НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОМПОЗИЦИЯ И КОНЪЮГАТ, СОДЕРЖАЩИЕ ЕЕ, А ТАКЖЕ СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. МиРНК, способная ингибировать экспрессию гена ВГВ, которая содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, причем указанная смысловая цепь и антисмысловая цепь обе содержат модифицированные фтором нуклеотиды и нуклеотиды с нефторной модификацией; при этом указанная смысловая цепь содержит сегмент нуклеотидной последовательности I; указанная антисмысловая цепь содержит сегмент нуклеотидной последовательности II; указанная нуклеотидная последовательность I и указанная нуклеотидная последовательность II по меньшей мере частично обратнокомплементарны, что позволяет образовывать двухцепочечную область; при этом указанная нуклеотидная последовательность I содержит нуклеотидную последовательность А, которая имеет ту же длину, что и нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 155, и отличается от нее не более чем 3 нуклеотидами; и указанная нуклеотидная последовательность II содержит нуклеотидную последовательность В, которая имеет ту же длину, что и нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 156, и отличается от нее не более чем 3 нуклеотидами:
5'-CCUUGAGGCAUACUUCAAZ-3' (SEQ ID NO: 155);
5'-Z'UUGAAGUAUGCCUCAAGG-3' (SEQ ID NO: 156);
в которых,
Z представляет собой A;
Z' представляет собой U;
A
указанная нуклеотидная последовательность А содержит нуклеотид Z в положении, соответствующем Z;
B
указанная нуклеотидная последовательность В содержит нуклеотид Z' в положении, соответствующем Z;
B
нуклеотид Z' представляет собой первый нуклеотид с 5'-конца антисмысловой цепи; модифицированные фтором нуклеотиды расположены внутри нуклеотидных последовательностей А и В;
в направлении от 5'-конца к 3'-концу, нуклеотиды в положениях 7, 8 и 9 указанной нуклеотидной последовательности 1 представляют собой модифицированные фтором нуклеотиды; и, в направлении от 5'-конца к 3'-концу, нуклеотиды в положениях 2, 6, 14 и 16 указанной нуклеотидной последовательности 2 представляют собой модифицированные фтором нуклеотиды.
2. МиРНК по п. 1, характеризующаяся тем, что указанная нуклеотидная последовательность А содержит не более 1 нуклеотида, отличного от нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 155; и/или указанная нуклеотидная последовательность В содержит не более 1 нуклеотида, отличного от нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 156;
B
B
предпочтительно, где указанное различие по нуклеотидам между указанной нуклеотидной последовательностью В и указанной нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 156, включает различие в положении Z', причем Z' выбран из А, С или G;
A
B
более предпочтительно, где Z представляет собой нуклеотид, комплементарный Z';
далее предпочтительно указанная нуклеотидная последовательность А является преимущественно обратнокомплементарной, по существу обратнокомплементарной или полностью обратнокомплементарной указанной нуклеотидной последовательности В; где «преимущественно обратнокомплементарный» относится не более чем к 3 неправильно спаренным основаниям в двух нуклеотидных последовательностях; «по существу обратнокомплементарный» относится не более чем к 1 неправильно спаренному основанию в двух нуклеотидных последовательностях; и «полностью обратнокомплементарный» относится к отсутствию неправильно спаренных оснований в двух нуклеотидных последовательностях.
3. МиРНК по п. 1 или 2, характеризующаяся тем, что указанная нуклеотидная последовательность А представляет собой нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; и указанная нуклеотидная последовательность В представляет собой нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2:
5'-CCUUGAGGCAUACUUCAAZa-3' (SEQ ID NO: 1);
B
5'-Z'UUGAAGUAUGCCUCAAGG-3' (SEQ ID NO: 2);
B
A
в которых Za выбран из A, U, G или С; и Z' представляет собой нуклеотид, комплементарный Z;
A
B
предпочтительно, где Z представляет собой А; и Z' представляет собой U.
