Средство для лечения эймериозов у животных
AGENT FOR TREATING EIMERIOSIS IN ANIMALS

Изобретение относится к ветеринарии, точнее к паразитологии, а именно - к средствам для лечения эймериозов у животных, содержащих (средство) N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин
в качестве действующего вещества и подсолнечное масло, как растворитель при их весовом соотношении 1:99, может быть использовано в качестве антиэймериозного (антикокцидиозного) препарата в ветеринарии для лечения сельскохозяйственных и домашних животных. Заявленное антиэймериозное средство вводят перорально в дозе 10 мг/кг живого веса животного дважды с интервалом в 6 дней. Заявленное средство обладает высокой противопаразитарной эффективностью и отсутствием токсичности (ЛД50 2500 мг/кг), вследствие чего является практически безопасным при использовании по назначению и обеспечивает повышение эффективности лечения.
Хорошо известно, что тяжелые формы паразитозов у животных преимущественно регистрируются на фоне иммунодефицитных состояний. В организме животных и птиц, больных эймериозом, происходит интоксикация продуктами обмена паразитов и гнилостной микрофлоры с кровавыми выделениями, что ведет к нарушению функции нервной системы, вызывая угнетение животных и птиц, вплоть до коматозного состояния, тремора мышц и паралича конечностей. Животные и птицы теряют в весе, мясо переболевших животных имеет низкую питательную ценность и быстро портится при хранении. У птиц снижается яйценоскость.
Кокцидиозы, а именно эймериозы – остро, подостро и хронически протекающие болезни животных и птиц, вызываемые различными видами простейших, относящихся к подцарству Protozoa и к семейству Eimeriidae. Эймериозы вызываются простейшими, паразитирующими преимущественно в эпителиальных клетках кишечника. При сильной степени инвазии эймериозы могут вызывать массовую гибель животных [Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев Р.М. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. – М.: Колос, 2008, – 756 с.].
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены ряд лекарственных препаратов, обладающих антиэймериозной активностью для лечения эймериозов животных и птиц: фуразолидон, фуракриллин, фуразолан (нитрофурановые препараты), химкокцид, трихопол, салиномицин, байкокс, сульфаниламидные препараты (сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфапередозин, норсульфазол, фталазол), а также левомецетин, мономиецин и многие другие [Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. – М.: Колос, 2000, - 559 с.; Плешаков С.А., Ларионов С.В., Розовенко М.В. Эффективность фуракриллина и фуразонала при эймериозе кроликов. Ветеринария, Cаратов, 1997. № 8, с. 28-30].
Однако имеющиеся на сегодняшний день лекарственные препараты против эймериоза обладают одним или несколькими негативными свойствами:
- слабое антиэймериозное действие, высокие дозы и многократное применение, высокая цена;
- высокая токсичность;
- кумуляция в съедобных тканях животных;
- иммунодепрессивное действие;
- длительное использование в ветеринарии и, как следствие, опасность развития резистентных штаммов возбудителя.
Несмотря на широкое использование лекарственных препаратов в качестве средств лечения и профилактики эймериозов, 100% показатели экстенс- и интес-эффективности из исследованного уровня техники заявителем не выявлены. Поэтому эти препараты применяются неоднократно. Например, для лечения эймериоза кроликов применяют фуразолидон по 250 мг/кг в течение 10 дней, а после 5 дневного перерыва – сульфадиметоксин – в первый день 2 г, в последующие 9 дней – по 1 г на животного [Пономаренко В.Я. Материалы научной конференции паразитологов УАССР. Киев, 1975, – С.116.].
Недостатком известного технического решения является то, что эффективная концентрация известных препаратов намного превышает эффективную концентрацию (дозу), используемую в заявленном техническом  решении, при этом указанные в известном источнике дозы вводятся на протяжении нескольких дней - до десяти, при этом требуется повторное лечение другими препаратами, что, в конечном счете, ведет к большим издержкам как материальных, так и трудовых ресурсов.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено изобретение по патенту РФ 2234932, сущностью является способ лечения коров, больных эймериозом, включающий введение с кормом кокцидина, отличающийся тем, что животным дополнительно вводят подкожно однократно 10%-ный раствор эраконда в дозе 4,5-5,5 мг/кг массы тела.
