Способ получения подвойного материала Гизела 5 и ВСЛ-2 в in vitro
METHOD OF PRODUCING GISELA 5 AND AFL-2 ROOTSTOCK IN IN VITRO

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии, и может быть использовано в питомниководстве для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых и семечковых) культур.
Изобретение представляет собой способ получения подвойного материала Гизела 5 и ВСЛ-2 в условиях in vitro, черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, отличающийся добавлением в среду высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л и) побеги большого размера (5-6 см) используют для размножения, а меньшего пересаживают на питательную среду содержанием 0,1 мг 6 БАЛ. При этом корректируется содержание аммиачного и нитратного азота. Пересадки необходимо проводить через 3-4 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, что можно определить по характерному блеску культур. Такие культуры выбраковываются, а условия культивирования (содержание агара, цитокининов, соотношение NH4, NO3, колебания температуры) корректируются. Оптимальные условия культивирования Гизелы 5 и ВСЛ 2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2000-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.
Наиболее близким техническим решением из известных является способ получения оздоровленных цитрусовых растений (см. BITTERS W.P., MURASHIGET., RANGAN Т. S. NAUER Е.Н., ROISTAHER C.N., HOLLIDAY Р.В. Healhty trees from the test-tube. Citrograph, 1972, v 57, N 3, p. 85-86), при котором меристематические апексы побегов прививаются на сеянцы, выращенные в стерильных условиях, а затем полученные саженцы доращиваются до необходимых размеров. Однако этот способ имеет следующие недостатки. Процесс вычленения апексов размером менее 1 мм и процедура его прививки на сеянцы трудоемкой операцией, производительность которой мала, в результате чего конечный выход растений невысок. Приживаемость таких мелких структур также неудовлетворительна. Кроме того, все полученные растения требуют обязательного тестирования, так как до этой процедуры их фитосанитарный статус неизвестен.
Задача изобретения заключается в получении подбойного материала Гизела 5 и ВСЛ-2 в условиях in vitro для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых и семечковых) культур.
Поставленная задача решается следующим образом: Первый этап считается завершенным после получения небольшого конгламерата побегов длиной 0,5-1,5 см. Для увеличения коэффициента размножения в первых пассажах можно не разделять на отдельные единицы, а переносить на свежую питательную среду целиком. При использовании этого приема величина коэффициента размножения резко возрастает и может достигать 40-60 за пассаж. Содержание цитокининов на первом этапе колеблется от 0,1 до 1 мг/л, ауксинов от 0,001 до 1 мг/л. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с большой концетрацией солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л). Побеги большого размера (5-6 см) используют для размножения, а меньшего пересаживают на питательную среду содержанием 0,1 мг 6 Бап. Необходимо корректировать содержание аммиачного и нитратного азота. Пересадки необходимо проводить через 3-4 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, что можно определить по характерному блеску культур. Такие культуры выбраковываются, а условия культивирования (содержание агара, цитокининов, соотношение NH4, NO3, колебания температуры) корректируются. Оптимальные условия культивирования Гизелы 5 и ВСЛ 2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2000-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.