Гемопоэтические стволовые клетки с индуцированным апоптозом эффективно подавляют рост клеток глиомы in vitro, но запускают новый механизм образования опухолевых стволовых клеток

70

Оригинальные исследования

ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ

С ИНДУЦИРОВАННЫМ АПОПТОЗОМ ЭФФЕКТИВНО ПОДАВЛЯЮТ

РОСТ клеток Глиомы in vitro, но запускают новый механизм образования опухолевых стволовых КЛЕТОК

И.С. Брюховецкий 12, П.В. Мищенко 12, Е.В. Толок12, Ю.С. Хотимченко 12,

С.В. Зайцев 1, А.С. Брюховецкий 13 1 Дальневосточный федеральный университет,

Владивосток, Россия

2Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского ДВО РАН,

Владивосток, Россия

3 Клиника восстановительной и интервенционной неврологии и терапии «Нейровита», Москва, Россия

Hematopoietic stem cells with induced apoptosis effectively inhibit glioma cell growth in vitro, but started new mechanism of tumor stem cells

I.S. Bryukhovetskiy12, P.V. Mischenko 12, E.V. Tolok 12, Yu. S. Khotimchenko 12,

S.V. Zaitsev1, A.S. Bryukhovetskiy13

1 Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia

2 A.V. Zhirmunsky Institute of Marine Biology of FEB RAS, Vladivostok, Russia

3 Clinic of Restorative and Interventional Neurology and Therapy “NeuroVita",

Moscow, Russia

Присутствие гемопоэтических стволовых клеток в культуре угнетает пролиферацию опухолевых клеток. Мы предположили, что предобработка стволовых клеток индукторами апоптоза повысит их противоопухолевую эффективность. Целью работы являлась характеристика способности стволовых клеток с индуцированным апоптозом эффективно подавлять рост и вызывать гибель опухолевых клеток in vitro. Использованы культуры глиомы линии С6 и гемопоэтические (CD34+/CD45+) стволовые клетки человека. В качестве индуктора апоптоза был использован дексаметазон. Доказано, что гемопоэтические стволовые клетки с индуцированным апоптозом более эффективно подавляют рост и вызывают гибель клеток глиомы С6, чем нативные стволовые клетки. В процессе межклеточного взаимодействия наблюдается феномен слияния стволовых и опухолевых клеток, который очевидно является одним из механизмов формирования новых опухолевых стволовых клеток.

Ключевые слова: опухолевые клетки, гемопоэтические стволовые клетки, межклеточное взаимодействие, опухолевые стволовые клетки.

Введение

Применение различных видов стволовых клеток (СК) в комплексном лечении рака и других злокачественных опухолей в 60-х годах 20-го века стало революционным научным событием. Сегодня они широко применяются для реконструкции кроветворной системы после химиотерапии, коррекции иммунодефицитных состояний, создания противоопухолевых вакцин, цитотоксических лимфоцитов и дендритных клеток. Перспективным направлением использования СК является направленный транспорт лекарственных веществ непосредственно в опухолевый очаг и создание генетически модифицированных клеток. Но чем шире становится спектр клинического применения СК, тем острее встает вопрос об их истинной роли в развитии злокачественных новообразований [1-3].

e-mail: bruhovetsky@mail.ru

The presence of hematopoietic stem cells in culture inhibits proliferation of tumor cells. We hypothesized that pretreatment of stem cell apoptosis inducers increase their anti-tumor efficacy. The aim of the study was to explore the possibility of stem cells to induce apoptosis effectively inhibit the growth and induce the death of tumor cells in vitro. Use line C6 glioma cultures and hematopoietic (CD34+/CD45 + ) stem cells. We used dexamethasone as the apoptosis inducer. It's known that hematopoietic stem cells with apoptosis induced more effectively inhibit growth and induce a death of C6 glioma cells than native stem cells. In the process of intercellular interaction we observed phenomenon of merging stem and tumor cells, which apparently is one of the mechanisms of new tumor stem cells formation.

Keywords: tumor cells, hematopoietic stem cells, cell-cell interaction, tumor stem cells.

