ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ РАСТЕНИЯ POLYSCIAS FILICIFOLIA ИЛИ ЕГО ФРАГМЕНТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОЗОВ И ИХ ПОСЛЕДСТВИЙ
USE OF PREPARATIONS OF POLYSCIAS FILICIFOLIA PLANT OR ITS FRAGMENTS FOR TREATMENT OF ELEMENTOSES AND THEIR CONSEQUENCES

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к применению препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов, в том числе полученных биотехнологическими методами, для лечения и профилактики элементозов и их последствий у субъекта, нуждающегося в этом. Настоящее изобретение также относится к лекарственному средству, которое содержит препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов, для лечения и профилактики элементозов и их последствий. В частности, такие элементозы могут быть индуцированы попаданием в организм субъекта постороннего химического соединения или инфекционным заболеванием.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Поддержание гомеостаза (постоянства внутренней среды), в том числе необходимого для жизнедеятельности содержания эссенциальных (жизненно-важных) элементов является базисной функцией организма.  Элементозы, которые представляют собой отклонения содержания эссенциальных элементов от уровней, необходимых для нормальной жизнедеятельности, приводят к возникновению значительного количества заболеваний [1].
Такие элементозы могут быть вызваны как внутренними причинами (например генетическими нарушениями или инфекционными заболеваниями), так и внешними воздействиями (например стрессом или попаданием в организм постороннего химического соединения). Для целей настоящего описания термин «элементозы, индуцированные внешними или внутренними факторами» или «индуцированные элементозы» будет относится к таким отклонениям содержания эссенциальных элементов в одном или нескольких внутренних органах, которые произошли в результате ограниченного во времени и определяемого воздействия внешних или внутренних факторов или их комбинации и привели к существенному (статистически значимому) отклонению содержания одного или нескольких эссенциальных элементов от уровней, характерных для данного организма до начала воздействия таких факторов.
Негативное воздействие индуцированных элементозов особенно возрастает в период беременности и определяет как собственное здоровье женщины, так и здоровье и развитие будущего ребенка [1, 2, 3]. Элементозы повышают риск преждевременных родов, различных видов внутриутробной патологии, вплоть до пороков развития и увеличивают детскую смертность [4, 5]. Влияние индуцированных элементозов во время беременности сопоставимо или даже превосходит роль генетических факторов [6]. Особенно сильное влияние оказывают индуцированные элементозы на гемопоэз (в том числе формирование клеток иммунной системы), который осуществляется при участии целого ряда эссенциальных элементов (Fe, Mn, Ca, Mg, I, Cu, Zn) [7].
Также последствия индуцированных элементозов включают, но не ограничиваются ими: дисбактериоз, анемии, утомляемость, нарушения умственного и физического развития у детей, метаболический синдром; расстройства, связанные с дефицитом инсулина или резистентностью к инсулину; сахарный диабет, включая диабет 2 типа; непереносимость глюкозы; нарушение липидного обмена; атеросклероз; артериальная гипертензия; гипергликемия; заболевания печени; дисфункция иммунной системы; воспалительные заболевания кишечника, в частности синдром раздраженного кишечника; сердечно-сосудистые заболевания; высокий уровень холестерина; повышенные триглицериды; астма; остеоартрит; нейро-дегенерации и онкологические заболевания [1].
При этом важным является тот факт, что индуцированные элементозы в организме проявляются в разнонаправленных изменениях содержания отдельных эссенциальных элементов в различных органах и тканях [8, 9]. Это затрудняет профилактику и лечение элементозов препаратами, содержащими соединения отдельных эссенциальных элементов, поскольку избыток жизненно важных элементов в организме так же опасен, как и их недостаток [10, 11].
Известны различные препараты, содержащие высокие концентрации эссенциальных элементов, предназначенные для профилактики и лечения элементозов, например препараты, содержащие органические соли меди [12], цинка [13], железа [14], магния [15] или кальция [16].
Однако попытка профилактики и лечения элементозов простым добавлением соединений, содержащих тот или иной элемент к пище, приводит к появлению побочных эффектов. Например, попытка восстановить баланс железа у женщин, страдающих анемией, приводит к увеличению уровня окислительного стресса (перекисное окисление липидов, высокий риск развития диабета и атеросклероза) [17, 18]. Потребление этого микроэлемента может осложниться накоплением ионов железа в головном мозге, что приводит к нейродегенеративным последствиям [19]. При избытке железа в организме печень берет на себя защитную функцию, накапливая ионы железа, при этом могут получить развития такие заболевания как стеатогепатит, фиброз, цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома [20]. Помимо этого следует учитывать, что прием железосодержащих препаратов связан с риском понижения потребления меди и, особенно, цинка [11], что может стать причиной развития ряда заболеваний. В свою очередь повышенное содержание цинка вызывает риск заболеваний, связанных с половой системой [21].
Также известны различные препараты (хелаторы), уменьшающие уровень содержания того или иного элемента в организме, например железа [22, 23, 24, 25] или меди [26, 27]. Однако снижение содержания железа в организме приводит к многочисленным иммунным нарушениям [28]. Уменьшение содержания меди в организме приводит к уменьшению синтеза голо-церулоплазмина и ослаблению феррооксидазной активности, что приводит в ряде случаев, к уменьшению выхода из тканей железа и развитию анемии [29]. С пониженным содержанием меди также связана антиоксидантная недостаточность организма, которая приводит к повышенной подверженности инфекционным заболеваниям и нарушениям эмбриогенеза [30, 31, 32, 33, 34].
Существует множество примеров других способов, которые используются для лечения и профилактики индуцированных элементозов. Все они имеют определенные недостатки, которые сужают возможности их использования в медицине.
Поскольку метаболические и транспортные пути эссенциальных элементов в организме тесно переплетены, существует необходимость в таком способе лечения элементозов, представляющих собой индуцированные внешними или внутренними факторами отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта сразу нескольких эссенциальных элементов, при котором не требуется обязательное использование источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
Авторы настоящего изобретения в результате большого количества экспериментов и клинических наблюдений неожиданно обнаружили, что препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов могут быть применены для лечения индуцированных элементозов у субъекта, нуждающегося в этом, без необходимости использования источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
В частности, авторы настоящего изобретения обнаружили, что такие препараты предпочтительно могут быть получены с использованием биотехнологического метода культуры клеток растения.
При этом незначительное содержание эссенциальных элементов и/или их хелаторов в препаратах растения Polyscias filicifolia или его фрагментов позволяет не рассматривать такие препараты как источники эссенциальных элементов, содержание которых нарушено, или их хелаторы [35].
