КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИАБЕТОМ
COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING HEART FAILURE IN DIABETIC PATIENTS

Область техники, к которой относится изобретения
Настоящее изобретение относится к применению белка нейрегулина для получения лекарственного средства для профилактики, лечения или задержки сердечной недостаточности у человека, и к способам профилактики, лечения или задержки сердечной недостаточности у человека с применением такого лекарственного средства. В частности, в настоящем изобретении предоставлены способы профилактики, лечения или задержки сердечной недостаточности с применением композиции, содержащей белок нейрегулина у пациентов с диабетом, которые имеют или находятся в зоне риска осложнения сердечных заболеваний.
Предпосылки создания изобретения
В течение последних лет значительно повысилось преобладание сахарного диабета (СД), в частности диабета 2 типа. Новые цифры показывают, что количество людей, имеющих диабет, вероятнее всего возрастет с 366 миллионов в 2011 до 552 миллионов к 2030, если не будет предпринято никаких срочных мер. Основной причиной заболеваемости и смертности у пациентов с диабетом являются сердечные осложнения или сердечно-сосудистые заболевания, особенно коронарная болезнь сердца (КБС), которая является причиной вплоть до 75% смертей у пациентов с СД 2 типа. Хотя наиболее частым сердечным проявлением является КБС, СД также сильно связан с СН (сердечная недостаточность), которая может развиться из КБС. Приблизительно 15-25% пациентов с СН являются диабетиками. Это множество людей с диабетом страдает сердечными осложнениями, особенно СН.
СД может быть причинно связан с сердечными осложнениями, особенно с развитием СН через следующие механизмы: из-за сопутствующих заболеваний, благодаря развитию коронарного атеросклероза, ухудшенного кальциевого обмена или через специфическую диабетическую кардиомиопатию, и так далее.
Сопутствующие заболевания или факторы риска могут частично являться причиной повышенного риска СН у пациентов с диабетом. Эти сердечно-сосудистые факторы риска, такие как дислипидемия, гипертензия, гиперкоагуляция, ожирение и воспаление являются частью синдрома инсулинорезистентности и, по меньшей мере, частично, регулируются ядерными рецепторами, активируемыми пролифератором пероксисом (PPAR); активация PPAR-гамма улучшает чувствительность к инсулину и эндотелиальную функцию, и снижает воспаление и кровяное давление. По фрамингемской шкале риска, мужчины и женщины с диабетом имеют более высокое кровяное давление и массу тела, чем не страдающие диабетом. Те же наблюдения были предоставлены для пациентов с СН.
Повышенный риск атеросклероза у пациентов с диабетом также может в значительной мере содействовать повышенному риску СН. СД связан со значительно повышенным риском болезни коронарных артерий, которая лежит в основе СН. Гипергликемия вызывает значительное количество изменений в ткани сосудов, которые возможно содействуют ускоренному атеросклерозу.
2+
2+
Значительное преобладание выделенной диастолической дисфункции наблюдается среди пациентов с диабетом. Это может быть результатом ухудшенного кальциевого обмена у пациентов с диабетом. На модели хронического диабета Ca в подавленном саркоплазматическом ретикулуме (СР) повторно поглощается во время фазы расслабления сердечных миоцитов, которые связаны с длительными потенциалами действия (ПД) и после деполяризаций на клеточном уровне и с ухудшенным расслаблением желудочков на уровне органа. Похоже, что эти механизмы ухудшенного повторного поглощения Ca в СР лежат в основе выделенной субклинической диастолической дисфункции, раннего патологического события, которое может развиться в диастолическую сердечную недостаточность.
Также существуют данные, позволяющие предположить, что СД может провоцировать развитие СН через существование специфической диабетической кардиомиопатии. Существующий механизм, посредством которого СД может вызывать СН независимо от эпикардиальной болезни коронарных артерий, неизвестен, но было выдвинуто несколько гипотез: они включают микроангиопатию, метаболические факторы и фиброз.
В иных случаях, ренин-ангиотензиновая система не контролируется диабетом, и ангиотензин II (Ang II) локально может приводить к окислительному повреждению, активируя смерть клеток сердца. Диабет характеризуется 85-кратным, 61-кратным и 26-кратным повышением апоптоза миоцитов, эндотелиальных клеток и фибробластов, соответственно. Более того, диабет и гипертензия повышает некроз миоцитов и эндотелиальных клеток. Апоптоз и некроз миоцитов может способствовать развитию расширенной миопатии, которая может вызвать сердечную недостаточность.
Одна из многообещающих новых терапий включает введение нейрегулина (далее обозначенного как "NRG") пациенту, страдающему или подверженному риску развития сердечных осложнений, особенно сердечной недостаточности. Нейрегулин может предотвращать, лечить или задерживать сердечные осложнения у пациентов с диабетом, где его функцией является улучшение структуры миокарда, стимулирование выживания кардиомиоцитов, стимулирование кальциевого гомеостаза и его антиатеросклеротического действия, которое повреждено у пациентов с диабетом.
NRG, семейство EGF-подобных факторов роста, включают семейство структурно родственных факторов роста и дифференциации, которые включают NRG1, NRG2, NRG3 и NRG4, и их изоформы, которые включены в ряд биологических реакций: стимулирование дифференцировки клеток рака молочной железы и выделение молочных белков; вызывание дифференцировки клеток нервных валиков до шванновских клеток; стимулирование синтеза клеток мышц скелета в ацетилхолиновых рецепторах; и стимулирование выживания клеток миокарда и синтеза ДНК. In vivo исследования нейрегулина, нацеленные на ген гомозиготных мышиных эмбрионов с тяжелыми дефектами при образовании желудочковой трабекулы и развитии дорсальных корешковых ганглий показывают, что нейрегулин является жизненно важным для развития сердца и нервов.
