СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕГО ВРОЖДЕННОГО СИФИЛИСА МАНИФЕСТНОГО
METHOD OF DIAGNOSING EARLY MANIFEST CONGENITAL SYPHILIS

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии, и может быть использовано в детской инфектологии для диагностики раннего врожденного сифилиса (РВС) манифестного.
Сифилис является одной из классических венерических болезней, возбудитель которой может поражать различные органы и обусловливать циклическую, хроническую инфекцию [1]. В последние годы в России регистрируется неуклонный рост заболеваемости сифилисом, который сопровождается закономерным повышением заболеваемости врожденным сифилисом (ВС) [2]. В свою очередь, своеобразие передачи сифилиса и общая низкая сопротивляемость организма плода к инфекциям объясняют особенности течения ВС [3]. Участились случаи раннего врожденного сифилиса (РВС) с активными проявлениями и летальным исходом [4].
Сифилитическая инфекция по-прежнему не потеряла своей научной актуальности как в плане эпидемиологическом, так и диагностическом. Однако, несмотря на значимость данной проблемы, многие вопросы остаются открытыми и требуют дальнейшего изучения. Если несколько десятилетий назад важным признавалось совершенствование специфической терапии сифилиса, то сегодня интерес сместился в сторону изучения серодиагностики, закономерностей эпидемиологии сифилиса и изучения иммунопатогенеза этой инфекции [5].
Установление диагноза РВС принято проводить с учетом следующих основных критериев [6]:
- данные анамнеза: отсутствие лечения или неадекватное лечение матери;
- рентгенологическое исследование длинных трубчатых костей;
- более высокая позитивность серологических реакций в венозной крови ребенка в сравнении с пуповинной кровью;
- более высокая позитивность серологических реакций в венозной крови ребенка, взятой на 7-8-й день лечения, в сравнении с кровью матери;
- патология в ликворе;
- температурная реакция обострения после начала лечения;
- положительный тест IgM-ИФА с венозной кровью ребенка (как дополнительный критерий).
Клинические проявления РВС зависят от сроков инфицирования плода и преморбидного состояния матери. Сложность трактовки диагноза РВС манифестного связана с полиорганностью поражения, а следовательно, с многообразием клинических проявлений, большая часть которых не является патогномоничными и требует дифференциальной диагностики с другими внутриутробными инфекциями (ВУИ) [7].
В настоящее время отмечается, что РВС чаше стал протекать в скрытой форме или со стертыми клиническими проявлениями. Для последних характерна малосимптомность и скудность высыпаний, иногда отрицательные серологические реакции и даже негативные реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), что затрудняет диагностику заболевания, особенно у детей грудного возраста [8]. При моносимптомном РВС манифестном единственным специфическим признаком заболевания чаще оказывается поражение костной системы (60%), или асимптомный менингит (нейросифилис) с положительными серологическими реакциями в ликворе. Данные клинические проявления требуют проведения рентгенологического обследования и люмбальной пункции, с чем могут возникнуть определенные трудности [7], при этом диагноз РВС может быть «пропущен» или расценен как «скрытый».
Также отмечается патоморфоз клинических проявлений РВС манифестного, который, по мнению многих авторов, мог быть обусловлен бесконтрольным приемом легкодоступных антибактериальных препаратов матерью и ранней массивной антибактериальной терапией, которая начинается при подозрении на ВУИ в родильном доме новорожденному [9].
Возможность верификации РВС большинством исследователей ассоциируется с необходимостью детекции специфических иммуноглобулинов класса М (JgM) методом иммуноферментного анализа (ИФА) или РИФ-абс, которые за счет избирательной проницаемости плаценты не обнаруживаются у детей при отсутствии сифилиса (при трансплацентарной передаче материнских антител). Однако качество тест-систем для выявления IgM, применяемых в настоящее время в России, не позволяет полностью полагаться на полученный результат. Также на практике при их выявлении могут возникать сложности, связанные с концентрацией в серологических реакциях данных Jg с антителами класса G. Все из предложенных на сегодняшний день методов удаления JgG не могут быть адаптированы для практического использования в связи с крайней методической сложностью, трудоемкостью и дороговизной [8, 10, 11].
В то же время несмотря на имеющиеся трудности необходимо раннее установление диагноза РВС для своевременного проведения соответствующего лечения - профилактического либо специфического [6].
