Применение липосом в фотохимиотерапии: липосомы в ФДТ

УДК 577.115:615.831

LG. Meerovich, N.A. Oborotova

USE OF LIPOSOMES IN PHOROCHEMOTHERAPY: 1. LIPOSOMES IN PDT

N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

ABSTRACT

Study is devoted to discussion of possibilities to use the liposomal drug formulations to improve the main branch of the photochemotherapeutical methods—the photodynamic therapy. Different types of liposomes and strategies to use them in the area of photodynamic therapy are analyzed. A number of examples of use of photosensitizers-based liposomal to enhance their solubility, selectivity of accumulation in malignancies and photodynamic efficiency are presented.

Key words: liposomes; photochemotherapy; photodynamic therapy; PDT; photosensitizer; targeting; solubuilization.

И.Г. Меерович, Н.А. Оборотова

ПРИМЕНЕНИЕ ЛИПОСОМ В ФОТОХИМИОТЕРАПИИ: 1. ЛИПОСОМЫ В ФДТ

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

РЕЗЮМЕ

Обзор посвящен обсуждению возможностей применения липосомальных (лекарственных) форм для совершенствования основного направления фотохимиотерапии—метода фотодинамической терапии. В работе анализируются различные типы липосом и стратегия их применения. Приводятся примеры использования липосомальных форм на основе фотосенсибилизаторов для их солюбилизации, повышения селективности накопления и фотодинамической эффективности.

Ключевые слова: липосомы; фотохимиотерапия; фотодинамическая терапия; ФДТ; адресная доставка; солюбилизация.

ВВЕДЕНИЕ

Противоопухолевые препараты должны обеспечивать максимальное разрушение опухоли при минимальном повреждении нормальных клеток и тканей организма. Сложность выполнения этой задачи заключается в том, что цитотоксическая активность препарата проявляется прежде всего по отношению к наиболее чувствительным клеткам организма (ретикулоэндоте-лиальной и иммунной систем, кроветворных органов и т.д.). Поэтому при химиотерапии больных с опухолями, в том числе и при фотохимиотерапии, на первый план выходит проблема повышения избирательности действия препарата на опухолевые клетки.

ФОТОХИМИОТЕРАПИЯ НОВООБРАЗОВАНИЙ

Фотохимиотерапия новообразований—относительно новое направление противоопухолевой терапии, в котором воздействие на ткань химиотерапевтического агента-фотосенсибилизатора (ФС), введенного в орга-

низм, инициируется облучением патологического очага световым излучением, поглощаемым эти агентом.

Среди основных методов фотохимиотерапии можно выделить фотодинамическую терапию (ФДТ) и химиотерапию с использованием так называемых фотоак-тивируемых лекарственных средств. При этом в ФДТ свет выполняет функции адресации воздействия и является источником энергии для фотобиохимической реакции, приводящей к образованию в опухолевой ткани и/ или сосудах опухоли цитотоксических агентов (активных форм кислорода). А при химиотерапии с использованием фотоактивируемых лекарственных средств свет обеспечивает, кроме адресации, также высвобождение цитостатического лекарственного препарата (перевод его в биологически активную форму).

Фотодинамическая терапия (ФДТ)—наиболее распространенный метод фотохимиотерапии. Одной из не решенных до настоящего времени проблем ФДТ является остаточная фототоксичность ФС в течение длительного времени после лечения, обусловленная достаточно медленным снижением их концентрации в органах и

Устойчивые везикулы могут быть приготовлены с использованием многих фосфолипидов природного и синтетического происхождения, насыщенных и ненасыщенных, нейтральных или заряженных (положительно или отрицательно), и приготовлены так, чтобы заключить внутри водной «полости» или в липидной мембране необходимое количество лекарственного вещества [8; 9; 20; 29].

тканях, а особенно в коже пациента. В первую очередь, это относится к ряду синтетических ФС на основе производных фталоцианинов, которые в организме практически не разрушаются за счет метаболизма. Остаточная фототоксичность приводит к необходимости для пациента соблюдать в течение длительного времени после лечения специальный световой режим.

В последнее время появился ряд работ, целью которых было повышение избирательности локализации ФС в опухолях [3]. По сути, сформировалось новое направление — направленная фотодинамическая терапия (НФДТ).

