ИНЪЕЦИРУЕМЫЕ СОСТАВЫ АНТИБИОТИКОВ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
INJECTABLE ANTIBIOTIC FORMULATIONS AND METHODS OF THEIR USE

ТЕХНИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ
Настоящее изобретение относится к инъецируемым составам антибиотиков и способам их применения и, в частности, но не специально для лечения и предупреждения мастита у дойных животных.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Микробные инфекции у животных, такие как мастит молочных коров, как правило, лечат или предупреждают в период лактации путем интрамаммарной (IMM) инфузии, внутримышечной (IM) или подкожной (SC) инъекции.
Как правило, антибиотики, такие как пенициллины или пролекарства бензилпенициллина (ВР), такие как пенетемат (PNT), были использованы в качестве активных веществ для лечения мастита крупного рогатого скота. PNT представляет собой диэтиламиноэтиловый сложный эфир бензилпенициллина. В составах, предназначенных для применения в ветеринарии, использование PNT включается в форме гидроиодида (HI). PNT HI используется в интрамаммарных продуктах во время лактации (UBRO YELLOWТМ, Boehringer Ingelheim) и в течение сухого периода (UBRO REDТМ, Boehringer Ingelheim), а также в качестве инъецируемой суспензии в период лактации (MamyzinТМ, Boehringer Ingelheim и PenethajectТМ, Bayer Animal Health) для лечения мастита у коров.
PNT является пролекарством, из которого бензилпенициллин и диэтиламиноэтанол освобождаются путем гидролиза. Антимикробная активность соединения относится исключительно к бензилпенициллину. Предельно допустимая концентрация (MRL) для молока крупного рогатого скота, например, в Европе и Новой Зеландии, составляет 4 нг/кг (EMEA, BP).
В качестве пролекарства бензилпенициллина, гидроиодид пенетамата эффективен при лечении мастопатии в результате особенности его фармакокинетики. После внутримышечного введения гидроиодид пенетамата всасывается из участка инъекции и при попадании в кровь частично диссоциирует путем гидролиза на бензилпенициллин и диэтиламиноэтанол. При pH крови (7,2) устанавливается равновесие, при котором 91,8% активного вещества присутствует в своей гидролизованной форме (бензилпенициллин) с остатком, представляющим собой пенетамат. Равновесие поддерживается за счет повторной ассоциации бензилпенициллина и диэтиламиноэтанола. Пиковые уровни сыворотки (измеряемые как диссоциированный пенициллин G) быстро достигаются через 3,76 часов после инъекции (Friton 2003).
Недиссоциированная форма пенетамата легко проходит через барьер кровь-молоко из-за градиента pH между молоком (pH 6,6-6,8) и плазмой (pH 7,2) и ее слабо основным состоянием (pKa=8,4). Липофильный характер пенетамата также облегчает его прохождение через липопротеиновый барьер кровь-молоко. Пенетамат начинает диссоциировать после прохождения через барьер кровь-молоко, и это продолжается во время диффузии препарата через вымя с высвобождением бензилпенициллина. Бензилпенициллин быстро ионизируется в вымени (pKa=2,8), в результате низкого уровня pH молока, с задержкой активного вещества в вымени при увеличенных концентрациях.
Современные PNT-продукты, доступные на рынке для внутримышечной (IM) или подкожной (SC) инъекции, представлены в форме порошка для восстановления раствора или суспензии стерильной водой во время применения (например, MamyzinTM Boehringer Ingelheim или PenethajectТМ Bayer Animal Health). Типичные дозировки этих продуктов включают три ежедневные дозы 5 г PNT или одна дозу 10 г с последующей дозой 5 г на следующий день.
Применение водного средства доставки позволяет PNT быстро растворяться в участке инъекции и при этом быстро всасываться. Особенно желательные свойства для лечения маститов в период лактации включают быструю абсорбцию активного вещества, быстрое терапевтическое действие и короткий период удержания. Способность пенетамата преодолевать барьер кровь-молоко и концентрироваться в вымени обеспечивает эффективное терапевтическое действие и достаточно короткий период удержания.
Несмотря на свою эффективность в качестве терапевтических активных веществ, недостатком имеющихся в настоящее время композиций в качестве инъекций, содержащих пенициллин или PNT, является их ограниченный срок годности (часто только 2-3 дня) после восстановления из порошка в виде водного раствора. Это неудобно для пользователя, который должен восстанавливать порошок в жидкой форме, например, путем отбора стерильного водного носителя из одного флакона, добавлять жидкость во второй флакон, содержащий порошок, и перемешивать до образования раствора или однородной суспензии. После разведения продукт должен быть использован в течение ограниченного периода стабильности или же он должен быть выброшен.
В настоящее время не существует коммерчески доступного, готового к применению IM/SC инъецируемого состава PNT для лечения мастита крупного рогатого скота или других заболеваний. Существенной проблемой при разработке готового к применению инъецируемого состава является недостаточная стабильность при хранении PNT в водных носителях. От применения неводных носителей для PNT-составов отказываться, поскольку носители на основе масла, в частности, как правило, предоставляют гораздо более медленное высвобождение активного вещества после IM/SC-инъекции. Замедленное высвобождение активного вещества продлило бы период удержания для дойных коров, что особенно нежелательно, и, вероятно, предотвратило бы коммерциализацию продукта.
В опубликованном патентном документе США 4446144 отмечается, что PNT может применяться в суспензиях или растворах в подходящем носителе, который может быть изготовлен на водной или масляной основе. Отмечается, что неводные носители обеспечивают большую стабильность. Составы, описанные в патентном документе США 4446144 для парентерального применения, например, инъекций, приводятся в виде водного раствора или суспензии. Нет никакого упоминания о желательности получения быстрого высвобождения активного вещества или биоэквивалентности с водными составами.
Существует ограниченное число исследований для разработки PNT-композиции для IM/SC инъекции с помощью неводного носителя. В Edwards, S.J. (1964), Veterinary Record, Vol. 78, No. 17, 583-5, документируются исследования уровней пенициллина в молоке после внутримышечной инъекции.
Продукты предшествующего уровня техники, требующие восстановление PNT в водном носителе, обеспечивают компромисс преимущества быстрого поглощения активного вещества при введении с недостатком ограниченной стабильности при хранении восстановленной композиции.
Уже давно ощущается необходимость в готовой к применению PNT-композиции, которая имеет хорошую стабильность при хранении и быстрое высвобождение активного вещества.
Предметом настоящего изобретения является решение указанных выше проблем или, по меньшей мере, предоставление общественности полезного выбора.
