БИЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ ПИПЕРАЗИНА
BICYCLIC PIPERAZINE COMPOUNDS

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Данная обычная заявка, поданная согласно 37 Своду Федеральных Правил (CFR; от англ. Code of Federal Regulations) §1.53(b), претендует на приоритет согласно 35 Кодексу законов США (USC; от англ. U.S. Code) §119(e) предварительной заявки США, серийный номер 61/555396, поданной 3 ноября 2011, полностью включенной посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение в целом относится к соединениям для лечения расстройств, опосредованных тирозинкиназой Брутона (Btk; от англ. Barton's Tyrosine Kinase), включающих воспаление, иммунологические расстройства и рак, и более конкретно к соединениям, ингибирующим активность Btk. Изобретение также относится к способам применения этих соединений для диагностики или лечения клеток млекопитающих или ассоциированных патологических состояний in vitro, in situ и in vivo.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Протеинкиназы, самое обширное семейство ферментов человека, охватывает значительно более 500 белков. Тирозинкиназа Брутона (Btk) является членом семейства тирозинкиназ Тес и является регулятором как раннего развития В-клеток, так и активации, передачи сигнала и выживания зрелых В-клеток.
Передача сигнала В-клеток посредством рецептора В-клеток (BCR; от англ. B-cell receptor) может приводить к широкому ряду биологических результатов, которые, в свою очередь, зависят от стадии развития В-клеток. Величина и продолжительность сигналов BCR должна быть точно отрегулирована. Аберрантная BCR-опосредованная передача сигнала может вызвать нарушенную регуляцию активации В-клеток и/или образование патогенных аутоантител, что ведет к множественным аутоиммунным и/или воспалительным заболеваниям. Мутация Btk у людей приводит в результате к X-сцепленной агаммаглобулинемии (XLA; от англ. X-linked agammaglobulinaemia). Это заболевание обусловлено нарушенным созреванием В-клеток, уменьшенным продуцированием иммуноглобулина, нарушенными независимыми от Т-клеток иммунными ответами и заметным ослаблением пролонгированного кальциевого сигнала при стимуляции BCR. Данные, свидетельствующие о роли Btk при аллергических расстройствах и/или аутоиммунном заболевании и/или воспалительном заболевании, установлены в моделях Btk-дефицитных мышей. Например, в стандартных мышиных доклинических моделях системной красной волчанки (SLE; от англ. systemic lupus erythematosus) показано, что дефицит Btk приводит в результате к заметному ослаблению прогрессирования заболевания. Кроме того, мыши с дефицитом по Btk могут быть также устойчивыми к развитию коллаген-индуцированного артрита и могут быть менее чувствительными к артриту, индуцированному стафилококком. Большой объем данных подтверждает роль В-клеток и гуморальной иммунной системы в патогенезе аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний. Терапевтические средства на основе белков (такие как ритуксан), разработанные для истощения В-клеток, представляют собой метод лечения ряда аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний. В связи с ролью Btk в активации В-клеток ингибиторы Btk могут быть полезны в качестве ингибиторов опосредованной В-клетками патогенной активности (такой как продуцирование аутоантител). Btk также экспрессируется в остеокластах, мастоцитах и моноцитах, и показано, что она важна для функции этих клеток. Например, дефицит Btk у мышей ассоциирован с нарушенной IgE-опосредованной активацией мастоцитов (заметным уменьшением высвобождения TNF-альфа и других воспалительных цитокинов), а дефицит Btk у людей ассоциирован со значительно сниженным продуцированием TNF-альфа активированными моноцитами.
Таким образом, ингибирование активности Btk может быть полезным для лечения аллергических расстройств и/или аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний, таких как следующие заболевания: SLE, ревматоидный артрит, множественные васкулиты, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), тяжелая миастения, аллергический ринит и астма (Di Paolo et al (2011) Nature Chem. Biol. 7(1):41-50; Liu et al. (2011) Jour. of Pharm. and Exper. Ther. 338(1):154-163). Кроме того, сообщали, что Btk играет роль в апоптозе; следовательно, ингибирование активности Btk может быть полезно для лечения рака, а также В-клеточной лимфомы, лейкоза и других гематологических злокачественных опухолей. Кроме того, с учетом роли Btk в функции остеокластов, ингибирование активности Btk может быть полезным для лечения костных расстройств, таких как остеопороз. Описаны специфичные ингибиторы Btk (Liu (2011) Drug Metab. and Disposition 39(10):1840-1849; US 7884108, WO 2010/056875; US 7405295; US 7393848; WO 2006/053121; US 7947835; US 2008/0139557; US 7838523; US 2008/0125417; US 2011/0118233; заявка на патент PCT/US2011/050034 «PYRIDINONES/PYRAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF», поданная 31 августа 2011; заявка на патент PCT/US2011/050013 «PYRIDAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF», поданная 31 августа 2011; заявка на патент US серийный №13/102720 «PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE», поданная 6 мая 2011).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение в целом относится к бициклическим соединениям пиперазина формулы I, обладающим модулирующей активностью в отношении тирозинкиназы Брутона (Btk).
Соединения формулы I имеют следующую структуру:
включая их стереоизомеры, таутомеры или фармацевтически приемлемые соли. Различные заместители определены в данном описании ниже.
Один аспект изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, состоящую из соединения формулы I и фармацевтически приемлемого носителя, вещества, способствующего скольжению, разбавителя или эксципиента. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать второе терапевтическое средство.
Другой аспект изобретения представляет собой способ получения фармацевтической композиции, включающий объединение соединения формулы I с фармацевтически приемлемым носителем.
Изобретение включает способ лечения заболевания или расстройства, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы I пациенту, страдающему заболеванием или расстройством, выбранным из следующих заболеваний или расстройств: иммунных расстройств, рака, сердечно-сосудистого заболевания, вирусной инфекции, воспаления, расстройств метаболизма/эндокринной функции и неврологических расстройств, и опосредованным тирозинкиназой Брутона.
Изобретение включает набор для лечения состояния, опосредованного тирозинкиназой Брутона, включающий: а) первую фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I; и b) инструкции по применению.
Изобретение включает соединение формулы I, применяемое в качестве лекарственного средства, и применяемое при лечении заболевания или расстройства, выбранного из следующих заболеваний или расстройств: иммунных расстройств, рака, сердечно-сосудистого заболевания, вирусной инфекции, воспаления, расстройств метаболизма/эндокринной функции и неврологических расстройств, и опосредованного тирозинкиназой Брутона.
Изобретение включает применение соединения формулы I при получении лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства, выбранного из следующих заболеваний или расстройств: иммунных расстройств, рака, сердечно-сосудистого заболевания, вирусной инфекции, воспаления, расстройств метаболизма/эндокринной функции и неврологических расстройств, и опосредованного тирозинкиназой Брутона.
Изобретение включает способы получения соединения формулы I.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фиг. 1а показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 101, начиная с 6-хлор-8-бромимидазо[1,2-а]пиридина 101а.
На фиг. 1b показано получение 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетата 101I, начиная с 3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 101g и 2,6-дибром-4-фторбензилацетата 101j.
На фиг. 2 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 102, начиная с трет-бутил-4-(6-(6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-8-иламино)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата 102а.
2,7
На фиг. 3 показано получение 5-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-{(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)}фенил]-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-6-она 103, начиная с 2-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-4-фтор-6-(1-оксо-3,4,5,6,7,8-гексагидробензотиено[2,3-с]пиридин-2(1Н)-ил)бензилацетата 103g:
На фиг. 4 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 104, начиная с 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазина 104а.
На фиг. 5 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 105, начиная с 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина 105а.
На фиг. 6 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиразин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 106, начиная с трет-бутил-4-(6-(6-бромимидазо[1,2-а]пиразин-8-иламино)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата 106а.
На фиг. 7 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-a]пиразин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 107, начиная с 2-(5-фтор-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-имидазо[1,2-а]пиразин-6-ил)-2-(2-оксопропил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 107а.
а
На фиг. 8 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[112-а]индол-1(2Н)-она 108, начиная с (E)-N'-(3-бром-5-хлорпиридин-2-ил)-N,N-диметилформимидамида 108.
а
На фиг. 9 показано получение 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(3-метил-7-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-3Н-бензо[d]имидазол-5-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-она 109, начиная с 2-бром-4-хлор-6-нитробензоламина 109.
2,6
2,6
На фиг. 10 показано получение 10-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-4,4-диметил-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]додека-2(6),7-диен-9-она 110, начиная с 2-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-4-фтор-6-(9-оксо-4,4-диметил-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]-додека-2(6),7-диен-10-ил)бензилацетата 110g и 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амина.
2,7
2,7
На фиг. 11 показано получение 5-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-6-она 111, начиная с (4-фтор-2-{6-оксо-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-5-ил}-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетата 103g и 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина.
2,7
2,7
На фиг. 12 показано получение 5-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-8-тиа-4,5-диазатрицикло-[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7),3-триен-6-она 112, начиная с (4-фтор-2-{6-оксо-8-тиа-4,5-диазатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7),3-триен-5-ил}-6-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетата и 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина.
2,6
На фиг. 13 показано получение 10-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-4,4-диметил-7-тиа-10-азатрицикло[6.4.0.0]додека-1(8),2(6)-диен-9-она 113, начиная с (2-{4,4-диметил-9-оксо-7-тиа-10-азатрицикло[6.4.0.02,6]додека-1(8),2(6)-диен-10-ил}-4-фтор-6-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетата 113j и 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амина.
На фиг. 14 показано получение 2-(3-(гидроксиметил)-4-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)пиридин-2-ил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[112-а]индол-1(2Н)-она 114, начиная с (2-(1-оксо-3,4)6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)метилацетата 114е и 6-хлор-Ν-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВОПЛОЩЕНИЙ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Авторы далее приводят определенные воплощения изобретения, примеры которых проиллюстрированы в сопроводительных структурах и формулах. Хотя изобретение описано в сочетании с перечисленными воплощениями, понятно, что они не предназначены для ограничения изобретения этими воплощениями. Напротив, подразумевают, что изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения, определенный формулой изобретения. Специалистам в данной области техники известны многие способы и материалы, подобные или эквивалентные раскрытым в данном изобретении, которые могут быть применены на практике настоящего изобретения. Настоящее изобретение никоим образом не ограничено раскрытыми способами и материалами. В том случае, когда один или более из включенных литературных источников, патентов и подобных материалов отличается от данного изобретения или противоречит ему, включая, но не ограничиваясь ими, определенные термины, использование терминов, раскрытые методы или тому подобное, данное изобретение имеет преимущественную силу. Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно понимает любой из обычных специалистов в области техники, к которой принадлежит данное изобретение. Хотя на практике или при тестировании изобретения можно применять способы и материалы, подобные или эквивалентные раскрытым в данном изобретении, подходящие способы и материалы раскрыты ниже. Все публикации, заявки на патенты, патенты и другие ссылки, упомянутые в данном описании, полностью включены посредством ссылки. Номенклатура, используемая в данном изобретении, основана на систематической номенклатуре ИЮПАК, если не указано иное.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
При указании числа заместителей термин «один или более» относится к диапазону, включающему от одного заместителя до высшего возможного числа замещений, то есть от замены одного атома водорода вплоть до замещения всех атомов водорода заместителями. Термин «заместитель» означает атом или группу атомов, замещающие атом водорода на исходной молекуле. Термин «замещенный» означает, что указанная группа несет один или более заместителей. Где какая-либо группа может нести множественные заместители, и предложено разнообразие возможных заместителей, эти заместители выбраны независимо и необязательно должны быть одинаковыми. Термин «незамещенный» означает, что указанная группа не несет заместителей. Термин «необязательно замещенный» означает, что указанная группа является незамещенной или замещена одним или более заместителей, независимо выбранных из группы возможных заместителей. При указании числа заместителей термин «один или более» означает от одного заместителя до высшего возможного числа замещений, то есть от замены одного атома водорода вплоть до замещения всех атомов водорода заместителями.
1
12
1
8
1
6
3
2
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
3
3
3
2
2
2
2
3
3
2
2
3
2
3
2
3
2
2
3
3
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
3
2
3
2
2
3
3
2
2
2
3
3
3
2
3
3
2
3
2
3
2
3
2
2
3
3
2
3
2
3
2
3
3
3
Термин «алкил», как используют в данном описании, относится к насыщенному нормальному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от одного до двенадцати (C-C), где алкильный радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных ниже. В другом воплощении изобретения алкильный радикал представляет собой радикал из атомов углерода в количестве от одного до восьми (C-C) или из атомов углерода в количестве от одного до шести (C-C). Примеры алкильных групп включают, но не ограничены ими, метил (Me, -СН), этил (Et, -СНСН), 1-пропил (n-Pr, н-пропил, -СНСНСН), 2-пропил (i-Pr, изопропил, -СН(СН)), 1-бутил (n-Bu, н-бутил, -СНСНСНСН), 2-метил-1-пропил (i-Bu, изобутил, -СНСН(СН)), 2-бутил (s-Bu, втор-бутил, -СН(СН)СНСН), 2-метил-2-пропил (t-Bu, трет-бутил, -С(СН)), 1-пентил (н-пентил, -СНСНСНСНСН), 2-пентил (-СН(СН)СНСНСН), 3-пентил (-СН(СНСН)), 2-метил-2-бутил (-С(СН)СНСН), 3-метил-2-бутил (-СН(СН)СН(СН)), 3-метил-1-бутил (-СНСНСН(СН)), 2-метил-1-бутил (-СНСН(СН)СНСН), 1-гексил (-СНСНСНСНСНСН), 2-гексил (-СН(СН)СНСНСНСН), 3-гексил (-СН(СНСН)(СНСНСН)), 2-метил-2-пентил (-С(СН)СНСНСН), 3-метил-2-пентил (-СН(СН)СН(СН)СНСН), 4-метил-2-пентил (-СН(СН)СНСН(СН)), 3-метил-3-пентил (-С(СН)(СНСН)), 2-метил-3-пентил (-СН(СНСН)СН(СН)), 2,3-диметил-2-бутил (-С(СН)СН(СН)), 3,3-диметил-2-бутил (-СН(СН)С(СН), 1-гептил, 1-октил и тому подобное.
1
12
1
8
1
6
2
2
2
2
2
2
Термин «алкилен», как используют в данном описании, относится к насыщенному нормальному или разветвленному двухвалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от одного до двенадцати (C-C), где алкиленовый радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных ниже. В другом воплощении изобретения алкиленовый радикал представляет собой радикал из атомов углерода в количестве от одного до восьми (C-C) или из атомов углерода в количестве от одного до шести (C-C). Примеры алкиленовых групп включают, но не ограничены ими, метилен (-СН-), этилен (-СНСН-), пропилен (-СНСНСН-) и тому подобное.
2
8
2
2
2
2
Термин «алкенил» относится к нормальному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от двух до восьми (C-C) по меньшей мере с одним сайтом ненасыщенности, то есть углерод-углеродной, sp двойной связью, где алкенильный радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных в данном изобретении, и включает радикалы, имеющие «цис» и «транс» ориентации, или альтернативно «Е» и «Z» ориентации. Примеры включают, но не ограничены ими, этиленил или винил (-СН=СН), аллил (-СНСН=СН) и тому подобное.
2
8
2
2
Термин «алкенилен» относится к нормальному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от двух до восьми (C-C) по меньшей мере с одним сайтом ненасыщенности, то есть углерод-углеродной, sp двойной связью, где алкенильный радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных в данном изобретении, и включает радикалы, имеющие «цис» и «транс» ориентации, или альтернативно «Е» и «Z» ориентации. Примеры включают, но не ограничены ими, этиленилен или винилен (-СН=СН-), аллил (-СНСН=СН-) и тому подобное.
2
8
2
Термин «алкинил» относится к нормальному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от двух до восьми (C-C) по меньшей мере с одним сайтом ненасыщенности, то есть углерод-углеродной, sp тройной связью, где алкинильный радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных в данном изобретении. Примеры включают, но не ограничены ими, этинил (-С≡СН), пропинил (пропаргил, -СНС≡СН) и тому подобное.
2
8
Термин «алкинилен» относится к нормальному или разветвленному двухвалентному углеводородному радикалу из атомов углерода в количестве от двух до восьми (C-C) по меньшей мере с одним сайтом ненасыщенности, то есть углерод-углеродной, sp тройной связью, где алкиниленовый радикал может быть необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных в данном изобретении. Примеры включают, но не ограничены ими, этинилен (), пропинилен (пропаргилен, ) и тому подобное.
3
12
Термины «карбоцикл», «карбоциклил», «карбоциклическое кольцо» и «циклоалкил» относятся к одновалентному неароматическому, насыщенному или частично ненасыщенному кольцу, имеющему от 3 до 12 атомов углерода (C-C) в виде моноциклического кольца или от 7 до 12 атомов углерода в виде бициклического кольца. Бициклические карбоциклы, имеющие от 7 до 12 атомов, могут иметь структуру, например, в виде бицикло [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] системы, и бициклические карбоциклы, имеющие 9 или 10 кольцевых атомов, могут иметь структуру в виде бицикло [5,6] или [6,6] системы, либо в виде систем, соединенных мостиковой связью, таких как бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.2]октан и бицикло[3.2.2]нонан. Спиро-группировки также включены в объем данного определения. Примеры моноциклических карбоциклов включают, но не ограничены ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогексадиенил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил и тому подобное. Карбоциклильные группы необязательно независимо замещены одним или более заместителей, описанных в данном изобретении.
6
20
«Арил» означает одновалентный ароматический углеводородный радикал из 6-20 атомов углерода (C-C), образованный путем удаления одного атома водорода из одного атома углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые арильные группы представлены в иллюстративных структурах как «Ar». Арил включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим кольцом. Характерные арильные группы включают, но не ограничены ими, радикалы, образованные из бензола (фенил), замещенных бензолов, нафталина, антрацена, дифенил, инденил, инданил, 1,2-дигидронафталин, 1,2,3,4-тетрагидронафтил и тому подобное. Арильные группы необязательно независимо замещены одним или более заместителей, описанных в данном изобретении.
6
20
«Арилен» означает двухвалентный ароматический углеводородный радикал из 6-20 атомов углерода (C-C), образованный путем удаления двух атомов водорода из двух атомов углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые ариленовые группы представлены в иллюстративных структурах как «Ar». Арилен включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим кольцом. Характерные ариленовые группы включают, но не ограничены ими, радикалы, образованные из бензола (фенилен), замещенных бензолов, нафталина, антрацена, дифенилен, инденилен, инданилен, 1,2-дигидронафталин, 1,2,3,4-тетрагидронафтил и тому подобное. Ариленовые группы необязательно независимо замещены одним или более заместителей, описанных в данном изобретении.
Термины «гетероцикл», «гетероциклил» и «гетероциклическое кольцо» используют в данном описании взаимозаменяемо и относят к насыщенному или частично ненасыщенному (то есть имеющему одну или более двойных и/или тройных связей внутри кольца) карбоциклическому радикалу из кольцевых атомов в количестве от 3 до приблизительно 20, в котором по меньшей мере один кольцевой атом представляет собой гетероатом, выбранный из атома азота, кислорода, фосфора и серы, где остальные кольцевые атомы представляют собой С, где один или более кольцевых атомов необязательно независимо замещен одним или более заместителей, описанных ниже. Гетероцикл может представлять собой моноцикл, имеющий от 3 до 7 членов кольца (от 2 до 6 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из Ν, О, Ρ и S), или бицикл, имеющий от 7 до 10 членов кольца (от 4 до 9 атомов углерода и от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из Ν, О, Ρ и S), например: бицикло [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систему. Гетероциклы описаны в книгах Paquette, Leo Α.; «Principles of Modern Heterocyclic Chemistry» (W.A. Benjamin, New York, 1968), в частности, в главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; «The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs» (John Wiley & Sons, New York, с 1950 до настоящего времени), в частности, в томах 13, 14, 16, 19 и 28; и в статье J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. «Гетероциклил» также включает радикалы, где гетероциклические радикалы конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим или гетероциклическим кольцом. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничены ими, морфолин-4-ил, пиперидин-1-ил, пиперазинил, пиперазиН-4-ил-2-он, пиперазин-4-ил-3-он, пирролидин-1-ил, тиоморфолин-4-ил, 8-диоксотиоморфолин-4-ил, азокан-1-ил, азетидин-1-ил, октагидропиридо[1,2-а]пиразин-2-ил, [1,4]диазепан-1-ил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидино, морфолино, тиоморфолино, тиоксанил, пиперазинил, гомопиперазинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил, 3-азабицикло[4.1.0]гептанил, азабицикло[2.2.2]гексанил, 3Н-индолил, хинолизинил и Ν-пиридилмочевины. Спиро-группировки также включены в объем данного определения. Примерами гетероциклической группы, где 2 кольцевых атома замещены группировками оксо (=O), являются пиримидинонил и 1,1-диоксо-тиоморфолинил. Гетероциклические группы в данном описании необязательно независимо замещены одним или более заместителей, описанных в данном изобретении.
Термин «гетероарил» относится к одновалентному ароматическому радикалу из 5-, 6- или 7-членных колец и включает конденсированные кольцевые системы (по меньшей мере одна из которых является ароматической) из 5-20 атомов, содержащие один или более гетероатомов, независимо выбранных из атома азота, кислорода и серы. Примерами гетероарильных групп являются следующие группы: пиридинил (включающий, например, 2-гидроксипиридинил), имидазолил, имидазопиридинил, пиримидинил (включающий, например, 4-гидроксипиримидинил), пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксадиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, хинолинил, изохинолинил, тетрагидроизохинолинил, индолил, бензимидазолил, бензофуранил, циннолинил, индазолил, индолизинил, фталазинил, пиридазинил, триазинил, изоиндолил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, фуразанил, бензофуразанил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридинил. Гетероарильные группы необязательно независимо замещены одним или более заместителей, описанных в данном изобретении.
Гетероциклические или гетероарильные группы могут быть связаны с атомом углерода (углерод-связанными) или с атомом азота (азот-связанными), где такое возможно. В качестве примера и без ограничения, углерод-связанные гетероциклы или гетероарилы связаны в положении 2, 3, 4, 5 или 6 пиридина, в положении 3, 4, 5 или 6 пиридазина, в положении 2, 4, 5 или 6 пиримидина, в положении 2, 3, 5 или 6 пиразина, в положении 2, 3, 4 или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, тиофена, пиррола или тетрагидропиррола, в положении 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола, в положении 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола, в положении 2 или 3 азиридина, в положении 2, 3 или 4 азетидина, в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или в положении 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина.
В качестве примера и без ограничения, азот-связанные гетероциклы или гетероарилы связаны в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина, 1Н-индазола, в положении 2 изоиндола или изоиндолина, в положении 4 морфолина и в положении 9 карбазола или β-карболина.
Термины «лечить» и «лечение» относятся к терапевтическому лечению, где цель состоит в замедлении (уменьшении) нежелательного физиологического изменения или расстройства, такого как развитие или распространение артрита или рака. Для целей данного изобретения полезные или желательные клинические результаты включают, но не ограничены ими, следующие результаты: облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (то есть не ухудшающееся) состояние заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или облегчение болезненного состояния и ремиссию (либо частичную, либо полную), либо обнаружимую, либо необнаружимую. «Лечение» может также означать продление жизни по сравнению с ожидаемой продолжительностью жизни, если не получать лечение. Нуждающиеся в лечении включают страдающих состоянием или расстройством.
Выражение «терапевтически эффективное количество» означает количество соединения по настоящему изобретению, которое: (i) лечит определенное заболевание, состояние или расстройство, (ii) ослабляет, улучшает или устраняет один или более симптомов определенного заболевания, состояния или расстройства, либо (iii) предупреждает или задерживает появление одного или более симптомов определенного заболевания, состояния или расстройства, раскрытого в данном изобретении. В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшить число раковых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать (то есть до некоторой степени замедлить, и предпочтительно остановить) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (то есть до некоторой степени замедлить, и предпочтительно остановить) метастазы опухоли; до некоторой степени ингибировать рост опухоли и/или до некоторой степени облегчить один или более симптомов, обусловленных раком. В зависимости от степени, до которой лекарственное средство может предотвратить рост и/или устранить существующие раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Для терапии рака эффективность можно измерить, например, путем оценки времени до прогрессирования заболевания (ТТР; от англ. time to progression) и/или определения частоты ответа (RR; от англ. response rate).
«Воспалительное расстройство», как используют в данном описании, может относиться к любому заболеванию, расстройству или синдрому, при котором избыточный или нерегулируемый воспалительный ответ приводит к избыточным воспалительным симптомам, повреждению ткани хозяина или к утрате функции ткани. «Воспалительное расстройство» также относится к патологическому состоянию, опосредованному притоком лейкоцитов и/или хемотаксисом нейтрофилов.
«Воспаление», как используют в данном описании, относится к локализованному защитному ответу, вызванному повреждением или деструкцией тканей, служащему для разрушения, ослабления или перекрытия (секвестрации) как повреждающего агента, так и поврежденной ткани. Воспаление, в частности, связано с притоком лейкоцитов и/или хемотаксисом нейтрофилов. Воспаление может быть результатом инфекции патогенными организмами и вирусами и неинфекционных явлений, таких как травма или реперфузия вследствие инфаркта миокарда или удара, иммунный ответ на чужеродный антиген и аутоиммунные реакции. Соответственно, воспалительные расстройства, поддающиеся лечению соединениями формулы I, включают расстройства, обусловленные как ответами специфической системы защиты, так и ответами неспецифической системы защиты.
«Специфическая система защиты» относится к компоненту иммунной системы, реагирующему на присутствие специфических антигенов. Примеры воспаления в результате ответа специфической системы защиты включают классический ответ на чужеродные антигены, аутоиммунные заболевания и аллергическую реакцию замедленного типа, опосредованную Т-клетками. Хронические воспалительные заболевания, отторжение солидной трансплантированной ткани и органов, например, трансплантатов почки и костного мозга, и болезнь «трансплантат против хозяина» (БТПХ) являются дополнительными примерами воспалительных реакций специфической системы защиты.
Термины «неспецифическая система защиты» как используют в данном описании, относятся к воспалительным расстройствам, опосредованным лейкоцитами, неспособными к иммунологической памяти (например, гранулоцитами и макрофагами). Примеры воспаления, являющегося результатом, по меньшей мере частично, реакции неспецифической системы защиты, включают воспаление, связанное с такими состояниями, как респираторный (острый) дистресс-синдром взрослых (РДСВ) или синдромы полиорганной недостаточности; реперфузионное повреждение; острый гломерулонефрит; реактивный артрит; дерматозы с острыми воспалительными компонентами; острый гнойный менингит или другие воспалительные расстройства центральной нервной системы, такие как удар; термическое повреждение; воспалительное кишечное заболевание; синдромы, обусловленные трансфузией гранулоцитов; и цитокин-индуцированная токсичность.
«Аутоиммунное заболевание», как используют в данном описании, относится к любой группе расстройств, при которых повреждение ткани связано с гуморальными или клеточно-опосредованными ответами на компоненты собственного организма.
«Аллергическое заболевание», как используют в данном описании, относится к любым симптомам, повреждению ткани или утрате функции ткани в результате аллергии. «Артритное заболевание», как используют в данном описании, относится к любому заболеванию, характеризующемуся воспалительными повреждениями суставов, обусловленными разнообразными этиологиями. «Дерматит», как используют в данном описании, относится к любому заболеванию из обширного семейства заболеваний кожи, характеризующихся воспалением кожи, обусловленным разнообразными этиологиями. «Отторжение трансплантата», как используют в данном описании, относится к любой иммунной реакции, направленной против трансплантированной ткани, такой как органы или клетки (например, костный мозг), характеризующейся утратой функции трансплантированной ткани и окружающих тканей, болью, отеком, лейкоцитозом и тромбоцитопенией. Терапевтические способы по настоящему изобретению включают способы лечения расстройств, обусловленных активацией воспалительных клеток.
«Активация воспалительных клеток» относится к индукции стимула (включающего, но не ограниченного ими, цитокины, антигены или аутоантитела) пролиферативного клеточного ответа, продуцирования растворимых медиаторов (включающего, но не ограниченного ими, цитокины, кислородные радикалы, ферменты, простаноиды или вазоактивные амины) или экспрессии на клеточной поверхности новых медиаторов или увеличенных количеств медиаторов (включающих, но не ограниченных ими, антигены главного комплекса гистосовместимости или молекулы клеточной адгезии) в воспалительных клетках (включающих, но не ограниченных ими, моноциты, макрофаги, Т-лимфоциты, В-лимфоциты, гранулоциты (то есть полиморфоядерные лейкоциты, такие как нейтрофилы, базофилы и эозинофилы), мастоциты, дендритные клетки, клетки Лангерганса и эндотелиальные клетки). Специалистам в данной области техники понятно, что активация одного или комбинации этих фенотипов в данных клетках может вносить вклад в инициацию, персистирование или обострение воспалительного расстройства.
