Оценка биоэквивалентности двух таблетированных форм лизиноприла на здоровых добровольцах

Оценка биоэквивалентности двух таблетированных форм лизиноприла на здоровых добровольцах

Алтынбеков С.А.1, Джолдыгулов Г.А.1, Серяков В.Н.1, Будач Я.М.2, Курилов О.Э.2, Кузнецова Н.И.3

1 — РГКП «Республиканский научно-практический центр психиатрии, психо-

терапии и наркологии» МЗ РК, Республика Казахстан, г. Алматы

2 — АО «Химфарм», Республика Казахстан, г. Алматы

3 — ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный университет им.

И.М. Сеченова», г. Москва

Резюме

В рамках перекрёстного, однократного, открытого, рандомизированного исследования с периодом отмывки 1 неделя, с двумя последовательностями на 18 добровольцах изучена биоэквивалентность таблеток, покрытых оболочкой, лизиноприла двух производителей (доза 20 мг). Концентрацию лизиноприла в образцах плазмы крови определяли методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием в течение 72 ч. Для исследуемых препаратов рассчитаны следующие фармакокинетические параметры: AUC0-«, Cmax, tmax, Cmax/AUC. 90% доверительный интервал отношений AUC0-« сравниваемых препаратов составил 0,8520 — 1,2102 и для Cmax — 0,9288 — 1,1451. В дополнение к 90% доверительным интервалам, дисперсионный анализ не выявил статистически значимых различий между изучаемыми препаратами. Сделан вывод о биоэквивалентности сравниваемых препаратов лизиноприла.

Ключевые слова: лизиноприл, ВЭЖХ, флуорометрическое детектирование, биоэквивалентность.

Evaluation of bioequivalence of two tablet forms of lisinopril in healthy volunteers

Altynbekov S.A.1, Dzholdygulov G.A.1, Seryakov V.N.1, Budach Y.M.2, Kurilo O.E.2, Kuznetsova N.I.3

1 — Republican Scientific and Practical Centre for Psychiatry, Psychotherapy and Addiction, MoH, Republic of Kazakhstan, Almaty

2 — JSC «Chimpharm», Republic of Kazakhstan, Almaty

3 — Medical University «First Moscow State University, IM Sechenov», Moscow

Summary

Under cross, single, open, randomized trial with 1 week washout period, with two sequences of 18 volunteers studied bioequivalence coated tablets, two manufacturers of lisinopril (20 mg dose). The concentration of lisinopril in the plasma samples was determined using HPLC with fluorimetric detection within 72 hours for the investigated preparations the following pharmacokinetic parameters were calculated: AUC , C , t , C /AUC. 90% confidence interval relations AUC

-1 1 1 0-« max max max 0-«

compared drugs totaled 0.8520 — 1.2102 for Cmax — 0,9288 — 1,1451. In addition to the 90% confidence intervals, analysis of variance revealed no statistically significant differences between the studied drugs. Concluded bioequivalence compared drugs lisinopril.

Keywords: lisinopril, HPLC, fluorometric detection, bioequivalence

Введение

Лизиноприл, (8)-1-[^-(1-карбокси-3-фенил)^-лизил]^-пролина дигидрат, представляет собой длительно действующий ингибитор ангиотензин-пре-вращающего фермента, который используется для лечения гипертензии и хронической сердечной недостаточности в суточной дозировке 5-40 мг [4]. Он снижает концентрации ангиотензина и альдостерона в плазме крови за счёт ингибирования ангиотензин-пре-вращающего фермента.

На рынки стран СНГ введены в обращение несколько воспроизведённых препаратов лизиноприла. При этом следует иметь ввиду, что воспроизведён -ный препарат должен быть эквивалентен оригиналу по фармакокинетическим и фармакодинамическим параметрам, обладая при этом более низкой стоимостью, что делает его доступным для большего числа пациентов с хроническим инвалидизирующим заболеванием. Поэтому целью данного исследования является оценка биоэквивалентности двух препаратов лизиноприла.

№2.20131

33

1Фшаишш И Фармащшмш

Материалы и методы

Методом отбора к исследованию были допущены 8 женщин и 10 мужчин (35,3+6,0 лет; 68,6±6,3 кг; 170,5+6,0 см).

