АНТАГОНИСТЫ ТОЛЛ-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 4 И ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ
ANTAGONISTS OF TOL-LIKE RECEPTOR 4 AND USE IN AUTOIMMUNE LIVER DISEASES

Уровень техники
Данное изобретение относится к новым медицинским применениям морфинанов, таких как налтрексон, налмефен и их соответствующие производные. Данное изобретение относится к соединениям антагонистов толл-подобного рецептора 4 (Toll-like receptor 4, TLR4) и их фармацевтическим составам и применению их для профилактики и лечения аутоиммунных заболеваний печени, включающих, в частности, аутоиммунный гепатит и первичный билиарный цирроз.
В публикации РСТ - WO 03/097608 нами описаны некоторые новые медицинские применения опиоидных соединений и соединений аналогичных опиоидам, включающих налтрексон. В публикации РСТ - WO 2006029167 описан ряд новых медицинских применений этилен-6-дезокси-N-циклопропилметил-14-гидроксидигидронорморфина) или налмефена, длительно действующего, перорально доступного, сильнодействующего наркотического антагониста с истинной антагонистической активностью.
Последние достижения при исследовании нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы показали, что опиоиды могут играть роль в модуляции экспрессии воспалительных факторов, таких как провоспалительные цитокины, свободные радикалы и метаболиты арахидоновой кислоты в микроглии и в иммуноопосредованной нейродегенерации [Adv. Exp. Med. Biol. 402: 29-33 (1996); Mov. Disord. 12: 855-858 (1997)] и невропатической боли [Hutchinson MR, et al. Eur J Neurosci. 28:20-299(2008)].
Аутоиммунные заболевания являются иммунологическими нарушениями, характеризующимися Т-клеточной гиперактивностью и В-клеточной сверхстимуляцией, приводящими к сверхсинтезу аутоантител. Однако, патогенез различных аутоиммунных заболеваний еще предстоит исследовать. Толл-подобные рецепторы (TLRs) являются паттерн-распознающими рецепторами, которые являются частью врожденной иммунной системы человека, которая распознает и опосредует ранний ответ на повреждение ткани с последующей активацией адаптивной иммунной системы (Kesar и Odin 2014). Помимо этих экзогенных патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (pathogen-associated molecular pattern, PAMP) TLRs также могут связываться с ассоциированными с повреждением молекулярными паттернами (damage-associated molecular patterns, DAMP), продуцированными в состоянии стресса или повреждением тканей или апоптозом клеток. Полагают, что TLRs создают мостик между врожденным иммунитетом и аутоиммунностью. Существует пять адаптеров для TLRs, включающих MyD88, TRIF, TIRAP/MAL, TRAM и SARM. В результате активации TLRs пополняют специфические адаптеры для инициирования обратных сигнальных путей, приводящих к продуцированию воспалительных цитокинов и хемокинов. При определенных обстоятельствах лигирование TLRs приводит к аберрантной активации и нерестриктированным воспалительным реакциям, способствующим, тем самым, к сохранению воспаления при аутоиммунных заболеваниях. В прошлом большая часть исследований фокусировалась на внутриклеточных TLRs, таких как TLR3, TLR7 и TLR9, но последние исследования показывают, что клеточные поверхности TLRs, особенно TLR2 и TLR4, также играют важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний и обеспечивают несколько терапевтических мишеней [Clin Rev Allergy Immunol. 47(2): 136-47(2014)]. TLR4 связан с гепатоцитами и непаренхимальными клетками, включая клетки Купфера, миелоидные дендритные клетки, звездчатые клетки, Т-клетки, NK-клетки и синусоидальные эндотелиальные клетки. В последние годы некоторые данные свидетельствуют о возможной посреднической роли TLR-4 в патогенезе и прогрессировании аутоиммунных заболеваний печени (autoimmune liver diseases, AILDs) (He et al 2006; Longhi et al 2009; Mencin et al 2009). Моноциты от больных с РВС продуцируют повышенные уровня провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, IL-6 и т.д., когда сенсибилизировали различными лигандами, особенно теми, которые передают сигнал путем TLR4 и TLR5 (Мао et al, 2005). Эндогенные DAMPs высвобождаются после повреждения тканей. Лиганды для TLR-2 и TLR-4, такие как белки теплового шока, HMGB1, гиалуроновая кислота, фибронектин, гепарансульфат и бигликан продуциируются, чтобы содействовать стерильному воспалению (Moreth et al 2014). Биологические характеристики, сигнальные механизмы TLR2/4, отрицательные регуляторы TLR2/4 пути и ключевая функция TLR2/4 в патогенезе аутоиммунных заболеваний, включая ревматоидный артрит, системную красную волчанку, системный склероз, синдром Шегрена, псориаз, рассеянный склероз и аутоиммунный диабет, недавно рассматривались Liu Y, et al. [Clin Rev Allergy Immunol. 47(2):136-47(2014)]. Хотя предполагается, что TLR 4 играет ключевую функцию TLR2/4 в патогенезе аутоиммунных заболеваний, прямых доказательств того, что TLR4 причастен к AILD, по-прежнему нет. В данной заявке нами раскрыто, что антагонисты TLR продемонстрировали эффективность при лечении AILD.
Аутоиммунные заболевания печени (AILDs), включая, в частности аутоиммунный гепатит (autoimmune hepatitis, AIH) и первичный билиарный цирроз (primary biliary cirrhosis, РВС), все являются редкими заболеваниями и приводят к значительному долговременному осложнению и смертности (Dyson et al 2015). AIH является хроническим воспалительным заболеванием неизвестной этиологии, характеризуемым наличием циркулирующих аутоантител, гипергаммаглобулинемии и некровоспалительных изменений при гистологии печени и существенным ответом на терапию кортикостероидами (Makol et al 2011). Тип 1 AIH характеризуется наличием антинуклеарного антитела (antinuclear antibody, ANA), антигладкомышечного антитела (anti-smooth muscle antibody, SMA), или обоих; тип 2 AIH характеризуется наличием антител к микросомам печени и почек типа 1 (anti-liver kidney microsomal 1 antibodies, LKM1), и/или LKM3, и/или печеночному цитозолю типа 1 (anti-liver cytosol 1 antibodies, LC1) (Krawitt 2006; Makol et al 2011).