С одной стороны, роль СК в развитии злокачественных опухолей можно считать доказанной. Накоплены и систематизированы весомые аргументы в пользу развития глиом от собственных нейральных стволовых и прогениторных клеток головного мозга человека [4]. Сформулирована концепция опухолевых или раковых СК, обоснована роль СК в процессах метастазирования злокачественных опухолей. Не менее показателен тот факт, что большинство линий опухолевых клеток для экспериментальной онкологии получены путем индукции канцерогенеза именно у беременных животных [5-7].

С другой стороны, противоопухолевые свойства СК также были неоднократно доказаны. Основными механизмами их противоопухолевого действия является миграция в опухолевый очаг, межклеточные и межсистемные взаимодействия в зоне неоплазии,

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014

Оригинальные исследования

71

«by stander effect», обмен цитокинами и информационными молекулами [8—10].

Очевидно, правильный выбор вектора модификации, в ту или иную сторону, определяет информационную направленность взаимодействия СК и опухолевых клеток, что является стратегически важной задачей при создании новых антиметастатических и противораковых клеточных препаратов. В свою очередь, количество СК является одним из не менее важных параметров тканевого гомеостаза. Непрерывное образование, миграция, межклеточное взаимодействие и гибель нейробластов в мозге представляет собой одну из комплексных саноге-нетических программ. Интенсивность нейрогенеза в мозге ослабевает по мере старения организма, уменьшается количество здоровых нейральных СК, они накапливают мутации, снижается их регуляторный потенциал, что отчасти объясняет преобладание глиом у пожилых пациентов [12].

С этих позиций восполнение числа СК и усиление их регуляторных противоопухолевых свойств может существенно повысить эффективность лечения глиальных опухолей. Однако столь «механический» подход к решению вопроса не является продуктивным, поскольку не ясна конечная судьба СК, вводимых в организм больного. Только четкое и однозначное понимание этого вопроса позволит прогнозировать степень безопасности и эффективности потенциального клеточного препарата.

Нашей научной группой была предложена идея создания систем СК с индуцированным апоптозом. В серии экспериментов предобработка СК лектинами из группы рибосом-инактивирующих белков II типа (рицин и вискумин) позволила достичь элиминации 50% клеток глиомы С6, однако их стереотаксическое введение в головной мозг животного с опухолью сопровождалось массивной гибелью нейронов, глиоцитов и опухолевых клеток с выраженной гли-омезодермальной реакцией, ведущей к увеличению объема неопластического узла [13].

Массивный инструктивный апоптоз, сравнимый с внутримозговым введением рицина, запускал мощные пролиферативные процессы, которые быстро восполняли объём неопластического узла. По всей видимости, создание биопрепаратов на основе СК с индуцированным апоптозом для лечения глиальных опухолей требует еще более тонкого и сбалансированного подхода.

На сегодняшний день мы завершили первый этап исследований по сравнительному протеомному картированию и биоинформационному анализу лизатов нейральных (Сй133 + ) СК, выделенных из обонятельной выстилки носа человека, мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК, Сй29+/С044+/С073+/С090+/Сй34-) костного мозга человека и опухолевых СК (CD133 + ) глиобластомы человека линии U87 [14]. Наибольшая степень про-теомных отличий свойственна ММСК костного мозга. Это позволяет предположить, что они сохранили естественный циторегуляторный потенциал.

Ряд специализированных онкологических учреждений в России и за рубежом на протяжении ряда лет успешно используют препарат мобилизованных в периферическую кровь мононуклеаров, основу которого составляют гемопоэтические СК (ГСК) [15].

Данные сравнительного исследования проте-омных профилей ГСК позволяет предположить, что трансплантация этого типа клеток уже сегодня может быть инструментом повышения эффективно-

сти стандартных схем лечения глиальных опухолей головного мозга. Обработка клеток дексаметазоном — наиболее мягким, физиологическим индуктором апоптоза в клетках лейкоцитарного ряда, позволяет получить индуцированные в данном направлении «регуляторные» ГСК.

