КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЭКСТРАКТ ТРАВЫ ВЕРБЕЙНИКА СЕННОГО, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ
COMPOSITION CONTAINING MONEYWORT EXTRACT FOR PREVENTING AND TREATING METABOLIC DISORDERS

Область техники
Изобретение относится к композиции для профилактики и лечения заболеваний обмена веществ, которая содержит экстракт травы вербейника сенного (Lysimachiae Foenum-Graeci Herba) в качестве активного ингредиента, в частности к сырью, функциональному питанию и растительным медикаментам для использования в качестве гепатопротектора и средства для профилактики и лечения множества заболеваний обмена веществ, включая диабеты, высокое кровяное давление, ожирение печени, сердечно-сосудистые заболевания, и гиперлипидемию, посредством снижения в крови уровня глюкозы, триглицеридов и холестерина, уровней аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT), а также уровня жира в печени.
Предшествующий уровень техники
В последние годы в связи с повышением уровня жизни в ходе экономического роста улучшилась и среда здравоохранения, а привычки питания изменились в сторону частого потребления неполноценной пищи и пищи, содержащей много мяса, приводящего к чрезмерному накоплению калорий в организме. Однако, поскольку снижение уровня расходования калорий ввиду отсутствия физических нагрузок добавляется к такому изменению современных привычек питания, появляется тенденция к тому, что быстро увеличивается популяция, страдающая ожирением. В этом случае калории, чрезмерно накапливающиеся в организме, проявляются в форме различных заболеваний, в дополнение к ожирению, и примерами таких заболеваний являются заболевания обмена веществ и метаболический синдром, такие как диабеты, гиперлипидемия и ожирение печени.
Диабеты являются разновидностью системного заболевания обмена веществ, вызванного генетическими факторами и факторами окружающей среды, и подразумевает состояние, в котором ненормально высокая концентрация в крови обусловлена абсолютным и относительным дефицитом инсулина в организме. Осложнения диабета включают гипогликемию, кетоацидоз, гиперосмолярную кому, заболевания макрокровеносных сосудов, диабетическую ретинопатию, диабетическую невропатию, диабетическую нефропатию.
Гиперлипидемия является общим термином для гиперхолестеринемии и повышенного содержания триглицеридов и подразумевает состояние, в котором содержание холестерина (240 мг/децилитр или более) и триглицеридов (200 мг/децилитр или более) повышено по сравнению с нормальными значениями вследствие нарушения метаболизма липопротеинов и липидов. Гиперлипидемия по большей части классифицируется двух типов, а именно первичная гиперлипидемия, вызванная генетическими нарушениями, и вторичная гиперлипидемия, вызванная другими нарушениями, такими как диабеты или прием медикаментов. Гиперлипидемия не обладает какими-либо конкретными симптомами, но является проблемой, при которой повышение уровней холестерина и триглицеридов в крови может вызывать артериосклероз, высокое кровяное давление, сердечно-сосудистые заболевания и так далее.
Ожирение печени относится к состоянию, в котором жир накапливается в гепатоцитах. Такой накопленный жир сам по себе не является токсичным для гепатоцитов, не дает симптомов и в большинстве случаев функция печени является нормальной или слегка нарушенной в случае, когда ожирение печени не является серьезным. Однако если ожирение печени становится серьезным и увеличивает размер кусков жира в гепатоцитах, функция гепатоцитов, включая их ядра, нарушается. Таким образом, жир, накопленный в гепатоцитах, угнетает микрососуды и лимфатические железы между гепатоцитами, что затрудняет циркуляцию крови и лимфы в печени. В результате этого необходимое количество кислорода и питательных веществ не может быть доставлено в гепатоциты, и таким образом нарушаются функции печени.
Сердечно-сосудистые заболевания относятся к сердечным и сосудистым нарушениям и включают в себя заболевания сердца, заболевания основных кровеносных сосудов, таких как аорта, и заболевания периферических сосудов органов и тканей. Более конкретно сердечно-сосудистые заболевания включают в себя заболевания сердца и сосудов; первые из которых включают остановку сердца. заболевания сердца, связанные с высоким кровяным давлением, аритмию, заболевания клапанов, врожденные заболевания сердца, и кардиомиопатию, а вторые из которых включают несчастные случаи с сосудами головного мозга и заболевания периферических сосудов.
Указанные заболевания обусловлены усилением артериосклеротических факторов вследствие увеличения уровня холестерина, повреждения клеток эндотелия сосудов из-за окисления липопротеинов низкой плотности (Low-Density Lipoprotein, LDL), нарушения кровотока вследствие свертываемости крови и так далее, и могут осложняться гиперлипидемией, артериосклерозом и так далее. Другими словами, метаболизм липидов и концентрация липидов в крови существенным образом влияют на начало и развитие сердечно-сосудистых заболеваний. Более конкретно состояние при сердечно-сосудистых заболеваниях может быть улучшено путем предотвращения окисления LDL, чтобы снизить уровень LDL холестерина и повысить уровень HDL холестерина для того, чтобы снизить артериосклеротические факторы.
