СПОСОБЫ МОДИФИКАЦИИ ПОВЕРХНОСТНОГО ЗАРЯДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ

1. Способ модификации изоэлектрической точки антитела, причем указанный способ включает:
обеспечение антитела, при этом указанное антитело содержит:
первый полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, и
второй полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи; и
H
замещение в по меньшей мере одном из первого и второго полипептидов антитела одного или более аминокислотных остатков вариабельной области тяжелой цепи (V) в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 70, 74, 82a, 84 и 113 в соответствии с системой нумерации по Кабату, при этом указанное замещение увеличивает или уменьшает изоэлектрическую точку антитела.
H
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) представляют собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более нейтрально заряженных аминокислотных остатков на один или более положительно заряженных аминокислотных остатков для увеличения изоэлектрической точки антитела.
H
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) представляют собой отрицательно заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более отрицательно заряженных аминокислотных остатков на один или более нейтрально или положительно заряженных аминокислотных остатков для увеличения изоэлектрической точки антитела.
H
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 9, 70, 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) представляют собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более нейтрально заряженных аминокислотных остатков на один или более отрицательно заряженных аминокислотных остатков для уменьшения изоэлектрической точки антитела.
H
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 9, 70, 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) представляют собой положительно заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более положительно заряженных аминокислотных остатков на один или более нейтрально или отрицательно заряженных аминокислотных остатков для снижения изоэлектрической точки антитела.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антитело представляет собой мультиспецифическое антитело, а первый и второй полипептиды содержат разные вариабельные области тяжелой цепи.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что указанное замещение выполняют только в одном из первого или второго полипептидов.
8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что указанное замещение выполняют в обоих из первого или второго полипептидов.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что замены одного или более аминокислотных остатков первого полипептида отличаются от замен одного или более аминокислотных остатков второго полипептида.
H
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 74 (нумерация по Кабату) в по меньшей мере одном из первого или второго полипептидов на отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
H
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 82a (нумерация по Кабату) в по меньшей мере одном из первого или второго полипептидов на отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
H
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 84 (нумерация по Кабату) в по меньшей мере одном из первого или второго полипептидов на отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
H
13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V по меньшей мере в двух положениях, выбранных из положений 74, 82a и 84 (нумерация по Кабату), в по меньшей мере одном из первого или второго полипептидов на отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
H
14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V во всех трех положениях 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) в по меньшей мере одном из первого или второго полипептидов на отрицательно заряженный аминокислотный остаток.
15. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антитело представляет собой антитело IgG.
16. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антитело представляет собой химерное антитело, гуманизированное антитело или человеческое антитело.
17. Антитело, имеющее модифицированную изоэлектрическую точку, полученную при помощи способа по п. 1.
18. Способ увеличения степени разделения биспецифического антитела от двух исходных антител, причем указанный способ включает:
обеспечение первого и второго исходного антител, при этом каждое исходное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи;
H
замещение в по меньшей мере одном из первого и второго исходных антител одного или более аминокислотных остатков в вариабельной области тяжелой цепи (V) в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 70, 74, 82a, 84 и 113, в соответствии с системой нумерации по Кабату, при этом указанное замещение увеличивает или уменьшает изоэлектрическую точку первого исходного антитела относительно второго исходного антитела;
получение биспецифического антитела из двух исходных антител после указанного замещения;
отделение полученного биспецифического антитела от его двух исходных антител, при этом указанное разделение увеличивается в результате указанного замещения.
