Использование хроматографических методов в анализе лоратадина

4. Мазитова М. И., Ляпахин А. Б. Безгазовая лапароскопия в гинекологии как альтернатива классической эндоскопии // Казанский медицинский журнал. - 2008. - Т. 89. № 4. - С. 498-502.

5. Малярчук В. И., Русанов В. П., Иванов В. А, Малюга В. Ю. Хирургия калькулезного холецистита в геронтологической практике // Клиническая геронтология. - 2004. - Т. 10. № 2. - С. 22-28.

6. Мамсуров М. Э. Лечение острого холецистита у больных с повышенным операционным риском: Автореф. дис. канд. мед. наук. 14.00.27 / М. Э. Мамсуров; Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова. - СПб, 2009. - 22 с.

7. Нестеренко Ю. А, Михайлусов С. В. Острый холецистит у пожилых и стариков // Клиническая геронтология. - 2006. - Т. 12. № 6. - С. 40-46.

8. Патент на изобретение № 2372045 МПК8 А61 В19/00, А61 В17/02. Веерообразный лапаролифт / С. А. Касумьян, А. А. Ма-куров, И. В. Абраменкова, В. И. Соловьев. 2008116916; заявл. 28.04.2008., 10.11.2009.

9. Тезяев В. В. Возможности использования мини-лапаротом-ной холецистэктомии при остром холецистите у больных пожилого и старческого возраста // Нижегородский медицинский журнал. - 2005. - № 2. - С. 124-128.

10. Шулутко А. М., Агаджанов В. Г. «Открытая» лапароскопия: пути улучшения хирургического лечения калькулезного холецистита у пациентов пожилого и старческого возраста // Клиническая геронтология. - 2004. - Т. 10. № 2. - С. 39-42.

11. Chousleb Mizrahi E., Tousle Kalach A., ShuchleibChaba S. Actual status of laparoscopic cholecystectomy // Gastroenterol mex. -2004. - Vol. 1. - P. 28-35.

12. Connor S., Garden O. J. Bile duct injury in the era of laparoscopic cholecystectomy // Br. j. surg. - 2006. - Vol. 93. - P.158-168.

13. Ishizaki Y., Miwa K., Yoshimoto J. Conversion of elective laparoscopic cholecystectomy to open cholecystectomy between 1993 and 2004 // Br. j. surg. - 2006. - Vol. 93. -P.987-991.

14. Korolija D, Sauerland S., Wood-Dauphinee S. Evaluation of quality of life after laparoscopic surgery. Evidence-based guidelines of the European association for endoscopic surgery // Surg. endoscopy. - 2004. - Vol. 18. - P. 879-897.

15. Tambyraja A. L., Kumar S., Nixon S. J. Outcome of laparoscopic cholecystectomy in patients 80 years and older // World j. surgery. -2004. - Vol. 28. - P. 151-156.

Поступила 11.02.2011

О. О. НОВИКОВ1, Е. Т. ЖИЛЯКОВА2, Н. Н. САБЕЛЬНИКОВА1, Г. В. ВАСИЛЬЕВ1, Т. С. ПОЛУХИНА1, М. Ю. НОВИКОВА2, М. В. ПОКРОВСКИЙ1, М. Ю. ЧАЙКИНА2

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В АНАЛИЗЕ ЛОРАТАДИНА

кафедра фармацевтической химии и фармакогнозии;

2кафедра фармацевтической технологии, управления и экономики здравоохранения ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет»,

Россия, 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85, тел. (4722) 301425. E-mail: novikov@bsu.edu.ru

В статье приведены результаты разработки методик контроля качества лоратадина методами хроматографии в тонком слое сорбента и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Разработана методика определения примесей в субстанции лоратадина. Разработанный набор методов контроля качества лоратадина рекомендован авторами для его определения в различных лекарственных объектах.

Ключевые слова: лоратадин, ТСХ, ВЭЖХ, примеси, контроль качества.

O. O. NOVIKOV1, E. T. ZHILYAKOVA2, N. N. SABEL’NIKOVA1, G. V. VASILEV1, T. S. POLUKHINA1, M. Yu. NOVIKOVA2, M. V. POKROVSKY1, M. Yu. CHAIKINA2

APPLICATION OF CHROMATOGRAPHIC METHODS IN LORATADINE'S QUALITY CONTROL

1Department of pharmaceutical chemistry and pharmacognosy of Belgorod state university; department of pharmaceutical technology, management and economics of public health service

of Belgorod state university,

Russia, 308015, Belgorod, Pobedy st., 85, tel. (4722) 30-14-25. E-mail: Novikov@bsu.edu.ru

The results of elaborating of quality control methods of loratadine are represented in article. TCL and HPLC methods were used in estimation and quantification of loratadine. Estimation of foreign substances in loratadine was established. Authors recommend these quality control methods for analysis of loratadine in different drugs.

