КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ РАССТРОЙСТВ ПОЧКИ
COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING RENAL DISORDERS

Данное изобретение относится к композициям и способам терапевтического или профилактического лечения хронического почечного заболевания. В частности, данное изобретение касается композиций, содержащих VIP (вазоактивный интестинальный пептид) или некоторые активные фрагменты VIP, и их применения в лечении хронического почечного заболевания, фиброза почки или почечной недостаточности.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Любое обсуждение предшествующего уровня техники в данном описании изобретения ни в коей мере не должно рассматриваться как признание того, что такой предшествующий уровень техники является широко известным или образует часть обычных общеизвестных знаний в данной области.
Хроническое почечное заболевание (CKD) поражает приблизительно 10% всего населения западного мира. Данные из Великобритании и США показывают, что хотя заболеваемость CKD составляет приблизительно 2% у молодого взрослого населения, она заметно увеличивается с возрастом, достигая 50%-ной заболеваемости у населения в возрасте старше 75 лет. Эти цифры будут увеличиваться вследствие старения населения в западных странах и из-за роста (заболеваемости) диабетом II типа в результате эпидемии ожирения. Большинство пациентов с диабетом II типа имеют подтвержденное почечное поражение, такое как микроальбуминурия, во время диагностики у них диабета, и, таким образом, увеличение заболеваемости диабетом будет автоматически увеличивать заболеваемость CKD ранней стадии. Оно также возможно увеличит заболеваемость CKD более поздней стадии. Немногим более десятиления назад диабет занимал 3-е или 4-ое место в качестве причины для вступления в программы заместительной почечной терапии (диализ и/или трансплантация). Хотя другие причины не изменились или лишь слегка усилились, вклад диабета увеличился, став наиболее распространенной причиной для вступления в конечную стадию программ, касающихся почечной недостаточности, менее чем за десятилетие.
При CKD происходит прогрессирующая потеря почечной функции вследствие отложения фиброзной ткани между функциональными единицами почки или нефронами (интерстициальный фиброз), а также постоянной замены фильтрующей поверхности фиброзной тканью (гломерулосклероз). Некоторые исследования показывают, что первый (интерстициальный фиброз) может быть более важным, чем последний (гломерулосклероз) при определении того, достигнет ли пациент конечной стадии. Хотя первичное гломерулярное поражение также является важным в развитии CKD и терминальной стадии почечной недостаточности (ESRD), существует доказательство того, что увеличенный интерстициальный фиброз ускоряет потерю гломерулярной функции, вызывая ишемическое поражение клубочков посредством спадения клубочков и утолщения капсул, приводящих к постепенному прекращению их функции. Посредством этого механизма интерстициальный фиброз ускоряет развитие почечного заболевания до терминальной стадии. Доступные в настоящее время способы лечения (такие как ингибиторы АСЕ (ангиотензин-превращающий фермент), блокаторы рецепторов ангиотензина, ингибиторы ренина) изменяют гемодинамику клубочков, снижая внутриклубочковое давление, посредством этого стабилизируя гломерулосклероз. В общем, они замедляют, но не предупреждают развитие CKD. При возрастающем распространении CKD очевидно имеется значительная потребность в снижении необходимости заместительной почечной терапии путем предупреждения и/или обращения фиброза почки.
VIP был открыт Said и Mutt в 1970-е годы, и было показано, что он влияет на мочевыделение натрия и бикарбоната почкой. Системное введение VIР также увеличивает секрецию ренина почкой, который может быть профибротическим, поскольку недавно было показано, что ренин обладает провоспалительными и профибротическими свойствами. Однократное введение VIР снижает скорость клубочковой фильтрации и почечного плазмотока, однако эффекты длительного введения не известны. Было показано, что VIP, введенный до инсульта, защищает от острой почечной недостаточности, которая происходит в результате кровоизлияния. Однако механизмы, вовлеченные в гиповолемическую острую почечную недостаточность (низкое перфузионное давление и гипоксия) не способствуют развитию CKD. Было показано, что агенты, которые снижают кровяное давление, замедляют развитие хронического почечного заболевания путем снижения внутриклубочкового давления и, таким образом, уменьшения развития гломерулосклероза. VIP представляет собой мощный сосудорасширяющий фактор, однако сам по себе VIP не снижает кровяное давление в организме животного.
