Полиморфизм генов-кандидатов нарушений гемостаза у пациенток с преждевременными родами

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Статья поступила в редакцию 5.04.2015 г.

Белокриницкая Т.Е., Анохова Л.И., Страмбовская Н.Н., Тарбаева Д.А., Фролова Н.И.

Читинская государственная медицинская академия,

г. Чита

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА У ПАЦИЕНТОК С ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫМИ РОДАМИ

Изучен полиморфизм генов FM:20210G>A, FV:1691G>A, FVM:10976G>A, FXIM:103 G>T, FGB:455G>A, ITGA2:807C>T, ITGB3:1565T>C, PAI-1:6755G>4G у 132 пациенток c преждевременными родами (основная группа) и 101 женщины с родами в срок (группа сравнения). Число носительниц полиморфизма генов FII, FVII, FXIII, имеющих мутантный аллель, было существенно выше среди пациенток с преждевременными родами. Генотипы PAI-1:675 5G5G и PAI-1:675 5G4G также ассоциировались с преждевременными родами. Сделано заключение, что полиморфизмы генов протромбина (FII: 20210G>A), проконвертина (F7:0976 G>A), фибринстабилизирующего фактора (F13:103 G>G и ингибитора тканевого активатора плазминогена (PAI-1:675 5G>4G) могут быть молекулярными предикторами преждевременных родов. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: полиморфизм генов; гемостаз; преждевременные роды.

Belokrynitskaya T.E., Anochova L.I., Strambovskaya N.N., Tarbaeva D.A., Frolova N.I.

Chita State Medical Academy, Chita

POLYMORPHISMS OF GENE-CANDIDATES OF HEMOSTASIS DISORDER IN PATIENTS WITH PRETERM LABOR

Genes polymorphisms of FII:20210G>A, FV:1691G>A, FVII:10976G>A, FXIII:103 G>T, FGB:455G>A, ITGA2:807C>T, ITGB3:1565T>C, PAI-1:6755G>4G were studied in 132 women with preterm labor (main group), and 101 pregnancies with term delivery (comparison group). The number of carriers of genes FII, FVII, FXIII mutant allels was higher in the main group than in the normal controls. Genotypes PAI-1:675 5G5G and PAI-1:675 5G4G were associated with preterm labor too. We concluded, that polymorphisms of prothrombin gene (FII: 20210G>A), proconvertin gene (F7:0976 G>A), fibrin stabilising factor (F13:103 G>G and inhibitor of tissue activator of plasminogene (PAI-1:675 5G>4G) may be used as molecular predictors of preterm labor.

KEY WORDS: genetic polymorphism; hemostasis; preterm labor.

Медико-социальная значимость преждевременных родов обусловлена высокой частотой репродуктивных потерь и инвалидиза-ции детей. Особо остро медицинские, этические и экономические проблемы, связанные с рождением детей с экстремально низкой массой тела, встали в России с началом регистрации и выхаживания 500граммовых младенцев [1]. Известно, что в генезе преждевременных родов основное значение принадлежит плацентарной недостаточности, которая приводит к гипоксии, задержке развития и гибели плода [2]. С развитием беременности во всех звеньях гемостаза происходят адаптационные изменения, направленные на поддержание нормальной деятельности фетоплацентарной системы и остановку кровотечения из сосудов плацентарной площадки после отделения последа [3]. Срыв адаптационных механизмов гемостаза во время беременности и родов, особенно на фоне генетической предрасположенности к тромбозам, способен стать одной из причин акушерских осложнений — преждевременных родов, преэклампсии, задержки роста плода, гибели плода, несостоявшегося аборта и др. [4-6].

Корреспонденцию адресовать:

БЕЛОКРИНИЦКАЯ Татьяна Евгеньевна, 672090, г. Чита, ул. Горького, 39-a, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России. Тeл.: +7-914-469-32-25.

