МЕТОД МУТАЦИОННО-ЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ СУПРЕССИИ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

1. Метод мутационно-чувствительной супрессии ПЦР для выявления в образце нуклеиновых кислот мутантной нуклеиновой кислоты (МНК), где указанная МНК содержит в исследуемом нуклеотиде отличие от референсной нуклеиновой кислоты (РефНК), включающий:
(а) получение образца ДНК, содержащего МНК и РефНК;
(б) ПЦР с использованием этого образца в качестве матрицы в присутствии олигонуклеотидных праймеров НП и СП и
(в) анализ продукта ПЦР,
где праймер НП - это ген-специфический праймер, последовательность которого комплементарна одной из цепей РефНК (далее цепь «Б») и отдалена от исследуемого нуклеотида не менее чем на 40 нуклеотидов и не более чем на 500 нуклеотидов, а праймер СП - это встречный праймер, имеющий структуру N(1)-N(x)N(x+1)-N(y)N(y+1)-N(z), где фрагмент N(1)-N(x) - это последовательность, комплементарная цепи «Б» целевой последовательности РефНК, так что нуклеотид N(1) комплементарен исследуемому нуклеотиду; фрагмент N(х+1)-N(y) - это произвольная последовательность нуклеотидов и фрагмент N(y+1)-N(z) - ген-специфическая последовательность, комплементарная другой цепи целевой последовательности (далее цепь «А») и отдалена от исследуемого нуклеотида не более чем на 40 нуклеотидов и где в ходе ПЦР происходит подавление амплификации фрагментов РефНК и селективная амплификация фрагментов МНК.
2. Метод по п.1, где в образце ДНК присутствует избыток референсной нуклеиновой кислоты (РефНК).
3. Метод по п.2, где образец ДНК - это образец фетальной или опухолевой ДНК или кДНК.
4. Метод по п.1, где концентрация АТФ уменьшена в реакционной смеси для ПЦР по сравнению с концентрацией других дезоксинуклеотидтрифосфатов.
5. Метод по п.1, где реакционная смесь для ПЦР также содержит интеркалятор, стабилизирующий двухцепочечную ДНК.
6. Метод по п.1, где реакционная смесь для ПЦР также содержит блокирующий олигонуклеотид.
7. Метод по п.1, где анализ продукта ПЦР осуществляется с помощью секвенирования.
8. Метод по п.1, где анализ продукта ПЦР осуществляется с помощью ПЦР в режиме реального времени.
9. Набор для осуществления метода по пп.1-9, содержащий праймер СП, праймер НП и инструкцию по применению.
10. Набор по п.10, также содержащий блокирующий олигонуклеотид.
11. Набор по п.10, также содержащий интеркалятор.