СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ НАСГ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ НАСГ-ИНДУЦИРОВАННОЙ ГЦК
METHODS FOR TREATMENT OF NASH AND PREVENTION OF NASH-INDUCED HCC

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к способам лечения неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и к способам предупреждения НАСГ–индуцированной гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), причем такие способы включают введение амидоксима О–(3–пиперидино–2–гидрокси–1–пропил)–никотиновой кислоты (BGP15), отдельно или в комбинации с ингибитором транссигнального ответа рецептора интерлейкина–6, в частности, gp130Fc.
Уровень техники изобретения
Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) является одним из самых распространенных и смертельных раковых заболеваний во всем мире. В развитых странах за последние три десятилетия заболеваемость ГЦК утроилась и стала самой быстрорастущей причиной смертности, связанной с раком (El–Serag et al., 2014), что первоначально объяснялось появлением вируса гепатита С (HCV). Однако следует отметить, что только 50% резкого увеличения ГЦК в развитых странах могут быть связаны с HCV. До 50% новых случаев ГЦК встречаются у пациентов с «отсутствием вируса» (El–Serag, 2011), где этиология заболевания до недавнего времени оставалась неясной (Starley et al., 2010). Большинство пациенты с ГЦК c «отсутствием вируса» имеют ожирение, неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП) и неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) (Cohen et al., 2011). По оценкам, по крайней мере 25% населения в развитых странах имеют НАЖБП (Lazo et al., 2013), причем до 8% из них проявляют некоторую степень НАСГ (Clark et al., 2003)
Существует потребность в лекарственных средствах, которые могут лечить НАСГ и предотвращать развитие ГЦК у пациентов с НАСГ.
Соединение формулы I,
et al.
et al.
Амидоксим О–(3–пиперидино–2–гидрокси–1–пропил)–никотиновой кислоты, также известный как BGP15, в основном известен в данной области для применения при лечении диабета (Literáti–Nagy , 2014). WO2013024311 и Gehrig  (2012) описывают полезность BGP15 для лечения атрофии мышц, главным образом путем уменьшения фиброза скелетных мышц. В WO2005123049 описан эффект BGP15 на митохондриальный генез и его возможное использование в регенерации мышц. В WO 9713504 описано применение BGP15 при нейродегенеративных заболеваниях, миопатии и различных заболеваниях митохондриального происхождения.
Nagy et al. (2010) описывают, как BGP 15 предотвращает транслокацию митохондрий в ядро и деполяризацию митохондрий в клетках печени.В WO 2005123049 раскрыто, что BGP15 может увеличивать количество митохондрий в различных тканях.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
BGP15 также известен для лечения приобретенной мышечной миопатии и рабдомиолиза (WO 2013003593), черепно–мозговой травмы (Eroglu , 2014), периферической нейропатии (Bardos , 2003) и фибрилляция предсердий и сердечной недостаточности (Sapra et al., 2014). Wu et al. (2015) описывают, как BGP15 увеличивает содержание мтДНК в ооцит. Halmosi  (2001) и Szabados  (2000) показывают, как BGP15 защищает кардиомиоциты от инактивации митохондрий, вызванной активными формами кислорода (ROS), благодаря его PARP–ингибирующему действию. Farkas  (2002), описывают эффект BGP15 на митохондрии кожи в связи с его активностью против PARP.
Краткое описание фигур
На фиг.1А показан уровень фиброза при окрашивании сириусом красным в клетках печени мышей дикого типа, которые получали диету Chow или HFD, а также мышей MUP–uPA, получавших диету HFD, которые получали лечение BGP15 или не получали лечение BGP15.
На фиг.1В показано окрашивание сириусным красным у мышей MUP–uPA на диете HFD, получавших лечение BGP15 или не получавших лечение BGP15.
На фиг.2 показаны уровни ALT у мышей дикого типа (WT) и мышей MUP–uPA (Mup), которые получали диету Chow или HFD, и которые получали лечение BGP15 или не получали лечение BGP15.
