АКАРИЦИДНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ СОЛИ ЧЕТВЕРТИЧНОГО ФОСФОНИЯ, ЗАМЕЩЕННОГО ДИНИТРОБЕНЗОФУРАКСАНА И КСИМЕДОНГИДРОХЛОРИДА
ACARICIDAL PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF QUATERNARY PHOSPHONIUM SALTS, SUBSTITUTED DINITROBENZOFURAXAN AND XYMEDON HYDROCHLORIDE

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к ветеринарии, и может быть использовано при лечении паразитарных болезней кожи животных, вызванных чесоточными клещами (чесотка) у животных.
Под названием «чесоточные клещи» обычно объединяются клещи - паразиты человека, домашних и диких животных, паразитирующие внутри или на коже их и вызывающие длительное заболевание - чесотку. Чесоточные клещи относятся к типу членистоногих, к классу паукообразных и к отряду клещей.
Саркоптоидозы в большинстве случаев протекают в хронической форме, что является причиной отсутствия лечения и профилактических мероприятий. Однако данные инвазии наносят значительный экономический ущерб, который складывается из снижения продуктивности животных, ухудшения качества шкуры, затрат на проведение лечебно - профилактических мероприятий и т.д., как показано в работе [Токарев, А.Н. Изучение активности «Инсектоакарицида - Д» / А.Н. Токарев // Мат. науч. -. практич. конф. «Вклад молодых ученых в отраслевую науку с учетом современных тенденций развития АПК». - М., 2008. - С.265-266.].
Спектр клинических признаков при болезнях, вызываемых паразитическими клещами, широк: от зуда и локальных поражений кожи до интоксикации и угнетения центральной нервной системы.
В разные годы для терапии животных, больных саркоптоидозами, применялись химические вещества из группы фенолов, серы, гексахлорана [Абуладзе К.И. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственных животных. М.:, «Колос», 1984, 252 с.]. Первые из них обладают слабым акарицидным действием, а последние являются высокотоксичными веществами для животных [Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. М.:, «Колос С», 2002, 743 с.]. В последние годы для борьбы с саркоптоидозами применяют фосфорорганические препараты, пиретроиды и макроциклические лактоны, которые уничтожают клещей, паразитирующих на животных, сравнительно быстро разрушаются во внешней среде, что снижает их опасность для животных [Ахмадеев, Р.Н. Акарицидная и лечебная эффективность сульфоксидов и сульфона при псороптозе кроликов / Р.Н. Ахмадеев // Мат. Республ. научно - технич. конференции. - Казань. - 1978. - С.20-21.].
Однако в большинстве случаев паразитические насекомые и клещи достаточно быстро приобретают устойчивость к используемым препаратам, что вызывает необходимость разрабатывать и испытывать новые инсектоакарицидные средства для борьбы с эктопаразитами животных [Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. М.:, «Колос С», 2002, 743 с.].
Одним из путей решения проблемы является создание противочесоточных средств, оказывающих многоплановое воздействие: овоцидное, обезболивающее противовоспалительное, иммуномодулирующее, и ранозаживляющее.
Задачей данного изобретения является разработка акарицидного состава для лечения паразитарных болезней кожи животных и птиц, вызванных чесоточными клещами (чесотка).
Сущность изобретения заключается в том, что используют фармацевтический состав в виде спрея состоящий из четвертичной соли фосфония (1), замещенного динитробензофуроксана (2), ксимедонгидрохлорида (3) и диметилсульфоксида, в качестве растворителя («Дегельм КД»).
Основными действующими веществами искомого состава являются фармацевтическая композиция четвертичной соли фосфония (1) и замещенного динитробензофуроксана (2), проникающая через кутикулу клеща и разрушающая ее. Прототипом данной заявки является полученный нами патент РФ №2413513, опубл. 10.03.2011 Бюл. №7.
Новый лечебный состав на основе смеси четвертичной соли фосфония (1), замещенного динитробензофуроксана (2), ксимедонгидрохлорида (3) и диметилсульфоксида позволяет получить новую акарицидную фармацевтическую композицию, а именно состав, обладающий более высоким акарицидным и лечебным действием, превосходящий применяемые в настоящее время средства [Ильященко В.И. Испытание новых акарицидных препаратов при отодектозе плотоядных. Сб.научн. тр. Семипалатинского ЗВИ, ч.1. Семипалатинск, 1995. С.67-70].
Для лучшего понимания изобретения ниже приводятся примеры.