То есть начало различных сердечно-сосудистых заболеваний, обусловленных гиперлипидемией и дисфункцией кровеносной системы, может быть в значительной степени предотвращено путем снижения уровней холестерина в крови. Также в случае, когда тромболитическая активность, активность по агрегированию тромбоцитов и тенденция к чрезмерной коагуляции крови подавляются за счет ингибирования реакционноспособных частиц кислорода, главным образом ответственных за перокисление LDL, что может быть причиной повреждения клеток эндотелия сосудов и, как результат, свертывания крови, возможно эффективно предотвращать и улучшать состояние при сосудистых заболеваниях и заболеваниях системы кровообращения, таких как артериосклероз, высокое кровяное давление, ишемические заболевания сердца, и несчастных случаях, связанных с сосудами головного мозга, и таким образом улучшить состояние при сердечно-сосудистых заболеваниях.
Термин "метаболический синдром" относится к синдрому, который включает в себя набор различных факторов риска, таких как гиперлипидемия, высокое давление, нарушенный метаболизм глюкозы, и ожирение. В последние годы указанный синдром был формально назван как "метаболический синдром" или "синдром устойчивости к инсулину " в ходе программы АТР III (Adult Treatment Program III, программа III лечения взрослых), разработанной ВОЗ (Всемирной организацией здравоохранения) и Национальным институтом сердца, легких и крови Национального института здоровья США (NIH, National Institutes of Health).
В соответствии с программой АТР III Национальной образовательной программы США по холестерину (NCEP, National Cholesterol Education Program), которая была опубликована в 2001, метаболический синдром диагностируется, когда у одного пациента присутствуют по крайней мере три из пяти факторов риска: 1) брюшное ожирение, при котором окружность талии составляет более 40 дюймов (102 см) для мужчин и более 35 дюймов (88 см) для женщин; 2) высокий уровень триглицеридов более чем 150 мг/децилитр; 3) уровень HDL холестерина менее чем 40 мг/децилитр для мужчин и менее чем 50 мг/децилитр для женщин; 4) высокое кровяное давление 130/85 мм ртутного столба или выше; и 5) уровень глюкозы при голодании более чем 110 мг/децилитр. В случае жителей востока брюшное ожирение слегка скорректировано до 90 см для мужчин и 80 см для женщин, и недавние исследования сообщают, что у около 25% популяции Кореи присутствуют симптомы метаболического синдрома в случае применения указанных выше критериев.
Устойчивость к инсулину относится к феномену, при котором хотя секреция инсулина в организме является нормальной, инсулин не может функционировать должным образом для того, чтобы снабжать клетки глюкозой. Поскольку глюкоза из крови не может проникать в клетки, появляется гипергликемия, а клетки становятся неспособными к функционированию вследствие дефицита глюкозы, что приводит к появлению метаболического синдрома. До настоящего времени лекарства для лечения метаболического синдрома разработано не было и были предприняты попытки лечения метаболического синдрома только с использованием лекарств против диабетов, гиперлипидемии и высокого кровяного давления. Однако их доступность как лекарств является ограниченной. Среди доступных в настоящее время лекарств, метформин, лекарства на основе TZD (тиазолидиндионов), ингибиторы глюкозидазы, двойные агонисты PPAR γ/α, и DDP (дипептидилпептидазы), использующиеся для лечения диабетов, находятся в центре внимания как лекарства для лечения метаболического синдрома. В дополнение к этому уделяется внимание изоформе ароА-1 и родственным пептидам, являющихся мишенями для антигипертензивных и антигиперлипидемических агентов, ингибиторам белков-транспортеров сложных эфиров холестерина (cholesterol ester transport protein, CETP) и им подобным.
В настоящем изобретении диабеты, гиперлипидемия, ожирение печени и заболевания, про которые известно, что они обусловлены ими, а именно артериосклероз, высокое кровяное давление и сердечно-сосудистые заболевания, и метаболический синдром, сопровождаемый одновременным и множественным проявлением указанных выше заболеваний, собирательно названы как "метаболический синдром".
Техническая проблема
Таким образом, настоящее изобретение было совершено для решения по крайней мере вышеуказанных проблем, встречающихся в предшествующем уровне техники, и целью настоящего изобретения является предоставление сырья, функционального питания, косметики и лекарственных препаратов из растений для использования в качестве гепатопротектора и средства для профилактики и лечения заболеваний обмена веществ, которые в качестве активного ингредиента включают в себя экстракт травы вербейника сенного, действенный для снижения уровней глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени (AST, ALT) в крови, а также для снижения количества жира в печени.
