СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОРИОИДАЛЬНОЙ НЕОВАСКУЛЯРИЗАЦИИ ПРИ ВЛАЖНОЙ ФОРМЕ ВОЗРАСТНОЙ МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИИ ПО ЛОКАЛЬНОМУ ИММУНОЛОГИЧЕСКОМУ ПРОФИЛЮ
DIFFERENTIAL DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR CHOROIDAL NEOVASCULARISATION ACCOMPANYING AGE-RELATED WET MACULAR DEGENERATION BY LOCAL IMMUNOLOGICAL PROFILE

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и предназначено для дифференциальной диагностики различных типов хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ) при возрастной макулярной дегенерации (ВМД).
В последние годы ведутся исследования по изучению процессов образования ХНВ при возрастной макулярной дегенерации. Основной инициатор ангиогенеза данной патологии - фактор роста эндотелия сосудов (Vascular endothelial growth factor - VEGF). В нормальных условиях функциональная стабильность эндотелиальных клеток обеспечивается балансом между проангиогенными (в основном VEGF) и антиангиогенными (Pigment epithelium derived factor - PEDF) факторами (Machalinska A., 2012). При этом на процессы неоваскуляризации эти факторы действуют противоположно. Нарушение гомеостаза визуализируется при активации процессов образования ХНВ. Так, при влажной форме ВМД определяется активация индукции VEGF на фоне депрессии активности PEDF. В основе формирования неоваскуляризации лежат несколько ключевых звеньев патогенеза: реакция воспаления, дисбаланс иммунной системы, формирование промежуточных активных форм кислорода.
Наиболее часто встречаемые формы хориоидальной неоваскуляризации:
- Классическая ХНВ, располагающаяся над пигментным листком;
- Смешанная ХНВ, локализующаяся в средней части пигментного слоя;
- Активная фиброваскулярная ХНВ, включающая процессы фиброзирования.
Дифференциальная диагностика данных форм представляет большую клиническую значимость для выбора адекватного хирургического лечения заболевания. Основными методами дифференциальной диагностики являются оптическая когерентная томография, определяющая область ХНВ как гиперрефлективное образование, офтальмоскопия. Клинической сложностью проведения диагностических мероприятий является то, что по данным оптической когерентной томографии не всегда удается точно определить вид неоваскуляризации, что может привести к ошибочной постановке диагноза. При проведении офтальмоскопии субъективное восприятие картины глазного дна препятствует правильной оценке состояния сетчатки.
Наиболее близким аналогом изобретения является способ дифференциальной диагностики ХНВ при ВМД, заключающийся в том, что больным проводят оптическую когерентную томографию. По уровню залегания мембраны определяют форму ХНВ [Klein R., Peto Т., Bird А., Vannewkirk M.R. The epidemiology of age-related macular degeneration // Am. J. Ophthalmol. - 2004. - Vol.137. -P. 486-95]. Недостатком данного способа является низкая информативность, что определяет использование дополнительных методик: флуоресцентная ангиография, микропериметрия.
При рассмотрении вопросов развития ХНВ при ВМД и перехода одной формы в другую важным моментом является разработка дифференциальных критериев оценки неоваскуляризации на основе изменения концентрации основного инициатора ангиогенеза - VEGF на локальном уровне. Основной платформой для решения данного вопроса является влага передней камеры глаза, максимально точно отражающая гомеостаз глазного яблока.
Задачей изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики различных типов хориоидальной неоваскуляризации при возрастной макулярной дегенерации по локальному иммунологическому профилю влаги передней камеры глаза.
Техническим результатом изобретения является повышение точности и упрощение способа.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе дифференциальной диагностики типов хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ) при влажной форме возрастной макулярной дистрофии согласно изобретению производят забор влаги передней камеры глаза, в которой определяют концентрацию фактора роста эндотелия сосудов, при ее значении более 650 пг/мл диагностируют классическую ХНВ; при значении 300-400 пг/мл диагностируют смешанную ХНВ; менее 160 пг/мл - активную фиброваскулярную ХНВ.
Предлагаемый способ дифференциальной диагностики ХНВ при ВМД осуществляют следующим образом. У пациентов с хориоидальной неоваскуляризацией на фоне ХНВ с помощью шприца с иглой менее 25G из передней камеры глаза забирают влагу до 0,2 мл. Определяют содержание VEGF во влаге передней камеры глаза больных методом твердофазного иммуноферментного анализа «Сэндвич» вариантом с использованием тест-систем «ВектортБест» (г.Новосибирск).
