СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕЛИЗАТА ТРОМБОЦИТОВ, СОДЕРЖАЩЕГО ФАКТОРЫ РОСТА

1. Способ получения содержащего факторы роста релизата тромбоцитов из жидкого концентрата тромбоцитов млекопитающих, включающий последовательные стадии:
a. подвергание концентрата тромбоцитов первому этапу снижения концентрации патогена с целью разрушения как ДНК, так и РНК микроорганизмов, присутствующих в концентрате тромбоцитов;
b. подвергание концентрата тромбоцитов стадии активации, путем приведения его в контакт с активирующим агентом с целью инициирования высвобождения тромбоцитами по меньшей мере части альфа-гранул и факторов роста, присутствующих в них, тем самым обеспечивая жидкий релизат тромбоцитов;
c. подвергание жидкого релизата тромбоцитов стадии снижения концентрации фибриногена и выделение жидкого релизата тромбоцитов, обедненного фибриногеном;
d подвергание жидкого релизата тромбоцитов, обедненного фибриногеном, второй стадии снижения концентрации патогена с целью разрушения вирусов в оболочке;
e. подвергание релизата тромбоцитов стерильной фильтрации и выделение со стадии фильтрации отфильтрованной жидкости, содержащей факторы роста,
f. разделение отфильтрованной жидкости на отдельные порции, причем объем каждой отдельной порции регулируют так, чтобы каждая порция содержала примерно одинаковое количество тромбоцитов, причем полученные отдельные порции отфильтрованной жидкости подвергаются лиофилизации.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что активирующий агент представляет собой раствор, содержащий одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из соли кальция, тромбина, коллагена, тромбоксана А2 и аденозиндифосфата (АДФ), предпочтительно раствор, содержащий тромбин.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что первый этап снижения концентрации патогена включает инкубацию концентрата тромбоцитов с фотохимически активным агентом и воздействие ультрафиолетового излучения на концентрат тромбоцитов.
2
2
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что УФ-излучение представляет собой УФА-излучение, предпочтительно УФА-излучение с плотностью энергии между 1 и 10 Дж/см, более предпочтительно УФА-излучение с плотностью энергии 3 Дж/см.
5. Способ по п. 3 или 4, отличающийся тем, что фотохимически активный агент представляет собой псорален, в частности амотосален или рибофлавин.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что вторая стадия снижения концентрации патогена включает инкубацию релизата тромбоцитов с растворителем и/или детергентом, с последующим удалением растворителя и/или детергента и выделением релизата тромбоцитов, обедненного растворителем и/или детергентом.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что растворитель для инкубации концентрата тромбоцитов выбирают из группы, состоящей из ди- или триалкилфосфатов, предпочтительно три-н-бутилфосфата.
8. Способ по п. 6 или 7, отличающийся тем, что детергент выбирают из группы, включающей одно или несколько полиоксиэтиленовых производных жирных кислот, частичных сложных эфиров ангидридов сорбита, неионных детергентов, дезоксихолата натрия и сульфобетаинов, и предпочтительно представляет собой Triton Х-45, Triton Х-100 или Tween 80.
9. Способ по любому из пп. 6-8, отличающийся тем, что растворитель и/или детергент удаляют из релизата тромбоцитов путем масляной экстракции.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что масляную экстракцию проводят в присутствии количества масла, которое составляет от 2 до 20 мас. %, предпочтительно от 5 до 15 мас. %, более предпочтительно от 5 до 10 мас. %, в расчете на общий вес смеси концентрата тромбоцитов и растворителя и/или детергента.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно включающий по меньшей мере одну стадию центрифугирования релизата тромбоцитов после удаления растворителя и/или детергента на второй стадии снижения концентрации патогена.
5
7
3
6
3
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что жидкий фильтрат разделяют на отдельные порции, которые содержат релизат примерно из 2×10-2×10 тромбоцитов на см, предпочтительно релизат примерно из 2×10 тромбоцитов на см.
13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что человеческий альбумин добавляют в отфильтрованную жидкость, полученную на стадии е, перед тем, как отфильтрованную жидкость подвергнут лиофилизации.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что перед тем как подвергнуть концентрат тромбоцитов стадии активации b, концентрат тромбоцитов подвергают стадии инактивации лейкоцитов.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что концентрат тромбоцитов млекопитающих обогащен факторами роста тромбоцитов человека или лошади.
16. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что концентрат тромбоцитов млекопитающих содержит пул концентратов тромбоцитов, которые происходят от разных субъектов.
17. Релизат тромбоцитов, содержащий факторы роста, полученный способом по любому из пп. 1-16 для применения в регенеративной медицине, в частности для одного или нескольких применений, выбранных из группы, состоящей из усиления пролиферации клеток множественных линий и стимулирования заживления ран и заживления язв.
18. Релизат тромбоцитов, содержащий факторы роста, полученные способом по любому из пп. 1-16 для применения в одной или более средах для культивирования клеток, выбранных из стволовых клеток, фибробластов или дендритных клеток.
19. Состав, содержащий релизат тромбоцитов, содержащий факторы роста, полученный способом по любому из пп. 1-16, выбранный из одного или более, представленного в группе, состоящей из аэрозоля, жидкости для обработки, спрея, миста, лосьона, крема, мази, геля, камеди, повязки, кожного пластыря, пластыря.