Применение метода полимеразной цепной реакции для диагностики пародонтопатогенных микроорганизмов при ортопедическом лечении больных сахарным диабетом 2 типа съемными акриловыми протезами

МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ

Применение метода полимеразной цепной реакции для диагностики пародонтопатогенных микроорганизмов при ортопедическом лечении больных сахарным диабетом 2 типа съемными акриловыми протезами Шевкунова Н. А.

Шевкунова Наталья Алексеевна / Shevkunova Nataliy Alekseevna - кандидат медицинских наук,

доцент,

кафедра ортопедической стоматологии, стоматологический факультет,

Ижевская государственная медицинская академия, г. Ижевск

Аннотация: актуальность выбранной темы обусловлена необходимостью

проведения противовоспалительных мероприятий при обострении заболеваний пародонта у больных сахарным диабетом 2 типа в период адаптации к съемным акриловым протезам. К выбору антимикробных препаратов необходимо подходить с учетом, обнаруженных в слюне больных пародонтопатогенов и их чувствительности к антибиотикам.

Abstract: the relevance of the topic chosen due to the need for anti-inflammatory activities in the exacerbation of periodontal disease in patients with type 2 diabetes in the period of adaptation to a removable acrylic dentures. By the choice of antimicrobial drugs should be approached based on the detected in the saliva of patients paradontopatogenus and their sensitivity to antibiotics.

Ключевые слова: сахарный диабет 2 типа, частичная адентия, анализ ПЦР.

Keywords: type 2 diabetes partially, edentulous, PCR analysis.

Введение.

Каждые 10-15 лет число больных сахарным диабетом (СД) удваивается, в основном за счёт увеличения количества больных, страдающих сахарным диабетом 2 типа (СД2) [7, с.115]. Известно, что СД2 в большинстве случаев встречается у пациентов старше 40 лет и оказывает неблагоприятное влияние на ткани пародонта и целостность зубов, что приводит к раннему образованию дефектов зубных рядов и увеличению обращаемости таких больных за стоматологической помощью, при этом 54 % нуждаются в ортопедической стоматологической помощи [3, с.34].

Зубные протезы создают ретенционные пункты для образования зубного налета, что приводит к обострению заболеваний пародонта, а это в свою очередь, помимо общего фактора - диабета, является сложной проблемой для любого стоматолога при реабилитации данной категории пациентов [1, с.90; 4, с.28; 8, с.935]. В ряде случаев успешному лечению пародонтита мешает патогенная микрофлора полости рта. На сегодняшний день качественный состав основных «провокаторов» развития пародонтита известен. В эту группу входят Prevotella intermedia, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis [9, с.2111; 10, с.111]. Молекулярно-генетический метод количественного анализа

анаэробных пародонтопатогенных микроорганизмов - ПЦР (полимеразная цепная реакция) позволяет обнаружить не только «маркеров» пародонтита, но также и гены, кодирующие резистентность к антибиотикам [6, с.520; 5, с.2]. Благодаря анализу

полученных результатов, стоматолог может выбрать необходимый препарат для проведения противовоспалительных мероприятий в каждом конкретном случае [5, с. 3].

172

Цель исследования - определить эффективность применения ПЦР для определения состава пародонтопатогенных микроорганизмов слюны при ортопедическом лечении больных СД2 типа частичными съемными акриловыми протезами.

Материалы и методы.

В исследование были включены 43 человека в возрасте от 48 до 60 лет, которые были разделены на 2 группы. Первую группу составили 19 больных СД 2 типа (12 женщин и 7 мужчин). В обследование включались пациенты с отсутствием более 6 зубов на одной из челюстей 1 или 2 классов по Кеннеди. Среднее число отсутствующих зубов составляло 12,2±1,6. Длительность заболевания СД 2типа была в среднем 6,8± 1,7 года. Контроль уровня сахара в крови осуществлялся пациентами индивидуальными гликометрами, средний уровень сахара в исследуемой группе составлял 9,5-1,2 ммоль/л.

Вторая группа состояла из 24 пациентов (15 женщины и 9 мужчин) с аналогичными дефектами зубного ряда при отсутствии инфекционных и другие соматические заболеваний.

