СУППОЗИТОРИИ КОМБИНИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (ВАРИАНТЫ)
SYNERGISTIC SUPPOSITORIES FOR INFECTIOUS GYNECOPATHIES TREATMENT (VERSIONS)

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к биоцидным лекарственным препаратам для наружного применения, в частности к лекарственным формам с упруговязкопластичной средой, предназначенным для лечения инфекционных гинекологических заболеваний.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В настоящее время в связи с высокой частотой протозойных, грибковых и бактериальных инфекций нижнего отдела женских половых органов большую важность в гинекологии имеют биоцидные препараты местного действия. Ввиду большой вариабельности и широкой распространенности штаммов возбудителей вульвитов и вагинитов особое значение имеет широта спектра действия применяемого препарата [Красильников А.П. Справочник по антисептике. - Минск: Вышейшая школа, 1995. - 367 с.].
Применение эффективной композиции веществ с антипротозойным, антимикробным и фунгицидным действием представляет только часть решения, остальное остается за созданием рациональной лекарственной формы. В большинстве случаев существует необходимость обеспечения равномерного распределения препарата по всей поверхности слизистой оболочки влагалища для достижения тотального уничтожения возбудителя, а также пролонгированного действия. Интравагинальная лекарственная форма должна обеспечивать комфортность при введении (не травмировать слизистую оболочку, иметь оптимальную консистенцию и время полной деформации/растворения) и высокую биодоступность действующих веществ [Промышленная технология лекарств / под ред. проф. В.И.Чуешова - Харьков: НФАУ, - 2002].
Среди пролонгированных лекарственных форм местного действия, применяемых в гинекологии, можно перечислить таблетки, мази, суппозитории. Мягкие лекарственные формы (суппозитории и мази) обладают преимуществом перед водными растворами, обеспечивая более существенное пролонгирование терапевтического эффекта за счет высокой вязкости и структурированности [Синев Д.Н., Марченко Л.Г., Синева Т.Д. Справочное пособие по аптечной технологии лекарств. - СПб.: Невский диалект, 2001. - 316 с.]. Известны преимущества гидрофильных и дифильных суппозиторных основ перед липофильными: лучшие растворимость в вагинальном секрете, распределение по слизистой оболочке, параметры высвобождения, снижение риска микробной контаминации [Полимеры в фармации / под ред. А.И.Тенцовой, Медицина, Москва (1985)].
Дифильные основы могут быть представлены продуктами направленной этерификации и гидрогенизации жирных кислот (витепсол, массупол, лазупол), а также смесями поверхностно-активных (Твины, Спэны, полоксамеры, эмульгаторы), липофильных (жиры, воски) и гидрофильных веществ. В качестве гидрофильных основ используют полиэтиленгликоли (макроголы), гели желатина, высшие жирные спирты.
Известны составы вагинальных суппозиториев, предназначенных для лечения бактериальных вагинитов и содержащих в качестве основного действующего вещества антибактериального и противомикробного действия препараты ряда нитроимидазолов (например, метронидазол), и дополнительно необязательно содержащих антибиотик в качестве действующего вещества антифунгального действия. Общим недостатком указанных решений является слабая растворимость действующих компонентов в липофильных, дифильных и гидрофильных суппозиторных основах. Данное явление напрямую влияет на высвобождение лекарственных веществ из основы и реализацию терапевтического действия.
Среди вагинальных суппозиториев противогрибкового действия известен препарат «Пимафуцин» (№ гос. регистрации П №013552/01-2002), производства Яманучи, который содержит в качестве действующего вещества полиеновый макролидный противогрибковый агент натамицин (пимафуцин). Преимуществом введения натамицина в суппозиторий является его низкая токсичность, он показан для введения беременным [Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. Б-476, изд-во ЗАО АстраФармСервис, 2002].
В заявке США 20060241061 указано, что натамицин слабо растворим в этаноле и воде, однако поднятие рН среды до 12 гидроксидом натрия увеличивает растворимость. Такое изменение рН может негативно сказаться на состоянии вагинального тракта, имеющего в норме рН 4-5.
Натамицин, по сведениям европейского патента №1642500, менее активен в кристаллической форме, чем в виде раствора. Данный факт может свидетельствовать в пользу введения растворителя для натамицина в пропись.
В патенте России №2032402 описаны композиции для введения во влагалище, при этом рН крема, по утверждению авторов патента, оптимизирован под нормальный рН влагалища и составляет 3,75-4,75. Кроме того, в описании патента приведен целый ряд ПАВов, консервантов и загустителей. В качестве адъювантов и сорастворителей приведены этанол и другие одноатомные спирты, а также пропиленгликоль и другие многоатомные спирты.