Цель работы состояла в оценке способности стволовых клеток с индуцированным апоптозом эффективно подавлять рост и вызывать гибель клеток глиальной опухоли in vitro.

Материал и методы

Культура клеток глиомы С6

Культура клеток глиомы С6 была предоставлена лабораторией фундаментальной и прикладной нейробиологии Государственного научного центра им. В.П. Сербского МЗ РФ. По спектру белков и палитре генетических нарушений она наиболее близка к мультиформной глиобластоме человека и характеризуется самым большим количеством опухолевых СК среди доступных экспериментальных моделей [7].

Клетки размораживали при 37°С в течение 10 мин. и отмывали от DMSO в среде DMEM, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) и антибиотик-антимикотик «100Х» (Gibco, США). Клетки осаждали центрифугированием, добавляли свежую среду, ресуспендировали и высаживали в культуральные флаконы.

Культивирование продолжали до образования монослоя, снимали с помощью ферментативной диссоциации (0,05% trypsin-EDTA, 1:4, при 37°С, 10 мин.), центрифугировали (120g, 3 мин.), добавляли свежую среду, ресуспендировали, обрабатывали маркером Vybrant CFDA SE Cell Tracer (Molecular Probes, США) и использовали для проведения эксперимента.

Мобилизованные ГСК

Препарат ГСК предоставлен «Клиникой восстановительной и интервенционной неврологии и терапии «Нейровита» (Москва). Описание иммунологических особенностей клеточного препарата было представлено ранее [15].

Клетки получены от мужчин 46 и 52 лет, проходивших курс лечения по поводу онкологических заболеваний. С целью увеличения количества ГСК в периферической крови донор получал 8 инъекций гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ, Филграстим) с интервалом 12 ч. в течение 4 дней. В первые три дня доза Г-КСФ составляла 2,5 мкг/кг массы тела, а в последний день была удвоена.

Клетки с фенотипом CD34+/CD45+ получали из периферической крови пациента с помощью аппарата COBE Spectra Apheresis System (Terumo, США). Содержание мононуклеарных клеток с маркером клеточной поверхности CD34+/CD45+ в препарате составляло 1,2%. Пациенты подписывали добровольное информированное согласие на использование клеток в исследовательских целях.

После разморозки клетки культивировали 24 ч. в среде DMEM с 10% содержанием фетальной телячьей сыворотки, фактора роста фибробластов, эпидермального фактора роста, антибиотика-анти-микотика «100Х» (10,000 уд.ед/мл пенициллина, 10,000 мкг/мл стрептомицина и 25 мкг/мл фунги-

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014

72

Оригинальные исследования

зона (Gibco, США). Далее, клетки осаждали центри-фурованием, окрашивали CellTracker™ Red CMTPX (Molecular Probes, США) и использовали для проведения эксперимента.

ГСК с индуцированным апоптозом

В качестве агента, индуцирующего апоптоз (пер-турбогена), был использован раствор дексаметазона (KRKA, Словения). Как мы отмечали выше, декса-метазон является наиболее физиологичным индуктором апоптоза в клетках лейкоцитарного ряда. ГСК в количестве 0,5х106 инкубировали 60 мин. в двух миллилитрах бессывороточной среды DMEM (Gibco, США), содержащей 5 мкг/мл дексаметазона, при 37°С и содержании CO2 6%. После обработки клетки осаждали и отмывали 0,9% стерильным раствором хлорида натрия.

Дизайн эксперимента

Исследование одобрено Комиссией по биомедицинской этике Школы биомедицины ДВФУ (протокол № 11 от 01.08. 2014).

