ИНСУЛИНОТРОПНЫЙ КОМПЛЕКС, В КОТОРОМ ИСПОЛЬЗОВАН ФРАГМЕНТ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Конъюгат инсулинотропного пептида, содержащий инсулинотропный пептид и Fc-фрагмент иммуноглобулина, которые связаны непептидным полимером, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где один из концов молекулы непепидного полимера связан с аминокислотным остатком, отличным от N-концевого остатка инсулинотропного пептида.
2. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором инсулинотропный пептид выбран из группы, состоящей из GLP-1, эксендина-3, эксендина-4, их агонистов, производных, фрагментов и вариантов, а также их комбинаций.
3. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.2, в котором производное выбрано из группы, состоящей из пептидов, обладающих инсулинотропным действием и содержащих на N-конце аминогруппу, которая замещена, удалена или модифицирована по сравнению с нативным инсулинотропным пептидом, а также их фрагменты или варианты.
4. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.2, в котором производное выбрано из группы, состоящей из пептидов, в которых удален альфа-атом углерода и аминогруппа на N-конце нативного инсулинотропного пептида, а также их фрагментов и вариантов.
5. Конъюгат инсулинотропного пептида, в котором производное эксендина-4 и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где в производном эксендина-4 аминогруппа на N-конце замещена, удалена или модифицирована и где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
6. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.5, где производное эксендина-4 выбрано из группы, состоящей, в числе других инсулинотропных пептидов, из производного эксендина-4, полученного удалением N-концевой аминогруппы, производного эксендина-4, полученного замещением N-концевой аминогруппы гидроксильной группой, производного эксендина-4, полученного модификацией N-концевой аминогруппы с помощью введения двух метильных групп, производного эксендина-4, полученного удалением α-атома углерода гистидина, т.е. первого аминокислотного остатка эксендина-4, производного эксендина-4, полученного заменой 12-ого аминокислотного остатка (лизина) на серин, или производного эксендина-4, полученного заменой 12-ого аминокислотного остатка (лизина) на аргинин.
7. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором дезаминогистидилэксендин-4, полученный удалением аминогруппы из N-концевого остатка эксендина-4, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
8. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором дезаминогистидилэксендин-4, полученный удалением аминогруппы из N-концевого остатка эксендина-4, и альбумин связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
9. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором производное эксендина-4, полученное заменой аминогруппы N-концевого остатка эксендина-4 гидроксильной группой, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
10. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором производное эксендина-4, полученное заменой аминогруппы N-концевого остатка эксендина-4 гидроксильной группой, и альбумин связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
11. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором производное эксендина-4, полученное удалением альфа-атома углерода, к которому присоединена N-концевая аминогруппа гистидина в N-концевой области эксендина-4, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
12. Конъюгат инсулинотропного пептида в котором производное эксендина-4, полученное удалением альфа-атома углерода, к которому присоединена N-концевая аминогруппа гистидина, в N-концевой области эксендина-4, и альбумин связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
13. Производное инсулинотропного пептида, где указанное производное представлено следующей формулой 1:
1
2
R-X-Y-Z-R (1)
1
где заместитель R выбран из гистидина, дезаминогистидильной группы, N-диметилгистидильной группы, бета-гидроксиимидазолильной группы и 4-имидазоацетильной группы;
2
2
заместитель R выбран из группы, состоящей из -NH, -OH и -Lys;
фрагмент X выбран из группы, состоящей из
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser,
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly и
Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser;
3
фрагмент R выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg;
4
фрагмент R выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg;
Y представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированный полиол, поливиниловый спирт, полисахарид, декстран, поливинилэтиловый эфир, биоразрушаемый полимер, липидный полимер, хитин, гиалуроновую кислоту и их комбинации;
Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина.
14. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где каждый из двух концов молекулы непептидного полимера связан с аминогруппой и тиольной группой Fc-фрагмента иммуноглобулина и инсулинотропного пептида.
15. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина дегликозилирован.
H
H
H
H
16. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина состоит из 1-4 доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов C1, C2, C3 и C4.
17. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.16, где Fc-фрагмент иммуноглобулина дополнительно включает шарнирную область.
18. Конъюгат инсулинотропного пептида по любому из пп.1-5, где Fc-фрагмент иммуноглобулина, представляет собой Fc-фрагмент полученный из иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
19. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.18, где каждый из доменов, входящих во Fc-фрагмент иммуноглобулина, представляет собой гибрид доменов различного происхождения, полученных из иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
20. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.18, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой димер или мультимер (комбинацию Fc-фрагментов иммуноглобулина), состоящий из цепей иммуноглобулина одного и того же происхождения.
21. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.18, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент IgG4.
22. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.21, где Fc-фрагмент иммунглобулина представляет собой дегликозилированный Fc-фрагмент человеческого IgG4.
23. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где реакционноспособная группа непептидного полимера выбрана из альдегидной группы, пропиональдегидной группы, бутиральдегидной группы, малеимидной группы и производных сукцинимида.
24. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.23, где производное сукцинимида выбрано из группы, состоящей из сукцинимидилпропионата, сукцинимидилкарбоксиметила, гидроксисукцинимидила или сукцинимидилкарбоната.
25. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.23, где на обоих концах молекулы непептидного полимера имеются реакционноспособные альдегидные группы.
26. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.25, где непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
27. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида, включающий стадии
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционноспособную группу, выбранную альдегида, малеимида и производных сукцинимида, с амино или тиольной группой инсулинотропного пептида;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с аминокислотным остатком, отличным от аминокислотного остатка, находящегося на N-конце; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата, с получением конъюгата пептида, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
28. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида, включающий стадии
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционноспособную альдегидную группу, с остатком лизина инсулинотропного пептида при pH 7,5 или выше;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с остатком лизина; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата, с получением белкового конъюгата, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
29. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.27 или 28, где инсулинотропный пептид представляет собой дезаминогистидилэксендин-4, полученный удалением аминогруппы, находящейся на N-конце.
30. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.27 или 28, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, полученное замещением аминогруппы, находящейся на N-конце, гидроксильной группой.
31. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.27 или 28, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, полученное удалением α-атома углерода гистидина, т.е. первого аминокислотного остатка эксендина-4.
32. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.27 или 28, где непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
33. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения диабета, ожирения, острого коронарного синдрома или синдрома поликистоза яичников, включающая конъюгат пептида по любому из пп.1-32.