Иммуногистохимические различия плацент при пролонгированной и истинно переношенной беременности

8. Павловский М.П., Тимочко М.Ф., Лукавецкий А.В., Ткаченко О.Р. Процессы перекисного окисления липидов в крови и ткани печени при гипо- и гиперфункции щитовидной железы в эксперименте // Проблемы патологии в эксперименте и клинике: сб. науч. тр. Харьковского мед. ин-та. 1986. № 8. С. 114-115.

9. Bednarek J, Wysocki H, Sowinski, J. Oxidation products and antioxidant markers in plasma of patients with Graves' disease and toxic multinodular goiter: effect of methimazole treatment // Free Rad-ic. Res. 2004. Vol. 38(6). P. 659-664.

10. Eyquem A. Immunopatologie de la thyroidite de Hachimoto // Eurobiologiste. 1998. Vol. 32, № 235. P. 9-15.

18. Folch J., Lees M, Staley G. A simple method for the isolated and purificarion of total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. Vol. 22. P. 497-499.

19. I nfluence of hyper- and hypothyroidism on lipid peroxidation, unsaturation of phospholipids, glutathione system and oxidative damage to nuclear and mitochondrial DNA in mice skeletal muscle / R. Gredilla, M. Lopez Torres, M. Portero-Otin et al. // Molecular and Cellular Biochemistry. 2001. Vol. 221, № 1 -2. P. 41 -48.

20.Nishicimi M, Roo A, Xagi K. The occurrence of superoxide anion in reactions of redused phenaxi-nemetasulfate and molecular oxygen // Biochem. Biophys. res. commun. 1972. Vol. 146, № 2. P. 849-854.

21.Peripheral parameters of oxidative stress in Graves' disease. The effects of methimazole and 131-lodine treatments / M. Abalovich, M. Repetto, M. Loto et al. // Clinical Endocrinology. 2003. Vol. 59. P. 321.

22. The effect of hypothyroidism, hyperthyroidism, and their treatment on parameters of oxidative stress and antioxidant status / H. Erdamar, H. Demirci, H. Yaman et al. // Clin. Chem. Lab. Med. 2008. Vol. 46(7). P. 1004-1010.

ТУКТАНОВ НИКОЛАИ ВАЛЕРИАНОВИЧ. См. с. 554.

КИЧИГИН ВАДИМ АЛЕКСАНДРОВИЧ - кандидат медицинских наук, доцент кафедры госпитальной терапии № 1 с курсом фтизиатрии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (vadim-kichigin@mail.ru).

KICHIGIN VADIM ALEKSANDROVICH - candidate of medical sciences, assistant professor of Hospital Therapy № 1 Chair with a course of phthisiology, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.

УДК 616.36-091:618.2+618.36-091:618.398 ББК 57.16

М.В. ФЕДОРОВА, Т.Л. СМИРНОВА

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ РАЗЛИЧИЯ ПЛАЦЕНТ ПРИ ПРОЛОНГИРОВАННОЙ И ИСТИННО ПЕРЕНОШЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

Ключевые слова: плацента, иммуногистохимия, иммуномаркер эндотелиальных клеток CD34, переношенная беременность.

Изучены иммуногистохимические особенности экспрессии CD34 при физиологической, пролонгированной и истинно переношенной беременности у пациенток Чувашской Республики. У женщин с переношенной беременностью отмечается низкая интенсивность иммуноэкспрессии маркера CD34.

M.V. FEDOROVA, T.L. SMIRNOVA IMMUNOHISTOCHEMICAL DIFFERENCES IN THE PLACENTAS OF PROLONGED AND THE TRUE POST-TERM PREGNANCY

Key words: placenta, immunohistochemistry, immunomarker endothelial cell CD34, prolonged pregnancy.

Immunohistochemical peculiarities of CD34markers expression during physiological and prolonged and veritably post term pregnancy with patients in Chuvash Republic. Women with post term pregnancy demonstrate a low intensity immunoexpression of marker CD34.

