Особенности экспрессии раково-тестикулярных генов в клетках костного мозга больных хроническим миелоидным лейкозом

Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1

Материалы и методы. Была изучена кровь 39 (7 мужчин и 32 женщины, медиана возраста 57 лет) первичных больных хМПЗ, положительных по JAK2V617F, и 11 (6 мужчин и 5 женщин, медиана возраста 59 лет) BCR-ABL-положительных больных в дебюте ХМЛ. Для сравнения была исследована кровь 11 здоровых доноров. Оценку уровня экспрессии 8 РТГ относительно гена ABL проводили методом количественной ПЦР в режиме реального времени. Для сравнения групп по признакам уровня экспрессии генов применяли критерий Манна-Уитни.

Результаты и обсуждение. В клетках крови здоровых доноров не обнаружено никаких признаков экспрессии РТГ. В клетках крови у 4 (10%) из 39 больных хМПЗ и у 1(9%) из 11 больных ХМЛ экспрессировался ген РЯЛМЕ. Уровень экспрессии у всех больных был сопоставим (р = 0,001).

Заключение. Профили экспрессии 8 РТГ в клетках крови у больных с впервые диагностированными хМПЗ и ХФ ХМЛ не различаются. Таким образом, патогенетическое сходство ХМЛ и Р!ънегативных хМПЗ подтверждено на молекулярном уровне совпадением профилей экспрессии исследованных нами РТГ

Изменение профиля экспрессии канцер-тестис генов в крови при прогрессии хронического миелоидного

лейкоза

Мисюрин В.А.1, Мисюрин А.В.12, Кесаева Л.А.12, Финашутина Ю.П.12, Мисюрина Е.Н.2, Солдатова И.Н.12, Крутов А.А.2, Лыжко Н.А.12,

Ахлынина Т.В.2, Лукина А.Е.3, Барышников А.Ю.1 'ФГБУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина, Москва; 2Медицинский центр ООО "ГеноТехнология", Москва; 3ФГБУ

Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Тирозинкиназа BCR-ABL инициирует накопление генетических изменений, которые приводят к прогрессии хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) от хронической фазы (ХФ) в фазу акселерации (ФА) и бластный криз (БК) и уникальны для каждой стадии.

Цель работы. Определение маркеров прогрессирования заболевания и поиск универсальной мишени специфической иммунотерапии в крови больных с диагнозами ХФ, ФА и БК ХМЛ путем исследования профиля экспрессия раково-те-стикулярных генов (РТГ) GЛGE1, МЛЭЕЛ1, SCP1, SEMG1, SPЛNXЛ и РЯЛМЕ.

Материалы и методы. Была исследована кровь 27 больных (11 мужчин и 16 женщин, медиана возраста 51 год), находящихся в стадии ХФ ХМЛ, 21 больного (8 мужчин и 13 женщин, медиана возраста 47 лет) в стадии ФА ХМЛ и 10 больных (3 мужчин, 7 женщин, медиана возраста 51 год), находящихся в стадии БК ХМЛ. Все больные получали лечение иматинибом. Исследование уровня экспрессии РТГ проводили методом количественной ПЦР в режиме реального времени. Для создания группы отрицательного контроля взяты пробы крови 12 здоровых доноров.

Результаты и обсуждения. Из 27 больных ХФ ХМЛ в крови у 1(4%) был активен ген SPЛNXЛ1, у 2(7%) - ген РЯЛМЕ. Из 21 больного при ФА ХМЛ: у 4(19%) - GЛGE1, у 1 (5%) -МЛЭЕЛ1, у 5 (24%) - SEMG1, у 1 (5%) - SPЛNXЛ1, у 3 (14%) - SSX1, у 6 (19%) - РЯЛМЕ. У 2 больных наблюдалась коактивация генов SEMG1 и РЯЛМЕ, у 3 больных активности рассматриваемых РТГ не обнаружено. Из 10 больных ХМЛ при БК: у 4 (40%) - GЛGE1, у 4(40%) - SEMG1, у 1(10%) -SEMG1, у 6(60%) - РЯЛМЕ. В крови больных, находящихся в стадиях ФА и БК ХМЛ, экспрессируется больше генов, чем при ХФ (по критерию х2 статистическая значимость различий р = 0,032 и р = 0,048 соответственно).

Заключение. Профиль экспрессии РТГ в крови больных ХМЛ, получающих иматиниб, отличается в разных стадиях. Выявление таких маркеров, как мРНК РТГ GЛGE1, N1-ESO-1, МЛЭЕЛ1, SCP1, SEMG1, SPЛNXA1, SSX1 и РЯЛМЕ, в клетках крови при мониторинге больных ХМЛ в стадии ХФ будет свидетельствовать о скорой трансформации заболевания в ФА и БК. Распространенность экспрессируемого гена РЯЛМЕ среди больных делает его подходящим объектом для разработки методов специфической иммунотерапии ХМЛ.

Особенности экспрессии раково-тестикулярных генов в клетках костного мозга больных хроническим

миелоидным лейкозом

Мисюрин В.А.1, Мисюрин А.В.12, Кесаева Л.А.12, Финашутина Ю.П.12, Мисюрина Е.Н.2, Солдатова И.Н.1-2, Крутов А.А.2, Лыжко НА1-2,

Ахлынина Т.В.2, Лукина А.Е.3, Барышников А.Ю.1

1ФГБУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина, Москва; 2Медицинский центр ООО "ГеноТехнология", Москва; 3ФГБУ

Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Тирозинкиназа BCЯ-ЛBL инициирует накопление генетических и эпигенетических изменений, которые приводят к эволюции хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) от хронической фазы (ХФ) в фазу акселерации (ФА) и бластный криз (БК) и уникальны для каждой стадии.

Цель работы. Для определения маркеров прогрессиро-вания заболевания и поиска универсальной мишени специфической иммунотерапии в крови больных с диагнозами ХФ, ФА и БК ХМЛ был исследован профиль экспрессия раково-тестикулярных генов (РТГ) GЛGE1, NY-ESO-1, SEMG1, SSX1 и РЯЛМЕ.

Материалы и методы. Были исследованы образцы костного мозга 5 (2 мужчин, 3 женщины, медиана возраста 55 лет) первичных больных ХМЛ, находящихся в ХФ),

и 10 леченых больных ХМЛ на стадии ХФ (6 мужчин и 4 женщины, медиана возраста 48 лет), 6 больных на стадии ФА (3 мужчин и 3 женщины, медиана возраста 52 года) и 5 больных в БК (3 мужчин и 2 женщины, медиана возраста 54 года), принимающих иматиниб. Исследование уровня экспрессии РТГ проводили методом количественной ПЦР.

Результаты и обсуждение. У первичных больных не активен ни один РТГ. У 10 леченых больных при ХФ ХМЛ экспрессировались следующие гены: у 1 (10%) - NY-ESO-1, у 1 (10%) - SCP1, у 3 (30%) - РЯЛМЕ, причем у 1 больного наблюдалась коэкспрессия генов РЯЛМЕ и NY-ESO-1, и у 5 больных данные РТГ не экспрессировались; из 6 больных при ФА: у 2 (33%) - SEMG1, у 1 (17%) - SSX1, у 5 (84%) -РЯЛМЕ, у 2 больных наблюдалась коэкспрессия генов SEMG1 и РЯЛМЕ, у 1 больного экспрессировался только SSX1, у 3 - только РЯЛМЕ; из 5 больных при БК: у 1 (20 -GЛGE1, у 4 (80%) - РЯЛМЕ, при этом у 1 больного GЛGE1 коэкспрессировался вместе с РЯЛМЕ и у 1 больного не выявлено активности рассматриваемых генов. Наблюдаемые значения уровня экспрессии гена РЯЛМЕ у больных в стадии БК были выше, чем при ХФ (р = 0,06 по критерию Манна-Уитни) и при ФА (р = 0,026 по критерию Манна-Уитни).

