ЭКСПРЕССИЯ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ β И ß   1 В ТКАНИ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЁГКОГО ЧЕЛОВЕКА

Экспрессия эстрогеновых рецепторов в И А в ткани немелкоклеточного рака лёгкого человека

А. С. ШАТУРОВА', Т. А. БОГУШ', Е. А. ДУДКО1, Г. Ю. ЧЕМЕРИС1, Р. Ю. РАМАНАУСКАЙТЕ', И. Д. КАЛГАНОВ2

1 Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 Государственный научный центр колопроктологии МЗ РФ, Москва

Expression of Estrogen Receptors fi and fij in Tissue of Human Non-Small Cell Lung Cancer

A. S. SHATUROVA, T. A. BOGUSH, E. A. DUDKO, G. YU. CHEMERIS, R. YU. RAMANAUSKAITE, I. D. KALGANOV

N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center, Moscow State Scientific Centre of Coloproctology, Moscow

Исследована сопоставимость уровня и интенсивности экспрессии эстрогеновых рецепторов (ЭР)в при проточноцитофлу-ориметрическом анализе ткани немелкоклеточного рака лёгкого 32 пациентов с применением разных антител: к тотальной фракции рецепторов ЭРв (клон 14С8) и полноразмерной изоформе ЭРв1 (клон ЕМЯ02). Индивидуальные различия, обнаруженные при использовании антител к ЭРв и ЭРв1, не сказываются на уровне показателей экспрессии ЭРв в среднем по группам пациентов. Подтверждением этого служат, в частности, полученные в настоящем исследовании данные о более частой и более интенсивной экспрессии ЭРв в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у женщин в сравнении с пациентами мужского пола, выявленные при использовании антител как к ЭРв, так и к ЭРв1. Поэтому при сравнительном анализе экспрессии ЭРв между группами больных с разными клинико-морфологическими характеристиками заболевания можно использовать оба антитела. Для прогноза течения заболевания конкретного пациента в рутинной клинической практике рекомендовано использовать антитела к ЭРв, поскольку существуют индивидуальные различия между показателями экспрессии ЭРв и ЭРв1.

Ключевые слова: немелкоклеточный рак лёгкого, эстрогеновые рецепторы в, эстрогеновые рецепторы вь

Comparability of the level and intensity of estrogen receptors в (ЕДв expression in non-small cell lung cancer tissue of 32 patients was analyzed by flow cytometry using various antibodies — to the total fraction of ЕДв (clone 14C8) as well to the full-length ЕДв1 isoform (clone EMRO2). The differences in the ER expression indexes detected by anti-ЕДв or anti-ERei antibodies were revealed in some patients, but it had no influence on average indexes of the ЕДв expression in the patient groups investigated. It was confirmed by the findings on more frequent and more intensive expression of ЕДв in the non-small cell lung cancer tissue of female patients vs. the males irrespective of antibody type — anti-ЕДв or anti-ЕДвр Therefore, in comparative analysis of ЕДв expression in the groups of the patients with different clinicomorphologic characteristics of the disease it is possible to use both the antibodies. For individual disease prognosis in the routine clinical practice it is recommended to use the antibodies to the total fraction of ЕДв, since there are individual differences between the ЕДв expression indexes revealing by various types of antibodies.

Key words: non-small cell lung cancer, estrogen receptors fi, estrogen receptors fi.

Введение

Результаты экспериментальных и клинических исследований последних лет свидетельствуют о чувствительности ткани рака лёгкого к эстрогенам, которые вовлечены в патогенез этого заболевания [1, 2]. По этой причине в настоящее время обсуждаются новые терапевтические подходы к лечению рака лёгкого, основанные на модификации эстрогенового сигнала [3, 4]. Действие эстрогенов опосредовано эстрогеновыми рецепторами (ЭР), относящимися к внутриклеточным рецепторам. В немелкоклеточном раке лёгкого ЭР играют роль как прогностических,

© Коллектив авторов, 2012

Адрес для корреспонденции:

E-mail: labmedchem@mail.ru

так и предиктивных маркёров, поскольку являются клеточной мишенью для гормональных препаратов, контролирующих или подавляющих опухолевый рост.