В ряде патентов в качестве вспомогательного вещества используется пропиленгликоль в количестве предпочтительно не более 5 мас.%. Патент России №2032402 содержит метронидазол в смеси полиэтиленгликолей, которые растворяются в вагинальном секрете. В заявке США №2005080038 указана композиция метронидазола и пропиленгликоля в форме вагинального геля, в заявке США №2006024243 - композиция метронидазола с пропиленгликолем в форме пены, в международной заявке WO 2006/050303 - буферированная композиция для лечения бактериальных вагинитов, содержащая метронидазол в комбинации с пропиленгликолем.
Вместе с тем, ни в одной композиции не достигается оптимальная дисперсность метронидазола и натамицина при условии их совместного использования наряду с пролонгированным эффектом.
Наиболее близкое к предлагаемому нами решению рассмотрено в патенте США №6432935, где описана фармацевтическая суппозиторная композиция, состоящая из антибиотика, сульфонамида, нистатина и метронидазола. В качестве основы используется ПЭГ и какао-масло.
Недостатками указанного решения является низкая дисперсность применяемых лекарственных веществ, обусловленная свойствами суппозиторной основы, что обуславливает ухудшение параметров их высвобождения и доставки к очагу инфекционного поражения, а также низкая комфортность применения и возможность абразивного действия на слизистую оболочку влагалища.
В патенте России №2195281 заявлена композиция пессариев, содержащих метронидазол, миконазол и лидокаин. Подобная композиция имеет высокую комфортность применения за счет местного анестетика, вместе с тем, присутствует ряд недостатков, обусловленных присутствием азолового противогрибкового агента миконазола: разнообразные проявления токсичности [Т.С.Meeker, M.S.Siegel, F.M.Shiota, J.J.Crowley, R.W.Mcguffin. Toxicity of Amphotericin B, Miconazole, and Ketoconazole to Human Granulocyte Progenitor Cells In Vitro/Antimicrobial agents and chemotherapy, 1983, p.169-171], аллергенность, наличие резистентных форм грибов.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей настоящего изобретения является создание комбинированных биоцидных составов местного применения для лечения широкого спектра инфекционных заболеваний нижнего отдела женских половых органов, обеспечивающих улучшенное высвобождение метронидазола и натамицина при совместном использовании наряду с пролонгированным действием и комфортностью.
В соответствии с изобретением описываются интравагинальные суппозитории для лечения инфекционных заболеваний нижнего отдела женских половых органов, содержащие в качестве антибактериального и противомикробного агента соединение из ряда нитроимидазолов, в качестве противогрибкового средства - полиеновые макролидные соединения и местный анестетик в дифильной или гидрофильной суппозиторной основе при следующем соотношении компонентов, % мас.:
соединение из ряда нитроимидазолов
15,0-30,0
макролидное полиеновое соединение
4,0-6,0
местный анестетик
0,01-5,0
дифильная или гидрофильная
суппозиторная основа
остальное
В следующем аспекте настоящего изобретения описываются интравагинальные суппозитории для лечения инфекционных заболеваний нижнего отдела женских половых органов, содержащие, помимо соединения ряда нитроимидазолов в качестве антибактериального и противомикробного агента, соединения ряда полиеновых макролидов в качестве противогрибкового агента и местного анестетика, репаративный агент, способствующий ускоренному заживлению ран, в следующем соотношении компонентов, % мас.:
соединение из ряда нитроимидазолов
15,0-30,0
макролидное полиеновое соединение
4,0-6,0
местный анестетик
0,01-5,0
репаративный агент
0,01-5,0
дифильная или гидрофильная
суппозиторная основа
остальное
В следующем аспекте настоящего изобретения описываются интравагинальные суппозитории для лечения инфекционных заболеваний нижнего отдела женских половых органов, дополнительно содержащие буферную систему для поддержания естественного для влагалища уровня рН, при следующем соотношении компонентов, % мас.:
соединение из ряда нитроимидазолов
15,0-30,0
макролидное полиеновое соединение
4,0-6,0
местный анестетик
0,01-5,0
репаративный агент
0,01-5,0
буферная система
0,01-1,0
дифильная или гидрофильная
суппозиторная основа
остальное
В следующем аспекте настоящего изобретения описываются интравагинальные суппозитории для лечения инфекционных заболеваний нижнего отдела женских половых органов, дополнительно содержащие антиоксидант при следующем соотношении компонентов, % мас.:
соединение из ряда нитроимидазолов
20,0-27,0
макролидное полиеновое соединение
4,0-6,0
местный анестетик
0,01-5,0
репаративный агент
0,01-5,0
антиоксидант
0,01-2,0
дифильная или гидрофильная
суппозиторная основа
остальное
В соответствии с настоящим изобретением применяемые биоцидные агенты ряда нитроимидазола выбирают из группы, включающей метронидазол, тинидазол, секнидазол, орнидазол и группы полиеновых антибиотиков: натамицин, нистатин, амфотерицин, рифамицин, входят в действующее издание Британской, Европейской, Американской Фармакопей.
