Анальгетическая активность производного бензимидазола на моделях воспалительной боли

УДК 615.212.7:616-092.9

АНАЛЬГЕТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНОГО БЕНЗИМИДАЗОЛА НА МОДЕЛЯХ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ БОЛИ

О. Ю. Гречко1, Н. В. Елисеева1, А. А. Спасов1, Р. А. Литвинов1

1Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра фармакологии

Изучена анальгетическая активность производного бензимидазола (РУ-1205) на моделях воспалительной боли. Показано, что исследуемое соединение проявляет выраженную обезболивающую активность и в остром, и в хроническом эксперименте.

Ключевые слова: каппа-опиоидный рецептор, опиоидные анальгетики, воспалительная боль, формалин, буторфанол.

ANALGETIC ACTIVITY OF A BENZIMIDAZOLE DERIVATIVE ON MODELS OF INFLAMMATORY PAIN

O. Yu. Grechko, N. V. Eliseeva, A. A. Spasov, R. A. Litvinov

1The Volgograd state medical University, Department for Pharmacology

We studied the analgesic activity of RU-1205, a benzimidazole derivative, on the models of inflammatory pain. The derivative has been found to exhibit pronounced analgesic activity in both acute and chronic experimental pain models. Key words: kappa-opioid receptor, opioid analgesics, inflammatory pain, formalin, butorphanol.

Пристальное внимание в последние годы уделяется изучению селективных каппа-опиоццных агонистов, обладающих рядом преимуществ по сравнению с неселективными опиоидами. Существуют убедительные литературные данные, свидетельствующие о выраженной активности каппа-агонистов не только на центральных моделях алгезии, но и на периферических [4]. В ходе предыдущих экспериментов по направленному скринингу новых производных гетероциклических систем в тестах in vitro было выявлено соединение производное морфолиноэтилбензи-мидазола под лабораторным шифром РУ-1205, с высокой каппа-опиоидной агонистической активностью [2].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучение анальгетической активности соединения РУ-1205 в тестах острой и хронической воспалительной боли.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

В данной работе представлены данные по изучению обезболивающих свойств соединения дигидрох-лорида 9-(2-морфолиноэтил)-2-(4-фторфенил)имида-зо[1,2-а]-бензимидазола (РУ-1205), синтезированного в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета (Пат. РФ № 2 413 512 С1 от 279.07.2009 г.) [3]

При оценке ноцицептивной чувствительности использовались буторфанола тартрат («ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), налоксон (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), адъювант Фрейнда («SIGMA», США), формалин («Биомед», Россия). Лицензия на работу с наркотическими средствами ЛО-34-04-000022 от 12 октября 2012 г

Эксперименты выполнялись на 126 самцах нелинейных белых крыс массой 220—250 г, содержащихся в условиях вивария (температура 22—24 °С, относительная влажность воздуха 40—50 %) с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных в соответствии с ГОСТ Р 50258-92, с соблюдением правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ, регламентированных ГОСТ Р 51000.3-96 и ГОСТ Р 51000.4-96, а также правил и Международных рекомендаций «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях».

Исследование анальгетической активности проводили в соответствии с «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [1].

Для оценки влияния соединения на острое воспаление использовали метод формалиновой гиперал-гезии и метод механического раздражения на фоне формалиновой гипералгезии. Данное состояние моделировали подкожным введением 50 мкл 2%-го водного раствора формалина в тыльную поверхность правой задней лапки. Регистрировалось число болевых реакций «flinches» (поднятие лапки, облизывание, покусывание места инъекции) с момента введения формалина и на протяжении всего периода наблюдения с учетом острой (первые 10 мин) и воспалительной (с 10 по 60 мин) фаз ноцицептивного ответа.

Анальгетическую активность соединений оценивали отдельно для I и II фаз ноцицептивного ответа по уменьшению числа болевых реакций относительно таковых у контрольных животных.

В основе теста Рандалл-Селлитто лежит возникновение афферентной болевой импульсации при постепенно усиливающемся давлении на фоне острого воспаления химическим раздражителем. Механическую гипералгезию индуцировали также введением 50 мкл 2%-го раствора формалина в вентро-латеральную поверхность правой задней лапки подкожно с последующим применением дозированного нарастающего механического давления, точечно приложенного к месту инъекции. Регистрировали порог ноцицептивного ответа (вес в граммах, при достижении которого появлялся рефлекс «отдергивания лапки») через 2 минуты после инъекции формалина. Исследуемое соединение вводилось внут-рибрюшинно, равно как и препарат сравнения бу-торфанол, в дозах 0,01—1 мг/кг.

Для моделирования хронического воспаления за 4 дня до эксперимента животным подкожно в вен-тролатеральную поверхность правой задней лапки вводился адъювант Фрейнда (взвесь БЦЖ в вазелиновом масле) в объеме 0,05 мл. Критерием достижения ноцицептивного порога, выражаемого в граммах, являлся рефлекс «отдергивания лапы» при точечном механическом давлении на ее тыльную поверхность на 4-й день эксперимента. Исследуемые вещества вводились внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг 2 раза в день, начиная с первого дня эксперимента [4].

Для подтверждения опиоидного механизма действия проводили тесты с антагонистом опиоидных рецепторов — налоксоном.

