®
®
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРИИ, СОДЕРЖАЩАЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИНТЕРФЕРОН АЛЬФА-2b, ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТ И АСКОРБИНОВУЮ КИСЛОТУ, ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО МУЛЬТИФЕРОН ДЛЯ ВЕТЕРИНАРИИ НА ЕЕ ОСНОВЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА МУЛЬТИФЕРОН В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОВИРУСНОГО И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА В СХЕМАХ ВАКЦИНАЦИИ МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
®
®
VETERINARY COMPOSITION CONTAINING HUMAN RECOMBINANT INTERFERON ALPHA-2B, TOCOPHEROL ACETATE AND ASCORBIC ACID, BASED VETERINARY DRUG PREPARATION MULTIFERON AND USE OF DRUG PREPARATION MULTIFERON AS ANTIVIRAL AND IMMUNOMODULATORY AGENT IN VACCINATION SCHEDULES FOR YOUNG AGRICULTURAL ANIMALS

Область техники

Изобретение относится к ветеринарии и представляет собой композицию человеческого рекомбинантного интерферона, токоферола ацетата (витамин Е) и аскорбиновой кислоты (витамин С), обладающую более высоким противовирусным и иммуномодулирующим действием по сравнению с композицией интерферона без витаминов. Созданный на основе указанной композиции препарат Мультиферон предназначен для лечения желудочно-кишечных и острых респираторных заболеваний вирусной и смешанной этиологии у крупного рогатого скота, свиней, лошадей, овец и их молодняка. Также к настоящему изобретению относится применение препарата Мультиферон при вакцинации молодняка сельскохозяйственных животных.
Предшествующий уровень техники
Использование в медицине человеческого рекомбинантного интерферона в качестве противовирусного и иммуномодулирующего средства в последние годы получило широкое распространение. Часто для проведения подобной терапии используют свечи или растворы местного применения (например, препарат Гриппферон).
3
Известен препарат в форме раствора для применения в качестве глазных капель, интраназально, интравагинально, интрауретально, для введения в гайморовы пазухи и для орошения слизистой оболочки респираторного тракта. Препарат обладает пролонгированным действием и содержит в мг на 1 мл: интерферон человеческий рекомбинантный (1-50)·10 ME, лимонную кислоту 1-3, борную кислоту 8-11, натрия тетраборат 5-10, унитол 1-5, альбумин сывороточный человеческий 1-5, натрия хлорид 1-3, натрия карбоксиметилцеллюлозу или гидроксиэтилцеллюлозу 5-50, и воду, очищенную до 1 мл (патент РФ №2270692). В качестве антимикробных веществ используются борная кислота и тетраборат натрия. Данный препарат предназначен для местного применения и не рассматривается в качестве инъекционного препарата вследствие значительно меньших количеств интерферона, чем необходимо для проведения инъекционной терапии.
4
6
Известен препарат, содержащий в 1 г следующие компоненты: интерферон человеческий рекомбинантный (10-3·10) ME, полиэтиленгликоль 4000-6000 - 0,0001-0,5, полиглюкин 0,001-0,1, структурообразователь (мальтоза, манит, глюкоза, фруктоза) 0,01-0,8, набухающее и диспергирующее вещество (целлюлоза, метилцеллюлоза, ацетилфталилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и т.д.) 0,001-0,1 и целевая добавка - остальное. При этом препарат представляет собой смесь для формирования таблетки или содержимого капсулы. В качестве интерферона используют сухую субстанцию, сублимированную из раствора, содержащего полиглюкин, структурообразователь и рекомбинантный человеческий интерферон, адсорбированный полиэтиленгликолем (патент РФ №2292907). Однако данный препарат не является инъекционным, а указанная композиция должна была увеличить биодоступность рекомбинантного человеческого интерферона в таблетированном виде.
Известно противовирусное и антибактериальное средство «Интерлизин» (патент РФ №2188665), представляющее собой водный раствор интерферона и лизоцима при следующем соотношении компонентов: интерферон 2500-5000 МЕ/мл и лизоцим 2,5-5,0 мг/мл. Препарат является местным средством, содержит интерферон в концентрациях на три-четыре порядка ниже, чем необходимо для проведения инъекционной терапии животных.
