Морфофункциональные изменения тимуса у потомства мышей в период полового созревания и у взрослых особей после однократного иммуностимулирующего воздействия на материнский организм в ранние сроки беременности

КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ

9. Kanneganti T. D., Lamkanfi M., Kim Y. G. et al. Pannexin-1-mediated recognition of bacterial molecules activates the cryopyrin inflammasome independent of Toll-like receptor signaling // Immunity. - 2007. - Vol. 26. - P. 433-443.

10. Kawai T., Akira S. Pathogen recognition with Toll-like receptors // Curr. Opin. Immunol. - 2005. - Vol. 17. - P. 338-344.

11. Marina-Garcia N., Franchi L., Kim Y. G. et al. Pannexin-1-me-diated intracellular delivery of muramyl dipeptide induces cas-pase-1 activation via cryopyrin/NLRP3 independently of Nod2 // J. Immunol. - 2008. - Vol. 180. - P. 4050-4057.

12. PashenkovM. V., PopilyukS. F., Alkhazova B. I. et al. Muropeptides trigger distinct activation profiles in macrophages and dendritic cells // Int. Immunopharmacol. - 2010. - Vol. 10. - P. 875-882.

13. Ronkina N., Kotlyarov A., Dittrich-Breiholz O. et al. The mitogen-activated protein kinase (MAPK)-activated protein kinases MK2 and MK3 cooperate in stimulation of tumor necrosis factor biosynthesis and stabilization of p38 MAPK // Mol. Cell. Biol. -2007. - Vol. 27. - P. 170-181.

14. Sallusto F., Lanzavecchia A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granu-locyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha // J. Exp. Med.

- 1994. - Vol. 179. - P. 1109-1118.

15. Tada H., Aiba S., Shibata K. et al. Synergistic effect of Nod1 and Nod2 agonists with toll-like receptor agonists on human dendritic cells to generate interleukin-12 and T helper type 1 cells // Infect. and Immun. - 2005. - Vol. 73. - P. 7967-7976.

16. Wang L., Trebicka E., Fu Y. et al. Regulation of lipopolysaccha-ride-induced translation of tumor necrosis factor-alpha by the toll-like receptor 4 adaptor protein TRAM // J. Innate Immun.

- 2011. - Vol. 3. - P. 437-446.

17. WolfertM. A., Murray T. F., Boons G. J., Moore J. N. The origin of the synergistic effect of muramyl dipeptide with endotoxin and pep-tidoglycan // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277. - P. 39179-39186.

Поступила 01.10.12

КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ

© н. в. ЯГЛОВА, с. с. ОБЕРНИХИН, 2013 УДК 618.2-092:612.017.1]-07

Н.В. Яглова, С.С. Обернихин

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТИМУСА У ПОТОМСТВА МЫШЕЙ

в период полового созревания и у взрослых особей после однократного иммуностимулирующего воздействия на материнский организм в ранние сроки беременности

Лаборатория развития эндокринной системы, лаборатория клеточной иммунопатологии и биотехнологии ФГБУ НИИ морфологии человека РАМН

Цель настоящего исследования - изучение морфофункционального состояния тимуса в период полового созревания и после его наступления у потомства мышей, подвергшихся однократному иммуностимулирующему воздействию конканавалина A на раннем сроке беременности до начала формирования тимуса у плода. Выявлены стойкие изменения морфофункционального состояния тимуса у потомства на поздних сроках постнатального развития, что выражалось в задержке возрастных инволютивных изменений и повышенной пролиферативной активности тимоцитов у половозрелых мышей.

