ИЗУЧЕНИЕ КОНТАМИНАЦИИ МИКОПЛАЗМЕННЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ КУЛЬТУР КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ ИЗ КОЛЛЕКЦИИ ФБУН ГНЦ ВБ «ВЕКТОР» РОСПОТРЕБНАДЗОРА

_ВЕСТНИК ПНИПУ_

2023 Химическая технология и биотехнология № 3

DOI: 10.15593/2224-9400/2023.3.02 Научная статья

УДК 57.085.23

Н.Б. Думченко, А.О. Семенцова, Е.А. Нечаева

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Новосибирская область, р.п. Кольцово, Россия

ИЗУЧЕНИЕ КОНТАМИНАЦИИ МИКОПЛАЗМЕННЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ КУЛЬТУР КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ ИЗ КОЛЛЕКЦИИ ФБУН ГНЦ ВБ «ВЕКТОР» РОСПОТРЕБНАДЗОРА

Культуры клеток широко применяют в различных направлениях современной науки и медицинской практики. Сохранение коллекции культур клеток, строго обеспечивающее условия отсутствия перекрестной контаминации клеточных линий, является сложной задачей. Наибольшую опасность для клеточной культуры из-за их бессимптомного протекания представляют микоплазменные инфекции. Они отличаются от других микроорганизмов отсутствием клеточной мембраны, паразити-рованием на различных видах животных и растений, на поверхности или внутри клеток. Некоторые виды микоплазм потенциально патогенны для человека, in vitro конкурируют с клетками за питательные вещества, вызывают хромосомные аббе-рации, препятствуют нормальному метаболизму клеток. Микоплазменная контаминация является причиной гибели клеточных культур и потенциальным источником артефактов в цитологических и биохимических экспериментах.

Цель настоящего исследования - мониторинг состояния культур клеток насекомых, заложенных в 1982-1989 гг. на хранение в коллекцию культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

Проведено сравнительное исследование контаминации микоплазменными инфекциями культур клеток с использованием микробиологического метода контроля, в котором выполнялся посев испытуемого образца на полужидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм, а также метода индикаторной клеточной культуры, который основан на внесении испытуемого образца в клеточную культуру и последующей обработке культуры клеток специфическим флуоресцирующим красителем Hoechst-33258, и метода ПЦР, заключающегося в идентификации геномной ДНК микоплазмы с помощью праймеров.

В результате проведенной работы доказано, что культуры клеток насекомых в процессе их закладки на хранение в коллекцию и во время хранения не были конта-минированы микоплазмами и могут быть использованы в биотехнологии, биологии, медицине и ветеринарии.

Ключевые слова: культура клеток, микоплазменная инфекция, микробиологический контроль, цитохимический метод контроля, ПЦР.

N.B. Dumchenko, A.O. Sementsova, E.A. Nechaeva

State Research Centre of Virology and Biotechnology "Vector" of the Federal Service for Surveillance in Consumer Rights Protection and Human Well-being, Novosibirsk Region, Koltsovo, Russian Federation

RESEARCH OF CONTAMINATION WITH MYCOPLASMA INFECTIONS OF THE COLLECTION OF CELL CULTURES OF THE FBSI SRC VB "VECTOR" OF ROSPOTREBNADZOR

Cell cultures are widely used in various areas of modern science and medical practice. Maintaining a collection of cell cultures that strictly ensures the absence of cross-contamination of cell lines is a difficult task. Mycoplasma infections are the most dangerous for cell culture due to their asymptomatic course. They differ from other microorganisms in the absence of a cell membrane, parasitism on various species of animals and plants, on the surface or inside cells. Some types of mycoplasmas are potentially pathogenic for humans; in vitro they compete with cells for nutrients, cause chromosomal aberrations, and interfere with normal cell metabolism. Mycoplasma contamination is the cause of cell culture death and a potential source of artifacts in cytological and biochemical experiments.

The purpose of this study is to monitor the state of insect cell cultures deposited in 1982-1989 for storage in the collection of cell cultures of the FBSI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor.