Близкими к предложенному лекарственному средству являются композиции, обладающие противовирусным, противобактериальным и противовоспалительным действиями (патент РФ №2187332). Лечебное средство представлено в виде мази, геля, суппозитория, пасты, крема, линимента, таблеток на основе интерферона и, дополнительно, иммуномодуляторов, витаминов, антибиотиков широкого спектра, антисептиков, противопаразитарных и противовоспалительных средств. В примерах патента РФ №2187332 группа витаминов представлена витаминами Е, С, Д3, РР в диапазоне концентраций 0,005-0,12 г на 1 г препарата, при этом в качестве интерферона представлены интерфероны альфа, бета и гамма. Также указанные в примерах композиции содержат в качестве активных веществ интерлейкин-2, фактор некроза опухоли альфа или бета, метронидазол, ацикловир, лидокаин и диклофенак. В примерах патента не указаны терапевтические достоинства указанных композиций (только декларированы их безопасность и отсутствие аллергических реакций у добровольцев 18-20 лет), не указано, что средство является инъекционным и предназначено для внутримышечного или подкожного введения (основные примеры приведены для мазей, гелей, суппозиториев, линиментов). К тому же данные композиции будут очень дорогостоящими при использовании их в ветеринарии при вакцинации сельскохозяйственных животных.

Наиболее близким к предложенному лекарственному средству является препарат Миксоферон, производства ЗАО «Мосагроген», Москва. Препарат Миксоферон представляет собой лиофилизат для приготовления раствора для инъекций или готовый раствор для инъекций, который содержит 0,5 или 1,0 млн ME интерферона в 1 мл раствора. Миксоферон применяют с профилактической и лечебной целями при желудочно-кишечных и острых респираторных заболеваниях вирусной и смешанной этиологии (вирусной на фоне бактериальной) у крупного рогатого скота, свиней, лошадей, овец и их молодняка (парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея КРС, трансмиссивный гастроэнтерит свиней, ринопневмония, грипп лошадей и другие заболевания).

Предлагаемая композиция человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b, токоферола ацетата (витамин Е) и аскорбиновой кислоты (витамин С) и препарат Мультиферон на ее основе обладают более высоким противовирусным и иммуномодулирующим действием по сравнению с препаратом Миксоферон, который не содержит указанных витаминов.
Подробное описание изобретения
В области ветеринарной сельскохозяйственной медицины использование свечей, растворов местного применения или таблеток является трудоемким и неудобным процессом. При этом для подобных препаратов необходимо использовать более высокие концентрации интерферона, что связано с большей по сравнению с людьми массой животных. В этой области наиболее удобной формой препарата являются инъекционные растворы.
Целью настоящего изобретения является создание композиции для ветеринарии на основе человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b, обладающей противовирусным и иммуномодулирующим действием, в виде стабильного раствора для инъекций, а также лекарственного средства на основе указанной композиции. Данная композиция и лекарственное средство на ее основе, за счет введения дополнительных активных веществ как обладающих собственным противовирусным и иммуномодулирующим действием, так и усиливающим противовирусное и иммуномодулирующее действие интерферона, должны иметь преимущество в контексте терапевтической эффективности противовирусного ветеринарного препарата по сравнению с препаратом интерферона без подобных добавок.
Известно, что аскорбиновая кислота обладает противовирусным и иммуномодулирующим действием как сама по себе, так и в комплексах с другими веществами (Jariwalla RJ, Harakeh S. «Antiviral and immunomodulatory activities of ascorbic acid», Subcell Biochem. 1996; 25:213-31. Furuya A, Uozaki M, Yamasaki H et al., «Antiviral effects of ascorbic and dehydroascorbic acids in vitro», Int J Mol Med. 2008 Oct; 22(4):541-5). Аскорбиновая кислота участвует в иммуномодулировании, стимулируя синтез экзогенного интерферона. Витамин С переводит двухвалентное железо в трехвалентное, тем самым способствует его всасыванию. Являясь сильнейшим антиоксидантом, защищает липопротеины от окисления.
Токоферол ацетат (витамин Е) также является антиоксидантом, обладает противовирусной и иммуномодулирующей активностью, является стабилизатором клеточных мембран (United States Patent 5114957, «Tocopherol-based antiviral agents and method of using same», 05/19/1992. Bailin Liang, Ronald R Watson, «Monthly Updates Biologicals & Immunologicals: Vitamin E and immunomodulation for cancer and Aids resistance», 1996, Vol.5, No.9, P.1221-1225). Витамин Е увеличивает пролиферацию лимфоцитов, уменьшает продукцию иммуносупрессивного простагландина Е2 и уменьшает уровни иммуносупрессивных сывороточных жировых пероксидов. (Das SK, Gupta G, Rao DN, et al. Effect of lecithin with vitamin-B complex and tocopheryl acetate on long-term effect of ethanol induced immunomodulatory activities. Indian JExp Biol. Aug 2007; 45(8):683-8.)
