Эмульсионный препарат полипренолов
EMULSION PREPARATION OF POLYPRENOLES

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к препаратам полипренолов в аэрозольной форме, обладающих высокой стабильностью и сохранением активности полипренолов при хранении.
Из уровня техники известно фунгицидное средство (Патент РФ 2432744. Опубликован 10.11.2011, Бюл. №31). Эта смесевая композиция, содержит эфирное масло пихты сибирской (Abies Sibiricd), выделяемое методами гидротермической обработки или экстракции из хвои, древесной зелени, получается в виде устойчивой 2-5%-ной водной эмульсии, содержащей, в качестве эмульгатора, жидкое мыло и образующейся при высокоскоростном перемешивании компонентов. Недостатком средства является малая стабильность во времени эмульсии из-за слабых эмульгирующих свойств жидкого мыла, что требует приготовления ее непосредственно перед употреблением.
Предложен способ получения (Патент РФ 2369383. Опубликован 10.10.2009, Бюл. №28) фосфолипидной эмульсии содержащей активную форму дигидрокверцетина, в частности к липосомную биологически активную форму дигидрокверцетина, а также предложен достаточно простой и экономичный способ получения такой эмульсии. Фосфолипидная эмульсия включает дигидрокверцетин, мембранообразующий фосфолипид, глицин, водный раствор этилового спирта. Введение аминокислоты - глицина в эмульсию, обеспечивает, помимо известных позитивных эффектов биологического воздействия, стабильность реологических параметров эмульсии, не допуская ее разделение на фракции. Способ получения фосфолипидной эмульсии осложняется реакцией этерификации глицина с этанолом с обратимым образованием аминоуксусного эфира. В отличие от аминокислот их эфиры не имеют биполярной структуры, и являются летучими соединениями, что приводит к изменению состава эмульсии. Сохранность препарата составляет несколько месяцев.
16
18
Наиболее близкий к предлагаемому является (Патент 2189231. Опубликован 20.09.2002, Бюл. №26) эмульсионный препарат, включающий полиизопреноиды, а в качестве неионогенного поверхностно-активного вещества используют эфиры жирных кислот с полиэтиленгликолем, или эфиры жирных кислот с многоатомными спиртами (сорбитом), или блок-сополимеры этилена и пропилена, или оксиэтилированное касторовое масло, или высшие жирные спирты (C-C). Преимуществом данного решения является возможность существенно уменьшить применяемую дозу полипренолов, а также обеспечить селективную активацию системы иммунитета дыхательного тракта с целью обеспечения лечебно-профилактического действия против респираторных инфекций.
Недостатком прототипа является чувствительность полиэфиров жирных кислот к кислороду. В присутствии ультрафиолетового излучения они образуют гидроперекиси с высокой реакционной способностью, а отсутствие антиоксиданта приводит к разложению полиизопреноидов в процессе хранения препарата с образованием пероксидов с последующим разложением последних и образованием продуктов вторичного окисления: эпоксидов и альдегидов. [Molinska Е., Klimczak U.,  Derewiaka D., Obiedzinrski M., Kania M, Danikiewicz W., Swiezewska E. (2015) Double bond stereochemistry influences the susceptibility of short chain isoprenoids and polyprenols to decomposition by thermo-oxidation. Lipids, V. 50(4), pp. 359-370.] и особенно старению вторичного органического аэрозоля [Rohr А.С.(2013) The health significance of gas- and particle-phase terpene oxidation products: a review. Environ Int. V. 60, pp 145-162; doi:10.1016/j.envint.2013.08.002.]. Подобное наблюдается при окислении других важных липидов к которым относятся ПП, например жирных кислот, стеринов, деградирующих до низкомолекулярных продуктов, например олефинов, спиртов, кетонов, альдегидов, кислот. Эти летучие продукты образуются при расщеплении эпоксидного кольца, [Frankel E.N. Chemistry of free radical and singlet oxidation of lipids. Prog. Lipid Res. 1984, V.23, pp.197-221].
