СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ДИСКООРДИНАЦИИ РОДОВОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ
METHOD FOR PREDICTION OF DYSTHYROIDISM

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, предназначено для прогнозирования патологии в родах, в частности дискоординации родовой деятельности (дистоции шейки матки).
Частота аномалий родовой деятельности в настоящее время не имеет тенденции к снижению и по данным разных авторов (Савицкий А.Г., 2008; Радзинский В.Е., 2011; Савельева Г.М. и соавт., 2011) составляет от 7 до 33% по отношению ко всем родам. Важность проблемы определяется не только высокой частотой возникновения данной патологии родов, но и многообразием ее неблагоприятных влияний на организм матери и плода. По-прежнему, в структуре аномалий родовой деятельности преобладает первичная слабость родовой деятельности, наблюдающаяся у 8-10% рожениц (Сидорова И.С., 2006; Абрамченко В.В., 2007; Савицкий А.Г., 2008; Радзинский Е.В., 2011). Этот процент, очевидно, не отражает реальную картину, так как около 65% всех родов в настоящее время заканчиваются применением окситоцина (по данным ВОЗ), и это только те случаи, которые были документально подтверждены и вошли в статистику.
Дискоординация родовой деятельности по данным литературных источников встречается в 1-3% случаев (Сидорова И.С., 2006; Абрамченко В.В., 2007; Айламазян Э.К., 2008; Савицкий А.Г., 2008; Радзинский Е.В., 2011). По данным иностранных авторов частота дистоции шейки матки в структуре причин оперативных родов составляет от 8 до 30% (Shields S.G. et al., 2007; Neal J.L. et al., 2010).
Клиническая динамика дискоординации родовой деятельности отражена в классификации И.С. Сидоровой (2000, 2006). Согласно этой классификации следует различать по тяжести:
1. Дискоординацию родовой деятельности легкой степени - «Дистоция шейки матки».
2. Дискоординацию родовой деятельности средней степени -  «Сегментарная дистоция матки».
3. Дискоординацию родовой деятельности тяжелой степени - «Тотальная дистоция». Особый интерес в структуре дискоординации родовой деятельности вызывает дистоция шейки матки.
По определению, данному И.С. Сидоровой (2006), под дистоцией шейки матки надо понимать функциональную патологию, вызванную некоординированными сокращениями и недостаточным расслаблением матки и, как следствие, нарушением крово- и лимфообращения области внутреннего зева.
В структуре причин экстренного оперативного родоразрешения дистоция шейки матки занимает более 50% (Shields S.G. Dystocia in nulliparous women / S.G. Shields, S.D. Ratcliffe, P. Fontaine, L. Leeman / Am. Fam. Physician. - 2007. - Vol. 75, № 11. - P.1671-1678).
С целью терапии дискоординации родовой деятельности необходима своевременная диагностика данной патологии. Вопросам прогнозирования аномалий родовой деятельности, в том числе ее дискоординации, отечественными и зарубежными исследователями уделяется большое значение.
Описан способ прогнозирования дискоординации родовой деятельности, АС №16483446 (Бюл. 1991, №18, стр.17). Сущность метода состоит в том, что в крови шейки матки определяют активность аденозиндезаминазы и при ее повышении относительно нормы прогнозируют дискоординацию.
К недостаткам данного способа следует отнести:
Прогнозирование дискоординации родовой деятельности осуществляется в период родов, что значительно сужает по времени возможность проведения лечебных мероприятий.
Описаны методы диагностики аномалий родовой деятельности с помощью гистерографии: наружной и внутренней (В.В. Абрамченко.  Активное ведение родов // Специальная литература, СПб., 1999, 667 с.). Общим недостатком названных методов является то, что они диагностируют аномалию родовой деятельности на этапах ее манифестации. При этом к недостаткам внутренней гистерографии следует отнести высокий риск развития осложнений со стороны матери и плода (внутриматочная инфекция, острая асфиксия плода, отслойка нормально расположенной плаценты, а также необходимость в интерпретации результатов с привлечением сложных, громоздких программ при помощи ЭВМ).
