СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА СУХОГО ПОРОШКА ИЗ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ
METHOD OF MANUFACTURING DRY POWDER OF EARTHWORMS

Настоящее изобретение относится к способу производства сухого порошка из дождевых червей, в частности к способу производства нетоксичного сухого порошка из дождевых червей при исключении инактивации ферментов, содержащихся в дождевом черве.
Дождевые черви использовались с древних времен в восточных странах в качестве лекарственных средств для предупреждения и лечения различных заболеваний, и нашли применения в качестве стимулирующего уменьшение и выведение внутрипузырных камней средства, средства против наличия солей желчных кислот в крови или тканях, вызывающего или облегчающего роды средства, тонизирующего средства, укрепляющего рост волос средства, улавливающего средства, жаропонижающего средства, средства для лечения судорог, ускорителя кровотока, средства для лечения гемиплегии, анальгетика непрямого действия, средства для улучшения мочеиспускания, средства против бронхиальной астмы, противогипертонического средства и других.
Для производства лекарства для орального введения при использовании дождевого червя в качестве сырья необходимо удалить землю из дождевого червя, остающуюся в пищеварительных трактах, отложение на коже и другое, и для этой цели были предложены различные способы.
Примеры ранее предложенных способов включают способы производства сухого порошка из дождевых червей, применимого в качестве противодиабетического средства, средства против гиперлипидемии или средства для регулирования кровяного давления, путем погружения живых организмов дождевых червей в водный раствор соли щелочного металла, такой как соль натрия или соль калия, предоставления им возможности выведения экскрементов в пищеварительных трактах, мокрого измельчения дождевых червей и высушивания замороженной суспензии, полученной таким образом, в вакууме (JP 64-47718 А, JP 64-47719 A, JP 64-47720 A и JP 01-268639 A),
и способ производства лекарства для пациентов с тромбозом путем погружения живых организмов дождевых червей в водный раствор кислоты, сохраняемый при 6-25°С, на 0,1-5 часов, предоставления им возможности выведения экскрементов в пищеварительных трактах, измельчения дождевых червей, дегазации гомогената и сушки в вакууме гомогената при ступенчатом повышении температуры (JP 03-72427 А).
Авторы настоящего изобретения также предложили способ вынуждения дождевого червя выводить свое содержимое из пищеварительного тракта путем постановки дождевого червя в рамках окружающей среды в условие непривлекательной среды обитания, созданной с использованием органической кислоты (JP 2008-081476 А).
Однако порошки из дождевых червей, полученные с помощью общепринятых способов производства, имели проблему, заключающуюся в том, что содержащиеся в дождевом черве микробы не в достаточной степени стерилизованы, в зависимости от стадии сушки с помощью высушивания замороженного продукта в вакууме и т.п. Хотя были приняты меры, такие как стерилизация спиртом, эти меры также имели проблемы, связанные с увеличением работы и удлинением периода времени, а следовательно, увеличением затрат, и поэтому существовала потребность в мерах для решения этих проблем.
Задачей настоящего изобретения является предоставление простого и легкого способа производства нетоксичного сухого порошка из дождевых червей при исключении инактивации ферментов, содержащихся в дождевом черве.
После тщательных исследований для решения указанной выше проблемы авторы настоящего изобретения установили, что ее можно решить путем нагревания порошка из дождевых червей при специфической температуре после лиофилизации, и создали настоящее изобретение.
Общеизвестно, что обычно ферменты неустойчивы к нагреванию, за исключением ферментов в некоторых термофильных бактериях, и поэтому проводилась термообработка при вплоть до приблизительно 80°С, но термообработка при температуре, превышающей 80°С, еще не обсуждалась. Однако авторы настоящего изобретения сфокусировались на том факте, что термообработка является самым безопасным, самым простым и самым удобным способом среди исследованных способов стерилизации порошка из дождевых червей, и исследовали оптимальные температуры нагревания. В результате они установили, что активность ферментов, содержащихся в порошке из дождевых червей, сохранялась, даже если порошок из дождевых червей нагревали до температуры, существенно превышающей температуру, используемую в других способах.
Конкретно, способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением включает стадии измельчения живых дождевых червей в гомогенат, лиофилизации гомогената и термообработки высушенного продукта при температуре в пределах 110°С и выше, но ниже 130°С.