РВС характеризуется медленно нарастающим разрушением мелких желчевыводящих протоков печени, с внутридольковыми протоками, пораженными уже на начальной стадии заболевания. Когда эти протоки повреждаются, желчь накапливается в печени (холестазе) и со временем повреждает ткани. Это может привести к рубцеванию, фиброзу и циррозу печени. У большей части больных имеются антимитохондриальные антитела (AMAs) против пируватдегидрогеназного комплекса (PDC-E2), ферментного комплекса, который находится в митохондриях (Mencin et al 2009; Testro et al 2009). Перекрывание презентирования было отмечено с AIH и РВС.
Как AIH, так и РВС имеют неясную этиологию, отражающую сложное взаимодействие между триггерными факторами (например, врожденный иммунитет), аутоантигенами, наследственными предрасположенностями и иммунорегуляторными сетями. Стероидная/иммуносупрессивная комбинация и стероид/урсодезоксихолевая кислота (ursodeoxycholic acid, UDCA) являются, соответственно, начальными стадиями лечения для AIH и РВС. Отсутствие эффективных и безопасных препаратов является главной мотивацией для инновационного нового лечения.
+
Конканавалин A (concanavalin A, Con А), как Т-клеточный митоген, вызывает острый гепатит при активация Т-клеток (Tiegs et al 1992; Sass et al 2002; Shen et al 2014). В дополнение к инфильтрации и накоплению CD4 Т-клеток, клеток Купфера и естественных киллерных Т-клеток (natural killer Т, NKT), модель Con А ассоциируется с провоспалительными цитокинами, включая IL-1β, IL-6 и IFN-γ. Следовательно, Con А-индуцированный гепатит считается репрезентативной моделью аутоиммунного гепатита.
Con А-индуцированный гепатит у мышей, в котором мышей иммунизируют 2-октиновой кислотой, соединенной с BSA/OVA (2-OA-BSA/OVA), считается превосходной моделью AIH (Xu et al 2011; Kawata et al 2013). Эта модель является преимущественно Т-клеточно-зависимой за счет IL-23/Th17 пути, в дополнение к IFN-γ. Con А гепатит является чувствительным к дексаметазону. Как известно, хромосомный белок группы 1 с высокой подвижностью (high mobility group box chromosomal protein 1, HMGB), эндогенный лиганд TLR4, усиливает Con A-индуцированный гепатит, при этом анти-HMGB-1 защищал мышей от Con А гепатита (Zhou et al 2012).
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к соединениям антагонистов толл-подобного рецептора 4 (TLR4) и их фармацевтическим составам и применению их для профилактики и лечения аутоиммунных заболеваний печени, в том числе и аутоиммунного гепатита.
Данное изобретение относится к применению соединения антагониста TLR4 формулы (I) при лечении аутоиммунных заболеваний печени или патологических состояний или для производства медикаментов для лечения таких состояний:
3
3
2
А является ОН-группой или ОСН-группой; R является атомом водорода, СН-группой или циклопропилметильной группой; X представляет атом кислорода; Y является атомом кислорода, СН-группой; Z представляет атом водорода или ОН-группу. Соединения формулы (I) могут являться энантиомерами, диастереоизомерами и их фармацевтически приемлемыми солями.
Формула (I) может иметь структуру, такую как одна из следующих структур:
или
2
Особенно предпочтительным является соединение А (налтрексон), соединение (I), в котором А является ОН-группой, R представляет циклопропилметильную группу, X является атомом кислорода, Y является атомом кислорода и Z является ОН-группой; соединение В (налмефен), соединение (I), в котором А является ОН-группой, R является циклопропилметильной группой, X представляет атом кислорода, Y является СН-группой и Z является ОН-группой.
Краткое описание чертежей
На Фиг. 1 показаны изменения сывороточной аланинтрансаминазы (alanine transaminase, ALT) и аспартаттрансаминазы (aspartate transaminase, AST) у мышей, обработанных конканавалином A (Con А). Уровни сывороточной ALT и AST измеряли через 24 часа после Con А. Все величины представляют среднее ± SEM для 6 животных. *Р<0,05, против контроля носителем; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннетта.
На Фиг. 2 показаны изменения сывороточной аланинтрансаминазы (ALT) и аспартаттрансаминазы (AST) у мышей, обработанных конканавалином A (Con А). Уровни сывороточной ALT и AST измеряли через 24 часа после Con А. Все величины представляют среднее ± SEM для 6 животных. *Р<0,05, против контроля носителем; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннетта.
На Фиг. 3 показаны субпопуляции NK-клеток печени в мышиной модели первичного билиарного цирроза. C57BL/6 мышей 8-10-недельного возраста иммунизировали 2-OA-BSA и α-GalCer в 0-неделю с последующими бустер-инъекциями в 2, 4 и 8. Пероральное введение соединения А (налтрексон), соединения В (налмефен), соединения С (3-метоксиморфинан) и соединения D (3-гидроксиморфинан) при 50 мг/кг дважды в день имело место с 4 недели по 10 неделю. Каждая величина представляет индивидуальных животных. Некоторые животные умирали по причине нападения.
На Фиг. 4 показаны субпопуляции NKT-клеток печени в мышиной модели первичного билиарного цирроза. C57BL/6 мышей 8-10-недельного возраста иммунизировали 2-OA-BSA и α-GalCer в 0-неделю с последующими бустер-инъекциями в 2, 4 и 8. Пероральное введение соединения А (налтрексон), соединения В (налмефен), соединения С и соединения D при 50 мг/кг дважды в день имело место с 4 недели по 10 неделю. Каждая величина представляет индивидуальных животных. Некоторые животные умирали по причине нападения.