2
Термин «НПВП» представляет собой сокращенное обозначение «нестероидного противовоспалительного препарата», и представляет собой терапевтическое средство, обладающее анальгезирующими, жаропонижающими (снижающими повышенную температуру тела и облегчающими боль без нарушения сознания) и в более высоких дозах противовоспалительными эффектами (уменьшающими воспаление). Термин «нестероидный» используют, чтобы отличать эти препараты от стероидов, которые (среди широкого ряда других эффектов) обладают подобным подавляющим эйкозаноиды противовоспалительным действием. В качестве анальгетиков НПВП необычны тем, что они являются ненаркотическими. НПВП включают аспирин, ибупрофен и напроксен. НПВП обычно показаны для лечения острых или хронических состояний, где присутствуют боль и воспаление. НПВП, как правило, показаны для симптоматического облегчения следующих состояний: ревматоидного артрита, остеоартрита, воспалительных артропатий (например, анкилозирующего спондилоартрита, псориатического артрита, синдрома Рейтера, острой подагры, дисменореи, метастатической костной боли, головной боли и мигрени, послеоперационной боли, боли, от слабой до умеренной, вследствие воспаления и повреждения ткани, пирексии, непроходимости кишечника и почечной колики. Большинство НПВП действует в качестве неселективных ингибиторов фермента циклооксигеназы, ингибирующих оба изофермента, циклооксигеназу-1 (СОХ-1; от англ. cyclooxygenase) и циклооксигеназу-2 (СОХ-2). Циклооксигеназа катализирует образование простагландинов и тромбоксана из арахидоновой кислоты (которая сама образуется из клеточного фосфолипидного бислоя фосфолипазой А). Простагландины действуют (среди прочего) в качестве информационных молекул в процессе воспаления. Ингибиторы СОХ-2 включают целекоксиб, эторикоксиб, лумиракоксиб, парекоксиб, рофекоксиб и вальдекоксиб.
Термин «рак» относится к физиологическому состоянию у млекопитающих, в характерном случае характеризующемуся нерегулируемым клеточным ростом, или описывает это состояние. «Опухоль» включает одну или более раковых клеток. Примеры рака включают, но не ограничены ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфоидные злокачественные опухоли. Более конкретные примеры таких раков включают чешуйчато-клеточный рак (например, эпителиальный чешуйчато-клеточный рак), рак легкого, включающий мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого («НМРЛ»), аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, печеночно-клеточный рак, рак желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) или желудка, включающий рак ЖКТ, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак ободочной кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или тела матки, карциному слюнной железы, рак почки или почечно-клеточный рак, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, анальную карциному, карциному пениса, а также рак органов головы и шеи.
«Гематологические злокачественные опухоли (от англ. Hematological malignancies)» ' (британское написание «Haematological» злокачественные опухоли) представляют собой типы рака, поражающего кровь, костный мозг и лимфатические узлы. Поскольку все три эти компонента тесно связаны посредством иммунной системы, заболевание, поражающее один из трех, часто также поражает другие: хотя лимфома является заболеванием лимфатических узлов, она часто распространяется на костный мозг, поражая кровь. Гематологические злокачественные опухоли представляют собой злокачественные новообразования («рак»), и, как правило, их лечат специалисты в гематологии и/или онкологии. В некоторых центрах «гематология/онкология» представляет собой единую узкую специализацию медицины внутренних болезней, тогда как в других эти специальности рассматривают как отдельные подразделения (существуют также онкохирурги и онкологи-радиологи). Не все гематологические расстройства являются злокачественными («раковыми»); эти другие состояния крови может также лечить гематолог. Гематологические злокачественные опухоли могут иметь происхождение от любой из двух основных линий клеток крови: миелоидной и лимфоидной клеточной линии. Миелоидная клеточная линия в норме продуцирует гранулоциты, эритроциты, тромбоциты, макрофаги и мастоциты; лимфоидная клеточная линия продуцирует В-клетки, Т-клетки, естественные клетки-киллеры (NK; от англ. «natural killer») и плазматические клетки. Лимфомы, лимфоцитарные лейкозы и миелома образованы из лимфоидной линии, тогда как острый и хронический миелогенный лейкоз, миелодиспластические синдромы и миелопролиферативные заболевания имеют миелоидное происхождение. Лейкозы включают острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелогенный лейкоз (ОМЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), хронический миелогенный лейкоз (ХМЛ), острый моноцитарный лейкоз (ОМОЛ) и мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (МЛЛ). Лимфомы включают ходжкинские лимфомы (все четыре подтипа) и неходжкинские лимфомы (все подтипы).
«Химиотерапевтическое средство» представляет собой химическое соединение, полезное при лечении рака, независимо от механизма действия. Классы химиотерапевтических средств включают, но не ограничены ими, следующие средства: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды, представляющие собой веретенные яды, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназ. Химиотерапевтические средства включают соединения, применяемые в «прицельной терапии» и традиционной химиотерапии. Примеры Химиотерапевтических средств включают следующие средства: эрлотиниб (Тарцева, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (Таксотер, Sanofi-Aventis), 5-FU (фторурацил, 5-фторурацил, CAS No. 51-21-8), гемцитабин (Гемзар, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диамин, дихлорплатина(II), CAS No. 15663-27-1), карбоплатин (CAS No. 41575-94-4), паклитаксел (Таксол, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), трастузумаб (Герцептин, Genentech), темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло[4.3.0]нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид, CAS No. 85622-93-1, Темодар, Темодал, Schering Plough), тамоксифен ((Z)-2-[4-(1,2-дифенилбут-1-енил)фенокси]-N,N-диметилэтанамин, Нолвадекс, ISTUBAL, Валодекс) и доксорубицин (Адриамицин), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.
Дополнительные примеры химиотерапевтических средств включают следующие средства: оксалиплатин (Элоксатин, Sanofi), бортезомиб (Велкад, Millennium Pharm.), сутент (Сунитиниб, SU11248, Pfizer), летрозол (Фемара, Novartis), иматиниб мезилат (Гливек, Novartis), XL-518 (ингибитор Mek, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (ингибитор Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (ингибитор PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (ингибитор PI3K, Novartis), XL-147 (ингибитор PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), фулвестрант (Фазлодекс, AstraZeneca), лейковорин (фолиновая кислота), рапамицин (сиролимус, Рапамун, Wyeth), лапатиниб (Tykerb, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (Sarasar™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (Нексавар, BAY43-9006, Bayer Labs), гефитиниб (Иресса, AstraZeneca), иринотекан (Камптосар, CPT-11, Pfizer), типифарниб (Зарнестра™, Johnson & Johnson), Абраксан™ (без кремофоров), препараты паклитаксела, сконструированного с альбумином, в виде наночастиц (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), вандетаниб (rINN, ZD6474, Zactima, AstraZeneca), хлорамбуцил, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), темсиролимус (Торизел, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфосфамид (Телцита, Telik), тиотепа и циклофосфамид (Цитоксан, Neosar); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включающие алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфамид и триметиломеламин; ацетогенины (в частности, буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелизин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая его синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; хлорметины, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, меклоретамин, меклоретамина оксида гидрохлорид, мелфалан, новембицин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимустин; антибиотики, такие как ендииновые антибиотики (например, калихеамицин, калихеамицин гамма 1I, калихеамицин омега I1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); динемицин, динемицин A; бисфосфонаты, такие как клодронат; и эсперамицин; а также неокарциностатин хромофор и родственные хромофоры, представляющие собой хромопротеиновые ендииновые антибиотики), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карцинофиллин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролидино-доксорубицин и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, неморубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналы, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиниум ацетат; эпотилон; этоглюцид; галлия нитрат; гидроксимочевина; лентинан; лонидайнин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и анзамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK полисахаридный комплекс (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазониевая кислота; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангвидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ara-С»); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорельбин (Навельбин); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (Кселода, Roche); ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых из вышеуказанных средств.
В определение «химиотерапевтическое средство» также включены следующие средства: (i) антигормональные средства, действующие как регуляторы или ингибиторы действия гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM; от англ. selective estrogen receptor modulators), включающие, например, тамоксифен (включая Нолвадекс; тамоксифен цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и Фарестон (торемифен цитрат); (ii) ингибиторы ароматазы, ингибирующие фермент ароматазу, регулирующий продуцирование эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, Мегейс (мегестрола ацетат), Аромазин (экземестан; Pfizer), форместан, фадрозол, RIVISOR (ворозол), Фемара (летрозол; Novartis) и Аримидекс (анастрозол; AstraZeneca); (iii) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, люпролид и гозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый аналог нуклеозида цитозина); (iv) ингибиторы протеинкиназ, такие как ингибиторы МЕК (WO 2007/044515); (v) ингибиторы липидкиназ; (vi) антисенс-олигонуклеотиды, в частности, ингибирующие экспрессию генов в биохимических путях передачи сигнала, вовлеченных в аберрантную клеточную пролиферацию, например, РКС-альфа, Raf и H-Ras, такие как облимерсен (GENASENSE, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF; от англ. vascular endothelial growth factor) (например, Ангиозим) и ингибиторы экспрессии рецептора эпидермального фактора роста 2 (HER2; от англ. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2); (viii) вакцины, такие как генотерапевтические вакцины, например, ALLOVECTIN, LEUVECTIN и VAXID; Пролейкин rlL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как Луртотекан; Абареликс rmRH; (ix) антиангиогенные средства, такие как бевацизумаб (Авастин, Genentech); а также фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых из перечисленных выше средств.
В определение «химиотерапевтическое средство» также включены терапевтические антитела, такие как алемтузумаб (Кэмпас), бевацизумаб (Авастин, Genentech); цетуксимаб (Эрбитукс, Imclone); панитумумаб (Вектибикс, Amgen), ритуксимаб (Ритуксан, Genentech/Biogen Idee), пертузумаб (Омнитарг™, 2С4, Genentech), трастузумаб (Герцептин, Genentech), тозитумомаб (Бексар, Corixia) и конъюгат антитела с лекарственным средством, гемтузумаб озогамицин (Милотарг, Wyeth).
Гуманизированные моноклональные антитела, обладающие терапевтическим потенциалом в качестве химиотерапевтических средств, в комбинации с ингибиторами Btk по изобретению включают следующие антитела: алемтузумаб, аполизумаб, азелизумаб, атлизумаб, бапинеузумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделизумаб, сертолизумаб пегол, цидфуситузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфуситузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, резивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, тализумаб, тефибазумаб, тосилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, тукуситузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и визилизумаб.
«Метаболит» представляет собой продукт, полученный посредством метаболизма указанного соединения или его соли в организме. Метаболиты соединения могут быть идентифицированы, используя рутинные методы, известные в данной области техники, а их активности могут быть определены, используя тесты, такие как описаны в данном изобретении. Такие продукты могут быть получены в результате, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления введенного соединения и тому подобного. Соответственно, в изобретение включены метаболиты соединений по изобретению, включающие соединения, полученные способом, при котором соединения формулы I по данному изобретению приводят в контакт с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения продукта его метаболизма.
Термин «инструкция по применению» используют для отнесения к инструкциям, обычно включенным в имеющиеся в продаже упаковки терапевтических препаратов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предостережениях, касающихся применения таких терапевтических препаратов.
Термин «хиральный» относится к молекулам, обладающим свойством неналагаемости зеркального отображения партнера, тогда как термин «ахиральный» относится к молекулам, налагаемым на зеркальное отображение партнера.
Термин «стереоизомеры» относится к соединениям, имеющим идентичную химическую композицию, но различающимся расположением атомов или групп в пространстве.
«Диастереомер» относится к стереоизомеру, имеющему два или более центров хиральности, и молекулы которого не являются зеркальными отображениями друг друга. Диастереомеры обладают различными физическими свойствами, например, различными температурами плавления, температурами кипения, спектральными свойствами и реакционной способностью. Смеси диастереомеров можно разделить с помощью аналитических методов высокого разрешения, таких как электрофорез и хроматография.
«Энантиомеры» относятся к двум стереоизомерам соединения, являющимся неналагаемыми зеркальными отображениями друг друга.
Стереохимические определения и правила, использованные в данном описании, как правило, следуют руководству S.P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel, E. and Wilen, S., «Stereochemistry of Organic Compounds», John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения по изобретению могут содержать асимметрические или хиральные центры, и, следовательно, существуют в различных стереоизомерных формах. Подразумевают, что все стереоизомерные формы соединений по изобретению, включающие, но не ограниченные ими, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, то есть обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы D и L или R и S используют для обозначения абсолютной конфигурации молекулы вокруг ее хирального центра (центров). Префиксы d и I или (+) и (-) используют для обозначения знака вращения плоскополяризованного света соединением, где (-) или 1 означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры идентичны за исключением того, что представляют собой зеркальные отображения друг друга. Конкретный стереоизомер может также относиться к энантиомеру, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называют рацемической смесью или рацематом, который может встречаться там, где в химической реакции или процессе отсутствовала стереоселекция или стереоспецифичность. Термины «рацемическая смесь» и «рацемат» относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных соединений, не обладающей оптической активностью. Энантиомеры могут быть выделены из рацемической смеси способом хирального разделения, таким как сверхкритическая жидкостная хроматография (СЖХ). Оценка конфигурации при хиральных центрах в разделенных энантиомерах может быть гипотетической, и изображенные в таблице 1 структуры предназначены для иллюстративных целей, тогда как стереохимическое определение, такое как данные рентгенокристаллографии, еще ожидается.
Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам различных энергий, которые являются взаимопревращаемыми за счет низкого энергетического барьера. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимные превращения за счет миграции протона, такие как кето-енольные и имино-енаминные изомеризации. Таутомеры валентности включают взаимные превращения путем реорганизации некоторых из электронов связи.
Термин «фармацевтически приемлемые соли» означает соли, не являющиеся ни биологически, ни иначе нежелательными. Фармацевтически приемлемые соли включают как соли присоединения кислоты, так и соли присоединения основания. Выражение «фармацевтически приемлемый» указывает на то, что вещество или композиция должны быть совместимы химически и/или токсикологически с другими ингредиентами, составляющими препарат, и/или с млекопитающим, подлежащим лечению этим препаратом.
Термин «фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты» обозначает фармацевтически приемлемые соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, угольная кислота, фосфорная кислота, и с органическими кислотами, выбранными из алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоновых классов органических кислот, такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, аспарагиновая кислота, аскорбиновая кислота, глутаминовая кислота, антраниловая кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, эмбоновая кислота, фенилуксусная кислота, метансульфоновая кислота «мезилат», этансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота и салициловая кислота.
Термин «фармацевтически приемлемая соль присоединения основания» обозначает фармацевтически приемлемые соли, образованные с органическим или неорганическим основанием. Примеры приемлемых солей неорганических оснований включают соли натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца и алюминия. Соли, образованные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклических аминов и основных ионообменных смол, такие как соли изопропиламина, триметиламина, диэтиламина, триэтиламина, трипропиламина, этаноламина, 2-диэтиламиноэтанола, триметамина, дициклогексиламина, лизина, аргинина, гистидина, кофеина, прокаина, гидрабамина, холина, бетаина, этилендиамина, глюкозамина, метилглюкамина, теобромина, пуринов, пиперазина, пиперидина, Ν-этилпиперидина и полиаминных смол.
«Сольват» относится к ассоциации или комплексу одной или более молекул растворителя и соединения по изобретению. Примеры растворителей, образующих сольваты, включают, но не ограничены ими, воду, изопропанол, этанол, метанол, диметилсульфоксид (ДМСО), этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.
50
Термин «ЕС» представляет собой половинную максимальную ингибиторную концентрацию и обозначает концентрацию конкретного соединения в плазме, необходимую для получения 50% максимума конкретного эффекта в живом организме (in vivo).
Термин «Ki» представляет собой константу ингибирования и обозначает абсолютное сродство связывания конкретного ингибитора с рецептором. Эту константу измеряют, используя конкурентные анализы связывания, и она равна концентрации, при которой конкретный ингибитор занял бы 50% рецепторов, если бы конкурирующий лиганд (например, радиоактивный лиганд) отсутствовал. Значения Ki могут быть преобразованы логарифмически в значения pKi (-log Ki), где более высокие значения указывают на экспоненциально возрастающую эффективность.
50
50
50
50
70
90
Термин «IC» представляет собой половинную максимальную ингибиторную концентрацию и обозначает концентрацию конкретного соединения, необходимую для получения 50% ингибирования биологического процесса in vitro. Значения IC могут быть преобразованы логарифмически в значения pIC (-log IC), где более высокие значения указывают на экспоненциально возрастающую эффективность. Значение IC50 не является абсолютным значением, а зависит от экспериментальных условий, например, от используемых концентраций, и может быть преобразовано в абсолютную константу ингибирования (Ki) с использованием уравнения Ченга-Прусоффа (Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099). Можно вычислить другие параметры процента ингибирования, такие как IC, IC и т.д.
Термины «соединения по данному изобретению», «соединения по настоящему изобретению» и «соединения формулы I» включают соединения формулы I и их стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры, сольваты, метаболиты, а также фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.
Любая формула или структура, приведенная в данном описании, включающая соединения формулы I, также предназначена для представления гидратов, сольватов и полиморфов таких соединений и их смесей.
2
3
11
13
14
15
18
31
32
35
36
125
3
13
14
18
2
Любая формула или структура, приведенная в данном описании, включающая соединения формулы I, также предназначена для представления как немеченых форм, так и изотопно-меченых форм соединений. Изотопно-меченые соединения имеют структуры, изображенные формулами, приведенными в данном описании, за исключением того, что один или более атомов заменен атомом, имеющим выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как, но не ограниченные ими, Н (дейтерий, D), Н (тритий), С, С, С, N, F, Ρ, Р, S, Cl и I. Различные изотопно-меченые соединения по настоящему изобретению представляют собой, например, соединения, в которые включены радиоактивные изотопы, такие как Н, С и С. Такие изотопно-меченые соединения могут быть полезны в метаболических исследованиях, в исследованиях кинетики реакций, в методах обнаружения или визуализации, таких как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), включающих анализы тканевого распределения лекарственного средства или субстрата, или при радиоактивном лечении пациентов. Терапевтические соединения по изобретению, меченые или замещенные дейтерием, могут обладать улучшенными свойствами метаболизма и фармакокинетики лекарственных веществ (DMPK; от англ. drug metabolism and pharmacokinetics), относящимися к всасыванию, распределению, метаболизму и выведению (ADME; от англ. Absorption, Distribution, Metabolism, and Excretion). Замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, может обеспечить определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например, увеличенный период полувыведения in vivo или сниженные потребности в дозировке. Соединение, меченое F, может быть полезным для исследований ПЭТ или ОФЭКТ. Изотопно-меченые соединения по данному изобретению и их пролекарства могут быть, как правило, получены путем выполнения методов, раскрытых в схемах или в примерах и примерах получения, описанных ниже, путем замещения легко доступного изотопно-меченого реагента реагентом, не меченым изотопом. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, в частности, дейтерием, (то есть Н или D), может обеспечить определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например, увеличенный период полувыведения in vivo или сниженные потребности в дозировке, или улучшение терапевтического индекса. Понятно, что дейтерий в данном контексте рассматривают как заместитель в соединении формулы (I). Концентрацию такого более тяжелого изотопа, в частности, дейтерия, можно определить с помощью фактора изотопного обогащения. Подразумевают, что в соединениях по данному изобретению любой атом, конкретно не обозначенный как определенный изотоп, представляет собой любой стабильный изотоп этого атома. Если не указано иное, когда положение конкретно обозначено как «H» или «атом водорода», это положение понимают как имеющее атом водорода в его распространенной в природе изотопной композиции. Соответственно, подразумевают, что в соединениях по данному изобретению любой атом, конкретно обозначенный как дейтерий (D), представляет собой дейтерий.
БИЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ ПИПЕРАЗИНА
В настоящем изобретении предложены бициклические соединения пиперазина, имеющие формулу I, включающую формулы Ia-Ih, и их фармацевтические препараты, потенциально полезные при лечении заболеваний, состояний и/или расстройств, модулируемых киназой Btk:
или их стереоизомеры, таутомеры или фармацевтически приемлемые соли, где:
сплошная/пунктирная линия  указывает простую или двойную связь;
1
1
X представляет собой CR или N;
2
2
X представляет собой CR или N;
3
3
X представляет собой CR или N;
1
2
3
где ни один, один или два из Χ, X и X представляют собой N;
1
2
Y и Y независимо выбраны из СН и N;
3
Y представляет собой С или N;
4
6
Y представляет собой CR, N или NH;
1
2
3
4
где один или два из Υ, Υ, Y и Y представляют собой N;
1
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
1
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
R, R и R независимо выбраны из Н, F, Cl, -NH, -NHCH, -N(CH), -ОН, -ОСН, -ОСНСН, -ОСНСНОН и С-C алкила, необязательно замещенного F, Cl, CN, -NH, -NHCH, -N(CH), -ОН, -ОСН, -ОСНСН и -ОСНСНОН;
4
2
3
3
2
3
2
2
2
2
3
2
3
3
2
2
3
3
2
3
3
2
3
2
2
R выбран из Н, F, Cl, CN, -СНОН, -СН(СН)ОН, -С(СН)ОН, -CH(CF)OH, -CHF, -CHF, -CHCHF, -CF, -C(O)NH, -C(O)NHCH, -C(O)N(CH), -NH, -NHCH, -N(CH), -NHC(O)CH, -OH, -OCH, -OCHCH, -OCHCHOH, циклопропила, циклопропилметила, 1-гидроксициклопропила, имидазолила, пиразолила, 3-гидрокси-оксетан-3-ила, оксетан-3-ила и азетидин-1-ила;
5
3
2
3
2
2
2
3
2
2
R выбран из -СН, -СНСН, -СНОН, -CHF, -CHF, -CF, -CN и -CHCHOH;
5
либо две группы R образуют 3-, 4-, 5- или 6-членное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо;
5
8
либо группа R и группа R образуют 3-, 4-, 5- или 6-членное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо;
n равно 0, 1, 2, 3 или 4;
6
3
2
3
2
2
2
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
R выбран из Н, Cl, -СН, -СНСН, -СНСНОН, -CHF, -CHF, -CF, -NH, -NHCH, -N(CH), -OH, -OCH, -OCHCH и -OCHCHOH;
7
R выбран из следующих структур:
где волнистой линией указано место присоединения;
8
3
2
3
R выбран из Н, -СН, -S(O)CH, циклопропила, азетидин-3-ила, оксетан-3-ила и морфолин-4-ила;
9
9
3
2
3
2
2
2
3
3
2
3
2
3
2
2
Ζ представляет собой CR или Ν; где R выбран из Н, F, Cl, -СН, -СНСН, -СНСНОН, -NH, -NHCH, -N(CH), -ОН, -ОСН, -ОСНСН и -ОСНСНОН.
Иллюстративные воплощения соединений формулы l включают соединения формул Ia-Ih:
1
2
2
3
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где X представляет собой Ν, X представляет собой CR, и X представляет собой CR.
1
1
2
3
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где X представляет собой CR, X представляет собой Ν, и X представляет собой CR.
1
1
2
2
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где X представляет собой CR, X представляет собой CR, и X представляет собой N.
1
3
1
2
2
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I выбраны из соединений, где: X и X представляют собой Ν, X и X представляют собой Ν, либо X и X представляют собой N.
4
2
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где R представляет собой -СНОН.
2
2
2
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где X представляет собой CR, и R представляет собой F.
1
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где X и X представляют собой СН.
4
6
6
3
Иллюстративные воплощения соединений формулы I включают соединения, где Υ представляет собой CR, и R представляет собой СН.
Соединения формулы I по изобретению могут содержать асимметрические или хиральные центры и, следовательно, существуют в различных стереоизомерных формах. Подразумевают, что все стереоизомерные формы соединений по изобретению, включающие, но не ограниченные ими, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения.
Кроме того, настоящее изобретение включает все диастереомеры, включающие цис-транс (геометрические) и конформационные изомеры. Например, если соединение формулы I включает двойную связь или конденсированное кольцо, цис- и транс-формы, а также их смеси включены в объем изобретения.
В структурах, представленных в настоящем описании, где стереохимия какого-либо конкретного хирального атома не указана, все стереоизомеры рассмотрены и включены как соединения по изобретению. Где стереохимия указана обозначениями в виде сплошного клина или пунктирной линии, представляющими конкретную конфигурацию, то данный стереоизомер, таким образом, указан и определен.
Соединения по настоящему изобретению могут существовать как в несольватированных, так и в сольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и тому подобное, и подразумевают, что изобретение включает как сольватированные, так и несольватированные формы.
Соединения по настоящему изобретению могут также существовать в различных таутомерных формах, и все такие формы включены в объем изобретения. Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам различных энергий, которые являются взаимопревращаемыми за счет низкого энергетического барьера. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимные превращения за счет миграции протона, такие как кето-енольные и имино-енаминные изомеризации. Таутомеры валентности включают взаимные превращения путем реорганизации некоторых из электронов связи.
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
50
50
50
50
90
Относительные эффективности соединений формулы I в качестве ингибиторов ферментативной активности (или другой биологической активности) могут быть установлены путем определения концентраций, при которых каждое соединение ингибирует активность до предопределенной степени с последующим сравнением результатов. В характерном случае предпочтительным определением является концентрация, ингибирующая 50% активности в биохимическом анализе, то есть 50% ингибиторная концентрация или ''IC''. Определение значений IC может быть выполнено, используя традиционные методы, известные в данной области техники. Как правило, IC можно определить путем измерения активности данного фермента в присутствии диапазона концентраций исследуемого ингибитора. Концентрацию ингибитора, показывающую 50% активности фермента (по сравнению с активностью в отсутствие какого-либо ингибитора), принимают за значение IC. Аналогично путем соответствующих определений активности могут быть определены другие ингибиторные концентрации. Например, в некоторых обстоятельствах может быть желательно установить 90% ингибиторную концентрацию, то есть IC, и т.д.
Соединения формулы I были протестированы с помощью стандартного биологического анализа киназы Btk (Пример 901).
Общий метод стандартного клеточного анализа киназы Btk, который можно использовать для тестирования соединений формулы I представляет собой анализ Ramos Cell Btk Assay (Пример 902).
Стандартный клеточный анализ пролиферации В-клеток можно использовать для тестирования соединений формулы I с В-клетками, очищенными из селезенки мышей Balb/c (Пример 903).
Стандартный анализ пролиферации Т-клеток можно использовать для тестирования соединений формулы I с Т-клетками, очищенными из селезенки мышей Balb/c (Пример 904).
На соединениях формулы I можно проводить анализ ингибирования CD86 на ингибирование активности В-клеток, используя суммарные спленоциты мыши, очищенные из селезенок 8-16 недельных мышей Balb/c (Пример 905).
На соединениях формулы I можно проводить анализ выживаемости клеток B-ALL для измерения числа жизнеспособных клеток B-ALL в культуре (Пример 906).
2
70
На соединениях формулы I можно проводить анализ цельной крови на CD69 для определения способности соединений к ингибированию продуцирования CD69 В-лимфоцитами в цельной крови человека, активированного сшиванием поверхностного IgM с F(ab') козы против IgM человека (Пример 907). CD69 представляет собой лектин С-типа типа II, вовлеченный в миграцию лимфоцитов и секрецию цитокинов. Экспрессия CD69 представляет собой один из самых ранних доступных показателей активации лейкоцитов, и ее быстрая индукция происходит посредством транскрипционной активации (Vazquez et al. (2009) Jour. of Immunology Published October 19, 2009, doi:10.4049/jimmunol.0900839). Зависимое от концентрации ингибирование стимуляции рецептора антигена селективными ингибиторами Btk индуцирует экспрессию маркера активации лимфоцитов CD69 на клеточной поверхности (Honigberg et al (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107(29):13075-13080). Следовательно, ингибирование CD69 селективными ингибиторами Btk может быть согласовано с эффективностью терапии определенных В-клеточных расстройств. Значения IC CD69 на основании флуоресцентной сортировки (FACS; от англ. Fluorescence Activated Cell Sorting) крови человека представлены для иллюстративных соединений формулы I в таблицах 1 и 2.
50
50
Цитотоксическую или цитостатическую активность иллюстративных соединений формулы I можно измерить следующим путем: основания линии пролиферирующих опухолевых клеток млекопитающего в клеточной культуральной среде, добавления соединения формулы I, культивирования клеток в течение периода, составляющего от приблизительно 6 часов до приблизительно 5 суток; и измерения жизнеспособности клеток (Пример 908). Анализы in vitro на клеточной основе используют для измерения жизнеспособности, то есть пролиферации (IC), цитотоксичности (ЕС) и индукции апоптоза (активации каспазы), и они могут быть полезны при предсказании клинической эффективности против гематологических злокачественных опухолей и солидных опухолей.
Эффективности in vitro комбинаций соединений формулы I с химиотерапевтическими средствами могут быть измерены с помощью анализа клеточной пролиферации Примера 908; люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo, имеющегося в продаже от фирмы Promega Corp., Madison, WI. Данный однородный метод анализа основан на рекомбинантной экспрессии люциферазы Coleoptera (US 5583024; US 5674713; US 5700670) и определяет число жизнеспособных клеток в культуре на основе количественного определения присутствия аденозинтрифосфата (АТФ), являющегося показателем метаболически активных клеток (Crouch et al. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). Анализ CellTiter-Glo был проведен в 96-или 384-луночном формате, что делает его подходящим для автоматического скрининга с высокой пропускной способностью (HTS; от англ. high-throughput screening) (Cree et al. (1995) Anticancer Drugs 6:398-404). В этот однородный метод анализа вовлечено добавление единственного реагента (реагента CellTiter-Glo) непосредственно к клеткам, культивируемым в среде с добавлением сыворотки. Отмывка клеток, удаление среды и многочисленные стадии пипетирования не требуются. Система обнаруживает всего лишь 15 клеток/лунка в 384-луночном формате за 10 минут после добавления реагента и смешивания.