Ключевые слова: тимус, пренатальное воздействие, конканавалинА, инволюция N.V Yaglova, S.S. Obernikhin

MORPHOFUNCTIONAL CHANGES IN THYMIC OFFSPRING OF MICE IN THE PERIOD OF PUBERTY AND IN ADULTS AFTER A SINGLE IMMUNOSTIMULATORY EFFECTS OF THE PARENT ORGANISM IN THE EARLY STAGES OF PREGNANCY

The aim of this research was the study of morphofunctional state of thymus in puberty and after its occurrence in the offspring of mice exposed to a single immunostimulatory effects of concanavalin early in pregnancy prior to the formation of thymus in the fetus. Identified persistent changes morphofunctional state of thymus in the offspring in the later stages of postnatal development, expressed in the delay of the age of involutive changes and increased proliferative activity thymocytes at adult mice.

Key words: thymus, prenatal exposure, concanavalin A, involution

Одной из малоизученных и актуальных проблем биологии и медицины является изучение влияния реакций иммунной системы материнского организма на развитие иммунной системы плода. Существуют данные, подтверждающие связь между функциональными изменениями иммунной системы

Яглова Наталья Валентиновна - д-р мед. наук, зав. лаб., тел. 8(499)120-80-65, e-mail: morfolhum@mail.ru

потомства после различных воздействий на иммунную систему матери во время беременности [1, 14], но механизмы этих изменений не ясны. По различным данным, изменения органов иммунной системы в пре- и постнатальном развитии организма могут быть как значительными, так и отсутствовать даже при внутриутробной гибели плода [2, 10].

Цель настоящего исследования - изучить морфофункциональное состояние тимуса в период полового созревания и после его наступления у потомства мышей, подвергшихся

- 15 -

ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013

однократному иммуностимулирующему воздействию конка-навалина А (КонА) на раннем сроке беременности.

Материалы и методы. Эксперимент проводили на мышах C57Bl/6. Первую опытную группу (группа КонА) составили самцы (n=8), рожденные самками, которым на 7-е сутки после оплодотворения в качестве активатора иммунной системы однократно ввели КонА в орбитальный синус в дозе 5мг/кг Контрольную группу составили самцы (n=10), родившиеся от интактных самок. Для дифференцировки действия КонА и индуцируемых им цитокинов на плод сформировали вторую опытную группу (группа ПЛ), в которую вошли самцы (n=8), родившиеся от мышей, которым производили перенос активированных КонА лимфоцитов. Для этого небеременным самкам аналогичного возраста однократно вводили КонА в орбитальный синус в дозе 15 мг/кг. Забор селезенки производили через 2 ч. Выделяли клетки селезенки, после трехкратной отмывки средой Хенкса доводили до концентрации 2-107/мл. 0,2 мл взвеси сингенных клеток вводили в орбитальный синус (4-106 клеток). Во 2-ю контрольную группу включили самцов (n = 6), рожденных самками, которым вводили клетки селезенки от интактных мышей, полученные вышеописанным способом, в том же количестве. Самцов мышей выводили из эксперимента в возрасте 1,5 мес (период полового созревания) и 2,5 мес (начало репродуктивного периода) передозировкой диэтилового эфира. Исследование гистологических препаратов тимуса, окрашенных гематоксилином и эозином, толуидиновым синим, проводили методом световой микроскопии и компьютерной морфометрии с помощью программы ImageScope (Leica Microsystems Gmbh, Австрия). Оценивали соотношение коркового и мозгового веществ, ширину субкапсулярного слоя, количество лимфоцитов в 1 мм2 среза мозгового вещества, количество тимических телец на 1 мм2 площади мозгового вещества и фазу их развития по О.В. Зайрятьянцу [4], количество клеток, входящих в тимическое тельце, и количество выявляемых тучных клеток в 1 мм2. Определяли пролиферативную активность клеток тимуса. Клетки в количестве 2-105 вносили в 96-луночные планшеты для определения 4-часовой пролиферации ex tempore [3], добавляли 3Н-тимидин (1 мкКи/лунку). После инкубации клетки снимали на харвестре, метку просчитывали на р-счетчике (LKB, Швеция). Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Statis-tica 7.0 (Statsoft, США). Для сравнения групп использовали критерии Стьюдента и Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты. При исследовании тимуса мышей обеих контрольных групп статистически значимых различий не выявили. Масса тимуса мышей контрольной группы в возрасте 1,5 мес составила 0,37 ± 0,02% массы тела. Тимус был представлен двумя крупными долями. В дольках хорошо развито корковое вещество (см. таблицу). Субкапсулярный слой представлен рыхло лежащими лимфоцитами, в пространствах между которыми видны клетки стромы. Ядра лимфоцитов субкапсулярного слоя были в основном гиперхромны-ми, что указывает на высокое содержание гетерохроматина в ядре. В корковом слое встречали единичные тучные клетки в стадии депонирования секреторного продукта (см. таблицу). Граница между мозговым и корковым веществом четкая. В мозговом слое содержалось большое количество лимфоцитов (см. таблицу), в том числе митотически делящихся. Также в мозговом веществе отметили тимические тельца (тельца Гассаля) (см. таблицу), 53,66 ± 3,03% из которых были во 2-й фазе развития, т.е. представляли собой концентрически наслоившиеся друг на друга ретикулоэпителиоциты с накоплением оксифильных масс кератина в цитоплазме. Тимические тельца 1-й фазы развития, представлявшие собой скопления ретикулоэпителиоцитов с повышенной оксифилией цитоплазмы, составили 36,58 ± 1,71%. Тимические тельца 3-й и 4-й фаз развития, т.е. с формированием полости, некрозом центральной части телец и появлением в них нейтрофилов

