Действие антигенов in vitro и in vivo на эффективность клонирования стромальных клеток-предшественников и экспрессию генов цитокинов в первичных культурах костного мозга и селезенки мышей

ЦИТОКИНЫ

ЦИТОКИНЫ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 612.014.3.017.1.08

Ю.Ф. Горская, Т.А. Данилова, Е.Н. Семенова, М.В. Мезенцева, И.М. Шаповал,

В.Г Нестеренко

действие антигенов in vitro и in vivo на эффективность клонирования стромальных клеток-предшественников и экспрессию генов цитокинов в первичных культурах костного мозга и селезенки мышей

Лаборатории регуляции иммунитета, микробиологии латентных инфекций, лаборатория интерфероногенеза НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. гамалеи Минздравсоцразвития России

Присутствие препарата микробных клеток (HCL-экстракт стрептококка группы А) в первичных культурах костного мозга и селезенки мышей линии СВА приводило к синтезу мРНК цитокинов, способствующих развитию иммунного ответа интерлейкина (ИЛ)-2, ИЛ-6 и ИЛ-8; в культурах селезенки появлялась мРНКИЛ-1Р и ИЛ-6 и исчезала мРНК ИЛ-4. Введение мышам комплекса антигенов S. typhimurium вызывало 5-кратное увеличение эффективности клонирования (ЭКО-Ф) и соответственно содержания стромальных клеток-предшественников (КОК-Ф) в костном мозге бедра мышей и 9-кратное - в селезенке этих животных, максимум которого фиксировали на 1-е сутки. Одновременно в культурах костного мозга и селезенки, взятых от иммунизированных животных, в отличие от таковых у интактных уже через сутки после иммунизации выявлялась экспрессия генов провоспалительных цитокинов ИЛ-ip, ИЛ-6, ИЛ-8 и фактора некроза опухоли (ФНОа). Экспрессия генов цитокинов сохранялась в культурах костного мозга, взятого на 1-3-и сутки после иммунизации, а в культурах селезенки - до 15 сут. У мышей линии СВА в ответ на введение поливинилпирролидона (ПВП), вызывающего слабый иммунный ответ, наблюдали гораздо меньшее увеличение количества КОК-Ф в костном мозге и селезенке (соответственно в 1,9 и 1,8 раза). Только на 1-е сутки отметилиь появление экспрессии генов ИЛ-6, ИЛ-8 и ФНОа в первичных культурах. У мышей линии СВА/N, не отвечающих на ПВП, не обнаружили ни увеличения количества КОК-Ф в указанных органах, ни экспрессии генов провоспалительных цитокинов в первичных культурах.

Полученные данные свидетельствуют о тесных взаимоотношениях между стромальной тканью и иммунной системой.

К л ю ч е в ы е с л о в а : стромальные клетки, иммунный ответ, мРНК цитокинов

U.F. Gorskaya, T.A. Danilova, E. N. Semjonova, M.V.Mezentseva, I.M.Shapoval,V.G. Nesterenko

EFFECT OF ANTIGENS ON COLONY FORMING EFFICIENCY OF STROMAL CLONOGENIC CELLS AND

EXPRESSION OF CYTOKINE GENES IN PRIMARY CULTURES OF BONE MARROW AND SPLEEN OF MICE

Presence of microbial cells preparation (HCL - extract of group A streptococcus) in primary cell cultures of bone marrow (BMCC) and spleen (SCC) of CBA mice induced the expression mRNA of proinflammatory cytokines genes: IL-2, IL-6 and IL-8 in BMCC; in SCC cultures mRNA IL-1 p and IL-6 appeared and mRNA IL-4 disappeared. Injection of S. typhimurium antigen complex to mice CBA increased 5 times colony forming efficiency (CFE) and, respectively, content of stromal precursor cells (CFU-F) in femur bone marrow and 9 times in spleen of these animals with maximum at the first day. In both primary BMCC and SCC from immunized animals expression of proinflammatory cytokines genes IL-1 p, IL-6, IL-8 and TNFa was revealed - in BMCC on 1-3 day after immunization, and in SCC - up to 15 days. In CBA mice injected with polyvinylpyrrolidone (PVP) CFE and number of CFU-F in BMCC and SCC increased 1,9 and 1,8 times only and expression of genes IL-6, IL-8 and TNF-а was observed only on the first day. In СВА/N xid mice there was neither increase CFU-F in the corresponding organs, nor expression of proinflammatory cytokines genes in primary cultures. Degree of activation of stromal tissue in immunized mice, apparently, correlates with the degree of immune response, supposing a close relationship between stromal tissue and immune system.

