ДЕТСКОЕ ПИТАНИЕ С НЕЖИЗНЕСПОСОБНЫМИ БИФИДОБАКТЕРИЯМИ И НЕУСВОЯЕМЫМИ ОЛИГОСАХАРИДАМИ
INFANT FOOD CONTAINING UNVIABLE BIFIDOBACTERIA AND INDIGESTIBLE OLIGOSACCHARIDES

Настоящее изобретение относится к области кормления грудничков и/или детей младшего возраста. В частности, настоящее изобретение относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста с неусвояемыми олигосахаридами и нежизнеспособными бифидобактериями. Такую питательную композицию предпочтительно используют для лечения или профилактики аллергии, предпочтительно пищевой аллергии и/или атопических заболеваний, включая атопические дерматиты и/или астму.
У грудничков, которых кормят грудью, развивается кишечная микрофлора, богатая молочнокислыми бактериями, которые продуцируют молочную кислоту из присутствующих в грудном молоке неусвояемых сахаридов, которые специфически ферментируются молочнокислыми бактериями, в частности бифидобактериями.
Микрофлора, богатая бифидобактериями, является полезной, поскольку оказывает профилактическое воздействие на инфекции, диарею, запор, воспаление желудочно-кишечного тракта, аллергию, в частности пищевую аллергию, атопические заболевания, включая атопические дерматиты и астму, и она оказывает благоприятное воздействие на иммунную систему.
Bifidobacterium breve
Детское питание или детская смесь, используемая для имитации грудного молока, может быть выполнена также для имитации бифидогенного воздействия грудного молока. В WO 2005039319 описано применение живых  и смеси двух различных неусвояемых сахаридов в смеси для кормления грудничков для улучшения микрофлоры. В документе описывается релевантность бифидобактерий по семействам наряду с таковой по родам. В WO 20070046698 описывается применение композиции, содержащей неусвояемые олигосахариды, для получения композиции для энтерального введения грудному ребенку, рожденному с проведением кесарева сечения. Совместно вводят молочно-кислые бактерии для увеличения разнообразия и/или количества микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте грудничка, рожденного с проведением кесарева сечения. В JP 01242532 описывается применение жизнеспособных или нежизнеспособных B. breve в качестве иммуннопотенциаторов, стимулирующих пейеровы бляшки, предотвращая, таким образом, внутрикишечные инфекции и аллергию. В этом документе не упоминается смесь для питания грудничков и/или детей младшего возраста.
Известно, что живые клетки B. breve могут улучшать микрофлору и, следовательно, снижать аллергию. Однако предпочтительно применение нежизнеспособных B. breve. Это имеет несколько преимуществ:
1) Продукт с нежизнеспособными B. breve легче хранится, и снижаются расходы, поскольку нет необходимости в особых мерах предосторожности для поддержания жизнеспособности клеток B. breve на приемлемом уровне. По существу это относится к продуктам с активностью воды выше 0,3.
2) За счет отсутствия ферментативной способности у B. Breve в хранящихся продуктах с высокой активностью воды и/или в смеси для питания грудничков и/или детей младшего возраста кислотность не повышается в период после восстановления водой и до момента потребления.
E. sakazakii
3) После получения готовая питательная композиция с нежизнеспособными B. breve может быть пастеризована и/или стерилизована, следовательно, снижен риск микробного обсеменения вредными микроорганизмами, такими как . Таким образом, настоящее изобретение может быть воплощено в жидкой готовой к употреблению смеси, содержащей нежизнеспособные B. breve, получаемой и хранящейся при комнатной температуре.
4) Если требуется, порошкообразный продукт с нежизнеспособными B. breve может быть восстановлен водой с температурой выше 37°C.
5) Доза клеток B. breve, получаемых каждым грудным ребенком и/или ребенком младшего возраста, может быть более легко проконтролирована, поскольку не происходит дополнительного роста как в жидком продукте, так и в желудочно-кишечном тракте грудничка. Последнее является варьирующим фактором, зависящим от индивидуальной среды желудочно-кишечного тракта, и, следовательно, ведет к варьированию степени оказания положительного воздействия на отдельных грудничков.
Bifidobacterium breve,
Bifidobacterium breve
Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что питание для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащее неусвояемые олигосахариды, преимущественно дополненное клетками нежизнеспособных  оказывает профилактическое и/или лечебное воздействие на пищевую аллергию и/или атопические заболевания. Воздействие нежизнеспособных  в композициях сравнимо с воздействием жизнеспособных клеток B. breve. Наблюдаемое противоаллергическое воздействие инактивированных B. breve не может быть объяснено прямым пробиотическим воздействием, таким как воздействие через улучшение флоры, поскольку клетки больше не живые и, следовательно, количество клеток B. breve в микрофлоре не увеличивается. До настоящего времени положительное воздействие B. breve предполагалось за счет присутствия живых клеток.
Воздействие нежизнеспособных клеток B. breve сравнимо, но немного меньше по сравнению с таковым для живых клеток B. breve. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что воздействие нежизнеспособных B. breve даже может быть дополнительно улучшено за счет присутствия неусвояемых олигосахаридов. Это неожиданно, поскольку, как правило, в симбиотических препаратах присутствие неусвояемых олигосахаридов стимулирует присутствующие пробиотические бактерии и, следовательно, демонстрирует улучшенное воздействие. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что также в препаратах, содержащих инактивированные B. breve, которые обычно не используют, положительное влияние от присутствия неусвояемых олигосахаридов также возрастает при использовании их в комбинации по сравнению с использованием по отдельности.
Неусвояемые олигосахариды стимулируют кишечную микрофлору грудничка и/или ребенка младшего возраста, в частности, количество бифидобактерий и/или молочнокислых бактерий. Улучшение микрофлоры за счет использования неусвояемых олигосахаридов в смеси для питания грудничков и/или детей младшего возраста при добавлении нежизнеспособных B. breve одновременно в результате приводит к улучшению профилактического воздействия и/или лечения расстройств, таких как профилактическое воздействие на инфекции, диарею, запор, воспаление желудочно-кишечного тракта, развитие кишечника, аллергию, в частности, пищевую аллергию, атопичесике дерматиты и/или астму.
Bifidobacterium breve
Bifidobacterium breve
3
3
Настоящее изобретение относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащему неусвояемые олигосахариды A и/или B и нежизнеспособные в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 10 КОЕ на г сухого веса питания для грудничков и/или детей младшего возраста, и содержащему жизнеспособные в количестве менее чем 10 КОЕ на г сухого веса питания для грудничков и/или детей младшего возраста.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу вскармливания грудничков и/или детей младшего возраста.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики аллергии, предпочтительно пищевой аллергии и/или атопических заболеваний, включая атопическую экземы и/или астму, указанный способ включает введение субъекту питания для грудничков и/или детей младшего возраста.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики инфекции, указанный способ включает введение субъекту питания для грудничков и/или детей младшего возраста.
В другом дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики пеленочного дерматита, указанный способ включает введение субъекту питания для грудничков и/или детей младшего возраста.
