СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АГЕНТА, СВЯЗЫВАЮЩЕГОСЯ С ПРЕПРО-ВАЗОПРЕССИНОМ ИЛИ С ЕГО ФРАГМЕНТАМИ

1. Способ получения и/или подтверждения получения агента, связывающегося с препро-вазопрессином (SEQ ID NO. 1) или с его фрагментами длиной по меньшей мере 6 аминокислот, включая копептин (SEQ ID NO. 2), где указанный способ включает по меньшей мере одну из нижеследующих стадий:
a) получения связывающего агента с использованием формирующего агента, содержащего аминокислотную последовательность длиной по меньшей мере в 6 аминокислот, содержащуюся в аминокислотной последовательности, соответствующей C-концевой части, но не содержащей аминокислоту 164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1);
b) определения способности связывающего агента связываться с аминокислотной последовательностью длиной по меньшей мере в 4 аминокислоты, содержащейся в аминокислотной последовательности, соответствующей C-концевой части, но не содержащей аминокислоту 164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1);
c) отбора и, необязательно, выделения связывающего агента из множества связывающих агентов, способных связываться с аминокислотной последовательностью, содержащейся в аминокислотной последовательности, соответствующей C-концевой части, но не содержащей аминокислоту 164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1);
d) осуществления анализов на связывание со связывающим агентом в целях определения ex vivo стабильности препро-вазопрессина или его фрагментов длиной по меньшей мере в 6 аминокислот, включая копептин, в биологическом образце;
e) осуществления анализов на связывание со связывающим агентом и с другим связывающим агентом в целях сравнения для определения концентрации препро-вазопрессина или его фрагментов длиной по меньшей мере в 6 аминокислот, включая копептин, в биологическом образце;
где C-концевая часть состоит из аминокислот 138-164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1),
с получением связывающего агента или смеси связывающих агентов, способных связываться с эпитопом, содержащимся в аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам 138-163, но не содержащей аминокислоту 164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
2. Способ по п. 1, где аминокислоты 163-164, предпочтительно, аминокислоты 162-164, а наиболее предпочтительно, аминокислоты 161-164 отсутствуют в аминокислотной последовательности, соответствующей C-концевой части препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
3. Способ по п. 1 или 2, где указанная аминокислотная последовательность, соответствующая C-концевой части препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1), соответствует аминокислотам 140-163, предпочтительно, 142-163, более предпочтительно, 144-163, а наиболее предпочтительно, 146-163 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
4. Способ по п. 1 или 2, где аминокислотная последовательность, содержащаяся в формирующем агенте, и/или аминокислотная последовательность, содержащаяся в аминокислотной
последовательности, соответствующей C-концевой части препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1), содержит по меньшей мере 8, предпочтительно, по меньшей мере 10, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере 12 непрерывно следующих друг за другом аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам 146-163 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1) и, предпочтительно, выбранных из группы, включающий пептиды, состоящие из аминокислот 146-163 (SEQ ID NO. 7), 146-162 (SEQ ID NO. 8), 146-161 (SEQ ID NO. 9), 146-160 (SEQ ID NO. 10), 146-159 (SEQ ID NO. 11), 146-158 (SEQ ID NO. 12) и 146-157 (SEQ ID NO. 13) препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
5. Способ по п. 1 или 2, где указанный связывающий агент обладает способностью связываться с аминокислотной последовательностью, состоящей по меньшей мере из 6, предпочтительно, по меньшей мере из 8, более предпочтительно, по меньшей мере из 10, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере из 12 непрерывно следующих друг за другом аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам 146-163 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1), а предпочтительно, аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из аминокислот 146-163 (SEQ ID NO. 7), 146-162 (SEQ ID NO. 8), 146-161 (SEQ ID NO. 9), 146-160 (SEQ ID NO. 10), 146-159 (SEQ ID NO. 11), 146-158 (SEQ ID NO. 12) и 146-157 (SEQ ID NO. 13) препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
6. Способ по п. 1 или 2, где стадия определения (b) включает картирование эпитопов.
7. Способ по п. 1 или 2, где специфичность связывания связывающего агента с указанным эпитопом определяют, в частности, в стадиях (d) и/или (e) путем сравнения со специфичностью к эпитопу другого связывающего агента, проводимого в сравнительных целях, а предпочтительно, связывающего агента, которому, как известно, для связывания с указанным эпитопом не требуется присутствия указанной аминокислоты 164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO.1).
8. Способ по п. 1 или 2, где стадия отбора включает аффинное разделение.
9. Способ по п. 1 или 2, включающий проведение:
- стадии a), но не стадий b), c), d) и e), или
- стадии b), но не стадий a), c), d) и e), или
- стадии c), но не стадий a), b), d) и e), или
- стадии d), но не стадий a), b), c) и e), или
- стадии e), но не стадий a), b), c) и d), или
- стадий b) и c), но не стадий a), d) и e).
10. Пептид, который помимо связывающей части состоит из функциональной части или содержит функциональную часть, состоящую по меньшей мере из 6, предпочтительно, по меньшей мере из 8, более предпочтительно, по меньшей мере из 10, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере из 12 непрерывно следующих друг за другом аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам 146-163 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1), а предпочтительно, пептида, выбранного из группы, включающей пептиды, состоящие из аминокислот 146-163 (SEQ ID NO. 7), 146-162 (SEQ ID NO. 8), 146- 161 (SEQ ID NO. 9), 146-160 (SEQ ID NO. 10), 146-159 (SEQ ID NO. 11), 146-158 (SEQ ID NO. 12) и 146-157 (SEQ ID NO. 13) препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
11. Применение пептида по п. 10 в качестве формирующего агентa в способе по любому из пп. 1-9.
12. Связывающий агент, полученный способом по любому из пп. 1-9, или его применение по п. 11.
13. Связывающий агент по п. 12, а именно антитело, предпочтительно моноклональное антитело, поликлональная антисыворотка, обогащенное или очищенное поликлональное антитело, рекомбинантное антитело или их функциональные производные.
14. Применение связывающего агента по п. 12 или 13 для качественного или количественного детектирования препро-вазопрессина или его фрагментов, включая копептин, в биологическом образце.
15. Применение по п. 14, где указанный биологический образец представляет собой физиологическую жидкость, выбранную из группы, включающей кровь, сыворотку, плазму, мочу, цереброспинальную жидкость и слюну.
16. Применение по п. 14 или 15, где используется по меньшей мере один дополнительный связывающий агент, способный связываться с эпитопом, который полностью или частично содержится в аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам 126-164 препро-вазопрессина (SEQ ID NO. 1).
17. Применение по п. 16, где указанный по меньшей мере один дополнительный связывающий агент представляет собой антитело,
предпочтительно, моноклональное антитело, поликлональную антисыворотку, обогащенное или очищенное поликлональное антитело, рекомбинантное антитело или их функциональные производные.
18. Набор для качественного или количественного детектирования препро-вазопрессина или его фрагментов, включая копептин, в биологическом образце, где указанный набор содержит связывающий агент по п. 12 или 13.