СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ КОГНИТИВНОЙ ФУНКЦИИ
METHODS AND COMPOSITION TO IMPROVE COGNITIVE FUNCTION

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение в целом имеет отношение к питанию животных и его влиянию на когнитивную функцию и в особенности к применению длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот, которые вводят во время беременности с помощью материнской диеты или в послеродовый период с материнским молоком или непосредственно с помощью диеты для взрослых животных для улучшения решения задач, сохранения приобретенной информации и психической стабильности.
Предшествующий уровень техники
Различные публикации, включающие патенты, опубликованные заявки, технические статьи и научные статьи, процитированы в описании изобретения. Каждая публикация включена в настоящий документ путем отсылки, во всей своей полноте. Полные ссылки на публикации, не процитированные полностью в описании изобретения, приведены в конце описания изобретения.
Длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦПНЖК) как (n-3), так и (n-6) классов важны для перинатального развития. Многочисленные наблюдения указывают на то, что (n-3) жирные кислоты особенно важны при развитии центральной нервной системы (ЦНС). У приматов развитие нервной системы начинается в третьем триместре беременности, достигает максимума примерно в момент рождения и продолжается в течение примерно 18-24 месяцев после родов (Menard, CR et al. 1998, Martinez, M 1992). Несмотря на вероятные различия, считается, что такой образец развития справедлив для большинства видов животных (Bauer JE et al. 2004).
Во время этого периода развития происходит быстрое включение жирных кислот, таких как арахидоновая кислота (АК) и докозагексаеновая кислота (ДГК), в ткани нервной системы (Sinclair, AJ 1975, Greiner, RC et al. 1997). Накопление ДГК первоначально происходит во время поздней беременности и в постнатальный период развития, хотя обогащение неврологических тканей ДГК продолжается и после родов (Carnielli, VP et al. 1998). ДГК в основном обнаруживают в сериновых и этаноламиновых фосфолипидах в ретинальных и в неврологических тканях.
Было изучено включение дополнительной ДГК в неврологическую ткань. В опытах in vitro показали, что нейроны сетчатки крысы, которые инкубировали с ДГК, содержали от 4-х до 6-ти раз больше ДГК, чем клетки, которые инкубировали с другими жирными кислотами (Rotstein, NP et al. 1999). Добавление других жирных кислот в этом исследовании не влияло на изменение состава жирных кислот клеточной мембраны. Это сообщение указывает на то, что нейроны сетчатки обладают специфическими механизмами контроля над содержанием жирных кислот различной длины и различной степени ненасыщенности и над избирательным поглощением ДГК. Действительно, похоже, существует, по меньшей мере, один механизм, с помощью которого ДГК избирательно поглощается нервными тканями и тканями сетчатки. Опыты на свиньях показали, что диеты, дополненные ДГК, увеличивают аккумуляцию ДГК мозгом в период постнатального роста (Morris SA et al. 1999). Кроме того, в опытах in vivo была показана аккумуляция дополнительной ДГК в неврологических тканях поросят, котят и приматов, за исключением человека (Pawlosky, RJ et al. 1997, Green, P et al. 1996). Напротив, было показано, что дефицит ДГК вреден для лабораторных видов. Например, диеты с неполным питанием снижали память и когнитивную (познавательную) способность у крыс (Moriguichi Т et al. 2000). Похожие результаты наблюдали у недоношенных младенцев и у макак-резусов, получавших ДГК-дефицитную диету (Carlson SE et al. 1993; и Neuringer M et al. 1984).
Высокое содержание ДГК, обнаруженное в мозге и в сетчатке, позволяет предположить ее функциональную роль в этих тканях (Litman, BJ et al. 2001). У приматов, за исключением человека, и у младенцев было показано, что дополнительная ДГК увеличивает остроту зрения и когнитивные способности (Willats Р 2002; Uauy R et al. 2003; Gil A et al. 2003). Недостаток (n-3) полиненасыщенных жирных кислот во время фазы развития тканей нервной системы может привести к необратимым функциональным нарушениям.
Было показано также, что добавление к рациону ДГК и АК улучшает обучение крыс и макак-резусов (Lothaller МА et al. (1991), Greiner RS et al. (1999) и Wainwright РЕ et al. (1999)). Кроме того, дети, питавшиеся детской смесью, дополненной этими ДЦПНЖК, также показали улучшенную остроту зрения и имели более высокие показатели в тесте по определению индекса умственного развития (MDI) по сравнению с группой, питавшейся идентичной детской смесью, не содержавшей ДГК и АК (Birch ЕЕ et al. (2000)).
Не все опыты по изучению влияния добавления ДГК и АК на развитие центральной нервной системы продемонстрировали такие положительные результаты (Gibson RA et al. 1997). Более глубокое исследование содержания АК и ДГК в корме, а также периода развития животного может дать объяснение различиям между опытами, в которых была или не была показана польза добавок. По-видимому, существует промежуток времени в ходе раннего развития, в течение которого добавление ДЦПНЖК наиболее полезно. Это время может меняться от вида к виду в зависимости от того, когда рост и развитие ЦНС происходит наиболее быстрыми темпами (Connor WE et al. (1990) и (Liu CC et al. (1987). Например, макаки-резусы показали значительное увеличение в содержании ДГК коры своего головного мозга после одной недели ее добавления. Концентрация ДГК в мозге продолжала увеличиваться в течение 12 недель, в этот момент она стабилизировалась на уровне, превышающем в 7 раз концентрацию до ее добавления (Connor WE et al. (1990)). Таким образом, оказалось, что добавление должно происходить в тот момент, когда мозг включает ДГК и АК с максимальной скоростью и в максимальной концентрации, и должно быть продолжено в течение длительного периода для насыщения плазматических мембран в неврологических тканях. Хотя максимальное включение ДЦПНЖК может происходить в течение ограниченного промежутка времени, соответствующие поглощения ДЦПНЖК могут быть необходимы на протяжении всей жизни, это подтверждается тем фактом, что, оказывается, период полураспада ДГК в мозге макак-резусов равен только 21 дню (Connor WE et al. (1990)).
Количество каждого типа ДЦПНЖК, предусмотренного в диете животных, также важно, как и выбор момента и продолжительности добавки. В одном исследовании было показано, что у детей, получавших только добавку ДГК, наблюдали значительное увеличение в концентрации ДГК в мембранах эритроцитов, хотя не было зарегистрировано значительного изменения в показателях их MDI по сравнению с детьми, не получавшими добавку (Gibson RA et al. (1997)). Исследования с детьми (Carlson SE (1996)), на крысах (Greiner RS et al. (1999)) и на макаках-резусах (Connor WE et al. (1990)) показали, что добавление ДГК без добавления АК приводит к увеличению концентраций ДГК в ЦНС и RBC с сопутствующим снижением концентрации АК в их мембранах. В большинстве исследований, в которых была установлена польза от добавления ДГК, добавляли в то же время и АК.