Недостатком известного способа является многократное применение препарата, а именно - сначала вводят перорально кокцидин, а затем инъекционно вводят раствор эраконда, при этом лечение характеризуется сложностью и высокой стоимостью.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено изобретение по патенту РФ 2322235, сущностью является способ лечения эймериоза у животных и птиц, включающий двукратное, с интервалом 5 дней скармливание ксимедона или ксимедонгидрохлорида в дозе 30 мг/кг массы тела мелким животным и дополнительно введение фуразолидона в дозе 20 мг/кг массы тела пятидневным курсом с интервалом 3 дня.
Недостатком известного способа является многократное применение двух препаратов в высоких дозах.
Таким образом, принцип использования антиэймериозных препаратов  на дату представления заявочных материалов основан на многократном их применении, что  может оказать побочное негативное воздействие на организм (неиндифферентно для организма).
Многие из известных препаратов обладают токсическим, раздражающим и иммунодепрессивным действием. Кроме того, длительное применение одного лекарства приводит к появлению дисбактериоза, способствует угнетению ферментативной активности желудочно-кишечного тракта и может стать причиной других функциональных изменений в организме птиц и животных.
50
Из исследованного уровня техники выявлено изобретение по патенту заявителя РФ 2473334 «Антиэймериозная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана», сущностью является антиэймериозная фармацевтическая композиция, содержащая н-тетрадецилтри-н-бутилфосфоний хлорид и 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-динитробензофуроксан в качестве активных компонентов при их весовом соотношении 1:10 и глюкозу как вспомогательное вещество. Композицию используют путем 2-х кратного приема с интервалом в 24 часа в дозе 4 мг/кг (в пересчете на действующее вещество - соль фосфония) при ЛД 2500 мг/кг.
Недостатком известного технического решения является необходимость двукратного применения препарата. Кроме этого, известное средство характеризуется достаточно сложным и дорогостоящим синтезом, что не способствует его широкому применению, при этом ни сам препарат, ни его составляющие серийно не выпускаются на территории РФ, т.к. синтезируется исключительно в условиях лаборатории Казанского федерального университета, в силу того, что патент РФ №2473334 принадлежит КФУ и не доведен до стадии промышленного производства вследствие отсутствия инвестиций для выполнения доклинических  и клинических испытаний.
Из исследованного уровня техники выявлено изобретение по патенту заявителя РФ 2557889 «Средство для лечения кокцидиозов у птиц и животных», сущностью является антиэймериозная фармацевтическая композиция, содержащая н-тетрадецилтри-н-бутилфосфоний бромид и лекарственный препарат «Эринит» в качестве активных компонентов при их весовом соотношении 1:2 и глюкозу как вспомогательное вещество.
Известный препарат используют одноразово, лечебная доза составляет 2,5 мг/кг, при этом препарат обладает низкой токсичностью.
Недостатком известного технического решения является то, что известное средство характеризуется достаточно сложным и дорогостоящим синтезом активного вещества н-тетрадецилтри-н-бутилфосфоний бромида, что не способствует его широкому применению, при этом, ни сам препарат, ни его составляющие не выпускаются на территории РФ, т.к. синтезируется исключительно в условиях лаборатории Казанского федерального университета, при этом изобретение по указанному патенту также принадлежит КФУ и изобретение не доведено до стадии промышленного производства также вследствие отсутствия инвестиций.
50
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено изобретение по патенту РФ 2629316 «Средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии», сущностью является средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии, содержащее н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид в качестве активного компонента и подсолнечное масло при их весовом соотношении 1:99. Известное средство малотоксично (ЛД 225 мг/кг – III опасности), обладает высокой терапевтической эффективностью при низких лечебных дозах.
