Способ диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин
METHOD FOR DIAGNOSING THE SEVERITY OF CHRONIC PLACENTAL INSUFFICIENCY IN WOMEN SEROPOSITIVE FOR CYTOMEGALOVIRUS

Область применения: изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин.
Уровень техники
Плацентарная недостаточность - синдром, обусловленный морфофункциональными изменениями, возникающими в результате сложной компенсаторной реакции плаценты и плода в ответ на различные патологические состояния организма беременной женщины, в том числе острые или хронические инфекции [5, 6]. В настоящее время, разработаны различные системы оценки фетоплацентарного комплекса, включающие в себя неинвазивные методы ультразвуковой диагностики (УЗИ, УЗДГ, КТГ) [1], определение показателей фетоплацентарных гормонов (плацентарный лактоген, эстриол, кортизол и др.) и специфических белков беременности (хорионический гонадотропин и его β-субъединица, РАРР и др.) [4], морфологическое исследование плаценты [2, 7].
Прогностическая значимость данных способов диагностики плацентарной недостаточности показывает сильный разброс в показателях чувствительности и диагностической точности, что затрудняет выбор оптимальных методов диагностики, позволяющих более точно оценить наличие и степень тяжести плацентарной недостаточности для прогнозирования течения послеродового и раннего неонатального периода.
Указанные факторы могут быть устранены в заявляемом способе.
Техническим результатом является повышение точности диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин.
Заявляемый технический результат достигается тем, что у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин после родов проводят забор плодовой части плаценты, готовят гомогенат плаценты и иммуноферментным методом анализа определяют содержание прогестерона и белка теплового шока Hsp90 и при показателях прогестерона 140,34±4,52 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 104,71±3,06 нг/мл диагностируют компенсированную плацентарную недостаточность, при показателях прогестерона 97,30±3,46 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 161,26±2,91 нг/мл диагностируют субкомпенсированную плацентарную недостаточность, при показателях прогестерона 53,41±1,57 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 220,86±3,65 нг/мл диагностируют декомпенсированную плацентарную недостаточность.
Ранее совокупность указанных признаков в диагностике степени тяжести хронической плацентарной недостаточности инфекционного генеза не использовалась.
Согласно имеющимся представлениям, прогестерон принимает активное участие в регуляции процессов децидуолизации слизистой матки, формирования плаценты и маточно-плацентарного кровотока, тонуса матки [8, 9], что необходимо для сохранения беременности. Подавляющая часть эффектов прогестерона опосредуется его рецепторами, в составе которых находится белок теплового шока 90 [3]. Точное предназначение белка теплового шока Hsp90 в поддержании рецептора прогестерона в активном состоянии для связывания с лигандом остается предметом споров. Некоторые считают, что белок теплового шока 90 является основным регулятором связывания прогестерона с рецептором и его транслокации к ядру для формирования ответной реакции гормончувствительного фрагмента ДНК [3]. Вместе с тем данных об интеграции маркеров цитомегаловирусной инфекции у женщин с показателями прогестерона и белка теплового шока Hsp90 в гомогенате плаценты в диагностике степени тяжести плацентарной недостаточности нет.
Вышеизложенное явилось основанием к исследованию в гомогенате плаценты, взятой после родов у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин, показателей прогестерона и белка теплового шока Hsp90 для диагностики степени тяжести плацентарной недостаточности. Наши исследования позволили установить интегральные показатели прогестерона и белка теплового шока Hsp90 в гомогенате плаценты, при которых с точностью 90,9% диагностируют компенсированную, субкомпенсированную и декомпенсированную плацентарную недостаточность.
Способ осуществляют следующим образом:
У серопозитивных к цитомегаловирусу женщин проводят забор плодовой части плаценты после родов и готовят гомогенат плаценты. Для получения гомогената кусочки плаценты отмывают физиологическим раствором от клеток крови, перемешивая 15 мин на магнитной мешалке. Отмытые кусочки слегка подсушивали на фильтровальной бумаге, взвешивали и гомогенизировали до однородной массы. К полученному гомогенату добавляют физиологический раствор в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г - 1 мл физиологического раствора). Взвесь помещают в пластиковые пробирки Falcon и подвергают замораживанию при -20°С в течение суток. Затем гомогенат размораживают, центрифугируют при 4000 g при температуре +4°С. Надосадочную жидкость используют для иммуноферментных исследований.
Определение показателей прогестерона и белка теплового шока Hsp90 проводят методом иммуноферментного анализа с использованием стандартных тест-систем ВСМ Diagnostics (США). Учет реакции проводят на иммуноферментном анализаторе Stat Fax-2100 (США) согласно протоколам для постановки иммуноферментного анализа от фирмы-производителя.