Известен способ прогнозирования дискоординации родовой деятельности у беременных группы риска (патент РФ №2235499, 10.09.2004), по регистрации колебания частоты сердечных сокращений в низких частотах (LF), и в высоких частотах (HF) и по их значениям осуществляют прогноз данной патологии. Этот метод разработан только для беременных группы риска, что ограничивает его использование в других условиях.
Известен способ прогнозирования нарушения родовой деятельности (патент РФ №2268465, 20.01.2006) по микроскопии полученных образцов сыворотки, высушенной в форме капли на предметном стекле при температуре 18-25°C в течение 18-24 часов. При наличии крайне низкого уровня структуропостроения и отсутствии радиально-симметричного рисунка фации, прогнозируют нарушение родовой деятельности, требующее оперативного завершения родов. Условием реализации разработанного способа прогнозирования является начало выполнения его за 3-5 дней до предполагаемых родов. Причем в случае развития за этот период преждевременных родов использовать его нельзя. К другим недостаткам данного способа следует отнести то, что им невозможно прогнозировать тип нарушения родовой деятельности.
Известен способ прогнозирования аномалий родовой деятельности (патент РФ №2296993, 10.04.2007), заключающийся в определении осморезистентности эритроцитов в присутствии адреноблокатора-1 (1-изопропиламино)-3(1-нафталенил-окси)-2-пропанола гидрохлорида, и при определенных ее величинах прогнозируют аномалии родовой деятельности в прелиминарном или I периоде родов. Недостатком метода, несомненно, является то, что данные, по которым можно прогнозировать аномалии родовой деятельности, получены в прелиминарном или I периоде родов, а это сокращает возможность своевременного назначения терапии. Кроме того, данным методом нельзя дифференцировано прогнозировать слабость родовых сил или их дискоординацию.
Доказанным является участие субстанции Р в подготовке и инициации родовой деятельности.
Описано повышение уровня субстанции Р в амниотической жидкости, что является маркером нарушений в плацентарной системе, развитии дискоординации родовой деятельности и диктует рассмотрение вопроса об оперативном родоразрешении (Михельсон А.А. Роль биологически активных веществ в подготовке и инициации родов: автореф. дис.… канд. мед. наук. / А.А. Михельсон. - Ростов н/Д., 2009. - 22 с.).
Описан прогноз характера родовой деятельности на основании изучения структурно-оптических свойств сыворотки крови в конце беременности (Синчихин С.П. Прогнозирование характера родовой деятельности с помощью оценки структурно-оптических свойств сыворотки крови беременной / С.П. Синчихин, В.Ф. Коколина, А.К. Аюпова // Рос. вестн. акуш. - гин. - 2005. - №4. - С.3-6).
Метод прогнозирования и диагностики патологических состояний, основанный на получении информации на уровне молекулярных нарушений при фазовом переходе биологической жидкости в твердое состояние, был предложен и разработан С.Н. Шатохиной (Шатохина С.Н. Диагностическое значение кристаллических структур биологических жидкостей в клинике внутренних болезней: автореф. дис.… д-ра мед. наук / С.Н. Шатохина. - М., 1995. - 40 с.) и В.Н. Шабалиным (Шабалин В.Н. Морфология биологических жидкостей человека / В.Н. Шабалин, С.Н. Шатохина. - М.: Хризостом, 2001. - 304 с.). Согласно этим исследованиям имеется определенная связь между структурной организацией сыворотки крови беременной и предстоящим характером родовой деятельности, что позволяет прогнозировать исход родов. Данный метод сложен, для его осуществления необходимо специализированная аппаратура.
