НОВЫЕ ГИДРОКСИСЛОЖНОЭФИРНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ
NOVEL HYDROXY-ESTER DERIVATIVES, A METHOD FOR PRODUCTION THEREOF AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM

Настоящее изобретение относится к новым гидроксисложноэфирным производным, к способу их получения и к фармацевтическим композициям, содержащим их.
Соединения настоящего изобретения являются новыми и обладают очень ценными фармакологическими характеристиками в области апоптоза и онкологии.
Апоптоз, или запрограммированная гибель клеток, является физиологическим процессом, который имеет решающее значение для эмбрионального развития и поддержания тканевого гомеостаза.
Гибель клеток по типу апоптоза вовлекает морфологические изменения, такие как конденсация ядра, фрагментация ДНК, а также биохимический феномен, такой как активация каспаз, что вызывает повреждение ключевых структурных компонентов клетки, таким образом вызывая ее разборку и смерть. Регуляция процесса апоптоза является комплексной и задействует активацию или репрессию нескольких внутриклеточных путей передачи сигналов (Cory S. и др., Nature Review Cancer 2002, 2, 647-656).
Дерегулирование апоптоза вовлечено в определенные патологии. Повышенный апоптоз связан с нейродегенеративными заболеваниями, такими как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера и ишемия. Наоборот, недостаточности осуществления апоптоза играют важную роль в развитии злокачественных новообразований и их резистентности к химиотерапии, при аутоиммунных заболеваниях, воспалительных заболеваниях и вирусных инфекциях. Следовательно, отсутствие апоптоза является одним из характерных фенотипических признаков злокачественного новообразования (Hanahan D. и др., Cell 2000,100, 57-70).
Антиапоптотические белки семейства Bcl-2 связаны с многочисленными патологиями. Задействование белков семейства Bcl-2 описано для многочисленных типов злокачественных новообразований, таких как рак ободочной кишки, рак молочной железы, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичников, рак предстательной железы, хронический лимфоидный лейкоз, лимфома, миелома, острый миелоцитарный лейкоз, рак поджелудочной железы и т.д. Сверхэкспрессия антиапоптотических белков семейства Bcl-2 связана с онкогенезом, с устойчивостью к химиотерапии и с клиническим прогнозом пациентов, страдающих злокачественным новообразованием. В особенности, Mcl-1, член семейства антиапоптотических белков Bcl-2, сверхэкспрессируется при различных типах рака (Beroukhim R. и др., Nature 2010, 899-905). Таким образом, существует терапевтическая потребность в соединениях, которые ингибируют антиапоптотическую активность белков семейства Bcl-2.
Помимо того, что соединения настоящего изобретения являются новыми, они обладают проапоптотическими свойствами, что позволяет их применение при патологиях, в которые вовлечен дефект апоптоза, как, например, для лечения злокачественного новообразования и иммунопатологических и аутоиммунных заболеваний.
Более конкретно, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
где:
в которой 1 означает место присоединения к атому кислорода и 2 означает место присоединения к фенильному кольцу,
1
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
11
11
6
R представляет собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, цианогруппу, -NRR', -Cy или атом галогена,
2
3
4
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
1
6
9
9
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
6
R, R, R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(C-C)-NRR', -О-алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
2
3
3
4
4
5
1
6
11
11
0
6
1
или заместители одной из пар (R, R), (R, R), (R, R), когда они присоединены к двум расположенным рядом атомам углерода, вместе с атомами углерода, несущими их, образуют ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, при этом следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, -NRR', -алкил(С-С)-Cy или оксо,
6
7
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
1
6
9
9
1
0
6
1
2
6
1
2
6
1
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
б
R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (C-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(C-C)-NRR', -О-Cy, -алкил(С-С)-Cy, -алкенил(С-С)-Cy, -алкинил(С-С)-Cy, -O-алкил(С-C)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
6
7
1
6
11
11
0
6
1
или заместители пары (R, R), когда они присоединены к двум расположенным рядом атомам углерода, вместе с атомами углерода, несущими их, образуют ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, при этом следует понимать, что полученное в результате кольцо может быть замещено группой, выбранной из линейной или разветвленной (С-С)алкильной группы, -NRR', -алкил(С-С)-Cy или оксо,
8
1
6
1
6
1
6
3
1
6
3
2
6
3
2
6
3
3
4
2
6
3
3
0
6
0
6
4
12
12
12
R представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, -Cy, -алкил(С-С)-Cy, -алкенил(С-С)-Cy, -алкинил(С-С)-Cy, -Cy-Cy, -алкинил(С-С)-O-Cy, -Cy-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Cy, атом галогена, цианогруппу, -C(O)-R или -C(O)-NRR',
9
9
1
6
0
6
1
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, -алкил(С-С)-Cy,
9
9
1
6
или заместители пары (R, R') вместе с атомом азота, несущим их, образуют ароматическое или неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, при этом следует понимать, что данный азот может быть замещен группой, представляющей собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и при этом следует понимать, что один или несколько атомов углерода возможных заместителей могут быть дейтерированы,
10
1
1
0
6
2
1
0
6
0
6
2
1
0
6
9
0
6
2
1
2
0
6
5
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
2
9
9
9
R представляет собой -Cy, -Cy-алкил(С-С)-Cy, -Cy-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Cy, -Cy-алкил(С-C)-NR-алкил(С-C)-Cy, -Cy-Cy-О-алкил(С-С)-Cy, -C(O)-NRR', -NRR', -OR, -NR-C(O)-R', -O-алкил(С-С)-OR, -SO-R, -C(O)-OR или -NH-C(O)-NH-R,
11
11
12
12
1
6
R, R', R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
13
1
6
R представляет собой атом водорода, гидроксигруппу или гидрокси(С-С)алкильную группу,
a
1
6
R представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
b
c
c
c
c
2
R представляет собой группу -O-C(O)-O-R, группу -O-C(O)-NRR' или группу -O-P(O)(OR),
c
c
1
8
1
6
1
6
1
6
1
6
R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, циклоалкильную группу, (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, (С-С)алкоксикарбонил(С-С)алкильную группу,
c
c
1
6
или заместители пары (R, R') вместе с атомом азота, несущим их, образуют неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода и азота, при этом следует понимать, что данный азот может быть замещен группой, представляющей собой линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу,
1
2
3
4
5
6
Cy, Cy, Cy, Cy, Cy и Cy независимо друг от друга представляют собой циклоалкильную группу, гетероциклоалкильную группу, арильную группу или гетероарильную группу,
n означает целое число, равное 0 или 1,
при этом следует понимать, что:
- "арил" означает фенильную, нафтильную, бифенильную, инданильную или инденильную группу,
- "гетероарил" означает любую моно- или бициклическую группу, состоящую из 5-10 кольцевых членов, содержащую по меньшей мере один ароматический фрагмент и содержащую от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота,
- "циклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, содержащую от 3 до 10 кольцевых членов,
- "гетероциклоалкил" означает любую моно- или бициклическую неароматическую карбоциклическую группу, содержащую от 3 до 10 кольцевых членов и содержащую от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, которая может включать конденсированные, мостиковые или спиро-кольцевые системы,
1
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
причем арильные, гетероарильные, циклоалкильные и гетероциклоалкильные группы, определенные таким образом, и алкильные, алкенильные, алкинильные и алкокси группы могут быть замещены 1-4 группами, выбранными из необязательно замещенного линейного или разветвленного (С-С)алкила, необязательно замещенного линейного или разветвленного (С-С)алкенила, необязательно замещенного линейного или разветвленного (С-С)алкинила, необязательно замещенного линейного или разветвленного (С-С)алкокси, необязательно замещенного (С-С)алкил-S-, гидрокси, оксо (или N-оксида, в соответствующих случаях), нитро, циано, -С(О)-OR', -O-C(O)-R', -C(O)-NR'R'', -NR'R'', -(C=NR')-OR'', линейного или разветвленного (С-С)полигалогеналкила, трифторметокси или галогена, при этом следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, и при этом следует понимать, что один или несколько атомов углерода предшествующих возможных заместителей могут быть дейтерированы,
их энантиомерам, диастереоизомерам и атропоизомерам, и их солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.
Из числа фармацевтически приемлемых кислот могут быть упомянуты, без какого-либо ограничения, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфоновая кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, глутаровая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, малеиновая кислота, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, щавелевая кислота, метансульфоновая кислота, камфорная кислота и т.д.
Из числа фармацевтически приемлемых оснований могут быть упомянуты, без какого-либо ограничения, гидроксид натрия, гидроксид калия, триэтиламин, трет-бутиламин и т.д.
2
3
4
5
Предпочтительно по меньшей мере одна группа, выбранная из R, R, R и R, не представляет собой атом водорода.
Более конкретно, соединения формулы (I), которым отдают предпочтение, являются соединениями, где n означает целое число, равное 1.
В другом варианте осуществления изобретения предпочтительными являются соединения формулы (I-а):
1
2
3
4
5
6
7
a
b
13
где R, R, R, R, R, R, R, R, R, R и А являются такими, как определено для формулы (I).
1
1
6
1
В предпочтительных соединениях изобретения R представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу или атом галогена. Более предпочтительно R представляет собой метальную группу, этильную группу, атом брома или атом хлора.
Атропоизомеры представляют собой стереоизомеры, возникающие из-за затрудненного вращения вокруг одинарной связи, где разности энергий вследствие пространственной деформации или других причин создают барьер для вращения, который является достаточно высоким для обеспечения выделения индивидуальных конформеров. В случае соединений в соответствии с изобретением, атропоизомеры имеют следующее строение:
a
Предпочтительным атропоизомером является (5S).
13
Предпочтительно R представляет собой атом водорода.
2
1
6
2
2
Предпочтительно R представляет собой атом галогена, гидроксигруппу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу. Более предпочтительно R представляет собой метокси группу, гидроксигруппу, атом фтора, атом брома или атом хлора. Еще более предпочтительно R представляет собой атом хлора.
3
1
6
1
6
9
9
3
1
6
9
9
R предпочтительно представляет собой атом водорода, гидроксигруппу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу или -O-алкил(С-С)-NRR'. Предпочтительно R представляет собой -O-алкил(С-С)-NRR'.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения
1
9
9
где R, R и R' являются такими, как определено для формулы (I).
