Способ получения экстракта прополиса на водной основе
METHOD FOR PRODUCTION OF WATER-BASED PROPOLIS EXTRACT

Изобретение относится к пищевой, косметической и фармацевтической промышленности и может быть использовано для получения экстракта прополиса на водной основе за счет разработки технологии растворения прополиса в воде.
В соответствии с ГОСТ 28886-2019 «Прополис. Технические условия» (вводится в действие взамен ГОСТ 28886-90 с 01 июня 2020 года) и ГОСТ 25629-2014 «Пчеловодство. Термины и определения» прополис, как продукт пчеловодства, называемый пчелиным клеем и произведенный пчелами из смолистых выделений растений, секрета мандибулярных желез пчел и пчелиного воска, получают путем соскабливания с различных частей улья и с применением специальных приспособлений. Прополис - смолистое вещество желтовато-зеленого, бурого, серого, коричневого или темно-коричневого цвета с характерным смолистым запахом и горьковатым и слегка жгучим вкусом; имеет твердую структуру, при понижении температуры ниже 20°С становится твердым и хрупким, свыше 20°С - вязким, при нагревании свыше 30°С мягким, тягучим и клейким.
Известны различные способы приготовления экстрактов прополиса.
Прополис относится плохо растворимому в воде продукту за счет высокого содержания пчелиного воска (до 36%). Растворимость прополиса в водных растворах составляет до 11-12%. Соответственно, для лучшей экстракции наиболее часто используют экстракты прополиса в органических растворителях, например, этанол, спирт с эфиром. Такие экстракты активно применяются в фармацевтической промышленности для приготовления биопрепаратов, длительность экстракции может составлять до 2 суток [1].
Недостатком таких способов является ограниченные возможности применения спиртовых экстрактов прополиса в пищевой промышленности в связи с тем, что пищевые продукты являются продуктами массового потребления (за исключением специализированного назначения -диетического, диабетического, для детского питания). Употребление пищевых продуктов с содержанием этанола может вызвать обострение болезней желудочно-кишечного тракта и неприемлемо для детей.
Известен способ экстракции прополиса водным раствором минеральных солей, через который пропускают пульсирующий электрический ток с помощью двух электродов, один из которых, катод, выполнен из серебра. С помощью частотного преобразователя меняют частоту тока с 50 до 1000 Гц в течение 3-6 час. Затем, меняя полярность электродов, вновь пропускают электрический ток той же плотности не менее 10 мин [2].
Недостатком известного способа является то, что при пропускании тока водный раствор нагревается и требуется поддержание температуры водного раствора не более 96,5°С, при повышении частоты тока свыше 1000 Гц смолистые вещества прополиса могут попадать в экстракт и после его охлаждения коагулироваться и выпадать в осадок. Часть минеральных веществ переходит в водный раствор, что влияет на качество водного экстракта прополиса. Концентрация прополиса незначительная и составляет 2-4 мас. %.
Наиболее близким техническим решением для получения водных растворов прополиса, как возможных для применения при производстве вареных колбас, является способ экстрагирования из водного раствора прополиса (прополис ранее измельчен) с добавлением стабилизатора (ионизированная микро- и макроэлементами вода) после обработки ультразвуком и последующей экстракции путем нагревания смеси до температуры кипения воды с последующим охлаждением и фильтрованием [3].
Недостатком предложенного способа является то, что технология подготовки прополиса к экстракции осуществляется 2 раза: сначала прополис измельчают до порошкообразного состояния, затем прополис еще раз измельчают в процессе ультразвуковой гомогенизации - «прополис измельчают до порошкообразного состояния, смешивают с частью воды со стабилизатором (ионы серебра), обрабатывают ультразвуком», хотя сама сущность процесса ультразвуковой гомогенизации заключается в уменьшении размера мягких и твердых частиц и их равномерном распределении в жидкости, соответственно на первом этапе необязательно прополис измельчать до порошкообразного состояния, что позволит оптимизировать технологический процесс при промышленном применении известного способа. К недостатку известного изобретения также относится низкий выход массовых долей флавоноидных и других фенольных соединений 0,41% из прополиса в экстракт.