Key words: loratadine, TCL, HPLC, foreign substances, quality control.

Введение По мнению исследователей, несмотря на то что

Проблема аллергии сегодня - одна из важнейших аллергические болезни известны человеку более двух

для медицины. По данным ВОЗ, аллергические прояв- с половиной тысяч лет, в современном мире пробле-

ления встречаются у 20% населения мира. мы, связанные с вопросами диагностики, терапии

Кубанский научный медицинский вестник № 2 (125) 2011 УДК 615.31

Кубанский научный медицинский вестник № 2 (125) 2011

и профилактики аллергопатологий, остаются весьма актуальными.

Начиная с 50-х годов ХХ века было синтезировано большое количество препаратов для лечения аллергии -антигистаминных лекарственных средств. Данные лекарства были найдены в ряду различных групп азотсодержащих органических соединений, относящихся в основном к производным этилендиамина, простых эфиров диметиламиноэтанола, пиперазина, 10-алкил-фенотиазина, пиперидинилиденциклогептана.

В настоящее время одним из наиболее перспективных антигистаминных препаратов с хорошим фармакологическим профилем является лоратадин.

Лоратадин, производное пиперидинилиденциклогептана - блокатор Н1-гистаминовых рецепторов (длительного действия), который подавляет высвобождение гистамина и лейкотриена С4 из тучных клеток [1]. Лоратадин предупреждает развитие и облегчает течение аллергических реакций, обладает противоаллергическим, противозудным, противоэкссудативным действием, уменьшает проницаемость капилляров, предупреждает развитие отека тканей, снимает спазмы гладкой мускулатуры [2]. Противоаллергический эффект развивается через 30 мин, достигает максимума через 8-12 ч. и длится 24 ч. Лоратадин не влияет на ЦНС и не вызывает привыкания (т. к. не проникает через гематоэн цефалический барьер). Молекулярная масса - 382,88 г/моль.

Для определения подлинности лоратадина в настоящее время используют в основном физико-химические методы (ИК и УФ-спектроскопию), чистоту контролируют методом тонкослойной хроматографии [4]. Количественное определение субстанции лоратадина проводят методом неводного титрования в среде ледяной уксусной кислоты, для анализа лекарственных форм используется метод УФ-спектрофотометрии.

Хроматографические методы как одни из наиболее экспрессных и объективных в фармацевтическом анализе для лоратадина изучены недостаточно [3]. Поэтому целью настоящего исследования явилась разработка хроматографических методов контроля качества лоратадина для стандартизации субстанции и лекарственных форм на его основе.

Для реализации поставленной цели необходимо было изучить хроматографическое поведение лора-тадина в условиях методов тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Методика исследования

Тонкослойная хроматография

Приготовление испытуемого раствора. 3,0 г лората-дина количественно переносили в сосуд вместимостью 20 мл, прибавляли 10 мл метанола и взбалтывали в течение 15 мин. Полученную смесь фильтровали через предварительно промытый бумажный фильтр «синяя лента».

Приготовление раствора сравнения лоратадина. 5 мг ГСО лоратадина растворяли в 10 мл метанола.

На линию старта хроматографической пластинки SilicaGel 60 F254 размером 5 х 15 см микрошприцем наносили 50 мкл испытуемого раствора, рядом наносили эквивалентное количество раствора ГСО лоратадина. Пластину помещали в хроматографическую камеру и хроматографировали восходящим способом в системе «диэтиловый эфир - диэтиламин» (40: 1). Когда фронт растворителей достигал около 10 см от линии старта, пластинку вынимали, сушили в токе воздуха до исчезновения запаха диэтиламина и просматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме испытуемого раствора наблюдали одно пятно, расположенное на одном уровне пятна ГСО лоратадина.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Приготовление испытуемого раствора. Точную навеску лоратадина количественно переносили в сосуд вместимостью 20 мл, прибавляли 10 мл метанола и перемешивали в течение 30 мин, затем смесь фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 25 мл, объём полученного фильтрата доводили до метки метанолом и перемешивали.

Полученный раствор дополнительно фильтровали через мембранный фторопластовый или нейлоновый фильтр с размером пор 0,47 мкм, отбрасывая первые

2 мл фильтрата.

Приготовление раствора сравнения лоратадин. Около 50 мг (точная навеска) ГСО лоратадина помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 40 мл метанола, доводили объём раствора метанолом до метки и перемешивали.

