ЭТАЛОННОЕ УСТРОЙСТВО К ЛЮМИНЕСЦЕНТНОМУ МИКРОСКОПУ ТИПА "ЛЮМАМ-И"

Полезная модель относится к лабораторной технике, а именно к люминесцентным микроскопам, и может быть использована в качестве эталонного устройства при измерении интенсивности люминесценции биологических объектов мазков крови, мокроты или срезов ткани человека и животных.
Известен технический эталон, представляющий собой люминесцирующую пластинку из уранового стекла ЖС19 круглой или прямоугольной формы, приклеенную к стеклянной пластине, имеющей размеры предметного стекла. Технические эталоны разной толщины входят в комплект фотометрической насадки «ФМЭЛ-1» к люминесцентным микроскопам типа «ЛЮМАМ-И», предназначенной для измерения интенсивности люминесценции биологических объектов в видимой и ультрафиолетовой областях спектра [1]. Перед проведением измерений на эталон наносят иммерсионное масло, устанавливают его на предметный столик микроскопа и настраивают микроскоп для работы с тем же объективом, который применяют при измерении интенсивности люминесценции исследуемых биологических объектов. Показания, снимаемые по шкале мультиметра, являются мерой интенсивности люминесценции в условных единицах (у. е.).
Известный эталон имеет недостатки:
- использование технического эталона, требующее нанесения на него иммерсионного масла, способствует постепенной его порче и отклеиванию урановых пластинок от стеклянной пластины;
- материал, из которого изготовлен технический эталон (стекло), не обеспечивает длительной работы эталона, так как может легко разбиться при падении;
- трудоемкость измерений из-за необходимости использования иммерсионного масла при настройке технического эталона и последующей тщательной и осторожной очистке эталона от следов масла;
- незащищенность эталона от воздействия внешней среды (пыль, свет), что ведет к получению нестабильных показаний при его настройке.
Задачей полезной модели является разработка надежного эталонного устройства, обеспечивающего воспроизводимость результатов измерения интенсивности люминесценции биологических объектов без применения иммерсионного масла.
Данная задача решается за счет того, что эталонное устройство к люминесцентному микроскопу типа «ЛЮМАМ-И» содержит микрообъектив со встроенной внутренней ирисовой диафрагмой и регулировочным кольцом для установки необходимого диаметра ирисовой диафрагмы при настройке эталонного устройства. К нижней части микрообъектива плотно прижата люминесцирующая пластинка из уранового стекла ЖС19 днищем металлического стакана, плотно надетого на корпус микрообъектива. Для предотвращения сбоя настройки ирисовой диафрагмы на металлический стакан плотно насажен съемный полый цилиндрический корпус, диаметр которого больше диаметра регулировочного кольца микрообъектива.
Сущность полезной модели поясняется чертежом (фиг. 1).
На фиг. 1 схематично изображен продольный разрез эталонного устройства, состоящего из микрообъектива (объектив микроскопа) 1 со встроенной ирисовой диафрагмой внутри и регулировочным кольцом 2, вращением которого изменяют диаметр ирисовой диафрагмы при настройке эталонного устройства. Люминесцирующая пластинка 3 из уранового стекла ЖС19 плотно прижата днищем съемного металлического стакана 4 к нижней части микрообъектива 1. Металлический стакан 4 плотно прилегает к корпусу микрообъектива 1, обеспечивая надежную фиксацию люминесцирующей пластинки 3 к микрообъективу 1 и изоляцию ее от контакта с внешней средой (пылью, светом). На металлический стакан 4 плотно надевается съемный полый цилиндрический корпус 5, диаметр которого больше диаметра регулировочного кольца 2 микрообъектива 1, что предотвращает сбой настройки ирисовой диафрагмы 2. Микрообъектив 1 - это такой же объектив микроскопа, который применяется в качестве рабочего при измерении интенсивности люминесценции исследуемых биологических объектов, только снабженный ирисовой диафрагмой. Микрообъектив 1 имеет присоединительную резьбу для установки его в револьверное устройство микроскопа.
Эталонное устройство работает следующим образом.
Для количественного измерения интенсивности люминесценции анализируемых биологических объектов может быть использована специальная установка, включающая люминесцентный микроскоп типа «ЛЮМАМ-И» с фотометрической насадкой «ФМЭЛ-1», блок питания ртутной лампы микроскопа, блок питания фотоэлектронного умножителя (ФЭУ), блок электрометрического усилителя и мультиметр.