A comparative study of cell culture contamination with mycoplasma infections was carried out using a microbiological control method, in which the test sample was inoculated on a semi-liquid nutrient medium for the isolation and cultivation of mycoplasmas, using the indicator cell culture method, which is based on introducing the test sample into the cell culture and subsequent processing of the cell culture with a specific fluorescent dye Hoechst-33258 and the PCR method consisting in the identification of mycoplasma genomic DNA using primers.

As a result of the work carried out, it was proved that insect cell cultures were not contaminated with mycoplasmas during their storage in the collection and during storage and can be used in biotechnology, biology, medicine and veterinary medicine.

Keywords: cell culture, mycoplasma infection, microbiological control, cytochemical control method, PCR.

Одними из самых распространенных контаминантов клеточных культур являются микоплазмы [1-3]. Некоторые виды микоплазм потенциально патогенны для человека, in vitro конкурируют с клетками за питательные вещества, вызывают хромосомные аберрации, препятствуют нормальному метаболизму клеток [4, 5]. В литературе представлены данные о выделении из клеточных линий не менее 20 видов микоплазмы, из них 95 % случаев приходится на 7 видов, наиболее часто встречающихся в клеточных культурах животных и человека: M. orale, M. hyorhinis, M. arginin, M. Fermentans, M. hominis, M. sali-varium, Acholeplasma laidlawii [6, 7]. Ранее сообщалось, что уровень

контаминации в различных коллекциях культур клеток в России и в мире составляет от 45 до 96 % [8, 9]. Однако истинная распространенность микоплазменной инфекции культур клеток может быть выше, чем публикуемые данные, так как чувствительность методов, применяемых для тестирования различна [10, 11]. Нормативная документация условно делит методы выявления контаминации на прямые и дополнительные. К прямым относятся посев на селективные питательные среды и методом индикаторной клеточной культуры (цитохимический) с использованием флуоресцирующего красителя ДНК. К дополнительным - ПЦР и электронная микроскопия [12, 13].

В фармакопейной статье рекомендовано испытание посевных (исходных) клеток, мастер-банка, рабочих банков, производственных и контрольных клеточных культур проводить двумя методами: микробиологическим и методом индикаторной клеточной культуры. Испытание на присутствие микоплазм проводят при строгом соблюдении всех правил асептики в условиях, не оказывающих влияния на выявляемые микроорганизмы, исключающих контаминацию испытуемого образца, и обязательном мониторинге условий испытания [14].

Целью работы был мониторинг состояния культур клеток насекомых, заложенных в 1982-1989 гг. на хранение в коллекцию культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

Экспериментальная часть. В работе исследовали следующие перевиваемые линии клеток насекомых: Аа - линия клеток Aedes aegypti получена из измельченных кусочков нескольких личинок комара; Aedes albopictus - линия клеток получена из измельченных кусочков личинок комара Aedes albopictus; Aedes pseudoscuttellaris - линия клеток получена из гомогенат личинок комара Aedes pseudoscuttellaris; Bm - линия клеток получена из гомогената яичников куколок тутового шелкопряда Bombyx mori; Euxoa scandens (EuS) - линия клеток получена из измельченных яичников куколок совки Euxoa scandens; G (Ж) -линия клеток получена из гемолимфы колорадского жука Leptinotarsa decemlineata; НРВ-МВ - линия клеток получена из яичников взрослой совки Mamestra brassicae; IPLB-HZ-1075 - линия клеток получена из яичников взрослой совки Heliothis zea; IPLB-Ld-65z - линия клеток получена из гомогената яичников куколок непарного шелкопряда Lyman-tria dispar; SCLd-135 - линия клеток получена из яичников 6-8-дневных куколок непарного шелкопряда Lymantria dispar; Sf21 - линия клеток получена из яичников куколок совки Spodoptera frugiperda; IZD-Ld-1307 -

