Экспериментальная оценка состояния иммунной системы организма в условиях иммунодефицита и коррекции растительным экстрактом

уменьшение количества костных отломков во все сроки наблюдения в условиях лечения диализом КР (табл. 1): низкая лейкоцитарная инфильтрация не приводит к вторичной альтерации тканей пародонта, а активный фагоцитоз обеспечивает быструю резорбцию и элиминацию костных отломков.

Восстановление структуры тканей пародонта в условиях лечения диализом КР идет быстрее, чем при лечении диализом только сукцината, за счет более активного синтеза коллагена и его созревания (табл. 1). По-видимому, это связано с более высокой функциональной активностью фибробластов, синтезирующих коллаген, а также с действием витамина С — мощного стимулятора формирования коллагеновых волокон. В результате уже к 10 суткам наблюдения количество тканей с нормальной структурой при диализе КР увеличивается на 35,7%, а при диализе сукцината — на 27,2%.

Таким образом, при лечении пародонтита диализом композиционного раствора сукцината и витаминов де-

структивные процессы купируются рано, лейкоцитарная инфильтрация минимальна, а фагоцитарная активность нейтрофилов существенно увеличивается, воспалительный отек снижается за счет активного оттока экссудата, восстановительные процессы идут активно. Перечисленные эффекты лечения пародонтита диализом КР можно объяснить активацией энергозависимых функций клеток очага воспаления, так как в процессе лечения клетки получали субстрат окисления — сукци-нат и необходимые для окислительно-восстановительных процессов коферменты и витамины. На основании полученных результатов можно сделать заключение о существенном повышении естественной резистентности тканей пародонта при лечении пародонтита трансмембранным диализом композиционного раствора сук-цината и витаминов В1, РР и С, что позволяет наиболее полноценно восстановить структуру и функции тканей пародонта.

EXPERIMENTAL BASIS OF THE SANOGENESICAL PRINCIPLE OF PARODONTIT TREATMENT BY THE DIALYSIS OF COMPOSITE SOLUTION OF SODIUM SUCCINATE AND

VITAMINS В1, PP, C.

V.A. Kurganova, L.S. Vasiljeva, V.D. Molokov

The resume. In experiment it is established, that the transmembrane dialysis of a composite solution of sodium succinate and vitamins B1, PP, C essentially, in comparison with application only succinate, optimizes inflammatory process in parodont tissue: reduces leukocyte infiltration and destuctive tissue, activates exudate outflow from the inflammation focus, accelerates regenerative processes.

ЛИТЕРАТУРА

1. АвтандиловГ.Г. Медицинская морфометрия. — М.: Медицина, 1990. - 384 с.

2. Воложин А.И., Виноградова С.И. Патогенез экспериментального пародонтита у кроликов // Стоматология. — 1991. — № 4. — С.10-12.

3. Молоков В.Д., Тирская О.И. Лечение пародонтита ме-

тодом трансмембранного диализа // Российский стоматологический журнал. — 2002. — № 5. — С.14-16.

4. Морозова М.В. Эффективность сочетанного применения сукцината натрия и электромиостимуляции в комплексном лечении больных с переломами нижней челюсти: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Краснодар, 2000. — 19 с

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© ЛЕБЕДЕВА С.Н., ХРЕБТОВСКИЙ М.А. - 2006

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА В УСЛОВИЯХ ИММУНОДЕФИЦИТА И КОРРЕКЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫМ ЭКСТРАКТОМ

С.Н. Лебедева, М.А. Хребтовский

Резюме. Установлено, что семикомпонентный растительный экстракт, составленный по прописям тибетской медицины, обладает иммуномодулирующим действием в условиях iv vivo, восстанавливая показатели клеточного, гуморального и фагоцитарного звеньев иммунитета у животных, находящихся в состоянии иммунодефицита, вызванного иммунодепрессантом азатиоприном.

Ключевые слова. Семикомпонентный растительный экстракт, иммунодефицит, коррекция.

