Природные вещества морского происхождения как потенциальные препараты для терапии грамотрицательного сепсиса и эндотоксического шока

Вестник ДВО РАН. 2010. № 5

УДК 577.124

Т.Ф.СОЛОВЬЕВА, И.Н.КРАСИКОВА, И.М.ЕРМАК

Природные вещества морского происхождения как потенциальные препараты для терапии грамотрицательного сепсиса и эндотоксического шока

Представлены результаты исследования веществ морского происхождения (липиды А, хитозаны, карра-гинан) в качестве потенциальных препаратов для терапии грамотрицательного сепсиса. Установлено, что липиды А из морских бактерий родов Chryseobacterium и Marinomonas обладают свойствами антагонистов эндотоксинов. Хитозаны и каррагинан ингибируют эндотоксическую активность липополисахаридов. Полученные результаты позволяют считать изученные вещества потенциально полезными для терапии клинических синдромов, связанных с эндотоксинами.

Ключевые слова: сепсис, септический шок, липополисахарид (ЛПС), эндотоксин, липид А, хитозан, карра-гинан, морские бактерии.

Natural substances of marine origin as potential drugs for treatment of gram-negative sepsis and endotoxic

shock. T.F.SOLOV’EVA, I.N.KRASIKOVA, I.M.YERMAK (Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, FEB RAS, Vladivostok).

Results of investigation of substances of marine origin (lipid A’s, chitosans, carrageenan) as potential drugs for treatment of gram-negative sepsis are presented in the paper. Lipid A’s from Chryseobacterium and Marinomonas marine bacteria were found to have properties of endotoxin antagonists. Chitosans and carrageenan were shown to modify endotoxic activities of lipopolysaccharides. The obtained results permit us to consider the studied substances as potentially useful for treatment of clinical syndromes associated with endotoxins.

Key words: sepsis, septic shock, lipopolysaccharide (LPS), endotoxin, lipid A, chitosan, carrageenan, marine bacteria.

В рамках программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине» Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН осуществляет несколько проектов, задача которых - решение социально значимых проблем медицины. Один из предложенных проектов, являющийся частью проводимых в институте исследований по теме «Изучение молекулярных основ иммунных процессов, в том числе антибактериального и антиопухолевого иммунитета», посвящен изучению возможности использования веществ из морских источников при заболеваниях бактериального происхождения.

Грамотрицательный сепсис и септический (эндотоксический) шок являются серьезной клинической проблемой. Они дают высокий процент летальных исходов даже в странах с развитой системой здравоохранения [13]. Все более широкое использование в медицинской практике инвазивных процедур, иммуносупрессивной и цитотоксической терапии, а также старение населения, сопровождающееся увеличением числа хронических заболеваний, способствуют росту септических осложнений у больных. Разработка и внедрение в медицинскую практику новых антибиотиков не решает проблему кардинально, более

СОЛОВЬЕВА Тамара Федоровна - доктор химических наук, заведующая лабораторией, КРАСИКОВА Инна Николаевна - доктор химических наук, ученый секретарь, ЕРМАК Ирина Михайловна - доктор химических наук, главный научный сотрудник (Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, Владивосток).

E-mail: sоltaf@mail.ru

того, применение антибиотиков в ряде случаев может приводить к ухудшению состояния септического больного.

В последние годы наблюдается заметный прогресс в понимании молекулярных и клеточных механизмов, лежащих в основе грамотрицательного сепсиса и эндотоксического шока [13, 19]. Они возникают в результате накопления в крови организма-хозяина эндотоксинов (липополисахаридов - ЛПС), которые высвобождаются из клеток бактериального патогена вследствие системной бактериальной инфекции или инъекции лекарственного препарата, загрязненного ЛПС. ЛПС через взаимодействие со специфическими рецепторами на эффекторных клетках хозяина индуцируют синтез большого количества эндогенных провоспалительных цитокинов, вызывающих в свою очередь активацию клеток-мишеней, которые высвобождают биологически активные молекулы. Гиперпродукция провоспали-тельных медиаторов приводит к развитию неконтролируемой реакции воспаления, что, в конечном счете, и обусловливает серьезные физиологические нарушения в организме.

