СПОСОБ ОЦЕНКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ДЛЯ СУСТАВНЫХ ХРЯЩЕЙ
METHOD FOR EVALUATING MEDICINES FOR ARTICULAR CARTILAGE

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[001] Настоящее изобретение относится к способам оценки лекарственных средств для суставных хрящей у здоровых и больных индивидуумов.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[002] По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения относительно распространенности по всему миру двух наиболее часто встречающихся заболеваний суставных хрящей у людей заболеваемость остеоартритом (ОА) у взрослых людей старше 60 лет составляет 9,6% у мужчин и 18,0% у женщин (приблизительно 84 миллиона человек в сумме), и заболеваемость ревматоидным артритом (РА) у взрослых людей 25 лет и старше составляет 1% (приблизительно 42 миллиона человек). Ожидается, что эти показатели заболеваемости будут увеличиваться почти в геометрической прогрессии по мере старения населения в мире.
[003] Как ОА, так и РА имеют в основе одинаковую патологию заболевания, при которой суставы воспаляются, что приводит к разрушению хряща, которое обычно ослабляет сустав. Воспаление и последующая утрата хряща приводят к скованности и боли в суставе, и в этот момент люди начинают поиск медикаментозных мероприятий для лечения этих симптомов. На данном этапе воспаление суставных хрящей, вероятно, существовало у пациентов в течение многих лет, при этом разрушение хряща происходило бессимптомно в течение всего времени. Это приводит к состоянию, которое труднее поддается лечению. Отсутствие лекарственных средств, которые могут остановить развитие артрита (например, болезнь-модифицирующие средства) в сочетании с тем фактом, что его диагностируют на более тяжелой стадии, приводит к тому, что ОА и РА являются значительной трудностью для всемирных систем здравоохранения. Поскольку данные изнурительные заболевания приобретает такое большое количество людей, в настоящее время существует очевидная потребность в лекарственных средствах для суставных хрящей, и в будущем данная потребность будет значительно больше.
[004] В настоящее время не существует одобренных лекарственных средств, модифицирующих течение остеоартрита, (DMOAD) и одобрено только небольшое количество лекарственных средств, модифицирующих течение ревматоидного артрита (DMARD), таких как антитела, причем последние имеют тяжелые побочные эффекты, некоторые из которых даже могут приводить к смерти. Возможность оценки новых лекарственных средств для суставных хрящей имеет первостепенное значение для одобрения новых молекулярных структур или для новых показаний к применению существующих лекарственных средств.
[005] Проведена оценка различных индикаторов состояния заболевания (биомаркеров) для улучшения понимания развития и/или прогнозирования артрита и для улучшения осуществления разработки терапевтических мероприятий. Исследователи проанализировали особенности иммунных клеток в суставах, серологические параметры (например, холестерин и триглицериды) и маркеры окислительного стресса (например, малондиальдегид и С-реактивный белок (CRP), уровни цитокинов в синовиальной жидкости (например, TNF-α, IL-1β, IL-6 и т. д.), а также хрящевые компоненты в синовиальной жидкости (например, хондроитинсульфат, гликозаминогликаны, гиалуроновую кислоту и т. д.). Многие из этих биомаркеров имеют ряд недостатков: от недосточной специфичности (например, холестерин) до сложности в получении образцов (например, синовиальная жидкость). Из-за наличия большого количества биомаркеров, которые можно выбрать для оценки артрита, Сеть Биомаркеров Остеоартрита (Osteoarthritis Biomarkers Network), финансируемая Национальными Институтами Здравоохранения/Национальным Институтом Артрита, Костно-мышечной Системы и Кожных Заболеваний (NIH/NIAMS) предложила схему классификации биомаркеров, чтобы обеспечить общий формат проведения исследований в данной области. Эта схема называется BIPED, что является аббревиатурой от Burden of disease, Investigative, Prognostic, Efficacy of intervention, and Diagnostic (Уровень заболеваемости, Исследование, Прогнозирование, Эффективность вмешательства и Диагностика). Эти характеристики помогают ранжировать биомаркеры по их клиническому применению в диагностике и лечении артрита. Исходя из этих критериев, индикаторы хрящевого метаболизма (то есть синтеза и деградации) переместились в верхнюю часть списка биомаркеров-кандидатов, которые могут быть наиболее полезными.
[006] Хрящ в основном состоит из внеклеточного матрикса (ВКМ), смешанной сети белков, таких как коллаген типа II, взаимодействующих с отрицательно заряженными полисахаридами, такими как гиалуроновая кислота и хондроитинсульфат, все из которых синтезируются и секретируются клетками хряща, известными как хондроциты. В течение нормального хрящевого обмена (метаболизма) в здоровых суставах продуцирование ВКМ уравновешивает распад ВКМ, тем самым обеспечивая непрерывное обновление этой важнейшей смягчающей суставной ткани. Однако при патологических условиях (при заболевании) синтез ВКМ не может происходить одновременно с деградацией, и результатом является утрата структурной целостности суставного хряща. Продукты такого дисбаланса деградации можно обнаружить как в крови, так и в моче пациентов, страдающих артритом.
[007] Ряд этих биомаркеров хрящевого обмена (например, деградации и синтеза) были исследованы для их диагностических и прогностических свойств. Двумя из наиболее широко изученных биомаркеров деградации хряща являются c-концевой поперечно сшитый телопептид коллагена типа II (CTX-II) и олигомерный матриксный белок хряща (COMP). Два из наиболее широко изученных биомаркеров синтеза хряща представляют собой N-концевой пропептид проколлагена типа IIA (PIIANP) и карбоксипептид проколлагена типа II (CPII). Из всех биомаркеров хрящевого обмена CTX-II в моче продемонстрировал наиболее высокий диагностический и прогностический потенциал согласно системе BIPED.
[008] CTX-II связан как с заболеваемостью, так и с прогрессированием остеоартрита (ОА) в нескольких клинических исследованиях и прогнозирует развитие ОА как согласно рентгенографии, включая два лонгитюдных исследования длительностью более 5 лет, так и согласно магнитно-резонансной томографии. Известно, что уровни CTX-II в моче значительно повышены в подгруппе населения с заболеванием суставных хрящей (например, ОА и РА), но также известно, что уровни также повышены у многих здоровых подгрупп населения.
2
2
[009] Например, уровни CTX-II в моче у детей в период роста примерно в 50 раз выше, чем у взрослых. Было показано, что уровни CTX-II в моче повышаются вследствие интенсивных упражнений с высокой ударной нагрузкой у здоровых выносливых спортсменов в возрасте, соответствующем посещению колледжа, таких как участники кроссового бега, примерно на 85% по сравнению с контрольными по возрасту и массе, но не были значительно увеличены у выносливых спортсменов с низкой ударной нагрузкой, таких как пловцы и гребцы. Было также показано, что CTX-II в моче у женщин в постменопаузе примерно в 2 раза выше по сравнению с женщинами до менопаузы того же возраста, и умеренно повышен (примерно на 25%) у людей с избыточной массой тела (ИМТ более либо равен 25 кг/м) по сравнению с контрольными с нормальной массой тела (ИМТ менее 25 кг/м).
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0010] В настоящем изобретении предложен способ определения эффективности композиций, применяемых для лечения заболеваний суставных хрящей у млекопитающих. Способ включает в себя определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща у млекопитающего до физического упражнения и после физического упражнения, затем введение млекопитающему композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей, и определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща у млекопитающих до физического упражнения и после физического упражнения.
[0011] Согласно настоящему изобретению снижение изменения уровней биомаркеров деградации хряща после физического упражнения (но до введения композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей) по сравнению с уровнями упомянутых биомаркеров после физического упражнения (но после введения композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей) указывает, что композиция является эффективной для лечения заболеваний суставных хрящей у упомянутых млекопитающих.
[0012] В другом варианте осуществления изобретения предложен способ определения эффективности композиций, применяемых для лечения заболеваний суставных хрящей у млекопитающих. Способ включает в себя введение композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей всем, кроме одной группы из двух или более групп млекопитающих, и последующее определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща в группах млекопитающих до физического упражнения и после физического упражнения. В данном варианте осуществления изобретения снижение изменения уровней биомаркеров деградации хряща после физического упражнения в группе или группах, которым вводили соединение, по сравнению с уровнями упомянутых биомаркеров после физического упражнения в группе, которой не вводили композицию, (без лечения) указывает, что композиция является эффективной для лечения заболеваний суставных хрящей у упомянутых млекопитающих.