E-mail: tanbell24@mail.ru

Среди наследственно детерминированных нарушений гемокоагуляции особую роль отводят тромбофилиям. Баркаган З.С. и Момот А.П. (2001) определяют тромбофилии как нарушения гемостаза и гемореологии, которые характеризуются повышенной склонностью к развитию тромбозов кровеносных сосудов с ишемией органов [7]. Взгляд на роль тромбофилий в патогенезе тромботических осложнений существенно изменился после открытия мутации в генах FV Leiden, протромбина и АФС. Установлено, что генетические аномалии гемостаза ответственны за развитие тромбозов в 80-90 % случаев [8]. В последнее время появилось достаточно много работ, свидетельствующих о роли материнско-плодовой тромбофилии в формировании тяжелых форм плацентарной недостаточности [2, 9].

Цель исследования — оценить распространенность полиморфизмов генов F2:20210 G>A, F5:1691 G>A, F7:10976 G>A, F13:103 G>T, FGB:455 G>A, IT-GA2:807 C>T, ITGB3:1565 T>C, PAI-1:675 5G>4G, ассоциированных с нарушениями гемостаза, у женщин с преждевременными родами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Для решения поставленной цели обследованы 132 женщины с ПР (основная группа). Группу контроля составили 101 здоровая беременная, роды у которых закончились в срок. Критериями включе-

№3(62) 2015 <ыН?гь и^пя вс7|узбассе

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА У ПАЦИЕНТОК С ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫМИ РОДАМИ

ния пациенток в основную группу исследования служили: преждевременные роды (ПР), обусловленные плацентарными нарушениями, задержкой роста плода (ЗРП) и преждевременной отслойкой нормально расположенной плаценты (ПОНРП). Критериями исключения были: предлежание плаценты, многоплодная беременность, истмико-цервикальная недостаточность, субкомпенсированные и декомпенсированные формы экстрагенитальной патологии и острые инфекционные заболевания. Женщины обеих групп были сопоставимы по паритету, возрасту, степени инфекционного риска.

Изучение генетических маркеров тромбофилии проводилось в лаборатории молекулярной генетики НИИ молекулярной медицины ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия». Данное исследование одобрено этическим комитетом Читинской государственной медицинской академии (протокол № 44 от 09.11.2012 г.).

Для выявления полиморфизма генов выполнено молекулярно-генетическое типирование. Изучали генетические маркеры тромбофилии — FGB:ген F1 — Р-фибриноген, (полиморфизм -455G>A), ген FII — коагуляционный фактор 2, протромбин (полиморфизм -20210G>A), ген FV — коагуляционный фактор 5, (полиморфизм -1691G>A, мутация Лейдена), ген FVII — коагуляционный фактор 7, (полиморфизм -10976G>A Arg506Gln) и ген FXIII — коагуляционный фактор 13 (полиморфизм -163G>T, Val34Leu). Из группы генов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза определяли ITGA2 — интегрин — гликопротеин la, тромбоцитарный рецептор к коллагену (полиморфизм -807С>Т), ген ITGB3 — рецепторный гликопротеин GpIIIa, интегрин-р3, тромбоцитарный рецептор фибриногена (полиморфизм -1565Т>С, Leu33Pro) и ген PAI-1 (SERPINE), ингибитор активатора плазминогена I тип (полиморфизм -6755G>4G).

В качестве метода исследования использована полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени с использованием комплекта реагентов «Кардио Генетика тромбофилии».

Качественные данные представлены в виде числа n и % (число больных с данным признаком, процент от их количества в группе) или десятичной доли единицы (Р).

Генотипы обследованных пациенток проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга.

