КОМПОЗИЦИИ ЛИНЕЗОЛИДА
LINEZOLID COMPOSITIONS

Перекрестная ссылка на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивает приоритет в соответствии с заявкой на патент США №62/58701, поданной 16 ноября 2017 г. и озаглавленной “Linezolid formulations”; содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки полностью.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к композициям линезолида, способам и продуктам, используемым для лечения хронической боли в области поясницы. В одном из аспектов изобретения, композиция линезолида включает суспензию линезолида формы II, йогексол и полоксамер 407 и является инъецируемой.
Уровень техники
et al
Eur. Spine J.
Хроническая боль в пояснице (CLBP) распространена среди населения всего мира. Анализ методом МРТ показал положительную ассоциацию между изменениями по типу Модик (отек костной ткани) и неспецифической болью в области поясницы со средним отношением шансов (OR), составляющим 4,5. Jensen и соавт. показали, что распространенность для любых типов изменений по типу Модик (например, типы I-III) у пациентов с неспецифической CLBP составила 46% по сравнению с 6% в общей совокупности населения (Jensen .,  2008, 17:1407-1422).
Propionibacterium acnes
P. acnes
et al.
Lancet,
Spine J.
Eur Spine J.,
PLoS One
PLos One
P. acnes
., Eur Spine J.
P. acnes
Biomed Res Int
Int Orthop
J Orthop Res
P. acnes
Orthop Traumatol Surg Res
Spine
P. acnes
et. al
Изменения по типу Модик, характеризуемые отеком (или воспалением) в позвонках, вероятно, вызваны хронической инфекцией ткани диска, где повреждение диска/концевой пластинки и длительное присутствие воспалительного раздражителя создают предрасполагающие условия. Было показано, что  () внутри непиогенных межпозвоночных дисков является одним из патогенов, вызывающим изменения по типу Модик (например, типа I) и неспецифическую боль в пояснице (Stirling 2001, 357:2024-2025; Agarwal et al. 2010, 10: S45-S46; Albert et al.,  2013, 22(4): 690-696; Capoor et al., , 2016, 11(8):e0161676. doi: 10.1371; и Capoor et al., , 2017, 12(4): e0174518.doi:10.1371). Клетки межпозвоночного диска могут демонстрировать воспалительный ответ на инфекцию  (Dudli et al, 2017, Sep 7. doi: 10.1007/s00586-017-5291-4). Выделенная у пациента, ассоциированная с изменениями по типу Модик и дегенерацией межпозвоночного диска, при инокуляции в межпозвонковые диски, может вызывать воспалительную реакцию, дегенерацию межпозвоночного диска и изменения по типу Модик (Chen et al., . 2016: 9612437. doi: 10.1155/2016/9612437. Epub 2016 Jan 26; и Chen et al., . 2016, 40(6):1291-1298.; и Dudli et al., . 2016, 34(8):1447-1455). Исследования, проведенные на животных, также показывают, что инфекция  межпозвоночного диска может вызывать дегенерацию межпозвоночного диска и изменения по типу Модик (Zamora et al., ., 2017, 103(5): 795-799; Shan et al., , 2017, Apr 10. doi: 10.1097/BRS.0000000000002192; и Shan et al, J Bone Joint Am., 2017, 99(6): 472-481). Штаммы , ассоциированные с инфекциями тканей, также экспрессируют ферменты, разрушающие гиалуроновую кислоту, что может способствовать дегенерации межпозвоночного диска. (Nazipi ., Microorganisms. 2017 Sep 12;5(3). pii: E57. doi: 10.3390/microorganisms5030057).
P. acnes
Eur Spine J.,
Предполагается, что анаэробные бактерии (например, ) из полости рта и кожи могут получить доступ к межпозвонковым дискам. Местное воспаление прилегающей кости может быть вторичным эффектом вследствие продукции цитокинов и пропионовой кислоты, причем инфекция находится в межпозвонковом диске, а изменения по типу Модик являются “побочным эффектом”, проявляющимся в кости (Albert et al.,  2013, 22(4): 690-696).
Br. J. Sports Med.
Eur Spine J.
Антибиотикотерапия может быть эффективной при лечении CLBP, ассоциированной с изменениями по типу Модик. Несколько исследований показали, что пероральное введение антибиотиков, таких как амоксициллин-клавуланат, может иметь клинически значимое и статистически значимое (р<0,001) улучшение всех показателей эффективности у пациентов с хронической LBP. (Albert et al., 2008, 42(12): 969-973; и Albert et al.  2013, 22(4): 697-707). Эти результаты подтвердили гипотезу о том, что бактериальная инфекция может играть некоторую роль в CLBP с именениями по типу Модик.
P. acnes
Хотя некоторые нехирургические способы лечения, включая внутридисковые инъекции стероидов, анти-TNF-α-антител и бисфосфонатов, продемонстрировали некоторую кратковременную эффективность в недублированных клинических исследованиях по снижению изменений по типу Модик и CLBP, ни один из этих способов не является успешным и они дают противоречивые результаты. Соответственно, в данной области существует потребность в способах лечения, облегчения, предотвращения и/или уменьшения боли, которая, сопутствует заболеваниям, состояниям или нарушениям костей, суставов, связок и/или сухожилий, в частности тем, которые ассоциированы с изменениями по типу Модик или отеком костной ткани. Настоящее изобретение относится к композициям линезолида, удовлетворяющим этой потребности. Линезолид представляет собой антибиотик, используемый для лечения инфекций, вызванных грамположительными бактериями, устойчивыми к другим антибиотикам. Клинические изоляты , устойчивые к линезолиду (минимальная ингибирующая концентрация (MIC) >4 мкг/мл), не были широко представлены. Композиции линезолида обеспечивают эффективную доставку линезолида в пораженный межпозвоночный диск и позвонки, соответственно, повышают эффективность лечения изменений по типу Модик и CLBP.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к инъецируемым композициям, подходящим для доставки линезолида в инфицированные участки позвоночника для лечения, предотвращения, уменьшения и/или ослабления одного или нескольких типов боли или фенотипических проявлений, сопутствующих клиническому состоянию костей, суставов, связок или сухожилий. Также предусмотрены наборы, упаковки, а также способы их изготовления и применения.
in situ
В соответствии с настоящим изобретением, композициям линезолида придают форму суспензий, которые образуют гидрогели  в ответ на нагревающую температуру тела. Композиция по настоящему изобретению является термочувствительной и инъецируемой.
В некоторых вариантах осуществления, композиция по настоящему изобретению содержит эффективное количество линезолида. В некоторых аспектах, линезолид представляет собой линезолид формы II, который получают в виде суспензии частиц в композиции. Линезолид может быть помещен в носитель для доставки (то есть гидрогель) с образованием суспензии, содержащей от около 1% до около 20% или предпочтительно от около 2,5% до около 20% по массе или по объему конечной композиции. В некоторых примерах, композиция суспензии может содержать около 25 мг/мл, около 30 мг/мл, около 35 мг/мл, около 40 мг/мл, около 45 мг/мл, около 50 мг/мл, около 55 мг/мл, около 60 мг/мл, около 65 мг/мл, около 70 мг/мл, около 75 мг/мл, около 80 мг/мл, около 85 мг/мл, около 90 мг/мл, около 95 мг/мл, около 100 мг/мл, около 150 мг/мл или около 200 мг/мл линезолида.
В некоторых вариантах осуществления, композиция линезолида по настоящему изобретению содержит полоксамер в качестве носителя для доставки, который образует гидрогель в ответ на повышение температуры. В некоторых аспектах, полоксамер представляет собой полоксамер 407. Композиция линезолида по настоящему изобретению может содержать полоксамер 407 в количестве около 9,5-17% по массе композиции или около от 9,5 до 14,5 по массе композиции или от около 10,5% до около 13,5% по массе композиции или в концентрации от около 115 мг/мл до около 207 мг/мл в композиции или в концентрации от около 130 мг/мл до около 165 мг/мл в композиции. Предпочтительно композиция линезолида может содержать полоксамер 407 в количестве от около 10,8% до около 12,8% по массе композиции или в концентрации от около 130 мг/мл до 156 мг/мл в композиции.
В некоторых вариантах осуществления, композиция линезолида по настоящему изобретению содержит рентгеноконтрастный краситель. В некоторых аспектах, вещество представляет собой йогексол. Композиция линезолида может содержать йогексол в количестве от около 14 до около 59% по массе композиции, или от около 14 до около 40% по массе композиции, или в концентрации от около 165 мг/мл до около 718 мг/мл в композиции, или в концентрации от около 200 до около 450 мг/мл в композиции. Предпочтительно композиция линезолида может содержать йогексол в количестве от около 17% до около 30% по массе композиции, или в концентрации от около 206 до 364 мг/мл в композиции.
В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция линезолида содержит линезолид формы II в количестве от около 2,5% до около 20% по массе или по объему конечной композиции, и средство доставки (также известное как разбавитель), содержащее полоксамер 407 в количестве от около 10,8% до около 12,8% по массе композиции, и йогексол в количестве от около 17% до около 30% по массе композиции. Композиция представляет собой суспензию линезолида. Композиция линезолида является инъецируемой и имеет температуру золь-гель перехода в диапазоне от около 26°C до около 36°C.
Композиции по настоящему изобретению могут применяться к субъекту, нуждающемуся в лечении межпозвоночного диска в поясничной области и/или прилегающих позвонков, связок, мышц, сухожилий и суставов, причем применение осуществляется посредством открытого оперативного вмешательства или инъекции, или посредством микрохирургической или чрескожной процедуры.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к способам изготовления и применения композиций линезолида. В некоторых примерах, композиция линезолида может быть упакована по отдельности, включая дозу порошков линезолида и раствор носителя для доставки, содержащий полоксамер 407 и йогексол с оптимизированным соотношением концентраций. Суспензия может быть получена путем смешивания линезолида и носителя с полоксамером перед введением. Настоящее изобретение также включает набор, содержащий настоящие композиции, носители и шприц и/или иглу для введения стерильной инъецируемой композиции.
Краткое описание чертежей
На фигуре 1А показано распределение частиц линезолида (форма II) по размеру после микронизации. На фигуре 1В представлены типичные изображения линезолида формы II до и после микронизации.
Фигура 2 представляет собой изображение, на котором показаны иглы, расположенные в соседних межпозвонковых дисках, и 0,1 мл инъецированной композиции, содержащей йогексол. Положение инъецируемой композиции можно наблюдать с помощью рентгенографии или рентгеноскопии.
Фигура 3 демонстрирует количество линезолида, извлеченного из овечьего межпозвоночного диска после внутридискового введения. Каждая точка показывает среднее значение и стандартную ошибку среднего на 3-4 дисках.
На фигуре 4 показаны бактерии, выделенные из дисков, обработанных линезолидом, по сравнению с необработанными дисками.
На фигуре 5 показана способность суспензии линезолида проходить через иглу при введении (PP353) через предварительно нагретый батат.
На фигуре 6 представлена фармакокинетика линезолида у овец, которым вводили суспензии линезолида РР353. Ось Y соответствует концентрации линезолида в плазме в нг/мл. Ось X соответствует времени в часах.
Подробное описание изобретения
Вышеизложенное достаточно широко описало признаки и технические преимущества настоящего изобретения для того, чтобы можно было лучше понять следующее подробное описание изобретения. Далее будут описаны дополнительные признаки и преимущества по изобретению, которые относятся к заявленному объекту по изобретению. Специалистам в данной области должно быть понятно, что описанная концепция и конкретный вариант осуществления могут быть легко использованы в качестве основы для модификации или разработки других структур для достижения тех же самых целей по настоящему изобретению. Специалистам в данной области также должно быть понятно, что такие эквивалентные конструкции не выходят за пределы сущности и объема изобретения, изложенных в прилагаемой формуле изобретения. Новые признаки, которые, как полагают, являются отличительными для изобретения, как в отношении его организации, так и способа осуществления, а также другие цели и преимущества будут лучше понятны из следующего описания при рассмотрении в связи с прилагаемыми чертежами. Однако следует ясно понимать, что каждый из чертежей представлен только с целью иллюстрации и описания, но не предназначен в качестве определения объема настоящего изобретения.
Настоящее изобретение основано на открытиях в исследованиях на человеке того, что хроническая боль в пояснице (CLBP) часто ассоциируется с изменениями по типу Модик и образованием грыжи межпозвоночного диска, при которых наблюдается бактериальная инфекция. Соответственно, разработаны фармацевтические составы и композиции, содержащие антибиотики против бактериальных инфекций, которые вызывают изменения по типу Модик и CLBP. Эти композиции и способы можно использовать для лечения, предотвращения, ослабления и/или уменьшения одного или нескольких типов боли или фенотипического проявления, которые, как установлено, сопутствуют заболеваниям, состояниям или нарушениям костей, суставов, связок и/или сухожилий, в частности в случае, когда существует ассоциация с изменениями по типу Модик или отеком костной ткани, вызванными бактериальной инфекцией.
Типы боли могут включать, но ими не ограничиваясь, острую боль, подострую боль, хроническую или постоянную боль, локальную боль, корешковую боль, гетеротопическую боль, соматическую боль, иррадиирующую боль, невропатическую боль, воспалительную боль и боль смешанного типа или неспецифического происхождения. Боль может присутствовать в различных частях организма, включая конечности, мышцы, кожу, суставы, глубоколежащие ткани или органы или позвоночник (включая шейный, грудной, поясничный или крестцовый отдел позвоночника).
Фенотипические проявления, определяемые как любое физическое проявление, воспринимаемое или испытываемое субъектом, могут включать, но не ограничиваясь каким-либо типом боли в целом, нарушение сна ночью из-за боли, боль во время пробы Вальсальвы, боль во время активного сгибания поясничного отдела позвоночника, боль во время активного разгибания поясничного отдела позвоночника, положительный тест на черепную компрессию, боль во время прыгающего теста, затруднение переворачивания в постели, затруднение подъема со стула, затруднение подъема по лестнице, затруднение сгибания или вставания на колени и затруднение находиться в положении стоя или ходить в течение длительного времени.
Заболевания, состояния или нарушения костей, суставов, связок и/или сухожилий, которые сопутствуют боли, включают, но ими не ограничиваются: изменения по типу Модик, отек костной ткани, грыжу межпозвоночного диска в поясничном отделе, тендинит, разрыв сухожилия, воспаление связок, разрыв связок, разрыв лобкового симфиза, синдром тазового пояса и болезнь Шейерманна.
