Стандартизация сухого экстракта с противовоспалительными и анальгетическими свойствами из листьев Arctium tomentosum Mill

Экспериментальные и клинические исследования

Стандартизация сухого экстракта с противовоспалительными и анальгетическими свойствами из листьев Arctium tomentosum Mill.

Дудко В.В.1, Хоружая Т.Г.1, Пашинский В.Г.2, Поветьева Т.Н.2, Новожеева Т.П.2, Коршунова Н.Е.2

Standardization of the dry extract having anti-inflammatory and analgesic properties from the leaves Arctium tomentosum Mill.

Dudko V.V., Khoruzhaya T.G., Pashinsky V.G., Povetyeva T.N., Novozheyeva T.P., Korshounova N.Ye.

1 Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

2 НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, г. Томск

© Дудко В.В., Хоружая Т.Г., Пашинский В.Г. и др.

Исследование посвящено проблеме получения сухих и жидких экстрактов из листьев лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill.) на 25-, 40- и 70%-м этаноле и их стандартизации. Предложен разработанный опти-мальный состав таблетированной лекарственной формы на основе сухого экстракта на 70%-м этаноле. В эксперименте на животных выявлена антиэкссудативная активность сухого экстракта на 70-, 40- и 25%-м этаноле, анальгетическая активность сухого экстракта на 70- и 25%-м этаноле, ранозаживляющее действие сухого экстракта на 25%-м этаноле.

Ключевые слова: сухой экстракт листьев лопуха войлочного, стандартизация, противовоспалительные, анальгетические, ранозаживляющие свойства.

The work is devoted to the problems of obtaining dry and liquid extracts from the leaves of Arctium tomentosum Mill. on 25, 40, and 70% ethanol solution and their standardization. Optimal content of tablet drug form based on the dry extract on 70% ethanol is offered. Animal experiments revealed anti-exudative activity of the dry extract of krctium tomentosum Mill.on 70, 40 и 25% of ethanol solution, analgesic activity of the dry extract on 70 and 25% of ethanol solution, wound healing action of the dry extract on 25% of ethanol solution .

Key words: dry extracts from the leaves of Arctium tomentosum Mill., standardization, anti-inflammatory, analgesic, wound healing properties.

УДК 616.072:615.276:615.212:582.998

Лопух войлочный (Arctium tomentosum Mill., семейство Asteraceae) — двулетник высотой до 60 см. Во флоре Западной Сибири этот вид широко распространен. Он встречается как сорное растение на пустырях, около жилья, в огородах, вдоль дорог. В народной медицине основные виды рода лопух (Arctium L.) (A. tomentosum Mill. — лопух войлочный, A. lappa L. — лопух репейник и A. minus (Mill.) Bernh. — лопух малый) используются по одинаковым показателям без различия по видам. Листья по сравнению с корнями имеют более ограниченное применение.

Они используются наружно при опухолях, ревматизме, рожистых воспалениях, внутрь — при злокачественных опухолях, заболеваниях печени, скрофулезе, диабете, тахикардии, а также как диуретическое, желчегонное, детоксикаци-онное, ранозаживляющее, и при головной боли. Обладают антипротозойными свойствами [5]. В экспериментальных исследованиях выявлена ранозаживляющая и умеренная противовоспалительная активность экстрактов из корней и листьев лопуха войлочного [4]. Литературных сведений, касающихся разработки ле-

карственных форм из листьев лопуха войлочного, за исключением сока [3], не обнаружено.

В задачу изучения входило проведение стандартизации жидких и сухих экстрактов из листьев лопуха войлочного и таблетированных лекарственных форм на основе сухого экстракта, а также экспериментальное исследование фармакологической активности полученных средств.

Материал и методы

Материалом для изучения послужили листья лопуха войлочного, которые были заготовлены в окрестностях г. Томска на заброшенных сельскохозяйственных полях в период цветения в июле 1998 и 1999 гг.

Фармакологические исследования проводили на белых беспородных мышах массой 20—25 г (по 6 животных в каждой группе), полученных из коллекционного фонда отдела экспериментальных биологических моделей ТНЦ СО РАМН (г. Томск) (животные сертифицированы).