24-луночные планшеты (Greiner Bio-One, Австрия) заполняли средой DMEM, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, фактор роста фибробластов, эпидермальный фактор роста и анти-биотик-антимикотик «100Х» (Gibco, США). Часть лунок планшета заполняли интактными ГСК в количестве 0,5х106, в оставшиеся лунки вносили по 0,5х106 ГСК, предобработанных дексаметазоном. Лунки второго планшета заполнялись окрашенными флуорохомным красителем клетками глиомы в количестве 0,5х106. Часть культур использовалась в качестве контроля. Нативные ГСК и клетки с индуцированным апоптозом вносили в лунки культурального планшета, формируя ко-культуры. Соотношение опухолевых клеток и ГСК в сочетанных культурах составило 1:1, 1:2 и 1:3 Клетки инкубировались при температуре 37°С и 5% СО2 в течение 120 ч. в автоматическом режиме с использованием системы непрерывного наблюдения за живыми клетками Cell-IQ (CM-Technologes, США).

Специальные методы исследований

В работе использованы: система визуализации живых клеток LSM 5 (Karl Zeiss, Германия), конфокальный лазерный сканирующий микроскоп LSM 710 (Carl Zeiss, Германия), система глубокого оптического имиджинга биоматериалов FluoView FV 1200MPE (Olympus). Определение жизнеспособности ГСК проводили методом проточной цитофлуориметрии на аппарате Cytomics FC 500 (Beckman Coulter, США) с использованием набора SYTOX Green Dead Cell Stain (Molecular Probes, США). Для работы с изображением применялись программы 3D for LSM Version 1.4.2 и ImageJ (США). Статистическую обработку проводили с помощью программы MS Excel (2010). Оценку статистической значимости различий проводили с применением двухвыборочного t-критерия Стьюдента.

Результаты

Спустя 120 ч. наблюдения число интактных ГСК в контрольной культуре несколько возросло, что очевидно было вызвано пролиферацией. При этом некоторая часть клеток под влиянием коктейля факторов роста подвергались дифференцировке и распластывались по дну культурального планшета.

В свою очередь количество живых клеток в культуре ГСК с индуцированным апоптозом существенно уменьшилось. Анализ морфологии ГСК с использованием SYTOX Green Dead Cell Stain подтвердил фрагментацию 34,5±15% от общего числа ядер. Клетки, предобработанные дексаметазоном, имели выраженные признаки дезорганизации цитоскелета, неровные контуры цитоплазмы, содержали фрагментированные ядра, что указывало на развитие поздней стадии апоптоза (рис. 1).

70 000 60 000 50 000 40 000 30 000 20 000 10 000 0

0 часов 120 часов

Нативные ГСК  ГСК с индуцированным апоптозом

Рис. 1. Количество ГСК без и под действием дексаметазона — индуктора апоптоза

ГСК и опухолевые клетки в сочетанных культурах активно флуоресцировали в свете лазеров двух типов (рис. 2А, Б). Через 24 ч. в цитоплазме опухолевых клеток стали отмечаться накопления флуоресцентного красителя CellTracker™ Red CMTPX, который изначально был связан с цитоплазматическими белками ГСК (рис. 3А). Очевидно, что при совместном культивировании может происходить обмен внутриклеточными белками, механизм которого пока недостаточно понятен. Возможно участие в этом процессе каких-то транспортных посредников, либо белки ГСК способны выходить во внеклеточное пространство и захватываться опухолевыми клетками.

Через 48 ч. эксперимента включения красного флуорохрома содержались в цитоплазме всех опухолевых клеток, а через 72 ч. все клетки глиомы в сочетанных культурах активно флуоресцировали в полосе аргонового лазера с X = 546 нм, что было вызвано накоплением в них белков, окрашенных CellTracker™ Red CMTPX. Данное явление было одинаково выраженным в сочетанных культурах с нативными ГСК и ко-культурах, содержащих ГСК с индуцированным апоптозом. Выраженность феномена не зависела от исходного соотношения клеток (рис. 3Б). Спустя 120 ч. опухолевые клетки в ко-культурах с нативными ГСК и клетками с индуцированным апоптозом отвечали флуоресценцией на воздействие лазеров с длиной волны 488 и 546 нм (рис. 4 А, Б).

Клетки глиомы в контрольной культуре прикреплялись по дну планшета, интенсивно пролиферировали, образовывали многочисленные отростки и формировали монослой. Напротив, в сочетанных культурах с ГСК опухолевые клетки, накопившие красный краситель, были округлой, овальной и неправильной полигональной формы, напоминающей яичницу-глазунью. Клетки практически не прикреплялись ко дну планшета, что очевидно было прямым следствием взаимодействия с ГСК.