Однородный формат «добавление-смешивание-измерение» приводит в результате к лизису клеток и образованию люминесцентного сигнала пропорционально количеству присутствующего АТФ. Количество АТФ прямо пропорционально числу клеток, находящихся в культуре. Анализ CellTiter-Glo создает люминесцентный сигнал типа «свечения», продуцируемый люциферазной реакцией, имеющий период спада, как правило, более пяти часов в зависимости от типа клеток и используемой среды. Жизнеспособные клетки отражены в относительных единицах люминесценции (относительных световых единицах; ОСЕ). Субстрат, представляющий собой люциферин жука, претерпевает окислительное декарбоксилирование рекомбинантной люциферазой светляка при одновременном преобразовании АТФ в аденозинмонофосфат (АМФ) и образовании фотонов. Продолжительный период спада устраняет необходимость в использовании инжекторов реагента и обеспечивает гибкость обработки многочисленных планшетов в непрерывном или периодическом режиме. Данный анализ клеточной пролиферации можно использовать в различных многолуночных форматах, например, в 96- или 384-луночном формате. Данные можно регистрировать с помощью люминометра или устройства визуализации с цифровой камерой. Выход люминесценции представляют в виде относительных световых единиц (ОСЕ), измеряемых по времени.

50
Антипролиферативную активность иллюстративных соединений формулы I и их комбинаций с химиотерапевтическими средствами измеряют с помощью анализа CellTiter-Glo (Пример 908) против определенных линий гематологических опухолевых клеток. Значения ЕС устанавливают для тестируемых соединений и их комбинаций.
Иллюстративные соединения формулы I, приведенные в таблицах 1 и 2, были получены, охарактеризованы и протестированы на ингибирование Btk в соответствии со способами по данному изобретению и имеют приведенные ниже структуры и соответствующие названия (ChemDraw Ultra, версия 9.0.1, и ChemBioDraw, версия 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge ΜΑ). В случаях, где с соединением формулы I или промежуточным соединением связано более чем одно название, данное соединение следует определять на основании химической структуры.
ВВЕДЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I
Соединения по изобретению можно вводить любым путем, подходящим для состояния, подлежащего лечению. Подходящие пути включают пероральный, парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, подоболочечный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (включая трансбуккальный и подъязычный), вагинальный, интраперитонеальный, внутрилегочный и интраназальный. Для локального иммуносупрессивного лечения соединения можно вводить путем внутриочагового введения, включающего перфузию или иное приведение в контакт трансплантата с ингибитором перед трансплантацией. Понятно, что предпочтительный путь может варьировать, например, в зависимости от состояния реципиента. При пероральном введении соединения его можно включать в препарат в виде пилюли, капсулы, таблетки и т.д. с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. При парентеральном введении соединения его можно включать в препарат с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем в стандартной дозируемой инъекционной форме, как подробно описано ниже.
Доза для лечения пациентов-людей может находиться в диапазоне от приблизительно 10 мг до приблизительно 1000 мг соединения формулы I. Характерная доза может составлять от приблизительно 100 мг до приблизительно 300 мг соединения. Дозу можно вводить один раз в сутки (QID), дважды в сутки (BID) или чаще в зависимости от фармакокинетических и фармакодинамических свойств, включающих всасывание, распределение, метаболизм и выведение конкретного соединения. Кроме того, факторы токсичности могут влиять на дозировку и режим введения. При пероральном введении пилюлю, капсулу или таблетку можно принимать внутрь ежесуточно или реже в течение указанного периода времени. Режим можно повторять в течение ряда циклов терапии.
СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЯМИ ФОРМУЛЫ I
Соединения формулы I по настоящему изобретению полезны для лечения пациента, представляющего собой человека или животное, страдающего заболеванием или расстройством, возникающим в результате аномалий роста, функции или поведения клеток, связанных с киназой Btk, таким как следующие заболевания или расстройства: иммунное расстройство, сердечно-сосудистое заболевание, вирусная инфекция, воспаление, расстройство метаболизма/эндокринное расстройство или неврологическое расстройство, которые можно, таким образом, лечить способом, включающим введение соединения по настоящему изобретению, как определено выше. Пациента, представляющего собой человека или животное, страдающего раком, можно также лечить способом, включающим введение соединения по настоящему изобретению, как определено выше. Таким образом, можно улучшить или облегчить состояние пациента.
Соединения формулы I могут быть полезны для диагностики или лечения in vitro, in situ и in vivo клеток млекопитающих, организмов или ассоциированных патологических состояний, таких как системное и локальное воспаление, иммуно-воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, подавление иммунитета, отторжение трансплантата органа, аллергии, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, дерматит, астма, системная красная волчанка, синдром Шегрена, рассеянный склероз, склеродерма/системный склероз, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), васкулит, обусловленный антинейтрофильными цитоплазматическими антителами (АНЦА), хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), псориаз, а также для эффектов общей защиты суставов.
Способы по изобретению также включают лечение таких заболеваний, как заболевания суставов, такие как ревматоидный артрит, односуставной артрит, остеоартрит, подагрический артрит, спондилоартрит; болезнь Бехчета; сепсис, септический шок, эндотоксический шок, грамотрицательный сепсис, грамположительный сепсис и синдром токсического шока; синдром полиорганной недостаточности, вторичный по отношению к септицемии, травме или кровотечению; глазные расстройства, такие как аллергический конъюнктивит, весенний конъюнктивит, увеит и офтальмопатия, обусловленная щитовидной железой; эозинофильная гранулема; легочные или дыхательные расстройства, такие как астма, хронический бронхит, аллергический ринит, острый респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), хроническое воспалительное заболевание легких (например, хроническая обструктивная болезнь легких), силикоз, легочный саркоидоз, плеврит, альвеолит, васкулит, эмфизема, пневмония, бронхоэктаз и легочная кислородная токсичность; реперфузионное повреждение миокарда, головного мозга или конечностей; фиброз, такой как муковисцидоз; образование келоида или образование рубцовой ткани; атеросклероз; аутоиммунные заболевания, такие как системная красная волчанка (СКВ), аутоиммунный тиреоидит, рассеянный склероз, некоторые формы диабета и синдром Рейно; и расстройства, представляющие собой отторжение трансплантата, такие как GVHD болезнь «трансплантат против хозяина» (БТПХ) и отторжение аллотрансплантата; хронический гломерулонефрит; воспалительные кишечные заболевания, такие как хроническое воспалительное кишечное заболевание (ХВКЗ), болезнь Крона, неспецифический язвенный колит и некротизирующий энтероколит; воспалительные дерматозы, такие как контактный дерматит, атопический дерматит, псориаз или крапивница; лихорадка и миалгии, обусловленные инфекцией; воспалительные расстройства центральной или периферической нервной системы, такие как менингит, энцефалит и повреждение головного или спинного мозга вследствие небольшой травмы; синдром Шегрена; заболевания, в которые вовлечен диапедез лейкоцитов; алкогольный гепатит; бактериальная пневмония; заболевания, опосредованные комплексом антиген-антитело; гиповолемический шок; сахарный диабет типа I; острая и замедленная аллергическая реакция; болезненные состояния, обусловленные лейкоцитарной дискразией и метастазом; термическое повреждение; синдромы, обусловленные трансфузией гранулоцитов; и токсичность, индуцированная цитокинами.
Способы по изобретению также включают лечение рака, выбранного из рака молочной железы, яичника, шейки матки, простаты, семенника, мочеполовых путей, пищевода, гортани; глиобластомы, нейробластомы; рака желудка, кожи; кератоакантомы; рака легкого; эпидермоидной карциномы; гигантоклеточной карциномы; немелкоклеточной карциномы легкого (НМКЛ), мелкоклеточной карциномы, аденокарциномы легкого; рака кости, ободочной кишки; аденомы; рака поджелудочной железы, аденокарциномы; рака щитовидной железы; фолликулярной карциномы, недифференцированной карциномы, папиллярной карциномы; семиномы; меланомы, саркомы; карциномы мочевого пузыря; карциномы печени и желчных протоков; карциномы почки, поджелудочной железы; миелоидных расстройств; лимфомы, «волосатых» клеток; рака щечного кармана, носоглотки, глотки, губы, языка, полости рта, тонкого кишечника, прямой и ободочной кишки, толстого кишечника, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы; лимфомы Ходжкина; лейкоза; рака бронхов, щитовидной железы, печени и внутрипеченочного желчного протока, печеночно-клеточного рака, рака желудочно-кишечного тракта; глиомы/глиобластомы; рака эндометрия; меланомы; рака почки и почечной лоханки, мочевого пузыря, тела матки, шейки матки; множественной миеломы, острого миелогенного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, лимфоцитарного лейкоза, хронического лимфоидного лейкоза (ХЛЛ), миелоидного лейкоза; рака полости рта и глотки, неходжкинской лимфомы, меланомы и ворсинчатой аденомы ободочной кишки.
Способы по изобретению могут обладать пользой при лечении субъектов, которые подвергаются или могут подвергаться реперфузионному повреждению, то есть повреждению в результате ситуаций, при которых ткань или орган претерпевает период ишемии с последующей реперфузией. Термин ''ишемия'' относится к локализованной анемии ткани вследствие обструкции входящего тока артериальной крови. Преходящая ишемия с последующей реперфузией характерно приводит в результате к активации нейтрофилов и их трансмиграции через эндотелий кровеносных сосудов в пораженной области. Аккумуляция активированных нейтрофилов, в свою очередь, приводит в результате к образованию активных метаболитов кислорода, которые повреждают компоненты вовлеченной ткани или органа. Это явление «реперфузионного повреждения» обычно обусловлено такими состояниями, как сосудистый удар (включая глобальную и фокальную ишемию), геморрагический шок, ишемия или инфаркт миокарда, трансплантация органа или спазм сосудов головного мозга. В качестве иллюстрации реперфузионное повреждение происходит при окончании операции коронарного шунтирования или во время остановки сердца, когда начинается реперфузия сердца после предотвращения снабжения его кровью. Ожидают, что ингибирование активности Btk может привести в результате к сниженным количествам реперфузионных повреждений в таких ситуациях.
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
В целях применения соединения по данному изобретению для терапевтического лечения млекопитающих, включая людей, обычно готовят их препараты в виде фармацевтической композиции в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Согласно данному аспекту изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение по данному изобретению в ассоциации с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
В характерном случае препарат готовят путем смешивания соединения по настоящему изобретению и носителя, разбавителя или эксципиента. Подходящие носители, разбавители и эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники и включают такие вещества, как углеводы, воски, водорастворимые и/или набухающие полимеры, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, вода и тому подобное. Конкретный используемый носитель, разбавитель или эксципиент зависит от средств, с помощью которых применяют соединение по настоящему изобретению, и от цели его применения. Растворители, как правило, выбраны на основе растворителей, общепризнанных специалистами в данной области техники безопасными (GRAS) для введения млекопитающему. Как правило, безопасные растворители представляют собой нетоксичные водные растворители, такие как вода и другие нетоксичные растворители, растворимые в воде или смешиваемые с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 400, ПЭГ 300) и т.д. и их смеси. В препараты можно также включать один или более буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ (ПАВ), увлажняющих агентов, смазывающих веществ, эмульгаторов, суспендирующих агентов, консервантов, антиоксидантов, кроющих агентов, веществ, способствующих скольжению, технологических добавок, красящих веществ, подсластителей, ароматизирующих веществ, корригентов и других известных добавок для обеспечения элегантной формы выпуска лекарственного средства (то есть соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции), или помогающих при получении фармацевтического препарата (то есть лекарственного средства).
Препараты можно готовить, используя традиционные методы растворения и смешивания. Например, нерасфасованное лекарственное вещество (то есть соединение по настоящему изобретению или стабилизированную форму этого соединения (например, комплекс с производным циклодекстрина или с другим известным агентом комплексообразования) растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или более из вышеописанных эксципиентов. Соединение по настоящему изобретению в характерном случае включают в фармацевтические дозируемые формы, чтобы обеспечить легко контролируемую дозировку лекарственного средства и обеспечить соблюдение пациентом предписанного ему режима лечения.
Фармацевтическая композиция (или препарат) для применения может быть упакована различными путями в зависимости от способа, применяемого для введения лекарственного средства. Как правило, изделие для продажи включает контейнер, в котором хранится фармацевтическая композиция в соответствующей форме. Подходящие контейнеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают такие материалы, как бутылки (пластмассовые или стеклянные), пакеты-саше, ампулы, полимерные пакеты, металлические цилиндры и тому подобное. Контейнер может также включать укупорочное средство с индикацией вскрытия, чтобы предотвратить неосторожный доступ к содержимому упаковки. Дополнительно на контейнер нанесена этикетка, на которой описано содержимое контейнера. Этикетка может также содержать соответствующие предостережения.
Фармацевтические препараты соединений по настоящему изобретения можно готовить для различных путей и типов введения. Например, соединение формулы I, имеющее желаемую степень чистоты, может быть необязательно смешано с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.) в форме лиофилизированного препарата, измельченного порошка или водного раствора. Получение препарата может быть выполнено путем смешивания при температуре окружающей среды, при соответствующем рН и при желаемой степени чистоты с физиологически приемлемыми носителями, то есть носителями, нетоксичными для реципиентов при применяемых дозировках и концентрациях. рН препарата, в основном, зависит от конкретного применения и от концентрации соединения, но может находиться в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 8. Подходящее воплощение изобретения представляет собой препарат в ацетатном буфере при рН5.
Соединение обычно можно хранить в виде твердой композиции, лиофилизированного препарата или в виде водного раствора.
Фармацевтические композиции по изобретению включают в препараты, дозируют и вводят способом, то есть в количествах, концентрациях, режимах, курсах, растворителях и пути введения, согласованным с надлежащей медицинской практикой. Факторы, учитываемые в данном контексте, включают конкретное расстройство, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину расстройства, сайт доставки агента, способ введения, режим введения и другие факторы, известные практикующим медицинским работникам. «Терапевтически эффективное количество» соединения, которое следует вводить, регулируется такими соображениями и представляет собой минимальное количество, необходимое для улучшения или лечения гиперпролиферативного расстройства.
В качестве общего предположения, первоначальное фармацевтически эффективное количество ингибитора, вводимое парентерально на дозу, находится в диапазоне приблизительно 0,01-100 мг/кг, в частности, приблизительно 0,1-20 мг/кг массы тела пациента в сутки, причем, характерный применяемый первоначальный диапазон дозы соединения составляет от 0,3 до 15 мг/кг/сутки.
Приемлемые разбавители, носители, эксципиенты и стабилизаторы нетоксичны для реципиентов при применяемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включающие аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты, такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензетония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и мета-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включающие глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА); сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Ζn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как Твин™, Плюроники™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Активные фармацевтические ингредиенты могут быть также заключены в подготовленные микрокапсулы, например, с помощью методов коацервации или полимеризации на границе раздела фаз, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли-(метилметакрилат) микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методы раскрыты в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
Можно готовить препараты соединений формулы I пролонгированного высвобождения. Подходящие примеры препаратов пролонгированного высвобождения включают полупроницаемые матриксы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие соединение формулы I, которые находятся в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриксов пролонгированного высвобождения включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтил-метакрилат) или поливиниловый спирт), полилактиды (US 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, неразлагаемые сополимеры этилена и винилацетата, разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как Люпрон депо™ (инъекционные микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты и люпролида ацетата), и поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту.
Препараты включают препараты, подходящие для путей введения, подробно описанных в данном изобретении. Препараты могут быть для удобства представлены в стандартной дозируемой форме, и их можно готовить любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Общее описание методов и препаратов можно найти в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Такие способы включают стадию приведения в контакт активного ингредиента с носителем, состоящим из одного или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, препараты готовят путем однородного и тщательного приведения в контакт активного ингредиента с жидкими носителями, либо с тонкоизмельченными твердыми носителями, либо с обоими видами носителей с последующим формованием препарата при необходимости.
Препараты соединения формулы I, подходящие для перорального введения, можно готовить в виде дискретных единиц, таких как пилюли, капсулы, крахмальные облатки или таблетки, каждая из которых содержит предопределенное количество соединения формулы I. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящем аппарате активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть получены путем формования в подходящем аппарате смеси порошкообразного активного ингредиента, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрыты или помечены риской, и их необязательно готовят таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение из них активного ингредиента. Для перорального применения можно готовить таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, например, желатиновые капсулы, сиропы или эликсиры. Препараты соединений формулы I, предназначенные для перорального применения, можно готовить в соответствии с любым способом получения фармацевтических композиций, известным в данной области техники, и такие композиции могут содержать один или более агентов, включающих подсластители, корригенты, красящие вещества и консерванты, в целях обеспечения приятного на вкус препарата. Приемлемыми являются таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым эксципиентом, подходящим для получения таблеток. Эти носители могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия; гранулирующие агенты и разрыхлители, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие вещества, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми, либо могут быть покрыты известными методами, включающими микроинкапсуляцию, для замедления разрыхления и всасывания в желудочно-кишечном тракте, и, следовательно, обеспечивают пролонгированное действие в течение более продолжительного периода. Например, можно использовать вещество, замедляющее время высвобождения, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, отдельно или с воском.
Для лечения глаза или других наружных тканей, например, полости рта и кожи, препараты предпочтительно наносят в виде местной мази или крема, где эти формы содержат активный ингредиент(ы) в количестве, составляющем, например, от 0,075 до 20 масс. %. При включении в препарат в виде мази активные ингредиенты можно применять либо с парафиновой, либо с несмешиваемой с водой мазевой основой. Альтернативно активные ингредиенты можно включать в препарат в виде крема с кремовой основой, представляющей собой эмульсию масло-в-воде. При желании водная фаза кремовой основы может включать многоатомный спирт, то есть спирт, имеющий две или более гидроксильных групп, такой как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая ПЭГ 400) и их смеси. В местные препараты можно при желании включать соединение, усиливающее абсорбцию или проницаемость активного ингредиента через кожу или другие пораженные области. Примеры таких усилителей кожной проницаемости включают диметилсульфоксид и родственные аналоги. Масляная фаза эмульсий по данному изобретению может быть составлена из известных ингредиентов известным способом. Хотя данная фаза может содержать только эмульгатор, она желательно включает смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом, либо и с жиром, и с маслом. Предпочтительно гидрофильный эмульгатор включают вместе с липофильным эмульгатором, действующим как стабилизатор. Также предпочтительно включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) или без стабилизатора составляют так называемый эмульгирующий воск, и этот воск вместе с маслом и жиром составляет так называемую эмульсионную мазевую основу, образующую масляную дисперсную фазу препаратов в виде крема. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсий, подходящие для применения в препарате по изобретению, включают Твин 60, Span 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.
Водные суспензии соединений формулы I содержат активные вещества в смеси с эксципиентами, подходящими для получения водных суспензий. Такие эксципиенты включают суспендирующий агент, такой как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, кроскармелоза, повидон, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь, и диспергирующие или увлажняющие агенты, такие как природный фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, образованным из жирной кислоты и ангидрида гексита (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия может также содержать один или более консервантов, таких как этил- или н-пропил-пара-гидроксибензоат, одно или более красящих веществ, один или более корригентов и один или более подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
Фармацевтические композиции соединений формулы I могут находиться в форме стерильного инъекционного препарата, такого как стерильная инъекционная водная или масляная суспензия. Эту суспензию можно готовить в соответствии с тем, что известно в данной области техники, используя такие подходящие диспергирующие или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты, как упомянуто выше. Стерильный инъекционный препарат может также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном, парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле, либо его готовят в виде лиофилизированного порошка. Среди приемлемых основ и растворителей, которые можно использовать, находятся следующие вещества: вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспензионной среды можно традиционно использовать стерильные фиксированные масла. Для данной цели можно использовать любое легкое фиксированное масло, включающее синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при получении инъекционных препаратов можно также использовать жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Количество активного ингредиента, которое можно объединять с веществом-носителем для получения однократной дозируемой формы, варьирует в зависимости от хозяина, подлежащего лечению, и от конкретного способа введения. Например, препарат медленного высвобождения, предназначенный для перорального введения людям, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного вещества, смешанного с подходящим и удобным количеством вещества-носителя, которое может варьировать от приблизительно 5 до приблизительно 95% суммарных композиций (масс.:масс.). Фармацевтическую композицию можно готовить таким образом, чтобы обеспечить легко измеряемые количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенной инфузии, может содержать приблизительно от 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора, чтобы инфузия подходящего объема могла происходить со скоростью приблизительно 30 мл/ч.
Препараты, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, делающие препарат изотоническим с кровью предназначенного реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.
Препараты, подходящие для местного введения в глаз, также включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в частности, в водном растворителе, для активного ингредиента. Активный ингредиент в таких препаратах предпочтительно находится при концентрации, составляющей приблизительно от 0,5 до 20 масс. %, например, приблизительно от 0,5 до 10 масс. %, например, приблизительно 1,5 масс. %.
Препараты, подходящие для местного введения в полость рта, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в корригентной основе, обычно представляющей собой сахарозу и аравийскую камедь или трагакант; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и аравийская камедь; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
Препараты для ректального введения могут быть представлены в виде суппозитория с подходящей основой, включающей, например, масло какао или салицилат.
Препараты, подходящие для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, находящийся, например, в диапазоне от 0,1 до 500 микрон (включая размеры частиц в диапазоне от 0,1 до 500 микрон с приращениями микрон, составляющими, например, 0,5, 1, 30 микрон, 35 микрон и т.д.), которые вводят путем быстрого вдыхания через носовой проход или путем вдыхания через рот, таким образом, чтобы они могли достичь альвеолярных мешочков. Подходящие препараты включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Препараты, подходящие для введения аэрозоля или сухого порошка, могут быть получены в соответствии с традиционными способами и могут быть доставлены с другими терапевтическими средствами, такими как соединения, до настоящего времени применяемые при лечении или профилактике расстройств, как описано ниже.
Препараты, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или распыляемых препаратов, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны как целесообразные в данной области техники.
Препараты могут быть упакованы в контейнеры однократной дозы или многократных доз, например, в запаянные ампулы и флаконы, и могут храниться в высушенном вымораживанием (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии, приготовленные для немедленного применения, готовят из стерильных порошков, гранул и таблеток описанного выше вида. Предпочтительные стандартные дозируемые препараты представляют собой препараты, содержащие суточную дозу или однократную суточную субдозу активного ингредиента, как указано выше в данном описании, либо ее соответствующую часть.
В изобретении дополнительно предложены ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный ингредиент, как определено выше, вместе с их ветеринарным носителем. Ветеринарные носители представляют собой вещества, полезные для целей введения композиции, и могут представлять собой твердые, жидкие или газообразные вещества, в остальном являющиеся инертными или приемлемыми в области ветеринарии и совместимыми с активным ингредиентом. Эти ветеринарные композиции можно вводить парентерально, перорально или любым другим желаемым путем.
КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ
Соединения формулы I можно применять отдельно или в комбинации с другими терапевтическими средствами для лечения заболевания или расстройства, описанного в данном изобретении, такого как воспаление или гиперпролиферативное расстройство (например, рак). В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I объединяют в комбинированном фармацевтическом препарате или в режиме дозирования в виде комбинированной терапии с дополнительным, вторым терапевтическим соединением, обладающим противовоспалительными или гипопролиферативными свойствами, или с соединением, полезным для лечения воспаления, расстройства иммунного ответа или гиперпролиферативного расстройства (например, рака). Дополнительное терапевтическое средство может представлять собой противовоспалительное средство, иммуномодулирующее средство, химиотерапевтическое средство, усилитель апоптоза, нейротропный фактор, средство для лечения сердечно-сосудистого заболевания, средство для лечения заболевания печени, противовирусное средство, средство для лечения расстройств крови, средство для лечения диабета и средство для лечения иммунодефицитных расстройств. Второе терапевтическое средство может представлять собой нестероидный противовоспалительный препарат (НПВП). Второе терапевтическое средство может представлять собой химиотерапевтическое средство. Второе соединение комбинированного фармацевтического препарата или режима дозирования предпочтительно обладает активностями, комплементарными активностям соединения формулы I, таким образом, чтобы они не оказывали вредного действия друг на друга. Такие соединения целесообразно находятся в комбинации в количествах, эффективных для предназначенной цели. В одном воплощении изобретения композиция по данному изобретению содержит соединение формулы I или его стереоизомер, таутомер, сольват, метаболит, либо фармацевтически приемлемую соль или пролекарство, в комбинации с терапевтическим средством, таким как НПВП.
Комбинированную терапию можно вводить в виде одновременного или последовательного режима. При одновременном введении комбинацию можно вводить за два или более введений. Комбинированное введение включает совместное введение с применением отдельных препаратов или в едином фармацевтическом препарате, и последовательное введение в любом порядке, где предпочтительно существует период времени, когда оба (или все) активных агента одновременно проявляют свои биологические активности.
Подходящие дозировки для любого из вышеописанных совместно вводимых средств представляют собой дозировки, применяемые в настоящее время, и могут быть снижены за счет комбинированного действия (синергизма) нового идентифицированного средства и других терапевтических средств или методов лечения.
Комбинированная терапия может обеспечивать «синергизм» и оказаться «синергетической», то есть эффект, достигаемый при совместном применении активных ингредиентов, выше, чем сумма эффектов, полученных в результате применения этих соединений по отдельности. Синергетический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты: (1) включают в совместный препарат и вводят или доставляют одновременно в комбинированном стандартном дозируемом препарате; (2) доставляют путем чередования или параллельно в виде отдельных препаратов или (3) с помощью какого-либо другого режима. При доставке в виде чередующейся терапии синергетический эффект может быть достигнут, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например, с помощью различных инъекций в отдельных шприцах, отдельных пилюль или капсул или отдельных инфузий. Как правило, во время чередующейся терапии эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, то есть серийно, тогда как при комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят совместно.
В конкретном воплощении терапии соединение формулы I или его стереоизомер, таутомер, сольват, метаболит, либо фармацевтически приемлемую соль или пролекарство можно комбинировать с другими терапевтическими, гормональными или антительными средствами, такими как раскрыто в данном изобретении, а также комбинировать с хирургическим лечением и радиотерапией. Таким образом, комбинированные терапии согласно настоящему изобретению включают введение по меньшей мере одного соединения формулы I или его стереоизомера, таутомера, сольвата, метаболита, либо фармацевтически приемлемой соли или пролекарства и применение по меньшей мере одного другого способа лечения рака. Количества соединения (соединений) формулы I и другого фармацевтически активного терапевтического средства (средств) и относительное время введения выбрано с целью достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта.
МЕТАБОЛИТЫ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I
В объем данного изобретения также входят продукты метаболизма in vivo соединений формулы I, раскрытых в данном изобретении. Такие продукты могут являться результатом, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления введенного соединения и тому подобного. Соответственно, изобретение включает метаболиты соединений формулы I, включающие соединения, полученные способом, при котором соединение по данному изобретению приводят в контакт с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения продукта его метаболизма.
14
3
Продукты метаболизма в характерном случае идентифицируют путем получения радиоактивно-меченого (например, С или Н) изотопа соединения по изобретению, его введения парентерально в определяемой дозе (например, большей, чем приблизительно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, предоставления достаточного времени для прохождения метаболизма (в характерном случае приблизительно от 30 секунд до 30 часов) и выделения продуктов его преобразования из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты легко выделяются, поскольку они являются мечеными (другие выделяют с использованием антител, способных к связыванию эпитопов, сохраняющихся в метаболите). Структуры метаболитов определяют традиционным путем, например, с помощью масс-спектрометрии (МС), жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХ/МС) или анализа ядерно-магнитного резонанса (ЯМР). Как правило, анализ метаболитов проводят таким же путем, как традиционные исследования метаболизма лекарственных средств, хорошо известные специалистам в данной области техники. Продукты метаболизма, если иначе они не обнаруживаются in vivo, полезны в диагностических анализах для терапевтического дозирования соединений по изобретению.
ИЗДЕЛИЯ
В другом воплощении изобретения предложено изделие или «набор», содержащий материалы, полезные для лечения заболеваний и расстройств, описанных выше. В одном воплощении изобретения набор включает контейнер, содержащий соединение формулы I или его стереоизомер, таутомер, сольват, метаболит, либо фармацевтически приемлемую соль или пролекарство. Набор может дополнительно включать этикетку или инструкцию по применению, находящуюся на контейнере или связанную с ним. Термин «инструкция по применению» используют для отнесения к инструкциям, обычно включенным в имеющиеся в продаже упаковки терапевтических препаратов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предостережениях, касающихся применения таких терапевтических препаратов. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, блистерную упаковку и т.д. Контейнер может быть изготовлен из различных материалов, таких как стекло или полимер. Контейнер может содержать соединение формулы I или его препарат, эффективный для лечения состояния, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенных инъекций или флакон, имеющий пробку, прокалываемую подкожной инъекционной иглой). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой соединение формулы I. На этикетке или в инструкции по применению указано, что композицию применяют для лечения выбранного состояния, такого как рак. Кроме того, на этикетке или в инструкции по применению может быть указано, что пациент, подлежащий лечению, представляет собой пациента, страдающего расстройством, таким как гиперпролиферативное расстройство, нейродегенерация, сердечная гипертрофия, боль, мигрень или нейротравматическое заболевание или несчастный случай. В одном воплощении изобретения на этикетках или в инструкциях по применению может быть указано, что композицию, содержащую соединение формулы I, можно применять для лечения расстройства, являющегося результатом аномального клеточного роста. На этикетке или в инструкции по применению может быть также указано, что композицию можно применять для лечения других расстройств. Альтернативно или дополнительно изделие может дополнительно включать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (БВДИ), фосфатно-солевой буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Оно может дополнительно включать другие материалы, желательные с коммерческой и потребительской точки зрения, включающие другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Набор может дополнительно содержать указания по введению соединения формулы I и второй фармацевтический препарат, если он присутствует. Например, если набор включает первую композицию, содержащую соединение формулы I, и второй фармацевтический препарат, этот набор может дополнительно включать указания по одновременному, последовательному или отдельному введению первой и второй фармацевтических композиций пациенту, нуждающемуся в этом.