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к применению препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов и их последствий у субъекта, нуждающегося в этом, где элементозы представляют собой индуцированные внешними или внутренними факторами отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Ca, Cr, I, Mn, без необходимости использования источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
В другом общем аспекте настоящее изобретение относится к применению препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов и их последствий у субъекта, нуждающегося в этом, где элементозы представляют собой индуцированные внешними или внутренними факторами отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Ca, Cr, I, Mn, и, в дополнение к этим элементам -  отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Cu, Mg, Fe, Zn, без необходимости использования источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
В конкретном варианте осуществления изобретения пример № 1 иллюстрирует препарат Polyscias filicifolia в виде водно-этанольного экстракта побегов растения Polyscias filicifolia.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где фрагмент растения Polyscias filicifolia получен биотехнологическим методом культуры клеток растений.
В некоторых вариантах осуществления изобретения предложено применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где фрагмент растения Polyscias filicifolia получен биотехнологическим методом культуры клеток растений на основе штамма БФТ 01-95, № 58 ВККК ВР.
В конкретном варианте осуществления изобретения пример № 2 иллюстрирует препарат Polyscias filicifolia в виде водно-этанольного экстракта биомассы растения, полученной  методом суспензионной культуры клеток высших растений на основе штамма, полученного из листа растения Polyscias filicifolia (MOORE EX ROUNIER) BAILEY БФТ 01-95 и депонированного во Всероссийской коллекции растительных клеток и органов высших растений за № 58 от 5 июня 1995 г.
В некоторых вариантах осуществления изобретения предложено применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где препарат представляет собой ферментированный пробиотическими микроорганизмами фрагмент растения Polyscias filicifolia, полученный биотехнологическим методом культуры клеток растений.
В конкретном варианте осуществления изобретения пример № 3 иллюстрирует препарат Polyscias filicifolia в виде суспензии ферментированной пробиотическими микроорганизмами биомассы растения, полученной  методом суспензионной культуры клеток высших растений на основе штамма, полученного из листа растения Polyscias filicifolia (MOORE EX ROUNIER) BAILEY БФТ 01-95 и депонированного во Всероссийской коллекции растительных клеток и органов высших растений за № 58 от 5 июня 1995 г.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где препарат применяют в составе фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один препарат растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в сочетании с фармацевтически приемлемым эксципиентом, который выбирают из группы, состоящей из растворителя; агента, регулирующего рН; агента изотоничности; консерванта; антиоксиданта; поверхностно-активного вещества; загустителя; усилителя абсорбции или их комбинации.
В конкретном варианте осуществления изобретения пример № 4 иллюстрирует фармацевтическую композицию, которая содержит препарат растения Polyscias filicifolia в сочетании с комбинацией фармацевтически приемлемых эксципиентов, включая растворитель; агент, регулирующий рН; агент изотоничности; консервант; антиоксидант; поверхностно-активное вещество; загуститель; усилитель абсорбции.
В некоторых вариантах осуществления изобретения предложено применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где элементозы индуцированы попаданием в организм субъекта постороннего химического соединения или инфекционным заболеванием.
В конкретных вариантах осуществления изобретения приведены примеры применения препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов и их последствий, индуцированных попаданием в организм постороннего химического соединения (Пример 5), и инфекционным заболеванием (Пример 6).
В некоторых вариантах осуществления изобретения предложено применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где элементоз представляет собой отклонение содержания одного или нескольких эссенциальных элементов по меньшей мере в одном из внутренних органов, выбранных из группы: печень, селезенка, кровь.
В конкретных вариантах осуществления изобретения приведены примеры применения препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов, где элементоз представляет собой отклонение содержания одного или нескольких эссенциальных элементов по меньшей мере в одном из внутренних органов, выбранных из группы: печень, селезенка, кровь. (Примеры 5 и 6).
В некоторых вариантах осуществления изобретения предложено применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где препарат применяют перорально или сублингвально.
В конкретных вариантах осуществления изобретения приведены примеры применения препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, где препарат применяют перорально (Пример 5)  или сублингвально (Пример 6).
В другом общем аспекте предложено лекарственное средство для лечения перечисленных ранее  элементозов и их последствий, которое содержит препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в составе фармацевтической композиции, где последствиями элементозов являются дисбактериоз, анемии, утомляемость, нарушения умственного и физического развития у детей, метаболический синдром; расстройства, связанные с дефицитом инсулина или резистентностью к инсулину; сахарный диабет, включая диабет 2 типа; непереносимость глюкозы; нарушение липидного обмена; атеросклероз; артериальная гипертензия; гипергликемия; заболевания печени; дисфункция иммунной системы; воспалительные заболевания кишечника, в частности синдром раздраженного кишечника; сердечно-сосудистые заболевания; высокий уровень холестерина; повышенные триглицериды; астма; остеоартрит; нейро-дегенерации и онкологические заболевания.
В конкретном варианте осуществления изобретения пример № 6 иллюстрирует средство для лечения перечисленных ранее элементозов и их последствий, которое содержит препарат растения Polyscias filicifolia в составе фармацевтической композиции, где последствием элементозов является дисфункция иммунной системы.
Детали одного или нескольких вариантов осуществления изобретения изложены в приведенном ниже описании. Другие признаки, объекты и преимущества изобретения будут очевидны из описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
Рисунки являются только иллюстративными и не требуются для реализации изобретения, раскрытого в данном документе.
Рисунки 1(a)÷(d) - изменение содержания эссенциальных элементов в печени животных для различных экспериментальных групп в % к среднему значению содержания соответствующего элемента в контрольной группе, где:
Рис.1 (a) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней), Т1 – (глифосат (150 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 1  (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,01, ***р≤0,001;
Рис.1 (b) -  К – контроль, Р2 – глифосат (750 мкг/кг х 7 дней), Т2 – (глифосат (750 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 2 (900 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.1 (c) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней),  Т3 – (глифосат (150 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 3 (3 мл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.1 (d) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней),  Т4 – (глифосат (150 мкг/кг) + фармацевтическая композиция в соответствии с Примером 4 (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001.
Рисунки 2(a)÷(c) - изменение содержания эссенциальных элементов в сгустке форменных элементов крови животных для различных экспериментальных групп в % к среднему значению содержания соответствующего элемента в контрольной группе, где:
Рис.2 (a) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней), Т1 – глифосат (150 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 1  (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.2 (b) - К – контроль, Р2 – глифосат (750 мкг/кг х 7 дней), Т2 –глифосат (750 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 2  (900 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.2 (c) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней), Т4 –глифосат (150 мкг/кг) + фармацевтическая композиция в соответствии с Примером 4  (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001.