В последние годы внимание специалистов привлекают иммуногистохимические исследования плаценты. Исследования сыворотки крови беременных показали иммунореактивность к основному белку миелина, белку S100b, белку ядерного хроматина АСИЗ14/18, белку адгезии МР65. В исследованиях уделяется внимание VEGF, PlGF и их рецепторам Flt-1 (VEGFR-1), KDR (VEGFR-2), Flt-4 (VEGFR-3) и нейропилинам 1 и 2 [2]. При герпесвирусной инфекции не происходит изменений в продукции клетками плаценты VEGF, при плацентарной недостаточности снижаются экспрессия VEGFR-3, продукция bFGF, увеличивается

экспрессия антиангиогенного фактора Tsp-1 [1]. При плацентарной недостаточности увеличивается экспрессия проапоптозного белка p53, снижается экспрессия белка Mcl-1. Противовирусный иммунный ответ связан с активацией естественных киллеров, CD 4+ Th1-лимфоцитов и CD8+ цитотоксических лимфоцитов. CD34 - маркер ранней дифференцировки клеток-предшественников ге-мопоэза, эндотелиальных клеток. Доказана индуцирующая роль эндотелиальных молекул адгезии в процессе цитотрофобластической инвазии [3]. Не изучены вопросы, касающиеся особенностей локализации маркеров плацентарной недостаточности CD34.

Цель исследования - изучение иммуногистохимических особенностей экспрессии CD34 при физиологической, пролонгированной и истинно переношенной беременности у пациенток Чувашской Республики.

Материалы и методы исследования. В акушерских стационарах МУЗ «Городская клиническая больница № 1» г. Чебоксары собраны 3 группы последов у рожениц со следующими сроками беременности: 1-я группа (контроль), включающая 351 послед от женщин с физиологически протекавшей беременностью и срочными самопроизвольными родами с рождением здорового новорожденного; 2-я группа (40 последов) - от женщин с пролонгированной беременностью (41-42 недели) без явной патологии новорожденных; 3-я группа (25 последов) - от женщин с истинной переношенной беременностью 42-43 недели и проявлениями признаков переношенности у новорожденных.

В работе использован иммуногистохимический стрептавидин-биотин-пероксидазный метод [4, 5]. Плаценты родильниц после фиксации в 10%-ном растворе нейтрального формалина заливали парафином. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм готовились на микротоме МПС-2, и после депарафинирования и регидратации в этаноле нисходящей концентрации срезы плаценты погружали в восстанавливающий цитратный буфер (рН 6,0). Затем проводили высокотемпературную обработку прогреванием на водяной бане при 90-95°С в течение 30 мин с целью демаскировки искомых антигенов в тканях. После ингибирования эндогенной пероксидазы 3%-ным раствором перикиси водорода на метаноле проводили иммуногистохимическую реакцию методом трехэтапного непрямого иммуноферментного анализа с использованием первичных моноклональных антител (МКАТ) к антигенным маркерам CD34 в разведении 1:100 согласно рекомендации фирмы-изготовителя (Dako, Дания). Визуализацию первичных МКАТ, связавшихся с антигенами, проводили стандартным биотин-стрептавидин-пероксидазным методом с использованием набора LSAB-2 (Labeled Streptavidin Biotin System Peroxidase). На заключительном этапе срезы докрашивались то-луидиновым синим по Нисслю. Морфометрическое исследование участков плаценты проведено с применением компьютерного анализа микроскопических изображений. Аппаратное обеспечение состояло из микроскопа, цифровой камеры Canon, ПК на базе Intel Pentium 4, имеющего программное обеспечение для анализа изображений Sigma Scan Pro 5.0 (Systat). Границы каждого поля зрения ворсин хориона записывали в формате JPEG, размер ворсин составлял 118-535 пикселей при увеличении светового микроскопа 400, для каждого случая вычисляли площадь экспрессии иммуногистохимических маркеров.

Статистическая обработка полученных цифровых данных проводилась с использованием пакета программ Microsoft Office (Word и Excel). Оценка статистической значимости проводилась по t-критерию Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение. Положительная иммуно-гистохимическая реакция с антителами CD34 наблюдалась на всех препаратах в эндотелии капилляров ворсин.