H
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) первого исходного антитела представляют собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более нейтрально заряженных аминокислотных остатков на один или более положительно заряженных аминокислотных остатков для увеличения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) первого исходного антитела представляют собой отрицательно заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более отрицательно заряженных аминокислотных остатков на один или более нейтрально или положительно заряженных аминокислотных остатков для увеличения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
21. Способ по п. 18, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 9, 70, 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) первого исходного антитела представляют собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более нейтрально заряженных аминокислотных остатков на один или более отрицательно заряженных аминокислотных остатков для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
22. Способ по п. 18, отличающийся тем, что когда один или более аминокислотных остатков V в положениях 9, 70, 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) первого исходного антитела представляют собой положительно заряженные аминокислотные остатки, указанное замещение включает обмен указанных одного или более положительно заряженных аминокислотных остатков на один или более нейтрально или отрицательно заряженных аминокислотных остатков для снижения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
23. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 74 (нумерация по Кабату) в первом исходном антителе на отрицательно заряженный аминокислотный остаток для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
24. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 82a (нумерация по Кабату) в первом исходном антителе на отрицательно заряженный аминокислотный остаток для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
25. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V в положении 84 (нумерация по Кабату) в первом исходном антителе на отрицательно заряженный аминокислотный остаток для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
26. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V по меньшей мере в двух положениях, выбранных из положений 74, 82a и 84 (нумерация по Кабату) в первом исходном антителе, на отрицательно заряженный аминокислотный остаток для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
H
27. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанное замещение включает обмен аминокислотного остатка V во всех трех положениях 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) в первом исходном антителе на отрицательно заряженный аминокислотный остаток для уменьшения изоэлектрической точки первого исходного антитела.
28. Мультиспецифическое антитело, содержащее
первый полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, и
второй полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, причем изоэлектрическая точка первого полипептида ниже, чем изоэлектрическая точка второго полипептида, и один или более аминокислотных остатков в положениях 9, 70, 74, 82a и 84 (нумерация по Кабату) вариабельной области тяжелой цепи первого полипептида содержат нейтрально или отрицательно заряженный аминокислотный остаток, и один или более аминокислотных остатков в соответствующих положениях вариабельной области тяжелой цепи второго полипептида содержат аминокислотный остаток с отличающимся зарядом по сравнению с первым полипептидом.
29. Мультиспецифическое антитело по п. 28, отличающееся тем, один или более аминокислотных остатков в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 вариабельной области тяжелой цепи второго полипептида содержат нейтрально или положительно заряженный аминокислотный остаток, и один или более аминокислотных остатков в соответствующих положениях вариабельной области тяжелой цепи первого полипептида содержат аминокислотный остаток с отличающимся зарядом по сравнению со вторым полипептидом.
30. Мультиспецифическое антитело по п. 28, отличающееся тем, что нейтрально или отрицательно заряженные аминокислотные остатки в одном или более положениях 9, 70, 74, 82а и 84 (нумерация по Кабату) представляют собой аминокислотные замены.
31. Мультиспецифическое антитело, содержащее
первый полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, и
второй полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, причем изоэлектрическая точка первого полипептида выше, чем изоэлектрическая точка второго полипептида, и один или более аминокислотных остатков в положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) вариабельной области тяжелой цепи первого полипептида содержат нейтрально или положительно заряженный аминокислотный остаток, и один или более аминокислотных остатков в соответствующих положениях вариабельной области тяжелой цепи второго полипептида содержат аминокислотный остаток с отличающимся зарядом по сравнению с первым полипептидом.
32. Мультиспецифическое антитело по п. 30, отличающееся тем, один или более аминокислотных остатков в положениях 9, 70, 74, 82a, и 84 (нумерация по Кабату) вариабельной области тяжелой цепи второго полипептида содержат нейтрально или отрицательно заряженный аминокислотный остаток, и один или более аминокислотных остатков в соответствующих положениях вариабельной области тяжелой цепи первого полипептида содержат аминокислотный остаток с отличающимся зарядом по сравнению со вторым полипептидом.
33. Мультиспецифическое антитело по п. 31, отличающееся тем, что нейтрально или положительно заряженные аминокислотные остатки в одном или более положениях 7, 9, 11, 14, 41, 74, 84, и 113 (нумерация по Кабату) представляют собой аминокислотные замены.
34. Мультиспецифическое антитело по любому одному из пп. 28-33, отличающееся тем, что мультиспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело.