КОНСТРУИРОВАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫХ ДОМЕНОВ

1. Композиция, содержащая каркас иммуноглобулина, содержащий одну или более чем одну неканоническую дисульфидную связь в каркасной области (FR).
H
L
H
L
2. Композиция по п.1, где каркас иммуноглобулина выбран из каркаса V (вариабельная область тяжелой цепи) или V (вариабельная область легкой цепи), причем каркас V содержит по меньшей мере одну неканоническую дисульфидную связь в FR, где неканоническая дисульфидная связь образована между остатками цистеина, введенными в положения 49 и 69 согласно нумерации Кэбата; и каркас V содержит по меньшей мере одну неканоническую дисульфидную связь в FR, где неканоническая дисульфидная связь образована между остатками цистеина, введенными в положения 48 и 64 согласно нумерации Кэбата.
2
3. Композиция по п.1, где каркас является частью большего белка антитела или фрагментом, выбранным из группы, состоящей из однодоменного антитела (sdAb), scFv (одноцепочечный вариабельный фрагмент), Fab (антигенсвязывающий фрагмент), F(ab) или зрелого иммуноглобулина.
4. Композиция по п.3, где зрелый иммуноглобулин выбран из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE и/или IgM.
H
5. Композиция по п.1, где каркас иммуноглобулина представляет собой V.
H
H
6. Композиция по п.5, где V относится к семейству V3.
L
7. Композиция по п.1, где каркас иммуноглобулина представляет собой V.
L
8. Композиция по п.7, где V относится к семейству каппа или лямбда.
9. Композиция по любому из пп.1-8, где одна или более чем одна неканоническая дисульфидная связь образована между остатками цистеина, введенными посредством мутаций в FR2 и FR3.
10. Композиция по п.5 или 6, где остатки цистеина вводят в положения 49 и 69 согласно нумерации Кэбата.
11. Композиция по п.7 или 8, где остатки цистеина вводят в положения 48 и 64 согласно нумерации Кэбата.
12. Композиция по п.1, где каркасы мультимеризованы, причем образующийся при этом мультимер содержит по меньшей мере димер, тример, тетрамер, пентамер, гексамер, гептамер или октамер.
13. Композиция по п.1, где каркас слит со второй последовательностью, где вторая последовательность выбрана из Fc фрагмента, направляющей последовательности, сигнальной последовательности и метки очистки, или любой их комбинации.
14. Композиция каркаса по п.1, где каркас иммуноглобулина содержит каркасные области последовательностей, выбранных из группы, состоящей из:
или последовательностей по существу идентичных им, или их фрагментов, при условии, что по существу идентичная последовательность, или ее фрагменты, содержит как канонические, так и неканонические дисульфидные связи, и где остатки, содержащие CDR1, CDR2 и CDR3, могут представлять собой любую подходящую последовательность.
15. Нуклеиновая кислота, кодирующая композицию по п.1.
16. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.15.
17. Клетка-хозяин или организм, содержащий экспрессионный вектор по п.16.
5
6
7
8
9
9
18. Рекомбинантная библиотека, содержащая по меньшей мере один каркас иммуноглобулина, который определен в п.2, причем каркас иммуноглобулина дополнительно содержит множество подходящих последовательностей CDR, где множество последовательностей CDR обеспечивают многообразие по меньшей мере 10, по меньшей мере 10, по меньшей мере 10, по меньшей мере 10, по меньшей мере 10 или более чем 10 клонов на библиотеку.
19. Способ улучшения стабильности композиции, содержащей каркас иммуноглобулина, при котором вводят одну или более чем одну неканоническую дисульфидную связь в каркасную область.
20. Композиция по п.1, где последовательность иммуноглобулина происходит от животного, не являющегося человеком.
21. Композиция по п.20, где животное, не являющееся человеком, выбрано из птиц, амфибий, рептилий, млекопитающих, верблюдовых, цыпленка, крысы, мыши, кролика, козы, овцы, коровы, кошки, собаки, лошади или нечеловекоподобных приматов.
22. Композиция по п.21, где животное, не являющееся человеком, является верблюдовым.
23. Композиция по п.22, где вид верблюдовых выбран из ламы, альпаки и верблюда.
H
L
H
24. Композиция по п.23, где каркас иммуноглобулина выбран из любой одной или более чем одной области V, V или области VH.
25. Композиция по п.20, где каркас иммуноглобулина является гуманизированным.
26. Композиция по п.1, где последовательность иммуноглобулина происходит от человека.