Перспективы клинико-лабораторного использования растворимой формы антигена CD95

Перспективы

клинико-лабораторного

использования

растворимой формы

антигена

Резюме. В статье приводятся выявленные особенности циркуляции растворимой формы Fas/Apo-1(CD95)-антигена в сыворотке крови и возможности его клинико-лабораторного использования на примере ВИЧ-инфекции. Проведена оценка содержания sFas/Apo-1(CD95) в сравнении с содержанием растворимой формы Fas-лиганда (sFasL) на различных стадиях прогрессирования заболевания.

Ключевые слова: растворимая форма, sFas/Apo-1(CD95), sFasL, ВИЧ-инфекция, иммуноферментный анализ, иммунный ответ.

В настоящее время накапливаются данные о том, что многие поверхностные антигены иммунокомпетентных клеток могут находиться не только в мембранной, но и в растворимой форме ^-форме), принимая участие в реализации иммунного ответа. Исследования, проведенные в различных лабораториях, выявили, что мембранные белки, относящиеся к так называемым дифференцировочным антигенам, наряду с белками главного комплекса гистосовместимости обнаруживаются в сыворотке крови и в других биологических жидкостях.

Известно, что сывороточное содержание отдельных белков является мониторинговым показателем течения патологического процесса при ряде заболеваний. Охарактеризовано более 150 мембранных диф-ференцировочных антигенов клеток иммунной системы, однако сведения о количественном содержании и функциональной роли их растворимых форм немногочисленны. Растворимые формы, появляющиеся в биологических жидкостях, могут вызывать множественные эффекты, отражающие их роль в регуляции иммунологических механизмов на разных этапах реализации иммунного ответа. Наряду с мембранными антигенами они принимают участие в формировании иммунных механизмов, направленных на защиту от чужеродных агентов, в том числе и от вирусов. Вклад в иммунные реакции многих из них пока далек от полного понимания. Отражением функциональной роли каждого из растворимых анти-

Сергей Жаворонок,

первый проректор Белорусского государственного медицинского университета, доктор медицинских наук, профессор

Наталья Москалева,

младший научный сотрудник Научно-исследовательской лаборатории БелМАПО, кандидат медицинских наук

Оксана Тумаш,

ассистент кафедры инфекционных болезней Гомельского государственного медицинского университета

Анатолий Барышников,

директор НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН, доктор медицинских наук, профессор

генов являются изменения в их содержании при заболеваниях различной этиологии [1, 2]. Поэтому исследование растворимых форм поверхностных антигенов - новое и перспективное направление, которое позволит накапливать информацию о существенной значимости растворимых форм в механизмах иммунного ответа на опухолевые клетки, в развитии аутоиммунных процессов, в регуляции ответа на патогены бактериальной и вирусной природы.

Несомненный интерес для ученых представляют молекулярные механизмы иммунного ответа при наиболее распространенных вирусных инфекциях, таких как вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекция, грипп [3].

Среди активно исследуемых s-форм мембранных белков при различного рода патологиях находится Fas/Apo-1(CD95)-антиген - один из ключевых рецепторов, запускающих программу самоуничтожения клетки (апоптоз). Растворимая форма sFas/Apo-1(CD95) - продукт альтернативного сплайсинга полноразмерной мРНК. Этот растворимый белок конкурирует с мембранно-связанным рецептором

Fas/Apo-1(CD95) в связывании лиганда (FasL) и может подавлять Fas/FasL-опосредован-ный апоптоз [3, 4, 5]. FasL является членом суперсемейства лигандов ФНО и мембранным белком второго типа, опосредует гибель клеток путем перекрестного связывания с Fas/Apo-1(CD95) в апоптоз-чувствительных Fas-положительных клетках. FasL экспрес-сируется на активированных Т-лимфоцитах и NK-клетках, а также на клетках Сертоли и паренхиматозных клетках передней камеры глаза, что позволяет этим клеткам убивать любую Fas-экспрессирующую клетку, в том числе и активированный Т-лимфоцит. FasL может освобождаться с клеточной поверхности и быть физиологически активным в растворенной форме [5, 6]. Одна из первых работ японских авторов, посвященных изучению растворимой формы sFas/Apo-1(CD95), была опубликована в 1997 г. Ученые выявили повышение концентрации sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови 25 больных хроническим гепатитом С и циррозом печени [7]. В последующих работах отмечено, что уровень sFas/Apo-1(CD95) повышался при системной красной волчанке [8], инфекционных заболеваниях, в том числе вирусных гепатитах В и С [3, 9], при онкологических недугах [10], а также при патологии щитовидной железы [11].

