СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АУТОЛОГИЧНЫХ Т-КЛЕТОК

1. Способ лечения или профилактики рассеянного склероза (РС) у пациента, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
2. Способ по п.1, где по меньшей мере 5% CTL экспрессируют CD107a.
3. Способ по п.1, где по меньшей мере 10% CTL экспрессируют CD107a.
4. Способ по п.1, где по меньшей мере 15% CTL экспрессируют CD107a.
5. Способ по п.1, где по меньшей мере 20% CTL экспрессируют CD107a.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где по меньшей мере 5% CTL экспрессируют ИФНγ.
7. Способ по п.6, где по меньшей мере 10% CTL экспрессируют ИФНγ.
8. Способ по п.7, где по меньшей мере 15% CTL экспрессируют ИФНγ.
9. Способ по п.8, где по меньшей мере 20% CTL экспрессируют ИФНγ.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где по меньшей мере 5% CTL экспрессируют ФНОα.
11. Способ по п.10, где по меньшей мере 10% CTL экспрессируют ФНОα.
12. Способ по п.11, где по меньшей мере 15% CTL экспрессируют ФНОα.
13. Способ по п.12, где по меньшей мере 20% CTL экспрессируют ФНОα.
14. Способ по любому из пп. 1-13, где по меньшей мере 1% CTL экспрессируют ИЛ-2.
15. Способ по п.14, где по меньшей мере 5% CTL экспрессируют ИЛ-2.
16. Способ по п.15, где по меньшей мере 10% CTL экспрессируют ИЛ-2.
17. Способ по п.16, где по меньшей мере 15% CTL экспрессируют ИЛ-2.
18. Способ по п.1, где по меньшей мере 30% CTL экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2.
19. Способ по п.1, где по меньшей мере 40% CTL экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2.
20. Способ по п.1, где по меньшей мере 50% CTL экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2.
21. Способ по п.1, где по меньшей мере 70% CTL экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2.
22. Способ по любому из пп. 1-21, где CTL имеют по меньшей мере 5% реактивности в отношении EBV.
23. Способ по п.22, где CTL имеют по меньшей мере 7% реактивности в отношении EBV.
24. Способ по п.23, где CTL имеют по меньшей мере 10% реактивности в отношении EBV.
25. Способ по п.24, где CTL имеют по меньшей мере 15% реактивности в отношении EBV.
26. Способ по п.25, где CTL имеют по меньшей мере 20% реактивности в отношении EBV.
27. Способ по п.26, где CTL имеют по меньшей мере 30% реактивности в отношении EBV.
28. Способ лечения или профилактики рассеянного склероза (РС) у пациента, включающий:
a) выделение образца, содержащего цитотоксические T-клетки (CTL), экспрессирующие T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I, от пациента;
b) введение CTL пациенту.
29. Способ лечения или профилактики РС у пациента, включающий:
a) инкубацию образца, содержащего аутологичные цитотоксические T-клетки (CTL), с антигенпрезентирующими клетками (АПК), презентирующими пептид EBV, и, таким образом, индуцирование пролиферации пептид-специфических T-клеток в образце;
b) введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
30. Способ лечения или профилактики РС у пациента, включающий:
a) инкубацию антигенпрезентирующих клеток (АПК) с конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид EBV, и, таким образом, индуцирование презентации пептида EBV АПК;
b) индуцирование пролиферации пептид-специфических CTL посредством инкубации образца, содержащего аутологичные CTL, с антигенпрезентирующими клетками (АПК), и, таким образом, индуцирование пролиферации аутологичных CTL; и
c) введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
31. Способ по п.30, где конструкция нуклеиновой кислоты является вирусным вектором.
32. Способ по п.31, где вирусный вектор является AdE1-LMPpoly.
33. Способ по любому из пп. 29-32, дополнительно включающий анализ экспрессии CD107a пролиферирующими пептид-специфическими аутологичными CTL и, если по меньшей мере 5% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL экспрессируют CD107a, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
34. Способ по п.33, где CTL вводят, если по меньшей мере 10% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a.
35. Способ по п.33 или 34, где CTL вводят, если по меньшей мере 15% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a.
36. Способ по любому из пп. 33-35, где CTL вводят, если по меньшей мере 20% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a.
37. Способ по любому из пп. 29-36, дополнительно включающий анализ экспрессии ИФНγ пролиферирующими пептид-специфическими аутологичными CTL и, если по меньшей мере 5% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL экспрессируют ИФНγ, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
38. Способ по п.37, где CTL вводят, если по меньшей мере 10% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИФНγ.
39. Способ по п.37 или 38, где CTL вводят, если по меньшей мере 15% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИФНγ.
40. Способ по любому из пп. 37-39, где CTL вводят, если по меньшей мере 20% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИФНγ.
41. Способ по любому из пп. 29-40, дополнительно включающий анализ экспрессии ФНОα пролиферирующими пептид-специфическими аутологичными CTL и, если по меньшей мере 5% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL экспрессируют ФНОα, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
42. Способ по п.41, где CTL вводят, если по меньшей мере 10% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ФНОα.
