Воздействие различных комбинаций цитокиновых препаратов на рост и метастазирование меланомы B-16 в эксперименте на мышах линии C57BL/6

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

Результаты. Одной из важных характеристик опухоли является пролиферативная активность. Определяли про-лиферативную активность в группе первичных и рецидивных СМТ. В группе первичных сарком показатель Ю67составили 30,7±9,2%, а в группе рецидивов 35,5±8,72%, t> 2. (Р>0,05). Пролиферативная активность в группе рецидивных сарком была выше по сравнению с первичными, однако показатель %2 оказался недостоверным. Экспрессия Ki67, в ядрах опухолевых клеток, колебалась от 5% до 45% в каждом конкретном случае. Тоже относилось и к рецидивным опухолям мягких тканей. В развитии рецидивов и метастазов имеют значение факторы ангиогенеза. CD34 и VEGF (фактор роста эндотелия сосудов). Показатели были следующими: в группе первичных сарком мягких тканей CD34 составил 12,2±0,94 а в рецидивных 9,18±1,6 (p<0,05). VEGF в первичных СМТ составил 10,6±1,88, а в рецидивных 8,12±1,6 (p>0,05). Вероятно, некоторое снижение факторов ангиогенеза в рецидивных опухолях можно объяснить проводимой адъювантной химиотерапией, способствующей подавлению роста опухоли. Учитывая, что особое значение в механизмах опухолевого роста имеют факторы апоптоза, и в частности в СМТ, были изучены маркеры Bax и Bcl2. При этом, в группе первичных опухолей показатели были следующими: bax 7,67± 2,3; bcl24,42±1,46. Экспрессия bax отсутствовала в трех наблюдениях, bcl2 — в двух. Соотношение bax/bcl2 составило 1,68±0,54. В литературе имеются противоречивые сведения, касающиеся соотношения bax/bcl2 в развитии метастазов. В некоторых работах отмечена его позитивная роль, например при меланоме увеального тракта, раковых опухолях яичников. Однако до конца эти механизмы не раскрыты. В группе рецидивных опухолей: bax1,68±0,54; bcl24,28±0,67). В данной группе экспрессия bax отсутствовала в 4х наблюдениях, bcl2-7. Соотношение bax/bcl2 составило 0,60±0,15. При проведении статистической обработки отмечена тенденция к изменению показателей. В группе первичных СМТ Bax по сравнению с рецидивными, был статистически выше (7,67±2,3 и 1,68±0,54) соответственно (p<0,05). Данные статистически достоверны. Показатели bcl2 как в группе первичных, так и в рецидивных были примерно одинаковы (4,42±1,46 и 4,28±0,67 соответственно). Заключение. Таким образом, проведенное ИГХ исследование некоторых показателей пролиферативной активности, апоп-тоза и проапоптоза, факторов ангиогенеза выявило ряд особенностей в первичных и редидивных СМТ.

Воздействие различных комбинаций цитокиновых препаратов на рост и метастазирование меланомы B-16 в эксперименте на мышах линии C57Bl/6

Е.Ю. Златник', Е.И. Золотарева', Е.М. Непомнящая1, О.Г. Шульгина', И.А. Новикова', А. О. Гранкина' Место работы: 'ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Россия e-mail: iftrnioi@yandex.ru

В настоящее время известно, что метастазирование является одной из основных причин смертности онкологических больных. Иммунодепрессия, вызываемая противоопухолевыми средствами, способствует продолженному опухолевому росту из химиорезистентных клеток. В последнее время активно ведется изучение противоопухолевых агентов естественного происхождения. Вместе с тем разработаны

и применяются отечественные рекомбинантные препараты, характеризующиеся двойным действием на опухолевые клетки: непосредственным, ведущим в реализации которого является угнетение пролиферативной активности опухолевых клеток и индукция их апоптоза, и опосредованным через активацию различных звеньев иммунной системы, прежде всего, цитотоксических (CTL- и NK-клеточного), благодаря чему они нашли применение в клинике, в т. ч., при лечении меланомы (Абрамов М. Е., 2006, 2009; Proper D. J., 2003), рака яичника (Windbichler G. H., 2000) и других опухолей (Артамонова Е. В., 2014; Vladimirova L. Y., 2013). Цель. Разработка и экспериментальное обоснование новых методов иммунотерапии меланомы с применением различных комбинаций цитокиновых препаратов. Материалы и методы. Эксперимент проведен на 30 мышах-самках линии С57Bl/6 с перевиваемой меланомой В16, которую трансплантировали подкожно в правую надлопаточную область в количествах 5х106 живых опухолевых клеток, разведенных в 0,5 мл физиологического раствора. Вводились различные комбинации иммуномодуляторов на основе рекомбинантных цитокинов: IL-2 (Ронколейкин), IFN-y (Инга-рон), TNF-a с тимозином (Рефнот) по схемам: 1 группа — 4 дня «Ронколейкин», затем 4 дня «Доксорубицин»;2-я «Ронколейкин» и «Ингарон» через день; 3-я «Ронколейкин» и «Рефнот» через день; 4-я чередование «Ронколейкин», «Ингарон» и «Рефнот»; 5-я «Доксорубицин»; 6-я контроль (физиологический раствор).

