СПОСОБ ОЦЕНКИ ИНДУЦИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ НА ДЕФОРМИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
METHOD FOR ASSESSING INDUCING ACTION OF CYTOMEGALOVIRAL INFECTION ON DEFORMING PROPERTIES OF PERIPHERAL BLOOD ERYTHROCYTES IN THIRD TRIMESTER OF GESTATION

1. Цель исследования - выявить, что обострение цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации приводит к снижению содержания в эритроцитах АТФ, формированию актина, понижая их деформабельность.
2. Изобретение относится к медицине, а именно к прогнозу состояния деформабельности эритроцитов периферической крови под влиянием цитомегаловирусной инфекции, что угрожает развитием тканевой гипоксии.
3. Раскрытие изобретения
Нормальное обеспечение тканей кислородом во многом зависит от проникновения эритроцитов к клеткам через узкие просветы капилляров, испытывая при этом деформабельность своего тела [2]. Деформабельность эритроцитов регулируется через белок актин, формирование которого зависит от АТФ [2]. Проникновение в эритроцит возбудителя ЦМВИ подавляет синтез АТФ, от чего снижается содержание в нем количества актина, обеспечивающего подвижность скелетных белков, что влечет за собой нарушение деформабельности эритроцита. Снижение деформабельности эритроцитов приводит к недостаточному проникновению их через узкие тканевые капилляры к клеткам органов, вызывая формирование в организме тканевой гипоксии [3, 5].
4. Новая техническая задача
Цитомегаловирусные белки, внедряясь через мембрану эритроцитов, оказывают подавляющее влияние на синтез АТФ, от которого зависит формирование актина, белка, обеспечивающего двигательную функцию скелетных белков эритроцита. В результате снижается деформабельность эритроцитов, способность их проникать по мелким капиллярам к клеткам тканей, что создает угрозу формирования тканевой гипоксии.
5. В доступной литературе аналогов по данному вопросу не отмечено.
6. Осуществление изобретения
6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 20 беременных на третьем триместре гестации с обострением цитомегаловирусной инфекции с титром 1:1600. Контролем служили 15 беременных, не болевших цитомегаловирусной инфекцией в период гестации. У беременных симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПНР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
Содержание АТФ в эритроцитах проводилось по методу Виноградовой И.А., Багрянцевой С.Ю. и Дервиз Г.В. [1]. Уровень содержания актина в мембранах эритроцитов выполнялось методом вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (10%) полиакриламидном геле в присутствии 0,1% раствора додецилсульфата натрия по методике U. Laemmli [4] на аппарате «Вio Doc-Analize» (Германия). Деформабельность эритроцитов определялась по формуле, разработанной М.Т. Луценко [3].
7. В процессе исследования были получены следующие результаты.
При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации до титра антител 1:1600 в эритроцитах периферической крови снижался уровень АТФ до 0,40±0,02 мкмоль/мл (контроль - 0,90±0,05 мкмоль/мл). Методом диск-электрофореза отмечалось снижение в эритроцитах содержания актина до 8,24±0,09% (контроль - 9,30±0,08%). Снижение синтеза актина уменьшает деформабельность эритроцитов до 0,04±0,0002 усл. ед. (контроль - 0,22±0,003 усл. ед.). Снижение деформабельности эритроцитов приводит к нарушению их проходимости через узкие капилляры тканевых систем и создает угрозу формирования тканевой гипоксии.
Источники информации
1. Виноградова И.А., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лабораторное дело, 1980, №7, с.424-426.
2. Зинчук В.В. Методика измерения деформабельности эритроцитов // Здравоохранение Белоруссии, 1989, №12, С.93-98.
3. Луценко М.Т. Способ оценки нарушения деформируемости эритроцитов в периферической крови беременных при обострении в третьем триместре гестации герпес-вирусной инфекции. Патент 2463597. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 10.10.2012. Опубликован в Бюл. «Изобретения и полезные модели», №28, 10.10.12.
4. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: 1971, 154 с.
5. Kikuchi Y., Da Q.W., Fujino Т. Variation in red cell deformability and possible consequences for oxygen transport to tissue // Microvascul. Res. 1994. Vol.47, №2. P.222-231.