Актопротекторные и нейротропные эффекты нового производного дигидрокверцетина

Материалы и методы исследования. В исследование были включены 36 пациентов с краниофациальными опухолями головного мозга. Больные были разделены на 2 группы: контрольную и экспериментальную. В контрольную группу вошли 19 пациентов: мужчин - 8, женщин - 11. В экспериментальную группу вошли 17 пациентов: мужчин - 9 , женщин - 8.

Контингент пациентов в сравниваемых группах был идентичен: существенного различия состава групп по полу, возрасту, степени выраженности клинических проявлений не было выявлено (р > 0,05). В исследование не включались пациенты с выявленными нарушениями психики.

Распределение пациентов обеих групп в соответствии с возрастом показало, что больных работоспособного возраста - от 31 до 50 лет: 48% - пациентов экспериментальной группы и 51,5% - в контрольной группе. В исследование включались пациенты с краниофациальными опухолями головного мозга, как имеющих, так и не имеющих обнаруженных нарушений ВПФ (у 47% пациентов обеих групп нарушения ВПФ имели сочетанный характер).

Для оценки состояния ВПФ всем пациентам проведено комплексное обследование по схеме нейропсихологического исследования ВПФ. Реактивная и личностная самооценка тревожности пациентов проводилась с помощью Шкалы Тревоги Спилбергера (State-Trait Anxiety Inventory). Выявление депрессии и оценка изменения тяжести состояния в результате терапии проводилась при помощи Шкалы Монтгомери-Асберг (Montgo-merty - Asberg Depression Scale).

При работе с больными данной категории наиболее адекватной оказалась позитивная, рациональная психотерапия разъяснительного, успокаивающего, отвлекающего характера, косвенное внушение с учетом индивидуальных особенностей личности, характера заболевания и тяжести общего состояния.

Работа выполнена на базе 6-го нейроонкологического отделения ГУ «Научно-исследовательского института нейрохирургии имени Н.Н.Бурденко» РАМН.

Статистическая обработка результатов исследования проведена с использованием математических методов вариационной статистики с использованием компьютерного математического анализа на персональном компьютере (программа «Microsoft Excel и пакета прикладных программ BIOSTAT, ver. 3.03.) с определением средней арифметической (М), достоверности различия по критерию Стьюдента, анализ распределения с использованием критерия %2.

Результаты и их обсуждение. Анализ результатов проведенного клинического исследования и работы с пациентами, имевшими краниофациальные опухоли головного мозга и нарушения ВПФ, показал, что после хирургического вмешательства восстановление ВПФ было высокоэффективным в обеих группах больных (p<0,05). Однако в экспериментальной группе, с которой проводилась возможная работа по восстановлению ВПФ в комплексе с психотерапией, восстановление ВПФ оказалось более выраженным (р<0,001) Разница в восстановлении ВПФ у пациентов на 9 день после операции составила 12%. Учитывая сложный характер патологии и медленное восстановление мозгового субстрата, данный отрыв на коротком промежутке времени представляется нам весьма значительным.

Сравнительный анализ результатов показал следующие данные по восстановлению отдельных видов ВПФ у обеих групп пациентов. Наиболее существенные различия между контрольной и экспериментальной группами пациентов были обнаружены при анализе их эмоционального состояния. Однако выраженного снижения эмоционального напряжения в конце стационарного этапа не наблюдалось, что, вероятно, связано с волнением пациентов перед предстоящей временной или постоянной сменой жизненных ориентиров после операции.

Наиболее полную картину динамики эмоционального состояния по шкале Монтгомери-Асберг, которая использовалась нами для оценки наличия депрессии и изменения тяжести состояния в результате терапии.

