Акцептивный иммунитет - основа симбиотических взаимоотношений

2014. Специальный выпуск

Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума

генных бактерий к антибактериальным препаратам хорошие перспективы в качестве антимикробной терапии имеют бактериофаги. Целью настоящего исследования явилось изучение чувствительности наиболее этиологически значимых возбудителей ОКИ к некоторым бактериофагам и оценка возможности применения их для лечения воспалительных процессов ЖКТ.

На чувствительность к сальмонеллезному бактериофагу исследовано 184 штамма сальмонелл 18 серологических вариантов, серогрупп В, Q, С2, С3, Dj, E1. Все культуры показали высокую чувствительность к указанному бактериофагу. В группе ЭПКП исследовано 137 штаммов, принадлежащих к 21 се-рогруппам. По частоте обнаружения на первом месте были ЭПКП серогруппы О:25, на втором месте О:144, затем О:151, О:1, О:26. Более 60 % штаммов ЭПКП были чувствительны к колипротейному фагу и около 80 % к пиобактериофагу. Наиболее выраженная ли-тическая активность колипротейного бактериофага отмечалась у штаммов серогрупп О:25, О:151, О:1, О:26 - более 70 % случаев. В 50 % случаев E. coli (lac -) были чувствительными к колипротейному бактериофагу и около 70 % штаммов — чувствительны к пиобактериофагу. Бактерии родов Klebsiella, Proteus также показали более высокую чувствительность к пиобактериофагу (35 и 43,5 % соответственно) при сравнении с бактериофагом клебсиелл поливалентным и коли-протейным.

Таким образом, результаты исследования показали высокую литическую активность монобактериофага сальмонеллезного, пиобактериофага в отношении ЭПКП и E. coli (lac -). Поэтому фаготерапия должна быть рекомендована для лечения ОКИ бактериальной этиологии, но с обязательным проведением определением чувствительности штаммов к бактериофагам.

Т051 ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БИОПЛЁНОК ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

О.Д. Кирилова, Н.А. Селянская, С.В. Титова, Л.М. Веркина

ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора, Ростов-на-Дону, Россия

Основной формой существования Vibrio cholerae в естественных условиях являются биоплёнки, в составе вибрионы более устойчивы к неблагоприятным факторам.

Цель работы: оценить антибиотикочувствитель-ность V. cholerae в составе биоплёнки на разных стадиях её формирования.

Материалы и методы. Штаммы V. cholerae El Tor и non О1/ non О139, выделенные от людей (ctx+, tep+). Антибактериальные препараты: левомицетин, док-сициклин, гентамицин, рекомендованные для лечения холеры (МУК 3.4.2552-09), в концентрациях 1,08,0 мг/л, соответствующих чувствительности или промежуточной устойчивости (МУК 4.2.2495-09).

В пенициллиновые флаконы, содержащие пластиковые пластины для получения биоплёнок, добавляли по 5 мл кипячёной водопроводной воды и суспензию V. cholerae п*104м.кл. Для изучения чувствительности биоплёнок к антибиотикам на стадии формирования во флаконы одновременно с суспензией вносили антибиотики. Для изучения антибиотикочув-ствительности зрелых биоплёнок антибиотики во фла-

коны добавляли через 4 суток после внесения суспензии V. cholerae. В контрольные флакон антибиотики не добавляли. После выдерживания в течение 24 часов при 370С делали высев планктонной и биоплёночной культур на агар Мартена. Результат учитывали через 24 часа по наличию или отсутствию роста холерных вибрионов.

Результаты. При изучении антибиотикочувстви-тельности биоплёнок на стадии формирования при высеве на агар наблюдали рост биоплёночной формы V. cholerae El Tor при воздействии всех концентраций антибиотиков, а V.cholerae non О1/ non О139 - 1-2 мг/л при отсутствии роста планктона. При воздействии антибиотиками на зрелые биоплёнки наблюдали гибель планктона V. cholerae El Tor при концентрациях гентамицина, левомицетина 2—8 мг/л, доксицикли-на — 4 мг/л и V. cholerae non О1/ non О139 на всех концентрациях. Биопленки сохраняли жизнеспособность. В контроле был рост и биоплёнок и планктона в обоих случаях.