На сегодняшний день известно о существовании двух типов ЭР: ЭРа и ЭРв. В ткани немелкоклеточного рака лёгкого преобладающим типом эстрогеновых рецепторов являются ЭРв, экспрессия которых прогнозирует более благоприятное течение болезни в сравнении с группой пациентов, в опухоли которых ЭРв не выявляются [5]. Экспрессия гена Е5Я2, кодирующего ЭРв, сопровождается альтернативным сплайсингом, благодаря чему образуется минимум пять изоформ рецепторов: ЭРв1 (мажорная фракция), ЭРв2/сх, ЭРв3, ЭРв4, ЭРв5 [6]. Основные отличия между ними локализованы на С-концевом участке поли-

пептида, который, кроме трансактивационного, содержит и лиганд-связышающий домен. «Полноразмерным» вариантом ЭРв являются лишь ЭРвь С-концевые домены всех остальных изоформ усечены. Таким образом, только ЭРв1 способны связываться с лигандом и опосредовать геномные эффекты эстрогена. Клеточные функции других изоформ ЭРв на сегодняшний день окончательно не ясны, пока что им отводится регуляторная роль при проведении сигнала эстрогена.

При иммуногистохимическом анализе тотальной фракции ЭРв используются моноклональные антитела, специфичные к N-терминальному домену белка, который присутствует во всех изоформах. Для определения ЭРв1 необходимо использовать моноклональные антитела, взаимодействующие с С-концевым фрагментом белка, характерным лишь для полноразмерной изоформы рецептора. Однако в публикуемых работах можно встретить случаи, когда определению подвергается один тип рецепторов (например, ЭРв1), а в вышодах фигурирует другой (например, ЭРв) [7, 8] Такое несоответствие может порождать противоречивые данные о прогностической роли ЭРв и ЭРв1, а также о корреляциях между экспрессией этих типов ЭР и клиникоморфологическими признаками опухоли.

Чтобы ответить на вопрос, насколько важно при оценке статуса эстрогеновых рецепторов в опухоли учитывать тип используемых специфических антител, проведён сравнительный анализ экспрессии ЭРв и ЭРв1 в опухолевой ткани больных немелкоклеточным раком лёгкого — по подгруппам и «внутри» каждого пациента.

Материал и методы

В работе проанализированы хирургические биопсийные образцы немелкоклеточного рака лёгкого 32 пациентов (16 мужчин и 16 женщин). Для приготовления одноклеточной суспензии следовали разработанной ранее методике, которая заключается в измельчении фрагмента опухоли, его мягкой гомогенизации, фильтрации и фиксации 4% раствором формальдегида [9]. Для контроля активности антител и корректности условий проведения анализа в каждом эксперименте использовали референсную культуру клеток рака молочной железы человека линии MCF-7. Оценку экспрессии эстроге-новых рецепторов в опухолевой ткани проводили согласно разработанному и запатентованному авторами методу имму-нофлуоресцентного анализа с помощью проточной цитофлу-ориметрии [10]. Для этого клетки инкубировали в 1% растворе Tween 20 (Sigma), отмывали фосфатным буферным раствором (рН 7,4), инкубировали в темноте при t=4°C в течение 15—20 ч с первичными антителами, затем в течение 1,5 ч — с вторичными, после чего дважды отмывали от свободных антител фосфатным буферным раствором (рН 7,4). Рабочие концентрации всех использованных антител получали путём разведения с помощью 0,1% раствора азида натрия в фосфатном буферном растворе (pH 7,4).

В исследовании использовали первичные моноклональные антитела, специфичные к N-терминальному домену белка ЭРв в концентрациях 1,2; 2,5; 5 мкг/мл (Abcam, клон 14C8). Анализ ЭРв1 проводили с применением первичныгх моноклональный антител в разведениях коммерческого раствора 1:200, 1:100 и 1:50 (Novocastra, клон EMR02). Паратоп данный: анти-

тел комплементарен фрагменту С-концевого домена белка (этот фрагмент присутствует лишь в полноразмерной изоформе рецептора). В качестве изотипического контроля к ЭРв и ЭРв1 использовали соответственно мышиные моноклональные антитела IgG2a (Abcam, клон MG2a-53) и IgG1 (Abcam, клон MG1-45) в эквивалентный: специфическим антителам концентрациях. Вторичные поликлональные антитела, конъюгированные с FITC (F2772, Sigma), добавляли в соответствии с концентрациями первичных антител.