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014

Оригинальные исследования

73

Рис. 2. Клетки глиомы линии С6 (А) и ГСК человека при культивировании с клетками глиомы линии С6 (Б). Окраска: А — Vybrant CFDA SE Cell Tracer; Б — CellTracker™ Red CMTCMTPX. А — мультифотонная микроскопия, Б — лазерная сканирующая конфокальная микроскопия. Отрезок — 50 мкм

Рис. 3. Клетки глиомы С6 при совместном культивировании с ГСК, меченными флюорохромом CellTracker™ Red CMTPX: А — 24 ч., Б — 72 ч. культивирования. Клетки глиомы накапливают краситель.

Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

Рис. 4. Клетки глиомы С6 после 120 ч. культивирования с ГСК: А — нативными ГСК; Б — ГСК с индуцированным апоптозом. Окраска: А — Vybrant CFDA SE Cell Tracer; Б — CellTracker™ Red CMTPX.

Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014

74

Оригинальные исследования

Подсчет живых, интенсивно флуоресцирующих морфологических элементов подтвердил существенную разницу в количестве опухолевых клеток в сочетанных культурах (рис. 5 А—В).

ГСК с индуцированным апоптозом в соотношении с опухолевыми клетками 1:1 достоверно подавляли рост опухолевых клеток по сравнению с контролем (t-критерий 4,4) и нативными клетками (t-критерий 3,1). Выявленная динамика сохранялась при соотношении опухолевые клетки/ГСК с индуцированным апоптозом 1:2, но характеризовались меньшей репрезентативностью по сравнению с нативным клетками.

При совместном культивировании опухолевых клеток и ГСК в соотношении 1:3 фаза логарифмического роста опухолевых клеток смещалась во времени, но наблюдаемые различия в противоопухолевых свойствах нативных ГСК и клеток с индуцированным апоптозом нельзя назвать достоверными. Очевидно, что имеет место некий качественно-количественный переход, амортизирующий регуляторное влияние воздействующих клеток.

Обсуждение

Контроль

Нативные ГСК 1/1 — Модифицрованные ГСК 1/1

—“ Контроль

Нативные ГСК 1/2 — Модифицрованные ГСК 1/2

Контроль Нативные ГСК 1/3 —“Модифицрованные

ГСК 1/3

Рис. 5. Динамика роста опухолевых клеток глиомы линии С6, ко-инкубированных с культурами ГСК в различных соотношениях: А — 1:1, Б — 1:2,

В — 1:3. Система автоматического наблюдения «Cell-IQ»

Феномен направленной миграции СК в опухолевый очаг проливает свет на ряд важных аспектов патогенеза злокачественных новообразований. Принято считать, что высвобождение из поврежденных тканей фактора стромальных клеток (SDF-1a), фактора стволовых клеток (SCF), фактора роста гепатоцитов (HGF) и ряда других лигандов ведет к активизации соответствующих рецепторов клеточной поверхности ГСК, что стимулирует их пролиферацию, выход из депо в костном мозге и миграцию в область повреждения.

Далее, взаимодействуя с локальным микроокружением опухолевого очага, ГСК и другие регуляторные клетки угнетают пролиферацию опухолевых клеток, подавляют процессы эпителиально-мезенхимального перехода, препятствуя метастазированию, и напрямую индуцируют клеточную смерть, стимулируя рецепторные белки CD 95, DR3, DR4, RD5. Но это только один из возможных сценариев процесса межклеточной коммуникации в патологическом очаге.

Как удалось установить, источником хемокинов могут быть непосредственно опухолевые клетки [16]. В этом ключе, наблюдаемый переход красителя, связанного с белками цитоплазмы ГСК, в клетки глиомы только отчасти можно объяснить формированием структурного и функционального синцития, намного вероятнее их слияние с клетками глиомы.