4. МиРНК по любому из пп. 1-3, характеризующаяся тем, что указанная нуклеотидная последовательность I дополнительно содержит нуклеотидную последовательность III; и указанная нуклеотидная последовательность II дополнительно содержит нуклеотидную последовательность IV; указанная нуклеотидная последовательность III и указанная нуклеотидная последовательность IV каждая независимо имеет длину 1-4 нуклеотида; указанная нуклеотидная последовательность III соединена с 5'-концом нуклеотидной последовательности А; указанная нуклеотидная последовательность IV соединена с 3'-концом нуклеотидной последовательности В; и указанная нуклеотидная последовательность III имеет ту же длину, что и нуклеотидная последовательность IV и является по существу обратнокомплементарной или полностью обратнокомплементарной ей; «по существу обратнокомплементарный» относится к не более чем 1 неправильно спаренному основанию в двух нуклеотидных последовательностях; и «полностью обратнокомплементарный» относится к отсутствию неправильно спаренных оснований в двух нуклеотидных последовательностях;
предпочтительно, где указанная нуклеотидная последовательность III и указанная нуклеотидная последовательность IV обе имеют длину 1 нуклеотид, а основание нуклеотидной последовательности III представляет собой А;
указанная нуклеотидная последовательность III и указанная нуклеотидная последовательность IV обе имеют длину 2 нуклеотида;
в направлении от 5'-конца к 3'-концу, основания нуклеотидной последовательности III представляют собой G и А последовательно;
указанная нуклеотидная последовательность III и указанная нуклеотидная последовательность IV обе имеют длину 3 нуклеотида; в направлении от 5'-конца к 3'-концу, основания нуклеотидной последовательности III представляют собой С, G и А последовательно; или
указанная нуклеотидная последовательность III и указанная нуклеотидная последовательность IV обе имеют длину 4 нуклеотида;
в направлении от 5'-конца к 3'-концу, основания нуклеотидной последовательности III представляют собой С, С, G и А последовательно.
5. МиРНК по любому из пп. 1-4, характеризующаяся тем, что указанная нуклеотидная последовательность II дополнительно содержит нуклеотидную последовательность V, которая имеет длину 1-3 нуклеотида и соединена с 3'-концом антисмысловой цепи с образованием 3'-липкого конца указанной антисмысловой цепи;
предпочтительно, где указанная нуклеотидная последовательность V содержит 2 нуклеотида в длину;
предпочтительно, где указанная нуклеотидная последовательность V комплементарна мРНК-мишени или, в направлении от 5'-конца к 3'-концу, указанная нуклеотидная последовательность V представляет собой 2 последовательных тимидиновых дезоксирибонуклеотида или 2 последовательных уридиновых рибонуклеотида;
более предпочтительно, где указанная смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, и указанная антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4:
5'-CCUUGAGGCAUACUUCAAZa-3' (SEQ ID NO: 1);
B
5'- Z'UUGAAGUAUGCCUCAAGGUU-3' (SEQ ID NO: 3);
B
5'- Z' UUGAAGUAUGCCUCAAGGUC-3' (SEQ ID NO: 4);
B
A
B
A
в которых нуклеотид Z' представляет собой первый нуклеотид с 5'-конца указанной антисмысловой цепи; Z выбран из A, U, G или С; и Z' представляет собой нуклеотид, комплементарный Z;
при этом далее предпочтительно указанная миРНК представляет собой siHBa1 или siHBa2 Смысловая цепь: 5'-CCUUGAGGCAUACUUCAAA-3' (SEQ ID NO: 5),
Антисмысловая цепь: 5'-UUUGAAGUAUGCCUCAAGGUU-3' (SEQ ID NO: 6), siHBa2
Смысловая цепь: 5'-GACCUUGAGGCAUACUUCAAA-3' (SEQ ID NO: 7),
Антисмысловая цепь: 5'-UUUGAAGUAUGCCUCAAGGUCGG-3' (SEQ ID NO: 8).
6. МиРНК по любому из пп. 1-5, характеризующаяся тем, что, в направлении от 5'-конца к 3'-концу, нуклеотиды в положениях 7, 8 и 9 или 5, 7, 8 и 9 указанной нуклеотидной последовательности А в смысловой цепи представляет собой модифицированные фтором нуклеотиды, а нуклеотиды в остальных положениях в смысловой цепи представляют собой нуклеотиды с нефторной модификацией; и нуклеотиды в положениях 2, 6, 14 и 16 или 2, 6, 8, 9, 14 и 16 указанной нуклеотидной последовательности В в антисмысловой цепи представляют собой модифицированные фтором нуклеотиды, а нуклеотиды в остальных положениях в антисмысловой цепи представляют собой нуклеотиды с нефторной модификацией.
