ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО И УСИЛИТЕЛЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ДЕЙСТВИЯ
ANTITUMOR AGENT AND ANTITUMOR EFFECT AMPLIFIER

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001]
Настоящее изобретение относится к противоопухолевому средству, усилителю противоопухолевого действия и комплектации, объединяющей соединение ацилтиомочевины или его соль с регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002]
4-[2-Фтор-4-[[[(2-фенилацетил)амино]тиоксометил]амино]фенокси]-7-метокси-N-метил-6-хинолинкарбоксамид является противоопухолевым средством со сниженными побочными эффектами (PTL 1) и, как известно, проявляет желательный эффект усиления противоопухолевого действия при использовании с другими противоопухолевыми средствами (PTL2). В исследованиях, проведенных в последнее время, сообщается, что такое соединение ацилтиомочевины ингибирует дифференциацию остеокластов посредством ингибирования CSF1 и проявляет противоопухолевое действие в модели остеолитических метастазов опухоли кости (NPL 1). Было также показано ингибирующее действие в отношении ферментов семейства TAM (NPL2).
[0003]
В дополнение к дифференциации остеокластов, CSF1R также является фактором, который модулирует пролиферацию макрофагов, встречающихся в качестве клеток-предшественников остеокластов, и пролиферацию макрофагов, ассоциированных с опухолью и участвующих в малигнизации опухоли, а также было описано влиянии его ингибитора на иммунитет (NPL 3, 4). Также известно, что протеинтирозинкиназа 3 (TYRO3), AXL (тирозинкиназа рецептора AXL) и MERTK (протоонкоген MER, тирозинкиназа) семейства TAM также играют важную роль в факторах внутриопухолевого микроокружения, таких как макрофаги, ассоциированные с опухолью, иммуносуппрессорные клетки, полученные из костного мозга, внутриопухолевые васкулярные эндотелиальные клетки и фибробласты, ассоциированные с опухолью (NPL 5, 6).
[0004]
В качестве новой формы терапии рака была разработана иммунотерапия рака. Активация адаптивной иммунной реакции инициируется связыванием комплекса антигенный пептид-MHC с T-клеточным рецептором (T-cell receptor - TCR). Связывание регулируется костимуляцией или коингибированием вследствие связывания семейства B7 - костимулирующей молекулы - и его рецептора семейства CD28. В частности, Т-клеткам необходимы два характерных сигнальных события для антиген-специфической активации, а Т-клетки, стимулируемые исключительно антигеном без костимуляции семейством В7, предполагают состояние иммунологической невосприимчивости (анергии), индуцирующее иммунную толерантность.
[0005]
Используя преимущество этого механизма, раковые клетки избегают иммунологического контроля и продолжают свой рост, ингибируя активацию антиген-специфических Т-клеток. Поэтому для лечения рака считается эффективным усилить костимуляцию или блокировать коингибирование индуцирования противоопухолевого иммунного ответа в организме пациента, страдающего раком, и таким образом контролировать опухоль, которая избегает воздействия иммунитета. С этой целью были предложены различные типы иммунотерапии, которые нацелены на костимулирующие молекулы (стимулирующие костимулирующие молекулы) или коингибирующие молекулы (супрессивные костимулирующие молекулы) (NPL 7). Например, ниволумаб (моноклональное антитело человека IgG4 против PD-1 человека) использовали для лечения таких видов рака, как злокачественная меланома, в качестве регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа, который активирует Т-клетки путем ингибирования связывания PD-1 и его лигандов (PD-L1 и P6D-L2) (NPL 1, NPL 8). Также была показана вовлеченность макрофага, ассоциированного с опухолью, в механизм устойчивости против такой иммунотерапии рака (NPL 9, 10).
[0006]
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), приведенной ниже, или его соль известны в качестве ингибитор ac-Met (PTL 1, 3), и описано комбинирование ингибитора c-Met с другими противоопухолевыми средствами (PTL 2).
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА (PATENT LITERATURE - PTL)
[0007]
PTL 1: WO 2009/125597
PTL 2: WO 2013/100014
PTL 3: WO 2016/175305
НЕПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА (NON PATENT LITERATURE - NPL)
[0008]
NPL 1: PLoS ONE,11(10): e0164830(2016)
NPL 2: Molecular Cancer Therapeutics, 12 (12): 2685-2696 (2013)
NPL 3: Cancer Cell, 25: 846-859 (2014)
NPL 4: Frontiers in Immunology, 5: Article 489 (2014)
NPL 5: Cancers, 8(10), 97: 8100097 (2016)
NPL 6: Cancers, 8(11), 103: 8110103 (2016)
NPL 7: Nat. Rev. Cancer, 12(4): 252-264 (2012)
NPL 8: The New England Journal of Medicine, 366; 26: 2443-2454 (2012)
NPL 9: Cell, 168(4): 707-723(2017)
NPL 10: Science Translational Medicine, 9 (389): eaal 3604 (2017)
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА
[0009]
Что касается NPL 8 - NPL 10, ожидается, что совместное применение противоракового средства и агента против макрофагов приведет к усилению противоопухолевого действия.
Что касается PTL2, комбинированное применение соединения ацилтиомочевины или его солей с регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа не известно.
Соответственно, предметом настоящего изобретения является новое противоопухолевое средство и новый усилитель противоопухолевого действия, которые демонстрируют выраженное противоопухолевое действие со сниженными побочными эффектами.
РЕШЕНИЕ ПРОБЛЕМЫ
[0010]
Автор настоящего изобретения изучил противоопухолевое действие, вызываемое комбинацией соединения ацетилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа и установил, что эти лекарственные средства при использовании в комбинации обеспечивают в значительной степени более сильное противоопухолевое действие без серьезных побочных эффектов по сравнению с их применением по отдельности. Было также обнаружено, что соединение ацилтиомочевины или его соли значительно уменьшают количество ассоциированных с опухолью макрофагов, которые играют основную роль в подавлении противоопухолевого иммунного ответа.
Автором настоящего изобретения также было обнаружено, что соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соли обладают иммуностимулирующим действием.
[0011]
В частности, настоящее изобретение обеспечивает следующие предметы изобретения [1] - [21].
[0012]
[1] Противоопухолевое средство, отличающееся совместным введением соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной далее общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
[0013]
[Хим. формула 1]
[0014]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
1
2
1
2
3
4
5
6
1-6
1-10
1-6
[2] Противоопухолевое средство по пункту [1], в котором соединение ацетилмочевины представляет собой соединение, представленное общей формулой (I), где Х представляет собой СН, Y представляет собой О, R представляет собой атом водорода или C алкильную группу, R представляет собой атом водорода, Cалкильную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель, R представляет собой Cалкильную группу, которая может содержать заместитель, R представляет собой атом галогена, и каждый из R и R независимо представляет собой атом водорода или атом галогена.
1
2
3
4
5
6
1-10
[3] Противоопухолевое средство по пункту [1] или [2], в котором соединение ацетилмочевины представляет собой соединение, представленное общей формулой (I), где Х представляет собой СН, Y представляет собой О, R представляет собой атом водорода или метильную группу, R представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, или 5-7-членную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель и содержит от одного до двух атомов азота или кислорода, R представляет метильную или пропильную группу, которая может содержать 5-7-членную гетероциклическую группу, содержащую от одного до двух атомов азота или кислорода, R представляет собой атом фтора, R представляет собой атом водорода, и R представляет собой атом галогена.
Точнее, противоопухолевое средство по пункту [1] представляет собой противоопухолевое средство, в котором соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, выбранное из следующей группы соединений:
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(3-изопропоксипропил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-((2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)метил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(2,3-дигидроксипропил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(пиридин-3-илметил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-метилхинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(метоксиэтил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(2-(диэтиламино)этил)-4-(2-Фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-морфолиноэтил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-(2-гидроксиэтокси)этил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(2-ацетамидоэтил)-4-(2-Фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(1,3-дигидроксипропан-2-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
трет-бутил-4-(4-(2-Фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид)-6-карбоксамид)пиперидин-1-карбоксилат,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(пиперидин-4-ил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(1-(этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-оксоазепан-3-ил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-оксо-2-(пирролидин-1-ил)этил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(1-ацетилпиперидин-4-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-(4-фторфенил)ацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-n-(2-оксоазепан-3-ил)хинолин-6-карбоксамид,
(S)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-(3-Фторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-морфолино-2-оксоэтил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-(4-фторфенил)ацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-гидроксибутил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-гидрокси-2-метилпропил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-((1-гидроксициклогексил)метил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-((4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-(метилсульфонил)этил)хинолин-6-карбоксамид.
[4] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [3], в котором регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антагониста пути метаболизма PD-1, агониста пути метаболизма ICOS, антагониста пути метаболизма CTLA-4 и агониста пути метаболизма CD28.
[5] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [4], в котором регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антагониста пути метаболизма PD-1, антагониста пути метаболизма CTLA-4 и агониста пути метаболизма CD28.
[6] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [5], в котором регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа представляет собой по меньшей мере одно соединение из антагониста пути метаболизма PD-1 и антагониста пути метаболизма CTLA-4.
[7] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [6], в котором регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа представляет собой антагонист пути метаболизма PD-1.
[8] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [4] - [7], в котором антагонист пути метаболизма PD-1 представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против PD-L2.
[9] Противоопухолевое средство по пункту [8], в котором антитело против PD-1 представляет собой по меньшей мере одно соединение из ниволумаба и пембролизумаба, и антитело против PD-L1 представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из атезолизумаба, дурвалумаба и авелумаба.
[10] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [4] - [6], в котором антагонист пути метаболизма CTLA-4 представляет собой антитело против CTLA-4.
[11] Противоопухолевое средство по пункту [10], в котором антитело против CTLA-4 представляет собой по меньшей мере одно соединение из ипилимумаба и тремелимумаба.
[12] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [3], в котором соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль представляет собой 4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-метилхинолин-6-карбоксамид или его соль.
[13] Противоопухолевое средство по любому из пунктов [1] - [12],
в котором целевым раковым заболеванием является по меньшей мере одно заболевание, выбранное из меланомы, рака почки, рака легкого, рака головы и шеи, лимфомы Ходжкина, рака мочевого пузыря, рака толстой кишки, рака печени, рака желудка, остеосаркомы и саркомы мягких тканей, рака молочной железы и рака предстательной железы.
[14] Усилитель противоопухолевого действия для регуляторов молекул контрольных точек иммунного ответа, включающий соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной далее общей формулой (I), или его соль в качестве активного компонента.
[0015]
[Хим. формула 2]
[0016]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[15] Противоопухолевое средство для лечения больного раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа, включающее
соединение ацилтиомочевины или его соль,
где соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, представленное приведенной далее общей формулой (I).
[0017]
[Хим. формула 3]
[0018]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[16] Противоопухолевое средство для лечения пациента, страдающего раком, которому вводится соединение ацилтиомочевины или его соль, включающее
регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа,
где соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, представленное приведенной далее общей формулой (I).
