СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БИГУАНИДОВ
METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF BIGUANIDINE DERIVATIVES

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для количественного определения лекарственных веществ - производных бигуанидов: глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина в субстанциях в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях.
Количественное определение глибутида в таблетках на практике проводят согласно методике, изложенной в технических условиях ТУ №42-133-77, сущность которой заключается в титровании препарата методом Фольгарда или УФ-спектрометрией.
Подтверждение подлинности метфорфина в таблетках на практике проводят методом ТСХ на пластине, покрытой силикагелем, в системе н-бутанол - лед. уксусная кислота - вода (4:1:5). Этим же методом устанавливают содержание примеси исходного продукта синтеза - циангуанидина в системе ацетон - бензол - вода (12:6:1) на пластинке, покрытой целлюлозой (Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. Учебное пособие. - М.: МЕДпресс-информ., 2007. - с.326-327).
Количественное определение метформина гидрохлорида на практике проводят согласно общей методике Британской Фармакопеи (British Pharmacopoeia. - 1993. - Vol.I. - с.415-416), сущность которой заключается в неводном титровании хлорной кислоты в ледяной уксусной кислоте в присутствии ртути (II) ацетата. Другая методика количественного определения метформина гидрохлорида заключается в изучении снятых УФ-спектров при 232 нм (British Pharmacopoeia. - 1993. - Vol.II. - с.1092).
Предложена цветная реакция метформина с I-нафтолом и гипохлоритом натрия в щелочной среде (Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. Учебное пособие. - М: МЕДпресс-информ., 2007). Раствор окрашивается в оранжево-красный цвет, темнеющий со временем. Данная реакция не может быть использована для количественного определения метформина.
Количественное определение прогуанила гидрохлорида проводят согласно общей методике Государственной Фармакопеи СССР Х-ого изд. (ГФ, X, 1968), сущность которой заключается в осаждении из водного раствора точной навески препарата прогуанил-основания, извлекаемого эфиром. Эфирный экстракт упаривают досуха и взвешивают, определяют температуру прогуанил основания (129-132°C). С прогуанилом ГХ аммиачный раствор меди (II) сульфат осаждает комплексную медную соль розово-фиолетового цвета, растворимую в бензоле.
Приведенные выше способы количественного определения исследуемых препаратов являются малочувствительными и неспецифическими.
Технический результат изобретения заключается в повышении чувствительности, селективности и точности определения лекарственных веществ в фармакопейных препаратах.
Технический результат достигается тем, что способ количественного определения производных бигуанидов, а именно глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина, в фармакопейных препаратах включает растворение анализируемой пробы в очищенной воде или спирте, выдерживание на водяной бане при перемешивании и температуре 30-40°C до полного растворения, доведение объема раствора после охлаждения до метки тем же растворителем и взбалтывание; последовательную обработку аликвотной части полученного раствора 1%-ным щелочным раствором натрия нитропруссида, 3% раствором водорода перекиси и 0,1М раствором гидроксида калия, фотоэлектроколориметрирование окрашенного раствора при длине волны 490 нм и количественное определение производных бигуанидов методом наименьших квадратов.
Предлагаемый способ количественного определения производных бигуанидов в субстанциях основан на их взаимодействии со свежеприготовленным 1% щелочным раствором химического реактива и раствором водорода перекиси.
Щелочной раствор химического реактива получают следующим образом: 1 г натрия нитропруссида растворяют в 100 мл 0,1М раствора КОН в склянке из темного стекла. После полного растворения вещества постепенно прибавляют каплями из градуированной пипетки 0,2-0,3 мл 30% раствора водорода перекиси при перемешивании (светло-оранжевый прозрачный раствор еще раз перемешивается и хранится в склянке из темного стекла в течение месяца).
Щелочной раствор нитропруссида натрия получают путем растворения 3 г в 100 мл 0,1М раствора KOH в склянке из темного стекла (хранится в холодильнике в течение месяца).
Продукты реакции окрашивают растворы в темно-малиновый цвет, устойчивый на протяжении 2 часов. Оптическую плотность поглощения окрашенных растворов измеряют при длине волны 490 нм с помощью фотоэлектроколориметра.
Количественные определения производных бигуанидов в субстанциях проводят методом наименьших квадратов после статистической обработки калибровочных графиков.
На фиг.1 приведена таблица результатов количественного определения глибутида в субстанции.
На фиг.2 приведена таблица результатов количественного определения метформина в субстанции.
На фиг.3 приведена таблица результатов количественного определения прогуанила в субстанции.
На фиг.4 приведена таблица результатов количественного определения пиклоксидина в субстанции.
На фиг.5 приведена таблица результатов количественного определения хлоргексидина в субстанции.
На фиг.6 приведена таблица со сравнительными данными, подтверждающими преимущества предлагаемого способа количественного определения производных бигуанидов.
Пример. Точные навески растертых порошков глибутида (около 0,25 г), метформина (около 0,25 г), прогуанила (около 0,30 г), пиклоксидина (около 0,20 г) и хлоргексидина (около 0,50 г) растворяют в 50 мл очищенной воды или спирта в мерных колбах емкостью 100 мл и выдерживают на водяной бане при 30-40°С до полного растворения при перемешивании. Затем охлаждают, доводят объемы раствора до метки тем же растворителем и взбалтывают.
Для построения калибровочных графиков отмеренные объемы 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мл приготовленных растворов всех исследуемых веществ помещают в мерные колбы емкостью 25-50 мл, последовательно каплями при перемешивании прибавляют 2,5 мл свежеприготовленного щелочного 1% раствора химического реактива в 0,1М растворе KOH и 0,1 мл 3% раствора водорода перекиси. Полученные растворы выдерживают 1 мин при перемешивании и температуре 30-40°C на водяной бане. Появляется темно-малиновое окрашивание. Растворы охлаждают, доводят объемы растворов до метки 0,1М раствором KOH с рН 10 (дополнительное добавление раствора KOH необходимо для сохранения устойчивости окраски полученных растворов в течение 2 часов) и взбалтывают.
Оптическую плотность поглощения окрашенных растворов измеряют на протяжении 10-15 мин с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 в кювете с поглощающим слоем 10,0 мм при длине волны 490 нм. Раствор сравнения - смесь щелочного раствора химического реактива, раствора перекиси водорода и калия гидроксида. Подчинения интенсивности поглощения окрашенных растворов закону Бугера-Ламберта-Бера находятся в пределах концентраций 0,10-0,50 мг/мл для субстанций глибутида и метформина; 0,06-0,30 мг/мл прогуанила; 0,04-0,20 мг/мл пиклоксидина; 0,10-0,50 мг/мл хлоргексидина. Относительная ошибка количественного определения исследуемых лекарственных препаратов в субстанциях не превышает ±0,99%.
Коэффициенты а и b исследуемых субстанций вычислены при обработке калибровочных графиков методом наименьших квадратов.
Разработанный способ количественного определения лекарственных средств производных бигуанидов в субстанциях прост в выполнении, не требует дорогостоящей аппаратуры, дефицитных реактивов и дает воспроизводимые результаты.