Кроме того, в заявленный состав для повышения комфортности вводят местные антибиотики: лидокаина гидрохлорид, ксилокаин, бупивакаин, новокаин, бензокаин, обладающие местным обезболивающим действием. Для ускорения заживления пораженных инфекцией тканей в состав суппозиториев включены аминокислоты, ускоряющие репарацию (репарационные агенты). В предпочтительном варианте осуществления изобретения кислоты выбраны из группы, включающей таурин, аргинин, триптофан, лизин, пролин, гистидин [Jacobsen, J.; Smith, L.; Biochemistry and Physiology of Taurine and Taurine Derivatives. Phys. Rev. 48; 1968], также входящие в действующие издания Американской и Европейской Фармакопей.
В одном из вариантов осуществления изобретения в состав суппозитория в качестве компонента для регулирования рН входит буферная система. В предпочтительном варианте осуществления изобретения под буферными системами, добавляемыми к составу для регулировки значения рН, подразумевают аскорбатный, карбонатный, фосфатный, цитратный, оксалатный буферы. В предпочтительном варианте осуществления изобретения в состав суппозиториев добавляют от 0,1 до 1 мас.% аскорбатного буфера. Аскорбатный буфер, помимо регулировки значения рН в суппозитории, может выполнять роль антиоксиданта для предотвращения окисления действующих веществ (например, натамицина) в процессе приготовления и упаковки суппозитория.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения в качестве дополнительных антиоксидантов в состав суппозитория добавляют соединения, чьи антиоксидантные свойства проявляются в дифильных и гидрофильных суппозиторных основах. Такие антиоксиданты выбирают из группы, включающей аскорбиновую кислоту, аскорбил пальмитат, гипофосфорную кислоту, аскорбат натрия, витамины С и Е, бисульфит натрия, ЭДТА, лимонную кислоту и другие соединения, известные специалистам, которые проявляют свои антиоксидантные свойства в полимерных дифильных или гидрофильных основах.
Сочетание и соотношение указанных компонентов было установлено экспериментальным путем и является оптимальным по результатам физико-химических, фармакотехнологических и биологических исследований.
Дозировка метронидазола в вагинальных суппозиториях («Флагил» производства Лабораториз Авентис) составляет от 200 до 500 мг при высшей разовой дозе 1 г.
Дозировка натамицина в препаратах «Пимафуцин» производства Яманучи - 100 мг.
Лидокаина гидрохлорид взят в минимальном количестве, рекомендованном в Справочнике Машковского М.Д. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Харьков, 1997) для местного применения в гинекологии.
В соответствии с изобретением дифильная суппозиторная основа представляет собой смесь жирорастворимых компонентов (твердого жира различных типов, восков) и водорастворимых компонентов (эмульгатора №1, эмульгатора Т-2, Твинов, Спэнов, гликолей, дистиллированных моноглицеринов). В предпочтительном варианте осуществления изобретения в качестве жирорастворимых компонентов используют твердые жиры, а в качестве водорастворимых компонентов - эмульгатор Т-2, Твин-80, ПЭГ-1500 (полиэтиленгликоль-1500) и пропиленгликоль. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения используют дифильную суппозиторную основу при следующем соотношении компонентов, % мас.:
твердый жир типа А
55,0-80,0
эмульгатор Т-2
4,5-6,0
Твин-80
1,5-3,0
ПЭГ-1500
0,1-5,0
пропиленгликоль
0,1-10,0
В соответствии с изобретением в качестве компонентов гидрофильной суппозиторной основы выступают водорастворимые компоненты: глицерины, гликоли. В предпочтительном варианте изобретения в качестве компонентов гидрофильной основы используют ПЭГ-1500 и пропиленгликоль. В наиболее предпочтительном варианте изобретения указанные компоненты включают в суппозиторную основу в следующих соотношениях, мас.%:
ПЭГ-1500
60,0-85,0
пропиленгликоль
0,1-20,0
Суппозитории в соответствии с изобретением характеризуются следующими физико-химическими свойствами.
Температура плавления или период полной деформации. Для разработанных составов значения данных характеристик соответствуют требованиям Государственной Фармакопеи (ГФ-XI), а именно температура плавления не превышает 37°С, а время полной деформации составляет менее 1 часа.
Время растворения. Время растворения суппозиториев по изобретению, а точнее время превращения суппозиториев в водной среде в тонкую дисперсию, соответствует требованиям, изложенным в Государственной Фармакопее. Следовательно, описываемые в изобретении составы обеспечивают эффективное распределение действующих веществ по слизистой оболочке.