Рисунки 3(a)÷(c) - изменение содержания эссенциальных элементов в селезенке животных для различных экспериментальных групп в % к среднему значению содержания соответствующего элемента в контрольной группе, где:
Рис.3 (a) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней), Т1 –глифосат (150 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 1  (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.3 (b) - К – контроль, Р2 – глифосат (750 мкг/кг х 7 дней), Т2 –глифосат (750 мкг/кг) + препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 2  (900 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001;
Рис.3 (c) - К – контроль, Р1 – глифосат (150 мкг/кг х 7 дней),  Т4 – глифосат (150 мкг/кг) + фармацевтическая композиция в соответствии с Примером 4 (300 мкл/кг)) х 7 дней, *р≤0,05, **р≤0,005, ***р≤0,001.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, хотя и указывают варианты осуществления изобретения, даны только в качестве иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в пределах сущности и объема изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники. Специалист в данной области, основываясь на приведенных здесь определениях, может использовать настоящее изобретение в полной мере. Следующие конкретные варианты осуществления должны быть истолкованы как просто иллюстративные и никоим образом не ограничивающие остальную часть раскрытия.
Если не указано иное, все термины, используемые в данном документе, включая технические и научные термины, имеют значение, обычно понимаемое специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение.
Для целей раскрытия ниже перечислены определения различных терминов, используемых для описания настоящего изобретения. Если не указано иное, эти определения применяются к терминам, используемым в описании и прилагаемой формуле изобретения, по отдельности или в составе более широкой группы. Они не должны интерпретироваться в буквальном смысле. Они не являются общими определениями и актуальны только для этого описания.
Используемый здесь термин «или» обычно используется в его значении, включая «и / или», если содержание явно не предписывает иное.
Используемый здесь термин «примерно» означает приблизительно и может быть истолкован для оценки значения, которое составляет ± 10% от указанного значения или диапазона.
Используемый здесь термин «лечение» означает предотвращение (т. е. предотвращение возникновения), уменьшение или облегчение по меньшей мере одного неблагоприятного воздействия или симптома заболевания, расстройства или состояния. Таким образом, этот термин относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим мерам, где целью является предотвращение или замедление (уменьшение) целевого патологического состояния или расстройства.
Используемый здесь термин «количество, достаточное для лечения» или «эффективное количество» относится к количеству препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов, которое, не вызывая значительных отрицательных или неблагоприятных побочных эффектов, при введении субъекту для лечения заболевания, расстройства или другого нежелательного патологического состояния достаточно для обеспечения благоприятного эффекта на заболевание, расстройство или состояние.
Эффективное количество может быть введено до начала заболевания или расстройства для профилактического действия. Альтернативно или дополнительно, эффективное количество можно вводить после начала заболевания или расстройства для терапевтического действия.
Используемый здесь термин «препарат растения или его фрагментов» означает вещество или смесь веществ растительного происхождения, полученное как из целого растения, так и из его частей, включая, но не ограничиваясь: листья, стебель, побеги, семена, плоды, кора, корни, а также из фрагментов частей растения, вплоть до отдельной растительной клетки, в том числе полученных биотехнологическими методами.
Используемый здесь термин «культура клеток растений» означает биотехнологический процесс, посредством которого фрагменты растения: отдельные клетки (или единственная клетка), ткани или части растения искусственно выращиваются в контролируемых условиях.
Препарат растения или его фрагментов может быть изготовлен, включая, но не ограничиваясь, в виде настоя, отвара, настойки, вытяжки, экстракта, сока, сиропа, суспензии, порошка, мази, пасты, жирного или эфирного масла, в том числе в ферментированном пробиотическими микроорганизмами виде, способами, хорошо известными специалисту в данной области техники.
Используемый здесь термин «пробиотический микроорганизм» относится к непатогенным и полезным для субъекта живым микроорганизмам, которые могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из Bifidobacterium adolescentis,  Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium thermophilum, Bifidobacterium breve; Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus reuteri; Lactococcus lactis; Escherichia coli; Enterococcus Faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus salivarius, Streptococcus thermophilus; Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus licheniformis или их комбинации.
Используемый здесь термин «фармацевтическая композиция» или «композиция» означает однократную дозу или многократную дозу одного или нескольких препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в сочетании с фармацевтически приемлемыми эксципиентами, которые могут быть получены способами, описанными в одном или нескольких вариантах осуществления настоящего изобретения.
Для целей настоящего изобретения фармацевтическую композицию предпочтительно помещают в подходящий контейнер. Этот контейнер также может быть частью устройства, в котором фармацевтическую композицию готовят непосредственно перед введением пациенту.
Различные виды фармацевтической композиции для целей настоящего изобретения могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается: раствор, суспензию, сироп, жидкость, гель, гидрогель, эмульсию, липосому, аэрозоль, туман, пленку, полимер, имплантат или композиция с замедленным высвобождением.
Способ введения субъекту препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в составе фармацевтических композиций по настоящему изобретению может быть выбран из группы, которая включает, но не ограничивается: перорально, сублингвально, трансбуккально, ректально, трансдермально, дермально, подкожно, назально, ингаляционно.
Предпочтительным вариантом осуществления изобретения является способ, когда препарат применяют перорально или сублингвально.
В некоторых вариантах осуществления изобретения эффективное количество препарата растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в составе фармацевтической композиции по настоящему изобретению вводят субъекту один раз в день, два раза в день, три раза в день или чаще. В других вариантах осуществления изобретения вводят через день или реже.
Предпочтительно фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов в количестве, достаточном для лечения элементозов и их последствий, когда фармацевтическую композицию вводят субъекту, нуждающемуся в этом.
Используемый здесь термин «субъект» означает животное, предпочтительно млекопитающее и наиболее предпочтительно человека. В контексте настоящего изобретения термин «субъект» используется взаимозаменяемо с термином «пациент».
В контексте настоящего изобретения фраза «субъект, нуждающийся в этом» включает тех, у кого уже есть заболевание или расстройство, а также тех, кто склонен иметь заболевание или расстройство, или тех, у кого заболевание или расстройство должны быть предотвращены, и для которых препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть подходящим образом использованы.
Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый» означает подходящий для нормального фармацевтического применения, то есть не вызывающий побочных эффектов у пациентов.
Используемый здесь термин «эксципиент» относится к фармацевтически приемлемому веществу или группе веществ, которые можно вводить пациенту вместе с препаратами растения Polyscias filicifolia или его фрагментов по настоящему изобретению, которое не снижает фармакологическую активность препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов, и включаются в фармацевтическую композицию с целью стабилизации или для придания терапевтического усиления действующему ингредиенту или для снижения вязкости или для повышения растворимости или для других целей, хорошо известных специалисту в данной области техники.
Для целей осуществления настоящего изобретения такой фармацевтически приемлемый эксципиент, выбирают из группы, состоящей из растворителя; агента, регулирующего рН; агента изотоничности; консерванта; антиоксиданта; поверхностно-активного вещества; загустителя; усилителя абсорбции или их комбинации.