Повышенные уровни NK-клеток и NKT-клеток, а также повышенные уровни мононуклеарных клеток печени (не показаны) у обработанных '2-OS-BSA+α-GalCer' мышей подавлялись соединением А, соединением В, соединением С и соединением D.
Подробное описание изобретения
Терапии или медикаменты, полученные согласно изобретению, включают таковые для профилактики или лечения аутоиммунных заболеваний печени (AILD), среди прочих включающих аутоиммунный гепатит (AIH).
Согласно другим вариантам данное изобретение относится к способам профилактики или лечения AILD, включая, но не ограничиваясь AIH, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество одного или нескольких конкретных соединений.
Предшествующие и другие аспекты данного изобретения были теперь рассмотрены более подробно в отношении других вариантов, описанных здесь. Следует отметить, что изобретение может осуществляться в различных формах и не должно рассматриваться как ограниченное вариантами, изложенными в данном документе. Вернее, эти варианты осуществляются таким образом, что это раскрытие будет тщательным и полным и будет полностью передавать объем изобретения специалистам в данной области.
Терминология, используемая в описании настоящего изобретения, предназначена для описания только конкретных вариантов и не предназначена для ограничения изобретения. Используемые в описании изобретения и приложенной формуле изобретения формы единственного числа с артиклями "a", "an" и "the" предназначены для включения также форм множественного числа, если в контексте четко не указано иное.
Если не указано особо, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такие же значения, которые обычно понятны специалисту в данной области, к которой относится данное изобретение.
Все публикации, патентные заявки, патенты и другие приведенные противопоставленные материалы включены в данный документ полностью посредством ссылки для сведений, относящихся к предложению и/или параграфу, в котором представлена ссылка.
Термин «опиоидный» в контексте данного документа относится к соединениям, которые обладают свойствами, подобными опию или морфию, включая активность агонистов и антагонистов, где такие соединения могут взаимодействовать со стереоспецифическими и насыщаемыми активными центрами в мозге и других тканях. Фармакологические свойства ранее включали сонливость, угнетение дыхания, изменения в настроении и психическое помутнение без потери сознания. Термин «подобный опию» в контексте данного документа относится к соединениям, которые являются близкими по структуре и/или фармакологическому профилю с известными опиоидными соединениями.
«Лечить» или «лечение» в контексте данного документа относится к любому типу лечения, которое обеспечивает лечебный эффект для пациента, страдающего болезнью, включая улучшение состояния пациента (например, одного или нескольких симптомов), задержку в прогрессировании состояния, профилактику или задержку начала заболевания и т.д..
В контексте данного документа «фармацевтически приемлемый» компонент (например, соль, носитель, наполнитель или растворитель) означает, что соединение или композиция пригодна для введения субъекту для обеспечения лечения, описанного в данном документе, без чрезмерно вредных побочных эффектов с учетом тяжести заболевания и необходимости лечения.
В контексте данного документа термин «профилактика» означает введение лекарственного препарата до проявления соответствующих симптомов, чтобы снизить риск проявляющегося заболевания или снизить его тяжесть, если она проявляется.
«Терапевтически эффективное количество» в контексте данного документа относится к количеству, необходимому для предотвращения, задержки или снижения тяжести исследуемого состояния и также включает количество, необходимое для повышения нормальной физиологической деятельности.
Активные соединения, описанные в данном изобретении, могут быть водорастворимыми и могут также включать известные водорастворимые опиоидные и подобные опиоидам производные.
Соединения настоящего изобретения могут иметь асимметричный(ые) атом(ы) углерода и поэтому могут находиться в виде энантиомеров или диастереомеров. Таким образом, соединения данного изобретения включают энантиомеры и диастереоизомеры, а также фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных в данном изобретении.
Активные соединения настоящего изобретения могут вводиться самостоятельно или в комбинации с другими лечебными средствами. Например, активные соединения, описанные в данном изобретении, могут вводиться совместно с известными в настоящее время соединениями или впоследствии идентифицированными, которые могут успешно применяться для предупреждения и/или лечения аутоиммунных заболеваний печени (AILD), таких как, в частности, аутоиммунный гепатит (AIH). Типичные соединения включают противовоспалительные средства, кортикоиды (стероиды), такие как преднизон, иммунодепрессанты, такие как азатиоприн, и тому подобные, но не ограничиваются ими.
Как отмечалось выше, налтрексон, налмефен и декстрометорфан являются документально подтвержденными и коммерчески доступными соединениями. Другие используемые в данном изобретении соединения можно получить путем модификации налмефена обычными химическими методами или с использованием методик, аналогичных тем, которые описаны в РСТ публикации WO 03/097608.
Термин «активный агент» в контексте данного документа включает фармацевтически приемлемые соли соединения. Фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые сохраняют требуемую биологическую активность исходного соединения и не вызывают нежелательных токсикологических эффектов. Примерами таких солей являются (а) соли, образованные присоединением неорганической кислоты, например соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты и т.п.; и соли, образованные органическими кислотами, такими как, например уксусная кислота, щавелевая кислота, винная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, глюконовая кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, аскорбиновая кислота, бензойная кислота, дубильная кислота, пальмитиновая кислота, альгиновая кислота, полиглутаминовая кислота, нафталинсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, нафталиндисульфоновая кислота, полигалактуроновая кислота и т.п.; и (б) соли, образованные из элементарных анионов, таких как хлор, бром и йод. В других частных случаях фармацевтически приемлемые соли образуются с яблочной кислотой. В частных случаях фармацевтически приемлемые соли образуются с соляной кислотой.
