Качественные показатели спермы козла, сохраняемой при температуре тающего льда

по сравнению с поросятами-гипотрофиками. 30-е сутки характеризовались увеличением содержания ТТГ в сыворотке крови поросят-гипотрофиков по сравнению с аналогами II опытной группы на 33,0%, уровень оТ3 также имел тенденцию к увеличению - на 34,6% (Р<0,01), а оТ4 - на 59,4% (Р<0,01).

Таким образом, анализ сыворотки крови на тиреодные гормоны, обуславливающие функциональное состояние щитовидной железы животных, показал: у поросят контрольной группы на протяжении всех возрастных периодов содержание ТТГ было непостоянным, отмечалось повышение уровня гормона в период рождения до отъёма животных. В период новорождённости щитовидная железа активно включается в процессы энергетического обмена, о чём свидетельствует повышенная концентрация тироксина в сыворотке крови поросят. При достижении возраста 30 суток содержание в сыворотке крови животных трийодтиронина и тироксина характеризуется значительным понижением, достигая границ физиологической нормы для данного возраста животных.

У поросят-гипотрофиков по всем возрастным периодам выявлено колебание со стороны показателей тиреоидного статуса, содержание ТТГ в 1-е сутки снижалось, а в последующие находилось на относительно одинаковом уровне. Трийодти-ронин сохранял тенденцию к снижению с 1-х по 30-е сутки, содержание тироксина незначительно снижалось на 5-е сутки, при этом сохранялась стабильность показателя как на 1-е, так и на 15-е и 30-е сутки.

В сыворотке крови поросят II опытной гр. отмечались колебания уровня тиреотропного гормона, который увеличивался на 5-е и 15-е сутки

и снижался к 30-м суткам. Гормоны тироксин и трийодтиронин имели тенденцию к снижению концентрации во всех возрастных периодах (с 1-го дня по 30-е сутки) до уровня значений контрольной группы.

Вывод. В результате проведённого исследования выявлено, что тиреотропно-тиреоидная система новорождённых поросят находится в состоянии функционального напряжения, о чём свидетельствует возрастание показателей ТТГ, более низкие оТ3 и оТ4 в опытных группах по сравнению с новорождёнными поросятами без патологии. Подобные признаки, возможно, свидетельствуют о врождённой гипофункции щитовидной железы на фоне сложившейся гипотрофии, которые неизбежно могут привести к снижению продуктивности, темпу роста и развития животных. Следует отметить положительное влияние комплексного препарата Седимин на общее состояние поросят, при применении которого значения тиреодных гормонов в сыворотке крови животных достигли уровня показателей контрольной группы животных.

Литература

1. Демидович А.П. Гипотрофия у поросят в условиях промышленных комплексов // Учёные записки УО ВГАВМ. 2004. Т. 40. Ч. 1. С. 47-48.

2. Жаров А.В. Функциональная морфология органов иммунной и эндокринной систем поросят при гипотрофии // Ветеринарная патология. 2003. № 2. С. 58-59.

3. Коротаева О.С., Калинина Е.А. Седимин как один из факторов увеличения роста поросят-отъёмышей // Известия Нижневолжского агроуниверситетского комплекса: наука и высшее профессиональное образование. 2010. № 4. С. 1-4.

4. Миропольская О.В. Современные технологии — путь к успеху в выращивании поросят // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. 2014. № 6-1. С. 157-159.

5. Шестакова М.И., Сидоренко А.О. Применение добавки «Сангровит» при постнатальной гипотрофии поросят // Учёные записки УО ВГАВМ. 2001. Т. 47. Ч. 1. С. 316-319.

Качественные показатели спермы козла, сохраняемой при температуре тающего льда

М.М. Айбазов, д.с.-х.н, профессор, Т.В. Мамонтова, к.с.-х.н., ВНИИОК - филиал ФГБНУ Северо-Кавказский ФНАЦ; М.С. Сеитов, д.б.н, профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ

Молочное козоводство в Российской Федерации в последние десятилетия развивается быстрыми темпами. Наибольшее развитие эта подотрасль получила в таких формах хозяйствования, как КФХ и ЛПХ, так как разведение коз экономически более эффективно в небольших хозяйствах и в частном секторе. Наряду с этим имеются попытки создания крупных товарных ферм [1]. Прогнозные оценки показывают, что, по-видимому, тенденция и темпы развития сохранятся на ближайшие годы. В то же время молочное козоводство испытывает ряд про-

блем, которые объективно связаны с издержками относительной новизны подотрасли и её роста, и на сегодняшний день решаются очень медленно. В первую очередь это касается хронического дефицита высокоценных козлов-производителей. Отечественный генофонд высокоценных производителей наиболее продуктивных молочных пород (зааненской, альпийской, нубийской), стойко передающих свои качества потомству, фактически отсутствует. Фрагментарный и, как правило, бессистемный завоз производителей из-за рубежа крайне ограничен, предназначен для решения локальных проблем отдельных КФХ и ЛПХ и не решает проблему в масштабах страны.