Другими словами, настоящее изобретение относится к применению питания для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению для получения композиции или питания для лечения и/или профилактики аллергии, предпочтительно пищевой аллергии, атопических заболеваний, включая атопическую экзему и/или астму, или другими словами, настоящее изобретение относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста для применения при лечении и/или для профилактики аллергии, предпочтительно пищевой аллергии, атопической экземы и/или астмы.
В качестве альтернативы, настоящее изобретение относится к применению питания для грудничков и/или детей младшего возраста для получения композиции или питания для лечения и/или профилактики инфекции или, другими словами, настоящее изобретение относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста для применения при лечении и/или для профилактики инфекции.
Также в качестве альтернативы, настоящее изобретение относится к применению питания для грудничков и/или детей младшего возраста для получения композиции или питания для лечения и/или профилактики пеленочного дерматита или, другими словами, настоящее изобретение относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста для применения при лечении и/или для профилактики пеленочного дерматита.
Bifidobacterium breve.
Bifidobacterium breve
B. breve
Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol
B. breve
представляют собой грамм-положительные, анаэробные разветвленные палочковидные бактерии.  по настоящему изобретению предпочтительно имеют, по меньшей мере, 95% идентичность последовательности 16 S рРНК при сравнении со штаммом B. breve ATCC 15700, более предпочтительно, по меньшей мере, 97% идентичность (. 44:846-849). Бифидобактерии, включенные в композицию, способы и применения в настоящем изобретении, предпочтительно выявляются методом гибридизации пробы  с 5' нуклеазой, как описано в WO 2005039319.
B. Breve,
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. breve
B. Breve
B. breve
Предпочтительные штаммы B. breve представляют собой выделенные из фекалий здоровых грудничков, находящихся на грудном вскармливании. Как правило, они коммерчески доступны от производителей молочно-кислых бактерий, но также могут быть выделены непосредственно из фекалий, идентифицированы, охарактеризованы и продуцированы. Согласно предпочтительному варианту изобретения композиция по настоящему изобретению содержит, по меньшей мере, одну  выбранную из группы, состоящей из  Bb-03 (Rhodia/Danisco),  M-16V (Morinaga),  R0070 (Institute Rosell, Lallemand),  BR03 (Probiotical),  BR92) (Cell Biotech) DSM 20091, и LMG 11613. Наиболее предпочтительно нежизнеспособный  представляет собой нежизнеспособный M-16V (Morinaga). Наиболее предпочтительно нежизнеспособный выбирают из штамма  1-2219, депонированного в CNCM в Париже, Франция.
3
3
13
4
12
5
11
5
10
4
13
4
13
5
12
6
11
4
14
5
13
6
12
8
11
4
14
5
13
6
12
6
11
Композиция по настоящему изобретению включает нежизнеспособные Bifidobacterium breve в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 10 КОЕ на г сухого веса композиции. Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает нежизнеспособные Bifidobacterium breve в количестве, эквивалентном от 10 до 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) B. breve на г сухого веса композиции по настоящему изобретению, предпочтительно от 10 до 10, наиболее предпочтительно от 10 до 10, наиболее предпочтительно эквивалентно от 10 до 10 КОЕ B. breve на г сухого веса композиции по настоящему изобретению. Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает нежизнеспособные Bifidobacterium breve в количестве, эквивалентном от 10 до 10, предпочтительно от 10 до 10, наиболее предпочтительно от 10 до 10, наиболее предпочтительно эквивалентно от 10 до 5×10 колониеобразующих единиц (КОЕ) B. breve на г общих неусвояемых олигосахаридов. Доза нежизнеспособных B. breve по настоящему изобретению, предпочтительно вводимая как дневная доза, эквивалентна от 10 до 10, более предпочтительно от 10 до 10, еще более предпочтительно эквивалентна от 10 до 10, наиболее предпочтительно эквивалентна от 10 до 5×10 колониеобразующих единиц (КОЕ). В случае, когда композиция находится в жидком состоянии, она предпочтительно включает эквивалент от 10 до 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) нежизнеспособных B. breve на 100 мл композиции по настоящему изобретению, предпочтительно от 10 до 10, более предпочтительно от 10 до 10, наиболее предпочтительно эквивалентна от 10 до 10 КОЕ B. breve на 100 мл композиции по настоящему изобретению.
3
3
Количество нежизнеспособных Bifidobacterium breve, эквивалентное, по меньшей мере, 10 КОЕ на г сухого веса, означает такое количество нежизнеспособных Bifidobacterium breve, которое эквивалентно по меньшей мере 10 КОЕ живых B. breve на грамм (по сухому веществу).
Эквивалент КОЕ может быть определен проведением анализа 5' нуклеазой с пробами B. breve и праймерами, как описано в WO 2005039319 в продукте (то есть смеси для кормления грудничков), содержащем нежизнеспособные B. breve, и сравнением его с калибровочной кривой, полученной от сопоставимого продукта (например, стандартная смесь для детского питания), в котором известно количество КОЕ добавленных сухих жизнеспособных B. breve. Сухие жизнеспособные бифидобактерии могут быть коммерчески получены, как описано выше. Показатель КОЕ на калибровочной кривой, полученной для жизнеспособных или живых B. breve, которые имеют такой же отклик при анализе с 5'нуклеазой, как продукт, содержащий инактивированные B. breve, считается эквивалентным количеством КОЕ нежизнеспособных B. breve. В качестве альтернативы, количество КОЕ на г сухой массы может быть определено в композиции только перед стадией инактивации.
3
2
4
3
2
3
Присутствие большого количества жизнеспособных бифидобактерий в результате может привести к пост продуцированию кислоты в жидкой смеси для питания грудничков. Следовательно, композиция по настоящему изобретению включает менее чем 10 КОЕ жизнеспособных бактерий, предпочтительно менее чем 10, еще более предпочтительно менее чем 10 КОЕ на г сухой массы композиции по настоящему изобретению. В случае, когда композиция по настоящему изобретению находится в жидком состоянии, она предпочтительно включает менее чем 10 КОЕ жизнеспособных бифидобактерий, предпочтительно менее чем 10, более предпочтительно менее чем 10 КОЕ на 100 мл. Подходящий способ определения КОЕ жизнеспособных бифидобактерий описан в Ingham, S. C, 1999, J. Food Prot. 62 (1) p.77-80. Предпочтительно композиция включает совсем неопределяемое КОЕ живых B. breve. Однако полное отсутствие B. breve трудно или невозможно определить. Соответственно, отсутствие живых B. breve может быть определено методом посева на чашках, при указанном пределе определения. Этот предел определения составляет 10 КОЕ/г сухой массы композиции.
Нежизнеспособные B. breve по настоящему изобретению относятся к инактивированным B. breve, некультивируемым B. breve, нерастущим B. breve и/или (метаболически) нежизнеспособным B. breve. Клетки B. breve могут быть инактивированны способами, известными из уровня техники, включающими стадии тепловой обработки (включая стерилизацию, пастеризацию, УВТ обработку), облучение (УФ), обработку кислородом, обработку бактерицидами, такими как этанол, ультразвуком, сверхвысоким давлением, гомогенизацией высокого давления и с использованием деструктора клеток. Предпочтительно B. breve инактивируют нагреванием.