линия клеток получена из тканей непарного шелкопряда Lymantria dispar; IZD-Ld-1407 - линия клеток получена из тканей непарного шелкопряда Lymantria dispar; KG (КЖ) - линия клеток получена из гемолимфы колорадского жука Leptinotarsa decemlineata; MB-0503 - линия клеток получена из гомогената гусеницы 4-го возраста совка Mamestra brassicae; MB-0504 - линия клеток получена из гомогената гусеницы 4-го возраста совка Mamestra brassicae; МБ КС23-987 - линия клеток получена из гомогената тканей яичников куколок совки Mamestra bras-sicae; МБ О3С4-788 - линия клеток получена из эмбрионов совки Agrothis segetum; МБ О3С4-688 - линия клеток получена из эмбрионов совки Agrothis segetum; МБ ХС - 685 - линия клеток получена из измельченных яичников куколок совки Heliothis armigera; МС Ар-1 - линия клеток получена из гомогената яичников куколок дубового шелкопряда Antheraea pernyi; Моя-20А - линия клеток получена из гомогената личинок комара Aedes aegypti; Sf9 - линия клеток получена из яичников куколок совки Spodoptera frugiperda [15].

Криопробирку с замороженной суспензией клеток поднимали из криохранилища, оттаивали при температуре 37-40 °С. Определяли концентрацию и жизнеспособность клеток, переносили в культураль-ный флакон. Для выращивания культур клеток использовали питательную среду Грейса (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора) с добавлением 10 % сыворотки крови плодов коровы (Gibco, США). Суспензию клеток вносили в культуральные флаконы и инкубировали при температуре 28 °С в течение 3-7 сут.

Микробиологический метод испытания на присутствие мико-плазм выполнялся по следующей схеме: посев испытуемого образца на полужидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм, содержащую 0,3 % агара (среда Каган полужидкая), и последующее инкубирование посевов во влажной атмосфере при температуре 37±1 °С в течение 14 сут. Учет результатов при проведении испытаний проводили путем визуального просмотра засеянных пробирок в проходящем свете на 3, 7, 10 и 14 сут. В качестве отрицательного контроля одновременно инкубировали образцы стерильных (незасеянных) питательных сред.

Метод обнаружения микоплазм с использованием индикаторной клеточной культуры, чувствительной к микоплазмам, основан на внесении испытуемого образца в клеточную культуру и последующей обработке клеток культуры тканей специфическим флуоресцирующим

красителем Hoechst-33258 (Bisbenzimide). В стерильную чашку Петри помещали стерильное предметное стекло и вносили 20-23 мл суспензии клеточной культуры в питательной среде Грейса или ДМЕМ в концентрации не более 105 кл/мл и добавляли не более 5 % сыворотки крови плодов коровы, предварительно прошедшей контроль на стерильность и отсутствие контаминации микоплазмами. Вносили 1 мл испытуемого образца в чашку Петри и инкубировали в течение 3-5 сут при температуре 36±1 °С в атмосфере с 5,0±0,5 % СО2 до формирования 50—70 % монослоя. Образование монослоя наблюдали в световом микроскопе при увеличении ок. 10*, об. 40*. Культуральную жидкость сливали, промывали препарат фосфатным буферным раствором (рН 7,2-7,4). Помещали предметное стекло на 30-35 мин в 96%-й этиловый спирт. Спирт сливали и сушили препарат на воздухе. Окрашивали рабочим раствором красителя Hoechst-33258 (Sigma, США) в защищенном от света месте при температуре 36±1 °С в течение 30-35 мин. Краситель сливали, препарат промывали стерильной водой очищенной, подсушивали на воздухе и микроскопировали с помощью люминесцентного микроскопа [14, 16, 17].

Метод ПЦР заключался в идентификации геномной ДНК ми-коплазмы с помощью праймеров GPO1 и MGSO (ООО «Биосинтез», Россия), специфичных для выявления следующих видов микоплазм Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma alkalescens, M. arginin, M. arthri-tidis, M. bovis, M. buccale, M. canis, M. fermentans, M. gallisepticum, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. pulmonis, M. salivarium. Положительным контролем служили клетки Aedes albopictus Clone C6/36, инфицированные микоплазмой; отрицательным контролем - деио-низованная вода, маркер молекулярного веса фирмы Fermentas (США) [13].