Техническое решение
Отличительным признаком настоящего изобретения является растительный экстракт, полученный из травы вербейника сенного (Lysimachiae Foenum-Graeci Herba), действенный для снижения уровней маркеров заболеваний обмена веществ (уровней глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови), а также для снижения количества жира в тканях печени.
Настоящее изобретение предоставляет способ получения экстракта травы вербейника сенного, действенного для снижения уровней маркеров заболеваний обмена веществ (уровней глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови), а также для снижения количества жира в тканях печени путем выделения экстракта из травы вербейника сенного, при этом указанный способ включает в себя стадии: 1) сушка и измельчение целых растений вербейника сенного вместе с листьями; (2) экстракция растворителем вербейника сенного, полученного на стадии (1), путем добавления к нему органического растворителя в количестве от 5 до 50 частей по отношению к весу вербейника сенного; и (3) фильтрация экстракционного раствора с использованием фильтровальной бумаги, а затем концентрирование в вакууме отфильтрованного раствора при температуре 40°С или ниже.
Органический растворитель включает в себя низший спирт, содержащий от 1 до 4 атомов углерода.
Поскольку экстракт травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению, приготовленный в соответствии с описанным выше способом, эффективно снижает уровни маркеров заболеваний обмена веществ (уровни глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови), а также снижает количество жира в тканях печени, он может быть использован в качестве сырья, функционального питания и лекарственного препарата из растений для профилактики и лечения заболеваний обмена веществ.
В реализации настоящего изобретения эффект снижения уровней маркеров заболеваний обмена веществ (уровней глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови), а также снижение количества жира в тканях печени наблюдались при назначении пациентам экстракта согласно настоящему изобретению.
Также настоящее изобретение предоставляет композицию, содержащую указанный экстракт в количестве от 0.1 до 50% от общего веса указанной композиции. Композиция согласно настоящему изобретению, содержащая экстракт травы вербейника сенного также может содержать подходящие носители, инертные наполнители или разбавители, традиционно используемые для этих целей. Примеры носителей, инертных наполнителей и разбавителей, которые могут быть включены в композицию согласно настоящему изобретению, включают в себя лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, камедь сенегальской акации, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, аморфную целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Композиция, содержащая экстракт согласно настоящему изобретению, может использоваться в формах для орального применения, таких как порошки, гранулы, таблетки, капсулы, суспензии, эмульсии, сиропы и аэрозоли, или в формах для наружного применения, суппозиториях или виде стерильных инфузий для внутривенного введения, традиционно используемых для этих целей. Более конкретно указанная композиция может быть использована для получения фармацевтической формы с применением традиционно используемых растворителей или инертных наполнителей, таких как наполнитель, разбавитель, связующее вещество, увлажняющий агент, дезинтегрирующий агент, сурфактант. Твердые лекарственные формы для орального применения, включающие таблетки, шарики, порошки, гранулы, капсулы и т.д., могут быть приготовлены смешением, по крайней мере, одного наполнителя, например, крахмала, карбоната кальция, сахарозы, лактозы и желатина с экстрактом согласно настоящему изобретению. Также лубриканты, такие как стеарат магния и тальк, могут быть использованы в дополнение к простым наполнителям. Жидкие лекарственные формы для орального применения, включающие суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и т.д., могут включать различные инертные наполнители, например увлажняющий агент, подсластитель, ароматизирующий агент и консервант, в дополнение к традиционно используемым простым разбавителям, а именно воде и жидкому парафину. Лекарственные формы для парентерального введения включают в себя стерильные водные растворы, неводные растворители, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты и суппозитории. В качестве неводных растворителей и суспензий могут быть использованы пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, такое как оливковое масло, сложный эфир для инъекций (такой как этилолеат), и так далее. В качестве основы для суппозитория могут быть использованы витепсол, макрогол, твин 61, масло какао, лауриновое масло, глицерожелатин и т.д. Хотя дозировка может отличаться в зависимости от возраста, пола и веса пациентов, экстракт согласно настоящему изобретению может быть назначен в общем случае от одного до нескольких раз в день в количестве от 0.01 до 500 мг/кг и предпочтительно от 0.1 до 100 мг/кг. Также дозировка может быть увеличена или уменьшена в зависимости от способа применения, остроты заболевания, пола, веса и возраста. Таким образом, рамки настоящего изобретения не могут быть ограничены каким-либо образом указанными выше дозировками.
Композиция согласно настоящему изобретению может быть назначена млекопитающим, таким как крысы, мыши, домашние животные, человек и т.д., посредством различных способов применения. Все виды способов назначений могут быть использованы и назначение указанной композиции может быть осуществлено, например, орально, ректально, с помощью внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции, подкожной инъекции, внутриматочной инъекции, инъекции в твердые мозговые оболочки и интрацеребровентрикулярной инъекции. Поскольку экстракт травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению не обладает токсическим и побочными эффектами, он может быть использован без особых опасений в ходе длительного назначения в целях предупреждения заболевания.