Измерение флуоресценции проводили на проточном ци-тофлуориметре FACSCanto II (Becton Dickinson), настройки которого соответствовали требованиям методики [10], с применением программного обеспечения FACSDiva 6.0. Число анализируемых событий — 5000. Среднюю флуоресценцию клеток анализировали с помощью программы WinMDI 2.9. Для расчёта интенсивности экспрессии эстрогеновых рецепторов, флуоресценцию клеток после инкубации со специфическими антителами относили к этому показателю после инкубации с изотипическими. Количество специфически окрашенный: клеток, т. е. долю клеток, экспрессирующих эст-рогеновые рецепторы, рассчитывали с помощью статистического критерия Колмогорова—Смирнова, встроенного в программу FlowJo 7.6.1. Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета прикладных программ STATISTICA (StatSoft), версия Statistica 6.0. Различия между анализируемыми группами считали достоверными при р<0,05.

Результаты исследований

Для получения достоверных данных о доле клеток, экспрессирующих эстрогеновые рецепторы в исследуемом образце опухоли, использовали диапазон концентраций антител, в который включены как область линейной зависимости флуоресцентного специфического окрашивания клеток от концентрации антител, так и область плато. Все обсуждаемые в работе количественные характеристики экспрессии эстрогеновых рецепторов получены при достижении области плато.

Одним из важных вопросов при оценке результатов иммунофлуоресцентного анализа было установление порогового уровня флуоресцентного окрашивания, превышение которого свидетельствует об экспрессии эстрогеновых рецепторов в опухолевой ткани. Многократное повторение анализа одних и тех же образцов позволяет утверждать, что совокупная погрешность определения уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов не превышает 10%. Поэтому ЭР-по-ложительной опухолевой тканью считали лишь ту, в которой доля специфически флуоресцирующих клеток превышает 10%.

Согласно результатам анализа образцов немелкоклеточного рака лёгкого экспрессия ЭРв вымвляется у 80% пациентов. Уровень экспрессии ЭРв в опухолях разных больныгх колеблется от 13 до 77% специфически окрашенных клеток (среднее значение — 33,8±16,1%; медиана показателя — 30%) (табл. 1). Интенсивность экспрессии ЭРв, которая оценивалась как отношение интенсивности специфической флуоресценции к изотипиче-ской, варьирует от 1,2 до 5,4 отн. ед. (среднее значение — 1,9±0,8; медиана — 1,7 отн. ед.).

Таблица 1. Характеристика статуса эстрогеновых рецепторов в (ЭРв) го рака лёгкого и Д (ЭРД) в ткани 1 о н У о т е л к о к л е 2 е н

Рецептор Среднее+СО* Медиана 95% ДИ** р*****

Уровень экспрессии***

ЭРв 33,8+16,1 30,0 23,0—40,0 0,102

ЭРв! 41,4+20,2 42,0 23,0—57,0

Интенсивность экспрессии****

ЭРв 1,9+0,8 1,7 1,6—2,1 0,009

ЭРв1 3,2+2,1 2,5 ,8 3, —3 ,8

Примечание. * СО —стандартное отклонение среднего; ** — 95% ДИ — 95% доверительный интервал; *** — уровень экспрессии — количество клеток, экспрессирующих ЭР в каждой из исследуемых опухолей (%); **** — интенсивность экспрессии — отношение средней флуоресценции клеток после инкубации со специфическими антителами к этому показателю после инкубации с изотипическими антителами (отн.ед.); ***** — для оценки статистической значимости различий между попарно сравниваемыми группами использовали Окритерий Манна-Уитни. Выбранный критерий статистической значимости обнаруженных различий между выборками — р<0,05.

Экспрессия ЭРв1 в опухолевой ткани также наблюдается в 80% случаев. Нижняя (13%) и верхняя (83%) границы уровня экспрессии ЭРв1 совпадают с таковыми для ЭРв. Среднее значение (41,4±20,2%) и медиана (42,0%) уровня экспрессии ЭРв1 также выше по сравнению с ЭРв, однако различия не являются статистически значимыми (р=0,102). Что касается интенсивности экспрессии, то для ЭРв1 она варьирует в более широком диапазоне, чем для ЭРв, — от 1,3 до 9,7 отн. ед. Среднее значение этого показателя составляет 3,2±2,1 отн. ед., что в 1,7 раза больше среднего значения интенсивности экспрессии ЭРв. Обнаруженное превышение интенсивности экспрессии ЭРв1 над аналогичным параметром экспрессии ЭРв является статистически значимым (р=0,009).

