ВЕТЕРИНАРНОЕ ИМПЛАНТИРУЕМОЕ СРЕДСТВО ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ (ВАРИАНТЫ)
VETERINARY IMPLANTED RETARD DRUG FOR IMPROVING PRODUCTIVITY OF FARM ANIMALS (VERSIONS)

Изобретение относится к средствам ветеринарной медицины и может быть использовано в пушном звероводстве и животноводстве для повышения сохранности молодняка и продуктивности животных.
Прогресс ветеринарной фармакологии обеспечивается постоянным поиском и созданием новых высокоэффективных и безопасных препаратов. Установлено, что на метаболизм и иммунную систему животных многие факторы окружающей среды, такие как несбалансированное кормление, стрессы различной этиологии, действуют неблагоприятно. Все это приводит к снижению естественной резистентности и нарушению воспроизводительной способности (уменьшению оплодотворяемости, увеличению эмбрионной смертности) животных и, следовательно, снижению их продуктивности. Например, у свиней, убитых в состоянии стресса и после него, обнаруживают язвы желудка, атрофию лимфоидной ткани, увеличение размеров надпочечников. Мясо таких животных невысокого качества: бледное, водянистое [Смирнов А.П., Пигалев С.А. Естественная резистентность организма зверей в условиях безвыгульного содержания. Минсельхоз СССР. - Саратов. - 1983. - 60]. В связи с этим разработка, исследование и производство фармакологических средств профилактики и лечения болезней, связанных с нарушением обмена веществ, а также средств стимуляции роста и продуктивности животных, является актуальным направлением в ветеринарии.
Известно применение для увеличения прироста живой массы животных синтетических гормональных препаратов, таких как тестостероны, метиландростендиол и др. [Падучева А.Л., Гормональные препараты в животноводстве. - М.: Россельхозиздат, 1979, 231]. Известно также применение синтетического пептида - тимогена в качестве средства для повышения роста и сохранности молодняка [Патент RU 2111756, опубл. 27.05.1998 г.; БИ №15 (II ч), стр.237, 1998 г.]. Известно также применение селенопирана для интенсивности роста и сохранности поголовья поросят путем однократной инъекции подкожно или внутримышечно новорожденным поросятам пролонгированной формы селенопирана в гидрофобном носителе в дозе 14 мг селенопирана на одного поросенка [Патент RU 2157690, 20.10.2000].
К сожалению, применяемые известные фармакологические препараты на разных этапах технологического процесса выращивания животных действует кратковременно. Возникает необходимость применения их по определенным схемам в течение всего периода выращивания животных, что ведет к удорожанию сельскохозяйственной продукции.
Известно применение синтетического мелатонина для регуляции биологического ритма процессов жизнедеятельности животных [Патент AU 78305/81 06.1982]. Известно также применение для этих целей ветеринарных имплантантов, содержащих мелатонин или родственные химические препараты класса индола, полимерный носитель и покрытие для имплантата из физиологически совместимого полимера [Патент USA 4882137 от 21.11.1989]. Указанные имплантаты имеют низкий уровень пролонгации мелатонина (менее 20 суток), многокомпонентный состав, способ их изготовления технологически сложен и многостадиен. Более привлекательными являются ветеринарные препараты, разработанные в России, содержащие мелатонин и полимерную основу, способствующие ускорению созревания волосяного покрова пушных зверей [А.с. 1579489 СССР, МКИ А01К 67/02; RU 2122787 от 12.10.1998 г., МПК 6 А01К 67/02, А61К 31/51 // БИ №9, 1999 г., ]. Но и они не лишены некоторых существенных недостатков, а именно содержат частично биодеструктируемую полимерную основу, что приводит к неполному "высвобождению" мелатонина; кроме этого данные препараты эффективны при обязательном включении в рацион перевариваемого протеина в количестве 6-8 г на 100 ккал корма.
Известно применение для выращивания пушных зверей ветеринарного имплантируемого препарата, содержащего синтетический гормон шишковидной железы - мелатонин на полимерной основе, полученной из этилцианакрилата [RU 2096044, МКИ А61К 47/30 (А61К 47/30, 38:22). // БИ №32, 1997 г.]. Применение указанного препарата в пушном звероводстве позволяет произвести забой зверей на 1,5-2 месяца раньше стандартных сроков забоя и получить пушную продукцию площадью на 10-15% больше стандартной.