[0019]
[Хим. формула 4]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[17] Противоопухолевое средство, включающее
соединение ацилтиомочевины или его соль в комбинации с регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа,
где соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, представленное приведенной далее общей формулой (I).
[0021]
[Хим. формула 5]
[0022]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[0023]
[18] Иммуностимулятор, включающий
соединение ацилтиомочевины приведенной далее общей формулы (I) или его соль в качестве активного компонента.
[0024]
[Хим. формула 6]
[0025]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, Cалкильную группу, Cалкоксигруппу, Cалкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[19] Фармацевтическая композиция для усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания,
где фармацевтическая композиция включает
соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной далее общей формулой (I), или его соль.
[0026]
[Хим. формула 7]
[0027]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[20] Фармацевтическая композиция, включающая
соединение ацилтиомочевины или его соль с лекарственным средством, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания в комбинации,
где соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, представленное приведенной далее общей формулой (I).
[0028]
[Хим. формула 8]
[0029]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[21] Иммуностимулятор для лечения пациента, которому вводится лекарственное средство, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания, включающий
соединение ацилтиомочевины или его соль,
где соединение ацилтиомочевины представляет собой соединение, представленное приведенной далее общей формулой (I).
[0030]
[Хим. формула 9]
[0031]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[0032]
Настоящее изобретение также относится к следующим вариантам осуществления.
(1) Фармацевтическая композиция для предотвращения и/или лечения опухоли, включающая соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль и регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа.
(2) Противоопухолевое средство для применения в предотвращении и/или лечении опухоли совместным введением соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
(3) Противоопухолевое средство для применения в предотвращении и/или лечении опухоли, включающее соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль в комбинации с регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа.
(4) Противоопухолевое средство для применения в лечении пациента, страдающего раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа, где противоопухолевое средство включает соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль.
(5) Применение соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа для производства противоопухолевого средства.
(6) Применение соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли для производства противоопухолевого средства, предназначенного для применения пациентом, страдающим раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа.
(7) Соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль для усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
(8) Применение соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли для усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
(9) Применение соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли для производства усилителя противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
(10) Способ предотвращения и/или лечения опухоли, включающий стадию введения пациенту терапевтически и/или профилактически эффективного количества комбинации соединения ацетилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
(11) Способ предотвращения и/или лечения опухоли, включающий стадию введения терапевтически и/или профилактически эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли пациенту, страдающему раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа.
(12) Способ предотвращения и/или лечения опухоли, включающий стадию введения терапевтически и/или профилактически эффективного количества регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа пациенту, страдающему раком, которому вводится соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль.
(13) Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа для применения в лечении и/или предотвращении опухоли у пациента, страдающего раком, которому вводится соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль.
(14) Применение регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа для производства противоопухолевого средства, предназначенного для применения в лечении и/или предотвращении опухоли у пациента, страдающего раком, которому вводится соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль.
(15) Способ усиления противоопухолевого действия, включающий стадию введения терапевтически и/или профилактически эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного приведенной выше общей формулой (I), или его соли пациенту, страдающему раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа.
(16) Продукт, включающий соединение ацилтиомочевины, представленное приведенной выше общей формулой (I), или его соль и регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа как комбинированный препарат (далее именуемый «комплектацией» (“kit preparation”)), которые должны использоваться одновременно, последовательно или с интервалами для предотвращения и/или лечения опухоли.
Полезные эффекты изобретения
[0033]
Противоопухолевое средство по настоящему изобретению позволяет лечить рак с высокоэффективным противоопухолевым действием (в частности, посредством уменьшения размера опухоли и задержкой роста опухоли (эффект продления жизни)) при снижении побочных эффектов и повышении шансов длительной выживаемости пациентов, страдающих раком. Иммуностимулятор по настоящему изобретению обеспечивает новое лечение различных заболеваний (например, различных инфекций, иммунодефицитных заболеваний и опухолей), поддающихся облегчению с помощью иммуностимуляции.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0034]
На фигуре 1 представлены графики, демонстрирующие эффекты комбинаций соединения 1 и антитела против PD-1 мыши на модели мыши с трансплантированной клеточной линией МС38 рака толстой кишки мыши.
На фигуре 2 представлен график, показывающий комбинированное действие трех соединений: соединения 1, антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши - на мышиной модели с трансплантированной клеточной линией EMT6 рака молочной железы мыши.
Описание вариантов осуществления
[0035]
Настоящее изобретение относится к противоопухолевому средству, усилителю противоопухолевого действия и комплектации, отличающим совместным введением соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли, и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа (в частности, антитела против PD-1), к применению этих средств, способу лечения опухолей, способу предотвращения опухолей и способ усиления противоопухолевого действия. Настоящее изобретение также относится к иммуностимулятору. Используемый здесь термин «для совместного введения» является синонимом термина «для применения при совместном введении».
[0036]
Соединение ацилтиомочевины
В настоящем изобретении соединения ацилтиомочевины или их соли представляют собой соединения, представленные приведенной далее общей формулой (I), или их соли.
[0037]
[Хим. формула 10]
[0038]
(где в общей формуле (I)
Х представляет собой СН или N;
Y представляет собой О или NH;
1
2
3
1
2
1-10
3-10
6-14
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, C циклическую алкильную группу, которая может содержать заместитель, C ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом атомом азота, тем самым образовывая азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель; и
4
5
6
5
6
1-6
1-6
1-6
каждый из R, R и R независимо представляет собой атом водорода, атом галогена, C алкильную группу, C алкоксигруппу, C алкиламиногруппу, ароматическую углеводородную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель, или R и R могут быть соединены друг с другом фенильным кольцом, тем самым образовывая кольцо).
[0039]
Термин «может содержать заместитель», когда используется в настоящем описании в сочетании с указанной структурой, означает, что структура может содержать один, два или большее количество «заместителей» в химически приемлемых положениях. Термин «содержащий заместитель», используемый настоящем описании в сочетании с указанной структурой, означает, что структура содержит один, два или большее количество «заместителей» в химически приемлемых положениях.
Тип, количество и положение заместителей в структуре конкретно не ограничены и могут быть одинаковыми или разными, когда имеют место два или большее количество заместителей. Примеры «заместителя» включают атом галогена, гидроксильную группу, цианогруппу, нитрогруппу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, циклоалкильную группу, содержащую от 3 до 7 атомов углерода, алкенильную группу, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, алкоксигруппу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, карбонильную группу, аминокарбонильную группу, сульфонильную группу, алкилсульфонильную группу, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу, карбониламиногруппу, ацильную группу, оксогруппу, насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу и ароматическую углеводородную группу, содержащую от 6 до 14 атомов углерода. Когда присутствуют эти заместители, их количество обычно составляет от одного до трех.
1-6
Цифры, показанные в нижнем регистре после символа C, представляют количество атомов углерода. Например, «C» означает от одного до шести атомов углерода.
[0040]
В общей формуле (I) Х представляет собой СН или N, предпочтительно СН.
В общей формуле (I) Y представляет собой О или NH, предпочтительно О.
[0041]
1-10
1-10
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «Салкильная группа», используемый во фразе «Салкильная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 10 атомов углерода, такую, как метильная группа, этильная группа, н-пропильная группа, изопропильная группа, н-бутильная группа, втор-бутильная группа, трет-бутильная группа, н-пентильная группа, н-гексильная группа, н-октинильная группа или н-деканильная группа.
1-10
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «C алкильная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных выше в качестве примера.
[0042]
3-10
3-10
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «C циклическая алкильная группа», используемый во фразе «C циклическая алкильная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает циклическую алкильную группу, содержащую от 3 до 10 атомов углерода, такую как, например, циклопропильная группа, циклобутильная группа, циклопентильная группа или циклогексильная группа.
3-10
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «C алкильная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше.
[0043]
6-14
6-14
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «C ароматическая углеводородная группа», используемый во фразе «C ароматическая углеводородная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает моноциклическую или бициклическую ароматическую углеводородную группу, содержащую от 6 до 14 атомов углерода, такую как, например, фенильная группа или нафтильная группа.
6-14
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «C ароматическая углеводородная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше.
[0044]
1
2
3
1
2
3
В описании общей формулы (I) термин «насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа», используемый во фразе «насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает моноциклическую или бициклическую насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую один или два атома кислорода, один или два атома азота или один или два атома серы, такую как, например, пирролидинильная группа, пиперидинильная группа, пиперазинильная группа, гексаметилениминогруппа, морфолиногруппа, тиоморфолино группа, гомопиперидинильная группа, имидазолильная группа, тиенильная группа, фурильная группа, пирролильная группа, оксазолильная группа, изоксазолильная группа, тиазолильная группа, изотиазолильная группа, пиразолинильная группа, триазолильная группа, тетразолильная группа, пиридильная группа, пиразильная группа, пиримидинильная группа, пиридазильная группа, индолильная группа, изоиндолильная группа, индазолильная группа, метилендиоксифенильная группа, этилендиоксифенильная группа, бензофуранильная группа, дигидробензофуранильная группа, бензоимидазолильная группа, бензооксазольная группа, бензотиазолильная группа, пуринильная группа, хинолильная группа, изохинолильная группа, хиназолинильная группа или хиноксалильная группа. Предпочтительно, термин «насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа», используемый во фразе «насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает 5-7-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атома азота или один или два атома кислорода, более предпочтительно 5-7-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атома азота, такое как, например, пирролидинильная группа, пиперидинильная группа, пиперазинильная группа или гексаметилениминогруппа.
1
2
3
1-6
1-6
1-6
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше, и предпочтительно представляет собой C алкилкарбонильную группу, C алкиламинокарбонильную группу, С алкоксикарбонильную группу или оксогруппу, более предпочтительно трет-бутоксикарбонильную группу, этиламинокарбонильную группу, ацетильную группу или оксогруппу.
[0045]
1
2
В описании общей формулы (I) термин «азотсодержащее гетероциклическое кольцо», используемый во фразе «азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель», относящейся к группе, образованной соединение R и R друг с другом и с атомом азота, может представлять собой, например, пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу или морфолиногруппу.
1
2
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель», относящейся к группе, образованной соединением R и R друг с другом и с атомом азота, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше.
[0046]
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «атом галогена», относящийся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, атом фтора, атом брома, атом хлора или атом йода и предпочтительно означает атом фтора.
1-6
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «Cалкильная группа», относящийся к группе, обозначенной как R, R и R, означает линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, такую как, например, метильная группа, этильная группа, н-пропильная группа, изопропильная группа, н-бутильная группа, втор-бутильная группа, трет-бутильная группа, н-пентильная группа или н-гексильная группа.
[0047]
1-6
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «Cалкоксигруппа», относящийся к группе, обозначенной как R, R и R, означает линейную или разветвленную алкоксигруппу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, такую как, например, метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропилоксигруппа, изопропилоксигруппа, н-бутилоксигруппа, втор-бутилоксигруппа, трет-бутилоксигруппа, н-пентилоксигруппа или н-гексилоксигруппа.