Совместное использование интерферона и витамина Е в контексте усиления противовирусной активности интерферона также было описано в литературе (Перцева Н.Г., Ананенко А.А., Малиновская В.В. и др. «Влияние реаферона и альфа токоферола на процессы перекисного окисления липидов при экспериментальной гриппозной инфекции». Вопр. вирусол. - 1995. - №2 - 59-62).

Таким образом, композиция согласно настоящему изобретению, содержащая человеческий рекомбинантный интерферон, токоферола ацетат (витамин Е) и аскорбиновую кислоту (витамин С), может обладать более высоким противовирусным и иммуномодулирующим действием по сравнению с композицией интерферона без витаминов. При этом ветеринарный инъекционный препарат Мультиферон, в котором соотношения этих трех активных компонентов обоснованы, будет более эффективным препаратом по сравнению с другими препаратами интерферона для лечения желудочно-кишечных и острых респираторных заболеваниях вирусной и смешанной этиологии у крупного рогатого скота, свиней, лошадей, овец и их молодняка.
Кроме того, композиция согласно настоящему изобретению, содержащая человеческий рекомбинантный интерферон, токоферола ацетат (витамин Е) и аскорбиновую кислоту (витамин С), представляет собой масляно-водную эмульсию, способную пролонгировать всасывание и выведение интерферона, т.е. композицию пролонгированного действия. В состав масляной фазы, помимо токоферола ацетата, входит гидрогенизированное касторовое масло и поверхностно-активное вещество, стабилизирующее эмульсию. В данной системе аскорбиновая кислота дополнительно выступает как антиоксидант и стабилизатор интерферона.

Препарат Мультиферон, созданный на основе вышеописанной композиции, может применяться как противовирусное средство, с профилактической и лечебной целью при желудочно-кишечных и острых респираторных заболеваниях вирусной и смешанной этиологии (вирусной на фоне бактериальной) у крупного рогатого скота, свиней, лошадей, овец и их молодняка (парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея КРС, трансмиссивный гастроэнтерит свиней, ринопневмония, грипп лошадей и другие заболевания). Препарат рекомендован для профилактики и смягчения действия комбинированных стрессов, для уменьшения вероятности возникновения послеродовых осложнений, а также в ходе проведения массовых ветеринарных мероприятий: вакцинации и дегельминтизации.
Нарушение функции иммунной системы рассматривается как один из патогенетических механизмов любого патологического процесса. Первичные (или врожденные) иммунодефициты (ИД) являются следствием наличия в организме генетического дефекта. Вторичные ИД, которые встречаются чаще, носят приобретенный характер и обусловлены воздействием на организм вирусов, бактерий, паразитов, нарушением обмена веществ.
Наиболее распространенной формой вторичной иммунологической недостаточности животных являются нарушения в передаче материнских антител потомству, обуславливающие высокую заболеваемость и смертность новорожденных животных.
Вторичные ИД являются результатом воздействия неблагоприятных факторов, сопровождают хронические вирусные и бактериальные инфекции. Они характеризуются нарушением гуморального и клеточного иммунитета, отсутствием или снижением активности цитотоксических лимфоцитов и макрофагов. Вторичные ИД могут быть обусловлены нарушением функциональной активности лимфоцитов и макрофагов, а также NK-клеток. Хронические, часто рецидивирующие, вялотекущие, трудно поддающиеся лечению традиционными средствами воспалительные процессы любой локализации, повышенная частота возникновения аллергических и аутоиммунных заболеваний рассматриваются как клинические проявления вторичного ИД.
При этом, например, выраженный у поросят ИД устанавливается при обнаружении иммуноглобулинов (Ig) в сыворотке их крови в концентрации менее 8,0 мг/мл.
При оценке В-системы иммунитета важнейшими показателями являются: % и абсолютное количество В-лимфоцитов (CD19, CD20) и уровень продуцируемых иммуноглобулинов G-, М- и А-классов. Определение количества Ig - важнейший критерий при диагностике ИД, связанных с биосинтезом антител.