K e y w o r d s : stromal cells-immunity, immune response, cytokine mRNA

Введение. Стромальные клетки выполняют в организме целый ряд важнейших функций: отвечают за микроокружение кроветворных и лимфоидных клеток, участвуют в репарации тканей и создании межклеточного матрикса. Показано, что стромальные клетки подавляют иммунный ответ лимфоцитов на трансплантационные антигены и митогены

Горская Юлия Федоровна (Gorskaya Yuliya Fedorovna), e-mail: Uliya.Gorskaya@nearmedic.ru

in vitro и in vivo [13]. В то же время оказалось, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК) экспрессируют Toll-like рецепторы (ТЛР) 1, ТЛР-2, ТЛР-3, ТЛР-4, ТЛР-5, ТЛР-6 и ТЛР-9, отвечают на ТЛР-лиганды и действуют как антиген-презентирующие клетки при стимуляции интерфероном-у (ИФН-у) [12]. Показано, что in vitro в МСК человека экспрессируются гены цитокинов и ростовых факторов, включая интерлейкин (ИЛ)-6, ИЛ-8, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-14, ИЛ-15, LIF, G-CSF, GM-CSF, M-CSF, FL, SCF [9]. Поскольку стромальные клетки кроветворных и лимфоидных органов обеспечи-

- 101 -

ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013

вают специфическое микроокружение для пролиферации и дифференцировки гемопоэтических и лимфоидных клеток, следует, по-видимому, ожидать, что эти клетки могут принимать участие и в развитии иммунного ответа.

Целью данного исследования стало изучение характеристик стромальной ткани в присутствии антигенов in vitro и при иммунизации животных in vivo. Изучали профиль мРНК цитокинов в первичных культурах стромальных клеток костного мозга и селезенки мышей линии СВА в присутствии HCL-экстракта стрептококка группы А in vitro.

Определяли также изменение эффективности клонирования (ЭКО-Ф) стромальных клеток-предшественников (колоний-клонов стромальных фибробластов - КОК-Ф) (по новой терминологии - МСК и профиль мРНК цитокинов в первичных культурах костного мозга и селезенки у мышей линии СВА и СВА/N, иммунизированных комплексом антигенов S. typhimurium или поливинилпирролидоном (ПВП).

Материалы и методы. В работе использовались мыши-самцы массой 18-20 г линии СВА (получены из Центрального питомника лабораторных животных "Крюково") и линии СВА/N (получены из Института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова). Комплекс антигенов S. typhimurium (НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи) (400 мкг на 1 мышь) или ПВП ("Sigma", США) ( 3 мкг на 1 мышь) вводили однократно внутрибрюшинно в 0,4 мл физиологического раствора. Ранее показано, что указанные дозы являются оптимальными для обеспечения иммунного ответа на данные антигены. Клеточные взвеси костного мозга и селезенки интактных и иммунных доноров готовили так, как описано ранее [5]. О количестве стромальных клеток-предшественников в эксплантируемых взвесях судили по количеству колоний-клонов стромальных фибробластов, которые эти клетки образуют in vitro. Для определения ЭКО-Ф клетки костного мозга или селезенки интактных мышей и мышей через 1, 3, 6 и 15 дней после иммунизации эксплантировали во флаконы с площадью дна 25 см2 по 1-3 • 106 (для костного мозга) и по 5 •106-1 • 107 (для селезенки). Для культивирования клеток использовали среду а-МЕМ ("Sigma", США) c 15% эмбриональной телячьей сыворотки ("ПанЭко", Россия). Культуры выращивали в инкубаторе с 5% СО2 при 37оС. На 10-12-й день эти культуры состояли из дискретных колоний стромальных фибробластов с примесью макрофагов. Культуры фиксировали этанолом, окрашивали азур-эозином и подсчитывали колонии, содержащие не менее 50 фибробластов. По количеству выросших колоний определяли ЭКО-Ф, т. е. количество колоний, образующееся при эксплантации 106 клеток. Для определения экспрессии генов цитокинов клетки костного мозга (по 5 • 106 -1 • 107) или селезенки (по 1,5-2 • 107) интактных и иммунизированных мышей эксплантировали в такие же флаконы. Через 8-10 дней эти культуры состояли из слоя фибробластов (образовавшегося вследствие сливного роста колоний КОК-Ф); в культурах присутствовали также макрофаги и некоторое количество гемопоэтических и лимфоидных клеток. HCL-экстракт стрептококка группы А (НИИЭМ им Н.Ф. Гамалеи) добавляли в культуральную среду на 9-10-е сутки культиви-