Проанализированные образцы НМРЛ были разделены на группы в зависимости от уровня и интенсивности экспрессии ЭРв и ЭРв1 в опухолевой ткани. Опухоли с экспрессией ЭР менее чем в 30% клеток отнесены к группе с низким уровнем ЭР; при выявлении ЭР в 30—49% клеток — к группе с умеренной, а в 50% и большем количестве клеток — с высокой экспрессией ЭР. Группу с низкой интенсивностью экспрессии эстрогеновых рецепторов составили пациенты, в опухолях которых данный показатель был менее 2 отн. ед. Остальные больные были отнесены к группе с высокой интенсивностью экспрессии (2 отн. ед. и более).

При сравнении частоты встречаемости опухолей с разным уровнем экспрессии ЭРв и ЭРв1 не выявлено существенных различий (рис. 1, а). Низкий уровень экспрессии ЭРв в ткани НМРЛ характерен для 44% пациентов, средний — для 38% и высокий — для 18%. Для ЭРв1 аналогичные показатели составили 35, 26 и 39% соответственно. Несмотря на то что группа пациентов с высоким уровнем экспрессии ЭРв1 в опухолевой ткани превосходит по численности аналогичную группу с экспрессией ЭРв, статистически достоверных различий между описываемыми распределениями обнаружено не было (р>0,05).

Показано, что ЭРв экспрессируются с низкой интенсивностью в 59% проанализированных образцов (рис. 1 б), в то время как высокая интенсивность экспрессии этого маркёра характерна для опухолей меньшего числа пациентов (41% больных). Противоположная закономерность обнаружена при анализе интенсивности экспрессии ЭРв1. Этот антиген в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у большинства пациентов экспрессируется на высоком уровне — 61% больных, а на низком — в 39% случаев. Однако статистически значимых различий в распределении больных в зависимости от интенсивности ЭРв и ЭРв1 в ткани рака лёгкого не обнаружено (р>0,05).

Кроме того, в рамках данной работы была проведена сравнительная оценка статуса эстроге-новых рецепторов в опухолевой ткани больных разного пола.

Средний уровень экспрессии как ЭРв, так и ЭРв1 в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у женщин в 1,4 раза выше, чем у мужчин (39,9+17,6 против 27,7+12,2% для ЭРв и 48,5+19,7 против 33,9+18,5% для ЭРвО (табл. 2). В обоих случаях указанное различие является статистически значимым (р=0,03 для ЭРв, р=0,04 для ЭРв^.

Низким уровнем экспрессии ЭРв характеризуется ткань немелкоклеточного рака лёгкого 63% мужчин и 25% женщин (р<0,05) (рис. 2, а). Такие же статистически значимые различия между больными разного пола выявляются при низком уровне экспрессии ЭРв: — у 53% мужчин и 19% женщин (рис. 2, б). Напротив, высокий уровень экспрессии ЭРв в опухоли значительно чаще встречается среди женщин, чем у мужчин — в 31 и 6% случаев соответственно (р<0,05). Аналогичная закономерность выявлена и при сравнении количества больных разного пола с высоким уровнем экспрессии ЭРвь у женщин — в 56% случаев, у мужчин — в 20% (^<0,05). Количество больных с умеренным уровнем экспрессии эстро-геновых рецепторов обоих типов в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у пациентов разного пола было одинаковым (р>0,05). Так, для ЭРв по-

Таблица 2. Характеристика статуса эстрогеновых рецепторов в (ЭРв) и в1 (ЭР^) в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у больных разного пола