Боль или фенотипическое проявление могут быть (1) вызваны заболеванием, состоянием или расстройством, (2) возникать одновременно с заболеванием, состоянием или расстройством, (3) присутствовать на участке или рядом с участком болезненного состояния или расстройства, или (4) любым сочетанием вышеуказанных пунктов. Примеры заболеваний, которые вызывают боль в пояснице (LBP), включают артрит, диффузный идиопатический скелетный гиперостоз (DISH или болезнь Форестье), ишиас, дегенеративное заболевание межпозвонковых дисков, стеноз поясничного отдела позвоночника, спондилолистез, грыжа межпозвоночного диска, сколиоз, радикулопатия, суставная дисфункция, кокцигодиния, эндометриоз и остеопороз.
in situ
Настоящее изобретение относится к составам и композициям линезолида, которые обеспечивают локальную доставку эффективного количества линезолида в пораженный участок/участки или области, расположенные в непосредственной близости от участка(участков), которые необходимо лечить. Линезолид объединяют в составе композиции с термочувствительными полоксамерными носителями, которые образуют разлагающиеся гели в ответ на изменения температуры. Эти термочувствительные носители, которые представляют собой водные растворы при комнатной температуре, образуют гель  при температуре тела и высвобождают переносимый линезолид к целевому участку(участкам). Свойство гелеобразования композиции могло бы предотвращать утечку активных лекарственных веществ из мест, подвергаемых лечению посредством инъекции, соответственно, увеличивая количество активных лекарственных веществ в целевых участках.
I. Композиции линезолида
Фармацевтические составы и композиции по настоящему изобретению содержат линезолид в качестве активного фармацевтического ингредиента (API) в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или наполнителями для лечения, предотвращения, ослабления или уменьшения боли. Составы и композиции линезолида по настоящему изобретению могут необязательно содержать одно или несколько дополнительных активных веществ, например, терапевтически и/или профилактически активные вещества. В некоторых примерах, композиции могут содержать, по меньшей мере, другое противовоспалительное средство или другое противоинфекционное средство или тому подобное.
В частности, композиции линезолида могут применяться для введения антибиотических композиций, как описано в настоящем документе, в пораженный участок (или участки) для лечения, профилактики, ослабления или уменьшения боли в пояснице и одновременного устранения бактериальной инфекции в позвонке шейного, грудного, поясничного или крестцового отдела позвоночника.
Описанные в настоящем документе композиции могут быть получены любым способом, известным или разработанным в будущем в области фармакологии. Общие принципы получения и/или производства фармацевтических препаратов можно найти, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (содержание которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки). Как правило, такие способы получения включают стадию объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом, разбавителем и/или одним или несколькими другими вспомогательными ингредиентами, а затем, при необходимости и/или если желательно, разделение, формование и/или упаковка продукта в желаемый однодозовый или многодозовый контейнер.
Фармацевтическая композиция в соответствии с изобретением может быть получена, упакована и/или продана в нефасованном виде, в виде единичной стандартной дозы и/или в виде множества единичных стандартных доз. В контексте настоящего документа, “стандартная доза” представляет собой дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента, обычно, соответствует дозе активного ингредиента, которую вводят субъекту, и/или удобной фракции такой дозы, такой как, например, половина или одна треть такой дозы.
Композиция линезолида по настоящему изобретению может содержать терапевтически эффективное количество линезолида, объединенного в составе препарата с носителем для доставки, который включает термочувствительный полоксамерный гидрогель и неионное контрастное вещество йогексол. Средство доставки, содержащее полоксамер и йогексол, представляет собой водный раствор при температуре ниже 26°С и гели при более высокой температуре, например ближе к температуре тела. В композицию также могут необязательно добавляться одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Относительные количества активного ингредиента (то есть линезолида), фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с изобретением будут изменяться в зависимости от индивидуальных характеристик, размера и/или состояния подвергаемого лечению субъекта, а также в зависимости от способа введения композиции.
Композиция может быть инъецируемой. Инъецируемые фармацевтические композиции получены для инъекции в анатомическую структуру субъекта, включая, но ими не ограничиваясь, межпозвоночный диск, межпозвоночное пространство, внутрисуставное пространство, связки, сухожилие, соединение сухожилия и кости, сустав, эпидуральное пространство, фасеточный сустав, участок, прилегающий к отеку костной ткани, или другие отделы позвоночника. В одном предпочтительном варианте осуществления, инъецируемую композицию линезолида можно применять для доставки API в межпозвоночный диск и/или пространство межпозвоночного диска. Инъецируемые композиции содержат, по меньшей мере, один полимер, который образует раствор кроме гелей при температуре тела. Термочувствительные гидрогели переносят включенные антибиотики к участку инъекции, где антибиотик эффективен против инфекций. Гелеобразующая композиция по настоящему изобретению может оставаться достаточно долго на месте, подвергаемом лечению посредством инъекции, для того, чтобы антибиотик мог диффундировать в ткань межпозвоночного диска и избежать утечки антибиотиков из места, подвергаемого лечению посредством инъекции. Это свойство, в частности, эффективно в пораженных дисках, где достаточно жидкий препарат может быстро вытечь из межпозвоночного диска после извлечения инъекционной иглы.
В некоторых вариантах осуществления, составы и композиции линезолида вводят человеку, пациенту-человеку или субъектам, не относящимся к человеку. Например, композицию можно вводить пациентам с болью в пояснице или пациентам с риском развития боли в пояснице. В некоторых вариантах осуществления, субъект, которому вводят терапевтическую композицию, страдает или подвержен риску развития боли в костях или в расположенной рядом области, в суставе, в связке или в сухожилии.
Активный ингредиент - линезолид
Согласно уровню техники, хроническая боль в поясничном отделе часто тесно связана с изменениями по типу Модик после грыжи межпозвоночного диска в поясничном отделе. Поскольку анаэробные бактерии часто обнаруживаются в тканях ядра межпозвоночной грыжи в поясничном отделе, фармацевтические композиции для лечения боли, ассоциированной с изменениями по типу Модик, могут содержать, по меньшей мере, один антибиотик в качестве активного ингредиента, который уничтожает или ингибирует одну или несколько бактерий-мишеней.
Staphylococcus spp.
P. acnes
P. acnes
Staphylococcus
P. acnes
Выбор активных веществ может зависеть от бактериальных патогенов, выделенных из дисков при изменениях по типу Модик. Бактериальными патогенами, наиболее часто выделяемыми из дисков с изменениями по типу Модик, являются  и . Устойчивость к антибиотикам изменяется по всему миру в зависимости от популяции и местности. Для надежной и широко эффективной терапии, охват общих резистентностей предпочтительнее с  и  или, как минимум, только с . Предпочтительно, антибиотики, которые эффективны против существующих клинических изолятов из любого участка инфекции, могут быть выбраны в качестве активных веществ составов и композиций по настоящему изобретению с учетом профилей резистентности патогенов, выделенных на участке инфекции, ассоциированной с изменениями по типу Модик.
Staphylococcus spp
P. acnes
P. acnes
P. acnes
Staphylococcus spp.
P. Acnes
Staphylococci
P. Acnes
Staphylococci
Например, фармацевтические препараты по настоящему изобретению могут содержать активные вещества для лечения как ., так и , которые являются бактериальными патогенами, наиболее часто выделяемыми из дисков при изменениях по типу Модик. В некоторых аспектах, фармацевтические препараты по настоящему изобретению могут содержать, по меньшей мере, один антибиотик для лечения инфекции , которая вызывает большинство исследованных инфекций, около 38% пациентов с изменениями по типу Модик-1. Согласно данным предшествующего лечения с применением ряда потенциальных антибактериальных методов лечения в отношении  и  соответственно, идентифицировали некоторое количество антибиотиков, которые также эффективны в отношении, по крайней мере, одного из патогенов. В соответствии с настоящим изобретением, антибиотики, которые эффективны как в отношении ,так и , могут быть выбраны в качестве активных веществ составов и композиций по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления, может быть выбрано сочетание антибиотиков, которые эффективны как в отношении ,так и .
streptococci
enterococci
Staphylococcus aureus
Eur J Clin Microbiol Infect Dis.
JM.J Biomater Appl.
Surg Infect (Larchmt).
Int. J Antimic Agents
Eur Spine J.
J.
Antimicrob. Chemother
В одном из предпочтительных вариантов осуществления, антибиотик представляет собой линезолид. Линезолид является первым клинически применяемым оксазолидиноном против большинства грамположительных бактерий, вызывающих заболевания, включая , резистентные к ванкомицину (VRE) и резистентный к метициллину (MRSA) (Gaudin et al.,  2013, 32(2):195-198). Он успешно применяется для лечения пациентов с эндокардитом и бактериемией, остеомиелитом, инфекциями костей и суставов, и туберкулезом, и часто применяется для лечения сложных инфекций, когда другие методы лечения оказались не эффективными (Gautier et al.,  2012, 26(7):811-828; Tsiolis et al.,  2011, 12(2): 131-135). Длительное применение (например, более 2 недель) линезолида может вызвать серьезный побочный эффект (Falagas et al., , 2007, 29(3): 233-239). Линезолид хорошо абсорбируется, биодоступность составляет около 100% у здоровых добровольцев. Линезолид может проникать в ткани относительно быстро, с достижением своей минимальной ингибирующей концентрации (MIC) 4 мг/л. Он также может проникать в межпозвонковые диски и окружающие ткани (Komatsu et al.,  2010, 19(12): 2149-2155). Более высокие показатели эффективности для линезолида могут наблюдаться при AUC: значения MIC 80-120 и в случае, когда концентрации остаются выше MIC в течение всего интервала дозирования (рассмотрено Dryden, . 2011, 66 (suppl 4): iv7-iv15).
В соответствии с настоящим изобретением, линезолид выбран в качестве активного ингредиента и включен в состав композиции для доставки фармацевтически эффективного количества линезолида к целевому участку у нуждающегося в лечении субъекта. Эффективное количество композиций обеспечивается, по меньшей мере, частично, с учетом целевых бактерий, средств введения и других показателей. В общем случае, эффективное количество композиции обеспечивает эффективное уничтожение или ингибирование бактерий-мишеней и уменьшает боль или риск развития боли у нуждающегося в лечении субъекта.
P. acnes
Corynebacterium propinquum
Staphylococcus
В некоторых вариантах осуществления, эффективный уровень дозировки линезолида выше минимальной ингибирующей концентрации (MIC) для бактерий-мишеней. Бактерии-мишени представляют собой анаэробные бактерии, такие как ,  или бактерии рода .
Различные модификации кристаллических структур (полиморфы) линезолида могут быть получены путем перекристаллизации с использованием органических растворителей в различных условиях. Несколько полиморфных форм линезолида могут быть выбраны в качестве активного ингредиента композиций по настоящему изобретению. Например, линезолид может быть формы I (например, патент США №6444813) или формы II (например, патент США №6559305) или форму III (например, патент США №7718799; публикация патента США №2007/0104785) или формы IV (например, публикация патента США №2008/0319191) или соответствовать другим кристаллическим формам, описанным в публикациях заявок PCT №№ WO 2007/026369, WO2006/110155 и WO2014/013498; и публикации патента США №2017/0008919; содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки полностью. Как подробно описано в патенте США №6559305, линезолид ((S)-N-[[3-[3-фтор-4-(4-морфолинил)фенил]-2-оксо-5-оксазолидинил]метил]ацетамид) формы II может характеризоваться порошковой рентгенограммой со следующими пиками:
Межплоскостное расстояние d <img file="00000001.jpg" he="6" wi="6" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Угол 2-тета (°)
Относительная интенсивность (%)
12,44
7,10
2
9,26
9,54
9
6,37
13,88
6
6,22
14,23
24
5,48
16,18
3
5,28
16,79
100
5,01
17,69
2
4,57
19,41
4
4,50
19,69
2
4,45
19,93
6
4,11
21,61
15
3,97
22,39
23
3,89
22,84
4
3,78
23,52
7
3,68
24,16
1
3,52
25,28
13
3,34
26,66
1
3,30
27,01
3
3,21
27,77
1
-1
Как подробно описано в патенте США №6559305, линезолид ((S) -N-[[3-[3-фтор-4-(4-морфолинил)фенил]-2-оксо-5-оксазолидинил]метил]ацетамид), в виде суспензии в минеральном масле, может дополнительно характеризоваться инфракрасным (ИК) спектром со следующими пиками: 3364, 1748, 1675, 1537, 1517, 1445, 1410, 1401, 1358, 1329, 1287, 1274, 1253, 1237, 1221, 1145, 1130, 1123, 1116, 1078, 1066, 1049, 907, 852 и 758 см.
В одном из вариантов осуществления, линезолид формы II выбран в качестве активного ингредиента композиции по настоящему изобретению. Линезолид формы II может быть измельчен и равномерно диспергирован в растворе полоксамера при низкой или комнатной температуре. Диспергированные частицы линезолида формы II образуют суспензию в растворе полоксамера.
В соответствии с настоящим изобретением, частицы линезолида могут быть стерилизованы для получения стерильных инъецируемых композиций. Линезолид может быть стерилизован любыми способами, известными в данной области (например, сухим жаром или паром). В предпочтительном варианте осуществления, частицы линезолида могут быть стерилизованы гамма-излучением.
Сопутствующие (или лекарственные средства, вводимые в сочетании) лекарственные средства могут вводиться вместе с активными ингредиентами по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления, также вводят противовоспалительное лекарственное средство, такое как аспирин, ибупрофен, кетопрофен, напроксен, цефакоксиб, рофекоксиб, парекоксиб, целекоксиб, вальдекоксиб и индометацин. В некоторых вариантах осуществления также вводят обезболивающее лекарственное средство, такое как ацетаминофен, морфин, оксикодон и кодеин. Сопутствующие препараты могут также включать безрецептурные обезболивающие пластыри, лекарства и/или мази.
