СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ВИРУСА

1. Способ получения вектора переноса, который включает гибридный ген, содержащий по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, и ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок, причем способ включает следующие стадии (а)-(с) и/или (d) и (e):
(а) стадию модификации полинуклеотидной последовательности гена, кодирующего белок gp64 бакуловируса, таким образом, чтобы не изменялись аминокислотные остатки, составляющие соответствующий природный белок gp64 бакуловируса, и, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее, и получения информации о последовательности нуклеиновой кислоты полинуклеотида, включающего ген, кодирующий модифицированный белок gp64 бакуловируса;
(b) стадию синтеза полинуклеотида на основании информации о последовательности нуклеиновой кислоты, полученной на стадии (а);
(с) стадию лигирования или введения в полинуклеотид, синтезированный на стадии (b), полинуклеотида гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок;
(d) стадию синтеза полинуклеотида, кодирующего частичный полипептид из природного белка gp64 бакуловируса, полученного посредством делеции N-концевых аминокислотных остатков без сигнальной последовательности таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1 % от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности, составляющей природный белок gp64 бакуловируса или полинуклотида, чья последовательность была модифицирована таким образом, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее, и
(е) стадию лигирования или введения в полинуклеотид, синтезированный на стадии (d), полинуклеотида гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок.
Mycobacterium tuberculosis
2. Способ по п.1, где ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок, представляет собой ген для антигена, выбранного из антигена малярии, антигена вируса гриппа, антигена , антигена вируса SARS, антигена вируса лихорадки Западного Нила, антигена вируса лихорадки Денге, антигена ВИЧ, антигена гепатита С, антигена лейшмании, антигена трипаносомы, антигена лейкоцитозоона и антигена рака; или ген для гибридного антигена цитокина и по меньшей мере один ген, выбранный из группы этих антигенных генов.
3. Способ по п.1, где в векторе переноса гибридный ген лигируют в нижнем направлении от двойного промотора, полученного посредством лигирования между промотором, способным к функционированию в клетках позвоночных, и промотором бакуловируса.
4. Способ по п.3, где промотор, способный к функционированию в клетках позвоночных, выбирают из промотора цитомегаловируса, промотора SV40, промотора ретровируса, промотора металлотионеина, промотора белка теплового шока, промотора GAG, промотора фактора элонгации 1α, промотора актина, промотора убиквитина, промотора альбумина и промотора класса МНС; и промотор бакуловируса выбирают из промотора полиэдрина, промотора р10, промотора IE1, промотора p35, промотора р39 и промотора gp 64.
5. Способ получения вектора переноса, содержащего область ДНК гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок, причем область ДНК вводят между областями ДНК вируса, включающими по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, причем способ включает модификацию полинуклеотидной области ДНК вируса, кодирующей белок gp64 бакуловируса, в N-концевой и/или С-концевой области ДНК вируса, гибридизированной с областью ДНК гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок, таким образом, чтобы аминокислотные остатки, составляющие природную полинуклеотидную последовательность такой же области ДНК вируса, не изменялись, и идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее; и/или модификацию полинуклеотидной последовательности таким образом, что N-концевые аминокислотные остатки, составляющие белок gp64 бакуловируса без сигнальной последовательности, подвергаются делеции, таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1% от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности.
6. Способ получения рекомбинантного бакуловируса, включающий использование вектора переноса, который включает гибридный ген, содержащий по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, и ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок, причем способ включает со-трансфекцию, в клетку-хозяина насекомого, ДНК бакуловируса и вектора переноса, полученного посредством модификации полинуклеотидной последовательности гена, кодирующего белок gp64 бакуловируса, таким образом, чтобы не изменялись аминокислотные остатки, составляющие соответствующий природный белок gp64 бакуловируса, и, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее, и/или модификацию полинуклеотидной последовательности гена таким образом, что N-концевые аминокислотные остатки, составляющие белок gp64 бакуловируса без сигнальной последовательности, подвергаются делеции, таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1% от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности.
