АНТИТЕЛА К CD6 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛОЙ АСТМЫ
ANTIBODIES TO CD6 FOR THE TREATMENT OF SEVERE ASTHMA

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА
[00901 Данная заявка заявляет приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/636092, поданной 27 февраля 2018 года, при этом указанная заявка включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ЗАЯВЛЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНО ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Перечень последовательностей, относящийся к настоящей заявке, предоставляется в текстовом формате вместо бумажной копии и тем самым включен в данное описание посредством ссылки. Текстовый файл, содержащий перечень последовательностей, называется EQIL_006_01WO_ST25.txt. Размер текстового файла составляет 5 КБ, он создан 27 февраля 2019 года и подается в электронном виде посредством EFS-Web.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Область техники
[0003] Настоящее изобретение относится к композициям и способам для лечения тяжелой астмы. Астма представляет собой заболевание, при котором возникают (i) бронхоконстрикция, (ii) избыточное продуцирование слизи и (iii) воспаление и отечность дыхательных путей, вызывая широко распространенную, но изменчивую обструкцию дыхательных путей, таким образом затрудняя дыхание больного астмой. Астма представляет собой хроническое нарушение, в первую очередь характеризующееся стойким воспалением дыхательных путей. Однако астма дополнительно характеризуется острыми эпизодами дополнительного сужения дыхательных путей за счет сокращения гиперчувствительных гладких мышц дыхательных путей.
[0004] При астме хронические воспалительные процессы в дыхательных путях играют центральную роль в увеличении сопротивления воздушному потоку в легких.
[0005] Хронический характер астмы также может приводить к ремоделированию стенки дыхательных путей (т.е. к структурным изменениям, таким как утолщение или отек), что может в дальнейшем оказывать эффект в отношении функции стенки дыхательных путей и влиять на гиперчувствительность дыхательных путей. Другие физиологические изменения, связанные с астмой, включают избыточное продуцирование слизи, и, если астма тяжелая, закупорку слизью, а также непрерывную денудацию и восстановление эпителия. Вследствие денудации эпителия нижележащие ткани подвергаются воздействию веществ, которые обычно не контактируют с ними, еще больше усиливая цикл клеточного повреждения и воспалительного ответа.
[0006] У восприимчивых людей симптомы астмы включают повторяющиеся эпизоды одышки (диспноэ), хрипения, стеснения в груди и кашля. В настоящее время борьбу с астмой осуществляют с помощью сочетания избегания раздражителя и применения фармакологических средств, в зависимости, в первую очередь, от подтипа астмы, который присутствует у пациента.
[0007] Астма - это гетерогенное заболевание, классифицируемое согласно Национальной образовательной и превентивной программе по бронхиальной астме (NAEPP) на четыре основные клинические категории в зависимости от тяжести астмы, в том числе: (1) интермиттирующая астма, (2) легкая персистирующая астма, (3) умеренная персистирующая астма (4) и тяжелая персистирующая астма. С другой стороны, Глобальная инициатива по борьбе с астмой (GINA) в 2016 г. подразделяет тяжесть астмы на легкую, умеренную или тяжелую, причем тяжесть оценивается на основе уровня лечения, необходимого для контроля симптомов и обострений.
[0008] Например, в NAEPP приняты следующие клинические характеристики.
[0009] Интермиттирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания менее двух раз в неделю; наличием обострений, которые являются непродолжительными, но интенсивность которых может варьировать; проявлением симптомов в ночное время реже двух раз в месяц; отсутствием симптомов между обострениями; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими 80% или больше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей менее 20%, при сравнении утро-утро, утро-вечер, между отдельными днями (веб-страница всемирной сети: //emedicine.medscape.com/article/296301-guidelines#g2).
[0010] Легкая персистирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания 3-6 раз в неделю; наличием обострений, которые могут повлиять на уровень активности; проявлением симптомов в ночное время 3-4 раза в месяц; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими 80% и больше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей менее 20-30% (там же).
[0011] Умеренная персистирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания каждый день; наличием обострений, которые могут повлиять на уровень активности; проявлением симптомов в ночное время 5 или более раз в месяц; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими более 60%, но менее 80% от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей более 30% (там же).
[0012] Тяжелая персистирующая астма характеризуется  наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания, которые являются продолжительными; частым проявлением симптомов в ночное время; результатами теста функции легких FEV 1, составляющими 60% или меньше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей более 30% (там же).
[0013] Кроме того, исходя из типов воспалительных клеток или их отсутствия в дыхательных путях при астме существует четыре различных фенотипа воспаления дыхательных путей: эозинофильное воспаление, нейтрофильное воспаление, смешанное воспаление и малогранулоцитарное воспаление. Как обсуждается ниже, нейтрофильное воспаление, смешанное воспаление и малогранулоцитарное воспаление являются неэозинофильными формами астмы.
[0014] Эозинофильное воспаление, часто называемое эозинофильной или аллергической астмой, считается результатом опосредованного Th2 воспалительного ответа (часто обозначается как "с высоким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IL-4, IL-5 и IL-13, что приводит к увеличению количества эозинофилов легких. Эозинофилы выделяют дополнительные цитокины, которые усиливают основное воспаление и ухудшают симптомы астмы. Клинически дифференциация эозинофильной астмы от неэозинофильных форм основана в первую очередь на уровне циркулирующих эозинофилов, обнаруженных в образце крови, который используется в качестве косвенного показателя для получения представления об уровнях эозинофилов, которые, вероятно, будут присутствовать в легких. Обычно считается, что у пациентов «низкий» уровень эозинофилов в крови, если количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. У таких пациентов неэозинофильная астма. И наоборот, считается, что у пациентов с количеством эозинофилов в крови, составляющим > 300 клеток/мкл, - эозинофильная.
[0015] Нейтрофильное воспаление, часто называемое нейтрофильной или неаллергической астмой, считается результатом опосредованного Th1/Th17 воспалительного ответа (часто обозначается как "с низким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IFN-γ, IL-6, IL- 17 и IL-8, что приводит к увеличению количества нейтрофилов в легких. Нейтрофилы выделяют дополнительные цитокины, которые усиливают основное воспаление и ухудшают симптомы астмы. Как правило, у пациентов с нейтрофильной астмой показывают количество нейтрофилов в крови, составляющее > 4600 клеток/мкл, например (Vedel-Krogh, S. et al., Clin Chem. 2017 Apr;63(4):823-832; Schleich, F. et al., BMC Pulm Med. 2013; 13: 11).