5,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объём раствора метанолом до метки и перемешивали. Полученный раствор фильтровали через мембранный фторопластовый или нейлоновый фильтр с размером пор 0,47 мкм, отбрасывая первые 2 мл фильтрата.

По 10 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения лоратадина хроматографировали на жидкостном хроматографе с УФ спектрофотометрическим детектором

Приготовление раствора для проверки пригодности хроматографической системы. 2 мг СО дезлоратади-на (примесь D лоратадина) и 2 мг примеси F CRS EP лоратадина помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 40 мл метанола, доводили объём раствора до метки метанолом и перемешивали.

По 10 мкл испытуемого раствора, раствора сравнения лоратадина и раствора для проверки пригодности хроматографической системы хроматографировали на жидкостном хроматографе с УФ спектрофотометрическим детектором в следующих условиях:

- колонка размером 150 х 4,0 мм, заполненная сорбентом «ReproSil - Pur Basic C18», размер частиц

3 мкм или аналогичная, для которой выполняются требования к пригодности хроматографической системы:

- подвижная фаза: фосфатный буферный рН 2,5 -ацетонитрил (30 : 23);

- скорость подвижной фазы - 0,8 мл/мин;

- температура колонки 35° С;

- длина волны детектирования - 220 нм.

Содержание лоратадина в одной дозе препарата

(Х), в миллиграммах, рассчитывали по формуле:

^ _ Si х Шо х К* х 5 х х х Р _ Si х ni „ х F* х a х Р

£о х п 1 х 5 0 х X X х 1 0 0 S> х т х 5000X

где Б| - среднее значение площадей пиков лората-дина, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

Бо| - среднее значение площадей пиков лората-дина, вычисленное из хроматограмм раствора сравнения;

то - масса навески СО лоратадина, в миллиграммах;

т - масса навески препарата, в граммах;

Vk - вместимость мерной колбы, используемой для приготовления испытуемого раствора;

а - среднее значение массы препарата в единице упаковки;

Р - содержание основного вещества в СО лората-дина.

Содержание лоратадина в препарате в перерасчете на среднюю массу одной дозы должно быть от 2,25 до 2,75 мг (или 4,5 до 5,5 мг).

Результаты считаются достоверными, если выполняются следующие условия:

- эффективность хроматографической системы, рассчитанная по пикам лоратадина на хроматограммах раствора сравнения лоратадина, должна быть не менее 5000 теоретических тарелок;

- относительное стандартное отклонение площадей пиков лоратадина на хроматограммах испытуемого раствора и раствора сравнения лоратадина должно быть:

для двух параллельных хроматограмм - 0,51%;

для трех - не более 1,34%;

для четырех - не более 1,92%;

для пяти - 2,37%;

- коэффициент разделения пиков примеси F и лоратадина на хроматограммах раствора для проверки пригодности хроматографической системы должен быть не менее 1,8.

Приготовление фосфатного буферного раствора рН 2,5. 1,1 г лития дигидрофосфата растворяли в 1000 мл воды и при непрерывном перемешивании прибавляли кислоту фосфорную концентрированную до получения раствора со значением рН, равным 2,50 ± 0,1.

Содержание лоратадина (X) в одной дозе, в процентах, от заданного количества рассчитывали по формуле:

^ _ 5/ х т„ х Уо х 5 х Р х 1 0 0 _ & х т „ х У о х а х Р ^

где Б. - среднее значение площадей пиков лоратадина, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

Бо. - среднее значение площадей пиков лоратадина, вычисленное из хроматограмм раствора сравнения;

то - масса навески СО лоратадина, в миллиграммах;

Vk - вместимость мерной колбы, используемой для приготовления испытуемого раствора;

Ь -масса лоратадина в заданной дозе препарата в миллиграммах;

Р - содержание основного вещества в СО лората-дина.

Содержание лоратадина в единице условной дозы находилось в пределах ±10%.

Определение сопутствующих примесей

Определение проводили одновременно с количественным определением лоратадина методом ВЭЖХ.

Приготовление раствора сравнения. 25 мкл испытуемого раствора, приготовленного, как указано выше, помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объём раствора метанолом до метки и перемешивали.

Хроматограмма испытуемого раствора, содержащего лоратадин

123

Кубанский научный медицинский вестник № 2 (125) 2011

УДК 616.248-08:615.234 Кубанский научный медицинский вестник № 2 (125) 2011

Содержание каждой примеси (X) в препарате, в процентах от количества действующего вещества, рассчитывали по формуле:

где Б. - среднее значение площади примеси, рассчитанное из хроматограмм испытуемого раствора;

Бо. - среднее значение площади пика лоратадина, рассчитанное из хроматограмм раствора сравнения;

F - коэффициент пересчета, учитывающий отличие оптических коэффициентов поглощения примесей от лоратадина.

