Рекомендации по практической диагностике и оздоровлению стад крупного рогатого скота от лейкоза

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ И ОЗДОРОВЛЕНИЮ

СТАД КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ОТ ЛЕЙКОЗА

RECOMMENDATIONS ABOUT PRACTICAL DIAGNOSTICS AND _IMPROVEMENT OF HERDS FROM BOVINE LEUKOSIS_

УДК619:616-006.446

О.В. Иванов, О.Ю. Иванова

Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.К. Беляева, Ивановская областная ветеринарная лаборатория

O. Ivanov, O. Ivanova

Ivanovo State Agriculture Academy, Ivanovo region veterinary laboratory

Ключевые слова: лейкоз крупного рогатого скота, РИД, ИФА, ПЦР, вирус лейкоза крупного рогатого скота, ложноположительный результат, ложноотрицательный результат

Key words: bovine leukosis, AGID, IFA, PCR, bovine leukemia virus (BLV), false-positive result,

false-negative result

Аннотация

Даны рекомендации по применению РИД, ИФА, ПЦР при оздоровлении стад крупного рогатого скота от лейкоза в конкретных условиях производства.

Summary

Recommendations on the use of AGID, IFA, PCR in the recovery of the cattle herds from leukosis in specific conditions of production.

Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота остается в нашей стране стабильно неблагополучной многие десятилетия. В настоящее время удельный вес лейкоза среди основных заразных болезней крупного рогатого скота составляет 58,2% (С.А.Шейн, 2013). Одна из причин этой ситуации - качество серологической диагностики и особенности ее применения в практических условиях.

Основой обеспечения благополучия хозяйства по лейкозу служат:

1. Своевременная и надежная диагностика инфекции; четкое знание эпизоотической ситуации в своем стаде и в хозяйствах-поставщиках скота для воспроизводства, включая поставку спермы для искусственного осеменения коров.

2. Обеспечение четкого племенного учета и нумерации (мечения) всех телок и коров, ответственной

племпродажи и приобретения животных, отказ от ведомственных амбиций для достижения общей цели - благополучия хозяйств по лейкозу. 3. Обеспечение асептики и антисептики при массовых обработках животных. Проведение тщательной дезинфекции животноводческих помещений и оборудования после каждого исследования животных. Из благополучных по лейкозу хозяйств (отделений, ферм) животные реализуются без ограничений при условии получения отрицательного результата серологического исследования (РИД, ИФА), проведенного за 30 дней до вывода из хозяйства. Вновь поступивших животных во время профилактического ка-рантинирования необходимо исследовать на лейкоз серологическим методом дважды, в начале и в конце срока изоляции. При использовании метода РИД срок карантинирования - 45-60 дней, при исследовании методом ИФА - 30 дней. В случае получения положительного результата ставят в известность госветслуж-бу и поставщика. Серопозитивных животных рекомендуется возвратить хозяйству-поставщику или сдать на мясоперерабатывающее предприятие с компенсацией покупателю возможных затрат. Остальных завезенных животных дополнительно исследуют серологическим методом до получения двух отрицательных результа-

тов. Импортное поголовье размещать только на благополучных по лейкозу фермах и содержать изолированно в течение 12 месяцев.

Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования -реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД) и метод иммуноферментного анализа (ИФА).

Во избежание ложноотрицательных и ложноположи-тельных результатов исследования рекомендуется:

а) обеспечить благополучие животных по другим инфекционным и инвазионным болезням;

б) кровь у стельных животных брать за 30 суток до отела или через 30 суток после него;

в) до взятия крови проводить диагностические исследования на паразитарные болезни и, при необходимости дегельминтизации, исследование методом ИФА проводить через 30 дней, а методом РИД - через 60 дней после обработки;

г) кровь для исследования брать до введения животным вакцин, аллергенов или через 60 дней после;

д) гематологическому исследованию подвергать животных, начиная с 18-месячного возраста, в сыворотке крови которых серологическим методом (РИД, ИФА) обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.

