Основные механизмы доставки лекарственных веществ в мозг с помощью полимерных наночастиц

Основные механизмы доставки лекарственных веществ в мозг с помощью полимерных наночастиц

Балабаньян В. Ю.1, Гельперина С. Э.2

1 — ООО «Технология лекарств», г. Химки, Московская область

2 — ООО «НПК «Наносистема», г. Москва

Резюме

В обзоре рассмотрены возможные механизмы транспорта лекарственных веществ через гематоэнцефалический барьер в составе полимерных наночастиц. Представлены экспериментальные данные о влиянии поверхностно-активных веществ и аполипопротеинов плазмы крови на способность полимерных наночастиц доставлять лекарственные вещества в мозг.

Ключевые слова: полимерные наночастицы, гематоэнцефалический барьер, аполипопротеины, рецептор-зависимый эндоцитоз.

Гематоэнцефалический барьер

Мозг является одним из наименее доступных объектов для фармакотерапии из-за наличия ге-матоэнцефалического барьера (ГЭБ), который регулирует обмен веществ между кровью и нервной тканью (мозгом). Основными структурными элементами ГЭБ являются мембраны клеток эндотелия, периваскулярная базальная мембрана, а также мембраны ножек глиальных клеток, окружающих сосуды [1]. Отличительной особенностью эндотелиальных клеток капилляров мозга и хориоидального (сосудистого) сплетения желудочков мозга являются плотные межклеточные контакты, образующиеся при участии трансмембранных белков (рис. 1). Эти эндотелиаль-ные клетки отличаются низкой пиноцитарной активностью. Кроме того, в капиллярах мозга практически отсутствуют фенестры. Благодаря этому ГЭБ создаёт надёжную преграду на пути циркулирующих в крови продуктов обмена веществ и ксенобиотиков, не позволяя им проникать в мозг путём диффузии. Поглощение и экскреция жизненно важных соединений, таких как аминокислоты, гексозы, нейропепти-ды и белки осуществляется при участии специфических транспортных систем. Путём пассивной диффузии преодолевать ГЭБ могут только низкомоле-

кулярные липофильные соединения (м.м.<500 Да) [2, 3]. Однако многие липофильные молекулы немедленно удаляются из эндотелиальных клеток с помощью трансмембранных белков, таких как Р-гликопротеин [4]. Р-гликопротеин функ-

ционирует как АТФ-зависимый насос, выбрасывая липофильные молекулы из эндотелиальных клеток, что препятствует их проникновению и накоплению в тканях мозга (рис. 1).

Вследствие этого многие потенциально эффективные лекарственные вещества (ЛВ), предназначенные для лечения заболеваний центральной

Р-гликопротеин

Астроцит

Эндотелий, плотные соединения

Капилляр мозга

Фенестры НЧ-

транспорт

Митохондрии

Простая

диффузия Трансцитоз Перицит

Обычный капилляр

Пиноцитоз

Рис. 1. Строение стенки капилляра мозга

ФМКОКШШ и ФМЩШМШ!

3

I №2.2012

нервной системы (ЦНС), проявляя высокую активность in vitro, оказываются неэффективными при введении в организм, поскольку ГЭБ препятствует поступлению этих веществ в мозг в терапевтически значимых концентрациях. Разработка безопасных и неинвазивных методов доставки ЛВ в мозг представляет собой серьезную проблему, для решения которой нужны новые стратегии.

Перспективным направлением исследований в этой области является разработка наносомаль-ных систем доставки. Так было показано, что доставку в мозг ЛВ, не способных преодолевать ГЭБ, можно осуществить с помощью коллоидных систем доставки на основе полибутилцианоакрилат-ных (ПБЦА) наночастиц (НЧ), поверхность которых модифицирована полисорбатом 80 (ПС-80). Используя указанный носитель, удалось доставить в мозг гексапептид даларгин, четвертичное аммониевое соединение — прозерин, а также лопера-мид и доксорубицин — это вещества, которые, являясь субстратами Р-гликопротеина, не способны преодолеть ГЭБ [5—11]. Впоследствии применение ПБЦА наночастиц, покрытых ПС-80, позволило обеспечить транспорт в мозг веществ макромоле-кулярной природы-белков с нейротрофической активностью: фактора роста нервов и рекомби-нантного эритропоэтина человека [12—14, 26]. Факт поступления этих веществ в мозг с помощью наночастиц был доказан путём фармакологических тестов, демонстрирующих центральное действие наносомальных форм, в то время как свободные вещества такого действия не оказывали. Эти результаты послужили основанием для создания совершенно новой концепции о том, что наноча-стицы могут служить средством доставки в мозг веществ, которые в свободном виде не способны преодолеть ГЭБ.