Поскольку культуры клеток могут выступать как в виде экспериментальной модели, так и субстратом для производства лекарственных препаратов, необходимо соблюдать строжайший контроль контаминации в хранилищах культур клеток.

Результаты и обсуждение. Исследование заключалось в общем сплошном скрининге культур методом ПЦР. Было установлено, что культуры клеток Аа, Aedes albopictus, Aedes pseudoscuttellaris, Bm, Euxoa scandens (EuS), G (Ж), НРВ-МВ, IPLB-HZ-1075, IPLB-Ld-65z, SCLd-135, Sf21, IZD-Ld-1307, IZD-Ld-1407, KG (КЖ), MB-0503, MB-0504, MB КС23-987, MB ОзС4-788, MB О3С4-688, MB ХС - 685, MG Ар-1,

Mos-20A, Sf9 свободны от микоплазмы (рис. 1, 2). Образец под номером 15 является индикаторным положительным контролем, культура Aedes albopictus Clone C6/36, зараженная штаммом микоплазмы.

Рис. 1. Выявление микоплазмы методом ПЦР культур клеток: 1 - Аа; 2 - Aedes albopictus; 3 - Aedes pseudoscuttellaris; 4 - Bm; 5 - Euxoa scandens (EuS); 6 - G (Ж); 7 - НРВ-МВ; 8 - IPLB-HZ-1075; 9 - IPLB-Ld-65z; 10 - SCLd-135; 11 - Sf21; 12 - IZD-Ld-1307; 13 - IZD-Ld-1407; 14 - KG (КЖ); 15 - Aedes albopictus Clone C6/36; К+ - положительный контроль; К- - отрицательный контроль; М - маркер молекулярной массы -GeneRuler 100 bp DNA Ladder - Thermo Scientific

Рис. 2. Выявление микоплазмы методом ПЦР культур клеток: 16 - MB-0503;

17 - MB-0504; 18 - МБ КС23-987; 19 - МБ О3С4-788; 20 - МБ ХС - 685; 21 - МС Ар-1; 22 - Mos-20A; 23 - Sf9,24 - Aedes albopictus Clone C6/36; К+ - положительный контроль; К- - отрицательный контроль; М - маркер молекулярной массы - GeneRuler 100 bp DNA Ladder - Thermo Scientific

Поскольку ПЦР может давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты [18-20], для подтверждения достоверности результатов было проведено микроскопирование препаратов этих же культур клеток. В положительном контроле при микроскопии образца обнаружены микоплазмы в виде мелких гранул, скоплений ярко-зеленого свечения, расположенные вне клеток или на их поверхности (рис. 3) [16]. В остальных образцах микоплазмы не обнаружены (рис. 4).

IW "А А

Р V4 «А**

Рис. 3. Выявление микоплазм методом флуоресцентной микроскопии -культура клеток Aedes albopictus Clone C6/36 (контаминирована микоплазмами: указано стрелками). Окрашивание Hoechst 33258. Увел. ок.10*, об.40х

Рис. 4. Выявление микоплазм методом флуоресцентной микроскопии -культура клеток Aa (Aedes aegypti). Окрашивание Hoechst 33258.

Увел. ок.10*, об.40х

Для обнаружения микоплазм также применяли микробиологический метод. При посеве кондиционной среды культур клеток насекомых на специальную селективную среду колонии микоплазм не обнаружены.

В результате проведенных экспериментов было показано, что в культурах клеток Аа, Aedes albopictus, Aedes pseudoscuttellaris, Bm, Euxoa scandens (EuS), G (Ж), НРВ-МВ, IPLB-HZ-1075, IPLB-Ld-65z, SCLd-135, Sf21, IZD-Ld-1307, IZD-Ld-1407, KG (КЖ), MB-0503, MB-0504, МБ КС23-987, МБ О3С4-788, МБ О3С4-688, МБ ХС - 685, МС Ар-1, Mos-20A, Sf9, заложенных на криоконсерацию с 1982 по

1989 г., микоплазменной контаминации не обнаружено, что подтверждено тремя разными методами выявления микоплазм, и они могут быть использованы в биотехнологии, биологии, медицине и ветеринарии.

