ЗАМЕЩЕННЫЕ ПИРАЗОЛОПИРИДИНЫ, КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ
SUBSTITUTED PYRAZOLOPYRIDINES, CONTAINING COMPOSITIONS, METHOD FOR MAKING AND APPLICATION

Настоящее изобретение относится к новым химическим соединениям, в частности к новым замещенным пиразолопиридинам, композициям, содержащим их, и их применению в качестве лекарственных средств.
Более предпочтительно и в первом аспекте изобретение относится к новым специфическим пиразолопиридинам, проявляющим противораковую активность посредством модуляции активности протеинов, в частности киназ.
До настоящего времени большинство имеющихся в продаже соединений, применяемых в химиотерапии, создает значительные проблемы в отношении вторичных явлений и переносимости больными. Такие явления могли бы быть ограничены в известной мере, если бы применяемые лекарственные средства действовали на раковые клетки селективно, исключая здоровые клетки. Одно из решений для ограничения нежелательных явлений при химиотерапии может, таким образом, состоять в применении лекарственных средств, действующих на метаболические пути или элементы, составляющие такие пути, которые были бы выражены в своем большинстве в раковых клетках и не были бы выражены или были бы выражены в малой степени в здоровых клетках.
Протеинкиназы представляют собой группу ферментов, которые катализируют фосфорилирование гидроксильных групп специфических остатков протеинов, таких как остатки тирозина, серина или треонина. Такое фосфорилирование может широко изменять функцию протеинов; таким образом, протеинкиназы играют важную роль в регулировании большого числа разнообразных клеточных процессов, включающих в себя, в частности, метаболизм, клеточную пролиферацию, клеточную дифференцировку, клеточную миграцию или выживаемость клеток. Среди различных клеточных функций, в которые вовлечена активность протеинкиназы, некоторые процессы представляют собой привлекательные цели для лечения раковых заболеваний, а также других болезней.
Таким образом, одна из целей настоящего изобретения состоит в предложении композиций, обладающих противораковой активностью, проявляемой, в частности, в воздействии на киназы. Среди киназ, в отношении которых исследуется модуляция активности, предпочтительными являются FAK, KDR и Tie2.
Такие соединения соответствуют следующей формуле (I):
Формула (I)
где
1) A и Ar независимо выбирают из группы, которую составляют: арил, гетероарил, замещенный арил, замещенный гетероарил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил;
2
2
2
2
2
2
2
2
2) L выбирают из группы, которую составляют: простая связь, CO, NH, CO-NH, NH-CO, NH-SO, NH-SO, SO-NH, NH-CH, CH-NH, CH-CO-NH, NH-CO-CH, NH-CH-CO, CO-CH-NH, NH-CO-NH, NH-CS-NH, NH-CO-O, O-CO-NH;
3) один из радикалов X, Y и Z выбирают из N и NO, а два других радикала Z, Y и X представляют собой C(R5) и C(R6);
2
2
2
2
2
4) R5 и R6 независимо выбирают из группы, которую составляют: H, галоген, R2, CN, O(R2), OC(O)(R2), OC(O)N(R2)(R3), OS(O)(R2), N(R2)(R3), N=C(R2)(R3), N(R2)C(O)(R3), N(R2)C(O)O(R3), N(R4)C(O)N(R2)(R3), N(R4)C(S)N(R2)(R3), N(R2)S(O)(R3), C(O)(R2), C(O)O(R2), C(O)N(R2)(R3), C(=N(R3))(R2), C(=N(OR3))(R2), S(R2), S(O)(R2), S(O)(R2), S(O)O(R2), S(O)N(R2)(R3); где каждый из R2, R3, R4 независимо выбирают из группы, которую составляют H, алкил, алкилен, алкинил, арил, гетероарил, циклоалкил, гетероциклил, замещенный алкил, замещенный алкилен, замещенный алкинил, замещенный арил, замещенный гетероарил, замещенный циклоалкил, замещенный гетероциклил, алкилен, замещенный алкилен, замещенный алкинил; где R2 и R3 могут быть связаны между собой для образования 4-8-членного цикла, содержащего от 1 до 3 гетероатомов, выбираемых из O, N и S.
В соединениях формулы (I) Ar-L-A представляет собой предпочтительно:
где каждый из X1, X2, X3 и X4 независимо выбирают из N и C-R11, причем R11 имеет такие же значения, как и R5, определенный ранее.
Ar-L-A представляет собой предпочтительно:
3
где X2 выбирают из N, C-CH, CF и CH.
2
3
2
Заместители R11, выбираемые из группы, которую составляют H, F, Cl, метил, NH, OCF и CONH, являются предпочтительными.
Предпочтительные заместители R5 и R6 независимо выбирают из H, галогена, OMe и метила.
R5 и R6 предпочтительно выбирают из H и F.
R5 и R6 представляют собой предпочтительно H.
2
Предпочтительные заместители L-A выбирают преимущественно из NH-CO-NH-A и NH-SO-A.
Особенно эффективную комбинацию L-A получают в том случае, когда L-A представляет собой NHCONH-A.
Соединения, соответствующие настоящему изобретению, предпочтительно содержат заместитель A, выбираемый из группы, которую составляют фенил, пиридил, пиримидил, тиенил, фурил, пирролил, оксазолил, тиазолил, изоксазолил, изотиазолил, пиразолил, имидазолил, индолил, индазолил, бензимидазолил, бензоксазолил и бензотиазолил, и замещенный при необходимости.
Более предпочтительно A выбирают из фенила, пиразолила и изоксазолила, замещенных при необходимости.
Заместитель A более предпочтительно содержит заместитель, выбираемый из первой группы, которую составляют (C1-C6)алкил, (C1-C6)алкилгалогенид, (C2-C6)алкилен, (C2-C6)алкинил, арила, галогена, гетероарил, O-(C1-C6)алкил, O-aрил, O-гетероарил, S-(C1-C6)алкил, S-aрил, S-гетероарил, причем каждый из них при необходимости содержит один или несколько заместителей, выбираемых из (C1-C3)алкила, галогена, O-(C1-C3)алкила.
3
2
2
3
Заместитель A предпочтительно содержит заместитель, выбираемый из второй группы, которую составляют F, Cl, Br, I, OH, SH, SOM, COOM, CN, NO, CON(R8)(R9), N(R8)CO(R9), (C1-C3)алкил-OH, (C1-C3)алкил-N(R8)(R9), (C1-C3)алкил-(R10), (C1-C3)алкил-COOH, N(R8)(R9); где R8 и R9 независимо выбирают из H, (C1-C3)алкила, (C1-C3)алкил-OH, (C1-C3)алкил-NH, (C1-C3)алкил-COOM, (C1-C3)алкил-SOM; где R8 и R9, когда они оба отличаются от H, могут быть связаны для образования 5-7-членного цикла, содержащего от 0 до 3 гетероатомов, выбираемых из O, N и S; где M представляет собой H или катион щелочного металла, выбираемый из Li, Na и K; и где R10 представляет собой H или замещенный при необходимости неароматический гетероцикл, содержащий от 2 до 7 атомов углерода и от 1 до 3 гетероатомов, выбираемых из N, O и S.
Особо предпочтительные заместители A выбирают из фенила и изоксазолила; причем упомянутые заместители A могут содержать в качестве заместителей галоген, (C1-C4)алкил, (C1-C3)алкилгалогенид, O-(C1-C4)алкил, S-(C1-C4)алкил, O-(C1-C4)алкилгалогенид и S-(C1-C4)алкилгалогенид. В случае, когда A является двузамещенным, два заместителя A могут образовывать 5-7-членный цикл, содержащий от 0 до 3 гетероатомов.
3
2
2
3
A предпочтительно содержит один или несколько заместителей, являющихся одинаковыми или различающимися, выбираемых независимо из группы, которую составляют F, Cl, Br, I, OH, SH, SOM, COOM, CN, NO, CON(R8)(R9), N(R8)CO(R9), (C1-C3)алкил-OH, (C1-C3)алкил-N(R8)(R9), (C1-C3)алкил-(R10), (C1-C3)алкил-COOH, N(R8)(R9), (C1-C6)алкил, (C2-C6)алкилен, (C2-C6)алкинил, арил, гетероарил, O-(C1-C6)алкил, O-aрил, O-гетероарил, S-(C1-C6)алкил, S-aрил, S-гетероарил, причем каждый из них при необходимости содержит один или несколько заместителей, выбираемых из (C1-C3)алкила, галогена, O-(C1-C3)алкила; где R8 и R9 независимо выбирают из H, (C1-C3)алкила, (C1-C3)алкил-OH, (C1-C3)алкил-NH, (C1-C3)алкил-COOM, (C1-C3)алкил-SOM; где R8 и R9, когда они оба отличаются от H, могут быть связаны для образования 5-7-членного цикла, содержащего от 0 до 3 гетероатомов, выбираемых из O, N и S; где M представляет собой H или катион щелочного металла, выбираемый из Li, Na и K; и где R10 представляет собой H или замещенный при необходимости неароматический гетероцикл, содержащий от 2 до 7 атомов углерода и от 1 до 3 гетероатомов, выбираемых из N, O и S.
По предпочтительному варианту воплощения A представляет собой преимущественно 2-фтор-5-трифторметилфенил или 2-метокси-5-трифторметилфенил.
В качестве соединений, соответствующих настоящему изобретению, могут быть выбраны:
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метилкарбониламино-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метилкарбониламино-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина;
3-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-метоксибензойная кислота;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-гидрокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трет-бутилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-трифторметил-4-метилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-этилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-1,3-бензодиоксол-5-илмочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метоксифенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-хлорфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этоксифенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-метилфенил)мочевина;
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид.
В качестве других соединений, соответствующих настоящему изобретению, могут быть выбраны:
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-{2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(фенил)мочевина;
1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метилкарбониламино-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевина;
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трет-бутилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-трифторметил-4-метилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-
(2,5-дифторфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метил-5-фторфенил]мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,4-диметокси-5-хлорфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-трифторметилсульфанилфенил)мочевина.
В качестве других соединений, соответствующих настоящему изобретению, могут быть выбраны:
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина;
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-с]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина;
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид.
Соединение, соответствующее настоящему изобретению, может находиться в форме:
нехиральной, или
рацемической, или
обогащенной одним из стереоизомеров, или
обогащенной одним из энантиомеров,
и при необходимости может быть переведено в форму соли, гидратировано и сольватировано.
Соединение, соответствующее настоящему изобретению, может быть использовано для получения лекарственного средства, являющегося полезным при лечении патологического состояния, в частности рака.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к лекарственному средству, содержащему соединение формулы (I) согласно первому аспекту или аддитивную соль такого соединения с фармацевтически приемлемой кислотой, или также гидрат или сольват соединения формулы (I).
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение согласно первому или второму аспекту в комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к применению продукта согласно одному из других аспектов изобретения в качестве агента, ингибирующего реакции, катализируемые киназой. Предпочтительными киназами являются FAK, KDR и Tie2.
Настоящее изобретение относится также к терапевтическим композициям, содержащим соединение по настоящему изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом, соответствующим выбранному способу введения. Фармацевтическая композиция может находиться в виде твердого вещества, жидкости или липосом.
Среди твердых композиций можно упомянуть порошки, желатиновые капсулы, таблетки. Среди форм для перорального введения можно также отметить твердые формы, защищенные в отношении кислой среды желудка. Применяемые носители для твердых форм представляют собой, в частности, минеральные носители, такие как фосфаты, карбонаты, или органические носители, такие как лактоза, целлюлозы, крахмал или полимеры. Жидкие формы представляют собой растворы, суспензии или дисперсии. Они содержат в качестве дисперсионного носителя как воду, так и органический растворитель (этанол, NMP или другие), или смеси поверхностно-активных агентов и растворителей, или комплексообразующих агентов и растворителей.
Жидкие формы применяются, предпочтительно, для инъекций, и это обстоятельство делает композицию приемлемой для такого применения.
Приемлемое введение путем инъекции включает в себя введение внутривенно, интраперитонеально, внутримышечно и подкожно, причем внутривенное введение является традиционно предпочтительным.
Вводимая доза соединений по настоящему изобретению устанавливается лечащим врачом в зависимости от пути введения больному и состояния последнего.
Соединения по настоящему изобретению могут вводиться отдельно или в смеси с другими противораковыми средствами. Среди возможных сочетаемых средств можно упомянуть:
алкилирующие агенты и, в частности, циклофосфамид, мелфалан, ифосфамид, хлорамбуцил, бусульфан, тиотепа, преднимустин, кармустин, ломустин, семустин, стептозотоцин, декарбазин, темозоломид, прокарбазин и гексаметилмеламин;
производные платины, такие как, в частности, цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин;
антибиотики, такие как, в частности, блеомицин, митомицин, дактиномицин;
антимикротубулярные агенты, такие как, в частности, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин, таксоиды (паклитаксел и доцетаксел);
антрациклины, такие как, в частности, доксорубицин, даунорубицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон, лосоксантрон;
ингибиторы топоизомераз I и II групп, такие как этопозид, тенипозид, амсакрин, иринотекан, топотекан и томудекс;
фторпиримидины, такие как 5-фторурацил, UFT, флоксуридин;
аналоги цитидина, такие как 5-азацитидин, цитарабин, гемцитабин, 6-меркаптомурин, 6-тиогуанин;
аналоги аденозина, такие как пентостатин, цитарабин или фосфат флударабина;
метотрексат и фолиевая кислота;
ферменты и иные соединения, такие как L-аспарагиназа, гидроксимочевина, транс-ретиновая кислота, сурамин, дексразоксан, амифостин, герцептин, а также эстрогенные и андрогенные гормоны;
антиваскулярные агенты, такие как производные комбретастатина или колхицина и их пролекарства.
Также возможно сочетать соединения по настоящему изобретению с лечением радиотерапией. Такое лечение может проводиться одновременно, раздельно или последовательно. Курс лечения адаптируется лечащим врачом в зависимости от состояния больного, подлежащего лечению.