NRG связываются с семейством рецепторов EGF, которое включает EGFR, ErbB2, ErbB3 и ErbB4, каждый из которых играет важную роль во множестве клеточных функций, включая рост, дифференциацию и выживание клеток. Они являются рецепторами протеинтирозинкиназы, состоящими из внеклеточного лиганд-связывающего домена, трансмембранного киназного домена и цитоплазматического тирозинкиназного домена. После того как NRG связывается с внеклеточным доменом ErbB3 или ErbB4, он вызывает конформационное изменение, которое приводит к образованию гетеродимера между ErbB3, ErbB4 и ErbB2, или образование гомодимера между самим ErbB4, что вызывает фосфорилирование С-концевого домена рецептора внутри клеточной мембраны. Фосфорилированный внутриклеточный домен затем связывает дополнительные сигнальные белки внутри клетки, активируя соответствующий нисходящий сигнальный путь AKT или ERK и вызывая ряд клеточных реакций, таких как стимулирование или подавление пролиферации клеток, дифференциации клеток, апоптоза клеток, миграции клеток или адгезии клеток. Среди этих рецепторов, в основном ErbB2 и ErbB4 экспрессируются в сердце.
Было показано, что EGF-подобные домены NRG-1, варьирующиеся в размере от 50 до 64-аминокислот, являются достаточными для связывания и активации этих рецепторов. Проведенные ранее исследования показали, что нейрегулин-1β (NRG-1β) может связываться непосредственно с ErbB3 и ErbB4 с высокой аффинностью. Рецептор-сирота, ErbB2, может образовывать гетеродимер с ErbB3 и ErbB4 с более высокой аффинностью, чем ErbB3 или ErbB4 гомодимеры. Исследования развития нервной системы показали, что образование симпатической нервной системы требует неповрежденной NRG-1β, ErbB2 и ErbB3 сигнальной системы. Направленное разрушение NRG-1β или ErbB2 или ErbB4 приводит к смерти эмбриона из-за дефектов развития сердца. Недавние исследования также подчеркнули роль NRG-1β, ErbB2 и ErbB4 в развитии сердечно-сосудистой системы, а также в поддержании нормальной сердечной функции у взрослых. Было показано, что NRG-1β улучшает организацию саркомера во взрослых кардиомиоцитах. Введение рекомбинантного NRG-1β EGF-подобного домена значительно улучшает или защищает от ухудшения работы миокарда на различных животных моделях сердечной недостаточности, а также в клинических испытаниях. Эти результаты делают NRG-1 многообещающим ведущим соединением для лечения сердечной недостаточности. И в описании настоящего изобретения авторы предоставили еще больше доказательств того, что лечение NRG-1 может обеспечивать профилактическую или терапевтическую пользу пациентам с диабетом, которые страдают или подвержены высокому риску осложнений сердечных заболеваний.
Сущность изобретения
В клинических испытаниях нейрегулин для лечения сердечной недостаточности на человеке, авторы настоящего изобретения обнаружили, что пациенты с сердечной недостаточностью, которые также страдают диабетом, получали значительную пользу при лечении нейрегулином. Такая польза включает значительное снижение смертности.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что NRG улучшает дифференциацию клеток сердечной мышцы и организацию саркомерной и цитоскелетной структуры, а также адгезию клеток. Также было обнаружено авторами настоящего изобретения, что NRG значительно улучшает или защищает от ухудшения работы миокарда на различных животных моделях сердечной недостаточности и в клинических испытаниях. NRG эффективен для улучшения структуры миокарда, способствует выживанию кардиомиоцитов, способствует кальциевому гомеостазу и его антиатеросклеротическому действию, которое нарушено у пациентов с диабетом. Нейрегулин, полипептид нейрегулина, производные нейрегулина или соединения, которые имитируют действие нейрегулинов, входят в объем настоящего изобретения.
Таким образом, в первом аспекте настоящего изобретения предоставлен способ профилактики, лечения или задержки сердечных осложнений у пациентов с диабетом, включающий введение пациентам фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество нейрегулина. В некоторых вариантах осуществления сердечным осложнением является сердечная недостаточность. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме введения. В некоторых оптимизированных вариантах осуществления режим введения включает непрерывное введение фармацевтической композиции в течение, по меньшей мере, 3, 5, 7 или 10 дней. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме поддержки в течение, по меньшей мере, 6 месяцев после введения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления режим поддержки включает введение фармацевтической композиции каждые 3, 5, 7 или 10 дней.
Во втором аспекте предоставлен способ профилактики, лечения или задержки сердечной недостаточности, включающий введение пациентам фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество нейрегулина. В некоторых вариантах осуществления пациентами являются пациенты с диабетом. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме введения. В некоторых оптимизированных вариантах осуществления режим введения включает непрерывное введение фармацевтической композиции в течение, по меньшей мере, 3, 5, 7 или 10 дней. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме поддержки в течение, по меньшей мере, 6 месяцев после введения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления режим поддержки включает введение фармацевтической композиции каждые 3, 5, 7 или 10 дней.
В третьем аспекте, в настоящем изобретении предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество нейрегулина для профилактики, лечения или задержки сердечных осложнений у пациентов с диабетом. В некоторых вариантах осуществления сердечным осложнением является сердечная недостаточность. В некоторых вариантах осуществления пользой является значительное снижение смертности. В некоторых вариантах осуществления пользой является значительное снижение повторной госпитализации. В некоторых вариантах осуществления пользой является улучшение уровней биомаркеров, которое показывает улучшение хронической сердечной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления сердечным осложнением является сердечная недостаточность.
В четвертом аспекте, в настоящем изобретении предоставлена комбинация, которая включает эффективное количество нейрегулина и эффективное количество профилактических или терапевтических средств для лечения сахарного диабета.
В пятом аспекте, в настоящем изобретении предоставлен способ улучшения выживаемости или снижения смертности у пациентов с хронической сердечной недостаточностью, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество нейрегулина, пациентам с хронической сердечной недостаточностью. В одном из вариантов осуществления пациентами с хронической сердечной недостаточностью являются пациенты с диабетом. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме введения. В некоторых оптимизированных вариантах осуществления режим введения включает непрерывное введение фармацевтической композиции в течение, по меньшей мере, 3, 5, 7 или 10 дней. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациентам в режиме поддержки в течение, по меньшей мере, 6 месяцев после введения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления режим поддержки включает введение фармацевтической композиции каждые 3, 5, 7 или 10 дней.
В шестом аспекте предоставлено применение белка нейрегулина для получения лекарственного средства. Лекарственное средство предназначено для пациентов с хронической сердечной недостаточностью для получения долговременной пользы. В некоторых вариантах осуществления пациентами с хронической сердечной недостаточностью являются пациенты с диабетом. В некоторых вариантах осуществления долговременной пользой является улучшение или выживаемость. В некоторых вариантах осуществления долговременной пользой является снижение повторной госпитализации. В другом варианте долговременной пользой является улучшение биомаркеров, которые являются долговременным прогнозом хронической сердечной недостаточности.
