Разработка технологии детекции мутаций генов cdkn2a/arf, FLT3, Kit, NPM1, NRAS, TET2, TP53, WT1 при острых миелоидных лейкозах

РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 4, 2013

Заключение. Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что число AgNORs в опухолевых клетках было взаимосвязано с рядом важных прогностических клинико-анатомических факторов ПКР и поэтому данный параметр может быть использован в качестве дополнительного фактора прогноза. Увеличение количества AgNORs в клетках опухоли можно рассматривать в качестве критерия вероятного возникновения метастазов опухоли. Выявлена взаимосвязь экспрессии AgNORs c 5-летней послеоперационной выживаемостью больных.

А.К. Бурцев, Е.А. Степанов, Е.Л. Мальчугина, С.А. Агафонкин

ПРИМЕНЕНИЕ МАММОСЦИНТИГРАФИИ ПО МЕТОДУ BSGI В ДИАГНОСТИКЕ НОВООБРАЗОВАНИЙ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

БУ Чувашской Республики «Республиканский клинический онкологический диспансер» Минздравсоцразвития Чувашии, г. Чебоксары, Чувашская Республика, Россия

В июне 2012 г. в БУ «РКОД» введена в эксплуатацию портативная мобильная гамма-камера Dilon 6800 для проведения сцинтиграфии молочных желез по методу BSGI (Breast Specific Gamma Imaging — специализированная гамма-визуализация для маммологии). Сцинтиграфия молочных желез проводилась с применением компактного детектора размером 15*20*10 см и коллиматором LEHR (low energy high resolution - низкой энергии высокого разрешения). Принципиальным отличием от традиционной маммосцинтиграфии является возможность непосредственного прилегания детектора к молочной железе, что обеспечивает быструю и точную визуализацию различных патологических изменений. В работе использовались укладки в прямой и боковой проекциях, аналогичные применяемым при классической рентгеновской маммографии. У женщин с молочными железами большого объема применялась тройная проекция - сначала сканировались наружные отделы каждой железы по отдельности, а затем синхронно медиальные отделы. Для проведения данного обследования применялся радиофармпрепарат 99мТс-МИБИ с активностью от 370 до 700 МБк. Затраты времени на выполнение исследования в одной проекции составляли от 7 до 10 мин.

Нами проведены 52 исследования 51 женщине в возрасте от 37 до 83 лет с непальпируемыми новообразованиями молочной железы, обнаруженными при УЗИ и/ или маммографии. Исследования проводились с 3-го по 12-й день менструального цикла либо в период менопаузы.

Результаты исследований по изменению накопления радиофармпрепарата распределены по 5 основным группам, соотнесенных с 5 категориями международной классификации Bi-rads. Наиболее оптимальным, на наш взгляд, является следующее деление на группы: 1-я группа (Bi-rads 1) — равномерное, диффузное, слабо интенсивное накопление радиофармпрепарата; 2-я группа (Bi-rads 2) — симметричное, неравномерное, слабо и умеренноинтенсивное накопление, а также участки ги-пофиксации радиофармпрепарата; 3-я группа (Bi-rads

3) — неопределенное накопление, как правило, асимметричное, неравномерное, умеренно и высокоинтенсивное; 4-я группа (Bi-rads 4) — очаговое накопление радиофармпрепарата низкой или умеренной интенсивности; 5-я группа (Bi-rads 5) — очаговое накопление радиофармпрепарата высокой или крайне высокой интенсивности. Минимальные размеры выявленного очага составили 5—6 мм. Категории Bi-rads 1 соответствовали изменения молочных желез у 18 (35,3%) пациенток; Bi-rads 2 — у 2 (3,9%); Bi-rads 3 - у 10 (19,6%); Bi-rads 4 - у 9 (17,6%) и Bi-rads 5 -у 12 (23,5%) больных. Определение пациенток в группу Bi-rads 1—3 позволило отказаться от оперативного лечения и оставить их под динамическим наблюдением, существенной динамики за период наблюдения (от 1 до 6 мес) не отмечено. Пациенткам с изменениями в молочных железах, соответствующим критериям Bi-rads 4—5 были выполнены секторальные резекции, при которых у 7 больных был выявлен рак молочной железы (1 пациентка из 4-й группы и 6 пациенток из 5-й группы), у 14 больных доброкачественные новообразования.