Наиболее значимыми являются отличия в содержании иммуноглобулинов G- и М-изотипов. При этом важным фактором, обуславливающим концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови поросят, является время потребления молозива, количество молозива, попавшее в пищеварительный тракт поросенка, содержание в нем иммуноглобулинов и эффективность их абсорбции в кишечнике. Очевидно, что эти параметры могут отличаться у поросят, не только содержащихся в различных условиях, но даже и у поросят одного помета.
Согласно полученным данным, большое значение для практики имеют индивидуальные различия в количественном содержании IgG и IgM у животных одного хозяйства. Так, в любой популяции обследованных животных одного хозяйства, фермы и даже одного помета могут присутствовать поросята с выраженным иммунодефицитом, объективным показателем которого является низкий уровень IgG.
Эти животные впоследствии не могут адекватно отвечать на введение вакцины формированием выраженного иммунитета, поэтому, оставаясь в стаде и будучи неиммунными, они могут быть восприимчивы к заражению вирулентным возбудителем. Было установлено, что у поросят с выраженным иммунодефицитом (IgG<6 мг/мл) после проведения плановой вакцинопрофилактики не были обнаружены (или были на крайне низком уровне) антитела к вирусу классической чумы свиней (КЧС), в то время как у животных с нормативным содержанием IgG они достигли протективного значения.
Также анализ полученных данных по обнаружению антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и цирковируса свиней (ЦВС-2) показал следующее: у 70% иммунодефицитных поросят в сыворотке крови антитела не были выявлены, в то время как у всех серопозитивных животных уровень IgG превышал 8 мг/мл.

В подобных ситуациях для иммунодифицитного молодняка применение препаратов интерферона и препарата Мультиферон, в частности, способно повысить иммунный статус животного до получения устойчивого иммунного ответа на вакцинирование.

Таким образом, к настоящему изобретению относится применение препарата Мультиферон в качестве противовирусного и иммуномодулирующего средства, повышающего иммунитет молодняка сельскохозяйственных животных в период доращивания, увеличивающего сохранность молодняка и усиливающего иммунный ответ молодняка в процессе вакцинации.
Сущность изобретения поясняется в следующих примерах.
Пример 1. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций с разными
соотношениями интерферона и витаминов
8
Для приготовления масляной части эмульсии помещают навески гидрогенизированного касторового масла (Кремофор EL, BASF), твина-80 и токоферола ацетата в реактор. Смесь перемешивают, нагревают до 50°С и инкубируют при данной температуре в течение 10 минут. В отдельную емкость заливают воду для инъекций и добавляют при постоянном перемешивании цитрат натрия 5,5 водный и аскорбиновую кислоту. При постоянном перемешивании в реактор медленно вливают водный раствор. Охлаждают смесь до комнатной температуры при постоянном перемешивании и вносят необходимое количество субстанции человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b с удельной активностью 2,2·10 МЕ/мг.
Доводят объем полученного раствора до расчетного водой для инъекций. Полученный раствор представляет собой прозрачную бесцветную жидкость без посторонних включений. Далее проводят стерилизующую фильтрацию раствора в стерильную емкость и разливают стерильно по 10 мл в стерильные 10-мл флаконы, укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.
Полученные препараты, после измерения содержания действующих веществ, имели состав, представленный в таблице 1.
Таблица 1
№ опытной серии
Интерферон, ×10<sup>5</sup> МЕ/мл
Аскорбиновая кислота, мг/мл
Токоферола ацетат, мг/мл
01
10,1
12,2
12,6
02
9,8
25,3
25,0
03
10,4
50,8
50,5
Пример 2. Исследование стабильности опытных препаратов
5
5
Опытные серии из предыдущего примера хранили в течение 18 месяцев при температурах 4±2°С, 20±2°С, 30±1°С, 40±1°С. Результаты измерения содержания действующих веществ (в 10 МЕ/мл - для интерферона и в мг/мл - для витаминов) представлены в таблице 2. В качестве контроля приведена субстанция интерферона, разведенная 50 мМ натрий-ацетатным буфером, рН 4,5 до активности 10,0-10 МЕ/мл, стерилизованная аналогично опытным сериям препарата.
