НАНОКАПСУЛЫ ЖИРОРАСТВОРИМОГО АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА, ИХ ПРОИЗВОДСТВО И ВИДЫ ПРИМЕНЕНИЯ
NANO-CAPSULES OF FAT-SOLUBLE ACTIVE INGREDIENT, MANUFACTURE AND TYPES OF USE THEREOF

Изобретение относится к нанокапсулам жирорастворимого активного ингредиента, способу их производства и видам применения.
Во многих областях техники, таких как фармацевтическая, косметическая и агропищевая промышленность и, в частности, в области питания животных очень широко применяются такие молекулы, как витамины, жирные кислоты, эфирные масла. Например, витамины А и Е обычно применяются для производства корма, способствующего росту и здоровью животных.
Гидрофобная природа и уязвимость по отношению к условиям окружающей среды, в частности к нагреванию и химическому воздействию в процессе формирования их смеси и хранения, а также в процессе их применения, делает инкапсуляцию молекул необходимой.
Витамин Е или токоферол (сокращенно TOL), существующий преимущественно в форме α-токоферола (αTOL), в естественном состоянии представляет собой маслянистую, липофильную, смешиваемую во всех соотношениях жидкость в любой гидрофобной или липидной фазе. Он крайне нестабилен, легко окисляется и в окисленном состоянии утрачивает большую часть своей биологической активности. Его биодоступность у животных не превышает 50% при пероральном приеме, поскольку, быстро окисляясь, он главным образом абсорбируется в окисленной неактивной форме. Кроме того, при пероральном приеме витамин Е находится в форме более стабильного производного, обычно выбранного из сложных эфиров, например ацетата, и солей витамина Е.
Витамин А существует в нескольких формах, в частности в виде сложного эфира, и находится в одной из наиболее стабильных форм - в форме ретинола ацетата, которая чаще всего потребляется домашним скотом (птицей, свиньями и крупным рогатым скотом). Однако его чувствительность к окислению, температуре, свету, кислотам сохраняется. Таким образом, при применении в фармацевтической области или в питании животных он очень быстро разлагается, как только попадает под действие первых жестких условий, в частности кислой среды, пищеварительной системы, в результате чего биодоступная форма витамина А не образуется.
Давно известно, что в целях лучшего сохранения этих чувствительных активных ингредиентов их можно защитить посредством покрытия или инкапсуляции. Для инкапсуляции витаминов, в частности витаминов А и Е, разработаны и широко применяются различные средства, такие как средства, включающие белки.
Однако авторы изобретения все еще находятся в поисках композиции жирорастворимого активного ингредиента, который обладал бы высокой биодоступностью.
Авторы изобретения искали новую композицию таких активных ингредиентов, способную повышать их абсорбцию, в частности абсорбцию в кишечнике.
Поскольку большинство этих активных ингредиентов обычно применяют в защищенной форме, еще более существенной была разработка композиции, позволяющей указанным активным ингредиентам абсорбироваться в их свободной активной форме, что означает, что гидролиз защищенной формы и ее абсорбция должны происходить почти одновременно.
Авторами изобретения впервые обнаружено, что такие активные ингредиенты можно включать в нанокапсулы с высоким содержанием указанных активных ингредиентов, и это можно осуществлять чистым способом в том смысле, что в нем не используют никаких органических растворителей. Впоследствии авторы изобретения разработали нанокапсулы, способные эффективным образом высвобождать активную форму активного ингредиента, а именно форму, удовлетворяющую всем описанным выше требованиям.
Таким образом, изобретение относится к композиции с высоким содержанием жирорастворимого(-ых) активного(-ых) ингредиента(-ов) в форме нанокапсул, который в предпочтительном варианте осуществления обладает повышенной биодоступностью по сравнению с композициями, представленными в настоящее время на рынке.
Изобретение дополнительно нацелено на осуществление промышленно применимого и экологически безвредного способа получения таких нанокапсул. Кроме того, разработанный авторами изобретения способ приводит к получению нанокапсул, обладающих низким остаточным влагосодержанием, предпочтительно менее 8%, что обеспечивает их стабильность со временем независимо от условий хранения.