Для исследования препаратов плаценты от женщин c физиологической дононошенной беременностью и оценки степени выраженности васкуляриза-ции в опорных, промежуточных и терминальных ворсинах использован спе-

циальный иммунногистохимический маркер эндотелия (Сй34). Оказалось, что данный маркер визуализирует эндотелиальную выстилку сосудов всех типов: широких артериол и венул в составе опорных ворсин, второго и третьего порядка и промежуточных ветвей. В промежуточных и терминальных ветвях видно, что в 25-30% ворсин выявляются так называемые синцитиокапилляр-ные мембраны. Ворсины характеризуются сближением, синцитиотрофобласт истончен и формирует самые тонкие участки плацентарного барьера, что обеспечивает максимальную диффузионную способность плаценты в конце беременности. Площадь экспрессии Сй34 в плацентах родильниц с физиологическим течением беременности составляет 7,8+0,009% (таблица).

Гистохимические исследования препаратов плаценты от женщин с пролонгированной беременностью показали, что Сй34-иммунопози-тивными структурами являются хориальные ворсины: наблюдаются узкие просветы в сосудах опорных ворсин второго и третьего порядка, т.е. развивается облитерационная ангиопатия. В промежуточных и терминальных ветвях картина иммунораспространения Сй34 маркера доказала наличие меньшего количество синцитиокапиллярных мембран. Площадь экспрессии Сй34 маркера достоверно меньше, чем в 1-й группе, и составила 2,3+0,005% (р < 0,05) (таблица).

В препаратах плаценты после переношенной беременности иммуновизуализация эндотелиальных клеток показала узкие просветы в сосудах опорных и промежуточных ворсин, в терминальных ворсинах при наличии достаточного количества узких капилляров, расположенных преимущественно в центре стромы. Синцитиокапиллярные мембраны не визуализируются, поскольку даже близко расположенные к эпителию капилляры отделялись от синцитиотрофобласта прослойкой мезенхимальных клеток. Площадь экспре-сии Сй34 значительно ниже уровня экспрессии этого маркера в других клинических группах - 1,2+0,008% (р < 0,05) (таблица).

На всех препаратах плаценты родильниц отмечена экспрессия исследуемого маркера Сй34, что совпадает с рядом проведенных ранее исследований [3].

Анализ микроскопического строения плаценты выявил структурно-функциональные изменения этого органа при пролонгированной и истинно переношенной беременностях. При физиологической беременности маркер визуализирует эндотелиальную выстилку сосудов всех типов: широких артериол и венул в составе опорных ворсин, второго и третьего порядка и промежуточных ветвей. В патологический процесс вовлекаются все структурные компоненты плаценты: соединительная ткань, синцитиотрофобласт, сосуды. При пролонгированной беременности развивается облитерационная ангиопатия, уменьшается количество синцитиокапиллярных мембран. При переношенной беременности просветы сосудах опорных и промежуточных ворсин узкие, капилляры в терминальных ворсинах также узкие и расположены преимущественно в центре стромы ворсин. Следовательно, при переношенной беременности возникают структурнофункциональные изменения, приводящие к плацентарной недостаточности [2].

В процессе дифференцировки клеток экспрессия Сй34 снижается. В наших исследованиях площадь экспрессии Сй 34 маркера у женщин с физиологическим течением беременности значительно превышает площадь экспрессии этого маркеры у женщин с пролонгированной и переношенной беременностью.

Полученные результаты указывают, что продолжительность и особенности течения беременности влияют на степень васкуляризации ворсинчатого хориона.

Площадь экспрессии ОР34 в плацентах беременных с физиологической, пролонгированной и истинно переношенной беременностями, %

Клинические группы Площадь экспрессии,%

Физиологическая беременность 7,8±0,009

Пролонгированная беременность 2,3±0,005*

Истинно переношенная беременность 1,2±0,008*

Примечание. *р < 0,05 при сравнении с данными 1-й группы.

Выводы. 1. В плаценте родильниц содержатся CD34-позитивные структуры.

