ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ОЛИГОМЕРНУЮ МОЛОЧНУЮ КИСЛОТУ
PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING OLIGOMERIC LACTIC ACID

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, включающим олигомеры молочной кислоты. Эти композиции подходят для применения в лечении или профилактике заболеваний или состояний, в которых желательно местное понижение значения pH до уровня 3,8-5. Такие заболевания или состояния включают бактериальные, вирусные или грибковые заболевания. В частности, композиции по настоящему изобретению подходят для лечения гинекологических заболеваний, например, гинекологических инфекций. Было показано, что композиции по настоящему изобретению подходят для лечения бактериального вагиноза. Композиции высвобождают действующий ингредиент, т.е. молочную кислоту, в течение продолжительного времени, что делает возможной частоту введения один или два раза в неделю с достижением желаемого терапевтического эффекта.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Термины "гинекологические инфекции" или "инфекции репродуктивных органов", как правило, относятся к трем различным типам инфекций, которые поражают половые пути. Эндогенные инфекции включают бактериальный вагиноз и кандидоз, и их причиной является избыточное размножение микроорганизмов, которые обычно присутствуют во влагалище. Эти эндогенные инфекции во всем мире являются наиболее обычной формой инфекций нижнего отдела гинекологического тракта (LGTI) и легко поддаются лечению. Однако, как правило, они появляются повторно, что является существенной проблемой для медицины. Второй группой являются ятрогенные инфекции, которые возникают, когда инфекционный агент (бактерии или другие микроорганизмы) различными путями заносят в репродуктивный тракт, например, при регулировании менструаций, искусственном прерывании беременности, введении внутриматочной спирали или во время родового акта. Наконец, инфекции, передающиеся половым путем (STI) вызваны микроорганизмами, например, вирусами, бактериями, или паразитическими микроорганизмами, которые передаются в результате половой активности от инфицированного партнера. Среди STI есть несколько тяжелых заболеваний, например, ВИЧ, хламидиоз, вызванный chlamydia trachomatis, кондилома остроконечная, сифилис и гонорея, вызванная гонококками Neisseria gonorrhea. STI могут поражать как мужчин, так и женщин, но, кроме того, может происходить передача инфекции от матери плоду во время беременности и родов.
Бактериальный вагиноз (BV) является наиболее распространенной эндогенной инфекцией, а также наиболее обычным медицинским состоянием женских половых путей. С BV связано усиление осложнений при беременности, кроме того BV может быть вовлечен в патогенез воспалительных заболеваний тазовых органов и повышать опасность заболевания ВИЧ. До настоящего времени остается много вопросов относительно этиологии BV, что осложняет лечение рецидивирующих инфекций.
BV представляет собой чрезмерное размножение анаэробных бактерий при отсутствии нормальной микрофлоры, т.е. бактерий молочнокислых бактерий Lactobacilli, что приводит к нарушению нормального баланса вагинальной микрофлоры. При беременности BV связан с неблагоприятным исходом перинатального периода и вызывает преждевременные роды. Выявление и лечение BV может снизить риск таких последствий. Был протестирован ряд терапевтических методик для ослабления или предупреждения рецидивов BV.
К настоящему времени неизвестно, является ли частое повторение эпизодов BV следствием повторного инфицирования или рецидивом. Связь BV с сексуальным поведением позволяет предположить, что BV передается половым путем, и что последующие эпизоды заболевания могут быть вызваны повторным инфицированием. Однако существующие факты не подтверждают вывод о передаче BV половым путем и повторном инфицировании, и в ряде исследований, оценивающих факторы риска повторных эпизодов BV, делается предположение, что эти эпизоды являются рецидивами. Женщины с ранним развитием рецидива обычно жалуются на аномальные выделения в конце лечения. Кроме того, у женщин, не ощущающих симптомов, которые считают себя выздоровевшими после лечения, сохраняется аномальная вагинальная микрофлора. Более того, чем сильнее эти аномалии микрофлоры, тем раньше обычно наступает рецидив.
Эффективность бактериотерапии, в которой безвредные бактерии применяются для вытеснения патогенных микроорганизмов, остается невыясненной.
Некоторые женщины могут сообщать о психосексуальных симптомах, заключающихся в потере полового влечения и тревоге по поводу инфекции, вследствие повторяющихся эпизодов бактериального вагиноза и связанного с ним плохого запаха. Однако одновременное лечение полового партнера не уменьшает частоту рецидивов BV. Тем не менее, использование презерватива половым партнером может способствовать снижению риска рецидива бактериального вагиноза. Использование гормональной контрацепции не увеличивает заболеваемость бактериальным вагинозом, хотя у женщин, пользующихся внутриматочными противозачаточными устройствами или системами in situ, может иметься повышенный риск возникновения BV.
Вагинальные выделения
Вагинальные выделения являются распространенным присутствующим симптомом, который может быть физиологическим или патологическим. Хотя BV остается одним из самых частых диагнозов у женщин, посещающих гинекологические медицинские учреждения, вульвовагинальный кандидоз является другой распространенной причиной вагинальных выделений, и он поражает примерно 75% женщин в тот или иной момент в течение их репродуктивного возраста. Примерно в 50% случаев бактериальный вагиноз протекает бессимптомно, и реальная распространенность этого состояния среди населения составляет примерно 10-30%. Молочнокислые бактерии, населяющие вагинальный эпителий, могут играть определенную роль в защите от инфекции. Нормальная микрофлора влагалища (lactobacilli, т.е. молочнокислые бактерии) поддерживает pH в диапазоне от 3,8 до 4,4. Характер и количество вагинальных выделений у одной и той же женщины может меняться с течением времени. Существует широкий диапазон изменения вагинальных выделений, и у каждой женщины имеется собственное ощущение нормы, а также того, что является приемлемым или избыточным.
Основной проблемой патогенных вагинальных выделений является неприятный запах. Этот запах напоминает запах гнилой рыбы, что характерно для бактериального вагиноза, и его причиной являются амины, главным образом, триметиламин. Другими клиническими проявлениями BV могут являться избыточные выделения и ощущение несвежести.
Настоящее изобретение является дальнейшим развитием изобретения, раскрытого в WO 2008/119518, опубликованной 9 Октября 2008. В WO 2008/119518 описаны олигомеры молочной кислоты и их терапевтическое и профилактическое применение. Однако составы, описанные в указанной заявке, характеризуются проблемами, выявленными в ходе первоначальных клинических исследований, например, слишком быстрым вытеканием и т.д., и, соответственно, существует потребность в разработке композиций, которые удобны для потребителя и остаются на месте введения в течение такого периода времени, который позволяет вводить их только один или два раза в неделю.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Как видно из изложенного выше, существует необходимость в разработке составов, которые подходят для применения в лечении гинекологических инфекций, в частности, бактериального вагиноза, и дают возможность осуществлять менее частое введение по сравнению со схемами введения известного уровня техники, в которых требуется ежедневное или более частое введение.
Авторы настоящего изобретения выяснили, что для решения этой проблемы подходят олигомеры молочной кислоты, сравните WO 2008/119518. С одной стороны эти олигомеры высвобождают молочную кислоту при контакте с водной средой, и с другой стороны эти олигомеры служат в качестве депо молочной кислоты, т.е. не вся молочная кислота высвобождается немедленно, причем высвобождение молочной кислоты зависит от применяемого олигомера.
Однако олигомеры молочной кислоты обладают различными физическими свойствами в зависимости от средней молекулярной массы и коэффициента полидисперсности и, соответственно, производителю легче вводить в композиции некоторые из этих олигомеров. Определенную роль играет также степень полимеризации, т.е. PDn.
Кроме того, важно выбрать олигомер молочной кислоты, который обеспечивает желаемый эффект в течение желаемого периода времени и, в то же время, позволяет получить композицию, удобную для применения конечным пользователем.
Настоящее изобретение решает эти проблемы, причем были проведены предварительные клинические исследования для выяснения того, обеспечивают ли композиции олигомерной молочной кислоты желаемые результаты.
В заявке WO 2008/119518 упоминаются различные композиции. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что для достижения желаемого пролонгированного действия, которое дает возможность введения один раз в неделю, олигомерная молочная кислота должна иметь расширенное распределение молекулярной массы, т.е. индекс полидисперсности, который превышает предусмотренный в WO 2008/119518. Кроме того, степень полимеризации, т.е. PDn не должна превышать 4,1. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что важно выбрать олигомерную молочную кислоту с такими физическим свойствами, чтобы ее состояние было примерно промежуточным между полутвердым и твердым, и примерно промежуточным между липким и не липким. Это важно для превращения олигомерной молочной кислоты в композицию, которая удобна для применения. Имеется в виду, что среднечисловая молекулярная масса, а также коэффициент полидисперсности являются важными параметрами для получения желаемой продолжительности терапевтического действия, а также для достижения физических свойств, которые облегчают или делают возможным производство фармацевтической композиции.
В настоящей заявке критерии Амселя используются для диагностики BV, а также как средство оценки эффективности той или иной методики лечения BV. Критерии Амселя включают:
i) однородные выделения (водянистые, белые, желтые);
ii) наличие ключевых клеток;
iii) появление рыбного запаха при действии гидроксида калия на выделения;
iv) pH более 4,5.
Если выполняются три из четырех критериев, у пациента имеется BV.
Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что значение pH во влагалище после или во время лечения (в сочетании с другими упомянутыми выше критериями) не является решающим критерием оценки успешности лечения. По-видимому, наиболее важным параметром является наличие определенного снижения значения pH, а не существующее значение pH. Так, например, при рассмотрении приведенных в заявке данных клинических исследований, кажется, что если происходит снижение значения pH на 0,5 единицы или более, и не выполняется только один или ни одного из других критериев Амселя, то лечение оказалось эффективным.
Соответственно, для оценки результата лечения BV следует выявить:
i) наличие однородных выделений (водянистых, белых, желтых);
ii) наличие ключевых клеток;
iii) появление рыбного запаха при действии гидроксида калия на выделения;
iv) изменение pH (ΔpH) менее 0,5 (т.е. не включая 0,5), где ΔpH означает разность pH во влагалище до и после лечения.
Если выполняются три из четырех приведенных критериев, лечение от BV оказалось неэффективным.
Цель настоящего изобретения заключается в разработке композиции, включающей олигомерную молочную кислоту в форме, с которой легко обращаться конечному пользователю, которую легко помещать во влагалище, причем продолжительность действия композиции настолько велика, что достаточно вводить ее раз в неделю или раз в месяц (для профилактики рецидива) (хотя могут возникнуть ситуации, когда может потребоваться введение чаще, чем раз в месяц или раз в неделю, например, два раза в неделю). Кроме того, цель изобретения заключается в разработке композиции, которую легко производить, и которая повторяемо соответствует общим требованиям к допустимым отклонениям, например, отклонениям массы, способности к разрушению, растворимости, стабильности и т.д.
Принцип действия олигомерной молочной кислоты в композициях по настоящему изобретению заключается в постепенном высвобождении молочной кислоты, которая в свою очередь обеспечивает наличие слабокислой среды на участке введения. По сути дела это означает, что такие композиции могут применяться для лечения любого заболевания или состояния, при которых было бы полезно наличие слабокислой среды. Примерами являются:
i) гинекологические инфекции;
ii) поражения слизистой оболочки полости рта вследствие бактериальных, вирусных или грибковых инфекций или других медицинских причин, например, лейкоплакии или "синдрома жжения рта";
iii) заболевания или расстройства прямой кишки, такие как геморрой, анальные трещины, анальный зуд или проктит;
iv) кожные заболевания или расстройства, такие как раны, экзема, атопический дерматит, псориаз, акне, розацеа, крапивница, зуд, световой дерматоз, потливость (гипергидроз), облысение, а также бактериальные инфекции, вирусные инфекции, грибковые инфекции и эктопаразиты;
v) лечение или профилактика кариеса и/или парадонтита, и/или запаха изо рта (галитоза); или
vi) в гастроэнтерологии, когда полезный эффект может наблюдаться при нарушении выработки кислоты, например, при ахилии.
Композиции по настоящему изобретению особенно подходят для применения в профилактике и/или лечении гинекологических инфекций. Гинекологические инфекции могут являться бактериальными инфекциями, например, бактериальным вагинозом, неспецифическим кольпитом, старческим кольпитом, цервицитом и уретритом. Кроме того, гинекологические инфекции могут являться грибковыми инфекциями, например, кандидозом (возбудитель candida albicans), криптококкозом, актиномикозом, или вирусными инфекциями, например, вирусом иммунодефицита человека (HIV, ВИЧ), вирусом простого герпеса (HSV), вирусом папилломы человека (HPV).
Высвобождение молочной кислоты происходит по следующему механизму:
Бактериальный вагиноз (BV); его характеристики и эпидемиология
BV характеризуется вагинальными выделениями с плохим запахом, значением pH во влагалище более 4,5, положительным тестом на амины и водянистыми однородными белыми выделениями, а также наличием ключевых клеток в микроскопических образцах и проявлениями вагинального жжения или зуда.
Вагинальная микрофлора подвергается изменениям, т.е. вместо преобладания нормальных молочнокислых бактерий (LB) возникает микрофлора с пониженным числом LB и избыточным количеством Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis и анаэробных бактерий, таких как streptococci, Prevotella spp. и Mobiluncus spp.
Бактериальный вагиноз обычно диагностируют с использованием критериев Амселя, в случае, если выполняются 3 критерия из 4-х: 1) значение pH во влагалище превышает 4,5; 2) в вагинальной жидкости присутствуют ключевые клетки (эпителия влагалища); 3) водянистые серые или белые однородные выделения; 4) положительный результат теста на неприятный запах (появление рыбного запаха при добавлении к вагинальной жидкости 10% гидроксида калия).
Было показано, что некоторые провоцирующие факторы повышают риск BV, например, молодой возраст, принадлежность к негроидной расе, спринцевание, курение и контрацепция с применением IUD. В некоторых сообщениях BV связывали с половым поведением, недавней сменой полового партнера, а также наличие нескольких партнеров.
Терапия бактериального вагиноза
При использовании пероральных или вагинальных препаратов метронидазола и клиндамицина, у женщин первоначально будет наблюдаться реакция на лечение в 80-90% случаев, но в течение 3 месяцев будет происходить 15-30% рецидивов. Если рассматривать взаимосвязь между молочнокислыми бактериями, продуцированием пероксида водорода, вагинальным pH и избыточным размножением бактерий, связанных с BV, корректировка только одного из этих параметров может помочь некоторым женщинам с рецидивирующим BV, но она может оказаться недостаточной для лечения всех случаев заболевания.
Хотя имеется хорошо известная взаимосвязь между молочнокислыми бактериями, выработкой пероксида водорода, вагинальным pH и избыточным размножением бактерий, связанных с BV, фактор, инициирующий BV, остается неизвестным.
Лечение, сфокусированное только на одном аспекте приведенной комбинации, может принести пользу некоторым женщинам с рецидивирующим BV, но более предпочтительным является комбинированный подход. Поскольку бактериальный вагиноз может также протекать бессимптомно, рецидивы часто нельзя отличить от неудачного лечения. Поэтому рецидивирующий бактериальный вагиноз можно предотвратить с помощью эффективного лечения во время первого эпизода.
Параметры кислотности
Низкое значение pH во влагалище возникает благодаря выработке молочной кислоты в результате жизнедеятельности молочных бактерий, а также за счет превращения гликогена в молочную кислоту клетками эпителия влагалища под действием эстрогенов. В культуре молочнокислые бактерии подкисляют ростовую среду до значения pH 3,2-4,8. При этих значениях pH устанавливается состояние стационарного равновесия, при котором кислотность начинает оказывать автоингибирующее действие. Анаэробные микроорганизмы плохо растут при значениях pH 4,5 или ниже. Исследования in vitro показали, что концентрации бактерий, связанных с BV, возрастают с увеличением значения вагинального pH. Однако было обнаружено, что молочная кислота и низкие значения pH оказывали более слабое ингибирующее действие на эти бактерии, чем пероксид водорода. Тем не менее, когда значение pH во влагалище возрастает, например, после полового акта и во время менструации, может иметь место избыточное размножение бактерий, связанных с BV. Интересно, что низкие значения pH, по-видимому, имеют важное значение для прикрепления молочнокислых бактерий к эпителиальным клеткам. BV может также быть вызван внесением бактерий, связанных с BV, в здоровое влагалище, как было показано в ранних работах Gardner и Dukes (Gardner HL, Dukes CD. Haemophilus vaginalis vaginitis. Am J Obstet Gynecol 1955; 69:962-76).
Таким образом, точный механизм возникновения BV остается неизвестным. BV связан с уменьшением числа молочнокислых бактерий (LB) и пониженной выработкой пероксида водорода. Это приводит к росту вагинального pH и избыточному размножению микроорганизмов, связанных с BV. В настоящее время неизвестно, что вызывает уменьшение выработки пероксида водорода соответствующими штаммами молочнокислых бактерий при BV.