Все ссылки, включая любые патенты или патентные заявки, цитируемые в настоящей спецификации, включаются в настоящий документ посредством ссылки. Не делается никакого допущения, что любая ссылка представляет предшествующий уровень техники. Обсуждение ссылок устанавливает, что их авторы утверждают, и заявители оставляют за собой право оспаривать точность и релевантность цитируемых документов. Следует четко понимать, что, хотя ряд публикаций предшествующего уровня техники упоминаются в настоящем документе, эта ссылка не является признанием того, что любой из этих документов являются частью общего предшествующего уровня знаний в рассматриваемой области, в Новой Зеландии или в любой другой стране.
В описании изобретения, слово «включать» или его вариации, такие как «включает» или «включающий», следует понимать как подразумевающие включение заявленного элемента, числа или стадии, или группы элементов, чисел или стадий, но не исключение любого другого элемента, числа или стадии, или группы элементов, чисел или стадий.
Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из последующего описания, которое приводится исключительно для примера.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предоставляется композиция, включающая пенетамат (PNT) или его фармацевтической эквивалент; и по меньшей мере один масляный носитель.
Предпочтительно, вязкость композиции составляет менее 3000 мПа⋅с при температуре 20°C и скорости сдвига 1/с, определенной способом чашеобразного цилиндра.
3
Масляный носитель в настоящем документе также включает неводные носители, которые только частично растворяются в воде - например, предпочтительным масляным носителем является триацетин. Триацетин имеет вязкость приблизительно 23 мПа⋅с при 20°C и плотностью 1,16 г/см.
Предпочтительно, пенетамат (PNT) или его фармацевтический эквивалент составляет 55% масс./об. композиции или меньше.
Предпочтительно композиция включает по меньшей мере одно средство, предотвращающее слеживание.
В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения предоставлена композиция, включающая
пенетамат (PNT) или его фармацевтический эквивалент;
по меньшей мере один масляный носитель; и,
по меньшей мере одно незагущающее вещество, предотвращающее слеживание.
В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения предоставлена композиция, включающая:
пенетамат (PNT) или фармацевтический эквивалент;
и масляный носитель низкой вязкости.
Предпочтительно композиция содержит суспензию пенетамата (PNT) или
его фармацевтического эквивалента.
В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения предоставлена композиция, включающая:
пенетамат (PNT) или его фармацевтический эквивалент;
и по меньшей мере один масляный носитель, обладающий вязкостью в диапазоне от 2,0 до 100,0 мПа при 25°C.
Авторы изобретения разработали PNT-композиции, в которых преодолены многие недостатки PNT-композиции предшествующего уровня техники.
Настоящее изобретение представляет готовую к применению инъецируемую PNT-композицию, которая может обеспечить биодоступность или биоэквивалентность, сходные с таковыми инъецируемых композиций на водной основе.
В композиции по изобретению успешно предотвращен гидролиз активного вещества с помощью масляного носителя. Первоначальные исследования показали отсутствие в существенной степени деградации PNT-активного вещества или других проблем со стабильностью даже после хранения в течение 180 дней при 30ºC.
Это является явным преимуществом по сравнению с составами предшествующего уровня техники, такими как PenethajectТМ, которые имеют срок годности приблизительно только два дня после разведения и хранения при температуре 25°C (или всего одной недели при хранении при 2-8°C). Пользователи могут сохранять композицию по настоящему изобретению в готовом к применению жидком препарате, например в заранее подготовленном шприце. В крупных молочных хозяйствах, и особенно во время сезона доения, это изобретение представляет значительный вклад в рассматриваемую область техники по сравнению с другими композициями, применяемыми в настоящее время в промышленности.
Различные композиций на основе масла уже известны в рассматриваемой области техники для доставки антибиотиков в виде жидкости для инъекций. Масло используется, чтобы избежать гидролиза (т.е. деградации и, следовательно, низкой стабильности) активного вещества, который может возникать в результате применения на водной основе. Однако применение масел было использовано для обеспечения профиля пролонгированного высвобождения активного вещества в течение относительно длительного периода времени.
Удивительно, настоящее изобретение обеспечивает быстрое высвобождение PNT и короткое время удержания (WHP). Обе эти преимущественные особенности предоставляются композицией на водной основе PenethajectТМ для лечения/профилактики мастита в период лактации. Это противоречит тому, что ожидалось.
Ранее доступные масляные инъецируемые составы имеют профили значительно более долгого поддерживаемого высвобождения.
Таким образом, настоящее изобретение может иметь особое применение для лечения или профилактики состояний, таких как мастит у дойных животных, при которых желательны быстрое высвобождение, короткая персистенция и короткий WHP.
Кроме того, неожиданно установлено, что применение настоящего изобретения также обладает профилем биодоступности, сходным и потенциально лучшим, чем для составов на водной основе предшествующего уровня техники, таких как PenethajectТМ. Предшествующий уровень техники был сконцентрирован на предоставлении PNT-составов на основе водных систем, исходя из требований биодоступности. При этом также ожидалось, что масляный состав приведет к замедленному высвобождению и более длительному периоду удержания.
Вследствие этого авторы изобретения определили решение, направленное на текущую проблему низких стабильности и срока годности подходящих PNT-композиций или SC/IM инъекции для лечения мастита. Настоящее изобретение также предоставляет средства для улучшения характеристик WHP и биодоступности по сравнению с другими ветеринарными композициями, обычно применяемыми при лечении или профилактике мастита во время лактационного периода животных.
Кроме того, несмотря на то, что масляные носители были использованы с бензилпенициллином (пенициллином G) и/или прокаинпенициллином (см. китайский патент № 1517090), проведенные авторами изобретения тесты показали, что они химически нестабильны при хранении. Таким образом, долговременная стабильность PNT с триацетином (или другими масляными носителями) является весьма неожиданной.
В частности, проверки авторов изобретения определили, что при замене прокаинпенициллина на пенетамат в предпочтительном составе по настоящему изобретению получившаяся композиция является химически нестабильной. После одного месяца при ускоренной стабильности компоненты композиции, как оказалось, быстро деградировали с изменение в результате цвета от грязно-белого до темно-желтого с образованием темно-бурого осадка. Компоненты деградация, как выяснилось, включали газ, что приводило к вздутию контейнера от образовавшегося давления. Соответственно, о составах, описанных в CN 1517090, не известно, являются ли они стабильными при хранении.
Применение триацетина предоставило состав, стабильный при хранении, как химически, так и физически. Триацетин сам по себе успешно предотвращает проблему спекания других составов с масляными носителями. Добавление поверхностно-активных веществ дополнительно улучшает способность композиции к ресуспендированию при хранении.
Было обнаружено, что время удержания эквивалентно таковому известного, но нестабильного продукта под названием Mamyzin, и он представлял собой биоэквивалент.
В данной спецификации термин пенетамат (PNT) следует принимать как означающий диэтиламиноэтилэфирное пролекарство бензилпенициллина (ВР). Именно ВР является антибактериальным активным веществом, на котором основывается настоящее изобретение, и оно также хорошо известно в промышленности.