Группа Экспрессия ЭРв Экспрессия ЭРв1

сравнения среднее+СО* медиана 95% ДИ** р*** среднее+СО* медиана 95% ДИ** р***

Уровень экспрессии****

Мужчины 27,7+12,2 26,5 17-38 0,03 33,9+18,5 29,0 17-47 0,04

Женщины 39,9+17,6 41,5 22-53 48,5+19,7 57,0 35-60

Интенсивность экспрессии*****

Мужчины 1,7±0,4 1,6 1,5-2,0 0,11 2,7+1,8 2,1 1,4-1,6 0,11

Женщины 2,2+1,0 2,1 1,6-2,4 3,7+1,8 3,5 1,8-5,0

Примечание. * СО — стандартное отклонение среднего; ** — 95% ДИ — 95% доверительный интервал; *** — для оценки статистической значимости различий между попарно сравниваемыми группами использовали ^-критерий Манна-Уитни. Выбранный критерий статистической значимости обнаруженных различий между выборками — р<0,05; **** — уровень экспрессии — количество клеток, экспрессирующих ЭР в каждой из исследуемых опухолей (%); ***** — интенсивность экспрессии — отношение средней флуоресценции клеток после инкубации со специфическими антителами к этому показателю после инкубации с изотипическими антителами (отн. ед.).

казатель составил 31 и 44%, а для ЭРв1 — 27 и 25% в группе больных мужского и женского пола соответственно.

Среднее значение интенсивности экспрессии ЭРв в ткани рака легкого мужчин и женщин составило 1,7+0,4 и 2,2+1,0 отн. ед. соответственно. Значимые различия по описываемому показателю не обнаружены (р=0,11). Опухолевая ткань мужчин и женщин характеризуется также сходной интенсивностью экспрессии ЭРв1 (2,7+1,8 и 3,7+1,8 отн. ед. соответственно) при отсутствии достоверных различий, связанных с полом (р=0,11) (см. табл. 2).

Что касается распределения больных в зависимости от интенсивности экспрессии маркёра, то ни относительно ЭРв, ни относительно ЭРв! статистически значимых различий между пациентами разного пола не обнаружено (р>0,05 для обоих рецепторов). Низкая интенсивность экспрессии ЭРв в опухолевой ткани характерна для 75% пациентов мужского пола и 44% женского (рис. 2, в). С высокой интенсивностью этот мар-

Рис. 1. Распределение больных в зависимости от уровня и интенсивности экспрессии эстрогеновых рецепторов в (ЭРв) и эстрогеновых рецепторов Д| (ЭРД ) в ткани немелкоклеточного рака лёгкого.

На рис. а по оси абсцисс — показатели уровня экспрессии ЭРв и ЭРв1 (низкий — 10—29% специфически окрашенных клеток; умеренный — 30—49%; высокий — 50% и более). На рис. б по оси абсцисс — показатели интенсивности экспрессии ЭРв и ЭРв1 (низкая — <2 отн.ед.; высокая — 2 и более отн.ед.). На рис. а и б по оси ординат — количество опухолей с разным уровнем и интенсивностью экспрессии ЭРв и ЭРв1 в процентах к общему числу пациентов в группе. Для оценки статистической значимости различий между показателями экспрессии в опухолях пациентов мужского и женского пола использовали ^критерий Стьюдента. Во всех случаях различия не достоверны (р>0,05).

кёр экспрессируется в клетках рака лёгкого у 25% мужчин и 56% женщин. Анализ ЭРв1 продемонстрировал, что низкая интенсивность экспрессии маркёра выявлена в опухолевой ткани половины пациентов и мужского (47%), и женского (45%) пола (рис. 2, г). Высокая интенсивность экспрессии ЭРв1 с одинаковой частотой выявлялась сре-

ди мужчин и женщин — в 53 и 55% случаев соответственно.

Обсуждение результатов

Главный вопрос, на который мы попытались ответить в настоящем исследовании — насколько сопоставимы показатели экспрессии ЭРв в опухоли при их иммунологическом анализе с использованием разных антител. В данной работе для определения ЭРв в ткани немелкоклеточного рака лёгкого использовали мышиные моноклональные антитела, которые характеризуются специфичностью к М-терминальному домену белка, а следовательно, позволяют оценить всю совокупность изоформ рецепторов. Поскольку ЭРв! входят в эту совокупность, ожидалось, что количественные характеристики их экспрессии при анализе опухолевой ткани одного и того же пациента, не должны превосходить показатели экспрессии ЭРв. Полученные в исследовании значения уровней экспрессии ЭРв и ЭРв1 согласуются с вышеуказанным предположением. Однако значения интенсивности экспрессии анализируемых антигенов свидетельствуют об обратном: среднее значение показателя для ЭРв1 почти в два раза выше, чем для ЭРв. При этом верхняя граница диапазона вариабельности интенсивности экспрессии ЭРв1 в два раза выше, чем ЭРв.