Слияние клеток, или эффект клеточной фузии, — фундаментальный биологический процесс, который является ключевым компонентом полового размножения, наблюдается при построении костей, плаценты и мышечных волокон, описан в патогенезе ряда инфекций. Процесс состоит из трех принципиальных этапов: компетенция (клеточная индукция и диф-ференцировка), взаимодействие (детерминация, миграция и адгезия) и слияние мембран с цитоплазматическим смешиванием [17—19].

Поскольку спустя 120 ч. мы практически не обнаруживали ГСК, то изменение морфологии опухолевых клеток и накопление в их цитоплазме чужеродных белков, вероятно, вызвано именно слиянием взаимодействующих клеток.

С определенной долей вероятности можно утверждать, что посредством этого механизма происходит обмен дефектными белками, что ведет к нарушениям эпигенетической регуляции экспрессии генов. Грубые нарушения процесса метилирования ДНК резко дестабилизируют геном. В свою очередь,

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014

Оригинальные исследования

75

межклеточный обмен микроРНК в результате смешивания цитоплазмы подавляют экспрессию генов онкосупрессоров: miR-34/ инактивирует ген с-Met, miR-1468/ген Notch, miR-7/ген EGFR, miR-128/ ген Bmi1, miR-195/ген E2F3, ген CCND3 — и стимулируют активность онкогенов miR-21/ген RECK, miR-268/ген PTEN и ген RB1, miR-221 и miR-гены 222/p27Kip1, PTPjU, PUMA [20]. В результате образуется клетка-гибрид с мощными функциями стволовой и опухолевой клеток, возможно, новая опухолевая стволовая клетка (рис. 6).

Рис. 6. Схематическое изображение феномена клеточной фузии (слияния), наблюдаемой при взаимодействии ГСК и опухолевых клеток

Обработка ГСК дексаметазоном индуцирует в них апоптоз, мягко модифицирует протеом путем накопления в цитоплазме специфических белков (Bcl-x-s, Bax , Bad, Bag, p53, p 21, ced-3, IL-ip), но не исключена секреция индуцированными клетками специфических лигандов. Данный эффект оптимально выражен при соотношении взаимодействующих клеток 1:1, по мере увеличения количества ГСК становится не так очевиден, что вероятно объясняется спецификой процессов межклеточных взаимо-

действий, либо запуском более сложных процессов, таких как слияние клеток.

Исследование позволяет сделать ряд выводов:

— обработка ГСК фенотипа CD34+\CD45 + дек-саметазоном позволяет получить культуру клеток с мягко индуцированным апоптозом;

— ГСК с индуцированным апоптозом, ко-культивированные с опухолевыми клетками в соотношении 1:1 и 1:2, достоверно, по сравнению контролем и нативными клетками, подавляют рост глиомы С6 и вызывают их гибель in vitro.

Безусловно, описанная технология имеет определенные клинические перспективы, но ее путь в клинику не представляется простым и очевидным. Можно предположить, что ГСК или другие регуляторные клетки, «нагруженные» индукторами апоптоза в форме нанокапсул с заданными параметрами биодеградации, будут более эффективны in vivo в отношении новообразований глиального ряда, чем просто апоптоз-индуцированные клетки. Нельзя исключить усиление противоопухолевого эффекта регуляторных клеток при комбинированном введении с модуляторами апоптоза (гифитиниб и др.).

Резистентность к физиологическим регуляторным сигналам — один из важнейших признаков опухолевых клеток. Результаты эксперимента позволяют предположить, что оставаясь резистентными к ординарным, физиологическим сигналам опухолевые клетки остаются способны воспринимать сильные регуляторные воздействия. Наблюдаемый феномен слияния клеток, очевидно, представляет собой один из возможных механизмов образования новых опухолевых стволовых клеток.

Благодарности

Работа поддержана Министерством образования и науки РФ (Соглашение № 14.575.21.0038; уникальный идентификатор проекта RFMEF157514X0038).

