СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ ПОПУЛЯЦИЙ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ И ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ КЛЕТОК, УСТОЙЧИВЫХ К ЗАБОЛЕВАНИЯМ И СПОСОБНЫХ К ДИФФЕРЕНЦИРОВКЕ

1. Способ получения дифференциирующихся клеток путем клеточного перепрограммирования, включающий этапы, на которых:
- выбирают не плюрипотентные соматические клетки;
- сверхэкспрессируют или вводят нуклеиновую(-ые) кислоту(-ы) или белок (белки), соответствующие одному или нескольким транскрипционным факторам, обычно присутствующим в желаемых клетках.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные клетки и/или их потомство сверхэкспрессируют транскрипционный фактор белков или нуклеиновых кислот, выбранных из группы, включающей:
a. Mash1 (Ascl1) или их часть;
b. MyoD, миогенин, Myf5, Myf6, Mef2, миокардин, Ifrd1, транскрипционный фактор мышечных клеток и/или последовательность, кодирующую специфический для клеток мышечного типа bHLH или ее часть;
с. Foxa2, Sox17, HLXB9 и/или Pdx1 или их части;
d. печеночный ядерный фактор (HNF)-1, HNF-3, HNF-4, FTNF-6 и/или CREB-связывающий белок или их части;
e. Runx1/AML1 и/или NOV (CCN3) или их части;
f. Sox9, CREB-связывающий белок, Gata6 и/или Runx2 или их части;
g. OLIG1,OLIG2 и/или Zfp488 или их части;
h. MyoD, миогенин, миокардин, Myf5, Myf6, Mef2A, Gata4, Gata5 и Gata6 или их части;
i. Gata4, Gata5 и/или Gata6 или их части;
j. миокардин или его часть;
k. миогенин и MyoD или их части;
l. Runx2 или его часть;
m. Mash1 (Ascl1), Ngn2, Nurr1, Lmx1b и/или Ptx-3 или их части;
n. Mash1 (Ascl1), Phox2b, Lmx1b, Nkx2.2, Pet1, Gata2, Gata3 и/или Pet1 или их части;
o. Mash1 (Ascl1), Phox2a и/или REST4 или их части;
p. Mash1 (Ascl1), PITX2, Dlx2, Dlx5, искусственных олигонуклеотидов, целенаправленно воздействующих на HES1, Phox2a и/или REST4 или их части;
q. Mash1 (Ascl1), Phox2a, Phox2b, dHand, Gata2 и/или Gata3 или их части;
r. Mash1 (Ascl1), Nurr1, REN, нейрогенин 1, нейрогенин 2, нейрогенин 3, Mash1, Phox2b, Phox2a, dHand, Shh, FGF8, Lmx1b, Nkx2.2, Pet1, Lbx1, Rnx, Gata3 и/или антисмысловая РНК Hes1 или их части;
s. PRR-Numb или его часть; или
t. Numblike или его часть.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные клетки и/или их потомство инкубируют в дифференцирующей среде.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные клетки и/или их потомство инкубируют в дифференцирующей среде, включающей одно или более средств, выбранных из группы, включающей
а. ретиноевую кислоту, нейротрофин 3 (NT3), фактор роста нервов (NGF), фактор роста, полученный из клеточной линии глии (GDNF) и/или интерферон-γ (IFN-γ), гексаметилен-бис-акриламид, диметилсульфоксид (DMSO), фетальную бычью сыворотку (FBS), нормальную бычью сыворотку (NBS), ретиноевую кислоту, кондиционированную среду для кардиомиоцитов, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), LIF, тромбопоэтин, колониестимулирующий фактор, M-CSF (CSF-1), GMCSF, IL-7, цитокин, стимулирующий CD4+ Т-клеточную дифференцировку, маслянокислый натрий, активин А, фактор роста эпидермиса, основной фактор роста фибропластов, ноггин, инсулиноподобный фактор роста и никотинамид;
b. ретиноевую кислоту, нейротрофин 3 (NT3), фактор роста нервов (NGF), фактор роста, полученный из клеточной линии глии (GDNF) и/или интерферон-γ (IFN-γ);
c. гексаметилен-бис-акриламид или диметилсульфоксид;
d. фетальную бычью сыворотку (FBS);
e. нормальную бычью сыворотку (NBS), диметилсульфоксид, ретиноевую кислоту и/или кондиционированную среду для кардиомиоцитов;
f. фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), тромбопоэтин и колониестимулирующие факторы, соответствующие типу целевой клетки;
g. LIF, нейротрофин 3 (NT3) и/или фактор роста нервов (NGF);