Используемый здесь термин «растворитель» означает вещество, выбранное из группы, которая включает, но не ограничивается ими: вода, этиленгликоль, диэтиленгликоль, триэтиленгликоль, тетраэтиленгликоль, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, дипропиленгликоль, трипропиленгликоль, метоксипропиленгликоль, полиэтиленоксид, глицерин, этанол, пропиловый спирт, изопропиловый спирт, бензиловый спирт, бензилбензоат, гликофурол или их комбинация. Предпочтительное количество растворителя, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 90,0% (масс).
Используемый здесь термин «агент, регулирующий рН» означает вещество, которое регулирует рН фармацевтических композиций до желаемого значения рН. Агенты, регулирующие рН, могут включать фармацевтически приемлемые кислоты, основания или буферные агенты. Например, кислоты могут включать, но не ограничиваются ими, одну или несколько неорганических минеральных кислот, таких как лимонная, фумаровая, глюконовая, молочная, яблочная, метатартаровая, винная, аскорбиновая и бензолсульфоновая кислоты и тому подобное. Основания могут быть одним или несколькими неорганическими основаниями или органическими основаниями, включая, но не ограничиваясь этим, щелочной карбонат, щелочной бикарбонат, карбонат щелочноземельного металла, гидроксид щелочного металла, гидроксид щелочноземельного металла или амин. Например, неорганическое или органическое основание может представлять собой щелочной гидроксид, такой как гидроксид лития, гидроксид калия, гидроксид цезия, гидроксид натрия или тому подобное; щелочной карбонат, такой как карбонат кальция, карбонат натрия или тому подобное; или щелочной бикарбонат, такой как бикарбонат натрия или тому подобное; органическое основание также может быть ацетатом натрия. Буферный агент может представлять собой, но не ограничиваясь этим, соль щелочного металла аминокислоты, гидроксида алюминия, гидроксида алюминия, глицината магния, ацетата кальция, бикарбоната кальция, бората кальция, карбоната кальция, цитрата кальция, глюконата кальция, глицерофосфата кальция гидроксид кальция, лактат кальция, фталат кальция, фосфат кальция, сукцинат кальция, тартрат кальция, двухосновный фосфат натрия, двухосновный гидрофосфат, двухкалийфосфат. Предпочтительное количество агента, регулирующего рН, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 2,0% (масс).
Используемый здесь термин «рН» представляет собой меру концентрации ионов водорода, которая обычно используется в данной области. Как правило, pH обеспечивает меру по шкале от 0 до 14 кислотности или щелочности раствора. В контексте настоящего изобретения pH фармацевтической композиции составляет от примерно 2,0 до примерно 11,0.
Используемый здесь термин «агент изотоничности», как он используется, относится к веществу в фармацевтической композиции, которое служит для изменения осмотического давления фармацевтической композиции, так что осмотическое давление становится ближе к таковому в плазме крови человека. Примеры агентов изотоничности включают, но не ограничиваются ими: хлорид натрия или хлорид калия или физиологически переносимый полиол, такой как, например, сахарный спирт, в частности сорбит или глицерин, в концентрации, необходимой для придания изотоничности. Предпочтительное количество агента изотоничности, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 1,0% (масс).
Используемый здесь термин «консервант» относится к веществу, которое добавляют в фармацевтическую композицию для предотвращения или замедления микробной активности (роста и метаболизма). Примеры консервантов, которые можно использовать в фармацевтической композиции, могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из фенилкарбинола, бензалкония хлорида, тимеросала, бензилового спирта, этилового спирта, фенилэтилового спирта, метилпарабенов, этилпарабенов, пропилпарабенов и бутилпарабенов. или их комбинация. Предпочтительное количество консерванта, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 2,0% (масс).
Примеры подходящих антиоксидантов, которые могут быть использованы в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из аскорбиновой кислоты, альфа-токоферола (витамина е), бутилированного гидроксианизола, бутилированного гидрокситолуола, глутатиона и тому подобного. Предпочтительное количество антиоксиданта, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может составлять от около 0,001 до около 1,0% (масс).
Примеры подходящих поверхностно-активных веществ, которые могут быть использованы в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из полисорбатов, их простых этоксилатов, полученных реакцией сложных эфиров сорбита с этиленоксидом, полиоксиэтиленалкилфенолом, полиоксиэтиленцетиловым эфиром, полиоксиэтиленалкилариловым эфиром, полиоксиэтиленмонолауратом, полиоксиэтиленовым растительным маслом, сложным эфиром полиоксиэтилена или смешанными жирными и смоляными кислотами, производным полиоксиэтиленсорбитол-ланолина, сложными эфирами полиоксиэтилен-тридецилэфира, производными полиоксиэтилен ланолина, олеатом натрия, производными четвертичного аммония, олеатом калия,  лаурилсульфатом натрия или их смесью. Предпочтительное количество поверхностно-активных веществ, которые могут присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может составлять от около 0,001 до около 5,0% (масс).
Примеры подходящих загустителей, которые можно использовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из водонерастворимых полимеров, акриловых полимеров, блок-сополимеров полиоксиэтилена и полиоксипропилена, ксантановой камеди, трагакантовой камеди, альгинатов, агар-агара, желатина, сорбитола. Предпочтительное количество загустителя, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 2,0% (масс).
Примеры подходящих усилителей абсорбции, которые можно использовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны, но не ограничиваются ими, из динатрийэдетата, бензилового спирта, этанола, тиамина или его соли, каприновой кислоты или ее соли, яблочной кислоты или его соли, пирофосфорной кислоты или ее соли, лимонной кислоты или ее соли, салициловой кислоты или ее соли, пирофосфорной кислоты или ее соли, или их комбинации. Предпочтительное количество усилителя абсорбции, которое может присутствовать в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от около 0,001 до около 2,0% (масс).
Изобретение дополнительно иллюстрируется следующими примерами, которые представлены в качестве примера изобретения и не ограничивают объем изобретения. Хотя настоящее изобретение было описано в терминах его конкретных вариантов осуществления, определенные модификации и эквиваленты будут очевидны для специалистов в данной области техники и предназначены для включения в объем настоящего изобретения.
Пример 1. Препарат боковых побегов растения Polyscias filicifolia.
Для получения препарата собранные боковые побеги растения Polyscias filicifolia измельчали и сушили в сушильном шкафу при температуре 35±1°С в течение 48 час. Экстракцию высушенных побегов проводили 40 % водным раствором этилового спирта (ГОСТ Р 51786), исходя из соотношения вес/объем 1:30 - 1:32 методом перколяции. Для этого высушенные побеги заливали 40 % водным раствором этилового спирта из расчета 20 мл на 1 г высушенных побегов и оставляли на 48 часов.  Полученный раствор центрифугировали (3000 об., 5 мин), супернатант сливали в коллекторную емкость, а осадок заливали новой порцией 40 % водного раствора этилового спирта (из расчета 10 мл на 1 г исходного веса высушенных побегов) и оставляли на 48 часов.  Полученный раствор центрифугировали (3000 об., 5 мин), вторую порцию супернатанта сливали в ту же коллекторную емкость и полученную смесь выдерживали в холодильнике в течение 3 суток, декантировали и отфильтровывали с использованием фильтров-насадок Millipore 0,45 мкм*25мм. Полученный экстракт был охарактеризован с помощью ВЭЖХ.