рования клеток интактных мышей в концентрации 25 мкг/мл на 24 ч. По истечении указанного срока культуральную среду сливали и в клетках культур изучали экспрессию мРНК ряда цитокинов. Активность мРНК цитокинов в клетках культур определяли с использованием методов обратной транскрипции (ОТ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Выделение РНК проводили по методике P.Chomczynsky, N.Sacchi [4] методом кислой гуанидин-тиоцианат-фенол-хлороформ экстракции. ОТ и ПЦР-амплификацию выполняли в соответствии с методикой, предложенной C. Gelder и соавт. [7]. В работе использовали пары праймеров для следующих цитокинов: ИФН-a [7], ИЛ-6, ИЛ-8 [10], ИЛ-Ш, IL-2, ИЛ-4, ИЛ-10 факторы некроза опухоли а (фНОа), ИФН-у [15], ИЛ-18 [6], ИЛ-12 [14]. Положительным контролем служил р-актин [10]. Регистрацию результатов ПЦР осуществляли электро-форетически в 2,5% агарозном геле, окрашенном бромистым этидием. Для идентификации нуклеотидных последовательностей использовали маркер для электрофореза фирмы "Promega" (G 1758). О наличии (в табл. 1, 3 знак "+") или отсутствии (в табл. 1, 3 знак "-") активности мРНК судили по результатам не менее трех независимых опытов.

Результаты и обсуждение. В культурах клеток костного мозга мышей линии СВА присутствие HCL-экстракта стрептококка группы А способствовало экспрессии гена IL-2, а также вызывало экспрессию генов ИЛ-6 и ИЛ-8. В культурах селезенки появлялась мРНК ИЛ-1Р и ИЛ-6; при этом в культурах и костного мозга, и селезенки исчезала мРНК ИЛ-4 (см. табл. 1). В нашей предыдущей работе [1] показано, что присутствие препаратов микробных клеток в культуральной среде в течение 24 ч вызывало в пассажных стромальных фибробластах костного мозга человека подавление экспрессии генов провоспалительных цитокинов ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-8 и IL-2, а также стимуляцию экспрессии генов противовоспалительного цитокина ИЛ-4, что согласуется с данными об иммуносупрессорном действии стромальных клеток на лимфоидные. Культуры стромальных пассажных фибробластов костного мозга человека состояли из стромальных фибробластов, клеток других категорий в них не обнаружено. [3]. Напротив, в первичных культурах клеток костного мозга и селезенки (в которых, кроме подслоя фибробластов, образовавшегося вследствие сливного роста колоний стромальных клеток-предшественников, имелись также макрофаги и некоторое количество гемопоэтических и лимфоидных клеток) присутствие HCL-экстракта стрептококка группы А, как видно из табл. 1, вызывало экспрессию генов провоспалительных цитокинов.

Данные, полученные в краткосрочных культурах in vitro о том, что активация ТЛР-4 в МСК человека приводит к синтезу этими клетками провоспалительных цитокинов, а активация ТЛР-3 - противовоспалительных [14 ]. Имеются также полученные in vitro данные, что активация ТЛР 3 и 4 в МСК способна блокировать супрессию Т-клеточного иммунного ответа [10]. Наши результаты вряд ли могут объясняться тем, что в отличие от пассажных фибробластов костного мозга человека в клетках первичных культур костного мозга

Таблица 1

Влияние препаратов микробных клеток стрептококка группы А на синтез мРНК цитокинов в клетках первичных культур костного мозга и селезенки мышей линии свА

Препарат ИФН-а ИФН-у ИЛ-1р IL-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-8 ИЛ-10 ИЛ-12 ИЛ-18 ФНОа

Контроль - костный мозг + - - +/- + - - - - + +

Костный мозг + НС1-экстракт стрептококка группы А in vitro + - - +т -i +Т +Т - - + +

Контроль - селезенка + - - + + - + - - + +

Селезенка + НС1-экстракт стрептококка группы А in vitro + - +Т + -i +Т -i - - + +

П р и м е ч а н и е . ( - появление мРНК; i - исчезновение мРНК.

