Способ очистки дарбэпоетина альфа

1. Способ очистки дарбэпоетина альфа, включающий:
(а) связывание дарбэпоетина альфа на анионобменной хроматографической колонке путем загрузки смеси, содержащей дарбэпоетин альфа, имеющий различное содержание сиаловой кислоты, на анионобменную хроматографическую колонку;
(b) промывание хроматографической колонки с помощью промывающего буферного раствора, содержащего аргинин; и
(с) элюирование дарбэпоетина альфа, который остается связанным на хроматографической колонке, из этой колонки.
2. Способ по п. 1, в котором дарбэпоетин альфа, выделенный на стадии (с), имеет изоэлектрическую точку от pI 2,0 до 4,0.
3. Способ по п. 1, в котором промывающий буферный раствор, содержащий аргинин, имеет рН в области от 3,0 до 5,0.
4. Способ по п. 1, в котором промывающий буферный раствор, содержащий аргинин, дополнительно содержит по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, состоящей из NaCl и мочевины.
-3
-3
5. Способ по п. 4, в котором промывающий буферный раствор содержит NaCl в концентрации от 5×10 М до 90×10 М.
6. Способ по п. 4, в котором промывающий буферный раствор содержит мочевину в концентрации от 3 М до 8 М.
7. Способ по п. 1, стадия (b) которого состоит в вымывании структурных изоформ дарбэпоетина альфа, имеющих более высокие изоэлектрические точки, чем целевая изоэлектрическая точка, для получения структурной изоформы дарбэпоетина альфа, имеющей целевую изоэлектрическую точку.
8. Способ по п. 1, дополнительно включающий до или после стадии (b) промывание с помощью промывающего буферного раствора, содержащего или не содержащего аргинин.
9. Способ по п. 1, дополнительно включающий перед стадией (b) первичное промывание колонки с помощью промывающего буферного раствора, имеющего рН в области от 6 до 8, при этом стадия (b) представляет
собой вторичное промывание колонки с помощью содержащего аргинин промывающего буферного раствора, имеющего рН в области от 3 до 5.
10. Способ по п. 9, в котором промывающий буферный раствор для первичного промывания представляет собой раствор фосфата натрия, а промывающий буферный раствор для вторичного промывания представляет собой раствор глицина-HCl.
11. Способ по п. 1, в котором биологическая жидкость представляет собой дрожжевую культуру, культуру растительной клетки или культуру животной клетки.
12. Способ по п. 1, в котором анионобменная хроматографическая колонка содержит смолу, имеющую функциональную группу, которая выбрана из группы, состоящей из четвертичного амина (Q), диэтиламиноэтила (DEAE, ДЭАЭ) и четвертичного аминоэтила (QAE, ЧАЭ).
13. Способ по п. 1, дополнительно включающий (d) фракционирование элюата анионобменного хроматографирования, полученного на стадии (с), путем хроматографирования методом гель-фильтрующей хроматографии.
14. Способ очистки дарбэпоетин альфа, включающий:
(а) элюирование фракции, содержащей дарбэпоетин альфа, путем хроматографирования биологической жидкости, содержащей дарбэпоетин альфа, методом анионобменной хроматографии;
(b) элюирование фракции, содержащей дарбэпоетин альфа, путем хроматографирования элюата, полученного на стадии (а), методом адсорбционной хроматографии;
(с) связывание дарбэпоетина альфа на анионобменной хроматографической колонке путем загрузки элюата, полученного на стадии (b), на анионобменную хроматографическую колонку;
(d) промывание колонки, обработанной на стадии (с), с помощью промывающего буферного раствора, содержащего аргинин; и
(е) элюирование дарбэпоетина альфа, который остается связанным на хроматографической колонке при промывании на стадии (d), из этой колонки.
15. Способ по п. 14, в котором неподвижная фаза в методе адсорбционной хроматографии представляет собой гидроксиаппатитовую смолу.
16. Способ по п. 14, дополнительно включающий (f) фракционирование элюата анионобменного хроматографирования, полученного на стадии (е), путем его хроматографирования методом гель-фильтрующей хроматографии.
17. Способ по п. 14, стадия (а) которого включает адсорбирование биологической жидкости, содержащей дарбэпоетин альфа, на уравновешенную анионобменную смолу путем добавления на нее указанной жидкости, промывание полученной смолы с помощью промывающего буферного раствора, который имеет рН от 6 до 8 и содержит от 0 ммоль до 100 ммоль NaCl, и элюирование фракции, содержащей дарбэпоетин альфа, с помощью элюирующего буферного раствора, который имеет рН от 6 до 8 и содержит от 100 ммоль до 300 ммоль NaCl.
18. Способ по п. 14, стадия (b) которого включает загрузку элюата, выделенного на стадии (а), на уравновешенную гидроксиаппатитовую смолу, промывание полученной смолы с помощью промывающего буферного раствора, который имеет рН от 6 до 8 и содержит от 0 ммоль до 100 ммоль фосфата натрия, и получение фракции, содержащей дарбэпоетин альфа, из жидкости, вымываемой со смолы, которая не адсорбируется на нее в процессе загрузки и промывания.