НОВЫЕ КАПСИДНЫЕ БЕЛКИ АДЕНО-АССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА

1. Адено-ассоциированный вирус (AAV), содержащий капсидный белок, причем капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична: (i) любой из SEQ ID NO:15-89, (ii) области VP2 любой из SEQ ID NO:15-89, или (iii) области VP3 любой из SEQ ID NO:15-89, и дополнительно содержащий трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторными последовательностями, которые контролируют экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине.
2. AAV по п. 1, отличающийся тем, что капсидный белок содержит аминокислотную последовательность: i) любой из SEQ ID NO:15-89, (ii) области VP2 любой из SEQ ID NO:15-89, или (iii) области VP3 любой из SEQ ID NO:15-89.
3. AAV по п. 1 или 2, дополнительно содержащий инвертированные концевые повторы AAV.
4. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 1-3, и физиологически совместимый носитель.
5. Способ доставки трансгена в клетку, включающий в себя приведение в контакт клетки с AAV по любому из пп. 1-3.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что клетка представляет собой мышечную клетку.
7. Способ по п. 5 или 6, отличающийся тем, что трансген кодирует микродистрофин.
8. Способ лечения субъекта, страдающего от нарушения или заболевания, связанного с аномальной активностью эндогенного белка, включающий в себя введение субъекту эффективного количества AAV, содержащего капсидный белок, причем капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична: (i) любой из SEQ ID NO:15-89; (ii) области VP2 любой из SEQ ID NO:15-89; или (iii) области VP3 любой из SEQ ID NO:15-89; и при этом AAV содержит трансген, кодирующий биологически активную копию белка.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна, и при этом трансген кодирует микродистрофин.
10. Вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок адено-ассоциированного вируса (AAV), имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична: (i) любой из SEQ ID NO:15-89; (ii) области VP2 любой из SEQ ID NO:15-89; или (iii) области VP3 любой из SEQ ID NO:15-89.
11. Вектор по п. 10, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность функционально связана с гетерологичным регуляторным элементом, который контролирует экспрессию капсидного белка в клетке-хозяине.
12. Клетка, содержащая вектор по п. 10 или 11.
13. Применение AAV по любому из пп. 1-3 в изготовлении лекарственного средства для лечения нарушения или заболевания.
14. Применение по п. 13, отличающееся тем, что нарушение или заболевание связано с аномальной активностью эндогенного белка, и дополнительно при этом AAV содержит трансген, который кодирует биологически активную копию белка.
15. Применение по п. 14, отличающееся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна и трансген кодирует микродистрофин.
16. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 1-3 для лечения заболевания или нарушения.
17. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна и трансген кодирует микродистрофин.
18. Адено-ассоциированный вирус (AAV), содержащий химерный капсидный белок, имеющий аминокислотную последовательность VP1 реципиентного каракаса капсида AAV, содержащего вариабельные области I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII и IX, кроме тех случаев, когда одну или большее количество вариабельных областей I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII и IX заменяют соответствующей вариабельной областью из одного или большего количества донорных капсидов AAV.
19. AAV по п. 18, отличающийся тем, что только одну вариабельную область из реципиентного капсида AAV заменяют соответствующей вариабельной областью из донорного капсида AAV.
20. AAV по п. 18, отличающийся тем, что две или большее количество вариабельных областей из реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями из одного донорного капсида AAV.
21. AAV по п. 18, отличающийся тем, что две или большее количество вариабельных областей из реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями из двух или большего количества донорных капсидов AAV.
22. AAV по п. 18, отличающийся тем, что все девять вариабельных областей реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями из одного донорного капсида AAV.
23. AAV по любому из пп. 18-22, отличающийся тем, что реципиентный капсид AAV дополнительно содержит область GBS или область петли GH, и область GBS или область петли GH заменяют соответствующей областью из одного или большего количества донорных капсидов AAV.
24. AAV по п. 23, отличающийся тем, что все девять вариабельных областей и область GBS реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями и областью GBS из одного или большего количества донорных капсидов AAV.
25. AAV по п. 23, отличающийся тем, что все девять вариабельных областей и область GBS реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями и областью GBS из двух или большего количества донорных капсидов AAV.
26. AAV по п. 23, отличающийся тем, что петлю GH реципиентного капсида AAV заменяют соответствующей областью петли GH из донорного капсида AAV.
27. AAV по п. 23, отличающийся тем, что все девять вариабельных областей и область петли GH реципиентного капсида AAV заменяют соответствующими вариабельными областями и областью петли GH из одного или большего количества донорных капсидов AAV.