Сущность изобретения
Как показано в Nakagawa et al. (2014) и в Maurel et al. (2014), кормление мышей MUP–uPA диетой с высоким содержанием жиров (HFD) приводит к тому, что у этих животных формируется больная печень, которая повторяет человеческие особенности НАСГ. Что наиболее важно, эти мыши демонстрируют большее повреждение печени, выраженное воспаление печени и, как следствие, проявляется НАСГ и развивается типичная стеатогепатитная ГЦК.
Лечение мышей MUP–uPA, получавших HFD, BGP15 приводит к улучшению состояния.
Соответственно, в первом варианте осуществления предложен способ лечения НАСГ у субъекта, включающий введение такому субъекту соединения формулы I, его таутомеров, энантиомеров или фармацевтически приемлемых солей.
Во втором варианте осуществления предложен способ предупреждения НАСГ–индуцированной ГЦК у субъекта, включающий введение субъекту, пораженному НАСГ, соединения формулы I, его таутомеров, энантиомеров или фармацевтически приемлемых солей.
Подробное описание изобретения
Как указано выше, в первом варианте осуществления предложен способ лечения НАСГ у субъекта, включающий введение такому субъекту соединения формулы I, его таутомеров, энантиомеров или фармацевтически приемлемых солей.
Как указано выше, во втором варианте осуществления предложен способ предупреждения НАСГ–индуцированной ГЦК у субъекта, включающий введение субъекту, пораженному НАСГ, соединения формулы I, его таутомеров, энантиомеров или фармацевтически приемлемых солей.
Предыдущая работа показала, что воспаление печени можно уменьшить у мышей, получавших HFD, путем ингибирования транссигнального ответа рецептора интерлейкина–6. (Kraakman et al. 2015)
in vivo
Лечение gp130Fc, который является ингибитором транссигнального ответа рецептора интерлейкина–6, может быть удобно имитировано  с использованием трансгенных мышей, сверхэкспрессирующих белок gp130. (Kraakman et al. 2015).
Лечение мышей MUP–uPA, получавших HFD, которые сверхэкспрессировали gp130, с BGP15, приводит к облегчению заболевания.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления способы по изобретению дополнительно включают введение субъекту в комбинации с BGP15 ингибитора транссигнального ответа рецептора интерлейкина–6.
В конкретном варианте осуществления ингибитор транссигнального ответа рецептора интерлейкина–6 представляет собой gp130Fc или его функциональное производное.
Лекарственная форма
Композиции, представленные в настоящем документе, могут быть в форме таблеток или пастилок, полученных традиционным способом. Например, таблетки и капсулы для перорального введения могут включать обычные эксципиенты, включая, но не ограничиваясь ими, связующие агенты, наполнители, смазывающие вещества, дезинтегранты и смачивающие агенты. Таблетки могут быть покрыты оболочкой в соответствии со способами, хорошо известными в данной области.
Композиции, представленные в настоящем документе, также могут быть жидкими композициями, включая, но не ограничиваясь ими, водные или масляные суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и эликсиры. Композиции также могут быть получены в виде сухого продукта для разведения водой или другим подходящим носителем перед использованием. Такие жидкие препараты могут содержать добавки, включая, но не ограничиваясь ими, суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, неводные носители и консерванты.
Композиции, представленные в настоящем документе, также могут быть получены в виде суппозиториев, которые могут содержать основы для суппозиториев, включая, но не ограничиваясь ими, масло какао или глицериды.
Композиции, представленные в настоящем документе, также могут быть составлены для ингаляции, которые могут быть в форме, включающей, но не ограничиваясь этим, раствор, суспензию или эмульсию, которые можно вводить в виде сухого порошка или в форме аэрозоля с использованием пропеллента, такого как как дихлордифторметан или трихлорфторметан.