В случайном порядке добровольцы принимали вначале 1 таблетку (20 мг) тестируемого препарата (Лизино-прил, таблетки 20 мг, АО «Химфарм», Республика Казахстан; тест-препарат; Т) [1-й период исследования], спустя 7 дней — 1 таблетку (20 мг) референс-препарата (Лизиноприл-Ратиофарм таблетки 20 мг, производства «Меркле» ГмбХ, ФРГ; препарат сравнения; R) [2-й период исследования]. В обратном порядке добровольцы вначале принимали 1 таблетку препарата Лизино-прил-Ратиофарм [1-й период исследования], а затем спустя 7 суток — 1 таблетку Лизиноприла [2-й период исследования]. Препараты принимали внутрь, не разжёвывая, запивая 200 мл воды. Взятие образцов крови для определения содержания лизиноприла в плазме крови осуществлялось в дискретные интервалы времени — до принятия препарата (0) и через 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 6,0, 8,0, 12,0, 24,0,48,0 и 72,0 ч после приёма препаратов.

Определение концентраций лизиноприла в плазме крови добровольцев проводили методом ВЭЖХ с флуо-рометрическим детектированием [5]. В качестве дерива-тизирующего агента использовали флюороскамин (0,7 мг/мл в ацетоне). Предел количественного определения лизиноприла составил 5,0 нг/мл.

Оценка биоэквивалентности проводилась применительно к параметрам площади под фармакокине-тической кривой лизиноприла в плазме крови добровольцев от ноля до бесконечности (АиС0_ю, поскольку вклад экстраполированной части кривой от последней точки определения концентрации лизиноприла до бесконечности в среднем составил 2,2%) и максимальной концентрации лизиноприла в плазме крови (Стах) (натуральные и логарифмически преобразованные данные) с использованием методов параметрической статистики.

В статье представлены результаты дисперсионного анализа ANOVA для показателей биоэквивалентности 1пАиС0_ю и 1пСтах. Условием применения является предположение о нормальном распределении изучаемых показателей.

В качестве рабочей была принята нулевая гипотеза: между средними значениями показателей биоэквивалентности тест-препарата и препарата сравнения отсутствуют статистически значимые различия.

В качестве источников вариации изучались межиндивидуальные различия, обусловленные испытуемыми, которые принимали исследуемые препараты («испытуемые»), лекарственной формой препарата («препарат») и последовательностью приёма препаратов («последовательность»).

Гипотеза биоэквивалентности принималась, когда 90% доверительный интервал для отношения среднего значения (цт/цк) логарифмически преобразованных данных АиС, составлял 0,8>цт/цк>1,25, для Стах и

Спах/АиС 0,7>цт/цк> 1,33. Границы, этих интервалов, рассчитывались при помощи дисперсионного анализа ANOVA. Расчёт 90% доверительных интервалов проводили с использованием программы «Bioeqv», Россия [3].

Расчёт фармакокинетических параметров анализируемых препаратов проведён с использованием модель-но-независимого метода. В табл. 1 приведены средние арифметические значения (х) соответствующие им стандартные отклонения (SD) и стандартные ошибки среднего значения (вх—), коэффициенты вариации (С.^%), размах — непараметрический параметр статистики (разность между максимальным и минимальным значениями ряда) и среднее геометрическое (х—геом).

Рассчитывали парные 1-критерии Стьюдента в предположении отсутствия влияния периода получения препарата и нормального распределения изучаемого показателя. По результатам строили графики, показывающие распределение индивидуальных различий между значениями показателя для сравниваемых препаратов. График индивидуальных различий демонстрирует, насколько симметрично они расположены относительно оси абсцисс. График стандартизованных различий (центрированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) позволяет выявить резко отличающиеся индивидуальные различия. Учитывая нормальное распределение индивидуальных различий (со средним значением равным 0 и стандартным отклонением равным 1), более 95% от их общего числа должно располагаться в полосе [-2;2].

Результаты и их обсуждение

На рис. 1 представлены усреднённые фармакоки-нетические профили лизиноприла в плазме крови добровольцев после однократного приёма 20 мг таблеток Лизиноприл и Лизиноприл-Ратиофарм, где анализируемое лекарственное вещество определяется на протяжении 72 ч.

