Изучение противоопухолевой активности циклических гидроксамовых кислот, ингибиторов гистондеацетилазы

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

киллеров у больных обнаружил увеличение полугодовой и годичной выживаемости, а также безрецидивной выживаемости и среднего времени до прогрессирования по сравнению со статистическими показателями.

Заключение. Результаты работы доказывают отсутствие побочных эффектов и положительный эффект иммунотерапии. Метод сопроводительной иммунотерапии цитокин-индуцированными киллерами может способствовать снижению риска метастазирования и рецидива опухолевого роста. Показано, что наилучший результат достигается у пациентов c минимальной опухолевой массой, поэтому данный вид терапии должен применяться для лечения ре-зидуальной болезни и профилактики рецидивов заболевания. Исследование показывает, что иммунотерапия цитокин-индуцированными киллерами является перспективным и эффективным методом лечения больных метастатической меланомой с плохим прогнозом.

К.Г. Абутнарица, О. В. Кеца, И. А. Шмараков СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОХРОМА Р450 В МИКРОСОМНОЙ ФРАКЦИИ КАРЦИНОМЫ ГЕРЕНА КРЫС В УСЛОВИЯХ ВВЕДЕНИЯ

«3-ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ

Черновицкий национальный университет им. Ю. Федьковича, Черновцы, Украина

Введение. Одним из возможных механизмов антиканцерогенного действия ю3-полиненасыщенных жирных кислот является их конверсия в эйкозаноиды, играющая важную роль в клеточном росте и дифференциации. Компоненты монооксигеназной системы катализируют превращение ю3-полиненасыщенных жирных кислот в гидрокси-, дигидрокси- и эпоксипроизводные, которые прямо или опосредственно могут влиять на размножение и рост опухолевых клеток.

Цель исследования — определить содержание цитохро-ма Р450 и скорость образования супероксидного радикала компонентами оксигеназной цепи монооксигеназной системы в микросомной фракции карциномы Герена крыс в условиях введения ю3-полиненасыщенных жирных кислот.

Материалы и методы. В работе использовались самки беспородных крыс. Животных разделили на 2 группы: 1-ю составили крысы с трансплантированной карциномой Ге -рена, 2-ю — крысы-опухоленосители, которым до (за 4 нед) и после трансплантации карциномы Герена вводили ю3-полиненасыщенные жирные кислоты в дозе 120 мг/кг.

Результаты. Результаты проведенных исследований показали, что введение ю3-полиненасыщенных жирных кислот до и после трансплантации опухоли приводит к снижению содержания цитохрома Р450 в микросомной фракции карциномы Герена в латентной и логарифмической фазах онкогенеза по сравнению с показателями крыс-опухоленосителей. Следствием снижения содержания цито-хрома Р450 является повышение скорости его инактивации и перехода в неактивную форму — цитохром Р420. Переход цитохрома Р450 в Р420 происходит в результате модификации 8Н-групп аминокислот, находящихся в активном центре. Неактивная форма Р420 неустойчива и в присутствии кислорода быстро теряет гем, поэтому образование Р420 является одним из этапов деградации цитохрома Р450

в клетках карциномы Герена в условиях действия ю3-поли-ненасыщенных жирных кислот. Снижение содержания цитохрома Р450 может привести к отклонениям в моноок-сигеназном цикле. При этом не весь кислород будет вводиться в молекулу субстрата, часть его будет выделяться из тройного комплекса субстрат-цитохром Р450-оксиген в виде супероксидного радикала. Нами установлено, что снижение содержания цитохрома Р450 происходит на фоне повышения генерации супероксидного радикала компонентами оксигеназной цепи монооксигеназной системы. Образованный супероксидный радикал инициирует процессы окислительной модификации белков и липидов мембран эндоплазматического ретикулума.

Заключение. Введение ю3-полиненасыщенных жирных кислот приводит к снижению содержания цитохрома Р450 в микросомной фракции карциномы Герена, что сопровождается увеличением скорости его перехода в неактивную форму — цитохром Р420 и генерацией супероксидного радикала. Одним из механизмов противоопухолевого действия ю3-полиненасыщенных жирных кислот может быть их влияние на компоненты монооксигеназной системы, нарушение функционирования которых будет снижать резистентность опухолевых клеток к действию лекарственных препаратов.

