом ВЭЖХ

Краткое сообщение

оценку коэффициентов клинической и экономической эффективности лекарственных препаратов, врач может выбрать средство с с учетом клинической эффективности, а также уровня финансирования ЛПУ и финансовых возможностей пациента.

Для сравнительной оценки клинической и экономической эффективности медикаментозного лечения больных хроническими формами ишемической болезни сердца произведено изучение влияния на нарушение функционального состояния левого и правого желудочков и общую гемодинамику и кровообращение малого круга у больных ИБС ряда периферических вазодилатато-ров: из группы нитратов (кардикет-ретард), антагонистов кальция (амлодипин), ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента (моноприл). Исследования проводились у 150 человек, страдающие стабильной стенокардией напряжения (II ф.к. - 104 человек, III ф.к. - 46 человек), дополнительно подразделенные на следующие клинические группы: стенокардия на фоне постин-фарктного кардиосклероза -75, диффузного мелкоочагового атеросклеротического кардиосклероза - 75 человек. Обе указанные формы, сопровождались гипертонической болезнью у 32 и были осложнены хронической сердечной недостаточностью у 125 больных. Группа для оценки гемодинамических эффектов каждого из указанных препаратов состояла из 50 больных, разделенных на вышеперечисленные клинические подгруппы. Методы контроля - общеклинический, всем больным до, в процессе и после лечения проводилась ЭКГ, эхокардиография, реопульмоногра-фия. Определялись показатели систолической и диастолической функции левого (ЛЖ) и правого (ПЖ) желудочков: конечный систолический и диастолический объем, ударный объем, сердечный индекс, фракция выброса, максимальные скорости потока в периоды раннего и позднего наполнения, соотношение максимальных скоростей раннего и позднего наполнения ЛЖ и ПЖ и др. Всего по каждой группе рассчитывали 114 показателей.

Стоимость медикаментозной терапии определялась по средней розничной стоимости препаратов, предоставленной Фармацевтическим управлением Минздрава РСО-Алания. Упаковка препарата «Амлодипин» включающая 30 таблеток по 5 мг стоила 357,72 рубля. Стоимость препарата «Кардикет-ретард» 60 мг в количестве 20 таблеток составила 111,2 рубля. Препарат «Моноприл» 10 мг в количестве 28 таблеток стоил 204 рубля.

Результаты. На фоне лечения больных хроническими формами ИБС кардикетом отмечено улучшение показателей общей гемодинамики, систолической и диастолической функций левого желудочка в 83%, легочного кровообращения - 80,1%, функционального состояния правого желудочка - в 72,1% случаев. Под влиянием амлодипина выявлено улучшение сократительной активности левого желудочка и общей гемодинамики в 91,2%, легочного кровообращения - в 86,2%, функционального состояния правого желудочка - в 80,1% случаев. При приеме моноприла имело место улучшение сократительной деятельности левого желудочка и общей гемодинамики имело место в 84%, легочного кровообращения - в 80,3%, функционального состояния правого желудочка - в 72,1% случаев. Высокие значения коэффициента «г» (0,5-0,84 по основным показателям) говорят о ведущей роли кардикета, амлодипина и моноприла в положительных гемодинамических сдвигах у лиц, страдающих ИБС.

Всего выявлено 99 (28%) «высокодостоверных» положительных изменений средних величин гемодинамических показателей. По отдельным препаратам высокодостоверные изменения (Д%) составляют у принимавших кардикет - 34 ( 28,8%), амлоди-пин - 36 (31,5%), моноприл - 29 (25,4%). Кардикет-ретард назначался под контролем общего состояния больного и АД, в суточной дозе 40-60-120 мг. Средний срок проводимого курса лечения кардикет-ретардом до получения достоверных и наибольших количественных положительных изменений средних величин показателей составил 15,8 дней. Средний курс лечения кардикет-ретардом 1 больного - 1153, 4 мг, стоимость курса 106,57 рубля.