Другими словами, к настоящему времени общепризнано, что основная цель профилактики или лечения BV заключается в поддержании вагинального pH на уровне 4,5 или ниже. Это позволяет предотвратить избыточное размножение патогенных бактерий до тех пор пока нормальные LB не восстановятся и не будут способны поддерживать необходимые уровни pH. Однако, как можно видеть из примеров настоящей заявки, важным фактором в подавлении BV является снижение pH от исходного значения, но эти результаты, также демонстрируют, что не так важно достичь значения pH 4,5 или менее; наиболее очевидный эффект дает само по себе снижение pH. В примерах было продемонстрировано, что уменьшение pH от исходного значения на 0,5 единицы pH или более (например, на 1,0) является показателем эффективного лечения. Таким образом, модифицированные критерии для оценки конкретного способа лечения BV после одного курса лечения можно было бы сформулировать следующим образом:
i) однородные выделения (водянистые, белые, желтые);
ii) наличие ключевых клеток;
iii) появление рыбного запаха при действии гидроксида калия на выделения;
iv) понижение вагинального pH менее, чем на 0,5 единицы pH при измерении через 3 или 4 дня после окончания лечения,
где, как минимум, 3 из 4-х критериев должны быть выполнены, если пациент по-прежнему страдает BV, что указывает на неэффективность лечения.
Периодическая pH-понижающая терапия, во время эпизода заболевания или на профилактической основе, может считаться способом предупреждения рецидива BV.
Композиции, включающие олигомерную молочную кислоту
Настоящее изобретение относится к композициям, включающим олигомерную молочную кислоту, способам получения таких композиций, а также к применению таких композиций для лечения или профилактики состояний, при которых желательно местное понижение значения pH. Значение pH должно быть понижено до величины в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 5. Эти состояния описаны выше и включают профилактику и/или лечение бактериального вагиноза.
Как указано выше, настоящее изобретение представляет собой дальнейшее развитие идей, изложенных в WO 2008/119518. Хотя описаны многие олигомеры молочной кислоты и содержащие их композиции, авторы настоящего изобретения обнаружили, что по-прежнему имеется необходимость в подборе олигомерной молочной кислоты, которая обладает наиболее подходящими свойствами для i) превращения в фармацевтическую композицию; ii) проявления желаемого эффекта; iii) наличия желаемой продолжительности действия и iv) удобства введения пациентом. Кроме того, поскольку основной целью является разработка композиции, которая сохраняется на месте введения в течение желаемого периода времени, авторы настоящего изобретения столкнулись с техническими проблемами, относящимися к достижению подходящих мукоадгезивных свойств итоговой композиции.
Эти проблемы удалось решить путем разработки композиции, включающей:
i) олигомерную молочную кислоту приведенной ниже формулы
,
3
где n является целым числом от 2 до 20, от 2 до 19, от 2 до 18, и где содержание олигомерной молочной кислоты, представляющей собой тример, т.е. HL, для которого n=2, составляет от примерно 10 до примерно 20 масс.% общей массы олигомерной молочной кислоты; и
ii) мукоадгезивный агент.
Как видно из примеров настоящей заявки и в противоположность предусмотренному в WO 2008/119518, авторы настоящего изобретения обнаружили, что олигомерная молочная кислота должна обладать определенными свойствами для достижения продолжительного действия, которого достаточно, чтобы избежать более чем одного или двух введений (если проблема заключается в рецидиве заболевания, как указано в тексте заявки). Так, например, среднечисловая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 200 до примерно 500, степень полимеризации pDn должна составлять максимум 4,1, и распределение молекулярной массы не должно быть слишком узким, т.е. конкретная олигомерная кислота содержит ряд олигомеров, для которых коэффициент n находится в диапазоне от 1 до 13. Коэффициент полидисперсности должен составлять 1,45 или более.
В частности, среднечисловая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 200 до примерно 240, среднемассовая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 290 до примерно 500, коэффициент полидисперсности должен находиться в диапазоне от 1,45 до 2,5. Степень полимеризации обычно должна составлять от 2,5 до 3,8.
Среднечисловая молекулярная масса может также находиться в диапазоне от примерно 255 до примерно 425, при этом среднемассовая молекулярная масса находится в диапазоне от примерно 370 до примерно 580, коэффициент полидисперсности находится в диапазоне от 1,45 до 2,5. Степень полимеризации должна составлять от 3 до 4,1.
Кроме того, как упомянуто выше, олигомерные молочные кислоты имеют различные физические свойства в зависимости от средней молекулярной массы и полидисперсности. Физическая форма олигомерной молочной кислоты может изменяться от жидкой (низкая средняя молекулярная масса) через полутвердую до твердой формы (высокая средняя молекулярная масса). Некоторые из олигомерных молочных кислот обладают способностью к адгезии, которой достаточно для того, придать композиции необходимые мукоадгезивные свойства. Однако даже если выбранные олигомерные молочные кислоты обладают определенной мукоадгезивностью, авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинация олигомерной молочной кислоты с мукоадгезивным агентом необходима для гарантии того, что композиция останется в месте введения в течение желательного периода времени.
n
Среднечисловая молекулярная масса M олигомерной молочной кислоты составляет от примерно 200 до примерно 500. Как можно видеть из примеров настоящей заявки, удовлетворительные результаты были получены при использовании олигомерных молочных кислот со среднечисловой молекулярной массой от примерно 200 до примерно 350.
Как было упомянуто выше, коэффициент полидисперсности также играет важную роль как для обеспечения относительно быстрого начала действия, так и для пролонгированного эффекта. Не ограничиваясь каким-либо объяснением, считается, что олигомерные кислоты с низкой молекулярной массой, содержащиеся в олигомерной молочной кислоте, включенной в композицию, позволяют добиться быстрого начала действия, а также короткой-средней продолжительности действия, тогда как олигомерные кислоты "высокой" молекулярной массы, содержащиеся в олигомерной молочной кислоте, включенной в композицию, отвечают за продолжительное действие.
Так, например, композиция по настоящему изобретению содержит олигомерную молочную кислоту с коэффициентом полидисперсности от примерно 1,45 до примерно 6. Как видно из примеров настоящей заявки, удовлетворительные результаты достигаются, если степень полимеризации (PDn) олигомерной кислоты составляет от примерно 2,5 до примерно 4,1, в том числе, если степень полимеризации олигомерной кислоты составляет от 3 до 3,6.
Как показано в примерах настоящей заявки, композиция по настоящему изобретению содержит олигомерную молочную кислоту, которая включает:
2
от 10 до 20 масс.% HL (т.е. n=1);
4
от 10 до 20 масс.% HL (т.е. n=3);
5
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=4);
6
от 5 до 15 масс.% HL (т.е. n=5).
10
11
10
11
12
10
11
12
13
10
11
12
13
14
Олигомерная молочная кислота может также включать от 1 до 5 масс.% каждой из следующих кислот: HL и HL; HL, HL и HL; HL, HL, HL и HL; HL, HL, HL, HL и HL.
Конкретный интерес представляет композиция, в которой олигомерная молочная кислота представляет собой OMLA 3, 6 или OMLA 22, имеющие следующий состав:
1
от 7 до 10% HL;
2
от 12 до 15 масс.% HL (т.е. n=1);
3
от 14 до 16 масс.% HL (т.е. n=2);
4
от 11 до 15 масс.% HL (т.е. n=3);
5
от 10 до 14 масс.% HL (т.е. n=4);
6
от 8 до 10 масс.% HL (т.е. n=5); и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Эта олигомерная молочная кислота также подробно описана на фиг.3 (OMLA 3 и OMLA 6) и на фиг.5 (OMLA 22) настоящей заявки, где приведены среднечисловые молекулярные массы и степени полимеризации (OMLA 3: Mn=258, PI=1,48 и PDn=3,33; OMLA 6: Mn=313, PI=1,5 и PDn=4,1; и OMLA 22: Mn=255 и PDn=3,29 или Mn=265, PI=1,46 и PDn=3,43).
Как указано выше, важным компонентом композиции по настоящему изобретению является средство для придания мукоадгезивных свойств (мукоадгезивный агент). Комбинированный эффект мукоадгезивности олигомерной молочной кислоты и мукоадгезивного агента дает возможность получить композицию, которая после попадания в место введения, (например, во влагалище) при наличии в месте введения относительно небольшого количества жидкой среды организма, приобретает мукоадгезивные свойства и прикрепляется к слизистой оболочке на период времени, которого достаточно для результативного лечения.
Мукоадгезия (или биоадгезия) определяется, как процесс, в результате которого синтетические или природные макромолекулы прикрепляются к поверхности различных слизистых оболочек организма. Если молекула обладает мукоадгезивными свойствами, или если мукоадгезивные материалы включены в качестве компонентов в фармацевтические составы или композиции, местное действие или абсорбция лекарственного препарата клетками слизистой оболочки может быть усилена или продлена по времени. Более того, если молекула обладает мукоадгезивными свойствами, или если состав содержит мукоадгезивные компоненты, высвобождение и действие лекарственного вещества в месте нанесения может быть сильнее и продолжаться дольше. Кроме того, важно, чтобы композиция оставалась в месте введения так долго, как это желательно.
Мукоадгезивный агент может представлять собой производное целлюлозы, выбранное из гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMC), метилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы (HEC), гидроксипропилцеллюлозы (HPC), этил гидроксиэтилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, включающей натрий карбоксиметилцеллюлозу, микрокристаллической целлюлозы, а также их смесей.
Конкретными производными целлюлозы являются:
Гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMC):
Metolose-60-SH-15, Metolose-60-SH-50, Metolose-60-SH-10000, Metolose-65-SH-50, Metolose-65-SH-400, Metolose-65-SH-1500, Metolose-90-SH-400, Metolose-90-SH-4000, Metolose-90-SH-15000, Metolose-90-SH-100000, Pharmacoat 606, Shin-Etsu, Tokyo, Japan; однако, как показано ниже, предпочтительной является HPMC с вязкостью в диапазоне от 10 до 20 сП.
Метилцеллюлозы (MC):
Metolose SM-4 (MC1), Metolose SM-15 (MC2), Metolose SM-100 (MC3), Metolose SM-400 (MC4), Metolose SM-1500 (MC5), Metolose SM-4000 (MC6), Shin-Etsu; причем предпочтительными являются первые три марки метилцеллюлозы из перечисленных.
Натрий кросскармелоза (CMC):
CMC низкой вязкости (CMC1), CMC средней вязкости (CMC2), CMC высокой вязкости (CMC3), Sigma-Aldrich, St.Louis, USA.
Гидроксиэтилцеллюлоза (HEC):
Natrosol 250 HX, Hercules, Wilmington, USA.
Мукоадгезивный агент может представлять собой:
производное крахмала, включая крахмал с умеренной степенью поперечного сшивания;
акриловый полимер;
карбомер и его производные (Polycarbophyl, Carbopol и т.д.);
хитозан (поли-(D-глюкозамин);
природный полимер, в т.ч. желатин, альгинат натрия, пектин, склероглюкан, трагакант, геллан, ксантановую камедь или гуаровую камедь;
сополимер (метилвиниловый эфир/малеиновый ангидрид), и
их смеси, а также смеси перечисленных веществ с одним или несколькими из упомянутых выше производных целлюлозы.
Как видно из примеров настоящей заявки, удовлетворительные результаты достигаются, если мукоадгезивный агент представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу.
Гидроксипропилметилцеллюлоза (HPMC), которую также именуют гипромеллозой (USP) или hypromellosum (Ph.Eur.). Химическое наименование этого продукта 2-гидроксипропил метиловый эфир целлюлозы (CAS 9004-65-3). В зависимости от модели замещения, HPMC подразделяют также на несколько различных типов:
Тип
Содержание метоксигрупп JP 2001
Содержание метоксигрупп USP 25
Содержание гидрокси-пропоксигрупп JP 2001
Содержание гидрокси-пропоксигрупп USP 25
Тип 1828
16,5-20,0%
23,0-32,0%
Тип 2208
19,0-24,0%
19,0-24,0%
4,0-12,0%
4,0-12,0%
Тип 2906
27,0-30,0%
27,0-30,0%
4,0-7,5%
4,0-7,5%
Тип 2910
28,0-30,0%
28,0-30,0%
7,0-12,0%
7,0-12,0%
Кроме того, в рамках индивидуальных типов доступны продукты с различными типами вязкости (см., например, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th Edition, PhP Press, 2003). Так, например, тип 2910 доступен в виде сортов, имеющих вязкости в диапазоне от 3 до 15 сП (можно приобрести, например, у ShinEtsu, Japan), более конкретно, следующие значения вязкости: 3, 4, 5, 6 и 15 сП. В данном случае, вязкость представляет собой кажущуюся вязкость. Дополнительные сведения относительно измерения вязкости HPMC приведены в Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th Edition, PhP Press, 2003, т.е. измерения 2% масса/объем водного раствора при 20°C.
Интересный результат, описанный в примерах настоящей заявки, достигается при применении HPMC типа 2910 с вязкостью 15 cP. Специалист в данной области техники, исходя из приведенных в заявке примеров, способен внести изменения, необходимые для применения других комбинаций мукоадгезивных агентов, а именно HPMC и олигомерной молочной кислоты, с учетом приведенных в заявке результатов.
Так, например, композиция по настоящему изобретению может содержать HPMC в качестве мукоадгезивного агента, где вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы составляет от примерно 10 до примерно 20 сП.
Концентрация мукоадгезивного агента в композиции может находиться в диапазоне от 10 до 65 масс.%, от 20 до 60 масс.%, от 30 до 50 масс.% или от 35 до 45 масс.%. В особенно интересных примерах, концентрация мукоадгезивного агента в композиции составляет 39-42 масс.% (пример 9).
Если применяется гидроксипропилметилцеллюлоза, ее содержание, обычно, находится в диапазоне от 5 до 65 масс.%, от 20 до 60 масс.%, от 30 до 50 масс.% или от 35 до 45 масс.%.
Как продемонстрировано в примерах настоящей заявки, при применении композиции по настоящему изобретению в клинических исследованиях достигался достаточный эффект снижения pH. Кроме того, композиция оставалась в месте введения (не выпадала или не вытекала). Кроме того, эти клинические исследования подтвердили, что эффективное лечение женщин, страдающих BV, композицией по настоящему изобретению достигалось только после одного курса лечения, т.е. только одного введения. В некоторых случаях, введение могло осуществляться один или два раза в неделю, как правило, только один раз. В некоторых случаях, если ожидается рецидив, рекомендуется повторять лечение ежемесячно.
Композиция по настоящему изобретению может также содержать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты можно выбрать из группы, состоящей из носителей, разбавителей, связующих веществ, дезинтегрирующих агентов, агентов для улучшения текучести, pH- регулирующих агентов, стабилизаторов, агентов для регулирования вязкости, консервантов, агентов, способствующих гелеобразованию или набуханию, ПАВ, эмульгирующих агентов, суспендирующих агентов, основ суппозиториев, вагинальных свечей или пессариев, основ кремов, мазей, гелей, лосьонов, шампуней, пен, спреев и т.п. Конкретный выбор фармацевтически приемлемых эксципиентов зависит от конкретной формы состава, например, дозированной лекарственной формы. Специалист в данной области техники может обнаружить соответствующие указания, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences (Gennaro, Alfonso R., ed., 18.ed., 1990, xvi, Mack, ISBN: 0-912734-04-3).
Конечный состав может также включать одну или несколько фармацевтически приемлемых солей, например, лактат, фосфат, сукцинат, лизинат, ацетат, ципионат, валерат, гемисукцинат, бутират или соль трометамола, индивидуально или в комбинации. Количество олигомерной молочной кислоты, включенной в каждую дозу препарата, может находиться в пределах от 0,01 мг до 50 г на единицу дозированной формы, но, преимущественно, от 0,5 мг до 5 г. Как видно из примеров настоящей заявки, подходящая доза составляет от примерно 250 мг до примерно 1 г, например, 600 мг. Вся эта доза обычно содержится в композиции. Композиция по настоящему изобретению может восстанавливать нормальное физиологическое значение pH во влагалище, хотя, как обсуждалось выше, важно именно само понижение pH, причем необязательно, чтобы композиция эффективно восстанавливала нормальное физиологическое значение pH. Понижение pH сократит количество анаэробных бактерий, которые вызывают характерный для вагиноза неприятный запах за счет продуцирования триметиламина.
Композиция по настоящему изобретению включает как минимум 5 масс.% олигомерной молочной кислоты. Как видно из приведенных примеров, содержание олигомерной молочной кислоты, как правило, находится в диапазоне от 20 до 80 масс.%, в том числе от 20 до 50 масс.%. В некоторых примерах, концентрация в конечной композиции составляет от 30 до 45 масс.%. В примере, представляющем особый интерес, концентрация олигомерной молочной кислоты в композиции составляет 35-36 масс.% (Пример 9).
Количество олигомерной молочной кислоты в композиции по настоящему изобретению соответствует примерно 200-2000 мг молочной кислоты, в том числе от 500 до 1000 мг молочной кислоты. В примере, представляющем особый интерес, количество олигомерной молочной кислоты соответствует 700 мг молочной кислоты (Пример 9).
В одном из вариантов осуществления, один или несколько олигомеров молочной кислоты высвобождают молочную кислоту в течение периода времени, равного, как минимум, 8 часам, как минимум 12 часам, например, как минимум 16 часам, как минимум, 20 часам, как минимум 24 часам, как минимум 36 часам, как минимум 2 дням, как минимум 3 дням, как минимум 4 дням, как минимум 5 дням, как минимум 6 дням, как минимум 7 дням, при действии воды при комнатной температуре.
В тех случаях, когда композиция предназначена для гинекологического применения, эта композиция рассчитана на вагинальное введение, включая интравагинальное или трансвагинальное введение.
Композиция может иметь твердую, полутвердую или жидкую форму, в зависимости от предполагаемого применения.