Подробное описание изобретения
Для ясности описания, но не с целью ограничения, подробное описание изобретения разделено на подразделы, которые представлены ниже. Все указанные публикации включены в данное описание посредством ссылок для раскрытия и описания способов и/или материалов, в соответствии с которыми даны ссылки на публикации.
Определения
Если не указано иное, все технические и научные термины, использованные в данном описании, имеют значения, общепринятые среди специалистов в области, к которой относится изобретение. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, представленные в данном описании, включены посредством ссылок во всей их полноте. Если определение, представленное в этом разделе, противоречит или не соответствует определению, представленному в патентах, заявках, опубликованных заявках и других публикациях, которые включены в данное описание посредством ссылок, определение, данное в этом разделе, превалирует над определением, которое включено в данное описание посредством ссылки.
В данном описании единственное число означает, "по меньшей мере, одно" или "одно или более", если контекст недвусмысленно не указывает иное.
th
В данном описании "нейрегулин" или "NRG", применяемый в соответствии с данным изобретением, относится к белкам или пептидам, которые могут связывать и активировать ErbB2, ErbB3, ErbB4 или их комбинации, включая, но, не ограничиваясь ими, все изоформы нейрегулина, отдельный EGF-подобный домен нейрегулина, полипептиды, содержащие EGF-подобный домен нейрегулина, мутанты или производные нейрегулина и любой тип нейрегулин-подобных генных продуктов, которые также активируют указанные выше рецепторы, как описано более подробно ниже. Нейрегулин также включает NRG-1, NRG-2, NRG-3 и NRG-4 белки, пептиды, фрагменты и соединения, которые имитируют действие нейрегулина. Нейрегулин, используемый в настоящем изобретении, может активировать указанные выше рецепторы ErbB и модулировать их биологические реакции, например, стимулировать синтез рецептора ацетилхолина в клетках скелетных мышц; и/или улучшать дифференциацию, выживание и ДНК синтез кардиоцитов. Нейрегулин также включает варианты с консервативными замещениями аминокислот, которые по существу не изменяют его биологическое действие. Подходящие консервативные замещения аминокислот известны специалистам в данной области техники и могут быть сделаны по существу без изменения биологической активности полученной молекулы. Специалисту в данной области техники будет понятно, что, как правило, отдельные замещения аминокислот в не существенных областях полипептида по существу не изменяют биологическую активность (см., например, Watson et al.,Molecular Biology of the Gene, 4 Edition, 1987, The Bejacmin/Cummings Pub.co.,p.224). В предпочтительных вариантах осуществления нейрегулин, используемый в настоящем изобретении, связывается и активирует ErbB2/ErbB4 или ErbB2/ErbB3 гетеродимеры, например, но, не ограничиваясь ими, пептиды, включающие 177-237 остатки NRG-1 β2 изоформы, содержащей последовательность аминокислот: SHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCPNEFTGDRCQNYVMASFYKAEELYQ (SEQ ID NO:1). Пептиды, включающие 177-237 остатки NRG-1 β2 изоформы, содержат EGF-подобный домен, который является достаточным для связывания и активации рецепторов.
В данном описании "эпидермальный фактор роста-подобный домен" или "EGF-подобный домен" относится к полипетидному мотиву, кодированному геном нейрегулина, который связывается с и активирует ErbB2, ErbB3, ErbB4 или их комбинации, и несет структурное сходство со связывающим рецептор EGF доменом, как описано в WO 00/64400, Holmes et al., Science, 256:1205-1210 (1992); патентах США 5530109 и 5716930; Hijazi et al., Int. J. Oncol., 13:1061-1067 (1998); Chang et al., Nature, 387:509-512 (1997); Carraway et al., Nature, 387:512-516 (1997); Higashiyama et al., J. Biochem., 122:675-680 (1997); и WO 97/09425, содержание которых включено в данное описание посредством ссылок. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен связывается с и активирует ErbB2/ErbB4 или ErbB2/ErbB3 гетеродимеры. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот рецептора, связывающего домен NRG-1. В некоторых вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот, соответствующую аминокислотным остаткам 177-226, 177-237 или 177-240 из NRG-1. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот рецептора, связывающего домен NRG-2. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот рецептора, связывающего домен NRG-3. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот рецептора, связывающего домен NRG-4. В определенных вариантах осуществления EGF-подобный домен содержит последовательность аминокислот Ala Glu Lys Glu Lys Thr Phe Cys Val Asn Gly Gly Glu Cys Phe Met Val Lys Asp Leu Ser Asn Pro, как описано в патенте США 5834229.
Композиция, доза и способ введения белка нейрегулина, предпочтительно в форме фармацевтических композиций, могут быть определены методами, известными в данной области техники (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Alfonso R. Gennaro (Editor) Mack Publishing Company, April 1997; Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing, and Delivery Systems, Banga, 1999; и Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins, Hovgaard and Frkjr (Ed.), Taylor & Francis, Inc., 2000; Medical Applications of Liposomes, Lasic and Papahadjopoulos (Ed.), Elsevier Science, 1998; Textbook of Gene Therapy, Jain, Hogrefe & Huber Publishers, 1998; Adenoviruses: Basic Biology to Gene Therapy, Vol. 15, Seth, Landes Bioscience, 1999; Biopharmaceutical Drug Design and Development, Wu-Pong and Rojanasakul (Ed.), Humana Press, 1999; Therapeutic Angiogenesis: From Basic Science to the Clinic, Vol. 28, Dole et al. (Ed.), Springer-Verlag New York, 1999).
Белок нейрегулина может быть составлен для перорального, ректального, местного, ингаляционного, буккального (например, подъязычного), парентерального (например, подкожного, внутримышечного, чрезкожного или внутривенного), чрезкожного введения или любого подходящего способа введения. Наиболее подходящий способ в любом конкретном случае зависит от природы и тяжести подвергаемого лечению состояния и природы конкретного белка нейрегулина, который используют. Белок нейрегулина может вводиться отдельно. Альтернативно и предпочтительно, белок нейрегулина вводят совместно с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. В способе настоящего изобретения может быть использован любой подходящий фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Alfonso R. Gennaro (Editor) Mack Publishing Company, April 1997).
