СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ ПРОТИВ АМН И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Способ получения антител против AMH млекопитающих (антимюллеров гормон млекопитающих), отличающийся тем, что он содержит стадии:
(i) иммунизации животного полипептидом AMH или полинуклеотидом, кодирующим указанный полипептид AMH,
причем указанный полипептид AMH содержит по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:1, и не более 560 аминокислот последовательности SEQ ID NO:2 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:2,
(ii) получения гибридом из клеток лимфоидного органа животного, получившего иммуноген,
(iii) отбора гибридом, секретирующих антитела, распознающие полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:1, и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:8, но не распознающие ни (a) полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 131 аминокислоту последовательности SEQ ID NO:13 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:13, и не более 156 аминокислот последовательности SEQ ID NO:11 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:11, ни (b) любой линейный эпитоп, расположенный в последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:1, и
(iv) получения антител.
2. Способ получения антител против AMH по п.1, в котором используемый иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 230 аминокислот последовательности SEQ ID NO:10 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:10, и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:8, предпочтительно выбранный из полипептидов AMH последовательностей SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10 или последовательностей, имеющих идентичность по меньшей мере 75% с этими последовательностями.
3. Способ получения антител против AMH по п.1, в котором используемый иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 535 аминокислот последовательности SEQ ID NO:4 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:4, предпочтительно выбранный из полипептидов AMH последовательностей SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:4 или последовательностей, имеющих идентичность по меньшей мере 75% с этими последовательностями.
4. Способ получения антител против AMH по любому из пп.1-3, в котором полипептид AMH (a), который не распознается антителами, представляет собой полипептид последовательностей, выбранных из: SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13, и последовательностей, которые по меньшей мере на 75% идентичны указанным последовательностям.
5. Способ получения антител против AMH по п.4, в котором последовательности, которые по меньшей мере на 75% идентичны последовательностям SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13, выбраны из последовательностей: SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43 и SEQ ID NO:44.
6. Способ получения антител против AMH по любому из пп.1-4, в котором линейные эпитопы (b), которые не распознаются антителами, представляют собой последовательности с SEQ ID NO:45 по SEQ ID NO:56.
7. Способ получения антител против AMH по любому из пп.1-5, в котором
- млекопитающее является человеком, иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 и не более 560 аминокислот последовательности SEQ ID NO:2, полипептид AMH, распознаваемый антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8, и полипептид AMH (a), который не распознается антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 131 аминокислоту последовательности SEQ ID NO:13 и не более 156 аминокислот последовательности SEQ ID NO:11, или
- млекопитающее представляет собой лошадь, иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий этот полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:14 и не более 573 аминокислот последовательности SEQ ID NO:15, полипептид AMH, распознаваемый антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:14 и не более 265 аминокислот последовательности SEQ ID NO:19, и полипептид AMH (a), не распознаваемый антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 144 аминокислоты последовательности SEQ ID NO:22 и не более 166 аминокислот последовательности SEQ ID NO:21, или
- млекопитающее представляет собой собаку, иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий этот полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:23 и не более 572 аминокислот последовательности SEQ ID NO:24, полипептид AMH, распознаваемый антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:23 и не более 264 аминокислот последовательности SEQ ID NO:28, и полипептид AMH (a), который не распознается антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 144 аминокислоты последовательности SEQ ID NO:31 и не более 165 аминокислот последовательности SEQ ID NO:30, или
- млекопитающее представляет собой корову, иммуноген представляет собой полипептид AMH или полинуклеотид, кодирующий этот полипептид AMH, который содержит по меньшей мере 100 аминокислот последовательности SEQ ID NO:32 и не более 575 аминокислот последовательности SEQ ID NO:33, полипептид AMH, распознаваемый антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 100 аминокислот последовательности SEQ ID NO:32 и не более 270 аминокислот последовательности SEQ ID NO:39, и полипептид AMH (a), который не распознается антителами, секретируемыми гибридомами, представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 146 аминокислот последовательности SEQ ID NO:44 и не более 270 аминокислот последовательности SEQ ID NO:42.
8. Моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH млекопитающих, распознающие полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:1, и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:8, но не распознающий ни (a) полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 131 аминокислоту последовательности SEQ ID NO:13 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:13, и не более 156 аминокислот последовательности SEQ ID NO:11 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:11, ни любой линейный эпитоп, расположенный в последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:1.
9. Моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH млекопитающих по п.8, для которых нераспознаваемый полипептид AMH (a) представляет собой полипептид последовательностей, выбранных из: SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13, или последовательностей, имеющих идентичность по меньшей мере 75% с этими последовательностями.
10. Моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH млекопитающих по п.9, для которых последовательности, которые по меньшей мере на 75% идентичны последовательностям SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13, выбраны из последовательностей: SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43 и SEQ ID NO:44.
11. Моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH млекопитающих по любому из пп.8-10, для которых линейные эпитопы (b), которые не распознаются антителами, имеют последовательности SEQ ID NO:45-56.
12. Моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH млекопитающих по любому из пп.9-11, для которых
- млекопитающее является человеком, распознаваемый полипептид AMH представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:1 и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8, и нераспознаваемый полипептид AMH (a) представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 131 аминокислоту последовательности SEQ ID NO:13 и не более 156 аминокислот последовательности SEQ ID NO:11, или
- млекопитающее представляет собой лошадь, распознаваемый полипептид AMH представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:14 и не более 265 аминокислот последовательности SEQ ID NO:19, и нераспознаваемый полипептид AMH (a) представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 144 аминокислоты последовательности SEQ ID NO:22 и не более 166 аминокислот последовательности SEQ ID NO:21, или
- млекопитающее представляет собой собаку, распознаваемый полипептид AMH представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 99 аминокислот последовательности SEQ ID NO:23 и не более 264 аминокислот последовательности SEQ ID NO:28, и нераспознаваемый полипептид AMH (a) представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 144 аминокислоты последовательности SEQ ID NO:31 и не более 165 аминокислот последовательности SEQ ID NO:30, или
- млекопитающее представляет собой корову, распознаваемый полипептид AMH представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 100 аминокислот последовательности SEQ ID NO:32 и не более 270 аминокислот последовательности SEQ ID NO:39, и нераспознаваемый полипептид AMH (a) представляет собой полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 146 аминокислот последовательности SEQ ID NO:44 и не более 270 аминокислот последовательности SEQ ID NO:42.
13. Конъюгат, содержащий
(i) моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела против AMH по любому из пп.8-12 или полученные в соответствии со способом по любому из пп.1-7, и
(ii) метку, способную генерировать испускание детектируемого сигнала для визуализации иммунологической реакции между этим конъюгатом и AMH биологического образца.
14. Способ количественного определения AMH млекопитающих с помощью сэндвич-иммуноанализа в биологическом образце, который может содержать AMH, который содержит следующие стадии:
- приведение упомянутого биологического образца в контакт с двумя связывающими AMH партнерами, причем по меньшей мере один из упомянутых партнеров которого представляет собой антитело или фрагмент антитела по любому из пп.8-12 или полученные в соответствии со способом по любому из пп.1-7, или же конъюгат по п.13,
- детектирование сигнала, испускаемого при связывании между упомянутыми связывающими партнерами и AMH, если он присутствует, с использованием метки, способной генерировать испускание детектируемого сигнала, и
- преобразование детектируемого сигнала в концентрацию AMH.
15. Способ количественного определения AMH по п.14, в котором биологический образец представляет собой образец крови, сыворотки или плазмы.
16. Способ количественного определения AMH по любому из пп.14 и 15, в котором второй связывающий AMH партнер представляет собой антитело, распознающее полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 196 аминокислот последовательности SEQ ID NO:57 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:57, но не распознающий ни (a) полипептид AMH, содержащий по меньшей мере 230 аминокислот последовательности SEQ ID NO:10 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:10, и не более 255 аминокислот последовательности SEQ ID NO:8 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:8, ни (b) линейный эпитоп, расположенный в последовательности SEQ ID NO:57 или последовательности, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO:57.
17. Применение способа количественного определения AMH, определенного в любом из пп.14-16 в качестве вспомогательного средства для диагностики нарушений, связанных с дисфункцией яичников у женщин детородного возраста.
18. Применение способа количественного определения AMH, определенного в любом из пп.14-16 в качестве вспомогательного средства в оценке овариального фолликулярного резерва у молодых девушек старше 12 лет и женщин.
19. Применение способа количественного определения AMH, определенного в любом из пп.14-16 в качестве вспомогательного средства в оценке нарушений, связанных с половой дифференциацией у мальчиков до наступления половой зрелости.
20. Набор, содержащий антитело или фрагмент антитела по любому из пп.8-12 или полученные в соответствии со способом по любому из пп.1-7 и/или конъюгат по п.13.