и макрофагов, встречали редко, они составляли по 4,87 ± 0,23%. В мозговом веществе выявили единичные тучные клетки в стадии депонирования секреторного продукта. Отметили неравномерное кровенаполнение сосудов.

У мышей группы КонА в возрасте 1,5 мес масса тимуса составила 0,4±0,02% массы тела, что соответствовало значениям в контрольной группе. Корковое вещество хорошо развито (см. таблицу). Ширина субкапсулярного слоя не отличалась от значений в контрольной группе (см. таблицу). Но субкапсулярный слой в отличие от такового у контрольных животных был представлен плотно лежащими лимфобластами, с менее выраженными тинкториальными свойствами ядер. Граница между корковым и мозговым веществом четкая. Количество лимфоцитов в мозговом веществе соответствовало значениям в контрольной группе (см. таблицу). Тимические тельца встречали реже, чем в контроле, но среднее количество клеток в их составе не отличалось от значений в контрольной группе (см. таблицу). Изменилось соотношение стадий развития телец. Тимические тельца 1-й фазы развития составили 25,93%, что было меньше, чем в контроле. Тимические тельца 2-й фазы развития составили более половины тимических телец, как и в тимусе мышей контрольной группы, а доля тимических телец в III и IV стадии развития увеличилась, составив 7,4 ± 0,48 и 11,11 ± 0,76% соответственно. Тучные клетки не выявляли ни в корковом, ни в мозговом веществе.

У мышей группы ПЛ относительная масса тимуса составила 0,39 ± 0,02% и не отличалась от значений в контрольной группе и группе сравнения, как и соотношение коркового и мозгового вещества в тимусе (см. таблицу). Субкапсулярный слой слабовыражен, представлен плотно лежащими лимфобластами, по тинкториальным свойствам сходными с лимфобластами субкапсулярного слоя группы КонА. Его ширина превышала значения в контроле (р = 0,027) и группе сравнения (р = 0,0056) (см. таблицу). Граница между корковым и мозговым веществом четкая. Количество лимфоцитов в мозговом веществе не отличалось от значений в контрольной группе и группе, получавшей КонА (см. таблицу). Количество тимических телец также соответствовало значениям в контроле (см. таблицу). Отметили увеличение количества ретикулоэпителиоцитов в составе тимических телец по сравнению с таковым в контрольной группе (р=0,01) и группе сравнения (р = 0,0039) (см таблицу). Доля телец 1-й и 2-й фаз была приблизительно одинаковой (33,59 ± 1,68 и 38,98 ± 1,88% соответственно). Выявили увеличение доли тимических телец 4-й фазы до 16,96 ± 0,72% по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе (р=0,00022) и группе КонА (р = 0,0089). В мозговом веществе обнаружили единичные тучные клетки в стадии депонирования секреторных продуктов.