Наиболее предпочтительными являются имплантируемые ветеринарные препараты пролонгированного действия, содержащие мелатонин или мелатонин с ксимедоном, биодеструктируемую полимерную основу и технологические добавки или пластификатор [RU 2219910 С2, 27.12.2003 г. - прототип]. Ксимедон (1-(β-оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2-оксипиримидин)- перспективное лекарственное средство, хорошо зарекомендовавшее себя при лечении гнойно-воспалительных послеоперационных осложнений [Патент RU 2019176, МКИ А61К 31/505 // БИ №60 1995; Патент RU 2063752, МКИ А61К 31/505 // БИ №20, 1996; Патент RU 2082402, МКИ А61К 31/505 // БИ №18, 1997]. Приказом Минздрава Российской Федерации от 07.12.93 г. №287 ксимедон разрешен к применению в медицине. В сравнении с такими препаратами, как ретаболил, метандростенолон, левомизол, ксимедон является препаратом, обладающим комбинированным лечебным эффектом, не имеет побочных действий, не вызывает аллергических реакций, не обладает какой-либо гормональной активностью и не влияет на эндокринный гомеостаз. В качестве полимерной основы используют водорастворимые производные целлюлозы, предпочтительно, микрокристаллическую целлюлозу (МКЦ) со степенью полимеризации 150-200 с применением технологических добавок для придания композиции необходимых физико-механических и пролонгирующих свойств или биодеструктируемые полимеры на основе этилцианакрилата (циакрин-ЭО) с применением пластификаторов. Введение вышеописанного препарата норкам, больным вирусным плазмоцитозом, способствует протеканию заболевания в виде вялотекущей субклинической инфекции без активизации аутоиммунной фазы течения болезни. Это обеспечивает сохранность поголовья норок до убойного периода при сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца раньше стандартных сроков и получение пушной продукции площадью на 18-20% больше по сравнению с необработанными зверями. Заявленные препараты позволяют повысить неспецифическую резистентность организма и сохранность поросят в постнатальный период развития, обеспечить прирост живой массы на 20-50%.
Следует отметить, что наилучшие результаты при применении препарата-прототипа получены при использовании в качестве полимерной основы полиэтилцианакрилата, для получения которого необходим дорогостоящий циакрин - ЭО по ТУ 2435-353-00208947-2001 (стоимость 1 кг этого реагента составляет около 14000 рублей), что приводит к удорожанию целевой продукции в несколько раз. Кроме этого применение этилцианакрилата (циакрина-ЭО) для получения полимерной основы обеспечивает получение более технологичной для переработки массы. Однако в данном случае сохранение необходимых физико-химических характеристик образцов препарата обеспечивается лишь при введении в рецептуру препарата ксимедона в количестве не более 9%. Повышение содержания ксимедона в рецептуре проводит к разжижению реакционной массы и невозможности переработки ее в конечную продукцию.
Таким образом, известные имплантируемые препараты-прототипы пролонгированного действия имеют следующие недостатки:
- высокую стоимость препаратов, связанную с использованием в качестве полимерного носителя полимера на основе дорогостоящего этилцианакрилата (циакрина-ЭО), что приводит к повышению себестоимости препаратов;
- невозможность введения в рецептуру препарата активно действующего вещества ксимедон в количестве более 9 мас.%, что снижает эффективность препарата.
Задача изобретения - новые имплантируемые препараты пролонгированного действия для ветеринарии на основе синтетического мелатонина, расширяющие арсенал известных высокоэффективных лекарственных ветеринарных средств, повышающие продуктивность сельскохозяйственных животных при минимальном их потреблении, обладающие низкой себестоимостью и высокой экономической эффективностью.
Технический результат - новые, более дешевые, экономически эффективные имплантируемые ветеринарные средства пролонгированного действия, повышающие продуктивность сельскохозяйственных животных при минимальном их потреблении.
Технический результат достигается применением в качестве полимерной основы перспективного композиционного полимерного носителя - КПН-1 по ФСП 42-0354196501, представляющего собой интерполимерный комплекс полиметакриловой кислоты и полиэтиленгликоля эквимольного состава, или КПН-2 по ТУ 6-02-121-98, представляющего собой интерполимерный комплекс полиметакриловой кислоты и полипропиленгликоля эквимольного состава. Стоимость КПН-1 и КПН-2 в 10-12 раз ниже стоимости циакрина-ЭО. Применение интерполимерных комплексов в рецептурах лекарственных средств на основе мелатонина позволит как минимум в 2 раза снизить себестоимость ветеринарных препаратов.
