Изменение активности лактатдегидрогеназы, аланинаминтрансферазы и аспартатеминотрансферазы сыворотки крови мышей под действием дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis

ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2011 - Т. ХУШ, № 3 - С. 44

вали с величиной индекса PASI.

Включение методов эфферентной и квантовой медицины в комплекс лечения заболевания способствует нормализации некоторых нарушенных показателей гемостаза. Наибольшим корригирующим действием на процессы гемостаза обладает плазмафе-рез и его модификации с ультрафиолетовым облучением или озонированием возвращаемой эритроцитарной взвеси.

Литература

1. Вестн. Дерматол / М.М. Абрамкина [и др.]. - 1991. - № 1.

- С. 46-49.

2. Баркаган, З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот.- М. : Нью-диамед, 2001. - С. 45-177.

3. Данилов, А.Ю. Клинико-патогенетическое обоснование применения эфферентных методов и озонотерапии в ранней реабилитации больных, перенесших миомэктомию : Автореф. дис... д-ра мед. Наук / А.Ю. Данилов. - М, 2009. - 48 с.

4. Кореньков, Д.Г. Эфферент. Тер / Д.Г. Кореньков [и др.].-2008. - Т. 14., № 3-4. - С. 10-20.

5. Мирсаева, А.Р. Нарушения системы гемостаза, липопе-роксидация в тромбоцитах и содержание оксида азота у больных псориазом : Автореф. дис. канд. мед. Наук / А.Р. Мирсаева. -Уфа, 2010. - 23 с.

6. Новиков, А.И. Тез. научн. работ Первого Российского конгресса дерматовенерологов / А.И. Новиков, С. А. Усова. - Т. 1.

- Санкт-Петербург, 2003. - С. 682-683.

7. Пат. 2394563 RU. Способ лечения псориаза / Байтяков В.В. // Рефераты российских патентных документов. - 2010. -№20. - 4 с.

8. Пиксин, И.Н. Квантовые и эфферентные методы лечения в хирургии / И.Н. Пиксин [и др.].- М. : Наука, 2010. - С. 58-151.

9. Потекаев, Н.С. Вестн. Дерматол / Н.С. Потекаев [и др.].

- 1990. - № 10. - С. 35-37.

10. Садыков, А.А. Вестн. Дерматол / А.А. Садыков. - 2007. -№ 4. - С. 31-33.

11. Хазизов, И.Е. Тер. Архив / И.Е. Хазизов, Е.С. Нодова. -1993.- № 11.- С. 43-49.

12. Цыганок, С.С. Фундаментальн. исслед.- 2004.- № 1 .С. 91.

13. Шевцова, О.М. Журн. теоретич. и практич. Мед / О.М. Шевцова, Н.В. Шаповалова. - 2005. - Т. 3., № 3. - С. 321-325.

14. Krueger, J.G. Ann. Rheumat. Dis / J.G. Krueger, A. Bow-cock. - 2005. - Vol. 64. - P. 1130-1136.

THE DYNAMICS OF SOME COAGULOGRAM INDICES IN PATIENTS

WITH PSORIASIS WITH THE INCLUSION OF EFFERENT QUANTUM AND OZONE THERAPY METHODS IN THE COMPLEX THERAPY

V. V. BAITYAKOV

Mordovia State University after N. P. Ogarev, Medical Institute

253 patients with progressive stage of extensive psoriasis have been examined. The effect of efferent and quantum and ozone therapy methods on some hemostasis indices has been studied. The tendency to hypercoagulation has been revealed in patients with the exacerbation of extensive psoriasis. No valid dynamics in indices has been observed both in standard therapy and in its combination with ozone therapy. Beneficial effect on abnormal indices has been produced by the inclusion of photohemocorrection methods, plasmapheresis and its modifications.

Key words: psoriasis, hemostasis, coagulogram, photohemo-correction methods, ozone therapy.

