Фотоиндуцированная противоопухолевая активность фотосенсибилизаторов на основе хлорофилла а в системах in vitro и in vivo

70

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

нимальной субтерапевтической дозе, а введением в комбинацию хемосенсибилизатора можно добиться повышения ее эффективности в предотвращении развития опухоли.

Цель исследования — изучение противоопухолевой и хемосенсибилизирующей активности полученных рацемических ЦГК на экспериментальных лекарственно-чувствительных опухолях мышей.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность изучали на лимфолейкозе Р388 мышей линии BDF1. Критерием эффективности лечения служило увеличение средней продолжительности жизни.

Результаты. Изучены 2 ряда ЦГК на основе аминокислот Gly, Ala, Val, Leu, содержащих тетраметилзамещенный или N-метилзамещенный спиропиперидиновый фрагмент. Показано, что в каждом ряду ЦГК, содержащих однотипный спиропиперидиновый фрагмент, наибольшую хемо-сенсибилизирующую активность при терапии лейкемии Р388 проявляют кислоты валинового ряда. Это позволяет сделать вывод о том, что наличие объемной изопропиль-ной группы в имидазолидиновом цикле соединений ряда 1-гидрокси-1,4,8-триазаспиро[4.5]декан-2-она способствует значительному повышению их адъювантной способности на экспериментальной модели Р388. ЦГК, полученные на основе 1-метилпиперидона-4, обладают меньшей острой токсичностью, чем кислоты, полученные на основе триацетонамина, и являются более эффективными хемо-сенсибилизаторами. Установлено, что изученные ЦГК не обладают прямым антиоксидантным действием в реакции с тиобарбитуровой кислотой, но, являясь хелаторами ионов железа, могут проявлять опосредованное влияние при окислительном стрессе и модулировать действие различных металлопротеаз, участвующих в канцерогенезе. Методом квантово-химических расчетов провели теоретический анализ влияния структуры исследуемых ЦГК на их хелатирующую способность, полученные данные были подтверждены в экспериментах in vivo.

Заключение. Использование ЦГК в комбинированной химиотерапии может стать одним из способов повышения эффективности и снижения токсичности известных цито-статиков.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант № 14-03-00687А).

Л. Ф. Морозова, Н.М. Сураева, О. С. Бурова, М.А. Барышникова

ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК КЛЕТОК СУБКЛОНА МЕЛАНОМНОЙ ЛИНИИ ЧЕЛОВЕКА MEL IBR ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ В РОСТОВОЙ СРЕДЕ С НИЗКОЙ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ТЕЛЯЧЬЕЙ СЫВОРОТКИ ФГБУ«РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Злокачественная опухоль представляет собой гетерогенную популяцию клеток на различных стадиях дифференцировки. Многообразие нарушений, происходящих в клетке в процессе опухолевой прогрессии, требует создания адекватной модели для исследования стадий онкогенеза. При культивировании клеток меланом-ной линии человека Mel Ibr в ростовой среде со сниженным содержанием эмбриональной телячьей сыворотки

до 5 % нами были обнаружены 2 морфологически различные субпопуляции клеток.

Цель исследования — получение одного из субклонов клеток данной линии и оценка его морфологических, иммунологических и цитогенетических характеристик в целях создания новой клеточной модели для изучения опухолевой прогрессии.

Материалы и методы. Клетки меланомной линии Mel Ibr адаптировали к росту в питательной среде RPMI-1640 с добавлением 5 % эмбриональной телячьей сыворотки в течение 3—5 пассажей. Затем клетки рассеивали с низкой плотностью в чашки Петри для получения колоний. Колонии из веретеновидных клеток извлекали и культивировали на протяжении длительного времени (до 60 пассажей) в такой же ростовой среде. Морфологические, иммунологические и цитогенетические исследования проводили на различных пассажах.

Результаты. Клетки субклона отличались морфологией от родительской популяции: имели значительно меньший размер, веретеновидную форму с длинными отростками, большим ядром, занимающим практически всю цитоплазму, и характеризовались интенсивным ростом. Иммунологические отличия проявлялись в уменьшении процента HLA-DR и СБ54-положительных клеток, увеличением CD63 и появлением CD133-положительных клеток.