В предпочтительных соединениях изобретения
9
9
где R и R' являются такими, как определено для формулы (I).
4
5
R и R предпочтительно представляют собой атом водорода.
1
5
2
4
1
5
1
6
2
4
В предпочтительном варианте осуществления заместители пары (R, R) являются одинаковыми и заместители пары (R, R) являются одинаковыми. В предпочтительных соединениях изобретения заместители пары (R, R) являются одинаковыми и представляют собой (С-С)алкильную группу, предпочтительно метильную группу, в то время как заместители пары (R, R) являются одинаковыми и представляют собой атом галогена, предпочтительно атом хлора, или атом водорода.
6
1
6
1
6
10
6
1
6
10
В другом варианте осуществления изобретения R представляет собой необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу или группу -O-алкил(С-С)-R. Предпочтительно R представляет собой 2,2,2-трифторэтокси группу, метокси группу, 2-метоксиэтокси группу или группу -О-алкил(С-С)-R.
7
R предпочтительно представляет собой атом водорода.
В предпочтительных соединениях изобретения
10
где R является таким, как определено для формулы (I).
В другом варианте осуществления изобретения предпочтительными являются соединения формулы (I-b):
1
6
9
9
a
b
13
где R, R, R, R', R, R, R и А являются такими, как определено для формулы (I).
8
1
6
2
6
2
6
8
2
6
8
8
8
В предпочтительных соединениях изобретения R представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, арильную группу или гетероарильную группу. Предпочтительно R представляет собой линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, арильную группу или гетероарильную группу. Более предпочтительно R представляет собой проп-1-ин-1-ильную группу, бут-1-ин-1-ильную группу, фенильную группу или фуран-2-ильную группу. В более предпочтительном варианте осуществления R представляет собой 4-(бензилокси)фенильную группу, 4-(пиридин-4-илметокси)фенильную группу, 4-фенилбут-1-ин-1-ильную группу, 4-фторфенильную группу или 5-фторфуран-2-ильную группу. Еще более предпочтительно R представляет собой 4-фторфенильную группу.
9
9
1
6
9
9
1
6
9
9
9
9
9
9
9
9
В предпочтительных соединениях изобретения R и R' независимо друг от друга представляют собой линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, или заместители пары (R, R') вместе с атомом азота, несущим их, образуют неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, при этом следует понимать, что данный азот может быть замещен группой, представляющей собой атом водорода или линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу. Более предпочтительно R и R' представляют собой метильную группу, или заместители пары (R, R') вместе образуют 4-метилпиперазинильную группу или 4-этилпиперазинильную группу. В более предпочтительном варианте осуществления заместители пары (R, R') вместе образуют 4-метилпиперазинильную группу. В другом предпочтительном варианте осуществления R и R' представляют собой метильную группу.
10
1
1
0
6
0
6
2
1
0
6
2
10
1
1
2
2
1
2
Предпочтительно R представляет собой -Cy, -Cy-алкил(С-С)-O-алкил(С-С)-Cy или -Cy-алкил(С-С)-Cy. Более конкретно, R представляет собой -Cy -Cy-O-СН-Cy или -Cy-Cy.
1
1
1
Cy предпочтительно представляет собой гетероарильную группу, в частности, пиримидинильную группу, пиразолильную группу, триазолильную группу, пиразинильную группу или пиридинильную группу. Более предпочтительно Cy представляет собой пиримидин-4-ильную группу, пиразол-5-ильную группу, триазол-5-ильную группу, пиразин-2-ильную группу или пиридин-4-ильную группу. В предпочтительных соединениях изобретения Cy представляет собой пиримидин-4-ильную группу.
1
1
6
1
6
1
6
1
6
В другом варианте осуществления изобретения Cy представляет собой гетероарильную группу, которая замещена необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкильной группой, необязательно замещенной линейной или разветвленной (С-С)алкокси группой, группой -NR'R'', или линейной или разветвленной (С-С)полигалогеналкильной группой, при этом следует понимать, что R' и R'' независимо друг от друга представляют собой атом водорода или необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу.
2
2
2
Cy предпочтительно представляет собой фенильную группу, пиридинильную группу, пиразолильную группу, морфолинильную группу, фуранильную группу или циклопропильную группу. Более предпочтительно Cy представляет собой фенильную группу, пиридин-2-ильную группу, пиридин-3-ильную группу, пиридин-4-ильную группу, пиразол-1-ильную группу, морфолин-4-ильную группу, фуран-2-ильную группу или циклопропильную группу. В предпочтительных соединениях изобретения Cy представляет собой фенильную группу.
10
1
2
1
2
Другими соединениями изобретения, которым отдают предпочтение, являются те, в которых R представляет собой -Cy-Cy, где Cy представляет собой пиримидинильную группу и Cy представляет собой фенильную группу, пиридинильную группу, пиразолильную группу, морфолинильную группу, фуранильную группу или циклопропильную группу. Еще более предпочтительно,
11
15
1
6
1
6
1
6
14
15
15
14
где R и R независимо друг от друга представляют собой атом водорода, необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, необязательно замещенную линейную или разветвленную (C-С)алкокси группу, гидроксигруппу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу или атом галогена. Предпочтительными группами R и R являются следующие: водород; метил; этил; метокси; этокси; изопропокси; метоксиэтокси; фтор; гидрокси; трифторметил. Предпочтительно R представляет собой атом водорода и R расположена в орто-положенин фенильной группы.
a
Более конкретно, соединения формулы (I), которым отдают предпочтение, являются соединениями, где R представляет собой атом водорода или метильную группу.
b
1
8
c
c
c
c
1
8
1
6
1
6
1
6
1
6
c
c
2
Предпочтительно R представляет собой -O-С(O)-O-(С-С)алкильную группу; -O-С(O)-O-циклоалкильную группу; группу -O-C(O)-NRR', в которой R и R' независимо друг от друга представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, (С-С)алкокси(С-С)алкильную группу, (С-С)алкоксикарбонил(С-С)алкильную группу, или заместители пары (R, R') вместе с атомом азота, несущим их, образуют неароматическое кольцо, состоящее из 5-7 кольцевых членов, которое может содержать в дополнение к атому азота от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода и азота; или группу -O-Р(O)(ОН).
a
b
3
2
3
3
2
3
3
8
17
3
2
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
3
a
b
2
3
3
2
Предпочтительно R представляет собой метильную группу и R представляет собой группу, выбранную из -O-С(O)-O-СН; -O-С(O)-O-СНСН; -O-С(O)-O-СН(СН); -O-С(O)-O-С(СН); -O-С(O)-O-циклопентил; -O-С(O)-O-СН; -O-C(O)-N(CH); -O-C(O)-N(CHCH); -O-С(O)-N-морфолин; -О-С(О)-NH-(CH)-OCH; -O-C(O)-N[(CH)-OCH]; или -O-C(O)-N(CH)(CH-C(O)-ОСН). Более предпочтительно R представляет собой метильную группу и R представляет собой группу, выбранную из -O-С(O)-O-СНСН или -О-С(О)-N(CH).
Из числа предпочтительных соединений изобретения могут быть упомянуты:
a
- 1-[(метоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-[(трет-бутоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[(циклопентилокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d)пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[(октилокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил(2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-[(диэтилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[(2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноил]окси}этил морфолин-4-карбоксилат;
a
- 1-{[(2-метоксиэтил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[бис(2-метоксиэтил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-xnop-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- 1-{[(2-метокси-2-оксоэтил)(метил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
a
- (фосфоноокси)метил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
- 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
- 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
- 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат;
- 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат.
Изобретение также относится к способу получения соединений формулы (I), который отличается тем, что в качестве исходного вещества применяют соединение формулы (II):
где А является таким, как определено для формулы (I), в которой 1 означает место присоединения к атому хлора и 2 означает место присоединения к атому брома,
причем соединение формулы (II) подвергают сочетанию с соединением формулы (III):
6
7
13
1
6
где R, R, R и n являются такими, как определено для формулы (I), и Alk представляет собой необязательно замещенную линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу,
с получением соединения формулы (IV):
6
7
13
где R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I), и Alk является таким, как определено выше,
соединение формулы (IV) далее подвергают сочетанию с соединением формулы (V):
1
2
3
4
5
B1
B2
1
6
B1
B2
где R, R, R, R и R являются такими, как определено для формулы (I), и R и R представляют собой атом водорода, линейную или разветвленную (C-С)алкильную группу, или R и R вместе с атомами кислорода, несущими их, образуют необязательно метилированное кольцо,
с получением соединения формулы (VI):
1
2
3
4
5
6
7
13
где R, R, R, R, R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I), и Alk является таким, как определено выше,
Alk-O-C(O)- сложноэфирную функцию соединения формулы (VI) гидролизуют с получением карбоновой кислоты (VII):
1
2
3
4
5
6
7
13
где R, R, R, R, R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I),
которую подвергают сочетанию с соединением формулы (VIII):
a
b
где R и R являются такими, как определено для формулы (I),
с получением соединения формулы (I), которое можно очистить в соответствии с обычными методиками разделения, которое превращают, при необходимости, в его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием и которое необязательно разделяют на его изомеры в соответствии с обычными методиками разделения,
при этом следует понимать, что в любое время, признанное подходящим в ходе описанного выше способа, некоторые группы (гидрокси, амино …) исходных реагентов или промежуточных соединений синтеза могут быть защищены, впоследствии лишены защиты и функционализированы, как того требует синтез.
Соединения формул (II), (III), (V) и (VIII) либо доступны для приобретения, либо могут быть получены специалистом в данной области техники с использованием обычных химических реакций, описанных в литературе.
A
Изобретение также относится к соединению формулы (VI), частному случаю соединения формулы (VI):
где:
2
3
4
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
1
6
9
9
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
6
R', R', R' и R' независимо друг от друга представляют собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (C-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(C-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(С-C)-NRR', -О-алкил(C-C)-NRR', -О-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
T представляет собой (С-С)алкильную группу, (C-С)карбонилокси(С-С)алкильную группу или ди(С-С)алкиламинокарбонил(С-С)алкильную группу,
1
6
7
13
R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I),
его энантиомерам, диастереоизомерам и атропоизомерам, и его солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
в качестве промежуточного соединения синтеза, а также в качестве соединения для применения в качестве проапоптотических средств.
