Стабилизированная композиция пеметрекседа
STABILIZED PEMETREXEDE COMPOSITION

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к стабилизированной композиции пеметрекседа и, более конкретно, к стабилизированной композиции пеметрекседа, содержащей ацетилцистеин в качестве антиоксиданта и цитрат натрия в качестве забуферивающего агента, и к способу ее получения. Дополнительно настоящее изобретение относится к композиции пеметрекседа в герметичном контейнере, содержащей пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, где содержание кислорода в свободном пронстранстве контейнера составляет 3% об./об. или менее.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Соединения, имеющие конкретные антифолатные активности, известны в качестве химиотерапевтических агентов. В патенте США №5344932 описан способ изготовления особым образом замещенных антифолатных производных на основе пирроло[2,3-d]пиримидина, включающих пеметрексед, и в публикации заявки на европейский патент №0434426 раскрыт ряд производных 4-гидроксипирроло[2,3-d]пиримидин-L-глутаминовой кислоты.
Пеметрексед, 5-замещенный пирроло[2,3-d]пиримидин, представляет собой направленный на много мишеней антифолат, демонстрирующий противораковую активность посредством подавления активностей метаболитов, вовлеченных в метаболизм фолата, при разных видах рака, включая немелкоклеточный рак легкого.
Было известно, что пеметрексед направленно действует на тимидилатсинтазу (TS) и дигидрофолатрезуктазу (DHFR) при его активации в полиглутаматные производные фолилполиглутаматсинтетазой (FPGS) после его введения в клетки посредством восстановленного фолатного носителя (RFC), который представляет собой главный внутриклеточный транспортный канал для фолатов.
Пеметрексед, уже представленный под фирменным наименованием ALIMTA™, в настоящее время доступен на рынке в качестве агента для лечения злокачественной плевральной мезотелиомы и немелкоклеточного рака легкого (Physicians' Desk Reference, 60th ed., pp, 1722-1728(2006)). AUMTA™ в настоящее время продается на рынке в форме лиофилизированной композиции (100 мг или 500 мг), которая требует растворения перед введением, т.е. при введении пациенту она должна быть растворена в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и затем разбавлена 0,9%-ным раствором хлорида натрия (конечная концентрация 0,25 мг/мл).
Процесс изготовления композиций типа лиофилизированного порошка является сложным, и его обработка требует высоких затрат. Кроме того, существует риск микробного загрязнения во время растворения лиофилизированных композиций, и фармацевты, врачи, медицинские сестры и т.д., которые участвуют в приготовлении лекарственного средства, с высокой вероятностью будут подвергнуты воздействию веществ, разрушающих клетки. Соответственно, в случае цитотоксического противоракового агента, такого как пеметрексед, необходимо вместо лиофилизированной композиции разработать готовую к применению жидкую композицию, которую можно хранить в течение длительного периода времени.
Во многих случаях проблемой жидких композиций является их нестабильность во время хранения. Из-за данной нестабильности многие инъецируемые копозиции используют в форме лиофилизированной композиции, которую растворяют немедленно перед инъекцией. В случае пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, которые были предоставлены в форме лиофилизированной композиции, изготовление в форме водного раствора может приводить к увеличению количества неизвестных примесей и, таким образом, долговременное хранение при комнатной температуре может быть невозможным. По причинам стабильности их все еще используют в клинических исследованиях в форме лиофилизированных композиций.
Для преодоления вышеописанных проблем было предложено несколько композиций. Например, в патенте США №6686365 (публикация заявки на корейский патент №2002-0081293) раскрыта стабильная жидкая композиция пеметрекседа, которая представляет собой жидкую композицию пеметрекседа, содержащую терапевтически эффективное количество пеметрекседа, эффективное количество антиоксиданта и фармацевтически приемлемый эксципиент, где антиоксидант выбран из группы, состоящей из монотиоглицерина, L-цистеина и тиогликолевой кислоты.
