СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ФОНОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ СНЯТИЯ НАТИВНОГО МАТЕРИАЛА С ПОВЕРХНОСТИ ШЕЙКИ МАТКИ
METHOD OF ESTIMATING LOCAL INFLAMMATION ACTIVITY IN CASE OF BACKGROUND NECK OF UTERUS DISEASES AND DEVICE FOR REMOVAL OF NATIVE MATERIAL FROM NECK OF UTERUS SURFACE

Изобретения относятся к области медицинской техники и медицины - к практической и экспериментальной. Может быть использовано в гинекологии, в клинической лабораторной диагностике для изучения активности локального воспаления слизистой оболочки шейки матки для выбора адекватного метода лечения.
Известно, что возрастание частоты предраковых и злокачественных новообразований шейки матки, особенно у молодых женщин, обусловлено сочетанием фоновой патологии с хроническим цервицитом [Этиология, патогенетические аспекты, оптимизация диагностики и терапии хронических цервицитов / Э.А.Казачкова, Е.Л.Казачков, Б.И.Медведев // Материалы VI Всероссийского форума «Мать и дитя». - Москва, 2004. - С.367-368].
Частота цервицитов, обусловленных бактериальным инфицированием, составляет 40-50%. В последнее десятилетие для воспаления шейки матки характерно отсутствие четко выраженной клинической картины, склонность к длительному течению, рецидивированию, что приводит к формированию морфологических изменений как на поверхности шейки матки, так и в ее толще [Влияние инфекций на репродуктивную систему женщин / В.И.Краснопольский, О.Ф.Серова, В.А.Туманова и др. // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - №5. - С.39-41]. Воспаление в ответ на хроническую инфекцию приводит к продукции неспецифических защитных противомикробных оксидантов, вызывающих окислительное повреждение ДНК клеток хозяина. Известна связь повышенного уровня провоспалительного цитокина интерлейкина-6 с цервикальной интраэпителиальной неоплазией. [Микробиоценоз влагалища и патология шейки матки. Возможности коррекции дисбиотических состояний / И.Б.Манухин, Г.Н.Минкина, B.C.Калинина // Поликлиническая гинекология. Клинические лекции / Под ред. проф. В.Н.Прилепской. - 2-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2005. - С.37-46]. Параллельно с воспалением развивается вторичный местный иммунодефицит клеточных и гуморальных иммунных реакций [Роль воспаления в диагностике и лечении патологии шейки матки / М.Н.Костава // Гинеколог. - 2005. - №12. - С.27-30]. Эктопия шейки матки также относится к фоновой патологии и занимает одно из первых мест в структуре гинекологической заболеваемости [Рудакова Е.Б. Псевдоэрозия шейки матки / Практическая гинекология. Клинические лекции / Под ред. акад. РАМН В.И.Кулакова, проф. В.Н.Прилепской. - 3-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2006. - С.40-48].
Известны разные способы диагностики, оценки, исследования фоновых заболеваний шейки матки в виде запатентованных медицинских технологий: [патент RU на изобретение №2134535 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки»]. Основан на воздействии знакопеременным током на клетки исследуемого органа в фоновой среде - молочной кислоте, разведенной в дистиллированной воде, при полном прекращении биокинетики, спустя 20 минут диагностируют воспалительное заболевания шейки матки; [патент RU на изобретение №2240040 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки»]. Основан на цветовом допплеровском картировании маточных и влагалищных артерий; [патент RU на изобретение №2240041 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки»]. Основан на дополнительной расширенной кольпоскопии при выявлении объемных включений в толще шейки при двухмерной сонографии и выявлении в них капсулы при трехмерной сонографии.
Однако по всем описанным выше способам по установлению воспалительного заболевания шейки матки нельзя судить о степени его активности и состоянии местного иммунитета шейки матки.
Недостатками всех названных способов является отсутствие информации о степени активности диагностируемого воспаления. Известен также «Способ диагностики эктопии шейки матки у женщин репродуктивного возраста» [патент RU на изобретение №2306569], основанный на исследовании фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, эстрадиола, прогестерона в сыворотке крови иммуноферментным методом.