Также настоящее изобретение предоставляет здоровое функциональное питание для предупреждения тревожного расстройства, связанного с черепно-мозговой системой, который включает в себя экстракт травы вербейника сенного и ситологически приемлемую пищевую добавку. Примеры продуктов, в которые может быть добавлен экстракт травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению, включают в себя различные напитки, жвачки, чаи, витаминные комплексы, пищевые продукты, способствующие оздоровлению, и т.д., а также этими продуктами могут быть пилюли, порошки, гранулы, инфузии, таблетки, капсулы или напитки. В общем случае экстракт согласно настоящему изобретению может быть добавлен к композиции лечебного питания согласно настоящего изобретения в количестве от 0.01 до 15 весовых процента в пересчете на общий вес пищевого продукта, а в случае композиции для лечебного напитка указанный экстракт может быть добавлен в количестве от 0.02 до 10 грамм, предпочтительно от 0.3 до 1 грамма на 100 мл напитка.
Пищевые добавки, упомянутые в настоящем описании, включают пищевые добавки, традиционные известные из уровня техники, такие как ароматизирующие агенты, вкусовые добавки, красители, наполнители и стабилизаторы. Нет каких-либо особых ограничений для дополнительных ингредиентов, которые могут быть добавлены в композицию лечебного напитка согласно настоящему изобретению в дополнение к определенному количеству экстракта как существенного ингредиента, и композиция лечебного напитка согласно настоящему изобретению может содержать дополнительные ингредиенты, такие как подсластители или натуральные углеводы, в таком же виде, как и в традиционных напитках. Примеры натуральных углеводов включают в себя сахара, такие как моносахариды (например, глюкоза, фруктоза и т.д.), дисахариды (например, мальтоза, сахароза и т.д.), полисахариды (например, декстрин, циклодекстрин и т.д.), и сахарные, спирты, такие как ксилит, сорбит, эритрит. Натуральные подсластители, такие как тауматин, экстракт посконника крапиволистного (например, стевиозид (rebaudioside А), глицирризин и т.д.) и синтетические подсластители, такие как сахарин, аспартам, и т.д. могут быть использованы в качестве подсластителей также, как и указанные выше. Натуральные углеводы включаются обычно в количестве от 1 до 20 грамм и предпочтительно от 5 до 12 грамм на 100 мл композиции согласно настоящему изобретению.
В дополнение к указанным выше дополнительным ингредиентам, указанная композиция согласно настоящему изобретению может содержать различные питательные вещества, витамины, минералы (электролиты), вкусовые добавки, включая натуральные или синтетические вкусовые добавки, красители, усилители вкуса (сыр, шоколад и т.д.), пектиновую кислоту и ее соль, альгиновую кислоту и ее соль, органические добавки, защитный коллоидный загуститель, регулятор кислотности, стабилизатор, консервант, глицерин, спирт, агент для получения углекислого газа и так далее. Также композиция согласно настоящему изобретению может содержать мякоть, использующуюся для получения натурального фруктового сока, напитков с фруктовым соком, овощных напитков. Каждый из этих ингредиентов может быть использован независимо или в любой комбинации с другими ингредиентами. Хотя процентный состав таких добавок не является важным, указанные добавки составляют обычно от 0 до 20 весовых частей на 100 весовых частей композиции согласно настоящему изобретению.
Полезные эффекты
Как описано ниже, указанный экстракт травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению обладает превосходным эффектом по снижению уровней маркеров заболеваний обмена веществ (уровней глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови) и снижению количества жира в тканях печени, он может быть эффективно использован в качестве сырья, функционального питания и лекарственного препарата из растений в качестве гепатопротектора и как лекарственное средство для профилактики и лечения диабетов, гиперлипидемии, ожирения печени и метаболического синдрома, сопровождающегося одновременным и множественным проявлением указанных заболеваний.
Краткое описание чертежей
Указанные выше и другие объекты, особенности и преимущества настоящего изобретения станут более очевидными из последующего подробного описания, взятого вместе с сопроводительными чертежами, в которых:
Фиг.1 показана серия картинок, иллюстрирующих образцы ткани печени, извлеченные из мышей контрольной группы, группы больных мышей, и группы положительного контроля, образцы ткани печени окрашены с помощью гематоксилина-эозина, а жир окрашен с помощью масляного красного О, который распределен в тканях печени;
Фиг.2 показаны графики, иллюстрирующие результаты измерения содержания триглицеридов и холестерина в образцах ткани печени, извлеченных из мышей контрольной группы, группы больных мышей, и группы положительного контроля;
Фиг.3 показан график, иллюстрирующий результаты измерения количества включения глюкозы при назначении экстракта травы вербейника сенного и метформина мышиным миобластным клеткам (С2С12),
Фиг.4 показан график, иллюстрирующий результаты измерения количества секреции инсулина при назначении экстракта травы вербейника сенного панкреатическим β-клеткам хомяка (HIT-T15), и
Фиг.5 показан график, иллюстрирующий результаты измерения количества глюкозы в крови при назначении экстракта травы вербейника сенного мышам db/db, страдающим диабетом, использованным в качестве модели.