Для сравнения распределений частот генотипов и аллелей в двух группах использовался критерий х2 с поправкой Йетса, достигнутый уровень значимости (р) считался равным или меньше 0,05. Во всех случаях рассчитывался показатель интенсивности связи V — Крамера [10].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Частота генотипов и аллелей искомых маркеров в группах представлены в таблице. При анализе таблиц сопряженности не выявлено ассоциативной связи между генами фибриногена FGB:455G>A, фактора Лейден FV: 1691G>A, гена интегрина ITgA2:807 C>T, гена интегрина ITGB3:1565 T>C и развитием преждевременных родов.

При мутации в гене FII возрастает концентрация протромбина и усиливается образование тромбина, который по принципу обратной положительной связи активирует коагуляционный каскад, стимулирует образование фибрина. Частота мутации FII в Европе составляет 1,7-3 % [8]. У пациенток с венозными тромбоэмболиями мутация FII диагностируется в 4-8 % случаев. В группе пациенток с ПР частота му-

Сведения об авторах:

БЕЛОКРИНИЦКАЯ Татьяна Евгеньевна, доктор мед. наук, профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии педиатрического факультета, ФПК и ППС, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России, г. Чита, Россия. E-mail: tanbell24@mail.ru

АНОХОВА Людмила Ильинична, канд. мед. наук, ассистент, кафедра акушерства и гинекологии педиатрического факультета, ФПК и ППС, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России, г. Чита, Россия. E-mail: milaanokh@yandex.ru

СТРАМБОВСКАЯ Наталья Николаевна, канд. мед. наук, доцент, кафедра нервных болезней, нейрохирургии и медицинской генетики, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России, г. Чита, Россия. E-mail: strambovskaya@yandex.ru

ТАРБАЕВА Долгорма Александровна, канд. мед. наук, ассистент, кафедра акушерства и гинекологии педиатрического факультета, ФПК и ППС, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России, г. Чита, Россия. E-mail: dolgorma35@mail.ru

ФРОЛОВА Наталия Ивановна, канд. мед. наук, ассистент, кафедра акушерства и гинекологии педиатрического факультета, ФПК и ППС, ГБОУ ВПО ЧГМА Минздрава России, г. Чита, Россия. E-mail: taasyaа@mail.ru

Information about authors:

BELOKRINITSKAYA Tatiana Evgenyevna, doctor of medical sciences, professor, chief of the department of obstetrics and gynecology, Chita State Medical Academy, Chita, Russia. E-mail: tanbell24@mail.ru

ANOKHOVA Lyudmila Ilyinichna, candidate of medical sciences, assistant, department of obstetrics and gynecology, Chita State Medical Academy, Chita, Russia. E-mail: milaanokh@yandex.ru

STRAMBOVSKAYA Nataliya Nikolaevna, candidate of medical sciences, docent, department of nervous diseases, neurosurgery and medical genetics, Chita State Medical Academy, Chita, Russia. E-mail: strambovskaya@yandex.ru

TARBAEVA Dolgorma Alexandrovna, candidate of medical sciences, assistant, department of obstetrics and gynecology, Chita State Medical Academy, Chita, Russia.

FROLOVA Nataly Ivanovna, candidate of medical sciences, assistant, department of obstetrics and gynecology, Chita State Medical Academy, Chita, Russia. E-mail: taasyaа@mail.ru

с/$(ръ и^ггя всу^бассе

№3(62) 2015

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА У ПАЦИЕНТОК С ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫМИ РОДАМИ

Таблица

Частоты генотипов и аллелей протромботических мутаций в группах здоровых беременных и с преждевременными родами

Полиморфизм тромбофил генов ии Здоровые беременные женщины (n = 101) Женщины с ПР в анамнезе (n = 132) df х2 р V-Крамера

