СПОСОБ ЭКСПАНСИИ NK-КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ ФИДЕРНЫХ КЛЕТОК

2
2
2
2
2
Способ экспансии NK-клеток человека с помощью фидерных клеток, включающий выделение  мононуклеарных клеток (МНК),  из периферической крови человека методом градиентного центрифугирования, стимуляцию пролиферации NK-клеток осуществляют с помощью фидерных клеток, предварительно полученных облучением клеточной линии К562 дозой 100 Гр, в  полной ростовой среде RPMI-1640, содержащей IL-2, в условиях СО-инкубатора при 37°С и 5% СО, продолжительность экспансии составляет  21 сутки, отличающийся тем, что МНК доводят до концентрации 5 млн/мл, засеивают в чашку Петри или культуральный флакон в чистую среду RPMI и инкубируют 60 минут в СО-инкубаторе при 37°С и 5% СО, после чего неприкрепленные NK-клетки собирают, центрифугируют при 1000 оборотов/мин в течение 5 минут и доводят до нужной концентрации, далее в условиях СО-инкубатора в питательной среде RPMI - 1640 с IL-2 - 300 Ед/мл и 10% FBS полученные NK-клетки культивируют совместно с фидерными клетками, причем фидерные клетки добавляют к NK-клеткам трижды: на 0 сутки культивирования в пропорции 1:1, на 7 сутки - 2:1 и 14 сутки - 5-10:1,  каждые 48 часов обновляют питательную среду с добавлением IL-2 - 300 Ед/мл, фидерные клетки использовать сразу после получения или хранения в жидком азоте с криопротектором, состоящим из 10% Диметилсульфоксида (DMSO) и 90% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS).