Аллельный полиморфизм генов про- и противовоспалительных цитокинов при инфаркте миокарда в европеоидной популяции мужчи

ФАКТОРЫ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАЗВИТИЮ АТЕРОСКЛЕРОЗА

УДК 616.12

В.И. Коненков, И.Г. Ракова, В.Н. Максимов, М.И. Воевода АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ

ПРО- И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ИНФАРКТЕ МИОКАРДА В ЕВРОПЕОИДНОЙ ПОПУЛЯЦИИ МУЖЧИН

ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск ГУ НИИ терапии СО РАМН, Новосибирск

Изучены частоты генотипов и аллелей генов про- и противовоспалительных цитокинов у больных с перенесенным инфарктом миокарда с целью определения группы риска развития инфаркта миокарда. Полиморфизм генов цитокинов исследовали методом рестриктного анализа продуктов амплификации специфических участков генома у 118 пациентов (мужчины) в возрасте от 30 до 64 лет. Контролем служила группа из 100 здоровых мужчин в возрасте 34-64 лет. Показано, что частоты генотипов генов цитокинов и аллелей сопоставимы с частотами генотипов и аллелей генов цитокинов в западноевропейских популяциях. Обнаружена ассоциация генотипа G/G в позиции T-330G промоторной области гена ^-2 с инфарктом миокарда. Ассоциаций с генотипами и аллелями генов ^-10 промоторной области в позиции С-592 А и ^-12 в позиции А-1188 С промоторный регион при инфаркте миокарда не было обнаружено. Выявлена ассоциация генотипа С/Т в позиции С-590Т гена ^-4 с инфарктом миокарда. Также была проанализирована частота встречаемости аллелей промоторной зоны генов рецептора к интерлейкину-4 и выявлено, что гомозиготный вариант Я/Я этого гена в позиции 574 в несколько раз ниже среди больных инфарктом миокарда в сравнении с репрезентативной контрольной группой. Таким образом, изучение полиморфизмов генов цитоки-нов и их рецепторов может служить одним из критериев для выделения группы риска развития инфаркта миокарда.

Ключевые слова: инфаркт миокарда, противовоспалительные цитокины

Среди основных стратегий борьбы с такой ме- 195 мм рт. ст.) — в 3 раза, гиперхолестеринемия

дицинской и социальной проблемой, как инфаркт (8,5 ммоль/л, 330 мг/дцл и более) — в 4 раза, а со-

миокарда, справедливо рассматриваются как раз- четание трех перечисленных факторов риска — в

работка новых высокоэффективных антиатеро- 16 раз [13].

генных лечебных технологий, так и разработка После выявления этих факторов риска была

новых эффективных способов профилактики проведена значительная работа по исключению

этого заболевания. Здесь сразу возникает вопрос их воздействия на человека. Она дала ощутимые

о максимально раннем начале профилактичес- результаты, что проявилось в ощутимом сниже-

ких мероприятий и, следовательно, об индивиду- нии заболеваемости и смертности от клинических

альных критериях повышенного риска развития проявлений атеросклероза в виде коронарных ка-

приводящих к инфаркту миокарда атеросклеро- тастроф и мозговых инсультов.

тических изменений коронарных сосудов. Однако у этой стратегии вскоре обнаружи-

К настоящему времени установлены так назы- лись и определенные недостатки, связанные, с

ваемые «традиционные факторы» риска развития одной стороны, с ограниченным уровнем влия-

атеросклероза и проведена оценка их прогности- ния традиционных факторов риска на снижении

ческой значимости. К таким значимым факторам заболеваемости, а во-вторых, с отсутствием инди-

относятся курение, гипертензия, диабет, гиперли- видуального характера степени воздействия этих

педемия, мужской пол, пожилой возраст, избы- факторов на конкретного индивида.

точный вес [17]. Это стимулировало начало поиска конститу-

При этом курение увеличивает риск возникно- циональных, генетически присущих индивиду

вения коронарных событий в 1,6 раза, гипертен- факторов риска развития атеросклероза не на по-

зия (систолическое артериальное давление выше пуляционном, а на индивидуальном уровне [14].

