Эмбриотипия в фетальный период развития крысы в экспериментальной модели рака желудка

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

77

ЭМБРМОТИПИЯ В ФЕТАЛЬНЫй ПЕРИОД РАЗВИТИЯ КРЫСЫ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ РАКА ЖЕЛУДКА © Д.А. Боков, н. с., М.П. Обидченко, студ.

Оренбургский государственный медицинский университет, г. Оренбург, Россия

Актуальность проблемы

Этапность гисто-, органо-, системогене-за — важнейший механизм реализации всего комплекса условий пренатального онтогенеза, определяющий динамический аспект адаптации процесса становления пространственной организации эмбриона и плода к последовательному закономерному изменению имманентных факторов регуляции морфогенеза. Объем, интенсивность, направленность последнего зависят от возникновения и усложнения необходимых взаимоотношений орагнизмов эмбриона (плода) и матери с учетом достижения ими эффективных параметров.

В основе тканевых трансформаций — ком-митирование и детерминация — явления специальной активности генома в соответствующий критический период. Следует подчеркнуть, что открытие новых генов, функциональная активность которых контролирует реализацию конкретных условий гистогенеза, все еще не связано с определением достоверных, объективных моделей взаимодействия генов, что ограничивает методолого-методические возможности изучения формообразовательных процессов, прежде всего разработку понятия о биологической форме и ее возникновении в широком смысле. Обозначенные проблемы имеют множество практических приложений, но все еще далеки от разрешения.

Структурная, физиологическая, биохимическая характеристика этапов развития в прена-тальный период на основе синтезного подхода и с учетом верификации критериального значения каждого из изменений все еще недостаточно разработанная проблемная область эмбриологии. Подготовка каждого последующего качественного изменения в процессе дифференцировки структур и несостоятельность соответствующего градиентного потенциала — сложно обусловленные феномены. Здесь актуально установление значения патогенетического модулирования гестационной доминанты матери и обобщение конкретных моделей материнско-плодных отношений в связи с обозначенными выше проблемами. Это лежит в основе решения задачи формирования новых теоретических представлений и развития практических технологий.

Цель исследования: показать гистогенетиче-ские свойства трансформации тканевых дифферо-нов в фетальном периоде с учетом верификации конкретных ее динамических условий при моделировании рака желудка беременной самки.

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на беспородных белых крысах-самках (Ы= 35), которым в течение 6 месяцев интрагастрально вливали 0,02 % водный раствор формальдегида и перекиси водорода (в соотношении 1 : 1) два раза в неделю через неделю (запатентованный способ моделирования экспериментального рака желудка). При работе с животными соблюдались нормы Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (Страсбург, 1985). Через 5 месяцев интоксикации к самкам подсадили самцов по формуле 1 х 5. После завершения беременности новорожденных крысят фиксировали в формалине. Для гистологических исследований материал подвергли стандартной обработке. Тотальные серийные срезы плодов окрашивали гематоксилином Майера и эозином. Количественные данные обработали обычными методами статистики с уровнем значимости, не превышающим 5 %.

Результаты исследования

Беременность наступила только

у 17,1 ± 0,6 % самок по сравнению с контрольной группой животных (р < 0,001). При этом среднее количество крысят, приходящихся на одну крысу, было почти в два раза меньше (р < 0,001), а масса тела троекратно снижена по сравнению с группой контроля (р < 0,001). Доля новорожденных крысят, обнаруженных живыми, составила 16,8 ± 1,3 % (р < 0,001). При сравнительно обычном сроке гестационного периода (около 21 дня) крысята, обнаруженные неживыми, характеризовались недостаточной динамикой гисто- и органогенеза. Органы и их системы были сформированы, но наблюдалось значительное ослабление процессов дифференцировки и необходимой прогрессивной тканевой трансформации. Тканевые элементы были образованы незрелыми дифферо-нами. Гистологический анализ позволил установить, что крысята осуществили первый вдох — в респираторный отдел дыхательной системы поступил воздух. При этом паренхима легких характеризовалась значительным уровнем незрелости. В обширном объеме недифференцированной ткани обнаруживалось малое количество зачатков альвеол. Признаки саккулярного легкого не определяли реализацию всего объема морфогенетиче-ских процессов данной стадии развития, то есть свидетельствовали о нарушении этапности раз-

ЖУРИ.иЪ АКУШЕРСТВА - ЖЕНСКИХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

КЫ 1684-0461

Международная конференция «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2016» International conference "Reproductive medicine: young scientists' overlook — 2016"

вития легких. Выстилка мешочков была образована кубическим эпителием, иногда гетерогенна и демонстрировала метаплазию при развитии плоского эпителия. В паренхиме обнаруживались многочисленные беспросветные эпителиальные тяжи и отсутствовали взаимоотношения сосудистого аппарата и респираторных элементов. В целом в легких не были сформированы структурные условия для эффективного газообмена.

