ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ СТЕРОИДНЫХ ЭСТРОГЕНОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЭНДОМЕТРИОЗА
DRUG BASED ON STEROID ESTROGENS FOR TREATMENT OF ENDOMETRIOSIS

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается средств для лечения эндометриоза.
Эндометриоз - заболевание, при котором за пределами полости матки происходит доброкачественное разрастание ткани, по морфологическим и функциональным свойствам подобной эндометрию, в результате чего в брюшной полости появляются очаги эндометриоза, в которых происходят циклические микрокровотечения с персистирующим воспалительным процессом, приводящим к развитию спаечной болезни и хроническим тазовым болям [Петросян, М.А.; Балашова, Н.Н.; Полянских, Л.С.; Базиян, Е.В.; Траль Т.Г.; Фасахутдинова Л.Х.; Разыграев, А.В.; Сапронов, Н.С. Влияние аналогов прогестерона на эндометриоидные гетеротопии в экспериментальной модели эндометриоза. Экспериментальная и клиническая фармакология, 2018, 81(7), 53-58.].
Эндометриоз представляет собой важнейшую проблему современной гинекологии, являясь одним из самых распространенных заболеваний женской репродуктивной системы и одной из основных причин бесплодия. Многочисленные работы посвящены изучению эндометриоза, однако существенного прогресса в его диагностике и лечении не достигнуто [Zondervan, K.Т.; Becker, Ch.M.; Missmer, S.A. Endometriosis. N. Engl. J. Med. 2020, 382, 1244-1256.].
Эндометриоз поражает до 10% женщин репродуктивного возраста, и основной целью его лечения является купирование симптомов заболевания [Greene, A.D.; Lang, S.A.; Kendziorski, J.A.; Sroga-Rios, J.M.; Herzog, T.J.; Burns, K.A. Endometriosis: where are we and where are we going? Reproduction 2016,152(3), R63-78.].
В настоящее время для лечения больных эндометриозом ведущее место занимает гормональная терапия.
К первой линии терапии относят монотерапию прогестинами, поскольку они не только позволяют устранить боль и осуществить регресс уже имеющихся очагов заболевания, но также предотвратить развитие новых очагов [Casper, R.F. Progestin - only pills may be a better first-line treatment for endometriosis than combined estrogen-progestin contraceptive pills. Fertil Steril. 2017,107(3), 533-536.].
Несмотря на разнообразие препаратов гестагенного ряда, их выбор для лечения эндометриоза не велик.
Самым известным препаратом, эффективно применяющимся в клинической практике является диеногест [Murji, A.;  K.; Leng, J.; Mueller, M.D.;  Т.; Vignali, M.; Yarmolinskaya, M. Use of dienogest in endometriosis: a narrative literature review and expert commentary. Curr Med Res Opin. 2020, 36(5), 895-907. [Andres, M.P.; Lopes, L.A.; Baracat, E.C.; Podgaec, S. Dienogest in the treatment of endometriosis: systematic review. Arch Cynecol. Obstet. 2015, 292(3), 523-529. Katsuki, Y.; Takano, Y.; Futamura, Y.; Shibutani, Y.; Aoki, D.; Udagawa, Y.; Nozawa, S. Effects of dienogest, a synthetic steroid, on experimental endometriosis in rats. Eur. J. Endocrinol. 1998, 138(2), 216-226.].].
Диеногест при ежедневном введении (внутрижелудочно через зонд) в течении 21 дня в дозе 1.0 мг/кг уменьшает объем очагов экспериментального эндометриоза у крыс на 67.5% по сравнению с контрольной группой (112,4%) (р=0.0449) от исходных показателей во время диагностических замеров [Петросян, М.А.; Балашова, Н.Н.; Полянских, Л.С.; Базиян, Е.В.; Траль, Т.Г.; Фасахутдинова, Л.Х.; Разыграев, А.В.; Сапронов, Н.С. Влияние аналогов прогестерона на эндометриоидные гетеротопии в экспериментальной модели крыс. Экспериментальная и клиническая фармакология. Фармакология репродуктивной системы, 2018, 81(7), 14-19.].
Из уровня техники известно незначительное количество исследований о применении ингибиторов ароматазы для лечения эндометриоза, таких как летрозол, анастрозол [Молотков, А.С.; Ярмолинская, М.И. Возможности применения ингибиторов ароматазы в терапии генитального эндометриоза. Журнал акушерства и болезней, 2011, 60(4), 117-125.]. Однако, как правило, они проявляют различные нежелательные эффекты и используются в виде комбинаций, например, с гестагенами (Pakkalin, A.; Knauthe, R.; Schmitz, H.; Tailing, Ch.; Jukarainen, H.; Korolainen, H. Parenteral pharmaceutical form which releases aromatse inhibitor and gestagens, for the treatment of endometriosis. WO 2011120925 A1).