Амлодипин назначался в первоначальной дозе 5 мг в сутки (по 2,5 мг. 2 раза в день). В дальнейшем, при необходимости, суточная доза увеличивалась до 10 мг под контролем АД. Средний срок лечения амлодипином составил 15,4 дней. Средний курс лечения одного больного - 115, 5 мг. Стоимость курса лечения -275,44 рубля. Индивидуальная доза моноприла устанавливалась с учетом величины АД, степени выраженности сердечной недостаточности и составляла 5-10-20мг в сутки. Средний срок лечения моноприлом составил 16,3 дней. Средний курс лечения одного больного - 189,08 мг. Стоимость курса лечения - 137,76 рубля.

Для сравнительной оценки клинической и экономической эффективности кардикета, амлодипина и моноприла произведено сопоставление максимально достоверных (р<0,001) и наибольших количественных (по ±Д%) положительных изменений сред-

них величин гемодинамических показателей, сроков проведенных курсов и стоимости полученных препаратов в клинических группах больных ИБС. Рассчитывая по предлагаемой формуле коэффициент клинической эффективности (ККЭ=Д%/ Дн), получаем результаты: кардикет - 1,82, амлодипин - 2,05, моноприл -1,56. Рассчитывая по предлагаемой формуле коэффициент экономической эффективности КЭЭ=Ст / Д%)-1 , получаем результаты: кардикет - 0,27, амлодипин - 0,11, моноприл - 0,18.

Заключение. Предлагаемый метод раздельной клинической и экономической оценки медикаментозной терапии свидетельствует о клинической и экономической эффективности применяемых методов лечения, что дает возможность выбирать наиболее эффективные и оптимальные варианты лечения больных, учитывая финансовые возможности лечебного учреждения и больного. Использование в качестве критерия клинической эффективности число максимально достоверных и наибольших количественных положительных изменений средних величин показателей, выраженное в процентах, позволяет сформировать единый подход при проведении клинико-экономической оценки эффективности методов лечения заболеваний, расширяет возможности многократного проведения оценки их эффективности с использованием клинических, биохимических и функциональнодиагностических критериев улучшения состояния больного. Объективность метода повышает использование в расчетах сроков достижения максимального клинического эффекта.

Простота и удобство расчетов позволяет рекомендовать предлагаемый метод не только в научно-исследовательской работах, но и для применения практическими врачами для определения наиболее эффективных лекарственных препаратов в лечении больных ИБС. Использование метода для определения эффективности медикаментозной коррекции гемодинамических расстройств у больных хроническими формами ИБС позволяет сделать вывод, что амлодипин имеет высокую, а кардикет и моноприл - среднюю клиническую эффективность. Одновременно кардикет имеет высокую, а амлодипин и моноприл - среднюю экономическую эффективность. Препаратом выбора в лечении хронических форм ИБС является амлодипин, а при наличии финансовых ограничений для коррекции гемодинамических расстройств у больных ИБС рекомендуется кардикет. Это не исключает возможность использования моноприла, обладающего средней клинической и экономической эффективностью.

Литература

1. Белоусов Ю.Б. и др. // Сердечная недостаточность.- Т.31 (29), № 6.- 2005.- С.23-27.

2. Рудаков А. // Клин. фармакол. и тер.-2003.- №3.- С. 23.

3. Белоусов Ю. Б. и др. // Проблемы стандартизации в здравоохранении.- 2000.- № 1.- С. 54-58.

4. Ольбинская Л.И., Игнатенко С.Б. // Клин. фармакол. и терапия.- 1999.- Т. 8, №4.- С..94-96.

5. Воробьев ПА. и др. Клинико-экономический анализ.- М.: Ньюдиамед, 2004.- С.3-4.

6. Рудаков А // Клин. фармакол. и тер.- 2003.- №1.- С. 87.

7. Воробьев П. и др. // Клин. геронтол.- 2001.- № 12.- С. 9.

8. Чурилин Б.Б. // Качеств. клин. практ.- 2001.- № 2.- С. 63.