По данным проведенных исследований, использование комплексной системы нейропсихологической реабилитации, включающей психотерапию наряду с восстановлением имеющихся нарушений ВПФ у пациентов с краниофациальными опухолями головного мозга, как имеющих нарушения ВПФ, так и не имеющих таковых, увеличивает эффективность процесса их восстановления и общего самоощущения. Полученные положительные результаты позволяют сделать предварительное заключение,

о том, что предложенный нами подход в реабилитации данной категории пациентов предпочтителен по сравнению со стандартным. Поскольку позволяет добиться улучшения общего уровня качества жизни пациентов. Внедрение психотерапии и восстановления ВПФ в раннем периоде реабилитации является весьма перспективным направлением развития нейрореабилитации, требующим дальнейшего накопления клинического материала и усовершенствования ее методов.

PSYCHOLOGICAL REHABILITATION NEUROLOGICAL PATIENTS IN THE HOSPITAL

N.A. GRIDNEVA ”Dubna”International University of Nature, Society and Person

The article highlights the problem of psychological rehabilitation of patients with cerebrum craniofacial tumors using methods of neuropsychology and psychotherapy.

Key words: neurosurgery, rehabilitation, hospital.

УДК 612.028 + 547.917

АКТОПРОТЕКТОРНЫЕ И НЕЙРОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА

А.А. СЕРГИЕВИЧ*, Т.А. БАТАЛОВА*, М.Л. ПЛАСТИНИН*,

М.П. КОРОТЕЕВ**, А.М. КОРОТЕЕВ**, Т.С. КУХАРЕВА**,

Э.Е. НИФАНТЬЕВ**

Исходя из имеющихся данных о выраженных антиоксидантных свойствах природного флавоноида дигидрокверцетина, представляется актуальном в практическом отношении изучение физиологических эффектов, проявляющихся у новых его производных. В сравнительном аспекте с известным препаратом мексидолом показан выраженный актопротекторный и нейротропный эффекты у соединения НК-2 (6-диизопропиламинометил-2,3-дигидрокверцетина). Ключевые слова: работоспособность, тест Порсолта, модульное устройство, производное дигидрокверцетина НК-2

В настоящее время достаточно широко расширены представления о связи химического строения, биотрансформации и о механизмах действия лекарственных средств, у которых реализация фармакологического эффекта сводится к изменению показателей физической работоспособности [1] и когнитивной сферы [2]. Параллельно с разработкой таких фармакологических соединений ведутся исследования по изучению физиологически активных веществ, полученных из природных материалов или синтезированных химическим путем, способных влиять на ряд физиологических функций одновременно. К числу таких относятся важнейшие природные флавоноиды, в частности дигидрокверце-тин (ДГК).

ДГК, выделенный из древесины Дугласовой ели [3], а затем из древесных отходов заготовки даурской и сибирской лиственницы [4,5] оказался эффективным антиоксидантом, в связи с чем было предложено его использование в качестве лекарственного средства [6] и пищевой добавки [7]. В дальнейшем начались работы по химической модификации ДГК [3], в ходе которых выяснилось, что наряду с полезными веществами данная субстанция содержит ряд примесей, которые могут оказывать на организм нежелательное влияние. В дальнейшем химическим путем был получен ряд новых соединений, очищенных химически от сопровождающих их дополнительных компонентов (что исключает проявление побочных эффектов), синтезированных из ДГК.

Цель исследования — изучение изменения некоторых физиологических функций (физической работоспособности с взаимосвязью с поведенческими характеристиками) при введении вещества НК-2 (6-диизопропиламинометил - 2,3-дигидрокверцетина), синтезированного из ДГК в эксперименте на лабораторных животных, в сравнении непосредственно с самим ДГК и известным антиоксидантом - мексидолом.

