Диагностическая зффективностб R-бруцеллезных антигенов при бруцеллезе крупного рогатого скота

ологических исследований позволяет выявить допол- ют специфичностью и диагностической активностью в

нительно до 43 % культур бруцелл, персистирующих в РА и РСК. Использование L-бруцеллёзных антигенов

организме инфицированных животных в изменённом повышает диагностическую эффективность иссле-

состоянии. Антигены, изготовленные из L-форм бру- дований. Их можно применять в общем комплексе

целл физическими и химическими методами, облада- лабораторной диагностики бруцеллёза.

Литература:

1. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинёв. - 1982. - С.243 - 251.

2. Косилов И.А., Аракелян П.К., Димов С.К. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных. - Новосибирск. - 1999. - С.50 - 68.

3. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. Биология L-форм бактерий. - М. - 1961. - С.176.

4. Прозоровский С.В., Кац Л.Н. L-формы бактерий. - М. - 1981. - 178с.

5. Триленко П.А. МВБ и L-формы бруцелл/ Труды//ЛВИ. - 1971. - Вып.32. - С.35.

6. Гордиенко Л.Н. Свойства изменённых форм бруцелл, изолированных от северных оленей в очагах «оленьего» бруцеллёза / Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: Сб.науч.тр. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск. - 2003. - С.222 - 225.

7. Бакулов И.А., Зеленцова Т.Я. Проблема L-форм в ветеринарии // Ветеринария. - 1980. - №10. - С.23 - 27.

8. Гордиенко Л.Н. Получение L-вариантов бруцелл и их морфология на разных стадиях трансформации / Вестник КрасГАУ. - Красноярск. - 2011. - №7. - С.141 - 143.

9. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н., Милых Л.И. Изыскание специфических сывороток для индикации L-форм бруцеллёза / Бактериальные, вирусные и паразитарные заболевания с.-х. животных и птиц Сибири и Дальнего Востока // Сб.науч.тр. ОмСХИ. - Омск. - 1992. - С.93 - 100.

10. Ощепков В.Г., Гордиенко Л. Н. Получение и применение специфических сывороток для идентификации L-форм бруцелл // Паразиты и вызываемые ими болезни в Сибири // Тез. докл. 2-ой науч.конф. Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН. - Новосибирск. - 1997. - С.86 - 87.

11. Санитарно-эпидемиологические правила. 1.3. Эпидемиология, безопасность работы с микроорганизмами I-II группы патогенности (опасности) СП 1.3.1285-03. - М., 2003. 61с.

12. Островская Н.Н., Грекова Н.А., Мирзаева М. Биологические свойства пенициллиновых сферопластов бруцелл // ЖМЭИ.- 1974. - №9. - С.130.

13. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н., Братцев А.Ю. Способ получения диагностической сыворотки против бруцелл в L-форме /Патент на изобретение № 268748. - М.,2006. - 6с.

14. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных. Приказ Минздрава СССР 12.08.1977 N 755 « О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных. - М., 1977. - 7с.

15. Булдыгин Д.В., Гордиенко Л.Н., Шестаков В.А., Братцев А.Ю. Степень выраженности реакций организма лабораторных животных в зависимости от введения дозы L-культуры бруцелл // Матер. Всерос.науч.конф.факультета ветеринарной медицины НГАУ. - Новосибирск. - 2001. - С.133 - 134.

16. Наставление по диагностике бруцеллёза животных № 13 - 5 - 02/0850. Утв. Департаментом Ветеринарии Минсельхоза России 29.09.03г. - М.,2003. - 64с.

results of production test diagnosticums made from l-form brucella

L.G. Gordienko

Summary. The principal place is belong to the laboratory methods of studies in the complex diagnostic procedures for animal of brucellosis. The existing diagnostic agents can identify animals with persistent typical forms of the pathogenic organism. At the same time some of the animals infected with the modified (L) forms of Brucella remain undetected and pose a threat to susceptible livestock in herds. Production testing of diagnostic agents, made of Brucella in an L-shape, was carried out to determine its effectiveness and feasibility of the overall complex laboratory tests.

There were made experimental models of antigens and hyperimmune serum from reversibility Brucella strains transformed in vitro for the production tests.

The work was conducted in herds of reindeer disadvantaged brucellosis. There have found that L-antigens have specificity in the study of serum from healthy and infected animals.

