ОБЩИЕ ЛЕГКИЕ ЦЕПИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, включающая первую и вторую антигенсвязывающие части молекулы, в которой первая антигенсвязывающая часть молекулы включает первую легкую цепь, причем первая антигенсвязывающая часть молекулы способна специфически связываться с антигеном, активирующим Т-клетки, и в которой вторая антигенсвязывающая часть молекулы включает вторую легкую цепь, причем вторая антигенсвязывающая часть молекулы способна специфически связываться с антигеном целевых клеток, в которой аминокислотные последовательности первой и второй легких цепей идентичны.
2. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 1, в которой первой антигенсвязывающей частью молекулы является Fab.
3. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-2, в которой второй антигенсвязывающей частью молекулы является Fab.
4. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-3, дополнительно включающая третью антигенсвязывающую часть молекулы, способную специфически связываться с антигеном целевых клеток.
5. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 1, дополнительно включающая домен Fc, состоящий из первой и второй субъединиц, способных стабильно ассоциировать.
6. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-5, в которой первая и вторая легкие цепи включают CDR легкой цепи SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34.
7. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-6, в которой первая и вторая легкие цепи включают константный домен легкой цепи каппа.
8. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-6, в которой первая и вторая легкие цепи включают константный домен легкой цепи лямбда.
9. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 8, в которой первая и вторая легкие цепи являются легкой цепью человека лямбда или гуманизированной легкой цепью лямбда.
10. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 9, в которой первая и вторая легкие цепи являются легкой цепью человека лямбда 7 или гуманизированной легкой цепью лямбда 7.
11. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-6 и 8-10, в которой первая и вторая легкие цепи включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
12. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 11, в которой первая и вторая легкие цепи включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
13. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-8, в которой антигенсвязывающая часть молекулы, способная специфически связываться с антигеном, активирующим Т-клетки, включает CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 и SEQ ID NO: 39.
14. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-13, включающая не более одной антигенсвязывающей части молекулы, способной специфически связываться с антигеном, активирующим Т-клетки.
15. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-13, в которой первая и вторая антигенсвязывающие части молекулы слиты друг с другом необязательно через пептидный линкер.
16. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 2-13, в которой вторая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом тяжелой цепи Fab первой антигенсвязывающей части молекулы.
17. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 2-13, в которой первая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом тяжелой цепи Fab второй антигенсвязывающей части молекулы.
18. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 2-13 и 9, в которой вторая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом первой или второй субъединицы домена Fc.
19. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 2-13, в которой первая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом первой или второй субъединицы домена Fc.
20. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 2-13, в которой каждая из первой и второй антигенсвязывающих частей молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом одной из субъединиц домена Fc.
21. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 4, в которой каждая из первой, второй и третьей антигенсвязывающих частей молекулы является молекулой Fab, включающей идентичную легкую цепь VLCL.
22. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 4 или 21, в которой каждая первая, вторая или третья антигенсвязывающая часть молекулы является молекулой Fab, включающей CDR легкой цепи SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34.
23. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 4 или 21, в которой каждая первая, вторая или третья антигенсвязывающая часть молекулы является молекулой Fab, включающей легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
24. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 4 или 21-23, в которой третья антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом первой или второй субъединицы домена Fc.
25. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 4 или 21-23, в которой каждая вторая или третья антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом одной из субъединиц домена Fc, и первая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом тяжелой цепи Fab второй антигенсвязывающей части молекулы.
26. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 25, в которой вторая и третья антигенсвязывающие части молекулы и домен Fc являются частью молекулы иммуноглобулина, в частности иммуноглобулина класса IgG.
27. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 4 или 21-23, в которой каждая первая или третья антигенсвязывающие части молекулы слиты на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом одной из субъединиц домена Fc, и вторая антигенсвязывающая часть молекулы слита на С-конце тяжелой цепи Fab с N-концом тяжелой цепи Fab первой антигенсвязывающей части молекулы.
28. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 27, в которой первая и третья антигенсвязывающие части молекулы и домен Fc являются частью молекулы иммуноглобулина, особенно иммуноглобулина класса IgG.
29. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 5-28, в которой домен Fc является доменом Fc IgG, особенно IgG1 или IgG4.
30. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 5-25, в которой домен Fc является доменом Fc человека.
31. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 5-23, в которой домен Fc включает модификацию, индуцирующую ассоциацию первой и второй субъединиц домена Fc.
32. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 31, в которой в домене СН3 первой субъединицы домена Fc аминокислотный остаток замещен аминокислотным остатком, имеющим больший объем боковой цепи, тем самым формируя выступ в домене СН3 первой субъединицы, который помещается в полость в домене СН3 второй субъединицы, и в домене СН3 второй субъединицы домена Fc аминокислотный остаток замещен аминокислотным остатком, имеющим меньший объем боковой цепи, тем самым формируя полость в домене СН3 второй субъединицы, в которую помещается выступ второго домена СН3 первой субъединицы.
33. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 5-32, в которой домен Fc проявляет пониженное связывающее сродство с рецептором Fc и/или пониженную эффекторную функцию по сравнению с доменом нативного Fc IgG1.
34. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 5-32, в которой домен Fc включает одну или несколько аминокислотных замен, которые снижают связывание с рецептором Fc и/или эффекторную функцию.
35. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 34, в которой одна или несколько аминокислотных замен в одном или нескольких положениях выбраны из группы, включающей L234, L235 и Р329.
36. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 34, в которой каждая субъединица домена Fc включает три аминокислотных замещения, которые снижают связывание с активирующим рецептором Fc и/или эффекторную функцию, причем указанными аминокислотными замещениями являются L234A, L235A и P329G.
37. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 33-36, в которой рецептором Fc является рецептор Fcγ.
38. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 33-37, в которой эффекторной функцией является антителозависимая клеточно-обусловленная цитотоксичность (ADCC).
39. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предшествующих пунктов, в которых активирующим Т-клетки антигеном является CD3.
40. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предшествующих пунктов, в которых антиген целевой клетки выбран из группы, включающей: и рецептор фолиевой кислоты 1 (FolR1), муцин-1 (MUC1) и антиген созревания В-клеток (ВСМА).
41. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предшествующих пунктов, в которых первая и вторая легкие цепи являются гуманизированными легкими цепями.
42. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предшествующих пунктов, в которых первая и вторая легкие цепи могут быть применены более чем в двух антигенсвязывающих частях молекулы, обладающих разной антигенной специфичностью.
43. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предшествующих пунктов, в которых антиген целевых клеток не является ВСМА.
44. Легкая цепь, включающая аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34 для применения в активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле.
45. Легкая цепь по п. 44, которая включает константный домен легкой цепи каппа.
46. Легкая цепь по п. 44, которая включает константный домен легкой цепи лямбда.
47. Легкая цепь по п. 46, которая является легкой цепью лямбда человека или гуманизированной легкой цепью лямбда.
48. Легкая цепь по п. 46, которая является легкой цепью лямбда 7 человека или гуманизированной легкой цепью лямбда 7.
49. Легкая цепь по пп. 46-48, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
50. Легкая цепь по п. 49, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
51. Легкая цепь, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34, для применения в библиотеке для получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы.
52. Легкая цепь по п. 51, которая включает константный домен легкой цепи каппа.
53. Легкая цепь по п. 51, которая включает константный домен легкой цепи лямбда.
54. Легкая цепь по п. 53, которая является легкой цепью лямбда человека или гуманизированной.
55. Легкая цепь по п. 54, которая является легкой цепью лямбда 7 человека или гуманизированной.
56. Легкая цепь по пп. 53-55, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
57. Легкая цепь по п. 56, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
58. Выделенный полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
59. Выделенный полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
60. Выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-41 или ее фрагмент, или выделенный полипептид по п. 58 или 59, или его фрагмент.
61. Полипептид, кодируемый выделенным полинуклеотидом по п. 60.
62. Вектор, особенно экспрессирующий вектор, включающий выделенный полинуклеотид по п. 60.
63. Клетка-хозяин, включающая выделенный полинуклеотид по п. 60 или вектор по п. 62.
64. Способ получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-43, включающий стадии: а) культивирования клеток-хозяев по п. 63 в условиях, пригодных для экспрессии активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы и б) выделения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы.
65. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, получаемая способом по п. 64.
66. Фармацевтическая композиция, включающая активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-43 и фармацевтически приемлемый носитель.
67. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-43 или фармацевтическая композиция по п. 66 для применения в качестве лекарственного средства.
68. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-43 или фармацевтическая композиция по п. 66 для применения в лечении заболевания индивидуума, нуждающегося в этом.
69. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула или фармацевтическая композиция по п. 66, причем заболеванием является рак.
70. Применение активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-43 или легкая цепь по любому из пп. 44-57, для получения лекарственного средства для лечения заболевания индивидуума, нуждающегося в этом.
71. Способ лечения заболевания индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества композиции, включающей активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-43 или легкую цепь по любому из пп. 44-57 в фармацевтически приемлемой форме.
72. Применение по п. 70 или способ по п. 71, в которых указанное заболевание является раком.
73. Способ индукции лизиса целевых клеток, включающий контакт целевых клеток с активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулой по любому из пп. 1-43 в присутствии Т-клеток.
74. Способ идентификации вариабельной тяжелой цепи для применения в активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекул молекуле и антигена целевых клеток, включающий стадию скрининга комбинаторой библиотеки, включающей вариабельные тяжелые цепи с легкой цепью, включающей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34.
75. Способ по п. 74, в котором легкая цепь включает константный домен легкой цепи каппа.
76. Способ по п. 74, в котором легкая цепь включает константный домен легкой цепи лямбда.
77. Способ по п. 76, в котором легкая цепь лямбда является цепью человека или гуманизированной.
78. Легкая цепь по п. 77, которая является легкой цепью лямбда 7 человека или гуманизированной.
79. Способ по любому из пп. 76-78, в котором легкая цепь включает аминокислотную последовательность of SEQ ID NO: 31.
80. Способ по п. 79, в котором легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.