УДК 616-098:591:11

ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ, АЛАНИНАМИНТРАНСФЕРАЗЫ И АСПАРТАТЕМИНОТРАНСФЕРАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ МЫШЕЙ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА BACILLUS THURINGIENSIS

М.С. ФЕКЛИНА, Д.В. КАМЕНЕК, Э.К. ЮНУСОВА, Л.К КАМЕНЕК*

Показано, что 5-эндотоксин Bacillus thuringiensis достоверно не изменял активности лактатдегидрогеназы, аланинаминотранферазы и

аспартатаминотрансферазы сыворотки крови лабораторных мышей.

* ГОУ ВПО Ульяновский государственный университет, г. Ульяновск, ул. Льва Толстого 42., тел. 8 (8422) 32-00-16

Ключевые слова: лактатдегидраза, аспартатеминотрансфераза, сыворотка крови, мыши.

В настоящее время широко распространены препараты, содержащие спорово-кристаллические комплексы Bacillus thuringiensis, занимающие до 90-95% мирового рынка биоинсектицидов [1]. Кроме того, с развитием генной инженерии, стали создаваться трансгенные растения, модифицированные геном токси-нообразования. Такие растения уже производятся рядом генно-инженерных фирм в промышленных масштабах. Разработаны так же новые препараты на основе очищенного от спор и других балластных веществ и предварительно активированного эндотоксина [7,8]. Уникальная избирательность взаимодействия 5-эндотоксина с мембранами клеток насекомых дает возможность использовать его для защиты сельскохозяйственных растений и леса от листогрызущих насекомых-вредителей.

Существуют данные о безвредности 5-эндотоксина для млекопитающих, основанные на изучении его прямой токсичности. Попадая в организм животного, 5-эндотоксин может всасываться в кишечнике и, в первую очередь, имеет возможность взаимодействия с элементами крови. При длительном воздействии токсических веществ в концентрациях, не вызывающих внешне обнаруживаемого эффекта, могут выявляться скрытые изменения ряда биохимических показателей системы крови, которая является чувствительным индикатором, отражающим состояние организма в целом.

Метаболизм клетки включает множество разветвленных ферментативных реакций, которые формируют отдельные циклы: гликолиз, цикл трикарбоновых кислот и т.д. При интоксикации накапливается большое количество промежуточных и конечных продуктов обмена, которые оказывают деструктивное действие на важнейшие системы организма [2].

Сопряженные химические реакции, протекающие в живом организме, и активность ферментов, катализирующих их, характерны почти исключительно для внутриклеточной среды. Лак-татдегидрогеназа (ЛДГ), аланинаминотрасфераза (АлАТ) и аспартатаминотрансфераза (АсАТ) сыворотки крови являются ферментами, которые способны выходить в межклеточное пространство в результате нарушений целостности клеточных мембран [4]. В этом случае на основании результатов анализов внеклеточных жидкостей (особенно плазмы или сыворотки крови) можно сделать заключение о характере изменений, происходящих внутри клеток разных органов и тканей. Поэтому исследования выше перечисленных ферментов являются важным лабораторным тестом, позволяющим выявить нарушение в работе органов на ранних стадиях токсикации [3].

Цель исследования - изучение влияния различных концентраций 5-эндотоксина B. thuringiensis subsp. kurstaki, который наиболее широко используется в защите растений, на активность ЛДГ, АсАТ, АлАТ.

Материалы и методы исследования. В исследованиях использовали полугодовалых белых беспородных мышей - самок со средним весом 30±2 гр. Животным в течении 4 недель дважды в неделю перорально вводили препарат в дозах - 100, 50 или 25 мг на кг массы животного, что составило 0,003, 0,0015 или 0,00075 мг на особь, соответственно. В эксперименте использова-вали 360 животных, разделенных на 4 группы, три опытные и одна контрольная. Контрольным животным токсин не вводили. Материалом для исследования служила сыворотка крови. Забор крови для оценки активности проводили еженедельно путем декапитации животных, для усыпления животных использовали эфир.

Сыворотку крови получали методом отстаивания цельной крови и ретракции кровяного сгустка с последующим центрифугированием. Центрифугирование сыворотки проводили при скорости 3000 об/мин в течение 10 мин [7].

Определение активности ферментов проводили в присутствии восстановленной формы кофермента НАДН. В качестве субстрата для определения ЛДГ использовали пируват, АсАТ - L-аспарагиновую кислоту, АлАТ - L-аланин.