Используемые интерполимерные комплексы являются продуктами межмолекулярного взаимодействия линейной или редкосшитой полиметакриловой кислоты с полиэтиленгликолем или полипропиленгликолем. Комплексы представляют собой структуры с регулярными последовательностями водородных связей, разделенных дефектами - полимерными звеньями, не вошедшими в реакцию комплексообразования. Эти комплексы не расворимы в кислой среде и распадаются на водорастворимые компоненты в нейтральной среде. Использование интерполимерных комплексов позволяет не только обеспечить пролонгирующий эффект, но и избежать многокомпонентности состава и снизить количество вспомогательных веществ.
Известно, что КПН-1 и КПН-2 используются в качестве носителей, обеспечивающих равномерное выделение активно действующих веществ в желудочно-кишечный тракт, в лекарственных препаратах пролонгированного действия при перроральном введении [Патент RU 2267321 от 25.05.2004; Патент RU 2267322 от 25.05.2004; Патент RU 2267318 от 25.05.2004; Патент RU 2172170 от 07.10.1999]. Применение КПН-1 и КПН-2 в качестве полимерных носителей в лекарственных средствах, имплантируемых под кожу животных, ранее в литературе описано не было.
Заявляются четыре композиции ветеринарного имплантата на основе мелатонина следующего состава (мас.%):
1. Мелатонин
10-50
КПН-1
89,95-35
Технологические добавки
0,05-15
2. Мелатонин
5-25
Ксимедон
5-25
КПН-1
89,95-35
Технологические добавки
0,05-15
3. Мелатонин
10-50
КПН-2
89,95-35
Технологические добавки
0,05-15
4. Мелатонин
5-25
Ксимедон
5-25
КПН-2
89,95-35
Технологические добавки
0,05-15
Отличительной особенностью заявляемых композиций лекарственных препаратов пролонгированного действия является использование в качестве полимерного носителя композиционного полимерного материала КПН-1 или КПН-2.
Введение действующих веществ ниже 5 мас.% не обеспечивает ожидаемого эффекта, выше 50 мас.% (композиции 1, 3) и 25 мас.% (композиции 2, 4) - экономически нецелесообразно.
Содержание полимерной основы ниже 35 мас.% и выше 89,95 мас.% не обеспечивает необходимых пролонгирующих свойств препарата. В качестве технологических добавок используют лактозу или водорасворимые производные целлюлозы, предпочтительно, микрокристаллическую целлюлозу. Введение технологических добавок позволяет улучшить физико-механические характеристики препарата. Являясь порообразователями, эти добавки позволяют регулировать процесс пролонгированного высвобождения активно действующих веществ.
Применение технологических добавок выше 15 мас.% приводит к нарушению прочностных характеристик препарата, ниже 0,05 мас.% не обеспечивает необходимых физико-химических характеристик композиции.
Лекарственной формой предлагаемых композиций являются таблетки цилиндрической формы массой 0,040±0,010 г диаметром 2,0-2,4 мм коричневого цвета (оттенки не нормируются). Приготовление препарата осуществляли аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Применение препарата на основе КПН-1 или КПН-2 в пушном звероводстве способствует сохранности поголовья норок до убойного периода при сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца раньше стандартных сроков и получению пушной продукции площадью на 15-20% больше по сравнению с необработанными зверями при себестоимости в 1,5-2 раза ниже известных.
Эксперимент показал, что имплантация модельных ветеринарных композиций, содержащих в качестве активнодействующего вещества только ксимедон и КПН-1 или КПН-2, норкам не обеспечивает ускоренного созревания волосяного покрова пушных зверей, привес живой массы и увеличение площади шкурок. Созревание меха у опытных зверей и их убой в данном случае происходили в те же сроки, что и у необработанных препаратами норок (табл.2).
18
Для оценки эффективности заявленных ветеринарных препаратов была изучена кинетика выделения ("высвобождения") активно действующих веществ из опытных образцов заявляемых препаратов в среде кровезаменяющего раствора (жидкости ЛИПК) аналогично [Патент RU 2096044, МКИ А61К 47/30 (А61К 47/30, 38:22) // БИ №32 1997 г.]. Исследуемые образцы в количестве 10 мг помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляли 50 мл жидкости ЛИПК с консервантом, закрывали колбу пробкой и помещали в термостат при температуре 37°С. Пробы по 5 мл отбирали на 2, 10, 20, 30, 40, 50, 60 сутки эксперимента. После отбора каждой пробы в мерную колбу добавляли по 5 мл жидкости ЛИПК с консервантом. Содержание действующего вещества в пробах определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе фирмы "Waters" (LC/GPC-244) или любой другой модели, снабженном УФ-спектрофотометрическим детектором (длина волны 254 нм; сорбент - селикагель C зернистостью 5-18 мкм; элюент - ацетонитрил-вода; температура 25°С). Высокую эффективность предлагаемых ветеринарных имплантируемых препаратов подтверждают следующие примеры.
