Характеристика подтипов ВИЧ-1 у женщин и детей с ВИЧ-инфекцией

Вопросы диагностики

Характеристика подтипов ВИЧ-1 у женшин и детей с ВИЧ-инфекцией

Е. Б. Ястребова, Т. Н. Виноградова, А. Г. Рахманова

СПб ГУЗ «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями», Санкт-Петербург

Исследовано 56 образцов крови (пар мать-ребенок) на подтипы ВИЧ-1 в Национальном институте микробиологии им. Короля Карла III (Мадрид, Испания). Почти у всех исследуемых пар был выделен подтип А. Только у одной пациентки — первого ВИЧ-инфицированного ребенка в России, рожденного в 1982 г., был обнаружен подтип F. Выявление подтипа А свидетельствует о его существовании как в популяции ВИЧ-позитивных наркопотребителей, так и о возможности передаче данного подтипа половым и перинатальным путями. Судя по количеству пациентов, получающих противовирусную терапию из числа обследованных, подтип А, вероятно, обусловливает прогрессирование ВИЧ-инфекции у женщин и детей. В свою очередь, подтип F способствует более медленному прогрессированию заболевания. Ключевые слова: ВИЧ-инфекция, женщины, дети, подтипы ВИЧ-1

Characteristics of HIV-1 Subtype in Women and Children with HIV Infection

E. B. Yastrebova, T. N. Vinogradova, A. G. Rakhmanova

Centre for Prevention and Control of AIDS and infectious diseases, St. Petersburg

56 samples of blood (from mother-infant pairs) were studied in the National Institute of Microbiology named after King Charles III (Madrid, Spain) to detect subtypes of HIV-1. Almost in all the pairs studied subtype A was isolated. Only in one patient — the first HIV-infected child in Russia, born in 1982 — subtype F was isolated. Detection of subtype A suggests its existence in both population of HIV-positive drug addicts, and the possibility of its sexual and perinatal transmission. Judging by the number of patients receiving antiviral therapy among the examined, subtype A is probably responsible for the progression of HIV infection in women and children. In its turn, subtype F favors slower progression of the disease. Key words: HIV, women, children, HIV-1 subtypes

Контактная информация: Ястребова Елена Борисовна — к.м.н., старший врач-педиатр городского центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, доц. каф. инфекционных болезней и эпидемиологии с курсом ВИЧ-медицины Санкт-Петербургского ГМУ; (812) 407-83-14, (812) 407-83-10

УДК 616.914-08

Генетическое разнообразие ВИЧ является прямым следствием особенностей его быстрого репликативно-го цикла, в результате которого в организме зараженного человека образуется от 109 до 10ю новых вирусных частиц ежедневно, при этом частота мутаций составляет 3 X X 10-5 / один нуклеотид / один цикл. С учетом того обстоятельства, что размер генома ВИЧ приблизительно равен 1 0 000 нуклеотидов, в день формируется до миллиона вирусных частиц, содержащих хотя бы одну мутацию. Другим источником формирования разнообразия ВИЧ является процесс рекомбинации, заключающийся в обмене участками РНК между разными генетическими вариантами вируса. Это событие в случае инфекции или суперинфекции двумя или более штаммами ВИЧ происходит практически неизбежно [1].

Выделяют три группы ВИЧ-1 — М (major), N и О (outlier), из них группа М включает все наиболее распространенные варианты вируса, а две другие представлены лишь небольшим числом штаммов, встречающихся преимущественно в Африке. В группе М, в свою очередь, на основании анализа целого генома различают от 14 до 18 подтипов, обозначаемых буквами А, В, С, D и т. д. По числу вызванных случаев ВИЧ-инфекции в мире лидирует подтип С (Южная Африка и Азия) (47,2%), а в развитых странах наиболее распространен подтип В (12,3%) [2].