В стремлении достичь направленной доставки противоопухолевых субстанций исследователи идут различными путями. Одним из подходов к решению этой проблемы является микроинкапсулирование, т.е. использование специфических носителей [1; 2; 5; 6; 14; 16; 19; 22-28; 30; 31; 33; 59-61], основными характеристиками которых должны быть:

• биологическая совместимость с системами организма;

• биодеградируемость, отсутствие кумулятивной токсичности;

• защита реактивного лекарственного вещества в процессе хранения лекарственной формы и во время транспорта в биологических жидкостях организма;

• защита окружающих тканей организма от цитоток-сического действия лекарственного вещества, в том числе предупреждение местнотканевых реакций при введении;

• способность эффективно и контролируемо связывать и высвобождать лекарственное вещество за счет заданной проницаемости микроконтейнера;

• возможность доставлять лекарственное вещество в органы, ткани и отдельные клетки;

• доступность составляющих материалов и простота получения.

В качестве материала для микрокапсул в последние десятилетия интенсивно изучают природные ам~ фифильные липиды. Микрокапсулы из них получили название липосом.

ЛИПОСОМЫ КАК ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМА ДЛЯ ДОСТАВКИ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ

Липосомы можно упрощенно представить как ге-терофазные пузырьки (везикулы), в которых водная фаза окружена одной или несколькими бислойными мембранами, построенными из фосфолипидных молекул. Липосомы условно подразделяют на 3 класса в соответствии с их морфологией и размером, который может быть в диаметре от десятков нанометров до десятков микрометров [11]. В зависимости от структуры и размера липосомы подразделяются на:

1) малые однослойные (МОЛ);

2) большие однослойные (БОЛ), состоящие из одного фосфолипидного бислоя;

3) многослойные (МСЛ) с несколькими концентрическими липидными бислоями, перемежаемыми водным пространством.

ЛИПИДЫ, ОБРАЗУЮЩИЕ

липосомы

Не все липиды, полученные из биомембран, способны образовывать липидные бислои. Мембранные белки могут быть разделены на 3 группы в соответствии с относительным объемом их полярной группы («головы») по сравнению с гидрофобной ацильной цепью («хвостом») [11; 29]. Первая группа включает в себя «цилиндрические» липиды, такие, как фосфатидилхолин (Р С), фосфа-тидилсерин (Р8) и сфингомиелин (8М). Они самопроизвольно образуют бислои, будучи диспергированными в водной среде в концентрациях, превышающих уровень их фазовых переходов «гель — жидкокристаллическая фаза». Наиболее широко используемыми липидами для приготовления липосом стали фосфатидилхолины, которые получаются весьма стабильными против изменения pH и концентраций солей (ионной силы). Вторая группа включает в себя «конические» липиды, например—фос-фатидилэтаноламин (РЕ) и кардиолипин (СЬ), обладающие относительно крупным гидрофобным «хвостом» по сравнению с полярной «головой». Такие липиды называют небисяойными; они образуют как гексагональные, так и бислойные структуры, в зависимости от условий [11; 29]. Эти типы липидов, по-видимому, играют основную роль в процессе слияния липосомальной и клеточной мембран. Третья группа состоит из «клиновидных» липидов, в частности, лизофосфолипидов.

Анализ имеющихся данных о свойствах липидов позволяет сделать вывод о необходимости выбора и оптимизации состава липидов в соответствии с назначением липосом, например, для солюбилизации лекарств или для проникновения через клеточную мембрану.

МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ липосом

В большинстве случаев получение липосом начинается с приготовления МСЛ, например, по классической методике Бенгема, гидратацией тонкой липидной пленки из смеси липидов, упаренной из органического растворителя (например, хлороформа) [9; 11]. МОЛ можно получить из МСЛ механическим разрушением последних с помощью ультразвуковой соникации или пресса Френча. Гомогенные по размеру липосомы получаются путем экструзии через поликарбонатные мембраны с порами заданного размера. Разработаны были и другие способы приготовления липосом, например, методами гидратации липидов из органической фазы или детерген-тного диализа [4; 9; 11]. С фармацевтической точки зрения, желательно вообще избегать использования органических растворителей и детергентов, которые сложно полностью удалить [20]. Метод экструзии, по-видимому, оказывается тут лучшим, так как позволяет получать однородные и хорошо воспроизводимые липосомы с высокой удерживающей способностью.

ПРИМЕНЕНИЕ ЛИПОСОМ ДЛЯ АДРЕСНОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

В последние десятилетия было проведено много исследований по использованию липосом в качестве «транспортеров» для терапевтических агентов in vivo [10; 36] либо для моделирования биомембран [62]. При использовании липосом в качестве «транспортеров» для различных лекарств, в частности, антибиотиков [42], противогрибковых [43] и противораковых средств [32], достигается их направленная доставка, усиление и стабилизация клинического эффекта, уменьшение токсичности препаратов и предохранение их от преждевременного метаболизма и иммунных ответов [48; 49]. Лекарство может быть заключено либо в водной фазе липосом, либо в их липидных бислоях, в зависимости от его гидрофильности. Разработан целый ряд специфических липосом для достижения улучшенной целевой доставки лекарств [11; 48]. Для решения этой задачи существуют 4 основные стратегии.