Практическим приложением исследований растворимых форм антигенов является сопутствующая разработка методов прогнозирования течения как инфекционных, так и соматических заболеваний. С этой целью мы проанализировали sFas/Apo-1(CD95) при ВИЧ-инфекции в рамках проекта Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований по изучению особенностей циркуляции в сыворотке крови растворимого антигена Fas/Apo(CD95), клинико-диагностической и прогностической значимости его исследования у ВИЧ-инфицированных больных. Наш выбор был подкреплен сведениями о том, что именно Fas/FasL-опосредованный апоптоз является главным механизмом гибели Т-лимфоцитов [5, 12, 13]. Это сложный процесс, в который вовлекаются и зараженные, и незараженные ВИЧ клетки [12]. Установлено, что большая часть Т-лимфоцитов (в частности CD4+) крови при ВИЧ подвергается Fas/FasL-опо-средованному апоптозу. При этом инфицированные клетки защищаются от него, а гибель неинфицированных клеток иммунной системы может привести к тяжелой иммуно-супрессии [14].

В доступной литературе отсутствовала информация о клинико-диагностическом значении sFas/Apo-l(CD95) при ВИЧ-инфекции [15, 16, 17]. Представляли интерес исследование его содержания в сыворотке крови ВИЧ-инфицированных пациентов, анализ связей уровня sFas/Apo-1(CD95) с основными клинико-иммунологическими показателями, установление возможностей практического применения sFas/Apo-1(CD95) в качестве лабораторного критерия оценки прогрессирования ВИЧ-инфекции, а также изучение его содержания во взаимосвязи с содержанием sFasL.

Исследования растворимых форм антигенов стали возможными благодаря получению моноклональных антител (МКА). В частности, получение МКА анти-Fas/Apo-1(CD95) проводится на базе Научно-исследовательского института экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина Российской академии медицинских наук [18]. На основе МКА с высокой специфичностью к Fas/Apo-1(CD95) конструируются высокочувствительные иммуноферментные тест-системы [11]. Однако недостаточная изученность клинико-диагностического значения sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови и высокая стоимость (от 1000 долл.) наборов ИФА коммерческих производителей, которые сегодня рекомендованы только для научно-исследовательских целей, ограничивают возможность их использования в клинической и лабораторной практике. Данные проблемы предполагают необходимость конструирования альтернативных, экономически доступных вариантов отечественных тест-систем ИФА для более глубокого изучения закономерностей циркуляции sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови при ВИЧ-инфекции.

Нами были обследованы 177 ВИЧ-инфицированных пациентов, не получавших анти-ретровирусную терапию (АРТ). Основную группу составили находившиеся на амбулаторном и диспансерном лечении в учреждениях здравоохранения Гомельской области в период с 2010 по 2012 г. пациенты, в том числе 22 ребенка (или 12%) 7,0 [3,7; 9,0] лет, 52 мужчины (30%) 36,5 [32,0; 41,5] лет и 103 женщины (58%) 29,0 [25,0; 32,0] лет, из них на момент обследования 40 женщин (39%) были беременны (возраст пациентов представлен медианой и интерквартильным размахом). Диагноз «ВИЧ-инфекция» выставлялся профильными специалистами. Критерием включения в груп-

пу явилось наличие подтвержденной ВИЧ-инфекции, критерием исключения - отсутствие антител к ВИЧ-1,2. Все пациенты основной группы были подразделены:

в соответствии с международной классификацией CDC 1993 г. для взрослых и 1994 г. для детей - на две подгруппы: пациенты в стадии СПИД (клинико-иммунологические категории А3, В3, С1, С2, С3) и пациенты с клинико-иммунологическими категориями А1, А2, В1, В2;

в соответствии с уровнем СD4-лимфо-цитов крови - на две подгруппы: пациенты с количеством CD4-лимфоцитов менее 350X10 клеток/л (уровень СD4-лимфоцитов, рекомендованный ВОЗ для старта АРТ [19]) и пациенты с количеством CD4-лимфоцитов более 350X10 клеток/л. Разделение на подгруппы ВИЧ-инфицированных беременных не производили, так как стадия ВИЧ-инфекции им была установлена согласно клинической классификации ВОЗ 2002 г.;

в соответствии с возрастом - на две подгруппы: взрослые и дети;

в соответствии с полом - на две подгруппы: мужчины и женщины (в том числе беременные).

