ИЗУЧЕНИЕ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА STREPTOCOCCUS НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

STRUCTURAL CHANGES OF THE HEPATOCYTES AND KUPFFER CELLS, MAKING AN ACUTE PHASE OF OPISTHORCHIASIS

Sidelnikova A. A.

Summary

In the simulation of opisthorchiasis in rabbits, adult males, 50 metacercarial invasion of Opisthorchis felineus in 1 month and 1 week, histological examination of the liver cells. Servings of meat fish (Dace) larvae fed animals after 1 month and 1 week confirmed well-established invasive detection of trematode eggs using the Kato-Miura, after which animals were taken from experiment. The micro specimens hematoxylin-eosin, examined by light microscopy, morphometry of hepatocytes and macrophages liver - Kupffer cells. The aim of the study was to determine the peculiarities of the structure of hepatocytes and Kupffer cells in the acute phase of opisthorchiasis. For this I measured the cells and their structures, identify differences from the norm in comparison. It is established that hepatocytes can be divided on structural grounds into three groups, the first modified form, the second dual-core cells, the third with multiple structural changes. Compared with the control, they differed a lot size of 1,76 times, a large nucleolus size of 1,33 times, altered tinctorial properties, compared to the norm. Also conducted cross-group comparative analysis. Classic lobe of the liver was observed the absence of many of the Kupffer cells. Only a few Kupffer cells at the edge of the dilated sinusoidal spaces. The dimensions of the nuclei saved Kupffer cells more normal values of 1,18 times. The shape of the sinusoidal spaces modified, extended, with fine oxyphilic collagen fibrils in the gaps. Such changes of the hepatocytes and Kupffer cells we treated as structural changes associated with hypoxia and intoxication caused by acute phase of Opisthorchis felineus invasion. Changes in the sinusoidal spaces of the classical lobules of the liver regarded as the beginning of fibrosis of the liver, but not from the connective tissue of portal tracts, and the space of disse sinusoidal vessels.

УДК:619:579.862.1

ИЗУЧЕНИЕ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА STREPTOCOCCUS НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Тахавиев И.Г. - аспирант, Алимов А.М.- д.в.н., профессор ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Ключевые слова: бактерии, питательные среды, интенсивность роста, стрептококки.

Key words: bacteria, nutrient media, growth intensity, streptococci

Для культивирования микроорганизмов в искусственных условиях in vitro - необходимы особые субстраты — питательные среды разного химического состава, соответствующие требованиям изучаемого вида.

Питательные среды являются основным звеном в системе микробиологических работ, и их качество нередко определяет результаты всего исследования,

которые должны создавать наилучшие (оптимальные) условия для жизнедеятельности культур[5].

В последние годы значительное развитие получают многокомпонентные синтетические среды, содержащие только химически чистые соединения. Достоинством синтетических питательных сред является стандартность и воспроизводимость с высокой степенью точности.

Данные среды наиболее удобны для проведения экспериментальных исследований в области обмена веществ микроорганизмов [3]. Скорость роста микроорганизмов в значительной степени зависит от питательной ценности среды, её доброкачественности.

Возбудители стрептококкозов — микроорганизмы рода S^epte^^us, включающего больше 24 видов, грамположительные круглые или овоидные (ланцетовидные) кокки, спор не образуют. Микроорганизмы этого рода вызывают заболевания животных характеризующиеся разнообразными формами проявления инфекционной патологии. Стрептококки требовательны к питательным средам, так как не могут синтезировать многие аминокислоты [1,2]. Изучение особенностей роста отдельных штаммов микроорганизмов, относящихся к роду Streptococcus на различных питательных средах является актуальным, так как полученные данные могут быть использованы в практической деятельности ветеринарных лабораторий.

Целью работы явилась оценка особенностей роста штамма СЛП из рода Streptococcus на жидких питательных средах различного состава.