1
1
М.Г. Некрасова (2011)в своих исследованиях установила важное участие цитокинов и факторов роста (ФНО-α, ИЛ-1β, ТФР-β), а также вазоактивных веществ (оксида азота, NO-синтазы) и релаксина в процессах регуляции сократительной деятельности матки. Для развития и поддержания физиологической родовой деятельности необходим определенный уровень и соотношение этих веществ. Так, при коэффициенте отношения ТФР-β/метаболиты оксида азота накануне срочных родов, равном 5,84 и выше, следует прогнозировать развитие дистоции шейки матки.
Прототипом заявляемого изобретения нами выбран способ прогнозирования дискоординации родовой деятельности путем анализа биологической жидкости, отличающийся тем, что при доношенной беременности в начале I периода родов или при дородовом излитии околоплодных вод в амниотической жидкости иммуноферментным методом определяют содержание субстанции Р и, при ее величине, равной 2,9 нг/мл и выше, прогнозируют дискоординацию родовой деятельности.
Недостатком данного метода является необходимость исследования амниотической жидкости, что является инвазивным исследованием, имеющим много противопоказаний.
Таким образом, до сих пор нет надежных способов прогнозирования аномалий родовой деятельности. В связи с этим, важным является поиск информативных и доступных прогностических критериев, основанных на знании физиологических механизмов подготовки, развития нормальной и причин дискоординированной родовой деятельности.
Задача заявляемого изобретения - разработка способа, позволяющего еще на доклинической стадии прогнозировать с высокой точностью дискоординацию родовой деятельности (ДРД) - дистоцию шейки матки, что найдет широкое применение в практическом акушерстве для объективного прогнозирования важнейших осложнений родов.
Поставленная задача решается тем, что при доношенной беременности в начале I периода родов в сыворотке крови женщин иммуноферментным методом определяют содержание кортикотропин-рилизинг гормона, субстанции Р, нейрокининов А и В, интерлейкинов 6 и 8, релаксина и кортизола, и рассчитывают прогностическую вероятность П по формуле:
П=(-0,0011229·CRH+(-0,15119·NA)+(-0,0071961·NB)+(-0,021071·IL6)+0,0032637·IL8+(-0,00085785·pF2α)+9,5773·REL+(-0,0098088·SP)+0,0058058·cort)·2,719, где
CRH - кортикотропин-рилизинг гормон,
NA - нейрокинин А,
NB - нейрокинин В,
IL6 - интерлейкин 6,
IL8 - интерлейкин 8,
pF2α - простагландин,
SP - субстанция Р,
Cort - кортизол,
и при уровне вероятности П больше 0,51 прогнозируют высокий риск развития дискоординации родовой деятельности и завершения родового процесса экстренным оперативным путем.
Технический результат, полученный в ходе использования заявляемого изобретения, состоит в повышении точности прогнозирования дискоординации родовой деятельности, что позволяет своевременно сформировать группу высокого риска, дифференцировать характер нарушения РД, тем самым выбрать адекватную тактику ведения пациентки.
При изучении основных механизмов инициации срочных родов, вне поля зрения исследователей остался вопрос о роли кортикотропин-рилизинг гормона (CRH) в инициации срочных родов. Кортикотропин-рилизинг гормон представляет собой пептид, состоящий из 41 аминокислоты, и играет ключевую роль в формировании системного ответа на действие стресса (Gravanis A., A.N. Margioris. The corticolropin-releasing factor (CRF) family of neuropeptides in inflammation: potential therapeutic applications. Curr. Med. Chem. 2005; 12:1503-1512). Авторы доказали плацентарное происхождение этого гормона во время беременности.
Многие ученые подчеркивают важность участия тахикининов в регуляции родовой деятельности. К ним относятся нейрокинины А и В (NA, NB), субстанция Р (SP). Синтезируемые в дорсальных ядрах рогов спинного мозга и накапливающиеся в плотных везикулах нервных окончаний воздействуют на ткань шейки матки и вызывают так называемое нейрогенное воспаление. При этом происходят дестабилизация структуры коллагена и соединительнотканного вещества шейки матки, гидратация и разрыхление коллагеновой сети со снижением концентрации коллагена (Jocelyn N. Pennefather, Eva Patak et al. Regulation of the Stimulant Actions of Neurokinin A and Human Hemokinin-1 on the Human uterus: A corparison with Histamin Biol Reprod 2006; 75:334-341).