[0048]
1-6
1-6
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «C алкиламиногруппа», относящийся к группе, обозначенной как R, R и R, означает аминогруппу, монозамещенную или дизамещенную C алкильной группой, представленной выше. Примеры включают метиламиногруппу, этиламиногруппу, диметиламиногруппу, метилэтиламиногруппу, н-пропиламиногруппу, изопропиламиногруппу, н-бутиламиногруппу, втор-бутиламиногруппу, трет-бутиламиногруппу, н-пентиламиногруппу и н-гексиламиногруппу.
[0049]
4
5
6
6-14
В описании общей формулы (I) термин «ароматическая углеводородная группа», используемый во фразе «ароматическая углеводородная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает ароматическую углеводородную группу, содержащую от 6 до 14 атомов углерода, такую как «C ароматическая углеводородная группа». Предпочтительные примеры включают фенильную группу и нафтильную группу.
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «ароматическая углеводородная группа, которая может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше.
[0050]
4
5
6
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо», используемый во фразе «насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает моноциклическую или бициклическую ненасыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую один или два атома кислорода, один или два атома азота или один или два атома серы, как и в предыдущем случае. Примеры включают пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу, морфолиногруппу, тиоморфолиногруппу, гомопиперидинильную группу, имидазолильную группу, тиенильную группу, фурильную группу, пирролильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, пиразолинильную группу, триазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиразильную группу, пиримидинильную группу, пиридазильную группу, индолильную группу, изоиндолильную группу, индазолильную группу, метилендиоксифенильную группу, этилендиоксифенильную группу, бензофуранильную группу, дигидробензофуранильную группу, бензоимидазолильную группу, бензооксазольную группу, бензотиазолильную группу, пуринльную группу, хинолильную группу, изохинолильную группу, хиназолинильную группу и хиноксалильную группу. Предпочтительно, термин «насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо», используемый во фразе «насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, которое может иметь заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, означает 5-7-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атома азота, такой как, например, пирролидинильная группа, пиперидинильная группа или пиперазинильная группа.
4
5
6
В описании общей формулы (I) термин «заместитель», используемый во фразе «насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель», относящейся к группе, обозначенной как R, R и R, может означать, например, любой из заместителей, приведенных в качестве примера выше.
[0051]
5
6
Примеры «кольца», образованного соединением R и R друг с другом и с фенильным кольцом, включают нафталиновое кольцо, хинолиновое кольцо, хиназолиновое кольцо, индольновое кольцо, бензимидазольное кольцо, метилендиоксифенильное кольцо и этилендиоксифенильное кольцо.
[0052]
Далее более конкретно описаны заместители в общей формуле (I), представленной выше.
Примеры атома галогена включают атом фтора, атом брома, атом хлора и атом йода.
Примеры алкильной группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, включают метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, н-пентильную группу и н-гексильную группу.
Примеры циклоалкильной группы, содержащей от 3 до 7 атомов углерода, включают циклопропильную группу, циклобутильную группу, циклопентильную группу и циклогексильную группу.
Примеры алкенильной группы, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, включают винильную группу и 2-пропенильную группу.
Примеры алкоксигруппы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, включают метоксигруппу, этоксигруппу, изопропилоксигруппу и н-бутилоксигруппу.
Насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа представляет собой моноциклическую или бициклическую насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую один или два атома кислорода, один или два атома азота или один или два атома серы, как указано выше. Примеры включают пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу, морфолиногруппу, тиоморфолиногруппу, гомопиперидинильную группу, имидазолильную группу, тиенильную группу, фурильную группу, пирролильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, пиразолинильную группу, триазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиразильную группу, пиримидинильную группу, пиридазильную группу, индолильную группу, изоиндолильную группу, индазолильную группу, метилендиоксифенильную группу, этилендиоксифенильную группу, бензофуранильную группу, дигидробензофуранильную группу, бензоимидазолильную группу, бензооксазольную группу, бензотиазолильную группу, пуринильную группу, хинолильную группу, изохинолильную группу, хиназолинильную группу и хиноксалильную группу.
Примеры ароматической углеводородной группы, содержащей от 6 до 14 атомов углерода, включают фенильную группу и нафтильную группу.
[0053]
1
1
1-10
1-6
Предпочтительные примеры R включают атом водорода и C алкильную группу. R более предпочтительно представляет собой атом водорода или Cалкильную группу, особенно предпочтительно атом водорода или метильную группу.
[0054]
2
1-10
Предпочтительно, R представляет собой атом водорода, C алкильную группу, которая может содержать заместитель, или насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, которая может содержать заместитель.
1-10
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
3-10
1-6
Предпочтительные примеры заместителя в С алкильной группе включают группы, выбранные из атома галогена, гидроксильной группы, Cалкоксигруппы, аминогруппы, C алкиламиногруппы, ди(C алкил)аминогруппы, гидрокси-C алкоксигруппы, C алканоиламиногруппы, аминокарбонильной группы, C алкиламинокарбонильной группы, ди(C алкил)аминокарбонильной группы, C циклоалкильной группы, C алкилсульфонильной группы, гетероциклической группы, упомянутой выше, гетероциклической карбонильной группы, упомянутая выше, и оксогруппы. Предпочтительно, гетероциклическое кольцо представляет собой 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от одного до двух атомов азота или от одного до двух атомов кислорода, такое как, например, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, пиридил, гомопиперидинил, морфолинил, диоксолан и диоксан.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
Гетероциклическое кольцо может быть замещено, например, атомом галогена, гидроксильной группой, оксогруппой, C алкоксигруппой, C алкильной группой, C алканоильной группой, C алкиламинокарбонильной группой, C алкоксикарбонильной группой, аминогруппой, Cалкиламиногруппой или ди(Cалкил)аминогруппой.
[0055]
2
Насыщенная или ненасыщенная гетероциклическая группа, которая может содержать заместитель, представленная как R, предпочтительно представляет собой 5-7-членную гетероциклическую группу, содержащую от одного до двух атомов азота или от одного до двух атомов кислорода, такую как, например, пирролидинильная группа, пиперидинильная группа, пиперазинильная группа, пиридильная группа, гомопиперидинильная группа, морфолинильная группа, диоксолановая группа и оксановая группа.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
Гетероциклическая группа может быть замещена, например, атомом галогена, гидроксильной группой, оксогруппой, C алкоксигруппой, C алкильной группой, C алканоильной группой, C алкиламинокарбонильной группой или C алкоксикарбонильной группой.
1
2
Предпочтительно, R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют азотсодержащее гетероциклическое кольцо, которое может содержать заместитель.
[0056]
3
1-10
1-6
Предпочтительно, R представляет собой C алкильную группу, которая может содержать заместитель, более предпочтительно C алкильную группу, которая может содержать заместитель, особенно предпочтительно метильную группу, которая может содержать заместитель, или пропильную группу, которая может содержать заместитель. Заместитель предпочтительно представляет собой 5-7-членную гетероциклическую группу, содержащую от одного до двух атомов азота или от одного до двух атомов кислорода, более предпочтительно морфолиновую группу.
[0057]
4
4
R предпочтительно представляет собой атом галогена, особенно предпочтительно атом фтора. Предпочтительно R замещен в положении 2.
[0058]
5
6
5
6
5
6
5
6
6
R и R предпочтительно представляют собой атомы водорода или атомы галогена. Особенно предпочтительно, один из R и R представляет собой атом водорода, а другой представляет собой атом галогена. Предпочтительно, R и R замещены в положениях 3 и 4. Когда R представляет собой атом водорода и R представляет собой атом галогена, R предпочтительно замещен положении 4.
[0059]
Среди соединений, представленных общей формулой (I) по настоящему изобретению, предпочтительными являются следующие соединения:
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(3-изопропоксипропил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-((2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)метил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(2,3-дигидроксипропил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(пиридин-3-илметил-)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-метилхинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(метоксиэтил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(2-(диэтиламино)этил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-морфолиноэтил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-(2-гидроксиэтокси)этил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(2-ацетамидоэтил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
N-(1,3-дигидроксипропан-2-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
трет-бутил-4-(4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид)-6-карбоксамид)пиперидин-1-карбоксилат,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(пиперидин-4-ил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(1-(этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-оксоазепан-3-ил)хинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-оксо-2-(пирролидин-1-ил)этил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(1-ацетилпиперидин-4-ил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-(4-фторфенил)ацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-оксоазепан-3-ил)хинолин-6-карбоксамид,
(S)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-(3-фторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-морфолино-2-оксоэтил)хинолин-6-карбоксамид,
N-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)-4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-(4-фторфенил)ацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-гидроксибутил-)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-(2-гидрокси-2-метилпропил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-((1-гидроксициклогексил)метил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-N-((4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-7-метоксихинолин-6-карбоксамид,
4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-(2-(метилсульфонил)этил)хинолин-6-карбоксамид.
Среди соединений, представленных общей формулой (I), особенно предпочтительным в настоящем изобретении является 4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-метилхинолин-6-карбоксамид.
[0060]
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I) по настоящему изобретению, включает сольват, такой как стереоизомер, оптический изомер или гидрат.
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I) по настоящему изобретению, может представлять собой соль, и соль предпочтительно представляет собой фармакологически приемлемую соль. Примеры таких солей включают соли неорганических оснований, соли органических оснований, соли с органической кислотой, соли с органической кислотой, соли с кислой аминокислотой и соли с основной аминокислотой.
[0061]
В частности, примеры солей неорганических оснований включают соли щелочных металлов, такие как соли натрия и соли калия, и соли щелочно-земельных металлов, такие как соли магния и соли кальция.
Примеры солей органических оснований включают соли триметиламина, триэтиламина, пиридина, N-метилпиридина, N-метилпирролидона, этаноламина, диэтаноламина, триэтаноламина и дициклогексиламина.
[0062]
Примеры неорганических кислот включают соляную кислоту, серную кислоту, бромистоводородную кислоту, йодистоводородную кислоту, азотную кислоту и фосфорную кислоту.
Примеры органических кислот включают муравьиную кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, глутаровую кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, молочную кислоту, яблочную кислоту, лимонную кислоту, винную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и метансульфоновую кислоту (метилсульфоновую кислоту).
[0063]
Примеры кислых аминокислот включают глутаминовую кислоту и аспарагиновую кислоту. Примеры основных аминокислот включают лизин, аспарагин и орнитин.
[0064]
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I) по настоящему изобретению, может иметь форму фармакологически приемлемого пролекарства. Фармакологически приемлемое пролекарство может представлять собой любое соединение при условии, что оно превращается в соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), в физиологических условиях организма, таких как, например, гидролиз, окисление или восстановление под действием желудочной кислоты или фермента. Примеры таких соединений включают сложноэфирные соединения для модификации карбоксильной группы, такие как метиловый эфир, этиловый эфир, пропиловый эфир, фениловый эфир, карбоксиоксиметиловый эфир и этоксикарбониловый эфир. Типичные примеры соединений, которые образуют такие пролекарства, включают соединения, которые превращаются в соединения ацилтиомочевины, представленные общей формулой (I), в физиологических условиях, описанных в Drug Development, Vol. 7, pp. 163-1989 (1990), Hirokawa Publishing Company.
