МЫШИ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ ОГРАНИЧЕННЫЙ РЕПЕРТУАР ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Мышь, содержащая:
L
L
L
L
два генных сегмента V иммуноглобулина человека и два или более генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с константной областью легкой цепи иммуноглобулина, причем два генных сегмента V иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека, и два или более генных сегментов J иммуноглобулина человека выбирают из группы, состоящей из Jκ1, Jκ2 Jκ3, Jκ4 и Jκ5 человека; и
H
H
H
один или несколько генных сегментов V иммуноглобулина человека, один или несколько генных сегментов D иммуноглобулина человека и один или несколько генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с отличной от человеческой константной областью иммуноглобулина;
при этом генные сегменты человека способны к реаранжировке и кодированию человеческих вариабельных доменов антитела, и, кроме того, при этом мышь не содержит эндогенный генный сегмент Vκ иммуноглобулина, который способен к реаранжировке для образования легкой цепи иммуноглобулина.
L
L
2. Мышь по п. 1, у которой два генных сегмента V человека и два или более генных сегментов J человека функционально связаны с константной областью легкой цепи иммуноглобулина крысы или мыши.
3. Мышь по п. 2, у которой константная область легкой цепи представляет собой область Сκ крысы.
4. Мышь по п. 2, у которой константная область легкой цепи представляет собой область Сκ мыши.
L
5. Мышь по п. 1, причем мышь содержит пять генных сегментов J человека.
L
6. Мышь по п. 5, у которой пять генных сегментов J человека представляют собой Jκ1, Jκ2 Jκ3, Jκ4 и Jκ5 человека.
L
L
7. Мышь по любому из пп. 1-4, у которой два генных сегмента V человека и два или более генных сегментов J человека присутствуют в эндогенном локусе легкой цепи.
H
H
H
8. Мышь по любому из пп. 1-4, у которой один или несколько генных сегментов V человека, один или несколько генных сегментов D человека и один или несколько генных сегментов J человека функционально связаны с константной области мыши.
9. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит функциональный локус легкой цепи λ.
10. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит нефункциональный локус легкой цепи λ.
L
L
11. Мышь по любому из пп. 1-4, у которой два генных сегмента V человека и два или более генных сегментов J человека, функционально связанные с константной областью легкой цепи мыши или крысы, присутствуют в локусе, содержащем по порядку: два генных сегмента Vκ человека, которые представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека, и Jκ1, Jκ2 Jκ3, Jκ4 и Jκ5 человека.
12. Мышь по любому пп. 1-4, причем мышь содержит локус DLCJ-5J фигуры 9.
4
5
+
+
+
13. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию про-В-клеток в костном мозге в диапазоне от приблизительно 2,5×10 до приблизительно 1,5×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD19, CD43, c-kit.
6
6
+
-
-
14. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию пре-В-клеток в костном мозге в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 2×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD19, CD43, c-kit.
5
5
+
int
15. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию незрелых В-клеток в костном мозге в диапазоне от приблизительно 5×10 до приблизительно 7×10 клеток, характеризующихся экспрессией IgM, B220.
4
5
+
hi
16. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию зрелых В-клеток в костном мозге в диапазоне от приблизительно 3×10 до приблизительно 1,5×10 клеток, характеризующихся экспрессией IgM, B220.
+
6
6
17. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит общую популяцию CD19 В-клеток в костном мозге в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 3×10 клеток.
+
6
6
18. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию CD19 В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 2×10 до приблизительно 7×10 клеток.
+
hi
lo
6
6
19. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию CD19, IgD, IgM В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 4×10 клеток.
+
lo
hi
5
6
20. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию CD19, IgD, IgM В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 9×10 до приблизительно 2×10 клеток.
6
6
+
+
-
hi
21. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит переходную Т1 популяцию В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 2×10 до приблизительно 7×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 CD23 IgM.
6
6
+
+
hi
+
22. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит переходную Т2 популяцию В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 7×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 IgM CD23.
6
6
+
+
+
lo
23. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит переходную Т3 популяцию В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 4×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 CD23 IgM.
6
6
-
+
hi
hi
-
24. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит популяцию маргинальной зоны В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 3×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 IgM CD21/35 CD23.
6
7
-
+
int
lo
hi
25. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит фолликулярную популяцию типа 1 (FO-I) В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 3×10 до приблизительно 1,5×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 CD21/35 IgM IgD.
6
6
-
+
int
int
hi
26. Мышь по любому из пп. 1-4, причем мышь содержит фолликулярную популяцию типа 2 (FO-II) В-клеток селезенки в диапазоне от приблизительно 1×10 до приблизительно 2×10 клеток, характеризующихся экспрессией CD93 В220 CD21/35 IgM IgD.
27. Выделенная клетка мыши по любому из пп. 1-26.
28. Клетка по п. 27, причем клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ЭС) клетку.
29. Эмбрион мыши, который содержит ЭС клетку по п. 28.
30. Клетка по п. 27, причем клетка представляет собой В-клетку.
31. Гибридома, полученная с В-клеткой по п. 30.
32. Применение мыши по любому из пп. 1-26 для получения антитела или для идентификации последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи человека.
33. Способ получения антитела, которое связывается с представляющим интерес антигеном, предусматривающий:
иммунизацию мыши по любому из пп. 1-26 представляющим интерес антигеном,
получение генной последовательности вариабельной области иммуноглобулина из мыши и
использование генной последовательности вариабельной области иммуноглобулина для получения антитела, которое связывается с антигеном.
