КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, СВЯЗАННЫЕ СО СКОНСТРУИРОВАННЫМИ КОНСТРУКЦИЯМИ НА ОСНОВЕ Fc-АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ДОМЕНА, НАЦЕЛЕННЫМИ НА CTLA-4

1. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая домен, связывающий CTLA-4, и первый Fc-домен, присоединенный ко второму Fc-домену посредством линкера, где каждый из первого и второго Fc-доменов содержит либо модуль селективности, обеспечивающий гетеродимеризацию, либо модуль селективности, обеспечивающий гомодимеризацию.
2. Полипептид, содержащий домен, связывающий CTLA; линкер; первый мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; второй линкер; второй мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; необязательный третий линкер и необязательный третий мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен, где по меньшей мере два мономера Fc-домена содержат либо модуль селективности, обеспечивающий гетеродимеризацию, либо модуль селективности, обеспечивающий гомодимеризацию.
3. Полипептид, содержащий домен, связывающий CTLA-4; линкер; первый мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; второй линкер; второй мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; необязательный третий линкер и необязательный третий мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен,
где по меньшей мере один мономер Fc-домена содержит одну, две или три мутации, предусматривающие аминокислотную замену, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
4. Полипептид по п. 3, где второй линкер и необязательный третий линкер независимо состоят из 4-30, 4-20, 8-30, 8-20, 12-20 или 12-30 остатков глицина.
5. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена по п. 1, где конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена содержит:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) линкер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена; и
d) антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду, второму полипептиду или третьему полипептиду;
при этом первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена.
6. Способ лечения рака, включающий введение Fc-антигенсвязывающей конструкции по любому из предыдущих пунктов, где рак выбран из группы, состоящей из меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого, почечноклеточной карциномы, рака головы и шеи, мелкоклеточной карциномы легкого, рака желудка, рака пищевода, мезотелиомы, уротелиального рака, глиобластомы, рака яичника, рака предстательной железы, высокозлокачественных новообразований центральной нервной системы, рака печени, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома и диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы.
7. Фармацевтическая композиция, содержащая Fc-антигенсвязывающую конструкцию по любому из предыдущих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.
8. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена;
iii) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) третий мономер Fc-домена,
ii) четвертый мономер Fc-домена,
iii) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий третий и четвертый мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий пятый мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий шестой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
f) шестой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и третий мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, второй и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, четвертый и шестой мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
9. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена;
iii) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) третий мономер Fc-домена,
ii) четвертый мономер Fc-домена,
iii) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий третий и четвертый мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий пятый мономер Fc-домена и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
d) четвертый полипептид, содержащий шестой мономер Fc-домена и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и третий мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, второй и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, четвертый и шестой мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
10. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена;
iii) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) третий мономер Fc-домена,
ii) четвертый мономер Fc-домена,
iii) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий третий и четвертый мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий пятый мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий шестой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
f) шестой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, третий и шестой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, второй и четвертый мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
11. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) третий мономер Fc-домена,
iv) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена; и
vi) линкер, соединяющий второй и третий мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) четвертый мономер Fc-домена,
ii) пятый мономер Fc-домена,
iii) шестой мономер Fc-домена,
iv) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий четвертый и пятый мономеры Fc-домена, и
vi) линкер, соединяющий пятый и шестой мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий седьмой мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий восьмой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий девятый мономер Fc-домена;
f) шестой полипептид, содержащий десятый мономер Fc-домена;
g) седьмой полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
h) восьмой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и седьмой мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, четвертый и восьмой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, второй и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, третий и девятый мономеры Fc-домена совместно образуют четвертый Fc-домен, шестой и десятый мономеры Fc-домена совместно образуют пятый Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
12. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) третий мономер Fc-домена,
iv) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена; и
vi) линкер, соединяющий второй и третий мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) четвертый мономер Fc-домена,
ii) пятый мономер Fc-домена,
iii) шестой мономер Fc-домена,
iv) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий четвертый и пятый мономеры Fc-домена, и
vi) линкер, соединяющий пятый и шестой мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий седьмой мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий восьмой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий девятый мономер Fc-домена и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
f) шестой полипептид, содержащий десятый мономер Fc-домена и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и седьмой мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, четвертый и восьмой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, второй и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, третий и девятый мономеры Fc-домена совместно образуют четвертый Fc-домен, шестой и десятый мономеры Fc-домена совместно образуют пятый Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
13. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) третий мономер Fc-домена,
iv) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена; и
vi) линкер, соединяющий второй и третий мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) четвертый мономер Fc-домена,
ii) пятый мономер Fc-домена,
iii) шестой мономер Fc-домена,
iv) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий четвертый и пятый мономеры Fc-домена, и
vi) линкер, соединяющий пятый и шестой мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий седьмой мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий восьмой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий девятый мономер Fc-домена;
f) шестой полипептид, содержащий десятый мономер Fc-домена;
g) седьмой полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
h) восьмой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и четвертый мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, второй и седьмой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, пятый и восьмой мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, третий и девятый мономеры Fc-домена совместно образуют четвертый Fc-домен, шестой и десятый мономеры Fc-домена совместно образуют пятый Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
14. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) третий мономер Fc-домена,
iv) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена; и
vi) линкер, соединяющий второй и третий мономеры Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий:
i) четвертый мономер Fc-домена,
ii) пятый мономер Fc-домена,
iii) шестой мономер Fc-домена,
iv) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи,
v) линкер, соединяющий четвертый и пятый мономеры Fc-домена, и
vi) линкер, соединяющий пятый и шестой мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий седьмой мономер Fc-домена;
d) четвертый полипептид, содержащий восьмой мономер Fc-домена;
e) пятый полипептид, содержащий девятый мономер Fc-домена и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
f) шестой полипептид, содержащий десятый мономер Fc-домена и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и четвертый мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, второй и седьмой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, пятый и восьмой мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, третий и девятый мономеры Fc-домена совместно образуют четвертый Fc-домен, шестой и десятый мономеры Fc-домена совместно образуют пятый Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
15. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена; и
b) второй полипептид, содержащий:
i) третий мономер Fc-домена,
ii) четвертый мономер Fc-домена,
iii) линкер, соединяющий третий и четвертый мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий пятый мономер Fc-домена и первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи; и
d) четвертый полипептид, содержащий шестой мономер Fc-домена и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи;
e) пятый полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
f) шестой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, третий и шестой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, второй и четвертый мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют первый Fab; и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи совместно образуют второй Fab.
16. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий:
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена,
iii) первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий первый и второй мономеры Fc-домена,
b) второй полипептид, содержащий:
i) третий мономер Fc-домена,
ii) четвертый мономер Fc-домена,
iii) второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи и
iv) линкер, соединяющий третий и четвертый мономеры Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий пятый мономер Fc-домена и первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи;
d) четвертый полипептид, содержащий шестой мономер Fc-домена и четвертый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
e) пятый полипептид, содержащий первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
f) шестой полипептид, содержащий второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
g) седьмой полипептид, содержащий третий домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи; и
h) восьмой полипептид, содержащий четвертый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи;
где первый и пятый мономеры Fc-домена совместно образуют первый Fc-домен, третий и шестой мономеры Fc-домена совместно образуют второй Fc-домен, второй и четвертый мономеры Fc-домена совместно образуют третий Fc-домен, первый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи и третий домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи совместно образуют первый Fab, второй домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи и четвертый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи совместно образуют второй Fab, третий домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи и первый домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи совместно образуют третий Fab; и четвертый домен, связывающий CTLA-4, легкой цепи и второй домен, связывающий CTLA-4, тяжелой цепи совместно образуют второй Fab.