Возрастные особенности формирования сенсибилизации к грибам рода Malassezia у детей с атопическим дерматитом

Возрастные особенности формирования сенсибилизации к грибам рода Malassezia у детей с атопическим дерматитом

М.А. Мокроносова, А.Н. Пампура, Е.В. Голышева, А.М. Глушакова

Age-related characteristics of sensitization to Malassezia spp in children with atopic dermatitis

M.A. Mokronosova, A.N. Pampura, E.V. Golysheva, A.M. Glushakova

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва; Московский НИИ педиатрии и детской хирургии

Обследованы 133 больных с различной степенью тяжести атопического дерматита с поражением кожи головы и шеи. Возраст пациентов варьировал от 1 года до 55 лет. Пробы на микобиоту брали с кожи верхней части тела методом соскоба. Видовую идентификацию представителей рода Malassezia проводили по морфологическим, физиологическим и хемотаксономиче-ским признакам. В детском возрасте наиболее часто выделяли M. sympodialis (у 60% детей в возрасте до 5 лет и у 73% — от 5 до 15 лет). В старшей возрастной группе на коже в 43% случаев присутствовали дрожжи M. globosa, которые у детей встречались в 2 раза реже. IgE-антитела к Malassezia spp. выявляли у 42,85% всех обследованных пациентов. Установлено, что частота встречаемости IgE-антител к Malassezia spp. у детей в 2 раза ниже, чем у взрослых. Сделаны выводы, что вид и плотность колонизации дрожжей Malassezia spp. не влияют на формирование сенсибилизации к грибам; спектр колонизации кожи различными видами Malassezia spp. зависит от возраста больных атопическим дерматитом.

Ключевые слова: дети, взрослые, атоническая экзема/дерматит, липофильные грибы, Malassezia spp., IgE-антитела, сенсибилизация.

One hundred and thirty-three patients with varying degrees of atopic dermatitis (AD) involving the head and neck were examined. Their age varied 1 to 55 years. Samples to be mycologically tested were taken from the skin of the upper torso via scraping. The species specificity of the representatives of the Malassezia genus was identified from their morphological, physiological, and chemo-taxonomic signs. In childhood, M. sympodialis was most frequently isolated (in children aged less than 5 years (60%) and in those aged 5 to 15 years (73%)). In 43% of cases in the old age group, the skin contained the yeast M. globosa that was twice less frequently encountered in children. IgE antibodies to Malassezia spp. were detected in 42,85% of all the examined patients with AD. In children, the frequency of IgE antibodies to Malassezia spp. was twice less than that in adults. It is concluded that the species and colonization density for Malassezia spp. do not affect the development of sensitization to the fungi; the spectrum of skin colonization with various species of Malassezia spp. depends on the age of patients with AD.

Key words: children, adults, atopic eczema/dermatitis, lipophilic fungi, Malassezia spp., IgE antibody, sensitization.

Липофильные дрожжи рода Malassezia колонизи-рут кожу практически каждого человека и обитают в тесном симбиозе с хозяином на протяжении всей его жизни. Мантийный слой на поверхности кожи, образуемый дрожжами, создает дополнительную защиту от воздействия физических и химических факторов благодаря жиру, необходимому для жизнедеятельности клетки. Кроме того, такие факторы, как высокая плотность контаминации дрожжевыми клетками; продукция Malassezia spp. азелаиновой кисло© Коллектив авторов, 2010 Ros Vestn Perinatal Pediat 2010; 3:89-93

Адрес для корреспонденции: Мокроносова Марина Адольфовна — д.м.н., проф., зав. лабораторией клинической аллергологии НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова 103064 Москва, Малый Казенный пер., д. 5а

Голышева Екатерина Викторовна — м.н.сотр. той же лаборатории Глушакова Анна Марковна — к.м.н., ст.н.сотр. той же лаборатории Пампура Александр Николаевич — д.м.н., рук. отделения аллергологии и клинической иммунологии МНИИ педиатрии и детской хирургии 125412 Москва, ул. Талдомская, д. 2

ты, обладающей фунгицидным, антибактериальным и противоопухолевым свойствами, способствуют защитному эффекту организма от киллинговой активности фагоцитов и дезинфицирующему эффекту против патогенных грибов и бактерий [1—4].