Установлено, что масляный носитель дает желаемые результаты в плане WHP и профиля биодоступности, сравнимые с доступными в настоящее время композициями пенетамата на водной основе.
Тип и количество масляного носителя можно выбирать из любого подходящего масляного носителя и его количества, которое обеспечивает желаемую скорость высвобождения лекарственного средства и/или периода удержания.
Предпочтительно соотношение PNT к масляному носителю составляет от 1:1 до 1:4 масс./об.
Однако композиция по настоящему изобретению может также использоваться для лечения других бактериальных инфекций, похожими на те, которые подвергали действию PenthajectТМ, например, метрита, респираторных инфекций и копытной гнили крупного рогатого скота и лошадей.
Предпочтительно масляный носитель представляет собой этилолеат, среднецепочечные триглицериды или триацетин.
В ходе первоначального испытания этилолеат служил примером демонстрации преимущественных характеристик настоящего изобретения, а именно повышения стабильности, и поддержания (если не улучшения) WHP и биодоступности по сравнению PenethajectТМ.
В документе CN 101822637 предшествующего уровня техники раскрывается применение этилолеата в качестве носителя для β-лактамных антибиотиков. Композиции включают 2-5% активных веществ, 2% суспендирующих средств, 0,1-3% загустителей и консерванты, такие как бензиловый спирт. Суспендирующие средства включают стеарат алюминия, что приводит к увеличению вязкости, а загустители, согласно сообщениям, включают Tween 80.
Настоящее изобретение отличается от этого документа тем, что в нем специально используется гидроиодидпенетамат, который в качестве эфира β-лактама, как может ожидаться, имеет отличные свойства и требования к носителю. Количество антибиотика существенно отличается, поскольку, по меньшей мере, 20% PNT в современных составах ставит различные проблемы в 2-5% документов предшествующего уровня техники. При использовании этилолеата в качестве носителя настоящее изобретение не использует загуститель в качестве суспендирующего агента, а оно основывается на поверхностно-активных веществах для обеспечения повторного ресуспендирования композиции, а не попытке предотвращения оседания суспензии. При использовании этилолеата было обнаружено, что настоящее изобретение обладает долговременной стабильностью до трех месяцев.
Тем не менее, последующие испытания показали, что триацетин является гораздо лучшим носителем, пригодным для инъекций и с меньшей вероятностью приводящим к слеживанию суспендированного PNT.
Однако следует понимать, что может использоваться ряд различных масляных носителей, все еще обеспечивающих требования, которые приводят к благотворным результатам, как описано в настоящем документе.
Совершенно очевидно, что специалист в рассматриваемой области сможет признать, без излишних экспериментов, что другие масляные носители могут использоваться в качестве замены этилолеату, среднецепочечные триглицериды, триацетин или комбинации по меньшей мере двух масляных носителей.
Другие примеры носителей, которые считаются подходящими для применения, включают соевое масло, хлопковое масло, кукурузное масло, подсолнечное масло, арахисовое масло, кунжутное масло и парафиновое масло. Другие масляные носители рассматриваются в пределах объема изобретения.
Предпочтительно концентрация PNT в композиции составляет от 15-55% масс./об.
Наиболее предпочтительно концентрация PNT в композиции составляет от 20% до 35% масс./об.
Авторы изобретения определили, что этих предпочтительных количеств PNT в составе может быть достаточно для предоставления около 5 г активного вещества животному в заданной дозировке. В предыдущих исследованиях это количество PNT было идентифицировано, чтобы обеспечить терапевтический эффект, аналогичный таковому для PenethajectТМ.
Предпочтительно диаметр частиц d50 PNT составляет от 1 до 100 мкм.
Наиболее предпочтительно диаметр частиц d50 PNT составляет от 8 до 30 мкм с 95%<50 мкм.
Это приблизительный размер частиц PNT в текущем доступном составе PenethajectТМ. Эта особенность может быть важной, чтобы помочь обеспечить или улучшить профили биодоступности состава.
В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция содержит по меньшей мере одно вспомогательное вещество, препятствующее слеживанию.
Удивительно, включение дополнительного вспомогательного вещества, такого как некоторые поверхностно-активные вещества, может значительно улучшить физическую стабильность неводных суспензий PNT. Например, полисорбат 80 работает особенно хорошо в предпочтительном варианте осуществления.
Как правило, суспензии физически стабилизируют путем добавления стандартного вещества, препятствующего слеживанию, или загустителя, такого как коллоидный диоксид кремния или стеарат алюминия. В то время как коллоидный диоксид кремния не следует назначать парентерально (Справочник фармацевтических вспомогательных веществ), стеарат алюминия загущает суспензию, что замедляет высвобождение лекарственного вещества из носителя. Эти вещества не дают практического решения физической стабилизации PNT-суспензий.
Было установлено, что триацетин представляет собой носитель, который значительно улучшает физическую стабильность PNT-суспензии, но в то же время позволяет достигать удовлетворительной химической стабильности. Это удивительно, учитывая, что триацетин частично растворяется в воде (хотя до сих пор считается масляным носителем), что могло бы, как ожидается, приводить к гидролизу активного вещества.
С другой стороны, немасляные носители, такие как вода и пропиленгликоль, позволяют достигать хорошей физической стабильности PNT-суспензий, но такие PNT-суспензии химически стабильны только в течение нескольких дней (например, Mamyzin на водной основе) или менее 2 месяцев при хранении в пропиленгликоле. Опять же это не дает практического решения проблемы готовой к применению PNT-композиции с приемлемым сроком годности.
На удивление, было также обнаружено, что масляные носители, такие как этилолеат или среднецепочечные триглицериды в сочетании с конкретными вспомогательными веществами, повышают физическую стабильность PNT-суспензии без ущерба для химической стабильности.
Значение гидрофобно-липофильного балана (HLB) указывает на растворимость поверхностно-активного вещества. Чем ниже значение HLB, тем более липофильным или маслорастворимым является поверхностно-активное вещество. Чем выше значение HLB, тем более водорастворимым или гидрофильным является поверхностно-активное вещество. Значения HLB используются только для неионогенных поверхностно-активных веществ.
В составах, в которых не используется триацетин в качестве масляного носителя (например, этилолеат вместо этого), поверхностно-активные агенты, такие как эмульгаторы и поверхностно-активные вещества, необходимы для предотвращения спекания (массовой агломерации частиц).
Span 80 (сорбитанмоноолеат) с относительно низким значением HLB (4,3) является растворимым в масляном носителе, но при условии небольшого улучшения физической стабильности PNT-суспензии. Tween 80 (полисорбат 80) с относительно высоким значением HLB 15,0 практически не растворяется в масляном носителе, а также значительно улучшена стабильность PNT-суспензии. Нерастворимое поверхностно-активное вещество PEG12Оleate (HLB 13,7) в масляном носителе также значительно улучшало физическую стабильность.
