Модифицированная импрессионная Цитология конъюнктивы у больных синдромом «Сухого глаза» в условиях хронического глазного ишемического синдрома

ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2009 - Т. XVI, № 1 - С. 149

УДК 617.711-004.1

МОДИФИЦИРОВАННАЯ ИМПРЕССИОННАЯ ЦИТОЛОГИЯ КОНЪЮНКТИВЫ У БОЛЬНЫХ СИНДРОМОМ «СУХОГО ГЛАЗА» В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОГО ГЛАЗНОГО ИШЕМИЧЕСКОГО СИНДРОМА

С.В. ЯНЧЕНКО*

Импрессионная цитология (ИЦ) используется в офтальмологии для верификации морфологических изменений тканей «глазной поверхности», в том числе, и при синдроме «сухого глаза» (ССГ) [2,6].Но при использовании классической техники ИЦ результаты исследования могут быть оценены неоднозначно, что связано с отсутствием стандартизации усилия компрессии при заборе клеточного материала, а также, с субъективностью морфологического анализа [4,6].

Цель работы — изучение морфологических изменений конъюнктивы у больных ССГ в условиях хронического глазного ишемического синдрома, путём использования модифицированной импрессионной цитологии.

Материалы и методы Под наблюдением было 64 человека (29 мужчин, 35 женщин) 66,4±3,3 лет.

Критерии включения: впервые выявленный ССГ средней тяжести [2]; наличие хронического глазного ишемического синдрома (ХГИС).

Критерии исключения: системные заболевания соединительной ткани; воспалительное, дегенеративное, рубцовое поражение «глазной поверхности»; офтальмохирургия в анамнезе; инстилляционная терапия препаратами с консервантом. Было обследовано 25 человек той же возрастной группы без признаков офтальмопатологии. Всем проводили рутинное офтальмологическое обследование, функциональные тесты слёзопродукции, биомикроскопию с витальными красителями, ультразвуковое исследование слёзной железы и модифицированную импресси-онную цитологию конъюнктивы [4]. Отпечатки внутреннего квадранта бульбарной конъюнктивы на целлюлозно-ацетатный фильтр (HATH, Millipore) получали путём использования оригинального инструмента для дозированного забора клеточного материала. Затем отпечатки переносили на предметное стекло, фиксировали, окрашивали по Май-Грюнвальду [5] и фотографировали с помощью цифровой микрофотоустановки «Imprint-104».

В отпечатках (в расчете на 100 случайно отобранных цитологических объектов) определяли: среднее число эпителоцитов с признаками кариопикноза и кариорексиса, среднее число бокаловидных клеток (БК) в одном поле зрения. Случайность выборки обеспечивалась тотальным подсчетом объектов при просмотре каждого отпечатка П-образными, параллельными галсами. Затем изображения эпителия с увеличением 400 x сохраняли в компьютере (в виде графического файла формата РСХ, режим «серая шкала», разрешение 640x480 пикселей), и подвергали их морфометрическому анализу по программе «M-SCAN», разработанной на кафедре гистологии Кубанского ГМУ.

Методом компьютерной морфометрии [4] измеряли интегральный коэффициент энтропии ткани (по Г.А. Автандилову, 1990) [1], что позволяло объективно судить об уровне её структурной дезорганизации. В 1-группу вошло 25 человек без признаков офтальмопатологии, во 2-группу - 64 больных ССГ с наличием ХГИС. Третью и 4-ю группы образовали пациенты 2-й группы после 8 дней лечебного воздействия.

Пациенты 3-группы (34 чел.) получали слёзозаместитель-ную терапию (0,15% гиалуроновая кислота, 4-6 инстилляций в сутки), больным 4-группы дополнительно выполняли блокады синокаротидной зоны (2,0% р-р лидокаина 4,0 мл вводили через день, по №4 на каждой стороне) [3]. Выбор лечебной тактики проводили методом адаптивной рандомизации.

Пациенты 3-й и 4-й групп получали идентичную традиционную терапию ХГИС. С 3 суток терапии нужное число инстилляций пациенты определяли сами, ориентируясь на купирование субъективных проявлений ССГ. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом. Результаты обрабатывали методами вариационной статистики, различия считали достоверными при р<0,05. Статистический анализ вели с использованием программы «Micro Stat» («Borland Corporation»).

