Генетический полиморфизм IL-10 и CRP у больных с циррозом печени вирусной этиологии

© ЕМЕЛЬЯНОВА А. Н., ВИТКОВСКИЙ Ю.А. — 2013 УДК:616.36:576.8.077.3

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ IL-10 И CRP У БОЛЬНЫХ С ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Альвина Николаевна Емельянова, Юрий АнтоновичВитковский

Резюме. Проведено изучение частоты аномальных аллельных вариантов IL-10(G1082A) и CRP(C3872T) у здоровых доноров и больных с циррозом печени в исходе ХВГС европеоидной популяции Забайкальского края. Среди пациентов с ХВГС с IV стадией фибротических изменений в печени аллель А полиморфизма гена IL10 (G1082A) и генотип АА встречается чаще, чем у здоровых лиц и наблюдается носительство только С-аллели генотип СС полиморфизма гена CRP (C3872T).

Ключевые слова: IL-10, CRP, полиморфизм гена, HCV- инфекция, цирроз.

POLYMORPHISM OF GENES IL-10 AND CRP IN PATIENTS WITH CIRROSIS OF VIRAL ETIOLOGY

A.N. Emelyanova1, V.Y. Antonovich2

Summary. The study of the frequency of abnormal alleles IL-10 (G1082A) and CRP (C3872T) from healthy donors and patients with liver cirrhosis in the outcome of HCV of Сaucasian population of Trans-Baikal region has been conducted. Among patients with chronic hepatitis C with stage IV of fibrotic changes in the liver, allele A of polymorphism of gene IL10 (G1082A) and the AA genotype are found more often than in healthy individuals, and there is only a carrier of the C-allele of genotype CC of polymorphism of CRP (C3872T).

Key words: IL-10, CRP, polymorphism, HCV-infection, cirrhosis.

По данным Всемирной организации здравоохранения на земном шаре более 200 млн человек (3% населения мира) инфицированы вирусом гепатита С (НСУ). Предполагается, что к 2015-2020 гг. число инфицированных НСУ” в мире удвоится [10]. Коварством этой инфекции является способность вируса «ускользать» от иммунной системы хозяина и вызывать непрерывно прогрессирующее течение с развитием цирроза печени (ЦП) у 12,5% больных за 20 лет и у 20-30% больных за 30 лет [1,6,15,17]. Среди всех инфицированных HCV доля больных на стадии ЦП составляет 10-25% Значительное увеличение частоты выявления ХВГС на стадии цир-ротических изменений прогнозируется к 2015-2020 гг. [7,11].

В настоящее время считается, что в формировании хронических вирусных гепатитов важную роль играют иммуноопосредованные механизмы. При этом центральное место принадлежит цитокинам [5, 8]. Показана их роль в развитии процессов фиброзирования печёночной ткани при гепатитах, в том числе вирусной этиологии [2, 13]. В реализации иммунного ответа, при ряде иммунных заболеваний, существенную роль играет генетический полиморфизм медиаторов воспаления [1, 12, 14]. Облигатными участниками воспалительного процесса являются П,-10 и CRP, однако остаётся мало изученным влияние полиморфизма генов этих белков на модифицирование скорости фиброгенеза при ХВГС.

Целью данных исследований явилось изучение частоты аномальных аллельных вариантов П.-10 (G1082A) и CRP(C3872T) у больных с циррозом печени в исходе ХВГС.

Материалы и методы

Клинико-лабораторные наблюдения проведены у 40 пациентов с циррозом печени в исходе ХВГС в возрасте от 30 до 55 лет, проживающих на территории Забайкальского края. (28 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 25 до 56 лет (средний возраст 33±4 года). При постановке диагноза использовали международную классификацию хронических гепатитов, принятую всемирным конгрессом гастроэнтерологов в Лос-Анджелесе (1994 г.), основанную на этиологическом принципе, рабочую классификацию хронического гепатита, разработанную в ФГУ «ННИИ ДГ Росмедтехнологии», с выделением

степени активности патологического процесса в печени — 0, I, II, III, IV; также использовали классификацию циррозов печени по морфологическим признакам и по Чайлд-Пью.

