СПОСОБ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ

1. Способ очистки белка, включающий:
a. получение образца, содержащего белок;
b. обработку образца с помощью поглощающей хроматографической смолы с получением первого элюата, содержащего белок;
c. дезактивирование вирусов в первом элюате с получением дезактивированного элюата, содержащего белок;
d. обработку дезактивированного элюата с помощью, по меньшей мере, одного фильтра глубинного типа с получением фильтрованного элюата, содержащего белок; и
e. обработку фильтрованного элюата с помощью, по меньшей мере, одной ионообменной мембраны с получением второго элюата, содержащего белок.
2. Способ по п.1, в котором стадия фильтрования с помощью фильтра глубинного типа и стадия с ионообменной мембраной предлагаются в виде последовательности фильтров.
3. Способ по п.1, в котором поглощающую хроматографическую смолу выбирают из группы, состоящей из афинной смолы, ионообменной смолы, смолы для хроматографии смешанного режима и смолы с гидрофобными взаимодействиями.
4. Способ по п.1, в котором поглощающую хроматографическую смолу выбирают из группы, состоящей из смолы с белком А, смолы с белком G, смолы с белком А/G и смолы с белком L.
5. Способ по п.1, в котором белок выбирают из группы, состоящей из фрагмента белка, антитела, моноклонального антитела, иммуноглобулина и белка слияния.
6. Способ по п.1, в котором образец представляет собой культуру клеток.
7. Способ по п.1, в котором образец осветляют перед обработкой с помощью поглощающей хроматографической смолы.
8. Способ по п.7, в котором образец осветляют с помощью способа осветления, выбранного из группы, состоящей из центрифугирования, микрофильтрования, ультрафильтрования, фильтрования с помощью фильтра глубинного типа, стерильного фильтрования и обработки детергентом.
9. Способ по п.1, в котором дезактивирование вирусов включает способ, выбранный из группы, состоящей из обработки кислотой, детергентом, химикалиями, агентами для поперечной сшивки нуклеиновых кислот, ультрафиолетовым светом, гамма излучением и теплом.
10. Способ по п.9, в котором дезактивирование вирусов включает понижение pH первого элюата до pH примерно от 3 примерно до 4.
11. Способ по п.10, в котором первый элюат инкубируют в течение примерно 30 - примерно 90 минут во время дезактивирования вирусов.
12. Способ по п.1, в котором дезактивированный элюат доводят до pH 5-10 перед стадией фильтрования с помощью фильтра глубинного типа.
13. Способ по п.1, в котором стадия фильтрования с помощью фильтра глубинного типа включает фильтрование, по меньшей мере, через один фильтр глубинного типа.
14. Способ по п.1, в котором стадия фильтрования с помощью фильтра глубинного типа включает фильтрование, по меньшей мере, через два фильтра глубинного типа, расположенных последовательно или параллельно.
15. Способ по п.1, в котором после стадии фильтрования с помощью фильтра глубинного типа следует стадия фильтрования на капсульном стерильном фильтре.
16. Способ по п.1, в котором ионообменная мембрана содержит Q мембрану.
17. Способ по п.16, в котором стадию с использованием Q мембраны осуществляют в проточном режиме.
18. Способ по п.1, в котором после стадии с использованием ионообменной мембраны следует стадия фильтрования с помощью стерильного капсульного фильтра.
19. Способ по п.1, в котором дезактивированный элюат обрабатывают с помощью одного фильтра глубинного типа и отфильтрованный элюат обрабатывают с помощью ионообменной мембраны, расположенной последовательно с ним.
20. Способ по п.1, в котором второй элюат дополнительно подвергают воздействию дополнительной стадии хроматографии.
21. Способ по п.20, в котором дополнительную стадию хроматографии выбирают из группы, состоящей из хроматографии гидрофобных взаимодействий, хроматографии, работающей в смешанном режиме, и катиоонобменной хроматографии.
22. Способ по п.1, в котором второй элюат дополнительно подвергают воздействию стадии нанофильтрования.
23. Способ по п.1, в котором второй элюат дополнительно подвергают воздействию стадии ультрафильтрования и диафильтрования.
24. Способ очистки белка, включающий:
a. получение образца, содержащего белок;
b. осветление образца с получением осветленного образца;
c. обработку осветленного образца с помощью поглощающей хроматографической смолы с получением первого элюата, содержащего белок;
d. дезактивирование вирусов в первом элюате с получением дезактивированного элюата, содержащего белок;
e. обработку дезактивированного элюата с помощью, по меньшей мере, одного фильтра глубинного типа с получением отфильтрованного элюата, содержащего белок;
f. обработку отфильтрованного элюата с помощью, по меньшей мере, одной ионообменной мембраны с получением второго элюата, содержащего белок;
g. обработку второго элюата с помощью дополнительной хроматографической смолы с получением третьего элюата, содержащего белок;
h. воздействие на третий элюат нанофильтрования с получением элюата после нанофильтрования, содержащего белок; и
i. воздействие на элюат после нананофильтрования ультрафильтрования и диафильтрования.
25. Способ по п.24 в котором дополнительная хроматографическая смола включает хроматографическую смолу для работы в смешанном режиме.
26. Способ по п.25, в котором обработка второго элюата с помощью дополнительной хроматографической смолы, работающей в смешанном режиме, включает одну или несколько хроматографических методик, выбранных из группы, состоящей из анионного обмена, катионного обмена, гидрофобных взаимодействий, гидрофильного взаимодействия, водородной связи, связи пи-пи орбиталей и сродства к металлам.
27. Способ по п.26, в котором обработка второго элюата с помощью дополнительной хроматографической смолы, работающей в смешанном режиме, включает сочетание механизмов хроматографии анионного обмена и гидрофобных взаимодействий.
28. Способ по п.26, в котором хроматографическая колонка для работы в смешанном режиме может работать в проточном режиме или в режиме связывания-элюирования.
29. Способ по п.24, в котором дополнительная хроматографческая смола включает катионообменную смолу.
30. Способ по п.29, в котором обработка второго элюата с помощью дополнительной хроматографической смолы для работы в смешанном режиме включает одну или несколько хроматографических методик, выбранных из группы, состоящей из анионного обмена, катионного обмена, гидрофобных взаимодействий, гидрофильных взаимодействий, водородной связи, связи пи-пи орбиталей и сродства к металлам.
31. Способ по п.30, в котором обработка второго элюата с помощью дополнительной хроматографической смолы для работы в смешанном режиме включает сочетание хроматографических механизмов анионного обмена и гидрофобных взаимодействий.
32. Способ по п.29, в котором колонка для хроматографии катионного обмена работает в режиме связывания-элюирования.