КОНСТРУКЦИИ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ МАСЛА С ИЗМЕНЕННЫМ СОСТАВОМ ИЗ СЕМЯН

1. Семя сои, характеризующееся составом жирных кислот в масле из семян, в котором содержание олеиновой кислоты составляет от около 42 до около 85 мас.% от общего содержания жирных кислот и содержание насыщенных жирных кислот составляет менее 8 мас.% от общего содержания жирных кислот.
2. Семя сои по п.1, которое включает геном с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая подавляет экспрессию эндогенных FAD2-1 и FATB сои, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагмент интрона FAD2-1 сои, содержащий от около 20 до около 420 нуклеотидов, и фрагмент гена FATB сои, содержащий от около 40 до около 450 нуклеотидов; и указанный геном дополнительно включает последовательность нуклеиновой кислоты, повышающую экспрессию бета-кероацил-АСР-синтазы IV или дельта-9-десатуразы либо обеих вместе.
3. Семя сои по п.2, в котором указанный фрагмент интрона FAD2-1 сои и указанный фрагмент FATB сои транскрибированы в смысловой и антисмысловой ориентации с образованием РНК, которая по крайней мере частично является двухцепочечной.
4. Семя сои по п.2, в котором указанная последовательность нуклеиновой кислоты, подавляющая экспрессию эндогенных FAD2-1 и FATB сои, собирается в виде функциональной единицы транскрипции после введения в хромосому растения.
5. Семя сои по п.1, которое дополнительно включает геном с последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей фрагмент интрона FAD2-1 сои длиной от около 20 до около 420 последовательных нуклеотидов и фрагмент гена FATB сои длиной от около 40 до около 450 последовательный нуклеотидов.
6. Семя сои по п.5, в котором указанный фрагмент интрона FAD2-1 сои и указанный фрагмент FATB сои транскрибированы в смысловой и антисмысловой ориентации с образованием РНК, которая по крайней мере частично является двухцепочечной.
7. Семя сои по п.5, в котором указанная последовательность нуклеиновой кислоты собирается в виде функциональной единицы транскрипции после введения в хромосому растения.
8. Семя сои по п.1, которое включает геном с последовательностью нуклеиновой кислоты, подавляющей экспрессию эндогенного FAD2-1 сои, содержащего фрагмент интрона FAD2-1 сои длиной от около 20 до около 420 нуклеотидов; и указанный геном дополнительно содержит последовательность нуклеиновой кислоты, повышающую экспрессию бета-кетоацил-АСР-синтазы IV или дельта-9-десатуразы либо обеих вместе.
9. Способ уменьшения величины подавления гена FAD2 по сравнению с величиной подавления гена FAD2 путем экспрессии конструкции дцРНКи, включающей гетерологичную последовательность FAD2, состоящую из всего интрона FAD2 или всей UTR FAD2, который включает:
i) экспрессию гетерологичной последовательности FAD2 в растительной клетке, причем указанная гетерологичная последовательность FAD2, получаемая из эндогенного гена FAD2 в растительной клетке, состоит из фрагмента интрона FAD2 или фрагмента UTR FAD2; и
ii) подавление эндогенного гена FAD2 указанной гетерологичной последовательностью, при этом величина подавления гена FAD2 меньше величины экспрессии гена, достигаемой в результате экспрессии гетерологичной последовательности FAD2, состоящей из всего интрона FAD2 или всей UTR FAD2.
10. Способ по п.9, в котором указанный фрагмент интрона FAD2 содержит от около 40 до около 320 последовательных нуклеотидов всего интрона 1 FAD2 и указанный фрагмент UTR FAD2 содержит от около 100 до около 140 последовательных нуклеотидов всей 3'-концевой UTR FAD2.
11. Способ изменения состава масла растительной клетки, который включает: трансформацию растительной клетки гетерологичной последовательностью FAD2, выделенной из части эндогенного гена FAD2, при этом указанная гетерологичная последовательность FAD2 состоит из фрагмента интрона FAD2 или фрагмента UTR FAD2; и выращивание указанной растительной клетки в условиях инициации транскрипции указанной гетерологичной последовательности FAD2, при этом состав масла изменяется по сравнению с растительной клеткой, имеющей подобную генетическую среду, но не содержащей указанную гетерологичную последовательность FAD2.
12. Способ увеличения содержания олеиновой кислоты и уменьшения содержания насыщенных жирных кислот в семени растения, который включает:
i) укорачивание длины первой гетерологичной последовательности FAD2 по крайней мере до частичного уменьшения величины подавления гена FAD2 в растении, трансформированном первой гетерологичной последовательностью FAD2, по сравнению с величиной подавления гена FAD2 в растительной клетке, имеющей подобную генетическую среду и вторую гетерологичную последовательность FAD2, которая состоит из более эндогенной последовательности FAD2, чем указанная первая гетерологичная последовательность FAD2;
ii) экспрессию гетерологичной последовательности FATB, способной по крайней мере частично уменьшать экспрессию гена FATB в растительной клетке по сравнению с подавлением FATB в растительной клетке, имеющей подобную генетическую среду, но не содержащей указанную гетерологичную последовательность FATB;
iii) выращивание растения, содержащего геном с указанной первой гетерологичной последовательностью FAD2 и указанной гетерологичной последовательностью FATB; и
iv) культивирование растения, образующего семя с пониженным содержанием насыщенных жирных кислот по сравнению с семенем растения, имеющего подобную генетическую среду, но не содержащего указанную первую гетерологичную последовательность FAD2 и указанную гетерологичную последовательность FATB.