Наряду с этим проведена оценка ассоциированности развития атеросклероза с большим числом аллелей так называемых «кандидатных» генов, белковые продукты которых, согласно господствующей теории сочетанных нарушений липидного обмена и тромбообразования в развитии атеросклероза, участвуют в молекулярных событиях, приводящих к формированию атеросклеротической бляшки и к нарушению ее целостности. Среди них идентифицированы: гены ангиотен-зиногена, ангиотензин-1-конвертирующего энзима, рецептора ангиотензина 2, фибриногена, аполипопротинов В, С и Е, матричных металло-протеиназ и аллели гена одного из группы регуляторных белков межклеточных взаимодействий, цитокинов, в частности интерлейкина-6 [9, 21].

Однако анализ степени информативности установленных ассоциаций выявил их невысокую прогностическую значимость, что не дает реальной возможности использовать их в качестве индивидуальных прогностических критериев предрасположенности человека к развитию атеросклероза или инфаркта миокарда [6].

В противовес этому такие цитокины с условно противовоспалительной активностью, как ^-4 и ^-10, тормозят экспрессию тканевого фактора, вызывая гипокоагуляцию и усиление секреции активатора плазминогена [22]. Кроме того, ^-4 и ^-10 подавляют действие ^-1р, ^-6 и TNFa на эндотелиальные клетки и макрофаги, являющиеся основными триггерами гиперкоагуляции.

Такие интерлейкины, как INF-y, GM-CSF и ^-4, индуцируют способность макрофагов продуцировать активатор плазминогена, являющийся протеиназой, которая конвертирует плазмино-ген в плазмин. Кроме того, выявлена способность ^-1р и TNFa значительно увеличивать стимулирующий эффект тромбина и угнетать продукцию фактора Виллебранда, вызванную его агонистами [7].

Активная роль цитокинов в процессах атеро-генеза и его клинических проявлений подтверждается и увеличением более чем в 2,5 раза концентрации таких цитокинов, как М-СБ^ ^-6, ^-1р. в плазме у больных с нестабильной стенокардией и острым инфарктом миокарда. Одним из факторов риска развития инфаркта миокарда является повышение уровня фибриногена и С-реактивного протеина, тесно коррелирующих с уровнем TNFa, ^-1р и ^-6 [20].

Гены интерлейкинов обладают чрезвычайно высокой степенью полиморфизма, причем количество участков этого полиморфизма в одном гене может достигать нескольких десятков и располагаться они могут как в кодирующих экзонах, так и в интронах и, что особенно важно, в промоторных

регуляторных зонах структуры гена. Эти участки ДНК содержат зоны связывания регуляторных факторов, которые определяют не структуру считывания, а интенсивность наработки клеткой конечного белкового продукта, т.е. самих молекул интерлейкина. [5] Другими словами, наличие аллельного полиморфизма в промоторных участках генов интерлейкинов обеспечивает разнообразие индивидов по степени продукции цитокинов при антигенной стимуляции, т.е. при формировании воспалительных клеточных реакций, в том числе и при остром инфаркте миокарда. [16]

В развитие этой концепции нами проведен анализ частоты встречаемости отдельных аллелей ряда генов интерлейкинов, расположенных именно в промоторных участках генов.

Материалы и методы

Для исследования использовалась цельная кровь 118 мужчин, перенесших инфаркт миокарда. В исследование были включены мужчины, перенесшие острый инфаркт миокарда по данным популяционного регистра инфаркта миокарда (программы ВОЗ «Регистр острого инфаркта миокарда» и «МОНИКА»). Всего было обследовано 118 мужчин, из них 93 с «определенным» инфарктом миокарда и 25 с «возможным». Диагностические категории инфаркта миокарда определялись по протоколам указанных выше программ. Заболевание было диагностировано в возрасте от 30 до 64 лет (средний возраст 51,9 г., ст. откл. — 7,7 г.).

При эпидемиологическом исследовании по программе ВОЗ МОНИКА обследована репрезентативная выборка (100 мужчин) из неорганизованной популяции мужчин в возрасте 34-64 лет (средний возраст 52,58, ст. отклонение — 5,7 лет). Проведены опрос по анкете Роуза и антропометрия.

Для определения частот генотипов и аллелей анализируемых полиморфизмов в исследуемой популяции генотипирование было проведено на выборке жителей из открытой популяции г. Новосибирска, обследованной в рамках программы ВОЗ МОНИКА, возрастной и половой состав которой соответствовал группе обследованных пациентов.

Для генотипирования использовали образцы ДНК, выделенные из цельной венозной крови методом высаливания с использованием протеина-зы К [3].

