ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ КОНСТРУКЦИИ АПИРАЗЫ, СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ АПИРАЗЫ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ

1. EN-апираза, где EN-апираза является растворимой CD39L3 или ее гомологом, имеет гомогенный N-конец и
a) имеет среднюю изоэлектрическую точку в диапазоне примерноот 3,0 до примерно 4,5; и/или
b) где указанная EN-апираза имеет время полужизни in vivo у кроликов или свиней, по меньшей мере, в два раза больше, чем в случае HEK sol-CDE39L3-01, измеренной с помощью анализа апиразы.
2. EN-апираза по п.1, которая продуцируется трансформированной линией клеток СНО.
3. EN-апираза по п.1, в которой N-конец имеет последовательность EVLP.
4. EN-апираза по п.3, которая содержит последовательность SEQ ID NO: 5, начиная с положения 7, или является ее гомологом.
5. Клетки СНО, модифицированные так, что они содержат конструкцию нуклеиновой кислоты для продуцирования EN-апиразы по п.1, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальную последовательность, линкер и растворимую апиразу, при этом линкер имеет последовательность EVLP в качестве его С-конца, и при этом указанный линкер или его часть может представлять собой последовательность, присутствующую в нативной растворимой апиразе, и оперативно связанный промотор, функциональный в клетках СНО так, чтобы получить растворимую апиразу с N-концевой последовательностью EVLP.
6. Клетки по п.5, где растворимая апираза представляет собой растворимую CD39L3 или ее гомолог.
7. Клетки по п.6, где растворимая апираза имеет последовательность SEQ ID NO:5, начиная с ее положения 7.
8. Способ получения EN-апиразы, и такой способ включает в себя культивирование клеток по любому из пп.5-7 и сбор культуральной среды.
9. Способ по п.8, в котором во время культивирования в среде поддерживается концентрация глутамина примерно 1,5-4 мМ, и рН от 7,0 до 7,8, и при этом температуру сдвигают от 37°С до 31-35°С на 4-6 день культивирования.
10. Способ по п.9, в котором во время культивирования в среде поддерживается концентрация глутамина примерно 2 мМ и рН 7,4, и при этом температуру культуры сдвигают от 37°С до 34°С на 5 день культивирования.
11. EN-апираза, полученная способом по п.8.
12. EN-апираза, полученная способом по п.9.
13. EN-апираза, полученная способом по п.10.
14. Фармацевтическая композиция, содержащая EN-апиразу по п.1.
15. Фармацевтическая композиция, содержащая EN-апиразу по п.11.
16. Способ лечения состояний, при которых полезна активность апиразы, при этом такой способ включает в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества фармацевтической композиции по п.14.
17. Способ лечения состояний, при которых полезна активность апиразы, при этом такой способ включает в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества фармацевтической композиции по п.15.
18. Способ очистки EN-апиразы по п.1, при этом такой способ включает в себя подвергание культуральной среды, содержащей указанную EN-апиразу, анионообменной хроматографии с последующей обработкой содержащего EN-апиразу элюата, полученного в результате указанной анионообменной хроматографии, для очистки с использованием катионообменной хроматографии.