КОНСЕРВАТИВНЫЙ МЕМБРАННЫЙ АКТИВАТОР КАЛЬЦИНЕВРИНА (СМАС), НОВЫЙ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ БЕЛОК И МИШЕНЬ

1. Выделенный полипептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:2, или его фрагмент или практически подобная белковая последовательность, идентичная по меньшей мере на 50% SEQ ID NO:2, или ее функциональный эквивалент, и обладающая биологической активностью, выбранной из таких видов активности, как ионный транспорт, ионная диффузия, путь активации кальциневрина, кальцийзависимая активация Т-клеток, ядерная транслокация TORC, ядерная транслокация NFAT или контролируемая реагирующим элементом цАМФ (CRE) активность в отношении экспрессии генов, которые характерны для нативной последовательности SEQ ID NO:2.
2. Полипептид по п.1, последовательность которого выбрана из группы, включающей SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20 и SEQ ID NO:21.
3. Антитело или фрагмент антитела, обладающий способностью связываться с полипептидом по п.1 или 2.
4. Антитело или фрагмент антитела, который специфические связывается с сМАС (SEQ ID NO:2), или полипептид, содержащий сМАС-специфическую связывающую область.
2
5. Фрагмент антитела по п.3, представляющий собой Fab- или F(ab')-фрагмент.
6. Антитело по п.3, представляющее собой моноклональное антитело.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по п.1 или 2.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.7, содержащая SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:12.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.7, дополнительно содержащая промотор, функционально связанный с молекулой нуклеиновой кислоты.
10. Выделенная нуклеотидная последовательность, выбранная из SEQ ID NO:3, 4 и 5.
11. Векторная молекула, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по одному из пп.7-10.
12. Векторная молекула по п.11, содержащая нуклеотидную последовательность сМАС (SEQ ID NO:1).
13. Вектор, содержащий промотор сМАС (SEQ ID NO:3), функционально связанный с нуклеотидной последовательностью репортерного белка.
14. Клетка-хозяин, содержащая векторную молекулу по одному из пп.11-13.
15. Способ получения полипептида по п.1 или 2, заключающийся в том, что культивируют клетку-хозяина, в которую встроен экспрессионный вектор, представляющий собой вектор по п.11 или 12, в условиях, пригодных для экспрессии полипептида в клетке-хозяине.
16. Способ получения полипептида сМАС, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:2, заключающийся в том, что культивируют клетку-хозяина, в которую встроен экспрессионный вектор, представляющий собой вектор по п.11 или 12, в условиях, пригодных для экспрессии полипептида в клетке-хозяине.
17. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве агент, который ингибирует активность сМАС.
18. Способ по п.17, в котором нарушение представляет собой ассоциированное с сМАС нарушение.
19. Способ по п.17, в котором агент представляет собой антитело или фрагмент антитела или полипептид, содержащий сМАС-специфическую связывающую область.
20. Антитело, фрагмент антитела или полипептид по п.3, содержащий сМАС-специфическую связывающую область, в качестве лекарственного средства.
21. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве агент, который ингибирует экспрессию сМАС.
22. Способ по п.21, в котором нарушение представляет собой ассоциированное с сМАС нарушение.
23. Способ по п.21, в котором агент представляет собой ингибирующую нуклеиновую кислоту, обладающую способностью специфически ингибировать экспрессию сМАС.
24. Способ по п.23, в котором ингибирующую нуклеиновую кислоту выбирают из группы, включающей антисмысловой олигонуклеотид, PHKi-агент и рибозим.
25. Способ по п.24, в котором PHKi-агент выбирают из группы, включающей dsPHK, siPHK и shPHK.
26. Способ по п.25, в котором PHKi-агент содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO:22 - SEQ ID NO:101 и SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136 и SEQ ID NO:137.
27. PHKi-агент, содержащий по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO:22 - SEQ ID NO:101 и SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136 и SEQ ID NO:137.
28. PHKi-агент, специфичный в отношении сМАС, выбранный из группы, включающей dsPHK, siPHK и shPHK, в качестве лекарственного средства, где PHKi-агент содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO:22 - SEQ ID NO:101 и SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136 и SEQ ID NO:137.
29. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве агент, который усиливает активность сМАС.
30. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве агент, который усиливает экспрессию сМАС.
31. Способ по п.30, в котором агент представляет собой энхансер транскрипции гена сМАС.
32. Способ по п.30, в котором агент представляет собой применяемый для генной терапии вектор, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую сМАС или его фрагмент.
33. Способ по п.32, в котором агент представляет собой вектор по п.11 или 12.
34. Способ по п.30, в котором нарушение представляет собой ассоциированное с сМАС нарушение.
35. Фармацевтическая композиция, содержащая в эффективном количестве агент, который ингибирует экспрессию сМАС или ингибирует активность сМАС, и фармацевтически приемлемый носитель.
36. Фармацевтическая композиция по п.35, в которой агент представляет собой антисмысловой олигонуклеотид или PHKi-агент.
37. Фармацевтическая композиция по п.36, в которой PHKi-агент содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO:22 - SEQ ID NO:101 и SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136 и SEQ ID NO:137.
38. Фармацевтическая композиция по п.35, в которой агент представляет собой антитело или фрагмент антитела, который специфически связывается с сМАС, или полипептид, содержащий сМАС-специфическую связывающую область.
39. Фармацевтическая композиция по п.38, в которой антитело представляет собой антитело по одному из пп.3-6.
