СРЕДСТВО ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ, АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ, РАНОЗАЖИВЛЯЮЩИМ, РЕГЕНЕРАТИВНЫМ, АНАЛЬГЕТИЧЕСКИМ, ПРОТИВООЖОГОВЫМ ДЕЙСТВИЕМ И ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ НА ЕГО ОСНОВЕ
AGENT OF PEPTIDE STRUCTURE POSSESSING ANTI-INFLAMMATORY, ANTIBACTERIAL, WOUND-HEALING, REGENERATIVE, ANALGESIC, BURNTREATING ACTION AND BASED DOSAGE FORMS

Изобретение относится к области биологически активных соединений и может быть использовано для получения ранозаживляющих лекарственных препаратов для лечения повреждения кожи, ран, ожогов и кожных заболеваний, способа его получения.
Проблема лечения ран, ожогов и других повреждений кожи, несмотря на большое разнообразие предлагаемых методов и препаратов, остается актуальной. В большинстве случаев при лечении ран предпочтение отдается местному медикаментозному лечению ((Гаврилюк Б.К. Нанокомпозитные регенерационные системы для лечения ран/ Б. К. Гаврилюк, В. Б. Гаврилюк. - (Биофизика сложных систем) //Биофизика. - 2011. - Т. 56, №6. - С.1138-1141; Lloyd ЕС, Rodgers ВС, Michener М, Williams MS. Outpatient burns: prevention and care. Am Fam Physician. 2012 Vol.85(1), P.25-32; Profyris C, Tziotzios C, Do Vale I. Cutaneous scarring: Pathophysiology, molecular mechanisms, and scar reduction therapeutics Part I. The molecular basis of scar formation. J Am Acad Dermatol. 2012, Vol.66(1), P.1-12; Elliot D, Sierakowski A. The surgical management of painful nerves of the upper limb: a unit perspective. J Hand Surg Eur Vol.2011 Vol.36(9), P.760-770). Однако следует отметить, что эффективность предлагаемой терапии зависит в этом случае не только от правильного выбора лекарственного средства, но и формы, в которой оно должно быть применено (Endorf FW, Ahrenholz D. Burn management. Curr Opin Crit Care. 2011 Vol.17(6), P.601-605). Широко применяют противовоспалительные лекарственные средства, которые подразделяются на стероидные и нестероидные. Нестероидные противовоспалительные средства уменьшают экссудацию, тормозят пролиферацию тканей, обезболивают и снижают температуру. Их недостатком является высокая токсичность. Стероидные противовоспалительные средства являются аналогами глюкокортикоидов. По силе антиэкссудативного действия превосходят нестероидные противовоспалительные средства в несколько раз, но не обладают анальгезирующим и жаропонижающим действием и при длительном применении вызывают нарушение гормонального фона в организме. Также применяют противомикробные препараты, однако они способствуют аллергизации организма, развитию устойчивой раневой микрофлоры и дисбактериозу. Применение препаратов ферментов (протеаз, трипсина, хемотрипсина, аминокислот и другие) ограничено их эффективностью только в первой фазе раневого процесса и необходимостью их сочетать с другими ранозаживляющими лекарственными средствами. Комплексное действие на рану оказывают лекарственные средства растительного происхождения благодаря содержанию комплекса флавоноидных соединений и витаминов, однако они не обладают обезболивающим действием (Mendonca Machado N, Gragnani A, Masako Ferreira L. Bums, metabolism and nutritional requirements. Nutr Hosp.2011 Aug; 26(4):692-700; Lloyd EC, Rodgers ВС, Michener M, Williams MS. Outpatient burns: prevention and care. Am Fam Physician. 2012 Vol.85(1), P.25-32). Известны ранозаживляющие и противовоспалительные препараты в виде кремов и мазей, содержащие активное вещество, жирную основу (смесь ланолина и вазелина) и добавки. Однако вазелино-ланолиновая основа в этих лекарственных препаратах препятствует нормальному газообмену, что снижает ранозаживляющую активность препарата, особенно при вялотекущих процессах (Profyris С, Tziotzios С, Do Vale I. Cutaneous scarring: Pathophysiology, molecular mechanisms, and scar reduction therapeutics Part I. The molecular basis of scar formation. J Am Acad Dermatol. 2012, Vol.66(1), P.1-12.).