[0065]
Конкретным примером соединения ацетилтиомочевины является 4-(2-фтор-4-(3-(2-фенилацетил)тиоуреидо)фенокси)-7-метокси-N-метилхинолин-6-карбоксамид (называемый далее «соединение 1») следующей структуры.
[0066]
[Хим. формула 11]
[0067]
Соединение 1 может быть синтезировано с использованием известного способа. Например, синтез соединения 1 может быть основан на WO2009/125597 (PTL 1) или WO2016/175305 (PTL 3).
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль по настоящему изобретению непосредственно воздействует на молекулу иммунной контрольной точки само по себе, вызывая противоопухолевый иммунный ответ в организме пациента, страдающего раком и, таким образом, контролируя опухоль, на которую не действует иммунитет.
[0068]
Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа
Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа по настоящему изобретению непосредственно воздействует на молекулу контрольной точки иммунного ответа, чтобы индуцировать противоопухолевый иммунный ответ в организме пациента, страдающего раком, и таким образом контролировать опухоль, на которую не действует иммунитет.
Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа может представлять собой, например, вещество, которое облегчает функцию костимулирующей молекулы (стимулирует костимулирующую молекулу), или вещество, которое подавляет функцию коингибирующей молекулы (подавляет костимулирующую молекулу).
[0069]
Примеры молекулы контрольных точек иммунного ответа включают молекулы семейства B7 (например, B7-1, B7-2, PD-L1, PD-L2), семейства CD28 (например, CTLA-4, PD-1), суперсемейства TNF (4-1BBL, OX40L) и суперсемейства рецепторов TNF (4-1BB, OX40). Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа может представлять собой вещество, которое нацелено на такую молекулу контрольной точки иммунного ответа. Например, регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа может быть антагонистом пути метаболизма PD-1, агонистом пути метаболизма ICOS, антагонистом пути метаболизма CTLA-4, агонистом пути метаболизма CD28, антагонистом пути метаболизма BTLA или агонистом пути метаболизма 4-1BB.
Регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антагониста пути метаболизма PD-1, агониста пути метаболизма ICOS, антагониста пути метаболизма CTLA-4 и агониста пути метаболизма CD28. С точки зрения уменьшения побочных эффектов, регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа по настоящему изобретению более предпочтительно представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антагониста пути метаболизма PD-1, антагониста пути метаболизма CTLA-4 и агониста пути метаболизма CD28, еще более предпочтительно по меньшей мере одно соединение из антагониста пути метаболизма PD-1 и антагониста пути метаболизма CTLA-4, более предпочтительно антагонист пути метаболизма PD-1 или антагонист пути PD-1 и антагонист пути CTLA-4.
[0070]
Антагонист пути метаболизма PD-1 ингибирует иммуносупрессивный сигнал от PD-1, экспрессируемый на Т-клетках, или его лиганда PD-L1 или PD-L2. Примеры антагониста пути метаболизма PD-1 включают антитело против PD-1, антитело против PD-L1, антитело против PD-L2, внеклеточный домен PD-1, внеклеточный домен PD-L1, внеклеточный домен PD-L2, PD-1-Ig (белок слияния внеклеточного домена PD-1 и области FC Ig), PD-L1-Ig, PD-L2-Ig, PD-1 миРНК, PD-L1 миРНК и PD-L2 миРНК. Антагонист пути метаболизма PD-1 предпочтительно представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против PD-L2, более предпочтительно по меньшей мере одно соединение из антитела анти-PD-1 и антитела против PD-L1, особенно предпочтительно антитело против PD-1.
[0071]
Антагонист пути метаболизма CTLA-4 ингибирует иммуносупрессивный сигнал от CTLA-4, экспрессируемого на Т-клетках, или его лиганда B7-1 (CD80) или B7-2 (CD86). Антагонист пути метаболизма CTLA-4 предпочтительно представляет собой антитело против CTLA-4, внеклеточный домен CTLA-4, CTLA-4-Ig, антитело против B7-1 (CD80) или антитело против B7-2 (CD86), более предпочтительно антитело против CTLA-4 или CTLA-4-Ig, особенно предпочтительно антитело против CTLA-4.
[0072]
2
Примеры этих антител включают иммуноглобулины (например, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, IgY), Fab фрагменты, F(ab')фрагменты, фрагменты одноцепочечных антител (scFv), однодоменные антитела и диатела (Nat. Rev. Immunol, 6: 343-357, 2006). Антитела могут быть моноклональными или поликлональными, включая, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, мышиные антитела, антитела ламы и куриные антитела.
Предпочтительно, антитела представляют собой гуманизированные IgG моноклональные антитела или человеческие IgG моноклональные антитела.
[0073]
Примеры антитела против PD-1 в настоящем изобретении включают ниволумаб, пембролизумаб, цемлиплимаб и спартализумаб. Предпочтительными являются ниволумаб и пембролизумаб.
Примеры антитела против PD-L1 в настоящем изобретении включают атезолизумаб, дурвалумаб и авелумаб. Предпочтительным является атезолизумаб.
Примеры антитела против CTLA-4 в настоящем изобретении включают ипилимумаб и тремелимумаб. Предпочтительным является ипилимумаб.
Примеры CTLA-4-Ig в настоящем изобретении включают абатацепт. Предпочтительным является абатацепт.
Эти антитела могут быть получены с использованием общеизвестного способа получения антител.
Антитело против PD-1 является коммерчески доступным или планируется поступить в продажу как ниволумаб или пембролизумаб. Антитело против PD-L1 является коммерчески доступным или или планируется поступить в продажу как атезолизумаб, дурвалумаб или авелумаб. Антитело против CTLA-4 является коммерчески доступным или планируется поступить в продажу как ипилимумаб или ортремилюмаб. CTLA-4-Ig является коммерчески доступным или планируется поступить в продажу как абатацепт. Возможно также использовать эти коммерчески доступные продукты.
[0074]
В настоящем изобретении при использовании двух или большего количества регуляторов молекул контрольных точек иммунного ответа, можно использовать в комбинации, например, антитело против PD-1 и антитело против CTLA-4 или может использоваться биспецифическое антитело, способное связываться с PD-1 и CTLA-4. Примеры биспецифического антитела включают XmAb20717 (PD-1×CTLA-4).
[0075]
Соединения ацилтиомочевины, представленные общей формулой (I), или их соли оказывают иммуностимулирующее действие в отношении людей и других млекопитающих, включая, например, обезьян, мышей, крыс, кроликов, собак, кошек, коров, лошадей, свиней и овец. Термин «иммуностимулирующее действие», когда используется в настоящем описании, означает эффект активации иммунных клеток и стимулирования клеточного деления или продуцирования различных цитокинов. Соединения ацилтиомочевины, представленные общей формулой (I), или их соли оказывают воздействие стимуляции иммунных клеток, в частности Т-клеток. Настоящее изобретение относится к иммуностимулятору, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль и к способу стимуляции иммунитета у пациента, нуждающегося в профилактике или лечении, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли в качестве иммуностимулятора.
[0076]
Благодаря иммуностимулирующему действию соединений ацилтиомочевины, представленных общей формулой (I), или их солей, соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль способно предотвращать или лечить заболевания, поддающиеся облегчению с помощью иммуностимуляции, такие как, например, различные инфекции, иммунодефицитные заболевания, заболевания, вызванные ослаблением иммунной функции в результате старения, и опухоли, связанные с вирусом.
[0077]
Примеры инфекций, которые можно предотвратить или лечить с помощью соединения ацетилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли, включают паразитарные инфекции (например, инфекции, вызванные трипаносомой, малярийными паразитами, токсоплазмой), бактериальные инфекции (например, инфекции, вызванные пневмококком, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Bacillus anthracis, Vibrio cholerae, микоплазмой, Helicobacter pylori) и вирусные инфекции (например, инфекции, вызванные вирусом Т-клеточной лейкемии человека (HTLV-1), вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом папилломы человека (ВПЧ), вирусом Эпштейна-Барра (ВЭБ), цитомегаловирусом (CMV), вирусом гриппа (FLU), вирусом гепатита B человека (HBV), вирусом герпеса, вирусом гепатита C человека (HCV), коронавирусом SARS, коронавирусом MERS, вирусом денге и вирусом Эбола).
[0078]
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль для иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения инфекции, к соединению ацилтиомочевины, представленному общей формулой (I), или его соли для иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения инфекции и к способу иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения инфекции у пациента, нуждающегося в профилактике или лечении, где способ включает введение пациенту эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли.
[0079]
Примеры иммунодефицитных заболеваний, которые можно предотвратить или лечить с помощью соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли, включают заболевания врожденного иммунодефицита и заболевания приобретенного иммунодефицита, в частности приобретенный иммунодефицит, вызванный вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). В связи с этим другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль для иммуностимулирующего лечения иммунодефицитного заболевания, к соединению ацилтиомочевины, представленному общей формулой (I), или его соли для иммуностимулирующего лечения иммунодефицитного заболевания и к способу иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения иммунодефицитного заболевания у пациента, нуждающегося в лечении, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли.
[0080]
Конкретные примеры заболеваний, вызванных ослаблением иммунной функции вследствие старения, которые можно предотвратить или лечить с помощью соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его солей, включают пневмонию. В связи с этим, другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль для иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения заболевания, вызванного ослаблением иммунной функции вследствие старения, к соединению ацилтиомочевины, представленному общей формулой (I), или его соли для иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения заболевания, вызванного ослаблением иммунной функции вследствие старения, и к способу иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения заболевания, вызванного ослаблением иммунной функции вследствие старения у пациента, нуждающегося в профилактике или лечении, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли.
[0081]
Конкретные примеры опухолей, связанных с вирусом, или опухолей, вызванных вирусной инфекцией, которые можно предотвратить или лечить с помощью соединения ацетилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его солей, включают лимфому Беркитта, гепатоцеллюлярную карциному, рак шейки матки, Т-клеточный лейкоз взрослых, саркому Капоши и рак головы и шеи. В связи с этим, еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль для иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения опухоли, связанной с вирусом, к соединению ацилтиомочевины, представленному общей формулой (I), или ее соли для иммуностимулирующей профилактики или иммуностмулирующего лечения опухоли, связанной с вирусом, и к способу иммуностимулирующей профилактики или иммуностимулирующего лечения опухоли, связанной с вирусом, у пациента, нуждающегося в профилактике или лечении, где указанный способ включает введение пациенту эффективного количества соединения ацетилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли пациенту.