В зависимости от области применения активного ингредиента нанокапсулы по изобретению могут осуществляться в форме для более простого обращения, например, в форме микрочастиц, в частности, путем адсорбции указанных нанокапсул на носителе. В последующем описании термин «частица» будет закреплен за любой формой указанных наночастиц, и в качестве примера такие частицы представляют собой микрочастицы, содержащие нанокапсулы по изобретению. Таким образом, если активный ингредиент предназначен для питания животных, особенно преимущественным являются нанокапсулы, включенные в сухие частицы, характеризующиеся отличной смешиваемостью для их включения в премикс. При данном показании к применению такие частицы представляют собой микрочастицы, средний размер которых составляет менее 300 мкм.
Теперь различные объекты изобретения будут описаны более подробно.
Далее изобретение описано более конкретно в отношении витамина Е, но очевидно, что его объем не ограничен им, и изобретение применимо к любому жирорастворимому активному ингредиенту и любой смеси таких веществ.
Как указано выше, изобретение относится к наночастицам, содержащим по меньшей мере один жирорастворимый ингредиент в высокой концентрации, который является стабильным и может обладать высокой биодоступностью. Наночастицы по изобретению могут находиться в форме коллоидной суспензии или в сухой форме после высушивания этой суспензии.
Как в форме коллоидной суспензии, так и в сухой форме указанные нанокапсулы содержат по меньшей мере одну масляную фракцию, включающую или состоящую из жирорастворимого ингредиента и ионного поверхностно-активного вещества (ПАВ), и один предпочтительно гидрофильный полимер, окружающий указанную масляную фракцию.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что для того, чтобы сделать витамин Е биодоступным или по меньшей мере повысить его биодоступность, нанокапсулы должны дополнительно содержать по меньшей мере одно неионное поверхностно-активное вещество. Разумеется, в зависимости от показаний к применению активного ингредиента эта биодоступность может быть нежелательной или даже недопустимой, и в этом случае нанокапсулы не будут содержать неионное ПАВ.
Как уже упоминалось, нанокапсулы по изобретению позволяют переносить любой жирорастворимый активный ингредиент. Таким образом, этот ингредиент может быть выбран из:
жирорастворимых витаминов, таких как витамины A, D, Е, K, их производных, в частности сложных эфиров, например ацетата, пропионата или сукцината, а также их метаболитов, таких как ретиналь, ретиноевая кислота, 25-гидроксихолекальциферол, 1,25-дигидроксихолекальциферол;
каротиноидов;
эфирных масел, таких как эфирные масла тимьяна, душицы, розмарина, чеснока, камелии, горчицы, имбиря, куркумы, винограда, цитрусовых плодов, эспарцета, юкки, полыни, корицы, мяты, гвоздичного дерева, ягод, кумина и эхинацеи;
насыщенных, мононенасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот;
жирных масел.
Если активный ингредиент представляет собой жидкость или, вероятно, становится жидким при нагревании, оно может состоять из собственной масляной фазы, в которой будет присутствовать ионное поверхностно-активное вещество.
Если активный ингредиент находится не в жидком состоянии при температуре получения нанокапсул, то его можно предварительно солюбилизировать в масле, как правило, в инертном масле, которое будет использоваться в качестве носителя. В качестве примера это масло может представлять собой триолеин.
Преимущество нанокапсул по изобретению заключается в том, что содержание в них активного ингредиента может находиться в диапазоне от минимум, например, 5 мас. % до более 50 мас. % или даже по меньшей мере 90 мас. % относительно сухой массы нанокапсул. Это содержание определяется в зависимости от назначения нанокапсул и, как правило, составляет по меньшей мере 5 мас. %, предпочтительно по меньшей мере 25 мас. % и более предпочтительно по меньшей мере 50 мас. % или даже по меньшей мере 70 мас. %, даже по меньшей мере 90 мас. % относительно сухой массы нанокапсул.
Указанное ионное поверхностно-активное вещество предпочтительно выбрано из ПАВ, молекулярная масса которых составляет максимум 1500 г/моль или даже максимум 1000 г/моль. Выше 1500 г/моль нанокапсулы формируются с трудом. Среди этих предпочтительных поверхностно-активных веществ могут быть фосфатидилхолины, такие как яичный лецитин или соевый лецитин, или гексадецилтриметиламмоний бромид. Положительно или отрицательно заряженное ионное поверхностно-активное вещество выбрано так, чтобы его заряд был противоположен заряду полимера.