Контрольную группу составили 86 неин-фицированных ВИЧ лиц: 57 мужчин (или 68%) 38,0 [28,0; 45,0] лет и 29 женщин (32%) 35,0 [28,0; 43,0] лет - практически здоровые доноры крови.

С целью определения sFas/Apo-1(CD95) и в сыворотке крови пациентов нами была сконструирована экспериментальная имму-ноферментная тест-система для качественного твердофазного анализа на основе МКА к sFas/Apo-1(CD95) (клон ИК0-160) (диагностическая чувствительность (ДЧ) - 90%, диагностическая специфичность (ДС) - 96%) [20]. Исследовали sFasL в сыворотке крови с помощью иммуноферментной тест-системы «R&D Systems» (США) на анализаторе АИФ-М/340

Таблица 1. УровниОП и частота выявления повышенного уровняОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови пациентов контрольной и основной групп

Группы пациентов Критерий Манна-Уитни

Контрольная (n=66) Основная (n=123) U р

Уровни ОП sFas/Apo-1 (CD95), е.о.п., Ме (Р25; Р75) 0,084 (0,069;0,144) 0,233 (0,119; 0,804) 1626 <0,001

Критерий х2

Доля пациентов X2 р

с повышенным уровнем ОП sFas/Apo-1(CD95) (положительный результат качественного теста), % 9,1 53,7 36,2 <0,001

Таблица 2. Уровни ОП и частота выявления повышенных уровней ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови ВИЧ-инфицированных подгрупп детей, беременных и взрослых

Подгруппы пациентов

ANOVA по Краскелу-Уоллису

Дети (n=22) Беременные (n=40) Взрослые (n=61) H p

Уровни ОП 5ра5/Аро-1(Сй95), е.о.п., Ме (Р25; Р75) 0,204 (0,126; 0,834) 0,507 (0,101; 1,063) 0,228 (0,137; 0,564) 0,680 0,712

1 2 3 Критерий х2

Доля пациентов с повышенным уровнем ОП 5ра5/Аро-1(С095) (положительный результат качественного теста), % X2 р

54,5 57,5 50,8 (Ь2) 0,050 «> 0,430 (,-3) 0,090 (1-2) 0,822 °-3> 0,510 ("> 0,764

(«Витязь», Беларусь). Определение количества CD4-лимфоцитов в крови (Х108 клеток/л) проводилось методом проточной цитофлюори-метрии на анализаторе «FACScan» («Becton Dickinson», США). Статистическая обработка осуществлялась посредством статистических пакетов Statistica 6.0 и MedCalc 9.6.2.0.

Было установлено, что у ВИЧ-инфицированных пациентов уровень оптической плотности (ОП, е.о.п.) sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови достоверно выше (Ме 0,233 [0,119; 0,804] е.о.п. в сравнении с 0,084 [0,069; 0,144] е.о.п., р<0,001 у здоровых лиц контрольной группы) и выявляется чаще (53,7%, n=123 против 9,1%, n=66, х2=36,2, р<0,001 соответственно) (табл. 1).

Частота выявления повышенного уровня sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови и его средние уровни не различаются в подгруппах ВИЧ-инфицированных детей, беременных и взрослых (54,5% (n=22), 57,5% (n=40) и 50,8% (n=61), p>0,05; 0,204 [0,126; 0,834] о.е.п. против 0,507 [0,101; 1,063] о.е.п., против 0,228 [0,137;

0.564] о.е.п., p=0,712 соответственно) и не зависят от пола (у мужчин и женщин: 55,0% против 53,1%, p=0,878; 0,398 [0,176; 0,927] против 0,557 [0,112; 0,742] о.е.п., р=0,226 соответственно) (табл. 2).

На стадии СПИД (категории А3, В3, С1, С2, С3 по CDC) выявлялись в 2,2 раза более высокие уровни ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови (0,295 [0,177; 0,723] е.о.п. против 0,136 [0,073; 0,243] е.о.п. у пациентов с категориями А1, А2, В1, В2, р<0,001) и в 2,5 раза чаще (65,8% (n=38) в сравнении с 26,1% (n=23), х2=9,04, p=0,003 у пациентов с категориями А1, А2, В1, В2).