43. Способ по п.41 или 42, где CTL вводят, если по меньшей мере 15% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ФНОα.
44. Способ по любому из пп. 41-43, где CTL вводят, если по меньшей мере 20% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ФНОα.
45. Способ по любому из пп. 29-44, дополнительно включающий анализ экспрессии ИЛ-2 пролиферирующими пептид-специфическими аутологичными CTL и, если по меньшей мере 1% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL экспрессируют ИЛ-2, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
46. Способ по п.45, где CTL вводят, если по меньшей мере 5% пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИЛ-2.
47. Способ по п.45 или 46, где CTL вводят, если по меньшей мере 10% пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИЛ-2.
48. Способ по любому из пп. 45-47, где CTL вводят, если по меньшей мере 15% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют ИЛ-2.
49. Способ по любому из пп. 29-32, дополнительно включающий анализ экспрессии CD107a, ФНОα, ИФНγ и ИЛ-2 пролиферирующими пептид-специфическими аутологичными CTL и, если по меньшей мере 20% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL экспрессируют CD107a, ФНОα, ИФНγ и ИЛ-2, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
50. Способ по п.49, где CTL вводят, если по меньшей мере 30% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a, ФНОα, ИФНγ и ИЛ-2.
51. Способ по п.49 или 50, где CTL вводят, если по меньшей мере 40% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a, ФНОα, ИФНγ и ИЛ-2.
52. Способ по любому из пп. 49-51, где CTL вводят, если по меньшей мере 50% пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в образце экспрессируют CD107a, ФНОα, ИФНγ и ИЛ-2.
53. Способ по любому из пп. 29-52, дополнительно включающий анализ реактивности пролиферирующих пептид-специфических аутологичных CTL в отношении EBV и, если реактивность выше заранее определенного порогового значения, введение пациенту пептид-специфических аутологичных CTL.
54. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 5%.
55. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 7%.
56. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 10%.
57. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 20%.
58. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 30%.
59. Способ по п.53, где пороговое значение составляет 50%.
60. Способ по любому из пп. 29-59, где на стадии (a) образец инкубируют с одним или более цитокинами.
61. Способ по любому из пп. 29-60, где АПК включают B-клетки.
62. Способ по любому из пп. 29-61, где АПК включают антигенпрезентирующие T-клетки.
63. Способ по любому из пп. 29-62, где АПК включают дендритные клетки.
64. Способ по любому из пп. 29-63, где АПК включают искусственные антигенпрезентирующие клетки.
65. Способ по п.64, где искусственные антигенпрезентирующие клетки являются клетками aK562.
66. Способ по любому из пп. 28-65, где образец содержит мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC).
67. Способ по любому из пп. 1-66, дополнительно включающий получение образца из пациента.
68. Способ по любому из пп. 1-67, где пептид EBV содержит аминокислотную последовательность, приведенную в таблице 1.
69. Способ по любому из пп. 1-67, где пептид EBV содержит пептид LMP1 или его фрагмент.
70. Способ по любому из пп. 1-67, где пептид EBV содержит пептид LMP2A или его фрагмент.
71. Способ по любому из пп. 1-67, где пептид EBV содержит пептид EBNA1 или его фрагмент.
6
72. Способ по любому из пп. 1-71, включающий введение пациенту приблизительно 5×10 CTL в дозе.
7
73. Способ по любому из пп. 1-71, включающий введение пациенту приблизительно 1×10 CTL в дозе.
7
74. Способ по любому из пп. 1-71, включающий введение пациенту приблизительно 1,5×10 CTL в дозе.
7
75. Способ по любому из пп. 1-71, включающий введение пациенту приблизительно 2×10 CTL в дозе.
76. Способ по любому из пп. 1-75, где пациенту вводят множество доз CTL, например, повышающиеся дозы.
77. Способ по п.76, где дозы вводят еженедельно.
78. Способ по п.76, где дозы вводят раз в две недели.
79. Способ по п.78, включающий введение четырех доз последовательно повышающихся количеств CTL.
6
7
7
7
80. Способ по п.79, включающий введение первой дозы 5×10 CTL, второй дозы 1×10 CTL, третей дозы 1,5×10 CTL и четвертой дозы 2×10 CTL.
81. Способ по любому из пп. 1-80, где пациент не испытывает значительных неблагоприятных воздействий в результате введения CTL.
82. Способ по любому из пп. 1-81, где способ дополнительно включает оценку эффективности адоптивной иммунотерапии у пациента с рассеянным склерозом, где способ включает:
(a) получение первого образца спинномозговой жидкости (CSF) пациента,
(b) определение количества IgG против EBV в CSF в первом образце до введения CTL,
(c) получение второго образца CSF пациента через некоторое время после введения CTL,
(d) определение количества IgG против EBV в CSF во втором образце, и
если количество IgG против EBV во втором образце меньше, чем в первом образце, заболевание стабилизировано и/или не прогрессирует.
83. Способ по любому из пп. 1-82, где РС является рецидивирующе-ремиттирующим РС, вторично-прогрессирующим РС, первично-прогрессирующим РС или прогрессирующе-ремиттирующим РС.