Конкретную форму следует выбирать в зависимости от конкретного пути введения. Так, например, для перорального введения (в желудочно-кишечный тракт), предпочтительны полутвердые или твердые композиции, например, твердые дозированные формы (такие как таблетки, капсулы, саше), порошки, гранулы, шарики, драже и т.д. Для местного введения или нанесения на полость рта могут подходить кремы, мази, лосьоны, порошки, пластыри, зубные пасты, полоскания для рта и т.д. Специалист в данной области техники может обнаружить необходимые указания по приготовлению таких лекарственных форм и по выбору подходящих фармацевтически приемлемых эксципиентов, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences.
В конкретном аспекте настоящего изобретения, композиция предназначена для введения во влагалище. В этом случае подходят следующие дозированные формы: тампоны, вагинальные свечи, вагинальные аэрозоли, вагинальные колпачки, вагинальные гели, вагинальные вкладыши, вагинальные пластыри, вагинальные кольца, вагинальные губки, вагинальные суппозитории, вагинальные кремы, вагинальные эмульсии, вагинальные пены, вагинальные лосьоны, вагинальные мази, вагинальные порошки, вагинальные шампуни, вагинальные растворы, вагинальные спреи, вагинальные суспензии, вагинальные таблетки, вагинальные палочки, вагинальные диски, вагинальные устройства, полупроницаемые упаковки и любые комбинации перечисленных форм. Как видно из примеров настоящей заявки подходящая композиция имеет форму вагинальной таблетки.
Вагинальные таблетки по настоящему изобретению могут включать буферные или pH-регулирующие агенты, наполнители, связующие вещества, средства, способствующие лиофилизации, или другие фармацевтически приемлемые эксципиенты, традиционно применяемые для получения таблеток и/или для тех или иных стадий производства, в т.ч. стадии лиофилизации.
Подходящие буферные или pH-регулирующие агенты могут являться фармацевтически приемлемыми буферными агентами, подходящими для регулирования pH в диапазоне от примерно 3 до примерно 5.
Подходящие агенты включают лактаты (например, лактат натрия), ацетаты, цитраты, малонаты, фосфаты, винную кислоту, малеаты и т.д. Как видно из примеров настоящей заявки, лактаты предпочтительны в качестве буферных или pH-регулирующих агентов; в этом случае, агент идентичен мономерам олигомерной молочной кислоты и это дает преимущество в том отношении, что буферная пара представляет собой комбинацию молочная кислота/олигомерная молочная кислота/лактат.
Буферный или pH-регулирующий агент обеспечивает значение pH ниже примерно 5, например, ниже 4, для достижения более быстрого восстановления кислотной среды, с целью оптимизации реакции на терапию и восстановления роста молочнокислых бактерий. Если композиция введена пациенту, эффект снижения pH под действием буфера зависит от значения pH в месте применения.
Как следует из примеров настоящей заявки, подходящим эксципиентом является лактоза. Лактоза представляет собой наполнитель или средство, способствующее лиофилизации, но настоящее изобретение не ограничено применением лактозы, поскольку специалисты в данной области техники должны знать, как заменить лактозу другими эксципиентами. Другими подходящими эксципиентами являются, например, мальтоза и трегалоза. Концентрация лактозы или эквивалентного вещества обычно находится в диапазоне от 5 до 35 масс.%. В частности, в композиции по настоящему изобретению концентрация находится в диапазоне от 5 до 20 масс.%, или от 5 до 15 масс.%. Как видно из примера 9 настоящей заявки, концентрация составляет примерно 9-10 масс.%. Для применения в контексте настоящего изобретения также могут подходить и другие дисахариды, как, например, сахароза, лактулоза, целлобиоза и т.д. В композиции по настоящему изобретению дисахарид, как правило, способствует получению подходящей структуры композиции.
Олигомерную молочную кислоту можно включить в устройство, например, систему доставки лекарственного средства с регулируемым высвобождением.
Композиция по настоящему изобретению может включать гликоген или его предшественника или производное, например, чтобы эти компоненты служили источником питательной среды для молочнокислых бактерий.
Композиция по настоящему изобретению может включать пробиотики в форме живых микроорганизмов, например, Lactobacillus acidophilus (ацидофильных лактобактерий) или аналогичных видов, которые при введении в подходящих количествах улучшают состояние здоровья организма-хозяина, приводя к восстановлению доминирующего положения молочнокислых бактерий в микрофлоре влагалища.
Фармацевтически приемлемый эксципиент может представлять собой липофильный или гидрофильный носитель. Примерами липофильных носителей являются воски, масла, изопропил миристат, твердые триглицериды и масло какао. Примерами гидрофильных носителей являются глицерин, пропиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль.
Средства, препятствующие адгезии патогенов
Композиции по настоящему изобретению могут дополнительно включать одно или несколько средств, препятствующих адгезии патогенов. Молочнокислые бактерии, которые придают благоприятные кислотные свойства вагинальной среде, не прикрепляются к слизистой оболочке влагалища. В то же время, патогенные грибки прикрепляются к слизистой оболочке, и патогенные бактерии могут вступать в контакт со слизистой оболочкой и разрушать защитный слой нормальной здоровой слизистой оболочки влагалища. Это может повышать риск рецидива вагиноза у восприимчивых пациентов. Поэтому состав, который включает одно или несколько соединений, препятствующих адгезии патогенов к слизистой оболочке, может оказаться полезным для профилактики, предупреждения и лечения бактериального вагиноза. Состав по настоящему изобретению может включать один или несколько наполнителей, которые препятствуют мукоадгезии патогенных микроорганизмов, преимущественно, анаэробных бактерий и грибков. Антиадгезионные средства могут либо создавать барьер, препятствующий адгезии, либо вызывать отделение уже прикрепившихся микроорганизмов. Примерами антиадгезионных средств, вызывающих отделение микроорганизмов, могут служить манноза, лактоза, ксилит и другие сахарные спирты.
Средства, препятствующие адгезии патогенов, могут быть выбраны из группы, состоящей из маннозы, лактозы, ксилита и других сахарных спиртов. Как указано в заявке, лактоза может также служить и другим целям, но если она присутствует только в качестве антиадгезионного средства, ее концентрация может находиться в том же диапазоне, как и у других средств, препятствующих адгезии патогенов, а именно в диапазоне от 0,01 до 20 масс.% от массы конечной композиции.
Антимикробные свойства
Микробиологические исследования, проведенные на протяжении менструального цикла, показали, что концентрация микроорганизмов, не являющихся LB, повышается во время менструации. Таким образом, в это время существует потенциал избыточного размножения бактерий, поскольку имеет место неустойчивость вагинальной микрофлоры.
Смысл добавления или включения антибактериальных компонентов в композицию по настоящему изобретению, заключается в том, что патогенные бактерии продуцируют гидролитические ферменты, которые разрушают защитный слой слизистой оболочки влагалища. Это приводит к повреждению нормального защитного слоя слизистой оболочки влагалища патогенами.
2
2
2
2
2
2
2
2
Композиция по настоящему изобретению может также включать один или несколько антимикробных агентов, например, антибиотиков, таких как клиндамицин или метронидазол, эссенциальных масел, таких как масло чайного дерева, катионов или элементов, таких как Hg, Cu, Pb или Ag, полиеновых противогрибковых средств, имидазол, триазол, аллиламины, эхинокандин, ацикловир, амантадин, спирты, четвертичные аммониевые соединения, борную кислоту, хлоргексидина глюконат, пероксид водорода, гидропероксид мочевины, йод, меркурохром, октенина дигидрохлорид, фенольные соединения (карболовую кислоту), хлорид натрия, гипохлорит натрия, ноноксинол, а также комбинации и/или смеси этих агентов. Окислители, например, HO будут создавать неблагоприятную среду для патогенных анаэробных бактерий, характерных для бактериального вагиноза. Кроме того, некоторые окислители, например, HO могут также усиливать антибактериальное действие на патогены. Действие, например, HO на молочнокислые бактерии, которые сами продуцируют HO, является не столь неблагоприятным.
Антимикробные агенты могут применяться в подходящих концентрациях, которые определяет специалист в данной области техники. Концентрация антимикробного агента может составлять более 0,01 масс.процента, например, находиться в диапазоне от 0,01 до 50 масс. процентов, в т.ч. от 0,01 до 25 масс. процентов, от 0,05 до 25 масс. процентов, от 0,1 до 10 масс. процентов, от 0,5 до 5 масс. процентов от массы композиции.
Композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать антибактериальный агент, выбранный из группы, состоящей из клиндамицина, тетрациклина, амоксициллина, ампициллина, эритромицина, доксициклина, ломефлоксацина, норфлоксацина, афлоксама, ципрофлаксина, азитромицина, цефалексина и хлорхинальдола.
Композиция по настоящему изобретению может включать один или несколько антибактериальных агентов для профилактики и/или лечения гинекологических инфекций, которые определены в настоящей заявке.
Этот антибактериальный агент может быть выбран из группы, состоящей из клиндамицина, тетрациклина, амоксициллина, ампициллина, эритромицина, доксициклина, ломефлоксацина, норфлоксацина, афлоксама, ципрофлаксина, азитромицина и цефалексина.
Количество антибактериального агента может находиться в диапазоне от 5 мг до 1000 мг на дозу.
Антибактериальный агент можно также выбрать из группы, состоящей из тетрациклина, доксициклина, азитромицина или эритромицина или одного или нескольких антибиотических агентов широкого спектра действия.
Антибиотический агент широкого спектра действия для профилактики и/или лечения гонореи или хламидийных инфекций может быть выбран из группы, состоящей из клиндамицина, тетрациклина, амоксициллина, ампициллина, эритромицина, доксициклина, ломефлоксацина, норфлоксацина, афлоксама, ципрофлаксина, азитромицина и цефалексина. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения, количество антибиотика широкого спектра действия находится в диапазоне от 100 мг до 3000 мг на дозу.
Антибиотик широкого спектра действия для профилактики и/или лечения гонореи может быть выбран из группы, состоящей из тетрациклина, амоксициллина, ампициллина, ломефлоксацина, норфлоксацина, афлоксама, ципрофлаксина, азитромицина или цефалексина. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения, количество антибиотика широкого спектра действия находится в диапазоне от 400 мг до 3000 мг на дозу, или антибиотик широкого спектра действия для лечения хламидийных инфекций может быть выбран из группы, состоящей из тетрациклина, доксициклина и эритромицина. В следующем варианте осуществления, количество антибиотика широкого спектра действия находится в диапазоне от 100 мг до 2000 мг на дозу. В еще одном варианте осуществления, состав имеет форму тампона.
Композиция по настоящему изобретению может также включать средство против хламидий, выбранное из группы, состоящей из тетрациклина, доксициклина и эритромицина.
Композиция по настоящему изобретению может, кроме того, включать противогрибковый агент, выбранный из группы, состоящей из миконазола, терконазола, изоконазола, фентиконазола, флуконазола, нистатина, кетоконазола, клотримазола, бутоконазола, эконазола, тиоконазола, итраконазола, 5-фторурацила и метронидазола. В другом варианте осуществления, для лечения кандидоза количество противогрибкового агента на дозу находится в диапазоне от 0,1 мг до 2000 мг. В еще одном варианте осуществления, один или несколько противогрибковых агентов выбраны из группы, состоящей из кетоконазола, миконазола и метронидазола и, необязательно, этот агент помещен в тампон.
Композиция может также содержать спермицидный агент.
Композиции по настоящему изобретению могут также содержать фармацевтически приемлемые эксципиенты, выбранные в зависимости от конкретного пути введения и дозированной формы. Специалист в данной области техники, следуя указаниям соответствующих фармацевтических руководств, будет способен выбрать такие эксципиенты.
Конкретные композиции
Ниже приведены конкретные составы композиций по настоящему изобретению:
от 20 до 80 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 2 до 35 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 20 до 60 масс.% мукоадгезивного агента,
от 20 до 80 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 2 до 20 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 20 до 60 масс.% мукоадгезивного агента,
от 20 до 70 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 5 до 15 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 20 до 50 масс.% мукоадгезивного агента,
от 30 до 70 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 5 до 15 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 30 до 50 масс.% мукоадгезивного агента,
от 20 до 60 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 5 до 15 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 20 до 50 масс.% мукоадгезивного агента,
от 30 до 60 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 5 до 15 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 30 до 50 масс.% мукоадгезивного агента,
от 30 до 50 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 7 до 12 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 35 до 50 масс.% мукоадгезивного агента,
от 30 до 40 масс.% олигомерной молочной кислоты,
от 7 до 12 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
от 35 до 45 масс.% мукоадгезивного агента,
примерно 35-36 масс.% олигомерной молочной кислоты,
примерно 9-10 масс.% лиофилизирующего агента/наполнителя,
примерно 35-45 масс.% мукоадгезивного агента.
Олигомерная молочная кислота соответствует описанию, приведенному в настоящей заявке.
Лиофилизирующий агент/наполнитель может представлять собой лактозу. Мукоадгезивный агент может представлять собой HPMC, в т.ч. HPMC 15cP. Упомянутые выше композиции могут содержать один или несколько pH-регулирующих или буферных агентов. Если они присутствуют в композиции, их концентрация обычно составляет от примерно 2 до примерно 20 масс.%, от примерно 5 до примерно 20 масс.% или от примерно 10 до примерно 15 масс.%.
Кроме того, упомянутые выше композиции могут содержать такой буфер, как лактат натрия в концентрации от 5 до 20 масс.%, в т.ч. от 10 до 20 масс.%, как, например, 14-15 масс.%.
Более конкретные примеры композиций приведены в разделе примеров настоящей заявки.
Олигомеры молочной кислоты
Настоящее изобретение относится к определенным олигомерам молочной кислоты, которые, насколько известно авторам настоящего изобретения, являются новыми соединениями.
Более конкретно, изобретение также относится к:
олигомерной молочной кислоте следующей формулы:
,
3
где n является целым числом от 2 до 20, от 2 до 19 или от 2 до 18, и где содержание олигомерной молочной кислоты, представляющей собой тример, т.е. HL, для которого n=2, составляет от примерно 10 до примерно 20 масс.% общей массы олигомерной молочной кислоты. Кроме того, среднечисловая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 200 до примерно 500, степень полимеризации pDn должна быть не более 4,1, и распределение молекулярных масс не должно быть слишком узким, т.е. олигомерная кислота по настоящему изобретению содержит спектр олигомеров с n в диапазоне от 1 до 13. Коэффициент полидисперсности должен составлять 1,45 или более.
В частности, среднечисловая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 200 до примерно 240, среднемассовая молекулярная масса должна находиться в диапазоне от примерно 290 до примерно 500, коэффициент полидисперсности должен находиться в диапазоне от 1,45 до 2,5, и степень полимеризации должна составлять от 2,5 до 3,8.
Среднечисловая молекулярная масса может также находиться в диапазоне от примерно 255 до примерно 425, при этом среднемассовая молекулярная масса находится в диапазоне от примерно 370 до примерно 580, коэффициент полидисперсности находится в диапазоне от 1,45 до 2,5, и степень полимеризации должна составлять от 3 до 4,1.
Ниже описаны конкретные олигомерные молочные кислоты, которые имеют состав, позволяющий удовлетворить любым из приведенных выше критериев.
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению включает:
2
от 10 до 20 масс.% HL (т.е. n=1);
4
от 10 до 20 масс.% HL (т.е. n=3);
5
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=4);
6
от 5 до 15 масс.% HL (т.е. n=5).
10
11
10
11
12
10
11
12
13
10
11
12
13
14
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению может также включать от 1 до 5 масс.% каждой из следующих кислот: HL и HL; HL, HL и HL; HL, HL, HL и HL; HL, HL, HL, HL и HL.
Приведенные ниже более конкретные олигомерные молочные кислоты имеют среднечисловую молекулярную массу в диапазоне от примерно 255 до примерно 425, как указано выше, и соответствуют другим упомянутым условиям.
Олигомерная молочная кислота, именуемая OMLA3 и имеющая следующий состав:
1
от 7 до 10 масс.% HL;
2
от 12 до 15 масс.% HL (т.е. n=1);
3
от 14 до 16 масс.% HL (т.е. n=2);
4
от 11 до 16 масс.% HL (т.е. n=3);
5
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=4);
6
от 7 до 10 масс.% HL (т.е. n=5), и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению, имеющая следующую формулу
и включающая:
1
от 7 до 10 масс.% HL, например, приблизительно 7,5;
2
от 12 до 15 масс.% HL (т.е. n=1), например, приблизительно 14;
3
от 14 до 16 масс.% HL (т.е. n=2), например, приблизительно 15,5;
4
от 11 до 16 масс.% HL (т.е. n=3), например, приблизительно 14;
5
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=4), например, приблизительно 13;
6
от 7 до 10 масс.% HL (т.е. n=5), например, приблизительно 9, и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению, именуемая OMLA6 и имеющая следующий состав:
1
от 3 до 10 масс.% HL;
2
от 7 до 15 масс.% HL (т.е. n=1);
3
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=2);
4
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=3);
5
от 9 до 15 масс.% HL (т.е. n=4);
6
от 7 до 12 масс.% HL (т.е. n=5), и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению, имеющая следующую формулу
и включающая:
1
от 3 до 10 масс.% HL, например, 5,5;
2
от 7 до 15 масс.% HL (т.е. n=1), например 9,5;
3
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=2), например 12;
4
от 10 до 15 масс.% HL (т.е. n=3), например 12;
5
от 9 до 15 масс.% HL (т.е. n=4), например 11;
6
от 7 до 10 масс.% HL (т.е. n=5), например, 9, и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Другая олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению именуется OMLA22, и она имеет следующий состав:
1
от 3 до 10 масс.% HL, например, от 7 до 9%;
2
от 12 до 15 масс.% HL (т.е. n=1), например, от 13 до 14%;
3
от 10 до 20 масс.% HL (т.е. n=2), например, от 15 до 16%;
4
от 10 до 17 масс.% HL (т.е. n=3), например, приблизительно 14%;
5
от 9 до 15 масс.% HL (т.е. n=4), например, приблизительно 12%;
6
от 7 до 12 масс.% HL (т.е. n=5), например, приблизительно 9%, и
7
18
уменьшающиеся массовые процентные доли HL-HL.