7. Вектор переноса, который получают посредством осуществления следующих стадий (а)-(с) и/или (d) и (e), вектор переноса, включающий гибридный ген, содержащий по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, и ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок:
(а) стадии модификации полинуклеотидной последовательности гена, кодирующего белок gp64 бакуловируса, таким образом, чтобы не изменялись аминокислотные остатки, составляющие соответствующий природный белок gp64 бакуловируса, и, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее, и получения информации о последовательности нуклеиновой кислоты полинуклеотида, включающего ген, кодирующий модифицированный белок gp64 бакуловируса;
(b) стадии синтеза полинуклеотида на основании информации о последовательности нуклеиновой кислоты, полученной на стадии (а);
(с) стадии лигирования или введения в полинуклеотид, синтезированный на стадии (b), полинуклеотида гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок;
(d) стадии синтеза полинуклеотида, кодирующего частичный полипептид из природного белка gp64 бакуловируса, полученного посредством делеции N-концевых аминокислотных остатков без сигнальной последовательности таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1% от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности, составляющей природный белок gp64 бакуловируса или полинуклотида, чья последовательность была модифицирована таким образом, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее, и
(е) стадии лигирования или введения в полинуклеотид, синтезированный на стадии (d), полинуклеотида гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок.
Mycobacterium tuberculosis
8. Вектор переноса по п.7, где ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок, представляет собой ген для антигена, выбранного из антигена малярии, антигена вируса гриппа, антигена , антигена вируса SARS, антигена вируса лихорадки Западного Нила, антигена вируса лихорадки Денге, антигена ВИЧ, антигена гепатита С, антигена лейшмании, антигена трипаносомы, антигена лейкоцитозоона и антигена рака; или ген для гибридного антигена цитокина и по меньшей мере один ген, выбранный из группы этих антигенных генов.
9. Вектор переноса по п.7, где гибридный ген лигируют в нижнем направлении от двойного промотора, полученного посредством лигирования между промотором, способным к функционированию в клетках позвоночных, и промотором бакуловируса.
10. Вектор переноса по п.9, где промотор, способный к функционированию в клетках позвоночных, выбирают из промотора цитомегаловируса, промотора SV40, промотора ретровируса, промотора металлотионеина, промотора белка теплового шока, промотора GAG, промотора фактора элонгации 1α, промотора актина, промотора убиквитина, промотора альбумина и промотора класса МНС; и промотор бакуловируса выбирают из промотора полиэдрина, промотора р10, промотора IE1, промотора p35, промотора р39 и промотора gp64.
11. Вектор переноса, содержащий область ДНК гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок, причем область ДНК вводят между областями ДНК вируса, включающими по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, где полинуклеотидную последовательность N-концевой и/или С-концевой области ДНК вируса, гибридизированной с областью ДНК гена, кодирующего чужеродный иммуногенный белок, модифицируют таким образом, чтобы аминокислотные остатки, составляющие природную полинуклеотидную последовательность такой же области ДНК вируса не изменялись, и чтобы идентичность нуклеотидной последовательности доводилась до 85% или менее; и/или полинуклеотидную последовательность модифицируют таким образом, что N-концевые аминокислотные остатки, составляющие белок gp64 бакуловируса без сигнальной последовательности, подвергаются делеции, таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1% от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности.
12. Способ ингибирования роста мутантного вируса в способе получения рекомбинантного бакуловируса, включающего использование вектора переноса, который включает гибридный ген, содержащий по меньшей мере один ген, кодирующий белок gp64 бакуловируса, и ген, кодирующий чужеродный иммуногенный белок, причем способ включает со-трансфекцию, в клетку-хозяина насекомого, ДНК бакуловируса и вектора переноса, полученного посредством модификации полинуклеотидной последовательности гена, кодирующего белок gp64 бакуловируса, таким образом, чтобы не изменялись аминокислотные остатки, составляющие соответствующий природный белок gp64 бакуловируса, и, чтобы идентичность нуклеотидной последовательности между модифицированными и немодифицированными полинуклеотидами доводилась до 85% или менее, и/или модификацию полинуклеотидной последовательности гена таким образом, что N-концевые аминокислотные остатки, составляющие белок gp64 бакуловируса без сигнальной последовательности, подвергаются делеции, таким образом, чтобы длина аминокислотных остатков составляла от 55% до 1% от длины аминокислотных остатков непроцессированной аминокислотной последовательности.