СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ ПРИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ И ПРЕДРАКОВЫХ ПРОЦЕССАХ ШЕЙКИ МАТКИ У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
METHOD FOR PREDICTION OF CERVICAL CANCER IN BENIGN AND PRE-CANCER CERVICAL PROCESSES IN FEMALES OF REPRODUCTIVE AGE

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии.
Одним из способов прогнозирования рака шейки матки является выявление и оценка следующих факторов риска: методы контрацепции, наличие инфекции, передающейся половым путем (ИППП), наличие вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого риска, хронические воспалительные заболевания органов малого таза, многочисленные аборты, отягощенная наследственность (Кравинская Т.А: Лечебно-диагностическая тактика при доброкачественных заболеваниях шейки матки. Дисс.… канд. мед. наук. М., 2009. - 119 с.).
Недостатком способа является невысокая точность, обусловленная выявлением только клинико-анамнестических факторов риска, которые позволяют диагностировать уже существующие патологические изменения, в то время как с позиций онкологической настороженности необходимо выявлять наиболее ранние маркеры, определяющие вероятность развития рака на максимально раннем этапе, еще до фенотипического формирования опухоли.
Прогнозирование рака шейки матки на основании проведения анализа метилирования генов в плоскоклеточных карциномах и аденокарциномах шейки матки по трем генам RARb-2, TIMP-2, TIMP-3 в присутствии ВПЧ инфекции показал, что ВПЧ позитивные плоскоклеточные карциномы отличаются друг от друга по количеству метилированных маркеров и их сочетаний. Автор отмечает, что профиль метилирования генов уникален для каждой опухоли и является доказательством того, что метилирование генов является одним из главных событий развития ВПЧ позитивных плоскоклеточных карцином шейки матки (Иванова Т.А. Гиперметилирование ДНК в опухолях человека. Дисс.…канд. биол. наук. М., 2004).
Недостатком способа является невысокая точность в связи с отсутствием взаимосвязи между клинико-анамнестическими данными и генетическими исследованиями.
Наиболее близким к предлагаемому способу является прогнозирование развития рака шейки матки на основании выявления метилирования генов p16, CDH1, MGMT, MLH1, НСl, N33 при дисплазиях шейки матки. Автор отмечает увеличение % метилирования в ряду: морфологически неизмененная смежная с CIN III ткань (цервикальная интраэпителиальная неоплазия по классификации Richart R.M.) → дисплазия (по классификации J.W.Reagan CIN III - тяжелая дисплазия и CIS), (Подистов Ю.И. Эпителиальные дисплазии шейки матки (диагностика, лечение): Дисс.…докт. Мед. наук. - М., 2005. - 246 с.).
Недостатком этого способа прогнозирования является невысокая точность, вероятно, обусловленная определением метилирования генов-супрессоров опухолевого роста только в образцах предрака шейки матки без детализации степени неопластического процесса, а также без учета доброкачественных заболеваний шейки матки, в то время как эпигенетические нарушения в геноме клетки могут возникнуть задолго до злокачественной трансформации, еще не выявляемой при морфологическом исследовании.
Задачей изобретения является способ повышения точности прогнозирования рака шейки матки.
Поставленная задача решается способом прогнозирования рака шейки матки при доброкачественных и предраковых процессах шейки матки у женщин репродуктивного возраста, включающим определение метилирования генов в биоптате шейки матки, отличием которого является определение клинических факторов риска развития рака шейки матки, и метилирования генов MLH1, HIC1, RASSF1A, MGMT, N33, CDH1, и расчета вероятности развития рака шейки матки по формуле ,
где:
р - коэффициент вероятности риска развития рака шейки матки;
е - основание натурального логарифма, равное 2,71828182845904;
z=-2,4274+2,2163*Х1+0,3791*X1+0,528*X3+1,1373*X4+1,2187*X5+2,1587*X6+26,5802*X7+1,3323*X8+1,9323*X9+1,8596*X10+1,6689*X11+1,2123*X12+1,0690*X13;
X1 - морфотип (доброкачественные процессы - 1, CIN I - 2, CIN II - 3, CIN III - 4),
X2 - метилирование MLH1 (значения: есть - 1, нет - 0),
Х3 - метилирование МGМT (значения: есть - 1, нет - 0),
Х4 - метилирование N33 (значения: есть - 1, нет - 0),
Х5 - метилирование RASSF1 (значения: есть - 1, нет - 0),
Х6 - метилирование HIC1 (значения: есть - 1, нет - 0),
Х7 - метилирование CDH1 (значения: есть - 1, нет - 0),
Х8 - ВПЧ высокого риска (значения: есть - 1, нет - 0),
X9 - дисплазия шейки матки в анамнезе (значения: есть - 1, нет - 0),
X10 - эрозия шейки матки в анамнезе (значения: есть - 1, нет - 0),
X11 - травмы шейки матки после родов/абортов (значения: есть - 1, нет - 0),
X12 - ИППП (значения: есть - 1, нет - 0);
X13 - отягощенная онкологическая наследственность (значения: есть - 1, нет - 0),
и при величине р больше 0,6 прогнозируют высокую вероятность риска развития рака шейки матки, при р, равном 0,3-0,59, - умеренную вероятность, при р меньше 0,29 - низкую вероятность. На основании полученных данных можно определить 3 группы пациенток:
- с низкой вероятностью развития рака - р=0,0-0,29;
- с умеренной вероятностью развития рака - р=0,3-0,59;
- с высокой вероятностью развития рака - р=0,6-1,0.
