МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ЗЕЛЕНЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Выделенная нуклеиновая кислота, включающая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок, по существу, подобный флуоресцентному белку Aequorea macrodactyla дикого типа с SEQ ID No: 2, аминокислотная последовательность которого отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2 по меньшей мере аминокислотным замещением F220L, где указанный генетически сконструированный флуоресцентный белок имеет повышенную скорость созревания при температуре 20°С или выше в сравнении с зеленым флуоресцентным белком Aequorea macrodactyla дикого типа.
2. Нуклеиновая кислота по п.1, где аминокислотная последовательность генетически сконструированного функционального флуоресцентного белка дополнительно включает одно или несколько аминокислотных замещений, выбранных из группы, состоящей из K3G, E6D, T9A, P58T, F99L, F99Н M128K, M128E, I136M, Y151H, N144S, K162E, K156M, T214A, G228C, G228S и K238R.
3. Нуклеиновая кислота по п.2, где последовательность нуклеиновой кислоты кодирует генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок, который, по существу, идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID Nо: 18.
4. Нуклеиновая кислота по п.3, где генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No: 18, 20, 22 и 24.
5. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.1.
6. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.2.
7. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.3.
8. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.4.
9. Кассета экспрессии, включающая:
(a) участок инициации транскрипции, который является функциональным в экспрессионном организме-хозяине;
(b) нуклеиновую кислоту по п.1 и
(c) участок терминации транскрипции, функциональный в указанном экспрессионном организме-хозяине.
10. Кассета экспрессии, включающая:
(a) участок инициации транскрипции, который является функциональным в экспрессионном организме-хозяине;
(b) нуклеиновую кислоту по п.2 и
(c) участок терминации транскрипции, функциональный в указанном экспрессионном организме-хозяине.
11. Кассета экспрессии, включающая:
(a) участок инициации транскрипции, который является функциональным в экспрессионном организме-хозяине;
(b) нуклеиновую кислоту по п.3 и
(c) участок терминации транскрипции, функциональный в указанном экспрессионном организме-хозяине.
12. Кассета экспрессии, включающая:
(a) участок инициации транскрипции, который является функциональным в экспрессионном организме-хозяине;
(b) нуклеиновую кислоту по п.4 и
(c) участок терминации транскрипции, функциональный в указанном экспрессионном организме-хозяине.
13. Клетка-хозяин или ее потомство, включающие кассету экспрессии по п.9 в качестве части внехромосомного элемента или интегрированную в геном клетки-хозяина в результате введения указанной кассеты экспрессии в указанную клетку-хозяина.
14. Клетка-хозяин или ее потомство, включающие кассету экспрессии по п.10 в качестве части внехромосомного элемента или интегрированную в геном клетки-хозяина в результате введения указанной кассеты экспрессии в указанную клетку-хозяина.
15. Клетка-хозяин или ее потомство, включающие кассету экспрессии по п.11 в качестве части внехромосомного элемента или интегрированную в геном клетки-хозяина в результате введения указанной кассеты в указанную клетку-хозяина.
16. Клетка-хозяин или ее потомство, включающие кассету экспрессии по п.12 в качестве части внехромосомного элемента или интегрированну. в геном клетки-хозяина в результате введения указанной кассеты в указанную клетку-хозяина.
17. Трансгенная клетка или ее потомство, включающие нуклеиновую кислоту по п.1.
18. Трансгенная клетка или ее потомство, включающие нуклеиновую кислоту по п.2.
19. Трансгенная клетка или ее потомство, включающие нуклеиновую кислоту по п.3.
20. Трансгенная клетка или ее потомство, включающие нуклеиновую кислоту по п.4.
21. Генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок, аминокислотная последовательность которого, по существу, подобна флуоресцентному белку Aequorea macrodactyla дикого типа с SEQ ID No: 2, и которая отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2 по меньшей мере аминокислотным замещением F220L, где указанный генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок имеет повышенную скорость созревания при температуре 20°С или выше в сравнении с зеленым флуоресцентным белком Aequorea macrodactyla дикого типа.
22. Генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок по п.21, отличающийся тем, что указанный генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок включает одно или несколько аминокислотных замещений, выбранных из группы, состоящей из K3G, E6D, T9A, P58T, F99L, F99H, M128K, M128E, I136M, Y151H, N144S, K162E, K156M, T214A, G228C, G228S и K238R.
23. Генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок по п.22, отличающийся тем, что указанный генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок, по существу, идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID Nо: 18.
24. Генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок по п.23, отличающийся тем, что указанный генетически сконструированный функциональный флуоресцентный белок имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей SEQ ID Nо: 18, 20, 22 и 24.
25. Набор, включающий по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту по п.1.