Процесс заселения кожи липофильными грибами изучен поверхностно. Использование контактного плашечного посева позволило определить возрастную динамику колонизации кожи здоровых пациентов без заболеваний кожи. В исследованиях, проведенных A. Gupta и соавт., у детей до 15 лет грибы Malassezia выделяли достоверно реже, чем у пациентов старше 15 лет. Данные по видовому разнообразию у детей и взрослых различаются. В том же исследовании показано, что у детей значительно чаще выявляется M. globosa, а у взрослых — M. sympodialis [5]. В работе Y. Takahata у детей с атопическим дерматитом чаще выделяли Malassezia restricta, в то время как у взрослых идентифицировали с одинаковой частотой M. restricta и M. globosa [6]. Результаты работы F Sandstrom и соавт.

свидетельствовали о преимущественной колонизации M. obtusa и M. globosa как у детей, так и у взрослых [7].

Доказано, что видовой и количественный состав липофильных грибов, обитающих на коже, не влияет на патогенетический механизм атопическо-го дерматита, но имеет значение при других кожных заболеваниях. Многочисленные исследования показали, что у пациентов с атопией, страдающих атопическим дерматитом, но не ринитом и не астмой, индуцируются IgE-антитела к грибам рода Malassezia [8, 9]. Ранее была выявлена высокая перекрестная реактивность между антигенами грибов Malassezia spp. и других дрожжеподобных грибов, таких как C. albicans, Rhodotorula rubra, Cryptococcus albidus и Saccharomyces spp. Она обусловлена гомологией антигенных детерминант высокомолекулярных маннопротеинов, выделенных из этих грибов [10]. Считается, что первичную сенсибилизацию вызывают грибы Malassezia spp. Одним из наиболее значимых аллергенов для сенсибилизации организма больного атопическим дерматитом является маннан липофильных грибов, вызывающий индукцию специфичных к нему IgE-антител, что подтверждается положительным прик-тестом у половины пациентов, сенсибилизированных к Malassezia spp. [11, 12].

На высвобождение аллергенов на коже влияет, прежде всего, рН на поверхности кожи — данный показатель у пациентов с атопическим дерматитом выше, чем у здоровых. Показано, что клетки M. sympodialis продуцируют, экспрессируют и высвобождают в большом количестве аллергены при наиболее высоких значениях pH. Это оказалось особенно характерным для главного аллергена с молекулярной массой 67 кД, обозначаемого как Mala s 12 [13].

Учитывая, что сенсибилизация к Malassezia spp. является особым симптомом, выделяющим атопи-ческий дерматит среди прочих аллергических заболеваний, важно знать, на каких возрастных этапах появляется колонизация кожи грибами Malassezia spp. Какие виды дрожжей и какой плотности колонизируют кожу? Когда формируется сенсибилизация к Malassezia spp.? Эти показатели могут иметь прогностическое значение, определяющее путь «атопическо-го марша».

Таблица 1. Распределение пациентов по возрасту и полу

Цель исследования: оценить возрастные особенности видового и количественного разнообразия грибов Malassezia на коже и уровень 1§Е-антител к Malassezia в сыворотке крови детей и взрослых с атопическим дерматитом.

ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕТЕЙ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Наблюдались 133 пациента в возрасте от 5 до 55 лет, страдающих атопической экземой/дерматитом с поражением кожи головы, шеи и верхней части тела. Диагноз был верифицирован на основании критериев НапШп. Пациенты были обследованы на предмет выявления колонизации кожи грибами Malassezia зрр. и наличия 1§Е-антител к Malassezia зрр. Большинство (60,9%) пациентов были в возрасте от 1 года до 15 лет, из них 53% — до 5-летнего возраста. Старшая возрастная группа (от 16 до 55 лет) составила 39,1%. Распределение пациентов по полу и возрасту представлено в табл. 1. Тяжесть течения атопического дерматита оценивали в соответствии с системой SCORAD. По тяжести течения атопического дерматита больные распределялись равномерно на группы с легкой, средней и тяжелой степенью.

Определение наличия и концентрации 1§Е-анти-тел к Malassezia зрр. и уровня общего 1§Е в сыворотке крови пациентов исследуемых групп проводили иммунохемилюминесцентным методом на приборе 1шшипоСАР 100 (РИаШа АВ, Швеция) с применением соответствующих реагентов.