Присутствие нежизнеспособных B. breve преимущественно предотвращает и/или лечит, по меньшей мере, одно расстройство, выбранное из группы, состоящей из инфекций, диареи, запора, воспаления желудочно-кишечного тракта, расстройств, вызванных замедленным развитием желудочно-кишечного тракта, (пищевой) аллергии, атопических дерматитов, экземы и астмы, при этом обеспечивая множество технологических преимуществ продукту, включая увеличение срока хранения, снижение случаев бактериального обсеменения, снижение постпродуцирования кислоты в продукте, упрощенный контроль дозы и более удобное восстановление.
Неусвояемые олигосахариды.
Композиция по настоящему изобретению включает неусвояемые олигосахариды A и/или B. Неусвояемые олигосахариды A и/или B предпочтительно стимулируют рост кишечных бактерий, продуцирующих молочную кислоту, в частности, бифидобактерий и/или молочно-кислых бактерий и, следовательно, стимулируют формирование здоровой кишечной микрофлоры и предпочтительно перевариваются в органические кислоты. Образованные органические кислоты стимулируют продуцирование слизи и, следовательно, дополнительно улучшают функцию кишечного барьера и/или развитие у грудничков. В результате присутствие неусвояемых олигосахаридов A и/или B оказывает положительное воздействие на инфекции, аллергию и/или атопические заболевания. Преимущественно неусвояемые олигосахариды A и/или B являются водорастворимыми (согласно методу, описанному в L. Prosky et al, J. Assoc. Anal. Chem 71: 1017-1023, 1988) и представляют собой олигосахариды со степенью полимеризации (СП) от 2 до 200. СП (среднее) неусвояемых олигосахаридов A и/или B предпочтительно составляет менее 200, более предпочтительно менее 100, еще более предпочтительно менее 60, наиболее предпочтительно менее 40. Неусвояемые олигосахариды A и/или B не перевариваются в кишечнике под действием пищеварительных ферментов, присутствующих в верхнем отделе пищеварительного тракта человека (тонкий кишечник и желудок). Неусвояемые олигосахариды A и/или B предпочтительно перевариваются кишечной микрофлорой человека. Усвояемыми считаются, например, глюкоза, фруктоза, галактоза, сахароза, лактоза, мальтоза и мальтодекстрины. Олигосахариды могут включать моносахариды, такие как глюкоза, фруктоза, фукоза, галактоза, рамноза, ксилоза, глюкуроновая кислота, GalNac и тому подобное, но не являются частью олигосахаридов по настоящему изобретению.
Неусвояемые олигосахариды A и/или B, входящие в композиции и способы применения по настоящему изобретению, включают смесь неусвояемых олигосахаридов. Это общая практика, поскольку применение неусвояемых олигосахаридов, например, с одной длиной цепочки очень дорого. Предпочтительно неусвояемые олигосахариды выбирают из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов (включая инулин), неусвояемого декстрина, галактоолигосахаридов (включая трансгалактоолигосахариды), ксилоолигосахаридов, арабиноолигосахаридов, арабиногалактоолигосахаридов, глюкоолигосахаридов (включая гентиоолигосахариды и циклодекстрин), глюкоманноолигосахаридов, галактоманноолигосахаридов, маннанолигосахаридов, хитоолигосахаридов, олигосахаридов, содержащих уроновую кислоту, сиалилолигосахаридов (включая 3-SL, 6-SL, LSTa,b,c, DSLNT, S-LNH, DS-LNH) и фукоолигосахаридов (включая (не)сульфатированный фукоидан OS, 2-FL, 3-FL, LNFP I, II, III, V, LNnFPI, LNDH) и их смесей, более предпочтительно из фруктоолигосахаридов (включая инулин), неусвояемого декстрина, галактоолигосахаридов (включая трансгалактоолигосахариды, α и предпочтительно β связанные), олигосахаридов, содержащих уроновую кислоту, и фукоолигосахаридов и их смесей, еще более предпочтительно трансгалактоолигосахаридов и/или инулина, наиболее предпочтительно транслагалктоолигосахаридов. В случае, когда неусвояемые олигосахариды A и/или B представляют собой смесь, по настоящему изобретению используют средние соответствующие параметры.
Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает два различных неусвояемых олигосахарида, то есть неусвояемый олигосахарид A и неусвояемый олигосахарид B. Неусвояемый олигосахарид A и неусвояемый олигосахарид B предпочтительно имеют различный тип гликозидной связи, различную степень полимеризации и/или различную моносахаридную композицию. В предпочтительном варианте изобретения процент определенных моносахаридов в неусвояемом олигосахариде A составляет, по меньшей мере, по количественному содержанию на 40% выше, чем процент тех же моносахаридов в неусвояемом олигосахариде B, предпочтительно, по меньшей мере, на 50%, более предпочтительно, по меньшей мере, на 75%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, на 90%. Большее разнообразие моносахаридов стимулирует более широкую популяцию полезных кишечных бактерий. Процент моносахаридов в неусвояемых олигосахаридах легко может быть рассчитан делением числа соответствующих моносахаридных звеньев (например, глюкозы) в неусвояемых олигосахаридах на общее число моносахаридных звеньев в этих неусвояемых олигосахаридах и умножением его на 100. В случае, когда неусвояемые олигосахариды представляют собой смесь неусвояемых олигосахаридов, следует принимать во внимание вклад каждого отдельного моносахаридного звена в цепи молекулы неусвояемого олигосахарида. Процент моносахаридов в смеси неусвояемых олигосахаридов легко может быть определен полным гидролизом смеси и определением процента каждого моносахарида. Предпочтительно неусвояемый олигосахарид A содержит, по меньшей мере, в количественном отношении 40 % галактозы, предпочтительно, по меньшей мере, 67% галактозы, более предпочтительно, по меньшей мере, 75% галактозы. Предпочтительно неусвояемый олигосахарид содержит, по меньшей мере, 30 % фруктозы, более предпочтительно, по меньшей мере, 67% фруктозы, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 80% фруктозы.
В предпочтительном варианте изобретения средняя СП неусвояемого олигосахарида A составляет, по меньшей мере, на 5 моносахаридных звеньев ниже, чем средняя СП неусвояемого олигосахарида B, предпочтительно, по меньшей мере, на 10, более предпочтительно, по меньшей мере, на 15. Предпочтительно неусвояемый олигосахарид A имеет среднюю СП в пределах 2-10, более предпочтительно 3-5. Предпочтительно неусвояемый олигосахарид B имеет среднюю СП ниже 200, более предпочтительно в пределах 11-60, еще более предпочтительно 20-30. Включение неусвояемых олигосахаридов с повышенной степенью полимеризации снижает осмотическую нагрузку, что является преимуществом для питания для грудничков и/или улучшает пребиотическую стимуляцию кишечной микрофлоры также в более дистальных частях толстой кишки. Неусвояемые олигосахариды A и B с различными СП могут иметь одинаковые или различные моносахаридные композиции. Предпочтительно неусвояемые олигосахариды A и B имеют различные моносахаридные композиции и различные СП.