Активные агенты, используемые для получения композиций, описанных в настоящем изобретении, в альтернативном варианте могут быть виде фармацевтически приемлемого свободного основания активного агента. Поскольку соединение в виде свободного основания менее растворимо, чем соль, композиции со свободным основанием применяются для обеспечения более замедленного высвобождения активного агента в целевой области. Активный агент, присутствующий в целевой области, который не переходит в раствор, не доступен для стимулирования физиологической реакции, а служит в качестве депо биодоступного препарата, который постепенно переходит в раствор.
Фармацевтические составы
Опиоидные и подобные опию соединения, описанные в данном изобретении, пригодны в качестве фармацевтически активных агентов и могут быть использованы в в форме ангро (in-bulk). Однако, более предпочтительно, когда данные соединения входят в фармацевтические составы для введения. Любой из числа пригодных фармацевтических составов может использоваться в качестве носителя для введения соединений, описанных в данном изобретении.
Понятно, что конкретные соединения вышеприведенных формул могут иметь асимметричный(ые) атом(ы) углерода и, таким образом, способны существовать в виде энантиомеров. Если не указано особо, данное изобретение включает такие энантиомеры, в том числе рацематы. Отдельные энантиомеры могут синтезироваться из хиральных исходных веществ или рацематы могут разделяться с помощью методик, которые хорошо известны в области химии, такие как хиральная хроматография, фракционированная кристаллизация диастереометрических солей и т.д..
Соединения, описанные в данном изобретении, могут входить в состав для введения при лечении целого ряда состояний. При производстве фармацевтического состава соединения, описанные в настоящем изобретении, и их физиологически приемлемые соли или любые производные кислот (далее рассматриваемые как «активное соединение»), как правило, смешиваются, помимо всего прочего, с приемлемым носителем. Разумеется, носитель должен быть приемлемым в том смысле, что совместимым с любыми другими ингредиентами в составах и не должен быть вредным для пациента. Носитель может быть твердым или жидким, или и тем и другим, и предпочтительно входить в состав с соединением в виде одноразовой дозы, например таблетки, которая может содержать от 0,5 вес. % до 95 вес. % активного соединения. В одном частном случае фармацевтическая композиция содержит менее 80 вес. % активного соединения. В других частных случаях фармацевтическая композиция содержит менее 50 вес. % активного соединения. Одно или несколько каждого из активных соединений могут включаться в составы, описанные в изобретении, которые можно получить любой из широко известных в фармации методик, состоящих, главным образом, из смешивания компонентов, возможно, включающих один или несколько дополнительных ингредиентов.
Составы, описанные в изобретении, включают составы, пригодные для перорального, ректального, местного применения, трансбуккального (например, сублингвального), парентерального (например, подкожного, внутримышечного, интрадермального или внутривенного) и трансдермального введения, хотя наиболее подходящий маршрут в каждом конкретном случае будет зависеть от природы и тяжести состояния, которое лечат, и от природы конкретного активного соединения, которое используется.
Составы, пригодные для перорального введения, могут быть представлены в дискретных единицах, таких как капсулы, крахмальные капсулы, таблетки для рассасывания, таблетки, драже или сиропы, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного соединения в виде порошка или гранул, в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде эмульсии типа "масло в воде", или типа "вода в масле". Такие составы можно приготовить любым подходящим в фармации методом, который включает стадию введения в смесь активного соединения и подходящего носителя (который может содержать один или несколько вспомогательных ингредиентов, как отмечалось выше).
В общем, составы, описанные в изобретении, получают при равномерном и тщательном смешивании активного соединения с жидким или мелкоразмельченным твердым носителем, или того и другого, и затем, при необходимости, формировании полученной смеси. Например, таблетку можно получить прессованием или формованием порошка или гранул, содержащих активное соединение, возможно с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно получить прессованием соединения в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, возможно, смешанные со связывающим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем и/или поверхностно-активным(ыми)/диспергирующим(ими) агентом(ами) в соответствующей машине. Формованные таблетки можно получить формованием порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким связывающим веществом, в соответствующей машине.
Составы, пригодные для трансбуккального (сублингвального) введения, включают таблетки для рассасывания, содержащие активное соединение в ароматизированной основе, обычно сахарозе и гуммиарабике или трагаканте, и пастилки, содержащие соединение в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и гуммиарабик.
Составы, описанные в настоящем изобретении, пригодные для парентерального введения, в целях удобства включают стерильные водные препараты активного соединения, где препараты предпочтительно изотоничны крови предполагаемого получателя. Эти препараты могут вводиться с помощью подкожной, внутривенной, внутримышечной или внутрикожной инъекции. Такие препараты в целях удобства могут быть получены смешиванием соединения с водой или глицериновым буфером и приданием полученному раствору стерильности и изотоничности с кровью.
Составы, пригодные для ректального введения, предпочтительно представлены в виде суппозиторий с одноразовой дозой. Их можно получить смешиванием активного соединения с одним или несколькими типичными твердыми носителями, например какао-масло, и затем формированием полученной смеси.
Составы, пригодные для местного применения на коже, предпочтительно принимают вид мази, крема, лосьона, пасты, геля, спрея, аэрозоля или масла.
Составы, пригодные для трансдермального введения, могут быть представлены в виде дискретных пластырей, приспособленных для нахождения в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Составы, пригодные для трансдермального введения, также могут быть доставлены ионофорезом (см., например, Pharmaceutical Research 3(6):318 (1986)) и обычно принимают вид, возможно, водного буферного раствора активного соединения. Соответствующие составы включают цитратный или бис/трис буфер (рН 6) или этанол/воду и содержат от 0,01 до 0,2 М активного ингредиента.
