Роль гистамина и гистаминовых рецепторов Н3/4-типа в регуляции синтеза IgE при атопических заболеваниях

Выводы

Результаты проведенных исследований показывают несомненное преимущество гемосорбента СКН-1К, модифицированного натрия гипохлоритом, перед неселективным сорбентом в плане устранения последствий ишемического-реперфузионного повреждения задней конечности у экспериментальных животных. Данное преимущество выражалось в том, что применение модифицированного сорбента приводило к значительному ослаблению (в мышцах бедра) и полному устранению (в мышцах голени) феномена “эЬш-геНош”.

Таким образом, гемокарбоперфузия на модифицированном сорбенте приводит к восстановлению оксигена-ции тканей после ишемии и реперфузии конечностей. Проведение же гемокарбоперфузии на стандартном гемосорбенте СКН-1К, напротив, приводит к снижению парциального напряжения кислорода скелетных мышц.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бенсман В. М., Галенко-Ярошевский П. А., Мехта С. К., Тралдафилов К. В. Предотвращение ампутаций конечностей у больных с осложнением «диабетической стопы» // Хирургия. 1999. № 10. С 49-52.

2. Гтишин Н. Н., Козловский А. А., Кокошко Ю. И. Этиология, патогенез, классификация и хирургическое лечение синдрома диабетической стопы // Хирургия. 2003. № 4. С. 42-46.

3. Гульмурадов Т. Г., Рахматуллаев Р. Р., Султанов Д. Д., Валиев Ш. Ю. Выбор способа хирургической коррекции кровотока при тяжелой ишемии нижних конечностей // Ангиология и сосудистая хирургия. 1998. № 1. С. 102-113.

4. Каримов 3. 3., Бахритаинов Ф. Ш., Трынкин А. В. Длительная внутриартериальная терапия в хирургическом лечении больных с критической ишемией нижних конечностей // Хирургия. 2001. № 12. С. 42-44.

5. Комаров А. Л., Панченко Е. Л., Деев А. Д., Давлетов К. К., Ешкеева А. Р., Маркова Л. А., Карпов Ю. А. Течение перемежающейся хромоты и прогноз больных атеросклеротическим поражением артерий нижних конечностей // Ангиология и сосудистая хирургия. 2000. № 2. С. 9-18.

6. Лобзин В. С., Жулев Н. М., Тюкаркина А. Б., Шутов В. В., Шур А. Н., Жулев С. Н. Способ диагностики вегетативных нарушений при компрессионно-ишемических невропатиях: Пат.

Известно, что гистамин является одним из важнейших эндогенных медиаторов иммунитета, а также основным медиатором воспаления, в том числе и аллергического, лежащего в основе таких заболеваний, как атопическая астма, аллергические ринит, конъюнктивит, и осуществляет свои эффекты через рецепторы различных типов, экспрессирующихся практически на всех клетках иммунной системы. Вместе с тем гистамин, как и ряд других медиаторов нецитокиновой природы, является не только медиатором ранней фазы воспаления, но и важнейшим фактором, участвующим в регуляции синтеза иммуноглобулина Е (1дЕ), гиперпродукция которого лежит в основе аллергического ринита и астмы [2]. Ранее было показано, что гиста-

2051617 Россия, МКИ А61В 5/05. № 5022350/14; заявл. 19.12.91; опубл. 10.01.96, бюл. № 1.

7. Лужников Е. А., Гольдфарб Ю. С., Марупов А. М. Особенности диагностики и лечения синдрома эндотоксикоза при острых отравлениях химической этиологии // Анестезиология и реаниматология. 2002. № 2. С. 9-14.

8. Пасечников В. Д., Таций Ю. П., Ивашкин В. Т. и соавт. Оценка эффективности гемосорбции при реперфузионных повреждениях печени // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатоло-гии и колопроктологии. 1996. № 3. С. 66-69.

9. Петросян Э. А., Сергиенко В. И., Сухинин А. А., Захарченко И. С., Петросян Н. Э. Способ модификации углеродных сорбентов: Патент РФ № 2161987 от 20.01.01.

10. Степанов Н. Г., Измайлов С. Г. Реампутация: причины и результаты лечения // Нижегородский медицинский журнал. 2002. № 2. С. 78-79.