Изобретение направлено на улучшение качества готового экстракта прополиса на водной основе за счет повышения эффективности экстракции водного раствора прополиса в результате увеличения выхода флавоноидных и других фенольных соединений из прополиса в экстракт на 0,21% или до 0,62 мас. % по сравнению с прототипом (0,41 мас. %) за счет обогащения экстракта водного прополиса повышенным содержанием биологически активных веществ, в частности флавоноидных и других фенольных соединений, что способствует повышению антиоксидантной активности полученного экстракта в результате усиления реакционных способности экстрагента при увеличении контактной площади измельченного прополиса и его растворимости за счет активации диффузионных процессов под воздействием высокого давления и проникновения воды в мельчайшие поры прополиса и, соответственно, интенсификации массообмена между жидкой средой (водой) и твердой фазой (прополиса); а также на снижение температуры экстрагента для уменьшения термический инактивации лабильных биологических компонентов и не попадания смолистых веществ в готовый экстракт; на сокращение времени экстракции; на уменьшение содержания рафината (нерастворимого остатка).
Это достигается тем, что в способе получения экстракта прополиса на водной основе прополис очищают от механических примесей в воздушном потоке, замораживают при температуре -20°С, измельчают, приготавливают водный раствор прополиса путем смешивания измельченного прополиса с предварительно очищенной от солей тяжелых металлов и ионизированной ионами серебра питьевой водопроводной водой при пропускании через фильтр и электролизер, осуществляют обработку раствора прополиса ультразвуком в течение 20-30 мин, гомогенизированный раствор прополиса упаковывают в термопластичную пленочную упаковку, имеющую обратимую деформацию, затем герметично упакованный раствор прополиса помещают в камеру высокого давления, заполненную дистиллированной водой, герметично закрывают и обрабатывают давлением 600-1000 МПа в течение 5-6 мин, раствор прополиса помещают на водяную баню при температуре 80-85°С и осуществляют процесс экстракции в течение 3-4 часов, экстракт прополиса охлаждают до температуры 15-17°С, фильтрацию осуществляют через ткани, предназначенные для фильтрации, и центрифугированием.
Таким образом, заявленный способ получения экстракта прополиса на водной основе соответствует критерию изобретения «новизна».
Предлагаемый способ получения экстракта прополиса на водной основе можно применять в пищевой промышленности для обогащения пищевой продукции ценными флавоноидными и другими фенольными соединениями и для уменьшения микробиологической обсемененности пищевых продуктов.
Предлагаемый способ получения экстракта прополиса на водной основе реализован следующим образом.
Пример 1.
Для приготовления водного экстракта прополиса 1 кг прополиса очищают от примесей при подаче воздуха с помощью вентилятора в воздушном потоке при использовании аэросепаратора Зиг-Заг (производитель НПО «ЭРГА», производительность до 120 кг/ч), что позволяет разделять сырье на фракции по аэродинамическим свойствам -прополис и механические примеси, за счет выдувания вертикальным потоком воздуха веществ легкой фракции (примеси), тяжелую фракцию (прополис) выводят из аэросепаратора через разгрузочное устройство. Очищенный от механических примесей прополис замораживают в течение 2-х часов при температуре -20°С до хрупкого состояния. Прополис дробят и режут до мелких фракций 1-2 мм механическими автоматизированными методами дробяще-режущим воздействием. Чистую водопроводную воду пропускают через минеральный фильтр для отчистки от солей тяжелых металлов. Для получения ионизированной ионами серебра раствора используют электролизер СТЭЛ-1 ОН-120-01, в которой проводится электролиз питьевой водопроводной воды. На кран линии водопровода надевают специальную насадку с фильтром, открывают вентиль крана, установку включают в электрическую сеть при напряжении сети 220 В, ручкой регулирования устанавливают сила тока 3,5 А. Согласно режимно-технологической карты отрегулирован гидравлический режим работы установки (необходимый объемный расход из шлангов «АНОЛИТ» и «КАТОЛИТ») и обогащенный ионами серебра анолит вырабатывают в специальную емкость.