Несмотря на знания, накопленные в отношении пользы ДГК и АК, и пользы от добавления ДГК и АК в рацион питания людей и некоторых лабораторных млекопитающих, польза ДГК и АК в неврологическом развитии домашних животных и домашних животных, таких как собаки и кошки, остается, в большой мере, неисследованной. Таким образом, существует необходимость в области техники, обеспечивающей композиции и способы, позволяющие воспользоваться преимуществами ДГК и АК и, в целом, ДЦПНЖК этим типам животных для улучшения их когнитивной функции и для обеспечения связанных с этим неврологических преимуществ. Обогащение диет, предназначенных для репродукции/лактации и роста, этими жирными кислотами (ДЦПНЖК) может обеспечить животных с более совершенной когнитивной функцией, что приведет к улучшению связи домашнее животное - хозяин. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность.
Сущность изобретения
Один аспект изобретения характеризует композицию, включающую одну или несколько длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (ДЦПНЖК), в количестве, эффективном для улучшения когнитивной функции у животного. В различных воплощениях композиция представляет собой кормовую композицию для домашних животных или добавку к рациону. В различных воплощениях животное представляет собой животное-компаньона, предпочтительно собаку или кошку. ДЦПНЖК могут включать, по меньшей мере, одну из арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, докозапентаеновой кислоты или докозагексаеновой кислоты и могут присутствовать в количестве, по меньшей мере, от примерно 0,1% до примерно 10% от массы композиции, точнее от примерно 0,4 до примерно 5,0% от массы композиции и еще более точно от примерно 2% до примерно 2,5% от массы композиции.
Другой аспект изобретения характеризует способ усиления когнитивной функции у животного, включающий введение животному одной или нескольких ДЦПНЖК в количестве, эффективном для усиления когнитивной функции у животного. В этом аспекте ДЦПНЖК могут включать одну или несколько из арахидоновой кислоты, эйкозалентаеновой кислоты, докозапентаеновой кислоты или докозагексаеновой кислоты. В некоторых воплощениях животное представляет собой животное-компаньона, предпочтительно собаку или кошку.
В одном воплощении ДЦПНЖК вводили животному во время беременности. В другом воплощении ДЦПНЖК вводили животному в период между родами на протяжении примерно двенадцати недель после родов. В другом воплощении ДЦПНЖК вводили животному во время беременности и в период между родами на протяжении примерно двенадцати недель после родов.
В различных воплощениях ДЦПНЖК вводили в кормовую композицию для домашних животных или в добавку к рациону. В другом воплощении ДЦПНЖК вводили в молоко, полученное в период лактации от животного, которому была введена одна или несколько ДЦПНЖК. В других воплощениях ДЦПНЖК вводили в кормовую композицию для домашних животных или в добавку к рациону и в молоко, полученное в период лактации от животного, которому была введена одна или несколько ДЦПНЖК.
ДЦПНЖК может быть введено животному в различных режимах. В одном воплощении ДЦПНЖК вводили ежедневно. В другом воплощении ДЦПНЖК вводили животному как часть диетического режима. В особых воплощениях продолжительность диетического режима колебалась от родов до примерно 12-й недели жизни.
Другие особенности и преимущества изобретения будут понятны из осуществления изобретения и последующих примеров.
Подробное описание изобретения
Правильное развитие нервной системы млекопитающих разных видов зависит от присутствия ДЦПНЖК, главным образом, ДГК в период развития плода и в перинатальный период. В этом отношении особенно важны ДГК и АК, так как для них было продемонстрировано усиление когнитивных способностей у людей, и у некоторых обезьян, и у лабораторных животных. В соответствии с настоящим изобретением было показано, что длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты, доступные для плода животных через материнское питание и для животных после рождения через питание животных, эффективны для стимуляции усиления когнитивных способностей у животных. Усиления когнитивной функции достигали, если ДЦПНЖК вводили животным опосредованно через их матерей во время беременности, непосредственно животным через их диету или вводили животным, комбинируя эти два способа.
Таким образом, важно гарантировать, чтобы ДЦПНЖК, такие как ДГК и АК, в изобилии доставлялись в кровь самки млекопитающего во время беременности и в изобилии доставлялись в кровь новорожденного животного в перинатальный период и в ходе развития молодого животного. Эту задачу можно решить с помощью диеты, подходящей и беременной самке, и ее развивающимся новорожденным.
Особое замечание следует сделать в отношении того, что диетические ДЦПНЖК могут быть доставлены новорожденному животному с молоком лактирующей самки. У людей диетические добавки, поступающие из обогащенной рыбной муки или рыбьего жира, приводят к депонированию (n-3) жирных кислот, главным образом ДГК, в грудном молоке. Содержание ДГК в человеческом грудном молоке пропорционально содержанию ДГК в материнской диете. Это наблюдение, вероятно, справедливо для других млекопитающих, включая приматов, кроме человека, обезьян, крыс и собак. Между содержанием ДГК в диете и содержанием ДГК в молоке кормящих самок собак наблюдали прямо пропорциональную зависимость (Bauer JE et al. 2004, реферат). Таким образом, получение диетических ДЦПНЖК через молоко кормящей самки представляет собой один из способов обеспечения ими новорожденных и молодых животных, в особенности в течение периода их перинатального развития.
Определения
Различные термины, имеющие отношение к способам и другим аспектам настоящего изобретения, применяются на всем протяжении описания изобретения и формулы изобретения. Такие термины будут даны в их обычных для этой области техники значениях, если не оговорено иначе. Другие специально определенные термины будут истолкованы в соответствии с определением, предусмотренным настоящим документом.
Следующие сокращения могут быть применены в описании изобретения и в примерах: АК, арахидоновая кислота; ANOVA, дисперсионный анализ; BW, масса тела; ДГК, докозагексаеновая кислота; DM, сухое вещество; ДПК, докозапентаеновая кислота; ЭПК, эйкозапентаеновая кислота; ДЦПНЖК, длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты.
Термин «животное» означает любое животное, которому может принести пользу один или несколько способов или композиций настоящего изобретения, включая усиление когнитивной функции, когнитивной способности, концептуального обучения, внимания, социальных контактов, ясность ума, памяти и интеллектуальной живости. Обычно, животное представляет собой человека, птицу, корову, собаку, лошадь, кошку, козла, волка, мышь, овцу и свинью. Предпочтительно термин «животное» означает животное, для которого желаемо усиление когнитивной функции или которое получит пользу от улучшения когнитивной функции. «Животное-компаньон» представляет собой любое одомашенное животное и включает, без ограничений, кошек, собак, кроликов, морских свинок, хорьков, хомяков, мышей, песчанок, лошадей, коров, коз, овец, обезьян, свиней и им подобных. Предпочтительно животное представляет собой человека или животное-компаньона, такое как собака или кошка.