Материалы и методы исследования. Биологическая часть. Эксперимент проведен на 37 белых беспородных крысах-самцах. Животных содержали в стандартных условиях вивария в клетках по 4-5 особей при естественном освещении и свободном доступе к воде и пище. В работе соблюдались принципы Хель-

* Амурская государственная медицинская академия, 675000, г. Благовещенск, Горького, 95, altexes@mail.ru

Московский государственный педагогический университет, 119021, г. Москва, пер. Несвижский, 3, chemdept@mail.ru

синской декларации о гуманном отношении к животным. В исследовании использованы после предварительного отбора по разработанной нами методике [8] лабораторные животные, относящиеся ко второй типологической принадлежности. Все особи были разделены на две группы: контрольные, получающие плацебо (физраствор); подопытная группа, получавшая НК-2 (25 мг/кг); подопытная группа, получавшая ДГК (25 мг/кг); подопытная группа, получавшая мексидол (25 мг/кг). Все исследуемые вещества вводились за 40 мин до начала эксперимента внутри-брюшинно. Исследование параметров высшей нервной деятельности проводилось однократно, после чего в течение 5 дней изучалась физическая выносливость.

Для анализа способности достижения пищевого подкрепления использовали разработанное нами модульное устройство МУ [9].

Рис. 1. Схема модульного устройства, используемого для изучения способности животных к достижению подкрепления.

Предлагаемое устройство (рис. 1) включает в себя стартовый модуль и четыре целевых модуля. Стартовый модуль имеет размеры, необходимые для свободного размещения трех подопытных крыс. В боковых стенках стартового модуля вырезаны по два отверстия: вход и выход. Выходы прикрыты дверцами, открывающимися только внутрь стартового модуля. Целевые модули идентичной конструкции включают в себя разделительную стенку, целевую часть, в которой размещается подкрепление, входной тоннель с аверзивным препятствием и выходной коридор. Перед входом в тоннель в стартовом модуле размещается педаль, ярко окрашенная, соединенная с дверцей. При нажатии на педаль происходит открытие затвора дверцы. Дверца открывается внутрь стартового модуля.

В стартовый модуль помещается животное. В целевую часть кладется подкрепление. Это может быть в зависимости от сформированной у животного мотивации еда, вода или половой партнер. Во входном тоннеле располагается аверзивное препятствие (вода, решетка под электрическим током, острые предметы). Животное реагирует на подкрепление и пытается добраться до него по входному тоннелю. Аверзивное препятствие мешает ему. В попытках достичь подкрепления животное методом «проб и ошибок» [10] нажимает на педаль (оперантное поведение). Дверца выхода падает внутрь целевого модуля и открывает доступ к подкреплению. Животное по выходному коридору, как по обходному пути, добирается до подкрепления, минуя аверзивное препятствие.

В МУ фиксировали следующие показатели: латентный период (ЛП), равный периоду времени с момента помещения животного в устройство до первой побежки (правильной или ошибочной); время достижения подкрепления (ВДП), состоящее из среднего временного периода от момента первой побежки (правильной или ошибочной) до нахождения подкрепления в последнем модульном отсеке; показатель безошибочности побежек (ПБП), отражающий процентное соотношение доли правильных побежек к ошибочным. При достижении подкрепления через тоннель с аверзивным раздражителем, побежка расценивалась

как ошибочная, и, соответственно, через выход, открываемый после нажатия на педаль - правильной.

Предварительно перед экспериментом животные, испытывающие голод помещались в МУ, в котором все выходы были открыты. Подопытные особи имели возможность оценить обстановочную афферентацию и воспользоваться любым выходом. Данная процедура проходила троекратно, после чего у животных контрольной и подопытных групп перед экспериментом производилась депривация пищи (в течение 3 суток). На следующий день начинался эксперимент.

Для изучения физиологических показателей использовался плавательный тест «отчаяния» Р. Порсолта [11]. Данное устройство предусматривает оценку двигательной активности крыс, помещенных в стеклянный цилиндр, диаметр которого составляет 20 см., высота 40 см. цилиндр на 1/3 заполняется водой с температурой 27±1 оС.

