ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ РЕПРЕССИИ OmpT МАЛОЙ РНК VrrA У РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ VIBRIO CHOLERAE

2014, Т. 4, № 1

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ РЕПРЕССИИ OmpT МАЛОЙ РНК VrrA У РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ VIBRIO CHOLERAE

А.В. Керманов12, Т.В. Шамова3, А.Б. Мазрухо1, Р.В. Писанов1

1 Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора

2Южный федеральный университет, г. Ростов-на-Дону 3Волгоградский государственный аграрный университет

У V. cholerae лабораторными методами обнаружены десятки типов молекул, относящихся к группе малых РНК-регуляторов. Неоднократно показано их участие в эффективном управлении экспрессией генов. Для малой РНК VrrA получены убедительные молекулярно-генетические доказательства подавления синтеза мембранных белков OmpA и OmpT.

Целью нашего исследования было выявление особенностей взаимодействия малой РНК VrrA и мишени — матричной РНК ompT штаммов V. cholerae с доступной геномной информацией. Эксперимент проводили in silico на 210 штаммах (N16961 рассматривали в качестве референтного), при этом оценивали свободную энергию гибридизации мишени с последовательностью малой РНК и участвующие в связывании позиции в последовательностях. Степень репрессии белка OmpT малой РНК VrrA принималась пропорциональной увеличению энергии гибридизации.

Результаты демонстрируют ожидаемое преобладании «референтной» или крайне близкой к ней энергии гибридизации VrrA с ompT. Тем не менее, у некоторых штаммов подавление ompT малой РНК VrrA усилено (штаммы RC385, CP1035 (8), LMA3984-4) или же ослаблено (штамм 1587). Усиление репрессии ompT при экспрессированной VrrA обеспечивается увеличением (по модулю) энергии образования дуплекса «малая РНК—мРНК» на 27%, а общей свободной энергии связывания — на 11%. Для штамма 1587 наблюдается уменьшение энергии связывания на 8%, причем участок связывания на мРНК расширен по направлению к 5'-концу, что, вероятно, еще более ослабляет удельную гибридизационную энергию для стандартного региона связывания. Недостаток сопроводительной информации затрудняет выявление функциональной связи между полученными результатами и другими биологическими особенностями штаммов. Дополнительные сведения о молекулярных механизмах, вовлеченных в регуляцию экспрессии мембранных белков, могут пролить свет на значение полученных отличий в гибриди-зационных энергиях ompT и VrrA для адаптивности штаммов холерного вибриона.

ИЗУЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ, ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ МКА К АНТИГЕНУ 200 kDa B. PSEUDOMALLEI 100 Е.Э. Ким, Т.В. Замарина ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора

На основе высокоактивных моноклональных иммуноглобулинов различной эпитопной направленности, взаимодействующих с гликопротеином капсулы возбудителя мелиоидоза с м.м. 200 kDa, были

получены экспериментальные образцы высокоактивных и специфичных диагностических препаратов для метода флуоресцирующих антител (МФА).

Для оценки спектра их специфической активности использовали мазки-препараты из взвесей 31 музейного штамма B. pseudomallei.

Установлено, что наибольшей активностью в отношении возбудителя мелиоидоза, сопоставимой с активностью моноклонального препарата сравнения, обладают иммуноглобулины флуоресцирующие моноклональные 5H11.

Специфичность всех экспериментальных образцов иммуноглобулинов флуоресцирующих моно-клональных оценивали по результатам окрашивания мазков-препаратов, приготовленных из взвесей гетерологичных микроорганизмов III—IV групп патогенности: B. thailandensis (5 штаммов), B. cepacia (5 штаммов), B. allicola, B. gladioli, B. marginata, P. putida (по одному штамму). Специфичность образцов была различной.

Оба препарата сравнения, приготовленные на основе поли- и моноклональных иммуноглобулинов, «узнавали» все штаммы B. thailandensis. В то время, как три из четырех вновь приготовленных препаратов (3C6, 5H11 и 6A11) проявили себя как специфичные диагностические средства, не взаимодействующие ни с одним из штаммов взятых в работу видов гетерологичных микроорганизмов. Только конъюгат 5C2 обладал перекрестной активностью в отношении одного штамма B. thailandensis и одного штамма B. cepacia. Наибольший интерес представляют данные об отсутствии кросс-реактивности МКА 3C6, 5H11, 6A11 в отношении B. thailandensis — буркхоль-дерии, наиболее близкой в антигеном отношении B. pseudomallei. Этот факт заслуживает внимания, так как по данным литературы подавляющее большинство экспериментальных препаратов и тест-систем, предназначенных для обнаружения возбудителя ме-лиоидоза, не позволяют дифференцировать эти два вида буркхольдерий.

Таким образом, получены доказательства того, что экспериментальные образцы конъюгатов мели-оидозных моноклональных 3C6, 5H11 и 6A11 по параметру специфичности превосходят применявшиеся в работе аналоги.

МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ ДЛЯ ВИДОВОЙ РАСШИФРОВКИ CANDIDA SPP. У ПАЦИЕНТОВ С ДИАРЕЙНЫМ СИНДРОМОМ И КЛИНИЧЕСКИМИ ПРОЯВЛЕНИЯМИ ДИСБИОЗА КИШЕЧНИКА

Н.С. Климович1, Е.А. Оришак2

1 ЗАО «Ситилаб», Санкт-Петербург

2 Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург

Известно, что грибы рода Candida могут транс-лоцироваться из кишечника и вследствие гематогенной диссеминации поражать различные органы, без специфической симптоматики, а иногда и без явной клинической картины, что приводит к несвоевременной постановке диагноза «кандидоз». Возрастает число случаев кандидозов, вызываемых не С. albicans. Многие виды не С. albicans обладают устойчивостью к антифунгальным препаратам или имеют тенденцию к быстрому формированию таковой в ходе лечения. Доказано, что данные виды способны вызывать инвазивный кандидоз у лиц,