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению, имеющая следующую формулу
,
где:
от примерно 5 до примерно 8 масс.% имеет n=0;
от примерно 9 до примерно 14 масс.% имеет n=1;
от примерно 12 до примерно 16 масс.% имеет n=2;
от примерно 12 до примерно 14 масс.% имеет n=3;
от примерно 11 до примерно 13 масс.% имеет n=4;
от примерно 8 до примерно 10 масс.% имеет n=5;
от примерно 6,5 до примерно 8,5 масс.% имеет n=6;
от примерно 5 до примерно 7 масс.% имеет n=7;
от примерно 4 до примерно 6 масс.% имеет n=8;
и до 100 масс.% одного или нескольких олигомеров, имеющих n=9, n=10, n=11, n=12, n=13, n=14, n=15, n=16 и/или n=17.
n
w
Среднечисловые молекулярные массы M этих олигомерных молочных кислот, их среднемассовые молекулярные массы M, коэффициенты полидисперсности и степени полимеризации соответствуют указанным выше по тексту заявки.
Олигомерные молочные кислоты по настоящему изобретению также подробно описаны на фиг. 3 (OMLA 3 и 6) и на фиг.5 (OMLA 22) настоящей заявки, где приведены среднечисловые молекулярные массы и параметры полидисперсности (OMLA 3: Mn=258 и PDn=3,33; OMLA 6: Mn=313 и PDn=4,1; и OMLA 22: Mn=255 и PDn=3,29 или Mn=265 и PDn=3,43).
Олигомерная молочная кислота по настоящему изобретению включает все комбинации оптических изомеров олигомеров молочной кислоты по настоящему изобретению (например, R и S энантиомеров, D- и L-форм), а также рацемические, диастереомерные, мезо и другие смеси таких изомеров.
Кроме того, олигомеры молочной кислоты можно превратить в соответствующие сложные эфиры, амиды, тиоэфиры или соли. Соль олигомера молочной кислоты может представлять собой любую фармацевтически приемлемую соль, например, соль натрия, калия, кальция, магния или аммония, или соль трометамола. Кроме того, олигомеры молочной кислоты могут входить в комплексы с металлами или с макромолекулами.
Олигомерная молочная кислота имеет растворимость в воде при комнатной температуре, как минимум, 1 масс. процент, например, от 0,1 до 50, от 1 до 50 масс. процентов, от 1 до 30 масс. процентов, от 5 до 30 масс. процентов. Растворимость олигомеров молочной в воде зависит от длины цепи олигомера. Кроме того, растворимость может повышаться в разбавленных растворах щелочей.
Способ получения композиций по настоящему изобретению
В настоящем изобретении, кроме того, разработан способ получения композиции по настоящему изобретению, где указанный способ включает:
i) нагревание воды, необязательно смешанной с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, до температуры примерно 80°C,
ii) добавление мукоадгезивного агента небольшими порциями и медленное перемешивание в промежутках между добавлениями,
iii) охлаждение смеси,
iv) добавление олигомерной молочной кислоты с периодической гомогенизацией,
v) заполнение форм материалом, полученным на стадии iv),
vi) замораживание заполненных форм,
vii) лиофилизация замороженного материала, полученного на стадии vi).
Было показано, что в этом способе получения, лиофилизация является подходящей стадии процесса. Однако смесь всех компонентов в воде можно также подвергнуть сублимационной сушке и полученный материал можно спрессовать в таблетки.
Способ получения композиции подробно описан в примерах настоящей заявки. Могут применяться и другие способы получения.
Определения
Термины "олигомерная молочная кислота" и "OMLA" являются синонимами, и они предназначены для обозначения олигомеров молочной кислоты формулы (I), соответствующих определениям, данным в тексте заявки.
Однако, что касается применения олигомеров молочной кислоты, подразумевается, что небольшие изменения структуры олигомеров не оказывают влияния на их способность высвобождать молочную кислоту. Соответственно, имеется в виду, что производные олигомеров, в которых концевая карбоксильная группа и/или гидроксильная группа превращены, например, в сложноэфирную группу, амидогруппу, тио-сложноэфирную группу (для карбоксильной группы) или фрагмент простого эфира (для гидроксильной группы), подходят для применения в настоящем изобретении. Соответственно, производные олигомеров молочной кислоты приведенной ниже формулы (II)
,
1
2
1
1
1
2
3
4
4
1
6
1
6
где n соответствует определениям для формулы (I), которые даны выше по тексту заявки, и R означает H, RRN-, RO- или RS-, и заместители R, R и R являются одинаковыми или различными, и выбраны из H, C-C алкила, в т.ч. метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, трет-бутила, пентила, гексила или арила, включая бензил, и их фармацевтически приемлемые соли, и X представляет собой H или алкил, включая метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, гексил или ацил, -OCR, где R выбран из H, C-C алкила, в т.ч. метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, трет-бутила, пентила, гексила или арила, включая бензил, а также их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что R не является OH, если X представляет собой H, также могут применяться в комбинации с описанными в заявке олигомерами молочной кислоты формулы (I) или вместо них.
Имеется в виду, что термин "антимикробный" означает эффект прекращения или подавления развития микроорганизмов, например, бактерий (таких как стрептококков группы B), грибков, вирусов или паразитов. Подразумевается, что термин "антибактериальный" означает эффект прекращения или подавления развития бактерий. Под термином "противогрибковый" имеется в виду эффект прекращения или подавления развития грибков. Под термином "антивирусный" подразумевается эффект нарушения или подавления способности вирусов к репликации и, следовательно, подавления их способности увеличивать свою численность, воспроизводиться или расти.
w
w
i
i
i
i
i
i
i
i
2
Термин "среднемассовая молекулярная масса" или "M" предназначен для описания молекулярной массы полимера. Среднемассовую молекулярную массу вычисляют по формуле M=Σ(NM)/Σ(NM), где N представляет собой число молекул молекулярной массы M. Говоря наглядно, если среднемассовая молекулярная масса составляет w, и вы выбираете случайный мономер, то полимер, в который он входит, будет в среднем иметь молекулярную массу w. Среднемассовую молекулярную массу можно определить, например, масс-спектроскопией, спектроскопией ЯМР, по рассеянию света, с помощью малоуглового рассеяния нейтронов (SANS), по рассеянию рентгеновских лучей и по скорости осаждения.
n
n
i
i
i
i
i
i
i
Термин "среднечисловая молекулярная масса" или "M" предназначен для определения молекулярной массы полимера. Среднечисловая молекулярная масса представляет собой обыкновенное среднее значение молекулярных масс индивидуальных молекул полимера. Ее можно определить измерением молекулярных масс n полимерных молекул, суммированием этих масс и делением на n, т.е. по формуле: M=Σ(NM)/Σ(N), где N означает число молекул молекулярной массы M. Среднечисловую молекулярную массу полимера можно определить например, масс-спектроскопией, спектроскопией ЯМР, осмометрией с определением давления паров, титрованием концевых групп и по коллигативным свойствам (свойствам растворов, зависящим от концентрации растворенных частиц).
Термин "коэффициент полидисперсности" предназначен для обозначения меры распределения молекулярных масс в образце полимера, и он определяется как отношение среднемассовой молекулярной массы к среднечисловой молекулярной массе полимера.
n
n
n
Термин "степень полимеризации" или PD означает частное от деления среднечисловой молекулярной массы на молекулярную массу мономерного звена. PD=(M-18)/72.
Термины "состав" и "композиция" являются взаимозаменяемыми и означают композиции, включающие одну или несколько олигомерных молочных кислот, смешанных с мукоадгезивным агентом и, необязательно, одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами или такими эксципиентами, которые могут подходить для местного нанесения на кожу или слизистую оболочку. Композиция по настоящему изобретению может иметь любую подходящую форму, в том числе для введения во влагалище, включая вагинальное введение.
Под термином "средство против адгезии" или "антиадгезионный агент" подразумевается любой агент, который способен понизить способность к адгезии гинекологических патогенных микроорганизмов или вирусов и, в частности, агенты, которые будут вызывать отделение таких микроорганизмов или вирусов.
Под термином "адгезивность" или "адгезионная способность" подразумевается эффект, который вызывает или содействует адгезии или "прилипанию" к поверхности, например, поверхности слизистой оболочки. Для адгезии к слизистой оболочке может также применяться термин "мукоадгезивность".
Под термином "композиция для вагинального введения" подразумевается лекарственное средство, которое вводят во влагалище, где происходит высвобождение и абсорбция активных ингредиентов и их действие на слизистую оболочку; может применяться большое количество различных форм, в т.ч. вагинальные тампоны и "пессарии", которые используются как синонимы.
Способ лечения
Композиции и новые олигомерные молочные кислоты по настоящему изобретению могут применяться в лечении заболеваний и состояний, описанных в настоящей заявке.
Так, например, они могут применяться в способе профилактики и/или лечения гинекологических инфекций, где этот способ включает введение субъекту, которому это необходимо, эффективной дозы олигомерной молочной кислоты, определенной в настоящей заявке, необязательно в форме композиции, определенной в настоящей заявке.
Кроме того, в изобретении предложен способ ослабления, профилактики и/или лечения запаха от вагинальных выделений, где указанный способ включает введение субъекту, которому это необходимо, эффективной дозы олигомерной молочной кислоты, определенной в настоящей заявке, необязательно в форме композиции, определенной в настоящей заявке.
Помимо этого, в изобретении предложен способ ослабления, профилактики и/или лечения запаха от вагинальных выделений, где указанный способ включает введение субъекту, которому это необходимо, эффективной дозы олигомерной молочной кислоты, определенной в настоящей заявке, необязательно в форме композиции, определенной в настоящей заявке, и где эта композиция включает гигиеническое устройство.
Описание иллюстративного материала
Фиг. 1 - технологическая схема производственного процесса и контрольные параметры.
Фиг. 2 - схема введения препарата из примера 5.
n
n
Фиг. 3 - распределение олигомеров, средние молекулярные массы M и степени полимеризации PD для партий олигомерных молочных кислот, применяемых в составах по настоящему изобретению (OMLA 3 и 6).
n
n
Фиг. 4 - распределение олигомеров, средние молекулярные массы M и степени полимеризации PD для партий олигомерных молочных кислот, которые не следует применять в составах по настоящему изобретению (OMLA 4, 5 и 7).
n
n
Фиг. 5 - распределение олигомеров, средние молекулярные массы M и степени полимеризации PD для партий олигомерных молочных кислот (OMLA 21 и 22).
Фиг. 6 - общее высвобождение кислоты, вычисленное как количество молочной кислоты (мг), высвободившееся из вагинальных таблеток Laccure и вагинального геля Lactal в 900 мл воды при pH 3,5-5,5.
Фиг. 7 - значения pH в средней части влагалища (MV) и соответствующие значения p.
Фиг. 8 - уменьшение значения pH с высокой статистической достоверностью.
Фиг. 9 - уменьшение вагинального pH по сравнению с визитом 1 (средние значения и 95% доверительный интервал) при введении вагинальных таблеток Laccure один раз в неделю (ow) и два раза в неделю (bw).
Далее по тексту заявки изобретение будет более подробно описано и проиллюстрировано с привлечением нижеследующих примеров, которые были тщательно выбраны, чтобы охватить наиболее важные аспекты изобретения. Соответственно, примеры не следует истолковывать, как ограничивающие изобретение каким-либо образом.
Способы и методики анализа
Внешний вид
Внешний вид вагинальных таблеток, содержащих олигомерную молочную кислоту, оценивали путем визуального осмотра.
Идентификация
Идентичность олигомерной молочной кислоты в вагинальных таблетках подтверждали положительной реакцией на лактаты согласно Ph.Eur.2.3.1.
Анализ для определения олигомерной молочной кислоты
Определение свободных кислот проводили с помощью титрования в неводной среде, а именно метилатом калия в метаноле до pH 8,4.
Определение общего содержания кислот осуществляли титрованием. Добавляли избыток NaOH для гидролиза олигомеров и титровали полученный раствор HCl.
Разность между содержанием свободных кислот и общим содержанием кислот дает информацию об общем количестве молочной кислоты, которая является связанной и, следовательно, недоступна в виде кислоты. Содержание олигомерной молочной кислоты вычисляют на безводной основе, исходя из разности между содержанием свободной кислоты и общим содержанием кислот, и используя в расчете молекулярную массу мономера (остатка молочной кислоты) и количество свободных кислот, а также молекулярную массу молочной кислоты.
Степень полимеризации
Степень полимеризации определяли делением общего содержания кислот на содержание свободной кислоты (оба параметра определяли титрованием, как описано выше).
Однородность массы
Однородность массы определяли в соответствии с Ph.Eur. 2.9.5.
Содержание воды
Содержание воды в составе определяли волюметрическим титрованием по Карлу Фишеру согласно Ph.Eur. 2.5.12. Method A, используя хлороформ в качестве растворителя.
Определение pH
Состав растворяли в 25 мл воды. pH определяли согласно Ph.Eur. 2.2.3.
Растворение
Растворение осуществляли в 900 мл 0,9% NaCl при 37°C, используя устройство с лопастной мешалкой на скорости 100 об/мин (Ph.Eur. 2.9.3. Apparatus 2). Состав (таблетку) снабжали грузом, закрепленным в марле, и помещали в сосуд для растворения вместе с индикаторами pH бромкрезоловым зеленым, метиловым красным и бромтимоловым синим. Через фиксированные интервалы времени добавляли 0,5 М NaOH, чтобы повысить pH до 5,0-5,5. Растворение продолжали в течение 48 ч, и результат определяли как частное от деления количества добавленного основания на теоретическое количество, необходимое для гидролиза одной таблетки.
Микробиологические тесты
Тесты на общее количество аэробных микроорганизмов (Total Aerobic Microbial Count, TAMC) и общее совокупное количество плесневого/дрожжевого грибка (Total Combined Yeasts/Moulds Count, TYMC) осуществляли согласно Ph.Eur.2.6.12 curr.ed. и тесты на Pseudomonas Aeruginose, Staphylococcus Aureus и Candidia albicans проводили согласно Ph.Eur.2.6.13 curr.ed.
Определение олигомерной молочной кислоты - содержание свободной кислоты
Данная методика описывает определение свободной кислоты в олигомере L-молочной кислоты с помощью титрования метилатом калия в неводной среде.
Оборудование
Прибор для титрования
Metrohm 716 DMS Titrino.
Электрод
Solvotrode Metrohm 6.0229.100. Комбинированный LL pH стеклянный электрод, эталонный электролит LiCl в этаноле.
Весы
Подходящие весы с точностью более 0,001 г.
Может применяться эквивалентное оборудование.
Определение результатов
Вычисление содержания свободной кислоты.
Содержание свободной кислоты вычисляют по приведенному ниже уравнению:
FA=(V×C)/m (моль/г),
где
FA=содержание свободных кислот (моль/г),
V=объем метилата калия, необходимого для достижения pH 8,4 (мл),
C=концентрация метилата калия (моль/л),
m=масса образца (мг).
Определение олигомерной молочной кислоты - общее количество кислоты
Приведенная ниже методика описывает определение общего количества молочной кислоты в олигомере L-молочной кислоты. Добавляют избыток NaOH для омыления олигомеров, и затем раствор потенциометрически титруют HCl.
Оборудование
Прибор для титрования
Metrohm 716 DMS Titrino.
Электрод
Metrohm 6.0234.110. Комбинированный LL микро pH стеклянный электрод.
Весы
Подходящие весы с точностью более 0,001 г.
Нагревательная плитка.
Может применяться эквивалентное оборудование.
Расчеты
Вычисление общего содержания кислоты (моль/г).
Общее содержание кислоты в моль/г вычисляют по следующей формуле:
NaOH
NaOH
EP1
HCl
TA=(V×C-V×C)/m (моль/г),
где
NaOH
V=Общий объем раствора NaOH, добавленного к образцу (мл).
NaOH
C=Концентрация NaOH (моль/л).
EP1
V=Общий объем раствора HCl, использованного для титрования (мл).
HCl
C=концентрация HCl (моль/л).
m=масса образца (мг).
Вычисление результата анализа, т.е. общего содержания олигомеров молочной кислоты в препарате, без учета содержания воды (масс.%)
Результат анализа, т.е. общее содержание безводных олигомеров молочной кислоты, вычисляют по следующему уравнению:
Lactate
Lacticacid
H2O
Результат анализа=(((TA-FA)×Mw)+(FA×Mw))×(100/(100-C)) (масс.%),
где
Lactate
Mw=молекулярная масса лактата, т.е. 72,06 (г/моль),
Lacticacid
Mw=молекулярная масса молочной кислоты, т.е. 90,08 (г/моль),
TA=общее содержание кислоты согласно 7,1 (моль/г),
FA=свободная кислота (моль/г),
H2O
C=содержание воды (масс.%).