ЛИТЕРАТУРА:

1. Jiang P., Mukthavaram R., Chao Y. et al. In vitro and in vivo anticancer effects of mevalonate pathway modulation on human cancer cells. Br. J. Cancer 2014; 111(8): 1562-71.

2. Gaspar V., Melo-Diogo D., Costa E. et al. Breast cancer immunotherapy: monoclonal antibodies and peptide-based vaccines. Expert Rev. Clin. Immunol. 2014; 10(7): 927-б1.

3. Iwamoto H., Ojima T., Nakamori M. et al. Cancer vaccine therapy using genetically modified induced pluripotent stem cell-derived dendritic cells expressing the TAA gene. Gan. to Kagaku Ryoho. 2013; 40(12): 1575-7.

4. Брюховецкий И.С., Брюховецкий А.С., Кумейко и др. Стволовые клетки в канцерогенезе мультиформной глиобластомы. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2013; VIII (2):13-19.

5. Kaur S., Singh G., Kaur K. Cancer stem cells: An insight and future perspective. J. Cancer Res. Ther. 2014; 10(4): 846-52.

6. Arvelo F., Cotte C., Sojo F. Stem cells and cancer. Invest. Clin. 2014; 55(4): 371-91.

7. Barth R.F., Kaur B. Rat brain tumor models in experimental neuro-oncology: the C6, 9L, T9, RG2, F98, BT4C, RT-2 and CNS-1 gliomas. J. Neurooncol. 2009; 3(94): 299-312.

8. Брюховецкий И.С., Мищенко П.В., Толок Е.В. и др. Взаимодействие гемопоэтических стволовых и опухолевых клеток in vitro. Тихоокеанский медицинский журнал 2014; 4(58):31-7.

9. Пальцев М.А., Иванов А.А., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия. Москва: Медицина, 2003.

10. Walzlein J.H., Synowitz M., Engels B. et al. The antitumorigenic response of neural precursors depends on subventricular proliferation and age. Stem Cells 2008; 26(11): 2945-54.

11. Silva-Vargas V., Crouch E.E., Doetsch F. Adult neural stem cells and their niche: a dynamic duo during homeostasis, regeneration, and aging. Curr. Opin. Neurobiol. 2013; 23(6): 935-42.

12. Glass R., Synowitz M., Kronenberg G. et al. Glioblastoma-induced attraction of endogenous neural precursor cells is associated with improved survival. Neuroscience 2005; 25(10): 2637-46.

13. Брюховецкий А.С. Клеточные технологии в нейроонкологии: циторегуляторная терапия глиальных опухолей головного мозга. Москва: Издательская группа РОНЦ; 2011.

14. Bryukhovetskiy A., Shevchenko V., Kovalev S. et al. To the novel paradigm of proteome-based cell therapy of tumors: through comparative proteome mapping of tumor stem cells and tissue-specific stem cells of humans. Cell Transplantation 2014; 23 Suppl 1:151-70.

15. Брюховецкий А.С. Травма спинного мозга: клеточные технологии в лечении и реабилитации. Москва: Практическая медицина; 2010.

16. Брюховецкий И.С., Мищенко П.В., Хотимченко Ю.С. и др. Обоснование в эксперименте in vitro феномена направленной миграции гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток взрослых млекопитающих к клеткам крысиной глиомы линии С6. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 2014; 25 (1-2): 31-7.

17. Wurmser A.E., Gage F.H. Cell fusion causes confusion. Nature 2002; (6880) 416: 485-87.

18. Schichor C., Aibrecht V., Korte B. et al. Mesenchymal stem cells and glioma cells form a structural as well as a functional syncytium in vitro. Exp. Neurol. 2012; 1(234): 208-19.

19. Aguilar P.S., Baylies M.K., Fleissner A. et al. Genetic basis of cell-cell fusion mechanisms. Trends Genet. 2013; 29(7): 427-37.

20. Floyd D., Purow B. Micro-masters of glioblastoma biology and therapy: increasingly recognized roles for microRNAs. Neuro Oncol. 2014; 16(5): 622-7.

Поступила: 10.10.2015

Гены & Клетки Том IX, № 4, 2014