СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПИЩЕВОЙ НЕПЕРЕНОСИМОСТИ У ДЕТЕЙ
METHOD FOR PREDICTION OF FOOD INTOLERANCE IN CHILDREN

Изобретение относится к медицине, в частности, педиатрии и может быть использовано для прогнозирования развития пищевой непереносимости у детей.
В последние годы отмечается широкая распространенность пищевой аллергии и пищевой непереносимости у детей. В клинической практике приходится сталкиваться с серьезными проблемами ранней диагностики и терапии пищевой аллергии (ПА), которая является лишь одним из многочисленных проявлений собирательного понятия «побочные реакции на пищу». Повышенная чувствительность к пище включает разные по механизмам развития и прогнозу реакции непереносимости пищевых продуктов: пищевую непереносимость (ПН), пищевую аллергию, отвращение к пище.
Известно, что стратегия профилактики аллергии и ПН состоит в ранней идентификации факторов риска для организации комплекса мероприятий, предотвращающих сенсибилизацию. Манифестация данных заболеваний чаще всего происходит у детей в раннем детском возрасте. При этом далеко не всегда наблюдается наследственная отягощенность, хотя риск развития аллергической патологии и ПН при отягощенности по аллергии, особенно с материнской стороны, многократно возрастает. Полученные за последние годы сведения позволили конкретизировать некоторые представления о механизмах формирования и проявления ПН, что абсолютно необходимо для осмысленного подхода к использованию существующих методов лечения данного состояния, в том числе и в новых условиях проживания человека, а также поиска усовершенствованных, наиболее эффективных патогенетических методов терапии и профилактики аллергических заболеваний и иммунной недостаточности, обусловленных реакциями непереносимости пищевых продуктов.
Известны способы прогнозирования пищевой аллергии у детей на основании анамнеза, данных о распространенности аллергических болезней в детской популяции региона с расчетом суммарного прогностического коэффициента (Балаболкин И.И. и др. Метод раннего прогнозирования развития аллергических болезней у детей. - Вопр.охр.мат.1989, N 2, с.19-22).
Однако известный способ не обладает достаточной точностью и информативностью, имеет ограниченную область применения, с его помощью нет возможности оценить риск развития пищевой непереносимости у новорожденных детей.
Известен способ прогнозирования развития аллергических заболеваний у детей [Haus М., Heese Н., Weinberg E., Potter P., Maiherbe D., Hall J/Genetic and environmental influences on cord blood serum IgE and on atopic sensitization in infancy // S. Afr. Med. J 1990. V. 77, 1. - P.7-13], сущность которого заключается в том, что проводится определение уровня IgE в пуповинной крови. Этот метод приобрел широкое распространение для прогнозирования развития аллергических заболеваний.
Однако автор, суммируя результаты многочисленных исследований, включая собственные, на основании анализа корреляции между анамнестическими данными, клиническими проявлениями атопиц и уровнем общего и специфических (к белку яиц, коровьему молоку и клещам домашней пыли) IgE заключил, что атопия в течение первого года жизни развивается у детей чаще, чем можно предположить, исходя из наличия аллергических заболеваний в семье и уровня IgE в пуповинной крови. Так, если аллергическая отягощенность в обследуемых семьях составляла 16%, то атопия в течение первого года жизни развивалась у 64% детей. Кроме того, определение общего и специфических IgE не дают возможности для определения вероятности возникновения реакций непереносимости, возникающих без участия иммунных механизмов. Использование сложного, дорогостоящего и небезопасного радиоиммунного метода также ограничивает применение данного способа в клинической практике.
Известен способ прогнозирования развития атопического аллергического заболевания у новорожденного (патент RU №2108749, кл. А61В 10/00; G01N 33/543, 1998, бюл. №11), взятый за прототип, заключающийся в прогнозировании развития атопического аллергического заболевания у новорожденного, в том числе пищевой аллергии. Сущность известного способа в том, что в сыворотке пуповинной или периферической крови новорожденного с помощью иммуноферментного анализа определяют количественное содержание общего иммуноглобулина Е. При количественном содержании указанного иммуноглобулина, равном или выше 8 КЕ/л, прогнозируют развитие атопического аллергического заболевания у новорожденного.