Согласно современным представлениям можно предположить, что наночастицы доставляют вещества через ГЭБ с помощью следующих механизмов:

1. Неспецифическое повышение проницаемости ГЭБ (то есть повышение проницаемости мембран эндотелиальных клеток капилляров мозга или нарушение плотных контактов между этими клетками) в результате воздействия НЧ или поверхностно-активных веществ (ПАВ) (токсический эффект). В этом случае циркулирующие в крови частицы и ЛВ могут проникнуть в мозг.

2. Поступление ЛВ в мозг в результате повышения градиента концентрации кровь-мозг (то есть при повышении концентрации ЛВ в крови).

3. Взаимодействие НЧ с мембранами эндо-телиальных клеток капилляров мозга (неспецифическое или рецептор-опосредован-

ное) и, как результат, поступление их внутрь клетки (эндоцитоз) или удерживание вблизи клеточной мембраны. Можно представить, что в первом случае происходит деградация НЧ внутри клетки, затем выделение ЛВ и поступление его в мозг через апикальную мембрану эндотелиальной клетки капилляра. Во втором случае ЛВ выделяется из НЧ в непосредственной близости от клетки; при этом может создаваться микроокружение, способствующее проникновению ЛВ через клеточную мембрану в мозг.

4.Ингибирование АТФ-зависимых трансмембранных белков, таких как P-gp, препятствующих поступлению субстратов в эндотели-альные клетки сосудов мозга.

Механизм 1: неспецифическое повышение проницаемости ГЭБ

Первый из названных выше механизмов, а именно неспецифическое повышение проницаемости ГЭБ в результате токсического действия наночастиц и/или ПАВ, сразу казался маловероятным, поскольку ни в одном из многочисленных экспериментов in vivo мы не наблюдали клинических признаков нейротоксичности. С другой стороны, если бы барьерные функции ГЭБ действительно нарушались, то в связывании ЛВ с НЧ не было бы необходимости: при введении после НЧ эти вещества могли бы проникать через нарушенный ГЭБ в результате простой диффузии.

С целью подтверждения этой гипотезы был проведён эксперимент, позволяющий судить о состоянии ГЭБ после введения ПБЦА НЧ, покрытых ПС-80. В этом эксперименте определяли анальгезирующее действие даларгина, свободного или включённого в ПБЦА НЧ, при различных режимах введения [15]. Даларгин является агони-стом опиоидных рецепторов, однако не оказывает анальгезирующего действия при внутривенном введении, поскольку практически не проникает в мозг, являясь субстратом P-gp. В то же время, как ранее показал Аляутдин Р. Н. и соавторы, даларгин, связанный с ПБЦА НЧ, покрытыми ПС-80, значительно понижает порог болевой чувствительности мышей [16]. Более того, анальгезирую-щий эффект даларгина устранялся антагонистом опиоидных рецепторов — налоксоном, что свидетельствует о воздействии связанного с НЧ далар-гина на опиоидные рецепторы ЦНС, то есть о его проникновении через ГЭБ. Анальгезирующее действие оценивали в тесте отдёргивания хвоста (tail-flick test). Увеличение промежутка времени, которое требуется мышам для того, чтобы ощутить боль при нагревании хвоста и отдёрнуть его, свидетельствует о повышении порога их болевой

Анальгезирующий эффект

и ПБЦА наночастиц, покрытых полисорбатом 80

Группы % МРЕ

Время после введения

15 мин 30 мин 45 мин 60 мин

Пустые ПБЦА наночастицы 3,8±3,3 1,5±9,0 0,75±3,2 3,9±4,3

Даларгинв растворе 2,3±4,6 10±9,8 9,3±2,8 4,7±5,1

ПБЦА наночастицы, нагруженные даларгином и покрытые ПС-80 8,6±6,2 35±11,7* 52±20,2** 26±13,4*

ПБЦА наночастицы, покрытые ПС-80 и смешанные с даларгином ex tempora 6,1±8,3 3,3±7,0 4,5±5,1 10,3±4,3