2
[0013] В одном варианте осуществления изобретения один или более биомаркеров деградации хряща выбраны из группы, состоящей из c-концевого поперечно сшитого телопептида коллагена типа I (CTX-I), c-концевого поперечно сшитого телопептида коллагена типа II (CTX-II), N-концевого поперечно сшитого телопептида коллагена типа I (NTX-I), олигомерного матриксного белка хряща (COMP), гликозаминогликанов, неоэпитопа коллагена типа II (TIINE), продукта расщепления коллагена типа II (C2C), специфического неоэпитопа коллагена типа II (C2M), 9-аминокислотного пептида коллагена типа II и его нитрованной формы (Coll 2-1 и Coll 2-1-NO), фибулин-3-пептидов (Fib3-1 и Fib3-2), фоллистатин-подобного белка 1 (FSTL-1), хрящевого гликопротеина 39 (YKL-40), неоэпитопов расщепления коллагена типа I и типа II (C1 И C2), пиридинолина (PYR), глюкозил-галактозилпиридинолина (Glc-Gal-PYR) и спирального пептида коллагена типа II (HELIX-II).
[0014] В другом аспекте один или более биомаркеров синтеза хряща выбраны из группы, состоящей из N-концевого пропептида проколлагена типа IIA (PIIANP), карбоксипептида проколлагена типа II (CPII) или C-концевого пропептида проколлагена типа II (PIICP) и эпитопа 846 хондроитинсульфата из аггрекана (CS846).
[0015] Согласно настоящему изобретению, биомаркеры деградации и синтеза хряща получены из синовиальной жидкости, цельной крови, сыворотки или мочи упомянутого млекопитающего, а сустав выбран, например, из позвоночника, плеч, локтей, запястий, пальцев, бедер, коленей, лодыжек и пальцев ног.
[0016] В одном варианте осуществления изобретения физическое упражнение обеспечивает низкую ударную нагрузку на сустав и имеет умеренную интенсивность. Физическое упражнение с низкой ударной нагрузкой выбрано, например, из ходьбы, катания на роликовых коньках, плавания, езды на велосипеде, йоги, гребли, водной аэробики, подъема по лестнице и подъема веса.
[0017] В предпочтительном варианте осуществления изобретения физическое упражнение выполняют в течение короткого периода в день в течение нескольких недель. В соответствии с настоящим изобретением млекопитающее страдает заболеванием суставных хрящей. В одном аспекте заболевание суставных хрящей выбрано из группы, состоящей из остеоартрита, ревматоидного артрита, псориатического артрита, ювенильного артрита, анкилозирующего спондилита, подагры, подагрического артрита, тендинита, синовита, синдрома Шегрена, септического артрита или системной красной волчанки.
[0018] В другом варианте осуществления изобретения млекопитающее находится в состоянии, предшествующем заболеванию, или с отсутствием симптомов, но имеет основные неблагоприятные структурные изменения суставных хрящей. В предпочтительном варианте осуществления изобретения млекопитающее в состоянии, предшествующем заболеванию, или с полным отсутствием симптомов, которое имеет основные неблагоприятные структурные изменения суставных хрящей, представляет собой женщину, страдающую ожирением, или женщину в постменопаузе или обеих.
[0019] В дополнительном варианте осуществления изобретения млекопитающее является здоровым и не испытывает каких-либо симптомов заболевания суставных хрящей и не имеет каких-либо основных неблагоприятных структурных изменений суставных хрящей. В предпочтительном варианте осуществления изобретения млекопитающее, которое является здоровым и не испытывает каких-либо симптомов заболевания суставных хрящей и не имеет каких-либо основных неблагоприятных структурных изменений суставных хрящей, представляет собой женщину, страдающую ожирением, или женщину в постменопаузе или обеих.
[0020] В одном аспекте композиция представляет собой хондропротекторный агент и выбрана, например, из глюкозамина; гликозаминогликанов; метилсульфонилметана (МСМ); S-аденозилметионина (SAMe); мембраны яичной скорлупы или гидролизатов мембраны яичной скорлупы; омега-3 или омега-6 полиненасыщенных жирных кислот; Boswellia species или экстракта Boswellia; куркумы или экстракта куркумы; куркумина или куркуминоидов; коры белой ивы или экстракта коры белой ивы; протеолитических ферментов; коллагена или коллагеновых гидролизатов; экстракта сосновой коры; цетилированных жирных кислот; растительных экстрактов; витамина или предшественника витамина; минерала или их комбинаций.
[0021] В другом аспекте композиция воздействует или предназначена для воздействия на симптоматику, связанную с суставами. В одном варианте осуществления изобретения симптоматика, связанная с суставами, представляет собой, например, боль; жжение; чувствительность; дискомфорт; скованность; отек; локализованную лихорадку или жар; отсутствие гибкости; ограничение или снижение диапазона движения; крепитацию; частичную утрату функциональности; утрату способности к нагрузке или слабость; или их комбинации.
[0022] В последнем варианте осуществления изобретения симптоматику, связанную с суставами, оценивают во время или сразу после физического упражнения или в течение некоторого периода времени после физического упражнения или их комбинации.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1: Клиренс CTX-II в моче в течение 24 часов после физического упражнения умеренной интенсивности.
Фигура 2: Уровни боли и скованности в течение времени немедленно после или через 12 часов после физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой при приеме или терапевтической композиции для суставных хрящей или плацебо.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0023] Настоящее изобретение относится к способу быстрой и систематической оценки терапевтических композиций для суставных хрящей у больных или здоровых индивидуумов. В настоящем изобретении предложен способ определения эффективности композиций, применяемых для лечения заболеваний суставных хрящей у млекопитающих. Под “эффективностью” подразумевают, что композиции являются эффективными для снижения уровней биомаркеров деградации хряща у млекопитающего.
[0024] Способ включает в себя определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща у млекопитающего до физического упражнения и после физического упражнения, затем введение млекопитающему композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей, и определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща у млекопитающего до физического упражнения и после физического упражнения.
[0025] Согласно настоящему изобретению снижение изменения уровней биомаркеров деградации хряща после физического упражнения (но до введения композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей) по сравнению с уровнями упомянутых биомаркеров после физического упражнения (но после введения композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей) указывает, что композиция является эффективной для лечения заболеваний суставных хрящей у упомянутых млекопитающих.
[0026] В настоящем изобретении также предложен альтернативный способ, который включает в себя введение композиции, применяемой для лечения заболеваний суставных хрящей, всем, кроме одной группы из двух или более групп млекопитающих, и последующего определение изменения уровней одного или более биомаркеров деградации хряща в группах млекопитающих до физического упражнения и после физического упражнения. В данном варианте осуществления изобретения снижение изменения уровней биомаркеров деградации хряща после физического упражнения в группе или группах, которым вводили соединение, по сравнению с уровнями упомянутых биомаркеров после физического упражнения в группе, которой не вводили композицию (без лечения) указывает, что композиция является эффективной для лечения заболеваний суставных хрящей у упомянутых млекопитающих.
[0027] При определении изменения уровней биомаркеров больший процент снижения биомаркера коррелирует с большей эффективностью вводимого соединения. Однако любое снижение уровня биомаркера означает эффективность соединения.
[0028] Использование терминологии «композиция, применяемая для лечения заболеваний суставных хрящей» или ее множественное число в целях настоящего изобретения предназначено для обозначения любой композиции или агента, вводимого субъекту, который обеспечивает терапевтический эффект в любом суставе упомянутого субъекта. Примеры таких композиций включают в себя, но не ограничиваются ими, хондропротекторные агенты, например, глюкозамин; гликозаминогликаны; метилсульфонилметан (МСМ); S-аденозилметионин (SAMe); мембрану яичной скорлупы или гидролизаты мембраны яичной скорлупы; омега-3 или омега-6 полиненасыщенные жирные кислоты; Boswellia species или экстракт Boswellia; куркуму или экстракт куркумы; куркумин или куркуминоиды; кору белой ивы или экстракт коры белой ивы; протеолитические ферменты; коллаген или коллагеновые гидролизаты; экстракт сосновой коры; цетилированные жирные кислоты; растительные экстракты; витамин или предшественник витамина; минерал или их комбинации.