Вычисление средней длины цепи
Среднюю длину цепи (или степень полимеризации) вычисляют согласно следующему уравнению:
PD=TA/FA,
где
PD=степень полимеризации,
FA=содержание свободной кислоты согласно методике M186 (моль/г),
TA=общее содержание кислоты (моль/г), которое определено выше.
Вычисление средней молекулярной массы олигомера L-молочной кислоты.
Среднюю молекулярную массу олигомера L-молочной кислоты вычисляли по следующему уравнению:
Lactate
H2O,
Mw=(PD×MW)+MW
где
Mw=средняя молекулярная масса олигомера L-молочной кислоты (г/моль),
PD=степень полимеризации, согласно приведенному выше расчету,
Lactate
MW=молекулярная масса лактата, т.е. 72,06 (г/моль),
H2O
MW=молекулярная масса воды, т.е. 18,02 (г/моль).
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Композиция, содержащая олигомерную молочную кислоту
Получали вагинальные таблетки, имеющие следующий состав:
Наименование ингредиента
Количество (мг/единицу)
Функция
Стандарт
Олигомерная молочная кислота
700*
pH-регулирующий агент, действующий ингредиент
Местный стандарт
Натрия-(S)-лактат
240
Буферный агент
Ph.Eur.
Лактоза
160
Содействует лиофилизации
Ph.Eur.
Гипромеллоза
680
Загущающий агент и мукоадгезивное средство
Ph.Eur.
Целевая масса
Примерно 1680**
* Количество, в пересчете на молочную кислоту. Реальное количество олигомерной молочной кислоты зависит от степени полимеризации олигомерной молочной кислоты.
** Целевая масса, вычисленная для степени полимеризации 3,5 для использованной олигомерной молочной кислоты.
Олигомерная молочная кислота
Олигомерная молочная кислота применяется в данном медицинском препарате для понижения pH после введения. При контакте с водой олигомерная молочная кислота подвергается медленному гидролизу до действующего вещества, т.е. молочной кислоты. Олигомерную молочную кислоту получали в основном, как описано в WO 2008/119518, но в условиях и с применением способа очистки, которые способствовали достижению более высокой полидисперсности конечного продукта, причем степень полимеризации должна составлять от примерно 3,0 до примерно 4,1 по данным титрования, которое было описано выше по тексту.
Натрия-(S)-лактат
Натрия-(S)-лактат применялся в качестве буферного агента, который не дает стать составу слишком кислым при действии воды после введения. Натрия-(S)-лактат добавляли в состав в виде 50% водного раствора. Поставщиком раствора натрий-(S)-лактата являлась компания Merck Chemicals.
Моногидрат лактозы
Лактозу применяли в качестве средства, содействующего лиофилизации, а также для придания составу твердости и лучшей текстуры. Поставщиком моногидрата лактозы являлась компания DMV-Fonterra.
Гипромеллоза
Гипромеллозу применяли в качестве загущающего агента и в качестве мукоадгезивного средства. Она образует гель совместно с олигомером молочной кислоты, когда таблетка подвергается гидратации после введения. Применялась гипромеллоза марки Pharmacoat 615, поставщиком которой являлась компания Shin-Etsu Chemical Co., Japan. Гипромеллозой именуется гидроксипропилметилцеллюлоза.
Изготовление вагинальной таблетки
Далее описан способ, который подходит для получения гелевого состава, обладающего высокой вязкостью, заполнения подходящих форм этим гелем и лиофилизации изготовленного материала. Более подробное описание приведено в примере 2.
Состав содержит относительно большое количество гипромеллозы, что в сочетании с относительно высоким содержанием олигомерной молочной кислоты делает гель высококонцентрированным и вязким. Чтобы появилась возможность растворить значительное количество гипромеллозы, ее добавляли в водный раствор, содержащий лактозу и лактат натрия при повышенной температуре, где гипромеллоза не растворялась. При охлаждении гипромеллоза начинала набухать и растворяться, придавая раствору все большую вязкость. Добавляли олигомерную молочную кислоту и продолжали охлаждение до комнатной температуры с периодической гомогенизацией для получения однородного продукта. Процесс охлаждения проводили в вакууме, чтобы избежать попадания воздуха в гель.
Полученным гелем заполняли предварительно сформированные пластмассовые ячейки овальной формы и замораживали с помощью сухого льда. Затем пластмассовые оболочки удаляли до начала лиофилизации, чтобы получить большую площадь, на которой происходит сублимация при проведении лиофильной сушки.
Когда заканчивалась первая стадия сушки в замороженном состоянии (лиофилизации), вторую стадию сушки проводили при комнатной температуре в течение как минимум 24 часов, для уменьшения содержания влаги в конечном продукте перед окончательной упаковкой.
Упаковка
Таблетку помещали в алюминиевый пакетик, имеющий внешние размеры 15×15 см, поставщиком которого являлась компания Oliver-Tolas Healthcare Packaging, и запаивали пакетик термическим способом.
Пример 2
Получение состава олигомерной молочной кислоты в форме таблетки
Ингредиенты состава для получения вагинальных таблеток на основе олигомерной молочной кислоты
Ингредиенты
Количество (г)
Олигомерная молочная кислота Purasorb OL
1400*
Натрия-(S)-лактат 50% раствор
320
Лактоза
1360
Гипромеллоза Pharmacoat 615
960
Очищенная вода
до 8000
Целевая масса
8000
* В пересчете на молочную кислоту. Реальное количество олигомерной молочной кислоты вычисляли исходя из степени полимеризации сырья.
Описание производственного процесса
Технологическая схема производственного процесса приведена на фиг.1.
Пример 3
Определение характеристик вагинальных таблеток, содержащих олигомерную молочную кислоту
Растворение
Таблетки, изготовленные, как описано в примерах 1 и 2, подвергали тесту на растворение, который описан выше по тексту заявки.
Высвобождение олигомера молочной кислоты и молочной кислоты измеряли титрованием, как описано выше по тексту заявки. Процентная доля растворенного вещества представляет собой сумму содержания высвободившихся олигомеров и молочной кислоты, образовавшейся из высвободившихся олигомеров.
В результате теста были получены следующие результаты:
Начало теста в момент времени t=0.
В момент времени t=6 часов высвободилось 20%±10%.
В момент времени t=24 часа высвободилось 35%±10%, т.е. суммарное высвобождение 55%.
В момент времени t=48 часов высвободилось как минимум 30%, т.е. суммарное высвобождение 85%.
Пример 4
Стабильность композиции, содержащей олигомерную молочную кислоту
Техническое исследование стабильности состава осуществляли для получения вспомогательных данных о медицинском продукте. Исследование стабильности представляло собой 6-месячное исследование с возможностью продления срока исследования до 36 месяцев.
Сводку результатов исследования стабильности можно видеть в таблице 1 и таблице 2.
Таблица 1Условия хранения и моменты времени исследования вагинальных таблеток в алюминиевых пакетах, содержащих олигомерную молочную кислоту, в тесте на стабильность
Условия хранения
Отбор образцов (месяцы)
0
3
6
9
12
18
24
30
36
25°C/60% отн.влажн.
x,y, z,w*
x,y,w
x,y,w
x,y,w
x,y, z,w
x,y,w
x,y, z,w
(x,y,w)
(x,y, z,w)
40°C/75% отн.влажн.
x,y,w
x,y,w
Тесты в скобках являются необязательными.
* При исследовании стабильности для каждого варианта условий хранения следили за изменениями массы состава в трех пакетах (одни и те же пакеты во всех измерениях).
Таблица 2Тестируемые параметры и методики тестирования при исследовании стабильности TS-1009-09
Сокращенное обозначение в таблице 1
Тестируемый параметр
Методика тестирования
Внешний вид
Визуальный осмотр
Содержание олигомерной молочной к-ты (мг/таблетку)
Титрование
x
Степень полимеризации
Содержание воды
Титрование
Изменение массы
Взвешивание. Следили за массой 3 одних и тех же пакетов в ходе исследования стабильности
y
Растворение
Титрование
Результаты
В исследовании стабильности изучали стабильность вагинальных таблеток, содержащих олигомерную молочную кислоту, которые использовались в клинических испытаниях. В настоящей заявке приведены и оценены данные первых 24 месяцев исследований. Состав оказался стабильным и не проявил признаков разрушения в течение исследованного периода до 24 месяцев при 25°C/отн.влажн. 60% и 6 месяцев при 40°C/отн.влажн. 75%. Исходя из этих данных, предполагаемый срок хранения продукта составляет 36 месяцев в случае хранения при температуре не выше 25°C.
Таблица 3Результаты для таблеток, которые хранились при 25°C/отн.влажн.60%
Свойства
Методика анализа
Лимиты (для срока хранения)
Единицы
Время (месяцы)
0
3
6
9
12
18
24
Дата анализа
N/A
N/A
N/A
17.11.2010
22.02.2011
18.05.2011
29.08.2011
22.11.2011
21.05.2012
29.11.2012
Внешний вид
Визуальный осмотр
белые - не совсем белые яйцевидные таблетки
N/A
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
белые яйцевидные таблетки
Анализы
M189,M190
630-770
мг мол. к-ты/табл.
730
723
717
728
725
715
726
Для информации
мг.OMLA/табл.
627
619
615
624
622
611
618
Степень полимеризации
3,0-5,0
N/A
3,4
3,6
3,5
3,5
3,5
3,7
3,9
Средняя молек. масса
Для информации
г/моль
264
274
271
271
267
281
302
Содерж. воды
М188
≤3,0
%
0,3
0,3
0,6
0,3
0,3
0,4
0,4
pH
M192
3,0-4,0
N/A
3,5
3,5
3,5
3,5
3,5
3,5
3,5
Изм. массы
М116 изм.
Для информации
%
0
-0,80
+0,18
+0,19
+0,12
+0,24
+0,14
Масса 3 Al пакетов с 1 табл. в каждом
N/A
г
21,4640
21,4212
21,4734
21,4741
21,4706
21,4767
21,4715
Масса 3 пустых Al пакетов
N/A
г
16,1408
Микробиологические характеристики
TAMC
Ph.Eur. 2.6.12
NMT 10^2
CFU/г
<100
<100
<100
TYMC
NMT 10^1
CFU/г
<100*
<100*
<100*
Pseudomonas aeruginosa
Ph.Eur. 2.6.13
Отсутств. в 1 г
N/A
Отсутств.
Отсутств.
Отсутств.
Staphylococcus aureus
Отсутств. в 1 г
N/A
Отсутств.
Отсутств.
Отсутств.
Candidia albicans
Отсутств. в 1 г
N/A
Отсутств.
Отсутств.
Отсутств.
Таблица 4Результаты для таблеток, которые хранились при 40°C/отн.влажн.75%
Свойства
Методика анализа
Лимиты (для срока хранения)
Единицы
Время (месяцы)
0
3
6
Дата анализа
N/A
N/A
N/A
Внешний вид
Визуальный осмотр
белые - не совсем белые яйцевидные таблетки
N/A
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Анализы
M189,M190
630-770
мг мол. к-ты/ табл.
730
720
722
Для информации
мг OMLA/ табл.
627
617
620
Степень полимеризации
3,0-5,0
N/A
3,4
3,5
3,4
Средняя молек. масса
Для информации
г/моль
264
269
262
Содерж. воды
М188
≤3,0
%
0,3
0,2
0,4
pH
M192
3,0-4,0
N/A
3,5
3,5
3,5
Изм. массы
М116 изм.
Для информации
%
0
-0,89
+0,20
Масса 3 Al пакетов с 1 табл. в каждом
N/A
г
21,3938
21,3470
21,4045
Масса 3 пустых Al пакетов
N/A
г
16,1408
Растворение таблетки соответствовало указанным лимитам в обоих исследованиях стабильности.
Внешний вид
Внешний вид таблеток оставался без изменений при обоих протестированных вариантах условий хранения.
Данные анализов
Можно заметить небольшое уменьшение содержания кислот между анализом в начальный момент времени и в моменты времени 3 и 6 месяцев при обоих вариантах условий хранения. При 25°C/отн.влажн. 60% результаты анализов вновь увеличивались для двух последующих моментов времени. Исходя из этого разумно предположить, что более низкие результаты в промежуточные моменты времени отражают степень точности аналитической методики. Все значения хорошо укладываются в пределы точности измерительной установки.
Степень полимеризации - средняя молекулярная масса
Не удалось обнаружить уменьшения степени полимеризации или средней молекулярной массы при любом варианте условий хранения за период исследования.
Содержание воды
Все измеренные значения существенно ниже установленных пределов, что подразумевает непроницаемость первичной упаковки для влаги.
pH
За период тестирования не отмечено изменений pH.
Пример 5
Исследование свойств вагинальных таблеток OMLA 400 мг и пессария OMLA 500 мг у здоровых женщин по сравнению с препаратами Lactal и Vivag
Цель настоящего исследования заключалась в сравнении двух различных композиций, содержащих олигомеры молочной кислоты, с двумя коммерческими продуктами.
Тестируемые продукты
Вагинальные таблетки 400 мг получали по методике лиофилизации, описанной в настоящей заявке.
Таблетки имели следующий состав.
Компонент
Гель до лиофилизации
Конечный продукт
мг/ед.
%
мг/ед.
%
Олигомерная молочная кислота (OMLA 30)
400
20
400
40
Лактоза
200
10
200
20
HPMC
400
20
400
40
Вода
1000
50
-
-
Общая масса=2 г
Общая масса=1 г
Пессарий 500 мг
Использованный в исследовании пессарий, изготавливали в Department of Pharmaceutical Technology, Academia Medical Gdansk. OMLA 30 смешивали с Macrogol 6000 и формовали в 3 г форме для суппозитория. Пессарий имел следующий состав:
Формованный пессарий (мг)
Олигомерная молочная кислота (OMLA 30)
500
Macrogol 6000
2000
OMLA 30 получали нагреванием рацемической молочной кислоты (85%) при 120°C в течение 30 ч (Lund University).
Продукты сравнения
Вагинальный гель Lactal 5 мл (Kullgren Pharma AB, Sweden) представляет собой медицинский препарат, используемый для восстановления физиологического баланса pH во влагалище. Он содержит молочную кислоту, гликоген, пропиленгликоль, метилгидроксипропилцеллюлозу, лактат натрия и воду.
Vivag VG (вагинальные капсулы, Ferrosan AB) представляет собой натуральное фармацевтическое средство, традиционно применяемое в случае нарушения баланса вагинальной микрофлоры. Он содержит лиофилизированные Lactobacillus Acidophilus в комбинации с лактозой и стеаратом магния.
Оба использованных в исследовании препарата, т.е. Lactal и Vivag, являлись коммерческими препаратами.
Схема исследования
Схема исследования показана на фиг.2.
Один и тот же субъект тестировал пессарий OMLA 500 мг, вагинальную таблетку OMLA 400 мг, Lactal и Vivag в указанном порядке. Субъект измерял pH и следил за переносимостью/приемлемостью в течение 4 дней после введения пессария и вагинальной таблетки и в течение 1 дня после введения Lactal и Vivag. После введения, время измерения pH составляло 0, 4 ч, 8 ч и 12 ч ежедневно во время периода наблюдения. Промежуток времени между каждым из тестов составлял не менее одной недели.
Измерения
pH слизистой оболочки влагалища оценивалось субъектом с использованием полосок для измерения pH (pH-Fix 3,6-6,1, Macherey-Nagel). Субъект сообщал об общей переносимости/приемлемости и типе испытанного дискомфорта.
Результаты
Как вагинальные таблетки, так и пессарий понижали значение pH во влагалище в течение примерно 3 дней. Более выраженный эффект понижения pH наблюдался для вагинальных таблеток. Вагинальная таблетка не вызывала какого-либо субъективного дискомфорта и общая переносимость/приемлемость оценивалась как "очень хорошая". Пессарий извлекали в течение первых 2 дней после введения и общая оценка переносимости/приемлемости была "умеренный дискомфорт" и "хорошая, но не оптимальная".
Lactal понижал вагинальное pH в течение 8 часов. Сообщали о легком жжении и выделениях в течение первого дня после введения. Общая переносимость/приемлемость получила оценку "хорошо".
Vivag не оказывал какого-либо влияния на значения вагинального pH и не вызывал дискомфорта.
Пример 6
Исследование свойств вагинальных таблеток OMLA 600 мг с двумя различными распределениями олигомеров
Олигомер молочной кислоты потенциально способен понижать значения pH во влагалище за счет образования молочной кислоты при гидролизе, а также за счет непосредственного действия концевой карбоксилатной группы олигомера. Это может принести пользу в ситуации нефизиологически высоких значений вагинальных pH. Состав, включающий олигомеры молочной кислоты и подходящий мукоадгезивный полимер, мог бы обладать способностью понижать значения вагинальных pH в течение нескольких дней.
В предыдущем исследовании свойств на здоровых женщинах, вагинальные таблетки, содержащие 400 мг олигомерной молочной кислоты, продемонстрировали многообещающие возможности снижения pH. В данном исследовании, для выяснения того, можно ли повысить продолжительность действия подобного состава, получали 2 новых состава, содержащих 600 мг олигомеров молочной кислоты с различным распределением олигомеров, и подвергали их тестированию на 4 здоровых женщинах.
