БИС-(3,5-ДИ-ТРЕТ-БУТИЛ-4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)ПРОПИЛ)СЕЛЕНИД, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ И ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
BIS- (3- (3,5-DI-TERT-BUTYL-4-HYDROXYPHENYL) PROPYL) SELENIDE, HAVING ANTIOXIDANT AND HYPOGLYCEMIC ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии и медицины, в частности к синтезу новых химических соединений с фармакологической активностью, конкретнее к новому производному 2,6-ди-трет-бутилфенола, обладающему высокой антиоксидантной активностью, низкой токсичностью и выраженным гипогликемическим действием на фоне сахарного диабета. Заявляемое соединение может найти применение в медицине и ветеринарии.
Современная наука насчитывает более 200 заболеваний и патологических состояний, возникновение и развитие которых сопряжено с интенсификацией процессов неферментативного окисления - окислительным стрессом. В число таких патологий входят широко распространенные сердечнососудистые, воспалительные, онкологические и эндокринные заболевания, в частности, сахарный диабет [1. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З., Бондарь И.А., Труфакин В.А. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания. - Новосибирск: АРТА, 2008. - 284 с.].
Природные и синтетические алкилированные фенолы эффективно нормализуют интенсивность окислительных процессов в живых системах и повышают результативность профилактики и терапии заболеваний, связанных с развитием окислительного стресса [2. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Кандалинцева Н.В. Фенольные антиоксиданты в биологии и медицине. - Saarbrücken: LAP LAMBERT, 2012 - 496 с.]. Вместе с тем, в ряду лекарственных препаратов такие антиоксиданты представлены лишь тремя соединениями: 2,6-Ди-трет-бутил-4-метилфенол (ионол, дибунол, (II)) применяется для лечения рака и папилломатоза мочевого пузыря, циститов, ожогов, обморожений, трофических и лучевых язв [3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - 1216 с. 721-722].
4,4′-(Изопропилидендитио)-бис-(2,6-ди-трет-бутил)фенол (пробукол, (III)) назначается как гиполипидемическое средство при гиперхолестеринемии с риском развития ишемической болезни сердца [3. с. 466].
6-Гидрокси-2-метил-2-(4,8,12-триметил-тридецил)хроман(α-токоферол, витамин Е, (IV)):
применяют в виде ацетата при мышечных дистрофиях, дерматомиозитах, амиотрофическом боковом склерозе, нарушениях менструального цикла, климаксе, угрозе прерывания беременности, нарушении функции половых желез у мужчин, астеническом и неврастеническом синдромах, склеродермии, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, атеросклерозе, а так же при некоторых дерматозах, псориазе, спазмах периферических сосудов. В связи с антиоксидантными свойствами α-токоферола ацетат используется в комплексной терапии глазных болезней, для уменьшения побочных реакций при лечении химиотерапевтическими препаратами и в гериатрической практике. [3. с. 627-628].
Установлено, что указанные антиоксидантные препараты положительно влияют на состояние здоровья экспериментальных животных и пациентов с различными формами сахарного диабета. Так, при моделировании аллоксанового диабета у животных витамин Е стабилизировал мембраны эритроцитов, оказывал гипогликемическое действие, ингибировал процессы перекисного окисления липидов клеточных мембран и гликозирование белков [4. Бобырева Л.Е. Антиоксиданты в комплексной терапии диабетических ангиопатий // Экспер. клин. фармакол. - 1998. - Т. 61, №1. - С. 74-80]. Назначение витамина Е пациентам, страдающим сахарным диабетом I и II типов, приводило к снижению проявлений окислительного стресса [5. Бондарь И.А., Пупышев А.Б., Климонтов В.В. Перекисное окисление липидов и активность лизосомальных ферментов в сыворотке крови при сахарном диабете I типа и их коррекция // Консилиум. - 1999. - №6. - С. 23-26; 6. Wu J.Н., Ward N.С., Indrawan А.P. et al. Effects of α-tocopherol and mixed tocopherol supplementation on markers of oxidative stress and inflammation in type 2 diabetes // Clin. Chem. - 2007. - Vol. 53. - P. 511-519]. В условиях экспериментального аллоксанового диабета у крыс ионол проявлял тенденцию, а пробукол эффективно тормозил развитие гликемии, гиперлипидемии и усиление автоокисления в сосудистой стенке [7. Бобырева Л.Е. Влияние фенольных антиоксидантов на развитие аллоксанового диабета у крыс // Экспер. клин. фармакол. - 1997. - Т. 60, №3. - С. 51-53]. Включение пробукола в комплексную терапию больных сахарным диабетом типа II способствовало существенному снижению проявлений окислительного стресса и позволило стабилизировать состояние компенсации углеводного обмена без увеличения доз сахароснижающих препаратов [8. Недосугова Л.В., Ланкин В.З., Балаболкин М.И., Коновалова Г.Г., Лисина М.О., Антонова К.В., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Взаимосвязь между компенсацией углеводного обмена и выраженностью проявлений окислительного стресса при сахарном диабете II типа // Бюл. экспер. биол. - 2003. - Т. 138, №8. - С. 152-155].