Ортопедическое стоматологическое лечение всем пациентам проводилось с применением частичных съёмных протезов с акриловым базисом. Перед лечением проводились санация и профессиональная гигиена полости рта. Частичные съемные пластиночные протезы были изготовлены из базисной пластмассы одного производителя в зуботехнической лаборатории Республиканской стоматологической поликлиники г. Ижевска.

Для определения видового состава микрофлоры слюны использовали молекулярно-генетический метод обнаружения микроорганизмов - полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей обратной ДНК-гибридизацией с праймерами пародонтопатогенных бактерий. Забор материала и исследование производили в «Центре новых диагностических технологий. Медицинская лаборатория» г. Ижевска. ПЦР диагностику проводили у каждого пациента два раза - до ортопедического лечения и спустя месяц после наложения съемных пластиночных протезов.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы «Statisticа 6.0» Рассчитывались среднеарифметические значения количественных показателей, представленных в тексте в виде M ± m, где M - среднее выборочное, m -ошибка средней. Проверка гипотезы о равенстве генеральных средних в двух сравниваемых группах проводилась с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни для независимых выборок. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимался равным 0,05.

Результаты и обсуждение.

При осмотре полости рта перед ортопедическим воспалительные изменения в тканях пародонта встречались у больных СД2 в 100 % случаев: у 44,3 % пациентов данные изменения соответствовали лёгкой степени поражения пародонта, у 53,6 % пациентов были выявлена средняя степень тяжести и у 2,1 % - тяжёлая. При этом наблюдалась прямая зависимость тяжести поражения пародонта от уровня сахара крови: при легкой степени он составлял 7,2±1,2 ммоль/л., при средней 9,1±2,4 ммоль/л., при тяжелой 12,4±1, 6 ммоль/л., что согласуется с литературными данными [2, с.10]. У пациентов без соматической патологии воспалительные изменения в тканях пародонта встречались в 32,8% случаев. Легкая степень поражения наблюдалась в 24,4% случаев (р<0,05), средняя в 8,4%(р<0,01), тяжелая степень не диагностировалась.

В результате проведенных исследований методом мультипраймерной ПЦР слюны у пациентов с дефектами зубного ряда до ортопедического лечения из всех пародонтопатогенов наиболее часто встречалась P. gingivalis - у 44,74% больных СД2 и 41,18% в группе сравнения (р>0,02). На втором месте по частоте обнаружения у

173

больных СД2 - T.denticola -54,39 %, при 15,29 % у лиц без диабета (р<0,01). Частота встречаемости P. intermedia 24,21% и 28,10% соответственно (р<0,05), а A. Actinomycetemcommitans (31,11% и 36,49% ) практически не отличалась в исследуемых группах (р>0, 02). B. fonythus чаще обнаруживался у пациентов без диабета (29,41%), чем у пациентов с СД2 (12,35%, р<0,01).

При ортопедическом лечении на этапах коррекции зубного протеза были выявлены воспалительные изменения в виде гиперемии, эрозий и язв на слизистой оболочке протезного ложа в области границ протеза, а также в области повышенного давления базиса протеза у пациентов обеих групп. У больных СД2, использующих частичный съёмный протез, признаки механической травмы встречались в 80 % случаев, а в группе сравнения в 30 % случаев (р<0,01). После рациональной коррекции зубных протезов данные симптомы обнаружены не были.

Заболевания пародонта через месяц после наложения зубных протезов у больных СД2 диагностировались в 15,2 % в лёгкой степени (р<0,001), в 73,1 % случаев была выявлена средняя степень(р<0,05) и в 11,7 % - тяжёлая (р<0,01). В группе сравнения при пользовании частичными съемными акриловыми протезами воспалительные изменения в тканях пародонта встречались в 47,2% случаев: легкая степень поражения наблюдалась в 28,8% (р<0,05), средняя в 18,4% (р<0,01).

При исследовании слюны больных СД2 спустя месяц после ортопедического лечения частичными съемными акриловыми протезами, состав пародонтопатогенных бактерий изменялся в сторону увеличения концентрации T. denticola (81,3%) и P. gingivalis (68,1%)(р<0,01), при частоте встречаемости B. forsythus (14,6%), P. intermedia (26,8%) и A. actinomycetemcomitans (34,8%) (р<0,05).

