Новый подход к исследованию тимопоэза при тимомегалии у детей

иммунология № 4, 2014

et al. Study of thymic size and function in children and adolescents with treatment refractory systemic sclerosis eligible for immunoablative therapy. Clin. Immunol. 2009; 133 (3): 295-302.

14. Kayser C., Alberto F.L., da Silva N.P., Andrade L.E. Decreased number of T cells bearing TCR rearrangement excision circles (TREC) in active recent onset systemic lupus erythematosus. Lupus. 2004; 13 (12): 906-11.

15. Muraro P.A., Douek D.C., Packer A., Chung K., Guenaga F.J., Cassiani-Ingoni R. et al. Thymic output generates a new and diverse TCR repertoire after autologous stem cell transplantation in multiple sclerosis patients. J. Exp. Med. 2005; 201 (5): 805-16.

16. Armengol M.P., Sabater L., Fernandez M., Ruiz M., Alsono N., Otero M.J. et. al. Influx of recent thymic emigrants into autoimmune thyroid disease glands in humans. Clin. Exp. Immunol. 2008; 153 (3): 338-50.

17. Elgbratt K., Kurlberg G., Hahn-Zohric M., Hornquist E.H. Rapid migration of thymic emigrants to the colonic mucosa in ulcerative colitis patients. Clin. Exp. Immunol. 2010; 162 (2): 325-36.

Поступила 25.04.14

references

1. Douek D.C., McFarland R.D., Keiser P.H., Gage E.A., Massey J.M., Haynes B.F. et al. Changes in thymic function with age and during the treatment of HIV infection. Nature. 1998; 396: 690-5.

2. Hazenberg M.D., Verschuren M.C., Hamann D., Miedema F., van Dongen J. J. T cell receptor excision circles as markers for recent thymic emigrants: basic aspects, technical pproach, and guidelines for interpretation. J. Mol. Med. 2001; 79 (11): 631-40.

3. Kong F.K., Chen C.L., Six A., Hockett R.D., Cooper M.D. T cell receptor gene deletion circles identify recent thymic emigrants in the peripheral T cell pool. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999; 96 (4): 1536-40.

4. Ribeiro R.M., Perelson A.S. Determining thymic output quantitatively: using models to interpret experimental T-cell receptor excision circle (TREC) data. Immunol. Rev. 2007; 216: 21-34.

5. Hochberg E.P., Chillemi A.C., Wu C.J., Neuberg D., Canning C., Hartman K. et al. Quantitation of T-cell neogenesis in vivo after allogeneic bone marrow transplantation in adults. Blood. 2001; 98: 1116-21.

6. Kilpatrick R.D., Rickabaugh T., Hultin L.E., Hultin P., Hausner M.A., Detels R. et al. Homeostasis of the naive CD4+ T cell compartment during aging. J. Immunol. 2008; 180 (3): 1499-507.

7. Lorenzi A.R., Patterson A.M., Pratt A., Jefferson M., Chapman C.E., Ponchel F., Isaacs J.D. Determination of thymic function directly from peripheral blood: a validated modification to an established method. J. Immunol. Meth. 2008; 339 (2): 185-94.

8. Donetskova A.D., Sharova N.I., Nikonova M.F., Mitin A.N., Lit-vina M.M., Komogorova V.V., Yarilin A.A. Role of thymus in recovery of T-cells population after influence of various damaging agents. Immunologiya. 2013; 34 (6): 309-13 (in Russian).

9. Goronzy J.J., Weyand C.M. Thymic function and peripheral T-cell homeostasis in rheumatoid arthritis. Trends Immunol. 2001; 22 (5): 251-5.

10. Koetz K., Bryl E., Spickschen K., O'Fallon W.M., Goronzy J.J., Weyand C.M. T cell homeostasis in patients with rheumatoid arthritis. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2000; 97 (16): 9203-8.

11. Thewissen M., Linsen L., Somers V., Geusens P., Raus J., Stinissen P. Premature immunosenescence in rheumatoid arthritis and multiple sclerosis patients. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2005; 1051: 255-62.

