СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА СУХОЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЗАКВАСКИ "НАРИНЭ-I" В КАПСУЛАХ
METHOD OF PRODUCTION CAPSULATED DRY STARTER MATERIAL "NARINE-1"

Изобретение относится к молочной промышленности, медицине и микробиологии.
Известен способ получения сухой бактериальной закваски, включающий стерилизацию обезжиренного молока, охлаждение до температуры заквашивания, внесение маточной закваски Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402, культивирование, охлаждение, выдержку, замораживание и сушку, см. RU 2120762 С1, 27.10.1998.
7
Известен также способ производства лечебно-профилактического препарата в твердой и мягкой формах, включающий получение сухой микробной массы Lactobacillus acidophilus штамм 317/402 «Наринэ» с титром не менее 10КОЕ на 30 мг капсулы, см. RU 2146526 С1, 20.03.2000.
В качестве наиболее близкого аналога к заявленному способу является способ приготовления сухой бактериальной закваски «Наринэ», включающий стерилизацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 15-17%, охлаждение до температуры 39°С, внесение 1,5-2,0% маточной закваски чистых культур Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402, культивирование при температуре 37°С в течение 8-9 час, выдержку в условиях холодильника при температуре 5-8°С в течение 2-3 час, расфасовку во флаконы, замораживание при температуре минус 40-50°С в течение 20-34 час и высушивание под вакуумом, см. RU 95115835 A1, 20.04.1996.
Недостаток закваски, полученной по известному способу, заключается в том, что она имеет недостаточно хорошую растворимость за счет повышенной влажности.
Технический результат заключается в получении закваски повышенной растворимости, высокой активности с улучшенным качеством и более длительным сроком хранения.
9
11
Технический результат достигается тем, что способ производства сухой бактериальной закваски «Наринэ», включающий стерилизацию обезжиренного молока с содержанием сухих веществ 15-17%, охлаждение до температуры заквашивания, внесение маточной закваски Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402, культивирование, охлаждение, выдержку, замораживание при температуре минус 40-50°С в течение 22-24 час, расфасовку и высушивание готовой закваски под вакуумом, отличается тем, что наряду с маточной закваской Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402, вносят 0,1% сухой закваски Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402, а высушивание готовой закваски осуществляют в течение 20-24 час до влажности 1,7-2,9 мас.% после расфасовки ее в капсулы, при этом содержание живых клеток лактобактерий в готовой закваске до и после расфасовки ее в капсулы составляет (3,5-4,0)·10-(3,5-4,0)· 10.
9
11
За счет внесения 0,1% сухой закваски Lactobacillus acidophilus штамм, 317/402, наряду с маточной закваской Lactobacillus acidophilus штамм, 317/402, повышается титр живых клеток лактобактерий до (3,5-4,0)·10-(3,5-4,0)·10.
Высушивание продукта необходимо проводить до влажности 1,7-2,9 мас.%, т.к. при такой влажности повышается срок годности готовой закваски в капсулах, который составляет 1-2 года.
Сухая закваска с влажностью 1,7-2,9 мас.% позволяет повысить растворимость, а именно растворимость порошка закваски в количестве 0,2 г на 2-2,5 мл воды или молока составляет 1-2 мин.
Также полученная сухая закваска «Наринэ-1» с влажностью 1,7-2,9 мас.% позволяет повысить ее качество, а именно повысить количество живых клеток лактобактерий.
Сухая закваска «Наринэ-1» проявляет активность по отношению к тест-культурам: Е.Coli и Staph. Aureus.
«Наринэ-1» обладает высокой питательной ценностью и выраженными антимикробными свойствами по отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам, способствует всасыванию кальция, железа, витамина D. «Наринэ-1» с богатым свойством белков, минеральных солей, витаминов сохраняет свои полезные свойства в течение 5-7 дней при температуре хранения 5-8°С.
Экспериментальные исследования лиофилизированной формы «Наринэ-1» показали оптимальный температурный режим, при котором выживаемость активных клеток была бы максимальной - замораживание при температуре 40-50°С при 22-24 час, высушивание в течение 20-24 час, растворимость при этом составляет 0,2 г на 2-2,5 мл воды или молока в течение 1-2 минут. В данном режиме в 1 г сухого порошка количество живых клеток составляет 21-24 млрд.
