Сравнительная характеристика заживления хирургических ран слизистой оболочки полости рта и кожи у домашних свиней. Светооптическое и электронно-микроскопическое исследование

Сравнительная характеристика заживления хирургических ран слизистой оболочки полости рта и кожи у домашних свиней. Светооптическое и электронно-микроскопическое исследование

Ч.Р. Рагимов1, Э.К. Гасымов2, Т.Р. Кулиев1, Ф.Г. Рзаев3

1 Кафедра хирургии полости рта и челюстно-лицевой области Азербайджанского медицинского университета; Азербайджанская Республика, 1022, Баку, ул. Бакиханова, 23; 2кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии Азербайджанского медицинского университета; Азербайджанская Республика, 1022, Баку, ул. Миргасымова, 1; 3отдел электронной микроскопии Азербайджанского медицинского университета; Азербайджанская Республика, 1022, Баку, ул. Миргасымова, 1

Контакты: Эльдар Кочари оглы Гасымовgeldar1949@gmail.com

Цель исследования — изучить особенности структурных элементов твердого неба и кожи при заживлении резано-ушитых ран на стадии гемостаза и воспаления у домашних свиней.

Материалы и методы. Для эксперимента бьли взяты 9поросят с массой тела 35—40 кг. На коже спины и в твердом небе бьли сделаны прямолинейные разрезы (модели хирургических ран) длиной 2,5—3,0 см. Для проведения морфологических исследований в каждой серии экспериментов (контроль, через 6 ч и на 3-е и 7-е сутки после операции) было взято по 3 биоптата как из кожи, так и из слизистой оболочки твердого неба. Материал для электронной микроскопии фиксировали иммерсией in situ и далее обрабатывали по общепринятой методике. Полу- и ультратонкие срезы изучали соответственно под световым микроскопом Latimet (Leica) и электронным микроскопом JEM-1400 (JEOL) при ускоряющем напряжении 80—120 кВ.

Результаты. Быстрое угасание воспалительных процессов резано-ушитых ран кожи на ранних этапах заживления приводит к задержке очистки поврежденных структур и фибриноидов с раневой поверхности по сравнению с таковыми на слизистой оболочке твердого неба. Поэтому формирование созревшей грануляционной ткани на коже начинается не на 3-и, а на 7-е сутки. Выводы. Различия в фазах гемостаза и воспаления отражаются на последующих фазахрепаративной регенерации (пролиферации и формирования рубца), что, возможно, и приводит к различию в развитии рубцовой ткани послеоперационных ран.

Ключевые слова: модель хирургической раны, кожа, слизистая оболочка твердого неба, гемостаз, воспаление, трансмиссионный электронный микроскоп, репаративнаярегенерация, фибрин, кератиноциты, тонофибриллы, фибриноид, нейтрофильная и макро-фагальная инфильтрация, фагоцитоз, апоптотические тельца, онкотический некроз, грануляционная ткань

Е

ге

Е

и

DOI: 10.17650/2408-9613-2015-2-4-8-14

Comparative description of healing of surgical wounds in the oral mucosa and skin of pigs. Light optical and electron microscopic examination

Ch.R. Ragimov1, E.K. Gasymov2, T.R. Kuliev1, F.G. Rzaev3

IOral and Maxillofacial Surgery Department, Azerbaijan Medical University; 23 Bakikhanova St., Baku, 1022, Republic of Azerbaijan; 2Department of Histology, Embryology, and Cytology, Azerbaijan Medical University; 1 Mirgasymova St., Baku, 1022, Republic of Azerbaijan; 3Department of Electron Microscopy, Azerbaijan Medical University; 1 Mirgasymova St., Baku, 1022, Republic of Azerbaijan

Objective: to study the specific features of the structural elements of the hard palate and skin in the healing of incised and sutured wounds at the stage of hemostasis and inflammation in pigs.

Materials and methods. Nine piglets weighing 35—40kg were taken for an experiment. 2.5-3.0-cm rectilinear incisions (surgical wound models) were made in the back skin and hard palate. Three skin biopsy specimens and 3 hard palate mucosal biopsy specimens were taken for morphological examinations in each experimental series (control, 6 hours and 3 and 7 days postsurgery). The electron microscopic material was fixed by an in situ immersion method and then processed by the conventional procedure. Semi- and ultrafine sections were examined under a Latimet light microscope (Leica) and a JEM-1400 electron microscope (JEOL), respectively, at an accelerating voltage of80—120 kW. Results. A rapid decrement of inflammatory processes in the incised and sutured wounds in the early stages of healing results in delayed cleansing of damaged structures and fibrinoids from the wound surface compared to those in the heard palate mucosa. So formation of mature skin granulation tissue begins on day 7 rather on day 3.

