Идентификация стероидных и нестероидных противовоспалительных средств

При выбранных условиях пробоподготовки и анализа предел обнаружения теофиллина составляет 0,2 мкг/мл крови. Предел обнаружения определяли методом добавок к холостой крови как минимальная концентрация анализируемого вещества в крови, дающая отношение сигнал/ шум более 4. Предел количественного определения равен 5 мкг/мл.

Калибровочная кривая для теофиллина линейна в диапазоне 5-200 мкг/мл и имеет вид:

У = 29,4хХ+4,1 (Я = 0,999),

где У - концентрация теофиллина в крови в мкг/мл, Х- отношение площадей пиков анализируемого вещества и внутреннего стандарта, Я - коэффициент корреляции.

Таблица 2

Воспроизводимость методики определения теофиллина в крови

Серия определе- ний Найдено, *мкг/мл Sr Найдено, **мкг/мл Sr

1 10,2±0,4 0,051 101,2±3,5 0,043

2 9,8±0,5 0,069 99,2±6,1 0,077

3 10,3±0,6 0,074 100,7±2,3 0,028

Аналитическому определению теофиллина не мешают другие производные ксантина (кофеин и теобромин) имеющие сходные с теофиллином УФ спектры, так как при выбранных условиях анализа их пики хорошо разрешаются (рис.2).

* Введено 10 мкг/мл (нижний контроль).

** Введено 100 мкг/мл (верхний контроль).

В табл. 2 приведены показатели воспроизводимости методики по анализу трех серий образцов.

Рис.2. Хроматограмма смеси теобромина (2,21 мин), теофиллина (3,277 мин), кофеина (4,721 мин), 8-хлортеофиллина (7,677 мин).

Описанная методика охватывает область от терапевтических до летальных концентраций теофиллина в крови. Она применяется в настоящее время для судебнохимических анализов в Челябинском областном бюро судебно-медицинской экспертизы, а также для токсикологических анализов и терапевтического мониторинга в Челябинском областном токсикологическом центре.

Литература:

1. Вартанян Р.С. Синтез основныхлекарственных средств. М: МИА. - 2005. - 845 с.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2-х томах. Т.1.- 9-е изд., М.: Медицина. - 1984. - 624 с.

3. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. М.: АстраФармСервис. - 1995. -

4. Clarke’s analysis ofdrugs andPoisons. /London., Pharmaceutical Press. - Electronic version, 2004.

1168 c.

© П.Ю. Лукьянчиков, Н.Л. Муравьева, М.Г. Мусина, М.Г. Тихомирова, 2008 УДК 340.624

П.Ю. Лукьянчиков, Н.Л. Муравьева, М.Г. Мусина, М.Г. Тихомирова ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТЕРОИДНЫХ И НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ

ГУЗ “Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы” МЗ РТ (нач. - Н.Ш. Нигматуллин) Установлена возможность изолирования противовоспалительных средств производных метилпредни-золона, пропионовой, фенилуксусной кислот, сульфонанилида подкисленной водой. Проведена идентификация рассмотренных веществ различными физико-химическими методами: хроматография в тонком слое сорбента, газожидкостная хроматография, спектрофотометрия в ультрафиолетовой области спектра. Исследована возможность их количественного определения методами газожидкостной хроматографии и спектрофотометрии.

Ключевые слова: противовоспалительные средства, идентификация, хроматография в тонком слое сорбента, газожидкостная хроматография, спектрофотометрия.

IDENTIFICATION OF STEROIDAL AND NON-STEROIDAL ANTIINFLAMMATORI FACILITIES P. Yu. Lukiyanchikov, N.L. Muravieva, M.G. Musina, M.G. Tihomirova The possible isolation of antiinflammatori facilities derived methylprednisolone, propionic, phenylacetic acids, sul-fonanilide by acidified water was installed. The identification of considered drugs by different physico-chemical methods: thin-layer chromatography, gas-liquid chromatography, ultraviolet spectrofotometry was conducted. The possibility of their assay by methods of gas-liquid chromatography and spectrofotometry was explored.

Key words: antiinflammatori facilities, identification, thin-layer chromatography, gas-liquid chromatography, spectrofotometry.

Противовоспалительные препараты находят широ- сульфонанилида. Представители этих групп отображены

кое применение в медицинской практике. Они обладают в таблице 1 [2].