Пример 1. Получение акарицидной фармацевтической композиции «Дегельм КД».
В фарфоровой ступке смешивают и растирают в весовых соотношениях (0.1:1:10)-0,1 г четвертичной соли фосфония - н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид формулы (1), 1 г 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-динитробензофураксана (2) и 10 г ксимедонгидрохлорида (3) до получения однородного порошка красного цвета. Затем порциями при тщательном перемешивании добавляют 100 мл димексида (растворителя) и размешивают до получения однородной жидкости. Жидкость является лекарственной формой фармацевтической композиции «Дегельм КД» для лечения животных зараженных чесоточными клещами, который используется в виде спрея.
Синтез соли (1) и фуроксана (2) описан в нашем патенте РФ №2413513, опубл. 10.03.2011 Бюл. №7. Способ получения ксимедонгидрохлорида (3) описан в патенте РФ №2044730, опубл. 1995.9.27, патенте РФ 2219910, опубл. 2003.12.27, патенте РФ 2086240, опубл. 1997.08.10.
Пример 2. Изучение акарицидной активности «Дегельм КД» в отношении клещей P.cuniculi in vitro.
Исследования проводили в условиях in vitro на изолированных клещах P.cuniculi, взятых от спонтанно инвазированных кроликов по методике Ильященко В.И. [Ильященко В.И. Саркоптоидозные клещи, совершенствование методов диагностики и борьбы с ними.: Автореф. дис. докт. биолог, наук. С. - П., 1993. - 36 с.]. На фильтровальную бумагу, в чашке Петри, смоченную 1-2 мл «Дегельм КД» разной концентрации от 0,025 до 1% помещали по 20 живых клещей и накрывали их вторым листом бумаги, пропитанными композициями. Закрытые чашки помещали в термостат при температуре 30°, обеспечивая при этом доступ кислорода. Наблюдение за клещами вели после воздействия препаратов и через 10, 20, 30 мин., 1, 2, 4, 24 и 72 часа после нанесения препаратов часа. Контролем служили 20 клещей, помещенных на фильтровальную бумагу, смоченную дистиллированной водой. Данные исследований сведены в табл.1.
Таблица 1
Акарицидная эффективность состава
Препарат
Концентра-ция состава, %
Число клещей в опыте
Состояние клещей через 30 минут
Состояние клещей через 24 часа
Состояние клещей через 72 часа
Живые
Мертвые
Живые
Мертвые
Живые
Мертвые
0,025
20
20
-
2
18
-
20
0,05
20
18
2
1
19
-
20
0,1
20
17
3
1
19
-
20
0,4
20
9
11
-
20
-
20
«Дегельм КД»
0,8
20
3
17
-
20
-
20
1,0
20
-
20
-
20
-
20
Вода
Контроль
20
20
-
20
-
20
-
Из таблицы 1 видно, что через 30 минут после нанесения композиции «Дегельм КД» в 1% концентрациях мертвыми оказались 20 клещей, в 0,8% и 0,4% концентрациях - 17 и 11 соответственно. Дальнейшее понижение концентрации оказали менее губительное действие на клещей. При нанесении 0,1 и 0,05% концентрации погибли 3 и 2 клеща соответственно. «Дегельм КД» в 0,025% концентрации не оказал акарицидного действия.
При исследовании проб через 24 часа установили, что нанесение композиции «Дегельм КД» в 0,4-1% концентрациях оказал 100% акарицидное действие. При использовании композиции в 0,1-0,05% концентрациях 19 клещей из 20 оказались мертвыми, а в 0,025% - 18 клещей.
Через 72 часа после нанесения композиции в 0,025-1% концентрациях «Дегельм КД» проявил 100% акарицидное действие.
В контроле при нанесении на клещей воду в течение 24 часов все клещи оставались живыми.
Таким образом, действие композиции «Дегельм КД» усиливается с увеличением концентрации в течение первых 24 часов. Через 72 часа все испытуемые концентрации от 0,025 до 1% оказались эффективными.
Пример 3. Изучение эффективности акарицидного состава при нотоэдрозе крыс.
Испытание лечебной эффективности акарицидного состава проводили на 25 крысах, зараженных нотоэдрозом и разделенных на 5 групп.Крысам 1 группы применяли новую композицию «Дегельм КД», животным 2 группы применяли четвертичную соль фосфония (1) и замещенный динитробензофуроксан (2), растворенный в диметилсульфоксиде, 3 группе - четвертичную соль фосфония (1) и замещенный динитробензофуроксан (2), растворенные в масле, на 4 группе испытывали только растворитель - димексид, а 5 группа была контрольной и лечение крыс больных нотоэдрозом не проводили. Все препараты применяли наружно на пораженное место двукратно с интервалом 6 дней. Результаты исследований представлены в табл.2.
