Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека

Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека, отличающееся тем, что содержит емкость в виде плоскодонного цилиндра высотой 14 мм и диаметром 100 мм, в центре которого расположена шестигранная сквозная втулка, высота которой соответствует высоте бортов емкости, причем внутренняя поверхность втулки снабжена вертикальными бороздами, а ее внешние ребра соединены с бортами емкости радиальными перегородками, высота которых соответствует высоте бортов емкости.
Известны следующие устройства для сбора личинок и мелких нематод из фекалий:
1) Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (АС №1391625);
2) Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий травоядных (Патент №169122);
3) Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий травоядных (Патент №175234).
Недостатками этих устройств являются следующие:
1) необходимость иметь пробу исследуемых фекалий массой порядка 50 граммов, что не всегда возможно в случае отбора проб у диких/мелких/больных животных или больных людей/детей;
2) невозможность содержать полученных нематод в емкости устройств продолжительное время без угрозы загрязнения образца продуктами их обмена веществ, что снижает качество полученного материала и затрудняет дальнейшие исследования;
3) невозможность частичного воздействия (например, красителем) на собранных нематод, находящихся в емкости устройства.
Технический результат заключается в том, что предлагаемая полезная модель позволяет:
1) собирать личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека, даже если масса пробы составляет порядка 5 граммов;
2) сохранять полученных нематод продолжительное время, гарантируя при этом высокую чистоту материала;
3) проводить такие манипуляции как окрашивание части собранных нематод при интактности оставшихся нематод в одном устройстве.
Технический результат достигается тем, что устройство состоит из емкости 1 в виде плоскодонного цилиндра высотой 14 мм и диаметром 100 мм, в центре которого расположена шестигранная сквозная втулка 2, высота которой соответствует высоте бортов 3 емкости, причем внутренняя поверхность втулки снабжена вертикальными бороздами 4, а ее внешние ребра соединены с бортами емкости радиальными перегородками 5, высота которых соответствует высоте бортов емкости.
Устройство можно использовать по-разному, в зависимости от цели исследования.
1.1. При необходимости исследовать свежие фекалии, в которых могут содержаться личинки первого возраста (L1) дыхательных нематод отряда Strongylida (Dictyocaulus, Muellerius, Protostrongylus, Cystocaulus и др.), а также половозрелые мелкие нематоды отряда Rhabditida (Strongyliodes), поступают следующим образом:
1) устройство помещают в чашку ЧБН («чашка биологическая невысокая», ГОСТ 25336-82, известна как чашка Петри);
2) исследуемую пробу фекалий помещают в сквозную втулку так, чтобы она заполняла все ее внутреннее пространство, плотно прилегая к бороздам;
3) устройство максимально наполняют водой в пространствах между перегородками;
4) устройство в чашке ЧБН накрывают крышкой ЧБН;
5) экспонируют устройство в течение заданного времени, которое определяется исходя из предполагаемой интенсивности инвазии и составляет, в среднем, 6-12 часов; за это время нематоды из фекалий поднимаются по вертикальным желобам и мигрируют в резервуары с водой, где и оседают на дне;
6) снимают крышку ЧБН с устройства;
7) пипеткой (или иным способом) собирают личинок и/или мелких нематод со дна устройства для последующей микроскопии.
1.2. ГОСТом Р 54627-2011 «Животные сельскохозяйственные жвачные. Методы лабораторной диагностики гельминтозов» предусмотрена следующая процедура: «для дифференциации личинок диктиокаулюсов <…> добавляют <…> 0,1%-ного водного раствора метиленового синего. <…>. В результате личинки диктиокаулюсов овец окрашиваются в ярко-сиреневый, телят - в светло-сиреневый цвет, личинки других нематод остаются неокрашенными». Окрашивание полученных личинок можно производить непосредственно в секциях устройства, образованных его перегородками, путем добавления туда метиленового синего.