Удивительно, но было обнаружено, что определенные типы лецитина могут значительно улучшать физическую стабильность PNT-суспензий, в то время как другие типы лецитина не могут. Например, практически нерастворимый (при комнатной температуре) гидрированный соевый лецитин в масляном носителе оказывает положительное влияние на физическую стабильность PNT-суспензий, однако солюбилизированный соевый лецитин в масляном носителе не оказывает.
Было также обнаружено, что добавление Span 80 к масляному носителю, состоящему из среднецепочечного триглицерида и гидрированного соевого лецитина, не оказывало негативного влияния на физическую стабильность PNT-суспензий, но могут увеличивать биодоступность PNT.
Однако следует понимать, что ряд различных поверхностно-активных веществ могут быть заменены приведенными выше, но тем не менее обеспечивать физически стабильную PNT-суспензию, без ущерба химической стабильности, которая приводит к благотворным результатам, как описано в настоящем документе. Специалист в рассматриваемой области сможет легко удостовериться в способности любого конкретного поверхностно-активного вещества для стабилизации PNT-суспензии.
Кроме того, включение поверхностно-активного вещества не оказывает вредного воздействия ни на полезную стабильность, ни на короткий WHP композиции.
Вопреки ожиданиям и характерным свойствам высвобождения лекарственного средства из масляного носителя, было установлено, что высвобождение PNT из масляного носителя, в соответствии с настоящим изобретением, может быть таким же быстрым или даже быстрее, чем контрольные составы на водной основе.
Этот профиль быстрого высвобождения из масляного носителя может быть важным, так как способствует быстрому поглощению PNT, и, следовательно, обеспечивает быстрый терапевтический эффект.
Для составов не на основе триацетина желательно, чтобы поверхностно-активное вещество было выбрано из соединения с гидрофобно-липофильным балансом (HLB) примерно 7-16.
Более предпочтительно поверхностно-активное вещество имеет HLB выше 12.
В предпочтительных вариантах осуществления с триацетином в качестве масляного носителя поверхностно-активное вещество является гидрированным соевым лецитином. Следует отметить, что поскольку лецитин содержит ионные компоненты, система HLB не может быть правильно применена.
Это поверхностно-активное вещество, как было показано, существенно улучшает высвобождение PNT из масляной основы после введения (см. пример 3 в разделе Лучшие способы). Учитывая результаты, приведенные в качестве примера в настоящем документе, специалист в рассматриваемой области ожидал бы, что поверхностно-активное вещество или поверхностно-активные вещества наподобие гидрированного соевого лецитина, например, отнесенные к диапазону HLB 7-16, также предоставили бы аналогичное благотворное влияние на современный состав.
Однако Tween 80 показал значительно лучшие результаты с триацетином в качестве носителя. Он хорошо работает в качестве соединения, препятствующего спеканию, плюс не имеет загущающих свойств.
В предпочтительных вариантах включен по меньшей мере один консервант. Например, метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат или бензиловый спирт могут быть использованы в качестве консервантов.
Бензиловый спирт является предпочтительным в составах на основе триацетина, так как он хорошо смешивается с триацетином, сохраняет свою активность в масляных носителях, а также является пригодным для инъекций.
Для полезности продукта консервант является важным, поскольку он позволяет готовый к применению состав использоваться по несколько раз. Исследование было проведено с целью проверки стабильности и стерильности продукта по настоящему изобретению после отбора дозы из контейнера.
В настоящем исследовании суспензию пенетамата (в соответствии с предпочтительным составом), расфасованную в 100-мл флаконы из прозрачного пентаэритритола, хранящиеся при комнатной температуре, прокалывали с использованием 10 мл стерильного одноразового шприца с подкожной иглой 16G, каждую неделю в течение четырех недель. В каждом случае отбирали соответствующее количество образца и после дня 28 оставшийся образец анализировали на физические, химические и микробиологические характеристики. Результаты показывают, что суспензия пенетамата остается физически и химически стабильной после многократного прокалывания в течение 28 дней при комнатной температуре.
Далее, стерильность образцов не была нарушена путем многократного прокалывания после 28-дневного периода испытаний стабильности при использовании.
Способ лечения
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предоставлен способ лечения животного композицией, в существенной степени как описано в настоящем документе, для лечения или профилактики микробной инфекции, где способ включает внутримышечную или подкожную инъекцию состава животному, которое в этом нуждается.
Предпочтительно микробная инфекция представляет собой доклинический или клинический мастит.
Предпочтительно способ лечения включает режим дозирования 5 г PNT в день с повтором в течение примерно трех дней.
Альтернативный режим дозирования может включать доставку 10 г PNT в качестве первой дозы в первый день с последующей другой дозой 5 г PNT на второй день. Такие дозировки являются теми же, что и рекомендуемые в настоящее время для PenthajectТМ.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения обеспечивается применение, при изготовлении композиции в существенной степени как описано в настоящем документе, для лечения или профилактики микробной инфекции у животного.
Способ изготовления
В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения предоставлен способ изготовления композиции, в существенной степени описанной выше, включающий стадии:
а) подготовка масляного носителя путем либо (i) предоставления масла, или (ii) смешивания масла и поверхностно-активного вещества(в) в контейнере с образованием однородной масляной смеси;
b) диспергирование активного агента в масляном носителе.
Дополнительно, по меньшей мере один консервант добавляется к масляному носителю на стадии а). Предпочтительно масляный носитель со стадии а) стерилизуют путем фильтрации.
Предпочтительно на стадии b) использует оборудование для высокой дисперсии сдвига.
Дополнительным преимуществом предпочтительной низкой вязкости композиции является благоприятность, сказывающаяся на производственном процессе.
Кроме того, более низкая вязкость облегчает заполнение контейнеров, таких как ампулы или шприцы, после изготовления композиции.