Термин «эффективное количество» означает количество соединения, вещества или композиции, таких как были описаны в настоящем документе, которое эффективно для достижения особого биологического результата. Такие результаты включают, но не ограничиваются, усиление когнитивной функции, улучшение способности решать задачи, улучшение памяти и улучшение психической устойчивость. Такое эффективное действие может быть достигнуто, например, с помощью введения животному композиции по настоящему изобретению.
Термин «когнитивная функция» означает специальную, нормальную или правильную физиологическую деятельность мозга, включая, без ограничений, психическую устойчивость, способности к запоминанию/вспоминанию, способности к решению задач, способности к умозаключению, способности к мышлению, способности делать выводы, способности к обучению, осознанию, интуицию и способность давать отчет в собственных действия. «Усиленная когнитивная функция» означает любое улучшение в специальной, нормальной или правильной физиологической деятельности мозга, включая, без ограничений, психическую устойчивость, способности к запоминанию/вспоминанию, способности к решению задач, способности к умозаключению, способности к мышлению, способности давать, делать выводы, способности к обучению, осознанию, интуицию и способность давать отчет в собственных действиях, оцененное с помощью любого способа, применяемого в этой области техники.
Термин «длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты» или «ДЦПНЖК» означает любые монокарбоновые кислоты, имеющие, по меньшей мере, 20 атомов углерода и, по меньшей мере, две двойные связи. Неограничивающие примеры ДЦПНЖК включают (n-6) жирные кислоты, такие как арахидоновая кислота, и (n-3) жирные кислоты, такие как эйкозапентаеновая кислота, докозапентаеновая кислота и докозагексаеновая кислота.
Настоящее изобретение имеет отношение к любому животному, предпочтительно к млекопитающему и более предпочтительно к животным-компаньонам. «Животное-компаньон» представляет собой любое одомашенное животное и включает, без ограничений, кошек, собак, кроликов, морских свинок, хорьков, хомяков, мышей, песчанок, лошадей, коров, коз, овец, обезьян, свиней и им подобных. Собаки и кошки являются наиболее предпочтительными животным-компаньонам, и собаки служат примером в настоящем документе.
Термин «корм для домашних животных» или «кормовая композиция для домашних животных», так как он был применен в настоящем документе, означает композицию, которая предназначена для приема в качестве пищи животными и предпочтительно животными-компаньонами. «Полный и сбалансированный по питательной ценности корм для домашних животных» представляет собой такой корм, который содержит все известные необходимые питательные вещества в соответствующих количествах и пропорциях, основанных на рекомендациях признанных авторитетов в области кормления животных-компаньонов, и который, следовательно, может служить единственным источником диетического питания для поддержания жизни и стимуляции продуктивности, без добавления дополнительных источников питания. Сбалансированные по питательной ценности кормовые композиции для домашних животных широко известны и широко применяются в этой области техники.
Термин «добавка к рациону», так как он был применен в настоящем документе, означает продукт, который предназначен для приема с пищей в дополнение к нормальной диете животного.
Композиции
В одном из аспектов изобретение обеспечивает композиции, включающие одну или несколько ДЦПНЖК в количестве, достаточном для эффективного усиления когнитивной функции у животных. ДЦПНЖК могут присутствовать в композиции в качестве компонента или добавки. В одном из предпочтительных воплощений композиция включает (n-3) жирные кислоты, такие как ЭПК, ДПК и наиболее предпочтительно ДГК. В другом предпочтительном воплощении композиция включает (n-6) жирные кислоты, такие как АК. В более предпочтительном воплощении композиция включает комбинацию (n-3) и (n-6) жирных кислот, наиболее предпочтительно ДГК и АК. Композиции обогащают ДЦПНЖК плазму крови животных, которым композиция была введена, и обогащают ДЦПНЖК молоко кормящего животного у кормящих животных, которым была введена композиция.
В предпочтительном воплощении композиции по изобретению представляют собой кормовые композиции для домашних животных. Их полезно включать в корма, предназначенные обеспечить необходимые диетические потребности, а также лакомства (например, бисквиты) или другие добавки к рациону. Необязательно, кормовые композиции для домашних животных могут быть сухой композицией (например, гранулированный корм), полувлажной композицией, влажной композицией или любой смесью этих композиций. В другом предпочтительном воплощении композиция представляет собой диетическую добавку к рациону, такую как соус, питьевая вода, напиток, йогурт, порошок, гранула, паста, суспензия, жевательная резинка, маленькие кусочки, лакомство, легкая закуска, шарик, пилюля, капсула, таблетка или любую другую форму доставки. В детальном воплощении добавка к рациону может включать ДЦПНЖК или ДГК и АК в высокой концентрации, такой, что добавка может быть введена животному в маленьких количествах или, наоборот, может быть разбавлена перед введением животному. Может потребоваться смешать добавку к рациону с водой перед введением животному.
Композиция может быть охлаждена или заморожена. ДЦПНЖК могут быть предварительно смешаны с другими компонентами композиции для обеспечения требуемых полезных количеств, могут быть покрыты оболочкой из кормовой композиции для домашних животных или могут быть добавлены к композиции перед тем, как ее предлагают животному, например, посыпая порошком или замешивая.
Композиции изобретения включают ДЦПНЖК в количестве, достаточном для усиления когнитивной функции у животного, которому ввели композицию. В кормах для домашних животных количество (n-3) ДЦПНЖК, выраженное как процентное содержание от композиции, находится в диапазоне от примерно 0,1% до примерно 10% в некоторых воплощениях, до 5% в других воплощениях, и примерно 2,0% в особых воплощениях от композиции в пересчете на сухое вещество, хотя может быть обеспечено и более высокое процентное содержание. В различных воплощениях количество равно примерно 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1,0%, 1,1%, 1,2%, 1,3%, 1,4%, 1,5%, 1,6%, 1,7%, 1,8%, 1,9%, 2,0%, 2,1%, 2,2%, 2,3%, 2,4%, 2,5%, 2,6%, 2,7%, 2,8%, 2,9%, 3,0%, 3,1%, 3,2%, 3,3%, 3,4%, 3,5%, 3,6%, 3,7%, 3,8%, 3,9%, 4,0%, 4,1%, 4,2%, 4,3%, 4,4%, 4,5%, 4,6%, 4,7%, 4,8%, 4,9%, 5,0% или более от композиции в пересчете на сухое вещество. Количество (n-6) ДЦПНЖК как процентное содержание от композиции находится в диапазоне от примерно 0,1% до примерно 10% в некоторых воплощениях, до 5% в других воплощениях и примерно 2,0% в особых воплощениях, композиции от композиции в пересчете на сухое вещество, хотя может быть обеспечено и более высокое процентное содержание. В различных воплощениях количество равно примерно 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1,0%, 1,1%, 1,2%, 1,3%, 1,4%, 1,5%, 1,6%, 1,7%, 1,8%, 1,9%, 2,0%, 2,1%, 2,2%, 2,3%, 2,4%, 2,5%, 2,6%, 2,7%, 2,8%, 2,9%, 3,0%, 3,1%, 3,2%, 3,3%, 3,4%, 3,5%, 3,6%, 3,7%, 3,8%, 3,9%, 4,0%, 4,1%, 4,2%, 4,3%, 4,4%, 4,5%, 4,6%, 4,7%, 4,8%, 4,9%, 5,0% или более от композиции в пересчете на сухое вещество. Добавки к рациону могут быть составлены так, чтобы содержать ДЦПНЖК в концентрациях, в несколько раз более высоких, предназначенных для введения животному в форме таблетки, капсулы, жидкого концентрата или других похожих дозированных форм или предназначенных для разведения перед введениями, таким как растворение в воде, распыление или орошение корма для домашних животных, и другими похожими способами введения.