Подопытное животное помещается в установку на 5 мин, регистрировалось время иммобильности. Увеличение активного плавания наряду с уменьшением времени иммобилизации рассматривали как позитивное изменение работоспособности и как антидепрессантный эффект.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью программы «Biostat» [12] по методам вариационной статистики с оценкой статистической значимости показателей и различий рассматриваемых выборок по ^критерию Стьюдента. Различия в сравниваемых группах считали достоверными при уровне значимости 95% (р<0,05).

Химическая часть. Соединение НК-2 (6-

диизопропиламинометил-2,3-дигидрокверцетин, С22Н27NO7) синтезировано в научной лаборатории кафедры органической химии химического факультета Московского государственного педагогического университета (рис. 2).

Рис. 2. Структурная формула производного дигидрокверцетина НК-2 (6-диизопропиламинометил-2,3 -дигидрокверцетин).

Структура соединения изучена методом спектроскопии ЯМР на ядрах *Н и 13С и подтверждена элементным анализом, охарактеризована температурой плавления.

Синтез: смесь 0,49 г. (16.0 ммоль) формальдегида (в виде параформа) и 1.62 г (16.0 ммоль) диизопропилааминометила в 40 мл этанола перемешивали, при нагревании до 70°С, до полной гомогенизации, кипятили 30 минут, охлаждали. Полученный раствор прибавляли, при перемешивании к раствору 5,58 г. (16.0 ммоль) дигидрата 2,3 - дигидрокверцетина в 80 мл этанола, перемешивали 2 часа, при 20°С. Выпавший осадок отфильтровали, промывали этанолом (2x30 мл.), эфиром (2x30 мл) и высушивали в вакууме до постоянной массы. Выход 3,60 г. (54%).

Характеристики: т.пл. 245-248°С, Спектр ЯМР*Н, б, м.д. (I, Гц): 1,15 66 (12 СН3-СН), 3,24 м (2Н, СН-СН3), 3,86 с (2Н, СН2), 4, 42а (1Н,С3Н, ДНН) 11.00), 4, 78 а (1Н, С2Н, З (НН) 11.00), 5,28 с (1Н, С7ОН), 5,43 с (1Н, С8Н), 6,75 с (24, С5’, 6’Н), 6.91 с.

Результаты и их обсуждение. Показатели, полученные в МУ, свидетельствуют о наличии вторичных ноотропных свойств у всех исследуемых нами соединений (табл. 1), что проявляется в виде оптимизации процессов обучения в используемом устройстве. Наиболее высокая разница по всем регистрируемым параметрам получена у экспериментальных особей, получающих мексидол.

В данной группе значение ЛП уменьшилось на 128,0 с (р<0,05) по сравнению с контрольными особями. Значение времени достижения подкрепления также имело достоверно значимую разницу, уменьшившись на 55,9 с (р<0,05). Показатель безошибочности побежек, отражающий когнитивную составляющую процесса обучения, достоверно снизился практически в 2 раза.

В данной группе значение ЛП уменьшилось на 128,0 с

(р<0,05) по сравнению с контрольными особями. Значение времени достижения подкрепления также имело достоверно значимую разницу, уменьшившись на 55,9 с (р<0,05). Показатель безошибочности побежек, отражающий когнитивную составляющую процесса обучения, достоверно снизился практически в 2 раза.

У животных, получавших дигидрокверцетин, значительно, но без достоверной разницы снизилось ВДП на 44,3 с и ПБП на 14,5%. ЛП у данной исследуемой группы снизился в отличие от контрольной на 116,1 с (р<0,05).

В группе экспериментальных животных, получавших НК-2, аналогично снизились все показатели. Достоверно значимое уменьшение отмечалось в значениях ЛП и ПБП. Значение ВДП, характеризующее в большей степени энергетическую (физическую) сферу обучения животных значительно снизилось на 28,2%, не имея при этом достоверности.