Предпочтительно, способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением включает, кроме того, процесс приготовления живых дождевых червей, предшествующий стадии измельчения, который включает стадии нахождения живых дождевых червей на свету в течение от 10 до 50 часов; удаления образованных на их коже наносов; приведения дождевых червей в контакт с органической кислотой в течение 30 секунд или меньше; разбавления кислоты добавлением воды для доведения рН водного кислого раствора до рН в пределах от 2 до 5; нахождения смеси дождевых червей при указанном параметре рН в течение от 3 до 180 минут и затем промывки дождевых червей водой.
Альтернативно, способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением включает, кроме того, процесс приготовления живых дождевых червей, предшествующий стадии измельчения, который включает стадии нахождения живых дождевых червей на свету в течение от 10 до 50 часов; удаления образованных на их коже наносов; погружения дождевых червей в раствор органической кислоты, имеющий рН, доведенный заранее, в пределах от 2 до 5; нахождения смеси дождевых червей при указанном параметре рН в течение от 3 до 180 минут и затем промывки дождевых червей водой.
Также способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением включает, кроме того, процесс приготовления живых дождевых червей, предшествующий стадии измельчения, который включает стадии нахождения живых дождевых червей на свету в течение от 10 до 50 часов; удаления образованных на их коже наносов; приведения дождевых червей в контакт с кристаллическим порошком гидроксикарбоновой кислоты в течение 30 секунд или меньше; разбавления кислоты добавлением воды для доведения рН водного кислого раствора до рН в пределах от 2 до 5; нахождения смеси дождевых червей при указанном параметре рН в течение от 3 до 180 минут и затем промывки дождевых червей водой.
Кроме того, в способе производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно, чтобы промывку водой выполняли водой, содержащей микро-нанопузырьки.
Кроме того, в способе производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно, чтобы лиофилизация проводилась в вакууме после замораживания гомогената при температуре от -18°С до -35°С в течение 20-240 часов.
Настоящее изобретение может обеспечить простой и легкий способ производства нетоксичного сухого порошка из дождевых червей при исключении инактивации ферментов, содержащихся в дождевом черве.
На чертеже:
Фиг.1 представляет собой диаграмму, на которой демонстрируются результаты примеров 1 и 2 и сравнительного примера 1.
Ниже способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением будет описан подробно.
Lumbricus rubellus
Lumbricus terrestris
Eisenia foetida
Allolobophora caliginosa
Dendrobaena octaedra
Allobophora japonica
Drawida hattamimizu
Pheretima divergens
Pheretima communissima
Pheretima agrestis
Pheretima sieboldi
Pheretima hilgendorfi
Pontodrilus matsushimensis
Tubifex hattai
Limnodrilus gotoi
L. socialis
В способе в соответствии с настоящим изобретением живые дождевые черви используются в качестве сырья, и примеры живых дождевых червей включают , ,,,,Michaelsen,  Hatai,  Michaelsen, ,, Horst,,Lizuka,  Nomura, Hatai ( Stephenson) и т.д.
Приготовление живых дождевых червей для использования в относящемся к настоящему изобретению способе до измельчения особенно не ограничивается, но такое приготовление можно выполнить, например, следующим образом. Сначала живых дождевых червей, собранных с грядки культуры, переносят в уплощенную емкость, такую как емкость для хлеба, и сохраняют в ней в течение 10-50 часов, предпочтительно в течение одного дня. Содержание живых дождевых червей в емкости должно быть количеством, соответствующим толщине 30-60 мм, предпочтительно 40-50 мм. Должно быть проявлено внимание для обеспечения того, чтобы чужеродные материалы, такие как песок и грязь, не оставались в уплощенной емкости, и уплощенную емкость следует держать на свету в ночное время, как в культуре дневного света, поскольку дождевые черви ведут ночной образ жизни и активны в жизнедеятельности в темном месте и, следовательно, могут расходовать свою физическую силу. Живые дождевые черви демонстрируют свою функцию самозащиты при обработке, чтобы сохранить свою среду обитания путем выделения продуктов пищеварения, остающихся в пищеварительных трактах, покрывая свои тела целиком экскрементами, и, следовательно, предотвращая испарение воды, и можно, в конце концов, удалить продукты пищеварения в пищеварительных трактах и загрязнения, отложенные на их коже, почти полностью путем удаления загрязнений, т.е. экскрементов, покрывающих дождевых червей, многократно используя подходящий способ. Удаление загрязнений, отложенных на коже, можно выполнить путем покрытия живых дождевых червей, например, не являющейся текстильной тканью и, следовательно, предоставления возможности абсорбции загрязнений.