Недостатком известного технического решения является трудность промышленного применения, так как производство алкилфосфониевых солей в России не налажено и заводским способом они не синтезируются, а впервые были синтезированы в Казанском федеральном университете (лабораторный синтез), при этом изобретение по указанному патенту также принадлежит КФУ и изобретение не доведено до стадии промышленного производства также в вследствие отсутствия инвестиций.
Описанные выше аналоги являются аналогами заявленного технического решения по назначению.
При этом следует акцентировать внимание на том, что аналогов по структуре действующего вещества N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина заявителем из уровня техники не выявлено, поэтому формула изобретения составлена без ограничительной части.
Таким образом, из исследованного уровня техники можно сделать вывод, что изыскание новых препаратов и схем их применения для профилактики и лечения эймериозов животных, птиц и затем и человека, воздействующих на различные звенья патологического процесса, является актуальной задачей как ветеринарии, так и фармацевтики в целом.
Задачей и техническим результатом заявленного технического решения
является создание эффективного, нетоксичного антиэймериозного средства нового поколения для ветеринарии с низкими лечебными дозами, расширяющего арсенал средств указанного назначения, на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, обладающего характерным комплексом свойств:
- низкими лечебными дозами в пересчете на действующее вещество - N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин;
- отсутствием токсичности;
- удобным методом введения препарата во время кормления животных в виде масляного раствора;
- высокой эффективностью в отношении эймерий, обеспечивающей расширение арсенала известных средств, являющихся на дату подачи заявочных материалов преимущественно малоэффективными, токсичными и дорогостоящими средствами указанного назначения.
Сущностью заявленного технического решения
является средство для лечения эймериозов у животных, содержащее N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин в качестве действующего вещества и подсолнечное масло в качестве растворителя при их весовом соотношении: N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин : подсолнечное масло = 1 : 99.
Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг.1-3.
На Фиг.1 представлена Таблица 1, в которой приведена сравнительная эффективность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина и известного препарата фуразолидона, используемого  при лечении эймериоза крупного рогатого скота (телята), как наиболее доступного препарата.
На Фиг.2 представлена Таблица 2, в которой приведена сравнительная эффективность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина и известного препарата ампролиума, используемого  при лечении эймериоза мелкого рогатого скота (козлята).
На Фиг.3 представлена Таблица 3, в которой приведена сравнительная эффективность заявленного средства на основе при N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина и известного препарата «Байкокс 2,5%», используемого  при лечении эймериоза кроликов.
Сокращения в Таблицах означают:
- экз. – количество экземпляров яиц;
- ИИ – интенсинвазированность;
- ИЭ - интенсэффективность;
- ЭЭ – экстенсэффективность.
Поставленные задачи и заявленный технический результат достигаются посредством синтеза принципиально нового средства для лечения эймериозов у животных, полученного впервые в мире, состоящего из действующего вещества N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, растворенного в подсолнечном масле, при их весовом соотношении 1 : 99:
N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин
Заявленное техническое решение осуществляется следующим образом.
Пример 1. Получение заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина для лечения эймериозов у животных.
Заявленное средство получают в два этапа.
Этап 1.
Получение действующего компонента заявленного средства – N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина.
Действующий компонент заявленного средства – N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин формулы (1) получают известным способом, описанным заявителем в патенте на изобретение РФ № 2640816, опубл. 18.01.18, Бюл. № 2. Галкина И.В., Бахтиярова Ю.В., Герасимов А.В., Шулаева М.П., Поздеев О.К., Галкин В.И. «Применение ароматических азометинов с высшими алкильными заместителями в качестве средства, обладающего бактерицидной и фунгицидной активностью», приведенным (способ получения) заявителем далее.
(1)
К раствору 2,063 г (0,0112 моль) 4-бром-бензальдегида в 6 мл теплого, например, при 30 °С, этанола приливают раствор 3 г (0,0112 моль) октадециламина-1 в 15 мл того же растворителя (этанола). Реакционную смесь нагревают на водяной бане при температуре 30-50 °С в течение, например, 2 часов, затем реакционную смесь охлаждают.
