СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ СОСТОЯНИЯ МИКРОБИОТЫ КИШЕЧНИКА НОВОРОЖДЕННЫХ
METHOD FOR PREDICTION OF CONDITION OF NEWBORN INTESTINAL MICROBIOTA

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования состояния микрофлоры кишечника у новорожденных детей.
Известны способы прогнозирования состояния микробиоценоза кишечника новорожденных.
Способ определения нарушений микрофлоры кишечника новорожденных детей, извлеченных путем кесарева сечения [1]. Он заключается в том, что детей, рожденных путем кесарева сечения, следует относить к группе высокого риска по микробиологической дезадаптации с первых дней жизни и развитию гнойно-воспалительных заболеваний в постнатальном периоде. Недостатком данного способа является то, что не учитывалось состояние микробиоценоза кишечника беременной женщины, а только состояние её здоровья и путь родоразрешения.
Способ «Прогностическая оценка колонизационной резистентности кишечника новорожденных по фекальной и вагинальной лактофлоре матери» [2]. Свидетельствует о том, что в формировании микроэкосистемы новорожденного ведущая роль принадлежит микроэкологическому статусу матери, так как выявлена высокая прямая коррелятивная связь между микрофлорой матери и ребенка. Он заключается в том, что у беременной женщины определяли состояние микрофлоры 9 биотопов: кожных покровов, слизистых оболочек полости рта и влагалища, содержимого кишечника; у новорожденных - 9 биотопов кожных покровов, слизистой полости рта, испражнений, недостатком данного способа является дороговизна исследования, так как применялась методика бактериологического исследования и молекулярно-генетические технологии (ПЦР), а также не учитывалось наличие синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке у беременных [2].
Прототипом выбран метод прогноза микроэкологических нарушений ребенка в зависимости от микроэкологических нарушений матери (диссертация на соискание степени доктора медицинских наук «Микроэкологические нарушения у матери и ребенка: диагностика, прогоностическое значение» Николаевой И.В., 2011 г. [3]. Он заключается в том, что было определено прогностическое значение различных вариантов нарушений микробиоценозов у матери для формирования кишечной микрофлоры у ребенка в период грудного вскармливания. Выявлено, что при наличии у матери дефицита полезных бактерий в кишечнике дети имеет более высокий риск развития аналогичных изменений кишечной микрофлоры, чем дети, матери которых имеют нормальный состав кишечной микрофлоры.
Недостатком данного способа является использование для определения степени нарушений микробиоценоза кишечника матери и ребенка бактериологическое исследование фекалий, которое не отражает наличие синдрома избыточного бактериального роста (СИБР) в тонкой кишке у беременных.
Задача, описание
Целью предлагаемого способа является прогнозирование состояния микрофлоры кишечника новорожденных для оценки риска по микробиологической дезадаптации ребенка.
Новизна способа заключается в том, что впервые для прогнозирования состояния микрофлоры кишечника новорожденных используется определение наличия синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке у беременных, у которых для определения состояния микробиоценоза используется методика водородного дыхательного теста, отражающего степень нарушений кишечной микрофлоры.
Технический результат достигается путем определения синдрома избыточного бактериального роста у беременных методом водородного дыхательного теста с лактулозой, при обнаружении которой констатируется синдром избыточного бактериального роста у матери и прогнозируется нарушение формирования микробиоценоза кишечника новорожденного.
Способ осуществляют следующим образом.
Для выявления СИБР используется водородный дыхательный тест (ВДТ) с лактулозой (дисахарид, состоящий из галактозы и фруктозы, не расщепляется в желудке и тонкой кишке, метаболизирующийся в толстой кишке кишечными бактериями), имеющей неограниченный доступ к бактериям всех отделов пищеварительного тракта. Исследование проводят на приборе Gastrolyzer - 2, производства BedfontscientificLTD; Великобритания. Исследование проводится натощак для минимизации базовой экскреции водорода. Измеряется исходная концентрация водорода в выдыхаемом воздухе. Затем беременной дают выпить раствор лактулозы (15 мл) в 100 мл воды. Используется препарат «Дюфалак», содержащий лактулозу 667мг в 1 мл. Через каждые 15 минут в течение часа после выпитой жидкости измеряется концентрация водорода в пропромиллях (ppm).
Критериями СИБР являются: увеличение концентрации водорода в выдыхаемом воздухе (>10 ppm) в течение первых 30-60 минут исследования.
Ровная кривая на протяжении часа исследования с возможными отклонениями не более чем на 5 ppm считается нормой.
Пример применения.
