Способ получения цитокинов из тромбоцитов пуповинной крови, как субстрата для разработки лекарственных средств для человека и животных

Способ получения цитокинов из тромбоцитов пуповинной крови, как субстрата для разработки лекарственных средств для человека и животных, содержащий три этапа: на первом этапе производят забор пуповинной крови у разных доноров, вводят в каждый пакет с донорской кровью раствор «Стабизол 200/400» в объеме 20% от объема крови пакета, центрифугируют каждый из пакетов с кровью в режиме плавного изменения программы, в результате чего кровь разделяется на обогащенную тромбоцитами плазму и эритроциты, указанная программа состоит из следующих режимов: разгон с ускорением 4 до 540 в течение 5 мин; разгон с ускорением 9 до 900 в течение 2 мин; торможение с ускорением 9 до 300 и вращением в течение 2 мин; торможение с ускорением 9 до 100 и вращение в течение 1,3 мин с последующим отключением, (свободное вращение со 100), затем из пакетов осторожно удаляют эритроциты и утилизируют их; на втором этапе проводят объединение всех донорских пакетов ОТП и концентрацию тромбоцитов, для чего полученную обогащенную тромбоцитами плазму переносят в соответствующее количество пробирок типа фалькон (50 мл), проводят центрифугирование (концентрацию тромбоцитов) в режиме 15 минут на скорости 4000 g, в результате центрифугирования получают концентрат тромбоцитов и обедненную плазму, обедненную плазму убирают для использования в качестве растворителя, оставляя 5 мл плазмы на дне пробирок, полученные тромбоцитарные концентраты разных доноров объединяют в одной пробирке (50 мл) и разводят обедненной плазмой до объема 50 мл, или в качестве растворителя используют физиологический раствор, если в дальнейшем требуется исключить белки плазмы; полученный пул тромбоконцентрата повторно центрифугируют в режиме 60 минут на скорости 50 g для удаления остатков эритроцитов и лейкоцитов, после центрифугирования надосадочную жидкость в объеме 45-48 мл переносят в новую пробирку объемом 50 мл, а 1 мл раствора отправляют в лабораторию для подсчета тромбоцитов на автоматизированном гематологическом анализаторе, на третьем этапе полученный тромбоконцентрат с известным количеством тромбоцитов на мл или мкл подвергают процедуре хранения/активации, при этом фалькон с тромбоконцентратом опускают в криохранилище сухого типа на 15 минут при температуре -196 градусов, замороженный продукт помещают на хранение в морозильную камеру при температуре -80 градусов, где хранят до 3-х лет, причем дальнейшую активацию продукта проводят перед непосредственным использованием путем быстрого размораживания, для этого фалькон помещают в водяную баню с температурой +37 градусов, до полного оттаивания продукта, а при необходимости получить продукт с концентрацией цитокинов/ тромбоцитов менее чем в замороженном продукте, конечный продукт разводят в соответствующее количество раз, при этом используют исходную концентрацию тромбоцитов.