Соединения по настоящему изобретению являются полезными в качестве агентов, ингибирующих реакции, катализируемые киназой. FAK, KDR и Tie2 являются киназами, в отношении которых соединения по настоящему изобретению могут быть в особенности полезными в качестве ингибиторов.
Причины, по которым выбраны такие киназы, приведены далее.
FAK
2
FAK представляет собой цитоплазматическую тирозинкиназу, играющую важную роль в трансдукции сигнала, передаваемого интегринами, группой гетеродимерных рецепторов клеточной адгезии. FAK и интегрины колокализованы в перимембранных структурах, называемых фокальные контакты. На многих клеточных типах было показано, что активация FAK, а также ее фосфорилирование по остаткам тирозина и, в частности, ее аутофосфорилирование по тирозину 397 зависели от связи интегринов с их внеклеточными лигандами и, таким образом, индуцировались при клеточной адгезии [Kornberg L., et al., J. Biol. Chem. 267(33): 23439-442. (1992)]. Аутофосфорилирование FAK по тирозину 397 предоставляет сайт связи для другой тирозинкиназы, Src, посредством ее домена SH2 [Schaller et al., Mol. Cell. Biol. 14:1680-1688. 1994; Xing et al., Mol. Cell. Biol. 5:413-421. 1994]. Src может при этом фосфорилировать FAK по тирозину 925, рекрутируя таким образом адаптирующий протеин Grb2 и индуцируя в некоторых клетках активацию пути Ras и MAP-киназы, вовлеченной в управление клеточной пролиферацией [Schlaepfer et al., Nature; 372:786-791. 1994; Schlaepfer et al., Prog. Biophy. Mol. Biol. 71:435-478. 1999; Schlaepfer and Hunter, J. Biol. Chem. 272:13189-13195. 1997]. Активация FAK может также индуцировать путь сигнализации jun-NH-концевой киназы (JNK) и вызывать прогрессию клеток к G1 фазе клеточного цикла [Oktay et al., J. Cell. Biol. 145:1461-1469. 1999]. Фосфатидилинозитол-3-OH-киназа (PI3-киназа) связывается также с FAK по тирозину 397, и это взаимодействие, возможно, является необходимым для активации PI3-киназ [Chen and Guan, Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 91: 10148-10152. 1994; Ling et al., J. Cell. Biochem. 73:533-544. 1999]. Комплекс FAK/Src фосфорилирует различные субстраты, такие как паксиллин и p130CAS в фибробластах [Vuori et al., Mol. Cell. Biol. 16: 2606-2613. 1996].
Результаты многочисленных исследований подкрепляют гипотезу о том, что ингибиторы FAK могли бы быть полезными при лечении рака. Исследованиями показывается, что FAK могла бы играть важную роль в пролиферации и/или выживаемости клеток in vitro. Например, некоторые авторы доказали, что в клетках CHO сверхэкспрессия p125FAK ведет к ускорению перехода от G1 к S, указывая, что p125FAK благоприятствует клеточной пролиферации [Zhao J.-H. et al., J. Cell Biol. 143:1997-2008. 1998]. Другими авторами было показано, что опухолевые клетки, обработанные антисмысловыми олигонуклеотидами FAK, утрачивают свою адгезию и входят в стадию апоптоза (Xu et al., Cell Growth Differ. 4:413-418. 1996). Также было доказано, что FAK способствует миграции клеток in vitro. Таким образом, фибробласты, проявляющие недостаточность в экспрессии FAK (мышь, "нокаутированная" по FAK), проявляют округленную морфологию, недостаточность клеточной миграции в ответ на хемотаксические сигналы, и такие дефекты подавляются реэкспрессией FAK [D.J. Sieg et al., J. Cell Science. 112:2677-91. 1999]. Сверхэкспрессия С-концевого домена FAK (FRNK) блокирует растягивание прилегающих клеток и уменьшает клеточную миграцию in vitro [Richardson A. and Parsons J.T., Nature. 380:538-540. 1996]. Сверхэкспрессия FAK в клетках CHO, COS или в клетках астроцитомы человека благоприятствует миграции клеток. Вовлечение FAK в стимулирование пролиферации и миграции клеток во многих типах клеток in vitro указывает на потенциальную роль FAK в неоплазических процессах. В недавнем исследовании было убедительно доказано увеличение пролиферации опухолевых клеток in vivo после индуцирования экспрессии FAK в клетках астроцитомы человека [Cary L.A. et al., J. Cell Sci. 109:1787-94. 1996; Wang D. et al., J. Cell Sci. 113:4221-4230. 2000]. Более того, иммуногистохимическими исследованиями биопсийных материалов человека было доказано, что сверхэкспрессия FAK имела место при раке простаты, молочной железы, щитовидной железы, толстой кишки, меланоме, раке головного мозга и легкого, причем уровень экспрессии FAK прямо коррелировался с типами опухолей, представлявших наиболее агрессивный фенотип [Weiner T.M. et al., Lancet. 342(8878):1024-1025. 1993; Owens et al., Cancer Research. 55:2752-2755. 1995; Maung K. et al., Oncogene. 18:6824-6828. 1999; Wang D. et al., J. Cell Sci. 113:4221-4230. 2000].
KDR
KDR (Kinase insert Domain Receptor (киназный рецептор со встроенным доменом)), также называемый VEGF-R2 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 (рецептор 2 васкулярного эндотелиального фактора роста)), экспрессируется только в эндотелиальных клетках. Такой рецептор фиксируется на факторе ангиогенного роста VEGF и служит, таким образом, медиатором трансдукционного сигнала путем активации своего внутриклеточного домена киназы. Прямое ингибирование активности киназы VEGF-R2 позволяет уменьшить феномен ангиогенеза в присутствии экзогенного VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor: васкулярного эндотелиального фактора роста) (Strawn et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p. 3540-3545). Такой процесс был доказан, в частности, с помощью мутантных VEGF-R2 (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p. 1615-1620). Рецептор VEGF-R2, кажется, не имеет никакой другой функции у взрослого человека, кроме связанной с ангиогенной активностью VEGF. Следовательно, селективный ингибитор активности киназы VEGF-R2 должен показывать низкую токсичность.
В дополнение к такой центральной роли в динамическом ангиогенном процессе полученные недавно результаты указывают на то, что экспрессия VEGF способствуют выживаемости опухолевых клеток после химио- и радиотерапии, подчеркивая потенциальный синергизм ингибиторов KDR с другими агентами (Lee et al., Cancer Research, 2000, vol. 60, p. 5565-5570).
Tie2
Tie-2 (TEK) представляет собой член группы рецепторов тирозинкиназы, специфичной к эндотелиальным клеткам. Tie2 является первым восприимчивым к активности тирозинкиназы рецептором, известным также как агонист (ангиопоэтин 1 или Ang1), который стимулирует аутофосфорилирование рецептора и клеточную сигнализацию [S. Davis et al., (1996) Cell 87, 1161-1169], и антагонист (ангиопоэтин 2 или Ang2) [P.C. Maisonpierre et al., (1997) Science 277, 55-6O]. Ангиопоэтин 1 может проявлять синергизм с VEGF в последних стадиях неоангиогенеза [Asahara T., Circ. Res. (1998) 233-240]. Испытания с нокаутом генов и трансгенные манипуляции экспрессии Tie2 или Ang1 проводят с животными, которые проявляют недостаточность васкуляризации [D.J. Dumont et al., (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909, и C. Suri, (1996) Cell 87, 1171-1180]. Связь Ang1 с его рецептором ведет к аутофосфорилированию домена киназы Tie2, которая является существенной для неоваскуляризации, а также для рекрутирования и взаимодействия сосудов с перицитами и гладкими мышечными клетками; такие явления способствуют созреванию и стабильности новообразованных сосудов [P.C. Maisonpierre et al., (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al., (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078, и Lin P., (1998) PNAS 95, 8829-8834, показали ингибирование роста и опухолевой васкуляризации, а также уменьшение метастазов в легком при инфицировании аденовирусами или инъекциях внеклеточного домена Tie-2 (Tek) в моделях ксенографов опухоли молочной железы и меланомы.
Ингибиторы Tie2 могут применяться в случаях, когда неоваскуляризация происходит несоответствующим образом (то есть при диабетической ретинопатии, хроническом воспалении, псориазе, саркоме Капоши, хронической неоваскуляризации, обусловленной макулярным вырождением, ревматоидном артрите, гемангиоме детского возраста и раковых заболеваниях).
Определения
Термин "галоген" относится к элементу, выбираемому из F, Cl, Br и I.
Термин "алкил" относится к линейному или разветвленному насыщенному углеводородному заместителю, содержащему от 1 до 12 атомов углерода. Заместители метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилэтил, пентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 1-этилбутил, 2-этилбутил, 3,3-диметилбутил, гептил, 1-этилпентил, октил, нонил, децил, ундецил и додецил представляют собой примеры алкильных заместителей.
Термин "алкилен" относится к линейному или разветвленному углеводородному заместителю, содержащему одну или несколько ненасыщенных двойных связей и от 2 до 12 атомов углерода. Заместители этенил, 1-метилэтенил, проп-1-енил, проп-2-енил, Z-1-метилпроп-1-енил, E-1-метилпроп-1-енил, Z-1,2-диметилпроп-1-енил, E-1,2-диметилпроп-1-енил, бут-1,3-диенил, 1-метилиденилпроп-2-енил, Z-2-метилбут-1,3-диенил, E-2-метилбут-1,3-диенил, 2-метил-1-метилиденилпроп-2-енил, ундец-1-енил и ундец-10-енил представляют собой примеры алкиленовых заместителей.
Термин "алкинил" относится к линейному или разветвленному углеводородному заместителю, содержащему по меньшей мере одну ненасыщенную тройную связь по двум вицинальным атомам углерода и от 2 до 12 атомов углерода. Заместители этинил, проп-1-инил, проп-2-инил и бут-1-инил представляют собой примеры алкинильных заместителей.
Термин "арил" относится к моно- или полициклическому ароматическому заместителю, содержащему от 6 до 14 атомов углерода. Заместители фенил, нафт-1-ил, нафт-2-ил, антрацен-9-ил, 1,2,3,4-тетрагидронафт-5-ил и 1,2,3,4-тетрагидронафт-6-ил представляют собой примеры арильных заместителей.
Термин "гетероарил" относится к моно- или полициклическому гетероароматическому заместителю, содержащему от 1 до 13 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов. Заместители пиррол-1-ил, пиррол-2-ил, пиррол-3-ил, фурил, тиенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, изоксазолил, изотиазолил, 1,2,4-триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, индолил, бензо[b]фурил, бензо[b]тиенил, индазолил, бензимидазолил, азаиндолил, хинолил, изохинолил, карбазолил и акридил представляют собой примеры гетероарильных заместителей.
Термин "гетероатом" относится в данном случае к по меньшей мере двухвалентному атому, отличающемуся от углерода. N, O, S и Se представляют собой примеры гетероатомов.
Термин "циклоалкил" относится к циклическому насыщенному или частично ненасыщенному углеводородному заместителю, содержащему от 3 до 12 атомов углерода. Заместители циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклопентадиенил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, бицикло[2.2.1]гептил, циклооктил, бицикло[2.2.2]октил, адамантил и пергидронафтил представляют собой примеры циклоалкильных заместителей.
Термин "гетероциклил" относится к циклическому насыщенному или частично ненасыщенному углеводородному заместителю, содержащему от 1 до 13 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов. Предпочтительно циклический насыщенный или частично ненасыщенный углеводородный заместитель является моноциклом и содержит 4 или 5 атомов углерода и от 1 до 3 гетероатомов.
2
2
2
2
3
3
3
2
Термин "замещенный" относится к одному или нескольким заместителям, отличающимся от H, таким, как, например, галоген, алкил, арил, гетероарил, циклоалкил, гетероциклил, алкилен, алкинил, OH, O-алкил, O-алкилен, O-арил, O-гетероарил, NH, NH-алкил, NH-арил, NH-гетероарил, N-алкил-алкил', SH, S-алкил, S-арил, S(O)H, S(O)-алкил, S(O)-арил, SOH, SO-алкил, SO-арил, CHO, C(O)-алкил, C(O)-арил, C(O)OH, C(O)O-алкил, C(O)O-арил, OC(O)-алкил, OC(O)-арил, C(O)NH, C(O)NH-алкил, C(O)NH-арил, NHCHO, NHC(O)-алкил, NHC(O)-арил, NH-циклоалкил, NH-гетероциклил, CONH-гетероциклил, CO-гетероарил, CO-гетероциклил, NHCO-гетероарил, NHCO-гетероциклил, NHCONH-алкил.
Настоящее изобретение относится также к способу получения соединений формулы (I).
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены, исходя из традиционных способов органической химии. Приведенная далее схема 1 представляет собой иллюстрацию к способу, использованному для получения по примеру 1, относящемуся к пиразоло[3,4-b]пиридинам. В этом качестве она не представляет собой ограничения пределов изобретения в том, что относится к способам получения соединений по настоящему изобретению.
Схема 1
Приведенная далее схема 2 представляет собой иллюстрацию к способу, использованному для получения по примерам, относящимся к пиразоло[4,3-c]пиридинам. В этом качестве она не представляет собой ограничения пределов изобретения в том, что относится к способам получения соединений по настоящему изобретению.
Схема 2
Схема 3
Способ получения пиразоло[3,4-c]пиридинов (неограничительный):
Приведенная далее схема 4 представляет собой иллюстрацию к способу, использованному для получения по примерам, относящимся к цепочкам производных боронатов.
Схема 4
Приведенная далее схема 5 представляет собой иллюстрацию к способу, использованному для получения 4-иод-1Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламина.
Схема 5
Приведенная далее схема 6 представляет собой иллюстрацию к способу, использованному для получения карбамидных производных 4-бром-1H-пиразоло[4,3-b]пиридин-3-иламина.