7. МиРНК по любому из пп. 1-6, характеризующаяся тем, что каждый нуклеотид с нефторной модификацией независимо представляет собой нуклеотид, образованный путем замещения 2'-гидроксила его рибозной группы группой, отличной от фтора, или аналог нуклеотида;
предпочтительно, где указанный нуклеотид, образованный путем замещения 2'-гидроксила рибозной группы группой, отличной от фтора, выбран из 2'-алкокси-модифицированных нуклеотидов, 2'-замещенных алкокси-модифицированных нуклеотидов, 2'-алкил-модифицированных нуклеотидов, 2'-замещенных алкил-модифицированных нуклеотидов, 2'-амино-модифицированных нуклеотидов, 2'-замещенных амино-модифицированных нуклеотидов или 2'-дезоксинуклеотидов; и аналог нуклеотида выбран из изонуклеотида, LNA, ENA, сЕТ, UNA или GNA;
более предпочтительно, где каждый нуклеотид с нефторной модификацией представляет собой метокси-модифицированный нуклеотид, который относится к нуклеотиду, образованному путем замещения 2'-гидроксила рибозной группы метоксигруппой.
8. МиРНК по любому из пп. 1-7, характеризующаяся тем, что по меньшей мере одна из фосфатных групп в фосфатно-рибозном остове по меньшей мере одной одиночной цепи в смысловой цепи и антисмысловой цепи представляет собой фосфатную группу с модифицированными группами;
предпочтительно, где указанные фосфатные группы с модифицированными группами представляют собой фосфотиоатные группы, образованные путем замещения по меньшей мере одного атома кислорода в сложной фосфодиэфирной связи в фосфатных группах атомом серы;
предпочтительно, где фосфатные группы с модификацией представляют собой фосфотиоатные группы, имеющие структуру, представленную Формулой (101):
более предпочтительно, при этом в указанной миРНК фосфотиоатная связь присутствует по меньшей мере в одном из следующих положений:
положение между первым и вторым нуклеотидами на 5'-конце смысловой цепи;
положение между вторым и третьим нуклеотидами на 5'-конце смысловой цепи;
положение между первым и вторым нуклеотидами на 3'-конце смысловой цепи;
положение между вторым и третьим нуклеотидами на 3'-конце смысловой цепи;
положение между первым и вторым нуклеотидами на 5'-конце антисмысловой цепи;
положение между вторым и третьим нуклеотидами на 5'-конце антисмысловой цепи;
положение между первым и вторым нуклеотидами на 3'-конце антисмысловой цепи; и
положение между вторым и третьим нуклеотидами на 3'-конце антисмысловой цепи.
9. МиРНК по любому из пп. 1-8, характеризующаяся тем, что указанный 5'-концевой нуклеотид в антисмысловой цепи представляет собой 5'-фосфатный нуклеотид или нуклеотид, модифицированный аналогом 5'-фосфата;
предпочтительно, где указанный 5'-фосфатный нуклеотид представляет собой нуклеотид, представленный Формулой (102); и нуклеотид, модифицированный аналогом 5'-фосфата, представляет собой нуклеотид, представленный любой из Формул (103)-(106):
в которых
R представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из Н, ОН, метокси или F; «Основание» представляет собой основание, выбранное из A, U, С, G или Т.
10. МиРНК по любому из пп. 1-9, где указанная миРНК представляет собой любую, выбранную из группы, состоящей из: siHBa1M1, siHBa1M2, siHBa2M1, siHBa2M2, siHBa1M1S, siHBa1M2S, siHBa2M1S, siHBa2M2S, siHBa1M1P1, siHBa1M2P1, siHBa2M1P1, siHBa2M2P1, siHBa1M1SP1, siHBa1M2SP1, siHBa2M1SP1 и siHBa2M2SP1.
11. Фармацевтическая композиция, характеризующаяся тем, что указанная композиция содержит миРНК по любому из пп. 1-10 и фармацевтически приемлемый носитель; предпочтительно, где массовое отношение миРНК к фармацевтически приемлемому носителю составляет 1:(1-500);
где далее предпочтительно массовое отношение миРНК к фармацевтически приемлемому носителю составляет 1:(1-50).
12. Конъюгат миРНК, который содержит миРНК по любому из пп. 1-10 и конъюгирующую группу, соединенную путем конъюгации с указанной миРНК.
13. Применение миРНК по любому из пп. 1-10, фармацевтической композиции по п. 11 и конъюгата по п. 12 в изготовлении лекарственного средства для лечения и/или предотвращения патологических состояний или заболеваний, вызванных инфекцией вирусом гепатита В (ВГВ);
предпочтительно, где указанное патологическое состояние или заболевание, вызванное инфекцией вирусом гепатита В (ВГВ), выбрано из хронических заболеваний печени, гепатита, фиброза печени и пролиферативных заболеваний печени.
14. Способ ингибирования экспрессии генов ВГВ, включающий приведение эффективного количества конъюгата миРНК по любому из пп. 1-10, фармацевтической композиции по п. 11 и конъюгата миРНК по п. 12 в контакт с пораженными гепатитом клетками, инфицированными ВГВ.