СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИОЭФИРА ПЕПТИДА

1. Способ получения тиоэфира пептида, включающий следующие стадии (а)-(с):
2
(а) стадия получения первого интермедиата путем взаимодействия соединения А, представленного следующей формулой (I), с тиоловой группой остатка цистеина для отщепления R в пептидной цепи, имеющей остаток цистеина:
[Химическая формула 1]
1
2
в которой Х представляет собой атом серы или атом кислорода, и R и R представляют собой замещаемые группы;
3
(b) стадия взаимодействия соединения В, представленного следующей формулой (II), с указанным первым интермедиатом в органическом растворителе для добавления группы -NH-C(=Y)NHR к карбоксильной группе, образующей пептидную связь между остатком цистеина и аминокислотой, прилегающей к N-концевой стороне указанного остатка цистеина, и расщепления указанной пептидной связи, с получением, таким образом, с N-концевой стороны фрагмента пептида, расположенного ближе к N-концевой стороне, чем расщепленная пептидная связь, в качестве второго интермедиата:
[Химическая формула 2]
3
в которой Y представляет собой атом кислорода, атом серы или NH-группу, и R представляет собой атом водорода, ацильную группу или алкоксикарбонильную группу; и
3
(с) стадия тиоэтерификации С-конца второго интермедиата в реакции тиола со вторым интермедиатом для обмена группы -NH-C(=Y)NHR на С-конце на тиоловую группу.
2. Способ по п.1, в котором Х представляет собой атом серы.
1
6
3. Способ по п.1, в котором R представляет собой -O-С арильную группу.
2
6-10
4. Способ по п.1, в котором R представляет собой атом галогена или замещенную или незамещенную -S-С арильную группу.
5. Способ по п.1, в котором Y представляет собой NH-группу.
3
6. Способ по п.1, в котором R представляет собой ацетильную группу.
7. Способ по п.1, в котором тиол в стадии (с) представляет собой тиол, представленный следующей формулой (III):
4
R-SH, (Формула III)
4
в которой R представляет собой любую группу, которую выбирают из замещенной или незамещенной бензильной группы, замещенной или незамещенной арильной группы и замещенной или незамещенной алкильной группы.
8. Способ по п.1, в котором пептидная цепь представляет собой рекомбинантный белок.
9. Способ по любому из пп.1-8, в котором пептидная цепь представляет собой рекомбинантный белок, включающий метку для очистки.
10. Способ получения полипептида, включающий стадию связывания тиоэфира пептида, полученного с помощью способа по любому из пп.1-9, с пептидной цепью, имеющей цистеин на N-конце, способом лигирования.
11. Способ получения второго интермедиата, применяемого в способе получения тиоэфира пептида по любому из следующих пп.1-9, включающий следующую стадию (а) или (b):
2
(a) стадия получения первого интермедиата путем взаимодействия соединения А, представленного следующей формулой (I), с тиоловой группой остатка цистеина для отщепления R в пептидной цепи, имеющей остаток цистеина:
[Химическая формула 3]
1
2
в которой Х представляет собой атом серы или атом кислорода, и R и R представляют собой замещаемые группы; или
3
(b) стадия взаимодействия соединения В, представленного следующей формулой (II), с указанным первым интермедиатом в органическом растворителе для добавления группы -NH-C(=Y)NHR к карбоксильной группе, образующей пептидную связь между остатком цистеина и аминокислотой, прилегающей к N-концевой стороне указанного остатка цистеина, и расщепление указанной пептидной связи, с получением, таким образом, с N-концевой стороны фрагмента пептида, расположенного ближе к N-концевой стороне, чем расщепленная пептидная связь, в качестве второго интермедиата:
[Химическая формула 4]
3
в котором Y представляет собой атом кислорода, атом серы или NH-группу, и R представляет собой атом водорода, ацильную группу или алкоксикарбонильную группу.
3
3
12. Пептидная цепь, имеющая группу -NH-C(=Y)NHR, в которой Y представляет собой атом кислорода или NH-группу, и R представляет собой атом водорода, ацильную группу или алкоксикарбонильную группу, на ее С-конце.
3
13. Способ получения полипептида, включающий стадию связывания пептидной цепи, имеющей группу -NH-C(=Y)NHR на своем С-конце, по п.12 с пептидной цепью, имеющей цистеин на своем N-конце способом дотирования.
14. Способ удаления метки для очистки, присоединенной к С-концевой части рекомбинантного белка, включающий следующие стадии (а)-(с):
2
(a) стадия получения первого интермедиата путем взаимодействия соединения А, представленного следующей формулой (I), с тиоловой группой остатка цистеина для отщепления R в рекомбинантном белке, включающем метку для очистки на своем С-конце:
[Химическая формула 5]
1
2
в которой Х представляет собой атом серы или атом кислорода, и R и R представляют собой замещаемые группы;
3
(b) стадия взаимодействия соединения В, представленного следующей формулой (II), с указанным первым интермедиатом в органическом растворителе для добавления группы -NH-C(=Y)NHR к карбоксильной группе, образующей пептидную связь между остатком цистеина и аминокислотой, прилегающей к N-концевой стороне указанного остатка цистеина, и расщепление указанной пептидной связи, с получением, таким образом, с N-концевой стороны фрагмента пептида, расположенного ближе к N-концевой стороне, чем расщепленная пептидная связь в качестве второго интермедиата:
[Химическая формула 6]
3
в которой Y представляет собой атом кислорода, атом серы или NH-группу, и R представляет собой атом водорода, ацильную группу или алкоксикарбонильную группу; и
3
(с) стадия тиоэтерификации С-конца второго интермедиата в реакции тиола со вторым интермедиатом для обмена группы -NH-C(=Y)NHR на С-конце на тиоловую группу.