Растворитель удаляют на роторном испарителе, осадок промывают на воронке Шотта этиловым спиртом. Получают N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин в виде белого порошкообразного продукта.
-1
1
3
3
3
3
3
3
3
HH
HH
2
HH
2
2
HH
2
15
HH
2
3
HH
25
42
H
H
H
H
H
-
H
-]
H
Характеристики полученного продукта: т.пл. 59,5 °С. Выход продукта 4,75 г (97.3 %). ИК-спектр, см: 1644 (С=N). ЯМР H (400 МГц, СDCl): 8.23 s (1H, -C=N-), 7.61 d (2H, NC-C=C-, J= 8.39 Гц), 7.55 d (2H, BrC=C-CH=, J= 8.40 Гц), 3.61 t. (2H, =NC-, J= 6.81 Гц), 1.70 m. (2H, =NCH-C, J= 13.60 Гц), 1.27 m (30H, [-C, J= 15.64 Гц), 0.90 t. (3H, -CH-C, J= 7.00 Гц). Вычислено, %: С 68.81; Н 9.63; N 3,21. CHNBr. Найдено, %: С 68,54; Н 9,79; N 3,09.
Этап 2.
Получение целевого продукта - заявленного средства для лечения эймериозов у животных.
Собственно заявленное средство для лечения эймериозов у животных готовят следующим образом.
В фарфоровой ступке растирают 1,0 г N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, полученного на Этапе 1, до получения бесцветной однородной пудры и растворяют в 99,0 г подсолнечного масла при температуре, например, 35 °С. Использовали масло подсолнечное нерафинированное, первый сорт, холодный отжим, ГОСТ 1129-2013.
Для лечения масляную лекарственную форму скармливают животным во время утреннего кормления. Для дозирования у животных используют приготовленный 1% раствор N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина в подсолнечном масле в количестве, зависящем от веса животного.
Пример 2. Изучение противоэймериозной эффективности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина.
Противоэймериозную эффективность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина изучали в трех опытах, на примере:
- крупного рогатого скота - телята (опыт 1);
- мелкого рогатого скота – козлята (опыт 2);
- кроликов (опыт 3).
Опыт 1. Изучение противоэймериозной эффективности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)-октадекан-1-амина при эймериозе крупного рогатого скота (телята).
Изучали 30 телят 4-5 месячного возраста, естественно инвазированых Eimeria bovis, Eimeria zuernii и Eimeria ellipsoidalis, содержащихся в ООО «Татнефтепродукт» Атнинского района РТ.
Клинические признаки характеризовались исхуданием, периодически появляющейся диареей, общим угнетением и снижением аппетита.
На основании результатов копрологических исследовании телята были разделены на 3 группы (по 10 голов), из них две опытные (1-я и 2-я) и одна контрольная (3-я). Животные в группах были подобраны по принципу аналогов.
Телятам 1-ой группы однократно задавали N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин в дозе 10 мг/кг, дважды с интервалом в 6 дней.
Телята 2-й группы получали известный препарат фуразолидон (20 мг/кг) двумя пятидневными курсами с интервалом в 3 дня.
Телята 3-й группы служили контролем – без лечения.
Телята всех групп содержались в одинаковых условиях, а кормление их проводилось в соответствии с зоотехническими нормами. Ежедневно проводили клинический осмотр поголовья. Пробы фекалии для исследования брали до введения препарата и через 7, 15 и 30 дней после лечения соответственно.
Результаты изучения противоэймериозной эффективности заявленного средства на телятах, естественно инвазированных эймериозом, представлены на Фиг.1 в Таблице 1.
Из данных, представленных в Таблице 1, видно, что интенсивность эймериозной инвазии у естественно зараженных телят колебалась от 287±2,5 до 339±1,9.
Через 7 дней после лечения:
- у животных 1-й и 2-й опытных групп произошло снижение ооцист. Интенсэффективность препаратов в 1-й группе составила 40,0%, во 2-й – 30,0%.