The blood serum was studied in the agglutination test (RT) and the complement fixation reaction (CFT). The indication of cultures of Brucella was conducted in view of the typical and modified forms of Brucella in various stages of transformation.

There are shown of diagnostic activity L-antigens of Brucella with homologous antiserum at its breeding 1:20-1:50.

The use of L-antigens in the whole complex serological studies revealed an additional 0,36% of the animals carriers of brucella.

The L-serum permit additional to identify to 43% of Brucella in the study of cultures isolated from reindeer in the foci of infection.

It is established that the antigens and serum, made of Brucella in an L-shape, can be effectively used in the diagnosis of brucellosis in animals. Key words: brucella, L-forms, diagnosticums, prepared, production test, specifically, activity, identification, detection, cultures.

УДК 619:616-07:616.981.42:636.22/28

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТь r-бруцеллезных антигенов при бруцеллезе

КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Л.В. ДЕГТЯРЕНКО, доктор ветеринарных наук, зав. сектором

М.Ю. КАРЛОВА, кандидат ветеринарных наук, младший научный сотрудник

ВНИИБТЖ Россельхозакадемии И.Н. КАЛИКИН, директор

ГУОО «Омская областная ветеринарная лаборатория

E-mail: vniibtg@rambler.ru

Резюме. Результаты производственных испытаний диагностической ценности R-бруцеллезных антигенов ВНИИБТЖ для реакции связывания комплемента (РСК) и реакции агглютинации (РА) при бруцеллезе крупного рогатого скота показали, что они обладают специфичностью и чувствительностью. R-бруцеллезные антигены можно применять в комплексе при дифференциальной диагностике и контроле иммунного ответа у крупного рогатого скота на введение диссоциированных слабоагглютиногенных вакцин из штаммов B. abortus 82 и 75/79-АВ. При этом контроль иммунного ответа

у животных, вакцинированных указанными штаммами, необходимо осуществлять при исследовании сыворотки крови с R-бруцеллезными антигенами через 30...45 суток после прививки, так как в этот срок в благополучных по бруцеллезу стадах регистрировали максимальное количество реагирую-щихживотных - в РСК95,0.100,0 %, в РА 59,0.92,8 %. Отрицательные результаты РСК и РА с R-бруцеллезными антигенами свидетельствует об отсутствии иммунного ответа и целесообразности проведения дополнительной вакцинации животных, в сыворотке крови которых не определили R-бруцеллезные антитела, что может улучшить качество специфической профилактики инфекции. Использование R-бруцеллезных антигенов ВНИИБТЖ в комплексе с другими средствами и методами дифференциальной диагностики при оздоровлении крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, позволило исключить необоснованный убой 277 здоровых животных с поствакцинальными реакциями, а также надежно оздоровить хозяйства от бруцеллеза в течение 12 месяцев. Ключевые слова: крупный рогатый скот, бруцеллез, вакцины, иммунизация, диагностика, антигены, антитела.

Бруцеллез крупного рогатого скота представляет эпизоотическую и эпидемиологическую опасность, наносит значительный экономический ущерб животноводству.

Изменение форм собственности в сельском хозяйстве, создание малых предприятий, миграция населения и сложности ветеринарно-санитарного контроля за передвижением животных в административно-территориальных районах России и из сопредельных государств, неблагополучных по бруцеллезу животных (Казахстан, Монголия), повысили вероятность появления новых очагов инфекции.

Кроме того, рецидивы бруцеллезной инфекции в ранее оздоровленных хозяйствах могут быть связаны с наличием латентно больных животных и изменчивостью возбудителя инфекции, переходом его в менее вирулентные или авирулентные формы (R- и L-) и длительным сохранением их в среде обитания.

В течение 2010 г. на территории РФ выявлено 223 новых неблагополучных пунктов по бруцеллезу крупного рогатого скота.

В этой связи для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота сохраняется объективная необходимость применения на отдельных территориях слабоагглютиногенных вакцин из штаммов B. abortus82 и 75/79-АВ, в антигенной структуре которых преобладают R-компоненты. Для определения реакто-генных свойств этих вакцин или реактивности организма иммунизированных животных необходимо применять бруцеллезные диагностикумы, сконструированные на основе диссоциированных (R) штаммов бруцелл, которые биологическая промышленность не выпускает до сих пор, хотя они были предложены учеными и апробированы в производственных условиях [1, 2, 3 и др.].

