ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО
IMMUNOSTIMULATING DRUG

Изобретение относится к ветеринарии, касается средства природного происхождения и может быть использовано для стимуляции факторов иммунитета и естественной резистентности у сельскохозяйственных животных.
Известны лекарственные препараты, обладающие аналогичным действием: препараты биогенного происхождения Зимозан (полисахариды, получаемые из культуры дрожжей); Прополис; Апилак; Рибомунил (бактериальные рибосомы); Бронхомунал (лиофилизат бактерий); Паспат (комбинированный препарат из аутолизатов бактерий); Тималин, Тактивин, Тимоптин, Тимоген - растворы и лиофилизаты для подкожного и внутримышечного введения и др.; препараты, полученные методом химического синтеза Метилурацил, Лейкоген (стимуляторы лейкопоэза); Милдронат (аналог карнитина, обладает анаболическим действием); Арбидол (противовирусное средство); Леакадин (таблетки и раствор для инъекций); Диуцифон (раствор для инъекций); Декарис (таблетки) и др. [1]; препараты растительного происхождения экстракт элеутероккока, алоэ, настойка женьшеня, Иммунал (сок эхинацеи пурпурной); Тонзилгон (комбинированный препарат из растений) [2].
Однако для вышеперечисленных препаратов существует ряд противопоказаний, одним из которых является индивидуальная повышенная чувствительность, в частности к некоторым иммунокорригирующим средствам синтетического происхождения. Кроме того, использование средств, получаемых из тканей животных, ограниченно из-за возможного присутствия в них прионов - новых форм патогенов, не имеющих генома и являющихся, по сути, инфекционными белками - возбудителями фатальных медленно прогрессирующих дегенеративных болезней мозга. Еще одним ограничением является известная непредсказуемость действия некоторых иммунотропных препаратов, которые, будучи назначенными с одной целью, могут привести к нежелательным последствиям типа аутоиммунных расстройств, аллергии или лейкопролиферативных реакций.
Наиболее близким к предлагаемому по действию является препарат растительного происхождения - Иммунал (капли для внутреннего применения, состоящие из сока, выжатого из цветущих свежесобранных растений эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L). Однако действие указанного препарата ограничено, так как он содержит только одну эхинацею пурпурную в качестве основной составляющей.
Новой технической задачей является расширение арсенала препаратов с более высокой степенью иммунокорригирующей активности и дающих при применении меньшее количество осложнений.
Поставленная задача решается новым иммуностимулирующим средством на основе спиртовой настойки, полученной из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого {Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5.
Химический состав предлагаемого лекарственного средства представлен комплексом биологически активных веществ, обеспечивающим его высокий фармакотерапевтический эффект [2].
Доминирующими биологически активными веществами являются: полисахариды, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, тритерпеновые сапонины, витамины, микроэлементы.
Полисахариды оказывают иммунокорригирующее, противовоспалительное и противовирусное действие. Они стимулируют неспецифический иммунитет и фагоцитоз, деятельность макрофагов и нейтрофилов, а также бактерицидную функцию клеток. Кроме того, включают специфическую иммунную защиту, повышая количество Т-лимфоцитов, продукцию цитокинов, а также снижают активность гиалуронидазы, которую вырабатывают бактерии и вирусы. В результате чего сохраняется гиалуроновая кислота - субстанция, которая формируется в тканях между клетками и служит барьером против инфекций [3].
Флавоноидам присущи гепатопротективные свойства, которые включают холеретические, холатостимулирующие, противовоспалительные и капилляроукрепляющие компоненты, флавоны и халконы обладают бактериостатическим свойством, а также тормозят образование продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, основания Шиффа); они обладают способностью нормализовать липидный обмен в печени, в частности его фосфолипидную фракцию [4]. Препятствуя накоплению мезофосфатидилхолина, проявляют антифосфолипидную активность. Кроме того, флавоноиды обладают противомикробными, гиполипидемическими, мембраностабилизирующими и антиоксидантными свойствами. Входящий в сбор флавоноид кверцетин обладает свойством блокировать Na+, К+ и митохондриальную (Са2+)-АТФазы и секрецию гистамина тучными клетками. Полагают, что в механизме действия флавоноидов на тучную клетку большое значение имеет их сродство к определенным фосфолипидным компонентам клеточных мембран [5].