Проблема возникновения, развития и коррекции состояний, сопровождающихся нарушением функционирования иммунной системы организма человека и животных, является одной из важнейших проблем современности. Она определяет актуальность разработки новых средств — иммуномодуляторов, обладающих способностью восстанавливать иммунологическую реактивность организма. Среди данных средств перспективным является использование средств растительного происхождения, поскольку они обладают достаточно выраженным иммуномодулирующим действием, малой токсичностью и наличием комплекса биологически активных веществ, действующих на весь организм в целом [1,6].

Объектом данных исследований явился сухой растительный экстракт (РЭ), составленный по прописям тибетской медицины. В его состав вошли семь компонентов: корневища аира болотного (сем. Araceae), корни одуванчика (сем. Asteraceae), соцветия ромашки (сем. Asteraceae), плоды шиповника (сем. Rosaceae), плоды боярышника (сем. Rosaceae), черные листья бадана толстолистного (сем. Saxifragaceae) и трава горца птичьего (сем. Polygonaceae) в весовом соотношении 3: 3: 2: 6: 4: 1: 1.

Ранее было установлено, что данный растительный экстракт обладает выраженным гиполипидемическим действием [3,4]. В частности, выявлено снижение общего холестерина, триацилглицеридов, атерогенных классов липопротеидов в сыворотке крови при экспериментальных гиперлипидемиях, повышение антиатеро-генных липопротеидов сыворотки крови на фоне снижения свертывающего потенциала и активации противо-свертывающей системы крови. У данного средства установлены адаптогенная и антиоксидантная активности.

Целью настоящей работы явилось изучение имму-номодулирующих свойств растительного экстракта в условиях экспериментальной азатиоприновой иммуно-супрессии.

Материалы и методы

Сухой семикомпонентный растительный экстракт (РЭ) был получен в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по рациональной технологии, обеспечивающей максимальный выход действующих веществ из данного растительного сырья (разработчики

ции "трансплантат против хозяина" (РТПХ) по В. Тессе-неву [7].

Состояние гуморального иммунитета исследовали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham [9].

Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей в отношении культуры Staphylococcus aureus оценивали по методике И.С. Фрейдлин [8]. Изучение ан-тигенпрезентирующей функции перитонеальных макрофагов — по методике E.A. Jmelbayeva [10].

Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение Экспериментальные данные по состоянию клеточного иммунитета в условиях иммунодепрессии и коррекции РЭ в локальной реакции "трансплантат против

Таблица 1

Влияние азатиоприна и растительного экстракта на выраженность реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) (M±m), n = 7

Группы Доза, мг/кг Относительная масса тимуса, % от массы мыши Индекс увеличения лимфатических узлов

Интактные - 0,25 ± 0,02 2,9 ± 0,1

Азатиоприн (Аз) 50 0,13 ± 0,01*1 1,3 ± 0,1*1

Аз + РЭ 100 0,20 ± 0,02*2 1,6 ± 0,1

Аз + РЭ 300 0,23 ± 0,02*2 2,8 ± 0,1*2

Аз + РЭ 500 0,17 ± 0,02*2 1,8 ± 0,1*2

РЭ 300 0,21 ± 0,03 2,9 ± 0,1

Примечание к табл. 1-4: 1(2).

достоверность р<0,05 относительно группы

хозяина", оцениваемой по гипертрофии лимфатических узлов на модели гибридов мышей первого поколения F1, представлены в таблице 1.

Способность цитостатика азатиоприна угнетать указанную форму клеточно-опосредованной иммунной реакции проявилась в уменьшении индекса увеличения лимфоузлов по сравнению с контролем на 55% (2 группа). При коррекции РЭ в дозах 300 и 500 мг/кг на фоне описанной выше супрессии наблюдали достоверное повышение индекса увеличения лимфоузлов на 115 и 38% соответственно (4 и 5 группы); наиболее выраженный эффект отмечен при дозе 300 мг/кг (4 группа). При этом РЭ в данной дозе не оказывал влияния на клеточный иммунитет интактных животных (6 группа).

Таким образом, результаты реакции РТПХ свидетельствовали о наиболее эффективном иммуномодули-рующем действии РЭ в дозе 300 мг/кг.

Иммуномодулирующий эффект экстракта подтвердился в достоверном увеличении массы тимуса у жи-

д.м.н., проф. С.М. Николаев и к.фарм.н., с.н.с. П.Б. Лубсандоржиева).