11. Fiedler R., Baumann F., Deschler B., Osten B. Haemoperfusion combined with haemodialysis in ifosfamide intoxication // Nephrol. Dial. Transplant. 2001. Vol. 16. P. 1088-1089.

I. M. LAJPANOV, E. A. PETROSJAN, V. I. SERGIENKO

COMPARATIVE ESTIMATION OF PARTIAL PRESSURE OF OXYGEN IN SKELETAL MUSCLES OF EXTREMITY AT EFFERENT THERAPIES OF THE SYNDROME OF THE ISCHEMIA-REPERFUSION

On 94 adult not purebred dogs the condition of an oxygen homeostasis is studied at development and treatment of a syndrome of a sharp ischemia-reperfusion of leg with application modified antiradical hemosorbent SKN-1K. It is shown, that hemoperfusion on a modified sorbent leads to restoration tissues oxigenation after an ischemia and reperfusion legs. Carrying out of hemoperfu-sion on standard hemosorbent SKN-1K, on the contrary, leads to even more expressed decrease of oxygen partial pressure of skeletal muscles.

Key words: leg’s ischemia-reperfusion, modified sorbent, sodium hypohlorite, oxygen partial pressure

мин и блокада гистаминовых рецепторов 1-го (Н1) и 2-го (Н2) типов специфическими антагонистами по-разному модулируют синтез 1дЕ у здоровых доноров и больных атопией [4]. В последнее время стало известно, что не только Н1- и Н2-рецепторы принимают участие в регуляции синтеза 1дЕ, но и гистаминовые рецепторы третьего типа (Н3) [3].

Этот новый класс гистаминовых рецепторов изначально был обнаружен в качестве пресинаптических рецепторов ЦНС, а в последующем и на мононуклеа-рах периферической крови (МПК) человека, что доказывается, в частности, методами, основанными на геномной технологии [8]. Вопрос идентичности Н3- и Н4-рецепторов в настоящее время дискутируется:

Д. В. ЛЕСИК, Р. А. ХАНФЕРЯН, А. Н. АНДРЕЯНОВА

РОЛЬ ГИСТАМИНА И ГИСТАМИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ Н3/4-ТИПА В РЕГУЛЯЦИИ СИНТЕЗА ГСЕ ПРИ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Кафедра клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики

ГОУ ВпО КГМУ Росздрава

УДК 616-056.3:611-018.1:547.781.5

Таблица 1

Уровень синтеза 1дЕ в спонтанных клеточных культурах МПК больных поллинозом

IgE, поллиноз спонтанный M а p

K0 3,12 2,05

Г-5 2,69 2,03 p<0,05

Г-8 5,60 7,44 p<0,01

FUB-181 6,54 6,84 p<0,01

FUB-181 -Г-5 7,12 6,46 p<0,01

FUB-181 -Г-8 8,26 7,26 p<0,01

Примечание: Ко - уровень синтеза 1дЕ МПК, обследуемых без добавления гистамина и блокатора Н3/4-рецепторов РЫБ 181 hydrogenmaleate (исходный);

Г-5 - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10-5 М; Г-8 - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10-8 М; РЫБ-181 - уровень синтеза при добавлении в систему МПК блокатора рецепторов гистамина Н3/4 типа РЫБ 181 hydrogenmaleate;

РЫБ-181-Г(-5;-8) - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК блокатора Н3/4-рецепторов РЫБ 181 hydrogenmaleate одновременно с гистамином в соответствующей концентрации;

р - уровнь значимости при сравнении с К0.

имеется мнение, что разница между ними условна, как и для рецепторов других типов - в зависимости от локализации в различных тканях и клетках, что доказывается, в частности, наличием общих антагонистов, которые в научной литературе имеют обозначение НЗ/ Н4-антагонисты [7], однако другие исследователи утверждают, что эта разница существует, основываясь на отсутствии ожидаемого ответа искусственно клонированных ими рецепторов на ряд Н1-, Н2-, НЗ-агонис-тов, и определяются ими как Н4-рецепторы. Вместе с тем они не отрицают блокирования данного рецептора известными Н3/Н4-антагонистами, кроме того, гомологии Н4- и НЗ-рецепторов как в молекулярном строении, так и в структурном уровне кодирующих их генов [6]. В результате предыдущих работ нашей кафедры были получены данные, свидетельствующие о важной роли НЗ/4-рецепторов гистамина в регуляции синтеза IgE при атопии, а также подобраны оптимальные концентрации блокатора НЗ/4-рецепторов - FUB 181 hydrogenmaleate для исследования in vitro [5].