Затем живые дождевые черви, у которых удалены таким образом загрязнения, предпочтительно подвергают непосредственному воздействию среды обитания, непривлекательной для живых дождевых червей. Такая обработка вынуждает живых дождевых червей пытаться улучшить среду обитания путем выделения жидкости организма при проявлении у них функции самосохранения, и поэтому можно вынудить дождевых червей выделять не только продукты пищеварения, остающиеся в пищеварительных трактах, но также аммиак, причину зловонного запаха, а также жидкость организма, содержащую мышьяк, который токсичен для организма.
Примером способа создания непривлекательной среды обитания является приведение живых дождевых червей в контакт с органической кислотой. Непривлекательную для живых дождевых червей среду обитания можно создать сразу же путем приведения дождевых червей в контакт с органической кислотой. Что касается контактирования с органической кислотой, порошок органической кислоты можно распылить непосредственно или в виде концентрированного водного раствора органической кислоты на живых дождевых червей. Примеры органических кислот, использованных затем, включают уксусную кислоту, яблочную кислоту, лимонную кислоту, молочную кислоту, молоновую кислоту, янтарную кислоту и т.п. Эти кислоты можно использовать сами по себе или в виде смеси двух или более кислот. Особенно предпочтительной органической кислотой является лимонная кислота. Если создается такая непривлекательная среда обитания, которая описана выше, длительный контакт между живыми дождевыми червями и порошком органической кислоты или концентрированным водным раствором органической кислоты приводит к гибели дождевых червей с утратой жизнедеятельности и, следовательно, к отсутствию выделения продукта пищеварения в пищеварительных трактах, и поэтому органическую кислоту следует разбавить водой в кратчайшие сроки, обычно в пределах 30 секунд или меньше, предпочтительно 20 секунд или меньше, для доведения рН водного кислого раствора до рН в пределах от 2 до 5. Предпочтительным является использование следующей содержащей микро-нанопузырьки воды в качестве воды для разбавления органической кислоты, поскольку она приводит к увеличению количества жидкости организма, выделяемой из дождевых червей.
Вместо приведения дождевых червей в контакт с порошком органической кислоты или концентрированным водным раствором органической кислоты с последующим разбавлением в кратчайшие сроки, как описано выше, водный раствор органической кислоты можно приготовить заранее с доведением рН в пределах от 2 до 5, и в него можно погрузить дождевых червей, и можно также использовать водный раствор органической кислоты, содержащий микро-нанопузырьки. Период, когда живые дождевые черви проявляют функцию самозащиты, варьирует до некоторой степени, поскольку приблизительно 65% ткани живого дождевого червя является влагой, и поэтому существует некоторая периодическая поправка на функцию самозащиты. Однако, поскольку гибель живых дождевых червей является нежелательной, должно быть проявлено внимание в контролировании периода, на который живых дождевых червей помещают в непривлекательную среду обитания. Этот период может меняться в соответствии с используемым условием, но обычно находится в пределах от 3 до 180 минут. Помимо разбавления водой, рН можно довести путем нейтрализации щелочью или использования буферного раствора. Использование такой органической кислоты эффективно для вынуждения дождевого червя выделять продукт пищеварения, остающийся в пищеварительном органе, как описано выше, и также для стерилизации нежелательных микробов, которые нельзя удалить промывкой водой, вследствие бактерицидного действия органической кислоты.
