Фагоцитоз грибов рода Candida, Aspergillus и Mucor (invitro)

Прудковский Ю.В. Сетариоз крупного рогатого скота (эпизоотология, диагностика, лечение, профилактика): Дис. ... канд. вет. наук. Киев, 2006. 215 с.

Сорокина Н.М. Этиологические и патогенетические факторы в возникновении и развитии сетариоза крупного рогатого скота: Дис. ... д-ра вет. наук. Киев, 2004. 235 с.

Скрябин К.И., Шихобалова Н.П. Филярии животных и человека. М., 1948. 607 с.

SETARIOS OF CATTLE

O.N. Nechaeva, E.A. Greblova

Saratov State Aqrarian University

The article presents the data of investigation of cattle blood for presence of setaria infants and their pathological influence on morphology and biochemistry of blood.

ФАГОЦИТОЗ ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ASPERGILLUS И MUCOR

В.А. Агольцов

Саратовский государственный аграрный университет

Исследования особенностей фагоцитоза грибов Candida, Aspergillus и Mucor имеет не только чисто научный, но и практический интерес. Изучение динамики фагоцитоза в первую очередь позволяет раскрыть механизмы иммунобиологической защиты организма животных от инвазивного действия паразитических видов грибов.

Известно, что в фагоцитозе микроорганизмов участвуют две группы фагоцитов: первая - это нейтрофильные полинуклеары, вторая - моноциты крови. Процесс фагоцитирования проходит в пять этапов. Наиболее сложный этап для фагоцитов - третий, включающий в себя поглощение микробов и других объектов. При фагоцитировании крупных микроорганизмов, например бацилл, происходит их постепенное захватывание. Мицелий плесневых и псевдомицелий дрожжевидных грибов имеют на порядок больший размер, даже по сравнению с самыми крупными бациллами. Вследствие этого фагоцитоз грибов протекает несколько иначе.

Материалы и методы исследований

Исследования проводили по общепринятой методике с использованием культур возбудителей висцеральных микозов (C. albicans, A. fumigatus и M. racemosus). В гепаринизированную кровь взрослых кроликов и телят 5-7-дневного возраста вносили 1-2 капли суспензии грибов в концентрации 1х109спор/см3, без учета мицелия (псевдомицелия) на 1.0 мл крови.

Пробирки помещали в термостат с температурой 370С. Мазки крови окрашивали по Романовскому-Гимзе и исследовали под микроскопом через разные промежутки времени (2-5-10-20-30 и 60 мин). Отдельные

фрагменты фагоцитоза аспергилл изучали в нативном препарате (висячая капля), лейкоцитарной смесью крови и добавлением жидкости Тюрка.

Результаты исследований

Проведенные эксперименты по фагоцитозу с кровью кроликов (in vitro) показали, что сам процесс фагоцитоза наступает уже с первых минут внесения культур грибов в пробирки с кровью интактных животных. Отдельные нейтрофилы содержали в цитоплазме от 1до 2 спор. В некоторых зонах зрения отмечали скопления тромбоцитов, среди которых обнаруживали споры грибов. На поверхности грибных нитей мицелия также выявляли тромбоциты. Через 10-20 мин инкубирования мицелий аспергилл, мукора и псевдомицелий кандиды сплошь был облеплен тромбоцитами и нейтрофилами. Количество спор в фагоцитировавших нейтрофилах достигало 8-10 клеток. Отмечено участие в фагоцитозе моноцитов и эозинофилов. К этому времени начинают обнаруживаться единичные лимфоциты с прилипшими к ним спорами. Количество нейтрофилов, прикрепившихся к мицелию, значительно возрастает.

Через 30 мин тромбоциты облепляют гифы, а нейтрофилы плотно фиксируются к мицелию. Некоторые конидии абсорбируются нейтрофилами, тромбоцитами и несколько реже эозинофилами. Отмечали и разрушенные клетки белой крови.

К окончанию срока наблюдений (60 мин) уже не оставалось свободных от абсорбированных элементов грибов клеток крови. Однако количество разрушенных нейтрофилов резко увеличивалось. Некоторые лимфоциты содержали в центре и на поверхности ядра споры и частицы мицелия. Ядра отдельных лимфоцитов как бы заглатывали споры, так как в их вдавлении находилась клетка гриба. Участки мицелия, облепленные лимфоцитами, были втянуты к центру ядра лейкоцитов.

Исследования по фагоцитозу с кровью телят (in vitro) показали, что в первые пять минут количество фагоцитированных конидий было незначительным. Лишь отдельные нейтрофилы содержали их в цитоплазме. Основная масса конидий и мицелия равномерно распределялась по мазку. В поле зрения часто попадали скопления тромбоцитов. Тромбоциты также можно было видеть и на поверхности грибных нитей.

Через 15-20 мин микроскопическая картина резко менялась. Гифы грибов сплошь были покрыты тромбоцитами (рис. 1), выявлялись и нейтрофилы, прикрепившиеся к мицелию в разных его участках. Тромбоциты просматривались в виде больших кучек, в центре которых различались множественные конидии. Количество конидий в нейтрофилах значительно увеличивалось (до 8-12), но чаще можно было видеть, как 1015 нейтрофилов, моноцитов, а иногда и эозинофилов как бы окружают скопления конидий, часть из которых уже находилась в цитоплазме, а часть среди разрушенных клеток белой крови. К этому времени обнаруживали и

лимфоциты, находившиеся в плотном контакте с конидиями, а количество нейтрофилов, прикрепившихся к гифам гриба возросло.