Введение даларгина через 5 мин после ПБЦА наночастиц, покрытых ПС-80 3,7±8,4 5,2±6,9 3,9±4,6 7,8±11,4

Введение даларгина через 30 мин после ПБЦА наночастиц, покрытых ПС-80 4,9±5,9 5,2±11,1 0,7±4,8 3,5±7,0

Примечания: *=2р < 0,05; ** = 2р < 0,01 по сравнению с даларгином в растворе

чувствительности по сравнению с интактным состоянием. Как видно из данных, приведённых в таблице, значительное понижение порога болевой чувствительности достигалось только при введении даларгина, сорбированного на НЧ, покрытых ПС-80. Анальгезирующее действие самого даларгина или НЧ, введённых по отдельности, было незначительно. Последовательное введение НЧ и свободного даларгина (через 5 и 30 минут после введения НЧ) не привело к увеличению анальгезирующего эффекта.

Результаты этого эксперимента позволяют сделать два важных вывода:

1.внутривенное введение ПБЦА НЧ, покрытых ПС-80, не приводит к повышению проницаемости ГЭБ, достаточному для проникновения через него низкомолекулярных субстратов P-gp;

2.субстраты P-gp проникают в мозг, только будучи связанными с НЧ, покрытыми ПС-80.

Кроме того, целостность ГЭБ при контакте с НЧ была исследована в опытах in vitro [15]. В опытах использовали модель ГЭБ, состоящую из совмещённых слоёв эндотелиальных клеток капилляров мозга быка и астроцитов крысы. В качестве маркеров проницаемости ГЭБ использовали [3Н] -инулин и [14С] -сахарозу. Было показано, что количество этих гидрофильных маркёров, проникающих через ГЭБ, не изменяется после инкубации клеток с НЧ, как в присутствии, так и в отсутствие ПС-80.

Таким образом, как показывают результаты исследований in vivo и in vitro, механизм доставки на-ночастиц и/или связанных с ними веществ в мозг не связан с нарушением барьерной функции ГЭБ.

Механизм 2: доставка в мозг в результате повышения градиента концентраций кровь-мозг

Непроницаемость ГЭБ относительна, поскольку способность ЛВ проникать через ГЭБ в значительной степени зависит от концентрации этих веществ в крови. В соответствии с правилом фарма-кокинетики, сформулированным У. Пардриджем [3]: количество вещества, доставляемого в мозг, пропорционально коэффициенту проницаемости ГЭБ и величине интегрального показателя площади под фармакокинетической кривой «концентрация в плазме-время» (AUC). Таким образом, количество поступающего в мозг ЛВ может возрастать при увеличении его концентрации и/или времени циркуляции в крови.

Одним из путей, позволяющим увеличить время циркуляции ЛВ, является применение в качестве носителей длительно циркулирующих наночастиц. Наиболее распространённый подход к созданию таких частиц состоит в гидрофилизации их поверхности путём создания пространственного (стерического) барьера, препятствующего сорбции белков. Стерическая стабилизация наночастиц создаёт так называемый «стелс-эффект» (от англ. stealth — невидимый), позволяющий НЧ стать «невидимыми» для макрофагов и избежать захвата. Технология «стелс» обеспечивает продолжительную циркуляцию НЧ в крови, а значит, в соответствии с упомянутым выше правилом фармакоки-нетики, должна способствовать доставке частиц и связанного с ними ЛВ в мозг. Однако в случае ПБЦА НЧ, модифицированных ПС-80, такая закономерность не наблюдается. Действительно, как показывают данные фармакокинетического

исследования наносомальной формы доксоруби-цина [17], а также данные ряда авторов, изучавших влияние ПС-80 на распределение НЧ [18, 19], эффективность этого ПАВ как «стелс-агента» невысока. Модификация ПБЦА НЧ полисорбатом привела лишь к незначительному повышению концентрации доксорубицина в плазме: показатель АиС для плазмы возрос лишь на 70% по сравнению с немодифицированными частицами (рис. 2).