Широкое распространение сахарного диабета в современном мире (по оценкам ВОЗ 347 миллионов человек в мире больны диабетом [9. Диабет: Информационный бюллетень №312, октябрь 2013 г.// http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs312/ru/], диабет занимает 6 место в ряду ведущих причин смерти [10. 10 ведущих причин смерти в мире: Информационный бюллетень №310, май 2014 г.// http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/ru/]) и необходимость использования антиоксидантов в профилактике и терапии данного заболевания при весьма ограниченном их ассортименте обуславливают актуальность создания новых фармацевтических агентов с выраженным антиоксидантным действием.
Изобретение решает задачу разработки нового нетоксичного антиоксиданта, обладающего гипогликемической активностью и расширяющего арсенал антиоксидантных препаратов для использования в комплексной терапии сахарного диабета.
Технический результат достигается предлагаемым новым соединением, а именно, бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)селенидом формулы I:
Сущность способа получения заявляемого нового соединения заключается в последовательном превращении 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропилбромида (V) в бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)диселенид (VI) и далее в целевой бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)селенид (I) по следующей схеме:
Исходный бромид V получали по ранее описанной методике [11. Пат. РФ 1376511, C07C 39/24, 20.10.1993], способы получения и свойства диселенида VI и селенида I ранее не были описаны. Состав и строение соединений I и VI подтверждены элементным анализом и спектральными данными.
2
2
Антиоксидантную активность селенида I тестировали в модельной реакции автоокисления метилолеата (60 С) в сравнении с α-токоферолом. Скорость окисления отслеживали по динамике накопления гидропероксидов, концентрацию которых определяли железороданидным методом по классической методике [12. Лясковская Ю.Н., Пиульская В.И. Методы исследования окислительной порчи жиров. - М.: ГОСИНТИ, 1960. - 50 с.]. Об антиоксидантной активности исследуемых соединений судили по длительности периода индукции автоокисления, за величину которого принимали время достижения пероксидного числа (ПЧ) 0.05% I (исходное ПЧ метилолеата составляло 0.003% I).
Установлено, что селенид I в диапазоне концентраций 0.25-1.00 мкмоль/г ингибировал автоокисление метилолеата в 1.4-5.4 раза длительнее, чем α-токоферол в концентрации 1.00 мкмоль/г (см. Фиг.). На Фиг. представлены периоды индукции автоокисления метилолеата при 60°C: без ингибитора (1), с добавкой α-токоферола 1 мкмоль/г (2) и селенида I: 0.25 мкмоль/г (3), 0.5 мкмоль/г (4), 1 мкмоль/г (5).
Таким образом, в рассматриваемых условиях селенид I значительно превосходил по противоокислительному действию α-токоферол, который принято считать одним из самых эффективных природных антиоксидантов [2].
50
50
Острую токсичность селенида I определяли на белых беспородных мышах массой 20-25 г. при пероральном способе введения [13. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // Под ред. Р.У. Хабриева - М: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.]. Трем группам экспериментальных животных (по 6 особей в каждой) натощак однократно внутрижелудочно вводили масляный раствор селенида I в дозах 150, 500 и 5000 мг/кг (из расчета по 0.2 мл/10 г массы тела). Наблюдение за животными осуществляли в течение 10 дней, за этот период ни одно животное ни в одной группе не погибло (табл. 1). Среднесмертельная доза (ЛД) селенида I рассчитанная на основе пробит-анализа составила более 5000 мг/кг, по ГОСТ 12.1.007-76 он относится к малоопасным соединениям (IV класс токсичности). Следует отметить, что используемый в медицинской практике ионол (II) относится к умеренно токсичным соединениям: ЛД для мышей составляет 2000 мг/кг (III класс токсичности) [14. Пат. РФ 2447888, A61K 31/095, 20.04.2012]. Таким образом, заявляемый селенид I является менее токсичным агентом, чем ионол.