Необходимо отметить, что при введении Твин 80 выше 1% приводит к загущению конечного продукта, высокие концентрации как правило, применяются только для использования твердых продуктов. К недостаткам прототипа также следует отнести, что предлагаемые ПАВ имеют синтетическую природу получения и могут представлять опасность для здоровья человека [https://www.thevaccinereaction.org/2016/01/polysorbate-80-a-risky-vaccine-ingredient/].
Задачей предлагаемого изобретения является разработка состава эмульсионного препарата позволяющего устранить недостатки прототипа - неустойчивость полипренолов к процессам окисления, что приводит к снижению лечебно-профилактического действия препарата при длительном хранении, а также повысить безопасность эмульсионного продукта.
Технический результат - повышение качества эмульсионного препарата полипренолов.
Технический результат - повышение стабильности полипренолов (ПП).
Указанный технический результат достигается тем, что предлагается водная эмульсия на основе ПП, где в качестве стабилизатора эмульсии используют природное неионогенное поверхностно-активное вещество - арабиногалактан (АГ), при этом дополнительно в эмульсию вводят антиоксидант - дигидрокверцетин (ДКВ) при следующем соотношении компонентов, в вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 1-5,0
Неионогенное поверхностно-активное вещество - 2-5,0
Антиоксидант - 0,02-0,2
Вода - Остальное до 100%
1. Полипренолы - натуральные изопреноидные спирты, содержащие более 4-х изопреноидных единиц, выделяются из зелени хвойных растений. Полипренолы большинства организмов содержат более 10 изопреноидных единиц. Обладая структурным сходством с долихолом, принимают участие в восстановлении поврежденных клеток организма, при развитии патологических состояний укрепляя их клеточные мембраны. [Sweiezewska Е., Danikiewiez W. Polyisoprenoids: structure, biosynthesis and function // Progress in Lipid Research, 44 (2005), p.235-250.]. Чистую фракцию полипренолов - Ропрен получают способом, описанном в патенте (Патент РФ №2252026. Опубликован 20.05.2005. Бюл. №14). Продукт проявляет гепатопротекторное [Вышлов Е.В.,. Цой Е.И, Султанов В.С, Трусов В.Б., Рябов В.В.. Гиполипидемическое и гепатопротективное действие полипренолсодержащего препарата у пациентов с острым коронарным синдромом. Бюл. экспер. биол. 2018. Т. 168, №8. С. 289-291.], иммуномодулирующее (Патент РФ 2137479 Опубликован 20.09.1999). Препарат применяется как средство для лечения больных с дементным синдромом (Патент РФ 2327480. Опубликован 27.06.2008. Бюл. №18). Полипренолы принимают участие в биосинтезе гликопротеинов. Использование эмульсий для транспорта ПП открывает возможности не только увеличить биодоступность последних, но и обеспечить пролонгирование действия ПП. Полипренолы нетоксичны и безопасны [Danilov L.L., Maltsev S.D., Deyeva А.V., Narovlyansky A.N., Sanin A.V., Ozherelkov S.V., Pronin A.V. Phosprenyl: A novel drug with antiviral and immunomodulatory activity. Arch. Immunol. Ther. Exp.1995, 44, 395-400.]. Использовался препарат Ропрен (регистрационное удостоверение ЛСР-001521/07 от 12.07.2007) с содержанием суммы полипренолов 95%.