Полученные результаты показали, что все исследуемые антиоксиданты, в том числе и новое соединение НК-2, проявили выраженный позитивный эффект в отношении познавательной сферы, о чем свидетельствуют наблюдаемые нами значения когнитивного уровня (а именно ПБП) с оптимизацией условнорефлекторной деятельности. Кроме этого, мы предполагаем, что данное соединение, достоверно снизив значение ЛП, оказало эффект снижения общего уровня тревожности (аналогично с известными сравниваемыми препаратами). Нейротропная активность антиоксиданта мексидола на сегодняшний день является общеизвестным фактом, о чем свидетельствуют как данные других исследователей [13,14], так и наши предыдущие работы [15].

Показатели иммобильности, определяемые у лабораторных крыс подробно отражены в табл. 1.

Таблица 1

Показатели обучаемости лабораторных животных в модульном устройстве под влиянием НК-2, дигидрокверцетина и мексидола

Параметры Подопытные группы

Контроль НК-2 ДГК Мексидол

ЛП, (с) 297,4±44,3 177,8±21,6* 181,3±33,7* 169,4±31,2*

ВДП, (с) 187,3±27,8 154,2±17,9 143,0±24,3 131,4±13,3*

ПБП (%) 59,3±13,8 31,1±8,5* 44,8±7,7 30,5±10,1*

Примечание: * - достоверные различия между контрольными и опытными особями.

Таблица 2

Средние временные значения

Сутки исследования Контроль НК-2 ДГК Мексидол

1 сутки 51,64±8,13 34,21±4,38 39,14±7,31 35,14±12,35

2 сутки 48,72±10,11 30,75±12,81 38,23±10,11 31,73±9,7

3 сутки 55,87±8,71 27,34±8,5* 38,71±8,93 29,14±9,3*

4 сутки 61,31±11,73 24,77±7,3** 35,32±11,72* 25,73±8,71*

5 сутки 59,27±11,31 25,41±11,3** 36,14±12,3 24,11±11,54**

Примечание: * - p<0,05, ** - p<0,01 по сравнению с контрольной группой

Средние значения в контрольной выборке не имели какой-либо четкой тенденции к увеличению или снижению, находясь в течение всего периода наблюдения в диапазоне от 48,8±10,1 до 61,3±11,7 сек.

Во всех подопытных группах в разной мере наблюдалась четкая тенденция к снижению количественного значения иммобильности в тесте вынужденного плавания. Так, у особей, получавших НК-2, в 1 сутки данный параметр снизился в 1,5, а во 2 сутки в 1,6 раза в сравнении с контролем, не имея при этом достоверно значимой разницы. В 3-ий день исследования иммобильность в этой группе была достоверно ниже в 2 раза (р<0,05). Аналогичная картина фиксировалась в предпоследние и последние сутки исследования, где изучаемый параметр уменьшился в 2,3 раза при р<0,01.

В группе лабораторных животных, получавших ДГК, тенденция к снижению в течение периода проведения опыта выражалась менее значительно. Так, например, показатель иммобильности у этих особей к 5 суткам (по сравнению с первым днем) уменьшился только на 3 сек, тогда как в группе с НК-2 данная разница составила 8 сек. Тем не менее, на 4 сутки эксперимента у особей, получавших ДГК, в сравнении с контрольной группой иммобильность достоверно уменьшилась в 1,7 раза (р<0,05).

У лабораторных крыс из подопытной группы, получавшей мексидол, динамика снижения параметра «отчаяния» и работоспособности была ярко выраженной. В 1 и 2 день исследования иммобильность снизилась в отличие от контроля в 1,5 раза (р>0,05). Начиная с 3 суток, данные значения имели достоверную разницу, уменьшившись в 1,9 (р<0,05), 2,4 (р<0,01) и 2,5 раза (р<0,01) соответственно. При этом внутри группы значение иммобильности к последнему дню в сравнении с первым снизилось на 11 сек.