Эффективными формами ранозаживляющих средств являются гели. В качестве гелеобразователя могут быть использованы полисахариды: галактоманнан, или глюкоманнан, или альгиновые кислоты, или соли альгиновых кислот, или агар-агар, или гиалуроновая кислота, или желатин, или пектин, или аэросил, или цеолиты, или коллодий или 1,2 пропиленгликоль (Elliot D, Sierakowski A. The surgical management of painful nerves of the upper limb: a unit perspective. J Hand Surg Eur Vol.2011 Vol.36(9), P.760-770).
Известен ранозаживляющий лекарственный препарат "Линимент метилурацила" (патент РФ N 2007997, приор, от 08.07.92 г., А61К 9/06), содержащий в качестве активного вещества β-форму метилурацила, а качестве основы - касторовое масло. Препарат обладает повышенной ранозаживляющей активностью за счет высокой биодоступности лекарственной формы. Однако в данном лекарственном препарате активное вещество не обладает противоинфекционными и интерфероногенными свойствами, что не позволяет лечить инфицированные раны.
Задачей настоящего изобретения является создание средства, лишенного вышеперечисленных недостатков, при этом технический результат, достигаемый при реализации такой задачи, состоит в получении эффективного противовоспалительного, ранозаживляющего и обезболивающего средства для наружного применения.
2
3
2
5
Указанный технический результат достигается тем, что в качестве активного вещества используется оригинальное вещество пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН в следующих видах лекарственных форм: мази, гели, линименты, спреи, суппозитории, пластыри, орально-дезинтегрируемые таблетки и капли.
2
3
2
5
2
3
2
5
В частности, заявлено применение дипептида общей формулы Tyr-Pro-Х, где Х-ОН, NH, ОСН, ОСН, в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства, а также лекарственная форма, содержащая в качестве действующего вещества дипептид общей формулы Tyr-Pro-X, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, применяемая в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства;
предпочтительные, но не обязательные варианты исполнения лекарственной формы предполагают ее исполнение в виде одной из следующих лекарственных форм: мазь, гель, линимент, спрей, суппозитории, пластырь, орально-дезинтегрируемые таблетки, капли.
Пептидные соединения согласно настоящей заявке, их свойства и способ получения в литературе не описаны.
Синтез соединений. Tyr-Pro-Х синтезировали с применением тетрабутиламмонийных солей (ТБА) и пивалоил хлорида (PivCL). Для синтеза использовали производные D; L; DL аминокислот. Упаривание растворов проводили на вакуумном испарителе при 40°С. Температуры плавления, определенные на столике для плавления Boetiys, даны без исправления. Контроль над синтезом и индивидуальность полученных соединений проверяли с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках с силикагелем фирмы Silufol (ЧСФР) при опрыскивании раствором нингидрина в системах растворителей:
1 - гексан: ацетон (3:2);
2 - этилацетат:ацетон:50% уксусная кислота (2:1:1);
3 - бензол:этанол (8:2);
4 - хлороформ:метанол:аммиак (7:2.5:0.5);
5 - хлороформ:метанол:аммиак (6:4:1);
6 - хлороформ:метанол:уксусная кислота (42:7:1);
7 - ацетон:бензол:уксусная кислота (2:1:1);
8 - хлороформ:метанол:аммиак (8:1.75:0.25);
9 - хлороформ.метанол (9:1);
10 - этанол:аммиак (7:3).
11 - изо-пропанол:муравьиная кислота:вода (20:1:5).
Далее по тексту в скобках после Rf указана система растворителей.
Все растворители абсолютировали соответствующим образом. Точки плавления не корректировали. Колоночную хроматографию проводили с использованием носителей Силикагель L-40/100 m и Silasorb 600 [LC] фирмы Chemapol (ЧСФР).
Принятые сокращения: Ас - ацетат; Вос - трет-бутилоксикарбонильная группа; ОБТ - I-оксибензтриазол; ДМФА - диметилформамид; ДЦГК дициклогексилкарбодиимид; PivCI - пивалоил хлорид; ТБА - тетрабутиламмоний; ТЭА - триэтиламин; OSu - N-оксисукцинимидный эфир; ДЦГК - N,N-дициклогексикарбодиимид; ОМе - метиловый эфир; DiBoc - трет-бутилоксикарбонил; ТСХ - тонкослойная хроматография.
Получение дипептида Tyr-Pro.
1. К Pro 150 мг (1.326 ммоль) добавляли 2.83 мл (1.326 моль) 13% ТБА, упаривали 1 раз с этанолом, 1 раз с изо-пропанолом, 1 раз с бензолом, охлаждали до 0°С.