12. Hug A., Korporal M., Schröder I., Haas J., Glatz K., Storch-Hagenlocher B. et al. Thymic export function and T cell homeo-stasis in patients with relapsing remitting multiple sclerosis. J. Immunol. 2003; 171 (1): 432-7.

13. Reiff A., Krogstad P., Moore S., Shaham B., Parkman R., Kitchen C. et al. Study of thymic size and function in children and adolescents with treatment refractory systemic sclerosis eligible for immunoablative therapy. Clin. Immunol. 2009; 133 (3): 295-302.

14. Kayser C., Alberto F.L., da Silva N.P., Andrade L.E. Decreased number of T cells bearing TCR rearrangement excision circles (TREC) in active recent onset systemic lupus erythematosus. Lupus. 2004; 13 (12): 906-11.

15. Muraro P.A., Douek D.C., Packer A., Chung K., Guenaga F.J., Cassiani-Ingoni R. et al. Thymic output generates a new and diverse TCR repertoire after autologous stem cell transplantation in multiple sclerosis patients. J. Exp. Med. 2005; 201 (5): 805-16.

16. Armengol M.P., Sabater L., Fernandez M., Ruiz M., Alsono N., otero M.J. et.al. Influx of recent thymic emigrants into autoimmune thyroid disease glands in humans. Clin. Exp. Immunol. 2008; 153 (3): 338-50.

17. Elgbratt K., Kurlberg G., Hahn-Zohric M., Hörnquist E.H. Rapid migration of thymic emigrants to the colonic mucosa in ulcerative colitis patients. Clin. Exp. Immunol. 2010; 162 (2): 325-36.

Received 25.04.14

О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 616.438-007.61-053.2-07

Донецкова А.Д.1, Никонова М.Ф.1, Ваганов П.Д.2, Смыслова З.В.3, Кузьменко л.г.3, Пащенков М.В.1, яновская Э.Ю.2, Ярилин А.А.1

НОВЫЙ ПОДХОД К ИССЛЕДОВАНИЮ ТИМОПОЭЗА ПРИ ТИМОМЕГАЛИИ У ДЕТЕЙ

1ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, 115478, г Москва; 2ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 117997, г. Москва; 3Российский университет дружбы народов, 117198, г. Москва

В статье представлены свидетельства ослабления эмиграции Т-клеток из тимуса в периферический отдел иммунной системы у детей с тимомегалией, т. е. ослабления у них процессов Т-лимфопоэза в тимусе. Оценку эмиграции Т-клеток из тимуса проводили двумя методами: полимеразной цепной реакции в реальном времени (исследовали уровень Т-рецепторных эксцизионных колец (T-cell receptor excision circles - TREC) и проточной цитофлюориме-трии (исследовали содержание CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток). Показано, что при тимомегалии у детей до 10 лет статистически значимо снижено количество копий TREC в пересчете на 1000 лимфоцитов. Уровень TREC у детей с тимомегалией до 2-летнего возраста соответствует нормальным показателям, свойственным примерно 8-летним детям, у которых функциональная активность тимуса снижена по сравнению с таковой у детей более раннего возраста. Параллельно со снижением уровня TREC с возрастом у детей снижается процентное и абсолютное содержание в крови CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток. Однако снижение содержания Т-клеток, недавно эмигрировавших из тимуса (Recent thymic emigrants - RTE), с возрастом по фенотипическому маркеру CD31 не столь интенсивно, как снижение RTE по уровню TREC. Результаты оценки содержания CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток в крови у детей с тимомегалией в возрасте от 2 до 10 лет и детей без тимомегалии той же возрастной группы показали, что при тимомегалии количество клеток этой субпопуляции не изменяется.

Ключевые слова: недавние эмигранты из тимуса; Т-рецепторные эксцизионные кольца; CD31; тимомегалия.