9. ErhardtL. et al. // Europ. Heart.J.- 1995.- Vol.16.- P.1892.

10. Levy E. // Europ. Heart J.- 1998.- Vol.19, Suppl.- P. 2-4

11. Kobelt G. // Клин. фармакол. и тер.- 1999.- №2.- С. 50.

12. Kobel G. // Клин. фармакол. и тер.- 1999.- №4.- С. 93.

УДК 615.322:547.9+543.544

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ В СЫРЬЕ И ПРЕПАРАТАХ СОЛОДКИ ГОЛОЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ

З.Д. ХАДЖИЕВА*

Солодка голая (Glycyrriza glabra) - одно из древнейших лекарственных растений, не потерявших актуальности до настоящего времени. Традиционно солодка и лекарственные препараты на её основе применяются в медицине в качестве отхаркивающего, обволакивающего, лёгкого слабительного средства [6]. Корень солодки содержит вещества, относящихся к различным классам химических соединений, наиболее ценным в фармакологическом отношении из них являются тритерпеновые и флавоноидные

* ГОУ ВПО Пятигорская фармацевтическая академия, г. Пятигорск, Россия

Краткое сообщение

вещества [3]. Из тритерпеновых соединений корня солодки наибольший интерес представляет глицирризиновая кислота [4].

Рядом авторов была показана дезоксикортикостероидная активность глицирризиновой кислоты, аналогичная действию гормонов коры надпочечников [4-5, 7]. На основании этого предложено много препаратов, содержащих глицирризиновую кислоту и различные её производные, установлена их противовоспалительная активность, отхаркивающее и антиаллергическое действие. В России И.А. Муравьёвым (1968 г.) на основе гли-цирризиновой кислоты предложен препарат глицирам, представляющий собой аммонийную соль глицирризиновой кислоты [5]. В настоящее время в Российской Федерации зарегистрированы: корень солодки в качестве лекарственного растительного сырья (ГФХ - ст. 406), экстракт солодки густой (ФС 42-2614-96), экстракт солодки сухой (ФС 42-2636-89), сироп солодкового корня (ФС 42-1187-96), глицирам субстанция (НД 42-10798-00), глици-рам ГСО (ФС 42-0034-00), таблетки глицирама 0,05 г (ФС 420034-00), гранулы глицирама 0,025 г (ВФС 42-1822-88) [6].

В соответствии с действующей нормативной документацией подлинность препарата устанавливают по качественной химической реакции на глицирризиновую кислоту (по реакции осаждения из водных растворов кислотой серной разведенной). Количественное определение глицирризиновой кислоты в препаратах солодки голой проводят методом УФ-спектрофотометрии, при этом анализу предшествует очень сложная пробоподготовка с использованием токсичных реактивов и сопровождающая значительными затратами времени. Поэтому вполне обоснованы работы исследователей по усовершенствованию имеющихся и разработке новых методов анализа препаратов солодки. Особую актуальность эти исследования приобретают с появлением фальсифицированных лекарственных средств. Важным моментом при разработке новых лекарственных форм на основе растительного сырья является соблюдение принципа унификации метода анализа в ряду: «сырьё - субстанция - лекарственная форма» [1-2].

Цель исследования - изучение возможности оценки качества сырья - корня солодки голой и препаратов на его основе по действующим веществам с использованием метода ВЭЖХ. Применение метода ВЭЖХ для анализа препаратов солодки в настоящее время считается наиболее оптимальным, так как позволяет одновременно провести идентификацию соединений по времени удерживания - специфичной характеристики для природных соединений в одних и тех же стандартных условиях, и одновременно провести их количественное определение в исходном сырье и препаратах. Объективной предпосылкой для совершенствования методик количественного анализа сырья и препаратов солодки является наличие стандартного государственного образца (ГСО) глицирама (ФС 42-0034-00), разработанного во Всероссийском институте лекарственных растений.

Экспериментальная часть. При анализе использовали образцы сырья: корни солодки голой (ГФХ, ст. 406), экстракт солодки густой (ФС 42-2614-96). Для извлечения глицирризиновой кислоты из ЛРС применили модифицированную нами фармакопейную методику экстракции глицирризиновой кислоты из корня солодки и препаратов на его основе, основанную на замене спирта этилового 95% на спирт этиловый 50%.