Настоящее изобретение также может относиться к препарату с замедленным высвобождением. Композиция с замедленным высвобождением включает, но не ограничивается композициями, в которых активный ингредиент связывается с ионообменной смолой, на которую наносится диффузионный барьер для мофицирования антиадгезионных свойств смолы. Носители и/или разбавители, которые могут применяться, включают вазелин, ланолин, глицерин, растительные масла или жировые эмульсии, полиэтиленгликоли, спирты, трансдермальные усиливающие агенты, природные или отвержденные масла или воски и комбинации из двух или нескольких компонентов.
Способы применения
В дополнение к соединениям указанных выше формул, данное изобретение также предлагает эффективные терапевтические способы. Например, данное изобретение предлагает способ лечения аутоиммунных заболеваний печени (AILD), среди прочего включающий в себя аутоиммунный гепатит и первичный билиарный цирроз.
Типичные пернатые согласно настоящему изобретению включают кур, уток, индеек, гуся, куропатку, фазана, бегающих птиц (например, страуса) и домашних птиц (например, попугаев и канареек) и включают птиц in ovo. Куры и индейки предпочтительны.
Пригоден любой субъект-млекопитающее, нуждающееся в лечении в соответствии с данным изобретением. Предпочтительны человеческие существа. Человеческие существа обоих полов и на любой стадии развития (т.е. новорожденный, ребенок, подросток, молодой человек, взрослый человек) можно лечить согласно данному изобретению.
Как отмечалось выше, настоящее изобретение предусматривает фармацевтические составы, включающие соединения формул, описанных в данном документе, или их фармацевтически приемлемые соли, в фармацевтически приемлемых носителях для любого подходящего пути введения, включая, но не ограничиваясь, пероральным, ректальным, местным, трансбуккальным, парентеральным, внутримышечным, внутридермальным, внутривенным и трансдермальным введением.
Согласно настоящему изобретению способы этого изобретения включают введение эффективного количества композиции, описанной в данном изобретении, как описано выше по данному вопросу. Эффективное количество композиции, применение которой является объектом настоящего изобретения, будет несколько изменяться от субъекта к субъекту и будет зависеть от таких факторов, как возраст и состояние субъекта и путь доставки. Такие дозы можно определить в соответствии с обычными фармакологическими методиками, известными специалистам в данной области. Например, соединения, описанные в данном изобретении, могут вводиться субъекту в количестве, изменяющемся от нижнего предела до приблизительно 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,20, 0,30, 0,40, 0,50, 0,60, 0,70, 0,80, 0,90, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, или 10% до верхнего предела, изменяющегося от приблизительно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 вес. % композиции. В некоторых вариантах соединения составляют от 0,05 вес. % до приблизительно 95 вес. % от композиции. В других вариантах соединения составляют от 0,05 вес. % до приблизительно 60 вес. % от композиции. В еще других вариантах соединения составляют от приблизительно 0,05 вес. % до приблизительно 10 вес. % от композиции.
Терапевтически эффективная доза любого конкретного соединения будет несколько изменяться от соединения к соединению, от пациента к пациенту и будет зависеть от состояния пациента и пути доставки. В качестве общей нормы доза от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг с еще более высокими дозами, которые потенциально используются для перорального введения и/или введения в виде аэрозоля, будут иметь терапевтическую эффективность. Проблемы токсичности на высшем уровне могут ограничить внутривенный режим дозирования до более низких уровней, а именно до приблизительно 10 мг/кг, причем все веса рассчитываются, исходя из веса активной основы, включая случаи, в которых используется соль. Обычно для внутривенного или внутримышечного введения будет использоваться доза от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг. Доза от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг может использоваться для перорального введения.
В конкретных вариантах соединения, описанные в настоящем изобретении, могут вводиться при суточной дозе от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 20 мг на кг массы тела животных, которая может даваться раздельными дозами от одного раза в день до четырех раз в день или в форме замедленного высвобождения. Для людей общая суточная доза может быть в диапазоне от приблизительно 1 мг до приблизительно 1400 мг, например от приблизительно 1 мг до 50 мг ежедневно и в других конкретных вариантах общая суточная доза находится в диапазоне от приблизительно 10 мг до приблизительно 100 мг. В еще других вариантах стандартные лекарственные формы, пригодные для перорального введения, могут включать от приблизительно 1 мг до приблизительно 1400 мг соединения, возможно, смешанного с твердым или жидким фармацевтическим носителем или разбавителем. Соединения, описанные в настоящем изобретении, могут вводиться в любом количестве, применяемом для введения субъекту при состоянии, которое подлежит лечению, как установлено специалистами в данной области с помощью ссылки на соответствующие тексты и литературу и/или с помощью стандартного экспериментирования (см., например, Remington, The Science And Practice of Pharmacy (9th Ed. 1995). Однако, в общем, удовлетворительные результаты получают, когда соединения, описанные в изобретении, вводятся при суточной дозе от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 20 мг на кг массы тела животных, предпочтительно при введении раздельными дозами от 1 до 4 раз в день или в форме пролонгированного высвобождения.
Вышеизложенное наглядно иллюстрирует настоящее изобретение и не должно истолковываться как ограничивающее его. Изобретение определяется следующей формулой изобретения с эквивалентами признаков, включенных в нее.
Соединение А (налтрексон) и соединение В (налмефен) все коммерчески доступны.
Пример 1 Ингибирование активации TLR4
Общая методика
Секретируемый щелочной фосфатазой репортер находится под контролем индуцируемого промотора с помощью транскрипционного фактора NF-κB. Стимуляция TLR при скрининге проверяется путем определения активации NF-κB в HEK293 клетках, экспрессирующих данный TLR. Этот репортерный ген предусматривает мониторирование сигнального пути через TLR, основанное на активации NF-κB. В 96-луночном планшете (общий объем 200 мкл), содержащем соответствующие клетки (25000-50000 клеток/лунке), добавляют 20 мл образца или положительных контрольных лигандов к лункам. Для проверки антагонистов образцы инкубируют с клетками в течение 30 минут до прибавления соответствующего стимулирующего лиганда. Среда, прибавленная к лункам, предназначается для обнаружения NF-κB, индуцирующего SEAP экспрессию. После 16-20 часов инкубации определяется OD при 650 нм на детекторе поглощения Beckman Coulter AD 340 С.