Рекомендованные сроки серологических и гематологических исследований в благополучных хозяйствах:

• осенью, за две недели до постановки скота на стойловое содержание, животных обрабатывают против эн-до- и эктопаразитов, через 6-8 недель проводят серологические и, при необходимости, гематологические исследования, туберкулинизацию и вакцинации, согласно плану противоэпизоотических мероприятий;

• весной, до выгона животных на пастбища, проводят диагностические исследования на паразитарные болезни; если результат отрицательный, проводят серологические и гематологические исследования на лейкоз; если есть необходимость, обрабатывают животных, через 6-8 недель исследуют на лейкоз и приступают к вакцинации, согласно плану весенних обработок.

Согласно действующим «Правилам по профилактике

и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» (1999 г.), неблагополучным по лейкозу считается хозяйство (ферма, двор), в котором у животных положительный серологический диагноз (РИД+; ИФА+) подтвержден гематологическим (гем+) или патоморфологическим исследованием. Но, учитывая, что животное, зараженное ВЛКРС, независимо от развившейся стадии является источником возбудителя инфекции и представляет опасность для здорового крупного рогатого скота (Гу-люкин М.И. и др., 2008), рекомендуется при появлении в стаде вирусоносителей (РИД+; ИФА+; ПЦР+), без подтверждения их статуса больных лейкозом, считать стадо неблагополучным по лейкозу и проводить весь комплекс вынужденных противолейкозных мероприятий.

Учитывая собственный многолетний опыт борьбы с лейкозом крупного рогатого скота и опыт ведущих ученых РФ (академика М.И. Гулюкина (2002, 2008), вологодских ученых А.П. Горбунова (2004) и др., нижегородских ученых НИВИНЗ РФ Ю.П. Смирнова, П.Н. Си-сягина, Р.Е. Кима (2006) и многих других), а также зарубежных коллег, мы рекомендуем следующий комплекс оздоровительных мероприятий, дополняющих действующие «Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» (1999).

При оздоровлении стада от лейкоза необходимо:

1. Четкая нумерация животных и соответствующих им проб крови.

2. Для исключения ложных реакций необходимо избавлять животное от сопутствующих лейкозу незаразных и заразных (паразитарные, инфекционные, грибковые) заболеваний. Если в короткий промежуток времени этого сделать не удается, то исследования проводить более чувствительными методами - ИФА или ПЦР.

3. Серологическое исследование коров и нетелей следует проводить как можно быстрее (в течение 2-3 дней).

При массовом взятии крови в помощь ветеринарным специалистам необходимо привлекать зоотехников (для читки инвентарных номеров и оформления первичной описи животных).

4. Выявленных в РИД, ИФА сероположительных и, на более поздних стадиях, гематологически положительных животных необходимо таврить буквой «Л» и соответственно «Л+» или метить другим способом (ошейник, бирка, нанесение краски и т.д.), изолировать в отдельную группу, ферму, двор. Одновременно необходимо вносить пометки в журналы перестановки животных и учета вирусоносителей и больных (номер, пол, возраст, откуда и куда переместили животное, дата).

5. Во избежание неоправданных затрат не проводить повторных (при условии правильно организованного первичного учета) серологических исследований се-ропозитивных животных (РИД+, ИФА+). Самоизлечения не бывает, а носительство ВЛКРС и специфических антител пожизненное.

6. Кратность и начало серологических исследований. Первое исследование телят рекомендуем проводить следующим образом:

• при использовании метода РИД исследовать сыворотки крови дважды, с интервалом 45-60 дней, начиная с 4-5-месячного возраста (при получении второго положительного результата телят изолировать и направлять на откорм);

• при использовании метода ИФА исследовать парные сыворотки крови, взятые с интервалом 2-3 недели у 4-месячных телят. При выраженном приросте антител (>15 Еи) или одинаково высоком их содержании в двух образцах можно с высокой степенью достоверности констатировать инфицированность теленка ВЛКРС (О.В. Иванов и др., 2008, 2009).