Лиофилизированная форма в капсулах является эффективным средством для восстановления кишечной микрофлоры у больных с различными заболеваниями кишечника, позволяет сократить сроки нормализации биоценоза кишечника, дисбактериоза у лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации в зоне аварии на Чернобыльской АЭС в период ликвидации ее последствий, для больных с различными заболеваниями кишечника, для больных колоректальным раком, воспалительными и функциональными заболеваниями толстой кишки.
Выбор биологических (особенно бактериальных) препаратов для лечения и профилактики гнойно-воспалительных заболеваний имеет важное и решающее значение.
Пример 1.
Обезжиренное молоко с содержанием сухих веществ 16% стерилизуют паром под давлением (15 минут при 1,5атм и температуре 120°С), охлаждают до 39-40°С и вносят маточную закваску Lactobacillus acidophilus штамма 317/402 в количестве 1.5-2% от общей массы молока и 0,1% сухой закваски Lactobacillus acidophilus, штамм 317/402.
10
Заквашенное молоко переносят в термостат с температурой 37°С и сквашивают до получения сгустка кислотностью 110-130° Тернера. Сквашенное молоко выдерживают в холодильнике при температуре +6 - +8°С, замораживают при температуре минус 45°С, расфасовывают в капсулы и высушивают в течение 22 час до влажности 2 мас.%. Содержание живых клеток лактобактерий в готовой закваске до и после расфасовки ее в капсулы составляет (3,5-4,0)·10.
«Наринэ» подвергали сублимационному высушиванию на лиофилизационной установке типа "LZ-45" из замороженного состояния в стерильных условиях. До высушивания замораживали в морозильной установке пристеночным методом в охлажденном до 40-50°С этиловом спирте.
С целью усиления антибиотических свойств «Наринэ-1» подвергали сублимационному высушиванию, а потом растворяли, что увеличивало концентрацию антибиотических веществ и молочной кислоты.
Антибиотическая активность культуры молочнокислых бактерий «Наринэ-1» кислотностью 110-130°Т после лиофилизации. В качестве тест-микроорганизмов были использованы чистые культуры госпитальных штаммов золотистого стафилококка, протейя, кишечной палочки, грибов рода Candida.
Пробирки, содержащие разведения указанных препаратов с культурами микроорганизмов, инкубировали в термостате при 37°С в течение 16 часов, а затем производили секторальный высев стандартной бактериологической петлей на соответствующие питательные среды из расчета размещения на одной чашке 5-и секторов для посева.
Были получены следующие результаты
Полная задержка роста культур тест-микроорганизмов была получена при использовании культуры «Наринэ», подвергнутого сублимации и растворенного изотонического раствора в разведении 1:2. Автоклавирование и сублимационное высушивание не снизили антибиотической активности исследовавшихся средств. Таким образом, антибиотическую активность «Наринэ» повышает.
Сублимационное высушивание «Наринэ», помимо этого, увеличивает сроки хранения для получения продуктов метаболизма молочнокислых бактерий любой концентрации, что может контролироваться кислотностью в градусах Тернера, появляются возможности для точного дозирования в получении препаратов в виде порошка, таблеток и капсул.
Таким образом, предлагаемый способ получения сухой бактериальной закваски в капсулах позволяет получить препарат с высоким качеством, а также более длительным сроком хранения и повышенной растворимостью с влажностью 1.7-2.9 мас.%, повышенной растворимостью 0.2 г порошка на 2-2.5 мл воды или молока в течение 1-2 минут, улучшенным качеством, длительным сроком хранения 1-2 года.
Таблица 1.
Влияние количества сухих веществ в молоке на титр ацидофильных бактерий в жидких заквасках.