Рис. 2. Показатели АиС различных форм доксорубицина при в/в введении крысам в дозе 5 мг/кг йох — раствор доксорубицина; Оох+РнБО — раствор доксорубицина с полисорбатом 80; Оох-ЫР — доксорубицин, включённый в наночастицы; йох-МР+РзвО — доксорубицин, включённый в на-ночастицы, модифицированные полисорбатом 80

Рис. 3. Уровень концентрации доксорубицина, ассоциированного с наночастицами, модифицированными полисорбатом 80, в головном мозге крыс при в/в введении в дозе 5 мг/кг йох—раствор доксорубицина; йох-ЫР — доксорубицин, включённый в наночастицы; йох-ЫР+РзвО — доксорубицин, включённый в наночастицы, модифицированные полисорбатом 80

Однако показатель АиС для мозга почти в 10 раз превышал соответствующий показатель для плазмы [17]. При этом только введение модифицированных НЧ привело к достижению в мозге весьма высокой концентрации доксорубицина — 6 мкг/г, в то время как при введении немодифици-рованных НЧ концентрации оставались ниже 0,1 мкг/г (рис. 3).

Таким образом, модификация НЧ полисорбатом позволила повысить концентрацию доксорубицина в мозге, по крайней мере, в 60 раз.

Тем не менее, исследования, проведённые впоследствии рядом авторов, подтвердили справедливость сформулированного выше правила фарма-кокинетики. Действительно, при внутривенном введении применение стелс-частиц способствует росту концентраций ЛВ в мозге при одновременном росте интегрального показателя АиС плазмы. Так включение доксорубицина в стелс-НЧ из твёрдых липидов позволила повысить АиС в плазме в 9 раз по сравнению со свободным антибиотиком, параллельно возросла и его концентрация в мозге [20]. Однако, следует отметить, что концентрация в мозге доксорубицина при введении его в составе липид-ных НЧ, не превышала 0,25% от дозы, в то время как ПБЦА НЧ, покрытые полисорбатом, доставляли в мозг 1% дозы доксорубицина и поддерживали этот уровень в течение 2 ч.

С другой стороны, некоторые стерически стабилизированные НЧ долго циркулируют в крови, но не проникают через ГЭБ. Так в исследовании П. Калво и соавт. адсорбция по-локсамина 908 на поверхности полигексадецилцианоакрилат-ных НЧ позволила существенно повысить время их циркуляции и концентрацию в плазме, однако концентрации частиц в мозге были незначительны [18]. В то же время, НЧ из поли-гексадецилцианоакрилата, модифицированные ковалентно

вмвш (ШШШ

>33"

РБвО йох

Наночастица, нагруженная

доксорубицином и покрытая полисорбатом 80

связанным полиэтиленглико-лем, лучше проникали в мозг, хотя их концентрации в плазме были существенно ниже, чем у НЧ, модифицированных по-локсамином 908.

Фармакокинетическое исследование, проведённое И. Бриггер и соавт. на крысах с интракраниальной глиобла-стомой, также показало, что сродство полигексадецилци-аноакрилатных НЧ, модифицированных полиэтиленгли-колем (ПЭГ), к неповреждённым участкам мозга нельзя рассматривать как результат исключительно диффузии этих носителей [21]. Не исключено, что, модификация поверхности ПЭГ способствует контакту НЧ с эндотели-альными клетками капилляров мозга, тогда как стериче-ский эффект полоксамина 908 не только обеспечивает защиту НЧ от опсонизации, но и препятствует такому контакту.

Было бы естественно предположить, что увеличение гидрофильности затруднит взаимодействие частиц с эндотелиальными клетками и помешает им преодолеть ГЭБ. Однако в действительности этого не происходит, что подтверждает предположение о том, что модификация ПЭГ играет важную роль в специфическом взаимодействии НЧ с эндотелиальными клетками ГЭБ.

Анализ описанных выше данных позволяет заключить, что в осуществлении переноса НЧ через ГЭБ могут участвовать различные механизмы. С одной стороны, как отмечалось выше, транспорт через ГЭБ с помощью длительно циркулирующих НЧ может быть результатом повышения концентрации частиц и связанных с ними ЛВ в плазме, и обусловлен ростом градиента концентраций в системе плазма-мозг. С другой стороны, ряд экспериментальных данных указывает на то, что эффективность носителей определяется не только (и не столько) длительностью циркуляции и достижением высоких концентраций в плазме, но и возможностью контакта частицы с клеточными мембранами, которая, в свою очередь, зависит от структуры поверхности (в том числе и от модифицирующего агента).