Выявлена умеренная прямая корреляция уровня ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови пациентов основной группы с иммунологической стадией ВИЧ-инфекции (категории

1, 2, 3 по CDC) (R=0,465, р<0,001), что может

указывать на компенсаторную роль подавления апоптоза CD4-лимфоцитов при снижении их количества при прогрессировании заболевания. Выявлена прямая умеренная корреляция уровня ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови с клинической стадией прогрессирова-ния заболевания (категории А, В, С по CDC) у пациентов с количеством CD4-лимфоци-тов менее 350Х106 клеток/л крови (R=0,296, р=0,020), что может свидетельствовать о роли sFas/Apo-1(CD95) в развитии клинических проявлений ВИЧ-инфекции на стадии умеренной и выраженной иммуносупрессии.

У ВИЧ-инфицированных пациентов с количеством CD4-лимфоцитов менее 350Х106 клеток/л крови выявлялись достоверно высокие уровни ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови (0,313 [0,178; 0,729] е.о.п. против 0,116 [0,073; 0,158] е.о.п. у пациентов c количеством CD4-лимфоцитов более 350Х106 клеток/л, р<0,001).

Нами проведен анализ выявления повышенных уровней ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови у ВИЧ-инфицированных пациентов в зависимости от количества CD4-лимфоцитов (рис. 1).

Как видно, повышенные уровни ОП sFas/ Apo-1(CD95) (положительный результат качественного теста определения sFas/Apo-1(CD95) методом твердофазного ИФА на основе использования сконструированной отечественной тест-системы) выявлялись только у ВИЧ-инфицированных пациентов с количеством CD4-лимфоцитов менее 350Х106 клеток/л крови.

Провели оценку диагностической значимости определения уровня ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови при ВИЧ-инфекции с помощью ROC-анализа. Установлены высокие значения критериев диагностической надежности теста определения повышенного уровня ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови с целью

выделения пациентов с количеством CD4-лим-фоцитов менее 350X10 клеток/л крови: АиС ROC=81%, ДЧ=68%, ДС=94%, диагностическая эффективность (ДЭ)=44%, прогностическая ценность положительного ПЦ(+)=97% и отрицательного ПЦ(-)=53% результатов теста. Рассчитанное значение ДЧ означает, что из 100 ВИЧ-инфицированных только у 68 имеет место положительный результат исследования теста (уровень ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови повышен и соответствует количеству CD4-лимфоцитов менее 350X10 клеток/л крови). А поскольку ПЦ(+) составляет 97%, то у обследуемого пациента с положительным результатом анализа вероятность наличия количества CD4-лимфоцитов менее 350X10 клеток/л крови очень высока (практически полностью исключается возможность ложноположительного результата). Найденное значение ДС показывает, что отрицательный результат (уровень ОП sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови низкий и соответствует количеству CD4-лимфоцитов более 350X10 клеток/л) выявляется у 94 из 100 обследуемых. И вместе с тем получение у ВИЧ-инфицированного отрицательного результата анализа не может исключать наличия у него числа CD4-лимфо-цитов менее 350X10 клеток/л крови, так как ПЦ(-) невысока - 53%.

Полученные сведения дают основания для использования определения повышенного уровня ОП sFas/Apo-1(CD95) при ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного лабораторного критерия, позволяющего с высокой диагностической надежностью выделять пациентов с количеством CD4-лимфоцитов менее 350X10 клеток/л крови (уровень CD4-лимфоцитов, рекомендованный ВОЗ для старта АРТ).

Таким образом, установленный лабораторный критерий следует использовать в комплексе с общепринятым критерием оценки прогрессирования ВИЧ-инфекции (количество CD4-лимфоцитов в крови) для выделения пациентов, нуждающихся в АРТ. В случае невозможности определения количества CD4-лимфоцитов в крови повышенный уровень ОП sFas/Apo-1(CD95) может выступать в качестве основного лабораторного критерия старта АРТ, что в совокупности позволяет повысить эффективность диагностики прогрес-сирования ВИЧ-инфекции. Предлагаемый тест прост в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и доступен клинико-диагностическим лабораториям лечебно-профилактических учреждений, оснащенных установками для иммуноферментного анализа.