х
у
х
х
у
х
х
х

Указанное неионное поверхностно-активное вещество предпочтительно выбрано из блок-сополимеров полиоксиэтилен-полиоксипропилен, смесей блок-сополимеров полиоксиэтилен (ПОЭ)-полиоксипропилен (ПОП), Твин-80, сложных эфиров жирных кислот и сахарозы и, в частности пальмитатов и стеаратов, и любой их смеси. В рамках этого определения предпочтительные поверхностно-активные вещества выбраны из сополимеров формулы ПОЭ-ПОП-ПОЭ, где х находится в диапазоне от 75 до 85, и у находится в диапазоне от 25 до 35, сополимеров формулы ПОЭ-ПОП-ПОЭ, где х находится в диапазоне от 55 до 65, и у находится в диапазоне от 35 до 45, и сополимеров формулы ПОЭ-ПОПу-ПОЭ, где х находится в диапазоне от 112 до 123, и у находится в диапазоне от 40 до 50, а также сложных эфиров жирных кислот и сахарозы, имеющихся в продаже под торговыми марками SISTERNA SP70 и PS750.
Полимер(-ы), позволяющий(-ие) получить нанокапсулы в соответствии с изобретением, выбран(-ы) из катионных или анионных полимеров, где заряд полимера противоположен заряду ионного поверхностно-активного вещества. Предпочтительно это полимеры природного происхождения, таким образом, предпочтительно это один или более полимеров выбраных из хитозана, альгината, пектина, крахмала, целлюлозы, казеина и их комбинаций. Таким образом, предпочтительные комбинации полимера и ионного ПАВ состоят из хитозана и яичного лецитина и альгината и цетилтриметиламмоний бромида (ЦТАБ).
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения содержание в суспензии неионного ПАВ, как определено выше, составляет по меньшей мере 15 мас. % относительно сухой массы нанокапсул.
Другой объект изобретения состоит из нанокапсул, полученных в результате высушивания описанной выше коллоидной суспензии. Эти нанокапсулы, таким образом, содержат по меньшей мере масляную фракцию, включающую или состоящую из жирорастворимого активного ингредиента, ионного поверхностно-активного вещества, необязательно неионного поверхностно-активного вещества и полимера, предпочтительно гидрофильного полимера, причем указанные нанокапсулы получены путем высушивания коллоидной суспензии по изобретению. Высушивание преимущественно осуществляют в присутствии лактозы, причем нанокапсулы по изобретению адсорбируют на лактозе.
В изобретении также предложены частицы, содержащие нанокапсулы, как те, что описаны выше, которые адсорбированы на носителе. Носитель может быть выбран из любого инертного носителя, такого как, например, лактоза. В предпочтительном варианте осуществления эти частицы представляют собой микрочастицы, содержащие нанокапсулы по изобретению, адсорбированные на лактозе.
Способ по изобретению для получения нанокапсул, как в виде коллоидной суспензии, описанной выше, так и в сухом состоянии после обработки такой суспензии, является еще одним объектом изобретения.
Таким образом, способ получения коллоидной суспензии нанокапсул включает следующие стадии:
Наличие, с одной стороны, первой фазы, содержащей по меньшей мере масляную фракцию, включающую или состоящую из по меньшей мере жирорастворимого активного ингредиента и ионного поверхностно-активного вещества, и, с другой стороны, второй водной фазы, содержащей по меньшей мере полимер и необязательно неионное поверхностно-активное вещество, где молярная концентрация указанного ионного ПАВ и одного из неионных ПАВ, если целесообразно, больше или равна 100-кратной критической концентрации мицеллобразования (ККМ) указанного(-ых) ионного(-ых) ПАВ и указанного(-ых) неионного(-ых) ПАВ соответственно; при этом активный(-ые) ингредиент(-ы), ионные поверхностно-активные вещества, неионные поверхностно-активные вещества и полимеры соответствуют приведенным выше определениям.
Формирование крупнозернистой эмульсии, которую впоследствии гомогенизируют под высоким давлением для образования коллоидной суспензии нанокапсул.
Определение ККМ может быть выполнено любым методом, хорошо известным специалистам в данной области техники, например, путем измерения поверхностного натяжения с помощью тензиометра по методу пластины или кольца.
Если активный(-ые) ингредиент(-ы) находится(-ятся) не в жидком состоянии при комнатной температуре или обладает(-ют) слишком большой вязкостью, масляную и водную фазы доводят до температуры в диапазоне от 60 до 70°С, позволяя активному(-ым) ингредиенту(-ам) расплавиться.