Затем измельченный прополис заливают предварительно очищенной от минеральных примесей ионизированной ионами серебра питьевой водопроводной водой с температурой 18-20°С в соотношении прополис: вода 1:0,5, что способствует усилению диспергирования под влиянием адсорбции (эффект Ребиндера) и образованию пульпы при обработке ультразвуком для повышения эмульгирования и уменьшения дисперсности частиц до 0,3-0,5 мкм. Обработку ионизированного раствора прополиса ультразвуком осуществляют в ультразвуковом гомогенизаторе HD 4400 Sonopuls (производство Германия) в течение 20 мин путем подключения ВЧ генератора HD 4400 в электрическую сеть при напряжении сети 220 В с частотой 50 Гц и максимальной высокочастотной мощности блока управления 400 Вт. Для запуска гомогенизатора включают тумблер питания на цифровом блоке управления и задают режим обработки с возможностью ограничения повышения температуры раствора. Наконечник титанового зонда опускают в емкость с подготовленным раствором прополиса и после выбора программы нажатием клавиши «старт-стоп», запускают процесс гомогенезации. Отключение происходит в автоматическом режиме.
Полученный водный гомогенизированный раствор прополиса в виде суспензии, упаковывают в термопластичную вакуумно-пленочную упаковку с помощью вакуумного упаковщика HENKELMAN серии BOXER, помещают в камеру высокого давления гидростата. Дистиллированную воду заливают в емкость камеры высокого давления через горловину и фильтр, которая по трубке попадает в гидравлический насос, подающий дистиллированную воду к форсункам. Дистиллированная вода под высоким давлением поступает к манометру и вентилю сброса дистиллированной воды в емкость и вентилю, перекрывающему выход к камере высокого давления с предохранительным клапаном, через который дистиллированная вода перетекает в емкость. Камера высокого давления, заполненная дистиллированной водой, герметично закрывается. Гидростат подключают к электрической сети 220 В, 50 Гц, с помощью рукоятки для установки режимов давления, создаваемого насосом, выбирают режим и пультом для включения и выключения установки включают и водный гомогенизированный раствор прополиса обрабатывают давлением 600 МПа в течение 5 мин. Высокое давление «вгоняет» воду в мельчайшие поры измельченного прополиса, изменяя микроструктуру прополиса. При этом происходит нарушение клеточных мембран и самой клеточной структуры, процессов метаболизма, изменение взаимодействий на молекулярном и межмолекулярном уровнях - гидрофильных, гидрофобных, ван-дер-ваальсовых взаимодействий, водородных связей [4, 5].
После обработки высоким давлением в полученный экстракт доливают 4,5 л ранее подготовленного экстрагента и проводят экстракцию на водяной бане при постоянном перемешивании с температурой в экстракторе до 80°С в течение 3 часов. Полученный экстракт охлаждают до температуры 15-17°С, при этом слой застывшего воска на поверхности убирают механическим или ручным способом. Осуществляют двойную фильтрацию: фильтрование под действием собственного веса раствора через ткани, предназначенные для фильтрации (бельтинг, фильтродиагональ и фильтросванбой), с осаждением грубых фракций прополиса и центрифугирование экстракта прополиса в центрифуге большого объема CN-650 для осадки рафината путем подключения к сети переменного тока 220 В (частота 50 Гц), с подбором времени центрифугирования 300 сек и частоты вращения 5000 об/мин. Полученный водный экстракт прополиса расфасовывают в заранее приготовленную чистую, сухую, без постороннего запаха стеклянную тару темного цвета.
