ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕ RET, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с рецепторной тирозинкиназой RET (REarranged during Transfection - перестроенной во время трансфекции), причем антитело обладает одной или несколькими из следующих характеристик:
(a) представляет собой полностью человеческое антитело;
D
-7
-12
(b) характеризуется K в диапазоне от приблизительно 1,0×10 M до приблизительно 1,0×10 M по результатам измерения с помощью поверхностного плазмонного резонанса;
(c) ингибирует или блокирует связывание или взаимодействие RET с одним или несколькими лигандами-представителя семейства GDNF (GDNF, нейртурином, артемином и персефином) в комплексе с их соответствующими корецепторами (GFRα1, GFRα2, GFRα3 и GFRα4 соответственно);
(d) ингибирует передачу сигналов RET, опосредованную одним или несколькими лигандами-представителями семейства GDNF, выбранными из GDNF, нейртурина, артемина и персефина;
(e) усиливает интернализацию/разрушение RET после связывания антитела с рецептором RET;
(f) содержит вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274 и 290; или
(g) содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282 и 298.
50
2. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, причем антитело блокирует связывание человеческой RET с совместным комплексом GDNF:GFRα1 со значением IC в диапазоне от приблизительно 100 пМ до приблизительно 7,0 нМ.
50
3. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2, причем антитело блокирует связывание человеческой RET с совместным комплексом GDNF:GFRα1 со значением IC в диапазоне от приблизительно 250 пМ до приблизительно 5,2 нМ.
4. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 3, причем процент блокирования человеческой RET с совместным комплексом GDNF:GFRα1 находится в диапазоне от приблизительно 40% до 100%.
5. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 4, причем процент блокирования человеческой RET с совместным комплексом GDNF:GFRα1 находится в диапазоне от приблизительно 57% до приблизительно 97%.
50
6. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, причем GDNF-опосредованная передача сигнала RET ингибируется со значением IC в диапазоне от приблизительно 50 пM до более чем 100 нM.
50
7. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 6, причем GDNF-опосредованная передача сигнала RET ингибируется со значением IC в диапазоне от приблизительно 143 пM до более чем 100 нM.
8. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 6, причем GDNF-опосредованная передача сигнала RET ингибируется на величину, варьирующую от приблизительно 40% до приблизительно 100%.
9. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 7, причем GDNF-опосредованная передача сигнала RET ингибируется на величину, варьирующую от приблизительно 60% до приблизительно 100%.
50
10. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, причем артемин-опосредованная передача сигнала RET ингибируется со значением IC в диапазоне от приблизительно 100 пM до приблизительно 500 нM.
50
11. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 10, причем артемин-опосредованная передача сигнала RET ингибируется со значением IC в диапазоне от приблизительно 250 пM до приблизительно 341 нM.
12. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 11, причем артемин-опосредованная передача сигнала RET ингибируется на величину, варьирующую от приблизительно 57% до приблизительно 100%.
13. Выделенное человеческое моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, содержащие пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282 и 290/298.
14. Выделенное человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с RET, причем антитело содержит HCVR, содержащий три CDR тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), содержащиеся в пределах аминокислотной последовательности HCVR, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274 и 290; и LCVR, содержащий три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), содержащиеся в пределах аминокислотной последовательности LCVR, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282 и 298.
15. Выделенное человеческое моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 14, содержащие:
;
(a) домен HCDR1 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276 и 292
(b) домен HCDR2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278 и 294;
(c) домен HCDR3 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280 и 296;
(d) домен LCDR1 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284 и 300;
(e) домен LCDR2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286 и 302; и
(f) домен LCDR3 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288 и 304.
16. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые конкурируют за специфическое связывание с RET с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, содержащим пары последовательностей тяжелой и легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282 и 290/298.
17. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают тот же эпитоп на RET, который распознается антителом, содержащим пары последовательностей тяжелой и легкой цепей, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282 и 290/298.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-17.
19. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 18.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая одно или несколько антител, которые специфически связывают RET, или их антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-17 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
21. Способ лечения нарушения или патологического состояния, связанного с экспрессией, активацией или передачей сигнала гена рецепторной тирозинкиназы RET или его перестроенной формы, или боли, связанной с нарушением или патологическим состоянием, причем способ предусматривает введение нуждающемуся в том пациенту одного или нескольких антител или их антигенсвязывающих фрагментов по любому из пп. 1-17 или фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько антител по любому из пп. 1-17.
22. Способ по п. 21, причем нарушение или патологическое состояние, связанное с экспрессией, активацией или передачей сигнала гена рецепторной тирозинкиназы RET или его перестроенной формы, представляет собой рак, и причем рак выбран из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака легких, рака поджелудочной железы, рака кожи, рака молочной железы и рака крови.
