СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ РАЗВИТИЯ ОПУХОЛЕЙ У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ С ВЫСОКОЙ ЧАСТОТОЙ СПОНТАННОГО ОПУХОЛЕОБРАЗОВАНИЯ
METHOD FOR PREVENTION OF TUMOUR DEVELOPMENT IN EXPERIMENTAL ANIMALS WITH HIGH-FREQUENCY SPONTANEOUS TUMOUR FORMATION

Изобретение относится к медицине, а именно к способам профилактики развития опухолей у экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования.
Известен способ профилактики развития опухолей у мышей линии СЗН, предрасположенных к развитию рака молочной железы, при котором добавление в питание животных синтетического антиоксиданта 2-меркаптоэтиламина увеличило среднюю продолжительность жизни на 26%. Возникновение опухолей наблюдалось в более отдаленные сроки, однако частота развития спонтанных опухолей не изменилась [Harman D. Free-radical theory of aging: increasing the functional life span // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1994.-Vol.717. - P. 1-15].
Задачей изобретения является создание способа повышения эффективности профилактики развития опухолей у экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования.
Поставленная задача решается тем, что в заявляемом способе используется комплексный фитоадаптогенный препарат фитомикс-40 (фм-40) на основе компонентов 40 экстрактов растений, включая женьшень, родиолу розовую, элеутерококк, лимонник, аралию, заманиху, зверобой, календулу, подорожник, калган, бессмертник, сосновые и березовые почки, толокнянку, эвкалипт, можжевельник, солодку, ромашку, чагу, валериану, спорыш, пустырник, душицу, мяту перечную, одуванчик, пижму, толокнянку, тысячелистник, хвощ полевой, чабрец, череду, кориандр, шиповник, калину, рябину черноплодную, боярышник, клюкву, бруснику, чернику, смородину черную [патент РФ №2099410; Шейченко В.И., Бочарова О.А., Шейченко О.П., Бочаров Е.В., Барышников А.Ю., Быков В.А. Аналитические возможности метода ЯМР для определения компонентов препарата фитомикс-40. // Заводская лаборатория. - 2006. - Т. 72. - №8. - с.15-23].
Заявляемый способ осуществляли следующим образом.
Исследование проводили на 230 мышах-самцах линии СВА с высокой частотой спонтанного образования гепатокарцином. В исследование были включены опытная группа - 70 мышей и 2 контрольные группы (I группа - 90 мышей и II группа - 70 мышей).
Мыши опытной группы получали 10% раствор препарата фм-40 с питьевой водой, который применяли в течение первого месяца постнатального развития, включая период завершения дифференцировки ткани печени.
Мыши I контрольной группы получали в качестве питья воду, мыши II контрольной группы - 3% раствор этанола в профилактическом режиме.
3
В каждой группе забивали 10-13 мышей в возрасте 22 месяцев. Остальные мыши находились под наблюдением до их естественной гибели. Определяли объем опухолей (мм) в печени, который вычисляли по стандартной формуле. Гистологическое исследование печени проводили на парафиновых срезах. Наличие лимфоцитарной инфильтрации и деструкции опухолевых участков в печени мышей опытной группы являлось благоприятным прогностическим фактором течения опухолевого процесса [Оbl D., Loewe R., Yu P., Mihm M. Focus on TILs: Prognostic significance of tumor infiltrating lymphocytes in human melanoma // Cancer Immun. - 2009. - Vol.9. - №3. - p.245-251; Wansom D., Light E., Thomas D., Worden F., Prince M., Urba S., Chepeha D., Kumar В., Cordell K., Eisbruch A., Taylor J., Moyer J., Bradford C, D'Silva N. Infiltrating lymphocytes and human papillomavirus-16-associated oropharyngeal cancer. // Laryngoscope. - 2012. - Vol.122. - №1. - p.121-127]. Для оценки качества жизни определяли вес мышей, наличие алопеции, двигательную активность животных оценивали в тесте «открытого поля» в автоматическом режиме.