Дополнительный потенциальный источник эндотоксинов в организме - популяция бактерий, которые обитают в кишечнике. При абсолютной или относительной недостаточности эндотоксин-связывающих и выделяющих систем организма-хозяина концентрация липополисахарида, который поступает в общий кровоток из кишечника, может достигать значительного уровня, и он может вносить вклад в развитие и патогенез большой гетерогенной группы заболеваний «неинфекционного генеза» [11].

Современная медицина не располагает препаратами для специфической терапии клинических синдромов, индуцированных эндотоксинами. Несмотря на значительный прогресс в антимикробной химиотерапии, количество летальных исходов при таких состояниях остается неприемлемо высоким. Это делает весьма актуальной разработку препаратов специфического действия для лечения сепсиса и эндотоксического шока, основанную на знании их патофизиологии. Большой интерес в качестве таких препаратов могут представлять вещества, конкурирующие с ЛПС за рецепторы на иммунокомпетент-ных клетках, - антагонисты эндотоксинов, а также соединения, которые образуют с ЛПС стабильные макромолекулярные комплексы. Обе группы веществ, действуя по различным механизмам, блокируют связывание эндотоксина со специфическими рецепторами на клетках-мишенях, предотвращая синтез провоспалительных цитокинов.

Потенциальным кандидатом на роль антагонистов эндотоксинов являются сами эндотоксины. В химическом плане они представляют собой ЛПС, включающие липидный домен, называемый липидом А, который считается эндотоксическим центром ЛПС [16, 19]. Наиболее распространенным структурным вариантом липида А, обладающим ярко выраженными эндотоксическими свойствами («золотой стандарт» эндотоксинов), является дифосфорилированный дисахарид D-глюкозамина, имеющий шесть остатков жирных кислот. В то же время производные липида А с низкими степенями фосфорилирования и ацилирования проявляют слабую эндотоксическую активность (или не проявляют ее вовсе), что делает возможным их использование в качестве антагонистов эндотоксинов.

Производные липида А, обладающие антиэндотоксической активностью, могут быть получены в результате химической деградации нативной молекулы липида А или ЛПС, а также как продукт органического синтеза (синтетические аналоги липида А). Другим источником антагонистов эндотоксинов на основе липида А являются бактерии-мутанты, в которых нарушен биосинтез этого компонента наружной мембраны; бактерии, филогенетически удаленные от бактерий сем. Enterobacteriaceae, основных возбудителей грамот-рицательных инфекций, и синтезирующие липиды А с необычной структурой.

Особенности строения липида А во многом определяются условиями роста бактерий. Мы предположили, что морские бактерии, живущие в особых, по сравнению с наземными микроорганизмами, условиях (повышенное содержание солей, низкая температура, высокое гидростатическое давление), могут синтезировать липиды А с низким эндотоксиче-ским потенциалом.

Следует сказать, что до начала нынешнего века такого научного направления, как химия «морских» липидов А, практически не существовало. Единичные работы по изучению липидов А из морских бактерий, датированные второй половиной XX в., касались в основном характеристики состава их жирных кислот. Систематические исследования «морских» липидов А, ведущиеся в лаборатории молекулярных основ антибактериального иммунитета ТИБОХ ДВО РАН на протяжении последних десяти лет, показали, что для них характерно большое структурное разнообразие [2, 3, 17]. Более того, оказалось, что многие препараты липида А, выделенные из морских грамотрицательных бактерий, характеризуются особенностями, отличающими их от липидов А наземных бактерий: весьма специфический жирнокислотный состав, низкая степень ацилирования и фосфорилирования, моносахаридная структура (липиды А бактерий рода Chryseobacterium) и низкая токсичность.

Таким образом, по своим структурным и биологическим характеристикам «морские» липиды А близки к тем производным липида А, которые проявляют свойства антагонистов эндотоксинов. Токсические свойства эндотоксинов связывают со способностью липида А и ЛПС индуцировать синтез провоспалительных цитокинов, таких как фактор некроза опухоли (ФНО-а), в иммунокомпетентных клетках хозяина [19]. Эксперименты, проведенные нами, продемонстрировали, что ЛПС и липиды А ряда морских бактерий, в отличие от липидов А наземных бактерий, являются слабыми индукторами синтеза ФНО-а [1].