Генотипирование аллельных вариантов осуществляли методом рестриктного анализа продуктов амплификации специфических участков генома. Амплификацию осуществляли в пробирках типа «Эппендорф» путем полимеразной цепной реакции, используя структуру праймеров и

параметры температурных циклов, описанных в литературе [11, 12, 24].

Реакционная среда общим объемом 20 мкл состояла из буфера для проведения ПЦР («Сибэнзим», Новосибирск), включающего в себя следующие реагенты: 60 мМ Трис-HCl (pH 8,5); 25 мМ KCl; 1,5 мМ MgCl2; 10 мМ 0,1% мер-каптоэтанола; Triton X-100; а также 30 пкмолей каждого олигонуклеотида; 125 мМ каждого dNTP («Сибэнзим», Новосибирск); 50-200 нг геномной ДНК и 1-2 ед. Taq полимеразы («Сибэнзим», Новосибирск).

Программа амплификации включала стандартно предварительную денатурацию при 94 °С в течение 5 минут с последующими 30-35 циклами отжига при специфической для каждой пары праймеров температуре (1 мин), элонгации цепи при 72 °С (1 мин) и денатурации при 94 °С (1 мин). Программу завершала финальная элонгация при 72°С в течение 5 минут.

Для разделения фрагментов ДНК использовали 2%-ный агарозный гель. Продукты амплификации подвергали рестрикции соответствующими эндонуклеазами (Таблица 1). Продукты рестрикции разделяли с помощью электрофореза в 2%-ном агарозном геле, содержащем 0,5 мг/мл этидиум бромида при напряжении 120-130 B в течение 30-45 минут и визуализировали в УФ-све-

те. В качестве маркера размера ДНК использовали плазмиду pUC19, расщепленную рестриктазой MspI («Сибэнзим», Новосибирск).

Расчет показателей осуществлялся с использованием пакета статистических программ Statistica 6.0.

Результаты исследования

Свой анализ мы начали с интерлейкина-2, одного из ключевых цитокинов, обеспечивающих при необходимости значительное нарастание количества лимфоидных клеток и активацию их функциональной активности, связанную, в частности, и с каскадными процессами наработки цитокинов. В двух опубликованных работах по изучению распределения генотипов указанного полиморфизма John и Reynard также указывают на преобладание среди английских европеоидов варианта T/T (53,2% и 55,3%) по сравнению с T/ G (39,2 и 40,8% соответственно) [2, 24].

Как показали проведенные исследования частоты выявляемости всех генотипов по аллелям в точке полиморфизма, T-330G достоверно отклоняется от нормы среди пациентов, перенесших инфаркт миокарда на фоне развитого атеросклеротического процесса. Особенно высокой специфичностью и, соответственно, высоким прогностическим коэффициентом обладает наличие гомозиготного варианта G/G (7,0%), частота ко-

Таблица 1

Частота встречаемости генотипов генов интерлейкинов среди больных инфарктом миокарда в %

IL-2 T-330G Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

T/T 63,0 69,5 1,34 69,49 37,0 0,14 0,4 0,0687

T/G 29,0 28,8 -1,01 29,00 71,19 0,01 0,0 0,1190

G/G 7,0 1,69 -4,36 7,00 98,31 2,05 -6,2 0,0426

IL-4 C-590T Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

T/T 16,0 7,63 -2,31 16,00 92,37 1,07 -3,2 0,0269

T/C 83,00 88,98 1,65 88,98 17,00 0,10 0,3 0,0697

C/C 1,0 3,39 3,47 3,39 99,0 1,76 5,3 0,1958

IL-10 C-592A Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

A/A 3,0 9,32 2,1 9,32 95,33 1,0 3,0 0,0635

A/C 32,67 32,2 -1,02 32,67 67,8 0,02 -0,1 0,1041

C/C 62,67 58,47 -1,19 62,67 41,53 0,1 -0,3 0,0785

IL-12 А-1188С Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

A/A 52,0 56,78 1,21 56,78 48,00 0,13 0,4 0,0847

A/C 43,00 38,13 -1,22 43,00 61,86 0,17 -0,5 0,0844

C/C 5,0 5,08 1,02 5,08 95,00 0,02 0,1 0,2421

торого среди пациентов снижена в несколько раз (1,69%). Это свидетельствует об определенном защитном, протективном значении наличия такого генотипа в геноме человека и может рассматриваться в качестве одного из факторов устойчивости к развитию инфаркта миокарда.

Огромную роль во взаимодействии клеточных и гуморальных факторов иммунных и воспалительных реакций играет интерлейкин-4 [18]. Именно его продукция лимфоцитами ^2 типа обеспечивает активацию антигенраспознающих свойств клеток иммунной системы за счет усиления экспрессии HLA-DR антигенов, а также интенсивную продукцию иммуноглобулинов различных классов, реализующих функции антител. Подавляя функцию макрофагов и секрецию ими ИЛ-1, ФНО-а и ИЛ-6, ИЛ-4 оказывает противовоспалительное действие. В то же время он повышает цитокинетическую активность макрофагов, способствует миграции в очаг воспаления нейтрофилов, усиливает выработку колониестимулирующих факторов.

Согласно полученным результатам, представленным в таблице 1, в анализируемой популяции для полиморфизма С-590Т гена ^-4 выявлено преобладание гетерозиготного С/Т варианта в контрольной выборке. Доля гетерозиготного С/Т варианта среди здоровых лиц достигает почти 60%, что соответствует характеру распределения аллелей этого гена для иных европеоидных популяций, где также доминирует гетерозиготный вариант данного полиморфизма — 48,9%, тогда как распространение гомозиготного варианта С/С в несколько раз снижено и составляет 21,1%, что даже ниже, чем содержание варианта Т/Т (30%) [12].

Проведенный нами анализ частоты распределения аллелей этого гена среди здоровых лиц и больных с инфарктом миокарда показал, что частота встречаемости гомозиготных вариантов обоих аллелей значительно снижена среди больных при повышении частоты гетерозиготного варианта (Т/Т=7,63%).

Нами был проанализирован аллельный полиморфизм гена интерлейкин-10, подавляющего функции макрофагов и ТЫ лимфоцитов. ИЛ-10, который продуцируется активированными лимфоцитами, макрофагами и тучными клетками, является одним из основных ингибиторов синтеза провоспалительных цитокинов, а также подавляет активность макрофагов. ИЛ-10 подавляет стимуляцию эндотелия модифицированными (окисленными) липопротеинами и высвобождение металлопротеиназ из макрофагов, а также стимулирует синтез тканевого ингибитора металло-протеиназы-1 моноцитами [15]. Результаты этого исследования не выявили достоверных различий между сопоставляемыми группами. Аналогичные результаты были получены и при анализе распределения генотипов интерлейкина-12, являющегося костимулятором пролиферации Т-клеток и активатором активности натуральных киллеров и лимфокинактивированных клеток [4].

Помимо аллельного полиморфизма генов самих интерлейкинов, выявлен еще и факт наличия аналогичного строения генов рецепторов к интерлейкинам. Эти гены также обладают широким полиморфизмом в различных регионах, включая промоторные участки генов рецепторов.

В связи с вышеприведенным анализом распределения аллелей гена интерлейкина-4 представлялось закономерным проанализировать частоты встречаемости аллелей гена промоторной зоны генов рецептора к интерлейкину-4 [19].

Эти исследования показали, что распространенность гомозиготного варианта R/R этого гена в позиции 574 также в несколько раз ниже среди больных инфарктом миокарда(2,54%) в сравнении с репрезентативной группой здоровых лиц (67%) (Таблица 2).

Аналогичные данные получены нами и при исследовании другого полиморфизма этого гена в позиции 50 промоторного региона. Здесь также оказалась снижена частота встречаемости гомозиготного варианта Val/Val среди пациентов, пе-

Таблица 2

Частота встречаемости генотипов генов рецептора к интерлейкину-4 в позициях Л 4R Q-576R и ^ 4RILE-50VAL среди больнъх инфарктом миокарда в %

Генотип Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % ЯЯ Ч С И ДК Р

й/й 67,00 73,73 1,38 73,73 33,00 0,14 0,4 0,0658

О/я 19,0 23,73 1,33 23,73 81,0 0,32 1,0 0,0926

Я/Я 14,00 2,54 -6,24 14,00 97,46 2,46 - 7,4 0,0014

^Е/^Е 33,00 41,53 1,44 41,53 67,0 0,33 1,0 0,0486

ILE/VAL 38,00 47,46 1,47 47,46 62,00 0,32 1,0 0,0410

VAL/VAL 29,00 11,02 - 3,3 29,0 88,98 1,04 -4,2 0,0005

ренесших инфаркт миокарда (47,46%) при сопоставлении с репрезентативной группой здоровых лиц (38%) (Таблица 2).