[0016] Смешанное воспаление - это фенотип, при котором у пациентов могут наблюдаться как эозинофильное, так и/или нейтрофильное воспаление, хотя уровни любого из этих типов гранулоцитов могут быть низкими.
[0017] Малогранулоцитарное воспаление - это фенотип, при котором у пациентов наблюдается воспаление легких, несмотря на нормальные уровни эозинофилов и нейтрофилов. Также это форма неаллергической астмы, которая, как полагают, является результатом опосредованного Th1/Th17 воспалительного ответа (часто обозначается как "с низким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IFN-γ, IL-6 и IL-17. Примечательно, что у пациентов с малогранулоцитарной астмой, как правило, отсутствуют обнаруживаемые количества эозинофилов в крови.
[0018] Гетерогенность астмы проиллюстрирована на фиг. 7, на которой показана взаимосвязь между типом воспаления (например, с высоким или низким содержанием Th2) и текущим представлением о различных фенотипах астмы. Хотя фенотипы перекрываются, опосредованные Th2 ответы показаны на фигуре слева, и они коррелируют с аллергическими эозинофильными ответами, которые являются чувствительными к лечению кортикостероидами. Напротив, неаллергические, неэозинофильные ответы на фигуре справа демонстрируют ответы с низким содержанием Th2, характеризуются ответами с высоким содержанием Th1 и/или Th1/Th17, являются нейтрофильными или малогранулоцитарными и не проявляют чувствительности к лечению кортикостероидами.
[0019] Существующие в настоящее время возможности лечения астмы / борьбы с астмой варьируют от избегания раздражителя до фармакологических или даже хирургических вмешательств.
[0020] Избегание раздражителя достигается за счет систематической идентификации и минимизации контакта с каждым типом раздражителей. Однако избегание всех потенциальных раздражителей может оказаться непрактичным и не всегда целесообразным.
[0021] Борьбу с астмой посредством фармакологических средств осуществляют путем (1) долгосрочного контроля посредством применения противовоспалительных средств и бронходилататоров длительного действия и (2) краткосрочной борьбы с острыми обострениями посредством применения бронходилататоров краткосрочного действия (например, бета-агонистов). Оба этих подхода требуют многократного и регулярного применения назначенных лекарственных средств.
[0022] В условиях клиники пациенты с астмой чаще всего проходят тестирование на аллергическую или другие формы астмы путем анализа количества эозинофилов в их крови для определения наилучшего плана действий в отношении борьбы с заболеванием. Как обсуждается далее в данном документе, лечение стероидами противопоказано пациентам с низким содержанием или отсутствием эозинофилов в их крови. Несмотря на то, что в данной области техники существуют разные мнения относительно того, где именно находится граница для разграничения низкого и нормального или высокого содержания эозинофилов в крови, как используется в данном документе, «низкое» количество эозинофилов в крови означает, что у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300клеток/мкл. Такие пациенты с низким содержанием (или отсутствием) обнаруживаемых количеств эозинофилов в крови представляют собой пациентов с тяжелой астмой, относящихся к популяции высокого риска, для которых эффективное лечебное средство является крайне необходимым.
[0023] Современные виды лечения астмы включают бета-агонисты длительного действия (LABA), бета-агонисты краткосрочного действия (SABA), такие как альбутерол (ProAir HFA, Proventil HFA, Ventolin HFA), метапротеренол, левальбутерол (Xopenex HFA) и пирбутерол (Maxair), которые вводят с помощью быстродействующего ингалятора (скорой помощи) или с помощью небулайзеров, которые превращают лекарственный препарат в туман, который пациент может вдыхать глубоко в легкие. Для лечения астмы также применяют. Эти лекарственные препараты, которые часто принимают путем ингаляции или в форме таблеток, помогают уменьшить воспаление легких и контролировать симптомы астмы. Кортикостероиды также можно вводить внутривенно, как правило, пациентам с рвотой или дыхательной недостаточностью. Также иногда в качестве бронходилататора для лечения тяжелых приступов астмы применяют ипратропий (атровент), особенно если альбутерол не вполне эффективен. В таблице 1 представлен список различных фармакологических средств, которые либо в настоящее время одобрены FDA для лечения тяжелой астмы, либо разрабатываются в настоящее время или были разработаны ранее для лечения астмы.
Таблица 1. Одобренные или разработанные средства для лечения тяжелой астмы
(По состоянию на январь 2018 года)
[0024] Наконец, если приступ астмы представляет угрозу для жизни, для облегчения дыхания пациента может понадобиться интубация, искусственная вентиляция легких и кислород, в то время как для того, чтобы взять астму под контроль пробуют другие лекарственные препараты.
[0025] Однако все доступные в настоящее время виды лечения имеют недостатки.
[0036] Сложность, связанная с соблюдением пациентом требований в отношении борьбы посредством фармакологических средств, и сложность избегания раздражителя, индуцирующего астму, являются распространенными препятствиями на пути к успешному исходу борьбы с астмой. Более того, многие из этих видов лечения сфокусированы на уменьшении выраженности симптомов астмы, но не устраняют первопричины заболевания. Таким образом, современные методики борьбы не являются ни полностью успешными, ни лишенными побочных эффектов.
[0027] Высокие дозы кортикостероидных противовоспалительных лекарственных средств могут иметь серьезные побочные эффекты, требующие тщательного контроля. Кроме того, некоторые пациенты являются резистентными или рефрактерными к видам лечения стероидами. Эти пациенты составляют дополнительную категорию пациентов с астмой, называемых пациентами с тяжелой астмой (СА), которые представляют собой огромную клиническую проблему вследствие тяжести их заболевания и отсутствия у них ответа на традиционные виды лечения астмы. Действительно, хотя резистентное или рефрактерное к стероидам заболевание имеется только у 5-10% астматиков, на медицинскую помощь этим пациентам приходится 50-80% всех связанных с астмой затрат на здравоохранение в США, Европе и Австралии из-за частых случаев их госпитализации и потребности в неотложной помощи (Hansbro et al., Immunological Reviews. 2017;278:41-62.