[0029] В дополнение к вышеупомянутым композициям в настоящем изобретении предложена любая фармацевтическая композиция, которая, как известно, является эффективной для лечения заболеваний суставных хрящей. Например, композиции включают в себя ацетаминофен, диклофенак, ибупрофен, целекоксиб, пропоксифен или любые другие анальгетики, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) или наркотические средства или их комбинации.
[0030] Согласно настоящему изобретению заболевания суставных хрящей включают в себя, например, остеоартрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит, ювенильный артрит, анкилозирующий спондилит, подагру, подагрический артрит, тендинит, синовит, синдром Шегрена, септический артрит или системную красную волчанку.
[0031] Терапевтические композиции вводят субъекту местно, перорально или посредством инъекции.
[0032] Термин «млекопитающие» включает в себя любого млекопитающего. Предпочтительно млекопитающее является человеком. Млекопитающее также может представлять собой домашнее животное или сельскохозяйственное животное. Примеры домашних животных включают, например, собак, кошек и кроликов. Примеры сельскохозяйственных животных включают, например, лошадей, коров и свиней.
2
[0033] «Биомаркеры деградации хряща» включают в себя многие различные типы фрагментов, которые образуются при возникновении деградации хряща в течение биологических процессов. Такие продукты фрагментации могут быть обнаружены в синовиальной жидкости, цельной крови, сыворотке или моче субъектов, страдающих деградацией хряща. Такие примеры включают, например, c-концевой поперечно сшитый телопептид коллагена типа I (CTX-I), c-концевой поперечно сшитый телопептид коллагена типа II (CTX-II), N-концевой поперечно сшитый телопептид коллагена типа I (NTX-I), олигомерный матриксный белок хряща (COMP), гликозаминогликаны (например, кератансульфат, дерматансульфат, хондроитинсульфат, гиалуроновую кислоту и. т. д.), неоэпитоп коллагена типа II (TIINE), продукт расщепления коллагена типа II (C2C), специфический неоэпитоп коллагена типа II (C2M), 9-аминокислотный пептид коллагена типа II и его нитрованную форму (Coll 2-1 и Coll 2-1-NO), фибулин-3-пептиды (Fib3-1 и Fib3-2), фоллистатин-подобный белок 1 (FSTL-1), хрящевой гликопротеин 39 (YKL-40), неоэпитоп расщепления коллагена типа I и типа II (C1 И C2), пиридинолин (PYR), глюкозил-галактозилпиридинолин (Glc-Gal-PYR) и спиральный пептид коллагена типа II (HELIX-II).
[0034] Биомаркер также может представлять собой биомаркер синтеза хряща, такой как PIIANP или CPII. Существует ряд фрагментов проколлагена и другого белка, как известно, необходимых для синтеза и/или восстановления хряща. Эти фрагменты синтеза можно обнаружить в синовиальной жидкости, сыворотке или моче субъектов, у которых происходит синтез или восстановление хряща. Такие примеры представляют собой: N-концевой пропептид проколлагена типа IIA (PIIANP), карбоксипептид проколлагена типа II (CPII) или C-концевой пропептид проколлагена типа II (PIICP) и эпитоп 846 хондроитинсульфата из аггрекана (CS846).
[0035] В еще одном аспекте настоящего изобретения можно применять соотношение биомаркера деградации хряща к биомаркеру синтеза хряща. Хрящевой обмен или метаболизм хряща представляет собой баланс деградации хряща и синтеза или восстановления хряща в организме. Соотношение этих двух типов биомаркеров иногда может быть лучшим показателем общего состояния здоровья хряща сустава, чем оба типа биомаркера отдельно. Примеры соотношений хрящевого обмена представляют собой: CTX-II/CPII, COMP/PIIANP, CTX-II/PIIANP и COMP/CPII.
[0036] Применение термина «биомаркер» или его множественного числа предназначено для обозначения характеристики или характеристик, которые объективно определяют и оценивают в качестве индикаторов нормальных биологических процессов, патогенных (при заболевании) процессов или фармакологического ответа на терапевтические вмешательства.
[0037] Физическое упражнение: Согласно настоящему изобретению субъекты выполняют физическое упражнение умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой, такое как подъем по лестнице или подъем веса, в течение короткого периода в день через день в течение нескольких недель подряд. В конце каждой недели субъекты предоставляют образцы мочи и крови, из которых могут быть получены уровни биомаркера, которые можно сравнить исходными (перед физическим упражнением) значениями. Традиционные клинические испытания лекарственных средств для суставных хрящей имеют длительность 3-6 месяцев для «краткосрочных» исследований и 1-5 лет для «долгосрочных» исследований.
[0038] Это происходит вследствие установленного длительного периода времени, необходимого для наблюдения биологических изменений, связанных с заболеванием суставных хрящей. Они включают в себя изменения симптомов (например, боль, скованность, утрату функциональности и т. д.), а также изменения объективных показателей прогрессирования заболевания (т. е., биомаркеров, ширины суставной щели и т. д.). Неожиданное кратковременное увеличение уровней биомаркеров хряща вследствие физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой позволяет объективно оценивать хондропротекторные (для защиты хряща) лекарственные средства для суставных хрящей за период всего от 24 часов до 2-4 недель. Таким образом, настоящее изобретение приводит к сокращению продолжительности исследования по сравнению с предшествующим уровнем техники в 6 раз или более (то есть 2 недели против 12 недель). Специалист в данной области техники может предусматривать применение альтернативной продолжительности исследований (например, 4 недели, 6 недель, 8 недель и т. д.) или применение плана исследования согласно настоящему изобретению в альтернативных форматах. Например, субъекты выполняют физические упражнения каждый день вместо выполнения через день, или субъекты выполняют физические упражнения через день в течение 2 недель с последующим периодом отсутствия активности (например, 2 месяца, 6 месяцев, 12 месяцев и т. д.), а затем следует другой период выполнения физических упражнений через день в течение 2 недель, чтобы сравнить ответ суставных хрящей субъектов на комплекс физических упражнений в течение более длительных периодов времени. Такие эквиваленты и альтернативы предназначены для включения в объем настоящего изобретения.
[0039] Использование термина «низкая ударная нагрузка» предназначено для обозначения физических упражнений, в течение которых возникают минимальные осевые силы, испытываемые суставами. Часто при выполнении упражнений данного типа одна нога всегда остается на земле, и резкие движения отсутствуют (например, прыжки, скачки, подпрыгивания, бег и т. д.). Другой аспект упражнений данного типа может представлять собой случаи, когда вода или машина, или устройство поддерживают часть или весь организм во время физического упражнения. Примеры физических упражнений с низкой ударной нагрузкой включают, но не ограничиваются ими: ходьбу (плоская поверхность, наклонная беговая дорожка и т. д.), катание на роликовых коньках, плавание, езду на велосипеде, йогу, греблю, водную аэробику, подъем по лестнице и некоторые виды поднятия веса.
[0040] Использование термина «умеренный» предназначено для обозначения физических упражнений, которые не требуют высоких уровней нагрузки или интенсивных движений, и в течение которых частота сердечных сокращений субъекта существенно не увеличивается (т. е., более чем на 20-30%). Например, ходьба на 1/4-й мили (примерно 0,4 км) за 10 минут относительно ходьбы на то же расстояние всего за 5 минут будет представлять собой умеренную скорость ходьбы. Другие примеры представляют собой подъем на 5 лестничных пролетов за 10 минут относительно подъема на них всего за 5 минут, или плавание 5 кругов в бассейне за 10 минут относительно плавания всего за 5 минут. Эти неограничивающие примеры приведены для пояснения терминологии и не предназначены для охвата всего объема настоящего изобретения.
[0041] Способ согласно настоящему изобретению направлен на оценку суставных хрящей, которые включают в себя, но не ограничиваются ими: позвоночник (включая шею и спину), плечи, локти, запястья, пальцы, бедра, колени, лодыжки и пальцы ног. Более предпочтительно настоящее изобретение направлено на крупные суставы, такие как плечи, бедра, локти и колени. Физическое упражнение умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой, выполненное согласно настоящему изобретению, следует выбирать таким образом, чтобы в результате оценить артикуляцию (движение) конкретного суставного хряща, подлежащего оценке. Например, подъем по лестнице будет в первую очередь влиять на колени, тогда как подъем веса над головой будет в первую очередь влиять на плечи. Эти неограничивающие примеры приведены для пояснения и не предназначены для охвата всего объема настоящего изобретения.
