Иммуногистохимическая характеристика заживления механической травмы печени у плодов крыс на фоне применения биологически активных веществ

ных животных фибробласты появляются позднее - на 7-е сутки, и развитие соединительной ткани происходит также позднее - на 11-е сутки. Выполненное исследование показывает, что комплексное применение биологически активных препаратов «Трепел» и «Сувар» уменьшает повреждающее действие травмы на сохраняющуюся печеночную ткань, уменьшает реактивно-воспалительные изменения на границе с участком травмы, блокирует рекрутирование фибробластов к участку травмы и, тем самым, замедляет развитие соединительнотканного рубца на месте погибшей ткани печени.

Литература

1. Архипова М.Н. Становление и развитие функциональных систем у боровков в биогеохимических условиях Чувашского центра в условиях дисбаланса биогенных аминов: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Чебоксары, 2008. 20 с.

2. Григорьев С.Г., Шуканов А.А. Корреляционный анализ физиологических процессов у боровков, содержащихся в биогеохимических условиях Чувашского Засурья // Аграрная наука. 2009. № 1. С. 22-24.

3. Меркулова Г.А. Курс патогистологической техники. М.: Медицина, 1969. 423 с.

4. Мохаммед З. Изучение влияния цеолитсодержащего трепела на биоаминосодержащие структуры тимуса, а также на иммунобиохимические и гематологические параметры крови // Изучение и применение трепелов диамитов: сб. ст. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 2000. С. 44-60.

5. Солопаева И.М. Стимуляция регенерации патологически измененной печени и хориони-ческий гонадотропин. Н. Новгород: Изд-во нНгУ, 1991. 147 с.

6. Palmes D. Animal modes of liver regeneration // Palmes. Biomaterials. 2004. Vol. 25. P. 1601-1611.

РОМАНОВА ЛЮБОВЬ ПЕТРОВНА - кандидат биологических наук, доцент кафедры нормальной физиологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (samung@yandex.ru).

ROMANOVA LUBOV - candidate of biological sciences, assistant professor of Normal Physiology Chair, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.

УДК 591.236.2-091:599.323.4 БВК Е 623.362.423*694.6*725.3

Л.П. РОМАНОВА, И.И. МАЛЫШЕВ

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЗАЖИВЛЕНИЯ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЫ ПЕЧЕНИ У ПЛОДОВ КРЫС НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Ключевые слова: плоды крыс, печень, механическая травма, пролиферация гепа-тоцитов, иммуногистохимическое исследование.

Изучена пролиферация гепатоцитов плодов крыс после механической травмы печени по данным иммуногистохимического исследования. Установлено, что у экспериментальных животных индекс меченых ядер гепатоцитов был больше, чем у контрольных. Сравнительный анализ показал, что динамика изменений индекса окрашенных ядер гепатоцитов совпадает с динамикой количества митозов.

L. ROMANOVA, I. MALYCHEV IMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF MECHANICAL LIVER INJURY HEALING IN RAT FOETUSES ON THE BACKGROUND OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES USE

Key words: rat fetuses, liver, mechanical injury, proliferation of hepatocytes, immunohisto-chemical study.

The proliferation of hepatocytes of rat fetuses after mechanical injury of the liver was studied basing on the data of immunohistochemical research. It was established that the experimental animals had a greater nuclear labeling index of hepatocytes than the control animals. Comparative analysis showed that the dynamics of changes of stained nuclei index of hepatocytes coincides with the dynamics of the number of mitoses.

В ранее опубликованной работе было установлено, что у плодов крыс восстановление печени после механического повреждения на фоне применения некоторых биологических веществ происходит с высокой пролифератив-ной активностью сохранившихся гепатоцитов [4]. В настоящее время нет со-

мнений, что иммунные механизмы играют в организме важную роль и возникают раньше и клинических, и морфологических проявлений [5]. В этой связи представляется целесообразным осуществить иммуноморфологическое исследование печени в ходе ее восстановления после механической травмы в норме и при использовании биологически активных веществ.

Целью исследования явилось иммуноморфологические исследование пролиферативной активности печени плодов крыс в ходе ее регенерации после механической травмы в условиях введения в рацион животных биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар».

Материалы и методы исследования. Самкам крыс под глубоким эфирно-масочным наркозом на 17-19-й день беременности после вскрытия и выведения в рану брюшной полости матки с находившимися в ней плодами стальной иглой с ограничителем выполняли прокол вначале плодного пузыря, а затем и плода в правом подреберье в месте проекции печени. Всего оперативному вмешательству было подвергнуто 12 беременных самок, от которых было получено 48 плодов с повреждениями печени.

Сразу после операции в основной рацион самок добавляли биологически активные вещества «Трепел» (в дозе 1,25 мг/кг) и «Сувар» (в дозе 50 мг/кг). Контролем был 51 плод крысят аналогичного срока беременности.