Традиционный взгляд на взаимосвязь структуры и функции применительно к активности VIP состоит в том, что N-концевые аминокислотные остатки (1-5) являются важными и необходимыми для доставки сигнала после того как VIP связывается со своим рецептором. Кроме того, в молекуле VIP имеются определенные ключевые аминокислотные остатки, удаленные от N-конца, которые важны для связывания с рецептором. Это позволяет предположить, что фрагменты VIP, не имеющие либо N-концевых остатков, либо существенных частей, которые охватывают рецептор-связывающие остатки, не являются полностью функциональными.
Ранее не сообщалось об активности VIP или фрагментов VIP в лечении таких состояний, как фиброз почки, хроническое почечное заболевание или почечная недостаточность. В настоящее время существует потребность в лучших и/или альтернативных способах лечения таких состояний.
Поэтому цель настоящего изобретения состоит в преодолении или уменьшении по меньшей мере одного недостатка из предшествующего уровня техники или в предложении полезной альтернативы.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение частично основано на наблюдении того, что VIP и/или фрагменты VIP обладают способностью предупреждать развитие или обращать установленный фиброз в почке. Несмотря на преобладающий в настоящее время взгляд, активность VIP и его фрагментов в лечении и/или предупреждении хронического почечного заболевания и фиброза не уменьшается делецией ни N-концевых остатков VIP, ни большей части аминокислотных остатков, ответственных за связывание с рецептором.
Согласно первому аспекту в изобретении предложена композиция для профилактического или терапевтического лечения хронического почечного заболевания, содержащая фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIР) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен. Предпочтительно, ассоциированным состоянием является фиброз почки.
Согласно второму аспекту в изобретении предложена композиция для профилактического или терапевтического лечения почечной недостаточности, содержащая фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIР) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
Согласно третьему аспекту в изобретении предложена композиция для профилактического или терапевтического лечения фиброза почки, содержащая фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIP) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
Предпочтительно, композиции согласно настоящему изобретению вводят в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, который может представлять собой любой из носителей, известных в данной области или разработанных ниже и подходящих для предполагаемого применения. В дополнение к носителям фармацевтические композиции по изобретению могут включать другие ингредиенты, включая, например, красители, консерванты, буферы и антиоксиданты. Их предпочтительно можно вводить в сочетании с одним или более другими активными агентами, полезными в лечении почечных состояний. Предпочтительно, они могут быть приготовлены в виде препарата для введения пероральным, внутривенным, внутримышечным или подкожным путем. Другие способы введения, такие как пластыри, лекарственные средства для вдыхания через нос, интраназальные спреи и тому подобное, будут известны специалистам в данной области.
Фармацевтически эффективное количество VIP или активного фрагмента VIP будет варьироваться в зависимости от общего состояния пациента и/или точной природы и тяжести заболевания. Эти переменные могут быть установлены специалистом в данной области лишь на основе опыта и посредством обычного экспериментирования. Подходящий диапазон дозировок в качестве исходной точки можно вывести из дозировок, вводимых в описанных в данной заявке животных моделях, или со ссылкой на PCT/AU2005/000835. Композиции по изобретению можно использовать для предупреждения или замедления развития установленного почечного заболевания или состояния, в частности фиброза, а также для уменьшения степени или предупреждения образования фиброза.