Далее нами проанализирован характер распределения в обеих обследованных группах гена интерлейкина-5 [1]. Этот интерлейкин играет активную роль в вовлечении в воспалительный процесс эозинофилов, придающих этим клеточным процессам острый, гиперэргический характер, приводящий к значительной активации тканевых взаимодействий [8].

Эти исследования показали высоко достоверное увеличение частоты выявления гомозиготных генотипов Т/Т (14,41%) среди больных, перенесших инфаркт миокарда. Частота его выявления среди пациентов возрастает по сравнению с контрольной группой (4,0) более чем в 3 раза. Наряду с этим практически в 2 раза снижена частота другого гомозиготного варианта С/С (34,74%) (Таблица 3).

Комплексные исследования интерлейкина-5 были продолжены путем анализа распределения аллельных вариантов генов рецептора к этому цитокину [10]. Нами выявлено значительное увеличение частоты встречаемости гомозиготного варианта ^^) по этому полиморфизму среди больных, перенесших инфаркт миокарда (50,85%) при соответствующем снижении частоты встречаемости гетерозиготного А^ варианта (39,83%) (Таблица 3).

Таким образом, нами установлено значительное изменение соотношения аллельных вариантов промоторных участков генов интерлейкинов у больных атеросклерозом, перенесших инфаркт миокарда. Среди них выявлены изменения частоты встречаемости тех аллелей, которые тесно ассоциированы с изменениями интенсивности продукции соответствующих цитокинов. Эти данные вскрывают новые механизмы реализа-

ции предрасположенности человека к развитию атеросклероза и позволяют сделать предположение о причинах избирательности развития атеросклероза среди лиц, проживающих в одинаковых экологических условиях, ведущих сходный нездоровый образ жизни и при условии равноценного воздействия общеизвестных факторов риска.

Эти данные подтверждают перспективность дальнейшего поиска индивидуальных генетических факторов риска развития атерогенных поражений сосудистого русла и связанных с ними тяжелых клинических проявлений. Дальнейший скрининг большого числа вариантных участков кандидатных генов позволит вывить все большее число достоверных ассоциативных связей между аллельными вариантами полиморфных участков ДНК и предрасположенностью к развитию сосудистых катастроф.

Нам представляется, что на данном этапе основное внимание должно быть сосредоточено именно на системном скрининге большого числа полиморфных участков максимального числа генов на значительных выборках пациентов для набора максимального числа достоверных ассоциаций, пусть и со слабой прогностической значимостью. На дальнейших же этапах исследования возможен переход от геномных технологий к протеомным с детальным анализом роли белковых продуктов, кодируемых выявленными, достоверно ассоциированными с развитием атеросклероза генами, с перспективой создания новых способов воздействия на эти механизмы и новых методов лечения заболевания.

Уже разработанный математический аппарат позволяет путем проведения непрерывных последовательных процедур выявлять суммарные высокоинформативные прогностические коэффициенты с заданным и достаточно высокоин-

Таблица 3

Частота встречаемости генотипов генов рецептора к интерлейкину-5 в позиции ^ 5 Т-576С и гена рецептора к интерлейкину-5 в позиции ^ 5ЯА А-50G среди больных инфарктом миокарда в %

т-5 С-703Т Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

Т/Т 4,0 14,41 4,04 14,41 96,0 1,85 5,6 0,0059

Т/С 37,00 50,85 1,76 50,85 63,00 0,46 1,4 0,0134

С/С 59,00 34,74 -2,70 59,00 65,25 0,76 -2,3 0,0001

^-5ЯА А-50G Контрольная группа % Пациенты Инфаркт миокарда % RR Ч С И ДК Р

А/А 9,00 9,32 1,04 9,32 91,0 0,05 0,2 0,1851

А^ 64,00 39,83 -2,68 64,00 60,17 0,68 -2,1 0,0001

G/G 27,0 50,85 2,8 50,85 73,0 0,91 2,7 0,0001

формативным уровнем 95, 99 или 99,9% вероятности реализации прогноза.

Нами разработан алгоритм расчета предрасположенности к развитию атеросклероза, рассчитанный на основании проведенного исследования. Его применение основано на суммировании величин прогностических коэффициентов, рассчитанных для информативности выявления генотипов проанализированных полиморфизмов. ^-5 Т/Т DK=5,6 + ^-5ЯА G/G DK=2.7 + ^-4Я ^Е/^Е DK=1,0 + 1Ь-2 Т/Т DK=0,4 +IL-4 Т/С DK=0,3 + ^-4Я О/Я DK=0,7. В случае выявления у пациента всех перечисленных вариантов величина суммарного прогностического коэффициента достигнет величины DK=10,7. Уровень вероятности реализации такого прогноза достигает 95%.