Схема 6
Приведенная далее схема 7 представляет собой иллюстрацию к альтернативному способу, использованному для получения по примерам, относящимся к пиразоло[4,3-c]пиридинам.
Схема 7
Приведенная далее схема 8 представляет собой иллюстрацию к альтернативному способу, использованному для получения пиразоло[3,4-c]пиридинов.
Схема 8
Специалисту в данной области техники понятно, что для осуществления способов по настоящему изобретению, описанных ранее, может оказаться необходимым введение групп, защищающих функциональные амино- карбокси- и спиртовую гидроксигруппы для того, чтобы избежать вторичных реакций. Такими группами являются группы, допускающие их удаление без затрагивания остальной части молекулы. В качестве примеров групп, защищающих аминогруппу, можно упомянуть трет-бутилкарбамат, который может быть восстановлен посредством трифторуксусной кислоты или иодтриметилсилана, ацетил, который может быть восстановлен в кислой среде (например, в соляной кислоте). В качестве групп, защищающих карбоксигруппу, можно упомянуть сложные эфиры (например, метоксиметиловый сложный эфир, бензиловый сложный эфир). В качестве групп, защищающих спиртовую гидроксигруппу, можно упомянуть сложные эфиры (например, бензоиловый сложный эфир), которые могут быть восстановлены в кислой среде или каталитическим гидрированием. Другие защитные группы, приемлемые для использования, описаны Т.W. GREENE et coll. в издании Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience.
Другим объектом настоящего изобретения являются соединения общей формулы (II):
где X, Y, Z имеют такие же значения, как и определенные ранее, а G представляет собой атом галогена, приемлемый в реакции сочетания Судзуки, в качестве промежуточных соединений для получения соединений общей формулы (I), таких как определено в п.1.
Другим объектом настоящего изобретения являются соединения общей формулы (III):
где
X, Y, Z имеют такие же значения, как и определенные ранее;
3
2
2
X представляет собой Ar-L-A, где Ar, L и A имеют такие же значения, как и определенные ранее, или Ar-L, где Ar имеет такие же значения, как и определенные ранее, а L представляет собой NH или NO;
1
2
2
2
X и X являются различными и независимо выбираются из CN, Cl, -NH-NH, -N(Boc)-NH(Boc), -N(Boc)-N(Boc), в качестве промежуточных соединений для получения соединений общей формулы (I), таких как определено в п.1.
Соединения формулы (I) могут быть выделены и очищены известными традиционными способами, например, перекристаллизацией, хроматографией или экстракцией.
Энантиомеры, диастереоизомеры соединений формулы (I) составляют в равной мере часть данного изобретения.
Соединения формулы (I), содержащие основный остаток, могут быть, при необходимости, превращены в аддитивные соли неорганических или органических кислот действием таких кислот в среде растворителя, например органического растворителя, такого, как спирт, кетон, простой эфир или хлорсодержащий растворитель.
Соединения формулы (I), содержащие кислотный остаток, могут быть, при необходимости, превращены в соли металлов или в аддитивные соли с азотсодержащими основаниями согласно известным способам. Такие соли могут быть получены действием оснований металлов (например, щелочных или щелочноземельных), таких, как аммиак, амин или соль амина, на соединение формулы (I) в растворителе. Образовавшуюся соль отделяют традиционными способами.
Такие соли также составляют часть настоящего изобретения.
Если соединение по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну свободную основную группу, то фармацевтически приемлемые соли могут быть получены взаимодействием между упомянутым соединением и неорганической или органической кислотой. Фармацевтически приемлемыми солями являются хлориды, нитраты, сульфаты, гидросульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, моногидрофосфаты, дигидрофосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, ацетаты, пропионаты, акрилаты, 4-гидроксибутираты, каприлаты, капронаты, капринаты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, глутараты, адипаты, пимелинаты, малеаты, фумараты, цитраты, тартраты, лактаты, фенилацетаты, манделаты, себацинаты, субераты, бензоаты, фталаты, метансульфонаты, п-толуолсульфонаты, пропансульфонаты, ксиленсульфонаты, салицилаты, циннаматы, глютаматы, аспартаты, глюкуронаты, галактуронаты.
Если соединение по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну свободную кислотную группу, то фармацевтически приемлемые соли могут быть получены взаимодействием между упомянутым соединением и неорганическим или органическим основанием. Фармацевтически приемлемыми основаниями являются гидроксиды катионов щелочных или щелочноземельных металлов, таких как Li, Na, K, Mg, Ca, щелочные аминосоединения, такие, как аммиак, аргинин, гистидин, пиперидин, морфолин, пиперазин, триэтиламин.
В настоящем изобретении описаны также следующие далее примеры, приведенные в качестве иллюстраций к настоящему изобретению.
Анализы ЖХ/МС производили на приборе Micromass модели LCT, связанном с прибором HP 1100. Содержание соединений измеряли с помощью диодно-матричного детектора HP G1315A в диапазоне волн 200-600 нм и детектора рассеяния света Sedex 65. Запись масс-спектров осуществляли в диапазоне от 180 до 800. Данные анализировали с использованием программы Micromass MassLynx. Разделение осуществляли на колонке Hypersil BDS C18, 3 мкм (50 Ч 4,6 мм), элюируя с линейным градиентом от 5 до 90% раствором ацетонитрила, содержащим 0,05% (об./об.) трифторуксусной кислоты (ТФУ), в воде, содержащей 0,05% (об./об.) ТФУ, в течение 3,5 мин при скорости подачи 1 мл/мин. Общее время анализа, включая время установления равновесия в колонке, составляет 7 мин.
+
Масс-спектры МС записывали в режиме электроспрея (ЭС) на приборе Platform II (Micromass). Описывали главные наблюдаемые ионы.
Температуры плавления измеряли в капилляре на приборе Mettler FP62 в диапазоне от 30 до 300°C при скорости подъема температуры 2°C в минуту.
Очистка способом ЖХ/МС
18
+
+
++
++
++
Продукты могут быть очищены способом ЖХ/МС с использованием системы Waters FractionsLynx, состоящей из насоса градиента Waters модели 600, насоса регенерации Waters модели 515, насоса разбавления Waters Reagent Manager, автоинжектора Waters модели 2700, двух клапанов Rheodyne модели LabPro, диодно-матричного детектора Waters модели 996, масс-спектрометра Waters модели ZMD и коллектора фракций Gilson модели 204. Система функционирует под управлением программой Waters FractionLynx. Разделение осуществляли попеременно на двух колонках Waters Symmetry (C, 5 мкм, 19 Ч 50 мм, номер по каталогу 186000210), причем пока одну колонку регенерировали смесью вода/ацетонитрил, 95/5 (об./об.), содержащей 0,07% (об./об.) трифторуксусной кислоты, другая колонка работала в режиме разделения. Элюирование колонок осуществляли с использованием линейного градиента от 5 до 95% раствора ацетонитрила, содержащего 0,07% (об./об.) трифторуксусной кислоты, в воде, содержащей 0,07% (об./об.) трифторуксусной кислоты, при скорости подачи 10 мл/мин. На выходе из разделяющей колонки одна тысячная часть выходящего потока отделяется посредством устройства LC Packing Accurate, разбавляется метиловым спиртом со скоростью подачи 0,5 мл/мин и направляется к детекторам из расчета 75% к диодно-матричному детектору, а оставшиеся 25% к масс-спектрометру. Остаток выходящего потока (999/1000) направляется к коллектору фракций, где поток удаляется до тех пор, пока масса ожидаемого продукта не детектируется программой FractionLynx. Молекулярные формулы ожидаемых продуктов вводятся в программу FractionLynx, которая осуществляет пуск системы сбора продукта, когда сигнал детектированной массы соответствует иону [M+H] и/или [M+Na]. В некоторых случаях, зависевших от результатов аналитической ЖХ/МС, когда детектировался интенсивный ион, соответствующий [M+2H], значение, соответствующее половине расчетной молекулярной массе (MW/2), также вводилось в программу FractionLynx. В этих условиях пуск системы сбора также происходил, когда детектировался сигнал массы иона [M+2H] и/или [M+Na+H]. Продукты собирались в тарированные стеклянные пробирки. После сбора растворители испаряли в центробежном испарителе Savant AES 2000 или Genevac HT8 и массы продуктов определяли взвешиванием пробирок после испарения растворителей.
Пример 1
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
2-Фтор-3-иодпиридин
К раствору 0,103 моль LDA в 200 мл ТГФ при -75°C прибавляют 10 г 2-фторпиридина в 50 мл ТГФ. Раствор желтого цвета перемешивают в течение 3 часов при -75°C, затем прибавляют 26,2 г иода в 80 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 часов при -75°C, затем при этой же температуре прибавляют 50 мл воды. Температуре дают повышаться, затем при 0°C прибавляют дополнительно 100 мл воды. Суспензию обесцвечивают прибавлением тиосульфата натрия. Смесь экстрагируют диэтиловым эфиром. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобный остаток очищают на диоксиде кремния Si60 (40-63 мкм) (циклогексан/диэтиловый эфир, 95:5). Полученный продукт растворяют в диэтиловом эфире и нерастворенное вещество бежевого цвета отделяют от жидкости. После сушки в вакууме получают 10,21 г белого порошка 2-фтор-3-иодпиридина.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 224 [MH+].
2-Фтор-4-иодникотинонитрил
К раствору 21,5 ммоль LDA в 20 мл ТГФ при -75°C прибавляют 4,8 г 2-фтор-3-иодпиридина в 20 мл ТГФ. Раствор желтого цвета перемешивают в течение 1 ч 10 мин при -75°C, затем при этой же температуре прибавляют 3,9 г паратолуолсульфонилцианида в 20 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при -75°C, затем при этой же температуре прибавляют 20 мл воды. Температуре дают повышаться, затем при 0°C прибавляют дополнительно 40 мл воды. Смесь экстрагируют диэтиловым эфиром. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученное смолоподобное вещество коричневого цвета очищают на диоксиде кремния Si60 (40-63 мкм) (циклогексан/диэтиловый эфир, 8:2). Получают одну фракцию 667 мг желтого порошка 2-фтор-4-иодникотинонитрила и другую фракцию 2,1 г светло-желтого порошка 2-фтор-3-иодизоникотинонитрила.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 249 [MH+].
2-Гидразино-4-иодникотинонитрил
К раствору 1,2 г 2-фтор-4-иодникотинонитрила в 20 мл MeOH при 20°C прибавляют 2,4 мл гидразингидрата. Суспензию желтого цвета перемешивают в течение 20 мин при 20°C, затем фильтруют. Выпавший осадок промывают метанолом с получением после сушки в вакууме 947 мг белого порошка 2-гидразино-4-иодникотинонитрила.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 261 [MH+].
Ди-трет-бутил-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилат и три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилат
2
2
К смеси 234 мг 2-гидразино-4-иодникотинонитрила, 27,5 мг N,N-диметиламинопиридина и 0,316 мл триэтиламина в 11 мл дихлорметана при 4°C прибавляют 492 мг ди-трет-бутилдикарбоната в 5 мл дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 4°C, затем температуре дают повышаться до 20°C и перемешивают еще в течение 5 ч. Прибавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобный остаток желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/метанол, сначала 99,5:0,5 затем 99:1) с получением 2 основных фракций: первая фракция - 110 мг желтого порошка три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата (масс-спектр (ЭС+): m/z = 561 [MH+]) и вторая фракция - 202 мг светло-желтого маслоподобного вещества, содержащего ди-трет-бутил-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилат. Упомянутое маслоподобное вещество желтого цвета повторно очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: циклогексан/этилацетат, сначала 95:5, затем 9:1) с получением 114 мг бежевого порошка ди-трет-бутил-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилата.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 461 [MH+].
Три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилат
2
К смеси 925 мг 2-гидразино-4-иодникотинонитрила, 109 мг N,N-диметиламинопиридина и 2,6 мл триэтиламина в 45 мл дихлорметана при 4°C прибавляют 3,9 г ди-трет-бутилдикарбоната (BocO) в 20 мл дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 4°C, затем температуре дают повышаться до 20°C. Прибавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом, затем сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобный остаток коричневого цвета очищают на диоксиде кремния Si60 (40-63 мкм) (дихлорметан/метанол, 98:2) с получением 1,2 г желтого порошка три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата.
пл
t = 138°C (прибор Кефлера).
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 561 [MH+].
Сочетание Судзуки (X = C) с производным ди-Boc
3
2
К раствору 110 мг ди-трет-бутил-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилата и 122 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины в 5,5 мл диоксана прибавляют 57 мг NaHCO в 1,7 мл воды. Затем прибавляют 26 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 100°C. Через 2,5 ч раствор светло-желтого цвета охлаждают до 20°C и прибавляют 10 мл этилацетата. Органический слой промывают 2 раза по 8 мл воды, затем 8 мл насыщенного раствора хлорида натрия. После сушки над сульфатом магния и концентрирования при пониженном давлении оставшееся маслоподобное вещество желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (циклогексан/этилацетат, 9:1). Получают 114 мг ди-трет-бутил-(3-циано-4-{4-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]фенил}пиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилата.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 631 [MH+].
Сочетание Судзуки (X = C) с производным три-Boc
3
2
К раствору 108 мг три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата и 98 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины в 4,5 мл диоксана прибавляют 45,4 мг NaHCO в 1,4 мл воды. Затем прибавляют 20,3 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 100°C. Через 2,5 ч раствор светло-желтого цвета охлаждают до 20°C и прибавляют 10 мл этилацетата. Органический слой промывают 2 раза по 8 мл воды, затем 8 мл насыщенного раствора хлорида натрия. После сушки над сульфатом магния и концентрирования при пониженном давлении оставшееся маслоподобное вещество желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (циклогексан/этилацетат, сначала 9:1, затем 7:3). Получают фракцию 86 мг три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-{4-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]фенил}пиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата и фракцию 31 мг ди-трет-бутил-(3-циано-4-{4-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]фенил}пиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилата.