Способ безопасен, может быть применен в течение первого месяца жизни ребенка, однако с его помощью прогнозируют только IgE опосредованные реакции, невозможно судить о риске развития неиммунологических реакций на пищевые продукты, нельзя оценить риск развития пищевой непереносимости, кроме того, известный способ не обладает достаточной точностью и информативностью, имеет ограниченную область применения.
Аналогов способа прогнозирования пищевой непереносимости в известной литературе не найдено.
Задача заявляемого способа - прогнозирование пищевой непереносимости у детей.
Поставленная задача решается заявляемым способом, сущность которого заключается в том, что исследуют ДНК из лимфоцитов пуповинной крови новорожденного ребенка. Определяют генотипы и аллели полиморфных вариантов генов фолатного обмена MTHFR C677T и А1298С, MTRR G66A методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом. При выявлении сочетания аллеля Т промоторного полиморфизма MTHFR C677T, аллеля С промоторного полиморфизма MTHFR A1298C и аллеля А промоторного полиморфизма MTRR G66A прогнозируют развитие пищевой непереносимости.
Технический результат изобретения заключается в своевременном прогнозировании пищевой непереносимости с первых дней жизни ребенка, позволяет планировать профилактические мероприятия и тактику ведения ребенка первых лет жизни, что позволяет предупредить развитие обострений и осложнений, связанных с побочными реакциями на пищу (нарушений нутритивного статуса, хронических гастроэнтерологических заболеваний, вторичной иммунной недостаточности) и добиться максимальных достижений в улучшении качества жизни детей.
Фолатный цикл является поставщиком одноуглеродных фрагментов для таких жизненно важных клеточных процессов, как регенерация метионина, биосинтез пуриновых нуклеотидов, метилирование ДНК и РНК. Полиморфные мутации могут приводить к индивидуальным отличиям в уровне экспрессии генов - участников фолатного цикла, что вызывает различные нарушения метаболизма фолатов: способствуют развитию дефицита метаболически активных форм фолиевой кислоты, блокируют превращение гомоцистеина в метионин, вызывают накопление в организме гомоцистеина, то есть гипергомоцистеинемию. Последняя сопровождается выраженным токсическим эффектом, главным образом, вследствие нарушения процессов метилирования, которые являются одним из универсальных механизмов регуляции функции генов, необходимы для нормального синтеза ДНК, РНК и белков, важных для пролиферации клеток, обеспечения процессов нормального функционирования органов и тканей. Таким образом, нарушение синтеза нуклеиновых кислот, прямой цитотоксический эффект гипергомоцистеинемии на быстро пролиферирующие клетки слизистых оболочек ЖКТ, иммунотропные клетки могут быть непосредственной причиной развития пищевой непереносимости у детей.
Способ осуществляется следующим образом.
Под наблюдением находилось 56 детей в возрасте от 3 до 9 месяцев. Все дети в течение 3-8 недель имели персистирующую диарею, явления аллергического дерматита, у всех детей отсутствовал эффект от амбулаторно проводимой элиминационной диетотерапии. Всем детям осуществлено комплексное клинико-лабораторное обследование. Материалом для исследования служила сыворотка венозной крови. Полиморфизм генов MTHFR 677-СТ и 1298-АС, MTRR 66-GA тестировали с помощью методик, основанных на полимеразной цепной реакции. Оценку полученных результатов и комплексный системный анализ данных проводили методом вариационной статистики с вычислением средней относительной величины (Р), ошибки средней относительной величины (mp), средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), доверительного коэффициента Стьюдента (t) при заданном уровне значимости (р). Результаты статистического анализа принимались как достоверные при р<0,05. Статистическую обработку материала выполняли с помощью специализированных пакетов прикладных программ для исследований («Excel-2007» и «Statstica 6.0» for Windows). Распределение генотипов проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга с помощью критерия χ2. Для сравнения частот генотипов и аллелей между исследуемыми группами использовали критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность.
