СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФАГОВОЙ БИБЛИОТЕКИ

1. Способ получения фаговой библиотеки, экспонирующей антитело или фрагмент антитела, включающий:
предоставление первого полинуклеотида, второго полинуклеотида и третьего полинуклеотида, причем указанный первый полинуклеотид содержит LC, указанный второй полинуклеотид содержит коннексон, и указанный третий полинуклеотид содержит HC, где указанная LC содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь или фрагмент легкой цепи антитела или фрагмента антитела, и указанная HC содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или фрагмент тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела;
введение указанного первого полинуклеотида в первую бактерию с получением бактериальной библиотеки с компонентом легкой цепи, введение указанного второго полинуклеотида в указанную вторую бактерию с получением бактериальной библиотеки с компонентом коннексона, и введение указанного третьего полинуклеотида в третью бактерию с получением бактериальной библиотеки с компонентом тяжелой цепи;
получение плазмиды с компонентом легкой цепи, содержащей указанную LC из указанной бактериальной библиотеки с компонентом легкой цепи, получение плазмиды с компонентом коннексона, содержащей указанный коннексон из указанной бактерии с компонентом коннексона, и получение плазмиды с компонентом тяжелой цепи, содержащей указанную HC из указанной бактериальной библиотеки с компонентом тяжелой цепи;
получение высвободившейся LC из указанной плазмиды с компонентом легкой цепи, получение высвободившегося коннексона из указанной плазмиды с компонентом коннексона, и получение высвободившейся HC из указанной плазмиды с компонентом тяжелой цепи;
предоставление вектора для дисплея и получение высвободившегося фрагмента вектора для дисплея из указанного вектора для дисплея;
соединение высвободившейся LC, высвободившегося коннексона, высвободившейся HC и высвободившегося фрагмента вектора для дисплея с образованием соединенного продукта для дисплея;
введение указанного соединенного продукта для дисплея в четвертую бактерию с получением библиотеки бактериального дисплея антитела или фрагмента антитела; и
получение указанной фаговой библиотеки, экспонирующей антитело или фрагмент антитела, с использованием указанной библиотеки бактериального дисплея.
2. Способ по п.1, где указанный соединенный продукт для дисплея в 6) может экспрессировать легкую цепь или фрагмент легкой цепи и тяжелую цепь или фрагмент тяжелой цепи в соответствии с рамкой считывания в условиях, подходящих для экспрессии антитела или фрагмента антитела.
3. Способ по любому из пп.1, 2, где все из указанного первого полинуклеотида, указанного второго полинуклеотида и указанного третьего полинуклеотида представляют собой линейные молекулы нуклеиновой кислоты.
4. Способ по любому из пп.1-3, где указанный коннексон включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальный пептид pelB или его фрагмент.
5. Способ по любому из пп.1-4, где указанный первый полинуклеотид содержит структуру R1-LC-R2 в направлении от 5’ к 3’, указанный второй полинуклеотид содержит структуру R3-коннексон-R4 в направлении от 5’ к 3’, указанный третий полинуклеотид содержит структуру R5-HC-R6 в направлении от 5’ к 3’, и указанный вектор для дисплея содержит структуру R7-фрагмент вектора для дисплея-R8 в направлении от 5’ к 3’, где R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и R8 представляют собой участки распознавания для эндонуклеазы рестрикции, где конец, образовавшийся посредством расщепления указанного R2 эндонуклеазой рестрикции, может распознавать и может быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления указанного R3 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот, и не может распознавать или быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления любого из указанных R1, R4, R5, R6, R7 и R8 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; конец, образовавшийся посредством расщепления указанного R4 эндонуклеазой рестрикции, может распознавать и быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления указанного R5 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; и не может распознавать или быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления любого из указанных R1, R2, R3, R6, R7 и R8 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; конец, образовавшийся посредством расщепления указанного R6 эндонуклеазой рестрикции, может распознавать и быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления указанного R7 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; и не может распознавать или быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления любого из указанных R1, R2, R3, R4, R5 и R8 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; конец, образовавшийся посредством расщепления указанного R8 эндонуклеазой рестрикции, может распознавать и быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления указанного R1 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот; и не может распознавать или быть соединен с концом, образовавшимся посредством расщепления любого из указанных R2, R3, R4, R5, R6 и R7 эндонуклеазой рестрикции, и наоборот.
6. Способ по п.5, где конец, образовавшийся посредством расщепления любого из указанных R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и R8 эндонуклеазой рестрикции, представляет собой не палиндромную последовательность.
7. Способ по любому из пп.5, 6, где два или более из указанных R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и R8 могут распознаваться и расщепляться одной и той же эндонуклеазой рестрикции.