Механизм адресной доставки липосомальных препаратов основан на том, что они состоят из липидов, образующих мембрану, которая обладает внутренней неустойчивостью (метастабильностью). К примеру, ненасыщенные фосфатидилэтаноламины охотнее образуют гексагональные и/или обращенно-мицеллярные структуры, чем бислойные. Мембрана может быть стабилизирована контактом с белками, как правило, путем ковалентного прикрепления определенных антител к мембране через цепочки жирных кислот или другие липидные молекулы. Когда такие лиганды агрегируют при прикреплении к «цели», их способность стабилизировать мембрану падает и липосомы разрушаются, высвобождая свое содержимое.

Иммунолипосомы специфически связываются с «антигенными» целевыми клетками, а также способствуют поглощению макрофагами.

В составе температурночувствительных липосом имеются липиды, которые претерпевают при определенной температуре фазовый переход, и ввиду значительного увеличения проницаемости липосомальной мембраны во время фазового перехода могут быть использованы для высвобождения при этой температуре своего содержимого. Например, нагревом целевой области можно вызвать разрушение липосом, построенных из дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC) в качестве основного компонента.

Подобный подход (сиспользованием фосфатидшгэ-таноламина в качестве основного липидного компонента) был применен при создании рН-чувствительных липосом. В этом случае мембрана стабилизировалась добавкой компонентов (например, жирных кислот, паль-митоилгомоцистеина), которые при нейтральном pH заряжены, но при низких значениях pH теряют заряд, дестабилизируя липосому.

Очень важными факторами, обеспечивающими опу-холетропность липосомальных форм противоопухолевых препаратов, являются, с учетом особенностей ангиогенеза опухолей, размеры везикул (менее 100 нм), липидный состав (фосфолипиды с холестерином) и поверхностные характеристики (заряд, направляющие лиганды) липосом.

Помимо перечисленных выше сайт-специфичных взаимодействий, липосомы, введенные in vivo, подвержены различным дополнительным воздействиям. Судьба введенных липосом существенно различается в зависимости от того, были они поглощены ретикулоэндотелиаль-ной системой (РЭС) или захвачены макрофагами.

Попытки замедления быстрого захвата липосомаль-ных препаратов ЮС и уменьшения скорости высвобождения препаратов из липосом привели к разработке ряда маскирующих покрытий, которые препятствуют взаимодействию везикул с белками плазмы,—опсонинами. Покрытие позволяет липосомам дольше находиться в кровотоке, что повышает их противоопухолевую эффективность. Была изучена модификация поверхности липосом полимерами сгибкой гидрофильной цепью, для чего использованы специальные синтетические липиды, например, фосфатидилэтаноламин, конъюгированный с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Эластичные молекулы ПЭГ на мембране создают избыточное осмотическое давление, защищая этим липосомы от опсонинов [12; 17; 40; 57]. Исследования показали, что время полувы-ведения липосом с ПЭГ (так называемых «пегилиро-ванных липосом») размером менее 100 нм у человека составляет около 45 ч. За это время липосомальный препарат накапливается в опухоли в больших концентрациях, чем при введении обычных липосом [7].

ЛИПОСОМЫ В ФДТ

Многие ФС, представляющие интерес для ФДТ и флюоресцентной диагностики с точки зрения высоких значений экстинкции и квантового выхода синглетно-го кислорода, удобного спектрального диапазона, хороших флюоресцентных свойств, обладают ограниченной растворимостью или вообще не растворимы в воде. Это не дает возможности использовать их для системного, в особенности внутривенного введения. Поэтому липосомальные технологии начали применяться с самого начала работ по созданию препаратов для ФДТ.

Липосомы могут были использованы для солюбилизации ФС, обеспечивающей возможность их доклинического изучения и клинического применения [44; 54; 65]. Более того, исследования показывают, что инкапсуляция гидрофобных ФС в липосомы не только облегчает введение ФС in vivo, но также улучшает их фармакокинетический профиль [38; 41; 50; 51; 55]. Многие аспекты сенсибилизации сиспользованием липосомальных форм ФС изучались группой G. Jori [13; 18; 34; 67]. Было показано, например, что порфирины в липосомальной форме также оказываются, как правило, лучшими фотодина-мическими агентами, чем водные растворы тех же пор-фиринов [34]. Повышенная активность многих ФС в ли-посомах может быть частично объяснена тем, что в полярной структуре липосом происходит полная мономе-ризация агрегатов. Это обеспечивает высокую фотоак-тивносгь (в водном растворе фотодинамическая активность ФС может быть снижена из-за агрегации) [13; 37]. Показано, что накопление и удержание порфиринов в культурированных опухолевых клетках и/или опухолевых тканях животных оказываются существенно выше, если вводимые порфирины связаны с МОЛ [18]. Повышенная эффективность связывания липосомальных форм с митохондриальными мембранами была также подгвер-

ждена на выделенных лизосомах печени крысы [53]. Солюбилизация ФС в липосомах с липидным составом, имитирующим митохондриальную мембрану, еще более улучшает их связывание с митохондриями.