[0082]
Соединения ацилтиомочевины, представленные общей формулой (I), или их соли обладают иммуностимулирующим действием, который может усиливать действие лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания. Конкретные примеры лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания, включают профилактические вакцины против инфекций (например, профилактические вакцины против таких инфекций, как дифтерия, столбняк и коклюш), противовирусные средства (например, вакцину против гриппа, вакцину против гепатита В, препараты интерферона альфа, препараты интерферона бета, телапревир, рибавирин, симепревир, софосбувир, комбинированные препараты ледипасвира и софосбувира, видарабин, ацикловир, ганцикловир, валганцикловир, нуклеозидные аналоговые ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI; например, AZT (зидовудин), ddI (диданозин), ddC (зальцитабин), d4T (ставудин) и 3TC (ламибудин)), ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI; например, невирапин и делавирдин), ингибиторы протеазы (саквинавир, ритонавир, индинавир и нельфинавир) и противоопухолевые стимуляторы иммунного ответа (например, регуляторы молекул контрольных точек иммунного ответа и противораковые вакцины (например, сипулейцел-T)). В связи с этим, еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль для усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания, к соединению ацилтиомочевины, представленному общей формулой (I), или его соли для усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания, и к способу усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания, где указанный способ включает введение пациенту лекарственного средства и эффективного количества соединения ацетилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли.
[0083]
В настоящем изобретении, исходя из требования усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа или усиления иммуностимулирующего действия с помощью соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли, суточная доза введения соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I) или его соли предпочтительно составляет от 25 до 100%, более предпочтительно от 50 до 100%, еще более предпочтительно от 60 до 100%, особенно предпочтительно от 80 до 100%, наиболее предпочтительно 100% дозы, рекомендованной при отдельном введении соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли. Рекомендованная доза для людей предпочтительно составляет от 100 до 1200 мг/пациент/день, более предпочтительно от 200 до 800 мг/пациент/день, особенно предпочтительно от 200 до 650 мг/пациент/день.
[0084]
В настоящем изобретении, исходя из требования усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа или усиления иммуностимулирующего действия соединениями ацилтиомочевины, представленными соединением 1, или его солями, суточная доза соединений ацилтиомочевины, представленных соединением 1, или их солей предпочтительно составляет от 25 до 100%, более предпочтительно от 50 до 100%, еще более предпочтительно от 60 до 100%, особенно предпочтительно от 80 до 100%, наиболее предпочтительно 100% дозы, рекомендованной при отдельном введении соединений ацилтиомочевины, представленных соединением 1, или их солей. Рекомендованная доза для людей предпочтительно составляет от 100 до 1200 мг/пациент/день, более предпочтительно от 200 до 800 мг/пациент/день, особенно предпочтительно от 200 до 650 мг/пациент/день.
[0085]
В настоящем изобретении, исходя из требования усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа соединениями ацилтиомочевины, представленными общей формулой (I), или их солями, суточная доза введения регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа предпочтительно составляет от 30 до 100%, более предпочтительно от 50 до 100%, особенно предпочтительно 100% дозы, рекомендованной при отдельном введении регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
[0086]
В настоящем изобретении, исходя из требования усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа с помощью соединений ацилтиомочевины, представленных соединением 1, или его солями, суточная доза введения регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа предпочтительно составляет от 10 до 50%, более предпочтительно от 20 до 40%, особенно предпочтительно 33% дозы, рекомендованной при отдельном введении регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
[0087]
В частности, что касается дозы, рекомендованной для введения ниволумабалона, доза, утвержденная для введения одного ниволумаба составляет 2 мг/кг (массы тела) на введение или, в Японии, 3 мг/кг (масса тела) на введение. Соответственно, в настоящем изобретении суточная доза введения ниволумаба предпочтительно составляет от 0,3 до 3 мг/кг (массы тела) на введение, более предпочтительно от 1 до 3 мг/кг (массы тела) на введение, еще более предпочтительно 2 мг/кг (массы тела) на введение или 3 мг/кг (массы тела) на введение.
[0088]
Что касается рекомендованной дозы для введения одного пембролизумаба, утвержденная доза введения одного пембролизумаба составляет 2 мг/кг (массы тела) на введение или, в Японии, 200 мг на введение. Соответственно, в настоящем изобретении суточная доза введения пембролизумаба предпочтительно составляет от 0,2 до 2 мг/кг (массы тела) на введение или от 20 до 200 мг на введение; более предпочтительно от 1 до 2 мг/кг (массы тела) на введение или от 100 до 200 мг на введение; еще более предпочтительно 2 мг/кг (массы тела) на введение или 200 мг на введение.
[0089]
Что касается рекомендованной дозы для введения одного атезолизумаба, утвержденная в Соединенных Штатах доза для введения одного атезолизумаба составляет 1200 мг на введение. Соответственно, в настоящем изобретении суточная доза введения атезолизумаба предпочтительно составляет составляет от 120 до 1200 мг на введение, более предпочтительно от 600 до 1200 мг на введение, еще более предпочтительно 1200 мг на введение.
[0090]
В настоящем изобретении, исходя из требования усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания, с помощью соединений ацилтиомочевины, представленных общей формулой (I), или их солей, суточная доза введения лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания, предпочтительно составляет от 50 до 100%, более предпочтительно 100% дозы, рекомендованной при отдельном введении лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания.
[0091]
Что касается дозы, рекомендованной для введения одного ипилимумаба, утвержденная в Японии доза для введения одного ипилимумаба составляет 3 мг/кг (массы тела) на введение. Соответственно, в настоящем изобретении суточная доза введения ипилимумаба предпочтительно составляет от 0,3 до 3 мг/кг (массы тела) на введение, более предпочтительно от 1,5 до 3 мг/кг (массы тела) на введение, еще более предпочтительно 3 мг/кг (массы тела) на введение.
[0092]
Термин «рекомендованная доза», когда используется в настоящем описании, означает дозу, которая была определена в экспериментах, таких как клинические испытания, и представляет собой количество, которое обеспечивает максимальный терапевтический эффект и является безопасной для использовании, не вызывая серьезных побочных эффектов. В частности, рекомендованная доза может представлять собой любую из доз, утвержденных, рекомендованных и предложенных государственными учреждениями или организациями, такими как Агентство фармацевтики и медицинского оборудования (Pharmaceuticals and MedicalDevices Agency - PMDA) Японии, Управление по контролю за продуктами и лекарствами (Food and Drug Administration - FDA) США и Европейское агентство по лекарственным средствам (European Medicines Agency - EMA), которые указаны в инструкциях, таких как вкладыши в пакеты, формы интервью и рекомендации по лечению. Рекомендованная доза предпочтительно представляет собой дозу, одобренную любой организацией, выбранной из PMDA, FDA и EMA.
[0093]
При использовании ниволумаба в качестве регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа доза соединения, представленного общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли может составлять предпочтительно от 0,6 до 10,8 мг, более предпочтительно от 0,6 до 10 мг, еще более предпочтительно от 1,1 до 6,7 мг, особенно предпочтительно от 1,1 до 5,4 мг, из расчета на 1 мг ниволумаба.
[0094]
При использовании пембролизумаба в качестве регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа доза соединения, представленного общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли может составлять предпочтительно от 0,5 до 10 мг, более предпочтительно от 0,5 до 9,75 мг, еще более предпочтительно от 1,0 до 6,7 мг, особенно предпочтительно от 1,1 до 5,4 мг, из расчета на 1 мг пембролизумаба.
[0095]
При использовании атезолизумаба в качестве регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа доза соединения, представленного общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли может составлять предпочтительно от 0,08 до 1,62 мг, более предпочтительно от 0,08 до 1 мг, еще более предпочтительно от 0,17 до 0,67 мг, особенно предпочтительно от 0,17 до 0,54 мг, из расчета на 1 мг атезолизумаба.
[0096]
При использовании ипилимумаба в качестве регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа доза соединения, представленного общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли может составлять предпочтительно от 0,6 до 10,8 мг, более предпочтительно от 0,6 до 6,7 мг, еще более предпочтительно от 1,1 до 4,4 мг, особенно предпочтительно от 1,1 до 3,6 мг, из расчета на 1 мг ипилимумаба.
[0097]
Схема приема противоопухолевого средства по настоящему изобретению может быть подходящим образом выбрана в соответствии с такими факторами, как тип онкологического заболевания и стадия болезни.
В случае соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его солей, противоопухолевое средство вводится предпочтительно ежедневно или в соответствии с циклической схемой, включающей 5 дней непрерывного введения с последующим 2-дневным перерывом.
Когда регулятором иммунной контрольной точки является ниволумаб, противоопухолевое средство вводится предпочтительно два раза в неделю, один раз в неделю или один раз в 2-3 недели. В случае пембролизумаба противоопухолевое средство вводится предпочтительно два раза в неделю, один раз в неделю или один раз в 3 недели. В случае атезолизумаба противоопухолевое средство вводится предпочтительно два раза в неделю, один раз в неделю или один раз в 3 недели. В случае ипилимумаба противоопухолевое средство вводится предпочтительно два раза в неделю, один раз в неделю или один раз в 3 недели.
[0098]
Ежедневное количество доз противоопухолевого средства по настоящему изобретению может быть подходящим образом выбрано в соответствии с такими факторами, как тип онкологического заболевания и стадия болезни.
Противоопухолевое средство вводится предпочтительно один раз в день, независимо от того, является ли регулятором иммунной контрольной точки ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб или ипилимумаб.
Порядок введения соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли по настоящему изобретению и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа может быть подходящим образом выбран в соответствии с такими факторами, как тип онкологического заболевания и стадия болезни, и они могут вводиться в указанном или в обратном порядке или одновременно.
Интервал между введением соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли по настоящему изобретению и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа может подходящим образом выбираться в соответствии с такими факторами, как тип онкологического заболевания и стадия болезни. В частности, их можно вводить в один и тот же день или с интервалом не более 2 недель. Предпочтительно, соединения вводятся в один и тот же день или с интервалом не более 1 недели, более предпочтительно - в тот же день или с интервалом в 2 дня.
[0099]
Опухоль-мишень в настоящем изобретении конкретно не ограничена при условии, что в отношении этой опухоли может быть усилено противоопухолевое действие. Предпочтительно, опухолями-мишенями являются опухоли, в отношении которых соединения ацилтиомочевины, представленные общей формулой (I), или их соли могут вызывать противоопухолевое действие, более предпочтительно злокачественные опухоли, в которые вовлечен c-Met, и опухоли с большим количеством макрофагов, инфильтрирующих опухоль.
[0100]
В случае злокачественных опухолей конкретные примеры онкологических заболеваний-мишеней по настоящему изобретению включают рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак печени, рак желчного пузыря и желчных протоков, рак желчных путей, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, рак уретры, рак легкого, рак молочной железы, рак яичника, рак шейки матки, рак эндометрия, рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, опухоль яичка, остеосаркому и саркому мягких тканей, лейкоз, злокачественную лимфому, множественную миелому, рак кожи, опухоль головного мозга и мезотелиому.
[0101]
Онкологическими заболеваниями-мишенями в настоящем изобретении предпочтительно являются меланома, рак почки, рак легкого, рак головы и шеи, лимфома Ходжкина, рак мочевого пузыря, рак толстой кишки, рак печени, рак желудка, остеосаркома и саркома мягких тканей, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак пищевода, рак яичника, глиобластома, мезотелиома, множественная миелома и рак уретры, более предпочтительно меланома, рак почки, рак легкого, рак головы и шеи, лимфома Ходжкина, рак мочевого пузыря, рак толстой кишки, рак печени, рак желудка, остеосаркома и саркома мягких тканей, рак молочной железы и рак предстательной железы, особенно предпочтительно рак толстой кишки, рак молочной железы, рак легкого, меланома, остеосаркома и саркома мягких тканей, наиболее предпочтительно рак толстой кишки и рак молочной железы.