Заключение. Клетки субклона могут рассматриваться как модель для изучения опухолевой прогрессии.

Н. Б. Морозова1, Е.А. Плотникова1, А.Д. Плютинская1, М.А. Грин2, А.Ф. Миронов2, Р.И. Якубовская1 ФОТОИНДУЦИРОВАННАЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ НА ОСНОВЕ ХЛОРОФИЛЛА А В СИСТЕМАХ IN VITRO И IN VIVO

1МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ НМИРЦ Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО МИРЭА, Москва

Введение. Известно, что на поверхности опухолевых клеток присутствуют рецепторы, распознающие все типы углеводов. Среди них особое место занимают галектины, представляющие собой белки семейства лектинов, специфичные к Р-галактозидам. Их специфичность обусловлена наличием белков консервативного углевод-узнающего домена. Поэтому Р-галактозидные заместители способны улучшить направленную доставку фотосенсибилизаторов (ФС) путем связывания с галектинами на поверхности клетки.

Цель исследования - сравнительное изучение фотоин-дуцированной активности триметилового эфира хлорина е6 и его производного с остатком галактозы в пирроле А в системах in vitro и in vivo, их биораспределения и накопления в опухолевой и окружающей тканях животных.

Материалы и методы. В качестве ФС использовали триметиловый эфир хлорина е6 (ЗМеСЫ) и конъюгат на его основе с остатком галактозы в пирроле А (3MeChl_gal). Изучение фотоиндуцированной активности проводили в системе in vitro относительно опухолевых клеток мышиной карциномы легкого Льюиса (Lewis lung carcinoma, LLC) в мультипараметрической системе. Биологически значимым эффектом считали ингибирование роста клеток в культуре

