Средство, модулирующее концентрацию ферритина в сыворотке крови
PREPARATION MODULATING FERRITIN CONCENTRATION IN BLOOD SERUM

Изобретение относится к фармацевтике и медицине и касается средства, повышающего уровень концентрации ферритина в сыворотке крови.
2
Ферритин (Фе) - это железосодержащий αН-глобулин, молекулярная масса которого составляет около 450 кД. Он представляет растворимый в воде комплекс гидроксифосфата железа с белком апоферритином. Наибольшее его количество находится в клетках печени, селезенки, костного мозга и ретикулоцитах, где наиболее интенсивно проходят процессы синтеза, созревания и деградации эритроцитов. Фе активно участвует в метаболизме и перераспределении железа в организме. Способность синтезировать Фе появилась у клеток на ранних этапах эволюции. Характерные аналоги ферритина найдены у грибов, бактерий, растений [см. Ragland М, Briat JF, Gagnon J. Evidence for conservation of ferritin sequences among plants and animals and for a transit peptide in soybean. The Journal of biological chemistry. 1990; 265, 30: 18339-18344; Theil E.C. Ferritin: Structure, gene regulation, and cellular function in animals, plants, and microorganisms. Ann Rev Biochem. 1987; 56: 289-315]. У позвоночных защита от токсического эффекта железа и активных форм кислорода осуществляется двумя железосвязывающими белками: внеклеточными трансферринами и внутриклеточными ферритинами. Оба сохраняют железо в безопасной окисленной форме Фе (III), которая не катализирует продукцию свободных радикалов. Фе содержит 15-20% общего количества железа в организме. Концентрация ферритина при рождении повышенная - до 600 нг/мл, в течение нескольких месяцев она снижается примерно до 30 нг/мл, после чего начинает медленно возрастать и к 24-25 годам принимает значения, сохраняющиеся до старости. В норме для взрослых концентрация ферритина в сыворотке составляет 20-350 нг/мл [см. Трубников Г.А. - Иммунохимические маркеры воспаления и опухолей в клинической пульмонологии // Астрахань: Астраханская медицинская академия. - 2000. - 209 с.]. У женщин в постменопаузе (обычно 48-50 лет) достигает средних величин, характерных для мужчин [см. Сухарев А.Е. - Тканевые и сывороточные острофазовые белки в клинической оценке неспецифических заболеваний и рака легких // Автореф. дис.  док. мед. наук. - 1991. - 28 с.]. Падение концентрации ниже 10 нг/мл свидетельствует о развитии железодефицитной анемии, в то время как при избыточном накоплении железа концентрация ферритина может возрастать до нескольких тысяч нг/мл [см. Complementary Feeding And The Control Of Iron Deficiency Anemia In The Newly Independent States Presentation By WHO At A WHO/Unicef Consultation Geneva, Switzerland 4 February (http://www.cdc.gov/mmwr/distrnds.html)]. Различают тканевой и сывороточный Фе [см. Caskey Y., Iones С., Muller Y.E. et al. Human Ferritin gene in assigned to chromosome 19 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - Vol. 80. - Р. 482-486]. Тканевой Фе синтезируется клетками различных органов, сывороточный Фе секретируется клетками печени и ретикулоэндотелиальной системы.