Штаммы Ацидофильных бактерий
Количество сухих веществ (в %)
11.2
12
13
14
15
16
17
Титр ацидофильных бактерий
I.acidophilus B-3324
6×10<sup>8</sup>
9×10<sup>8</sup>
1.2×10<sup>9</sup>
2.8×10<sup>9</sup>
3.3×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>9</sup>
I.acidophilus шт.261
6×10<sup>8</sup>
9×10<sup>6</sup>
1.3×10<sup>9</sup>
2.9×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>9</sup>
3.9×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>9</sup>
I.acidophilus шт. 1047
6×l0<sup>8</sup>
9×10<sup>8</sup>
1.3×10<sup>9</sup>
2.9×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>9</sup>
4.0×10<sup>9</sup>
3.8×10<sup>9</sup>
I.acidophilus шт.317/402
6×l0<sup>8</sup>
9×10<sup>8</sup>
1.2×10<sup>9</sup>
2.9×10<sup>9</sup>
3.3×10<sup>9</sup>
4.0×10<sup>9</sup>
3.5×10<sup>11</sup>
Таблица 2.
Влияние температуры замораживания на выживаемость клеток ацидофильных бактерий.
Штаммы ацидофильных Бактерий
Температура замораживания (количество сухих веществ 15%)
-30°
-40°
-50°
-60°
I.acidophilus ИММ B-3324
2.5×10<sup>10</sup>
1.9×10<sup>10</sup>
2.0×10<sup>10</sup>
1.8×10<sup>10</sup>
I.acidophilus шт.261
1.8×10<sup>10</sup>
2.0×10<sup>10</sup>
2.1×10<sup>10</sup>
1.8×10<sup>10</sup>
I.acidophilus шт.317/402
1.6×l0<sup>10</sup>
1.9×10<sup>10</sup>
2.1×l0<sup>10</sup>
1.9×10<sup>10</sup>
Исследование сухого препарата в капсулах с БАЛБ «Наринэ» на микробиологическую чистоту включает количественное и качественное определение жизнеспособности бактерий, а также выявление определенных видов микроорганизмов, присутствие которых недопустимо в сухой микробной массе живых штаммов лактобактерий «Наринэ».
Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте продукции лечебно-профилактического питания и, в частности, к биомассе ацидофильных лактобактерий «Наринэ», определяются соответствующими гигиеническими нормативами по САНЭН (232-560-96) ГОСТ 9225 ТУ 9197-002-42741590-02 ФС - 42-3256-96.
Требования к микробиологической чистоте капсул определяются соответствующими нормативами по ГФ XI вып.2 стр.193 и изменением №1 к разделу “Требования к микробиологической чистоте”. При этом в одном грамме капсул должно содержаться не более 1000 аэробных бактерий, 100 грибов при отсутствии Е.coli, Salmonella и других кишечных бактерий.
БАЛБ «Наринэ-1» в условиях испытания обладает антагонистической активностью. В зоне роста лактобактерий в диаметре не менее 20 мм наблюдается отсутствие роста колонии тест-штаммов Мигеля, золотистого стафилококка, энтеропатогенной кишечной палочки.
Штамм 317/402 обладает высокой стойкостью к антибиотическим, химиотерапевтическим и антисептическим препаратам. Штамм продуцирует значительное количество безвредных антибиотических веществ, подавляющих рост и развитие как грамположительных (Staph. Aureus), так и грамотрицательных (Е.coli) бактерий, в том числе всех без исключения бактерий - возбудителей дизентерии и дизентериеподобных заболеваний. В мазках препарата из капсул с БАЛБ «Наринэ» чистая культура ацидофильных бактерий посторонних бактерий не содержится. БАЛБ «Наринэ» непатогенен и безвреден (тест по ФС - 42-325696).
Метод микроскопирования.
Метод основан на просмотре препаратов, окрашенных метиленовым голубым, микроскопом для ориентировочной характеристики микрофлоры кисломолочных продуктов.
Эти данные соответствуют нормативам ГФ XI вып.2 стр.193 и изменениям №1 от 01.06.96 г. к разделу "Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте готовых лекарственных средств" и гигиеническим нормативам микробиологической чистоты продукции лечебно-профилактического питания.
Одним из основных признаков качества капсул является количество живых клеток в нем, проявление высокой антимикробной активности по отношению к тест-культурам Е.coli и Staph. Aureus.
БАЛБ «Наринэ-1» в капсулах может быть использован как самостоятельный продукт, так и для получения кисломолочного продукта «Наринэ». Предложенный способ вполне осуществлен промышленным способом.
9
11
Капсулирование производится в стерильных условиях без наполнителей. Титр живых клеток до и после капсулирования составляет (3,5-4,0)·10-(3,5-4,0)·11.