ХИМЕРНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ АНТИГЕНА ПРОТИВ МЕЗОТЕЛИНА ЧЕЛОВЕКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный рецептор антигена (CAR), где CAR содержит: i) антитело или фрагмент антитела, содержащие мезотелин-связывающий домен человека, ii) трансмембранный домен и iii) внутриклеточный сигнальный домен, содержащий стимулирующий домен, и где указанный мезотелин-связывающий домен содержит одну или более из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (CDR1 LC), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (CDR2 LC) и определяющей комплементарности области 3 легкой цепи (CDR3 LC), содержащих аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5, и одну или более из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (CDR1 HC), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (CDR3 HC), содержащих аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC, где CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, где CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, содержащая CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC, где CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5, и CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, где CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где мезотелин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенных в таблице 2.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где мезотелин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенных в таблице 2.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где мезотелин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенных в таблице 2, и любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенных в таблице 2.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где мезотелин-связывающий домен представляет собой scFv.
9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где мезотелин-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 2, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 2.
10. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где мезотелин-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 2, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 2
11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый мезотелин-связывающий домен содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62 или последовательности с 95-99% идентичностью с ними.
12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая мезотелин-связывающий домен, содержит a последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 и SEQ ID NO: 110 или последовательности с 95-99% идентичностью с ними.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый CAR включает трансмембранный домен, который содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или зета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3-эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, которая содержит по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранный домен, содержит последовательность SEQ ID NO: 17 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый мезотелин-связывающий домен связан с трансмембранным доменом шарнирной областью.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.17, где кодируемая шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.17, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирную область, содержит последовательность SEQ ID NO: 13 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней.
20. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая последовательность, кодирующую костимулирующий домен.
21. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.20, где костимулирующий домен представляет собой функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278) и 4-1BB (CD137).
22. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.20 или 21, где кодируемый костимулирующий домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7.
23. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.20 или п.21, где кодируемый костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7.
24. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.20 или 21, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимулирующий домен, содержит последовательность SEQ ID NO: 18 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней.
25. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3-зета.
26. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и/или последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
27. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
28. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной рамке считывания и в качестве единой полипептидной цепи.
29. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен, содержит последовательность SEQ ID NO: 18 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней, и/или последовательность SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность с 95-99% идентичностью с ними.
30. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая лидерную последовательность.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.32, где лидерная последовательность содержит SEQ ID NO: 1.
32. Выделенная полипептидная молекула, кодируемая молекулой нуклеиновой кислоты по любому из п.п.1-32.
33. Выделенный полипептид по п.32, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85 и SEQ ID NO: 86.
34. Выделенная молекула химерного рецептора антигена (CAR), содержащая мезотелин-связывающий домен человека, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.
35. Выделенная молекула CAR по п.34, содержащая i) антитело или фрагмент антитела, которые включают мезотелин-связывающий домен человека, ii) трансмембранный домен и iii) внутриклеточный сигнальный домен.
36. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34 или 35, где мезотелин-связывающий домен не конкурирует за связывание мезотелина человека с антигенсвязывающим доменом, содержащим последовательность, содержащую SEQ ID NO: 279.
37. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-36, где мезотелин-связывающий домен конкурирует с антигенсвязывающим доменом, содержащим:
a) одну или более из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (CDR1 LC), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (CDR2 LC) и определяющей комплементарность область 3 легкой цепи (CDR3 LC) последовательности мезотелин-связывающего домена, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49, и одну или более из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (CDR1 HC), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (CDR3 HC) последовательности мезотелин-связывающего домена, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49;
b) CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC аминокислотной последовательности легкой цепи против мезотелина, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49, и CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC аминокислотной последовательности тяжелой цепи против мезотелина, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49; или
c) последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49.
38. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-37, где мезотелин-связывающий домен связывается с отличающимся эпитопом на мезотелине человека, от эпитопа мезотелина человека, на который нацелен антигенсвязывающий домен, содержащий последовательность, содержащую SEQ ID NO: 279.
39. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-38, где мезотелин-связывающий домен связывается с C-концом мезотелина человека.