Масс-спектр (ЭС+): m/z = 731 [MH+].
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина (исходя из производного ди-Boc)
2
К раствору 111 мг ди-трет-бутил-(3-циано-4-{4-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]фенил}пиридин-2-ил)гидразиндикарбоксилата в 4 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,3 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, и реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч. Затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении с получением твердого вещества оранжево-красного цвета. Полученный остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, от 95:5 до 90:10; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 56 мг бежевого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-{2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
-1
ИК-спектр (KBr): 3370; 3300; 1717; 1604; 1541; 1443; 1317; 1310; 1205; 1184; 1122; 1114; 1069 и 818 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,58 (с уширенный, 2H); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,41 (дм, J=9,0 Гц, 1H); 7,52 (т уширенный, J=9,0 Гц, 1H); 7,56 (д уширенный, J=8,5 Гц, 2H); 7,68 (д уширенный, J=8,5 Гц, 2H); 8,37 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,62 (дд уширенный, J=2,5 и 7,5 Гц, 1H); 9,13 (м растянутый, 1H); 9,57 (м растянутый, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
пл
t = 175°C с разложением (прибор Кефлера).
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина может быть получена аналогичным способом исходя из производного три-Boc, в соответствии с приведенной далее методикой.
2
К раствору 81 мг производного три-трет-бутил-N,N',N'-[3-циано-4-{4-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]фенил}пиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата в 3 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,2 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении с получением твердого вещества оранжево-красного цвета. Полученный остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 95:5, затем 90:10; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 27 мг бежевого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины.
Пример 2
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
Сочетание Судзуки (X = N)
3
2
К раствору 150 мг три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата и 136 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевины в 6,2 мл диоксана прибавляют 63 мг NaHCO в 1,9 мл воды. Затем прибавляют 29 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 100°C. Через 2,5 ч раствор желтого цвета охлаждают до 20°C и прибавляют 10 мл этилацетата. Органический слой промывают 2 раза по 8 мл воды, затем 8 мл насыщенного раствора хлорида натрия. После сушки над сульфатом магния и концентрирования при пониженном давлении оставшееся маслоподобное вещество желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, от 98:2 до 95:5; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 67 мг три-трет-бутил-N,N',N'-{3'-циано-6-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]-[3,4']бипиридинил-2'-ил}гидразинтрикарбоксилата (масс-спектр (ЭС+): m/z = 732
[MH+]) и 55 мг ди-трет-бутил-{3'-циано-6-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]-[3,4']бипиридинил-2'-ил}гидразиндикарбоксилата (масс-спектр (ЭС+): m/z = 632 [MH+]).
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
К раствору 55 мг ди-трет-бутил-{3'-циано-6-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]-[3,4']бипиридинил-2'-ил}гидразиндикарбоксилата в 2 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,15 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч.
Отдельно к раствору 67 мг производного три-трет-бутил-N,N',N'-{3'-циано-6-[3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)уреидо]-[3,4']бипиридинил-2'-ил}гидразинтрикарбоксилата в 3 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,16 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч.
2
Реакционные смеси красно-коричневого цвета объединяют и концентрируют при пониженном давлении с получением твердого вещества оранжево-красного цвета. Полученный остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, сначала от 95:5 до 90:10, затем 70:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают продукт, который растворяют в этилацетате и промывают водой для удаления трифторацетата аммония. После сушки над сульфатом магния и концентрирования при пониженном давлении получают 58 мг желто-бежевого порошка 1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)-пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
-1
ИК-спектр (KBr): 3209; 1708; 1610; 1571; 1441; 1376; 1302; 1250; 1168; 1119; 1071; 822 и 616 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,70 (с уширенный, 2H); 7,00 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,45 (дм, J=9,0 Гц, 1H); 7,55 (т уширенный, J=9,0 Гц, 1H); 7,65 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 8,06 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 8,41 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,54 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,67 (дд, J=2,5 и 7,5 Гц, 1H); 10,15 (с уширенный, 1H); 11,15 (м сильно растянутый, 1H); 12,35 (м растянутый, 1H).
пл
t = > 260°C (прибор Кефлера).
Пример 3
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ол
Смесь 1,2 г 2-гидрокси-4-метоксиникотинонитрила и 30 мл гидразингидрата выдерживают при 140°C в течение 18 ч в бомбе. Затем реакционную смесь выпаривают досуха. Остаток растворяют в этиловом эфире и образовавшуюся суспензию фильтруют. Получают 1,1 г 3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ола в виде твердого вещества серого цвета.
+
+o
пл
Масс-спектр: 150 = M ; t = 240°C с разложением (прибор Кефлера).
4-Бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламин
3
К 3,5 г POBr, расплавленного при 45°C, прибавляют 0,4 г 3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ола, затем суспензию выдерживают при 70°C в течение 4 ч. Дают охладиться и с соблюдением осторожности гидролизуют раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и затем концентрируют при пониженном давлении. Получают 0,33 г 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина в виде твердого вещества кремового цвета.
+
+o
пл
Масс-спектр: 212 = M; t = 230°C с разложением (прибор Кефлера).
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 53 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина в 6 мл диоксана прибавляют 127 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины, 60 мг бикарбоната натрия в 1,8 мл воды и 30 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают на бане при 100°C в течение 2 ч. Дают охладиться и затем прибавляют этилацетат. Смесь промывают водой. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобный остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, от 90:10 до 70:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 34 мг 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины в виде твердого вещества кремового цвета со следующими характеристиками:
+
+
Масс-спектр: 431 = MH
-1
ИК-спектр (KBr): 3354; 1717; 1605; 1542; 1442; 1339; 1313; 1181; 1119; 816 и 615 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,72 (с уширенный, 2H); 7,20 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,41 (м уширенный, 1H); 7,51 (т уширенный, J=9,5 Гц, 1H); 7,59-7,72 (м, 4H); 8,22 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,65 (д уширенный, J=7,5 Гц, 1H); 8,96 (с уширенный, 1H); 9,37 (с, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
Пример 4
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 106 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина в 10 мл диоксана прибавляют 252 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[5-[4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевины, 120 мг бикарбоната натрия в 3 мл воды и 60 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают на бане при 100°C в течение 2 ч. Дают охладиться, затем прибавляют этилацетат и смесь промывают водой. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобный остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, от 90:10 до 70:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 35 мг 1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины в виде твердого вещества желтого цвета со следующими характеристиками:
+
+
Масс-спектр: 432 = MH.
-1
ИК-спектр (KBr): 3404; 3224; 1693; 1609; 1572; 1441; 1340; 1300; 1246; 1119; 819 и 615 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,88 (с уширенный, 2H); 7,25 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,44 (м уширенный, 1H); 7,50-7,53 (м, 2H); 8,15 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 8,26 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,63 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,70 (д уширенный, J=7,5 Гц, 1H); 10,15 (с уширенный, 1H); 11,3 (м сильно растянутый, 1H); 12,2 (с уширенный, 1H).
Пример 5
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
1-(2-Метокси-4-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)мочевина
2
К раствору 1 г 2-метокси-4-(трифторметил)анилина и 128 мг 4-диметиламинопиридина в 150 мл тетрагидрофурана и 1,5 мл триэтиламина прибавляют при 20°C 1,28 г 2-(4-изоцианатофенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана. Через 4 ч реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в смеси этилацетата и воды. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Оставшееся маслоподобное вещество желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: циклогексан/этилацетат, 8:2). Получают порошок светло-желтого цвета, который растворяют в метаноле. Образуется нерастворимое вещество белого цвета, которое отделяют фильтрованием, затем фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении с получением 0,47 г светло-желтого порошка 1-(2-метокси-4-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины.
+
+
Масс-спектр: 437 = MH.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,30 (с, 12H); 3,99 (с, 3H); 7,22 (д, J=9 Гц, 1H); 7,34 (дд, J=9 и 1 Гц, 1H); 7,50 (д, J=9: 2H); 7,63 (д, J=9 Гц, 2H); 8,56 (мт: 2H); 9,58 (с, 1H).
Производные ди-Boc и три-Boc 1-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины
2
К раствору 0,27 г три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата в 14 мл диоксана при 20°C прибавляют 273 мг 1-(2-метокси-4-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины. К полученному раствору прибавляют раствор 114 мг бикарбоната натрия в 4 мл воды, затем прибавляют 51 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 100°C в течение 2,5 ч. Раствор светло-желтого цвета охлаждают, затем прибавляют этилацетат. Смесь промывают водой и затем насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученное смолоподобное вещество желто-оранжевого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: сначала циклогексан/этилацетат, 7:3, затем дихлорметан/раствор A, 9:1; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 0,33 г желтого порошка смеси производных ди-Boc и три-Boc 1-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины.
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 272 мг смеси производных ди-Boc и три-Boc 1-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины в 7,7 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,62 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола. Через 3 ч перемешивания смесь оранжево-красного цвета концентрируют досуха при пониженном давлении. Оставшееся маслоподобное вещество оранжево-красного цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор A, от 90:10 до 70:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают порошок желто-бежевого цвета, который растворяют в этилацетате. Раствор промывают водой. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении с получением 61 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
+
+
Масс-спектр: 443 = MH.
-1
ИК-спектр (KBr): 3380; 1706; 1675; 1600; 1539; 1314; 1269; 1134; 1117; 822 и 622 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 3,99 (с, 3H); 4,59 (с уширенный, 2H); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,22 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,34 (дд уширенный, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 7,55 (д уширенный, J=8,5 Гц, 2H); 7,66 (д уширенный, J=8,5 Гц, 2H); 8,37 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,56-8,61 (м, 2H); 9,66 (с, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
пл
t = > 260°C (прибор Кефлера).
Пример 6
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
1-(5-Бромпиридин-2-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
3,32 г 2-метокси-5-трифторметилфениламина в 30 мл тетрагидрофурана прибавляют по каплям к раствору 1,8 г трифосгена в 180 мл тетрагидрофурана при 0°C. Затем прибавляют 4,95 мл триэтиламина и реакционную смесь перемешивают при этой же температуре в течение 10 мин. Температуре дают повышаться до 20°C и перемешивают в течение 1 ч 15 мин. Затем по каплям прибавляют раствор 3 г 2-амино-5-бромпиридина в 30 мл ТГФ. Через 16 ч суспензию фильтруют, затем фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в смеси этилацетата и воды. Получают нерастворимый осадок белого цвета, который отфильтровывают, промывают этилацетатом и затем сушат в вакууме. Получают 3,3 г белого порошка 1-(5-бромпиридин-2-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины.
+
+
Масс-спектр: 390 = MH.
1-(2-Метокси-5-трифторметилфенил)-3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевина
К раствору 51 мг трициклогексилфосфина в 12 мл диоксана при 20°C прибавляют 30 мг бис-(дибензилиденацетон)палладия. Раствор коричнево-фиолетового цвета перемешивают в течение 30 мин, затем прибавляют 500 мг 1-(5-бромпиридин-2-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины и 190 мг ацетата калия. Суспензию нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч 15 мин, затем раствор красно-фиолетового цвета охлаждают до 20°C и концентрируют досуха при пониженном давлении. Получают остаток серо-зеленого цвета, который промывают смесью этилацетата и воды. Органический слой фильтруют и фильтрат желтого цвета концентрируют при пониженном давлении. Полученный твердый остаток растворяют в метаноле. Образуется осадок, который отфильтровывают и промывают метанолом и этилацетатом. Получают 244 мг светло-желтого порошка 1-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевины.
+
+o
Масс-спектр: 437 = M.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,32 (с, 12H); 4,03 (с, 3H); 7,25 (д, J=9,5 Гц, 1H); 7,34 (д уширенный, J=9 Гц, 1H); 7,39 (дд, J=9,5 и 1 Гц, 1H); 7,96 (дд, J=9 и 2 Гц, 1H); 8,52 (д, J=1 Гц, 1H); 8,63 (д, J=2 Гц, 1H); 10,20 (с, 1H); 11,50 (с уширенный: 1H).
Производные ди-Boc и три-Boc 1-(3'-циано-2'-гидразино[3,4']бипиридинил-6-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины
2
234 мг 1-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевины прибавляют при 20°C к раствору 0,3 г три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата в 16,5 мл диоксана. Затем прибавляют раствор 126 мг бикарбоната натрия в 4,5 мл воды и 57 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Полученную суспензию желтого цвета нагревают с обратным холодильником при 100°C в течение 2,5 ч. После охлаждения прибавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и затем насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Оставшееся смолоподобное вещество желто-оранжевого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: сначала циклогексан/этилацетат, 7:3, затем дихлорметан/раствор А, 95:5; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 265 мг смеси производных ди-Boc и три-Boc 1-(3'-циано-2'-гидразино[3,4']бипиридинил-6-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины в виде порошка желтого цвета.
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2
0,8 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, прибавляют при 20°C к раствору 242 мг смеси производных ди-Boc и три-Boc 1-(3'-циано-2'-гидразино[3,4']бипиридинил-6-ил)-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины в 7 мл дихлорметана. Через 2,5 ч перемешивания реакционную смесь оранжево-красного цвета концентрируют досуха при пониженном давлении. Оставшееся маслоподобное вещество оранжево-красного цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Å, SiO, 32-63 мкм (градиентный элюент: дихлорметан/раствор А, от 90:10 до 70:30; раствор А = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 130 мг желто-бежевого порошка 1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)-пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
+
+
Масс-спектр: 444=МН.
