АНАЛИЗ ИЗМЕРЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕЦЕПТОРНО-ЛИГАНДНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ НАНОЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ

1. Композиция, содержащая:
a) по меньшей мере одну клетку, содержащую:
i. рекомбинантный рецептор Т-клетки (TCR), содержащий альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR; и
ii. зависимый от пути рецептора Т-клеток репортер, причем рекомбинантный TCR специфичен для релевантного для заболевания антигена, связанного с молекулой главного комплекса гистосовместимости (МНС); и
b) нанолекарственное средство, содержащее релевантный для заболевания антиген, связанный с молекулой МНС, которая связана с наночастицей.
2. Композиция по п. 1, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер активно транскрибируется.
3. Композиция по п. 1 или 2, причем релевантный для заболевания антиген, связанный с молекулой МНС, связан с наночастицей в соотношении 10:1 или более.
4. Композиция по любому из пп. 1 или 3, причем наночастица имеет диаметр от около 1 нанометра до около 100 нанометров.
5. Композиция по любому из пп. 1 или 4, причем наночастица содержит металлическое ядро.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген.
7. Композиция по п. 6, причем релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген выбран из перечня, состоящего из антигена сахарного диабета I типа, антигена астмы или аллергической астмы, антигена рассеянного склероза, антигена периферической нейропатии, антигена билиарного первичного цирроза, антигена нарушения оптикомиелитного спектра, антигена синдрома скованного человека, антигена аутоиммунного энцефалита, антигена обыкновенной пузырчатки, антигена листовидной пузырчатки, антигена псориаза, антигена синдрома/болезни Шегрена, антигена воспалительного заболевания кишечника, антигена артрита или ревматоидного артрита, антигена системной эритематозной волчанки, антигена склеродермы, антигена ассоциированного с ANCA васкулита, антигена синдрома Гудпасчера, антигена болезни Кавасаки, антигена глютеиновой болезни, антигена аутоиммунной кардиомиопатии, антигена миастении гравис, антигена аутоиммунного увеита, антигена базедовой болезни, антигена антифосфолипидного синдрома, антигена аутоиммунного гепатита, антигена склерозирующего холангита, антигена первичного склерозирующего холангита, антигена хронического обструктивного заболевания легких, релевантного для увеита антигена и их комбинаций.
8. Композиция по любому из пп. 1-7, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер активирует транскрипцию гена, выбранного из группы, состоящей из гена люциферазы, гена бета-лактамазы, гена хлорамфениколацетилтрансферазы (CAT), гена секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), гена флуоресцентного белка и их комбинаций.
9. Композиция по любому из пп. 1-8, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из перечня, состоящего из последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции ядерного фактора активированных Т-клеток (NFAT), последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции NF-κB, последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции AP1, последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции IL-2, и их комбинаций.
10. Композиция по любому из пп. 1-9, причем по меньшей мере одна клетка выбрана из JurMA, Jurkat, BW5147, HuT-78, СЕМ или Molt-4.
11. Композиция по любому из пп. 1-10, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой полипептид, состоящий из любой из SEQ ID NO: 1-352 и их комбинаций.
12. Композиция по любому из пп. 1-10, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой полипептид, состоящий из любой из SEQ ID NO: 353-455 и их комбинаций.
13. Композиция по любому из пп. 1-12, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR транслируются как единый полипептид.
14. Композиция по п. 13, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR единого полипептида разделены последовательностью перескока рибосомы.
15. Композиция по п. 14, причем последовательность перескока рибосомы изложена в любой из SEQ ID NO: 456-523.
16. Композиция по п. 13, причем единый полипептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 527, 533 или 538.
17. Композиция по любому из пп. 1-12, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR транслируются как отдельные полипептиды.
18. Композиция по любому из пп. 1-17, причем альфа-цепь TCR содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 528, 530, 534, 536, 539, 541, и бета-цепь TCR содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 529, 531, 535, 537, 540 или 542.
19. Композиция по любому из пп. 1-18, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR экспрессируются на поверхности клетки.
20. Композиция по любому из пп. 1-19, причем клетка содержит по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид, кодирующий альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR.
21. Композиция по п. 20, причем по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты IRES.
