АНТИТЕЛА К CXCR4 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

1. Способ отбора анти-СХСР4-антитела или одного из его функциональных фрагментов или производных, способных ингибировать активацию CXCR4, характеризующийся тем, что он включает следующие этапы:
i) скрининг созданных антител и отбор антител, способных специфически связывать CXCR4, а также модулировать СХСР4-активацию;
ii) тестирование выбранных антител этапа i) и отбор антител, способных индуцировать конформационные изменения гомодимеров CXCR4; и затем
iii) тестирование выбранных антител этапа ii) и отбор антител, способных индуцировать конформационные изменения гетеродимеров CXCR4/CXCR2.
2. Способ по п.1, где этап ii) заключается в оценке антител с помощью анализа BRET на клетках, экспрессирующих оба CXCR4-RLuc/CXCR4-YFP, и отборе антител, способных ингибировать по меньшей мере 40% сигнала BRET.
3. Способ по п.1, где этап iii) заключается в оценке антител с помощью анализа BRET на клетках, экспрессирующих оба CXCR4-RLuc/CXCR2-YFP, и отборе антител, способных ингибировать по меньшей мере 40% сигнала BRET.
4. Изолированное антитело или его производное или функциональный фрагмент, которое может быть получено способом по п.1, причем указанное антитело способно ингибировать по меньшей мере 40% сигнала BRET на клетках, экспрессирующих оба CXCR4-RLuc/CXCR4-YFP и(или) CXCR4-RLuc/CXCR4-YFP.
5. Антитело или его производное или функциональный фрагмент, способное ингибировать активацию CXCR4, характеризующееся тем, что указанное антитело или его производное или функциональный фрагмент выбрано из группы, состоящей из:
(а) антитела или его производного или функционального фрагмента, содержащего:
- легкую цепь, содержащую, согласно IMGT, CDR-L1 последовательности SEQ ID №1, CDR-L2 последовательности SEQ ID №2 и CDR-L3 последовательности SEQ ID №3; и
- тяжелую цепь, содержащую, согласно IMGT, CDR-H1 последовательности SEQ ID №7, CDR-H2 последовательности SEQ ID №5 и CDR-H3 последовательности SEQ ID №8:
(б) антитела или его производного или функционального фрагмента, содержащего:
- легкую цепь, содержащую, согласно Kabat, CDR-L1 последовательности SEQ ID №9, CDR-L2 последовательности SEQ ID №10 и CDR-L3 последовательности SEQ ID №3; и
- тяжелую цепь, содержащую, согласно Kabat, CDR-H1 последовательности SEQ ID №11, CDR-H2 последовательности SEQ ID №12 и CDR-H3 последовательности SEQ ID №6:
(в) антитела или его производного или функционального фрагмента, содержащего:
- легкую цепь, содержащую, согласно IMGT, CDR-L1 последовательности SEQ ID №40, CDR-L2 последовательности SEQ ID №2 и CDR-L3 последовательности SEQ ID №41; и
- тяжелую цепь, содержащую, согласно IMGT, CDR-H1 последовательности SEQ ID №44, CDR-H2 последовательности SEQ ID №5 и CDR-H3 последовательности SEQ ID №45; и
(г) антитела или его производного или функционального фрагмента, содержащего:
- легкую цепь, содержащую, согласно Kabat, CDR-L1 последовательности SEQ ID №46, CDR-L2 последовательности SEQ ID №47 и CDR-L3 последовательности SEQ ID №41; и
- тяжелую цепь, содержащую, согласно Kabat, CDR-H1 последовательности SEQ ID №48, CDR-H2 последовательности SEQ ID №49 и CDR-H3 последовательности SEQ ID №43.
6. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по п.5, характеризующееся тем, что указанное антитело или его производное или функциональный фрагмент выбрано из группы, состоящей из
(а) антитела или его производного или функционального фрагмента, содержащего последовательность легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №13, и последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №14; и
(б) антитела или его производного или функционального фрагмента по п.14, содержащего последовательность легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №50, и последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №51.