Согласно настоящему изобретению, белок нейрегулина, отдельно или в комбинации с другими средствами, носителями или эксципиентами, может быть составлен для любого подходящего способа введения, такого как интракавернозная инъекция, подкожная инъекция, внутривенная инъекция, внутримышечная инъекция, внутрикожная инъекция, пероральное или местное введение. В способе могут применяться композиции для введения инъекцией в единичной дозированной форме, в ампулах или многодозных контейнерах, с добавлением консерванта. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать вспомогательные агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может быть в виде порошка для восстановления подходящим носителем, стерильной апирогенной водой или другими растворителями, перед применением. При местном введении в настоящем изобретении может применяться пена, гель, крем, мазь, чрезкожный пластырь или паста.
Фармацевтически приемлемые композиции и способы их введения, которые могут применяться в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, описанные в патентах США 5736154; 6197801 B1; 5741511; 5886039; 5941868; 6258374 B1 и 5686102.
Размер терапевтической дозы для лечения или профилактики варьируется в зависимости от тяжести подвергаемого лечению состояния и способа введения. Доза и, вероятно, частота дозы, также варьируется в зависимости от возраста, массы тела, состояния и реакции конкретного пациента.
Следует отметить, что лечащий врач знает, как и когда прекращать, прерывать или корректировать терапию для снижения дозы из-за токсичности или побочных эффектов. Также, терапевт знает, как и когда корректировать лечение до более высоких уровней, если клиническая реакция не является достаточной (исключая токсичные побочные эффекты).
Может применяться любой подходящий способ введения. Дозированные формы включают таблетки, пастилки, облатки, дисперсии, суспензии, растворы, капсулы, пластыри и подобные. См. Remington's Pharmaceutical Sciences. На практике, белок нейрегулина, отдельно или в комбинации с другими средствами, может быть объединен в качестве активного ингредиента в однородной смеси с фармацевтическим носителем или эксципиентом, таким как бета-циклодекстрин и 2-гидроксипропил-бета-циклодекстрин, с применением стандартных методик получения фармацевтических форм. Носитель может принимать множество форм препаратов, желательных для введения, местного или парентерального. При получении композиций для парентеральных дозированных форм, таких как внутривенные инъекции или вливания, может применяться похожая фармацевтическая среда, вода, гликоли, масла, буферы, сахар, консерванты, липосомы и подобные, известные специалисту в данной области техники. Примеры таких парентеральных композиций включают, но не ограничиваются ими, декстрозу 5% масс./об., обычный физиологический раствор или другие растворы. Общая доза белка нейрегулина, отдельно или в комбинации с другими вводимыми средствами, может вводиться во флаконе с внутривенной жидкостью, в дозе от около 1 мл до 2000 мл. Объем жидкости для разведения варьируется в зависимости от общей вводимой дозы.
В изобретении также представлены наборы для осуществления терапевтических режимов по настоящему изобретению. Такие наборы содержат, в одном или более контейнерах, терапевтически эффективные количества белка нейрегулина, отдельно или в комбинации с другими средствами, в фармацевтически приемлемой форме. Предпочтительные фармацевтические формы объединены со стерильным физиологическим раствором, раствором декстрозы или буферным раствором, или другой фармацевтически приемлемой стерильной жидкостью. Альтернативно, композиция может быть лиофилизирована или высушена; в таком случае, набор необязательно также включает контейнер с фармацевтически приемлемым раствором, предпочтительно, стерильным, для восстановления комплекса, с получением раствора для инъекции. Обычные фармацевтически приемлемые растворы включают физиологический раствор и раствор декстрозы.
В другом варианте осуществления набор по настоящему изобретению также содержит иглу или шприц, предпочтительно упакованный стерильно, для инъекции композиции, и/или спиртовую салфетку в упаковке. Необязательно включены инструкции по введению композиции для терапевта или для пациента.
Как используется в данном описании, "лечить", "лечение" и "обработка" относится к любым действиям, посредством которых симптомы состояния, расстройства или заболевания облегчаются или другим образом благоприятно изменяются. Действие может быть профилактическим в смысле полной или частичной профилактики заболевания или его симптома, и/или может быть терапевтическим в смысле частичного или полного излечивания заболевания и/или побочного эффекта, присущего заболеванию. Лечение также охватывает любое фармацевтическое применение композиций по настоящему изобретению.
Как используется в данном описании, "сердечная недостаточность" означает аномалию сердечной функции, при которой сердце не качает кровь со скоростью, отвечающей требованиям метаболизирующих тканей. Сердечная недостаточность включает широкий спектр болезненных состояний, таких как застойная сердечная недостаточность, инфаркт миокарда, тахиаритмия, наследственная гипертрофическая кардиомиопатия, ишемическая болезнь сердца, идиопатическая дилатационная кардиомиопатия, миокардит и подобные. Сердечная недостаточность может быть вызвана любым количеством факторов, включая, но без ограничений, ишемические, врожденные, ревматические, вирусные или идиопатические формы. Хроническая сердечная гипертрофия является крайне болезненным состоянием, которое является предшественником застойной сердечной недостаточности и остановки сердца.
Как используется в данном описании, "белок" является синонимом "полипептида" или "пептида", если в контексте ясно не указано иное.
Как используется в данном описании, "плазма" является синонимом "сыворотки", если в контексте ясно не указано иное.
Как используется в данном описании, "долговременная польза" означает пользу, вызванную лечением или вмешательством, которое не наблюдается в кратком периоде после лечения или вмешательства. Для пациентов с хронической сердечной недостаточностью, долговременной пользой может быть улучшение выживаемости, снижение повторной госпитализации или улучшение биомаркеров, которые показывают долговременный прогноз. В некоторых вариантах осуществления период времени наблюдения пользы составляет около 6 месяцев. В некоторых вариантах осуществления период времени наблюдения пользы составляет около 1 года. В некоторых вариантах осуществления период времени наблюдения пользы составляет около 2 лет. И в других вариантах осуществления период времени наблюдения пользы составляет около 3 лет, 5 лет, 10 лет или дольше.