Таблица 2
Эффективность препаратов при нотоэдрозе крыс
№ гр.
ИИ до начала лечения
Интенсивность инвазии (ИИ) по дням
Клещи
Яйца
7
10
15
20
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
1.
+++
+++
+
+
-
-
-
-
-
-
2.
+++
+++
+
+
-
+
-
-
-
-
3.
+++
+++
+
+
+
+
-
-
-
-
4.
+++
+++
+
+
-
+
-
+
+
+
5.
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
Из табл.№2 видно, что в первой группе животных препарат «Дегельм КД», дает положительный результат уже на 10 сутки после начала курса лечения. Он действует губительно как на яйца возбудителя, так и на клещей. Следует отметить, что при использовании нового препарата «Дегельм КД» также отмечается заживление поврежденных участков уха и спинки носа крыс уже на 10-15 день исследования.
Во второй группе животных полный положительный результат достигается только на 15-й день лечения. К этому периоду после обработки погибли как яйца, так и имаго клещей. Аналогичный результат был получен у крыс третьей группы.
При лечении животных четвертой группы в соскобах были установлены яйца и имаго в течение всего срока исследования.
На протяжении всего опытного периода в 5 группе крыс при акарологических исследованиях соскобов кожи с ушей мы находили в поле зрения микроскопа, как яйца клещей, так и их взрослые особи, причем на 10-й день имаго стало несколько меньше, а уже к 15-му дню их количество снова возросло.
В течение опыта в соскобах контрольной группы находили яйца и клещей N.notoedres на разных стадиях развития.
Таким образом, для лечения крыс, зараженных нотоэдрозом, наиболее эффективным оказался предлагаемый нами препарат «Дегельм КД».
Пример 4. Изучение эффективности акарицидного состава при псороптозе кроликов.
Опыты проводили на больных псороптозом кроликах (возбудитель Psoroptes cuniculi) со средней и сильной степенью поражения. Животных разделили на 6 групп (по 3 животных в каждой). Кроликов 1 группы лечили составом «Дегельм КД», к животным 2 группы применяли состав из соли фосфония (1) и фуроксана (2) в растворителе - диметилсульфоксиде, на кроликах 3 группы изучали действие предыдущего состава ингредиентов (1 и 2) растворенных в подсолнечном нерафинированном масле, на животных 4 группы изучено действие только ксимедонгидрохлорида (3) в диметилсульфоксиде. На 5 группе кроликов изучалось влияние чистого растворителя - диметилсульфоксида, а 6 группа была контрольной, в которой лечение не проводили. Животных обрабатывали двукратно суспензиями препаратов с интервалом 7 дней.
Учет результатов опытов проводили путем осмотра ушной раковины с последующим исследованием соскобов, взятых из внутренней поверхности ушных раковин, на наличие живых клещей. Учет проводили через 1, 3, 5 и 7 дней после первой обработки и через 7, 14 и 30 дней после вторичного нанесения препаратов. Результаты исследований приведены в табл.3.
Таблица 3
Эффективность препаратов при псороптозе кроликов
№гр.
ИИ до начала лечения
Интенсивность инвазии по дням
Клещи в разн. стадиях развития
Яйца
7
10
15
20
30
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
1.
+++
+++
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
2.
+++
+++
-
+
+
+
-
-
-
-
-
-
3.
+++
+++
-
+
+
+
-
-
-
-
-
-
4.
+++
+++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
5.
+++
+++
-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
6.
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
Из таблицы видно, что до лечения в соскобах кожи больных кроликов обнаружили как клещей Psoroptes cuniculi, так и яйца.
После проведенного лечения у животных 1 группы в соскобах кожи яйца клещей обнаруживаются на 7 день исследований. При взятии соскоба у животных 2 группы клещей находили на 10 день исследований, в последующие дни яйца и клещи в соскобах отсутствовали.
У кроликов 3 группы на 7 день в соскобах кожи находили яйца клещей, а на 10 день кроме того и клещей Psoroptes cuniculi. В последующие дни в соскобах яиц и клещей не обнаружили. У животных 4 группы в соскобах находили яйца и клещей во все сроки исследований.
