СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО АКТИВНОСТИ КРЕАТИНФОСФОКИНАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
METHOD FOR ASSESSING STALLION SPERM QUALITY BY CREATINPHOSPHOKINASE ACTIVITY IN BLOOD SERUM

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Известно исследование (Атрощенко М.М. Взаимосвязь качества спермы жеребцов и ее криоустойчивости с показателями крови / М.М. Атрощенко. Е.Ю. Бородкина // Коневодство и конный спорт. - 2010. - №2. - С. 34-36), в котором речь идет о биохимическом исследовании крови в зависимости от активности креатинфосфокиназы (КФК) и сравнении уровня активности фермента в сыворотке крови с репродуктивными качествами жеребцов.
Основным отличием данного исследования от заявляемого способа является то, что в нем отмечено повышенное, значительно выше нормы, содержание КФК в сыворотке крови у большинства жеребцов всех групп, но нет сравнительной оценки репродуктивных качеств жеребцов относительно показателя КФК.
Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки энзимологических показателей сыворотки крови и качества спермы жеребцов (Атрощенко, М.М. Взаимосвязь энзимологических показателей сыворотки крови и качества спермы жеребцов / М.М. Атрощенко, М.Г. Енгалычева, A.M. Кудлаева, Е.Ю. Бородкина, В.А. Науменкова, А.А. Незаленова, Н.А. Фролова, О.В. Широкова // Коневодство и конный спорт.- 2020. - №4. - С. 9-13), в котором подтверждена положительная корреляция между общим количеством сперматозоидов в эякуляте (r равна 0,39; р меньше 0,01) с активностью КФК в сыворотке крови и общим количеством сперматозоидов с прогрессивной подвижностью (r равна 0,44; р меньше 0,01).
Недостатком способа является то, что он не дает возможности оценить репродуктивные качества жеребцов по качеству спермы, а именно по общему числу сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте. При этом в нем не приводятся границы интервалов для сопоставления полученных при использовании способа результатов, что в принципе делает невозможным оценку репродуктивных качеств жеребцов по активности ферментов в сыворотке крови.
Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимого уровня (ПДУ) активности КФК в сыворотке крови жеребцов, что позволить оценить качество спермы.
Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высоким качеством спермы в зависимости от активности КФК в сыворотке крови позволяет оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.
Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высоким качеством спермы по активности КФК в сыворотке крови.
РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Используя ранее разработанную методику (Науменкова В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.), были отобраны образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 21). После получения спермы, каждый эякулят оценивали по следующим показателям: объем эякулята, концентрация, активность, общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.
Одновременно с получением спермы производится забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.
Была изучена активность КФК в сыворотке крови колориметрическим методом. На основании полученных результатов, согласно ранее разработанным рекомендациям (Назаренко Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. - М.: Медицина, 2002. - 544 с.), был рассчитан ПДУ активности КФК в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки: ПДУ КФК оказался равным 178 МЕ/л.
Затем мы распределили животных по группам. Формирование жеребцов для анализа осуществлялось, опираясь на значение 50 процентиля, которое составило 178 МЕ/л. В первой группе находились жеребцы со значением ПДУ больше 178 МЕ/л, во второй группе, соответственно, меньше 178 МЕ/л.
Как видно из полученных данных, жеребцы с активностью КФК в сыворотке крови больше 178 МЕ/л превосходили по общему количеству сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте на 148,79% аналогов из группы с меньшим значением данного показателя (Р не больше 0,01).
По данным исследования (Атрощенко М.М. Изучение взаимосвязи белкового спектра спермоплазмы и показателей качества спермы жеребцов / М.М. Атрощенко, A.M. Шитикова, М.Г. Енгалычева, О.В. Денисова, Д.Г. Навасардянц, О.С. Белоновская, А.А. Пасько // Коневодство и конный спорт.- 2020. - №6. - С. 12-15) количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте в выборке жеребцов с наилучшими показателями качества спермы в среднем составляет 5,6 млрд.
Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях активности КФК в сыворотке крови больше 178 МЕ/л, отмечается высокий уровень общего количества сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края.
Сначала производится отбор образцов спермы жеребцов и оценивается по следующим показателям: объем эякулята, концентрация, активность, общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С. Одновременно с получением спермы осуществляется забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.
Полученные образцы оцениваются по активности КФК в крови колориметрический метод. Кроме того, определяют общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте.
Вывод: при активности КФК в сыворотке крови выше 178 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при активности КФК в сыворотке крови ниже 178 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой.
Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения качества спермы жеребцов, не нужно знать общее количество сперматозоидов в эякуляте с прогрессивной подвижностью, а достаточно знать уровень активности КФК в сыворотке крови.