Однако методом иммуноферментного анализа ИФА исследуют содержание гормонов в крови, данный способ позволяет диагностировать только неосложненную гормонозависимую эктопию.
Известна также оценка состояния иммунитета с использованием цитокинов. В настоящий момент диагностическая значимость оценки уровня цитокинов заключается в констатации самого факта повышения или понижения их концентрации у данного больного с конкретным заболеванием. Центральную роль в локальном и системном, остром и хроническом воспалении играет интерленкин-6 - ИЛ6, который входит в группу провоспалительных цитокинов [Сравнение наборов реагентов для определения интерлейкина 1 бета и интерлейкина 6 двух различных производителей / Т.Г.Рябичев, Н.А.Вараксин, Н.В.Тимофеева // Журнал «Цитокины и воспаление». - 2007. - №2. - с.70-72].
Известен способ определения содержания ИЛ6 в вагинальном отделяемом у пациенток с фоновыми заболеваниями шейки матки [Кореева Н.В. Оптимизация комплексного лечения фоновых заболеваний шейки матки у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дис. канд. мед. наук / Российский государственный медицинский университет. - г.Москва, 2007. - 21 с.].
Однако исследование цитокинов в вагинальном отделяемом не дает достоверной информации о состоянии локального иммунитета шейки матки, т.к. забор биоматериала производят достаточно далеко от патологического очага. Защитная роль провоспалительных цитокинов проявляется локально, в очаге воспаления, поэтому целесообразно измерять их уровни в соответствующих тканях.
www.consilium
Наиболее близким по технической сущности к предложенному способу является способ исследования содержания ИЛ6 в слизи цервикального канала методом твердофазного ИФА у больных кандидозным цервицитом, в котором забор осуществляют с помощью универсального зонда [Хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз: возможности терапии / В.Н.Прилепская, А.С.Анкирская, Г.Р.Байрамова и др. // Журнал «Гинекология» Т.9, №3. - 2007. - http: //  medicum.].
Однако при исследовании цитокинов в цервикальном содержимом данные могут быть искажены при наличии воспалительных заболеваний верхнего отдела гениталий.
Известно также «Устройство для забора цитологического материала с шейки матки» [авторское свидетельство SU №1779334], содержащее полый корпус с размещенным в нем штоком с режущими выступами и рукояткой. Корпус выполнен со сквозным каналом и режущей кромкой на рабочем торце, а режущие выступы штока расположены на его рабочем конце, причем половина их выполнена пирамидальными, а половина - в виде радиальных наклонных лезвий.
Известно также «Устройство для сбора диагностического материала шейки матки» [авторское свидетельство SU №839496], содержащее рукоятку, переходящую в стержень и рабочую часть конической формы. Конус рабочей части выполнен с чашеобразным бортом, имеющим радиусный отгиб, причем конус и чашеобразный борт выполнены перфорированными.
Известно также «Устройство для забора цитологического материала» [патент RU на изобретение №2019146], содержащее ручку, шейку и головку с заборным элементом. Головка выполнена в виде направленной вершиной вперед треугольной спереди и сбоку упругой пластины с вогнутыми боковыми сторонами и ребрами, а заборные элементы - в виде упругоэластичных ленточных обрамлений по ребрам, выполненных в сечении треугольной формы, по концам - со сходом и расположены в плоскости боковых сторон, противоположных направлению вращения головки.
Однако данные устройства сложны, громоздки и не исключают вероятности травмирования в той или иной степени исследуемой поверхности.
Известно устройство в виде универсального зонда, используемого в технологии забора слизи из цервикального канала [Хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз: возможности терапии / В.Н.Прилепская, А.С.Анкирская, Г.Р.Байрамова и др. // Журнал «Гинекология» Т.9, №3. - 2007. - http:// www.consilium medicum].
Однако при заборе биологического материала с помощью универсального зонда трудно исключить полное отсутствие травматичности, так как устройство вводят непосредственно в цервикальный канал и не исключается возможность травмирования его стенок.