рН. Интервал значений рН составов с дифильной основой и гидрофильной основой составляет 5-7. Действующее вещество - соединение из ряда нитроимидазолов - повышает значение рН суппозиторной основы. Значение рН разработанных препаратов соответствует физиологическому значению рН слизистых оболочек организма и немного превышает естественный рН влагалища (4-5). Вместе с тем, учитывая то, что препарат применяют при воспалительных процессах, возможно, кислые значения рН нежелательны.
Структурно-механические свойства. Осуществлено определение оптимальной консистенции суппозиториев путем измерения динамической вязкости разработанных составов (см. табл.5 в разделе «Примеры»).
Размеры частиц. В разработанных суппозиториях размеры частиц при использованной в лабораторных условиях методике диспергирования относились к среднедисперсным, тогда как данный показатель для препаратов сравнения (Флагил, Пимафуцин) промышленного производства - к тонкодисперсным. Основа влияет значительнее на размер частиц метронидазола: в гидрофильных суппозиториях степень дисперсности метронидазола намного выше по сравнению с дифильной. Разброс значений диаметра частиц меньше в гидрофильных основах.
Применение модуля «Коллоидная мельница» (гомогенизатор Labor Pilot, IKA) в составе технологической линии позволило получить суппозитории с размером частиц не более 1 мкм.
Таким образом, дисперсность получаемого препарата сопоставима с препаратами сравнения.
Ускоренное хранение. Совместимость компонентов разработанных суппозиторных составов исследовали в ходе ускоренного хранения. Суппозитории помещали в термостат при температуре 30°С. По истечении 6 месяцев хранения оценивали параметры: внешний вид, однородность на срезе, рН, время растворения или полной деформации. Оценка физико-химических параметров проводилась согласно статье «Общие методы анализа» Американской фармакопеи, 26 изд. (USP-26) и статье «Суппозитории» Государственной Фармакопеи, изд.XI (ГФ-XI).
В соответствии с изобретением описан способ лечения инфекционных гинекологических заболеваний, включающих вагиниты, вульвиты, вульвовагиниты, вызываемых анаэробными бактериями, грибами и простейшими.
Как видно из табл.10 раздела «Примеры», антибактериальная активность в отношении анаэробной флоры предложенных в соответствии с изобретением комбинаций превышает аналогичный показатель для аналога, проявляя активность в разведении до 1:10000 (25 мкг/мл). Натамицин повышает антибактериальную эффективность метронидазола.
Таким образом, препарат оказывает выраженный антипротозойный, микробоцидный и антифунгальный эффект в эксперименте на представителях основных видов возбудителей инфекционных вагинитов, наиболее распространенных среди населения: Trichomonas, Bacteroides, Fusobacterium, Candida. Эффективность разработанного препарата не уступает монопрепаратам метронидазола (Флагил) и натамицина (Пимафуцин), а в отношении трихомонад - превосходит.
Согласно следующему аспекту настоящего изобретения описан способ получения суппозиториев, состоящий в сплавлении компонентов основы при 30-75°С, измельчении твердых компонентов с расплавленной основой, розливе в упаковку и охлаждении.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фиг.1. Зависимость напряжения сдвига от скорости сдвига разработанного гидрофильного состава (Пример 1) и Пимафуцина.
Фиг.2. Зависимость напряжения сдвига от скорости сдвига разработанного дифильного состава (Пример 3) и Флагила.
Далее описаны примеры осуществления изобретения, которые приводятся для иллюстрации и не ограничивают объем изобретения.
ПРИМЕРЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример №1.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 0,9%, эмульгатора Т-2 - 4,5%, твина-80 - 1,5% и твердого жира типа А - 50,45%.
Способ изготовления включает следующие основные этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава твердого жира с Т-2 и расплава ПЭГ с твином 80 и пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из фольги.
5. Охлаждение.
Пример №2.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26,5%, натамицина 5,75%, лидокаина гидрохлорида 0,01%, таурина 1%, пропиленгликоля 4,73%, ПЭГ 1500 - 1%, эмульгатора Т-2 -  5%, твина-80 - 2,0% и твердого жира типа А - 50,45%. Этапы приготовления соответствуют примеру 1.
Пример №3.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26,0%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 65,25%.
Способ изготовления включает следующие этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава ПЭГ с пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Пример №4.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26,5%, натамицина 5,75%, лидокаина гидрохлорида 0,5%, таурина 0,02%, пропиленгликоля 0,01%, полиэтиленгликоля 1500 - 65,25%. Этапы приготовления соответствуют примеру 3.
Пример №5.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие тинидазола 0,5 г, амфотерицина 0,1 г, бензокаина 0,02 г, аргинина 0,1 г, гидрофильной основы 1,48 г.
Способ изготовления включает следующие основные этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава ПЭГ 1500 с пропиленгликолем при 50-60°С.
3. Смешивание твердых веществ с расплавленной основой, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе в течение 10-15 минут.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Состав стабилен, размер частиц в пределах 10 мкм, среднее время растворения 22 минуты.