Через 15 дней после лечения:
- у животных 1-й и 2-й опытных групп произошло дальнейшее снижение ооцист эймерий. В 1-й группе их количество равнялось 95±1,9, во 2-й - 166±1,5, а интенсэффективность – 64,7% и 47,2% соответственно. В этот период восемь животных из 1-й группы и шесть – из 2-й полностью освободились от эймерий.
Через 30 дней после лечения:
- в 1-й группе интенсивность эймериозной инвазии снизилась до 25±2,2 ооцист, интенсэффективность составила 88,7%, а экстенсэффективность – 90,0%.
- во 2-й группе после лечения фуразолидоном среднее количество ооцист у телят в этот период составила 100±2,6, интенсэффективность - 68,1 и экстенсэффективность – 70,0%.
- в 3-й группе (нелеченной) интенсивность эймериозной инвазии у телят за период опыта возросла до 375±3,2 ооцист, против 339±1.9 в начале опыта.
Из указанного можно сделать вывод, что интенсэффективность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина при эймериозе крупного рогатого скота при исследовании через 7 дней была выше в сравнении с фуразолидоном на 9,0%, через 15 дней - на 17,5%, через 30 дней - на 20,6%, а эктенсэффективность была выше на 20,0% соответственно.
Опыт 2. Изучение противоэймериозной эффективности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)-октадекан-1-амина при эймериозе мелкого рогатого скота (козлята).
Изучение противопаразитарной эффективности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина при эймериозе мелкого рогатого скота проводили в Крестьянско-фермерское хозяйстве (КФХ) «Абдрахманов А.А.» Высокогорского района РТ на 32 козлятах 3-4 месячного возраста, естественно зараженных возбудителями эймериозов.
Перед началом опыта в корпусах 1 и 2 выборочно брали свежие пробы фекалий, которые помещали в пробирки и увлажняли 2%-ным раствором двухромовокислого калия. Пробирки этикетировали и доставляли на кафедру эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ. Пробы исследовали по методу Котельникова-Хренова. Для определения видовой принадлежности выявленных эймерий пробы перекладывали в бактериологические чашки и ставили для созревания ооцист в термостат с температурой 27-28°С на 10 дней. В течение этого времени фекалий ежедневно исследовали на обнаружение ооцист. Всплывшие на поверхность флотационной жидкости ооцисты помещали на предметное стекло, поверх которого клали покровное и производили изучение видового состава ооцист (об.×40, ок. ×10) по общепринятому методу. В исследованных пробах были выявлены ооцисты следующих видов: Eimeria faurei, Eimeria intricate, Eimeria ninaekohljakimovae. На основании результатов копрологического исследования животные были разделены на 3 группы по 10 -12 голов в каждой.
Перед введением препаратов козлят в течение 12 часов выдерживали на голодной диете, водопой не ограничивали.
Козлятам 1-й группы внутрь с помощью бутыли выпаивали масляный раствор N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина в дозе 10 мг/ кг дважды с интервалом в 6 дней.
Козлятам 2-й группы в смеси с концентратами задавали известный препарат ампролиум 30% в дозе 240 мг ДВ на 1 л воды в течение 7 дней.
3-я группа козлят была контрольной и их не подвергали лечению.
За козлятами ввели наблюдение в течение 30 дней. Пробы фекалий брали и исследовали через 7, 15 и 30 дней соответственно после лечения. Результаты исследования представлены на Фиг. 2 в Таблице 2.
Из данных, представленных в Таблице 2, видно, что:
Через 7 дней после лечения:
- у козлят 1-й группы, получавших заявленное средстве на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, ИИ составила 59±2,4, ИЭ и ЭЭ препарата равнялись 45,4 % и 30% соответственно.
- у козлят 2-й группы, леченных препаратом ампролиум, эти показатели составили 71±1,8; 36,5 и 20,0% соответственно.
- у козлят 3-й, контрольной группы ИИ повышалась и составила в этот период 120±3,1 ооцист в одном грамме фекалий.