В другом воплощении изобретения наборы подходят для доставки твердых пероральных форм соединения формулы I, таких как таблетки или капсулы. Такой набор предпочтительно включает ряд стандартных доз. Такие наборы могут включать карту, на которую нанесены дозы в порядке их предназначенного применения. Примером такого набора является «блистерная упаковка». Блистерные упаковки хорошо известны в упаковочной промышленности и широко применяются для упаковки фармацевтических стандартных дозируемых форм. При желании может быть предложена памятка, например, в форме чисел, букв или других маркировок, или с календарным вкладышем, на котором обозначены сутки в режиме лечения, на которые можно вводить дозы.
Согласно одному воплощению изобретения набор может содержать следующие компоненты: (а) первый контейнер с содержащимся в нем соединением формулы I; и необязательно (b) второй контейнер с содержащимся в нем вторым фармацевтическим препаратом, где второй фармацевтический препарат содержит второе соединение, обладающее гипопролиферативной активностью. Альтернативно или дополнительно набор может дополнительно содержать третий контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (БВДИ), фосфатно-солевой буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Он может дополнительно содержать другие материалы, желательные с коммерческой и потребительской точки зрения, включающие другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
В некоторых других воплощениях изобретения, где набор содержит композицию соединения формулы I и второе терапевтическое средство, этот набор может содержать контейнер для содержания отдельных композиций, такой как разделенная бутылка или разделенный пакет из фольги, тем не менее, отдельные композиции могут также содержаться в едином, неразделенном контейнере. В характерном случае набор включает указания по введению отдельных компонентов. Форма набора, в частности, предпочтительна, когда отдельные компоненты, предпочтительно вводимые в различных дозируемых формах (например, пероральной и парентеральной), вводят через различные интервалы дозирования, или когда для лечащего врача желательно титрование индивидуальных компонентов комбинации.
ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I
Соединения формулы I можно синтезировать с помощью путей синтеза, включающих способы, аналогичные хорошо известным в области химии, в частности, в свете описания, содержащегося в данном изобретении, а также с помощью путей синтеза других гетероциклов, описанных в следующих документах: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, например, том 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12): 1328-31, (1990), каждый из которых явным образом включен путем ссылки. Исходные вещества в целом доступны из коммерческих источников, таких как Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI), либо их легко получают, используя способы, хорошо известные специалистам в данной области техники (например, получают способами, в целом описанными в следующих документах: Louis F. Fieser and Магу Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), или Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, включая приложения (также доступных посредством базы данных онлайн Beilstein)).
rd
Преобразования химии синтеза и методологии защитных групп (защита и удаление защиты), полезные при синтезе соединений формулы I, а также необходимые реагенты и промежуточные соединения известны в данной области техники и включают, например, описанные в следующих документах: R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3 Ed., John Wiley and Sons (1999); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) и их последующих изданиях.
Соединения формулы I могут быть получены по отдельности или в виде библиотек соединений, содержащих по меньшей мере 2, например, от 5 до 1000 соединений или от 10 до 100 соединений. Библиотеки соединений формулы I могут быть получены комбинаторным методом 'разделения и соединения' или с помощью множественных параллельных синтезов, используя либо жидкофазную, либо твердофазную химию, методами, известными специалистам в данной области техники. Таким образом, согласно следующему аспекту изобретения предложена библиотека соединений, содержащая по меньшей мере 2 соединения или их фармацевтически приемлемые соли.
В графических материалах и в Примерах предложены иллюстративные способы получения соединений формулы I. Специалистам в данной области техники понятно, что для синтеза соединений формулы I можно использовать другие пути синтеза. Хотя в графических материалах и в Примерах изображены и обсуждены определенные исходные вещества и реагенты, их можно легко заменить другими исходными веществами и реагентами с получением разнообразных производных и/или условий реакции. Кроме того, многие из иллюстративных соединений, полученных описанными способами, можно дополнительно модифицировать в свете данного описания, используя традиционную химию, хорошо известную специалистам в данной области техники.
При получении соединений формулы I может быть необходима защита удаленной функциональной группы (например, первичного или вторичного амина) промежуточных соединений. Необходимость в такой защите варьирует в зависимости от природы удаленной функциональной группы и условий способов получения. Подходящие амино-защитные группы включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (ВОС), бензилоксикарбонил (CBz) и 9-флуореенилметиленоксикарбонил (Fmoc). Необходимость в такой защите легко определяется специалистами в данной области техники. Общее описание защитных групп и их применения см. в книге Т.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
Экспериментальные методы, промежуточные соединения и реагенты, полезные для получения соединений формулы I, можно найти в заявке на патент US, серийный №13/102720, ''PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE'', поданной 6 мая 2011, полностью включенной посредством ссылки.
На фиг. 1-14 описан синтез иллюстративных воплощений соединений формулы I 101-115, которые более полно описаны в Примерах 101-124 и могут быть полезны для получения других соединений формулы I.
ОБЩИЕ МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ
Общий метод: Сочетание Сузуки
Реакция сочетания по типу Сузуки полезна для образования углерод-углеродных связей для присоединения колец соединений формулы I и промежуточных соединений, таких как А-3 (Suzuki (1991) Pure Appl. Chem. 63:419-422; Miyaura and Suzuki (1979) Chem. Reviews 95(7):2457-2483; Suzuki (1999) J. Organometal. Chem. 576:147-168). Сочетание Сузуки представляет собой опосредованную палладием реакцию кросс-сочетания гетероарилгалогенида, такого как В-2 или В-4, с бороновой кислотой, такой как А-1 или А-2. Например, В-2 можно объединять приблизительно с 1,5 эквивалентами 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) и растворять приблизительно в 3 эквивалентах карбоната натрия в виде 1 молярного раствора в воде и равном объеме ацетонитрила. Добавляют каталитическое или большее количество палладиевого реагента низкой валентности, такого как бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид. В некоторых случаях вместо карбоната натрия используют ацетат калия, чтобы регулировать рН водного слоя. Затем реакционную смесь нагревают приблизительно до 140-150°C под давлением в микроволновом реакторе (Biotage АВ, Uppsala, Sweden) в течение от 10 до 30 минут. Содержимое экстрагируют этилацетатом или другим органическим растворителем. После выпаривания органического слоя бороновый сложный эфир А-1 можно очищать на силикагеле или с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой. Заместители являются такими, как определено, или представляют собой их защищенные формы или предшественники. Аналогично бромидное промежуточное соединение В-4 можно боронилировать с получением А-2.
В результате сочетания Сузуки В-2 и А-2 или А-1 и В-4 получают соединение формулы I или промежуточное соединение А-3. Бороновый эфир (или кислоту) (1,5 экв.) А-1 или А-2 и палладиевый катализатор, такой как бис(трифенилфосфин)палладия(II) хлорид (0,05 экв.), добавляют к смеси галогено-промежуточного соединения (1 экв.) В-2 или В-4 в ацетонитриле и 1 Μ водного раствора карбоната натрия (объем, равный объему ацетонитрила). Реакционную смесь нагревают приблизительно до 150°C в микроволновой печи в течение приблизительно 15 мин. ЖХ/МС показывает, когда реакция завершена. К смеси добавляют воду, и осажденный продукт фильтруют и очищают с помощью ВЭЖХ с получением продукта А-3. Заместители являются такими, как определено, или представляют собой их защищенные формы.
2
3
2
3
2
2
2
3
4
3
2
3
2
2
2
2
2
2
2
2
3
2
2
3
3
2
3
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
6
6
3
2
2
2
2
2
2
2
На стадии сочетания Сузуки можно использовать разнообразные палладиевые катализаторы. В реакции сочетания Сузуки можно использовать различные катализаторы низкой валентности, Pd(II) и Pd(0), включающие PdCl(PPh), Pd(t-Bu), PdCl dppf CHCl, Pd(PPh), Pd(OAc)/PPh, ClPd[(Pet)], Pd(DIPHOS), ClPd(Bipy), [PdCl(PhPCHPPh)], ClPd[P(o-tol)], Pd(dba)/P(o-tol), Pd(dba)/P(фурил), ClPd[P(фурил)], ClPd(PMePh), ClPd[P(4-F-Ph)], ClPd[P(CF)], ClPd[P(2-COOH-Ph)(Ph)], ClPd[P(4-COOH-Ph)(Ph)], и инкапсулированные катализаторы Pd EnCat™ 30, Pd EnCat™ TPP30 и Pd(ll)EnCat™ BINAP30 (US 2004/0254066).
Общий метод: Реакция Бухвальда
5
2
2
3
2
3
Реакция Бухвальда полезна для аминирования промежуточных 6-бром-соединений В-1 (Wolf and Buchwald (2004) Org. Synth Coll. Vol.10:423; Paul et al (1994) Jour. Amer. Chem. Soc. 116:5969-5970). К раствору галогено-промежуточного соединения В-1 в ДМФ добавляют соответствующий амин R-NH (200 моль%), CsCO (50 моль%), Pd(dba) (5 моль%) и 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен (Ксантфос, регистрационный № CAS 161265-03-8, 10 моль%). Реакционную смесь нагревают до приблизительно 110°C под давлением в микроволновом реакторе (Biotage АВ, Uppsala, Sweden) в течение приблизительно 30 мин. Полученный в результате раствор концентрируют в вакууме с получением В-2. Могут быть полезны другие палладиевые катализаторы и фосфиновые лиганды.
7
Ν-Гетероариламидные промежуточные соединения В-4 могут быть также получены в условиях реакции Бухвальда с циклическими амидными промежуточными соединениями (R), такими как 3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 101g, и гетероарилдибромидами В-3.
СПОСОБЫ РАЗДЕЛЕНИЯ
В способах получения соединений формулы I может быть предпочтительным отделить продукты реакции друг от друга и/или от исходных веществ. Желаемые продукты каждой стадии или серии стадий отделяют и/или очищают до желаемой степени гомогенности методами, общеизвестными в данной области техники. В характерном случае такие разделения включают многофазную экстракцию, кристаллизацию из растворителя или из смеси растворителей, перегонку, возгонку или хроматографию. Хроматография может включать любое число способов, включающих, например, следующие способы: с обращенной фазой и с нормальной фазой; эксклюзионную; ионообменную; способы и аппараты хроматографии высокого, среднего и низкого давления; маломасштабную аналитическую; хроматографию с псевдодвижущимся слоем (ПДС) и препаративную тонкослойную и толстослойную хроматографию, а также методы маломасштабной тонкослойной и флэш-хроматографии.
Другой класс способов разделения включает обработку смеси реагентом, выбранным таким образом, что он связывает желаемый продукт или иным путем делает его отделяемым от не прореагировавшего исходного вещества, побочного продукта реакции или тому подобного. Такие реагенты включают адсорбенты или абсорбенты, такие как активированный углерод, молекулярные сита, ионообменные среды или тому подобное. Альтернативно реагенты могут представлять собой кислоты в случае основного вещества, основания в случае кислого вещества, связывающие реагенты, такие как антитела, связывающие белки, селективные хелаторы, такие как краун-эфиры, реагенты жидкостно-жидкостной ионной экстракции (LIX; от англ. ''liquid/liquid ion extraction'') или тому подобное. Выбор подходящих способов разделения зависит от природы вовлеченных веществ, например, от температуры кипения и молекулярной массы при перегонке и возгонке, присутствия или отсутствия полярных функциональных групп при хроматографии, стабильности веществ в кислых и основных средах при многофазной экстракции и тому подобное.
Диастереомерные смеси можно разделить на их индивидуальные диастереомеры на основании их физико-химических различий способами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как, например, хроматография и/или фракционная кристаллизация. Энантиомеры можно разделить путем преобразования энантиомерной смеси в диастереомерную смесь путем взаимодействия с подходящим оптически активным соединением (например, с хиральным вспомогательным веществом, таким как хиральный спирт или хлорангидрид Мошера), разделения диастереомеров и преобразования (например, гидролиза) индивидуальных диастереоизомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Некоторые из соединений по настоящему изобретению также могут представлять собой атропизомеры (например, замещенные диарилы) и рассмотрены как часть данного изобретения. Энантиомеры можно также разделить путем использования хиральной колонки ВЭЖХ.
Отдельный стереоизомер, например, энантиомер, по существу свободный от его стереоизомера, может быть получен путем разделения рацемической смеси, используя способ, такой как образование диастереомеров с использованием оптически чистых разделяющих агентов (Eliel, Ε. and Wilen, S. ''Stereochemistry of Organic Compounds,'' John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, С.H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302). Рацемические смеси хиральных соединений по изобретению можно разделить и выделить любым подходящим способом, включающим следующие способы: (1) образование ионных, диастереомерных солей с хиральными соединениями и разделение с помощью фракционной кристаллизации или других способов, (2) образование диастереомерных соединений с хиральными дериватизирующими реагентами, разделение диастереомеров и преобразование в чистые стереоизомеры, и (3) выделение по существу чистых или обогащенных стереоизомеров непосредственно в хиральных условиях. См. книгу: ''Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology'' Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).
При способе (1) диастереомерные соли могут быть образованы путем взаимодействия энантиомерно чистых хиральных оснований, таких как бруцин, хинин, эфедрин, стрихнин, α-метил-β-фенилэтиламин (амфетамин) и тому подобное, с асимметрическими соединениями, несущими кислотную функциональную группу, такую как карбоновая кислота и сульфоновая кислота. Индуцировать разделение диастереомерных солей можно путем фракционной кристаллизации или ионной хроматографии. Для разделения оптических изомеров аминосоединений присоединение хиральных карбоновых или сульфоновых кислот, таких как камфорсульфоновая кислота, винная кислота, миндальная кислота или молочная кислота, может привести в результате к образованию диастереомерных солей.
1
Альтернативно посредством способа (2) субстрат, подлежащий разделению, подвергают взаимодействию с одним энантиомером хирального соединения с образованием диастереомерной пары (Е. and Wilen, S. «Stereochemistry of Organic Compounds», John Wiley & Sons, Inc., 1994, p.322). Диастереомерные соединения могут быть образованы путем взаимодействия асимметрических соединений с энантиомерно чистыми хиральными дериватизирующими реагентами, такими как производные ментила, с последующим разделением диастереомеров, и гидролиза с получением чистого или обогащенного энантиомера. Способ определения оптической чистоты включает получение хиральных сложных эфиров, таких как ментиловый эфир, например, (-) ментилхлорформиат, в присутствии основания или сложного эфира Мошера, α-метокси-α-(трифторметил)фенилацетата (Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165), рацемической смеси и анализ спектра Н ЯМР на присутствие двух атропизомерных энантиомеров или диастереомеров. Стабильные диастереомеры атропизомерных соединений можно разделить и выделить с помощью хроматографии с нормальной и обращенной фазой, следуя способам разделения атропизомерных нафтилизохинолинов (WO 96/15111). Посредством способа (3) рацемическую смесь двух энантиомеров можно разделить с помощью хроматографии, используя хиральную стационарную фазу («Chiral Liquid Chromatography» (1989) W.J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378). Обогащенные или очищенные энантиомеры можно различить способами, используемыми для различения других хиральных молекул с асимметрическими атомами углерода, такими как оптическое вращение и круговой дихроизм.
ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 101а 6-Хлор-8-бромимидазо[1,2-а]пиридин 101а
2
+
1
Смесь 3-бром-5-хлорпиридин-2-амина (10 г, 49 ммоль) и хлорацетальдегида (50% в HO, 12 мл, 98 ммоль) в этаноле (100 мл) нагревали при 50°C в течение ночи. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. К остатку добавляли ацетон (30 мл), и полученную в результате смесь быстро перемешивали в течение 2 ч полученное в результате твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали с получением 101а в виде желтого твердого вещества (10,0 г, 89%). Масс-спектрометрия (МС):[М+Н] 231. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.20 (s, 1 Η), 8.33 (s, 1 Η), 8.29 (s, 1 Η), 8.09 (s, 1 Η).
Пример 101b 6-Хлор-N-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин 101b
2
3
2
3
+
Смесь 101а (2,3 г, 10 ммоль), 5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-амина (1,9 г, 10 ммоль), Ксантфос (576 мг, 1,0 ммоль), Pd(dba) (915 мг, 1,0 ммоль) и CsCO (6,5 г, 20 ммоль) в диоксане (50 мл) нагревали при 100°C в течение 12 ч в атмосфере азота. Затем смесь фильтровали и выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 1:1 этилацетатом/петролейным эфиром, с получением 101b в виде зеленого твердого вещества (1,5 г, 44%). МС:(М+Н)343.
Пример 101с 2,2,2-Трихлор-1-(4,5,6,7-тетрагидро-1H-индол-2-ил)этанон 101с
1
6
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой, холодильником и входом азота, продували азотом и загружали в нее 4,5,6,7-тетрагидро-1Н-индол (3,00 г, 24,8 ммоль), трихлорацетилхлорид (13,5 г, 74,4 ммоль) и 1,2-дихлорэтан (50 мл). Раствор перемешивали при 85°C в течение 2 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 100% выхода (6,50 г) 101 с в виде черного полутвердого вещества: Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 11.94 (s, 1Н), 7.05 (s, 1Н), 2.62 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.47 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.80 (m, 2Н), 1.65 (m, 2Н); МС (ESI+) m/z 266.0 (М+Н).
Пример 101d Этил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-индол-2-карбоксилат 101d
1
3
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 101 с (6,50 г, 24,8 ммоль), этилат натрия (17,0 мг, 0,25 ммоль) и этанол (40 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 100% выхода (4,80 г) 101d в виде коричневого твердого вещества: т.пл. 70-72°C; Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 9.08 (s, 1Н), 6.75 (s, 1Н), 4.25 (q, 2Н, J=7.2 Гц), 2.65 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.56 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.85 (m, 4Н), 1.28 (t, 3Н, J=7.2 Гц); МС (ионизация электрораспылением (ИЭР)+) m/z 194,1 (М+Н).
Пример 101е Этил-1-(цианометил)-4,5,6,7-тетрагидро-1H-индол-2-карбоксилат 101е
1
3
Одногорлую круглодонную колбу на 125 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 101d (5,76 г, 29,8 ммоль) и ДМФ (50 мл). Раствор охлаждали до 0°C, используя ледяную баню. Добавляли NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 1,43 г, 35,8 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого периода времени добавляли бромацетонитрил (1,43 г, 35,8 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток распределяли между этилацетатом (150 мл) и водой (450 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (3×150 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 55% выхода (3,80 г) 101е в виде желтого полутвердого вещества: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 6.66 (s, 1Н), 5.29 (s, 2Н), 4.28 (q, 2Н, J=7.2 Гц), 2.62 (t, 2Н, J=6.3 Гц), 2.49 (t, 2Н, J=6.3 Гц), 1.92 (m, 2Н), 1.75 (m, 2Н), 1.33 (m, 3Н, J=7.2 Гц); МС (ИЭР+) m/z 233.1 (М+Н)
Пример 101f Этил-1-(2-аминоэтил)-4,5,6,7-тетрагидро-1H-индол-2-карбоксилат 101f
1
6
Сосуд реактора Парра на 200 мл продували азотом и загружали в нее 10% палладий на углероде (влажность 50%, сухая масса 1,28 г), 101е (3,00 г, 12,9 ммоль), 12% соляную кислоту (6,5 мл, 25 ммоль), этилацетат (60 мл) и этанол (40 мл). Сосуд присоединяли к аппарату гидрогенизации Парра, откачивали воздух, загружали в нее газ водород до давления 50 psi (344,74 кПа) и перемешивали в течение 6 ч. После этого периода времени водород откачивали, и в сосуд загружали азот. Добавляли фильтрующий агент диатомовую землю (Целлит 521, 4,0 г), и смесь фильтровали через слой целлита 521. Фильтрационный кек промывали этанолом (2×20 мл), и объединенные фильтраты концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток распределяли между этилацетатом (150 мл) и 10% водным раствором карбоната калия (100 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (3×75 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растирали с этанолом (5 мл) с получением 71% выхода (1,71 г) этил-1-(2-аминоэтил)-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-индол-2-карбоксилата 101f в виде белого твердого вещества: т.пл. 102-104°C; Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 6.61 (s, 1Н), 6.22 (br, 2Н), 4.15 (m, 4Н), 2.77 (m, 2Н), 2.59 (t, 2Н, J=6.5 Гц), 2.42 (t, 2Н, J=6.5 Гц), 1.70 (m, 2Н), 1.62 (m, 2Н), 1.23 (t, 3Н, J=7.0 Гц); МС (химическая ионизация атмосферного давления (ХИАД)+) m/z 237,2 (М+Н).
Пример 101g 3,4,6,7,8,9-Гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 101g
1
6
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 101f (1,80 г, 7,63 ммоль), этилат натрия (1,55 г, 22,8 ммоль) и этанол (50 мл). Смесь перемешивали при 55°C в течение 5 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток распределяли между этилацетатом (200 мл) и водой (100 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 42% выхода (605 мг) 101g в виде белого твердого вещества: т.пл. 207-209°C; Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 7.41 (s, 1Н), 6.36 (s, 1Н), 3.84 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 3.42 (m, 2Н), 2.51 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.42 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.76 (m, 2Н), 1.65 (m, 2Н); (ХИАД+) m/z 191,3 (М+Н).
Пример 101h 2,6-Дибром-4-фторбензальдегид 101h
2
3
1
К раствору 1,3-дибром-5-фтор-2-йодбензола (50 г, 132 ммоль) в безводном толуоле (300 мл), охлажденному при -35°C, добавляли раствор изопропилмагния хлорида (84 мл, 171 ммоль, 2,0 Μ в EtO) в течение 30 минут, поддерживая при этом внутреннюю температуру ниже -25°C. Получили прозрачный коричневый раствор, и перемешивание продолжали в течение 1,5 ч при -25°C. Затем добавляли безводный ДМФ (34 мл, 436 ммоль) в течение периода 30 минут. Реакционную смесь подогревали до 10°C (комнатной температуры) в течение 1 ч и перемешивали при этой температуре в течение 1,5 ч. Затем ее гасили 3,0 Μ HCl с последующим добавлением этилацетата. Органический слой отделяли и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя петролейным эфиром/этилацетатом (от 50:1 до 20:1) с получением 101h в виде белого твердого вещества (20 г, 54%). Н ЯМР (500 МГц, CDCl) δ 10.23 (s, 1 Η), 7.48 (d, J=7.5, 2H).
Пример 101i (2,6-Дибром-4-фторфенил)метанол 101i
4
2
4
6
+
1
К раствору 101h (20 г, 71 ммоль) в EtOH (500 мл) добавляли NaBH (10 г, 284 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре (10°C) в течение 4 ч, и тонкослойная хроматография (ТСХ) показала исчезновение исходного вещества. Реакционную смесь гасили добавлением раствора HCl (150 мл, 1 М) и выпаривали в вакууме до отгонки большей части EtOH. Остаток экстрагировали этилацетатом (500 мл×3). Органические слои объединяли, высушивали NaSO и выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя петролейным эфиром/этилацетатом (от 50:1 до 20:1) с получением 101i в виде белого твердого вещества (15 г, 75%). МС:[М-ОН]267. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 7.68 (d, J=8.5, 2Н), 5.23 (s, 1Н), 4.71 (s, 2Н).
Пример 101i 2,6-Дибром-4-фторбензилацетат 101j
2
2
3
+
1
К раствору 101i (20 г, 71 ммоль) в CHCl (500 мл) при 0°C добавляли пиридин (8,4 г, 107 ммоль) и ацетилхлорид (8,3 г, 107 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. ТСХ показала исчезновение исходного вещества. Реакционную смесь выпаривали в вакууме, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя петролейным эфиром/этилацетатом (от 50:1 до 20:1), с получением 101j в виде белого твердого вещества (20 г, 87%). МС:[М-ОАС]267. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 7.36 (d, J=7.5, 2Н), 5.38 (s, 2Н), 2.10 (s, 3Н).
Пример 101k 2-Бром-4-фтор-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)бензилацетат 101k
2
3
2
6
+
1
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой, загружали 101g (3,8 г, 20 ммоль), 101j (20 г, 60 ммоль), Ксантфос (1,2 г, 2 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (1,8 г, 2 ммоль), CsCO (16 г, 50 ммоль) и 1,4-диоксан (120 мл). Из системы откачивали воздух, а затем снова заполняли N. К колбе присоединяли обратный холодильник, и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной флэш-хроматографией, элюируя 5:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 101k в виде белого твердого вещества (5,2 г, 60%). МС:[М+Н]435. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 7.70 (dd, J=3, 1Н), 7.48 (dd, J=3, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.01 (m, 2H), 4.18 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.73 (m, 1H), 2.60 (m, 2H), 2.45 (m, 2H), 1.98 (s, 3Н), 1.77 (m, 2 Η), 1.68 (m, 2H).
Пример 101l 4-Фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101I
2
2
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой, загружали в нее 101k (3,8 г, 8,65 ммоль), (PinB) (11 г, 43,25 ммоль), Pd(dppf)Cl (0,4 г, 0,5 ммоль), КОАс (2,5 г, 26 ммоль) и 1,4-диоксан (150 мл). Из системы откачивали воздух, а затем снова заполняли N. К колбе присоединяли обратный холодильник, и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 15 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной флэш-хроматографией, элюируя 5:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 101I в виде желтого твердого вещества (3,2 г, 77%). МС:[М+Н]483.
Пример 101 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 101
2
3
2
3
3
2
4
3
3
+
1
В запаянную трубку на 25 мл загружали 101b (300 мг, 0,88 ммоль), 101I (423 мг, 0,88 ммоль), CsCO (572 мг, 1,76 ммоль), Pd(dba) (80 мг, 0,09 ммоль), суспендированный в CHCN (25 мл), и HO (1 мл). Смесь нагревали при 140°C при микроволновом облучении в течение 1 часа. Затем ее выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 10:1 метиленхлоридом/метанолом, с получением неочищенного продукта, который дополнительно очищали на колонке Combi-flash с обращенной фазой, элюируя 0,3% NHHCO в 1:4 воде/CHCN, с получением 101 в виде желтого твердого вещества (150 мг, 28%). МС:(М+Н)621. Η ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 8.94 (s, 1Η), 8.27 (d, J=1.5, 1H), 8.16 (d, J=1.5, 1H), 7.96 (d,J=1.0, 1H), 7.91 (d, J=2.5, 1H), 7.58 (d, J=1.5, 1H), 7.33-7.42 (m, 3H), 7.25-7.28 (m, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.88 (t, J=4.5, 1 H), 4.30 (d, J=4.5, 2H), 4.12-4.20 (m, 3H), 3.90-3.92 (m, 1H), 3.06 (t, J=4.5, 4H), 2.53-2.65 (m, 2H), 2.43-2.48 (m, 6H), 2.21 (s, 3H), 1.76-1.81 (m, 2H), 1.67-1.71 (m, 2H).
Пример 102a трет-Бутил-4-(6-(6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-8-иламино)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 102а
2
3
2
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (60 мл), трет-бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат (1,5 г, 5,39 ммоль), 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин 101а (3,7 г, 16,18 ммоль) и карбонат цезия (3,52 г, 10,79 ммоль). Добавляли Ксантфос (312 мг, 0,539 ммоль) и Pd(dba) (494 мг, 0,539 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч в атмосфере азота. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на флэш-колонке, элюируя 100:1 CHCl/MeOH, с получением 102а (1,8 г, 78%). МС:[М+Н]429.
Пример 102b 6-Хлор-N-(5-(пиперазин-1-ил)пиридине-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин 102b
+
Соединение 102а (1,75 г, 4,08 ммоль) суспендировали в 4,0 Μ HCl/диоксане (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Затем ее концентрировали при пониженном давлении с получением 102b (1,2 г, 81%). МС:[М+Н]329.
Пример 102с 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин 102с
3
2
2
2
+
Смесь 102b (0,773 г, 1,75 ммоль), оксетан-3-она (0,189 г, 2,62 ммоль), NaBHCN (0,22 г, 3,5 ммоль) и хлорида цинка/EtO (3,5 мл, 3,5 ммоль) в метаноле (40 мл) перемешивали при 50-60°C в течение 5 часов. Твердое вещество удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией, элюируя 5:1 CHCl/метанолом, с получением 102с (200 мг, 30%). МС:[М+Н]385.
