Изучение фенольных соединений шалфея мутовчатого (Salvia verticillata L. )

УДК: 582.949.27

В. Н. Бубенчикова, Ю. А. Кондратова

Изучение фенольных соединений шалфея мутовчатого

ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3; тел. (4712) 58-07-39

НОУ ВПО ««Курский медицинский институт»» 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3; тел. (4712) 58-07-39

В статье приведены результаты исследования фенольных соединений надземной части Salvia verticillata L. методами бумажной хроматографии, тонкослойной хроматографии и ВЭЖХ. Указанными методами обнаружено 27 веществ фенольной природы, которые в основном представлены флавоноидами, кумаринами, фенол-карбоновыми кислотами.

Ключевые слова: шалфей мутовчатый, фе-нольные соединения.

Шалфей мутовчатый (Salvia verticillata L.) — многолетнее травянистое растение семейства губоцветные. В народной медицине шалфей мутовчатый применяется как вяжущее, дезинфицирующее и противовоспалительное средство. В химическом плане данное растение изучено недостаточно. Имеются сведение лишь о компонентном составе эфирного масла 1.

Целью нашей работы было изучение фе-нольного состава травы шалфея мутовчатого.

Объектом исследования служила воздушно-сухая измельченная надземная часть шалфея мутовчатого, заготовленная в 2007 г. в Курской области в период массового цветения растений.

Материалы и методы исследования

Исследование полифенольных соединений проводили при помощи характерных качественных реакций и методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ). Для этого 100.0 г сырья шалфея мутовчатого измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм и экстрагировали 70% этиловым спиртом при соотношении сы-рье-экстрагент (1 : 5) путем нагревания на кипящей водяной бане в колбе с обратным холодильником до полного истощения сырья. Объединенные извлечения упаривали в вакууме до водного остатка, охлаждали, фильтровали (для отделения хлорофилла и смол). Филь-

Дата поступления 07.03.08

трат использовали для последовательной жидкостной экстракции органическими рас-твори-телями: хлороформом, этилацетатом, бутано-лом.

Хлороформные фракции спирто-водных извлечений использовали для обнаружения кумаринов методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол» с использованием в качестве подвижной фазы системы растворителей: бензол-этилацетат (2 : 1). Хроматограммы просматривали в УФ-свете до и после обработки их специфическими реактивами (пары аммиака, 10% раствор калия гидроксида в спирте этиловом) 2.

Наличие флавоноидов в этил-ацетатных фракциях и водном остатке извлечения из травы шалфея мутовчатого определяли с помощью характерных качественных реакций (циа-нидиновой пробы и цианидиновой пробы по Брианту, с 2% раствором хлорида алюминия, с 10% раствором гидроксида натрия), а также с использованием методов хроматографии на бумаге в системах растворителей: 15% раствор уксусной кислоты, бензол-этилацетат-уксусная кислота (50 : 50 : 1), с последующим проявлением специфическими реактивами (пары аммиака, 10% раствор гидроксида натрия в этиловом спирте, 2% раствор хлорокиси циркония в метиловом спирте) 3-6. Хроматограммы просматривали в УФ-свете до и после обработки хромогенными реактивами.

Для обнаружения фенолкарбоновых кислот использовали этилацетатную фракцию. Определение проводили путем хроматографи-рования на бумаге восходящим способом в системе растворителей: 2% раствор кислоты уксусной. Хроматограммы обрабатывали специфическими реактивами: парами аммиака, 1% спиртовым раствором хлорида окисного железа, диазотированным п-нитроанилином 4 7.

Для детального изучения компонентного состава фенольных соединений травы шалфея мутовчатого применяли метод ВЭЖХ. Анализ

проводили на высокоэффективном жидкост-ном хроматографе фирмы «GILSON» (Франция) (модель 305) с ручным инжектором RHEODYNE-7125 (USA) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования, используя программу Мультихром для «Windows» 8. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора GILSON UV/VIS (модель 151). Хроматографическая колонка Kromasil C 18, 4.6 • 250 мм с размером частиц 5 мкм. Подвижная фаза — смесь метанол—вода—концентрированная кислота фосфорная в соотношении 400 : 600 : 5. Скорость подачи элюента 0.80 мл/мин, рабочая длина волны 254 нм, объем пробы — 20,0 мкл, температура колонки комнатная, продолжительность анализа 70.95 мин.