При показателях в гомогенате плаценты у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин 140,34±4,52 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 104,71±3,06 нг/мл диагностируют компенсированную плацентарную недостаточность, при показателях прогестерона 97,30±3,46 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 161,26±2,91 нг/мл диагностируют субкомпенсированную плацентарную недостаточность, при показателях прогестерона 53,41±1,57 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 220,86±3,65 нг/мл диагностируют декомпенсированную плацентарную недостаточность.
Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:
Пример 1. Беременная М., 27 л., поступила в отделение патологии беременности городской клинической больницы г. Благовещенска с направительным (предварительным) диагнозом:
Диагноз: Угрожающие преждевременные роды при сроке 35 недель беременности.
При УЗИ выявлена хроническая плацентарная недостаточность задержка роста плода I степени, при допплерометрическом исследовании -нарушение гемодинамики IA степени.
Проводилось лечение угрозы преждевременных родов и хронической плацентарной недостаточности дигидропиридиновыми производными (нифедипин).
Роды через естественные родовые пути в срок 39 недель беременности. Без осложнений. Родилась живая доношенная девочка массой тела 3040 г, длиной тела 52 см, с оценкой по шкале Апгар на 1-й минуте - 8 баллов, на 5-й минуте - 8 баллов, без признаков морфофункциональной незрелости.
Произведен забор материала плодовой части плаценты. По заявленному способу в гомогенате плаценты показатели прогестерона составили 72,2 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 148,3 нг/мл, что соответствует компенсированной форме хронической плацентарной недостаточности.
Заключение гистологического исследования плаценты: плацента с инволютивно-дистрофическими изменениями, соответствующими сроку гестации.
В периоде ранней адаптации и все время пребывания в отделении новорожденных ребенок был в удовлетворительном состоянии. Послеродовой период у матери протекал без осложнений.
Пример 2. Беременная А., 26 лет, поступила в отделение патологии беременности ГАУЗ АО «Благовещенская городская клиническая больница» с предварительным диагнозом: Беременность 34 недели. Хроническая плацентарная недостаточность. Задержка роста плода 1 степени.
Акушерско-гинекологический анамнез осложнен двумя медицинскими абортами при сроке 9-10 недель беременности (за 2 года до настоящей беременности).
При УЗИ выявлена задержка роста плода I степени, при допплерометрическом исследовании установлено нарушение гемодинамики IБ степени.
Проводилось медикаментозное лечение, направленное на лечение синдрома задержки роста плода и плацентарных нарушений селективными бета2-адреностимуляторами.
Родоразрешилась через естественные родовые пути в срок 39 недель беременности. Без осложнений. Родился живой доношенный мальчик массой тела 2800 г, длиной тела 49 см, с оценкой по шкале Апгар на 1-й минуте - 8 баллов, на 5-й минуте - 8 баллов, с признаками морфофункциональной незрелости, соответствующей задержке роста плода I степени.
Произведен забор материала плодовой части плаценты. По заявленному способу в гомогенате плаценты показатели прогестерона составили 53,0 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 177,1 нг/мл, что соответствует субкомпенсированной форме хронической плацентарной недостаточности, характеризующейся неустойчивым состоянием функций фетоплацентарного комплекса.
Заключение гистологического исследования плаценты: хроническая плацентарная недостаточность с умеренными компенсаторно-приспособительными реакциями.
В периоде ранней адаптации и все время пребывания в отделении новорожденных ребенок был в удовлетворительном состоянии. Послеродовой период у матери протекал без осложнений.
Пример 3. Беременная Е., 35 лет, поступила в отделение патологии беременности ГАУЗ АО «Благовещенская городская клиническая больница» предварительным диагнозом: Угрожающие преждевременные роды при сроке 35 недель беременности. Хроническая плацентарная недостаточность. Хроническая гипоксия плода. Задержка роста плода II степени
При ультразвуковом исследовании выявлена задержка роста плода III степени, при допплерометрическом - нарушение гемодинамики II степени.
Родоразрешена в экстренном порядке путем операции кесарево сечение. Родился живой недоношенненный мальчик массой тела 1730 г, длиной тела 38 см, с оценкой по шкале Апгар на 1-й минуте - 4 баллов, на 5-й минуте - 5 баллов, с признаками выраженной морфофункциональной незрелости.
Произведен забор материала плодовой части плаценты. По заявленному способу в гомогенате плаценты показатели прогестерона составили 45,0 нмоль/л и белка теплового шока Hsp90 248 нг/мл, что соответствует декомпенсированной форме хронической плацентарной недостаточности, характеризующейся полным истощением функциональных резервов фетоплацентарного комплекса.
Заключение гистологического исследования плаценты: хроническая плацентарная недостаточность с отсутствием компенсаторно-приспособительных реакций.
Новорожденный ребенок был переведен на второй этап лечения с последующей выпиской в удовлетворительном состоянии. Послеродовой период у матери протекал без осложнений.
Данные примеры наглядно демонстрируют возможность более точной диагностики при применении заявленного способа степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин по сравнению с применяемыми стандартными методами оценки функционального состояния фетоплацентарного комплекса в период беременности и после родов.
Использование для оценки показателей прогестерона и белка теплового шока Hps90 в гомогенате плаценты расширяет диагностические возможности метода, повышает точность диагностики, расширяя диагностические возможности морфологических и гистологических оценочных параметров, характеризующих различные патогенетические звенья хронической плацентарной недостаточности, позволяет прогнозировать течение послеродового и раннего неонатального периода.
Для предлагаемого способа диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин (с ретроспективным сопоставлением с перинатальными исходами, результатами морфологического исследования плаценты) с позиций доказательной медицины были определены чувствительность, специфичность, точность, прогностическая ценность положительного и отрицательного результатов, которые соответственно составили 76,9%, 95,2%, 90,9%, 83,3%, 93,0%, что свидетельствует о высокой информативности и достоверности предлагаемого способа диагностики.
Положительный эффект предлагаемого способа диагностики заключается в принципиально новой возможности диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин благодаря оценке неиспользуемых ранее показателей прогестерона и белка теплового шока Hps90 в гомогенате плаценты.
Способ неинвазивен, безопасен и может быть доступен для современных учреждений родовспоможения.
На дату подачи заявки заявитель не обнаружил способа диагностики с заявленной совокупностью признаков, что соответствует критерию изобретения «новизна».
По результатам интегративного анализа совокупность признаков заявляемого способа диагностики обеспечивает ему новые свойства в виде повышения точности диагностики степени тяжести хронической плацентарной недостаточности у серопозитивных к цитомегаловирусу женщин, что обеспечивает соответствие заявляемого способа критерию «изобретательский уровень».
Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что заявляемый способ диагностики может быть успешно применен для подтверждения или уточнения признаков хронической плацентарной недостаточности различной степени тяжести для подбора тактики ведения послеродового и раннего неонатального периода.
Используемые источники
1. Кузнецов М.И., Ордынский В.Ф., Васильев А.Р. Анализ результатов 3-летнего применения шкалы определения плацентарной недостаточности и шкалы оценки реактивности сердечнососудистой системы плода // Ультразвуковая диагностика в акушерстве, гинекологии и педиатрии. - 2000. - №2. - С. 113-122.
2. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод: Руководство для врачей. - М: Медицина, 1999. - 448 с.
3. Смирнов А.В. Молекулярная биология прогестерона // Рос.хим. журнал им. Д.И. Менделеева. - 2005. - Т. XLIX, №1. - С. 64-74.
4. Стрижаков А.Н., Липатов И.С., Тезиков Ю.В. Плацентарная недостаточность: Патогенез. Прогнозирование. Диагностика. Профилактика. Акушерская тактика. - Самара: ООО «Офорт», 2014. -239 с.
5. Орджоникидзе Н.В., Тютюнник В.Л. Хроническая плацентарная недостаточность при бактериальной и/или вирусной инфекции // Акушерство и гинекология. - 1999. - №4. - С. 46-50.
6. Орджоникидзе Н.В. Современный алгоритм обследования женщин с вирусной и/или бактериальной инфекцией до и в период беременности // Акушерство и гинекология. - 2002. - №5. - С. 61-63.
7. Патоморфологическая характеристика отдельных звеньев системы мать-плацента-плод при преждевременных родах / Т.Ю. Пестрикова, Е.А. Юрасова, Т.М. Бутко и др. // Акушерство и гинекология. -2002.-№3. -С. 25-27.
8. Karteris Е., Zervou S., Pang Y., Dong J., Hillhouse E. Progesterone signaling in human myometrium through two novel membrane G protein - coupled receptors: potential role in functional progesterone withdrawal at term. Mol. Endocrinol. 2006;20:1519-1534.
9. da Fonseca E.B., Bittar R.E., Damiao R., Zugaib M. Prematurity prevention: the role of progesterone Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 2009;21 (2):142-147.