На процессы созревания и раскрытия шейки матки оказывают действие и провоспалительные цитокины - интелейкины 6 и 8 (IL6, IL8). Стимулируя освобождение макрофагами ферментов расщепляющих внеклеточный матрикс, вырабатываемый цервикальным фибробластом, они способствуют созреванию шейки матки (F. Sata, S. Toya. Proinflammatory cytokine polymorphisms and the risk of preterm birth and low birthweight in a Japanese population. Molecular Human Reproduction, Vol.15, No. 2 pp.121-130, 2009).
За последние годы большое внимание уделяется изучению «гормона родов» - релаксину (REL), обусловливающему лизис хряща лонного сочленения, расслабление связок малого таза, раскрытие шейки матки и другие эффекты. Выделены клеточные рецепторы, с которыми связывается этот полипептид - LGR7 и LGR8. Однако его динамика в процессе родовой деятельности, особенно при ее нарушении, изучена недостаточно и требует дальнейших исследований. (Vodstrcil L.A. Decreased expression of the rat myometrial relaxin receptor (RXFP1) in late pregnancy is partially mediated by the presence of the conceptus / L.A. Vodstrcil, O. Shynlova, J.W. Verlander et al. // Biol. Reprod. - 2010. - Vol. 83, N 5. - P. 818-824).
2
2α
2
2α
2α
В регуляции репродуктивных процессов, в том числе созревания шейки матки, развязывания и поддержания родовой деятельности традиционно большое значение отводится простагландинам (Соколова Н.И. и соавт., 1990, Абрамченко В.В., 2003; Сидорова И.С. 2006). Простагландины обладают широким спектром действия. Считается, что эти вещества действуют как локальные паракринные модуляторы клеточных функций, оказывают стимулирующее влияние на выделение гипоталамических рилизинг-гормонов (Корхов В.В., Мац М.Н., 1994). Наибольший интерес в акушерстве и гинекологии представляют Простагландины Е и F, которые в значительных количествах выделяются в фолликулах, матке и тканях мозга (Сидорова И.С., 2006). Простагландин Е вызывает расслабление маточных труб, в то же время F их сокращение. Оба они вызывают контракцию матки, причем с увеличением срока беременности сила сокращений под их влиянием увеличивается (Джаффе Р.Б., 1998). Простагландины F вызывают сокращение всей матки, и максимальная их концентрация достигается к активной фазе родов (Сидорова И.С., 2006).
Подробное описание способа и примеры его клинического применения.
Были использованы основные общепринятые методы обследования: сбор анамнеза, жалобы, осмотр беременных, общелабораторные исследования, ультразвуковое исследование с допплерометрией. При выявлении признаков патологии объем обследований и терапии, соответственно, расширялся до необходимого.
Определение готовности организма женщины к родам проводили на основании комплексного обследования и с учетом оценки степени «зрелости» шейки матки после 38 недель беременности по шкале Е.Н. Bishop, модифицированной Е.А. Чернуха (1982). Характеризовали консистенцию, длину, проходимость цервикального канала, положение относительно продольной оси таза, место расположения предлежащей части плода.
Забор крови женщин производился в первом периоде родов, с последующим определением методом иммуноферментного анализа содержания биологически активных веществ: кортикотропин-рилизинг гормона (CRH), субстанции Р (SP), нейрокининов А и В (NA, NB), интерлейкинов 6 и 8 (IL6, IL8), релаксина (REL) и кортизола (Cort), простагландина pF2α.
Определение уровня содержания кортикотропин-рилизинг гормона (CRH).
Уровень CRH в сыворотке крови пациентов определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы ВАСНЕМ GROUP (USA).