Через 15 дней после лечения:
-  у козлят 1-й группы ИИ, ИЭ и ЭЭ равнялись 55 ±1,7; 66,1% и 70%,
- у козлят 2-й группы ИИ, ИЭ и ЭЭ равнялись 69±1,4; 45,% и 50,0% соответственно.
- у козлят 3-й, контрольной группы ИИ повысилась до 125±2,5 (Табл. 2 на Фиг. 2).
Через 30 дней после лечения:
- у козлят 1-й групп показатели ИИ, ИЭ и ЭЭ равнялись 4± 2,3; 86,3% и 80,0%,
- у козлят 2-группы показатели ИИ, ИЭ и ЭЭ равнялись 21,8±2,4; 69,1% и 60,0%,
-  у козлят 3-й, контрольной группы ИИ повысилась до 128±3,4 и отмечалось угнетенное состояние, ухудшение аппетита, фекалии были жидкие с примесью крови и слизи с неприятным запахом, животные в основном лежали и у них проявлялась жажда.
Таким образом, из данных, приведенных в Таблице 2, можно сделать вывод, что заявленное средство на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина при эймериозе коз является более эффективным, чем известный препарат ампролиум.
Опыт 3. Изучение противоэймериозной эффективности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)-октадекан-1-амина на примере кроликов.
В третьем опыте использовали 30 крольчат 2-х месячного возраста весом 2-2,5 кг, которые содержались в виварии кафедры эпизоотологии и  паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ. Исследования проводили в октябре – ноябре 2018 года.
В результате копроскопического исследования проб фекалий методом Котельникова-Хренова было установлено, что животные заражены эймериозом.
Источником инвазии явились больные кролики, которые ранее содержались в этом помещении. Дезинвазия не была проведена. Это способствовала естественному заражению кроликов в данном опыте.
Для определения видовой принадлежности эймерий брали пробы фекалий и доставляли на кафедру эпизоотологии и паразитологии, где изучали видовую принадлежность, пользуясь определительной таблицей М.В. Крылова.
При рассмотрении каждого вида эймерий обращали внимание на форму и цвет оболочек, наличие в ооцисте и споре остаточных тел, вели наблюдение за процессом спорогонии. Размеры ооцист, спор, спорозоитов, толщину оболочек ооцист и величину шапочки определяли путем промеров по 150 ооцист каждого вида с помощью винтового микрометра, который фиксировали на окуляр микроскопа. Подсчет спорулированных ооцист производили в счетной камере ВИГИС.
В результате исследований было установлено, что кролики заражены смешанной культурой ооцист следующих видов: Eimeria stiedae, Eimeria perforans, Eimeria magna.
После этого кроликов разделили на 2 опытные и 1 контрольную группы:
Кроликам 1-й группы внутрь с помощью бутыли выпаивали масляный раствор N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина в дозе 10 мг/ кг дважды с интервалом в 6 дней.
Кролики 2-й группы получали известный препарат «Байкокс 2,5%» в дозе 7 мг/кг с водой два дня подряд.
Кролики 3-й группы служили в качестве контроля, их не лечили.
Кролики каждой группы во время эксперимента содержались в индивидуальных клетках. Условия содержания и кормления соответствовали зоогигиеническим нормам. Кормили сухим кормом для кроликов.
Результаты определения интенсивности инвазии, интенсэффективности и экстенсэффективности представлены на Фиг.3 в Таблице 3.
Из данных, представленных в Таблице 3, видно, что до лечения все кролики были заражены эймериозом. Интенсивность инвазии колебалась от 148±8,4 до 169±9,1 ооцист эймерий в 1 г помета.
У кроликов 1-й группы, получавших N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин:
- через 3 дня после начала лечения интенсивность инвазии значительно снизилась и составила 28±1,9 ооцист эймерий, интенсэффективность при этом составила 79,3%, а экстенсэффективность равнялась 80%.
- через 7 дней произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии - этот показатель равнялся 18±1,9 ооцист, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 85,6% и 90% соответственно.