В другом воплощении количество ДЦПНЖК в композиции представляет собой функцию от количества, необходимого для достижения заданной концентрации ДЦПНЖК в сыворотки крови животного. Заданные концентрации ДЦПНЖК в сыворотки крови находятся в диапазоне от примерно 0,1% до примерно 25% от общего содержания жирных кислот в сыворотке крови. В еще одном воплощении количество ДЦПНЖК в композиции представляет собой функцию от количества, необходимого для достижения заданных концентраций ДЦПНЖК в молоке кормящего животного. Заданные концентрации (n-3) ДЦПНЖК в молоке находятся в диапазоне от примерно 0,1% до примерно 7,0% от общего содержания жирных кислот в молоке. Заданные концентрации (n-6) ДЦПНЖК в молоке находятся в диапазоне от примерно 0,1% до примерно 7,0% от общего содержания жирных кислот в молоке.
Источником каждой из ДЦПНЖК может быть любой подходящий источник, синтетический или природный. Предпочтительные источники ДЦПНЖК включают, без ограничений, цианобактерии и водоросли, такие как Crypthecodinium cohnii и Schizochytrium spp., и рыбу, главным образом рыбу, живущую в холодной воде, такую как лосось, тунец, скумбрия, селедка, морской окунь, полосатый окунь, акула, палтус, сом, сардины, креветок и двустворчатых моллюсков, и масла, экстрагированные из них, или ДЦПНЖК могут быть синтезированы de novo в соответствии с любым применяемым в этой области техники способом.
Композиции по изобретению могут необязательно включать дополнительные вещества, такие как минералы, витамины, соли, приправы, красители и консерванты. Неограничивающие примеры дополнительных минералов включают кальций, фосфор, калий, натрий, железо, хлор, бром, медь, цинк, магний, йод, селен и им подобные. Неограничивающие примеры дополнительных витаминов включают витамин А, различные витамины группы В, витамин С, витамин D, витамин Е и витамин К. Могут быть также включены дополнительные добавки к рациону, например ниацин, пантотеновая кислота, инулин, фолевая кислота, биотин, аминокислоты и им подобные.
Композиции по изобретению могут необязательно включать одно или несколько дополнительны веществ, которые стимулируют или поддерживают общее неврологическое здоровье или дополнительно усиливают когнитивную функцию. Такие вещества включают, без ограничений, холин, фосфатидилсерин, ацетил-L-карнитин и экстракты трав, таких как Ginko biloba, Bacopa monniera, Convolvulus pluricaulis и Leucojum aestivum.
В различных воплощениях кормовые композиции для домашних животных или композиции-лакомства для домашних животных по изобретению могут включать общий белок от примерно 15% до примерно 50% от массы композиции в пересчете на сухое вещество. Материал общего белка может включать растительные белки, такие как белки соевых бобов, хлопковых семян и арахиса, или животные белки, такие как казеин, альбумин и мясной белок. Неограничивающие примеры мясного белка, применяемого в настоящем документе, включают свинину, баранину, конину, мясо домашней птицы, мясо рыбы и их смеси.
Композиции могут дополнительно включать жир от примерно 5% до примерно 40% от массы композиции в пересчете на сухое вещество. Композиции могут дополнительно включать источник углеводов. Композиции могут включать углеводы от примерно 15% до примерно 60% от массы композиции в пересчете на сухое вещество. Неограничивающие примеры таких углеводов включают зерна или крупы, такие как рис, кукуруза, мило, сорго, люцерна, ячмень, соя, канола, овес, пшеница и их смеси. Композиции могут также необязательно включать другие материалы, такие как сухая сыворотка и другие побочные диетические продукты молочного производства.
Композиции могут также включать, по меньшей мере, один источник волокон. Могут быть применены разнообразные растворимые и нерастворимые волокна, которые известны специалистам в этой области техники. Источник волокон может быть представлен свекловичным жомом (из сахарной свеклы), аравийской камедью, камедью талха, подорожником, рисовыми отрубями, камедью бобов рожкового дерева, цитрусовой пульпой, пектином, фруктоолигосахаридом дополнительно к короткоцепочечной олигофруктозе, маннанолигофруктозой, волокном сои, арабиногалактаном, галактоолигосахаридом, арабиноксиланом или их смесями. Альтернативно, источник волокон может быть ферментируемым волокном. Ранее было описано, что ферментируемое волокно полезно для иммунной системы животного-компаньона. Ферментируемое волокно или другие известные специалистам в этой области техники композиции, обеспечивающие пребиотическую композицию для усиления роста пробиотических микроорганизмов в кишечнике, могут быть также включены в композиции с целью усиления пользы, обеспечиваемой настоящим изобретением для иммунной системы животного. Дополнительно, такие виды пробиотических микроорганизмов, как, например, Lactobacillus или Bifidobacterium, могут быть добавлены к композиции.
В детальном воплощении композиция представляет собой полный и сбалансированный по питательной ценности корм для домашних животных. В этом контексте корм для домашних животных может быть влажным кормом, сухим кормом или кормом с промежуточным содержанием влаги, что должно быть определено специалистами в области создания и производства кормов для домашних животных. «Влажный корм» означает корм для домашних животных, который обычно продают в консервных банках или в пакетах из фольги и содержание влаги в котором обычно находится в диапазоне от примерно 70% до примерно 90%. «Сухой корм» означает корм для домашних животных, который имеет сходную с влажным кормом композицию, но содержит ограниченное количество влаги, обычно в диапазоне от примерно 5% до примерно 15%, и поэтому представлен, например, мелким, похожим на бисквиты, гранулированным кормом. Композиции и добавки к рациону могут быть специально созданы для взрослых животных, или для старых животных, или для молодых животных, например композиции «еда для щенков», «еда для котят» или «для взрослых животных». В целом, специализированные композиции учитывают энергетические и пищевые потребности, присущие животным на разных стадиях развития или разного возраста.