Слабая ФНО-а-индуцирующая активность ЛПС и липидов А морских бактерий в сочетании с их высокими летальными дозами предполагает, что они могут быть антагонистами эндотоксинов. Действительно, в экспериментах in vitro многие «морские» липиды А и ЛПС на 80-90% ингибировали индуцированный эндотоксинами синтез ФНО-а [1], тем самым предотвращая процессы, ведущие к развитию патофизиологических реакций. На примере ЛПС из морской бактерии Marinomonas communis было продемонстрировано, что изучаемые соединения являются конкурентными антагонистами эндотоксинов универсального типа действия. Интересно, что ингибирующая активность ЛПС из M. communis проявлялась при гораздо меньших концентрациях, чем в случае хорошо известного синтетического антагониста эндотоксинов Е-5531, разработанного на основе липида А из Rhodobacter capsulatus [12]. Для Е-5531 50%-ное ингибирование синтеза ФНО-а, индуцированного 10 нг/мл ЛПС из E. coli, наблюдалось при концентрации 3765 нг/мл, тогда как с ЛПС из M. communis аналогичный эффект наблюдался при концентрации менее 100 нг/мл. Полученные данные демонстрируют перспективность поиска потенциальных антагонистов эндотоксинов среди липидов А морских грамотрицательных бактерий.

Одним из способов ингибирования цитокин-индуцирующей активности эндотоксинов может быть также их связывание с поликатионами. Это объясняется тем, что липид А, который, как говорилось выше, играет центральную роль в активации эндотоксином синтеза провоспалительных цитокинов в иммунокомпетентных клетках [19], в силу своей анионной природы является основным сайтом связывания поликатионов с молекулой ЛПС.

Одним из представителей природных поликатионов является хитозан - нетоксичный, биоразрушаемый, биосовместимый полисахарид, обладающий широким спектром биологической активности [15]. Основным источником получения хитозана служат панцири морских ракообразных - отходы переработки морского сырья. Наше внимание привлекла способность хитозана как поликатиона образовывать специфические комплексы с полианионами различной природы. Сообщалось об успешном использовании хитозана в качестве сорбента для удаления эндотоксина из биологических жидкостей. Кроме того, хитозан имеет антимикробную активность, которая обычно свойственна веществам, способным нейтра-лизовывать эндотоксины. На основе этих данных возникло решение исследовать хитозан в качестве вещества, нейтрализующего эндотоксическую активность ЛПС и в силу этого перспективного с точки зрения создания на его основе специфического препарата для терапии эндотоксического шока.

Мы провели систематическое исследование связывания хитозана с ЛПС и охарактеризовали биологические свойства полученных комплексов [14, 20]. Хитозан, как нами было

показано, специфически взаимодействует с ЛПС с образованием водорастворимых стабильных стехиометрических либо нестехиометрических, в зависимости от соотношения компонентов в реакционной смеси, комплексов. Величины констант связывания имеют порядок 105 моль-1, что совпадает с таковым для комплексов ЛПС с другими природными поликатионами: альбумином сыворотки человека и полимиксином. Состав комплексов может варьировать в широких пределах: в комплексе на 1 моль ЛПС может приходиться от 9 до 200 мономерных остатков в молекуле хитозана. Константа связывания и стехиометрия комплексов, полученных в точке насыщения, сильно зависят от условий связывания: температуры, концентрации компонентов, рН и ионной силы раствора. Это определяется важной ролью, которую играет во взаимодействии ЛПС и хитозана физическое состояние ЛПС. Как известно, ЛПС в растворе существует в виде динамичных агрегатов, размеры, структура и поведение которых изменяются при варьировании вышеназванных факторов [19]. Аффинность связывания и стехиометрия комплексов зависят также от структурных особенностей компонентов и их молекулярных размеров. Увеличение молекулярной массы ЛПС приводит к усилению взаимодействия компонентов комплекса и уменьшению количества связанного ЛПС.

