СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ПУТЕМ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КАЧЕСТВЕ МИШЕНИ ГЕНА УТРОФИНА

1. Полинуклеотид, содержащий следующие нуклеотидные последовательности:
(а) нуклеотидную последовательность, кодирующую гибридный белок, состоящий из дефицитного по нуклеазной активности эффекторного белка CRISPR и активатора транскрипции,
(b) нуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК, мишенью которой является непрерывный участок длиной от 18 до 24 нуклеотидов в последовательности, описанной в SEQ ID NO: 104, 105, 135, 141, 153, 167 или 172, входящей в состав участка человеческого гена утрофина, регулирующего экспрессию.
2. Полинуклеотид по п. 1, где нуклеотидная последовательность, кодирующая направляющую РНК, включает нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 45, 46, 58, 59, 60, 135, 141, 153, 155, 156, 157, 159, 167 или 172, или нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 45, 46, 58, 59, 60, 135, 141, 153, 155, 156, 157, 159, 167 или 172, которая содержит удаление, замену, вставку и/или добавление 1-3 оснований.
3. Полинуклеотид по п. 1 или 2, содержащий по меньшей мере две разные нуклеотидные последовательности, кодирующие направляющую РНК.
4. Полинуклеотид по любому из пп. 1-3, где активатор транскрипции представляет собой пептид, содержащий VP64 и домен активации транскрипции RTA.
5. Полинуклеотид по п. 4, где активатор транскрипции содержит аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 117, или аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, описанной в SEQ ID NO: 117.
6. Полинуклеотид по любому из пп. 1-5, где эффекторный белок CRISPR, дефицитный по нуклеазной активности, представляет собой dCas9.
7. Полинуклеотид по п. 6, где dCas9 получают из Staphylococcus aureus.
8. Полинуклеотид по любому из пп. 1-7, дополнительно содержащий промоторную последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей направляющую РНК, и/или промоторную последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей гибридный белок, содержащий эффекторный белок CRISPR, дефицитный по нуклеазе, и активатор транскрипции.
9. Полинуклеотид по п. 8, где промоторная последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей направляющую РНК, выбрана из группы, включающей в себя промотор U6, промотор SNR6, промотор SNR52, промотор SCR1, промотор RPR1, промотор U3 и промотор H1.
10. Полинуклеотид по п. 8 или 9, где промоторная последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей гибридный белок, содержащий эффекторный белок CRISPR, дефицитный по нуклеазной активности, и активатор транскрипции, выбрана из группы, включающей в себя промотор EFS, промотор EF-1a, промотор CMV, промотор CK8, промотор MHC, промотор Des, промотор CAG и промотор MYOD.
11. Полинуклеотид по любому из пп. 8-10, где
нуклеотидная последовательность, кодирующая направляющую РНК, включает нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 45, 46 или 59, или нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 45, 46 или 59, которая содержит удаление, замену, вставку и/или добавление 1-3 оснований,
активатор транскрипции содержит аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 117, или аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, описанной в SEQ ID NO: 117,
дефицитный по нуклеазной активности эффекторный белок CRISPR представляет собой dCas9, полученный из Staphylococcus aureus,
промоторная последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей направляющую РНК, представляет собой промотор U6, и
промоторная последовательность нуклеотидной последовательности, кодирующей гибридный белок, содержащий эффекторный белок CRISPR, дефицитный по нуклеазе, и активатор транскрипции, представляет собой промотор CK8.
12. Полинуклеотид по п. 11, где
нуклеотидная последовательность, кодирующая направляющую РНК, включает нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 59, или нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 59, которая содержит удаление, замену, вставку и/или добавление 1-3 оснований.
13. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 1-12.
14. Вектор по п. 13, где вектор представляет собой плазмидный вектор или вирусный вектор.
15. Вектор по п. 14, где вирусный вектор выбран из группы, состоящей из вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV), аденовирусного вектора и лентивирусного вектора.
16. Вектор по п. 15, где вектор AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV587MTP, AAV588MTP, AAV-B1, AAVM41, AAVrh74, AAVS1_P1 и AAVS10_P1.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-12, или вектор по любому из пп. 13-16.
18. Фармацевтическая композиция по п. 18 для лечения или профилактики мышечной дистрофии Дюшенна или мышечной дистрофии Беккера.
19. Способ лечения или профилактики мышечной дистрофии Дюшенна или мышечной дистрофии Беккера, включающий в себя введение полинуклеотида по любому из пп. 1-12, или вектора по любому из пп. 13-16, индивидууму, нуждающемуся в этом.
20. Применение полинуклеотида по любому из пп. 1-12, или вектора по любому из пп. 13-16, для лечения или профилактики мышечной дистрофии Дюшенна или мышечной дистрофии Беккера.
21. Применение полинуклеотида по любому из пп. 1-12, или вектора по любому из пп. 13-16, в способе промышленного получения фармацевтической композиции для лечения или профилактики мышечной дистрофии Дюшенна или мышечной дистрофии Беккера.
22. Рибонуклеопротеин, содержащий
(c) гибридный белок, состоящий из эффекторного белка CRISPR, дефицитного по нуклеазной активности, и активатора транскрипции,
(d) направляющую РНК, мишенью которой является непрерывный участок длиной от 18 до 24 нуклеотидов в последовательности, описанной в SEQ ID NO: 104, 105, 135, 141, 153, 167 или 172, входящей в состав участка человеческого гена утрофина, регулирующего экспрессию.
23. Рибонуклеопротеин по п. 22, где направляющая РНК содержит нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206 или 207, или нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206 или 207, в которой 1-3 нуклеотида удалены, заменены, вставлены и/или добавлены.
24. Композиция или набор для активации экспрессии человеческого гена утрофина, содержащие
(e) гибридный белок, состоящий из эффекторного белка CRISPR, дефицитного по нуклеазной активности, и активатора транскрипции, или полинуклеотид, кодирующий указанный гибридный белок, и
(f) направляющую РНК, мишенью которой является непрерывный участок длиной от 18 до 24 нуклеотидов в последовательности, описанной в SEQ ID NO: 104, 105, 135, 141, 153, 167 или 172, входящей в состав участка человеческого гена утрофина, регулирующего экспрессию, или полинуклеотид, кодирующий указанную направляющую РНК.
25. Композиция или набор по п. 24, где направляющая РНК содержит нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206 или 207, или нуклеотидную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206 или 207, в которой 1-3 нуклеотида удалены, заменены, вставлены и/или добавлены.