В последние годы обнаружены физиологические функции ферритина, не связанные непосредственно с обменом железа. Оказалось, что Н-изоформы ферритина могут играть роль супрессоров в пролиферации клеток крови [см. Смирнова Л.А., Марцев С.П. Ферритин и его клиническое значение // «Медицинские новости» Журнал, Минск. - 1996. - №7. - С. 11-15]. Процессы миелосупрессии (подавления пролиферации миелоидных клеток) коррелируют с активацией синтеза Н-субъединиц на уровне генома [см. Broxmeyer Н.Е., Gentle P., Cooper S. // Blood Cells. - 1984. - V.10. - P.397-400; Broxmeyer H.E., Levi S., Arosio P. // Blood. - 1986. - V. 68. - P. 1257-1259; Broxmeyer H.E., Cooper S., Levi S., Arosio P. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1991. - V. 88. - P. 770-774]. Н-ферритин способен ингибировать пролиферацию миелоидных и лимфоидных клеток, причем активация его синтеза может быть связана с попыткой организма подавить их злокачественный рост [9. Broxmeyer Н.Е., Williams D.E., Geissler K. et al. // Blood. - 1989. - V. 73. - P. 74-79; Coccia E.M. // Blood. - 1995. - V.86. - Р. 1570-1578]. Установлено, что механизм подавления пролиферации клеток прямо связан с ферроксидазной функцией ферритина, которая приводит к формированию цитотоксических радикалов кислорода. Очевидно, цитотоксический эффект ферритина распространяется на многие типы клеток, но зарегистрирован пока лишь на некоторые из них, в частности на миелоидных клетках, предшественниках гранулоцитов, и моноцитах. Ингибирование осуществляется на уровне S-фазы клеточного цикла [см. Смирнова Л.А., Марцев С.П. Ферритин и его клиническое значение // «Медицинские новости» Журнал, Минск. - 1996. - №7. - С. 11-15]. Известно, что цитотоксический эффект характерен и для туберкулеза легких [см. Сухарев А.Е. - Тканевые и сывороточные острофазовые белки в клинической оценке неспецифических заболеваний и рака легких // Автореф. дис … док. мед. наук. - 1991. - 28 с.; Трубников Г.А. - Иммунохимические маркеры воспаления и опухолей в клинической пульмонологии // Астрахань: Астраханская медицинская академия. - 2000. - 209 с.]. Следовательно, чем сильнее выражен цитотоксический эффект, тем выше концентрация Фе, поскольку Фе обладает цитопротекторными свойствами. Таким образом, можно сделать вывод, что высокая концентрация Фе при патологических воспалительных состояниях говорит о высоком уровне иммунитета. А если концентрация Фе при туберкулезе низкая или незначительно повышена, то можно говорить о низком иммунитете организма больного.
Наиболее близким по сути средством, повышающим концентрацию сывороточного Фе (Н-изоформы) в организме человека является препарат трекрезан (Патент RU №2486895 С1 от 11 мая 2012). При этом лечение проводится с помощью препарата трекрезан, в количестве 0,2 мг 3 раза в сутки в течение 21 дня. Однако при этом способе лечения повышение уровня Фе в крови происходит недостаточно эффективно. Именно это и определяет потребность в поиске и внедрении в практику новых, более эффективных диагностических, профилактических и лекарственных средств, обладающих указанным действием.
Задачей изобретения является разработка средства, повышающего концентрацию ферритина в сыворотке крови человека.
Поставленная задача решается тем, что в качестве активатора Фе применяют биологически активную добавку (БАД) триастин, что позволяет расширить область ее применения и улучшить результат лечения больных.
Триастин - это биологически активная пищевая добавка (см. интернет ссылку www.si-ultra.ru) с широким спектром терапевтического действия. Его ингредиенты: оксиэтиламмония метилфеноксиацетат (основа препарата трекрезан), бета-каротин, альфа-токоферол, чеснок, лактоза. Известно применение триастина, как средства, повышающего адаптивные и защитные свойства организма. Согласно инструкции по применению, эффективное количество триастина зависит от массы тела, от пола, сопутствующих патологий и, предпочтительно, составляет от 200 до 500 мг в сутки. Курс лечения до 3 недель. Триастин незаменим при гриппе и вирусном гепатите, предохраняет от инфаркта и онкологических заболеваний, помогает при ревматоидном полиартрите, атеросклерозе, астено-невротическом синдроме, острых отравлениях пищевыми продуктами, эффективно регулирует обмен липидов.
Свойство триастина влиять на функциональную систему поддержания уровня ферритина в сыворотке крови человека, в частности, больных туберкулезом легких в литературе не описано.
2
Применение триастина, по новому назначению стало возможным благодаря его новым свойствам повышать концентрацию железосодержащего αН-глобулина Фе. Возможность осуществления изобретения может быть проиллюстрирована ниже представленными данными.
Методика.
