Влияние сенсибилизации белковым соматическим продуктом из тканей Ascaris suum на состояние генома соматических и эмбриональных клеток во время раннего органогенеза эмбрионов крыс

взаимоотношения ЖК с СК могут быть не только синергическими, но и антагонистическими.

Полученные данные позволяют полагать, что ЖК принимает участие в процессе индуцирования нематодоустойчивости томатов, композиция, которой с элиситорами заметно способствует сопротивлению растений патогенам.

Выводы. Результаты проведенных исследований указывают на участие СК и ЖК в механизме ИУ растений при фитогельминтозах. Полученные данные об иммуномодулирующем действии биогенных элиситоров и сигнальных молекул растений свидетельствует о регуляторной роли этих механизмов в патогенезе и устойчивости растений при фитогельминтозах и позволяют наметить методические основы использования принципа иммунизации растений для повышения их устойчивости и борьбы с фитогельминтозами.

Работа поддержана грантами «Биоресурсы» и РФФИ.

Participation of signal molecules in formation of plant resistance to nematodes. Zinovjeva S.V., Udalova Zh.V., Vasukova N.I., Gerasimova N.G., Ozeretskovskaya O.L. Center of Parasitology, IPEE RAS. Bach Institute of Biochemistry, RAS.

Summary. The salycic and jasmonic acids participate in formation of plant induced resistance at phytohelminthoses. These signal molecules exibit a regulatory role in pathogenesis and resistance of plants at phytohelminthoses. One can design the methodic basis for immunization of plants with the aim to increase their resistance to nematodes.

ВЛИЯНИЕ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВЫМ СОМАТИЧЕСКИМ ПРОДУКТОМ ИЗ ТКАНЕЙ ASCARIS SUUM НА СОСТОЯНИЕ ГЕНОМА СОМАТИЧЕСКИХ И ЭМБРИОНАЛЬНЫХ КЛЕТОК ВО ВРЕМЯ РАННЕГО ОРГАНОГЕНЕЗА ЭМБРИОНОВ КРЫС

Зорина В.В., Бекиш В.Я.

УО «Витебский государственный медицинский университет», Беларусь

Введение. Сенсибилизация белковыми соматическими продуктами из целых аскарид, кожно-мускульного мешка и полостной жидкости приводят к достоверному росту в костном мозге мышей количества поли- и нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами на 7-й, 14-й дни после их первого введения [1].

Цель исследования - изучить влияние сенсибилизации белковым соматическим продуктом из тканей аскарид на цитогенетические изменения в соматических клетках самок-крыс при беременности и в эмбриональных

204

клетках зародышей, а так же на уровни предимплантационной и постимплантационной гибели эмбрионов на ранней стадии органогенеза.

Материалы и методы. Исследования проводили на 20-ти самках и 4 самцах крыс линии Wistar массой 250 г в возрасте 4 месяца. Животных помещали в клетки в соотношении 5 самок и 1 самец. Скрещивание проводилось в течение 48 часов. Наступление беременности у самок определяли по гиперемии наружных половых органов и наличию сперматозоидов в мазке из влагалища. Беременных самок разделяли на 2 группы по 10 животных в каждой. Первая группа являлась контрольной, а вторая опытной. Получение белкового соматического продукта из тканей A. suum проводили в соответствии с методикой Бекиша В.Я. [1]. Белковый соматический продукт стерилизовался через бактерицидные капроновые фильтры с размером поры 0,45 мкм. Определение белка проводили биуретовым методом [5]. Первой группе вводили внутрибрюшинно стерильный 0,9 % раствор хлорида натрия в объеме 0,5 мл на 5-8 дни беременности. Опытной группе животных вводили внутрибрюшинно белковый соматический продукт из тканей аскарид в суточной дозе 50 мкг/г массы тела животного на стадии раннего органогенеза эмбрионов (5-8 дни беременности). На 19-й день беременности всех самок умерщвляли под эфирным наркозом. Выделяли матку с эмбрионами и бедренные кости. Эмбриотоксические изменения определяли с учетом рекомендаций Б.И. Любимова и соавт. [3] и Р.У. Хабриева и соавт. [6]. Основными показателями эмбриотоксичности считали предимплантационную смертность (разность между количеством желтых тел в яичниках и количеством мест имплантаций в матке) и постимплантационную гибель (разность между количеством мест имплантаций и количеством живых плодов). Клеточные суспензии костного мозга и эмбрионов получали по разработанному нами методу [4]. Метод ДНК-комет проводили по методике N.P. Singh et al. в нашей модификации [2]. В микропрепаратах ДНК-комет клеток костного мозга и эмбрионов подсчитывали по 50 клеток, где учитывали следующие показатели генотоксичности: «длина хвостов комет» в пикселях; процент ДНК в «хвосте кометы»; «момент хвоста» вычисленный программой из «длины хвоста» умноженного на процент ДНК в «хвосте кометы». Для оценки цитотоксического воздействия белкового соматического продукта из тканей A. suum в 100 случайно выбранных клетках костного мозга и эмбрионов определяли процент апоптотических клеток. Полученные данные от сенсибилизированных самок и их эмбрионов сравнивались с показателями контрольной группы.

Результаты и обсуждение. В контрольной группе животных предимплантационная гибель составила 2,53 %, а постимплантационная - 3,89 %.