Пример 102 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 102
2
2
3
2
3
+
1
К раствору 102с (180 мг, 0,468 моль) в диоксане/HO (12 мл/1 мл) добавляли 2-(5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 101I (225 мг, 0,468 ммоль), Pd(dba) (43 мг, 0,0468 ммоль), трициклогексилфосфин (131 мг, 0,468 ммоль) и CsCO (305 мг, 0,935 ммоль). Эту смесь нагревали в микроволновом реакторе при 140°C в течение 1 ч. Затем твердое вещество фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением желтого твердого вещества, которое дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 102 в виде белого твердого вещества (36 мг, 11%). Жидкостная хроматография с масс-спектрометрией (ЖХМС):[М+Н]663. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 8.53 (d, J=2.5, 1Н), 8.27 (s, 1Н), 8.16 (s, 1Н), 7.95 (s, 1Н), 7.92-7.91 (d, J=2.5, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.36-7.33 (m, 1H), 7.27-7.25 (d, J=9, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.88-4.86 (t, J=9, 1H), 4.57-4.54 (m, 2H), 4.47-4.45 (m, 2H), 4.31-4.30 (d, J=4.5, 2H), 4.18-4.13 (m, 3H), 3.92-3.90 (m, 1H), 3.45-3.42 (m, 1H), 3.09-3.10 (m, 4H), 2.64-2.54 (m, 2H), 2.47-2.45 (m, 2H), 2.39-2.38 (m, 4H), 1.79-1.78 (m, 2H), 1.69-1.67 (m, 2H).
Пример 103a N-Метокси-N-метил-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-карбоксамид 103a
1
3
Одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой, продували азотом, загружали в нее 4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-карбоновую кислоту (3,00 г, 16,5 ммоль), метиленхлорид (80 мл) и ДМФ (60 мг, 0,825 ммоль) и охлаждали до 0°C. К полученному в результате раствору добавляли по каплям оксалилхлорид (2,31 г, 18,2 ммоль). После завершения добавления реакционную смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Полученное в результате белое твердое вещество растворяли в метиленхлориде (80 мл), и раствор охлаждали до 0°C. Затем добавляли триэтиламин (5,00 г, 49,5 ммоль) и Ν,Ο-диметилгидроксиламин (1,61 г, 16,5 ммоль). После завершения добавления охлаждающую баню удаляли, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После этого периода времени реакционную смесь распределяли между водой (100 мл) и этилацетатом (200 мл). Слои разделяли, и водную фазу экстрагировали этилацетатом (100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (100 мл), а затем соляным раствором (100 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Высушивающий агент удаляли фильтрованием, и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток очищали флэш-хроматографией с получением 88% выхода 103а (3,29 г) в виде белого твердого вещества: т.пл. 36-37°C; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 7.79 (s, 1Н), 3.76 (s, 3Н), 3.34 (s, 3Н), 2.78 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.62 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.82 (m, 4Н); МС (ХИАД+) m/z 226,3 (М+Н).
Пример 103b 3-Хлор-1-(4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)пропан-1-он 103b
1
3
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой, продували азотом и загружали в нее 103а (2,70 г, 12,0 ммоль) и безводный ТГФ (45 мл), и раствор охлаждали до -10°C с помощью бани ацетон/лед. Добавляли по каплям 1,0 Μ раствор винилмагния бромида в ТГФ (13,2 мл, 13,2 ммоль), и полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. После этого периода времени реакционную смесь распределяли между этилацетатом (100 мл) и 2 Μ водным раствором соляной кислоты (40 мл). Слои разделяли, и водную фазу экстрагировали этилацетатом (40 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (100 мл), а затем соляным раствором (100 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток растворяли в метиленхлориде (30 мл) и добавляли 2 Μ раствор хлорида водорода в диэтиловом эфире (15 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч растворители удаляли при пониженном давлении. В результате очистки полученного в результате остатка колоночной хроматографией получили 29% выход (804 мг) 103b в виде беловатого твердого вещества: т.пл. 57-58°C; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 7.41 (s, 1Н), 3.89 (t, 2Н, J=7.0 Гц), 3.30 (t, 2Н, J=7.0 Гц), 2.81 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.64 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.83 (m, 4Н); МС (ИЭР+) m/z 229,1 (М+Н).
Пример 103с 5,6,7,8-Тетрагидро-1Н-бензо[b]циклопента[d]тиофен-3(2H)-он 103с
1
3
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную магнитной мешалкой, загружали 103b (800 мг, 3,51 ммоль) и 98% серную кислоту (8 мл). После перемешивания при 95°C в течение 16 ч реакционную смесь наливали в лед (50 г), и полученную в результате суспензию экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органические экстракты объединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток очищали флэш-хроматографией с получением 103 с при 47% выходе (320 мг) в виде беловатого твердого вещества: т.пл. 75-76°C; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 2.89 (m, 2Н), 2.87-2.83 (m, 4Н), 2.56 (t, 2Н, J=6.5 Гц), 1.84 (т, 4Н).
Пример 103d 5,6,7,8-Тетрагидро-1Н-бензо[b]циклопента[d]тиофен-3(2Н)-он оксим 103d
1
6
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали гидроксиламина гидрохлорид (573 мг, 8,25 ммоль) и метанол (10 мл). Смесь охлаждали до 0°C, используя ледяную баню. Добавляли ацетат натрия (677 мг, 8,25 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. После этого периода времени добавляли 103с (319 мг, 1,65 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После этого периода времени смесь концентрировали, и полученный в результате остаток растирали с водой (10 мл). Полученное в результате твердое вещество собирали и высушивали в вакуумной печи при 45°C с получением 84% выхода (287 мг) 103d в виде беловатого твердого вещества: т.пл. 173-174°C; Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 10.38 (s, 1Н), 2.97 (m, 2Н), 2.77-2.73 (m, 4Н), 2.47 (m, 2Н), 1.75 (m, 4Н); МС (ХИАД+) m/z 208,3 (М+Н).
Пример 103е 3,4,5,6,7,8-Гексагидробензотиено[2,3-с]пиридин-1(2H)-он 103e
1
3
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную обратным холодильником, магнитной мешалкой и входом азота, загружали 103d (285 мг, 1,38 ммоль) и полифосфорную кислоту (15 г). После перемешивания при 80°C в течение 16 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (30 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 30 мин и фильтровали. Фильтрационный кек промывали водой (20 мл) и высушивали в вакуумной печи при 45°C с получением 75% выхода (215 мг) 103е в виде беловатого твердого вещества: т.пл. 203°C, разлагается; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 5.62 (s, 1Н), 3.59 (t, 2Н, J=7.0 Гц), 2.81 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 2.72 (t, 2Н, J=7.0 Гц), 2.48 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 1.84 (m, 4Н). МС (ХИАД+) m/z 208,3 (М+Н).
Пример 103f 2-Бром-4-фтор-6-(1-оксо-3,4,5,6,7,8-гексагидробензотиено[2,3-с]пиридин-2(1H)-ил)бензилацетат 103f
2
3
2
3
+
1
Раствор 103е (3 г, 14,5 ммоль), 2,6-дибром-4-фторбензилацетат 101j (14 г, 43,5 ммоль), Ксантфос (839 мг, 1,45 ммоль), Pd(dba) (1,33 г, 1,45 ммоль) и CsCO (9,4 г, 29 ммоль) в диоксане (200 мл) нагревали при 100° в течение 15 ч в атмосфере азота. После фильтрования фильтрат выпаривали в вакууме и очищали на флэш-колонке, элюируя этилацетатом/петролейным эфиром (1:1), с получением 103f (5 г, выхода 77%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС: (М+Н)452. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 7.71 (dd, J=2.5, 1Н), 7.51 (dd, J=3, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 2.86 (m, 2H), 2.77 (m, 2H), 2.55 (m, 3Н), 1.98 (s, 3Н), 1.78 (m, 4H).
Пример 103g 2-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-4-фтор-6-(1-оксо-3,4,5,6,7,8-гексагидробензотиено[2,3-с]пиридин-2(1Н)-ил)бензилацетат 103g
2
3
+
К раствору 103f (3 г, 6,65 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-бис(1,3,2-диоксаборолан) (10 г, 40 ммоль) в диоксане (160 мл) добавляли PdCl(dppf)(543 мг, 0,66 ммоль) и CHCOOK (3,9 г, 40 ммоль). Смесь перемешивали при 100° в течение 15 ч в атмосфере аргона. Смесь фильтровали и выпаривали в вакууме и очищали на флэш-колонке, элюируя этилацетатом/петролейным эфиром (1:2) с получением 103g (2,5 г, выход 76%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС:(М+Н)500.
2,7
Пример 103 5-[5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-{(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)}фенил]-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-6-он 103
+
1
3
Следуя методам, описанным для соединения 101, соединение 103g (499 мг, 1,0 ммоль) и 6-хлор-N-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин 101b (342 мг, 1,0 ммоль) подвергали взаимодействию с получением 103 в виде белого твердого вещества (220 мг, 35%). ЖХМС:[М+Н]638. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 8.22 (s, 2Н), 7.96 (d, J=2.5, 1Н), 7.83 (s, 1Н), 7.63 (d, J=1.0, 1H), 7.57 (d, J=1.0, 1H), 7.30 (dd, J=3.0, 9.0, 1H), 7.24 (dd, J=2.5, 9.0, 1H), 7.03 (dd, J=3.0, 9.0, 1H), 6.92 (d, J=8.5, 1H), 4.57 (d, J=11.5, 1H), 4.35 (t, J=8.5, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.09-4.15 (m, 1H), 3.87-3.92 (m, 1H), 3.16 (t, J=5.0, 4H), 2.85-3.02 (m, 4H), 2.60 (t, J=5.0, 4H), 2.51-2.57 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.85-1.95 (m, 4H).
Пример 104a 8-Бром-6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазин 104a
+
Раствор 4-бром-6-хлорпиридазин-3-амина (5,0 г, 24 ммоль) и 2-хлорацетальдегид (12 г, 75 ммоль) в этаноле (100 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали и промывали ацетоном (75 мл) с получением 104а в виде желтого твердого вещества (6,0 г, 71%). МС:[М+Н]234.
Пример 104b 6-Хлор-N-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 104b
2
3
+
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 104а (2,0 г, 4 ммоль), 5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (920 мг, 4,8 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (366 мг, 0,4 ммоль), Ксантфос (688 мг, 1,2 ммоль), CsCO (2,6 г, 8,0 ммоль) и 1,4-диоксан (60 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали с обратным холодильником в течение 15 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном/метанолом (20:1), с получением 104b в виде желтого твердого вещества (1,4 г, 70%). МС: [М+Н]344.
Пример 104 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 104
2
3
3
+
1
В запаянную трубку загружали 104b (340 мг, 0,8 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101I (400 мг, 0,8 ммоль), Pd(dba) (72 мг, 0,1 экв., 0,08 ммоль), PCy (68 мг, 0,3 экв., 0,24 ммоль), карбонат цезия (520 мг, 2 экв., 1,6 ммоль), диоксан (15 мл) и воду (1 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 130°C в течение 14 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном/метанолом (20:1), с получением 104 (100 мг, 16%). ЖХМС:[М+Н]622. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.95 (s, 1Н), 8.23 (s, 1Н), 8.16 (s, 1Н), 8.00(d, J=2.0, 1Н), 7.67 (s, 1Н), 7.43-7.46 (m, 3Н), 7.34-7.36 (m, 1Н), 6.52 (s, 1Н), 4.67 (t, J=5.0, 1H), 4.34-4.41 (m, 2H), 4.13-4.18 (m, 3Н), 3.87-3.88 (m, 1H), 3.10-3.12 (m, 4H), 2.57-2.61 (m, 2H), 2.43-2.47 (m, 6H), 2.21(s, 3Н), 1.77-1.79 (m, 2H), 1.68-1.69 (m, 2H).
Пример 105а 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 105а
+
Следуя методам, описанным для соединения 104b, 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазин 104а (233 мг, 1,0 ммоль) и 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (234 мг, 1,0 ммоль) подвергали взаимодействию с получением 105а в виде белого твердого вещества (296 мг, 77%). ЖХМС:[М+Н]386.
Пример 105 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 105
Следуя методам, описанным для соединения 104, путем реакции Сузуки 105а (385 мг, 1,0 ммоль) и 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетата 1011 получили соединение 105 в виде желтого твердого вещества (60 мг, 9%).
+
1
ЖХМС:[М+Н]664. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 10.04 (d, J=4.0, 1Н), 8.26 (s, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 8.10-8.13 (m, 1Н), 7.70 (s, 1Н), 7.44-7.55 (m, 3Н), 7.34-7.36 (m, 1Η), 6.52 (s, 1Η), 4.84 (s, 1Н), 4.66-4.72 (m, 3Н), 4.33-4.43 (m, 2Н), 4.11-4.19 (m, 3Н), 3.86-3.89 (m, 2Н), 3.49-3.51 (m, 2Н), 3.03-3.14 (m, 4Н), 2.57-2.63 (m, 3Н), 2.45-2.47 (m, 4Н), 1.77-1.80 (m, 2Н), 1.68-1.69 (m, 2Н).
Пример 106а трет-Бутил-4-(6-(6-бромимидазо[1,2-а]пиразин-8-иламино)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 106а
2
2
+
Смесь 6,8-дибромимидазо[1,2-а]пиразина (1,2 г, 4,3 ммоль), диизопропилэтиламина (1,1 г, 8 ммоль) и трет-бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (1 г, 3,5 ммоль) в изопропиловом спирте (IPA) (20. мл) перемешивали при 130°C при микроволновом облучении в течение 1,5 ч. Полученную в результате суспензию фильтровали, и твердое вещество промывали водой и высушивали в вакууме с получением неочищенного продукта, который дополнительно очищали хроматографией на силикагеле, элюируя CHCl/MeOH (50:1) с получением 106а в виде белого твердого вещества (800 мг, 50%). МС:[М+Н]474.
Пример 106b 6-Бром-N-(5-(пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиразин-8-амин 106b
2
2
+
К смеси 106а (260 мг, 0,5 ммоль) в CHCl (3 мл) добавляли ТФУ (0,5 мл), и реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 2 ч. Реакционный раствор концентрировали с получением 106b в виде бледно-желтой жидкости без очистки для следующей стадии (210 мг, 97%). МС:[М+Н]374.
Пример 106с 6-Бром-N-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиразин-8-амин 106с
3
2
2
+
Смесь 106b (210 мг, 0,52 ммоль), формальдегида (150 мг, 5 ммоль) и NaBHCN (220 мг, 3,5 ммоль) в метаноле (8 мл) перемешивали при 20°C в течение 3 часов. Твердое вещество удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией, элюируя CHCl/метанолом (20:1) с получением 106с (200 мг, 90%). МС:[М+Н]388.
Пример 106d 4-Фтор-2-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо-[1,2-а]пиразин-6-ил)-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)бензилацетат 106d
2
3
2
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (60 мл), 106 с (200 мг, 0,5 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101I (385 мг, 0,8 ммоль) и карбонат цезия (332 мг, 1 ммоль). Добавляли Ксантфос (30 мг, 0,08 ммоль) и Pd(dba) (55 мг, 0,08 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 4 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на флэш-колонке, элюируя CHCl/MeOH (10:1), с получением 106d (200 мг, 60%). МС:[М+Н]664.
Пример 106 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиразин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 106
2
+
1
Смесь 106d (200 мг, 0,92 ммоль) и LiOH (300 мг, 10 ммоль) в iPrOH/ΤΓΦ (1:1, 3,5 мл) и HO (1 мл) перемешивали при 50°C в течение 0,5 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток экстрагировали этилацетатом (10 мл×2). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 106 (45 мг, 20%). ЖХМС:[М+Н]622. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.04 (s, 1Н), 8.41 (s, 1Н), 8.13-8.10 (m, 2Н), 7.98 (s, 1Н), 7.71 (s, 1Н), 7.47-7.44 (m, 2Н), 7.39-7.37 (m, 1Н), 6.53 (s, 1Н), 5.38-5.36 (m, 1Н), 4.37-4.44 (m, 2Н), 4.19-3.98 (m, 4Н), 3.12 (s, 4Н), 2.60-2.58 (m, 2Н), 2.50-2.45 (m, 6Н), 2.21 (s, 3 Η), 1.79-1.68 (m, 2Н), 1.69-1.67 (т, 2Н).
Пример 107а 2-(5-Фтор-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1 -ил)пиридин-2-иламино)-имидазо[1,2-а]пиразин-6-ил)-2-(2-оксопропил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 107а
2
3
4
3
2
2
2
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (60 мл), 6-бром-Ν-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиразин-8-амин (130 мг, 0,3 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101I (146 мг, 0.3 ммоль), PdCl(dppf) (25 мг, 0,03 ммоль), KPO (138 мг, 0,6 ммоль) и NaOAc (48 мг, 0,6 ммоль) в CHCN (5 мл) и HO (1,5 мл). Из системы откачивали воздух и снова заполняли N. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной флэш-хроматографией, элюируя 10:1 CHCl/MeOH, с получением 107а (150 мг, 70%) в виде коричневого твердого вещества. МС:[М+Н]706,4.
Пример 107 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-а]пиразин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидро-пиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 107
2
2
2
4
+
1
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл загружали 107а (150 мг, 0,21 моль) в ΤΓΦ/iΡΑ/ΗO (5 мл/5 мл/2 мл) и LiOH (85 мг, 3,5 ммоль) при перемешивании. Эту смесь перемешивали при 50°C в течение 0,5 ч. Затем добавляли 20 мл HO, и смесь экстрагировали этилацетатом (ЭА) (30 мл×3). Объединенный органический слой высушивали над NaSO и концентрировали с получением желтого твердого вещества, которое дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 107 в виде белого твердого вещества (74 мг, 52% выход). ЖХМС:[М+Н]664,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.06 (s, 1Н), 8.41 (s, 1Н), 8.13-8.10 (m, 2Н), 7.98 (d, J=2.5.1Н), 7.71 (s, 1Н), 7.48-7.44 (m, 2Н), 7.39-7.36(m, 1 Н),6.54 (s, 1Н), 5.38 (m, 1Н), 4.57-4.35 (m, 6Н), 4.18-4.13 (m, 4Н), 3.44-3.42 (m, 1Н), 3.15 (s, 4Н), 2.59 (d, J=3.0, 2Н), 2.47-2.40 (m, 6Н), 1.79-1.69 (m, 4Н).
Пример 108а (Е)-N'-(3-Бром-5-хлорпиридин-2-ил)-N,N-диметилформимидамид 108а
+
Смесь 3-бром-5-хлорпиридин-2-амина (10 г, 0,05 моль) и диметокси-Ν,Ν-диметилметанамина (7 г, 0,06 ммоль) перемешивали при 100°C в течение 1 ч. Смесь наливали в воду, а затем экстрагировали этилацетатом (20 мл×4). Объединенный органический слой концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали хроматографией на силикагеле, элюируя этилацетатом/петролейным эфиром (ПЭ) (1:2) с получением 108а (10 г, 77%). ЖХМС:[М+Н]262.
Пример 108b (Е)-N'-(3-бром-5-хлорпиридин-2-ил)-N-гидроксиформимидамид 108b
+
Смесь 108а (2 г, 10 ммоль) и гидроксиламина гидрохлорида (1,4 г, 20 ммоль) в МеОН (10 мл) перемешивали при 100°C в течение 0,5 ч. Смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл×4), и объединенную органическую фазу промывали водой. Затем ее концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 108b (2 г, 80%), которое использовали для следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС: [М+Н]250.
Пример 108с 8-Бром-6-хлор-[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин 108с
+
Смесь 108b (500 мг, 2 ммоль) и полифосфорной кислоты (ПФК) (1,4 г, 20 ммоль) перемешивали при 100°C в течение 4 ч. Затем смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл×4), и объединенную органическую фазу промывали водой. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 108с (250 мг, 50%), которое использовали для следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС:[М+Н]250.
Пример 108d 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-а]пиридин-8-амин 108d
2
3
2
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 25 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (8 мл), 108с (250 мг, 1,07 ммоль), 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (252 мг, 1 ммоль) и карбонат цезия (700 мг, 2 ммоль). Добавляли Ксантфос (30 мг, 0,08 ммоль) и Pd(dba) (55 мг, 0,08 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 105°C в течение 3 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали хроматографией на силикагеле, элюируя CHCl/MeOH (20:1), с получением 108d (250 мг, 60%). МС:[М+Н]386.
Пример 108е 4-Фтор-2-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6-ил)-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)бензилацетат 108е
2
3
4
2
+
Смесь 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетата 101I (165 мг, 0,38 ммоль), 108d (140 мг, 0,38 ммоль), PdCl(dppf) (41 мг, 0,056 ммоль), KPO (100 мг) и NaOAc (50 мг) в MeCN (10 мл) и HO (3 мл) нагревали при 110°C в запаянной трубке в течение 2 ч. Растворитель выпаривали в вакууме, и остаток очищали хроматографией на силикагеле с получением 108е (250 мг, 60%). МС:[М+Н]706.
Пример 108 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 108
2
+
1
Смесь 108е (250 мг, 0,35 ммоль) и LiOH (300 мг, 10 ммоль) в iPrOH/ΤΓΦ (1:1, 3,5 мл) и HO (1 мл) перемешивали при 50°C в течение 0,5 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток экстрагировали этилацетатом (5 мл×2). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 108 (110 мг, 25%). ЖХМС: [М+Н]664. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.33 (s, 1Н), 8.67 (s, 1Н), 8.55-8.54(m, 2Н), 7.95 (d, J=3.0, 1Н), 7.44-7.41 (m, 2Н), 7.37-7.33 (m, 2Н), 6.53 (s, 1Н), 4.98 (t, J=5.0, 1Н), 4.55-4.54 (m, 2Н), 4.45-4.44 (m, 2Н), 4.13-4.32 (m, 5Н), 3.91 (s, 1Н), 3.43-3.41 (m, 1Н), 3.10 (s, 4Н), 2.60-2.38 (m, 8Н), 1.78-1.76 (m, 2Н), 1.69-1.67 (m, 2Н).
Пример 109а 2-Бром-4-хлор-6-нитробензоламин 109а
2
3
2
4
3
+
1
Смесь 4-хлор-2-нитробензоламина (5,1 г, 30 ммоль) и Ν-бром-сукцинимида (6,2 г, 36 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли этилацетатом (50 мл). Смесь промывали насыщенным водным раствором KCO (100 мл×2). Органическую фазу отделяли, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 109а в виде желтого твердого вещества (8,1 г, 100%). ЖХМС:[М+Н]253. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 8.17(d, J=2.5 Гц, 1Н), 7.71 (d, J=2.5 Гц, 1Н), 6.64 (s, 2Н).
Пример 109b 3-Бром-5-хлорбензол-1,2-диамин 109b
2
2
2
3
2
4
3
+
1
К раствору 109а (5,0 г, 20 ммоль) в этилацетате (100 мл) добавляли SnCl.2HO (22,6 г, 100 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь наливали в водный раствор NaCO (200 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 109b в виде темно-красной жидкости (4,3 г, 97%). ЖХМС:[М+Н]223. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 6.97 (d, J=2.5 Гц, 1H), 6.65 (d, J=2.5 Гц, 1H), 3.67 (bs, 4Н).
Пример 109с 4-Бром-6-хлор-1Н-бензо[d]имидазол 109с
2
3
2
4
3
+
1
Смесь 109b (4,3 г, 19,5 ммоль) в муравьиной кислоте (10 мл) нагревали при 80°C в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь наливали в водный раствор NaCO (30 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 109 с в виде коричневого твердого вещества (3,5 г, 77%). ЖХМС:[М+Н]233. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 10.05 (bs, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 7.64 (bs, 1Н), 7.50 (s, 1Н).
Пример 109d 4-Бром-6-хлор-1-метил-1Н-бензо[d]имидазол 109d
2
4
3
+
1
К раствору 109с (3,5 г, 15 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) добавляли карбонат калия (4,14 г, 30 ммоль) и йодметан (1,4 мл, 22,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (50 мл) для гашения реакционной смеси, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом (5 мл×3). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией, элюируя петролейным эфиром/этилацетатом (от 4:1 до 1:2) с получением 109d в виде белого твердого вещества (1,4 г, 38%). ЖХМС:[М+Н]245/247. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 7.89 (s, 1Н), 7.46 (d, J=2.0 Гц, 1Н), 7.32 (d, J=2.0 Гц, 1Н), 3.81 (s, 3Н).
Пример 109е 6-Хлор-1-метил-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-4-амин 109е
+
1
3
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали 109d (486 мг, 2,0 ммоль), 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (390 мг 1,67 ммоль), карбонат цезия (1,09 г, 3,34 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (152 мг, 0,167 ммоль) и Ксантфос (193 мг, 0,334 ммоль). После барботирования азота через суспензию в течение 5 минут реакционную смесь нагревали при 120°C в течение ночи. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток промывали смесью петролейного эфира/этилацетата (15 мл, 2:1) с получением 109е в виде желтого твердого вещества (720 мг, 100%). ЖХМС:[М+Н]399,3. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 8.20 (d, J=2.0, 1H), 8.04 (d, J=2.5, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.28-7.29 (m, 1H), 6.90-6.91 (m, 2H), 4.70-4.71 (m, 4H), 3.77 (s, 3H), 3.70-3.71 (m, 1H), 3.17 (t, J=5.0, 4 H), 2.52 (t, J=5.0,4H).
Пример 109 2-(5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(3-метил-7-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)-3Н-бензо[d]имидазол-5-ил)фенил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 109
+
1
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали 109е (300 мг, 0,75 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101I (545 мг, 1,13 ммоль), карбонат калия (414 мг, 3,0 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (68 мг, 0,075 ммоль) и трициклогексилфосфин (210 мг, 0,75 ммоль). После барботирования азота через суспензию в течение 5 минут реакционную смесь нагревали при 110°C в течение ночи. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 109 в виде белого твердого вещества (71 мг, 14%). ЖХМС:[М+Н]677,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 8.64 (s, 1Н), 8.23 (d, J=1.0, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 7.88 (d, J=2.5, 1H), 7.38-7.39 (m, 1H), 7.33-7.35 (m, 1H), 7.24 (d, J=9.0, 1H), 7.18-7.19 (m, 2H), 6.52 (s, 1H), 4.85 (bs, 1H), 4.56 (t, J=6.0, 2H), 4.46 (t, J=6.0, 2H), 4.29 (s, 2H), 4.16-4.18 (m, 3H), 3.93-3.94 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.44-3.45 (m, 1H), 3.07 (t, J=4.0, 4H), 2.61-2.62 (m, 2H), 2.47 (t, J=6.0, 2H), 2.39 (t, J=4.0, 4H), 1.79-1.80 (m, 2H), 1.70-1.71 (m, 2H).
Пример 110a (Е)-Этил-3-(2-хлор-4,4-диметилциклопент-1-енил)акрилат 110a
Два описанных ниже метода были адаптированы из статьи Organic Preparations and Procedures Int., 29 (4), 471-498. В одногорлую круглодонную колбу на 500 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали 2-хлор-4,4-диметилциклопент-1-енкарбальдегид (38 г, 240 ммоль) в бензоле (240 мл). К раствору добавляли этоксикарбонилметилена трифенилфосфоран (84 г, 240 ммоль). Смесь перемешивали в течение 14 ч. После этого периода времени растворитель выпаривали, и остаток растирали с гексанами (2 л), чтобы экстрагировать продукт от побочных продуктов PPh3. Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией, используя градиент 100% гексан - 1:1 гексан/этилацетат, с получением 37% выхода (20 г) 110а.
Пример 110b Этил-5,5-диметил-1,4,5,6-тетрагидроциклопента[b]пиррол-2-карбоксилат 110b
2
2
2
2
2
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали 110а (17 г, 74 ммоль) в ДМСО (100 мл). К раствору добавляли азид натрия (9,6 г, 150 ммоль). Затем смесь нагревали до 75°C и перемешивали в течение 8 ч. После охлаждения до кт добавляли HO (100 мл) и CHCl (200 мл), и органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали CHCl (50 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией, используя градиент 100% гексан - 1:1 гексан/этилацетат, с получением 37% выхода (5,7 г) 110b.
Пример 110с Этил-1-(цианометил)-5,5-диметил-1,4,5,6-тетрагидроцикло-пента[b]пиррол-2-карбоксилат 110с
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали 110b (6,2 г, 30 ммоль) в ДМФ (57 мл). К раствору добавляли NaH (80% дисперсия в минеральном масле, 1,26 г, 42,1 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при кт в течение 90 мин. После этого периода времени добавляли бромацетонитрил (2,94 мл, 42 ммоль). Смесь перемешивали в течение 14 ч. После этого периода времени добавляли воду (100 мл) и этилацетат (200 мл), и органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 95% выхода (7 г) 110с.