Диагноз устанавливали на основании данных инструментального исследования (сцентиографическое, ультразвуковое исследование печени, эластометрия печени), серологического и генетического (полимеразная цепная реакция — ПЦР) методов. Оценка стадии фиброза проводилась согласно системе METAVIR [16]. Цепень активности заболевания учитывали по выраженности отклонений показателей цитолиза от нормы. Для оценки функционального состояния печени всем пациентам исследовали биохимические показатели стандартными унифицированными методами. Критерии исключения — наличие тяжёлой соматической патологии, наличие токсического и аутоиммунного гепатита. У всех пациентов диагностирован цирроз печени, класс А по Чайлд-Пью в исходе ХВГС I- II ст. активности, в стадию компенсации. В качестве контрольной группы обследовано 100 условно-здоровых жителей Забайкалья (из них 62 мужчин и 38 женщин). Группы сопоставимы по полу и возрасту. По национальной принадлежности все объекты исследования были рус-

Таблица 1

Частота встречаемости полиморфных маркёров Т330С в гене ТЬ2, С819Т в гене ТЬ-10, С1082Л в гене ТЬ-10 у больных циррозом в Забайкальском крае

Генотипы Группа контроля

1 2 3 4 5

абс. число % абс. число %

С3872Т в гене СВР Генотип С/С Генотип С/Т Генотип Т/Т 92 2 6 92% 2% 6% 40 0 0 100% 0% 0%

в1082А в гене 1110 Генотип в/в Генотип в/А Генотип А/А 92 2 6 92% 2% 6% 30 10 75% 25%

Таблица 2

Частоты генотипов IL10

Генотипы Здоровые

С3872Т CRP

аллель C 0.93 1,0

аллельТ 0,07 0

G1082AIL10

аллель G 0,94 0,75

аллель A 0,06 0,25

скими, родившимися и проживающими на территории Забайкальского края. В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki (1964, 2000 — поправки) и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266. Все больные подписывали формы добровольного информированного согласия.

Определение полиморфизма генов IL-10(G1082A) и СRP(С3872Т) осуществлялось методом ПЦР с использованием праймеров ООО «Литех» (Москва). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь», затем проводилась реакция амплификации с двумя парами аллель-специфических праймеров. Электрофорез проводили в агарозном геле.

Исследованный контингент проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга.

Статистическая обработка полученных данных выполнена методами вариационной статистики для связанных и несвязанных между собой наблюдений с использованием пакета электронных программ Microsoft Office Excel 2007, STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc., США). При ненормальном распределении признака применяли критерий Манна- Уитни (U-тест). Для сравнения частот применялся критерий c2 (Пирсона). Разницу считали статистически значимой при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Распределение генотипов у здоровых резидентов оказалось следующим: генотип GG встречался в 92%, GA — в 6%, AA — в 2% случаев (табл. 1). Распределение генотипов отклонялось от ожидаемого по критерию Манна-Уитни (U-тест, р<0,05). Установлено, что среди здоровых лиц частота встречаемости аллели G гена IL-10 (G1082A) составляла 0,94, а аллели А — 0,06 (табл. 2). У пациентов с циррозом печени в исходе хронического вирусного гепатита C аллель A встречалась с частотой

0,25, аллель G — 0,75 (c2 = 15,27; р<0,05). У них генотип GG выявлен в 74%, AA — 26% случаев, при этом гетерозиготы не обнаружены (табл. 1).

Полиморфизм гена С-реактивного белка

среди здоровых характеризовался преобладанием частоты аллели С — 0,93, тогда как аллель Т встречалась с частотой 0,07 (c2 = 5,32; р<0,05). Генотип СС выявлен в 92%, СТ — 2%, ТТ — 6% случаев. У больных с циррозом печени мы не выявили аллели Т. Все пациенты оказались гомозиготами СС (р<0,05).

Полиморфизмы генов IL-10 и CRP влияют на содержание соответствующих белков в плазме. Так известно, что аллель А полиморфизма гена IL10 С592A и аллель А полиморфизма гена IL10 G1082А способствуют сниженной продукции IL10. Это в свою очередь влияет на направленность иммунного ответа, своевременность и эффективность межклеточной сигнализации [9]. Наличие полиморфных маркеров в участке G1082A гена IL10 ассоциировано со сниженным образованием лимфо-цитарно-тромбоцитарных коагрегатов, а следовательно, и с миграцией иммунокомпетентных клеток в очаг повреждения [4]. Считается, что полиморфизм генов цитокинов является существенным фактором предрасположенности/резистентности к инфицированию [5]. В случае низкого уровня IL10 поддерживается высокая концентрация провоспалительных медиаторов иммунного ответа, что также проводит к неблагоприятному течению заболевания.