A
Изобретение относится к соединению формулы (VII), частному случаю соединения формулы (VII):
где:
2
3
4
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
1
6
9
9
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
6
R', R', R' и R' независимо друг от друга представляют собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (C-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(C-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(С-C)-NRR', -О-алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
1
6
7
13
R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I),
его энантиомерам, диастереоизомерам и атропоизомерам, и его солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
в качестве промежуточного соединения синтеза, а также в качестве соединения для применения в качестве проапоптотических средств.
A
A
1
5
2
4
Предпочтительно в случае соединений формулы (VI) и (VII), заместители пары (R, R') являются одинаковыми и заместители пары (R', R') являются одинаковыми.
A
Предпочтительным соединением формулы (VII) является (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановая кислота.
B
Изобретение также относится к соединению формулы (VI), частному случаю соединения формулы (VI):
где:
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
6
9
9
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
6
R' представляет собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(С-С)-NRR', -O-алкил(C,-C)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(С-С)-NR-C(O)R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
T представляет собой (С-С)алкильную группу, (С-С)карбонилокси(С-С)алкильную группу или диС-С)алкиламинокарбонил(С-С)алкильную группу,
1
3
6
7
13
R, R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I),
1
5
и где заместители пары (R, R') являются одинаковыми,
его энантиомерам, диастереоизомерам и атропоизомерам, и его солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
в качестве промежуточного соединения синтеза, а также в качестве соединения для применения в качестве проапоптотических средств.
B
Изобретение относится к соединению формулы (VII), частному случаю соединения формулы (VII):
где:
5
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
0
6
9
9
1
6
9
9
1
6
10
9
9
9
9
9
9
9
9
1
6
9
9
2
9
9
2
1
6
R' представляет собой атом галогена, линейную или разветвленную (С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкенильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкинильную группу, линейную или разветвленную (С-С)полигалогеналкильную группу, гидроксигруппу, гидрокси(С-С)алкильную группу, линейную или разветвленную (С-С)алкокси группу, -S-(С-С)алкильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, -алкил(С-С)-NRR', -O-алкил(C-C)-NRR', -O-алкил(С-С)-R, -C(O)-OR, -O-C(O)-R, -C(O)-NRR', -NR-C(O)-R', -NR-C(O)-OR', -алкил(C-C)-NR-C(O)-R', -SO-NRR', -SO-алкил(С-С),
1
3
6
7
13
R, R, R, R, R, А и n являются такими, как определено для формулы (I),
1
5
и где заместители пары (R, R') являются одинаковыми,
его энантиомерам, диастереоизомерам и атропоизомерам, и его солям присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
в качестве промежуточного соединения синтеза, а также в качестве соединения для применения в качестве проапоптотических средств.
B
Предпочтительным соединением формулы (VII) является (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановая кислота.
Фармакологическое исследование соединений изобретения показало, что они обладают проапоптотическими свойствами. Способность реактивировать апоптотический процесс в раковых клетках представляет большой терапевтический интерес для лечения злокачественных новообразований и иммунопатологических и аутоиммунных заболеваний.
Более конкретно, соединения в соответствии с изобретением будут полезны для лечения хемо- или радиорезистентных злокачественных новообразований.
Из числа намеченных противоопухолевых терапий может быть упомянута, без какого-либо ограничения, терапия рака мочевого пузыря, головного мозга, молочной железы и матки, хронических лимфоидных лейкозов, рака ободочной кишки, пищевода и печени, лимфобластных лейкозов, острых миелоидных лейкозов, лимфом, меланом, злокачественных заболеваний крови, миелом, рака яичников, немелкоклеточного рака легкого, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы и мелкоклеточного рака легкого.
A
B
A
B
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями.
Из числа фармацевтических композиций в соответствии с изобретением могут быть упомянуты более конкретно те, которые подходят для перорального, парентерального, назального, чрес- или транскожного, ректального, перлингвального, офтальмологического или респираторного введения, в особенности таблетки или драже, сублингвальные таблетки, саше, пакеты, капсулы, глоссеты, пастилки, суппозитории, кремы, мази, гели для кожи и питьевые или инъекционные ампулы.
Дозировка варьируется в зависимости от пола, возраста и веса пациента, пути введения, природы терапевтического показания, или каких-либо сопутствующих лечений, и находится в диапазоне от 0.01 мг до 1 г в 24 часа за одно или несколько введений.
A
B
A
B
Кроме того, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с противоопухолевым средством, выбранным из генотоксичных средств, митотических ядов, антиметаболитов, ингибиторов протеасом, ингибиторов киназ и антител, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации и их применению для изготовления лекарственных средств для применения для лечения злокачественного новообразования.
A
B
A
B
Предпочтительно настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором EGFR, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором mTOR/PI3K, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором MEK, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
Предпочтительно настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором HER2, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
Предпочтительно настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором RAF, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором EGFR/HER2, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с таксаном, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с ингибитором протеасом, иммуномодулятором или алкилирующим агентом, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такой тип комбинации.
A
B
A
B
Комбинацию соединения формулы (I), (VI), (VI), (VII) или (VII) с противоопухолевым средством можно вводить одновременно или последовательно. Предпочтительным путем введения является пероральный, причем соответствующие фармацевтические композиции могут обеспечивать незамедлительное или отсроченное высвобождение активных компонентов. Кроме того, соединения комбинации можно вводить в виде двух отдельных фармацевтических композиций, каждая из которых содержит один из активных компонентов, или в виде одной фармацевтической композиции, в которой активные компоненты находятся в смеси.
Для лечения злокачественного новообразования соединения изобретения также можно применять в комбинации с радиотерапией.
В заключение, соединения изобретения могут быть связаны с моноклональными антителами или их фрагментами или связаны с каркасными белками, которые могут относиться или не относиться к моноклональным антителам.
Фрагменты антител следует понимать как фрагменты Fv, scFv, Fab, F(ab')2, F(ab'), scFv-Fc типа или диатела, которые обычно имеют такую же специфичность связывания, что и антитело, из которого они происходят. В соответствии с настоящим изобретением, фрагменты антител изобретения могут быть получены исходя из антител с помощью методов, таких как переваривание ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или посредством расщепления дисульфидных мостиков с помощью химического восстановления. Другим путем, фрагменты антител, включенных в настоящее изобретение, могут быть получены с использованием методик генетической рекомбинации, также хорошо известных специалисту в данной области техники, или даже посредством пептидного синтеза с помощью, например, автоматических пептидных синтезаторов, таких как те, которые поставляются компанией Applied Biosystems, и т.д.
Под каркасными белками, которые могут относиться или не относиться к моноклональным антителам, понимают белок, который содержит или не содержит укладку цепи иммуноглобулинов и который обеспечивает способность к связыванию, такую же, как и у моноклонального антитела. Специалисту в данной области техники известно, каким образом выбрать каркас белка. Более конкретно, известно, что должен быть выбран такой каркас, который будет демонстрировать несколько следующих отличительных признаков (Skerra A., J. Mol. Recogn. 2000, 13, 167-187): хорошая филогенетическая консервативность, прочная архитектура с хорошо известной трехмерной молекулярной организацией (как, например, на основании кристаллографии или ЯМР), небольшой размер, отсутствие или лишь низкая степень посттрансляционных модификаций, простота получения, экспрессии и очистки. Таким каркасным белком может быть, без ограничения перечисленным, структура, выбранная из группы, состоящей из фибронектина и предпочтительно десятого домена фибронектина типа III (FNfn10), липокалина, антикалина (Skerra A., J. Biotechnol. 2001, 74(4), 257-75), белка Z, производного из домена В стафилококкового белка А, тиоредоксина А или любого белка с повторяющимся доменом, таким как "анкириновый повтор" (Kohl и др., PNAS 2003, 100(4), 1700-1705), "армадилло повтор", "богатый лейцином повтор" или "тетратрикопептидный повтор". Также можно упомянуть каркас, производный из токсинов (как, например, токсины скорпиона, насекомых, растений или моллюсков) или белковых ингибиторов нейрональной синтазы оксида азота (PIN).
Следующие Синтезы и Примеры иллюстрируют изобретение, но не ограничивают его каким-либо образом.
Общие Методики
Все реагенты, полученные из коммерческих источников, использовали без дополнительной очистки. Безводные растворители получали из коммерческих источников и использовали без дополнительной сушки.

f
Флэш-хроматографию выполняли на приборе ISCO CombiFlash Rf 200i с предварительно заправленными силикагелевыми картриджами (RediSepR Gold High Performance).
Тонкослойную хроматографию проводили на 5×10 см пластинах, покрытых силикагелем Merck Туре 60 F254.

Нагревание микроволновым излучением выполняли в приборе Anton Parr MonoWave или СЕМ Discover.

-1
4
3
Операции очистки с помощью препаративной ВЭЖХ выполняли на системе Armen Spot Liquid Chromatography с Gemini-NX 10 мкм C18, 250 мм × 50 мм в.д. колонкой, работая при скорости потока 118 мл⋅мин с УФ детектированием на диодной матрице (210-400 нм), используя 25 мМ водный раствор NHHCO и MeCN в качестве элюентов, если не указано иное.
2
Аналитическая ЖХ-МС: соединения настоящего изобретения характеризовали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии -масс-спектроскопии (ВЭЖХ-МС) на приборе Agilent НР1200 с Agilent 6140 квадрупольным ЖХ/МС, работая с электрораспылительной ионизацией в режиме положительных или отрицательных ионов. Диапазон сканирования молекулярных масс составлял от 100 до 1350. Параллельное УФ-детектирование проводили на 210 нм и 254 нм. Образцы вводили в виде 1 мМ раствора в ACN, или в смеси ТГФ/НО (1:1) с помощью 5 мкл петлевого дозатора. ЖХМС анализы выполняли на двух приборах, один из которых работал с основными, а другой с кислыми элюентами.
-1
Основная ЖХМС: Gemini-NX, 3 мкм, С18, 50 мм × 3.00 мм в.д. колонка при 23°С, при скорости потока 1 мл⋅мин, используя 5 мМ бикарбонат аммония (растворитель А) и ацетонитрил (растворитель В) с градиентом, начиная со 100%-ного растворителя А и завершая 100%-ным растворителем В в течение различных/определенных промежутков времени.
-1
Кислая ЖХМС: ZORBAX Eclipse XDB-C18, 1.8 мкм, 50 мм × 4.6 мм в.д. колонка при 40°С, при скорости потока 1 мл.мин, используя 0.02% об./об. водную муравьиную кислоту (растворитель А) и 0.02% об./об. муравьиную кислоту в ацетонитриле (растворитель В) с градиентом, начиная со 100%-ного растворителя А и завершая 100%-ным растворителем В в течение различных/определенных промежутков времени.
1
1
6
3
6
3
Н-ЯМР исследования выполняли на спектрометре Bruker Avance III 500 МГц и спектрометре Bruker Avance III 400 МГц, используя ДМСО-d или CDCl в качестве растворителя, H ЯМР данные представлены в виде дельта-значений, приведенных в миллионных долях (м.д.), используя остаточный пик растворителя (2.50 м.д. для ДМСО-d и 7.26 м.д. для CDCl) в качестве внутреннего стандарта. Картины расщепления обозначены в виде: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), quint (квинтет), m (мультиплет), br s (широкий синглет), dd (дублет дублетов), td (триплет дублетов), dt (дублет дублетов), ddd (дублет дублета дублетов).
+
Газовую хроматографию, комбинированную с масс-спектрометрией низкого разрешения, выполняли на газовом хроматографе Agilent 6850 и масс-спектрометре Agilent 5975С, используя 15 м × 0.25 мм колонку с 0.25 мкм покрытием HP-5MS и гелием в качестве газа-носителя. Источник ионов: EI, 70 эВ, 230°С, квадруполь: 150°С, интерфейс: 300°С.
Данные МСВР определяли на приборе Shimadzu IT-TOF, температура источника ионов 200°С, ESI +/-, напряжение ионизации: (+-)4.5 кВ. Разрешение по массам мин. 10000.
Элементарные анализы выполняли на элементном анализаторе Thermo Flash ЕА 1112.
Перечень сокращений
Общая Методика I:
Стадия А
1 экв. подходящего спирта и 1.2 экв. пиридина растворяли в ДХМ (1.2 мл/ммоль). При -78°С под азотом медленно добавляли 1.05 экв. 1-хлорэтилхлорформиата и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 3 часов. Холодную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт использовали без дополнительной очистки.
Стадия В
2
3
2
4
4
3
1 экв. соединения Синтеза 12, соединения Синтеза 13 или соединения Синтеза 14 растворяли в ДМФА (20 мл/ммоль) под азотом. Добавляли 6.7 экв. CsCO и 8 экв. 1-хлорэтилкарбонатного реагента. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь разбавляли соляным раствором и экстрагировали с помощью ДХМ, сушили NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой, используя 5 мМ водный раствор NHHCO и ацетонитрил в качестве элюентов с получением подходящего карбонатного производного в виде смеси стереоизомеров.
Общая Методика II:
Стадия А
1.05 экв. аминного реагента и 1.15 экв. пиридина растворяли в 1.3 мл/ммоль ДХМ, затем при -78°С под азотом добавляли 1 экв. 1-хлорэтилхлорформиата. Реакционную смесь перемешивали при -78°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Холодную смесь фильтровали; фильтрат концентрировали при пониженном давлении (30 мбар), используя 30°С баню. Сырой продукт использовали в течение 3 часов без дополнительной очистки.
Стадия В
2
3
4
4
3
1 экв. соединения Синтеза 12, соединения Синтеза 13 или соединения Синтеза 14 растворяли в 20 мл/ммоль ДМФА под азотом. Добавляли 10 экв. CsCO, затем 8 экв. карбаматного реагента (0.8 М раствор сырого продукта из Стадии А в ДМФА). Реакционную смесь перемешивали при к.т.тех пор, пока не достигали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь разбавляли соляным раствором и экстрагировали несколько раз этилацетатом. Объединенный органический слой сушили над MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой, используя 5 мМ водный раствор NHHCO и ацетонитрил в качестве элюентов с получением карбаматного производного.
Синтез 1: 5-бром-4-хлор-6-йодтиено[2,3-d]пиримидин
Стадия А: 6-йод-ЗН-тиено[2,3-d]пиримидин-4-он
1
6
В 1 л круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой, термометром и обратным холодильником, загружали раствор 433 мл уксусной кислоты, 13 мл серной кислоты и 87 мл воды. К нагретому до 60°С перемешиваемому раствору в течение 1 часа добавляли 69.3 г 3H-тиено[2,3-d]пиримидин-4-она (0.46 моль), 51.9 г йодной кислоты (0.23 моль) и 104 г йода (0.41 моль). Полученную в результате суспензию охлаждали до к.т., отфильтровывали, промывали смесью уксусной кислоты и воды (5:1) и затем диэтиловым эфиром. Полученное в результате бежевое кристаллическое твердое вещество сушили на воздухе. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 12.57 (br s, 1Н), 8.09 (s, 1Н), 7.65 (s, 1Н)
Стадия В: 4-хлор-6-йодтиено [2,3-d]пиримидин
2
6
1
В 1 л круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой, термометром, обратным холодильником и CaCl-трубкой, загружали 113 мл оксихлорида фосфора и 35 мл N,N-диметиланилина (0.29 моль). К смеси в течение 5 минут порциями добавляли 75.54 г 6-йод-3H-тиено[2,3-d]пиримидин-4-она (0.27 моль). Реакционную смесь перемешивали при 105°С в течение 1 часа. Полученную в результате суспензию охлаждали до 10°С, фильтровали и промывали гексаном. Сырой продукт добавляли к ледяной воде и перемешивали в течение 10 минут, отфильтровывали, промывали холодной водой, диэтиловым эфиром и сушили на воздухе. Получали бежевое кристаллическое твердое вещество. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.89 (s, 1Н), 7.98 (s, 1Н)
Стадия С: соединение Синтеза 1
1
6
В 1 л круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой, термометром и барботажным устройством, загружали 600 мл ацетонитрила. Добавляли 84.9 г 4-хлор-6-йодтиено[2,3-d]пиримидина (0.29 моль), 50.9 г NBS (0.29 моль) и 8.5 мл комплекса тетрафторборная кислота - диэтиловый эфир. Реакционную смесь перемешивали при к.т.в течение 16 часов. К смеси тремя порциями добавляли дополнительные 22.9 г (0.12 моль) NBS. После охлаждения суспензии до 0°С и перемешивания в течение еще 1 часа осадок отфильтровывали, промывали ацетонитрилом и сушили на воздухе. Соединение Синтеза 1 получали в виде бежевого кристаллического твердого вещества. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 8.88 (s, 1H)
Синтез 2: 5-бром-4-хлор-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d] пиримидин
2
6
t
1
75.08 г соединения Синтеза 1 (200 ммоль), 53.63 г 2-(4-фторфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (240 ммоль), 130 г карбоната цезия (400 ммоль), 2.245 г Pd(OAc) (10 ммоль) и 8.50 г BuX-Phos (20 ммоль) помещали в 2 л колбу. Добавляли 600 мл ТГФ и 200 мл воды и затем смесь перемешивали в течение ночи при 70°С в атмосфере аргона. ТГФ упаривали и затем продукт собирали с помощью фильтрования. Сырой продукт подвергали действию ультразвука в 250 мл ацетонитрила и снова отфильтровывали. Затем соединение Синтеза 2 кристаллизовали из смеси EtOH/ТГФ (2:1). Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 9.02 (s, 1Н), 7.80-7.77 (m, 2H), 7.47-7.43 (m, 2H)
Синтез 3: этил (2R)-2-ацетокси-3-(2-гидроксифенил)пропаноат
Стадия А: [2-(бромметил)фенил]ацетат
60.07 г 2-метилфенилацетата (400 ммоль) и 106.8 г NBS (600 ммоль) помещали в 1 л колбу. Добавляли 500 мл циклогексана и затем при интенсивном перемешивании в течение 30 минут добавляли 3.284 г AIBN (20 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения, затем охлаждали до к.т.Осадок отфильтровывали и промывали циклогексаном. Маточный раствор концентрировали при пониженном давлении и сырой продукт использовали на Стадии В без дополнительной очистки.
Стадия В: соединение Синтеза 3
2
23.10 г безводного LiCl (545 ммоль) и 65.36 г безводного ZnCl (479.6 ммоль) помещали в 2 л колбу, затем сушили при 160°С при давлении 0.1 мм Hg в течение 1 часа. После охлаждения до к.т., в атмосфере аргона добавляли 26.49 г магниевой стружки (1090 ммоль) и 1 л сухого, предварительного охлажденного (0°С) ТГФ. Полученную в результате смесь погружали в ледяную баню и затем перемешивали в течение 30 минут.
100 г [2-(бромметил)фенил]ацетата - сырого продукта из Стадии А- (~ 436 ммоль) растворяли в 120 мл сухого ТГФ и добавляли к предварительно охлажденной неорганике в течение 15 минут. После добавления реагента полученную в результате смесь перемешивали в течение 45 минут, поддерживая температуру в диапазоне 0-5°С. К смеси добавляли 64.82 мл этил 2-оксоацетата (654 ммоль, 50% в толуоле) в течение 5 минут и полученную в результате смесь перемешивали в течение еще 15 минут.
3
4
Оставшуюся неорганику удаляли из смеси путем фильтрования и затем к фильтрату добавляли 500 мл МеОН. Эту смесь перемешивали до тех пор, пока не завершится внутримолекулярная миграция ацетильной группы от фенольного кислорода к алкильному кислороду. К смеси добавляли 30 мл уксусной кислоты и затем летучие компоненты упаривали при пониженном давлении. К остатку добавляли 350 мл воды и смесь экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO и соляным раствором, и затем сушили над MgSO, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. К остатку добавляли 100 мл гексана и смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Образовавшиеся белые кристаллы собирали с помощью фильтрования и промывали гексаном с получением энантиомеров, которые разделяли с помощью хиральной хроматографии.