Очень важными направлениями использования липо-сом в ФДТ являются также повышение биодосгупности ФС, увеличение их проникновения через стенки сосудов опухоли в опухолевые ткани и внутрь опухолевых клеток, изменение биораспределения препаратов (в первую очередь, повышение его доли, поступающей в опухоль). Интересным представляется и изучение возможности изменения в нужную сторону фармакокинетики ФС—например, для оптимизации методик сочетанной терапии.

Было отмечено повышение фотодинамической эффективности включенных в липосомы порфиринов за счет более высокого накопления в опухолях [35]. В качестве материала для моноламеллярных липосом—носителей порфиринов—использовали дипальмитоид-фосфатидил-холин (DPPQ [21]. Ранее было показано, что селективность к опухолям, особенно для липофильных ФС, может быть связанасучасгиемв ихдоставкелипопротеинов крови, в частности, липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) [39; 52; 55; 66; 67]. Адресная доставка в опухолевые ткани порфиринов в липосомальной форме также может частично объясняться взаимодействием фосфолипидных везикул с липопротеинами крови. В самом деле, клетки новообразований характеризуются повышенным уровнем рецепторов к ЛПНП. Чтобы понять роль последних в «опухоль-направленном» биораспределении ФС, ведется широкое изучение взаимодействиямежду «сенсибилизированными» липосомами и ЛПНП [39; 52; 66; 67].

С. Milanesi et al. изучалась природа веществ, отвечающих за транспорт и внутритканевое распределение ФС в опухоли [46]. С этой целью исследовалось поведение in vivo водорастворимого порфирина—тетра-(4-сульфофенил)-порфина (TPPS) и фталоцианина цинка (ZnPc), включенного в моноламеллярные липосомы из DPPC. ФС вводились внутривенно самкам мышей линии Balb/c с трансплантированной фибросаркомой MS 2. Хроматографические исследования показали, что TPPS главным образом транспортируется глобулинами и альбумином сыворотки, в то время как ZnPc специфически связывается липопротеинами. Облучение мышей красным светом (300 Дж/см2) приводило к обширному некрозу опухоли. Морфологические исследования опухолей мышей через 15 ч. после ФДТ показали, что TPPS в большей степени фотоиндуцирует некроз клеток новообразования, в то время как ZnPc приводит к сильному повреждению как клеток новообразований, так и сосудистой системы опухоли.

Были получены и запатентованы в качестве фармацевтических композиций липосомы из фосфатидилсерина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилглицерина, содержащие производные бензопорфирина (BPD) [45]. Липосомальные препараты и водный раствор BPD с радиоактивными метками (3Н или 14С) были введены мышам с перевитыми опухолями. Затем было исследовано биораспределение BPD. В частности, через 3 ч. после введения ФС отношение концентраций ФС в опухоли и коже для водного раствора находилось в диапазоне от 2:1 до 3 :1. Использование

липокомплексов BPD с липопротеинами низкой плотности (ЛПНП) и липопротеинами высокой плотности (ЛПВП) привело к существенному повышению этого коэффициента (до значений 5,1 : 1 и 4,1 : 1 соответственно). Через 8 ч. после введения этот коэффициент все еще возрастал для ЛПВП (4,9 : 1), но эффект был не дольше наблюдаемого для ЛПНП. После 24 ч. липокомплексы не имели преимущества перед водорастворимыми препаратами BPD.

D.Wohrle, М. Shopova et al. проводили исследования по созданию ФС на основе липосом из DL-a-DPPC с включенными в них производными нафталоцианина цинка (ZnNc), в том числе тетраацетиламидозамещенным, тетрааминозамещенным и тетраметоксизамещенным ZnNc. Фармакокинетика и фотодинамическая активность ФС изучалась на мышах линии С57/В1аск с трансплантированной карциномой легких Льюиса [58; 64; 65]. Фармакокинетические исследования показали, что ZnNc и его тетраацетиламидозамещенные и тетраметоксизаме-щенные производные показывают хорошее накопление в карциноме Льюиса, причем в опухоли достигается самая высокая концентрация. Наиболее низкая концентрация в опухоли, так же как и наиболее низкий терапевтический эффект, были получены для тетрааминозамещен-ного ZnNc. Исследования биораспределения также показали, что через 72 ч после введения лекарства концентрация изучаемых ZnNc возвращается к базовой линии. Фоточувствительность кожи имела место в течение 3 дней после ФДТ. Установлено, что через 20 ч после введения концентрация ФС в опухоли оказывается больше, чем в ткани печени. Результаты морфологического анализа показали наличие фототоксических изменений в клеточной мембране клеток-мишеней, митохондриях, эндоплаз-матическом ретикулуме, а также замедленное разрушение эндотелиальных клеток. Авторы полагают, что ZnNc и его тетраацетиламидозамещенные и тетраметоксизаме-щенные производные при включении в липосомы могут быть эффективными ФС для ФДТ опухолей благодаря селективному транспорту к мишеням, медленному выводу их из опухолевой ткани, быстрому выводу из кожи и продолжительному фототерапевтическому эффекту.

