ИММОРТАЛИЗОВАННЫЕ ФИБРОБЛАСТЫ ЭМБРИОНА ЦЫПЛЕНКА

1. Стабильно трансфицированный иммортализованный фибробласт эмбриона цыпленка (ФЭЦ), отличающийся тем, что указанный иммортализованный ФЭЦ экспрессирует SV40 T антиген, экспрессирует теломеразу цыпленка (cTERT) под контролем гетерологичного промотора и не включает экзогенную ретровирусную ДНК с Длинным концевым повтором.
2. Культура клеток, включающая иммортализованные ФЭЦ по п.1.
3. Культура клеток по п.2, отличающаяся тем, что культуру клеток инфицируют вирусом птиц или вирусным вектором птиц.
4. Культура клеток по п.3, отличающаяся тем, что вирус птиц или вирусный вектор птиц выбирают из группы, состоящей из вируса болезни Марека (MDV), MDV-родственного вируса герпеса индеек (HVT), вируса болезни Ньюкасла (NDV), вируса инфекционного бронхита (IBV), вируса инфекционного бурсита (IBDV), вируса синдрома снижения несучести (EDSV), вируса ринотрахеита индеек (TRT), реовируса (RV), а также HVT вектора, включающего IBDV VP2-ген, IBV-ген белков шиловидного отростка, HA-ген птичьего гриппа, ILT-ген белка gD/gI или F-ген NDV.
5. Способ получения иммортализованных ФЭЦ по п.1, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии
а) получения первичных клеток ФЭЦ,
b) трансфекции указанных ФЭЦ при помощи 1) молекулы ДНК, не содержащей ДКП последовательности, включающей инвертированные повторы транспозона и включающей ген, кодирующий SV40 T антиген под контролем подходящего промотора, 2) молекулы ДНК, не содержащей ДКП последовательности, включающей инвертированные повторы транспозона и включающей ген, кодирующий теломеразу цыпленка; cTERT под контролем подходящего промотора и 3) молекулы ДНК, включающей ген, кодирующий транспозазу под контролем подходящего промотора.
с) отбора клеток ФЭЦ, которые культивируют в течение по меньшей мере 45 клеточных циклов.
6. Способ получения иммортализованных ФЭЦ по п.1, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии
a) получения первичных клеток ФЭЦ,
b) трансфекции указанных клеток ФЭЦ при помощи одной молекулы ДНК, не содержащей ДКП последовательности, включающей инвертированные повторы транспозона и включающей как ген, кодирующий SV40 T антиген под контролем подходящего промотора, так и ген, кодирующий теломеразу цыпленка под контролем подходящего промотора, и включающей ген, кодирующий транспозазу под контролем подходящего промотора,
c) отбора клеток ФЭЦ, которые культивируют в течение по меньшей мере 45 клеточных циклов.
7. Способ получения иммортализованных ФЭЦ по п.1, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии a) получения первичных клеток ФЭЦ,
b) трансфекции указанных клеток ФЭЦ при помощи 1) молекулы ДНК, не содержащей ДКП последовательности, включающей инвертированные повторы транспозона и включающей ген, кодирующий SV40 T антиген под контролем подходящего промотора, и ген, кодирующий теломеразу цыпленка под контролем подходящего промотора и при помощи 2) молекулы ДНК, включающей ген, кодирующий транспозазу под контролем подходящего промотора.
с) отбора клеток ФЭЦ, которые культивируют в течение по меньшей мере 45 клеточных циклов.
8. Способ по любому из пп. 5-7, отличающийся тем, что на стадии с) выбирают клетки, которые культивируют по меньшей мере в течение 100 клеточных циклов.
9. Способ репликации вируса птиц или вирусного вектора птиц, где указанный способ включает стадии a) культивирования иммортализованных ФЭЦ по п.1, b) контактирования иммортализованных ФЭЦ с вирусом птиц или вирусным вектором птиц c) обеспечения репликации вируса птиц или вирусного вектора птиц и d) выделения вирусного потомства.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что вирус птиц или вирусный вектор птиц выбирают из группы вирусов птиц, состоящей из вируса болезни Марека (MDV), MDV-родственного вируса герпеса индеек (HVT), вируса болезни Ньюкасла (NDV), вируса инфекционного бронхита (IBV), вируса инфекционного бурсита (IBDV), вируса синдрома снижения несучести (EDSV), вируса ринотрахеита индеек (TRT), реовируса (RV), а также HVT вектора, включающего IBDV VP2-ген, IBV-ген белков шиловидного отростка, HA-ген птичьего гриппа, ILT-ген белка gD/gI или F-ген NDV.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанный вирус птиц или вирусный вектор птиц выбирают из группы вирусов птиц, состоящей из MDV или векторного вируса MDV.
12. Способ получения вакцины, включающей вирус птиц или вирусный вектор птиц, отличающийся тем, что способ включает стадию смешивания культуры клеток по п.3 или 4 с фармацевтически приемлемым носителем.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что вирус птиц или вирусный вектор птиц представляет собой MDV.
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что MDV или вирусный вектор MDV в вакцине находятся в живой аттенуированной форме.
15. Вакцина, включающая культуру клеток по п.3 или 4, и фармацевтически приемлемый носитель.
16. Способ получения вакцины, включающей вирус птиц или вирусный вектор птиц, отличающийся тем, что данный способ включает стадии a) инфицирования культуры клеток по п.2 вирусом птиц или вирусным вектором птиц
b) репликации указанного вируса птиц или вирусного вектора птиц
с) выделения вирусного потомства
d) смешивания вирусного потомства с фармацевтически приемлемым носителем.