7. Мышиная гибридома, выбранная из гибридомы, зарегистрированной в CNCM, Институт Пастера, Париж, 22 октября 2007 года под номером 1-3860, или гибридомы, зарегистрированной в CNCM, Институт Пастера, Париж, 25 июня 2008 года под номером 1-4019.
8. Антитело, секретируемое гибридомой по п.7.
9. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по п.4, 5 или п.8, характеризующееся тем, что оно является химерным антителом.
10. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по п.9, характеризующееся тем, что указанное антитело или его производное или функциональный фрагмент выбрано из группы, состоящей из
(а) химерного антитела, содержащего последовательность легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №64, и последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №65; и
(б) химерного антитела или его производного или функционального фрагмента содержащего последовательность легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №66, и последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №67.
11. Изолированная нуклеиновая кислота, характеризующаяся тем, что она выбрана среди следующих нуклеиновых кислот:
- нуклеиновая кислота, ДНК или РНК, кодирующая антитело или его производное или функциональный фрагмент по одному из пп.4, 5 или 8;
нуклеиновая кислота, комплементарная нуклеиновой кислоте, определенной в (а);
- нуклеиновая кислота, состоящая из не менее 18 нуклеотидов, способная к гибридизации в условиях высокой жесткости по меньшей мере с одним из CDR, имеющим нуклеиновокислотные последовательности SEQ ID №№15-26 или SEQ ID №№52-61; и
- нуклеиновая кислота, состоящая из не менее 18 нуклеотидов, способная к гибридизации в условиях высокой жесткости по меньшей мере с легкой цепью нуклеиновокислотной последовательности SEQ ID №27 или SEQ ID №62 или SEQ ID №68 или 70 и(или) тяжелой цепью нуклеиновокислотной последовательности SEQ ID №28 или SEQ ID №63 или SEQ ID №69 или 71.
12. Вектор, составленный из нуклеиновой кислоты по п.11.
13. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.12.
14. Трансгенное животное, за исключением человека, содержащее клетку, трансформированную вектором по п.13.
15. Способ получения антитела или его производного или функционального фрагмента по одному из пп.4, 5 или 8, характеризующийся тем, что он включает следующие этапы:
- культивирование клетки-хозяина по п.13 в среде в соответствующих культуральных условиях; и
- выделение указанного антитела или одного из его функциональных фрагментов, полученных таким образом, из культуральной среды или указанных культивируемых клеток.
16. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по одному из пп.4, 5 или 8 для применения в качестве лекарственного средства.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение, представляющее собой антитело, или его производное или функциональный фрагмент по одному из пп.4, 5 или 8.
18. Фармацевтическая композиция по п.17, характеризующаяся тем, что она в качестве комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения дополнительно содержит противоопухолевое антитело, отличное от антитела, направленного против CXCR4.
19. Фармацевтическая композиция по п.17, характеризующаяся тем, что она в качестве комбинированного или конъюгированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения дополнительно содержит цитотоксический/цитостатический агент, клеточный токсин и(или) радиоизотоп.
20. Фармацевтическая композиция по п.17 для применения в качестве лекарственного средства.
21. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по одному из пп.4, 5 или 8 и/или фармацевтическая композиция по п.17 в качестве лекарственного средства для модуляции активности CXCR4 в клетке.
22. Антитело или его производное или функциональный фрагмент по одному из пп.4, 5 или 8 и/или фармацевтическая композиция по п.17 для профилактики или лечения рака.
23. Антитело или его производное или функциональный фрагмент и/или композиция по п.22, характеризующаяся тем, что указанный рак является раком, выбранным среди рака предстательной железы, остеосаркомы, рака легкого, рака молочной железы, рака эндометрия, множественной миеломы, рака яичников, рака поджелудочной железы и рака толстой кишки.