С другой стороны, в силу ряда экономических причин не все хозяйства могут позволить приоб-

ретение достаточно дорогостоящих животных. К примеру, козлики 4-мес. возраста стоят в стране разведения (Франция, Австрия, Германия) от 700 до 1200 евро. К этому необходимо добавить стоимость карантинных мероприятий и перевозку животных. Анализ показывает, что даже при создании максимально благоприятных условий отход завезённого поголовья составляет в первый год до 30%. Стоимость выбывших животных ложится на себестоимость оставшихся животных, что дополнительно удорожает продукцию от них. Но даже имеющиеся высокоценные производители используются для повышения продуктивности отечественных коз нерационально, и от них в среднем получают в лучшем случае по 400—600 потомков в год. Происходит это по причине использования разных вариантов естественной случки и игнорирования хозяйственниками наиболее прогрессивного метода воспроизводства коз — искусственного осеменения [2]. Справедливости ради следует заметить, что для этого есть и объективные причины: отечественная промышленность перестала выпускать всё оборудование, приборы и приспособления для искусственного осеменения, которые прописаны в приложении к «Инструкции по искусственному осеменению овец и коз», а навязываемые различными дистрибьюторами зарубежные аналоги зачастую худшего качества, хотя стоят кратно дороже.

Таким образом, остро стоит проблема масштабирования использования генофонда имеющегося поголовья высокоценных производителей с целью получения максимального количества потомства. Этого можно достичь организацией осеменения коз сохраняемой и транспортируемой на значительные расстояния спермой.

Технологии краткосрочного (в течение 12—72 часов) сохранения спермы разных видов домашних животных (жеребцов, быков, баранов) разработаны, однако применительно к видовым особенностям спермы козлов имеется мало сообщений. При хранении спермы необходимо учитывать неодинаковую способность спермиев реагировать на охлаждение. Такое свойство спермиев является не только видоспецифичным, но отличается у разных производителей одной породы и даже у разных эякулятов одного и того же производителя. Доказано, что обязательным условием при всех способах хранения спермы является необходимость предварительного её разбавления. Для этого используются различные разбавители (синтетические среды), обеспечивающие поддержание биологической полноценности спермиев в течение определённого времени. Состав среды играет существенную роль в сохранении биологической полноценности спермиев. Все они должны обладать достаточной буферной ёмкостью для поддержания стабильного рН, а их осмотическое давление не должно существенно отличаться от

данного показателя свежеполученной спермы [3]. В разбавители также должны входить ингредиенты, обеспечивающие поддержание жизнеспособности спермиев и необходимого уровня энергетических процессов в сохраняемой сперме. Кроме того, установлено, что у мужских гамет по сравнению с соматической клеткой содержание ненасыщенных жирных кислот в мембране высокое, вследствие чего они в значительной степени предрасположены к необратимому окислительному стрессу [4].

Цель настоящего исследования заключалась в изучении сохранности качества спермы козлов при её охлаждении до температуры тающего льда и сохранении в течение 12—72 часов, для чего была поставлена задача сконструировать новую синтетическую среду, учитывающую видовые особенности спермы козлов.

Материал и методы исследования. Эксперименты проводили в половой сезон (октябрь). Сперму получали от зааненских козлов (n = 3) общепринятым методом в искусственную вагину. Исследование половых рефлексов козлов и качества спермы проводили в соответствии со стандартной операционной процедурой (СОП) «Получение и оценка качества спермы». Для точного соблюдения методических требований с целью исключения влияния индивидуальных особенностей сперму от всех трёх козлов смешивали и затем, используя принцип разделённых эякулятов, разбавляли испытуемыми синтетическими средами и исследовали.

Охлаждение спермы проводили до околонулевой температуры. Предварительно выяснили, что в обычном пищевом термосе вместимостью 2,0 л при наличии в нём не менее 500 г льда поддерживается постоянная температура в пределах 0—1°С в течение 72 часов. Поэтому в своих опытах разбавленную сперму помещали в широкогорлый бытовой термос объёмом 2,0 л, заполненный на 1/3 кубиками льда. Для предохранения спермы от прямого контакта со льдом флаконы с разбавленной спермой помещали в поролоновые вкладыши.