-1
ИК-спектр (KBr): 3420; 3219; 1684; 1613; 1586; 1438; 1303; 1271; 1247; 1136; 834 и 622 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,02 (с, 3Н); 4,72 (м сильно растянутый, 2Н); 7,01 (д, J=5,0 Гц, 1Н); 7,24 (д, J=8,5 Гц, 1Н); 7,37 (дд уширенный, J=2,0 и 8,5 Гц, 1Н); 7,48 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1Н); 8,03 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1Н); 8,41 (д, J=5,0 Гц, 1Н); 8,59 (д, J=2,5 Гц, 1Н); 8,64 (д, J=2,0 Гц, 1Н); 10,2 (с, 1Н); 11,5 (м сильно растянутый, 1Н); 12,35 (с уширенный, 1Н).
пл
t = >260°С (прибор Кефлера).
Пример 7
1-[4-(3-Амино-1Н-пиразоло[3,4-с]пиридин-4-ил)фенил)-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
1-[4-(5-хлор-4-цианопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
3
2
К раствору 346 мг 3,5-дихлоризоникотинонитрила и 959 мг 1-(2-фтор-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины в 24 мл диоксана прибавляют 462 мг NaHCO в 14,4 мл воды. Затем прибавляют 462 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч, затем оставляют стоять в течение ночи при 20°C. Далее прибавляют 20 мл воды и смесь экстрагируют 2 раза по 60 мл этилацетата. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Маслоподобное вещество коричневого цвета очищают на кассетной колонке Merck, 30 г SiO, 15-40 мкм (сначала дихлорметан, затем дихлорметан/метанол, 99:1). Получают 290 мг кристаллов желтого цвета 1-[4-(5-хлор-4-цианопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины.
+
+
Масс-спектр (ЭС): m/z = 435 [MH].
1
Спектр ЯМР H при 400 МГц на спектрометре BRUKER AVANCE DRX-400, химические сдвиги (δ, м.д.) - стандартный растворитель (ДМСО-d6) с химическим сдвигом 2,50 м.д. при температуре 303 K: 7,41 (м, 1H); 7,51 (дд, J=8,5 и 10,5 Гц, 1H); 7,68 (с уширенный, 4H); 8,62 (дд, J=2,0 и 7,0 Гц, 1H); 8,85 (с, 1H); 8,94 (с, 1H); 9,04 (м растянутый, 1H); 9,49 (м растянутый, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевина
2
4
К раствору 145 мг 1-[4-(5-хлор-4-цианопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины в 2 мл EtOH при 20°C прибавляют 0,05 мл гидразингидрата. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч 30 мин. Вследствие неполноты протекания реакции прибавляют 1 мл EtOH и 0,05 мл гидразингидрата и дополнительно нагревают с обратным холодильником в течение 18 ч 30 мин. Смеси дают охладиться до 20°C и концентрируют в токе азота. Остаток очищают хроматографированием на силикагеле: кассетная колонка Merck, 30 г SiO, 15-40 мкм (сначала дихлорметан; затем дихлорметан/метанол, 95:5; далее дихлорметан/метанол, 1:1; в конце дихлорметан/метанол/NHOH, 82:15:3). Получают неочищенное маслоподобное вещество бежевого цвета, которое снова хроматографируют в тех же самых условиях. Продукт все же остается загрязненным, и его очищают способом основной препаративной ВЭЖХ: условия: колонка: Nucleodur Gravity C18, 5 мкм (№ по каталогу Macherey Nagel: 762101; серия 4055902; партия 3044); скорость подачи: 20 мл/мин; детектирование при 254 нм (UV118, Gilson); градиентный элюент от 10 до 95% ацетонитрила в воде, содержащей формиат аммония, 10 мM, согласно следующему протоколу: (t (мин): ацетонитрил (%)): 0:10; 2:10; 25:95; 33:95; 34:10. Получают 19 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-трифторметилфенил)мочевины.
пл
t = 196°C (прибор Кефлера).
+
+
Масс-спектр (ЭС): m/z = 431 [MH].
1
Спектр ЯМР H при 400 МГц на спектрометре BRUKER AVANCE DRX-400, химические сдвиги (δ, м.д.) - стандартный растворитель (ДМСО-d6) с химическим сдвигом 2,50 м.д. при температуре 303 K: 4,61 (с, 2H); 7,40 (м, 1H); 7,50 (м, 3H); 7,66 (д уширенный, J=8,5 Гц, 2H); 7,94 (с, 1H); 8,63 (дд, J=2,0 и 7,0 Гц, 1H); 8,74 (с, 1H); 9,10 (м растянутый, 1H); 9,51 (с, 1H); 12,3 (м растянутый, 1H).
-1
ИК-спектр (KBr): 1610; 1531; 1443; 1340; 1314; 1265; 1195; 1166; 1118; 1069; 820 и 615 см.
Пример 8
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-фенилмочевина
Получение по схеме 2
1-Фенил-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевина
К раствору 490 мг 2-(4-изоцианатофенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2,-диоксаборолана и 203 мг триэтиламина в 5 мл тетрагидрофурана прибавляют 198 мг анилина. Раствор перемешивают в течение 12 часов при 20°C в атмосфере аргона. К реакционной смеси прибавляют 10 мл метанола. Затем перемешивают при 20°C в течение 15 минут. После концентрирования смеси при пониженном давлении получают 630 мг 1-фенил-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины со следующими характеристиками:
Масс-спектр: 339(+) = (M+H)(+); 337(-) = (M-H)(-).
ИК-спектр (KBr): 3332; 2976; 1656; 1593; 1543; 1400; 1361; 1143; 1092; 963; 860 и 655
-1
см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,29 (с, 12H); 6,98 (т уширенный, J=7,5 Гц, 1H); 7,28 (т уширенный, J=8,0 Гц, 2H); 7,41-7,49 (м, 4H); 7,59 (д уширенный, J=8,0 Гц, 2H); 8,70 (с, 1H); 8,82 (с, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-фенилмочевина
2
К раствору 65 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина, полученного по методике примера 3, в 3 мл диоксана прибавляют 155 мг 1-фенил-3-[4-(4,4,5,5,-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины, 72 мг гидрокарбоната натрия в 1 мл воды и 53 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Суспензию нагревают при 100°C в атмосфере аргона в течение 2 ч. После охлаждения реакционную смесь выливают в 50 мл воды и экстрагируют 3 раза этилацетатом. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении с получением 302 мг неочищенного продукта, который очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиент раствора A в дихлорметане от 5:95 до 30:70; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 23 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил]фенил]-3-фенилмочевины со следующими характеристиками:
Масс-спектр: 344(+) = M(+) (МС-ЭУ).
-1
ИК-спектр (KBr): 3388; 1672; 1601; 1528; 1498; 1442; 1313; 1233; 1180; 1045; 752 и 693 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 4,71 (с уширенный, 2H); 6,99 (т, J=7,5 Гц, 1H); 7,19 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,30 (т, J=7,5 Гц, 2H); 7,48 (д, J=7,5 Гц, 2H); 7,62 (м, 4H); 8,21 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,73 (с, 1H); 8,89 (с, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
пл
t = 188°C (прибор Кефлера).
Пример 9
1-[5-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 70 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина в 3 мл диоксана прибавляют 215 мг 1-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]мочевины (полученной по методике примера 6), 77 мг гидрокарбоната натрия в 1 мл воды и 38 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Суспензию нагревают при 80°C в атмосфере аргона в течение 2 ч. После охлаждения реакционную смесь выливают в 50 мл воды и смесь экстрагируют 3 раза смесью этилацетат/метанол, 90/10. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. 393 мг неочищенного продукта очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиент раствора A в дихлорметане от 5/95 до 30/70; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38/17/2). Получают 16 мг желтого порошка 1-[5-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 444(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3657; 3387; 3308; 3223; 2925; 1685; 1610; 1580; 1439; 1351; 1302; 1246; 1166; 1135; 1116; 1037; 807 и 542 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 4,02 (с, 3H); 4,89 (с уширенный, 2H); 7,21-7,28 (м, 2H); 7,38 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,46 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 8,12 (дд, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 8,27 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,63 (д, J=2,0 Гц, 1H); 8,69 (д, J=2,0 Гц, 1H); 10,15 (с, 1H); 11,65 (м растянутый, 1H); 12,2 (с уширенный, 1H).
пл
t = 228°C (прибор Кефлера).
Пример 10
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-с]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 50 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина в 3 мл диоксана прибавляют 122,8 мг 1-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины, 99,5 мг карбоната натрия в 1 мл воды и 54,24 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Суспензию нагревают при 80°C в атмосфере аргона в течение 22 часов. После охлаждения реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают 2 раза водой. Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. 438 мг неочищенного продукта очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиент раствора A в дихлорметане от 5/95 до 30/70; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак 38/17/2). Получают 32 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 443(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3326; 1691; 1605; 1542; 1447; 1314; 1270; 1217; 1120; 1024; 812 и 623 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 3,99 (с, 3H); 4,73 (с уширенный, 2H); 7,19 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,22 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,33 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 7,64 (м, 4H); 8,21 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,59 (м, 2H); 9,63 (с, 1H); 12,1 (с, уширенный, 1H).
пл
t = 200°C (прибор Кефлера).
Пример 11
N-(2-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
N-(2-{3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
Получение по схеме 4
К раствору 343 мг N1-[2-амино-4-(трифторметил)фенил]ацетамида и 39 мг 4-диметиламинопиридина в 50 мл тетрагидрофурана и 0,45 мл триэтиламина прибавляют при 20°C 385 мг 2-(4-изоцианатофенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана. После выдерживания в течение ночи при 40°C реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в смеси дихлорметана и воды. Органический слой промывают 1 н. раствором HCl, выпавший осадок белого цвета отделяют и промывают дихлорметаном, затем сушат в вакууме с получением 356 мг белого порошка N-(2-{3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 464(+) = (M+H)(+).
-
МС-ЭС: 462(-) = (M-H)(-).
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,28 (с, 12H); 2,15 (с уширенный, 3H); 7,37 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 7,50 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,54 (д частично маскированный, J=8,5 Гц, 1H); 7,61 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,16(с уширенный, 1H); 8,28 (с уширенный, 1H); 9,43 (с уширенный, 1H); 9,79 (с уширенный, 1H).
N-(2-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламин и N-(2-{3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид соединяют по реакции Судзуки по методике, аналогичной методике примера 10. Получают желтый порошок N-(2-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида со следующими характеристиками:
Масс-спектр:
470(+) = (M+H)(+);
468(-) = (M-H)(-);
514(-) = (M + муравьиная кислота - H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3390; 1667; 1605; 1528; 1436; 1336; 1315; 1247; 1167; 1126; 1042; 813 и 684 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 2,16 (с, 3H); 4,72 (с, 2H); 7,19 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,37 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 7,56 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,64 (м, 4H); 8,21 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,28 (м, 2H); 9,54 (с уширенный, 1H); 9,82 (с уширенный, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
пл
t = 182°C (прибор Кефлера).
Пример 12
N-(2-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
Производные N,N',N'-три-Boc N-(2-{3-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)-фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида
Получение по схеме 1
2
К раствору 278 мг три-трет-бутил-N,N',N'-(3-циано-4-иодпиридин-2-ил)гидразинтрикарбоксилата (полученного по примеру 1) в 15 мл диоксана при 20°C прибавляют 282 мг N-(2-{3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида. К полученному раствору прибавляют раствор 117 мг бикарбоната натрия в 4,2 мл воды, затем прибавляют 53 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 100°C в течение 2,5 ч. Раствор светло-желтого цвета охлаждают, затем прибавляют этилацетат. Смесь промывают водой и затем насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученное смолоподобное вещество желто-оранжевого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: сначала циклогексан/этилацетат, 7:3, затем дихлорметан/раствор A, 9:1; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 239 мг желтого порошка смеси производных ди-Boc и три-Boc N-(2-{3-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида.
N-(2-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
Получение по схеме 1
Производные ди-Boc и три-Boc N-(2-{3-[4-(3-циано-2-гидразинопиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида преобразуют по методике примера 6. Полученный продукт представляет собой порошок светло-желтого цвета со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 470(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3363; 1672; 1596; 1525; 1435; 1336; 1316; 1126; 1078 и 825 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,16 (с уширенный, 3H); 4,58 (с, 2H); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,39 (д уширенный, J=9,0 Гц, 1H); 7,52-7,58 (м, 3H); 7,67 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,21 (с уширенный, 1H); 8,29 (с уширенный, 1H); 8,37 (д, J=5,0 Гц, 1H); 9,52 (с уширенный, 1H); 9,84 (с уширенный, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
Пример 13
N-(2-{3-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
N-(2-{3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
Получение по схеме 4
К раствору 10 мг трициклогексилфосфина в 2,5 мл диоксана при 20°C прибавляют 6 мг бис-(дибензилиденацетон)палладия. Раствор коричнево-фиолетового цвета перемешивают в течение 30 мин. Затем прибавляют 100 мг N-{2-[3-(5-бромпиридин-2-ил)уреидо]-4-трифторметилфенил}ацетамида, 36 мг ацетата калия и 84 мг бис-(пинаколато)дибора. Суспензию нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч 15 мин, затем охлаждают до 20°C и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток серо-зеленого цвета растворяют в этилацетате и нерастворившееся вещество удаляют фильтрованием. Фильтрат желтого цвета промывают водой, затем сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Получают 88 мг порошка светло-желтого цвета N-(2-{3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 465(+) = (M+H)(+).
4-Иод-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламин
Получение по схеме 5
К раствору 1,145 г 2-фтор-4-иодникотинонитрила в 27 мл этанола прибавляют 2,5 мл гидразингидрата. Сразу после прибавления гидразингидрата образуется осадок белого цвета. Суспензию перемешивают при 20°C в течение 20 минут. Осадок отфильтровывают и промывают этанолом. Получают 882 мг бежевого порошка 2-гидразино-4-иодникотинонитрила. Полученный промежуточный продукт растворяют в 35 мл дихлорметана. К образовавшейся суспензии белого цвета прибавляют 5,8 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола. Полученный раствор желто-оранжевого цвета перемешивают при 20°C в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Полученный порошок красного цвета растворяют в 28%-м водном растворе аммиака (в количестве, достаточном для получения щелочного значения pH): суспензия приобретает светло-желтый цвет. Нерастворенное вещество отфильтровывают и сушат с получением 862 мг 4-иод-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламина.