Данные обрабатывали статистически при помощи компьютерной программы GraphPad Prism 5.0. с использованием критериев Краскелла-Уоллиса и Ман-на-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Субплантарная инъекция 2%-го формалина в дорсальную поверхность задней лапки вызывала характерную бифазную поведенческую ноцицептивную реакцию «flinch» (поднятие лапки, облизывание, покусывание места инъекции): острую или I фазу (первые 10 минут с пиком действия через 5 минут после введения формалина) и воспалительную или II фазу (с 10-й по 60-ю минуту с максимальной реакцией на 30-й минуте) ноцицептивного ответа. Введение растворителя не вызывало статистически значимых изменений порогов болевой чувствительности в контрольной группе животных и количество типичных поведенческих ответов составляло (150,2 ± 8,7) и (390,2 ± 12,5) «флинчей» в I и II фазах соответственно.

В первой фазе формалинового теста соединение РУ-1205 при внутрибрюшинном введении в дозах 0,01; 0,1 и 1 мг/кг уменьшало число вздрагиваний конечности на 28, 40 и 57 % соответственно. Во второй фазе — на 16, 43 и 54 % соответственно. В данном тесте анальгетическая активность исследуемого соединения была равна препарату сравнения — буторфанолу (рис.).

По уровню терапевтического индекса (ТИ = ЛД.0/31Ц50) изучаемое соединение превосходило эталонный препарат во II фазе ноцицептивного ответа в 1,8 раза и его показатель составил 711,2 для препарата и 400 для буторфанола.

На модели механической гипералгезии отмечалось статистически значимое уменьшение порога но-цицептивной реакции на 27,4 % по сравнению с интакт-ными животными, что составляло (740,6 ± 43,2) гр. В группе интактного контроля данный показатель соответствовал (885,6 ± 34,3) гр.

А

"Статистически значимо по отношению к интактному контролю (p < 0,05).

Б

Рис. Влияние соединения РУ-1205 и буторфанола на болевой порог крыс в тесте формалиновой боли (при в/бр введении): А — влияние соединений в острой фазе; Б — влияние соединений в воспалительной фазе

^^^^ 102

Выпуск 2 (58). 2016

I^mpfö ©©СаГГГМЩ

Тестируемое соединение РУ-1205, равно как и буторфанол, дозозависимо увеличивало порог болевой чувствительности в ответ на действие нарастающего механического стимула, точечно приложенного к задней лапке крысы в условиях формалиновой гипералге-зии. Исследуемое вещество в диапазоне доз 0,01— 1,0 мг/кг вызывало статистически значимое увеличение порога отдергивания лапки на 20,6; 58,3 и 93,2 % соответственно (р < 0,05) и было сопоставимо с препаратом сравнения (табл.).

Влияние вещества РУ-1205 и буторфанола при в/бр введении на величину болевого порога при механическом давлении в тесте Рандалл-Селитто

Вещество/группа Доза, мг/кг Болевой порог, г

Контроль — 740,6 ± 43,2

РУ-1205 0,01 880,0 ± 27,6

0,1 1161,3 ± 53,6*

1,0 1313,8 ± 108,6*

Буторфанол 0,01 911,3 ± 35,1

0,1 1138,3 ± 82,4*

1,0 1326,7 ± 95,5*

*p < 0,05 — данные статистически значимы по отношению к контрольной группе животных.

Анальгетический эффект соединения РУ-1205 блокировался антагонистом опиоидных рецепторов налок-соном, что подтверждает опиоидергический механизм его действия.

Адъювант Фрейнда при введении в вентролате-ральную поверхность задней лапы крысы приводил к возникновению воспалительной реакции, сопровождающейся гипералгезией ткани с максимальной выраженностью на 4-е сутки. На фоне этого порог болевой

чувствительности при механическом надавливании статистически значимо уменьшался на 35 % по сравнению с интактным контролем и составил (346,5 ± 13,8) г. Было установлено, что изучаемое соединение в дозе 10 мг/кг статистически значимо увеличивало порог «отдергивания лапки» на 45 % и было сопоставимо по активности буторфанолу.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследуемое соединение РУ-1205 проявляет до-зозависимое анальгетическое действие на всех экспериментальных моделях периферической воспалительной боли, сопоставимое по активности с препаратом сравнения и превосходящее его по терапевтическому индексу почти в 2 раза.

ЛИТЕРАТУРА

1. Воронина Т. А., Гузеватых Л. С. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А. Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. — 214 с.

2. Гречко О. Ю., Спасов А. А., Штарёва Д. М. и др. // Вестник ВолгГМУ. — 2014. — Т. 49, № 1. — С. 61—63.

3. Пат. РФ № 2 413 512 С1 от 29.07.2009 «Средство, обладающее каппа-опиоидной агонистической активностью» Анисимова В. А. и др. Опубл. 11.03.2011; Бюл. изобретений № 7.

4. Jiang Y. L, HeX. F., Shen Y. F., et al. // Exp Ther Med. — 2015. — Jun. — Vol. 9 (6). — P. 2344—2348.

Контактная информация

Елисеева Наталья Владимировна — к. м. н.,

ассистент кафедры фармакологии, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: nvkirillova@rambler.ru