Применение агонистов дофамина, бигуанидов, витамина D, мелатонина, не оказывающих прямого влияния на стероидогенез, но имеющих возможное влияние на различные звенья патогенеза эндометриоза, также показало положительный терпевтический эффект по сравнению с контрольной группой, но менее выраженный, чем в группах диеногеста и летрозола [Ярмолинская, М.И.; Петросян, М.А.; Флорова, М.С.; и др. Сравнительная оценка эффективности перспективных препаратов для таргетной терапии эндометриоза на основании экспериментальной модели заболевания. Гинекология. 2018, 20(5), 46-51.].
Задачей настоящего изобретения является поиск препарата монотерапии для лечения эндометриоза.
Задача решается применением соединения 3-О-сульфамата 16,16-диметил-D-гомоэквиленина (1) для лечения эндометриоза.
3-О-сульфамат 16,16-диметил-D-гомоэквиленина известен как препарат, который ингибирует сульфатазу эстрона и проявляет активность против трижды-негативного рака молочной железы [Ilyasov, Sh.S.; Shavva, A.G.; Morozkina, S.N. Use of 3-O-sulfamate-16,16-dimethyl-D-homoequilinine to treat oncological diseases. WO 2020096486(A1)- 2020-05-14.]. Способ его получения описан, например, в патенте [Ilyasov, Sh.S.; Shavva, A.G.; Morozkina, S.N. Use of 3-O-sulfamate-16,16-dimethyl-D-homoequilinine to treat oncological diseases. WO 2020096486(A1)- 2020-05-14.].
Согласно изобретению, установлена новая активность известного соединения и соответственно новая область его возможного применения в клинической практике. Технические результаты:
- действие препарата сравнимо с применяющимся в клинической практике диеногестом,
- механизм ингибирования роста эндометриоза - ингибирование ключевого фермента ароматазы.
При этом предлагаемый препарат не оказывает или оказывает минимальные побочные эффекты, свойственные диеногесту и ингибиторам ароматазы, такие как остеопороз, приливы, головные боли.
Изобретение может быть продемонстрировано нижеследующими экспериментальными данными.
Пример 1. Ингибирование роста очагов эндометриоза
Исследование проводили на половозрелых самках крыс линии Вистар массой 170-250 г. Все лабораторные животные были получены из ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово» и содержались в регламентируемых условиях вивария ФГБНУ «НИИ АгиР им. Д.О. Отта» при соблюдении всех правил содержания лабораторных животных (время и порядок проведения карантина, маркировка всех особей, постоянный санитарный контроль, стандартный пищевой рацион, свободный доступ к воде и к корму, автоматический режим освещения день:ночь 12:12 ч).
Для проведения хирургического моделирования эндометриоза были отобраны самки с регулярным 4-5 дневным эстральным циклом. Мониторинг эстрального цикла проводили ежедневно в течение 2 недель. Все операции выполняли на стадии эструс, стандартизируя условия трансплантации фрагментов матки, находящихся в одинаковой стадии эстрального цикла. Операции проводили под общей анестезией животных препаратом Zoletil-100 (Virbac, Франция) в дозе 10 мг/кг при внутрибрюшинном введении. Освобождали место хирургического доступа (брюшную часть туловища) от шерстного покрова и фиксировали животных в положении «лежа на спине». Поверхность кожи обрабатывали антисептическим раствором и накрывали стерильной салфеткой.
Хирургическое моделирование эндометриоза проводили согласно методу M.W. Vernon, E.A. Wilson с модификациями [Vernon, M.W.; Wilson, E.A. Studies on the surgical induction of endometriosis in the rat. Fertil Steril. 1985, 44(5), 684-694.]. Доступ в брюшную полость животных проводили путем лапаротомии. В нижней части туловища выполняли вертикальный серединный разрез на коже около 2 см, а затем послойно на подкожной жировой клетчатке и брюшине, через который извлекали правый рог матки. Перевязку рога осуществляли в области маточно-трудного перехода и на 1 см выше места бифуркации рогов. Фрагмент рога между лигатурами (≈1 см) иссякали. Удаленный участок матки переносили в стерильную чашку Петри в 1 мл стерильного физиологического раствора, вскрывали вдоль со стороны прикрепления маточной брыжейки и вырезали 3 равные части размером 2×2 мм. Затем проводили аутотрансплантацию фрагментов ткани матки на 3 участка, расположенные в брюшной полости животного. Размещали два импланта на передней брюшной стенке в области локализации крупных сосудов, справа и слева от срединного разреза таким образом, чтобы эндометрий был ориентирован в сторону мезотелия.
