Особенности дифференцировки лимфоцитов при реагиновой аллергии у детей

2015, Т. 17, № 4 2015, Vol. 17, No 4

«Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2015» Immunology Days in St. Petersburg 2015

ОСОБЕННОСТИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РЕАГИНОВОЙ АЛЛЕРГИИ У ДЕТЕЙ

Дементьева Е.А., Гурина О.П., Блинов А.Е., Варламова О.Н., Тимохина В.И.

ГБОУ ВПО СПбГПМУ, Санкт Петербург, Россия

В патогенезе аллергического воспаления ключевую роль играют лимфоциты — основные эффекторы иммунной системы. Особенностью иммунного механизма развития атопической реакции является повышенная склонность к образованию специфических IgE-антител в ответ на аллергены. При этом Т-хелперы, секретирующие IL-4, 5, 6, 10, 13, 31, переключают в В-лимфоцитах синтез антител с IgG на IgE, тем самым способствуют развитию у атопиков частых ОРВИ, пиодермий, хронических отитов, гайморитов и других инфекционных заболеваний.

Цель работы: исследование субпопуляций лимфоцитов при реагиновой бронхиальной астме (БА) и атопиче-ском дерматите (АД) у детей.

Материалы и методы: обследовано 180 детей с АД и 112 детей с БА в возрасте от 1 года до 17 лет. Иммунофе-нотипирование лимфоцитов выполнялось методом проточной цитометрии с использованием прямой иммуноф-луоресценции цельной периферической крови и «без-отмывочной» технологии (проточный цитометр Epics XL, Весктап Coulter, США). Для оценки распределения лимфоцитов по различным популяциям клетки окрашивались трехцветными комбинациями моноклональных антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями FITC/PE/PC5: CD45/CD3/CD19, CD45/CD3/CD4, CD45/CD3/CD8/, CD45/CD3/CD(16+56), CD45/CD3/ HLA DR (Весктап Coulter, США). Популяции клеток выделялись при помощи гетерогенного гейтирования. Абсолютные значения лимфоцитов подсчитывались с использованием референсных частиц. Статистическая обработка полученных результатов программа Microsoft Ехсе1.

Результаты и обсуждение

Атопический характер заболеваний у данной группы пациентов подтвержден исследованием концентрации общего IgE в сыворотке крови.

У детей с АД выявлены абсолютная и относительная В-лимфоцитопения (у 13% и 17% обследованных детей соответственно). Относительный Т-лимфоцитоз обнаружен у 27% детей с АД за счет повышения относительного содержания CD3+/CD4+ Т-хелперов у 20% пациентов и CD3+/CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов у 17% обследованных. У 20% детей, страдающих АД, отмечается снижение относительного количества NK-клеток (CD3 /CD(16+56)+), а также низкий абсолютный и относительный уровень активированных Т-лимфоцитов CD3+/HLA DR+ (у 30% и 31% обследованных). Иммуно-регуляторный индекс при этом у равного количества детей (27%) имеет повышенное или сниженное значение.

БА у детей протекает на фоне абсолютной и относительной В-лимфоцитопении (у 33% и 25% детей соответственно) в сочетании с относительным Т-лимфоцитозом (в 33% случаев) за счет высокого относительного содержания CD3+/CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов (у 44% обследованных). У 22% детей обнаружено снижение относительного количества CD3 /CD(16+56)+ NK-клеток. У 44% пациентов выявлено повышение относительного содержания CD3+/CD(16+56)+ NKr-лимфоцитов, которые обладают способностью секретировать цитокины, стимулирующие эффекторы ^2-ответа. Так же как и при

АД отмечается снижение абсолютного и относительного уровней активированных Т-клеток CD3+/HLA DR+ (у 56% и 50% обследованных). Иммунорегуляторный индекс у 56% пациентов ниже нижней границы возрастной нормы.

Полученные результаты свидетельствуют об иммунной компрометации больных атопическими заболеваниями. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов у детей с реагиновыми аллергическими заболеваниями необходимо для проведения обоснованной индивидуальной патогенетической иммунокоррекции с целью повышения эффективности базовой терапии, снижения тяжести заболевания, частоты обострений, а также снижения частоты и тяжести сопутствующей патологии.