DonetskovaA.D.1, NikonovaM.F.1, VaganovP.D.2, Smyslova Z.V.3, KuzmenkoL.G.3, PashenkovM.V.1, YanovskayaE.Yu.2, Yarilin AAT]

NEW WAY TO THYMOPOIESIS RESEARCH IN CHILDREN WITH THYMOMEGALY

'National Research Center «Institute of Immunology» FMBA of Russia, 115478, Moscow, Russian Federation; 2Pirogov Russian National Research Medical University, 117997, Moscow, Russian Federation; 'Peoples' Friendship University of Russia, 117198, Moscow, Russian Federation

The evidence of weakening of T cells emigration from thymus to peripheral immune system in children with thymomegaly is presented. It means the thymopoiesis is reduced in children with thymomegaly. The thymic emigration was investigated by two methods: real time PCR (the TREC level was measured) and flow cytometry (the number of CD3+CD4+CD45RA+CD31 + cells was measured). It was shown that the number of TREC copies per 1000 lymphocytes is significantly decreased in children with thymomegaly till 10 years. The TREC level in children with thymomegaly till 2 years approximately fits to the normal level of 8 years old children at which functional thymic activity is reduced in comparison with smaller children. In parallel with TREC level decrease with age the percentage and absolute content of CD3+CD4+CD45RA+CD31 + cells in blood is also decreased. However the TREC reduce is more intensive than CD3+CD4+CD45RA+CD31 + cells number decrease. The investigation of CD3+CD4+CD45RA+CD31 + cells number in blood of 2-10 years children with thymomegaly and without it showed that the number of cells of this subpopulation in thymomegaly is not changed.

Key words: recent thymic emigrants; T-cell receptor excision circles; CD31; thymomegaly.

Увеличение тимуса (тимомегалия) - часто встречающееся состояние у детей раннего возраста [1-3]. Однако до сих пор отсутствует объяснение биологической сущности и клинической значимости данного явления. Термин «тимомегалия» принят у морфологов и обозначает увеличение объема и массы тимуса выше предельных возрастных значений с сохранением нормальной гистоархитектоники органа [4, 5]. У клиницистов нет единого термина для обозначения увеличенной вилочковой железы; не установлено, является ли данный феномен вариантом нормы или патологии [1, 3, 6, 7].

Поскольку вероятна связь увеличения размера тимуса с изменением его функционирования, целью настоящей работы стала оценка тимопоэза при тимомегалии посредством показателей, характеризующих эмиграцию Т-клеток из тимуса. Ранее показано, что при тимомегалии у детей наблюдается Т-лимфопения с преимущественным снижением уровня CD4+-клеток [1, 3, 6, 8]. Таким образом, несмотря на увеличение количества тимоцитов при тимомегалии, наблюдается снижение содержания Т-лимфоцитов в периферической крови. Уменьшение количества Т-клеток на периферии может быть результатом снижения их прироста, обусловленного притоком Т-клеток из тимуса и их пролиферацией на периферии, или убыли клеток в связи с их гибелью. Ни спонтанная пролиферация, ни спонтанный апоптоз Т-клеток у детей с увеличением тимуса не изменены [8]. Поэтому можно предположить, что при тимомегалии ослаблена эмиграции Т-лимфоцитов из тимуса, роль которой в становлении популяции Т-лимфоцитов у детей достаточно существенна.

В настоящее время существуют два подхода к определению содержания Т-клеток - недавних эмигрантов из тимуса (Recent thymic emigrants - RTE). В их основу положено выявление признаков, связанных с уникальными событиями, которые происходят в период развития клеток в тимусе. В одном из подходов таким событием является перестройка К-генов Т-клеточного рецептора (TCR), в другом - экспрессия определенных молекулярных маркеров [9-14].

Оценка функционального состояния тимуса по уровню кольцевидных структур, которые вырезаются из геномной ДНК при реаранжировке генов Т-клеточного рецептора -TREC (T-cell receptor excision circles), основана на том, что вырезанное в процессе перестройки генов кольцо не реплицируется и при делении Т-клеток остается только в одной из дочерних клеток [9, 10]. При последующих делениях количество TREc на общее количество клеток уменьшается. В связи с этим высокое содержание TREc свойственно лишь

Для корреспонденции: Донецкова Альмира Дмитриевна, e-mail: almira_donetskova@yahoo.com

For correspondence: Donetskova Almira Dmitrievna, e-mail: almira_donetskova@yahoo.com

Т-лимфоцитам, недавно эмигрировавшим из тимуса, в последующем в связи с пролиферацией Т-клеток происходит «разбавление» TREC. Основной недостаток метода определения содержания RTE по уровню TREC состоит в невозможности его использования при анализе индивидуальных Т-клеток.