2,8 2,6 2,4 2,2 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0

. О

- О

О

О

а.

, , , "

200 300 400 500 600 700

Количество CD4-лимфоцитов, * 10-6 клеток/л

Исследование sFasL в сыворотке крови инфицированных и неинфицированных ВИЧ лиц проводилось по стандартной методике твердофазного ИФА с помощью иммунофер-ментной тест-системы «R&D Systems» (США). Основная группа была представлена 54 ВИЧ-инфицированными пациентами, в том числе 32 мужчинами (или 59,6%) 38 [34; 43] лет и 22 женщинами (40,4%) 32 [23; 39] лет. В контрольную группу вошли 20 здоровых человек: 12 мужчин (или 60%) 37 [32; 44] лет и 8 женщин (40%) 30 [24; 35] лет.

В результате установлено, что у ВИЧ-инфицированных концентрация sFasL в сыворотке крови значимо выше (183 [127; 248] пг/мл в сравнении с 93 [88; 101] пг/мл, p<0,05 в контрольной группе здоровых лиц), что свидетельствует о возможном участии sFasL в патогенезе ВИЧ-инфекции (табл. 3).

Концентрация sFasL при прогрессирова-нии заболевания имела тенденцию к снижению. У пациентов в стадии СПИД концентрация sFasL в 1,7 раз ниже (130 [101; 173] пг/мл в сравнении с 219 [172; 285] пг/мл, р=0,001 у пациентов с категориями А1, А2, В1, В2 по CDC). Что подтвердилось наличием умеренной обратной корреляционной взаимосвязи между концентрацией sFasL и стадией

Группы пациентов Критерий Манна-Уитни

Контрольная (n=20) Основная (n=54) U р

Концентрации sFasL в сыворотке крови, пг/мл, Ме (Р25; Р75) 93 (88; 101) 183 (127; 248) 115 <0,001

Рис. 1. УровниОП sFas/Apo-1 (CD95) в зависимости от количества CD4-лимфицитов х106 клеток/л крови

Таблица 3. s

Концентрация S «с

sFasL в сыворотке сс 0 1

крови пациентов I s

контрольной S <

и основной групп I

71

ВИЧ-инфекции, установленной иммуноло-гически (категории 1, 2, 3 по CDC) (R=-0,468, р<0,001).

Выявлена заметная обратная корреляция концентрации sFas/Apo-1(CD95) с концентрацией sFasL в сыворотке крови ВИЧ-инфицированных пациентов при прогрессировании заболевания (R=-0,549, р<0,001). Полученные данные свидетельствуют о возможном участии данных показателей в регуляции апоптоза CD4-лимфо-цитов и о целесообразности совместного определения sFas/Apo-1(CD95) и sFasL для оценки прогрессирования ВИЧ-инфекции.

С помощью экспериментальной тест-системы ИФА были проведены пилотные исследования sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С на разных стадиях заболевания, при этом наблюдались колебания уровня sFas/Apo-1(CD95) антигена в зависимости от стадии. Было отмечено повышенное содержание sFas/ Apo-1(CD95) в сыворотке крови в сравнении со здоровыми лицами (р<0,05), регистрировался широкий разброс данных.

Таким образом, на примере ВИЧ-инфекции выявлены особенности циркуляции sFas/

Apo-1(CD95) в сыворотке крови и установлена возможность его клинико-лабораторного использования. Полученные результаты позволяют расширить и углубить существующие представления о диагностической и прогностической значимости лабораторного теста определения sFas/Apo-1(CD95) при ВИЧ-инфекции, что в свою очередь способствует повышению эффективности лабораторной диагностики прогрессирования заболевания.

Проведенные исследования содержания sFas/Apo-1(CD95) при ВИЧ-инфекции и вирусном гепатите С, а также наличие сведений об его участии в регуляции иммунного ответа на опухолевые клетки и в развитии аутоиммунных процессов позволяют рекомендовать лабораторный тест определения sFas/Apo-1(CD95) в сыворотке крови для более широкого применения в клинико-лабораторной практике.

Дальнейшее изучение роли растворимых форм антигенов в иммунных реакциях на инфекционные агенты позволит сделать новые шаги в совершенствовании инфекционной диагностики, а также в разработке методов прогнозирования инфекционной заболеваемости.

