СПОСОБ АМПЛИФИКАЦИИ GС-БОГАТЫХ МАТРИЦ ДНК

1. Способ повышения процессивности одной или нескольких ДНК-полимераз на, по меньшей мере, одной GC-богатой матрице ДНК, способ, включающий осуществление реакции амплификации ДНК в водном растворе, содержащем dNTP в соотношении GC/AT больше одного.
2. Способ по п.1, где соотношение GC/AT составляет между 1,1 и 25.
3. Способ по п.1, где соотношение GC/AT составляет между 2,5 и 10.
4. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК обладает GC-обогащенностью, по меньшей мере, 65%.
5. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК обладает GC-обогащенностью, по меньшей мере, 90%.
6. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК содержит, по меньшей мере, пять последовательных повторов ди-, три- или тетрануклеотидов, состоящих из остатков G и C.
7. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК содержит, по меньшей мере, часть 5'-UTR FMR1.
8. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК содержит CGG повторы 5'-UTR FMR1.
9. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК содержит, по меньшей мере, часть 5'-UTR FMR2.
10. Способ по п.1, в котором GC-богатая матрица ДНК содержит CGG повторы 5'-UTR FMR2.
11. Способ по п.1, в котором водный раствор дополнительно содержит, по меньшей мере, один энхансер.
12. Способ по п.11, в котором, по меньшей мере, один энхансер включает, по меньшей мере, один из бетаина, аналога бетаина, DMSO или нейтрального детергента.
13. Способ по п.11, в котором, по меньшей мере, один энхансер включает
a. бетаин или аналог бетаина; и
b. по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из DMSO, нейтрального детергента и 7-деаза-GTP.
14. Способ по п.1, включающий амплификацию GC-богатой матрицы в водном растворе, содержащем
a. по меньшей мере, одну GC-богатую матрицу ДНК;
b. по меньшей мере, одну магниевую соль;
c. по меньшей мере, одну ДНК-полимеразу;
d. по меньшей мере, один буфер; и
e. dNTP в соотношении GC/AT больше одного,
и подвергание раствора, по меньшей мере, одному периоду инкубации, в течение которого происходит амплификация.
15. Способ по п.14, где водный раствор дополнительно содержит, по меньшей мере, один энхансер.
16. Способ по п.15, где, по меньшей мере, один энхансер включает, по меньшей мере, один из бетаина, аналога бетаина, 7-деаза-GTP, DMSO и нейтрального детергента.
17. Способ по п.1, в котором, по меньшей мере, одну GC-богатую матрицу амплифицируют способом, выбранным из, по меньшей мере, одного из SDA, NASBA, LAMP, RCA или LCR.
18. Способ по п.1, дополнительно включающий предоставление, по меньшей мере, одного праймера, отжигающегося на, по меньшей мере, одной GC-богатой матрице.
19. Способ повышения процессивности одной или нескольких ДНК-полимераз на, по меньшей мере, одной GC-богатой матрице ДНК, способ, включающий амплификацию матрицы посредством ПЦР в водном растворе, содержащем:
a. dNTP в соотношении GC/AT между 2 и 10;
b. по меньшей мере, один энхансер, выбранный из бетаина, DMSO и нейтрального детергента;
c. по меньшей мере, одну ДНК-полимеразу;
d. общую концентрацию магния 1,5-2 мМ; и
e. общую концентрацию dNTP 0,7-0,9 мМ;
где, по меньшей мере, одна GC-богатая матрица содержит CGG повторы 5'-UTR FMR1.
20. Способ по п.19, в котором нейтральный детергент содержит TWEEN-20.
21. Способ по п.19, в котором ПЦР продуцирует продукт, содержащий, по меньшей мере, 200 CGG повторов.
22. Способ по п.19, в котором ПЦР продуцирует продукт, содержащий, по меньшей мере, 300 CGG повторов.
23. Способ определения генотипа, связанного с болезнью экспансии GC-богатых тринуклеотидных повторов, включающий осуществление реакции амплификации ДНК на, по меньшей мере, одних генотипах, связанных с GC-богатыми повторами, в котором процессивность одной или нескольких ДНК-полимераз повышают предоставлением водного раствора, содержащего dNTP в соотношении GC/AT больше одного.
24. Способ определения генотипа, связанного с синдромом ломкой X-хромосомы, синдромом тремора/атаксии, связанным с ломкостью X-хромосомы, и/или преждевременной недостаточностью яичников, связанной с ломкостью X-хромосомы, включающий осуществление реакции амплификации ДНК на, по меньшей мере, одной GC-богатой матрице ДНК, в котором процессивность одной или нескольких ДНК-полимераз повышают предоставлением водного раствора, содержащего dNTP в соотношении GC/AT больше одного.
25. Способ по п.22, где матрица содержит CGG повторы 5'-UTR FMR1 или FMR2.
26. Способ по п.22, где соотношение GC/AT составляет между 1,1 и 25.
27. Способ по п.22, где соотношение GC/AT составляет между 2 и 10.