[0042] В одном аспекте настоящего изобретения способ может применять для индивидуумов, страдающих заболеваниями суставных хрящей, включая широкий спектр артропатий. Примеры заболеваний суставных хрящей включают, но не ограничиваются ими: остеоартрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит, ювенильный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, подагру, подагрический артрит, тендинит, синовит, синдром Шегрена, септический (или инфекционный) артрит или системную красную волчанку.
[0043] В другом аспекте настоящего изобретения способ можно применять для индивидуумов в состоянии, предшествующем заболеванию, при котором заболевание суставных хрящей присутствует, но не имеет симптомов. Состоянием, предшествующим заболеванию, является состояние, при котором может возникать повреждение суставного хряща, но при отсутствии или недостаточном количестве клинических симптомов, которые могут позволить диагностировать такое заболевание, и суставы субъекта в противном случае считались бы здоровыми. Биомаркеры, применяемые для определения статуса этого состояния, предшествующего заболеванию, лишь немного выходят за пределы нормы, что происходит в результате естественных изменений среди субъектов одного пола, возраста и массы тела, но недостаточно отклоняются от нормы, чтобы квалифицировать их как заболевание. Они, как правило, находятся в интервале плюс или минус 10-20% от среднего значения или нормы для определяемых биомаркеров. Авторы настоящего изобретения считают, что суставы данных субъектов будут существенно более чувствительными к хрящевому обмену, вызванному физическими упражнениями. Хотя субъекты считают здоровыми, они могут периодически испытывать возникновение симптомов заболевания суставных хрящей (то есть боль, скованность, утрату функциональности и т. д.), и применение терапевтического вмешательства является для них благоприятным; и такое лечение может даже, возможно, предотвратить достижение субъектом болезненного состояния с полной симптоматикой.
[0044] Использование термина «периодический» предназначено для обозначения состояния, которое время от времени повторяется, но не последовательно или постоянно. Таким образом, состояние может возникать один или несколько дней в неделю, но не каждый день. Более предпочтительно, состояние возникает реже, например, один или несколько дней в месяц.
[0045] В еще одном аспекте настоящего изобретения способ можно применять для здоровых людей, у которых отсутствует заболевание суставных хрящей. Биомаркеры, применяемые для определения статуса здоровых суставных хрящей, будут хорошо соответствовать норме, что происходит в результате естественных изменений среди субъектов одного пола, возраста и массы тела, и у этих субъектов отсутствуют клинические признаки или симптомы заболевания суставных хрящей (см. таблицу 1 для ожидаемых интервалов CTX-II).
Таблица 1: Ожидаемые интервалы CTX-II в моче для различных возрастных групп
Женщины
Мужчины
Возраст
20-25
450-550
300-400
30-50
100-150
100-150
> 50
--
150-250
До менопаузы
100-150
н/о
После менопаузы
200-300
н/о
ОА радиографически
250-450
≥ 35
ИМТ < 25 кг/м<sup>2</sup>
100-150
ИМТ ≥ 25 кг/м<sup>2</sup>
150-200
Радиографически
450-550
250-350
Значения приведены в форме нанограммов CTX-II с поправкой на миллимоли креатинина (нг/ммоль Cr).
[0046] Существует ряд особых подгрупп здоровых индивидуумов, хрящ в суставах которых, как было обнаружено авторами настоящего изобретения, неожиданно проявлял чувствительность к обмену, вызванному физическими упражнениями. Эти группы представляют собой женщин в постменопаузе (см. примеры 1-3) и индивидуумов с избыточной массой тела (обоих полов) (см. пример 4). Не будучи связанными теорией, авторы настоящего изобретения полагают, что в суставах женщин в постменопаузе и индивидуумов с избыточной массой тела происходят биохимические изменения, что делает их хрящ особенно восприимчивым к повреждению, особенно в течение длительных периодов времени. Вероятно, поэтому данные подгруппы индивидуумов имеют значительно более высокую вероятность развития заболевания суставных хрящей в течение их жизни.
[0047] Вследствие того, что хрящевой обмен вызван физическими нагрузками, также возникает сопутствующее увеличение дискомфорта в суставе (например, боль, скованность и т. д.), что позволяет также субъективно оценивать лекарственные средства, устраняющие симптомы, связанные с суставами (снижающие боль в суставах, скованность и т. д.). В другом аспекте настоящего изобретения субъектам предлагают заполнить опросник или анкету, в которых необходимо оценить их субъективные симптомы, связанные с суставами. Это может включать в себя оценку во время или немедленно после физического упражнения или через некоторый период времени после физического упражнения, например, через 6, 12, 24 или 48 часов после физического упражнения. Примеры субъективных симптомов, связанных с суставами, включают, но не ограничиваются ими: боль, жжение, болезненность, чувствительность, дискомфорт, скованность (например, временную, как утром, или постоянную), отек; локализованную лихорадку или жар, отсутствие гибкости, ограничение или снижение диапазона движения, крепитацию (т. е. треск, хруст или щелкающие звуки или ощущения в суставе), частичную утрату функциональности (например, трудности при поднятии из положения сидя, трудности при входе и выходе из автомобиля, трудности при подъеме по лестнице и т. д.) и утрату способности к нагрузке или слабость. Все эти симптомы могут быть временными, эпизодическими или периодическими, или хроническими.
[0048] В другом аспекте настоящего изобретения оценка лекарственного средства для суставных хрящей может быть осуществляться в различных клинических исследованиях, включая, но не ограничиваясь следующим: открытое, одностороннее слепое, двойное слепое, плацебо-контролируемое, исследование c активным компаратором, исследование по более высокой эффективности, исследование по не меньшей эффективности или любые их комбинации или вариации. Использование термина «открытое» обозначает исследование, в котором исследуемое лекарственное средство оценивают без применения компаратора (то есть плацебо или активного вещества), а субъект(ы) исследования и исследователь(и) осведомлены об идентичности лекарственного средства. Использование термина «одностороннее слепое» обозначает исследование, в котором либо субъект(ы), либо исследователь(и) не осведомлены о назначенном лечении (то есть, получают ли субъекты исследуемое лекарственное средство или плацебо, или активный компаратор); чаще всего данный термин применяют для описания субъекта(ов), не осведомленных о назначенном лечении. Применение термина «двойное слепое» обозначает исследование, в котором как субъект(ы), так и исследователь(и) не осведомлены о назначенном лечения (получают ли субъекты исследуемое лекарственное средство или плацебо, или активный компаратор). Использование термина «плацебо-контролируемое» обозначает исследование, в котором исследуемое лекарственное средство сравнивают с плацебо (т.е. лекарственной формой, которая не содержит активного терапевтического ингредиента, но неотличима от лекарственной формы, которая действительно содержит активное лекарственное средство). Плацебо обычно относится к сахарной пилюле. Использование термина «с активным компаратором» обозначает исследование, в котором исследуемое лекарственное средство сравнивают с другим неисследуемым активным лекарственным средством, предназначенным для той же или аналогичной терапевтической цели. Использование термина «по более высокой эффективности» обозначает исследование, в котором исследуемое лекарственное средство должно быть эффективнее или лучше, чем компаратор (то есть плацебо или активное вещество), чтобы считаться успешным. Использование термина «по не меньшей эффективности» обозначает исследование, в котором исследуемое лекарственное средство не должно быть менее эффективным или хуже, чем компаратор (то есть плацебо или активное вещество), чтобы считаться успешным. Специалист в данной области техники может легко представить себе изменения в вышеупомянутых планах исследования или использовать альтернативные планы исследований. Такие эквиваленты и альтернативы включены в объем настоящего изобретения.