Было проведено клинико-микробиологическое обследование 30 беременных женщин в возрасте 25-32 лет методом водородного дыхательного теста с лактулозой на сроке гестации 28-32 недель. Все женщины были с антенатальными факторами риска по развитию инфекционно-воспалительных заболеваний у их новорожденных детей: токсикоз первого триместра беременности (73%), угроза прерывания (43,7%), анемия (64%), гестоз (61%), хроническая внутриутробная гипоксия плода (62%).
Первоначальные исследования микробиоценозов влагалища и толстой кишки обнаружили у 73,2% беременных женщин нарушения микробиоты влагалища, у 67,5% - кишечника, у 57,5% - в двух биотопах одновременно.
7
5
Спектр условно-патогенных бактерий (УПБ) в обоих биотопах был представлен аэробными грамотрицательными бактериями семейства Enterobacteriaceae и их ассоциациями с грибами рода Candida в различных вариантах. При этом видовой состав выделенных УПБ в основном был идентичным в обоих биотопах. В то же время частота встречаемости и концентрация отдельных представителей УПБ в кишечном и влагалищном биоценозах была различной. Во влагалищном секрете значительно чаще и в большем количестве обнаруживались патогенные стафилококки (50%): (St.saprophyticus 25%, St.Epidermalis 25%); Enterococcus faecalis 25%, Gardnerella vaginalis 10% и грибы рода Candida (34%) с дефицитом лактобактерий у 75%. В кишечном биотопе соответственно все представители аэробных грамотрицательных бактерий: Klebsiella spp. (40%), Proteus spp. (26%), Citrobacter spp. (29%), Enterobacter faecalis (39%), синдром атипичных эшерихий (25%) на фоне снижения количественного уровня бифидобактерий до 10КОЕ/г, лактобактерий до 10КОЕ/г у 78%.
Методом ВДТ с лактулозой СИБР был выявлен у 17 из 30 беременных. Соответственно, женщины были разделены на 2 группы: основную (17 беременных с СИБР) и группу сравнения (13 беременных без СИБР). Был проведен сравнительный анализ микрофлоры беременных с СИБР и без такового (таб 1.)
Таблица 1. Результаты бактериологических исследований беременных женщин основной группы и группы сравнения.
Результаты посевов
Беременные с СИБР
Беременные без СИБР
Достоверность отличий
Влагалищный секрет
St.saprophyticus
25%
25%
-
St. Epidermalis
20%
5%
*
Enterococcus faecalis
20%
5%
*
Gardnerella vaginalis
10%
0%
*
Лактобактерии
Менее 10<sup>3 </sup>КОЕ/г
10<sup>6 </sup>КОЕ/г
*
Фекалии
Klebsiella spp.
20%
20%
-
Proteus spp.
16%
10%
-
Citrobacter spp.
22%
7%
*
Enterobacter faecalis
19%
20%
-
Гемолизирующие кишечные палочки
15%
10%
-
Дефицит бифидобактерий до 10<sup>7 </sup>КОЕ/г
15%
18%
-
Дефицит лактобактерий до 10<sup>5 </sup>КОЕ/г
60%
28%
*
• - достоверное отличие (p ≤0,005)
Роды у всех женщин были физиологическими, в срок 39-40 недель.
Все дети родились с нормальным физическим развитием (масса тела =3500±200г, рост=54±2см) с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов (69%), 8/8 баллов (31%). Все новорожденные были приложены к груди в первые сутки и находились на совместном пребывании с матерью. Все дети были выписаны из роддома на 3-5-е сутки.
Для дальнейшего наблюдения дети также были разделены на 2 группы: в основную группу вошли дети, рожденные от матерей с СИБР, а группу сравнения составили дети, рожденные от матерей без СИБР.
В первый месяц жизни у 33% детей основной группы отмечалось беспокойное поведение, вздутие и урчание в животе, при этом нарушений характера стула у них не было. Ко 2-3-му месяцу у этих детей отмечался разжиженный и не переваренный стул с примесями прозрачной слизи, боли в животе.
6
6
Исследования микробиоты кишечника в первый год жизни выявили у всех детей нарушения становления нормофлоры (снижение количественного уровня бифидо - и лактобактерий ниже 10КОЕ/г) с пролиферацией различных представителей условно - патогенной флоры (УПФ) (превышающей диагностический титр более 10КОЕ/г), наиболее частыми из которых были аэробные грамотрицательные бактерии: Klebsiella spp., Proteus spp., Citrobacter spp., нередко в ассоциации с грамположительными кокками - Staphylococcus spp.
У детей группы сравнения от матерей без СИБР на первом месяце жизни отмечались периодические боли в животе, метеоризм, срыгивания (6 из 13), после 2 месяцев жизни стул стал регулярным, 2-3 раза в сутки, кашицеобразным, без патологических примесей, метеоризм и срыгивания е беспокоили. Отмечалась нормальная прибавка в весе.