Авторы [52; 63] изучали взаимодействие липосом, содержащих фталоцианин цинка, и липопротеинов человеческой плазмы. Было показано, что большая часть фталоцинина цинка связывается с ЛПНП и ЛПВП.

В качестве нового потенциального агента для ФДТ опухолей был предложен фталоцианин германия Ge(TV) (GePc) с двумя аксиально связанными остатками холестерина, встроенный в малые моноламеллярные липосомы (CGP 55398) [56]. Препарат GePc, вводимый системно мышам с внутримышечно имплантированной фибросаркомой MS-2, взаимодействует с липопротеинами сыворотки и локализуется в опухолевых тканях с высокой эффективностью: через 24 ч1 после инъекции содержание GePc в опухоли превышало его содержание в нормальных тканях приблизительно в 5 раз. При облучении сенсибилизированной фибросаркомы красным светом достигается быстрое и обширное разрушение опухоли, включающее как некроз малигнизированных тканей, так и поражение питающих опухоль кровеносных сосудов.

J. Morgan et al. проводились клеточные исследования фотодинамической активности и селективности дей-

сгвия фталоцианина алюминия, включенного в липосо-мы, конъюгированные с моноклональными антителами 791Т/36. Методика получения липосом, конъюгированных с антителами, описана [15]. Средний диаметр липосом составлял 50 нм, они содержали 50-60 молекул AlSPc на липосому. Исследования проводились на клетках остеосаркомы 791Т и карциномы прямой кишки С170, а также клетках DW-BCL (вирус Эпштейна-Барра) в качестве контроля. Для сенсибилизации использовались водный раствор AlSPc, а также липосомальные формы AlSPc на основе неконъюгированных липосом и иммуно-липосом с моноклональными антителами 791Т/36 и нерелевантными антителами того же класса. AlSPc во всех формах добавлялся к клеткам из расчета 2,5 мкг/мл. Сенсибилизированные клетки облучались красным светом с плотностью мощности 1,7 мВт/см2 в течение 25 мин.

В результате была показана максимальная токсичность на клетках 791Т и С170 при действии AlSPc в иммунолипосомах с антителами 791Т/36 и отсутствие сколько-нибудь заметной токсичности при всех других комбинациях, даже при использовании 10-кратной концентрации AlSPc в свободной форме [47].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, липосомальные препараты чрезвычайно перспективны для повышения эффективности фотохимиотерапии. Благодаря мембранотропности и био-совмесгимости, коллоидным свойствам, контролируемым размерам и поверхностным характеристикам липо-сомы рассматриваются как перспективные системыдос-тавки препаратов в кровеносное русло. При этом водорастворимые вещества могут быть включены в водное пространство липосом, а жирорастворимые—в липидный бислой. Создание липосомальных моделей лекарственной формы позволяет:

• солюбилизировать водонерастворимые ФС для увеличения их биодоступности при внутривенном введении;

• совершенствовать их фармакокинетические параметры;

• поддерживать высокий индекс селективности;

• обеспечивать достаточную фотодинамическую эффективность.

Включение в мембрану липосом гидрофобных ФС создает возможность широкого изучения потенциальных препаратов при их внутривенном или внутрипо-лостном введении.

ЛИТЕРАТУРА

1. Варпаховская И. Новые системы доставки лекарственных средств // Ремедиум, 1999. — № 2. — С. 62-70.

2. Каплун П.А.,Ле Банг Шон, Краснопольский Ю. М., Швец В. И. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопр. мед. Химии.

— 1999.—Т.45, — №1, — С. 3-12.

3. НечаеваИС., МитинаВ.Х.,ПономаревГ.В.,Клящ1щкийБ.А. Фотоиммунотоксины — новые сенсибилизаторы направленного действия для фотодинамической терапии опухолей // Хим. фарм. Журнал. —1993. — Т. 10. — С.7-16.