Практически способ осуществляли следующим образом. После проведения клиническо-анамнестических исследований выявляли клинические факторы риска развития рака шейки матки: наличие ВПЧ высокого риска, дисплазия шейки матки в анамнезе, эрозия шейки матки в анамнезе, травмы шейки матки после родов и абортов, ИППП, отягощенная онкологическая наследственность.
По показаниям производилось выскабливание цервикального канала, биопсия шейки матки. Затем часть биопсийного материала шейки матки направлялась на морфологическое исследование, другая часть - в генетическую лабораторию. Для определения метилирования генов-супрессоров применяли метод метилчувствительной полимеразно-цепной реакции (МЧ-ПЦР).
При постоянном использовании полученные результаты обследования заносились в таблицу Microsoft Office Excel. Затем в ячейки вводились индивидуальные данные каждой пациентки и вычислялся риск злокачественной трансформации эпителия шейки матки.
Вероятность развития события рассчитывалась по формуле , разработанной на основании изучения клинического и лабораторного материала с учетом бинарной логистической регрессии.
Значения коэффициентов вычислялись на основании комплексного обследования и лечения 127 пациенток репродуктивного возраста с доброкачественными и предраковыми процессами шейки матки. После обработки и анализа полученных данных в программах «Microsoft Excel» и пакете прикладных программ «Statistica for Windows» v.7.0, StatSoft Inc. (США) были определены статистически значимые факторы риска и оценен их вклад (коэффициент в формуле бинарной логистической регрессии) в вероятность развития рака шейки матки (Н.И.Пирогов. Логистическая регрессия. Основные понятия и возможности мeтодa. http://www.biometrica.tomsk.ru/logit_1.htm).
Чувствительность - 97%, специфичность - 90%.
Пример 1.
Больная К., 27 лет, обратилась с жалобами на обильные слизистые выделения из половых путей, периодически беспокоящий зуд во влагалище. При обследовании выявлены следующие факторы риска: хламидиоз в анамнезе, эрозия шейки матки, ВПЧ высокого риска. Произведена биопсия шейки матки, выскабливание цервикального канала. Морфологический диагноз - эктопия шейки матки, хр.цервицит. Метилирования генов-супрессоров не выявлено.
Таким образом: Х1=1, Х2=0, Х3=0, Х4=0, Х5=0, Х6=0, Х7=0, Х8=0,59, Х9=0, Х10=1, X11=0, Х12=1, Х13=0.
Вероятность развития рака шейки матки по предлагаемому способу составила р=0,29, что указывало на низкий риск развития рака шейки матки.
После проведения этиопатогенетической терапии произведена лазеровапоризация патологически измененных участков шейки матки. Обследование через 6 месяцев не выявило патологических изменений.
Пример 2.
Больная Н., 33 лет, обратилась с жалобами на обильные слизистые выделения из половых путей. При обследовании выявлены следующие факторы риска: разрыв шейки матки 1 ст. после родов, два аборта, криодеструкция по поводу эрозии шейки матки в анамнезе, отягощенная онкологическая наследственность, ВПЧ высокого риска в клинически значимой концентрации. Произведена биопсия шейки матки, выскабливание цервикального канала: гистоанализ - цервикальная эктопия, хр.цервицит. Методом МЧ-ПЦР выявлено метилирование генов MLH1, HICl, RASSF1A.
Таким образом: Х=1, Х2=1, Х3=0, Х4=0, Х5=1, Х6=1, Х7=0, Х8=0,65, Х9=0, Х10=1, X11=1, Х12=0, Х13=1.
Расчетное р=0,5, что указывало на умеренный риск развития рака шейки матки.
После проведения противовоспалительной и противовирусной терапии пациентке была проведена радиоволновая деструкция шейки матки. Повторное обследование через 6 мес. не выявило патологических изменений.
Пример 3.
Больная В., 36 лет, обратилась с жалобами на обильные слизистые выделения из половых путей, периодически «контактные» кровотечения. При обследовании выявлены факторы риска: разрыв шейки матки 1 ст. после родов, 3 аборта, лазеродеструкция по поводу дисплазии легкой степени, ВПЧ высокого риска, хламидиоз, уреаплазмоз. После проведения этиопатогенетической терапии пациентке произведено выскабливание цервикального канала, биопсия шейки матки. Морфологически обнаружены признаки CIN II. Методом МЧ-ПЦР выявлено метилирование генов N33, HICl, RASSF1, MLH1.
Таким образом: Х1=3, Х2=1, Х3=0, X4=1, X5=1, X6=0, X7=0, X8=0,77, Х9=1, Х10=0, X11=1, Х12=1, Х13=0.
Получили р=0,8, что указывало на высокую вероятность развития рака шейки матки. Пациентке назначено этиопатогенетическое лечение, предложена радиоволновая конизация шейки матки. Пациентка отказалась от предложенного лечения. Повторное обследование через 6 мес. выявило аденокарциному шейки матки.
Способ изобретения повышает чувствительность и прогностическую значимость прогнозирования риска развития рака шейки матки.