С целью изучения ранозаживляющих свойств мышам под эфирным наркозом наносили кожное повреждение в виде лоскутной раны (средний диаметр раны — 10 мм). Для моделирования длительного заживления струпы периодически снимали. Острое асептическое воспаление вызывали субплантарным введением мышам 1%-го раствора каррагенина в дозе 0,05 мл. Обезболивающее действие изучали на модели уксусных корчей, индуцированных внутрибрюшинным введением мышам 0,75%-го раствора уксусной кислоты [6].

Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986).

Результаты исследований обрабатывались методами непараметрической и параметрической статистики. Различия считались достоверно значимыми при р„ < 0,05 и pt < 0,05 для количественных характеристик (метод Вилкоксона— Манна—Уитни и метод Стьюдента соответственно) [2].

Нормативные показатели экстрактов определяли по требованиям Государственной фармакопеи СССР (1989). Экстракт листьев жидкий (1 : 1) получали методом противоточного многоступенчатого экстрагирования, используя в качестве растворителя 25-, 40- и 70%-й этанол. Жидкие экстракты стандартизовали по сухому остатку, содержанию этанола, плотности, наличию примесей тяжелых металлов [1]. Для получения сухого экстракта растворитель удаляли под вакуумом и сушили при температуре 60 °С до остаточной влажности, не превышающей 5%. Стандартизацию проводили по содержанию влаги, тяжелых металлов согласно требованиям нормативной документации [1]. Для обоснования состава и технологии изготовления таблеток из сухого экстракта на 70%-м этаноле были изучены технологические свойства порош -ка: пористость, насыпная масса, фракционный состав, сыпучесть, угол естественного откоса. Для изготовления таблеток использовали метод влажной грануляции. При разработке прописи таблеток применяли такие вспомогательные вещества, как аэросил, молочный сахар, магния стеа-рат.

Результаты и обсуждение

При фармакологических испытаниях в первой серии экспериментов исследовали ранозажив-ляющую активность. Беспородные мыши-самки, используемые в эксперименте, получали сухой экстракт листьев 70 (экстракция 70%-м этанолом), сухой экстракт листьев 40 (экстракция 40%-м этанолом), сухой экстракт листьев 25 (экстракция 25%-м этанолом). Для сопоставления фармакологической активности все препараты вводились в одной дозе — 50 мг на 1 кг массы тела в лечебном режиме: через 1 ч после нанесения кожного повреждения, затем ежедневно однократно до момента заживления. Растительные средства вводились внутрижелудочно. Измерение раны проводили сразу же после снятия струпа, длительность наблюдения — 20 дней. У контрольных животных (n = 10) полное заживление ран наблюдали на 20-е сут. Существенную активацию регенерации вызвал сухой экстракт листьев 25 — уже с 5-х сут раны в 1,2 раза были меньше контрольных, а на 15-е сут отмечалось

введении его в дозе 50 мг на 1 кг массы тела — 37% торможения прироста веса лапки в сравнении с контрольными животными (табл. 1). Волнообразный характер противовоспалительных эффектов наблюдался у сухого экстракта листьев 25: на 29% снижался отек под действием препарата в дозах 100 и 10 мг на 1 кг; отсутствие эффекта в дозах 50 и 1 мг на 1 кг массы тела. Сухой экстракт листьев 70 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела на 26,8% снижал экссудативное действие флогогена.

При изучении обезболивающей активности установлено, что под влиянием сухого экстракта листьев 70 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела на 32,5% сокращалось количество корчей у мышей (рис. 2). Наиболее выраженный анальгети-ческий эффект на этой модели выявлен у особей, которым вводили сухой экстракт листьев 25 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела — до 34,5%, т.е. количество корчей сокращалось в 12 раз.

Для получения лекарственных форм использовали измельченное сырье — порошок листьев, проходивший сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм. Были получены следующие нормативные показатели порошка листьев: влажность — (8,8 ± 0,3)%; зола: общая — (12,9 ± 1,6)%, нерастворимая в хлороводородной кислоте — (4,2 ± 0,3)%; экстрактивные вещества, извлекаемые водой, — (13,4 ± 0,1)%; 25%-м этанолом — (9,3 ± 0,2)%, 40%-м этанолом — (12,3 ± 0,1)%; 70%-м этанолом — (10,7 ± 0,2)%.