Заключение. Профиль экспрессии РТГ в костном мозге больных ХМЛ, получающих иматиниб, отличается на разных стадиях ХМЛ. Выявление таких маркеров, как мРНК РТГ GЛGE1, М^О-1, SCP1, SEMG1, SSX1 и РЯЛМЕ, в

Приложение 1

клетках крови при мониторинге больных ХМЛ стадии ХФ будет свидетельствовать о скорой трансформации заболевания в ФА и БК. Распространенность экспрессируемого

гена PRAME среди больных делает его подходящим объектом для разработки методов специфической иммунотерапии ХМЛ.

Сосудистые и клеточные аспекты болезни Кастлемана при развитии РОЕМS-синдрома

Михайлов А.М.1, Байков В.В.2,Бессмельцев С.С.3, Криволапов Ю.А.1, Пожарисский К.М.4, Ругаль В.И.3, Семенова Н.А.3' 'Северо-Западный ГМУ им.И.И.Мечникова; 2Первый Санкт-Петербургский ГМУ им. И.П.Павлова, 3 ФГБУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России; 4Российский научный центр радиологии и хирургических технологий, Санкт-Петербург

Введение. Болезнь Кастлемана (БК), или ИЛ-6-зависимая ангиофолликулярная гиперплазия лимфатических узлов, -редкое заболевание, имеющее два гистологических варианта: гиалиново-васкулярный и плазмоклеточный, который может осложняться развитием POEMS-синдрома. Считается, что в развитии этого синдрома определяющую роль играет неоан-гиогенез и иммунная патология, обусловленная измененной функцией плазматических клеток, которым для усиленного развития необходима обильная васкуляризация.

Цель работы. Сопоставление гистологического варианта БК при развитии у больных POEMS-синдрома с плотностью сосудистой сети и количеством плазмоцитов в срезах лимфатических узлов, а также содержанием ИЛ-6 в крови. Группой сравнения служили больные БК без POEMS-синдрома.

Материалы и методы. Обследован 21 больной БК (11 женщин и 10 мужчин) в возрасте от 26 до 65 лет. Диагноз БК установлен при гистологическом (Г+Э) и гистохимическом исследовании лимфатических узлов (по нормальному распределению субпропуляций Т- и В-лимфоцитов в ткани фолликулов и межфолликулярных пространствах). POEMS-синдром диагностирован у 5 больных по наличию 3 больших и 1 любого малого критерия. К большим критериям относили: наличие диагностированной БК, плазмоклеточную инфильтрацию ткани лимфатических узлов, моноклональ-ность по Х-цепи при гистохимическом определении легких цепей на плазматических клетках или в сыворотке крови иммунологическим методом либо при определении методом иммунофиксации. Проводили изучение нейро-мышечной передачи методом электронейромиографии с регистрацией сенсорных и моторных потенциалов. Для подтверждения малых критериев POEMS-синдрома, таких как экссудация в полости плевры, перикарда, брюшины и органомегалия, проводили эхокардиографическое исследование, ультразвуковое исследование брюшной полости и компьютерную томографию (КТ). Изменения костей регистрировали с помощью КТ и изотопной сцинтиграфии. Плазматические клетки в срезах узлов маркировали гистохимически по CD138+ и подсчитывали их количество визуально в 10 полях зрения (п/з) 400х. Площадь сосудов определяли по периметру окраски эндотелия CD31 методом Video Test soft ware и выражали

в процентах от площади визуализации. Определяли концентрацию ИЛ-6 в сыворотке крови (в пг/мл). Данные обработаны статистически по Стьюденту, статистически значимыми считали изменения при p < 0,05.