Включение Н-тимидина в тимоциты после 4-часовой инкубации в группе КонА статистически значимо превышало контрольные значения почти в 4 раза (р = 0,000001), в группе ПЛ - в 2,5 раза (р = 0,0012) (см. рисунок).

У мышей контрольной группы в возрасте 2,5 мес отметили уменьшение размера тимуса и его относительной массы, составившей 0,21 ± 0,01%. Соотношение коркового и мозгового вещества не изменилось. Наблюдали очаговую нечеткость границ между корковым и мозговым веществом. В корковом веществе часто встречали картину «звездного неба», что обусловлено гибелью лимфоцитов. Ширина субкапсулярного слоя увеличилась (см. таблицу). Повысилось содержание тучных клеток в корковом веществе (см. таблицу). В мозговом веществе уменьшилась численность лимфоцитов (р = 0,046) и увеличилось количество тимических телец (р = 0,000001) (см. таблицу). Уровень ретикулоэпителиоци-тов в составе тимических телец не отличался от такового в предыдущий срок исследования (см. таблицу). Превалировали тельца 1-й и 2-й фаз развития (42,57 ± 1,23 и 47,05 ± 2,11% соответственно). Доля телец 3-й и 4-й фаз развития составила 4,98 ± 0,25 и 5,41 ± 0,31%.

- 16 -

КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ

Изменения морфометрических показателей тимуса у потомства мышей контрольной группы, которым ввели КонА и активированные КонА клетки селезенки на 7-е сутки беременности

Показатель 1,5 мес 2,5 мес

контроль КонА ПЛ контроль КонА ПЛ

Доля коркового вещества, % 73,54 ± 2,11 79,03 ± 3,69 75,99 ± 3,22 72,83 ± 2,54 80,19 ± 1,09* 72,43 ± 2,20**

Ширина субкапсулярного слоя, мкм 50,45 ± 2,97 36,51 ± 2,07 45,30 ± 2,08*,** 48,5 ± 3,44 26,01 ± 1,43* 19,68 ± 0,96*,**

Количество лимфоцитов в 1 мм2 среза мозгового вещества 16 572,73 ± 695,84 18 380,0 ± 1388,31 17 116,67 ± 1068,15 14 084,55 ± 990,63 21 250,00 ± 526,69* 17 420,0 ± 526,68*,**

Количество тимических телец в 1 мм2 среза мозгового вещества 9,70 ± 1,12 8,45 ± 0,85* 11,05 ± 1,35** 16,84 ± 0,82 16,25 ± 1,41 7,98 ± 0,67*,**

Количество клеток в тимических тельцах 4,27 ± 0,31 4,18 ± 0,25 5,47 ± 0,27*,** 4,37 ± 0,16 4,84 ± 0,26 4,91 ± 0,28

Количество тучных клеток в 1 мм2 среза тимуса 0,15 ± 0,01 О о * 0,07 ± 0,01*,** 0,26 ± 0,03 0,13 ± 0,01* 0,0*,**

Примечание. * - статистически значимые отличия от показателей в контрольной группе, ** - от показателей в группе КонА.