Пример №6.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие орниадзола 0,5 г, нистатина 0,015 г, бупивакаина 0,01 г, лизина 0,05 г, дифильной основы 1,67 г.
Способ изготовления включает следующие основные этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава твердого жира с эмульгатором Т-2 и расплава ПЭГ с твином 80 и пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавленной основой, одновременное перемешивание, частичное растворение и измельчение в гомогенизаторе в течение 10-15 минут.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Состав стабилен, размер частиц в пределах 20 мкм, среднее значение периода полной деформации 8 минут.
Пример №7.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 0,9%, эмульгатора Т-2 - 4,5%, твина-80 - 1,5% и твердого жира типа А - 50,4%, аскорбатного буфера 0,2%.
Способ изготовления включает следующие основные этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава твердого жира с эмульгатогром Т-2 и расплава ПЭГ с твином 80 и пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Пример №8.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 0,9%, эмульгатора Т-2 - 4,5%, твина-80 - 1,5% и твердого жира типа А - 50,4%, оксалатного буфера 0,2%, ЭДТА 0,1%.
Способ изготовления включает следующие основные этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава твердого жира с Т-2 и расплава ПЭГ с твином 80 и пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Пример №9.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26,0%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 65,1%, аскорбатного буфера 0,2%.
Способ изготовления включает следующие этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава ПЭГ с пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
Пример №10.
Суппозитории для интравагинального применения, содержащие метронидазола 26,0%, натамицина 4,75%, лидокаина гидрохлорида 0,45%, таурина 0,5%, пропиленгликоля 0,85%, ПЭГ 1500 - 65,1%, ЭДТА 0,2%.
Способ изготовления включает следующие этапы.
1. Отвешивание компонентов, подготовка оборудования.
2. Приготовление расплава ПЭГ с пропиленгликолем.
3. Смешивание твердых веществ с расплавами, одновременное перемешивание и измельчение в гомогенизаторе.
4. Дозирование в блистеры из алюминиевой фольги.
5. Охлаждение.
ПРИМЕРЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СВОЙСТВ СУППОЗИТОРИЕВ
В качестве препаратов сравнения в исследованиях были использованы монопрепараты метронидазола и натамицина: «Флагил» производства Лабораториз Авентис (№ гос. регистрации П №014269/01-2002) и «Пимафуцин» (№ гос. регистрации П №013552/01-2002) производства Яманучи, а также монопрепараты метронидазола и натамицина в избранных нами основах (табл.1).
Пример №11. Распадаемость в водной среде
Время и характер растворения (образования однородной дисперсии в воде) разработанных дифильных и гидрофильных составов в водной среде проводили согласно требованиям статьи «Определение распадаемости лекарственных форм» ГФ-XI, вып.2, стр.158, с использованием прибора «Качающаяся корзинка» производства Эрвека и изотонического раствора натрия хлорида в качестве дисперсионной среды.
Таблица 2Время растворения (образования дисперсии) препаратов метронидазола и натамицина и характер образующихся систем
Состав*
время растворения, мин
характер дисперсной системы
Дифильный
47±3
эмульсия
Дифильный без натамицина
35±1
эмульсия
Дифильный без метронидазола
45±2
грубая эмульсия
Гидрофильный
25±3
эмульсия
Гидрофильный без натамицина
20±2
раствор
Гидрофильный без метронидазола
30±2
раствор
Пимафуцин
43±2
эмульсия
Флагил
нерастворим
-
*Название состава соответствует названию в табл.1
Как видно из табл.2, среднее время растворения дифильного состава, а точнее образование однородной дисперсии, по результатам трех экспериментов составило 45 мин. Время растворения гидрофильного состава составило 25 мин в трех последовательных экспериментах. Метронидазол улучшает распадаемость и растворимость формы в водной среде. Флагил, имеющий липофильную основу, не образует водную дисперсию в данном тесте. Пимафуцин образует дисперсию в течение 40-45 минут. Данные показатели отличаются в лучшую сторону от показателей для препаратов сравнения. Время растворения дифильного состава и гидрофильного состава удовлетворяет требованиям ГФ-Х1, следовательно, составы обеспечивают эффективное распределение по слизистой оболочке.
Пример №12. (Измерение значений рН разработанных составов)
Значение рН разработанных составов (комбинированных и моно-) сравнивали со значением рН монопрепаратов: Пимафуцина (только натамицин, дифильная основа) и Флагила (только метронидазол, липофильная основа). Пробоподготовку дифильных суппозиториев осуществляли в соответствии с ГФ-XI для мазей (стр.114), диспергируя суппозиторий стеклянными бусами в воде в отношении 1:10 для получения эмульсии, включения диспергировали ультразвуком на установке Ultrasonic, Германия.