Список литературы

1. Annex 2. Recommendations to assure the quality, safety and efficacy of poliomyelitis vaccines (oral, live, attenuated). Replacement of Annex 1 of WHO Technical Report series, № 904, and Addendum to Annex 1 of WHO Technical Report series, № 910. In WHO Expert Committee on Biological Standardization, WHO Technical Report series, № 980 (63 report). WHO; 2014.

2. Полянская Г.Г., Ефремова Т.И., Эндер Н.А. Влияние микоплазменной контаминации клеточной линии лейомиосаркомы человека SK-UT-1B на кариотипическую структуру // Цитология. - 1998. - Т. 40, № 1. - С. 23-30.

3. Staphylococcus aureus extracellular vesicles carry biologically active ß-lactamase / J. Lee, E.Y. Lee, SH. Kim, D.K. Kim, K.S. Park, K.P. Kim, Y.K. Kim, T.Y. Roh, Y.S. Gho // Antimicrob. Agents Chemother. - 2013. - Vol. 57, № 6. -Р.2589-2595.

4. Langdon S.P. Cell culture contamination: an overview // Methods Mol. Med. - 2004. - Vol. 88. - P. 309-317.

5. Rottem S., Barile M. Beware of mycoplasmas // Trends. Biotechnol. -1993. - Vol. 11. - P. 143-151.

6. Uphoff C., Drexler H. Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Cultures // Curr. Protoc. Mol. Biol. 106: 28.4.1-28.4.14. doi.org/ 10.1002/0471142727.mb2804s106

7. Rottem S., Kosower N.S., Kornspan J.D. Contamination of Tissue Cultures by Mycoplasmas // Biomedical Tissue Culture / ed. Dr. Luca Ceccherini-Nelli. 2012.

8. Drexler H.G. Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention // Cytotechnology. - 2002. -Vol. 39. - P. 75-90.

9. Nikfarjam L., Farzaneh P. Prevention and Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture // Cell J. - 2012. - Vol. 13 (4). - Р. 203-212.

10. Микоплазмы / С.Н. Борхсениус, О.А. Чернова, В.М. Чернов, М.С. Вон-ский. - СПб.: Наука, 2002. - 320 c.

11. Uphoff C.C., Meyer C., Drexler H.G. Elimination of mycoplasma from leukemia-lymphoma cell lines using antibiotics // Leukemia. - 2002. - Vol. 16. -P.284-288.

12. Host Cell Responses to Persistent Mycoplasmas - Different Stages in Infection of HeLa Cells with Mycoplasma hominis / M. Hopfe, R. Deenen, D. De-grandi, K. Kohrer, B. Henrich // PLoS One. - 2013. - Vol. 8 (Suppl 1). - e54219.

13. Рибонуклеолитическая активность микоплазм / О.Н. Ильинская, Ю.В. Сокуренко, В.В. Ульянова, В.И. Вершинина, П.В. Зеленихин, А.И. Кол-

паков, Е.С. Медведева, Н.Б. Баранова, М.Н. Давыдова, А.А. Музыкантов [и др.] // Микробиология. - 2014. - Т. 83, № 3. - С. 320-327.

14. Фармакопейная статья ОФС. 1.7.2.0031.15 «Испытания на присутствие микоплазм» // Государственная Фармакопея 14. - 2022. - Т. 2. - С. 2997-3008.

15. Радаева И.Ф., Нечаева Е.А., Дроздов И.Г. Коллекция культур клеток ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». - Новосибирск, 2009. - 250 с.