Эксперименты проведены на 162 мышах обоего пола линии F1 (СВА х С57В1/6) и на 42 мышах самцах линии СВА массой 17-19 г (питомник РАМН "Столбовая").

Для моделирования иммунодефицита использовали цитостатик азати-оприн, который вводили животным в дозе 50 мг/кг

массы тела ежедневно, перорально в течение 5 дней.

РЭ растворяли в теплой воде и вводили животным пе-рорально в дозах 100, 300 и 500 мг/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 7 дней.

Состояние клеточного иммунитета оценивали в реак-

Таблица 2

Влияние азатиоприна и растительного экстракта на антителообразование (M±m), n = 7

Группы Доза, Относит. масса Абсолютное число Число АОК на

мг/кг селезенки, % от массы мыши АОК на селезенку 106 спленоцитов

Интактные - 0,48 ± 0,03 14212 ± 1738 89 ± 6

Азатиоприн (Аз) 50 0,29 ± 0,01*1 4746 ± 631*1 51 ± 6*1

Аз + РЭ 100 0,37 ± 0,02*2 9880 ± 726*2 66 ± 5

Аз + РЭ 300 0,44 ± 0,02*2 13873 ± 839*2 93 ± 4*2

Аз + РЭ 500 0,44 ± 0,02*2 8223 ± 1119*2 73 ± 10

РЭ 300 0,47 ± 0,03 13951 ± 1477 87 ± 9

вотных, получавших азатиоприн и экстракт в дозе 300 мг/кг (4 группа), по сравнению с массой тимуса у животных, подвергшихся иммунодепрессивному воздействию азатиоприна, в 1,8 раза (2 группа).

1

Изучение влияния препаратов на гуморальный иммунный ответ также является важным этапом при исследовании иммунотропных свойств различных соединений. Спектр указанной активности определяется характером действия данных веществ на процесс антите-лообразования, который осуществляется В-лимфоци-тами. Для иммунизации животных эритроцитами барана была выбрана доза 2х108 клеток, которая, по литературным данным, рассматривается как оптимальная антигенная нагрузка [2]. Полученные экспериментальные данные представлены в таблице 2.

Установлено, что азатиоприн в дозе 50 мг/кг снижал как абсолютное число АОК, так и число АОК на 106 спленоцитов на 67 и 43% соответственно (2 группа) по отношению к контролю (1 группа). При курсовом введении РЭ в дозах 100, 300 и 500 мг/кг на фоне имму-нодепрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК в абсолютных значениях в 2,1; 2,9 и 1,7 раза соответственно (3, 4 и 5 группы). При расчете числа АОК на 106 ядросодержащих клеток достоверное увеличение их отмечено только при дозе 300 мг/кг (в 1,8 раза). Выявлено, что при введении РЭ в дозе 300 мг/кг показатели гуморального иммунного ответа интактных животных не изменялись (6 группа). Это подтвердилось как при расчете содержания АОК на 106 спленоцитов, так и при определении их абсолютного количества.

Таким образом, введение РЭ в дозе 300 мг/кг отменяло супрессивное действие аза-тиоприна на антителогенез, что выразилось восстановлением показателей иммунного ответа на тимусзависимый корпускулярный антиген до уровня интактных (контрольных) животных.

Известно, что макрофаги участвуют не только в неспецифической защите организма от чужеродных агентов — фагоцитозе. Они также участвуют в представлении (презентации) антигенного материала лимфоцитам при инициации иммунного ответа [5]. Это обусловило целесообразность исследования влияния РЭ как на фагоцитарную активность макрофагов, так и на их антигенпрезентирующую активность.

Функциональную активность перитонеальных макрофагов мышей in vivo изучали по фагоцитозу Staphylococcus aureus, оценивая при этом как активность (процент фагоцитирующих клеток от общего числа подсчитанных клеток), так и интенсивность фагоцитоза (среднее количество Staphylococcus aureus, поглощенное одной клеткой) (табл. 3).