[0102]
Соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа и лекарственное средство, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания, могут быть приготовлены в форме отдельных препаратов, содержащих соответствующие активные компоненты (комплектация) или могут вводиться в один препарат (смесевое лекарственное средств), в зависимости от лекарственных форм и схем приема активных компонентов. В случае комплектации препаратов активные ингредиенты могут производиться и продаваться в одной упаковке, подходящей для совместного применения, или могут производиться и продаваться в отдельных упаковках.
[0103]
Лекарственная форма противоопухолевого средства по настоящему изобретению конкретно не ограничена и может быть подходящим образом выбрана в соответствии с предполагаемым лечением. Конкретные примеры возможных лекарственных форм включают препараты для перорального введения (например, таблетки, таблетки с покрытием, порошки, гранулы, препараты с форме капсул и жидкие препараты), инъекции, суппозитории, пластыри и мази.
В случае соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли противоопухолевое средство предпочтительно представляет собой противоопухолевое средство для перорального введения.
В случае регулятора молекул иммунных контрольных точек противоопухолевое средство может быть представлено в любой из лекарственных форм, приведенных в качестве примера выше. В частности, в случае антитела против PD-1, антитела против PD-L1 или антитела против CTLA-4 предпочтительной лекарственной формой является препарат для инъекций.
[0104]
Противоопухолевое средство, иммуностимулятор и лекарственное средство, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания по настоящему изобретению, может быть приготовлено с использованием фармацевтически приемлемого носителя общеизвестным способом, выбор которого определяется лекарственной формой, независимо от того, являются ли они соединением ацилтиомочевины представленным общей формулой (I), или его солью, регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа или лекарственным средством, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания. Носителем может быть любой из обычных носителей, используемых для типичных лекарственных средств. Примеры таких носителей включают эксципиенты, связующие вещества, дезинтегрирующие вещества, смазывающие вещества, разбавители, солюбилизирующие вещества, суспендирующие агенты, регуляторы тоничности, регуляторы рН, буферы, стабилизаторы, красители, ароматизаторы и вещества, улучшающие запах.
[0105]
Настоящее изобретение также относится к усилителю противоопухолевого действия, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, для усиления противоопухолевого действия регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа у пациента, страдающего раком. Усилитель противоопухолевого действия получают в любой из перечисленных выше форм противоопухолевого средства.
Настоящее изобретение также относится к усилителю противоопухолевого действия, содержащему регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа, для усиления противоопухолевого действия соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли у пациента, страдающего раком. Усилитель противоопухолевого действия получают в любой из перечисленных выше форм противоопухолевого средства.
Настоящее изобретение также относится к иммуностимулятору, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, для усиления действия лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения патологических состояний у пациента, страдающего заболеванием, поддающимся облегчению с помощью иммуностимуляции. Иммуностимулятор получают в любой из перечисленных выше форм иммуностимулятора.
[0106]
Настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, для лечения пациента, страдающего раком, которому вводится регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа. Противоопухолевое средство получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
Настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа, для лечения пациента, страдающего раком, которому вводится соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль. Противоопухолевое средство получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
Термин «лечение», когда используется в настоящем описании, включает послеоперационную вспомогательную химиотерапию, проводимую для предотвращения рецидива после хирургического удаления опухоли, и предоперационную вспомогательную химиотерапию, проводимую до хирургического удаления опухоли.
Настоящее изобретение также относится к иммуностимулятору, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, для лечения пациента, который страдает заболеванием, поддающимся облегчению с помощью иммуностимуляции, и которому вводится лекарственное средство, воздействующее на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания. Иммуностимулятор получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
[0107]
Настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, где противоопухолевое средство используется в комбинации с регулятором молекул контрольных точек иммунного ответа для пациента, страдающего раком. Противоопухолевое средство получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
Настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему регулятор молекул контрольных точек иммунного ответа, где противоопухолевое средство используется в комбинации с соединением ацилтиомочевины, представленным общей формулой (I), или его солью для пациента, страдающего раком. Противоопухолевое средство получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
Настоящее изобретение также относится к иммуностимулятору, содержащему соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль, где иммуностимулятор используется в комбинации с лекарственным средством, которое воздействует на иммунитет для предотвращения или лечения заболевания у пациента, страдающего заболеванием, поддающимся облегчению с помощью иммуностимуляции. Иммуностимулятор получают в любой из перечисленных выше форм препаратов.
[0108]
Настоящее изобретение также относится к комплектации (kit preparation), включающей:
противоопухолевое средство, содержащее соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль; и
инструкцию по применению, содержащую инструкции по совместному введению пациенту, страдающему раком, соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли и регулятора молекул контрольных точек иммунного ответа.
В данном случае «инструкция по применению» может содержать инструкции, в которых представлены дозы, указанные выше, и может иметь или не иметь юридической силы. Предпочтительно, в инструкции по применению представлены дозы, указанные выше в качестве рекомендованных доз. Конкретные примеры такой инструкции по применению включают вкладыши в упаковку и брошюры. Комплектация, содержащая инструкцию по применению, может быть такой, что инструкция по применению печатается на упаковке комплектации или прикрепляется к ней или инструкция по применению может быть вложена в упаковку комплектации вместе с противоопухолевым средством или иммуностимулятором.
Настоящее изобретение также относится к комплектации, включающей:
иммуностимулятор, содержащий соединение ацилтиомочевины, представленное общей формулой (I), или его соль; и
инструкцию по применению, содержащую инструкции по совместному введению соединения ацилтиомочевины, представленного общей формулой (I), или его соли и лекарственного средства, которое воздействует на иммунитет, для предотвращения или лечения заболевания у пациента, страдающего заболеванием, поддающимся облегчению с помощью иммуностимуляции.
[0109]
Далее настоящее изобретение описывается более подробно с помощью примеров. Однако следует отметить, что настоящее изобретение никоим образом не ограничивается представленными далее примерами, и специалист в данной области техники может сделать различные модификации, не отступая от технической идеи изобретения, раскрытого в настоящем описании.
ПРИМЕР 1
[0110]
Эксперимент проводили на мышиной модели опухоли МС38. Клетки опухоли культивировали in vitro и подкожно трансплантировали самцам мышей возраста шести месяцев в правую область грудной клетки с последующим ежедневным введением соединения 1 и контрольного антитела. При непрерывном введении была установлена предпочтительная минимальная доза соединения 1, обеспечивающая максимальную эффективность у мышей, составляющая 50 мг/кг при пероральном введении один раз в день в течение 21 дня. Эта доза (непрерывное пероральное введение 50 мг/кг в течение 21 дня, ежедневно) эквивалентна рекомендованной дозе соединения 1 для людей при его отдельном введении.
[0111]
[Пример 1] Комбинированное действие (противоопухолевое действие) соли метансульфоновой кислоты соединения 1 и антитела против PD-1 мыши в модели трансплантации клеток рака толстой кишки
2
MC38 (клеточная линия рака толстой кишки мыши) получают от доктора Yoshihiro Hayakawa (University of Toyama, Toyama, Japan). MC38 культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (fetal bovine serum - FBS). MC38 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0112]
6
Суспензию клеток МС38 готовят в смеси (1:1) фосфатно-солевого буфера (PBS) и компонента внеклеточного матрикса Matrigel, и полученную суспензию, содержащую 1×10 клеток/0,1 мл, трансплантируют подкожно мышам C57BL/6NCrl (Charles River Laboratories Japan Inc.) возраста шести недель в область вокруг последнего правого ребра.
3
После этого опухоли дают возможность расти до достижения объема опухоли (tumor volume - TV) 100-200 мм. Размер опухоли определяют измерением бóльшей оси и меньшей оси опухоли с помощью электронно-цифрового штангенциркуля с последующим расчетом TV по следующей формуле:
3
TV (мм) = бóльшая ось (мм) × меньшая ось (мм) × меньшая ось (мм)/2
Животных делят на группы по 10 особей методом стратифицированного рандомизированного группирования, используя TV в качестве показателя. День разделения на группы (N = 10) обозначают как день 1.
[0113]
Для измерения массы тела животных используют электронные весы для животных. Процент изменения массы тела в день n (BWCn) n рассчитывают по массе тела в день 1 (BW1) и массе тела (BWn) в день n, используя следующую формулу:
Процент изменения массы тела BWCn (%) = (BWn - BW1)/BW1 × 100
[0114]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 5 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 50 мг/кг. Полученный раствор разбавляют растворителем с получением раствора для введения дозы 25 мг/кг и 12,5 мг/кг. Эти растворы вводят перорально как растворы соединения 1 один раз в день в дозах 12,5 мг/кг/день, 25 мг/кг/день или 50 мг/кг/день непрерывно в течение 21 дня.
Антитело против PD-1 мыши (anti-mPD-1 Ab) приготавливают разбавлением Anti-Mouse CD279 (PD-1) Functional Grade Purified (Clone:RMP-1-14, Affymetrix) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против PD-1 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,05 мг/особь в первый день (день 1) введения и на восьмой день с момента начала введения.
Лекарственные средства, представленные в таблице 1, вводят по схемам в дозах и в лекарственных формах, показанных в таблице 1 (группы №№ 1 - 8). Результаты представлены на фигуре 1 и таблице 1.
[0115]
[Таблица 1]
Группа
Схема
Доза
Способ введения
BWC<sub>22</sub> (%)
TV, день 22 (мм<sup>3</sup>)
No.
Лекарственное средство
День
СРЕДНЕЕ .ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
СРЕДНЕЕ .ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
Результат теста значимого различия
1
Растворитель/
q.d. 1-21
-
p.o./
-2,7±1,9
2447±154
-
PBS
1,8
i.p.
2
Растворитель/
q.d. 1-21
-/
p.o./
4,3±1,0
1217±250
*, #, *, †
Антитело против PD-1 мыши
1,8
0,05 мг/особь
i.p.
3
Соединение 1/
q.d. 1-21
12,5 мг/кг/
p.o./
6,1±0,7
1007±161
*, #
PBS
1,8
-
i.p.
4
Соединение 1/
q.d. 1-21
25 мг/кг/
p.o./
5,0±0,9
763±50
*, *
PBS
1,8
-
i.p.
5
Соединение 1/
q.d. 1-21
50 мг/кг/
p.o./
-0,3±0,9
437±62
*, †
PBS
1,8
-
i.p.
6
Соединение 1/
q.d. 1-21
12,5 мг/кг/
p.o./
2,2±0,6
409±82
*
антитело против PD-1 мыши
1,8
0,05 мг/особь
i.p.
7
Соединение 1/
q.d. 1-21
25 мг/кг/
p.o./
0,7±0,8
225 ±53
*
антитело против PD-1 мыши
1,8
0,05 мг/особь
i.p.