Н.П. Акентьева, И. В. Выстороп, Д. В. Мищенко ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ЦИКЛИЧЕСКИХ ГИДРОКСАМОВЫХ КИСЛОТ, ИНГИБИТОРОВ ГИСТОНДЕАЦЕТИЛАЗЫ

ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область

Введение. Фермент гистондеацетилаза является молекулярной мишенью последнего поколения противораковых препаратов, поскольку он играет важную роль в регуляции экспрессии генов, пролиферации раковых клеток, развитии опухолей. Ингибиторы гистондеацетилазы обладают высоким потенциалом в лечении онкологических заболеваний. Поэтому их разработка является весьма актуальной в настоящее время.

Цель исследования — синтезировать, идентифицировать молекулярную мишень и исследовать противоопухолевую активность 10 рацемических спироцикличе-ских гидроксамовых кислот (ЦГК) 1—10 (производные 1-гидрокси-1,4,8-триазаспиро[4.5]декан-2-она).

Материалы и методы. Для синтеза ЦГК использовали реакции циклоконденсации а-аминогидроксамовых кислот с замещенными у-пиперидонами (триацетонамином и 1-метилпиперидоном-4). Ингибирование гистондеацетилазы под действием ЦГК оценивали методом флуоресцентного анализа. Анализ противоопухолевой активности ЦГК in vivo проводили методом комбинированной терапии с цисплатином и циклофосфаном на опухолях лейкемии Р388 и лейкемии L1210.

Результаты. Впервые синтезированы и исследованы 10 рацемических спироциклических гидроксамовых кислот ЦГК 1—10 (производные 1-гидрокси-1,4,8-триазаспиро [4.5] декан-2-она). Впервые идентифицирована молекулярная мишень ЦГК 1—10 in vitro. С помощью метода флуоресцентного анализа показано, что добавление ЦГК 1—10 к лизатам клеток рака молочной железы (MDA — MB-231) вызывает