Не вызывает сомнений ключевая роль иммунной системы в развитии любых патологических процессов. Реактивность иммунной системы в значительной степени определяет тяжесть любого инфекционного процесса. Различные звенья иммунной системы тесно взаимосвязаны между собой, в связи с чем недостаточность одного из них приводит к срыву всего механизма иммунореактивности [12, 13].
Известно, что при сифилитической инфекции в организме человека возникает специфический воспалительный процесс, формируется нестерильный или инфекционный иммунитет, который сохраняется все время нахождения возбудителя в организме больного [14, 15]. До настоящего времени механизм иммунитета при сифилисе окончательно не установлен, хотя очевидно, что в его формировании участвуют все звенья иммунной системы [14, 16]. Их исследование при сифилисе является актуальным и необходимым: для создания модели взаимодействия возбудителя и иммунной системы, для изучения особенностей иммунных реакций при различных клинических формах инфекции с целью улучшения диагностики и лечения, для определения «иммунологических критериев» излеченности больных сифилисом и рациональности проведения иммунокоррегирующей терапии [16].
Клеточный иммунитет является одним из наиболее ранних ответов макроорганизма человека на внедрение бледной трепонемы и играет значительную роль в формировании иммунной защиты [14, 15]. Вместе с тем данные роли гуморального звена иммунитета в патогенезе сифилиса противоречивы [16, 17]. В последние годы в литературе все чаще стали появляться работы по изучению иммунологических характеристик больных в различные периоды сифилитической инфекции [18], у инфицированных беременных [14], ВИЧ-позитивных лиц, а также с серорезистентностью после лечения сифилиса. При этом нам не встретились работы по изучению иммунологии РВС.
Задача изобретения: ускорение диагностики РВС манифестного.
8
4
8
95
+
+
+
+
Поставленную задачу решают за счет того, что при значениях относительного числа CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов более 20,0% и фагоцитарном числе нейтрофилов более 4,2 ед. по отношению к контрольной группе, а также при значении ИРИ (CD /CD ) менее 2,9 и относительном содержании CD  - лимфоцитов менее 19,6%, чем в контрольной группе, диагностируется РВС манифестный.
Способ осуществляют следующим образом.
Проводили исследование клеточного и гуморального звена иммунитета, а также фагоцитоза.
Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода проточной цитофлоуметрии, используя FACS Calibur (Becton Dickinson, USA) и реагенты Simul Test IMK-Lymphocyte Kit (USA). Анализ проводили, используя программу Simul Set.
3
4
8
19
16
95
4
8
4
8
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Изучили содержание CD -, CD -, CD -, CD -, CD -, CD  - клеток в периферической крови. Определили соотношение CD /CD  - клеток (иммунорегуляторный индекс (ИРИ)), которое используют для оценки иммунного статуса пациентов с аутоиммунными нарушениями, с иммунодефицитом или иммунными реакциями. Показано, что относительный процент CD  субпопуляции снижен, а относительный процент CD  субпопуляции повышен у многих пациентов с врожденными или приобретенными иммунодефицитными состояниями, такими как тяжелый комбинированный иммунодефицит и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). ИРИ, равный 1,5-2,5, соответствует нормергическому состоянию, более 2,5 - гиперактивности, менее 1,0 - иммунодефициту. При тяжелом течении воспалительного процесса ИРИ может быть меньше 1,0. Повышение ИРИ до 3,0 нередко отмечается в острой фазе различных воспалительных заболеваний за счет повышения Т-хелперов и снижения уровня Т-супрессоров. При стихании воспалительного процесса эти показатели и их соотношение нормализуются [19].
Концентрацию иммуноглобелинов классов А, М, G в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по G.Mancini [20].
Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли в реакции с полиэтиленгликолем по методике V.Haskova et al. [21].
Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови изучали в реакции с частицами латекса. Рассчитывали процент фагоцитирующих нейтрофилов и фагоцитарное число, то есть среднее число поглощенных одним нейтрофилом частиц.
Фагоцитоз - поглощение клеткой крупных частиц, видимых в микроскоп. Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний. Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число и индекс завершенности фагоцитоза [19].