Пример 1. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-1 - 89,95, лактоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 2. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-1 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 3. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-1 - 89,95, лактоза - 0,025, микрокристаллическая целлюлоза - 0,025 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 4. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 50, КПН-1 - 35, лактоза - 7,5, микрокристаллическая целлюлоза - 7,5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 5. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 50, КПН-1 - 35, лактоза - 15 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 6. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, КПН-1 - 69, лактоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 7. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, КПН-1 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 8. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 9, КПН-1 - 89,95, лактоза - 1,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 9. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 9, КПН-1 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 1,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 10. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 60, КПН-1 - 37, микрокристаллическая целлюлоза - 3 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 11. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-2 - 89,95, лактоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 12. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-2 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Пример 13. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 10, КПН-2 - 89,95, лактоза - 0,025, микрокристаллическая целлюлоза - 0,025 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 14. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 50, КПН-2 - 35 лактоза - 7,5, микрокристаллическая целлюлоза - 7,5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 15. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 50, КПН-2 - 35, лактоза - 15 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 16. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, КПН-2 - 69, лактоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 17. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, КПН-2 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 18. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 9, КПН-2 - 89,95, лактоза - 1,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 19. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 9, КПН-2 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 1,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 20. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 60, КПН-2 - 37, микрокристаллическая целлюлоза - 3 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 21. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 5, ксимедон - 5, КПН-1 - 89,95, лактоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 22. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 5, ксимедон - 5, КПН-1 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.]. Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 23. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, ксимедон - 25, КПН-1 - 45, лактоза - 5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 24. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 12,5, ксимедон - 12,5, КПН-1 - 49, лактоза - 0,5, микрокристаллическая целлюлоза - 0,5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 25. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 3, ксимедон - 3, КПН-1 - 89,95, лактоза - 5,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 26. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 30, ксимедон - 30, КПН-1 - 30, лактоза - 10 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 27. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 5, ксимедон - 5, КПН-2 - 89,95, лактоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 28. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 5, ксимедон - 5, КПН-2 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 0,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 29. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 25, ксимедон - 25, КПН-2 - 45, лактоза - 5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 30. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 12,5, ксимедон - 12,5, КПН-2 - 49, лактоза - 0,5, микрокристаллическая целлюлоза - 0,5 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 31. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 3, ксимедон - 3, КПН-2 - 89,95, лактоза - 5,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 32. Композиция состава (мас.%): мелатонин - 3, ксимедон - 3, КПН-2 - 89,95, микрокристаллическая целлюлоза - 5,05 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Кинетические данные высвобождения АДВ в процентах приведены в таблице 1.
Пример 33. Композиция состава (мас.%): ксимедон - 25, КПН-1 - 69, лактоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Пример 34. Композиция состава (мас.%): ксимедон - 25, КПН-2 - 69, лактоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Пример 35. Композиция состава (мас.%): ксимедон - 25, КПН-2 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6 получена аналогично [Патент RU 2267318 от 25.05.2004 г.].
Пример 36. Композиция состава (мас.%): ксимедон - 25, КПН-2 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6 получена аналогично [Патент RU 267318 от 25.05.2004 г.].
Как видно из данных, приведенных в табл.1, биодеструктируемая полимерная основа, содержащая КПН-1 или КПН-2 с технологическими добавками: лактозой или микрокристаллической целлюлозой или их смесью, обеспечивает достаточно равномерное "высвобождение" мелатонина и мелатонина с ксимедоном в заявляемых ветеринарных препаратах, что определяет их 100% "срабатываемость" (примеры 1-7, 11-17, 21-24, 27-30). В модельных образцах (примеры 33-36), не содержащих мелатонин, выделение ксимедона происходило гораздо быстрее, время пролонгации составило 30-40 суток.
Пример 37. Испытания опытных образцов заявляемых ветеринарных препаратов в пушном звероводстве.
С целью изучения влияния разрабатываемых ветеринарных препаратов пролонгированного действия, содержащих синтетический мелатонин и ксимедон, на организм норок проведены производственные испытания опытных образцов на норководческой ферме зверосовхоза "Кощаковский" Пестречинского района Республики Татарстан.