[0049] Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления изобретения хондропротекторную терапевтическую композицию для суставных хрящей оценивают в открытом клиническом исследовании. При этом: субъекты выступают в качестве контрольной группы для самих себя, сначала выполняя физическое упражнение умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой, которое обеспечивает работу коленей (например, наклонная беговая дорожка, степ-тренажер в положении сидя с сопротивлением, подъем по лестнице, жим ногами в положении сидя, чтобы поднимать вес, и т. д.) в течение не более 10 минут в день в через день в течение 2 недель подряд; в течение двухнедельного периода исследования субъектам предлагают заполнить анкету после физических упражнений, в которой они оценивают любую боль в коленях или скованность во время или немедленно (не более 1 часа) после физического упражнения, а затем снова оценивают любую боль в коленях или скованность приблизительно через 12 часов после физического упражнения (например, на следующее утро); в конце каждой недели субъекты предоставляют образцы мочи и крови, из которых получают уровни биомаркера. Затем следует период покоя в течение 2 недель или более, чтобы колени испытуемого могли вернуться в их основное состояние. Тот же комплекс упражнений повторяют (т. е. 10 минут в день, через день в течение 2 недель), при этом субъекты осведомлены, что они употребляют хондропротекторную терапевтическую композицию для суставных хрящей. Субъекты снова заполняют анкеты после физических упражнений относительно боли в коленях и скованности, и еженедельно предоставляют образцы крови и мочи для анализа биомаркеров. После завершения всех данных процедур согласно исследованию уровни биомаркера и уровни боли и скованности в период лечения (т.е. 2-й период физических упражнений) сравнивают с уровнями биомаркера и уровнями боли и скованности в контрольный период (т.е. 1-й период физических упражнений) чтобы определить, снижает ли хондропротекторное лекарственное средство хрящевой обмен, вызванный комплексом физических упражнений (т.е. меньшее увеличение биомаркера деградации хряща), и/или уменьшает ли терапевтическая композиция для суставных хрящей связанную боль в колене или скованность.
[0050] В более предпочтительном варианте осуществления изобретения хондропротекторную терапевтическую композицию для суставных хрящей оценивают с применением плана рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого клинического исследования. При этом: субъектов случайным образом распределяют (аналогично перевороту монеты или броску кости) либо в группу исследования лекарственного средства, либо в группу плацебо, двойным слепым способом; затем субъекты в обеих группах выполняют физическое упражнение умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой, которое обеспечивает работу коленей (например, наклонная беговая дорожка, степ-тренажер в положении сидя с сопротивлением, подъем по лестнице, жим ногами в положении сидя, чтобы поднимать вес, и т. д.) не более 10 минут в день, через день в течение 2 недель подряд; в течение двухнедельного периода исследования субъектам предлагают заполнить анкету после физических упражнений, в которой они оценивают любую боль в коленях или скованность во время или немедленно (не более 1 часа) после физического упражнения, а затем снова оценивают любую боль в коленях или скованность приблизительно через 12 часов после физического упражнения (например, на следующее утро); в конце каждой недели субъекты предоставляют образцы мочи и крови, из которых получают уровни биомаркера. После завершения процедур согласно исследованию назначение группы лечения раскрывают, и уровни биомаркеров и уровни боли и скованности сравнивают между двумя группами (т.е., исследование лекарственного средства относительно плацебо) чтобы определить, снижает ли хондропротекторная терапевтическая композиция для суставных хрящей хрящевой обмен, вызванный комплексом физических упражнений (т.е., меньшее увеличение биомаркера деградации хряща), и/или уменьшает ли лекарственное средство связанную боль в коленях или скованность.
[0051] Хотя настоящее изобретение направлено на людей, специалист в данной области техники может предположить возможность применения того же или аналогичного плана исследования для других млекопитающих, таких как собаки, кошки, кролики, лошади, коровы, козы, свиньи и т. д. Кроме того, в некоторых примерах настоящая заявка была описана со ссылкой на ограниченное число физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой, с помощью которых индуцируется хрящевой обмен. Специалист в данной области техники может легко установить различные способы физических упражнений, которые будут индуцировать хрящевой обмен, например, увеличивая интенсивность физического упражнения или увеличивая степень ударной нагрузки на суставы (например, физическое упражнение с высокой ударной нагрузкой) или увеличивая частоту физического упражнения. Все такие эквиваленты и альтернативы включены в объем настоящего изобретения.
[0052] Настоящее изобретение также относится к персональному набору для тестирования, который может применяться индивидуумом или в условиях клиники. Набор для тестирования включает в себя средство для получения образца у индивидуума и средство для тестирования образца одного или нескольких биомаркеров деградации и/или синтеза хряща. В наборе также присутствует средство для количественного определения одного или более биомаркеров деградации и/или синтеза хряща. Такой набор позволяет индивидууму оценить деградацию и/или синтез его хряща до и после тренировки и, кроме того, оценить любые добавки (например, композиции, фармацевтические препараты и т. д.), которые принимают для их воздействия на деградацию и/или синтез хряща.
[0053] Образец, собранный для применения в наборе, может представлять собой мочу, кровь или слюну. Средство для тестирования образца упомянутого одного или более биомаркеров деградации и/или синтеза хряща представляет собой любой подходящий анализ, включая, например, фермент-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA).
ПРИМЕРЫ
[0054] Следующие неограничивающие примеры приведены для иллюстрации различных вариантов осуществления изобретения:
Пример 1: Определение временного клиренса в моче биомаркера деградации хряща CTX-II у здоровых и страдающих артритом людей в течение 24 часов
[0055] Следующий пример является иллюстрацией определения временного клиренса в моче биомаркера деградации хряща CTX-II у здоровых и страдающих артритом людей в течение 24 часов. Известно, что белки в кровотоке с течением времени выводятся организмом человека посредством выделения почками в мочу. Этот клиренс белка происходит с разной скоростью для разных индивидуумов, и поэтому для нормирования скоростей клиренса часто применяют внутренний стандарт всегда присутствующего в моче белка, такого как креатинин, чтобы их можно было сравнить между индивидуумами или группами индивидуумов. Таким образом, рассчитывают соотношение CTX-II в моче, выраженное в нанограммах на децилитр (нг/дл), к креатинину (Cr) в моче, выраженное в миллимолях на децилитр (ммоль/дл), и результаты приводят в форме нанограммов CTX- II на миллимоль креатинина (нг/ммоль Cr). Уровни CTX-II в моче оценивали с применением коммерческого фермент-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA) от Immunodiagnostics Systems, Inc. (Urine CartiLaps EIA) в соответствии с инструкциями производителя. Исходные образцы мочи собирали от второго утреннего опорожнения и немедленно замораживали (-20°C), и выдерживали до необходимости проведения анализа. Когда образцы оттаивали, их подразделяли на аликвоты, чтобы избежать повторных циклов замораживания/оттаивания, которые могут привести к аберрантным значениям повторного анализа.
2
[0056] Две женщины (возраст 34 и 37) и один мужчина (возраст 34) с ИМТ менее 25 кг/м и имеющие здоровые коленные суставы предоставляли исходные образцы мочи для определения исходного уровня CTX-II. Субъекты впоследствии выполняли упражнения (женщины: подъем на 300 ступеней на каждую ногу в течение 10-15 минут, мужчины: бег 4 мили (примерно 6,4 км) в течение примерно 45 минут), что, как ожидалось, увеличило бы уровень выводимого CTX-II в моче. Субъекты предоставляли образцы мочи приблизительно каждые 2-4 часа для отслеживания клиренса CTX-II повременно (с течением времени), чтобы определить, когда будет наблюдаться максимальный уровень CTX-II после физического упражнения.
2
[0057] Аналогичным образом, женщина в постменопаузе (возраст 60 лет) с ИМТ менее 25 кг/м с диагностированным остеоартритом правого колена предоставляла исходный образец мочи для определения исходного уровня CTX-II. Субъект впоследствии выполнял физическое упражнение (подъем на 300 ступеней на каждую ногу в течение 10-15 минут), что, как ожидалось, увеличило бы уровень выводимого CTX-II в моче. Субъект предоставлял образцы мочи приблизительно каждые 2-4 часа для отслеживания клиренса CTX-II повременно (с течением времени), чтобы определить, когда будет наблюдаться максимальный уровень CTX-II после физического упражнения. Результаты оценки клиренса представлены на фигуре 1.
[0058] Существует достоверное увеличение CTX-II в первом образце мочи после физического упражнения (2-4 часа), однако наиболее достоверное и, как правило, наибольшее увеличение отмечают через 24 часа после физического упражнения (второе опорожнение). Для субъекта A (37-летняя здоровая женщина, подъем на 300 ступеней на каждую ногу) увеличение от исходного значения через 24 часа составляло 37,6%. Для субъекта B (34-летняя здоровая женщина, подъем на 300 ступеней на каждую ногу) увеличение от исходного значения через 24 часа составляло 85,5%. Для субъекта C (34-летний здоровый мужчина, бег 4 мили (примерно 6,4 км)) увеличение от исходного значения через 24 часа составляло 69,9%. Для субъекта D (60-летняя женщина в постменопаузе, страдающая артритом, подъем на 300 ступеней на каждую ногу) увеличение от исходного значения через 24 часа составляло 139,7%. Субъект (D) в постменопаузе, страдающий артритом, в любом случае демонстрировал увеличение в интервале от 1,5 раз (субъект B) до 3,5 раз (субъект A), чем более молодые женщины в возрасте до менопаузы с здоровыми коленными суставами.