Результаты исследования. Было выяснено, что половые рефлексы у всех трёх козлов соответствовали норме. Среднее время, затрачиваемое на выделение одного эякулята, составляло 136,0+5,1 сек. Качество спермы характеризовалось следующими показателями (средние показатели по 3 козлам): подвижность свежеполученной спермы — 7,4+0,8 балла, объём эякулята — 0,82+0,3 мл, концентрация спермиев — 4,09+0,5 млрд/мл. Количество спермиев с аномальной морфологией было равно 12,7%. Общее число непатогенных микроорганизмов составляло 3500 шт/см, а патогенные и условно патогенные бактерии, вирусы и грибы не были обнаружены. Эти показатели соответствовали минимальным требованиям к сперме козлов.

Для разбавления спермы козла использовали две синтетические среды. В качестве контрольной была патентованная среда OVIX CELL (Франция),

а в качестве экспериментальной использовали разбавитель TRIS, изменённый по составу и количеству ингредиентов под видовые особенности спермы козла. Сперму разбавляли экспериментальной средой в соотношении 1:2—1:3, в зависимости от её концентрации. Разбавление спермы контрольной средой осуществляли в соответствии с наставлением по её применению.

На первом этапе провели лабораторную оценку качества охлаждённой спермы, для чего сперму оценивали по показателям подвижности через каждые 2 часа. Сравнительными лабораторными тестами выяснили, что сразу после разбавления и в течение 6 часов после подвижность спермы практически не изменялась в обоих разбавителях и была одинаковой (8—7,5 балла). После 12-часового хранения проявилось преимущество экспериментальной среды: подвижность спермы, сохраняемой в опытной среде, составила 7,5 балла, в контрольном разбавителе — снизилась до 7 баллов.

С удлинением срока хранения разница между средами увеличились. Так, в экспериментальной среде через 18 часов подвижность спермиев снизилась только на 10%, в контроле снижение составляло 20—25%, а через 24 и 36 часов эти показатели составили соответственно 6,5 и 5,5 балла и 6,0 и 5,0 балла.

Через 48 ч. хранения при околонулевой температуре сперма, разбавленная в контрольной среде, потеряла подвижность, допустимую для осеменения, — в соответствии с Инструкцией по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных (М., 2000) сперма с подвижностью менее 4 баллов не допускается к осеменению. Для спермы, разбавленной в экспериментальной среде, это ограничение наступило на 12 часов позже.

Через 72 часа после помещения спермы в околонулевую температуру клетки в контрольном разбавителе погибли, тогда как в экспериментальной среде количество спермиев с прямолинейным поступательным движением составило 20%. Отмечено, что в контрольной среде число агглютинированных спермиев, а также совершающих колебательные и манежные движения, было существенно больше.

Анализ спермы составляет основу определения оплодотворяющей способности племенного производителя [5]. Из литературных источников известно, что технологические процедуры обработки спермы после взятия значительно влияют

на микроструктуру спермиев [6—9]. Одной из задач настоящего опыта являлось изучение структурных повреждений спермиев в процессе сохранения при околонулевой температуре, которое оценивалось по акроскопическому методу [10].

Для иммобилизации спермы перед исследованием использовали 1-процентный водный раствор хлористого натрия. Каплю подготовленной к использованию спермы наносили на предметное стекло, накрывали тонким покровным стеклом. Избыток влаги удаляли фильтрованной бумагой, придавливая её к стеклу рукой. При этом спер-мии в остающемся слое жидкости располагались свободно, в один слой. Края покровного стекла запаивали парафином или смазывали вазелином, чтобы в процессе просматривания не происходило высыхания препарата.

Просмотр проводили в оптическом микроскопе при увеличении х 400—500, используя конденсор тёмного поля 0И-10 или ОИ-13. В каждом препарате подсчитывали 200 спермиев, отдельно регистрируя неподвижные спермии и спермии с повреждёнными акросомами (включая полное отсутствие акросом). Характер и степень структурных повреждений оценивали следующим образом. У неповреждённых спермиев чётко просматривается ярко светящийся контур головки и жгутиков. Среди остальных спермиев различали 4 категории их неполноценности: общее разбухание акросомы, что выражено тусклыми её контурами; начало отслоения акросомы — отсутствие свечения в области экваториального сегмента; потеря акросомы, когда видны только задний ядерный колпачок и жгутики; полная утеря головки, когда видны только жгутики. Необходимо подчеркнуть, что иммобилизация спермиев перед исследованием не позволяет дифференцировать повреждения среди подвижных и неподвижных спермиев.