8
Соединение 1/
q.d. 1-21
50 мг/кг/
p.o./
0,1±1,0
205±43
*
антитело против PD-1 мыши
1,8
0,05 мг/особь
i.p.
q.d.: раз в день
*: p < 0.05 с критерием Даннета относительно группы № 1
p.o.: пероральное введение
#: p < 0,05 с t-критерием Стьюдента относительно группы № 6
i.p.: интраперитонеальное введение
*: p < 0,05 с t-критерием Стьюдента относительно группы № 7
†: p < 0,05 с t-критерием Стьюдента относительно группы № 8
[0116]
Тест Даннетта (уровень значимости 0,05) проводят для анализа TV у животных каждой группы в день 22. Группа с введением только антитела против PD-1 (№ 2), группы с введением только соединения 1 в разных дозах (№№ 3 - 5) и группы с совместным введением комбинации соединение 1 в разных дозах + антитело против PD-1 мыши (№№ 6 - 8) показывают значительно меньшие TV, чем контрольная группа (№ 1), что наглядно демонстрирует противоопухолевое действие. В t-тесте Стьюдента (уровень значимости 0,05) группы с введением комбинации соединение 1 + антитело против PD-1 мыши показывают значительно меньшие TV и более сильное противоопухолевое действие, чем группы с введением только соединения 1 или группа с введением только антитела против PD-1 мыши, независимо от дозы соединения 1.
22
22
Среднее значение BWC в группе совместного введения не значительно отличается от среднего значения BWC групп с единственным введением соединения 1 или группы с единственным введением антитела против PD-1 мыши, и совместное введение не вызывает повышения токсичности, независимо от дозы соединения 1.
Результаты показывают, что совместное введение соединения 1 или его соли и антитела против PD-1 вызывает значительно более высокий противоопухолевый эффект, чем при их отдельном введении.
[0117]
[Пример 2] Комбинированное действие (действие на макрофаг, связанный с опухолью) соли метансульфоновой кислоты соединения 1 и антитела против PD-1 мыши в модели трансплантации клеток рака толстой кишки
2
MC38 (клеточная линия рака толстой кишки мыши) получают от доктора Yoshihiro Hayakawa (University of Toyama, Toyama, Japan). MC38 культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% FBS. MC38 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0118]
6
Клеточную суспензию клеток MC38, содержащую 2×10 клеток/0,1 мл, трансплантируют подкожно мышам C57BL/6NJJcl (CLEA Japan, Inc.) возраста шести недель в область вокруг последнего правого ребра.
3
После этого опухоли дают возможность расти до достижения ею объема (TV) 50-300 мм. Размер опухоли определяют измерением бóльшей оси и меньшей оси опухоли с помощью электронно-цифрового штангенциркуля с последующим расчетом TV по следующей формуле:
3
TV (мм) = бóльшая ось(мм) × меньшая ось(мм) × меньшая ось(мм)/2
Животных делят на группы по 5 особей методом стратифицированного рандомизированного группирования, используя в качестве показателя TV. День разделения на группы (N = 5) обозначают как день 1.
[0119]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 2,5 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Затем соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 25 мг/кг.
Полученный раствор вводят перорально как раствор соединения 1 один раз в день в дозе 25 мг/кг/день непрерывно в течение 9 дней.
Антитело против PD-1 мыши (анти-mPD-1 Ab) приготавливают разбавлением Anti-Mouse CD279 (PD-1) Functional Grade Purified (Clone:RMP-1-14, Affymetrix) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против PD-1 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,05 мг/особь в первый день (день 1) введения.
[0120]
На 10 день (День 10) с момента начала введения опухоль отделяют и приготавливают суспензию опухоли с использованием метода обработки пищеварительным ферментом. Затем суспензию опухоли подвергают взаимодействию с магнитными шариками, содержащими иммобилизованное на них антитело против CD45 (антитело против CD45 мыши) (лейкоцитарный маркер) - антиген, обычно экспрессируемый на лейкоцитах, и пропускают через магнитную колонку для выделения лейкоцитов, инфильтрующих опухоль (tumor infiltrated leukocytes - TIL). Выделенные TIL подвергают взаимодействию с меченным флуоресценцией антителом против CD45, антителом против CD90.2 (Т-клеточным маркером), антителом против CD11b (маркером миелоидных лейкоцитов), антителом против Ly-6G (гранулоцитарным маркером клеток-супрессоров, полученных из костного мозга), анти-Ly-6C (моноцитарный маркер клеток-супрессоров, полученных из костного мозга) и антителом против F4/80 (маркер макрофагов) и фракцию макрофагов, связанных с опухолью, в TIL вычисляют методом флуоресцентной проточной цитометрии. Определение количества связанных с опухолью макрофагов и метод расчета доли связанных с опухолью макрофагов в TIL проводят следующим образом.
Макрофаг, связанный с опухолью: CD45 положительный, CD90.2 отрицательный, CD11 положительный, Ly6-G отрицательный, Ly-6C отрицательный и F4/80 положительный.
Фракция макрофагов, ассоциированных с опухолью (%) =
Количество макрофагов, связанных с опухолью ÷ Количество CD45 положительных клеток × 100
Лекарственные средства, представленные в Таблице 2, вводят по схемам в дозах и в лекарственных формах, показанных в таблице 2 (группы №№ 1 - 4). Результаты также представлены в таблице 2.
[0121]
[Таблица 2]
Группа
Схема введения
Доза
Способ введения
Фракция макрофага,ассоциированного с опухолью (%)
№
Лекарственное средство
День
СРЕДНЕ ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
Результат теста значимого различия
1
Необработанная
-
-
-
25,9±3,5
-
2
Антитело против PD-1 мыши
q.d. 1
0,05 мг/особь
i.p.
19,1±3,3
n.s.
3
Соединение 1
q.d. 1-9
25 мг/кг
p.o.
8,2±2,3
*
4
Соединение 1/
q.d. 1-9/
25 мг/кг/
p.o./
11,7±1,8
*
антитело против PD-1 мыши
1
0,05 мг/особь
i.p.
q.d.: раз в день
n.s.: p > 0,05 с критерием Даннета относительно группы № 1
p.o.: пероральное введение
*: p < 0,05 с критерием Даннета относительно группы № 1
i.p.: интраперитонеальное введение
[0122]
Тест Даннетта (уровень значимости 0,05) проводят для анализа фракции связанных с опухолью макрофагов для каждой группы. В группе с введением только соединения 1 (№ 3) и группе с совместным введением комбинации соединение 1 + антитело против PD мыши (№ 4) фракции макрофага, связанного с опухолью, значительно меньше, чем у контрольной группы (№ 1), что показывает эффект подавления макрофагов, связанных с опухолью. Группа с введением только антитела против PD-1 мыши (№ 2) не показывает значительного подавляющего эффекта в отношении макрофагов, связанных с опухолью.
Эти результаты подтверждают, что соединение 1 или его соли оказывают иммуностимулирующее действие при раке толстой кишки и проявляют такое же действие при комбинированном использовании соединения 1 или его солей с антителом против PD-1.
[0123]
[Пример 3] Комбинированное действие (противоопухолевое действие) трех средств - соли метансульфоновой кислоты соединения 1, антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши - в модели трансплантации клеток рака молочной железы
2
EMT6 (клеточная линия рака молочной железы мыши) получают из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection - ATCC). EMT6 культивируют в среде Waymouth's MB752/1, содержащей 15% FBS. EMT6 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0124]
4
Суспензию клеток EMT6 готовят в смеси (1:1) PBS и компонента внеклеточного матрикса Matrigel и трансплантируют полученную суспензию, содержащую 1×10 клеток/0,1 мл, подкожно мышам BALB/c (Charles River Laboratories Japan Inc.) возраста шести недель в область вокруг правого последнего ребра.
3
После этого опухоли дают возможность расти до достижения ею объема (TV) 50-200 мм. Размер опухоли определяют измерением большей оси и меньшей оси опухоли с помощью электронно-цифрового штангенциркуля с последующим расчетом TV по следующей формуле:
3
TV (мм) = бóльшая ось(мм) × меньшая ось(мм) × меньшая ось(мм)/2
Животных делят на группы по 15 особей методом стратифицированного рандомизированного группирования, используя в качестве показателя TV. День разделения на группы (N = 15) обозначают как день 1.
[0125]
Для измерения массы тела животных используют электронные весы для животных. Процент изменения массы тела (BWCn) в день n рассчитывают по методике, описанной в примере 1.
[0126]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 4,2 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Затем соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 42 мг/кг. Полученный раствор вводят перорально как соединение 1 один раз в день в дозе 42 мг/кг/день непрерывно в течение 14 дней.
Антитело против PD-1 мыши (анти-mPD-1 Ab) приготавливают разбавлением Anti-Mouse CD279 (PD-1) Functional Grade Purified (Clone:RMP-1-14, Affymetrix) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против PD-1 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,1 мг/особь в первый день (день 1) введения и на четвертый (день 4), восьмой (день 8) и одиннадцатый (день 11) день с момента начала введения.
Антитело против CTLA-4 мыши (анти-mCTLA-4 Ab) получают разбавлением In Vivo MAbAnti-Mouse CTLA-4(CD152)(Clone:9H10, Bio X Cell) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против CTLA-4 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,5 мг/особь в первый день (день 1) и через 4 дня (день 4), 8 дней (день 8) и 11 дней (день 11) после введения.
Лекарственные средства, представленные в Таблице 3, вводят по схемам в дозах и в лекарственных формах, показанных в таблице 3 (группы №№ 1 - 4). Результаты представлены на фигуре 2 и в таблице 3.
[0127]
[Таблица 3]
Группа
Доза
Схема введения
Способ введения
BWC<sub>15</sub> (%)
TV, день 15 (мм<sup>3</sup>)
№
Лекарственное средство
(день)
СР. ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
СР. ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
Результат теста значимого различия
1
Растворитель
-
q.d. 1-14
p.o.
7,4±1,4
1037±105
-
PBS
-
q.d. 1,4,8,11
i.p.
2
Соединение 1
42 мг/кг
q.d. 1-14
p.o.
3,2±1,0
312±29
*, #
PBS
-
q.d. 1,4,8,11
i.p.
3
Растворитель
-
q.d. 1-14
p.o.
9,4±1,1
705±106
*, #
Антитело против PD-1 мыши
0,1 мг/особь
q.d. 1,4,8,11
i.p.
Антитело против CTLA-4 мыши
0,5 мг/особь
q.d. 1,4,8,11
i.p.
4
Соединение 1
42 мг/кг
q.d. 1-14
p.o.
2,4±1,0
191±38
*
Антитело против PD-1 мыши
0,1 мг/особь
q.d. 1,4,8,11
i.p.