4. Оборотов A.B. Биофармацевтические аспекты разработки лекарственных форм гормоноцитостатиков — кортифена и цитэстрол ацетата // Дис. канд. фарм. наук, Москва, 2000.

5. Оборотова Н.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов //Антибиот, и химиотер. -1991. — Т.36, № 10. — С.47-50.

6. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Хим. фарм. Журнал. — 2001. — Т. 35, № 4. — С.32-38.

7. Оборотова Н. А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии. //Успехи современной биологаи. — 2001. — Т.121, № 5. — С. 464-475.

8. Incorporation of drugs, proteins and genetic material, in Gregoriadis G. (ed.) Liposome technology, 1984, CRC Press, Boca Raton, FL.

9. Preparation of liposomes, in Gregoriadis G. (ed.) Liposome technology, 1984, CRC Press, Boca Raton, FL.

10. Targeted drug delivery and biological interaction, in Gregoriadis G. (ed.) Liposome technology, 1984, CRC Press, Boca Raton, FL.

11. Liposomes: a practical approach, in Rickwood D. and Hames B.D. (eds.) Practical Approach Series, 1990, Oil Press at Oxford University Press, Oxford.

12. Allen T.M., Hansen C. Pharmacokinetics of stealth versus conventional liposomes: effect of dose // Biochim. Biophys. Acta. —1991.—Vol.1068, N.2. — P.133-141.

13. AndreoniA., CubedduR., Jori G., P. Laporta,Reddi E. Time-resolved fluorescence studies of hematoporphyrm in different solvent systems // Z. Naturforsch. — 1983. — Vol. 38. —P.83-89.

14. Bally M.B., Ansell S.М., Tardi P.G.,Harasym T.O. Liposome targeting following intravenous administration, Defining expectations and a need for improved methodology // J. Liposome Res. — 1997. — Vol. 7, N.4. —P. 331-335.

15. Barbet J., Machy P.,Leserman L.D. Monoclonal antibody covalently coupled to liposomes: specific targeting to cells. Hi. Supramol. Struct., 1981, V. 16, P.237-240.

16. Beck B., Kreuter J., Reszka R.,Fichtner I., Influence of polybutylcyanoacrylate nanoparticles and liposomes on the efficacy and toxicity of the anticancer drug mitoxantrone in murine tumour models. //Journal of Microencapsulation, 1993, V.10,N.l, P.101-114.

17. Blume G., Cevc G. Liposomes for the sustained drug release in vivo. //Biochim. Biophys. Acta, 1990, V.1029, N.l, P.91-97.

18. Cozzani I., Jori G., Bertoloni G., Milanesi C.,Sicuro T. Efficient photosensitization of malignant tumor cells in vitro by liposome-bound porphyrins. //Chem. Biol. Interact., 1985, V.53, P.131-143.

19. Crommelin D.J.A.,Schreier H., Liposomes, in Kreuter J. (ed.) Colloidal Drug Delivery Systems, 1994, Marcel Dekker Inc., New York. P. 73-93.

20. Cullis P., Hope М., Bally М., Madden L., Mayer L.Janoff A. Liposomes as pharmaceuticals, in Ostro M. (ed.) Liposomes from biophysics to therapeutics, 1987, Marcel Dekker, New York, NY. P. 39-73.

21. Cuomo V., Jori G., Rihter B„ Kenney M.E.,Rodgers M.A.J. Liposome-delivered Si(IV)-naphtalocyanine as a photodynamic sensitizer for experimental tumors; pharmacokinetic and phototherapeutic studies. //Br. J. Cancer, 1990, V.62, N.6, P.966-970.

22. Dass C.R., Walker T.L., Burton M.A.,Becruz E.E. Enhanced anticancer therapy mediated by specialized liposomes. //J. Pharm. Pharmacol., 1997, V.49, N.10, P.4671-4674.

23. Duncan R., ‘Dimitrijevic S.,Evagorou E.G. The role of polymer conjugates in the diagnosis and treatment of cancer. //S. T. P. Pharma Sci., 1996, V.6, N.4, P.237-263.

24. Forssen E., Willis M. Ligand-targeted liposomes. //Adv. Drug Del. Rev., 1998, V.29, N.3, P.249-252.

25. GabisonA., GorenD., Horowitz A. T. etal. Long-circulating liposomes for drug delivery in cancer therapy: a review of biodistribution studies in tumor-bearing animals. //Adv. Drug Del. Rev., 1997, V.24, P.337-344.

26.Gabison A..Martin F. Polyethylene Glycol-coated pegylated liposomal Doxorubicin. Rationale for use in

solid tumors. //Drugs, 1997, V.54, N.Suppl.4, P. 15-21.