Эффективность специфической профилактики при бруцеллезе сельскохозяйственных животных определяется качеством иммунизации, зависящим от естественной резистентности животных, свойств вакцины и других факторов.

По этой причине важно контролировать ответную реакцию организма животных на введение вакцин для выявления ареактивных и слабореактивных особей.

Из-за индивидуальных особенностей реактивности организма крупного рогатого скота его иммунный ответ различается, и животные могут реагировать в разные сроки и с разной активностью.

Объективность оценки иммунного ответа в значительной мере зависит от биологических свойств диагностикумов: специфичности, активности, чувствительности, оптимальных схем их комплексного при-

менения с целью выявления более широкого спектра гуморальных антител.

Остается проблемой дифференциальная диагностика бруцеллеза при использовании живых вакцин из штаммов B. abortus 82 и 75/79-АВ, особенно при проведении оздоровительных мероприятий, когда согласно нормативной документации [4] все особи, положительно реагирующие в РА, РСК со стандартными диагностикумами, в том числе и здоровые, сдаются на убой, что наносит экономический ущерб. Кроме того, у специалистов практической ветеринарной службы возникают затруднения при снятии ограничений. Так как серопозитивные реакции после вакцинации со стандартными S-бруцеллезными антигенами сохраняются у иммунизированных животных до двух лет и более, их необходимо надежно дифференцировать.

В связи с изложенным, на разрешение были поставлены следующие задачи:

изучить диагностическую ценность R-бруцеллезных антигенов в РА и РСК при обследовании крупного рогатого скота, иммунизированного вакцинами из штаммов B. abortus 82, 75/79-АВ в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу, и определить оптимальные сроки проведения контроля иммунного ответа у животных;

апробировать R-бруцеллезные антигены в комплексе с другими дифференциальными методами и средствами диагностики при оздоровлении крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82.

Условия, материалы и методы. В работе использовали R-бруцеллезные антигены для РА и РСК, изготовленные по методикам ВНИБТЖ [1]. R-бруцеллезные комплементсвязывающие антитела в сыворотке крови животных определяли в разведении 1:5, R-агглютинины - в разведении 1:50.

Постановку РА, РСК, РНГА и РИД с S-бруцеллезными антигенами осуществляли по общепринятым методикам.

Специфичность R-бруцеллезных диагностикумов для РА и РСК проверяли при исследовании 952-х проб сыворотки крови от непривитого противобруцеллез-ными вакцинами крупного рогатого скота из 14-и населенных пунктов Омской области, благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Диагностическую эффективность R-бруцеллезных антигенов изучали в благополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма B. abortus 82

Оздоровление неблагополучных по бруцеллезу хозяйств проводили по разработанной во ВНИИБТЖ схеме с применением вакцины из штамма B. abortus 82, при этом исследование сыворотки крови животных осуществляли через 2 месяца и в последующие сроки после иммунизации, что позволяет использовать не только иммуногенные, но и диагностические качества вакцины, как провоцирующей латентно больных животных с целью максимально возможного выявления источников инфекции.

Диагностическую ценность R-бруцеллезных антигенов для РСК и РА изучали в комплексе с другими средствами и методами дифференциальной диагностики при оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйств Омской области (ЗАО «Нива» Павлоградского района, СПК «Комсомольский» Одесского района).

При оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу хозяйств животных, реагирующих позитивно в РА (титр 200 МЕ и выше), РСК (титр 1:20 и выше), РНГА (титр 1:200 и выше), РИД со стандартными S-диагностикумами, а также не имеющих в сыворотке крови R-бруцеллезных антител к R-бруцеллезным антигенам в РСК и РА, изолировали и сдавали на убой. Особей с невысокими титрами РА (50...100 МЕ) и РСК (1:5...1:10) с наличием R-бруцеллезных антител в сыворотке крови считали здоровыми, реагирующими на вакцину.

Результаты и обсуждение. При исследовании сыворотки крови от 952-х непривитых животных в благополучных хозяйствах со стандартными и R-антигенами в РА и РСК получен отрицательный результат, что показывает их специфичность.

Иммунный ответ у наибольшего количества животных в благополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма

(95,3...98,2 %) животных, реагирующих в близкие сроки (1.2 мес.) после иммунизации, удается диагностировать с помощью R-бруцеллезного антигена РСК (табл. 2).