В таблице 1 представлены органолептические и физико-химические показатели экстракта прополиса на водной основе. Первая группа (прототип) - экстракт получен путем экстрагирования обработанного ультразвуком в течение 20 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей, без применения сверхвысокого давления 600 МПа и центрифугирования на этапе фильтрации, вторая группа (предлагаемый способ) - экстракт получен путем экстрагирования обработанного ультразвуком в течение 20 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей в воздушном потоке, и сверхвысоким давлением 600 МПа в течение 5 мин и прошедшему фильтрацию комбинированным способом под воздействием собственного веса раствора через ткани, предназначенные для фильтрации, и центрифугированием в течение 300 сек.
Комплексную оценку проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 28886-2019 «Прополис. Технические условия» (введен в действие взамен ГОСТ 28886-90 с 01 июня 2020 года) для прополиса. В прополисе физико-химические показатели соответствуют требованиям нормативной документации. В предлагаемом способе по сравнению с прототипом увеличилось содержание антиоксидантов: массовая доля флавоноидных и других фенольных соединений на 0,12 мас. % до 0,53 мас. %, в том числе рутина - до 0,05 мас. %, кверцетина - до 0,07 мас. % и наренгинина - до 0,24 мас. %, а также полифенольных соединений - до 0,25 мг/г. При этом уменьшилась массовая доля рафината (воска и других нерастворимых в воде примесей) на 0,03 мас. % до 0,12 мас. %.
В таблице 2 представлены микробиологические показатели прополиса (сырье) и экстракта прополиса на водной основе. Образцы сырья (прополис) отвечают требованиям TP ТС 021/2011 Технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции». Микробиологические показатели экстракта прополиса на водной основе соответствуют нормативным показателям по прополису.
В предлагаемом способе по сравнению с прототипом произошло обогащение флавоноидными и другими фенольными соединениями на 0,12 мас. % при одновременном уменьшении массовой доли рафината на 0,03 мас. %, микробиологические показатели соответствуют требованиям TP ТС 021/2011.
Применение сверхвысокого давления способствует интенсификации технологического процесса, лучшей проникаемости воды в структуру прополиса при формировании дисперсной системы в виде водного раствора прополиса и насыщению экстракта прополиса биологически активными веществами по сравнению с прототипом.
Пример 2.
Для приготовления водного экстракта прополиса 1 кг прополиса очищают от примесей в воздушном потоке при использовании аэросепаратора Зиг-Заг (производитель НПО «ЭРГА»). Очищенный от механических примесей прополис замораживают в течение 2-х часов при температуре -20°С до хрупкого состояния. Прополис дробят и режут до мелких фракций 1-2 мм механическими автоматизированными методами дробяще-режущим воздействием. Чистую водопроводную воду пропускают через минеральный фильтр для отчистки от солей тяжелых металлов. Для получения ионизированной ионами серебра раствора используют электролизер СТЭЛ-1 ОН-120-01, в которой проводят электролиз питьевой водопроводной воды. Затем измельченный прополис заливают предварительно очищенной от минеральных примесей ионизированной ионами серебра питьевой водопроводной водой с температурой 18-20°С в соотношении прополис: вода 1:0,5. Обработку ионизированного раствора прополиса ультразвуком осуществляют в ультразвуковом гомогенизаторе HD 4400 Sonopuls в течение 25 мин.
Полученный водный гомогенизированный раствор прополиса в виде суспензии, упакованный в термопластичную вакуумно-пленочную упаковку с помощью вакуумного упаковщика HENKELMAN серии BOXER, помещают в камеру высокого давления гидростата и обрабатывают давлением 800 МПа в течение 5,5 мин.
В остальном способ производства водного экстракта прополиса осуществляют как в примере 1.
В таблице 3 представлены органолептические и физико-химические показатели экстракта прополиса на водной основе. Первая группа (прототип) - экстракт получен путем экстрагирования при температуре 82°С в течение 3,5 часов ранее обработанного ультразвуком в течение 25 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей, без применения сверхвысокого давления 800 МПа и центрифугирования на этапе фильтрации, вторая группа (предлагаемый способ) - экстракт получен путем экстрагирования при температуре 82°С в течение 3,5 часов ранее обработанного ультразвуком в течение 25 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей в воздушном потоке, и сверхвысоким давлением 800 МПа в течение 5,5 мин и прошедшему фильтрацию комбинированным способом под воздействием собственного веса раствора через ткани, предназначенные для фильтрации, и центрифугированием в течение 300 сек.