Композиции, представленные в настоящем документе, также могут быть получены в виде трансдермальных композиций, включающих водные или неводные носители, включая, но не ограничиваясь ими, кремы, мази, лосьоны, пасты, лечебный пластырь, патч или мембрану.
Композиции, представленные в настоящем документе, также могут быть составлены для парентерального введения, включая, без ограничения, инъекцию или непрерывную инфузию. Лекарственные формы для инъекций могут быть в форме суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных носителях и могут включать агенты для лекарственной формы, включая, но не ограничиваясь ими, суспендирующие, стабилизирующие и диспергирующие агенты.
Введение
Введение композиций с использованием способа, описанного в настоящем документе, может быть пероральным, парентеральным, сублингвальным, трансдермальным, ректальным, трансмукозальным, местным, путем ингаляции, посредством буккального введения или их комбинаций. Парентеральное введение включает, но не ограничивается ими, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, подкожное, внутримышечное, интратекальное и внутрисуставное.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения BGP15 вводят в комбинации с одним или несколькими другими фармацевтически активными средствами. Фраза «в комбинации», как используется в настоящем документе, относится к средствам, которые одновременно вводят субъекту. Следует понимать, что два или более средств считаются вводимыми «в комбинации» всякий раз, когда субъект одновременно подвергается воздействию обоих (или более) средств. Каждый из двух или более средств может вводиться в соответствии с различным режимом; не требуется, чтобы отдельные дозы различных средств вводились одновременно или в одной и той же композиции. Скорее, пока оба (или более) средства остаются в организме субъекта, их считают вводимыми «в комбинации».
Режим дозирования
Способ может включать введение терапевтически эффективного количества композиции пациенту, нуждающемуся в этом. Терапевтически эффективное количество, требуемое для использования в терапии, варьируется в зависимости от природы состояния, подлежащего лечению, периода времени, требуемого для увеличения гемопоэтических стволовых клеток в кровоток, и возраста/состояния пациента. В целом, однако, дозы, используемые для лечения взрослых людей, обычно находятся в диапазоне от 0,001 мг/кг до примерно 200 мг/кг в день. Доза может составлять от примерно 1 мкг/кг до примерно 100 мкг/кг в день. Нужную дозу можно удобно вводить в виде однократной дозы или в виде нескольких доз, вводимых с соответствующими интервалами, например, в виде двух, трех, четырех или более субдоз в день. Многократные дозы могут быть желательны или необходимы.
Дозировка может быть в любой дозировке, включая, но не ограничиваясь ими, примерно 0,1 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,3 мкг/кг, 0,4 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 0,6 мкг/кг, 0,7 мкг/кг, 0,8 мкг/кг, 0,9 мкг/кг, 1 мкг/кг, 25 мкг/кг, 50 мкг/кг, 75 мкг/кг, 100 мкг/кг, 125 мкг/кг, 150 мкг/кг, 175 мкг/кг, 200 мкг/кг, 225 мкг/кг, 250 мкг/кг, 275 мкг/кг, 300 мкг/кг, 325 мкг/кг, 350 мкг/кг, 375 мкг/кг, 400 мкг/кг, 425 мкг/кг, 450 мкг/кг, 475 мкг/кг, 500 мкг/кг, 525 мкг/кг, 550 мкг/кг, 575 мкг/кг, 600 мкг/кг, 625 мкг/кг, 650 мкг/кг, 675 мкг/кг, 700 мкг/кг, 725 мкг/кг, 750 мкг/кг, 775 мкг/кг, 800 мкг/кг, 825 мкг/кг, 850 мкг/кг, 875 мкг/кг, 900 мкг/кг, 925 мкг/кг, 950 мкг/кг, 975 мкг/кг или 1 мг/кг.
Примеры
Изобретение теперь описано с помощью неограничивающих примеров.
Пример 1. Лечение мышей MUP–uPA, получавших HFD, с помощью BGP15
Мышам MUP–uPA в соответствии с диетой HFD вводили BGP15, содержащую воду, для достижения BGP15 уровней в сыворотке в диапазоне от 200 до 400 нг/мл, при которых концентрация соединения является активной. 12 групп по 10 таких мышей использовали для определения эффективности BGP15 в лечении НАСГ и профилактики НАСГ–индуцированного ГЦК.