Так совершенно ясно, что феноменальный эффект полисорбата в случае ПБЦА НЧ — 60-кратное увеличение концентрации доксорубицина в мозге, трудно объяснить незначительным повышением

Взаимодействие с LDL-рецептором, опосредованное ApoE

Внеклеточная жидкость

Липопротеин низкой плотности

Фосфолипиды Холестирин Аро 8-100

Цитозоль

АроЕ

^ 1_01_рецептор

Мембрана

Холестирин

Поглощение ЛПНП

Рис. 4. Рецептор-зависимый эндоцитоз ЛПНП, опосредованный АроЕ

градиента концентраций в системе кровь-мозг. Вероятно, эти носители используют другой механизм для проникновения в мозг.

Механизм 3: доставка в мозг в результате рецептор-опосредованного эндоцитоза

Описанные выше явления хорошо объясняет гипотеза, согласно которой ПБЦА НЧ, модифицированные ПС—80, интернализуются эндотели-альными клетками капилляров мозга в результате рецептор-опосредованного эндоцитоза.

В 2002 году Й. Кройтер и соавт. показали, что полисорбат 80 способствует сорбции на поверхности ПБЦА НЧ белков плазмы — аполипопро-теинов Е и В [22]. Эти данные позволили предположить, что НЧ проникают в мозг в результате рецептор-опосредованного эндоцитоза, который является результатом взаимодействия этих белков с рецепторами к липопротеинам низкой плотности (ЛПНП-рецепторами или LDL-рецепторами), экспрессированными в мембранах эндотелиаль-ных клеток капилляров мозга. ЛПНП-рецепторы воспринимают НЧ как агрегаты липопротеинов низкой плотности, поступающие в мозг из крови. Внутри эндотелиальной клетки частица подвергается биодеградации под действием ферментов и выделяет ЛВ, которое затем диффундирует через мембрану в межклеточное пространство (рис. 4).

Впоследствии было показано, что, несмотря на различную химическую структуру ПАВ,

тШШШШНЕ [B(DW

Предполагаемый механизм:

Взаимодействие АроА-I со скавенджер-рецептором SR-BI эндотелиальных клеток, формирующих ГЭБ

ApoA-I

ЛПВП

F68

ApoA-I

Частица липопротеинов высокой плотности с белками-переносчиками

1 - ApoA-I; 2 - триглицерид; 3 - ApoC; 4 - эфиры холестирина; 5 - фосфолипиды; 6 - неэтерифицированный холестирин; 7 - apoE

Рис. 5. Рецептор-зависимый эндоцитоз ЛПВП, опосредованный АроА-I

СЕ—холестерол этерифицированный; F68 — плюроник F68

использованных для модификации, профили белков плазмы, сорбированных на поверхности ПБЦА НЧ, обнаружили как количественное, так и качественное сходство [23]. При этом в значительном количестве присутствовал АроА4 (24% от общего количества). Возможно, что доставка веществ в мозг осуществляется путём взаимодействия АроА4, адсорбированного на поверхности НЧ, со скавенджер-рецептором BI (SR-BI), экс-прессированным на поверхности эндотелиальных клеток, формирующих ГЭБ. Этот рецептор, экс-прессируемый также и другими клетками (в том числе, гепатоцитами), участвует в переносе липи-дов от АроА4 внутрь клетки. При переносе липида в клетку АроА- связывается с клеточной мембраной посредством рецептора SR-BI, который и передаёт липид клетке. После этого сам белок, уже лишённый липида, диссоциирует с поверхности клетки и возвращается в кровь. Вполне вероятно, что поступление наночастиц в эндотелиальные клетки осуществляется по той же схеме: АроА-!, адсорбированный на поверхности НЧ, взаимодействует с рецептором SR-BI, но вместо липида в клетку поступает частица (рис. 5).

В пользу этой гипотезы, несомненно, свидетельствует тот факт, что альбуминовые наноча-стицы, модифицированные АроА-I, также преодолевают ГЭБ и доставляют в мозг лоперамид [24]. Являясь субстратом Р-gp, агонист опиоидных рецепторов лоперамид не способен самостоятельно преодолеть ГЭБ и поэтому не оказывает аналь-гезирующего действия. Значительное снижение порога болевой чувствительности мышей, выявленное в тесте отдёргивания хвоста после внутривенного введения лоперамида, связанного с НЧ, модифицированными АроА-I, указывает на его проникновение в мозг.

