СРЕДСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ АКТИВНОСТЬ КИСЛОЙ ЛИПАЗЫ ТРОМБОЦИТОВ
AGENT INTENSIFYING THROMBOCYTE ACID LYPASE ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, фармакологии и биологии и, конкретно, может быть использовано, например, для повышения устойчивости сосудистой системы к холестерину при развитии атеросклеротического процесса.
Известно, что нарушения липидного обмена в виде атерогенных гиперхолестеринемий сопровождаются повышением свертываемости крови, что оправдывает применение в этих условиях препаратов с антикоагулянтным и липолитическим действием, например гепарина. В свою очередь, коагуляционный гемостаз и липидный профиль в значительной мере определяются состоянием тромбоцитов, их ферментативными реакциями. В этом плане заслуживают внимания исследования и разработки средств, изменяющих активность липаз тромбоцитов, в частности - кислой липазы тромбоцитов. Этот фермент с оптимумом pH 4,0-5,0 отличается широкой субстратной специфичностью и осуществляет гидролиз триглицеридов (ТГ), диглицеридов, моноглицеридов и эстерифицированного холестерина ЛПНП в лизосомах различных клеток, а также является маркером активности атеросклеротического процесса и эффективности проводимого лечения как больных атеросклерозом, так и больных с осложнениями атеросклероза, в частности - больных ишемической болезнью сердца - ИБС (стенокардией напряжения II ФК) [2].
В литературе имеются сведения о возможности активации кислой липазы различными химическими соединениями [Coates P.M., Brown S.A., Junawan J., Koldovaky О., 1977, 1979, С.К.Евтушенко, Т.М.Морозова, И.Н.Голубева, 2007]. Однако существует потребность в поиске и внедрении в практику новых диагностических и лекарственных средств, обладающих указанной активностью.
В качестве ближайшего аналога может быть указан источник: М.А.Самсонов, А.В.Васильев, А.В.Погожева, С.Н.Бобкова. Сравнительная оценка гиполипидемического действия ПНЖК w-3 и липостабила // Вопр. питания, 1996, №4. с.12-16. [3].
Задачей изобретения является разработка нового средства, повышающего активность кислой липазы.
Поставленная задача решается тем, что в качестве активатора кислой липазы применяют новый отечественный препарат трекрезан, что позволяет расширить область его применения.
Трекрезан обладает широким спектром терапевтического действия и отвечает формуле:
3
6
4
2
2
2
3
-
+
[2-CHCHOCHCOO][NH(CHCHOH)]
Известно применение трекрезана как препарата, повышающего иммунитет и адаптивные свойства организма [1]. Применение трекрезана по новому назначению стало возможным благодаря выявленным нами его новым свойствам. Впервые показано, что введение трекрезана повышает активность лизосомального липолитического фермента из класса гидролаз (КФ 3.1.1) - кислой липазы (КФ 3.1.1.3) (КЛ).
Свойство трекрезана повышать активность кислой липазы в литературе не описано.
Возможность осуществления изобретения может быть проиллюстрирована ниже представленными данными.
Методика. В исследование включены 27 больных ИБС: стенокардией напряжения II ФК (17 мужчин и 10 женщин), средний возраст - 55,4±6,7 лет. Диагноз верифицировали на основании рекомендаций ААК/ААС/ЕОК, 2003 и Канадской классификации СтН в модификации ВКНЦ.
В исследование не включались больные с нестабильной стенокардией, инфарктом миокарда давностью менее 3 месяцев, с тяжелой и злокачественной артериальной гипертензией, с хронической сердечной недостаточностью ФК III-IV по NYHA, со стойкой артериальной гипотензией (САД<100 мм рт.ст.), с AV-блокадой II-II-III степени, синдромом слабости синусового узла, с выраженной почечной и печеночной недостаточностью, а также с заболеваниями или состояниями, которые могли повлиять на объективность исследования.