Таблица 2
Температура хранения 4±2°С
Серия
3 месяца
6 месяцев
12 месяцев
18 месяцев
ИНФ
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
01
10,1
12,2
12,5
9,7
12,2
12,6
9,9
12,1
12,5
9,3
12,1
12,5
02
9,9
25,2
25,0
10,2
25,2
25,1
10,0
25,0
25,1
9,1
24,8
25,0
03
10,3
50,8
50,5
10,1
50,2
50,5
9,7
50,1
50,5
8,8
49,3
50,1
конт-роль
9,5
-
-
5,1
-
-
1,1
-
-
0,023
-
-
Температура хранения 20±2°С
Серия
3 месяца
6 месяцев
12 месяцев
18 месяцев
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
01
10,1
12,2
12,6
9,7
12,0
12,6
9,1
11,9
12,4
8,4
11,0
12,1
02
9,8
25,3
25,0
10,0
25,3
25,2
9,4
24,6
25,2
8,1
23,4
25,2
03
10,3
50,5
50,5
10,0
50,6
50,8
9,6
49,1
50,5
8,7
46,3
50,3
конт-роль
8,6
-
-
1,7
-
-
0,081
-
-
-
-
-
Температура хранения 30±1°С
Серия
3 месяца
6 месяцев
9 месяцев
12 месяцев
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
01
10,0
12,2
12,6
9,3
12,2
12,6
7,3
11,6
12,5
5,3
10,1
11,9
02
9,6
25,3
25,0
8,9
25,3
25,0
7,6
24,0
24,3
4,9
22,4
24,0
03
10,0
50,7
50,3
9,1
49,2
50,4
5,1
47,4
50,0
5,0
42,8
48,3
конт-роль
2,8
-
-
0,88
-
-
0,011
-
-
-
-
-
Температура хранения 40±1°С
Серия
1 месяц
2 месяца
3 месяца
4 месяца
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
ИФН
Вит С
Вит Е
01
9,6
12,2
12,6
8,4
12,2
12,5
6,5
12,1
12,5
4,1
11,4
12,4
02
9,7
25,3
25,0
8,2
25,2
25,0
6,9
25,0
25,2
4,0
24,6
24,9
03
9,8
50,8
50,6
8,9
50,5
50,5
6,7
50,0
50,2
4,0
47,0
49,7
контроль
1,5
-
-
0,11
-
-
0,048
-
-
-
-
-
Из таблицы видно, что выбранные композиции значительно стабилизируют интерферон по сравнению с контролем на всех температурах. При хранении препарата от 4 до 22°С опытные серии показывают незначительное падение действующих веществ, вплоть до 1 года хранения.
Пример 3. Исследование иммуномодулирующего действия опытных серий препарата
Исследование проводилось в условиях предприятия, находящегося, на момент проведения исследования, в сложном финансово-экономическом положении: сокращение рационов, нехватка химиотерапевтических и профилактических лекарственных средств, что, с одной стороны, повлияло на полученные результаты, но в то же время достигнутые результаты являются особенно показательными.
Целью исследования явилась подготовка иммунной системы поросят к вакцинации протии болезни Ауески и болезни классической чумы свиней (КЧС). Оба заболевания имеют вирусную природу. Также целью исследования являлась профилактика технологического стресса поросят, возникающего вследствие перевода животных на доращивание.
Схема эксперимента представлена на Фигуре 1 и заключалась в следующем.
Было сформировано 5 групп животных в возрасте 18-20 дней, по 30 голов в каждой группе, подобранных по принципу парных аналогов. В 1-й группе - Миксоферон серии оп-020110, внутримышечно в дозе 1 мл/гол.; во 2-й группе - Мультиферон серии-01 внутримышечно в дозе 1 мл/гол.; в 3-й группе - Мультиферон серии-02 внутримышечно в дозе 1 мл/гол.; в 4-й группе - Мультиферон серии-03 внутримышечно в дозе 1 мл/гол. Пятая группа - контроль. Поросята всех групп в возрасте 28 дней вакцинированы и в 50-дневном возрасте ревакцинированы против болезни Ауески. В 40-дневном возрасте поросята вакцинированы против классической чумы свиней. Пробы крови получены до введения препаратов и вакцинации, в 50-дневном возрасте и через 20 дней после ревакцинации.
При формировании групп вес животных составил 4,0-5,5 кг. Показатели продуктивности в группах показаны в таблице 3.