Животных выводили из эксперимента эфиром в сроки от 1 до 20 суток после операции (для каждого срока наблюдения n = 6).

Для подтверждения травмы печени, а также для изучения восстановительных и регенераторных процессов применяли гистологические методики. Печень после извлечения взвешивали на аналитических весах, вырезали из нее кусочек размером 0,6x0,6 см, который фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина с последующей заливкой в парафин по стандартной методике. Полученные гистотопографические серийные срезы толщиной 4,6-5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином по ван Гизону и железным гематоксилином по Гейденгайну [3].

Пролиферативные процессы в печени оценивали, подсчитывая митозы гепатоцитов на 7000 ядер при увеличении 90x10.

Для иммуногистохимического исследования были использованы два коммерческих моноклональных антитела фирмы Santa Cruze: 1) маркер пролифера-тивной активности Ki-67; 2) маркер апоптоза Вс1-2. Иммуногистохимическое исследование проводилось согласно стандартному протоколу. Срезы толщиной 3 мкм наносили на высокоадгезивные стекла, обработанные L-polisine и высушивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Окраска проводилась ручным и аппаратным способами с использованием иммуногистохимических контейнеров AUT0STAINER-360 (THERMO, Великобритания) и Leica BOND-MAX (Германия) с использованием систем визуализации En-vision (DACO. Дания) и NovoLinc poli-mer (NovoCastra, Великобритания). Контролем чувствительности и специфичности реакции служили неиммунизированные кроличьи и мышиные сыворотки, а также срезы контрольных тканей печени. Результаты реакций оценивали, подсчитывая количество окрашенных ядер на 200 ядер гепатоцитов в шести полях зрения, вычисляли отношение окрашенных гепатоцитов к общему количеству гепатоцитов и выражали полученные результаты в процентах.

Статистическую достоверность определяли с помощью f-критерия Стью-дента [1].

Результаты исследования и их обсуждение. Выполненное исследование устанавливает, что после нанесения травмы печени у плодов вокруг зоны повреждения возникает реактивно-воспалительная реакция в виде появления клеточного инфильтрата, состоящего преимущественно из лимфоидных клеток с примесью небольшого количества нейтрофильных лейкоцитов. У эксперимен-

тальных животных количество клеток в инфильтрате было небольшим в отличие от контрольных плодов, у которых имела место резко выраженная инфильтрация вокруг зоны повреждения. По мере заживления у экспериментальных крысят происходит уменьшение площади травмированного участка за счет выраженной пролиферации гепатоцитов; этому способствовало и то, что фибробласты среди клеток инфильтрата появлялись лишь на 7-9-е сутки, в результате чего развитие соединительной ткани на месте очага повреждения происходило на 11-е сутки.

У контрольных животных заметного уменьшения площади травмированного участка не отмечалось, что объяснялось двумя причинами: интенсивность пролиферации гепатоцитов была значительно меньше, чем у экспериментальных крысят, фибробласты появлялись среди клеток инфильтрата на 5-7-е сутки, и замещение участка повреждения соединительной тканью наступало на 9-е сутки после операции.

Таким образом, выполненное исследование показывает, что комплексное применение биологически активных препаратов «Трепел» и «Сувар» уменьшает реактивно-воспалительные изменения на границе с участком травмы, замедляет рекрутирование фибробластов к участку травмы и тем самым замедляет развитие соединительнотканного рубца на месте погибшей ткани печени. В табл. 1 представлены результаты подсчета митозов гепатоцитов в зависимости от времени после операции.

Данные подсчета окрашенных в результате иммуногистохимического исследования ядер маркером пролиферации гепатоцитов (К1-67) в опыте и контроле приводятся ниже (табл. 2).

Таблица 1 Количество митозов в печени плодов крыс в опыте и контроле в зависимости от времени после операции

Таблица 2

Результаты иммуногистохимического исследования печени плодов крыс в опыте и контроле в зависимости от сроков после операции

Время после операции, сут. Количество митозов, %о

опыт контроль

1 2,8±0,7 1,6±0,8

3 5,4±1,8* 3,6±0,9

5 9,0±2,6** 5,2±3,2

9 6,2±2,5** 1,6±0,7

15 3,4±0,9 -

20 0,8±0,3 -

Время после операции, сут. Количество окрашенных ядер, %

опыт Контроль

1 2,6±1,6 2,0±0,9

3 4,2±1,8 3,1±1,8

5 9,0±3,5** 5,3±2,6

9 6,3±2,6** 1,7±0,8

15 2,8±0,8 -

20 1,4±0,2 -

Примечание. * р < 0,01; ** р < 0,001. Примечание. ** р < 0,001.

Результаты иммуногистохимического исследования печени плодов крыс в опыте и контроле подтверждают, что наибольшее количество окрашенных ядер приходится на 3-, 5- и 9-е сутки после операции (табл. 2). На 15- и 20-е сутки в контроле окрашенные ядра не выявляются, что полностью соответствует литературным данным [2].