В микропланшет с иммобилизованными антителами вносят по 100 мкл стандартов VEGF, в остальные - по 100 мкл исследуемых образцов влаги передней камеры глаза. Планшет инкубируют 2 часа при +18 - +25°C при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывают буфером. Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости. В каждую ячейку микропланшета вносят по 100 мкл конъюгата. Планшет инкубируют в течение 60 мин при +18 - +25°C при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляют и 5 раз промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой. Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубируют в течение 25 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте на шейкере. Наблюдается развитие голубой окраски. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования 4,5 часа.
Учет результатов проводят с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм. Результаты выражают в пг/мл.
Нами проведено исследование влаги передней камеры глаза у 18 больных с ХНВ на фоне ВМД. Предварительный диагноз был поставлен по данным офтальмоскопии и оптической когерентной томографии. Пациенты были подобраны следующим образом:
- С классической ХНВ - 6 пациентов (6 глаз);
- Со смешанной ХНВ - 6 пациентов (6 глаз);
- С активной фиброваскулярной ХНВ - 6 пациентов (6 глаз).
У пациентов с хориоидальной неоваскуляризацией на фоне ХНВ во всех группах с помощью шприца с иглой менее 25G из передней камеры глаза забирали влагу до 0,2 мл. Определяли содержание VEGF во влаге передней камеры глаза больных методом твердофазного иммуноферментного анализа «Сэндвич» вариантом с использованием тест-систем «Вектор-Бест» (г.Новосибирск). В микропланшет с иммобилизованными антителами вносили по 100 мкл стандартов VEGF, в остальные - по 100 мкл исследуемых образцов влаги передней камеры глаза. Планшет инкубировали 2 часа при +18 - +25°C при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывали буфером. Проводили полную аспирацию оставшейся жидкости. В каждую ячейку микропланшета вносили по 100 мкл конъюгата. Планшет инкубировали в течение 60 мин при +18 - +25°C при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляли и 5 раз промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой. Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубировали в течение 25 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте на шейкере. Наблюдали развитие голубой окраски. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку.
Учет результатов проводили с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм.
У пациентов с классической ХНВ уровень VEGF во влаге передней камеры глаза соответствовал 722,1±48,4 пг/мл, концентрация фактора роста эндотелия сосудов всегда была более 650 пг/мл. У пациентов со смешанной ХНВ концентрация фактора роста эндотелия сосудов была в пределах 300-400 пг/мл, средняя концентрация - 353,3±20,8 пг/мл. У пациентов с активной фиброваскулярной ХНВ уровень VEGF был менее 160 пг/мл, средняя концентрация соответствовала 120,2±24,1 пг/мл.
Преимуществом предлагаемого способа дифференциальной диагностики ВМД с формированием ХНВ является однократное определение содержания VEGF во влаге передней камеры глаза, что позволяет контролировать переход одной формы неоваскуляризации в другую более точно, чем офтальмологические методики исследования, такие как офтальмоскопия и оптическая когерентная томография.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.
Пример 1. Больной Ибрагимов В.И., 73 года. По данным офтальмоскопии и оптической когерентной томографии установлен диагноз: Возрастная макулярная дегенерация сетчатки, влажная форма с образованием классической неоваскулярной мембраны. Проведено исследование влаги передней камеры глаза. Установлено: концентрация VEGF - 693,7 пг/мл. Концентрация ростового фактора подтверждает данный диагноз.
Пример 2. Больной Ишмуратов Л.Л., 68 лет. По данным офтальмоскопии и оптической когерентной томографии установлен диагноз: Возрастная макулярная дегенерация сетчатки, влажная форма с образованием активной фиброваскулярной мембраны. Установлено: концентрация VEGF - 102,4 пг/мл. Концентрация ростового фактора подтверждает данный диагноз.
Пример 3. Больная Муртазина К.И., 71 год. По данным офтальмоскопии и оптической когерентной томографии установлен диагноз: Возрастная макулярная дегенерация сетчатки, влажная форма с образованием смешанной неоваскулярной мембраны. Установлено: концентрация VEGF - 321,7 пг/мл. Концентрация ростового фактора подтверждает данный диагноз.
Таким образом, предлагаемый способ делает достоверной дифференциальную диагностику различных типов ХНВ при ВМД по данным концентрации VEGF во влаге передней камеры глаза без привлечения дополнительной дорогостоящей аппаратуры, такой как оптический когерентный томограф, флуоресцентная ангиография.