Средство доставки-термочувствительные гидрогели
Активный ингредиент по изобретению (то есть линезолид) может быть включен в средство доставки для введения нуждающемуся в лечении субъекту. Средство доставки может быть пригодным для инъекций. Например, средство доставки может представлять собой водный раствор, раствор с низкой вязкостью, суспензию или термообратимый гель. Носитель предпочтительно представляет собой биоразлагаемый и биосовместимый носитель. Используемый в настоящем документе термин “биосовместимый” означает, что носители не токсичны для тканей и клеток. Используемые в настоящем документе термины “биоразлагаемый” и “биоабсорбируемый” используются взаимозаменяемо. “Биоразложение” или “биоабсорбция” в контексте настоящего изобретения относится к разложению, дезинтеграции, расщеплению или исчезновению веществ для доставки после высвобождения объединенных в составе композиции терапевтически активных ингредиентов в биологической среде под действием живых организмов и преимущественно при физиологических значениях рН и температуры. Конкретные реакции включают, но ими не ограничиваются, химическое или ферментативное разложение.
in vivo
В соответствии с настоящим изобретением, термочувствительные гидрогели, биоматериалы, в частности, инъецируемые термочувствительные гидрогели с температурой перехода раствор-гель около или ниже физиологической температуры, используются в доставке линезолида. Водная суспензия, содержащая линезолид, образуется при комнатной температуре, но после инъекции  может переходить в нетекучий/густой гель при температуре тела. В течение нескольких часов или дней гели распадаются (то есть биоразлагаются). Изменение концентраций компонентов в композиции может обеспечить корректировку свойств, таких как температура, при которой образуется гель, или скорость разложения геля.
1. Полоксамер
in vitro
in situ
in vivo
Термочувствительный гидрогель может состоять из синтетических полимеров, природных полимеров или их сочетаний. Фармацевтические агенты (например, линезолид) и соответствующие носители могут быть смешаны с растворами полимеров  с гелеобразованием, причем несущий лекарственное средство гидрогель может образовываться  после введения .
В некоторых вариантах осуществления, термочувствительный гидрогель может быть образован синтетическими полимерами. Синтетические полимеры могут включать, но ими не ограничиваясь, триблок-сополимеры поли(этиленоксид)-поли(пропиленоксид)-поли(этиленоксид) (PEO-PPO-PPO) (также известные как Poloxamers или Pluronics) и их производные, сополимеры на основе поли(N-изопропилакриламида) (PNIPAAM) и их производные, поли(органофосфазен) и сополимеры поли(этиленгликоля) (PEG) и биоразлагаемого сложного полиэфира.
Poloxamers или Pluronics являются одобренными Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) термочувствительными синтетическими полимерами. Полоксамеры представляют собой неионные триблок-сополимеры, состоящие из центральной гидрофобной цепи полиоксипропилена (полипропиленоксида), в окружении двух гидрофильных цепяй полиоксиэтилена (поли(этиленоксида)). Биосовместимые полоксамеры широко используются для доставки лекарств, а также в тканевой инженерии. Гидрогели на основе полоксамера обеспечивают обратимое гелеобразование при определенных физиологических температурах и рН путем регулирования состава ПЭО (PEO) и ППО (PPO), а также общей молекулярной массы и концентрации. Полоксамеры, которые использовались для доставки лекарственных средств, включают, но ими не ограничиваются, Poloxamer 188 (Pluronic F-68, FLOCOR или RheothRx), Poloxamer 237 (Pluronic F87), Poloxamer 238 (Pluronic F-88), Pluronic F-98, Poloxamer124 (Pluronic L-44), Poloxamer184 (L-64), Poloxamer 338 (Pluronic F-108), Poloxamer 401 (Pluronic L-121) и Poloxamer 407 (Pluronic F-127). Физико-химические характеристики и гелеобразующие свойства некоторых выбранных полоксамеров можно найти в таблице 1 из патента США №5702717; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки полностью.
Poloxamer 407 (также известный как Pluronic F-127, Kolliphor 407 и SynperonicPE/F 127) является одним из наименее токсичных из блок-сополимеров и широко используется в качестве систем доставки лекарственных средств. В чистом виде при концентрации 20% (массовые проценты), Poloxamer 407 является жидким в водном растворе при комнатной температуре или ниже (~25°C), но образует мягкий гель при температуре тела (37°C). Poloxamer 407 представляет собой триблок-сополимер, состоящий из приблизительно 70% ПЭО (полиэтиленоксид) и 30% ППО (полипропиленоксид) по массе со средней молекулярной массой 11500. Как и другие полоксамеры, Poloxamer 407 демонстрирует свойства термообратимого гелеобразования. Poloxamer 407 использовался для доставки многих лекарственных средств, белков и генов, как описано Gong и соавт. (Curr. Med. Chem. 2013, 20, 79-94; содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки полностью).
В некоторых вариантах осуществления, термочувствительный гидрогель может быть образован природными полимерами, включая модифицированные полимеры с улучшенными свойствами термочувствительного гелеобразования. Природные полимеры, которые можно использовать для образования термочувствительных гидрогелей, включают, но ими не ограничиваются, хитозан и родственные производные, метилцеллюлозу, альгинат, гиалуроновую кислоту, декстран и ксилоглюкан.
2. Неионное контрастное вещество - йогексол
Int. J. Pharm
Antimicrob Agents Chemother
Polim. Med
J Control Release
Хотя предыдущие исследования показывают, что полоксамер, несущий антибиотики, включая ванкомицин и линезолид, может использоваться для контролируемого и длительного высвобождения антибиотиков для повышения их эффективности в подавлении пролиферации бактерий (Veyries et al., ., 1999, 192(2): 183-193; Veyries et al., ., 2000, 44(4):1093-1096; Kalorewicz et al., , 2011, 41(4) 3-15; и Lee et al., , 2004, 96(1): 1-7), ни одно из этих предшествующих исследований не выявило эффект добавления других фармацевтических средств. Например, рентгеноконтрастные вещества часто используются в качестве указателя для подтверждения расположения кончика иглы во время инъекций и других болезненных процедур (например, дискография). Содержание йода в контрастном веществе, таком как йогексол (торговое название: Omnipaque), может блокировать проникновение рентгеновских лучей и визуализировать места инъекции при рентгеноскопии или рентгеновском исследовании. Йогексол представляет собой трийодированную молекулу с молекулярной массой 821,1 (содержание иода 46,3%). Наиболее распространенный препарат на основе йогексола - Omnipaque имеет различные концентрации иода, например, Omnipaque 140 содержит 302 мг йогексола, эквивалентных 140 мг органического йода на мл; Omnipaque 180 содержит 388 мг йогексола, эквивалентных 180 мг органического йода на мл; Omnipaque 240 содержит 518 мг йогексола, эквивалентных 240 мг органического йода на мл; Omnipaque 300 содержит 647 мг йогексола, эквивалентных 300 мг органического йода на мл; и Omnipaque 350 содержит 755 мг йогексола, эквивалентных 350 мг органического йода на мл.
В соответствии с настоящим изобретением, носитель, содержащий полоксамер, может дополнительно содержать радиоконтрастное вещество, такое как йогексол, для облегчения применения препарата линезолида к целевому пораженному участку, например межпозвоночному диску. Добавление радиоконтрастного вещества в антибиотические композиции по настоящему изобретению поможет практикующему специалисту (например, врачу) увидеть вводимый продукт и контролировать состояние межпозвоночного диска, в который вводят продукт, с помощью флюороскопии. Эта информация в реальном времени может помочь практикующему специалисту решить, когда прекратить инъекцию, когда межпозвоночный диск заполнен и начинается утечка.
Эксперименты, осуществленные в настоящем изобретении, показали, что добавление йогексола к композиции линезолида увеличивает радиографическую видимость композиции для контроля ее доставки к пораженным участкам (например, как показано на фиг. 2). Также было обнаружено, что концентрации йогексола и полоксамера 407 в носителе для доставки необходимо оптимизировать для достижения целевого диапазона температур для перехода раствора в гель композиций термочувствительного гидрогеля по настоящему изобретению (см. пример 5). Взаимодействие полоксамера и йогексола в гидрогеле оказывает влияние на температуру перехода композиции линезолида.
В некоторых вариантах осуществления, носитель для доставки, содержащий полоксамер 407 и йогексол, может быть получен в виде отдельного раствора перед добавлением линезолида для образования композиции линезолида (то есть суспензии линезолида). Концентрации полоксамера и йогексола оптимизируются до определенных диапазонов, так что температура гелеобразования раствора оптимизируется на уровне температуры тела или близко к ней.
Настоящее изобретение также относится к термочувствительным гидрогелям для доставки лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, носитель может содержать полоксамер в качестве фармацевтически приемлемого биоразлагаемого и биосовместимого полимера, который образует гидрогель в ответ на повышение температуры. В некоторых аспектах, носитель для доставки содержит полоксамер 407 в диапазоне от около 10% до около 17% по массе носителя для доставки или в концентрации от около 121 до около 207 мг/мл по объему носителя. Предпочтительно он может содержать полоксамер 407 в диапазоне от около 11,5% до 13,5% по массе носителя или с концентрацией около 140-165 мг/мл в носителе. В других вариантах осуществления, средство доставки дополнительно содержит рентгеноконтрастный краситель. В некоторых аспектах, носитель содержит йогексол в диапазоне от около 14,5% до около 62,5% по массе носителя или в концентрации от около 174 до около 755 мг/мл в носителе. Предпочтительно носитель для доставки может содержать йогексол в диапазоне от около 18 до 35% по массе носителя или в концентрации от около 206 до около 425 мг/мл в носителе.
Специалист в данной области может знать, что в дополнение к образованию суспензии линезолида по настоящему изобретению средство доставки, описанное в настоящем документе, можно использовать для доставки любого лекарственного средства, например антибиотиков из классов антибиотиков бета-лактамов (например, пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы и монобактамы), оксазолидиноны, аминогликозиды, гликопептиды, липопептиды и глицилциклины.
В соответствии с настоящим изобретением, раствор полоксамерного гидрогеля может быть получен при более низкой температуре, включая стадии (1) приготовления холодного раствора йогексола путем добавления йогексола к раствору, содержащему трометамин и динатрий кальция ЭДТА (рН около 8,0); и (2) медленное добавление порошка полоксамера 407 к холодному раствору йогексола и перемешивание раствора до полного растворения порошка полоксамера, при этом порошок полоксамера добавляют порциями. Раствор полоксамер-йогексол может быть стерилизован и упакован в отдельные сосуды.
Другие носители и вспомогательные вещества
Композиции линезолида по настоящему изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, подходящих для конкретной желаемой лекарственной формы. Различные вспомогательные вещества для получения фармацевтических композиций и способы получения композиции известны в данной области (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включена в настоящий документ посредством ссылка). Использование среды обычного вспомогательного вещества может рассматриваться в рамках объема настоящего изобретения, за исключением того, что любая среда обычного вспомогательного вещества может быть несовместима с веществом или его производными, например, вызывая любой нежелательный биологический эффект или иным пагубным образом взаимодействуя с любым другим компонентом(ами) фармацевтической композиции.
Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США
В некоторых вариантах осуществления, фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может иметь чистоту, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98%, по меньшей мере, 99% или 100%. В некоторых вариантах осуществления, вспомогательное вещество может быть одобрено для применения человеком и для ветеринарного применения. В некоторых вариантах осуществления, вспомогательное вещество может быть одобрено . В некоторых вариантах осуществления, вспомогательное вещество может быть фармацевтической степени чистоты. В некоторых вариантах осуществления, вспомогательное вещество может соответствовать стандартам фармакопеи США (USP), Европейской фармакопеи (EP), Британской фармакопеи и/или Международной фармакопеи.
В некоторых вариантах осуществления, композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать хелатирующие агенты и буферные агенты. Типичные хелатообразующие агенты включают этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), моногидрат лимонной кислоты, динатрия эдетат, динатрия кальция эдетат, дикалия эдетат, эдетовую кислоту, фумаровую кислоту, яблочную кислоту, фосфорную кислоту, натрия эдетат, винную кислоту и/или тринатрий эдетат. В одном примере агент может представлять собой соль ЭДТА.
Типичные буферные агенты включают, но ими не ограничиваются, цитратные буферные растворы, ацетатные буферные растворы, фосфатные буферные растворы, хлорид аммония, карбонат кальция, хлорид кальция, цитрат кальция, глубионат кальция, глюцептат кальция, глюконат кальция, d-глюконовая кислота, глицерофосфат кальция, лактат кальция, пропионовую кислоту, левулинат кальция, пентановую кислоту, двухосновный фосфат кальция, фосфорную кислоту, трехосновный фосфат кальция, гидроксид-фосфат кальция, ацетат калия, хлорид калия, глюконат калия, смеси калия, двухосновный фосфат калия, одноосновный фосфат калия, смеси фосфатов калия, ацетат натрия, бикарбонат натрия, хлорид натрия, цитрат натрия, лактат натрия, двухосновный фосфат натрия, одноосновный фосфат натрия, смеси фосфатов натрия, трометамин, гидроксид магния, гидроксид алюминия, альгиновую кислоту, апирогенную воду, изотонический раствор, раствор Рингера, этиловый спирт и т.д. и/или их сочетания. В одном из вариантов осуществления, буферный агент может представлять собой трометамин.
Композиции линезолида
Композиции линезолида по настоящему изобретению содержат термочувствительный гидрогель полоксамера, содержащий эффективное количество линезолида, неионное контрастное вещество йогексол в концентрации, оптимизированной для перехода раствора полоксамера в гель, и, необязательно, одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.
В некоторых вариантах осуществления, композиции по настоящему изобретению содержат линезолид в концентрации в диапазоне около 1-50% по массе или по объему композиции (то есть суспензии линезолида). В некоторых аспектах, его содержание может составлять от около 1% до около 20% или от около 2,5% до около 20%, или от около 2,5% до около 10% или от около 3,0% до около 10% по массе или по объему композиции. В одном аспекте, композиция линезолида может содержать около 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% или 20% линезолида по массе конечной композиции (например, суспензии). Линезолид может присутствовать в композиции в концентрации от около 10 мг/мл до около 200 мг/мл или от около 20 мг/мл до около 200 мг/мл или от около 50 мг/мл до около 200 мг/мл. В частности, линезолид может присутствовать в композиции в концентрации 10 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл, 50 мг/мл, 55 мг/мл, 60 мг/мл, 65 мг/мл. мл, 70 мг/мл, 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл, 100 мг/мл, 150 мг/мл или 200 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления, композиция по настоящему изобретению содержит полоксамер в качестве фармацевтически приемлемого биоразлагаемого и биосовместимого полимера, который образует гидрогель в ответ на повышение температуры. В некоторых аспектах, полоксамер представляет собой полоксамер 407. Композиция линезолида по настоящему изобретению может содержать полоксамер 407 в количестве от около 9,5 до около 17% по массе композиции, или от около 9,5 до около 14,5% по массе композиции, или в концентрации от около 115 мг/мл до около 207 мг/мл, или в концентрации от около 115 мг/мл до около 173 мг/мл в композиции. Предпочтительно композиция линезолида может содержать полоксамер 407 в количестве от около 10,8% до около 12,8% по массе композиции или в концентрации от около 130 мг/мл до 156 мг/мл в композиции.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению дополнительно содержат неионное контрастное вещество. Например, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать от около 30 до около 600 мг йода на миллилитр раствора композиции, предпочтительно от около 50 до около 300 мг или от около 75 до около 200 мг йода на миллилитр раствора композиции.