Пример 2. Препарат биомассы растения Polyscias filicifolia, полученный биотехнологическим методом культуры клеток растений.
Биомассу Polyscias filicifolia выращивали в биореакторе методом суспензионной культуры клеток высших растений на основе штамма, полученного из листа растения Polyscias filicifolia (MOORE EX ROUNIER) BAILEY БФТ 01-95, депонированного во Всероссийской коллекции растительных клеток и органов высших растений за № 58, в соответствии со способом, описанным в Патенте RU 2 337 138 «Штамм культуры клеток Polyscias filicifolia (MOORE EX ROUNIER) BAILEY для получения лекарственных препаратов, биологически активных добавок и косметических средств» [36]. Сушка биомассы проводилась на подносах в сушильном шкафу в токе горячего воздуха при 45 – 50°С в течение 12 - 18 часов. Экстракцию воздушно-сухой биомассы клеток проводили 40 % водным раствором этилового спирта (ГОСТ Р 51786), исходя из соотношения вес/объем 1:10 - 1:12 методом перколяции. Биомассу помещали в перколятор и заливали 40 % водным раствором этилового спирта таким образом, чтобы последний полностью закрывал биомассу (из расчета 5300 мл на 1 кг биомассы) и оставляли на ночь. На следующий день экстракт через нижний кран сливали в коллекторную емкость, а биомассу заливали новой порцией 40 % водного раствора этилового спирта (из расчета 3300—3400 мл на 1 кг исходной биомассы) и, перемешав, оставляли на ночь.  На третий день экстракт сливали в ту же коллекторную емкость и вновь заливали биомассу новой порцией 40 % водного раствора этилового спирта в таком количестве, чтобы в итоге получить 10 л экстракта. Третью порцию экстракта сливали на следующее утро в ту же коллекторную емкость, объединив все три экстракта. Объединенный экстракт выдерживали в холодильнике в течение 3 суток, декантировали и фильтровали. Полученный препарат был охарактеризован в соответствии с требованиями ТУ 9154-001-89061833-2011 с изменениями №1, предъявляемыми к  Биологически активной добавке к пище «Витагмал», СГР № RU 77.99.29.003.E.003414.02.15 от 12.02.2015 г.
Пример 3. Препарат ферментированной пробиотическими микроорганизмами биомассы растения Polyscias filicifolia.
9
Биомассу растения Polyscias filicifolia выращивали в биореакторе методом суспензионной культуры клеток высших растений в соответствии со способом, описанным в Патенте RU 2 337 138 [36]. Затем 10 г полученной воздушно-сухой биомассы Polyscias filicifolia и 0,1 г витамина С суспендировали в 100 мл предварительно простерилизованного молока. В полученную суспензию инокулировали 1 мл (около 10 КОЕ/мл) культуральной жидкости Bifidobacterium longum с последующей ферментацией в течение 24 часов при 37±1 ° C, при постоянном перемешивании. Полученный препарат был охарактеризован с помощью ВЭЖХ.
Пример 4. Фармацевтическая композиция, которая содержит препарат растения Polyscias filicifolia.
Приготовление фармацевтической композиции для целей настоящего изобретения включало следующие стадии:
(а) приготовление препарата растения Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 1;
(б) добавление к препарату при постоянном перемешивании фармацевтически приемлемых эксципиентов, включая растворитель; агент, регулирующий рН; агент изотоничности; консервант; антиоксидант; поверхностно-активное вещество; загуститель; усилитель абсорбции;
(с) наполнение фармацевтической композицией стерильных стеклянных флаконов по 25 мл с последующим закрытием.
Была приготовлена фармацевтическая композиция, содержащая  препарат растения Polyscias filicifolia,  состав которой указан в Таблице 1:
Таблица 1
<b>Тип эксципиента</b>
<b>Эксципиент</b>
<b>Кол-во в композиции,</b><b>% (масс)</b>
<b>pH фармацевтической композиции</b>
Препарат Polyscias filicifoliaАгент, регулирующий рНКонсервантАгент изотоничностиУсилитель абсорбцииАнтиоксидантПоверхностно-активное веществоЗагустительРастворитель
Препарат Polyscias filicifolia в соответствии с Примером 1Уксусная кислотаХлорид бензалконияХлорид натрияЭДТААскорбиновая кислотаПолисорбат TWEEN 20ЖелатинПолиэтиленгликоль
97,00,220,010,50,0050,020,011,0до 100%
3,7±0.1
Пример 5. Применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов, индуцированных попаданием в организм постороннего химического соединения.
Грызуны являются стандартными объектами для фармакологических исследований в соответствии с рекомендациями Руководств по доклиническим исследованиями потенциальных лекарственных препаратов [37, 38, 39].
Количество животных, использованных в исследовании применения препаратов растения Polyscias filicifolia для лечения элементозов, является минимально возможным в каждой экспериментальной группе, и достаточным для получения достоверных результатов исследования и полной статистически значимой регистрации изучаемых эффектов.
В эксперименте было использовано 60 специально разведённых, ранее не принимавших участие в исследованиях, белых аутбредных крыс-самцов породы Вистар возрастом около двух месяцев с массой 200-220 г.
Животных содержали в помещениях с контролируемыми условиями при температуре воздуха 20-26°С и относительной влажности 30-70% с регулярной сменой светового цикла (12 часов света / 12 часов темноты), водой и кормом ad libitum. Все животные прошли 30-дневный карантин перед отправкой на территории питомника. После привоза животные прошли 48-часовую адаптацию в виварии. Во время периода адаптации у животных визуально контролировали клинические признаки здоровья (общее состояние, подвижность, опрятность, упитанность, аппетит, отсутствие симптомов заболевания). Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент (масса тела, клиническое здоровье) были распределены по 10 животных в группе. Распределение было произведено так, чтобы средние массы групп животных одного вида отличались не более чем на 10%. Каждому животному был присвоен уникальный номер.
Эксперименты с использованием лабораторных животных проводились с соблюдением гуманного обращения и этических норм использования животных в эксперименте в соответствии с правилами [40, 41, 42, 43].
Для моделирования элементозов в организме животных было решено использовать глифосат (N-фосфонометилглицин), который является хелатором для целого ряда эссенциальных элементов, включая железо, медь, цинк и магний [44].
Пероральное введение приготовленных растворов в дозах, указанных в Таблице 2, проводили на протяжении 7 дней.
Таблица 2 - Дизайн исследования для различных экспериментальных групп животных.