Живых дождевых червей можно привести в контакт с гидроксикарбоновой кислотой, в качестве способа создания непривлекательной среды обитания. В этом случае контакт с гидроксикарбоновой кислотой можно осуществлять с помощью любого способа, но предпочтительно живых дождевых червей сочетают с кристаллическим порошком гидроксикарбоновой кислоты путем распыления с последующим добавлением воды сразу же для разбавления гидроксикарбоновой кислоты, чтобы довести рН водного кислого раствора до рН в пределах от 2 до 5, и смесь дождевых червей сохраняют при указанном параметре рН в течение от 3 до 180 минут. Длительный контакт между живыми дождевыми червями и порошком гидроксикарбоновой кислоты приводит к гибели дождевых червей с утратой жизнедеятельности и, следовательно, к отсутствию выделения продукта пищеварения в пищеварительных трактах, и поэтому гидроксикарбоновую кислоту следует разбавить водой в кратчайшие сроки, обычно в пределах 30 секунд или меньше, предпочтительно 20 секунд или меньше, для доведения рН водного кислого раствора до рН в пределах от 2 до 5. Помимо разбавления водой, рН можно довести путем нейтрализации щелочью или использования буферного раствора. Предпочтительным является использование следующей содержащей микро-нанопузырьки воды в качестве воды для разбавления органической кислоты, поскольку она приводит к увеличению количества жидкости организма, выделяемой из дождевого червя. Если используется такая гидроксикарбоновая кислота, ее высокая степень кислотности разлагает кожу живых дождевых червей, а ее стерилизующая активность вызывает сразу же создание среды обитания, непривлекательной для дождевых червей, так что дождевой червь пытается улучшить среду обитания путем выделения жидкости своего организма в рамках функции самозащиты. Контактная обработка также эффективна для уменьшения патогенных микробов, содержащихся в организме дождевого червя. Гидроксикарбоновая кислота, которая может образовывать комплексные соединения с тяжелыми металлами, связывается с токсичными металлами, такими как меркурий, кадмий и свинец, присутствующими в организме дождевого червя, преимущественно выводя эти металлы из организма. Кристаллическая гидроксикарбоновая кислота, используемая в таком случае, особенно не ограничивается количеством гидроксильных групп или карбоксильных групп, содержащихся в ней, если соединение является кристаллическим при используемом условии. Таким образом, она может быть монокарбоновой монооксикислотой, поликарбоновой монооксикислотой, монокарбоновой полиоксикислотой или поликарбоновой полиоксикислотой. Примеры гидроксикарбоновых кислот включают гликолевую кислоту, молочную кислоту, β-гидроксипропионовую кислоту, α-гидрокси-н-масляную кислоту, β-гидрокси-н-масляную кислоту, α-гидрокси-н-валериановую кислоту, β-гидрокси-н-валериановую кислоту, яблочную кислоту, α-метиляблочную кислоту, α-гидроксиглутаровую кислоту, β-гидроксиглутаровую кислоту, лимонную кислоту и т.п., среди которых молочная кислота, яблочная кислота и лимонная кислота являются предпочтительными, в разрезе доступности. Эти гидроксикарбоновые кислоты могут использоваться сами по себе или в виде смеси двух или более кислот.
Затем тела живых дождевых червей после практически полного удаления отложений промывают очищенной водой и затем измельчают в жидкость или пастообразный гомогенат. Измельчение выполняют, например, в гомогенизаторе, смесителе, смесителе-гомогенизаторе, заторном аппарате или прессе для клеток высокого давления, обычно при температуре, составляющей от 1 до 25°С, предпочтительно от 2 до 15°С. Гомогенат затем подвергают лиофилизации. Поскольку содержащиеся в организме живых дождевых червей ферменты неактивны, когда клетки все еще живы, но взаимодействуют моментально с погибшими клетками с образованием тепла и сильного гнилостного запаха при глистном разложении, для его предотвращения предпочтительным является использование лиофилизации в рамках проводимого в вакууме процесса, в котором гомогенат можно быстро охладить до температуры, составляющей от -18°С до -35°С, для ингибирования действий ферментов и лиофилизации.
Для превращения в порошок без ухудшения фармакологического действия, присущего дождевому червю, гомогенат следует лиофилизировать быстро, но, с другой стороны, очень быстрое замораживание не является предпочтительным, поскольку, когда гомогенат замораживают за чрезмерно короткий период времени, примеси, присутствующие вместе с белками, которые являются основным компонентом пасты из дождевых червей, могут не отделяться, поскольку они образуют неоднородные не замороженные участки. По этой причине замораживание предпочтительно проводят при низкой температуре, составляющей от -18°С до -35°С, в течение периода времени, составляющего от 20 до 240 часов, более предпочтительно от 50 до 170 часов.
Во время сушки замороженного продукта в вакууме важно выбрать условие, делающее возможным предпочтительное удаление воды, а также примесей. Для этой цели предпочтительным является проведение сушки замороженного продукта в вакууме при ступенчатом увеличении температуры в пределах от -60°С до +90°С под давлением в 50 Па или меньше, занимающем от 10 до 60 часов.