Таким образом, BSGI-маммосцинтиграфия является перспективным и высокоинформативным методом молекулярной визуализации при дооперационном обследовании пациенток с подозрением на злокачественное новообразование молочной железы. Использование в работе критериев Bi-rads способствует объективизации полученных при маммосцинтиграфии данных и определению дальнейшей тактики ведения пациенток.

А.В. Виноградов

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ДЕТЕКЦИИ МУТАЦИЙ ГЕНОВ CDKN2A/ARF, FLT3, KIT, NPM1, NRAS, TET2, TP53, WT1 ПРИ ОСТРЫХ МИЕЛОИДНЫХ ЛЕЙКОЗАХ

ГБОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Екатеринбург, Россия

В настоящее время активно разрабатывается генетическая прогностическая стратификация острых миелоидных лейкозов (ОМЛ). Установлено, что ОМЛ представляют собой генетически гетерогенную группу заболеваний, молекулярные механизмы онкогенеза при которых отличаются многошаговостью и варьируют в широких пределах.

Цель исследования - разработать диагностическую тест-систему для детекции мутаций генов CDKN2A/ ARF, FLT3, KIT, NPM1, NRAS, TET2, TP53, WT1 методом прямого автоматического секвенирования.

Материал и методы. Исследованы пробы периферической крови и костного мозга 119 больных ОМЛ. В исследуемой группе всем пациентам проведено ци-тогенетическое и/или молекулярно-генетическое

ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИИ

по прямой и обратной последовательностям согласно рекомендациям производителя. Сопоставление сегментов, выравнивание и сравнение последовательностей нуклеотидов и аминокислот проводили с использованием компьютерной программы MEGA, версия 3.1.

Результаты и обсуждение. Праймеры, фланкирующие участки кДНК, соответствующие кодирующим последовательностям исследуемых генов, содержащих горячие точки прогностически значимых мутаций, разработаны с использованием депонированных в GenBank нуклеотидных последовательностей (см. таблицу).

Праймеры, использованные для амплификации и секвенирования

Hазвание

Последовательность

FLT-ITD-F З' TGT TCA GAC AAG TCT CCC AAC TGC 3'

FLT-ITD-R З' CAT CTT GAG TTC TGA CAT GAG TGC C 3'

FLT-TK-F З' AAG ATC TTC TTT GCT TTG CAT ATC A 3'

FLT-TK-R З' GGA ATG CCA GGG TAA GGA TT 3'

KITl-F З' CCG AAG GAG GCA CTT ACA C 3'

KITl-R З' GCA GGC TCC AAG TAG ATT CA 3'

KIT2-F З' CAA CCA AGG CCG ACA A 3'

KIT2-R З' ACT TAG AAT CGA CCG GCA TT 3'

KITl-SF З' TCA ATG CTG CCA TAG 3'

KIT2-SF З' TGA CTC CCG CCA TCA 3'

KN-F З' GCGTCCCCTTGCCTGGAAAGATACC 3'

KN-R З' TGAGGGACCTTCCGCGGCATCTAT 3'

KN-SF З' ACAGGGTCGGAGGGGGCTCT 3'

KN-SR З' GCATCTATGCGGGCATGGTT 3'

NPMl-F З' AGGAAGCTGAAGAAAAAGCG 3'

NPMl-R З' GGACAGCCAGATATCAACTG 3'

NPMl-Sl З' GGACAAGAATCCTTCAAGAA 3'

NRAS-F З' GTT CAT GGC GGT TCC 3'

NRAS-R З' GGC GTA TTT CTC TTA CCA GT 3'

NRAS-S З' CGG CTG TGG TCC TAA ATC TG 3'

P53-F З' AGT CAG ATC CTA GCG TCG AG 3'

P53-R З' TGG CGG GAG GTA GAC TG 3'

P53-S1 З' ACA TTT TCA GAC CTA TGG AA 3'