Определяли уровни ИЛ-6 и ИЛ-10 в сыворотке крови, т.к. цитокины ИЛ-6 и ИЛ-10 участвуют в патогенезе кахексии животных, повышая уровень С-реактивного белка и усиливая расщепление мышечных белков, а также ИЛ-6 оказывает негативное влияние на функциональную активность волосяных фолликулов [Krzystek-Korpacka М., Matusiewicz М., Diakowska D., Grabowski К. et al. Acute-phase response proteins are related to cachexia and accelerated angiogenesis in gastroesophageal cancers. // Clin. Chem. Lab. Med. - 2008. -Vol.46. - №3. - p.359-364; Deans D., Tan В., Ross J. et al. Cancer cachexia is associated with the IL10-1082 gene promoter polimorphism in patients with gastroesophageal malignancy. // Am. J. Clin. Nutr. - 2009. - Vol.89. - №4. - p.1164-1172; Biswas S., Pinson D., Bronshteyn I., LeVine S. IL-6 deficiency allows for enhanced therapeutic value after bone marrow transplantation across a minor histocompatibility barrier in the twitcher (globoid cell leukodystrophy) mouse. // J. Neurosci. Res. - 2001. - Vol.65. - №4. - p.298-307]. Содержание цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-10 в сыворотке крови определяли с использованием иммуноферментного анализа.
Уровень экспрессии лейкоцитарных интегринов LFA-1 (CD11a) и Мас-1 (CD11b) на лимфоцитах периферической крови определяли с использованием проточной цитофлуометрии.
Среднюю продолжительность жизни (СПЖ) и медиану выживаемости определяли по методу Каплан-Мейера. Статистический анализ результатов проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа ONE-WAY ANOVA программы "STATISTICA-6,0», достоверными считали различия при P<0,05.
Результаты определения изучаемых параметров в контрольных группах не имели различий, поэтому мыши двух контрольных групп были объединены в одну контрольную группу (n=160).
3
3
У мышей опытной группы, получавших препарат фм-40, выявлено снижение частоты возникновения спонтанных опухолей на 30,8% по сравнению с мышами контрольной группы (P<0,001). Количество опухолей на мышь в опытной группе было ниже, чем у мышей контрольной группы (1,0±0,3 и 2,7±0,3 соответственно; P<0,001). Средний объем опухолевой массы на мышь в опытной группе также был ниже, чем у мышей контрольной группы, и составил 268,4±78,0 мм и 1043,1±230,0 мм соответственно, P<0,05.
Вес мышей опытной группы был выше, чем в контрольной группе, и составил 34,6±0,5 г и 24,4±0,2 г соответственно, P<0,01. Мыши опытной группы имели полноценный шерстный покров в отличие от мышей контрольной группы, у которых в 16,6% случаев наблюдалась алопеция. Эти данные коррелировали со снижением уровня сывороточных цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-10 в опытной группе по сравнению с контрольной группой (114,8±12,3 пг/мл и 46,8±5,3 пг/мл) и (139,1±6,6 пг/мл и 60,9±3,9 г/мл) соответственно, P<0,05. Экспрессия лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Мас-1 у мышей опытной группы была выше значений в контрольной группе и составила (40,7±1,9% и 11,5±1,1%) и (35,4±1,6% и 7,8±1,0%) соответственно, Р<0,05. Эти данные свидетельствуют об усилении иммунореактивности животных под воздействием препарата фм-40 при его применении в профилактическом режиме. Двигательная активность мышей опытной группы в возрасте 31 месяца соответствовала двигательной активности мышей контрольной группы в возрасте 24 месяцев. СПЖ мышей контрольной группы составила 22 месяца.
СПЖ мышей опытной группы увеличилась на 14,5% (25,2 месяца). Медиана выживаемости мышей опытной группы увеличилась на 23% по сравнению с мышами контрольной группы и составила 25,9 и 21,1 месяцев соответственно.
Изобретение иллюстрируется фиг. 1-2.
На фиг.1 представлен участок трабекулярно-ацинарной гепатокарциномы низкой степени дифференцировки у мыши контрольной группы (гистология печени, окраска гематоксилином и эозином, увеличение х 400, указано стрелками).
На фиг.2 представлен участок лимфоцитарной инфильтрации гепатокарциномы у мыши опытной группы, получавшей препарат фм-40 в профилактическом режиме (окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400, указано стрелками).
Технический результат заявляемого способа заключается в увеличении средней продолжительности жизни и медианы выживаемости, в снижении частоты возникновения спонтанных гепатокарцином и улучшении качества жизни мышей-самцов линии СВА с высокой частотой спонтанного образования гепатокарцином.