Дубильные вещества (почки сосны обыкновенной - до 5%, солодка голая - до 9,46%, девясил высокий - 9,3%), в составе которых преобладают полифенолы, обладают противовоспалительными, противомикробными свойствами, а также оказывают антиоксидантный и антитоксический эффект [5].
11
Противовоспалительные и противоаллергические свойства обусловлены наличием тритерпеновых сапонинов: глицирризиновой (ГК) и глицирретиновой кислот. ГК по структуре своего агликона и метаболита - глицирретиновой кислоты имеет сходство со структурой глюкокортикоидных гормонов. Действие последних зависит от наличия группировки - и - неопределенного кетона, кислородной функции у С и кетольной группы в боковой цепи. Два первых элемента структуры кортикоидных гормонов имеются и у глицирретиновой кислоты [4].
Высокое содержание аскорбиновой кислоты {эхинацея пурпурная - до 4,0%), солодка голая - 3,0% почки сосны обыкновенной - 0,3%) стимулирует функцию надпочечников, повышая секрецию кортизола, вызывая противовоспалительный и противоаллергический эффект.
Ионы марганца (содержание марганца, мкг/г: гармала обыкновенная - 5,8, почки сосны обыкновенной - 88,0) входят в состав различных ферментных систем, влияют на процессы кроветворения, функцию печеночной клетки, тонус стенок сосудов, желчных ходов, способны предупреждать образование внутрисосудистых тромбов. Органические соли йода (содержание йода, мкг/г: солодка голая - 0,09; почки сосны обыкновенной - 0,15) улучшают ассимиляцию белка, усвоение фосфора, кальция и железа. Микроэлемент цинк (содержание цинка, мкг/г: почки сосны обыкновенной - 31,10, солодка голая - 0,33, гармала обыкновенная - 0,78, девясил высокий - 0,27) участвует в организме в иммунных процессах, селен (содержание селена, мкг/г: солодка голая - 17,1, девясил высокий - 10,0, гармала обыкновенная - 1,0, почки сосны обыкновенной - 0,20) является мощным антиоксидантом, железо (содержание железа, мг/г: эхинацея пурпурная - 0,48, гармала обыкновенная - 0,14, девясил высокий - 0,9, солодка голая - 0,7, почки сосны обыкновенной - 0,04) является основным структурным компонентом гемоглобина крови и гемсодержащих ферментов, его соли нормализуют в организме липидный обмен и оказывают стимулирующее действие на эритропоэз. а также в комплексе с кобальтом (содержание кобальта, мкг/г: солодка голая - 0,03, гармала обыкновенная - 0,4) оказывает стимулирующее влияние на иммуногенез при вирусных инфекциях, медь (содержание меди, мг/г: почки сосны обыкновенной - 6,8, девясил высокий - 1,1, солодка голая - 0,2, гармала обыкновенная - 0,37) повышает функциональную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.
Пример получения предлагаемого иммуностимулирующего средства.
0,45 кг воздушно-сухого сбора измельчают до частиц размером 3 мм. Затем измельченный сбор при помощи сита с диаметром отверстий 0,25 мм освобождают от пыли (частиц менее 0,25 мм) и получают 0,45 кг готового сырья (расходный коэффициент равен 1,03), который помещают в сосуд темного стекла, заливают 4500 мл 70%этилового спирта, выдерживают в темном месте при температуре 18-20°С в течение 7 дней и фильтруют через холст, отжимая сырье. Иммуностимулирующее средство применяют в виде 7-8% водного раствора
Клиническая оценка иммуностимулирующее средства проведена на клинически здоровых телятах 20-30-дневного возраста. Было сформировано две группы животных по 10 голов в каждой (1-опытной вводили иммуностимулирующее средство в виде 7%водного раствора в дозе 2,5 мл/кг живой массы в течение 10 дней, 2 группа была опытной). В начале эксперимента проводили скрининговые исследования крови для отбора животных в опыт с дисбалансом в иммунной системе (таблица), в последующем (через 7 дней) отслеживали изменения, происходящие в организме телят, по следующим показателям: функциональная активность нейтрофилов крови, бактерицидная (БАСК) и лизоцимная (ЛАСК) активность сыворотки крови, относительное и абсолютное число Т- и В-лимфоцитов, уровень иммуноглобулинов.