Для более ранней диагностики и снижения риска перезаражения телят при совместном содержании до срока первого исследования на лейкоз рекомендуем исследовать преколостральную сыворотку новорожденных телят, рожденных от коров-носителей ВЛКРС (РИД+; ИФА+). До первой выпойки молозива у теленка исследовать сыворотку в ИФА (при невозможности - исследовать в РИД). При получении положительного результата теленка изолировать и направить на откорм.

Кратность серологических исследований в группе се-ронегативных животных в стаде должна составлять для РИД - 45-60 дней, для ИФА - 21-30 дней, до получения двух подряд отрицательных результатов по всему стаду. Последнее исследование проводить согласно «Правилам по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» (1999), через 3 месяца. При получении отрицательного результата стадо можно считать оздоровленным.

7. Гематологические исследования стабилизированной трилоном Б крови взрослых серопозитивных животных необходимо проводить в первые 4-10 часов после взятия крови при условии ее хранения при температуре +4-+8оС. Исследования проводить каждые 6 месяцев. Для чистоты и специфичности результатов исследования кровь брать у агельминтных, свободных от хронических инфекционных и незаразных болезней животных. При выявлении по лейкозному ключу подозрительных по заболеванию животных исследование повторить через 3 месяца.

Обязательным условием правильного гематологического исследования является указание в сопроводительном документе точного возраста животного и его индивидуального номера, соответствующего номеру пробы.

8. При наличии экономической возможности для разделения стада на инфицированных ВЛКРС и здоровых животных возможно однократное исследование присланных проб от всех животных стада, начиная с 15-дневного возраста в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Разрыв механизма передачи ВЛКРС

При отсутствии в настоящее время надежных средств терапии и профилактики лейкоза оздоровление неблагополучного стада может быть достигнуто путем быстрого и радикального устранения источника возбудителя инфекции (больного и зараженного ВЛКРС животного) и незамедлительного разрыва всех возможных механизмов передачи вируса лейкоза восприимчивым животным (О.В. Иванов и др., 2014).

Основной путь передачи возбудителя связан с антропогенным (человеческим), а чаще с ятрогенным (зооветеринарное вмешательство) факторами, т.е. согласуется со здравым смыслом и является управляемым процессом. Проанализировав ситуацию в хозяйстве, можно быстро устранить эти пути и прекратить распространение инфекции.

Возможные пути решения: • ветеринарным врачам и зооинженерам при гематологических манипуляциях с животными использовать только стерильные инструменты (особенно в группах с неопределенным статусом, таких как телята до 6-месячного возраста и серонегативные животные). При этом использовать одноразовые шприцы, закрытые системы взятия крови, одноразовые перчатки при ректальном исследовании, способы бескровного ме-чения животных. Исключить возможность передачи вируса при грубой фиксации за носовую перегородку. Стерилизовать (прокаливать, обрабатывать дезин-фектантами - 3-5%-ный раствор фенола, 2%-ный рас-

твор едкого натра и т.д.) инструменты после расчистки копытного рога каждого животного. Использовать разовые инструменты при искусственном осеменении коров и нетелей. Грамотно использовать сыворотку крови реконвалесцентов, молозиво, сыворотку молозива для лечебных целей телятам;

• обязать доярок при раздое первотелок, ручном сдаивании молока при маститах обязательно дезинфицировать руки после каждого животного (2-3%-ный раствор фенола, 25-40%-ный раствор спирта); закрепить индивидуальные доильные аппараты за группами здоровых животных и вирусоносителей;

• после каждой массовой кровавой манипуляции с животными (туберкулинизация, взятие крови, вакцинация и т.д.) проводить дезинфекцию скотомест и кормовых проходов;

• активно и регулярно заниматься дезинфекцией, дезинсекцией и дератизацией на всей территории хозяйства одновременно, выдерживая необходимый порядок и продолжительность обработок.