Целью настоящей работы стало изучение закономерностей влияния гистамина и блокады гистами-новых рецепторов Н3/Н4 типа на синтез IgE МПК больных с пыльцевой бронхиальной астмой средней степени тяжести в ремиссию и при модуляции обострения с помощью специфического аллергена in vitro.

Материалы и методы

Объектом исследования служили МПК 48 больных атопической астмой средней степени тяжести с сенсибилизацией к пыльце амброзии в стадии ремиссии. Кроме того, проявления поллиноза у данных больных сопровождались риноконъюнктивитом. Все обследуемые являлись пациентами института аллергии и астмы г. Краснодара, где ранее им был выставлен диагноз «полли-ноз летне-осенний, аллергический рино-конъюнктивит. Астма, среднетяжелое течение (сенсибилизация к пыльце амброзии)» и определена степень тяжести астмы в соответствии с критериями Global Initiative for Asthma, пересмотр 2002 года (GINA) [1]. Исследуемые группы были выровнены по возрасту и полу. Критериями исключения служило наличие интеркуррентных заболе-

ваний и вредных привычек (употребление алкоголя и курение). МПК выделялись из гепаринизированной крови общепринятым методом на центрифуге РС-6 в градиенте плотности фиколл-пак (1077-78 р) («Pharmacia», Швейцария). После двукратной отмывки в среде 199 лейкоциты ресуспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 2 мМ L-глютамина, 10 мМ Hepes («Serva», Германия) с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл гентамицина. Культивирование проводилось в 96 луночных планшетах в концентрации 200 тысяч клеток на лунку и объеме 150 мкл, в С02-инкубаторе, содержащем 5% С02, при 96%-ной влажности и температуре 37о С, в течение 6 суток для определения уровня синтеза IgE. Исследование содержания общего IgE в сыворотках и концентрации IgE в супернатантах проводили иммуноферментным методом с использованием стандартных тест-наборов для определения общего IgE человека (IgE-total, FELA, «Pharmacia»). Мы изучали характер синтеза IgE на 6-е сутки в спонтанных культурах МПК и при стимуляции причинным аллергеном (амброзийным (Nelco Labs INC, USA) в концентрации 15 PNU/ml, при условии наличия кожного ответа в скарификационных пробах) как модель аллергического обострения in vitro. В культуральную систему последовательно добавляли блокатор Н3/ 4 гистаминовых рецепторов FUB 181 hydrogenmaleate в концентрации 10-5 M, гистамин в низкой (10-8 М) и высокой (10'5 М) концентрациях, а также их сочетания. Концентрации используемых веществ были установлены нами ранее на основании предварительно проведенных исследований [5]. Полученные результаты сравнивали с уровнем синтеза IgE тех же пациентов без введения в систему гистамина и FUB 181 hydrogenmaleate.

Статистические методы обработки данных. Вследствие небольшого объема выборки нормальность распределения признаков не производилась. Анализ различий признаков проводился с помощью непараметрического критерия Вилкоксона. Данные представлены в виде М±с, где М - среднее арифметическое значение признака, а - среднее квадратичное отклонение. На представленных рисунках приведены данные о кратности изменения изучаемых показателей

Таблица 2

Уровень синтеза 1дЕ в стимулированных аллергеном амброзии

IgE, поллиноз стимулированные M с p Р1

K0 6,31 4,44 p<0,01

Г-5 7,86 6,65 p<0,05 p<0,01

Г-8 9,58 6,39 p<0,01 p<0,01

FUB-181 10,91 6,77 p<0,01 p<0,01

FUB-181-Г-5 24,18 26,74 p<0,01 p<0,01

FUB-181-Г-8 19,98 11,47 p<0,01 p<0,01

Примечание: р1 - уровень значимости при сравнении с соответствующим показателем в спонтанных клеточных культурах МПК.

ного иммуноглобулина (р<0,05) (рис. 2; табл. 2).

Низкие концентрации гистамина (10'8 М) оказывают стимулирующее влияние на синтез 1дЕ у больных поллинозом, причем в спонтанных культурах лим-фоцитов-атопиков под влиянием низких концентраций гистамина уровень синтеза 1дЕ возрастает более чем в 1,7 раза (р<0,01) по сравнению с исходным уровнем (рис. 1; табл. 1), тогда как при стимуляции аллергеном амброзии низкие концентрации гистамина повышают синтез 1дЕ лишь в 1,5 раза по сравнению с соответствующим исходным уровнем (рис. 2; табл. 2).

