Разработка препарата для лечения псориаза на основе рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-36 (IL-36ra) человека

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы Immunomodulators of endogenous and exogenous nature

(нормальной) плазмы крови человека в тесте генерации тромбина; активность прокоагулянтных факторов свертывания крови (II, VII, IX, X, XI); а так же изменение неактивированного частичного тромбопластинового времени стандартной плазмы крови человека. Критериями оценки являются максимальное количество тромбина в тесте генерации тромбина, не превышающее 350 нМоль, латентный период (лаг-фаза) генерации не менее 11 мин., период образования максимального количества тромбина — не менее 19 мин., активность фактора Xfe, не превышающая 10 мМЕ/мл, факторов II, VII, IX, X и калликреина — менее 50 мМЕ/мл, а также отсутствие уменьшения времени образования сгустка в стандартной плазме крови человека. Выявлено, что в исследованных образцах препаратов иммуноглобулинов человека четырех отечественных производителей остаточное содержание факторов свертывания крови IX, Ка, VII не превышает установленный предел, активность факторов II и X не проявляется, установлено наличие в образцах антитромбина III в количестве более

1 МЕ/мл, латентный период генерации тромбина и период образования максимального количества тромбина не превышает 3 мин. Полученные результаты свидетельствуют о низком тромбогенном потенциале этих образцов.

Заключение. Обоснованные параметры и критерии могут быть использованы для подтверждения безопасности препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения в части оценки их возможного негативного влияния на свертывающую систему крови пациента. Тромбогенный потенциал изученных образцов препаратов иммуноглобулинов человека отечественного производства соответствует международным стандартам качества.

РАЗРАБОТКА ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНОГО РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-36 (IL-36ra) ЧЕЛОВЕКА

Колобов А.А.1, 2, Кондратьева Е.В.1, Кудлинг Т.В.1, Карасев М.М.1, Калинин Р.С.1, Протасов Е.А.1, Нимирицкий П.П.1, 2, Стефанов В.Е.1, 2, Александров Г.В.1, Петров А.В.1, Симбирцев А.С.1

1ФГУП«Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА РФ, Санкт-Петербург, Россия

2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Генерализованный пустулезный псориаз (ГПП) — это редкая, в некоторых случаях смертельно опасная форма псориаза, которая вызывается рядом мутаций в гене рецепторного антагониста интерлейкина-36 (IL-36ra), сопровождающихся его сниженной экспрессией или активностью. Введение экзогенного IL-36ra могло бы применяться для лечения ГПП и других форм псориаза.

Цель и задачи. Цель данной работы — проведение доклинических исследований лекарственного средства для лечения псориаза на основе рекомбинантного IL-36ra человека. Задачи данной работы включали в себя создание плазмидных векторов для экспрессии гена IL-36ra, создание штамма-продуцента IL-36ra на основе E. coli, разработку методов очистки и хранения IL-36ra и доклинические исследования активности и токсичности IL-36ra.

Материалы и методы. Поскольку для полной биологической активности IL-36ra необходимо отщепление инициаторного остатка метионина, нами был получен

штамм-продуцент IL-36ra на основе E. coli, трансформированный плазмидами, несущими гены IL-36ra и ме-тионинаминопептидазы (МАП) E. coli. Была разработана методика культивирования штамма-продуцента IL-36ra в ферментерах. Была разработана схема хроматографи-ческой очистки IL-36ra на анионообменном сорбенте GE Q и гидрофобном сорбенте Tosoh Butyl-650. Была разработана композиция его готовой лекарственной формы. Была подобрана эффективная доза препарата. Были исследованы фармакокинетика и острая токсичность препарата на мышах, крысах и кроликах.

Результаты. Разработанная методика культивирования штамма-продуцента IL-36ra и его дальнейшей очистки позволяет получать с 1 литра бактериальной культуры до 40 мг очищенного IL-36ra с примесью < 5% его формы, содержащей неотщеплённый N-концевой остаток метионина. Показана способность полученного препарата IL-36ra купировать индуцированный псориазоподобный фенотип у мышей в дозе 0,5 мг/кг при подкожном введении. Дозы препарата до 200 мг/ кг не токсичны для грызунов и зайцеобразных. Препарат апирогенен и не оказывает местно-раздражающего действия.

Заключение. Полученный препарат рекомбинантно-го рецепторного антагониста интерлейкина-36 (IL-36ra) человека эффективно купирует псориазоподобный фенотип у мышей и не демонстрирует острой токсичности в дозах до 200 мг/кг, что в тысячи раз превосходит расчетную терапевтическую дозу для человека. Методика получения IL-36ra пригодна для промышленного масштабирования. После окончания доклинических испытаний препарат может быть испытан на людях.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ АКТИВАТОРА ПРЕКАЛЛИКРЕИНА В ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ АЛЬБУМИНА ЧЕЛОВЕКА

Кривых М.А., Корнилова О.Г., Жук И.Е.

ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия

Введение. Количественное определение содержания активатора прекалликреина является одним из ключевых показателей качества, определяющих специфическую безопасность таких инфузионных препаратов крови, как альбумин человека. С присутствием в указанных препаратах активатора прекалликреина связывают возможные нежелательные реакции в виде гипотензии. До настоящего времени лекарственные препараты альбумина человека отечественного производства не подвергались контролю качества на содержание активатора прекалликреина ни в процессе производства, ни при выпуске готового лекарственного препарата. Всемирная организация здравоохранения рекомендует проводить определение содержания активатора прекалликреина в препаратах крови человека, включая альбумин. Фармакопейной статьей «Альбумин человека» ФС.3.3.2.0006.15 Государственной фармакопеи Российской Федерации XIII издания впервые в отечественной фармацевтической практике установлены требования по содержанию активатора прекал-ликреина на уровне не более 35 МЕ/мл.