<b>Наименование группы</b>
<b>Способ введения и количество вводимого раствора,</b><b>объем раствора/вес животного</b>
<b>Состав вводимого раствора,</b><b>вес или объем ингредиента/</b><b>объем раствора</b>
<b>Количество животных в каждом тесте</b>
К
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Вода очищенная – 100 %
10
P1
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 50 мкг/млВода очищенная – до 100 %
10
P2
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 250 мкг/млВода очищенная – до 100 %
10
T1
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 50 мкг/млПрепарат Polyscias filicifolia (Пример 1) – 100 мкл/млВода очищенная – до 100 %
10
T2
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 250 мкг/млПрепарат Polyscias filicifolia (Пример 2) – 300 мкл/млВода очищенная – до 100 %
10
T3
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 50 мкг/млПрепарат Polyscias filicifolia (Пример 3) – до 100 %
10
T4
Внутрижелудочное, один раз в день утром по 3 мл/кг на протяжении 7 дней
Глифосат – 50 мкг/млФармацевтическая композиция(Пример 4) – 100 мкл/млВода очищенная – до 100 %
10
На восьмой день у животных производили забор крови в объеме 5 мл. Полученные образцы разделяли на плазму и сгусток форменных элементов крови и замораживали при -18°С. Также изымали для дальнейшего исследования печень и селезенку, взвешивали и замораживали при -18°С. Образцы в замороженном состоянии транспортировались для проведения количественного анализа микроэлементов. Анализ содержания эссенциальных элементов в образцах проводили в соответствии с МУК 4.1.1483 методом атомно-эмиссионной спектрометрии на масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой Agilent 7900 ICP-MS.
Статистическая обработка полученных данных проводилась в программе IBM SPSS Statistics 24. Для описания групп при однородных данных или имеющих распределение, близкое к нормальному, использовались средние значения (X) и стандартные отклонения (S), а сравнение групп проводилось методом дисперсионного анализа (F-критерий), попарное сравнение апостериорным критерием Шеффе в случае однородной дисперсии в сравниваемых группах или апостериорных критерием Тамхейна в случае неоднородной дисперсии. Тест на нормальность распределения проводился критерием Шапиро-Уилка, тест на гомогенность дисперсии проводился критерием Ливиня. Сравнение групп проводилось непараметрическим дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса (H-критерий), а попарное сравнение непараметрическим критерием Манна-Уитни. Критический уровень значимости для достоверных различий принимали p≤0.05.
Проверка данных на нормальность распределения показала, что у большой части показателей распределение отличается от нормального, а значит оценку различий по ним нужно проводить при помощи непараметрических критериев. Тест Крускала-Уоллиса выявил достоверные отличия между экспериментальными группами по содержанию целого ряда эссенциальных элементов в печени, селезенке и сгустке форменных элементов крови.  Результаты эксперимента представлены в Таблице 3 (содержание эссенциальных элементов в органах животных для различных экспериментальных групп (мкг/г)) и на рисунках 1 - 3.
Таблица 3
Орган
Группа
Mg
Al
Ca
Cr
Mn
Fe
Cu
Zn
I
Печень
К
Среднее
324,895
8,627
415,976
0,975
2,215
106,138
3,685
42,844
0,403
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
86,550
8,392
135,284
0,518
0,811
36,183
2,275
10,417
0,551
Медиана
366,655
6,145
455,445
1,230
2,425
113,780
4,165
45,670
0,127
Р1
Среднее
208,829
5,923
272,288
0,307
1,362
66,386
0,696
24,588
0,182
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
22,782
0,436
38,544
0,233
0,194
14,972
0,457
4,295
0,282
Медиана
211,885
6,005
282,405
0,220
1,395
67,870
0,570
24,505
0,093
Р2
Среднее
204,392
2,969
508,411
0,025
0,474
56,295
0,468
26,644
0,157
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
12,640
1,048
13,871
0,079
0,145
25,187
0,554
6,230
0,108
Медиана
206,000
2,735
510,070
0,000
0,520
50,205
0,275
25,010
0,133
Т1
Среднее
186,781
2,648
178,797
0,300
1,425
79,011
1,674
32,404
0,155
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
21,572
0,919
46,144
0,070
0,159
19,486
0,908
5,264
0,069
Медиана
179,725
2,415
167,915
0,315
1,415
81,730
1,345
31,845
0,137
Т2
Среднее
189,179
2,482
178,234
0,373
1,283
63,243
1,498
33,625
0,120
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
13,657
0,440
33,495
0,039
0,338
27,967
0,413
5,810
0,025
Медиана
186,255
2,355
175,440
0,370
1,385
58,510
1,435
31,085
0,121
Т3
Среднее
200,550
2,635
148,755
0,316
1,588
76,833
1,500
31,499
0,238
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
20,022
1,083
65,083
0,071
0,297
21,738
0,606
4,475
0,089
Медиана
190,695
2,330
129,245
0,320
1,480
78,240
1,280
31,285
0,218
Т4
Среднее
189,027
2,660
140,192
0,663
1,824
85,670
1,824
33,358
0,194
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
22,126
0,735
50,717
0,982
1,375
28,521
2,297
16,071
0,067
Медиана
191,405
2,390
126,135
0,305
1,430
81,830
1,130
28,935
0,189
Сгустокформенныхэлементовкрови
К
Среднее
59,620
2,059
97,900
0,646
606,533
0,006
0,504
5,683
0,060
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
7,16
0,713
4,321
0,253
247,376
0,015
1,412
0,694
0,013
Медиана
58,750
2,015
99,200
0,680
540,850
0,000
0,005
5,565
0,058
Р1
Среднее
61,320
1,556
101,480
0,635
527,968
0,007
0,013
6,461
0,049
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
12,830
0,501
20,524
0,208
94,910
0,016
0,020
1,052
0,012
Медиана
62,700
1,660
97,700
0,660
494,700
0,000
0,000
6,280
0,048
Р2
Среднее
69,991
0,904
101,485
0,695
758,530
0,052
0,082
7,073
0,041
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
12,149
0,311
16,621
0,244
103,141
0,141
0,205
0,821
0,026
Медиана
66,890
0,845
99,750
0,860
738,300
0,000
0,010
6,985
0,032
Т1
Среднее
45,481
1,801
126,889
0,850
764,961
0,032
0,049
8,586
0,079
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
3,603
0,742
25,039
0,066
120,441
0,027
0,028
0,773
0,010
Медиана
45,850
1,890
122,295
0,860
732,900
0,040
0,040
8,925
0,081
Т2
Среднее
61,617
1,181
89,063
0,691
846,815
0,008
0,970
8,049
0,060
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
10,154
0,434
17,199
0,244
100,599
0,016
2,089
1,658
0,017
Медиана
65,900
0,965
90,850
0,725
803,175
0,000
0,070
7,895
0,058
Т4
Среднее
47,748
1,111
131,878
0,718