В конце 80-х годов прошлого века в республиках бывшего Советского Союза наблюдалось медленное развитие эпидемии ВИЧ-1. Было зарегистрировано только несколько случаев ВИЧ-1 инфекции, главным образом, среди иностранцев. В 1989 году произошла изолированная

нозокомиальная вспышка ВИЧ-инфекции с подтипом О в больницах среди детей в городах Элиста и Ростов-на-Дону [3—5]. К концу 1995 года появились сообщения об увеличении случаев ВИЧ-1 инфекции среди потребителей инъекционных наркотиков (ПИН) сначала в Украине, затем в России и Белоруссии. В указанных географических регионах данная вспышка была вызвана преимущественно вируса подтипа А, в меньшей степени был представлен подтип В [3, 4, 6—8]. Несколько лет спустя две новые вспышки, вызванные подтипом А, возникли в Иркутске и Москве в 1999 году, в Тольятти — в 2000—2001 гг., в Екатеринбурге — в 2002—2003 гг. [9].

В связи с активным вовлечением женщин детородного возраста в эпидемический процесс и увеличением гетеросексуального пути в структуре передачи вируса, целью работы явилось изучение подтипов ВИЧ у женщин и детей и оценка их роль в клинике ВИЧ-инфекции.

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось на базе отделения материнства и детства Санкт-Петербургского государственного учреждения здравоохранения «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями». Исследовано 56 образцов сыворотки крови ВИЧ-инфицированной пары мать-ребенок (по 28 образцов женщин и детей). Средний возраст обследуемых женщин составил 24,2 + 0,4 лет. Длительность заболевания с момента выявления ВИЧ составила 2,4 + 0,2 года, предположительный срок инфицирования — 3,7 + 0,2 года. Воз-

Е. Б. Ястребова и др. Характеристика подтипов ВИЧ-1 у женшин и летей с ВИЧ-инФЕкииЕй

раст ВИЧ-позитивных детей колебался от 6 месяцев до 5 лет и в среднем составил 2,6 + 0,3 лет.

Из 28 матерей 25 (89,3%) инфицировались через внутривенные наркотики, только 3 (10,7%) — половым путем. В свою очередь, 10 женщин (35,7%) были из дис-кордантных пар.

Иммунологическое обследование семей включало определение количественных показателей основных субпопуляций Т-хелперов/индукторов(СЭ4). Исследования осуществлялись с использованием моноклональных антител фирмы Berhing в лимфоцитотоксическом тесте (NIH USA). Вирусологическое исследование (качественная полиме-разная цепная реакция (ПЦР) — определение вирусной ДНК в лимфоцитах и количественная ПЦР — определение РНК-вируса иммунодефицита человека в плазме) проводилось всем пациентам. Качественная ПЦР ДНК ВИЧ проводилась с использованием отечественной тест-системы «Ампли Сенс ДНК-ВИЧ-96 М» и коммерческой тест-системы фирмы «Roche» — «Amplicor HIV-1 Monitor test». Для количественной ПЦР использовали систему «Abbot m 2000 rt». Лабораторные исследования проводились в лаборатории СПб ГУЗ «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями». Исследование подтипов ВИЧ-1 в паре мать-ребенок проводилось в Национальном институте микробиологии им. Короля Карла III (Мадрид, Испания).

Статистическая обработка материалов исследования проводилась с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows (версия 6.0). Критерием статистической достоверности получаемых выводов мы считали общепринятую в медицине величину p < 0,05.

Результаты и их обсуждение

При анализе клинических проявлений у женщин и детей выявлено, что из 28 женщин 9 (32,1%) были в стадии 3, 16 (57,1 %) — в стадии 4А и 3 (10,8%) — в стадии 4Б ВИЧ-инфекции (Покровский В.И., 2001). В свою очередь, 9 детей (32,1%) находились в стадии 3, 18 (64,3%) — в 4А стадии и 1 (3,6%) — в стадии 4Б ВИЧ-инфекции. Динамика показателя СЭ4-лимфоцитов и РНК ВИЧ у женщин в разные периоды представлена на рис. 1 и 2. Ввиду того, что ВИЧ-инфицированные женщины в период беременности были не привержены к наблюдению в центре СПИД и лечению ВИЧ-инфекции, а также употребляли внутривенные наркотики, не удалось к родам достаточно снизить уровень РНК и увеличить показатель СЭ4-лимфоцитов, что привело к рождению детей с ВИЧ-инфекцией. Далее после родов до назначения высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ) показатели РНК ВИЧ и СЭ4-лимфоцитов ухудшались. По клиническим, иммунологическим и вирусологическим показаниям ВААРТ была назначена 14 женщинам (50,0%) и 19 детям (67,9%).