Как используется в данном описании, "выживаемость" означает время или вероятность того, сколько пациент будет оставаться живым или жить. Она может быть выражена временем выживаемости или степенью выживаемости. Время выживаемости представляет собой период времени, начиная с диагностики или лечения, заканчивая концом жизни. Степень выживаемости означает процент людей, которые живы в течение данного периода времени после диагностики или лечения. Для каждого пациента, продленное время выживаемости благодаря лечению или вмешательству может считаться пользой. Для группы пациентов или больших популяций, продленное среднее время выживаемости или повышенная степень выживаемости могут считаться пользой.
Как используется в данном описании, "повторная госпитализация" означает количество или частоту лечения пациента в стационаре в течение данного периода времени. Лечение в стационаре может быть вызвано всеми состояниями или вызвано одним и тем же состоянием, которое подвергается лечению. Для каждого пациента, снижение количества случаев повторной госпитализации в данный период времени считается пользой. И для группы пациентов или больших популяций, снижение общего количества случаев повторной госпитализации может считаться пользой.
Уровни в плазме BNP и NT-proBNP являются многообещающими инструментами в ежедневном управлении предполагаемой или установленной сердечной недостаточностью. Большинство исследований применения BNP и NT-proBNP в клинической практике относится к их диагностическим свойствам, и находится все больше доказательств, подтверждающих прогностическую ценность BNP и NT-proBNP. Так как NT-proBNP имеет период полжизни в крови в около 6 раз больше, чем BNP, он более широко используется в качестве диагностического или прогностического маркера для сердечной недостаточности. Уровень NT-proBNP в плазме может быть проанализирован с помощью коммерческих наборов. В качестве примера, но не для ограничения, коммерческих наборов от Roche или Biomedica. В примерах настоящего изобретения уровень NT-proBNP определяют с помощью набора от Biomedica (Austria).
Уровни BNP и NT-proBNP в крови используют для скрининга, диагноза сердечной недостаточности, и их применяют для установления прогноза сердечной недостаточности, так как оба маркера обычно выше у пациентов с плохим результатом. И, как описано в настоящем изобретении, уровни в плазме BNP или NT-proBNP являются показателем того, что пациент подходит для лечения сердечной недостаточности нейрегулином. Фактически, любые диагностические или прогностические маркеры для сердечной недостаточности могут применяться для определения того, подходит ли пациент для лечения сердечной недостаточности нейрегулином. Уровень в плазме NT-proBNP, идентифицированный в настоящем изобретении, может применяться скорее как руководство, чем как ограничение пациентов с сердечной недостаточностью, которые будут получать значительную пользу от лечения нейрегулином. Например, применение уровня в плазме 5000 фмоль/мл все еще подходит для выбора пациентов с сердечной недостаточностью, которые будут получать пользу от лечения нейрегулином, но некоторые из этих пациентов будут получать пользу от лечения в меньшей степени.
Как используется в данном описании, "единица активности" или "EU" или "U" означает количество стандартного продукта, который может вызвать 50% максимальную реакцию. Другими словами, для определения единицы активности для данного активного агента, необходимо измерить EC50. Например, если EC50 для партии продукта составляет 0,1 мкг, она будет составлять одну единицу. Также если применяют 1 мкг этих продуктов, то применяют 10 EU (1/0,1). EC50 может быть определена любым способом, известным в данной области техники, включая способ, применяемый авторами настоящего изобретения. Такое определение единицы активности является важным для контроля качества генно-инженерных продуктов и клинически применяемых лекарственных средств, и позволяет количественно измерять продукт из различных фармацевтических средств и/или различных партий с применением однородного критерия.
Далее предоставлен иллюстративный, быстрый, чувствительный, с большой интенсивностью потока и количественный способ определения биологической активности NRG-1 через объединение NRG с молекулой поверхности клетки ErbB3/ErbB4 и косвенное опосредование фосфорилирования ErbB2 (см., например, Michael D. Sadick et al., 1996, Analytical Biochemistry, 235:207-214 и WO 03/099300).
Кратко, анализ, названный фермент-связанным иммуносорбентным исследованием активации рецептора киназы (KIRA-ELISA), включает два отдельных титровальных микропланшета, один для клеточной культуры, стимулирования лиганда и лизиса клеток/солюбилизации рецептора, и другой для отлавливания рецептора и фосфотирозинового ELISA. Исследование разработано для анализа вызванной NRG активации ErbB2, и в нем применяется стимулирование нетронутого рецептора на сращенной колонии клеток карциномы молочной железы, MCF-7. Белки мембраны солюбилизируют через лизис Triton X-100, и рецептор улавливают в лунках ELISA, покрытых ErbB2-специфическими антителами без перекрестной реакции с ErbB3 или ErbB4. Степень фосфорилирования рецептора затем количественно оценивают антифосфотирозиновым ELISA. Воспроизводимую стандартную кривую затем создают с EC50 приблизительно 360 пМ для херегулина бета 1 (177-244). Если анализируют идентичные образцы HRG бета 1 (177-244) и KIRA-ELISA и количественным антифосфотирозиновым вестерн-блоттингом, результаты коррелируются очень близко друг к другу. Анализ, описанный в этом отчете, может специфически количественно оценивать фосфорилирование тирозина ErbB2, которое возникает при взаимодействии HRG с ErbB3 и/или ErbB4.
Так как большинство генно-инжиниринговых лекарственных средств являются белками и полипептидами, их активность может быть определена их последовательностью аминокислот или центром активности, образованным их пространственной структурой. Титр активности белка и полипептида не согласуется с их абсолютным качеством, поэтому не может быть определен с помощью единиц массы, как это делается для химических лекарственных средств. Однако биологическая активность генно-инженерных лекарственных средств обычно согласуется с их фармакодинамикой, и система определения титра, установленная через данную биологическую активность, может определять их титровальную единицу. Поэтому определение биологической активности может быть частью процесса титрования вещества с биологической активностью и является важным компонентом контроля качества генно-инженерного продукта. Важно определять критерии биологической активности для контроля качества генно-инженерного продукта и клинически применяемых лекарственных средств.
Количество стандартного продукта, которое может вызвать 50% максимальную реакцию, определено как единица активности (1 EU). Следовательно, продукт из различных фармацевтических средств и из различных партий может быть количественно оценен с применением однородных критериев.
Краткое описание фигур
Фиг. 1: Результаты NT-proBNP у пациентов с диабетом с rhNRG-1 и плацебо на 11, 30 и 90 день.