Предпочтительные активные агенты являются микронизированными. Применение микронизированных активных агентов может помочь предотвратить быстрое осаждение твердых веществ в композиции.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Дальнейшие аспекты настоящего изобретения станут очевидными из последующего описания, которое приводится исключительно для примера и со ссылкой на прилагаемые чертежи, в которых:
Фиг. 1. Средние концентрации бензилпенициллина в плазме и молоке после внутримышечного введения Mamyzin;
Фиг. 2. Концентрации бензилпенициллина в молоке после внутримышечного введения PNT от Edwards 1965;
Фиг. 3. Концентрации бензилпенициллина в молоке после внутримышечного введения различных PNT-композиций;
Фиг. 4. Концентрации бензилпенициллина в плазме после внутримышечного введения внутримышечного введения различных PNT-композиций;
Фиг. 5. Концентрации бензилпенициллина в молоке после внутримышечного введения Mamyzin и композиции OT11PNTRTU-d;
Фиг. 6. Ингибирующая концентрация вещества в молоке после внутримышечного введения композиций OT11PNTRTU-e, -f и -g;
Фиг. 7. Ингибирующая концентрация вещества в молоке после внутримышечного введения композиций OT11PNTRTU-f и -h;
Фиг. 8. Ингибирующая концентрация вещества в молоке после внутримышечного введения композиций OT11PNTRTU-I, и-j;
Фиг. 9. Концентрация бензилпенициллина в молоке после внутримышечного введения Penethaject и композиций ОТ11PNTRTU-e и -k;
Фиг. 10. Концентрация бензилпенициллина в молоке после внутримышечного введения различных режимов дозирования композиции OT11PNTRTU-е;
Фиг. 11. Концентрация бензилпенициллина в плазме крови после внутримышечного введения Penethaject и композиций ОТ11PNTRTU-e и -k;
Фиг. 12. Относительная биодоступность бензилпенициллина после внутримышечного введения композиций OT11PNTRTU-e и -k в отношении Penethaject;
Фиг. 13. Относительная биодоступность бензилпенициллина после внутримышечного введения композиций OT11PNTRTU-I, -d, -a и -b в отношении Penethaject;
Фиг. 14. Процент восстановления PNT из композиций OT11PNTRTU-I, -d и -n во время испытаний стабильности;
Фиг. 15. Процент восстановления PNT из композиций OT11PNTRTU-o, -p во время испытаний стабильности;
Фиг. 16. Истощение бензил/пенициллина в молоке из Примера 6.
НАИЛУЧШИЕ СПОСОБЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Ряд составов, иллюстрирующих настоящее изобретение, приведен ниже.
Пример 1. Иллюстрация составов по настоящему изобретению, все проценты в примере 1 представляют собой % масс./масс.
OT11PNTRTU-a
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
31,3
Span 80
0,080
0,50
Пропилпарабены
0,003
0,02
Метилпарабены
0,013
0,08
Этилолеат
3,271
20,45
Кунжутное масло
7,63
47,71
Итого
16,00
100,0%
OT11PNTRTU-b
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
31,3
Span 80
0,080
0,50
Пропилпарабены
0,003
0,02
Метилпарабены
0,013
0,08
Этилолеат
10,90
68,15
Кунжутное масло
16,00
100,0%
Итого
5,0
31,3
OT11PNTRTU-c
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
31,3
PEG12Oleate
0,048
0,30
Пропилпарабены
0,003
0,02
Метилпарабены
0,013
0,08
Aerosil R972
0,160
1,00
Miglyol 812
10,78
67,35
Итого
16,00
100,0%
OT11PNTRTU-d
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
33,3
PEG12Oleate
0,075
0,50
Пропилпарабены
0,003
0,02
Метилпарабены
0,012
0,08
Этилолеат
9,91
66,07
Итого
15,00
100,0%
OTPNTRTU-e
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Tween 80
0,022
0,15
Этилолеат
9,28
64,89
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-f
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
34,96
Span 80
0,022
0,15
Этилолеат
9,28
64,89
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-g
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Tween 80
0,022
0,15
Span 80
0,022
0,15
Этилолеат
9,26
64,74
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-h
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Span 80
1,430
10,00
Этилолеат
7,87
55,03
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-i
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Tween 80
0,143
1,00
Этилолеат
9,16
64,0
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-j
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Tween 80
1,430
10,0
Этилолеат
7,87
55,0
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-k
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
35,0
Этилолеат
9,30
65,0
Итого
14,30
100,0%
OTPNTRTU-l
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
22,7
Tween 80
0,110
0,50
Пропилпарабены
0,004
0,02
Метилпарабены
0,018
0,08
Полипропиленгликоль
16,87
76,67
Итого
22,00
100,0%
OTPNTRTU-m
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
31,3
Span 80
0,080
0,50
Пропилпарабены
0,003
0,02
Метилпарабены
0,013
0,08
Migliol 840
10,90
68,15
Итого
16,00
100,0%
OTPNTRTU-n
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
22,7
Tween 80
0,077
0,35
Span 80
0,033
0,15
Пропилпарабены
0,004
0,02
Метилпарабены
0,018
0,08
Этилолеат
16,87
76,67
Итого
22,00
100,0%
OTPNTRTU-q
г
%
гидроиодид пенетамата
5
20,5
Бензиловый спирт
0,2443
1
Tween 80
1,222
5,00
Span 80
0,024
0,10
Триацетин
17,94
73,43
Итого
24,43
100%
OTPNTRTU-r
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
23,9
Бензиловый спирт
0,20
1,0
Tween 80
0,073
0,35
Span 80
0,031
0,15
Lipoid 90H
0,076
0,36
Miglyol 812
15,50
74,23
Итого
20,88
100%
OTPNTRTU-s
г
%
гидроиодид пенетамата
5,0
24,4
Бензиловый спирт
0,2
1,0
Tween 80
0,072
0,35
Span 80
0,031
0,15
Этилолеат
12,1
59,0
Триацетин
3,1
15,1
Итого
20,503
100,0%
OTPNTRTU-t
г
%
гидроиодид пенетамата
3,4
34,00
Бензиловый спирт
0,1
1,00
Полисорбат 80
0,01
0,10
Лецитин (фосфолипан 90H)
0,036
0,36
Триацетин
6,454
64,54
Итого
10,0
100,0%
Пример 2. Иллюстрация короткого периода удержания
Неожиданно было обнаружено, что путем регулирования вязкости композиций OT11PNTRTU-a и -b, высвобождение лекарственного средства из композиций в участке инъекции является достаточно быстрым, чтобы достичь WHP в молоке равна или меньше чем 60 часов, или с учетом доверительных интервалов, как требуется регулирующими органов, до 72 часов, как показано на Фигуре 3.
Обе композиции давались в виде дозы 10 г PNT. WHP (период удержания) определяется как если концентрационная кривая разрезает линию MRL, с последующим умножением на 12. Например, вычисляемый WHP в 52 часа предоставляет зарегистрированный WHP в 60 часов. Это также включает, что некоторые регистрирующие органы по всему миру требуют рассмотрения доверительного интервала для определения WHP. Эти результаты особенно удивительны, если сравнить результаты, показанные на Фиг. 3, с данными Edwards, S.J. (1964), Veterinary Record, Vol. 78, № 17, 583-5, как показано на Фиг. 2 для состава на масляной основе 5 MiolU (эквивалент 5 г PNT).
Данные Edwards предполагали бы гораздо более длительный WHP, чем 84 часов только с половиной дозы (5 г PNT). Композиция масляного носителя, используемого Edwards, не была раскрыта в опубликованном документе, однако выводы Edwards находятся в соответствии с общими сведениями о носителях на основе масла, что высвобождение активных веществ, как ожидается, будет более медленным.