Эмульсию, называемую крупнозернистой эмульсией, получают путем простого перемешивания водной и масляной фаз. После этого проводят ее гомогенизацию под высоким давлением, например, в течение по меньшей мере 6 минут при давлении, по меньшей мере равном 600 бар.
Чтобы получить сухие нанокапсулы по изобретению из коллоидной суспензии нанокапсул, как описано выше, указанные нанокапсулы высушивают распылением в присутствии лактозы. Этим способом получают суспензии, которые не являются липкими и могут храниться при комнатной температуре.
Изобретение также относится к видам применения таких нанокапсул. Они представляют большой интерес в питании животных, в частности, моногастричных животных. При данном показании к применению их используют в форме частиц, и в частности в форме микрочастиц, как описано выше.
Изобретение проиллюстрировано, и его преимущества освещены в приведенных ниже примерах, показывающих получение нанокапсул альфа-токоферола ацетата (αТАС) и их характеристик в питании животных в тест-системах in vitro и in vivo.
На Фиг. 1 показана биодоступность in vitro ТАС для различных композиций ТАС.
На Фиг. 2 показана степень гидролиза in vitro ТАС в TOL для различных композиций ТАС.
На Фиг. 3 показана концентрация αTOL в плазме (в мкмоль/л) у крыс после введения различных композиций ТАС путем принудительного кормления.
На Фиг. 4 показана концентрация αTOL в плазме (в мкг/мл) у петухов после введения различных композиций ТАС путем принудительного кормления.
На Фиг. 6 показана концентрация αTOL в плазме (в мкг/мл) у цыплят после введения различных композиций ТАС в составе корма.
В приведенных ниже примерах проведен анализ различных показателей и, в частности, биодоступности витамина Е.
Биодоступность жирорастворимого активного ингредиента, такого как витамин Е или производное витамина Е, выражена в виде концентрации витамина Е, высвобождаемого в кровь, относительно концентрации витамина Е, присутствующего в рационе животного, или относительно концентрации, выраженной в виде эквивалента витамина Е производного витамина Е, введенного в рацион питания животного, в случае введения производного витамина. При таком представлении биодоступности витамина Е, таким образом, учитывают абсорбцию витамина Е или производного витамина Е в кишечнике во время прохождения через пищеварительный тракт.
Пример 1: Получение нанокапсул в соответствии с изобретением
Композиция
Нанокапсулы, полученные в данном примере, обозначены индексами С24, А37 и С40.
Их получают из коллоидной суспензии, содержащей по меньшей мере:
- ТАС
- ионное поверхностно-активное вещество, выбранное из яичного лецитина (Lipoid Е80) и гексадецилтриметиламмоний бромида (ЦТАБ),

- для нанокапсул С24 и А37 неионное поверхностно-активное вещество Lutrol-F68,
- по меньшей мере один ионный гидрофильный полимер, выбранный из (катионного) хитозана и (анионного) альгината натрия,
причем указанную коллоидную суспензию впоследствии высушивают в присутствии лактозы.
Композиция этих наночастиц показана в следующей таблице 1, где содержание ингредиентов выражено в виде мас. % (мас./мас. сухого вещества):
Получение
Способ получения наночастиц имеет 3 следующие стадии:
- получение наноэмульсии;
- получение коллоидной суспензии нанокапсул; и
- высушивание нанокапсул.
Протокол получения нанокапсул С24 и А37:
Получение наноэмульсии:
Для нанокапсул С24:
- ионное поверхностно-активное вещество Lipoid Е80 диспергируют в ТАС при перемешивании при помощи турбины, и температуру дисперсии доводят до 65°С, чтобы получить масляную фазу,

- неионное поверхностно-активное вещество (Lutrol F68) растворяют в воде и доводят температуру раствора до 65°С, чтобы получить водную фазу.
Для нанокапсул A37:
- температуру ТАС, составляющего масляную фазу, доводят до 65°С, и диспергируют в нем ионное поверхностно-активное вещество ЦТАБ,

- неионное поверхностно-активное вещество (Lutrol F68) растворяют в воде и доводят температуру раствора до 65°С, чтобы получить водную фазу,
затем для нанокапсул С24 и A37:
- водную фазу добавляют к масляной фазе при перемешивании и формируют первичную или крупнозернистую эмульсию с помощью турбины Reyneri при 600 об./мин при 65°С в течение 15 минут,
- эмульсию переносят в гомогенизатор высокого давления и гомогенизируют при давлении 600 бар в течение 6 минут при 65°С, чтобы получить наноэмульсию.