2. Источником для промышленного получения арабиногалактана служит древесина лиственницы, содержащая до 20% этого полисахарида (Патент РФ №2256668. Опубликован 20.07.2005. Бюл. №20). Арабиногалактан - водорастворимый высокоразветвленный полисахарид с м.м. 9-18 кДа, состоящий из D - галактопиранозильных звеньев соединенных β-связями и боковых цепей D - галактопиранозильных и L - арабинофуранозильных остатков. Такое строение обеспечивает образование межмолекулярных комплексов водородными связями боковых цепей и двойными связями полипренолов. Характеризуется низкой токсичностью (не проявляет острой токсичности в дозе 5000 мг/кг массы тела) и высокой биологической активностью: пребиотической, гастро- и гепатопротекторной и др. [Медведева Е.Н., Бабкин В.А., Остроухова Л.А. Арабиногалактан лиственницы - свойства и перспективы использования (обзор). // Химия растительного сырья. 2003. №1. С. 27-37.]. Безопасность АГ из лиственницы официально удостоверена Администрацией пищевых продуктов и лекарств США (USA Food and Drag Administration) (Agency Response Letter GRAS Notice No. GRN 000084 February 25, 1964, 30 FR 2430; 21 CFR 172. 610), и с 1965 г. он используется в США как пищевая добавка. Зарегистрирован под кодом Е409 в Кодексе Продовольственного Комитета Всемирной Организации Здравоохранения (ФАО/ВОЗ) для пищевых продуктов в качестве стабилизатора эмульсий и загустителя. Разрешен в нашей стране к применению в качестве добавки к пищевым продуктам нормативными актами [СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов"; Раздел 2.3.2. Продовольственное сырье и пищевые продукты, стр. 120, Е409]. Согласно Перечню, утвержденному Главным санитарным врачом РФ, адекватный уровень потребления АГ составляет 10 г/сутки, а верхний допустимый уровень - 20 г/сутки. [Рациональное питание. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ. // Методические рекомендации MP 2.3.1. 19150-04. Утверждены 2 июля 2004 г. ]. Наиболее ценными свойствами АГ являются хорошая растворимость в холодной воде, низкая вязкость концентрированных растворов, высокая диспергирующая способность, отсутствие запаха, устойчивость при температурной обработке. Способность АГ связывать жир и удерживать влагу расширяет перспективу использования в качестве стабилизатора эмульсий. Использовался арабиногалактан «ФиброларС» разрешенный в качестве сырья для производства биологически активных добавок ТУ 9363-021-39094141-08. СанПин №77.99.03.003.Т.001137.05.08.
Выбор ДКВ, являющимся соединением группы флавоноидов, для разработки композиции обусловлен, с одной стороны, широким спектром биологического действия: оказывает ангиопротективное, регенирирующее, дезинтоксикационное, противоотечное, антиоксидантное действие. Уровень его антиоксидантной активности позволяет поставить его на первые позиции среди веществ аналогичного спектра действия. Установлено, что дигидрокверцетин способствует увеличению срока годности продуктов в 1,5-3 раза, прерывая реакции самоокисления жировых компонентов [Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Жамбалова Б.А., Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А., Радаева И.А., Шулькина С.Н. Ингибирование дигидрокверцетином свободно-радикального окисления липидов сухого молока. Биотехнология и управление. - 1995. - №1. - с. 36-39.]. Кроме того, дигидрокверцетин осуществляет функцию подавления роста микроорганизмов в продуктах, уже подверженных процессу окисления. На основании результатов испытаний молочных консервов установлен срок годности консервов молочных с добавлением дигидрокверцетина до 24 месяцев [Гусева Т.Б., Караньян О.М., Рассоха С.Н., Радаева И.А. Применение природного антиокислителя дигидрокверцетина для увеличения срока годности молочных консервов. Пищевая промышленность №8/2017 С.54-56.]. ДКВ тормозит преждевременное старение клеток и развитие различных заболеваний; укрепляет стенки сосудов, улучшает микроциркуляцию; угнетает воспалительные процессы, оказывает противоотечное действие; благоприятно влияет на кожные покровы, нормализует синтез коллагена/эластина в коже. Постановлением от 14.11.2001 г. №36 СанПиН 2.3.2.1078-01» классифицирует дигидрокверцетин как антиокислитель. Согласно Методическим рекомендациям Государственного санитарно-эпидемиологического нормирования РФ №2.3.1.1915-04 от 2004 г. «Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ» устанавливают адекватный и верхний допустимый уровни потребления дигидрокверцетина в количестве 25 и 100 мг в сутки. Рекомендован в качестве антиокислителя - ГОСТ 33504-2015 Добавки пищевые. Дигидрокверцетин. Технические условия.
Использовался "Лавитол (дигидрокверцетин) " (ТУ 9325-001-70692152-07) продукция ЗАО "Аметис", содержание дигидрокверцетина - не менее 90%.