Скорость всасывания PNT является важным компонентом для лечения мастита у дойных коров. Композиции на основе масла, как инъекции, как правило, считаются лекарственными формами с медленным высвобождением. Как правило, скорость всасывания инъецируемых композиций является высокой для водных растворов, содержащих препарат с гидрофильными свойствами, и низкой для масляных растворов, содержащих препарат с липофильными свойствами. Предсказание скорости всасывания лекарства из масляной суспензии, как правило, основывается на свойствах препарата.
Композиция OT11PNTRTU-c с гораздо более высокой вязкостью по сравнению с OT11PNTRTU-a и -b, имеет WHP дольше, чем 96 часов. В Таблице 1 перечислены вязкости проверенных композиций. Фиг. 4 показывает, что OT11PNTRTU-c более медленно всасывается в кровь после дозы 10 г PNT по сравнению со всеми другими композициями на Фиг. 4 и имеет все еще повышенные концентрации через 36 часов и 48 часов BP в плазме крови после последнего лечения, что способствует увеличению WHP по сравнению с другими композициями.
Таблица 1Вязкость тестируемых композиций -a, -b, -c и Penethaject
Композиция
Вязкость мПас при 20°C, Скорость сдвига 1/с
Penethaject
280
OT11PNTRTU-a
380
OT11PNTRTU-b
770
OT11PNTRTU-c
3270
Ожидается, что PNT-композиции, раскрытые в US 4446144 в качестве примеров от 51 до 53, также будет иметь столь же медленное высвобождение и долгий периода удержания из-за значительного количества загустителя, в виде 12-гидроксистеарина и моностеарата алюминия.
В дальнейшем было установлено для дозы 10 г PNT, что WHP в молоке композиции на основе масла OT11PNTRTU-d практически идентичен композиции на водной основе MamyzinТМ (после восстановления), как показано на Фигуре 5. Это удивительно, учитывая, что составы на масляной основе, как правило, считаются составами с медленным высвобождением, и особенно в отношении липофильного характера PNT.
Было также обнаружено, что с увеличением концентрации поверхностно-активного вещества WHP может дополнительно уменьшаться. Как показано на Фиг. 7, сравнение производится между OT11PNTRTU-f, который содержит 0,15% Span 80, и ОТPNTRTU-h, который содержит 10% Span 80. Аналогично на Фиг. 8 сравниваются OT11PNTRTU-I, который содержит 1,00% Tween 80, с OT11PNTRTU-j, который содержит 10% Tween 80. Понятно, что увеличение поверхностно-активного вещества соответствует уменьшению в периоде удержания.
Фиг. 9 показывает концентрацию BP в молоке для композиций по настоящему изобретению со временем после трех инъекций (в соответствии с предложенным режимом дозировки), со сравнением между OT11PNTRTU-e, OT11PNTRTU-k и PenethajectТМ. Как можно видеть, рассчитанный WHP после ACVM-рекомендаций проверенных композиций сходен (примерно 42-46 часов) с PenethajectТМ, которая в настоящее время доступна на рынке. Неожиданно было обнаружено, что этот короткий период удержания возможен для композиции на основе этилолеата без какого-либо поверхностно-активного вещества (OT11PNTRTU-k).
Далее было неожиданно обнаружено, что рассчитанный WHP как для режима дозирования 10 г с последующим 5 г PNT на следующий день, так и для режима дозирования 3×5 г PNT суточных доз находятся ниже 48 часов и, следовательно, имел бы WHP 48 часов после расчетов по ACVM-рекомендациям Новой Зеландии, как показано на Фиг. 10. Это удивительно эффективно для водной суспензии MamyzinТМ, которая после режима дозировки 10 г + 5 г PNT имеет 60-часовой WHP.
Пример 3. Иллюстративный пример биодоступности
На Фиг. 3 показана концентрация ВР в молоке для различных тестируемых композиций, MamyzinТМ и PenethajectТМ, после дозы 10 г PNT. Опять же, можно видеть, что композиции OT11PNTRTU-a и -b существенно выровнены с профилем высвобождения MamyzinТМ.
Биоэквивалентность в настоящем документе определяются как разница площади под кривой между эталонным продуктом (PNT-композиция на водной основе) и тестируемым продуктом (PNT-композиция на масляной основе), каждая из которых, данных как одинаковая доза (относительная биодоступность), составляет не более чем на 20% (биоэквивалент=1; в пределах от 0,9 до 1,1) (РЕГИСТРАЦИОННЫЕ ACVM-СТАНДАРТЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ТОРГОВОГО НАИМЕНОВАНИЯ ПРОДУКЦИИ).
На Фиг. 4 показана концентрация ВР в плазме для композиций OT11PNTRTU-a, -b и -c, по сравнению PenethajectТМ после дозы 10 г PNT. Опять же, можно видеть, что композиции OT11PNTRTU-a и -b существенно выровнены с профилем высвобождения PenethajectТМ.
Результаты относительной биодоступности для BP плазмы показаны в Таблице 2. Композиции ОТ11PNTRTU-a и -b удовлетворяют требованиям биоэквивалентности или даже более высокой биодоступностью, как определено выше, в то время как состав с высокой вязкостью OT11PNTRTU-с показывает отсутствие биоэквивалентности.
Таблица 2Относительная биодоступность тестируемых композиций -a, -b и –c
Композиция
Относительная биодоступность AUC<sub>24ч, масло</sub>/AUC<sub>24ч, водн.</sub>
OT11PNTRTU-a
0,93
OT11PNTRTU-b
1,11
OT11PNTRTU-c
0,78
AUC24h масло на основе PNT композиций исследованы Edwards был значительно ниже, чем на водной основе PNT композиции в эквивалентных дозах, как показано в таблице 3. Вязкий состав OT11PNTRTU-c сравним по результатам относительной биодоступности с масляным составом 5 MiolU у Edwards. Несмотря на то, что данные Edwards представлены для молока, а Фиг. 4 показывает данные в плазме крови, тем не менее уместно сравнивать относительные биодоступности, поскольку существует прямая корреляция между концентрациями ВР в плазме и молоке, касающаяся площади под кривой, как показано на Фигуре 1.
Таблица 3Относительная биодоступность композиций Edwards
Композиция
доза
AUC<sub>24ч </sub>IU/ мл*ч
Относительная биодоступность AUC<sub>24ч, масло</sub>/AUC<sub>24ч, водн.</sub>
на основе масла
1
4,0
0,68
на водной основе
1
5,9
на основе масла
2
5,9
0,86
на водной основе
2
6,9
на основе масла
5
18,2
0,77
на водной основе
5
23,7
Кроме того, было обнаружено, что различные поверхностно-активные вещества с различными значениями HLB (Span 80 и Tween 80) или их сочетания приводят к сходным концентрациям ВР в молоке (Фиг. 6).
Неожиданно было обнаружено, что при применении режима дозировки из трех ежедневных доз 5 г PNT, композиции на основе масла OT11PNTRTU-e и -k обладают почти такими же концентрациями ВР в молоке, как и PenethajectТМ на основе водного раствора (после восстановления), как показано на фиг. 9.