2. К охлажденному раствору ТБА Pro в 10 мл абс. этилацетата при охлаждении добавляли в сухом виде DiBoc-Tyr-OSu 634.5 мг (1.326 моль), перемешивали 1 час при комнатной температуре на магнитной мешалке, за ходом реакции следили по ТСХ в системе (7).
4
4
4
По окончании реакции растворитель упаривали, добавляли воду, подкисляли NaHSO (пятикратный избыток) до рН 3, экстрагировали 5 раз по 50 мл этилацетатом. Объединенные фракции этилацетата промывали водой, 10% раствором KHSO, водой, сушили над MgSO, упаривали, высаждали из эфира гексаном (дважды). Осадок в виде порошка сушили в вакууме.
Выход 1.32 г (2.76 ммоль).
Rf=0.382 (7).
Нижеследующие примеры иллюстрирую эффективность применения заявленного нового пептидного соединения в качестве действующего вещества в противовоспалительных, ранозаживляющих и обезболивающих средствах для наружного применения, а также варианты получения таких средств. Подразумевается, что хотя в подробном описании и конкретных примерах раскрыты предпочтительные варианты осуществления изобретения, они приведены лишь для наглядности, поскольку из описания, а также формулы изобретения для специалиста в данной области техники станут очевидными различные изменения и усовершенствования, не выходящие за пределы существа и объема изобретения.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 1. На 100 суппозиториев: в раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят 55,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 с 5,0 г эмульгатора, затем перемешивают 10 минут. К смеси постепенно прибавляют 275 г предварительно расплавленной гидрофобной основы (витепсол) с 15,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Полученную взвесь разливают в предварительно охлажденные суппозиторные формы и помещают в холодильник при -4°С. Препарат используют в качестве суппозиториев. В 1 суппозитории содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2)
3
2
5
Пример 2. На 100 суппозиториев: в раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл постепенно прибавляют 275 г предварительно расплавленной дифильной основы (Suppocire АР) с 15,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Полученную взвесь разливают в предварительно охлажденные суппозиторные формы и помещают в холодильник при -4°С. Препарат используют в качестве суппозиториев. В 1 суппозитории содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X -ОН, NH ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 3. На 100 г мази: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 85,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 с 5,0 г стабилизатора (нипазол), перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде мази, в которой содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 4. На 100 г мази: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 40,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 40 с 5,0 г эмульгатора, затем перемешивают 10 минут. К смеси постепенно прибавляют 45 г предварительно расплавленной гидрофобной основы (силоксановая основа) с 5,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде мази, в которой содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 5. На 100 г геля: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 85,0 г расплава смеси ПВП 12600 и ПВП 8000 с 5,0 г стабилизатора (нипазол), перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде геля, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 6. На 100 мл спрея: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в смесь, содержащую 20 мг пропиленгликоля, 20 мг ПЭГ 1000 цетостеарилового эфира, 5 мл воды очищенный и 50 мл этанола ректифицированного, перемешивают в течение 10 минут и заправляют в полипропиленовый флакон с дозирующим насосом и насадкой. Препарат используют в виде спрея, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
2
3
2
5
Пример 7. На 100 пластырей: 5 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, вводят в смесь, состоящую из 9,72 г поли(DL-лактид) и/или поли(DL-лактид-согликолид) с молекулярной массой 50000 Да и соотношением 50:50 с 1,0 г стабилизатора (бензоат натрия) в 60 мл хлороформа. Смесь тщательно перемешивают и разливают тонким слоем, после чего сушат теплым воздухом до полного удаления органического растворителя. Полученную пленку соединяют с тканной основой. Препарат используют в виде пластыря, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
Пример 8. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получали методом прямого прессования на таблеточном прессе смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".
2
3
2
5
Пример 9. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получают методом влажной грануляции таблеточной смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".
2
3
2
5
Пример 10. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получают методом сухой грануляции таблеточной смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".
2
3
2
5
Пример 12. На 1 мл раствора для капель раствор вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, с концентрацией с=0,01-10 мг вводят в смесь, содержащую натрия гидрофосфат 0,1-5,0 мг, натрия дигидрофосфат 1,0-10,0 мг, сорбитол 1,0-25,0 мг, бензалкония хлорид 0,1-3,0 мг, масло лавандовое 1,0-30,0 мг, вода очищенная до 1,0 мл. Препарат используют в виде назальных капель, в котором содержится 0,01-10 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где
2
3
2
5
Х-ОН, NH, ОСН, ОСН.