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 5

ингибирование от 55 до 92 % активности гистондеаце- онкогенеза, что, возможно, связано с модификацией со-тилазы. Уровень ингибирования является высоким даже става жирных кислот фосфолипидов митохондриальных по сравнению с трихостатином, известным ингибитором мембран, в то же время снижается интенсивность набу-гистондеацетилазы. Проведенные in vivo исследования хания митохондрий. ЦГК 1—10 в комбинированной терапии с цисплатином Заключение. Введение ю3-полиненасыщенных жирных и циклофосфаном на опухолях лейкемии Р388 и лейкемии кислот до и после трансплантации карциномы Герена при-L1210 показали, что ЦГК обладают выраженной хемосен- водит к снижению интенсивности процессов перекисного сибилизирующей противоопухолевой активностью, увели- окисления липидов в митохондриальной фракции печени чивают продолжительность жизни животных в 1,5—2 раза. крыс, что выражается в снижении уровня первичных и вто-ЦГК 1—10 также проявляли антиметастатический эффект ричных продуктов перекисного окисления липидов в пе-при полихимиотерапии меланомы В16. риод интенсивного роста опухоли в организме. Таким Заключение. ЦГК являются потенциальными препа- образом, применение ю3-полиненасыщенных жирных ратами для лечения онкологических заболеваний. кислот в комбинации с противоопухолевыми препаратами может повысить противоопухолевый эффект последних А.И. Александрова. О.В. Кеца. И.А. Шмараков и способствовать защите от процессов перекисного окис-ВЛИЯНИЕ ю3-ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ ления липидов в мембранах митохондрий. КИСЛОТ НА ПРОЦЕССЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ Е.Н. Александрова. Д.А. Церковский. Ю.П. Истомин ФРАКЦИИ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ С ТРАНСПЛАНТИРОВАННОЙ КАРЦИНОМОЙ ГЕРЕНА ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ Черновицкий национальный университет им. Ю. Федьковича, С ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОМ ФОТОЛОН Черновцы, Украина В КОМБИНАЦИИ С ЦИСПЛАТИНОМ Введение. Развитие опухоли в организме сопровожда- В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO ется интенсификацией свободнорадикальных процессов ГУ«РНПЦОМР им. Н.Н. Александрова», в субклеточных органеллах отдаленных органов. Интенси- агрогородок Лесной, Республика Беларусь фикация перекисного окисления липидов мембран мито- Введение. Одним из путей повышения эффективно-хондрий может привести к набуханию последних и, сти фотодинамической терапии является ее комбини-как следствие, к потере органеллами их основной функ- рование с методами, в основе которых лежат принципи-ции — способности синтезировать аденозинтрифосфат. ально иные механизмы повреждения опухолевой клетки Полиненасыщенные жирные кислоты могут проявлять (химиотерапия). протекторное действие на мембраны митохондрий, по- Цель исследования — изучение противоопухолевой эф-скольку являются их основными структурными компонен- фективности фотодинамической терапии с фотосенсиби-тами. С другой стороны, ю3-полиненасыщенные жирные лизатором фотолон в комбинации с цисплатином (ЦП) кислоты служат источником для синтеза эйкозаноидов, вли- в эксперименте на культуре клеток HeLa. яющих на процессы клеточного деления и дифференциации, Материалы и методы. Монослойную культуру опухо-что делает их перспективными для использования в качестве левых клеток HeLa в логарифмической стадии роста инку-профилактических средств в условиях онкогенеза. бировали в течение 24 ч в питательной среде DMEM (РН-Цель работы — изучение процессов перекисного окис- ПЦ ЭМ) с добавлением 10 % эмбриональной телячьей ления липидов в митохондриальной фракции печени крыс сыворотки и 50 мкг/мл гентамицина. После добавления с трансплантированной карциномой Герена в условиях ЦП (Цитоплатин-ЛЭНС, АО «ВЕРОФАРМ») в дозах 0,05; введения ю3-полиненасыщенных жирных кислот. 0,1 и 0,2 мкг/мл флаконы с культурой клеток инкубирова-Материалы и методы. Исследования проводили на самках ли в течение 24 ч в термостате при температуре 37 °С. Затем белых беспородных крыс. Источником ю3-полиненасы- на 3 ч добавляли раствор фотосенсибилизатора фотолон щенных жирных кислот служил рыбий жир, в состав кото- (РУП «Белмедпрепараты», 1 мкг/мл). Фотооблучение осу-рого входили 32 % эйкозапентаеновой кислоты и 24 % ществляли полупроводниковым лазером «УПЛ ФДТ» (LEMT, докозагексаеновой кислоты. Декапитацию животных про- РБ, X = 661 нм) в экспозиционной дозе 0,25 Дж/см2. Спустя водили под легким эфирным наркозом на 7, 14 и 21-е сут- 21 ч монослой клеток диспергировали 0,02 % раствором ки после трансплантации карциномы Герена, что для опу- Версена и проводили подсчет живых клеток в камере Го -холеносителей соответствует латентной, логарифмической ряева. С помощью регрессионного анализа данных опре-и стационарной стадиям онкогенеза. деляли показатель торможения роста ЭК50 — концентрацию Результаты. По мере роста в организме карциномы ЦП, вызывающую торможение роста культуры опухолевых Герена в митохондриальной фракции печени крыс по- клеток на 50 % по сравнению с контролем. Статистиче-вышается уровень первичных и вторичных продуктов скую обработку результатов проводили c использованием перекисного окисления липидов с максимальными зна- пакета программ Origin Pro 7.0 и STATISTICA 8.0. Крити-чениями в стационарную фазу онкогенеза, что приводит ческий уровень значимости (р) принимался равным 0,05. к набуханию митохондрий. Введение ю3-полиненасыщен- Результаты. Инкубация клеток с ЦП без фотолона ных жирных кислот приводит к снижению уровня про- и фотооблучения в течение 48 ч приводила к дозозави-дуктов перекисного окисления липидов в митохондри- симому угнетению пролиферации: выживаемость клеток альной фракции печени крыс в логарифмическую фазу для ЦП в дозах 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/мл составила 65, 54 и 48 %

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