Воздействие начинали на 10 день после перевивки (по достижении опухолью замеряемого размера) и продолжали в течение 8 дней. Изучали динамику опухолевого роста, наличие макро- и микрометастазов меланомы в легкие и селезенку, морфологию меланомы, селезенки и тимуса, состав субпопуляций лимфоцитов в крови и в селезенке методом проточной цитофлюориметрии.

Результаты. В процессе сравнительного анализа эффективности различных сочетаний цитокиновых препаратов было выявлено торможение роста опухоли под действием комбинации Ронколейкин+Ингарон, которая как в процессе введения, так и после его окончания, тормозит рост опухоли на 30-38%. Эффект торможения наблюдался и при комбинациях Ронколейкин+Доксорубицин, Ронколейкин+Рефнот, а также Доксорубицин, но только до тех пор, пока продолжалось воздействие препарата, а по окончании воздействия опухолевый рост возобновлялся. При применении комбинации Ронколейкин+Ингарон наблюдался выраженный (100%) антиметастатический эффект, т. е., полное отсутствие метастазов у животных, тогда как в контрольной группе они выявлены у 60%. Количество метастатических очагов было минимальным в группе, получавшей Ронколейкин+Инга-рон+Рефнот, а также в группе, получавшей Ронколейкин+-Доксорубицин. Процент животных с метастазами в этих двух группах одинаков (25%), однако количество метастатических очагов в группе Ронколейкин+Доксорубицин было значительно больше и сравнимо с их количеством в контроле, тогда как в группе с введением Доксорубицина количество метастатических очагов было меньше, чем в контроле. Морфологическое изучение опухоли показало обширные очаги некроза (до 2/3 площади опухоли), лейкоцитарную инфильтрацию, кровоизлияния, тромбы в просвете сосудов и дистрофические изменения опухолевых клеток, отмеченные при действии всех исследованных комбинаций иммуномоду-ляторов. У животных контрольной группы меланома имела типичное строение. Выявленные метастазы были как мелкими, так и крупными, иногда множественными с обширным

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

поражением легких. У некоторых животных отмечено наличие метастазирования в селезенку.

В группе мышей, получавших Ронколейкин+Ингарон, наблюдалось наиболее активное состояние тимуса. Морфологическое исследование тимуса выявило развитое корковое вещество с плотным расположением тимоцитов, что свидетельствует об активном состоянии Т-клеточного звена иммунитета. По результатам субпопуляционного анализа спленоцитов содержание Т-клеток у мышей данной группы было выше, чем в контроле (60,33±1,42% против 46,1±2,06%), за счет Th, уровень которых был максимальным среди всех групп (47,9±1,5%), тогда как в других группах он колебался от 15 до 35%. В селезенке этих же мышей отмечалась развитая белая пульпа с крупными фолликулами. Заключение. Проведенные исследования свидетельствуют об антиметастатическом и иммуномодулирующем эффекте паратуморального применения комбинации Ронколей-кин+Ингарон в эксперименте, а также о целесообразности ее использования в лечении онкологических больных. Дальнейший поиск может выявить и другие эффективные сочетания иммунопрепаратов, что позволит оптимизировать цитоки-нотерапию и уточнить ее роль и место в комплексном лечении злокачественных опухолей, в том числе, в комбинации с химиотерапией.

Оценка противоопухолевой активности фармацевтической субстанции эноксифол на модели экспериментальной опухоли легкого

Е. Ф. Комарова', Е. П. Коробейникова', Л. В. Ванжа, М. И. Бра-гина', А. А. Спасов2, А. С. Морковник3, О.Н. Жуковская3, В. А. Анисимова3