Пример 2: Увеличение биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у женщины, страдающей артритом, в постменопаузе после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
[0059] Следующий пример является иллюстрацией увеличения биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у женщины, страдающей артритом, в постменопаузе после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Женщина в постменопаузе (возраст 58) с диагностированным остеоартритом левого колена, которая выполняла физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, предоставляла исходный образец мочи для определения исходного уровня CTX-II (119 нг/ммоль Cr). Субъект впоследствии выполнял физическое упражнение в течение 7-10 минут через день в течение двух недель подряд на степ-тренажере в положении сидя (фирмы NuStep) с рабочей нагрузкой 5,0 и темпом приблизительно 70 ступеней в минуту. В конце каждой недели субъект предоставлял образец мочи для сравнения уровней CTX-II с исходным. В первую неделю CTX-II увеличился на 77,9 % (211 нг/ммоль Cr) от исходного, и во вторую неделю CTX-II аналогичным образом увеличился на 75,3% (208 нг/ммоль Cr) от исходного.
[0060] Пример 3: Увеличение биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у здоровой женщины в постменопаузе после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
[0061] Следующий пример является иллюстрацией увеличения биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у здоровой женщины в постменопаузе после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Женщина в постменопаузе (возраст 67) со здоровыми коленными суставами (отсутствие боли в коленях или скованности), которая выполняла физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, предоставляла исходный образец мочи для определения исходного уровня CTX-II (156 нг/ммоль Cr). Субъект впоследствии выполнял физическое упражнение в течение 7-10 минут через день в течение двух недель подряд на наклонной беговой дорожке с наклоном 14 градусов и темпом 1,7 миль (примерно 2,7 км) в час. В конце каждой недели субъект предоставлял образец мочи для сравнения уровней CTX-II с исходным. В первую неделю CTX-II увеличился на 20,4% (188 нг/ммоль Cr) от исходного, и во вторую неделю CTX-II аналогичным образом увеличился на 27,1% (199 нг/ммоль Cr) от исходного.
Пример 4: Увеличение биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у здорового мужчины с ожирением после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
2
[0062] Следующий пример является иллюстрацией увеличения биомаркера деградации хряща CTX-II в моче у здорового мужчины с ожирением после комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Мужчина с ожирением (возраст 43) с ИМТ более 25 кг/м со здоровыми коленными суставами (отсутствие боли в коленях или скованности), который выполнял физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, предоставлял исходный образец мочи для определения исходного уровня CTX-II (70 нг/ммоль Cr). Субъект впоследствии выполнял физическое упражнение подъема на 50 ступеней (стандартной высоты) на каждую ногу в течение приблизительно 10 минут ежедневно в течение одной недели. В день 4 и день 8 субъект предоставлял образец мочи для сравнения уровней CTX-II с исходным. В день 4 CTX-II увеличился на 43,6% (100 нг/ммоль Cr) от исходного, и в день 8 CTX-II увеличился на 24,3% (87 нг/ммоль Cr) от исходного.
Пример 5: Сравнение увеличения биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после трех различных комплексов физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
[0063] Следующий пример является иллюстрацией сравнения увеличения биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после трех различных комплексов физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Описанное ниже исследование проводили согласно методике Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов согласно надлежащей клинической практике (Глава 21, Свод федеральных постановлений, части 50 и 56 и ICH E6) и Хельсинской Декларации. Протокол исследования одобрен уполномоченным должным образом Экспертным советом медицинского учреждения (IRB), и все субъекты предоставили письменное информированное согласие для участия.
[0064] Группу из 30 женщин в постменопаузе (возрастной интервал 46-72) со здоровыми коленными суставами (отсутствие боли в коленях или скованности), каждая из которых выполняла физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, случайным образом распределяли в одну из трех групп с различным комплексом физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Субъекты группы A выполняли ходьбу в течение не менее 7 минут через день в течение двух недель подряд на беговой дорожке с уклоном 14 градусов с темпом 1,7 миль (примерно 2,7 км) в час. Субъекты группы B выполняли физическое упражнение в течение не менее 7 минут через день в течение двух недель подряд на степ-тренажере в положении сидя (фирмы NuStep) с рабочей нагрузкой 7,0 и темпом 30-40 ступеней в минуту. Субъекты группы C выполняли 3 подхода по 8 подъемов каждый жима ногами в положении сидя (Cybex brand) 90 фунтов (41 кг) в течение не более 7 минут через день в течение двух недель подряд. Все субъекты предоставляли исходные образцы мочи для определения исходного уровня CTX-II и образцы мочи в конце каждой недели для сравнения уровней CTX-II с исходным. В таблице 2 предоставлены исходные демографические данные для трех групп исследуемых субъектов.
Таблица 2: Исходные демографические данные
Группа A
Группа B
Группа C
Возраст, годы
58,2 ± 4,7
52,4 ± 6,2
57,8 ± 7,1
Масса, кг
73,4 ± 11,1
83,5 ± 18,2
77,2 ± 12,2
ИМТ
26,8 ± 3,4
30,1 ± 4,4
28,6 ± 4,2
uCTX-II (нг/ммоль Cr)
259 ± 102
219 ± 98
288 ± 84
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 30). ИМТ определяли как массу тела в килограммах, поделенную на рост в метрах в квадрате.
[0065] Три группы не имели статистических различий в каких-либо из исходных демографических данных при применении непараметрического критерия Краскела-Уоллиса для нескольких групп. Также важно, что уровни CTX-II в их моче соответствуют уровням здоровых женщин в постменопаузе, и составляют средние уровни CTX-II на нижней границе интервала от ожидаемого у субъектов, страдающих артритом, и в пределах ожидаемого нормального интервала для женщин их возраста и гормонального статуса (см. выше в таблице 1). В таблице 3 представлены результаты CTX-II в моче для трех групп субъектов после предшествующего выполнения назначенных комплексов физических упражнений в течение двух недель подряд.
Таблица 3: Исходные уровни CTX-II в моче и через 1 неделю и 2 недели выполнения одного из трех комплексов физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой.
Временная точка
uCTX-II
% Различие относительно исходного
Группа A
Исходная
259 ± 102
Н/О
Неделя 1
223 ± 80
-14,0
Неделя 2
228 ± 88
-11,6
Группа B
Исходная
219 ± 98
Н/О
Неделя 1
233 ± 103
+6,4
Неделя 2
218 ± 102
-0,5
Группа C
Исходная
288 ± 84
Н/О
Неделя 1
331 ± 117
+14,9
Неделя 2
313 ± 108
+8,7
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 10 на группу).
[0066] С применением непараметрического критерия Фридмана для повторных измерений в сочетании с ретроспективным анализом Коновера для определения отличающихся временных точек (исходные данные, неделя 1 или неделя 2) было определено, что группа С статистически отличается (Р менее 0,05 ) от исходных данных на неделе 1 и неделе 2. Группа А показала четкую статистическую тенденцию отличия от исходных данных (P менее 0,10) для недели 1 и недели 2. Группа В статистически не отличалась в любой временной точке. При анализе данных по всем группам существует четкая тенденция для физических упражнений тяжелого характера (для подъема веса больше, чем для степ-тренажера в положении сидя, для которого больше, чем для наклонной беговой дорожки) относительно влияния на величину хрящевого обмена коленного сустава. Этот неожиданный результат по сравнению с известным эффектом от характера воздействия физических упражнений (низкое в сравнении с высоким) на сустав позволяет оценивать хрящевой обмен, вызванный физическим упражнением.
[0067] Только один или два субъекта в группе A испытывали какую-либо боль или скованность после ходьбы на наклонной беговой дорожке (как описано ранее). Поэтому в таблице 4 приведены результаты для боли и скованности для только группы B и группы C.