Примеры
Пример 1: Действие введения Neucardin™ различными способами на степень выживаемости у крыс с ЗСН
Введение
В этом исследовании применяют модель лигирования коронарной артерии (ЛКА), имитирующую инфаркт миокарда у пациентов с диабетом для исследования того, оказывает ли введение Neucardin™ через капельницу внутривенно (ВВ) с применением микронасоса или в виде подкожного (ПК) болюса воздействие на степень выживаемости и сердечную гемодинамику через 120 дней после начала введения Neucardin™ через 4 недели после ЛКА. Эхокардиографию и ремоделирование сердца также применяют для определения сердечной функции и восстановления после ЛКА.
2. Способы
2.1. Тестируемые животные
Вид, происхождение: крысы Wistar, Shanghai SLAC Laboratory Animal CO. LTD; масса, 200±10 г, самцы.
2.2 Тестируемый препарат
2.2.1 Neucardin™
Идентификация: рекомбинантный человеческий нейрегулин-1 для инъекций (rhNRG-1, Neucardin™)
Номер партии: 200607009
Производитель: Zensun (Shanghai) Sci & Tech Co., Ltd
Лекарственная форма: лиофилизированный порошок
Вид: белая или не совсем белая лепешка
Меченое содержание rhNRG-1: 250 мкг/флакон
Специфическая активность: 4897 U/флакон
Условия хранения: 2~8°C
2.2.2 Носитель
Идентификация: плацебо для рекомбинантного человеческого нейрегулина-1
Лекарственная форма: лиофилизированный порошок
Вид: белая или не совсем белая лепешка
Композиция: человеческий сывороточный альбумин, манит, фосфат, NaCl
Условия хранения: 2~8°C
2.3 Методика
2.3.1 Создание крысиной модели ЗСН
Лигируют ПНА крыс. Кратко, крыс анестезируют гидрохлоридом кетамина (100 мг/кг, ВБ), и их грудную клетку бреют и стерилизуют. Крыс эндотрахеально интубируют и механически вентилируют окружающим воздухом (скорость дыхания 60 вдохов/мин, объем вдоха 20 мл). Затем проводят левую торакотомию на 4 и 5 межреберном пространстве, и затем кожу рассекают вдоль левого края грудины. Затем четвертое ребро отрезают близко к грудинной кости. Перикард прокалывают и обнажают сердце. ПНА лигируют приблизительно в 2 мм от ее начала с применением 6-0 шелковой хирургической нити. Затем воздух из грудной клетки удаляют и грудную клетку закрывают тремя слоями (ребра, мышцы и затем кожа). Затем крысам дают возобновить самостоятельное дыхание, выводят из анестезии и затем возвращают в клетки. Крыс поддерживают в течение 4 недель, затем делают эхокардиографию, включают в формальное исследование, если они показывают значение % EF 30-45%. Животных из всех групп размещают по 5 в клетке, кормят без ограничений стандартным кормом и обеспечивают свободный доступ к воде. В комнате поддерживают температуру 21±1°C и 12 ч цикл день/ночь.
2.3.2 ВВ капельница через микронасос
В методе с применением ВВ капельницы с носителем или Neucardin™ используют хвостовую вену. Для этого используют подходящую клетку для иммобилизации крыс в соответствии с массой животного. Крысу помещают рядом с клеткой для иммобилизации и осторожно помещают в аппарат. Обычно крысам помогают попасть в клетку для иммобилизации. Затем хвост крысы вытирают марлей, смоченной спиртом для усиления притока крови в хвостовую вену и в смягченный эпидермис кожи. Две боковых (на стороне) хвостовых вены локализуют и, направляя скошенный край иглы, расположенный вверху иглы, практически параллельно вене, вводят иглу на 2 мм в хвостовую вену на расстоянии 2-3 см от конца хвоста. Для того чтобы удостовериться, что игла успешно введена в вену, кровь экстрагируют в разъем иглы. Иглу закрепляют на хвосте медицинским пластырем. Начинают вливание лекарственного средства или носителя с подходящей скоростью (0,2-0,4 мл/ч) с использованием микронасоса или болюсной инъекции.
2.3.3 ПК болюс
ПК болюс с носителем или Neucardin™ помещают на спину крысы. Для этого используют подходящую клетку для иммобилизации крысы в соответствии с массой животного. Спину крысы протирают марлей, смоченной спиртом, для стерилизации кожи. Направляя скошенный край иглы, расположенный вверху иглы, практически параллельно вене, вводят иглу подкожно на 3-4 см в спину крысы. Иглу закрепляют на спине с помощью медицинского пластыря и подсоединяют к перфузионной трубке. Затем крысу помещают рядом с клеткой для иммобилизации и осторожно помещают в аппарат. Обычно крысы входят в клетку для иммобилизации без помощи. После того, как закроют клетку для иммобилизации, начинают болюсную инъекцию.
2.3.4 Экспериментальные группы и вливание лекарственного средства
MI крыс рандомизируют по значению EF % на четыре группы следующим образом:
группа A (отрицательный контроль) для ВВ и ПК болюса. n=58 крыс: ВВ капельница с носителем в течение 10 дней с применением микронасоса со скоростью 0,2 мл/ч в течение 8 ч каждый день в течение первых 10 дней, ПК болюс с носителем (объем такой же, как для Neucardin™), каждые 5 дней до дня 120;
группа B (ПК болюс Neucardin™), n=58: ВВ капельница с носителем с применением микронасоса со скоростью 0,2 мл/ч в течение 8 ч каждый день в течение первых 10 дней, ПК болюс Neucardin™ (10 мкг/день), каждые 5 дней до дня 120;
группа C (ВВ капельница Neucardin™), n=57: ВВ капельница Neucardin™ (0,625 мкг/кг/ч) с применением микронасоса со скоростью 0,2 мл/ч в течение 8 ч каждый день в течение первых 10 дней, ПК болюс с носителем (объем такой же, как для Neucardin™), каждые 5 дней до дня 120;
группа D (ВВ капельница и ПК болюс Neucardin™), n=57: ВВ капельница Neucardin™ (0,625 мкг/кг/ч) с применением микронасоса со скоростью 0,2 мл/ч в течение 8 ч каждый день в течение первых 10 дней, ПК болюс с носителем (объем такой же, как для Neucardin™) на 1, 6, 11 дни и затем ПК болюс Neucardin™ (10 мкг/кг), каждые 5 дней с 16 дня до конца.
2.3.5 Сбор данных
Степень выживаемости; параметры эхокардиографии; параметры гемодинамики.