G/G 64

G/A 29 (29 %) 45 (34,1 %) 2 2,89 0,23 0,02

FGB: 455 G>A A/A 8

G 0,772 0,697 1 3,04 0,08 0,03

А 0,228 0,303

G/G 100

G/A 1 (1 %) 9 (7 %) 1 6,34 0,041* 0,16

FII: 20210G>A A/A 0 2

G 0,991 0,946 1 6,25 0,01* 0,02

А 0,009 0,054

G/G 98

G/A 3 (4 %) 8 (6 %) 1 0,62 0,42 0,08

FV: 1691G>A A/A 0 0

G 0,961 0,969 1 0,61 0,43 0,01

А 0,039 0,031

G/G 95

G/A 6(6%) 33(25%) 2 17,89 0,000* 0,32

FVII: 10976 G>A A/A 0 3

G 0,971 0,848

1 16,94 0,000* 0,23

А 0,029 0,152

G /G 50

G/T 48 (47 %) 30 (22,8 %) 2 19,70 0,000* 0,16

FXIII: 103 G>r T/T 3

G 0,733 0,75 1 0,10 0,75 0,03

T 0,267 0,25

c/c 53

c/t 37 (36,6 %) 63 (47,7 %) 2 5,08 0,08 0,05

ITGA2: 807 С>Т T/T 11

C 0,703 0,712 1 0,01 0,93 0,001

T 0,297 0,288

T/T 78

T/C 18 (18 %) 37 (28 %) 2 4,04 0,13 0,07

ITGB3: 1565Т>С C/C 5

T 0,861 0,788 1 3,34 0,07 0,02

C 0,139 0,212

5G/5G 36

5G/4G 34 (34 %) 80 (61 %) 2 16,67 0,000* 0,25

PAI-1: 675 5G>4G 4G/4G 31

5G 0,525 0,523 1 0,00 0,96 0,08

4G 0,475 0,477

Примечание: df - число степеней свободы, р - достигнутый уровень значимости, х2 - значение хи-квадрат.

тантных аллелей в гетеро- и гомозиготном состоянии полиморфизма FII имеет значимо большую частоту, нежели у представителей группы сравнения (х2 = 6,34; р = 0,04). При плацентарных нарушениях и ЗРП у женщин с ПР гетерозиготное носительство мутантных аллелей FII:20210 отмечено в 22,4 %. Общеизвестно, данный полиморфизм наследуется по аутосомно-до-минантному типу, поэтому патологический эффект может реализоваться даже при наличии одной копии поврежденного гена [8].

Мутация гена проконвертина, заключающаяся в замене гуанина на аденин в позиции 10976, приводит к снижению экспрессии гена FVII на 30 % и, соответственно, пониженный уровень F7 является за-

щитным фактором в развитии инфаркта миокарда и тромбозов, но, с другой стороны, повышается вероятность кровотечений [8]. Исследование полиморфизма гена FVII:10976 показало, что гетерозиготные и мутантные гомозиготные носительницы значимо чаще регистрировались среди беременных с ПР (х2 = 17,89; р = 0,000).

Аналогичная картина отмечена при изучении полиморфизма F:XIII 103G>T: распространенность гетерозиготного и мутантного гомозиготного генотипа в группе женщин с преждевременными родами была значительно большей (х2 = 19,7; р = 0,000). Мутация в гене F13 изменяет способность белка «сшивать» фибриновые мономеры, вследствие чего сгустки ста-

№3(62) 2015 с/^ть и^пя вс7|узбассе

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

новятся более тонкими и нестабильными, что предполагает высокий риск кровотечений [8].

Частота полиморфизма PАI-1:5G6754G существенно отличалась в сравниваемых группах, причем по всем вариантам: PAI-1:675 5G5G, PAI-1:675 5G4G PAI-1:675 4G4G. Ген PAI-1 кодирует белок, который обеспечивает до 60 % общей ингибиторной активности в отношении активатора плазминогена в плазме крови и, тем самым, играет важную роль в регуляции фибринолиза, препятствуя растворению тромбов, что повышает риск сосудистых осложнений и различных тромбоэмболий. В настоящее время специфические аллели 4G гена PAI-1 связывают с более высоким уровнем и активностью активатора плазминогена, чем у гетерозигот или гомозигот по 5G-алле-лю с нормальной и низкой активностью последнего, соответственно. При варианте 4G/4G уровень PAI-1 повышается на 25 % [8]. В нашем исследовании в группе с преждевременными родами преобладали носительницы 5G5G и 5G4G (х2 = 16,67; р = 0,000). Этот факт можно объяснить тем, что гипофибрино-лиз, обусловленный носительством гетерозиготных и гомозиготных генотипов по 5G-аллелю, может выс-