Способ с заявляемыми отличительными признаками при анализе патентной и научно-технической литературы не обнаружен.
Способ осуществляется следующим образом. Гель АГ 20% готовят растворением в дистиллированной воде при 50-70°С в течение 15-20 мин. В отдельной емкости получают 20% концентрат ДКВ в этаноле при 20-25°С. В отдельной емкости растворяют 1:1 в пентане ПП при температуре не выше 30°С в течение 15-20 мин. Раствор ДКВ в ПП готовят растворением на водяной бане "жирной" фазы добавлением по каплям спиртового раствора ДКВ в раствор ПП в течение 5-10 мин при температуре 30±2°С и скоростях вращения ротора - 1000-1500 об/мин до получения однородного раствора. Первичную эмульсию получают добавлением к раствору АГ, раствора ПП с ДКВ при скорости вращения ротора 1.0-1.5 тыс. об/мин и температуре 35±2°С до получения однородной эмульсии, испарения пентана и образования гомогенной эмульсии. Эмульсию стабилизируют при обработке ультразвуком не менее 15 мин при частоте ультразвукового воздействия 22 кГц±1.65. Размер глобул контролируют с использованием гемовизора, предел регистрации - 0.4 мкм, облучение монохроматическим зеленым светодиодом, длина волны - 0,528 нм, разрешение в поле препарата - 4 пиксель/микрон.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Определение содержания полипренолов при хранении в эмульсии методом ВЭЖХ. 10 мл эмульсии, содержащей от 2 до 10% ПП, помещают в центрифужную пробирку объемом 20 мл, добавляют 10 мл гексана, встряхивают 1 мин, обрабатывают 1 мин в ультразвуковой бане, центрифугируют 3 мин. Отбирают 0,8 мл гексанового слоя переносят в другую пробирку и упаривают. Остаток перерастворяют в 0,5 мл подвижной фазы, и хроматографируют. Условия хроматографического анализа: Колонка с обращенной фазой 5 мкм, С18, подвижная фаза: смесь гексана и изопропилового спирта в соотношении 99:1, УФ-детектор, длина волны 210 нм. На хроматограмме ВЭЖХ находится типичный для полипренолов набор пиков, отвечающих отдельным изопренологам от С 50 до С 100. В качестве стандарта используется субстанция полипренолов с содержанием 1 мг/мл (точную навеску) стандартного образца полипренолов. Количественное содержание ПП определяют методом внешнего стандарта по сумме площадей всех пиков.
Пример 2. Определение содержания дигидрокверцетина при хранении в эмульсии методом ВЭЖХ. 10 мл эмульсии, содержащей 0.01-0.2% ДКВ, помещают в колбу, добавляют 10 мл этанола для осаждения АГ и взбалтывают. 1,0 мл водно-этанольного раствора микропипеткой переносят в центрифужную пробирку объемом 2,0 мл, добавляют 1,0 мл петролейного эфира для освобождения от липидной фракции, тщательно встряхивают 3 мин, центрифугируют 3 мин и 0,8 мл этанольного слоя переносят в другую пробирку и испаряют.Остаток перерастворяют в 0,5 мл подвижной фазы, и хроматографируют.Условия хроматографического анализа: Колонка с обращенной фазой 5 мкм, С18, подвижная фаза: ацетонитрил - 0.03% трифторуксусная кислота в соотношении по объему 30:70, УФ-детектор, длина волны 290 нм. В качестве стандарта используется (ГСО Государственный стандартный образец «Дигидрокверцетин» Свидетельство на ГСО-ДКВ-Аметис №ГСО 10766-2016) дигидрокверцетина с содержанием 1 мг/мл. Количественное содержание ДКВ определяют методом внешнего стандарта по ГОСТ 33504-2015 Добавки пищевые. Дигидрокверцетин. Технические условия. Дата введения 2017-01-01.
Пример 3. Контрольный раствор ПП (используют препарат Ропрен, регистрационное удостоверение ЛСР-001521/07 от 12.07.2007, с содержанием суммы полипренолов 95%>) получают растворением ПП 2.5 г в 97.5 г пентана (154.8 мл) при температуре не более 30±2°С раствора (контроль стабильности ПП, см. Таблицу 1).