Однако приведенный выше патент по имеющимся сообщениям имеет проблему в том, что в ходе анализа долговременной стабильности при хранении при 25°С происходит образование осадка и он, таким образом, не может гарантировать стабильность в течение желательного периода времени (международная патентная публикация № WO 2012/015810). До настоящего времени не было экспериментально или коммерчески успешной жидкой композиции пеметрекседа, имеющей долговременную стабильность при хранении. Авторы настоящего изобретения получили жидкую композицию, содержащую пеметрексед, с использованием L-цистеина, описанного выше антиоксиданта, провели ее анализ стабильности и обнаружили, что проблемы, такие как изменения характеристик, такие как изменение цвета и т.д., увеличение количества примесей, снижение рН и т.д, имели место со второй недели при тестировании в условиях стресса. Дополнительно авторы настоящего изобретения получили жидкие композиции, содержащие пеметрексед, с использованием более чем шестидесяти стабилизаторов, включая аскорбиновую кислоту, тиосульфат натрия, бутилированный гидроксианизол, пропилгаллат, EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), L-метионин, ацетилцистеин и т.д. Однако все эти композиции не обладали подходящей стабильностью.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
Авторы настоящего изобретения, стремясь преодолеть проблему стабильности, присутствующую в жидких композициях, содержащих пеметрексед, открыли, что композиция пеметрекседа, которая способна эффективно снижать или исключать образование изомера пеметрекседа в качестве примеси и неизвестные примеси и сохранять высокую стабильность в состоянии прозрачного раствора без образования осадка во время периода хранения, может быть изготовлена посредством совместного использования ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуферивающего агента, что и составляет настоящее изобретение. Дополнительно авторы настоящего изобретения подтвердили то, что в случае крупномасштабного производства приведенной выше композиции стабильность данной композиции может обеспечиваться посредством контролирования пустого пространства в верхней части контейнера, т.е. содержания кислорода в свободном пространстве, посредством этого осуществляя настоящее изобретение.
Техническое решение
Задачей настоящего изобретения является предложение стабилизированной композиции пеметрекседа.
Полезные эффекты изобретения
Согласно настоящему изобретению может быть предложена композиция пеметрекседа с улучшенным удобством введения и стабильностью, которую можно легко изготавливать с коммерческой точки зрения, и которая может предотвращать сопутствующее микробное загрязнение во время лиофилизации или растворения. Дополнительно, поскольку композиция пеметрекседа по настоящему изобретению содержит ацетилцистеин в качестве антиоксиданта и цитрат натрия в качестве забуферивающего агента, может быть предоставлена стабилизированная композиция пеметрекседа, удовлетворяющая стандартным требованиям, без аномальных характеристик, таких как изменение цвета или образование осадка, по сравнению с традиционной жидкой композицией для инъекции, содержащей пеметрексед. Дополнительно настоящее изобретение может предотвращать окисление, которое может происходить в свободном пространстве, путем контролирования содержания кислорода в свободном пространстве, посредством этого обеспечивая более стабильную композицию пеметрекседа.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На ФИГ. 1 представлено изображение, иллюстрирующее сравнительные показатели стабильности между содержащими пеметрексед традиционными жидкими композициями для инъекции (Сравнительные примеры 1, 12 и 14) и содержащей пеметрексед жидкой композицией для инъекции согласно настоящему изобретению (Пример 11) после 4-недельного теста на стабильность в условиях стрессового воздействия (60°С/80%). Для целей сравнения также показаны свойства воды для инъекции.
ЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для решения приведенной выше задачи в настоящем изобретении предложена композиция пеметрекседа, содержащая пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, N-ацетил-L-цистеин и цитрат натрия.
В настоящем изобретении отношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-1_-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30: 0,15-2,0: 1,0-15,0.
Предпочтительно отношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30: 1,5: 1,0-15,0.
В настоящем изобретении композиция может представлять собой жидкую композицию, которую можно хранить в состоянии раствора.
В настоящем изобретении композиция может представлять собой жидкую композицию для инъекции в герметичном готовом к употреблению контейнере.
Однако объем настоящего изобретения не обязательно может ограничиваться жидкими композициями для инъекции, но может включать другие типы жидких композиций и нежидкие композиции, которые можно составлять на основе обычного знания обычного специалиста в данной области или способа, традиционно используемого в данной области.
Дополнительно согласно настоящему изобретению предложена композиция пеметрекседа в герметичном контейнере, содержащая пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, где данная композиция имеет содержание газообразного кислорода в свободном пространстве контейнера 3% об./об. или менее относительно общего объема свободного пространства.
Согласно настоящему изобретению композиция предпочтительно может дополнительно содержать N-ацетил-L-цистеин и цитрат натрия.
Согласно настоящему изобретению отношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30: 0,15-2,0:1,0-15,0.
Предпочтительно соотношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30:1,5:1,0-15,0.
В настоящем изобретении композиция может представлять собой жидкую композицию, которую можно хранить в состоянии раствора.
В настоящем изобретении композиция может представлять собой жидкую композицию для инъекции в герметичном готовом к употреблению контейнере.