Колонка: OD; Элюенты: гептан/EtOH; (S)-энантиомер, элюирующийся раньше, собирали с 99.8% ее и (R)-энантиомер, элюирующийся позже, собирали в качестве соединения Синтеза 3 с 99.9% ее.
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 9.53 (s, 1H), 7.06 (t, 1Н), 7.04 (d, 1Н), 6.79 (d, 1Н), 6.71 (t, 1Н), 5.10 (dd, 1Н), 4.05 (q, 2Н), 3.06 (dd, 1Н), 2.94 (dd, 1Н), 2.00 (s, 3Н), 1.09 (t, 3Н)
Синтез 4: этил (2R)-2-гидрокси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноат
Стадия А: этил (2R)-2-ацетокси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноат
3
2
4
103.3 г соединения Синтеза 3 (409 ммоль) растворяли в 280 мл 3,4-дигидро-2H-пирана. Добавляли 300 мг моногидрата пара-толуолсульфоновой кислоты и смесь перемешивали до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли 1 л этилацетата, промывали 200 мл насыщенного раствора NaHCO, затем 200 мл воды. Объединенные органические слои сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали. Затем остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя смесь гептан/EtOAc.
Стадия В: соединение Синтеза 4
1
6
137.57 г этил (2R)-2-ацетокси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноата (409 ммоль) растворяли в 600 мл этанола, затем добавляли 20 мл раствора этилата натрия (1 M в этаноле) и смесь перемешивали до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь концентрировали до половины ее объема, затем добавляли 300 мл воды и 300 мл соляного раствора, и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенную органику сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Энантиочистота исходного вещества была сохранена. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d, 1:1 смесь диастереомеров) δ 7.16 (t, 1Н), 7.13 (d, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.87 (t, 1H), 5.51-5.47 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.04-4.02 (q, 2H), 3.73-3.56 (m, 2H), 3.06-3.04-2.74-2.71 (dd, 2H), 1.95-1.64 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.65-1.50 (m, 2H), 1.12-1.10 (t, 3H)
Синтез 5: этил (2R)-2-[5-бром-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноат
2
3
2
2
4
48.45 г соединения Синтеза 2 (141 ммоль), 45.63 г соединения Синтеза 4 (155 ммоль) и 137.8 г CsCO (423 ммоль) помещали в 2 л колбу. Добавляли 1.4 л трет-бутанола и смесь перемешивали при 70°С в атмосфере N до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Приблизительно 1 л растворителя упаривали при пониженном давлении, затем смесь разбавляли водой, рН доводили до 8 с помощью 2 М раствора HCl и затем смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением соединения Синтеза 5 в виде смеси диастереоизомеров.
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 8.67-8.66 (s, 1Н), 7.75 (m, 2Н), 7.43 (dm, 1Н), 7.41 (m, 2Н), 7.19 (m, 1Н), 7.08-7.06 (dm, 1Н), 6.89 (m, 1Н), 5.87-5.70 (dd, 1Н), 5.60-5.55 (m, 1Н), 4.23-4.08 (m, 2Н), 3.80-3.48 (m, 2Н), 3.52-3.49 (dd, 1Н), 3.19-3.17 (dd, 1Н), 2.09-1.49 (m, 6Н), 1.15-1.10 (t, 3Н)
28
26
2
5
МСВР: рассчитано для CHBrFNOS: 600.0730, найдено: 601.0809/601.0798 (М+Н)
Синтез 6: 2-хлор-3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенол
Стадия А: (4-бром-2-хлорфенокси)-триметилсилан
1
3
20.8 г 4-бром-2-хлорфенола (100 ммоль) растворяли в 150 мл сухого ТГФ, затем добавляли 24.2 г HMDS (150 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 85°С в атмосфере аргона в течение 1.5 часа, затем концентрировали при пониженном давлении с получением продукта, который использовали без дополнительной очистки. Н ЯМР (200 МГц, CDCl): 7.49 (d, 1Н), 7.23 (dd, 1H), 6.75 (d, 1Н), 0.26 (s, 9Н)
Стадия В: 4-бром-2-хлор-3-метилфенол
n
1
4
4
2
4
3
48 мл раствора BuLi в гексанах (2.5 М, 120 ммоль) при -78°С в атмосфере аргона по каплям добавляли к раствору 12.1 г сухого DIPA (120 ммоль) в 250 мл сухого ТГФ. Смесь перемешивали в течение 30 минут при такой же температуре, затем по каплям добавляли 28.0 г (4-бром-2-хлорфенокси)-триметилсилана (100 ммоль). Спустя 2.5 часа по каплям добавляли 21.3 г MeI (150 ммоль), затем охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали в течение ночи. Реакцию гасили 100 мл раствора NHOH и 200 мл раствора NHCl, и экстрагировали с помощью EtOAc, сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученную в результате темную массу несколько раз нагревали в колбе с обратным холодильником с чистым гексаном (аликвоты 150-150 мл) и декантировали, оставляя черную смолу. Объединенные органические фазы концентрировали при пониженном давлении с получением 19.0 г сырого продукта, используемого далее без дополнительной очистки. Н ЯМР (200 МГц, CDCl): 7.32 (d, 1Н), 6.76 (d, 1Н), 5.62 (s, 1Н), 2.49 (s, 3Н)
1
3
Стадия С: (4-бром-2-хлор-3-метилфенокси)-триметилсилан 20.8 г HMDS (129 ммоль) добавляли к раствору 19.0 г 4-бром-2-хлор-3-метилфенола (86.0 ммоль) в 150 мл сухого ТГФ. Смесь перемешивали при 85°С под баллонным аргоном в течение 1.5 часа и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт использовали без дополнительной очистки. Н ЯМР (200 МГц, CDCl): 7.30 (d, 1Н), 6.63 (d, 1Н), 2.50 (s, 3Н), 0.28 (s, 9Н)
Стадия D: соединение Синтеза 6
4
6
1
Раствор 25.2 г (4-бром-2-хлор-3-метилфенокси)-триметилсилана (86.0 ммоль) в 250 мл сухого ТГФ охлаждали до -78°С под аргоном и затем по каплям добавляли 38 мл раствора "BuLi в гексанах (2.5М, 94.6 ммоль). Спустя 5 минут по каплям добавляли 19.2 г 2-изопропокси-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (103 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и смеси давали медленно нагреться до к.т. Затем смесь добавляли к 200 мл раствора NHCI и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении и пропускали через набивку силикагеля, используя гексан и EtOAc в качестве элюентов. Сырой продукт перекристаллизовывали из смеси EtOAc и гексана с получением соединения Синтеза 6. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 10.40 (s, 1Н), 7.42 (d, 1Н), 6.80 (d, 1Н), 2.49 (s, 3Н), 1.27 (s, 12Н)
a
Синтез 7: этил (2R)-2-[(5S)-5-(3-хлор-4-гидрокси-2-метилфенил)-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноат
2
3
2
4
186.6 г соединения Синтеза 5 (310.3 ммоль) и 99.99 г соединения Синтеза 6 (372.3 ммоль) растворяли в 1.2 л ТГФ, затем добавляли 202.2 г CsCO (620.6 ммоль), растворенного в 300 мл воды. Затем добавляли 11.0 г AtaPhos (15.51 ммоль) и смесь перемешивали под азотом при нагревании в колбе с обратным холодильником до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Большую часть летучих компонентов упаривали при пониженном давлении, затем смесь разбавляли ДХМ и соляным раствором. После встряхивания рН водной фазы доводили до 8 с помощью 2 М раствора HCl. После разделения фаз водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Органические слои объединяли и сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Диастереоизомеры разделяли с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и этилацетат в качестве элюентов. Диастереоизомерную пару, элюирующуюся позже, собирали в качестве соединения Синтеза 7.