Получение таких парадоксальных на первый взгляд, результатов может быть вызвано несколькими причинами, все из которых связаны с особенностями использованных в работе антител. Специфические антитела к ЭРв являются иммуноглобулинами класса ^02, в то время как антитела к ЭРв1 относятся к классу 1§01. С этим могут быть связаны различия в структуре данных антител, их подвижности, и, как следствие, в способности взаимодействовать с антигеном. Кроме того, на выявляемые количественные характеристики экспрессии эстрогеновых рецеп-

Рис. 2. Распределение больных мужского и женского пола в зависимости от уровня и интенсивности экспрессии эстрогеновых рецепторов в (ЭР/3) и эстрогеновых рецепторов в, (ЭРв в ткани немелкоклеточного рака лёгкого.

На рис. а и б по оси абсцисс — показатели уровня экспрессии ЭРв и ЭРв1 (низкий — 10—29% специфически окрашенных клеток; умеренный — 30—49%; высокий — 50% и более). На рис. в и г по оси абсцисс — показатели интенсивности экспрессии ЭРв и ЭРв1 (низкая — <2 отн. ед.; высокая — 2 и более отн. ед.). На рис. а, б, в и г по оси ординат — количество опухолей с разным уровнем и интенсивностью экспрессии ЭРв и ЭРв1 в процентах к общему числу пациентов в группе. Для оценки статистической значимости различий между показателями экспрессии в опухолях пациентов мужского и женского пола использовали ї-критерий Стьюдента. * — различия считаются достоверными при р<0,05.

торов влияет активность, которая у разных антител могла быть разной. Контролировать этот параметр невозможно, поскольку производители использованных антител не предоставляют информацию относительно количества единиц активности иммуноглобулинов на единицу объёма. Потенциальным источником различий между показателями средней интенсивности экспрессии ЭРв и ЭРв1 может быть разная стехиометрия взаимодействия каждого клона специфических антител с вторичными. Если с одной молекулой антитела, специфического к ЭРв1, взаимодействует большее число молекул вторичного FITC-меченого антитела, чем при аналогичной реакции с участием антитела к ЭРв, то в результате возможна разная амплификация сигнала от каждого из первичных антител. Это и может порождать «аномально» высокое значение интенсивности экспрессии ЭРв1 по сравнению с тотальной фракцией ЭРв.

Тем не менее использование любого из антител позволяет установить факт наличия соответствующего антигена. Кроме того, при разделе -нии проанализированных опухолевых образцов на группы в зависимости от интенсивности и уровня экспрессии маркёров для ЭРв и ЭРв1 получены сходные результаты. Хотя высокая интенсивность и высокий уровень экспрессии чаще обнаруживались для ЭРв1, чем ЭРв, статистически значимых различий между группами не выявлено. Таким образом, в большинстве случаев использование обоих антител позволяет отнести анализируемую ткань к одной и той же группе, в зависимости от уровня экспрессии ЭР. Кроме того, оба антитела позволили выявить половые различия в экспрессии ЭРв в ткани немелкоклеточного рака лёгкого. Так, ЭРв чаще экспрессируются на низком уровне в опухолях пациентов мужского пола, чем женского, что было достоверно установлено и при анализе ЭРв1. Напротив, высоким уровнем экспрессии ЭРв чаще характеризуется опухолевая ткань женщин, а не мужчин. При анализе ЭРв1 указанное различие также статистически значимо.

Таким образом, можно утверждать, что, невзирая на выявленные различия в средних показателях интенсивности экспрессии ЭРв при использовании антител к этому антигену или к

ЛИТЕРАТУРА

1. Márquez-Garbán D. C., Chen H. W., Fishbein M. C. et al. Estrogen receptor signaling pathways in human non-small cell lung cancer. Steroids 2007; 72: 2: 135-143.

2. Zhang G., Liu X., Farkas A.M. et al. Estrogen receptor beta functions through nongenomic mechanisms in lung cancer cells. Mol Endocrinol 2009; 23: 2: 146-156.

3. Богуш Т. А., Дудко E. А., Беме А. А. и др. Экспрессия эстрогеновых рецепторов в опухолях, отличных от рака молочной железы. Антибиотики и химиотер 2009; 54: 7—8: 41—49.

