ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ НЕ ОТНОСЯЩИЕСЯ К ЧЕЛОВЕКУ ЖИВОТНЫЕ С ОГРАНИЧЕННЫМИ ЛОКУСАМИ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Мышь, содержащая в своей зародышевой линии:
H
H
H
(a) геномную последовательность человека, содержащую единственный генный сегмент V человека, один или несколько генных сегментов D и один или несколько генных сегментов J; и
(b) последовательность, которая кодирует белок ADAM6, который является функциональным у самца мыши, причем последовательность, которая кодирует ADAM6, расположена в положении, отличном от локуса ADAM6 мыши дикого типа.
H
H
2. Мышь по п. 1, у которой единственный генный сегмент V человека представляет собой полиморфный генный сегмент V.
3. Мышь по п. 1, у которой последовательность, которая кодирует ADAM6, представляет собой последовательность мыши.
4. Мышь по п. 1, у которой геномная последовательность мыши расположена погранично или смежно с геномной последовательностью человека.
5. Мышь по п. 1, у которой геномная последовательность человека и геномная последовательность мыши присутствуют на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.
6. Мышь по п. 1, у которой геномная последовательность человека присутствует на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина, и геномная последовательность мыши присутствует в положении в геноме мыши, отличном от эндогенного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина.
H
7. Мышь по п. 1, причем мышь содержит делецию всех или по существу всех эндогенных генных сегментов V.
H
H
H
H
H
H
8. Мышь по п. 1, у которой единственный генный сегмент V человека выбран из V1-2, V1-69, V2-26, V2-70, V3-23 или их полиморфного варианта.
H
H
9. Мышь по п. 8, у которой генный сегмент V человека представляет собой V1-69.
H
H
10. Мышь по п. 8, у которой генный сегмент V человека представляет собой V1-2.
H
11. Мышь по п. 1, у которой единственный генный сегмент V функционально связан с относящимся к человеку, мыши или химерным относящимся к человеку/мыши геном константной области иммуноглобулина.
12. Мышь по п. 11, у которой ген константной области иммуноглобулина представляет собой ген константной области мыши.
H
H
H
13. Мышь по п. 11, у которой константный ген иммуноглобулина содержит последовательность человека, выбранную из C1 человека, шарнира человека, C2 человека, C3 человека и их комбинации.
14. Мышь по п. 12, у которой константный ген мыши находится на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.
H
H
H
15. Мышь по п. 1, у которой геномная последовательность человека содержит генный сегмент V1-69 человека, 27 генных сегментов D человека и шесть генных сегментов J человека.
H
H
H
16. Мышь по п. 1, у которой геномная последовательность человека содержит генный сегмент V1-2 человека, 27 генных сегментов D и шесть генных сегментов J человека.
17. Мышь по пп. 1, 15 или 16, дополнительно содержащая один или несколько генных сегментов Vκ человека и один или несколько генных сегментов Jκ.
18. Мышь по п. 17, у которой один или несколько генных сегментов Vκ человека и один или несколько генных сегментов Jκ присутствуют на эндогенном локусе легкой цепи иммуноглобулина.
H
H
H
19. Мышь, содержащая по меньшей мере один генный сегмент V человека, функционально связанный по меньшей мере с одним генным сегментом D человека и по меньшей мере одним генным сегментом J человека, причем мышь содержит эктопическую последовательность ADAM6 мыши.
20. Мышь по п. 19, у которой указанная последовательность нуклеиновой кислоты присутствует в эктопическом положении.
21. Мышь по п. 19, у которой последовательность нуклеиновой кислоты присутствует на эндогенном локусе иммуноглобулина.
22. Мышь по п. 19, у которой последовательность нуклеиновой кислоты присутствует в геноме мыши в положении, отличном от эндогенного локуса иммуноглобулина.
H
H
23. Мышь, которая экспрессирует сывороточный иммуноглобулин, причем больше чем 80% сывороточного иммуноглобулина мыши содержит вариабельный домен тяжелой цепи человека и когнатный вариабельный домен легкой цепи человека, причем вариабельный домен тяжелой цепи человека происходит из репертуара генных сегментов V, состоящего по существу из единственного генного сегмента V человека и/или его полиморфных вариантов.
H
H
24. Мышь, содержащая в своей зародышевой линии замещение на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина всех или по существу всех эндогенных генных сегментов V единственным генным сегментом V человека и/или его полиморфными вариантами.
25. Мышь по п. 24, дополнительно содержащая замещение на эндогенном локусе легкой цепи иммуноглобулина всех или по существу всех эндогенных генных сегментов V легкой цепи одним или несколькими генными сегментами V легкой цепи человека.
26. Мышь по п. 25, дополнительно содержащая один или несколько генных сегментов J легкой цепи человека, функционально связанных с генными сегментами V легкой цепи человека.
27. Клетка или ткань, полученная от мыши по пп. 1, 19, 23 или 24.
H
28. Способ получения популяции антител человека, содержащих тяжелые цепи, происходящие из единственного генного сегмента V человека, причем способ включает:
(a) иммунизацию мыши по п. 1 представляющим интерес антигеном;
(b) предоставление указанной мыши возможности развить иммунный ответ на представляющий интерес антиген; и
(c) идентификацию или выделение последовательности вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного, причем антитело связывает представляющий интерес антиген.
29. Способ по п. 28, при котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентична SEQ ID NO: 5.
30. Способ по п. 28, при котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина содержит SEQ ID NO: 5.
31. Способ по п. 28, при котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентична SEQ ID NO: 64.
32. Способ по п. 28, при котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина содержит SEQ ID NO: 64.
33. Способ модификации локуса тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, включающий:
(a) получение первой модификации локуса тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, которая приводит к снижению или устранению эндогенной активности ADAM6 мыши у самца мыши; и
(b) получение второй модификации мыши для восстановления активности ADAM6 у мыши.
34. Способ по п. 33, при котором последовательность нуклеиновой кислоты на стадии (b) присутствует в эктопическом положении.
35. Способ по п. 33, при котором первая модификация включает присутствие одной или нескольких генных последовательностей иммуноглобулина человека.
36. Способ по п. 33, при котором первая модификация включает замещение одной или нескольких последовательностей в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши одной или несколькими генными последовательностями иммуноглобулина человека в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.
H
H
37. Способ по п. 36, при котором первая модификация включает замещение одного или нескольких эндогенных генных сегментов V единственными генными сегментами V человека в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.
38. Способ по п. 33, при котором первая модификация включает замещение эндогенной вариабельной генной последовательности тяжелой цепи вариабельной генной последовательностью тяжелой цепи человека в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.
39. Способ по п. 33, при котором первую и вторую модификацию осуществляют одновременно.
40. Способ получения антитела, специфического в отношении антигена, включающий следующие стадии:
(a) иммунизация мыши по п. 1 антигеном;
(b) выделение по меньшей мере одной клетки из мыши, производящей антитело, специфическое в отношении антигена; и
(с) культивирование по меньшей мере одной производящей антитело клетки согласно стадии (b) и получение указанного антитела.
41. Способ по п. 40, при котором культивирование на стадии (с) проводят по меньшей мере на одной гибридомной клетке, полученной по меньшей мере из одной клетки, полученной на стадии (b).
42. Способ по п. 40, при котором по меньшей мере одна клетка из полученных на стадии (b) происходит из селезенки, лимфатического узла или костного мозга мыши согласно стадии (а).
43. Способ по п. 40, при котором иммунизацию антигеном на стадии (а) проводят с помощью белка, ДНК, комбинации ДНК и белка или экспрессирующих антиген клеток.