Например, как описано выше, гомогенат замораживают при температуре, составляющей от -18°С до -35°С, в течение периода времени, составляющего от 20 до 240 часов, и сушку замороженного продукта в вакууме выполняют в течение 10-60 часов при ступенчатом изменении температуры и давления в пределах от -60°С до +90°С и от 40 до 25 Па, соответственно, для получения бледно-желтого сухого порошка из дождевых червей в стерильном состоянии.
Живых дождевых червей для использования в настоящем изобретении предпочтительно промывают водой, например, после такой обработки, которая описана выше, и до превращения в порошок, но в таком случае предпочтительно можно использовать содержащую микро-нанопузырьки воду в качестве используемой воды. Использование такой воды несет выигрыш, заключающийся в том, что эффективность промывки увеличивается. Микро-нанопузырьки означают здесь пузырьки, имеющие диаметр от 0,01 до 100 мкм, и пузырек может быть воздушным пузырьком и кислородным пузырьком. Содержащую микро-нанопузырьки воду можно приготовить, например, с помощью способа ее получения путем разрушения микропузырьков под высоким давлением или с помощью способа получения пузырьков путем использования мембраны из пористого стекла типа SHIRASU (SPG). Примером устройства, создающего содержащую микро-нанопузырьки воду, является создающая/растворяющая мелкие пузырьки система, имеющая барботажное устройство с включенными отверстиями, такая как система, производимая SPG Technology Co., Ltd.
Способ производства сухого порошка из дождевых червей в соответствии с настоящим изобретением характеризуется термообработкой высушенного продукта из дождевых червей, который получают путем высушивания гомогената промытых живых дождевых червей, при температуре, составляющей 110°С или выше, но ниже 130°С, предпочтительно при 115-125°С. Когда температура нагревания ниже 110°С, высушенный продукт может быть стерилизован в недостаточной степени, в то время, как она составляет 130°С или выше, содержащиеся в высушенном продукте из дождевых червей ферменты могут непредпочтительно инактивироваться, что приводит к снижению их активностей. Способ нагревания особенно не ограничивается, и его примеры включают способ путем продувки горячего воздуха, путем использования нагревательной рубашки, путем нагревания с использованием нагревателя на полке и т.п., путем использования печи при постоянной температуре и т.п.
Период нагревания предпочтительно составляет от 30 секунд до 130 минут, более предпочтительно от 30 минут до 90 минут и далее предпочтительно от 60 минут до 90 минут. Не является предпочтительным, когда чрезмерно короткий период нагревания может привести к недостаточной стерилизации, в то время как чрезмерно длинный период - к инактивации ферментов.
Промышленная применимость
Сухой порошок из дождевых червей, получаемый с помощью способа производства в соответствии с настоящим изобретением, применим, например, в качестве средства для регулирования кровяного давления, средства против гиперлипидемии, противодиабетического средства или тромболитического средства, аналогично сухим порошкам из дождевых червей, приготовленным с помощью общепринятых способов. Также возможно использование порошков в качестве активного ингредиента в лекарствах, косметических средствах и вспомогательных средств, путем экстракции порошка, например, с использованием очищенной воды или спирта, центрифугирования полученного раствора и фракционирования ингредиентов по молекулярной массе.
Ниже настоящее изобретение будет описано конкретно со ссылкой на примеры, но должно быть понятно, что настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.
Приготовление высушенного продукта из дождевых червей
Lumbricus rubellus
30 кг живых дождевых червей , приготовленных путем выдерживания на свету в течение от 10 до 50 часов и очищенных от наносов, образованных на их коже, помещали и распределяли до толщины, составляющей приблизительно 5 см, в уплощенной емкости, и на них равномерно распыляли 250 г порошка лимонной кислоты, и через 15 секунд кислоту разбавляли 30 литрами очищенной воды. рН водного кислого раствора сразу же после добавления воды составлял 2,25, в то время как рН в конце разбавления составлял 2,74.
При добавлении порошка лимонной кислоты путем распыления, дождевые черви выделяли желтоватую жидкость организма без замедления, и таким образом, были удалены аммиак, причина зловонного запаха, тяжелые металлы, такие как мышьяк, опасный для организма, и вещества, ингибирующие гиперфибринолиз.
Живых дождевых червей затем отделяли от грязного водного раствора лимонной кислоты, промывали водой и измельчали в пасту из дождевых червей при 10°С, используя гомогенизатор. Затем пасту из дождевых червей дегазировали в вакууме, помещали на лоток из нержавеющей стали, охлаждали мгновенно до -35°С и сохраняли при этой же температуре, делая возможным постепенное замораживание в течение периода времени, составляющего 50 часов.