Отбор производился из 364 детей в возрасте от 0 до 3 месяцев, составивших группу риска по РВС. В данной группе нами выявлено 64 ребенка с наибольшей вероятностью развития РВС. У 34 из них диагностирован РВС (у 16 детей - манифестный, а у 18 - скрытый). Профилактическое лечение по схеме РВС получили 30 детей (с перинатальным контактом по сифилису), которые составили контрольную группу.
Статистическая обработка результатов проведенных исследований [22] выявила у детей с РВС манифестным изменения функциональной активности Т-клеточного звена иммунитета.
Таблица 1
Показатели клеточного иммунитета у детей в возрасте от 0 до 3 месяцев с РВС манифестным
Контрольная группа (n=30)
РВС манифестный (n=16)
CD<sub>3</sub> <sup>+</sup> - клетки (%)
71,567±1,144
72,125±1,712
CD<sub>3</sub> <sup>+</sup> - клетки, (10<sup>3</sup>/мкл)
4331,6±295,724
3725,5±145,942
CD<sub>3</sub> <sup>+</sup>CD<sub>8</sub> <sup>+</sup>, (%)
20,±1,026
23,625±1,179p<0.05
CD<sub>3</sub> <sup>+</sup>/CD<sub>8</sub> <sup>+</sup>
2,938±0,213
2,174±0,122p<0,05
CD<sub>19</sub> <sup>+</sup> - клетки (%)
12,133±1,136
13,813±1,84
HLA-DR<sup>+</sup> - клетки (%)
1,474±0,14
2,313±0,514
HLA-DR<sup>+</sup> - клетки (10<sup>3</sup>/мкл)
80,579±11,811
117,938±25,705
CD<sub>95</sub> <sup>+</sup>CD<sub>8</sub> <sup>+</sup> - клетки (%)
19,632±2,928
11,875±1,879p<0.05
Примечание: р - достоверность различий показателей больных с РВС манифестным относительно контрольной группы
3
8
4
8
8
95
+
+
+
+
+
+
Результаты проведенных иммунологических исследований, представленные в табл. 1, показывают, что в группе детей с РВС манифестным в период до лечения заболевания выявлено статистически значимое повышение, относительно контрольной группы, процентного содержания CD  - клеток, выраженное увеличением более 20,0% (в 1,2 раза (р<0,05)) относительного содержания CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов. Изменение соотношения CD /CD  - клеток менее 2,9, по сравнению с параметрами контрольной группы, привело к падению ИРИ, что свидетельствует о снижении функциональной активности Т-клеточного звена иммунитета. Также выявлено достоверно значимое снижение процентного содержания CD  - клеток, несущих рецептор индукции апоптоза (CD ), менее 19,6% (в 1,7 раза (р<0,05)), чем в контрольной группе.
4
8
+
+
CD95-антиген называется также Fas или АРО-1, - трансмембранный гликопротеид, являющийся членом группы рецепторов к фактору некроза опухолей. Он экспрессируется в значительных количествах на CD  и CD  Т-лимфоцитов периферической крови и, в меньшей степени, на В-лимфоцитах и NK-клетках. Этот антиген экспрессируется также на гранулоцитах, моноцитах, клетках тканей и неопластических клетках. Связывание CD95 с Fas-лигандом (CD95L) индуцирует в клетках апоптоз [19].
Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у детей данной группы обнаружило увеличение более 4,2 ед. количества активно «работающих» клеток на фоне повышенной их поглотительной способности (табл. 2).
Таблица 2
Показатели фагоцитарной активности у детей в возрасте от 0 до 3 месяцев с РВС манифестным
Контрольная группа (n=30)
РВС манифестный (n=16)
ФИ (%)
43,462±1,182
46,933±0,753
ФЧ (ед.)
4,219±0,087
4,847±0,119p<0.001
Примечание: р - достоверность различий показателей больных с РВС манифестным относительно контрольной группы
Показатели гуморального иммунитета, в частности JgM, подтверждают полученные нами данные.
Таблица 3
Показатели гуморального иммунитета у детей в возрасте от 0 до 3 месяцев с РВС манифестным
Контрольная группа (n=30)
РВС манифестный (n=16)
JgM (г/л)
0,707±0,079
1,053±0,198p<0.05
ЦИК (ед.)
22,05±1,364
29,75±6,556
Примечание: р - достоверность различий показателей больных с РВС манифестным относительно контрольной группы
Из табл.3 видно, что реакция гуморального звена иммунитета характеризовалась повышением уровня JgM в сыворотке крови в группе детей с РВС манифестным по сравнению с параметрами контрольной группы. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в крови достоверно от контрольных величин при РВС манифестном не отличалось.