Микологическое исследование с целью выделе -ния и идентификации липофильных дрожжей рода Malassezia проводили методом соскоба и сбора с поверхности кожи на участке 1 см2 на ватный тампон. Пробы брали с пораженных и непораженных участков кожи на верхней части тела (голова и шея). Далее производили пересев в трехкратной повторности на элективной среде №1шап-агар (LNA). Чашки с посевом инкубировали в термостате при температуре 32°С в течение 2 нед. Видовую идентификацию представителей рода Malassezia проводили по морфологическим, физиологическим и хемотаксономиче-ским признакам. Подсчет средних значений КОЕ/см2

Возраст абс. муж. % Пол абс. жен. % абс. Всего %

До 5 лет 21 15,8 22 16,5 43 32,3

От 6 до 15 лет 15 11,3 23 17,3 38 28,6

От 16 до 25 лет 7 5,2 11 8,3 18 13,5

От 26 до 55 лет 14 10,5 20 15,1 34 25,6

Итого... 57 42,8 76 57,2 133 100

Мокроносова М.А. и соавт. Возрастные особенности формирования сенсибилизации к грибам рода Malassezia у детей с атопическим...

осуществляли в соответствии с количеством колоний, выросших на плашке с пробы, взятой с участка кожи размером 1 см2.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Исследование видового разнообразия Malassezia spp. и частоты выявления IgE-антител к Malassezia spp. проводили в четырех возрастных группах. Дрожжи, относящиеся к роду Malassezia spp., были выделены с кожи всех обследованных пациентов. Видовое разнообразие Malassezia spp. было представлено четырьмя видами: M. jurfur, M. sympodialis, M. globosa, M. restricta. Последний вид был выделен с кожи только одной пациентки в ассоциации с M. sympodialis.

На рис. 1 представлено видовое разнообразие ли-пофильных грибов в зависимости от возраста пациентов. Как видно, в детском возрасте наиболее часто выделяли M. sympodialis — в 60% случаев у детей в возрасте до 5 лет и в 73% — у детей от 5 до 15 лет (в 40% случаев у больных старше 16 лет). В старшей возрастной группе больных на коже присутствовали в 43% случаев дрожжи M. globosa, которые у детей встречались в 2 раза реже. Не было выявлено различия по видам дрожжей на пораженных участках и на непораженных участках кожи тех же пациентов.

На рис. 2 представлена плотность колонизации липофильными грибами Malassezia spp. кожи больных атопическим дерматитом в различных возрастных

группах. Наиболее часто (в 65% случаев) плотность заселения кожи дрожжами у детей до 15 лет не превышала 105 КОЕ/см2. С возрастом, после 16 лет плотность колонизации нарастала и сохранялась постоянной в старших возрастных группах, когда у половины больных атопическим дерматитом плотность колонизации кожи грибами рода Malassezia spp. составляла 108 КОЕ/см2. Не выявлено закономерности распределения плотности колонизации от вида Malassezia spp. Не установлено зависимости между тяжестью течения дерматита, локализацией участка взятия пробы с кожи и видом грибов и плотностью контаминации. Однако было выявлено различие по плотности колонизации дрожжей на пораженных участках (на 2—3 порядка выше) в сравнении с непораженными участками кожи тех же пациентов.

1§Е-антитела к Malassezia spp. выявляли у 42,85% всех обследованных пациентов с атопическим дерматитом (табл. 2). В 30,2% случаев эти антитела появлялись уже в раннем в возрасте — до 5 лет, а в старшей возрастной группе противодрожжевые 1§Е-антитела обнаруживали в 2 раза чаще.

Вид липофильных дрожжей, выделенных с кожи больных независимо от возраста, никак не влиял на наличие или отсутствие 1§Е-антител к Malassezia sрp. (рис. 3). Частота выявления этих антител в сыворотке крови была практически одинаковой у пациентов с различными видами Malassezia spp . Не было также установлено зависимости между плотностью коло-

От 25 до 55 лет От 16 до 25 лет От б до 15 лет До 5 лет

100 %

o

2o

40

60

80

M. sympodialis

M. sympodialis + M. furfur

M. furfur

M. globosa

Рис. 1. Видовое разнообразие липофильных грибов Malassezia spp. на коже больных атопическим дерматитом в различных возрастных группах.

