СПОСОБЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ, СОДЕРЖАЩИХ ОБЛАСТЬ Fc

1. Способ очистки белка, имеющего область Fc, от исходной жидкости, содержащей указанный белок и одну или более примесей, включающий следующие этапы:
адсорбция белка на веществе, связывающем Fc;
промывка вещества, связывающего Fc, буферным раствором, содержащим соль бивалентного катиона с целью удаления одной или более примесей;
и выделение белка из вещества, связывающего Fc, в растворе для элюции.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей выбраны из группы, состоящей из: разновидностей прочтения интронов (IRT), разновидностей с пониженным содержанием дисульфидных связей (UDB) и разновидностей с низкой молекулярной массой (LMW).
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что одна или более примесей представляют собой IRT.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что белок представляет собой антитело.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что антитело выбирают из группы, состоящей из: слитой конструкции, содержащей антитело, антитела мыши, химерного антитела, гуманизированного антитела и антитела человека.
6. Способ по п.4, отличающийся тем, что антитело представляет собой анти-IL-13 антитело.
7. Способ по п.4, отличающийся тем, что антитело связывает антиген, выбранный из группы, состоящей из: CD3, CD52, VEGF, EGFR, CD33, CD20, HER-2, ФНОα, CD25, RSV, IgE, gp IIb/IIIa, CD11a и интегрина α4.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что белок, содержащий область Fc, получают по технологии рекомбинантной ДНК.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что белок, содержащий область Fc, получают по технологии рекомбинантной ДНК в клетке яичника китайского хомячка (СНО).
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что вещество, связывающее Fc, содержит один или более из Белка А и Белка G.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что вещество, связывающее Fc, иммобилизовано на твердой фазе.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что твердая фаза содержит одно или более из следующего: гранула, гель, смола и частица.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что соль бивалентного катиона содержит хаотропную соль.
2
2
2
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что соль бивалентного катиона выбирают из группы, состоящей из: CaCl, MgCl, NiCl и их смесей.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что буферный раствор, рН буферного раствора, содержащего соль бивалентного катиона, находится в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 8.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что рН буферного раствора, содержащего соль бивалентного катиона, находится в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,5.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрация соли бивалентного катиона в буферном растворе находится в диапазоне от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что концентрация соли бивалентного катиона в буферном растворе находится в диапазоне от приблизительно 0,5 М до приблизительно 3 М.
2
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что буферный раствор, содержащий соль бивалентного катиона, содержит, по меньшей мере, приблизительно 0,6 М CaCl.
2
20. Способ по п.1, отличающийся тем, что буферный раствор, содержащий соль бивалентного катиона, содержит, по меньшей мере, приблизительно 2 М MgCl.
2
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что буферный раствор, содержащий соль бивалентного катиона, содержит, по меньшей мере, приблизительно 2 М CaCl.
22. Способ по п.1, отличающийся тем, что этапы адсорбции белка на веществе, связывающем Fc, и промывки вещества, связывающего Fc, проводят при температуре в диапазоне от приблизительно 2°С до приблизительно 24°С.
23. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включает одно или более из следующего: белок клетки-хозяина, ДНК клетки-хозяина, белок культуры клеток и их смеси.
24. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включает нежелательные разновидности белка, содержащего область Fc.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что нежелательные разновидности белка, содержащего область Fc, включают одну или более цепей антитела или фрагментов цепей, имеющих последовательность, представляющую собой другой вариант прочитывания интронов, одну или более цепей антитела или фрагментов цепей, имеющих неправильную дисульфидную связь, половинчатое антитело, или его фрагмент, димер легкой цепи или его фрагмент, а также димер тяжелой цепи или его фрагмент.
26. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап выделения белка из вещества, связывающего Fc, включает элюирование белка при помощи буфера для элюции, рН которого находится в диапазоне от приблизительно 2,0 до приблизительно 6,5.
27. Способ по п.1, отличающийся тем, что способ включает дополнительно этап хроматографии, выбранный из группы, состоящей из: анионообменной хроматографии, катионообменной хроматографии, аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом и хроматографии гидрофобного взаимодействия (НIC).
28. Способ по п.1, отличающийся тем, что способ включает дополнительно этап хроматографии, выбранный из группы, состоящей из: гидроксиапатитной хроматографии, диализа, аффинной хроматографии, осаждения сульфатом аммония, осаждения этанолом, обращено-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ) и хроматофокусирования.
29. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включают один или более вариантов прочтения интронов белка, и уровень вариантов прочтения интронов в растворе для элюции, содержащем указанный белок, по меньшей мере, в 5 раз ниже, чем уровень вариантов прочтения интронов в исходной жидкости.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что уровень вариантов прочтения интронов в растворе, содержащем белок, выделенный в растворе для элюции, по меньшей мере, в 10 раз ниже, чем уровень вариантов прочтения интронов в исходной жидкости.
31. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включают один или более вариантов прочтения интронов белка, и варианты прочтения интронов в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 1% разновидностей указанного белка.
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что варианты прочтения интронов в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,8% разновидностей указанного белка.
33. Способ по п.32, отличающийся тем, что варианты прочтения интронов в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,5% разновидностей указанного белка.
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что варианты прочтения интронов в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,2% разновидностей указанного белка.
35. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включают один или более разновидностей белка с низкой молекулярной массой, и разновидности с низкой молекулярной массой в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 1% разновидностей указанного белка.
36. Способ по п.35, отличающийся тем, что разновидности с низкой молекулярной массой в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,8% разновидностей указанного белка.
37. Способ по п.36, отличающийся тем, что разновидности с низкой молекулярной массой в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,5% разновидностей указанного белка.
38. Способ по п.37, отличающийся тем, что разновидности с низкой молекулярной массой в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 0,2% разновидностей указанного белка.
39. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна или более примесей включают варианты белка с пониженным содержанием дисульфидных связей, и варианты с пониженным содержанием дисульфидных связей в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 15% разновидностей указанного белка.
40. Способ по п.39, отличающийся тем, что варианты с пониженным содержанием дисульфидных связей в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 10% разновидностей указанного белка.
41. Способ по п.40, отличающийся тем, что варианты с пониженным содержанием дисульфидных связей в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 5% разновидностей указанного белка.
42. Способ по п.41, отличающийся тем, что варианты с пониженным содержанием дисульфидных связей в растворе для элюции составляют менее, чем приблизительно 2% разновидностей указанного белка.
43. Белок, очищенный способом по п.1.
44. Белок по п.43, отличающийся тем, что указанный белок представляет собой антитело.
45. Набор, включающий реагенты для очистки белка, содержащего область Fc, от примесей, содержит:
реагент, выбранный из группы, состоящей из: соли бивалентного катиона и вещества, связывающего Fc, и
инструкции по применению.