- через 14 дней организм кроликов полностью освободился от ооцист эймерий. Аппетит, общее состояние кроликов, консистенция фекалий в этот период нормализовались. Падежа отмечено не было, но у некоторых особей наблюдался жидкий стул. Интенс- и экстенсэффективности на 14 и 21 дни составили 100%, что говорит об эффективном действии N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина при эймериозе кроликов.
У кроликов второй группы, получавших известный препарат Байкокс 2,5%:
- через 3 дня интенсивность инвазии равнялась 41±4,8 ооцист эймерий, интенсэффективность составила 74,4%, экстенсэффективность – 50%.
- через 7 дней интенсивность инвазии снизилась и составила 26 ± 1,9, интенсэффективность и экстенсэффективность при этом равнялись 82,6% и 80% соответственно.
- через 14 дней и 21 день произошло дальнейшее снижение интенсивности эймериозной инвазии. Препарат Байкокс также показал высокую противопаразитарную эффективность, но она была ниже, чем при использовании заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина. Например, на 14 сутки ИЭ Байкокса составила 84,5 %, ЭЭ - 90,0%, против 100% при введении заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, то есть она была ниже на 15,5% и 10% соответственно.
Аналогичная закономерность отмечена при исследованиях и на 3, 7 и 21 дни после лечения.
У кроликов 3-й, контрольной группы интенсивность инвазии возросла с 164±7,1 до 230±8,1 ооцист эймерий в 1 грамме фекалий. У животных к концу опыта падеж составил 20% от общего поголовья, наблюдались клинические признаки эймериоза: вялость, потеря в весе, жидкий фекалий с примесью крови, понижение аппетита (на утро корм оставался в кормушке), анемичность слизистых оболочек глаз, носовой и ротовой полости.
Таким образом, анализ данных, представленных в Таблице 3 на Фиг.3, показывает, что заявленное средство на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин в дозе 10 мг/кг при двукратном введении с интервалом 6 суток полностью освобождает организм кроликов от эймерий через 14 дней после лечения и обладает более высокой противоэймериозной эффективностью.
Пример 3. Определение токсичности заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина.
Токсичность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина изучали на не линейных белых мышах. Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ в период с декабря 2018 по январь 2019 года.
Токсический эффект оценивали в соответствии с методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве. Наблюдения за мышами вели в течение 14 дней с момента введения препарата. При этом учитывали внешний вид и поведение мышей, состояние шерстного покрова и видимых слизистых оболочек, отношение к корму, подвижность, время возникновения и характер интоксикации, ее тяжесть, обратимость, сроки гибели, количество павших и выживших животных. Случаи гибели регистрировали и проводили патологоанатомическое вскрытие.
В течение опыта мыши находились в одинаковых условиях содержания. Кормление осуществляли в соответствии с ветеринарными и зоотехническими нормами. Ежедневно проводили клинический осмотр поголовья.
В опыте использовали 42 белых мышей, обоего пола, массой тела 18-22 г. Лабораторных мышей, учитывая пол, возраст, массу тела, разделили на 7 групп, 6 опытных и одну контрольную (по 6 голов в каждой). Лекарственное соединение растворяли в теплой воде, вводили однократно в желудок в различных дозах с помощью иглы с булавовидным утолщением.
Мышам шести опытных групп препарат задавали из расчета 400 мг/кг, 600мг/кг, 800 мг/кг, 1000 мг/кг, 3000 мг/кг и 5000 мг/кг. Контрольным мышам вводили 0,5 мл воды. Мышей допускали к корму через 2 часа после введения препарата. Доступ к воде не ограничивали.
Клиническое состояние мышей опытных групп не отличалось от такового у мышей контрольной группы. Мыши охотно поедали корм, адекватно реагировали на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители. Состояние кожного покрова и слизистых оболочек мышей опытных групп было такое же, как и у мышей контрольной группы.
В ходе проведения опыта было проведено вскрытие мышей. Вскрытие проводили по одному животному с каждой группы на 3 и 7 дни опыта. Видимых изменений в органах грудной и брюшной полостей у мышей как контрольной, так и опытных групп заявителем не обнаружено.