2
3
2
5
Пример 13. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, в тесте формалиновой боли для выявления анальгетической и противовоспалительной активности.
Самцов беспородных крыс помещали в индивидуальные пластиковые боксы. Острую воспалительную реакцию (отек) вызывали субплантарным (под подошвенный апоневроз) введением 50 мкл 5% формалина. Регистрировали число болевых реакций (постукивание лапой об пол, грызение лапы и т.д.) в первые 5-10 минут - I фаза (воздействие на первичные афференты боли) и с 30-50 минуту - II фаза (боль, возникающая в результате воспалительной реакции) (Bannon et al., 1998). Критерием анальгетического эффекта считали достоверное уменьшение числа болевых реакций в опытной группе относительно контрольной группы.
Исследуемые образцы (образец 1 - мазь 5%, образец 2 - гель 10%) наносили на лапу одновременно с введением формалина самцам нелинейных белых крыс весом 200-300 г. Контрольным животным наносили наружное средство без активного вещества. Полученные результаты приведены в таблице 1.
Таблица 1
Испытуемый образец
I фаза
II фаза
Контроль (без активного вещества)
6,2±1,2
9,8±4,1
Образец 1 (мазь 5%)
5%
3,5±1,8*
4,9±2,7*
Образец 2 (гель 10%)
10%
1,1±0,4*
0,9°±0,3*
* - достоверность по сравнению с контролем при Р<0,05.
2
3
2
5
Из таблицы 1 видно, что средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, уменьшает болевую чувствительность в I фазу формалиновых болей, характеризующую воздействие на первичные афференты, и оказывает противовоспалительное действие во II фазу, вызванную развитием воспаления.
2
3
2
5
Таким образом, средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, обладает анальгетическим и противовоспалительным действием в тесте формалиновых болей.
2
3
2
5
Пример 14. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, при моделировании термического ожога.
Для моделирования термического ожога использовали стандартный метод (Кочетыгов Н.И. О способах воспроизведения термических ожогов. Л.: Медицина, 1964, стр.86) на кроликах породы шиншилла весом 2,8-3,2 кг. Ожоги наносились на боковую поверхность бедра. С участка боковой поверхности бедра животного удаляли шерсть и прикладывали к коже керамический тигель диаметром 1,5 см, нагретый в муфельной печи до 600°С, а течение 5 сек. После этого осуществляли исследование в трех группах животных. В первой (контрольной) группе лечение не проводили. Во второй (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази без активного вещества, изготовленной согласно прототипу. В третьей (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%. В четвертой (опытной) группе лечение проводили заявляемым средством наружного применения с концентрацией активного вещества в виде геля 10,0 мас.%.
Животных ежедневно осматривали, определяли состояние и размер ожоговой раны. На 7, 14 и 28 сутки ожоговые раны тотально вырезали вместе с участком здоровой кожи и подвергали гистологическому исследованию.
В контрольной группе на месте термического ожога сразу после его нанесения формировался участок сухого коагуляционного некроза, четко ограниченного от окружающей здоровой ткани. Через 1 сутки вокруг этой зоны образовалась демаркационная линия поврежденного эпидермиса размером 3-4 мм. Начиная со 2-го дня, на поверхности ожоговой раны образовалась фибриновая пленка, которая утолщалась и становилась более темной в течение первой недели. В последующие 7 дней по периферии ожога наблюдалась гиперимия и образовался воспалительный валик. При этом размеры очага поражения значительно уменьшались. К 14-му дню от начала опыта очаг уменьшился за счет врастания в него с периферии эпидермиса в виде языков. К 28-му дню ожоговая рана полностью заживилась.
Во 2-й группе кроликов (использование средства наружного применения без активного вещества) заживление ожоговой раны происходило в более короткие сроки, чем в 1-й группе, однако в течение всего срока лечения было значительно выражено местное воспаление. Форма ожоговой раны менялась за счет неравномерного врастания эпидермиса. К 21-му дню рана полностью эпителизовалась с краев, а к 28-му дню полностью зажила.
В 3-й группе (наружное применение лечебного средства с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%.) были отмечены хорошие результаты. В течение первых семи дней наблюдалась интенсивная местная воспалительная реакция, однако уже на 14-е сутки воспаление полностью исчезло и ожоговая рана эпителизировалась за счет наползания регенерирующего эпителия с краев. Полное сращивание эпителия заживления раны наступило на 21-й день лечения, что на 7 дней раньше, чем во 2-й группе (прототип), и на две недели раньше, чем в контрольной группе. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.