22. Композиция по п. 21, причем последовательность нуклеиновой кислоты IRES изложена в любой из SEQ ID NO: 524-526.
23. Композиция по любому из пп. 20-22, причем по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% гомологичную изложенной в любой из SEQ ID NO: 532 или 557.
24. Композиция по любому из пп. 1-23 для применения in vitro при определении эффективности или активности нанолекарственного средства.
25. Применение по п. 24, причем нанолекарственное средство предназначено для применения на человеке.
26. Клетка, содержащая рекомбинантный рецептор Т-клетки (TCR) и зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер, причем рекомбинантный рецептор Т-клетки специфичен к релевантному для заболевания антигену, связанному с молекулой главного комплекса гистосовместимости.
27. Клетка по п. 26, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер активно транскрибируется.
28. Клетка по п. 26 или 27, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген.
29. Клетка по п. 28, причем релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген выбран из перечня, состоящего из антигена сахарного диабета I типа, антигена астмы или аллергической астмы, антигена рассеянного склероза, антигена периферической нейропатии, антигена билиарного первичного цирроза, антигена нарушения оптикомиелитного спектра, антигена синдрома скованного человека, антигена аутоиммунного энцефалита, антигена обыкновенной пузырчатки, антигена листовидной пузырчатки, антигена псориаза, антигена синдрома/болезни Шегрена, антигена воспалительного заболевания кишечника, антигена артрита или ревматоидного артрита, антигена системной эритематозной волчанки, антигена склеродермы, антигена ассоциированного с ANCA васкулита, антигена синдрома Гудпасчера, антигена болезни Кавасаки, антигена глютеиновой болезни, антигена аутоиммунной кардиомиопатии, антигена миастении гравис, антигена аутоиммунного увеита, антигена базедовой болезни, антигена антифосфолипидного синдрома, антигена аутоиммунного гепатита, антигена склерозирующего холангита, антигена первичного склерозирующего холангита, антигена хронического обструктивного заболевания легких, релевантного для увеита антигена и их комбинаций.
30. Клетка по любому из пп. 26-29, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер активирует транскрипцию гена, выбранного из группы, состоящей из гена люциферазы, гена бета-лактамазы, гена хлорамфениколацетилтрансферазы (CAT), гена секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), гена флуоресцентного белка и их комбинаций.
31. Клетка по любому из пп. 26-30, причем зависимый от пути рецептора Т-клетки репортер содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из перечня, состоящего из последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции ядерного фактора активированных Т-клеток (NFAT), последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции NF-κB, последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции AP1, последовательности ДНК или промотора, с которыми связывается фактор транскрипции IL-2, и их комбинаций.
32. Клетка по любому из пп. 26-31, причем клетка выбрана из JurMA, Jurkat, BW5147, HuT-78, СЕМ или Molt-4.
33. Клетка по любому из пп. 26-32, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой полипептид, состоящий из любой из SEQ ID NO: 1-352 и их комбинаций.
34. Клетка по любому из пп. 26-33, причем релевантный для заболевания антиген представляет собой полипептид, состоящий из любой из SEQ ID NO: 353-455 и их комбинаций.
35. Клетка по любому из пп. 26-34, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR транслируются как единый полипептид.
36. Клетка по п. 35, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR единого полипептида разделены последовательностью перескока рибосомы.
37. Клетка по п. 36, причем последовательность перескока рибосомы изложена в любой из SEQ ID NO: 456-523.
38. Клетка по п. 35, причем единый полипептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 527, 533 или 538.
39. Клетка по любому из пп. 26-34, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR транслируются как отдельные полипептиды.
40. Клетка по любому из пп. 26-39, причем альфа-цепь TCR содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 528, 530, 534, 536, 539, 541, и бета-цепь TCR содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 529, 531, 535, 537, 540 или 542.
41. Клетка по любому из пп. 26-40, причем альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR экспрессируются на поверхности клетки.
42. Клетка по любому из пп. 26-41, причем клетка содержит по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид, кодирующий альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR.
43. Клетка по п. 42, причем по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты IRES.
44. Клетка по п. 43, причем последовательность нуклеиновой кислоты IRES изложена в любой из SEQ ID NO: 524-526.