Согласно четвертому аспекту в изобретении предложен способ профилактического или терапевтического лечения хронического почечного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту, подверженному риску развития хронического почечного заболевания, или субъекту, имеющему хроническое почечное заболевание, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIP) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
В отношении профилактического лечения следует понимать, что такое лечение будет особенно полезно для субъектов, которые подвержены риску развития хронического почечного заболевания и/или фиброза почки. Примером субъектов в категории риска являются субъекты, имеющие ассоциированные состояния, такие как гипертензия, диабет, гломерулонефрит, отравление тяжелыми металлами, подагра, получающие лекарственные средства, такие как цисплатин и другие, которые используются в химиотерапии рака, а также золото и пеницилламин, которые используются в лечении ревматоидного артрита, имеющие генетическую предрасположенность, другие состояния, таких как рефлюкс-нефропатия, SLE (системная красная волчанка) и васкулит, и тому подобное.
Профилактическое лечение можно использовать для предупреждения или замедления развития фиброза у субъекта, имеющего фиброз или подверженного риску развития фиброза.
Согласно пятому аспекту в изобретении предложен способ профилактического или терапевтического лечения почечной недостаточности у субъекта, включающий введение субъекту, подверженному риску развития почечной недостаточности, или субъекту, имеющему почечную недостаточность, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIP) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
Согласно шестому аспекту в изобретении предложен способ профилактического или терапевтического лечения фиброза почки у субъекта, включающий введение субъекту, подверженному риску развития фиброза почки, или субъекту, имеющему фиброз почки, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIР) или одного или более функциональных фрагментов VIР, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
Профилактическое лечение можно эффективно использовать для предупреждения или замедления развития установленного хронического почечного заболевания, в частности установленного фиброза, у субъекта, или его можно использовать для предупреждения развития фиброза у субъекта, подверженного риску развития фиброза.
Состояния, которые ассоциированы с развитием фиброза почки или провоцируют у субъекта развитие фиброза почки, включают состояния, которые приводят к генерации профибротических медиаторов.
Для специалиста в данной области будет очевидно, что схема применения композиций по изобретению и дозовый режим возможно должны быть изменены для оптимального эффекта. Возможно, необходимо принять во внимание природу заболевания или состояния, а также его тяжесть.
Согласно седьмому аспекту в изобретении предложен вазоактивный интестинальный пептид (VIР) или один или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен, для применения в профилактическом или терапевтическом лечении хронического почечного заболевания.
Согласно восьмому аспекту в изобретении предложен вазоактивный интестинальный пептид (VIP) или один или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен, для применения в профилактическом или терапевтическом лечении почечной недостаточности.
Согласно девятому аспекту в изобретении предложен вазоактивный интестинальный пептид (VIP) или один или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен, для применения в терапевтическом или профилактическом лечении фиброза почки.
Предпочтительно, применение предназначено для предупреждения или замедления развития установленного хронического почечного заболевания. В качестве альтернативы предназначено для предупреждения или замедления развития фиброза у субъекта, подверженного риску развития фиброза. Применение также предназначено для снижения уровня установленного фиброза.
Согласно десятому аспекту в изобретении предложен способ снижения уровней, ингибирования или уменьшения продукции профибротических медиаторов у субъекта, подверженного риску развития или имеющего почечное заболевание, включающий введение указанному субъекту композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIP) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
Согласно одиннадцатому аспекту в изобретении предложен способ снижения образования коллагена или усиления деградации коллагена в почке субъекта, включающий введение указанному субъекту композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество вазоактивного интестинального пептида (VIP) или одного или более функциональных фрагментов VIP, выбранных из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) или их консервативных замен.
В контексте настоящего изобретения определенные термины можно использовать взаимозаменяемо или включать в термин с более широким значением. Таким образом, термины "почечное расстройство" или "почечное заболевание" можно использовать взаимозаменяемо. Термины "хроническое почечное заболевание", "почечное заболевание" могут охватывать такие состояния, как фиброз почки и почечную недостаточность. Подразумевается, что термин "ассоциированное состояние" в том виде, как он используется в контексте настоящего изобретения, охватывает состояния и расстройства, которые являются прямым следствием почечного заболевания, а также состояния, которые способствуют развитию или обострению почечного заболевания. Например, термин "ассоциированное состояние" в отношении почечного заболевания может охватывать, без ограничения, гломерулонефрит, тубулоинтерстициальное заболевание, рефлюкс-нефропатию, поликистозное заболевание, SLE, васкулит, склеродермию, синдром Шегрена, подагру, гипертензию, диабет и фиброз почки.