противовоспалительной, анальгетической и умеренной Стандартные растворы исследуемых веществ готови-

жаропонижающей активностью. Эти препараты пользу- ли из выпускаемых лекарственных форм (ампульные рас-

ются спросом у населения и находятся в аптеке в свобод- творы дексаметазона, кетопрофена, ортофена, таблетиро-

ной продаже. В литературе описаны методы исследования ванные формы ибупрофена, индометацина, нимесулида)

производных пиразолона, парааминофенола, салициловой экстракцией хлороформом из водного раствора при рН

кислоты. Нами же были исследованы производные ме- 2 после подкисления раствором щавелевой кислоты и рН

тилпреднизолона, пропионовой, фенилуксусной кислот, 9-10 после подщелачивания 25% раствором гидроксида

19

Таблица 1

Наименования лекарственных средств, их химические формулы и названия

аммония[1]. Исследования показали, что дексаметазон, ибупрофен, индометацин, кетопрофен извлекаются при рН 2, а нимесулид и ортофен при рН 2 и рН 9-10. Параллельно готовили модельные смеси: к 50 г измельчённой печени добавляли 50 мг стандарта и через сутки экстрагировали аналогично стандартным растворам. Для идентификации исследуемых соединений использовали физико-химические методы анализа: спектрофотометрию

в ультрафиолетовой области спектра, хроматографию в тонком слое сорбента (ТСХ) и газожидкостную хроматографию (ГЖХ). Модельные смеси исследовали аналогично стандартным растворам. Получены сопоставимые результаты. ТСХ-скрининг проводили на пластинах для тонкослойной хроматографии «Сорбфил» ПТСХ-П-А-УФ (тип сорбента - силикагель СТХ-1А). Следует отметить, что вещества этой группы имеют низкие абсолютные

значения ЯГ во многих системах растворителей. Для исследования были использованы следующие системы растворителей [3]:

I - хлороформ - ацетон (9:1); II - хлороформ - этанол (70:30); III - этилацетат - этанол - 25% раствор гидроксида аммония (85:10:5); IV - этилацетат - этанол - 25% раствор гидроксида аммония (90:30:10); V - хлороформ - изопропанол -25% раствор гидроксида аммония ( 30:10:1);

VI - толуол - ацетон - этанол - 25% раствор гидроксида аммония (45:45:7.5:2.5); VII - хлороформ - ацетон - диок-сан - 25% раствор гидроксида аммония (45:5:47.5:2.5); VIII

- этилацетат; IX - толуол - хлороформ (3:1); X - дихлорэтан - этанол - вода (95:5:0.2). Пробег фронта растворителя 8 см. Значения ЯГ внесены в таблицу 2.

Таблица 2

Абсолютные значения веществ в системах растворителей

систе- ма декса- мета- зон ибуп- рофен индо- мета- цин кето- про- фен ниме- сулид орто- фен

I 0,00; 0,34 0,02 0,00 0,00 0,48 0,00

II 0,42 0,00 0,42 0,43 0,68 0,47

III 0,00; 0,51 0,06 0,00 0,00 0,18 0,07

IV 0,007; 0,59 0,19 0,18 0,14 0,34 0,24

V 0,00; 0,66 0,13 0,00 0,00 0,34 0,08

VI 0,00 0,12 0,08 0,07 0,33 0,12

VII 0,00; 0,57 0,03 0,00 0,00 0,43 0,00

VIII 0,29; 0,6 0,00 0,22 0,21 0,61 0,31

IX 0,00 0,14 0,36 0,00 0,14 0,24

X 0,42 0,52 0,13 0,22; 0,62 0,62 0,16; 0,46; 0.62

При детектировании хроматограмм исследовали взаимодействие полученных извлечений нестероидных и стероидных противовоспалительных средств с различными реактивами: 1 - концентрированная серная кислота; 2

- реактив Марки; 3 - реактив Фреде; 4 - 10% раствор хлорида окисного железа; 5 - 0,5% раствор феррицианида калия с добавлением 10% раствора хлорида окисного железа; 6

- смесь равных объёмов 1% растворов сульфата меди (II) и феррицианида калия; 7 - реактив Драгендорфа, модифицированный по Мунье; 8 - 1% раствор перманганата калия в 0,25М растворе серной кислоты; 9 - 3% раствор бихромата калия в серной кислоте[3]. Результаты исследований отразили в таблице 3.