Гипогликемическая активность селенида I была установлена в экспериментах на взрослых самцах крыс линии Wistar. Животные были поделены на четыре группы: первая (9 особей) и вторая (7 особей) группы являлась контрольными, крысам третьей (12 особей) и четвертой (11 особей) групп вводили в межлопаточную область 10% раствор аллоксана из расчета 0.1 мл/100 г массы тела для моделирования сахарного диабета, в то же время животным первой и второй групп вводили физиологический раствор в том же объеме. За неделю до введения аллоксана и на протяжении 1 недели после его инъекции животным 2-й и 4-й групп один раз в сутки перорально вводили селенид I в дозе 100 мг/кг в виде масляного раствора (0.1 мл/100 г массы тела). В течение послеинъекционного периода у всех крыс на 1, 3 и 6 сутки путем надсечки хвоста брали пробы крови (по 0.2 мл), в которых определяли уровень глюкозы пикриновым методом. В конце эксперимента (на 6 сутки) у всех животных под эфирным наркозом забирали образцы тканей печени для определения содержания гликогена методом ШИК-реакции по Мак-Манусу.
Установлено, что у здоровых животных селенид I не оказывает существенного влияния на содержание глюкозы в крови, вместе с тем, на фоне развития аллоксанового диабета достоверно (практически до контрольных значений) снижает ее уровень (таблица 2). У животных 3 группы уровень гликогена в печени был достоверно ниже показателей контрольной группы 1, что, вероятно, обусловлено нарушением синтеза гликогена в результате снижения активности гликогенсинтетазы и ослабления процессов окисления глюкозы вследствие дефекта в пируватдегидрогеназном комплексе [15. Согуйко Ю.Р., Кривко Ю.Я., Крикун Е.Н., Новиков О.О. Морфофункциональная характеристика печени крыс в норме и при сахарном диабете в эксперименте // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №1. - С. 52-59]. В печени обеих групп (2-я и 4-я) животных, получавших селенид I, наблюдалось достоверное увеличение содержания гликогена (таблица 3). Этот результат дает основание полагать, что селенид I активирует синтез гликогена в печени, что может способствовать сохранению углеводного баланса при сахарном диабете. Таким образом, в условиях сахарного диабета селенид I оказывал выраженное гипогликемическое действие, что подтверждает целесообразность его использования в комплексной терапии данной патологии.
Таким образом, новое производное 2,6-ди-трет-бутилфенола - заявляемый бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)селенид I обладает высокой антиоксидантной активностью, низкой токсичностью, выраженным гипогликемическим действием на фоне сахарного диабета, а также способностью активизировать накопление гликогена в печени. Данные свойства заявляемого соединения могут найти применение в медицине, ветеринарии и экспериментальной биологии.
Способ синтеза и свойства соединения I ранее были не известны, в патентной и научной литературе не описаны. Таким образом, предполагаемое техническое решение соответствует критериям патентоспособности изобретения, а именно «новизне», «изобретательскому уровню» и «промышленной применимости».
Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)-диселенида (VI) из 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропилбромида (V).
2
3
2
4
Суспензию селена (0.47 г, 5.95 ммоль) в растворе NaSO (3.02 г, 23.95 ммоль) в 20 мл воды кипятили до полного растворения селена (10 ч). К полученному раствору при 70°C по каплям добавляли раствор (1.75 г, 5.36 ммоль) бромида V в 20 мл этанола, смесь нагревали и кипятили 1 ч. Затем из реакционной массы отгоняли этанол, остаток кипятили еще 3 часа. Далее реакционную массу охлаждали, обрабатывали толуолом (3×10 мл), объединенный экстракт промывали насыщенным раствором NaCl (2×20 мл), сушили NaSO, растворитель отгоняли, остаток (1.64 г) кристаллизовали из этанола, получали 1.26 г (72%) диселенида VI в виде светло-желтых игольчатых кристаллов, т.пл. 79.5-81°C.
