СТИМУЛЯЦИЯ ПУТИ Wnt ПРИ ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК

1. Способ перепрограммирования соматической клетки млекопитающего, включающий создание контакта соматической клетки млекопитающего со средством, которое модулирует путь Wnt, так, что клетка становится перепрограммированной в плюрипотентное состояние.
2. Способ по п.1, где способ включает:
a) культивирование клетки в среде для культивирования, содержащей средство;
b) культивирование клетки в среде для культивирования, содержащей средство, как минимум в течение 10 дней;
c) создание контакта клетки со средством, которое модулирует путь Wnt, тем самым увеличивая число колоний ЭС-подобных клеток как минимум в 5 раз;
d) создание контакта клетки со средством, которое модулирует путь Wnt, тем самым увеличивая число колоний ЭС-подобных клеток как минимум в 10 раз;
e) культивирование клетки в Wnt3a кондиционированной среде;
f) культивирование клетки в Wnt кондиционированной среде;
g) создание контакта клетки со вторым средством, которое модулирует путь Wnt; или
h) культивирование клетки в среде, содержащей экзогенный растворимый биологически активный белок Wnt.
3. Способ по п.1, где клетка:
a) представляет собой человеческую клетку;
b) представляет собой окончательно дифференцированную клетку;
c) представляет собой фибробласт;
d) модифицирована, чтобы экспрессировать или содержать как минимум один перепрограммирующий фактор в количествах больших, чем обычно встречается в клетках данного типа;
e) не является генетически модифицированной или
f) не является генетически модифицированной для экспрессии c-Myc в количествах больших, чем обычно встречается в клетке данного клеточного типа.
4. Способ по п.2, где белок Wnt представляет собой Wnt3a.
5. Способ по п.1, дополнительно включающий:
a) подтверждение того, что перепрограммированная клетка является плюрипотентной;
b) введение перепрограммированной клетки субъекту или
in vitro
c) дифференцирование клетки в нужный клеточный тип  после перепрограммирования клетки.
6. Способ по п.5, дополнительно включающий введение дифференцированной клетки субъекту.
7. Способ по п.1, где способ практикуют на:
a) популяции клеток, и способ дополнительно включает идентификацию ЭС-подобных клеток по морфологическим критериям;
b) популяции клеток, и способ не включает проведение химической селекции для отбора перепрограммированных клеток; или
c) популяции клеток, и способ дополнительно включает отделение клеток, которые являются перепрограммированными в плюрипотентное состояние, от клеток, которые не являются перепрограммированными в плюрипотентное состояние.
8. Способ лечения индивидуума, нуждающегося в этом, включающий:
(a) получение соматических клеток от индивидуума;
(b) перепрограммирование как минимум некоторых соматических клеток при помощи способа по п.1; и
(c) введение как минимум некоторых перепрограммированных клеток индивидууму, возможно, после дифференцирования клеток в один или большее количество желаемых клеточных типов.
9. Композиция, содержащая (i) соматическую клетку млекопитающего, которая была модифицирована или подвергнута обработке так, что она экспрессирует или содержит как минимум один перепрограммирующий фактор в количествах больших, чем было бы без подобной модификации или обработки; и (ii) средство, которое повышает активность пути Wnt и вносит вклад в перепрограммирование соматической клетки в плюрипотентное состояние.
10. Композиция по п.9, где соматическая клетка:
a) является модифицированной для экспрессии или содержания в ней как минимум одного перепрограммирующего фактора в количествах больших, чем обычно встречается в соматических клетках данного типа;
b) не является генетически модифицированной;
c) не является генетически модифицированной для экспрессии c-Myc в количествах больших, чем обычно встречается в соматических клетках данного типа; или
d) является модифицированной для экспрессии или содержания в ней как минимум одного перепрограммирующего фактора в количествах больших, чем обычно встречается в соматических клетках данного типа.
11. Способ выявления средства, пригодного для модулирования перепрограммирования соматических клеток млекопитающих, включающий:
(a) культивирование популяции соматических клеток млекопитающих в среде, содержащей средство, которое модулирует активность пути Wnt, и средство-кандидата;
(b) определение после соответствующего периода времени присутствуют ли клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, после культивирования клеток и их потомков в течение соответствующего периода времени, где средство-кандидата идентифицируют как пригодное для модулирования перепрограммирования соматических клеток млекопитающих в ЭС-подобное состояние, если клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, присутствуют в количествах, отличающихся от тех, которые можно было ожидать в случае, если бы среда не содержала средство-кандидата.
12. Способ выявления средства, пригодного для перепрограммирования соматических клеток млекопитающих в ЭС-подобное состояние, включающий:
(a) создание контакта популяции соматических клеток млекопитающих со средством, которое повышает активность пути Wnt, и средством-кандидатом;
(b) поддержание клеток в течение соответствующего периода времени в системе культивирования клеток; и
(c) определение того, присутствуют ли клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, в указанной системе культивирования, где средство идентифицируют как пригодное для перепрограммирования соматических клеток млекопитающих в ЭС-подобное состояние, если клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, присутствуют в количествах больших, чем можно было ожидать в случае, если бы клетки не контактировали со средством-кандидатом.
13. Способ перепрограммирования соматической клетки млекопитающего, включающий культивирование клетки в присутствии внеклеточной сигнальной молекулы таким образом, что клетка становится перепрограммированной.
14. Способ по п.13, где указанная внеклеточная сигнальная молекула представляет собой молекулу, связывание которой с внеклеточным доменом клеточного рецептора запускает или изменяет путь передачи сигнала внутри клетки.
15. Способ по п.14, где путь передачи сигнала представляет собой путь Wnt.
16. Способ выявления модулятора пути Wnt, пригодного для модулирования перепрограммирования соматических клеток млекопитающих в плюрипотентное состояние, включающий:
(a) культивирование популяции соматических клеток млекопитающих в среде, содержащей модулятор пути Wnt;
(b) определение после соответствующего периода времени присутствуют ли клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, после культивирования клеток и их потомков в течение соответствующего периода времени, где модулятор пути Wnt идентифицируют как пригодный для модулирования перепрограммирования соматических клеток млекопитающих в ЭС-подобное состояние, если клетки, обладающие одним или большим количеством признаков ЭС клеток, присутствуют в количествах, отличающихся от тех, которые можно было ожидать в случае, если бы среда не содержала модулятора пути Wnt.
17. Композиция, включающая:
(a) среду для культивирования клеток, содержащую модулятор пути Wnt; и
(b) множество соматических клеток млекопитающих, где (i) клетки являются генетически модифицированными или временно трансфицированными для экспрессии одного или более перепрограммирующих факторов; (ii) клетки генетически модифицированы для содержания последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей селектируемый маркер, функционально связанный с промотором для эндогенного гена плюрипотентности; или (iii) среда для культивирования клеток содержит одну или большее количество малых молекул, нуклеиновых кислот или полипептидов, которые заменяют перепрограммирующий фактор, отличный от c-Myc.
18. Композиция по п.17, где:
a) среда для культивирования клеток включает Wnt-3a CM; и/или
b) один или более перепрограммирующих факторов выбирают из: Oct4, Nanog, Sox2, Lin28 и Klf4.
19. Композиция, содержащая иПС клетку и средство, которое активирует путь Wnt.
20. Применение средства, которое модулирует путь Wnt, в производстве лекарственного средства для перепрограммирования соматической клетки млекопитающего.