8. Способ по любому из пп.5-7, где указанные R1, R2, R3, R4, R5 и R8 могут распознаваться и расщепляться одной и той же эндонуклеазой рестрикции.
9. Способ по любому из пп.5-8, где указанные R6 и R7 могут распознаваться и расщепляться одной и той же эндонуклеазой рестрикции.
10. Способ по любому из пп.1-9, где указанное антитело или его фрагмент содержит Fab, Fab’, (Fab)2 и/или (Fab’)2.
11. Способ по любому из пп.1-10, где 2) включает расщепление указанного первого полинуклеотида эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R1 и R2, соединение расщепленного первого полинуклеотида с фрагментом вектора для хранения легкой цепи с образованием соединенного продукта для хранения легкой цепи, и введение указанного соединенного продукта для хранения легкой цепи в указанную первую бактерию с получением указанной бактериальной библиотеки с компонентом легкой цепи; где указанный вектор для хранения легкой цепи содержит указанные R1 и R2, и указанный фрагмент вектора для хранения легкой цепи получают путем расщепления указанного вектора для хранения легкой цепи эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R1 и R2.
12. Способ по п.11, где 2) включает расщепление указанного третьего полинуклеотида эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R5 и R6, соединение расщепленного третьего полинуклеотида с фрагментом вектора для хранения тяжелой цепи с образованием соединенного продукта для хранения тяжелой цепи, и введение указанного соединенного продукта для хранения тяжелой цепи в указанную третью бактерию с получением указанной бактериальной библиотеки с компонентом тяжелой цепи; где указанный вектор для хранения тяжелой цепи содержит указанные R5 и R6, и указанный фрагмент вектора для хранения тяжелой цепи получают путем расщепления указанного вектора для хранения тяжелой цепи эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R5 и R6.
13. Способ по п.12, где указанный вектор для хранения тяжелой цепи содержит только участок распознавания для BsmBI.
14. Способ по любому из пп.1-13, где указанный 2) включает соединение указанного второго полинуклеотида в фрагментом векторе с образованием вектора для хранения коннексона, и введение указанного вектора для хранения коннексона в указанную вторую бактерию с получением указанной бактерии с компонентом коннексона.
15. Способ по п.14, где указанный вектор для хранения коннексона содержит указанные R3 и R4.
16. Способ по любому из пп.1-15, где 4) включает расщепление указанной плазмиды с компонентом легкой цепи эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R1 и R2, с получением указанной высвободившейся LC.
17. Способ по любому из пп.1-16, где 4) включает расщепление указанной плазмиды с компонентом тяжелой цепи эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R5 и R6, с получением указанной высвободившейся HC.
18. Способ по любому из пп.1-17, где 4) включает расщепление указанного вектора для хранения коннексона эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R3 и R4, с получением указанного высвободившегося коннексона.
19. Способ по любому из пп.1-18, где 4) включает получение продукта амплификации из указанного вектора для хранения коннексона, указанный продукт амплификации содержит указанный коннексон, указанный R3 и указанный R4; и указанный продукт амплификации расщепляют с использованием эндонуклеазы рестрикции, распознающей указанные R3 и R4, с получением указанного высвободившегося коннексона.
20. Способ по любому из пп.1-19, где 5) включает расщепление указанного вектора для дисплея эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R7 и R8, высвобождая указанный фрагмент вектора для дисплея.
21. Способ по любому из пп.1-20, где указанный вектор для дисплея происходит из вектора pComb3x.
22. Способ по любому из пп.5-21, где три различных расщепленных фрагмента получают после расщепления указанного вектора для дисплея эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R1, R2, R3, R4, R5 и R8.
23. Способ по любому из пп.5-22, где указанный вектор для дисплея является линеаризованным после расщепления указанного вектора для дисплея эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R6 и R7.
24. Способ по любому из пп.5-23, где четыре различных расщепленных фрагмента получают после расщепления указанного вектора для дисплея эндонуклеазой рестрикции, распознающей указанные R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и R8.
25. Способ по любому из пп.1-24, где 2) включает проведение детекции в образцах из указанной бактериальной библиотеки с компонентом легкой цепи, указанных бактерий с компонентом коннексона и/или указанной бактериальной библиотеки с компонентом тяжелой цепи для определения емкости и/или качества указанной бактериальной библиотеки с компонентом легкой цепи, указанных бактерий с компонентом коннексона и/или указанной бактериальной библиотеки с компонентом тяжелой цепи.
26. Фаговая библиотека, полученная в соответствии со способом по любому из пп.1-25.
27. Способ селекции антитела или фрагмента антитела, включающий использование фаговой библиотеки по п.26.