Таким образом, показатель иммобильности в нашем исследовании наиболее позитивно изменяется во всех исследуемых группах (но с разной степенью). Это связано с улучшением физической работоспособности, появлением и усилением антидепрес-сивного влияния. ДГК, мексидола, а соответственно и НК-2, являясь антиоксидантами, препятствуя активации перекисного окисления липидов и образованию свободных радикалов в организме, наблюдающихся при физических и эмоциональных стрессах, оказывают положительные физиологические влияния.

Полученные результаты показывают практически одинаковое влияние нового соединения, синтезированного из ДГК - НК-2 и мексидола, являющегося производным янтарной кислоты (3-гидрокси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат) и зарегистрированного на сегодняшний день как лекарственного средства, обладающего широким спектром фармакологической активности [16].

НК-2 аналогично мексидолу получен синтетическим химическим путем, но преимущество данного вещества заключается в том, что его исходной субстанцией является природный флаво-ноид и финансовая стоимость конечного продукта оказывается более экономически выгодной. Кроме этого, 6-

диизопропиламинометил-2,3-дигидрокверцетин в настоящее время можно применять как биологически активное химическое соединение, обладающее физиологически позитивными эффектами, что показывают полученные нами данные.

Заключение. На основе полученных данных, исходя из системных позиций, можно сделать вывод, что новое химическое вещество НК-2, позитивно изменяя физиологические параметры рабочих элементов, проявляет актопротекторное свойство, стимулирует адаптационные механизмы, которые в конечном итоге направлены на восстановление системоорганизующих факторов

обладает ноотропным и анксиолитическим свойствами. По параметру, характеризующему когнитивную сферу, НК-2 превосходит дигидрокверцетин, что имеет немаловажное значение в прикладном аспекте.

Литература

1. Аулик И.В. Определение физической работоспособности в клинике и спорте / И.В. Акулик // М.: Медицина, 1990.

2. Думенко В.Н. Высокочастотные компоненты ЭЭГ и инструментальное обучение / В.Н. Думенко / М.: Наука, 2006.- 151 с.

3. Pew J.C. A Flavonon from Douglas-Fir Heatwood / Pew J.C. // J. Am. Chem. Soc, 1948.- № 15.- Р. 3031.

4. Способ выделения дигидрокверцитина: пат. 2180566 Рос. Федерация. № 2001101592/14; заявл. 18.01.01; опубл. 20.03.02.

5. Способ выделения дигидрокверцетина : пат. 2000797 Рос. Федерация, опубл. 1993, Бюл. № 37.

6. Диквертин - новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство / В. К.Колхир [и др.] // Хим.- фарм. Ж, 1995.- № 9.- С. 61-63.

7. Тюкавкина Н.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки / Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. // Вопр. Питания, 1996.- № 4.- С. 33-36.

8. Typological Features in the Behavior of Rats / N.R. Grigorev [et al.] // Neuroscience and Behavior Physiology, 2008.- № 6.-Р. 597-603.

9. Модульное устройство для изучения способности живот-

ных к достижению подкрепления: пат. Рос. Федерация 2311763, опубл. 2007. Бюлл. № 5.

10. Зорина З.А., Полетаева И.И. Элементарное мышление животных / Зорина З.А., Полетаева И.И. // М.: Аспект пресс, 2003.- 320 с.

11. Porsolt R.D. Behavioural despair in rats: a new model sensitive to andepressant treatments / Porsolt R.D., Anton G., Blavet N. // Eur. J. Pharmacol, 1978.- Vol. 47.- P. 379-391.

12. Гланц С. Медико-биологическая статистика (пер. с англ.) / Гланц С. // М.: Практика, 1999.- 459 с.

13. Молодавкин Г.М. Изучение комбинированного действия мексидола и ненаркотических анальгетиков на поведение в условиях эмоционального стресса и на болевые пороги / Молодавкин Г.М., Воронина Т. А., Ларенцова Л.И. // Эксперим. и клин. Фармакология, 2007.- № 2.- С. 16-19.