Избирательная блокада гистаминовых Н3/4-ре-цепторов специфическим блокатором РЫБ 181 Иу^одепта1еа1е в концентрации 10-5 М обнаруживает достоверное усиление синтеза 1дЕ как в спонтанных, так и в стимулированных культурах МПК атопиков по сравнению с исходным уровнем (р<0,01), что свидетельствует о роли данных рецепторов в отрицательной регуляции 1дЕ-синтеза при аллергопатологии (рис. 1, 2; табл. 1, 2).

Рисунок 1. Влияние гистамина и Н3/4-антагонистов на синтез 1дЕ у больных поллинозом в спонтанных культурах МПК:

Примечания: Г'5 - кратность изменения уровня синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10-5 М в сравнении с К0;

Г-8 - кратность изменения уровня синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10-8 М в сравнении с К0;

Н3/4 - кратность изменения уровня синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК блокатора Н3/4-рецепторов РЫБ 181 Иу^одепта1еа1е в сравнении с К0;

Н3/4 Г (-5; -8) - кратность изменения уровня синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК блокатора Н3/4-рецепторов РЫБ 181 Иу^одепта1еа1е одновременно с гистамином в соответствующей концентрации в сравнении с К0

в сравнении с К0. Кратность изменения рассчитывалась отдельно для каждого индивида, что позволило оценить не только кратность изменения в группе (К), но и ее ошибку (mK). Корреляция изучаемых признаков оценивалась при помощи вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена (rS). Данные приведены в виде (rS; p), где p - уровень значимости отличий rS от нуля. Подготовку данных для статистической обработки и построение графиков проводили в программе «Excell 2002» (корпорация MS, США). Статистическую обработку проводили в программе «Statiatica 6.0 for Windows» (фирма «StatSoft», США).

Результаты и обсуждение

Нами показано, что при добавлении в систему культивирования МПК больных поллинозом гистамина в высокой концентрации (10-5 М) имеется достоверная тенденция к снижению синтеза IgE в спонтанных культурах лимфоцитов (р<0,05) (рис.1; табл.1). Однако при стимуляции МПК аллергеном амброзии происходит отмена супрессирующего влияния высоких доз гистамина на синтез IgE с тенденцией к повышению уровня синтеза дан-

4.0

3.0

2.0 1,0 0,0

—I-------------1--------------1-------------1-------------1

Г-5 Г-8 H3/4 Н3/4+Г-5 Н3/4+Г-8

Рисунок 2. Влияние гистамина и Н3/4-антагонистов на синтез IgE у больных поллинозом в аллерген-стимулированных культурах МПК

Установлено, что введение гистамина в высоких и низких концентрациях в спонтанные культуры МПК больных поллинозом в условиях блокады Н3/4-рецеп-торов достоверно усиливает синтез IgE по сравнению с исходным уровнем (рис. 1), что свидетельствует о важной роли Н3/4-рецепторов в отрицательной регуляции синтеза IgE.

При стимуляции МПК атопиков аллергеном амброзии в условиях блокады их Н3/4-рецепторов уровень синтеза IgE достоверно повышается относительно спонтанного (р<0,01) и исходного уровней. При этом введение в систему культивирования как высоких (10'5 М), так и низких (10'8 М) доз гистамина в условиях блокады их Н3/4-рецепторов дает выраженный рост синтеза IgE как относительно спонтанного (р<0,01), так и исходного уровня (р<0,01) (рис. 1, 2; табл. 1, 2).

Полученные данные позволяют предположить существенную роль Н3/4-рецепторов в отрицательной регуляции синтеза IgE в условиях специфической антигенной нагрузки и возможное повышение их экспрессии на МПК больных амброзийным поллинозом в данных условиях. Таким образом, моделирование обострения аллергического процесса in vitro путем стимуляции МПК больных поллинозом причинным аллергеном ведет к выраженным нарушениям регуляции синтеза IgE гистамином. При стимуляции МПК аллергеном происходит отмена супрессии синтеза IgE высокими концентрациями гистамина (10'5 М) с тенденцией к его повышению.