Для испытаний было изготовлено 5 опытных образцов заявляемых ветеринарных средств (табл.2). В опыте было использовано 80 голов норок стандартного окраса 4-месячного возраста, разделенных на опытные и контрольную группы (звери, не обработанные препаратами, табл.2).
Испытуемые препараты были имплантированы по одной дозе (одной грануле) каждому зверю в подкожную клетчатку области между лопатками при помощи инъекционной иглы И-28 по ТУ 64-1-3177-77 с внутренним диаметром иглы 2,6 мм. Место инъекции и иглу стерилизовали 70%-ным спиртом. Молодняк обрабатывали в период с 25 июня по 10 июля. Побочных явлений и осложнений при применении препарата не наблюдалось. В месте имплантации препарата воспалительные процессы в наружных и внутренних слоях кожи и подкожной клетчатки отсутствовали. Изучение динамики изменения живой массы показало, что разница в привесе живой массы зверей опытных и контрольной групп составила от 15 до 20%. Звери опытных групп были убиты 22.09.07 г. - 25.09.07 г.; звери контрольной групп - 09.11.07 г. Пушнина после выделки соответствовала ГОСТ 7906. Результаты испытаний приведены в табл.2.
Таким образом, приведенные результаты демонстрируют высокую эффективность имплантируемых ветеринарных препаратов пролонгированного действия на основе КПН-1 и КПН-2 для повышения сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных.
Пример 38. Для оценки безопасности применения заявляемых препаратов в пушном звероводстве и животноводстве проведены морфологические исследования органов и тканей норок, подвергнутых воздействию опытных образцов препаратов.
Морфологичекие исследования были проведены в соответствии с методиками [Рапопорт Я.Л. Морфологические основы иммуногенеза (иммуноморфология) - Арх. патол., 1957, №2, с.3-19; Фонталин Л.Н. Иммунологическая реактивность лимфоидных органов и сток. - Л.: Медицина, 1967, 210 с.; Фриденштейн А.Я., Чертков И.Л. Клеточные основы иммунитета. - М.: Медицина, 1969, 256 с.; Барта И. Селезенка. Анатомия, физиология, патология и клиника. Будапешт: Издательство Акад. наук Венгрии, 1976, 264 с.; Петров Р.В. Иммунология. - М.: Медицина, 1983, 367 с.; Автандилов Г.Г., Яблучанский Н.И., Губенко В.Г. Системная стереометрия в изучении патологического процесса. - М.: Медицина, 1981, 192 с.; Лойда З. Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. - М.: Мир, 1982, 272 с.].
Морфологическим, гистохимическим и гистохимическим исследованиям подвергали образцы тканей и органов зверей, взятых на исследования в день забоя (конец эксперимента).
3
3
Печень. Гистологические изменения в печени норок, подвергшихся пролонгированному воздействию мелатонина и ксимедона, характеризовались развитостью структурной организации органа. Гепатоциты выделялись неоднородностью по величине и структуре цитоплазмы. Объем ядер гепатоцитов составил 154,37±4,64 мкм, что существенно превышало средние показатели объема ядер гепатоцитов 2-го класса и свидетельствовало об их умеренно выраженной полиплоидизации. О повышении синтетической активности в ядерном аппарате гепацитов свидетельствовали также обогащение их хроматином, присутствие одного, реже нескольких, ядрышек средним объемом 4,10±0,31 мкм и достаточно высокие показатели ядрышко-ядерного отношения - 0,027. Как результат протективного действия синтетического мелатонина в гепатоцитах не обнаруживали проявлений процессов перекисного окисления липидов в виде деструктивных процессов, обуславливающих развитие белковой и липоидной дистрофий. Желчные протоки имели хорошо выраженный просвет. Слизистая оболочка желчных протоков была представлена одним слоем призматических эпителиальных клеток, митотическая активность в ядрах которых не обнаруживалась. Гистохимическими исследованиями в стенках сосудов печени не выявлялись отложения хромотропного вещества, проявляющего метахромазию. В стенках сосудов микроциркуляции органа не отмечены признаки дезорганизации соединительных элементов. В периваскулярной соединительной ткани сосудов портальной системы органа отмечали присутствие единичных лимфоцитов. В умеренно кровенаполненных синусоидальных капиллярах располагались единичные лимфоциты, макрофаги.