Механизм 4: ингибирование P-gp

Роль АТФ-зависимых транспортеров в доставке веществ через ГЭБ с помощью НЧ в настоящее время до конца не изучена. Тем не менее, все низкомолекулярные вещества, доставленные в мозг с помощью ПБЦА НЧ (в том числе даларгин, ло-перамид, доксорубицин), являются субстратами P-gp, что и объясняет невозможность их независимого транспорта через ГЭБ. В пользу этой гипотезы может свидетельствовать тот факт, что доксорубицин в составе ПБЦА НЧ преодолевает P-gp-зависимую резистентность опухолевых клеток [25]. Этот феномен является результатом двух одновременно протекающих процессов: выделения доксорубицина из НЧ и её биодеградации

Свободный доксорубицин Доксорубицин в наночастицах

Поли

Клеточная мембрана

W « у н .

Ионная пара V« ^^ JH

>i - JHl

ЛНаносфераР,

Р-гликопротеин

Цитоплазма

Рис. 6. Предположительный механизм, с помощью которого доксорубицин в составе полиалкилцианоакрилатных наночастиц преодолевает резистентность опухолевых клеток, экспрессирующих P-gp [25]

с образованием полицианоакриловой кислоты. Доксорубицин и полицианоакриловая кислота образуют ионную пару, которая и проникает через клеточную мембрану, минуя Р^р (рис. 6).

Не исключено, что этот же механизм способствует и доставке доксорубицина в мозг. В этом случае присутствие АроА-1 на поверхности НЧ также может играть важную роль. Действительно, удерживание НЧ вблизи клеточной мембраны в результате взаимодействия со скавенджер-

рецептором при одновременной биодеградации и выделении доксорубицина должно способствовать его проникновению в эндотелиальные клетки ГЭБ в обход Р^р. Затем доксорубицин проникает в мозг через апикальную мембрану клетки. При таком развитии событий захват НЧ этими клетками не является необходимым условием доставки веществ в мозг, а доставка доксорубицина в мозг будет суммарным результатом действия двух механизмов.

Литература

1. Begley D. J. Delivery of therapeutic agents to the central nervous system: the problems and the possibilities. Pharmacol. Ther. 2004. Vol. 104, Р. 29-45.

2. Pardridge W. M. CNS drug design based on principles ofblood-brain barrier Transport. J. Neurochem.1998. Vol. 70, Р. 1781-1792.

3. Wu D, Pardridge W. M. Pharmacokinetics and blood-brain barrier transport of an anti-transferrin receptor monoclonal antibody (OX26) in rats after chronic treatment with the antibody. Drug Metab. Dispos. 1998. Vol. 26, Р. 937-939.

4. Cordon-Cardo C, O'Brien J.P., Casals D, et al. Multidrug-resistance gene (P-glycoprotein) is expressed by endothelial cells at blood-brain barrier sites. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1989. Vol. 86, P. 695-698.

5. Alyautdin R., GothierD., Petrov V. et al. Analgesic activity of the hexapeptide dalargin adsorbed on the surface of polysorbate 80-coated poly (butyl cyanoacrylate) nanoparticles. Eur. J. Pharm. Biopharm. 1995. Vol. 41, Р. 44-48.

6. Alyautdin R. N, Petrov V.E, LangerK, BertholdA., Kharkevich D. A., Kreuter J. Delivery of loperamide across the blood-brain barrier with polysorbate 80-coated polybutylcyanoacrylate nanoparticles. Pharm. Res. 1997. № 14, P. 325-328.

7. Gulyaev A. E, Gelperina S. E, Skidan I. N. et al. Significant transport of doxorubicin into the brain with polysorbate 80-coated nanoparticles. Pharm. Res. 1999. № 6, Р. 1564-1569.

8. Kreuter J., Gelperina S. Use of nanoparticles for cerebral cancer. Tumori 2008. Vol. 94, Р. 271-277.

9. Kreuter J., Alyautdin R. N, Kharkevich D. A., Ivanov A. A. Passage ofpeptides through the blood-brain barrier with colloidal polymer particles (nanoparticles). Brain Res. 1995. Vol. 674, Р. 171-174.

10. AmbruosiA., Gelperina S, Khalansky A., et al. Influence of surfactants, polymer and doxorubicin loading on the anti-tumour effect of poly (butyl cyanoacrylate) nanoparticles in a rat glioma model. J. Microencapsul. 2006. Vol. 23, Р. 582-592.