В некоторых аспектах, веществом является йогексол. Фармацевтические композиции могут содержать йогексол в количестве от около 14 до около 59% по массе композиции или в концентрации от около 165 до около 718 мг/мл в композиции. Предпочтительно композиция линезолида может содержать йогексол с содержанием от около 17% до около 30% по массе композиции или в концентрации от около 206 до 364 мг/мл в композиции.
Другие поверхностно-активные вещества, растворители или сорастворители, известные специалистам в данной области, также могут быть использованы в некоторых вариантах осуществления в рамках объема настоящего изобретения.
В некоторых вариантах осуществления, композиция линезолида по настоящему изобретению содержит от около 1% до около 20% линезолида по массе композиции (массовые проценты), от около 9,5% до около 17% полоксамера 407 по массе композиции (массовые проценты) и около от 14% до 59% йогексола по массе композиции (массовые проценты). В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция линезолида содержит около 5% по массе линезолида, около 11,8% по массе полоксамера и около 27,2% по массе йогексола. В некоторых примерах, водная композиция может превращаться в гель при температуре около 26°C, или около 27°C, или около 28°C, или около 30°C, или около 31°C, или около 32°C, или около 33°C, или около 34°C, или около 35°C, или около 36°C, или около 37°C. В одном неограничивающем примере, композиция линезолида превращатся в гель при температуре около 28°С. Линезолид может диффундировать из густого геля. В течение нескольких дней гели распадаются. Изменение концентраций компонентов (например, йогексола и полоксамера 407) в композиции может обеспечить точную корректировку свойств гелей, таких как температура перехода из раствора в гель.
В некоторых вариантах осуществления, композиция может быть получена способом, включающим стадии: (а) измельчение порошка линезолида формы II с образованием небольших частиц линезолида; (b) получение единицы частиц линезолида из стадии (а) и стерилизация препарата; (с) получение средства доставки, содержащего полоксамер 407 и йогексол; и (d) суспендирование указанных частиц линезолида из стадии (b) в носителе для доставки из стадии (с) с образованием стабильной и гомогенной суспензии.
Термогель полоксамер может быть растворен в соответствующем объеме водного раствора при низкой температуре, и концентрации полоксамера и йогексол оптимизированы с точки зрения гелеобразования носителя для доставки.
Линезолид, в частности линезолид формы II, может быть измельчен с образованием мелких частиц посредством струйного измельчения сухим воздухом или любыми другими способами измельчения. Полученный порошок линезолида может быть дополнительно стерилизован сухим жаром и/или гамма-излучением.
В некоторых вариантах осуществления, частицы линезолида и носитель для доставки, содержащий полоксамер/йогексол, могут быть получены и упакованы отдельно, например, в двух отдельных сосудах. Два препарата могут быть смешаны с образованием суспензии линезолида перед введением. Перед применением, порошок линезолида и носитель смешивают с образованием гомогенной суспензии. Антибиотическая суспензия может быть помещена в шприц и приготовлена с предполагаемым объемом дозирования. В одном из примеров, около 253 мг порошкообразного линезолида может быть предоставлено в сосуде и около 7 мл средства для доставки, содержащего полоксамер и йогексол, может быть приготовлено в другом флаконе. Средство доставки может быть предоставлено в объеме от около 3,8 до около 5,8 мл или от около 4,6 до около 5,0 мл.
Инъецируемые композиции могут быть стерилизованы, например, фильтрацией через удерживающий бактерии фильтр, облучением, стерилизацией паром и/или включением стерилизующих веществ в форме стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены или диспергированы в стерильной воде или другой стерильной инъецируемой среде перед применением.
В некоторых вариантах осуществления, композиции термочувствительного гидрогеля по настоящему изобретению можно вводить в пораженный участок с помощью иглы. Свойства водорастворимости термогелей при комнатной температуре и относительно низкая вязкость водного раствора делает возможным применение игл малого диаметра. Такую инъецируемую композицию можно эффективно вводить пациенту с помощью иглы небольшого размера без предварительного гелеобразования.
II. Введение и дозирование
Композиции линезолида по настоящему изобретению можно вводить любым способом, который приводит к терапевтически эффективному результату. В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция является подходящей для инъекций. Инъекционное введение, обеспечивающее локализованный эффективный уровень линезолида (выше MIC целевых бактерий), приводит к положительным результатам (например, ослабление боли).
Инъекционное введение могло бы снизить уровень системных побочных эффектов, повысить соблюдение пациентом режима дозирования и повысить эффективность на участке действия при меньшей дозировке антибиотика. Преимущества могут включать относительную простоту применения, локализованную доставку для локального действия в организме, снижение частоты дозирования без снижения эффективности лечения, улучшение соблюдения больным режима дозирования и т.д.
Фармацевтическим композициям в соответствии с изобретением обычно придают единичную дозированную форму для простоты введения и единообразия дозирования. Однако следует понимать, что назначение фармацевтических композиций по настоящему изобретению будет определять лечащий врач в рамках здравого медицинского заключения.
В соответствии с настоящим изобретением, фармацевтическую композицию можно вводить в дозах, достаточных для доставки общей дозы, составляющей от 5 мг до 450 мг линезолида, в межпозвоночный диск для достижения желаемого терапевтического эффекта. В некоторых вариантах осуществления, для получения желаемого терапевтического эффекта, композиции могут доставлять от около 50 мг до около 200 мг линезолида. В некоторых вариантах осуществления, общая доза составляет от около 10 мг до около 100 мг линезолида, или от около 10 мг до около 200 мг линезолида, или от около 20 мг до около 200 мг, или от около 50 мг до около 200 мг линезолида. В некоторых примерах, композиция может доставлять общую дозу линезолида, составляющую 50 мг, 60 мг, 70 мг, 80 мг, 90 мг, 100 мг, 110 мг, 120 мг, 130 мг, 140 мг, 150 мг, 160 мг, 170 мг, 180 мг, 190 мг или 200 мг. В некоторых вариантах осуществления, уровень дозы определяют с учетом инфицированных дисков. Например, дозы могут изменяться в диапазоне от 5 до 450 мг для каждого инфицированного диска, например, 5 мг для каждого инфицированного диска, или 10 мг для каждого инфицированного диска, или 15 мг для каждого инфицированного диска, или 20 мг для каждого инфицированного диска, или 50 мг для каждого инфицированного диска, или 100 мг на каждого инфицированного диска, или 150 мг для каждого инфицированного диска, или 200 мг для каждого инфицированного диска, или 250 мг для каждого инфицированного диска, или 300 мг для каждого инфицированного диска, или 350 мг для каждого инфицированного диска, или 400 мг для каждого инфицированного диска, или 450 мг для каждого инфицированного диска. В одном предпочтительном варианте осуществления, эффективное количество линезолида составляет от около 50 до около 200 мг для каждого инфицированного диска.
В качестве неограничивающих примеров, суспензия линезолида по настоящему изобретению может вводиться в объеме от около 0,1 мл до около 4,0 мл, например, 0,1 мл, или 0,3 мл, или 0,5 мл, или 1,0 мл, или 1,2 мл, или 1,5 мл, или 2,0 мл, или 2,5 мл, или 3,0 мл, или 3,5 мл, или 4,0 мл, или 4,5 мл, или 5,0 мл для достижения ожидаемой общей дозы линезолида для каждого инфицированного диска.
В некоторых вариантах осуществления, однократное введение (например, однократная инъекция) применяется для доставки желаемой дозы линезолида в инфицированный диск. В других вариантах осуществления, множественные введения могут применяться для получения желаемого терапевтического эффекта. В качестве неограничивающих примеров, вторая доза, возможно и третья доза, вводится через 2 дня, или 5 дней, или 10 дней, или через две недели, или через три недели, или через один месяц после предыдущей дозы.
В некоторых вариантах осуществления, композиции по настоящему изобретению могут применяться к кости или суставу, связке и сухожилию или к расположенной рядом области нуждающемуся в лечении субъекта посредством одной инъекции или, альтернативно, посредством многократных инъекций на более чем одном участке. Например, композиция линезолида может быть введена в несколько межпозвоночных дисков с одной и той же стороны позвоночника или с обеих сторон позвоночника. В других примерах, композиции и составы по настоящему изобретению могут вводиться в межпозвоночные диски и пространство межпозвоночного диска.
III. Наборы, иглы и устройства
В соответствии с настоящим изобретением также предусмотрены наборы, содержащие композицию линезолида по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления, набор может содержать одну или несколько дозированных единиц порошкообразного линезолида; и гидрогелевый носитель, содержащий полоксамер и йогексол, где порошкообразный линезолид и гидрогелевый носитель могут быть смешаны с образованием суспензии линезолида для применения.
Способы и устройства, известные в данной области техники для многократного введения в клетки, органы и ткани, рассматриваются для применения в сочетании со способами и композициями, описанными в настоящем документе, в качестве вариантов осуществления настоящего изобретения. К ним относятся, например, способы и устройства, которые имеют множество игл, гибридные устройства, использующие, например, полые иглы или катетеры, а также устройства, использующие механизмы управляемые теплом, электрическим током или излучением.
Устройства для введения могут применяться для доставки фармацевтических композиций, содержащих, по меньшей мере, один антибиотик по настоящему изобретению, в соответствии с однократным, многократным или раздельным режимом дозирования, описанным в настоящем документе. Согласно настоящему изобретению, эти устройства для многократного введения могут применяться для доставки однократных, многократных или разделенных доз антибиотиков, включенных в композиции, описанные в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления, устройства для доставки лекарственных веществ были описаны Mckay и соавт. и описаны, например, в патентной публикации РСТ № WO 2006/118804, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки полностью. Согласно Mckay, множество игл с несколькими отверстиями на каждой игле встроены в устройства для облегчения местной доставки в ткань, такую как внутреннее пространство позвоночного диска.
Для введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению могут применяться шприцы с иглами. В некоторых случаях, наконечники игл могут быть адаптированы для определенной цели инъекции, например инъекция в позвоночник. Шприцы для инъекции в позвоночник могут иметь иглу, помещенную в структуру или пространство в позвоночнике. Игла может иметь скос любого типа Quincke Babcock, Sprotte, Whitacre, Greene, Pitkin и Tuohy. Стержень иглы может быть прямым или изогнутым и иметь определенную длину, подходящую для размещения лекарственного средства в определенном месте в позвоночнике. Например, шприц и иглы могут иметь конструкцию, описанную в патенте США №№: 5628734; 6500153; 7367961; и 8112159; содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки полностью.
in situ
В некоторых вариантах осуществления, шприцы и иглы для введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению могут содержать специальные структуры, выполненные с возможностью смешивания компонентов фармацевтических композиций . Шприц может содержать одну, две или более отдельных камер, в которых компоненты фармацевтических композиций хранятся отдельно и смешиваются непосредственно перед инъекцией.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Активный фармацевтический ингредиент (API).
Используемый в настоящем документе термин “активный фармацевтический ингредиент (API)” относится к фармацевтическому веществу, которое является биологически активным. Например, вещество, которое при введении в организм оказывает биологическое воздействие на этот организм, считается биологически активным. В соответствии с настоящим изобретением API является линезолидом.
Биосовместимый.
Используемый в настоящем документе термин “биосовместимый” означает совместимый с живыми клетками, тканями, органами или системами, и не налагающий риска повреждения, токсичности или отторжения иммунной системой.
Биоразлагаемый.
Используемый в настоящем документе термин “биоразлагаемый” означает способность разлагаться на безопасные продукты под действием живых существ.
Композиция.
средство
Используемый в настоящем документе термин “композиция” включает, по меньшей мере, активный ингредиент и  доставки.
Гидрогель.
Используемый в настоящем документе термин “гидрогели” рассматривается как нерастворимые в воде сшитые трехмерные сети полимерных цепей в сочетании с водой, которая заполняет пустоты между полимерными цепями. Сшивание способствует нерастворимости в воде и обеспечивает необходимую механическую прочность и физическую целостность. Гидрогель представляет собой в основном воду (массовая доля воды намного больше, чем у полимера). Способность гидрогеля удерживать значительное количество воды подразумевает, что полимерные цепи должны обладать, по меньшей мере, умеренными гидрофильными свойствами.
Пациент.
Используемый в настоящем документе термин “пациент” относится к субъекту, который может обратиться или нуждаться в лечении, которому требуется лечение, получает лечение, получит лечение, или субъект, который находится под наблюдением квалифицированного специалиста для конкретного заболевания или состояния.
Фармацевтический состав.
Используемое в настоящем документе выражение “фармацевтический состав” относится к составу, который изменяет этиологию заболевания, расстройства и/или состояния.
Фармацевтически приемлемый.
Используемый в настоящем документе термин “фармацевтически приемлемый” используется для обозначения таких соединений, веществ, композиций и/или лекарственных форм, которые в рамках здравого медицинского мнения подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соразмерных с целесообразным соотношением польза/риск.
Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества:
Используемое в настоящем документе выражение “фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество” относится к любому ингредиенту, отличному от соединений, описанных в настоящем документе (например, носитель, способный суспендировать или растворять активное соединение) и обладающему свойствами по существу не оказывать токсическое действие и вызывать воспалительные процессы у пациента.
Место:
Используемый в настоящем документе термин “место”, в случае его использования в отношении отека костной ткани или изменений по типу Модик, означает непосредственно место отека костной ткани или изменения по типу Модик, или среду, окружающую отек костной ткани во всех направлениях на расстоянии 0,5-1 дюйма (1,27-2,54 см).
Разделенная доза:
Используемый в настоящем документе термин “разделенная доза” представляет собой разделение однократной стандартной дозы или общей лечебной дозы на две или более доз.
Терапевтически эффективное количество:
.