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d, 1:1 смесь диастереомеров): 10.27 (br s, 1Н), 8.60 (s, 1Н), 7.30 (m, 2Н), 7.22 (m, 2Н), 7.16-7.14 (d, 1Н), 7.12 (m, 1Н), 7.00 (d, 1Н), 6.96 (d, 1Н), 6.74-6.73 (t, 1Н), 6.34-6.36 (d, 1Н), 5.55-5.52 (m, 1Н), 5.54-5.41 (dd, 1Н), 4.06 (q, 2Н), 3.68-3.54 (m, 2Н), 3.10-3.07 (dd, 1Н), 2.44 (dd, 1Н), 1.98-1.90 (br s, 1Н), 1.85-1.83 (s, 3Н), 1.79 (br s, 2Н), 1.64 (br s, 1Н), 1.59 (br s, 1H), 1.54 (br s, 1H), 1.09-1.08 (t, 3H)
MCBP: (M+H)=663.1728 и 663.1717
a
Синтез 8: этил (2R)-2-[(5S)-5-[3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси-3-(2-тетрагидропиран-2-илоксифенил)пропаноат
3
2
2
2
+
132.3 г соединения Синтеза 7 (199.5 ммоль), 43.17 г 2-(4-метилпиперазин-1-ил)этанола (299.3 ммоль) и 94.20 г PPh (359.1 ммоль) растворяли в 1 л сухого толуола, затем добавляли 78.09 г ди-трет-бутил азодикарбоксилата (339.2 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С в атмосфере N до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. 980 мл толуола упаривали, затем добавляли 500 мл EtO и смесь перемешивали и подвергали действию ультразвука. Осажденные белые кристаллы отфильтровывали и промывали с помощью EtO с получением 65.9 г чистого трифенилфосфиноксида. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя EtOAc и МеОН в качестве элюентов с получением соединения Синтеза 8. МС: (М+Н)=789.2
a
Синтез 9: этил (2R)-2-[(5S)-[3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси-3-(2-гидроксифенил)пропаноат
2
2
3
2
4
199.5 ммоль соединения Синтеза 8 растворяли в 1 л EtOH, затем добавляли 1 л 1.25 М раствора HCl в EtOH и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Большую часть EtOH упаривали, затем добавляли EtO и осажденную HCl соль (белое твердое вещество) отфильтровывали и промывали с помощью EtO. HCl соль осторожно обрабатывали насыщенным раствором NaHCO, экстрагировали с помощью ДХМ, объединенные органические фазы сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения Синтеза 9.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 9.53 (br s, 1Н), 8.60 (s, 1H), 7.30 (m, 2H), 7.28 (d, 1H), 7.21 (m, 2H), 7.16 (d, 1H), 6.97 (t, 1H), 6.72 (d, 1H), 6.53 (t, 1H), 6.20 (d, 1H), 5.46 (dd, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.04 (m, 2H), 2.92 (dd, 1H), 2.75 (m, 2H), 2.53 (br s, 4H), 2.44 (dd, 1H), 2.36 (br s, 4H), 2.17 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.06 (t, 3H)
37
38
4
5
MCBP: рассчитано для CHClFNOS: 704.2235, найдено: 705.2288 (M+H)
Синтез 10: (E)-4-(диметиламино)-1,1-диметоксибут-3-ен-2-он
1
6
502.1 г 1,1-диметоксипропан-2-она (4.25 моль) и 506.4 г 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамина (4.25 моль) смешивали в 2 л колбе и перемешивали при 105°С в течение 3 часов. Образовавшийся МеОН непрерывно удаляли с помощью дистилляции. Когда образование МеОН прекратилось (при температуре головки 65°С) реакционную смесь подвергали вакуумной дистилляции (медленно уменьшая давление до 30 мбар) для удаления побочных продуктов и непрореагировавших исходных веществ. Сырой продукт дистиллировали при 0.1 мбар. Фракции собирали при температуре головки в диапазоне 107-118°С (температура бани 160-165°С) с получением желтого масла. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 7.59 (d, 1Н), 5.17 (d, 1Н), 4.42 (s, 1Н), 3.25 (s, 6Н), 3.09 (s, 3Н), 2.78 (s, 3Н)
Синтез 11: [2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метанол
Стадия А: 4-(диметоксиметил)-2-(2-метоксифенил)пиримидин
4
6
1
К смеси гидрохлорида 2-метоксибензамидина (1.2 экв.) и соединения Синтеза 10 (1 экв.) в сухом метаноле (0.5 мл/ммоль) по частям добавляли метилат натрия (1.2 экв.) и смесь перемешивали при 75°С в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли воду и смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.93 (d, 1Н), 7.55-7.44 (m, 3Н), 7.16 (d, 1Н), 7.06 (m, 1Н), 5.31 (s, 1Н), 3.76 (s, 3Н), 3.37 (s, 6Н)
Стадия В: соединение Синтеза 11
2
3
2
4
6
1
261 мг 4-(диметоксиметил)-2-(2-метоксифенил)пиримидина (1.0 ммоль) растворяли в 2 мл раствора HCl в диоксане (4 М раствор), затем добавляли 2 мл воды и эту смесь перемешивали при 50°С в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, затем добавляли частями 320 мг NaOH (8.0 ммоль). Значение рН доводили до 8, используя 10% раствор KCO, затем добавляли 76 мг борогидрида натрия (2.0 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Реакционную смесь разбавляли 5 мл воды и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением соединения Синтеза 11. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.84 (d, 1Н), 7.50-7.42 (m, 3Н), 7.14 (d, 1H), 7.03 (m, 1H), 5.66 (t, 1H), 4.58 (d, 2H), 3.75 (s, 3H)
a
Синтез 12: (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановая кислота
Стадия А
1 экв. соединения Синтеза 9, 2 экв. соединения Синтеза 11 и 2 экв. трифенилфосфина растворяли в абсолютном толуоле (0.2 М для фенола), затем добавляли 2 экв. ди-трет-бутил азодикарбоксилата. Смесь перемешивали при 50°С под азотом до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Летучие компоненты упаривали при пониженном давлении и сырое промежуточное соединение очищали с помощью флэш-хроматографии, используя этилацетат и метанол в качестве элюентов.
Стадия В
2
2
4
4
3
47
44
6
6
Полученное промежуточное соединение растворяли в смеси диоксан-вода 1:1 (10 мл/ммоль) и добавляли 10 экв. LiOH × НО. Смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли соляным раствором, нейтрализовали 2 М раствором HCl и экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой, используя 25 мМ водный раствор NHHCO и MeCN в качестве элюентов. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 874.2716; найдено: 438.1415 (М+2Н)
Синтез 13: (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановая кислота
Стадия А: 4-бром-2,6-дихлор-3,5-диметилфенол
2
4
6
1
30.16 г 4-бром-3,5-диметилфенола (150 ммоль) растворяли в смеси 75 мл 1,2-дихлорэтана и 75 мл ацетонитрила, затем по частям добавляли 40.06 г NCS (300 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток растворяли в ДХМ, промывали водой и соляным раствором. Органический слой сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении, и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 10.10 (s, 1Н), 2.46 (s, 6Н)
Стадия В: 1-бром-3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилбензол
2
3
2
4
6
1
К раствору 26.0 г 4-бром-2,6-дихлор-3,5-диметилфенола (96.3 ммоль) и 26.60 г KCO (192.6 ммоль) в 300 мл MeCN добавляли 6.6 мл Mel (105.9 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Твердые вещества отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт растворяли в ДХМ, промывали водой и соляным раствором. Органический слой сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении, и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 3.78 (s, 3Н), 2.49 (s, 6Н)
Стадия С: 2-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан
2
4
6
1
10.0 г 1-бром-3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилбензола (35.2 ммоль) растворяли в 360 мл сухого ТГФ под азотом и охлаждали до -78°С смесью сухой лед-ацетон. Добавляли 23.2 мл раствора nBuLi (1.6 М в гексанах) (37.0 ммоль) и смесь перемешивали в течение 15 минут, затем добавляли 8.6 мл 2-изопропокси-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (42.24 ммоль) и смеси давали нагреться до к.т. Смесь гасили соляным раствором, экстрагировали с помощью ДХМ, сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением 2-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 3.81 (s, 3Н), 2.33 (s, 6Н), 1.34 (s, 12Н)
Стадия D: этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)тиофен-3-карбоксилат
2
3
2
4
3.92 г этил 4-бромтиофен-3-карбоксилата (16.68 ммоль) и 9.9 г 2-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (30.0 ммоль) растворяли в 140 мл диоксана и затем добавляли 10.87 г CsCO (33.36 ммоль), растворенного в 40 мл воды. Затем добавляли 590 мг AtaPhos (0.83 ммоль) и смесь перемешивали под азотом при нагревании в колбе с обратным холодильником до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли ДХМ и соляным раствором. После разделения фаз водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Органические слои объединяли и сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)тиофен-3-карбоксилата.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.53 (d, 1Н), 7.47 (d, 1Н), 4.02 (q, 2Н), 3.83 (s, 3Н), 1.95 (s, 6Н), 1.00 (t, 3Н)
4
+
MCBP (M+NH)=376.0538
Стадия Е: этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-2,5-дийодтиофен-3-карбоксилат
1
6
2.65 г 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)тиофен-3-карбоксилата (7.38 ммоль) растворяли в 75 мл ацетонитрила, затем добавляли 2.2 мл комплекса фторборная кислота - диэтиловый эфир (16.23 ммоль) и 3.65 г N-йодсукцинимида (16.23 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-2,5-дийодтиофен-3-карбоксилата. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 3.98 (q, 2Н), 3.84 (s, 3Н), 1.92 (s, 6Н), 0.84 (t, 3Н)
Стадия F: этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-йодтиофен-3-карбоксилат
4
2
4
6
1
5.29 г 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-2,5-дийодтиофен-3-карбоксилата (8.66 ммоль) растворяли в 90 мл сухого ТГФ и затем охлаждали до -78°С в атмосфере аргона. Добавляли 6.7 мл комплекса хлорид изопропилмагния - хлорид лития (1.3 М в ТГФ) (8.66 ммоль) и смесь перемешивали при -78°С в течение 30 минут. Затем добавляли насыщенный водный раствор NHCl и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-йодтиофен-3-карбоксилата. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.71 (s, 1Н), 4.01 (q, 2Н), 3.86 (s, 3Н), 1.89 (s, 6Н), 0.99 (t, 3Н)
Стадия G: этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилат
2
3
3
4
2
4
4.20 г этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-йодтиофен-3-карбоксилата (8.66 ммоль) и 1.82 г 4-фторфенилбороновой кислоты (13.0 ммоль) растворяли в 80 мл диоксана, затем добавляли 5.64 г CsCO (17.32 ммоль), растворенного в 20 мл воды. Затем добавляли 500 мг Pd(PPh) (0.43 ммоль) и смесь перемешивали под азотом при 80°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли ДХМ и соляным раствором. После разделения фаз водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Органические слои объединяли и сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилата.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.58 (s, 1Н), 7.22-7.10 (m, 4Н), 4.03 (q, 2Н), 3.82 (s, 3Н), 1.92 (s, 6Н), 1.00 (t, 3Н)