34
54
2
2
max
2
2
2
2
-1
1
Найдено (%): С, 62.64; Н, 8.26. CHOSe. Вычислено (%): С, 62.56; Н, 8.34. УФ-спектр, λ/нм (lg ε): 277 (3.93). ИК-спектр, ν/см: 3646, 2960, 2915, 1435, 1392, 1362, 1316, 1233, 1160, 1121, 1025, 887. Спектр ЯМР Н, δ, м.д., J/Гц: 1.42 (с, 36 Н, t-Bu); 2.02 (м, 4 Н, ArCHCH); 2.60 (т, 4 Н, ArCH, J=7.8); 2.91 (т, 4 Н, CHSe, J=7.8); 4.90 (с, 2 Н, ОН); 6.87 (с, 4 Н, Ar).
Пример 2. Получение бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)-селенида (I).
4
2
4
К раствору бромида V (2.10 г, 6.43 ммоль) и диселенида VI (2.00 г, 3.06 ммоль) в смеси 25 мл этанола (абс.) и 25 мл тетрагидрофурана при комнатной температуре в токе аргона порциями прибавляли NaBH (0.46 г, 12.24 ммоль), затем перемешивали 0.5 ч, нагревали и кипятили 3 ч. Далее реакционную массу охлаждали, подкисляли HCl, обрабатывали толуолом (3×20 мл). Объединенный экстракт промывали насыщенным раствором NaCl (3×30 мл), сушили NaSO, растворитель отгоняли, остаток (3.53 г) кристаллизовали из гексана, получали 2.91 г (83%) селенида I в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 79-80°C.
34
54
2
max
2
2
2
2
отн
-1
1
+
Найдено (%): С, 71.31; Н, 9.32. CHOSe. Вычислено (%): С, 71.17; Н, 9.49. Спектр УФ, λ/нм (lg ε): 275 (3.71). ИК-спектр, ν/см: 3647, 2959, 1435, 1392, 1362, 1316, 1232, 1160, 1121, 887. Спектр ЯМР Н, δ, м.д., J/Гц: 1.43 (с, 36 Н, t-Bu); 1.93 (м, 4 Н, ArCHCH); 2.56 (т, 4 Н, ArCH, J=7.2); 2.60 (т, 4 Н, CHSe, J=7.2); 4.91 (уш с, 2 Н, ОН); 6.89 (с, 4 Н, Ar). Масс-спектр (ЭУ, 70 эВ), m/z (I (%)): 574 [М] (22), 272 (12), 246 (59), 231 (48), 219 (37), 215 (20), 189 (67), 161 (10), 147 (15), 133 (10), 57 (100).
4
3
1
Чистоту полученных образцов контролировали методом ВЭЖХ на приборе «Agilent 1220 Infinity LC» в изократическом режиме, 100% ACN, колонка ZORBAX SB-C18, 5 мкм, 150×4.6 мм, УФ детектор 275 нм. Температуры плавления определяли в капилляре на приборе «МР50 Mettler Toledo», скорость нагрева 0.5°C/мин. УФ спектры записаны в EtOH на спектрометре «Agilent Cary 60 UV-Vis», ИК спектры - в CCl на спектрометре «Agilent Cary 600 Series FTIR», спектры ЯМР Н - на спектрометре «Bruker DRX600» с рабочей частотой 600 МГц в CDCl. Масс-спектр получен на хроматографе «Agilent 7890 В» (HP-5MS UI, 30 м × 0.25 мм, газ-носитель -гелий) с масс-детектором «Agilent 5977А» (ЭУ, 70 эВ); в описании масс-спектра приведены пики ионов с интенсивностью ≥10%, включающих наиболее распространенные изотопы.
Пример 3. Изучение антиоксидантной активности селенида I в сравнении с α-токоферолом в модельной реакции автоокисления метилолеата.
2
2
Автокисление метилолеата (Acros Organics) проводили на воздухе в условиях термостатирования при 60±0.5°C. В качестве реперного антиоксиданта использовали α-токоферол (Fluka). Масса окисляемой пробы составляла 5 г, концентрация исследуемых соединений: α-токоферола - 1 мкмоль/г, селенида I - 0.25, 0.5 и 1 мкмоль/г. В течение эксперимента из окисляющихся проб отбирали по 0.1 г и определяли содержание пероксидных соединений железороданидным методом [12] с использованием спектрофотометра «Shimadzu UV-1800 UV-Vis». За период индукции принимали время достижения пероксидного числа 0.05% I. Исходное пероксидное число метилолеата составляло 0.003% I. Построение и математическую обработку кинетических кривых проводили с использованием программы Origin 6.0. Период индукции неингибированного автоокисления метилолеата составил 19 ч, автоокисления в присутствии 1 мкмоль/г α-токоферола, 0.25, 0.5 и 1 мкмоль/г селенида I - 5, 7, 12 и 27 суток, соответственно.