* Стимуляция толл-подобного рецептора (TLR4) проверяется путем определения активации NF-κB в HEK293 клетках, экспрессирующих данный TLR4. Активность образцов тестируется на человеческом TLR4 в качестве антагониста. Каждый лиганд проверяется при трех концентрациях на TLR4 и сравнивается с контрольными лигандами (см. перечень ниже). Эту стадию выполняют трижды (n=2).
Результаты
Соединение В показало слабое ингибирование LPS-индуцированной активации TLR4 при различных концентрациях антагонистов TLR4. Сообщалось, что соединение А являлось антагонистом TLR4 (Hutchinson et. al., Eur J Neurosci. 28:20-29, 2008).
Пример 2 Экспериментальные модели на животных
План исследования гепатита, индуцированного конканавалином А у мыши
Самцы мышей BALB/c весом 24±2 г воздерживались от приема пищи накануне вечером перед использованием. Проверяемое соединение при 20 мг/кг и 50 мг/кг и носитель (10 мл/кг) вводились через желудочный зонд (РО) за 24 часа, 16 часов и 0,5 часа перед внутривенной (IV) инъекцией конканавалина А (15 мг/кг или 20 мг/кг) и через 4 часа и 8 часов после провокационной пробы Con А, тогда как дексаметазон при 0,1 мг/кг вводили перорально за 0,5 часа перед и через 4 часа и 8 часов после провокационной пробы Con А. Кровь отбирали через 6 часов (0,15 мл) и 24 часа (0,4 мл) после внутривенного введения Con А. Животных умерщвляли через 24 часа после Con А и ткани печени брали для анализа для дальнейшего исследования.
Уровни сывороточной аланинаминотрансферазы (alanine aminotransferase, ALT) и аспартатаминотрансферазы (aspartate aminotransferase, AST) измеряли спектрофотометрически (оптимизированный УФ метод). Однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннетта используют для установления статистически значимого различия между соответствующими группами, которые подвергались лечению, и контрольной группой, получающей носитель. Критерий значимости устанавливается на Р<0,05.
Образцы сыворотки (@ 6 часов)
Образцы 6-ти часовой сыворотки хранили при - 80°С перед отправкой обратно к спонсору (заказчику) для дальнейших измерений цитокина.
Образцы печени
2
Для исследования брали терминальную правостороннюю дольку печени. Половину печени мгновенно замораживали с помощью жидкого N для RT-PCR в возможном реальном времени; другую половину зафиксировали в формалине для возможной гистопатологии и иммунохимии.
Результаты
Защитное действие соединения А (налтрексон) против Con А-индуцированного гепатита, мышиная модель AIH, показано на фиг. 2. Налтрексон при 20 мг/кг × 5 ассоциировали с уменьшенным ALT (-47%) (Р<0,05 против контрольной группы, получающей носитель; однофакторный дисперсионный анализ и тест Даннетта; n=6) без существенного влияния на AST (-31%); налтрексон при 50 мг/кг × 5 вызвал значительное ингибирование ALT (-95%) и AST (-92%) (Р<0,05) (фиг. 2). Аналогично, соединение В (налмефен) при 50 мг/кг (фиг. 1) вызвало значительное (Р<0,05) ингибирование Con А-индуцированного повышения печеночных ферментов ALT и AST. При цитокиновом уровне, соединение А (налтрексон) при 20 мг/кг ассоциировали с значительным (Р<0,05 против носителя) уменьшением воспалительных цитокинов IL-5 как в сыворотке (74%), так и в печени (21%), а также IL-6 в сыворотке (71%) и печени (32%) через 9 часов после провокационной пробы с Con А. Аналогично, соединение В (налмефен) при 50 мг/кг значительно уменьшало IL-5 в сыворотке (64%) и печени (16%) через 6 часов и 24 часа после провокационной пробы с Con А, соответственно. Значительное влияние налтрексона и налмефена на Con А-индуцированный гепатит представляет убедительное доказательство в поддержку применения соединения А (налтрексона) и соединения В (налмефена) при лечении AILDs.
Использованная литература
Aoyama Т, Paik Y-H, Seki Е. Toll-like receptor signaling and liver fibrosis (Толл-подобный рецептор сигнального пути и фиброз печени). Gastroenterol Res Practice. Article ID 192543, 2010:1-8, 2010.
Chuang Y-H, Ridgway WM, Ueno Y, Gershwin, ME. Animal Models of Primary BiliaryCirrhosis (Экспериментальные модели билиарного цирроза на животных). Clin Liver Dis 12:333-347, 2008.
Czaja AJ. Current and prospective pharmacotherapy for autoimmune hepatitis (Современная и перспективная фармакотерапия для аутоиммунного гепатита). Expert Opin Pharmacother. 15:1715-1736, 2014.
Day SA, Lakner AM, Moore CC, Yen M-H, Clemens MG, Wu ES, Schrum LW. Opioid-like compound exerts anti-fibrotic activity via decreased hepatic stellate cell activation and inflammation (Опиоид-подобное соединение обнаруживает противофиброзную активность против сниженной активации и воспаления звездчатых клеток печени). Biochem Pharmacol 81:996-1003, 2011.
Dyson JK, Webb G, Hirschfield GM, Lohse A, Beuers U, Lindor K, Jones DEJ. Unmet clinical need in autoimmune liver diseases (Нереализованная клиническая потребность при аутоиммунных заболеваниях печени). J Hepatol 62:208-218, 2015.