Приготовление растворов стандартов, антисыворотки, конъюгата, промывочного буфера проводили согласно инструкции к набору.
В соответствующие лунки планшета вносили по 50 мкл растворов стандартов или исследуемых проб.
Во все лунки планшета вносили по 25 мкл антисыворотки и по 25 мкл биотинового конъюгата. Инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре.
По окончании инкубации трижды промывали лунки планшета промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA). Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре.
Промывали планшет 5 раз, как описано выше.
Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора ТМБ, инкубировали в темноте в течение 30 минут, останавливали цветную реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл раствора 2 N HCl.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия).
В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций CRH в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию CRH в опытных пробах в пг/мл.
Определение уровня интерлейкинов 6 и 8 (IL6, IL8).
Уровень интерлейкина-8 и интерлейкина-6 в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы BENDER MEDSYSTEMS (Европа). Промывочный буфер, растворы стандартов, конъюгатов готовили согласно инструкции к набору.
В соответствующие лунки планшета, покрытые моноклональными антителами к интерлейкину-8 человека, вносили по 100 мкл стандартов. В остальные лунки вносили по 100 мкл опытных проб. Во все лунки многоканальным дозатором вносили по 50 мкл приготовленного биотинового конъюгата поликлональных антител к интерлейкину-8 или 6 человека. Инкубировали планшет в течение 2 часов при комнатной температуре.
Промывали лунки планшета 4 раза промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA).
Во все лунки приливали по 100 мкл раствора конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа.
Промывали планшет, как указано выше.
Во все лунки добавляли по 100 мкл раствора субстрата и оставляли при комнатной температуре на 10 минут.
Останавливали реакцию добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку.
Измерения оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия).
В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций ИЛ-8 или ИЛ-6 в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию ИЛ-8 и ИЛ-6 в опытных пробах в пг/мл.
Определение уровня субстанции Р (SP).
Уровень субстанции Р в сыворотке крови пациентов определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы Bachem Group (USA).
Приготовление растворов стандартов, конъюгатов, промывочного и рабочего буфера проводили согласно инструкции к набору.
Во все лунки планшета вносили по 25 мкл первичной антисыворотки и инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем в соответствующие лунки планшета вносили по 50 мкл растворов стандартов или исследуемых проб, инкубировали 2 часа при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносили по 25 мкл раствора биотинилированного конъюгата, накрывали планшет пленкой и оставляли на ночь при температуре 2-8°C.
По окончанию инкубации 5 раз промывали лунки планшета промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов Elisa Washer Human (USA). Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре. Промывали планшет, как описано выше. Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора ТМБ, инкубировали в темноте в течение 15 минут, останавливали цветную реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл раствора 2N HCl.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия). В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций субстанции Р в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию субстанции Р в опытных пробах в нг/мл.
Определение уровня нейрокининов А и В (NA, NB).
Уровень нейрокининов А и В в сыворотке крови пациенток определяли методом иммуноферментного анализа фирмы ВАСНЕМ GROUP (USA).
Приготовление растворов стандартов, конъюгатов, промывочного и рабочего буфера проводили согласно инструкции к набору.
Во все лунки планшета вносили по 50 мкл стандартов или исследуемых проб, затем во все лунки вносили по 25 мкл первичной антисыворотки и инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре. По окончании инкубации вносили по 25 мкл биотонилированного конъюгата в каждую лунку, накрывали планшет пленкой и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов.
По окончании инкубации 5 раз промывали лунки планшета промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA).
Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубировали планшет в течение 1 часа при комнатной температуре.
Промывали планшет, как описано выше. Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора ТМБ, инкубировали в темноте в течение 15 мин, останавливали цветную реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл раствора 2N HCl.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия). В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций нейрокининов А и В в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию нейрокининов А и В в опытных пробах в нг/мл.