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ, ЭНДОТЕЛИО-И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ СТАТИНОВ И L-НОРВАЛИНА В УСЛОВИЯХ ЭНДОТОКСИН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ

Ивлицкая И.Л., Покровский М.В., Провоторов В.Я., Покровская Т.Г.

Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия

Введение. Значительная роль сосудистого эндотелия в патогенезе многих соматических заболеваний, а также его тесная взаимосвязь с одной из важнейших систем регуляции гомеостаза — иммунной, не вызывает сомнений. Особую актуальность изучение эндотелиальной дисфункции, ее взаимосвязи с факторами врожденного иммунитета и способов коррекции имеющихся нарушений в перечисленных системах приобретает при инфекционной патологии, обусловленной инфекционными агентами и/или их токсинами.

Цель и задачи — оценить корригирующие эффекты статинов и L-норвалина на показатели врожденного иммунитета, сосудистые реакции и сократительную функцию миокарда в условиях экспериментальной модели эн-дотоксин-индуцированной эндотелиальной дисфункции (ЭИЭД).

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 150 крысах линии Вистар. Моделирование ЭИЭД у крыс производили подкожным введением 0,1 мл свежей взвеси Staphylococcus aureus (штамм 603, 106/мл микробных тел) с последующим 10-минутным компрессионным массажем места инъекции. Фагоцитарная активность ней-трофилов оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ) (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991). Кислородзависимая активность — по НСТ-тестам спонтанному (НСТ-сп.) и стимулированному опсонизирован-ным и неопсонизированным зимозаном (НСТ-ст. н/з, НСТ-ст. о/з), коэффициентам активации на опсонизиро-ванный и неопсонизированный зимозан, коэффициент опсонизации (Кан, КАо, КО) (Зинкин В.Ю. и др., 2004). Сосудистые реакции оценивали в пробах с ацетилхоли-ном (АХ) в дозе 40 мкг/кг и с нитропруссидом натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг. Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) вычисляли как отношение площадей треугольников восстановления АД в пробах с ацетилхо-лином и нитропруссидом. Изменение функциональных возможностей миокарда — левожелудочкового давления (ЛЖД), максимальной скорости повышения и снижения

«Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2015» Медицинская Иммунология

Immunology Days in St. Petersburg 2015 Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

ЛЖД (СС и СР), ЧСС и интенсивность функционирования структур (ИФС) исследовали в пробах на адрено-реактивность, нагрузку сопротивлением и реоксиге-нацию. Все животные были разделены на группы: 1 (15 крыс) — интактные животные; 2 (18 крыс) — животные с ЭИЭД без препаратов; 3 и 4 (19 и 20 крыс соответственно) — с ЭИЭД, получавшие симваститин или розуваста-тин (0,05 мг/кг, внутрижелудочно, через 24 часа, №7); 5-я группа (20 крыс) — ЭИЭД, получавшие L-норвалин (10 мг/кг, внутрижелудочно, через 24 часа, №7), в 6 и 7 группах вводили комбинации статинов и L-норвалина в указанных дозировках.

Основные результаты. У крыс с ЭИЭД снижались показатели ФП, ФЧ и повышалась метаболическая активность нейтрофилов периферической крови в спонтанном и стимулированном НСТ-тестах, кроме того, снижались САД, ДАД и увеличивалась ЧСС и, как следствие, КЭД. При исследовании сократительной функции миокарда в условиях ЭИЭД повышались СС и СР, не изменялись ЛЖД, ЧСС и ИФС, однако, при проведении функциональных проб отмечалось угнетение миокардиальных сократительных резервов. Внутрижелудочное введение розувастатина или L-норвалина, по сравнению с симва-статином, эффективнее корригировало показатели фагоцитоза, НСТ-сп., НТС-ст н/з и о/з, сосудистые реакции и сократительную функцию миокарда животных с ЭИЭД. Комбинированное использование L-норвалина и розувастатина по сравнению с сочетанием L-норвалина и сим-вастатина обладало более выраженным иммуномодули-рующим, эндотелио- и кардиопротективным действием при стафилококковой модели ЭИЭД.

