ПОСТОЯННЫЕ ЛИНИИ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУСОВ ГРИППА

1. Способ получения вакцины на основе вируса гриппа, включающий:
а) инфицирование постоянной клетки-амниоцита человека вирусом гриппа,
б) культивирование постоянной клетки-амниоцита человека,
в) экспрессию вируса гриппа и
г) изолирование вируса гриппа из среды,
причем постоянная клетка-амниоцит человека экспрессирует аденовирусные генные продукты E1A и E1B.
2. Способ по п.1, в котором постоянная клетка-амниоцит человека находится в или между экспоненциальной фазой роста и стационарной фазой роста в момент инфицирования вирусом гриппа.
3. Способ по п.1, в котором изолирование вируса гриппа из среды в этапе г) осуществляют путем дифференциального центрифугирования в градиенте плотности или зонального центрифугирования.
4. Способ по п.1, в котором аденовирусные генные продукты E1A и E1B содержат нуклеотиды от 1 до 4344, от 505 до 3522 или нуклеотиды от 505 до 4079 аденовируса человека серотип-5.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором постоянная клетка-амниоцит человека экспрессирует аденовирусный генный продукт pIX.
6. Способ по п.1, в котором осуществляют полную смену среды или 1:2 разбавление со средой до инфицирования вирусом гриппа.
-4
-5
-5
-5
-6
7. Способ по любому из пп.1-4, в котором добавляют трипсин в концентрации 1×10 E/клетку, 1×10 E/клетку, 3×10 Е/клетку, 5×10 E/клетку или 1×10E/клетку при инфицировании вирусом гриппа.
8. Способ по любому из пп.1-4, в котором при инфицировании вирусом гриппа используют объем вируса, обозначаемый как значение MOI, в пределах от 0.001 до 0.3.
9. Способ по любому из п.п.1-4 в котором вирус гриппа представляет собой вирус гриппа человека, вирус свиного гриппа или вирус лошадиного гриппа.
10. Способ по п.9, в котором вирус гриппа выбирают из штаммов вирусов гриппа A/PR/8/34, A/Uruguay/716/2007, A/Brisbane/59/2007, B/Florida/4/2006, вируса свиного гриппа A/Swine (H1N2) Bakum/1832/00 или вируса лошадиного гриппа A/Equine, A/Newmarket/1/93 (H3N8).
11. Применение постоянной клетки-амниоцита человека для получения вакцины на основе вируса гриппа, причем постоянная клетка-амниоцит человека экспрессирует аденовирусные генные продукты E1A и E1B.