Иммуногистохимический анализ синхронного первично-множественного рака желудка

© КРЫЛОВ А.Ю., 2011

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СИНХРОННОГО ПЕРВИЧНО-МНОЖЕСТВЕННОГО РАКА ЖЕЛУДКА

КРЫЛОВ А.Ю.

ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования»

Резюме. Проведен сравнительный иммуногистохимический анализ выраженности экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации ф53, Bcl 2 и Ю67) в клетках синхронных первично-множественных карцином желудка (п=21), сочетающихся с раком толстой кишки. В качестве контроля использовано 21 наблюдение рака желудка с пятилетней выживаемостью, без рецидивов и множественности после резекции желудка. Установлено, что значение показателя пролиферации Ю67 и апоптоза Bcl 2 в исследуемой группе было выше, чем в контрольной.

При клинико-морфологическом анализе экспрессии рецепторов эпидермального фактора роста (HER2/neu) в клетках резецированных карцином желудка (п=52) гиперэкспрессия этого маркера иммуногистохимически была выявлена в 23% случаев. Эти случаи были представлены опухолями с гистологическим строением аденокарциномы (кишечный тип). В опухолях диффузного типа гиперэкспрессия HER2/neu нами не выявлена. Полученные данные свидетельствуют об экономической целесообразности проведения дорогостоящего скрининга гиперэкспрессии HER2/ neu для решения вопроса о возможности таргетной терапии герцептином, прежде всего в опухолях с гистологическим строением аденокарциномы.

Ключевые слова: иммуногистохимический анализ, маркеры апоптоза и пролиферации (р53, Вс12 и К167), синхронные первично-множественные карциномы желудка, рецепторы эпидермального фактора роста (ИЕЯ2/ пей) при раке желудка.

Abstract. Comparative immunohistochemical analysis of the expression of markers of apoptosis and proliferation (p53, Bcl 2 and Ki67) in the cells of synchronous mulifocal stomach carcinomas (n=21) associated with colon cancer was made. As the control group 21 observations of stomach carcinoma with five-year survival rate, without backsets and multiplicity after stomach resection were used. It was determined that the value of proliferation index Ki67 and apoptosis Bcl 2 in the investigated group was higher than that in the control one.

At clinicomorphological analysis of the expression of epidermal growth factor receptors (HER2/ neu) in the cells of resected stomach carcinomas (n=52) hyperexpression of this marker was revealed immunohistochemically in 23% of cases. These cases were represented by the tumours with histological pattern of adenocarcinoma (intestinal type). In the tumours of diffuse type HER2/ neu hyperexpression was not revealed. The obtained results testify to the economic feasibility of carrying out high-priced HER2/neu hyperexpression screening to make a decision about the target therapy with gerceptin first of all in the tumours with histological pattern of adenocarcinoma.

В последние десятилетия проблема первично-множественных злокачественных опухолей (ПМЗО) приобрела особое значение в связи с наблюдаемым повышением их частоты [1]. Это в полной мере относится к

Адрес для корреспонденции: г.Минск, ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования»; e-mail: andrei_krilov@mail.ru, тел. моб.: 8(029) 614-87-41 - Крылов А.Ю.

опухолям желудочно-кишечного тракта [2, 3]. В практическом плане целесообразен поиск критериев возникновения второй опухоли при синхронном раке на основании морфологической оценки первой опухоли. Известно, что у членов «раковых семей» ПМЗО встречаются чаще, чем в популяции. Считается, что в случаях с ПМЗО имеет место нестабильность генной структуры [4]. На наш взгляд, при поиске прогностических критериев возникновения второй опухоли пер-

спективно исследование маркёров апоптоза и пролиферации. Работы по исследованию экспрессии Ю-67, р53, Вс1 2 при раке желудка единичны и посвящены прогнозированию его течения [5], а также изучению канцерогенеза [6].

Особое место при раке желудка занимают исследования экспрессии НЕЯ2/пеи у больных раком желудка в плане возможности использования герцептина для лечения этого заболевания [7], так как высокая эффективность этого препарата доказана при НЕЯ2/пеи - положительных карциномах молочной железы. Исследования экспрессии этого маркёра при раке желудка немногочисленны и довольно противоречивы. По данным разных авторов, в различных регионах мира ее частота варьирует в широких пределах (Япония - 23% [8]; Европа - 91% [9], 13% [10]; Корея - 16% [11]). Учитывая относительную немногочисленность исследований, посвященных экспрессии НЕЯ2/пеи при раке желудка и их неоднозначные результаты, а также перспективы в плане лечения рака желудка герцеп-тином, следует продолжить определение этого протеина при раке желудка, в том числе при первично-множественных злокачественных опухолях у больных раком желудка.