Ген CRP локализован в хромосоме 1 (1g21 — g23), эволюционно консервативной области, кодирующий ряд белков иммунной системы и белков, ответственных за межклеточные взаимодействия. Ген CRP кодирует С-реактивный белок, являющийся маркером системного воспалительного ответа. CRP относится к факторам врожденного иммунного ответа. Особенностью продукции этого белка является неспецифичность (по отношению к первопричине воспаления) и высокая корреляция между его концентрацией в крови, причиной, тяжестью и стадией заболевания. Синтез и метаболизм СРБ, как и других белков острой фазы, происходит в основном в печени и регулируется целым рядом медиаторов. К настоящему времени известно, что промотор гена СРБ содержит регуляторные последовательности, взаимодействующие и IL1 и IL6. «Дикий» аллельный вариант С полиморфизма гена CRP (C3872T) сопровождается высокой продукцией белка и активацией макрофа-гально-моноцитарной системы, к которым относятся и клетки Купфера, и, следовательно, к выраженной стимуляции пролиферативных процессов в печени. В то же время известно, что у носителей мутантной аллели Т гена CRP наблюдается сниженная продукция CRP, что замедляет развитие фибротических изменений в органе [16]. У наблюдаемых пациентов мы не выявили ни одного случая носительства аномальной аллели CRP.

Таким образом, у больных с циррозом печени в исходе ХВГС аллель А полиморфизма гена IL10 (G1082A) и генотип АА встречается чаще, чем у здоровых лиц. У пациентов с циррозом печени в исходе хронического вирусного гепатита C наблюдается носительство только С-аллели генотип СС полиморфизма гена CRP (C3872T).

ЛИТЕРАТУРА

1. Абдуллаев С.М., Целищева Ю.И., Самоходская Л.М. и др.Генетические факторы агрессивного течения хронического гепатита С. // Вестник РАМН. — 2007. — N1. — C. 8-13.

2. Виноградова С.В. Роль полиморфизма генов ци-токинов в развитии заболеваний печени. // Сучасна гастроентерологія. — 2004. — №5(19). — С. 23-27.

3. Доржиева Н.Э., Витковский Ю.А., Судакова Л.Р., Дагбаева О.Ф. Полиморфизм гена IL-10 (C819T) у больных с воспалительными заболеваниями пародонта в забайкальском крае. // Забайкальский медицинский вестник. — 2011. — №1. — С. 44-48. — Режим доступа: http://medacadem.chita.ru/ zmv.

4. Епифанцева Н.В., Витковский Ю.А. Взаимосвязь лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии с цитокинами у детей при коклюшной инфекции // Забайкальский медицинский

вестник. — 2011. — №2. — С. 98-103. — Режим доступа: http:// medacadem.chita.ru/zmv.

5. Зима А.П. Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции: автореф. дисс... д-ра мед. наук. — 2008. — 43 с.

6. Ивашкин В.Т., Буеверов А.О., Грязин А.Е. Механизмы устойчивости вируса гепатита С к противовирусным препаратам. // Молекулярная медицина. — 2004. — №2. — С.18-23.

7. Игнатова Т.М. Естественное течение хронической HCV-инфекции. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2002. — Т.4. №2. — С. 20-37.

8. Коротчаева Ю.В., Самоходская Л.М., Сперанский

А.И. и др. Прогностическое значение определения ИЛ-б в сыворотке крови и цитохрома Р450 в ткани печени у больных хроническим вирусным гепатитом С. // Российский журнал

гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2008. — Т. 18. №2. — С.42-47.

9. Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., Витковский Ю.А. Единая клеточно-гуморальная система защиты организма. // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2005. — № 2 (22). — С. 3-14.

10. Малов С.И., Малов И.В., ДагвадоржЯ. и др. Эпидемиология хронической ИОУ-инфекции в Прибайкалье и Монголии. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2012. — Т. 112. №5. — С. 107-110.

11. Онищенко Г.Г., Шахгильдян И.В. Актуальные вопросы эпидемиологии и профилактики вирусных гепатитов В и С в Российской Федерации. // Журнал микробиологии. — 2000. — №1. — С. 50-54.

12. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Белоконь В.В. и др. Цитокины и противовирусный иммунитет. // Успехи физиологических наук. — 2006. — Т.37. №4. — С.1-5.

13. Семёнова Н.А., Рязанцева Н.В. Новицкий В.В. и др. Роль полиморфизма гена !Ь6 — 174С\С в развитии хронической ИОУ-инфекции. // Бюллетень Сибирской медицины. — 2010. — №5. — С.93-97.

14. Фрейдин М.Б., Гончарова И.А., Рудко А.А. и др. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям. // Молекулярная медицина . — 2006. — №3. — С. 39-46.

15. Armstrong G.L., Alter M.J., McQuillan G.M., Margolis H.S. The past incidence of hepatitis C virus infection: implications for the future burden of chronic liver disease in the United States. // Hepatology. — 2000. — V. 31. — Р. 777-782.

16. Bedossa P., Poynard T. An algorithm for the grading of activity in chronic hepatitis C. The METAVIR Cooperative Study Group. // Hepatology. — 1996. — V. 24. — P. 289-293.

