СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
METHOD FOR PRODUCING THERAPEUTIC AGENT POSSESSING ANTIOXIDANT ACTIVITY

Изобретение относится к фармацевтике и медицине и касается способа получения средства из красных листьев винограда культурного, собранных в фазу конца вегетации растения и обладающего антиоксидантной активностью.
Виноград культурный (Vitis vinifera L.) сем. Виноградовые (Vitaceae) - одно из самых древних культурных растений Евразии, представляет собой крупную лиану, достигающую 30-40 м длины. Растет виноград культурный в умеренных и субтропических регионах. В настоящее время широко культивируется на Кавказе, в Средней Азии, в Молдавии, на Украине, в южных районах России.
Наряду с широким использованием в пищевой промышленности, виноград является перспективным источником биологически активных веществ.
Известен способ получения сухого водного экстракта из кожуры темных сортов винограда (Vitis vinifera L.), входящего в состав лекарственного препарата «Вита-плант». Способ заключается в экстрагировании водой методом перколяции измельченного сырья (кожуры красных сортов винограда). Полученный жидкий экстракт сушат распылительной сушкой и далее просеивают. Сухой экстракт представляет собой порошок темно-красного цвета со специфическим запахом (патент RU 2274469, МПК А61К 36/78, 2004).
Также известен способ получения сухого экстракта из гребней винограда, обладающего антиалкогольным действием. Способ заключается в следующем: гребни винограда, предварительно высушенные при 40-50°С и измельченные до размеров частиц, равных 0,1-0,5 см, экстрагируют при соотношении воды и этанола в пределах 34-46:6-14, температуре 45-55°С, а полученный экстракт подвергают отгонке при температуре 45-50°С и остаточном давлении 300-400 мм рт. ст. (патент SU 10772309).
Недостатками данных способов является то, что в качестве экстрагента используется вода. Поскольку в водное извлечение переходят фенольные соединения преимущественно гликозидной природы, кроме того, концентрирование водного экстракта занимает длительное время, в течение которого биологически активные вещества подвергаются воздействию нагревания. Данное обстоятельство может привести к снижению фармакологической активности полученного экстракта.
Наиболее близким к заявленному изобретению по назначению и по стадиям технологического процесса является способ получения основного компонента пригодной для распыления композиции. Данный способ (выбранный в качестве прототипа) заключается в том, что листья красного винограда собирают, сушат, измельчают, режут на кусочки и подвергают в течение 6-10 ч экстракционной обработке водой или этанолом или их смесью при повышенной температуре и при необходимости концентрируют (RU 2482864 С2, МПК А61К 36/87, 2008).
В отличие от прототипа в заявленном изобретении в качестве сырья используют красные листья винограда культурного (Vitis vinifera L.) сорта Каберне, заготовленные в фазу конца вегетации растения. В этот период растение вместо хлорофилла, необходимого летом для фотосинтеза, начинает синтезировать антоцианы, придающие листьям красный цвет.
Кроме того, в этот период вегетации в целях адаптации к холодной погоде, растение вырабатывает повышенные количество ресвератрола, что делает красные листья более ценным источником биологически активных веществ.
Следует учитывать также целесообразность сбора данного растительного сырья в период полного покраснения листьев, поскольку в климатических условиях нашей страны большинство виноградников находится в зоне рискованного земледелия, в связи с чем для улучшения условий зимовки перед укрытием, как правило, красные листья целенаправленно обрывают, что практикуется в первую очередь в Ростовской области. При этом красные листья являются вторичными ресурсами виноградарства и их сбор не вредит использованию винограда культурного в качестве сырья пищевой промышленности и виноделия.
Цель изобретения - получение средства из красных листьев винограда культурного, обладающего антиоксидантной активностью.
Поставленная цель достигается тем, что растительный материал (сырье) измельчают до размера частиц 1-7 мм, предпочтительно 3-5 мм; трижды экстрагируют 10-70% водно-спиртовой смесью, предпочтительно 20-50%; полученное извлечение объединяют и концентрируют под вакуумом. Далее концентрированный экстракт очищают центрифугированием при 3000-7000 об/мин, предпочтительно 5000-7000 об/мин. Очищенный экстракт сушат и измельчают.
Получают готовый продукт - сухой экстракт красных листьев винограда культурного с содержанием суммы фенольных соединений в пересчете на рутин не менее 5%, ресвератрола не менее 0,005%.
Виноград культурный является самым распространенным видом, широко культивируемым на территории РФ и успешно используемым для селекции. В настоящее время известно около 4 тысяч сортов винограда. В связи с этим, для обоснования выбора лекарственного сырья нами проведено исследование красных листьев широко культивируемых сортов винограда, таких как Саперави, Голубок, Каберне, Красностоп Золотовский. В указанных сортах определено содержание экстрактивных веществ, суммы фенольных соединений в пересчете на рутин и ресвератрол (Таблица 1).
Согласно данным таблицы 1 наибольшее количество экстрактивных веществ, фенольных соединений и ресвератрола содержится в красных листьях винограда культурного сорта Каберне.
Наряду с этим, проведено биотестирование в опытах in vitro с использованием глутатионредуктазной и пируваткиназной реакций сухих экстрактов, полученных из красных листьев винограда культурного 4 сортов (Л.А. Оганесян и др. // Напитки. Технологии и инновации. - 2012. - №10. - С. 63-65).
На основании биотестирования установлено, что образцы сорта Каберне обладают более высокой скоростью экспериментальных реакций и тем самым оказывают более выраженный антиоксидантный эффект (Таблица 2).
Таким образом, в качестве сырья для получения средства, обладающего антиоксидантной активностью, предпочтительно использование красных листьев винограда культурного сорта Каберне.