Инкубационная смесь для определения ЛДГ содержала 2,7 мл 100мМ трис буфера (рН 7,4); 0,1 мл сыворотки; 0,1 мл 23 мМ пирувата натрия; 0,1 мл 5 мМ НАДН.

Инкубационная смесь для определения АсАТ содержала 1 мл 80мМ фосфатного буфера (рН 7,4); 0,1 мл сыворотки; 2 мл 200мМ L-аспарагиновой кислоты, 0,02 мл а-кетоглутаровой ки-

ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2011 - Т. XVIII, № 3 - С. 45

слоты; 0,05 мл 18мМ НАДН.

Инкубационная смесь для определения АлАТ содержала 1 мл 80мМ фосфатного буфера (рН 7,4); 0,1 мл сыворотки; 2 мл 500мМ Ь-аланина, 0,02 мл а-кетоглутаровой кислоты; 0,05 мл 18мМ НАДН.

Для определения активности ферментов инкубационную смесь помещали в кварцевые кюветы толщиной в 1 см и оценивали скорость окисления НАДН, спектрофотометрически по убыли величины оптической плотности при длине волны 340 нм [6].

Активность ферментов измеряли в нмоль/(с-л), но для удобства активность выражали в %, принимая контроль за 100%, чтобы исключить изменения, связанные с внешними воздействиями на организм животного.

Экспериментальные данные обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики. Достоверность полученных результатов оценивали с помощью ^критерия Стьюдента.

Таблица 1

Влияние 5-эндотоксина на активность лактатдегидрогеназы в крови лабораторных мышей

Сутки Изменение активности ЛДГ,% в зависимости от дозы токсина, мг/кг

Контроль (без токсина) 25 50 100

1 100 103±9 103±15 100±13

7 100 103±11 100±0,11 99±9

14 100 79±8 94±7 91±12

21 100 96±10 93±12 92±21

Примечание: ***-p < 0,001 при n = 10, где n - число повторностей

Результаты и их обсуждение. Анализ данных указывает на отсутствие существенных изменений активности ЛДГ в сыворотки крови животных во всех исследуемых дозах на протяжении всего эксперимента. Однако прослеживается устойчивая тенденция к снижению активности данного фермента к окончанию эксперимента с увеличением дозы 5-эндотоксина. На наш взгляд, подобно снижение может быть связано с усилением аэробности условий, которое вызвано действием 5-эндотоксина. В литературе данный факт описан, как эффект Пастера.

Таблица 2

Влияние 5-эндотоксина на активность аспартатаминотрасферазы в крови лабораторных мышей

Сутки Изменение активности АсАТ, % в зависимости от дозы токсина, мг/кг

Контроль (без токсина) 25 50 100

1 100 103±7 102±5 119±14

7 100 107±2 103±3 97±4

14 100 99±2 98±2 97±3

21 100 103±8 108±6 99±5

Примечание: ***-р < 0,001 при п = 10, где п - число повторностей

В активности АсАТ также не было отмечено достоверных изменений во всех исследуемых дозах на протяжении всего эксперимента.

Также отсутствуют достоверные изменения для всех исследуемых дозах на протяжении всего эксперимента в активности АлАТ. во всех исследуемых дозах на протяжении всего эксперимента.

Таблица 3

Влияние 5-эндотоксина на активность аланинаминотрасферазы в крови лабораторных мышей

Сутки Изменение активности АлАТ, % в зависимости от дозы токсина, мг/кг

Контроль (без токсина) 25 50 100

1 100 98±10 106±4 109±23

7 100 118±5 133±13 130±11

14 100 97±13 111±12 91 ±22

221 100 100±11 96±12 98±8,8

Примечание: ***-p < 0,001 при n = 10, где n - число повторностей

Таким образом, не отмечено существенных изменений активности ЛДГ, АсАТ и АлАТ в сыворотки крови животных для всех исследованных доз на протяжении всего эксперимента. Следовательно, можно констатировать, что в таких количествах 5-эндотоксин не вызывает разрушения клеток и органов и тканей.