16. Ryan J., Mariano J. What are Mycoplasmas? - URL: http:// www.bionique.com/files/whataremycoplasma.pdf.

17. Выявление и деконтаминация микоплазма-инфекции в перевиваемых культурах клеток человека / И.Ф. Радаева, Н.С. Куцерубова, А. О. Семен-цова, К.Э. Трифонова, М.П. Богрянцева, С.В. Усова, Е.А. Нечаева // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. -2018. - Т. 14, № 2. - С. 17-23.

18. Abd El-Hafeiz Y.G.M., Yassin M.H. Protections of Cell Culture from Mycoplasma Contamination by an Antibiotic Mixture with Emphasis on Assessment of the Effective and Safe Doses // Global Veterinaria. - 2009. - Vol. 3 (4). - P. 286-291.

19. Mollicutes contamination: a new strategy for an effective rescue of cancer cell lines / E. Mariotti, F. D'Alessio, P. Mirabelli, R. Di Noto, G. Fortunato, L. Del Vecchio // Biologicals. - 2012. - Vol. 40, № 1. - Р. 88-91.

20. Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Biologics Evaluation and Research. - N.Y., 2010.

References

1. Annex 2. Recommendations to assure the quality, safety and efficacy of poliomyelitis vaccines (oral, live, attenuated). Replacement of Annex 1 of WHO Technical Report series, № 904, and Addendum to Annex 1 of WHO Technical Report series, № 910. In WHO Expert Committee on Biological Standardization, WHO Technical Report series, № 980 (63 report). WHO; 2014.

2. Poljanskaja G.G., Efremova T.I., Jender N.A. Vlijanie mikoplazmennoj kontaminacii kletochnoj linii lejomiosarkomy cheloveka SK-UT-1B na kari-otipicheskuju strukturu [Effect of Mycoplasma Contamination of the Human Leiomyosarcoma Cell Line SK-UT-1B on the Karyotypic Structure]. Citologija. 1998. Vol. 40. No. 1. pp. 23-30.

3. Lee J., Lee E.Y., Kim SH., Kim D.K., Park K.S., Kim K.P., Kim Y.K., Roh T.Y., Gho Y.S. Staphylococcus aureus extracellular vesicles carry biologically active ß-lactamase. Antimicrob. Agents Chemother. 2013. Vol. 57. No. 6. pp. 2589-2595.

4. Langdon S.P. Cell culture contamination: an overview. Methods Mol. Med. 2004. Vol. 88. pp. 309-317.

5. Rottem S., Barile M. Beware of mycoplasmas. Trends. Biotechnol. 1993. Vol. 11. Pp. 143-151.

6. Uphoff C., Drexler H. Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Cultures Curr. Protoc. Mol. Biol. 106: 28.4.1-28.4.14. // doi.org/10.1002/ 0471142727.mb2804s106

7. Rottem S., Kosower N.S., Kornspan J.D. Contamination of Tissue Cultures by Mycoplasmas //Biomedical Tissue Culture /Ed. Dr. Luca Ceccherini-Nelli. 2012.

8. Hans G. Drexler. Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology. 2002. Vol. 39 pp.75-90.

9. Nikfarjam L, Farzaneh P. Prevention and Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture. Cell J. 2012; 13 (4): 203-212.

10. Borhsenius S.N., Chernova O.A., Chernov V.M., Vonskij M.S. «Miko-plazmy» [Mycoplasmas]. - SPb. Nauka. 2002. 320 p.

11. Uphoff CC, Meyer C and Drexler HG Elimination of mycoplasma from leukemia-lymphoma cell lines using antibiotics. Leukemia 2002. Vol. 16. pp. 284-288.

12. Hopfe M., Deenen R., Degrandi D., Kohrer K., Henrich B. Host Cell Responses to Persistent Mycoplasmas - Different Stages in Infection of HeLa Cells with Mycoplasma hominis // PLoS One. 2013. Vol. 8 (Suppl 1). e54219.

13. Il'inskaja O.N., Sokurenko Ju.V., Ul'janova V.V., Vershinina V.I., Ze-lenihin P.V., Kolpakov A.I., Medvedeva E.S., Baranova N.B., Davydova M.N., Muzykantov A.A. i dr. «Ribonykleaticheskay activnost mycoplasmy» [Ribonu-cleolytic activity of mycoplasma]// Mikrobiologija. 2014. T. 83. № 3. S. 320-327.