621,560
0,009
0,136
7,135
0,068
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
6,176
0,435
10,841
0,112
47,161
0,009
0,191
0,729
0,017
Медиана
47,070
0,965
130,995
0,710
607,650
0,010
0,065
7,090
0,068
Селезенка
К
Среднее
210,623
1,237
1032,300
0,085
0,398
307,419
0,751
18,235
0,000
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
110,059
1,025
270,510
0,186
0,658
55,973
0,421
5,297
0,000
Медиана
176,245
0,885
169,600
0,015
0,210
305,300
0,610
17,750
0,000
Р1
Среднее
165,878
1,147
147,792
0,029
0,175
330,920
0,592
14,587
0,000
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
27,859
1,1851
40,642
0,050
0,045
53,925
0,099
3,819
0,000
Медиана
169,000
0,745
134,140
0,000
0,170
337,425
0,625
14,660
0,000
Р2
Среднее
173,109
0,843
142,154
0,005
0,186
335,748
0,697
13,714
0,056
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
27,621
0,158
17,701
0,007
0,051
118,167
0,259
2,967
0,098
Медиана
166,940
0,860
138,550
0,000
0,180
331,870
0,620
12,450
0,000
Т1
Среднее
192,019
0,932
140,019
0,141
0,186
383,093
1,148
14,757
0,035
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
47,389
0,315
27,000
0,118
0,040
103,226
0,351
2,799
0,110
Медиана
192,770
0,860
129,195
0,095
0,175
320,450
1,140
13,700
0,000
Т2
Среднее
216,080
0,827
210,557
0,183
0,216
334,110
1,011
20,814
0,000
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
18,030
0,313
168,258
0,135
0,036
110,063
0,297
12,342
0,000
Медиана
217,530
0,760
162,220
0,150
0,215
320,320
0,975
16,870
0,000
Т4
Среднее
214,181
0,704
154,689
0,180
0,231
409,315
0,898
15,848
0,079
N
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Стандартное отклонение
28,044
0,338
38,725
0,175
0,045
108,644
0,277
2,260
0,249
Медиана
210,495
0,605
149,535
0,130
0,235
390,500
0,865
15,750
0,000
Результаты эксперимента показывают, что препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов могут быть применены для лечения элементозов и их последствий у субъекта, нуждающегося в этом, где элементозы представляют собой индуцированные внешними или внутренними факторами отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Ca, Cr, I, Mn, и, в дополнение к этому, отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Cu, Mg, Fe, Zn, без необходимости использования источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
Пример 6. Применение препаратов растения Polyscias filicifolia или его фрагментов для лечения элементозов, индуцированных инфекционным заболеванием.
Инфекционные заболевания в частности ротовой полости, прежде всего пародонтит,  являются причиной многих системных заболеваний, включая сердечно-сосудистые, бактериальную пневмонию, диабет, остеопороз, артриты,  когнитивные нарушения, тромбозы и другие болезни [45].
Клиническое исследование применения препарата биомассы растения Polyscias filicifolia, полученного биотехнологическим методом культуры клеток растений (Пример 2), было проведено в МСЧ № 18 (Санкт-Петербург) - клинической базе кафедры внутренних болезней стоматологического факультета СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова под руководством доцента кафедры внутренних болезней стоматологического факультета СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова,  докт. мед. наук И. А. Горбачевой, и при участии терапевтов и стоматологов городского пародонтологического центра ПАКС и МСЧ № 18.
Были выбраны пациенты с проявлениями пародонтита в сочетании с различными патологиями внутренних органов.  Всего было обследовано 27 человек, из них 22 женщины и 5 мужчин в возрасте от 20 до 50 лет. Лечение проводилось по схеме:  10-12 капель препарата биомассы растения Polyscias filicifolia «Витагмал» сублингвально за 40 минут до еды утром на протяжении 30 дней. Кроме того, больные обрабатывали десны препаратом «Витагмал» после вечернего туалета полости рта.
Лабораторные исследования зафиксировали улучшение иммунологических показателей (р<0,001) у пациентов из опытной группы: мобилизация мононуклеарных фагоцитов в очаге асептического воспаления увеличилась с (52,1±0,7)%  до (62,8±1,5)% (при норме (69,3±0,61)%); количество циркулирующих в крови клеток-предшественниц моноцитов с (0,35±0,08) до (0,58±0,09)⋅109/л (при норме (0,6±0,05)⋅109/л); с выраженной десенсибилизацией организма: снижение уровня бласттрансформации лимфоцитов с (5,9±0,9)% до (1,5±0,09)%; уровня γ-глобулинов с (24,5±0,5)% до (20,0±0,6)%.
Все пациенты отмечали исчезновение гиперчувствительности и кровоточивости десен. Результаты лабораторных исследований содержания эссенциальных элементов в крови больных приведены в Таблице 4 (динамика содержания эссенциальных элементов в крови больных пародонтитом до и после лечения препаратом биомассы растения Polyscias filicifolia).
Таблица 4
Элемент
Срок          исследования
У здоровых
до лечения
после курса лечения
Мg (мМоль/л)в  плазмев эритроцитах
0,80± 0,031,82± 0,09
0,83±0,032,29 ±0,09
0,82 ± 0,022,3 ± 0,52
Са (мМоль/л)в плазмев эритроцитах
1,93 ± 0,090,34± 0,05
2,10 ± 0,090,38 ± 0,05
2,3 ±0,050,38 ±0,03
Zn (мкМоль/л)в  плазмев эритроцитах
5,98 ± 0,979,61± 0,30
14,7 ±0,3112,48 ± 0,5
16,38 ±0,75258,45± 1,22
Cu (мкМоль/л)в   плазмев эритроцитах
10,29 ± 0,512,85± 0,5
15,48 ±0,3514,8 ±1,5
15,74 ±0,6026,75 ± 2,68
Fe (мкМоль/л)в плазме
11,7±0,8
19,2 ±0,6
18,61 ±0,96
Результаты эксперимента показывают, что препараты растения Polyscias filicifolia или его фрагментов могут быть применены для лечения элементозов и их последствий у субъекта, нуждающегося в этом, где элементозы представляют собой индуцированные внешними или внутренними факторами отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Ca, Cr, I, Mn, и, в дополнение к этому, отклонения содержания в одном или нескольких внутренних органах субъекта по меньшей мере одного эссенциального элемента, выбранного из группы: Cu, Mg, Fe, Zn, без необходимости использования источников или хелаторов эссенциальных элементов, содержание которых нарушено.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Авцын А. П., Жаворонков М. А., Рош  М. А., Строчкова Л.С.  Микроэлементозы человека / М.: Медицина, 1991. - 496 с.
2. Батэ Н., Кобб К., Двайер Д., Грэни Л., Хейрд В. Рекомендации по питанию детей грудного и раннего возраста (программа Start Healthy Расти здоровым с первых дней) // Вопросы современной педиатрии. – 2007. – Т. 5, – №. 1. – С. 115-129.