Некоторые аспекты изобретения предпочтительно применяли в сочетании с полным и сбалансированным кормом (например, таким, какой был описан Национальным научно-исследовательским советом (National Research Council), 1985, в издании Nutritional Requirements for dogs. National Academy Press, Washington D.C., или Ассоциацией американских официальных контролеров по качеству кормов (Association of American Feed Control Officials), в издании Official Publication, 1996). To есть композиции, включающие ДЦПНЖК или ДГК и АК в соответствии с некоторыми аспектами этого изобретения, предпочтительно применяли вместе с высококачественным промышленным кормом. Так, как применено в настоящем документе, «высококачественный промышленно выпускаемый корм», произведенный для обеспечения, усвояемости ключевых питательных веществ на 80% или более, так, как сформулировано выше, например в рекомендациях Национального научно-исследовательского совета для собак, или так, как сформулировано в нормативах Ассоциации американских официальных контролеров по качеству кормов. Такие же высокие стандарты питательных веществ следует применять и для других животных.
Специалисту понятно, как определить соответствующее количество ДЦПНЖК или ДГК и АК, которое добавляют к данной композиции. Факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают тип композиции (например, кормовая композиция для домашних животных в сравнении с добавкой к рациону), среднее потребление определенных типов композиции разными животными и условия производства, в которых композиция была получена. Предпочтительно концентрации ДЦПНЖК или ДГК и АК, которые добавляли к композиции, рассчитывали на основе энергетических и пищевых потребностей животного. В соответствии с некоторыми аспектами изобретения ДЦПНЖК или ДГК и АК могут быть добавлены в любое время при производстве и/или при обработке композиции. Это включает, без ограничений, добавление как части состава пищевой композиции для домашних животных или добавки к рациону, или как оболочки, покрывающей кормовую композицию для домашних животных или добавку к рациону.
Композиции могут быть созданы в соответствии с любым способом, применяемым в этой области техники, таким как, например, способ, описанный в Waltham Book of Dog and Cat Nutrition, Ed. ATB Edney, Chapter by A.Rainbird, озаглавленный как «Сбалансированная диета» («A Balanced Diet») на страницах с 57 до 74, Pergamon Press Oxford.
Способы
В другом аспекте изобретение обеспечивает способы усиления когнитивной функции у животного, включающие введение животному композиции, включающей одну или несколько ДЦПНЖК, в количестве, достаточном для усиления когнитивной функции у животного. В детальном воплощении композиция представляет собой кормовую композицию для домашних животных или добавку к рациону, как показано в настоящем документе. В дополнительном детальном воплощении ДЦПНЖК представляют собой (n-3) ДЦПНЖК, включая, но не ограничиваясь, ЭПК, ДПК и ДГК. В другом детальном воплощении ДЦПНЖК представляют собой (n-6) ДЦПНЖК, включая, но не ограничиваясь, АК. В еще одном детальном воплощении, ДЦПНЖК представляют собой комбинацию (n-3) и (n-6) ДЦПНЖК, включая, но не ограничиваясь, ЭПК, ДПК, ДГК и АК. Животные могут включать любых одомашненных животных или животных-компаньонов, таких, какие были описаны выше. В некоторых воплощениях животное представляет собой животное-компаньона, такого как собака или кошка. В одном воплощении животное представляет собой собаку.
Композиции могут быть введены животному с помощью любого из множества альтернативных путей введения. Такие пути включают, без ограничений, пероральный, интраназальный, внутривенный, внутримышечный, внутрижелудочный, транспилорический, подкожный, ректальный и им подобные. Предпочтительно композицию вводили перорально. Так как применено в настоящем документе, термин «пероральное введение» или «перорально введенный» означает, что животное проглатывает или человеку предписано кормить животное или он сам кормит животное одной или несколькими композициями по изобретению, описанными в настоящем документе.
В случае, если человеку предписано кормить композицией, такая инструкция может заключаться в том, чтобы проинструктировать и/или проинформировать человека о том, что применение композиции может обеспечить и/или обеспечит такую пользу, о которой его проинформировали, например усиление когнитивной функции у животного. Такая инструкция может быть устной инструкцией (например, устная инструкция, полученная, например, от врача, ветеринара или другого медицинского специалиста) или из средств информации по радио или по телевизору (т.е. из рекламных объявлений), или письменной инструкцией (например, письменная инструкция, полученная, например, от врача, ветеринара или другого медицинского специалиста (например, рецепты), от торгового специалиста или от организации (например, из потребительских брошюр, буклетов или других информационных изданий), письменных средств информации (например, из Интернета, по электронной почте или с помощью других компьютерных средств информации) и/или из упаковки, связанной с композицией (например, этикетка, помещенная на тару, содержащую композицию).
Введение можно проводить по необходимости или по желанию, например, один раз в месяц, один раз в неделю, ежедневно или чаще, чем один раз в день. Аналогично, введение можно осуществлять через день, через неделю или через месяц, на каждый третий день, каждую третью неделю или каждый третий месяц, каждый четвертый день, каждую четвертую неделю или каждый четвертый месяц и т.п. Введение можно осуществлять много раз в день. При применении в качестве добавки к обычным диетическим потребностям композиция может быть введена непосредственно животному или в противном случае может контактировать или быть перемешана с ежедневным кормом или питанием. Введение при применении в качестве ежедневного корма или питания хорошо известно специалистам.
Введение может быть также осуществлено как часть режима питания животного. Например, режим питания может включать регулярное потребление животным композиции, включающей одну или несколько ДЦПНЖК, предпочтительно ДГК и АК, в количестве, достаточном для усиления когнитивной функции у животного. Регулярное поглощение может быть осуществлено один раз в день или два, три, четыре или более раз в день, на ежедневной основе. Цель регулярных приемов заключается в обеспечении животного предпочтительной суточной дозой ДЦПНЖК, описанных в настоящем документе.
Суточная доза ДЦПНЖК может быть определена как граммы ДЦПНЖК на кг массы тела (BW) животного или как процентное содержание от общей суточной потребности животного в калориях. Суточная доза ДЦПНЖК может варьировать от примерно 0,01 г/кг до примерно 2,0 г/кг BW животного. Предпочтительно суточная доза ДЦПНЖК равна от примерно 0,1 г/кг до примерно 1,25 г/кг BW животного. В типичном воплощении суточная доза ДЦПНЖК состоит из 0,11 г ДГК/кг массы тела и 0,056 г АК/кг массы тела.
Альтернативно, суточная доза ДЦПНЖК может варьировать от примерно 0,1 до примерно 15% от общей суточной потребности животного в калориях. Предпочтительно суточная доза ДЦПНЖК равна от примерно 3% до примерно 8% от общей суточной потребности животного в калориях. Более предпочтительно суточная доза ДЦПНЖК равна от примерно 6 до примерно 8% общей суточной потребности животного в калориях.