Используемый в настоящем документе термин “терапевтически эффективное количество” означает количество доставляемого вещества (например, антибиотика, медикамента, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т.д.), которое является достаточным при введении субъекту, страдающему от или предрасположенному к заболеванию, расстройству и/или состоянию, для лечения, улучшения симптомов, диагностики, предотвращения и/или задержки начала заболевания, расстройства и/или состояния
Терапевтически эффективный результат:
Используемый в настоящем документе термин “терапевтически эффективное количество” означает количество доставляемого вещества (например, антибиотика, медикамента, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т.д.), которое является достаточным при введении субъекту, страдающему от или предрасположенному к заболеванию, расстройству и/или состоянию, для лечения, улучшения симптомов, диагностики, предотвращения и/или задержки начала заболевания, расстройства и/или состояния.
Общая лечебная доза:
Используемая в настоящем документе “общая лечебная доза” соответствует количеству, определенному или назначаемому в период лечения. Она может вводиться в виде единичной стандартной дозы.
Лечение
: Используемый в настоящем документе термин “лечение” относится к частичному или полному облегчению, улучшению, регрессу, смягчению, задержке наступления, ингибированию прогрессирования, уменьшению тяжести и/или снижению частоты возникновения одного или нескольких симптомов или признаков конкретного заболевания, расстройства и/или состояния. Лечение может быть назначено субъекту, у которого отсутствуют признаки заболевания, расстройства и/или состояния, и/или субъекту, у которого проявляются только ранние признаки заболевания, расстройства и/или состояния, с целью снижения риска развития патологии, ассоциированной с заболеванием, расстройством и/или состоянием.
Носитель
: В настоящем документе, термины “носитель” и “средство доставки” используются взаимозаменяемо, относятся к любому веществу, соединению или любому их сочетанию, которые могут применяться для переноса активного вещества (например, API по настоящему изобретению) и его доставки к определенному месту.
ЭКВИВАЛЕНТЫ И ОБЪЕМ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Специалисты в данной области определят или смогут установить, проводя всего лишь обычные эксперименты, множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления в соответствии с описанным здесь изобретением. Объем настоящего изобретения не ограничивается вышеприведенным описанием, а определяется прилагаемой формулой изобретения.
В пунктах формулы изобретения, существительные в форме единственного числа могут соответствовать существительным во множественном числе, если не указано иное или иное не следует из контекста. Пункты формулы изобретения или описания, в которых используется союз “или” между одним или несколькими членами группы, считаются удовлетворенные, если один, больше одного или все члены группы присутствуют, используются или иным образом относятся к данному продукту или процессу, если не указано иное или иным образом не следует из контекста. Изобретение включает варианты осуществления, в которых только один член группы присутствует, используются или каким-либо другим образом относится к данному продукту или процессу. Изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного или все члены группы присутствуют, используются или иным образом относятся к данному продукту или процессу.
Также следует отметить, что термин “содержащий” является открытым и допускает, но не требует, включение дополнительных элементов или стадий. При использовании в настоящем документе термина “содержащий”, термин “состоящий из”, соответственно, также охватывается и описывается.
Там, где указаны диапазоны, включаются конечные значения. Кроме того, следует понимать, что, если иное не указано или не следует из контекста и понимания специалиста в данной области техники, значения, которые выражены в виде диапазонов, могут принимать любое конкретное значение или поддиапазон в пределах указанных диапазонов в различных вариантах осуществления изобретения, с точностью до десятых долей единицы нижнего предела диапазона, если иное явно не следует из контекста.
Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, который включен в уровень техники, может быть непосредственно исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления считаются известными для специалиста в данной области техники, они могут быть исключены, даже если это исключение в явном виде не изложено в настоящем документе. Любой конкретный вариант осуществления составов по изобретению (например, любой антибиотик, терапевтическое или активное вещество; любой способ производства; любой способ применения и т.д.) может быть исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения по любой причине, независимо от того, связан он или нет с наличием уровня техники.
Следует понимать, что используемые слова являются словами описания, а не ограничения, и что изменения могут быть внесены в объем прилагаемой формулы изобретения без отхода от действительного объема и сущности изобретения в своих более широких аспектах.
Хотя настоящее изобретение было описано в некотором объеме и с некоторой конкретностью в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не подразумевается, что оно должно ограничиваться какими-либо такими конкретными данными или вариантами осуществления или каким-либо конкретным вариантом осуществления, однако оно должно толковаться со ссылками к прилагаемой формуле изобретения с обеспечением максимально широкой интерпретации данной формулы изобретения с учетом уровня техники и соответственно эффективно охватывать предполагаемый объем изобретения.
Примеры
Пример 1: Овечья модель внутридисковой инфекции
S. aureus
in vivo
S. aureus
Для проверки эффективности антибиотических композиций  была разработана овечья модель внутридисковой инфекции . Самцов овец скрещенной породы Charollais или Suffolk массой около 35-40 кг в начале исследования содержали в соответствии с руководящими правилами Главного офиса (Home Office) на основании Акта о научных процедурах на животных (Animals (Scientific Procedures) Act 1986) и акклиматизировали в течение не менее 7 дней с подстилками из соломы и доступом к воде. Животных кормили овечьим концентратом без антибиотиков с добавлением кормовых растений (сено/солома).
1.1 Инфекция Staphylococcus aureus
6
4
Бактериальный инокулят (АТСС 29213) готовили из замороженного исходного раствора смеси глицерина/забуференного фосфатом солевого раствора при концентрации 2,5×10 КОЕ/мл путем разбавления до 2×10 КОЕ/мл.
1.2 Приготовление композиций для инъекций
S. aureus
1 мл-овый шприц с иглой размера 18G и длиной 1 или 1,5 дюйма заполняли 0,2 мл суспензии  или аналитическими композициями. Шприц можно оттягивать вперед и назад для удаления пузырьков по мере необходимости. Затем иглу заменяли иглой для введения размера 25G и длиной 4,69 дюйма и заполняли, оставляя дозу 0,05 мл или 0,1 мл. Если не использовали сразу, заполненный шприц оставляли в холодильнике, но его следовало использовать в течение 30 минут.
S. aureus
3
В терапевтической модели каждую овцу анестезировали. В рамках анестезии животному вводили анальгетики (внутримышечно) в форме мелоксикама в рекомендованной дозе. Этот анальгетик может быть введен повторно, если ветеринарный врач сочтет это необходимым. Каждая овца получала четыре по 0,05 мл (целевой объем) внутридисковых инъекций в L1/L2, L2/L3, L3/L4 и L4/L5 инокулята  (1×10 клеток/диск), по одной инъекции на диск.
Приблизительно через 1 час, или в другое выбранное время, после первой инъекции, каждой овце вводили вторую инъекцию композиции линезолида или контрольной композиции. В каждый межпозвоночный диск, который ранее был успешно инъецирован бактериями, осуществляли внутридисковую инъекцию по 0,1 мл (целевой объем). Время между введением антибиотика и введением бактерий может составлять часы, дни, недели или месяцы.
1.3 Способ инъекции: терапевтическое дозирование
.
Солокализованное дозирование
Первую спинальную иглу (размер 20G, длина 3,5 дюйма) размещали непосредственно на краю пульпозного ядра каждого диска. После подтверждения расположения игл, вторую иглу (размер 25G, длина 4,69 дюйма), заполненную дозированным раствором, вводили в первую иглу, а наконечник размещали в центре пульпозного ядра. После подтверждения позиционирования вторых игл, в каждый межпозвоночный диск вводили бактерии. Затем внутренние иглы удаляли. Непосредственно через 1 час после введения дозы бактерий, новую иглу (размер 25G, длина 4,69 дюйма), заполненную дозированным раствором, вставляли в иглу (20G, 3,5 дюйма) и размещали в центре пульпозного ядра. Дозу второго препарата вводили через данную иглу через 1 час после введения первой дозы.
Дискретное дозирование
Бактериальная инфекция: Первую спинальную иглу (размер 20G, длина 3,5 дюйма) размещали непосредственно на краю пульпозного ядра каждого диска. После подтверждения расположения игл, вторую иглу (размер 25G, длина 4,69 дюйма), заполненную дозированным раствором, вводили в первую иглу, а наконечник размещали в центре пульпозного ядра. После подтверждения позиционирования вторых игл, в каждый межпозвоночный диск вводили бактерии. Затем иглы удаляли. Положение животных изменяли для доступа к другой стороне позвоночника.
Инъекция композиции: Вторую спинальную иглу (размер 20G, длина 3,5 дюйма) размещали непосредственно на краю пульпозного ядра на противоположной от первой инъекции стороне каждого диска. Непосредственно перед введением, новую иглу (размер 25G, 4,69 дюйма), заполненную раствором для введения дозы, вводили в иглу (размер 20G, длина 3,5 дюйма) и размещали в центре пульпозного ядра. Вторую лечебную дозу вводили через эту иглу.
Для каждой инъекции взвешивали индивидуальный дозирующий шприц и, для вычисления фактической введенной дозы, регистрировали массу до и после дозирования.
Введение дозы каждой композиции осуществляли медленно, что для доставки должно занимать от 30 до 60 секунд, используя достаточное усилие для успешной доставки дозы к дозе, не допуская утечки какого-либо количества раствора из соединения шприца с иглой.
Систему цифровой рентгенографии использовали для содействия проведению инъекции и регистрации фиксации изображения непосредственно до и после введения дозы. Осуществляли непрерывный контроль за животными и, когда они полностью выздоравливали, возвращали в загон.
1.4 Цифровая рентгенография
Получали изображение каждой овцы и изображение фиксировали непосредственно до и непосредственно после каждого введения дозы. Данные последовательностей регистрировали. Компетентное лицо выполняло визуальную оценку каждой инъекции в межпозвоночный диск непосредственно после введения дозы. Инъекции оценивали/регистрировали как:
Положительные - отсутствие утечек: внутри диска наблюдается соответствующая дискретная доза, за пределами диска не наблюдается какое-либо количество препарата.
Минимальная утечка: внутри диска наблюдается соответствующая дискретная доза, за пределами диска наблюдается минимальное количество препарата.
Умеренная утечка: внутри диска наблюдается неполная доза, за пределами диска явно наблюдается некоторое количество препарата.
Значительная утечка: внутри диска наблюдается минимальная доза, за пределами диска явно наблюдается большая часть препарата.
В идеальном случае, для обеспечения научной надежности результатов исследования, требуется четыре обрабатываемых диска на группу и минимум три на группу. После завершения введения инъекций овцам, результаты подвергают анализу. Если менее чем желаемое количество дисков в целом оценивается как “положительное - отсутствие утечки» или “минимальная утечка”, будет рассматриваться возможность добавления в эту группу дополнительных овец, максимум в количестве до 2.
1.5 Образцы тканей
В определенные моменты времени, после введения дозы, овцу умерщвляли. Инъецированные межпозвоночные диски иссекали и пульпозное ядро из каждого межпозвоночного диска удаляли. Кроме того, отбирали дополнительный необработанный межпозвоночный диск для контроля ткани. Межпозвоночный диск удаляли после всех обработанных дисков у конкретного животного с осторожностью, чтобы не допустить инфицирования между контрольными и обработанными образцами.
1.6 Экстракция линезолида
Экстракцию линезолида из образцов межпозвоночного диска осуществляли добавлением 3 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) к предварительно взвешенным образцам межпозвоночного диска. Смеси гомогенизировали, используя прибор Omni-Prep Bead Ruptor при 4°C. Добавляли еще 3,5 мл PBS, и образцы гомогенизировали вручную, и, наконец, добавляли еще 3,5 мл PBS и тщательно перемешивали, получая общий объем 10 мл смеси ткани межпозвоночного диска и PBS. Репрезентативные аликвоты этого гомогената межпозвоночного диска, содержащего линезолид, разбавляли гомогенатом межпозвоночного диска из необработанных дисков для обеспечения того, чтобы образцы находились в пределах калибровочного диапазона анализа. Образцы экстрагировали осаждением белка тремя объемами ацетонитрила, содержащего толбутамид и лабеталол в качестве внутренних стандартов (при 50 и 25 нг/мл), подкисленного 0,1 мл муравьиной кислоты.
После перемешивания с завихрением и центрифугирования при 4°C супернатанты смешивали со смесью ацетонитрил:вода (1:1 об./об.), подкисленной 0,1% муравьиной кислотой, в неглубоких 96-луночных планшетах. Планшет герметически закрывали и встряхивали для обеспечения однородности перед проведением анализа. Образцы анализировали на линезолид методом ЖХ-МС/МС с ионизацией электрораспылением в режиме положительных ионов, используя масс-спектрометр Waters TQS (условия описаны ниже), в сравнении с рядом матриц, соответствующих калибровке и стандартам контроля качества. Стандарты получали путем добавления аликвот разведенного гомогената межпозвоночного диска из необработанных дисков с линезолидом и экстрагирования, способом, описанным выше.
Таблица 1
: Условия эксперимента
Информация о приборе
Прибор
Waters TQS C
Ионизация
ESI+
Режим
MRM
Условия масс-спектрометрии
Напряжение на капилляре (кВ)
0,7
Температура десольватации (°C)
600
Скорость газового потока в конусе (л/ч)
150
Скорость газового потока десольватации (л/ч)
1200
Режим разрешения
единица
Разрешение MS1(МС1)
0,75
Разрешение MS2(МС2)
0,75
Условия жидкостной хроматографии
Параметр
установка
Колонка
Acquity СВЭЖХ BEH C18 1,7 мкМ 2,1×50 мм
Температура колонки
40°C
Скорость потока
0,8 мл/мин
Объем введенной пробы
3 мкл
Подвижная фаза A
0,1% муравьиная кислота в воде (об/об)
Подвижная фаза B
0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле (об/об)
Профиль градиента
Время (мин)
Подвижная фаза B (%)
0
2
0,25
2
0,5
50
1
98
1,75
98
2,6
2
Время удерживания
линезолид
0,72 мин
Переходы соединений
Соединение
Исходное вещество (масса/заряд)
Продукт (масса/заряд)
Автозадержка
Задержка
Конус (В)
Столкновение (В)
Толбутамид
271,16
172,14
1
0,019
10
10
Лабеталол
329,24
162,24
1
0,019
50
34
Линезолид_a
725,43
144,09
1
0,019
38
14
Линезолид_b
725,43
241,97
1
0,019
38
50
Фармакокинетический анализ проводили с использованием программного обеспечения Phoenix WinNonL, версия 6.4, используя средние данные исследования четырех дисков от каждого животного, некомпартментный анализ и единообразное взвешивание, моменты номинального времени и фактическое количество линезолида, вводимого в диски. Данные измерений исключали из фармакокинетического анализа, если доза считалась меньше номинальной, например, наблюдалась значительная утечка.