Предпочтительно, по меньшей мере, 80 вес.%, более предпочтительно, по меньшей мере, 95 вес.%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 98 вес.% от общей массы неусвояемых олигосахаридов A и B имеют СП ниже 60, более предпочтительно ниже 40, наиболее предпочтительно ниже 20. Более низкая СП преимущественно снижает вязкость и повышает перевариваемость неусвояемых олигосахаридов. Предпочтительно, по меньшей мере, 50 вес.%, более предпочтительно, по меньшей мере, 75 вес.% от общей массы неусвояемых олигосахаридов A и B имеют СП в пределах 2-8. Перевариваемость и стимулирующее воздействие на рост молочно-кислых бактерий и бифидобактерий повышается при использовании смеси с высоким массовым процентом неусвояемых олигосахаридов с низкой молекулярной массой.
В предпочтительном варианте изобретения процент, по меньшей мере, неусвояемых олигосахаридов А, по меньшей мере, с одной гликозидной связью от всех гликозидных связей неусвояемого олигосахарида А, по меньшей мере, на 40% выше или ниже чем процент такой же гликозидной связи в неусвояемом олигосахариде В, предпочтительно, по меньшей мере, на 50%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, на 75%. Используемый здесь термин «гликозидная связь» относится к C-O-C связи, образовавшейся между кольцами двух циклических моносахаридов за счет удаления воды. Повышенное многообразие гликозидных связей стимулирует более широкий ряд полезных бактерий. Гликозидные связи отличаются по ковалентной связи атомов углеродов в различных позициях в моносахаридных звеньях и/или в образованных ими α или β связях. Примеры различных гликозидных связей неусвояемых сахаридов включают β (1,3), α (1,4), β (2,1), α (1,2), и β (1,4) связи. Предпочтительно гликозидные связи в неусвояемом олигосахариде A включают, по меньшей мере, 40% β (1,4) и/или β (1,6) гликозидных связей, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%. Гликозидные связи в неусвояемом олигосахариде B предпочтительно включают, по меньшей мере, 40% β (2,1) гликозидных связей, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%. Предпочтительно неусвояемые олигосахариды A и B отличаются по композиции моносахаридных звеньев и типу гликозидных связей. Предпочтительно неусвояемые олигосахариды A и B отличаются по типу гликозидных связей и СП. Более предпочтительно неусвояемые олигосахариды A и B отличаются по типу гликозидных связей, композиции моносахаридных звеньев и СП для оптимального улучшения биоразнообразия и стимуляции роста множества кишечных организмов, в частности различных видов бифидобактерий. Предпочтительно, по меньшей мере, 60%, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%, еще более предпочтительно 90%, наиболее предпочтительно 98% всех моносахаридных звеньев неусвояемых олигосахаридов A и B представляют собой моносахариды, выбранные из группы, состоящей из галактозных (gal), фруктозных (fru) и глюкозных (glu) моносахаридов.

Неусвояемый олигосахарид A предпочтительно представляет собой олигосахарид, выбранный из группы, состоящей из β-галактоолигосахаридов, α-галактоолигосахаридов и галактана. В более предпочтительном варианте изобретения неусвояемый олигосахарид A представляет собой β-галктоолигосахарид или трансгалактоолигосахарид. Предпочтительно неусвояемый олигосахарид A включает галактоолигосахариды с β (1,4) и/или β (1,6) гликозидными связями и концевой глюкозой. Трансгалактоолигосахариды доступны, например, под торговой маркой Vivinal GOS (Borculo Domo Ingredients, Zwolle,Netherlands), Bi2muno (Clasado), Cup-oligo (Nissin Sugar) и Oligomate55 (Yakult).

Неусвояемый олигосахарид B предпочтительно представляет собой фруктоолигосахарид. В другом контексте фруктоолигосахарид может иметь такие названия, как фруктополисахарид, олигофруктоза, полифруктоза, полифруктан, инулин, леван и фруктан и может относиться к олигосахаридам, содержащим β-связанные фруктозные звенья, которые предпочтительно связанны β (2,1) и/или β (2,6) гликозидными связями, с предпочтительным СП от 2 до 200. Предпочтительно фруктоолигосахариды содержат концевую β (2,1) гликозидносвязанную глюкозу. Предпочтительно фруктоолигосахариды содержат, по меньшей мере, 7 β -связанных фруктозных звеньев. В дополнительном предпочтительном варианте изобретения в качестве неусвояемого олигосахарида B используют инулин. Инулин представляет собой тип фруктоолигосахарида, в котором, по меньшей мере, 75% гликозидных связей представляют собой β(2,1) связи. Как правило, инулин имеет среднюю длину цепочки от 8 до 60 моносахаридных звеньев. Подходящие для использования в композиции по настоящему изобретению фруктоолигосахариды коммерчески доступны под торговой маркой «RaftilineHP» (Orafti). Другими подходящими источниками являются рафтилоза (Orafti), фибрулоза и фибрулин (Cosucra) и Frutafit и фруталоза (Sensus).
Наиболее предпочтительным неусвояемым олигосахаридом А являются трансгалактоолигосахариды со средней СП менее 10, предпочтительно менее 6, и наиболее предпочтительным неусвояемым олигосахаридом B являются фруктоолигосахариды со средней СП выше 7, предпочтительно выше 11, еще более предпочтительно выше 20, поскольку было установлено, что такая комбинация является оптимальной для улучшения кишечной микрофлоры. В случае, когда композиция включает неусвояемые олигосахариды A и B, массовое соотношение неусвояемого олигосахарида A к неусвояемому олигосахариду B составляет предпочтительно от 1/99 до 99/1, более предпочтительно от 1/19 до 19/1, еще более предпочтительно от 1 до 19/1. Это массовое соотношение по существу преимущественное в случае, когда неусвояемый олигосахарид A имеет низкую СП, и неусвояемый олигосахарид B имеет относительно высокую СП. Это гарантирует оптимальное равновесие между осмолярностью и перевариваемостью. Также это гарантирует оптимальное равновесие между многообразием моносахаридной композиции, гликозидных связей и/или степени полимеризации. Предпочтительно олигосахарид A представляет собой трансгалактоолигосахарид, а олигосахарид B представляет собой фруктоолигосахарид.
Следовательно, в одном варианте изобретения питание для грудничков включает неусвояемые олигосахариды A и B, причем неусвояемые олигосахариды A и B отличаются друг от друга:
i) по процентному содержанию, по меньшей мере, одного моносахарида олигосахарида А от всех моносахаридных звеньев олигосахарида А; моносахарид составляет, по меньшей мере, на 40% выше процентного содержания тех же моносахаридов в олигосахариде В; и/или
ii) по процентному содержанию, по меньшей мере, одной гликозидной связи олигосахарида A от всех гликозидных связей олигосахарида A; содержание гликозидных связей, по меньшей мере, на 40% выше, чем таких же гликозидных связей в олигосахариде B; и/или
iii) по степени полимеризации олигосахарида A; степень полимеризации олигосахарида A составляет, по меньшей мере, на 5 моносахаридных звеньев ниже, чем степень полимеризации олигосахарида B.