34. Способ по п. 33, предусматривающий:
экспрессию в единственной клетке:
H
(a) первой генной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, при этом генная последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина получена из первого антитела к первому представляющему интерес антигену, продуцируемого мышью по любому из пп. 1-26, которая была иммунизирована, причем первую генную последовательность вариабельной области тяжелой цепи сливают с генной последовательностью C человека; и
L
(b) генную последовательность вариабельной области легкой цепи, причем генную последовательность вариабельной области легкой цепи сливают с генной последовательностью C человека;
поддержание клетки в условиях, достаточных для экспрессии полностью человеческого антитела и
выделение антитела из клетки.
H
H
H
L
35. Способ по п. 34, при котором клетка дополнительно содержит вторую генную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, полученную из второго антитела ко второму представляющему интерес антигену, продуцируемому мышью по любому из пп. 1-26, которая была иммунизирована, причем вторую генную последовательность вариабельной области тяжелой цепи сливают с генной последовательностью C человека, причем первый и второй антигены являются одинаковыми или различными антигенами, таким образом что первая генная последовательность вариабельной области тяжелой цепи и вторая генная последовательность вариабельной области тяжелой цепи кодируют домены V, каждый из которых распознает (а) различные эпитопы одного и того же антигена, или (b) два различных антигена, и причем домены V взаимодействуют с доменом V, кодируемым генной последовательностью вариабельной области легкой цепи.
36. Применение мыши по любому из пп. 1-26 в получении биспецифического антитела человека.
37. Способ получения биспецифического антитела человека, причем способ предусматривает иммунизацию мыши по любому из пп. 1-26 и получение биспецифического антитела с использованием человеческих генных последовательностей вариабельной области В-клеток из мыши.
38. Способ по п. 37, при котором способ предусматривает:
(a) идентификацию клонально выбранного лимфоцита мыши по любому из пп. 1-26, причем мышь иммунизировали и ей позволили проявлять иммунный ответ на представляющий интерес антиген, причем лимфоцит экспрессирует антитело, которое специфически связывается с представляющим интерес антигеном;
(b) получение из лимфоцита или антитела нуклеотидной последовательности, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи человека, которая специфически связывается с представляющим интерес антигеном; и
(c) использование нуклеотидной последовательности (с) в создании биспецифического антитела.
39. Способ по п. 38, при котором стадии от (а) до (с) выполняются первый раз для первого представляющего интерес антигена для создания первой последовательности вариабельной области тяжелой цепи человека и стадии от (а) до (с) выполняются второй раз для второго представляющего интерес антигена для создания второй последовательности вариабельной области тяжелой цепи человека, и причем первая последовательность вариабельной области тяжелой цепи человека экспрессируется слитой с первой константной областью тяжелой цепи человека для образования первой тяжелой цепи человека, вторая последовательность вариабельной области тяжелой цепи человека экспрессируется слитой со второй константной областью тяжелой цепи человека для образования второй тяжелой цепи человека, причем первая и вторая тяжелые цепи человека экспрессируются в присутствии единственной легкой цепи человека, экспрессируемой из генного сегмента Vκ1-39 или Vκ3-20.
40. Способ по п. 39, причем способ предусматривает:
(a) клонирование вариабельных областей тяжелых цепей из В-клеток от:
(i) мыши по любому из пп. 1-26, которая была иммунизирована первым иммуногеном; и
(ii) той же мыши или другой мыши, которая генетически представляет собой такую же, которая была иммунизирована вторым иммуногеном; и
(b) экспрессию в клетке вариабельных областей тяжелых цепей (а) с той же константной областью тяжелой цепи и той же легкой цепью для получения биспецифического антитела.
41. Способ по п. 40, при котором первая тяжелая цепь человека содержит модификацию, которая устраняет или по существу уменьшает аффинность первой тяжелой цепи человека к белку А, а вторая тяжелая цепь человека сохраняет способность связываться с белком А, причем модификацию, которая устраняет или по существу снижает аффинность первой тяжелой цепи человека к белку А, выбирают из 95R (435R ЕС), 96F 436F (ЕС) и их комбинации.
42. Применение мыши по любому из пп. 1-26 для выбора генного сегмента вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека.
43. Мышь по любому из пп. 1-4, которая была иммунизирована.
44. Способ получения антитела, предусматривающий иммунизацию мыши согласно любому из пп. 1-26 антигеном и получение аминокислотной последовательности или кодирующей нуклеотидной последовательности вариабельной области тяжелой цепи из полученного антитела, производимого мышью против антигена, и использование указанной аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи в создании антитела.
45. Способ по п. 44, причем способ предусматривает:
(a) идентификацию аминокислотной последовательности или кодирующей нуклеотидной последовательности вариабельной области тяжелой цепи из двух различных антител против различных эпитопов антигена, которыми мышь иммунизировали; или
(b) иммунизацию той же мыши или дополнительной мыши согласно любому из пп. 1-26 другим антигеном, затем идентификацию аминокислотной последовательности или кодирующей нуклеотидной последовательности вариабельной области тяжелой цепи из антитела, производимого мышью, который специфичен для второго антигена,
причем способ дополнительно предусматривает использование двух различных вариабельных областей тяжелой цепи для производства биспецифического антитела.
46. Способ по п. 44 или 45, причем способ дополнительно предусматривает также идентификацию последовательности вариабельной области легкой цепи из антитела или двух антител.
47. Способ по п. 46, причем способ предусматривает также использование вариабельной области или областей легкой цепи и тяжелой цепи, идентифицированных в антителе, полученном с помощью способа.