3D IN VITRO ДВУХФАЗНЫЙ КОСТНО-ХРЯЩЕВОЙ КОНСТРУКТ

1. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид», содержащий:
a) слой искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток; и
b) слой искусственной костной ткани, где искусственная костная ткань содержит придающий структуру каркас и структуру костного мозга;
где слой искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток контактирует по меньшей мере с одной поверхностью слоя искусственной костной ткани.
+
+
+
+
+
+
2. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по п. 1, где искусственная хрящевая ткань/агрегаты хондрогенных клеток получены с использованием мезенхимальных клеток-предшественников, предпочтительно с использованием мезенхимальных клеток-предшественников, включающих по меньшей мере 50% клеток или состоящих из клеток, которые представляют собой CD105, CD106, CD44, CD73, CD90 и CD13, более предпочтительно из выделенных первичных хондроцитов.
3. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по п. 1, где искусственная хрящевая ткань/агрегаты хондрогенных клеток получены с помощью способа по п. 13.
4. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по п. 1, где структура костного мозга в искусственной костной ткани получена путем посева мезенхимальных стволовых клеток на придающий структуру каркас.
5. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по п. 4, где структура костного мозга в искусственной костной ткани получена путем посева мезенхимальных стволовых клеток на придающий структуру каркас и путем добавления гемопоэтических стволовых клеток после культивирования мезенхимальных стволовых клеток на придающем структуру каркасе в течение 2-10 дней.
6. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по п. 1, где придающий структуру каркас в искусственной костной ткани содержит биологический или небиологический материал или состоит из него.
7. 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по одному из предыдущих пунктов, где придающий структуру каркас в искусственной костной ткани содержит 3D керамический каркас или состоит из.
8. Способ получения 3D in vitro двухфазного костно-хрящевого «органоида» по одному из пп. 1-7, при этом способ включает следующие этапы:
посев мезенхимальных стволовых клеток на придающий структуру каркас;
культивирование указанных мезенхимальных стволовых клеток в течение 2-10 дней на указанном придающем структуру каркасе;
добавление гемопоэтических стволовых клеток к мезенхимальным стволовым клеткам, культивируемым на придающем структуру каркасе, и культивирование полученной смеси в течение по меньшей мере 5 дней для того, чтобы получить слой искусственной костной ткани, содержащий придающий структуру каркас, засеянный структурой костного мозга;
обеспечение искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток, полученных с помощью способа по одному из пп. 13-15, и
размещение слоя указанной искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток по меньшей мере на одной поверхности указанного слоя искусственной костной ткани.
9. Трансплантат, содержащий 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по одному из пп. 1-7.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по одному из пп. 1-7 или трансплантат по п. 9 и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
11. Способ in vitro скрининга веществ, которые модулируют свойства хрящевой или костной ткани, включающий следующие этапы:
обеспечение образца 3D in vitro двухфазного костно-хрящевого «органоида» по одному из пп. 1-7;
разделение соответствующего образца на порции;
инкубирование по меньшей мере одной порции с веществом, подлежащим скринингу; и
сравнение параметров, измеренных у обработанной порции и другой порции, которую не инкубировали с веществом, подлежащим скринингу.
12. Автономное устройство по типу 3D in vitro двухфазного костно-хрящевого «органоида»-на-чипе, содержащее по меньшей мере один резервуар для подачи среды, по меньшей мере одну секцию для роста органа, содержащую по меньшей мере одну полость для органа, вмещающую 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид» по одному из пп. 1-7, где резервуар для подачи среды соединен по меньшей мере с одной секцией для роста органа микроструйным питающим каналом.
13. Способ получения искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток, включающий следующие этапы:
a) обеспечение мезенхимальных клеток-предшественников; и
b) культивирование мезенхимальных клеток-предшественников в не обеспечивающих адгезию условиях с образованием искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток.
+
+
+
+
+
+
14. Способ по п. 13, где мезенхимальные клетки-предшественники включают по меньшей мере 50% клеток или состоят из клеток, которые представляют собой CD105, CD106, CD44, CD73, CD90 и CD13.
15. Способ по любому из пп. 13 или 14, где мезенхимальные клетки-предшественники включают выделенные первичные хондроциты или состоят из них.