Рис. 2. Плотность колонизации липофильными грибами Malassezia spp. на коже больных атопическим дерматитом в различных возрастных группах.

Таблица 2. Выявление IgE-антител к Malassezia spp. в различных возрастных группах больных атопическим дерматитом

Возраст Наличие IgE-антител к Malassezia spp. абс. %

До 5 лет 13 из 43 30,2

От б до 15 лет 13 из 38 34,2

От 16 до 25 лет 10 из 18 55,6

От 26 до 55 лет 21 из 34 61,8

низации (КОЕ) Malassezia spp. при посеве с кожи и присутствием и количеством IgE-антител к Malassezia spp. в сыворотке крови (p <0,05, r=—0.033).

Между тем была обнаружена взаимосвязь уровня общего IgE в крови и наличия IgE-антител к Malassezia sрp. В обследованной группе пациентов уровень об-

а

M. furfur M. sympodialis +

12% M. furfur

4%

Рис. 3. Вид дрожжей, колонизирующих кожу больных атопи-ческим дерматитом с наличием (а) или отсутствием (б) IgE-антител к Malassezia spp.

щего IgE варьировал от 120 до 5670 кЕ/л. Показатель общего IgE у пациентов с наличием IgE-антител к Malassezia spp. был достоверно выше (p<0,001), чем у пациентов с отсутствием IgE-антител к Malassezia spp. (рис. 4). Уровень общего IgE не зависел от возраста, у 39,5% детей в возрасте до 5 лет он превышал 1000 кЕ/л.

ОБСУЖДЕНИЕ

Сенсибилизация к липофильным грибам рода Malassezia представляет собой патогномоничный признак атопического дерматита в отличие от других заболеваний атопического генеза (ринита и астмы). «Атопический марш» подразумевает закономерные трансформации одной нозологической формы в другую в различные возрастные периоды жизни. Так, в возрасте до 3 лет доминируют кожные проявления, типичные для атопического дерматита, до 7 лет — появляются симптомы аллергического ринита, трансформирующегося в бронхиальную астму после 7 лет. Существует совсем немного прогностических признаков, по которым можно в раннем детстве определить, по какому пути пойдет «атопический марш». Так, ладонная и подошвенная исчерченность, белый дермографизм — это симптомы хронического течения атопического дерматита [14].

Многие исследователи считают, что один из наиболее объективных признаков атопического дерматита, который проявляется на протяжении всей жизни, —

IgE общий, кЕ/л

4500 4000 3500 3000

ш 2500

g- 2000 ю о ш

та 1500

1000 500 0

-500

0 1 Наличие IgE-антител к Malassezia spp.

Mean О ±SE ±SD

Рис. 4. Уровень общего IgE у пациентов с наличием и отсутствием IgE-антител к Malassezia spp.

Мокроносоеа М.А. и соает. Возрастные особенности формирования сенсибилизации к грибам рода Malassezia у детей с атопическим.

это наличие IgE-антител к Malassezia spp. Причем исследования по возрастному мониторингу появления и динамики уровня IgE-антител к Malassezia spp. не проводились.

В настоящей работе оценивались возрастные особенности видового и количественного разнообразия грибов Malassezia spp. на коже и уровень IgE-антител к Malassezia spp. в сыворотке крови детей и взрослых с атопическим дерматитом. Видовое разнообразие Malassezia spp. на коже больных отличалось от данных, полученных другими исследователями. Наиболее часто у всех больных выделяли M. sympodialis, причем чаще всего именно в возрасте от 1 года до 15 лет. Это отличается от результатов работы японских исследователей, которые у детей с атопическим дерматитом выделяли преимущественно M. restricta, и результатов шведских ученых, выявлявших в ранней возрастной группе преимущественно M. obtusa и M. globosa [6, 7]. Достаточно сложно сказать, с чем связаны эти различия. Возможно влияние различных факторов: воздействие УФ-лучей и влажности, моющих средств и состава водопроводной воды, этнической принадлежности и популяционных особенностей. В одном мнение авторов едино: вид и плотность контаминации дрожжей не влияют на формирование сенсиби-

лизации к Malassezia spp.

Нами показано, что в 30,2% случаев IgE-антитела к Malassezia spp. появляются уже в первые годы жизни ребенка, страдающего атопическим дерматитом. Это отличается от данных L. Lange и соавт., которые нашли указанные антитела только у 17% детей с атопическим дерматитом, проживающих в Германии. Имеет ли данный признак региональное значение, также пока неизвестно [15].