Почки крысят находились на этапе метанеф-рогенной бластемы, когда паренхима образована ветвящимся дивертикулом вольфого протока. Нефроны не обнаруживались. В печени развитая кроветворная активность, портальный аппарат и гепатобилиарная системы не были сформированы, печеночные балки отсутствовали. Головной мозг был представлен мозговыми

пузырями с объемными полостями. В хрящевых моделях костей отсутствовали очаги оссифика-ции: не индуцирована даже остеоидная стадия остеогистогенеза.

Выводы

Эксперимент по моделированию рака желудка самок при наступлении беременности позволил дать оценку патогенетического значения усугубляющих друг друга последовательно формируемых условий интоксикации и канцерогенеза для процессов морфогенеза плода. Доказан факт пролонгации эмбриотипии в плодном периоде.

Исследование выполнено за счет гранта Правительства Оренбургской области (Постановление № 465-п от 17.06.2015).

КЛЕТКИ ТРОФОБЛАСТА ПОДАВЛЯЮТ ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ NK-КЛЕТОК ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ

© А.Н. Викнянщук, студ., В.А. Михайлова, н. с., К.Л. Белякова, студ., Л.В. Колударова, студ., Е.В. Хохлова, студ.

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», отдел иммунологии, лаборатория межклеточных взаимодействий, г Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

NK-клетки играют важную роль в процессе подготовки эндометрия к имплантации. Количество NK-клеток в эндометрии закономерно изменяется в ходе менструального цикла, а также в течение беременности. Одним из возможных механизмов накопления NK-клеток в эндометрии является их пролиферация in situ. При беременности клетки трофобласта регулируют функциональную активность NK-клеток. В настоящее время недостаточно изучено влияние клеток трофобласта на пролиферацию NK-клеток.

Цель исследования: оценить влияние клеток трофобласта на пролиферативную активность NK-клеток при беременности.

Материалы и методы исследования

Обследовано 20 здоровых небеременных женщин в пролиферативной фазе менструального цикла (группа 1), 19 здоровых небеременных женщин в секреторной фазе менструального цикла (группа 2) и 20 женщин с физиологическим течением беременности на сроке 6-7 недель (группа 3). В лунки плоскодонного 96-луночного планшета с монослоем клеток линии JEG-3 вносили мононуклеары периферической крови и ре-комбинантный человеческий IL-2. После 7 суток инкубации оценивали относительное количество NK-клеток (CD56+) с помощью проточного цитофлюориметра (BD FACSCanto II, США).

Пролиферативную активность NK-клеток оценивали по интенсивности экспрессии маркерного белка пролиферации Ю-67 (в относительных единицах флуоресценции).

Результаты исследования

При добавлении ^-2 во всех исследуемых группах наблюдали увеличение пролифера-тивной активности NK-клеток по сравнению со спонтанным уровнем (интенсивность экспрессии маркерного белка пролиферации Ю-67 NK-клетками в присутствии ^-2 (относительные единицы флуоресценции); результаты представлены в виде: медиана {нижний квартиль; верхний квартиль}: группа 1 — 2698 {2030; 3280}, группа 2 — 2498 {2050,5; 7419,5}, группа 3 — 12481 {2644; 18900}; спонтанный уровень: группа 1 — 438 {170; 945}, группа 2 — 512 {216; 1286}, группа 3 — 1138 {507; 1453}. Достоверность различий внутри групп р< 0,001). В присутствии клеток трофобласта пролиферативная активность NK-клеток была ниже по сравнению со спонтанным уровнем (интенсивность экспрессии маркерного белка пролиферации Ю-67 NK-клетками в присутствии клеток трофобласта (относительные единицы флуоресценции): группа 1 — 162 {89; 204}, группа 2 — 168,5 {97; 486}, группа 3 — 485 {145,5; 1044}. Достоверность различий внутри групп от спонтанного уровня:

ЖУРИАЛЪ АКПИЕРСШ " ЖЕНСШХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461