[0028] Тяжелая астма чаще всего связана с неаллергическими фенотипами Th1/Th17, такими как нейтрофильная или малогранулоцитарная астма, или смешанным фенотипом Th1/Th17-нейтрофильной/ Th2-эозинофильной астмы, при которой клетки Th17 и нейтрофилы отвечают слабо, а иногда вообще не отвечают на кортикостероиды (фиг. 7).
[0029] В то время как аллергическая, опосредованная Th2, эозинофильная астма, как правило, является чувствительной к лечению кортикостероидами (фиг. 7).
[0030] Соответственно, существует потребность в новых видах лечения астмы, которые бы являлись избирательными в отношении лечения патологии, лежащей в основе заболевания. Также существует потребность в новых видах лечения астмы, которые эффективны при лечении форм астмы, резистентных или рефрактерных к стероидам (т.е. SA). Настоящее изобретение предусматривает композиции и способы для лечения, предотвращения и ослабления тяжелой астмы, и в конкретных вариантах осуществления - тяжелой астмы, характеризующейся низким содержанием эозинофилов в крови или их отсутствием.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0031] Настоящее изобретение среди прочего относится к лечению, предотвращению или смягчению астмы, включающим введение субъекту антитела к CD6. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой неаллергическую астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой неэозинофильную астму.
[0032] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2.
[0033] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.
[0034] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения или ослабления миграции Т-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.
[0035] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.
[0036] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий приведение T-клеток в контакт с антителом к CD6 или его антигенсвязывающим фрагментом.
[0037] В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. В некоторых вариантах осуществления астма является рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной.
[0038] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с белком CD6 на поверхности Т-клетки. В некоторых вариантах осуществления T-клетка представляет собой T-клетку Th1, Th17 или Th1 и Th17.
[0039] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой EQ001 или антигенсвязывающий фрагмент EQ001. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 1 или 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления связывание антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента с белком CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из mAb UMCD6, итолизумаба (EQ001), антитела к CD6, описанного в таблице 2, и антитела к CD6, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело к CD6 представляет собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640; антитело, имеющее ту же последовательность, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой; или антитело, имеющее те же последовательности CDR, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой.
[0040] В некоторых конкретных вариантах осуществления любой из способов, раскрытых в данном документе, включает введение EQ001. В некоторых конкретных вариантах осуществления любой из способов, раскрытых в данном документе, включает введение антигенсвязывающего фрагмента EQ001. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из Fv, Fab, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельной области, тяжелой(-ых) цепи(-ей) и легкой(-их) цепи(-ей).
[0041] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат одну или более последовательностей CDR, выбранных из SEQ ID NO: 5-10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления SEQ ID NO: 1 и 2 кодируются SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1, и последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2.
[0042] В некоторых вариантах осуществления любой из способов по настоящему изобретению дополнительно включает введение одного или более дополнительных средств, с помощью которых можно осуществлять лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, с помощью которого можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, которое представляет собой иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает бета-агонист длительного действия, бета-агонист краткосрочного действия или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает альбутерол. В некоторых вариантах осуществления альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает кортикостероид. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в виде состава для ингаляции. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в лекарственной форме, выбранной из таблетки, капсулы с отсроченным высвобождением, таблетки с пролонгированным высвобождением, капсулы с пролонгированным высвобождением, сиропа, раствора, настойки, суспензии, таблетки с отсроченным высвобождением, жидкости и таблетки для рассасывания. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает ипратропий. В некоторых вариантах осуществления ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей.
[0043] В некоторых вариантах осуществления любой из способов по настоящему изобретению дополнительно включает применение интубации, искусственной вентиляции легких и/или кислородной терапии.
[0044] В некоторых вариантах осуществления в любом из способов по настоящему изобретению антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в виде фармацевтической композиции, содержащей одно или более из фармацевтически приемлемых солей, вспомогательных веществ или сред-носителей. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ.
[0045] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2, и при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. В некоторых вариантах осуществления астма является резистентной или рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной. В некоторых вариантах осуществления Т-клетка выбрана из (i) Т-клетки Th1, (ii) Т-клетки Th17 или (iii) Т-клетки Th1 и Th17. В некоторых вариантах осуществления изобретения у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется неаллергическая астма. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001.
[0046] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.
[0047] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения или ослабления миграции Т-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на антиген, индуцирующий астму, где астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.
[0048] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.
[0049] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий приведение Т-клетки в контакт с антителом к CD6 или его антигенсвязывающим фрагментом, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.
[0050] В некоторых вариантах осуществления астма является резистентной или рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной. В некоторых вариантах осуществления T-клетка выбрана из (i) Т-клетки Th1, (ii) Т-клетки Th17 или (iii) Т-клетки Th1 и Th17. В некоторых вариантах осуществления у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется неаллергическая астма. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой EQ001 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 1 или 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из mAb UMCD6, итолизумаба (EQ001), антитела к CD6, описанного в таблице 2, и антитела к CD6, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело к CD6 представляет собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640; антитело, имеющее ту же последовательность, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой; или антитело, имеющее те же последовательности CDR, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат одну или более последовательностей CDR, выбранных из SEQ ID NO: 5-10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления SEQ ID NO: 1 и 2 кодируются SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1, и последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из Fv, Fab, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельной области, тяжелой(-ых) цепи(-ей) и легкой(-их) цепи(-ей). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с белком CD6 на поверхности T-клетки. В некоторых вариантах осуществления связывание антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента с белком CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки.
[0051] В некоторых вариантах осуществления такие способы дополнительно включают введение одного или более дополнительных средств, с помощью которых можно осуществлять лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, с помощью которого можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, которое представляет собой иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает бета-агонист длительного действия, бета-агонист краткосрочного действия или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает альбутерол. В некоторых вариантах осуществления альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает кортикостероид. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в виде состава для ингаляции. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает ипратропий. В некоторых вариантах осуществления ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает применение интубации, искусственной вентиляции легких и/или кислородной терапии. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в виде фармацевтической композиции, содержащей одно или более из фармацевтически приемлемых солей, вспомогательных веществ или сред-носителей. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0052] SEQ ID NO: 1: Аминокислотная последовательность последовательности VH EQ001.
[0053] SEQ ID NO: 2: Аминокислотная последовательность последовательности VK EQ001.
[0054] SEQ ID NO: 3: Нуклеотидная (ДНК) последовательность последовательности VH EQ001.