Подразумевается, что термин "профилактический" в том виде, как он используется в контексте настоящего изобретения, охватывает среди прочего лечения, используемые для предупреждения или замедления развития фиброза у субъекта, подверженного риску развития фиброза. Часть субъектов, которым можно дать профилактическое лечение, возможно уже имеет признаки почечного заболевания.
Подразумевается, что термин "терапевтический" в контексте настоящего изобретения означает частично или полностью куративное лечение существующего состояния.
Следует понимать, что объем настоящего изобретения также охватывает определенные аналоги фрагментов VIP, которые основаны на консервативных заменах одной или более аминокислот фрагментов VIP аминокислотами, которые не изменяют биологических активностей данных фрагментов VIP. Такие замены обычно хорошо известны специалистам в данной области и не требуют большего, чем простой способ проб и ошибок с использованием общеизвестных методов. Следовательно, подразумевается, что термин "фрагмент VIР" в том виде, как он используется в контексте настоящего изобретения, охватывает такие аналоги.
В данном описании и формуле изобретения, если контекст явно не требует иного, слова "содержать", "содержащий" и тому подобное следует истолковывать во включительном смысле, в отличие от исключительного или всеобъемлющего смысла; то есть в смысле "включающий, но не ограничивающийся".
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг.1: почечный интерстициальный фиброз после инфузии контрольного носителя или пептида в дозе 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель у SHR (спонтанно гипертензивные крысы) на 2,2%-ной солевой диете.
Фиг.2: почечный интерстициальный фиброз после инфузии контрольного носителя или пептида в дозе 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель у SHR на 2,2%-ной солевой диете. VB806f относится к VIP(6-10), VB806c относится к VIP(6-20), VB806b относится к VIP(6-24).
Фиг.3: почечный интерстициальный фиброз после инфузии контрольного носителя или пептида в дозе 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель у SHR на 2,2%-ной солевой диете. VB804e относится к VIP(4-12), VB804c относится к VIP(4-20), VB804b относится к VIP(4-24).
Фиг.4: почечный интерстициальный фиброз после инфузии контрольного наполнителя или пептида в дозе 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель у SHR на 2,2%-ной солевой диете.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВОПЛОЩЕНИЯ
Неожиданно здесь обнаружили, что молекула VIP, как единое целое, действует, предотвращая, уменьшая или обращая фиброз почки, и, таким образом, предупреждая или замедляя развитие хронического почечного заболевания. Кроме того, в свете общепринятых взглядов, сохраняющихся в данной области, неожиданно обнаружили, что фрагменты VIP, не имеющие аминокислот и мотивов, которые, как полагают, являются важными для их функции, тем не менее являются полезными терапевтическими агентами для обращения или замедления начала фиброза почки, или для предупреждения начала фиброза у субъектов, подверженных риску развития почечного заболевания. Особенно полезные фрагменты VIP могут быть выбраны, но не ограничиваются этим, из VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24). VIP или фрагменты VIP также являются полезными в лечении почечной недостаточности.
Применение фармацевтических композиций по изобретению в лечении хронического почечного заболевания или ассоциированных состояний представляет собой новый класс терапевтических агентов для этих состояний. Существующие способы лечения хронического почечного заболевания или ассоциированных состояний обычно нацелены на один или самое большее на два известных причинных механизма в хроническом почечном заболевании. Не желая быть связанным каким-либо конкретным механизмом действия, считается, что композиции или фармацевтические препараты по настоящему изобретению могут быть нацелены фактически на все известные в настоящее время провоцирующие факторы почечного заболевания.
Основываясь на настоящих исследованиях и не желая быть связанными теорией, утверждают, что VIP или фрагменты VIP действуют в качестве основных регуляторов для предупреждения развития фиброза, и что истощение VIP может „высвобождать синтез целого ряда профибротических медиаторов, посредством этого вызывая почечное поражение. Фрагменты VIP по настоящему изобретению, по-видимому, способны действовать, по существу, таким же путем, что и нативный VIР, но больше подходят для терапевтических приложений из-за меньшего размера и, следовательно, повышенной стабильности и легкости изготовления.