В настоящем изобретении композиция может представлять собой композицию, в которой содержание газообразного кислорода было доведено до уровня 3% об/об. или менее путем замены газообразного кислорода в свободном пространстве контейнера инертным газом.
В настоящем изобретении инертный газ может представлять собой газообразный азот или газообразный аргон, но не ограничиваясь ими.
Настоящее изобретение подробно описано ниже.
Имеются разные виды антиоксидантов, которые обычно можно использовать для стабилизирования композиций, и примеры данных антиоксидантов могут включать сложноэфирные производные парагидроксибензойной кислоты, спирты, фенольные производные, тимеросал, уксусный ангидрид, карбоксилат натрия, лаурилсульфат, антиоксиданты, сульфидные соединения, сульфит, цистин, цистеин, цистеамин, аминокислоты и органические кислоты, такие как аскорбиновая кислота, ретинол, токоферол, бутилированный гидроксианизол и т.д.
Кроме того, в корейском патенте №10-0774366 раскрыты N-ацетиламинокислоты в качестве антиоксидантов для паклитаксела, а в публикации корейского патента №10-2007-0028331 раскрыты монотиоглицерин и этилендиаминтетрауксусная кислота в качестве антиоксидантов для композиции, содержащей диклофенак.
В настоящем изобретении проводили эксперименты по стабилизации композиций пеметрекседа для инъекции с использованием описанных выше антиоксидантов. В результате подтвердили, что обычные антиоксиданты, опсанные выше, имеют проблемы в связи с тем, что их суточные дозы являются ограниченными, особенно при их использовании в качестве эксципиентов (антиоксидантов) вместо активных ингредиентов для инъецируемых композиций, а также в связи с тем, что одни только антиоксиданты не могут повысить стабильность композиций. Кроме того, когда были использованы аскорбиновая кислота, молочная кислота и т.д., которые часто используют в традиционных инъекциях, жидкости для инъекции демонстрировали кислотную нестабильность, такую как частичное изменение цвета и/или образование осадка, и т.д. (Экспериментальные примеры 1 и 2).
Однако авторы настоящего изобретения неожиданно открыли, что когда композиция, содержащая пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве антивного ингредиента, дополнительно содержала одновременно ацетилцистеин и цитрат натрия, тогда активный ингредиент не подвергался какому-либо существенному изменению, и также не происходило изменения цвета или образования осадка в условиях тестирования при стрессовом воздействии (60°C/80%) в течение четырех недель, таким образом подтверждая, что композиция имела подходящую стабильность для того, чтобы удовлетворять необходимым критериям принятия (Экспериментальные примеры 1 и 2). Поскольку как ацетилцистеин, так и цитрат натрия широко используются и их цены являются низкими, они имеют коммерческие преимущества.
Композиция пеметрекседа по настоящему изобретению содержит пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента. Пеметрексед включает фармакологически эффективное лекарственное средство или лекарственное средство, которое является фармакологически эффективным при определении химическим или ферментативным методом in vivo, и, в частности, может использоваться само лекарственное средство пеметрексед и его фармацевтически приемлемая соль.
Термин «пеметрексед» в том виде, как он используется в данном описании, относится к соединению, имеющему название «5-замещенный пирроло[2,3-d]пиримидин», и, в частности, относится к антифолату, имеющему много мишеней, представленному формулой 1, демонстрирующему противораковый эффект при разных видах рака, включая немелкоклеточный рак легкого, злокачественную плевральную мезотелиому и т.д.
[формула 1]
Пеметрексед демонстрирует противораковые эффекты, ингибируя активности метаболитов, вовлеченных в метаболизм фолата, при разных видах рака, включая немелкоклеточный рак легкого, злокачественную плевральную мезотелиому и т.д.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» в том виде, как он используется в данном описании, относится к соли, изготовленной согласно традиционному в данной области способу, и данный способ известен обычному специалисту в данной области. В частности, фармацевтически приемлемая соль может включать соли, полученные из фармакологически или физиологически приемлемых неорганических кислот, органических кислот и оснований, перечисленных ниже, но не ограничиваясь ими. Примеры подходящих кислот могут включать соляную кислоту, бромную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, фосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и т.д. Примеры солей, полученных с подходящими основаниями, могут включать соли щелочных металлов, например натрия или калия, щелочноземельных металлов, например магния, но не ограничиваются ими.