[0055] SEQ ID NO: 4: Нуклеотидная (ДНК) последовательность последовательности VK EQ001.
[0056] SEQ ID NO: 5: Аминокислотная последовательность CDR1 VH EQ001
[0057] SEQ ID NO: 6: Аминокислотная последовательность CDR2 VH EQ001
[0058] SEQ ID NO: 7: Аминокислотная последовательность CDR3 VH EQ001
[0059] SEQ ID NO: 8: Аминокислотная последовательность CDR1 VK EQ001
[0060] SEQ ID NO: 9: Аминокислотная последовательность CDR2 VK EQ001
[0061] SEQ ID NO: 10: Аминокислотная последовательность CDR3 VK EQ001
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0062] Фигура 1. Последовательности антитела к CD6 EQ001. Фиг. 1A: нуклеотидные последовательности вариабельной области тяжелой (VH) и легкой (VK) цепей EQ001, полученные из плазмидной и геномной ДНК. Фиг. 1B: аминокислотные последовательности VH и VK EQ001.
+
+
+
[0063] Фигура 2. Клетки CD6 присутствуют на высоких уровнях в легком у пациента с тяжелой астмой. Левая колонка: ALCAM экспрессируется в собственном слое легких при фатальной астме (слева в нижней части), но не в собственном слое легких в нормальном состоянии (слева в верхней части). Центральная колонка: количество клеток CD6 увеличивается в легких при фатальной астме (в центре в нижней части), по сравнению с нормальными легкими (в центре в верхней части). Правая колонка: клетки CD6 колокализируются с экспрессирующим ALCAM собственным слоем легких при астме (справа в нижней части).
[0064] Фигура 3. Анализ на основе биоинформатики de novo, сравнивающий экспрессию CD4, CD6 и различных маркеров Th17 у пациентов из контрольной группы, пациентов с умеренной астмой и пациентов с тяжелой астмой с помощью общедоступного набора данных RNASeq, сгенерированных с использованием клеток, собранных с помощью лаважа бронхов. Фиг. 3A: значительные отличия в уровнях экспрессии CD4, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD4 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3B: значительные отличия в уровнях экспрессии CD6, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD6 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3C - 3G: значительные отличия в уровнях экспрессии маркера Th17, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD6 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3C: экспрессия CCR6; фиг. 3D: экспрессия CCR4; фиг. 3E: экспрессия KLRB1; фиг. 3F: экспрессия IL-17A; фиг. 3G: экспрессия IL-17F.
[0065] Фигура 4. Уровень CD6 является наиболее высоким в кластере пациентов с тяжелой астмой. Фиг. 4A: независимый кластерный анализ, основанный на экспрессии > 1000 генов (независимо от тяжести астмы), показывает группу пациентов с астмой в виде 4 основных кластеров. Фиг. 4B: для каждого кластера продемонстрирована различная средняя экспрессия CD6, причем наиболее высокая экспрессия наблюдается в кластере 3, который состоит только из пациентов с тяжелой астмой, что позволяет предположить наличие подгруппы пациентов с тяжелой астмой с высокой экспрессией целевой молекулы.
[0066] Фигура 5. Блокада CD6 в мышиной модели аллергической астмы снижает уровни цитокинов Th2 в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов. Фиг. 5A: в таблице показаны группы лечения и распределение доз по группам. Фиг. 5B: иллюстрация распределения доз по группам. Фиг. 5C: блокада CD6 с помощью антитела к CD6 mCD6D1 во время стимуляции антигеном привела к снижению уровней Th2-продуцируемых цитокинов IL-4, IL-5 и IL-13, в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF), и умеренному снижению этих цитокинов в клетках легкого (данные не показаны).
[0067] Фигура 6. Блокада CD6 в классической Th2-модели вакцинации с помощью OVA обеспечивает подавление обусловленного Th2 продуцирования IgE. Фиг. 6A: в таблице показаны группы лечения и распределение доз по группам. Фиг. 6B: иллюстрация распределения доз по группам. Фиг. 6C: профилактическая блокада CD6 с помощью антитела к CD6, mCD6D1, обеспечивала подавление продуцирования OVA-специфического IgE, что демонстрирует влияние пути CD6 на ответы Th2.
[0068] Фигура 7. В примере показаны фенотипы астмы в зависимости от типа воспаления, с которым они связаны (с высоким или низким содержанием Th2), и других переменных. CS = кортикостероиды; GM-CSF = гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0099] При осуществлении настоящего изобретения на практике будут использовать, если конкретно не указано иное, общепринятые способы молекулярной биологии и методики рекомбинантной ДНК в пределах компетентности в данной области, многие из которых описаны ниже с целью иллюстрации. Такие методики полностью раскрыты в литературе. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3-еиздание, 2000 г.); DNA Cloning: A Practical Approach, том I и II (под ред. D. Glover); Oligonucleotide Synthesis (под ред. N. Gait, 1984 г.); Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (под ред. P. Herdewijn, 2004 г.); Nucleic Acid Hybridization (под ред. B. Hames и S. Higgins, 1985 г.); Nucleic Acid Hybridization: Modern Applications (под ред. Buzdin и Lukyanov, 2009 г.); Transcription and Translation (под ред. B. Hames и S. Higgins, 1984 г.); Animal Cell Culture (под ред. R. Freshney, 1986 г.); Freshney, R.I. (2005) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, 5-е изд. Hoboken NJ, John Wiley & Sons; B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (3-еиздание, 2010 г.); Farrell, R., RNA Methodologies: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization (3-еиздание, 2005 г.). Poly(ethylene glycol), Chemistry and Biological Applications, ACS, Вашингтон, 1997г.; под ред. Veronese, F., и J.M. Harris, Peptide and protein PEGylation, Advanced Drug Delivery Reviews, 54(4) 453-609 (2002 г.); Zalipsky, S. et al., «Use of functionalized Poly(Ethylene Glycols) for modification of polypeptides» в Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications. Обсуждаемые выше публикации предназначены исключительно для их раскрытия до даты подачи настоящей заявки. Ничто из изложенного в данном документе не должно толковаться как признание того, что данное изобретение не имеет права противопоставлять такое описание на основании более раннего изобретения.
Определения
[0070] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистами в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные таковым, описанным в данном документе, можно применять при осуществлении на практике или при испытании настоящего изобретения, описаны предпочтительные способы и материалы. Для целей настоящего изобретения следующие термины определены ниже.