У мышей группы КонА в возрасте 2,5 мес относительная масса тимуса (0,39 ± 0,022%) значительно превышала значения в контрольной группе. Доля коркового вещества долек тимуса была больше, чем в контроле, но не отличалась от показателей в предыдущий срок исследования (см. таблицу). В корковом слое встречали небольшие участки опустошения за счет гибели лимфоцитов. По сравнению с предыдущим сроком исследования и значениями в контрольной группе отметили статистически значимое (р = 0,00013 и р = 0,000039 соответственно) уменьшение ширины субкапсулярного слоя (см. таблицу). В корковом слое появились тучные клетки, насыщенные секреторным материалом (см. таблицу). Граница между корковым и мозговым веществом четкая. Количество лимфоцитов в мозговом веществе статистически значимо повысилось по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования (р = 0,0047) и превысило значения в контроле (р = 0,00019) (см. таблицу). Содержание тимических телец повысилось по сравнению с аналогичным показателем в предыдущий срок исследования и не отличалось от значений в контрольной группе (см. таблицу). Среднее количество клеток в тимических тельцах не отличалось от показателей в контроле и предыдущий срок исследования (см. таблицу). Соотношение фаз развития тимических телец не изменилось по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования. Половина тимических телец имела 2-ю фазу развития. Тельца 1-й фазы составили 33,45 ± 2,02%, 3-й - 10,36 ± 0,88%, 4-й - 6,19 ± 0,41%. Таким образом, наблюдали замедление новообразования телец.

У мышей группы ПЛ относительная масса тимуса (0,22 ± 0,01%) была статистически значимо меньше, чем у мышей группы КонА, и не отличалась от таковой в контрольной группе. Доля коркового вещества соответствовала значениям в контроле, но была статистически значимо меньше, чем в группе сравнения (см. таблицу). В корковом слое встречали единичные участки опустошения за счет гибели лимфоцитов. Субкапсулярный слой уменьшился по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования (р = 0) и имел значительно меньшую ширину, чем в контрольной группе и

группе сравнения (р = 0 и р = 0,00068 соответственно) (см. таблицу). Граница между корковым и мозговым веществом очагово размыта. Численность лимфоцитов в мозговом веществе не изменялась и превышала значения в контрольной группе (р = 0,047), но была статистически значимо ниже, чем в группе, получавшей КонА (р = 0,0035) (см. таблицу). Содержание тимических телец в мозговом веществе снизилось приблизительно в 2 раза по сравнению с аналогичным показателем в предыдущий срок исследования (см. таблицу). Количество клеток в тимических тельцах статистически значимо не отличалось от значений в предыдущий срок исследования и группах сравнения (см. таблицу). Соотношение фаз развития тимических телец соответствовало значениям в группе КонА. Тимические тельца 1-й фазы развития составили 35,5 ± 1,99%. Доля тимических телец во 2-й фазе развития по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования увеличилась до 53,33 ± 3,52%, в 4-й - уменьшилась до 6,67 ± 0,42%. Тучные клетки в тимусе мышей данной группы не выявляли. Отметили расширение и усиленное кровеносных сосудов венозного русла.

Результаты исследования пролиферативной активности показали снижение включения 3Н-тимидина в тимоциты более чем в 2 раза в контрольной группе по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования (см. рисунок). В группе КонА также наблюдали статистически значимое уменьшение включения тимидина по сравнению с аналогичным показателем в предыдущий срок в 3,5 раза (см. рисунок). Но эти значения превышали контрольные более чем в 2 раза. В группе ПЛ включение 3Н-тимидина также снизилось по сравнению с таковым в предыдущий срок исследования, но превышало значения в контрольной группе (см. рисунок).

Обсуждение. В эмбриональном развитии органов иммунной системы мыши критическим периодом являются 11—11,5-е сутки. На 11-е сутки происходит закладка тимуса, а на 11,5-е сутки начинается миграция предшественников Т-лимфоцитов в тимус [12, 19]. На 7-е сутки после оплодотворения, когда ввели КонА самкам, у зародыша мыши начинаются дифференцировка мезодермы и формирование ам-

- 17 -

ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013

имп/мин

Включение W-тимидина в клетки тимуса при исследовании пролиферации ex tempore потомства мышей контрольной группы и потомства мышей, которым ввели КонА и активированные КонА клетки селезенки на 7-е сутки беременности (M ± m).