Все последовательности относятся к VIP и фрагментам человеческого происхождения, но из-за очень высокого уровня консерватизма аминокислот, VIP и его фрагменты, происходящие от других видов млекопитающих, также рассматриваются и охватываются настоящим изобретением.
th
В изобретении также рассматриваются фармацевтические композиции, которые включают VIP и/или активные фрагменты VIP. Такие композиции могут включать любой тип лекарственной формы, такой как таблетки, капсулы, порошки, жидкие препараты, препараты с отсроченным или замедленным высвобождением, пластыри, лекарственные средства для вдыхания через нос, интраназальные спреи и тому подобное. Данные препараты дополнительно могут включать другие ингредиенты, такие как, например, красители, консерванты, буферы и антиоксиданты. Физическая форма и содержимое рассматриваемых фармацевтических препаратов представляют собой традиционные препараты, которые могут быть приготовлены специалистами в области приготовления фармацевтических препаратов, и основаны на хорошо установленных принципах и композициях, описанных, например, в The Science and Practice of Pharmacy, 19 Edition, 1995 (Mack Publishing Co. Pennsylvania, USA); British Pharmacopoeia 2000, и в аналогичных текстах и руководствах по приготовлению препаратов. Композиции по настоящему изобретению также могут включать другие активные агенты, полезные в лечении почечного заболевания, почечной недостаточности или фиброза почки.
Путь и частота введения композиций по настоящему изобретению будут зависеть от требований лечения и природы молекулы, подлежащей введению. Таким образом, препараты могут быть приготовлены подходящим образом для введения посредством внутривенной, внутримышечной или подкожной инъекции. VIР и/или фрагменты VIР также могут быть подходящими для введения через слизистую, такого как пероральное, сублингвальное, интраназальное и тому подобное. Специалисты в данной области легко определят эти параметры.
Было показано, что фармацевтические композиции по изобретению являются эффективными в предупреждении или замедлении развития установленного фиброза почки, а также в снижении степени (обращении) установленного фиброза и, таким образом, являются важными в терапевтических применениях. Композиции по настоящему изобретению также являются полезными для профилактического или терапевтического лечения хронического почечного заболевания. Они являются важными открытиями в отношении диапазона и тяжести состояний, которые можно лечить композициями по настоящему изобретению.
Кроме того, композиции по настоящему изобретению можно использовать профилактически у субъектов, подверженных риску развития хронического почечного заболевания или ассоциированного состояния. Примером субъектов в категории риска являются субъекты, имеющие ассоциированные состояния, такие как гипертензия, диабет, гломерулонефрит, отравление тяжелыми металлами, подагра, принимающие лекарственные средства, такие как циспатин и другие, которые используются в химиотерапии рака, а также золото и пеницилламин, которые используются в лечении ревматоидного артрита, имеющие генетическую предрасположенность, другие состояния, такие как рефлюкс-нефропатию, SLE и васкулит, и тому подобное.
Значительной терапевтической пользы можно добиться путем сохранения содержания VIP в почке у субъекта с хроническим почечным заболеванием или подверженного риску развития хронического почечного заболевания или ассоциированного состояния посредством применения композиций по настоящему изобретению. Данная польза включает уменьшение фиброза, снижение уровня, продукции или активности профибротических медиаторов, уменьшение развития фиброза, снижение образования коллагена или усиление деградации коллагена в почке.
Данное изобретение будет описано ниже более конкретно со ссылкой на неограничивающие примеры.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ РАЗДЕЛ
Вся общая методология и методы были подробно описаны в PCT/AU2005/000835, которая включена в данную заявку посредством ссылки во всей ее полноте.
Пример 1 - Аминокислотная последовательность VIP и фрагментов VIP. Все фрагменты VIP приобретали или синтезировали в Auspep, Австралия.