11. Басел А., Петров В. Е, Балабаньян В. Ю. и др. Транспорт прозерина в головной мозг при помощи полибутилцианоакрилатных на-ночастиц, покрытых полисорбатом 80. Рос. мед. журн. 2006. № 4, С. 28-32.

12. Kurakhmaeva K. B., DjindjikhashviliI. A., Petrov V. E. et al. Brain targeting of nerve growth factor using poly (butyl cyanoacrylate) nanoparticles. J. Drug Target. 2009. № 17, Р. 564-574.

13. Курахмаева К. Б., Воронина Т. А., Капица И. Г. и др. Антипаркинсоническое действие фактора роста нервов, сорбированного на полибутилцианоакрилатных наночастицах, покрытых полисорбатом-80. Бюлл. эксп. биол. мед. 2008. Т. 145, № 2, С. 221-224.

14. Балабаньян В. Ю., Солев И. Н., Елизарова О. С. и др. Нейропротекторный эффект человеческого рекомбинантного эритропоэтина, сорбированного на полимерных наночастицах, на модели интрацеребральной посттравматической гематомы (модель геморрагического инсульта). Экспериментальная и клиническая фармакология. 2011. Т. 74, № 5, С. 8-13.

15. Kreuter J., Ramge P., Petrov V. et al. Direct evidence that polysorbate-80-coated poly (butylcyanoacrylate) nanoparticles deliver drugs to the CNS via specific mechanisms requiring prior binding of drug to the nanoparticles. Pharm. Res. 2003. Vol. 20, Р. 409-416.

16. Kreuter J., Petrov V. E, Kharkevich D. A., Alyaudtin R. N. Influence of the type of surfactant on the analgesic effects induced by the peptide dalargin after its delivery across the blood-brain barrier using surfactant-coated nanoparticles. J. Control. Release 1997. Vol. 49, Р. 81-87.

17. Gulyaev A. E, Gelperina S. E, Skidan I. N. et al. Significant transport of doxorubicin into the brain with Ps 80-coated nanoparticles. Pharm. Res. 1999. V.16, P.1564-1569.

18. Calvo P., Gouritin B., Chacun H. et al. Long-circulating PEGylated polycyanoacrylate nanoparticles as new drug carrier for brain delivery. Pharm. Res. 2001. Vol. 18, Р. 1157-1166.

19. Araujo L., Loebenberg R., Kreuter J. Influence of the surfactant concentration on the body distribution of nanoparticles. J. Drug Targeting. 1999. V.6, P. 373-385.

20. Zara G. P., Cavalli R., Bargoni A. et al. Intravenous administration to rabbits of non-stealth and stealth doxorubicin-loaded solid lipid nanoparticles at increasing concentrations of stealth agent: pharmacokinetics and distribution of doxorubicin in brain and other tissues. J. Drug Target. 2002. Vol. 10, Р. 327-335.

21. Brigger I., Morizet J, Aubert G. et al. Poly (ethylene glycol) -coated hexadecylcyanoacrylate nanospheres display a combined effect for brain tumor targeting. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002. Vol. 303, Р. 928-936.

22. Kreuter J., Shamenkov D., Petrov V. et al. Apolipoprotein-mediated transport of nanoparticle-bound drugs across the blood-brain barrier. J. Drug Target. 2002. Vol. 10, Р. 317-325.

23. Petri B, Bootz A., Khalansky A. et al. Chemotherapy ofbrain tumour using doxorubicin bound to surfactant-coated poly (butyl cyanoacrylate) nanoparticles: revisiting the role of surfactants. J. Control. Release 2007. Vol. 117, Р. 51-58.

24. Kreuter J., Hekmatara T., Dreis S. et al. Covalent attachment ofapolipoprotein A-I and apolipoprotein B-100 to albumin nanoparticlesenables drug transport into the brain. J. Control. Release 2007. Vol. 118, Р. 54-58.

25. Vauthier C., Dubernet C., Chauvierre C, Brigger I., Couvreur P. Drug delivery to resistant tumors the potential of poly (alkyl cyanoacrylate) nanoparticles. J. Control. Release. 2003. V. 93, N 2, Р. 151-160.

26. Wohlfart S., Gelperina S., Kreuter J. Transport of drugs across the blood-brain barrier by nanoparticles. J. Control. Release 2012. Vol. 161, Р. 264-273.