Перед началом эксперимента определяют концентрацию Фе в сыворотке крови у 35-ти практически здоровых людей (доноры - добровольцы), в возрасте от 30 до 55 лет (мужчины - 25-40 лет, женщины периода менопаузы - 50-55 лет). Средняя концентрация Фе составляет у доноров - 243,43±25,5 нг/мл. Все доноры на день обследования имеют письменное заключение врача о состоянии своего здоровья - «практически здоровые», у женщин методом гинекологического обследования официально устанавливается период менопаузы.
Объектом исследования являются первично больные в возрасте от 35 до 55 лет (средний возраст 41,4±2,0 года) с диагнозом - инфильтративный туберкулез верхней доли правого (левого) легкого. Поскольку именно эта форма туберкулеза легких является наиболее часто встречающейся, для наблюдений выбирают пациентов с данным диагнозом. На рентгенограммах всех больных отмечаются негомогенные затемнения с нечеткими контурами диаметром более 1 см. При поступлении у всех больных определяют концентрация сывороточного Фе (для эксперимента выбирают больных с концентрацией сывороточного Фе ниже общепринятой нормы - до 30 нг/мл) [см. Смирнова Л.А., Марцев С.П. Ферритин и его клиническое значение // Ж. «Медицинские новости», Минск. - 1996. - №7. - С. 11-15], то есть с ослабленным уровнем иммунитета.
Всего обследовано 34 человека, у которых средняя концентрация Фе (М±m) до лечения составляет 24,7±1,85 нг/мл. Больных подразделяют на следующие группы:
- контрольную (16 человек, средняя концентрация Фе в группе - 24,9±1,9 нг/мл), получавшую только базисные средства (Изониазид 0,6 г, рифампицин 0,6 г, этамбутол 2,0 г, пиразинамид 2,0 г на протяжении 6 месяцев лечения в стационаре);
- основную - добровольцы (18 человек, средняя концентрация Фе 24,5±1,8 нг/мл), выразившие желание принимать триастин в дозе 400 мг/сутки в течение первые 3-х недель, а затем аналогичным повторным курсом на 4-м месяце лечения, за 15-30 минут до еды в дополнение к лечению базисными лекарственными средствами.
Уровень Фе в сыворотке крови определяют методом иммуноферментного анализа (ИФА), с использованием коммерческих наборов производства ЗАО «Вектор-Бест-Юг» г. Ростов-на-Дону.
Полученные результаты обрабатывают статистически с помощью программ "Microsoft Excel" и "Biostat" с использованием параметрического критерия (t-критерия Стьюдента) и непараметрического (U-критерия Манна-Уитни) с учетом малых выборок. Данные представляют в виде средних и стандартных значений ошибки - М и m, соответственно. Для относительных величин рассчитывают 95% процентные доверительные интервалы. Достоверными считают различия при р≤0,05 (см. кн. - Петри А., Сэбин К. Наглядная медицинская статистика / Пер. с англ. под ред. В.П. Леонова; 2-е изд., перераб. и доп. М: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 168 с.).
Результаты.
Установлено, что у больных основной группы применение триастина в дополнение к базисной химиотерапии изониазидом, рифампицином, этамбутолом и пиразинамидом сопровождается достоверным повышением уровня Фе сыворотки крови по сравнению с контролем (табл. 1) 633,3±23,2 нг/мл. В контрольной группе средняя концентрация Фе значительно ниже, чем в основной группе. Сниженная концентрация Фе наблюдается в сравнении с прототипом.
При комбинированной схеме лечения, при длительном дополнительном приеме комплексного соединения - триастина, не отмечаются увеличения побочных эффектов базисной терапии. При этом особое значение приобретает известный факт, что практически все ПТП в той или иной степени токсичны (см. Розмарiца, Н.О. Гепатотоксичнiсть iзонiазиду / Н.О. Розмарiца, I. М. Алексеева, I. С. Чекман. Лikрська токсикологiя [Электронный ресурс] - 2008. - №4. http:// www.medved.kiev.ua/MAG/st_2008/08_4_8.htm; Matejnу, В. Hepatotoxicita u chorych s pl'ucnou tuberkulozou liecenych kombinaciou antitubekulotiks pyrazinamidom a bez pyrazinamidu / B. Matejny. Stud. Pneumol. Phfiseol. Cech. - 1986. - Vol. 46, №112. - P. 23-31).