[0071] Термины в единственном числе используются в данном документе для обозначения одного или более одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта. В качестве примера, «элемент» означает один элемент или более одного элемента.
[0072] Термин «и/или» используется в настоящем изобретении для обозначения «и» или «или», если не указано иное.
[0073] Термин «например» используется в данном документе в значении «к примеру» и будет пониматься как подразумевающий включение указанной стадии, или элемента, или группы стадий, или элементов, но не исключение любой другой стадии, или элемента, или группы стадий, или элементов.
[0074] Под «приблизительно» подразумевается количественное значение, уровень, значение, число, частота, процент, величина, размер, количество, вес или длина, которые изменяются на значение, составляющее 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1% от эталонного количества, уровня, значения, числа, частоты, процента, величины, размера, количества, веса или длины.
[0075] Термин «введение», используемый в данном документе, относится к любому пути переноса, доставки, предоставления или транспортировки вещества, такого как соединение, например фармацевтическое соединение, или другого средства, такого как антиген, субъекту. Пути введения включают пероральное введение, местный контакт, внутривенное, внутрибрюшинное, внутримышечное, интраназальное или подкожное введение. Введение «в сочетании с» дополнительным веществом, таким как одно или более терапевтических средств, включает совместное (одновременное) и последовательное введение в любом порядке.
[0076] Используемый в данном документе термин «партнер по связыванию» относится к веществу, такому как молекула, в частности полимерная молекула, который может связывать молекулу нуклеиновой кислоты, такую как молекулу ДНК или РНК, включая молекулу мРНК, а также пептид, белок, сахарид, полисахарид или липид, посредством взаимодействия, достаточного для того, чтобы позволить средству образовать комплекс с молекулой нуклеиновой кислоты, пептидом, белком или сахаридом, полисахаридом или липидом, как правило посредством нековалентного связывания. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию представляет собой иммуноглобулин или белковую связывающую молекулу с иммуноглобулин-подобными функциями, как определено ниже. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию представляет собой аптамер. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию является специфичным к конкретной мишени. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию содержит несколько сайтов связывания, при этом каждый сайт связывания является специфичным к конкретной мишени. В качестве иллюстративного примера партнер по связыванию может представлять собой белковое средство с иммуноглобулин-подобными функциями с двумя сайтами связывания. Им может являться, например, антигенсвязывающий фрагмент антитела. Им может являться, например, биспецифическое диатело, такое как биспецифическое одноцепочечное диатело.
[0077] Термин «носитель», используемый в настоящем раскрытии, охватывает носители, вспомогательные вещества и разбавители и означает материал, композицию или среду-носитель, такую как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, вспомогательное вещество, растворитель или материал для инкапсулирования, участвующие в переносе или транспортировке фармацевтического средства из одного органа или части тела в другой орган или часть тела субъекта.
[0078] Используемый в данном документе термин «химерное антитело» относится к полипептиду иммуноглобулина или доменному антителу, которые содержат последовательности от более чем одного вида. В химерном антителе тяжелая цепь или легкая цепь может содержать последовательность вариабельной области от одного вида, например человека, и последовательность константной области от другого вида, например мыши. В качестве примера «химерное антитело» может представлять собой иммуноглобулин, который содержит вариабельные области, полученные из антитела животного, такого как антитело крысы или мыши, слитые с другой молекулой, например с константными доменами, полученными из антитела человека. Термин «химерное антитело» предназначен для охвата антител, в которых (i) тяжелая цепь является химерной, а легкая цепь содержит области V и C только от одного вида; (ii) легкая цепь является химерной, а тяжелая цепь содержит области V и C только от одного вида; и (iii) как тяжелая цепь, так и легкая цепь являются химерными.
[0079] «Эффективное количество» при использовании по отношению к определенному соединению представляет собой количество соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), необходимое для того, чтобы вызвать необходимый ответ. В некоторых вариантах осуществления необходимый ответ представляет собой биологический ответ, например, у субъекта. В некоторых вариантах осуществления соединение (например, антитело к CD6) можно вводить субъекту в количестве, эффективном для того, чтобы оказать влияние на биологический ответ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество представляет собой «терапевтически эффективное количество».
[0080] Термины «терапевтически эффективное количество» и «терапевтическая доза» используются взаимозаменяемо в данном документе для обозначения количества соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), которое после введения субъекту является эффективным в отношении лечения заболевания или нарушения у субъекта, описанного в данном документе.
[0081] Термин «профилактически эффективное количество» используют в данном документе для обозначения количества соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), которое после введения субъекту является эффективным в отношении предотвращения или отсрочки начала заболевания или нарушения у субъекта, описанного в данном документе.
[0082] В этом отношении «гуманизированное антитело», как описано в данном документе, представляет собой полипептид иммуноглобулина или доменное антитело, содержащие структурные элементы антитела человека и антигенсвязывающий сайт антитела, отличного от человеческого. «Гуманизированные антитела» содержат минимальное количество остатков антитела, отличного от человеческого, из которого они получены. Например, они могут содержать только области CDR антитела, отличного от человеческого, или только те остатки, которые составляют гипервариабельные области антитела, отличного от человеческого. Они также могут содержать определенные остатки из участков вне вариабельных областей полипептида, отличного от человеческого, такие как остатки, которые являются необходимыми для имитации структуры антитела, отличного от человеческого, или для минимизации стерического влияния. Как правило, гуманизированное антитело содержит каркасные области человека, по меньшей мере одну CDR из антитела, отличного от человеческого, причем любая присутствующая константная область является по сути идентичной константной области иммуноглобулина человека, т.е. идентичной на по меньшей мере приблизительно 85-90%, т.е. по меньшей мере 95 %. Следовательно, в некоторых случаях все части гуманизированного иммуноглобулина, за исключением, возможно, CDR, являются по сути идентичными соответствующим частям одной или более нативных последовательностей иммуноглобулина человека. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не соответствуют ни антителам человека, ни антителам, отличным от человеческих.
[0083] Используемый в данном документе термин «фрагмент антитела» относится к любой форме антитела, отличной от полноразмерной формы. Фрагменты антител в данном документе включают антитела, которые представляют собой более мелкие компоненты, которые существуют в пределах полноразмерных антител, и антитела, которые были сконструированы. Фрагменты антител включают без ограничения Fv, Fc, Fab и (Fab')2, одноцепочечный Fv (scFv), диатела, триатела, тетратела, бифункциональные гибридные антитела, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельные области, каркасные области, константные области, тяжелые цепи, легкие цепи, альтернативные каркасные молекулы, не являющиеся антителами, и биспецифические антитела. Если специально не указано иное, утверждения и пункты формулы изобретения, в которых используется термин «антитело» или «антитела», могут конкретно включать «фрагмент антитела» и «фрагменты антител».