8
8
95
4
8
+
+
+
+
+
Таким образом, результаты проведенных исследований установили у детей с РВС манифестным в период до лечения заболевания изменения в фенотипическом составе циркулирующего пула лимфоцитов. Отмечается выраженное увеличение процентного содержания CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов на фоне снижения относительного содержания CD  - клеток, несущих рецептор индукции апоптоза (CD ) и падение ИРИ (CD /CD ). Кроме того, отмечено увеличение фагоцитарного числа нейтрофилов относительно нормальных величин.
Полученные результаты позволили определить статистически значимые изменения показателей иммунного статуса у детей с РВС манифестным и выявить количественные и качественные показатели, характеризующие данный инфекционный процесс.
Предлагаемый способ может использоваться для ранней диагностики РВС манифестного, что будет способствовать своевременному проведению соответствующего лечения - профилактического либо специфического.
Пример 1
Больная К., 10 сут., переведена в инфекционный стационар из родильного дома с диагнозом: врожденный сифилис? Из анамнеза заболевания известно, что у матери в 4 нед. беременности выявлен вторичный сифилис и она получила курс специфического лечения ретарпеном. Профилактическое лечение во время беременности не проводилось.
Родилась девочка от срочных родов путем операции кесарево сечения. Масса при рождении 3850 г., закричала сразу, к груди не прикладывалась по тяжести состояния. В родильном доме у ребенка кровь на сифилис в реакции Вассермана (РВ) 2+.
При переводе состояние ребенка тяжелое, вялая, крик писклявый, питание через зонд. При обследовании выявлена выраженная гепатоспленомегалия, ринит, остеохондрит II ст., анемия, признаки гипертензионно-гидроцефального синдрома. При этом подобные клинические проявления могут наблюдаться и при других ВУИ. При обследовании сыворотки крови обнаружены резко положительные серологические реакции на сифилис, но в иммуноферментном анализе ИФА-JgM отр. Учитывая тяжесть состояния ребенка люмбальная пункция не проводилась.
Проведено обследование сыворотки крови. Забор крови из вены осуществляли утром натощак в стерильные герметически закрывающиеся полимерные пробирки (вакутейнеры), содержащие антикоагулянт:
3
- Для исследования клеточного звена иммунитета и проведения иммуногематологических исследований - пробирки с КЭДТА (1,5+0,15 мг на мл крови) - не менее 2 мл крови.
- Для исследования фагоцитоза - пробирки с гепарином - не менее 5 мл.
- Для исследования гуморального звена - «сухая пробирка» (без антикоагулянта) - не менее 2 мл.
Пробирки с кровью осторожно покачивали, чтобы антикоагулянт на стенках пробирки растворился в пробе. Пробирки с кровью помещали в контейнер и доставляли в центр «СПИД», стараясь избегать встряхивания в пути.
45
14
3
19
3
4
3
8
3
16
56
3
4
8
19
16
95
4
8
+
+
+
+
+
+
+
+
Для каждого образца пациента маркировалось 6 пробирок от А до F, в каждую из которых внесли по 4 мкл антител: CD/CD; негативный контроль; CD/CD; CD/CD; CD/CD; CD/CD+CD. На дно каждой пробирки аккуратно добавляется 50 мкл крови и перемешивается, затем инкубировали 20 мин при комнатной температуре в темноте. Разводили лизирующий раствор 1:10 дистиллированной водой при комнатной температуре и добавляли по 0,5 мл в исследуемые пробирки, тщательно перемешивали. Пробирки инкубировали 10 мин при комнатной температуре в темноте, затем центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин. Сливали супернатант, добавляли 2 мл Cell Wash (омыватель клеток) и тщательно перемешивали, затем вновь центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин. Вновь сливали супернатант, добавляли 0,35 мл Cell Wash и тщательно перемешивали. Приготовленные пробы анализировали на проточном цитометре FACS Calibur с помощью программы SimulSET, используя FACS Calibur (Becton Dickinson, USA) и реагенты Simul Test IMK-Lymphocyte Kit (USA). Изучили содержание CD -, CD -, CD -, CD -, CD -, CD -клеток в периферической крови. Определили соотношение CD /CD - клеток (иммунорегуляторный индекс (ИРИ)).