У кроликов, которым для лечения применяли диметилсульфоксид (5 группа) на 7 день в соскобах не обнаружили живых клещей. В последующие дни в материале находили яйца и клещей в разных стадиях развития. Кролики контрольной группы были заражены псороптозом во все сроки исследования.
Кроме того, установили, что заживление ран на месте локализации клещей у животных 1 группы происходило быстрее (к 15 дню), чем в других группах.
Пример 5. Изучение эффективности акарицидного состава при отодектозе кошек.
Лечению акарицидной композицией «Дегельм КД» подвергли больных отодектозом кошек, вызванным возбудителем Otodectos cynotis, паразитирующим на внутренней поверхности кожи ушной раковины и в наружном слуховом проходе. Перед применением акарицидную композицию подогревали до 30-35°С и тщательно взбалтывали. Обработку проводили путем аэрозольного распыления в ушные раковины и наружный слуховой проход, где локализуются возбудители болезни. Животным 1 группы наносили 1%-ю эмульсию в диметилсульфоксиде «Дегельм КД» в дозе 0,5 мл в каждую ушную раковину в виде спрея. Кратность обработки 2 раза, с интервалом в 6 дней. В качестве эталона для сравнения использовали продажный лекарственный препарат «Ивермек спрей» (животные 2 группы). Животные 3 группы лечению не подвергались. Учет результатов опытов проводили путем осмотра поверхности ушной раковины и слухового прохода и исследованием соскобов на наличие живых клещей.
Таблица 4
Эффективность препаратов при отодектозе кошек
№ гр.
ИИ до начала лечения
Интенсивность инвазии по дням (ИИ)
Клещи в разн. стадиях развития
Яйца
7
15
30
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
1.
+++
+++
-
-
-
-
-
-
2.
+++
+++
+
-
-
-
-
-
3.
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
Из таблицы видно, что до лечения в соскобах кожи больных животных обнаружили как клещей Otodectes cynotis, так и яйца.
После проведенного лечения у животных 1 группы на 7 день исследований в соскобах яйца клещей не обнаружили. У кошек 2 группы в этот период обнаружили только яйца клещей. В последующие дни в соскобах от животных 1 и 2 групп яиц и клещей не находили. Животные контрольной группы были заражены отодектозом во все сроки исследования.
Пример 6. Изучение эффективности акарицидного состава при демодекозе собак.
В опыте использовали 10 собак в возрасте от 7 мес.до 3 лет, больных чашуйчатой формой демодекоза и разделенные на 2 группы (опытная и контрольная). Лечению (1% эмульсия) акарицидной композицией «Дегельм КД» подвергли собак опытной группы больных демодекозом, вызванным возбудителем Demodex canis. У больных собак на коже головы (область надбровных дуг, губ) обнаруживали очаги поражения в виде отдельных круглых пятен, покрытых отрубевидными чешуйками ороговевшего эпидермиса. Кожа на пораженных участках с красновато-синеватым оттенком. При микроскопическом исследовании глубоких соскобов обнаружены клещи Demodex canis.
Акорицидную композицию наносили на предварительно очищенную от загрязнений и корочек кожу собак. «Дегельм КД» применяли путем опрыскивания пораженных участков кожи 1%-ной эмульсией двукратно с интервалом 7-10 дней.
Через неделю после лечения кожа приобрела светло-серый цвет. Новых очагов не наблюдалось. При исследовании соскоба в этот период находили клещей Demodex canis. Через 15 дней после лечения клещи в соскобе не обнаружены. Произошло выздоровление. У собак контрольной группы в соскобах находили клещей и заболевание прогрессировало.
Пример 7. Определение острой токсичности заявленной фармацевтической композиции «Дегельм КД».
50
Уровень острой токсичности заявляемой композиции определяли по стандартным методикам в условиях вивария кафедры паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины. Установлено, что при внутрижелудочном введении композиции мышам ЛД равняется 9750 мг/кг. Согласно ГОСТ 12.1.007-76 акарицидная композиция относится к веществам 4 класса токсичности - нетоксичная [Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении / Н.Ф. Измеров, И.В. Саноцкий, К.К. Сидоров // Медицина, м. - 1977. - С.196-197.].
Таким образом, фармацевтическая композиция, включающая в себя четвертичную соль фосфония (1), замещенный динитробензофуроксан (2), ксимедонгидрохлорид (3) и в качестве растворителя диметилсульфоксид обладает 100% акарицидным действием и не обладает токсичностью.