5
9
3
Термин «ацетилцистеин» в том виде, как он используется в данном описании, относится к соединению, имеющему название «N-ацетил-L-цистеин» (NAC, CHNOS, номер CAS 616-91-1), и относится к соединению, используемому в качестве антиоксиданта в композиции пеметрекседа по настоящему изобретению. В настоящем изобретении термины «ацетилцистеин» и «N-ацетил-L-цистеин» используются взаимозаменяемо.
Ацетилцистеин в качестве антиоксиданта описан в Фармакопее США 35 (Национальный формуляр 10, стр. 2069). Ацетилцистеин представляет собой предшественник L-цистеина, одной из аминокислот, присутствующих в пищевых продуктах, где цистеин окисляется и легко денатурирует до нерастворимого вещества, тогда как ацетилцистеин является стабильным и почти не денатурирующим и, таким образом, подходит для перорального введения или внутривенной инъекции.
Термин «цитрат натрия» в том виде, как он используется в данном описании, относится к натриевой соли лимонной кислоты и относится к соединению, используемому в качестве забуферивающего агента в композиции пеметрекседа по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение отличается тем, что оно может предложить композицию пеметрекседа, обеспечивающую долговременное фармацевтически стабильное хранение пеметрекседа при температуре в интервале от 1°С до 30°С посредством одновременного использования ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуферивающего агента.
В композиции пеметрекседа по настоящему изобретению отношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина, и цитрата натрия предпочтительно составляет 1-30:0,15-2,0:1,0-15,0 и более предпочтительно отношение концентраций составляет 1-30:1,5:1,0-15,0. В частности, единицей концентрации может быть «мг/мл» соответственно. Было показано, что композиция пеметрекседа, имеющая отношение концентраций, отличное от приведенного выше интервала, увеличивает образование примесей за пределы критериев принятия, наряду со сроком хранения (Экспериментальный пример 1).
В настоящем изобретении композиция пеметрекседа может содержать фармацевтически приемлемый носитель и агент, корректирующий рН.
В настоящем изобретении композиция пеметрекседа может предпочтительно представлять собой жидкую композицию, которую можно хранить в состоянии раствора, и, более предпочтительно, может представлять собой жидкую композицию для инъекции в герметичном готовом к употреблению контейнере.
Согласно настоящему изобретению, когда композиция пеметрекседа представляет собой жидкую композицию для инъекции, фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой воду для инъекции.
В настоящем изобретении рН жидкой композиции пеметрекседа для инъекции предпочтительно может находиться в интервале от примерно 6,0 до примерно 8,0 и, более предпочтительно, от примерно 7,2 до примерно 7,8. рН растворов возможно может быть скорректировано с помощью кислоты, такой как соляная кислота, или основания, такого как гидроксид натрия.
Композиция пеметрекседа по настоящему изобретению необязательно может содержать другие добавки, помимо ацетилцистеина и цитрата натрия, как описано выше, но может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый эксципиент. Примеры фармацевтически приемлемого эксципиента могут включать известные добавки, такие как лактоза, декстроза, циклодекстрин и его производное, сахароза, глицерин, карбонат натрия и т.д. и, предпочтительно, хлорид натрия, маннит и т.д.
Дополнительно согласно настоящему изобретению предложен способ изготовления стабилизированной композиции пеметрекседа, включающий смешивание пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия.
В настоящем изобретении отношение концентраций смешивания пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30:0,15-2,0:1,0-15,0.
Предпочтительно отношение концентраций смешивания пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия может составлять 1-30:1,5:1,0-15,0.
При изготовлении композиции по настоящему изобретению для того, чтобы поддерживать условия с низким уровнем кислорода, данную композицию продувают, используя инертный газ, такой как азот или аргон, и затем фильтруют для стерилизации.
Дополнительно стабилизированная композиция пеметрекседа по настоящему изобретению может быть упакована в подходящий контейнер, известный в данной области, например стеклянные флаконы, стеклянные бутыли, картриджи, предварительно заполненные шприцы или тому подобное и, предпочтительно, стеклянные флаконы. Инъецируемую жидкую композицию пеметрекседа согласно настоящему изобретению дозируют в предварительно вымытый и простерилизованный контейнер и контейнер герметично закрывают тефлоновой пробкой, поверхность которой не взаимодействует с жидкой композицией.
В частности, пространство между жидкой композицией для инъекции и пробкой может быть заполнено инертным газом, когда это необходимо. Пробка может быть прикреплена к нему с использованием обжимного колпачка, а сосуды, заполненные жидкой композицией для инъекции, могут быть простерилизованы посредством нагревания, когда это необходимо.