40. Выделенная молекула CAR по п.39, где мезотелин-связывающий домен связывается с эпитопом в пределах аминокислот 450-588 SEQ ID NO: 278.
41. Выделенная молекула CAR по п.40, где эпитоп содержит аминокислоты 485-490, 498-507, 532-537 или 545-572 SEQ ID NO: 278, или любую их подгруппу или комбинацию.
42. Выделенная молекула CAR по любому из п.п. 34-41, где мезотелин-связывающий домен человека содержит одну или более из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (CDR1 LC), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (CDR3 LC), содержащих аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5, и одну или более из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (CDR1 HC), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (CDR3 HC), содержащих аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
43. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-42, содержащая CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5.
44. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-43, содержащая CDR1 HC, CDR2 HC, и CDR3 HC, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
45. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-44, содержащая CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 5, и CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 4.
46. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-45, где мезотелин-связывающий домен представляет собой scFv.
47. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-46, где мезотелин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность легкой цепи и тяжелой цепи, приведенную в таблице 2.
48. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-47, где мезотелин-связывающий домен содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 2 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 2.
49. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-48, где мезотелин-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 2 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 2.
50. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-49, где мезотелин-связывающий домен содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62 или последовательности с 95-99% идентичностью с ними.
51. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-50, где трансмембранная область содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или зета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3-эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154.
52. Выделенная молекула CAR по п.51, где трансмембранный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 6.
53. Выделенная молекула CAR по п.51, где трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6.
54. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-53, где мезотелин-связывающий домен человека связан с трансмембранным доменом шарнирной областью.
55. Выделенная молекула CAR по п.54, где шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 36 или последовательность с 95-99% идентичностью с ней.
56. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-55, где внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность, кодирующую костимулирующий домен.
57. Выделенная молекула CAR по п.56, где костимулирующий домен содержит функциональный сигнальный домен белка, выбранный из группы, состоящей из OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), CD278 (также известный как "ICOS") и 4-1BB (CD137).
58. Выделенная молекула CAR по п.56 или 57, где костимулирующий домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7.
59. Выделенная молекула CAR по п.56 или 57, где костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификации аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7.
60. Выделенная молекула CAR по п.34-59, где внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен CD3-зета.
61. Выделенная молекула CAR по п.60, где внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и/или последовательность SEQ ID NO: 9.
62. Выделенная молекула CAR по п.60, где внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и/или последовательность SEQ ID NO: 10.
63. Выделенная молекула CAR по любому из п.п. 34-55, где внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
64. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.34-55, где внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность SEQ ID NO: 7 и последовательность SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, где последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной рамке считывания и в качестве единой полипептидной цепи.
65. Выделенная молекула CAR по любому из п.п.59-64, дополнительно содержащая лидерную последовательность.
66. Выделенная молекула CAR по п.65, где лидерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или последовательность с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1.
67. Мезотелин-связывающий домен человека, содержащий одну или более из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (CDR1 LC), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (CDR3 LC) мезотелин-связывающего домена SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62, и одну или более из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (CDR1 HC), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (CDR2 HC) и определяющей комплементарность область 3 тяжелой цепи (CDR3 HC) любого мезотелин-связывающего домена человека SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62.
68. Мезотелин-связывающий домен человека по п.67, где мезотелин-связывающий домен человека представляет собой scFv, содержащий легкую цепь и тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, и SEQ ID NO: 62.
69. Мезотелин-связывающий домен человека по п.67 или 68, где мезотелин-связывающий домен человека содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 62, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 62; и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 62, или последовательности с 95-99% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 62.
70. Мезотелин-связывающий домен человека, где мезотелин-связывающий домен не конкурирует за связывание мезотелина человека с антигенсвязывающим доменом, содержащим последовательность, содержащую SEQ ID NO: 279.