В соответствии со способами изобретения введение ДЦПНЖК, включая введение как часть режима питания, может продолжаться в течение времени, продолжающегося от беременности до взрослой жизни животного. В предпочтительном воплощении продолжительность введения варьировали от беременности до примерно 36-го месяца после родов. В более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 30-го месяца после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 24-го месяца после родов. В еще более предпочтительном воплощении, продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 18-го месяца после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 12-го месяца после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 40-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 35-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 30-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 25-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 20-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 18-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 16-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 14-й недели после родов. В еще более предпочтительном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 12-й недели после родов. В альтернативном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 10-й недели после родов. В другом альтернативном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 8-й недели после родов. В другом альтернативном воплощении продолжительность введения варьирует от беременности до примерно 6-й недели после родов.
В другом воплощении способ изобретения включает введение животному молока от кормящего животного, которому ввели одну или несколько ДЦПНЖК. Молоко, обогащенное ДЦПНЖК, может быть введено животному с целью усиления когнитивной функции у этого животного.
ДЦПНЖК может быть введена лактирующему животному в соответствии со способами изобретения, описанными в настоящем документе. В предпочтительном воплощении лактирующему животному вводят композицию, включающую одну или несколько ДЦПНЖК. В более предпочтительном воплощении лактирующему животному вводят композицию, включающую ДГК и АК. Композиция, включающая одну или несколько ДЦПНЖК, которую вводят лактирующему животному, может быть кормовой композицией для домашних животных или добавкой к рациону, описанными в настоящем документе. Композиция может быть введена лактирующему животному перед оплодотворением, во время беременности и после родов на протяжении периода выкармливания. Лактирующее животное может быть родителем животного, которому вводят молоко. Молоко может быть введено сосунку или может быть введено после отделения от лактирующего животного. Молоко может быть введено по необходимости или по желанию или как часть режима питания, как описано в настоящем документе.
В другом воплощении способ изобретения включает введение ДЦПНЖК животному во время беременности с помощью переноса от материнского животного к животному, которому ввели одну или несколько ДЦПНЖК. В предпочтительном воплощении материнскому животному вводят композиции, включающие одну или несколько ДЦПНЖК. В более предпочтительном воплощении материнскому животному вводят композиции, включающие ДГК и АК. Композиция, включающая одну или несколько ДЦПНЖК, которую вводят материнскому животному, может быть кормовой композицией для домашних животных или добавкой к рациону, описанными в настоящем документе. Композиция может быть введена материнскому животному от момента перед течкой до родов.
В еще одном воплощении ДЦПНЖК вводили животному как во время беременности, так и после родов в соответствии с подробным описанием, изложенным выше.
Количество композиции, применяемое в различных воплощениях способов изобретения, может зависеть от множества факторов, включая здоровье, состояние и/или возраст животного, особенности кормовой композиции для домашних животных или добавки к рациону, и от вида, размера или породы животного.
Определение улучшения когнитивных функций, таких как решение задач, памяти, и психической устойчивости животных, достигнутого в результате применения способов изобретения, может быть проведено с помощью любой методики, принятой в этой области техники. Примеры принятых методик будут приведены в последующих примерах.
В другом аспекте изобретение обеспечивает способ усиления одной или нескольких функций, которые выбирали из когнитивной способности, пространственного обучения, концептуального обучения, внимания, социальных контактов, ясности ума, памяти и интеллектуальной живости у животного с помощью введения животному композиции, включающей одну или несколько ДЦПНЖК в количестве, достаточном для усиления этой функции у животного. Способ особенно полезен для стареющих животных, для животных, которые достигли середины ожидаемой для этих животных продолжительности жизни. В одном воплощении способ включает регулярное введение ДЦПНЖК, например ежедневное или продленное регулярное введение, например ежедневное, еженедельное и им подобные на протяжении недель, месяцев, лет или на протяжении всей жизни животного. ДЦПНЖК вводили животному в таком количестве, как описано в настоящем документе. В одном воплощении пространственное обучение представляло собой память. В другом воплощении концептуальное обучение представляет собой обучаемость. Эти функции представляют собой прямой результат усиления когнитивных функций животного. Животные, в особенности стареющие животные, которым вводили ДЦПНЖК, имели лучшую память, быстрее решали задачи, контактировали с другими и были более проворными. Животные, такие как собаки и кошки, в особенности стареющие животные, были более легкотренируемыми, более контактными и, в целом, более живыми.
В дополнительном аспекте изобретение обеспечивает наборы, подходящие для введения животному композиции, включающей одну или несколько ДЦПНЖК. Наборы включают в отдельных контейнерах в порционной упаковке или в отдельных контейнерах, но в упаковке, не разделенной на порции, в качестве соответствующего набору компонента: (а) одну или несколько ДЦПНЖК и один или несколько из (1) один или несколько других компонентов, подходящих для потребления животными; (2) один или несколько когнитивных лекарственных препаратов; (3) один или несколько пребиотиков; (4) один или несколько пробиотиков; (5) один или несколько диагностических устройств, подходящих для определения того, может ли животное получить пользу от композиции и способов усиления когнитивной функции и связанных с ней функций; (6) инструкции по комбинированию или приготовлению ДЦПНЖК и любых других компонентов, предусмотренных в наборе для введения животному; (7) инструкции по применению комбинированных компонентов набора, подготовленных компонентов набора или других компонентов набора для пользы животного; и (8) устройство для приготовления и/или введение комбинированных или подготовленных компонентов набора животному. Каждый компонент поставляется в отдельном контейнере в порционной упаковке или в смеси различных компонентов в разных упаковках. Наборы могут включать компоненты в различных комбинациях. Например, набор может включать смесь одной или нескольких ДЦПНЖК и одного или нескольких кормовых компонентов, подходящих для комбинации или введения с ДЦПНЖК. Аналогично, набор может включать смесь ДЦПНЖК и кормовых компонентов, в одном контейнере и один или несколько других пребиотиков и/или пробиотиков в одном или нескольких других контейнерах. Другие такие комбинации могут быть созданы специалистом на основе характеристик компонентов и их физических и химических свойств и совместимости.
В другом аспекте изобретение обеспечивает способы донесения информации или инструкций для одной или нескольких из (1) применяемых композиций настоящего изобретения для усиления когнитивных и родственных функций, например когнитивной способности, пространственного обучения, концептуального обучения, внимания, общительности, ясности ума, памяти и живости ума; (2) смешивание ДЦПНЖК и других компонентов по изобретению для получения композиции, подходящей для усиления когнитивной и родственных функций; (3) применение наборов по настоящему изобретению для усиления когнитивной и родственных функций; и (4) введение композиции животному. Способы включают один или несколько физических или электронных документов, цифровое запоминающее устройство, оптическое запоминающее устройство, звуковой способ представления, аудиовизуальную демонстрацию или визуальную демонстрацию, включающие информацию или инструкции. Предпочтительно способы выбирали из группы, состоявшей из демонстрационного веб-сайта, наружной рекламы, брошюры, этикетки на изделии, вкладыша в упаковку, рекламного объявления, рекламной листовки, публичного заявления, звукозаписывающей ленты, видеопленки, DVD, CD-ROM, читаемого компьютером чипа, читаемой компьютером карты, читаемого компьютером диска, USB-устройства, FireWire-устройства, компьютерной памяти и любых их комбинаций.