Сущность изобретения
Здесь и далее, предпочтительные примеры и экспериментальные примеры настоящего изобретения будут описаны со ссылкой на прилагающиеся чертежи. Однако следующие примеры являются только иллюстративными и рамки настоящего изобретения не ограничиваются ими.
Пример 1: Получение экстракта травы вербейника сенного
Целые растения или листья вербейника сенного (Lysimachiae Foenum-Graeci Herba) высушивали и измельчали, к вербейнику добавляли спирт (метанол или этанол) в количестве от 5 до 50 частей по отношению к весу вербейника сенного, а затем активные вещества экстрагировали путем нагревания в сосуде с обратным холодильником в течение 24 часов или более. Затем спиртовой (метанол или этанол) экстракционный раствор отфильтровывали с использованием фильтровальной бумаги и подвергали концентрированию под вакуумом при температуре 40°С или ниже.
Пример 2: Проверка эффекта предотвращения и лечения заболевания обмена веществ на мышах, страдающих ожирением, индуцированным диетой (DIO Mice)
Самцов мышей C57BL/6 в возрасте семи недель (получены из Coretec Inc.) выращивали в сооружении для животных, в котором поддерживали следующие условия для выращивания: температура (20+1°С), влажность (50+10%), циклы света/темноты (12 hours), интенсивность освещения (от 150 до 300 Люкс) и вентиляция (от 10 до 20 раз/час). Мышей в свободном доступе обеспечивали твердой пищей, полученной от Folas International Inc., водопроводную воду подвергали стерилизации паром и затем свободно спаивали мышам в качестве питьевой воды. После акклиматизации в течение одной недели мышей снабжали твердой пищей 60% ккал, полученной из Research Diet Inc., и экстракт травы вербейника сенного назначали мышам орально в течение 42 дней в количестве 30, 100 и 300 мг/кг/день. Сибутрамин назначали группе положительного контроля в количестве 10 мг/кг/день, и 0.5% метилцеллюлозы назначали группе отрицательного контроля в том же количестве. Мыши, которым в течение шести недель назначали субстанции, голодали в течение одного дня, а затем их убивали с использованием газа СО. Кровь, собранную из брюшной полой вены мышей, помещали в пробирки с ЭДТА и хранили на льду, затем плазму, полученную центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин, анализировали с использованием биохимического автоматического анализатора (AU400, Olympus, Япония). Также органы, извлеченные из мыши, немедленно замораживали, помещая их в жидкий азот, и хранили в низкотемпературном холодильнике (-70°С), а затем анализировали с использованием методов гистологии.
На Фиг.1, А приведена картина с образцами печени, извлеченных из контрольной группы, группы больных мышей и группы положительного контроля, а на Фиг.1, В приведена картина гистологических наблюдений тканей печени, полученных при изучении образцов печени, извлеченных из контрольной группы, группы больных мышей и группы положительного контроля, приготовленных в виде срезов тканей и затем окрашенных с помощью гематоксилина-эозина. На Фиг.1, С приведена картина гистологических наблюдений распределения жира в тканях печени, полученная путем приготовления в виде срезов образцов тканей печени, извлеченных из контрольной группы, группы больных мышей и группы положительного контроля, а затем окрашивания жира в срезах с помощью масляного красного О. Как подтверждено на Фиг.1, у контрольной группы наблюдалось ожирение печени, потому что чрезмерное накопление жира в гепатоцитах было обусловлено диетой с высоким содержанием жира, но у группы больных мышей, которым назначали экстракт травы вербейника сенного, наблюдалось значительное улучшение в плане накопления жира в гепатоцитах в сравнении с группой положительного контроля.
В Таблице 1, представленной ниже, показаны результаты анализа крови, собранной для измерения уровней маркеров заболеваний обмена веществ, для мышей, страдающих ожирением, индуцированным диетой. Содержание триглицеридов и холестерина в извлеченных тканях печени также измеряли, результаты измерений приведены на Фиг.2.