ЭРв1, для сравнительной характеристики экспрессии ЭРв в опухолевой ткани групп пациентов с различным течением болезни или клиникоморфологическими особенностями опухоли могут использоваться как антитела клона 14С8 (фирмы Abcam), специфичные к тотальной фракции ЭРв, так и клона EMR02 (фирмы Novocastra), позволяющие выявить мажорную полноразмерную изоформу рецепторов ЭРв1. Подтверждением этого служат, в частности, полученные в настоящем исследовании данные о более частой и более интенсивной экспрессии ЭРв в ткани немелкоклеточного рака лёгкого у женщин в сравнении с пациентами мужского пола при использовании антител как к ЭРв, так и к ЭРв1. При оценке эстрогенового статуса опухоли, по мнению авторов, необходимо рассматривать уровень экспрессии ЭР, а не её интенсивность, поскольку второй показатель является комплексным, и зависит не только от количества молекул антигена в клетках анализируемой ткани, но и от стехиометрии взаимодействия первичных и вторичных антител.

На сегодняшний день сложно сказать, определение какого рецептора, ЭРв или ЭРв1, информативнее с точки зрения прогнозирования течения немелкоклеточного рака лёгкого и разработки на этой основе терапевтической стратегии. Считают, что экспрессия ЭРв в ткани НМРЛ прогнозирует более благоприятное течение болезни в сравнении с группой пациентов, в опухоли которых ЭРв не выявляются [5, 11, 12]. В то же время, согласно ряду работ, экспрессия именно ЭРв1 в ткани НМРЛ ассоциирована с повышением общей выживаемости пациентов мужского пола и с понижением среди женщин [7, 13]. Принимая во внимание результаты данного исследования, а именно, различия между показателями экспрессии ЭРв и ЭРв1, выявленные у отдельных больных, для прогноза течения заболевания конкретного пациента в рутинной клинической практике можно рекомендовать использование антител к ЭРв.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научных проектов № 10-04-00551-а, № 12-04-00028-а, № 12-04-33066-мол_а_вед.

4. Богуш Т. А., Дудко E. А., Беме А. А. и др. Эстрогеновые рецепторы, антиэстрогены и немелкоклеточный рак лёгкого. Биохимия 2010; 75: 12: 1633—1641.

5. Kawai H., Ishii A., Washiya K. et al. Estrogen receptor alpha and beta are prognostic factors in non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res 2005; 11: 14: 5084—5089.

6. Younes M., Honma N. Estrogen receptorв Arch Pathol Lab Med 2011; 135: 63-66.

7. Skov B. G., Fischer B. M., Pappot H. Oestrogen receptor beta over expression in males with non-small cell lung cancer is associated with better survival. Lung Cancer 2008; 59: 1: 88—94.

8. Stabile L. P., Dacic S., Land S. R. et al. Combined analysis of estrogen 11.

receptor beta-1 and progesterone receptor expression identifies lung cancer patients with poor outcome. Clin Cancer Res 2011; 17: 154—164.

9. Богуш Т. А, Дудко E. А., Богуш E. А., Барышников А. Ю. Характеры- 12.

стика взаимодействия специфических антител с Pgp в клетках Т-лимофбластного лейкоза линии Jurkat. Антибиотики и химиотер 2009; 54: 1—2: 3—9. 13

10. Богуш Т. А., Шатурова А. С., Дудко E. А. и др. Количественная им-мунофлуоресцентная оценка с использованием проточной цито-флуориметрии экспрессии эстрогеновых рецепторов в в солидных опухолях человека. Вестн Моск Университ Сер. 2. Химия.

2011; 52: 4: 305—312.

Wu C. T., Chang Y. L., Shih J. Y. and Lee Y. C. The significance of estrogen receptor beta in 301 surgically treated non-small cell lung cancers. J

Thorac Cardiovasc Surg 2005; 130: 979—986.

Wu C. T., Chang Y. L., Lee Y. C. Expression of the estrogen receptor beta in 37 surgically treated pulmonary sclerosing hemangiomas in comparison with non-small cell lung carcinomas. Hum Pathol 2005; 36: 1108—1112. Schwartz A. G., Prysak G. M., Murphy V. et al. Nuclear estrogen receptor ¡5 in lung cancer: expression and survival differences by sex. Clin Cancer Res 2005; 11: 20: 7280—7287.