Методика анализа корня солодки. Около 2 г (точная навеска) измельчённых корней солодки голой помещали в плоскодонную колбу со штифтом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 50% этилового спирта, взвешивали с погрешностью ±0,01 г, присоединяли к обратному холодильнику и кипятили в течение 1

ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивали, доводили до первоначальной массы 50% этиловым спиртом и фильтровали через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А). В случае получения мутного фильтрата, предварительно полученный фильтрат центрифугировали 10 минут со скоростью 5000 об/мин. 2 мкл раствора А вводили в микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром - А02» с УФ-детектором, снабженный колонкой (2x75 мм), заполненный обращено-фазовым сорбентом «Силасорб С18».

Анализ проводили методом градиентного элюирования при температуре 35°С. В качестве подвижной фазы использовали: элюент А - 0,1% раствор трифторуксусной кислоты; элюент Б -ацетонитрил. Режим элюирования - градиентный от 20% до 70% элюента Б за 10 минут, далее изократично - 70% элюента Б за 5 минут. Расход подвижной фазы 100 мкл/мин. Время записи - 15 минут. Детектирование вели при длинах волн 240, 252, 260 нм.

Параллельно в тех же условиях хроматографирования проводили анализ 2 мкл 0,02% ГСО глицирама в 50% этиловом спирте. Для приготовления стандартного раствора глицирама

~0,02 г (точная масса) навески порошка, соответствующего ФС 42-0034-00, помещали в колбу вместимостью 100 мл, добавляли 30 мл 50% этилового спирта, колбу энергично встряхивали 10 минут, доводили тем же раствором до метки. Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр. Эти условия анализа выбраны в ходе предварительных экспериментов, для чего изучались разные составы подвижной фазы (вода - ацетонитрил; 0,435% раствор кальция фосфата двузамещенного - ацетонитрил;

0,1% раствор трифторуксусной кислоты - ацетонитрил) и режим элюирования (изократический и градиентный); лучшее разделение компонентов в корне солодки получено при описанных в методике условиях. На хроматограмме извлечения из корня солодки обнаружено 10 пиков индивидуальных веществ (рис. 1).

--------.-------і--------т--------і--------,-------\--------Т--------Ь--------«-------Г

о 3 6 9 12 15

Время, мин

Рис. 1. Хроматограмма спиртового извлечения экстракта солодки. Пики: 1, 2 - растворитель; 3, 4, 5 - вещества флавоноидной природы; 7 - глицирризиновая кислота; 6, 8, 9 - неидентифицированные компоненты глицирама

Пики № 1 и № 2 соответствуют пику растворителей и обнаруживаются на всех хроматограммах. Пики №№ 3, 4, 5 со временем удерживания от 6,12 до 7,52 мин принадлежат веществам флавоноидной структуры, так как спектральные отношения в исследуемом извлечении соответствуют спектральным отношениям стандартных растворов рутина и квертицина.

Пики №№ 6, 7, 8, 9 идентифицированы как глицирризино-вая кислота (№ 7) и её примеси (№№ 6, 8, 9), так как их время удерживания соответствует времени удерживания идентичных пиков ГСО глицирама (7,52; 8,2б; 8,71; 9,06 мин.) (рис. 2).

Время, мин

Рис. 2. Хроматограмма ГСО глицирама. Пики 1, 2 - растворитель; 4 -глицирризиновая кислота; 3, 5, 6 - неидентифицированные компоненты глицирама

Спектральные отношения пиков в извлечении из корня солодки и в растворе ГСО глицирама приведены в табл. 1.

Как следует из данных табл.1, спектральные отношения пиков в исследуемом извлечении из корня солодки и в растворе ГСО глицирама идентичны. Глицирризиновую кислоту идентифицировали по времени удерживания (8,7 мин.).