Результаты. У офтальмологически здоровых лиц 1-группы проявления ССГ и ХГИС отсутствовали. В отпечатках конъюнк-

тивы отмечалось наличие единичных эпителиоцитов с конденсированным хроматином в ядрах и признаками кариопикноза (2,1±0,04). Количество БК составило (5±0,05). Интегральный коэффициент тканевой энтропии (КЭ) был равен 1,3±0,002 условных единиц. Напротив, у пациентов 2-группы (ССГ с наличием ХГИС) среднее количество клеток с признаками повреждения увеличилось на 24% (р<0,001), количество БК снизилось на 20% (р<0,001), КЭ составил 2,1±0,009 (на 62% выше аналогичного значение в условиях нормы; р<0,001).

У всех пациентов данной группы отмечались проявления ССГ (жалобы на «жжение» и «сухость» в глазах; снижение теста Ширмера-1 до 4,2±0,1 мм; уменьшение высоты слёзного мениска; выраженная складка бульбарной конъюнктивы; эпителиопатия конъюнктивы в пределах экспонируемой глазной щели); определялось снижение максимальной систолической скорости кровотока в слёзной артерии до 6,3±0,1 см/с. В 3-группе (традиционная терапия) субъективные проявления ССГ были практически полностью купированы к 7,7±0,3 суткам наблюдения (нужное число инстилляций искусственной слезы в течение суток равно 4,6±0,2).

К 9 суткам наблюдения, тест Ширмера-1 увеличился на 2,1±0,09 мм (р<0,05), высота слёзного мениска и выраженность складки бульбарной конъюнктивы остались неизменными, а явления эпителиопатии конъюнктивы сохранялись более чем на половине глаз. При ИЦ было выявлено небольшое улучшение морфологического статуса конъюнктивы: число БК увеличилось на 8% (р>0,05), КЭ уменьшился на 23% (р<0,05). У пациентов 4-группы (традиционная терапия и блокады синокаротидной зоны) положительная динамика реферируемых показателей была достоверно более выраженной, чем у больных третьей группы.

Субъективные проявления ССГ были купированы на 3,2±0,4 день терапии, что требовало 2,5±0,2 инстилляций искусственной слезы в течение суток. К 9 суткам наблюдения тест Ширмера-1 составил 12,9±0,4 мм (р<0,05), максимальная систолическая скорость кровотока в слёзной артерии - 12,2±0,12 см/с. Изменения коррелировали с регрессом объективных проявлений ССГ и положительной динамикой морфологического статуса конъюнктивы: среднее число клеток с признаками альтерации уменьшилось на 10% (р<0,05), число БК увеличилось на 16% (р<0,01). Наиболее выраженным было уменьшение КЭ (до 1,5±0,03; р<0,001). В указанные сроки не наблюдалось полного восстановления морфологического статуса конъюнктивы до показателей возрастной нормы, что обусловливало необходимость дальнейшего проведения слёзозаместительной терапии.

Заключение. Модифицированная ИЦ позволила выявить у больных ССГ с наличием ХГИС достоверные морфологические изменения эпителиальной выстилки бульбарной конъюнктивы, выражающиеся в увеличении числа клеток с признаками альтерации и снижении числа бокаловидных клеток.

Наиболее значимым оказалось изменение интегрального коэффициента тканевой энтропии. Традиционная терапия ССГ и ХГИС, достаточно быстро устраняя субъективные проявления «сухого глаза», не приводила к значимому увеличению слёзопро-дукции, купированию объективных проявлений заболевания и достоверному улучшению морфологического статуса конъюнктивы. Включение в комплексную терапию ССГ с наличием ХГИС блокад синокаротидной зоны позволяет в достоверно более короткие сроки нормализовать инстилляционный режим слёзоза-мещения, купировать проявления ССГ и достигнуть достоверного улучшения морфологического состояния конъюнктивы.

Литература

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия.- М.: Медицина, 1990.

2. Бржеский В.В. и др. Роговично-конъюнктивальный ксероз.- 2-е изд.- СПб, 2003.

3. Янченко С.В. и др.//ВНМТ.- 2008.- T.XV, №3.- С. 197.

4. Янченко С.В. и др. // ВНМТ.- 2008.-T.XV, №4.- С. 106

5. Pears A.G.E. Histochemestry, theoretical and applied / Ed II-a.- Ed. Little Brown, Boston, 1961.

6. Singh R. et al. // Br J of Ophthalmol.-2005.- Vol.89, №12.- Р. 1655-1659.

* Кубанский ГМУ, каф. глазных болезней, Краснодарский край, гор. Краснодар 350 000, ул. Седина, 4