3. Результаты
3.1 Степень выживаемости
В таблице 1 показана степень выживаемости для каждой группы. Степени выживаемости составляют 48,3%, 62,1%, 64,9% и 82,5% для ВВ капельницы и ПК болюса носителя для группы А, ПК болюса с Neucardin™ для группы B, ВВ капельницы с Neucardin™ для группы С и ВВ капельницы и ПК болюса с Neucardin™ для группы D, соответственно. Все степени выживаемости или среднее время выживаемости для смертности в группах B, C и D улучшались или продлялись по сравнению с группой A, где наилучшая эффективность достигалась в группе D.
Таблица 1Смертность, степень выживаемости и среднее время выживаемости в четырех группах
Группа
Обработка
Начальное количество крыс
Умершие
Количество выживших крыс
Степень выживаемости (%)
Среднее время выживаемости смертности в днях±С.О.
A
Носитель
58
30
28
48,3%
83,8±5,9
B
ПК болюс Neucardin™
58
22
36
62,1%
91,4±5,5
C
ВВ капельница Neucardin™
57
20
37
64,9%
97,5±5,1
D
ПК болюс и ВВ капельница Neucardin™
57
10
47
82,5%
107,5±4,1
3.2 Параметры эхокардиографии
Параметры эхокардиографии показаны в таблице 2. Через четыре недели после лигирования коронарной артерии и перед введением тестируемого вещества крыс с ЗСН рандомизируют на четыре группы в соответствии с их значениями EF %. Как показано в таблице 2, нет существенных отличий в четырех группах до обработки (ДО). Через 120 дней после начала введения значения EF % были 30,7±3,1, 32,9±4,1, 33,5±3,4, 36,2±4,8% для носителя, Neucardin™ через ПК болюс, Neucardin™ через ВВ капельницу и Neucardin™ через ВВ капельницу плюс ПК болюс, соответственно. После лечения EF % и FS % для групп B, C и D были выше, чем для группы A.
Таблица 2Параметры эхокардиографии для четырех групп
Группа
ДО ПО
N
LVEDd (см)
LVEDs (см)
EF % (%)
FS % (%)
A. Отрицательный контроль
ДО
58
0,987±0,083
0,829±0,088
38,0±5,5
16,2±2,7
ПО
25
1,100±0,089
0,961±0,090
30,7±3,1
12,7±1,4
B. ПК болюс Neucardin™
ДО
58
0,992±0,066
0,831±0,066
38,2±4,0
16,3±2,0
ПО
33
1,104±0,063
0,952±0,070
33,1±4,1
13,9±1,9
C. ВВ капельница Neucardin™
ДО
57
0,985±0,061
0,824±0,068
38,5±4,4
16,3±2,1
ПО
36
1,080±0,072
0,929±0,073
33,4±3,4
14,0±1,6
D. ПК болюс и ВВ капельница Neucardin™
ДО
57
0,979±0,065
0,818±0,066
38,7±4,3
16,5±2,1
ПО
44
1,052±0,087
0,893±0,092
36,2±4,8
15,3±2,4
ДО: до обработки; ПО: после обработка;
3.3 Параметры гемодинамики
В таблице 3 показаны значения MAP, HR, ±dp/dt, LVEDP и LVSP, измеренные в четырех группах анестезированных животных на день 121. Если Neucardin™ вводят только через ПК болюс или ВВ капельницу (группа B и C), Neucardin™ значительно повышает dp/dt и -dp/dt на 19,6% и 27,1%, 22,5% и 29.8% по сравнению с группой A. Если Neucardin™ вводят через ВВ капельницу и ПК болюс вместе (группа D), получают значительное повышение среднего артериального давления (MAP, 112,3±5,5 мм рт.ст.), систолического давления крови в левом желудочке (LVSP, 139,4±9,8 мм рт.ст.), +dp/dt (7012,1±903,0 мм рт.ст./с), -dp/dt (-4353,2±847,6 мм рт.ст./с) по сравнению с носителем. Интересно, что эти значения MAP, LVSP, +dp/dt и -dp/dt были на 10,6%, 9,2%, 38,5% и 37,8% выше, чем у крыс, обработанных носителем, соответственно. Результаты показывают, что группы B, C и D были лучше, чем группа A по гемодинамическим параметрам, где группа D является наиболее эффективной.
Таблица 3Параметры гемодинамики для четырех групп
Группа
Обработка
N
SBP (мм рт.ст.)
DBP (мм рт.ст.)
MAP (мм рт.ст.)
LVSP (мм рт.ст.)
A
Носитель
14
118,7±11,5
94,1±12,3
102,3±11,7
128,5±14,7
B
ПК болюс Neucardin™
27
123,8±11,5
95,3±8,9
104,9±9,5
129,5±13,6
C
ВВ капельница Neucardin™
25
122,5±10,5
95,0±7,5
104,4±8,2
131,7±10,0
D
ПК болюс и ВВ капельница Neucardin™
35
132,6±7,1
102,1±5,3
112,3±5,5
139,4±9,8
Группа
Обработка
N
LVEDP (мм рт.ст.)
dp/dt (мм рт.ст./с)
(-dp/dt) (мм рт.ст./с)
Частота сердечных сокращений (удар/мин)
A
Носитель
14
5,8±3,5
4995,6±532,2
3087,5±715,7
297,2±16,0
B
ПК болюс Neucardin™
27
4,5±2,8
6050,9±1231,3
4013,8±838,3
292,6±23,0
C
ВВ капельница Neucardin™
25
4,0±3,2
6199,9±709,5
4098,9±823,5
296,3±13,5
D
ПК болюс и ВВ капельница Neucardin™
35
3,9±2,5
7012,1±903,0
4353,2±847,6
292,5±19,1
4. Заключение
Совместное введение Neucardin™ через ВВ капельницу и ПК болюс или введение данного пептида каждым способом по отдельности повышает степень выживаемости крыс с ЗСН, вызванной ЛКА, и улучшает параметры сердечной функции по сравнению с крысами, обработанными носителем.