В соседние гнезда револьвера люминесцентного микроскопа устанавливают эталонное устройство со снятым полым цилиндрическим корпусом 5 и рабочий объектив микроскопа. Для настройки эталонного устройства предварительно проводят измерение интенсивности люминесценции достаточно большого числа (40-50) биологических объектов анализируемого препарата (мазок крови, мокрота, срез ткани), чтобы получить реальный разброс показаний мультиметра. Объектами могут быть клетки, белки, нуклеиновые кислоты и др. Поворотом револьвера в оптическую систему микроскопа вводят рабочий объектив, и производят замеры интенсивности люминесценции исследуемых объектов. Затем опускают предметный столик с анализируемым препаратом, поворотом револьвера в оптическую систему микроскопа вводят эталонное устройство со снятым полым цилиндрическим корпусом 5 и настраивают его на показание мультиметра, несколько превышающее максимальную величину интенсивности люминесценции объектов, зарегистрированную при проведенных ранее замерах. Настройку эталонного устройства на установленное показание мультиметра производят с помощью регулировочного кольца 2 микрообъектива 1. После настройки эталонного устройства на него плотно надевают полый цилиндрический корпус 5 для защиты регулировочного кольца 2 микрообъектива 1 от случайных внешних воздействий. При настройке эталонного устройства не используют иммерсионное масло. Поворотом револьвера в оптическую систему микроскопа вновь вводят рабочий объектив, и регистрируют интенсивность люминесценции исследуемых объектов анализируемого препарата.
Технический результат полезной модели:
- стабильная работа эталонного устройства, конструкция которого обеспечивает надежную фиксацию люминесцирующей пластинки к микрообъективу, исключая при этом контакт пластинки с иммерсионным маслом и внешней средой;
- снижение трудоемкости измерений за счет отсутствия необходимости использования иммерсионного масла при настройке эталонного устройства;
- упрощение введения эталонного устройства в оптическую систему микроскопа - поворотом барабана револьвера (в прототипе: нанесение на эталон иммерсионного масла, установка эталона на предметный столик микроскопа);
- расширение арсенала эталонных средств измерения при регистрации интенсивности люминесценции биологических объектов на микроскопах типа «Люмам-И».
Пример реализации устройства.
Определение интенсивности люминесценции моноаминов в лейкоцитах на мазках периферической крови.
Для регистрации интенсивности люминесценции моноаминов в лейкоцитах использовали установку, состоящую из люминесцентного микроскопа «ЛЮМАМ-ИЗ» с фотометрической насадкой «ФМЭЛ-1У4.2.», блока питания ртутной лампы ДРШ25003, блока питания фотоэлектронного умножителя УБПВ-1, блока электрометрического усилителя У5-7 и мультиметра серии М890.
-6
Определение интенсивности люминесценции моноаминов проводили при длине волны возбуждающего света 405 нм с использованием фильтров БС8, ЖЗС*24, ФС-1, при выходном напряжении 700в, сопротивлении 5·10 ом. Применяли зонд диаметром 0,5 мм, фильтры №6 (450 нм) для определения катехоламинов и фильтры №8 (525 нм) для определения серотонина. В револьвер микроскопа рядом с рабочим объективом установили заявленное эталонное устройство. Для настройки эталонного устройства провели измерение интенсивности люминесценции моноаминов в 40 лейкоцитах анализируемого мазка крови. На мазок крови, предварительно обработанный в формальдегидных парах по методу, изложенному в статье [2], наносили иммерсионное нефлуоресцирующее масло. Определили показание мультиметра для настройки эталонного устройства (100 у.е.), незначительно превышающее максимальное показание мультиметра при проведенных замерах. Поворотом барабана револьвера эталонное устройство со снятым цилиндрическим корпусом 5 ввели в оптическую систему микроскопа и настроили на показание мультиметра, равное 100 у.е., с помощью регулировочного кольца 2 микрообъектива 1. После чего на металлический стакан 4 эталонного устройства плотно надели съемный цилиндрический корпус 5. Поворотом барабана револьвера снова ввели в оптическую систему микроскопа рабочий объектив, и провели дальнейшие замеры интенсивности люминесценции моноаминов в лейкоцитах мазка крови.
Заявленное эталонное устройство надежно и удобно в эксплуатации, не требует применения иммерсионного масла и обеспечивает воспроизводимость результатов измерения интенсивности люминесценции биологических объектов.
Источники информации:
1. Техническое описание и инструкция по эксплуатации. Насадка фотометрическая люминесцентная ФМЭЛ-1, ФМЭЛ-1А. Найдено в Интернет 16.07.2013: http://www.mbs10.ru/instr_fmel-1+1a.html
2. Новицкая В.П. Модификация метода определения моноаминов в лейкоцитах на мазках периферической крови. // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. №1. С. 24, 33.