Полипептид, обладающий активностью фосфолипазы С, и его применение

1. Полипептид с активностью фосфолипазы С, где указанный полипептид:
(1) содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2, с аминокислотными заменами в одном или более чем одном положении, выбранном из группы, состоящей из положений 6, 8, 10, 104, 205 или любой их комбинации в аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2; причем предпочтительно аминокислотные замены присутствуют во всех положениях 6, 8, 10, 104, 205 аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2; или
(2) имеет идентичность последовательности (1) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, и по меньшей мере в одном из положений 6, 8, 10, 104 и 205 отличается от положений 6, 8, 10, 104 и 205 аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2.
2. Полипептид по п. 1, где
аминокислота лизин в положении 6 аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2, заменена на пролин, глицин, гидроксипролин, серии или треонин, предпочтительно пролин, и/или
аминокислота лизин в положении 8 заменена на изолейцин, лейцин, валин, метионин, аланин, фенилаланин или н-лейцин, предпочтительно изолейцин, и/или
аминокислота глицин в положении 10 заменена на треонин или серии, предпочтительно треонин, и/или
аминокислота лизин в положении 104 заменена на глицин или пролин, предпочтительно глицин, и/или
аминокислота серии в положении 205 заменена на тирозин, триптофан, фенилаланин или треонин, предпочтительно тирозин;
предпочтительно аминокислотная последовательность полипептида содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 4, или состоит из нее.
3. Выделенный полипептид, имеющий идентичность аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 4, по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, и где указанный выделенный полипептид имеет пролин, изолейцин, треонин, глицин и тирозин в положениях аминокислотных остатков, соответствующих положениям 6, 8, 10, 104 и 205 в SEQ ID NO: 4, соответственно, причем предпочтительно полипептид получен из Bacillus subtilis.
4. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из пп. 1-3, где предпочтительно молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, изложенную в SEQ ID NO: 3, или последовательность молекулы нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 3.
5. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 4, где предпочтительно вектор представляет собой экспрессионный вектор, более предпочтительно вектор сконструирован для экспрессии в эукариотической клетке или прокариотической клетке, особенно предпочтительно для экспрессии в бактериальной клетке, клетке гриба, дрожжевой клетке, клетке млекопитающего, клетке насекомого или растительной клетке.
6. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 4 или вектор по 5, где клетка предпочтительно представляет собой эукариотическую клетку или прокариотическую клетку, более предпочтительно бактериальную клетку, клетку гриба, дрожжевую клетку, клетку млекопитающего, клетку насекомого или растительную клетку.
7. Фосфолипаза С, продуцированная клеткой по п. 6.
8. Применение полипептида по любому из пп. 1-3 или полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты по п. 4, или полипептида, кодируемого вектором по п. 5, или ферментативного бульона, концентрата или полипептида, экспрессируемого клеткой по п. 6, или фосфолипазы С по п. 7 в качестве фосфолипазы С, предпочтительно в дегуммировании масел и жиров.
1
2
9. Ферментативная композиция, содержащая полипептид по любому из пп. 1-3, или полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п. 4, или полипептид, кодируемый вектором по п. 5, или полипептид, экспрессируемый клеткой по п. 6, или фосфолипазу С по п. 7 и по меньшей мере один фермент дегуммирования, причем предпочтительно по меньшей мере один фермент дегуммирования выбран из группы, состоящей из фосфолипазы A, фосфолипазы А, фосфолипазы В, фосфолипазы D, пектиназы и маннаназы.
10. Применение полипептида по любому из пп. 1-3, или молекулы нуклеиновой кислоты по п. 4, или вектора по п. 5, или клетки по п. 6, или ферментативной композиции по п. 9 в изготовлении фермента дегуммирования.