Пример 4. Изучение острой токсичности селенида I.
Острую токсичность селенида I изучали на беспородных мышах самках массой 20-25 г, содержавшихся в условиях обычного вивария на стандартном корме со свободным доступом к воде. Селенид I вводили экспериментальным животным в виде раствора в подсолнечном масле однократно в дозах 150, 500 и 5000 мг/кг (из расчета по 0.2 мл/10 г массы тела). В каждой группе было по 6 особей. Наблюдения за животными продолжались 10 дней после введения, в течение которых фиксировали количество погибших мышей.
Результаты представлены в таблице 1.
Поскольку в дозе 5000 мг/кг селенид I не вызывает гибели экспериментальных животных по ГОСТ 12.1.007-76 он относится к малоопасным соединениям (IV класс токсичности).
Пример 5. Изучение гипогликемического действия селенида I.
Гипогликемическую активность селенида I изучали в экспериментах на взрослых самцах крыс линии Wistar. Животные были поделены на четыре группы: первая (9 особей) и вторая (7 особей) группы являлась контрольными, крысам третьей (12 особей) и четвертой (11 особей) групп вводили в межлопаточную область 10% раствор аллоксана из расчета 0.1 мл/100 г массы тела для моделирования сахарного диабета, в то же время животным первой и второй групп вводили физиологический раствор в том же объеме. За неделю до введения аллоксана и на протяжении 1 недели после его инъекции животным 2-й и 4-й групп один раз в сутки перорально вводили селенид I в виде раствора в подсолнечном масле по 0.1 мл на 100 г массы тела в дозе 100 мг/кг. Все группы животных находились в стандартных условиях вивария без ограничения потребления воды и пищи.
В течение послеинъекционного периода у всех крыс на 1, 3 и 6 сутки путем надсечки хвоста брали пробы крови (по 0.2 мл), в которых определяли уровень глюкозы пикриновым методом. К 0.1 мл плазмы крови добавляли 0.9 мл дистиллированной воды и 0.5 мл пикриновой кислоты (1.2% р-р), тщательно перемешивали и центрифугировали в течение 15 мин при 3000 об/мин. Затем к 1 мл полученной жидкости приливали 0.2 мл NaOH (20% р-р) и помещали в кипящую водяную баню на 5 мин. После охлаждения растворы фотометрировали при 560 нм на спектрофотоколориметре «Spekol».
В конце эксперимента (на 6 сутки) у всех животных под эфирным наркозом забирали образцы тканей печени для определения содержания гликогена методом ШИК-реакции по Мак-Манусу. Кусочки ткани (50-100 мг) помещали в пробирки с предварительно налитым депротеинизирующим раствором (2 мл) и мелко измельчали. Пробирки закрывали пробками и помещали в кипящую водяную баню на 15 мин. После охлаждения пробы центрифугировали (5 мин при 3000 об/мин), отбирали по 1 мл надосадочной жидкости и добавляли по 3 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирок смешивали интенсивным взбалтыванием и нагревали в кипящей водяной бане ровно 6.5 мин. После охлаждения пробы фотометрировали при 520 нм на спектрофотоколориметре «Spekol». Концентрацию гликогена определяли по калибровочной кривой, построенной по стандартным отведениям глюкозы, и пересчитывали в мг/100 г сырой ткани.
Статистический анализ полученных результатов исследования проводили по средним арифметическим (М) и их ошибкам (±m). Различия показателей оценивали методами вариационной статистики по t-критерию Стьюдента для параметрических выборок и считали достоверными при p≤0.05. Расчеты производили по общепринятым формулам с использованием стандартных программ пакета Microsoft Office.
Все эксперименты выполняли в соответствии с Международными рекомендациями по проведению биомедицинских исследований с использованием животных, принятыми Международным советом научных обществ (CIOMS) в 1985 г., со ст. XI Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964 г.) и правилами лабораторной практики в РФ (Приказ МЗ РФ от 19.06.2003, №267).