Дополнительно настоящее изобретение относится к композиции пеметрекседа, содержащей пеметрексед или его фармацевтически премлемую соль в качестве активного ингредиента, и в нем предложена композиция пеметрекседа, в которой содержание кислорода в свободном пространстве контейнера контролировалось в интервале 3% об./об. или менее.
Термин «свободное пространство» в том виде, как он используется в данном описании, относится к верхнему пространству в герметичном контейнере, остающемуся после заполнения его композицией пеметрекседа. Объем свободного пространства может варьировать в зависимости от общего внутреннего объема контейнера, подлежащего использованию, и количества пеметрекседа, помещенного в него.
Термин «содержание газообразного кислорода в свободном пространстве» в том виде, как он используется в данном описании, относится к доле объема, приходящейся на объем пространства, занятого газообразным кислородом, относительно общего объема свободного пространства. Соответственно, %-ная единица, представляющая содержание кислорода, относится к объемному % (об./об.).
В настоящем изобретении содержание газообразного кислорода в свободном пространстве может составлять 3% об./об. или менее, т.е. в интервале от 0% об./об. до 3% об./об. и, конкретно, от 0,001% об./об. до 3% об./об. В типичном воплощении содержание газообразного кислорода в свободном пространстве может составлять 3% об./об.
Контейнер, подлежащий применению в настоящем изобретении, является таким же, как описано выше, и предпочтительно представляет собой стеклянный флакон.
В настоящем изобретении предпочтительно композиция может дополнительно содержать N-ацетил-L-цистеин и цитрат натрия. В частности, предпочтительное отношение концентраций пеметрекседа или его фармацевтически приемлемой соли, N-ацетил-L-цистеина и цитрата натрия является таким же, как раскрыто выше.
Предпочтительно композиция по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, которую можно хранить в состоянии раствора и, в частности, может представлять собой жидкую композицию для инъекции в герметичном готовом к употребелению контейнере.
В настоящем изобретении контроль содержания газообразного кислорода может осуществляться заменой кислорода в свободном пространстве контейнера инертным газом. Инертный газ может представлять собой азот или аргон, но не ограничивается ими.
В настоящем изобретении для того, чтобы минимизировать проблему образования примесей под действием кислорода в свободном пространстве контейнера во время изготовления композиции пеметрекседа, содержащей пеметрексед или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, в герметичном контейнере, особенно в ходе крупномасштабного производства композиции пеметрекседа, содержание газообразного кислорода в свободном пространстве контролировали до уровня 3% об./об. или менее и посредством этого значительно улучшали стабильность композиции пеметрекседа (Экспериментальный пример 1 и Таблица 10).
В настоящем изобретении, как описано выше, окисление, которое может происходить в свободном пространстве, может быть предотвращено с использованием способа контроля содержания газообразного кислорода в свободном пространстве и, более конкретно, с использованием метода замены кислорода в нем азотом. Согласно настоящему изобретению изготовление дешевой и стабилизированной композиции для инъекции, содержащей пеметрексед, может быть увеличено до коммерческого уровня с использованием широко используемой в настоящее время автоматизированной системы, обеспечивая, посредством этого, крупномасштабное производство данной композиции.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее настоящее изобретение будет более подробно описано со ссылкой на следующие Примеры. Однако данные Примеры служат лишь для иллюстративных целей, и подразумевается, что данное изобретение не ограничивается этими Примерами.
Примеры 1-14: получение растворов для инъекции, содержащих пеметрексед, содержащих в разных количествах ацетилцистеин в качестве антиоксиданта и цитрат натрия в качестве забуферивающего агента
После растворения 2,5 г D-маннита в 100 мл воды для инъекции в раствор последовательно добавляли ацетилцистеин и цитрат натрия в концентрациях, показанных в Таблице 1, приведенной ниже, и полностью растворяли. К полученному раствору медленно добавляли 2,5 г пеметрекседа (3,0 г пеметрекседа медленно добавляли в Примере 14), и смешанный раствор перемешивали, пока данный раствор не становился прозрачным. Затем его рН доводили до рН, показанного в Таблице 1, используя водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия. Раствор асептически фильтровали через стерильный 0,22 мкм фильтр (мембранный фильтр) в чистой комнате. Полученным таким образом раствором заполняли герметизируемый промытый и стерильный контейнер с последующей продувкой с использованием газообразного азота.