Получение коллоидной суспензии нанокапсул:

- наноэмульсию, полученную выше, разбавляют 1:10 раствором Lutrol F68,
- добавляют уксусный раствор хитозана в концентрации 0,05 г/л для нанокапсул С24 или добавляют раствор альгината натрия в концентрации 1,8 г/л для нанокапсул А37 при перемешивании при помощи турбины в течение 2 часов при комнатной температуре для получения коллоидной суспензии нанокапсул по изобретению.
Высушивание нанокапсул:
- нанокапсулы высушивают распылительной сушкой на лактозе; параметры представляют собой: расход насоса 15%, температура на входе 150°С, скорость потока 7 мл/мин и скорость потока сжатого воздуха 500 л/ч.
Протокол получения нанокапсул С40:
Нанокапсулы С40 получают описанным выше способом для нанокапсул С24 за исключением того, что неионное поверхностно-активное вещество не добавляют.
Определение характеристик нанокапсул:
Нанокапсулы характеризуют по размеру, указанному в приведенной ниже таблице 2, на двух стадиях способа получения, на первой - при формировании наноэмульсии до добавления полимера и на второй - в конце способа до высушивания нанокапсул:
В следующих примерах преимущество композиций ТАС в соответствии с изобретением проиллюстрировано на основании оценки биодоступности ТАС.
Биодоступность ТАС из композиции соответствует доле TOL, абсорбируемой слизистой оболочкой кишечника, которая будет использована для метаболизма клеток и функционирования органов. Эта биодоступность представляет собой комбинацию различных факторов и, в частности, биодоступности ТАС, то есть присутствующей в композиции доли витамина Е (в форме ТАС), солюбилизированного в смешанных мицеллах, и гидролиза ТАС в TOL гидролазой карбоксиэфиров (СЕН), секретируемой в пищеварительной системе.
Пример 2: Биодоступность ТАС в композициях ТАС, оцениваемая в тест-системах in vitro
Это исследование описано в Desmarchelier et al., 2013. Mol. Nutr. Food Res. 2013, 57, 1237-1245.
В этих тест-системах in vitro готовят смешанные мицеллы, содержащие различные композиции ТАС примера 1, что позволяет воспроизводить условия расщепления путем моделирования мицелл, задействованных в кишечнике.
Биодоступность витамина Е рассчитывают после расщепления in vitro корма, содержащего различные композиции. Ее определяют на основании соотношения витамина Е, определенного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), находящегося в мицеллярной фазе, и витамина Е, определенного методом ВЭЖХ, присутствующего в дигестате, полученном в конце дуоденальной фазы.
Анализы проводят на трех типах композиций:
- нанокапсулах С24 и А37 примера 1: исследование нанокапсул А37 проводят в двух формах: в форме порошка на лактозном носителе (А37); и
- в форме продукта, обозначенного как Promix, состоящего из масляного раствора витамина Е, адсорбированного на силикагеле (Promix и Promix (2) представляют собой два повторения одного и того же продукта)
Результаты представлены на Фиг. 1.
Отмечают, что нанокапсулы ТАС (С24 и А37) позволяют увеличить биодоступность витамина Е относительно продукта Promix, то есть количество содержащегося в кормовой основе витамина Е, солюбилизированного в смешанных мицеллах по окончании расщепления in vitro.
Пример 3. Гидролиз ТАС в TOL под действием СЕН в тест-системах in vitro
Протокол гидролиза витамина Е ацетата (ТАС) под действием СЕН описан в Desmarchelier et al., 2013. Mol. Nutr. Food Res. 2013, 57, 1237-1245.
Кратко, 500 мкл смешанных мицелл, содержащих ТАС, инкубируют в течение 30 минут при 37°С. Затем добавляют СЕН в концентрации 10 ед/мл в течение 30 мин. Затем определяют появление свободного токоферода (TOL) методом ВЭЖХ.
Анализы проводят на трех типах композиций:
- нанокапсулах С24 и А37 примера 1; и
- продукта, обозначенного как Е Promix, состоящего из масляного раствора витамина Е.
Результаты представлены на Фиг. 2.
Нанокапсулы ТАС (С24 и А37), позволяют увеличить превращение ТАС в TOL относительно продукта Е Promix, что приводит в результате к доступности большего количества витамина Е для абсорбции.