4
Исследования микробиоты кишечника у детей группы сравнения выявили, что показатели бифидо- и лактобактерий у них были близки к популяционному, количественное содержание выделенных условно-патогенных бактерий было в допустимых пределах (не более 10 КОЕ/г). (таб. 2.)
Таблица 2. Клинико-лабораторные показатели детей основной группы и группы сравнения.
Клинико-лабораторные показатели
Дети основной группы
Дети группы сравнения
Достоверность отличий
Кишечные дисфункции на 1 месяце жизни:
Боли в животе
33%
48%
-
Вздутие и урчание
33%
48%
-
Кишечные дисфункций на 2-3-м месяце жизни
Разжижение и  непереваренность стула
100%
0%
*
Примеси прозрачной слизи в кале
100%
0%
*
Боли в животе
100%
0%
*
Количественный уровень нормальной микрофлоры в фекалиях новорожденных
Дефицит бифидо флоры (≤10<sup>6 </sup>-10<sup>7 </sup>КОЕ/г)
88%
25%
*
Нормальный уровень бифидофлоры(10<sup>9</sup> -10<sup>11 </sup>КОЕ/г)
12%
75%
*
Дефицит лактофлоры≤10<sup>6 </sup>-10<sup>7 </sup>КОЕ/г
98%
45%
*
Нормальный уровень лактофлоры
2%
55%
*
Концентрация условно-патогенной флоры
Klebsiella spp.
10<sup>7 </sup>КОЕ/г
10<sup>3 </sup>КОЕ/г
*
Proteus spp.
10<sup>8 </sup>КОЕ/г
10<sup>4 </sup>КОЕ/г
*
Citrobacter spp.
10<sup>7 </sup>КОЕ/г
10<sup>3 </sup>КОЕ/г
*
Staphylococcus spp.
10<sup>6 </sup>КОЕ/г
0
*
*- достоверное отличие (p ≤0,005)
В результате проведенных исследований выявлена корреляционная зависимость наличия синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке у беременных с патологической колонизацией кишечника новорожденных условно-патогенными микроорганизмами и снижением защитного уровня нормальной микрофлоры, что отражается клинически развитием кишечных дисфункций у таких детей.
Таким образом, по сравнению с аналогом, данный способ позволяет быстро и точно прогнозировать нарушения формирования микроэкологической системы новорожденного и может использоваться с профилактической целью.
Список использованной литературы.
1. Гулямова М.А., Тухтаева У.Д., Ерназарова Б.Ж., Ходжиметов Х.А. Нарушение микрофлоры кишечника новорожденных детей, извлеченных путем кесарева сечения // Молодой ученый. - 2017. - №12. - С. 123-126. - URL https://moluch.ru/archive/146/41015/ (дата обращения: 02.03.2018).
2. Савченко Т.Н. Микроэкология новорожденных. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук - 2011 г. - 283 с.
3. Николаева И.В. Микроэкологические нарушения у матери и ребенка: диагностика, прогоностическое значение. // Автореферат диссертации на соискание степени доктора медицинских наук . - М. - 2011 г. - 292 с.
4. Н.И. Урсова «Особенности формирования микробиоценоза у грудных детей и дисбактериоз кишечника». - Журнал «Педиатрия. Приложение к журналу Consiliummedicum», 2005, Том 07, №2
5. Акоев Ю.С. Функциональные особенности недоношенных детей в раннем онтогенезе. // Автореф. дис. … д-ра мед. наук. М., 1999.
6. Фролова Н.А. Особенности формирования микробиоценоза у детей раннего возраста в зависимости от микробного пейзажа кишечника матери. // Автореф. дис. … канд. мед. наук. Смоленск, 2001.
7. Патент № 2249821, 2005. 10.04 «Способ оценки микробиоценоза влагалища, заключающийся в определении количественной и качественной микрофлоры и концентрации иммуноглобулинов. Е.А. Воропаева, С.С. Афанасьев, В.А. Алешкин.
8. Патент № 2179849 от 2002.02.27 по кл. А61К 31/19, 35/74 «Способ оценки биоценоза полового тракта у пациенток, заключающийся в определении лизоцимной активности влагалища и флоры с подсчетом общего микробного числа».
9. Патент № 2390022 Российская Федерация МПК G01N 33/48. Способ диагностики угрозы прерывания беременности. Т.Н. Савченко, О.В. Макаров, А.З. Хашукоева, В.А. Алёшкин, Е.А. Воропаева, С.С. Афанасьев, Л.О. Протопопова, Н.С. Матвеевская.
10. Плотникова Е.Ю., Захарова Ю.В. Диагностика и лечение синдрома избыточного бактериального роста. - Русский медициский журнал. - 2015. - №13. - С. 767-770.