При этом среднесмертельная доза (ЛД50) не была вычислена из-за отсутствия падежа животных во всех 6 опытных группах. Максимальная доза заявленного средства, введенная мышам 6-й группы, составила 5000 мг/кг.
Таким образом, заявленное средство на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина в дозе 5000 мг/кг не обладает токсическим действием и относится к IV классу опасности.
Пример 4. Изучение раздражающего действия заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина на слизистые оболочки глаз
Раздражающее действия заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина на слизистые оболочки глаз изучали на 15-ти кроликах весом 2,5-3 кг. Животным опытных групп на конъюнктиву правого глаза с помощью глазной пипетки однократно закапывали по 2 капли 0,1%, 0,3%, 0,5%, 0,7% и 1% водного раствора заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, а левого – воду комнатной температуры (18-20 °С). При нанесении заявленного средства оттягивали верхний угол конъюнктивального мешка, затем в течение 1 минуты прижимали слезно-носовой канал. Состояние животных оценивали через 5, 30, 60 минут после нанесения заявленного средства и ежедневно в течение 14 дней. Обращали внимание на состояние оболочки глаза, слезоточивость, отечность, гиперемию.
Реакцию слизистой глаза оценивали в баллах по пятибалльной шкале.
Вели наблюдение за появлением гиперемии, отечности, инъекции сосудов склеры и за состоянием зрачков. Оценивали воздействие раствора и по характеру конъюнктивита (поверхностный, глубокий), ожоги слизистой I, II, III-степени.
Исследования показали, что:
- растворы заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина в 0,1-0,5% концентрации за период исследований не оказывают отрицательного воздействия на слизистые оболочки.
- после введения 0,7% раствора заявленного средства отмечалось незначительное слезотечение, которое самопроизвольно прекращалось через 20-30 минут после введения препарата.
- после введения заявленного средства в 1% концентрации, кролики пытались почесать глаз, сидели с прищуренными глазами, через 2 часа слизистая оболочка глаз становилась гиперемированной, наблюдалась небольшая отечность, слезотечение. На следующий день слезотечение прекращалось, отечность спадала, цвет слизистых оболочек был розовым, на третий день становился бледно-розовым.
общий вывод
достигнуты поставленные задачи и заявленные технические результаты
Таким образом, из изложенного выше можно сделать , что заявителем , а именно - создано эффективное, нетоксичное антиэймериозное средство нового поколения для ветеринарии с низкими лечебными дозами, расширяющее арсенал средств указанного назначения, на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина, обладающее характерным комплексом свойств:
- низкими лечебными дозами в пересчете на действующее вещество - N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин – препарат принимают перорально в виде масляного раствора при утреннем кормлении - однократно в дозе 10 мг/кг живого веса животного и второй раз в той же дозе через 6 дней, то есть суммарно 20 мг/кг на весь курс лечения;
- отсутствием токсичности - ЛД50 2500 мг/кг (IV класс опасности);
- удобным методом введения препарата во время кормления животных в виде масляного раствора;
- высокой эффективностью в отношении эймерий, обеспечивающей расширение арсенала известных малоэффективных, токсичных и дорогостоящих средств указанного назначения.
Так, например, при эймериозе крупного рогатого скота (телята) интенсэффективность заявленного средства на основе N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амина при исследовании через 7 дней была выше в сравнении с фуразолидоном на 9,0%, через 15 дней - на 17,5%, через 30 дней - на 20,6%, а эктенсэффективность была выше на 20,0% соответственно.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью признаков, обеспечивающих достижение заявленных результатов.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям. Создано новое по структуре соединение N-(4-бромбензелиден)октадекан-1-амин, не известное в мире на дату предоставления заявочных материалов, являющееся активным компонентом заявленного антиэймериозного средства, что не является очевидным для специалиста в анализируемой области техники, в силу чего формула изобретения составлена без ограничительной части.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленное лекарственное средство может быть получено посредством использования известных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.