Повышение эффективности серологического контроля

Основным условием более эффективного и ускоренного оздоровления стада от лейкоза является разделение его на серопозитивных (РИД+; ИФА+; ПЦР+) и серонегативных (РИД-; ИФА-; ПЦР-) животных. И в этом случае все зависит от качества проведения лабораторных исследований. Но эффективность серологического контроля во многом зависит от работы зоовет-специалистов хозяйства, провоцирующих появление ложноположительных и ложноотрицательных реакций. Качество серологических и гематологических исследований зависит от благополучия стада по другим ассоциативным инфекционным, а также паразитарным болезням. Необходимо:

• организовать профилактические и лечебные мероприятия так, чтобы они не влияли на качество серодиагностики (вакцинации, серотерапия, туберкулинизация, дегельминтизация);

• профилактировать развитие иммунодефицитов -устранять причину вторичных иммунодефицитов, применять средства, стимулирующие иммунную систему организма (Т- и В-активины, витамины А, С, В12);

• постоянно проводить биохимические исследования крови животных, восполнять дефициты микро- и макроэлементов, витаминов. Контролировать кормовые рационы по питательным веществам, а также по наличию канцерогенных веществ (нитратов, нитритов, тяжелых металлов, пестицидов) - провокаторов развития лейкоза.

В целом, проводя мероприятия в группе серонега-тивных животных, необходимо быть крайне осторожными при массовых обработках животных, считать каждое животное скрытым потенциальным источником возбудителя инфекции, особенно после однократно проведенного серологического исследования.

Уменьшение риска вертикального пути передачи ВЛКРС и распространения инфекции среди молодняка

Учитывая то обстоятельство, что уровень внутриутробного заражения может достигать 30%, следует новорожденных телят от серопозитивных коров считать потенциальной угрозой заражения животных. В связи с этим рекомендуем:

• при невысоком и среднем уровне инфицированности коров и нетелей,телят от серопозитивных матерей изолировать и направлять на откорм;

• для раннего определения инфицированности телят ВЛКРС первое исследование проводить сразу после рождения теленка, получив сыворотку крови до выпойки молозива, методом ИФА. Если теленку выпаивали молозиво от здоровой коровы, то первый серологический контроль (ИФА или РИД) провести до перевода теленка на групповое содержание (возраст -15-20-дневки). При использовании ПЦР телят от серо-позитивных коров исследуют в 15-дневном возрасте. Всех серопозитивных животных изолируют и отправляют на откорм;

• телят, рожденных от гемположительных (больных) матерей к воспроизводству не допускают, отправляют на откорм. Осеменение больных коров запрещено (больных животных сдать на убой немедленно);

• молозиво, молоко от серопозитивных коров-матерей, больных маститом, неблагополучного по лейкозу стада телятам не скармливать, его необходимо уничтожать. Врачам заниматься профилактикой и лечением маститов у коров;

• телят, рожденных от серопозитивных коров, с полным задержанием последа с высокой степенью достоверности можно считать носителями ВЛКРС; их необходимо изолировать и отправлять на откорм. Серопозитивных коров, страдающих акушерскими заболеваниями, выбраковывать в первую очередь, не осеменять;

• молоко от серопозитивных коров-матерей, сборное молоко с неблагополучной фермы перед скармливанием пастеризовать или заквашивать (при рН 4,75 вирус лейкоза погибает через 2 часа);

• отделение на фермах не должно быть общим для серо-негативных и серопозитивных коров. На первом этапе оно будет использоваться для отела тех животных, которых больше;

• при высоком уровне вирусоносительства в стаде (> 30%) и невозможности замены серопозитивных телок их можно использовать первые два года для воспроизводства стада (при отрицательных гематологических исследованиях каждые 6 месяцев и отсутствии клинических признаков лейкоза - осмотр ежемесячно);

• запретить использовать серопозитивных быков-производителей, а также их сперму для осеменения коров и телок;

• в оздоравливаемых хозяйствах осеменение коров и телок проводить только искусственно, естественную случку запретить;

• запрещается использовать молоко от больных лейкозом (по гематологическим показателям или клиническим признакам) коров в пищу людям и скармливать животным. Такое молоко обеззараживают путем добавления формалина (50 г на литр), сухой хлорной извести (1 кг на 20 литров) и утилизируют.

Заключение

Одним из главных сдерживающих факторов, препятствующих повсеместной ликвидации лейкоза крупного рогатого скота, является недостаточная информированность населения о негативной роли вируса лейкоза на организм коров, влекущая за собой значительные экономические потери, связанные с недополучением молока, приплода, качественной мясной продукции.