Материалы и методы исследований. Изучали особенности роста бактерий, относящихся к роду Streptococcus на различных жидких питательных средах. В работе использовался штамм бактерий СЛП (СЛП - выделен в хозяйстве Липецкой области от поросенка, с явлениями сепсиса). Бактериальную массу для исследований получали на мясо-пеп-тонном агаре с добавлением 0,2% глюкозы и 5% крови. Односуточную культуру, выращенную в стационарных условиях при 37° С, смывали с поверхности агара стерильным физиологическим раствором хлористого натрия. Клетки микроорганизмов отмывали два раза от остатков питательной среды физиологическим раствором путем центрифугирования при 1000 g в течение 15 минут.

Затем исследуемую суспензию культуры вносили на питательные среды различного состава в количестве 10 млн/мл (таблица 1). Оценку интенсивности роста микроорганизмов проводили при помощи фотоэлектрического колориметра КФК 2 (определяли оптическую плотность бактериальной взвеси) через 24 и 48 часов после посева. В качестве контроля использовали стерильные питательные среды аналогичного состава.

Таблица 1 - Состав питательных сред

№ пп Наименование среды Состав

С1 интетическая среда Состоящая из:

Лимонно-кислый натрий

Серно-кислый аммоний

Серно-кислый магний

Цитрат закисьного железа

Лакто-альбумина гидролизат

Глюкоза

Тиамин

Биотин

Рибофлавин

Глицерин

Na2HPO4*3H2O

K2HPO4

Мясо-пептонный бульон с глюкозой 0,02% Мясо-пептонный бульон Глюкоза

Т3иогликолевая среда Глюкоза,

гидролизат казеина,

дрожжевой экстракт,

мясной экстракт,

L-цистин,

Тиогликолят натрия,

Резазурин

С4реда Китта-Тароцци мясопептонный бульон, обогащенный

экстрактивными продуктами печени животных и

содержащего кусочки вываренной печени в

качестве поглотителя свободного кислорода

Состав синтетической питательной среды разработан нами в процессе предыдущих исследований.

Результаты исследований. В ходе работы нами были получены следующие результаты: рост микроорганиз-

мов в жидких питательных средах характеризовался диффузным помутнением. Измерение оптической плотности сред с использованием ФЭК 2 при длине волны 600 нм позволило получить данные, представленные в таблице 2.

Таблица 2- Измерение оптической плотности на ФЭК 2

Питательная Среда Контроль Исходная Оптическая плотность

Через 24 часа Через 48 часов

Синтетическая среда 0,5 3,91 3,65

Мясо-пептонный бульон с глюкозой 0,02% 0,25 0,79 0,7

Тиогликолевая среда 0,5 2,5 2,1

Среда Китта-Тароцци 0,3 0,54 0,51

Полученные данные свидетельствуют о том, что в средах, заселённых культурой микроорганизма из штамма СЛП (опыт) через 24 часа после начала исследования, оптическая плотность значительно выше, чем в аналогичных исходных средах (контроль). При этом наибольшие значения оптической плотности были зарегистрированы во всех опытных образцах спустя 24 часа после посева. Через 48 часов наблюдалось снижение оптической плотности питательных сред, заселённых культурой микроорганизмов. Максимальная интенсивность роста микроорганизмов была зарегистрирована на синтетической питательной среде. Оптическая плотность среды увеличилась относительно контрольных данных в 7,8 раза через 24 часа после посева. Через 48

часов она была выше контрольных результатов в 7,3 раза. Достаточно высокие показатели были получены в результате определения оптической плотности тиогликолевой питательной среды. Через 24 часа после посева её оптическая плотность была выше контрольных значений в 5 раз, а спустя 48 часов - в 4,2 раза. Оптическая плотность бактериальной взвеси в мясопептонном бульоне с глюкозой была выше, чем плотность стерильной среды через 24 часа после посева в 3,16 раза, через 48 часов - в 2,8 раза. Незначительный рост бактериальной культуры был зарегистрирован нами в питательной среде Китта-Тароцци. Оптическая плотность заселённой среды через 24 часа после посева была выше кон-

троля лишь в 1,8 раза, через 48 часов - в свойства стрептококков из штамма СЛП

1,7 раза. Культурально-морфологические показаны в таблице 3.