71. Мезотелин-связывающий домен человека по п.70, где мезотелин-связывающий домен конкурирует с антигенсвязывающим доменом, содержащим:
a) одну или более из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (CDR1 LC), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (CDR2 LC) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (CDR3 LC) последовательности мезотелин-связывающего домена, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49, и одну или более из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (CDR1 HC), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (CDR2 HC) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (CDR3 HC) последовательности мезотелин-связывающего домена, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49
b) CDR1 LC, CDR2 LC и CDR3 LC аминокислотной последовательности легкой цепи против мезотелина, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49, и CDR1 HC, CDR2 HC и CDR3 HC аминокислотной последовательности тяжелой цепи против мезотелина, выбранной из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49; или
c) последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 49.
72. Мезотелин-связывающий домен человека по любому из п.п.70 или 71, где мезотелин-связывающий домен связывается с эпитопом мезотелина человека, отличным от эпитопа мезотелина человека, на который нацелен антигенсвязывающий домен, содержащий последовательность, содержащую SEQ ID NO: 279.
73. Мезотелин-связывающий домен человека по любому из п.п.70-72, где мезотелин-связывающий домен связывается с C-концом мезотелина человека.
74. Мезотелин-связывающий домен человека по п.73, где мезотелин-связывающий домен связывает эпитоп в пределах аминокислот 450-588 SEQ ID NO: 278.
75. Мезотелин-связывающий домен человека по п.74, где эпитоп содержит аминокислоты 485-490, 498-507, 532-537 или 545-572 SEQ ID NO: 278, или их любую подгруппу или комбинацию.
76. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR по любому из предшествующих пунктов.
77. Вектор по п.76, где вектор выбран из группы, состоящей из ДНК, РНК, плазмиды, лентивирусного вектора, аденовирусного вектора или ретровирусного вектора.
78. Вектор по п.76 или 77, дополнительно содержащий промотор.
79. Вектор по п.78, где промотор представляет собой промотор EF-1.
80. Вектор по п.79, где промотор EF-1 содержит последовательность SEQ ID NO: 11.
in vitro
81. Вектор по любому из п.п.76-78, где вектор представляет собой вектор, транскрибируемый .
82. Вектор по п.81, где последовательность нуклеиновой кислоты в векторе дополнительно содержит поли(A)-хвостовую часть.
83. Вектор по любому из п.п.81, где последовательность нуклеиновой кислоты в векторе дополнительно содержит 3’-UTR.
84. Клетка, содержащая вектор по любому из п.п.76-83.
85. Клетка по п.84, где клетка представляет собой T-клетку человека.
86. Клетка по п.85, где T-клетка представляет собой CD8+ T-клетку.
87. Способ получения клетки, включающий трансдукцию T-клетки вектором по любому из п.п.76-83.
in vitro
88. Способ получения популяции клеток со сконструированной способами инженерии РНК, включающий введение транскрибированной  РНК или синтетической РНК в клетку, где РНК содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу CAR по любому из предшествующих пунктов.
89. Способ обеспечения противоракового иммунитета у млекопитающего, включающий введение млекопитающему эффективного количества клетки, экспрессирующей молекулу CAR по любому из предшествующих пунктов.
90. Способ по п.89, где клетка представляет собой аутологичную T-клетку.
91. Способ по п.89 или 90, где клетка представляет собой аллогенную T-клетку.
92. Способ по любому из п.п.89-91, где млекопитающим является человек.
93. Способ лечения млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией мезотелина, включающий введение млекопитающему эффективного количества клеток, экспрессирующих молекулу CAR по любому из предшествующих пунктов.
94. Способ по п.93, где заболевание, ассоциированное с экспрессией мезотелина, выбрано из пролиферативного заболевания, такого как рак или злокачественная опухоль, или предзлзокачественного состояния, или представляет собой не связанное со злокачественной опухолью показание, ассоциированное с экспрессией мезотелина.
95. Способ по п.93-94, где заболевание представляет собой злокачественную опухоль, ассоциированную с мезотелином, выбранную из группы, состоящей из мезотелиомы, злокачественной плевральной мезотелиомы, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого или крупноклеточного рака легкого, рака поджелудочной железы, протоковой аденокарциномы поджелудочной железы, метастазирующего рака поджелудочной железы, рака яичника, рака ободочной и прямой кишки и рака мочевого пузыря, или любой их комбинации.