В 4-й группе (наружное применение лечебного средства с концентрацией активного вещества 10,0 мас.%.) были отмечены наилучшие результаты. В течение только первых пяти дней наблюдалась интенсивная местная воспалительная реакция, однако уже на 10-е сутки воспаление полностью исчезло и ожоговая рана эпителизировалась. Полное сращивание эпителия заживления раны наступило на 18-й день лечения, что на 10 дней раньше, чем во 2-й группе (прототип) и контрольной группах. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.
2
3
2
5
Таким образом, средство наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - NH, ОСН, ОСН, проявляет высокую ранозаживляющую, противовоспалительную и противоинфекционную эффективность и сокращает сроки лечения инфицированных ран и ожогов.
2
3
2
5
Пример 15. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, при моделировании кожной раны.
Кожную рану моделировали на кроликах породы шиншилла весом 2,8-3,2 кг. Для моделирования раны у кроликов выбривали область мягких тканей бедренной части и скальпелем делали разрез глубиной 1 см и длиной 5 см. После этого осуществляли исследование в трех группах животных. В первой (контрольной) группе лечение не проводили. Во второй (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази без активного вещества, изготовленной согласно прототипу. В третьей (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%.
Эффективность препаратов в опытных и контрольной группах оценивали по срокам отторжения струпа, очищению ран от гнойно-некротических масс, времени появления грануляционной ткани в ране и началу краевой эпителизации по динамике регресса воспалительного процесса, а также по динамике бактериологической обсемененности раны.
В контрольной группе образовался гнойник с инфильтрацией в окружающую ткань. На 6 день появилось отторжение струпа и краевая грануляционная ткань, а к 12-му дню курса лечения - первые признаки эпителизации. Полная санация раны наступила к 21-му дню.
Во второй группе кроликов наблюдалось отсутствие гнойного серозного отделяемого раны. Первичный струп на ране не препятствовал образованию грануляции. Отторжение струпа и первые признаки грануляции были отмечены на 6-й день от начала лечения. Появление краевой эпителизации раны отмечено на 12-й день курса лечения, а полная санация раны наступила к 21-му дню курса лечения.
В третьей группе (средство наружного применения, содержащее 5% вещества) были отмечены наилучшие результаты лечения. Не наблюдалось ни гнойного, ни серозного отделяемого из раны, отсутствовало воспаление, рана "сухая", наблюдалось формирование и рост грануляционной ткани (активной на периферии и островковой в центре раны). Опережающее развитие грануляционной ткани способствует более ранней эпителизации и полной санации раны, которая наступила в данной группе к 9-му дню от начала лечения, а полное излечение раны уже к 15-му дню курса лечения. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.
2
3
2
5
Таким образом, средство наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, обладает ранозаживляющим действием.
2
3
2
5
Пример 16. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, в тесте нейрогенного болевого синдрома, вызванного перерезкой седалищного нерва, как модели нейропатической боли для выявления анальгетической и противовоспалительной активности.
Эксперименты проводили на самцах нелинейных белых крыс весом 200-250 г. Нейрогенный болевой синдром у самцов беспородных крыс создавали перерезкой седалищного нерва на уровне подколенной ямки выше места его трифуркации на n.tibialis, n.peroneus и n.suralis и последующим его лигированием для предотвращения регенерации. Развитие болевого синдрома определяли по появлению признаков аутотомий на оперированной лапке. Интенсивность аутотомий оценивали по 11-балльной шкале: 1 балл - повреждение 1-го когтя; 2, 3, 4 и 5-ть баллов - повреждение 2-х, 3-х, 4-х и 5-ти когтей; 6 баллов - повреждение фаланги одного пальца; 7, 8, 9 и 10 баллов - повреждение фаланг соответственно на 2-х, 3-х, 4-х и 5-ти пальцах; 11 баллов повреждение плюсневых костей. Динамику развития болевого синдрома у крыс опытных и контрольной групп наблюдали в течение 25 дней (Крыжановский Г.Н. и др. 1991).
Животным контрольной группы в день перерезки седалищного нерва и последующие 10 дней после операции наносили средство наружного применения в виде мази без активного вещества, а животным опытной группы в те же сроки наносили средство наружного применения в виде мази с активным веществом в дозе 10 мг/кг.