По концентрации сывороточного Фе можно судить о состоянии иммунной системы у данной категории больных - чем выше концентрация Фе в начале заболевания, тем выше иммунные силы организма. Одновременно с повышением концентрации Фе в основной группе больных отмечается в дальнейшем ускорение рассасывания инфильтратов, рентгенологически - более раннее рубцевание легочной ткани, повышается аппетит, возрастает масса тела, улучшается функция печени и раньше нормализуется температура тела. Таким образом, триастин является модулятором образования ферритина в организме. Прием триастина в дополнение к базисной химиотерапии больных туберкулезом легких противотуберкулезными лекарственными средствами позволяет повысить эффективность проводимого лечения и улучшить качество жизни больных. Учитывая хорошую совместимость триастина с официальными противотуберкулезными препаратами, он может быть включен и в комплексные реабилитационные программы восстановительной медицины для определенной группы больных.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Ragland М, Briat JF, Gagnon J. Evidence for conservation of ferritin sequences among plants and animals and for a transit peptide in soybean. The Journal of biological chemistry. 1990; 265, 30: 18339-18344.
2. Theil E.C. Ferritin: Structure, gene regulation, and cellular function in animals, plants, and microorganisms. Ann Rev Biochem. 1987; 56: 289-315.
3. Трубников Г.A. - Иммунохимические маркеры воспаления и опухолей в клинической пульмонологии // Астрахань: Астраханская медицинская академия. - 2000. - 209 с.
4. Сухарев А.Е. - Тканевые и сывороточные острофазовые белки в клинической оценке неспецифических заболеваний и рака легких // Автореф. Дис. док. мед. наук. - 1991. - 28 с.
5. Complementary Feeding And The Control Of Iron Deficiency Anemia In The Newly Independent States Presentation By WHO At A WHO/Unicef Consultation Geneva, Switzerland 4 February (http://www.cdc.gov/mmwr/distrnds.html).
6. Caskey Y., Iones C, Muller Y.E. et al. Human Ferritin gene in assigned to chromosome 19 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - Vol. 80. - P. 482-486.
7. Смирнова Л.А., Марцев С.П. Ферритин и его клиническое значение // «Медицинские новости» Журнал, Минск. - 1996. - №7. - С. 11-15.
8. Broxmeyer Н.Е., Gentle P., Cooper S. // Blood Cells. - 1984. - V. 10. - P. 397-400.
9. Broxmeyer H.E., Levi S., Arosio P. // Blood. - 1986. - V. 68. - P. 1257-1259.
10. Broxmeyer H.E., Cooper S., Levi S., Arosio P. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1991. - V. 88. - P. 770-774.
11. Broxmeyer H.E., Williams D.E., Geissler K. et al. // Blood. - 1989. - V. 73. - P. 74-79; Coccia E.M. // Blood. - 1995. - V. 86. - P. 1570-1578.
12. Петри А., Сэбин К. Наглядная медицинская статистика / Пер. с англ. под ред. В.П. Леонова; 2-е изд., перераб. и доп. М: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 168 с.
13. Розмарiца, Н.О. Гепатотоксичнiсть iзонiазиду / Н.О. Розмарiца, I. М. Алексеева, I. С. Чекман. Лikрська токсикологiя [Электронный ресурс] - 2008. - №4. http:// www.medved.kiev.ua/MAG/st_2008/08_4_8.htm.
14. Matejny, В. Hepatotoxicita u chorych s pl'ucnou tuberkulozou liecenych kom-binaciou antitubekulotiks pyrazinamidom a bez pyrazinamidu / B. Matejny. Stud. Pneumol. Phfiseol. Cech. - 1986. - Vol. 46, №112. - Р. 23-31.
15. Расулов M.M., Кузнецов И.А., Стороженко П.А., Воронков М.Г., и соавт. - Средство, модулирующее концентрацию ферритина в сыворотке крови - Патент на изобретение RU №2486895, 2012 (прототип).