Нами отмечено, что исследуемые соединения слабо реагируют с реактивами, обычно используемыми в общем ходе анализа: дают окраски, более характерные для эндогенных соэкстрактивных веществ, или вообще не образуют окрашенных продуктов реакций. После хроматографирования во всех системах растворителей в зоне нимесулида наблюдали собственное жёлтое окрашивание, которое либо усиливалось при проявлении реактивом (концентрированная серная кислота, реактив Фреде), либо исчезало. Собственной окраски у остальных веществ после ТСХ-скрининга не наблюдали. Газохроматографический анализ исследуемых растворов проводили

на хроматографе «Кристаллюкс-4000» с детектором ионизационно-пламенным.

Таблица 3

Окраска продуктов реакций с различными реактивами

реак- тив декса- мета- зон ибуп- рофен индо- мета- цин кетопро- фен ниме- сулид орто- фен

1 гряз- но- сине- зелёное жёлтое жёлтое

2 свет- ло-бу- рое жёлто-бурое,^ в буроватокрасное крас- но-ко- ричн.

3 жёлтое, в сине-зелёное жёлтое розо- во-фи- олет.

4 свет- ло-се- рое буро- ватое бурова- то-оран- жевое серое

5 синее жёлто- бурое синее жёлто- бурое сине- зеле- ное

6 голу- бое серо- голу- бое серо-го- лубое бурое

7 светло- жёлтое свет- ло- жёлтое свет- ло-ко- ричн.

8 белое на розовом фоне белое на розовом фоне белое на розовом фоне

9 бурое бурое

Условия разделения: колонка капиллярная Витокап

- Al-0,2; материал колонки - кварц алюминированный, фаза VS-1, иммобилизованная SE-54; длина колонки 25 м, диаметр 0,23 мм, толщина пленки фазы 0,2 мкм. Температура колонки +240°С, испарителя +250°С, детектора ПИД +240°С. Расход азота: газ 1 - 25 см3/мин, газ 2 - 35 см3/мин, газ 3 - 35 см3/мин; водорода - 30 см3/мин, воздуха - 250 см3/мин. В качестве внутреннего стандарта использовали

0,1% раствор дифениламина в обезвоженном этаноле. По нему определяли относительное время удерживания исследуемых соединений (Т отн.). Спектрофотометрическое исследование веществ проводили на спектрофотометре СФ-56 в интервале длин волн 200-400 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см в этаноле, 0,1 н растворах хлористоводородной кислоты (HCl) и гидроксида натрия (NaOH). Полученные данные сведены в таблицу 4.

Количественное определение исследуемых веществ в модельных смесях проводили методом ГЖХ с использованием внутреннего стандарта. Определённый процент извлечения дексаметазона, ортофена, ибупрофена, ин-дометацина, кетопрофена, нимесулида, добавленных из расчёта 50 мг на 50 г печени, составил соответственно 8%, 14,5%, 12%, 9,5%, 11%, 9%.

Возможен также количественный анализ нимесулида в извлечении из биологического объекта спектрофотометрическим методом в 0,1 н растворе гидроксида натрия

при длине волны 390 нм после хроматографической очистки аликвотной части извлечения в системе этилацетат с последующей реэкстракцией смесью этанол-хлороформ (1:1). Экспериментально установили, что удельный показатель поглощения (Е|) нимесулида составил 680. При добавлении к 50 г печени 50 мг нимесулида определили 6,5% извлечённого вещества.

Таблица 4

Результаты ГЖХ и спектрофотометрии

ВЫВОДЫ:

1. Установлена возможность изолирования противовоспалительных средств производных метилпреднизоло-на, пропионовой, фенилуксусной кислот, сульфонанилида подкисленной водой при рН 2 и рН 9-10.

2. Отмечено, что при ТСХ-скрининге лишь некоторые системы растворителей пригодны для хроматографирования веществ исследуемой группы. Реакции окрашивания неспецифичны, что затрудняет идентификацию рассматриваемых лекарственных средств.

3. При идентификации данных веществ могут быть использованы комплексные исследования различными физико-химическими методами: хроматография в тонком слое сорбента, газожидкостная хроматография, спектро-фотометрия в ультрафиолетовой области спектра.

4. Количественное определение веществ можно проводить методом газожидкостной хроматографии, а нимесулида, кроме того, спектрофотометрическим в 0,1 н растворе гидроксида натрия при длине волны 390 нм.