В контрольной группе крыс развитие аутотомий после перерезки седалищного нерва появилось у 50% животных на 6 день после операции. Интенсивность болевых реакций составила 3.2±0.9 балла. На 9 день введения болевая реакция наблюдалась у 60% животных, соответствующая интенсивности 4.5±2.4 балла. На 18 сутки болевые реакции развивались у 70% и составили 6.5±3.1 балла.
Нанесение средства наружного применения без активного вещества не препятствовало развитию аутотомий после перерезки седалищного нерва (40% животных на 6 день после операции). Интенсивность болевых реакций составила 2.7±1.9 балла. На 9 день введения болевая реакция наблюдалась у 50% животных, соответствующая интенсивности 3.6±2.6 балла. На 18 сутки болевые реакции развивались у 60% и составили 5.2±2.4 балла.
Нанесение средства наружного применения с активным веществом препятствовало развитию болевого синдрома. На 6 и 9 день болевые реакции не наблюдались. На 13 сутки эксперимента на 5 день после отмены введения соединения появилась болевая реакция у 10% животных средней интенсивности 1.0+1.0 балл, а на 18 день - у 10% животных, средняя интенсивность реакции составила 2.0±1.0 балла.
2
3
2
5
Таким образом, средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, проявляет анальгетическое и противовоспалительное действие в тесте нейрогенного болевого синдрома, вызванного перерезкой седалищного нерва.
2
3
2
5
Пример 17. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, у больной Е., 68 лет. У больной диагностированы гнойные прыщи на лице в районе носа. На все пораженные участки накладывалось средство наружного применения в виде мази. На следующие сутки после однократного применения образовывалась светлая корочка, которая легко удалялась. На лице не оставалось следов от ран.
2
3
2
5
Пример 18. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, у больной А., 58 лет, с ожогом. У больной диагностирован ожог I, II степеней двух пальцев (среднего - площадью 1,5 см и безымянного площадью - 1 см) левой руки в районе ногтевого ложа раскаленным подсолнечным маслом. Травма бытовая. Наблюдалась гиперемия, отек кожи, большие сплошные пузыри с содержимым. После аппликации средства наружного применения в виде геля на следующие сутки наблюдалось значительное уменьшение гиперемии, практически полное отсутствие отека и содержимого пузырей. Средство применяли на протяжении 5 дней. На 5-й день наблюдалось отслоение тонкого слоя эпидермиса раневой поверхности, под которым образовалась молодая кожа без рубцов и воспаления. Через 14 дней наблюдалось полное восстановление поврежденной поверхности.
2
3
2
5
2
Пример 19. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, у больной Т., 56 лет, с ожогом. У больной диагностирован ожог I, II степеней тыльной стороны левого предплечья в области запястья - площадью 20 см горячим паром. Травма бытовая. Наблюдалась гиперемия, отек кожи, большие мелкие пузыри с содержимым. Средство применяли на протяжении 3 дней. После аппликации средства наружного применения в виде мази на следующие сутки наблюдалось значительное уменьшение гиперемии, практически полное отсутствие отека и содержимого пузырей. На 5-й день наблюдалось отслоение тонкого слоя эпидермиса раневой поверхности, под которым образовалась молодая кожа без рубцов и воспаления. Через 14 дней наблюдалось полное восстановление поврежденной поверхности.
2
3
2
5
2
Пример 20. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН, у больного ребенка С., 6 лет. На правом бедре ребенка в районе соприкосновения с резинкой диагностировано гиперемированное шероховатое пятно размером 1 см, которое не проходило в течение 7 дней. После аппликации средства наружного применения в виде мази на следующие сутки пятно исчезло и больше не появлялось.
2
3
2
5
2
Пример 21. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН. Больная Г., 33 года. На левом боку в районе соприкосновения с резинкой находилось гиперемированное пятно размером 1,5 см, которое не проходило в течение 10 дней. После аппликации средства наружного применения в виде спрея на следующие сутки пятно исчезло и больше не появлялось.
2
3
2
5
2
Пример 22. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH, ОСН, ОСН. Больная К., 45 лет. На левом локте больной находилось гиперемированное пятно площадью 3 см, которое не проходило в течение длительного времени. Больная неоднократно обращалась в лечебные учреждения, но результатов не было. После однократной аппликации средства наружного применения в виде пластыря через двое суток пятно исчезло и больше не появлялось.