Этого недостатка лишен подход определния уровня RTE по экспрессии специфических мембранных маркеров. Такой подход мог бы быть оптимальным в связи с его простотой, возможностью анализа индивидуальных клеток и отсутствием необходимости генетических манипуляций, однако отсутствие однозначной связи используемых маркеров с RTE ограничивает область его применения. У человека более или менее надежные маркеры RTE обнаружены лишь в отдельных субпопуляциях Т-лимфоцитов: CD31 на CD4+-клетках, CD103 на CD8+-клетках [12-15].

В нашей работе мы попытались оценить содержание RTE по уровню TREC методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени и количеству CD4+-клеток, экс-прессирующих молекулу CD31, методом проточной цито-флюориметрии.

Материалы и методы

Уровень TREC определяли у 48 детей с тимомегалией (29 мальчиков и 19 девочек) в возрасте от 1,5 мес до 18 лет. Наибольшее количество детей (n = 42) с тимомегалией было в возрасте до 5 лет. Больные находились на амбулаторном лечении в Многопрофильном медицинском холдинге "СМ-Клиника" и стационарном лечении в Морозовской детской клинической больнице. У части детей до 2 лет (n = 23) диагностирован острый простой/обструктивный бронхит в стадии разгара, материал для исследования был взят при поступлении в стационар до начала лечения. Остальные пациенты были из группы часто болеющих детей, состояние которых на данный момент признано клинически благополучным. Группу сравнения составили 53 условно-здоровых ребенка (28 мальчиков и 25 девочек) без тимомегалии.

Из периферической крови обследованных детей выделяли мононуклеары путем центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина (плотность 1,077 г/мл) (Sigma, США).

Из 1 • 106 мононуклеаров выделяли ДНК с использованием набора «Проба НК» («ДНК-Технология»). Метод основан на лизисе образцов в 4 М растворе гуанидинтиоцианата, осаждении нуклеиновых кислот изопропанолом с отмывками этанолом и ацетоном, подсушиванием и растворением в специальном буфере. Объем полученной ДНК составил 25 мкл. Концентрацию ДНК определяли спектрофотометрически на спектрофотометре DU 730 (Beckman Coulter), соотношение А260/А280 составляло 1,6-2. Выделенную ДНК хранили при -70°С.

ПЦР ставили в объеме 25 мкл на приборе «7300 Applied Biosystems Real-time PCR System», использовали набор TaqMan Univrsal PCR Master Mix Reagents Kit (Applied

90-1 80706050403020-ю-о-

Тимомегалия Здоровые дети

До 2

2-10

11 -18

Рис. 1. Возрастные различия уровня (в копиях на 1000 лимфоцитов) TREC у здоровых детей и детей с тимомегалией. По оси абсцисс - возраст (в годах); * -p < 0,05.

Biosystems). Уровень TREC определяли с помощью следующих праймеров: прямой 5'-CGTGAGAACGGTGAATGAAGA GCAGAC A-3', обратный 5'-CATCCCTTTCAACCATGC TGACACCTC T-3', зонд 5'-FAM-TTTTTGTAAAGGTGC CCACTCCTGTGCACGGTGA-MGB-3' («Синтол») [16]. Программа амплификации: 1 цикл - 50°С в течение 2 мин, 95°С в течение 10 мин, 50 циклов - 94°С в течение 30 с, 60°С в течение 30 с.

Расчет количества копий TREC осуществляли, используя стандартную кривую, построенную по разведениям плазми-ды с известной концентрацией ДНК ТRЕС. Плазмида получена путем клонирования ДНК TREC тимоцитов человека в вектор pJet1.2/Blunt (Fermentas). Результаты представлены количеством копий TREC на 1000 лимфоцитов.

