СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ У ЖИВОТНЫХ
METHOD TO STIMULATE REPRODUCTIVE FUNCTION IN ANIMALS

Изобретение относится к медицине и сельскому хозяйству и предназначено для повышения половой активности у самцов животных, а также увеличения их плодовитости при воспроизводстве потомства.
Известен «Способ повышения оплодотворяющей способности спермы баранов», включающий введение в среду для криоконсервации спермы баранов биологически активного вещества, в качестве которого используют комплекс синтетических аналогов простагландинов, депонированных в растительном масле, в концентрации 125 мкг на 1 мл разбавленной спермы баранов. Патент РФ на изобретение №2297197; МКИ: A61D 19/02, дата публ. 2007.04.20.
Известен «Способ повышения половой активности», включающий применение продуктов из морских иглокожих, в качестве которых используют икру морских ежей Strongylocentrotus pallidus и Strongylocentrotus nudus в мороженном или лиофилизированном виде в количестве 0,3-0,6 или 0,08-0,21 г/кг веса тела соответственно в течение 10-30 дней. Патент РФ №2197253; МКИ: 6 А61К 35/56, дата публ. 2003.01.27.
Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является «Способ стимуляции воспроизводительной функции у коров», включающий введение внутривлагалищно 2 мл суфрагона один раз в 10 дней и повторно в том же количестве через 7 дней после кровотечения в сочетании с осеменением в стимулированную охоту. Гавриченко Н.И. диссертация «Теоретические и практические основы гормонального регулирования воспроизводительной функции и повышения плодовитости коров и телок», БГСХА, Защита в НПЦ НАНБ по животноводству. Научно-теор. и инф.-методический журнал, вып. №3-4/2008 г.
К техническому результату относится повышение половой активности самцов животных и увеличение их плодовитости при воспроизводстве потомства путем применения суфрагона, стимулирующего процесс сперматогенеза и выработку тестостерона у самцов.
Технический результат достигается путем того, что «СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ У ЖИВОТНЫХ» включает гормональное регулирование плодовитости при воспроизводстве потомства путем введения синтетического гонадотропин-ризинг гормона - сурфагона. При этом сурфагон вводят в брюшную полость самцов животных в виде одноразовых инъекций. Количество вводимого вещества равно 0,4 мкг/кг. Оптимальный для достижения технического результата срок воздействия расположен в диапазоне 5-10 дней.
Примеры осуществления способа: согласно общепринятым представлениям для индукции сперматогенеза во время полового созревания требуется как фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), так и лютенизирующий гормон (ЛГ). Известно, что ФСГ и ЛГ оказывают стимулирующее влияние на формирование специализированных контактов между соседними клетками Сертоли во время полового созревания. ЛГ оказывает непрямое действие, стимулируя образование тестостерона в клетках Дейдига, поскольку для нормального течения сперматогенеза требуются высокие интратестикулярные концентрации тестостерона, действие тестостерона связано со стимуляцией клеток Сертоли. Понижение уровня тестостерона обуславливает ослабление полового влечения и неспособности к нормальной эрекции. ФСГ снижает процент половых клеток, которые в норме претерпевают дегенерацию в процессе сперматогенеза, что приводит к увеличению числа созревших половых клеток.
В связи с вышеизложенным целесообразно было при нарушении сперматогенеза и для повышения половой активности у самцов кроликов стимулировать синтез тестостерона посредством введения гонадотропин-ризинг гормона Гн-Рг - сурфагона. Так как сурфагон обладает стимулирующим влиянием на гонадотропную функцию гипофиза и на функциональную активность периферических половых желез, которые находятся под регулирующим влиянием гонадотропных гормонов гипофиза ЛГ и ФСГ.
Актуальность работы состоит в том, что стимуляция Гн-Рг (сурфагоном) способствует восстановлению функциональной половой потенции у самцов. Использование предлагаемого способа позволит восстановить функциональные нарушения половой активности у высокопродуктивных и выдающихся производителей без потери качества семени и тем самым получить высокоценный приплод.