N-(2-{3-[5-(3-амино-1H-дипиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамид
Получение по схеме 1
2
К раствору 70 мг 4-иод-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламина в 5,5 мл диоксана при 20°C прибавляют 246 мг N-(2-{3-[5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида. К полученной суспензии прибавляют раствор 64 мг бикарбоната натрия в 1 мл воды, затем прибавляют 32 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником при 85°C в течение 3,5 ч. Раствор светло-желтого цвета охлаждают, затем прибавляют этилацетат. Смесь промывают водой. Нерастворенное вещество отделяют фильтрованием, затем фильтрат промывают насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют досуха при пониженном давлении. Полученный таким образом остаток желтого цвета и ранее отделенное нерастворенное вещество очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 9:1, затем 8:2, далее 7:3; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 52 мг желтого порошка N-(2-{3-[5-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)пиридин-2-ил]уреидо}-4-трифторметилфенил)ацетамида со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 471(+) = (M+H)(+).
-
МС-ЭС: 469(-) = (M-H)(-).
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,16 (с, 3H); 4,70 (с, 2H); 6,97 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,40 (д, J=9,0 Гц, 1H); 7,47-7,54 (м, 2H); 8,04 (д, J=9,0 Гц, 1H); 8,41 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,48-8,54 (м, 2H); 9,86 (с, 1H); 10,15 (м растянутый, 1H); 10,85 (м растянутый, 1H); 12,35 (с, 1H).
-1
ИК-спектр (KBr): 3440; 3213; 3043; 2925; 1706; 1609; 1515; 1432; 1332; 1249; 1164; 1108; 1080 и 822 см.
Пример 14
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2-Этокси-5-трифторметилфениламин получали согласно European Journal of Pharmaceutical Sciences 22 (2004) p. 153-164.
1-(2-Этокси-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевина
2-Этокси-5-трифторметилфениламин приводят во взаимодействие с 2-(4-изоцианатофенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксабороланом по описанной в примере 5 методике получения 1-(2-метокси-4-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины. После очистки получают бежевый порошок 1-(2-этокси-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 451(+) = (M+H)(+).
-
МС-ЭС: 449(-) = (M-H)(-).
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,28 (с, 12H); 1,45 (т, J=7,0 Гц, 3H); 4,25 (кв, J=7,0 Гц, 2H); 7,18 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,30 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,50 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,61 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,37 (с, 1H); 8,55 (д, J=2,5 Гц, 1H); 9,66(с, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этокси-5-трифторметилфенил)мочевина
1-(2-Этокси-5-трифторметилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевину присоединяют по реакции Судзуки к 4-иод-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламину по методике примера 6. Получают желтый порошок 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 457(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3369; 1672; 1601; 1542; 1445; 1315; 1271; 1210; 1134; 1043 и 822 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,47 (т, J=7,0 Гц, 3H); 4,27 (кв, J=7,0 Гц, 2H); 4,59 (с уширенный, 2H); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,21 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,31 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 7,55 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,68 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,44 (с, 1H); 8,58 (с уширенный, 1H); 9,78 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
Пример 15
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина
1-(2-Фтор-5-метилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевина
К раствору 1,45 г 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фениламина, 1,86 мл триэтиламина и 162 мг 4-диметиламинопиридина в 150 мл тетрагидрофурана при 20°C прибавляют 1 г 1-фтор-2-изоцианато-4-метилбензола. Реакционную смесь перемешивают в течение 3,5 ч при 60°C, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в смеси воды и дихлорметана. Органический слой промывают 1 н. раствором HCl, затем сушат над сульфатом магния и концентрируют досуха при пониженном давлении. Получают 2,13 г белого порошка 1-(2-фтор-5-метилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевины со следующими характеристиками:
7
8
МС-ЭУ: 370(+) = (MX)(+); 125(+) = (CHNF)(+), базовый пик.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,28 (с, 12Н); 2,27 (с, 3Н); 6,81 (м, 1Н); 7,10 (дд, J=8,5 и 11,5 Гц, 1Н); 7,47 (д, J=8,5 Гц, 2Н); 7,60 (д, J=8,5 Гц, 2Н); 7,98 (дд, J=2,0 и 8,0 Гц, 1Н); 8,51 (д, J=2,5 Гц, 1Н); 9,21 (с, 1Н).
1-[4-(3-Амино-1Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-Фтор-5-метилфенил)мочевина
1-(2-фтор-5-метилфенил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]мочевину присоединяют по реакции Судзуки к 4-бром-1Н-пиразоло[4,3-b]пиридин-3-иламину по методике, аналогичной методике примера 3. Получают желтый порошок 1-[4-(3-амино-lH-пиразоло [3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
+
МС-ЗС: 377 (+)=(М+Н)(+).
-
МС-ЭС: 375 (-)=(М-Н)(-).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,28 (с, 3Н); 4,57 (с, 2Н); 6,82 (м, 1Н); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1Н); 7,11 (дд, J=8,5 и 11,5 Гц, 1Н); 7,54 (д, J=8,5 Гц, 2Н); 7,65 (д, J=8,5 Гц, 2Н); 7,99 (д уширенный, J=7,5 Гц, 1Н); 8,37 (д, J=5,0 Гц, 1Н); 8,56 (с уширенный, 1Н); 9,29 (с, 1Н); 12,25 (с, 1Н).
-1
ИК-спектр (KBr): 3368; 1709; 1602; 1537; 1314; 1217; 1184; 1116 и 817 см.
Пример 16
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло [3,4-b] пиридин-4-ил) фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевина
4-(4-Аминофенил-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламин
Получение по схеме 6
2
К раствору 190 мг 4-бром-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-иламина и 236 мг 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фениламина в 20 мл диоксана прибавляют раствор 215 мг бикарбоната натрия в 5 мл воды, затем прибавляют 103 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Реакционную смесь нагревают при 85°C в течение 3,5 ч. Раствор темно-желтого цвета охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 30 мл этилацетата, затем смесь промывают водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха при пониженном давлении. Твердый остаток желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 95:5, затем 90:10, далее 80:20; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 93 мг желтого порошка 4-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламина со следующими характеристиками:
МС-ЭУ: 225(+) = (M)(+), базовый пик.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,57 (с уширенный, 2H); 5,47 (с уширенный, 2H); 6,71 (д, J=8,5 Гц, 2H); 6,80 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,28 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,28 (д, J=5,0 Гц, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевина
Получение по схеме 6
2
К раствору 100 мг 4-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-иламина, 125 мкл триэтиламина и 10 мг 4-диметиламинопиридина в 17 мл тетрагидрофурана при 20°C прибавляют 66 мг 3,4-диметилфенилизоцианата. Реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при 80°C, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в смеси воды и этилацетата. Органический слой сушат над сульфатом магния, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток желтого цвета очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 95:5, затем 90:10, далее 80:20; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 29 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
+
-
-
-
2
9
10
ЖХ-МС: tr = 3,44 мин: m/z 373: [M+H], m/z 371: [M-H], m/z 417: [M-H] +HCOH, m/z 224: [M-H]-CHNO.
+.
+
8
10
МС-ЭУ: m/z 372: [M], m/z 121: CHN (базовый пик).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,16 (с, 3H); 2,20 (с, 3H); 4,59 (с, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,04 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,20 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,26 (д, J=2,5 Гц, 1H); 7,52 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,65 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,36 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,68 (с, 1H); 8,97 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
Приведенные далее соединения получены по примеру 16 (схема 6).
Пример 17
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(5-трет-бутил-2-метоксифенил)мочевина
+
-
ЖХ-МС на приборе ZQ: tr = 3,44 мин: m/z 431: [M+H], m/z 429: [M-H].
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,28 (с, 9H); 3,87 (с, 3H); 4,59 (с, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 6,92 (д, J=8,5 Гц, 1H); 6,97 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,53 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,68 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,28 (м, 2H); 8,37 (д, J=5,5 Гц, 1H); 9,58 (с, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
пл
t = 220°C (прибор Кефлера).
Пример 18
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(4-метил-3-трифторметилфенил)мочевина
+
-
ЖХ-МС: tr = 8,84 мин: m/z 427: [M+H], m/z 425: [M-H].
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,38 (с, 3H); 4,58 (с уширенный, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,35 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,53 (м, 3H); 7,68 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,96 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,38 (д, J=5,5 Гц, 1H); 9,06 (с, 1H); 9,09 (с, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
пл
t = 166°C (прибор Кефлера).
Пример 19
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метилфенил)мочевина
+
-
-
-
2
8
7
ЖХ-МС: tr = 3,30 мин: m/z 393: [M+H] (базовый пик), m/z 391: [M-H], m/z 437: [M-H]+HCOH, m/z 224: [M-H]-CHClNO.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,28 (с, 3H); 4,58 (с уширенный, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,18-7,29 (м, 2H); 7,53 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,66 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,72 (с уширенный, 1H); 8,38 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,92 (с, 1H); 9,02 (с, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
пл
t = 206°C (прибор Кефлера).
Пример 20
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-этилфенил)мочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР: 373(+) = (M+H)(+); 371(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3372; 3266; 1688; 1591; 1539; 1524; 1435; 1317; 1215; 1020; 822; 695 и 598 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,19 (т, J=7,5 Гц, 3H); 2,58 (кв, J=7,5 Гц, 2H); 4,59 (с, уширенный, 2H); 6,84 (д уширенный, J=8,0 Гц, 1H); 6,90 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,19 (т, J=8,0 Гц, 1H); 7,28 (д уширенный, J=8,0 Гц, 1H); 7,35 (с уширенный, 1H); 7,53 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,65 (д, J =8,5 Гц, 2H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,74 (с, 1H); 8,94 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 162°C (прибор Кефлера).
Пример 21
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-1,3-бензодиоксол-5-илмочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР:
389(+) = (M+H)(+);
387(-) = (M-H)(-);
433(-) = (M + AcForm - H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3301; 1639; 1585; 1503; 1490; 1246; 1209; 1035; 929; 838 и 816 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 4,58 (с уширенный, 2H); 5,98 (с, 2H); 6,79 (дд, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 6,84 (д, J=8,5 Гц, 1H); 6,90 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,23 (д, J=2,0 Гц, 1H); 7,52 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,63 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,69 (с, 1H); 8,99 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 242°C (прибор Кефлера).
Пример 22
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метоксифенил)мочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР: 409(+) = (M+H)(+); 407(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3370; 3301; 1711; 1680; 1594; 1539; 1524; 1502; 1396; 1319; 1280; 1218; 1060 и 822 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 3,82 (с, 3H); 4,58 (с уширенный, 2H); 6,90 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,10 (д, J=9,0 Гц, 1H); 7,30 (дд, J=2,5 и 9,0 Гц, 1H); 7,53 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,64 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,68 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,80 (с, 1H); 8,98 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 261°C (прибор Кефлера).
Пример 23
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(5-хлор-2-метоксифенил)мочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР: 409(+) = (M+H)(+); 407(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3365; 1707; 1596; 1522; 1417; 1316; 1213; 1175; 1131; 1025 и 820 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 3,91 (с, 3H); 4,59 (с уширенный, 2H); 6,91 (д, J=5,0 Гц, 1H); 7,00 (дд, J=2,5 и 9,0 Гц, 1H); 7,05 (д, J=9,0 Гц, 1H); 7,55 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,65 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,26 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,37 (д, J=5,0 Гц, 1H); 8,49 (с, 1H); 9,64 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 171°C (прибор Кефлера).
Пример 24
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-этоксифенил)мочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР: 389(+) = (M+H)(+); 387(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 2924; 2854; 1618; 1437; 1384; 1121; 1005; 826; 722; 695 и 544 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,43 (т, J=7,0 Гц, 3H); 4,16 (кв, J=7,0 Гц, 2H); 4,59 (с уширенный, 2H); 6,85-6,97 (м, 3H); 7,02 (дд, J=2,0 и 8,0 Гц, 1H); 7,54 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,67 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,14 (дд, J=2,0 и 8,0 Гц, 1H); 8,18 (с, 1H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 9,65 (с, 1H); 12,25 (с,1H).
пл
t = 152°C (прибор Кефлера).
Пример 25
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-метилфенил)мочевина
ЖХ-МС-ДМД-ИДСР: 389(+) = (M+H)(+); 387(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3346; 1673; 1594; 1538; 1316; 1279; 1211; 1181; 1135; 1028 и 823 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 2,24 (с, 3H); 3,85 (с, 3H); 4,59 (с уширенный, 2H); 6,76 (дд, J=2,0 и 8,0 Гц, 1H); 6,89-6,93 (м, 2H); 7,53 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,65 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,01 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,26 (с, 1H); 8,36 (д, J=5,0 Гц, 1H); 9,56 (с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 170°C (прибор Кефлера).
Пример 26
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид
+
+
МС-ЭС: 434(MH).
Время удерживания ДМД-ПИТ: 3,31 мин.
Пример 27
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина
2,4-Дихлорникотинонитрил
2
Раствор 5,0 г имеющегося в продаже 4-метокси-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила в 50 мл оксихлорида фосфора нагревают с обратным холодильником в течение 19 ч. После охлаждения реакционную смесь выливают на смесь воды и льда. Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат экстрагируют 2 раза раствором этилацетат/метанол, 90/10. Объединенные органические слои и осадок сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении с получением 6,76 г порошка желтоватого цвета. Неочищенный продукт очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиент этилацетата в циклогексане от 5/95 до 10/90) с получением 2,08 г белого порошка 2,4-дихлорникотинонитрила.
+.
+.
МС-ЭУ: 172 = [M] (базовый пик), 137 = [M]-Cl.