В другом аспекте изобретение обеспечивает способы производства кормовой композиции, включающей ДЦПНЖК и один или несколько других компонентов, подходящих для потребления животным, например белок, жир, углевод, волокно, витамины группы В и антиоксиданты. Способы включают смешивание одного или нескольких компонентов, подходящих для потребления животным с ДЦПНЖК и с другими компонентами. Альтернативно, способы включают нанесение ДЦПНЖК и других компонентов, если желаемо, то отдельно или в любой комбинации, на кормовую композицию, например, в качестве оболочки или покрытия. ДЦПНЖК могут быть добавлены в любой момент в ходе производства и/или обработки кормовой композиции. Это включает, например, замешивание ДЦПНЖК как части основного состава «тела» кормовой композиции или нанесение компонентов в качестве оболочки, т.е. главным образом на поверхность кормовой композиции после ее производства. Композиции могут быть сделаны в соответствии с любым способом, принятым в этой области техники.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает упаковку, включающую композицию по настоящему изобретению и этикетку, прикрепленную к упаковке, содержащую слово или слова, картинку, рисунок, аббревиатуру, слоган, фразу или другие символы или их комбинации, которые указывают на то, что содержимое упаковки содержит композицию, применяемую для усиления когнитивной и родственных функций. Обычно такие эмблемы включают слова «улучшает когнитивную функцию», «улучшает память», «поддерживает ясность и живость ума» или эквивалентное выражение, напечатанное на упаковке. Любая упаковка или упаковочный материал, подходящий для заключения в него композиции, применим в изобретении, например пакет, коробка, бутылка, консервная банка, мешочек и им подобные, произведенный из бумаги, пластика, фольги, метала и т.п. В предпочтительном воплощении упаковка содержит кормовую композицию, подобранную для определенного животного, такого как человек, собака или кошка, как указано на этикетке, предпочтительно кормовую композицию для животного-компаньона.
В другом аспекте изобретение обеспечивает применение ДЦПНЖК в приготовлении лекарственного средства для усиления когнитивной и родственных функций у животного. Лекарственное средство может дополнительно включать одну или несколько ДЦПНЖК. Обычно лекарственные средства готовили путем смешивания соединения или композиции с наполнителями, буферами, связующими веществами, пластификаторами, красителями, растворителями, сжимающими агентами, смазывающими веществами, отдушками, увлажнителями и с другими компонентами, известными специалистам в качестве применяемых для производства лекарственных средств и разработки рецептуры лекарственных средств, пригодных для введения животному.
Следующие примеры приведены для более подробного описания изобретения. Примеры предназначены проиллюстрировать, но не ограничить изобретение.
Пример 1
Влияние добавления ДЦПНЖК к пище на проявление когнитивной функции у щенков
1
2
Животные и корма. Собаки были помесью лайки и пойнтера. Собак-самок содержали в вольерах, имевших как закрытую, так и открытую часть, в течение от момента вязки до 3-й недели после появления щенков. В это время каждая самка и ее помет передвигались по загону размером 4 на 5 метров с большим домом. Щенков содержали вместе с их матерями до 10-недельного возраста и размещали группами в их загонах до конца исследования. С момента родов всех щенков приручали в течение 20-45 минут 1-2 раза в день. С 4-недельного возраста и до конца исследования щенков одного помета прогуливали как группу от / до 1 мили ежедневно.
Пять беременных самок на протяжении беременности и лактации кормили куриной и рисовой диетой Purina Preplan Performance (Nestle-Purina Pet Care Co., St. Louis, МО). Животных кормили для поддержания оптимального показателя состояния тела (5/10) во время беременности и лактации. Корм предлагали два раза в день. Щенков из 5 пометов равномерно, насколько это было возможно, разделяли по полу и их распределяли в одну из двух групп диетической обработки: «А» (кукурузное масло в качестве плацебо) и «В» (добавление ДГК и АК). Суммарно в каждую группу было определено по 20 щенков. Щенкам предлагали размоченную основную диету дважды в день, начиная с 3-недельного возраста. Добавки вводили как процентное содержание от диетического потребления жира (2% для ДГК, 1% для АК и 3% для кукурузного масла) один раз в день с утренним кормлением. Группа В ежедневно получала добавки ДГК и АК в количестве 1% и 2% от общего содержания жирных кислот в их основной диете (куриная и рисовая диета Purina Pro Plan Performance). Щенков еженедельно взвешивали, вес регистрировали и соответствующим образом регулировали дозу добавок. Их приручали и выводили на прогулки для обеспечения правильной социализации.
Тестирование когнитивной функции. Поведенческое тестирование начинали на 8-й неделе жизни с теста на вой и визг. В этом тесте для оценки психической устойчивости щенка изолировали в клетке и определяли, сколько ему понадобится времени для того, чтобы завыть в первый раз и затем завизжать или завыть 3 раза подряд. Было показано, что в тесте на вой и визг собаки, получавшие добавки, имели численную тенденцию к более хорошим показателям (им требовалось больше времени для того, чтобы завыть или завизжать), что говорит о более хорошей психической устойчивости. Эти данные суммированы в табл.1.
Таблица 1
Среднее время (секунды) в тесте на вой и визг
Время воя
Время визга
Обработка А (кукурузное масло)
18,5
35
Обработка В (ДГК и АК)
32
51
p-величина контроль = обработка
0,41
0,17
На 10-й неделе оценивали способность щенков решать задачи с помощью U-образного лабиринта. В этом тесте щенков помещали в закрытую U-образную ограду так, чтобы они могли видеть своего инструктора и порцию корма через проволочный экран, расположенный в верхней части лабиринта. Для того чтобы выйти из лабиринта, они должны были отвернуться от своих инструкторов и обойти весь лабиринт до конца. Измеряли время, потребовавшееся для выполнения этого задания. Щенкам давали 3 минуты для обследования лабиринта перед тем, как их уводили для совершения этой попытки. Это мероприятие повторяли 5 раз за сеанс и щенков тестировали в 2-х различных сеансах, проведенных через неделю. Данные суммированы в табл.2.