[0084] Термин «астма» имеет свое обычное научное значение и включает интермиттирующую астму, легкую персистирующую астму, умеренную персистирующую астму и тяжелую персистирующую астму.
[0085] Термин «тяжелая астма» используют в данном документе для описания отдельной категории астмы, при которой симптомы заболевания плохо поддаются контролю с помощью стероидов. Тяжелая астма включает астму, которая является резистентной к стероидам и/или рефрактерной к кортикостероидам (CS). В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма (SA) обусловлена в первую очередь нейтрофильным ответом, опосредованным Т-клетками Th1/Th17. В некоторых вариантах осуществления SA обусловлена в первую очередь малогранулоцитарным ответом, опосредованным Т-клетками Th1/Th17. В некоторых вариантах осуществления SA также устойчива к одному или более другим терапевтическим средствам от астмы. Например, в некоторых вариантах осуществления SA также устойчива к одному или более из SABA и/или LABA. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может характеризоваться наличием нейтрофильного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17, малогранулоцитарного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17, или комбинированного нейтрофильного и эозинофильного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17 и Т-клетками Th2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может включать нейтрофильный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может включать малогранулоцитарный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ.
[0086] Термин «астма, резистентная к стероидам» используется в данном документе для описания астмы, при которой лечение стероидами (например, кортикостероидами) характеризуется ограниченной эффективностью. Таким образом, лечение астмы, резистентной к стероидам, с помощью стероида (например, кортикостероида) позволяет получить весьма незначительный терапевтический эффект. В некоторых случаях такое лечение по сути не позволяет получить терапевтического эффекта.
[0087] Термин «стероид-рефрактерная астма» используется в данном документе для описания астмы, при которой лечение стероидами (например, кортикостероидами) характеризуется отсутствием эффективности. Таким образом, лечение стероид-рефрактерной астмы с помощью стероида (например, кортикостероида) не позволяет получить заметного терапевтического эффекта.
[0088] Термин «LABA» означает бета-агонист длительного действия. LABA известны в данной области техники и включают без ограничения формотерола фумарат; сальметерол ксинафоат.
[0089] Термин «SABA» означает бета-агонист краткосрочного действия. SABA известны в данной области техники и включают без ограничения альбутерол (например, сульфат альбутерола, сульфат альбутерола HFA, сульфат альбутерола в виде раствора для ингаляции, сульфат альбутерола в виде раствора для небулайзера и гидрохлорид левальбутерола), метапротеренол, пирбутерол (например, ацетат пирбутерола); изоэтарина гидрохлорид; изопротеренола гидрохлорид; и тербуталина сульфат.
[0090] Термин «VH» используют в данном документе для обозначения вариабельной области тяжелой цепи антитела.
[0091] Термин «VK» используют в данном документе для обозначения вариабельной области легкой цепи антитела.
[0092] Термин «антигенсвязывающий фрагмент» применительно к антителу относится к любому фрагменту антитела, который сохраняет аффинность связывания с антигеном, с которым связывается исходное полноразмерное антитело, и антигенсвязывающие фрагменты включают без ограничения Fv, Fab, (Fab') 2, scFv, диатела, триатела, тетратела, бифункциональные гибридные антитела, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельные области, тяжелые цепи, легкие цепи и биспецифические антитела.
[0093] Во всем данном описании, если контекст не требует иного, слова «содержать», «содержит» и «содержащий» будут пониматься как подразумевающие включение указанной стадии, или элемента, или группы стадий или элементов, но не исключение любых других стадии, или элемента, или группы стадий или элементов. Под «состоящим из» подразумевается включение того, что следует за фразой «состоящий из», и ограничение этим. Таким образом, фраза «состоящий из» указывает, что перечисленные элементы являются необходимыми или обязательными, и что никакие другие элементы не могут присутствовать. Под «состоящим по существу из» подразумевается включение любых элементов, перечисленных после фразы и ограниченных другими элементами, которые не мешают или не способствуют деятельности или действию, указанным в раскрытии для перечисленных элементов. Таким образом, фраза «состоящий по существу из» указывает на то, что перечисленные элементы являются необходимыми или обязательными, но что другие элементы являются возможными и могут присутствовать или не присутствовать в зависимости от того, оказывают ли они существенное влияние на активность или действие перечисленных элементов.
[0094] Термин «модулирование» включает «увеличение», «усиление» или «стимулирование,» а также «снижение» или «уменьшение», как правило, в отношении статистически значимого или физиологически значимого количества по сравнению с контролем. «Увеличенное», «стимулированное» или «повышенное» количество, как правило, является «статистически значимым» количеством и может включать увеличение в 1,1, 1,2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30 или больше раз (например, 500, 1000 раз) (включая все целые числа и числа с десятичной запятой между ними и более 1, например 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, и т.д.) количества, получаемого при отсутствии композиции (например, в отсутствие любых антител к CD6 по настоящему изобретению) или при присутствии контрольной композиции, образца или испытуемого субъекта. «Сниженное» или «уменьшенное» количество, как правило, является «статистически значимым» количеством и может включать 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% снижение количества, получаемого при отсутствии композиции (отсутствии средства или соединения) или при присутствии контрольной композиции, включая все целые числа между ними.
[0095] Термины «полипептид» и «белок» применяют взаимозаменяемо для обозначения полимера из аминокислотных остатков и его вариантов и синтетических аналогов. Таким образом, эти термины применяют в отношении аминокислотных полимеров, в которых один или более аминокислотных остатков являются синтетическими не встречающимися в природе аминокислотами, такими как химический аналог соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также в отношении встречающихся в природе аминокислотных полимеров.
[0096] Термины «субъект» или «пациент», используемые в данном документе, включают любое животное, у которого проявляется симптом, или которое находится в группе риска проявления симптома, которое можно лечить или диагностировать с помощью антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента. Подходящие субъекты (пациенты) включают, предпочтительно, пациентов-людей. Подходящие субъекты также включают лабораторных животных (таких как мышь, крыса, кролик или морская свинка), сельскохозяйственных животных (таких как свинья, лошадь, корова) и домашних животных или питомцев (таких как кошка или собака). Также включены приматы, отличные от человека (такие как обезьяна, шимпанзе, бабуин или макак-резус).