28. AAV по любому из пп. 18-27, отличающийся тем, что последовательность реципиентного капсида AAV представляет собой любую из SEQ ID NO:1-14, и последовательности донорного капсида AAV выбирают из группы последовательностей, состоящей из SEQ ID NO:1-14, и последовательность реципиентного капсида AAV и последовательности донорного капсида AAV являются разными.
29. AAV по любому из пп. 18-27, отличающийся тем, что последовательность реципиентного капсида AAV представляет собой любую из SEQ ID NO:1-89, и последовательности донорного капсида AAV выбирают из группы последовательностей, состоящей из SEQ ID NO:1-89, и последовательность реципиентного капсида AAV и последовательности донорного капсида AAV являются разными.
30. AAV по любому из пп. 18-27, отличающийся тем, что химерный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO:90-157.
31. AAV по любому из пп. 18-27, дополнительно содержащий инвертированные концевые повторы AAV и трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторными последовательностями, которые контролируют экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине.
32. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 18-31 и физиологически совместимый носитель.
33. Способ доставки трансгена в клетку, включающий в себя стадию приведения в контакт клетки с AAV по п. 31 или композицией по п. 32.
34. Способ по п. 33, отличающийся тем, что клетка представляет собой мышечную клетку и трансген кодирует микродистрофин.
35. Способ лечения субъекта, страдающего от нарушения или заболевания, связанного с аномальной активностью эндогенного белка, включающий в себя введение субъекту эффективного количества AAV по п. 31, причем гетерологичный ген кодирует биологически активную копию белка.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна и трансген кодирует микродистрофин.
37. Вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный капсидный белок адено-ассоциированного вируса (AAV), причем химерный капсидный белок AAV содержит аминокислотную последовательность VP1 последовательности реципиентного капсида AAV, имеющую вариабельные области I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII и IX, и при этом одну или большее количество вариабельных областей I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX заменяют соответствующей вариабельной областью из последовательности донорного капсида AAV, при этом аминокислотные последовательности химерного капсидного белка AAV и реципиентная капсидная последовательность являются разными.
38. Вектор по п. 37, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность функционально связана с гетерологичным регуляторным элементом, который контролирует экспрессию химерного капсидного белка AAV в клетке-хозяине.
39. кДНК, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный капсидный белок, имеющий аминокислотную последовательность VP1 реципиентного каракаса капсида AAV, содержащую вариабельные области I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII и IX, и при этом одну или большее количество вариабельных областей I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII и IX заменяют соответствующей вариабельной областью из одного или большего количества донорных капсидов AAV.
40. Клетка, содержащая вектор по п. 37 или 38, или кДНК по п. 39.
41. Применение AAV по любому из пп. 18-31 в изготовлении лекарственного средства для лечения нарушения или заболевания.
42. Применение по п. 41, отличающееся тем, что нарушение или заболевание связано с аномальной активностью гена, экспрессированного AAV.
43. Применение по п. 42, отличающееся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна и трансген кодирует микродистрофин.
44. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 18-31 для лечения заболевания или нарушения.
45. Композиция по п. 44, отличающаяся тем, что нарушение или заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна и трансген кодирует микродистрофин.
46. Способ нацеливания трансгена на мышечную клетку, включающий в себя приведение в контакт мышечной клетки с AAV по любому из пп. 18-31.
47. Способ продуцирования адено-ассоциированного вируса (AAV) по любому из пп. 1-3 или 18-31, включающий в себя:
(а) культивирование вирус-продуцирующей клетки, в которую был введен первый нуклеотидный вектор, содержащий 5' и 3'-последовательности инвертированных концевых повторов AAV, фланкирующих трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторными последовательностями, которые контролируют экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине, и второй нуклеотидный вектор, содержащий нуклеотидные последовательности rep и cap AAV, причем указанная нуклеотидная последовательность cap кодирует капсид AAV, который по меньшей мере на 95% идентичен любой из SEQ ID NO:15-157; и
(б) выделение AAV из супернатанта вирус-продуцирующей клеточной культуры.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что вирус-продуцирующая клетка является клеткой насекомого.
49. Способ по п. 48, отличающийся тем, что клетка насекомого является клеткой Sf9.
50. Способ по п. 47, отличающийся тем, что первый нуклеотидный вектор вводят в вирус-продуцирующую клетку путем инфицирования вирус-продуцирующей клетки бакуловирусом, содержащим первый нуклеотидный вектор.
51. Способ по п. 47, отличающийся тем, что первый и второй нуклеотидные векторы вводят в вирус-продуцирующую клетку путем инфицирования вирус-продуцирующей клетки первым бакуловирусом, содержащим первый нуклеотидный вектор, и вторым бакуловирусом, содержащим второй нуклеотидный вектор.
52. Адено-ассоциированный вирус (AAV), продуцируемый с помощью способа по любому из пп. 47-51.