Целью данного исследования явилось изучение иммуногистохимических особенностей синхронного первично-множественного рака желудка на основании оценки экспрессии в клетках карциномы К1-67, р53, Вс1 2, а также проведение клинико-морфологического анализа экспрессии НЕЯ2/пеи при раке желудка.

Методы

Материалом для исследования явился 21 случай резецированного желудка у больных первично-множественным синхронным раком, где первой опухолью являлся рак желудка, а второй - рак толстой кишки. Эти случаи отобранны из республиканского канцер-регистра за 1997-2007 гг. В качестве контрольной группы использовано 21 наблюдение рака желудка с пятилетней выживаемостью, без рецидивов и множественности (Т3) после резекции желудка. Клинико-морфологический анализ экспрессии Нег2/пеи проведен в 52 случаях впервые выявленного рака желудка после резекции.

Микроскопический анализ операционного материала проведен в соответствии с гистологическими классификациями ВОЗ (2000) и Lauren (1965). Гистологический вариант рака определялся по наименее дифференцированному компоненту опухоли.

В работе использованы стандартные окраски гистологических препаратов (гематоксилин и эозин), иммуногистохимические маркёры Ki-67 (клон MTB 1), p53 (клон DO-7), Bcl 2 (клон 124), Her2/neu (клон 1D5), в качестве визуализирующей системы использовали набор LSAB-2 корпорации DAKO.

Степень выраженности экспрессии маркеров Ki-67, p53, Bcl-2 определялась в процентном соотношении на тысячу клеток в разных полях зрения.

Степень выраженности экспрессии HER2/ neu оценивали по трем градациям на основании данных литературы, посвященной его изучению при раке желудка [12, 13]. Экспрессию HER2/ neu оценивали как 3+ при сильном окрашивании мембран у более 10% опухолевых клеток. 2+ соответствовало слабой или умеренной окраске полной окружности клеточных мембран 10% или более опухолевых клеток. Степень 1+ выставлялась при неполном окрашивании мембран у 10% и более клеток карциномы. Степень 0 соответствовала наблюдениям, где мембранное окрашивание было у менее чем у 10% клеток или отсутствовало. Степени 2+ и 3+ классифицировались как гиперэкспрессия HER2/neu.

Статистический анализ результатов исследования был выполнен с использованием аналитического пакета Statistica 7.0. Для проверки достоверности различий изучаемых признаков в независимых выборках - U-тест Манна-Уитни (Mann-Whitney). При необходимости сравнения частот встречаемости признаков в различных группах использовали тест %2, а при малом (n<10) размере сравниваемых групп - точный тест Фишера (Fisher’s exact test).

Результаты и обсуждение

Нами был исследован 21 случай синхронного рака желудка (12 случаев карцином кишечного и 9 диффузного типа рака желудка, классифицированных по Lauren). Контрольную груп-

пу составил 21 случай рака желудка с пятилетней выживаемостью, без рецидивов и множественности (Т3). По гистологическому типу она была подобрана в соответствии с изучаемой группой (12 случаев кишечного и 9 случаев диффузного типа рака желудка). Результаты имму-ногистохимического исследования экспрессии Кі-67, р53, Всі 2 приведены в таблице 1.

Анализ данных таблицы 1 показывает, что значение маркера пролиферации Кі67 и маркера апоптоза Всі 2 для клеток синхронного рака желудка достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,0001 и р=0,0015 соответственно). Значение иммуногистохимического маркера р53 в клетках синхронного рака желудка было выше, чем в контрольной группе, однако различия статистически не достоверны (р>0,05).

Экспрессия Нег2/пеи в клетках карцином желудка в случаях синхронных поражений отмечалась как 1+ в 5 наблюдениях, в остальных -не наблюдалась. В отдельных случаях присутствовало фоновое очаговое цитоплазматическое окрашивание. Гиперэкспрессия в клетках синх-

ронного рака желудка не наблюдалась ни в одном случае.

В контрольной группе гиперэкспрессия Нег2/пеи была выявлена в 7 случаях (16%). Все они гистологически были представлены аденокарциномами О 2 (кишечный тип рака желудка) (рис. 1).