Таблица 3 - Культурально-морфологические свойства стрептококков из штамма

СЛП

Показатели Наименование питательных сред

Синтетическая Тиогликолевая Мясо- Китта-Тароцци

среда среда пептонный бульон с глюкозой

Рост в питательных средах Помутнение среды Помутнение среды Помутнение среды Незначительное помутнение

Образование индола нет нет нет нет

Выделение нет нет нет нет

сероводорода

Газообразование нет нет нет нет

Окраска по Граму + + + +

Наличие - + - -

капсулы в мазках

отпечатках

Осадок + + + -

В процессе роста бактериальной культуры в питательной среде происходит изменение плотности бактериальной взвеси и, как следствие, изменение оптической плотности жидкой питательной среды. Таким образом, имеет место прямая зависимость между интенсивностью роста микроорганизмов в жидкой питательной среде и её оптической плотностью. Исходя из этого, полученные нами данные свидетельствуют о том, что подходящими для культивирования микроорганизмов из штамма СЛП являются ти-огликолевая среда, синтетическая питательная среда и мясопептонный бульон с глюкозой. В среде Китта-Тароцци изменение оптической плотности среды через 24 часа после посева не превышает 80% относительно контрольных данных, через 48 часов - 70%.

При этом нами было отмечено, что максимальные изменения оптической плотности питательных сред регистрируются спустя 24 часа после посева, за-

тем этот показатель начинает снижаться. Это свидетельствует о том, что наиболее интенсивное деление бактериальных клеток происходит в первые 24 часа после заселения в питательную среду. Затем концентрация микробных тел достигает порогового значения, начинается конкурентная борьба за жизнеобеспечивающие ресурсы среды, что приводит в свою очередь к снижению бактериальной массы, а следовательно, к просветлению питательной среды и снижению её оптической плотности.

Наиболее интенсивно повышалась оптическая плотность в синтетической и тиогликолевой средах, что свидетельствует о наиболее оптимальном их составе для культивирования микроорганизмов рода Streptococcus, относящихся к штамму СЛП.

Достаточно высокие значения интенсивности изменения оптической плотности зарегистрированы нами в мясо-пептонном бульоне с глюкозой.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что более интенсивный рост бактериальной культуры наблюдается в тиогликолевой и синтетической питательных средах. В мясо-пептонном бульоне интенсивность бактериального роста также достаточно высока. В среде Китта-Тароции не наблюдалось значительного увеличения бактериальной массы микроорганизмов из штамма СЛП.

Культурально-морфологические свойства бактерий штамма СЛП на различных питательных средах проявляются одинаково, кроме образования капсулы в тиогликолевой среде, что объясняется наличием в составе среды панкреатического гидролизата казеина неглубокой степени расщепления.

Заключение. Проведённые нами исследования позволили сделать следующие выводы:Максимальная интенсивность роста бактериальной культуры микроорганизмов штамма СЛП из рода Streptococcus наблюдается при использовании тиогликолевой питательной среды, а также синтетической питательной среды. Использование мясо-пептонного бульона с глюкозой также дало положительные результаты, проявляющиеся в интенсивном росте бактериальной куль-

туры. При этом данная среда с экономической точки зрения является самой дешевой. Среда Китта-Тароцци не обеспечивает интенсивного роста микроорганизмов штамма СЛП.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Кисленко, В.Н. Ветеринарная микробиология и иммунология. Часть 2. Иммунология / В.Н. Кисленко, Н.М. Колычев. - М.: КолосС, 2007. - 224 с.

2. Покровский, В.И. Стрептококки и стрептококкозы / Покровский В.И., Брико НИ., Ряпис Л.А. //- М.: ГЭОТАР-Медиа 2006. - 546с.