Селезенка. Селезенка подопытных норок имела слабовыраженный рисунок фолликулярного строения. Малочисленные фолликулы отличались полиморфизмом с преобладанием компактных форм. Средняя площадь лимфатических узелков составила 106,21±7,32 у.е. Герминативные центры узелков были слабовыраженными и также отличались небольшими размерами. Средняя площадь герминативных центров составила 23,12±3,52 у.е. Клеточные элементы реактивных центров узелков были представлены набухшими ретикулярными клетками, малочисленными бластами, средними лимфоцитами. Митотическая активность в клетках зародышевых центров узелков была слабо выраженной и наблюдалась лишь в виде единичных фигур митоза. Основную массу лимфоидной ткани узелков составляли средние и малые лимфоциты, большая часть из которых сосредотачивалась по периферии, вблизи к мантийной зоне узелков. Ядра этих клеток имели большую оптическую плотность и были обогащены хроматином. Сравнительно узкая мантийная зона лимфатических узелков была представлена резко сдавленными ретикулярными волокнами, ретикулярными клетками, малыми и средними лимфоцитами. Отмечено заметное увеличение присутствия малых лимфоцитов вблизи тимусзависимой периартериальной зоны узелков. Разреженность клеточных элементов в маргинальной зоне узелков явилось следствием интенсивной миграции лимфоцитов в красную пульпу органа. В умеренно кровенаполненной красной пульпе органа преобладали ретикулярные клетки, малые, средние лимфоциты, встречались макрофаги и компактные разреженные скопления плазмобластов. Обнаруживали увеличение содержания мегакариоцитов, среди которых преобладали незрелые клеточные формы, выделявшиеся небольшими размерами и округлостью границ цитоплазмы и слабой сегментацией ядра. Эти изменения свидетельствовали о достаточном уровне фильтрации крови в органе и высокой активности лимфоидно-макрофагального звена клеточного механизма проявления иммунной реактивности организма. Это также подтверждалось высоким уровнем активности кислой фосфатазы в ретикулярных клетках, герминативных центрах узелков и особенно в малых лимфоцитах, располагающихся вблизи периартериальной зоны и вокруг эллипсоидных артериол.
Почки. Почки подопытных норок, подвергшихся воздействию комплексного препарата, имели развитую структуру коркового и мозгового вещества. Увеличенные в объеме клубочки были представлены развитой сетью резко кровенаполненных капилляров с четко очерченной линией базальной мембраны. Ядра подоцитов, эндотелиальных мезангинальных клеток выделялись насыщенностью хроматиновыми гранулами. Отмечено уменьшение содержания клеток юкстагломерулярных и юкставаскулярных клеток. Ядра этих клеток были уменьшенными в объеме и становились интенсивно базофильными, что отражало в целом процесс снижения биосинтеза ренина (вазоактивных веществ) в органе. Компенсаторной реакцией к этим процессам следует считать увеличение объема и количества мезангиальных клеток, свидетельствовавшее о компенсации возникшего дефицита синтеза вазоактивных веществ. Большинство эпительальных клеток извитых канальцев имели интенсивно окрашенную цитоплазму, без проявлений белковых, жировых дистрофий. И не было отмечено, в отличие от контрольных не обработанных препаратами норок, отложений мукополисахаридов в стенках сосудов. Следовательно, характер структурных изменений в почках больных норок свидетельствует о том, что инфекционный процесс приостанавливается или затягивается на стадии первичного инфекционного цикла, без активации аутоиммунной фазы течения болезни.
Желудок. Слизистая оболочка желудка подопытных норок характеризовалась целостностью фовеолярного и ямочного эпителия, клетки которых выделялись цилиндрической формой. Отмеченные изменения в состоянии эпителиальной ткани слизистой оболочки желудка отражали умеренно выраженный процесс регенерации клеток и биосинтез этими клетками протективного фактора. Популяции экзокриноцитов в трубчатых железах выделялись своей дифференцированностью и многочисленностью. В большинстве ядер этих клеток отмечали малое содержание элементов хроматина, что указывало на завершенность клеточной дифференцировки. Элементы стромы слизистой оболочки желудка были представлены малочисленными лимфоидными клетками, гистиоцитами, фибробластами, фиброцитами, малодифференцированными клетками. Сосудистая система органа отличалась развитостью капилляров, артериол, венул и лимфатических сосудов и их умеренным наполнением и отсутствием признаков дезорганизации элементов соединительной ткани в их стенках. Гистохимическими исследованиями установлен высокий уровень активности сукцинат дегидрогеназы в поверхностноэпителиальных клетках, главных и особенно париетальных экзокриноцитах. Следовательно, состояние слизистой оболочки желудка подопытных норок характеризовалось сохранением клеточных элементов эпителиальной и соединительной ткани органа, высоким уровнем синтетической и регенераторной активности и выработки пищеварительных ферментов. Следует отметить отсутствие выявленных нарушений в сосудистой стенке, а также плазмоклеточной инфильтрации элементов стромы органа, часто обнаруживаемых в слизистой оболочке контрольных норок.