Общепризнанным является факт, что связывание ЛПС с соединениями катионной природы происходит за счет электростатических взаимодействий между противоположно заряженными группами обоих компонентов и включает карбоксильные и фосфатные группы кора и липида А в молекуле ЛПС [19]. В силу вышесказанного существенным фактором, влияющим на связывание ЛПС с хитозаном, является значение рН реакционной среды, которое определяет степень ионизации заряженных групп взаимодействующих биополимеров. Выполненное исследование показало, что комплекс ЛПС-хитозан образуется в диапазоне рН 4,0-6,5. Выше рН 7 связывания не происходит. Существенное значение электростатических факторов в связывании ЛПС с хитозаном подтверждается заметной диссоциацией комплексов вплоть до полного разрушения при их инкубации в 0,6 М и 1,0 М растворах хлористого натрия. Однако обнаружены комплексы ЛПС-хитозан, которые сохраняют стабильность в растворах с высокой ионной силой. Это свидетельствует в пользу участия в образовании комплекса кроме электростатических других сил.

Проведенные исследования показали, что хитозан является перспективным поликатионом для связывания ЛПС. Однако желательно было найти возможность увеличить эффективность взаимодействия этих компонентов. Приведенные выше данные о структуре связывающего центра на молекуле ЛПС (липида А) позволяют предположить, что наиболее перспективными для высокоаффинного связывания ЛПС могут быть гидрофобные производные хитозана с низкой степенью замещения аминогрупп. В связи с этим в молекулу хи-тозана был введен липофильный заместитель (остаток 3-гидрокситетрадекановой кислоты), который должен был стабилизировать комплексы ЛПС-хитозан через гидрофобные взаимодействия с полиацильными доменами липида А [7]. Для увеличения растворимости в водной среде получаемых гидрофобных производных в экспериментах использовали хитозан с низкой молекулярной массой (4-5 кДа). Как и ожидалось, в сравнении с незамещенным аналогом константа связывания №ацилированного хитозана (ацил-Х-ОЛ) с ЛПС оказалась на порядок выше. Дальнейшее повышение ЛПС-связывающей активности хитозана было достигнуто за счет встраивания ацил-Х-ОЛ в липосомы. Высокая эффективность взаимодействия липосомальной формы хитозана с ЛПС была обеспечена многоточечным связыванием ЛПС с молекулами хитозана, закрепленными на поверхности липосом, и дополнительным включением ЛПС в фосфолипидный бислой [4].

На основе анализа пространственных моделей комплексов ЛПС-хитозан, построенных с помощью методов компьютерного моделирования, была получена информации об их структуре [7]. Помимо связывания хитозана на основных анионных сайтах, локализующихся на коре и липиде А молекулы ЛПС, комплекс стабилизируется несколькими водородными связями, в образовании которых участвуют гидроксильные и карбонильные группы обоих компонентов. При образовании комплекса жирнокислотный остаток №ацилирован-ного хитозана располагается параллельно остаткам жирных кислот липида А, что усиливает

их гидрофобное взаимодействие и увеличивает аффинность связывания ацилированного хитозана (в сравнении с незамещенным полисахаридом) с ЛПС. В целом данные об аффинности взаимодействия ЛПС и производных хитозана, полученные при анализе теоретических комплексов, совпадают с экспериментальными результатами, представленными выше.

Образование комплекса с хитозаном модифицирует биологические свойства ЛПС. Исследования показали, что хитозан, связывая ЛПС, снижает его острую токсичность. LD50 ЛПС в комплексе увеличивается в 5,0-12,5 раза в зависимости от источника ЛПС, молекулярной массы хитозана и условий опыта [20]. Существенное уменьшение токсичности ЛПС в комплексе ЛПС-хитозан может быть следствием того, что хитозан блокирует токсофорную группу ЛПС или изменяет заряд и/или структуру агрегатов ЛПС.