Достаточно высокую чувствительность при выявлении поствакцинальных R-антител при исследовании крупного рогатого скота через 30 суток после иммунизации имела РА (82,1.83,2 % реагирующих).

По итогам дифференциации с применением средств и методов диагностики, разработанных во ВНИИБТЖ, из 161-го животного с S-серопозитивными реакциями 31 отнесены к больным бруцеллезом (3,6 %), так как в сыворотке крови выявляли с помощью РА, РСК, РНГА S-бруцеллезные антитела в высоких титрах, остальные (81,4 %) - к здоровым, реагирующим на вакцины из штаммов B. abortus 82 и 75/79-АВ, в

100,0 % случаев у них обнаружены поствакцинальные R-бруцеллезные антитела в РА и РСК.

Таблица 1. Результаты серологических исследований сыворотки крови крупного рогатого скота, при витого вакциной из штамма 82, в благополучных по бруцеллезу хозяйствах

Срок исследования после ревакцинации

№ хозяйства

Число

проб

Животные, реагирующие

S-антигенами в РА, РСК

гол.

%

с R-антигенами в:

РА

гол.

%

РСК

гол.

%

Результаты

дифференциации

больные

с пост-вакцинальной

30 1 50 3 6,0 А9 92,8 50 100,0 - 3

2 198 Аз 21,7 177 89,3 198 100,0 - Аз

1 602 бб 9,1 378 62,8 588 97,7 - 55

з 100 8 8,0 78 78,0 95 95,0 - 8

Аб 2 з2 6 18,1 19 59,0 з2 100,0 - 6

2 257 68 26,5 195 76,0 255 99,2 - 68

А здб 97 24,6 2АА 61,8 385 96,9 - 97

60 1 196 6 3,1 1А9 76,0 192 98,0 - 6

б 74 10 13,5 1А 18,9 5з 71,6 - 10

90 1 189 11 5,8 1АА 76,2 169 89,6 - 11

2 зз 2 6,1 А 12,1 29 88,9 - 2

120 1 199 з 1,6 118 59,3 185 93,0 - з

180 1 198 з 1,5 85 42,9 131 66,2 - з

210 1 ззд 8 2,4 126 37,2 277 81,7 - 8

300 1 590 зб 5,9 91 46,4 з9 19,9 - з5

330 1 585 12 2,1 85 49,7 18 10,5 - 12

360 1 159 - - - - з5 22,0 - -

Всего 4196 370 8,8 1956 46,6 2731 65,1 - 370

B. abortus 82, удавалось регистрировать с помощью R-бруцеллезного антигена РСК на 30-е и 45-е сутки (95,0.100,0 % реагирующих). В эти же сроки исследований R-агглютинины устанавливали в сыворотке крови 59,0.92,8 % животных (табл. 1). В хозяйстве №1 много особей, реагирующих в РСК с R-бруцеллезным антигеном, регистрировали на протяжении 120 суток (89,6.98,0 %). В отдаленные сроки (300.360 суток) позитивные показатели РСК с R-антигеном снижались и составляли 10,5.22,0 %. Вместе с тем, у 100,0 % животных с S-поствакцинальными реакциями в сыворотке крови определяли R-комплементсвязывающие антитела.

Из общего количества исследованных проб сыворотки крови (4196) наибольшее количество реагирующих зарегистрировано в РСК с R-антигеном (65,1 %). Более низкую диагностическую эффективность имела РА (46,6 % реагирующих).

В результате дифференциации серопозитивных реакций на S-бруцеллезные антигены у 370-и животных (8,8 %), их отнесли к поствакцинальным, так как в РСК с R-антигеном имели позитивные результаты 100,0 % коров, в РА с R-антигеном - от 34,3 до 77,8 %.

Дальнейшее изучение диагностической ценности R-бруцеллезных антигенов для РА и РСК в неблагополучных по бруцеллезу гуртах крупного рогатого скота, иммунизированного вакцинами из штаммов B. abortus 82 и 75/79-АВ показало, что наибольшее количество

Изучение иммунного ответа у молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, с целью определения оптимальных сроков проведения контроля качества вакцинации в благополучных по бруцеллезу хозяйствах показало, что в ранние сроки (1.2 месяца) после иммунизации телят количество животных, реагирующих в РСК и РА с R-антигенами в хозяйствах значительно различается.