Дополнительный неожиданный результат состоит в том, что средняя максимальная концентрация Сmax ВР в плазме крови после последнего лечения тремя ежедневными дозами по 5 г PNT для композиций на основе масла OT11PNTRTU-e и -k была больше, по сравнению с Penethaject, как показано на Фиг. 11. Далее было найдено, что относительная биодоступность композиций на основе масла OT11PNTRTU-e и -k была больше, чем 1,0, что означает, что эти композиции на основе масла обладают более высокой биодоступностью в течение 24 часов и в целом, чем PenethajectТМ, как показано на Фиг. 12.
Относительная биодоступность в плазме композиций на основе масла OT11PNTRTU-I, -d, -a,- b после дозы 10 г PNT показана на Фиг. 13. Результаты показывают, что композиции являются, по меньшей мере, биоэквивалентными или обладают даже более высокой биодоступностью, чем PenethajectТМ.
Было очень удивительно обнаружить, что биодоступность масляных композиций была выше, или, по меньшей мере, соответствовала нижнему пределу биодоступности для достижения биоэквивалентности, по сравнению с PNT-композицией на водной основе. Следовательно, это также окажет положительное влияние на концентрации BP в молоке из-за прямой корреляции между кровью и молоком, как показано на Фигуре 1. Это может позволить снизить дозы PNT, при достижении такой же биодоступности и эффективности. Снижение дозы PNT может также привести к более короткому периоду удержания.
Пример 4. Иллюстративный пример характеристик стабильности при хранении
Было установлено, что PNT не является химически стабильным во всех неводных составах, несмотря на утверждение, сделанное в патентном документе США 4,446,144. Фиг. 14 показывает, что PNT в пропиленгликоле (OT11PNTRTU-I) разлагается на около 30 % масс./масс. после примерно двух месяцев, в то время как PNT химически стабилен в течение примерно шести месяцев в составах OT11PNTRTU-d и -m, при температуре 40ºC и в условиях неконтролируемой влажности.
Далее, было с удивлением обнаружено, что OT11PNTRTU-d и -n химически стабильны в течение не менее трех месяцев при 40ºC и относительной влажности 75%, хотя PNT может гидролизоваться в присутствии воды/влаги. Восстановление PNT после двух месяцев показано в Таблице 4.
Таблица 4Стабильность PNT в композициях OT11PNTRTU-d и -n
Композиция
Восстановление PNT %
OT11PNTRTU-d
100,5
OT11PNTRTU-n
100,2
Стеклянные контейнеры, как правило, дают лучшую защиту от влаги. Несмотря на то, что порошок PNT стабилен во флаконах из пентаэритритола, удивительно, что неводные суспензии PNT также являются стабильными, поскольку коэффициент диффузии у жидкостей значительно выше, чем у порошков.
Очевидно, что настоящее изобретение показывает очень хорошую химическую стабильность PNT при хранении в течение длительного периода времени.
Пример 5. Иллюстративный пример физической стабильности неводных PNT-суспензий
Для лечения мастита крупного рогатого скота концентрация PNT в инъецируемой композиции может составлять 20% масс./об. или больше. Несмотря на то, что такие суспензии PNT и масла без каких-либо дополнительных вспомогательных веществ могут проявлять физическую стабильность в контролируемых лабораторных условиях или во время хранения, при типичных условиях транспортировки и обращения суспензии могут демонстрировать свойства слеживания.
Первоначальное тестирование характеристик седиментации и/или спекания проводилось путем воздействия на образцы реальных условий перевозки. Более контролируемое и удобное тестирование проводилось с помощью специально построенного механического прибора для перемешивания. Было обнаружено, что контролируемые лабораторные эксперименты согласуются с результатами, полученными в реальных условиях.
Установлено, что для некоторых композиций суспендированные PNT-частицы оседают на дне флакона или другой емкости, образуя осадок. Несмотря на то, что для суспензии является обычным отстаиваться и образовывать осадок, чтобы быть полезным в практическом продукте, такой осадок должен относительно легко повторно суспендироваться, и следует избегать слеживаемости. В документе US 4446144 предшествующего уровня техники делается предположение, что растительные масла должны обеспечивать высочайшую степень стабильности. Однако суспензии PNT в масляном носителе, таком как кунжутное масло, например, OT11PNTRTU-b повторно не суспендируются путем встряхивания в реальные сроки.
Время, необходимое для повторного суспендирования спекшихся композиций, в некоторых случаях превышало 30 минут. Предпочтительно время, необходимое для повторного суспендирования осевших частиц композиции, составляет порядка нескольких минут. Наиболее предпочтительно, если ресуспендирование необходимо, то это должно занимать меньше 1 минуты.
Соответственно, желательно включать агент, препятствующий слеживанию, в композицию по изобретению.
Чтобы избежать длительных периодов удержания и низкой биодоступности, в составах по изобретению используются вещества, препятствующие слеживанию, которые не приводят к существенному увеличению вязкости композиции.
Без ограничений, такие незагущающие вещества, препятствующие слеживанию, включают растворители, поверхностно-активные вещества и эмульгаторы. Эти вещества могут иметь незначительный эффект на вязкость композиции, но это не существенно по сравнению с веществами, препятствующими слеживанию, - коллоидным кремнеземом и стеаратом алюминия, которые, как известно, являются загустителями.
Было обнаружено, что поверхностно-активные вещества, такие как Tween 80 (полисорбат 80) и PEG12Oleate, обеспечивают более стабильную суспензию, которая более легко повторно ресуспендируется.
Удивительно, но было обнаружено, что при использовании носителя, который имеет низкую растворимость в воде, такого как триацетин, физическая стабильность суспензии PNT является значительно улучшенной во время хранения и транспортировки. В одном испытании композиция 100 мл PNT-суспензии OT12PNTRTU-q содержалась в 100 мл флаконе из пентаэритритола.
Второй удивительный пример дает OT12PNTRTU-r, которая основывается на носителе среднецепочечных триглицеридов. Добавление гидрированного соевого лецитина к суспензии PNT значительно улучшало физическую стабильность.
Предпочтительная композиция представляет собой OT12PNTRTU-s, которая включает триацетин в качестве носителя и вещества, препятствующего слеживанию, и Tween-80 в качестве вещества, препятствующего слеживанию, наряду с бензиловым спиртом, который, как было также найдено, является полезным для стабильности и повторного суспендирования.
Пример 6
Предпочтительный состав приведен ниже.