Пример 4: Биодоступность ТАС в тест-системах in vivo у крыс
Протокол
Анализы проводят на самцах крыс линии Вистар 6-недельного возраста, которые в течение 2 недель получали корм с дефицитом токоферола.
Крыс не кормили за ночь до принудительного кормления.
Крыс (n=10) принудительно кормили в течение 5 дней подряд 5 мг различных растворов ТАС в воде:

- Microvit Е Promix 50 (витамина Е ацетат, адсорбированный на силикагеле),
- сухие нанокапсулы С24 примера 1 и
- сухие нанокапсулы А37 примера 1.
Через три часа после последнего принудительного кормления крысам проводили анестезию, собирали кровь путем внутрисердечной пункции и после центрифугирования выделяли плазму крови. После двукратной экстракции гексаном определяли концентрацию альфа-токоферола (αTOL) в плазме крови методом ВЭЖХ.
Результаты
Результаты представлены на Фиг. 3.

В результате принудительного кормления композициями С24 и А37 концентрации αTOL в плазме крови соответственно составляли 26% и 24% и существенно превышали (Р меньше 0,001) концентрации после принудительного кормления Microvit Е Promix 50.
Пример 5: Биодоступность ТАС в тест-системах in vivo у петухов
Протокол
Схема эксперимента подробно описана в  et а1. 2015, British Poultry Science, 56: 2013, 1, 94-102.
Кратко, 60 петухов породы Иза Браун из двух птичников помещают в отдельные клетки. За неделю до распределения в экспериментальные группы петухов кормят кормом, не содержащим витамин Е.
Петухов (n=10 петухов на группу) принудительно кормили различными растворами ТАС в воде.
Птичник 1: Сухие нанокапсулы С24 примера 1.
TOL и ТАС в форме масла в качестве контроля
Птичник 2: Сухие нанокапсулы С40 примера 1,
TOL и ТАС в форме масла в качестве контроля.
После введения помещенных в капсулу продуктов витамина Е путем принудительного кормления брали образцы крови через 0, 6, 12, 24, 48 и 96 ч после принудительного кормления. После центрифугирования плазму крови сливали и определяли количество несвязанного токоферола методом ВЭЖХ.
Результаты
Результаты проиллюстрированы на Фиг. 4 и 5 и указаны для моментов времени 24 ч и 96 ч в следующих таблицах 3 и 4, где диффузия витамина Е в крови выражена в виде площади под кривой зависимости концентрации от времени (AUC) и процента диффузии относительно ТАС.
В результате принудительного кормления композицией С24 концентрации αTOL в плазме крови существенно выше, чем после принудительного кормления ТАС, не включенным в композицию.
В результате принудительного кормления композицией С40 концентрации αTOL в плазме крови существенно не отличались от концентраций после не включенного в композицию контрольного ТАС, и, таким образом, приготовление без неионного ПАВ не обеспечивает потенциал биодоступности.
Пример 6: Биодоступность ТАС в тест-системах in vivo у цыплят
Протокол
Исследуют 1-дневных цыплят, которых кормили в течение 7 дней кормом, содержащим недостаточное количество токоферола; фиксированная общая продолжительность экспериментальной фазы составляет 15 дней, в течение которых они получают различные препараты витамина Е, смешанные с гранулированным кормом (n=18 на один препарат). Перед этим цыплят размещают группами по 6 штук на клетку. В возрасте 21 день животных подвергают эвтаназии и берут образцы печени. После экстракции определяют количество витамина Е в этой ткани.
Цыплят кормили следующими композициями:

- Microvit Е Promix 50 (витамина Е ацетат, адсорбированный на силикагеле),
- Сухие нанокапсулы С24 примера 1.
После введения помещенных в капсулу продуктов витамина Е путем принудительного кормления брали образцы крови через 0, 6, 12, 24, 48 и 96 ч после принудительного кормления. После центрифугирования плазму крови сливали и определяли количество несвязанного токоферола методом ВЭЖХ.
Результаты
Результаты представлены на Фиг. 6.
В результате принудительного кормления композицией С24 концентрации αTOL в плазме крови существенно выше, чем после принудительного кормления продуктом Е50.
В результате принудительного кормления композицией С24 концентрации αTOL в печени (плюс 24%) были существенно выше, чем после рациона питания с композицией Е50 на основании сравнения углов наклонов вправо кривых доза-ответ.