+
МСВР (М+Н)=453.0498
Стадия Н: этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)-2-нитротиофен-3-карбоксилат
2
4
6
1
1.97 г этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилата (4.34 ммоль) растворяли в 40 мл сухого ацетонитрила, затем добавляли 576 мг тетрафторбората нитрония (4.34 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли ДХМ и соляным раствором. После разделения фаз водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Органические слои объединяли и сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)-2-нитротиофен-3-карбоксилата. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 7.37-7.33 (m, 2Н), 7.32-7.26 (m, 2Н), 4.14 (q, 2Н), 3.82 (s, 3Н), 2.06 (s, 6Н), 0.88 (t, 3Н)
Стадия I: этил 2-амино-4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилат
1.85 г этил 4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)-2-нитротиофен-3-карбоксилата (3.71 ммоль) растворяли в смеси 90 мл уксусной кислоты и 18 мл воды, затем по частям добавляли 2.43 г цинковой пыли (37.1 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением этил 2-амино-4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилата.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 7.73 (s, 2Н), 7.12-7.06 (m, 2Н), 7.02-6.97 (m, 2Н), 3.86-3.80 (m, 2Н), 3.80 (s, 3Н), 2.01 (s, 6Н), 0.72 (t, 3Н)
+
МСВР (М+Н)=456.0598
Стадия J: 5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)-3Н-тиено [2,3-d] пиримидин-4-он
1.10 г этил 2-амино-4-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-5-(4-фторфенил)тиофен-3-карбоксилата (2.35 ммоль) растворяли в 20 мл формамида и смесь перемешивали при 150°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь выливали на воду и осажденный продукт собирали с помощью фильтрования с получением 5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)-3H-тиено[2,3-d]пиримидин-4-она.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 12.53 (br s, 1Н), 8.18 (s, 1H), 7.23-7.16 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 1.96 (s, 6H)
+
MCBP (M+H)=449.0289
Стадия К: 4-хлор-5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)тиено [2,3-d]пиримидин
700 мг 5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)-3H-тиено[2,3-d]пиримидин-4-она (1.56 ммоль) растворяли в 6 мл оксихлорида фосфора и смесь перемешивали при 90°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, затем к сырому продукту добавляли ледяную воду и смесь подвергали действию ультразвука в течение 10 минут. Осажденный продукт собирали с помощью фильтрования с получением 4-хлор-5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 9.02 (s, 1Н), 7.38-7.26 (m, 4Н), 3.86 (s, 3Н), 1.99 (s, 6Н)
+
МСВР (М+Н)=466.9954
Стадия L: 2,6-дихлор-4-[4-хлор-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-3,5-диметилфенол и 4-[4-бром-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-2,6-дихлор-3,5-диметилфенол
4
2
4
К перемешиваемому раствору 700 мг 4-хлор-5-(3,5-дихлор-4-метокси-2,6-диметилфенил)-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина (1.50 ммоль) в 15 мл ДХМ при 0°С добавляли 3.0 мл трибромида бора (1 M в ДХМ) (3.0 ммоль) и смеси давали нагреться до к.т. и перемешивали до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь гасили насыщенным водным раствором NHCl и экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением 2,6-дихлор-4-[4-хлор-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-3,5-диметилфенола и 4-[4-бром-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-2,6-дихлор-3,5-диметилфенола в виде 37:63 смеси продуктов.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 10.14 (br s, 1H), 9.01 (s, 1H), 7.40-7.23 (m, 4H), 1.95 (s, 6H) и 10.14 (br s, 1H), 8.93 (s, 1H), 7.40-7.23 (m, 4H), 1.93 (s, 6H)
+
MCBP (M+H)=452.9800 и 496.9287
Стадия M: 4-хлор-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин и 4-бром-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин
300 мг смеси 2,6-дихлор-4-[4-хлор-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-3,5-диметилфенола и 4-[4-бром-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-5-ил]-2,6-дихлор-3,5-диметилфенола (0.62 ммоль), 286 мг 2-(4-метилпиперазин-1-ил)этанола (1.98 ммоль) и 520 мг трифенилфосфина (1.98 ммоль) растворяли в 10 мл сухого толуола и затем добавляли 460 мг ди-трет-бутилазодикарбоксилата (1.98 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С под азотом до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Летучие компоненты упаривали при пониженном давлении и сырое промежуточное соединение очищали с помощью флэш-хроматографии, используя EtOAc и метанол в качестве элюентов с получением 4-хлор-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина и 4-бром-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина в виде 35:65 смеси продуктов.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 9.02 (S, 1H), 7.40-7.22 (m, 4Н), 4.11 (t, 2Н), 2.78 (t, 2Н), 2.63-2.20 (m, 8Н), 2.17 (br s, 3Н), 1.98 (s, 6Н) и 8.94 (S, 1Н), 7.40-7.22 (m, 4Н), 4.11 (t, 2Н), 2.78 (t, 2Н), 2.63-2.20 (m, 8Н), 2.15 (br s, 3Н), 1.98 (s, 6Н)
+
МСВР (М+Н)=579.0968 и 623.0455
Стадия N: (Е)-4-(диметиламино)-1,1-диметоксибут-3-ен-2-он
1
6
502.1 г 1,1-диметоксипропан-2-она (4.25 моль) и 506.4 г 1,1 -диметокси-N,N-диметилметанамина (4.25 моль) смешивали в 2 л колбе и перемешивали при 105°С в течение 3 часов. Образовавшийся МеОН непрерывно удаляли с помощью дистилляции. Когда образование МеОН прекратилось (при температуре головки 65°С), реакционную смесь подвергали вакуумной дистилляции (медленно уменьшая давление до 30 мбар) для удаления побочных продуктов и непрореагировавших исходных веществ. Сырой продукт дистиллировали при 0.1 мбар. Фракции собирали при температуре головки в диапазоне 107-118°С (температура бани 160-165°С) с получением желтого масла. H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d): 7.59 (d, 1Н), 5.17 (d, 1Н), 4.42 (s, 1Н), 3.25 (s, 6Н), 3.09 (s, 3Н), 2.78 (s, 3Н)
Стадия О: 4-(диметоксиметил)-2-(2-метоксифенил)пиримидин
4
6
1
К смеси соли уксусной кислоты и 2-метоксибензамидина (1.2 экв.) и (Е)-4-(диметиламино)-1,1-диметоксибут-3-ен-2-она (1.0 экв.) в сухом метаноле (0.5 мл/ммоль) по частям добавляли метилат натрия (1.2 экв.) и смесь перемешивали при 75°С в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли воду и смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением 4-(диметоксиметил)-2-(2-метоксифенил)пиримидина. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.93 (d, 1Н), 7.55-7.44 (m, 3Н), 7.16 (d, 1H), 7.06 (m, 1H), 5.31 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.37 (s, 6H)
Стадия P: [2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метанол
2
3
2
4
6
1
261 мг 4-(диметоксиметил)-2-(2-метоксифенил)пиримидина (1.00 ммоль) растворяли в 2 мл раствора HCl в диоксане (4 М раствор), затем добавляли 2 мл воды и эту смесь перемешивали при 50°С в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, затем частями добавляли 320 мг NaOH (8.0 ммоль). Значение рН доводили до 8, используя 10% раствор KCO, затем добавляли 76 мг борогидрида натрия (2.0 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Реакционную смесь разбавляли 5 мл воды и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии, используя гептан и EtOAc в качестве элюентов с получением указанного в заголовке продукта. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.84 (d, 1Н), 7.50-7.42 (m, 3Н), 7.14 (d, 1Н), 7.03 (m, 1Н), 5.66 (t, 1Н), 4.58 (d, 2Н), 3.75 (s, 3Н)
Стадия О: (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропановая кислота
2
3
2
2
2
6
1
37.84 г (150 ммоль) соединения Синтеза 3, 48.65 г (225 ммоль) [2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метанола и 59.01 г (225 ммоль) трифенилфосфина растворяли в 160 мл абсолютного толуола, затем добавляли 102.47 мл (225 ммоль) диэтилазодикарбоксилата. Смесь перемешивали при 50°С под азотом до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Летучие компоненты упаривали при пониженном давлении. Затем добавляли 400 мл EtO, смесь подвергали действию ультразвука и фильтровали (для удаления PPh). EtO удаляли в вакууме. Остаток растворяли в 130 мл ТГФ, затем добавляли 30 г NaOH в 130 мл НО. Смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь подкисляли 2М раствором HCl и ТГФ удаляли в вакууме. Добавляли 300 мл ДХМ и осадок отфильтровывали, промывали холодной НО и ДХМ и сушили в вакууме с получением (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропановой кислоты. Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.88 (d, 1Н), 7.80 (d, 1Н), 7.55 (dd, 1Н), 7.49-7-44 (m, 1Н), 7.26 (dd, 1Н), 7.17-7.11 (m, 2Н), 7.06 (t, 1Н), 6.98 (d, 1Н), 6.88 (t, 1Н), 5.22 (s, 2Н), 3.81 (dd, 1Н), 3.77 (s, 3Н), 3.73 (dd, 1Н), 2.44 (dd, 1H)
Стадия R: этил (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил] метокси] фенил]пропаноат
2
4
3
2
4
23
24
2
5
51.7 г (136 ммоль) (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропановой кислоты растворяли в 520 мл EtOH и затем добавляли 20 мл концентрированной HSO. Смесь перемешивали при 60°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли водой, нейтрализовали концентрированным раствором NaHCO и экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя EtOAc и МеОН в качестве элюентов с получением этил (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропаноата. МСВР: рассчитано для CHNO: 408.1685, найдено: 409.1757 (М+Н)
Стадия S: соединение Синтеза 13
2
3
2
4
200 мг смеси 4-хлор-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина и 4-бром-5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидина (0.33 ммоль), 211 мг этил (2R)-2-гидрокси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропаноата (0.52 ммоль) и 202 мг CsCO (0.62 ммоль) растворяли в 5 мл трет-бутанола и смесь перемешивали при 70°С до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь разбавляли этилацетатом и затем промывали соляным раствором. Органический слой сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя EtOAc и метанол в качестве элюентов с получением этил (2R)-2-[5-[3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил]-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси-3-[2-[[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси]фенил]пропаноата.
