СРЕДСТВО ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА В
AGENT FOR INFLUENZA B VIRUS

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии и созданию лекарственных средств, и может быть использовано для лечения гриппа, вызываемого вирусами гриппа В.
Вирусы гриппа в 60-65% являются причиной эпидемических и инфекционных заболеваний в мире. По данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) в мире ежегодно болеют до 100 миллионов человек во время эпидемии гриппа и смертность от гриппа в разных возрастных группах колеблется от десятков до сотен случаев на 100 тысяч населения. Поскольку вакцинация, являющая основным средством борьбы с гриппом, не позволяет в значительном числе случаев предупредить заболеваемость населения гриппом, важным средством борьбы с этим заболеванием остаются этиотропные химиопрепараты, подавляющие репродукцию вируса. В настоящее время в мире используется несколько таких препаратов. К первому поколению относятся препараты адамантанового ряда: Амантадин (1-аминоадамантан гидрохлорид и его производное римантадин (альфа-метил-1-адамантан-метиламин гидрохлорид), являющиеся блокаторами ионных каналов, образованных М2 белком вируса гриппа. Широко используемые препараты производные адамантана терапевтически и профилактически эффективны в отношении вируса гриппа А, но не эффективны в отношении вируса гриппа В (Douglas R.G. 1990. Prophylaxis and treatment of influenza. New Engl. J. Med., 322, 443-450 Review, Hayden F.G. 1996, Amantadine and rimantadine-clinical aspects. In: Richman, D.D. (Ed) Antiviral Drug Resistance. John Wiley and Sons, Ltd, New York, pp 43-51, Zlydnikov D.M., Kubar O.I., Kovaleva T.P. et al. 1981. Study of rimantadine in the USSR: a review of the literature. Rev. Infect. Dis.3, 408-421) и, кроме того, вызывают возникновение ряда побочных эффектов. Препараты второго поколения, к которым относятся ингибиторы нейраминидазы - занамивир, используемый в форме аэрозоля, и озельтамивир, применяемый в виде капсул или суспензии для детей, эффективны в отношении как вируса гриппа А, так и вируса гриппа В (Von Itzstein M., Wu, W-Y, Kok G.K. et al. 1993. Rational design of potent sialidase-based inhibitors of influenza virus protection. Nature 363, 418-423, Kim C.U., Lew W., Williams M.A. 1997, Influenza neuraminidase inhibitors possessing a novel hydrophobic interactions in the enzyme active site: design, synthesis, and structural analysis of carbocyclic sialic acid analogues with potent antiinfluenza activity. J. Am. Chem. Soc 119, 681-690), но их применение также часто сопряжено с возникновением побочных эффектов.
В России широкое распространение получил отечественный препарат Арбидол, созданный совместными усилиями ученых Медицинского Центра Химии лекарственных средств (ЦХАС-ВНИХФИ, г.Москва) и НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (г.Санкт-Петербург). Антивирусный препарат Арбидол (1-метил-2-фенил-тиометил-3-карботокси-4-диметиламинометил-5-гидрокси-6-бромоиндолгидрохлорид моногидрат) ингибирует репродукцию вируса гриппа А и В в культуре клеток и защищает от гибели мышей, инфицированных вирусом гриппа. Арбидол действует на ранних стадиях вирусной репродукции, ингибируя слияние вирусной липидной оболочки с клеточными мембранами, предотвращает проникновение вируса внутрь клетки. Противовирусная активность Арбидола доказана в многочисленных клинических исследованиях.
Поскольку длительное применение противовирусных препаратов, как правило, приводит к усилению резистентности к ним вирусов гриппа и тем самым к снижению терапевтической эффективности, совершенно очевидно, что только новые препараты могут обеспечить прогресс в лечении гриппа.
Предлагаемое изобретение основано на обнаружении авторами у заявленного ими противогриппозного средства гидрохлорид 5-гидрокси-4-аминометил-1-циклогексил-3-этилоксикарбонилиндол (далее препарат), эффективно подавляющего репродукцию вирусов гриппа А, способности подавлять репродукцию вирусов гриппа В. Указанный препарат имеет следующую структуру:
Противовирусное действие препарата в отношении вирусов гриппа В продемонстрировано в эксперименте по изучению влияния препарата на репродукцию вирусов гриппа В в культуре клеток МДСК (перевиваемые клетки культуры ткани почки собаки).
В предварительных экспериментах было исследовано цитотоксическое действие препарата для установления минимально токсической концентрации, которая составила 15 мкг/мл.
Испытания противовирусной активности препарата были проведены на штаммах вирусов гриппа В в условиях одинаковой множественности заражения вирусом. Противовирусная активность препарата изучена на основании его способности подавлять репродукцию вирусов при использовании в концентрации 10 мкг/мл.
В качестве препарата сравнения был использован противогриппозный препарат Арбидол. Исследование выполнялось по следующей схеме: на монослой клеток МДСК в 96 луночной панели вносили препарат и Арбидол в концентрации 10 мкг/мл, инкубировали 2-3 часа при 37°С, а затем заражали вирусами с одинаковой множественностью. Панели инкубировали 24 часа при 37°С. Затем осуществляли постановку иммуноферментного анализа для определения концентрации вируса. С этой целью в лунки панелей последовательно вносили мышиные моноклональные антитела к вирусам гриппа В, конъюгат пероксидазы хрена и антител к мышиным антителам, субстрат для пероксидазы. После остановки реакции проводили учет результатов при сравнении показателей плотности в контрольных (вирус) и опытных лунках (вирус + препарат). Результаты исследования влияния препарата на репродукцию вирусов гриппа В приведены в таблице 1.
Таблица 1
Сравнительная эффективность действия препарата и Арбидола на вирус гриппа В
Штаммы вируса гриппа В
Подавление репродукции вирусов гриппа, % (препарат и Арбидол 10 мкг/мл)
Препарат
Арбидол
В/Хабаровск/57/05
50,0
51,0
В/Москва/3/05
19,0
0
В/Москва/4/05
39,0
25,0
В/Владимир/30/05
4,0
19,0
В/Москва/35/05
42,0
20,0
50
50
Кроме этого, для оценки противовирусной активности препарата были определены концентрации (мкг/мл), ингибирующие вирусную репродукцию вируса гриппа В Москва 79/08 на 50% (ИК). Результаты определения ИК препарата для вируса гриппа В в клетках MDCK в сравнении с Арбидолом приведены в таблице 2.
Таблица 2
Противовирусная активность препарата в отношении вируса гриппа В в клетках MDCK
Штамм вируса В
Ингибирующая концентрация (ИК<sub>50</sub>, мкг/мл)
Препарат
Арбидол
В/Москва/79/08
6,2
5,5
Из данных, приведенных в таблицах 1 и 2, видно, что препарат в отношении вируса гриппа В обладает специфической активностью, соизмеримой с активностью препарата сравнения - Арбидола.