Ebrahimkhani MR, Kiani S, Oakley F, Kendall T, Shariftabrizi A, Tavangar SM, Moezi L, Payabvash S, Karoon A, Hoseininik H, Mann DA, Moore KP, Mani AR, Dehpour AR. Naltrexone, an opioid receptor antagonist, attenuates liver fibrosis in bile duct ligated rats (Налтрексон, антагонист опиоидных рецепторов, смягчает фиброз печени в желчевыводящих протоках лигированных крыс). Gut. 55:1606-1616, 2006.
Gong Q, Zhang H, Li JH, Duan LH, Zhong S, Kong XL, Zheng F, Tan Z, Xiong P, Chen G, Fang M, Gong FL. High-mobility group box 1 exacerbates concanavalin A-induced hepatic injury in mice (Группа блока 1 с высокой подвижностью усугубляет конканавалином А-индуцированное поражение печени у мышей). J Mol Med (Berl) 88:1289-98, 2010.
Greeneltch KM, Haudenschild CC, Keegan AD, Shi R. The opioid antagonist naltrexone blocks acute endotoxic shock by inhibiting TNF-α production (Опиоидный антагонист налтрексона блокирует острый эндотоксический шок путем подавления продуцирования TNF-α). Brain Behav Immun 18:476-484, 2004.
He X-S, Ansari AA, Ridgway WM, Coppel RL, Gershwin ME. New insights to the immunopathology and autoimmune responses in primary biliary cirrhosis (Новые взгляды на иммунопатологию и аутоиммунные реакции при первичном билиарном циррозе). Cell Immunol 239:1-13, 2006.
Hutchinson MR, Zhang Y, Brown K, Coats BD, Shridhar M, Sholar PW, Patel SJ, Crysdale NY, Harrison JA, Maier SF, Rice КС, Watkins LR. Non-stereoselective reversal of neuropathic pain by naloxone and naltrexone: involvement of tolllike receptor 4 (TLR4) (Нестереоселективное купирование невропатической боли с помощью налоксона и налтрексона: вовлечение Толл-подобного рецептора 4 (TLR4). Eur J Neurosci. 28:20-29, 2008.
Hutchinson MR, Zhang Y, Shridhar M, Evans JH, Buchanan MM, Zhao TX, Slivka PF, Coats BD, Rezvani N, Wieseler J, Hughes TS, Landgraf KE, Chan S, Fong S, Phipps S, Falke JJ, Leinwand LA, Maier SF, Yin H, Rice КС, Watkins LR. Evidence that opioids may have toll-like receptor 4 and MD-2 effects (Доказательство, что опиоиды могут иметь эффекты толл-подобного рецептора 4 и MD-2). Brain Behav Immun. 24:83-95, 2010.
Jaume M, Jacquet S,  P,  G, Stephan L, Blanpied C, Demur C, Brousset P, Dietrich G. Opioid receptor blockade reduces Fas-induced hepatitis in mice (Блокада опиоидных рецепторов уменьшает Fas-индуцированный гепатит у мышей). Hepatology 40:1136-1143,2004.
Jeffrey GP, MacQuillan G, Chua F, Galhenage S, Bull J, Young E, Hulse G, ONeil G. Hepatitis С virus eradication in intravenous drug users maintained with subcutaneous naltrexone implants (Уничтожение вируса гепатита С у потребителей инъекционных препаратов, поддержанных подкожными имплантами налтрексона). Hepatology. 45:111 - 117, 2007.
Kawata K, Tsuda М, Yang GX, Zhang W, Tanaka H, Tsuneyama K, Leung P, He XS, Knechtle S, Ansari AA, Coppel RL, Gershwin ME. Identification of potential cytokine pathways for therapeutic intervention in murine primary biliary cirrhosis (Определение потенциальных проводящих путей цитокина для терапевтического воздействия на первичный билиарный цирроз у мышей). PLoS One. 2013 Sep 10; 8(9):е74225. doi: 10.1371/journal.pone.0074225. eCollection 2013.
Kesar V, Odin JA. Toll-like receptors and liver disease (Толл-подобные рецепторы и заболевание печени). Liver Inter 34:184-196,2014.
Kim H-C, Nabeshima T, Jhoo WK, Ко KH, Kim WK, Shin EJ, Cho M, Lee PH. Anticonvulsant effects of new morphinan derivatives (Противосудорожные действия новых производных морфинана). Bioorg Med Chem Lett 11:1651-1654, 2001.
Krawitt EL. Autoimmune hepatitis (Аутоиммунный гепатит). N Eng J Med 354:54-66, 2006.
Lang KS, Recher M, Junt T, Navarini AA, Harris NL, Freigang S, Odermatt B, Conrad C, Ittner LM, Bauer S, Luther SA, Uematsu S, Akira S, Hengartner H, Zinkernagel RM. Toll-like receptor engagement converts T-cell autoreactivity into overt autoimmune disease (Вхождение толл-подобного рецептора преобразует Т-клеточную аутореактивность в явное аутоиммунное заболевание). Nat Med. 11:138-45, 2005.
Lin SL, Lee YM, Chang HY, Cheng YW, Yen MH. Effects of naltrexone on lipopolysaccharide-induced sepsis in rats (Влияния налтрексона на липополисахарид-индуцированный сепсис у крыс). J Biomed Sci. 12:431-440,2005.
Liu Y, Yin H, Zhao M, Lu Q. Clin Rev Allergy Immunol. 2014 Oct; 47(2): 136-47. TLR2 and TLR4 in autoimmune diseases: a comprehensive review (TLR2 и TLR4 при аутоиммунных заболеваниях: исчерпывающий обзор).
Longhi MS, Mitry RR, Samyn M, Scalori A, Hussain MJ, Quaglia A, Mieli-Vergani G, Ma Y, Vergani D. Vigorous activation of monocytes in juvenile autoimmune liver disease escapes the control of regulatory T-cells (Агрессивная активация моноцитов при ювенильном аутоиммунном заболевании печени избегает контроля регуляторными Т-клетками). Hepatology. 50:130-42, 2009.