Все пациенты в течение 30 дней до начала исследования получали стандартную терапию СтН, которая при необходимости включала нитраты (изосорбида динитрат 40-80 мг/сут), β-адреноблокаторы (атенолол 25-50 мг/сут), дезагреганты (аспирин 125 мг/сут), ингибиторы АПФ (каптоприл 25-50 мг/сут), а затем в составе комплексного лечения трекрезан, по 600 мг в сутки в течение 30 дней. Реологические свойства крови (РСК) исследовали на вискозиометре ротационного типа АКР-2 (МП “Комед”, Россия) [4], оценивали вязкость крови (ВКр), индекс агрегации эритроцитов (ИАЭ) и индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ), вязкость плазмы (ВПл). Фибриноген плазмы крови (ФБПл) определяли по методике Клаусса [5]. Эуглобулиновым методом (ЭуЛ) оценивали активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), фибринолитическую активность крови [5]. Агрегационную активность тромбоцитов изучали методом, рекомендованным [4]. Содержание холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) определяли ферментативным способом на анализаторе FP-900 (Финляндия), ХС липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) - в супернатанте после преципитации липопротеидов других классов хлоридом магния. ХС липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) рассчитывали по формуле W.Friedwald [6]. Индекс атерогенности (ИА) определяли методом [5]. Исследования проводили до начала лечения и через 1,5 месяца комплексного лечения. Тромбоциты выделяли из крови путем последовательного центрифугирования в градиенте фиколлверографии методом [7]. Активность кислой липазы определяли спектрофотометрически [8]. Результаты обрабатывали статистически.
-1
-1
-1
Результаты. При сравнении исходных показателей РСК и гемостаза, отмечено превышение верхних границ нормы исходных средних значений: вязкость крови при скоростях сдвига 200 с (ВКр200) - в 1,1 раза, вязкость крови при скоростях сдвига 100 с (BKp100) - в 1,1раза, вязкость крови при скоростях сдвига 20 с (ВКр20) - в 1,4 раза. Среднее значение ИДЭ составило -1,093+0,057, что меньше нормы в 1,10 раза, и свидетельствовало о повышенной жесткости эритроцитов и их меньшей доступности для капиллярной зоны микроциркуляции (табл.1). После применения в течение месяца стандартного лечения отмечено некоторая положительная, но не достоверная динамика показателей РСК и гемостаза. При добавлении трекрезана в дозе 600 мг в сутки к стандартной терапии в течение 1 месяца наблюдались достоверные положительные изменения РСК: снижение ВКр200, BKp100, ВКр20, ИАЭ, ВПл, ФБПл, ИАТр, укорочение времени ЭуЛ и удлинение ТВ (табл.1). Не выявлено значимых побочных эффектов или осложнений, связанных с приемом трекрезана, требовавших его отмены.
Вместе с тем, на фоне проводимого стандартного лечения наблюдалось снижение уровня активности КЛ тромбоцитов, которые, как известно, являются составной частью атеросклеротического процесса, особенно на ранних стадиях повреждений. Изменения тромботической формации включают активацию тромбоцитов с последующей адгезией к субэндотелиальному коллагену [9]. Все это свидетельствует о нарушении липидного обмена и не противоречит результатам других исследований [2, 10]. После добавления к стандартизованному лечению СтН трекрезана, у больных ИБС отмечалось достоверное повышение активности КЛ в Тц на 32% по сравнению с активностью этого фермента до начала лечения и снижение уровня ХС, ЛПНП, ТГ, ИА (табл.2).
Таблица 1
Реологические свойства крови и гемостаз у больных СтН ПФК при включении трекрезана в комплексное лечение(n=27) (M±m)
Показатель
Исходно
Через 1 месяц станд. леч.