Таблица 3

Влияние азатиоприна и растительного экстракта на показатели фагоцитоза (M±m), n = 10

Из анализа данных таблицы 3 следует, что введение мышам азатиоприна (2 группа) вызывало снижение активности и интенсивности фагоцитоза по сравнению с интактными животными на 43 и 49%, соответственно. РЭ в исследуемых дозах 100, 300 и 500 мг/кг на фоне действия азатиоприна восстанавливал функциональную активность перитонеальных макрофагов до уровня показателей у интактных животных, что указывает на его иммунокорригирующие свойства (3, 4 и 5 группы). В данных группах активность фагоцитоза увеличивалась в 1,5; 1,8 и 1,5 раза соответственно, а интенсивность — в 1,4; 1,9 и 1,6 раза по сравнению с уровнем супрессии. Была установлена зависимость регуляции функций фагоцитоза макрофагов от дозы РЭ. Оптимальной также была доза 300 мг/кг. РЭ в дозе 300 мг/кг (6 группа) не изменял показатели фагоцитоза у интактных животных.

Экспериментальные данные по влиянию РЭ на антигенпрезентирующую функцию макрофагов представлены в таблице 4.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что азатиоприн оказывал иммуносупрессивное действие на антигенпрезентирующую активность макрофагов, выразившуюся как в снижении абсолютного числа АОК, так и количества АОК на 106 спленоцитов на 46 и 49 %

Таблица 4

Влияние азатиоприна и растительного экстракта на антигенпрезентирующую функцию макрофагов (M±m), n = 10

Группы Доза, мг/ кг Абсолютное число АОК на селезенку Число АОК на 106 спленоцитов

Интактные _ 188093 ± 10320 2139 + 215

Азатиоприн (Аз) 50 102423 + 52011 1088 +105*1

Аз + РЭ 100 163720 + 8740 1658 + 139

Аз + РЭ 300 175241 + 9560 2097 + 126

Аз + РЭ 500 125092 ± 6314 1475 ± 152

РЭ 300 194827+11520 2045+194

Группы Доза, Активность Интенсивность

мг/кг фагоцитоза, % фагоцитоза

Интактные - 68,8 ± 1,7 14,9 ± 0,3

Азатиоприн (Аз) 50 38,9 ± 1,0*1 7,6 ± 0,3*1

Аз + РЭ 100 58,4 ± 3,1*2 10,3 ± 0,6*2

Аз + РЭ 300 68,6 ± 1,7*2 14,3 + 0,4*2

Аз + РЭ 500 58,1 ± 2,1*2 12,1 ± 0,4*2

РЭ 300 66,2 ± 1,0 14,6 + 0,4

соответственно по отношению к интактной группе мышей.

На фоне действия азатиоприна РЭ в исследуемых дозах вызывал увеличение как абсолютных, так и относительных значений АОК. При этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 1,6; 1,7 и 1,2 раза, соответственно; а второй показатель — в 1,5; 1,9 и 1,4 раза, соответственно (3, 4 и 5 группы). Кроме того, РЭ в дозе 300 мг/кг (6 группа) не оказывал влияния на антигенпрезентирующую активность макрофагов интактных животных.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что изучаемый семикомпонентный РЭ обладает иммуномодулирующим действием, восстанавливая показатели клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа до уровня интактных (здоровых) животных. Его активность носит дозозависи-мый характер и в большей степени проявляется при введении дозы 300 мг/кг массы тела. РЭ не влияет на показатели интактных животных, что свидетельствует о его активности только в условиях повреждения иммуни-

тета. Также установлена важная роль активации анти-генпрезентирующей функции макрофагов в механизме иммуномодулирующего действия РЭ. Наличие у исследуемого растительного экстракта иммуномодулиру-ющей активности и ранее установленных антисклеро-

тических свойств позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения в качестве средства для профилактики атеросклероза и вторичных иммунодефицитных состояний.

EXPERIMENTAL ESTIMATION OF IMMUNE SYSTEM STATE OF AN ORGANISM IN CONDITIONS OF THE IMMUNODEFICIENCY AND CORRECTION BY PLANT EXTRACT

S.N. Lebedeva, M.A. Hrebtovsky

It is established, that the seven-componential plant extract, made on recipe of the Tibetan medicine, possesses immunomodulating action in conditions iv vivo, restoring parameters of cellular, humoral and phagocytal parts of immunity in the animals, who were in condition of immunodeficiency, caused by immunodepressant Azathioprinum.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бакуридзе АД, Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Им-муномодуляторы растительного происхождения (обзор) // Хим.- фармац. журн. - 1993. - № 8. - С.43-47.