При анализе частот генотипов и аллелей по С677Т и А1298С полиморфизмам гена MTHFR у детей с ПН было выявлено, что благоприятный гомозиготный генотип (СС) встречался в 46,67% случаев, гетерозиготный вариант СТ имели 43,33% детей, гомозиготный вариант - ТТ был выявлен в 10% случаев. Среди детей с ПН выявлено преобладание лиц, имеющих гетерозиготный вариант АС гена MTHFR (А1298С, 56,67%), гомозиготный вариант АА имели 33,33% больных, гомозиготный вариант СС был выявлен в 10% случаев. При анализе частот генотипов и аллелей по гену MTRR G66A выявлено, что благоприятный гомозиготный генотип (GG) встречается в 23,3% случаев, гетерозиготный вариант GA и мели 60,00% детей, гомозиготный вариант - АА был выявлен в 16,67% случаев. При анализе наличия сочетания полиморфизмов генов фолатного обмена было установлено, что сочетание полиморфизма генов MTHFR 677T/1298C или MTRR 66A по 2 или 3 аллелям отмечалось у 85,7% детей с пищевой непереносимостью, что свидетельствует об ассоциированности аллелей MTHFR 677T/1298C и MTRR 66A с развитием пищевой непереносимости у детей.
Примеры конкретного исполнения.
Пример 1. Хохлачева (девочка). Матери 28 лет, страдает хроническим гастродуоденитом, хроническим панкреатитом. Беременность II, роды I в сроке 38 недель. Семейный аллергический анамнез не отягощен. Иммуногенетическое исследование показало наличие у ребенка MTHFR C677C, MTHFR C1298C, MTRR G66A,  т.е. наличие сочетания полиморфизма генов MTHFR 1298C и MTRR 66A. Первые проявления пищевой непереносимости появилась в возрасте ребенка 1 мес. 19 дней при употреблении кормящей мамой в рационе молочной колбасы в виде гиперемии, папулезной сыпи на коже лица. С 5 месяцев диагностирована пищевая непереносимость, характеризующаяся сочетанием гастроинтестинального и кожного синдромов. Заболевание в последующем прогрессировало, присоединились явления реактивного панкреатита, дисбактериоза кишечника, аллергического дерматита.
Пример 2. Шипова (девочка). Матери 25 лет, здорова. Беременность I, осложнившаяся кольпитом. Роды I, срочные. Семейный аллергологический анамнез не отягощен. Иммуногенетическое исследование показало наличие у ребенка MTHFR C677C, MTHFR A1298A, MTRR G66G, т.е. отсутствие патологических полиморфизмов в генах MTHFR и MTRR. При наблюдении в катамнезе явлений пищевой непереносимости у ребенка не отмечалось.
Пример 3. Пушко (мальчик). Матери 26 лет, страдает хроническим пиелоноферитом, миопией II степени. Семейный аллергический анамнез отягощен у двоюродной сестры матери - экзема, у старшей сестры мальчика -нейродермит. Беременность III, осложнившаяся анемией, нефропатией 1 степени, угрозой преждевременных родов. Роды II, срочные, стремительные. Иммуногенетическоб исследование показало наличие у ребенка MTHFR Т677Т, MTHFR С1298С, MTRR G66A, т.е. наличие сочетания полиморфизма генов MTHFR 677T, MTHFR 1298С и MTRR 66A. Проявления пищевой непереносимости в виде неустойчивого стула, персистирующей диареи наблюдались с 2 месячного возраста при нарушении диеты корящей мамы, несмотря на коррекцию диеты мамы сохранялись явления пищевой непереносимости. В дальнейшем обострение заболевания наблюдалось на введение овощного, фруктового прикормов, безглютеновой безмолочной каши, легкоусвояемых углеводов. С 6 месяцев ребенок наблюдался у аллерголога по поводу пищевой непереносимости, аллергического дерматита.
На основании клинических наблюдений и исследований можно сделать вывод, что предлагаемый способ обладает следующими преимуществами: простотой применения, быстрым получением результата, высокой информативностью, уменьшением травматичности при взятии биологического материала (пуповинная кровь).
Предлагаемый способ диагностики может применяться при скрининговых обследованиях новорожденных детей, позволяет планировать профилактические мероприятия и тактику ведения ребенка первых лет жизни, что позволяет предупредить развитие обострений и осложнений, связанных с приемом пищи, и добиться максимальных достижений в улучшении качества жизни детей. Способ оценки технически прост, малоинвазивен, информативен, позволяет в короткие сроки получить достоверные сведения о прогнозировании пищевой непереносимости у детей, и его внедрение не требует больших экономических затрат.
Заявляемый способ прогнозирования пищевой непереносимости у детей является новым и в доступной литературе не описан.