Таблица 1
Диета с высоким содержанием жира
Наполнитель
Сибутрамин (10 мт/кг)
Экстракт травы вербейника сенного (30 мг/кг)
Экстракт травы вербейника сенного (100 мг/кг)
Экстракт травы вербейника сенного (300 мг/кг)
AST (IU/л)
149.33±29.7
172.33±58.4
99±13.2
97.67±17.6
101.67±11.6
ALT (IU/л)
93±22.0
64±15.1
54.67±23.8
45.33±18.8
49.3±10.4
GLU (мг/дл)
470±90.0
182.66±27.3
213.33±58.5
268.66±69.9
193.3±52.6
СНО (мг/дл)
172.67±13.6
187.33±15
154±6.4
151.7±11.7
147±52.3
ТG (мг/дл)
72±8.9
91.33±17.0
50vl0.9
43.67±10.3
37.7±12.6
ALB (г/дл)
2.17±0.2
2.1±0.1
2.2±0.1
2.17±0.1
2.17±0.2
Комментарий: AST (аспартатаминотрансфераза), ALT (аланинаминотрансфераза), GLU (глюкоза), СНО (холестерин), TG (триглицериды), ALB (альбумин)
В Таблице 1 подтверждено, что назначение экстракта травы вербейника сенного статистически значимо снижает повышение уровней ферментов печени AST и ALT, глюкозы в крови, холестерина и уровня триглицеридов в ходе диеты с повышенным содержанием жира. Однако в случае группы положительного контроля, которой назначали сибутрамин, уровни ALT и глюкозы значимо снижались, а уровни AST и холестерина не менялись, а уровень триглицеридов даже повышался.
Также Фиг.2 подтверждает, что содержание триглицеридов и холестерина в печени значимо снижалось таким же образом, как и в группе положительного контроля, когда назначали экстракт травы вербейника сенного.
Пример 3: Измерение антигиперлипидемической активности экстракта травы вербейника сенного
Самцов мышей ICR в возрасте пяти недель (получены из Central Lab. Animal Inc.) выращивали в сооружении для животных, в котором поддерживали следующие условия для выращивания: температура (20+1°С), влажность (50+10%), циклы света/темноты (12 hours), интенсивность освещения (от 150 до 300 люкс) и вентиляция (от 10 до 20 раз/час). Мышей в свободном доступе обеспечивали твердой пищей, полученной от Cargill Agri Purina Inc., водопроводную воду подвергали стерилизации паром и затем в свободном доступе спаивали мышам в качестве питьевой воды. После акклиматизации в течение одной недели мышей снабжали твердой пищей 60% ккал, полученной из Research Diet Inc., экстракт травы вербейника сенного назначали орально восьми мышам из группы в концентрации 100 мг/кг, и физиологический раствор назначали орально контрольной группе вместо экстракта. По истечении двух часов контрольной группе назначали орально 1 г/кг кукурузного масла, а нормальной группе назначали орально физиологический раствор вместо кукурузного масла. По истечении 2 часов и 30 минут после назначения кукурузного масла, мышиную кровь, собранную из брюшной полой вены, помещали в пробирки с ЭДТА и хранили на льду, а затем плазму, полученную центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин, анализировали с использованием биохимического автоматического анализатора (AU400, Olympus, Япония). Результаты анализа представлены ниже в Таблице 2. 10 мг/кг ксеникала использовали в качестве контрольного лекарства.
Таблица 2
Нормальная группа
Контрольная группа
Экстракт травы вербейника сенного (100 мг/кг)
Ксеникал (10 мг/кг)
TG (мг/дл)
238.8.±28.88
485.17±55.09*
300.20±42.70*
311.17±45.56*
СНО (мг/дл)
147±2.56
150.67±2.08
145.20±4.49
148.83±8.26
Комментарий: TG (триглицерид), СНО (холестерин).
Как видно из Таблицы 2, при назначении экстракта травы вербейника сенного количество триглицеридов и холестерина снижалось по сравнению с их количествами при использовании контрольного лекарства. Таким образом была подтверждена антигиперлипидемическая активность экстракта травы вербейника сенного.
Пример 4: Измерение антидиабетического эффекта экстракта травы вербейника сенного
Миобластные клетки мышей С2С12 (АТСС, CRL-1772) выращивали в питательной среде DMEM, содержащей 10% телячьей сыворотки. Когда плотность клеток достигала около 85-90%, индуцировали дифференциацию клеток сменой среды DMEM на среду с 1% телячьей сывороткой. Дифференцированные клетки С2С12 подвергали голоданию в среде DMEM с низким содержанием глюкозы, а затем обрабатывали экстрактом травы вербейника сенного в концентрации 10 мкг/мл в течение 4 часов. Затем указанные клетки дополнительно культивировали в течение 20 минут в буферном физиологическом растворе с HEPES с одновременной обработкой с использованием 2-[3H] дезоксиглюкозы. После удаления буферного физиологического раствора с HEPES клетки три раза промывали буфером PBS, охлажденном во льду, и ресуспендировали с использованием 0.1N NaOH, а затем уровень включения глюкозы в клетки определяли количественно с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика, измеряя количество импульсов в минуту. В качестве контрольного лекарства использовали метформин (2 мМ). В результате эксперимента было показано, что уровень включения глюкозы при назначении экстракта травы вербейника сенного повышался по сравнению с контрольной группой или группой, которой назначали метформин (Фиг.3).