Через месяц после вкл. трекрезана
Вязкость крови при скоростях сдвига 200 с<sup>-1</sup> (ВКр200), (сП)
5,7±0,06
5,6±0,09
5,4±0,07*
Вязкость крови при скоростях сдвига 100 с<sup>-1</sup> (BKp100), (сП)
6,2±0,08
6,0±0,11
5,8±0,08*
Вязкость крови при скоростях сдвига 20 с<sup>-1</sup> (ВКр20), (сП)
8,6±0,09
8,3±0,06
7,9±0,06*
Вязкость плазмы (ВПл), (сП)
1,9±0,02
1,86±0,04
1,7±0,01*
Индекс агрегации эритроцитов (ИАЭ)
1,4±0,09
1,37±0,08
1,3±0,06*
Индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ)
1,07±0,04
1,07±0,06
1,08±0,1
Гематокрит, (%)
41,8±3,7
41,5±2,4
41,5±3,2
Общий белок (ОБ), (г/л)
76,2±11,5
75,9±7,4
75,5±9,2
Фибриноген плазмы крови (ФБПл), (г/л)
345,4±14,8
341,9±13,7
301,9±12,3*
Спонтанная агрегация тромбоцитов (САТр), (%)
6,8±0,2
6,8±0,3
6,6±0,3
Индуцированная-АДФ агрегация тромбоцитов (ИАТр), (%)
49,6±1,1
42,9±1,8
39,9±1,5*
Активированное частичное тромбопластиновое время АЧТВ, (сек.)
38,5±1,2
40,2±1,9
43,8±2,7
Протромбиновое время (ПВ), (секунды)
16,1±2,2
16,5±2,8
17,3±3,2
Тромбиновое время (ТВ), (секунды)
17,6±1,9
18,4±1,7
23,5±1,6*
Время эуглобулинового лизиса ЭуЛ, (секунды)
204,9±15,8
198,5±26,4
180,5±15,3*
Примечание: * p<0,05
Таблица 2
Изменение активности кислой липазы в тромбоцитах (мкмоль/мин на 1 г белка) и уровня липидов у больных СтН ФК II при включении трекрезана в состав комплексной терапии (n=27) (M±SD)
Показатель
Исходно
Через 1 месяц станд. лечения
Через месяц после вкл. трекрезана
КЛ (Тц)
0,25±0,01
0,27±0,05
0,33±0,03*
ХС, ммоль/л
6,52±0,21
6,33±0,18
5,73±0,20*
ЛПВП ммоль/л
0,97±0,13
0,98±0,10
1,17±0,11
ЛПНП ммоль/л
3,92±0,15
3,76±0,07
3,64±0,08
ЛПОНП ммоль/л
1,44±0,14
0,28±0,17
0,88±0,23*
ТГ ммоль/л
2,32±0,17
2,17±0,14
1,77±0,11*
ИА
5,72±0,34
5,45±0,28
3,89±0,28*
Примечание: * - p<0,05
Литература
1. Воронков М.Г., Расулов М.М. Трекрезан - родоначальник нового класса адаптогенов и иммуномодуляторов // Хим.-фарм. Ж., 2007, №1, с.3-9
2. Anderson R.A., Bryson G.M., Parks J.S. // Methods in Molecular Biology (1999), Vol.68, №3, P.333-345.
3. Самсонов M.A., Васильев A.B., Погожева A.B., Бобкова С.Н.: Сравнительная оценка гиполидемического действия ПНЖК ω-3 и липостабила // Вопр. питания 1996, №4. с.12-16.
4. Захарченко В.Н. // В сб.: Реологические исследования в медицине, вып.I, М., Медицина, (1997), С.2.
5. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина. (1987), С.106-174.
6. Friedwald W.T., Levy R.I., Fredrickson D.S Estimation of plasma low density lipoprotein cholesterol concentration with use of the preparative ultracentri-fuge. // Clin Chem (1972); V.18, P.499-502.
7. Gmeling-Meyling F., Waldmann T. Separation of human blood monocytes and lymphocytes on a continuous percoll gradient. //, J. Immun. Methods, (1980). Vol.26, №1, P.308-603.
8. Булычев А.Г., Семенова Е.Г., Ассиновская О.А. Влияние аггрегации нейтрального красного, акридинового оранжевого и хлористого аммония клетками (сублинии) на активность лизосомальных гидролаз // Цитология. - (1986). Т.28, №7. С.703-711.
9. Packard R.R., Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction // Clin Chem. (2008). Vol.54, №1. P.24-38.
10. Coates P.M., Langer Т., Cortner J.A. Genetic variation of human mononuclear leukocyte lysosomal acid lipase activity relationship to aterosclerosis // Aterosclerosis, Vol.62. - P.11-20. (1986).