- 102 -

ЦИТОКИНЫ

Т аблица 2

ЭКО-Ф в культурах клеток костного мозга и селезенки мышей, иммунизированных антигенами S. typhimurium или пвп

Линия мышей Орган Антиген Срок после иммунизации, сут Количество ядерных клеток на орган, • 107 ЭКО-Ф, •105 Количество КОК-Ф на орган

СВА Костный мозг - Контроль (интактные) 1,1±0,2 1,4±0,2 161±22

S typhimurium 1 1,2±0,2 7,5±1.2 900±128

3 1,1±0,2 6,5±0,7 715±73

8 1,1±0,1 3,0±0,3 330±65

ПВП 1 1,0±0,2 3,0±0,4 300±60

3 1,0±0,2 1,4±0,1 140±28

Селезенка - Контроль (интактные) 14,5±2,1 0,10±0,02 140±16

S typhimurium 1 16,6±0,4 0,73±0,1 1207±137

6 16,9±1,2 0,07±0,01 102±6

15 18,0±2,0 0,06±0,02 102±18

ПВП 1 12,4±0,3 0,21±0,03 260±63

3 11,9±1,0 0,17±0,02 205±35

СВА/N Костный - Контроль 0,8±0,2 5,5±0,2 440±110

мозг

ПВП 1 0,8±0,2 7,1±0,4 568±132

3 1,0±0,2 5,5±0,1 550±110

Селезенка - Контроль (интактные) 8,8±1,0 0,08±0,02 69±7

ПВП 1 8,0±0,4 0,08±0,01 65±2

3 9,0±1,2 0,08±0,01 72±8

и селезенки мышей под влиянием препаратов бактериальных клеток происходит активация разных ТЛР, поскольку мы использовали одни и те же препараты микробных клеток. Кроме того, как показали наши данные, присутствие лиганда ТЛР-4 липополисахарида в культурах МСК костного мозга человека в течение 24 ч вызывало в этих клетках подавление экспрессии генов провоспалительных цитокинов [5]. Из этого следует, что экспрессия генов цитокинов, способствующих развитию иммунного ответа, в первичных культурах костного мозга и селезенки скорее может являться следствием клеточных взаимодействий стромальных и иммунокомпетентных клеток, присутствующих в культурах.

Введение мышам линии СВА комплекса антигенов S. typhimurium вызывало существенное (5,5-кратное) повышение ЭКО-Ф и соответственно содержания КОК-Ф в костном мозге бедра мышей, максимум которого наблюдали на 1-3-е сутки после иммунизации (табл. 2).

Одновременно в культурах костного мозга, взятого от иммунизированных животных, в отличие от таковых у интактных (табл. 3), отметили появление экспрессии генов провоспалительных цитокинов: ИЛ-ф (через 1 сут после иммуни-

Таблица 3

влияние иммунизации антигенами S. typhimurium или пвп на синтез мрнК цитокинов в первичных культурах костного мозга и селезенки мышей

Линия мы- шей Орган Антиген Срок после иммунизации, сут ИФН-а ИФН-у ИЛ-1Р ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-8 ИЛ-10 ИЛ-12 ИЛ-18 ФНОа

СВА Костный Контроль + + + + + +

мозг

S. typhimurium 1 + - i +Т + - +Т +т + + + +т

3 + +Т -i + - + -i + + - i +

6 - i + - + +Т -i - + + +Т +

ПВП 1 + + - + +/- +Т +т + + + -/+t

3 + + +/- + -i - - -i + + -

Селезен- - Контроль - + - + + - + + + - -

ка

S. typhimurium 1 - + +Т + + +т + -i -i - -

6 +т + +т + -i +т + -i + +т +т

15 +т + +т + + - + + + +т +т

ПВП 1 + + + + - i +т + + + - -

СВА/N Костный - Контроль - + - + + - - + + + -

мозг

ПВП 1 - + - + + - - + + + -

3 - + - + + - - + + + -

Селезен- - Контроль - + + + + - - + + + -

ка

ПВП 1 - + + + - i - - + + + -

- 103 -

ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013

зации), ИЛ-6 (на 1-3-и сутки) и ФНОа (на 1, 3, 6-е сутки), а также ИФН-а (на 1-3-и сутки). Экспрессия гена противовоспалительного цитокина ИЛ-4 имела место на 6-е сутки после иммунизации (см. табл. 3).