Вторым по значимости фактором, сдерживающим полномасштабность и повсеместность оздоровительных мероприятий при лейкозе, является позиция государства: нет материальной заинтересованности неблагополучных по лейкозу хозяйств в оздоровлении (компенсация за сдачу инфицированных и больных животных, повышение закупочных цен на молоко и молочную продукцию из хозяйств, благополучных по инфекционным и инвазионным заболеваниям, стимулирование зооветспециалистов при проведении оздоровительных мероприятий, материальные компенсации дояркам и другим работникам ферм за временные потери, связанные с преждевременным убоем инфицированных высокопродуктивных коров и их заменой здоровыми нетелями и первотелками). Для решения проблемы лейкоза крупного рогатого скота нужна единая Государственная программа по ликвидации лейкоза и его профилактике в дальнейшем, в которой будет заложено поэтапное осуществление программ по оздоровлению отдельных регионов с привлечением федеральных средств для ее проведения.

Для оздоровленных хозяйств необходима действенная система страхования животных от инфицирования ВЛКРС и заболевания лейкозом. Для повышения эффективности диагностических исследований необходи-

мо в ближайшее время обеспечить ветеринарные лаборатории аппаратами и диагностикумами для проведения серологического контроля методом ИФА (иммуно-ферментный анализ), а, в обозримом будущем, возможность использования метода прямого обнаружения ВЛКРС - ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Литература

1. Горбунов А.П. Лейкоз крупного рогатого скота в Вологодской области (эпизоотология, диагностика, меры борьбы) / А.П.Горбунов, А.П.Кузнецов. - Вологда-Молочное: ИЦ ВГМХА, 2004. - 70 с.

2. Гулюкин М.И. Разработка эффективности мероприятий против лейкоза круп. рог. скота / М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, Н.В. Замараева и др. // Ветеринария. - 2002. - №12. - С. 3-8.

3. Гулюкин М.И. Особенности инфекционного процесса, индуцированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, А.Ф. Валихов, В.М. Нахмансон, Л.А. Иванова и др. // Ветеринарный Консультант. - 2008. - №19. - С. 7-9.

4. Иванов О.В. Возрастная динамика содержания антител к вирусу лейкоза у телят, рожденных от се-ропозитивных коров / О.В. Иванов, О.Ю. Иванова, В.П. Федотов, М.В. Баландина, О.А. Верховский, Ю.Н. Федоров // Сельскохозяйственная биология. - 2008. - №6. - С. 87-90.

5. Иванов О.В. Рекомендации по диагностике, профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота в ЦФО РФ /О.В. Иванов, В.П. Федотов, О.Ю. Иванова//Иваново. - 2013. - 52 с.

6. Иванов О.В., Иванова О.Ю. Качество серологической диагностики - гарантия оздоровления стада от лейкоза крупного рогатого скота / О.В. Иванов, О.Ю. Иванова // Farm Animals. - 2014. - №3. -С. 26-30.

7. Иванов О.В. Эффективность серологических методов исследования при лейкозе круп. рог. скота / О.В. Иванов, О.Ю. Иванова, В.П. Федотов//Ветеринария. - 2008. - №3. - С. 6-8.

8. Иванов О.В. Влияние вакцинации на иммунологическую реактивность и эффективность серологической диагностики лейкоза у телят / О.В. Иванов, А.Е. Верховская, О.Ю. Иванова, Ю.Н. Федоров // Ветеринарный врач. - 2009. -№1. - С. 19-23.

9. Смирнов Ю.П. Методические рекомендации по методам и средствам диагностики, профилактики и борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / Ю.П. Смирнов, П.Н. Сисягин, Р.Е. Ким // Ветеринарный консультант. - 2006. - №21. - С. 15-17.

10. Шейн С.А. Вопросы угрозы распространения болезней животных и птицы на территории Российской Федерации / С.А. Шейн // Farms Animals. -2013. - №3-4. - С.28-37.