Заключение. Таким образом, ЭИЭД характеризуется выраженными изменениями соотношений фагоцитарной, метаболической активности нейтрофилов, сосудистых реакций и сократительной активности миокарда, увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции. Применение розувастатина, L-норвалина и их сочетаний оказалось эффективнее, чем симвастатин и его сочетание с L-норвалином в коррекции нарушенных показателей при моделировании ЭИЭД.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СОДЕРЖАНИЯ АНТИТЕЛ К ГИСТОНОВЫМ БЕЛКАМ И ОСНОВНОМУ БЕЛКУ МИЕЛИНА В КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ

Кляус Н.А., Седых С.Е., Невинский Г.А.

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия

Введение. Выявление специфических аутоантител (ААТ) на ранних стадиях развития аутоиммунных заболеваний не всегда обладает достаточной диагностической точностью в связи с тем, что возможна их продукция и у людей без аутоиммунных заболеваний. В последние годы обнаружено, что ААТ могут обладать каталитической активностью, оценка уровня которой может рассматриваться как перспективный метод диагностики аутоиммунных заболеваний.

Цель и задачи: анализ относительного содержания ААТ к ОБМ и ГБ в крови больных РС и здоровых доноров, получение поликлональных ААТ из крови исследу-

емых лиц и исследование относительной активности гидролиза ОБМ и ГБ абзимами.

Материал и методы. Исследованы препараты плазмы крови 6 пациентов с подтвержденным ранее диагнозом РС и 6 здоровых доноров. Для определения содержания АТ к ОБМ и ГБ использовался метод прямого иммуно-ферментного анализа. Методом аффинной хроматографии на Protein G-Sepharose у исследованных лиц были получены IgG, из которых выделены фракции IgG, обладающие высоким сродством к ОБМ и ГБ, используя гистон-сефарозу и ОБМ-сефарозу. Полученными абзи-мами проведен гидролиз ОБМ и ГБ, активность которого оценивалась при помощи определения белковых фракций на электрофорезе. Для расчета достоверности различий использовались методы непараметрической статистики.

Результаты. Содержание АТ к ГБ у здоровых доноров — 0,59+0,09 А^50 , в сравнении с пациентами с РС — 0,77+0,10 А,50 (р < 0,05). Содержание АТ к ОБМ у группы исследованных здоровых доноров 0,56+0,19 А^о значимо не отличалось в сравнении с больными РС — 0,6+0,12 А^50, (р < 0,05). Выделенные из плазмы крови здоровых доноров АТ не продемонстрировали значимой гидролитической активности. Фракции IgG из плазмы крови больных РС, связывающие ГБ, в 28 раз более активны в гидролизе ГБ, чем ОБМ. Фракции, не связывающие ГБ, но имеющие сродство к ОБМ в 62 раза более активны в гидролизе ГБ, чем ОБМ. Фракции IgG из плазмы крови больных РС, связывающие ОБМ, в 1,3 раза более активны в гидролизе ОБМ, чем ГБ. Фракции, не связывающие ОБМ, но имеющие сродство к гистон-сефарозе более активны как в гидролизе ОБМ, так и ГБ; гидролиз ГБ этими фракциями в 1,1-2,4 раза более эффективен, чем ОБМ.

Заключение. Впервые показано, что плазма крови больных РС и здоровых доноров содержит АТ к ГБ и ОБМ, обладающие каталитической активностью. Выделенные препараты АТ из крови больных РС, но не здоровых доноров, эффективно гидролизуют ГБ. АТ, взаимодействующие с иммобилизованными ОБМ и ГБ, гидролизуют как ОБМ, так и ГБ. Эффективность гидролиза ГБ существенно выше, чем ОБМ.

ЦИТОКИНОВЫЙ СПЕКТР ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ С ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ ДО И ПОСЛЕ СТАНДАРТНОГО ЛЕЧЕНИЯ

Поляков Д.В., Солошенко В.В., Конопля Е.Н., Локтионов А.Л.

Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия

Введение. Цитокины являются одной из наиболее мощных систем регуляции и интеграции врожденных и адаптивных форм иммунного ответа. Кроме того, исследование концентрации цитокинов в плазме крови больных с различной соматической патологией позволяет предполагать наличие новых механизмов развития болезни и разрабатывать в этой связи эффективные фармакологические и нефармакологические способы лечения. Одним из актуальных заболеваний, характеризуемых высокими показателями летальности, несмотря на имеющиеся методы диагностики, а также появление новых ле-