Пример 110d Этил-1-(2-аминоэтил)-5,5-диметил-1,4,5,6-тетрагидроцикло-пента[b]пиррол-2-карбоксилата гидрохлорид 110d
Сосуд реактора Парра на 500 мл продували азотом и загружали в него 10% палладий на углероде (влажность 50%, сухая масса 2,0 г), 110с (4,5 г, 18 ммоль), 12% соляную кислоту (9,2 мл, 37 ммоль), этилацетат (80 мл) и этанол (52 мл). Сосуд присоединяли к аппарату гидрогенизации Парра, откачивали воздух, загружали в него газ водород до давления 50 psi (344,74 кПа) и перемешивали в течение 6 ч. После этого периода времени водород откачивали, и в сосуд загружали азот. Добавляли целлит 521 (10,0 г), и смесь фильтровали через слой целлита 521. Фильтрационный кек промывали этанолом (2×50 мл), и объединенные фильтраты концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Неочищенный остаток 110d переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Пример 110е 4,4-Диметил-1,10-диазатрицикло[6.4.0.02,6]додека-2(6),7-диен-9-он 110е
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее неочищенное соединение 110d (приблизительно 18 ммоль), этилат натрия (6,2 г, 92 ммоль) и этанол (120 мл). Смесь перемешивали при 55°C в течение ночи. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток распределяли между этилацетатом (200 мл) и водой (100 мл). Раствор фильтровали. Твердое вещество промывали этилацетатом (15 мл) с получением 850 мг желаемого продукта 110е. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении почти до сухого состояния. Раствор фильтровали, и твердое вещество (1,44 г) промывали этилацетатом (15 мл). Объединенные твердые вещества высушивали в вакууме с получением 61% выхода (2,3 г) 110е.
2,6
Пример 110f 2-Бром-4-фтор-6-(9-оксо-4,4-диметил-1,10диазатрицикло[6.4.0.0]-додека-2(6),7-диен-10-ил)бензилацетат 110f
2
Запаянную трубку оборудовали магнитной мешалкой и загружали в нее 110е (740 мг, 3,6 ммоль), 2,6-дибром-4-фторбензилацетат 101j (2,4 г, 7,2 ммоль) и карбонат цезия (2,6 г, 7,9 ммоль) в 1,4-диоксане (36 мл). После барботирования азота через раствор в течение 30 мин добавляли Ксантфос (250 мг, 0,43 ммоль) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (260 мг, 0,29 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 16 ч. После этого периода времени добавляли HO (50 мл) и этилацетат (50 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические экстракты промывали соляным раствором (100 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией, элюируя градиентом 100% гексаны - 100% этилацетат, с получением 56% выхода (910 мг) 110f.
2,6
Пример 110q 2-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-4-фтор-6-(9-оксо-4,4-диметил-1,10диазатрицикло[6.4.0.0]-додека-2(6),7-диен-10-ил)бензилацетат 110g
2
2
2
2
2
Соединение 110g синтезировали, используя такой же метод, как для 103g, за исключением использования 110f (450 мг, 1,0 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5,,5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (635 мг, 2,5 ммоль), ацетата калия (393 мг, 4,0 ммоль), комплекс бис(дифенилфосфино)-ферроцен]дихлорпалладия(II) с CHCl (Pd Cldppf:CHCl (1:1), 66 мг, 0,08 ммоль) и 1,4-диоксан (20 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целлита 521. Фильтрационный кек промывали этилацетатом (2×25 мл), и объединенные фильтраты концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением 110g (количественный выход) в виде черного масла, которое использовали непосредственно для следующей стадии. МС (ИЭР+) m/z 497,3 (М+Н).
2,6
Пример 110 10-[5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-4,4-диметил-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]додека-2(6),7-диен-9-он 110
2
2
3
3
2
+
1
К суспензии 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амина 102с (300 мг, 0,777 моль) в диоксане/HO (12 мл/1 мл) добавляли 110g (385 мг, 0,777 ммоль), Pd(dba) (70 мг, 0,0777 ммоль), трициклогексилфосфин (220 мг, 0,777 ммоль) и CsCO (510 мг, 1,554 ммоль). Эту смесь перемешивали при 120°C в атмосфере N в течение 15 ч. Затем смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением желтого твердого вещества, которое дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 110 в виде белого твердого вещества (70 мг, 15% выход). ЖХМС:[М+Н]678. Н ЯМР (500 МГц, MeOD)δ 8.29 (s, 1Н), 8.09 (d, J=2.5, 1H), 8.05 (s, 1Η), 7.66 (s, 1Н), 7.50 (dd, J=3.5, 9.5, 1H), 7.41 (dd, J=2.0, 9.0, 1H), 7.34 (dd, J=2.5, 8.5, 1H), 7.17 (d, J=9, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.74 (t, J=7, 2H), 4.65 (t, J=6, 2H), 4.58-4.59 (m, 2H), 4.29-4.30 (m, 1H), 4.24-4.25 (m, 2H), 4.04-4.05 (m, 1H), 3.58-3.59 (m, 1H), 3.26-3.27 (m, 4H), 2.61 (s, 2H), 2.56-2.58 (m, 4H), 2.50 (s, 2H), 1.27 (s, 6H).
2,7
Пример 111 5-[5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-6-он 111
2,7
+
1
2
3
2
3
В запаянную трубку, оборудованную магнитной мешалкой, загружали (4-фтор-2-{6-оксо-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-5-ил}-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетат 103g (200 мг, 0,44 ммоль), 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 108а (155 мг, 0,44 ммоль), трициклогексилфосфин (112 мг, 0,4 ммоль), Pd(dba) (28 мг, 0,024 ммоль), CsCO (261 мг, 0,8 ммоль) и диоксан (25 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном реакционную смесь нагревали при 110°C в течение 16 ч. Затем смесь выпаривали в вакууме, и остаток экстрагировали этилацетатом (10 мл×2). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 111 (59 мг, 22%). МС:[М+Н]681. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.94 (s, 1Н), 8.23 (s, 1Н), 8.16 (s, 1Н), 8.02 (s, 1Н), 7.67 (s, 1Н), 7.44-7.46 (m, 3Н), 7.34-7.36 (m, 1Н), 4.64-4.66 (m, 1Н), 4.54-4.57 (m, 2Н), 4.42-4.48 (m, 3Н), 4.35-4.38 (m, 1Н), 3.96-4.10 (m, 1H), 3.79-3.89 (m, 1H), 3.42-3.45 (m, 1H), 3.14-3.16 (m, 4H), 2.54-2.96 (m, 4H), 2.47-2.50 (m, 2H), 2.37-2.41 (m, 4H), 1.79 (t, J=4.0, 4H).
2,7
Пример 112 5-[5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-8-тиа-4,5-диазатрицикло-[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7),3-триен-6-он 112
2,7
+
1
2
3
2
3
В запаянную трубку, оборудованную магнитной мешалкой, загружали (4-фтор-2-{6-оксо-8-тиа-4,5-диазатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7),3-триен-5-ил}-6-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетат (200 мг, 0,44 ммоль), 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 105а (155 мг, 0,44 ммоль), трициклогексилфосфин (112 мг, 0,4 ммоль), Pd(dba) (28 мг, 0,024 ммоль), CsCO (261 мг, 0,8 ммоль) и диоксан (25 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном реакционную смесь нагревали при 110°C в течение 16 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток экстрагировали этилацетатом (10 мл×2). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 112 (26 мг, 12%). МС:[М+Н]680. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО) δ δ 9.95 (s, 1Н), 8.49 (s, 1Н), 8.24 (s, 1Н), 8.17 (s, 1Н), 8.04 (s, 1Н), 7.67 (s, 1Н), 7.45-7.53 (m, 4Н), 4.54-4.57 (т, 3Н), 4.45-4.47 (т, 2Н), 4.33 (d, J=12.5, 2Н), 3.35-3.46 (m, 1Н), 3.13-3.17 (m, 4Н), 2.83-2.94 (m, 4Н), 2.47-2.50 (m, 4Н), 1.82-1.87 (m, 4Н).
Пример 113а 3,3-Диметилциклопентанон 113а
1
3
В трехгорлую круглодонную колбу на 1 л, оборудованную магнитной мешалкой, капельной воронкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее эфир (200 мл) и йодид меди(1) (54,46 г, 0,286 моль). Смесь охлаждали до 0°C, к реакционной смеси добавляли по каплям метиллитий (1,6 Μ в эфире, 357,5 мл, 0,572 моль) в течение 1,5 ч и перемешивали при 0°C дополнительно в течение 2 ч. После этого периода времени добавляли по каплям раствор 3-метилциклопент-2-енона (25 г, 0,260 моль) в эфире (150 мл) в течение 1,5 ч. Затем реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч и наливали в декагидрат ацетата натрия (300 г). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 30 мин. После этого периода времени смесь фильтровали и промывали эфиром (1000 мл). Фильтрат концентрировали и перегоняли при пониженном давлении с получением 70% выхода (20,5 г) 3,3-диметилциклопентанона 113а в виде бесцветной жидкости: т.кип. 50-55°C (при 10 мм Hg); Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 2.31 (t, 2Н, J=7.8 Гц), 2.05 (s, 2Н), 1.79 (t, 2Н, J=7.8 Гц); МС (ИЭР+) m/z 113,3 (М+Н).
Пример 113b Этил 5,5-Диметил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[b]тиофен-2-карбоксилат 113b
1
3
Трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл, оборудованную магнитной мешалкой, обратным холодильником, капельной воронкой и входом азота продували азотом и загружали в нее ДМФ (9,49 г, 0,100 моль) и метиленхлорид (100 мл). Реакционную смесь охлаждали до 0°C, и к реакционной смеси добавляли по каплям оксихлорид фосфора (14,1 г, 0,0920 моль) в течение 30 мин. Как только это добавление было завершено, реакционную смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. После этого периода времени добавляли по каплям раствор 113а (11,2 г, 0,100 моль) в метиленхлориде (100 мл) в течение 1 ч. Затем реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и наливали в смесь колотого льда (400 мл) и ацетата натрия (100 г, 1,22 моль). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 45 мин. После этого периода времени водный слой отделяли и экстрагировали метиленхлоридом (2×500 мл). Затем объединенные органические слои промывали водой (2×200 мл), затем соляным раствором (200 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Затем высушивающий агент удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта 2-хлор-4,4-диметилциклопент-1-енкарбальдегида, который помещали в трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл, оборудованную магнитной мешалкой, обратным холодильником и входом азота. Затем добавляли метиленхлорид (200 мл), этил-2-меркаптоацетат (11,0 г, 0,092 моль) и триэтиламин (30 г, 0,207 моль). Затем реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 6 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали с получением густого оранжевого остатка. Добавляли этанол (200 мл) и триэтиламин (30,0 г, 0,207 моль), и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток разбавляли эфиром (600 мл). Полученную в результате смесь промывали 1 Μ соляной кислотой (150 мл), соляным раствором (100 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток очищали флэш-хроматографией с получением 113b при 34% выходе (7,70 г) в виде бесцветной жидкости: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 7.48 (s, 1Н), 4.33 (q, 2Н, J=7.2 Гц), 2.72 (s, 2Н), 2.56 (s, 2Н), 1.38 (t, 3Н, J=1.8 Гц), 1.17 (s, 6Н); МС (ИЭР+) m/z 225,1.
Пример 113 с 5,5-Диметил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[b]тиофен-2-карбоновая кислота 113с
1
3
В одногорлой круглодонной колбе на 250 мл, оборудованной магнитной мешалкой и обратным холодильником, соединение 113b (4,00 г, 17,8 ммоль) растворяли в этаноле (50 мл). Добавляли ТГФ (50 мл), воду (50 мл) и гидроксид лития (854 мг, 35,6 ммоль), и смесь перемешивали при 60°C в течение 4 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли 2 Μ соляной кислотой до рН 1,5, а затем экстрагировали этилацетатом (2×200 мл). Органические слои объединяли, промывали водой (2×100 мл), затем соляным раствором (100 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Затем высушивающий агент отделяли фильтрованием. После выпаривания полученного в результате субстрата получили 113с при 91% выходе (3,2 г) в виде белого твердого вещества: т.пл. 170-172°C; Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 12.77 (s, 1Н), 7.46 (s, 1Н), 2.71 (s, 2Н), 2.53 (s, 2Н), 1.20 (s, 6Н); МС (ИЭР-) m/z 195,0.
Пример 113d 5,5-Диметил-5,6-дигидро-4H-циклопента[b]тиофен-2-карбоновая кислота 113d
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой, обратным холодильником и барботером, помещенным на холодильник, загружали 113с (2,30 г, 11,6 ммоль), толуол (25 мл), тионилхлорид (4,09 г, 34,9 ммоль) и ДМФ (1 каплю). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч, а затем выпаривали при пониженном давлении на роторном испарителе при 45°C. Полученный в результате хлорангидрид разбавляли метиленхлоридом (20 мл).
1
3
В отдельной трехгорлой круглодонной колбе на 250 мл, оборудованной магнитной мешалкой, растворяли N,O-диметилгидроксиламина гидрохлорид (2,26 г, 23,2 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (2,97 г, 23,0 ммоль) в безводном метиленхлориде (20 мл) в атмосфере азота, и раствор охлаждали до 0°C в бане лед/вода. Добавляли раствор хлорангидрида, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь экстрагировали водой (100 мл), 10% водным раствором лимонной кислоты (50 мл) и смесью 1:1 насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и воды (100 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении на роторном испарителе с получением 93% выхода (2,60 г) 113d в виде светло-желтого твердого вещества: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 7.66 (s, 1Н), 3.77 (s, 3Н), 3.35 (s, 3Н), 2.74 (s, 2Н), 2.58 (s, 2Н), 1.23 (s, 6Н).
Пример 113е 3-Хлор-1-(5,5-диметил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[b]тиофен-2-ил)пропан-1-он 113е
1
3
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой, продували азотом и загружали в нее 113d (2,41 г, 10,0 ммоль) и безводный ТГФ (20 мл). Раствор охлаждали до -70°C и добавляли 1 Μ винилмагния бромид в ТГФ (11 мл, 11,0 ммоль) при поддержании температуры реакционной смеси ниже -60°C. Реакционную смесь перемешивали при температуре от -13 до -7°C в течение 2 ч, а затем подогревали до комнатной температуры в течение 30 мин. Реакционную смесь снова охлаждали до -70°C и добавляли 2 Μ раствор хлорида водорода в эфире (22,5 мл, 45 ммоль). Затем реакционную смесь хранили в морозилке при -10°C в течение ночи. После этого периода времени смесь выпаривали при пониженном давлении на роторном испарителе, и полученный в результате остаток распределяли между водой (100 мл) и эфиром (100 мл). Эфирный экстракт высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении на роторном испарителе с получением неочищенного соединения 113е (2,86 г, 118%) в виде коричневого масла приблизительно 75% чистоты (по ЯМР): Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 7.45 (s, 1Н), 3.89 (t, 2Н, J=6.9 Гц), 3.30 (t, 2Н, J=6.9 Гц), 2.75 (s, 2Н), 2.59 (s, 2Н), 1.24 (s, 6Н).
Пример 113f 6,6-Диметил-1,2,6,7-тетрагидродициклопента[b,d]тиофен-3(5Н)-он 113f
1
3
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой, загружали неочищенное соединение 113е (2,86 г, 10,0 ммоль, предположительный количественный выход) и 98% серную кислоту. Реакционную смесь нагревали в масляной бане на 90°C в течение ночи. Реакционную смесь помещали в баню лед/ацетон и добавляли холодный (5°C) раствор вторичного кислого фосфата калия (105 г, 0,603 моль) в воде (300 мл) одной порцией. Полученную в результате смесь перемешивали с этилацетатом (300 мл) и фильтровали. Фильтрационный кек промывали этилацетатом (100 мл). Этилацетатный слой фильтрата отделяли, высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении на роторном испарителе. Полученный в результате остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, 80:20 гексаны/этилацетат) с получением 113f при 37% выходе за две стадии (683 мг) в виде аморфного коричневого твердого вещества: т.пл. 60-62°C; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 2.92-2.87 (m, 4H), 2.79 (s, 2H), 2.53 (s, 2H), 1.26 (s, 6H);DMC (ИЭР+) m/z 207.0 (M+H).
Пример 113g 6,6-Диметил-1,2,6,7-тетрагидродициклопента[b,d]тиофен-3(5Н)-он 113g
1
3
В одногорлую круглодонную колбу на 250 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали гидроксиламина гидрохлорид (688 мг, 9,90 ммоль), ацетат натрия (812 мг, 9,90 ммоль) и метанол (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. После этого периода времени добавляли по каплям раствор 113f (680 мг, 3,30 ммоль) при комнатной температуре, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч в атмосфере азота. Поскольку реакция не прошла полностью, добавляли гидроксиламина гидрохлорид (1,15 г, 16,5 ммоль) и ацетат натрия (1,35 г, 16,5 ммоль), и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 58 ч. После этого периода времени смесь разбавляли метиленхлоридом (150 мл) и водой (100 мл), и слои разделяли. Органический слой промывали соляным раствором (50 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Высушивающий агент удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали с получением неочищенного соединения 113g при количественном выходе (730 мг) в виде желтого полутвердого вещества, которое использовали в следующей стадии без очистки: т.пл. 122-124°C; Н ЯМР для основного изомера (500 МГц, CDCl)δ 3.13-3.11 (m, 2Н), 2.85-2.83 (m, 2Н), 2.77 (s, 2Н), 2.49 (s, 2Н), 1.24 (s, 6Н); МС (ИЭР+) m/z 222,0 (М+Н).
Пример 113h 6,6-Диметил-3,4,6,7-тетрагидро-5Н-циклопента[4,5]тиено[2,3-с]пиридин-1(2Н)-он 113h
1
3
В трехгорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную обратным холодильником, магнитной мешалкой и входом азота, загружали 113g (700 мг, 3,16 ммоль) и полифосфорную кислоту (25 г). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 13 ч в атмосфере азота. После этого периода времени смесь охлаждали до 0°C и осторожно добавляли по каплям воду (50 мл), поддерживая внутреннюю температуру между 10-45°C. Смесь разбавляли смесью 90:10 метиленхлорид/метанол (100 мл), и слои разделяли. Водный слой экстрагировали смесью 90:10 метиленхлорид/метанол (50 мл), и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), соляным раствором (150 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Высушивающий агент удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, 95:5 метиленхлорид/метанол) с получением 6,6-диметил-3,4,6,7-тетрагидро-5Н-циклопента[4,5]тиено[2,3-с]пиридин-1(2Н)-она 113h при 90% выходе (630 мг) в виде аморфного беловатого твердого вещества: т.пл. 205-207°C; Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 5.51 (s, 1Н), 3.60-3.56 (m, 2Н), 2.76-2.73 (т, 4Н), 2.49 (s, 2Н), 1.26 (s, 6Н); МС (ИЭР+) m/z 222,0 (М+Н).
2,6
Пример 113i (2-Бром-6-{4,4-диметил-9-оксо-7-тиа-10-азатрицикло[6.4.0.0]додека-1(8),2(6)-диен-10-ил}-4-фторфенил)метилацетат 113i
2
3
2
3
+
Смесь 113h (2 г, 9,05 ммоль), 2,6-дибром-4-фторбензилацетата (101j) (8,8 г, 27,15 ммоль), Ксантфос (524 мг, 0,9 ммоль), Pd(dba) (828 мг, 0,9 ммоль) и CsCO (5,9 г, 18 ммоль) в диоксане (200 мл) нагревали при 100°C в течение 15 ч в атмосфере азота. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали на колонке силикагеля, элюируя 1:1 этилацетатом/петролейным эфиром, с получением 113i в виде желтого твердого вещества (3 г, 71%). МС:(М+Н)466.
2,6
Пример 113i (2-{4,4-Диметил-9-оксо-7-тиа-10-азатрицикло[6.4.0.0]додека-1(8),2(6)-диен-10-ил}-4-фтор-6-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетат 113j
2
3
+
Раствор 113i (3 г, 6,45 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан)(9,8 г, 38,7 ммоль) в диоксане (160 мл) добавляли PdCl(dppf) (525 мг, 0,65 ммоль) и CHCOOK (3,8 г, 38,7 ммоль). Смесь перемешивали при 100°C в течение 15 ч в атмосфере аргона. После взаимодействия смесь фильтровали и выпаривали в вакууме, и остаток очищали на колонке силикагеля, элюируя 1:2 этилацетатом/петролейным эфиром, с получением 113j в виде желтого твердого вещества (2,5 г, 76%). МС:(М+Н)514.
2,6
Пример 113 10-[5-Фтор-2-(гидроксиметил)-3-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)фенил]-4,4-диметил-7-тиа-10-азатрицикло[6.4.0.0]додека-1(8),2(6)-диен-9-он 113
+
1
Следуя методам, описанным в Примере 112, 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин и 113j подвергали взаимодействию с получением 113 при 13% выходе. ЖХМС:[М+Н]695. Н ЯМР (500 МГц, MeOD)δ 8.30 (s, 1Н), 8.09 (d, J=2.5, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.50 (dd, J=3.5, 9.0, 1H), 7.40 (dd, J=3, 9, 1H), 7.34 (dd, J=2, 9, 1H), 7.16 (d, J=9, 1H), 4.74 (t, J=6.5, 2H), 4.65 (t, J=6, 2H), 4.60-4.61 (m, 2H), 4.16-4.17 (m, 1H), 4.01-4.02 (m, 1H), 3.58-3.59 (m, 1H), 3.25-3.26 (m, 4H), 3.12-3.14 (m, 1H), 2.97-2.98 (m, 1H), 2.81 (s, 2H), 2.60-2.61 (m, 2H), 2.55-2.56 (m, 4H), 1.29 (d, J=2.5, 6H).
Пример 114a 2-Бром-4-хлорникотинальдегид 114a
4
2
4
1
К раствору 2-бром-4-хлорпиридина (1,6 г, 8,0 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (40 мл), охлажденному при -70°C, добавляли раствор диизопропиламида лития (5,0 мл, 10,0 ммоль, 2,0 М) в течение периода 5 минут и перемешивали при -70°C еще в течение 1 ч. Безводный ДМФ (1,3 г) вводили в течение периода 3 минуты, и смесь перемешивали еще в течение 30 минут. Затем ее гасили насыщенным NHCl (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенный органический слой высушивали над безводным MgSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя петролейным эфиром/этилацетатом (20:1), с получением 114а в виде желтого твердого вещества (900 мг, 48%). Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 10.21 (s, 1Н), 8.52 (d, J=5.5 Гц, 1 Η), 7.79 (d, J=5.0 Гц, 1H).
Пример 114b 4-Хлор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)никотинальдегид 114b
2
3
+
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 114а (800 мг, 3,5 ммоль), 3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 101g (665 мг, 3,5 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (320 мг, 0,35 ммоль), Ксантфос (400 мг, 0,7 ммоль), CsCO (2,3 г, 7,0 ммоль) и 1,4-диоксан (20 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 90°C в течение 5 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном/метанолом (80:1), с получением 114b в виде желтого твердого вещества (1,2 г, 50%). МС:[М+Н]330.
Пример 114с 2-(4-хлор-3-(гидроксиметил)пиридин-2-ил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 114с
2
4
+
К раствору 114b (1,0 г, 3,0 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли боргидрид натрия (380 мг, 9,0 ммоль) при 10°C и перемешивали еще в течение 30 минут. Затем реакционную смесь гасили водой (1 мл) и концентрировали. Остаток растворяли в дихлорметане (50 мл) и промывали водой (10 мл). Органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 114с в виде желтого твердого вещества (900 мг, 90%). МС:[М+Н]332.
Пример 114d (4-Хлор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-3-ил)метилацетат 114d
+
К смеси 114с (900 мг, 2,7 моль) и триэтиламина (900 мг, 9,0 моль) в дихлорметане (5 мл) добавляли по каплям ацетилхлорид (600 мг, 6,0 моль) при перемешивании при комнатной температуре и перемешивали еще в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном с получением 114d в виде белого твердого вещества (950 мг, 94%). МС:[М+Н]374.
Пример 114е (2-(1-Оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ил)метилацетат 114е
2
2
2
3
+
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 114d (950 мг, 2,5 ммоль), PinB (1,6 г, 2,0 экв., 5 ммоль), Pd(dba) (230 мг, 0,1 экв., 0,25 ммоль), X-phos (232 мг, 0,2 экв., 0,5 ммоль), AcOK (735 мг, 3 экв., 7,5 ммоль) и диоксан (20 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали до 65°C в течение 14 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток промывали ПЭ/ЭА=3/1 (10 мл) с получением 114е в виде желтого твердого вещества (950 мг, 87%). МС:[М+Н]383.
Пример 114 2-(3-(Гидроксиметил)-4-(8-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)пиридин-2-ил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 114
2
3
3
+
1
В запаянную трубку загружали 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 105а (200 мг, 0,5 ммоль), 114е (200 мг, 1,0 экв., 0,5 ммоль), Pd(dba) (46 мг, 0,1 экв., 0,05 ммоль), PCy (40 мг, 0,2 экв., 0,1 ммоль), карбонат цезия (325 мг, 2 экв., 1,0 ммоль) и диоксан (10 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 130°C в течение 14 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном/метанолом (40:1), и дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 114 (13 мг, 4%). ЖХМС:[М+Н]647. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 9.96 (s, 1Н), 8.56 (d, J=5.0, 1Н), 8.24 (s, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 7.99 (d, J=2.5, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.45-7.50 (m, 3Н), 6.58 (s, 1H), 4.72 (t, J=5.0,1H), 4.55-4.59 (m, 3H), 4.45-4.47 (m, 2H), 4.37-4.40 (m, 1H), 4.19-4.29 (m, 2H), 4.08-4.10 (m, 1H), 3.91-3.94(m, 1H), 3.42-3.45 (m, 1H), 3.14-3.16 (m, 4H), 2.52-2.63 (m, 2H), 2.46-2.47 (m, 2H), 2.36-2.40 (m, 4H), 1.76-1.78 (m, 2H), 1.66-1.70 (m, 2H).
Пример 115a трет-Бутил-4-(6-нитропиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 115a
2
3
+
К раствору 5-бром-2-нитропиридина (30 г, 148 ммоль) в ДМСО (1 л) добавляли KCO (40 г, 296 ммоль) и трет-бутилпиперазин-1-карбоксилат (28 г, 148 ммоль). Смесь перемешивали при 65°C в течение ночи. После охлаждения смесь наливали в воду (2 л). Осажденное твердое вещество собирали и высушивали в вакууме. Затем его дополнительно очищали на флэш-колонке, элюируя 20:1 петролейным эфиром/этилацетатом, а затем метиленхлоридом с получением 115а в виде желтого твердого вещества (17 г, 37%). МС:[М+Н]309.
Пример 115b трет-Бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилат 115b
+
Сосуд на 500 мл продували азотом и загружали в него 115а (3,1 г, 10 ммоль), 10% палладий на углероде (влажность 50%, 1,0 г) и этанол (100 мл). Из сосуда откачивали воздух, загружали в него газ водород и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем водород откачивали, и в сосуд загружали азот. Катализатор удаляли фильтрованием через слой целлита, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 115b (2,7 г, 97%). МС:[М+Н]279.
Пример 115с (S)-трет-Бутил-4-(6-(6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазин-8-иламино)пиридин-3-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат 115с
+
Следуя методу для соединения 101b, и начиная с 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазина 104а (1,44 г, 6,2 ммоль) и 115b (905 мг, 3,1 ммоль), получили 115 с в виде желтого твердого вещества (2,2 г, 80%). МС-ИЭР:[М+Н]444,2.
Пример 115d (S)-6-Бром-N-(5-(2-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина гидробромид 115d
+
В автоклав загружали 115с (1,60 г, 3,6 ммоль) и HBr/АсОН (60 мл). Смесь нагревали при 150°C в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением черного масла. Это масло перекристаллизовали смесью метанол (30 мл)/дихлорметан (30 мл)/петролейный эфир (90 мл) с получением 115d в виде желтого твердого вещества (1,1 г, 65%). МС-ИЭР:[М+Н]388,1.
Пример 115е (S)-6-Бром-N-(5-(2-метил-4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 115е
2
3
4
+
К смеси (S)-6-бром-N-(5-(2-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амина гидробромида 115d (1,05 г, 2,24 ммоль), оксетан-3-он (483 мг, 6,7 ммоль) и ZnCl (914 мг, 6,7 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли NaBHCN (421 мг, 6,7 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 14 ч и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли воду (30 мл), и полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (%×30 мл). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным MgSO и фильтровали. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 115е в виде желтого твердого вещества (220 мг, 22%). МС-ИЭР:[М+Н]444,1.
Пример 115 (S)-2-(3-(гидроксиметил)-4-(8-(5-(2-метил-4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил)пиридин-2-ил)-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1(2Н)-он 115
2
3
3
6
+
1
В запаянную трубку загружали 115е (156 мг, 0,35 ммоль), 3-(ацетоксиметил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-4-илбороновую кислоту 114е (134 мг, 0,35 ммоль), Pd(dba) (64 мг, 0,070 ммоль), PCy (40 мг, 0,14 ммоль), карбонат цезия (228 мг, 0,70 ммоль), воду (1 каплю) и диоксан (9 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 130°C в течение 16 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40:1 дихлорметаном/метанолом, и дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 115 (31 мг, 13%). МС-ИЭР:[М+Н]661,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 9.97 (s, 1Н), 8.56 (d, J=5.0 Гц, 1Н), 8.25 (d, J=5.0 Гц, 1Н), 8.19 (d, J=0.5 Гц, 1Н), 7.95 (s, 1Н), 7.68 (d, J=1.0 Гц, 1Н), 7.48-7.44 (m, 3Н), 6.58 (s, 1Н), 4.76 (t, J=5.0 Гц, 1Н), 4.58-4.54 (m, 3Н), 4.49-4.46 (m, 1Н), 4.43-4.36 (m, 2Н), 4.30-4.05 (m, 3Н), 3.94-3.87 (m, 2Н), 3.42-3.37 (m, 1Н), 3.24-3.19 (m, 1Н), 3.00-2.96 (m, 1Н), 2.66-2.57 (m, 3Н), 2.47-2.43 (m, 3Н), 2.28-2.26 (m, 1Н), 2.12-2.09 (m, 1Н), 1.79-1.68 (m, 4Н), 1.00 (d, J=6.5 Гц, 3Н).