27.Greenwald R.B. Drug delivery systems: anticancer prodrugs and their polymeric conjugates (review). //Exp. Opin. Ther. Patents, 1997, V.7, N.6, P.601-609.

28. Gregoriadis G.,Florence A.T. Liposomes in drug delivery. //Clin. Diag. Ophthal. Potent. Drugs, 1993, V.45, P. 15-28.

29. Gruner S., Material properties of liposomal bilayers, in Ostro M. (ed.) Liposomes from biophysics to therapeutics,

1987, Marcel Dekker, New York, NY. P. 1-39.

30. Gulati M., Grover M., Singh S., Singh M. Lipophilic drug derivatives in liposomes. //Infection, 1998, V.165, N.2, P.129-132.

31. Gupta P.K, Drug targeting in cancer chemotherapy: a clinical perspective. //J. Pharm. Sei., 1990, Y.79, N.ll, P.949-962.

32.Hagiwara A., Takahashi T.,Oku N. Cancer chemotherapy administered by activated carbon particles and liposomes. //CRC Crit. Rev. Oncol./Hematol., 1989, V.9, P.319-350.

33.Hansen S.O.,Wakonen J. Challenges to deliver therapies. / /Eur. J. Pharm. Sei., 1998, V.6, P.337-341.

34. Jori G., Reddi E., Cozzani I., Tomoi L. Controlled targeting of different subcellular sites by porphyrins in tumor-bearing mice. //Br. J. Cancer, 1986, V.53, P.615-623.

35. Jory G., Tomio L.,Reddi E. Preferential delivery of liposome incorporated porphyrins to neoplastic cells in tumor-bearing rats. IIBr. J. Cancer, 1983, Y.48, N.2, P.307-309.

36. Kaye S.,Richardson V.J. Potential of liposomes as drug-carriers in cancer chemotherapy: a review. //Cancer Chemother. Pharmacol., 1979, V.3, P.81-85.

37. Keene J., Kessel D., Land E., Redmont R., Truscott T. G. Direct detection of singlet oxygen sensitized by haematoporphyrin and related compounds. //Photochem. Photobiol., 1986, V.43, P.117-120.

38. Kessel D. The role of low density: lipoprotein in the biodistrubution of photosensitizing agents. //J. Phorochem. Photobiol., B: Biol., 1992, V.14, P.261-262.

39. Kessel D., Garbo G.,Hampton J. The role of lipoproteins in the distribution of Tin etiopurpurin (Sn ET2) in the tumor-bearing rat. //Photochem. Photobiol., 1993, Y.57, P.298-301.

40.Klibanov A.L., Maruyama R., Torchilin V.P.,Huang L. Amphipathic polyethyleneglycols effectively prolong the circulation time of liposomes. //FEBS Letters, 1990, V.268, N.l,P.235-237.

41. Korbelik M. Low density lipoprotein receptor pathway in the delivery of Photofrin : how much is relevant for selective accumulation of the photosensitizer in tumors? Iß. Phorochem. Photobiol., B: Biol., 1992, V.12, P.107-109.

42. Kreuter J. Liposomes and nanoparticles as vehicles for antibiotic. //Infection, 1991, V.19, N.4, P.224-228.

43. Lopez-Berenstein G., Bodey G.P., Frankel L.S.,Mehta K. Treatment of hepatosplenic fungal infections with liposomal amphotericin. //Br. J. Clin. Oncol., 1987, V.5, P.310-317.

44. May hew E., Vaughan L., Panus A., Murray MHenderson B., Lipid-associated methylpheophorrbide-A (hexyl-ester) as a photodynamic agent in tumor-bearing mice. // Photochem. Photobiol., 1993, V.58, P.845-851.

45. Milanesi C. Benzoporphyrin derivatives for photodynamic therapy. //US Patent 5214036, May 25,1993.

46. Milanesi C., Biolo R., Reddi E.,G. Jori. Ultrastructural studies on the mechanism of the photodynamic therapy of tumors. //Photochem. Photobiol., 1987, V.46, N.5, P.675-681.

47.Morgan J., Gray A.G.,Huehns E.R. Specific targeting and toxicity of sulphonated aluminium phthalocyanine photosensitized liposomes directed to cells monoclonal antibody in vitro. //Br. J. Cancer, 1989, V.59, P.366-370.

48. Oku N. Liposomes, in Dunn R. and Ottenbrite R. (eds.) Polymeric drugs and drug delivery systems, 1991, ACS Symposium Series. P. 24-33.

49. Oku N., Namba Y., Okada S. Tumor accumulation of novel RES-avoiding liposomes. //Biochim. Biophys. Acta, 1992, V.1126, P.255-260.