Антитело против CTLA-4 мыши
0,5 мг/особь
q.d. 1,4,8,11
i.p.
q.d.: один раз в день
*: p < 0,05 с критерием Даннета относительно группы № 1
p.o.: пероральное введение
#: p < 0,05 с t-критерием Стьюдента относительно группы № 4
i.p.: интраперитонеальное введение
[0128]
Тест Даннетта (уровень значимости 0,05) проводят для анализа TV у животных каждой группы в день 15. Группа с совместным введением антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши (№ 3), группа с введением только соединения 1 (№ 2) и группа совместного введения комбинации соединение 1 + антитело против PD-1 мыши + антитело против CTLA-4 мыши (№ 4) показывают значительно меньшие значения TV, чем контрольная группа (№ 1), что демонстрирует противоопухолевое действие. В t-тесте Стьюдента (уровень значимости 0,05) группа с совместным введением комбинации соединение 1 + антитело против PD-1 мыши + антитело против CTLA-4 мыши показывает значительно меньшее значение TV и более сильное противоопухолевое действие, чем группа с введением только соединения 1 или группа с введением комбинации антитело против PD-1 мыши + антитело против CTLA-4 мыши.
15
15
Среднее значение BWC в группе с совместным введением трех средств существенно не отличается от среднего значения BWCгруппы с введением соединения 1 или группы с совместным введением антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши. Было показано, что совместное введение трех агентов не вызывает повышения токсичности.
Результаты показывают, что совместное введение соединения 1 или его солей, антитела против PD-1 и антитела против CTLA-4 вызывает значительно более высокий противоопухолевый эффект, чем их отдельное введение.
[0129]
[Пример 4] Действие (действие на макрофаг, связанный с опухолью) соли метансульфоновой кислоты соединения 1 и действие совместного введения двух средств: антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши - в модели трансплантации клеток рака молочной железы
2
EMT6 (клеточная линия рака молочной железы мыши) получают из ATCC. EMT6 культивируют в среде Waymouth's MB752/1, содержащей 15% FBS. EMT6 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0130]
4
Суспензию клеток EMT6 готовят в смеси (1:1) PBS и компонента внеклеточного матрикса Matrigel и транспортируют полученную суспензию, содержащую 1×10 клеток/0,1 мл, подкожно мышам BALB/c (Charles River Laboratories Japan Inc.) возраста шести недель в область вокруг правого последнего ребра.
Через 4 дня после трансплантации животных делят на группы по 5 особей с использованием метода стратифицированного рандомизированного группирования, используя в качестве показателя массу тела. День разделения на группы (N = 5) обозначают как день 1.
[0131]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 4,2 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Затем соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 42 мг/кг. Полученный раствор вводят перорально как соединение 1 один раз в день в дозе 42 мг/кг/день непрерывно в течение 6 дней.
Антитело против PD-1 мыши (анти-mPD-1 Ab) приготавливают разбавлением Anti-Mouse CD279 (PD-1) Functional Grade Purified (Clone:RMP-1-14, Affymetrix) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против PD-1 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,1 мг/особь в первый день (день 1) и четвертый день (день 4) с момента начала введения.
Антитело против CTLA-4 мыши (anti-mCTLA-4 Ab) получают разбавлением In Vivo MAbAnti-Mouse CTLA-4(CD152)(Clone:9H10, Bio X Cell) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против CTLA-4 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,5 мг/особь в первый день (день 1) и ччетвертый день (день 4) с момента начала введения.
[0132]
На седьмой день (день 7) с момента начала введения опухоль отделяли и приготавливают суспензию опухоли с использованием метода обработки пищеварительным ферментом. Затем суспензию опухоли подвергают взаимодействию с магнитными шариками, содержащими иммобилизованное на них антитело против CD45 (антитело против CD45 мыши), которое обычно экспрессируется на лейкоцитах, и пропускают через магнитную колонку для выделения TIL. Выделенные TIL подвергают взаимодействию с меченным флуоресценцией антителом против CD45, антителом против CD90.2, антителом против CD11b, антителом против Ly-6G, антителом против Ly-6C и антителом против F4/80, и фракцию макрофагов, ассоциированных с опухолью, в TIL вычисляют методом флуоресцентной проточной цитометрии. Определение количества связанных с опухолью макрофагов и расчет фракции связанных с опухолью макрофагов в TIL проводят следующим образом.
Связанный с опухолью макрофаг: CD45 положительный, CD90.2 отрицательный, CD11 положительный, Ly6-G отрицательный, Ly-6C отрицательный и F4/80 положительный
Фракция макрофагов, ассоциированных с опухолью (%) =
Количество макрофагов, связанных с опухолью ÷ Количество CD45 положительных клеток × 100
Лекарственные средства, представленные в таблице 4, вводят по схемам в дозах и в лекарственных формах, показанных в таблице 4 (группы №№ 1 - 3). Результаты также представлены в таблице 4.
[0133]
[Таблица 4]
Группа
Схема введения
Доза
Способ введения
Фракция макрофага, ассоциированного с опухолью (%)
№
Лекарственное средство
(день)
СРЕДНЕЕ. ЗНАЧЕНИЕ ± S.E.
Результат теста значимого различия
1
Необработанная
-
-
-
41.4±6.4
-
2
Соединение 1
q.d. 1-6
42 мг/кг
p.o.
20.3±4.8
*
3
Антитело против PD-1 мыши/
q.d. 1-4/
0,.1 мг/особь/
i.p./
35.7±4.5
n.s.
Антитело против CTLA-4 мыши
q.d. 1-4
0,5 мг/кг/особь
i.p.
q.d.: раз в день
n.s.: p > 0,05 с критерием Даннета относительно группы № 1
p.o.: пероральное введение
*: p < 0,05 с критерием Даннета относительно группы № 1
i.p.: интраперитонеальное введение
[0134]
Тест Даннетта (уровень значимости 0,05) проводят для анализа фракции макрофагов, связанных с опухолью, для каждой группы. В группе с введением только соединения 1 (№ 2) фракция связанных с опухолью макрофагов значительно меньше фракции связанных с опухолью макрофагов контрольной группы (№ 1), что показывает эффект подавления макрофагов, связанных с опухолью. Группа с совместным введением антитела против PD-1 мыши и антитела против CTLA-4 мыши (№ 3) не показывает значительного подавляющего эффекта в отношении макрофагов, связанных с опухолью.
Представленные результаты показывают, что соединение 1 или его соли оказывают иммуностимулирующее действие при раке молочной железы.
[0135]
[Пример 5] Комбинированное действие (противоопухолевое действие) соли метансульфоновой кислоты соединения 1 и антитела против PD-1 мыши в модели трансплантации клеток рака молочной железы
2
EMT6 (клеточная линия рака молочной железы мыши) получают из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection - ATCC). EMT6 культивируют в среде Waymouth's MB752/1, содержащей 15% FBS. EMT6 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0136]
4
Суспензию клеток EMT6 готовят в смеси (1:1) PBS и компонента внеклеточного матрикса Matrigel и трансплантируют полученную суспензию, содержащую 1×10 клеток/0,1 мл, подкожно мышам BALB/c (Charles River Laboratories Japan Inc.) возраста шести недель в область вокруг правого последнего ребра.
3
После этого опухоли дают возможность расти до достижения ею объема (TV) 50-200 мм. Размер опухоли определяют измерением бóльшей оси и меньшей оси опухоли с помощью электронно-цифрового штангенциркуля с последующим расчетом TV по следующей формуле:
3
TV (мм) = бóльшая ось(мм) × меньшая ось(мм) × меньшая ось(мм)/2
Животных делят на группы по 15 особей с использованием метода стратифицированного рандомизированного группирования, используя в качестве показателя TV. Первый день разделения на группы (N = 15) обозначают как день 1.
[0137]
Для измерения массы тела животных используют электронные весы для животных. Процент изменения массы тела (BWCn) в день n рассчитывают в соответствии с методикой, описанной в примере 1.
[0138]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 4,2 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Затем соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 42 мг/кг. Полученный раствор вводят перорально как растворы соединения 1 один раз в день в дозе 42 мг/кг/день непрерывно в течение 14 дней.
Антитело против PD-1 мыши (anti-mPD-1 Ab) приготавливают разбавлением Anti-Mouse CD279 (PD-1) Functional Grade Purified (Clone:RMP-1-14, Affymetrix) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против PD-1 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,1 мг/особь в первый день (день 1), четвертый день (день 4), восьмой день (день 8) и одиннадцатый день (день 11) с момента начала введения.
[0139]
[Пример 6] Комбинированное действие (противоопухолевое действие) соли метансульфоновой кислоты соединения 1 и антитела против CTLA-4 мыши в модели трансплантации клеток рака молочной железы
2
EMT6 (клеточная линия рака молочной железы мыши) получают из Американской коллекции типовых культур (ATCC). EMT6 культивируют в среде Waymouth's MB752/1, содержащей 15% FBS. EMT6 субкультивируют в инкубаторе при 37°C и 5% CO в соотношении от 1:3 до 1:5 один-два раза в неделю.
[0140]
4
Суспензию клеток EMT6 готовят в смеси (1:1) PBS и компонента внеклеточного матрикса Matrigel и трансплантируют полученную суспензию, содержащую 1×10 клеток/0,1 мл, подкожно мышам BALB/c (Charles River Laboratories Japan Inc.) возраста шести недель в область вокруг правого последнего ребра.
3
После этого опухоли дают возможность расти до достижения ею объема (TV) 50-200 мм. Размер опухоли определяют измерением бóльшей оси и меньшей оси опухоли с помощью электронно-цифрового штангенциркуля с последующим расчетом TV по следующей формуле:
3
TV (мм) = бóльшая ось(мм) × меньшая ось(мм) × меньшая ось(мм)/2
Животных делят на группы по 15 особей методом стратифицированного рандомизированного группирования, используя TV в качестве показателя. День разделения на группы (N = 15) обозначают как день 1.
[0141]
Для измерения массы тела животных используют электронные весы для животных. Процент изменения массы тела (BWCn) в день n рассчитывают в соответствии с методикой, описанной в примере 1.
[0142]
Соль метансульфоновой кислоты соединения 1 растирают в агатовой ступке и готовят раствор с концентрацией 4,2 мг/мл в пересчете на свободную форму с использованием растворителя. Затем соединение растворяют с помощью ультразвука с получением раствора для введения дозы 42 мг/кг. Полученный раствор вводят перорально как соединение 1 один раз в день в дозе 42 мг/кг/день непрерывно в течение 14 дней.
Антитело против CTLA-4 мыши (анти-mCTLA-4 Ab) получают разбавлением In Vivo MAbAnti-Mouse CTLA-4(CD152)(Clone:9H10, Bio X Cell) PBS таким образом, чтобы получить заданную концентрацию антитела непосредственно перед введением. Антитело против CTLA-4 мыши вводят интраперитонеально в дозе 0,5 мг/особь в первый день (день 1), четвертый день (день 4), восьмой день (день 8) и одиннадцатый день (день 11) с момента начала введения.
[0143]
Хотя настоящее изобретение было описано подробно и со ссылкой на определенные варианты осуществления изобретения, для специалиста в данной области техники будет очевидно, что в описание могут быть внесены различные изменения и модификации без выделения их из сущности и объема изобретения. Эта патентная заявка основана на японской патентной заявке № 2017-173352, поданной 8 сентября 2017 г., полное содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.