Определение уровня релаксина (REL).
Содержание релаксина в крови определяли методом иммунфлюоресцентного анализа наборами фирмы BIOSOURCE (USA). Промывочный буфер, растворы стандартов, стрептавидин-пероксидазного конъюгата, готовили согласно инструкции к набору. Во все лунки планшета, покрытые поликлональными антителами к релаксину человека, вносили по 50 мкл инкубационного буфера. В лунку-бланк вносили 100 мкл раствора для разведения стандартов, в лунки для построения стандартной кривой вносили по 100 мкл приготовленных стандартных проб, в остальные лунки - по 100 мкл исследуемых проб. Накрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре.
По окончании инкубации промывали лунки планшета промывочным буфером 4 раза на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA).
Затем во все лунки вносили по 100 мкл раствора биотинилированных антител к релаксину человека. Инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 1 часа.
Промывали планшет 4 раза промывочным буфером как описано выше.
Во все лунки вносили по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубировали планшет 30 минут при комнатной температуре.
Затем проводили промывку, как описано выше.
Во все лунки вносили по 100 мкл раствора субстрата и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Останавливали цветную реакцию добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия). В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций релаксина в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию релаксина в опытных пробах в пг/мл.
Определение уровня кортизола (Cort).
Уровень кортизола в сыворотке крови и околоплодных водах определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы «Алкор Био» (Россия).
Промывочный буфер, растворы калибровочных проб готовили согласно инструкции к набору.
В соответствующие лунки вносили по 50 мкл стандартов или опытных проб. Во все лунки планшета, покрытые антителами к кортизолу человека, вносили по 150 мкл раствора анти-кортизол-пероксидазы.
Инкубировали планшет при температуре 37°С в течение 60 минут при непрерывном встряхивании на шейкере ST 3 (Латвия).
Промывали планшет четырехкратно промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA).
В каждую лунку вносили по 100 мкл останавливающего раствора ТМБ и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут, защищая от света.
Останавливали цветную реакцию добавлением 100 мкл останавливающего раствора в каждую лунку.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия).
В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций кортизола в опытных пробах. Выражали уровень кортизола в нмоль/л.
Определение уровня простагландина pF2α.
2α
Уровень простагландина F в сыворотке крови и околоплодной жидкости определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы ASSAY DESIGNS (Канада).
Экстракцию образцов, промывочный буфер, растворы стандартов готовили согласно инструкции к набору.
В лунку-бланк вносили 100 мкл раствора для разведения стандартов, в лунки для построения стандартной кривой вносили по 100 мкл приготовленных стандартных проб, в остальные лунки - по 100 мкл исследуемых проб.
2α
2α
В каждую лунку вносили по 50 мкл конъюгата щелочной фосфатазы с простагландином F и по 50 мкл раствора кроличьих поликлональных антител к простагландину F. Накрывали планшет пленкой и инкубировали в течение 2 часов на шейкере.
По окончании инкубации промывали лунки планшета промывочным буфером 3 раза на промывочным устройстве для микропланшетов ELISA WFSER HUMAN (USA).
Во все лунки вносили по 200 мкл раствора субстрата и инкубировали в течение 45 минут, защищая от прямых солнечных лучей.
Останавливали цветную реакцию добавлением 50 мкл стоп-реагента в каждую лунку.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результаттов проводили на фотометре MultILABEL Counter 1420 (Финляндия).
2α
2α
В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций простагландина F в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию простагландина F в опытных пробах в пг/мл.
Работоспособность заявленного способа подтверждается следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Беременная Ту-ва Н.В., 20 лет. История болезни №6525/1041. Диагноз при поступлении: Беременность 38-39 недель.