3. Cooke R. J. Postdischarge nutrition of preterm infants: more questions than answers // Nutrition support for infants and children at risk. – Karger Publishers, 2007. – Vol. 59. - P. 213-228.
4. Шиц, И. В. Влияние беременности на элементный статус женщин в республике Саха-Якутия. Сообщение 1. Национальные, возрастные и другие особенности // Микроэлементы в медицине. 2006. - № 7. Вып. 3. - С. 23 - 29.
5. Secretariat W. H. O., Andersson M., De Benoist B., Delange F., Zupan J. Prevention and control of iodine deficiency in pregnant and lactating women and in children less than 2-years-old: conclusions and recommendations of the Technical Consultation // Public health nutrition. – 2007. – Vol. 10. – №. 12A. – P. 1606-1611.
6. Сусликов В. Л. Геохимическая экология болезней / Атомовиты. – М.: Гелиос АРВ, 2000. - 672 с.
7. Oliveira D. C., Nogueira-Pedro A., Santos E. W., Hastreiter A., Silva G. B., Borelli P., Fock R. A. A review of select minerals influencing the haematopoietic process // Nutrition research reviews. – 2018. – Vol. 31. – №. 2. – P. 267-280.
8. Failla M. L., Kiser R. A. Altered tissue content and cytosol distribution of trace metals in experimental diabetes // The Journal of nutrition. – 1981. – Vol. 111. – №. 11. – P. 1900-1909.
9. Serdar M.A., Bakir F., Haşimi A., Çelik T., Akin O., Kenar L., Aykut O, Yildirimkaya M. Trace and toxic element patterns in nonsmoker patients with noninsulin-dependent diabetes mellitus, impaired glucose tolerance, and fasting glucose // International journal of diabetes in developing countries. – 2009. – Vol. 29. – №. 1. – P. 35.
10. Рустембекова С. А., Барабошкина Т. А. Микроэлементозы и факторы экологического риска / М.: Университетская книга; Логос, 2006. - 112 с.
11. Скальный А. В., Рудаков И. И. Биоэлементы в медицине / М.: Издательский дом "Оникс 21 век"; Мир, 2004. – 216 с.
12. US 4757059 A, 1988.
13. WO 2008001110 A2, 2008.
14. US 6779468 B1, 2004.
15. US 6887492 B2, 2005.
16. US 20070292493 A1, 2007.
17. Martínez R. M. G. Supplements in pregnancy: the latest recommendations // Nutricion hospitalaria. – 2016. – Vol. 33. – №. Suppl 4. – P. 336-336.
18. Berggren K. L., Chen J., Fox J., Miller J., Dodds L.,Dugas B., Vargas L., Lothian A., McAllum E., Volitakis I., Roberts B., Bush A. I., Fox J. H. Neonatal iron supplementation potentiates oxidative stress, energetic dysfunction and neurodegeneration in the R6/2 mouse model of Huntington's disease // Redox biology. – 2015. – Vol. 4. – P. 363-374.
19. Chen J. H., Singh N., Tay H., Walczyk T. Imbalance of iron influx and efflux causes brain iron accumulation over time in the healthy adult rat // Metallomics. – 2014. – Vol. 6. – №. 8. – P. 1417-1426.
20. Anderson E. R., Shah Y. M. Iron homeostasis in the liver // Comprehensive Physiology. – 2013. – Vol. 3. – №. 1. – P. 315-330.
21. Turgut G., Abban G., Turgut S., Take G. Effect of overdose zinc on mouse testis and its relation with sperm count and motility // Biological trace element research. – 2003. – Vol. 96. – №. 1-3. – P. 271-279.
22. WO 2006107626 A1, 2006.
23. US 4613616 A, 1986.
24. WO 2010033847 A1, 2010.
25. US 6268336 B1, 2001.
26. WO 2000021941 A1, 2000.
27. US 6855340 B2, 2005.
28. Алексеев Н. А.  Анемии. / СПб: Гиппократ, 2004. - 511 с.
29. Sharp P. The molecular basis of copper and iron interactions // Proceedings of the Nutrition Society. – 2004. – Vol. 63. – №. 4. – P. 563-569.
30. Ho Y. S., Gargano M., Cao J., Bronson R. T., Heimler I., Hutz R. J. Reduced fertility in female mice lacking copper-zinc superoxide dismutase // Journal of Biological Chemistry. – 1998. – Vol. 273. – №. 13. – P. 7765-7769.
31. Mieden G. D., Keen C. L., Hurley L. S.,  Klein N. W. Effects of whole rat embryos cultured on serum from zinc-and copper-deficient rats // The Journal of nutrition. – 1986. – Vol. 116. – №. 12. – P. 2424-2431.
32. Keen C. L, Uriu-Hare J. Y., Hawk S. N., Jankowski M. A., Daston G. P., Kwik-Uribe C. L., Rucker R. B. Effect of copper deficiency on prenatal development and pregnancy outcome // The American journal of clinical nutrition. – 1998. – Vol. 67. – №. 5. – P. 1003S-1011S.
33. Rucker R. B., Kosonen T., Clegg M. S., Mitchell A. E., Rucker B. R., Uriu-Hare J. Y., Keen C. L. Copper, lysyl oxidase, and extracellular matrix protein cross-linking // The American journal of clinical nutrition. – 1998. – Vol. 67. – №. 5. – P. 996S-1002S.
34. Danks D. M. Copper deficiency in humans // Annual review of nutrition. – 1988. – Vol. 8. – №. 1. – P. 235-257.
35. Спасенков А. И., Стрелкова М. А., Спасенкова О. М., Слепян Л. И., Кириллова Н. В., Давыдов В. В. Микроэлементный состав биомассы культуры ткани полисциас (polyscias filicifolia Bailey) // Российский медико-биологический вестник имени академика ИП Павлова. – 2007. – №. 2.
36. RU 2337138 C2, 2006.
37. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. – 944 с.
38. Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных. Восьмое издание. / пер. с англ. Под ред. И.В. Белозерцевой, Д.В. Блинова, М.С. Красильщиковой. – М.: ИРБИС, 2017. – 336 с.
39. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева – М: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. – 832 с.
40. Директива 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 года по охране животных, используемых в научных целях.
41. European convention for the protection of vertebrate animals used for experimental andother scientific, 2005.
42. Guide for the care and use of laboratory animals. National Academy press. –Washington, D.C. 1996.
43. Guideline on the non-clinical development of fixed combinations of medicinal products, London January 2008.
44. Samsel A., Seneff S. Glyphosate, pathways to modern diseases II: Celiac sprue and gluten intolerance // Interdisciplinary toxicology 6.4, 2013: 159-184.
45. Robert J. Genco, Ray C. Williams. Periodontal Disease and Overall Health // A Clinician’s Guide, 2010.