Пример 116а 4-Бром-6-хлор-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[d]имидазол 116а
2
4
+
К раствору 4-бром-6-хлор-1Н-бензо[d]имидазола 109с (3,5 г, 15 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) добавляли гидрид натрия (360 мг, 15 ммоль) и 2-(триметилсилил)этоксиметилхлорид (2,7 г, 16,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду (100 мл) для гашения реакционной смеси. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×80 мл). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 116а в виде коричневого твердого вещества (4,2 г, 77%). МС-ИЭР:[М+Н]361,0.
Пример 116b 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[d]имидазол-4-амин 116b
+
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали 116а (600 мг, 1,65 ммоль), 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (390 мг 1,67 ммоль), карбонат цезия (1,09 г, 3,34 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (152 мг, 0,167 ммоль), Ксантфос (193 мг, 0,334 ммоль) и диоксан (10 мл). После барботирования азота через суспензию в течение 10 минут реакционную смесь нагревали при 120°C в течение ночи. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток промывали смешанным растворителем из петролейного эфира и этилацетата (15 мл, 2:1) с получением 116b в виде желтого твердого вещества (720 мг, 85%). МС-ИЭР:[М+Н]515,2.
Пример 116с 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-4-амин 116с
2
4
+
Смесь 116b (720 мг, 1,4 ммоль) в ТФУ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разбавляли водой (10 мл). рН смеси доводили до 7 добавлением водного раствора аммиака. Затем смесь экстрагировали дихлорметаном (3×20 мл). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 116с в виде коричневого твердого вещества (500 мг, 93%). МС-ИЭР:[М+Н]385,1.
Пример 116 2-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-[7-[[5-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]-2-пиридил]амино]-3Н-бензимидазол-5-ил]фенил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 116
+
1
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали 116с (300 мг, 0,78 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101k (545 мг, 1,13 ммоль), карбонат калия (414 мг, 3,0 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (68 мг, 0,075 ммоль), трициклогексилфосфин (210 мг, 0,75 ммоль), воду (0,2 мл) и диоксан (10 мл). После барботирования азота через суспензию в течение 10 минут запаянный флакон нагревали при 110°C в течение ночи. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 116 в виде белого твердого вещества (52 мг, 10%). МС-ИЭР:[М+Н]663,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 8.23 (bs, 1Н), 8.11 (s, 1Н), 7.88 (d, J=4.5 Гц, 1Н), 7.35-7.31 (m, 1Н), 7.23-7.17 (m, 2Н), 7.13-7.09 (m, 2Н), 6.52 (s, 1Н), 4.57-4.45 (m, overlap, 4H), 4.31 (d, J=7.5 Гц, 2H), 4.11-4.01 (m, 4H), 3.51-3.47 (m, 1H), 3.10-3.06 (m, 4H), 2.59-2.41 (m, 8H), 1.81-1.68 (m, 4H).
Пример 117а 6-Хлор-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-2-амин 117а
+
Смесь 6-хлор-9Н-пурин-2-амина (5,0 г, 29,6 ммоль) и NaH (1,43 г, 32,5 ммоль) в ДМФ (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч. (2-Добавляли (хлорметокси)этил)триметилсилан (SEMCI, регистрационный № CAS 76513-69-4, 4,91 г, 29,6 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,0 ч. Затем ее фильтровали, и фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 3:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 117а (5,1 г, 58%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]300,1.
Пример 117b 6-Хлор-2-йод-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин 117b
2
2
4
2
4
+
К смеси 117а (2,99 г, 10,0 ммоль), CHI (4,0 мл, 51,0 ммоль) и Cul (1,91 г, 10,0 ммоль) в ТГФ добавляли изоамилнитрит (4,0 мл, 30,0 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1,0 ч и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь распределяли между этилацетатом и 1 н. водным раствором HCl. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором NHCl, высушивали над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 3:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 117b (2,02 г, 49%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]411,0.
Пример 117с 1-(4-Нитрофенил)пиперазин 117с
+
К раствору 117b (3,07 г, 10,0 ммоль) в диоксане (50 мл) добавляли 4,0 Μ HCl/диоксан (10 мл, 40,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 117с (2,4 г, 99%) в виде желтого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки. МС:[М+Н]208.
Пример 117d 1-(4-Нитрофенил)-4-(оксетан-3-ил)пиперазин 117d
3
+
К смеси 117с (2,0 г, 8,23 ммоль), хлорида цинка (2,2 г, 16,4 ммоль), оксетан-3-она (1,18 г, 16,4 ммоль) в метаноле (80 мл) добавляли NaBHCN (1,02 г, 16,4 ммоль). Смесь перемешивали при 50°C в течение 5 часов. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток разбавляли водой (100 мл). Ее экстрагировали дихлорметаном (3×100 мл), и объединенный органический слой концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 4:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 117d (1,65 г, 76%) в виде желтого твердого вещества. МС:[М+Н]264.
Пример 117е 4-(4-(Оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)анилин 117е
+
Круглодонную колбу на 250 мл продували азотом и загружали в нее 117d (1,5 г, 5,7 ммоль), 10% палладий на углероде (влажность 50%, 750 мг) и этанол (60 мл). Из колбы откачивали воздух, загружали в нее газ водород и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Затем водород откачивали, и в колбу загружали азот. Катализатор удаляли фильтрованием через слой целлита, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 117е (1,2 г, 90%), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС:[М+Н]234.
Пример 117f 2-Йод-N-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фенил)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-6-амин 117f
+
Смесь 117b (2,05 г, 5,0 ммоль), 117е (1,17 г, 5,0 ммоль) и триэтиламина (1,01 г, 10 ммоль) в изопропаноле (30 мл) перемешивали при 80°C в течение 4 ч. Затем ее фильтровали, и фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 117f (1,82 г, 60%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]608,1.
Пример 117q 4-Фтор-2-(6-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-2-ил)-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)бензилацетат 117g
2
3
4
+
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 117f (607 мг, 1,0 ммоль), 4-фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 101k (482 мг, 1,0 ммоль), Pd(dppf)Cl (82 мг, 0,10 ммоль), KPO (424 мг, 2,0 ммоль), ацетат натрия (164 мг, 2,0 ммоль), воду (0,5 мл) и ацетонитрил (20 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 117g в виде желтого твердого вещества (600 мг, 72%). МС-ИЭР:[М+Н]836,5.
Пример 117h 4-Фтор-2-(6-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)-9Н-пурин-2-ил)-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)бензилацетат 117h
3
+
Смесь 117g (550 мг, 0,660 ммоль) и CFCOOH (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем ее концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 117h в виде желтого твердого вещества (140 мг, 30%), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС-ИЭР:[М+Н]706,4.
Пример 117 2-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-[6-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]анилино]-9Н-пурин-2-ил]фенил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 117
+
1
3
Смесь 117h (140 мг, 0,20 ммоль) и гидроксида лития (48 мг, 2,0 ммоль) в изопропаноле/ТГФ (1:1,4 мл) и воде (1 мл) перемешивали при 30°C в течение 1 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток разбавляли водой (5 мл). Затем ее экстрагировали этилацетатом (2×10 мл). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 117 (85 мг, 64%) в виде белого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]664,4. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 12.45 (s, 1Н), 8.26 (s, 1Н), 7.86 (d, J=8.5 Гц, 2H), 7.66 (d, J=8.0 Гц, 2H), 7.11 (d, J=9.0 Гц, 1H), 6.96 (d, J=8.0 Гц, 2H), 6.88 (s, 1Н), 4.74-4.68 (m, 4Н), 4.66-4.60 (m, 2Н), 4.17-4.09 (m, 3Н), 3.91-3.90 (m, 1Н), 3.59 (t, J=6.5 Гц, 1H), 3.25-3.23 (m, 4Н), 2.59-2.52 (m, 8Н), 1.89-1.80 (m, 4Н).
Пример 118а 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензоИимидазол-4-амин 118а
+
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали в нее 4-бром-6-хлор-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[d]имидазол 116а (600 мг, 1,65 ммоль), 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (390 мг, 1,67 ммоль), карбонат цезия (1,09 г, 3,34 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (152 мг, 0,167 ммоль), Ксантфос (193 мг, 0,334 ммоль) и диоксан (10 мл). После барботирования азота через суспензию в течение 10 минут реакционную смесь нагревали при 120°C в течение ночи. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток промывали смешанным растворителем из петролейного эфира и этилацетата (15 мл, 2:1) с получением 118а в виде желтого твердого вещества (720 мг, 85%). МС-ИЭР:[М+Н]515,2.
Пример 118b 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)-1Н-бензо[d] имидазол-4-амин 118b
2
4
+
Смесь 118а (720 мг, 1,4 ммоль) в ТФУ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разбавляли водой (10 мл). рН смеси доводили до 7 добавлением водного раствора аммиака. Затем ее экстрагировали дихлорметаном (3×20 мл). Объединенную органическую фазу высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 118b в виде коричневого твердого вещества (500 мг, 93%). МС-ИЭР:[М+Н]385,1.
Пример 118 2-[3-(гидроксиметил)-4-[7-[[5-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]-2-пиридил]амино]-3Н-бензимидазол-5-ил]-2-пиридил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 118
+
В сосуд для микроволнового реактора, оборудованный магнитной мешалкой, загружали 118b (200 мг, 0,52 ммоль), 3-(ацетоксиметил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-4-илбороновую кислоту 114е (545 мг, 0,78 ммоль), карбонат калия (216 мг, 1,56 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (48 мг, 0,052 ммоль), трициклогексилфосфин (146 мг, 0,52 ммоль), воду (0,2 мл) и диоксан (10 мл). После барботирования азота через суспензию в течение 10 минут запаянный флакон облучали в микроволновом реакторе при 110°C в течение 1 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 118 в виде белого твердого вещества (50 мг, 15%). МС-ИЭР:[М+Н]646,3. 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО)δ 8.69 (d, J=2.0 Гц, 1Н), 8.49 (d, J=5.0 Гц, 1Н), 8.32-8.28 (m, 2Н), 8.13 (s, 1Н), 7.85-7.83 (гл, 1Н), 7.39-7.33 (m, 2Н), 7.36 (s, 1Н), 7.29 (s, 1Н), 6.59 (s, 1Н), 5.89 (s, 1Н), 4.56 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 4.46 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 4.23-4.16 (m, 2Н), 4.15-4.12 (m, 4Н), 3.89-3.53 (m, 1Н), 3.13-3.07 (m, 5Н), 2.64-2.54 (m, 2Н), 2.51-2.43 (m, 5Н), 1.79 -1.70 (m, 4Н).
2,7
Пример 119а {4-Фтор-2-[6-({4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]фенил}амино)-9-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}пурин-2-ил]-6-{6-оксо-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-5-ил}фенил}метилацетат 119а
2,7
+
2
3
4
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали (4-фтор-2-{6-оксо-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-5-ил}-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метилацетат 103g (288 мг, 0,60 ммоль), 2-йод-N-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фенил)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-6-амин 117f (364 мг, 0,60 ммоль), Pd(dppf)Cl (49 мг, 0,060 ммоль), KPO (254 мг, 1,20 ммоль), ацетат натрия (98 мг, 1,20 ммоль), воду (0,5 мл) и ацетонитрил (10 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 119а (307 мг, 60%). МС-ИЭР:[М+Н]853,4.
2,7
Пример 119b {4-Фтор-2-[6-({4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]фенил}амино)-9Н-пурин-2-ил]-6-{6-оксо-8-тиа-5-азатрицикло[7.4.0.0]тридека-1(9),2(7)-диен-5-ил}фенил}метилацетат 119b
3
3
4
+
Смесь 119а (307 мг, 0,360 ммоль) и CFCOOH (5 мл) перемешивали при 30°C в течение 2 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток разбавляли водой (5 мл). рН смеси доводили до 7 насыщенным раствором NaHCO и экстрагировали этилацетатом (3×10 мл). Объединенный экстракт высушивали над MgSO и выпаривали до сухого состояния с получением 119b (150 мг, 60%), которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки. МС-ИЭР:[М+Н]723,4.
Пример 119 2-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-[6-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]анилино]-9Н-пурин-2-ил]фенил]-3,4,5,6,7,8-гексагидробензотиофено[2,3-с]пиридин-1-он 119
+
1
3
Смесь 119b (150 мг, 0,210 ммоль) и гидроксида лития (50 мг, 2,10 ммоль) в изопропаноле/ТГФ (1:1,4 мл) и воде (1 мл) перемешивали при 30°C в течение 1 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток разбавляли водой (5 мл). Затем его экстрагировали этилацетатом (2×10 мл). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 119 (85 мг, 58%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]681,3. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 12.72 (s, 1Н), 8.45 (s, 1Н), 7.93 (d, J=7.5 Гц, 1H), 7.79 (s, 1Н), 7.72 (d, J=9.0 Гц, 2H), 7.12 (d, J=8.0 Гц, 1H), 6.98 (d, J=9.0 Гц, 2H), 4.74-4.67 (m, 6H), 4.09-4.04 (m, 1H), 3.78-3.73 (m, 1H), 3.57 (t, J=6.5 Гц, 1H), 3.24-3.22 (m, 4H), 2.99-2.93 (m, 1H), 2.88-2.83 (m, 3Н), 2.53-2.51 (m, 6H), 1.93-1.81 (m, 5 Η).
Пример 120а Метил-5,6,7,8-тетрагидроиндолизин-2-карбоксилат 120а
1
6
Круглодонную колбу на 500 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 5,6,7,8-тетрагидроиндолизин-2-карбоновую кислоту (30,4 г, 184 ммоль), ДМФ (1,00 г, 13,6 ммоль) и метиленхлорид (300 мл). Раствор охлаждали до 0°C, используя ледяную баню. Добавляли по каплям оксалилхлорид (28,0 г, 221 ммоль), и реакционную смесь подогревали до комнатной температуры в течение 30 мин и перемешивали в течение 5 ч. После этого периода времени полученный в результате раствор концентрировали с получением коричневого твердого вещества. Это твердое вещество растворяли в безводном метаноле (400 мл), и раствор охлаждали до 0°C. К реакционной смеси добавляли триэтиламин (57 г, 552 ммоль) и перемешивали еще в течение 2 ч при комнатной температуре. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток разбавляли метиленхлоридом (300 мл) и промывали водой (200 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате остаток титровали гексаном (200 мл) с получением 120а при 58% выходе (19,1 г) в виде белого твердого вещества: т.пл. 72-74°C; Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d)δ 7.13 (s, 1Η). 6.23 (s, 1H), 3.93 (t, 2H, J=6.0 Гц), 3.77 (s, 3Н), 2.75 (t, 2H, J=6.0 Гц), 1.93 (m, 2H), 1.80 (m, 2H); (ХИАД+) m/z 180,1 (M+H).
Пример 120b Метил-3-(цианометил)-5,6,7,8-тетрагидроиндолизин-2-карбоксилат 120b
1
3
Трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл оборудовали капельной воронкой, термометром и загружали в нее 120а (6,70 г, 37,4 ммоль), йодацетонитрил (12,5 г, 74,9 ммоль), сульфат железа(II) гептагидрат (5,20 г, 18,7 ммоль) и диметилсульфоксид (250 мл). К смеси добавляли по каплям пероксид водорода (35%, 18,2 г, 187 ммоль) в течение периода 1 ч через шприцевой насос при комнатной температуре, используя водяную баню. К реакционной смеси добавляли порциями сульфат железа(II) гептагидрат (от 2 до 3 эквивалентов) для поддержания температуры между 25°C и 35°C, пока цвет реакционной смеси не становился темно-красным. Когда ТСХ показала, что реакция не завершена, таким же способом добавляли дополнительное количество пероксида водорода (2-3 эквивалента) и дополнительное количество сульфата железа(II) гептагидрата (1-2 эквивалента) до завершения реакции. После этого периода времени реакционную смесь распределяли между насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и этилацетатом (400 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором тиосульфата натрия (50 мл), высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 78% выхода (6,40 г) 120b в виде желтого масла: Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 6.23 (s, 1Н), 4.23 (s, 2H), 3.94 (t, 2H, J=6.5 Гц), 3.81 (s, 3Н), 2.74 (t, 2H, J=6.5 Гц), 2.00 (m, 2H), 1.83 (m, 2H); (ХИАД+) m/z 219,3 (М+Н).
Пример 120с Метил-3-(2-аминоэтил)-5,6,7,8-тетрагидроиндолизин-2-карбоксилата соль гидрохлорид 120с
Метил-3-(цианометил)-5,6,7,8-тетрагидроиндолизин-2-карбоксилат 120b подвергали гидрогенизации с оксидом платины в качестве катализатора при 50 psi (344,74 кПа) водорода в этаноле и этилацетате в присутствии хлорида водорода в течение ночи при комнатной температуре с получением соединения 120с (380 мг, 1,74 ммоль), которое использовали в следующей стадии.
Пример 120d 3,4,6,7,8,9-Гексагидропиридо[3,4-b]индолизин-1(2H)-он 120d
1
6
Одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 120с (получено выше, по оценкам 1,74 ммоль, предполагаемый количественный выход), этилат натрия (354 мг, 5,22 ммоль) и этанол (20 мл). Смесь перемешивали при 55°C в течение 5 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток распределяли между этилацетатом (200 мл) и водой (100 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением 67% выхода (220 мг) 120d в виде белого твердого вещества: т.пл. 195-197°C; Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 6.76 (s, 1Н), 5.89 (s, 1Н), 3.78 (t, 2Н, J=6.5 Гц), 3.35 (m, 2Н), 2.66 (m, 4Н),1.87 (m, 2Н), 1.72 (m, 2Н); (ХИАД+) m/z 191,3 (М+Н).
Пример 120е 2-Бром-4-фтор-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиридо[3,4-b]-индолизин-2(1Η)-ил)бензил ацетат 120е
+
1
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (60 мл), 2,6-дибром-4-фторбензилацетат (1,9 г, 6,0 ммоль), 120d (400 мг, 2,0 ммоль) и карбонат цезия (1,3 г, 4,0 ммоль). После барботирования азота через полученную в результате смесь в течение 30 минут добавляли Ксантфос (120 мг, 0,2 ммоль) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (180 мг, 0,2 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 12 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, распределяли между этилацетатом (40 мл) и водой (40 мл) и фильтровали. Водный слой отделяли и экстрагировали этилацетатом (3×70 мл). Объединенный органический слой промывали соляным раствором (30 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Высушивающий агент удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на флэш-колонке, элюируя 2:1 петролейным эфиром/этилацетатом, с получением 120е (421 мг, 46%) в виде желтого твердого вещества. МС:[М+Н]435. Н ЯМР (500 МГц, MeOD)δ 7.52-7.50 (m, 1Н), 7.23-7.20 (m, 1Н), 6.14 (s, 1Н), 5.20-5.10 (m, 2Н), 4.09-4.06 (m, 1Н), 3.95-3.92 (m, 1Н), 3.88-3.85 (m, 1Н), 3.78-3.75 (m, 1Н), 3.07-2.97 (m, 2Н), 2.81-2.77 (m, 2Н), 2.03-2.00 (m, 5Н), 1.87-1.84 (m, 2Н).
Пример 120f 4-Фтор-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиридо[3,4-b]индолизин-2(1Н)-ил)-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензилацетат 120f
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 100 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 1,4-диоксан (30 мл), 120е (1000 мг. 2,30 ммоль), бис(пинаколато)дибор (3,03 г, 11,5 ммоль), Pd(dppf)Cl (94 мг, 0,11 ммоль) и ацетат калия (676 мг, 6,90 ммоль). После барботирования азота через смесь в течение 10 минут смесь нагревали при 90°C в течение 3 ч. Затем ее фильтровали, и фильтрат выпаривали в вакууме с получением 120f (1,2 г, 108%) в виде черного масла. МС-ИЭР:[М+Н]483,2.
Пример 120q 4-Фтор-2-(6-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-2-ил)-6-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиридо[3,4-b]индолизин-2(1Н)-ил)бензилацетат 120g
2
3
4
2
+
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 120f (400 мг, 0,82 ммоль), 2-йод-N-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фенил)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-6-амин 117f (604 мг, 0,99 ммоль), PdCl(dppf)(33 мг, 0,040 ммоль), KPO (347 мг, 1,64 ммоль) и ацетат натрия (134 мг, 1,64 ммоль), ацетонитрил (15 мл) и воду (1 мл). Из системы откачивали воздух и снова заполняли N. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 120g (460 мг, 66%) в виде зеленого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]836,4.
Пример 120h 4-Фтор-2-(6-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фениламино)-9Н-пурин-2-ил)-6-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиридо[3,4-b]индолизин-2(1Н)-ил)бензилацетат 120h
+
В одногорлую круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 120g (350 мг, 0,42 ммоль), тетра-н-бутиламмония фторид (TBAF (от англ. tetra-n-butylammonium fluoride)) (925 мг, 2,93 ммоль) и ТГФ (10 мл). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 17 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 120h (240 мг, 83%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]706,3.
Пример 120 2-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-[6-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]анилино]-9Н-пурин-2-ил]фенил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиридо[3,4-b]индолизин-1-он 120
+
1
3
К раствору 120h (240 мг, 0,34 ммоль) в пропан-2-оле (8 мл), тетрагидрофуране (8 мл) и воде (1,5 мл) добавляли гидроксид лития (25 мг, 1,02 ммоль). Смесь перемешивали при 30°C в течение 1,5 ч. Смесь выпаривали, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 120 (116 мг, 51%) в виде желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]664,3. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 8.29 (s, 1Н), 7.81 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.69 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 7.08 (d, J=6.5 Гц, 1Н), 6.91 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 6.29 (s, 1Н), 4.71-4.57 (m, 6Н), 4.05-4.03 (m, 1Н), 3.86-3.77 (m, 3Н), 3.63-3.61 (m, 1Н), 3.23-3.22 (m, 4Н), 3.05-3.03 (m, 1Н), 3.89-2.79 (m, 3Н), 2.54-2.56 (m, 4Н), 2.00-1.98 (m, 2Н), 1.84-1.82 (m, 2Н).
Пример 121а 6-Хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-амин 121а
2
3
2
3
+
В круглодонную колбу на 50 мл, оборудованную обратным холодильником, загружали 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин 101а (264 мг, 1,14 ммоль), 5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-амин (328 мг, 1,14 ммоль), Pd(dba) (102 мг, 0,11 ммоль), Ксантфос (63 мг, 0,11 ммоль), CsCO (3,58 г, 11,0 ммоль), диоксан (20 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 100°C в течение ночи. Затем ее фильтровали, и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 1:50 метанолом/дихлорметаном, с получением 121а в виде оранжевого твердого вещества (290 мг, 66%). МС-ИЭР:[М+Н]385,1.
Пример 121 2-[3-(гидроксиметил)-4-[8-[[5-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]-2-пиридил]амино]имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил]-2-пиридил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 121
2
3
3
2
3
6
+
1
В сосуд для микроволнового реактора загружали 121а (100 мг, 0,26 ммоль), 3-(ацетоксиметил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-4-илбороновую кислоту 114е (150 мг, 0,39 ммоль), Pd(dba) (23 мг, 0,025 ммоль), P(Cy) (7 мг, 0,025 ммоль), CsCO (170 мг, 0,52 ммоль), диоксан (5 мл) и воду (0,1 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном реакционную смесь перемешивали при 130°C при микроволновом облучении в течение 1 ч. Затем ее фильтровали, и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 121 (66 мг, 39%). МС-ИЭР:[М+Н]646,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 8.99 (s, 1Η), 8.53 (d, J=5.0 Гц, 1Η), 8.31 (d, J=1.5 Гц, 1Η), 8.23 (d, J=1.5 Гц, 1Η), 7.99 (d, J=1.0 Гц, 1Η), 7.90 (d, J=3.0 Гц, 1Η), 7.58 (d, J=1.5 Гц, 1Η), 7.43-7.40 (m, 2Н), 7.35 (d, J=9.0 Гц, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.95 (bs, 1H), 4.56 (t, J=6.5 Гц, 2H), 4.46 (t, J=6.5 Гц, 2H), 4.42-4.40 (m, 2H), 4.28-4.09 (m, 3Н), 3.94-3.87 (m, 1H), 3.45-3.42 (m, 1H), 3.10-3.08 (m, 4H), 2.66-2.56 (m, 2H), 2.50-2.47 (m, внизу пик растворителя, 2Н), 2.40-2.38 (m, 4Н), 1.80-1.69 (m, 4Н).
Пример 122а (4-(8-(5-(4-(Оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-иламино)[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6-ил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-3-ил)метилацетат 122а
2
3
4
+
В запаянную трубку загружали 6-хлор-N-(5-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-8-амин 108d (196 мг, 0,51 ммоль), 3-(ацетоксиметил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-4-илбороновую кислоту 114е (200 мг, 0,52 ммоль), PdCl(dppf) (24 мг, 0,030 ммоль), KPO (212 мг, 1,0 ммоль), ацетат натрия (83 мг, 1,0 ммоль), ацетонитрил (10 мл) и воду (0,2 мл). Смесь нагревали при 140°C в течение 0,5 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 122а (200 мг, 56%) в виде белого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]689,3.
Пример 122 2-[3-(гидроксиметил)-4-[8-[[5-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]-2-пиридил]амино]-[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6-ил]-2-пиридил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 122
+
1
6
Смесь 122а (200 мг, 0,29 ммоль) и гидроксида лития (42 мг, 1,0 ммоль) в изопропаноле/ТГФ (1:1, 3,5 мл) и воде (1 мл) перемешивали при 40°C в течение 0,5 ч. Смесь выпаривали при пониженном давлении, и остаток разбавляли водой (5 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (2×5 мл). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 122 (70 мг, 38%) в виде бледно-желтого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]647,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 9.36 (s, 1Н), 8.69 (s, 1Н), 8.61 (s, 1Н), 8.57-8.55 (m, 2Н), 7.93 (d, J=2.5 Гц, 1Н), 7.48-7.43 (m, 2Н), 7.37-7.35 (m, 1Н), 6.59 (s, 1Н), 5.05 (t, J=5.0 Гц, 1Н), 4.57-4.55 (m, 2Н), 4.61-4.59 (m, 2Н), 4.40-4.39 (m, 2Н), 4.26-4.12 (m, 3Н), 3.92-3.89 (m, 1Н), 3.43 (t, J=6.0 Гц, 1Н), 3.11-3.09 (m, 4Н), 2.63-2.57 (m, 2Н), 2.50-2.47 (m, 2Н), 2.40-2.39 (m, 4Н), 1.79-1.77(m, 2 Η), 1.70-1.68 (m, 2H).
2,6
Пример 123а (2-{4,4-Диметил-9-оксо-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]додека-2(6),7-диен-10-ил}-4-фтор-6-[6-({4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]фенил}амино)-9-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}пурин-2-ил]фенил)метилацетат 123а
2,6
+
2
3
4
В одногорлую круглодонную колбу на 25 мл, оборудованную магнитной мешалкой и обратным холодильником, загружали 2-йод-N-(4-(4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил)фенил)-9-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-9Н-пурин-6-амин 117f (360 мг, 0,60 ммоль), {2-[(ацетилокси)метил]-3-{4,4-диметил-9-оксо-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]додека-2(6),7-диен-10-ил}-5-фторфенил}бороновую кислоту 110g (360 мг, 0,90 ммоль), Pd(dppf)Cl (30 мг, 0,030 ммоль), KPO (270 мг, 1,2 ммоль), ацетат натрия (180 мг, 1,2 ммоль), воду (0,5 мл) и ацетонитрил (10 мл). После трех циклов продувания вакуумом/аргоном смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный в результате остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20:1 дихлорметаном/метанолом, с получением 123а в виде желтого твердого вещества (200 мг, 35%). МС-ИЭР:[М+Н]850,4.
2,6
Пример 123b (2-{4,4-Диметил-9-оксо-1,10-диазатрицикло[6.4.0.0]додека-2(6),7-диен-10-ил}-4-фтор-6-[6-({4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]фенил}амино)-9Н-пурин-2-ил]фенил)метилацетат 123b
3
+
Смесь 123а (200 мг, 0,25 ммоль) и CFCOOH (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 123b в виде желтого твердого вещества (160 мг, 90%), которое использовали для следующей стадии без дополнительной очистки. МС-ИЭР:[М+Н]720,4.