Пример 4. Контрольный раствор ДКВ 0.2% в спирте этиловом (использовали "Лавитол (дигидрокверцетин)" (ТУ 9325-001-70692152-07) продукция ЗАО "Аметис", содержание дигидрокверцетина - не менее 90%.) получают растворением 0.2 г ДКВ в 98.8 мл воды при интенсивном встряхивании (контроль стабильности ДКВ, см. Таблицу 2).
Пример 5. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 1 г и ПП -1 г (используют арабиногалактан «ФиброларС» ТУ 9363-021-39094141-08.) в дистиллированной воде (см. Таблицу 1). Размер частиц менее 1 мкм.
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской -1,0
Поверхностно-активное вещество АГ - 1,0
Остальное вода до 100% Приготовление эмульсии:
I. Одновременно на водяной бане в разных емкостях растворяют "жирную" и "водную" фазы. ПП хорошо растворимы в пентане. АГ из лиственницы хорошо растворим как в горячей, так и в холодной воде. Растворимость арабиногалактана в воде - более 15 г/100 мл. В течение 15 минут можно растворить от 14 до 50 грамм арабиногалактана в 100 мл воды при температуре от 20 до 90°С;
II. Эмульгирование. Добавляют по каплям масляную фазу к водной методом роторно-статорной гомогенизации в течение 10-20 мин при температуре 30-35°С и скоростях вращения ротора - 1000-1500 об/мин до испарения пентана и получения однородной первичной дисперсии.
III. Диспергирование. Учитывая, что ультразвук не нарушает биологической активности большинства фармакологических препаратов, ультразвуковые генераторы можно использовать для получения однородных эмульсий. Эмульсию обрабатывают при частоте ультразвукового воздействия 22 кГц ± 1.65 в течение 15-20 мин. Микроэмульсия ПП достигла среднего размера мицелл не более 1 мкм.
IV. Эмульсия остужают естественным образом, при постоянном непрерывном перемешивании.
Пример 6. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 5 г и ПП -1 г в дистиллированной воде. Эмульсию получают в условиях Примера 5 (см. Таблицу 1). Размер частиц менее 1 мкм.
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 1,0
Поверхностно-активное вещество АГ - 5,0
Остальное вода до 100%
Пример 7. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 2 г, ПП -5 г и ДКВ 0.5 г в дистиллированной воде. Для более равномерного распределения ДКВ по массе ПП вводили ДКВ в виде раствора в этаноле. Приготовление раствора ДКВ в ПП. На водяной бане получают в емкости "жирной" фазы добавлением по каплям 20% спиртового раствора ДКВ в масляную фазу в течение 5-10 мин при температуре 30-35°С и скоростях вращения ротора - 1000-1500 об/мин до получения однородного раствора. Эмульгирование проводят в условиях примера 5, для достижения равномерного распределения частиц с размером от 10 до 15 мкм (Фиг. 1). Диспергирование проводят в условиях примера 5 (см. Таблицы 1 и 2). Эмульсия ПП достигла среднего размера мицелл 1-3 мкм (Фиг. 2).
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 5,0
Арабиногалактан от 2,0
Дигидрокверцетин - 0,5
Остальное вода до 100%)
Пример 8. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 5 г, ПП -2 г и ДКВ 0.2 г в дистиллированной воде. Эмульгирование в условиях примера 5, для достижения равномерного распределения частиц с размером от 10 до 15 мкм (Фиг. 1). Диспергирование проводят в условиях примера 5 (см. Таблицы 1 и 2). Эмульсия ПП достигла среднего размера мицелл не более 1 мкм (Фиг. 3). Вид эмульсии через 24 месяца (Фиг. 4.) полученной в условиях примера 7.
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 2,0
Арабиногалактан от 5,0
Дигидрокверцетин - 0,2
Остальное вода до 100%
Пример 9. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 5 г, ПП -2 г и ДКВ 0.08 г в дистиллированной воде. Эмульсию получают в условиях примера 7 (см. Таблицы 1 и 2).