Композиции и рН полученных растворов для инъекции, содержащих пеметрексед, показаны в Таблице 1, приведенной ниже.
Примеры 15 и 16: получение растворов для инъекции по настоящему изобретению, содержащих пеметрексед, согласно изменению РН
После растворения 2,5 г D-маннита в 100 мл воды для инъекции в раствор последовательно добавляли ацетилцистеин и цитрат натрия в концентрациях, показанных в Таблице 2, приведенной ниже, и полностью растворяли. В образующийся раствор медленно добавляли 2,5 г пеметрекседа, и смешанный раствор перемешивали до тех пор, пока данный раствор не становился прозрачным. Затем его рН доводили до рН, показанного в Таблице 2, используя водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия. Раствор асептически фильтровали через стерильный 0,22 мкм фильтр (мембранный фильтр) в чистой комнате. Полученным таким образом раствором заполняли герметизируемый промытый и стерильный контейнер с последующей продувкой с использованием газообразного азота.
Композиции и рН полученных растворов для инъекции, содержащих пеметрексед, показаны в Таблице 2, приведенной ниже.
Примеры 17-20: получение раствора для инъекции, содержащего пеметрексед, согласно содержанию кислорода в свободном пространстве
После растворения 2,5 г D-маннита в 100 мл воды для инъекции в раствор последовательно добавляли ацетилцистеин и цитрат натрия в концентрациях, показанных в Таблице 3, приведенной ниже, и полностью растворяли. В образующийся раствор медленно добавляли 2,5 г пеметрекседа, и смешанный раствор перемешивали до тех пор, пока данный раствор не становился прозрачным. Затем его рН подводили до рН, показанного в Таблице 3, используя водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия.
Раствор асептически фильтровали через стерильный 0,22 мкм фильтр (мембранный фильтр) в чистой комнате. Полученным таким образом раствором заполняли герметизируемый промытый и стерильный контейнер с последующей продувкой с использованием азота, пока содержание газообразного кислорода в свободном пространстве не достигало содержания, указанного в Таблице 3.
Композиции и содержание газообразного кислорода в свободном пространстве полученных растворов, содержащих пеметрексед, показаны в Таблице 3, приведенной ниже.
Сравнительные примеры 1-8: получение раствора для инъекции, содержащего пеметрексед, согласно типу антиоксидантов
Растворы, содержащие пеметрексед, получали согласно композициям и содержаниям в Таблице 4, приведенной ниже, тем же самым способом, что и в Примере 1. В Сравнительном примере 1 раствор получали с использованием в качестве носителя только воды для инъекции без добавления какого-либо антиоксиданта.
Сравнительные примеры 9-14: получение раствора для инъекции, содержащего пеметрексед, согласно типу антиоксидантов и присутствию забуферивающих агентов
Растворы, содержащие пеметрексед, получали согласно композициям и содержаниям, показанным в Таблице 5, приведенной ниже, таким же способом, что и в Примере 1.
Сравнительные примеры 15-17: получение раствора для инъекции, содержащего пеметрексед, согласно типу забуферивающих агентов
Растворы, содержащие пеметрексед, получали согласно композициям и содержаниям, показанным в приведенной ниже Таблице 6, тем же самым способом, что и в Примере 1.
Экспериментальный пример: тест на стабильность
Тесты на стабильность проводили для композиций, полученных в Примерах 1-20 и Сравнительных примерах 1-17 при тестировании в стрессовых условиях (60°С/80%) в течение четырех недель. Из их числа для композиций, полученных в Примере 11 и Сравнительных примерах 1, 12 и 14, тесты на стабильность также проводили при условиях ускоренного старения (40°С/70%) в течение четырех месяцев. Оценку стабильности проводили посредством измерения содержания пеметрекседа, остающегося в водном растворе, и содержания примесей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в условиях, описанных в Таблице 7, приведенной ниже.
Экспериментальный пример 1: тест на стабильность при тестировании в стрессовых условиях (60°С/80%, 4-недельная оценка стабильности)
Результаты тестов на стабильность, проведенных в стрессовых условиях тестирования, как описано выше, показаны в Таблицах 8-13.
Дополнительно, что касается жидких композиций для инъекции, содержащих пеметрексед, полученных выше, то на ФИГ. 1 приведены изображения, показывающие сравнительные характеристики при тестировании на стабильность в стрессовых условиях (60°С/80%) между жидкой композицией для инъекции по настоящему изобретению, содержащей пеметрексед, полученной в Примере 11, и традиционными жидкими композициями для инъекции, содержащими пеметрексед, полученными в Сравнительных примерах 1, 12 и 14. В частности, для целей сравнения также показан внешний вид воды для инъекции.