Таблица 2. Результаты серологических исследований сыворотки крови крупного рогатого скота, привитого вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ, в

Срок исследования (сутки) Хозяйство Число проб Животные, реагирующие

с S-антигенами с R-антигенами

РА РСК

гол 1 % гол. 1 % гол.\ %

30 1 151 АА 29,1 12А 82,1 1АА 95,3

30 2 з9з 79 20,1 327 83,2 386 98,2

60 1 159 5 3,1 85 53,4 152 95,7

120 1 165 5 3,0 з1 18,8 60 36,6

210 з 177 12 6,8 зА 19,2 АА 24,9

720 А 200 16 8,0 13А 67,0 109 54,5

Всего 12А5 161 12,9 735 59,0 895 71,9

R-комплементсвязывающие антитела в сыворотке крови через 30 дней после вакцинации определяли у 37,8.100,0 % животных, R-агглютинины - у 18,5.100,0 % (табл. 3).

Таблица 3. Результаты испытания R-бруцеллезных антигенов при контроле иммунного ответа у телочек, привитых вакциной из штамма B. abortus 82 _____________________________________________

Число проб Срок после Животные, реагирующие с R-антигенами: Выделено только в РА с R-антигеном

Хозяйство, район вакци- РСК РА

нации, мес. гол. % гол. % гол. %

СПК «Вольновский», Полтавский 50 1 А9 98,0 А2 84,0 1 2,0

ЗАО «Еремеевское», Полтавский 100 1 9з 93,0 99 99,0 6 6,0

ЗАО «Нива», отд. 1, Павлоградский 37 1 1А 37,8 12 32,4 А 10,8

ЗАО «Нива», отд. 2 54 1 5А 100,0 46 85,2 - -

ЗАО «Нива», отд. 4 28 1 28 100,0 22 78,6 - -

ЗАО «Нива», отд. 6 26 1 26 100,0 2А 92,3 - -

ЗАО «Богодуховское», Павлоградский 61 1 60 98,4 50 82,0 з 4,9

-//- 14 1 1з 92,9 1А 100,0 1 7,1

ОАО «Логиновский», отд.1, Павлоградский 16 1 1з 81,2 7 43,8 1 6,3

СПК «Овцевод», Марьяновский 54 1 29 53,7 10 18,5 - -

ЗАО «Солнцево», Исилькульский 15 1 15 100,0 15 100,0 - -

«Украинский», Исилькульский 20 1 12 60,0 7 35,0 - -

ООО «Альянс», Тевризкий 13 1 11 84,6 з 23,1 - -

ОАО АФ Екатеринославское, Щербакульский 36 2 27 75,0 20 55,6 з 8,3

ЗАО «Дружба», Марьяновский 18 2 9 50,0 А 22,2 - -

ООО «Лузинское молоко» 22 2 9 40,9 6 27,3 - -

ЗАО «Хлебодаровское», Русскополянский 74 3 А2 56,8 46 62,2 А 5,4

-//- 67 3 А 6,0 8 12,0 6 9,0

-//- 114 3 47 41,2 12 10,5 2 1,8

ООО «Красноярское», Большереченский 52 3 47 90,4 8 15,4 - -

Всего 871 602 69,1 А55 52,2 31 3,6

При исследовании сыворотки крови через 60 суток после вакцинации в РСК с R-антигеном количество реагирующих животных снизилось до 40,9.75,0 %, а R-агглютинины регистрировали у 22,0.55,6 %.

Низкое количество животных, положительно реагирующих с R-антигенами в РСК и РА в отдельных хозяйствах (ЗАО «Нива» отд. 1, СПК «Овцевод» и др.) свидетельствует об отсутствии иммунного ответа и целесообразности проведения дополнительной вакцинации особей, в сыворотке крови которых не определяли R-бруцеллезных антител, что может улучшить качество специфической профилактики заболевания.

Как и в предыдущих исследованиях, наиболее высокую диагностическую значимость при контроле иммунного ответа у молодняка крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, имеет РСК с R-бруцеллезным антигеном (69,1 % реагировавших от общего количества животных), R-агглютинины обнаружены тлько у 52,2 % телочек. Применение РА с R-антигеном позволило диагностировать дополнительно 31 животное (3,6 %) с наличием R-бруцеллезных антител, что подтверждает целесообразность использования этого теста в дополнение к РСК при контроле иммунного ответа у крупного рогатого скота, в сыворотке крови которого отсутствуют R-комплементсвязывающие антитела.