Фоновыми исследованиями (таблица) установлено, что в показателях, характеризующих иммунную реактивность организма у животных, выявлены: недостаточный уровень иммуноглобулинов G и М, низкая концентрация которых свидетельствует о иммунодефицитном состоянии, дисбаланс как в клеточном, так и в гуморальном звене иммунитета.
Таблица
Эффективность иммуностимулирующего средства при вторичном иммунодефиците телят:
Показатели
Группы животных
Опытная
Контрольная
Т-лимфоциты, %
<img file="00000001.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Т-лимфоциты, 10<sup>9</sup>/л
<img file="00000003.tif" he="13" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000004.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
В-лимфоциты, %
<img file="00000005.tif" he="13" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000006.tif" he="13" wi="19" img-content="undefined" img-format="tif" />
В-лимфоциты, 10<sup>9</sup>/л
<img file="00000007.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Функциональная активность нейтрофилов крови, %
- спонтанный тест
<img file="00000009.tif" he="13" wi="19" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000010.tif" he="13" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
- индуцированный тест
<img file="00000011.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000012.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
Иммуноглобулины, мг/мл
- IgG
<img file="00000013.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000014.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
-
- IgM
<img file="00000015.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000016.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лизоцимная активность сыворотки крови, %
<img file="00000017.tif" he="13" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000018.tif" he="13" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
Бактерицидная активность сыворотки крови, %
<img file="00000019.tif" he="13" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000020.tif" he="13" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание: числитель - показатели до опыта (фон), знаменатель - показатели через 7 дней после опыта
При сравнении параметров БАСК в динамике опыта отмечалось, что к концу эксперимента данный показатель у опытных телят был значительно выше, чем у контрольных животных (98,3±2,2% против 80,4±1,9%), ЛАСК в опытной группе в отличие от контрольных животных достигла нижних значений нормы. В результате анализа данных исследования клеточного и гуморального звеньев иммунитета установлено, что применение предлагаемого средства способствовало достоверному возрастанию содержания Т- и В-лимфоцитов. В опытной группе относительное количество Т-клеток составило 31,0±1,2%, В-клеток - 8,6±0,4%, в то время как у контрольных животных относительное количество Т- и В-лимфоцитов составило 24,2±0,4% и 6,0±0,7% соответственно. В гуморальном звене иммунитета определялось содержание иммуноглобулинов классов G и М у всех экспериментальных животных. Анализ этих данных позволил сделать вывод о том, что средство способствовало достоверному увеличению Ig G (15,0±0,1 мг/мл против 12,8±0,7 мг/мл в контроле), а в концентрации Ig М отмечена тенденция к увеличению.
Предлагаемое средство, содержащее спиртовую настойку лекарственного растительного сбора, является средством природного происхождения, приготовлено из доступного, экологически чистого сырья, а его применение оказывало выраженное стимулирующее влияние на иммунокомпетентные системы организма, в результате чего повысился уровень неспецифической защиты животного.
Источники информации
1. Новиков Д.К., Деркач Ю.Н., Новиков П.Д. Иммунотропные лекарства // В мире лекарств. - М., 1999. - 2 (4). - С.48-58.
2. Бакуридзе А. Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения (обзор) // Хим. - фармацевт, журнал. - М., 1993. - 8. - С.43-47.
3. Самородов В. Н., Поспелов СВ., Моисеева Г.Ф. и др. Фитохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Хим. - фармацевт, журнал. - М., 1996. - 4. - С.32-37.
4. Оболенцева Г.В., Литвиненко В.И., Аммосов А.С. и др. Фармакологические и терапевтические свойства препаратов солодки (обзор) // Хим. - фармацевт, журнал. - М., 1999. - 8. - С.24-28.
5. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. - М., 1990. - 464 с.