Действующий ингредиент
Действующий ингредиент (OMLA) получали в Lund University, Sweden. Олигомеризацию молочной кислоты осуществляли нагреванием L(+)-молочной кислоты (LA), поставщиком которой являлась компания Purac (Purac PF90, код продукта 20706, партия №0609002001). Продукт содержал 90% LA и 10% воды.
OMLA 6 и OMLA 3 получали по следующей методике: 50 мл LA помещали в 50 мл круглодонную колбу и нагревали на масляной бане в течение различных периодов времени при различных температурах. Колбу погружали в горячую масляную баню. Время нагревания раствора составляло примерно 10 минут. При этом колбу держали открытой, чтобы она могла сообщаться с атмосферой, и реакцию проводили в вытяжном шкафу, давая испаряться образующейся воде. После завершения реакции колбу извлекали из масляной бани, закрывали пробкой и давали остыть до комнатной температуры. Время охлаждения составляло примерно 20 минут. Для получения OMLA 3 колбу выдерживали при 120°C в течение 18 часов и для получения OMLA 6 выдерживали при 120°C в течение 24 часов.
n
n
Анализ распределения олигомеров проводился фирмой Purac, Netherlands. Молочную кислоту, лактид и олигомеры молочной кислоты разделяли, используя жидкостную хроматографию, и их количество устанавливали с помощью УФ-детектора. Разделение олигомеров производили с помощью градиентной системы, в которой концентрация органического растворителя повышалась по ходу эксперимента. УФ-сигнал олигомеров измеряли на длине волны, на которой поглощают карбонильные и сложноэфирные группы. Количественно определение осуществляли по методике с использованием внешнего стандарта. Результаты для партий продукта, которые могли бы применяться в составах по настоящему изобретению, показаны на фиг.3, и результаты для партий продукта, которые не могли применяться в составах по настоящему изобретению, показаны на фиг. 4. Среднечисловая молекулярная масса M является арифметическим средним молекулярных масс индивидуальных макромолекул. Степень полимеризации DP представляет собой среднее число повторяющихся звеньев в полимерной цепи.
Тестовые продукты, использованные в исследовании, получали следующим образом.
Лактозу и HPMC (Metolose 60SH 4000 сП) растворяли в воде с получением вязкого раствора. Добавляли OMLA 6 или OMLA 3 и все компоненты перемешивали, используя небольшую мешалку с высоким усилием сдвига в течение приблизительно 30 секунд. Образовавшийся гель вводили в форму (диаметром 15 мм и высотой >15 мм) с использованием шприца. Форму помещали в аппарат для лиофилизации (Christ Alpha 2-4) на 2 часа при -40°C и нормальном давлении для заморозки. Затем аппарат вакуумировали до давления 1 мбар и температуру постепенно повышали вручную (-25, -10, 0, 10°C) пока она не достигла 20°C примерно через 42 часа, и затем давление дополнительно понижали до 0,1 мбар. Температуру повышали до 30°C в течение 2 ч, после чего процесс завершался.
Препараты имели следующие составы.
Партия
Компонент
Гель до лиофилизации
Конечный продукт
Кол-во таблеток
мг/порцию
%
мг/таблетку
%
H6/1b
OMLA6
600
20
600
57
4
Лактоза
300
10
300
29
HPMC**
150
5
150
14
Вода
1950
65
-
-
Общаямасса=3 г
Общаямасса=1,05 г
H3/1a и H3/1b
OMLA3
600
20
600
57
2+3=5
Лактоза
300
10
300
29
HPMC**
150
5
150
14
Вода
1950
65
-
-
Общаямасса=3 г
Общаямасса=1,05 г
** Metolose 60SH 4000 сП - высокой вязкости (Shin-Etsu Chemicals).
Полученные таблетки были белыми, цилиндрическими и имели губчатую структуру.
Субъекты исследования
В исследовании принимали участие четыре здоровые женщины в возрасте 51-62 года (в среднем 56,5 лет).
Схема исследования
Четыре субъекта тестировали вначале вагинальные таблетки 600 мг OMLA 3 и затем OMLA 6. Субъекты измеряли pH и определяли переносимость/приемлемость в течение 7 дней. После введения, время измерения pH было 0, 4 ч, 8 ч и 12 ч каждый день на протяжении периода исследования. Между введениями двух препаратов имел место перерыв продолжительностью как минимум одна неделя.
Измерение pH
pH слизистой оболочки влагалища измеряли сами субъекты исследования, используя полоски для измерения pH (pH-Fix 3,6-6,1 производства Macherey-Nagel).
Переносимость/приемлемость
Субъекты сообщали общее впечатление о переносимости/приемлемости, сопровождая их комментариями о типе дискомфорта, который они испытали.
Результаты
Измерение pH
OMLA 3
У всех четырех субъектов наблюдалось снижение вагинального pH в течение первого дня.
У двух субъектов эффект уменьшения pH наблюдался более продолжительное время, равное примерно 6 и 3 дням соответственно.
OMLA 6
У всех четырех субъектов наблюдалось снижение вагинального pH в течение первого дня.
У двух субъектов эффект уменьшения pH наблюдался более продолжительное время, в течение 7 дней или более.
Два субъекта сообщали, что таблетка выпадала во время плавания и бега трусцой.
Пример 7
Исследование свойств вагинальных таблеток OMLA 600 мг с высоким содержанием целлюлозного полимера: I
В первом эксперименте по исследованию свойств вагинальных таблеток, в котором участвовала одна здоровая женщина, вагинальная таблетка, содержащая 400 мг олигомеров молочной кислоты, показала многообещающие возможности снижения pH. В следующем исследовании (описанном в примере 6), 4-я здоровыми женщинами были протестированы два новых состава, содержащих 600 мг олигомеров молочной кислоты с различным распределением. В этом случае составы продемонстрировали повышенную продолжительность действия по сравнению с первым исследованием, но проявляли меньшую адгезию к слизистой оболочке и имели тенденцию к выпадению.
Поэтому в данном исследовании был получен и протестирован новый состав с более высоким содержанием целлюлозного полимера для повышения мукоадгезивных свойств. Текущий пример относится к первой части исследования, в которой целлюлозный полимер представлял собой Metolose 60SH 15cP.
Действующий ингредиент
Три партии действующего ингредиента (OMLA) были изготовлены компанией Purac biomaterials, Gorinchem, The Netherlands. Образцы хранили при -15°C в течение 7 месяцев. Этим партиям были присвоены обозначения OMLA 21 и OMLA 22. Продукт OMLA 22 использовали в данном исследовании, поскольку он был наиболее близок по степени полимеризации к продукту OMLA, использованному в предыдущем исследовании. На фиг.5 показано распределение молекулярной массы этих олигомерных молочных кислот, а также сопутствующие данные.
Анализ распределения олигомеров был осуществлен в компании Purac. Молочную кислоту и олигомеры молочной кислоты разделяли с использованием жидкостной хроматографии и количество компонентов определяли с помощью УФ-детектора. Разделение олигомеров проводили с помощью градиентной системы, в которой концентрация органического растворителя повышалась по ходу эксперимента. УФ-сигнал олигомеров измеряли на длине волны, на которой поглощают карбонильные и сложноэфирные группы. Количественное определение осуществляли по методике с использованием внешнего стандарта.
Результаты анализов действующего ингредиента показаны на фиг. 5, результаты первого анализа и анализа после 7 месяцев хранения при -15°C хорошо соответствовали друг другу.
n
n
Среднечисловая молекулярная масса M является арифметическим средним молекулярных масс индивидуальных макромолекул. Степень полимеризации DP представляет собой среднее число повторяющихся звеньев в полимерной цепи.
Составы
Тестовый продукт, использованный в исследовании, получали по следующей методике:
Лактозу и HPMC (Metolose 60SH 15 сП) растворяли в воде с образованием вязкого раствора. Добавляли OMLA 22 и все компоненты перемешивали, используя небольшую мешалку с высоким усилием сдвига в течение приблизительно 30 секунд. Образовавшийся гель вводили в форму (трубку диаметром 16 мм с закругленным концом и высотой <20 мм) с использованием шприца. Форму помещали в аппарат для лиофилизации (Christ Alpha 2-4) на 2 часа при -40°C и нормальном давлении для заморозки. Затем аппарат вакуумировали до давления 1 мбар и температуру постепенно повышали вручную (-25, -10, 0, 10°C) пока она не достигла 20°C примерно через 42 часа, и затем дополнительно понижали давление до 0,1 мбар. Температуру повышали до 30°C в течение 2 ч, после чего процесс завершался.
Тестовый продукт имел следующий состав.
Компонент
Гель до лиофилизации
Конечный продукт
Кол-во таблеток*
мг/порцию
%
мг/таблетку
%
OMLA 22
600
15
600
41
6
Лактоза
170
4
170
12
HPMC 15cP**
680
17
680
47
Вода
2550
64
-
-
Общая масса=4 г
Общая масса=1,45 г
** Metolose 60SH 15 сП - низкой вязкости (Shin-Etsu Chemicals) - соответствует Hypromellose 615.
Субъекты исследования
В исследовании принимали участие четыре здоровые женщины в возрасте 52-63 лет (в среднем 57,5 лет).
Схема исследования
Четыре субъекта тестировали вагинальные таблетки 600 мг OMLA. Субъекты измеряли pH и определяли переносимость/приемлемость в течение как минимум 7 дней. В день, предшествующий введению, четыре раза осуществляли измерение pH, для получения данных об исходном уровне pH.
Измерение pH
pH слизистой оболочки влагалища измеряли сами субъекты исследования, используя полоски для измерения pH (pH-Fix 3,6-6,1 производства Macherey-Nagel).
Переносимость/приемлемость
Субъекты сообщали общее впечатление о переносимости/приемлемости, сопровождая их комментариями о типе дискомфорта, который они испытали.
Результаты
Измерение pH
У 3 из 4 субъектов продолжительность эффекта снижения pH превышала одну неделю. У четвертого субъекта эффект снижения pH наблюдался в течение первого дня.
Переносимость/приемлемость
Один субъект ощутил небольшое жжение в первый день через 2 часа после введения, у двух субъектов имелись выделения и они ощущали липкость в течение первых 2-3 дней. Переносимость/приемлемость оценивали, в основном, как "очень хорошие".
Исследование показало, что HPMC с вязкостью 15 сП очень хорошо подходит для достижения желаемого результата.
Пример 8
Исследование свойств вагинальных таблеток OMLA 600 мг с высоким содержанием целлюлозного полимера: II
Исследование проводили по методике описанной выше в примере 7. Однако тестированию подвергался другой состав, а именно:
Компонент
Гель до лиофилизации
Конечный продукт
Кол-во таблеток*
мг/порцию
%
мг/таблетку
%
OMLA 22
600
15
600
41
6
Лактоза
170
4
170
12
HPMC 6cP**
680
17
680
47
Вода
2550
64
-
-
Общая масса=4 г
Общая масса=1,45 г
** Pharmacoat 606 - низкой вязкости (Shin-Etsu Chemicals).
Субъекты исследования
В исследовании принимали участие четыре женщины в возрасте 52-63 лет (в среднем 57,5 лет).
Результаты
Измерение pH
У 2 из 4 субъектов продолжительность эффекта снижения pH составляла примерно 4-6 дней. У двух других субъектов эта продолжительность составляла примерно 1,5 дня.
Пример 9
Сравнение вагинальных таблеток Laccure и вагинального геля Lactal in vitro
Lactobacilli доминируют в нормальной экосистеме влагалища. Низкое значение вагинального pH, т.е. менее 4,5, поддерживается молочной кислотой, продуцируемой этой микрофлорой, и такая кислотность защищает от инфекций, вызванных микроорганизмами других видов. Нарушение описанной экосистемы может приводить к избыточному размножению других бактерий, например, Gardnerella, которое следует за повышением pH выше 4,5, как правило в диапазоне от 5 до 6. Это состояние именуется бактериальным вагинозом, или BV, и оно характеризуется сильным запахом гниющей рыбы, который часто сочетается с избыточными выделениями из влагалища и повышенным значением вагинального pH.
Современная терапия, которую назначают женщинам с BV в результате посещения гинеколога, заключается главным образом во введении антибиотиков. Однако большинство женщин пытаются решить эту проблему без помощи специалистов, и часто они применяют pH-регулирующие продукты, чтобы восстановить низкие физиологические значения pH менее 4,5. Вагинальный гель Lactal является широко применяемым безрецептурным продуктом, который содержит молочную кислоту в гипромеллозе. Lactal вводят ежедневно в течение 7 дней.
Компания Laccure AB разработала новый продукт, а именно вагинальную таблетку Laccure. В этот продукт включена молочная кислота, сконденсированная в олигомеры молочной кислоты, а также лактат натрия, гипромеллоза и лактоза, и смесь подвергнута лиофильной сушке с получением твердых вагинальных таблеток овальной формы. При контакте с водой на слизистой оболочке вагины, олигомеры молочной кислоты, лактат натрия и гипромеллоза медленно высвобождаются из таблетки, формируя мукоадгезивный гель, буферированный при pH 3,5, который прикрепляется к слизистой оболочке влагалища. Вагинальные таблетки Laccure предназначены для обеспечения интервала между введениями как минимум 3-4 дня, оптимально 7 дней.
В настоящем исследовании осуществлялось сравнение вагинальных таблеток по настоящему изобретению и вагинального геля Lactal, с точки зрения содержания молочной кислоты, значения pH после растворения в воде и общего высвобождения кислоты.
Вагинальная таблетка
Партию, использованную в этом исследовании, изготовили в качестве контрольной партии перед производством партий для клинических исследований. Кроме того, ее использовали для исследования стабильности. Состав таблеток приведен в следующей таблице.
Таблица 5Состав вагинальной таблетки Laccure
Исходный ингредиент
Количество
Олигомерная молочная кислота Purasorb OL
600 мг*
Лактат натрия
240 мг
Гипромеллоза Pharmacoat 615
680 мг
Лактозы моногидрат
160 мг
Общая масса
1680 мг
* соответствует 700 мг молочной кислоты.
Вагинальный гель Lactal
Вагинальный гель Lactal (партия №10-029) приобретали в местной аптеке в Malmö, Sweden. Единицей дозировки крема Lactal является тубус с 5 мл геля, содержащего молочную кислоту и гипромеллозу, и буферированного лактатом натрия при pH примерно 3,5.
Методики
Методики, применявшиеся в этом исследовании, аналогичны методикам определения параметров продуктов, использованным для измерения высвобождения вагинальной таблетки (таблица 2).
Таблица 6Тесты и методики
Тест
Способ/методика анализа
Масса
-
Определение содержания олигомерных молочных кислот
См. раздел "способы и методики анализа"
Степень полимеризации
См. раздел "способы и методики анализа"
pH
Ph.Eur.2.2.3, curr.ed.См. раздел "способы и методики анализа"
Растворение
ТитрованиеСм. раздел "способы и методики анализа"
Результаты
Результаты тестов, за исключением общего содержания кислот при растворении, показаны в приведенной ниже таблице. Масса дозированной формы вагинальной таблетки примерно в три раза ниже, чем дозированной формы вагинального геля Lactal, но общее содержание молочной кислоты в вагинальной таблетке примерно в 6 раз выше, чем в креме Lactal. Значения pH после растворения в воде в течение 24 часов являются примерно одинаковыми для обоих составов. Степень полимеризации молочной кислоты в вагинальной таблетке составляет 3,5, тогда как Lactal содержит очень небольшое количество олигомеров молочной кислоты.
Таблица 7Результаты тестирования
Тест
Вагинальная таблетка (партия83601-1009-14)
Вагинальный гель Lactal(партия 10-029)
Масса единицы дозированной формы
1,71 г
4,71 г
Количество молочной кислоты в единице дозированной формы
739 мг
125 мг
Степень полимеризации
3,5
1,2
pH (20 ч в 20 мл воды)
3,6
3,8
На фиг.6 показано общее содержание растворенной кислоты, высвобождающейся из вагинальной таблетки в течение 75 часов, и расчетное высвобождение из вагинального геля Lactal в течение того же периода времени. Высвобождение подкисляющего агента из вагинальной таблетки Laccure составляло примерно 150 мг эквивалента молочной кислоты через 6 часов, примерно 250 мг через 24 часа и примерно 310 мг через 72 ч. Такой режим высвобождения подобен суммарному высвобождению из трех доз крема Lactal, при ежедневном введении.
Выводы
Общее содержание молочной кислоты в вагинальной таблетке Laccure почти в 6 раз превышает содержание молочной кислоты в вагинальном геле Lactal, что согласуется с введением вагинальной таблетки Laccure один раз в неделю. При растворении в воде вагинальной таблетки достигается приблизительно то же значение pH, как и для вагинального геля Lactal.
Количество подкисляющего агента, высвобождающегося in vitro из вагинальной таблетки Laccure в течение первых 72 часов, примерно соответствует суммарному высвобождению из трех доз геля Lactal при ежедневном введении.
Пример 10
pH-регулирующий эффект и безопасность вагинальной таблетки, содержащей олигомеры молочной кислоты у пациентов с бактериальным вагинозом. Открытое контролируемое клиническое исследование с параллельными группами. Исследование A
Цели исследования
Основная цель
Оценить безопасность вагинальных таблеток для субъекта с бактериальным вагинозом (BV).
