СПОСОБЫ, ОТНОСЯЩИЕСЯ К КОМПОЗИЦИЯМ АКТИВИРОВАННЫХ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК И К ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКОМУ ЛЕЧЕНИЮ ИНДИВИДУУМОВ С ПРОГРЕССИРУЮЩИМ РАКОМ

1. Способ определения иммунотерапевтической активности композиции активированных дендритных клеток, где указанный способ включает стадии:
(i) получения активированных дендритных клеток;
(ii) определения относительных количеств интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), интерлейкина 12 (IL-12) и/или фактора некроза опухоли α (TNFα);
(iii) сравнения определенного количества IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα с пороговым количеством; и
(iv) подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет низкую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα имеют уровень ниже порогового; или подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет высокую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и TNFα имеют уровень выше порогового.
2. Способ повышения иммунотерапевтической активности популяции активированных ДК, где указанный способ включает стадии:
(i) получения популяции активированных дендритных клеток;
(ii) определения относительных количеств IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα;
(iii) сравнения определенного количества IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα с пороговым количеством;
(iv) подтверждения того, что любой один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα имеют уровень ниже порогового; и
(v) добавления достаточного количества агента, который может индуцировать продуцирование одного или любой комбинации и/или всех IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα активированными ДК до тех пор, пока количество IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα не будет превышать пороговое количество, с получением популяции активированных ДК, обладающих повышенной иммунотерапевтической активностью.
3. Способ отбора пациента, отвечающего на введение активированных дендритных клеток, путем определения иммунотерапевтической активности композиции активированных дендритных клеток, взятых у пациента, где указанный способ включает стадии:
(i) получения активированных дендритных клеток;
(ii) определения относительных количеств IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα;
(iii) сравнения определенного количества IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα с пороговым количеством; и
(iv) подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет низкую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα имеют уровень ниже порогового; или подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет высокую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и TNFα имеют уровень выше порогового, и отбора пациентов, у которых наблюдаются уровни выше порогового, как восприимчивых пациентов.
4. Способ отбора пациента, не отвечающего на введение активированных дендритных клеток, путем определения иммунотерапевтической активности композиции активированных дендритных клеток, взятых у пациента, где указанный способ включает стадии:
(i) получения активированных дендритных клеток;
(ii) определения относительных количеств IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα;
(iii) сравнения определенного количества IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα с пороговым количеством; и
(iv) подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет низкую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα имеют уровень ниже порогового; или подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет высокую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и TNFα имеют уровень выше порогового, и отбора пациентов, у которых наблюдаются уровни ниже порогового, как невосприимчивых пациентов.
5. Способ отбора агентов для созревания дендритных клеток в целях продуцирования активированных дендритных клеток с повышенной иммунотерапевтической активностью, где указанный способ включает стадии:
(i) получения активированных дендритных клеток путем контактирования незрелых дендритных клеток с тест-агентом для созревания дендритных клеток;
(ii) определения относительных количеств IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα;
(iii) сравнения определенного количества IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα с пороговым количеством; и
(iv) подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет низкую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и/или TNFα имеют уровень ниже порогового; или подтверждения того, что композиция активированных дендритных клеток имеет высокую иммунотерапевтическую активность, если один или любая комбинация и/или все IL-6, IL-8, IL-12 и TNFα имеют уровень выше порогового, и отбора агента для созревания дендритных клеток, который индуцирует продуцирование активированных дендритных клеток на уровне выше порогового.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где активированные дендритные клетки продуцируют приблизительно от 50 до приблизительно 200 нг IL-6/1 миллион клеток/24 часа; приблизительно от 500 до приблизительно 2000 нг IL-8/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно от 30 до приблизительно 70 нг TNFα/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно от 75 до приблизительно 100 нг субъединицы IL-12 p40/1 миллион клеток/24 часа; и приблизительно от 1 до 3 нг биологически активного IL-12 p70/1 миллион клеток/24 часа.
7. Способ по п. 6, где активированные дендритные клетки продуцируют приблизительно от 75 до приблизительно 150 нг IL-6/1 миллион клеток/24 часа; приблизительно от 750 до приблизительно 1500 нг IL-8/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно 100 нг IL-12 p40/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно от 1 до 3 нг IL-12 p70/1 миллион клеток/24 часа; и по меньшей мере приблизительно от 30 до 70 нг TNFα/1 миллион клеток/24 часа.
8. Способ по п. 7, где активированные дендритные клетки продуцируют приблизительно 100 нг IL-6/1 миллион клеток/24 часа, и 1000 нг IL-8/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно 100 нг IL-12 p40/1 миллион клеток/24 часа; по меньшей мере приблизительно 2 нг IL-12 p70/1 миллион клеток/24 часа; и по меньшей мере приблизительно 30 нг TNFα.