Известен также наконечник для забора цервикальной слизи, представляющий собой металлическую трубку, на дистальном конце которой кроме отверстия на верхушке имеется четыре радиально расположенных боковых отверстия, что позволяет производить смыв и забор материала из криптцервикального канала для исследовательских целей [Показатели местного гуморального иммунитета до и после лечения воспалительных заболеваний шейки матки и влагалища / Сенчук А.Я., Михальский Л.А., Рогачева В.П. - 2004. - http: // www.medi.ru].
Наиболее близким аналогом к заявляемому устройству является устройство для забора исследуемого материала, представляющее собой стерильную градуированную стеклянную пипетку [Система провоспалительных цитокинов в цервикальном секрете у женщин с урогенитальным хламидиозом / О.А.Гизингер, И.И.Долгушин // Журнал «Цитокины и воспаление». - 2006. - Т.5 №4. - с.13-16].
Однако при исследовании биологического материала, полученного из цервикального канала стеклянной пипеткой, может отмечаться искажение данных при наличии воспалительных заболеваний верхнего отдела гениталий.
Задачей заявляемого способа является повышение простоты осуществления процесса оценки активности локального воспаления при сохранении высокой точности результата.
Задачей заявляемого устройства для сбора исследуемого материала с поверхности шейки матки является упрощение конструкции при достижении атравматичности слизистой при его использовании.
Сущность заявляемого способа оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки характеризуется тем, что после клинического обследования и верификации диагноза больных производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя устройство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя устройство внутрь цервикального канала, затем помещают собранный материал до полного погружения в плотно закрывающуюся пробирку, заполненную 1,0 мл 1,055М раствором хлорида натрия, смесь встряхивают в центрифуге вортекс в течение 10 мин, исследуют полученные материалы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА на планшетах с помощью набора реагентов «Вектор-Бест», спектрофотометрически осуществляют определение концентрации цитокина интерлейкина-6 в исследуемых пробах, судят об активности локального воспаления по полученной концентрации интерлейкина-6 в сравнении с нормальной его концентрацией, равной значениям до 50 пг/мл у здоровых лиц из эталонной группы, и при значении выше 50 пг/мл до 92 пг/мл судят о наличии хронически протекающего воспалительного процесса, при значении выше 92 пг/мл - судят о наличии активно протекающего воспалительного процесса и выраженном иммунном ответе.
Заявляется также способ с вышеописанными признаками, в котором в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки сбор исследуемого материала осуществляют с поверхности зоны трансформации с помощью полосок фильтровальной бумаги-аппликатора размером 1×0,4 см.
Сущность заявляемого устройства для снятия нативного материала с поверхности шейки матки характеризуется тем, что оно имеет протяженный держатель в виде стержня с длиной, по крайней мере, превосходящей длину влагалища, с дистальной стороны стержня под прямым углом к нему размещен рабочий элемент в виде валика, имеющего покрытие из съемного высокогигроскопичного материала с развитой впитывающей поверхностью, проксимальный конец стержня служит манипулятором-ручкой, валик выполнен с возможностью перемещения по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева, с возможностью поворота вокруг своей оси и изменения его положения с горизонтального на вертикальное переключением манипулятора-ручки.
Заявляется также устройство с вышеописанными признаками и оптимальными размерами узлов и деталей:
длина держателя - 200÷220 мм;
протяженность валика - 7÷10 мм;
диаметр валика - 4÷6 мм;
толщина покрытия валика - 0,3 мм.
Технический результат заявляемой группы изобретений заключается в том, что повышение точности в оценке активности воспаления шейки матки производят с учетом данных, получаемых непосредственно с участка патологии в виде информации с нативной пробы, которая дает большую достоверность исследования, что отсутствовало в наиболее близком аналоге. Достигается этот результат технически: проба встряхивается с использованием центрифуги вортекс, процесс исследуют ИФА с применением технических средств. Устройство для снятия нативного материала с поверхности шейки матки, а также другие используемые в заявляемом способе устройства - его технические атрибуты.