При сенсибилизации белковым соматическим продуктом из тканей аскарид на 5-8 дни беременности, показатели количества желтых тел, мест имплантации, общего количества эмбрионов, количества живых и мертвых

205

эмбрионов достоверно не отличались от данных контроля. Количество резорбций достоверно возросло в 9 раз по отношению к контрольной группе и составило 0,90+1,10. Средняя масса эмбрионов в помете достоверно снизилась в 2,9 раза по сравнению с контролем. Средний краниокаудальный размер составил 19,30+ 4,50, что достоверно было ниже контрольного уровня в 1,4 раза. В опытной группе показатель предимплантационной гибели достоверно не изменился, а постимплантационная гибель достоверно возросла в 4 раза по сравнению с контрольным показателем.

При проведении щелочного гель-электрофореза изолированных клеток в контрольной группе в клетках костного мозга исследуемые показатели составили: длина “хвостов комет” (в пикселях) 3,34+0,18, процент ДНК в “хвостах комет” 0,42+0,16, “момент хвоста комет”0,02+0,01, процент апоптотических клеток 1,20+0,79.

При сенсибилизации белковым соматическим продуктом из тканей аскарид на 5-8 дни беременности крыс, все исследуемые показатели в клетках костного мозга достоверно отличались от данных контроля. Так, показатель длины “хвостов комет” возрос в 2,1 раза, а процент ДНК в “хвостах комет” - в 9,3 раза по сравнению с контролем. Показатель “момента хвоста комет” достоверно возрос в 1,35 раз и составил 0,27+0,15. Процент апоптотических клеток составил 6,40+1,26, что достоверно превышало контрольный показатель в 5,3 раза.

В контрольной группе при исследовании эмбриональных клеток, показатели метода ДНК-комет составили: длина “хвостов комет” (в пикселях) - 3,49+0,18, процент ДНК в “хвостах комет” - 0,45+0,14, “момент хвоста комет” - 0,02+0,01, процент апоптотических клеток - 1,60+0,70.

У сенсибилизированных на 5-8 дни беременности животных в клетках эмбрионов все показатели достоверно изменялись. Так, показатель длины “хвостов комет” составил 4,99+1,50, что достоверно превышало показатель контроля в 1,4 раза. Показатель процента ДНК в “хвостах комет” превышал контрольный уровень в 4 раза. “Момент хвоста комет” достоверно возрос в 18,5 раз, и составил 0,37+0,33. Показатель процента апоптотических клеток превысил достоверно контроль в 6 раз и составил 9,70+5,56.

Заключение. 1. Сенсибилизация белковым соматическим продуктом из тканей аскарид в суточной дозе 50 мкг/г массы тела крыс на стадии раннего органогенеза эмбрионов (5-8 дни беременности) сопровождается

эмбриотоксическим эффектом, который характеризуется достоверным ростом постимплантационной гибели в 4,98 раза, а также уменьшением средней массы эмбрионов и их краниокаудального размера в 1,42-1,44 раза.

2. Белковый соматический продукт из тканей аскарид обладает выраженными генотоксическим и цитотоксическим эффектами в

соматических и эмбриональных клетках при сенсибилизации беременных крыс на ранних стадиях органогенеза. Это выражается в увеличении клетках костного мозга и эмбрионов показателей процента поврежденной ДНК в 4-9,3 раза, а также числа апоптотических клеток в 5,3-6 раз.

206

Литература: 1. Бекиш В.Я. // Здравоохранение. - 1999. - № 6. - С. 17-19. 2. Дурнев А.Д., Бекиш В.Я и соавт. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений / Методические рекомендации. Утв. РАМН и РАСН. - М., 2006. - 27с. 3. Любимов Б.И. //Ведомости Фармакологического Комитета. - М.: - 1998. - №1. - 20с. 4. Пашинская Е.С., Зорина В.В. и соавт. //Достижения фундаментальной, клинической, медицины и фармации (Матер. 62-й научной сессии УО «ВГМУ»). - 2007, Витебск. - С. 163-165. 5. Морозова Н.А., Барышникова Т.А. и соавт. // Лабораторное дело. -1991. - №2. - С.23-25. 6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832с.

Influence of sensibilization by protein somatic product from Ascaris suum tissues on state of somatic and embryonic cells genome during early organogenesis of rat embryos. Zorina V.V., Bekish V.Ya. Vitebsk State Medical University.

Summary. Sensibilization of rats by protein somatic product originated from A. suum at dose level of 50 mg/g of body weight (5-8 days of gestation) resulted he in embryotoxic effect which was characterized by significant increase of postimplantation lethality by 4,98 times as well as by decrease of embryo mass and size by 1,42-1,44 times. Protein somatic product from A. suum displayed genotoxic and cytotoxic effects in somatic and embryonic cells at administration to pregnant rats what manifested in growth of damaged DNA in bone marrow cells and embryos by 4-9,3 times as well as number of apoptotic cells by 5,3-6 times.

К ПАРАФИЛЯРИОЗУ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ДАГЕСТАНЕ

Зубаирова М.М., Атаев А.М.

Дагестанская ГСХА

Введение. Спируратозы, филяриатозы крупного рогатого скота являются слабо изученными гельминтозами жвачных. А парафиляриоз крупного рогатого скота не изучен на территории Дагестана вообще. Имеющиеся работы А.И. Анисимовой (1983), А.М. Атаева, Х.А. Ахмедрабаданова, Д.А. Закрыжевской, А.А. Ширинова (2001), М.М. Зубаировой (2008, 2008а, 2009, 2009а и др.) посвящены различным аспектам онхоцеркоза, стефанофиляриоза, сетариоза, гонгилонемоза, телязиоза крупного рогатого скота.

Материал и методы. Для изучения парафиляриоза крупного рогатого скота исследованы в 2004-2009 годы 960 животных с подозрением на

207