Результаты и обсуждение

Таким образом, изучено хроматографическое поведение лоратадина с применением метода тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Подобраны условия хроматографирования лоратадина в тонком слое сорбента, а именно в качестве системы использованы диэтиловый эфир - диэтиламин (40: 1), что можно применять для определения подлинности субстанции лоратадина и контроля его чистоты в лекарственных формах, в том числе в смеси с другими веществами. Определены условия хроматографирования лоратадина методом обращённофазной высокоэффективной хроматографии. Установлено, что время хроматографирования испытуемого раствора модельного препарата составило около 3,5 времени удерживания пика лоратадина.

Времена удерживания основного пика на хроматограммах испытуемого раствора, полученные при количественном определении лоратадина, совпадали со временами удерживания пика лоратадина на хроматограммах раствора сравнения лоратадина (рисунок).

Установленные относительные времена удерживания пиков сопутствующих примесей лоратадина: примесь D - около 0,2; примесь В - около 0,9; примесь F -около 0,9; примесь Е - около 1,1; примесь А - около 2,4; примесь С - около 2,7. Все пики на хроматограмме испытуемого раствора с временами удерживания меньше времени удерживания примеси D не учитывались.

Для примеси А коэффициент F равен 1,7; для примеси Е - 3,4; для примеси F - 1,6, для остальных примесей - 1,0.

Все пики на хроматограмме испытуемого раствора с временами удерживания меньше времени удерживания примеси D и пики, площадь которых составляет 1/10 среднего значения площади пика лоратадина, рассчитанного из хроматограмм раствора сравнения, не учитывались.

Содержание каждой отдельной примеси не превышало 0,1%.

Суммарное содержание примесей не превышало 0,5%.

Таким образом, полученные экспериментальные данные доказывают, что применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии даёт по сравнению с другими физико-химическими методами (УФ-, ИК-спект-роскопия) исчерпывающую аналитическую характеристику лоратадину. То есть, используя метод ВЭЖХ, можно подтвердить подлинность лоратадина, нормировать количество примесей в нём, а также позволяет провести количественное определение как чистой субстанции, так и лекарственных форм на его основе.

Работа выполнена в рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы, Государственный контракт № 14.740.11.0119 от 8 сентября 2010 года, проект «Комплексные фармакологические и технологические исследования ряда субмикроструктури-рованных (наноструктурированных) фармацевтических субстанций с доказанными измененными физико-химическими свойствами».

ЛИТЕРАТУРА

1. Belsito D. V. Second-generation antihistamines for the treatment of chronic idiopathic urticaria // J. drugs dermatol. - 2010. - May, № 9 (5). - Р. 503-512.

2. Camelo-Nunes I. C. New antihistamines: a critical view // J. pediatr (Rio J). - 2006. - Nov, № 82 (5 Suppl). - Р. 173-180.

3. Lu J., Wei Y. C., Markovich R. J., Rustum A. M. Development and validation of a novel stability-indicating reversed-phase highperformance liquid chromatography method for assay of loratadine and determination of its related compounds // J. AOAC Int. - 2010. -May-Jun., № 93 (3). - Р. 891-903.

4. Patel B. N., Sharma N., Sanyal M., Shrivastav P. S. LC-MS-ESI for the determination of loratadine and descarboethoxyloratadine in human plasma // J. chromatogr. sci. - 2010. - Jan, № 48 (1). -Р. 35-44.

Поступила 20.12.2010

С. А. ПАВЛИЩУК, Н. В. ЛАБИНЦЕВА

ВИЗУАЛЬНО-АНАЛОГОВАЯ ШКАЛА КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ЭФФЕКТИВНОСТИ БАЗИСНОЙ ТЕРАПИИ АСТМЫ

Кафедра терапии № 1 ФПК и ППС Кубанского государственного медицинского университета, Россия, 350086, г. Краснодар, ул. 1 Мая, 167, тел. 8 (861) 252-77-41

На основании анализа опроса и анкетирования пациентов до и через год после начала базисной терапии астмы в трех различающихся по фармакотерапии подгруппах (фиксированные комбинации, сочетанное применение ингаляционных кортикостероидов с бета-агонистами длительного действия и избирательное использование ингаляционных кортикостероидов) установлено, что контролирующий эффект достигнут у большинства пациентов, принимавших фиксированные комбинации и сочетание ингаляционных кортикостероидов с бета-агонистами длительного действия.

Ключевые слова: астма, ингаляционные кортикостероиды, бета-2-агонисты длительного действия, визуально-аналоговая шкала.