Вопрос апоптоза сводится к тому, что и у опытных, и у контрольных крысят фиксируются лишь единичные клетки, меченные с помощью антител к апоптозу. При этом принадлежность таких меченых ядер к ядрам гепатоцитов сомнительна. В литературе также описываются единичные клетки, меченные с помощью антител к апаптозу, однако и у этих авторов вызывает сомнение принадлежность таких клеток к гепатоцитам [2, 5].

Таким образом, регенерация печени у плодов крысят после механической травмы осуществляется в значительной степени за счет пролиферации гепатоцитов, о чем свидетельствуют данные как подсчета количества митозов, так и иммуногистохимические исследования.

Литература

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфология. М.: Медицина, 1990. 384 с.

2. Ельчанинов А.В. Морфологическая характеристика репаративной регенерации феталь-ной печени крыс: дис. ... канд. мед. наук. М., 2011. 126 с.

3. Меркулова Г.А. Курс патогистологической техники. М.: Медицина, 1969. 423 с.

4. Романова Л.П., Малышев И.И. Влияние биологически активных веществ на пролифера-тивную активность гепатоцитов плодов и новорожденных крысят после механической травмы // Казанский медицинский журнал. 2011. № 6. С. 904-906.

5. Hughes P., Bouiller P., Strasser A. Role of Bim and other Bsl-2 family members in Autoimmun and degenerative diseases // Carr. Dir. Autoimmun. 2006. Vol. 9. P. 74-94.

РОМАНОВА ЛЮБОВЬ ПЕТРОВНА. См. с. 332.

МАЛЫШЕВ ИГОРЬ ИВАНОВИЧ - доктор медицинских наук, профессор кафедры патофизиологии, патологической анатомии с клинической патологической анатомией и судебной медициной, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (Malichev_ med@mail.ru).

MALISHEV IGOR - doctor of medical sciences, professor of Patophysiology, Pathological Anatomy Chair with a Clinical Pathological Anatomy and Forensic Medicine, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.

УДК 616.311:616.858 ББК 56.612

Г.Р. РУВИНСКАЯ, Л.Р. МУХАМЕДЖАНОВА, Л.Т. БАЯЗИТОВА

АНАЛИЗ КОЛИЧЕСТВЕННОГО И КАЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА МИКРОБИОЦЕНОЗА РАЗЛИЧНЫХ БИОТОПОВ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ У ПАЦИЕНТОВ С БОЛЕЗНЬЮ ПАРКИНСОНА

Ключевые слова: болезнь Паркинсона, микробиоценоз полости рта, леводопотерапия.

Проведена оценка микробного пейзажа полости рта у 47 пациентов с болезнью Пар-кинсона (БП). Микрофлора у первичных пациентов с БП и у пациентов БП, получающих леводопу, отличается качественными и количественными характеристиками. Уровень микробной контаминации при леводопотерапии достоверно ниже, чем у первичных пациентов с БП; показано снижение плотности высеваемости кокковой микрофлоры с большинства изучаемых биотопов. На дорсальной поверхности языка наблюдается обратная тенденция в картине обсемененности грибов рода Candida: частота и плотность высеваемости их при леводопотерапии достоверно выше по сравнению с таковыми у первичных пациентов с БП. Обсуждены возможные механизмы влияния ле-водопотерапии на уровень микробной контаминации.

G. RUVINSKAYA, L. MUHAMEDZHANOVA, L. BAJAZITOVA ANALYSIS OF THE QUANTITATIVE AND QUALITATIVE COMPOSITION OF MICROBIOCENOSIS OF DIFFERENT BIOTOPES OF THE ORAL CAVITY IN PATIENTS WITH PARKINSON'S DISEASE

Key words: Parkinson's disease, microbiocenosis of oral cavity, levodopa therapy.

A comparative evaluation of the microbiocenosis of different biotopes of the oral cavity in 47 patients with Parkinson's disease (PD) has been conducted. It is shown that the microflora in untreated patients with PD and PD patients receiving levodopa, is different by qualitative and quantitative characteristics. Level of oral cavity microbial contamination was significantly lower with levodopa therapy than in untreated PD patients, also has been shown density decrease growth of coccal microflora on the surface of most of the studied biotopes. On the tongue dorsal surface the opposite tendency is observed in contamination of fungi Candida: the frequency and density of their growth during levodopa therapy is significantly higher compared to patients with primary PD. The present study also discusses the possible mechanisms of levodopa therapy on the level of microbial contamination of the oral cavity.

Болезнь Паркинсона (БП) - наследственно-дегенеративное хроническое прогрессирующее заболевание, в патогенезе которой ключевая роль принадлежит дегенерации нигростриарных дофаминергических нейронов и/или уменьшению содержания дофамина в стриопаллидарной системе [10, 11]. Средний возраст пациентов, имеющих клинические признаки манифестации заболева-