Концентрацию иммуноглобелинов классов А, М, G в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по G. Mancini.
Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли в реакции с полиэтиленгликолем по методике V. Haskova et al.
Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови изучали в реакции с частицами латекса. Рассчитывали процент фагоцитирующих нейтрофилов и фагоцитарное число, то есть среднее число поглощенных одним нейтрофилом частиц.
8
95
+
+
Обследование данным методом показало выраженное увеличение процентного содержания CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов до 25% и соответственно снижение ИРИ до 1,39. Также обнаружено снижение относительного числа CD  - лимфоцитов до 13% и увеличение количества активно «работающих» нейтрофилов крови с нарастанием их поглотительной способности до 5,3 ед.
На основании анамнеза заболевания, клинических данных и комплексного обследования ребенку был выставлен диагноз: Ранний врожденный сифилис с клиническими проявлениями (гепатоспленомегалия, остеохондрит II ст., ринит, анемия).
Пример 2
Больной Д., 17 сут., переведен из соматического стационара с диагнозом: врожденный сифилис? Из анамнеза заболевания известно, что у матери выявлен скрытый сифилис за 1,5 года до беременности и она получила курс специфического лечения, профилактическое лечение не проводилось.
Родился мальчик от преждевременных (в 31 нед.), самостоятельных родов. Масса при рождении 1650 г., закричал после проведения реанимационных мероприятий, к груди не прикладывался. В первые сутки жизни, по тяжести состояния, обусловленной недоношенностью и незрелостью, был переведен в реанимационное отделение соматического стационара. При обследовании на ВУИ заподозрен врожденный сифилис. После стабилизации состояния ребенок переведен в инфекционный стационар для дальнейшего обследования и лечения.
При переводе состояние ребенка ближе к тяжелому, вяловат, сосание снижено. При обследовании выявлена выраженная гепатоспленомегалия, ринит, остеохондрит II ст., периостит, ринит, анемия, признаки гипертензионного синдрома и синдром угнетения. В сыворотке крови обнаружены положительные серологические реакции на сифилис, но реакция Вассермана (RW) и ИФА-JgM отр. При этом у ребенка положительные ИФА-JgG к вирусу простого герпеса и цитомегаловирусной инфекции. От проведения люмбальной пункции мать категорически отказалась.
8
95
+
+
Исследование иммунологических показателей данным методом показало выраженное увеличение процентного содержания CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов до 23,3% и соответственно снижение ИРИ до 1,42. Также обнаружено снижение относительного числа CD  - лимфоцитов до 13,9% и увеличение количества активно «работающих» нейтрофилов крови с нарастанием их поглотительной способности до 4,8 ед.
На основании анамнеза заболевания, клинических данных и комплексного обследования ребенку был выставлен диагноз: Ранний врожденный сифилис с клиническими проявлениями (гепатоспленомегалия, остеохондрит II ст., периостит, ринит, анемия).
8
8
95
8
+
+
+
+
Таким образом, результаты исследования иммунологических показателей установили у детей с РВС манифестным в период до лечения заболевания изменения в фенотипическом составе циркулирующего пула лимфоцитов. Отмечается выраженное увеличение процентного содержания CD  - субпопуляции Т-лимфоцитов на фоне снижения относительного содержания CD  - клеток, несущих рецептор индукции апоптоза (CD ). Увеличение CD  - клеток ведет к нарушению соотношения
4
8
+
+
CD /CD  - клеток в крови, которое приводит к падению ИРИ. Данный показатель свидетельствует о снижении функциональной активности Т-клеточного звена иммунитета. Кроме того, отмечено увеличение количества активно «работающих» нейтрофилов крови и нарастание их поглотительной способности.
Использование способа оценки иммунологических показателей у детей из группы риска по РВС с достаточной точностью позволит на ранних этапах диагностировать РВС манифестный, а значит своевременно и адекватно проводить необходимое лечение заболевания с включением в комплекс терапевтических мероприятий соответствующих иммунокоррегирующих препаратов.
Источники информации
1. Сенчук, А.Я. Перинатальные инфекции: Пратич. пособие / Под ред. А.Я.Сенчука, З.М.Дубоссарской. - М.: ООО «МИА», 2005. - С.28-47.
