АНТИИДИОТИПИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К HCMV И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Выделенное антиидиотипическое антитело, которое специфически связывается с антителом к HCMV, содержащим последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2, или с антителом к HCMV, содержащим последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4.
2. Антиидиотипическое антитело по п. 1, отличающееся тем, что антиидиотипическое антитело специфически связывается с антителом к HCMV, содержащим последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2.
3. Антиидиотипическое антитело по п. 1, отличающееся тем, что антиидиотипическое антитело специфически связывается с антителом к HCMV, содержащим последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4.
4. Антиидиотипическое антитело по п. 2, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело содержит три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
5. Антиидиотипическое антитело по п. 4, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 7.
6. Антиидиотипическое антитело по п. 3, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело содержит три гипервариабельные области тяжелой цепи
(HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
7. Антиидиотипическое антитело по п. 6, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 11.
8. Антиидиотипическое антитело по п. 2, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело специфически связывается, по меньшей мере, с одним HVR антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2.
9. Антиидиотипическое антитело по п. 3, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело специфически связывается, по меньшей мере, с одним HVR антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4.
10. Антиидиотипическое антитело по п. 3, отличающееся тем, что указанное антиидиотипическое антитело специфически связывается с HVR-H2 (SEQ ID NO: 36) антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4.
11. Антиидиотипическое антитело по п. 1, конъюгированное с обнаруживаемой меткой.
12. Антитело по п. 1, конъюгированное с биотином.
13. Способ твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) для специфического обнаружения в биологическом образце антитела, представляющего интерес, который включает (а) контактирование и инкубацию биологического образца с реагентом захвата, при этом реагент захвата представляет собой антиидиотипическое антитело по п. 1, с тем, чтобы связать любое из представляющих интерес антител, присутствующих в образце, и (b) контактирование реагента захвата и, следовательно, любого связанного антитела, представляющего интерес, с обнаруживаемым антителом, которое связывается с антителом, представляющим интерес, и измерение уровня антитела, представляющего интерес, связанного с антиидиотипическим антителом с использованием средств обнаружения для обнаруживаемого антитела, при этом антитело, представляющее интерес, выбрано из (а) первого антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2; (b) второго антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4; и (с) их комбинации.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что реагент захвата иммобилизован на твердой подложке, и способ дополнительно включает этап отделения биологического образца от иммобилизованного реагента захвата, связанного с любым присутствующим антителом, представляющим интерес.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что иммобилизованный реагент захвата наносят в качестве покрытия на микротитрационный планшет.
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что иммобилизованный реагент захвата конъюгирован с биотином и связан с покрытым стрептавидином микротитрационным планшетом.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что обнаруживаемое антитело представляет собой антитело от вида, не являющегося человеком, которое связывается с антителами человека.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что обнаруживаемое антитело представляет собой мышиное антитело к hulgG Fcγ.
19. Способ по п. 17 или 18, отличающийся тем, что обнаруживаемое антитело обнаруживается непосредственно.
20. Способ по п. 17 или 18, отличающийся тем, что обнаруживаемое антитело конъюгировано с пероксидазой хрена.
21. Способ по п. 17 или 18, отличающийся тем, что обнаруживаемое антитело обнаруживается с помощью люминисцентного или калориметрического реагента.
22. Способ специфического обнаружения в биологическом образце антитела, представляющего интерес, который включает: (а) контактирование и инкубацию биологического образца с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается с антителом, представляющим интерес; (b) контактирование и инкубацию образца с иммуноаффинными гранулами, которые связываются с антиидиотипическим антителом; (с) элюирование антитела, представляющего интерес; (d) нанесение элюированного антитела, представляющего интерес, на разделительную среду для осуществления отделения более чем одного компонента образца, при этом отделенный компонент образца содержит антитело, представляющее интерес, или его фрагмент, или сигнатурный пептид; и (е) установление отношения массы к заряду одного или более отделенных компонентов образца при помощи масс-спектрометрии, при этом антитело, представляющее интерес, выбрано из (а) первого антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2; (b) второго антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4; и (с) их комбинации.
23. Способ по п. 22, дополнительно включающий обработку биологического образца протеазой после инкубации с иммуноаффинными гранулами и перед или после элюирования антитела, представляющего интерес.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что протеаза представляет собой трипсин.
25. Способ по п. 22, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело является биотинилированным.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело связывается с покрытыми стрептавидином парамагнитными иммуноаффинными гранулами.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что антиидиотипические антитела связываются с иммуноаффинными гранулами перед контактированием и инкубацией с биологическим образцом.
28. Способ по п. 22, отличающийся тем, что иммуноаффинные гранулы представляют собой магнитные гранулы.
29. Способ по п. 22, отличающийся тем, что разделительная среда представляет собой подложку для хроматографии.
30. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2, а антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 7.
31. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2, а антиидиотипическое антитело содержит три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
32. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 7.
33. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4, а антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 11.
34. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4, а антиидиотипическое антитело содержит три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
35. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело содержит последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 11.
36. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4, а антиидиотипическое антитело специфически связывается с HVR-H2 (SEQ ID NO: 36) упомянутого антитела к HCMV.
37. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антитело, представляющее интерес, представляет собой первое антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2 и (b) второе антитело к HCMV, содержащее последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4.
38. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело связывается с антителом, представляющим интерес и не связывается, по меньшей мере, ни с одним другим антителом к HCMV в образце.
39. Способ по любому из пп. 13-18 и 22-29, отличающийся тем, что биологический образец выделяют от субъекта-человека.
40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что субъекта-человека лечили антителом к HCMV, выбранным из (а) первого антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2; (b) второго антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4; и (с) их комбинаций.
41. Способ по любому из пп. 13-18, 22-29 и 40, отличающийся тем, что способ дополнительно включает использование стандартной кривой, чтобы определить уровень антитела, представляющего интерес, в сравнении с известным уровнем.
42. Способ по любому из пп. 13-18, 22-29 и 40, отличающийся тем, что биологический образец представляет собой кровь, плазму или сыворотку.
43. Способ по п. 41, отличающийся тем, что образец представляет собой сыворотку.
44. Набор для иммуноанализа для специфического обнаружения в биологическом образце антитела, представляющего интерес, выбранного из (а) первого антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2; (b) второго антитела к HCMV, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4; и (с) их комбинации, при этом набор включает в себя: (а) контейнер, содержащий в качестве реагента захвата антиидиотипическое антитело, которое специфически связывается с антителом, представляющим интерес; (b) контейнер, содержащий обнаруживаемое антитело, которое связывается с антителом, представляющим интерес; и (с) инструкции для обнаружения указанного антитела, представляющего интерес.
45. Набор по п. 44, который может использоваться в способе ELISA для обнаружения антитела, представляющего интерес.
46. Набор по п. 45 дополнительно включающий твердую подложку для реагента захвата.
47. Набор по п. 46, отличающийся тем, что реагент захвата иммобилизован на твердой подложке.
48. Набор по п. 47, отличающийся тем, что реагент захвата наносят в качестве покрытия на микротитрационный планшет.
49. Набор по п. 44, отличающийся тем, что антиидиотипическое антитело выбрано из (а) первого антиидиотипического антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 7; (b) второго антиидиотипического антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 11; и (с) их комбинации.
50. Выделенное антиидиотипическое антитело, которое специфически связывается с антителом к HCMV, содержащим, по меньшей мере, одну гипервариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из NO: 13-24.
51. Антитело по п. 50, содержащее три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
52. Антитело по п. 50, содержащее три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.