2. Обнаруженные иммуногистохимические изменения в локализации и экспрессии маркера эндотелиальной дисфункции CD34 свидетельствуют о выраженных патоморфологических нарушениях в плацентарном комплексе при пролонгированной и истинно переношенной беременности.

Литература

1. Роль нарушений ангиогенеза в формировании плацентарной недостаточности при герпесвирусной инфекции / А.В. Колобов, Д.И. Соколов, Л.И. Королева и др.// Вестник Санкт-Петербургского университета. Сер. 11. 2008. Вып. 2. С. 157-167.

2. Роль нарушений формирования ворсинчатого дерева в патогенезе плацентарной недостаточности / Е.В. Лукьянова, И.Н. Волощук, А.Д. Липман и др. // Акушерство и гинекология. 2009. № 2. С. 5-11.

3. Экстраэмбриональные и околоплодные структуры при нормальной и осложненной беременности / В.Е. Радзинский, А.П. Милованов, И.М. Ордиянц и др. М.: МИА, 2004. 393с.

4. Sternberger L.A. Immunocytochemistry of neuropeptides and their receptors. In peptides in Neurobiology. N.Y.; L.: Plenum Press, 1977. P. 61-97.

5. Sternberger L.A., Petrali J.P. The unlabeled antibody enzyme method. Attempted use of peroxidase-conjugated antigen as the third layer in the technique // J. Histochem. Cytochem. 1977. Vol. 25(9), Sep. P. 1036-1042.

ФЕДОРОВА МАРИНА ВЛАДИМИРОВНА - врач-патологоанатом, Республиканское патологоанатомическое бюро, Россия, Чебоксары.

FEDOROVA MARINA VLADIMIROVNA - forensic pathologist, Republican Pathoanatomical Institution, Russia, Cheboksary.

СМИРНОВА ТАТЬЯНА ЛЬВОВНА - кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии имени Г.М. Воронцовой, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (tlsmr@mail.ru).

SMIRNOVA TATYANA LVOVNA - candidate of medical sciences, associate professor of Obstetrics and Gynecology Chair named after G.M. Vorontsova, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.

УДК 616.12-008.318; 616-056.52; 616.12-008.331.1 ББК 54.10

Н.С. ЦЫПЛЕНКОВА, Е.И. ПАНОВА, В.А. КИЧИГИН, Т.Г. ДОМАНОВА

СВЯЗЬ МАССЫ ТЕЛА С ОСОБЕННОСТЯМИ СЕРДЕЧНОГО РИТМА У МУЖЧИН С АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ

Ключевые слова: ожирение, артериальная гипертензия, фибрилляция предсердий, аритмия.

Изучена распространенность нарушений ритма у служащих в полиции мужчин с артериальной гипертензией. Суточное мониторирование ЭКГ проведено 91 пациенту, из них 54 с ожирением, 28 - с избыточной, 9 - с нормальной массой тела. Установлено, что ожирение увеличивает вероятность развития предсердных экстрасистол, постоянной и пароксизмальной формы мерцания-трепетания предсердий. Наличие метаболического синдрома и ишемической болезни сердца увеличивает вероятность развития этих нарушений ритма.

N.S. TSYPLENKOVA, E.I. PANOVA, V.A. KICHIGIN, T.G. DOMANOVA MASS COMMUNICATION FEATURES OF THE BODY OF HEART RATE IN MEN WITH ARTERIAL HYPERTENSION

Key words: obesity, hypertension, atrial fibrillation, arrhythmia.

Studied the prevalence of arrhythmias in male police officers to obesity and arterial hypertension.

ECG monitoring conducted 91 patients, including 54 with obesity, 28 - were overweight, 9 - with normal weight. Found that the obesity increases the risk of atrial premature beats, and the constant flicker-paroxysmal atrial fibrillation. The presence of metabolic syndrome and coronary heart disease increases the risk of these arrhythmias.

Нарастание массы тела с развитием ожирения связано с повышенным риском смертности от любых причин, в первую очередь от сердечно-сосудистых заболеваний, как у мужчин, так и у женщин всех возрастных групп. Четкая связь между ожирением (ОЖ) и развитием сердечно-сосудистых осложнений