Комплексную оценку проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 28886-2019 «Прополис.Технические условия» (введен в действие взамен ГОСТ 28886-90 с 01 июня 2020 года) для прополиса. В прополисе физико-химические показатели соответствуют требованиям нормативной документации. В предлагаемом способе по сравнению с прототипом увеличилось содержание антиоксидантов: массовая доля флавоноидных и других фенольных соединений на 0,17 мас. % до 0,58 мас. %, в том числе рутина - до 0,06 мас. %, кверцетина - до 0,08 мас. % и наренгинина - до 0,27 мас. %, а также полифенольных соединений - до 0,28 мг/г. При этом уменьшилась массовая доля рафината (воска и других нерастворимых в воде примесей) на 0,04 мас. % до 0,11 мас. %.
В таблице 4 представлены микробиологические показатели прополиса (сырье) и экстракта прополиса на водной основе. Образцы сырья (прополис) отвечают требованиям TP ТС 021/2011 Технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции». Микробиологические показатели экстракта прополиса на водной основе соответствуют нормативным показателям по прополису.
В предлагаемом способе по сравнению с прототипом произошло обогащение флавоноидными и другими фенольными соединениями на 0,17 мас. % при одновременном уменьшении массовой доли рафината на 0,04 мас. %, микробиологические показатели соответствуют требованиям TP ТС 021/2011.
Применение сверхвысокого давления способствует интенсификации технологического процесса, лучшей проникаемости воды в структуру прополиса при формировании дисперсной системы в виде водного раствора прополиса и насыщению экстракта прополиса биологически активными веществами по сравнению с прототипом.
Пример 3
Для приготовления водного экстракта прополиса 1 кг прополиса очищают от примесей в воздушном потоке при использовании аэросепаратора Зиг-Заг (производитель НПО «ЭРГА»). Очищенный от механических примесей прополис замораживают в течение 2-х часов при температуре -20°С до хрупкого состояния. Прополис дробят и режут до мелких фракций 1-2 мм механическими автоматизированными методами дробяще-режущим воздействием. Чистую водопроводную воду пропускают через минеральный фильтр для отчистки от солей тяжелых металлов. Для получения ионизированной ионами серебра раствора используют электролизер СТЭЛ-1 ОН-120-01, в которой проводят электролиз питьевой водопроводной воды. Затем измельченный прополис заливают предварительно очищенной от минеральных примесей ионизированной ионами серебра питьевой водопроводной воды с температурой 18-20°С в соотношении прополис: вода 1:0,5. Обработку ионизированного раствора прополиса ультразвуком осуществляют в ультразвуковом гомогенизаторе HD 4400 Sonopuls в течение 30 мин.
Полученный водный гомогенизированный раствор прополиса в виде суспензии, упакованный в термопластичную вакуумно-пленочную упаковку с помощью вакуумного упаковщика HENKELMAN серии BOXER, помещают в камеру высокого давления гидростата и обрабатывают давлением 1000 МПа в течение 6 мин.
В остальном способ производства водного экстракта прополиса осуществляют как в примере 1.
В таблице 5 представлены органолептические и физико-химические показатели экстракта прополиса на водной основе. Первая группа (прототип) - экстракт получен путем экстрагирования при температуре 85°С в течение 4 часов ранее обработанного ультразвуком в течение 30 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей, без применения сверхвысокого давления 1000 МПа и центрифугирования на этапе фильтрации, вторая группа (предлагаемый способ) - экстракт получен путем экстрагирования при температуре 85°С в течение 4 часов ранее обработанного ультразвуком в течение 30 мин (гомогенизация) раствора прополиса, предварительно очищенного от примесей в воздушном потоке, и сверхвысоким давлением 1000 МПа в течение 6 мин и прошедшему фильтрацию комбинированным способом под воздействием собственного веса раствора через ткани, предназначенные для фильтрации, и центрифугированием в течение 300 сек.