1 - 1,5 мес; 2 - 2,5 мес; * - статистически значимые отличия от показателей в контрольной группе, ** - от показателей в группе КонА.

ниотической оболочки [16]. Таким образом, введение КонА осуществили задолго до формирования тимуса, с тем чтобы избежать возможности прямого воздействия на орган. При внутривенном введении КонА происходит кратковременный выброс цитокинов активированными лимфоцитами: фактора некроза опухоли а, интерлейкина (ИЛ)-2 и интерферона-у, повышается содержание IL-4 и IL-10, происходит активация клеточного звена иммунитета [15]. Результаты проведенного исследования показали, что однократная кратковременная стимуляция иммунной системы матери на ранних сроках беременности приводит к длительно наблюдаемому изменению морфофункциональных показателей тимуса у потомства. У мышей группы КонА в возрасте 1,5 мес, т.е. в период полового созревания, в корковом веществе наблюдали изменения тинкториальных свойств ядер клеток субкапсулярного слоя, что свидетельствовало о более высоком содержании в ядре эухроматина, а соответственно, и о более высокой синтетической активности, у мышей группы ПЛ - расширение субкапсулярного слоя. Особенностью гистологического строения тимуса у мышей опытных групп было уменьшение численности тучных клеток. В контрольной группе тучные клетки выявляли как в корковом, так и мозговом веществе. У мышей группы ПЛ их количество было снижено, а у мышей группы КонА их не обнаружили. Тучные клетки являются полифункциональными клетками, и их роль в распознавании и уничтожении различных патогенов, осуществлении защитных реакций, формировании реакций как клеточного, так и гуморального иммунитета на сегодняшний день общепризнанна [5, 13, 18, 20]. Количество тучных клеток в тимусе увеличивается с возрастом [17]. Данные об их влиянии на Т-лимфоциты свидетельствуют о возможном ингибировании ими функциональной активности, пролиферации и диффе-ренцировки Т-клеток [9, 11], что подтверждает роль тучных клеток в развитии инволютивных изменений в тимусе. Снижение количества тучных клеток в тимусе у мышей опытных групп свидетельствует о замедлении процессов возрастной инволюции. Это предположение подтверждалось и повышенной пролиферацией тимоцитов in vitro. Результаты исследования в возрасте 2,5 мес показали, что темпы инволютивных изменений тимуса у внутриутробно перенесших активацию иммунной системы матери ниже, чем у контрольных животных. У контрольных мышей в возрасте 2,5 мес начало возрастной инволюции характеризовалось типичными проявлениями - уменьшением массы органа, гибелью лимфоцитов коркового слоя, увеличением количества тимических телец

[6]. У мышей группы КонА в возрасте 2,5 мес атрофии не наблюдали, меньше была выражена гибель лимфоцитов. Уменьшение ширины субкапсулярного слоя при сохранении толщины коркового вещества и повышенное содержание лимфоцитов в мозговом веществе в обеих опытных группах указывали на ускорение процессов созревания лимфобластов. Темпы гибели ретикулоэпителия не отличались у мышей группы КонА, но были снижены у мышей группы ПЛ. Так же, как и в возрасте 17 сут, отметили уменьшение количества тучных клеток в тимусе. Пролиферативная активность тимоцитов мышей опытных групп была повышенной, что, по литературным данным, характерно для гиперпластических и неопластических заболеваний тимуса [7].

При сравнении морфофункциональных показателей тимуса у потомства мышей, получавших однократно КонА и перенесших пассивный перенос активированных КонА лимфоцитов селезенки, выявили как общие для обеих групп изменения, так и отличия. Непосредственная стимуляция КонА вызывала более сильное повышение пролиферативной активности, что приводило к задержке снижения массы органа с возрастом, а также к более раннему снижению темпов гибели ретикуло-эпителия. Пассивный перенос активированных лимфоцитов вызывал снижение темпов гибели ретикулоэпителия тимуса в более поздние сроки. В обеих группах в период снижения гибели ретикулоэпителиоцитов наблюдали отсутствие тучных клеток как в мозговом, так и корковом веществе.