Важно подчеркнуть при этом, что стимулирующее влияние низких доз гистамина (10'8 М) в условиях блокады Н3/4-рецепторов МПК на синтез IgE в спонтанных и стимулированных аллергеном культурах больных поллинозом достоверно выше, чем при изолированном влиянии FUB 181 hydrogenmaleate (р<0,05 и р<0,01 для спонтанных и стимулированных культур соответственно) либо изолированном влиянии гистамина в концентрации 10'8 М (р<0,05 и р<0,01 для спонтанных и стимулированных культур соответственно).

Анализируя полученные данные, можно заключить, что костимуляция синтеза IgE при блокаде Н3/4-ре-цепторов МПК и введении гистамина в концентрации 10'8 М у больных поллинозом может свидетельствовать о скрытом запрещающем эффекте данных доз гистамина, опосредованном Н3/4-рецепторами, и его отмене при блокаде этих рецепторов. Это свидетельствует о прямой зависимости отрицательной регуляции синтеза IgE не столько от дозы вводимого гистамина, сколько от состояния рецепторов к нему и позволяет сделать предположение о дозозависимости эффектов гистамина, обусловленной различным уровнем экспрессии гистаминовых рецепторов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы / Под ред. А. Г. Чучалина. М., 2002. 160 с.

2. Котова С. А., Белова О. Б., Бережная Н. М. Дифференцированная оценка взаимодействия гистамина с Т- и В-лимфоцита-ми периферической крови больных с атопическими заболеваниями // Иммунология. 1995. № 1. С. 53-55.

3. Ригер Н. А., Ригер Н. А., Котова Н. В., Ханферян Р. А. Участие гистаминовых рецепторов в механизме гиперпродукции IgE // Успехи современного естествознания. 2003. Приложение 2. С. 64.

4. Ханферян Р. А., Котова Н. В. Использование блокады Н,-и Н2-рецепторов гистамина в исследовании их влияния на регуляцию синтеза IgE в норме и при атопии // Тезисы научной конференции студентов и молодых ученых вузов юга России. Краснодар, 2001. С. 15.

5. Khanferyn R., Lesik D., Milchenko N., Schunack W. The influence of histamine H3 receptor antagonists on IgE syntesis //Abstr. XXXIII Мееting ef the EНRS. Düsseldorf. Koln, Germani, 2004. Р. 62.

6. O’Reilly M., Alpert R., Jenkinson S. ot а1. Identification of a histamine H4 receptor on human eosinophils-role in eosinophil chemotaxis // J Recept Signal Transduct Res. 2002. V. 22 (1-4). P. 431-448.

7. Takahashi H. K., Morichika T., Iwagaki H. еt а!. Histamine downregulates CD14 expression via H2 receptors on human monocytes // Clin Immunol, 2003. V. 108 (3). P. 274-281.

8. Zhu Y., Michalovich D., Wu H. еt а1 Cloning, expression, and pharmacological characterization of a novel human histamine receptor // Mol. Pharmacol. 2001. V. 59 (3) Р. 434-441.

D. V. LESIK,

R. A. KHANFERYAN, A. N. ANDREYANOVA

THE ESTIMATION OF EVALUATION OF THE PATIENTS OPINION OF THE FEMINE ABOUT THE STATE OF HEALTH AND ORGANIZATION OF THE AMBULATORY HELP

The aim of investigations the study regularities of histamine and H3/H4-type histamine receptors impact on atopic diseases IgE synthesis. Materials and methods: 48 patients with moderate atopic asthma with ragweed sensitivity in remission period were studied. We isolated the mononuclear cells of peripheral blood in these patients and cultivated them with FUB 181 hydrogenmaleate blocker of H3/ H4-type histamine receptors in concentrations 10-5 M, as well as with incorporation of histamine low or high concentrations into the system. The same parameters were studied in conditions of the causally significant allergen stimulation with the aim to simulate in vitro the exacerbation of allergic process. It has been shown that blocade histamine receptors H3/H4-type stimulates IgE synthesis in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with moderate asthma both in spontaneous culture, and at the causally significant allergen stimulation. The influence of histamine on syntheses IgE dosage-dependent. Introduction FUB 181 hydrogenmaleate cancels the suppressed influence of the high doses of histamine on syntheses IgE.

Key words: histamine, H3/H4-type receptors, IgE, mononuclear cells.