Комплексную оценку проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 28886-2019 «Прополис.Технические условия» (введен в действие взамен ГОСТ 28886-90 с 01 июня 2020 года) для прополиса. В прополисе физико-химические показатели соответствуют требованиям нормативной документации. В предлагаемом способе по сравнению с прототипом увеличилось содержание антиоксидантов: массовая доля флавоноидных и других фенольных соединений на 0,21 мас. % до мас. 0,62%, в том числе рутина - до 0,07 мас. %, кверцетина - до 0,09 мас. % и наренгинина - до 0,31 мас. %, а также полифенольных соединений - до 0,32 мг/г. При этом уменьшилась массовая доля рафината (воска и других нерастворимых в воде примесей) на 0,05 мас. % до 0,10 мас. %.
В таблице 6 представлены микробиологические показатели прополиса (сырье) и экстракта прополиса на водной основе. Образцы сырья (прополис) отвечают требованиям TP ТС 021/2011 Технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции». Микробиологические показатели экстракта прополиса на водной основе соответствуют нормативным показателям по прополису.
В предлагаемом способе по сравнению с прототипом произошло обогащение флавоноидными и другими фенольными соединениями на 0,17 мас. % при одновременном уменьшении массовой доли рафината на 0,04 мас. %, микробиологические показатели соответствуют требованиям TP ТС 021/2011.
Применение сверхвысокого давления способствует интенсификации технологического процесса, лучшей проникаемости воды в структуру прополиса при формировании дисперсной системы в виде водного раствора прополиса и насыщению экстракта прополиса биологически активными веществами по сравнению с прототипом.
Как видно по результатам комплексной оценки, экстракт прополиса на водной основе обладает биологической ценностью, сопоставимый с собственно прополисом, который является уникальным природным антисептиком, богатым флавоноидами и другими ценными нутриентами, что обуславливает ценность прополиса для регуляции процессов метаболизма, кровотворения и регенерации, работы центральной нервной системы и формирования антигипоксических свойств. Состав флавонов и флавонолов в прополисе отличается своей стабильностью [6], которые обеспечивают выраженные антибактериальные, противовоспалительные, иммуномодулирующие, антиоксидантные и противоопухолевые свойства [7-11].
Использование способа получения экстракта прополиса на водной основе обеспечивает по сравнению с существующими способами, в том числе с прототипом, следующие преимущества:
1. Происходит интенсификация технологического процесса в результате использования сверхвысокого давления 600-1000 МПа в комплексе с другими методами воздействия (очищение сырья в воздушном потоке, температура охлаждения прополиса -20°С и экстракция при температуре 80-85°С, применение двойной фильтрации - под действием собственного веса раствора и применение центрифугирования) для очистки полученного экстракта.
2. Улучшает качество готового экстракта прополиса на водной основе за счет увеличения эффективности экстрагирования прополиса на водной основе в результате улучшения степени эмульгирования до 95% при обработке ультразвуком в течение 20-30 мин, уменьшения дисперсности частиц прополиса до 0,3-0,5 мкм и устойчивости суспензии в результате воздействия на раствор прополиса сверхвысоким давлением 600-1000 МПа в течение 5-6 мин и фильтрации экстракта прополиса центрифигурированием.
3. Снижает температуру экстракции до 80-85°С при сокращении времени экстракции до 3-4 часов за счет активации диффузионных процессов под воздействием высокого давления и лучшего проникновения воды в мельчайшие поры прополиса при формировании дисперсной системы в виде водного раствора прополиса и, соответственно, интенсификации массообменных процессов между жидкой средой (водой) и твердой средой (прополисом).
4. Повышает биологическую ценность полученного экстракта за счет увеличения содержания биологически активных веществ (антиоксидантов): флавоноидов и других фенольных соединений, в том числе рутина, кверцетина, наренгинина; также полифенольных соединений и насыщения ими полученного экстракта прополиса.