50. Peterson C., Masquelier M., Rudling M., Soderberg K, Vitols S. Lipoproteins, malignancy and anticancer agents, in Shaw

J.M. (ed.) Lipoproteins as Carriers of Pharmacological Agents, 1991, Marcel Dekker, New York, NY. P. 175-200.

51. Reddi E., Lo Castr G., Biolo R.,Jori G. Pharmacokinetic studies with Zinc(II) phthalocyanine in tumor-bearing mice. //Br. J. Cancer, 1987, V.56, P.597-600.

52. Remen P.C.N., Love W.G., Tailor P. W. In vitro interaction of Zinc(II)-phthalocyanine-containing liposomes and plasma lipoproteins. //J. Phorochem. Photobiol., B: Biol., 1994, Y.26, N. 1, P.29-35.

53.RicchelliF., GobboS., JoriG., MorenaG., VinzenoF.,Salet C. Photosensitization of mitochondria by liposome-bound porphyrins. //Photochem. Photobiol., 1993, V.58, P.53-58.

54.Ricchelli F.Jori G. Spectroscopic studies on the intra-liposomal distribution of porphyrins, in Jori G. and Perria C. (eds.) Photodynamic Therapy of Tumors and Other Diseases, 1985, Libreria Progetto, Padova. P. 85-87.

55. Richter A., Waterfield E., Jain A., Canaam B., Allison B., Levy J. Liposomal delivery of a photosensitizer, Benzoporphyrin derivative monoacid ring A (BPD), to tumor tissue in mouse tumor model. //Photochem. Photobiol., 1993, V.57, P. 1000-1006.

56. Segalla A., Milanesi C., Jory G., Capraro H.G., Isele U.,Schieweck K. Cgp 55398, a liposomal Ge(IV) phthalocyanine bearing 2 axially ligated cholesterol moieties

— a new potential agent for photodynamic therapy of tumors. //Br. J. Cancer, 1994, V.69, N.5, P.817-825.

57. Senior J., C. Delgado, Fisher D., Gregoriadis G. Influence of surface hydrophilicity of liposomes on their interaction with plasma protein and clearance from the circulation: studies with poly(ethylene glycol)-coated vesicles. // Biochim. Biophys. Acta, 1991, V.1062, N.l, P.77-82.

58. Shopova M., WohrleD., Stoichkova N., Miler A., Mantareva V., Muller S., Kassabov K.,Georgiev K. Hydrophobic Zn (Il)-naphthalocyanines as photodynamic therapy agents for Lewis lung carcinoma. //J. Phorochem. Photobiol., B: Biol., 1994, V.23, N.l, P.35-42.

59. Smith A. New venture for targeted cancer therapy. //Pharm. Sci. Res. Today, 1998, V.l, N.5, P.184-186.

60. Torchilin VP. Drug targeting. //Eur. J. Pharm. Sci., 2000, V.ll,N.Suppl.2, P.81-91.

61. Trubetskoy VS., Berdichevsky V.R., Efremov E.E., Torchilin VP. On the possibility of the unification of drug targeting systems. Studies with liposome transport to the mixtures of target antigens. //Biochem. Pharmacol., 1987, V.36, N.6, P.839-842.

62. Valenzeno D. Photomodification of biological membranes with emphasis on singlet oxygen mechanisms. // Photochem. Photobiol., 1987, V.46, P.146-150.

63.Versluis A.J., Rensen P.C.N., Kuipers M.E., Love W.G.,Tailor P.W. Interaction between zinc(II)-phtalocyanine-containing liposomes and human low density lipoproteins. //J. Phorochem. Photobiol., B: Biol., 1994, V.23, N.2-3,P.141-148.

64. Wohrle D., Shopova M., Muller S., Mantareva V, Spirov L.,Jankov P. Experimental photodynamic therapy with Zn(II)-naphthalocyanine compounds, in Spinelli P. (ed.) Photodynamic Therapy and Biomedical Lasers, 1992. P. 545-548.

65. Wohrle D., Shopova M., Muller S., Milev A., Mantareva V.,Krastev K. Liposome-delivered Zn(II)-2,3-naphthalocyanines as potential sensitizers for PDT: synthesis, photochemical, pharmacokinetic and phototherapeutic studies. //J. Phorochem. Photobiol., B: Biol, 1993, V.21, N.2-3, P. 155-165.

66. Woodburn K., Chang C., Lee S., Henderson B.,Kessel D. Biodistribution and PDT efficacy of a ketochlorin photosensitizer as a function of the delivery vehicle. // Photochem. Photobiol, 1994, V.60, P.154-159.

67. Zhou C., Milanesi C.,Jori G. An ultrastructural comparative evaluation of tumors photosensitized by porphyrins administrated in aqueous solution, bound to liposomes or to lipoproteins. //Photochem. Photobiol,

1988, V.48, N.487-492.