Выделенный гуманизированный белок, связывающийся с гликопротеином VI человека, выделенное антитело, связывающееся с гликопротеином VI человека

1. Выделенный гуманизированный белок, связывающий гликопротеин VI человека (hGPVI), для лечения связанного с GPVI состояния у нуждающегося в этом субъекта, при этом упомянутый выделенный гуманизированный белок вводят субъекту в течение, по меньшей мере, 2 часов, предпочтительно в течение, по меньшей мере, 4-6 часов.
2. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI по п. 1, который вводят предпочтительно путем внутривенного вливания.
3. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по п. 1 или 2, который вводят пациенту в дозе от около 0,5 мг/кг до около 50 мг/кг, предпочтительно от около 1 мг/кг до около 32 мг/кг, более предпочтительно около 8 мг/кг.
4. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по п. 1 или 2, который вводят пациенту в дозе от около 125 мг до около 2000 мг, предпочтительно от около 250 мг до около 1000 мг или от около 500 мг до около 1000 мг.
5. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 1-4, который вводят в форме первого болюса, предпочтительно составляющего от около 10 до 50%, предпочтительно около 20% общей дозы выделенного гуманизированного белка для введений, при этом первый болюс предпочтительно вводится в течение от около 5 до 30 минут, предпочтительно в течение около 15 минут.
6. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 1-5, при этом белок связывает конформационный эпитоп, содержащий:
по меньшей мере, один аминокислотный остаток из аминокислотных остатков 114-142 hGPVI (SEQ ID NO: 13) или из последовательности, по меньшей мере, на 60% идентичной на протяжении аминокислотных остатков 114-142 hGPVI (SEQ ID NO: 13); и
по меньшей мере, один аминокислотный остаток из аминокислотных остатков 165-187 hGPVI (SEQ ID NO: 13) или из последовательности, по меньшей мере, на 60% идентичной на протяжении аминокислотных остатков 165-187 hGPVI (SEQ ID NO: 13).
7. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по п. 6, при этом упомянутый конформационный эпитоп содержит, по меньшей мере, один аминокислотный остаток из аминокислотных остатков 121-135 или 121-136 hGPVI (SEQ ID NO: 13) или из последовательности, по меньшей мере, на 60% идентичной на протяжении аминокислотных остатков 121-135 или 121-136 hGPVI (SEQ ID NO: 13), и, по меньшей мере, один аминокислотный остаток из аминокислотных остатков 169-183 hGPVI (SEQ ID NO: 13) или из последовательности, по меньшей мере, на 60% идентичной на протяжении аминокислотных остатков 169-183 hGPVI (SEQ ID NO: 13).
D
8. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 1-7, при этом белок имеет K связывания hGPVI менее 1 нМ, которая измеряется путем поверхностного плазмонного резонанса с использованием 960-1071 резонансных единиц (RU) растворимого GPVI человека и с использованием PBS с рН 7,4 в качестве рабочего буфера, а изолированный гуманизированный белок не индуцирует истощенный фенотип GPVI in vivo.
9. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 1-8, представляющей собой молекулу антитела, выбранную из группы, включающей цельное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело, Fv, Fab; или фрагмент антитела, выбранного из группы, включающей унитело, доменное антитело и нанотело; или мономерное антитело-миметик, выбранное из группы, включающей аффитело, аффилин, аффитин, аднектин, атример, эвазин, DARPin, антикалин, авимер, финомер и версатело, предпочтительно одновалентное антитело.
10. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по п. 9, где указанный белок представляет молекулу выделенного антитела, связывающего hGPVI, у которого вариабельная область тяжелой цепи содержит, по меньшей мере, один из следующих гипервариабельных участков (CDR):
VH-CDR1: GYTFTSYNMH (SEQ ID NO: 1);
VH-CDR2: GIYPGNGDTSYNQKFQG (SEQ ID NO: 2); и
VH-CDR3: GVVGDWYFDV (SEQ ID NO: 3);
или любой CDR, имеющий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 60% идентичную SEQ ID NO: 1-3; и
вариабельная область легкой цепи содержит, по меньшей мере, один из следующих CDR:
VL-CDR1: RSSQSLENGNTYLN (SEQ ID NO: 4);
VL-CDR2: RVSNRFS (SEQ ID NO: 5); и
V1-CDR3: LQLTHVPWT (SEQ ID NO: 6);
или любой CDR, имеющий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 60% идентичную SEQ ID NO: 4-6.
11. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 9, 10, где указанный белок представляет молекулу выделенного антитела, связывающего hGPVI, у которого вариабельная область тяжелой цепи содержит следующие CDR: GYTFTSYNME (SEQ ID NO: 1), GIYPGNGDTSYNQKFQG (SEQ ID NO: 2) и GTVVGDWYFDV (SEQ ID NO: 3), а вариабельная область легкой цепи содержит следующие CDR: RSSQSLENGNTYLN (SEQ ID NO: 4), RVSNRFS (SEQ ID NO: 5) и LQLTHVPWT (SEQ ID NO: 6), или любой CDR, имеющий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 60% идентичную SEQ ID NO: 1-6.
12. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 9-11, где указанный белок представляет молекулу выделенного антитела, связывающего hGPVI, у которого аминокислотной последовательностью, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи, является SEQ ID NO: 7, а аминокислотной последовательностью, кодирующей вариабельную область легкой цепи, является SEQ ID NO: 8 или любая аминокислотная последовательность, по меньшей мере, на 60% идентичная SEQ ID NO: 7 или 8.
13. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 9-11, где указанный белок представляет молекулу выделенного антитела, у которого аминокислотной последовательностью, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи, является SEQ ID NO: 7, а аминокислотной последовательностью, кодирующей вариабельную область легкой цепи, является SEQ ID NO: 9, или любая аминокислотная последовательность, по меньшей мере, на 60% идентичная SEQ ID NO: 7 или 9.
14. Выделенный гуманизированный белок, связывающий hGPVI, по любому из пп. 1-13, где указанный белок представляет молекулу выделенного антитела, при этом связанным с GPVI состоянием является сердечно-сосудистое заболевание, выбранное из артериального и венозного тромбоза, рестеноза, острого коронарного синдрома, нарушений мозгового кровообращения вследствие атеросклероза, инфаркта миокарда, легочной эмболии, критической ишемии конечностей и заболевания периферических артерий.