В группе сравнения наибольшее увеличение частоты встречаемости наблюдалось B. forsythus (75,9%), незначительное P. intermedia (35,2%), A. actinomycetemcomitans (47,3%) и P. gingivalis (48,4%) (р<0,05), при отсутствии достоверных изменений T. denticola (16,7% (р>0, 01).

Выводы.

Таким образом был изучен видовой состав основных пародонтопатогенов (P. gingivalis, P. intermedia, В. forsythus, А. actinomycetemcomitans, Т. denticola) у больных СД2 при ортопедическом лечении частичными съемными акриловыми протезами с помощью ПЦР метода. Установлено, что наиболее часто у данной категории пациентов встречается бактериальный синергизм P. gingivalis и T. Denticola, что согласуется с данными литературы [11, с. 113]. При пользовании частичными съемными акриловыми протезами количество P. gingivalis и T. Denticola увеличивается в 1,5 раза. Ухудшение состояния тканей пародонта при пользовании съемными акриловыми протезами проявлялось в увеличении в 5 раз числа пациентов с тяжелой степенью пародонтита.

Исходя из результатов исследования, можно сделать вывод о том, что в данном случае ПЦР используется как специфический метод диагностики пародонтопатогенных микроорганизмов, который помогает врачу - ортопеду дифференцированно подходить к выбору схемы лечения в зависимости от выявленных в слюне пародонтогенных микроорганизмов и их чувствительности к антибиотикам. Полученные данные состава микробиоценоза слюны, при средней и тяжелой степенях пародонтита, позволяют своевременно назначать адекватную антибактериальную терапию, что дает возможность избежать осложнений при адаптации и пользовании съемными акриловыми протезами у больных СД 2 типа.

Литература

1. Бадалов P. M. Адаптация больных сахарным диабетом к съемным конструкциям

зубных протезов из акриловых пластмасс. / P. M. Бадалов, З. И. Гараев /

Стоматология нового тысячелетия: Сб. тез. - М., - 2000, С.90-91.

174

2. Доржиева З.В. особенности клиники и патогенеза хронического

генерализованного пародонтита у больных сахарным диабетом: Автореф. дис. ...канд. мед. наук. - Иркутск, 1997. - С.17.

3. Жирнова А.И., Щербаков А.С., Червинец Ю.В. Клинические особенности тканей полости рта у пациентов с сахарным диабетом, проходящих ортопедическое стоматологическое лечение протезами из различных конструкционных материалов // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 4. - С.34

4. Звигинцев М.А. Стоматологическая реабилитация больных сахарным диабетом / М.А. Звигинцев // - Омск, - 1998. С. 1-43.

5. Костюк С.А., Кулага О.К., Хворик Д.Ф. Новые аспекты клинического применения полимеразной цепной реакции. - «Медицинские новости» <#"justify">.

6. Ребриков Д.В., Трофимов Д.Ю. ПЦР «в реальном времени»: подходы к анализу данных. Прикладная биохимия и микробиология. 2006.- № 42. -С.520—528.

7. Фурцев Т.В. Нуждаемость и состояние ортопедической стоматологической помощи у больных сахарным диабетом /Т.В. Фурцев, Г.Т. Салеева // - Казань, -2009 - С. 115-117.

8. American Academy of Periodontology. Diabetes and periodontal desease (position paper). - 1999.-Vol. 70.-Р.935-949.

9. Maiden M.F., Cohee P., Tanner A.C. Proposal to conserve the adjectival form of the specific epithet in the reclassification of Bacteroides forsythus Tanner et al. gen. nov., comb. nov. Int J Syst Evol Microbiol 2003; 53:2111—2112.

10. Simonson L.G., McMahon K.T., Childers D.W., Morton H.E. Bacterial synergy of Treponema denticola and Porphyromonas gingivalis in a multinational population. Oral Microbiol Immunol 1992; 7: 111—112.

11. Socransky S.S., Haffajee A.D., Dzink J.L., Hillman J.D. Associations between microbial species in subgingival plaque samples. Oral Microbiol Immunol 1988; 3:113.

175