-1
ИК-спектр (KBr): 3072; 2236; 1559; 1539; 1445; 1368; 1220; 1197; 1069; 859; 818; 791 и 416 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 7,92 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,67 (д, J=5,5Гц, 1H).
Трет-бутиловый сложный эфир [4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]карбаминовой кислоты
2
К раствору 519 мг 2,4-дихлорникотинонитрила в 25,5 мл диоксана прибавляют 782 мг (4-Boc-аминофенил)бороновой кислоты, 693 мг бикарбоната натрия в 8,5 мл воды и 347 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Суспензию перемешивают при 100°C в течение 2 часов в атмосфере аргона. После охлаждения реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют 3 раза раствором этилацетат/метанол, 90/10. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. 1,58 мг неочищенного продукта очищают хроматографированием на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (градиент раствора A в дихлорметане от 0,5/99,5 до 1/99; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак 38/17/2). Получают 797 мг трет-бутилового сложного эфира [4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]карбаминовой кислоты со следующими характеристиками:
МС-ЭУ: 329 (+).
4
-1
ИК-спектр (CCl): 3343; 2981; 2230; 1741; 1524; 1501; 1411; 1392; 1368; 1316; 1220; 1155; 1050 и 844 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,50 (с, 9H); 7,62 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,78-7,84 (м, 3H); 8,83 (д, J=5,5 Гц, 1H); 9,67 (с, 1H).
2-(4-Аминофенил)хлорникотинонитрил
К раствору 3,40 г трет-бутилового сложного эфира [4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]карбаминовой кислоты в 20 мл дихлорметана прибавляют 5,5 мл трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают при 20°C в течение 26 часов. Раствор концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в водном растворе бикарбоната натрия и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Остаток промывают диэтиловым эфиром. Получают 1,678 г желтого порошка 2-(4-аминофенил)-4-хлорникотинонитрила со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 230(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3402; 3339; 3230; 2223; 1608; 1555; 1538; 1520; 1432; 1388; 1180; 1066; 825 и 607 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 5,76 (с уширенный, 2H); 6,67 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,63 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,68 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,73 (д, J=5,5 Гц, 1H).
1-[4-(4-Хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина
Получение по схеме 7
К раствору 115 мг 2-(4-аминофенил)-4-хлорникотинонитрила и 70 мкл триэтиламина в 5 мл тетрагидрофурана при 20°C прибавляют 65 мкл 2-фтор-5-метилфенилизоцианата. Через 3 ч выдерживания при 20°C прибавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, затем насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния и затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в диэтиловом эфире и нерастворившееся вещество отделяют фильтрованием с получением 118 мг белого порошка 1-[4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
7
8
МС-ЭУ: 380(+) = (M)(+); 125(+) = (CHNF)(+), базовый пик.
-1
ИК-спектр (KBr): 3379; 2231; 1687; 1598; 1550; 1413; 1315; 1219; 1185; 1116 и 810 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,28 (с, 3H); 6,82 (м, 1H); 7,12 (дд, J=8,5 и 11,5 Гц, 1H); 7,64 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,81 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,87 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,99 (д уширенный, J=8,0 Гц, 1H); 8,60 (с уширенный, 1H); 8,84 (д, J=5,5 Гц, 1H); 9,38 (с, 1H).
1-[4-(3-Циано-4-гидразинопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина
Получение по схеме 7
К смеси 50 мг 1-[4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины в 0,5 мл этанола при 20°C прибавляют 45 мкл гидразингидрата. Суспензию белого цвета перемешивают в течение 2 ч при 20°C, затем нагревают при 80°C в течение 4 ч. Суспензии дают охладиться до 20°C. Нерастворенное вещество отделяют фильтрованием и промывают этиловым эфиром с получением 33 мг 1-[4-(3-циано-4-гидразинопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины в виде твердого вещества бежевого цвета со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 377(+) = (M+H)(+).
-
МС-ЭС: 375(-) = (M-H)(-).
-1
ИК-спектр (KBr): 3379; 2212; 1700; 1599; 1551; 1440; 1314; 1257; 1221; 1187 и 816 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,28 (с, 3H); 4,52 (с, 2H); 6,81 (м, 1H); 7,06 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,11 (дд, J=8,5 и 11,5 Гц, 1H); 7,57 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,71 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,00 (д уширенный, J=8,0 Гц, 1H); 8,24 (с уширенный, 1H); 8,27 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,57 (с уширенный, 1H); 9,32 (с, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевина
Получение по схеме 7
2
2
2
2
2
2
4
К раствору 55 мг 1-[4-(3-циано-4-гидразинопиридин-2-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины в 2,2 мл дихлорметана при 20°C прибавляют 0,25 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола. Через 40 мин реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде, и среда становится щелочной. Образовавщийся осадок отделяют фильтрованием. Полученное твердое вещество бежевого цвета очищают хроматографированием на кассетной колонке AIT, 2 г диоксида кремния 15-40 мкм, после загрузки твердого вещества (элюент с градиентом от 100% CHCl до 60% CHCl/40% (CHCl, 38/MeOH, 17/NHOH, 3). Получают 26 мг 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-фтор-5-метилфенил)мочевины в виде твердого вещества бежевого цвета со следующими характеристиками:
пл
t: 195°C.
+
МС-ЭС: 377(+) = (M+H)(+).
-1
ИК-спектр (KBr): 3351; 1696; 1605; 1544; 1313; 1257; 1221; 1181; 1045 и 808 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,28 (с, 3H); 4,73 (с, 2H); 6,82 (м, 1H); 7,12 (дд, J=8,5 и 11,5 Гц, 1H); 7,19 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,59-7,67 (м, 4H); 8,01 (дд, J=2,5 и 8,0 Гц, 1H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,55 (д, J=2,5 Гц, 1H); 9,26 (с, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
Приведенные далее соединения получали по методике, аналогичной методике примера 27 (схема 7).
Пример 28
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевина
1-[4-(4-Хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил-3-(2,4-диметоксифенил)мочевина
Получение по схеме 7
2-(4-Аминофенил)-4-хлорникотинонитрил приводят во взаимодействие с 2,4-диметоксифенилизоцианатом в условиях, аналогичных условиям, описанным в примере 27. Получают 1-[4-(4-хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевину в виде твердого вещества белого цвета со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 409(+) = (M+H)(+).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 3,74 (с, 3H); 3,88 (с, 3H); 6,50 (дд, J=2,5 и 9,0 Гц, 1H); 6,63 (д, J=2,5 Гц, 1H); 7,62 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,80 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,85 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,94 (д, J=9,0 Гц, 1H); 8,12 (с, 1H); 8,84 (д, J=5,5 Гц, 1H); 9,49 (с, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевина
Получение по схеме 7
1-[4-(4-Хлор-3-цианопиридин-2-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевину обрабатывают сначала гидразингидратом, затем трифторуксусной кислотой в условиях, аналогичных условиям, описанным в примере 27. Получают 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,4-диметоксифенил)мочевину в виде твердого вещества бежевого цвета со следующими характеристиками:
+
МС-ЭС: 405(+) = (M+H)(+).
пл
t = 196°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 1603; 1526; 1452; 1210; 1180; 1157; 1035 и 824 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 3,74 (с, 3H); 3,87 (с, 3H); 4,74 (с уширенный, 2H); 6,50 (дд, J=2,5 и 9,0 Гц, 1H); 6,63 (д, J=2,5 Гц, 1H); 7,18 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,61 (с уширенный, 4H); 7,95 (д, J=9,0 Гц, 1H); 8,09 (с, 1H); 8,20 (д, J=6,0 Гц, 1H); 9,39 (с уширенный, 1H); 12,1 (м растянутый, 1H).
Пример 29
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(5-трет-бутил-2-метоксифенил)мочевина
JK33913-110-1
Продукт представляет собой твердое вещество желтого цвета со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 431(+) = (M+H)(+).
пл
t = 181°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3333; 2958; 1678; 1604; 1525; 1487; 1421; 1315; 1249; 1216; 1177; 1143; 1042; 842 и 807 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 1,27 (с, 9H); 3,87 (с, 3H); 4,73 (с уширенный, 2H); 6,92 (д, J=8,5 Гц, 1H); 6,97 (дд, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 7,19 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,63 (с, 4H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,25 (с, 1H); 8,29 (д, J=2,5 Гц, 1H); 9,51 (с, 1H); 12,1 (с уширенный, 1H).
Пример 30
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3,4-диметилфенил)мочевина
Продукт представляет собой твердое вещество желтого цвета со следующими характеристиками:
+
+
МС-ЭС: 373: [M+H].
пл
t = 182°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3413; 1679; 1621; 1549; 1210; 1136; 842; 803 и 724 см, содержит трифторуксусную кислоту.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,16 (с, 3H); 2,20 (с, 3H); 4,74 (с уширенный, 2H); 7,04 (д, J=8,0 Гц, 1H); 7,18 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,20 (дд частично маскированный, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,26 (д, J=2,5 Гц, 1H); 7,62 (с, 4H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,60 (с, 1H); 8,87 (с, 1H); 12,15 (с, 1H).
Пример 31
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(4-метил-3-трифторметилфенил)мочевина
Продукт представляет собой твердое вещество желтого цвета со следующими характеристиками:
+
+
МС-ЭС: 427: [M+H].
пл
t = 191°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3393; 3319; 3226; 3112; 1678; 1621; 1552; 1529; 1505; 1319; 1206; 1186; 1134; 1054; 839; 802 и 723 см, содержит трифторуксусную кислоту.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,38 (кв, J=2,0 Гц, 3H); 4,74 (с уширенный, 2H); 7,19 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,35 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,53 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,64 (с, 4H); 7,96 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,96 (с, 1H); 9,00 (с, 1H); 12,15 (с, 1H).
Пример 32
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2,5-дифторфенил)мочевина
Продукт представляет собой твердое вещество желтого цвета со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 381(+) = (M+H)(+).
пл
t = 187°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3372; 1718; 1606; 1534; 1442; 1313; 1208; 1179; 862; 796 и 727 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,74 (с уширенный, 2H); 6,84 (м, 1H); 7,20 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,31 (ддд, J=5,5-9,0 и 11,0 Гц, 1H); 7,61-7,68 (м, 4H); 8,07 (ддд, J=3,0-6,5 и 11,0 Гц, 1H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 8,87 (с уширенный, 1H); 9,36 (с, 1H); 12,15 (с уширенный, 1H).
Пример 33
1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-хлор-4-метилфенил)мочевина
Продукт представляет собой твердое вещество светло-желтого цвета со следующими характеристиками:
+
+
МС-ЭС: 393[M+H].
пл
t = 196°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3406; 3323; 3110; 1675; 1621; 1592; 1528; 1498; 1210; 1185; 1139; 839; 803 и 724 см, содержит трифторуксусную кислоту.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,27 (с, 3H); 4,74 (с уширенный, 2H); 7,19 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,21 (дд, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 7,25 (д, J=2,0 Гц, 1H); 7,63 (с, 4H); 7,72 (д, J=2,5 Гц, 1H); 8,21 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,88 (с, 1H); 8,96 (с, 1H); 12,15 (с, 1H).
Пример 34
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(5-фтор-2-метилфенил)мочевина
Продукт представляет собой твердое вещество желтого цвета со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 377(+) = (M+H)(+).
пл
t = >265°C (прибор Кефлера).
-1
ИК-спектр (KBr): 3287; 1639; 1604; 1539; 1452; 1312; 1217; 1156; 1109; 1046; 846 и 809 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 2,24 (с, 3H); 4,74 (с уширенный, 2H); 6,76 (дт, J=3,0 и 8,5 Гц, 1H); 7,19 (д, J=6,0 Гц, 1H); 7,20 (м частично маскированный, 1H); 7,64 (с, 4H); 7,86 (дд, J=3,0 и 12,0 Гц, 1H); 8,15 (с уширенный, 1H); 8,21 (д, J=6,0 Гц, 1H); 9,40 (с уширенный, 1H); 12,15 (с уширенный, 1H).
Пример 35
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид
+
МС-ЭС: 434(MH+).
Пример 36
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(5-хлор-2,4-диметоксифенил)мочевина
+
МС-ЭС: 439(MH+).
Пример 37
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(3-трифторметилсульфанилфенил)мочевина
+
МС-ЭС: 445(MH+).
Пример 38
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
3-Хлор-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрил
Получение по схеме 8
К раствору 1,73 г имеющегося в продаже 3,5-дихлоризоникотинонитрила в 120 мл диоксана прибавляют 2,74 г 4,4,5,5-тетраметил-2-(4-нитрофенил)-1,3,2-диоксаборолана, 2,31 г бикарбоната натрия в 70 мл воды и 1,16 г тетракис-(трифенилфосфин)палладия (0). Суспензию нагревают при 100°C в течение 1 ч 30 мин. После охлаждения реакционную смесь выливают в 40 мл воды и экстрагируют 3 раза по 100 мл этилацетата. Объединенные органические фракции промывают 50 мл воды, 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия, сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Оставшееся камедеподобное вещество коричневого цвета очищают хроматографированием на кассетной колонке Merck, 70 г диоксида кремния, 15-40 мкм, элюируя дихлорметаном. Получают 1,58 г 3-хлор-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрила в виде твердого вещества желтого цвета со следующими характеристиками:
МС-ЭУ: 259 (+).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 8,02 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,43 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,91 (с, 1H); 9,09 (с, 1H).
N,N'-ди-Boc-производное 3-гидразино-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрила
Получение по схеме 8
К раствору 4,43 г ди-трет-бутилгидразинодиформиата в 19 мл диметилформамида прибавляют 2,62 г карбоната калия и 990 мг 3-хлор-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрила. Суспензию нагревают при 75°C в течение 6 часов, затем перемешивают в течение 18 часов при 20°C. Реакционную смесь экстрагируют 3 раза по 80 мл этилацетата. Органические слои промывают 2 раза по 50 мл воды, затем 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Остаток коричневого цвета очищают хроматографированием на кассетной колонке Merck, 25 г диоксида кремния, 15-40 мкм (градиентный элюент: циклогексан/этилацетат, от 9/1 до 7/3). Получают 2,38 г N,N'-ди-Boc-производного 3-гидразино-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрила в виде твердого вещества желтого цвета, которое выделяют неочищенным и применяют в таком виде.
ЖХ-МС: 456(+) = (M+H)(+);
454(-) = (M-H)(-).
N,N'-ди-Boc-производное 3-(4-аминофенил)-5-гидразиноизоникотинонитрила
Получение по схеме 8
К раствору 1,74 г N,N'-ди-Boc-производного 3-гидразино-5-(4-нитрофенил)изоникотинонитрила в 8 мл этанола прибавляют 3 мл циклогексена и 200 мг гидроксида палладия. Суспензию перемешивают с обратным холодильником в течение 2 ч 15 мин, фильтруют в горячем виде через целит и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток бежевого цвета очищают хроматографированием на кассетной колонке Merck, 70 г диоксида кремния, 15-40 мкм, элюируя раствором этилацетат/дихлорметан, 8/2. Получают 309 мг N,N'-ди-Boc-производного 3-(4-аминофенил)-5-гидразиноизоникотинонитрила в виде твердого вещества желтого цвета со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 426(+) = (M+H)(+).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,45 (с уширенный, 18H); 5,61 (с, 2H); 6,71 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,31 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,55 (с уширенный, 1H); 8,64 (с, 1H); 10,05 (м растянутый, 1H).
N,N'-ди-Boc-производное 1-[4-(4-циано-5-гидразинопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
Получение по схеме 8
К раствору 41 мг трифосгена в 4 мл тетрагидрофурана прибавляют при 0°C в атмосфере аргона 78 мг 2-метокси-5-трифторметиланилина в 2 мл тетрагидрофурана и 110 мкл триэтиламина. Суспензию перемешивают при 0°C в течение 10 минут, затем при 20°C в течение 1 ч 15 мин. Затем прибавляют раствор 174 мг N,N'-ди-Boc-производного 3-(4-аминофенил)-5-гидразиноизоникотинонитрила в 2 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографированием на кассетной колонке Analogix, 12 г диоксида кремния, 50 мкм (градиент элюирования этилацетата в циклогексане от 1/9 до 5/5). Получают 195 мг N,N'-ди-Boc-производного 1-[4-(4-циано-5-гидразинопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил]мочевины в в виде твердого вещества желтого цвета со следующими характеристиками:
ЖХ-МС: 643(+) = (M+H)(+).
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 1,4-1,55 (с уширенный, 18H); 3,99 (с, 3H); 7,22 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,34 (дд, J=2,0 и 8,5 Гц, 1H); 7,58 (д, J=9,0 Гц, 2H); 7,69 (д, J=9,0 Гц, 2H); 8,57 (д, J=2,0 Гц, 1H); 8,65 (с, 1H); 8,69 (с уширенный, 1H); 8,72 (с, 1H); 9,78 (с, 1H); 10,08 (м растянутый, 1H).
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевина
Получение по схеме 8
Раствор 282 мг N,N'-ди-Boc-производного 1-[4-(4-циано-5-гидразинопиридин-3-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил]мочевины и 600 мкл трифторуксусной кислоты, содержащей 10% анизола, в 8 мл дихлорметана нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч 30 мин. После охлаждения реакционную смесь выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют 40 мл этилацетата. Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток желтого цвета растирают в этиловом эфире. После отфильтровывания и сушки в вакууме нерастворившегося вещества получают 103 мг 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил]мочевины в виде твердого вещества желтого цвета со следующими характеристиками:
+
-
-
2
ЖХ-МС: tr = 2,83 мин: 443 = [M+H]; 441 = [M-H]; 487 = [M-H] + HCOH.
8
6
3
+
+.
МС-ЭУ: 176 (базовый пик) = CHFO; 442 = [M].
-1
ИК-спектр (KBr): 3342; 1696; 1609; 1538; 1491; 1447; 1314; 1270; 1215; 1177; 1135; 1024; 837 и 622 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 3,99 (с, 3H); 4,61 (с, 2H); 7,22 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,33 (д уширенный, J=8,5 Гц, 1H); 7,50 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,64 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,93 (с, 1H); 8,58 (с уширенный, 2H); 8,74 (с, 1H); 9,61(с, 1H); 12,25 (с, 1H).
пл
t = 210°C (прибор Кефлера).
Пример 39
N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-c]пиридин-4-ил)фенил]-2,3-дихлорбензолсульфонамид
Получение по схемам 6 и 8
+
МС-ЭС = 434 (MH+).
Пример 40
3-{3-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-метоксибензойная кислота
2
К раствору 100 мг 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины, описанной в примере 5, в 5 мл дихлорметана при -40°C прибавляют по каплям 1,6 мл 1 M раствора трибромида бора и затем температуре дают повышаться до 20°C. Концентрируют досуха, пропуская аргон в течение ночи. Остаток очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 95:5, затем 90:10, далее 80:20, в конце 73:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 41 мг желтого порошка 3-{3-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]уреидо}-4-метоксибензойной кислоты со следующими характеристиками:
ЖХ-МС на приборе Quattro Premier: tr = 5,04 мин.
+
m/z 419: [M+H].
-1
ИК-спектр (KBr): 3354; 1697; 1597; 1542; 1431; 1319; 1279; 1205; 1122; 821 и 767 см.
1
3
2
Спектр ЯМР H (400 МГц, (CD)SO, δ, м.д.): 3,80 (с, 3H); 4,59 (с, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 6,92 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,51 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,54 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,67 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,38 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,40 (с, 1H); 8,79 (д, J=2,5 Гц, 1H); 9,60 (с, 1H); 10,6 (м сильно растянутый, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
Пример 41
1-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-гидрокси-5-трифторметилфенил)мочевина
2
К раствору 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)мочевины, описанной в примере 5, в 6 мл дихлорметана при -40°C прибавляют по каплям 1,6 мл 1 M раствора трибромида бора и затем температуре дают повышаться до 20°C. Через 30 мин реакционную смесь охлаждают на бане с ледяной водой, затем прибавляют воду. Через 15 мин перемешивания смесь фильтруют и нерастворившееся вещество оранжевого цвета промывают водой и дихлорметаном. Твердое вещество очищают на кассетной колонке Biotage KP-Sil, 60 Е, SiO, 32-63 мкм (элюент: дихлорметан/раствор A, сначала 95:5, затем 90:10, далее 80:20, в конце 73:30; раствор A = дихлорметан/метанол/аммиак, 38:17:2). Получают 29 мг желтого порошка 1-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-4-ил)фенил]-3-(2-гидрокси-5-трифторметилфенил)мочевины со следующими характеристиками:
ЖХ-МС на приборе ZQ: tr = 3,22 мин.
+
m/z 429 [M+H](базовый пик).
1
3
2
Спектр ЯМР H (300 МГц, (CD)SO d6, δ, м.д.): 4,59 (с, 2H); 6,90 (д, J=5,5 Гц, 1H); 7,00 (д, J=8,5 Гц, 1H); 7,18 (дд, J=2,5 и 8,5 Гц, 1H); 7,54 (д, J=8,5 Гц, 2H); 7,66 (д, J=8,5 Гц, 2H); 8,37 (д, J=5,5 Гц, 1H); 8,51 (м, 2H); 9,64 (с, 1H); 10,7 (м сильно растянутый, 1H); 12,25 (с уширенный, 1H).
Определение активности соединений - Протоколы экспериментов
1. FAK
Ингибирующую активность соединений в отношении FAK определяют измерением ингибирования аутофосфорилирования фермента с использованием флюоресценции с временным разрешением (HTRF).
кРНК, входящую в FAK человека, N-конец которой был маркирован гистидином, клонировали в вектор экспрессии бакуловируса pFastBac HTc. Протеин выделяли и очищали приблизительно до 70% гомогенности.
Активность киназы определяют, инкубируя фермент (6,6 мкг/мл) с различными концентрациями испытуемого соединения в 50 мM буфере Hepes с pH = 7,2, 10 мM
2
3
4
MgCl, 100 мкM NaVO, 15 мкM АТФ в течение 1 часа при 37°C. Ферментативную реакцию останавливают прибавлением буфера Hepes с pH = 7,0, содержащего 0,4 мM KF, 133 мM ЭДТА, 0,1% БСА, и маркировку осуществляют в течение от 1 до 2 часов при комнатной температуре прибавлением к упомянутому буферу антитела антигистидина, маркированного XL665, и моноклонального фосфоспецифичного к тирозину антитела, конъюгированного с криптатом европия (Eu-K). Характеристики двух флюорофоров приведены в издании G. Mathis et al., Anticancer Research, 1997, 17, pages 3011-3014. Передача энергии от возбужденного криптата европия к акцептору XL665 пропорциональна степени аутофосфорилирования FAK. Специфичный сигнал долгой длительности XL-665 измеряют счетчиком вспышек Packard Discovery. Все испытания осуществляют в параллельных опытах, рассчитывая среднее двух испытаний. Ингибирование активности аутофосфорилирования FAK соединениями по настоящему изобретению выражают в процентах относительно активности в контрольном опыте, которую измеряют в отсутствие испытуемого соединения. Для расчета % ингибирования используют отношение [сигнал при 665 нм/сигнал при 620 нм].
2. KDR
Ингибирующее действие соединений определяют в испытании на фосфорилирование субстрата ферментом KDR in vitro по технике сцинтилляции (планшета на 96 лунок, NEN).
Цитоплазматический домен фермента KDR человека клонировали в виде гибридного GST в вектор экспрессии бакуловируса pFastBac. Протеин выделяли из клеток SF21 и очищали приблизительно до 60% гомогенности.
2
2
2
3
4
33
Активность киназы KDR измеряют в 20 мM MOPS, 10 мM MgCl, 10 мM MnCl, 1 мM ДТТ, 2,5 мM ЭГТА, 10 мM b-глицерофосфата, pH 7,2, в присутствии 10 мM MgCl, 100 мкM NaVO, 1 мM NaF. 10 мкл соединения прибавляют к 70 мкл буфера киназы, содержащего 100 нг фермента KDR при 4°C. Реакцию инициируют, прибавляя 20 мкл раствора, содержащего 2 мкг субстрата (фрагмент SH2-SH3 PLCγ, выделенный в виде гибридного протеина GST), 2 мкКи γP[АТФ] и 2 мкM охлажденного АТФ. После 1 часа инкубации при 37°C реакцию останавливают, прибавляя 1 объем (100 мкл) 200 мM ЭДТА. Инкубационный буфер удаляют и лунки промывают три раза по 300 мкл PBS. Радиоактивность измеряют в каждой лунке, применяя счетчик радиоактивности Top Count NXT (Packard).
Фоновый уровень определяют измерением радиоактивности в четырех разных лунках, содержащих радиоактивный АТФ и только субстрат.
33
Контрольный уровень активности измеряют в четырех разных лунках, содержащих все реактивы (γP[АТФ], KDR и субстрат PLCγ), но в отсутствие испытуемого соединения.
Ингибирование активности KDR соединением по настоящему изобретению выражают в процентах относительно активности в контрольном опыте, которую определяют в отсутствие испытуемого соединения.
Соединение SU5614 (Calbiochem)(1 мкM) вводят в каждую планшету в качестве контроля ингибирования.
3. Tie2
Кодирующую последовательность Tie2 человека, соответствующую аминокислотам внутриклеточного домена 776-1124 генерировали с помощью ПЦР, применяя кДНК, выделенную из плаценты человека, в качестве модели. Такую последовательность вводили в вектор экспрессии бакуловируса pFastBacGT в виде гибридного протеина GST.
Ингибирующее действие соединений определяют в испытании на фосфорилирование PLC посредством Tie2 в присутствии GST-Tie2, очищенного приблизительно до 80% гомогенности. Субстрат составляют из фрагментов SH2-SH3 PLC, выделенной в виде гибридного протеина GST.
2
2
33
Активность киназы Tie2 измеряют в буфере MOPS, 20 мM, pH  7,2, содержащем 10 мM MgCl, 10 мM MnCl, 1 мM ДТТ, 10 мM глицерофосфата. В планшету на 96 лунок FlashPlate, выдерживаемую на льду, помещают реакционную смесь, состоящую из 70 мкл буфера киназы, содержащего 100 нг фермента GST-Tie2 на лунку. Затем прибавляют 10 мкл испытуемого соединения, разбавленного в ДМСО до концентрации 10% максимально. Каждое измерение для заданной концентрации осуществляют в четырех опытах. Реакцию инициируют, прибавляя 20 мкл раствора, содержащего 2 мкг GST-PLC, 2 мкM охлажденного АТФ и 1 мкКи dP[АТФ]. После 1 часа инкубации при 37°C реакцию останавливают, прибавляя 1 объем (100 мкл) 200 мM ЭДТА. После удаления инкубационного буфера лунки промывают три раза по 300 мкл PBS. Радиоактивность измеряют прибором MicroBeta1450 Wallac.
Ингибирование активности Tie2 рассчитывают и выражают в процентах относительно активности в контрольном опыте, определяемой в отсутствие испытуемого соединения.
Результаты
Структурная формула
Пример
FAK
KDR
Tie2
ИК 50 (нM)
ИК 50 (нM)
ИК 50 (нM)
<img file="00000055.tif" he="47" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
1
264
50
8
<img file="00000056.tif" he="44" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
2
150
940
23
<img file="00000057.tif" he="47" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
3
73
33
5
<img file="00000058.tif" he="44" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
4
80
218
4
<img file="00000059.tif" he="47" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
5
286
49
15
<img file="00000060.tif" he="44" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
6
190
1855
27
<img file="00000061.tif" he="47" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
7
-
36
9
<img file="00000062.tif" he="42" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
10
-
60
10
<img file="00000063.tif" he="40" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
14
-
24
21