УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОСАЖДЕНИЯ И ЗАЛИВКИ В ЭПОКСИДНУЮ СМОЛУ СВЕРХМАЛЫХ КОЛИЧЕСТВ КЛЕТОК

Полезная модель относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использована для осаждения малых количеств клеток и их заливки в эпоксидную смолу с целью приготовления ультратонких срезов для последующего исследования методами электронной микроскопии.
2
Известен способ и устройство для заливки клеток в эпоксидную смолу (Бирюзова В.И., Боровягин В.Л., Гилев В.П. и др. «Электронно- микроскопические методы исследования» М., 1962, с. 107), состоящее в том, что операции предшествующие заливке биологических клеток в эпоксидную смолу (осаждение, фиксация, окрашивание и обезвоживание) проводятся в отдельных сосудах, после чего клетки для заливки в эпоксидную смолу помещаются в желатиновые капсулы, имеющие дно в форме полусферы. Описанный способ и устройство приводит к большим потерям биологических клеток в процессе их обработки и заливки. Кроме того, поскольку для нарезки ультратонких срезов размер блока смолы с включенными в него клетками должен быть не более 2х2 мм, образующиеся после заливки в желатиновых капсулах блоки необходимо затачивать вручную до подходящего размера. Это приводит к дополнительной потере биологического материала, поскольку клетки распределяются по дну желатиновой капсулы практически равномерно. Другим недостатком является то, что описанная желатиновая капсула одноразовая и разрушается при извлечении из нее эпоксидного блока с клетками.
Известны способ и устройство для заливки клеток в эпоксидную смолу («Techniques for electron microscopy» ed. D.H.Kay, Oxford 1969, р.236), представляющее собой пластмассовый корпус, в дне которого сформировано пирамидальное углубление.
6
Преимущество этого устройства состоит в том, что помещаемый материал сосредотачивается преимущественно в углублении на дне корпуса, упрощается ручная заточка блока до необходимого размера и уменьшаются потери исследуемого материала. Однако, поскольку этапы предшествующие заливке, проводятся в отдельных сосудах потери клеток также весьма велики, и минимальное требуемое для заливки количество клеток составляет примерно 10 и более штук (для эукариотических клеток). Кроме того, пластмассовый корпус также является одноразовым и разрушается при извлечении блока смолы.
Задачей полезной модели является уменьшение потерь клеток при заливке в эпоксидную смолу и упрощение работы со сверхмалым количеством клеток.
Задача решается предлагаемым устройством для осаждения и заливки сверхмалых количеств клеток.
Устройство состоит фторопластового корпуса 1 с коническими стенками, в который ввинчивается цилиндр 2 с углублением, имеющим размеры не более 0 2 мм Х 2 мм глубиной, и дополнительного фторопластового корпуса 3 с цилиндрическими стенками. Устройство показано на чертеже.
Пример использования устройства.
:
Концентрация малого количества эукариотических клеток (на примере гемолимфы блох) для их последующей обработки в фиксаторах, дегидратирующих средствах и заливки в эпоксидную смолу для последующего приготовления ультратонких срезов. Гемолимфа с клетками извлекается из 2-3 насекомых на предметное стекло путем разрыва хитинового покрова насекомого иглами, разводится в два раза физиологическим раствором и помещается в фторопластовый корпус 1 с коническими стенками (предварительно заполненный физиологическим раствором) в который ввинчен цилиндр 2 с углублением. Корпус помещают в центрифугу и осаждают' клетки в течение 40 мин при ускорении 500 G. Клетки, скользя по коническим фторопластовым стенкам, собираются в углублении на дне цилиндра 2 в достаточно плотный осадок-конгломерат. После центрифугирования цилиндр 2×2 осадком отвинчивают и далее помещают в фиксирующий раствор и градиенты спиртов по' стандартной методике для проведения фиксации и обезвоживания- При этом клеточный конгломерат сохраняется в углублении фторопластового цилиндра 2 и имеет достаточную плотность.
После фиксации и дегидратации, цилиндр с содержимым ввинчивают в фторопластовый корпус 3 с цилиндрическими стенками для заливки и заливают эпоксидной смолой Spun". Далее заполимеризированный материал вынимают из корпуса 3. При этом клетки оказываются заключенными в малом выступе блока смолы и могут быть подвергнуты ультратонкой нарезке на ультрамикротоме, без операции ручной заточки блока до необходимого размера.
Таким образом, заявляемое устройство осуществляет сбор, конденсацию исследуемого материала, предварительные этапы их обработки (фиксацию, обезвоживание, окраску), и окончательную заливку в эпоксидную смолу, позволяя тем самым значительно уменьшить потери исследуемого материала, снизив тем самым количество клеток необходимого для приготовления эпоксидных блоков до 100 клеток и повысить удобство работы со сверхмалым количеством.
Предлагаемое устройство позволяет получить блок, пригодный для последующего получения ультратонких срезов на стандартном ультрамикротоме и образующийся с его
2
помощью блок не нуждается в ручной заточке, поскольку имеет размер необходимый и достаточный для получения среза (около 1 мм). При этом все процедуры, начиная со сбора клеток, их фиксации, дегидратации, окрашивания и последующей заливки в эпоксидную смолу производятся в одном устройстве которое может быть использовано многократно. Материал из которого изготовлено устройство (фторопласт) обладает низкой адгезивностью и инертен к большинству химреактивов.
Устройство компактно, отсутствует необходимость специальных условий эксплуатации, что - снижает требования к применению и повышает эффективность работы.