Содержание КОК-Ф в селезенке иммунизированных мышей линии СВА уже через сутки повышалось в 9 раз, снижаясь до нормальных значений к 6-м суткам после иммунизации (см. табл. 2). Одновременно в культурах селезенки этих мышей отметили стимуляцию синтеза мРНК провоспалительных цитокинов: ИЛ-1р, ИЛ-6 (1-е и 6-е сутки), ИЛ-18, ФНОа , ИФН-а (6-е сутки). Синтез мРНК ИЛ-4 был подавлен на 6-е сутки после иммунизации, а в остальном имел место в культурах как иммунной, так и интактной селезенки. Синтез мРНК ИЛ-10 был подавлен (на 1-е и 6-е сутки); мРНК ИЛ-6 исчезала на 15-е сутки после иммунизации животных (см. табл. 3).

Таким образом, никаких признаков подавления иммунного ответа со стороны стромальных клеток, которые являются преобладающей клеточной категорией в такой системе, в данной работе не зафиксировали. Полученные данные указывают на возможность позитивного участия стромальных клеток в развитии иммунного ответа в организме. Следует отметить, что экспрессия определенного набора генов провоспалительных цитокинов тестировалась в культурах клеток возрастом 10-12 дней. Спектр мРНК при этом существенно менялся в зависимости от срока после иммунизации животных уже через 1, 3 и 6 сут (см. табл. 3). Таким образом, создается впечатление, что стромальные клетки оказываются "запрограммированными" на экспрессию генов определенного спектра цитокинов и снятие или изменение этой "программы" не реализуются в культурах in vitro, а только в организме. Этот факт также скорее свидетельствует в пользу предположения о том, что как численность стромальных клеток соответствующих органов, так и синтез цитокинов в первичных культурах находятся под контролем активированных антигенами иммунокомпетентных клеток (макрофаги, лимфоциты).

Введение мышам линии СВА ПВП повышало ЭКО-Ф и соответственно содержание КОК-Ф в костном мозге бедра и селезенке мышей примерно в 2 раза на 1-е сутки после иммунизации (см. табл. 2). В культурах клеток костного мозга, взятого от иммунизированных животных, в отличие от таковых у интактных появлялась экспрессия генов провоспалительных цитокинов: ИЛ-6, ИЛ-8 и ФНОа (на 1-е сутки), а также ИЛ-1Р (на 3-и сутки), и подавлялась экспрессия гена ИЛ-4 (на 1-3-и сутки) и ИЛ-10 (на 3-и сутки). В культурах клеток селезенки, взятой от иммунных животных, уже через сутки появлялась экспрессия генов ИЛ-6 и подавлялась экспрессия гена ИЛ-4 (см. табл. 3).

Относительно небольшое увеличение численности КОК-Ф в костном мозге и особенно в селезенке, а также более узкий спектр и ускоренная динамика исчезновения экспрессии генов про- и противовоспалительных цитокинов в культурах стромальных клеток мышей линии СВА, иммунизированных ПВП, по сравнению с влиянием иммунизации антигенами S. typhimurium отражают, по-видимому, пониженную степень активации стромальной ткани при сравнительно слабом иммунном ответе на ПВП. Действительно показано, что количество специфических АОК в ответ на ПВП у мышей линии СВА увеличивается всего в 2 раза [2]. Это предположение нашло подтверждение в опытах, проведенных на мышах линии CBA/N, не отвечающих на ПВП вследствие отсутствия CD5+B-1a-клеток в результате xid-мутации в гене бруттон тирозинкиназы (Btk). У этих мышей после введения ПВП не наблюдалось ни увеличения численности КОК-Ф в указанных органах, ни экспрессии генов провоспалительных цитокинов в первичных культурах (см. табл. 3).

Полученные данные свидетельствуют о том, что степень активации стромальной ткани у иммунизированных мышей коррелирует со степенью выраженности иммунного ответа на соответствующие антигены.