2. Калинкович А.Г., Варданян И.К., Пинегин Б.В. Различное действие супраоптимальной дозы антигена и иммунных комплексов на формирование субпопуляций Т- и В- клеток // Иммунология. - 1983. - № 2. - С.47- 49.

3. Найданова Э.Г, Жамсаранова С.Д., Бураева Л.Б., Луб-сандоржиева П.Б. Гиполипидемическое действие комплексного фитопрепарата // Биоантиоксиданты: Тез. докл. Междунар. симпоз. - Тюмень, 1997. - С.88-89.

4. Найданова Э.Г, Жамсаранова С.Д., Лубсандоржиева П.Б., Бураева Л.Б. Влияние фитосбора на содержание липидов сыворотки крови при экспериментальной ги-перлипидемии // Человек и лекарство: Тез. докл. 5-го Всерос. нац. конгр. - М., 1998. - С.388.

5. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. - М.: Мир, 2000. - С.405-416.

6. Смирнов В.С..Фрейдлин И.С. Иммунодефицитные состояния. - СПб.: Фолиант, 2000. - С.535-556.

7. Тессенев В. Реакция "трансплантат против хозяина" на мышах гибридах первого поколения // Иммунологические методы. - М.: Мир, 1979. - С.182-186.

8. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных пе-ритонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ: Методические рекомендации. -Л., 1976. - 36 с.

9. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. -Vol. 207, № 5001. - P1106-1107.

10. Jmelbayeva E.A. Influece of Amine Salt of 2,4-Dichlorphe-noxyacetic Acid on Functional Activity of Peritoneal Macrophages in vitro // Russian Journal of Immunology. - 1997. - Vol. 2, № 3-4. - P.184-189.

© ХОБРАКОВА В.Б., НАГАСЛАЕВА О.В. - 2006

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА СУХОГО ЭКСТРАКТА

«ИММУНОПОЛИФИТ»

В.Б. Хобракова, О.В. Нагаслаева

Резюме. В опытах на мышах линий СВА и F1 (СВАхС57В1/6) установлена иммуномодулирующая активность сухого экстракта «Иммунополифит». Показано, что испытуемое средство в дозе 40 мг/кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез, клеточноопосредованную иммунную реакцию и фагоцитоз макрофагов, что выражается в повышении иммунологических показателей. Исследуемый экстракт не изменяет показатели иммунитета у интактных мышей.

Ключевые слова. Сухой экстракт «Иммунополифит», иммунитет, иммунодефицит, азатиоприн.

Несмотря на успехи современной медицины, лечение заболеваний, в патогенез которых вовлекается иммунная система, остается сложной задачей. Применяемые методы терапии либо недостаточно эффективны, либо сопровождаются развитием тяжелых побочных реакций [2].

В последние годы значительно возрос интерес к препаратам растительного происхождения, для большинства которых характерно мягкое иммуномодулирующее действие, низкая токсичность и отсутствие выраженных побочных эффектов благодаря наличию комплекса биологически активных веществ, оказывающих воздействие на организм в целом.

Объектом настоящего исследования явилось комплексное растительное средство - сухой экстракт «Иммунополифит», в состав которого входят корни солодки голой и вздутоплодника сибирского, семена льна обыкновенного, плоды лимонника китайского и шиповника иглистого, трава горца птичьего и пустырника

сердечного, соцветия ноготков лекарственных.

Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующих свойств растительного средства - сухого экстракта «Иммунополифита» в отношении клеточного, гуморального и макрофагально-го звеньев иммунного ответа.

Материалы и методы Эксперименты проведены на мышах-самцах линий СВА и F1 (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Действие исследуемого э1 кстракта на показатели клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета было изучено на интактных животных , находящихся в состоянии имму-нодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/ кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [3].

Исследуемое средство вводили 1-ой опытной группе на фоне азатиоприна и 2-ой опытной группе интактных мышей в виде раствора в дозе 40 мг/кг перорально ежедневно в течение 14 дней. Интактная группа животных получала дистиллированную воду по аналогичной схеме.

Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [5], гумораль-