45. Клетка по любому из пп. 42-44, причем по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 100% гомологичную изложенной в любой из SEQ ID NO: 532 или 557.
46. Популяция клеток по любому из пп. 26-45.
47. Клетка по любому из пп. 26-45 для применения in vitro при определении эффективности или активности нанолекарственного средства.
48. Клетка по п. 47, причем нанолекарственное средство предназначено для применения на человеке.
49. Популяция клеток по п. 46 для применения in vitro при определении эффективности или активности нанолекарственного средства.
50. Популяция по п. 49, причем нанолекарственное средство предназначено для применения на человеке.
51. Способ in vitro измерения агонистической активности нанолекарственного средства, содержащего релевантный для заболевания антиген, связанный с молекулой МНС, которая связана с наночастицей, причем способ включает:
a) приведение в контакт лекарственного нанолекарственного средства с клеткой по любому из пп. 26-45 или популяцией клеток по п. 46; и
b) детектирование сигнала, вырабатываемого зависимым от пути рецептора Т-клетки репортером.
52. Способ по п. 51, в котором нанолекарственное средство содержит множество наночастиц.
53. Способ по п. 52, в котором множество наночастиц содержит множество наночастиц, содержащих множество релевантных для заболевания антигенов, связанных с молекулой МНС, которая связана с наночастицей.
54. Способ по п. 53, в котором релевантный для заболевания антиген представляет собой релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген.
55. Способ по п. 54, в котором релевантный для аутоиммунного или воспалительного заболевания антиген выбран из перечня, состоящего из антигена сахарного диабета I типа, антигена астмы или аллергической астмы, антигена рассеянного склероза, антигена периферической нейропатии, антигена билиарного первичного цирроза, антигена нарушения оптикомиелитного спектра, антигена синдрома скованного человека, антигена аутоиммунного энцефалита, антигена обыкновенной пузырчатки, антигена листовидной пузырчатки, антигена псориаза, антигена синдрома/болезни Шегрена, антигена воспалительного заболевания кишечника, антигена артрита или ревматоидного артрита, антигена системной эритематозной волчанки, антигена склеродермы, антигена ассоциированного с ANCA васкулита, антигена синдрома Гудпасчера, антигена болезни Кавасаки, антигена глютеиновой болезни, антигена аутоиммунной кардиомиопатии, антигена миастении гравис, антигена аутоиммунного увеита, антигена базедовой болезни, антигена антифосфолипидного синдрома, антигена аутоиммунного гепатита, антигена склерозирующего холангита, антигена первичного склерозирующего холангита, антигена хронического обструктивного заболевания легких, релевантного для увеита антигена и их комбинаций.
56. Способ по любому из пп 51-55, в котором множество наночастиц содержит множество наночастиц с диаметром от 1 нанометра до около 100 нанометров.
57. Способ по любому из пп. 51-56, дополнительно включающий количественную оценку сигнала зависимого от пути рецептора Т-клетки репортера.
58. Способ по п. 57, в котором количественная оценка включает определение концентрации нанолекарственного средства, который инициирует ответ, который составляет около 50% от максимального ответа, причем максимальный ответ представляет собой ответ, инициируемый при наиболее высокой концентрации нанолекарственного средства, вступающего в контакт с клеткой или популяцией клеток при приведении множества концентраций нанолекарственного средства в контакт с клеткой или популяцией клеток.
59. Способ по п. 58, в котором множество концентраций нанолекарственного средства приводят в контакт с клеткой или популяцией клеток в одном и том же анализе.
60. Способ по п. 57, в котором количественная оценка включает определение концентрации нанолекарственного средства, которая инициирует ответ, который составляет по меньшей мере около 200% ответа от отрицательного контроля, причем отрицательный контроль содержит нанолекарственное средство, которое специфически не взаимодействует с рекомбинантным рецептором Т-клеток (TCR) у клетки или популяции клеток.
61. Способ по любому из пп. 51-60, в котором сигнал вырабатывается ферментом.
62. Способ по п. 61, в котором фермент представляет собой люциферазу или пероксидазу.
63. Способ по любому из пп. 51-60, в котором сигнал представляет собой флуоресцентный сигнал.
64. Способ по любому из пп. 51-63, причем способ применяется в качестве стадии контроля качества в производственном процессе.