Результаты опыта представлены в таблице.

Как видно по таблице, процесс хранения независимо от используемого разбавителя в значительной степени повреждает стабилизирующие факторы устойчивости белково-липидных компонентов, в частности акросом спермиев. Через 48 часов после хранения более половины спермиев в обеих синтетических средах имели видимые повреждения оболочки.

Выводы. По итогам исследования установлено, что сперма козла сохраняет высокую подвижность и выживаемость в разработанной нами синтетической среде в течение 48 часов. Это позволяет

Влияние среды и времени хранения на степень структурных повреждений спермиев

Структурные повреждения спермиев, в % от общего количества

Вариант после через через через через через через через

разбавл. 6 ч. 12 ч. 24 ч. 36 ч. 48 ч. 60 ч. 72 ч.

Опыт 15,0 19,0 23,0 41,0 53,0 59,0 68,0 86,0

Контроль 16,0 21,0 26,0 46,0 55,0 63,0 77,0 -

рекомендовать технологию охлаждения, сохранения и транспортировки спермы при температуре тающего льда для искусственного осеменения коз на товарных фермах (КФХ, ЛПХ), расположенных на значительном (800-1000 км) расстоянии от пункта получения спермы. Эффективность технологии существенно вырастет, если её сочетать с технологией синхронизации половой охоты у коз. Таким образом, появляется реальная возможность интенсификации использования высокоценных производителей. При этом целесообразность использования этой технологии диктуется обоюдной заинтересованностью сторон: владелец высокоценного животного получает дополнительный доход от реализации спермы и тем самым снижает затраты на его содержание и эксплуатацию, а хозяйство-покупатель получает возможность интенсивного наращивания высокопродуктивного потомства.

Литература

1. Багиров В.А. Рациональное использование генетических ресурсов и гибридизация в козоводстве / В.А. Багиров, П.М. Кленовицкий, Ш.Н. Насибов [и др.] // Сельскохозяйственная биология. 2009. № 6. С. 27-33.

2. Аксенова П.В., Айбазов А.-М. Рациональное использование генофонда зааненских производителей // Зоотехния. 2001. № 9. С. 6.

3. Озтерклер Й, Ари У. Краткий обзор современных добавок к разбавителям спермы, применяемых для повышения устойчивости семени баранов к замораживанию // Сельскохозяйственная биология. 2017. Т. 52-2. С. 242—250.

4. Солер K. Новые методы анализа спермы с использованием системы CASA (сomputeг-assisted sperm analysis) / Солер K., Валверде A., Бомпарт Д. [и др.] // Сельскохозяйственная биология. 2017. Т. 52-2. С. 232-241.

5. Айбазов А.М. К вопросу о сохранении генофонда и биологической полноценности криоконсервированной спермы /

A.М. Айбазов, П.В. Аксенова, К.К. Ашурбегов, Д.В. Коваленко // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2011. Т. 1. № 4-1. С. 24-29.

6. Желтобрюх Н.А. Нарушения в спермиях баранов в процессе эквилибрации и замораживании // Овцеводство. 1972. № 10. С. 33.

7. Атрощенко М.М. Сравнительное изучение ультраструктуры сперматозоидов в эпидидимальной, эякулированной и криоконсервированной сперме жеребцов / М.М. Атрощенко,

B.В. Калашников, Е.Е. Брагина, А.М. Зайцев // Сельскохозяйственная биология. 2017. Т. 52-2. С. 274-281.

8. Leboeuf B., Delgadillo J.A., Manfredi E., Piacere A., Clément V., Martin P., Pellicer M., Boué P., De Cremoux R. Management of goat reproduction and Insemination for genetic improvement in France // Reprod. Domest. Anim. 2008. N 43. P. 379-385.

9. Багиров В.А. Влияние криоконсервации на биологические параметры семени у гибридов романовской породы и архара / В.А. Багиров, Б.С. Иолчиев, Н.А. Волкова, Н.А. Зиновьева // Сельскохозяйственная биология. 2017. Т. 52-2.

C. 268-273.

10. Соколовская И.И., Овайдис Р.Н., Абилов А. О значении акросомы в оценке семени самцов // Животноводство. 1981. № 10. С. 45-47.