Количественное содержание глицирризиновой кислоты (мг/мл) находили по формуле:

, = .У, -С!со-100-100

5гсо  а

где: 8х - площадь пика глицирризиновой кислоты на хроматограмме исследуемого извлечения, мм2; 8ГСо - площадь пика глицирризиновой кислоты на хроматограмме раствора ГСО глицирама, мм2; СГСо - концентрация раствора ГСО глицирама,

Краткое сообщение

мг/мл; а - навеска сырья, г; w - потеря в массе при высушивании сырья, %. Для количественных расчётов использовали значение площади пика при длине волны 232 нм. Метрологические характеристики количественного определения глицирризиновой кислоты методом ВЭЖХ в корне солодки приведены в табл. 2.

Таблица І

Спектральные отношения пиков в извлечении из корня солодки и в растворе ГСО глицирама на хроматограмме

Основные пики в объектах исследования Время удерживания, мин А 24G/232 А 26G/232

ГСО глицирам (основной пик -глицир. кис-та) № 4 8,71 0,783 0,27

№ 3 (примесь) 8,27 0,749 0,804

№ 5 (примесь) 9,06 0,807 0,808

Извлечение корня солодки (основной пик -глицир. кис-та) №7 8,67 0,783 0,020

Пик № 6 (примесь) 8,17 0,773 0,797

Пик № 8 (примесь) 9,04 0,818 "

Таблица 2

Метрологические характеристики количественного определения глицирризиновой кислоты в сырье солодки голой

f X S Р.,% t(P1f) х Е,%

6 10,28 0,2287 93 2,37 ±0,42 4,08

Предложенная методика позволяет обнаружить глицирри-зиновую кислоту по времени удерживания (8,7 мин) и количественно определить, сравнивая площади пика стандартного и испытуемого растворов. Относительная ошибка определения не превышает 4,G8%. Опыт с добавками ГСО глицирама к извлечению из сырья солодки показали, что относительная ошибка определения находится в пределах ошибки единичного определения, это позволило сделать вывод о неосложненности методики систематической ошибкой. Основываясь на том, что ЛРС и препараты на его основе должны стандартизироваться по одним и тем же группам биоактивных веществ, обусловливающих фармакологические действие, нами разработана методика определения гли-цирризиновой кислоты в экстракте солодки густом.

Методика анализа экстракта солодки густого. ~G,3 г (точная масса) экстракта солодки густого помещали в мерную колбу объемом 3G мл, добавляют 3G мл 3G% этилового спирта, колбу энергично встряхивают 1G минут, доводят тем же растворителем до метки. Полученный раствор центрифугируют 1G мин. со скоростью 3GGG об/мин. Надосадочную жидкость исследуют на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром -А02» снабженном колонкой (2x73 мм), заполненной обращено -фазовым сорбентом «Силасорб С18». Пробы по 2 мкл полученного раствора и G,G2% раствора ГСО глицирама хроматографировали, получая не менее 3 хроматограмм в вышеуказанных условиях.

Количественное содержание глицирризиновой кислоты в густом экстракте солодки рассчитывают по формуле:

X = Sx-Cç-100400 V '

Sгсо -a

где: Sx - площадь пика глицирризиновой кислоты на хроматограмме экстракта, мм2; S^ - площадь пика глицирризиновой кислоты на хроматограмме раствора ГСО глицирама, мм2; Сгсо -концентрация раствора ГСО глицирама, мг/мл; а - навеска сырья, г; w - потеря в массе при высушивании экстракта, %. Результаты количественного определения глицирризиновой кислоты в экстракте солодки густом (серия 42G9G4) приведены в табл. 3.

Таблица З

Результаты количественного определения глицирризиновой кислоты в экстракте солодки густом

S гсо =3,29 мм С гсо=0,0204%

Навеска препарата, г Площадь пика Sx Найдено глицирриновой кислоты, г Метрологиче- ские хар-ки

0,3101 26,18 19,77 Х = 19,81

0,3084 23,94 19,66 Sx = 0,2329

0,4067 21,36 20,24 ±АХ = 0,9069

0,6866 34,24 19,22 Е = 4,38%

0,3461 28,20 19,20 t = 2,37

0,3226 27,18 20,03

Разработанная методика количественного определения гли-цирризиновой кислоты в сырье и экстракте имеет высокую чувствительность, небольшую относительную погрешность определения (4,G8% и 4,88%), хорошую воспроизводимость.