Conclusion. The differences in the phases of hemostasis and inflammation affect the further phases of reparative regeneration (proliferation and scar formation), which may lead to a difference in the development of postoperative wound scar tissue.

Key words: surgical wound model, skin, hard palate mucosa, hemostasis, inflammation, transmission electron microscope, reparative regeneration, fibrin, keratinocytes, tonoflbrils, fibrinoid, neutrophil and macrophage infiltration, phagocytosis, apoptotic bodies, oncotic necrosis, granulation tissue

Введение

Известно, что заживление ран кожи с восстановлением всех ее структурных элементов возможно только при поверхностных повреждениях, т. е. до базально-го слоя эпидермиса [1—3]. Глубокие (полнослойные) же повреждения кожи всегда сопровождаются в той или иной степени развитием рубцовой ткани, что вызывает как функциональные, так и социальные проблемы [4—8].

Несмотря на то, что репаративная регенерация является генетически детерминированным стереотип -ным процессом, различные ткани и органы по степени развития рубца существенно отличаются друг от друга. По данным многочисленных экспериментальных и клинических исследований показано, что по сравнению с кожей заживление ран слизистых оболочек происходит значительно быстрее и с меньшим образованием рубцовой ткани [9—11]. Установление причин этого может привести к разработке новых современных методов, позволяющих контролировать ход процессов репаративной регенерации в различных частях тела, в том числе и на коже лица [12, 13].

По мнению ряда авторов, степень выраженности рубцовой ткани слизистых оболочек зависит от иммунологической толерантности развития воспалительных процессов [14], состава факторов роста [15, 16], фенотипа местных фибробластов (склеротические или несклеротические) [17], состава внеклеточного матрикса [15, 18, 19], количества апоптоза [20] и т. д. Не умаляя роли вышеперечисленных факторов в процессе формирования рубцовой ткани, следует подчеркнуть, что до сих пор не уточнены ультраструктурные характеристики клеточных и фибриллярных структур на различных стадиях заживления ран слизистой оболочки полости рта и кожи в сравнительном аспекте.

Цель работы — изучить особенности изменения структурных элементов слизистой оболочки полости рта и кожи при заживлении хирургических ран в эксперименте на свиньях.

Материалы и методы

Эксперименты проведены в лаборатории НИИ ветеринарии при Министерстве сельского хозяйства Азербайджанской Республики на 9 поросятах с массой тела 35—40 кг, полученных от скрещивания свиней пород ландрас и украинская. Все хирургические манипуляции выполняли под общим наркозом [21] в рамках специального протокола.

На коже спины животных и на твердом небе в полости рта были созданы модели хирургических ран проведением прямолинейных полнослойных разрезов длиной 2,5—3,0 см и последующим их ушиванием узловыми швами [21]. Для проведения морфологических исследований в каждой серии экспериментов

были взяты по 3 биоптата кожи и слизистой оболочки твердого неба. Размеры биоптатов составляли 10,0 * 0,3—0,4 мм. Материал для электронной микроскопии фиксировали иммерсией in situ в течение 15 мин смесью 2,5 % раствора глутаральдегида, 2,5 % раствора параформальдегида и 0,1 % раствора пикриновой кислоты на фосфатном буфере (рН 7,4). Затем биоптаты на ночь помещали в свежую порцию фиксатора. Последующую фиксацию проводили в 1 % растворе че-тырехокиси осмия и 1,5 % растворе ферроцианида калия на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) в течение 2 ч. Дальнейшую обработку материала — обезвоживание и заливку в Аралдит и Эпон-812 — выполняли по общепринятой методике [22, 23]. Полу- и ультратонкие срезы получали на ультратоме Leica EM UC7. Полутонкие срезы (1—2 мкм) окрашивали 0,5 % раствором метиленового синего [24] и изучали под световым микроскопом Latimet (Leica, Германия). Изображения фотографировали цифровой фотокамерой Pixera (США). Ультратонкие срезы окрашивали 2 % насыщенным водным раствором уранилацетата, затем 0,6 % раствором чистого цитрата свинца (Serva, Гер -мания) на 0,1 M растворе NaOH. Ультратонкие срезы просматривали и фотографировали на электронном микроскопе JEM-1400 (JEOL, Япония) при ускоряющем напряжении 80—120 кВ.