При обследовании крупного рогатого скота трех ферм СПК «Комсомольский» перед реиммунизацией вакциной из штамма B. abortus 82 бруцеллез установлен на МТФ №1, где из 468 коров выделили 45 больных (9,6 %).

Исследование сыворотки крови коров в РСК и РА с R-бруцеллезными антигенами ВНИИБТЖ показало, что R-антитела определялись лишь у единичных животных (0,6 %). Это свидетельствовало о нарушении регламента ежегодной ревакцинации и отсутствии надежной иммунной защиты против бруцеллеза, что стало причиной острой вспышки бруцеллезной инфекции в хозяйстве.

В процессе оздоровления хозяйства от бруцеллеза при исследовании всего основного поголовья на протя-

жении 12 месяцев (6712 проб) диагностировали 118 (1,8 %) больных бруцеллезом коров, сохранено в стаде 94 (1,4 %) животных с поствакцинальными реакциями через 6 и более месяцев после ревакцинации. В сыворотке крови животных с поствакцинальными реакциями в 100,0 % случаев выявляли R-бруцеллезные антитела в РСК и РА.

При обследовании 847 коров ЗАО «Нива» отделения №2 перед иммунизацией вакциной из штамма B. abortus 82 с помощью РА, РСК, РНГА диагностировали 25 коров, больных бруцеллезом (3,0 %). В сыворотке крови животных из неблагополучных по бруцеллезу гуртов отсутствовали R-бруцеллезные агглютинины и комплементсвязывающие антитела, что также вызывало сомнение в проведении ежегодных иммунизаций крупного рогатого скота в хозяйстве.

За период оздоровления исследовали 9727 проб сыворотки крови, с помощью дифференциальнодиагностического комплекса выделили 120 больных животных (1,2 %), с поствакцинальными реакциями через 6 и более месяцев после иммунизации вакциной из штамма B. abortus 82 оставили в стаде 183-х здоровых коров (1,9 %), реагировавших в низких титрах с единым бруцеллезным антигеном в РА и РСК, имеющих в сыворотке крови R-бруцеллезные антитела.

Применение R-бруцеллезных антигенов ВНИИБТЖ в комплексе с другими средствами и методами дифференциальной диагностики позволило сохранить при оздоровлении неблагополучных гуртов животных двух хозяйств 277 здоровых коров с поствакцинальными реакциями для дальнейшего воспроизводства и надежно оздоровить хозяйства от бруцеллеза в течение 12-и месяцев.

Выводы. При проведении контроля иммунного ответа у крупного рогатого скота, иммунизированного вакцинами из штаммов B. abortus 82 или 75/79-АВ, в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу, R-бруцеллезные антигены для РА и РСК имеют высокую диагностическую значимость. Комплексное их применение через 30.45 суток после иммунизации животных

слабоагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами позволяет наиболее эффективно осуществлять контроль качества иммунизации, так как в благополучных по бруцеллезу стадах количество реагирующих с R-антигеном в РСК составляет от

95,0 до 100,0 %, в РА - от 59,0 до 92,8 %.

В результате использования R-бруцеллезных антигенов в РСК и РА наряду с другими средствами и методами дифференциальной диагностики по разработанной схеме ВНИИБТЖ при оздоровлении двух неблагополучных по бруцеллезу хозяйств сохранено от необоснованного убоя 277 здоровых коров с поствакцинальными реакциями.

Литература.

1. Дегтяренко Л.В. Разработка и совершенствование средств, методов диагностики бруцеллеза животных и инфекционного эпидидимита баранов: автореф. дис.... д-ра вет. наук. - Новосибирск, 2005. - 39 с.

2. Фомин А.М, Хузин Д.А. Новый антиген для дифференциальной диагностики бруцеллеза у животных после прививки живой вакцины из штамма 82// Первый Всесоюзный иммунологический съезд, тезисы докладов, Сочи, 1989. - М.,1989. - т. 1. - С. 179.

3. Иванов Н.П. Новые подходы к изготовлению диагностических препаратов при бруцеллезе и инфекционном эпидиди-мите баранов // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных: Сб. науч. тр. Со ВАСХНИЛ. Новосибирск, 1987 - с. 16-26.

4. Наставление по диагностики бруцеллеза животных. - Министерство сельского хозяйства Российской Федерации, Москва, - 2004. - 63 с.

