Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты

1. Способ получения активированного капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, 22F или 33F, включающий следующие стадии:
(а) взаимодействие выделенного капсульного полисахарида серотипа 10А, 22F или 33F с окислителем; и
(б) гашение реакции окисления путем добавления гасящего агента с получением активированного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, 22F или 33F.
2. Способ по п. 1, где концентрация полисахарида серотипа 10А, 22F или 33F на стадии (а) составляет от 0,5 до 5 мг/мл.
3. Способ по п. 1, где указанный полисахарид взаимодействует с 0,01-10, 0,05-5, 0,1-1, 0,5-1, 0,7-0,8, 0,01-0,2, 0,05-0,5, 0,05-0,2, 0,1-0,3 молярных эквивалентов окислителя на стадии (а).
4. Способ по п. 1, где окислитель представляет собой периодат или метапериодат натрия.
5. Способ п. 1, где температуру реакции на стадии (а) поддерживают от 1 до 10°C.
6. Способ по п. 1, где агент гашения представляет собой соединение формулы (II)
1
2
где каждый из R и R независимо выбран из Н, метила, этила, пропила или изопропила, или соединение выбрано из глицерина, этиленгликоля, пропан-1,2-диола, бутан-1,2-диола или бутан-2,3-диола.
7. Способ по п. 1, где реакцию окисления гасят путем добавления 0,1-10, 0,5-5, 0,5-3 или 0,5-2 молярных эквивалентов гасящего агента.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где температуру реакции на стадии (б) поддерживают от 1 до 10°C.
9. Активированный капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, полученный или получаемый способом по любому из пп. 1-8, где указанный полисахарид имеет молекулярную массу от 50 до 400, от 50 до 350, от 50 до 300, от 50 до 250, от 50 до 200, от 100 до 300, от 100 до 250 или от 100 до 200 кДа и/или имеет степень окисления от 5 до 20, от 5 до 15, от 8 до 14, от 8 до 12 или от 9 до 11.
10. Активированный капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 22F, полученный или получаемый способом по любому из пп. 1-8, где указанный полисахарид имеет молекулярную массу от 25 до 1000, от 100 до 1000, от 300 до 800, от 300 до 700, от 300 до 600, от 400 до 1000, от 400 до 800, от 400 до 700 или от 400 до 600 кДа, и/или имеет степень окисления от 10 до 25, от 10 до 20, от 12 до 20 или от 14 до 18, и/или содержит по меньшей мере 0,6 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F.
11. Активированный капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 33F, полученный или получаемый способом по любому из пп. 1-8, где указанный полисахарид имеет молекулярную массу от 50 до 1250, от 200 до 1200, от 500 до 1200, от 500 до 1000, от 700 до 1200, от 800 до 1200, от 800 до 1100, от 900 до 1200 или от 800 до 1000 кДа, и/или имеет степень окисления от 10 до 20, и/или содержит по меньшей мере 0,7 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 33F.
12. Способ получения иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, 22F или 33F, ковалентно связанный с белком-носителем, включающий следующие стадии:
(а) смешивание активированного полисахарида серотипа 10А, 22F или 33F, полученного или получаемого способом по любому из пп. 1-8, с белком-носителем; и
(б) взаимодействие смеси активированного полисахарида серотипа 10А, 22F или 33F и белка-носителя с восстановителем с образованием конъюгата полисахарид серотипа 10А, 22F или 33F:белок-носитель.
13. Способ по п. 12, дополнительно включающий стадию
(в) блокирования непрореагировавших альдегидов в конъюгате полисахарид серотипа 10А, 22F или 33F:белок-носитель.
14. Способ по п. 12, где стадии (а) и (б) выполняют в DMSO (диметилсульфоксид) или в водном растворе.
15. Способ по п. 12, где концентрация активированного полисахарида на стадии (б) составляет от 0,1 до 10 мг/мл, от 0,5 до 5 мг/мл или от 0,5 до 2 мг/мл.
16. Способ по п. 12, где исходное соотношение активированного полисахарида серотипа 10А, 22F или 33F к белку-носителю составляет от 5:1 до 0,1:1, от 2:1 до 0,1:1, от 2:1 до 1:1, от 1,5:1 до 1:1, от 0,1:1 до 1:1, от 0,3:1 до 1:1 или от 0,6:1 до 1,2:1.
17. Способ по п. 12, где на стадии (б) активированный полисахарид взаимодействует с 0,5-2,5 молярными эквивалентами цианоборгидрида натрия.
18. Способ по п. 12, дополнительно включающий стадию очистки конъюгата полисахарид:белок-носитель.
19. Иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, ковалентно связанный с белком-носителем, полученный или получаемый способом по любому из пп. 12-18, где указанный конъюгат имеет молекулярную массу от 500 до 15000; от 500 до 10000; от 2000 до 10000; или от 3000 до 8000 кДа, и/или
где указанный конъюгат содержит менее чем примерно 20% свободного полисахарида серотипа 10А по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 10А, и/или
где отношение полисахарида серотипа 10А к белку-носителю в конъюгате составляет от 0,5 до 3, и/или
где по меньшей мере 40% указанного иммуногенного конъюгата имеет значение Kd (константа диссоциации) ниже или равное 0,3 на колонке CL-4B, и/или
где степень конъюгации указанного иммуногенного конъюгата составляет от 2 до 15, от 2 до 13, от 2 до 10, от 2 до 8, от 2 до 6, от 2 до 5, от 2 до 4, от 3 до 15, от 3 до 13, от 3 до 10, от 3 до 8, от 3 до 6, от 3 до 5, от 3 до 4, от 5 до 15, от 5 до 10, от 8 до 15, от 8 до 12, от 10 до 15 или от 10 до 12.
20. Иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 22F, ковалентно связанный с белком-носителем, полученный или получаемый способом по любому из пп. 12-18, где указанный конъюгат содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F, и/или
где соотношение мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F в иммуногеном конъюгате к мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F в активированном полисахариде составляет по меньшей мере 0,7, и/или
где указанный конъюгат имеет молекулярную массу от 400 до 15000; от 500 до 10000; от 2000 до 10000 кДа; от 3000 до 8000 кДа; или от 3000 до 5000 кДа, и/или
где указанный конъюгат содержит менее чем примерно 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20 или 15% свободного полисахарида серотипа 22F по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 22F, и/или
где отношение полисахарида серотипа 22F к белку-носителю в конъюгате составляет от 0,5 до 2, и/или
где по меньшей мере 40% указанного иммуногенного конъюгата имеет значение Kd, которое ниже или равно 0,3 на колонке CL-4B, и/или
где степень конъюгации указанного иммуногенного конъюгата составляет от 2 до 15, от 2 до 13, от 2 до 10, от 2 до 8, от 2 до 6, от 2 до 5, от 2 до 4, от 3 до 15, от 3 до 13, от 3 до 10, от 3 до 8, от 3 до 6, от 3 до 5, от 3 до 4, от 4 до 7, от 5 до 15, от 5 до 10, от 8 до 15, от 8 до 12, от 10 до 15 или от 10 до 12.
21. Иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 33F, ковалентно связанный с белком-носителем, полученный или получаемый способом по любому из пп. 12-18,
где указанный конъюгат содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 33F, и/или
где соотношение мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 33F в иммуногенном конъюгате к мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 33F в активированном полисахариде составляет по меньшей мере 0,7, и/или
где указанный конъюгат имеет молекулярную массу от 500 до 30000; от 500 до 25000; от 500 до 20000; от 500 до 15000; от 500 до 10000; от 1000 до 10000; от 1000 до 8000; от 1000 до 5000; от 2000 до 10000 кДа; от 2000 до 8000; или от 2000 до 5000 кДа, и/или
где указанный конъюгат содержит менее чем примерно 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20 или 15% свободного полисахарида серотипа 33F по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 33F, и/или
где указанный конъюгат содержит менее чем примерно 20% свободного полисахарида серотипа 33F по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 33F, и/или
где отношение полисахарида серотипа 33F к белку-носителю в конъюгате составляет от 0,5 до 2, и/или
где по меньшей мере 40% указанного иммуногенного конъюгата имеет значение Kd, ниже или равное 0,3 на колонке CL-4B, и/или
где степень конъюгации указанного иммуногенного конъюгата составляет от 2 до 15, от 2 до 13, от 2 до 10, от 2 до 8, от 2 до 6, от 2 до 5, от 2 до 4, от 3 до 15, от 3 до 13, от 3 до 10, от 3 до 8, от 3 до 6, от 3 до 5, от 3 до 4, от 5 до 15, от 5 до 10, от 8 до 15, от 8 до 12, от 10 до 15 или от 10 до 12.
197
22. Иммуногенный конъюгат по любому из пп. 19-21, где белок-носитель представляет собой CRM.
197
23. Способ по п. 12, где белок-носитель представляет собой CRM.
24. Способ по любому из пп. 12-18 или 23, который дополнительно включает стадию приготовления конъюгата в поливалентной вакцине.
25. Иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат по любому из 19-22 и физиологически приемлемый носитель.
26. Иммуногенная композиция по п. 25, дополнительно содержащая адъювант.
27. Способ лечения или предупреждения инфекции Streptococcus pneumoniae, заболевания или состояния, ассоциированного с Streptococcus pneumoniae серотипа 10А, 22F или 33F, у субъекта, включающий стадию введения терапевтически или профилактически эффективного количества иммуногенной композиции по любому из пп. 25 или 26.