Заключение. Чувствительность к некоторым антибактериальным препаратам V. cholerae в планктонной форме и в виде биоплёнок различается, что требует проведения оценки активности антибактериальных препаратов в отношении биоплёнок для повышения эффективности рациональной антибиотикотерапии.

Т052 АКЦЕПТИВНЫЙ ИММУНИТЕТ - ОСНОВА СИМБИОТИЧЕСКИХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ

Е.П. Киселева

ФГБУНИИЭМСЗО РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Традиционно взаимоотношения иммунной системы макроорганизма с комменсалами принято рассматривать с точки зрения протективного иммунитета, отвечающего за защиту от патогенов. В то же время, функции иммунной системы по обеспечению проживания чужеродных микроорганизмов на поверхности кожи и слизистых значительно отличаются от протективного иммунитета. Было предложено выделить иммунный ответ в отношении нормальной миробиоты в отдельную функцию иммунитета и назвать ее акцептивной (В.Б. Климович, 2002). Взаимодействие с симбионтными бактериями, в отличие от патогенов, является физиологическим процессом. Между комменсалами и клетками иммунной системы отсутствует прямой контакт, поскольку они разделены слоем эпителиальных клеток. Основной стратегией иммунного ответа в борьбе с инфекцией является распознавание своего и чужого с последующей элиминацией патогена, в при взаимодействии с симбионтами это же распознавание приводит к мирному сожительству с бактериями. Иммунный ответ направлен на сохранение и поддержание микробного биоценоза, а также передачу потомству. Эти задачи реализуются как на уровне врожденного, так и приобретенного иммунитета. Ключевым этапом является распознавание клетками иммунной системы микробных сигналов, поступающих через эпителий, с помощью паттерн-распознающих рецепторов. В результате клетки эпителия под контролем иммунной системы синтезируют слизь, создающую специфическую среду для проживания кишечной микробиоты, а также антибактериальные пептиды для защиты макроорганизма. Главной иммунологической эффекторной молекулой является IgA, который секретируется в просвет кишечника и непосредственно контактирует с бактериями. IgA, в отличие

Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума

Инфекция и иммунитет

от IgG и IgM, играющих важную роль в защите от патогенов, не взаимодействует с комплементом и не убивает бактерии. Он выполняет другие функции, участвуя в создании биопленки, а также в контроле за поступлением бактерий через М-клетки. Важную роль играют также Т-регуляторные клетки, отвечающие за создание специфической толерантности к антигенам нормальной микробиоты. Таким образом, акцептивный иммунитет отличается от про-тективного по многим параметрам, включающих как запуск иммунного ответа, так и его реализацию, происходящую на уровне разных эффекторных молекул.

Т053 ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ ШТАММОВ ESCHERICHIA COLI ПОД ДЕЙСТВИЕМ

5-ЭНДОТОКСИНОВ BACILLUS THURINGIENSIS

Е.Г. Климентова

ФГБОУВПО УлГУ, Ульяновск, Россия

Известно, что гены ряда белков (б-эндотоксинов) параспоральных кристаллов различных подвидов бактерии B. thuringiensis введены во многие растения для защиты их от вредных насекомых. Такие генно-модифицированные растения (Bt-растения) обладают способностью синтезировать во время вегетации большие количества б-эндотоксинов. Показано, что б-эндотоксины B. thuringiensis обладают выраженной биологической активностью и способны оказывать антибиотическое действие на микроорганизмы — симбионты желудочно-кишечного тракта позвоночных животных и человека. Важнейшее значение симбиотической микробиоты для многих сторон жизнедеятельности животных и человека неоспоримо доказано, поэтому изучение влияния

6-эндотоксинов на свойства бактерий-симбионтов желудочно-кишечного тракта имеет большое значимость, особенно — в связи с расширяющимся использованием трансгенных Bt-растений в питании.