В связи с этим в задачу исследований текущего года входило:
1. Определение эффективных доз сурфагона и его влияние на секрецию ФСГ, ЛГ и тестостерона у самцов.
2. Повышение воспроизводительной функции у самцов кроликов при введении (Гн-Рг) сурфагона.
Исследования по определению эффективных доз сурфагона (Гн-Рг) проводили в виварии кардиологического центра под руководством Кривошеева О.Г. на крысах линии Вистар, массой тела около 50 г. в возрасте 25-27 дней. В опытной группе в физиологическом растворе вводили однократно внутрибрюшинно сурфагон в дозе 2.0, 0.4, 0.08 и 0.02 мкг/кг. Взятие крови в количестве 0.3 мл осуществлялось через 30, 60, 120, 180, 240 минут их декапитации, а в контрольной группе вводили физиологический раствор. Количество крыс в каждой группе составили 10 голов. ЛГ, ФСГ и тестостерон определяли радиоиммуннологическим методом с помощью коммерческих наборов. Исследования по повышению половой активности у самцов кроликов проводили на трех половозрелых самцах породы шиншилла в виварии института, расположенного в поселке Горки Ленинские Ленинского района Московской области. Половозрелым самцам кроликов в течение 10 дней вводили эффективную дозу сурфагона в количестве 0.4 мкг.
Влияние сурфагона в дозе 0.4 мкг/мл на концентрацию тестостерона в сыворотке крови кроликов изучали через 0, 2, 6, 24 часа после внутримышечного введения. Эти временные точки выбраны с учетом известного факта, что секреция этого гормона обычно повышается через 1,5-3 часа после повышения уровня эндогенного ЛГ. Взятие спермы у кроликов до введения и после введения сурфагона проводили на искусственную вагину два раза в неделю дуплетно и оценивали в лабораторных условиях. Время между 1-й и 2-й садкой хронометрировалось.
Результаты исследований. Влияние однократного введения сурфагона на секрецию ФСГ, ЛГ и тестостерона у самцов неполовозрелых крыс.
Сурфагон, будучи аналогом Гн-Рг, обладает стимулирующим влиянием на гонадотропную функцию гипофиза и на функциональную активность периферических половых желез, которые находятся под регулирующим влиянием гонадотропных гормонов гипофиза ЛГ и ФСГ, при однократном введении препарата.
Результаты влияния сурфагона на секрецию ЛГ у самцов крыс представлены в Таблице 1.
Таблица 1
Влияние сурфагона на секрецию ЛГ у инфантильных самцов крыс
Доза введения сурфагона
Время, мин
30
60 1 120
180
240
Концентрация ЛГ, нг/мл
2.0
7.8±1.6
12.1±1.28
19.911.67
15.811.0
13.5Ю.81
0.4
6.8±1.54
7.4±1.04
13.410.71
11.411.88
1.010.71
0.08
2.4±0.79
1.5±0.31
2.311.17
2.411.17
1.610.47
0.02
1.210.32
1.9+0.78
1.610.58
2.410.69
2.110.5
контроль
1.1±0.25
1.2±0.26
2.910.91
0.710.09
0.910.22
Из данных Таблицы 1 видно, что у самцов крыс содержание ЛГ нарастает с увеличением дозы сурфагона. Наибольшая концентрация ЛГ наблюдалась при дозе 2 мкг/кг. Пик концентрации ЛГ под влиянием всех доз возникал через 2 часа после введения сурфагона и затем наблюдалось его снижение.
Данные по концентрации ФСГ представлены в Таблице 2.
Концентрация ФСГ под влиянием сурфагона также зависит от дозы введения. Стимулирующее влияние двух меньших доз проявляется через 2 часа после введения, тогда как при большой дозе (2 мкг/кг) стимуляция секреции ФСГ отмечается через 2 часа. Повышение концентрации ФСГ под влиянием 2 мкг/кг сурфагона сохраняется в течение 3-х часов.