Таким образом, мы зафиксировали изменения, связанные со снижением запрограммированной гибели как лимфоцитов, так и ретикулоэпителиоцитов. Механизм изменений мог быть связан как с воздействием на оба типа клеток, так и в большей части на ретикулоэпителиоциты. На 7-е сутки внутриутробного развития мишенями цитокинов могли быть недифференцированные клетки энтодермы 3-го глоточного кармана - предшественники ретикулоэпителия, а также стволовые клетки крови, так как на 7-8-е сутки в желточном мешке начинается кроветворение. По данным работы [1], однократное введение самкам крыс на 11-е сутки беременности липополисахаридов (ЛПС) в дозе 100-150 мкг/кг приводило к уменьшению размера тимуса у потомства, а в возрасте 1,5 мес уменьшалось количество лимфоцитов в корковом слое. Ци-токиновые каскады, запускаемые КонА и ЛПС, близки и отличаются превалированием продукции IL-2 в первом случае и IL-1 во втором. Эти данные указывают на разный механизм изменения органогенеза и функционального потенциала клеток.

Выводы. Однократная стимуляция материнского организма КонА на ранних стадиях беременности до начала формирования органов иммунной системы плода приводит к стойким изменениям морфофункционального состояния тимуса у потомства на поздних сроках постнатального развития, что выражается в задержке возрастных инволютив-ных изменений и повышенной пролиферативной активности тимоцитов у половозрелых мышей. Наблюдаемое повышение пролиферативной активности тимоцитов в том возрасте, когда должна происходить возрастная инволюция, является фактором риска развития гиперпластических процессов в тимусе и отклонений функционирования иммунной системы взрослого организма.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бандажевский Ю.И., Мацюк Я.Р., Тарасюк И.В. Особенности формирования структуры тимуса и селезенки потомства белых крыс при воздействии пирогенала в период беременности // Морфология. - 1994. - № 4-6. - С. 9-17.

2. Кулида Л.В. Перетятко Л.П. Морфологические критерии дисхроний тимуса у плодов с экстремально низкой массой тела // Архив патологии. - 2010. - Т. 72, № 6. - С. 27-29.

3. Рахмилевич А.Л. Изменение иммунореактивности сплено-цитов мышей при посттравматической регенерации печени: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 1986.

- 18 -

РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА

4. Болезни вилочковой железы / Харченко В.П., Саркисов Д.С, Ветшев П.С. и др. - М., 1998.

5. Яглова Н.В. Тучные клетки и врожденный иммунитет // Иммунология. 2009. - Т 30, № 2. - C. 139-143.

6. Ярилин А.А. Возрастные изменения тимуса и Т-лимфоцитов // Иммунология. - 2003. - № 2. - С. 117-128.

7. Baroni C., Rigato P., Ruco L. et al. PHA and ConA lymphocyte response in normal, hyperplastic and neoplastic human thymus: morphologic and functional correlations // Cancer. - 1980. - Vol. 46. - P. 2055-2061.

8. Bunn L., Parsons P., Kao E., Dietert R. Exposure to lead during critical windows of embryonic development: differential Immu-notoxic outcome based on stage of exposure and gender // Toxicol. Sci. - 2001. - Vol. 64. - P. 57-66.

9. Chacon-Salinas R., Limon-Flores A., Chavez-Blanco A. et al. Mast cell-derived IL-10 suppresses germinal center formation by affecting T follicular cell function // J. Immunol. - 2011. - Vol. 186, - N.1. - P. 25-31.

10. Dietert R., Etzel R., Chen D. et al. Workshop to identify critical windows of exposure for children’s health: immune and respiratory systems work group summary // Environ. Hlth Perspect. -2000. - Vol. 108, Suppl. - P. 483-480.