Экстракция и определение количества S. aureus в овечьем межпозвоночном диске
1.7
S. aureus
Ядро каждого межпозвоночного диска помещали в пластиковую пробирку с шариками для измельчения Precellys объемом 7 мл, содержащую 2 мл стерильного фосфатно-солевого буфера (PBS) или пластиковый контейнер Sterilin bijoux объемом 6 мл. Гомогенизацию каждого ядра межпозвоночного диска в той степени, в которой это было достижимо, проводили дважды в гомогенизаторе с шариками для измельчения Precellys 24BB при 6500 об/мин в течение 45 секунд с 30-секундным паузами между каждым этапом гомогенизации. Образцы (около 100 мкл) удаляли и 10-кратно серийно разводили в стерильном PBS перед посевом на маннитно-солевой агар (MSA; Thermo Scientific CM0085) путем распределения или методом Miles и Misra (https://en.wikipedia.org/wiki/Miles_and_Misra_method). Планшеты с маннитно-солевым агаром (MSA) инкубировали в воздухе окружающей среды при 37°C в течение приблизительно 16 часов и определяли количество жизнеспособных  (ATCC 29213).
Пример 2: Методы оценки стабильности линезолида в композиционных препаратах
Ультраэффективную жидкостную хроматографию (СВЭЖХ) использовали для анализа количества и стабильности линезолида в композиционных препаратах. Анализ осуществляли посредством системы Waters Acquity, оснащенной детектором с диодной матрицей и одноквадрупольным масс-спектрометром под управлением программного обеспечения MassLynx. Данные метода приведены ниже в таблице 2.
Таблица 2
: СВЭЖХ для анализа линезолида
Колонка
BEH C18 1,7 мкм 100×2,1 мм
Температура колонки
40°C
Объем вводимой пробы
1 мкл
Детектирование
УФ-диодная матрица 200-500 нм
Фаза A
0,1% Муравьиная кислота в воде
Фаза B
0,15 Муравьиная кислота в ацетонитриле
Скорость потока 0,4 мл/мин
Время (мин)
% Фаза A
% Фаза B
0
95
5
0,4
95
5
6
5
95
6,8
5
95
7,0
95
5
8,0
95
5
Пример 3: Методы анализа количества йогексола в рецептурных препаратах
ВЭЖХ использовали для оценки чистоты и количества йогексола в композиционных препаратах. Данные используемого метода представлены ниже в таблице 3.
Таблица 3
: ВЭЖХ для анализа йогексола
Параметр
Метод ВЭЖХ
Колонка
ACE Excel C18 Амид (100×1,2 мм, 1,7 мкм)
Темп. колонки
40°
Скорость потока
0,23 мл/мин
Подвижная фаза A
ВЭЖХ вода
Подвижная фаза B
ВЭЖХ вода:ацетонитрил 1:1 об/об
Градиент
Время (мин)
A (% об/об)
B (% об/об)
0
90
10
2
90
10
5
10
90
7,5
10
90
7,6
90
10
15
90
10
Объем вводимой пробы
0,4 мкл
Время анализа
15 мин
УФ
254 нм
Фотодиодная матрица
180-300 нм
Растворитель для промывки/очистки
Подвижная фаза B
Разбавитель
ВЭЖХ вода: ацетонитрил (95:5 об/об)
Пример 4: Получение суспензии линезолида
4.1. Воздушноструйное измельчение линезолида формы II и формы III
Для оценки возможности разработки суспензии линезолида с линезолидными наполнениями 50 и 200 мг/мл определяли кратковременную физическую стабильность композиций, включая размер частиц, полидисперсность и гомогенность. Затем добавляли различные концентрации полоксамера 407 и определяли температуру перехода золь-гель и способность суспензии проходить через иглу при введении/проходимость через иглу.
Выбирали различные кристаллические формы линезолида и исследовали на возможность их суспендирования. Две кристаллические модификации (полиморфы) линезолида: форму II (FII) и форму III (FIII) получали от компании Symed labs Ltd (Индия). Приблизительно 1 г каждой из форм II и III подвергали струйному измельчению посредством струйного измельчителя LaboMill (F.P.S. Food and Pharma Systems s.r.l, Italy) с давлением в линии впрыска 7 бар и в линии измельчения 4 бар. Распределение частиц по размеру необработанного и измельченного воздухом материала анализировали с помощью лазерной дифракции (Sympatec GmbH, Helos Disperse). В диспергатор сухого порошка (RODOS/M) помещали 5 мг каждого образца. Перед обработкой каждого образца в течение 5 секунд при оптической концентрации 2% проводили контрольное измерение. Результаты получали при давлении 3 бар с использованием линз R1 (0,18-0,35 мкм) и R2 (0,25/0,45-87,5 мкм) (таблица 4). Данные собирали с использованием датчика HELOS и анализировали с использованием программного обеспечения Windox5.
Таблица 4
(FII)
(FIII)
: Распределение частиц по размерам необработанных и измельченных на струйном измельчителе форм II и III
API
Обработанные
Распределение частиц по размерам (мкм)Метод: Линзы-R1 (0,1-35 мкм)/R2 (0,25/0,45-87,5 мкм)Давление диспергирования: 3 бар 10 мм/с
Объем частиц по размеру частиц
X<sub>10</sub>
X<sub>50</sub>
X<sub>90</sub>
VMD (среднеобъемный диаметр в мкм)
FII
Необработанные (до измельчения)
0,94
3,79
44,75
14,70
Измельченные в струйном измельчителе
0,61±0,01
1,79±0,03
3,95±0,04
2,07
FIII
Необработанные (до измельчения)
1,03
4,33
11,46
5,52
Измельченные в струйном измельчителе
0,63±0,01
2,06±0,02
4,50±0,12
2,38
90
Распределение частиц по размеру Х после измельчения было одинаковым для обеих форм линезолида.
4.2. Суспензия измельченного линезолида формы II и формы III
Взвешивали 50 мг каждой формы и добавляли один мл полоксамерного носителя. Частицы ресуспендировали путем встряхивания вручную в течение одной минуты. Измельченные воздушной струей частицы формы II рассеивались равномерно. Частицы формы III образовывали комки и рассеивались неравномерно. Это наблюдение указывает на то, что форма линезолида II была предпочтительнее формы III вследствие ее лучшех свойств образовывать суспензии.
4.3. Масштабированное измельчение линезолида формы II и распределение частиц по размерам
Линезолид формы II (Symed, India) в количестве 0,5 кг измельчали посредством воздушной струи с получением микронизированного линезолида формы II для разработки композиции. Микронизацию осуществляли с использованием следующего метода, представленного в таблице 5.
Таблица 5
: Микронизация линезолида формы II
MC Jet Mill 50 (Dec Group)
Скорость подачи 25 г/30 секунд
Продолжительность 6,75 мин
Давление в трубке Вентури 1,6 бар
Давление измельчения 1,6 бар
Торец барабана d10=0,71 мкм, d50=3,11 мкм, d90=8,45 мкм
Размер частиц анализировали, как показано на фигуре 1
4.4. Стерилизация API (активный фармацевтический ингредиент): Линезолид формы II
Стерилизация измельченного порошка может быть достигнута стерилизацией сухим жаром или гамма-излучением. Изучение технической осуществимости стерилизации проводили с использованием стеклянных сосудов, содержащих 200 мг измельченного линезолида формы II.
Сухой жар
Сосуды, содержащие 200 мг микронизированного линезолида или spordex диски (AF0558: Steris Life Sciences, UK), инкубировали при температуре от 120 до 160°С в течение 2-50 часов, как указано в таблице 6. Внешний вид и химическую стабильность (метод из примера 2) порошкообразного линезолида формы II оценивали в каждый момент времени при определенной температуре. Диски со спорами культивировали в течение 7 дней при 30-35°С и регистрировали рост.
Таблица 6
: Стерилизация API сухим жаром
Темп. (°C)
120
120
130
130
130
140
140
140
160
Время (ч)
20
50
8
20
50
4
8
20
2
Внешний вид
Порошок
Порошок
Желтая жидкость
Желтая жидкость
Желтая жидкость
Желтая жидкость
Порошок
Желтая жидкость
Желтая жидкость
Ожидаемая химическая стабильность исходного вещества в % (2-8°C (контроль) t=0
100
99
39
26
19
52
97
17
16
Стерильность
Стерильный
Стерильный
Стерильная
Стерильная
Стерильная
Стерильная
Стерильный
Стерильная
Стерильная
Диски Sporedex, хранящиеся при 2-8°C, служили в качестве положительного контроля для роста бактерий, который наблюдался после 1 дня инкубации.
6
При всех условиях исследования стерилизации сухим жаром диски со спорами были стерилизованы, что свидетельствует о достижении >10 снижения бионагрузки. За исключением обработки при 140°С в течение 8 часов, нагревание порошка линезолида выше 120°С приводило к физическому переходу от порошка к вязкой жидкости желтого цвета и значительному снижению процента присутствующего линезолида. Нестабильность при обработке и при температуре выше 130°С предполагает, что стерилизация сухим жаром при или около 120°С может быть осуществимой, но технически сложной в масштабном процессе, поскольку незначительные колебания температуры могут привести к повышению температуры и нестабильности. Стерилизация с использованием относительно низкой температуры в течение длительного времени потребует масштабной оценки и выходит за рамки стандартных рекомендаций фармакопеи по стерилизации сухим жаром.
Гамма-облучение
Флаконы, содержащие 200 мг микронизированного линезолида, наполняли воздухом или азотом и подвергали гамма-облучению 15 кГр или 25 кГр при температуре окружающей среды или на холоде путем упаковки со льдом. Внешний вид и химическую стабильность (метод примера 2) оценивали в нулевой момент времени после облучения, а также через 28 днй хранения при 25 или 40°C для оценки долгосрочной стабильности (таблица 7).
Таблица 7
: Стерилизация API гамма-излучением
Атмосфера
Воздух
Азот
кГр
-
15
25
-
15
25
Темп.
хол.
к.т.
хол.
к.т..
хол.
к.т..
хол.
к.т..
хол.
к.т..
хол.
к.т..
Внешний вид
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
Стабильность % t=0
100
100
99
99,5
100
100
100
99,5
100
100
100
100,5
Стабильность % 25°C день 28
98,1
99,5
99,4
99,4
99,6
100
99,6
98,7
97,5
98,8
100
99,6
Стабильность % 40°C день 28
99,6
100,1
98,0
99,1
99,7
98,9
99
97,7
99,3
99,5
99,3
99,4
*Внешний вид: P = белый порошок. Оценки стабильности соответствует среднему значению дубликатов. Т=0 и через 28 дней хранения при 25°С или 40°С.
Не наблюдали каких-либо грубых изменений внешнего вида или цвета порошка после облучения ни при одном из условий. Химическая стабильность через 28 дней после облучения была хорошей и соответствовала ожиданиям. Отсутствовали какие-либо указания на то, что порошок должен помещаться в сосуд в атмосфере азота или что образцы должны охлаждаться в процессе облучения.
Гамма-облучение, вероятно, обеспечивает надежный способ стерилизации, который соответствует рекомендациям фармакопеи. Данные также свидетельствуют о том, что гамма-излучение не оказывает влияние на стабильность линезолида. Гамма-облучение является предпочтительным методом стерилизации измельченного помещенного в сосуд порошкообразного линезолида формы II.
Пример 5: Оптимизация средства доставки: гелевый носитель на основе полоксамера
5.1 Получение гидрогеля полоксамера
Для подготовки носителя полоксамера для инъекции линезолида использовали общеизвестную процедуру. Гидрогели полоксамера образуются с использованием холодного метода с модификациями, описанного в данной области техники (Schmolka, Journal of Biomedical Materials Research, 1972, Vol 6 (6): 571-582). Трометаминовый рН буфер, хелатир динатрий кальция ЭДТА и рентгеноконтрастное вещество йогексол сначала подготавливают в воде, а затем добавляют полоксамер 407. Смесь оставляют на холоде, пока полоксамер не гидратируется до прозрачного раствора. Этот носитель для инъекций составлен по массе вещества. Для оптимизации условий, процедуру повторяли до тех пор, пока не была определена подходящая композиция. Целевые концентрации и диапазоны для трометамина, ЭДТА и йогексола в конечной суспензии линезолида для инъекции задаются при помощи массы и объема.
5.2. Температура золь-гель перехода полоксамерного гидрогеля с добавлением йогексола
2
В одном из исследований, получали три носителя, начиная с разных концентраций йода, обеспечиваемых йогексолом: V150, V170 и V190, и с одинаковыми концентрациями трометамина и CaNaEDTA. Каждый носитель разделяли на два и добавляли полоксамер 407 в концентрации 12% по массе или 12,5% по массе соответственно. Объемы 12% и 12,5% по массе полоксамерных носителей и, соответственно, их плотности отличались незначительно. Оценивали золь-гель 6 композиций с оценкой влияния концентраций йода (йогексол) и полоксамера. Образцы классифицировали в соответствии с их реологическими свойствами, которые оценивались путем нагревания образцов от комнатной температуры до 40°C с интервалами 2°C и переворачивания сосуда: жидкость (L) - при быстром движении в направлении силы тяжести, вязкая жидкость (VL) и VVL - при медленном движении вниз в направлении силы тяжести и в виде геля (G) - когда образец остается на дне сосуда. Последний случай относили к температуре золь-гель перехода (таблица 8).
Таблица 8:
Полоксамер и йогексол в золь-гель композициях
Исследования
Носители
Йогексол(V 150 мг I/мл)
Йогексол(V 170 мг I/мл)
Йогексол(V 190 мг I/мл)
12% по массе
12.5% по массе
12% по массе
12.5% по массе
12% по массе
12.5% по массе
Плотность носителя(г/мл)
1,1415
1,1706
1,2010
Плотность (г/мл)
1,1682
1,1678
1,1881
1,1872
1,2084
1,2078
Температура соответствущая плотности (°C)
11
7
8
7
8
8
Осмоляльность мОсмол/л
500±14,1
492±5,7
575±23,3
589±13,43
673±7,5
687±3,5
Йогексол % по массе
24,0
27,0
30,0
Йогексол мг/мл
274,08
316,17
360,30
pH носителя
8,05
8,05
8,06
pH температура (°C)
17,9
18
20,6
pH
7,91
7,89
7,92
7,90
8,07
8,08
pH температура (<sup>o</sup>C)
20,2
20,4
20,6
21,3
21,1
20,5
Золь гель
28°C
L
L
L
L
L
G
30°C
L
L
L
L
VL
32°C
L
VL
VL
G
VL
34°C
L
G
VL
VL
36°C
L
VL
G
38°C
L
VVL
40°C
L*
VVL*
*образцы не являющиеся гелем
L = жидкость; G = гель; VL = вязкая жидкость и VVL = очень вязкая жидкость
Осмолярность увеличивается с увеличением содержания йогексола и полоксамера. Плотность также увеличилась с увеличением концентрации йогексола. Однако плотности 12% по массе и 12,5% по массе полоксамера для одного и того же носителя одинаковы (таблица 8).