На первые сутки пребывания в стационаре у пациентки началась родовая деятельность. В первом периоде родов взята кровь для определения кортикотропин-рилизинг гормона, субстанции Р, нейрокининов А и В, интерлейкинов 6 и 8, простагландина pF2α, релаксина (REL) и кортизола (Cort). Результаты исследования были использованы в формуле для расчета П, полученное при этом значение П, равное 0,50, позволило прогнозировать благоприятное течение родов. Данные роды протекали без осложнений и закончились через естественные родовые пути живым доношенным, здоровым ребенком. Заключительный диагноз: Роды I, в сроке 38 недель 2 дня.
Пример 2.
Беременная С-ва М.А., 25 лет. История родов №6972/1112, 2010 г.
Поступила в родильное отделение с диагнозом: Беременность в сроке 38-39 недель. Rh отрицательная принадлежность крови без титра антител. Эрозия шейки матки.
В первом периоде родов в сроке 39 недель была взята кровь пациентки для определения исследуемых биологически активных веществ (кортикотропин-рилизинг гормона, субстанции Р, нейрокининов А и В, интерлейкинов 6 и 8, простагландина pF2α, релаксина (REL) и кортизола (Cort). Результаты исследования были использованы в формуле для расчета П, полученное при этом значение П, равное 0,53, позволило спрогнозировать дискоординацию родовой деятельности, что подтверждало аномалию родового процесса (П>0,51). В родах проводилась непрерывная запись КТГ. По кардиотокограмме оценивалась эффективность силы и регулярности схваток. Раскрытия шейки матки оценивали с помощью шкалы Бишопа. Была диагностирована дистоция шейки матки, неподдающаяся терапии. Проведено кесарево сечение в экстренном порядке с благоприятным исходом. Родился живой, доношенный ребенок.
По заявляемому способу были обследованы 60 рожениц в сроки 38-41 недели беременности. Критерием формирования клинических групп явилась зрелость родовых путей и способ родоразрешения. I группу составили 40 женщины, роды у которых начались спонтанно в срок и закончились без осложнений физиологически. При определении показателей CRH-12,16, NA-4,99, NB-30,71, IL 6-7,38, IL 8-482,20, pF2α-8,630, Rel-166,56, SP-12,16, уровень рассчитанной вероятности П менее 0,51. II группу составили 20 рожениц с некупируемой дискоординацией родов, развившейся дистоцией шейки матки,  прооперированные в экстренном порядке. При определении показателей CRH-11,12, NA-5,88, NB-17,62, IL 6-4,60, IL 8-168,22, pF2α-8,803, Rel-490,80, SP-10,73, уровень вероятности П больше 0,51. При сравнении полученных показателей в обеих группах видно, что при некупируемой дискоординации родовой деятельности в сыворотке крови снижено содержание CRH в 1,1 раза, NB в 1,7 раза, IL 6 в 1,6 раза, IL 8 в 2,9 раз, SP в 1,1 раза. В то же время отмечается во второй группе повышение концентрации NB в 1,7 раза, pF2α в 0,9 раз и Rel в 2,9 раза. Такое соотношение изучаемых параметров и определяет вероятный исход родового процесса.
Представленные данные позволяют с уверенностью говорить о том, что реализация родов связана с содержанием и действием различных биологически активных веществ как в сыворотке крови больной. Особенности подготовки, характер родовой деятельности и исход родов зависит не только от абсолютных величин биологических субстратов в сыворотке крови, но и от их соотношения, описываемого специальной формулой расчета прогностической вероятности.
Вышеизложенное подтверждает прогностическую ценность заявленного способа.
Таким образом, заявляемый способ является специфичным и чувствительным по сравнению с известными. Способ специфичен, так как позволяет по достаточно простой методике с высокой точностью прогнозировать дискоординацию родовой деятельности.
1. Обладает высокой чувствительностью. Ложноотрицательных результатов получено только 3.
2. Клиническое применение способа позволит своевременно осуществлять акушерскую тактику.
Заявляемый способ прогнозирования дискоординации родовой деятельности апробирован на достаточном клиническом материале и может быть рекомендован к использованию в акушерских стационарах.