See: http://innosfera.org/2014/03/cd95

Литература

1. Новиков В.В. Растворимые дифференцировочные антигены / В.В. Новиков // Иммунотерапия рака: Матер. Европ. школы онкологов. - М., 1999. С. 1-8.

2. Новиков В.В. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы / В.В. Новиков, А.Ю. Барышников, А.В. Караулов // Иммунология. 2007, №4. С. 249-253.

3. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы при социально значимых инфекциях. Сообщение 2. Исследование их роли при вирусных инфекциях / В.В. Новиков [и др.] // Рос. биотерапевт. журн. 2005, №3. С. 131-142.

4. Барышников А.Ю. Fas/Apo-1 антиген - молекула, опосредующая апоптоз / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин // Гематология и трансфузиология. 1995, №6. С. 35-38.

5. Барышников А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. - М., 2002.

6. Рыжов С.В. Молекулярные механизмы апоптотических процессов / С.В. Рыжов, В.В. Новиков // Рос. биотерапевт. журн. 2002. Т. 1, №3. С. 27-33.

7. Fas-зависимый апоптоз и поражение печени / Л.Ц. Митрикова [и др.] // Мед. помощь. 2005, №1. С. 11-15.

8. Serum elevations of soluble Fas (CD95/Apo-I) concur In deregulating Tcell apoptosis during active lupus disease / F. Silvestris [et al.] // Clin. Exp. Med. 2002. Vol. 2, №1. Р. 13-27.

9. Растворимый и мембранный Fas/APO-1 (CD95) антиген в крови больных гепатитами В и С / Ю.С. Птицына [и др.] // Клин. лаб. диагностика. 2000, №10. С. 10-11.

0. Растворимый Fas в сыворотке крови онкологических больных / С.Г. Аббасова [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999, №3. С. 328-331.

1. Пивень Н.В. Иммуноферментный анализ Fas-рецептора (CD95) у лиц с патологией щитовидной железы / Н.В. Пивень // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2001, №3. С. 15-22.

2. Alimonti J.B. Mechanisms of CD4+ T lymphocyte cell death in human immunodeficiency virus infection and AIDS / J.B. Alimonti, T. Blake Ball, K.R. Fowke // J. Gen. Virol. 2003. Vol. 84, Pt. 7. Р. 1649-1661.

3. Cummins N.W. Mechanisms of HIV-associated lymphocyte apoptosis: 2010 / N.W. Cummins, A.D. Badley // Cell Death Dis. 2010. Vol. 1. Р. e99. - doi:10.1038/cddis.2010.77.

4. Ковальчук Л.В. Апоптогенные механизмы возникновения иммунодефицитных заболеваний / Л.В. Ковальчук, А.Н. Чередеев // Микробиология. 1999, №5. С. 47-52.

5. Elevated serum level of soluble Fas/Apo-1 in human immunodeficiency virus-infected individuals [letter] / B. Fadeel [et al.] // Blood. 1996. Vol. 88, №12. Р. 4727-4730.

6. Investigation of apoptotic markers among human immunodefciencyvirus (HIV-1) infected individuals / S. Ramalingam [et al.] // Indian J. Med. Res. 2008. Vol. 128, №6. Р. 728-733.

7. Anti-Fas (CD95/Apo-I) autoantibodies and soluble Fas levels concur in T cell depletion in HIV type 1 infection / F. Silvestris [et al.] // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2001. Vol. 17, №7. P. 603-614.

8. Полосухина Е.Р. Получение и характеристика моноклональных антител IC0-160, направленных к антигену CD95 (Fas/Apo-1), опосредующему апоптоз: автореф. дис. .. .канд. биол. наук : 4.00.14 / Е.Р. Полосухина; Рос. онкол. науч. центр им. Н.Н. Блохина РАМН. - М., 2000.

19. Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents inH IV-1—I nfected Adults and Adolescents // AIDS info. - Clinical guidelines portal. 2012. Electronic resource: http://aidsinfo.nih.gov/guidelines.

20. Иммуноферментный диагностический набор для определения растворимого Fas/Apo ^-95)-антигена в сыворотке крови / Н.В. Москалёва, О.Л. Тумаш, С.В. Жаворонок, А.Ю. Барышников // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2011, №1. С. 14-25.