Пример 123 3-[5-фтор-2-(гидроксиметил)-3-[6-[4-[4-(оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]анилино]-9Н-пурин-2-ил]фенил]-7,7-диметил-1,2,6,8-тетрагидроциклопента[3,4]пирроло[3,5-b]пиразин-4-он 123
+
1
3
Смесь 123b (160 мг, 0,20 ммоль) и гидроксид лития (48 мг, 2,0 ммоль) в ТГФ/изопропаноле (5:3, 8 мл) и воде (2 мл) перемешивали при 30°C в течение 1 ч. Смесь выпаривали в вакууме, и остаток разбавляли водой (5 мл). Затем ее экстрагировали этилацетатом (2×10 мл). Объединенный этилацетатный экстракт концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 123 (40 мг, 32%) в виде белого твердого вещества. МС-ИЭР:[М+Н]678,3. Н ЯМР (500 МГц, CDCl)δ 12.28 (s, 1Н), 8.62 (s, 1Н), 7.89-7.87 (m, 1Н), 7.72-7.67 (m, 3Н), 7.13-7.11 (m, 1Н), 6.99-6.97 (m, 2Н), 6.85 (s, 1Н), 4.73-4.65 (m, 6Н), 4.25-4.21 (m, 1Н), 4.16-4.09 (m, 2Н), 3.89-3.87 (m, 1Н), 3.59-3.57 (m, 1Н), 3.25-3.23 (m, 4Н), 2.56-2.51 (m, перекрывание, 8Н), 1.28 (s, 3Н), 1.27 (S, 3Н).
Пример 124а (3-Нитро-1Н-пиразол-5-ил)метанол 124а
1
6
Трехгорлую круглодонную колбу на 3 л, оборудованную магнитной мешалкой, капельной воронкой и входом азота, продували азотом и загружали в нее 3-нитропиразол-5-карбоновую кислоту (28,0 г, 178 ммоль) и ТГФ (420 мл) и охлаждали до -5°C, используя баню лед/ацетон. Добавляли раствор комплекса боран-ТГФ (1,0 М, 535 мл, 535 ммоль) со скоростью, поддерживающей внутреннюю температуру реакционной смеси ниже 5°C. После завершения добавления охлаждающую баню удаляли, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до -5°C, используя баню лед/ацетон, добавляли воду (70 мл) и 4 н. соляную кислоту (70 мл), и реакционную смесь перемешивали с обратным холодильником в течение 1 ч с целью разрушения комплекса борана с пиразолом. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 30 мл. Добавляли этилацетат (175 мл), и смесь перемешивали в течение 15 мин. Водный слой отделяли и экстрагировали этилацетатом (4×200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×50 мл), соляным раствором (50 мл) и высушивали над сульфатом натрия, высушивающий агент удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением (3-нитро-1Н-пиразол-5-ил)метанола 124а при 94% выходе (24,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества: Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d)δ 13.90 (brs, 1Н), 6.87 (s, 1H), 5.58 (t, 1H, J=5.4 Гц), 4.53 (d, 2H, J=5.1 Гц); МС (ИЭР+) m/z 144.0 (М+Н).
Пример 124b (1-(2-Бромэтил)-3-нитро-1Н-пиразол-5-ил)метанол 124b
2
4
3
1
Трехгорлую круглодонную колбу на 1 л, оборудованную магнитной мешалкой и терморегулятором, продували азотом и загружали в нее 124а (25,0 г, 175 ммоль), ДМФ (250 мл) и карбонат цезия (70,0 г, 215 ммоль), нагревали при 104°C в течение 5 мин. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°C, используя баню лед/ацетон, и добавляли порциями дибромэтан (329 г, 1,75 моль) (без экзотермии). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 4 ч. После этого периода времени медленно добавляли раствор KHPO (40 г) в воде (400 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли этилацетат (450 мл), и водный слой отделяли и экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические слои промывали водой (200 мл), соляным раствором (200 мл), высушивали над сульфатом натрия, и высушивающий агент удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 86% выхода (37,5 г) неочищенного 124b в виде оранжевого масла: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 6.85 (s, 1Н), 4.82 (d, 2Н, J=5.4 Гц), 4.66 (t, 2Н, J=6.3 Гц), 3.83 (t, 2Н, J=6.3 Гц); МС (ИЭР+) m/z 249,9 (М+Н).
Пример 124с 1-(2-Бромэтил)-5-(бромметил)-3-нитро-1H-пиразоле 124с
Трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл, оборудованную магнитной мешалкой, входом азота и обратным холодильником, продували азотом и загружали в нее 124b (37,0 г, 148 ммоль) и хлороформ (160 мл). Реакционную смесь охлаждали до -5°C, используя баню лед/ацетон, и добавляли порциями трибромид фосфора (40,0 г, 148 ммоль). Охлаждающую баню удаляли, и реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 2 ч. После этого периода времени реакционную смесь охлаждали до -5°C и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (250 мл) до достижения рН 8,5. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×150 мл), и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором карбоната натрия (2×50 мл), соляным раствором (75 мл), высушивали над сульфатом натрия, и высушивающий агент удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка, который растворяли при осторожном нагревании в метиленхлориде (60 мл). Добавляли гексаны (приблизительно 20 мл), и раствор становился мутным. Смесь нагревали до образования твердого осадка, добавляли метиленхлорид (9 мл), и раствор становился прозрачным. Раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры, и через 4 ч полученный в результате кристаллы собирали вакуумным фильтрованием. Фильтрационный кек промывали охлажденной во льду смесью 1:2 метиленхлорид:гексаны (2×20 мл) с получением 1-(2-бромэтил)-5-(бромметил)-3-нитро-1Н-пиразола (19,7 г).
1
3
Объединенные фильтраты выпаривали, и процедуру повторяли снова с получением дополнительно 9,70 г 1-(2-бромэтил)-5-(бром-метил)-3-нитро-1Н-пиразола. Твердые вещества объединяли и высушивали в высоком вакууме в течение 18 ч с получением 57% выхода (26,0 г) 1-(2-бромэтил)-5-(бромметил)-3-нитро-1Н-пиразола 124с в виде белых кристаллов: т.пл. 95-97°C; Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 6.93 (s, 1Н), 4.63 (t, 2Н, J=6.0 Гц), 4.54 (s, 2Н), 3.86 (t, 2Н, J=6.0 ГЦ).
Пример 124d 5-Метил-2-нитро-4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-а]пиразин 124d
1
3
В одногорлую круглодонную колбу на 1 л, оборудованную магнитной мешалкой и входом азота, загружали ТГФ (350 мл), 124 с (10,0 г, 32,2 ммоль), 2 Μ раствор метиламина в ТГФ (113 мл, 225 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. После этого периода времени реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, и полученное в результате твердое вещество перемешивали со смесью этилацетата (75 мл) и 10% водного раствора карбоната калия (75 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали этилацетатом (2×75 мл). Объединенные органические экстракты промывали 10% водным раствором карбоната калия (75 мл), а затем соляным раствором (50 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Высушивающий агент удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 124d при 97% выходе (5,70 г) в виде желтого твердого вещества: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 6.62 (s, 1Н), 4.28 (t, 2Н, J=5.4 Гц), 3.67 (s, 2Н), 2.95 (t, 2Н, J=5.4 Гц), 2.52 (s, 3Н); МС (ИЭР+) m/z 183,0 (М+Н).
Пример 124е 5-Метил-4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-а]пиразин-2-амин 124е
1
3
Сосуд реактора Парра на 500 мл продували азотом и загружали в него 10% палладий на углероде (влажность 50%, сухая масса 800 мг) и раствор 124d (4,00 г, 2,20 ммоль) в этаноле (160 мл). Сосуд присоединяли к аппарату гидрогенизации Парра, откачивали воздух, загружали в него газ водород до давления 45 psi (310,26 кПа) и перемешивали в течение 2 ч. После этого периода времени водород откачивали, и в сосуд загружали азот. Добавляли целлит 521 (1,0 г), и смесь фильтровали через слой целлита 521. Фильтрационный кек промывали этанолом (2×75 мл), и объединенные фильтраты концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением 99% выхода 124е (3,31 г) в виде оранжевого твердого вещества: Н ЯМР (300 МГц, CDCl)δ 5.34 (s, 1Н), 3.98 (t, 2Н, J=5.4 Гц), 3.52 (s, 3Н), 2.84 (t, 2Н, J=5.7 Гц), 2.45 (s, 3Н); МС (ИЭР+) m/z 153,1 (М+Н).
Пример 124f 6-Хлор-N-(5-метил-4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 124f
+
Следуя методам, описанным в Примере 104b, и начиная с 8-бром-6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазина 104а (1,43 г, 6,2 ммоль) и 124е (900 мг, 5,9 ммоль), получили 124f в виде желтого твердого вещества (800 мг, 44%). МС-ИЭР:[М+Н]304,1.
Пример 124g 6-Бром-N-(5-метил-4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин-8-амин 124g
+
В автоклав загружали 124f (800 мг, 2,6 ммоль) и HBr/АсОН (60 мл). Смесь нагревали при 150°C в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением черного масла. Это масло перекристаллизовали из метанола (30 мл)/дихлорметана (30 мл)/петролейного эфира (90 мл) с получением 124g в виде желтого твердого вещества (600 мг, 66%). МС-ИЭР:[М+Н]348,1.
Пример 124 2-[3-(гидроксиметил)-4-[8-[(5-метил-6,7-дигидро-4Н-пиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)амино]имидазо[1,2-b]пиридазин-6-ил]-2-пиридил]-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-1-он 124
+
1
6
Следуя методу, описанному в Примере 123, и начиная с 124g (900 мг, 2,60 ммоль) и 3-(ацетоксиметил)-2-(1-оксо-3,4,6,7,8,9-гексагидропиразино[1,2-а]индол-2(1Н)-ил)пиридин-4-илбороновой кислоты 114е (1,01 г, 2,6 ммоль), соединение 124 было получено в виде белого твердого вещества (147 мг, 10%). МС-ИЭР:[М+Н]565,3. Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d)δ 10.02 (s, 1Н), 8.56 (d, J=5.0 Гц, 1Н), 8.17 (s, 1Н), 7.75 (s, 1Н), 7.66 (s, 1Н), 7.46 (d, J=5.0 Гц, 1Н), 6.58 (s, 1Н), 6.03 (s, 1Н), 4.73 (t, J=5.0 Гц, 1Н), 4.62-4.58 (m, 1Н), 4.40-4.37 (m, 1Н), 4.27-4.19 (m, 2Н), 4.10-4.08 (m, 1Н), 4.00-3.93 (m, 3Н), 3.54 (s, 2Н), 2.82 (t, J=5.0 Гц, 2Н), 2.64-2.56 (m, 2Н), 2.47-2.46 (m, 2Н), 2.37 (s, 3Н), 1.79-1.68 (m, 4Н).
Пример 901 Биохимический анализ Btk
3
4
2
50
2
2
4
70
Обобщенный метод стандартного биохимического анализа киназы Btk, который можно применять для тестирования соединений формулы I, состоит в следующем. Готовят общую реакционную смесь без фермента Btk, содержащую 1Х буфер киназы клеточной сигнализации (25 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ бета-глицерофосфат, 2 мМ дитиотрейтол, 0,1 мМ NaVO, 10 мМ MgCl), 0,5 мкМ биотинилированного пептидного субстрата 2 РТК (Promega) и 0,01% бычий сывороточный альбумин (БСА). Готовят общую реакционную смесь с ферментом Btk, содержащую 1Х буфер киназы клеточной сигнализации, 0,5 мкМ биотинилированного пептидного субстрата 2 РТК (Promega), 0,01% БСА и 100 нг/лунка (0,06 мЕ/лунка) фермента Btk. Фермент Btk получают следующим образом: полноразмерную Btk человека дикого типа (номер доступа NM-000061) с С-концевой меткой V5 и 6х His субклонируют в векторе pFastBac для получения бакуловируса, несущего Btk, меченую в данном эпитопе. Размножение бакуловируса осуществляют на основании инструкций фирмы Invitrogen, подробно описанных в ее опубликованном протоколе ''Bac-to-Bac Baculovirus Expression Systems'' (№№ по каталогу 10359-016 и 10608-016). Пассаж 3 вируса используют для инфицирования клеток Sf9, чтобы получить гиперэкспрессию рекомбинантного белка Btk. Затем белок Btk очищают до гомогенности, используя колонку Ni-NTA. Чистота конечного препарата белка выше 95% на основании чувствительного окрашивания Sypro-Ruby. Готовят раствор 200 мкМ АТФ в воде и доводят до рН 7,4 1 н. NaOH. Количество соединений, составляющее 1,25 мкл в 5% диметилсульфоксиде (ДМСО), переносят в 96-луночный полистирольный планшет ½ площади фирмы Costar. Соединения тестируют однократно и с помощью 11-точечной кривой доза-ответ (исходная концентрация составляет 10 мкМ; разведение 1:2). Количество, составляющее 18,75 мкл, общей реакционной смеси без фермента (в качестве отрицательного контроля) и общей реакционной смеси с ферментом переносят в соответствующие лунки 96-луночного полистирольного планшета ½ площади фирмы Costar. К этой смеси в 96-луночном полистирольном планшете ½ площади Costar добавляют 5 мкл 200 мкМ АТФ для получения конечной концентрации АТФ 40 мкМ. Реакционной смеси дают возможность инкубироваться в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию останавливают 1х буфером обнаружения Perkin Elmer, содержащим 30 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), 20 нМ SA-APC и 1 нМ РТ66 Ab. Планшет считывают, используя флуоресценцию с временным разрешением, с помощью прибора Perkin Elmer Envision, используя фильтр возбуждения 330 нм, фильтр испускания 665 нм и второй фильтр испускания 615 нм. Затем вычисляют значения IC. Альтернативно для оценки активности белка Btk можно использовать анализ Lanthascreen посредством количественного определения его фосфорилированного пептидного продукта. Резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET; от англ. ''Fluorescence Resonance Energy Transfer''), который происходит между флуоресцеином на пептидном продукте и тербием на идентифицирующем антителе снижается при добавлении ингибиторов Btk, которые снижают фосфорилирование пептида. В реакционной смеси конечного объема 25 мкл Btk (человека) (0,1 нг/25 мкл реакционной смеси) инкубируют с 50 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин этансульфоновой кислотой (ГЭПЭС) рН 7,5, 10 мМ MgCl, 2 мМ MnCl, 2 мМ дитиотрейтолом (ДТТ), 0,2 мМ NaVO, 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА) и 0,4 мкМ флуоресцеин-поли-GAT. Реакцию инициируют добавлением АТФ до 25 мкМ (Km АТФ). После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливают добавлением конечной концентрации 2 нМ идентифицирующего антитела Tb-PY20 в 60 мМ ЭДТА в течение 30 минут при комнатной температуре. Идентификацию осуществляют на приборе Perkin Elmer Envision при 340 нм возбуждении и испускании при 495 нм и 520 нм. Иллюстративные значения IC ингибирования Btk приведены в таблицах 1 и 2.
Пример 902 Анализ Btk на клетках Ramos
7
2
Другой обобщенный метод стандартного клеточного анализа киназы Btk, который можно использовать для тестирования соединений формулы I, состоит в следующем. Клетки Ramos инкубируют при плотности 0,5×10 клеток/мл в присутствии тестируемого соединения в течение 1 ч при 37°C. Затем клетки стимулируют путем инкубации с 10 мкг/мл IgM F(ab) против человека в течение 5 минут при 37°C. Клетки осаждают, лизируют и проводят количественное определение белка на осветленном лизате. Равные количества белка образцов подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле с додецил сульфатом натрия (ДСН-ПААГ) и Вестерн блоттингу с антителом anti-phosphoBtk(Tyr223) (Cell Signaling Technology #3531; Epitomics, № по каталогу 2207-1) или с антителом phosphoBtk(Tyr551) (BD Transduction Labs #558034) для оценки аутофосфорилирования Btk, либо с антителом против Btk (BD Transduction Labs #611116) для контроля суммарных количеств Btk в каждом лизате.
Пример 903 Анализ пролиферации В-клеток
5
3
3
Обобщенный метод стандартного клеточного анализа пролиферации В-клеток, который можно использовать для тестирования соединений формулы I, состоит в следующем. В-клетки очищают из селезенок мышей Balb/c 8-16-недельного возраста, используя набор для выделения В-клеток (Miltenyi Biotech, №по каталогу 130-090-862). Тестируемые соединения разводят в 0,25% ДМСО и инкубируют с 2,5×10 очищенных В-клеток селезенки мыши в течение 30 мин, после чего добавляют 10 мкг/мл антитела IgM против мыши (Southern Biotechnology Associates, №по каталогу 1022-01) в конечном объеме 100 мкл. После 24 ч инкубации добавляют 1 мкКи Н-тимидина, и планшеты инкубируют дополнительно в течение 36 ч, после чего собирают данные, используя протокол изготовителя системы анализа захвата тимидина SPA[H] (Amersham Biosciences # RPNQ 0130). Флуоресценцию на основе SPA-гранул считают в микробета-счетчике (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Пример 904 Анализ пролиферации Т-клеток
5
3
3
Обобщенный метод стандартного клеточного анализа пролиферации Т-клеток, который можно использовать для тестирования соединений формулы I, состоит в следующем. Т-клетки очищают из селезенок мышей Balb/c 8-16-недельного возраста, используя набор для выделения Т-клеток (Miltenyi Biotech, № по каталогу 130-090-861). Тестируемые соединения разводят в 0,25% ДМСО и инкубируют с 2,5×10 очищенных Т-клеток селезенки мыши в конечном объеме 100 мкл в планшетах с плоским дном, предварительно покрытых в течение 90 мин при 37°C 10 мкг/мл каждого из антител против CD3 (BD # 553057) и против CD28 (BD # 553294). После 24 ч инкубации добавляют 1 мкКи Н-тимидина, и планшеты инкубируют дополнительно в течение 36 ч, после чего собирают данные, используя протокол изготовителя системы анализа захвата тимидина SPA[H] (Amersham Biosciences # RPNQ 0130). Флуоресценцию на основе SPA-гранул считают в микробета-счетчике (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Пример 905 Анализ ингибирования CD86
6
+
-
2
Обобщенный метод стандартного анализа ингибирования активности В-клеток, который можно использовать для тестирования соединений формулы I, состоит в следующем. Суммарные спленоциты мыши очищают из селезенок мышей Balb/c 8-16-недельного возраста путем лизиса эритроцитов (BD Pharmingen #555899). Тестируемые соединения разводят в 0,5% ДМСО и инкубируют с 1,25×10 спленоцитов в конечном объеме 200 мкл в планшетах с плоским дном (Falcon 353072) в течение 60 мин при 37°C. Затем клетки стимулируют добавлением 15 мкг/мл IgM (Jackson ImmunoResearch 115-006-020) и инкубируют в течение 24 ч при 37°C, 5% CO. После 24 ч инкубации клетки переносят в прозрачные 96-луночные планшеты с коническим дном и осаждают центрифугированием при 1200×g×5 мин. Клетки предварительно блокируют CD16/CD32 (BD Pharmingen #553142) с последующим тройным окрашиванием CD19-FITC (BD Pharmingen #553785), CD86-PE (BD Pharmingen #553692) и 7AAD (BD Pharmingen #51-68981 Ε). Клетки сортируют на сортере BD FACSCalibur и получают популяцию клеток, дающих сигнал выше порогового значения, CD19/7AAD. Уровни поверхностной экспрессии CD86 на популяции клеток, дающих сигнал выше порогового значения, измеряют против концентрации тестируемого соединения.
Пример 906 Анализ выживания клеток B-ALL
Метод стандартного исследования выживаемости клеток B-ALL (острого лимфобластного лейкоза) с использованием считывания данных ХТТ для измерения числа жизнеспособных клеток состоит в следующем. Данный анализ можно использовать для тестирования соединений формулы I на их способность к ингибированию выживаемости клеток B-ALL в культуре. Одной из линий В-клеток острого лимфобластного лейкоза человека, которую можно использовать, является линия SUP-B15, представляющая собой линию пре-В-клеток ALL человека, доступная из Американской коллекции типовых культур (АТСС; от англ. American Type Culture Collection).
5
2
Клетки пре-B-ALL SUP-B15 высевают в множественные 96-луночные микротитрационные планшеты в 100 мкл среды Исков с добавлением 20% фетальной бычьей сыворотки (ФБС) при концентрации 5×10 клеток/мл. Затем добавляют тестируемые соединения при конечной концентрации 0,4% ДМСО. Клетки инкубируют при 37°C и при 5% CO в течение вплоть до 3 суток. Через 3 суток клетки разделяют до 1:3 в новые 96-луночные планшеты, содержащие тестируемое соединение, и дают возможность для дополнительного роста в течение 3 суток. После каждого 24-часового периода в один из повторов 96-луночного планшета добавляют 50 мкл раствора ХТТ и снимают считывания поглощения через 2, 4 и 20 часов, следуя инструкциям изготовителя. Затем считывают данные при OD для клеток, обработанных только ДМСО, в пределах линейного диапазона анализа (0,5-1,5) и измеряют процент жизнеспособных клеток в лунках, обработанных соединением, против клеток, обработанных только ДМСО.
Пример 907 Анализ цельной крови на CD69
Кровь человека получают от здоровых волонтеров при следующих ограничениях: не принимающих лекарств в течение недели, некурящих. Кровь (приблизительно 20 мл на тестирование 8 соединений) собирают путем венопункции в пробирки Vacutainer (Becton, Dickinson and Co.) с гепарином натрием.
2
2
2
50
70
90
70
Растворы соединений формулы I при концентрации 10 мМ в ДМСО разводят 1:10 в 100% ДМСО, затем разводят путем серийных разведений в три раза 100% ДМСО для построения кривой доза-ответ по десяти точкам. Соединения дополнительно разводят 1:10 в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), а затем аликвоту 5,5 мкл каждого соединения добавляют к двум повторам 96-луночного планшета на 2 мл; 5,5 мкл 10% ДМСО в ФСБ добавляют в качестве контроля и в лунки без стимула. В каждую лунку добавляют цельную кровь человека (HWB; от англ. human whole blood) (100 мкл). После перемешивания планшеты инкубируют при 37°C, 5% CO, влажности 100% в течение 30 минут. В каждую лунку добавляют F(ab') IgM козы против человека (10 мкл раствора 500 мкг/мл, конечная концентрация 50 мкг/мл) (за исключением лунок без стимула) при перемешивании, и планшеты инкубируют дополнительно в течение 20 часов. По окончании 20-часовой инкубации образцы инкубируют с флуоресцентно-мечеными антителами в течение 30 минут при 37°C, 5% CO, влажности 100%. Включают индуцированный контроль, контроль без красителей и отдельные красители для регулирования степени компенсации и установок исходного напряжения. Затем образцы подвергают лизису с помощью набора PharM Lyse™ (BD Biosciences Pharmingen) согласно инструкциям изготовителя. Затем образцы переносят в 96-луночный планшет, подходящий для проведения эксперимента в 96-луночной системе прибора LSRII BD Biosciences HTS. Данные снимают, и значения средней интенсивности флуоресценции получают, используя программное обеспечение BD Biosciences DIVA. Результаты первоначально анализируют с помощью программного обеспечения анализа флуоресцентной сортировки клеток (FACS) (Flow Jo). Ингибиторные концентрации (IC, IC, IC и т.д.) для тестируемых соединений определяют как концентрацию, которая снижает, например, на 50%, процент CD69-положительных клеток, которые являются также CD20-положительными при стимуляции анти-IgM (среднее 8 контрольных лунок после вычитания среднего значения 8 лунок для фона без стимула). Значения IC вычисляют с помощью программы Prism версия 5, используя совпадение с кривой нелинейной регрессии, и эти значения представлены в таблицах 1 и 2.
Пример 908 Анализ клеточной пролиферации in vitro

Эффективность соединений формулы I измеряют с помощью анализа клеточной пролиферации, используя следующий протокол (Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488). Люминесцентный анализ выживаемости клеток CellTiter-Glo, включая реагенты и протокол, имеется в продаже (Promega Corp., Madison, Wl, Technical Bulletin TB288). В данном анализе оценивают способность соединений к поступлению в клетки и ингибированию клеточной пролиферации. Принцип анализа основан на определении процентного значения жизнеспособных клеток путем количественного определения АТФ, присутствующей в гомогенном анализе, где добавление реагента Cell-Titer Glo приводит в результате к лизису клеток и образованию люминесцентного сигнала посредством люциферазной реакции. Люминесцентный сигнал пропорционален количеству присутствующего АТФ.

Панель клеточных линий В-клеточной лимфомы (BJAB, SUDHL-4, TMD8, OCI-Ly10, OCI-Ly3, WSU-DLCL2) высевают в 384-луночный планшет в обычной среде для роста, и в каждую лунку добавляют серийно разведенные ингибиторы ВТК или один ДМСО. Выживаемость клеток оценивают после 96-часовой инкубации с помощью CellTiter-Glo (Promega). Данные могут быть представлены в виде относительной выживаемости клеток в клетках, обработанных ВТК, относительно контрольных клеток, обработанных ДМСО. Точки данных представляют собой средние значения 4 повторов при каждом уровне дозы. Величины ошибки представляют собой СО (стандартное отклонение) от среднего значения.
2
Метод: Сутки 1 - высевание клеток в планшеты (384-луночные черные, с прозрачным дном, микропрозрачные планшеты ТС с крышкой от Falcon #353962), Сбор клеток, высевание клеток в количестве 1000 клеток на 54 мкл на лунку в 384-луночные планшеты для клеточных культур для 3-суточного анализа. Среда для клеточной культуры: RPMI или DMEM с высоким содержанием глюкозы, 10% фетальная бычья сыворотка, 2 мМ L-глутамин, P/S. Инкубация в течение ночи при 37°C, 5% CO.
Сутки 2 - Добавление лекарственных средств к клеткам, разведение соединения, планшеты ДМСО (серийное 1:2 для 9 точек), добавление 20 мкл соединений при концентрации 10 мМ во 2-ю колонку 96-луночного планшета. Проводят серийные разведения 1:2 по горизонтали планшета (10μl+20μl 100% ДМСО) суммарно для 9 точек, используя Precision. Планшеты среды: 96-луночные полипропиленовые планшеты с коническим дном от Nunc (№по каталогу 249946) (разведение 1:50), во все лунки добавляют 147 мкл среды. Переносят 3 мкл ДМСО с соединением из каждой лунки из планшета ДМСО в каждую соответствующую лунку на планшете со средой, используя робот Rapidplate.
2
Добавление лекарственных средств к клеткам, планшет с клетками (разведение 1:10), добавляют 6 мкл среды с соединением непосредственно к клеткам (54 мкл среды уже на клетках). Инкубируют в течение 3 суток при 37°C, 5% CO в термостате, который не открывают часто.
Сутки 5 - проявление планшетов, оттаивание буфера Cell Titer Glo при комнатной температуре. Извлекают планшеты с клетками с 37°C и уравновешивают до комнатной температуры в течение приблизительно 30 минут. Добавляют буфер Cell Titer Glo к субстрату Cell Titer Glo (флакон во флакон). Добавляют 30 мкл реагента Cell Titer Glo (Promega №по каталогу G7572) в каждую лунку клеток. Помещают на встряхиватель для планшетов на 30 минут. Считывают люминесценцию на считывающем устройстве для планшетов Analyst НТ (половина секунды на лунку).
2
50
Анализы выживаемости клеток и комбинированные анализы: Клетки высевают при 1000-2000 клеток/лунка в 384-луночные планшеты на 16 ч. На вторые сутки готовят девять серийных разведений соединения 1:2 в ДМСО в 96-луночном планшете. Соединения дополнительно разводят в среде для роста, используя робот Rapidplate (Zymark Corp., Hopkinton, MA). Затем разведенные соединения добавляют в лунки 384-луночных клеточных планшетов в четырех повторах и инкубируют при 37°C и 5% CO. После 4 суток измеряют относительные количества жизнеспособных клеток с помощью люминесценции, используя Cell-Titer Glo (Promega) согласно инструкциям изготовителя, и считывают на считывающем устройстве Wallac Multilabel Reader (PerkinElmer, Foster City). Значения EC вычисляют, используя программу Prism 4.0 (GraphPad, San Diego). Соединения формулы I и химиотерапевтические средства добавляют одновременно или по отдельности с интервалом в 4 часа (одно перед другим) во всех анализах.
Дополнительная иллюстрация анализа клеточной пролиферации in vitro включает следующие стадии:
4
1. Аликвоту 100 мкл клеточной культуры, содержащую приблизительно 10 клеток в среде, помещают в каждую лунку 384-луночного планшета с непрозрачными стенками.
2. Готовят контрольные лунки, содержащие среду без клеток.
3. Добавляют соединение в экспериментальные лунки и инкубируют в течение 3-5 суток.
4. Планшеты уравновешивают до комнатной температуры в течение приблизительно 30 минут.
5. В каждую лунку добавляют объем реагента CellTiter-Glo, равный объему клеточной культуральной среды, находящейся в каждой лунке.
6. Содержимое перемешивают в течение 2 минут на орбитальном встряхивателе для индукции лизиса клеток.
7. Планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут для стабилизации люминесцентного сигнала.
8. Люминесценцию считывают и представляют на графиках в виде ОЕЛ = относительных единиц люминесценции.
Хотя описанное выше изобретение раскрыто в некоторых подробностях путем иллюстрации и примера с целью ясности понимания, эти описания и примеры не следует истолковывать как ограничивающие объем изобретения. Соответственно, все подходящие модификации и эквиваленты могут быть рассмотрены как входящие в объем изобретения, определенный приведенной ниже формулой изобретения. Описания всей патентной и научной литературы, цитируемой в данном изобретении, полностью явным образом включены посредством ссылки.