Депрессия макрофагов и изменение матриксных металлопротеиназ и их тканевого ингибитора при развитии и метастазировании аденокарциномы легких Льюис

чении опухолевой инвазии и метастазирования. Кроме способности к процессам деградации компонентов межклеточного матрикса, отмечено участие ММП-9 в аутокринном типе регуляции апоптоза и клеточной пролиферации.

Цель исследования. Оценить роль матрикс -ной металлопротеиназы-9 (ММП-9) в развитии меланомы кожи и определить возможность использования данного фермента в качестве патогенетической мишени при меланоме кожи.

Материал и методы. Было проведено исследование биоптатов кожи 102 пациентов с меланоцитарными новообразованиями кожи. Образцы кожи фиксировали в 10 % нейтральном забуференном формалине, срезы подвергали им-муногистохимическому окрашиванию по стандартной методике с моноклональными антителами к ММР-9 (АЬсат, разведение 1:250). Клетки меланомы кожи культивировали в среде RPMI в СО2-инкубаторе с 5 % содержанием СО2. По достижении концентрации 1,5*105 клеток мл-1 в клетки осуществлялась трансфекция интерферирующих РНК (иРНК) с помощью Lipofectamine 2000 (1отШ^еп) и РНК. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток осуществлялось с использованием моноклональных антител к ММР-9 (АЬсат, разведение 1:250), к PCNA (разведение 1:400). В отдельной серии экспериментов использовались скрамблированные последовательности РНК. В дальнейшем была создана экспериментальная модель меланомы кожи на мышах, линии С57 В16. Животные были разделены на 2 группы (контрольную и опытную) случайным образом. Трансплантация культуры опухолевых клеток меланомы В16 производилась путём подкожного введения 0,5 мл взвеси опухолевой

ткани в растворе Хенкса (1:10). На 10-е сут после трансплантации опухоли животным опытной группы было начато введение Inhibitor MMP-9 I (Calbiochem) в концентрации 5nM. Животные контрольной группы оставались без лечения. Животные находились в эксперименте до естественной гибели, после чего производилась оценка выживаемости животных-опухоленосителей, производился расчёт торможения роста опухоли (ТРО) и увеличения продолжительности жизни животных (УПЖ).

Результаты. При оценке данных иммуноги-стохимического исследования было выявлено 3-кратное увеличение уровня ММП-9 в клетках меланомы кожи по сравнению с контролем. При оценке уровня экспрессии ММП-9 в клетках культуры меланомы иммуноцитохимический (ИЦХ) индекс в контроле составил 244,25. На культуре клеток меланомы было произведено селективное ингибирование ММП-9, таким образом, показатель ИЦХ-индекс снизился до 100, оставаясь при этом на уровне 237,7 в клетках, инкубированных со скрамблированными РНК. Ингибирование ММП-9 вызывало снижение уровня клеточной пролиферации в 3 раза. При оценке выживаемости животных средняя продолжительность жизни животных (СПЖ) опытной группы увеличилась в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой, а показатель УПЖ составил 37 %. Таким образом, ингибитор ММП-9 оказывал биологически значимый эффект на продолжительность жизни животных-опухоленосителей.

Выводы. Селективное воздействие на активность матриксной металлопротеиназы-9 может быть использовано для формирования новых терапевтических стратегий при меланоме кожи.

ДЕПРЕССИЯ МАКРОФАГОВ И ИЭМЕНЕНИЕ МАТРИКСНЫХ

металлопротеиназ и их тканевого ингибитора при развитии и метастазировании аденокарциномы

ЛЕГКИХ ЛЬЮИС

Т.В. АЛЕКСЕЕНКО, С.Я. жАНАЕВА, Т.А. КОРОЛЕНКО

НИИ физиологии СО РАМН, г. Новосибирск

Актуальность. Известно, что матриксные деградацию основных компонентов внеклеточ-

металлопротеиназы (ММР), осуществляющие ного матрикса, играют важную роль в развитии

и метастазировании опухолей. Показано, что в опухолях с высоким инвазивным и метастатическим потенциалом повышены активность и концентрация ММР и нередко нарушен баланс между содержанием протеаз и их эндогенных ингибиторов (TIMP-1). Повышение концентрации и активности ММП отмечают как в опухолевых клетках, так и в макрофагах, инфильтрирующих ткань опухоли, роль которых в опухолевой прогрессии и метастазировании широко обсуждается в литературе. Показана важная самостоятельная роль эндогенного ингибитора ММР - TIMP-1 в регуляции роста и дифференцировке опухолевых клеток, обладающего антиангиогенным и антиапоптотическим эффектом.