Выводы. На основании исследований разработана ВЭЖХ методика количественного определения глицирризиновой кислоты в лекарственном растительном сырье - корне солодки и в экстракте солодки густом. Разработанная унифицированная методика позволяет провести качественный анализ по времени удерживания глицирризиновой кислоты, а также её количественное определение как в сырье, так и в экстракте солодки густом.

Литература

1. Арзамасце, А. и др. // Хим.-фармац. ж.- 2000.- N°3.- С. 47.

2. БагироваВ. и др. // Хим.-фармац. ж.- 2000.- К11.- С. 46.

3. Быков В.А. и др. // Тез. докл. III Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство», 1996.- С. 12.

4. Запесочная Г.Г. и др. // Химия природных соединений.-1994.- К 6.- С. 772-78G.

3.Муравьёв И. и др. // Хим.-фармац. ж.- 1992.- К 9-10, 39.

6. Регистр лекарственных средств России, вып. 11.- М., 2002.- 1303 с.

7. Хаджиева ЗД. Разработка и изучение пенных лекарственных форм препаратов солодки бальнеологического назначения: Автореф. дис. „.канд. фармац. н.- Пятигорск, 1993.- 23 с.

УДК 616-002.4; 616.748.2

ФАКТОРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО НЕКРОЗА БЕДРЕННЫХ ГОЛОВОК У ПАЦИЕНТОВ РЕВМАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ.

А.Э. ПОЛИВАНОВ, Н.М. МЫЛОВ,

В.Н. СОРОЦКАЯ*

Актуальность. Асептический некроз головок бедренных костей (АНГБК) - является одной из актуальных проблем в ревматологии, который осложняет течение ряда воспалительных и дистрофических поражений т/б сустава, сопровождающийся выраженными анатомическими изменениями, прогрессирующим течением, и большинстве случаев приводящий к необратимым функциональным нарушениям с большим процентом инвалидности [1-2, 4, 6, 8-10]. Причины развития АНГБК при ревматических заболеваниях еще до конца не изучены. Сведения об АНГБК при ревматических заболеваниях не дают достаточно полного представления о патогенезе, клинике и течении этой серьезной патологии [5, 6, 7]. Сложность диагностики этого клиникорентгенологического синдрома обусловлена тем, что АНГБК может протекать на фоне различных заболеваний и симулировать радикулит, туберкулезный или инфекционный коксартрит [3].

Таблица 1

Частота АНГБК при основных ревматических заболеваниях за 2002— 2003 гг. п = 1546 абс./%

Д-з Общее число больных Число больных g рентгенограммами таза Число больных g патологией т/б суставов по рентгенограммами таза Число больных g асети^ским некрозом бедренных головок

РА 773/100,0 90/11,6 33/4,3 27/3,3

БР 167/100,0 96/37,4 3/3,0 4/2,4

ПСА 103/100,0 33/31,4 3/4,8 3/2,8

ПОА 301/100,0 136/27,1 80/13,6 37/7,4

Всего 1346/100,0 333/23,0 123/8,0 71/4,3

Материалы и методы. Работа выполнялась на базе Тульской областной больницы на основании материала ревматологического и рентгенологического отделений. На стационарном лечении в ревматологическом отделении в период 2002 и 2003 гг., находилось 1546 пациентов с диагнозами: ревматоидный артрит (РА) - 773 человека, болезнь Рейтера (БР) - 167 человек, псориатический артрит (ПСА) - 105 человек, первичный остеоартроз (ПОА) - 501 человек. Пациентам, предъявлявших жалобы на боли в т/б суставах и нарушение их функции, боли в области крестца, подвздошных костях и нижнепоясничном отделе позво-

* ГУЗ ТО «Тульская областная больница»