Геноидентификация изолятов ВЛКРС, выявленных в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан

- № 1. - С. 39-40; 3. Изилов Ю.С. Практикум по скотоводству: учебник для высших учебн. заведений. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 1988. - 216 с.; 4. Загидуллин Л.Р. Физиологическое обоснование повышения эффективности машинного доения коров: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Казань, 2006. - 22 с.; 5. Инновации в молочном скотоводстве и представление научной продукции / Н.А. Сафиуллин, Ф.Х. Гатин, В.П. Лебедев [и др.]. - Казань: «Печатный двор», 2012. - 146 с.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОДГОТОВКИ НЕТЕЛЕЙ К ЛАКТАЦИИ

Емельянов Д.Г., Каюмов Р.Р., Сафиуллин Н.А.

Резюме

Подготовка нетелей к лактации путем проведения пневмомеханического массажа вымени оказывает положительное влияние на морфологические признаки и функциональные свойства молочной железы коров-первотелок. Промеры вымени первотелок опытной группы в среднем увеличились по сравнению с контролем от 1,6 до 22,6 %, интенсивность и полнота молоковыведения - 23,8 и 2,5 % соответственно, удой за 305 дней лактации - 10,1 %.

THE EFFECTIVENESS HEIFERS TRAINING FOR LACTATION

Yemel'yanov D.G., Kaiumov R.R., Safiullin N.A.

Summary

The heifers preparation for lactation through the pneumatic mechanical udder massage has a positive effect on the morphological and functional properties of the cows heifers breast. Heifers udder measurements of the experimental group increased on average compared to control from 1.6 to 22.6%, the intensity and completeness of lactation - 23.8 and 2.5% respectively, yield for 305-day of lactation - 10.1%.

УДК: 619:57.065:578.828

ГЕНОИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ ВЛКРС, ВЫЯВЛЕННЫХ В ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВАХ РЕСПУБЛИКИ

ТАТАРСТАН

Закирова З.Р. - аспирант Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана

e-mail:zuhr89@mail.ru

Ключевые слова: мониторинг, генодиагностика, лейкоз крупного рогатого скота, ПЦР.

Keywords: monitoring, gene diagnostic, cattle leucosis, PCR.

Лабораторно-диагностические исследования в системе мониторинга инфицированности стад ВЛКРС являются неразрывным звеном противолейкозных мероприятий [3, 4].

Вопросы генодиагностики лейкоза крупного рогатого скота в контексте изучения генетического многообразия его этиологического агента весьма актуальны, учитывая факт невозможности типизации данного вирусного патогена серологическими методами исследования [4].

Цель настоящей работы - филогенетический анализ изолятов ВЛКРС, выявленных в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан на предмет их таксономической классификации и совершенствование способов генотипической идентификации BLV по локусу env-гена.

Материалы и методы. При постановке ПЦР с выделенными образцами провирусной ДНК BLV применялась модификация «nested» ПЦР с применением внешних (env5032+env5608) и внутренних (env5099+env5521) праймеров, инициирующих на заключительном этапе реакции амплификацию фрагмента env-гена ВЛКРС длиной 444 п.н. [1, 2, 3].

Секвенирование продуктов амплификации локуса env-гена BLV с внутренними праймерами «env5099» и «env5521» изолятов ВЛКРС «N10», «N28», «N72» и «N174» проведено на приборе ABI-300.

Изоляты «N10» (GenBank A/N: HM102355), «N28» (GenBank A/N: HM102356), «N72» (GenBank A/N: JF683619) и «N174» (GenBank A/N: JF713455) были выравнены по длине 444 нуклеотидов локуса env-гена c соответствующими опубликованными в GenBank последовательностями известных представителей BLV, используя программы BLAST, CLUSTAL W (v. 1.83) и MEGA-4 с последующим филогенетическим анализом.

Эндонуклеазы рестрикции, отобранные для ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВЛКРС в соответствии с филогенетической классификацией: PvuII, SspI, HphI, HaeIII, BstYI.

ПЦР-ПДРФ-моделирование: NEBcutter v.2.0.

ПЦР-ПДРФ-продукты разгоняли в 2,5% агарозном геле (20 В/см, 40 мин) и визуализировали в УФ-трансиллюминаторе (Х=310 нм).