Дополнительные цели
Оценить переносимость (приемлемость/удобство для пользователя) и эффективность вагинальных таблеток Laccure для субъектов с бактериальным вагинозом (BV).
Первичные критерии оценки
Нежелательные явления, о которых сообщали сами субъекты, и нежелательные явления, которые обнаруживались при обследовании вульвовагинальной области во время заключительного визита к врачу.
Вторичные критерии оценки
- Нормализация вагинальных значений pH (4,5 или ниже) через одну и две недели.
- Оценка приемлемости/удобства для пользователя таблетки на основании записей в дневнике субъекта.
- Эффективность таблетки устанавливали также с использованием критериев Амселя.
Эффективность оценивали посредством определения через одну или две недели доли пациентов, удовлетворяющих каждому из следующих критериев:
1. Водянистые, белые, желтые однородные выделения.
2. Обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании.
3. Появление рыбного запаха при добавлении щелочи, т.е. 10% раствора гидроксида калия (KOH).
Кроме того, четвертым критерием Амселя является pH вагинальной жидкости >4,5, но этот критерий не указан в данном перечне, поскольку определение pH уже упоминалось выше в числе вторичных критериев оценки.
Ключевые клетки представляют собой клетки эпителия влагалища, которые принимают характерный крапчатый вид за счет находящихся на их поверхности бактерий. Ключевые клетки являются медицинским симптомом бактериального вагиноза, в т.ч., вызванного Gardnerella vaginalis, группой грамвариабельных бактерий. Эта бактериальная инфекция вызывает неприятный рыбный запах, водянистые вагинальные выделения. Кроме того, значения вагинального pH часто превышают 5,5. Нормальное значение вагинального pH находится в районе 4,5.
Наличие BV у пациента подтверждалось, если у пациента выполнялись 3 из 4 критериев Амселя.
Схема исследования
Применялась адаптивная схема исследования, которая включала две части: часть A и часть B.
Часть A
В части A исследования было задействовано две разных группы субъектов:
- группа 1 (10 пациентов): субъекты с наличием BV, которым вводили вагинальные таблетки Laccure один раз в неделю в течение двух недель.
- группа 2 (10 пациентов): субъекты с наличием BV, которым вводили вагинальные таблетки Laccure два раза в неделю в течение двух недель.
Субъектов, у которых имелся BV, случайным образом распределяли по группам 1 и 2. Для диагностики BV применялись критерии Амселя.
Если выполнялись как минимум три из следующих критериев, у пациента диагностировали наличие BV.
1. Водянистые, белые, желтые однородные выделения.
2. Обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании.
3. Появление рыбного запаха при добавлении щелочи, т.е. 10% раствора гидроксида калия (KOH).
4. pH более 4,5.
Критерии включения в исследование
- женщины в возрасте не менее 18 лет,
- подтвержденный текущий диагноз бактериального вагиноза (установленный при отборе на исследование) с использованием критериев Амселя,
- субъекты, которые соглашались воздержаться от применения всех остальных вагинальных продуктов на всем протяжении исследования, за исключением внутриматочных спиралей,
- участники должны были воздерживаться от половых контактов или использования презерватива на протяжении всего исследования,
- женщины детородного возраста должны были иметь отрицательный результат теста мочи на беременность в момент включения в исследование,
- субъекты соглашались отвечать на вопросы, которые в основном касались приемлемости продукта, но некоторые из них касались половой активности,
- субъекты, которые давали письменное информированное согласие и соглашались на последующее наблюдение.
Результаты
Субъекты
Два пациента в группе, получавшей препарат один раз в неделю, не завершили исследование, один из-за нежелательных явлений и один из-за начала менструации во время исследования. Один пациент в группе, получавшей препарат два раза в неделю, не завершил исследование из-за нежелательных явлений. Почти все пациенты осуществили все запланированные визиты; на 10 день 3 пациента в группе, получавшей препарат один раз в неделю, и 2 пациента в группе, получавшей препарат два раза в неделю, пропустили запланированный визит.
Таблица 8Число субъектов, завершивших исследование
Закончил ли пациент исследование
Одно введениев неделю
Два введенияв неделю
Всего
n
%
n
%
n
%
Нет
2
18,2
1
10,0
3
14,3
Да
9
81,8
9
90,0
18
85,7
Всего
11
100,0
10
100,0
21
100,0
Исходные характеристики и демографический состав
Средний возраст в группе, получавшей одно введение в неделю, составлял 33 года, а средний возраст в группе, получавшей 2 введения в неделю, составлял 29 лет. Все пациенты за исключением двух (негритянка, латиноамериканка) принадлежали к европеоидной расе. У всех пациентов имелся BV, наличие которого было подтверждено во время 1 визита к врачу с помощью критериев Амселя.
В день 1 были получены следующие результаты.
Таблица 9Индивидуальные критерии Амселя - водянистые, белые, желтые однородные выделения в день 1
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Нет
0
0
1
10,0
1
4,8
Есть
11
100,0
9
90,0
20
95,2
Таблица 10Индивидуальные критерии Амселя - обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании в день 1
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Нет
0
0
2
20,0
2
9,5
Есть
11
100,0
8
80,0
19
90,5
Таблица 11Индивидуальные критерии Амселя - pH вагинальной жидкости >4,5 в день 1 согласно CRF
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Есть
11
100,0
10
100,0
21
100,0
Таблица 12Индивидуальные критерии Амселя - появление рыбного запаха при добавлении щелочи, а именно 10% раствора гидроксида калия (KOH) в день 1
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Нет
0
0
1
10,0
1
4,8
Есть
11
100,0
9
90,0
20
95,2
Таблица 13Выполнение критериев Амселя в день 1
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Есть
11
100,0
10
100,0
21
100,0
Первичный критерий оценки - pH
Значения pH в средней части влагалища (MV)
Значения pH измеряли pH электродом. Во многих публикациях pH измеряли лакмусовой бумажкой, что является менее чувствительной методикой.
Только у 5 пациентов в группе, получавшей одно введение в неделю, и у 4 пациентов в группе, получавшей два введения в неделю, за период от визита 1 до визита 2 достигалось значение pH ниже 4,5. Соответствующие показатели для значения pH ниже 4,7 составляли 6 и 4, соответственно. У всех пациентов в какой-либо момент исследования наблюдалось более низкое значение pH, чем во время визита 1.
Среднее значение pH во время визита 1 составляло 5,6 для группы, получавшей одно введение в неделю, и 5,3 для группы, получавшей два введения в неделю. Изменение между визитом 1 и визитом 2 для группы, получавшей одно введение в неделю, составляло -0,99, и -0,66 для группы, получавшей два введения в неделю. Это уменьшение уровня pH было наибольшим за все время, за исключением визита 4, но в случае визита 4 отсутствуют данные для 3 пациентов в группе, получавшей одно введение в неделю, и для 2 пациентов в группе, получавшей два введения в неделю.
Сравнение значения pH (MV) в день 1 и день 3 или 4
На приведенной ниже гистограмме (см. фиг. 7) показаны значения pH в средней части влагалища (MV) в день 1 и день 4. В качестве альтернативы, если данные для дня 4 недоступны, pH измеряли в день 3 соответственно. На графике также размещены величины p из критерия знаковых рангов Вилкоксона. Различия между результатами дня 1 и дней 3 или 4 являются статистически значимыми (p<0,05) в обеих группах, а также при совместном рассмотрении данных для обеих групп. Это указывает на наличие влияния вагинальных таблеток Laccure на значения pH (MV) на первоначальном этапе применения. Аналогичный результат получался при графическом изображении средних значений.
Уменьшение значений pH приведено на фиг. 7.
Вторичный критерий оценки эффективности
Бактериальный вагиноз
Использование критериев Амселя
У всех пациентов группы, получавшей одно введение в неделю, BV во время визита 3 отсутствовал, и во время визита 5 BV отсутствовал у 8 пациентов. В группе, получавшей два введения в неделю, BV отсутствовал у девяти пациентов во время визита 3 и во время визита 5, соответственно.
Таблица 14Критерии Амселя - подтверждение наличия BV на 1-й и 2-й неделе
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Визит
Подтвержденный бактериальный вагиноз (BV)
Визит 3, день 8
Нет
10
100,0
9
90,0
19
95,0
Есть
0
0
1
10,0
1
5,0
Всего
10
100,0
10
100,0
20
100,0
Визит 5, день 15
Подтвержденный бактериальный вагиноз (BV)
Нет
8
80,0
9
100,0
17
89,5
Есть
2
20,0
0
0
2
10,5
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Таблица 15Пациенты с отсутствием BV на первой и второй неделях испытаний соответственно, включая точный 95% доверительный интервал (CI)
Визит
Схема введения
Число пациентов без BV
%
Точный 95% доверительный интервал
Визит 3, день 3
Один раз в неделю
10
100,0
(69,2-100,0)
Два раза в неделю
9
90,0
(55,5-99,7)
Визит 5, день 15
Один раз в неделю
8
80,0
(44,4-97,5)
Два раза в неделю
9
100,0
(66,4-100,0)
Критерии Амселя - водянистые, белые, желтые, гомогенные выделения
Все пациенты группы, получавшей одно введение в неделю, не имели "водянистых, белых, желтых, однородных выделений" во время визита 3, однако данный критерий выполнялся у трех пациентов во время визита 5. В группе, получавшей два введения в неделю, у восьми пациентов не имелось "водянистых, белых, желтых, однородных выделений" во время визита 3 и визита 5, соответственно.
Таблица 16Выполнение отдельных критериев Амселя - водянистые, белые, желтые однородные выделения, во время различных визитов
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
водянистые, белые, желтые однородные выделения
Визит 1, день 1
Нет
0
0
1
10,0
1
4,8
Есть
11
100,0
9
90,0
20
95,2
Всего
11
100,0
10
100,0
21
100,0
водянистые, белые, желтые однородные выделения
Визит 3, день 8
Нет
10
100,0
8
80,0
18
90,0
Есть
0
0
2
20,0
2
10,0
Всего
10
100,0
10
100,0
20
100,0
водянистые, белые, желтые однородные выделения
Визит 5, день 15
Нет
7
70,0
8
88,9
15
78,9
Есть
3
30,0
1
11,1
4
21,1
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Критерии Амселя - обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании
У всех пациентов в группе, получавшей одно введение в неделю, во время визита 3 ключевые клетки отсутствовали, однако эти клетки присутствовали у двух пациентов во время визита 5. В группе, получавшей два введения в неделю, ключевые клетки отсутствовали у 7 пациентов во время визита 3, и у 8 пациентов "ключевые клетки" отсутствовали во время визита 5.
Таблица 17Выполнение отдельных критериев Амселя - обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании во время различных визитов
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
обнаружение ключевых клеток при микроскопии
Визит 1, день 1
Нет
0
0
2
20,0
2
9,5
Есть
11
100,0
8
80,0
19
90,5
Всего
11
100,0
10
100,0
21
100,0
обнаружение ключевых клеток при микроскопии
Визит 3, день 8
Нет
10
100,0
7
70,0
17
85,0
Есть
0
0
3
30,0
3
15,0
Всего
10
100,0
10
100,0
20
100,0
обнаружение ключевых клеток при микроскопии
Визит 5, день 15
Нет
8
80,0
8
88,9
16
84,2
Есть
2
20,0
1
11,1
3
15,8
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Критерии Амселя - появление рыбного запаха при добавлении щелочи
У девяти пациентов в группе, получавшей одно введение в неделю, отсутствовал рыбный запах во время визита 3 и во время визита 5. В группе, получавшей два введения в неделю, рыбный запах отсутствовал у 8 пациентов во время визита 3 и у 9 пациентов во время визита 5.
Таблица 18Выполнение отдельных критериев Амселя - появление рыбного запаха при добавлении щелочи во время различных визитов
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
появление рыбного запаха при добавлении щелочи
Визит 1, день 1
Нет
0
0
1
10,0
1
4,8
Есть
11
100,0
9
90,0
20
95,2
Всего
11
100,0
10
100,0
21
100,0
появление рыбного запаха при добавлении щелочи
Визит 3, день 8
Нет
9
90,0
8
80,0
17
85,0
Есть
1
10,0
2
20,0
3
15,0
Всего
10
100,0
10
100,0
20
100,0
появление рыбного запаха при добавлении щелочи
Визит 5, день 15
Нет
9
90,0
9
100,0
18
94,7
Есть
1
10,0
0
0
1
5,3
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Критерии Амселя - pH вагинальной жидкости >4,5
Только три пациента в группе, получавшей одно введение в неделю, продемонстрировали pH 4,5 или ниже во время визита 3, и только один пациент во время визита 5. В группе, получавшей два введения в неделю, только у трех пациентов наблюдалось значение pH 4,5 или менее во время визита 3, и соответствующее число пациентов во время визита 5 составляло 4 субъекта.
Таблица 19Выполнение отдельных критериев Амселя - pH вагинальной жидкости >4,5 согласно CRF во время различных визитов
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
pH вагинальной жидкости превышает 4,5
Визит 1, день 1
Есть
11
100,0
10
100,0
21
100,0
Всего
11
100,0
10
100,0
21
100,0
pH вагинальной жидкости превышает 4,5
Визит 3, день 8
Нет
3
30,0
3
30,0
6
30,0
Есть
7
70,0
7
70,0
14
70,0
Всего
10
100,0
10
100,0
20
100,0
pH вагинальной жидкости превышает 4,5
Визит 5, день 15
Нет
1
10,0
4
44,4
5
26,3
Есть
9
90,0
5
55,6
14
73,3
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Общая оценка результата
Общая оценка результата, данная исследователем, заключалась в том, что у 7 пациентов в обеих группах в результате введения препарата наступило значительное улучшение.
Таблица 20Общая врачебная оценка
Общая врачебная оценка
Один раз в неделю
Два раза в неделю
Все
n
%
n
%
n
%
Нет улучшения
2
20,0
0
0
2
10,5
Незначительное улучшение
1
10,0
2
22,2
3
15,8
Значительное улучшение
7
70,0
7
77,8
14
73,7
Всего
10
100,0
9
100,0
19
100,0
Изменение pH
На фиг. 7 показано уменьшение значений вагинального pH, начиная с визита 1 (среднее значение и 95% доверительный интервал) при введении вагинальных таблеток Laccure один раз в неделю (ow) и два раза в неделю (bw). Как видно из приведенных данных, в среднем у всех пациентов наблюдалось понижение pH на 0,5, начиная с визита 2 и далее. В целом складывается впечатление, что снижение pH является существенно более важным критерием, чем значение pH само по себе. Так, например, если pH снижается на 0,5 единицы или более, и выполняется только один из остальных критериев Амселя, лечение, по-видимому, является эффективным (разумеется, что лечение также является эффективным, если выполняются только два или менее из четырех критериев Амселя). В пределах нормы, pH не должно опускаться ниже значения 3,5.
Основные выводы об эффективности
Качество данных, полученных в исследовании, с учетом пропущенных данных и числа пациентов, завершивших исследование, является хорошим, только три пациента из 21 не закончили исследования по намеченному плану.
Три пациента из 10 в группе, получавшей одно введение в неделю, и 4 пациента из 9 в группе, получавшей два введения в неделю, имели значение pH во время визита 5 менее 4,5 (две недели). Кроме того, у всех пациентов наблюдалось понижение значения pH по сравнению с визитом 1 (день 1), хотя не у всех это значение опускалось ниже 4,5.
В ходе исследования наблюдалось статистически достоверное снижение средних значений pH между визитом 1 и визитом 2 (дни 3-4) (p<0,05), в обеих группах, а также в объединенном результате для двух групп.
Эти результаты показывают, что при использовании вагинальных таблеток Laccure имело место падение среднего значения pH со временем. Различие между днем 1 и днями 3/4 являлось статистически достоверным (MV pH - значения, измеренные в средней части влагалища).
Определение наличия BV согласно совокупности критериев Амселя показало, что у 8 пациентов из 11 (в группе, получавшей одно введение в неделю) и у 9 пациентов из 10 (два введения в неделю) в конце исследования BV отсутствовал. Отдельные критерии Амселя, за исключением значений pH, показали, что введение препарата (в обеих группах, т.е. один и два раза в неделю) в течение 2 недель ослабило выполняемость всех критериев BV почти у всех пациентов.
Ощущения пациентов от лечения, занесенные в дневник на 15 день, независимо от частоты введения, явно продемонстрировали полное или частичное согласие с конкретными вопросами, например, "Я ощутила, что применение препарата удобно для пользователя", "Я думаю, что действие вагинальной таблетки являлось достаточно продолжительным", "В целом положительные ощущения от введения препарата", "Вагинальная таблетка не казалась мне липкой", "Я полагаю, что использование препарата ослабило мои проблемы", "Я подумаю об использовании этих таблеток, когда они появятся в продаже".
Общая оценка, данная врачами, показала, что в большинстве случаев у пациентов имело место существенное улучшение при применении вагинальных таблеток Laccure независимо от количества таблеток, вводимых за неделю (одна или две).
Общие выводы
Исследование было проведено надлежащим образом в соответствии с ICH GCP, причем большое число пациентов завершило исследование без пропущенных данных.
Значения pH понижались по ходу исследования, причем наиболее заметное понижение имело место между визитом 1 и визитом 2. Тем не менее, у большинства пациентов не произошло понижения pH ниже 4,5.
Влияние препарата на BV могло быть определено с использованием критериев Амселя, независимо от исследуемой группы, и BV прекратился почти у всех пациентов в обеих группах уже через одну неделю.