Также панкреатические клетки НIТ-Т15 (АТСС, CRL-1777) обрабатывали экстрактом травы вербейника сенного в концентрации 10 мкг/мл в течение 1 часа, а затем уровень секреции инсулина из клеток определяли с использованием метода ELISA, результаты которого приведены на Фиг.4. Как видно из Фиг.4, уровень секреции инсулина при назначении экстракта травы вербейника сенного повышался по сравнению с контрольной группой.
Самцов мышей db/db в возрасте пяти недель, страдающих диабетом и использованных в качестве модели (получены из Central Lab. Animal Inc.), выращивали в сооружении для животных, в котором поддерживали следующие условия для выращивания: температура (20+1°С), влажность (50+10%), циклы света/темноты (12 hours), интенсивность освещения (от 150 до 300 люкс) и вентиляция (от 10 до 20 раз/час). Мышей в свободном доступе обеспечивали твердой пищей, полученной от Cargill Agri Purina Inc., водопроводную воду подвергали стерилизации паром и затем свободно спаивали мышам в качестве питьевой воды. После акклиматизации в течение одной недели шести мышам из группы назначали орально экстракт травы вербейника сенного в концентрации 100 мг/кг, и физиологический раствор назначали орально контрольной группе вместо экстракта. Кровь получали из хвостовой вены мышей дважды в неделю в течение 24 дней и измеряли уровень глюкозы в полученной крови, результаты приведены на Фиг.5. Как видно из Фиг.5, количество глюкозы снижалось при назначении экстракта травы вербейника сенного.
Приведенные выше результаты эксперимента подтверждают антидиабетический эффект экстракта травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению.
Пример 5: Измерение антиатерогенной активности экстракта травы вербейника сенного и его активности, направленной против сердечно-сосудистых заболеваний
Самцов мышей ICR в возрасте пяти недель (получены из Central Lab. Animal Inc.) выращивали в сооружении для животных, в котором поддерживали следующие условия для выращивания; температура (20+1°С), влажность (50+10%), циклы света/темноты (12 hours), интенсивность освещения (от 150 до 300 люкс) и вентиляция (от 10 до 20 раз/час). Мышей в свободном доступе обеспечивали твердой пищей, полученной от Cargill Agri Purina Inc., водопроводную воду подвергали стерилизации паром и затем свободно спаивали мышам в качестве питьевой воды. После акклиматизации в течение одной недели шести мышам из группы назначали орально экстракт травы вербейника сенного в концентрации 100 мг/кг в течение 5 недель, в то время как мышей в свободном доступе обеспечивали пищей с высоким содержанием холестерина (Research Diet Inc.), а физиологический раствор назначали орально контрольной группе вместо экстракта. После последнего назначения мыши голодали в течение 16 часов, а затем кровь, полученную из брюшной полой вены мыши, помещали в пробирку с ЭДТА и хранили на льду. Затем плазму, полученную центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин, анализировали с использованием биохимического автоматического анализатора (AU400, Olympus, Япония), результаты анализа приведены ниже в Таблице 3.
Таблица 3
Нормальная группа
Контрольная группа
Экстракт травы вербейника сенного (100 мг/кг)
TG (мг/дл)
54.8±4.5
100.2±5.3
91.4±4.7
СНО (мг/дл)
83.1±6.2
183.7±4.8
121.2±3.9
HDL (мг/дл)
40.8±3.5
28.2±1.9
33.1±4.8
LDL (мг/дл)
37.5±2.7
80.5±2.0
59.6±2.3
Атерогенный индекс
1.04
5.51
2.66
Комментарий: TG (триглицериды), СНО (холестерин), LDL (липопротеин низкой плотности), HDL (липопротеин высокой плотности).
Атерогенный индекс = (общее количество холестерина
количество HDL холестерина)/количество HDL холестерина.
Как видно из Таблицы 3, уровень триглицеридов, общее количество холестерина и уровень LDL снижался, а уровень HDL повышался. Соответственно, атерогенный индекс повышался.
Сейчас будут сделаны ссылки на примеры рецептур для композиции согласно настоящему изобретению.
Пример рецептуры 1: Изготовление порошков.
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 300 мг
Лактоза: 100 мг
Тальк: 10 мг
Указанные выше ингредиенты смешивают и запечатывают в воздухонепроницаемый пакет для приготовления порошков.
Пример рецептуры 2: Изготовление таблеток
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 50 мг
Кукурузный крахмал: 100 мг
Лактоза: 100 мг
Стеарат магния: 2 мг
Указанные выше ингредиенты смешивают и затем подвергают таблетированию в соответствии с традиционным способом изготовления таблеток.