Однако на данном этапе работы такой прогноз возможен только для лиц, обладающих именно данным набором аллельных вариантов цитокино-вых генов, и для увеличения охвата таким достоверным прогнозом максимально большего числа людей необходим скрининг все большего числа полиморфных участков различных генов.

Еще с большей вероятностью возможен прогноз состояния резистентности к развитию атеросклероза и связанных с ним сосудистых проявлений. Однако проведение таких прогностических процедур также подчиняется вышеприведенным ограничениям.

Такого рода исследования проводятся в два основных этапа, один из которых проводится на т.н. «обучающих выборках», при этом, собственно, и выявляются достоверные отклонения в частоте встречаемости аллельных вариантов генов среди больших групп пациентов с уже сформировавшейся патологией и в сопоставимых репрезентативных контрольных группах. На втором этапе проводится повторное исследование на «инспектирующих выборках» с целью проверки реальной прогностической значимости выявленных генетических критериев предрасположенности к развитию заболевания во время длительных проспективных наблюдений.

Таким образом, можно заключить, что нами выявлены новые генетические факторы, которые во многом предопределяют предрасположенность индивида к развитию атеросклероза. Связь этих факторов с регуляцией интенсивности воспалительных процессов позволяет не только использовать эти данные в качестве индивидуальных прогностических критериев, но и надеяться на разработку новых лечебных подходов в терапии атеросклероза на основе цитокиновых и антици-токиновых лекарственных средств.

ALLELIC POLYMORPHISM OF GENES PRO-AND ANTI-INFLAMMATORY CYTOKINES AT MYOCARDIAL INFARCTION IN POPULATIONS OF MEN

V.I. Konenkov, I.G. Rakova, V.N. Maximov , M.I. Voevoda

Frequencies of genotypes and alleles of genes pro-and anti-inflammatory cytokines at patients with the myocardial infarction are investigated with the purpose of definition risks of development a myocardial infarction. A polymorphism of genes cytokines investigated by method Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLPs) at specific region the genome at 118 patients (man) in the age from 30 till 64 years. The control group was 100 men in the age of from 34-64 years served. It is shown, that frequencies of genotypes of genes cytokines and alleles are comparable to frequencies of genotypes and alleles of genes cytokines in the West-European populations. The association of genotype G/G in position T-330G in promotor region of gene IL-2 with a myocardial infarction is found. Associations with genotypes and alleles of genes IL-10 in promotor region in position C-592 A and IL-12 in a position and-1188 in promotor region at a myocardial infarction it was not revealed. The association of genotype C/T in position C-590T of gene IL-4 with a myocardial infarction is revealed. Frequency of receptor’s genes IL-4 in promotor region has been analyzed and is revealed, that homozygous variant R/R of this gene in a position 574 lower among patients with a myocardial infarction in comparison with representative control group. Thus, studying of polymorphisms of genes cytokines and their receptors can serve one of criteria for abjection the risk group of development a myocardial infarction.

Литература

1. A long-range restriction map of the interleukin-4 and interleukin-5 linkage group on chromosome 5 / S. C. Chandrasekharappa; M. S. Rebelsky, T. A. Firak et al. // Genomics. — 1990. — № 6. — P. 94-99.

2. Allele frequencies of polymorphisms of the tumour necrosis factor-a, interleukin-10, interfer-on-g and interleukin-2 genes in a North European Caucasoid group from the UK / M.P. Reynard, D. Turner, C.V. Navarrete // Eur. J. Immunogenetics

— 2000. — Vol. 27. — P. 241-249.

3. Chromosomal region of the cystic-fibrosis gene in yeast artificial chromosomes — a model for human genome mapping / E.D. Greene, M.V. Olson // Science. — 1990. — Vol. 250. — P. 94.

4. Coexpression of two distinct genes is required to generate secreted bioactive cytotoxic lympho-

cyte maturation factor / U. Gubler, A.O. Chua, D. S. Schoenhaut et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. — 1991.

— Vol. 88. — P. 4143-4147.

5. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases / J. Bidwell, L. Keen, G. Gallageher et al. // Genes Immun. — 1999. — Vol. 1. — P. 3-19.

6. Cytokines and thrombosis / C. Dosquet, D. Weill, JL Wautier // J. Cardiovasc. Pharmacol. — 1995. — Vol. 25 (Suppl 2). — P. S13-S19.

7. Differential regulation by cytokines of constitutive and stimulated secretion of von Willebrand factor from endothelial cells / E.M. Paleolog, D.C. Crossman, J.H. McVey, J.D. Pearson // Blood. — 1990. — Vol. 75 (3). — P. 688-695.

8. Genes that regulate eosinophilic inflammation / D.H. Broide, H. Hoffman, P. Sriramarao // Am. J. Hum. Genet — 1999. — Vol. 65. — P. 302-307.

9. Genetics of inflammation and risk of coronary artery disease: the central role of interleukin-6 / A. Woods, DJ. Brull, S.E. Humphries, et al. // Eur. Heart J. — 2000. — Vol. 21. — P. 1574-1583.

10. Identification and characterization of a functional promoter region in the human eosinophil IL-5 receptor alpha subunit gene / Z. Sun, D.A. Yergeau, T. Tuypens et al. // J. Biol. Chem. — 1995. — Vol. 270. — P. 1462-1471.

11. IL-10 promoter polymorphism in Southern Chinese patients with SLE / C.C. MokJ.S. Lanchbury, D.W. Chan et al. // Arthritis Rheumatism. — 1998.

— Vol. 41 (6). — P. 1090-1095.

12. IL-1beta, IL-1 receptor antagonist, IL-4, and IL-10 gene polymorphisms / A. Cantagrel, F. Navaux, P. Loubet-Lessonlie, et al. // Arthr. Rheum. — 1999.

— Vol. 42 (6). — P. 1093-1100.

13. Inflammation, pravastatin, and the risk of coronary events after myocardial infarction in patients with average cholesterol levels / P.M. Ridker, N. Rifai, M.A. Pfeffer et al. // Circulation. — 1998. -Vol. 98. — P. 839.

14. Inflammatory markers in men with angio-graphically documented coronary heart disease /

N. Rifai, R. Joubran, H. Yu et al.// Clin. Chem. — 1999. — Vol. 45 (11). — P. 1967.

15. Interleukin-10 blocks atherosclerotic events in vitro and in vivo. / L. J. Pinderski-Oslund, C.C. Hedrick, T. Olvera et al. //Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. — 1999. — Vol. 19. — P. 2847-2853.

16. Monocyte-related cytokines in acute myocardial infarction / H. Tashiro, H. Simokawa, K. Yamamoto et al. //Am. Heart J. — 1995. — Vol. 130.

— P. 446-452.

17. Myocardial infarction in men aged 40 years or less: a prospective clinical-angio-graphic study / J.A. Fournier, A. Sanchez, J. Quero et al. // Clinical Cardiology. — 1996. — Vol. 19. — P. 631-636.

18. Plasma levels of interleukin 2, 6, 10 and phenotypic characterisation of circulating T lymphocytes in ischemic heart disease / A. Mazzone, S. De Arvi, M. Vezzoli et al. // Atherosclerosis. — 1999.

— Vol. 145 (20). — P. 369.

19. Population-based studies reveal differences in the allelic frequencies of two functionally significant human interleukin-4 receptor polymorphisms in several ethnic groups / M. Caggana, K. Walker, A.A. Reilly et al. // Genet. Med. — 1999. — Vol. 1. — P. 267-271.

20. Relation between cytokines and routine laboratory data in children with septic shock and purpura / J.A. Hazelzet, E. van der Voort, J. Lindemans et al. // Intensive Care Med. — 1994. — 20 (5). — P. 371-374.

21. Relationship between interleukin -6 and mortality in patients with unstable coronary artery disease: effect of an early invasive or nonivasive strategy / E. Lindmark, E. Diderholm, L. Wallentin et al. // JAMA. — 2001. — Vol. 286. — P. 2107.

22. Serum levels of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 are decreased in patients with unstable / B.M. Smith, S. Irving, J. Sheldon et al. // Circulation. — 2001. — Vol. 104. — P. 746.

23. Two novel biallelic polymorphisms in the IL-2 gene / S. John, D. Turner, R. Donn et al. // Eur. J. Immunigenetics. - 1998. — Vol. 25 (6). — P. 419-420.