Была изучение гетерогенность популяции 130 штаммов культуры Escherichia coli выделенных из прямого отдела толстой кишки лабораторных мышей с экспериментальным дисбактериозом, обусловленным длительным пероральным введением б-эндотоксинов B. thuringiensis (дозы 75—100мг/кг веса животного, которые могут быть получены из пищи, содержащей Bt-растения) по их персистент-ным и патогенным свойствам, и 49 штаммов, выделенных от интактных животных. С помощью общепринятых методик были изучены антилизоцимная, антикомплементарная и антиинтерфероновая активности, а также адгезивные свойства, гемолитическая и лактозонегативная активности.

Было установлено, что в микробиоценозе толстого кишечника животных при действии б-эндотоксинов B. thuringiensis происходят дисбио-тические изменения, при этом количество гемолитических и лактозонегативных штаммов E. rnli достоверно увеличивалось по сравнению с микро-биотой кишечника интактных животных. Наличие и частота факторов персистенции штаммов E. rnli, выделенных от животных с экспериментальным дисбактериозом, оказались намного больше, чем у штаммов, выделенных от животных контрольной группы, отличаясь на статистически значимую величину. Наблюдалось резкое нарастание частоты проявления этих показателей в группах лактозо-негативных и гемолитических штаммов вплоть до

массового абсолютного (100%) уровня по антили-зоцимной и антиинтерфероновой активности. Следует отметить, что особенно часто высокие показатели факторов персистенции проявляли штаммы E. coli, выделенные из сложных микробиоценозов в виде ди-, три-, тетра-ассоциантов и прочих вариантов, содержащих такие культуры, как Klebsiella spp., Enterococcus spp., Staphylococcus spp., Citrobacter spp., Morganella morganii, Yersinia enterocolitica, дрожжепо-добные грибы р. Candida, и прочие. В результате проведенных нами исследований также было установлено, что в сложных биоценотипических условиях, обусловленных влиянием б-эндотоксинов, штаммы эшерихий, обнаруживая персистентные качества, синхронно усиливали патогенность, в частности, адгезивные свойства.

Таким образом, действие высоких доз б-эндо-токсинов B. thuringiensis на популяцию культуры E. coli в условиях in vivo вызвало усиление факторов персистенции, особенно среди лактозонегативных и гемолитических штаммов. Это сопровождалось колонизацией биотопа кишечника макроорганизма-хозяина добавочными и транзиторными условно-патогенными видами бактерий и привело к снижению количества представителей нормальной микробио-ты. Увеличение содержания условно-патогенных микроорганизмов, в свою очередь, сопровождалось развитием дисбактериоза и подавлением основных гуморальных факторов естественной резистентности макроорганизма.

Т054 ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ БАКТЕРИЙ НА МИКРОБИОТУ КУШЕЧНИКА КРЫС ПРИ ДИСБИОЗЕ

К.М. Климина, А.Н. Суворов, Е.И. Ермоленко, А.В. Коровкина, С.А. Гладышев, В.Н. Даниленко

ИОГен РАН, Москва, Россия;

ФГБУ«НИИЭМ» СЗО РАМН, Санкт-Петербург, Россия

На данный момент особый интерес приобрел анализ микробиологических сообществ кишечника при дисбиозе или других заболеваниях. Один из существующих методов метагеномного анализа — анализ на основе гена 16S рРНК, который позволяет анализировать состав микробиологического сообщества.

В нашей работе основной задачей было исследование лекарственного средства на основе штаммов Bifidobacterium longum, Lactobacillus rhammsus, Enterococcus faecium. Проведена оценка влияния данных пробиотических бактерий отдельно и в виде смеси этих микроорганизмов на модели экспериментального дисбиоза кишечника у крыс. Созданы 6 групп крыс, которым вводились по-отдельности пробиотические штаммы B. longum, L.rhammsus, E. faecium, входящих в состав ЛС; их смесь, в соотношении 1:1:1; антибиотик и контрольная группа, которые получали воду. В ходе пробиотикотерапии дисбиоза выявлены тенденции к более быстрому восстановлению содержания основных представителей облигатной флоры кишечника: лактоба-цилл, бифидобактерий, энтерококков, эшерихий и «благоприятного маркерного» вида бактерий Faecalibacterium prausnitzii. Доказана способность комплекса пробиотических бактерий стимулировать продукцию регуляторного цитокина TGF-p1 и экспрессию противовоспалительного цитокина IL-10.