Пример рецептуры 3: Изготовление капсул
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 50 мг
Кукурузный крахмал: 100 мг
Лактоза: 100 мг
Стеарат магния: 2 мг
Указанные выше ингредиенты смешивают и помещают в желатиновые капсулы в соответствии с традиционным способом изготовления капсул.
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 50 мг
Стерильная водя для инъекций: подходящее количество
Добавка, регулирующая рН: подходящее количество
Форму для внутривенного вливания изготавливают в соответствии с традиционным способом изготовления форм для внутривенного вливания в виде ампулы (2 мл) с указанной композицией.
Пример рецептуры 5: Изготовление жидкой формы
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 100 мг
Изомераза глюкозы: 10 г
Маннит: 5 г
Очищенная вода: подходящее количество
В соответствии с традиционным способом изготовления жидких лекарственных форм каждый из указанных выше ингредиентов добавляют, растворяют и перемешивают в очищенной воде в то время, как добавляют подходящее количество лимонного ароматизатора. Затем добавляют очищенную воду до полного объема в 100 мл, полученный раствор разливают в коричневые бутылки и стерилизуют для получения жидкой формы.
Пример рецептуры 6: Изготовление продукта здорового питания
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 1000 мг
Смесь витаминов; подходящее количество
Витамин А ацетат: 70 мкг
Витамин Е: 1.0 мг
Витамин В1: 0.13 мг
Витамин В2: 0.15 мг
Витамин В6: 0.5 мг
Витамин В12: 0.2 мкг
Витамин С: 10 мг
Биотин: 10 мкг
Амид никотиновой кислоты: 1.7 мг
Фолиевая кислота: 50 мкг
Пантотенат кальция: 0.5 мг
Смесь неорганических соединений: подходящее количество
Сульфат железа (I): 1.75 мг
Оксид цинка: 0.82 мг
Карбонат магния: 25.3 мг
Одноосновный фосфат калия: 15 мг
Двухосновный фосфат кальция: 55 мг
Цитрат калия: 90 мг
Карбонат кальция: 100 мг
Хлорид магния: 24.8 мг
Хотя указанные витамины и минеральные смеси смешивали в композицию в соотношениях относительно подходящих для продукта здорового питания согласно предпочтительному воплощению изобретения, могут быть произведены любые изменения в соотношениях для смешивания. Указанные выше ингредиенты смешивали и изготавливали гранулы в соответствии с традиционным способом изготовления продукта здорового питания. Изготовленные таким способом гранулы могут быть использованы для изготовления композиции для продукта здорового питания в соответствии с традиционным способом.
Пример рецептуры 7: Изготовление напитка здорового питания
Сухой порошок экстракта травы вербейника сенного по Примеру 1: 1000 мг
Лимонная кислота: 1000 мг
Олигосахариды: 100 г
Концентрированный сливовый сок: 2 г
Таурин:1 г
Общее количество после добавления очищенной воды: 900 мл
В соответствии с традиционным способом изготовления напитка здорового питания указанные выше ингредиенты смешивали, затем перемешивали с нагреванием до температуры 85°С в течение часа для получения раствора. Приготовленный раствор отфильтровывали и собирали в 2-литровый стерильный контейнер, а затем раствор, собранный в указанном контейнере, запечатывали и стерилизовали. Полученный раствор хранили в холодильнике, а затем использовали для приготовления композиции для напитка здорового питания согласно настоящему изобретению.
Хотя указанные выше ингредиенты смешивали в композицию в соотношениях относительно подходящих для воображаемого напитка здорового питания согласно предпочтительному воплощению изобретения, могут быть произведены любые изменения в соотношениях для смешивания в зависимости от региональных и расовых вкусов, таких как потребности, класса, потребности страны, и применения.
На основе вышеуказанных результатов экспериментов подтвержден антидиабетический эффект экстракта травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению.
Промышленная применимость
Поскольку экстракт травы вербейника сенного согласно настоящему изобретению обладает превосходным эффектом по снижению уровней маркеров заболеваний обмена веществ (уровни глюкозы, триглицеридов, холестерина и ферментов печени в крови), а также снижению количества жира в тканях печени, он может быть использован в качестве сырья, функционального питания и лекарственного препарата из растений в качестве гепатопротектора и средства для профилактики и лечения диабетов, гиперлипидемии, ожирения печени и метаболического синдрома, сопровождающегося одновременным и множественным проявлением указанных заболеваний.
Хотя предпочтительные способы осуществления настоящего изобретения детально описаны для иллюстративных целей, специалист в данной области техники понимает, что возможны различные модификации, добавления и замены, не выходящие за рамки и в духе настоящего изобретения, как это описано в сопутствующей формуле изобретения.