Результаты и обсуждение. У всех больных БК с POEMS-синдромом диагностированы массивные выпоты в серозные полости и гепато-спленомегалия. У всех больных имелись сосудистые изменения: повышение давления в легочной артерии до 47,4 ± 11,3 мм рт.ст. (норма 18 ± 3,1 мм рт. ст.;p < 0,05), у 2 выявлены множественные ангиомы кожи, у 1 больного обнаружена сосудистая микроаденома гипофиза при магнитно-резонансной томогрфии с контрастированием сосудов с одновременным низким уровнем тестостерона в крови и увеличением пролактина и фолликулостимулирующего гормона гипофиза. У 3 больных имелись нарушения нейромышечной передачи - от незначительной до фатальной с полным нейро-мышечным респираторным блоком и переводом больного на ИВЛ. У всех больных отмечено увеличение Х-цепей при ги-стохиимическом или иммунологическом определении в крови. У 1 больного, наиболее тяжелого, выявлены сочетанные изменения костей по типу остеолиза с остеосклерозом. При этом у больных БК с POEMS-синдромом площадь развития сосудов составила 29,4 ± 8,4%, а количество CD138+-клеток равнялось 70,8 ± 23,3 в п/з (t > 3) и концентрация ИЛ-6 - 71 ±13,1 пг/мл (норма 7 ± 3 пг/мл); p < 0,001. У больных БК при отсутствии признаков POEMS-синдрома площадь сосудов равнялась 11,5 ± 0,83% (p < 0,05), а количество CD138+-клеток сильно колебалось - от полного отсутствия до 34 в п/з, что не позволило определить статистически значимые различия. Также сильным колебаниям была подвержена концентрация ИЛ-6 в крови (54 ± 25 пг/мл), что не имело статистически значимых различий с уровнем у здоровых лиц и больных с POEMS-синдромом.

Заключение. Pезультаты исследования свидетельствуют, что развитие POEMS-синдрома у больных при БК характеризуется сочетанием прогрессии СD138+-клеток с развитием моноклональности по Х-цепи, повышенным уровнем ИЛ-6 и выраженным неоангиогенезом, а при отсутствии POEMS имелась только статистически значимо меньшая активация неоангиогенеза с непостоянным повышением уровня ИЛ-6.

Пневмоцистная пневмония при лимфоме Ходжкина

Моисеева Т.Н., Шаркунов Н.Н., Клясова Г.А., Аль-Ради Л.С., Чернова Н.Г., Марьин Д.С., Шитарева И.В., Джулакян У.Л., Грачева А.Н.,

Костина И.Э., Кравченко С.К. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Программная полихимиотерапия (ПХТ) и Т-клеточный иммунодефицит - важные факторы риска развития пневмоцистной пневмонии (ПП) у больных лимфомой Ходжкина (ЛХ). ПП может протекать фульминантно, в связи с чем необходима профилактика и ранняя диагностика.

Материалы и методы. За период с 1999 по 2013 г. ПП диагностирована у 21 (2,8%) из 740 больных ЛХ, получавших программную ПХТ. Соотношение мужчины:женщины 1:1,1, медиана возраста 32 года (18-65 лет). У 82% больных были продвинутые стадии болезни (ПВ-[У). Диагноз ПП устанавливали по данным бактериологического исследова-

ния (более 5 пневмоцист в препарате методом РНИФ) и компьютерной томографии (КТ).

Результаты. ПП развивалась после 4 и более курсов ПХТ и всегда была ассоциирована с другими возбудителями: с вирусами герпеса - у 72%, с бактериально-грибковой флорой -у 33% больных. Всем больным проводили комбинированную противомикробную терапию с применением бисептола в высоких дозах внутривенно. Искусственная вентиляция легких потребовалась 9 (43%) больным. Умерли 6 (29%) больных, при этом среди больных с рецидивами и резистентным течением заболевания летальность составила 80%.