СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДАВЛЕНИЯ ПЕРЕНОСА ЛИПИДОВ С ПОМОЩЬЮ ЛИПИДПЕРЕНОСЯЩИХ БЕЛКОВ H-FABP ЧЕРЕЗ ФЕТОПЛАЦЕНТАРНЫЙ БАРЬЕР У БЕРЕМЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНУЮ ИНФЕКЦИЮ
METHOD FOR DETECTING LIPID TRANSFER INHIBITION BY LIPID-TRANSFERRING PROTEINS H-FABP THROUGH FOETOPLACENTAL BARRIER IN PREGNANT WOMEN SUFFERED HERPES VIRUS INFECTION IN THIRD TRIMESTER OF GESTATION

Цель изобретения - разработать способ, позволяющий оценить подавляющее действие герпес-вирусной инфекции на перенос с помощью H-FABP липидов из крови матери через фетоплацентарный барьер, крайне необходимых для плода в период внутриутробного развития.
Транспортные белки участвуют в переносе метаболитов, как по руслу кровеносных сосудов, так и через наружные мембраны клеток и от клеточных органелл друг к другу. Транспортные белки переносят ионы, ферменты, углеводы, а также липиды в виде холестерина и жирных кислот [1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10]. Они способны переносить липиды и обменивать их между мембранами. Наиболее активно они переносят фосфолипиды, в составе которых находятся различные жирные кислоты (Zilversmit D., 1976). Липидпереносящие белки осуществляют перенос путем обмена липидами только одного типа из одной мембраны в другую. И только после этого находящаяся в фосфолипиде жирная кислота может отсоединяться в окружающую среду. Следовательно, липидпереносящие белки являются участниками обновления мембран, перенося липиды от одного липидного состава клеточной мембраны к другой мембране: от наружной мембраны к внутренней [2].
Чрезвычайно важным становится вопрос о переносе липидов через фетоплацентарный барьер для доставки их в кровь развивающегося плода. В вышеотмеченных работах такой вопрос в доступной литературе не ставился. В работах [3, 7, 8, 9, 10] разбираются теоретические концепции о передаче липидов от одной мембраны к другой в пределах одной клетки. В работах Титова В.Н. [5, 6] автор ограничивался изучением переноса липидов в пределах периферической крови, беря за основу участие в этом процессе липопротеидов высокой плотности.
В отличие от вышеупомянутых работ [5, 6, 7, 9], которые можно считать прототипом, в своих исследованиях мы использовали современные методы оценки липидпереносящего процесса белками, выделенными в чистом виде в виде реагента H-FABP, и с помощью ИФА метода определяли его содержание в периферической крови беременных и гомогенате плаценты у здоровых беременных и беременных, перенесших в период гестации обострение в третьем триместре герпес-вирусной инфекции. Своими исследованиями мы доказали, что липидпереносящие белковые комплексы в разной степени проникают через мембрану синцитиотрофобласта ворсинок плаценты в норме и при обострении герпес-вирусной инфекции, поскольку их содержание в гомогенате плаценты снижается у беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию. Подобных исследований с применением реагентов (Н-FABP), непосредственно участвующих в переносе липидов у беременных с герпес-вирусной инфекцией, не проводилось.
Заявленный способ имеет следующие приемы:
1. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН учреждения Российской академии медицинских наук. Обследовано 15 беременных в третьем триместре гестации с обострением герпес-вирусной инфекции с титром антител 1:12800 и 20 беременных, не болевших на протяжении всего периода гестации.
2. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека», с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
3. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat Fax-2100» (USA).
4. Липидпереносящие белки Human H-FABP ELISA Test kit («Био Хим МАК») определялись в периферической крови здоровых беременных и беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции на третьем триместре гестации.
Исследования, проведенные нами, показали, что у здоровых беременных на третьем триместре гестации в периферической крови содержится 23,94±3,1 нг/мл H-FABP, а в гомогенате плаценты - 29,11±2,7 нг/мл. У беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, содержание H-FABP в гомогенате плаценты снизилось до 23,93±2,7 нг/мл. Таким образом, обострение герпес-вирусной инфекции подавляет перенос липидов через фетоплацентарный барьер ворсинок плаценты, поскольку содержание H-FABP в гомогенате плаценты резко сократилось до 23,93±2,7 нг/мл.
Таким образом, при обострении герпес-вирусной инфекции у беременной на третьем триместре гестации подавляется перенос липидов из периферической крови через фетоплацентарный барьер в плаценту, что грозит снижением доставки липидов в кровь плода, необходимых для метаболических процессов в период внутриутробного развития.
Литература
1. Антонов В.К., Александров С.Я. В кн.: Биоорганическая химия. 1977. т.3. С.581-599.
2. Барсуков А.И. Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М., 1979, т.11. С.189-230.
3. Котык А., Яначек К. Мембранный транспорт. М., 1980, 205 с.
4. Никольский Н.Н., Трошин А.С. Транспорт сахаров через клеточные мембраны. Л., 1973, 209 с.
5. Титов В.Н. Состояние липид-транспортной системы в норме и его коррекция при некоторых нарушениях липидного обмена. Автореферат канд. диссертации, 2004.
6. Титов В.Н. С-реактивный белок-вектор переноса жирных кислот к клеткам, которые непосредственно реализуют синдром системного воспалительного процесса // Клиническая лабораторная диагностика, 2008, №5, С.21-36.
7. Edidin М. Lipids on the frontier: a century of cell-membrane bilayers // Nature Reviews-Molecular cell biology, 2003, №4, P.414-418.
8. Lev S. Non-vesicular lipid transport by lipid-transfer proteins and beyond // Nature Reviews-Molecular cell biology, 2010, №11, P.739-750.
9. Toll A. Plasma lipid transfer proteins // Ann. Rev. Biochem, 1995, Vol.64, P.235-257.
10. Zilversmit D., Hughes М. Methods in membrane biology. NY, 1976, Vol.7, P.211-259.