Сравнительный анализ основных фармакокине-тических параметров (табл. 1) лизиноприла, получен-

(О

с; ^

ср с о

— — Лизиноприл

—о— Лизиноприл-ратиофарм

0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80

Время, ч

Рис. 1. Усредненные фармакокинетические профили лизиноприла в плазме крови добровольцев после однократного приёма 20 мг таблеток Лизиноприл

100

80

60

40

20

0

ных по концентрационным кривым лизиноприла из таблеток Лизиноприл и Лизиноприл-Ратиофарм показал, что изучаемые препараты всасываются из желудочно-кишечного тракта практически с одинаковой скоростью. Так параметр, характеризующий скорость всасывания — Сшах/ЛиС0-ю для таблеток Лизиноприла составил 0,0410+0,0080 ч-1, и для таблеток Лизино-прил-Ратиофарм — 0,0401+0,0065 ч-1 (между сравниваемыми параметрами статистически значимые отличия не обнаружены). Время достижения максимальной концентрации ^ ) лизиноприла в плазме крови добровольцев не отличалось для сравниваемых препаратов и составило в среднем — 6,3+0,8 ч. При этом средняя максимальная концентрация лизиноприла, определяемая в плазме крови добровольцев (С ), составила для таблеток Лизиноприла — 81,6+13,6 нг/мл и для таблеток Лизиноприл-Ратиофарм — 79,1+13,4 нг/мл.

Анализ основного параметра, характеризующего степень и скорость биодоступности действующего вещества из лекарственной формы — ЛиС0-ю указывает

на умеренную вариабельность данного параметра (не выше 25%). Среднее значение ЛиС0-ю для препарата Лизиноприл составило 2056,1+500,0 и для Лизино-прил-Ратиофарм — 2022,1+482,0 нг/млхч. При этом не выявлено достоверно значимых различий для сравниваемых величин.

Степень относительной биологической доступности лизиноприла из таблеток тест-препарата по отношению к референс-препарату, определяемая отношением соответствующих значений ЛИС0_ю, составила в среднем 1,103+0,474% (усреднённые данные на основании точечных индивидуальных оценок) (табл. 2).

Доверительный интервал для логарифмически преобразованных значений ЛИС0_ю составил 0,8520 — 1,2102 (или 85,20 — 121,02%). Степень биодоступности, определяемая отношением соответствующих значений Сщах, составила 1,0687+0,2870, а доверительный интервал для логарифмически преобразованных значений Стах — 0,9288 — 1,1451 (или 92,88 — 114,51%). Полученные данные представлены в табл. 3.

Таблица 1

Фармакокинетические параметры лизиноприла у добровольцев после однократного приёма 20 мг исследуемых препаратов

Аис0-~

Т Т Т Т

X 2056,1 2022,1 81,6 79,1 6,3 6,3 0,0410 0,0401

SD 500,0 482,0 13,6 13,4 0,8 0,8 0,0080 0,0065

5 X 117,9 113,7 3,2 3,2 0,2 0,2 0,0019 0,0015

е.у.% 24,32 23,84 16,70 17,00 12,11 12,11 19,55 16,16

Размах 1839,8 1685,4 58,0 49,8 2,0 2,0 0,0294 0,0280

X геом. 1997,6 1967,3 80,5 78,0 6,3 6,3 0,0403 0,0397

Таблица 2

Точечная оценка индивидуальных отношений параметров, характеризующих относительную биодоступность