Таблица 2
Среднее время прохождения U-образного лабиринта (секунды)
Попытка 1
Попытка 2
Обработка А
27,0
17,3
Обработка В
31,3
14,3
На 12-й неделе жизни проводили тест на решение задач и память в длинном лабиринте. В этом тесте щенков помещали в длинный прямоугольный лабиринт с 6 воротами. Щенка помещали в один конец лабиринта, тогда как инструктор стоял в дальнем конце и призывал его подойти к порции с едой. Для того чтобы достичь инструктора, щенок должен найти и пройти через открытую часть каждых ворот. Каждый щенок пробегал одинаковый маршрут, но маршрут изменяли между следующими друг за другом щенками, так чтобы они не могли пользоваться обонянием для прохождения лабиринта. Для каждого пробега регистрировали время прохождения лабиринта и число ошибок. Каждый сеанс состоял из 3-х пробегов через лабиринт. Щенков тестировали один раз в неделю, в целом, в течение 3-х сеансов. В первой попытке не было обнаружено никаких различий между группами с разными обработками. Во второй попытке среднее, медиана и минимальное число пробегов было значительно ниже (p<0,05) для щенков группы обработки (В). Медиана и минимальное число ошибок было направленно (p<0,10) ниже для щенков, получавших обработку В. Собаки, употребляющие ДГК/АК, лучше вели себя во втором пробеге в длинном лабиринте. Эти данные позволяют предположить, что память была усилена добавлением ДГК/АК. Эти данные суммированы в табл.3.
Таблица 3
Значения для длинного лабиринта
Попытка 1
Попытка 1
Попытка 2
Попытка 2
Время пробега (сек)
Ошибки
Время пробега (сек)
Ошибки
Среднее из повторенных пробегов
Обработка А
74,8
4,2
55,3
4,2
Обработка В
94,2
4,3
43,7
2,8
p-величина А=В
0,51
0,73
0,03
0,15
Медиана из повторенных пробегов
Обработка А
79,0
4,0
53,3
4,0
Обработка В
87,5
4,5
40,5
3,0
p-величина А=В
0,56
0,79
0,03
0,07
Минимум из повторенных пробегов
Обработка А
52,5
3,0
37,5
2,0
Обработка В
57
3,0
25,0
1,0
p-величина А=В
0,33
0,33
0,05
0,08
На 15-й неделе жизни щенков тестировали на ключевые ассоциации в Т-образном лабиринте. В этом тесте щенки наблюдали, как подвешивали звонок, и звонили перед одним из двух входов, каждый был закрыт занавеской. После того как звонок прозвонил, его убирали и щенок должен быть подождать 30 секунды перед вхождением в камеру, в которой щенок мог выбрать сторону для входа. Предварительно щенку показывали, что та сторона, где звенел звонок, приводит к выходу из лабиринта и к корму, тогда как другая сторона представляла собой тупик. В Т-образном лабиринте попытки состояли из 10 пробегов, и всех щенков тестировали в 2-х попытках за две последующие недели. Дополнительно любой из щенков, который не совершил 7 из 10 правильных выборов после 2-х попыток, продолжал до тех пор, пока 7 из 10 правильных выборов не будет сделано за попытку. Проводили до 4-х попыток в Т-образном лабиринте. В первой попытке не было обнаружено различий между группами с разной обработкой. Во второй попытке среднее время пробега было направленно (p<0,10) ниже для щенков группы обработки А. Соответственная частота ошибок была численно ниже. Среднее время пробега также было численно ниже для щенков группы обработки А. Эти данные суммированы в табл.4.
Таблица 4
Значения для Т-образного лабиринта
Попытка 1
Попытка2
Попытка 1
Попытка 2
Время пробега
Ошибки
Время пробега
Ошибки
Среднее из повторенных пробегов
Обработка А
11,5
5
3,85
0,3
Обработка В
11,2
5
5,75
0,5
p-величина А=В
0,85
0,95
0,85
0,12
Медиана из повторенных пробегов
Обработка А
7
2,75
Обработка В
5
3,50
p-величина А=В
0,7
0,30
Для длинного и Т-образного лабиринта некоторые ответы были получены после многочисленных пробегов. Среднее, медиана и минимальное число пробегов и частота появления ошибок применяли в качестве ответов в длинном лабиринте. Среднее время пробега и частота появления ошибок и медианное время пробега применяли в качестве ответов в Т-образном лабиринте. Распределение большинства ответов показало значительное отклонение от нормального распределения. Различия между группами обработками для каждого ответа тестировали с помощью непараметрического анализа расхождений, выполненного по рядам данных после учета разницы в распределении разбросов внутри групп с разной обработкой.
Биохимические тесты. У всех щенков в возрасте 8-ми и 16-ти недель брали образцы крови. Образцы крови центрифугировали при 10,00 Х G и плазму удаляли. Эритроциты промывали 3 раза изотоническим солевым раствором и затем хранили в ампулах. Все образцы тканей (молоко, плазма и эритроциты) помещали в ампулы для замораживания и закрывали под азотом перед хранением при -70°С перед анализом.
В табл.5 и 6 представлены результаты анализа жирных кислот в плазме образцов, собранных на 8-й и 16-й неделях соответственно. Величины ДГК в плазме были примерно в 4 раза выше в группе собак обработки В, чем в группе обработки А для образцов, отобранных как на 8-й, так и на 16-й неделях жизни. Не наблюдалось значительных различий в величинах АК, ЛК, ДПК или ЭПК между группами с разными обработками для каждого периода времени.
Таблица 5
Анализ жирных кислот в плазме крови, собранной на 8-й неделе жизни (% относительно суммарных жирных кислот)
ЛК
АК
ЭПК
ДПК
ДГК
Обработка А
24,6
16,77
0,18
0,356
1,25
Обработка В
22,8
17,23
0,33
0,325
4,78
p-величина А=В
0,026
0,278
<0,001
0,235
<0,00001
Таблица 6
Анализ жирных кислот в плазме крови, собранной на 16-й неделе жизни (% относительно суммарных жирных кислот)
ЛК
АК
ЭПК
ДПК
ДГК
Обработка А
22,48
16,76
0,179
0,555
0,74
Обработка В
20,99
17,07
0,290
0,676
3,58
p-величина А=В
0,005
0,313
<0,0001
0,009
<0,0001
В табл.7 представлено содержание мембранных жирных кислот, полученных из RBC, собранных на 16-й неделе жизни. Как было показано, при анализе жирных кислот плазмы величины ДГК мембран RBC были значительно выше у собак в группе обработки В, чем в группе обработки А. Различия между группами обработки в концентрации ДГК мембран RBC было более чем в два раза больше, чем это же различие, полученное в образцах плазмы.
Таблица 7
Содержание жирных кислот в мембранах RBC на 16-й неделе жизни (% относительно суммарных жирных кислот)
ЛК
АК
ЭПК
ДПК
ДГК
Обработка А
11,617
21,316
0,139
0,42
0,346
Обработка В
10,812
22,735
0,226
0,344
2,65
p-величина А=В
0,012
0,053
<0,00001
0,004
<0,00001
Настоящее изобретение не ограничивается описанными и приведенными выше в качестве примеров воплощениями, а может быть изменено и модифицировано в рамках прилагаемой формулы изобретения.