84. Способ по п.83, где РС является первично-прогрессирующим РС.
85. Способ по любому из пп. 1-84, где двигательные навыки/равновесие/ловкость рук пациента, сон, острота зрения или цветное зрение, утомляемость и/или императивное недержание мочи улучшились после введения CTL.
86. Способ по любому из пп. 1-85, где баллы EDSS пациента остаются прежними после введения CTL.
87. Способ по любому из пп. 1-85, где баллы EDSS пациента снижаются по меньшей мере на 0,5 после введения CTL.
88. Способ по любому из пп. 1-85, где баллы EDSS пациента снижаются по меньшей мере на 1,0 после введения CTL.
89. Способ снижения уровней IgG против EBV в CSF пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
90. Способ улучшения остроты зрения, улучшения цветного зрения или стабилизации потери зрения у пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
91. Способ улучшения двигательных навыков, равновесия или ловкости рук у пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
92. Способ улучшения сна у пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
93. Способ лечения или профилактики утомляемости у пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
94. Способ лечения или профилактики императивного недержания мочи у пациента с РС, включающий введение пациенту аутологичных цитотоксических T-клеток (CTL), экспрессирующих T-клеточный рецептор, специфически связывающийся с пептидом EBV, презентированным на MHC класса I.
95. Способ по любому из пп. 1-94, где РС является рецидивирующе-ремиттирующим РС.
96. Способ по любому из пп. 1-94, где РС является вторично-прогрессирующим РС.
97. Способ по любому из пп. 1-94, где РС является первично-прогрессирующим РС.
98. Способ по любому из пп. 1-94, где РС является прогрессирующе-ремиттирующим РС.
99. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца, содержащего T-клетки, из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение реактивности в отношении EBV аутологичных T-клеток в образце и, если по меньшей мере аутологичные T-клетки в количестве по меньшей мере порогового значения процентной доли являются реактивными в отношении EBV, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
100. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 1%.
101. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 2%.
102. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 3%.
103. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 5%.
104. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 10%.
105. Способ по п.99, где пороговое значение составляет 20%.
106. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца, содержащего T-клетки, из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение процентной доли аутологичных T-клеток в образце, экспрессирующих CD107a и, если по меньшей мере некоторая процентная доля аутологичных T-клеток экспрессирует CD107a, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
107. Способ по п.106, где, если по меньшей мере 1% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
108. Способ по п.106, где, если по меньшей мере 3% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
109. Способ по п.106, где, если по меньшей мере 5% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
110. Способ по п.106, где, если по меньшей мере 10% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
111. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца, содержащего T-клетки, из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение процентной доли аутологичных T-клеток в образце, экспрессирующих ФНОα и, если по меньшей мере некоторая процентная доля аутологичных T-клеток экспрессирует ФНОα, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
112. Способ по п.111, где, если по меньшей мере 1% аутологичных T-клеток экспрессируют ФНОα, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
113. Способ по п.111, где, если по меньшей мере 3% аутологичных T-клеток экспрессируют ФНОα, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
114. Способ по п.111, где, если по меньшей мере 5% аутологичных T-клеток экспрессируют ФНОα, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
115. Способ по п.111, где, если по меньшей мере 10% аутологичных T-клеток экспрессируют ФНОα, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
116. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца, содержащего T-клетки, из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение процентной доли аутологичных T-клеток в образце, экспрессирующих ИФНγ и, если по меньшей мере некоторая процентная доля аутологичных T-клеток экспрессирует ИФНγ, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
117. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 1% аутологичных T-клеток экспрессируют ИФНγ, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
118. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 3% аутологичных T-клеток экспрессируют ИФНγ, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
119. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 5% аутологичных T-клеток экспрессируют ИФНγ, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
120. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 10% аутологичных T-клеток экспрессируют ИФНγ, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
121. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца, содержащего T-клетки, из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение процентной доли аутологичных T-клеток в образце, экспрессирующих ИЛ-2 и, если по меньшей мере некоторая процентная доля аутологичных T-клеток экспрессирует ИЛ-2, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
122. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 1% аутологичных T-клеток экспрессируют ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
123. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 3% аутологичных T-клеток экспрессируют ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
124. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 5% аутологичных T-клеток экспрессируют ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
125. Способ по п.116, где, если по меньшей мере 10% аутологичных T-клеток экспрессируют ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
126. Способ выбора пациента для адоптивной иммунотерапии, включающий:
(a) получение образца PMBC из пациента,
(b) выделение аутологичных T-клеток из образца,
(c) определение процентной доли аутологичных T-клеток в образце, экспрессирующих CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2 и, если по меньшей мере некоторая процентная доля аутологичных T-клеток экспрессирует CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2, выбор пациента для адоптивной иммунотерапии.
127. Способ по п.126, где, если по меньшей мере 1% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
128. Способ по п.126, где, если по меньшей мере 3% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
129. Способ по п.126, где, если по меньшей мере 5% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.
130. Способ по п.126, где, если по меньшей мере 10% аутологичных T-клеток экспрессируют CD107a, ИФНγ, ФНОα и ИЛ-2, пациента выбирают для адоптивной иммунотерапии.