Общая оценка препарата пациентами была очень хорошей, как и мнение врачей о результатах лечения. Все пациенты рассматривают возможность использования препарата, когда он появится в продаже.
Введение вагинальных таблеток Laccure было воспринято исследованными группами пациентов, как хорошо переносимое.
Результаты части A клинического исследования использовались также для определения начальных условий и схемы проведения части B клинического исследования.
Пример 11
pH-регулирующее действие и безопасность вагинальных таблеток Laccure у пациентов с бактериальным вагинозом. Открытое контролируемое клиническое исследование с параллельными группами и адаптивной схемой.
Исследование B
Цели исследования
Основная цель:
Исследовать эффективность вагинальных таблеток Laccure у субъектов с бактериальным вагинозом (BV).
Дополнительные цели:
Исследовать безопасность, переносимость, уровни pH и удовлетворенность субъектов с бактериальным вагинозом (BV) вагинальными таблетками Laccure.
Методология исследования
Исследование являлось открытым и включало три параллельные группы. Пациентов случайным образом распределяли по следующим группам:
введение вагинальных таблеток Laccure один раз в неделю в течение 1 недели (OW),
введение вагинальных таблеток Laccure два раза в неделю (BW),
контрольная группа, в которой введение BV не проводилось (C).
Пациенты посещали клинику по следующему расписанию:
Визит 1: день 1.
Визит 2: день 4*.
Визит 3: день 8.
* визит мог происходить на день раньше (-1 день).
Пациенты самостоятельно вводили таблетку вечером дня 1 в группе, получавшей одно введение в неделю, и вечером дня 1 и дня 4 в группе, получавшей два введения в неделю. Пациенты, рандомизированные во время визита 3, самостоятельно вводили таблетку вечером дня 8 в группе, получавшей одно введение в неделю, и вечером дня 8 и дня 11 в группе, получавшей два введения в неделю.
Количество субъектов
Для получения данных использовали как исследованную популяцию целиком (FAS), так и субъектов "выполнивших требования протокола" (PP). FAS состояла из всех рандомизированных пациентов, которые получали по крайней мере 1 дозу исследуемого препарата (эту популяцию рассматривали также, как выборку для оценки безопасности). PP состояла из всех рандомизированных пациентов, которые получили как минимум одну дозу исследуемого препарата и у которых отсутствовали серьезные нарушения протокола, т.е. невыполнения критериев включения/исключения, пропуск визита 3, применение антибиотиков, наличие менструации/кровотечения, применение несоответствующего количества вагинальных таблеток и осуществление визита 3 позже дня 13. Что касается контрольной группы, выборка FAS состояла из всех пациентов, и выборка PP из всех пациентов, у которых не было существенных нарушений протокола.
Количество пациентов
FAS
PP
Один раз в неделю
37
30
Два раза в неделю
35
32
Контроль
33
28
Всего
105
90
Диагностика и критерии для включения в исследование
В исследование включались женщины в возрасте ≥18 лет с подтвержденным диагнозом текущего бактериального вагиноза, т.е. у которых выполнялись, как минимум, 3 из следующих 4 критериев Амселя: водянистые белые-желтые однородные выделения, обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании, появление рыбного запаха при добавлении щелочи и pH>4,5.
Тестируемый продукт, номера партий, дозировки и способ введения
Тестировались вагинальные таблетки Laccure, GMP партия 83601-1010-06 и 83601-1010-10, введение вечером один раз в неделю или два раза в неделю в течение 1 недели. При каждом введении, 1 вагинальную таблетку помещали глубоко во влагалище в соответствии с инструкциями, которые давал исследователь.
Продолжительность введения
Период введения препарата составлял 1 неделю.
Контрольное введение препаратов
Контрольное введение не осуществлялось. Контрольная группа состояла из пациентов, не получавших препаратов.
Критерии оценки
Первичный критерий
- Сравнить частоту отсутствия BV согласно критериям Амселя через одну неделю у группы, получавшей одно введение в неделю, и контрольной группы, не получавшей препарата.
Нежелательные явления, о которых сообщали сами пациенты, и нежелательные явления, которые были выявлены при обследовании вульвовагинальной области во время заключительного визита.
Вторичные критерии
- Частота отсутствия BV согласно критериям Амселя через одну неделю у остальных групп, участвовавших в исследовании.
- Изменение вагинального pH с течением времени.
- Удовлетворенность пациента (благожелательное отношение к препарату согласно опросному листу во время последнего визита).
- Эффективность таблеток, которую оценивали как долю пациентов через одну неделю, у которых выполнялся каждый из отдельных критериев Амселя:
- Доля пациентов с водянистыми белыми-желтыми однородными выделениями.
- Обнаружение ключевых клеток при микроскопическом исследовании.
- Появление рыбного запаха при добавлении щелочи.
- pH>4,5.
- Параметры безопасности.
Статистические методы
Все параметры эффективности анализировали, используя результаты для выборок FAS и PP, которые включают данные, начиная с визита 1 (день 1) и до визита 3 (день 8).
В основном анализе сравнивали доли субъектов с отсутствием BV во время визита 3 (день 8) по критериям Амселя в группе, получавшей одно введение в неделю, и в контрольной группе, не получавшей препарата. Частоту отклика в этих двух группах сравнивали с использованием критерия хи-квадрат без коррекции на непрерывность.
Дополнительный анализ данных по BV во время визита 3 (день 8) согласно критериям Амселя заключался в сравнении результатов группы, получавшей два введения в неделю, с результатами контрольной группы, не получавшей препаратов, и результатов для объединенной группы с результатами для контрольной группы. Эти анализы проводили по тем же методикам, которые применялись для основного анализа.
Долю субъектов с отсутствием BV во время визита 3 (день 8) представляли с использованием таблиц частоты появления в сочетании с 95% доверительным интервалом для доли субъектов с отсутствием BV в отношении различных исследованных групп (т.е. получавших одно введение в неделю, два введения в неделю и контрольной группы, а также одной объединенной группы пациентов, получавших препарат). В эти таблицы включали значения p, соответствующие критерию хи-квадрат.
Разность значений pH, зарегистрированных во время визита 1 (день 1) и визита 2 (день 4)/визита 3 (день 8), для всех исследованных групп (т.е. для группы, получавшей одно введение в неделю, группы, получавшей два введения в неделю, для всей совокупности пациентов, получавших препараты, а также для контрольной группы) анализировали с использованием двух критериев:
1. Одновыборочного t-критерия и
2. Критерия знаковых рангов Вилкоксона.
Ответы субъектов на вопросы, заданные в опроснике
Долю субъектов, давших ответы на ряд вопросов относительно удовлетворенности продуктом, сравнивали для группы, получавшей одно введение в неделю, с группой, получавшей два введения в неделю, с использованием критерия хи-квадрат без коррекции на непрерывность.
Индивидуальные критерии Амселя:
Все дополнительные данные, касающиеся критериев Амселя, анализировали с использованием критерия хи-квадрат без коррекции на непрерывность.
Результаты
Бактериальный вагиноз
Количество пациентов, у которых во время визита 3 отсутствовал BV, представлено в таблице 21 для исследованной выборки и групп, получавших препарат. Существовало статистически достоверное различие в частоте реакции для групп, получавших препарат один или два раза в неделю, по сравнению с частотой реакции для контрольной группы (p<0,0001 для всех сравнений). Это было также справедливо при сравнении объединенной группы, получавшей препарат, с контрольной группой (p<0,0001).Эти результаты были аналогичны для обеих выборок, как FAS, так и PP. Не удалось обнаружить статистически достоверного различия в частоте реакции в группе, получавшей препарат один раз в неделю, по сравнению с группой, получавшей препарат два раза в неделю (FAS: p=0,3644; PP: p=0,3013).
Таблица 21Пациенты с бактериальным вагинозом (BV) согласно критериям Амселя
Группа
Визит 1 (день 1)
Визит 3 (день 8)
FAS
PP
FAS
PP
Один раз в неделю
Общее кол-во пациентов
37
30
34
30
Кол-во пациентов без BV
0
0
24
21
% пациентов без BV
0%
0%
70,6%
70,0%
Два раза в неделю
Общее кол-во пациентов
35
32
35
32
Кол-во пациентов без BV
0
0
28
26
% пациентов без BV
0%
0%
80,0%
81,3%
Объединенная группа(OW+BW)
Общее кол-во пациентов
72
90
69
62
Кол-во пациентов без BV
0
0
52
47
% пациентов без BV
0%
0%
75,4%
75,8%
Контрольная группа
Общее кол-во пациентов
33
28
30
28
Кол-во пациентов без BV
0
0
3
3*
% пациентов без BV
0%
0%
10,0%
10,7%* (правильно 7,4%)
* После блокировки базы данных было обнаружено, что один пациент из контрольной группы был распределен в группу, получавшую вагинальные таблетки Laccure уже во время визита 2 (день 4). Поэтому этого пациента не следовало включать в выборку PP и правильный процент пациентов без BV в этой группе должен составлять 7,4%.
Индивидуальные критерия Амселя: аномальные выделения, ключевые клетки и рыбный запах
В таблицах 22-24 показаны количества и доли пациентов с аномальными (водянистыми, белыми-желтыми) вагинальными выделениями, ключевыми клетками или рыбным запахом в момент начала исследования (визит 1) и через одну неделю (визит 3). pH>4,5.
Количества и доли пациентов с водянистыми белыми-желтыми вагинальными выделениями показаны в таблице 22. Через одну неделю наблюдалось статистически достоверное различие в частоте реакции при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, два введения в неделю и объединенной группой по сравнению с контрольной группой (p<0,0001) для обеих выборок FAS и PP. Не было обнаружено статистически достоверного различия при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, с группой, получавшей два введения в неделю.
Таблица 22Количества и доли пациентов с водянистыми белыми-желтыми однородными выделениями (критерий Амселя)
Группа
Визит 1 (день 1)
Визит 3 (день 8)
FAS
PP
FAS
PP
Один раз в неделю
94,6% (35/37)
96,7% (29/30)
41,2% (14/34)
43,3% (13/30)
Два раза в неделю
100% (35/35)
100% (32/32)
34,3% (12/35)
31,3% (10/32)
Объединенный результат(OW+BW)
97,2% (70/72)
98,4% (61/62)
37,7% (26/69)
37,1% (23/62)
Контрольная группа
100% (33/33)
100% (28/28)
90% (27/30)
92,9% (26/28)
Количества и доли пациентов, у которых при микроскопическом исследовании были обнаружены ключевые клетки, показаны в таблице 23. Через одну неделю наблюдалось статистически достоверное различие в частоте реакции при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, два введения в неделю и объединенной группой по сравнению с контрольной группой (p<0,0001) для обеих выборок FAS и PP. Не было обнаружено статистически достоверного различия при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, с группой, получавшей два введения в неделю.
Таблица 23Количества и доли пациентов, у которых при микроскопическом исследовании обнаруживались ключевые клетки (критерий Амселя)
Группа
Визит 1 (день 1)
Визит 3 (день 8)
FAS
PP
FAS
PP
Один раз в неделю
94,6% (35/37)
100% (30/30)
29,4% (10/34)
30,0% (9/30)
Два раза в неделю
91,4% (32/35)
96,9% (31/32)
14,3% (5/35)
12,5% (4/32)
Объединенный результат(OW+BW)
93,1% (67/72)
98,4% (61/62)
21,7% (15/69)
21,0% (13/62)
Контрольная группа
93,9% (31/33)
96,4% (27/28)
93,3% (28/30)
92,9% (26/28)
Количество и доля пациентов с вагинальными выделениями, которые имели рыбный запах, показаны в таблице 24. Через одну неделю наблюдалось статистически достоверное различие в частоте реакции при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, два введения в неделю и объединенной группой по сравнению с контрольной группой (p<0,05) для обеих выборок FAS и PP. Не было обнаружено статистически достоверного различия при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, с группой, получавшей два введения в неделю.
Таблица 24Количества и доли пациентов с вагинальными выделениями, которые имели рыбный запах при добавлении щелочи (критерий Амселя)
Группа
Визит 1 (день 1)
Визит 3 (день 8)
FAS
PP
FAS
PP
Один раз в неделю
91,9% (34/37)
90,0% (27/30)
29,4% (10/34)
26,7% (8/30)
Два раза в неделю
94,3% (33/35)
93,8% (30/32)
20,0% (7/35)
18,8% (6/32)
Объединенный результат(OW+BW)
93,1% (67/72)
91,9% (57/62)
24,6% (17/69)
22,6% (14/62)
Контрольная группа
81,8% (27/33)
82,1% (23/28)
73,3% (22/30)
71,4% (20/28)
Изменение значений pH
См. фиг. 8.
В день 4 (визит 2) и в день 8 (визит 3) наблюдалось статистически достоверное понижение средних значений pH и значений pH в средней части влагалища относительно исходных уровней (визит 1), в группе, получавшей одно введение в неделю, а также в группе, получавшей два введения в неделю, в обеих выборках FAS и PP. Понижение pH в средней части влагалища от исходного уровня до дня 4 при введении одной вагинальной таблетки Laccure составляло 0,9 единицы pH (p<0,0001), тогда как в контрольной группе понижение pH составило 0,2 единицы pH (p<0,05). Понижение pH в средней части влагалища от исходного уровня до дня 8 при введении вагинальной таблетки Laccure один или два раза в неделю (суммарные данные для пациентов, осуществлявших 1 или 2 введения в неделю) составляло 0,5 единицы pH (p<0,0001), тогда как в контрольной группе понижение pH составило 0,2 единицы pH (ns). Значения p вычисляли с использованием критерия знаковых рангов Вилкоксона (см. фиг. 9).
Количества и доли пациентов со значениями вагинального pH>4,5 показаны в таблице 25. Через одну неделю наблюдалось статистически достоверное различие в частоте реакции при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, два введения в неделю и объединенной группы против контрольной группы (p<0,05) для обеих выборок FAS и PP. Не было обнаружено статистически достоверного различия при сравнении группы, получавшей одно введение в неделю, с группой, получавшей два введения в неделю.
Таблица 25Количества и доли пациентов со значениями вагинальных pH>4,5 (критерий Амселя)
Группа
Визит 1 (день 1)
Визит 3 (день 8)
FAS
PP
FAS
PP
Один раз в неделю
100% (37/37)
100% (30/30)
67,6% (23/34)
63,3% (19/30)
Два раза в неделю
100% (35/35)
100% (32/32)
62,9% (22/35)
59,4% (19/32)
Объединенный результат(OW+BW)
100% (72/72)
100% (62/62)
65,2% (45/69)
61,3% (38/62)
Контрольная группа
90,9% (30/33)
92,9% (26/28)
90,0% (27/30)
89,3% (25/28)
Приемлемость/удобство для пользователя
Пациенты, получавшие вагинальные таблетки Laccure один или два раза в неделю в течение одной недели, заполняли опросник, включавший 9 вопросов, во время визита, проходившего в последний день исследования. Частота реакции и доверительный интервал для выборки FAS приведены в таблице 22. Частота реакции для выборки PP была аналогичной и поэтому не представлена в тексте заявки.
Более 85% пациентов полностью согласились с тем, что введение препарата было удобным для пользователя.
Более 85% пациентов полностью согласились с тем, что вводить вагинальную таблетку легко.
Более 90% пациентов полностью или частично согласились с тем, что вагинальная таблетка не вызывала ощущения липкости при применении.
Более 90% пациентов полностью или частично согласились с тем, что удобно не осуществлять более частое введение лекарственного средства.
Свыше 90% пациентов полностью или частично согласились, что таблетки оказались эффективными и проблема с запахом уменьшилась.
Безопасность
Во время исследования не были выявлены серьезные нежелательные явления (SAE).
Выводы из результатов клинических исследований
Исследование было проведено в соответствии с директивами ICH GCP с большим числом пациентов, завершивших исследование без пропущенных данных. Основной критерий эффективности, который заключался в сравнении доли субъектов, у которых отсутствовали признаки BV согласно критериям Амселя во время визита 3 (день 8), между группой, получавшей одно введение в неделю, и контрольной группой, не получавшей препарата, выявил статистически достоверное преимущество группы, получавшей одно введение в неделю, для обеих аналитических выборок FAS и PP. Результаты сравнений между группой, получавшей два введения в неделю, и контрольной группой, не получавшей препарата, а также объединенной группой, получавшей препарат, и контрольной группой, не получавшей препарата, также обладали статистической достоверностью для обеих аналитических выборок FAS и PP. Статистически достоверной разницы в частоте реакции между группами, получавшими одно и два введения в неделю, обнаружить не удалось.
Сравнение числовых данных по частоте реакции в исследованиях A и B, явно показало, что эффект от введения препарата один или два раза в неделю является практически идентичным. Во всех трех группах в среднем наблюдалось понижение значения pH (MV) от начала исследования до визита 2. Это понижение было статистически достоверным для всех групп. Кроме того, наблюдалось понижение значений pH от начала исследования до визита 3, однако это понижение не было статистически достоверным для контрольной группы, и статистическая достоверность присутствовала только у двух групп, получавших препарат. Понижение pH было существенно больше в двух группах, получавших препарат, по сравнению с контрольной группой.
Суммарные ощущения субъектов от применения препарата были очень хорошими с точки зрения эффективности и удобства для пользователя.
Среди популяции пациентов введение вагинальных таблеток Laccure считалось хорошо переносимым.