СПОСОБЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ АЛЛОГЕННЫХ И ВЫСОКОАКТИВНЫХ Т-КЛЕТОК ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ

1. Способ получения Т-клетки (Т-клеток) для иммунотерапии, включающий:
(а) модифицирование Т-клетки (Т-клеток) путем инактивации по меньшей мере:
- первого гена, кодирующего белок иммунной контрольной точки, и
- второго гена, кодирующего компонент рецептора Т-клеток (TCR); и
(б) размножение указанной Т-клетки (Т-клеток).
2. Способ по п. 1, включающий модифицирование Т-клеток путем:
(а) интродукции в указанную Т-клетку по меньшей мере одной редкощепящей эндонуклеазы, способной селективно инактивировать за счет расщепления ДНК соответственно:
- указанного гена, кодирующего белок иммунной контрольной точки, и
- по меньшей мере одного гена, кодирующего один компонент рецептора Т-клеток (TCR); и
(б) размножения указанных Т-клеток.
3. Способ по п. 1, в котором указанный ген иммунной контрольной точки выбран из группы, PD1, CTLA-4, LAG3, Tim3, BTLA, BY55, TIGIT, В7Н5, LAIR1, SIGLEC10 и 2B4.
4. Способ по п. 1, в котором указанные трансформированные Т-клетки размножают в крови пациентов.
5. Способ по п. 1, в котором указанные трансформированные Т-клетки размножают in vivo.
6. Способ по п. 1, в котором указанным геном иммунной контрольной точки является PD1 или CTLA-4.
7. Способ по п. 1, в котором по меньшей мере первый и второй инактивированные гены выбраны из группы, состоящей из PD1 и TCR alpha, PD1 и TCR beta, CTLA-4 и TCR alpha, CTLA-4 и TCR beta, LAG3 и TCR alpha, LAG3 и TCR beta, Tim3 и TCR alpha, Tim3 и TCR beta, BTLA и TCR alpha, BTLA и TCR beta, BY55 и TCR alpha, BY55 и TCR beta, TIGIT и TCR alpha, TIGIT и TCR beta, B7H5 и TCR alpha, B7H5 и TCR beta, LAIR1 и TCR alpha, LAIR1 и TCR beta, SIGLEC10 и TCR beta, SIGLEC10 и TCR beta, 2B4 и TCR alpha, 2B4 и TCR beta.
8. Способ по п. 2, в котором указанная по меньшей мере одна редкощепящая эндонуклеаза кодируется мРНК.
9. Способ по п. 2, который включает интродукцию одной или нескольких редкощепящих эндонуклеаз в указанную Т-клетку на стадии (а) путем электропорации РНК.
10. Способ по п. 2, в котором указанной по меньшей мере одной редкощепящей эндонуклеазой является TALE-нуклеаза.
11. Способ по п. 10, в котором по меньшей мере одна TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей TCRalpha, состоящей из SEQ ID NO: 37, с SEQ ID NO: 57 no SEQ ID NO: 60.
12. Способ по n. 10, в котором по меньшей мере одна TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей TCRbeta, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 39.
13. Способ по п. 10, в котором по меньшей мере одна TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей PD1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77 и SEQ ID NO: 78.
14. Способ по п. 10, в котором по меньшей мере одна TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей CTLA-4, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 76.
15. Способ по п. 1, дополнительно включающий интродукцию в указанную Т-клетку (Т-клетки) химерного антигенного рецептора (CAR).
16. Способ по п. 1, в котором указанная Т-клетка (Т-клетки) на стадии (а) является(ются) производной(ыми) от воспалительных Т-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, регуляторных Т-лимфоцитов или Т-лимфоцитов-хелперов.
17. Способ по п. 1, в котором указанная Т-клетка (Т-клетки) на стадии (а) является(ются) производной(ыми) от CD4+Т-лимфоцитов и/или CD8+Т-лимфоцитов.
18. Выделенная Т-клетка или линия клеток, получаемые способом по п. 1, или их субкультура.
19. Выделенная Т-клетка, в которой были инактивированы по меньшей мере два гена, выбранные из группы, состоящей из PD1 и TCR альфа, PD1 и TCR beta, CTLA-4 и TCR альфа, CTLA-4 и TCR beta, LAG3 и TCR альфа, LAG3 и TCR beta, Tim3 и TCR альфа, Tim3 и TCR beta, BTLA и TCR альфа, BTLA и TCR beta, BY55 и TCR альфа, BY55 и TCR beta, TIGIT и TCR альфа, TIGIT и TCR beta, B7H5 и TCR альфа, B7H5 и TCR beta, LAIR1 и TCR альфа, LAIR1 и TCR beta, SIGLEC10 и TCR альфа, SIGLEC10 и TCR beta, 2B4 и TCR альфа, 2B4 и TCR beta.
20. Выделенная Т-клетка по п. 19, дополнительно включающая экзогенную полинуклеотидную последовательность, кодирующую химерный антигенный рецептор.
21. Выделенная Т-клетка по п. 20, в которой указанным химерным антигенным рецептором является многоцепочечный химерный антигенный рецептор.
22. Выделенная Т-клетка по п. 19, дополнительно включающая экзогенную нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере фрагмент трансгена pTalpha для поддержки экспрессии на поверхности CD3.
23. Выделенная Т-клетка по п. 19 для применения в качестве лекарственного средства.
24. Выделенная Т-клетка по п. 19 для лечения рака или вирусной инфекции.
25. Выделенная Т-клетка по п. 19 для лечения лимфомы.
26. Фармацевтическая композиция, включающая по меньшей мере одну выделенную Т-клетку по п. 19.
27. Способ лечения пациента, включающий:
(а) получение популяции модифицированных Т-клеток по способу по п. 1, и
(б) введение указанных модифицированных Т-клеток указанному пациенту.
28. Способ по п. 27, в котором у указанного пациента диагностирован рак, вирусная инфекция, аутоиммунное расстройство или заболевание трансплантат-против-хозяина (GvHD).