Целью исследования было изучение влияния депрессии макрофагов хлористым гадолинием (ХГ) на рост и метастазирование опухоли аденокарциномы легких Льюис (АЛЛ) в легкие мышей C57B1/6 в сопоставлении с его влиянием на концентрацию ММР2 и TIMP-1 в сыворотке крови мышей с АЛЛ.

Материал и методы. Клетки опухоли АЛЛ вводили в мышцу бедра мышам С57В1/6 в количестве 2-5^106 на мышь. ХГ вводили в латеральную хвостовую вену в дозах 14 и 28 мг/кг на 3 и 8-е сутки после перевивки опухоли, соответственно до и после инициации метастазирования. Животных декапитировали на 20-е сут после перевивки опухоли. Во 2-й серии экспериментов ХГ вводили в дозе 14 мг/кг на 10-е сут после перевивки опухоли, а декапитацию проводили на 11, 13, 17-е сут. В сыворотке крови определяли концентрацию ММР2 и TIMP-1 (ELISA Kit, Ray

Biotech, США). Содержание ХГ в тканях печени, опухоли и легких мышей исследовали методом атомно-эмиссионной спектрометрии (Л-70, Франция, ОАО «Катализатор», Новосибирск).

Результаты. Показано, что введение ХГ в дозах 14 или 28 мг/кг как на ранних, так и на более поздних сроках развития АЛЛ тормозит рост опухоли в среднем на 15 % и снижает количество метастазов в легких мышей в 2-3 раза по сравнению с контрольной группой мышей с АЛЛ. Исследование концентрации ММП2 и TIMP-1 в сыворотке крови мышей с АЛЛ показало, что развитие опухоли сопровождается повышением концентрации ММР2 на ранних сроках развития опухоли (13-е сут) и TIMP-1 в течение всего наблюдаемого периода (13-17 сут). Введение ХГ приводило к снижению концентрации ММР2 (на 3-и и 7-е сут после введения препарата), а к 10-м сут показатели концентрации приближались к нелеченной группе. При введении ХГ отмечено повышение содержания TIMP-1 в сыворотке крови мышей с АЛЛ по сравнению с интактными животными, но при этом значения были ниже, чем у нелечен-ных мышей с АЛЛ. Наблюдаемые изменения содержания ММП2 в сыворотке крови, вероятно, связаны с влиянием ХГ на макрофаги печени мышей с АЛЛ. Исследование распределения ХГ в печени, опухоли и легких у мышей с АЛЛ показало, что гадолиний накапливается главным образом в печени мышей с АЛЛ, в то время как в других органах его концентрация незначительна - в опухоли и в легких соответственно в 15 и 25 раз меньше по сравнению с печенью.

заболеваемость раком предстательной железы

НАСЕЛЕНИЯ ПРИМОРСКОГО КРАЯ

О.А. АНАНИНА 1, В.Э. РОзНЕР 2

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1,

Городская больница № 1,

Актуальность. Рак предстательной железы (РПЖ) занимает 1-2-е место по частоте встречаемости среди всех новообразований у мужчин в развитых странах Европы и Северной Америки. В России в структуре онкозаболеваемости мужского населения эта опухоль занимает 4-ое

'. Комсомольск-на-Амуре2

место - 7,7 % и, как в большинстве стран мира, характеризуется высоким темпом роста.

Цель исследования. Изучить распространенность заболеваемости РПЖ в Приморском крае.

Материал и методы. За период 20032007 гг. изучена заболеваемость РПЖ (С61),