96. Способ по любому из п.п.93-95, где клетки, экспрессирующие молекулу CAR, вводят в комбинации со средством, которое повышает эффективность клетки, экспрессирующей молекулу CAR.
97. Способ по любому из п.п.93-96, где клетки, экспрессирующие молекулу CAR, вводят в комбинации со средством, которое смягчает один или более побочных эффектов, ассоциированных с введением клетки, экспрессирующей молекулу CAR.
98. Способ по любому из п.п.93-97, где клетки, экспрессирующие молекулу CAR, вводят в комбинации со средством, которое осуществляет лечение заболевания, ассоциированного с мезотелином.
99. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.1-31, выделенная полипептидная молекула по любому из п.п.32-33, выделенный CAR по любому из п.п.34-66, мезотелин-связывающий домен по любому из п.п.67-75, вектор по любому из п.п.76-83 или клетка по любому из п.п.84-86 для применения в качестве лекарственного средства.
1100. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.1-31, выделенная полипептидная молекула по любому из п.п.32-33, выделенный CAR по любому из п.п.34-66, мезотелин-связывающий домен по любому из п.п.67-75, вектор по любому из п.п.76-83 или клетка по любому из п.п.84-86 для применения для лечения заболевания, при котором экспрессируется мезотелин.
1101. Клетка по любому из п.п.84-86, дополнительно экспрессирующая ингибиторную молекулу, которая содержит первый полипептид, содержащий по меньшей мере часть ингибиторной молекулы, который связан со вторым полипептидом, содержащим положительный сигнал из внутриклеточного сигнального домена.
1102. Клетка по п.101, где первый полипептид содержит по меньшей мере часть PD1 и второй полипептид содержит костимулирующий домен и внутриклеточный сигнальный домен.
1103. Способ по п.96, где средство представляет собой ингибитор mTOR и индивидууму вводят низкую усиливающую иммунитет дозу ингибитора mTOR, например RAD001 или рапамицина.
1104. Способ по п.103, где ингибитор mTOR представляет собой RAD001.
1105. Способ по п.103, где доза содержит аллостерический или каталитический ингибитор mTOR.
1106. Способ по п.103, где ингибитор mTOR вводят в течение периода времени, достаточного для снижения доли положительных по PD-1 T-клеток, увеличения доли отрицательных по PD-1 T-клеток, или увеличения соотношения отрицательные по PD-1 T-клетки/положительные по PD-1 T-клетки, в периферической крови индивидуума или в препарате выделенных T-клеток от индивидуума.
1107. Способ по п.103, где иммунную эффекторную клетку, например T-клетку, подлежащую модификации способами инженерии для экспрессии CAR, собирают после достаточного периода времени или после достаточного дозирования низкой усиливающей иммунитет дозы ингибитора mTOR, чтобы уровень отрицательных по PD1 иммунных эффекторных клеток, например T-клеток, или соотношение отрицательные по PD1 иммунные эффекторные клетки, например, T-клетки/положительные по PD1 иммунные эффекторные клетки, например T-клетки, у индивидуума или после взятия от индивидуума по меньшей мере временно увеличивались.
1108. Способ по п.103, где доза ингибитора mTOR ассоциирована с ингибированием mTOR, составляющим по меньшей мере 5, но не более чем 90%, например, при измерении по ингибированию киназы p70 S6.
1109. Способ по п.103, где доза ингибитора mTOR ассоциирована с ингибированием mTOR, составляющим по меньшей мере 10%, но не более чем 40%, например, при измерении по ингибированию киназы p70 S6.
in vitro
1110. Способ лечения индивидуума, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией мезотелина, включающий ведение индивидууму эффективного количества клеток, содержащих нуклеиновую кислоту по любому из п.п.1-31, где нуклеиновую кислоту вводят в T-клетки или NK-клетки с использованием транскрипции , и индивидууму проводят первоначальное введение клеток, содержащих нуклеиновую кислоту, и одно или более последующих введений клеток, содержащих нуклеиновую кислоту, где одно или более последующих введений проводят менее чем через 15 суток, например, через 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или 2 суток, после предшествующего введения.