ПРОДУЦИРОВАНИЕ МЕТИОНИНА БЕЗ N-АЦИЛМЕТИОНИНА

1. Способ получения метионина или его предшественников в ферментативном процессе, включающий следующие стадии:
- культивирование модифицированного микроорганизма в соответствующей культуральной среде, содержащей источник углерода, источник серы и источник азота, и
- извлечение метионина и/или его производных из культуральной среды,
где накопление N-ацилметионина снижено по сравнению с немодифицированным микроорганизмом и/или способом.
2. Способ по п.1, где N-ацилметионин, накопление которого снижено, выбран из следующей группы: N-ацетилметионина, N-пропионилметионина, N-бутирилметионина и их комбинаций.
3. Способ по п.1, где указанное снижение накопления N-ацилметионина достигают в результате одной из перечисленных ниже модификаций:
- ослабления экспрессии по меньшей мере одного фермента метионин-трансацилазы; и/или
- экспрессии или усиления экспрессии по меньшей мере одной метионин-специфической аминоацилазы; и/или
- изменения условий культивирования.
4. Способ по п.3, где фермент метионин-трансацилаза, экспрессия которого ослаблена, кодируется геном, выбранным из yncA, argA, yjdJ, yfaP, yedL, yjhQ и их комбинаций.
5. Способ по п.4, где фермент метионин-трансацилаза, экспрессия которого ослаблена, кодируется геном yncA.
6. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате экспрессии в микроорганизме по меньшей мере одного нативного или гетерологичного фермента амидогидролазы N-ацил-L-аминокислот, выбранного из перечисленных ниже:
а. ацилазы N-ациламинокислот из Aspergillus,
b. свиной ацилазы N-ациламинокислот,
с. ацетилорнитин-деацетилазы, кодируемой геном argE.
7. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате адаптации условий культивирования, выбранных из рН, насыщения кислородом и/или температуры, или в результате добавления в среду ацилазы N-ациламинокислот.
8. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате:
a) ослабления экспрессии по меньшей мере одного из следующих генов: yncA, argA, yjdJ, yfaP, yedL, yjhQ, кодирующих ферменты метионин-N-ацилтрансферазы, и
b) экспрессии по меньшей мере одного нативного или гетерологичного фермента N-ацилметионин-деацилазы, такой как:
а. ацилаза N-ациламинокислот из Aspergillus,
b. свиная ацилаза N-ациламинокислот,
с. ацетилорнитин-деацетилаза, кодируемая геном argE.
9. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате ослабления экспрессии по меньшей мере одного из следующих генов yncA, argA, yjdJ, yfaP, yedL, yjhQ, кодирующих ферменты метионин-N-ацилтрансферазы, и в результате адаптации условий осуществления процесса (ферментации), таких как рН, насыщение кислородом и/или температура, или в результате добавления в среду ацилазы аминокислот.
10. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате экспрессии по меньшей мере одного нативного или гетерологичного фермента N-ацилметионин-ацилазы, такой как:
а. ацилаза N-ациламинокислот из Aspergillus,
b. свиная ацилаза N-ациламинокислот,
с. ацетилорнитин-деацетилаза, кодируемая геном argE,
и в результате адаптации условий осуществления процесса (ферментации), таких как рН, насыщение кислородом и/или температура, или в результате добавления в среду ацилазы аминокислот.
11. Способ по п.3, где продуцирование N-ацилметионина снижено в результате:
- ослабления экспрессии по меньшей мере одного из следующих генов: yncA, argA, yiiD, yhhY, yjdJ, yfaP, yedL, yjhQ, кодирующих ферменты метионин-N-ацилтрансферазы,
и
- экспрессии по меньшей мере одного нативного или гетерологичного фермента ацилазы N-ациламинокислот, такой как
а. ацилаза N-ациламинокислот из Aspergillus,
b. свиная ацилаза N-ациламинокислот,
с. ацетилорнитин-деацетилаза, кодируемая геном argE,
и
- адаптации условий культивирования, таких как рН, насыщение кислородом и/или температура, или добавления в среду ацилазы аминокислот.
12. Способ по п.1, где источник серы в культуральной среде представляет собой сульфат, тиосульфат, сульфид водорода, дитионат, дитионит, сульфит, метилмеркаптан, диметилдисульфид или комбинацию этих разных источников.
13. Способ по п.1, где источник серы в культуральной среде представляет собой сульфат или тиосульфат либо смесь этих двух источников.
14. Способ по п.1, где источником углерода является возобновляемое перерабатываемое сырье.
15. Способ по п.1, где источником углерода является глюкоза или сахароза.
16. Способ по п.1, где источник азота подается в аммониевой или аммиачной форме.
17. Способ по п.1, включающий стадию выделения желаемых аминокислот/составляющих из ферментационного бульона и/или из биомассы, возможно сохраняющихся отчасти или полностью (0-100%) в конечном продукте.
18. Способ по п.1, где микроорганизм лимитирован или подвержен голоданию по фосфату и/или калию.
19. Микроорганизм с модификациями, заявленными в п.3.