Образцы печени, образцы крови и мочи, не содержащие опухоли, получали из когорты в возрасте около 6 недель для установления исходных показателей и сравнивали с аналогичными образцами, взятыми в возрасте около 24 месяцев, когда развились НАСГ и фиброз, но не опухоли, и с образцами, взятыми в возрасте около 32 месяцев, когда развились опухоли. Отобранные образцы анализируют с помощью RNAseq (секвенирование РНК), как описано ранее в Kraakman et al. 2015 и в Umemura et al, 2016. Маркерами НАСГ являются уровни аспартатаминтотрансферазы (ALT) в сыворотке и уровни аланинтрансаминазы (AST), tunel–анализ для апопотоза, окрашивание ГЭ для клеточной инфильтрации, окрашивание сириусом красным для фиброза, окрашивание Ki67 и K19 для пролиферации клеток и кератина.
В качестве контроля можно использовать мышей, которых кормили Chow диетой, которая представляет собой диету с низким содержанием жира.
Как показано на фиг. 1A и 1B, окрашивание сириусом красным у мышей MUP–uPA с диетой HFD в возрасте 24 месяцев, которые получали лечение BGP15 или не получали лечение в течение 18 недель, и где на фиг. 1B более темные области обозначают фиброзные области, лечение с BGP15 существенно уменьшает фиброз.
Как показано на фиг.2, лечение BGP15 у мышей, получавших HFD, приводит к снижению уровней ALT.
Пример 2 – Лечение мышей MUP–uPA*sgp130 с помощью BGP15
Такую же процедуру, описанную в примере 1 выше, проводили на мышах MUP–uPA, которые были скрещены с sgp130 Tg мышами, описанными Kraakman et al. 2015, чтобы получить мышей MUP–uPA*sgp130 и определить эффективность комбинированного применения sgp130 и BGP15 в лечении НАСГ и профилактики НАСГ–индуцированной ГЦК.
Источники информации
Bardos G et al.. Toxicology and Applied Pharmacology (2003), 190(1), 9–16.
Clark, J.M., Brancati, F.L. & Diehl, A.M., Am J Gastroenterol 98, 960–967 (2003).
Cohen, J.C., Horton, J.D. & Hobbs, H.H., Science 332, 1519–1523 (2011).
El–Serag, H.B. & Kanwal, F., Hepatology 60, 1767–1775 (2014).
El–Serag, H.B., N Engl J Med 365, 1118–1127 (2011).
Eroglu B et al., Journal of Neurochemistry (2014), 130(5), 626–641.
et al.
Farkas , Biochemical Pharmacology, 2002,63, 921–932.
et al.
Gehrig SM , Nature (London) 484(7394), 394–398 (2012).
Halmosi et al., Molecular Pharmacology, 2001,59(6),1497–1505 .
Kraakman, M.J., et al., Cell Metab 21, 403–416 (2015).
Lazo, M., et al., Am J Epidemiol 178, 38–45 (2013).
Literáti–Nagy B et al., Metabolic Syndrome and Related Disorders (2014), 12(2).
Maurel, M., Samali, A. & Chevet., Cancer Cell 26,301–303 (2014).
Nagy et al., Toxicology and Applied Pharmacology 243. 96–103 (2010).
Nakagawa, H., et al., Cancer Cell 26, 331–343 (2014).
Sapra, G., et al. Nature communications 5, 5705 (2014).
Starley, B.Q., Calcagno, C.J. & Harrison, S.A., Hepatology 51, 1820–1832 (2010).
Szabados et al., Biochemical Pharmacology. 2000, 59, 937–945
Umemura et al., Cancer Cell. 2016 Jun 13;29(6):935–48.
Wu et al., Development, 2015,142,681–691.