23. Способ по п. 21, причем нарушение или патологическое состояние, связанное с экспрессией, активацией или передачей сигнала гена рецепторной тирозинкиназы RET или его перестроенной формы, выбрано из группы, состоящей из острой боли, хронической боли, невропатической боли, воспалительной боли, артрита, остеоартрита, мигрени, кластерных головных болей, невралгии тройничного нерва, герпетической невралгии, общих форм невралгии, нейродегенеративных нарушений, нейроэндокринных нарушений, висцеральной боли, острой подагры, постгерпетической невралгии, диабетической невропатии, пояснично-крестцового радикулита, позвоночной боли, боли в голове или шее, сильной или неустранимой боли, прорывной боли, послеоперационной боли, зубной боли, ринита, боли при раке или нарушений, связанных с мочевым пузырем.
24. Способ ингибирования роста опухоли или пролиферации опухолевых клеток, причем опухоль или опухолевая клетка экспрессирует RET или ее перестроенную форму, причем способ предусматривает введение нуждающемуся в том пациенту одного или нескольких антител или их антигенсвязывающих фрагментов по любому из пп. 1-17 или фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько антител по любому из пп. 1-17.
25. Способ по п. 24, причем опухоль представляет собой солидную опухоль или опухоль клеток крови.
26. Способ по п. 25, причем солидная опухоль выбрана из группы, состоящей из опухоли щитовидной железы, опухоли легкого, опухоли поджелудочной железы, опухоли кожи и опухоли молочной железы.
27. Способ по п. 26, причем опухоль щитовидной железы представляет собой папиллярную карциному щитовидной железы (PTC) или медуллярную карциному щитовидной железы (MTC).
28. Способ по п. 27, причем медуллярная карцинома щитовидной железы представляет собой наследственную форму MTC, выбранную из группы, состоящей из множественной эндокринной неоплазии 2-го или 3-го типа (MEN2A, MEN2B) и синдрома семейной медуллярной карциномы щитовидной железы (FMTC), или причем медуллярная карцинома щитовидной железы представляет собой спорадическую форму MTC.
29. Способ по п. 26, причем опухоль легкого представляет собой аденокарциному легкого.
30. Способ по п. 26, причем опухоль легкого представляет собой немелкоклеточный рак легкого (NSCLC).
31. Способ по п. 26, причем опухоль кожи представляет собой меланому.
32. Способ по п. 25, причем опухоль клеток крови представляет собой лейкоз.
33. Способ по п. 32, причем лейкоз представляет собой хронический миеломоноцитарный лейкоз.
34. Способ подавления экспрессии и/или функции RET, причем способ предусматривает введение нуждающемуся в том пациенту одного или нескольких антител или их антигенсвязывающих фрагментов по любому из пп. 1-17 или фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько антител по любому из пп. 1-17.
35. Способ по п. 34, причем подавление экспрессии и/или функции RET приводит к нарушению регуляции последующего сигнального пути, выбранного из группы, состоящей из пути RAS/RAF и пути PI3K.
36. Способ по любому из пп. 21-35, причем антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту в комбинации со вторым терапевтическим средством.
37. Способ по п. 36, причем второе терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из низкомолекулярного ингибитора тирозинкиназы, противоопухолевого средства, siRNA, специфической к RET, второго антитела, специфического к RET, и уменьшающего боль средства.
38. Способ по п. 37, причем низкомолекулярный ингибитор тирозинкиназы выбран из группы, состоящей из вандетаниба, цедираниба (AZD2171), гефитиниба, эрлотиниба, SU14813, ваталаниба, сорафениба, сорафениба (BAY43-9006), сунитиниба, кабозантиниба, мотесаниба, XL-647, XL-999, AG-013736, BIBF1120, TSU68, GW786034, AEE788, CP-547632, KRN951, CHIR258, CEP-7055, OSI-930, ABT-869, E7080, ZK-304709, BAY57-9352, L-21649, BMS582664, XL-880, XL-184, XL-820, RPI-1, PP-1 и NVP-AST478.
39. Способ по п. 37, причем противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из химиотерапевтического средства, радионуклида и конъюгата антитела с лекарственным средством.
v
v
v
v
v
v
v
v
40. Способ по п. 37, причем уменьшающее боль средство выбрано из группы, состоящей из ингибитора фактора роста нервов (NGF) (например, низкомолекулярного антагониста NGF или антитела к NGF), аспирина или другого NSAID, морфина, стероидов (например, преднизона), антитела к Na1.7 или низкомолекулярного ингибитора Na1.7, антагониста Na1.8 (например, антитела к Na1.8 или низкомолекулярного ингибитора Na1.8), антагониста Na1.9 (например, антитела к Na1.9 или низкомолекулярного ингибитора Na1.9), ингибитора цитокинов (например, ингибитора интерлейкина-1 (IL-1) (такого как рилонацепт («ловушка IL-1»); Regeneron) или анакинры (KINERET, Amgen), низкомолекулярного антагониста IL-1 или антитела к IL-1; ингибитора IL-18 (такого как низкомолекулярный антагонист IL-18 или антитело к IL-18); ингибитора IL-6 или IL-6R (такого как низкомолекулярный антагонист IL-6, антитело к IL-6 или антитело к рецептору IL-6), ингибиторов каспазы-1, p38, IKK1/2, CTLA-4Ig или опиоида.