Сушку замороженного продукта в вакууме выполняют таким образом, чтобы замороженная таким образом паста продолжала находиться при температуре, составляющей -35°С, под давлением 0 Па в течение 2 часов, и замороженную пасту из дождевых червей подвергали ступенчатому нагреванию при температуре, составляющей 25°С, под давлением 40 Па в течение 10 часов, при температуре, составляющей 40°С, под давлением 35 Па в течение 14 часов, при температуре, составляющей 65°С, под давлением 35 Па в течение 12 часов, и, наконец, при температуре, составляющей 80°С, под давлением 25 Па в течение 6 часов. Обработка давала бледно-желтый сухой порошок из дождевых червей с содержанием воды, составляющим 8% по весу.
Термообработка высушенного продукта
Сухой порошок, полученный, как указано выше, подвергали термообработке в нагревательном устройстве RM-50D (производимом OKAWARA CORPORATION). Параметром нагревания были 110°С, 120°С или 130°С, как описано ниже, и часть высушенного порошка отбирали с интервалом в 15 минут после того, как порошок был нагрет до заданной температуры. Что касается отобранного высушенного порошка, ферментативную активность, остающуюся в порошке, оценивали в чашечном тесте определения лизиса фибрина. Сначала 20 мл физиологического раствора добавляли к 1 г порошка, смесь встряхивали при комнатной температуре и при 150 оборотах/мин в течение 1 часа и центрифугировали при 10000 оборотах/мин и 4°С в течение 15 минут, и полученный супернатант использовали в качестве образца. В чашечном тесте определения лизиса фибрина фибриноген (производимый Sigma Aldrich Corporation) растворяли в 10 мл BSB (физиологическом буферном растворе бора, рН 7,8) до конечной концентрации, составляющей 0,6%, и добавляли тромбин до концентрации 5,0 Е/мл для приготовления чашки с фибриновой пленкой; 30 мкл образца помещали на чашку с фибриновой пленкой, и определили площадь окна фибринолиза, образованного после инкубации при 37°С в течение 4 часов. Полученные результаты суммированы в следующей таблице 1. Чашечный тест определения лизиса фибрина повторяли трижды, и определяли среднюю площадь. Кроме того, диаграмма, на которой демонстрируются полученные результаты, представлена на фиг.1.
Условие нагревания
Пример 1
Номер прогона
Температура
Суммарный период нагревания
Выдержанный при указанной температуре период времени
110-60-0
110°C
60 минут
0 минут
110-75-15
110°C
75 минут
15 минут
110-90-30
110°C
90 минут
30 минут
110-105-45
110°C
105 минут
45 минут
110-120-60
110°C
120 минут
60 минут
110-135-75
110°C
135 минут
75 минут
110-150-90
110°C
150 минут
90 минут
Пример 2
Номер прогона
Температура
Суммарный период нагревания
Выдержанный при указанной температуре период времени
120-40-0
120°C
40 минут
0 минут
120-55-15
120°C
55 минут
15 минут
120-70-30
120°C
70 минут
30 минут
120-85-45
120°C
85 минут
45 минут
120-100-60
120°C
100 минут
60 минут
120-115-75
120°C
115 минут
75 минут
120-130-90
120°C
130 минут
90 минут
Сравнительный пример 1
Номер прогона
Температура
Суммарный период нагревания
Выдержанный при указанной температуре период времени
130-40-0
130°C
40 минут
0 минут
130-55-15
130°C
55 минут
15 минут
130-70-30
130°C
70 минут
30 минут
130-85-45
130°C
85 минут
45 минут
130-100-60
130°C
100 минут
60 минут
130-115-75
130°C
115 минут
75 минут
130-130-90
130°C
130 минут
90 минут
Таблица 1
Площадь лизиса, мм<sup>2</sup>
Средняя
Первый раз
Второй раз
Третий раз
Контроль*
495,0
508,2
488,4
488,4
Пример 1
110-60-0
453,7
440,9
460,1
460,1
110-75-15
442,5
424,3
443,1
460,1
110-90-30
427,2
406,0
434,7
441,0
110-105-45
421,5
422,1
426,2
416,1
110-120-60
408,7
408,0
422,2
396,0
110-135-75
412,7
416,0
408,0
414,0
110-150-90
411,4
406,0
418,2
410,0
Пример 2
120-40-0
421,6
420,2
430,5
414,1
120-55-15
396,7
398,0
398,0
394,0
120-70-30
368,1
370,6
355,3
378,3
120-85-45
361,6
361,0
359,1
364,8
120-100-60
355,3
351,5
355,3
359,1
120-115-75
330,0
336,7
325,8
327,6
120-130-90
322,2
329,4
313,2
324,0
Сравни-тельный пример 1
130-40-0
293,0
294,1
290,7
294,1
130-55-15
196,0
191,8
198,8
197,4
130-70-30
158,5
152,5
151,3
171,6
130-85-45
132,6
128,8
134,5
136,8
130-100-60
122,1
124,3
121,0
121,0
130-115-75
112,3
115,5
111,1
110,2
130-130-90
99,0
103,0
98,0
96,0
*Контроль: не подвергнутый нагреванию сухой порошок.