По результатам проведенных анализов с определением подтипов ВИЧ-1 оказалось, что у 27 (96,4%) исследуемых пар был выделен подтип А (А1) ВИЧ. Только у одного ребенка с перинатальной ВИЧ-инфекцией, рожденного в 1 982 г., был обнаружен подтип F [10]. Пациентка в настоящее время жива и получает ВААРТ. У ее матери было выделено 2 подтипа ВИЧ (А и F), что, вероятно, обус-

370 , 360 -350 340 330

368

320

359

359

338

355

14 нед. 28 нед. 36 нед. 6 мес. 12 мес.

п/родов п/родов

Рисунок 1. Динамика Сй4-лимфоцитов у женщин, родивших ВИЧ-позитивных детей, в разные периоды, кл/мкл, п = 27

160000 -,

120000

80000

40000

132 350 ^—71

143 564 /—71

88 657

—71

19 450 z»—71

28 нед. 36 нед. 6 мес. 12 мес. берем. берем. п/родов п/родов

Рисунок 2. Динамика РНК ВИЧ у женщин, родивших ВИЧ-позитивных детей, в разные периоды, коп/мл, п = 27

ловило быстрое прогрессирование ВИЧ-инфекции и ее гибель.

Предполагаемая дата инфицирования девочки — первого ВИЧ-инфицированного ребенка в России — декабрь 1 982 г., вероятно, во время родов у матери. Мать — донор, умерла в 2000 году от криптококкового сепсиса. Юля — дочь обследована в 5 лет на ВИЧ-инфекцию. В первый год жизни перенесла пневмонию, генерализованную ветряную оспу, в 2—3—4 года опоясывающий герпес. При осмотре в 5 лет диагностированы двусторонний паротит, на коже следы опоясывающего герпеса, ге-патоспленомегалия. Ела лишь жидкую пищу, истощена, гемоглобин — 90 г/л, СЭ4-лимфоциты — 49 кл/мкл. Назначен в 1989 г. ретровир. Далее получала комбивир, в 1999 г. — зерит, эпивир, стокрин. В связи с побочными эффектами схемы ВААРТ менялись, в настоящее время получает видекс эпивир, калетру. В октябре 2010 г. РНК ВИЧ — менее 450 кл/мкл, СД4 12% — 257 кл/мкл.

Таким образом, выявление подтипа А свидетельствует о его существовании как в популяции ВИЧ-позитивных наркопотребителей, так и о возможности передаче данного подтипа вируса половым и перинатальным путями. Судя по количеству пациентов, получающих противовирусную терапию из числа обследованных, подтип А, ве-

0

Е. Б. Ястребова и ар. Характеристика подтипов ВИЧ-1 у женшин и летей с ВИЧ-инфекцией

роятно, обусловливает прогрессирование ВИЧ-инфекции у женщин и детей. В свою очередь, подтип F способствует более медленному прогрессированию заболевания.

Литература:

1. М.Р. Бобкова. Биология ВИЧ / Вирус иммунодефицита человека — медицина: рук-во для врачей под. ред. Н.А. Белякова и А.Г. Рахмановой. — Балт. мед. образ. центр. — СПб., 2010. — С. 1 7—42.

2. Анализ мутаций, связанных с лекарственной резистентностью, у нелеченных пациентов, зараженных различными генетическими формами ВИЧ I типа, распространенными в странах бывшего Советского Союза / Е. Вазкез де Парга и др. / / ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. — СПб. — 2010. — № 2, Т. 1. — С. 50—56.

3. Identification of an env G subtype and heterogeneity of HIV-1 strains in the Russian Federation and Belarus / A. Bobkov et. al. // AIDS. — 1994. — V. 8. — P. 1649—1655.

4. Genetic heterogeneity of HIV-1 type in Russia: Identification of H variants and relationship with epidemiological data. / A. Bobkov et. al. // AIDS Res. Hum Retroviruses. — 1 996. — V. 12. — P. 1 687— 1690.

5. HIV type 1 subtype E in Russia / A. Bobkov et. al. // AIDS Res. Hum. Retroviruses. - 1997. - V. 13. - P. 725-727.

6. Molecular epidemiology of HIV-1 in the former Soviet Union: Analysis of the env V3 sequenses and their correlation with epidemiological data / A. Bobkov et. al. // AIDS. - 1994. - V. 8. - P. 619— 624.