Таким образом, обнаруженные структурные изменения в паренхиматозных органах и слизистой оболочке желудка подопытных норок свидетельствуют о значительном снижении и даже отсутствии проявлений метаболических нарушений, возникающих при развитии вирусного плазмоцитоза. Отмечено резкое снижение выраженности плазмоклеточной реакции; отсутствие или слабовыраженное проявление нарушений транскапиллярного обмена, вызываемые дезорганизацией сосудистых стенок и отложение в них иммунных комплексов; отсутствие генерализованного характера клеточных реакций мезенхимальной ткани, ослабление митотической активности в клетках лимфатических узелков селезенки и возрастание миграционной подвижности иммуннокомпетентных клеток, в первую очередь, тимусзависимых лимфоцитов и макрофагов. Отмеченные изменения связаны с положительной ролью исследуемых опытных образцов в регуляции синтетических процессов, происходящих в клетках.
Предлагаемые рецептуры препаратов могут быть рекомендованы в качестве адаптогенных и стимулирующих средств, повышающих неспецифическую резистентность организма животных в постнатальный период развития.
В целом, в результате сравнительных гистологических исследований органов и тканей подопытных норок, подвергнутых имплантации заявляемыми препаратами, со здоровыми контрольными зверями структурных изменений в органах животных отмечено не было.
Таким образом, по сравнению с известными ветеринарными средствами на основе мелатонина, мелатонина и ксимедона предлагаемые ветеринарные препараты обладают существенными преимуществами:
1. Стоимость заявляемых лекарственных средств существенно (в 1.5-2 раза) ниже стоимости прототипов.
2. Применение ветеринарных средств, содержащих мелатонин, на основе КПН-1 или КПН-2 в пушном звероводстве по ускоренной технологии выращивании норок способствует сохранности поголовья норок до убойного периода при сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца и получению пушной продукции площадью на 15-20% большей по сравнению с необработанными зверями.
Промышленная применимость. Заявляемые ветеринарные препараты могут найти применение в пушном звероводстве, животноводстве, ветеринарной медицине. Выпуск первых опытно-промышленных партий запланирован на IV кв. 2010 г. - I кв. 2011 г. OOO научно-производственным предприятием "Ветта-Сервис".
Таблица 1.
Результаты изучения кинетики высвобождения мелатонина в опытных образцах с мелатонином и ксимедоном.
№ Примера
Состав образца, мас.%
Скорость высвобождения, %
Время испытания, сутки
10
20
30
40
50
60
1
мелатонин - 10; КПН-1 - 89,95; лактоза - 0,05
13,1
32,5
48,8
69,8
89,5
100
2
мелатонин - 10; КПН-1 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 0,05
11,3
26,4
43,7
67,4
86,9
100
3
мелатонин - 10; КПН-1 - 89,95; лактоза - 0,025; микрокристаллическая целлюлоза - 0,025
11,5
26,6
43,8
67,8
87,0
100
4
мелатонин - 50; КПН-1 - 35; лактоза - 7,5, микрокристаллическая целлюлоза - 7,5
12,4
27,6
44,2
71,4
88,2
100
5
мелатонин - 50; КПН-1 - 35; лактоза - 15
12,5
28,0
44,4
71,8
88,5
100
6
мелатонин - 25; КПН-1 - 69, лактоза - 6
13,
31,7
52,1
70,8
93,2
100
7
мелатонин - 25; КПН-1 -69, микрокристаллическая целлюлоза - 6
14,3
37,2
50,2
88,4
94,2
100
8
мелатонин - 9; КПН-1 - 89,95; лактоза - 1,05
12,9
28,2
69,8
88,7
100
9
мелатонин - 9; КПН-1 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 1,05
12,3
28,1
66,7
