СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКУИИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИМ ПРЕКОНДИЦИОНИРОВАНИЕМ НИКОРАНДИЛОМ ПРИ ADMA-ПОДОБНОЙ МОДЕЛИ ГЕСТОЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD FOR CORRECTION OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION OF PHARMACOLOGICAL PRE-CONDITIONING BY NICORANDIL IN SIMULATED ADMA-LIKE GESTOSIS EXPERIMENTALLY

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных и связанной с этим нарушением микроциркуляции в плаценте.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных животных с помощью дистантного ишемического прекондиционирования, согласно описанию патента (RU №2462765, публ. 27.09.2012 г., бюл. №27 - 4 с.), включающему коррекцию моделируемой патологии ежедневно, с 10 по 20 сутки беременности, воспроизведением дистантного прекондиционирования путем 10-минутного пережатия бедренной артерии на уровне верхней трети бедра, с последующей реперфузией.
Основным недостатком способа является то, что первая фаза защитного эффекта длится до 4 часов. Вторая фаза защитного эффекта по данным различных авторов хоть и имеет длительность до 24 часов, но значительно уступает первой по своему эффекту. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели патологии у беременных животных с использованием дистантного ишемического прекондиционирования неудовлетворительны.
Кроме этого, воспроизведение дистантного ишемического прекондиционирования неудобно (вызывает болевые ощущения, требует специальное оборудование и навыки) и потенциально небезопасно (существует риск тромботических осложнений и повреждения венозной стенки).
Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза, включающей воспроизведение фармакологического прекондиционирования, обладающего более длительным противоишемическим действием, более удобным в использовании, менее опасным.
Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование в качестве фармакологического прекондиционирования препарата никорандила.
Задача достигается тем, что на фоне моделирования гестоза в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток (с 14 по 20 день беременности) ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция эндотелиальной дисфункции с помощью фармакологического прекондиционирования, путем введения внутрижелудочно (через зонд) никорандила в дозе 10 мг/кг 2 раза в сутки (с 14 по 20 день беременности). Это приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции при моделируемой патологии.
+
Одной из конечных точек ишемического и фармакологического прекондиционирования, обуславливающего его противоишемический эффект, является активация АТФ-зависимых К каналов. Поэтому для подтверждения роли фармакологического прекондиционирования в коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобном гестозе в эксперимент введена группа беременных самок, которым в течение 7 суток (с 14 по 20 день беременности) за 45 минут до введения внутрижелудочно никорандила также 2 раза в сутки вводился внутрижелудочно неселективный блокатор АТФ-зависимых К+глибенкламид в дозе 50 мг/кг. Это приводило к практически полной отмене положительных эффектов никорондила, тем самым подтверждая версию о том, что коррекция нарушений происходит за счет его прекондиционирующих свойств.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г сроком беременности 14 дней. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Никорандил вводится внутрижелудчно в дозе 10 мг/кг 2 раза в сутки в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Глибенкламид вводится внутрижелудчно в дозе 50 мг/кг 2 раза в сутки в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности) за 45 минут перед никорондилом.
На 8 день от начала эксперимента (21 день беременности, через 14 часов после последнего введения никорондила) под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводят катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Проводят сосудистые пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ)-внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) - патент №2301015 от 20.06.2007 г. (Бюл. №17).
Исследование микроциркуляции в плаценте проводили с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDf100C и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ).
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным (с 14 по 20 день беременности) введением L-NAME в дозе 25 мг/кг/сут беременным крысам, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое расслабление (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) и увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до 3,06±0,32* (р<0,05). Длительное, в течение 7 суток (с 14 по 20 день беременности), ежедневное внутрижелудочное введение никорандила (10 мг/кг) 2 раза в сутки на фоне ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс приводило к достоверному снижению КЭД до 1,95±0,13, что статистически меньше, чем в группе животных с введением L-NAME (p<0,05).
Введение L-NAME также приводила к нарушению микроциркуляции в плаценте, о чем свидетельствует снижение ее величины с 425,90±39,55 ПЕ у интактных беременных животных до 210,00±21,80 ПЕ (p<0,05). Длительное, в течение 7 суток, ежедневное внутрижелудочное введение никорандила (10 мг/кг) 2 раза в сутки на фоне ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс приводило к достоверному повышению уровня микроциркуляции в плаценте до 394,20±19,00 ПЕ, что выше, чем у животных в группе с введением L-NAME (р<0,05).
Введение глибенкламида в дозе 50 мг/кг 2 раза в сутки в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности) за 45 минут перед никорондилом приводило к увеличению КЭД до 2,8±0,2 и снижению микроциркуляции в плаценте до 279,1±10,5 ПЕ, что статистически не отличалось от группы нелеченых животных с введением L-NAME.
Таким образом, снижение КЭД и повышение микроциркуляции в плаценте убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции эндотелиальной дисфункциии никорандилом в условиях воспроизводимой нами ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс, а отмена его эффектов глибенкламидом - о ключевой роли в их реализации прекондиционирующего компонента этого препарата.
+
Никорандил - производное никотинамида, уникальный препарат с двойным механизмом действия, обладающий свойствами активаторов АТФ-зависимых К каналов (активатор билогических процессов прекондиционирования) и нитратов, индуцирующий продукцию оксида азота (NO). В медицинской практике никорандил используется в качестве донатора NO. Как донатор NO никорандил действует 12 часов, поэтому фармакологические препараты на его основе вводятся 2 раза в сутки. Биологические процессы, протекающие при прекондиционировании, имеют более длительное течение. Проводя исследования через 14 часов после последнего введения никорандила, мы тем самым исключали его действие как донатора NO.
+
+
2+
Активируя митохондриальные АТФ-зависимые К каналы, никорандил индуцирует вход ионов К в митохондриальный матрикс, что вызывает деполяризацию внутренней митохондриальной мембраны. Это, в свою очередь, способствует снижению перегрузки митохондрий ионами Са во время ишемии, уменьшению их набухания и ведет к продукции сублетальных уровней активных форм кислорода (ROS). Это приводит к уменьшению расходования АТФ. Снижение уровня ишемии приводит к уменьшению ответного образования некоторых гуморальных факторов: рецептор-1 растворимого фактора роста эндотелия сосудов (VEGf) (sflt-1), свободные радикалы, аутоантителорецептор ангиотензина II (тип 1) (АТ1-АА) и цитокины (фактор некроза опухоли (TNf-α)) и интерлейкин-1 (IL-1), вызывающих эндотелиальную дисфункцию.