МОДИФИЦИРОВАННЫЕ БЕЛКИ ШЕЛКА ПАУКОВ

1. Способ модификации белка шелка пауков, включающий стадии:
а) получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок шелка пауков, который содержит один модуль SEQ ID NO: 1 или его вариант, где вариант содержит 1 аминокислотную замену, 1-2 аминокислотных делеций и/или 1-2 аминокислотных вставок, и который не содержит остатков лизина или цистеина;
б) замены последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей серин и/или глицин в указанном модуле указанного белка шелка пауков, последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей лизин и/или цистеин, и/или добавления к указанной последовательности последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминоконцевой TAG согласно SEQ ID NO: 20-24, содержащий лизин или цистеин наряду с другими аминокислотами, и/или карбоксиконцевой TAG согласно SEQ ID NO: 25-28, содержащий лизин или цистеин наряду с другими аминокислотами;
в) проведения экспрессии модифицированной последовательности нуклеиновой кислоты, полученной в (б), в подходящем хозяине и
г) выделения экспрессированного модифицированного белка шелка пауков.
2. Способ по п.1, который дополнительно включает связывание других веществ с указанной молекулой лизина и/или цистеина в модифицированном белке шелка пауков.
3. Способ по п.2, где вещество, подлежащее связыванию с указанной молекулой лизина и/или цистеина, представляет собой маркерную молекулу.
4. Способ по п.1, где белок шелка пауков, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, полученной в (а), содержит AQ или QAQ.
12
24
8
16
5. Способ по п.4, где белок шелка пауков, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, полученной в (а), содержит (AQ), (AQ), (QAQ) или (QAQ).
6. Способ по п.1, где модифицированный белок шелка пауков, выделенный на стадии (г), содержит один модуль с SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO:9.
7. Способ по п.1, где к модифицированному белку шелка пауков, выделенному на стадии (г), добавляют аминоконцевой TAG согласно SEQ ID NO: 20-24, содержащий лизин или цистеин наряду с другими аминокислотами, и/или карбоксиконцевой TAG согласно SEQ ID NO: 25-28, содержащий лизин или цистеин наряду с другими аминокислотами.
8. Модифицированный белок шелка пауков, подходящий для направленного связывания с веществами, получаемый способом по любому из пп.1-7.
9. Модифицированный белок шелка пауков по п.8, содержащий один модуль с SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9.
10. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая модифицированный белок шелка пауков по п.8 или 9.
11. Вектор экспрессии, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты по п.10 и одну и более регуляторных последовательностей.
12. Вектор экспрессии по п.11, который представляет собой плазмидный или вирусный вектор, предпочтительно бакуловирусную систему или векторную систему на основе вируса коровьей оспы.
13. Клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии по п.11 или 12 и подходящая для продуцирования модифицированного белка шелка пауков по п.8 или 9.
14. Клетка-хозяин по п.13, которая представляет собой прокариотическую клетку.
15. Клетка-хозяин по п.14, которая представляет собой E. соli или Bacillus subtilis.
16. Клетка-хозяин по п.13, которая представляет собой эукариотическую клетку.
17. Клетка-хозяин по п.16, которая представляет собой клетку млекопитающего, растительную клетку, дрожжевую клетку или клетку насекомого.
18. Клетка-хозяин по п.17, где клетка млекопитающего представляет собой клетку СНО (яичника китайского хомячка), COS, HeLa, 293T, НЕН или ВНК (почки детеныша хомяка).
19. Клетка-хозяин по п.17, где дрожжевая клетка представляет собой Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris, Candida albicans или Hansenula polymorpha.
20. Клетка-хозяин по п.17, где клетка насекомого выбрана из клеток насекомых Lepidoptera, предпочтительно из Spodoptera frugiperda и из Trichoplasia ni.
21. Клетка-хозяин по п.20, где клетка насекомого Spodoptera frugiperda представляет собой Sf9, Sf21 или клетку "high five".
22. Клетка-хозяин по п.17, где растительная клетка происходит из табака, картофеля, кукурузы, гороха и томата.