Наши результаты подтверждаются ранее полученными данным, согласно которым не было установлено непосредственного токсического эффекта 5-эндотоксина в высоких дозах (1000, 500 и 250 мг на кг массы животного) in vitro на клетки крови. Токсин также не оказывал влияния на жизнеспособность эритроцитов периферической крови животных [5]. Угнетающее действие B. thuringiensis in vivo в очень высоких дозах связано, вероятно, с неспецифической реакцией организма на чужеродный белок, способный проникать в кровоток.

В малых дозах 5-эндотоксин не влияет на состояние организма, в средних дозах обладает некоторым иммуностимулирующим действием, а в больших угнетает иммунную систему организма [6].

Работа выполнена при поддержке гранта Министерства образования и науки Российской Федерации, Федерального агентства по образованию, в рамках проекта: «Разработка теоретических основ экологически безопасного регулирования численности вредных организмов 5-эндотоксинами Bacillus thuringiensis» (код организации: 296, коды ГРНТИ: 62.09.39).

Литература

1. Харвуд, К.Р. Бациллы. Генетика и биотехнология /К.Р. Харвук.- М.: "Мир", 1992.- 530 с.

2. Новожилова, О.С. Автореф. на соиск. уч. степени канд. биол. наук. / О.С. Новожилова .- Уфа, 2007.- 122 с.

3. Бочкарева, А.В. Изменение активности лактатдегидроге-назы печени крыс при действии гепарина в условиях in vitro / Бочкарева А.В., Зимин Ю.В., Хомутов А.Е. // Биология, 2008.-№5.- 86-88 с.

4. Северина, Г.А. Функциональная активность ферментов и пути ее регуляции / С.Е. Северина, Г. А. Кочетова.- М.: Изд-во МГУ, 1981.- 180 с.

5. Феклина, М.С. Действие 5-эндотоксина на активность клеток периферической крови in vivo и in vitro / М. С. Феклина, Д. В. Каменек, Э. К. Юнусова, Л. К. Каменек.- Ульяновск, 2008.- 17 с. Деп. в ВИНИТИ 12.05.08 №407-В2008.

6. Феклина, М. С. Изменение активности клеток крови под действием 5-эндотоксина Bacillus thuringiensis / Л. К. Каменек, Э. К. Юнусова, Л.Ю.Савельева, В.В. Ногичева // Материалы II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии».- Казань: КГУ, 2008.- С. 139-140.

7. Каменек, Л.К. Д-эндотоксин Bacillus thuringiensis: строение, свойства и использование для защиты растений // Автореф. дисс. докт. биол. н. М., 1998.- 40 с.

8. Каменек, Л.К. Изучение механизма действия 5-эндотоксина Bacillus thuringiensis на насекомых / Л. К. Каменек// Автореф. дисс. канд. биол. н.- Л., 1985.- 19 с.

THE CHANGE IN ACTIVITY OF LACTATE DEHYDROGENASE, ALANINE AMINOTRANSFERASE AND ASPARTATE AMINOTRANSFERASE OF THE BLOOD SERUM IN MICE UNDER THE INFLUENCE OF DELTA-ENDOTOXIN BACILLUS THURINGIENSIS

M.S. FEKLINA, D.V. KAMENEK, E.K. YUNUSOVA, L.K. KAMENEK

Ulyanovsk State University

It was shown that 5-endotoxin Bacillus thuringiensis did not change the activity of lactate dehydrogenase, alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase of the blood serum in the mice tested.

Key words: lactate dehydrogenase, aspartate aminotransferase, blood serum, mice.

УДК: 616.5-002-053.4-08

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ ЛАКТОФИЛЬТРУМ И ГЕПОН НА СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ИММУННУЮ СИСТЕМУ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ У ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА.

А.С. САРОЯН, Л.В. СИЛИНА*

Проведена оценка клинической эффективности различных схем терапии у 96 детей дошкольного возраста страдающих атопическим

дерматитом, с учетом основных сопутствующих заболеваний. В II

группе детей, получавших лактофильтрум в дополнении к традици-

* Курский государственный медицинский университет, 305041, г,Курск, ул. К.Маркса,3.