Фиксацию импланта проводили с помощью шовного материала VICRYL Plus Antibacterial/resorbaarbeer (0-4) (Johnson and Johnson, Бельгия). Всем животным во время операции по моделированию эндометриоза была проведена двусторонняя овариэктомия, что позволило избежать образования кист яичников и унифицировать гормональный фон животных. Перед закрытием операционной раны проверяли гемостаз, в случае необходимости лигировали сосуды. Для закрытия операционной раны на брюшине накладывали непрерывный шов, на коже - отдельные п-образные швы с использованием шовного материала VICRYL Plus Antibacterial/unresorbaarbeer (0-2) (Johnson and Johnson, Бельгия). Поверхность послеоперационной раны обрабатывали 5% спиртовым раствором йода и антибактериальным препаратом «Ксероформ».
С целью профилактики послеоперационных осложнений в день операции и на протяжении 2 последующих дней животные получали антибактериальную терапию препаратом лендацин (цефтриаксон, Lec d.d.d, Словения) внутримышечно в дозе 100 мг/кг. Сразу после операции животным вводили нестероидный противовоспалительный препарат кетонал (кетопрофен, Lec d.d.d, Словения) внутримышечно в дозе 40 мг/кг. Кожный шов ежедневно обрабатывали антисептиками до момента заживления раны.
После экспериментального моделирования эндометриоза всем животным назначали заместительную гормональную терапию этинилэстрадиолом. Инъекции эстрогена проводили внутримышечно, начиная со дня операции, дважды в неделю до окончания эксперимента.
Спустя две недели после операции проводили повторную лапаротомию для оценки жизнеспособности и определения размеров имплантов в 3 плоскостях. Техника и условия выполнения оперативного вмешательства были аналогичны первой лапаротомии. Через 3 недели применения препарата животных выводили из эксперимента, используя глубокий ингаляционный наркоз. Проводили вскрытие, давали визуальную макроскопическую оценку имплантов. Иссеченный материал фиксировали в 10% забуференном формалине, обезвоживали в 4-х растворах изопропилового спирта по 45 мин, выдерживали в парафине при 57°С 2 ч и заливали в блоки. Гистологические срезы толщиной 4-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Проводили морфологическое исследование всех образцов на наличие эндометриоидной ткани в имплантах.
Результаты исследования
В модели экспериментального хирургически индуцированного эндометриоза на крысах показано, что 3-О-сульфамат 16,16-диметил-D-гомоэквиленина при ежедневном пероральном введении в дозе 1.0 мг на кг в течение 21 дня вызывает выраженное уменьшение эндометриоидных образований, по сравнению с контрольной группой (р=0,03297) по критерию Уилкоксона-Манна-Уитни с поправкой Бенджамини-Хохберга.
В группах, получавших диеногест и изучаемый препарат суммарный объем имплантов составлял 31,8% и 28,04% от исходного объема соответственно, тогда как в контрольной группе - 55,37% от исходных показателей. Результаты представлены на Рисунке 1.
Рисунок 1 отображает суммарный объем эндометриоидных гетеротопий после лечения в процентах от суммарного объема гетеротопий, сформированных при моделировании заболевания. Жирная линия внутри каждого бокса обозначает медиану. Нижняя и верхняя границы бокса - 25-й и 75-й процентили (1-й и 3-й квартили). Значения ниже 100% - регрессия гетеротопий (0% - полная регрессия); выше 100% - увеличение объема гетеротопий.
Таким образом, 3-О-сульфамат 16,16-диметил-D-гомоэквиленина проявил высокую эффективность, сходную с эффективностью диеногеста, в отношении уменьшения эндометриоидных очагов, что открывает большую перспективу его применения в акушерско-гинекологической практике для терапии эндометриоидной болезни.
Поскольку 3-О-сульфамат 16,16-диметил-D-гомоэквиленина не обладает связыванием с рецепторами эстрогенов альфа и бета, механизм ингибирования - через ингибирование фермента ароматазы.
Пример 2. Ингибирование фермента ароматазы
Активность ароматазы измеряли в образцах эндометрия с использованием анализа выделения тритированной воды. Для этого ткань гомогенизировали в фосфатном буфере (рН 7,4, 0,05 М, содержащий 0,25 M сахарозы и 1 мМ NADPH; 5.0 мл /г ткани). Активность ароматазы измеряли с использованием [1β-3H] андростендиона (2-3 нМ, 25 Ки / ммоль, Perkin Elmer) в течение 20-часового инкубационного периода. Способность ингибировать ароматазу 3-О-сульфамат-16,16-диметил-D-гомоэквиленином (1 мкМ) была сравнима с ингибированием летразолом.
Таким образом, настоящее изобретение позволяет существенно расширить область терапевтического применения 3-О-сульфамата 16,16-диметил-D-гомоэквиленина.