VIP(1-28) - His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-lle-Leu-Asn
VIP (10-28) - Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-lle-Leu-Asn
VIP(4-12) - Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg
VIP(4-16) - Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-GIn
VIP(4-20) - Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys
VIP(4-24) - Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn
VIP(6-10) - Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr
VIP(6-12) - Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg
VIP (6-16) - Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-GIn
VIP(6-20) - Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys
VIP(6-24) - Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn
Пример 2 - Эффект инфузии фрагментов VIP на фиброз почки в крысиных моделях фиброза.
Для экспериментов в отношении фиброза почки использовали два типа крыс - спонтанно гипертензивных крыс (SHR) и нормотензивных контрольных крыс Wistar-Kyoto (WKY) (животных получали из Australian Animal Resources, Perth, Western Australia, Australia):
1) самцов спонтанно гипертензивных (SHR) крыс на 2,2%-ной солевой диете;
2) самцов крыс Wistar-Kyoto (WKY) на 4,4%-ной солевой диете
В каждой модели данных крыс рандомизировали в отношении VIP(1-28), VIP(10-28), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24).
Начиная с 12-недельного возраста, крыс акклиматизировали к измерениям кровяного давления при помощи хвостовой манжеты и обработкам в течение 2 недель. Затем их подвергали вставке посредством операции осмотического мини-насоса (Alzet - производитель: Durect Corporation, Cupertino, Ca, USA; поставщик: Bioscientific Gymea, NSW, Australia), который конструировали для внутривенной доставки одного носителя (раствор Хартмана, Baxter Health Care Corporation, USA) - (контролей) или VIP, фрагмента или аналога VIP в дозе 4 пмоль/кг/мин или 5 пмоль/кг/мин.
Инфузию продолжали в течение 4 недель, на протяжении которых крыс взвешивали и их кровяные давления измеряли два раза в неделю. В конце 4-недельного инфузионного периода крыс подвергали анестезии и извлекали их почки.
После фиксации в забуференном формалине почки заключали в воск, делали срезы и окрашивали гематоксилином и эозином или трихромом по Masson (Lomb Scientific, USA).
Для количественной оценки интерстициального фиброза двадцать микроскопических полей от каждой почки оцифровывали, и количество фиброза в каждой определяли в виде процента площади поверхности с использованием программы Image-Pro Plus V5.0 (Cybernetics). Затем определяли среднее значение для каждой крысы и впоследствии для каждой инфузионной группы.
Фиг.1, 2, 3 и 4 показывают уменьшение почечного интерстициального фиброза, которое происходило в результате инфузии VIР и различных фрагментов VIP в течение 4 недель у SHR на 2,2%-ной солевой диете.
В репрезентативных данных, показанных на фигурах, VB804e относится к VIP(4-12), VB804c относится к VIP(4-20), VB804b относится к VIP(4-24), VB806f относится к VIP(6-10), VB806c относится к VIP(6-20), VB806b относится к VIP(6-24). Результаты исследований с фрагментами VIP, не показанные конкретно на данных фигурах, были сходны с результатами для показанных репрезентативных фрагментов.
Важность настоящего изобретения для здравоохранения будет сразу же ясна специалисту в данной области после прочтения данного описания. Несмотря на то, что способность лечить хроническое почечное заболевание значительно увеличилась с созданием ингибиторов АСЕ, блокаторов рецепторов ангиотензина и ингибиторов ренина, фармацевтические препараты по настоящему изобретению, которые действуют, предотвращая развитие лежащего в основе поражения (фиброза) или даже обращая фиброз, способны предупреждать развитие заболевания от умеренного до тяжелого и, следовательно, значительно снижать нагрузку на здравоохранение. Общий размер определенных фрагментов VIP и их активность делают их идеально подходящими в качестве мишеней для разработки лекарственных средств.
Следует понимать, что рассматриваются и другие воплощения и варианты композиций, способов и применений по изобретению, соответствующие идее и сущности описанного изобретения, и что они находятся в пределах объема данного изобретения.