При начальной концентрации 150 мг I/мл или 170 мг I/мл и 12,5% по массе полоксамера 407 достигалась целевая температура гелеобразования раствора в диапазоне 32-34°C для носителя. Тем не менее, при 190 мг I/мл носитель превращается в гель при 36°C с 12,0% по массе полоксамера 407, а также превращается в гель при 28°C с 12,5% по массе полоксамера 407, что предполагает, что оптимальная концентрация полоксамера 407 будет между 12,0% и 12,5% по массе в носителе, имеющем 190 мг I/мл.
5.3 Разработка композиции полоксамера с линезолидом
Микронизированный порошок линезолида, полученный способом, описанным в примере 4, смешивают с раствором полоксамера непосредственно перед введением. Целевая конечная концентрация линезолида при инъекции установлена на уровне 50 мг/мл. Концентрация линезолида 50 мг/мл может быть достигнута путем ресуспендирования ~200 мг порошка линезолида в приблизительно 3,8 мл полоксамерного носителя до конечного объема приблизительно 4,0 мл. Другие количества линезолида и полоксамерного носителя могут достигать анаогичной концентрации, например, 100 мг линезолида с 1,9 мл полоксамерного носителя.
5.4 Процедуры получения композиции
Для анализа добавления API (линезолида) в полоксамерный носитель, проводили другое исследование. В соответствии со способом получения, изложенным ниже, получали 300 г полоксамерного носителя (таблица 9).
Таблица 9
: Получение раствора, содержащего йогексол
Вещество
Носитель
% по массе
Масса (г), необходимая для 300 г носителя
Йогексол
32,743
98,229
Трометамин
0,122
0,366
Динатрий кальция ЭДТА
0,011
0,033
Деионизированная вода и доведение pH до значения, равного 8,0
67,124
201,372
Всего
100%
300 г
Стадия А. Способ получения 300 г раствора, содержащего йогексол:
1. Регистрация сухой массы лабораторного сосуда объемом 500 мл и добавление 150 г воды в лабораторный сосуд;
2. Дозирование необходимой массы трометамина, динатрий кальция ЭДТА и йогексола (таблица 9) в лабораторный сосуд и регистрация массы каждого добавленного компонента;
3. Смешивание смеси до полного растворения всех твердых веществ и, при необходимости, добавление дополнительного количества воды для растворения, если воды недостаточно для растворения твердых веществ;
4. Взвешивание лабораторного сосуда и затем доведение значения pH до 8,0 с помощью 5М HCl. Если значение рН уже близко к 8,0, то может потребоваться получение менее концентрированного раствора HCl.
5. Регистрация количества кислоты, используемой для корректировки pH, путем регистрации массы лабораторного сосуда;
6. Добавление оставшейся воды с тем, чтобы общая масса продукта составляла 300 г;
7. Регистрация внешнего вида и измерение плотности в двух экземплярах; и
8. Вычисление % масса/объем гелевой композиции путем умножения фактических значений % по массе вспомогательных веществ на значение плотности в г/мл;
Разделяли 300 г носителя на три части и добавляли полоксамер 407, как указано в таблице 10, в соответствии со способом производства полоксамерного геля.
Таблица 10
: Получение раствора полоксамера
Вещество
Гель 1
Гель 2
Гель 3
% по массе
Масса (г), необходимая для получения 100 г
% по массе
Масса (г), необходимая для приготовления 100 г
% по массе
Масса (г), необходимая для получения 100 г
Полоксамер
12,00
12,00
12,25
12,25
12,50
12,50
Носитель(Стадия A)
88,00
88,00
87,75
87,75
87,50
87,50
Всего
100,00%
100,00g
100,00%
100,00g
100,00%
100,00g
Стадия Б: Способ изготовления раствора полоксамер-йогексол:
1. Взвешивание необходимой массы носителя (из стадии А) для каждого геля в лабораторном сосуде объемом 150 мл (таблица 10) и помещение трех лабораторных сосудов в холодильник, по крайней мере, на 1 час для охлаждения;
2. Медленное добавление необходимого количества полоксамера 407 при температуре окружающей среды в охлажденный носитель с помощью мешалки с верхним приводом, пока смесь не станет однородной; и регистрация внешнего вида;
3. Помещение лабораторных сосудов в холодильник на ночь;
4. Проверка, на следующий день, того, что прозрачный раствор был сформирован, и тщательное перемешивание с помощью шпателя или аналогичного инструмента для подтверждения того, что раствор является однородным;
5. Измерение плотности с помощью алюминиевого пикнометра; и регистрация внешнего вида и хранение всей пробы в холодильнике до тех пор, пока не потребуются для анализа; и
6. Вычисление % масса/объем гелевой композиции путем умножения фактических значений % по массе вспомогательных веществ на значение плотности в г/мл.
Сначала проводили анализ золь-гель перехода с использованием 2×5 мл образцов каждого геля 1, геля 2 и геля 3. Если температура золь-гель перехода находится между целевыми температурами в диапазоне 30-34°С, добавляли измельченный на воздушном струйном измельчителе стандарта GMP порошок линезолида с получением раствора, содержащего линезолид в концентрации 50 мг/мл, и повторно проверили температуру золь-гель перехода следующим образом.
1. Распределение 200 мг измельченного линезолида в два прозрачных тарированных 8 мл-овых сосуда;
2. Добавление 3,8 мл геля 1, геля 2 или геля 3, приготовленного выше, в каждый сосуд; и
3. Энергичное встряхивание сосудов для суспендирования API (линезолида) и регистрация внешнего вида.
Таблица 11
: Полоксамерные композиции линезолида
Суспензия линезолида с гелем 1
Суспензия линезолида с гелем 2
Суспензия линезолида с гелем 3
Полоксамер % (массовые проценты)
12,0
12,25
12,5
Золь гель °C
38
36
34
12,5% по массе полоксамерный гель, приготовленный с раствором, содержащим 32,743% (массовые проценты) йогексола, обеспечивал целевую температуру золь-гель перехода (34°С) для 50 мг/мл суспензии линезолида.
Пример 6: Составы полоксамерных средств доставки
Средство доставки, содержащее 12,5% по массе полоксамера 407 и 32,7% по массе йогексола (что определено в примере 5), получали в промежуточном масштабе, а затем в большем масштабе для проверки устойчивости и долгосрочной стабильности композиции. Эти дополнительные партии свидетельствуют о воспроизводимости.
Таблица 12
: Вещества
Вещество
% по массе
Масса (г), необходимая для получения 400 г
Йогексол
32,743
130,972
Трометамин
0,122
0,488
Динатрий кальция ЭДТА
0,011
0,044
Деионизированная вода & доведение значения рН до 8,0
67,124
268,496
Всего
100%
400 г
Способ изготовления полоксамерного носителя массой 400 г для инъекций включает стадии:
1. Регистрация сухой массы 600 мл-ового лабораторного сосуда; и добавление 200 г воды в лабораторный сосуд;
2. Дозирование необходимой массы трометамина, динатрия кальция ЭДТА и йогексола (таблица 12) в лабораторный сосуд; и регистрация массы каждого добавленного компонента;
3. Перемешивание смеси до полного растворения всех твердых веществ и добавление дополнительного количества воды для растворения, при необходимости;
4. Взвешивание лабораторного сосуда и затем доводят значение pH до 8,0, используя 5M HCl;
5. Добавление оставшейся воды с тем, чтобы общая масса продукта составляла 400 г;
6. Регистрация внешнего вида и измерение плотности в двух экземплярах;
7. Вычисление % масса/объем гелевой композиции путем умножения фактических значений на % по массе вспомогательных веществ;
8. Дозирование 175 г раствора йогексола (стадия 6 выше) в лабораторный сосуд объемом 250 мл и помещение лабораторного сосуда в холодильник, по крайней мере, на 1 час для охлаждения;
9. Медленное добавление 25 г полоксамера 407 (BASF Kolliphor 407: Batch no: WPNK538B (R/003191)) при температуре окружающей среды к холодному раствору йогексола с использованием мешалки с верхним приводом до тех пор, пока смесь не станет однородной;
10. Помещение лабораторного сосуда в холодильник на ночь; и проверка на следующий день того, что прозрачный раствор образовался, и тщательное перемешивание, используя шпатель или аналогичный инструмент для того, чтобы убедиться, что раствор однородный;
11. Измерение плотности с помощью алюминиевого пикнометра на образце объемом 30 мл и регистрация внешнего вида и хранение всей пробы в холодильнике до тех пор, пока они потребуются для исследования; и
12. Вычисление % масса/объем гелевой композиции путем умножения фактических значений % по массе вспомогательных веществ на значение плотности в г/мл.
Раствор полоксамера стерилизовали фильтрованием с использованием перистальтического насоса Watson-Marlow. Раствор полоксамера фильтровали через фильтр Sartopore 2 с размером пор 0,4 мкм (Part №5441307H4G). Количества полоксамера и йогексола и золь-гель температуру геля оценивали до и после фильтрования с тем, чтобы установить задерживался ли йогексол на фильтре или характеристики геля были изменены фильтрованием (таблица 13).
Таблица 13
: Результаты анализа для геля до и после фильтрования
Образец
Анализ
Момент времени
Результат
Полоксамерный носитель
Плотность (до фильтрования)
День 1
1,97 г/см<sup>3</sup>
Плотность (после фильтрования)
День 1
1,207 г/см<sup>3</sup>
Анализ йогексола (до фильтрования)
День 1
27,1% по массе
Йогексол (после фильтрования)
День 1
27,5% по массе
Золь гель
День 1
34°C
День 3
34°C
День 7
34°C
День 14
34°C
Результаты до и после фильтрования показали, что гель можно фильтровать с использованием перистальтического насоса и что фильтрование не изменяет состав геля и его характеристики. Различия в результатах анализа до и после фильтрации находятся в пределах допусков и спецификаций анализа. Фильтрование является предпочтительным методом стерилизации геля.
Затем линезолид загружали в гель и определяли золь-гель температуру. Результаты представлены в таблице 14, указывая на то, что суспензия, полученная в промежуточном масштабе, сохраняет требуемую золь-гель температуру.
Таблица 14
: Золь-гель температура суспензии линезолида
Образец
Анализ
Момент времени
Результат
Суспензия линезолида в полоксамерном носителе3,8 мл полоксамерного носителя плюс 200 мг линезолида
Анализ линезолида
День 1
47,7 мг/мл
Золь-гель
День 1
34°C
День 3
34°C
День 7
34°C
День 14
34°C
Пример 7: Фармакокинетика
in vivo
и эффективность композиции линезолида
in vivo
Было проведено предварительное исследование для проверки фармакокинетики  и эффективности суспензий линезолида, полученных в соответствии с описанными в настоящем документе способами производства.
Средство доставки, содержащее 16,6% (массовый процент) полоксамера, содержащего 50 мг/мл суспензию линезолида, получали в соответствии со способами производства, описанными в примерах 2-5. Вводили 0,1 мл этой суспензии линезолида в межпозвоночный диск овцы, как описано в примере 1. Как показано на фиг. 2, использование йогексола в композиции может обеспечить визуализирование вводимой композиции. Определяли фармакокинетику линезолида после внутридискового введения. На фиг. 3 показано количество линезолида, извлеченного из овечьих дисков после инъекции 5 мг дозы линезолида в каждый диск.
Эффективность анализируемых суспензии линезолида, показанная на фиг. 4, указывает на то, что введение суспензии линезолида уменьшало среднюю бактериальную нагрузку на межпозвоночный диск более чем на 3 log (P=0,009). Больше 60% дисков в обработанной группе были стерильными. В тех дисках, в которых сохранялись бактерии, нагрузка была значительно снижена.
Пример 8: Способность композиции линезолида проходить через иглу при введении
Способность суспензии проходить через иглу при введении оценивали с помощью иглы 25 калибра с тонким отверстием, которая длиннее, чем требуется для введения человеку (4,69 дюйма), чтобы гарантировать, что суспензия не будет задерживаться в игле или не будет слишком вязкой при прохождении через шприц. Подготавливали только гидрогель или суспензию линезолида, и шприц с винтовым соединением типа Люэр объемом 1 мл заполняли композицией. Иглу позиционировали, и гель или суспензию вводили через иглу. Результаты регистрировали следующим образом: 1= инъекция невозможна; ток жидкости отсутствует; или 2= инъекция возможна; излияние по каплям; или 3= инъекция: умеренная; непрерывный ток жидкости. Бальная оценка геля и суспензий, 2 или 3, соответствует спицификации.
Пример 9: Масштабное получение суспензии линезолида
Далее следует отметить, что суспензия линезолида в растворе для доставки, содержащем полоксамер-йогексол, которая оптимизирована по настоящему изобретению, изготавливается в большем масштабе и в соответствии с действующими стандартами Good Manufacturing Practice (GMP). Композиция стерильна и готова к клиническому применению.
9.1 Микронизация и заполнение линезолидом формы II (API) в сосуды
С целью уменьшить размер линезолида формы II, для придания формы суспензии в композиции и прохождения через иглы для введения, линезолидную форму II микронизировали путем воздушноструйного измельчения. Крупные кристаллы линезолида формы II (около 1-2 кг) микронизировали в атмосфере азота с использованием струйного измельчителя LaboMill (F.P.S. Food and Pharma Systems s.r.l, Italy) со скоростью подачи от 60 г/мин до 160 г/мин, при давлении измельчения от 2 до 4 бар и давлении в трубке Вентури от 2 до 4 бар. Распределение частиц по размеру необработанного и измельченного воздухом вещества анализировали посредством лазерной дифракции (Sympatec GmbH, Helos Disperse). Собирали и анализировали данные о распределении по размерам для неизмельченного порошка (R1) и измельченного порошка (R4). Воздушноструйное измельчение уменьшило размер частиц с D10 4-6 мкм (D10, 10% по массе образца составляют частицы с диаметром меньше этого диапазона) и D90 40-50 мкм (D90, 90% по массе образца составляют частицы с диаметром меньше этого диапазона) распределения частиц по размеру до D10 0,4-0,50 мкм и D90 4-5 мкм. Спецификации для микронизированного линезолида формы II были установлены на уровне D10 0,2-1,0 мкм, D90 3-10 мкм. При масштабе от 1 кг до 1,5 кг, микронизация обеспечивала выход от 87% до 89% указанного в спецификации порошкообразного линезолида формы II.