В предпочтительном варианте изобретения композиция по настоящему изобретению включает неусвояемый олигосахарид С. Неусвояемый олигосахарид C включает олигосахариды, содержащие уроновую кислоту. Используемый здесь термин «олигосахариды, содержащие уроновую кислоту» относится к олигосахаридам, в которых, по меньшей мере, 50% численного процентного содержания моносахаридных звеньев, присутствующих в олигосахариде, представляет собой одну, выбранную из группы, состоящей из гулуроновой кислоты, маннуроновой кислоты, галактуроновой кислоты, идуроновой, рибуроновой и глюкуроновой кислоты. В предпочтительном варианте изобретения олигосахариды, содержащие уроновую кислоту, включают, по меньшей мере, в количественном отношении 50% галактуроновой кислоты от всех звеньев уроновой кислоты в олигосахариде, содержащем уроновую кислоту. Олигосахариды, содержащие уроновую кислоту, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно получены при деградации пектина, пектата, альгината, хондроитина, гилауроновых кислот, гепарина, гепарана, бактериальных углеводов и/или сиалогликанов, более предпочтительно пектина и/или альгината, еще более предпочтительно пектина, наиболее предпочтительно полигалактуроновой кислоты. Предпочтительно деградированый пектин получают гидролизом и/или удалением бета-связи у фруктовых и/или овощных пектинов, более предпочтительно яблочного, лимонного и/или пектина сахарной свеклы, еще более предпочтительно яблочного, лимонного и/или пектина сахарной свеклы, деградированного, по меньшей мере, одной лиазой.
Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает от 25 до 100 вес.%, более предпочтительно от 50 до 100 вес.% олигосахаридов, содержащих уроновую кислоту, с СП от 2 до 250 от общей массы олигосахаридов композиции, содержащих уроновую кислоту, более предпочтительно с СП от 2 до 100, еще более предпочтительно с СП от 2 до 50, наиболее предпочтительно с СП от 2 до 20 от общей массы олигосахаридов композиции, содержащих уроновую кислоту.
В предпочтительном варианте изобретения, по меньшей мере, одно концевое гексуроновокислотное звено олигосахарида, содержащего уроновую кислоту, имеет двойную связь. Двойная связь эффективно защищает от присоединения патогенных бактерий к эпителиальным клеткам кишечника. Это является преимуществом для грудничков. Предпочтительно одна из концевых звеньев гексуроновой кислоты включает C4-C5 двойную связь. Двойная связь концевого гексуроновокислотного звена может быть получена, например, ферментативным гидролизом пектина лиазой.
Могут быть получены производные олигосахаридов, содержащих уроновую кислоту. Олигосахариды, содержащие уроновую кислоту, могут быть метоксилированы и/или амидированы. В одном варианте изобретения олигосахариды, содержащие уроновую кислоту, характеризуются степенью метоксилирования выше 20%, предпочтительно выше 50%, еще более предпочтительно выше 70%. Используемый здесь термин «степень метоксилирования» (также относится к СЭ или «степени этерификации») означает степень, до которой были этерифицированы (например, метилированны) свободные группы карбоновой кислоты олигосахаридов, содержащих уроновую кислоту.
Предпочтительно композиция включает неусвояемые олигосахариды трансгалактоолигосахаридов, фруктоолигосахаридов и продуктов деградации пектина. Массовое соотношение трансгалактоолигосахарид: фруктоолигосахарид: продукт деградации пектина предпочтительно составляет от (20 к 2):1:(1 к 3), более предпочтительно (12 к 7):1:(1 к 2).
Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает от 0,05 до 20 вес.% неусвояемого олигосахарида (A+B+C), более предпочтительно от 0,5 до 15 вес.%, еще более предпочтительно от 1 до 10 вес.%, наиболее предпочтительно от 2,0 до 10 вес.% по сухому весу композиции по настоящему изобретению.
Рецептурный состав
Питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению предпочтительно вводят интерально, более предпочтительно орально. Питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению предпочтительно используют в качестве смеси для детского питания. Питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению преимущественно может быть применено в качестве сбалансированного питания для грудничков. Такой пищевой продукт включает липиды, белки и углеводы и предпочтительно вводится в жидкой форме. Предпочтительно композиция представляет собой готовый к употреблению жидкий пищевой продукт, например, представляет собой готовую к употреблению жидкую форму. Получение расфасованного готового к употреблению жидкого пищевого продукта преимущественно включает меньше стадий по сравнению с получением порошка для восстановления и, следовательно, снижается риск обсеменения вредными микроорганизмами.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к питанию для грудничков и/или детей младшего возраста, предпочтительно содержащему от 5 до 50 эн.% липидов, от 5 до 50 эн.% белка, от 15 до 90 эн.% углеводов и нежизнеспособные B. breve и неусвояемый олигосахарид A и/или B и необязательно C. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает от 35 до 50 эн.% липидов, от 7,5 до 12,5 эн.% белка и от 35 до 80 эн.% углеводов (термин эн.% является сокращением от энергетического процента и показывает относительное количество калорий, вносимых каждым составляющим в общую калорийность композиции).