Поскольку способ основан на использовании цитокина интерлейкина-6, который является локальным показателем, целесообразно измерять его уровень непосредственно в изучаемых тканях, в данном случае шейки матки.
Измененное количество цитокина интерлейкина-6 служит признаком иммунодефицитного состояния и показателем течения заболевания. В данной заявке изучалась иммуноактивность конкретного органа, конкретной патологической зоны органа - очаге воспаления шейки матки методом иммуноферментного анализа, который осуществлялся на заранее произведенных планшетах ЗАО «Вектор-Бест» г.Новосибирск - Россия. Учет результатов - спектрофотометрический на длине волны 450 нм. Для выяснения значений нормальной концентрации интерлейкина-6 был проведен анализ практически здоровых доноров - женщин репродуктивного возраста от 25 до 44 лет, представительниц различных социальных групп без любых заболеваний гениталий в настоящем времени и в прошлом, в первую очередь шейки матки. Все названные до данной фазы способа признаки, входящие в приемы осуществления способа, носят технический характер, например как сам ИФА, так и особенности его осуществления. Особенности сбора исследуемого материала также имеют техническую сущность - сколько собрать и чем материал для исследования, а также как его обработать до ИФА, а главное, какую естественную жидкость выбрать для исследования. В подавляющем большинстве для исследования данного органа - шейки матки при данной патологии используют для ИФА - исследование крови, реже содержимое цервикального канала, в заявляемом решении исследуется отделяемое цервикальных желез с поверхности зоны трансформации шейки матки.
Активность и точность локализации воспалительного процесса шейки матки подтверждается неоспоримо, например, при наличии нескольких воспалительных процессов вяло и/или активно текущих одновременно в одном организме. Например, наличие осложненной эктопии и пневмонии или флегмонозного заболевания одновременно в одном организме другими методами, например, анализом крови даже на цитокины, не позволяет оценить активность воспалительного заболевания шейки матки отдельно от других сопутствующих заболеваний.
Подробное описание способа.
Первоначально осуществляют клиническое обследование больной с помощью стандартных методов, т.е. с оценкой жалоб и соматического статуса, детальным сбором анамнеза с выявлением факторов, влияющих на иммунный статус, гинекологическое обследование с осмотром шейки матки с помощью зеркал, бимануальным исследованием, расширенной кольпоскопией, цитологическим исследованием соскоба с шейки матки. Затем дополнительно обследуют на наличие инфекций гениталий, т.е. осуществляют микроскопию окрашенных мазков из урогенитального тракта, бактериологическое исследование содержимого цервикального канала. Методом полимеразной цепной реакции обследуют на инфекции, передающиеся преимущественно половым путем. Проводят верификацию диагноза, критериями исключения из исследования являлись: беременность и лактация, воспалительные заболевания органов малого таза и наружных половых органов в стадии обострения, наличие инфекций, передающихся половым путем, в т.ч. папилломавирусной инфекции, наличие также цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки, наличие тяжелой экстрагенитальной патологии и признаков острых инфекционных заболеваний.
После клинического обследования больных и подтверждения наличия неспецифического воспаления шейки матки производят сбор биоматериала с поверхности патологического очага и зоны трансформации. Сбор биоматериала осуществляют следующим образом: больную располагают на гинекологическом кресле, шейку матки обнажают в зеркалах Куско. Стерильным сухим ватным тампоном удаляют влагалищное отделяемое с поверхности шейки матки. Затем производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя заявляемое устройство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала.
Заявляемое в данной заявке устройство для снятия нативного материала с поверхности шейки матки имеет съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик. С проксимальной стороны держателя выполнена манипулятор-ручка. Валик выполнен крепящимся с дистальной стороны держателя и с возможностью перемещения по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева, с возможностью поворота валика вокруг своей оси и изменения его положения с горизонтального на вертикальное переключением манипулятора-ручки. Авторами экспериментально подобраны геометрические размеры устройства: длина держателя - 200÷220 мм, протяженность валика - 7÷10 мм, диаметр валика - 4÷6 мм, толщина покрытия валика - 0,3 мм исходя из анатомических размеров и современных требований медицины - атравматичности, безболезненности. После полного выхода из гениталий осуществляют съем высокогигроскопического покрытия с нативным материалом и помещения его в раствор.