Настройка прибора и измерения производились в термостатированных условиях при температуре 20°С. рН определяли потенциометрическим методом (ГФ-XI, стр.113-114) при помощи автоматического рН-метра марки РН-150 (Россия) с точностью до 0,01.
Таблица 3Значения рН препаратов метронидазола и натамицина
Состав*
Среднее значение рН
Дифильный
6,5±0,2
Дифильный без натамицина
7,0±0,1
Дифильный без метронидазола
6,9±0,1
Гидрофильный
7,5±0,2
Гидрофильный без натамицина
7,2±0,1
Гидрофильный без метронидазола
7,5±0
Пимафуцин
5,9±0,1
Флагил
6,9±0,2
*Название состава соответствует названию в табл.1
Пример №13. (Температуры плавления)
пл
Температуру плавления (Т, °С эксп.) определяли на приборе с капилляром, снабженном термометром Убеллоде по методике ГФ-XI, вып.1, стр.18. Достоверными считали показатели с разбросом не более 1°С при трех последовательных измерениях.
пл
Температуру плавления (Т, °С теор.) составов предварительно устанавливали по формуле:
пл
где Т - температура плавления смеси;
1
2
3
T, Т и Т - температура плавления отдельных компонентов;
1
2
3
Q, Q и Q - содержание их в %;
Результаты теоретических расчетов и практических измерений представлены в табл.4.
Таблица 4Температуры плавления составов с метронидазолом и натамицином
Состав*
Т<sub>пл</sub>, °С теор.
Т<sub>пл</sub>, °С эксп.
Дифильный
35,0
34,4
Дифильный без натамицина
35,0
34,5
Дифильный без метронидазола
35,0
33,5
Гидрофильный
37,2
37,0
Гидрофильный без натамицина
37,2
37,0
Гидрофильный без метронидазола
37,2
36,8
Пимафуцин
37,2
37,1
Флагил
34,6
33,6
* Название состава соответствует названию в Табл.1
Пример №14. (Консистенция разработанных составов)
1
3
-1
Структурно-механические свойства, характеризующие течение, сохранение формы и внутреннее трение суппозиторной основы при температуре тела оценивались по значениям в определенных интервалах. Препараты расплавляли на водяной бане при 37°С, расплав немедленно переносили в цилиндр ротационного вискозиметра «Реотест-2» (Германия) с системой воспринимающих элементов «цилиндр-цилиндр» T-В. Цилиндр находился в аквариуме с непрерывным подогревом воды до 37±1°С. Измеряли динамическую вязкость при различных скоростях (диапазон 4-2048 с) сдвига вначале в направлении возрастания, затем в направлении убывания значений скорости. На основании полученных рядов зависимости вязкости от скорости сдвига находили значения напряжения сдвига по формуле:
τ=γ·η,
где τ - напряжение сдвига, сН/м (дин/см);
-1
γ - скорость сдвига, с;
η - динамическая вязкость, сП·с.
Строили графики зависимости τ(γ), где отмечали наличие петель гистерезиса и прохождения через реологический оптимум [Аркуша А.А. Исследования структурно-механических свойств мазей с целью определения оптимальной консистенции. Автореферат диссертации на соискание степени канд. фарм. наук. - Харьков, 1982. - 55 с.].
2
-1
Графики τ(logγ) разработанного состава по примеру 3 (гидрофильный состав), а также Пимафуцина (Фиг.1) обладают слабовыраженной петлей гистерезиса, что обусловлено преобладанием в составе ПАВ со сравнительно большой молекулярной массой (полиэтиленгликоль в разработанном составе, цетиловый спирт в Пимафуцине), в составе основы и свидетельствует о возможности изменения структуры расплава при постоянном давлении. Графики обоих разработанных составов проходят через реологический оптимум, значит, при распределении расплава при слизистой оболочке при естественном трении (эквивалент с).
Отсутствие существенных петель на графиках составов свидетельствует о сохранении структуры при возрастающем механическом воздействии или же о быстром восстановлении при снижении силы механического воздействия. Составы, содержащие в качестве основы преимущественно жир (пример 1, дифильный состав и Флагил) (Фиг.2), обладают максимальной вязкостью и стойкостью структуры расплавов. Вместе с тем, прохождение их графиков τ(log2γ) через оптимум консистенции говорит об отсутствии дискомфорта и трудности распределения по слизистой оболочке. Наличие выраженной дисперсной фазы (более 25%) в разработанных составах относительно препаратов сравнения повышает значение динамической вязкости относительно препаратов сравнения, что выражается более крутой линией графика.