P53-S2 З' GCG CCA TGG CCA TCT ACA AG 3'

P53-S3 З' ACC CTT TTT GGA CTT CAG GT 3'

TET-F З' AAC AAA CTG AAA ACG CAA GC 3'

TET-R З' GCC CAC GTC ATG AGA ACT AT 3'

TET-SlR З' CAG ATC CAT CGG CTG AGA 3'

TET-S2F З' CAG AAT ACC CAA TAT CCA 3'

TET-S3F З' TCC AAG GAG GCT TAC ACA 3'

WTl-F З' ACC CAG GCT GCA ATA AGA 3'

WTl-R З' AGG AGG AGT GGA GAG TCA GA 3'

WTl-S З' TAA GCT GTC CCA CTT ACA GA 3'

Частота мутаций (в том числе синонимичных замен) исследуемых генов, определяемых с использованием разработанной тест-системы, оказалась следующей: CDKN2A/ARF - 0%, FLT3 - 23,6%, KIT - 33,3%, NPMl - 1З,2%, NRAS - 11%, TET2 - 20%, TP53 - 11%, WT1 - 4,З%. Шиболее частыми типами мутаций во всех

исследуемых генах, за исключением NPM1, были одно-нуклеотидные замены. При этом наибольшая частота синонимичных, т. е. не приводящих к изменению аминокислотного остатка в кодируемом белке, замен отмечалась в кодирующих последовательностях генов FLT3 и KIT. Помимо них, в гене FLT3 со значимой частотой определялись тандемные дупликации, а в NPM1 преобладающим типом аномалий были тетрануклеотидные инсерции экзона 12. Кроме того, в 80,5% проб, обследованных на мутации экзонов 4—11 ТР53, выявлялась несинонимичная замена C215G, являющаяся полиморфным аллельным вариантом гена.

Заключение. Таким образом, разработанная тест-система позволяет эффективно определять мутации генов FLT3, KIT, NPM1, NRAS, TET2, TP53 и WT1 при ге-нотипировании ОМЛ методом прямого автоматического секвенирования.

Н.Л. Волова, Т.Р. Алексеева

КЛИНИКО-РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ ОПУХОЛЕЙ СРЕДОСТЕНИЯ

ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, г. Москва, Россия

Нейроэндокринные опухоли (НЭО) - это гетерогенная в морфологическом и биологическом отношении группа совершенно разных новообразований, развивающихся из клеток диффузной нейроэндокринной системы. Частота встречаемости НЭО средостения составляет от 2 до 5 случаев на 100 000 населения.

Целью работы является повышение эффективности диагностики нейроэндокринных опухолей средостения.

Материал и методы. Материалом для исследования послужил анализ клинико-рентгенологических данных обследования 19 больных с НЭО средостения. Диагностический алгоритм включал клиническое, лабораторное, эндоскопическое, рентгенологическое исследования, МСКТ в стандартном режиме и с внутривенным контрастированием. При морфологическом изучении опухолей проводились гистологическое, электронно-микроскопическое и иммуногистохимическое исследования.

Результаты и обсуждение. Среди 19 изученных больных мужчин было 15 (79%), женщин 4 (21%). Наибольшее число составляют пациенты в возрасте до 50 лет — 73,7%. Выявляется 2 пика заболеваемости: 1-й (31,6%) в диапазоне возрастов до 30 лет, 2-й (31,6%) - в 41—50 лет. Отмечено что, при локализации НЭО в средостении клиническая симптоматика в 52,6% наблюдений сопровождалась развитием нейроэндокрин-ных нарушений, из них в виде карциноидного синдрома в 15,8% случаев и АКТГ-эктопированного синдрома в 36,8%.

Проведено сопоставление рентгенологических признаков НЭО средостения (размер, структура, характер контуров и поверхность) с результатами ИГХ-исследований. При этом было установлено, что, несмотря на большие размеры опухолевого узла (до 11,5 см), он сохранял четкие контуры, ровную поверхность и однородную структуру - индекс пролиферативной активности < 2 (G1). В то время как независимо от размеров первичной опухо-

BS