13. Способ модуляции состава жирных кислот в масле из семян масличной культуры умеренного пояса, который включает выделение фрагмента генетического элемента длиной, равной по крайней мере 40 нуклеотидам, способного подавлять экспрессию эндогенного гена в пути синтеза жирных кислот; введение указанного генетического элемента в растительную клетку масличной культуры умеренного пояса; создание трансгенного растения и отбор семени трансгенного растения, содержащего указанный генетический элемент, модулирующий состав жирных кислот в масле из указанного семени.
14. Способ по п.13, в котором указанный эндогенный ген включает два или более эндогенных генов в пути синтеза жирных кислот.
15. Способ по п.13, в котором указанный генетический элемент выбирают из группы, включающей интрон, экзон, кодирующую последовательность ДНК транзитного пептида, 3'-UTR, 5'-UTR, открытую рамку считывания или транскрипт указанного эндогенного гена в пути синтеза жирных кислот.
16. Способ по п.13, в котором указанный эндогенный ген выбирают из группы, включающей FAD2-1, FAD3, FATB и их комбинации.
17. Способ по п.13, в котором указанную масличную культуру умеренного пояса выбирают из группы, состоящей из сои, канолы, подсолнечника, арахиса, кукурузы и хлопчатника.
18. Клетка семени сои, характеризующегося составом жирных кислот в масле из семян, в котором содержание олеиновой кислоты составляет от около 42 до около 85 мас.% от общего содержания жирных кислот и содержание насыщенных жирных кислот составляет менее 8 мас.% от общего содержания жирных кислот.
19. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, включающая фрагмент интрона FAD2-1 сои длиной от около 20 до около 420 последовательных нуклеотидов и фрагмент гена FATB сои длиной от около 40 до около 450 последовательных нуклеотидов.
20. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, включающая последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую фрагмент интрона FAD2-1 сои длиной от около 20 до около 420 нуклеотидов, фрагмент гена FATB сои длиной от около 40 до около 450 нуклеотидов и последовательность нуклеиновой кислоты, которая повышает экспрессию бета-кетоацил-АСР-синтазы IV или дельта-9-десатуразы либо обеих вместе.
21. Несмешанное соевое масло, характеризующееся составом жирных кислот, в котором содержание олеиновой кислоты составляет от около 42 до около 85 мас.% от общего содержания жирных кислот и содержание насыщенных жирных кислот составляет около 8 мас.% или меньше от общего содержания жирных кислот.
22. Соевая мука, полученная из семени сои, характеризующегося составом жирных кислот в масле из семян, в котором содержание олеиновой кислоты составляет от около 42 до около 85 мас.% от общего содержания жирных кислот и содержание насыщенных жирных кислот составляет менее 8 мас.% от общего содержания жирных кислот.
23. Способ уменьшения содержания линоленовой кислоты в семени сои, который включает:
i) введение в клетку сои молекулы гетерологичной нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере из двух членов семейства генов FАD3;
ii) экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты из гена FAD2, способной по крайней мере частично уменьшать экспрессию эндогенного гена FAD3 в растительной клетке;
iii) выращивание растительной клетки, содержащей геном с указанной последовательностью нуклеиновой кислоты по крайней мере из двух членов указанного семейства генов FAD3; и
iv) культивирование указанной растительной клетки с уменьшенным содержанием линоленовой кислоты по сравнению с растительной клеткой, имеющей подобную генетическую среду, но не содержащей по крайней мере два члена указанного семейства генов FAD3.
24. Способ по п.23, в котором указанное семейство генов FAD3 выбирают из группы, включающей FAD3-1A, FAD3-1B и FAD3-1C.
25. Способ по п.23, в котором указанные фрагменты ДНК находятся в 5'- или 3'-UTR транскрибированной области FAD3.
26. Конструкция рекомбинантной ДНК, включающая фрагменты ДНК по крайней мере из двух членов семейства генов FAD3.
27. Конструкция рекомбинантной ДНК по п.26, которая дополнительно включает фрагмент интрона FAD2-1 сои длиной от около 20 до около 420 последовательных нуклеотидов и фрагмент гена FATB сои длиной от около 40 до около 450 последовательных нуклеотидов.
28. Несмешанное соевое масло, характеризующееся составом жирных кислот, в котором содержание олеиновой кислоты составляет от около 42 до около 85 мас.% от общего содержания жирных кислот, содержание насыщенных жирных кислот составляет около 8 мас.% или меньше от общего содержания жирных кислот и содержание линоленовой кислоты составляет около 1,5 мас.% или меньше от общего содержания жирных кислот.
29. Семя сои, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по п.26.
30. Соевая мука, полученная из семени сои по п.29.