Количество CD3+CD4+СD45RA+-клеток определяли у 8 детей с тимомегалией и 10 детей с нормальными размером тимуса.

Экспрессию поверхностных молекул оценивали методом проточной цитофлюориметрии с использованием моно-клональных антител (АТ), меченных флюорохромами: АТ к CD3, меченных FITC («Сорбент»), CD4 РЕ, CD31 PE-Cy7, CD45RA и CD45R0 APC (eBioscience). Клетки отмывали, инкубировали с мечеными моноклональными АТ в течение 30 мин при 4°С, дважды отмывали и фиксировали 1% парафор-мальдегидом. Проточную цитофлуориметрию проводили на лазерном проточном цитофлюориметре BD FACSCanto™ II (Becton Dickinson, США). Данные анализировали с помощью программного обеспечения BD FACSDiva.

Статистическую обработку данных проводили методами непараметрического анализа. Исследованные количествен-

Таблица 1

содержание TREC в лимфоцитах периферической крови у детей с тимомегалией в сравнении с таковым у детей без увеличения размера тимуса

Возраст, годы Дети без тимомегалии Дети с тимомегалией

n TREC, копии на 1000 n TREC, копии на 1000

лимфоцитов лимфоцитов

До 2 10 73,34

2-10 36 16,37

11-18 17 5,02

Примечание. Здесь и в табл. 2: * казателями в контрольной группе.

p < 0,05 в сравнении с по-

ные показатели представлены в виде Ме (LQ-UQ), где Ме - медиана, LQ - нижний квартиль, UQ - верхний. Для сравнения двух независимых выборок по количественным признакам использовали и-критерий Манна-Уитни. Различие показателей в группах полагали статистически значимым при р < 0,05. Для выявления взаимосвязи переменных проводили расчет коэффициента ранговой корреляции по Спирмену.

результаты и обсуждение

Общеизвестно, что функция тимуса снижается с возрастом. Это нашло отражение и в данных определения содержания RTE по уровню ТККЕС в клетках периферической крови [9]. Поэтому нормативы содержания ТККЕС в лимфоцитах периферической крови рассчитывали отдельно для возрастных групп до 2, 2-10 и 11-18 лет. При сравнении содержания ТКЕС у мальчиков и девочек в одинаковых возрастных группах не выявили тендерных различий по уровню ТККЕС (р > 0,05). Также не установили статистически значимых различий в содержании ТККЕС у детей с тимомегалией в период разгара острого заболевания (23 ребенка до 2 лет) и детей подобного возраста в период клинического благополучия у (п = 7) (р > 0,05). Этих детей объединили в одну группу детей с тимомегалией до 2 лет.

Результаты оценки содержания ТККЕС в лимфоцитах крови у детей с тимомегалией до 2 лет и детей без тимомегалии той же возрастной группы показали, что при тимомегалии количество копий ТККЕС в пересчете на 1000 лимфоцитов снижено в 2,5 раза - 29,6 (18,1-41) копии против 73,3 (54-83,8) копии в контроле (табл. 1). Наблюдаемые различия статистически значимы (р = 0,001). При сопоставлении количества копий ТККЕС у детей до 2 лет с тимомегалией с показателями возрастной нормы (рис. 1) оказалось, что они соответствуют нормативным, свойственным примерно 8-летним детям, у которых функциональная активность тимуса снижена по

Рис. 2. Цитофлюориметрическое определение количества клеток, содержащих молекулу СD31, на примере здорового ребенка 2 лет.

Таблица 2

Экспрессия cD31 на наивных CD3+CD4+CD45RA+ Т-клетках у детей с тимомегалией и детей без увеличения размера тимуса

Возраст, Дети без тимомегалии Дети с тимомегалией

годы n % абс., • 109/л n % абс., -109/л

До 2 Н. д. Н. д. Н. д. 4 63,8

2-10 4 54,8

11-18 6 31,2 (29,9-52,9) 0,25 (0,16-0,35) Н. д. Н.д. Н. д.

Примечание. Н. д. - нет данных.

сравнению с таковой у детей более раннего возраста. В дальнейшем (после 2 лет) разница в уровне TREC у детей с ти-момегалией в сравнении с аналогичным показателем у лиц без увеличения тимуса менее выражена (в 1,8 раза в возрасте 2-10 лет), однако статистически значима (р = 0,02). У детей с тимомегалией старше 11 лет уровень TREc снижен, однако незначимо (p = 0,11), что, возможно, связано с небольшой выборкой детей с тимомегалией этого возраста (тимомегалия у детей подросткового возраста - достаточно редкое явление).

Содержание RTE по экспрессии мембранной молекулы CD31 в субпопуляции CD4+-Т-клеток определяли на клетках крови в небольшой группе детей: у 10 здоровых детей в возрасте от 2 до 18 лет и у 8 детей с тимомегалией в возрасте от 1,5 мес до 10 лет.

На рис. 2 представлены данные цитофлюориметрическо-го определения количества клеток, содержащих молекулу CD31, на примере здорового ребенка 2 лет.

Как следует из табл. 2, уровень CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток в крови (и процентное, и абсолютное содержание) снижается с возрастом. Снижение абсолютного количества CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток в крови коррелирует со снижением уровня TREC (коэффициент корреляции по Спир-мену 0,82,р < 0,05). Однако снижение содержания RTE с возрастом по фенотипическому маркеру CD31 не столь интенсивно, как снижение концентрации RTE по уровню TREc.

При оценке содержания CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток в крови детей с тимомегалией в возрасте от 2 до 10 лет и детей без тимомегалии той же возрастной группы установили, что при тимомегалии количество клеток этой субпопуляции не изменяется, р > 0,05 (в то время как количество копий TREC в пересчете на 1000 лимфоцитов у детей с тимомегалией этой группы статистически значимо снижено;р < 0,05).

На рис. 3 этот материал представлен в графической форме: уровень RTE (CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток, TREC) при тимомегалии в сравнении с таковым у детей без тимо-мегалии.

Таким образом, несмотря на то что цитофлюори-

25 и

* т

Т -г и

ш и

1

] Группа сравнения

Тимомегалия

Рис 3. Содержание CD3+CD4+CD45RA+CD31+-клеток (1; • 108/л) и ТИЕС (2; в копиях на 1000 лимфоцитов) у детей с тимомегалией в возрасте 2-10 лет в сравнении с аналогичными показателями у здоровых детей.

* - p = 0,04.

метрический анализ (на примере определения уровня CD3+CD4+CD45RA+CD31+-raeTOK) применим для оценки содержания в популяции Т-лимфоцитов клеток, недавно эмигрировавших из тимуса, отсутствие однозначной связи используемого маркера с RTE ограничивает область применения данного метода [11, 17]. Ограничение применения ци-тофлюориметрии для анализа содержания RTE также связано с необходимостью раздельного исследования фракций RTE в отдельных субпопуляциях Т-лимфоцитов (CD4+ или CD8+). На данный момент определение уровня TREC с помощью ПЦР можно считать наиболее адекватным и надежным методом исследования содержания RTE и оценки Т-лимфопоэза в тимусе.

Ранее сотрудники нашей лаборатории продемонстрировали, что среди иммунологических отклонений, зарегистрированных у детей раннего возраста с тимомегалией, наиболее постоянно проявляется Т-лимфопения с преобладающим снижением содержания CD4+-лимфоцитов, уровня пролиферативного ответа Т-клеток на митоген [8]. Кроме того, в предыдущих работах мы выявили снижение содержания естественных регуляторных CD4+CD25ы-Т-клeток и их основного внутриклеточного маркера FOXP3, а также усиление экспрессии генов супрессорных цитокинов трансформирующего фактора роста ß, интерлейкина (IL)-10 и IL-6 при тимомегалии у детей [18]. В этих работах мы высказали предположение о том, что снижение содержания T-лимфоцитов и их субпопуляций в крови у детей раннего возраста с тимо-мегалией обусловлено общим ослаблением продуктивного Т-лимфопоэза. В настоящей работе мы нашли подтверждение этому факту: нами впервые получены прямые свидетельства ослабления эмиграции Т-клеток из тимуса в периферический отдел иммунной системы у детей с тимомегалией, т. е. ослабления у них процессов Т-лимфопоэза в тимусе. Ослабление эмиграции Т-лимфоцитов при тимомегалии может стать причиной усиления гомеостатической пролиферации, которая способна исказить структуру популяции периферических Т-лимфоцитов и привести к нежелательным последствиям (например, таким, как аутоиммунная патология) в отдаленные сроки.

литература

1. Ваганов П.Д., Мартынова М.И., Арион В.Я. Клинико-иммунологическая характеристика детей с синдромом увеличенной вилочковой железы и их коррекция. Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2001; 46 (3): 59-60.

2. Кузьменко Л.Г., Зайратьянц О.В. Гетерогенность и полиморфизм синдрома увеличенной вилочкой железы у детей. Педиатрия. 1991; 10: 16-21.

3. Тюрин Н.А., Арион В.Я., Пушко Л.В., Кузьменко Л.Г., Бай-дун Л.В., Журавлева И.А. Т- и В-компоненты иммунной системы при острых бронхолегочных заболеваниях у детей с тимомегалией и без нее. Педиатрия. 1991; 6: 39-42.

4. Заратьянц О.В. Синдром увеличенного тимуса (тимомегалия у детей). В кн.: Патология тимуса у детей. СПб; 1996: 128-61.

5. Зайратьянц О.В. Гиперплазия тимуса: классификация, проблемы пато- и морфогенеза, важность для патологии человека. Архив патологии. 1991; 53 (10): 3-12.

6. Зайратьянц О.В., Серов В.В., Кузьменко Л.Г. Новые данные

о тимомегалии как синдроме врожденного (первичного) иммунодефицита. Архив патологии. 1990; 52 (6): 33-9.

7. Guseinov S.H., Alijev M.I., Kurbanov Т.Н. New data on thymus pathophysiology in children. Thymus. 1990; 16: 55-8.

8. Никонова М.Ф., Данько И.М., Ваганов П.Д., Ярилин А.А. Особенности популяции Т-лимфоцитов у больных с тимомегалией. Иммунология. 2008; 29 (4): 201-6.

9. Douek D.C., McFarland R.D., Keiser P.H., Gage E.A., Massey J.M., Haynes B.F. et al. Changes in thymic function with age and during the treatment of HIV infection. Nature. 1998; 396: 690-5.

10. Livak F., Schatz. Т-cell receptor alpha locus V(D)J recombination by-products are abundant in thymocytes and mature Т cells. Mol. Cell. Biol. 1996; 16: 609-18.

11. Kimming S., Przyylski G.K., Schmidt C.A., Laurisch K., Möwes B., Radbruch A. et al. Two subsets of naive Т helper cells with distinct T cell receptor excision circle content in human adult peripheral blood. J. Exp. Med. 2002; 195 (6): 789-94.

12. Kohler S., Thiel A. Life after the thymus: CD31+ and CD31- human naive CD4+ T-cell subsets. Blood. 2009; 113: 769-74.

13. McFarland R.D., Douek D.C., Koup R.A., Picker L.J. Identification of a human recent thymic emigrant phenotype. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2000; 97: 4215-20.

14. Ярилин А.А., Донецкова А.Д. Т-клетки - недавние эмигранты из тимуса. Иммунология. 2012; 33 (6): 326-34.

15. Demeure C.E., Byun D.G., Yang L.P., Vezzio N., Delespesse G. CD31 (PECAM-1) is a differentiation antigen lost during human CD4 T-cell maturation into Th1 or Th2 effector cells. Immunology. 1996; 88 (1): 110-5.

16. Hochberg E.P., Chillemi A.C., Wu C.J., Neuberg D. , Canning C., Hartman K. et al. Quantitation of T-cell neogenesis in vivo after allogeneic bone marrow transplantation in adults. Blood. 2001; 98: 1116-21.

17. Ribeiro R.M., Perelson A.S. Determining thymic output quantitatively: using models to interpret experimental T-cell receptor excision circle (TREC) data. Immunol. Rev. 2007; 216: 21-34.

18. Донецкова А.Д., Никонова М.Ф., Данько И.М., Ваганов П.Д., Бурменская О.В., Трофимов Д.Ю. и др. Регуляторные Т-лимфоциты у детей с тимомегалией. Российский иммунологический журнал. 2008; 2 (4): 427-32.

Поступила 25.04.14

references

1. Vaganov P.D., Martynova M.I., Arion V.Y. The clinicoimmuno-logical characteristics of children with thymomegaly syndrome and their correction. Rossiyskiy vestnik perinatologii i pediatrii. 2001; 46

2. Kuz'menko L.G., Zairat'yants O.V. Heterogeneity and polymorphism of thymomegaly syndrome in children. Pediatriya. 1991; 10: 16-21.

3. Tyurin N.A., Arion V. Ya., Pushko L.V., Kuz'menko L.G., Baydun L.V., Zhuravleva I.A. T- and V-components of immune system at acute bronchopulmonary disease in children with and without thymomegaly. Pediatriya. 1991; 6: 39-42.

4. Zairat'yants O.V. Thymomegaly in children. In: Thymus pathology in children. [Patologiya timusa u detey]. St. Peterburg; 1996: l28—61.

5. Zairat'yants O.V. Thymus hyperplasia: classification, problems of pato- and morphogenesis, importance for human pathology. Arkhiv patologii. 1991; 53

6. Zairat'yants O.V., Serov V.V., Kuz'menko L.G. New data on thy-momegaly as syndrome of primary immunodeficiency. Arkhiv patologii. 1990; 52

7. Guseinov S.H., Alijev M.I., Kurbanov T.H. New data on thymus pathophysiology in children. Thymus. 1990; 16: 55—8.

8. Nikonova M.F., Dan'ko I.M., Vaganov P.D., Yarilin A.A. The characteristics of T-lymphocytes in patients with thymomegaly. Immunologiya. 2008; 29

9. Douek D.C., McFarland R.D., Keiser P.H., Gage E.A., Massey J.M., Haynes B.F. et al. Changes in thymic function with age and during the treatment of HIV infection. Nature. 1998; 396: 690—5.

10. Livak F., Schatz. T-cell receptor alpha locus V(D)J recombination by-products are abundant in thymocytes and mature T cells. Mol. Cell. Biol. 1996; 16: 609—18.

11. Kimming S., Przyylski G.K., Schmidt C.A., Laurisch K., Möwes B., Radbruch A. et al. Two subsets of naive T helper cells with distinct T cell receptor excision circle content in human adult peripheral blood. J. Exp. Med. 2002; 195 (6): 789—94.

12. Kohler S., Thiel A. Life after the thymus: CD31+ and CD31" human naive CD4+ T-cell subsets. Blood. 2009; 113: 769—74.

13. McFarland R.D., Douek D.C., Koup R.A., Picker L.J. Identification of a human recent thymic emigrant phenotype. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2000; 97: 4215—20.

14. Yarilin A.A., Donetskova A.D. T cells the recent thymic emigrants. Immunologiya. 2012; 33

15. Demeure C.E., Byun D.G., Yang L.P., Vezzio N., Delespesse G. CD31 (PECAM-1) is a differentiation antigen lost during human cD4 T-cell maturation into Th1 or Th2 effector cells. Immunology. 1996; 88 (1): 110—5.

16. Hochberg E.P., Chillemi A.C., Wu C.J., Neuberg D. , Canning C., Hartman K. et al. Quantitation of T-cell neogenesis in vivo after allogeneic bone marrow transplantation in adults. Blood. 2001; 98: 1116—21.

17. Ribeiro R.M., Perelson A.S. Determining thymic output quantitatively: using models to interpret experimental T-cell receptor excision circle (TREC) data. Immunol. Rev. 2007; 216: 21—34.

18. Donetskova A.D., Nikonova M.F., Dan'ko I.M., Vaganov P.D., Burmenskaya O.V., Trofimov D.Yu. et al. Regulatory T cells in children with thymomegaly. Rossiyskiy immunologicheskiy zhur-nal. 2008; 2

Received 25.04.14