14. Александровский Ю.А. Применение мексидола при тревожных расстройствах / Александровский Ю.А., Аведисова А.С., Серебрякова Т.В. // Новые направления в создании лекарственных средств. Конгресс «Человек и лекарство». М.: 1997.-С. 242-244.

15. Влияние мексидола на некоторые формы врожденного поведения / В.А. Доровских [и др.] // Дальневост. мед. Журн, 2005.- № 1.- С. 70-72.

16. Смирнов Л.Д. Молекулярные механизмы действия и актуальные направления медико-биологического применения эмоксипина и мексидола / Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М. // Бюл. Всесоюзного научного центра по безопасности биологически активных веществ. Купавна: БНЦ БАФ, 1992.- С. 9.

THE STUDY OF INSTRUMENTAL BEHAVIOUR IN UNIVERSAL DEVICE WITH VARIABLE ARCHITECTURE. ACTOPROTECTIVE AND NEUROTROPIC EFFECTS OF NEW DERIVATIVE OF DIHYDROQUERCITIN

A.A. SERGIEVICH, T.A. BATALOVA, M.L. PLASTININ, M.P.KOROTEEV, A.M. KOROTEEV, T.S. KUHAREVA, E.E.NIFANTYEV

The Amur State Medical Academy, 675000, Blagoveshchensk, 95 Gorkiy St., altexes@mail. ru Chemistry Department of Moscow State Pedagogical University,

119021, Moscow, Nesvizskiiper., 3, chemdept@mail.ru

On the assumption of available information about antioxydative properties of natural flavonoid dihydroquercitin the study of physiological effects of its new derivative has offered actual. Expressed actoprotective effect of compound NK-2 (6-diisopropilaminometil -2,3- dihydroquercitin) has showed in comparative aspect with well-known drug mexidol.

Key words: efficienty, Porsolt test, modular device, derivative of dihydroquercitin.

УДК: 616.381-002: 616-092.9

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РАЗВИТИЕ ПОЛИОРГАННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ И УВЕЛИЧЕНИЯ РИСКА ЛЕТАЛЬНЫХ ИСХОДОВ ПРИ ПЕРИТОНИТЕ

И.А. ФАСТОВА*

В эксперименте при моделировании перитонита исследовали динамику уровня эндогенной интоксикации, Ил-1а, ФНОа, показателей газового, кислотно-основного состояния крови и морфологические изменения в жизненно важных органах - легких, кишечнике, печени, почках и сердце. Высокие концентрации эндотоксина, Ил-1а и ФНОа, наблюдаемые в нашем эксперименте, воздействуют на эндотелий, приводят к нарушению микроциркуляции, развитию гипоксии, полиор-ганной недостаточности и увеличивают риск летальных исходов. Ключевые слова: перитонит, Ил-1а и ФНОа, полиорганная недостаточность, летальный исход.

Одной из важнейших проблем экстренной хирургии, несмотря на большой прогресс в диагностике и интенсивной терапии, остается перитонит, летальность которого составляет 2530%, а при развитии синдрома полиорганной недостаточности достигает 80-90% [2,5,8]. По современным представлениям перитонит характеризуется как системная воспалительная реакция организма в ответ на развитие гнойно-некротического процесса в органах брюшной полости, клинически проявляющаяся эндоток-

* 400066, г.Волгоград, пл. Павших борцов 1, Волгоградский государственный медицинский университет. Кафедра патологической физиологии Вол-гГМУ. iafastova@yandex.ru

сикозом и множественной дисфункцией органов (MODS) [3,7,8]. Известно, что первой ответной реакцией на воспаление брюшины является нарушение микроциркуляции, что приводит к развитию гипоксии, нарушению трофики и задержке выведения токсических веществ [8]. Развитие и прогрессирование эндотоксикоза связаны с несоответствием между образованием токсических субстанций и способностью органов, входящих в функциональную систему детоксикации (легкие, печень, почки, желудочнокишечный тракт, система иммунологического надзора) трансформировать и элиминировать их, так как происходит существенное снижение функционального резерва этой системы.