Учитывая возможную перспективность лечения герцептином рака желудка с гиперэкспрессией Нег2/пеи, иммуногистохимически было исследовано 52 случая вновь выявленного рака желудка после резекции и был проведен клинико-морфологический анализ.

Средний возраст больных 64,7 лет, причем у женщин он составлял 68,1 лет, а у мужчин - 62 года. Мужчины - 29 случаев, женщины -23. Локализация опухоли согласно МКБ была следующей: гастроэзофагальное сочленение - 1 случай, тело желудка - 16 случаев, преддверье привратника - 23 случая, привратник - 12 случаев.

Гиперэкспрессия Нег2/пеи (2+,3+) наблюдалась в 12 случаях рака желудка, что составило

Таблица 1

Иммуногистохимические показатели экспрессии Ki-67, p53, Bel 2 у пациентов с синхронным раком желудка

Показатель Группа Значимость

СРЖ n = 21 К n = 21

Ki 67 40,0 (29,0-51,0) 5,0 (4,0-10,0) р<0,0001

p53 17,0 (3,0-41,0) 4,0 (3,0-30,0) р>0,05

Bcl 2 13,0 (2,0-37,0) 1,0 (0,0-4,0) р=0,015

Примечание: СРЖ - синхронный рак желудка, К - контрольная группа.

Таблица 2

Анализ экспрессии Нег2/пеи у пациентов с синхронным раком желудка

и контрольной группы

Экспрессия СРЖ РЖ ЕС 2 р

Her2/neu Абс. % Абс. % X

0 16 76,2 12 57,1

1+ 5 23,8 2 9,5

2+ 0 0 3 14,3 8,4 0,004

3+ 0 0 4 19,1

Всего 21 100 21 100

23% от всех наблюдений. Причём в 4 случаях опухоль локализовалась в теле желудка, что составило - 33,3%, в антральном отделе желудка в 7 случаях (58,3%), в области гастроэзофагаль-ного сочленения в 1 случае (8,3%).

В отдельных исследованиях экспрессии Her2/neu при раке желудка отмечено, что для опухолей гастроэзофагеального сочленения характерен более высокий процент по сравнению с другими локализациями рака желудка [10, 15]. В материале нашего исследования был всего 1 случай наблюдения карциномы гастроэзофагеального сочленения, гистологически представленный аденокарциномой G 2, в котором отмечалась гиперэкспрессия Her2/neu (2+).

По макроскопической форме язва-рак наблюдался в 18 случаев, утолщение слизистой -13 случаев, блюдцеобразный - 11 случаев, полиповидный - 6, в 4 случаях форму роста установить не представилось возможным.

26 случаев было представлено диффузным типом рака (по классификации Lauren), 26 - кишечным типом. Все случаи диффузного рака были представлены перстневидно-клеточным раком желудка, либо недифференцированным раком. Кишечный тип был представлен аденокарциномами различного грейда с преобладанием G 2.

Результаты исследования экспрессии НБЯ2/пеи представлены в таблице 3.

Анализ данных, представленных в таблице 2, показывает, что классическая гиперэкспрессия 3+ была выявлена в 4 случаях, 2+ - в 8 случаях у пациентов с аденокарциномой О2. В процентном соотношении гиперэкспрессия Нег2/ пеи (3+,2+)выявлялась в 23% случаев аденокарцином. В диффузных раках экспрессия данного маркёра выявлена не была. В относительно немногочисленных исследованиях экспрессии Нег2/пеи при раке желудка в зависимости от гистологического типа показано, что гиперэкспрессия чаще встречается при кишечном типе рака желудка по сравнению с диффузным (21% и 2% [14], 16% и 7% [10], 34% и 6% [15]).

Заключение

1. Установлено, что значение показателей пролиферации К167 и апоптоза Вс1 2 для клеток синхронного рака желудка, сочетающегося с раком толстой кишки, достоверно выше, чем в контрольной группе.

2. При анализе выраженности экспрессии Нег2/пеи в клетках карциномы желудка установлено, что он экспрессируется в 23% случаев. При этом гиперэкспрессия Нег2/пеи определялась в

Таблица 3

Анализ экспрессии Нег2/пеи у пациентов с впервые выявленным раком желудка

в зависимости от типа карциномы

Экспрессия Her2/neu Тип рака 2 X Р

Кишечный Диффузный

Абс. % Абс. %

0 12 46,15 21 80,8

1 2 7,69 5 19,2

2 8 30,78 0 0 15,6 0,0001

3 4 15,38 0 0

Всего 26 100 26 100

опухолях с гистологическим строением аденокарциномы. Случаев гиперэкспрессии в клетках диффузного типа рака желудка нами не выявлено.