40. Фармацевтическая композиция по п.38, в которой агент связывается с эпитопом сМАС, выбранным из SEQ ID NO:6, 7, 8, 9, 10.
41. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве фармацевтическую композицию агента, который ингибирует активность сМАС.
42. Способ по 41, в котором нарушение представляет собой ассоциированное с сМАС нарушение.
43. Способ по п.41, в котором агент представляет собой антитело или его фрагмент, который специфически связывается с сМАС (SEQ ID NO:2), или полипептид, содержащий сМАС-специфическую связывающую область.
44. Способ по п.43, в котором антитело представляет собой антитело по одному из пп.3-6.
45. Способ по п.43, в котором агент связывается с эпитопом сМАС, выбранным из SEQ ID NO:6, 7, 8, 9, 10.
46. Способ лечения нарушения у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят в эффективном количестве фармацевтическую композицию агента, который ингибирует экспрессию сМАС.
47. Способ по п.46, в котором агент представляет собой ингибирующую нуклеиновую кислоту, которая обладает способностью специфически ингибировать экспрессию сМАС.
48. Способ по п.47, в котором ингибирующую нуклеиновую кислоту выбирают из группы, включающей антисмысловой олигонуклеотид, PHKi-агент и рибозим.
49. Способ по п.48, в котором PHKi-агент выбирают из группы, включающей dsPHK, siPHK и shPHK.
50. Способ по п.49, в котором PHKi-агент содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO:22 - SEQ ID NO:101 и SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136 и SEQ ID NO:137.
51. Способ идентификации соединения, которое можно применять для лечения ассоциированного с сМАС нарушения, заключающийся в том, что:
(а) приводят в контакт тестируемое соединение с сМАС; и
(б) выявляют изменение биологической активности сМАС по сравнению с активностью сМАС, не контактировавшим с тестируемым соединением, где выявление изменения свидетельствует о том, что тестируемое соединение можно применять для лечения нарушения.
52. Способ идентификации соединения, которое можно применять для лечения ассоциированного с сМАС нарушения, заключающийся в том, что:
(а) приводят в контакт тестируемое соединение с сМАС в условиях, пригодных для проявления биологической активности сМАС;
(б) определяют уровень биологической активности сМАС;
(в) сравнивают уровень активности с активностью контрольного образца, в котором отсутствует тестируемое соединение; и
(г) отбирают тестируемое соединение, вызывающее указанный уровень изменения, для дальнейшей оценки в качестве потенциального агента для лечения указанного нарушения.
53. Способ по п.51, в котором изменение представляет собой снижение биологической активности.
54. Способ по п.51, в котором биологическую активность выбирают из таких видов активности, как ионный транспорт, ионная диффузия, взаимодействие белок-сМАС или модификация сМАС, кальцийзависимая активации Т-клеток, ядерная транслокация TORC и контролируемая реагирующим элементом цАМФ (CRE) экспрессия генов.
55. Способ тестирования способности соединения модулировать биологическую активность сМАС, заключающийся в том, что:
(а) приводят в контакт тестируемое соединение с сМАС; и
(б) выявляют изменение биологической активности сМАС по сравнению с активностью сМАС, не контактировавшим с тестируемым соединением, где выявление изменения свидетельствует о том, что тестируемое соединение является модулятором биологической активности сМАС.
56. Способ идентификации модуляторов, которые можно применять для лечения нарушения, заключающийся в том, что оценивают способность модулятора-кандидата ингибировать активность белка сМАС.
57. Способ идентификации модуляторов, которые можно применять для лечения нарушения, заключающийся в том, что оценивают способность модулятора-кандидата ингибировать экспрессию белка сМАС.
58. Соединение, идентифицированное с помощью способа по одному из пп.51-54.
59. Способ идентификации соединения, которое можно применять для лечения ассоциированного с сМАС нарушения, заключающийся в том, что вводят соединение, идентифицированное с помощью способа по п.65, животному, у которого смоделировано ассоциированное с сМАС нарушение.
60. Способ по п.18, где ассоциированное с сМАС нарушение выбирают из группы, включающей аутоиммунное заболевание, иммуносупрессию, воспалительное заболевание, рак, сердечно-сосудистое заболевание и неврологическое заболевание.
61. Способ ингибирования биологической активности сМАС в клетке, заключающийся в том, что приводят в контакт клетку с антителом к сМАС или его фрагментом, с полипептидом, содержащим сМАС-специфическую связывающую область, или с нуклеиновой кислотой, которая снижает экспрессию сМАС.
62. Способ по п.61, в котором биологическую активность выбирают из таких видов активности, как кальцийзависимая активации Т-клеток, ядерная транслокация TORC, ядерная транслокация NFAT и контролируемая реагирующим элементом цАМФ (CRE) экспрессия генов.
63. Способ избирательного ингибирования активности лимфоцитов у многоклеточного организма, заключающийся в том, что приводят в контакт клетку с антителом к сМАС или его фрагментом, с полипептидом, содержащим сМАС-специфическую связывающую область, или с нуклеиновой кислотой, которая снижает экспрессию сМАС.
64. Способ усиления Т-клеточной активации, заключающийся в том, что приводят в контакт Т-клетку или клетку-предшественник Т-клетки с очищенным полипептидом сМАС, применяемым для генной терапии вектором, содержащим ген сМАС или усилитель экспрессии гена сМАС.
65. Способ по п.64, в котором полипептид сМАС представляет собой полипептид по п.1 или 2.
66. Способ по п.64, в котором применяемый для генной терапии вектор, содержащий ген сМАС, представляет собой вектор по п.11 или 12.