Как можно видеть из результатов Таблицы 8, приведенной выше, при совместном использовании в композициях 1,5 мг/мл ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и от 1 мг/мл до 15 мг/мл цитрата натрия в качестве забуферивающего агента, на протяжении четырехнедельного периода тестирования на стабильность в стрессовых условиях тестирования индивидуальные примеси составляли 0,2% или менее, тогда как общие примеси составляли 1,0% или менее, таким образом, демонстрируя превосходную стабильность (Примеры 9-12).
Кроме того, когда концентрация ацетилцистеина находилась в интервале от 1,0 мг/мл до 1,5 мг/мл, а концентрация цитрата натрия составляла 2,0 мг/мл, индивидуальные примеси составляли 0,2% или менее, тогда как общие примеси составляли 1,0% или менее (Примеры 8 и 10), таким образом, демонстрируя превосходную стабильность. Однако, когда концентрация ацетилцистеина была ниже, чем 1,0-1,5 мг/мл, происходило изменение внешнего вида (изменение цвета), хотя содержание примесей и удовлетворяло критериям приемлемости (Примеры 1 и 2).
Кроме того, когда концентрация ацетилцистеина составляла 2,0 мг/мл, и концентрация цитрата натрия составляла 5 мг/мл, тогда уровень примесей удовлетворял критериям приемлемости, но происходило изменение внешнего вида (изменение цвета) (Пример 13).
Кроме того, когда концентрация ацетилцистеина составляла 0,5 мг/мл, и концентрация цитрата натрия находилась в интервале от 1,0 мг/мл до 1,5 мг/мл, тогда уровень примесей удовлетворял критериям приемлемости, но происходило изменение внешнего вида (изменение цвета) (Примеры 3-7).
Как можно видеть из результатов Таблицы 9, приведенной выше, при совместном использовании в композициях ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуферивающего агента, несмотря на изменения рН, индивидуальные примеси составляли 0,2% или менее, тогда как общие примеси составляли 1,0% или менее на протяжении четырехнедельного периода теста на стабильность в стрессовых условиях тестирования, что свидетельствует о превосходной стабильности.
При изготовлении приведенной выше композиции посредством крупномасштабного производства для коммерческого использования может увеличиваться вероятность контактирования композиции с кислородом, что является главной причиной образования примесей. Для предотвращения контакта с кислородом стабильность композиций могла бы обеспечиваться контролированием содержания газообразного кислорода, остающегося в производственной линии.
Как можно видеть из результатов Таблицы 10, приведенной выше, при совместном использовании в композициях ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуферивающего агента оказалось, что общее количество примесей в композициях снижалось путем контролирования содержания газообразного кислорода в свободном пространстве по сравнению с уровнем, используемым при традиционном производстве (Пример 11), таким образом демонстрируя превосходство в стабильности (Примеры 17 и 18). В частности, при контролировании содержания газообразного кислорода в свободном пространстве на уровне 3% об /об. или менее, содержание индивидуальных примесей составляло 0,2% или менее, тогда как общее содержание примесей составляло 1,0% или менее на протяжении четырехнедельного периода тестирования стабильности в стрессовых условиях проведения теста, что свидетельствует о превосходной стабильности (Пример 17).
Было установлено, что даже когда антиоксидант не был добавлен, стабильность композиции обеспечивалась в течение первых двух недель в стрессовых условиях тестирования при поддержании содержания газообразного кислорода в свободном пространстве на уровне 3% об /об. или менее (Пример 19) по сравнению с ситуацией, когда содержание газообразного кислорода в свободном пространстве не контролировалось (Сравнительный пример 1). Посредством приведенных выше результатов было подтверждено, что регулирование содержания газообразного кислорода в свободном пространстве может способствовать повышению стабильности композиции. Однако при дополнительном добавлении в композицию антиоксиданта и забуферивающего агента (Примеры 17 и 18) обеспечивалась более высокая стабильность.
Как можно видеть из результатов приведенной выше Таблицы 11, при использовании в композициях традиционно применяемого антиоксиданта имели место изменения внешнего вида композиции, такие как образование осадка или изменение цвета, или увеличение индивидуальных примесей до по меньшей мере 0,2% и общих примесей до по меньшей мере 1,0% в ходе теста на стабильность в стрессовых условиях. Соответственно, было установлено, что при приготовлении содержащих пеметрексед жидких композиций для инъекции с использованием антиоксиданта для традиционного применения, данные композиции демонстрировали неподходящие стабильности в отношении содержания примесей, изменения их внешнего вида и т.д.
