МЫШИ С ОГРАНИЧЕННОЙ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПЬЮ ИММУНОГЛОБУЛИНА

H
H
H
1. Крыса, содержащая в геноме своей зародышевой линии ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, характеризующийся наличием единственного нереаранжированного генного сегмента V человека, одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов D человека и одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области,
при этом крыса дополнительно содержит разнообразный репертуар реаранжированных генов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, каждый из которых связан с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области и происходит из ограниченного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина.
H
H
H
2. Крыса по п. 1, при этом крыса содержит делецию всех эндогенных генных сегментов V, D и J.
H
H
H
H
H
H
H
H
3. Крыса по п. 1 или 2, у которой единственный нереаранжированный генный сегмент V человека выбирают из V1-2, V1-69, V2-26, V2-70 и V3-23 или их полиморфных вариантов, способных к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
H
H
H
H
4. Крыса по п. 1 или 2, у которой единственный нереаранжированный генный сегмент V человека представляет собой V1-69 или его полиморфный вариант, способный к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
H
H
H
H
5. Крыса по п. 3, у которой единственный нереаранжированный генный сегмент V человека представляет собой V1-2 или его полиморфный вариант, способный к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
H
6. Крыса по п. 1 или 2, у которой единственный нереаранжированный генный сегмент V человека функционально связан с геном константной области иммуноглобулина грызуна.
7. Крыса по п. 6, у которой указанный ген константной области иммуноглобулина представляет собой ген константной области крысы.
L
L
8. Крыса по п. 1 или 2, дополнительно содержащая один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека, функционально связанных с одним или несколькими нереаранжированными генными сегментами J человека.
L
L
9. Крыса по п. 8, у которой один или несколько нереаранжированных генных сегментов V человека и/или один или несколько нереаранжированных генных сегментов J человека выбирают из генных сегментов κ и λ человека.
L
L
10. Крыса по п. 8, у которой один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов J человека функционально связаны с не относящимся к человеку геном константной области легкой цепи.
11. Крыса по п. 10, у которой не относящийся к человеку ген константной области легкой цепи представляет собой ген константной области κ или λкрысы.
H
H
H
H
H
H
12. Крыса по п. 1 или 2, у которой все или по существу все эндогенные генные сегменты V, D и J в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина заменены на ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, характеризующийся наличием указанного единственного нереаранжированного генного сегмента V человека, указанного одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов D человека и указанного одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области.
L
L
L
L
13. Крыса по п. 12, дополнительно содержащая замену в эндогенном локусе легкой цепи иммуноглобулина всех или по существу всех эндогенных генных сегментов V и Jодним или несколькими нереаранжированными V и одним или несколькими нереаранжированными J генными сегментами человека.
14. Клетка или ткань, полученная из крысы по любому из пп. 1-13.
15. Способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, включающий:
(а) амплификацию нуклеиновой кислоты, содержащей реаранжированный ген вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека из лимфоцита крысы по любому из пп. 1-13, или гибридомы, полученной из указанного лимфоцита,
при этом указанный лимфоцит содержит один из разнообразного репертуара реаранжированных генов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека.
H
16. Способ по п. 15, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека происходит из генного сегмента V1-69 человека, который содержит последовательность по меньшей мере на 75% идентичную SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56 или SEQ ID NO: 58.
H
H
H
17. Способ по п. 15, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека происходит из генного сегмента V1-69 человека, который содержит последовательность по меньшей мере на 75% идентичную SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58 или их полиморфных вариантов, при этом полиморфные варианты способны к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
18. Способ по п. 15, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит последовательность, которая кодирует белок по меньшей мере на 75% идентичный SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57 или SEQ ID NO: 59.
H
19. Способ по п. 15, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека происходит из генного сегмента V1-2 человека, который содержит последовательность по меньшей мере на 75% идентичную SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66 или SEQ ID NO: 68.
H
H
H
20. Способ по п. 19, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека происходит из генного сегмента V1-2 человека, который содержит последовательность SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 или их полиморфных вариантов, при этом полиморфные варианты способны к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
21. Способ по п. 15, в котором последовательность реаранжированного гена вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит последовательность, которая кодирует белок по меньшей мере на 95% идентичный SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67 или SEQ ID NO: 69.
22. Применение крысы по любому из пп. 1-13 для получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен тяжелой цепи человека.
H
H
H
23. Применение по п. 22, при котором вариабельный домен тяжелой цепи человека характеризуется наличием последовательностей FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3 человека, происходящих из полиморфного генного сегмента V человека, способного к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J
H
H
H
H
H
H
24. Применение по п. 22 или 23, при котором генный сегмент V человека выбран из генного сегмента V1-2, V1-69, V2-26, V2-70 или V3-23 человека.
H
H
H
H
25. Применение крысы по любому из пп. 1-13 для получения антитела человека, при котором антитело человека содержит вариабельный домен тяжелой цепи, происходящий из реаранжированного генного сегмента V1-2 человека, генного сегмента V1-69 человека или их полиморфных вариантов, при этом полиморфные варианты способны к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
H
H
H
H
26. Применение по п. 25, при котором реаранжированный генный сегмент V1-69 человека по меньшей мере на 75% идентичен SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56 или SEQ ID NO: 58, при этом реаранжированный генный сегмент V1-69 человека способен к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
H
H
H
H
27. Применение по п. 25, при котором реаранжированный генный сегмент V1-2 человека по меньшей мере на 95% идентичен SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66 или SEQ ID NO: 68, при этом реаранжированный генный сегмент V1-2 человека способен к реаранжировке и образованию реаранжированного вариабельного домена тяжелой цепи с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J.
28. Клетка по п. 14, при этом клетка представляет собой лимфоцит или гибридому, полученную из указанного лимфоцита.
29. Способ по любому из пп. 15-21, дополнительно включающий иммунизацию мыши представляющим интерес антигеном перед амплификацией нуклеиновой кислоты.
H
30. Способ по любому из пп. 15-21, в котором реаранжированная последовательность гена области V иммуноглобулина человека содержит по меньшей мере одну соматическую гипермутацию.
31. Способ по любому из пп. 15-21, в котором лимфоцит специфически связывает представляющий интерес антиген.
32. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность, которая получена способом по любому из пп. 15-21 и 28-31.
33. Вектор по п. 32, в котором указанная нуклеиновая кислота связана с последовательностью, которая кодирует константный домен тяжелой цепи человека.
H
H
H
34. Тотипотентная клетка крысы для получения крысы, которая продуцирует вариабельный домен тяжелой цепи человека, содержащая в своем геноме ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, характеризующийся наличием единственного нереаранжированного генного сегмента V человека, одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов D человека и одного или нескольких нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области тяжелой цепи человека.
35. Тотипотентная клетка крысы по п. 34, в которой не относящаяся к человеку генная последовательность константной области тяжелой цепи представляет собой генную последовательность константной области тяжелой цепи крысы.
36. Тотипотентная клетка крысы по п. 34 или 35, при этом тотипотентная клетка мыши представляет собой эмбриональную стволовую клетку.
37. Способ получения вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина человека, включающий экспрессию в клетке-хозяине нуклеиновой кислоты, полученной способом по любому из пп. 15-21 и 28-31, или нуклеиновой кислоты по любому из пп. 32 или 33.
38. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту, полученную способом по любому из пп. 15-21 и 28-31, или нуклеиновой кислоты по любому из пп. 32 или 33.
39. Клетка-хозяин по п. 38, при этом клетка представляет собой клетку млекопитающего.