Таблица 4: Исходные уровни боли и скованности и через 1 неделю и 2 недели выполнения одного из двух комплексов физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
Временная точка
Немедленная боль(% увеличения)
Боль через 12 часов(% увеличения)
Немедленная скованность(% увеличения)
Скованность через 12 часов(% увеличения)
Группа B
Исходная
0,1 ± 0,3 (Н/О)
0,1 ± 0,3 (Н/О)
0,2 ± 0,4 (Н/О)
0,2 ± 0,4 (Н/О)
Неделя 1
0,6 ± 1,0 (500%)†
0,7 ± 1,1 (600%)*
0,9 ± 1,0 (350%)†
0,9 ± 1,0 (350%)†
Неделя 2
0,8 ± 1,5 (700%)†
0,8 ± 1,1 (700%)*
0,6 ± 1,1 (200%)
0,9 ± 1,1 (350%)†
Группа C
Исходная
0,1 ± 0,3 (Н/О)
0,1 ± 0,3 (Н/О)
0,3 ± 0,5 (Н/О)
0,3 ± 0,5 (Н/О)
Неделя 1
1,0 ± 0,8 (900%)*
1,0 ± 1,1 (900%)*
1,0 ± 0,8 (233%)*
1,2 ± 1,0 (300%)*
Неделя 2
0,8 ± 0,8 (700%)*
0,7 ± 1,1 (600%)†
1,2 ± 1,0 (300%)*
0,9 ± 1,1 (233%)†
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 10 на группу). % увеличения приведен относительно исходных данных. * = P < 0,05; † = P ~ 0,10
[0068] Присутствовали значительные увеличения боли в обеих группах, немедленно после физического упражнения (500-900%) и через 12 часов после физического упражнения (600-900%). Аналогичным образом, присутствовали значительные увеличения скованности в обеих группах, немедленно после физического упражнения (200-350%) и через 12 часов после физического упражнения (233-350%). Для группы B эти результаты были статистически значимыми (P менее 0,05) для боли через 12 часов после физического упражнения (неделя 1 и неделя 2) и продемонстрировали статистическую тенденцию (P приблизительно составляет 0,10) для немедленной боли (обе недели), немедленной скованности (неделя 1) и скованности через 12 часов после физического упражнения (обе недели). Для группы C эти результаты были статистически значимыми (P менее 0,05) для всех категорий (немедленная боль и скованность и боль, и скованность через 12 часов) для недели 1, и для немедленной боли и скованности для недели 2, и продемонстрировали статистическую тенденцию (P приблизительно составляет 0,10) для боли и скованности через 12 часов после физического упражнения для недели 2.
Пример 6: Открытая оценка терпевтической композиции для суставных хрящей с помощью биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после одного комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой
[0069] Следующий пример является иллюстрацией открытой оценки терпевтической композиции для суставных хрящей с помощью биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после одного комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Описанное ниже исследование проводили согласно методике Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов согласно надлежащей клинической практике (Глава 21, Свод федеральных постановлений, части 50 и 56 и ICH E6) и Хельсинской Декларации. Протокол исследования одобрен уполномоченным должным образом Экспертным советом медицинского учреждения (IRB), и все субъекты предоставили письменное информированное согласие для участия.
[0070] Ту же группу (из примера 5) из 30 женщин в постменопаузе (возрастной интервал 46-72) со здоровыми коленными суставами (отсутствие боли в коленях или скованности), каждая из которых выполняла физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, случайным образом распределяли в одну из двух групп с различным лечением (после периода отдыха в течение 3 недель). Все субъекты выполняли одинаковый комплекс физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой (3 подхода по 8 подъемов каждый жима ногами в положении сидя (Cybex brand) 90 фунтов (41 кг) в течение не более 7 минут через день в течение двух недель подряд). Субъекты группы 1 принимали одну 500 мг капсулу в день порошкообразной терапевтической композиции мембран яичной скорлупы для суставных хрящей (доступной на рынке как мембраны яичной скорлупы бренда NEM) в течение 7 дней до начала комплекса физических упражнений, и продолжали принимать лекарственное средство в течение двухнедельного периода выполнения физических упражнений (3 недели в целом). Субъекты группы 2 принимали одну 500 мг капсулу в день той же порошкообразной терапевтической композиции мембран яичной скорлупы для суставных хрящей, но начинали прием с дня 1 двухнедельного периода выполнения физических упражнений, и продолжали прием в течение оставшегося периода (2 недели в целом). Все субъекты предоставляли исходные образцы мочи для определения исходного уровня CTX-II и образцы мочи в конце каждой недели для сравнения уровней CTX-II с исходным. В таблице 5 предоставлены исходные демографические данные для двух групп исследуемых субъектов.
Таблица 5: Исходные демографические данные субъектов
Группа 1
Группа 2
Возраст, годы
56,2 ± 8,0
56,1 ± 4,8
Масса, кг
78,4 ± 12,1
77,7 ± 16,7
ИМТ
28,4 ± 3,7
28,6 ± 4,7
uCTX-II (нг/ммоль Cr)
220 ± 97
174 ± 76
Значения приведены как среднее ± стандартное отклонение (СО) (n = 30). ИМТ определяли как массу тела в килограммах, поделенную на рост в метрах в квадрате.
[0071] Группы не имели статистических различий в каких-либо из исходных демографических данных при применении непараметрического U-критерия Манна-Уитни для независимых групп. Также важно, что уровни CTX-II в их моче вернулись к уровням, аналогичным обнаруженным в примере 5, после трехнедельного периода отдыха. Также, уровни CTX-II соответствуют уровням здоровых женщин в постменопаузе, и составляют средние уровни CTX-II на нижней границе интервала от ожидаемого у субъектов, страдающих артритом, и в пределах ожидаемого нормального интервала для женщин их возраста и гормонального статуса (см. выше в таблице 1). В таблице 6 представлены результаты CTX-II в моче для двух групп субъектов после предшествующего выполнения назначенных комплексов физических упражнений в течение двух недель подряд.
Таблица 6: Исходные уровни CTX-II в моче и через 1 неделю и 2 недели выполнения комплекса физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой при приёме терапевтической композиции для суставных хрящей.
Временная точка
uCTX-II
% Различие относительно исходного
Группа 1
Исходная
220 ± 97
Н/О
Неделя 1
222 ± 92
+1,3
Неделя 2
209 ± 93
-4,8
Группа 2
Исходная
174 ± 76
Н/О
Неделя 1
178 ± 87
+2,3
Неделя 2
161 ± 58
-5,7
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 15 на группу).
[0072] Для каждой группы не было статистически значимых различий с исходными данными для CTX-II в моче, что является противоположностью результатам, полученным в группе C в примере 5 (при выполнении одного и того же комплекса упражнений), указывая на то, что терапевтическая композиция мембран яичной скорлупы бренда NEM является хондропротекторной (для защиты хряща) в данном клиническом исследовании, предназначенном для индуцирования хрящевого обмена с помощью физического упражнения. Так как статистически значимые различия между группой 1 и группой 2 также отсутствовали для любой из категорий боли или скованности (см. таблицу 7 со сводными результатами), результаты тех же 10 субъектов из группы C, примера 5, сравнивали непосредственно с их результатами, полученными в примере 5, после выполнения того же комплекса упражнений, не принимая терапевтическую композицию для суставных хрящей (см. таблицу 8 со сводными результатами).
Таблица 7: Исходные уровни боли и скованности и через 1 неделю и 2 недели выполнения комплекса физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой при приёме терапевтической композиции для суставных хрящей.
Временная точка
Немедленная боль(% увеличения)
Боль через 12 часов(% увеличения)
Немедленная скованность(% увеличения)
Скованность через 12 часов(% увеличения)
Группа 1
Исходная
0,4 ± 1,1 (Н/О)
0,4 ± 1,1 (Н/О)
0,5 ± 1,0 (Н/О)
0,5 ± 1,0 (Н/О)
Неделя 1
1,2 ± 1,9 (200%)
1,1 ± 1,7 (168%)
0,8 ± 1,3 (50%)
1,0 ± 1,7 (88%)
Неделя 2
0,7 ± 1,4 (83%)
0,6 ± 1,0 (50%)
0,7 ± 1,2 (25%)
0,7 ± 1,0 (25%)
Группа 2
Исходная
0,4 ± 0,7 (Н/О)
0,4 ± 0,7 (Н/О)
0,6 ± 1,0 (Н/О)
0,6 ± 1,0 (Н/О)
Неделя 1
0,9 ± 0,8 (117%)
0,7 ± 0,9 (83%)
0,9 ± 0,9 (44%)
0,8 ± 1,1 (33%)
Неделя 2
0,9 ± 0,7 (117%)
0,3 ± 0,6 (-17%)
0,6 ± 0,6 (0%)
0,5 ± 0,7 (-11%)
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 15 на группу). % увеличения приведен относительно исходных данных.