Комплекс ЛПС-хитозан сохранял способность индуцировать синтез цитокинов в им-мунокомпетентных клетках, но его активность как индуктора интерлейкина-8 и ФНО-а была ниже (на 70 и 50%, соответственно), чем активность ЛПС [20]. Возможно, это отчасти определяет более низкую токсичность ЛПС в составе комплекса, поскольку, как говорилось выше, токсическое действие ЛПС связывают с его способностью стимулировать синтез в организме хозяина провоспалительных цитокинов, прежде всего ФНО-а. Известно, что многие ЛПС-связывающие катионные пептиды и белки существенно подавляют способность ЛПС стимулировать синтез цитокинов [19], однако механизмы ингибирования не установлены. Как известно, ЛПС индуцирует синтез цитокинов в клетках хозяина через активацию рецептора TLR4 [19]. Эксперименты, выполненные нами с использованием трансфицированных эмбриональных клеток почек человека (HEK 293 клетки), экспрессирующих на поверхности этот рецептор, показали, что уменьшение способности ЛПС в составе комплекса стимулировать синтез цитокинов в моноцитах, вероятно, не связано с ингибированием его взаимодействия с рецептором TLR4 [20]. Снижение цитокин-индуцирующей активности ЛПС может быть результатом конкуренции ЛПС и хитозана за CD 14 рецептор, который является общим для обоих полимеров рецептором на моноцитах, включенным в передачу активирующего сигнала в клетку [19].

Комплексообразование ЛПС с хитозаном снижает агрегационные эффекты эндотоксинов в опытах in vitro. Так, инкубация с комплексом ЛПС-хитозан приводит к достоверному снижению степени агрегации тромбоцитов на 5-8% по сравнению с величиной их АДФ-индуцированной агрегации и на 11-14% по сравнению с суммарной степенью агрегации, вызванной ЛПС и АДФ [8].

Следует отметить, что хитозан и его производные могут представлять интерес в терапии больных с синдромами сепсиса и септического шока не только вследствие их способности связывать и нейтрализовать эндотоксическую активность ЛПС, но и благодаря их собственной биологической активности. В связи с вышесказанным они могут рассматриваться также как потенциальные вспомогательные препараты неспецифического действия в комплексной терапии сепсиса и других клинических симптомов, обусловленных эндотоксинами.

каррагинан - другой природный полисахарид, полученный из морских красных водорослей, является полианионом и представляет собой сульфатированный галактан. Отобран как полимер, перспективный для использования в терапии эндотоксемии в качестве препарата неспецифического действия. В ряде исследований было показано, что пациенты с сепсисом могут быть иммуносупрессированы, особенно после острой фазы септического шока. На этом основании в терапии сепсиса оправданно использование препаратов, стимулирующих иммунную систему [18]. Все производные хитозанов, которые были использованы нами в экспериментах по изучению взаимодействия хитозан-ЛПС, обладали выраженной иммуномодулирующей активностью [6]. Каррагинан, как известно, тоже является иммуномодулятором. В опытах in vivo на экспериментальных животных он показал способность повышать токсическую дозу ЛПС. Действительно, этот

полисахарид, введенный внутрибрюшинно в дозе 100-200 мкг предварительно (за 1или 7 сут) или одновременно с ЛПС, снижал острую токсичность ЛПС для мышей. Наибольший эффект наблюдался при введении каррагинана за 7 дней до инъекции ЛПС. В этом случае LD50 ЛПС увеличилась в 2,9 раза, тогда как при одновременном введении этот показатель вырос в 2 раза [5].

Как известно, в условиях сепсиса развиваются гемокоагуляционные нарушения, которые у 30-50% больных имеют более тяжелую клиническую форму - диссеминированное внутрисосудистое свертывание (ДВС-синдром) - и приводят к поражению функций жизненно важных органов и систем [13]. В настоящее время установлено, что инициирующая роль в развитии этих нарушений принадлежит тромбоцитам.

Мы изучили влияние каррагинана и хитозана на агрегационную активность тромбоцитов донора (нативных и в условиях эндотоксемии) в опытах in vitro [8]. Показано, что хитозан и каррагинан являются протекторами клеток от такого сильного естественного индуктора агрегации, каким является аденозиндифосфат (АДФ). Так, инкубация тромбоцитов с хитозаном достоверно снижала степень их агрегации, индуцированную АДФ, на 11-18%. Предварительное воздействие каррагинана на донорские тромбоциты снижало их агрегационную активность, вызванную АДФ, на 33,7-37,8%, а величину их АДФ-ин-дуцированной агрегации при воздействии на клетки ЛПС Yersinia pseudotuberculosis - на 22%. Было исследовано также действие каррагинана на тромбоциты больных пищевыми токсикоинфекциями (ПТИ) [8]. Как известно, при ПТИ развивается ДВС-синдром со значительным повреждением тромбоцитов. Предварительное введение каррагинана в обогащенную тромбоцитами плазму больного (перед добавлением ЛПС и АДФ) снижало агрегационную активность тромбоцитов на 30%, практически полностью ингибируя агрегирующее действие ЛПС на тромбоциты. Последние результаты представляют особый практический интерес, так как показывают возможность защиты каррагинаном тромбоцитов таких больных.