Результаты и обсуждение

При исследовании ран на слизистой оболочке твердого неба после первых 6 ч (рис. 1) выявлено наличие сгустков крови с преобладанием эритроцитов в фибриновой массе (см. рис. 1а, г). Внутри сгустков крови по краям ран на уровне рогового слоя найдены бактерии (см. рис. 1б, указаны стрелками), а на уровне шиповатого слоя — фрагменты различных клеток (см. рис. 1в). На раневой поверхности собственной пластинки слизистой оболочки кроме эритроцитов обнаружены секреторные гранулы и фрагменты тромбоцитов, макрофаги, лимфоциты с расширенными перинуклеарными цистернами (см. рис. 1г), а также скопления фибриноида (см. рис. 1д).

Конечный продукт свертывания крови, формирующийся из фибриновых волокон, называют фибри-новыми сгустками [25, 26]. В результате свертывания крови во время беременности между ворсинками плаценты формируется фибриновый сгусток, называемый фибринным типом фибриноида. Следует отметить, что при заживлении ран фибриноидная масса образуется не только в результате свертывания крови, но и при расщеплении промежуточных филаментов — тоно-филаментов в кератиноцитах.

На рис. 2а, б видно, что в результате деструкции цитоплазматических элементов, особенно тонофила-ментов (см. рис. 2б, указаны стрелками), в кератиноци-тах, подвергшихся некрозу, формируется скопление

т а т с

Рис. 1. Светооптические (а) и ультраструктурные (б—д) характеристики структурных элементов твердого неба в резано-ушитой ране через 6 ч (пояснение в тексте): а — полутонкий срез, окрашивание метиленовым синим; б—д — ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % уранилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца

фибриллярных структур (указано звездочками), которые по ультраструктурным параметрам почти не отличаются от фибринного типа фибриноида, расположенного между коллагеновыми волокнами (рис. 2в). Таким .а образом, при заживлении ран на слизистой оболочке Е твердого неба формируются как фибринный, так и кета ратиновый типы фибриноида. Причем если фибринЕ ный тип обнаруживается по краям раны на уровне соб-" ственной пластинки слизистой оболочки твердого неба as (см. рис. 1г) и дермы, то кератиновый тип обычно рас-3 полагается под базальным слоем кератиноцитов эпите-= лиального покрытия твердого неба и эпидермиса (рис.

2г, д, указано стрелками). Последние, по мнению я G. Ödland и R. Ross (1968), образуют «ковер» s (см. рис. 2г), по которому осуществляется миграция = кератиноцитов в процессе реэпителизации раневой поверхности [1]. Обнаружено, что фибриноиды подвер-а гаются фагоцитозу не только со стороны нейтрофилов в и макрофагов, но и кератиноцитов (рис. 2е).

Рис. 2. Формирование и гистотопография фибриноидов кератинного (а, б, г, д) и фибринного (в) типов и их фагоцитоз кератиноцитами (е): а—в, д, е — ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % уранилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца; г — полутонкий срез, окрашивание метиленовым синим

При исследовании на коже отличительной чертой заживления ран в стадии гемостаза является четкое определение признаков острого воспаления в образцах, взятых из ран спустя 6 ч после создания модели. Как по краям раны в толще фибринного слоя (рис. 3а), так и вокруг кровеносных сосудов, расположенных между пучками коллагеновых волокон собственно кожи, обнаружено скопление большого количества нейтрофилов и отдельных макрофагов (рис. 3б). Кроме того, даже при малом увеличении электронного микроскопа среди скоплений фибринов различной плотности выявлены в большом количестве отдельные фрагменты осмиофильных секреторных гранул, подвергшихся дегрануляции тромбоцитов, нейтрофилов и тучных клеток (рис. 3в). Частичной дегрануляции подвергаются и тучные клетки, расположенные между пучками коллагеновых волокон собственно кожи. В толще фибринного слоя (см. рис. 3в, указано стрелками) и непосредственно на краях ран за счет резкого