В результате было установлено, что уже на 1-е сутки после инъекции аллоксана содержание глюкозы в крови животных 3-ей группы было достоверно выше, чем в контроле, что свидетельствовало о развитии сахарного диабета у экспериментальных крыс, полученный эффект сохранялся на протяжении всего периода наблюдения (таблица 2).
На фоне перорального введения селенида I у крыс 4-ой группы содержание глюкозы в крови было достоверно ниже по сравнению с аналогичными показателями крыс 3-ей группы на протяжении всего исследования. Вместе с тем, во 2-ой группе введение селенида I не вызвало существенных различий показателя от контрольных значений. Как следствие развития аллоксанового диабета уровень гликогена в печени крыс 3-ей группы был достоверно ниже показателей контрольной группы 1 (таблица 3).
Анализируя образцы печени крыс 2-ой и 4-ой групп, получавших селенид I per os, обнаружили достоверное повышение уровня гликогена по сравнению с группами 1 и 3. Таким образом, показано, что селенид I существенно активирует синтез гликогена в печени, что может способствовать сохранению углеводного баланса при сахарном диабете. В целом, полученные результаты свидетельствуют о наличии у селенида I выраженного гипогликемического действия, что может быть использовано в комплексной терапии сахарного диабета.
Таким образом, новое производное 2,6-ди-трет-бутилфенола - заявляемый бис-(3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил)селенид I обладает высокой антиоксидантной активностью, низкой токсичностью, выраженным гипогликемическим действием на фоне сахарного диабета, а также способностью активизировать накопление гликогена в печени.
Заявляемое новое биологически активное соединение может найти применение в медицине и ветеринарии, в частности, для использования в комплексной терапии сахарного диабета, а также в экспериментальной биологии в качестве антиоксиданта и активатора накопления гликогена.
Источники информации
1. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З., Бондарь И.А., Труфакин В.А. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания. - Новосибирск: АРТА, 2008. - 284 с.
2. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Кандалинцева Н.В. Фенольные антиоксиданты в биологии и медицине. - Saarbrücken: LAP LAMBERT, 2012. - 496 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: Новая волна, 2012. - 1216 с.
4. Бобырева Л.Е. Антиоксиданты в комплексной терапии диабетических ангиопатий // Экспер. клин. фармакол. - 1998. - Т. 61, №1. - С. 74-80.
5. Бондарь И.А., Пупышев А.Б., Климонтов В.В. Перекисное оксиление липидов и активность лизосомальных ферментов в сыворотке крови при сахарном диабете I типа и их коррекция // Консилиум. - 1999. - №6. - С. 23-26.
6. Wu J.Н., Ward N.С., Indrawan А.P. et al. Effects of α-tocopherol and mixed tocopherol supplementation on markers of oxidative stress and inflammation in type 2 diabetes // Clin. Chem. - 2007. - Vol. 53. - P. 511-519.
7. Бобырева Л.E. Влияние фенольных антиоксидантов на развитие аллоксанового диабета у крыс // Экспер. клин. фармакол. - 1997. - Т. 60, №3. - С. 51-53.
8. Недосугова Л.В., Ланкин В.З., Балаболкин М.И., Коновалова Г.Г., Лисина М.О., Антонова К.В., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Взаимосвязь между компенсацией углеводного обмена и выраженностью проявлений окислительного стресса при сахарном диабете II типа // Бюл. экспер. биол. - 2003. - Т. 138, №8. - С. 152-155.
9. Диабет: Информационный бюллетень №312, октябрь 2013 г.// http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs312/ru/.
10. 10 ведущих причин смерти в мире: Информационный бюллетень №310, май 2014 г.// http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/ru/.
11. Пат. РФ 1376511, С07С 39/24, 20.10.1993.
12. Лясковская Ю.Н., Пиульская В.И. Методы исследования окислительной порчи жиров. - М.: ГОСИНТИ, 1960. - 50 с.
13. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // Под ред. Р.У. Хабриева - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.
14. Пат. РФ 2447888, A61K 31/095, 20.04.2012.
15. Согуйко Ю.Р., Кривко Ю.Я., Крикун Е.Н., Новиков О.О. Морфофункциональная характеристика печени крыс в норме и при сахарном диабете в эксперименте // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №1. - С. 52-59.