Таблица 8: Исходные уровни CTX-II в моче, боли и скованности и через 1 неделю и 2 недели выполнения комплекса физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой без лечения и при приеме терапевтической композиции для суставных хрящей.
Недели
Лечение
Абсолютный
после лечения
Без лечения
NEM
Эффект лечения
uCTX-II
Исходная (n = 10, 10)
288 ± 84
237 ± 82
Н/О
1 (n = 10, 10)
331 ± 117
227 ± 85
-19,1%
2 (n = 10, 10)
313 ± 108
230 ± 70
-11,7%†
Немедленная
Исходная (n = 10, 10)
0,1 ± 0,3
0,6 ± 1,0
Н/О
боль
1 (n = 10, 10)
1,0 ± 0,8
0,8 ± 0,9
-867%†
2 (n = 10, 10)
0,8 ± 0,8
0,7 ± 0,8
-683%†
Боль через
Исходная (n = 10, 10)
0,1 ± 0,3
0,6 ± 1,0
Н/О
12 часов
1 (n = 10, 10)
1,0 ± 1,1
0,7 ± 0,9
-883%*
2 (n = 10, 10)
0,7 ± 1,1
0,4 ± 0,7
-633%†
Немедленная
Исходная (n = 10, 10)
0,3 ± 0,5
0,8 ± 1,1
Н/О
скованность
1 (n = 10, 10)
1,0 ± 0,8
0,9 ± 1,1
-220%†
2 (n = 10, 10)
1,2 ± 1,0
0,6 ± 0,8
-325%*
Скованность
Исходная (n = 10, 10)
0,3 ± 0,5
0,8 ± 1,1
Н/О
Через 12 часов
1 (n = 10, 10)
1,2 ± 1,0
0,9 ± 1,3
-287%†
2 (n = 10, 10)
0,9 ± 1,1
0,6 ± 0,8
-258%*
Если не указано иное, значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО). Абсолютный эффект лечения представляет собой чистое различие при лечении NEM и без лечения для изменения среднего эффекта лечения от исходного уровня, выраженного в процентах. Отрицательные значения боли или функционирования указывают на превосходное улучшение в группе, получавшей лечение. *P < 0,05; † P < 0,10
Пример 7: Рандомизированная, двойная слепая, плацебо-контролируемая оценка терпевтической композиции для суставных хрящей с помощью биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после одного комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой.
[0073] Следующий пример является иллюстрацией рандомизированной, двойной слепой, плацебо-контролируемой оценки терпевтической композиции для суставных хрящей с помощью биомаркера деградации хряща CTX-II в моче в группе здоровых женщин в постменопаузе после одного комплекса физического упражнения умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой. Уровни CTX-II приведены аналогично примеру 1, и их определяли от второго утреннего опорожнения, собранного в пределах 12-24 часов после завершения последнего физического упражнения. Описанное ниже исследование проводили согласно методике Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов согласно надлежащей клинической практике (Глава 21, Свод федеральных постановлений, части 50 и 56 и ICH E6) и Хельсинской Декларации. Протокол исследования одобрен уполномоченным должным образом Экспертным советом медицинского учреждения (IRB), и все субъекты предоставили письменное информированное согласие для участия.
[0074] Группу из 60 женщин в постменопаузе (возрастной интервал 44-71) со здоровыми коленными суставами (отсутствие боли или скованности), каждая из которых выполняла физические упражнения реже, чем 2 раза в неделю, случайным образом распределяли в одну из двух групп, получавших лечение вслепую (500 мг мембран яичной скорлупы бренда NEM или 500 мг плацебо, ежедневно). Все субъекты выполняли одинаковый комплекс физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой (50-100 ступеней на ногу менее чем за 10 минут через день в течение двух недель подряд). Количество ступеней для выполнения каждым участником определяли на скрининге, и участник выполнял подход с данным количеством ступеней в течение исследования. Все субъекты предоставляли исходные образцы мочи для определения исходного уровня CTX-II и образцы мочи в конце каждой недели для сравнения уровней CTX-II между группами лечения (т.е., лечение относительно плацебо). В таблице 9 предоставлены исходные демографические данные для двух групп исследуемых субъектов.
Таблица 9: Исходные демографические данные субъектов
NEM
Плацебо
Возраст, годы
56,1 ± 7,4
57,7 ± 7,9
Масса, кг
75,7 ± 13,6
78,1 ± 14,5
ИМТ
28,2 ± 5,4
28,8 ± 4,4
uCTX-II (нг/ммоль Cr)
258 ± 105
236 ± 175
Значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО) (n = 60). ИМТ определяли как массу тела в килограммах, поделенную на рост в метрах в квадрате.
[0075] Группы не имели статистических различий в каких-либо из исходных демографических данных при применении параметрического t-критерия Стьюдента для независимых групп. Также, уровни CTX-II соответствуют уровням здоровых женщин в постменопаузе, и составляют средние уровни CTX-II на нижней границе интервала от ожидаемого у субъектов, страдающих артритом, и в пределах ожидаемого нормального интервала для женщин их возраста и гормонального статуса (см. выше в таблице 1). В таблице 10 представлены результаты CTX-II в моче для двух групп субъектов после предшествующего выполнения назначенных комплексов физических упражнений в течение двух недель подряд.
Таблица 10: Исходные уровни CTX-II в моче, боли и скованности и через 1 неделю и 2 недели выполнения комплекса физических упражнений умеренной интенсивности с низкой ударной нагрузкой при приеме терапевтической композиции для суставных хрящей или плацебо.
Недели
Лечение
Абсолютный
После лечения
NEM
Плацебо
Эффект Лечения
uCTX-II
Исходная (n = 31, 29)
258 ± 105
236 ± 175
Н/О
1 (n = 31, 29)
234 ± 83
255 ± 172
-17,2%**
2 (n = 31, 29)
242 ± 101
245 ± 184
-9,9%*
Немедленная
Исходная (n = 31, 29)
1,4 ± 1,1
1,4 ± 1,4
Н/О
боль
1 (n = 31, 29)
1,2 ± 1,2
1,6 ± 1,5
-28,6%
2 (n = 31, 29)
0,7 ± 0,9
1,3 ± 1,5
-42,9%†
Боль
Исходная (n = 31, 29)
0,2 ± 0,4
0,5 ± 0,8
Н/О
Через 12 часов
1 (n = 31, 29)
0,4 ± 0,6
1,0 ± 1,3
0%
2 (n = 31, 29)
0,3 ± 0,6
0,8 ± 1,2
-10%*
Немедленная
Исходная (n = 31, 29)
1,3 ± 1,0
1,7 ± 1,3
Н/О
Скованность
1 (n = 31, 29)
0,9 ± 0,9
1,7 ± 1,5
-30,8%*
2 (n = 31, 29)
0,7 ± 0,9
1,2 ± 1,5
-16,7%†
Скованность
Исходная (n = 31, 29)
0,3 ± 0,6
0,6 ± 0,9
Н/О
Через 12 часов
1 (n = 31, 29)
0,5 ± 0,7
1,0 ± 1,2
0%
2 (n = 31, 29)
0,3 ± 0,6
0,9 ± 1,4
-33,3%*
Если не указано иное, значения приведены как среднее значение ± стандартное отклонение (СО). Абсолютный эффект лечения представляет собой чистое различие при лечении NEM и приеме плацебо для изменения среднего эффекта лечения от исходного уровня, выраженного в процентах. Отрицательные значения боли или функционирования указывают на превосходное улучшение в группе, получавшей лечение. *P < 0,05; ** P < 0,01; † P < 0,10
[0076] Группа, получавшая лечение посредством NEM, продемонстрировала статистически значимое снижение CTX-II относительно плацебо для недели 1 и недели 2, снова указывая на то, что терапевтическая композиция мембран яичной скорлупы для суставных хрящей бренда NEM является хондропротекторной (для защиты хряща) в данном клиническом исследовании, предназначенном для индуцирования хрящевого обмена с помощью физического упражнения. Группа, получавшая лечение посредством NEM, также продемонстрировала статистически значимое снижение скованности немедленно после физического упражнения в дни 7 и 11 и боли через 12 часов после физического упражнения и скованности в дни 8-14 и 4, 8, 12, и 14, соответственно (см. фигуру 2). Это демонстрирует, что терапевтическая композиция мембран яичной скорлупы для суставных хрящей бренда NEM также снижает симптоматику (т.е., боль и скованность) после физических упражнений и способствует восстановлению после физических упражнений.