Полученные данные свидетельствуют о выраженных протективных свойствах исследуемых полисахаридов в отношении тромбоцитов и позволяют предположить, что они могут положительно влиять на систему гемостаза в условиях эндотоксемии. Пероральное введение каррагинана больным с ПТИ сальмонеллезной этиологии на фоне стандартной терапии восстанавливало систему гемостаза по сравнению с контрольной группой более активно. При этом действие препарата носило регуляторный характер: у больных с гиперкоагуляцией отмечено снижение агрегационной активности тромбоцитов на 56,5%, а у больных с гипокоагуляцией степень агрегации возрастала на 20,6%. В то же время применение только базовой терапии не приводило к столь эффективной коррекции функционального состояния тромбоцитов. Аналогичная направленность сдвигов отмечалась и при исследовании активированного парциального тромбопластинового времени [8]. Отмечено также корригирующее влияние препарата на восстановление статуса иммунной системы у исследуемых больных. Достаточно быстрое восстановление показателей иммунной системы при приеме каррагинана, вероятно, обусловлено его иммунорегуляторными свойствами.

Эндотоксин, который может выходить в кровоток (вызывая эндотоксемию) при локальной или системной грамотрицательной инфекции, как известно, оказывает влияние практически на все системы организма, вызывая ряд патофизиологических изменений [13, 18]. В наших экспериментах ЛПС, введенный парентерально мышам, вызывал значительные биохимические и патоморфологические изменения в исследуемых тканях [9, 10]. Хитозан и каррагинан при профилактическом пероральном введении достоверно снижали морфологические и эндокринно-метаболические нарушения в печени, тимусе, селезенке, надпочечниках, крови у животных, вызванные эндотоксином. Полученные данные позволяют говорить о повышении устойчивости мышей к действию бактериального эндотоксина под влиянием этих полисахаридов. Таким образом, хитозан и каррагинан снижают токсическое действие ЛПС на организм при эндотоксемии.

Результаты проведенного исследования позволяют считать хитозан и его производные, а также липиды А из некоторых морских грамотрицательных бактерий перспективными соединениями для создания на их основе специфических препаратов для терапии грамотрицательного сепсиса и эндотоксическиго шока. Полученные данные также открывают перспективы практического использования каррагинанов и хитозана в качестве препаратов неспецифического действия в комплексной терапии клинических синдромов, связанных с эндотоксинами, для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

ЛИТЕРАТУРА

1. Воробьева Е.В., Красикова И.Н., Соловьева ТФ. Влияние липополисахаридов и липидов А из некоторых морских бактерий на индукцию спонтанного и индуцированного липополисахаридом из Escherichia coli синтеза ФНО-а клетками периферической крови человека // Биохимия. 2006. Т 71, № 7. С. 936-944.

2. Воробьева Е.В., Дмитренок А.С., Дмитренок П.С., Исаков В.В., Красикова И.Н., Соловьева Т.Ф. Структура необычного липида А из морской бактерии Marinomonas communis ATCC 27118T // Биоорган. химия. 2005. Т. 31, № 4. С. 404-413.

3. Воробьева Е.В., Красикова И.Н., Дмитренок А.С., Дмитренок П.С., Исаков В.В., Недашковская О.И., Соловьева ТФ. Характеристика необычного липида А моносахаридной природы из морской бактерии Chryseobacterium scophthalmum CIP 104199Т // Биоорган. химия. 2006. Т. 32, № 5. С. 538-545.

4. Горбач В.И., Набережных Г.А., Соловьева Т.Ф. Получение липосом, покрытых N-ацилированным низкомолекулярным хитозаном, и их взаимодействие с бактериальными эндотоксинами // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы IX Междунар. конф. Ставрополь; М.: Изд-во ВНИРО, 2008. С. 156-158.