Рис. 3. Светооптические (а, б) и ультраструктурные (в—д) признаки острого воспаления резано-ушитой раны кожи через 6 ч (пояснение в тексте): а, б — полутонкие срезы, окрашивание метиленовым синим; в—е — ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % ура-нилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца

уплотнения частей фибриновых волокон появляются фрагменты фибринного типа фибриноида (см. рис. 3г). Помимо ограждения краев раны, они частично диффундируют также между коллагеновыми волокнами собственно кожи. На месте формирования будущей рубцовой ткани в окружении фибриновых волокон и фибриноидов фибринного типа обнаружено скопление плотно упакованных нейтрофилов (рис. 3д, е). На последних электронограммах четко определены подвергшиеся деструктивным изменениям темные нейтрофилы с апоптотическими ядрами (см. рис. 3д, указано звездочками), на периферии которых отмечена суперконденсация гетерохроматина, а также функционально активные нейтрофилы (см. рис. 3д, е, указано снежинками). На электронограммах стрелками указаны также апоптотические тельца, появляющиеся в результате расщепления клеток в процессе запрограммированной клеточной смерти, и их фагоцитоз со стороны расположенных вокруг функционально

активных нейтрофилов. С одной стороны, закончившие свою активность нейтрофилы, подвергшиеся апоптозу, а с другой — удаление фагоцитозом апопто-тических частиц другими нейтрофилами указывают на то, что воспаление, развивающееся на хирургической ране кожи, в течение 6 ч подходит к завершающему этапу [27, 28].

Результаты, полученные на 3-и сутки заживления ран слизистой оболочки твердого неба, демонстрируют индивидуальные особенности у оперированных животных. В одной группе отмечено продолжение воспалительной фазы заживления, а в другой в этот же период наблюдали формирование грануляционной ткани. Наличие на 3-и сутки на ране твердого неба у 1 из 3 свиней нейтрофильной и макрофагальной инфильтрации в собственной пластинке слизистой оболочки и эпителиального покрова говорит о продолжающемся воспалительном процессе (рис. 4a). Наряду с воспалительной инфильтрацией обращает на себя внимание деструктивное изменение базального слоя кератиноцитов эпителиальной выстилки твердого неба. Кроме эксцентрично расположенных ядрышек, остальная часть ядра и цитоплазма похожи на пустое оптическое пространство, окруженное тонким базо-фильным ободком. Описанные деструктивные изменения базального слоя кератиноцитов могут быть оценены как результат нарушения кровоснабжения, которое приводит к ишемической гибели клеток — онкотическому некрозу [29]. На 3-и сутки заживления ран в составе эпителиального покрова твердого неба как между клетками шиповатого (см. рис. 4а) и рогового (рис. 4б) слоев, так и на наружной поверхности (рис. 4в) последнего обнаруживается немалое количество нейтрофилов.

В этот же период в биоптатах твердого неба под эпителиальной выстилкой, а также на внутренней поверхности пучков коллагеновых волокон (границы показаны штриховыми линиями), образующих собственную пластинку слизистой оболочки, формируется грануляционная ткань (рис. 4г), которая резко отличается от собственной пластинки твердого неба ^ как клеточным составом, так и составом фибрилляр- g ных элементов. На электронограмме между плотно я расположенными веретенообразными фибробластами Е (характерными для созревшей грануляционной ткани) " видны отдельные фрагменты фибриноидов (рис. 4д, „ указано звездочками). Фибриноид, расположенный з в центре, окружен клетками фагоцитарного ряда. =

Другим, не менее важным отличительным признаком грануляционной ткани является преобладание я клеточных элементов над синтезированными фибро- = бластами фибриллярных структур (см. рис. 4д), отно- = сящихся в основном к тонкому (III) типу коллагеновых волокон [17, 30]. Очень редко вокруг фибробластов а обнаруживают большое количество вновь образован- в

Рис. 4. Признаки острого воспаления (а—в) и развитие грануляционной ткани (г—е) резано-ушитой раны твердого неба на 3-и сутки (пояснение в тексте): а, г — полутонкие срезы, окрашивание метиленовым синим; б, в, д, е — ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % уранилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца

ных тонких коллагеновых волокон (рис. 4е), которые, располагаясь хаотично, не формируют пучки, характерные для контрольных препаратов.