91,5
100
10
мелатонин - 60; КПН-1 - 37, микрокристаллическая целлюлоза - 3
14,6
41,9
62,0
78,6
86,5
95,8
11
мелатонин - 10; КПН-2 - 89,95; лактоза - 0,05
13,0
27,8
47,2
70,4
88,1
100
12
мелатонин - 10; КПН-2 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 0,05
12,3
27,8
41,6
71,2
90,6
100
13
мелатонин - 10; КПН-2 - 89,95; лактоза - 0,025; микрокристаллическая целлюлоза - 0,025
12,1
24,3
43,2
69,8
89,1
100
14
мелатонин - 50; КПН-2 - 35; лактоза - 7,5, микрокристаллическая целлюлоза - 7,5
12,1
24,9
44,2
68,9
88,5
100
15
мелатонин - 50; КПН-2 - 35; лактоза - 15
12,9
23,8
43,6
68,7
87,8
100
16
мелатонин - 25; КПН-2 - 69, лактоза - 6
13,2
27,8
47,2
74,4
88,7
100
17
мелатонин - 25; КПН-2 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6
13,8
27,1
462
70,4
88,1
100
18
мелатонин - 9; КПН-2 - 89,95; лактоза - 1,05
12,7
27,8
69,8
95,5
100
19
мелатонин - 9; КПН-2 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 1,05
12,4
28,3
66,6
97,6
100
20
мелатонин 60; КПН-2 - 37, микрокристаллическая целлюлоза - 3
15,6
49,9
62,0
78,6
84,1
92,6
21
мелатонин - 5; ксимедон - 5, КПН-1 - 89,95; лактоза - 0,05
12,1
32,9
46,8
69,3
88,5
100
22
мелатонин - 5; ксимедон - 5, КПН-1 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 0,05
13,1
32,5
46,7
69,8
89,5
100
23
мелатонин - 25; ксимедон - 25, КПН-1 - 45; лактоза - 5
12,5
28,0
44,4
71,8
88,5
100
24
мелатонин - 12,5, ксимедон - 12,5, КПН-1 - 49; лактоза - 0,5
12,9
29,6
46,4
73,8
92,5
100
25
мелатонин - 3; ксимедон - 3, КПН-1 - 89,95; лактоза - 5,05
12,4
28,1
66,6
92,6
100
26
мелатонин - 30; ксимедон - 30, КПН-1 - 30; лактоза - 10
17,4
42,9
66,3
86,6
91,2
97,5
27
мелатонин - 5; ксимедон - 5, КПН-2 - 89,95; лактоза - 0,05
13,1
32,3
44,7
69,1
88,5
100
28
мелатонин - 5; ксимедон - 5, КПН-2 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 0,05
12,5
34,5
49,7
66,8
97,5
100
29
мелатонин - 25; ксимедон - 25, КПН-2 - 45; лактоза - 5
13,7
32,5
46,7
65,8
94,5
100
30
мелатонин - 12,5; ксимедон - 12,5, КПН-2 - 49; лактоза - 0,5
13,1
32,4
46,1
69,8
86,7
100
31
мелатонин - 3; ксимедон - 3, КПН-2 - 89,95; лактоза - 5,05
12,1
25,1
60,6
88,6
100
32
мелатонин - 3; ксимедон - 3, КПН-2 - 89,95; микрокристаллическая целлюлоза - 5,05
11,9
28,1
69,6
98,6
100
33
ксимедон - 25, КПН-1 - 69, лактоза - 6
31,6
78,8
96,8
100
34
ксимедон - 25, КПН-2 - 69, лактоза - 6
32,4
76,4
92,8
100
35
ксимедон - 25, КПН-1 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6
42,6
82,4
100
36
ксимедон - 25, КПН-2 - 69, микрокристаллическая целлюлоза - 6
39,6
78,8
100
Таблица 2.
Результаты испытаний опытных образцов ветеринарных препаратов на основе КПН-1 и КПН-2, содержащих мелатонин и ксимедон, на молодняке норки.
№ п/п
Испытуемый опытный образец, состав, мас.%
Количествозверей
Срокизабоя
Срабатываемость образцов, %
Разница в привесе живой массы опытных и контрольных зверей, %
Качество шкурок по ГОСТ 7906
1
Мелатонин - 25, КПН-1 - 74, лактоза - 1
15
25.09
100
15
стандарт
2
Мелатонин - 25, КПН-2 - 74 микрокристаллическая целлюлоза - 1
15
25.09
100
18
стандарт
3
Мелатонин - 12,5, ксимедон - 12,5, КПН-1 - 49, лактоза - 1
15
19.09
100
20
стандарт
4
Мелатонин - 12,5, ксимедон-12,5, КПН-2 - 49, микрокристаллическая целлюлоза - 1
15
19.09
100
20
стандарт
5
Ксимедон - 25, КПН-1 - 74, лактоза - 1
5
14.11
стандарт
6
контрольная группа зверей, не обработанных препаратом
20
14.11
стандарт