Для исследования надземную часть шалфея мутовчатого измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстия 2 мм по ГОСТ 214-83. 4.0 сырья помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70% этилового спирта, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спирто-водной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем 70% этиловым спиртом до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию 0.05% растворов стандартных образцов (РСО) фенольных соединений в 70% этиловом спирте.

Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставления времен удерживания пиков, полученных на хроматограм-ме пробы, с временами удерживания стандартных растворов (РСО).

Методом внутренней нормализации определено относительное содержание отдельных идентифицированных фенольных веществ в исследуемом образце.

Результаты и обсуждение

В результате хроматографического анализа в надземной части шалфея мутовчатого обнаружено 3 соединения в виде пятен с голубой флуоресценцией, отнесенные к соединениям кумариновой природы, 7 веществ в виде пятен с розовой, голубой и темной флуоресценцией в УФ-свете, отнесенные к фенолкарбоновым кислотам, 4 вещества в виде пятен с желтой и темной флуоресценцией, отнесенные к фла-воноидным соединениям.

В траве шалфея мутовчатого методом ВЭЖХ было установлено наличие 27 соединений фенольной природы, которые в основном представлены флавоноидами, кумаринами и фенолкарбоновыми кислотами. Из них 14 веществ были идентифицированы как умбелли-ферон, галловая кислота, хлорогеновая кислота, эпикатехин, эскулетин, кофейная кислота, цикоревая кислота, феруловая кислота, розмариновая кислота, цинарозид, кверцетин, люте-олин, скополетин, кемферол (табл. 1).

Таблица 1

Результаты исследования фенольных веществ травы шалфея мутовчатого методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Наименование PCO Время удерживания, мин Количественное соотношение, %

Умбеллиферон 2.88 1.59

Галловая кислота 3.32 10.86

Хлорогеновая кислота 4.05 3.66

Эпикатехин 4.43 3.68

Эскулетин 4.98 5.85

Кофейная кислота 5.38 6.47

Не идентифицированное вещество 5.81 5.29

Цикориевая кислота 6.69 2.93

Феруловая кислота 7.78 11.63

Розмариновая кислота 11.32 20.26

Цинарозид 12.20 2.33

Не идентифицированное вещество 13.74 1.78

Не идентифицированное вещество 15.51 0.98

Не идентифицированное вещество 16.42 0.71

Не идентифицированное вещество 17.65 1.79

Не идентифицированное вещество 19.50 1.00

Не идентифицированное вещество 22.85 3.43

Не идентифицированное вещество 25.96 2.13

Кверцетин 28.28 1.19

Не идентифицированное вещество 31.06 2.14

Лютеолин 34.03 1.99

Скополетин 37.97 1.01

Не идентифицированное вещество 39.74 0.61

Не идентифицированное вещество 41.71 1.00

Не идентифицированное вещество 44.28 0.92

Кемпферол 53.05 2.56

Не идентифицированное вещество 61.25 2.22

Таким образом, в траве шалфея мутовчатого обнаружено 27 веществ фенольной природы, из них впервые — умбеллиферон, галловая кислота, хлорогеновая кислота, эпикатехин, кофейная кислота, цикоревая кислота, феруловая кислота, розмариновая кислота, кверцетин, лютеолин, скополетин, кемферол.

Установлено, что в траве шалфея мутовчатого среди кислот преобладают розмариновая кислота, среди флавоноидов — кемферол, из кумаринов — эскулетин.

Литература

1. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Н1ррш1йасеае - ЬоЬеНасеае.- С.-Пб., 1991.- 200 с.

2. Бубенчикова В. Н., Дроздова И. Л. Кумарины донника рослого // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Сб. научных тр. (Пятигорская гос. фармацевт. акад.).- Пятигорск, 2003.- С. 14-15.

3. Бандюкова В. А., Шинкаренко А. А., Казаков А. Л. Методы исследования природных флавоноидов.- Пятигорск, 1977.- 72 с.

4. Хроматография на бумаге / Под ред. И. М. Хай-ца, К. Мацека.- М., 1962.- 851 с.

5. Bryant E. T. A note of the differentiation between flavonoid glycosides and their aglycones // J. Amer. Pharm. Assoc. 1950.- Vol. 39.-№8.- P. 480-488.

6. Geissman T. A. Chemistry of flavonoid compounds. Oxford, 1962.- 666 p.

7. Бандюкова В. А. // Химия природ. соединен. 1983.- №3.- С. 263-273.

8. Бубенчиков Р. А. // Химико-фармацевтический журнал.- 2005.- №3.- С. 18-21.