тупать дополнительным тромбогенным фактором, способствуя развитию плацентарных нарушений и, соответственно, преждевременному прерыванию беременности.

Следует отметить, что обнаруженные закономерности имеют не столь большие интенсивности, что выражается в небольших значениях V-критерия Крамера (табл.).

ВЫВОДЫ:

1. У женщин с преждевременными родами в полиморфизмах генов FII, FVII, FXIII преобладали генотипы, имеющие мутантный аллель.

2. Генотипы PAI-1:675 5G5G и PAI-1:675 5G4G ассоциированы с преждевременными родами.

3. Обнаруженные ассоциации преждевременных родов с полиморфизмом генов протромбина (FII: 20210G>A), проконвертина (F7:0976 G>A), фиб-ринстабилизирующего фактора (F13:103 G>r) и ингибитора тканевого активатора плазминогена (PAI-1:675 5G>4G) позволяют считать их молекулярными предикторами преждевременных родов.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Башмакова, Н.В. Сверхранние преждевременные роды в Уральском федеральном округе: проблемы и перспективы /Башмакова Н.В., Малыгина Г.Б., Литвинова А.М. //Акушерство и гинекология. - 2014. - № 7. - С. 48-52.

2. Нестерова, Э.А. Роль родительско-плодовой тромбофилии в формировании тяжелых форм плацентарной недостаточности /Нестерова Э.А., Путилова Н.В. //Акушерство и гинекология. - 2014. - № 12. - С. 5-9.

3. Долгов, В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза /Долгов В.В., Свирин П.В. - М.: Триада, 2005. - 227 с.

4. Айламазян, Э.К. Роль тромбофилии в развитии акушерской патологии /Айламазян Э.К., Зайнулина М.С., Петрищев Н.Н. //Акушерство и гинекология. - 2007. - № 5. - С. 38-42.

5. Роль угрозы прерывания беременности в генезе развития фетоплацентарной недостаточности /Макаров И.О., Боровкова Е.И., Ше-шукова Н.А. [и др.] //Гинекология. - 2010. - Т. 12, № 5. - С. 33-37.

6. Thrombophilic Mutations And Folate Gene Polymorphisms And Plasminogen Activator Inhibitor-1 In Russian Women With Unexplained Recurrent Early Spontaneous Abortion /Belokrinitskaya T.Ye., Frolova N.I., Strambovskaya N.N., Petrov A.A. //Brit. J. of Med. and Med. Research. - 2014. - V. 5(5). - Р. 626-632.

7. Barkagan, Z.S. Diagnostics and controlled therapy of hemostasis disturbances [the 2nd edition supplemented /Barkagan Z.S., Momot A.P. -M.: Newdiamed. - 2001. - 296 p.

8. Тромбогеморрагические осложнения в акушерско-гинекологической практике: Руководство для врачей /под ред. А.Д. Макацария. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2011. - 1056 с.

9. Особенности течения беременности у женщин с наследственными формами тромбофилии /Репина М.А., Сумская Г.Ф., Кузьмина-Крутецкая С.Р., Лапина Е.Н. //Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - Т. LV, Вып. 2. - С. 3-9.

10. Ланг, Т.А. Как описывать статистику в медицине. Аннотированное руководство для авторов, редакторов и рецензентов /Ланг Т.А., Сесик М. - М.: Практическая медицина, 2011. - 480 с.

с/$(ръ и^ггя в^^узбассе

№3(62) 2015