5. Ермак И.М., Барабанова А.О., Кукарских Т.А., Соловьева Т.Ф., Богданович РН., Полякова А.М., Астрина О.С., Малеев В.В. Природный полисахарид каррагинан как ингибитор токсического действия эндотоксинов грамотрицательных бактерий // Бюл. эксперим. биол. мед. 2006. Т. 141, № 2. C. 191-193.

6. Иванушко Л.А., Соловьева Т.Ф., Запорожец Т.С., Лукьянов П.А., Горбач В.И., Беседнова Н.Н. Сравнительное изучение иммуномодулирующих свойств хитозана и его производных // Мед. иммунология. 2007. Т. 9, № 4/5. С. 397-404.

7. Набережных Г.Ф., Горбач В.И., Лихацкая Г.Н., Давыдова В.Н., Соловьева Т.Ф. Взаимодействие хитозанов и N-ацилированных производных хитозанов с липополисахаридами грамотрицательных бактерий // Биохимия. 2008. Т. 73, вып. 4. С. 530-541.

8. Полякова А.М., Астрина О.С., Бахтина Ю.А., Малеев В.В., Ермак И.М., Барабанова А.О. Возможность коррекции функционального состояния тромбоцитов человека с помощью природных полисахаридов в условиях экспериментальной эндотоксемии и у больных пищевыми токсикоинфекциями // Инфекц. болезни. 2005. Т. 3, № 1. С. 44-47.

9. Хасина Э.И., Сгребнева М.Н., Ермак И.М., Малеев В.В. Влияние каррагинана на неспецифическую резистентность мышей при ЛПС-индуцируемой эндотоксемии // ЖМЭИ. 2007. № 2. С. 57-60.

10. Хасина Э.Н., Сгребнева М.Н., Ермак И.М., Горбач В.И. Хитозан и неспецифическая резистентность организма // Вестн. ДВО РАН. 2005. № 1. С. 62-71.

11. Яковлев М.Ю. «Эндотоксиновая агрессия» как предболезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека и животных // Успехи соврем. биол. 2003. Т. 123, № 1. С. 31-40.

12. Christ W.J., Asano O., Robidoux A.L.C. et al. E5531, a pure endotoxin antagonist of high potency // Science. 1995. Vol. 268, N 5207. P. 80-83.

13. Cohen J. The immunopathogenesis of sepsis // Nature. 2002. Vol. 420. P. 885-891.

14. Davidova V.N., Bratskaya S.Yu., Gorbach V.I., Solov’eva T.F., Kaca W., Yermak I.M. Comparative study of elec-trokinetic potentials and binding affinity of lipopolysaccharides-chitosan complexes // Biophys. Chem. 2008. Vol. 136. P. 1-6.

15. Dodane V., Vilivalam V.D. Pharmaceutical applications of chitosan // Pharmaceutical Sci. & Technology Today. 1998. Vol. 1, N 6. P. 246-253.

16. Hawkins L.D., Christ W.J., Rossignol D.P Inhibition of endotoxin response by synthetic TLR4 antagonists // Curr. Topics Med. Chem. 2004. Vol. 4, N 11. P. 1147-1171.

17. Krasikova I.N., Kapustina N.V., Isakov V.V., Dmitrenok A.S., Dmitrenok PS., Gorshkova N.M., Solov’eva T.F. Detailed structure of lipid A from lipopolysaccharide from the marine proteobacterium Marinomonas vaga ATCC 27119T // Eur. J. Biochem. 2004. Vol. 271, N 14. P. 2895-2904.

18. Russell J.A. Management of sepsis // New Engl. J. Med. 2006. Vol. 355. P 1699-1713.

19. Van Amersfoort E.S., Van Berkel T.J., Kuiper J. Receptors, mediators and mechanisms involved in bacterial sepsis and septic shock // Clinical Microbiol. Rev. 2003. Vol. 16, N 3. P. 379-414.

20. Yermak I.M., Davidova V.N., Gorbach VI., Luk’yanov PA., Solov’eva T.F., Ulmer A.J., Buwitt-Beckmann U., Rietchel E.T., Ovodov Yu.S. Forming and immunological properties of some lipopolysaccharide-chitosan complexes // Biochimie. 2006. Vol. 88. P. 23-30.