СКОНСТРУИРОВАННЫЕ УСТОЙЧИВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ИЗ КЛАДЫ ФИТАЗ С ВЫСОКОЙ Tm И ИХ ФРАГМЕНТЫ

1. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент, обладающий фитазной активностью, характеризующийся по меньшей мере 82% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной под SEQ ID NO: 1.
2. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по п. 1, где аминокислотная последовательность сконструированного полипептида фитазы или его фрагмента имеет балл согласно скрытой марковской модели (HMM), составляющий по меньшей мере приблизительно 1200, как представлено в таблице 11 для полипептидов из клады фитаз с высокой Tm.
3. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент, являющийся сердцевинным доменом, характеризующийся по меньшей мере 78% идентичностью последовательности с аминокислотами в положениях 14-325, соответствующих аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1.
4. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по любому из пп. 1-3, где полипептид или фрагмент характеризуется выходом в корме при брикетировании, составляющим по меньшей мере приблизительно 50% при внесении методом внесения жидкой формы в смеситель (MLA) при 95°C в течение 30 секунд, при использовании стандартного теста выхода в корме при брикетировании, описанного в примере 5.
5. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по любому из пп. 1-4, где полипептид или фрагмент характеризуется соотношением показателей выхода в корме при брикетировании, составляющим по меньшей мере приблизительно 0,7 при внесении методом MLA при 95°C в течение 30 секунд по сравнению с внесением методом MLA при 80°C в течение 30 секунд, при использовании стандартного теста выхода в корме при брикетировании, описанного в примере 5.
6. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по любому из пп. 1-5, где указанный полипептид или его фрагмент характеризуется температурой Tm, составляющей по меньшей мере приблизительно 92,5°C, при использовании условий анализа методом дифференциальной сканирующей калориметрии, описанных в примере 3.
7. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по п. 6, где указанный полипептид или его фрагмент обладает удельной активностью, составляющей по меньшей мере приблизительно 100 ед/мг при pH 3,5, в условиях анализа, описанных в примере 3.
8. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по любому из пп. 1-2 или пп. 4-7, где указанный полипептид фитаза содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID:NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, и SEQ ID NO:64.
9. Сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент по любому из пп. 1-2 или пп. 4-7, где указанный полипептид фитаза содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86, и SEQ ID NO:87.
10. Корм для животных, кормовой продукт, композиция на основе кормовых добавок или премикс, содержащие сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 1-9, где сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент можно применять (i) в отдельности, или (ii) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, или (iii) с по меньшей мере одним другим ферментом, или (iv) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, и по меньшей мере одним другим ферментом, или (v) согласно любому из (i), (ii), (iii) или (iv) с дополнительным включением по меньшей мере одного другого компонента, представляющего собой кормовую добавку, и при этом сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент необязательно присутствует в количестве, составляющем по меньшей мере приблизительно 0,1 г/тонна корма.
11. Корм для животных, кормовой продукт, композиция на основе кормовых добавок или премикс, содержащие сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 6-9, где сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент можно применять (i) в отдельности, или (ii) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, или (iii) с по меньшей мере одним другим ферментом, или (iv) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, и по меньшей мере одним другим ферментом, или (v) согласно любому из (i), (ii), (iii) или (iv) с дополнительным включением по меньшей мере одного другого компонента, представляющего собой кормовую добавку, и при этом сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент необязательно присутствует в количестве, составляющем по меньшей мере приблизительно 0,1 г/тонна корма.
12. Рекомбинантная конструкция, содержащая регуляторную последовательность, функциональную в организме хозяина-продуцента, функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 1-9.
13. Рекомбинантная конструкция, содержащая регуляторную последовательность, функциональную в организме хозяина-продуцента, функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 6-9.
14. Рекомбинантная конструкция по п. 12, где хозяин-продуцент выбран из группы, состоящей из бактерий, грибов, дрожжей, растений и водорослей.
15. Рекомбинантная конструкция по п. 13, где хозяин-продуцент выбран из группы, состоящей из бактерий, грибов, дрожжей, растений и водорослей.
16. Способ получения сконструированного полипептида фитазы или его фрагмента, включающий:
(a) трансформацию хозяина-продуцента рекомбинантной конструкцией по п. 12 и
(b) культивирование хозяина-продуцента из стадии (а) в условиях, при которых продуцируется сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент.
17. Способ получения сконструированного полипептида фитазы или его фрагмента, включающий:
(a) трансформацию хозяина-продуцента рекомбинантной конструкцией по п. 13 и
(b) культивирование хозяина-продуцента из стадии (а) в условиях, при которых продуцируется сконструированный полипептид фитаза или его фрагмент.
18. Способ по п. 16 или 17, где сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент необязательно извлекают из хозяина-продуцента.
19. Надосадочная жидкость культуры, содержащая фитазу, полученная с помощью способа по п. 16 или 17.
20. Надосадочная жидкость культуры, содержащая фитазу, полученная с помощью способа по п. 18.
21. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 1-9.
22. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент, обладающий фитазной активностью, по любому из пп. 6-9.
23. Высушенная ферментная композиция для применения в корме для животных, содержащая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 1-9.
24. Высушенная ферментная композиция для применения в корме для животных, содержащая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 6-9.
25. Высушенная ферментная композиция по п. 23, где высушенная ферментная композиция представляет собой гранулированную композицию на основе кормовых добавок.
26. Высушенная ферментная композиция по п. 24, где высушенная ферментная композиция представляет собой гранулированную композицию на основе кормовых добавок.
27. Жидкая ферментная композиция для применения в корме для животных, содержащая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 1-9.
28. Жидкая ферментная композиция для применения в корме для животных, содержащая сконструированный полипептид фитазу или его фрагмент по любому из пп. 6-9.
29. Способ улучшения питательной ценности корма для животных, где сконструированную фитазу или ее фрагмент по любому из пп. 1-9 добавляют в корм для животных.
30. Способ улучшения питательной ценности корма для животных, где сконструированную фитазу или ее фрагмент по любому из пп. 6-9 добавляют в корм для животных.
31. Способ улучшения продуктивности животного по одному или более показателям, включающий введение животному эффективного количества сконструированного полипептида фитазы по любому из пп. 1-9 или корма для животных, кормового продукта, композиции на основе кормовых добавок или премикса по п. 10 или 11.
32. Способ по п. 31, где один или более показателей выбраны из группы, состоящей из увеличенной эффективности использования корма, увеличенного прироста веса, сниженного коэффициента конверсии корма, улучшенной усвояемости питательных веществ или энергии в корме, улучшенного удержания азота, улучшенной способности избегать отрицательных эффектов некротического энтерита и улучшенного иммунного ответа.
33. Способ по п. 31 или 32, где животное представляет собой моногастричное животное, выбранное из группы, состоящей из домашней свиньи и домашней птицы.
34. Способ по п. 33, где домашняя свинья выбрана из группы, состоящей из поросят, растущих свиней и свиноматок.
35. Способ по п. 33, где домашняя птица выбрана из группы, состоящей из индеек, уток, кур, цыплят-бройлеров, несушек, гусей, фазанов, перепелов и эму.
36. Способ по п. 31 или 32, где животное представляет собой жвачное животное, выбранное из группы, состоящей из крупного рогатого скота, молодых телят, коз, овец, жирафов, бизона, лося, вапити, яков, индийского буйвола, оленя, северного оленя, карибу, верблюдов, альпак, лам, антилопы, вилорога и нильгау.