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 71

более чем на 50 %. В системе in vivo изучали распределение GPX1, GSR, GSTT и TXN определяли методом полимераз-ФС в органах и тканях мышей с опухолью LLC. Фотоди- ной цепной реакции в реальном времени с помощью намическую терапию (ФДТ) проводили на 7-й день роста qPCRmix-HS SYBR («Евроген») согласно методике произ-опухоли LLC (светодиодный источник Xmax = 662 ± 14 нм). водителя. Программа амплификации стандартная. Амино-Противоопухолевый эффект оценивали по торможению нитроксильный комплекс платины (IV) — ВС-131 (e-ам-роста опухоли (ТРО), увеличению продолжительности мин-d- (4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил) — a, жизни (УПЖ) и критерию излеченности (КИ). f-бис (пентаноато) — b, c-дихлороплатина (IV)) наносили Результаты. Показано, что 3MeChl_gal эффективно на- в концентрации полумаксимального ингибирования с экс-капливается в клетках культуры LLC и обладает более вы- позицией от 2 до 12 ч с шагом в 2 ч. Опыты проводили сокой фотоиндуцированной активностью по сравнению в 3-кратной повторности. с 3МеОД1 (концентрация полумаксимального ингибирова- Результаты. В ходе работы было определено влияние ния составляла 25 ± 2 и 171 ± 4 нМ соответственно). аминонитроксильного комплекса платины (IV) на экспрес-При оценке биораспределения ФС in vivo отмечено, что оба сию гена маркера окислительного стресса SOD2. Установ-соединения интенсивно накапливались в опухолевой тка- лено, что исследуемое соединение увеличивает экспрессию ни. Нормированная флуоресценция в опухоли LLC дости- данного гена, что предполагает накопление перекиси во-гала максимальных значений для 3MeCh1_ga1 в течение дорода в опухолевых клетках и развитие окислительного 5—15 мин, а для 3MeCh1 — в течение 15—60 мин и состав- стресса. Увеличение экспрессии генов TXN и GSTT об-ляла 34,1 ± 6,9 и 18,4 ± 0,7 усл. ед. соответственно. Отме- условлено их важной ролью в клеточных редокс-зависимых чена высокая флуоресцентная контрастность относительно процессах, защищающих от разрушительного действия окружающей ткани (кожа и мышца): 7,8 ± 0,3 и 3,6 ± 0,2 активных форм кислорода. Следует отметить, что экспрес-усл. ед. и 8,5 ± 0,3 и 4,2 ± 0,2 усл. ед. соответственно. сия генов SOD2, TXNи GSTTувеличивается синхронно к 12 ч. 3Ме^1 и 3MeCh1_ga1 показали высокую противоопухоле- Глутатион играет важную роль в поддержании редокс-ста-вую активность в системе in vivo (100 % ТРО, 100 % УПЖ, туса клеток, в механизмах системы детоксикации, в регу-100 % КИ) при оптимальных режимах проведения ФДТ. ляции клеточного цикла, экспрессии генов и развитии Заключение. Получен высокий противоопухолевый апоптоза, однако исследуемое соединение не вызывает эффект в системах in vitro и in vivo для обоих соединений. изменений в системе глутатиона. Экспрессия гена GPX1 Однако введение в хлориновый макроцикл углеводного при действии комплекса ВС-131 незначительно выражена фрагмента приводило к стремительному накоплению и вы- к 12 ч, в то время как экспрессия гена GSR не изменяется ведению ФС, что создавало сложности при проведении вовсе. сеанса ФДТ, а также к повреждению окружающих тканей, Заключение. Установлено, что действие аминонитро-что не позволяет отнести его к перспективным ФС ксильного комплекса платины ВС-131 в опухолевой линии для ФДТ и делает нецелесообразным проведение такой MCF-7 вызывает активацию транскрипции генов SOD2, модификации красителя. TXN и GSTT. В.А. Мумятова, А.А. Балакина, В.Д. Сень, А.А. Терентьев Р.Д. Мустафаев, Г.В. Тихов ВЛИЯНИЕ АМИНОНИТРОКСИЛЬНОГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ КОМПЛЕКСА ПЛАТИНЫ (IV) НА ИЗМЕНЕНИЕ ТЕРАПИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ ПЕРИТОНИТА СИСТЕМЫ ФГБУ ГНЦЛМ ФМБА России, Москва ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область Введение. Широкое развитие фотодинамической тера-Введение. Известно, что действие многих противоопу- пии (ФДТ) и успешное внедрение методики в клиниче-холевых соединений сопровождается образованием и на- скую практику лечения воспалительных процессов разной коплением активных форм кислорода. Аминонитроксиль- локализации, а также наличие выраженного антибактери-ные радикалы являются антиоксидантами и способны ального эффекта, маловероятность развития резистентности улучшать свойства различных противоопухолевых соеди- и возможность локального использования без губительно-нений. В связи с этим актуальным является изучение вли- го воздействия на нормальную микрофлору организма яния аминонитроксильных радикалов и возможности позволяют, с нашей точки зрения, осуществить попытку их применения для смягчения побочных эффектов в со- изучения возможности применения метода ФДТ для лече-ставе противоопухолевых соединений. ния распространенного перитонита в эксперименте. Цель исследования — изучение функционирования ан- Цель исследования — оценить эффективность приме-тиоксидантной системы опухолевых клеток линии MCF-7 нения ФДТ при лечении разлитого перитонита. при действии аминонитроксильного комплекса платины (IV). Материалы и методы. Исследование выполнено на 68 Материалы и методы. Работа проводилась на опухоле- крысах линии Вистар массой тела 200—250 г. Для создания вой линии MCF-7 (аденокарцинома молочной железы модели острого распространенного калового перитонита человека). Выделение суммарной РНК проводили с ис- применена модифицированная методика В. А. Лазаренко пользованием реагента ExtractRNA («Евроген») согласно и соавт. с использованием профильтрованной 10 % каловой методике производителя. Синтез первичной цепи кДНК взвеси в дозе 0,5 мл на 100 г. После введения каловой взве-проводили с помощью MMLV PT kit («Евроген») согласно си в брюшную полость подопытным крысам на 3-и сутки методике производителя. Уровень экспрессии генов SOD2, у них развивалась клиническая картина острого перитони-

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