[0097] «По сути» или «по существу» означает почти полностью или весь, например 95% или больше от некоторого заданного количественного значения.
[0098] Термины «лечение» или «осуществление лечения», используемые в данном документе, включают любой необходимый эффект в отношении симптомов или патологии заболевания или состояния и могут включать даже минимальные изменения или улучшения в одном или более поддающихся измерению маркерах заболевания или состояния, в отношении которых осуществляют лечение. «Лечение» или «осуществление лечения» не обязательно означают полную ликвидацию или излечение заболевания или состояния или связанных с ними симптомов. Субъект, получающий такое лечение, является любым субъектом, который в нем нуждается. Иллюстративные маркеры клинического улучшения будут очевидны специалистам в данной области техники.
[0099] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимают специалисты обычной квалификации в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя любые способы, композиции, реагенты, клетки, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, можно использовать при осуществлении на практике или при тестировании настоящего изобретения, в данном документе описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации и ссылки, включая без ограничения патенты и патентные заявки, цитируемые в этом описании, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, как если бы каждая отдельная публикация или ссылка были специально и индивидуально указаны для включения в данный документ посредством ссылки как полностью изложенные. Любая патентная заявка, приоритет которой испрашивается в данной заявке, также включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки, как описано выше для публикаций и ссылок.
Обзор
[00100] Настоящее изобретение относится к способу лечения, предупреждения или смягчения тяжелой астмы, включающему введение субъекту антитела к CD6.
[00101] CD6 представляет собой важный белок клеточной поверхности, который преимущественно экспрессируется человеческими Т-клетками и субпопуляцией В-клеток, а также В-клетками при некоторых хронических лимфоцитарных лейкозах и нейронами [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949; Kantoun et al., J. Immunol. 1981, 127:987; Mayer et al., J. Neuroimmunol. 1990. 29:193]. CD6 является представителем большого семейства белков, характеризующихся наличием по меньшей мере одного домена, гомологичного богатому цистеином домену фагоцитарного рецептора (SRCR) макрофагов типа I [Matsumoto et al., J. Exp. Med. 1991, 173:55, и Resnick et al., Trends Biochem. Sci. 1994, 19:5]. Другие представители данного семейства включают CD5 [Jones et al., Nature. 1986, 323:346]; циклофилин C [Friedman et al. 1993, PNAS 90:6815]; фактор I комплемента, который связывает активированные белки комплемента C3b и C4b [Goldberger et al., J. Biol. Chem. 1987, 262:10065]; бычий WC-1, экспрессируемый тау/дельта- T-клетками [Wijingaard et al., J. Immunol. 1992, 149:3273], и M130 [Law et al., Eur J. Immunol. 1993, 23:2320], маркер активации макрофагов.
[00102] Внеклеточный домен зрелого белка CD6 состоит из трех доменов SRCR (в дальнейшем обозначенных как D1, D2 и D3). D3, соответствующий мембрано-проксимальному домену SRCR, за которым следует короткая стволовая область, состоящая из 33 аминокислот. Эти внеклеточные домены прикреплены к клеточной мембране посредством короткого трансмембранного домена, за которым следует цитоплазматический домен переменной длины [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949].
[00103] Исследования с использованием слитых белков на основе иммуноглобулина CD6, содержащих выбранные внеклеточные домены CD6, слитые с константными доменами IgG1 человека (CD6-Rgs), привели к идентификации и клонированию лиганда CD6, названного «молекулой клеточной адгезии активированных лейкоцитов» (ALCAM), известного также как CD166 [Patel et al., J. Exp. Med. 1995. 181:1563-1568; Bowen et al., J. Exp. Med 1995, 181:2213-2220].
[00104] ALCAM представляет собой трансмембранный гликопротеин типа I размером 100-105 кДа, который является представителем суперсемейства иммуноглобулинов и содержит пять внеклеточных доменов иммуноглобулина (2 NH2-концевых, мембрано-дистальную вариабельного типа (V) (V1, V2 или D1, D2) и 3 мембрано-проксимальных константного типа (C2) структур Ig), [C1, C2, C3], трансмембранную область и короткий цитоплазматический хвост. N-концевой домен (D1) участвует исключительно в связывании лиганда, тогда как мембрано-проксимальные домены (C2, C3 или D4, D5) необходимы для гомофильных взаимодействий.
[00105] ALCAM связывается с доменом 3 CD6, соответствующим мембрано-проксимальному домену SRCR [Whitney et al., J. Biol. Chem 1995, 270: 18187-18190].
+
+
[00106] CD6 экспрессируется на поверхности Т-клеток, включая Т-клетки CD4, и может играть роль в активации, дифференцировке, выживании и миграции Т-клеток. Однако о роли T-клеток CD6 в патогенезе тяжелой неаллергической астмы ранее не сообщали.
[00107] Авторы настоящего изобретения сообщают в данном документе о неожиданном открытии того, что у пациентов с фатальной тяжелой астмой, которые являются стероид-рефрактерными, уровень экспрессии белка CD6 и его лиганда, ALCAM, в ткани легких значительно выше, чем у пациентов без астмы (фиг. 2). Дополнительно основанный на биоинформатике анализ de novo общедоступных наборов данных RNASeq подтверждает этот результат, демонстрируя, что у пациентов с тяжелой астмой мРНК CD6 экспрессируется на значительно более высоких уровнях по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 3B). Более того, основанный на биоинформатике анализ de novo этих наборов данных также продемонстрировал, что маркеры Th17 и цитокины CCR6, CCR4, KLRB1, IL-17A и IL-17F все экспрессируются на значительно более высоких уровнях у пациентов с тяжелой астмой по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 3C-3G). Учитывая стероид-рефрактерную природу заболевания у этих пациентов с тяжелой астмой (что свидетельствует об отличном от Th2-заболевании, поскольку опосредованная Th2 астма, как правило, хорошо поддается лечению стероидами, см. фиг. 7) и высокие уровни экспрессии данных маркеров Th17 и цитокинов, авторы настоящего изобретения заключают, что такая повышенная экспрессия CD6 обусловлена преимущественно инфильтрацией ткани легких Т-клетками Th17.