Наличие связи между уровнем общего IgE и наличием IgE-антител к Malassezia spp. подтверждают полученные ранее результаты [8, 16]. Является ли это следствием поликлональной сенсибилизации или же служит специфическим симптомом, также пока неясно.

Проведенное исследование позволяет сделать следующие основные выводы:

1. Частота встречаемости IgE-антител к Malassezia spp. у детей составляет 30,2%, что в 2 раза ниже, чем у взрослых.

2. Вид, плотность колонизации дрожжей Malassezia spp. не влияют на формирование сенсибилизации к грибам.

3. Спектр колонизации кожи различными видами Malassezia spp. зависит от возраста больных атопичес-ким дерматитом.

ЛИТЕРАТУРА

1. Мокроносоеа М.А. Грибы рода Malassezia и атопический дерматит // Рос. аллергол. журн. 2008. № 1. С. 12—19.

2. Brasch J., Christophers E. Azelaic acid has antimycotic properties in vitro // Dermatology. 1993. Vol. 186. P. 55—58.

3. Leeming J.P., HollandK.T., BojarR.A. The in vitro antimicrobial effect of azelaic acid // Br. J. Dermatol. 1986. Vol. 115. P. 551—556.

4. Akamatsu H, Komura J., Asada Y. et al. Inhibitory effect of azelaic acid on neutrophil functions: a possible cause for its efficacy in treating pathogenetically unrelated diseases // Arch. Dermatol. Res. 1991. Vol. 283. P. 162—166.

5. Gupta A.K., Kohli Y. Prevalence of Malassezia species on various body sites in clinically healthy subjects representing different age groups // Med. Mycol. 2004. Vol. 42, № 1. P. 35—42.

6. Takahata Y., Sugita T., Kato H. et al. Cutaneous Malassezia flora in atopic dermatitis differs between adults and children // Br. J. Dermatol. 2007. Vol. 157, № 6. P. 1178—1182.

7. Sandström F., Faergemann J. Atopic dermatitis in adults: does it disappear with age? // Acta Derm. Venereol. 2006. Vol. 86, № 2. P. 135—139.

8. Nordvall S.L., Lindgren L., Johansson S.G. et al. IgE antibodies to Pityrosporum orbiculare and Staphylococcus aureus in patients with very high serum total IgE // Clin. Exp. Allergy. 1992. Vol. 22. P. 756—761.

9. Ashbee H.R., Gunning J., Holland K.T. et al. Titres of IgE specific to Malassezia furfur serovars A, B and C in patients

with pityriasis versicolor and controls // J. Investig. Dermatol. 1995. Vol. 105. P. 492.

10. HuangX, Johansson S.G., Zargari A. et al. Allergen cross reactivity between Pityrosporum orbiculare and Candida albicans // Allergy. 1995. Vol. 50. P. 648—656.

11. Lintu P., Savolainen J., Kalimo K. IgE antibodies to protein and mannan antigens of Pityrosporum ovale in atopic dermatitis // Clin. Exp. Allergy. 1997. Vol. 27. P. 87—95.

12. Zargari A., Harfast B., Johansson S.G.et al. Identification of allergen components of the opportunistic yeast Pityrosporum orbiculare by monoclonal antibodies // Allergy. 1994. Vol. 49. P. 50—56.

13. Selander C., Zargari A., Mollby R. et al. Higher pH level, corresponding to that on the skin of patients with atopic eczema, stimulates the release of Malassezia sympodialis allergens // Allergy. 2006. Vol. 61, № 8. P. 1002—1008.

14. Wahn U., von Mutius E. Childhood risk factors for atopy and the importance of early intervention // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. Vol. 107, № 4. P. 567—574.

15. Lange L., AlterN., Keller T., RietschelE. Sensitization to Malassezia in infants and children with atopic dermatitis: prevalence and clinical characteristics // Allergy. 2008. Vol. 63, № 4. P. 486—487.

16. Bayrou O., Pecquet C, Flahault A. et al. Head and neck atopic dermatitis and malassezia-furfur-specific IgE antibodies // Dermatology. 2005. Vol. 211, № 2. P. 107—113.

Поступила 05.08.09