2
2
4
4
3
Полученное промежуточное соединение растворяли в 5 мл смеси диоксан-вода 1:1 (10 мл/ммоль) и добавляли 145 мг LiOH × НО (3.45 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Затем смесь разбавляли соляным раствором, нейтрализовали 2 М раствором HCl, экстрагировали с помощью ДХМ, сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой, используя 5 мМ водный раствор NHHCO и MeCN в качестве элюентов с получением соединения Синтеза 13.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): 8.89 (d, 1Н), 8.60 (s, 1Н), 7.81 (d, 1Н), 7.53 (dd, 1Н), 7.45 (td, 1Н), 7.29-7.21 (m, 4Н), 7.17-7.13 (m, 1Н), 7.14 (d, 1Н), 7.04 (td, 1Н), 7.01 (d, 1Н), 6.76 (t, 1Н), 6.20 (d, 1Н), 5.45 (dd, 1Н), 5.26 (d, 1Н), 5.20 (d, 1Н), 4.06-4.01 (m, 2Н), 3.76 (s, 3Н), 3.46 (dd, 1Н), 2.79-2.74 (m, 2Н), 2.67-2.38 (m, 8Н), 2.33 (s, 3Н), 2.26 (s, 3Н), 2.22 (dd, 1Н), 1.73 (s, 3Н)
2+
МСВР (М+2Н)=462.1310
Синтез 14: (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановая кислота
Используя методику, описанную для Синтеза 13, и начиная превращение непосредственно со Стадии В с 4-бром-3,5-диметилфенолом взамен 4-бром-2,6-дихлор-3,5-диметилфенола, получали соединение Синтеза 14.
a
Пример 1: 1-[(метоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
51
50
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и метанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 1. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 976.3033; найдено: 489.1604 и 489.1572 (М+2Н)
a
Пример 2: 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
52
52
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и этанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 2. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 990.3189; найдено: 496.1649 и 496.1685 (М+2Н)
a
Пример 3: 1-{[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси] фенил }-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
53
54
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и 2-пропанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 3. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1004.3345; найдено: 503.1766 (М+2Н)
a
Пример 4: 1-[(трет-бутоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси] фенил }-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
54
56
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и 2-метил-2-пропанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 4. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1018.3502; найдено: 510.1837 (М+2Н)
a
Пример 5: 1-{[(циклопентилокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
55
56
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и циклопентанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 5. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1030.3502; найдено: 516.1817 (М+2Н)
a
Пример 6: 1-{[(октилокси)карбонил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
58
64
6
9
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 12 и 1-октанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 6. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1030.3502; найдено: 538.2133 и 538.2149 (М+2Н)
a
Пример 7: 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
52
53
7
8
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и гидрохлоридом диметиламина в качестве аминного реагента, применяя 2.15 экв. пиридина на Стадии А, получали Пример 7. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 989.3349; найдено: 495.6740 и 495.6738 (М+2Н)
a
Пример 8: 1-[(диэтилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
54
57
7
8
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и диэтиламином в качестве аминного реагента, получали Пример 8. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1017.3662; найдено: 509.6902 (М+2Н)
a
Пример 9: 1-{[(2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноил]окси}этил морфолин-4-карбоксилат
54
55
7
9
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и морфолином в качестве аминного реагента, получали Пример 9. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1031.3455; найдено: 516.6826 и 516.6821 (М+2Н)
a
Пример 10: 1-{[(2-метоксиэтил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
53
55
7
9
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и 2-метоксиэтанамином в качестве аминного реагента, получали Пример 10. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1019.3455; найдено: 510.6809 и 510.6813 (М+2Н)
a
Пример 11: 1-{[бис(2-метоксиэтил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
56
61
7
10
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и 2-метокси-N-(2-метоксиэтил)этанамином в качестве аминного реагента, получали Пример 11. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1077.3873; найдено: 539.7029 и 539.7017 (М+2Н)
a
Пример 12: 1-{[(2-метокси-2-оксоэтил)(метил)карбамоил]окси}этил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
54
55
7
10
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 12 и гидрохлоридом метил 2-(метиламино)ацетата в качестве аминного реагента, применяя 2.15 экв. пиридина на Стадии А, получали Пример 12. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1047.3403; найдено: 524.6782 и 524.6781 (М+2Н)
a
Пример 13: (фосфоноокси)метил (2R)-2-{[(5S)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено [2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
2
3
2
4
700 мг соединения Синтеза 12 (0.8 ммоль), 233 мг ди-трет-бутил хлорметилфосфата (0.9 ммоль), 240 мг йодида натрия (1.6 ммоль) и 521 мг CsCO (1.6 ммоль) растворяли в 8 мл ДМФА и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота до тех пор, пока не наблюдали отсутствия дальнейшего превращения. Смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле, используя ДХМ и МеОН в качестве элюентов с получением ди-трет-бутилового сложноэфирного промежуточного соединения.
48
47
6
10
160 мг сложного ди-трет-бутилового эфира (0.15 ммоль) растворяли в 8 мл ДХМ и охлаждали на бане с ледяной водой. К смеси медленно добавляли 4 мл ТФУ. После добавления ТФУ смесь перемешивали в течение еще 15 минут и затем концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в форме соли. Осуществление препаративной ВЭЖХ с использованием раствора муравьиной кислоты и ACN с последующей лиофилизацией приводило к Примеру 13 в виде белого твердого вещества. МСВР: рассчитано для CHClFNOPS: 984.2485; найдено: 493.1338 (М+2Н)
Пример 14: 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 14 и этанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 14.
Пример 15: 1-[(этоксикарбонил)окси]этил (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
53
53
2
6
9
2+
Используя Общую Методику I с соединением Синтеза 13 и этанолом в качестве подходящего спирта, получали Пример 15. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1038.2955; найдено: 520.1543 и 520.1549 (М+2Н)
Пример 16: 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[5-{2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]оксн}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 14 и гидрохлоридом диметиламина в качестве аминного реагента, применяя 2.15 экв. пиридина на Стадии А, получали Пример 16.
Пример 17: 1-[(диметилкарбамоил)окси]этил (2R)-2-{[5-{3,5-дихлор-2,6-диметил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропаноат
53
54
2
7
8
2+
Используя Общую Методику II с соединением Синтеза 13 и гидрохлоридом диметиламина в качестве аминного реагента, применяя 2.15 экв. пиридина на Стадии А, получали Пример 17. МСВР: рассчитано для CHClFNOS: 1037.3115; найдено: 519.6616 и 519.6632 (М+2Н)
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ПРИМЕР А: Исследование ингибирования Mcl-1 с использованием методики поляризации флуоресценции

Относительный потенциал связывания каждого соединения определяли с помощью поляризации флуоресценции (FP). Метод включает использование меченного флуоресцеином лиганда (флуоресцеин-βAla-Ahx-A-REIGAQLRRMADDLNAQY-OH; мол. масса 2.765), который связывается с Mcl-1 белком (при условии, что Mcl-1 соответствует UniProtKB первичному номеру доступа: Q07820), что приводит к повышенный анизотропии, измеренной в единицах миллиполяризации (mP) с использованием ридера. Добавление соединения, которое конкурентно связывается с тем же самым сайтом в качестве лиганда, приводит к большей доли несвязанного лиганда в системе, определенной уменьшением единиц mP.
В ДМСО приготовляли 11-точечные серийные разведения каждого соединения и 2 мкл переносили в плоскодонный 384-луночный планшет с низкой связываемостью (конечная концентрация ДМСО 5%). Затем добавляли 38 мкл буфера (10 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота [HEPES], 150 мМ NaCl, 0.05% Tween 20, рН 7.4), содержащего меченный флуоресцеином лиганд (конечная концентрация 1 нМ) и Mcl-1 белок (конечная концентрация 5 нМ).
50
Аналитические планшеты инкубировали в течение ~2 часов при комнатной температуре перед тем, как измеряли FP на ридере Biomek Synergy2 (возбуждение 528 нм, испускание 640 нм, отсечение 510 нм) и рассчитывали единицы mP. Связывание возрастающих доз тестируемого соединения выражали в виде снижения mP в процентах по сравнению с окном, установленным между контролями ‘только 5% ДМСО’ и ‘100%-ное ингибирование’. Выполняли построение 11-точечных кривых зависимости доза-эффект с помощью программного обеспечения XL-Fit с использованием 4-параметрической логистической модели (сигмоидальная модель зависимости доза-эффект), и определяли ингибирующие концентрации, которые давали 50%-ное снижение mP (IC). Результаты представлены в Таблице 1 ниже.
Результаты показывают, что соединения изобретения ингибируют взаимодействие между Mcl-1 белком и флуоресцентным пептидом, описанным выше.
ПРИМЕР В: In vitro цитотоксичность
Исследования цитотоксичности осуществляли на опухолевой линии Н929 множественной миеломы.
Клетки распределяли на микропланшетах и подвергали действию тестируемых соединений в течение 48 часов. Жизнеспособность клеток затем определяли количественно с помощью колориметрического анализа, микрокультурального исследования на основе тетразолия (Cancer Res., 1987, 47, 939-942).
50
Результаты выражены в значениях IC (концентрация соединения, которая ингибирует жизнеспособность клеток на 50%) и представлены в Таблице 1 ниже.
Результаты показывают, что соединения изобретения являются цитотоксическими.
НО: не определено
ПРИМЕР С: Количественное in vivo определение расщепленной формы PARP
Способность соединений изобретения индуцировать апоптоз оценивали путем измерения уровней расщепленной PARP на ксенотрансплантатной модели множественной миеломы с использованием клеток АМО-1.
7
1.10 клеток АМО-1 пересаживали подкожно иммуносупрессивным мышам (штамм SCID). Через 12-14 дней после пересадки, животных лечили внутривенным или пероральным путем различными соединениями. После лечения, опухолевые массы извлекали и лизировали, и расщепленную форму PARP в лизатах опухолей определяли количественно.
Количественную оценку проводили с использованием исследования "Meso Scale Discovery (MSD) ELISA platform", которое предназначено для специфического анализа на расщепленную форму PARP. Оценку выражали в виде фактора активации, который равняется соотношению между количеством расщепленной PARP у получающих лечение мышей и количеством расщепленной PARP у контрольных мышей.
Результаты показывают, что соединения изобретения способны in vivo индуцировать апоптоз в опухолевых клетках АМО-1.
ПРИМЕР D: Противоопухолевая активность in vivo
Противоопухолевую активность соединений изобретения оценивали на ксенотрансплантатной модели множественной миеломы с использованием клеток АМО-1.
7
1×10 клеток АМО-1 пересаживали подкожно иммуносупрессивным мышам (штамм SCID).
3
Через 6-8 дней после пересадки, когда опухолевая масса достигла приблизительно 150 мм, мышей лечили различными соединениями согласно ежедневного плана (лечение в течение 5 дней). Опухолевую массу измеряли два раза в неделю с самого начала лечения.
Полученные результаты с использованием соотношения ΔТ/С (т.е. квалификационного параметра активности продукта, который определяют как отношение объем опухоли в группе, получающей лечение / объем опухоли в контрольной группе, не получающей лечения) показывают, что соединения изобретения индуцируют значительную регрессию опухоли в период лечения.
ПРИМЕР Е: Фармацевтическая композиция: Таблетки
Соединение, выбранное из Примеров 1-17 и соединений Синтезов 13 и 14 из расчета на 1000 таблеток, содержащих его в дозировке 5 мг
5 г
Пшеничный крахмал
20 г
Маисовый крахмал
20 г
Лактоза
30 г
Стеарат магния
2 г
Силикагель
1 г
Гидроксипропилцеллюлоза
2 г