5. Уменьшает содержание рафината (воска и других нерастворимых в воде примесей) за счет увеличения растворимости прополиса.
6. Сокращает микробиологическую обсемененность водного экстракта прополиса за счет ионизации ионами серебра в результате электролиза и уникального свойства прополиса к самостерилизации.
7. Благодаря указанным свойствам водный экстракт прополиса можно с успехом использовать в пищевой, косметической и фармацевтической промышленности. Промышленная применимость предлагаемого способа общедоступна.
Источники информации
1. Палош Е. Технология получения мягкой вытяжки прополиса для применения в фармацевтике. В кн. «Прополис» / Е. Палош, Н. Петре, Констанца АНДРЕЙ [под рук. В. Харнажа, отв. ред. Паулина Буня]. Изд. IV. Бухарест: Апимондия, 1988. С. 230-233.
2. Патент №RU 2303988С1, Российская Федерация. МПК А61К 35/64, Получение водного экстракта прополиса / Р.Г. Сазхиев (RU), И.Н. Токарев (RU) // заявители и патентообладатели фирма «ШИЛЛЬ ср.о.» (CZ), Р.Г. Сазхиев (RU), заявка №2005141471/15; заявл. 30.12.2005, опубл. 10.08.2007, бюл. №22.
3. Патент № RU 2185181 С1, Российская Федерация. МПК A61K 35/00, Способ получения водного экстракта прополиса эй-пи-ви / Р.Г. Хисматуллин (RU) // заявитель и патентообладатель ООО «Тенториум» (RU), заявка №2005141471/15; заявл. 05.03.2001, опубл. 20.07.2002 (прототип).
4. Carlez A. Effects of high pressure and bacteriostatic agents on the destruction of Citrobacter freundii in minced beef muscle. In High Pressure and Biotechnology. Colloque INSERM/J / A. Carlez, J.C. Cheftel, J.P. Rosec, N. Richard; N.L. Saldana, C. Balny [C. Balny, R. Hayashi, K. Heremans, P. Mason (eds.)], 1992, p. 365-368.
5. Нога И.В. Термодинамика воздействия высокого давления и температуры на микроорганизмы и витамины // Физика и техника высоких давлений. 2006. Т. 16. №3. С. 126-136.
6. Лупина Е.В. Химическое изучение состава флавонов и флавонолов в прополисе / Е.В. Лупина, Д.И. Писарев, О.О. Новиков, А.Ю. Малютина, Г.В. Васильев, Ю.Г. Васильева // Фармация и фармакология. 2018. Т. 6.№3. С. 241-254.
7. Luo Н. Kaempferol induces apoptosis in ovarian cancer cells through activating p53 in the intrinsic pathway / H. Luo, G.O. Rankin, Z. Li, L. Depriest, Y.C. Chen//Food Chem. 2010. Vol. 128. P. 513-519.
8. Watanabe M.A. Cytotoxic constituents of propolis inducing anticancer effects: a review / M.A. Watanabe, M.K. Amarante, B.J. Conti, J.M. Sforcin // JPP. 2011. Vol. 63.1s. 11. P. 1378-1386. DOI: 10.1111l/j.2042-7158.2011.01331.x.
9. Nirmala P. Effect of kaempferol on lipid peroxi-dation and antioxidant status in 1,2-dimethyl hydrazine induced colorectal carcinoma in rats / P. Nirmala, M. Ramanathan // Eur. J. Pharmacol. 2011. Vol. 654. P. 75-79.
10. Конакова И.А. Фармакологические свойства прополиса и его применение в ветеринарии / И.А. Конакова, Ф.А. Медетханов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2018. Т. 235. № з.с. 100-104.
11. Вахонина Е.А. Антиокислительная активность прополиса и его экстрактов / Е.А. Вахонина, Н.В. Будникова, Л.А. Репьева // Пчеловодство. 2019. №7. С. 56-57.