14. Farmakopejnaja stat'ja OFS. 1.7.2.0031.15 Ispytanija na prisutstvie mikoplazm [Ispytanija na prisutstvie mikoplazm]. Gosudarstvennaja Farmakopeja 14. 2022.Vol. 2. pp. 2997-3008.

15. Radaeva I.F., Nechaeva E.A., Drozdov I.G. Kollekcija kul'tur kletok FGUN GNC VB «Vektor» [Collection of cell cultures FSUE SRC VB "Vector" of the Rospotrebnadzor]. Novosibirsk, 2009. 250 p.

16. Ryan J, Mariano J. What are Mycoplasmas? Available from: http://www.bionique.com/files/whataremycoplasma.pdf

17. I.F. Radaeva, N.S. Kucerubova, A.O. Semencova, K.Je. Trifonova, M.P. Bogrjanceva, S.V. Usova, E.A. Nechaeva Vyjavlenie i dekontaminacija mikoplazma-infekcii v perevivaemyh kul'turah kletok cheloveka [Vyjavlenie i dekontaminacija mikoplazma-infekcii v perevivaemyh kul'turah kletok cheloveka/. Vestnik biotehnologii i fiziko-himicheskoj biologii imeni Ju.A. Ovchinnikova. 2018. Vol. 14. No. 2. pp. 17-23.

18. Y.G.M. Abd El-Hafeiz and M.H. Yassin Protections of Cell Culture from Mycoplasma Contamination by an Antibiotic Mixture with Emphasis on Assessment of the Effective and Safe Doses. Global Veterinaria. 2009. Vol. 3 (4). pp. 286-291.

19. Mariotti E., D'Alessio F., Mirabelli P., Di Noto R., Fortunate G., Del Vecchio L. Mollicutes contamination: a new strategy for an effective rescue of cancer cell lines // Biologicals. 2012. Vol. 40. No 1. pp. 88-91.

20. Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Biologics Evaluation and Research. 2010.

Об авторах

Думченко Наталья Борисовна (Кольцово, Россия) - заведующая лабораторией ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: dumchenko@vector.nsc.ru).

Семенцова Александра Олеговна (Кольцово, Россия) - научый сотрудник ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: sementsova_ao@vector.nsc.ru).

Нечаева Елена Августовна (Кольцово, Россия) - кандидат медицинских наук, заместитель генерального директора по научной и производственной работе ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: nechaeva@vector.nsc.ru).

About the authors

Natalya B. Dumchenko (Koltsovo, Russian Federation) - Head of the laboratory of FBRI SRC VB "Vector" Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: dumchenko@vector.nsc.ru).

Alexandra O. Sementsova (Koltsovo, Russian Federation) - Researcher of FBRI SRC VB "Vector" Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: sementsova_ao@vector.nsc.ru).

Elena A. Nechaeva (Koltsovo, Russian Federation) - Candidate of Medical Sciences, Deputy General Director for Scientific and Production Work of the FBRI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: nechaeva@vector.nsc.ru).

Поступила: 13.07.2023

Одобрена: 26.07.2023

Принята к публикации: 20.09.2023

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов равноценен.

Просьба ссылаться на эту статью в русскоязычных источниках следующим образом:

Думченко, Н.Б. Изучение контаминации микоплазменными инфекциями культур клеток насекомых из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора / Н.Б. Думченко, А.О. Семенцова, Е.А. Нечаева // Вестник ПНИПУ. Химическая технология и биотехнология. -2023. - № 3. - С. 19-29.

Please cite this article in English as:

Dumchenko N.B., Sementsova A.O., Nechaeva E.A. Research of contamination with mycoplasma infections of the collection of cell cultures of the FBSI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor. Bulletin of PNRPU. Chemical Technology and Biotechnology, 2023, no. 3, pp. 19-29 (In Russ).