2. Володин, Н. Н. Актуальные проблемы неонатологии / Под ред. Н.Н.Володина. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2004. - С.217-298.
3. Ильппе, А. Руководство по детским болезням: Пер. с нем. / Г.Фанкони, А.Вальгрен. - М., Медгиз, 1960. - С.465-476.
4. Тихонова, Л.И. Общий обзор ситуации с инфекциями, передаваемыми половым путем. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Российской Федерации / Л.И.Тихонова // Вести, дерматол. и венерол. - 1999. - №2. - С.4-8.
5. Новоселов, В.С. Серодиагностика сифилиса: врачебный выбор / В.С.Новоселов, А.В.Новоселов // Альманах клинич. мед. - 2007. - №15. - С.75-78.
6. Приказ Минздрава РФ от 30 июля 2001 г. №291 «О мерах по предупреждению распространения инфекций, передаваемых половым путем» (в ред. Приказа Минздрава РФ от 15.11.2001 №411).
7. Милявская, И.Р. О раннем врожденном сифилисе у новорожденных / И.Р.Милявская, И.А.Горланов, Л.М.Леина // Журн. акушерства и женских болезней. - 2004. - №S4. - С.59-60.
8. Терещенко, В.Н. К вопросу о современном течении раннего врожденного сифилиса и его диагностике / В.Н.Терещенко, М.П.Середина, Л.Ю.Бердицкая и др. // Тихоокеанский мед. журн. - 2003. - №4. - С.45-46.
9. Терещенко, В.Н. Патология нервной системы у детей, рожденных женщинами, инфицированными бледной трепонемой / В.Н.Терещенко, А.А.Овчинникова, Ю.В.Квон и др. // Тихоокеанский мед. журн. - 2003. - №4. - С.61-63.
1. Иванов, А.М. Серологическая диагностика сифилиса: возможности повышения информативности / А.М.Иванов, Е.В.Ходосевич, И.Н.Теличко и др. // Журн. акушерства и женских болезней. - 2004. -№S4. - С.63-64.
11. Прохоренков, В.И. Сифилис. Иллюстрированное руководство / Под. ред. проф. В.И.Прохоренкова. - М.: Медицинская книга, 2002. - С.81-98.
12. Железнякова, Г.Ф. Значение иммунологических исследований при инфекционных болезнях у детей / Г.Ф.Железнякова, В.В.Иванова // Детские инфекции. - 2007. - том 6. - №3. - С.7-16.
13. Жуковская, И.Г. Использование титансодержащих препаратов в комплексной терапии хронических цервицитов: Автореф. дис.… канд. мед. наук / И.Г.Жуковская. - Ижевск, 2007. - 24 с.
14. Панкратов, О.В. Динамика некоторых показателей иммунной системы у беременных, больных сифилисом / О.В.Панкратов // Мед. новости. - 2006. - №6. - С.114-119.
15. Родионов, А.Н. Сифилис // Краткое руководство. - СПб: Питер, 2007. - 320 с.
16. Прохоренков, В.И. Современные представления об инфекционном процессе при сифилисе / В.И.Прохоренков, Ю.В.Карачева // Клинич. дерматол. и венерол. - 2005. - №4. - С.4-8.
17. Борисенко, К.К. Роль некоторых факторов гуморального и клеточного иммунитета в патогенезе сифилиса / К.К.Борисенко, Е.М.Лезвинская, Ю.В.Вороник и др. // Вестн. дерматол. и венерол.. - 1984. - №6. - С.30-34.
18. Борисенко, К.К. Клинико-иммунологическая характеристика больных сифилисом / К.К.Борисенко, П.М.Басинская, Н.А.Михеев // Вестн. дерматол. венерол. - 1985. - №7. - С.24-27.
19. Кишкун, А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике / А.А.Кишкун. - М.: ООО «МИА», 2006. - 536 с.
20. Manchini, G. Immunochemical quantitation of antigens by single radial diffusion / G.Manchini, A.O.Carbonaro, J.F Haremans // Immunochemistry. - 1965. - Vol.2, - №3. - P. 235-254.
21. Haskova, V. Simple method of circulating immune complex detection in human sera by polyethylene glycol precipitation / V.Haskova, J.Kaslik, J.Riha // J. Immunol. - 1978. Vol.154, N 8. - P. 399-406.
22. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. - М.: Практика, 1998. - 495 с.