Пример №15. (Определение размеров частиц суспензионной фазы)
Определение размера частиц суспензионной фазы (метронидазол, натамицин) производили при помощи микроскопа со счетным окуляром. Суппозитории расплавляли при 40-50°С, расплав переносили на нагретое лабораторное стекло, накрывали покровным стеклом. Препарат исследовали с использованием микроскопа марки «ЛОМО» при увеличении х150, на объектив устанавливали микрометрометрическую счетную сетку MOB (Микрометра Окулярного Винтового). Размер частиц дисперсной фазы определяли согласно методике ГФ-XI, изложенной в статье «Мази», вып.2, с.146.
Таблица 6Линейные размеры частиц препаратов натамицина и метронидазола в поле зрения
Состав*
D<sub>min</sub>, мкм**
D<sub>max</sub>, мкм**
D<sub>средн</sub>, мкм**
Дифильный
менее 0,1
10,0
не более 5,0
Дифильный без натамицина
менее 0,1
15,0
не более 10,0
Дифильный без метронидазола
менее 0,1
10,0
не более 5,0
Гидрофильный
0,2
10,0
5,0
Гидрофильный без натамицина
0,1
5,00
2,5
Гидрофильный без метронидазола
0,2
8,0
4,0
Пимафуцин
менее 0,1
0,15
не более 0,2
Флагил
менее 0,1
0,50
не более 1,0
*Название состава соответствует названию в табл.1
** D<sub>min</sub> - минимальный размер частиц, D<sub>max</sub> - максимальный размер частиц,
D<sub>средн</sub> - среднее арифметическое значение размера частиц.
По табл.6 распределение размеров частиц подчинялось кривой Гаусса, посторонних включений отмечено не было. Для всех разработанных составов преобладает фракция со среднеарифметическим размеров частиц 5-7 мкм, дисперсия порядка 20%, максимальный размер 15 мкм. Размеры частиц всех препаратов укладываются в требования к препаратам суспензионного типа для наружного применения (от 0,1 до 100 мкм).
Пример №16 (изучение специфической активности препарата)
Кинетика высвобождения была оценена в тесте «Растворение», был использован прибор «Вращающаяся корзинка» (Erweka DT-6), эксперимент проведен в соответствии с требованиями ГФ-XI, стр.159. В качестве диализной среды использован изотоничный раствор натрия хлорида. Учитывая пролонгированный характер высвобождения из суппозиториев, пробы по 5 мл отбирали каждые 30 минут, объем восполняли диализной средой.
Отобранные пробы тестировались на способность к подавлению роста стандартных штаммов микроорганизмов: анаэробы: Fusobacterium necroforum, Bacteroides nodosus, грибы: Candida utilis (метод разведения со средой) [Красильников А.П. Справочник по антисептике. - Минск: Вышейшая школа, 1995. - 367 с.], а также трихомонад.
Изучение противотрихомонадной активности метронидазола проводили в опытах in vitro. Штаммы трихомонад в ассоциации с бактериями, в частности с кишечной палочкой, культивировали на среде Павловой, перевивая такие культуры каждые 2-3 дня. [Экспериментальное изучение антипротозойной активности фармакологических веществ (Методические рекомендации) / чл.-корр. РАМН Т.А.Гуськова]. Trichomonas vaginalis, выделенный из очага поражения, пересев со среды Павловой (совместный рост с Е. coli) на жидкую питательную среду (МПБ). Проверяли активность трихомонад (не менее 80% активно движется), наблюдая жидкий препарат при увеличении ×1000 на микроскопе «Lumex». Приготовление разведений производили десятичным методом, разводя 1 мл диализной среды, отобранной в эксперименте «Растворение» (время растворения 60 минут), 9 мл стерильного изотоничного хлорида натрия. Далее 1 мл полученного раствора переносили в пробирку с 9 мл стерильного изотоничного хлорида натрия, получая разведение 1:100 и т.д. Вносили 1 мл жидкой культуры трихомонады в пробирку с 1 мл разведения, оставляли на 1 ч, далее переносили препарат на стекло, микроскопировали, наблюдая за состоянием жгутиков и мембраны. За минимальную ингибирующую концентрацию принимали максимальное разведение, вызывающее остановку движения жгутиков и мембраны 98% микроорганизмов в поле зрения. В качестве стандарта использовали разведения 1%-ного водного раствора субстанции метронидазола, из расчета в одном суппозитории 500 мг, что эквивалентно 1% при 100%-ном высвобождении в 50 мл диализной среды.
Исследованию подвергали составы: на дифильной основе метронидазол+натамицин (1), натамицин (2) и метронидазол отдельно (3), на гидрофильной основе метронидазол + натамицин (4), натамицин (5) и метронидазол отдельно (6), препараты «Флагил» (метронидазол) (7) и «Пимафуцин» (8) для сравнения.