3. Поляков, М.С. Питательные среды для медицинской микробиологии / М.С. Поляков, В.И. Сухаревич, М.Э. Су-харевич. - С.-П.: ЭЛБИ- СПб, 2002. - 80с.

4. Терехов, В.И. Стрептокок-коз телят и поросят / В.И. Терехов, А.В. Скориков, О.Б. Терехов // Ветеринария Кубани. - 2006. - №6. - С.12-14

5. Федорова, О.В. Питательные среды в производствах медицинских и ветеринарных препаратов / О.В.Федорова, С.А. Понкратова, Р.Т. Ва-леева, И.Р. Исламгулов // Вестник Казанского технологического университета. -2017.-№4.-С.130-133.

ИЗУЧЕНИЕ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА STREPTOCOCCUS НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Тахавиев И.Г., Алимов А.М.

Резюме

В статье отражены оригинальные данные, полученные в ходе изучения роста микроорганизмов, относящихся к штамму СЛП из рода Streptococcus, в различных питательных средах.

Оценка интенсивности роста микроорганизмов проводилась с учётом изменения плотности бактериальной взвеси на разных этапах культивирования. Определены среды, обладающие оптимальным составом для использования при выращивании стрептококков изучаемого штамма. При этом установлено, что синтетическая питательная среда, состав которой разработан авторами, может эффективно применяться при культивировании микроорганизмов относящихся к роду Streptococcus.

STUDYING THE GROWTH OF MICROORGANISMS OF THE GENUS STREPTOCOCCUS ON VARIOUS NUTRIENTS

Takhaviev I.G., Alimov A.M.

Summary

The article reflects the original data obtained during the study of the growth of microorganisms belonging to the strain of SLA from the genus Streptococcus in various nutrient media. An estimate of the growth rate of microorganisms was carried out taking into account changes in the density of bacterial suspension at different stages of cultivation. The media with the optimal composition for use in the growth of streptococci of the strain under study were determined. It was found that a synthetic nutrient medium, the composition of which was developed by the authors, can be effectively used in the cultivation of microorganisms belonging to the genus Streptococcus.

УДК 591.1:636.92

ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТРАНСФЕРАЗ В ТКАНЯХ ТОНКОГО КИШЕЧНИКА У КРОЛИКОВ

*Терентьева М.Г. - к.б.н., доцент, Иванова Н.Н. - к.б.н., ст. преподаватель

*ФГБОУ ВО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия» ФГБОУ ВО Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова

Ключевые слова: ферменты, аланинаминотрансфераза,

аспартатаминотрансфераза, возрастные изменения, тощая кишка, кролики.

Key words: enzymes, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, age-related changes, jejunum, rabbits.

Известно, что функциональная активность различных отделов тонкого кишечника неодинаковая. Кроме этого, она может изменяться в зависимости от возраста, типа питания, условий содержания животных и многих других факторов. Одним из методов определения функционального состояния того или иного органа является оценка активности внутриклеточных ферментов, так как они являются показателями интенсивности обмена веществ, происходящего в его тканях. В научной литературе имеются многочисленные работы по изучению активности таких ферментов. Так, для выявления уровня белкового обмена, связанной с переаминированием аминокислот, рассматривается активность таких ферментов, как аланинаминотранфераза, аспар-татаминотрансфераза, глутамилтрансфе-

раза [2, 4, 5, 8, 11, 12], активности амило-литических процессов - амилаза [1, 3, 6, 10], уровня процессов отщепления фосфорной кислоты от ее органических соединений - фосфатазы [7, 9, 13].

Целью нашей работы было изучение возрастных изменений физиологического состояния среднего отдела тонкого кишечника кроликов - тощей кишки. В качестве одного из показателей, который позволил бы сделать это, мы выбрали определение некоторых параметров уровня белкового обмена в его тканях. Нами была рассмотрена активность ферментов переаминирования - аланинаминотранс-феразы (АлАТ) и аспартатаминотрансфе-разы (АсАТ). Известно, что в тонком кишечнике происходят процессы расщепления и всасывания питательных веществ, перемешивания и продвижения