Место работы: 'ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону; 2ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград; 3НИИ ФОХ ФГАОУ ВО «ЮФУ», г. Ростов-на-Дону

e-mail: katitako@gmail.com

Цель. Исследовать динамику роста перевиваемой опухоли легкого Льюис (LLC) мышей при внутрижелудочном применении фармацевтической субстанции эноксифол (дигидробромид-2- (3,4-дигидроксифенил) — 9-диэтилами-но-этилимидазо- [1,2-a] бензимидазол). Материалы и методы. Изучение противоопухолевой активности вещества проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ. Опухолевый штамм эпидермоидной карциномы легкого Льюис (LLC) прививали 80 мышам-самцам C57/Bl6 весом 18—20 грамм подкожно. Введение эноксифола внутри-желудочно (0,5 мл в сутки) начинали через 48 часов после перевивки опухоли ежедневно до достижения суммарных доз для каждой из опытных групп (500 мг/кг — 1 группа, 2 200 мг/кг — 2 группа и 5 000 мг/кг — 3 группа). Мышам контрольной группы (n=20) внутрижелудочно вводили физиологический раствор в тех же объемах, что и эноксифол. Результаты. При анализе результатов эксперимента было показано, что средняя продолжительность жизни животных опытных групп была различной. Так, средний срок жизни животных 1 группы составил — 18,2±2,9 дней, 2-й группы — 28,1±2,3 дней, в 3 группе — 21,8±2,2 дня. Продолжительность жизни контрольной группы составила 19,3±3,1 день. Сроки выхода опухоли в 1 группе были аналогичны контролю

и составили 6,4±0,5 против 6,8±0,4, а во 2-й и 3-й группе превышали контрольные показатели (8,8±0,7 и 7,2±0,6 дней соответственно).

При исследовании динамики роста первичной опухоли уже на 11-е сутки после перевивки опухоли (на 9 сутки после начала воздействия) объемы первичного очага различались в группах. При применении эноксифола в большой дозе (3 группа) объем опухоли был аналогичен показателям контрольной группы. При этом, в 1 группе размеры опухоли в 1,5 раза были больше, а во 2-й группе — в 3,8 раза меньше по сравнению с контролем. Изучение опухолевых объемов на 21 сутки от момента перевивки показали сходную с предыдущим сроком исследования динамику. Также в 3-й группе размеры опухоли были подобны контролю, в 1-й группе — в 1,4 раза больше, а во 2-й группе — в 3 раза меньше по сравнению с контрольной группой.

Заключение. Выявлено увеличение средней продолжительности жизни животных, увеличение срока выхода опухолей после перевивки, а также наименьшие размеры опухоли и ее регресс у животных с LLC при внутрижелудочном применении эноксифола в суммарной дозе 2 200 мг/кг.

Изучение противоопухолевых свойств и механизма действия препарата анфен

Е. М. Миль', В.Н. Ерохин', В. И. Бинюков', В. А. Семенов', А. А. Албантова'

Место работы: 'Институт биохимической физики РАН e-mail: еlenamil2004@mail.ru

Ранее нами было показано, что синтетические антиоксиданты из класса пространственно затрудненных фенолов, такие как фенозан и анфен синтезированные в ИБХФ РАН, обладают противоопухолевой активностью. Одним из методов контроля за развитием опухоли может служить изменение содержания антиапоптозных белков (Bcl-2 и р53). Известно, что высокий уровень белка Bcl-2 препятствует апоптозу и отвечает за контроль и выживаемость клеток. Уменьшение уровня белка может свидетельствовать о снижении репарационных и усилении процессов апоптоза. Показано, что при ряде онкологических процессов происходит изменение уровня этого белка, что может иметь прогностическое значение, например, в случае операбельного немелкоклеточ-ного рака легких. Поэтому эти методы могут иметь определенное значение при оценке противоопухолевой активности различных физико-химических агентов. Цель. Изучение действия антиоксиданта анфен (1-(Кар-бокси)-1-^-метиламид)-2-(3',5'-ди-трет-бутил-4'-гидрок-сифенил)-пропанат натрия) на развитие перевиваемой опухоли саркома 37 у мышей и на трансформированные клетки мышей с опухолью Льюис. Для изучения противоопухолевых свойств и механизма действия анфена животным или в суспензию опухолевых клеток вводили водные растворы препарата в различных концентрациях. Материалы и методы. При изучении противоопухолевых свойств препарата, анфен в концентрации 10 мг/кг и 100 мг/кг в 0,2 мл физиологического раствора вводили животным вну-трибрюшинно ежедневно 11 раз после трансплантации клеток саркомы 37. Противоопухолевая активность оценивалась по проценту торможения опухолевого процесса на 12-е сутки его развития (определяли суммарный объем опухолевых клеток в асцитной жидкости).

В работе были использованы мыши — гибриды C57Bl х DBA (возраст 3—4 месяца, масса 25 г). Клетки выделяли из изолированной опухоли на 14 день развития карциномы Льюис,

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org