17. Levine R.A., Sanderson S.O. Оценка прогрессирования фиброза на фоне нелечённого хронического гепатита С у жительниц Ирландии, заразившихся в результате использования анти- RhO(D) — иммуноглобулина. // Клиническая гастроэнтерология и гепатология. Русское издание. — 2008. — Т.1. №1. — С.24-31.

18. Moller D.E., Kaufman K.D. MetabolicSyndrome: A Clinical and Molecular Perspective. // Annu Rev Med. — 2005. — V. 56. — P. 45-62.

Информация об авторах: Емельянова Альвина Николаевна — к.м.н., доцент, доцент кафедры, 672090, г. Чита, ул. Горького, 39 а, e-mail: alvina1963jandex@.ru; Витковский Юрий Антонович — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой, e-mail: yuvitkovsky@rambler.ru

© БЕЛОНОГОВ А.В., ЛАЛЕТИН В.Г., БАРЫШНИКОВ Е.С., МАТОЧКИН В.В., ИЩЕНКО А.А. — 2013 УДК. 616.33-089.87:616-005.1-084

МЕТОД ПРОФИЛАКТИКИ КРОВОТЕЧЕНИЯ ПРИ ЭНДОСКОПИЧЕСКОЙ РЕЗЕКЦИИ СЛИЗИСТОЙ ЖЕЛУДКА

Александр Викторович Белоногов1,2, Владимир Григорьевич Лалетин2, Евгений Сергеевич Барышников3, Виталий Владимирович Маточкин3, Александр Анатольевич Ищенко3 (1Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор — д.м.н., проф.

В.В. Шпрах, кафедра хирургии, зав. — д.м.н., проф. Л.К. Куликов; 2Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра онкологии и лучевой терапии, зав. — д.м.н., проф.

В.В. Дворниченко; 3Иркутский областной онкологический диспансер, гл. врач — д.м.н., проф. В.В. Дворниченко)

Резюме. В статье рассматриваются возможности профилактики кровотечений при эндоскопической резекции слизистой желудка в пределах подслизистого слоя с применением 5% спиртового раствора бакелито-фенольной смолы. При анализе осложнений доказано, что частота кровотечений резко снижается после удаления полипов более 2,1см (p<0,001). Разработанный метод показал, что цианокрил может применяться при лечении полипов и раннего рака желудка.

Ключевые слова: резекция слизистой желудка, желудочные кровотечения, цианокрил.

METHOD OF BLEEDING PREVENTION IN ENDOSCOPIC RESECTION OF GASTRIC MUCOSA

A.V.Belonogov1, V.G.Laletin2, E.S.Baryshnikov3, V.V.Matochkin3, A.A.Ishenko3 (1Irkutsk State Medical Academy of Postgraduate Education; 2Irkutsk State Medical University;

3Irkutsk Regional Oncological Clinic)

Summary. The paper is devoted to a method of bleeding prevention in mucous membrane resection within submucous layer with the help of 5% solution of cianokril. The analysis of complication has shown the decrease of bleeding frequency after polyps resection more than 2,1 cm. ( p<0,001). The developed method showed that cianokril can be applied in treatment of polyps and early cancer of stomach.

Key words: resection of mucous membrane of stomach, gastric bleeding, cianokril.

Эндоскопическая резекция слизистой (ЭРС) занимает первое место среди методов эндоскопического лечения новообразований желудка, так как позволяет получить большой массив ткани, включающий опухоль, для детальной оценки ее морфологического строения и степени распространенности, что является определяющим в дальнейшей тактике лечения.

Самым частым осложнением в ходе и после эндоскопической операции является кровотечение. Частота кровотечений резко увеличивается при резекции слизистой размером более одного сантиметра и составляют от 7,0 до 24,0% [3,4]. Отсроченное кровотечение после эндоскопической резекции слизистой желудка отмечают у 6,0% больных, перфорацию желудка в 8,0% случаев. По данным В.Н. Сотникова и соавт. [1], из 153 удаленных полипов в желудке кровотечение возникло у 7 (4,6%) пациентов, угроза кровотечения сохранялась

у 17 (11,1%) больных. В.П. Харченко и соавт. [2] при эндоскопической полипэктомии электрохирургическим способом кровотечение отметили в 12 (9,6%) случаях, при использовании радиоволновой хирургии его удалось снизить до 5,3%.

Метод ЭРС желудка заключается в приподнимании и удержании фрагмента слизистой, подлежащего иссечению. Выделяют два типа удаления — «приподнимание и резекция» и «присасывание и резекция». При любой методике участок удаления приподнимается за счёт подслизистого введения физиологического раствора по периферии поражения из трех или четырех точек с помощью стандартной эндоскопической инъекционной иглы, что позволяет исключить захват глубоколежащих слоев стенки желудка. Такой раствор во время операции не долго удерживаются в тканях, вследствие чего возникает необходимость их дополнительного введения. Они