Устройством для снятия нативного материала может также являться фильтровальная бумага-аппликатор соответствующих размеров. Сорбирующую способность фильтровального материала на максимальное его впитывание предварительно оценивают в контрольных исследованиях. Полоску фильтровального материала взвешивают до и после пропитывания на аналитических весах. Полоску мягкого фильтровального материала размером 1,0×0,4 см с помощью пинцета плотно фиксируют к поверхности патологического очага, деликатным нежным надавливанием пинцетом дают возможность фильтровальному материалу впитать в себя воспалительный секрет цервикальных желез и компоненты поврежденных тканей в течение 15-20 с, а такой размер фильтровального материала, как правило, позволяет получить до 5,0±0,5 мг нативного материала. Это устройство применяется в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки, с помощью него осуществляют сбор исследуемого материала в виде отделяемого цервикальных желез с поверхности зоны трансформации. Описанные в данной заявке приемы снятия нативного материала обеспечивают максимальную полноту сбора и атравматичность в отличие от наиболее близкого аналога, когда цервикальный секрет берут из цервикального канала, а не с зоны патологического очага и с зоны трансформации, как в заявляемом способе.
Затем пробу помещают в пронумерованную пробирку до полного погружения, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, закрывают крышкой. Смыв биоматериала с поверхности фильтровального материала осуществляют в центрифуге вортекс CM 70М-07, Elmi в течение 10 мин в режиме встряхивания. Затем пробирку помещают в штатив.
Исследуемым тестируемым материалом является отделяемое со слизистой оболочки шейки матки, разведенное 1:200 в 0,155М растворе хлорида натрия.
Образцы тестируют методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА. Исследуемый образец в количестве 100 мкл вносят в лунку планшета с помощью автоматической пипетки. На первой стадии анализа ИЛ6, содержащийся в калибровочных и исследуемых образцах, связывается с первыми антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета. На второй стадии анализа иммобилизованный ИЛ6 взаимодействует с конъюгатом вторых антител с биотином. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству ИЛ6 в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу. Во время инкубации с субстратной смесью - раствором хромогена тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченных антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках с помощью иммуноферментного анализатора «Stat Fax-2100» на длине волны 450 нм на основании калибровочного графика, полученного при исследовании калибровочных проб, имеющихся в наборе реактивов, рассчитывают концентрацию ИЛ6 в анализируемых образцах. Результаты выражают в пг/мл. Общее время проведения анализа 90-100 мин.
Методом твердофазного ИФА тестируют свежеприготовленные образцы. Если это невозможно, то для исключения бактериального пророста пробирки с образцами помещают в морозильную камеру и осуществляют хранение при t -20°C. При этом не допускают даже однократного оттаивания образцов.
Для получения количественного значения эталонной нормы концентрацию интерлейкина-6 заблаговременно определяли в отделяемом со слизистой шейки матки у 20 практически здоровых лиц - женщин репродуктивного возраста с 25-44 лет и осуществляли построение градуировочной кривой. Концентрация полученных значений для них составила до 50 пг/мл. У большей части здоровых лиц величина составила в пределах значения 30,9 пг/мл.
У 20 пациенток с острым воспалением или обострением хронического воспалительного процесса возраста с 24 по 44 года диапазон полученных измеренных значений концентрации ИЛ6 составлял более 92 пг/мл. Для большей части пациенток данные значения укладывались около 158-160 пг/мл.
У 20 пациенток с длительным и вялотекущим хроническим воспалительным процессом того же возраста от 25 до 44 лет диапазон полученных измеренных концентраций ИЛ6 составил: 50-92 пг/мл.
