СПОСОБЫ ОБРАЗОВАНИЯ ПОЛИПЛЕКСОВ

1. Способ создания одного или более полиплексов, включающий:
(а) обеспечение:
i. полимера в первом потоке жидкости;
ii. компонента нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости;
(b) приведение в контакт полимера в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости с образованием полиплекса, имеющего размер и заряд, которые подходят для терапевтического введения; а также
(c) выделение полиплекса для получения стабилизированного полиплекса.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выделение включает транспортировку полиплекса по каналу для жидкости в течение времени пребывания, достаточного для стабилизации полиплекса.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно включающий оценку и сбор одного или более полиплексов.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что первый поток жидкости и первые потоки жидкости являются растворами.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно включающий прохождение первого потока жидкости и второго потока жидкости через устройство регулирования потока при скорости, которая обеспечивает полиплекс, имеющий размер и заряд, которые подходят для трансдермального введения.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что устройство регулирования потока выбирают из группы, состоящей из поршневого насоса прямого вытеснения, шприцевого насоса, нагнетательного насоса и гравитационного насоса.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что на стадии приведения в контакт используется насадка, микрожидкостное смесительное устройство, сенсорная трубка, жидкостный мостик, вертикальный смеситель, вращающаяся двойная трубка или распылитель.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что стадия приведения в контакт происходит в воздушном зазоре или в жидкости-носителе внутри канала для жидкости.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что стабилизированный полиплекс заряжен слабо положительно.
10. Способ по любому из пп. 2-9, отличающийся тем, что канал для жидкости заряжен слабо отрицательно.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что канал для жидкости содержит водную фазу, окруженную жидкостью-носителем.
3
3
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что плотность жидкости-носителя имеет значение в диапазоне от около 1300 до около 2000 кг/м, а плотность водной фазы имеет значение в диапазоне от около 900 до 1200 кг/м.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что водная фаза содержит натрий-ацетатный буфер.
14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что жидкость-носитель представляет собой масло.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что масло выбирают из группы, включающей: (a) Fluorinert FC-40 (фторуглеродное масло), (b) силиконовое масло, (c) минеральное масло, (d) перфторированное аминное масло, (е) фенилметилполисилоксан и (f) масло на основе фенилметилполисилоксана и добавки.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что добавка имеет число гидрофильно-липофильного баланса в диапазоне от 2 до 8.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что добавка представляет собой полисорбат.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что добавка полисорбата представляет собой SPAN 80, SPAN 65 или Tween 20.
19. Способ по п. 15, отличающийся тем, что концентрация добавки в водной фазе составляет от около 0,001% до около 10% (мас./мас.%).
20. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что выделение включает разделение полиплексов в канале для жидкости.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что пространство между разделенными полиплексами регулируется скоростью жидкости в канале.
22. Способ по любому из пп. 2-21, отличающийся тем, что время пребывания составляет от около 1 секунды до около 20 минут.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что время пребывания составляет около 10 минут.
24. Способ по любому из пп. 3-23, отличающийся тем, что оценка включает:
измерение показателя преломления полиплексов в канале для жидкости; и
необязательно удаление полиплексов с показателем преломления, не соответствующим спецификации.
25. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно включающий фильтрование, промывку, замораживание и/или лиофилизацию стабилизированных полиплексов.
26. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер заряжен положительно, а компонент нуклеиновой кислоты заряжен отрицательно.
27. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (мас./мас.).
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (мас./мас.).
29. Способ по п. 27, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении около 30:1 (мас./мас.).
30. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер представляет собой HPAE.
31. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (мас./мас.).
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (мас./мас.).
33. Способ по п. 31, отличающийся тем, что полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении около 30:1 (мас./мас.).
34. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что размер частиц стабилизированного полиплекса составляет менее, чем около 2 мкм.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что размер частиц стабилизированного полиплекса составляет от около 60 нм до около 250 нм.
36. Способ по п. 34, отличающийся тем, что размер частиц стабилизированного полиплекса составляет от около 175 нм до около 250 нм.
37. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 0 мВ до около 100 мВ.
38. Способ по п. 37, отличающийся тем, что дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 30 мВ до около 34 мВ.
39. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что стабилизированный полиплекс имеет сферическую форму.
W
40. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет M (молекулярную массу) около 10 кДа.
41. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что компонент нуклеиновой кислоты представляет собой плазмиду, наноплазмиду, нуклеиновую кислоту, миникольцо или систему редактирования генов.
42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что компонент нуклеиновой кислоты содержит ген, ассоциированный с генетическим заболеванием или нарушением.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что генетическое заболевание или нарушение вызвано мутацией в одном или более генах, которая приводит к низкой, отсутствующей или дисфункциональной экспрессии белка.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что ген выбирают из группы, состоящей из COL7A1, LAMB3, ADA, SERPINA1, CFTR, HTT, NF1, PHA, HBS, FERMT1, KRT14, DSP, SPINK5 и FLG.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что ген представляет собой COL7A1, а генетическое заболевание или нарушение представляет собой форму буллезного эпидермолиза.
46. Способ по п. 45, отличающийся тем, что последовательность гена оптимизирована для максимальной экспрессии белка после доставки полиплекса в клетку.
47. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, меньше, чем около 0,5.
48. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, от около 0,2 до около 0,5.
49. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет PDI (индекс полидисперсности) от около 1,01 до около 8,0.
50. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет PDI около 2,5.
W
51. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет M по меньшей мере 3 кДа.
W
52. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет M между около 5 кДа и 50 кДа.
W
53. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что полимер имеет M около 10 кДа.