СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЖИДКОГО КУЛЬТУРАЛЬНОГО ПРОДУКТА

1. Способ изготовления жидкого культурального продукта, с использованием стволовая клетка, полученной костно-мозговой жидкости, собранной у донора, способ, включающий этапы:
разделения костно-мозговой жидкости для разделения на слои костно-мозговой жидкости, собранной у донора;
выделения костно-мозговой жидкости для выделения костно-мозговой жидкости промежуточного слоя, расположенной в промежуточном слое костно-мозговой жидкости, разделенной на слои на этапе разделения костно-мозговой жидкости;
первого прикрепления стволовой клетки для заполнения костно-мозговой жидкостью из промежуточного слоя, выделенной на этапе выделения костно-мозговой жидкости, и предопределенной культуральной жидкостью первого культурального контейнера с предопределенной емкостью и предопределенной площадью нижней поверхности, оставления первого культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени, и прикрепления первой стволовой клетки, содержащейся в костно-мозговой жидкости промежуточного слоя, к нижней поверхности первого культурального контейнера;
первого культивирования стволовой клетки для удаления культуральной жидкости из первого культурального контейнера после прикрепления первой стволовой клетки к нижней поверхности первого культурального контейнера на этапе первого прикрепления стволовой клетки, заполнения новой культуральной жидкостью первого культурального контейнера, оставления первого культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени, и культивирования первой стволовой клетки до тех пока общая площадь первой стволовой клетки не достигнет первого целевого соотношения с площадью нижней поверхности первого культурального контейнера;
первого сбора стволовой клетки для сбора первой стволовой клетки из первого культурального контейнера, когда общая площадь первой стволовой клетки достигнет первого целевого соотношения в процессе культивирования первой стволовой клетки на этапе первого культивирования стволовой клетки;
выделения стволовой клетки для разделения на слои путем центрифугирования первой стволовой клетки, собранной на этапе первого сбора стволовой клетки;
второго сбора стволовой клетки для сбора второй стволовой клетки, расположенной в самом нижнем слое первой стволовой клетки, разделенной на слои на этапе разделения стволовой клетки;
второго прикрепления стволовой клетки для заполнения второй стволовой клеткой, собранной на этапе второго сбора стволовой клетки, и предопределенной культуральной жидкостью второго культурального контейнера с большей емкостью и большей площадью нижней поверхности, чем у первого культурального контейнера, оставления второго культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени, и прикрепления второй стволовой клетки к нижней поверхности второго культурального контейнера;
второго культивирования стволовой клетки для удаления культуральной жидкости из второго культурального контейнера после прикрепления второй стволовой клетки к нижней поверхности второго культурального контейнера на этапе второго прикрепления стволовой клетки, заполнения новой культуральной жидкостью второго культурального контейнера, оставления второго культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени и культивирования второй стволовой клетки до тех пока общая площадь второй стволовой клетки не достигнет второго целевого соотношения с площадью нижней поверхности второго культурального контейнера; и
первого выделения жидкого культурального продукта для выделения из второго культурального контейнера жидкого культурального продукта, который содержит предопределенный метаболит, секретируемый из единственного типа пролиферирующей второй стволовой клетки, когда общая площадь второй стволовой клетки достигает второго целевого соотношения в процессе культивирования на этапе второго культивирования стволовой клетки.
2. Способ изготовления жидкого культурального продукта по п. 1, где на этапах первого прикрепления стволовой клетки и первого культивирования стволовой клетки, первый культуральный контейнер может находиться в статическом состоянии под предопределенным углом наклона в течение предопределенного периода времени, и на этапах второго прикрепления стволовой клетки и второго культивирования стволовой клетки, второй культуральный контейнер может находиться в статическом состоянии под предопределенным углом наклона в течение предопределенного периода времени.
3. Способ изготовления жидкого культурального продукта по п. 1 или 2, включающий этапы:
второго сбора стволовой клетки для сбора второй стволовой клетки из второго культурального контейнера после выделения жидкого культурального продукта из второго культурального контейнера на этапе первого выделения жидкого культурального продукта;
третьго прикрепления стволовой клетки для заполнения второй стволовой клеткой, собранной при втором сборе стволовой клетки, и новой культуральной жидкостью третьего культурального контейнера с предопределенной емкостью и предопределенной площадью нижней поверхности, где емкость и площадь нижней поверхности больше, чем у второго культурального контейнера, оставления третьего культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени и прикрепления второй стволовой клетки к нижней поверхности третьего культурального контейнера;
третьего культивирования стволовой клетки для удаления культуральной жидкости из третьего культурального контейнера после прикрепления второй стволовой клетки к нижней поверхности третьего культурального контейнера на этапе третьего прикрепления стволовой клетки, заполнения новой культуральной жидкостью третьего культурального контейнера, оставления третьего культурального контейнера в статическом состоянии на предопределенный период времени и культивирования второй стволовой клетки до тех пор, пока общая площадь второй стволовой клетки не достигнет третьего целевого соотношения с площадью нижней поверхности третьего культурального контейнера; и
второго выделения жидкого культурального продукта для выделения из третьего культурального контейнера жидкого культурального продукта, который содержит предопределенный метаболит, секретируемый из единственного типа пролиферирующей второй стволовой клетки, когда общая площадь второй стволовой клетки достигает третьего целевого соотношения в процессе культивирования на этапе третьего культивирования стволовой клетки.