Микронизированный порошкообразный линезолид формы II помещали в 10 мл трубчатые прозрачные стеклянные сосуды Schott Type I из расчета 253 мг ±2 мг на сосуд вручную и закрывали бромбутиловыми эластомерными пробками West 4023/50 серого цвета, которые покрыты FluroTec на поверхности контакта с продуктом, и покрывали алюминиевыми уплотнениями. Приблизительно 2400 сосудов наполнили приблизительно 608 г микронизированного линезолида формы II (промежуточный лекарственный продукт: PP353-A).
9.2 Стерилизация линезолида (FII)
Подвергали ~2400 сосудов стерилизции гамма-излучением с использованием источника Cobalt 60 при ~23,5±10% кГр при температуре окружающей среды. Облученные сосуды с линезолидом формы II помечались как PP353-A. Стерильность облученного порошкообразного линезолида формы II проверяли в соответствии с требованиями фармацевтической стерильности (ЕР 2.6.1).
Содержимое 20 сосудов (20×253 мг линезолида) растворяли в 2500 мл стерильной воды при инкубации при температуре 35-39°С со встряхиванием (±200 об/мин) до растворения продукта. Фильтровали 200 мл раствора линезолида через устройство Durapore Steritest, предварительно увлажненное жидкостью D (включая 1,0 г пепсинового гидролизата животной ткани, 1 мл полисорбата 80, 1000 мл очищенной воды, pH: 7,1±0,2). Каждую мембрану промывали 5 раз 100 мл жидкости D. Одну емкость заполняли 100 мл TSB+1% Tween+0,07% лецитин (включая 17,0 г панкреатического гидролизата казеина, 3,0 г папаинового гидролизата соевой муки, 5,0 г хлорида натрия, 2,5 г гидрофосфата дикалия, 2,5 г моногидрата глюкозы, 10 мл полисорбата 80, 0,7 г лецитина, 1000 мл очищенной воды, pH 7,3±0,2) и инкубировали при 20-25°C в течение 14 дней. Другую емкость заполняли 100 мл FTM (жидкий тиогликолят) +1% Tween +0,07% лецитин (включая 0,5 г L-цистина, 0,75 г гранулированного агара, 2,5 г хлорида натрия, 5,5 г/5,0 г моногидрата глюкозы/безводной, 5,0 г дрожжевого экстракта, 15,0 г панкреатического гидролизата казеина, 0,5 г тиогликолята натрия или 0,3 мл тиогликолевой кислоты, 1,0 мл свежеприготовленного раствора натрия резазурина, 10 мл полисорбата 80, 0,7 г лецитина, 1000 мл очищенной воды, pH 7,1±0,2) и выдерживают при 30°С -35°С в течение 14 дней. Все растворы стерилизовали утвержденным способом. Через 14 дней инкубации, в образцах не наблюдали рост, что указывало на то, что образцы РР353-А были стерильными.
9.3 Масштабное получение разбавителя (средства доставки)
Получение раствора для доставки (раствор полоксамера 407 и йогексола) осуществляли в масштабе 18,4 л (~22 кг) с последующей стерилизацией путем асептического наполнения в 10 мл-овые прозрачные стеклянные сосуды Type I от компании Schott с целевой массой наполнения 8,40 г (эквивалентно номинальному объему наполнения 7 мл). Раствор получали в объеме до 2400 сосудов и обозначали как промежуточный лекарственный продукт PP353-B.
Таблица 15
: Состав раствора средства доставки (PP353-B)
Poloxamer Kolliphor 407
149,50 г
Йогексол
342,65 г
Динатрий кальция ЭДТА
0,100 г
Трометамин
1,210 г
1M раствор соляной кислоты
при необходимости
Вода для инъекций (WFI)
до 1196,0 г
Целевой рН промежуточной композиции(значение рН перед добавлением полоксамера и доведения конечной композиции до заданной массы)
pH 8,00±0,20
Получали 22 кг раствора для доставки (PP353-B) в соответствии со следующими стадиями:
1. Добавление 22,257 г трометамина к 11500 г предварительно охлажденной (5°C) WFI в сосуде объемом 20 л и перемешивание до растворения трометамина;
2. Добавление 1,839 г динатрия кальция ЭДТА и перемешивание до растворения, и затем добавление 6,303 г йогексола и перемешивание до растворения;
3. (необязательно). Регулирование рН раствора до значения, равного около 8,0 (приемлемый диапазон рН от 7,70 до рН 8,20), с помощью 1М соляной кислоты;
4. Добавление дополнительного количества предварительно охлажденной WFI с получением чистой массы, составляющей 18750 г;
5. Медленное добавление 2750 г полоксамера 407 частями, по около 100 г, при перемешивании; и обеспечение возможности любому скомковавшимуся полоксамеру распадаться и диспергироваться перед дальнейшими добавлениями; и
6. Добавление дополнительного количества предварительно охлажденной WFI с получением конечной целевой массы, составляющей 22000 г, эквивалентной номинальному объему 18,4 л, и перемешивание до растворения полоксамера.
Композицию охлаждали, поскольку полоксамер растворяется быстрее и имеет более низкую вязкость при более низких температурах. Конечный раствор полоксамера PP353-B имеет плотность 1,196 г/мл при 15°C.
Охлажденный продукт PP353-B стерилизовали путем двойного фильтрования. Раствор (PP353-B), с использованием перистальтического насоса, пропускали сначала через фильтр Sartopore 2 XLG Midicap в 8-перчаточный многоцелевой изолятор для наполнения, а затем через второй поточный фильтр Sartopore 2 XLG Midicap. Раствор охлаждали для снижения вязкости и облегчения прохождения через насос и фильтры. Стерильный PP353-B выдерживали при 15°C в 10 л-овых сосудах внутри изолятора. Этот температурный контроль устанавливали для определения плотности и гравиметрического наполнения сосудов. Стерильный раствор упаковывали в 10 мл-овые цилиндрические прозрачные стеклянные сосуды Type I от фирмы Schott по 7,0 мл (8,4 г) стерильного раствора на каждый сосуд, используя насос Masterflex, и закрывали бромбутиловыми эластомерными пробками West 4023/50 серого цвета, которые покрыты FluroTec на поверхность контакта с продуктом, и покрывли алюминиевыми уплотнениями. Примерно 2400 сосудов заполняли 22 кг раствора (PP353-B).
Стерильность PP353-B исследовали в соответствии с требованиями, установленными в EP 2.6.1. Двадцать сосудов с PP353-B распределяли между двумя контейнерами Steritest и фильтровали. Каждую канистру промывали приблизительно 300 мл жидкости A (0,1% пептонная вода). Контейнеры Steritest заполняли 100 мл жидкой соево-казеиновой среды (TSB) или жидкой тиогликолевой среды (FTM) и инкубировали в течение 14 дней. Отсутствие роста в культурах указывает на стерильность PP353-B.
9.4 Реологические свойства разбавителя
Температуру перехода раствора PP353-B оценивали в трех экземплярах в соответствии с золь-гель методом, описанным ниже:
1. Подготовка сосуда с “рубашкой”, содержащего деионизированную воду, и подсоединение сосуда к водяной бане с рециркуляцией;
2. Установка температуры водяной бани на уровне 22°C и измерение температуры в сосуде с рубашкой с использованием калиброванного термометра или термозонда;
3. Размещение образцов в сосуде с рубашкой, когда температура воды в сосуде с рубашкой находится на уровне 22°C и стабильна (±0,5°C в течение не менее 5 минут);
4. Оставление образцов на 15-20 минут для приведения температуры к 22°C;
5. Извлечение сосудов из сосуда с рубашкой и немедленное переворачивание для оценки характера изменения свойств перехода жидкость-гель; и немедленная классификация образцов по визуальным реологическим свойствам: 1) жидкость - быстрое движение в направлении силы тяжести; 2) вязкая жидкость - медленное движение вниз в направлении силы тяжести и 3) гель - если остается на дне сосуда;
6. (необязательно) ресуспендирование образцов и перенос обратно в сосуд с рубашкой как можно скорее, пока образцы не превратились в гель; и повышение температуры водяной бани на 2°С;
7. Регистрация характера изменения свойств перехода жидкость-гель;
8. Оставление образцов в течение дополнительных 15 минут для приведения к той же температуре после того, как температура воды в сосуде с рубашкой стабилизируется (±0,5°C) в течение 5 минут; и
9. Повторение описанных выше стадий (5), (6), (7) и (8) до тех пор, пока температура не достигнет 40°C.
Температура золь-гель перехода во всех трех анализируемых сосудах с раствором PP353-B составляла 28°C.
9.5 Получение композиции суспензии линезолида формы II
Сосуды, содержащие микронизированный и стерильный порошок линезолида (API), полученный в соответствии с вышеописанными стадиями, (9.1 и 9.2) (т.е. PP353-A), использовали для получения суспензий линезолида. Каждый сосуд содержал 253 мг API. Сосуды, содержащие стерильный раствор, полученный в соответствии с описанным выше методом (9.3 и 9.4) (т.е. PP353-B), использовали в качестве разбавителя. Каждый сосуд содержал 7 мл разбавителя PP353-B.
Для получения суспензии линезолида, приблизительно 4,8 мл раствора PP353-B переносили в сосуд с PP353-A. Содержимое сосуда перемешивали встряхиванием до тех пор, пока не наблюдали твердый порошок (около 1-1,5 минуты). Процесс осуществляли осторожно, чтобы избежать повышения температуры сосуда. Окончательный объем восстановленного содержимого одного сосуда составлял около 5 мл. Окончательная суспензия линезолида в разбавителе маркировалась как лекарственный продукт PP353.
9.4
Температуру золь-гель перехода в суспензии РР353 определяли в трех экземплярах в соответствии с золь-гель методом, описанным в пункте .
Температура золь-гель перехода во всех трех исследованных сосудах (PP353) составляла 28°C. Было замечено, что получаемые в меньших масштабах не соответствующих стандарту GMP продукты на основе композиций суспензии линезолида и полоксамерного гидрогеля имеют более высокие температуры золь-гель перехода в диапазоне 32°C-36°C (примеры 5 и 6), тогда как получаемые в большом масштабе GMP продукты на основе суспензий линезолида и геля, имеют более низкую температуру золь-гель перехода, равную 28°C. Результаты показывают, что суспензии линезолида и растворов гидрогеля на основе полоксамера имеют широкий диапазон температур золь-гель перехода, по меньшей мере, от около 28°C до около 36°C.
Пример 10. Способность суспензии линезолида проходить через иглу при введении (PP353)
Суспензии линезолида, полученные из этого получаемого в масштабе GMP препарата (PP353), дополнительно исследовали на способность проходить через инъекционную иглу с обеспечением возможности введения. В этом исследовании способность суспензии (PP353) проходить через иглу при введении анализировали с использованием метода двойной иглы и подогретого батата в качестве суррогата ткани пациента.
Батат нагревали до 37°С на водяной бане. 5-дюймовую (127 мм) иглу 18-го размера по шкале Шарьера вводили через батат. Эта игла представляет собой направляющую иглу, которая должна позиционироваться у пациента под визуализационным контролем с использованием флюороскопии, так, чтобы острие иглы располагалось рядом с межпозвоночным диском для инъекции. Затем через направляющую иглу вводили еще одну 7-дюймовую (178 мм) иглу 22-го размера по шкале Шарьера, пока ее конец не выступал из 5-дюймовой направляющей иглы. Эта игла представляет собой иглу для введения, которая вводиться в межпозвоночный диск для инъекции. Две иглы оставляли нагреваться до 37°C в батате. Шприц объемом 1 мл, заполненный суспензией линезолида (из РР353), которая находилась при комнатной температуре, присоединяли к игле для введения. Затем суспензию вводили через нагретую иглу и наблюдали, что суспензия выдавливается из иглы в виде геля, а не капает в виде жидкости (фиг. 5). Этот эксперимент продемонстрировал, что суспензию линезолида с более низкой температурой золь-гель перехода (т.е. PP353 при 28°C) можно вводить через теплую иглу для введения, и во время процесса она превращается из жидкости в гель внутри иглы.
Это наблюдение указывает на то, что, клинически, инъекция предварительно сформированного гидрогеля может локализовать введение к месту введения и минимизировать любую экстравазацию из места введения, например межпозвоночного диска пациента.
Пример 11. Системный фармакологический профиль суспензии линезолида РР353
Для определения системного фармакологического профиля продукта PP353, овцам (n=27, 3 на каждую экспериментальную группу) дозировали суспензию линезолида (PP353) путем внутридискового введения в соответствии с процедурой введения, описанной в разделе 1.3 примера 1. Рентгеновские изображения получали на протяжении всей процедуры инъекции, чтобы идентифицировать целевые позвоночные диски для содействия процедуре инъекции и в качестве показателя успешного дозирования. Композицию линезолида РР353 (0,1 мл суспензии, содержащей 5 мг линезолида) инъецировали в два диска одной овцы. Тот же объем носителя для доставки полоксамера-йогексола (то есть PP353-B) (0,1 мл) дозировали овцам в контрольных группах. Образцы крови отбирали в 0 минут (до введения исследуемого вещества) и через 15 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 8 часов, 16 часов, 30 часов и 48 часов после введения дозы.
Все образцы крови обрабатывали, и концентрацию линезолида в экстрактах плазмы измеряли и определяли с использованием ЖХ-МС/МС в соответствии с правилами GLP (Good Laboratory Practice для неклинических лабораторных исследований). Как показано на фиг. 6, концентрация линезолида в плазме имеет характер изменения, аналогичный наблюдаемому ранее с экспериментальными продуктами композиций (например, примеры 4-7). Небольшой объем инъекции (например, 0,1 мл) суспензии в овечьи диски может минимизировать потенциальный депонирующий эффект.
in vivo
Таким образом, эти наблюдения подтверждают возможность инъекции препарата  при относительно низкой температуре гелеобразования (например, 28°C) и высвобождения линезолида из препарата в окружающие ткани и кровь.