DIAGNOSTIC EFFICIENCY R-BRUCELLOSIS ANTIGEN BRUCELLOSIS IN CATTLE L.V. Degtyarenko, M.Y. Karlova, I.N. Kalikin

Summary. The article presents the production testing of the diagnostic value R-Brucella antigens VNIIBTG for the complement fixation reaction (CFR) and agglutination (RA) for brucellosis in cattle. The study there was found that the R-antigens have specificity and sensitivity. R-Brucella antigens can be used in conjunction with the differential diagnosis and monitoring of the immune response in cattle to the introduction of the dissociated mild agglutinogenic vaccine strains of B. abortus 82 and 75/79-AV. In this case, the control of immune response in cattle immunized with vaccine strain of B. abortus 82, 75/79-AV need to be pursued in the study of blood serum with the R-Brucella antigen 30-45 days after vaccination, since in this period in well with brucellosis herds recorded the maximum number of responders - the CFR 95,0-100,0%, in RA - 59,0-92,8%. In addition, the negative results of the CFR and RA to R-Brucella antigens indicates the absence of an immune response and the feasibility of additional animal vaccination, the serum which did not specify R-Brucella antibodies, which can improve the quality of specific prophylaxis of brucellosis infection. Using the R-Brucella antigens VNIIBTG in combination with other means and methods of differential diagnosis for recovery of cattle vaccinated the vaccine strain of B.abortus 82, possible to eliminate unjustified slaughter of healthy animals with 277 post-vaccination reactions and reliably improve the management of brucellosis within 12 months.

Key words: cattle, brucellosis, vaccines, immunizations, diagnosis, antigens, antibodies.

УДК 619:616.981:42

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КОЛьЦЕВОй РЕАКЦИИ С МОЛОКОМ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Т.Г. ПОПОВА, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник

П.K. AРAKЕЛЯН, доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией

ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Рос-сельхозакадемии

А.А. НОВИЦШЙ, доктор ветеринарных наук, профессор Омский ГАУимени П.А. Столыпина СХ. ДИМОВ, доктор ветеринарных наук профессор А.С. ДИМОВА, кандидат ветеринарных наук доцент Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии E-mail: vniibtg@rambler.ru

Резюме. В статье отражены материалы собственных исследований в период с 1987по 2010 гг. Специфичность кольцевой реакции доказана на 736 образцов молока. У коров с периодом стельности более 7 месяцев установлена непригодность секрета вымени для исследования в ^ с целью постановки диагноза на бруцеллез.

Маститы практически не влияют на специфичность показателей Щ так как из 557 исследованных проб молока как из благополучных, так и из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств положительная проба с димастином отмечена в 96 (17,2 %) случаях, а положительная ^ - в 27 (4,8 %) пробах молока только от коров неблагополучных по бруцеллезу стад. Из 96 положительных проб с димастином 8 (8,3 %) совпали

с положительной КР (в том числе в разведении 1:2 - 2, в разведении 1:32 - 6) у коров неблагополучных стад.

При исследовании 198 проб молока от животных благополучных по бруцеллезу стад, ревакцинированныхживой вакциной из сла-боагглютиногенного штамма B.abortus 82 по различным схемам, через 14...60 суток после последней реиммунизации был получен отрицательный результат КР, а сыворотка крови отражала по-ствакцинальный ответ. Это позволяет рекомендовать кольцевую реакцию какдифференциальный метод, отличающий инфицированных больных от вакцинированных штаммом B.abortus 82. При использовании даже малой дозы агглютиногенного вакцинного штамма B.abortus 19 такая возможность отсутствует.

После искусственного заражения вирулентной культурой B.abortus КР с молоком была положительной у 90,0 % коров уже на 9 сут., в то время каккомплементсвязывающие вещества (РСК) и агглютинины (РА) были зарегистрированы у всех животных лишь к 21 сут. Результаты проведенных исследований показали, что КР с молоком - специфический высоко чувствительный метод, с его помощью можно выявить заболевание на начальной стадии. Использование КР в отдаленные сроки (через 6 мес.) после ревакцинации в комплексе с другими серологическими реакциями дает возможность сокращать сроки оздоровления неблагополучных хозяйств в 2 раза и более.

Ключевые слова: крупный рогатый скот, коровы, бруцеллез, диагностика, экспресс-метод, молоко, кольцевая реакция, цветной антиген.

Кольцевая реакция (КР) с молоком для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота предложена