На основании полученных данных можно сделать обобщения, с помощью которых можно определять активное течение воспаления шейки матки или хронически текущие воспаления у больных. В зависимости от сделанной оценки больным назначается разное лечение. При правильной оценке состояния воспаления шейки матки и адекватном лечении наступает выздоровление больных как с остропротекающим воспалением, так и длительно затянувшимся хроническим процессом воспаления.
Предложенный способ проиллюстрирован следующими клиническими примерами.
Пример 1. Пациентка К-ва А.Н., 35 лет. Обратилась на прием с целью профосмотра. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведен устройством для снятия нативного материала с поверхности шейки матки сбор исследуемого продукта непосредственно с поверхности зоны трансформации с максимальной полнотой и атравматично путем прокатывания по поверхности экзоцервикса рабочей частью в виде валикас покрытием из высокогигроскопического материала. Устройство извлекли из влагалища, изменив положение валика с горизонтального на вертикальное, избегая касания стенок. Произвели снятие покрытия валика с помощью пинцета и поместили его до полного погружения в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Покрытие валика извлечено из пробирки с помощью пинцета, с отжатием избытка жидкости путем прижимания к стенке пробирки. Исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИЛ6-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ6 - 69,5 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс шейки матки.
Пример 2. Пациентка П-ва Е.Б., 33 года. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне хронического неспецифического цервицита. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесена в лунку планшета из набора «ИЛ6-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ6 - 85,4 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс. Назначено адекватное лечение с включением иммуномодуляторов локально в виде свечей на первом этапе, далее лечение по стандартной схеме.
Пример 3. Пациентка А-ва Л.А., 29 лет. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне бактериального неспецифического цервицита. Умеренная рубцовая деформация шейки матки. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец материала в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИЛ6-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ6 - 138,6 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: активно протекающий воспалительный процесс, выраженный иммунный ответ.
Способ апробирован в клинике акушерства и гинекологии педиатрического факультета Саратовского государственного медицинского университета на базе женской консультации ММУ «10 Городская клиническая больница» г.Саратова и Центральной научно-исследовательской лаборатории Саратовского государственного медицинского университета. Таким образом, заявляемый способ оценки активности локального воспаления слизистой шейки матки при фоновых заболеваниях, основанный на определении уровня ИЛ6 в отделяемом с поверхности патологического очага, позволяет:
- на основании полученных данных оценить активность локального воспаления;
- на основании полученных результатов осуществить своевременное адекватное патогенетическое лечение.
Данный способ обладает следующими преимуществами: высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации до 0,05 нг/мл; возможностью использовать минимальные объемы исследуемого материала; стабильностью при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА до года и более; простотой проведения реакции; наличием как инструментального, так и визуального учета; возможностью автоматизации всех этапов реакции; относительно низкой стоимостью диагностических наборов. Отличия в достигаемом результате - достоинства заявляемых изобретениях.
Для проверки достоверности результатов в оценке активности воспаления шейки матки осуществляли параллельно подсчет числа лейкоцитов в поле зрения мазка с поверхности экзоцервикса. Была произведена микроскопия окрашенного мазка с подсчетом количества лейкоцитов. Для нормы количество лейкоцитов составляет до 10 клеток в поле зрения. 15-20-25 клеток в поле зрения свидетельствует о бессимптомно протекающем хроническом воспалительном процессе, 30-35-40 клеток в поле зрения - о хронически протекающем воспалительном процессе, 45-50-55 клеток в поле зрения - об активно остропротекающем воспалительном процессе. Эти данные совпали с выводами, сделанными по заявляемому способу - о наличии хронически протекающего воспаления.
Увеличение числа лейкоцитов в мазке было характерно для картины активно протекающего острого процесса и, наоборот, - уменьшение числа лейкоцитов характеризовало наличие хронического воспалительного процесса.
На основании этих проверочных данных подтверждается вывод на деление больных с активно и хронически протекающим воспалением шейки матки при условии значения концентрации цитокина, полученного изложенным способом с известным набором реактивов ИФА, с учетом особенностей взятия пробы на начальном этапе и обработки проб на последующих этапах.