Как можно видеть из результатов Таблицы 12, приведенной выше, при совместном использовании в композициях ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуферивающего агента, и предпочтительно когда концентрация ацетилцистеина составяла 1,5 мг/мл, а концентрация цитрата натрия составляла 5,0 мг/мл, данные композиции демонстрировали на протяжении четырехнедельного теста на стабильность в стрессовых условиях тестирования уровень индивидуальных примесей 0,2% или менее и общий уровень примесей 1,0% или менее, таким образом, демонстрируя превосходную стабильность (Пример 11).
В отличие от этого, при использовании только цитрата натрия в качестве забуферивающего агента цвет растворов начинал становиться темно-желтым со второй недели тестирования в стрессовых условиях (Сравнительные примеры 9 и 10). Кроме того, при использовании только L-цистеина и ацетилцистеина, антиоксиданта, цвет растворов начинал становиться бледно-желтым со второй недели тестирования в стрессовых условиях, и их рН значительно снижался на протяжении четырех недель тестирования в стрессовых условиях (Сравнительные примеры 11 и 12-14). То есть было установлено, что при одновременном использовании ацетилцистеина и цитрата натрия стабильность примесей значительно повышалась по сравнению с использованием ацетилцистеина и цитрата натрия по отдельности.
Кроме того, композиции Сравнительных примеров 13 и 14, которые готовили с использованием только L-цистеина, давали ненормальный запах, такой как дурной запах тухлых яиц, со второй недели тестирования в стрессовых условиях. Однако такой ненормальный запах не имел места в случае композиций, приготовленных согласно настоящему изобретению, таким образом демонстрируя преимущество настоящего изобретения.
Как можно видеть из результатов Таблицы 13, приведенной выше, при использовании ацетилцистеина в качестве антиоксиданта вместе с разными видами забуферивающих агентов для обычного применения в композициях для проверки полученных в результате стабильностей наблюдали изменения внешнего вида (изменение цвета) с начальной стадии или увеличение индивидуальных примесей до по меньшей мере 0,2% и общих примесей до по меньшей мере 1,0% для композиций, содержащих забуферивающие агенты, отличные от цитрата натрия.
Соответственно, подтвердили, что при получении жидких композиций для инъекции, содержащих пеметрексед, самая превосходная стабильность композиций могла бы достигаться только при совместном использовании ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве буферизующего агента.
Экспериментальный пример 2: тест на стабильность в условиях ускоренного старения (40°С/70%, 4 месяца оценки стабильности)
Результаты проведенных тестов на стабильность в условиях ускоренного старения показаны в Таблице 14.
Как можно видеть из результатов Таблицы 14, приведенной выше, композиции Сравнительного примера 1, которые готовили с использованием в качестве носителя только воды для инъекции без какого-либо антиоксиданта начинали становиться желтыми со второго месяца в условиях ускоренного старения и демонстрировали содержание индивидуальных примесей 0,2% или более и общее содержание примесей 1,0% или более к четвертому месяцу в условиях ускоренного старения и, таким образом, не были подходящими в отношении показателей стабильности. Однако композиции, приготовленные в Примере 11, которые готовили с использованием ацетилцистеина в качестве антиоксиданта и цитрата натрия в качестве забуфериваующего агента, демонстрировали содержание индивидуальных примесей 0,2% или менее и общее содержание примесей 1,0% или менее, таким образом демонстрируя превосходную стабильность на протяжении шестимесячного периода тестирования на стабильность в условиях ускоренного старения.
Напротив, композиции, приготовленные с использованием только ацетилцистеина в качестве антиоксиданта (Сравнительный пример 12), также начинали желтеть или демонстрировали содержание индивидуальных примесей 0,2% или более с четвертого месяца хранения в условиях ускоренного старения и, таким образом, не были подходящими в отношении показателей стабильности.
Кроме того, композиции, содержащие только L-цистеин, приготовленные в Сравнительном примере 14, удовлетворяли критериям приемлемости в том, что касается примесей, но давали ненормальный запах, сходный с запахом протухших яиц, с четвертого месяца в условиях ускоренного старения. Однако композиции, приготовленные согласно настоящему изобретению, т.е. композиции, полученные в Примере 11, не давали такого ненормального запаха.