Makol A, Watt KD, Chowdhary VR. Autoimmune hepatitis: a review of current diagnosis and treatment (Аутоиммунный гепатит: обзор современной диагностики и лечения). Hepat Res Treat 2011; 2011:390916. doi: 10.1155/2011/390916. Epub2011 May 15.
Mao TK, Lian Z-X, Selmi C, Ichiki Y, Ashwood P, Ansari AA, Coppel RL, Shimoda S, Ishibashi H, Gershwin ME. Altered monocyte responses to defined TLR ligands in patients with primary biliary cirrhosis (Измененные реакции моноцитов на определенные лиганды TLR у больных с первичным билиарным циррозом). Hepatol 42:802-808,2005.
Matters GL, Harms JF, McGovern C, Fitzpatrick L, Parikh A, Nilo N, Smith JP. The opioid antagonist naltrexone improves murine inflammatory bowel disease (Опиоидный антагонист налтрексон улучшает воспалительные заболевания кишечника у мышей). J Immunotoxicol 5:179-187, 2008.
Mauss S, Berger F, Goelz J, Jacob B, Schmutz G. A prospective controlled study of interferon-based therapy of chronic hepatitis С in patients on methadone maintenance (Перспективное контролируемое исследование на основе терапии интерфероном хронического гепатита С у больных при поддерживающем лечении метадоном). Hepatology. 40:120-124, 2004.
Mencin A, Kluwe J, Schwabe RF. Toll-like receptors as targets in chronic liver disease (Толл-подобные рецепторы в качестве мишени при хроническом заболевании печени). Gut 58:704-722, 2009.
Moreth К, Frey Н, Hubo М, Zeng-Brouwers J, Nastase M-V, Hsieh LT-H, Haceni R, Pfeilschifter J, Iozzo RV, Schaefer L. Biglycan-triggered TLR-2 and TLR-4-signaling exacerbates the pathophysiology of ischemic acute kidney injury (Бигликан-стимулированная TLR-2 и TLR-4-сигнализация усугубляет патофизиологию ишемического острого повреждения почек). Matrix Biol 35:143-151, 2014.
Sass G, Heinlein S, Agli A, Bang R,  J, Tiegs G. Cytokine expression in three mouse models of experimental hepatitis (Экспрессия цитокина в трех моделях экспериментального гепатита у мышей). Cytokine 19, 115-120, 2002.
Shen М, Lu J, Cheng P, Lin C, Dai W, Wang F, Wang C, Zhang Y, Chen K, Xu L, Zhou Y, Guo C. Ethyl pyruvate pretreatment attenuates concanavalin a-induced autoimmune hepatitis in mice (Предварительное лечение этилпируватом ослабляет конканавалином А-индуцированный аутоиммунный гепатит у мышей). PLoS One. 2014 Feb 3; 9(2):е87977. doi: 10.1371/journal.pone.0087977.
Smith JP, Stock H, Bingaman S, Mauger D, Rogosnitzky M, Zagon IS. Low-dose naltrexone therapy improves active Crohn's disease (Лечение низкой дозой налтрексона улучшает активное заболевание Крона). Am J Gastroenterol. 102:820-8, 2007.
Testro AG, Visvanathan K. Toll-like receptors and their role in gastrointestinal disease (Толл-подобные рецепторы и их роль при желудочно-кишечном заболевании). J Gastroenterol Hepatol. 24:943-54, 2009.
Tiegs G, Hentschel J, Wendel A. AT cell-dependent experimental liver injury in mice inducible by concanavalin А (Т-клеточнозависимое экспериментальное повреждение печени у мышей, индуцируемое конканавалином A). J Clin Invest 90:196-203, 1992.
Wang CC, Cheng PY, Peng YJ, Wu ES, Wei HP, Yen MH. Naltrexone protects against lipopolysaccharide/D-galactosamine-induced hepatitis in mice (Налтрексон защищает от липополисахарид/D-галактозамин-индуцированного гепатита у мышей). J Pharmacol Sci. 108:239-247, 2008.
Watkins LR, Wang X, Mustafa S, Hutchinson MR. In vivo Veritas: (+)-naltrexones's actions define translational importance (In vivo Veritas: действия (+)-налтрексонов определяют трансляционную важность). Trends Pharmacol Sci 35:432-433, 2014.
Wu SJ, Yang Y-H, Tsuneyama K, Leung PSC, Illarionov P, Gershwin ME, Chuang Y-H.
Innate immunity and PBC: Activated invariant NKT cells exacerbate murine autoimmune cholangitis and fibrosis (Врожденный иммунитет и РВС: активированные инвариантные NKT клетки усугубляют аутоиммунный холангит и фиброз у мышей). Hepatol 53: 915-925, 2011.
Xu М, Morishima N, Mizoguchi I, Chiba Y, Fujita K, Kuroda M, Iwakura Y, Cua DJ, Yasutomo K, Mizuguchi J, Yoshimoto T. Regulation of the development of acute hepatitis by IL-23 through IL-22 and IL-17 production (Регулирование проявления острого гепатита путем продуцирования IL-23 через IL-22 и IL-17). Eur J Immunol. 41:2828-2839,2011.
Yen MH, Ко НС, Tang FI, Lu RB, Hong JS. Study of hepatotoxicity of naltrexone in the treatment of alcoholism (Исследование гепатотоксичности налтрексона при лечении алкоголизма). Alcohol 38:17-120, 2006.
Zhou RR, Liu HB, Peng JP, Huang Y, Li N, Xiao MF, Wang H, Fan XG. High mobility group box chromosomal protein 1 in acute-on-chronic liver failure patients and mice with Con A-induced acute liver injury (Группа хромосомного белка 1 с высокой подвижностью при острой до хронической печеночной недостаточности у больных и мышей с Con А-индуцированным острым поражением печени). Exp Mol Pathol. 93:213-219, 2012.