11. Eller K., Wolf D., Huber J. et al. IL-9 production by regulatory T cells recruits mast cells that are essential for regulatory T-cell-induced immune suppression // J. Immunol. - 2011. - Vol. 186, N 1. - P. 83-91.

12. Gordon J., Manley N. Mechanisms of thymus organogenesis and morphogenesis // Development. - 2011. - Vol. 138. - P. 38653878.

13. Gurish M., Boyce J. Mast cells: ontogeny, homing, and recruitment of a unique innate effector cell // J. Allergy Clin. Immunol.

- 2006. - Vol. 117, N 6. - P. 1285-1291.

14. HodylN., StarkM., Osei-Kumah A., Clifton V. Prenatal programming of the innate immune response following in utero exposure to inflammation: a sexually dimorphic process? // Expert Rev. Clin. Immunol. - 2011. - Vol. 7, N 5. - P. 579-592.

15. Kato M., Ikeda N., Matsushita E, et al. Involvement of IL-10, an anti-inflammatory cytokine in murine liver injury induced by Concanavalin A // Hepatol. Res. - 2001. - Vol. 20,N 2. -Р. 232-243.

16. Natale D., Starovic M., Cross J. Phenotypic analysis of mouse placenta // Meth. Mol. Med. - 2006. - Vol.121, N IV - P. 275-293.

17. Raica M., Cimpean A., Nico B. et al. A comparative study of the spatial distribution of mast cells and microvessels in the foetal, adult human thymus and thymoma // Int. J. Exp. Pathol. - 2010.

- Vol. 91. - P. 17-23.

18. Skokos D., Le Panse S., Villa I. et al. Mast cell-dependent B and T lymphocyte activation is mediated by the secretion of immunologically active exosomes // J. Immunol. - 2001. - Vol. 166. - P. 868-876.

19. Sultana D., Tomita S., Hamada M. et al. Gene expression profile of the third pharyngeal pouch reveals role of mesenchimal MafB in embryonic thymus development // Blood. - 2009. - Vol. 113.

- P. 2976-2987.

20. Theoharides T.C., Alysandratos K.D., Angelidou A. et al. Mast cells and inflammation // Biochim. Biophys. Acta. - 2012. -Vol. 1822, N 1. - P.21-33.

Поступила 24.05.12

РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА

© E. Г. ОРЛОВА, С. В. ШИРШЕВ, 2013 УДК 615.276.2/.4.03:618.2].015.44

Е. Г. Орлова, С. В. Ширшев

регуляция грелином функциональной активности моноцитов. роль блокады кальциевых каналов l-типа верапамилом

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Ран (614081, г Пермь, ул. голева, 13); тел. (342)2808431, факс (342)2809211; e-mail: orlova_katy@mail.ru

Исследована роль грелина в регуляции функциональной активности моноцитов периферической крови женщин на фоне блокады Са2+-каналов L-типа верапамилом (изоптин). Показано, что грелин в дозах, характерных для беременности, снижает фагоцитарную активность и продукцию оксида азота (No) моноцитами, но не влияет на спонтанную и стимулированную люминолзависимую хемилюминесценцию (ЛЗХЛ). Одномоментное с грелином внесение антагониста его рецепторов отменяет ингибирующее действие гормона на фагоцитарную активность, но угнетает секрецию No. На фоне блокады Са2+-каналов изоптином грелин снижает фагоцитарную активность, спонтанную и стимулированную ЛЗХЛ, но не влияет на продукцию No. Таким образом, грелин является значимым регулятором функций моноцитов, а Са2+-зависимые механизмы играют важную роль в реализации модулирующих эффектов грелина.

Ключевые слова: моноциты, грелин, верапамил, фагоцитарная активность, люминолзависимая хемилюминесценция, продукция NO

Орлова Екатерина Григорьевна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр., тел. 8(342)280-84-31, e-mail: orlova_katy@mail.ru

- 19 -