ПРОИЗВОДСТВО РЕКОМБИНАНТНОГО ЛУБРИЦИНА

1. Способ производства рекомбинантного гликопротеида лубрицина, содержащий стадии:
культивирования в некоторой среде клеток яичника китайского хомячка (CHO), трансфицированных человеческим геном PRG4 и экспрессирующих его и пост-трансляционно гликозилирующих продукт экспрессии, в течение некоторого времени при условиях культивирования, достаточных для того, чтобы произвести гликопротеин лубрицина, содержащий по меньшей мере 30 мас.% гликозидных остатков при концентрации в среде, составляющей по меньшей мере 0,4 г/л, и
очистки гликопротеина лубрицина от указанной среды.
2. Способ по п. 1, в котором клетками CHO являются клетки CHO-M, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую человеческий ген PRG4.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором клетки CHO трансфицируются первым вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую хроматиновый элемент, и вторым вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую человеческий ген PRG4.
4. Способ по п. 3, в котором хроматиновый элемент является граничным элементом, участком прикрепления к ядерному матриксу, участком управления локусом или универсальным открывающим хроматиновым элементом.
5. Способ по п. 4, в котором хроматиновый элемент является участком прикрепления к ядерному матриксу.
6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором клетки культивируются в течение некоторого времени при условиях культивирования, достаточных для того, чтобы произвести упомянутый гликопротеин лубрицина с концентрацией в среде, равной по меньшей мере 0,5 г/л.
7. Способ по любому из пп. 1-5, в котором клетки культивируются в течение некоторого времени при условиях культивирования, достаточных для того, чтобы произвести упомянутый гликопротеин лубрицина с концентрацией в среде, равной по меньшей мере 0,8 г/л.
8. Способ по любому из пп. 1-5, в котором клетки культивируются в течение некоторого времени при условиях культивирования, достаточных для того, чтобы произвести упомянутый гликопротеин лубрицина с концентрацией в среде, равной по меньшей мере 1,0 г/л.
9. Способ по любому из пп. 1-5, в котором клетки культивируются в течение некоторого времени при условиях культивирования, достаточных для того, чтобы произвести упомянутый гликопротеин лубрицина с концентрацией в среде, равной по меньшей мере 2,0 г/л.
10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором по меньшей мере 95 мас.% гликозилирования гликопротеина лубрицина являются гликозилированием ядра 1.
11. Способ по любому из пп. 1-9, в котором по меньшей мере 99 мас.% гликозилирования гликопротеина лубрицина являются гликозилированием ядра 1.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором гликозидные остатки являются обогащенными боковыми цепями сульфатированного сахарида по сравнению с природным человеческим лубрицином.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором гликопротеин лубрицина содержит мультимерный белок, дающий статический коэффициент трения не более 150% от статического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
14. Способ по любому из пп. 1-12, в котором гликопротеин лубрицина содержит мультимерный белок, дающий статический коэффициент трения не более 120% от статического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
15. Способ по любому из пп. 1-12, в котором гликопротеин лубрицина содержит мультимерный белок, дающий статический коэффициент трения не более 110% от статического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором гликопротеин лубрицина содержит мономерную разновидность лубрицина, совместно очищенную от упомянутой питательной среды в смеси с мультимерной разновидностью лубрицина.
17. Способ по любому из пп. 13-15, в котором гликопротеин лубрицина содержит димерную разновидность лубрицина.
18. Способ по любому из пп. 1-17, в котором гликопротеин лубрицина содержит по меньшей мере пять связанных дисульфидными мостиками или нековалентно связанных индивидуальных гликозилированных цепей аминокислоты и имеет молекулярную массу по меньшей мере 1200 кДальтон.
19. Способ по любому из пп. 1-18, в котором клетки культивируются по меньшей мере в 10, 50 или 100 литрах среды.
20. Способ по любому из пп. 1-19 в котором гликопротеин лубрицина содержит по меньшей мере 35 мас.% гликозидных остатков.
21. Гликопротеин лубрицина, произведенный способом по любому из пп. 1-20.
22. Композиция веществ, содержащая:
рекомбинантный мультимерный гликопротеин лубрицина, экспрессируемый из человеческого гена PRG4 в культуре клетки-хозяина, содержащий по меньшей мере 30 мас.% гликозидных остатков и создающий динамический коэффициент трения не более 150% от динамического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
23. Композиция по п. 22, в которой гликопротеин лубрицина характеризуется как создающий динамический коэффициент трения не более 120% от динамического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
24. Композиция по п. 22, в которой гликопротеин лубрицина характеризуется как создающий динамический коэффициент трения не более 110% от динамического коэффициента трения очищенного природного бычьего лубрицина при измерении в тесте трения хряща на хряще.
25. Композиция по любому из пп. 22-24, в которой гликопротеин лубрицина содержит по меньшей мере 35 мас.% гликозидных остатков.
26. Композиция по любому из пп. 22-24, в которой гликопротеин лубрицина содержит по меньшей мере 40 мас.% гликозидных остатков.
27. Композиция по любому из пп. 22-26, в которой по меньшей мере 99 мас.% гликозилирования гликопротеина лубрицина являются гликозилированием ядра 1.
28. Композиция по любому из пп. 22-27, в которой гликозидные остатки являются обогащенными боковыми цепями сульфатированного сахарида по сравнению с природным человеческим лубрицином.
29. Композиция по любому из пп. 22-28, дополнительно содержащая мономерную разновидность лубрицина, смешанную с мультимерной разновидностью лубрицина.
30. Композиция по любому из пп. 22-29, содержащая димерную разновидность лубрицина.
31. Композиция по любому из пп. 22-30, содержащая разновидности лубрицина, содержащие по меньшей мере пять связанных дисульфидными мостиками или нековалентно связанных индивидуальных гликозилированных цепей аминокислоты, имеющие молекулярную массу по меньшей мере 1200 кДальтон.
32. Композиция по любому из пп. 22-31, дополнительно содержащая гиалуроновую кислоту или ее соль в смеси с упомянутым гликопротеином лубрицина.
33. Композиция по любому из пп. 22-32 для приготовления медикамента для лечения суставного соединения путем введения в сустав препаратов, улучшающих скольжение суставных поверхностей.
34. Композиция по любому из пп. 22-32 для приготовления медикамента для местного нанесения на поверхность ткани.
35. Композиция по любому из пп. 22-32 для приготовления медикамента для лечения болезни сухих глаз.
36. Композиция по любому из пп. 22-32 для приготовления медикамента для нанесения на поверхность тела во время хирургической операции для предотвращения последующего формирования спаек или фиброзной соединительной ткани.
37. Композиция по любому из пп. 22-32 для приготовления медикамента для системного введения для предотвращения межклеточной адгезии или подвижность внутри сосудистой сети.
38. Композиция, содержащая раствор, содержащий 100 г человеческого лубрицина, в которой лубрицин содержит гликозилирование, которое по меньшей мере на 99 мас.% является гликозилированием ядра 1.
39. Композиция по п. 38, в которой человеческий лубрицин является рекомбинантным человеческим лубрицином.
40. Композиция по п. 38 или 39, в которой концентрация лубрицина в растворе составляет по меньшей мере 0,5 г/л.