FGF-R-FC СЛИТЫЙ БЕЛОК И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

1. Слитый белок рецептора выделенного растворимого фактора роста фибробластов (FGFR), слитый белок, содержащий: участок области промежуточной функциональной последовательности, полученный из Ig-подобного домена FGFR (IFS), 2-й Ig-подобный домен FGFR (D2) 3-й Ig-подобный домен FGFR (D3), и область Fc иммуноглобулина.
2. Слитый белок по п. 1 в естественных условиях и/или в пробирке фактор роста фибробластов (FGF) предпочтительно связывается с FGF2.
3. Слитый белок по п. 1, отличающийся тем, что фрагмент, полученный из IFS, содержит или не содержит кислую коробку (AB), фрагмент IFS предпочтительно не содержит кислой ячейки.
4. Слитый белок по п. 1, где указанный фрагмент, полученный из IFS, содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, №134-162, №145-162 или №151-162.
5. Слитый белок по п. 1, также содержит 1-й Ig-подобный домен FGFR (D1) или его часть.
6. Слитый белок по п. 5, отличающийся тем, что 1-й Ig-подобный домен FGFR или его часть, имеет:
аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, №40-118, или аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 1 №40-118; или аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1 №77-118, или аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 1 №77-118.
7. Слитый белок по п. 1, в котором
указанный домен содержит: аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1 №163-247, или аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 1 №163-247; и/или
указанный домен D3 содержит: аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1 №270-359, или аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%,93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 1 № 270-359.
8. Слитый белок по п. 1, в котором указанная область иммуноглобулина является Fc областью человеческого иммуноглобулина IgG, предпочтительно областью человеческого иммуноглобулина IgG1, предпочтительно имеющий:
аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, или аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 7; или
аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 8, или аминокислотную последовательность по крайней мере идентичность которой 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью, кодируемой нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 8.
9. Слитый белок по п. 1, включающий в себя участки, домен и/или его часть, которые непосредственно подключены друг с другом или через линкер.
10 Слитый белок по п. 1, включающий в себя фрагмент, полученный из внеклеточной области FGFR, фрагмент, полученный из Fc области иммуноглобулина, где фрагмент, полученный из внеклеточной области FGFR:
(1) имеет любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 9 №358-580, SEQ ID NO: 10 №304-526, SEQ ID NO: 11 №278-500, SEQ ID NO: 12 №246-468, SEQ ID NO: 13 №235-457, SEQ I D NO: 14 №229-451, SEQ ID NO: 15 №224-446, или любую аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью из SEQ ID NO: 16 №1074-1740, SEQ ID NO: 17 №912-1578, SEQ ID NO: 18 №834-1500, SEQ ID NO: 19 №738-1404, SEQ ID NO: 20 №705-1371, SEQ ID NO: 21 №687-1353, SEQ ID NO: 22 №672-1338;
(2) имеет аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 9 №358-580, SEQ ID NO: 10 №304-526, SEQ ID NO: 11 №278-500, SEQ ID NO: 12 №246-468, SEQ ID NO: 13 №235-457, SEQ ID NO: 14 №229-451 SEQ ID NO: 15 №224-446, или состоит из них; или
(3) аминокислотную последовательность, по крайней мере идентичность которой 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью, кодируемой нуклеотидной последовательностью из SEQ ID NO: 16 №1074-1740, SEQ ID NO: 17 №912-1578, SEQ ID NO: 18 №834-1500, SEQ ID NO: 19 №738-1404, SEQ ID NO: 20 №705-1371, SEQ ID NO: 21 №687-1353 и SEQ ID NO: 22 №672-1338.
11. Слитый белок Fc по п. 1, указанный белок:
(1) имеет любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 9-15 или состоит из них, или аминокислотную последовательность, кодируемую любой нуклеотидной последовательностью из SEQ ID NO: 9-15;
(2) или имеет аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 9-15; или
(3) имеет аминокислотную последовательность, по крайней мере идентичность которой 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 93%, 95%, 97%, 98% или 99% с любой аминокислотной последовательностью, кодируемой нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 16-22.
12. Слитый белок по п. 1 в пробирке и/или в естественных условиях связывания FGF предпочтительно связывается с FGF2.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок по любому из предшествующих пунктов.
14. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 13, которая содержит любую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 16-22.
15. Векторы, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты по п. 13 или 14.
16. Клетки, предпочтительно СНО клетки, трансфицированные указанными векторами по п. 15.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая слитый белок по любому из пп. 1-12, молекулу нуклеиновой кислоты п. 13 или 14, вектор по п. 15 или клетки по п. 16, фармацевтические векторы.
18. Способ получения слитого белка, ингибирующего развитие кровеносных сосудов, отличающийся тем, что указанный слитный белок может быть получен с использованием клеточных линий в прокариотических клетках или эукариотических клетках, экспрессирующих слитый белок по любому из пп. 1-12 настоящего изобретения, указанные клеточные линии предпочтительно представляют собой клеточные линии млекопитающих.
19. Слитый белок по любому из предшествующих пп. 1-12, молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 23 или 24, вектор по п. 15, клетку по п. 15 или фармацевтическую композицию п. 17 использовали в приготовлении новых лекарственных средств, предназначенных для ингибирования ангиогенеза млекопитающего.
20. Слитый белок по любому из предшествующих пп. 1-12, молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 13 или 14, вектор по п. 15, клетку по п. 16 или фармацевтическую композицию п. 17 использовали в приготовлении новых лекарственных средств, предназначенных для лечения или профилактики опухолей, например, указанные опухоли являются солидными опухолями, лечение или профилактика опухолей предпочтительно осуществляется путем ингибирования ангиогенеза или непосредственного ингибирования роста опухолевых клеток.
21. Способ ингибирования ангиогенеза, включая применение слитого белка по п. 1-12, молекулы нуклеиновых кислот по п. 13 или 14, векторов по п. 15, клеток по 16 и/или фармацевтической композиции по 17 эффективного количества по настоящему изобретению у объектов, требующих применения лекарств.
22. Способ лечения или профилактики опухолей, включая применение слитого белка по пп. 1-12, молекулы нуклеиновых кислот по п. 13 или 14, векторов по п. 15, клеток по п.16 и/или фармацевтической композиции по п.17 эффективного количества по настоящему изобретению у объектов, требующих применения лекарств, например, указанные опухоли являются солидными опухолями, лечение или профилактика опухолей предпочтительно осуществляется путем ингибирования ангиогенеза или непосредственного ингибирования роста опухолевых клеток.
23. Способ слияния FGF в пробирке или в естественных условиях, включая взаимодействие FGF со слитым белком по настоящему изобретению.