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает липиды. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает растительные липиды. Предпочтительно липидный компонент представляет собой комбинацию растительных липидов и, по меньшей мере, одного масла, выбранного из группы, состоящей из рыбьего жира, животного жира, масла из водорослей и бактериального масла. Предпочтительно липид включает более 50 мг/100 ккал (предпочтительно более 1 вес.% от всех жирных кислот) α-линоленовой кислоты (ALA). Предпочтительно липидная композиция имеет соотношение масса/масса линолевой кислоты (LA) к ALA в пределах 4 к 15, более предпочтительно 5 к 8. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦ-ПНЖК), более предпочтительно эйкозапентаеновую кислоту (ЭПК) и/или докозагексаеновую кислоту (ДГК) и/или арахидоновую кислоту (АРК). Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает от 0,03 до 0,8 вес.%, более предпочтительно от 0,12 до 0,4 вес.% ДГК от всех жирных кислот. Предпочтительно композиция включает от 0,01 до 0,2 вес.%, более предпочтительно от 0,03 до 0,1 вес.% ЭПК от всех жирных кислот. Предпочтительно композиция включает от 0,03 до 1,6 вес.%, более предпочтительно от 0,12 до 0,8 вес.% АРК от всех жирных кислот. Присутствие ДЦ-ПНЖК преимущественно снижает кишечную проницаемость или усиливает иммунную систему или и то и другое, следовательно, оказывает синергетическое воздействие с другими компонентами по настоящему изобретению в отношении аллергии, атопических дерматитов, инфекций и тому подобного. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает белки. Белки, используемые в питательной композиции, предпочтительно выбирают из группы, состоящей из белков животного происхождения, не принадлежащих к человеческим белкам (таких как, молочный белок, включая казеины и сывороточные белки, мясной белок и яичный белок), растительных белков (таких как, соевый белок, пшеничный белок, рисовый белок, картофельный белок, гороховый белок), гидролизаты (частичный и/или полные), свободные аминокислоты и их смеси. Источник азота, полученный из коровьего молока, в частности белки коровьего молока, в частности такие, как казеин и сывороточные белки, является предпочтительным, поскольку аминокислотная композиция этих белков хорошо сбалансирована. Поскольку композицию по настоящему изобретению предпочтительно используют для снижения аллергических реакций у грудничков и/или детей младшего возраста, белок питания для грудничков предпочтительно выбирают из группы, состоящей из гидролизованного молочного белка (например, гидролизат казеина и/или гидролизованный сывороточный белок), гидролизованного растительного белка и/или аминокислот. Применение этих белков дополнительно снижает аллергические реакции у грудничков и/или детей младшего возраста и/или повышает абсорбцию белка. Предпочтительно источник белка является полностью и/или частично гидролизованным. Более предпочтительно источник белка представляет собой полностью гидролизованный сывороточный белок, полученный из коровьего молока.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает усвояемые олигосахариды. Усвояемые олигосахариды, используемые в питательной композиции, предпочтительно выбирают из группы, состоящей из сахарозы, лактозы, мальтозы, галактозы, глюкозы, фруктозы, сухих веществ кукурузного сиропа, крахмала и мальтодекстринов, и их смесей, более предпочтительно лактозы.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает минеральные вещества, микроэлементы и витамины, холин, таурин, карнитин, миоинозитол и/или их смеси. Предпочтительно композиция по настоящему изобретению включает таурин, который снижает симптомы астмы (Adv. Exp. Med. Biol. 2003 526:403-10). Таурин действует синергетически с компонентами питания для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает нуклеотиды. Предпочтительно композиция включает цитидин 5'-монофосфат, уридин 5'- монофосфат, аденозин 5'- монофосфат, гуанозин 5'- монофосфат и инозин 5'- монофосфат. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает от 0,005 до 0,07, более предпочтительно от 0,01 до 0,035 вес.% нуклеотидов по сухому веществу. Присутствие нуклеотидов преимущественно оказывает воздействие на иммунную систему, кишечный барьер и/или кишечную микрофлору. Следовательно, нуклеотиды оказывают синергетическое воздействие с другими компонентами по настоящему изобретению в отношении аллергии, атопических дерматитов и инфекции, и тому подобного. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению включает, как ДЦ-ПНЖК, так и нуклеотиды.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению представляет собой неферментированную композицию. Ферментация микроорганизмами приводит к снижению pH, что может оказать воздействие на формирующиеся зубы. Предпочтительно композиция имеет pH выше 5,5, более предпочтительно 6,0, еще более предпочтительно 6,5 для снижения негативного воздействия на зубы. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста имеет pH от 6 до 8.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению представляет собой ферментированную композицию. Предпочтительно питание по настоящему изобретению включает продукты ферментации молока Bifidobacterium breve, клетки которых инактивируют после ферментации. Продукты ферментации молока B. breve включают фрагменты и/или продукты, экскретированные B. breve, такие как гликопротеины, гликолипиды, пептидогликаны, липотейхоевая кислота (LTA), липопротеины, капсулярные полисахариды и/или ДНК. Эти иммунногенные молекулы индуцируют толерантность желудочно-кишечного тракта к колонизации бактериями, продуцирующими молочную кислоту. Кроме того, во время ферментации и/или другого взаимодействия B. breve с получаемыми из молока продуктами могут быть получены дополнительные биоактивные соединения, такие как биоактивные пептиды и/или олигосахариды, которые также стимулируют иммунную систему и/или стимулируют колонизацию кишечной микрофлоры. Получаемые из молока продукты предпочтительно выбирают из группы, состоящей из молока, казеина, казеинового белка, гидролизата казеинового белка, казеиновых пептидов, сыворотки, сывороточных белков, гидролизата сывороточных белков, сывороточных пептидов и лактозы или их смесей. Молоко может представлять собой цельное молоко, наполовину обезжиренное или полностью обезжиренное молоко. Сыворотка может представлять собой сладкую сыворотку и/или кислую сыворотку. Предпочтительно ферментируемым водным субстратом является обезжиренное молоко.
Нерегулярный стул (например, твердый стул, недостаточный объем стула, диарея) является главной проблемой большинства детей. Было обнаружено, что проблемы со стулом могут быть снижены при введении комбинации по настоящему изобретению нежизнеспособных B. breve и неусвояемых олигосахаридов в жидкий пищевой продукт с осмолярностью от 50 до 500 мОсмол/кг, более предпочтительно от 100 до 500 мОсмол/кг.
Исходя из сказанного выше, также важно, что композиция жидкого пищевого продукта не имеет избыточной калорийности, однако имеет калорийность, все еще достаточную для питания субъекта. Следовательно, предпочтительно жидкий пищевой продукт имеет калорийность от 0,1 до 2,5 ккал/мл, еще более предпочтительно имеет калорийность от 0,4 до 1,2 ккал/мл, наиболее предпочтительно от 0,55 до 0,75 ккал/мл.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению имеет вязкость от 1 до 60 мПа*с, предпочтительно от 1 до 20 мПа*с, более предпочтительно от 1 до 10 мПа*с, и наиболее предпочтительно от 1 до 6 мПа*с. Низкая вязкость гарантирует естественное введение жидкости, например, естественным прохождением через отверстие в соске. Также эта вязкость близка к вязкости грудного молока. Кроме того, низкая вязкость в результате приводит к нормальной опорожняемости желудочно-кишечного тракта и лучшему усвоению энергии, что очень важно для грудничков и/или детей младшего возраста, которые нуждаются в энергии для оптимального роста и развития. Предпочтительно композицию по настоящему изобретению получают смешиванием порошкообразной композиции с водой. Как правило, смесь для детского питания получают таким способом. Также настоящее изобретение относится к расфасованной порошкообразной композиции, причем указанная упаковка снабжена инструкцией по смешиванию порошка с подходящим количеством жидкости с получением в результате жидкой композиции с вязкостью от 1 до 60 мПа*с.
-1
Вязкость жидкости определяют с использованием Physica Rheometer MCR 300 (Physica Messtechnik GmbH, Ostfilden, Германия) при градиенте скорости сдвига 95 с при температуре 20°C.
Включение нежизнеспособных B. breve по существу увеличивает срок хранения питания для грудничков и/или детей младшего возраста по сравнению с питанием для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащим жизнеспособные B. breve. Это является по существу преимуществом для жидкого питания для грудничков и/или детей младшего возраста. Следовательно, питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению предпочтительно пригодно для длительного хранения при комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 6 месяцев, предпочтительно, по меньшей мере, 12 месяцев, предпочтительно, когда питание для грудничков и/или детей младшего возраста находится в жидкой форме, готовой к употреблению форме.