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 2,0
Арабиногалактан от 5,0
Дигидрокверцетин - 0,08
Остальное вода до 100%
Пример 10. Эмульсионную форму ПП готовят с использованием ПАВ - АГ 5 г, ПП -2 г и ДКВ 0.02 г в дистиллированной воде. Эмульсию получают в условиях примера 7 (см. Таблицы 1 и 2).
Процентное содержание компонентов: вес. %:
Полипренолы пихты сибирской - 2,0
Арабиногалактан от 5,0
Дигидрокверцетин - 0,02
Остальное вода до 100%
В Таблице 1 приведены результаты контроля содержания ПП в эмульсиях с арабиногалактаном. Эмульгирование позволяет достичь равномерного распределения частиц с размером от 10 до 15 мкм (Фиг. 1). Эмульсии с содержанием ПП 5% и выше (Фиг. 2) приводит к увеличению размера мицелл и понижению стабильности эмульсии (Фиг. 2). Стабильность эмульсии оценивали при хранении в естественных условиях (20°С) в течение 24 месяцев. Эмульсия, в течение эксперимента оставалась прозрачной и не расслаивалась. Образование отдельных капель ПП размером не более 5 мкм, после хранения в течение 24 месяцев (Фиг. 4), показывает возможность длительного хранения ПП в эмульсиях стабилизированных АГ, и позволяет сделать вывод о долговременной динамической стабильности эмульсии.
Стабильность эмульсии, как и в условиях прототипа при содержании АГ 2-10%, преимущественно 5%> (см. пример 8, Рис. 3), проявляющего хорошую растворимость, низкую вязкость концентрированных растворов, высокую диспергирующую способность, отсутствие опасных продуктов распада, доступность всех компонентов эмульсии в промышленном масштабе, позволяет рекомендовать АГ в качестве неионогенного поверхностно-активного вещества при производстве эмульсий ПП.
Сохранность ПП до 90% в присутствии ДКВ, характеризующегося широким спектром фармакологической активности, являющегося природным антиоксидантом и производящемся в промышленном масштабе, расширяет область применения таких эмульсий. Дигидрокверцетин является антиоксидантом прямого действия, непосредственно связывающим свободные радикалы, обрывая ветвление свободно радикальной цепи. При этом дигидрокверцетин может функционировать как ловушка активных форм кислорода. В этом смысле он является эталонным продуктом по сравнению со всеми известными, в том числе и синтетическими антиоксидантами прямого действия. Установлено, что дигидрокверцетин ингибирует свободнорадикальное окисление как водорастворимых, так и жирорастворимых субстратов. (Круглова О.Г., Доровских В.А., Тиханов В.И., Круглова Т.Г., Бочарникова И.А. Влияние дигидрокверцетина на продукты перекисного окисления липидов при холодовом воздействии. Дальневосточный медицинский журнал. 2011.-N 3. -С. 90-92).
Самое результативное сочетание антиоксиданта в эмульсии достигается при содержании ДКВ от 0.02 до 0.2%. Дозировка ДКВ 0.5% заметно не увеличивает сохранность ПП, а концентрация ниже 0,02% (Пример 10, Табл. 2) будет недостаточна для снижения продуктов окислительной деструкции. В ходе исследований было установлено следующее: по мере увеличения продолжительности хранения эмульсий содержание ПП, за первый месяц хранения уменьшается на 10-15%> от исходного, затем темп снижения замедляется и не возрастает более 20-25% даже к концу 24-месячного периода хранения. Потери при хранении при стабилизации ПП в присутствии ДКВ не превышали 4,0% (см. Таблицу 1).
Предложенный состав позволяет получить эффективную биологически активную эмульсию ПП по упрощенной технологии при отсутствии побочных эффектов. Это средство характеризуется простотой изготовления, повышенной стабильностью, удобно и безопасно в применении.
Приведенные примеры свидетельствуют о несомненных преимуществах предложенной эмульсии с использованием ДКВ. Полученные экспериментальные данные показали, что необходимым условием сохранения стабильной формы ПП в эмульсии является антиоксидантное действие ДКВ.