СПОСОБ ОЦЕНКИ СТРУКТУРЫ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD FOR ASSESSING ERYTHROCYTE MEMBRANE STRUCTURE OF PERIPHERAL BLOOD IN PERIPHERAL WOMEN SUFFERING AGGRAVATED HERPES VIRUS INFECTION

Цель изобретения заключается в прогнозировании нарушения структуры мембран эритроцитов под влиянием герпес-вирусной инфекции, обострение которой в третьем триместре беременности приводит к активизации в периферической крови интерлейкина-8 (IL-8), увеличивающего содержание серотонина, что приводит к изменению микровязкости мембран эритроцитов и снижает их устойчивость.
Цитокины противовоспалительного действия, к которым относится IL-8, оказывают повреждающее действие на клетки тканевых систем организма. IL-8 вырабатывается нейтрофилами, фибробластами, децидуальными клетками, гемопоэтическими элементами, способствуя выделению в кровь таких биологически активных веществ, как серотонин (Н.Ю.Сотникова, А.В.Кудряшова, Н.В.Крошкина, 2006; R.Turner, К.Weingand, 1998; Sato Motoyoshi, 1996). Однако в доступной литературе не описано влияние IL-8 и серотонина на микровязкость мембран эритроцитов.
Прототипом избран способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных, основанный на определении содержания лизофосфатидилхолина и белка полосы-3 с последующим вычислением дискриминантного уравнения (Луценко М.Т., Андриевская И.А. «Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных». Мед. информатика, 2009. - №1, 19. - С.23-30). Однако в отличие от прототипа в нашем способе предлагается принять за основу повреждающего действия на структуру мембран эритроцитов у беременных, в третьем триместре перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, действие IL-8 на содержание серотонина, которые становятся повреждающим фактором микровязкости мембран эритроцитов.
В отличие от описанного прототипа проводится подробный анализ изменения микровязкости мембран эритроцитов, возникающей вследствие обострения герпес-вирусной инфекции у беременных в третьем триместре (титр антител к вирусу герпеса - 1:12800), приводящей к активизации выработки IL-8, что способствует повышению в крови биогенно-активных веществ (серотонина), способствующих изменению на этом фоне микровязкости мембран эритроцитов.
Цель достигается тем, что оценка изменения микровязкости мембран эритроцитов исследуется путем определения коэффициента эксимеризации пирена, который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров при одновременном включении метода дискриминантного анализа.
Заявленный способ имеет следующие приемы
Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Изучена у 30 беременных в третьем триместре гестации устойчивость мембран эритроцитов при увеличении содержания IL-8 и серотонина, что приводит к увеличению микровязкости мембран. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
экс
470
395
экс
мон
1. Изменение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении (Г.Е.Добрецов, 1989). Флюоресценцию пирена измеряли на спектрофотометре «Hitachi». Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (F = F/F), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F/F.
2. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat Fax-2100» (USA).
3. IL-8 определяли методом твердофазного ИФА с использованием моноклональных антител фирмы ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) на анализаторе иммуноферментных реакций «Униплан» АИФР-01, ЗАО «Пикон» (Москва).
4. Серотонин выявляли методом твердофазного ИФА с помощью реагентов «IBL» (Германия) на анализаторе АИФР-01, «Униплан» (Москва).
Показано, что при обострении герпес-вирусной инфекции в организме беременной повышается выработка IL-8, что приводит к увеличению в периферической крови серотонина, отрицательно влияющего на белково-липидное строение мембран эритроцитов, увеличивая их микровязкость.
Подобного подхода к решению вопроса, касающегося изменения белково-липидного комплекса мембран эритроцитов на фоне увеличения содержания в периферической крови IL-8 и серотонина при индуцирующем действии герпес-вирусной инфекции, в литературе не отмечено.
э
м
э
м
Исследования показали, что при обострении в третьем триместре беременности герпес-вирусная инфекция (титр антител к вирусу герпеса - 1:12800) индуцирует повышение выработки интерлейкина-8 (IL-8) до 37,0±0,9 пг/мл (контроль - 15,2±1,2 пг/мл; р<0,001), стимулирует увеличение в крови серотонина до 1,97±0,02 мкмоль/л (контроль - 0,42±0,03 мкмоль/л; р<0,001) и приводит к нарастанию микровязкости мембран эритроцитов. Белок-липидные контакты уменьшаются до 0,86±0,005 F/F (контроль - 1,14±0,006 F/F; р<0,05). Создается угроза нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов и, прежде всего, увеличение микровязкости.
Пример 1
э
м
Беременная А., 20 лет. Беременность 32 недели. Обострение герпес-вирусной инфекции на 30 неделе гестации. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в периферической крови содержание IL-8 было 18,0 пг/мл; серотонина - 0,57 мкмоль/л; микровязкость в мембранах эритроцитов - 1,24 F/F.
э
м
После обострения герпес-вирусной инфекции содержание IL-8 увеличилось до 37,9 пг/мл; серотонина - 1,98 мкмоль/л; микровязкости - 0,866 F/F. У беременной при отмеченных показателях создается угроза нарушения структуры мембран эритроцитов.
Пример 2
э
м
Беременная X., 21 год. Беременность 34 недели. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в периферической крови содержание IL-8 - 12,0 пг/мл; серотонина - 0,42 мкмоль/л; микровязкости в мембранах эритроцитов - 1,14 F/F.
э
м
После обострения герпес-вирусной инфекции содержание IL-8 - 36,1 пг/мл; серотонина - 1,96 мкмоль/л; микровязкость мембран эритроцитов - 0,859 F/F. Создается угроза нарушения структуры мембран эритроцитов.
Литература
1. Бордюшков Ю.Н., Горошинская И.А., Франциянц Е.М., Ткачева Г.Н., Горло Е.И., Нескубина И.В. Структурно-функциональные изменения мембран лимфоцитов и эритроцитов под воздействием переменного магнитного поля. // Вопросы мед. химии. - 2000. - Т.46. - №1. - С.72-80.
2. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. - М.: Наука, 1980. - 430 с.
3. Горошинская И.А., Голотина Л.Ю., Горло Е.И., Ровда Т.А., Бордюшков Ю.Н. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови онкологических больных. // Вопросы мед. химии. - 1999. - Т.45. - №1. - С.53-57.
4. Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеидов. - М.: Наука, 1989. - С.191-206.
5. Луценко М.Т., Ишутина Н.А., Андриевская И.А. Способ оценки структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции. Патент №2389021, выдан 10 мая 2010 г.
6. Веденеева М.В., Гагаева Ю.В., Крошкина Н.В., Кудряшова А.В., Панова И.А., Сотникова Н.Ю. Продукция цитокинов децидуальными макрофагами при физиологической беременности и синдроме задержки внутриутробного развития плода. // Журн. Цитокины и воспаление. - 2006. - №1. - С.1-3.
7. Motoyoshi Sato, Takashi Miyazaki, Voshiharu Murata Antioxidants inhibit tumor necrosis factor-α mediated stimulation of interleukin-8, monocyte chemoattractant prtein-1 and collagenase expression in cultured human synovial cells // J. Reumatol. - 1996. - Vol.23, №3. - P.432-438.
8. Turner R., Weingand K. Association between interleukin-8 concentration in nasal secretions and severity of symptoms of experimental zhinovirus colds // Clin. Infec. Diseases. - 1998. Vol.26, №4. - P.840-846.