Ингредиент
Количество (г/л)
Функция
Пантематгидриодид (микронизированный)
333,3 г
Активный ингредиент
Бензиловый спирт
10,0 г
Консервант
Полисорбат 80 (Tween 80)
1,0 г
Поверхностно-активное вещество
фосфолипoн Н90 (Лецитин)
3,6 г
Эмульгатор/ диспергирующий агент
Триацетин
q.s. в 1 л
Носитель
В конечном составе, количество пенетамата (33,33%) выбирают, чтобы соответствовать концентрации пенетамата в пионерском продукте на водной основе MamyzinТМ (при восстановлении). Концентрация является высокой относительно других препаратов для инъекций, поскольку пенетамат требует достаточно высокой дозы, пока существует практический минимум объема жидкости, который может быть инъецирован животному в одном участке. Такая высокая пропорция взвешенных твердых веществ усугубляет проблему слеживания, поскольку большой комок твердых спекшихся веществ сложнее ресуспендировать, чем небольшое количество.
Количество бензилового спирта является стандартным количеством при использовании в качестве консерванта. Количества полисорбата 80 и фосфолиона H90 являются стандартными количествами и действуют, чтобы способствовать повторному суспендированию активного вещества после хранения. Триацетин сам по себе преодолевает многое из проблемы спекания, но дисперсия и повторное суспендирование по-прежнему улучшаются (т.е. быстрее повторно суспенлируется) с добавлением этих агентов.
Поверхностно-активное вещество (полисорбат 80) также улучшает производственный процесс, поскольку он помогает триацетиновому носителю «смачивать» активное вещество гораздо быстрее, обеспечивая более быструю дисперсию. Без поверхностно-активного вещества активное вещество изначально имеет тенденцию плавать на поверхности жидкого носителя, и требуется достаточное перемешивание, чтобы диспергировать это до суспензии. В процессе производства партии это было бы значительным неудобством.
Дополнительные данные
Определение стабильности конечного состава еще не завершено, но оказывается, что срок годности при комнатной температуре будет составлять, по меньшей мере, 12 месяцев.
Проверка стабильности:
Параметры стабильности
<u>Инспекция</u>
<u>Критерии приемки</u>
<u>Описание</u>
Серовато белая гомогенная суспензия.
<u>Может разделяться при стоянии. Ресуспендируется при встряхивании</u>
<u>Относительная плотность</u>
<u>г/мл</u>
<u>Пенетаматгидриодид</u>
<u>масс./об.</u>
<u>Стерильность</u>
<u>При помощи способа прямой инокуляции (BP)</u>
<u>Нет роста в жидкой среде Тиогликолята после 14 дней инкубации (минимум) при 30-35°С</u>
<u>Нет роста в питательной среде соевого казеина после 14 дней (минимум) инкубации при 20-25°С</u>
Дата определения стабильности:
Batch No.: T1958
Упаковка: 100 мл прозрачные флаконы из полиаминотриазола
Тест
Условия хранения
Месяцы
0
1
3
6
Описание Серовато белая гомогенная суспензия
25°С/60% RH
соответствует
-
соответствует
соответствует
30°С/65% RH
соответствует
-
соответствует
соответствует
40°С/75% RH
соответствует
соответствует
соответствует
соответствует
Относительная плотность
25°С/60% RH
1,224
-
1,223
1,224
1000-1500 г/мл
30°С/65% RH
1,224
-
1,227
1,223
@ 20°C
40°С/75% RH
1,224
1,224
1,224
1,221
Пенетамат-гидриодид
25°С/60% RH
33,44
33,6
33,8
29,99-36,66% масс./об.
30°С/65% RH
33,44
-
34,8
33,5
40°С/75% RH
33,44
33,57
34,0
32,4
Стерильность
25°С/60% RH
удовлетворяет
-
удовлетворяет
удовлетворяет
Способ прямой инокуляции
25°С/60% RH
удовлетворяет
-
удовлетворяет
удовлетворяет
25°С/60% RH
удовлетворяет
*
удовлетворяет
удовлетворяет
*тест не проводили; - тест не требовался
Время удержания
Исследование было проведено с целью определить время удержания предпочтительного варианта осуществления, а именно в Примере 6. В исследовании были использованы 22 коровы, которым внутримышечно вводили 5 г (15 мл) пенетамата в течение трех последовательных дней. Образцы молока получали от всех коров, два раза в день, до 120 часов после последнего введения. Молоко из доений после 12, 36, 48, 60 и 72 часов анализировали на остатки пенициллина. Результаты, показанные на Фиг. 16, демонстрируют, что остаток бензилпенициллина в молоке падает ниже MRL (предельная допустимая концентрация) 0,004 мг/кг через около 41 часа после последней инъекции. Это обеспечило бы время удержания 48 часов исходя из доений дважды в день.
Это эквивалентно времени задержания 48 часа продукта MamyzinТМ, который представляет собой водную повторно разведенную суспензию.
Биоэквивалентность
Было проведено исследование с целью определения биоэквивалентности Примера 6 с MamyzinТМ.
Было выполнено 2х2 перекрестное исследование с использованием 20 дойных телок. Все телки получили внутримышечно 15 мг/кг гидроиодидпенетамата в день 0 и в день 14, как состав в Примере 6 или «Mamyzin». После 14-дневного периода промывания процедуры были отменены. Кровь отбирали перед лечением, затем через 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 24 и 36 ч после каждого лечения. Кровь центрифугировали, и образцы плазмы замораживали, затем отправляется в лабораторию для анализа на бензилпенициллин (анализ LC/MS/MS). Результаты анализа были использованы для расчета фармакокинетических параметров, для изучения биоэквивалентности. В соответствии с «площадью под кривой» (AUC) концентрации препарата в крови с течением времени, предпочтительным лечением является биоэквивалент MamyzinТМ.
Предпочтительный производственный процесс выглядит следующим образом:
Процесс формулирования
- Добавить 56% триацетина в подходящего размера сосуд для изготовления
- Добавить бензиловый спирт и полисорбат 80 при перемешивании
- Фильтровать смесь через стерильный 0,2 мкм фильтр в стерильный резервуар
- Нагреть до приблизительно 55°C, проверить температуру и поддерживать температуру
- Добавить фосфолипон H90, суспендировать и хорошо гомогенизировать. Проверить однородность
- Добавить пенетаматгидриодид (микронизированный, стерильный), приостановить и гомогенизации. Проверить однородность
- Охладить суспензию до приблизительно 25°C. Проверить температуру
- Довести объем трацетином
- Гомогенизировать до однородной суспензии, проверить однородность
Это составление и процесс продуцирует стабильный неспекающийся инъецируемый продукт, который работает, по меньшей мере, так же хорошо, как и обычные PNT-процедуры.
3
Она имеет вязкость 77 cП при 20°C в вискозиметре Brookfield со шпинделем LV1 при 30 об/мин. Плотность составляет 1,224 г/см.
Аспекты настоящего изобретения были описаны на примере только, и следует понимать, что изменения и дополнения могут быть внесенные в это без отхода от объема прилагаемых пунктов формулы изобретения.