Результаты, представленные в таблице 1, и диаграмма, представленная на фиг.1, отчетливо показывают, что активность ферментов, содержащихся в сухом порошке из дождевых червей, сохраняется в достаточной степени после нагревания при 110°С (пример 1) или при 120°С (пример 2), хотя некоторая ее часть теряется. Напротив, активность ферментов, содержащихся в сухом порошке из дождевых червей, теряется быстро при нагревании при 130°С (сравнительный пример 1), что очевидно при сравнении активностей, когда температура нагревания только достигала 130°С, (130-40-0) и активностей ферментов, сохраняемых при 130°С (130-55-15 и далее).
Определение количества клеток
Как описано выше, 1 г каждого из сухих порошков, подвергнутых термообработке при 120°С (примеры 2-1 - 2-5), при 80°С в течение 60 минут (сравнительный пример 2-1), 90°С в течение 60 минут (сравнительный пример 2-2) и при 100°С в течение 60 минут (сравнительный пример 2-3), растворяли в 20 мл воды для обеспечения раствора для испытания; определяли общее количество жизнеспособных клеток в них с помощью стандартного способа с использованием инкубирования на чашке с агаровой средой; количество колиподобных бактерий определяли с помощью способа с использованием среды с синтетическим ферментным субстратом, а количество термофильных бактерий определяли с помощью способа, описанного в Стандартных методах анализа в Регламенте по безопасности пищевых продуктов (условие нагревания: кипячение, 10 минут). Полученные результаты суммированы в следующей таблице 2.
Таблица 2
Общее количество жизнеспособных клеток (колониеобразующих единиц/г)
Количество колиподобных бактерий (колониеобразующих единиц/г)
Количество термофильных бактерий (колониеобразующих единиц/г)
Контроль*
94000
Отрицательное (мене 10)
3500
120-70-30 (Пример 2-1)
440
Отрицательное (мене 10)
10
120-85-45 (Пример 2-2)
400
Отрицательное (мене 10)
Не определено
120-100-60 (Пример 2-3)
220
Отрицательное (мене 10)
Не определено
120-115-75 (Пример 2-4)
160
Отрицательное (мене 10)
Не определено
120-130-90 (Пример 2-5)
50
Отрицательное (мене 10)
10
80°C (Сравнительный пример 2-1)
38500
Отрицательное (мене 10)
1400
90°C (Сравнительный пример 2-2)
18800
Отрицательное (мене 10)
1100
100°C (Сравнительный пример 2-3)
9400
Отрицательное (мене 10)
620
*Контроль: не подвергнутый нагреванию сухой порошок.
Escherichia coli
Escherichia coli
Как очевидно из результатов сравнительных примеров 2-1-2-3, представленных в таблице 2, термообработка при 80°С, 90°С или 100°С приводила к выживанию многих из всех жизнеспособных клеток и термофильных бактерий, хотя  подвергалась стерилизации. Напротив, как очевидно из результатов примеров 2-1-2-5, термообработка при 120°С приводила к снижению количеств всех жизнеспособных клеток,и термофильных бактерий до уровня 1000 колониеобразующих единиц/г или меньше, демонстрируя свою достаточную эффективность в стерилизации.
Результаты примеров отчетливо показывают, что сухие порошки из дождевых червей, полученные с помощью способа продукции в соответствии с настоящим изобретением, сохраняли ферментативную активность, подобную активностям, наблюдаемым в сухих порошках из дождевых червей, приготовленных с помощью общепринятых способов, и, кроме того, были в достаточной степени стерилизованы.