Полученные материалы показывают, что процесс л заживления, происходящий на 3-и сутки в кожных Е ранах, существенно отличается от соответствующего я периода заживления ран твердого неба. Если на твер-Е дом небе фибриноид представлен в виде отдельных " фрагментов (см. рис. 4д), то на ранах кожи они щ как бы «забором» (рис. 5а, указано стрелками) огра-3 ждают коллагеновые пучки собственной кожи = от окружающих структур. Помимо этого, большие образования фибриноидов, формирующиеся между я кровяными элементами (рис. 5б) и проникающие к между коллагеновыми волокнами дермы на различ-= ные расстояния (рис. 5в), образуют барьер, препятствующий переходу форменных элементов крови а между пучками коллагеновых волокон собственно в кожи. В раневом канале в составе сгустка крови на-

Рис. 5. Ультраструктурная характеристика клеточных и фибриллярных структур резано-ушитой раны кожи на 3-и сутки (пояснение в тексте). Ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % уранилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца

ряду с эритроцитами обнаруживаются подвергшиеся дегрануляции (неактивные) единичные нейтрофилы (рис. 5г), тромбоциты, тучные клетки, моноциты и лимфоциты (рис. 5д). Клетки, имеющие фагоцитарную активность, здесь очень редки (рис. 5е). Наличие остатков фибриноидов в просвете лимфатических капилляров дермы (рис. 6а, указано стрелками) и эритроцитов между кератиноцитами эпидермиса (рис. 6б, в) может служить дополнительным свидетельством угасания воспалительного процесса на 3-и сутки заживления ран кожи.

Обнаружение отдельных фибробластов округлой формы (рис. 6г, д) на незначительном участке раневой поверхности указывает на начальную стадию формирования растущей (молодой) грануляционной ткани на ранах кожи на 3-и сутки процесса заживления. При этом все признаки развития созревшей грануляционной ткани появляются только на 7-е сутки заживления ран кожи (рис. 6е).

ТОМ 2 ^ £ VOL. 2 "Г

WOUNDS AND WOUND INFECTIONS THE PROF. B.M. KOSTYUCHENOK JOURNAL

Заключение

Быстрое угасание воспалительного процесса резано-ушитых ран кожи сопровождается задержкой очистки раневой поверхности от поврежденных структур и фибриноидов, что приводит к формированию созревшей грануляционной ткани на коже

Рис. 6. Ультраструктурная характеристика клеточных и фибриллярных структур на 3-и и 7-е сутки резано-ушитой раны кожи (пояснение в тексте). Ультратонкие срезы, электронограммы, окрашивание 2 % уранилацетатом и 0,6 % чистым цитратом свинца

не на 3-и, а на 7-е сутки. Отмеченные различия в фазах гемостаза и воспаления отражаются на последующих фазах репаративной регенерации (пролиферации и формирования рубца), что, возможно, и обусловливает различия в развитии рубцовой ткани послеоперационных ран.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Odland G., Ross R. Human wound repair.

1. Epidermal regeneration. J Cell Biol 1968;39(1):135—51.

2. Alster T.S., Tanzi E. Hypertrophic scars and keloids. Clin Dermatol 2003;4(4):235-43.

3. Pastar I., Stojadinovic O., Yin N.C. et al. Epithelialization in wound healing:

a comprehensive review. Adv Wound Care (New Rochelle) 2014;3(7):445-64.

4. Martin P. Wound healing — aiming for perfect skin regeneration. Science 1997;276(5309):75-81.

5. Bayat A., McGrouther D.A., Ferguson M.W. Skin scarring. Br Med J 2003;326(1):88-92.

6. Ferguson M.W., O'Kane S. Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 2004;359(1445):839-50.

7. Толстых М.П., Ахмедов Б. А., Атаев А. Р. и др. Лечение ран антиоксидантами. Махачкала: Эпоха, 2004. 170 с.

[ ТоЫукИ М.Р., Mhmedov В.А., Jiaev А.Я. et al. Treatment of wounds with antioxidants. МакИасИка1а: ЕрокИа, 2004. 170p. (In Russ.)].

8. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция.

Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. 427 с. [Maev Yu.K. Surgeon's reference book. Wounds and wound infection. Rostov-on-Don: Feniks, 2006. 427p. (In Russ.)].