Благодаря прогрессу в области общей патологии, молекулярной биологии, иммунологии, стало очевидным, что развитие орга-но-системных повреждений, прежде всего, связано с неконтролируемым распространением из первичного очага инфекционного воспаления провоспалительных медиаторов, с последующей активацией под их влиянием макрофагов в других органах и тканях, с выделением аналогичных эндогенных субстанций [3,5,13]. Существует корреляция между стабильно высоким уровнем ФНОа, Ил-1 и летальностью [11,12], исследователи постепенно приходят к тому, что выброс ФНОа, Ил-1, 6, 8 дифференцирован и летальными у людей считаются концентрации 3000-4000 пкг/мл, при колебании их уровня у здоровых доноров от 0 до 100 пкг/мл [8]. Учитывая практически почасовое нарастание уровней провоспалительных медиаторов уже через 1-3 дня после массивного инфицирования, может развиваться ранняя органная недостаточность, а поражение более трех органов заканчивается летально [1]. Для снижения случаев летальных исходов в клинической практике необходимо установление всей цепочки событий от повреждения до прекращения функции жизненно важных органов.

Цель исследования - определить показатели, изменения которых играют ключевую роль в развитии полиорганной недостаточности и увеличения риска летального исхода при остром экспериментальном перитоните.

Материалы и методы исследования. Исследования проводились под нембуталовым наркозом на 50 крысах линии Wistar и 50 беспородных белых мышах мужского пола, с соблюдением принципов гуманного обращения с лабораторными животными. Все экспериментальные животные были разделены на 5 групп. Опытные группы составили животные, которым моделировали перитонит путем интраперитониального введения 1 мл 7% аутокаловой смеси с 1 каплей скипидара в физиологическом растворе. Первую группу животных выводили из эксперимента через 1 час после моделирования перитонита, вторую - через 3 часа, третью -через 6 часов и четвертую - через 24 часа. Контрольную группу составили 15 интактных животных, того же генотипа, пола и возраста. В течение эксперимента наблюдали за клинической картиной болезни, проводили регистрацию изменения внешнего дыхания, у крыс исследовали газовый состав, кислотно-основное состояние в артериальной (aorta abdominalis) и венозной (v^ortae) крови на анализаторах Raidlab 865 и ABL 615/625 (Radiometer). Кровь для определения уровня Ил-1а и ФНОа собирали в стеклянные пробирки без стабилизаторов при декапитировании мышей. Образцы сыворотки крови отбирали в пластиковые ампулы-эпендоры в объеме 1 мл и хранили при -200С в течение суток, затем измеряли уровень Ил-1а тест-системой mouse IL-Ia ELISA Cat-№BMS611 (Bender MedSystems Diagnostics GmbH, Vienna, Austria) и ФНОа тест-системой mouse TNFa ELISA Kit (BD Biosciences) в контроле и через 1, 3, 6 и 24 часа с момента моделирования перитонита. Степень эндогенной интоксикации оценивали по поглотительной способности мембраны с помощью определения сорбционной способности эритроцитов (ССЭ) по отношению к 0,025% раствору метиленового синего колометрическим методом у крыс в тех же группах. Все выведенные из эксперимента и погибшие животные подвергались патологоанатомическому исследованию. Для гистологического исследования брали кусочки брюшины, кишечника, печени, легких, сердца и почек. Кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по ван Гизон и по Массону. Для исследования содержания гликогена и гексоз была использована ШИК-реакция. Свежезамороженные срезы изготавливали на замораживающем микротоме для изучения тканевого распределения липидов суданом III. Количественные данные обрабатывали статистически с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6,0 и возможностей Microsoft Excel 2007. Критическая величина значимости различий