h. колониестимулирующий фактор, факультативно M-CSF (CSF-1), GM-CSF, IL-7 или цитокин, стимулирующий CD4+ Т-клеточную дифференцировку; и
i. маслянокислый натрий, активин А, ретиноевую кислоту, фактор роста эпидермиса, основной фактор роста фибропластов, ноггин, инсулиноподобный фактор роста II и никотинамид.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выбранную клетку модифицируют для экспрессии:
a. теломеразы, изменяющей срок жизни клетки;
b. продукта гена, отсутствующего у человека;
с. последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, выбранный из аспартоацилазы (ASP), HRPT, HTT, NPC1, GBA, PARK2, VHL, бета-глюкуронидазы, гексозаминидазы А (HEXA), гексозаминидазы В (HEXB), HRPT, HTT, альфа-галактозидазы (GLA), кислой бета-глюкозидазы (GBA), супрессора опухоли фон Гиппеля-Линдау (VHL), бета-глобина (HBB), NPC1, PARK2.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выбранную клетку или ее потомство модифицируют для экспрессии:
а. существенных последовательностей нуклеиновых кислот;
b. синтетических олигонуклеотидов, комплементарной РНК (siRNA), малой РНК, образующей шпильки (shRNA), малой интерферирующей РНК, антисмысловой РНК;
c. последовательности нуклеиновой кислоты или белка, замедляющей(его) инфицирование вирусом;
d. последовательности нуклеиновой кислоты или белка, воспроизводящей(его) указанные клетки и/или их потомство, менее способные поддерживать репликацию вируса;
e. последовательности нуклеиновой кислоты или белка, воспроизводящей(его) указанные клетки и/или их потомство, менее способные поддерживать транскрипцию вируса;
f. синтетического олигонуклеотида, направленного против корецептора вируса иммунодефицита;
g. РНК ловушки;
h. psi-последовательности ВИЧ;
i. последовательности нуклеиновой кислоты или белка, воспроизводящей(его) указанные клетки и/или их потомство, сопротивляющиеся заболеванию.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что белок, нуклеиновая кислота или средство присутствует для скрининга в отношении его способности индуцировать фенотические изменения или дифференцировки выбранных клеток в целевые популяции клеток.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют электропорацию, липосомы, нанокапсулы, нанохранилища, неинтегрирующийся вектор и/или другие подходы, недопускающие ретровирусное/лентивирусное объединение, или любую случайную замену генома указанной клетки, включая сайт-направленный мутагенез.
9. Способ по одному из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанную клетку и/или ее потомство культивируют в трехмерном или двухмерном каркасе, причем
указанные клетки и/или их потомства выращивают в децеллюляризованном органе или децеллюляризованной ткани, или указанные клетки или их потомства используют совместно с технологией струйной печати или тканевой инженерии.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что его осуществляют in vivo.
11. Популяция дифференциирующихся клеток, полученная от пациента, клеточной линии или донора, для применения в сферах, использующих клеточную терапию, генную терапию или в животноводческом хозяйстве, полученная с помощью рекомбинантных способов по пп. 1-10.
12. Применение популяции клеток по п. 11, которая скринирована на основе клеточного специфического маркера, трансгенного маркера экспрессии под управлением клеточных специфических стимуляторов, или трансгенного маркера экспрессии под управлением стимуляторов, связанных с нейротрансмиттером.
13. Способ лечения пациента с состоянием или заболеванием:
а. облегчаемым коррекцией генетически обусловленной недостаточности;
b. зависящим от экспрессии генов, ответственных за подверженность;
c. облегчаемым возобновленной пролиферацией клеток; или
d. характеризуемым как дисплазия, рак или аберрантное поведение клеток,
включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества клеток по п. 11.