9. Schrementi M.E., Ferreira A.M., Zender C., DiPietro L.A. Site-specific production

of TGF-beta in oral mucosal and cutaneous wounds. Wound Repair Regen 2008;16(1): 80-6.

10. Mak K., Manji A., Gallant-Behm C. et al. Scarless healing of oral mucosa is characterized by faster resolution of inflammation and control of myofibroblast action compared

to skin wounds in the red Duroc pig model. Dermatol Sci 2009;56(3):168-80.

11. Larjava H., Wiebe C., Gallant-Behm C. et al. Exploring scarless healing of oral soft tissues. J Can Dent Assoc 2011;77:b18.

12. Wu Z., Ding Y., Zhang L. et al. Primary grafting research of tissue engineered oral mucosa lamina propria on skin full thickness wounds. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian

Wai Ke Za Zhi 2006;20(2):172-6.

13. Glim J.E., van Egmond M., Niessen F.B. et al. Detrimental dermal wound healing: what can we learn from the oral mucosa? Wound Repair Regen 2013;21(5):648-60.

14. Pabst O., Bernhardt G., Forster R. The impact of cell-bound antigen transport on mucosal tolerance induction. J Leukoc Biol 2007;82(4):795-800.

15. Leask A., Abraham D. TGF-beta signaling and the fibrotic response. FASEB J 2004;18(7):816-27.

16. Walraven M., Gouverneur M., Middelkoop E. et al. Altered TGF-ß signaling in fetal fibroblasts: what is known about the underlying mechanisms? Wound Repair Regen 2014;22(1):3-13.

17. Mah W., Jiang G., Olver D. et al. Human gingival fibroblasts display a non-fibrotic phenotype distinct from skin fibroblasts

in three-dimensional cultures. PLoS One 2014;9(3):e90715.

18. Ghaffari A., Li Y., Karami A. et al. Fibroblast extracellular matrix gene expression in response to keratinocyte-releasable stratifin. J Cell Biochem 2006;98(2):383-93.

19. Wong J., Gallant-Behm C., Wiebe C. et al. Wound healing in oral mucosa results

in reduced scar formation as compared with skin: evidence from the red Duroc pig model and humans. Wound Repair Regen 2009;17(5):717-29.

E та E

u

20. Johnson A., Francis M., DiPietro L. Differential apoptosis in mucosal and dermal wound healing. Adv Wound Care

(New Rochelle) 2014;3(12):751-61.

21. Rshimov Q.R., Qasimov E.K., Quliyev T.R., Fsrzsliyev l.M. Agiz bo§lugunda csrrahi yaralarin sagalmasi prosesinin oyrsnilmssi UijUn mttnasib eksperimental model. Azsrbaycan Tibb Jurnali 2014;(2):120-5.

22. Уикли Б.С. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. 325 с. [Weekly B.S. Electronic microscopy

for beginners. Moscow: Mir, 1975. 325p. (In Russ.)].

23. Kuo J. Electron microscopy: methods and protocols. Totowa: Humana Press, 2007. 625 p.

24. D'Amico F. A polychromatic staining method for epoxy embedded tissue: a new combination of methylene blue and basic fuchsine for light microscopy. Biotech Histochem 2005;80(5-6):207-10.

25. Undas A., Ariens R.A. Fibrin clot structure and function: a role in the pathophysiology

of arterial and venous thromboembolic diseases. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2011;31(12):e88-99.

26. Weigandt K.M., White N., Chung D. et al. Fibrin clot structure and mechanics associated with specific oxidation of methionine residues in fibrinogen. Biophys J 2012;103(11):2399-407.

27. El Kebir D., Filep J.G. Role of neutrophil apoptosis in the resolution of inflammation.

Scientific World J 2010;10: 1731-48.

28. Esmann L., Idel C., Sarkar A. et al. Phagocytosis of apoptotic cells by neutrophil granu-locytes: diminished proinflammatory neutro-phil functions in the presence of apoptotic cells. J Immunol 2010;184(1):391-400.

29. Манских В.Н. Пути гибели клеток и их биологическое значение. Цитология 2007;49(11):909-15. [Manskikh V.N. Ways of cells' death and its biologic value. Tsitologiya = Cytology 2007;49(11):909-15. (In Russ.)].

30. Vlnar T., Bailey T., Smrkolj V. The wound healing process: an overview of the cellular and molecular mechanisms. J Int Med Res 2009;37(5):1528-42.