Существуют данные, указывающие на то, что стромальная ткань у xid-мышей не нарушена. Действительно адоптивный перенос лимфоцитов от нормальных мышей соответствующей линии xid-мышам быстро и в полной мере восстанавливает у последних ответ на ТН-2-антигены [12]. Этот факт свидетельствует о том, что само по себе введение антигенов в организм при отсутствии способных отвечать на него лимфоцитов, может не приводить к активации стромальной ткани. С учетом также того, что ПВП является синтетическим небактериальным антигеном, из полученных нами данных, по-видимому, следует, что активация клеток стромальной ткани в ходе иммунного ответа может происходить не только и не столько через ТЛР, сколько через взаимодействие иммунокомпетентных и стромальных клеток, причем первые, очевидно, играют ведущую роль роль в этом процессе. В целом полученные данные свидетельствуют о тесных взаимоотношениях между стромальной тканью и иммунной системой.

ЛИТЕРАТУРА

1. Горская Ю.Ф., Данилова Т.А., Мезенцева М.В. и др. Продукция цитокинов стромальными клетками костного мозга и селезенки под влиянием препаратов микробных клеток in vitro. Иммунология. 2011; 32 (5): 236-9.

2. СидороваЕ.В. Что мы знаем сегодня о В-лимфоцитах?. Успехи современной биологии. 2006; 3: 227-41.

3. Чайлахян Р.К., Герасимов Ю.В., Куралесова А.И. и др. Пролиферативные и дифференцировочные потенции индивидуальных клонов стромальных клеток-предшественников в костном мозге. Известия Академии наук. 2001; 6: 682-7.

4. Chomezynski P., Sacchi N. Anal. Biochem., Single- step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate phenol chloroform extraction. Analyt. Biochem. 1987; 162: 156-9.

5. FriedensteinA.Ya., LatzinicN.V., Gorskaya Yu.F. et al. Bone marrow stromal colony formation requires stimulation by haemopoi-etic cells. Bone and Mineral. 1992; 18: 199-213.

6. Gaede K.I., Mamat U., Schlaak M. et al. Analysis of differentially regulated mRNAs in monocytic cells induced by in vitro stimulation. J. Mol. Med. 1999; 77: 847-52.

7. Gelder C.M., Thomas P.S., Yates D.H. et al. Cytokine expression in normal, atopic and asthmatic subjects using the combination of sputum induction and the polymerase chain reaction. Thorax. 1995; 50: 1033-7.

8. Kim D.H., Yoo K.H., Choi K.S. et al. Gene expression profile of cytokine and growth factor during differentiation of bone marrow derived mesenchymal stem cell. Cytokine. 2005; 31: 11926.

9. Lin Y., ZhangM., BarnesP.F. Chemokine production by a human alveolar epithelial cell line in response to Mycobacterium tuberculosis. Infect. and Immun. 1998; 66: 1121-6.

10. Liotta F., Angeli R., Cosmi L. Toll-like receptors 3 and 4 are expressed by human bone marrow derived mesenchymal stem cells and can inhibit their T-cell modulatory activity by impairing notch signaling. Stem Cells. 2008; 26: 279-89.

11. Pevsner-Fisher M., Morad V, Cohen-Sfady M. et al. Toll-like receptors and their ligands control mesenchymal stem cells function. Blood. 2007; 109: 1422-32.

12. Prior L., Pierson S., WoodlandR.T., Riggs. J. Rapid restoration of B-cell function in XID mice by intravenous transfer of peritoneal cavity B cells. J. Immunol. 1994; 83 (2): 180-3.

13. Rasmussen I., Ringen O., Sundberg B. et al. Mesenchymal stem cells inhibit lymphocyte proliferation by mitogens and alloanti-gens by different mechanisms. Exp. Cell Res. 2005; 305: 33-41.

14. Waterman R.S., Tomchuk S.L., Henkle S.L., Betancourt A.M. A new mesenchymal stem cell paradigm: Polarization into a proinflammatory MSC-1 or an immunosupressive VSC-2 phenotipe. PLOS One. 2010; 5 (4): e 10088.

15. Yamamura M., Uyemura K., Deans R.J. et al. Defining protecting responses to pathogens: cytokine profiles in leprosy lesions. Science. 1991; 254: 277-9.

Поступила 16.11.12

- 104 -