4. Способ изготовления жидкого культурального продукта по п. 3, где на этапах третьего прикрепления стволовой клетки и третьего культивирования стволовой клетки третий культуральный контейнер может находиться в статическом состоянии под предопределенным углом наклона в течение предопределенного периода времени.
3
3
5. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 1-4, где на этапе разделения костно-мозговой жидкости, у донора забирают от 2 до 3 см костно-мозговой жидкости, от 2 до 3 см костно-мозговой жидкости помещают в вертикально удлиняющийся контейнер для разделения, контейнер для разделения оставляют в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, на предопределенный период времени, и костно-мозговая жидкость вертикально разделяется на слои в контейнере для разделения, и на этапе выделения костно-мозговой жидкости выделяют костно-мозговую жидкость промежуточного слоя, расположенную в промежуточном слое костно-мозговой жидкости, разделенной на слои в контейнере для разделения.
3
6. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 1-5, где емкость первого культурального контейнера составляет приблизительно от 20 до 30 см, исходная форма поверхности первой стволовой клетки приблизительно является круглой формой, и форма поверхности деформированной первой стволовой клетки является приблизительно, в основном, круглой формой, и плоской формой, когда первая стволовая клетка удлиняется в аморфной форме в одном направлении, и на этапе первого прикрепления стволовой клетки, первый культуральный контейнер может оставаться в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, на период от 12 до 24 часов, деформацию первой стволовой клетки от исходной формы поверхности в первом культуральном контейнере наблюдают в интервале приблизительно от 1 до 2 часов в течение периода от 12 до 24 часов, и, когда первая стволовая клетка деформируется из начальной формы поверхности в аморфную плоскую форму, определяют, что первая стволовая клетка прикрепилась к нижней поверхности первого культурального контейнера.
7. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 1-6, где на этапе первого сбора стволовой клетки, первый культуральный контейнер может оставаться в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, на период от 36 до 48 часов, и общую площадь первой стволовой клетки, прикрепленной к нижней поверхности первого культурального контейнера, по отношению к площади нижней поверхности первого культурального контейнера наблюдают в интервале приблизительно от 1 до 2 часов в течение периода от 36 до 48 часов.
8. Способ изготовления жидкого культурального продукта по п. 7, где первое целевое соотношение общей площади первой стволовой клетки составляет от 70 до 80% от площади нижней поверхности первого культурального контейнера.
9. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 1-8, где на этапе разделения стволовой клетки первую стволовую клетку загружают в контейнер для разделения, контейнер для разделения помещают в центрифужный сепаратор для разделения путем центрифугирования первой стволовой клетки, и на этапе первого сбора стволовой клетки собирают вторую стволовую клетку, расположенную в самом нижнем слое первой стволовой клетки, разделенной путем центрифугирования на слои в контейнере для разделения
3
3
10. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 3-9, где емкость второго культурального контейнера составляет приблизительно от 40 до 60 см, емкость третьего культурального контейнера составляет приблизительно от 70 до 80 см, исходная форма поверхности второй стволовой клетки приблизительно является круглой формой, и форма поверхности деформированной второй стволовой клетки является приблизительно, в основном, круглой формой, и плоской формой, когда вторая стволовая клетка удлиняется в аморфной форме в одном направлении, и на этапах второго прикрепления стволовой клетки и третьего прикрепления стволовой клетки второй и третий культуральные контейнеры могут оставаться в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, на период от 36 до 48 часов, деформацию второй стволовой клетки от исходной формы поверхности во втором и третьем культуральных контейнерах наблюдают в интервале приблизительно от 1 до 2 часов в течение периода от 36 до 48 часов, и когда вторая стволовая клетка деформируется из начальной формы поверхности в аморфную плоскую форму, определяют, что вторая стволовая клетка прикрепилась к нижней поверхности второго и третьего культуральных контейнеров
11. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 3-10, где на этапах второго сбора стволовой клетки и третьего сбора стволовой клетки, второй и третий культуральные контейнеры могут находиться в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, на период от 36 до 48 часов, общую площадь второй стволовой клетки, прикрепленной к нижней поверхности второго и третьего культуральных контейнеров по отношению к площади нижней поверхности второго и третьего культуральных контейнеров наблюдают в интервале приблизительно от 1 до 2 часов в течение периода от 36 до 48 часов.
12. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 3-11, где второе целевое соотношение общей площади второй стволовой клетки составляет от 88 до 92% от площади нижней поверхности второго культурального контейнера, и третье целевое соотношение общей площади третьей стволовой клетки составляет от 88 до 92% от площади нижней поверхности третьего культурального контейнера.
13. Способ изготовления жидкого культурального продукта по любому из пп. 1-12, где первая и вторая стволовые клетки представляют собой мезенхимальные стволовые клетки.