Влияние сурфагона на концентрацию тестостерона в сыворотке крови крыс оценивали через 180 минут после внутрибрюшинного введения сурфагона. Эта временная точка была выбрана с учетом известного факта, что секреция тестостерона обычно повышается через 1.5-3 часа после повышения уровня стимуляции эндогенного ЛГ. Дозы сурфагона выбирали с учетом максимальной секреции ЛГ. Результаты представлены в Таблице 3.
Таблица 3
Влияние сурфагона на продукцию тестостерона у самцов
Доза сурфагона, мкг/мл
Концентрация тестостерона, нг/мл
2
63291367
0.4
64251594
Физиологический раствор
523110
У самцов крыс (Таблица 3) сурфагон стимулирует образование тестостерона, а, как известно, половое поведение самцов частично зависит от концентрации тестостерона. В связи с этим предположили, что стимулирование сурфагоном положительно повлияет на сперматогенез и половое поведение самцов кроликов и не оказывает отрицательного влияния на секрецию собственных андрогенов.
Влияние введения сурфагона на воспроизводительную функцию у самцов кроликов. Исследования половой активности у самцов проводили на трех половозрелых самцах кроликов породы шиншилла в виварии института, расположенного в поселке Горки Ленинские Ленинского района Московской области.
Влияние сурфагона после однократной инъекции в дозе 0.4 мкг/кг на концентрацию тестостерона в сыворотке крови кроликов оценивали через 0, 2, 6, 24 часа после внутримышечного введения.
Данные по влиянию сурфагона на продукцию тестостерона у самцов кроликов представлены в Таблице 4.
Таблица 4
Влияние сурфагона на продукцию тестостерона у самцов кроликов
Время взятия образцов крови после стимуляции, час
Концентрация тестостерона, деца/литр
0
9.1±3.0
2
45.4±5.6
6
34.3±3.1
24
4.5±1.1
Как видно из Таблицы 4, максимальный уровень тестостерона после введения сурфагона наблюдали в первые 6 часов, который находился в пределах 45.4-34.3 деца/литр. Через 24 часа после введения сурфагона концентрация тестостерона уменьшилась до базального уровня.
Снижение концентрации тестостерона до начального уровня 0/24 часа позволила сделать вывод, что однократная инъекция не оказывает существенного влияния на половую активность у самцов. В связи с этим было целесообразно в течение 10 дней половозрелым самцам кроликов инъецировать сурфагон в дозе 0.4 мкг/кг.
Как видно из Таблицы 5, введение сурфагона в дозе 0.4 мкг/кг в течение 10 дней позволило увеличить объем эякулята спермы на 30-50%, а время между садками сократить на 5.6 минуты. Сурфагон оказал положительное влияние на увеличение объема эякулята и на половую активность самцов кроликов. Активность спермы у стимулируемых самцов находилась в пределах 0.8-0.9 баллов. Один из обработанных сурфагоном самец кроликов был спарен с тремя самками. Осеменение самок кроликов проводили непосредственно в крольчатнике. Самок для спаривания отбирали в состоянии охоты по признакам: наружные половые органы были красными и набухшими. Результаты осеменения крольчих при естественном спаривании представлены в Таблице 6.
Таблица 6
Результаты осеменения крольчих обработанными самцами при естественном спаривании.
Номе Р, п/п
Группа
Метод осеменения
Оплодотворяемость
Получено крольчат
Плодовитость на одну самку
Кол-во самок
Из них сукрольных
%
1
контрольная
естественное спаривание
10
8
80
56
7.0±0.40
2
опытная
естественное спаривание
3
3
100
26
8.7±0.38
Как видно из Таблицы 6, использование самцов, при естественном спаривании обработанных сурфагоном, позволило увеличить плодовитость на одну самку на 1.7 крольчонка и повысило оплодотворяемость на 20%. В связи с этим применение данного метода позволило не только увеличить количество крольчат, но и повысило половую активность самцов, что привело к более эффективному их использованию. Следовательно, использование сурфагона при стимуляции самцов кроликов в дозе 0.4 мкг/мл в качестве регулятора половой активности в течение 5-10 дней способствовало увеличению объема эякулята на 30-50% и сокращению времени между садками на 5-6 минут, а также увеличению плодовитости на 1.7 крольчонка.