Пример 2: Рандомизированное двойное слепое мультицентровое плацебо-контролируемое исследование для оценки эффективности и безопасности рекомбинантного человеческого нейрегулина 1 у пациентов с хронической сердечной недостаточностью на основе стандартного лечения
Для оценки эффективности рекомбинантного человеческого нейрегулина-1 для инъекций при хронической сердечной недостаточности, включая пациентов с диабетом, страдающих хронической сердечной недостаточностью, проводят фазу II, двойного слепого мультицентрового плацебо-контролируемого исследования на основе стандартного лечения во множестве клинических центров в Китае. Всего 195 пациентов с NYHA класса II или III стабильной хронической сердечной недостаточностью, включая 21 пациента с диабетом, включают в исследование и рандомизируют на три группы: плацебо, или 0,6 мкг/кг и 1,2 мкг/кг rhNRG-1. 13 пациентов с диабетом включены в группу Neucardin (5 в подгруппе 0,6 мкг/кг/день и 8 в подгруппе 1,2 мг/кг/день) и 9 пациентов включены в группу плацебо. Значительные вариации в демографических показателях или фоновой терапии среди групп отсутствуют. Согласно расписанию, пациентам вводят лекарственное средство в течение 10 последовательных дней сначала в больнице, после окончания наблюдения на 11 день их выписывают из больницы. Два других очных наблюдения проводят на 30 и 90 день. Телефонное собеседование проводят через год после включения в исследование последнего пациента.
Исследуемый продукт
Спецификация: Neucardin™, полипептид из 61 аминокислот, содержит EGF-подобный домен нейрегулина-1 β2 изоформы, молекулярная масса 7054 Дальтон (1 мкг=0,14 нмоль). 250 мкг (5000 EU)/флакон (1 мкг=20 EU).
Препарат: для инъекций.
Способ введения: внутривенная капельница.
Хранение: в безопасном месте, с ограниченным доступом и защищенном от света, при 3-8°C.
Плацебо
Спецификация: эксципиент для Neucardin™. 250 мкг/флакон и без активного рекомбинантного человеческого белка нейрегулина-1.
Группы дозирования
Доза
0 мкг/кг/день
0,6 нг/кг/день
1,2 мкг/кг/день
Ведение
Внутривенное вливание
Объем
50 мл
Курс
10 часов в день в течение последовательных 10 дней
Методика исследования
Пациентов произвольно разделяют на три группы, получавшие плацебо или rhNRG-1 (0,6 или 1,2 мкг/кг/день) в течение 10 последовательных дней, после окончания обследования нВ 11 день их выписывают из больницы. Два других очных наблюдения проводят на 30 и 90 день. Образцы крови каждого пациента собирают до лечения и на 11, 30 и 90 день. NT-proBNP в плазме тестируют в головной лаборатории с применением исследований NT-proBNP (набор от Biomedica).
У пациентов с диабетом (5 в подгруппе 0,6 мкг/кг/день и 8 в подгруппе 1,2 мкг/кг/день и 9 в группе плацебо), как показано на Фиг. 1, наблюдается снижение уровней NT-proBNP у пациентов, получавших Neucardin™, на 30 и 90 дни, что указывает на улучшенный долговременный прогноз. Повышенный уровень на 11 день вызван непосредственным выделением BNP из кардиомиоцитов при стимулировании Neucardin™, что подтверждается в предклинических исследованиях.
Эти результаты показывают, что лечение rhNRG-1 может снижать уровень в плазме NT-proBNP, указывая на то, что rhNRG-1 может обеспечивать долговременную пользу пациентам с диабетом, страдающим хронической сердечной недостаточностью.
Пример 3: Произвольное двойное слепое мультицентровое плацебо-контролируемое исследование выживаемости рекомбинантного человеческого нейрегулина 1 у пациентов с хронической сердечной недостаточностью на основе стандартного лечения
Для оценки эффективности рекомбинантного человеческого нейрегулина-1 для инъекций при хронической сердечной недостаточности, включая пациентов с диабетом, страдающих хронической сердечной недостаточностью, проводят фазу II, двойного слепого мультицентрового плацебо-контролируемого исследования на основе стандартного лечения во множестве клинических центров в Китае. Всего 351 пациентов с NYHA класса III или IV стабильной хронической сердечной недостаточностью включают в исследование и произвольно разделяют на плацебо группу или rhNRG-1 группу (0,6 мкг/кг). 68 из 351 пациента страдают диабетом, из них 35 пациентов включены в группу плацебо и 33 пациента включены в группу Neucardin™. Значительные вариации в демографических показателях или фоновой терапии среди групп отсутствуют. Согласно расписанию, пациентам вводят лекарственное средство в течение 10 последовательных дней в больнице, после окончания наблюдения на 11 день их выписывают из больницы и вводят лекарственное средство один раз в неделю с 3 недели до 25 недели как амбулаторным пациентам. Образцы крови каждого пациента собирают до лечения (базовое значение) и после каждого обследования. Информацию по выживанию собирают на 52 неделе исследования.
Исследуемый продукт
Спецификация: Neucardin™, полипептид из 61 аминокислот, содержит EGF-подобный домен нейрегулина-1 β2 изоформы, молекулярная масса 7054 Дальтон (1 мкг=0,14 нмоль). 250 мкг (5000 EU)/флакон (1 мкг=20 EU).
Препарат: для инъекций.
Способ введения: внутривенная капельница или вливание.
Хранение: в безопасном месте, с ограниченным доступом и защищенном от света, при 3-8°C.
Плацебо
Спецификация: эксципиент для Neucardin™. 250 мкг/флакон и без активного рекомбинантного человеческого белка нейрегулина-1.
Группы дозирования:
День 1-10
Неделя 3-25
Доза
0,6 мкг/кг/день rhNRG-1 или плацебо
0,8 нг/кг/день rhNRG-1 или плацебо
Путь
Внутривенная капельница
Внутривенное вливание
Режим
10 часов в день в течение последовательных 10 дней
10 минут вливания еженедельно
Для пациентов с диабетом все случаи смертности в группе плацебо на 52 неделе составляют 20%, 7 смертей среди 35 пациентов, количество в группе rhNRG-1 составляет 9,1%, 3 смерти среди 33 пациентов, закончивших исследование. Таким образом, из результатов можно видеть 55% снижение смертности при введении rhNRG-1 по сравнению с группой плацебо, даже если группа плацебо сохраняет предыдущее стандартное лечение хронической сердечной недостаточности.
Результаты этого исследования показали, что rhNRG-1 может значительно снижать смертность пациентов с диабетом, страдающих сердечными осложнениями, особенно СН.