9. Способ по любому из пп. 1-5, где активированные дендритные клетки получают путем проведения следующих стадий:
(i) выделения клеточной популяции, содержащей человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), из периферической крови;
(ii) обогащения клеточной популяции, содержащей человеческие МКПК, человеческими моноцитарными предшественниками дендритных клеток;
(iii) культивирования клеточной популяции, обогащенной человеческими моноцитарными предшественниками дендритных клеток, в среде для культивирования тканей, в которую было добавлено эффективное количество агента для дифференцировки дендритных клеток в течение периода времени, достаточного для дифференцировки человеческих моноцитарных предшественников дендритных клеток в незрелые человеческие дендритные клетки;
(iv) культивирования клеточной популяции, обогащенной незрелыми человеческими дендритными клетками, с эффективным количеством агента для созревания дендритных клеток, в целях активации незрелых человеческих дендритных клеток; и
(v) выделения и промывки активированных человеческих дендритных клеток.
10. Способ по любому из пп. 1-5, где активированные дендритные клетки получают путем проведения следующих стадий:
(i) выделения клеточной популяции, содержащей человеческие моноцитарные предшественники дендритных клеток;
(ii) культивирования клеточной популяции, обогащенной человеческими моноцитарными предшественниками дендритных клеток, в среде для культивирования тканей, в которую было добавлено эффективное количество агента для дифференцировки дендритных клеток в течение периода времени, достаточного для дифференцировки человеческих моноцитарных предшественников дендритных клеток в незрелые человеческие дендритные клетки;
(iii) культивирования клеточной популяции, обогащенной незрелыми человеческими дендритными клетками, с эффективным количеством агента для созревания дендритных клеток, в целях активации незрелых человеческих дендритных клеток; и
(iv) выделения и промывки активированных человеческих дендритных клеток.
11. Способ по п. 10, где моноцитарные предшественники дендритных клеток получают из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфоузлов, крови пупочного канатика или периферической крови.
12. Способ по любому из пп. 9-11, где моноцитарные клетки-предшественники дендритных клеток представляют собой неактивированные моноцитарные предшественники дендритных клеток.
13. Способ по любому из пп. 9-12, где моноцитарные предшественники дендритных клеток получают у отдельного индивидуума, подвергаемого лечению.
14. Способ по любому из пп. 9-12, где моноцитарные предшественники дендритных клеток получают у здорового индивидуума, у которого имеется HLA-совместимость с отдельным индивидуумом, подвергаемым лечению.
15. Способ по любому из пп. 9 и 10, где агентом для дифференцировки дендритных клеток является GM-CSF без какого-либо другого цитокина или GM-CSF в комбинации с IL-4, IL-7, IL-13 или IL-15.
16. Способ по любому из пп. 9 и 10, где агентом для созревания дендритных клеток являются инактивированная бацилла Кальметта-Герена (БКГ), интерферон γ (IFNγ), липополисахарид (ЛПС), фактор некроза опухоли α (TNFα), соединение имидазохинолина, синтетический двухцепочечный полирибонуклеотид, агонист ловушко-подобного рецептора (TLR), последовательность нуклеиновых кислот, содержащих неметилированные мотивы CpG, которые, как известно, индуцируют созревание дендритных клеток, или любые их комбинации.
17. Способ по п. 16, где инактивированная БКГ включает всю БКГ; БКГ, содержащую компоненты клеточных стенок; липоарабидоманнаны, происходящие от БКГ; или компоненты БКГ.
18. Способ по п. 17, где инактивированная БКГ представляет собой термоинактивированную БКГ; БКГ, полученную путем обработки формалином, или БКГ, полученную путем термоинактивации и обработки формалином.
5
7
19. Способ по любому из пп. 16-18, где эффективное количество БКГ составляет приблизительно от 10 до 10 к.о.е. на миллилитр среды для культивирования тканей, а эффективное количество IFNγ составляет приблизительно от 100 до приблизительно 1000 единиц на миллилитр среды для культивирования тканей.
20. Способ по п. 16, где соединением имидазохинолина является соединение имидазохинолин-4-амина.
21. Способ по п. 20, где соединением имидазохинолин-4-амина является 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1H-имидазол[4,5-c]хинолин-1,5-этанол или 1-(2-метилпропил)-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-4-амин или их производное.
22. Способ по п. 16, где синтетический двухцепочечный полинуклеотид представляет собой поли[I]:поли[C(12)U].