№/№ ДиС-гайо С -гайо тах С /дис-га^о тах

1 0,58720 0,87807 1,49490

2 1,08854 0,94142 0,86321

3 1,27689 0,89308 0,69932

4 1,29391 0,99128 0,76522

5 0,89602 0,80845 0,90226

6 2,36468 1,59619 0,67512

7 0,82369 0,80865 0,98006

8 0,44121 0,48651 1,10165

9 0,83033 1,08582 1,30769

10 1,71076 1,30587 0,76310

11 1,3777 1,69432 1,22965

12 1,63784 1,26408 0,77172

№/№ ДиС-га^о С -гайо тах С /ДиС-га^о тах

13 0,66192 1,02964 1,55738

14 0,99669 1,13820 1,14332

15 0,87144 1,03125 1,18256

16 1,38273 1,27208 0,92148

17 0,7019 0,91842 1,30769

18 0,90535 1,09302 1,20604

X 1,10271 1,06869 1,04846

5Р 0,47443 0,28701 0,27184

5 X 0,111895 0,06769 0,064112

С.У.% 43,02 26,86 25,93

Таблица 3

90% доверительные интервалы отношения среднего значения

Параметр Нижнее значение Верхнее значение

AUC0-. 0,85200 1,21015

C max 0.92881 1.14508

In AUC0-~

Источник вариации SS DF MS F

Препарат 0.018 1 0.018 1.84435

Последовательность 0.024 1 0.024 2.44571

Добровольцы 0.769 17 0.045 4.63858

Остаточная вариация 0.156 16 0.010

Общая вариация 0.967 35

ln Cmax

Источник вариации SS DF MS F

Препарат 0.003 1 0.003 0.26483

Последовательность 0.000 1 0.000 0.00012

Добровольцы 0.359 17 0.021 1.61603

Остаточная вариация 0.209 16 0.013

Общая вариация 0.572 35

Обозначения в таблице: SS — сумма квадратов отклонений; MS — средний квадрат; DF — число степеней свободы; F — рассчитанное значение F-критерия Фишера (при уровне значимости а=5%).

Добровольцы

Рис. 2. График стандартизованных различий (центрированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) для значений In AUC0-m лизиноприла

о о

~хг

Т ? ?

? О о о

о

о

2

4

6

8

10 12 14 16 18 20

Рис.

Добровольцы

3. График индивидуальных стандартизованных различий (цент-

рированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) для значений Cmax лизиноприла

Полученные интервальные значения лежат в пределах, установленных «Оценкой биоэквивалентности лекарственных средств (Методические рекомендации)» и «Проведением надлежащих исследований биоэквивалентности лекарственных средств в Республике Казахстан» [1, 2], что говорит о биоэквивалентности исследуемых препаратов.

Дисперсионный анализ показал, что на конечные результаты оказал влияние такой фактор, как «испытуемые»: на AUC0_œ — доброволец № 6, на Cmax — доброволец №8 (см. табл. 3, рис. 2, 3).

В литературе описаны случаи оценки биоэквивалентности различных воспроизведенных препаратов лизино-прила. Так, Neng Zhou и соавт. разработали ВЭЖХ-МС методику определения лизиноприла в плазме крови человека и апробировали ее при изучении биоэквивалентности 2 препаратов лизиноприла (доза 20 мг) на 18 добровольцах [6]. Авторами сделан вывод о биоэквивалентности исследуемых препаратов. Представленные в этом исследовании фармакокинетические параметры значительно отличались от полученных нами (за исключением t ). Имеющиеся различия можно объяснить разными подходами в пробоподготовке и аналитической методикой. Аналогичные результаты получены Shin M.C. и соавт. и Tamimi J.J. и соавт., доказавших биоэквивалентность препаратов лизиноприла на 26 и 28 добровольцах, соответственно, с использованием метода ВЭЖХ-МС/ МС [7, 8].

Литература

1. Оценка биоэквивалентности лекарственных средств (Методические рекомендации), Москва, 2008, с.32.

2. Проведение надлежащих исследований биоэквивалентности лекарственных средств в Республике Казахстан, Астана, 2007, с. 44.

3. Сергиенко В.И., Джеллифф Р., Бондарева И.Б. Прикладная фармакокинетика: основные положения и клиническое применение. Москва, Издательство РАМН, 2003; 208.

4. Регистр лекарственных средств России РЛС. Энциклопедия лекарств. Москва, РЛС-Медиа, 2013; 1296.

5. SagirliO., Ersoy L. An HPLC method for the determination of lisinopril in human plasma and urine with fluorescence detection. // J. Chromato-gr. B. 2004, Vol. 809, Р. 159-165.

6. NengZhou1, Yi-zengLiang1, Ben-mei Chen et al. Development and Validation of LC—MS Method for the Determination of Lisinopril in Human Plasma and its Application in a Bioequivalence Study. // Journal of Chromatogr. Sci. 2008, Vol. 46, Р. 848-853.

7. Shin M.C., Kim J.K., Kim C.K. Bioequivalence evaluation of two brands of lisinopril tablets by in vitro comparative dissolution test and in vivo bioequivalence test. // Arzneimittelforschung. 2008, Vol. 58(1), P. 11-17.

8. Tamimi J.J., Salem I.I., Alam S.M., Zaman Q., Dham R. Bioequivalence evaluation of two brands of lisinopril tablets (Lisotec and Zestril) in healthy human volunteers. // Biopharm. Drug Dispos. 2005, Vol. 26(8), P. 335-339.

2

1 -

0-

0

2

1 -

0-

0

0

2

4

6

8