КРИОКОНСЕРВАЦИЯ ЭМБРИОНОВ КОПЫТНЫХ

1. Способ, включающий этапы:
получение эмбрионов копытных, полученных in vitro (IVP)
криоконсервация эмбрионов; и
перенос эмбрионов для имплантации в организмы реципиентов-копытных; при этом криоконсервацию и перенос выполняют таким образом, который позволяет достичь частоты беременности, равной по меньшей мере приблизительно 10%.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что этап получения эмбрионов копытных, полученных in vitro, включает этапы:
получение яйцеклеток от самок;
созревание яйцеклеток in vitro;
оплодотворение зрелых яйцеклеток спермой с образованием зигот; и
удаление оболочек и культивирование зигот.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что сперма разделена по полу.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что сперма не разделена по полу.
5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что этап созревания яйцеклеток in vitro включает:
инкубирование яйцеклеток в пределах физиологически релевантного диапазона по меньшей мере одного из параметров, выбранных из группы, состоящей из: температуры, наличия или количества газа, влажности, рН, осмолярности и их комбинации.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что наличие или количество газа выбирают из группы, состоящей из O2 и CO2.
7. Способ по п. 2, отличающийся тем, что этап созревания яйцеклеток in vitro включает: инкубирование яйцеклеток при 35-40°С в присутствии 3-9% CO2 и влажности насыщения.
8. Способ по п. 2, отличающийся тем, что этап удаления оболочек и культивирования зигот включает инкубирование зигот при 35-40°С в присутствии 5% CO2 в воздухе и влажности насыщения.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что этап удаления оболочек и культивирования зигот дополнительно включает инкубирование зигот в присутствии 5% O2.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что этап криоконсервации эмбрионов включает этапы:
инкубирование эмбрионов в растворе, содержащем криопротектор; и погружение эмбрионов в жидкий азот.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что этап криоконсервации эмбриона включает этапы:
инкубирование эмбрионов в растворе для замораживания, состоящем из 1,0 - 4 М этиленгликоля, в течение 5-30 минут при первой температуре в диапазоне от приблизительно 10°С до приблизительно 38°С;
загрузка эмбрионов в контейнер, где пузырьки воздуха отделяют эмбрионы от размораживающего раствора, содержащего этиленгликоль в изотонической разбавляющей среде;
воздействие температуры в диапазоне от приблизительно минус 2 до приблизительно минус 10°С на эмбрионы в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 1 мин до приблизительно 60 минут;
снижение температуры со скоростью в диапазоне от приблизительно минус 0,2 до приблизительно минус 0,8°С в минуту до достижения второй температуры в диапазоне от приблизительно минус 30 до приблизительно минус 36°С; и
погружение эмбрионов в жидкий азот для хранения.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что этиленгликоль присутствует в диапазоне конечных концентраций от приблизительно 0,2 до приблизительно 1,3 моль.
13. Способ по п. 10, отличающийся тем, что эмбрионы криоконсервируют для прямого переноса в организмы реципиентов-самок.
14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что этап переноса эмбрионов включает этапы:
культивирование эмбрионов в среде с добавлением бычьего сывороточного альбумина (БСА) под минеральным маслом в течение времени в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 9 дней; и
перенос эмбрионов в организмы реципиентов-копытных.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что среду выбирают из группы, состоящей из среды С4, среды SOF, среды SOFaa и их комбинаций.
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что перенесенные эмбрионы находятся в стадии развития, выбранной из группы, состоящей из морулы, ранней бластоцисты, бластоцисты и поздней бластоцисты.
17. Способ по п. 1, отличающийся тем, что реципиентов-копытных синхронизируют.
18. Способ по п. 1, отличающийся тем, что реципиенты-копытные находятся в фазе естественного эструса.
19. Способ по п. 1, отличающийся тем, что эмбрионы являются свежими, витрифицированными или замороженными.
20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что копытные являются крупным рогатым скотом.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что эмбрионов выбирают из видов крупного рогатого скота, включая Bos taurus, Bos indicus и породы-гибриды Bos indicus-taurus.
22. Криоконсервированный эмбрион, полученный способом, включающим этапы: получение эмбрионов копытных, полученных in vitro (IVP);
криоконсервация эмбрионов в условиях, позволяющих достичь частоты беременности, равной по меньшей мере приблизительно 10%, при переносе криоконсервированных эмбрионов в организмы реципиентов-копытных.
23. Эмбрион по п. 22, отличающийся тем, что получение эмбрионов копытных, полученных in vitro, включает этапы:
получение яйцеклеток от самок;
созревание яйцеклеток in vitro;
оплодотворение зрелых яйцеклеток спермой; и
удаление оболочек и культивирование зигот.
24. Эмбрион по п. 23, отличающийся тем, что созревание яйцеклеток in vitro включает инкубирование яйцеклеток в пределах физиологически релевантного диапазона по меньшей мере одного из параметров, выбранных из группы, состоящей из: температуры, наличия или количества газа, влажности, рН, осмолярности и их комбинации.