Таблица 1

Влияние сухих экстрактов из листьев Arctium tomentosum Mill. на острое каррагениновое воспаление

Группа животных Доза, мл на 1 кг массы тела Число животных Прирост веса лапки, %

Контроль — 10 60,1 ± 4,4

Получавшая сухой экстракт 70 50 6 44,0 ± 3,4*

Получавшая сухой экстракт 40 100 6 52,0 ± 5,3

50 6 37,7 ± 2,5*

10 6 44,7 ± 7,9*

1 6 44,5 ± 4,2*

Получавшая сухой экстракт 25 100 6 42,7 ± 5,8*

50 6 51,8 ± 5,5

10 6 42,8 ± 5,6*

1 6 52,7 ± 5,8

* Различия статистически достоверны в сравнении с контролем при pu < 0,05, pt < 0,05.

их полное заживление у всех животных, т.е. сроки регенерации сокращались на 28,6% (рис. 1).

Рис. 1. Влияние сухих экстрактов листьев Arctium tomentosum Mill. на заживление лоскутной раны: * — различия статистически досто-верны в сравнении с контролем при pu < 0,05, pt < 0,05

На модели острого асептического воспаления, вызванного каррагенином, сравнивали противовоспалительное действие сухого экстракта листьев 70, сухого экстракта листьев 40, сухого экстракта листьев 25. Растительные средства вводились в превентивном режиме курсом в течение 5 дней, в последний день через 1 ч после фитопрепарата вводился каррагенин. Существенное противоотечное действие на этой модели оказал сухой экстракт листьев 40, так как все три дозы препарата были эффективными, наибольший противоэкссудативный эффект при

34,4

29,8

23,2*

22,5*

При стандартизации жидких экстрактов (табл. 2) установлено, что наибольшее содержание экстрактивных веществ обнаружено при экстрагировании 40%-м этанолом — (11,5 ± 0,4)%, далее следует 70%-й — (8,7 ± 0,6)% и наименьший выход получен при экстрагировании 25%-м этанолом — (5,3 ± 0,3)%. Плотность колебалась от (0,94 ± 0,02) г/см3 в случае применения 70%-го этанола до (0,97 ± 0,01) и (0,98 ± 0,02) г/см3 — в случае 25- и 40%-го соответственно. По содержанию этанола жидкие экстракты удовлетворяли требованиям на экстракты экстрагентами аналогичной концентрации [1], содержание тяжелых металлов не превышало 0,01%.

Т аб л и ца 2

Стандартизация жидкого и сухого экстрактов из листьев A. tomentosum

12 3 4

Рис. 2. Анальгетическая активность сухих экстрактов листьев Arctium tomentosum Mill. на модели уксусных корчей: 1 — контроль; 2 — сухой экстракт 70; 3 — сухой экстракт 40; 4 — сухой экстракт 25; *— различия статистически достоверны в сравнении

с контролем при pu < 0,05, pt < 0,05

Показатель Жидкий экстракт Сухой экстракт

25%-й 40%-й 70%-й 25%-й 40%-й 70%-й

Сухой остаток, % Этанол, % Плотность, г/см3 Влажность, % Выход:

по отношению к сырью по отношению к жидкому экстракту

5,30 ± 0,30 23,20 ± 0,10 0,98 ± 0,02

1 : 1

11,50 ± 0,40 37,10 ± 0,30 0,97 ± 0,01

1 : 1

8,70 ± 0,60 68,20 ± 0,20 0,94 ± 0,02

1 : 1

4,7 ± 0,2

5,3 ± 0,3

3,8 ± 0,3

11,5 ± 0,4

2,2 ± 0,2

8,7 ± 0,6

Сухие экстракты после измельчения представляли собой сыпучие порошки светло-коричневого (25-й и 40%-й этанол) и темно-коричневого (70%-й этанол) цвета. Влажность составляла (2,2 ± 0,2), (3,8 ± 0,3), (4,7 ± 0,2)% для 70-, 40- и 25%-го этанола соответственно. По содержанию влаги и тяжелых металлов сухие экстракты удовлетворяли требованиям нормативной документации [1] (табл. 2).

