СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК ОБОНЯТЕЛЬНОЙ ВЫСТИЛКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТРАВМ СПИННОГО МОЗГА

1. Способ получения обкладочных клеток из обонятельной выстилки млекопитающих для лечения травм спинного мозга, включающий этапы, на которых:
получают образцы ткани из обонятельной выстилки носа млекопитающего;
промывают их;
ткань инкубируют с диспазой II в концентрации 2 мг/мл в течение 1 часа при 37°С;
ткань переносят в среду DMEM:F12(1:1) с антибиотиками и механически отделяют обонятельный эпителий от собственной пластинки;
собственную пластинку измельчают и культивируют в виде эксплантной культуры в течение 14 дней в среде DMEM:F12(1:1), содержащей 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 мкг/мл стрептомицина, 100 ед/мл пенициллина и 60 мкг/мл гентамицина, смену среды производят каждые три дня;
после образования монослоя инкубируют клетки с 0,05%-ным раствором трипсина 2 минуты при 37°С, инактивируют фермент средой с сывороткой, ресуспендируют и центрифугируют 2 минуты при 900 g;
полученные клетки помещают на пластик, покрытый 0,01%-ным поли- L-лизином, и культивируют в среде DMEM:F12(1:1), содержащей 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 1% ITS, 100 мкг/мл стрептомицина, 100 ед/мл пенициллина и 500 нг/мл гидрокортизона, в течение 3 дней;
полученные клетки охарактеризовывают по маркерам p75NTR и GFAP.
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при необходимости после получения образцов ткани и до момента начала эксперимента по получению первичной культуры образцы ткани обонятельной выстилки носа млекопитающего транспортируют в питательной среде DMEM:F12(1:1) и хранят при +4°С не более 2 часов.
3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что образцы ткани обонятельной выстилки промывают в среде DMEM:F12(1:1) с антибиотиками 100 мкг/мл стрептомицина и 100 ед/мл пенициллина не менее 3 раз.
4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что механическое отделение обонятельного эпителия от собственной пластинки производят посредством микрошпателя в чашке Петри со средой DMEM:F12(1:1) с антибиотиками 100 мкг/мл стрептомицина и 100 ед/мл пенициллина.