Применение
Было обнаружено, что питание для грудничков и/или детей младшего возраста по настоящему изобретению по существу может быть использовано, как питание для детей, рожденных раньше срока, детей, рожденных в срок (как рожденных естественным путем, так и рожденных при проведении кесарева сечения), грудничков в период адаптации к твердым пищевым продуктам, грудничков и/или детей младшего возраста с повышенным риском развития аллергии и/или грудничков и/или детей младшего возраста с повышенным риском развития инфекций, таких как грудные дети и/или дети младшего возраста, посещающие центры дневного пребывания или страдающие от инфекций. По существу настоящее изобретение преимущественно предназначается для грудничков, рожденных естественным путем. По существу настоящее изобретение преимущественно предназначено для грудничков, рожденных с проведением кесарева сечения, поскольку такие грудные дети имеют ослабленную микробную колонизацию толстой кишки.
Следовательно, настоящее изобретение относится к способу обеспечения питания грудничков и/или детей младшего возраста, указанный способ включает введение грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста композиции по настоящему изобретению. Предпочтительно грудной ребенок и/или ребенок младшего возраста находится в возрасте от 0 до 36 месяцев, более предпочтительно в возрасте от 0 до 18 месяцев, еще более предпочтительно в возрасте от 0 до 12 месяцев. В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу обеспечения питания грудничка в возрасте 0-12 месяцев. В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу обеспечения питания грудничка в возрасте 12-36 месяцев.
Также настоящее изобретение относится к способу стимуляции здоровья грудничка и/или ребенка младшего возраста, включающему введение композиции, содержащей нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста.
Также настоящее изобретение относится к способу стимуляции здоровья грудничка и/или ребенка младшего возраста, включающему стадии a) смешивание i) по существу питательной или фармацевтически приемлемой жидкости; и ii) сухой композиции, причем сухая композиция II включает B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, и стадию b) введения композиции, полученной на стадии a), грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста.
Введение грудному ребенку питания, содержащего нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды, преимущественно в результате приводит к улучшению кишечной микрофлоры за счет повышения количества бактерий, продуцирующих молочную кислоту и/или снижения количества патогенных бактерий и/или стимуляции иммунной системы. Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащее нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, применяют в способе для лечения и/или профилактики расстройств желудочно-кишечного тракта и/или иммунной системы у грудничков и/или детей младшего возраста, указанный способ включает введение указанной композиции грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста.
Питание по настоящему изобретению может быть применено для лечения по существу аллергии (в частности по существу пищевой аллергии), аллергического ринита, пищевой гиперчувствительности, атопических дерматитов, то есть аллергической или атопической экземы, по существу раздражения кожного покрова, вызванного дерматитами, аллергических конъюнктивитов, астмы, по существу осложнений при дыхании, вызванных астмой, диареи, воспалений желудочно-кишечного тракта, инфекций, запора, спазмов кишечника и/или колик. В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики (пищевой аллергии) аллергического ринита, пищевой гиперчувствительности, экземы (то есть, атопических дерматитов), астмы, диареи, воспалений желудочно-кишечного тракта и/или инфекций. Предпочтительно настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики инфекции и/или диареи. В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики (пищевой аллергии) астмы и/или атопических дерматитов. Снижение риска возникновения этих заболеваний происходит за счет улучшения микрофлоры, усиления иммунной системы и/или снижения транслокации аллергенов через кишечный барьер. В одном варианте воплощения настоящее изобретение применяют для улучшения состояния кожного покрова и снижения раздражения кожного покрова у грудничка и/или ребенка младшего возраста. В одном варианте изобретения композицию используют для снижения осложнений при дыхании у грудничков и/или детей младшего возраста.
Дополнительно введение грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста питания, содержащего нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды, усиливает иммунную систему. В одном варианте изобретения питание для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащее нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, применяют в способе для лечения и/или профилактики системных и/или респираторных инфекций и/или воспалений у грудничков и/или детей младшего возраста, указанный способ включает введение указанному грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста питания для грудничков.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащее нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, применяют в способе для лечения и/или профилактики пеленочного дерматита (или опрелостей, потницы) у грудничков и/или детей младшего возраста, указанный способ включает введение указанному грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста питания для грудничков.
Предпочтительно питание для грудничков и/или детей младшего возраста, содержащее нежизнеспособные B. breve и неусвояемые олигосахариды A и/или B и необязательно C, применяют в способе для лечения и/или профилактики колик и/или спазмов кишечника, вздутия живота, метеоризма, болей в животе, запора, воспалительных заболеваний кишечника, синдрома раздраженной толстой кишки и/или улучшения минерализации костей, и/или профилактики ожирения на более поздних стадиях жизни (в частности, при центральном типе ожирения) у грудничков и/или детей младшего возраста, указанный способ включает введение указанному грудному ребенку и/или ребенку младшего возраста питания для грудничков.
В настоящем документе и формуле изобретения глагол «включать» и его формы следует интерпретировать в открытом, а не закрытом значении, если ясно не указано иное. Использованные здесь и в приложенной формуле изобретения формы единственного числа включают и множественное число, если в контексте ясно не просматривается иное. Кроме того, единственное число подразумевает, по меньшей мере, один.
ПРИМЕРЫ.
Пример 1
: Противоаллергическое воздействие неусвояемых B. breve.
Используют самцов мышей BALB/c (6-8 недель) от Charles River (Someren, Нидерланды). Мышей помещают в индивидуальные клетки типа II с полусинтетическим пищевым продуктом (AING93) на основе композиции для роста Американского Института питания (1993) и водой без ограничения. Мышей разделяют на различные лечебные группы A-D (N=6) и каждую группу разделяют на две когорты по 3 животных в когорте. Вторая когорта начинает с отсрочкой в одну неделю.
Активную сенсибилизацию проводят двумя интраперитонеальными инъекциями на 0 день и 7 день. Мышей из негативной контрольной группы (группа A) сенсибилизируют забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS), содержащим 2,25 мг гидроксида алюминия и 2,25 гидроксида магния в качестве адъюванта (Alum inject, Pierce), в объеме 100 мкл интраперитонеальной инъекцией. Мышей из других групп сенсибилизируют 10 мкг овальбумина (OVA) в PBS (0,2 мкм фильтрованного), содержащем 2,25 мг гидроксида алюминия и 2,25 мг гидроксида магния в качестве адъюванта (Alum inject, Pierce), в объеме 100 мкл интраперитонеальной инъекцией.
Через четыре недели после последней инъекции (на 35, 38 и 41 день), мышей из групп B, C, и D в течение 20 минут подвергают воздействию аэрозоля овальбумина (10 мг/мл) (всего 3 раза одной аэрозолью в течение 20 минут). Мышей из группы A подвергают воздействию аэрозоля солевого раствора. Аэрозоли распыляют струйным распылителем (Pari IS-2, Pari-Werk GmbH, Starnberg, Germany, размер частиц 2-3 микрона), соединенным с клеткой из макролона, в которую помещены мыши.