Результаты исследования и их обсуждение. По результатам филогенетического анализа выравненных нуклеотидных

последовательностей локуса env-гена типовых представителей известных генотипов ВЛКРС было установлено, что изолят «N28», выявленный в Спасском районе Республики Татарстан, принадлежал к кластеру 7-го генотипа, а изоляты «N10» и «N72», выявленные соответственно в Мензелинском и Дрожжановском районах Республики Татарстан, относились к 4-му генотипу BLV (рис. 1).

іЧ

-| КІО о ] М ] 023 5 51| -------З

Ы5

-------N72 ЩЦЩЦ

'4-2

----СКОС

-СЕ4АІ-2

151

----РЫ23В

---------12(583530}

^28 1НМ 102356)1

30 (1Х?059417>

1

----- 14

и^СА-! {ЕР06564?) иЭСА-2

- JPF

АЫ453

АЬ-164 <И80Й574)

АКО&НВ

Щ74^7Ш553 — 3-43

— 4-І

ЕШСге/МШЮ ^N9900 73)

МІШЇ Сг&'ОВ

ЬиО Сю/ВЕМ/08

ЕЦО СгаЮІАЩ ^N990070)

--------ЕЦО СязЛЖАЛ»

ЕЦО Спокам

кніїїіз’пи

УсІМ

- Со™ 527

— АЬ-63

_________і АЬ-2106 рт80«578>

I-------ІЗтСОбИ

і-----1

Рис. 1. Дендрограмма типовых представителей известных генотипов БЬУ

[МБОЛ-4: алгоритм N1, 400 пі, 40 Бед.]

Также выявленный в Дрожжановском районе Республики Татарстан другой уже изолят «N174» характеризовался признаком нового, ранее не обоснованного генотипа ВЛКРС, обозначенного нами «8-й генотип», ввиду формирования на выстраиваемой дендрограмме автономного генотипического кластера, в который также входили на момент обоснования нами нового генотипа БЬУ близкородственные изоляты «4-1» и «3-41», выявленные в Украине, а также изолят «М1/БЬ0_Сш/08», обнаруженный в Хорватии

Необходимо отметить, что факт существования обоснованного нами нового генотипа BLV [1] чуть позже был подтвержден Хорватскими

исследователями [2].

В процессе системного анализа рестрикционных картирований локуса env-гена известных представителей BLV, в рамках совершенствования схемы ПЦР-ПДРФ-генотипирования, согласующейся с филогенетической классификацией ВЛКРС, нами были подобраны новые условия идентификации по 5 эндонуклеазам рестрикции: PvuII, SspI, HphI, HaeIII и BstYI.

Для исчерпывающей же идентификации генотипов ВЛКРС целесообразно руководствоваться полной картиной env-ПЦР-ПДРФ-профилей с сопоставлением полученных данных с результатами секвенирования ПЦР-продуктов и последующим филогенетическим анализом представителей BLV по локусу env-гена.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Шаева А.Ю, Гараева З.Р., Вафин Р.Р., Хазипов Н.З., Алимов Н.З. Идентификация нового генотипа ВЛКРС // Ученые записки КГАВМ, 2012 г., Т. 211. - С. 192-197. 2. Balic D., Lojkic I., Periskic M., Bedekovic T., Jungic A., Lemo N., Roic B., Cac Z., Barbic L., Madic J. Identification of a new genotype of bovine leukemia virus // Arch. Virol., 2012. -Apr 10 [Epub ahead of print]. 3. Beier D., Blankenstein P., Marquardt O., Kuzmak J. Identification of different BLV provirus isolates by PCR, RFLPA and DNA sequencing // Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr., 2001, V. 114. - N. 7-8. - P. 252-256. 4. Moratorio G. Obal G., Dubra A., Correa A., Bianchi S., Buschiazzo A., Cristina J., Pritsch O. Phylogenetic analysis of bovine leukemia viruses isolated in South America reveals diversification in seven distinct genotypes // Arch. Virol., 2010. - V. 155. - N. 4. - P. 481-489.

ГЕНОИДЕНТИФИКАТТИЯ ИЗОЛЯТОВ ВЛКРС, ВЫЯВЛЕННЫХ В

ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВАХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН

Закирова З.Р.

Резюме

На основании филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена провируса BLV геноидентифицированы изоляты ВЛКРС, выявленные на территории Республики Татарстан.

VL CATTLE ISOLATES GENE IDENTIFICATION IN FARMS OF THE REPUBLIC

OF TATARSTAN

Zakirova Z.R.

Summary

On the basis of phylogenetic analysis of sequeneed order of eny-gene locus of BVL provirus the gene identification of VL cattle isolates was made, which were revealed on the territory of the Republic of Tatarstan.