3. Полученные нами данные предполагают необходимость проведения дорогостоящего скрининга для выявления гиперэкспрессии Her2/ neu с целью таргетной терапии герцептином, прежде всего для опухолей с гистологическим диагнозом аденокарцинома.

Литература

1. Чиссов, В.Н. Первично-множественные злокачественные опухоли. / В.Н. Чиссов, А.Х. Трахтенберг // М.: Медицина. - 2000. - 336 с.

2. Федоров, В. Д. Первично-множественные злокачественные опухоли пищеварительного тракта / В. Д. Федоров, Б. Д. Савчук, В. А. Косарев, А.И. Тугаринов // Сов. Мед. - 1979. - №8. - С. 57-61.

3. Kaibara, N. Patients with multiple primary gastric cancers

tend to develop second primaries in organs other than stomach / Maeta M., Jkegushi M. // Surg. Today. -1993. - Vol. 23, № 2. - Р 186-189.

4. Г арькавцева, РФ. Генетика рака желудочно-кишечного тракта / РФ. Гарькавцева, Т.П. Казубская, Н.Ф. Белев, В.Ю. Сельчук // Современная онкология. -2001. - Т. 3, № 4. - C. 1-6.

5. Зорькин, В.Т. Экспрессия ki-67 и р53 при дисплазии и раке желудка / В.Т. Зорькин, В.В. Лазарев, А.Ф. Климачев и др. // Архив патологии. - 2006. - Т. 68, № 3. - С. 6-10.

6. Ryo Wada, Mucin phenotypic and p53 gene abnormality of gastric super-minute well-differentiated adenocarcinoma: Re-evaluation with relationship between histogenesis of well-differentiated adenocarcinoma and intestinal metaplasia in distal stomachToshikazu / Ryo Wada, Yamaguchi, Takayuki Tanizaki // Journal of Carcinogenesis - 2005, N 4. - Р. 14-21.

7. Ганьшина, И.П. Герцептин: новые перспективы в лечении рака / И.П. Ганьшина, Е.В. Степанова // Фарматека - 2002. № 12.

8. Yano T, Expression of HTR2 in gastric cancer: comparison

between protein expression and gene amplification using a new commercial kit. / Yano T, Ochial A, Doi T et al. // J Clin Oncol - 2004; 22: 14S (Abstr 4053).

9. Allgayer H, C-erbB-2 is of independent prognostic relevance in gastric cancer and is associated with the expression of tumor associated protease systems / Allgayer H, J Babic R, Gruetzner KU et al. // Clin Oncol - 2000. - N 18. Р 2201-2209.

10. Gravalos C, Marguez A, Garcia-Caibonero R et al. Correlation

between Her2/neu jverexpression / amplification and clinicopathological parametes in advanced gastric cancer patients: a prospective study 2007 Gastrointestinal Cancers Symposium. 130 (Abstr 89).

11. Park DI, Yun JW, Park JH et al. HER2/neu amplification is an independent prognostic factor in gastric cancer. Dig Dis Sci 2006; 51: 1371-1379.

12. Mikihiko Kimura, Usefulness and Limitation of Multiple Endoscopic Biopsy Sampling for Epidermal Growth Factor Receptor and c-erbB-2 Testing in Patients with Gastric Adenocarcinoma / Mikihiko Kimura et al // Jap J Clin Oncol 2005. - N 35(6). Р 324-331.

13. S.D.Xie, HER2/neu protein expression in gastric cancer is associated with poor survival / S.D.Xie , C.Y. Xu, J.G. Shen, Z.N. Jiang, J.Y. Shen and L.B. // Wang Molecular medicine reports - 2009. N 2. P. 943-946.

14. Tanner M, Amplification of HER2 in gastric carcinoma: association with topoisomerase lla gene amplification, intestinal type, poor prognosis and sensitivity to trastuzumab / Tanner M, Hollmen M, Junttila TT et al. // Ann Oncol - 2005/ N 16. P 273-278.

15. Lordick, HER2-positive advanced gastric cancer: similar HER2-positivity levels to breast cancer / Lordick, Bang YJ, Kang YK et al. // Eur J Cancer - 2007. N 5(4). P. 271 (Abstr 3541).

Поступила 22.01.2011 г. Принята в печать 18.02.2011 г.