2. При необходимости исследовать фекалии после культивирования личинок третьего возраста (L3) нематод отряда Strongylida, паразитирующих у животных (Cooperia, Ostertagia, Nematodirus и др.) и человека (Ancylostoma, Trichostrongylus и др.), поступают следующим образом:
1) устройство помещают в чашку ЧБН;
2) исследуемую пробу фекалий помещают в сквозную втулку так, чтобы она заполняла все ее внутреннее пространство, плотно прилегая к бороздам;
3) устройство в чашке ЧБН накрывают крышкой ЧБН;
4) устройство в ЧБН помещают в термостат при температуре +24°С на срок порядка 10 суток (что позволяет личинкам паразитических нематод органов пищеварения вылупиться из яиц и развиться до стадии L3, когда они становятся морфологически отличимы друг от друга); при необходимости материал проветривают, вынимая ЧБН из термостата и приоткрывая крышку);
5) сняв крышку ЧБН, устройство максимально наполняют водой в пространствах между перегородками;
6) устройство в чашке ЧБН накрывают крышкой ЧБН;
7) экспонируют устройство в течение заданного времени, которое определяется исходя из предполагаемой интенсивности инвазии и составляет, в среднем, 6-12 часов; за это время нематоды из фекалий поднимаются по вертикальным желобам и мигрируют в резервуары с водой, где оседают на дне;
8) снимают крышку ЧБН с устройства;
9) пипеткой (или иным способом) собирают личинок и/или мелких нематод со дна устройства для последующей микроскопии.
Сущность полезной модели поясняется фигурами, где:
на Фиг. 1 схематично представлен общий вид устройства (сверху);
на Фиг. 2 - то же, но в разрезе А-А (сбоку);
на Фиг. 3 изображено устройство, помещенное в ЧБН, при этом сквозная втулка заполнена исследуемыми фекалиями;
на Фиг. 4 - то же, но в момент заполнения устройства водой;
на Фиг. 5 изображено устройство, помещенное в чашку ЧБН с приоткрытой крышкой для проветривания фекалий, но во избежание пересыхания пробы во время экспонирования;
на Фиг. 6 изображена личинка L3 паразитической нематоды отряда Strongylida, полученная из фекалий овцы при помощи предлагаемого устройства, сфотографированная при 40-кратном увеличении объектива микроскопа;
на Фиг. 7 изображено устройство, помещенное в ЧБН, при этом в одну из секций, образованных перегородками, добавлен краситель (метиленовый синий) с целью дифференциальной диагностики личинок дыхательных нематод отряда Strongylida согласно ГОСТ Р 54627-2011.
Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека состоит из емкости 1 в виде плоскодонного цилиндра высотой 14 мм и диаметром 100 мм, в центре которого расположена шестигранная сквозная втулка 2, высота которой соответствует высоте бортов 3 емкости, причем внутренняя поверхность втулки снабжена вертикальными бороздами 4, а ее внешние ребра соединены с бортами емкости радиальными перегородками 5, высота которых соответствует высоте бортов емкости.
Полезность предлагаемого изобретения представлена в табл 1.
Как видно из приведенной таблицы, полезность предлагаемой полезной модели заключается в том, что предлагаемая полезная модель позволяет:
1) собирать личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека, даже если масса пробы составляет порядка 5 граммов (что означает возможность проведения исследования даже при отборе небольшой пробы, экономию затрат на транспортировку материала в случае большого количества проб или возможность использовать только часть полученной пробы для сбора личинок и мелких нематод, в то время, как оставшуюся часть можно использовать для выявления яиц гельминтов, ооцист кокцидий или иных паразитов);
2) сохранять полученных нематод продолжительное время, гарантируя при этом высокую чистоту материала (что облегчает дифференциальную диагностику нематод, основанную на их морфологии, так как они успевают испражниться, и визуализация их внутренних структур за счет этого улучшается, однако при этом не наступает их отравления собственными метаболитами и существенного загрязнения воды, в которой они находятся; сбор таких личинок и мелких нематод для исследований молекулярно-генетическими методами не требует дополнительного их отмывания);
3) проводить такие манипуляции как окрашивание части собранных нематод при интактности оставшихся нематод в одном устройстве (что позволяет использовать оставшихся нематод для исследований другими методами).
Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека можно применять для:
1) точной диагностики гельминтозов животных и человека морфологическими и молекулярно-генетическими методами;
2) определения антигельминтной резистентности у паразитических нематод и скрининга препаратов против них in vitro в качестве несоизмеримо более дешевой и быстрой альтернативы полевым испытаниям методом гельминтологических вскрытий животных;
3) получения образцов антигенов нематод с целью изготовления серологических диагностикумов и вакцин;
4) изучения биологии нематод и разработки на ее основе более совершенных мер борьбы.