Как видно из таблицы 3, препараты интерферона, вводимые по указанной схеме в период вакцинации и перевода животных на доращивание, приводят к увеличению сохранности на 10-15% и увеличивают среднесуточный прирост.
Таблица 3
Показатели
1 группа
2 группа
3 группа
4 группа
контроль
Количество голов
30
30
30
30
30
Сохранность, голов
30
30
29
28
25
Сохранность, %
100
100
96,7
93,4
83,3
Среднесуточный прирост при отъеме, г
220
222
214
203
191
По результатам биохимии крови в начале опыта отмечалось понижение кальция в крови и повышение фосфора, что было связано с нарушением баланса минерального питания животных. В конце опыта в контрольной группе наблюдали дисбаланс кальция к фосфору. Во всех опытных группах баланс между кальцием и фосфором находился в норме.
Результаты исследования сывороток крови на содержание иммуноглобулинов отдельных классов (мг/мл) приведены в таблице 4.
Таблица 4
1-е взятие крови
2-е взятие крови
3-е взятие крови
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
IgA
1-я группа
М
10,07
1,55
0,18
13,09
2,32
0,49
17,62
2,43
0,62
STD
4,18
0,31
0,07
2,81
0,55
0,21
1,98
0,38
0,04
2-я группа
М
9,84
1,63
0,19
13,22
2,24
0,51
18,03
2,48
0,61
STD
2,50
0,31
0,06
3,16
0,32
0,06
1,49
0,24
0,05
3-я группа
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
IgA
М
8,69
1,32
0,16
10,71
1,95
0,36
18,24
2,44
0,62
STD
2,20
0,12
0,04
1,27
0,25
0,08
1,68
0,37
0,04
4-я группа
М
11,29
1,21
0,16
13,17
1,65
0,23
14,29
2,13
0,48
STD
2,76
0,09
0,04
2,48
0,26
0,05
2,27
0,39
0,04
5-я группа - контроль
М
8,01
1,63
0,13
12,84
2,25
0,21
16,72
2,34
0,50
STD
1,78
0,25
0,03
2,71
0,34
0,05
1,76
0,21
0,02
где М - среднее значение, STD - стандартное отклонение
Количественное определение уровня иммуноглобулинов отдельных классов проведено методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием моноспецифических антисывороток и моноклональных антител к отдельным классам иммуноглобулинов и стандартной сыворотки крови свиней с известным содержанием иммуноглобулинов отдельных классов.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что в целом изменения в количественной характеристике уровня иммуноглобулинов отдельных классов в сыворотке крови поросят носят возрастной характер. При этом следует отметить, что в возрасте 20 дней (начало эксперимента) 25,0% поросят имеют выраженное иммунодефицитное состояние, связанное с элиминацией пассивно приобретенных колостральных иммуноглобулинов. Введение поросятам Миксоферона и Мультиферона в сочетании с вакцинацией оказывает определенное стимулирующее влияние на синтез иммуноглобулинов в сравнении с контрольной группой, где изменения в количестве иммуноглобулинов связаны с собственным их синтезом. Более высокие показатели на заключительном этапе исследований отмечены во 2-й и 3-й группах поросят, вакцинация которых осуществлялась с применением препаратов Мультиферона серий 01 и 02. Введение Мультиферона серии 03 оказывало определенное иммунодепрессивное влияние, уровень иммуноглобулинов отдельных классов на заключительном этапе исследований был ниже такового в контрольной группе поросят, которая подвергалась вакцинации без применения препаратов интерферона. Отсутствие выраженного вторичного иммунного ответа на ревакцинацию можно объяснить, во-первых, тем, что вакцинация проводилась на фоне колострального иммунитета (интерференция между колостральными специфическими антителами и антигеном) и, во-вторых, незрелостью иммунной системы поросят на период иммунизации вакцинами против болезни Ауески и классической чумы свиней.
6
Таким образом, для ветеринарного инъекционного препарата в виде стабильной эмульсии интерферона и витаминов С и Е более предпочтительны соотношения интерферона, аскорбиновой кислоты и токоферола ацетата, равные 10 МЕ/мл интерферона к 10-30 мг/мл аскорбиновой кислоты и 10-30 мг/мл токоферола ацетата.
Хотя указанное изобретение описано в деталях со ссылкой на Примеры, для специалиста в указанной области техники очевидно, что могут быть совершены различные изменения и произведены эквивалентные замены, и такие изменения и замены не выходят за рамки настоящего изобретения.