Из табл.8 следует, что стандарт оказывает тотальное трихомоностатическое действие в разведении 1:1000 (0,001%). Все пробы диализатов оказывают трихомоностатическое действие, наиболее выраженное для комплексных препаратов метронидазол + натамицин. Липофильная основа (Флагил) обладает наименьшей высвобождающей способностью по отношению к метронидазолу - около 10% за 1 ч, гидрофильная и дифильная основы высвобождают за 1 ч примерно одинаковые количества метронидазола - около 50%. Натамицин потенцирует трихомонацидное действие метронидазола. Пимафуцин обладает слабым трихомонацидным эффектом в разведении 1:100.
Активность в отношении патогенной грибковой оценивалась на штаммах Candida utilis в соответствии с методикой ГФ-XI (метод серийных разведений со средой). Пошаговые разведения водных экстрактов из препаратов смешивали с питательной средой, на которую засевали тестовые культуры микроорганизмов. Результаты испытания серийных разведений препарата сравнительно с монопрепаратами натамицина представлены в Табл.9.
Очевидно, что по фунгицидной эффективности натамицин в предложенных нами комбинациях не уступает аналогу, проявляя активность в разведении до 31,25 мкг/мл. Метронидазол не влияет на противокандидозную активность натамицина.
Эффективность в отношении анаэробной бактериальной микрофлоры (метронидазол) рассматривалась на патогенных штаммах Bacteroides и Fusobacterium на базе ФГУ «ВГНКИ».
В ходе хранения составы проверялись на отсутствие роста патогенных штаммов согласно методике ГФ-XI по отсутствию роста микроорганизмов групп Pseudomonas, Enterobacteriaceae, Staphylococcus. Составы суспендировали стерильной водой 1:10, выдерживали на ультразвуковой бане для гомогенизации, далее подвергали прямому посеву на специальные питательные среды: тиогликолевую (группа синегнойной палочки), Сабуро (грибы) и МПА (кокки). В течение 1 недели не было отмечено роста колоний микроорганизмов, что свидетельствует о сохранении микробиологической чистоты в течение срока годности.
Пример №17 (острая и хроническая токсичность)
Токсичность препаратов, острая и хроническая, оценивалась на базе Государственного Научного центра по антибиотикам (ФГУП «ГНЦА»). Эксперимент был проведен на крысах чистой линии Wistar при ежедневном ректальном введении по 200 мг суппозиторной массы при одновременном плацебо-контроле (группы по 50 и 10 животных соответственно). [Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ. / Е.В.Арзамасцев, Т.А.Гуськова, И.В.Березовская, Б.И.Любимов и др. - М., 2000.]
Оценка влияния препарата производилась на протяжении курса введения - на общее состояние животных, сразу после окончания курса введения и спустя 2 недели - на биохимические показатели крови, картину периферической крови и показатели свертываемости крови, а также проведение морфометрического анализа и патогистологического исследования внутренних органов животных. Опыты проводились на четырех экспериментальных группах крыс по 15 самок и 15 самцов в каждой группе.
В эксперименте острой токсичности было установлено, что превышение предполагаемой дозы препарата в 10 раз не ведет к патологическим изменениям в организме.
В течение 2 недель (исходя из предполагаемого срока терапии 6-9 дней) не было зарегистрировано случаев смерти или острого отравления, биохимические показатели (уровень общего белка, соотношение белковых фракций и общего холестерина сыворотки крови, содержания глюкозы, мочевины, креатинина, а также активность аланин- и аспартат-трансаминаз, щелочной фосфатазы) оставались в норме. Гистологическое исследование органов не выявило отклонений в их строении.
Изучение местно-раздражающего действия испытуемого препарата производили в экспериментах (введение по схеме, предусмотренной для человека - 6-7 дней, не более). По окончании эксперимента производилась экспертиза состояния слизистой оболочки влагалища.
Случаев раздражающего действия отмечено не было, также как и видоизменения эпителия влагалища. Аппликация состава на слизистую оболочку глаза кролика (N=5) также не вызывала раздражения. Было установлено, что разработанные составы в форме суппозиториев не оказывают раздражающего действия.
Учитывая дозовый уровень токсического действия, разработанные суппозитории комбинированного состава по степени опасности можно классифицировать как малоопасный препарат (степень токсичности по ГОСТу 12.1.00.7.76-IY), который может быть рекомендован в качестве лекарственного препарата для медицинского применения. Соотношение было установлено экспериментальным путем и является оптимальным по результатам физико-химических, фармакотехнологических и биологических исследований.
Таким образом, разработанные составы суппозиториев для интравагинального применения обладают:
1) биологической безопасностью, проявляющейся в отсутствии раздражающего и токсического действия;
2) биоцидной эффективностью в отношении специфичных штаммов возбудителей, включая простейших, грибы и анаэробную микрофлору;
3) высокой дисперсностью и биодоступностью метронидазола и натамицина, сопоставимой с эффективностью монопрепаратов сравнения «Флагил» и «Пимафуцин»;
соответствуют требованиям нормативно-технической документации к качеству суппозиториев.