9
3
9
Начиная с 28 дня и до конца 42 дня каждый день мыши получают орально: мыши из группы A и B получают 200 мкл NaCl/день. Мыши из группы C получают 10 КОЕ Bifidobacterium breve M16-V в 200 мкл солевого раствора и мыши из группы D получают такое же количество бактерий, как и в группе C, с тем отличием, что они были инактивированны нагреванием в течение 10 минут при температуре 90°C. Композиция C включает менее чем 10 КОЕ живых B. breve на г живой массы (ниже предела обнаружения). Композиция C включает инактивированные B. breve в количестве, эквивалентном 10 КОЕ B. breve.
2
2
На 41 день проводят измерение толщины базального слоя эпидермиса уха мыши с использованием пружинного микрометра (Mitutoyo, Veenendaal, Нидерланды). Мышам вводят инъекцией 20 мкл OVA (40 мкг/мл в PBS) внутрикожно в ушную раковину обоих ушей под анестезией изофлураном, O и NO. Измерения, проводимые дважды, обоих ушей проводят за 1,6 и через 24 часа после OVA стимуляции животных под анестезией. Результаты приведены в Таблице1.
Негативный контроль показал увеличение толщины уха на около 20% по сравнению с увеличением в позитивном контроле, принятом за 100%. Лечение жизнеспособными B. breve показало увеличение толщины уха только на 45%. Это демонстрирует снижение аллергической реакции на около 70% по сравнению с позитивным и негативным контролем. С нежизнеспособными B. breve показало увеличение толщины уха на 60 %. Это демонстрирует снижение аллергической реакции на около 52% по сравнению с позитивным и негативным контролем. Эти результаты показывают, что улучшающее противоаллергическое и/или иммунное воздействие нежизнеспособных B. breve сравнимо (около 75%) с воздействием жизнеспособных клеток B. breve. Это неожиданно, поскольку инактивированные B. breve, как считается, не должны оказывать такого улучшающего воздействия на флору.
Таблица 1
<b>Процент увеличения толщины уха, вызванный аллергической реакцией на овальбумин у самцов мышей balb/c</b>
Лечебная группа мышей
Относительное увеличение толщины уха, % (s.e.)
Относительное снижение аллергической реакции, %
Группа А, негативный контроль
20,49 (9,83)
100
Группа В, позитивный контроль
100 (6,86)
0
Группа С, получавшие живые B. breve
45,13 (8,64)*
69
Группа D, получавшие нежизнеспособные B. breve
58,60 (13,12)*
52
p<0,5 по сравнению с позитивным контролем
Пример 2:
Усиленное противоаллергическое воздействие комбинации нежизнеспособных B. breve и неусвояемых олигосахаридов по сравнению с единственным из этих компонентов.
9
9
3
Используют мышей CH3/HeOuJ (3-5 недель) от Charles River. Мышей помещают в индивидуальные клетки типа II с полусинтетическим пищевым продуктом, свободным от белка коровьего молока, и водой без ограничения. На 2 неделе мышей разделяют на различные лечебные группы A-E (N=6). Различные лечебные группы A-E (N=6) представляют собой группу негативного контроля (группа A), группу позитивного контроля (группа B), группу, получающую 2х10 КОЕ Bifidobacterium breve M16-V, инактивированные нагреванием в течение 10 минут при температуре 90°C, на г рациона (группа C), группу, получающую 20 мг неусвояемых олигосахаридов (TOS (от Vivinal GOS, Borculo Domo) и IcFOS (Raftilin HP, Orafti) в соотношении масса/масса 9/1 на г рациона (группа D), и группу, получавшую как инактивированные нагреванием B. breve, так и неусвояемые олигосахариды (группа E). Таким образом, рацион групп C и D включает инактивированные B. breve в количестве, эквивалентном 2×10 КОЕ на г рациона. Композиция C включает менее чем 1×10 КОЕ живых B. breve на г рациона (ниже предела обнаружения).
Активную сенсибилизацию проводят внутрижелудочным зондом на 14, 21, 28, 35, 42 и 49 день 0,5 мл сывороточного белка (DMV International, Veghel, 40 мг сывороточный белок/мл PBS, с токсином холеры, 20 мкг/мл PBS, в качестве адъюванта). Мышей из негативной контрольной группы (группа A) сенсибилизируют PBS (забуференным фосфатом физиологическим раствором), содержащим токсин холеры в качестве адъюванта.
На 54 день мышам из групп A, B, C, D и E вводят инъекцией 20 мкл сывороточного белка (0,5 мг белка/мл в PBS) внутрикожно в ушную раковину левого уха. В правое ухо в качестве контроля делают инъекцию PBS. Толщину ушей измеряют дважды с использованием цифрового микрометра (Mitutuyo, Veenendaal) в t=0 и t=l. Отек определяют, t=0 вычитанием из толщины измеренной в t=l левого уха толщины контрольного правого уха.
Результаты приведены в Таблице 2. Негативный контроль показал увеличение толщины уха на 36,0 мкм (принято за 0 %) по сравнению с позитивным контролем, показавшим увеличение на 159,9 мкм, что принято за 100%. Лечение нежизнеспособными B. breve показало увеличение толщины уха на 116,0 мкм. Это демонстрирует снижение аллергической реакции на около 35% по сравнению с позитивным и негативным контролем. Применение неусвояемых олигосахаридов показало увеличение толщины уха на 103,8 мкм. Это демонстрирует снижение аллергической реакции на около 45% по сравнению с позитивным и негативным контролем. Комбинация нежизнеспособных B. breve и неусвояемых олигосахаридов показала увеличение толщины уха только на 80,4. Это демонстрирует снижение аллергической реакции на около 64% по сравнению с позитивным и негативным контролем.
Таблица 2
<b>Среднее увеличения толщины уха, вызванное аллергической реакцией на сывороточный белок у мышей</b>
Лечебная группа мышей
Относительное увеличение толщины уха, % (s.e.)
Относительное снижение аллергической реакции, %
Группа А, негативный контроль
36,0 (5,7)*
100
Группа В, позитивный контроль
159,9 (12,2)
0
Группа С, получавшие живые B. breve
116,0 (12,2)*
35
Группа Е, получавшие нежизнеспособные B. Breve и пребиотики
80,4 (10,8)*
64
p<0,5 по сравнению с позитивным контролем
Эти результаты показывают неожиданное улучшающее воздействие комбинации неусвояемых олигосахаридов и нежизнеспособных B. breve по сравнению с единственным компонентом. Это неожиданно, поскольку инактивированные B. breve не могут метаболизировать неусвояемые олигосахариды.
Пример 3
: Жидкое молоко с B. breve для детей младшего возраста.
Жидкий, готовый к потреблению напиток на молоке, содержащий на 100 мл:
67 ккал
1,9 г белка (белок коровьего молока)
8,1 г усвояемых углеводов (из которых 7,8 г лактозы)
3,0 г жира
0,8 г неусвояемых олигосахаридов:
0,72 галактоолигосахаридов, полученных от Vivival GOS
0,08 г фруктана, полученного от RaftilinHP
9
5×10 КОЕ эквивалент инактивированных нагреванием нежизнеспособных Bifidobacterium breve
pH около 6,7.