При исследовании технологических свойств порошка сухого экстракта на 70%-м этаноле (табл. 3) установлено, что порошок полидисперсный и содержит фракции от 0,25 до 1 мм в количестве (85,0 ± 1,3)%, пылевидной фракции не более 15%, что оказывает существенное влияние на сыпучесть таблетируемого материала, точность дозирования и возможность использования метода прямого прессования для таблети-рования массы.

Сыпучесть порошка характеризуется как отличная, насыпная масса как среднетяжелая, пористость составляет не более (40,0 ± 0,4)%.

Полученный порошок использовали при изготовлении таблеток. Из семи исследованных прописей таблеток

Таблица 3

Технологические показатели порошка сухого экстракта (экстрагент — 70%-й этанол) листьев А. ^теп^ит

Показатель Порошок сухого экстракта

Размер отверстий сита, мм: Фракционный состав, %

-3,0+2,0 0,50 ± 0,10

-2,0+1,0 2,50 ± 0,20

-1,0+0,5 36,00 ± 0,10

-0,5+0,25 45,50 ± 0,20

0,25+0,1 8,00 ± 0,30

-0,1 6,50 ± 0,10

Насыпная масса, г/см3 0,66 ± 0,03

Сыпучесть, г/с

Угол естественного откоса,

град

Пористость, %

12,50 ± 0,60 28,00 ± 0,20

40,00 ± 0,40

Примечание. «-» - сухой экстракт прошел через данный размер сита; «+» - сухой экстракт остался на сите.

требованиям нормативной документации [1] (по внешнему виду, распадаемости, отклонению от средней массы, прочности на истирание) удовлетворяли только две, состав и оценка качества которых представлены в табл. 4, 5.

Т а бл и ца 4

Оптимальный состав таблеток с сухим экстрактом (экстрагент — 70%-й этанол) листьев А. ^теп^ит

Пропись таблеток

Ингредиент 1 2

г % г %

Сухой экстракт 0,1000 33,330 0,1000 33,330

Молочный сахар (ВФС 42-3110-98) 0,1965 65,500 0,1940 64,670

Аэросил (ГОСТ 14922-77) 0,0025 0,835 0,0050 1,670

Магния стеарат (ТУ 6-09-129-75) 0,0010 0,335 0,0010 0,330

Масса порошка на одну таблетку 0,3000 100,0 0,3000 100,0

Т а бл и ца 5

Оценка качества таблеток с сухим экстрактом листьев А. ^теп^ит

Показатель Таблетки с сухим экстрактом Требования ГФ Х1

Пропись 1 Пропись 2

Распадаемость, мин Прочность на истирание, % Отклонение в массе отдельных таблеток, г 11,0 ± 0,2 12,0 ± 0,2 Не более 15 97,7 ± 0,3 97,6 ± 0,1 Не менее 97 0,3 ± 0,0101 0,3 ± 0,0093 Отклонения в средней массе до Менее 0,3 г до 7,5% Более 0,3 г до 5,0%

Примечание. ГФ Х1 - Государственная фармакопея. 11 -е издание.

Заключение

Результаты исследований свидетельствуют о наличии фармакологической активности у сухих экстрактов, полученных из листьев лопуха войлочного. В экспериментах на животных выявлен противовоспалительный эффект сухих экстрактов на 70-, 40- и 25%-м этаноле, анальгетическое действие сухих экстрактов на 70- и 25%-м этаноле, ранозаживляющая активность сухого экстракта на 25%-м этаноле. Проведена стандартизация

жидких и сухих экстрактов из листьев лопуха войлочного и таблетированных лекарственных форм на основе сухого экстракта.

Литература

1. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. М., 1989. Вып. 1, 2. 400 с.

2. Гублер Е. В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. М.: Медицина, 1978. 293 с.

3. Копытько Х.Ф., Кирьянов А.А., Стихин Ю.В. и др. Состав летучих веществ и жидких кислот сока листьев лопуха войлочного // Хим.-фарм. журн. 2003. № 6. С. 46—47.

4. Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Дудко В.В. и др. Противовоспалительные свойства сухих экстрактов из корней и листьев Arctium tomentosum Mill. // Раст. ресурсы. 2001. Т. 37. Вып. 2. С. 80—85.

5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейство Asteraceae. СПб.: Наука, 1993. 352 с.

6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2000. 398 с.

Поступила в редакцию 27.06.2005 г.