Рис. 1. Тромбоциты и нейтрофил на гифе гриба С. albicans. Окраска по Романовскому-Гимзе.

Через 30 мин в мазках крови уже не отмечали свободных конидий, все они были среди скоплений разрушенных нейтрофилов. Изменилась и микрокартина поведения лимфоцитов. Если основная их масса в первые минуты фагоцитоза находилась как бы в стороне от происходящей борьбы нейтрофилов с грибами, то через 30 мин цитоплазма некоторых из них становилась разрыхленной, можно было видеть 6-8 конидий, прилипших к лимфоцитам (рис. 2, а). Некоторые из них содержали на своей поверхности конидии и частицы гиф одновременно. Отмечены и отдельные лимфоциты, ядра которых пытались «заглатывать» конидии грибов. В этом случае с одной стороны ядра обнаруживали вдавление, равное размеру конидии, а внутри ямки и находилась сама конидия. На некоторых участках гиф можно было видеть лимфоциты, которые как бы втягивали в себя нить гриба (рис. 2б).

»

Ф

Wk

а

Рис. 2. Гифы гриба: а - лимфоцит и конидии гриба А. fumigatus (Фото: увеличение 1200); б - лимфоцит фагоцитирует гифу гриба. (Фото: увеличение 4800). Окраска по

Романовскому-Гимзе

Ядра нейтрофилов нередко принимали вытянутую форму и в виде коротких овальных палочек лежали на поверхности вдоль мицелия, облепляя его с обеих сторон (рис. 3).

, Р

+Г

Ф

\

Рис. 3. Нейтрофилы и лимфоцит на гифе гриба. Окраска по Романовскому-Гимзе.

Через 1 час микроскопическая картина в мазках не изменилась.

При микроскопировании лейкоцитарной смеси и грибов с внесением жидкости Тюрка отчетливо было видно, что ядра нейтрофилов, облеплявших мицелий, отклонялись от центра цитоплазмы к периферии в направлении грибной нити и как бы обхватывали её.

Таким образом, общим для всех изучаемых грибов в этом процессе является присутствие нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов, которые фагоцитировали только мелкие фрагменты грибов (конидии, бластоспоры). Они же пытаются фагоцитировать и гифы грибов, но из-за больших размеров им не удается это осуществить, и они отторгаются. Затем в процесс фагоцитоза подключаются лимфоидные клетки, которые лизируют гифы грибов с помощью ферментов (протеолитических и др.). Гриб при этом разрушается на разные по размерам фрагменты, из которых мелкие фагоцитируются нейтрофильными лейкоцитами и макрофагами.

FUNGI CANDIDA, ASPERGILLUS AND MUCOR'S PHAGOCYTOSIS

Заключение

V.A. Agoltsov

Saratov State Agrarian University

The peculiarities of the microscopic fungi Candida, Aspergillus and Mucor's phagocytosis were studied. Phagocytosis as a process was examined in development. The small fragments of micelium and spores phagocyte neutrophis and macrofages. Lymphoid cells lyse fungi fragments of micelium with the help of ferments.

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ И ЕЁ КОРРЕКЦИЯ ПРИ АССОЦИАТИВНОЙ ИНВАЗИИ ЛОШАДЕЙ

В.К. Брель, С.В. Ларионов

Саратовский государственный аграрный университет

В конце 90-х годов прошлого столетия в результате паритета цен и других негативных явлений коневодству был нанесен значительный урон -уменьшилось поголовье лошадей, резко сократилось производство конины и кумыса. Значительный урон коневодству наносится болезнями инвазионной этиологии. Среди них особое место занимают гельминтозы желудочно-кишечного тракта лошадей, на долю зараженности которыми приходится до 80 - 100% поголовья. На сегодня слабо изученными остаются вопросы влияния гельминтозов (а они протекают более чем в 75-80% случаях ассоциативно) на состояние иммунитета.

Целью нашей работы было установление возможности корреляции иммунного статуса организма при ассоциативной стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозной инвазии лошадей и разработка методов лечения.

Исследования проводились на лошадях в хозяйствах Саратовской области и Республики Башкортостан. Было сформировано пять групп из беспородных лошадей 3-6-летнего возраста по принципу аналогов: 1 группа - здоровые, 2-5 группы - больные стронгилоидозно-оксиурозно-параскариозным заболеванием. Лошадей 3-5 групп подвергали дегельминтизации дектомаксом. При этом животным 4 группы вводили в рацион препарат микровитам (аминокислотно-витаминно-минеральный комплекс), 5 группы - микровитам + бактонеотим (пробиотик и иммуностимулятор). Дектомакс применяли в дозе 0.2 мг/кг из расчета 1 мл 1%-нго раствора на 50 кг массы животного однократно, подкожно.

Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали гепаринизированную кровь. Объектом фагоцитоза служили суточные культуры Staphylococcus aureus, выращенные на агаре Хоттингера.

Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови лошадей 1-й контрольной группы за период наших исследований находилась на уровень от 60.9 до 62.6% (рисунок).