СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ЦЕЛЕВОГО БЕЛКА БЕЗ ПРИМЕСИ ПРИОНОВОГО БЕЛКА (PRPSC)

Sc
1. Способ выделения и очистки целевого белка посредством хроматографии, в котором хроматография удаляет или уменьшает содержание прионов (PrP), включающий стадии
sc
- взаимодействия потенциально PrP-загрязненного препарата, содержащего целевой белок, с комбинированным хроматографическим материалом;
sc
- создания буферных условий, таких, чтобы целевой белок связывался с комбинированным хроматографическим материалом, а PrP не связывался с комбинированным хроматографическим материалом;
- последующего элюирования целевого белка.
2. Способ по п.1, в котором целевой белок элюируется после элюирования приона посредством
- изменения ионной силы элюирующего буфера посредством увеличения или уменьшения ионной силы,
- добавления спиртов к элюирующему буферу - в частности в водном растворе - таких как моно- или дигидроксиалканолы, например, низшие алифатические спирты, такие как метанол, этанол, пропанол и/или
- изменения значения pH элюирующего буфера посредством увеличения или уменьшения pH.
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором значение уменьшения содержания прионового белка в белковой фракции, содержащей целевой белок, составляет от >1 до 4 lg(10), что рассчитано по его содержанию, которое изначально было в смоле.
4. Способ по п.1, в котором аналитическая величина содержания прионового белка в представляющей интерес белковой фракции ниже предела чувствительности Вестерн-блот-анализа приона.
5. Способ по п.1, в котором хроматографические условия включают, по крайней мере, две из нижеследующих стадий:
i) применение загрузочного и выравнивающего буфера, содержащего растворитель и/или неионный детергент;
ii) применение отмывочного буфера без растворителя и/или неионного детергента;
iii) применение отмывочного буфера, содержащего спирт и/или аминокислоту;
iv) применение отмывочного буфера, содержащего высокую концентрацию соли;
v) применение отмывочного буфера, содержащего низкую концентрацию соли;
vi) применение буфера, содержащего комбинацию спирта и высокой концентрации соли.
6. Способ по п.1, в котором хроматографические условия включают, по крайней мере, две из ниже следующих стадий:
i) применение загрузочного и выравнивающего буфера, содержащего растворитель и/или неионный детергент;
ii) применение первого отмывочного буфера, который представляет собой буфер без растворителя и неионного детергента;
iii) применение второго отмывочного буфера, содержащего спирт и аминокислоту;
iv) применение третьего отмывочного буфера, содержащего высокую концентрацию соли;
v) применение четвертого отмывочного буфера, содержащего низкую концентрацию соли;
vi) применение элюирующего буфера, содержащего комбинацию спирта и высокой концентрации соли.
7. Способ по п.1, в котором:
i) загрузочный и выравнивающий буфер содержит три-н-бутилфосфат и/или Triton x-100 в концентрации, лежащей в диапазоне от около 0,1 до около 10% (по массе);
ii) второй отмывочный буфер содержит этиленгликоль и/или лизин/аргинин, в диапазоне от около 5 до около 30% (по массе) этиленгликоля и от 0,2 до около 1,5 M лизин/аргинин;
iii) третий отмывочный буфер содержит хлорид натрия в концентрации, лежащей в диапазоне от около 0,5 до около 4 M, в частности от около 0,5 до около 1,5 M;
iv) четвертый отмывочный буфер содержит хлорид натрия в концентрации, лежащей в диапазоне от около 0,01 до около 0,2, в частности от 0,01 до около 0,1 M;
v) элюирующий буфер содержит этиленгликоль и/или хлорид натрия в диапазоне концентраций от около 25 до около 75% (по массе), в частности от около 25 до около 50% этиленгликоля и от около 0,5 до около 4 M NaCl.
8. Способ по п.1, в котором комбинированный хроматографический материал содержит
i) положительно заряженный N-бензил-N-метилэтаноламиновый лиганд;
ii) отрицательно заряженный лиганд 2-(бензоиламино)бутановой кислоты;
iii) фенилпропиловый лиганд;
iv) N-гексиловый лиганд;
v) 4-меркаптоэтилпиридиновый лиганд;
vi) лиганд 3-[{3-метил-5-((тетрагидрофуран-2-илметил)амино)-фенил}амино]бензойной кислоты.
9. Белковая фракция с пониженным содержанием прионового белка, выделенная из источников, содержащих потенциально инфекционный белок, которая содержит фармацевтически применимые белки, получаемые в соответствии со способом по одному из предшествующих пунктов.
10. Фракция по п.9, содержащая белки плазмы, пептидные гормоны, факторы роста, цитокины и поликлональные иммуноглобулиновые белки, белки плазмы, выбранные из факторов свертываемости крови человека и животных, в том числе фибриногена, протромбина, тромбина, протромбинового комплекса, FX, FXa, FIX, FIXa, FVII, FVIIa, FXI, FXIa, FXII, FXIIa, FXIII и FXIIIa, фактора Вон Виллебранда, транспортных белков, в том числе альбумина, трансферрина, церулоплазмина, гаптоглобина, гемоглобулина и гемопексина, ингибиторов протеаз, в том числе β-антитромбина, α-антитромбина, α2-макроглобулина, Cl-ингибитора, ингибитора пути тканевого фактора (ИПТФ), гепарин-кофактора II, ингибитора белка C (PAI-3), белка C и белка S, белков ингибитора α-1 эстеразы, α-1 антитрипсина, антиангионетических белков, в том числе неактивного антитромбина, высоко гликозилированных белков, в том числе α-1-кислого гликопротеина, антихимотрипсина, ингибитора интер-α-трипсина, α-2-HS-гликопротеина и С-реактивного белка и других белков, в том числе обогащенного гистидином гликопротеина, маннан-связывающего лектина, C4-связывающего белка, фибронектина, GC-глобулина, плазминогена, факторов крови, таких как эритропоэтин, интерферон, опухолевые факторы, tPA, γCSF.