5. Экспериментально определённый нами процент извлечения исследуемых веществ при изолировании подкисленной водой сравнительно невелик, что требует дальнейшего поиска оптимальных условий извлечения.

Иссле- дуемое вещество ГЖХ, Т отн. СФ-56, максимумы, нм

0,1н HCl 0,1н NaOH этанол

дексамета- зон 2,88 255 290 255

ибупро- фен 6,82 270,350 265 265

индомета- цин 10,01 - 230,280 230,318

кетопро- фен 1,72 250,320 250,325 245,315

нимесу- лид 5,30 - 390 300,325

ортофен 0,74 260,345 273 280

Литература:

1. Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. К,: Выща шк. Головное изд-во, 1989. - С. 194.

2. МашковскийМ.Д. Лекарственные средства. 12-е изд. М: Медицина,1993. 4.1. - С. 214-218, 673.

3. Moffat А.С., Jackson J.V., Moss M.S., Widdop В. Clarke's isolation and identification ofdrags inpharmaceuticals, bodyfluids andpost-mortemmaterial. 2-ndEd.-London. Thepharmaceuticalpress, 1986. -P.169-170, 518-519, 533, 677, 681, 697, 1169-1170.

© В.М. Напольских, Н.А. Бочкарева, В.Б. Столбов, 2008 УДК 616-006:616.35-089

В.М. Напольских, Н.А. Бочкарева, В.Б. Столбов ЭКСПЕРТНАЯ ОЦЕНКА УРГЕНТНЫХ СОСТОЯНИЙ В ОНКОПРОКТОЛОГИИ

Кафедра онкологии

ГОУ ВПО “Ижевская государственная медицинская академия Авторами проанализировано 68 пациентов с острой толстокишечной обструкцией (непроходимостью) опухолевого происхождения, описана тактика лечения зависящая от стадии заболевания, уровня непроходимости, сопутствующих осложнений (перитонит, перфорация кишечника, абдоминальный абсцесс).

При I стадии заболевания больным с легкой и среднетяжелой степенью непроходимости допустимо выполнение первично радикальной операции с забрюшинной лимфодиссекцией и наложением первичного межкишечного анастомоза. Адекватная декомпрессия кишечника при первичной операции (колостомия), позволяет в последующем через 1 месяц выполнить радикальную операцию с адекватной лимфодиссекцией и закрытием колостомы без каких-либо тяжелых осложнений для больного. Выполнение операций Гартмана часто является нерадикальным и требует направления больного в специализированное отделение для повторной радикальной операции.

Ключевые слова: острая толстокишечная обструкция, опухоль, хирургическая операция.

EXPERT ESTIMATION URGENT CONDITIONS IN ONCOPROCTOLOGY V.M. Napolskyh, N.A. Bochkareva, V.B. Stolbov Authors analyzed 68 patients with acute colon obstruction by of tumor genesis, they described tactic of treatment depends on staging disease, grade of impassability, concomitant complications (peritonitis, perforation of intestine, abscess in abdomen). The following conclusions were made because of research:

It is allowed to carry out firstly complete surgical operation with retroperitoneal dissection and laying on anastomosis for patients in first staging of disease with light and middle grades of impassability.

Key words: acute colon obstruction, tumor, surgical operation.

Заболеваемость колоректальным раком неуклонно Ежегодно в мире регистрируют около 800 тыс. больных

растет как у нас в стране, так и в большинстве западных раком ободочной и прямой кишки и 440 тыс. смертей от

государств. По данным В.И. Чиссова, в 2000 г. в структуре него (Шойхет, Аксель Е.М., 2001).

общей заболеваемости злокачественными новообразо- Рак ободочной и прямой кишки за последние годы

ваниями в России колоректальный рак составил 9,6% у занял высокое место в ряду общей структуры онкологи-

мужчин и 10,2% - у женщин. А в 2001 г. было зарегистри- ческих болезней и продолжает удерживать это место во

ровано 24849 вновь заболевших раком ободочной и 20541 многих странах Европы и Америки. За последние 5 лет

раком прямой кишки. В 2003 г. в России выявили 50698 не отмечается значительных изменений в структуре и аб-

новых случаев заболевания, что на 3168 (6,2%) превысил солютных показателях заболеваемости колоректальным

число заболевших в 2000 г. (Шойхет, Чиссов В.И., 2005). раком (Шойхет, Аксель Е.М., 2001). В настоящее время