ВЫСОКОБЕЗОПАСНЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННЫХ ФРАКЦИЙ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ получения фракций стволовых клеток, имеющих происхождение из липидной ткани, включающий стадии:
(a) сбора или получения образца липидной ткани, содержащей стволовые клетки;
(b) промывания образца со стадии (a) подходящим водным буфером;
(c) инкубирования образца со стадии (b) с ферментом, способным перерабатывать липидную ткань и извлекать из нее стволовые клетки;
(d) извлечения водной фазы из продукта со стадии (c);
(e) очистки водной фазы, полученной на стадии (d);
(f) титрования водной фазы, полученной на стадии (e), и, если необходимо, ее разбавление, чтобы получить конечную фракцию стволовых клеток с желаемой концентрацией и объемом,
в котором материал, содержащий стволовые клетки, обрабатывают в шприце на всем протяжении, по меньшей мере, стадий: (a), (b) и (c), указанный шприц, выполняет функции собирающего устройства, фазового разделителя и технологического реактора.
2. Способ по п.1, в котором шприц имеет объем заполнения, составляющий от 20 до 100 мл.
3. Способ по п.1, в котором шприц снабжен одной или более отметками, чтобы показать оптимальный(ые) объем(ы) заполнения, и/или с местами для записи или маркировки.
4. Способ по п.1, в котором липидным материалом является липоаспират.
5. Способ по п.1, в котором стадии (a) и (b-d), соответственно, выполняются двумя разными операторами в местах, удаленных друг от друга.
6. Способ по п.1, в котором на стадии (b) буфер представляет собой PBS буфер, дополненный ферментными питательными веществами.
7. Способ по п.1, в котором стадии (b) и/или (c) включают нисходящее ориентирование шприца (иглой книзу) или восходящее (иглой кверху), с последующим выпусканием фазы, ближайшей к игле.
8. Способ по п.1, в котором на стадии (c) фермент представляет собой либеразу, и инкубирование проводят в течение от 20 до 80 минут при температуре от 30 до 45°C.
9. Способ по п.1, в котором на стадии (d), инкубируемую смесь смешивают с раствором, содержащим альбумин, затем липидную фазу отбрасывают, и водную фазу возвращают для последующих стадий способа.
10. Способ по п.1, в котором материал, содержащий стволовые клетки, дополнительно сохраняется в середине указанного шприца на протяжении одной или больше стадий (d)-(e).
11. Способ по п.1, в котором очистку на стадии (e) выполняют путем центрифугирования(ий) и/или фильтрации(ий).
8
4
12. Способ по любому из пп.1-11, в котором конечную фракцию стволовых клеток формулируют в виде одной или более единиц по 1-5 мл, с общей концентрацией ядросодержащих клеток, которая составляет от 10 до 10 клеток/мл.