7. Amirkhanian Y. AIDS knowledge, attitudes, and behavior in Russia: Results of a population-based, random-digit telephone survey in St. Petersburg / Y. Amirkhanian, J. Kelly, T. McAuliffe // Int. J. STD AIDS. - 2001. - V. 12. - P. 50-57.

8. New insights into the origin of the HIV type 1 subtype A epidemic in former soviet unions countries derived from sequence analyses of preepidemically transmitted viruses / M.M. Thomson et al. // AIDS Res Hum Retroviruses. - 2007. - V. 23. - P. 1599-1604.

9. Molecular epidemiology of HIV-1 in St Petersburg, Russia: Predominance of subtype A, Former Soviet Union variant, and identification of intrasubtype subcluster / M.M. Thomson et al. / / Acquir Immune Defic Syndr. - 2009. - V. 51. - P. 332-338.

10. Near Full-Length Genome Characterization of a Newly Identified HIV Type 1 Subtype F Variant Circulating in St. Petersburg, Russia. / A. Fernai'ndez-Garcir'a et. al. // AIDS Res. and Hum. Retroviruses. -2009. - V. 25. - P. 1187-1191.

Выявление маркеров Эпштейна-Барр вирусной инфешии у детей с различной патологией

Р. Е. Бошьян, Н. В. КАРАЖАС, Т. Н. РЫБАЛКИНА, М. Ю. КАЛУГИНА, Л. В. ФЕКЛИСОВА, Н. А. САВИЦКАЯ

ФГБУ Научный исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н. Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, ГУ Московский областной научно-клинический институт им. М. Ф. Владимирского, Москва

При обследовании детей с различной патологией установлено, что Эпштейна-Барр вирусная инфекция может встречаться в различных формах. Показано, что для достоверного выявления инфекции необходимо использовать комплес различых лабораторных методов.

Ключевые слова: Эпштейна-Барр вирусная инфекция (ВЭБИ), дети, ОРЗ, микст-инфекция, инфекционный мононуклеоз, гастрит

Detection of Markers of Epstein-Barr Virus Infection in Children with Different Pathologies

R. E. Boshyan, N. V. Karazhas, M. Yu. Kalugina, T. N. Rybalkina, L. V. Feklisova, N. A. Savitskaya

Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after N.F. Gamaleya, Moscow Regional Clinical Research Institute named after M.F. Vladimirsky

In a study of children with different pathologies it was found out that Epstein-Barr virus infection can occur in different forms. It was shown that for reliable detection of infection it is necessary to apply complex of different laboratory methods.

Key words: Epstein-Barr virus infection (EBV), children, acute respiratory infections, ARD, concurrent infections, infectious mononucleosis, gastritis

Контактная информация: Бошьян Роман Евгеньевич — к.м.н., науч. сотр. лаборатории эпидемиологии оппортунистических инфекций НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи; 123098 г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18; (499) 193-43-91

УДК 616.9:578.825.11-08

В настоящее время вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) признан этиологическим агентом инфекционного мононук-леоза (ИМ) [1]. С 1990 года это заболевание официально регистрируется в нашей стране. Однако регистрация данной нозологии в значительной мере дефектна вследствие как гипо-, так и гипер- диагностики. Гиподиагностика происходит из-за того, что ИМ лишен специфических клинических признаков и может протекать под маской ОРЗ. К гипердиагностике приводит постановка неправильного дифференциального диагноза, так как мононуклеозоподобный синдром, вызываемый ЦМВ, могут принимать за ИМ. Следует отметить тот факт, что инфекционный мононуклеоз —

единственная форма ВЭБ-инфекции, которая подлежит официальной регистрации

Целью работы: выявить скрытые формы ВЭБ-инфекции у детей с диагнозом ОРЗ и хронический гастрит.

Материалы и методы исследования

Биологическим материалом, содержащим иммуноглобулины классов 1дМ, 1дОЕА и 1дОЫА, служила сыворотка крови больных и здоровых лиц. Лейкоциты периферической крови использовали для определения в них антигенов ВЭБ. Мокрота служила для определения антигенов возбудителя в отделяемом легких. Биоптаты тканей, полу-