СЛИТЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И КОНЪЮГАТЫ ПОЛИПЕПТИДА ЛИГАНДА РЕЦЕПТОРА ИНКРЕТИНА И FC-ОБЛАСТИ С ИЗМЕНЕННОЙ FC-ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ

1. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области, включающий один, два, три, или четыре встречающихся в природе или синтетических полипептида лиганда рецептора инкретина, каждый из которых соединен ковалентной связью с Fc-областью, причем слитый полипептид или конъюгат включает последовательность аминокислот LPXTG (SEQ ID NO: 75), необязательно LPETG (SEQ ID NO: 74).
2. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 1, включающий последовательность аминокислот LPETG (SEQ ID NO: 74) между последовательностью аминокислот полипептида лиганда рецептора инкретина и последовательностью аминокислот Fc-области.
3. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 2, включающий Gly-Gly или Gly-Gly-Ser или Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 88), Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 85), или Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 90), присоединенные C-терминально к LPETG (SEQ ID NO: 74).
n
m
o
4. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 3, включающий (GGGS), где n=1-6 (SEQ ID NO: 57-60, 88 и 89), (GGGGS), где m=1-6 (SEQ ID NO: 61-64, 90 и 91), или (GGGGGS), где o=l-6 (SEQ ID NO: 65-67 и 92-94).
5. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 4, включающий любую из SEQ ID NO: 57-67.
6. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 1, включающий Gly или Gly-Gly, присоединенные N-терминально к LPXTG (SEQ ID NO: 75).
7. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 1, отличающийся тем, что Fc-область представляет собой человеческую Fc-область с мутацией аминокислотного остатка в положении 329 и по меньшей мере одной дополнительной мутацией по меньшей мере одной аминокислоты, выбранной из группы, включающей аминокислотные остатки в положении 228, 233, 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320, 322 и 331, в другой остаток, причем остатки в Fc-области нумеруются в соответствии с индексом EU Кабата.
8. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п.1, отличающийся тем, что вариантная человеческая Fc-область имеет уменьшенное сродство к человеческому FcγRIIIA, и/или FcγRIIA, и/или FcγRI по сравнению со слитым полипептидом или конъюгатом Fc-области, включающим Fc-область антитела IgG дикого типа.
9. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 7, отличающийся тем, что по меньшей мере одна дополнительная мутация по меньшей мере одной аминокислоты в Fc-области представляет собой S228P, Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D или P331S.
10. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 9, отличающийся тем, что по меньшей мере одна дополнительная мутация в Fc-области представляет собой L234A и L235A, если Fc-область имеет человеческий изотип IgG1, или S228P и L235E, если Fc-область имеет человеческий изотип IgG4.
11. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 1, отличающийся тем, что агрегирование тромбоцитов, индуцированное слитым полипептидом или конъюгатом Fc-области, является уменьшенным по сравнению с агрегированием тромбоцитов, индуцированным слитым полипептидом или конъюгатом Fc-области, включающим Fc-область антитела IgG дикого типа человека.
12. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что он включает один или два полипептида лиганда рецептора инкретина.
13. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что каждый из полипептидов лиганда рецептора инкретина слит или конъюгирован с N-концом одной цепи полипептида Fc-области, посредством чего каждая цепь полипептида Fc-области слита или конъюгирована только с одним полипептидом лиганда рецептора инкретина.
14. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по п. 12, отличающийся тем, что каждый из полипептидов лиганда рецептора инкретина слит или конъюгирован с С-концом одной цепи полипептида Fc-области, посредством чего каждая цепь полипептида Fc-области слита или конъюгируется только с одним полипептидом лиганда рецептора инкретина.
15. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что полипептиды лиганда рецептора инкретина выбраны независимо друг от друга из GIP, GLP-1, эксендина-3, эксендина-4, двойных агонистов GIP-GLP-1, тройных агонистов рецептора GIP-GLP-1-глюкагон, химерных агонистов GIP/GLP, а также их предшественников, производных или функциональных фрагментов.
16. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, в котором Fc-область включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-56.
17. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, в котором полипептид лиганда рецептора инкретина включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-39, 76 и 77.
18. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-11, в котором слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области включает связывающий агент между Fc-областью и полипептидом лиганда рецептора инкретина, в котором связывающий агент включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 57-69 и 82-94.
19. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области, включающий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 95.
20. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области, включающий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 96.
21. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области, включающий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 97.
22. Слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области, включающий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 98.
23. Фармацевтическая композиция, включающая слитый полипептид Fc-области или конъюгат Fc-области по любому из пп. 1-22.
24. Применение слитого полипептида Fc-области или конъюгата Fc-области по любому из пп. 1-22 в качестве лекарственного средства.
25. Применение слитого полипептида Fc-области или конъюгата Fc-области по любому из пп. 1-22 для производства лекарственного средства для лечения заболевания, при котором предпочтительно, чтобы эффекторная функция слитого полипептида или конъюгата, включающего вариант Fc-области антитела IgG дикого типа человека, была сниженной по сравнению с эффекторной функцией, индуцируемой слитым полипептидом или конъюгатом, включающим Fc-область антитела IgG дикого типа человека.
26. Применение слитого полипептида Fc-области или конъюгата Fc-области по любому из пп. 1-22, включающего вариант Fc-области антитела IgG дикого типа человека, в котором Pro329 Fc-области антитела IgG дикого типа человека заменяется на глицин, в котором остатки нумеруются в соответствии с индексом EU Кабата, в котором слитый полипептид или конъюгат демонстрирует уменьшенное сродство к человеческому FcγRIIIA и FcγRIIA для понижения ADCC по меньшей мере на 20% по сравнению с ADCC, индуцируемой слитым полипептидом или конъюгатом, включающим Fc-область антитела IgG дикого типа человека, и/или для понижения ADCP.
27. Применение по п. 25, отличающееся тем, что заболевание представляет собой диабет 2 типа или ожирение.
28. Применение по п. 25, отличающееся тем, что заболевание представляет собой диабет 1 типа.
29. Полипептид, включающий последовательность аминокислот полипептида лиганда рецептора инкретина и LPXTG (SEQ ID NO: 75), где X является любой аминокислотой.
30. Полипептид по п. 29, в котором X является кислой аминокислотой.
31. Полипептид по п. 30, в котором кислая аминокислота представляет собой Glu.
32. Полипептид по любому из пп. 29-31, включающий Gly-Gly или Gly-Gly-Ser или Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 88), Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 85), или Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 90), присоединенные C-терминально к LPETG (SEQ ID NO: 74).
n
m
o
33. Полипептид по п. 32, включающий п (GGGS), где n=1-6 (SEQ ID NO: 57-60, 88 и 89), (GGGGS), где m=1-6 (SEQ ID NO: 61-64, 90 и 91), или (GGGGGS), где o=1-6 (SEQ ID NO: 65-67 и 92-94).
34. Полипептид по п. 33, включающий любую из SEQ ID NO: 57-67.
35. Полипептид по любому из пп. 29-31, включающий Gly или Gly-Gly, присоединенные N-терминально к LPXTG (SEQ ID NO: 75).
36. Применение полипептида по любому из пп. 29-35 в производстве лекарственного средства для лечения заболевания.
37. Применение по п. 36, в котором производство лекарственного средства включает применение сортазы А и человеческой Fc-области.