25. Эмбрион по п. 22, отличающийся тем, что перенос эмбрионов включает этапы:
культивирование эмбрионов в среде с добавлением бычьего сывороточного альбумина (БСА) под минеральным маслом в течение времени в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 9 дней; и
перенос эмбрионов в организмы реципиентов-копытных.
26. Эмбрион по п. 25, отличающийся тем, что среду выбирают из группы, состоящей из среды С4, среды SOF, среды SOFaa и их комбинаций.
27. Эмбрион по п. 25, отличающийся тем, что указанный эмбрион находится в стадии развития, выбранной из группы, состоящей из морулы, ранней бластоцисты, бластоцисты и поздней бластоцисты.
28. Устройство, содержащее:
контейнер;
криоконсервированный эмбрион копытного в растворе для криоконсервации, размещенный в первой области контейнера, по сторонам от указанной первой области находятся:
вторая и третья области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных второй и третьей областей находятся:
четвертая и пятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор, и по сторонам от указанных четвертой и пятой областей находятся:
шестая и седьмая области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных шестой и седьмой областей находятся:
восьмая и девятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор.
29. Устройство по п. 28, отличающееся тем, что одна или более из областей является камерой которая определена физическим отсеком, между которым и по меньшей мере одной из других смежных областей находится барьер.
30. Множество устройств по п. 28.
31. Способ, включающий этапы:
криоконсервация множества эмбрионов копытных; и
перенос множества эмбрионов в организмы реципиентов-копытных, причем криоконсервацию и перенос выполняют таким образом, который позволяет достичь частоты зачатия, равной по меньшей мере 30%.
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что этап криоконсервации включает размещение каждого эмбриона в растворе для криоконсервации в первой области контейнера, причем по сторонам от указанной первой области находятся:
вторая и третья области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных второй и третьей областей находятся:
четвертая и пятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор, и по сторонам от указанных четвертой и пятой областей находятся:
шестая и седьмая области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных шестой и седьмой областей находятся:
восьмая и девятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор.
33. Способ замораживания эмбрионов, включающий:
помещение эмбрионов копытных в раствор для замораживания (SC), состоящий из 1,0 - 4 М этиленгликоля, на 10 минут при температуре 35°С;
размещение каждого эмбриона в растворе для замораживания (SC) внутри контейнера, выполненного в размерах трубки, так что эмбрион в растворе для замораживания окружен четырьмя колонками размораживающего раствора (SD), разделенными колонками с воздухом, причем размораживающий раствор содержит 0,75 М этиленгликоля;
помещение контейнера в температурные условия, стабилизированные при температуре в диапазоне от приблизительно 0°С до приблизительно минус 10°С;
кристаллизацию колонок над и под эмбрионом через две минуты после помещения в морозильник;
поддержание эмбриона в течение от 1 до 60 минут при температуре в диапазоне от приблизительно 0°С до приблизительно минус 10°С;
снижение температуры со скоростью в диапазоне от приблизительно минус 0,2 до приблизительно минус 0,8°С в минуту до достижения второй температуры в диапазоне от приблизительно минус 30 до приблизительно минус 36°С; и
погружение замороженных эмбрионов в жидкий азот.
34. Способ размораживания эмбрионов, включающий:
воздействие на контейнер, содержащий криоконсервированный эмбрион копытного в растворе для криоконсервации, размещенный в первой области контейнера, причем по сторонам от указанной первой области находятся:
вторая и третья области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных второй и третьей областей находятся:
четвертая и пятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор, и по сторонам от указанных четвертой и пятой областей находятся:
шестая и седьмая области, каждая из которых содержит воздух, и по сторонам от указанных шестой и седьмой областей находятся:
восьмая и девятая области, каждая из которых содержит размораживающий раствор при комнатной температуре воздуха в течение первого периода времени, причем первый период времени является достаточным для начала размораживания замороженных эмбрионов;
помещение контейнера в размораживающую среду, характеризующуюся температурой размораживания в диапазоне от приблизительно 10°С до приблизительно 38°С, на второй период времени, причем второй период времени является достаточным для размораживания замораживающего раствора; и
смешивание размораживающего раствора, раствора для замораживания и эмбриона в контейнере.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что первый период времени соответствует температуре в диапазоне от приблизительно 10°С до приблизительно 38°С.
36. Способ по п. 34 или 35, отличающийся тем, что второй период времени соответствует температуре в диапазоне от приблизительно 20°С до приблизительно 38°С
37. Способ по п. 34, отличающийся тем, что размораживающая среда является или включает ванну с жидкостью.
38. Способ по п. 34, отличающийся тем, что температура размораживания находится в диапазоне от приблизительно 10°С до приблизительно 38°С
39. Способ по п. 34, отличающийся тем, что этап смешивания достигается за счет аккуратного встряхивания контейнера.
40. Способ по п. 34, дополнительно включающий этап переноса эмбриона копытного в организм реципиента-копытного.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что перенос выполняют одновременно с или после этапа воздействия или этапа смешивания.
42. Способ по п. 40, отличающийся тем, что этап переноса включает перенос в рог матки реципиента-копытного.