ОДНОВРЕМЕННОЕ РЕДАКТИРОВАНИЕ ГЕНОВ И ИНДУКЦИЯ ГАПЛОИДОВ

1. Способ редактирования геномной ДНК двудольных растений, включающий:
a) получение первого двудольного растения, содержащего мутацию в гене центромерного гистона 3 (CENH3) и необязательно в CENH3 трансгене с заменой хвоста, где указанное первое двудольное растение экспрессирует фермент модификации ДНК и необязательно по меньшей мере одну направляющую нуклеиновую кислоту;
b) получение второго двудольного растения, при этом второе двудольное растение содержит геномную ДНК двудольного растения, которую необходимо отредактировать;
в) опыление первого двудольного растения пыльцой второго двудольного растения; и
г) отбор по меньшей мере одного гаплоидного потомства, полученного в результате опыления на стадии (в), где гаплоидное потомство содержит геном второго двудольного растения, но не первого двудольного растения, и геном гаплоидного потомства был модифицирован с помощью модификации ДНК фермента и необязательно по меньшей мере одну направляющую нуклеиновую кислоту, доставляемую первым двудольным растением.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий:
е) обеспечение возможности удвоения хромосом по меньшей мере одному гаплоидному потомству, выбранному на стадии (г).
3. Способ по п. 2, где отредактированное гаплоидное потомство подвергается спонтанному удвоению хромосом, в результате чего создается отредактированное удвоенное гаплоидное потомство.
4. Способ по п. 2, в котором отредактированное гаплоидное потомство обрабатывают агентом, удваивающим хромосомы, в результате чего создается отредактированное удвоенное гаплоидное потомство.
5. Способ по п. 4, где агент, вызывающий удвоение хромосом, представляет собой колхицин, пронамид, дитипир, трифлуралин или другой известный агент против микротрубочек.
6. Способ по п. 1, где фермент модификации ДНК представляет собой сайт-направленную нуклеазу, выбранную из группы, состоящей из мегануклеаз (MNs), нуклеаз с цинковыми пальцами (ZFNs), эффекторных нуклеаз, подобных активаторам транскрипции (TALENs), нуклеазы Cas9, нуклеазы Cpf1 (Cas12a), dCas9-FokI, dCpf1-Fokl, химерной СавЭ-цитидиндезаминазы, химерной Cas9-адениндезаминазы, химерной FEN1-FokI и Mega-TALs, никазы Cas9 (nCas9), не-FokI химерной нуклеазы dCas9, не-FokI нуклеазы dCpf1, химерной Cpf1-цитидиндезаминазы и Cpf1-адениндезаминазы.
7. Способ по п. 1, где по меньшей мере одна направляющая нуклеиновая кислота представляет собой направляющую РНК.
8. Способ по п. 7, где направляющая РНК представляет собой последовательность из 18-21 нуклеотида и по меньшей мере на 90% идентична целевой последовательности.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что последовательность-мишень представляет собой SEQ ID NO: 103, а геномная ДНК двудольных растений представляет собой геномную ДНК арабидопсиса.
10. Способ по п. 1, где первое двудольное растение экспрессирует маркерный ген.
11. Способ по п. 10, где маркерный ген выбран из группы, состоящей из GUS, PMI, PAT, GFP, RFP, CFP, B1, C1, R-nj, антоциановых пигментов.
12. Способ по п. 1, в котором первое двудольное растение представляет собой трансформируемое двудольное растение, выбранное и/или полученное из группы, состоящей из Arabidopsis, Brassica, соевых бобов, томатов, подсолнечника и хлопка.
13. Способ по п. 1, где мутация в гене CENH3 выбрана из группы, состоящей из мутации с потерей функции, мутации с частичной потерей функции, мутации с восстановленным сдвигом рамки считывания и делеции внутри рамки считывания мутация.
14. Способ по п. 13, где мутация с частичной потерей функции представляет собой мутацию со сдвигом рамки считывания вблизи 3'-конца гена CENH3.
15. Способ по п. 13, где мутация с потерей функции представляет собой нокаут-мутацию.
16. Способ по п. 1, где по меньшей мере одно гаплоидное потомство содержит SEQ ID NO: 104, 105, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 или 117, и дополнительно при этом по крайней мере одно гаплоидное потомство является Arabidopsis.