[00108] Интересно, что в последнем отчете было высказано предположение, что эозинофильная обусловленная Th2 аллергическая астма может быть частично опосредована ALCAM, поскольку мыши с нокаутом ALCAM и мыши, обработанные антителами к ALCAM, демонстрируют сниженные уровни цитокинов Th2 в ответ на воздействие аллергеном. Kim et al., Am J Respir Crit Care Med. 2018 Apr 15;197(8):994-1008. Однако эти данные были ограничены аллергическими эозинофильными ответами, опосредованными Th2 (сосредоточенными на цитокинах Th2, в том числе IL-4, IL-5, IL-13 и IgE), на моделях аллергической астмы; тогда как, напротив, вышеупомянутые результаты авторов настоящего изобретения сосредоточены на случаях тяжелой неаллергической астмы, при которой наблюдается низкое содержание или отсутствие эозинофилов. Дополнительно данные авторов настоящего изобретения свидетельствуют о том, что высокие уровни Т-клеток Th1 и Th17, экспрессирующих маркеры Th17 (CCR6, CCR4, KLRB1, IL-17A и IL-17F) на значительно повышенных уровнях, могут обуславливать патологию при тяжелой стероид-рефрактерной астме. Интересно, что данные авторов настоящего изобретения также отличаются от результатов, сообщенных Kim et al., тем, что указанные авторы обнаружили низкий уровень резидентного белка ALCAM в легких вследствие шеддинга ALCAM (посредством активности металлопротеиназы семейства ADAM); тогда как, напротив, авторы настоящего изобретения наблюдали высокие уровни белка ALCAM в легких пациентов с неаллергической тяжелой астмой (фиг. 2). Таким образом, данные авторов настоящего изобретения в свете отчета Kim et al. дополнительно иллюстрируют сложные различия между эозинофильным и неэозинофильным типами астмы, которые, вероятно, обуславливают обычно чувствительную к стероидам природу первого и обычно стероид-рефрактерную или резистентную природу последнего.
[00109] Примечательно, что авторы настоящего изобретения также сообщают в данном документе, что на мышиной модели аллергической астмы, опосредованной Th2 (та же модель, которую использовали Kim et al. выше), ингибирование CD6 эффективно снижает содержание цитокинов Th2 в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (фиг. 5C) и подавляет обусловленное Th2 продуцирование IgE (фиг. 6), показывая, что эозинофильную Th2-астму также можно лечить с помощью антитела к CD6. Таким образом, в отличие от раздвоенного ответа на лечение стероидами, который практически является отличительной чертой между эозинофильным и неэозинофильным типами астмы, данные авторов настоящего изобретения свидетельствуют о том, что ингибирование CD6 может обеспечить универсальный механизм для одновременного подавления астмы, опосредованной Th2 и Th1/Th17. Насколько известно авторам настоящего изобретения, это первое сообщение, в котором предлагается осуществлять лечение тяжелой астмы, характеризующейся низким содержанием или отсутствием эозинофильного компонента (т.е. астмы, опосредованной Th1/Th17, а не аллергической астмы, опосредованной Th2), с помощью антитела к CD6.
[00110] Соответственно, в определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие ингибирование или блокирование передачи сигнала с помощью CD6. В конкретных вариантах осуществления способы и композиции направлены на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, характеризующаяся низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. Способы определения количества эозинофилов в крови хорошо известны в данной области техники и их можно применять в соответствии с настоящим изобретением (см., например, Kostikas et al., Curr Drug Targets. 2018 Dec; 19(16): 1882-1896, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
[00111] Специалисту средней квалификации в данной области техники будет ясно, что присутствие эозинофилов на высоком или низком уровнях является общепринятым золотым стандартом для дифференциации аллергической астмы от других форм неаллергической астмы. Эозинофилы обычно составляют менее 5% лейкоцитов периферической крови, но в ответ на воспаление, опосредованное Т-клетками-хелперами типа 2 (Th2) (например, при аллергической астме), их продуцирование значительно увеличивается, и во многих клинических исследованиях использовали измерение количества эозинофилов в крови в качестве косвенного показателя уровней эозинофилов в легких. См., например, Kostikas et al., Curr Drug Targets. 2018 Dec; 19(16): 1882-1896, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Как используется в данном документе, ссылка на пациента с астмой с «низким содержанием» эозинофилов означает, что у пациента количество эозинофилов в крови составляет ≤300 клеток/мкл. Ссылка на пациента с астмой, у которого эозинофилы «отсутствуют», означает, что у субъекта в крови нет обнаруживаемых количеств эозинофильных клеток/мкл.
[00112] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00113] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение или ослабление миграции T-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00114] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00115] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие приведение T-клетки в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00116] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00117] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение, или ослабление миграции T-клетки в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00118] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00119] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести тяжелой астмы, предусматривающие приведение T-клетки в контакт с партнером по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00120] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение, или ослабление миграции T-клетки в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00121] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00122] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
[00123] В некоторых вариантах осуществления способ лечения тяжелой астмы включает модулирование активации, пролиферации, дифференцировки, выживания и/или миграции одной или более клеток, экспрессирующих CD6, путем приведения клетки в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001). Например, клетка, экспрессирующая CD6, которую приводят в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001), может представлять собой T-клетку, которая экспрессирует CD6. Соответственно, такие свойства такой Т-клетки можно модулировать у субъекта, у которого имеется тяжелая астма, путем введения антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-клетку CD4+. В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-клетку, являющуюся T-хелпером 1 (Th1). В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-лимфоцит (T-клетку), являющуюся T-хелпером 17 (Th17). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 (например, EQ001) модулирует активацию, дифференцировку, выживание и/или миграцию T-клетки Th1 и/или T-клетки Th17, а также другой клетки, экспрессирующей CD6. Например, антитело к CD6 (например, EQ001) может модулировать активацию, дифференцировку, выживание и/или миграцию комбинации клеток, выбранных из (i) T-клетки Th17 и T-клетки Th2; (ii) T-клетки Th17 и T-клетки Th1; (iii) T-клетки Th1 и T-клетки Th2; и (iv) T-клетки Th17, T-клетки Th1 и T-клетки Th2. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
[00124] В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму, которая предусматривает нейтрофильный или смешанный фенотип, который является как эозинофильным, так и нейтрофильным. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму, которая предусматривает нейтрофильный, малогранулоцитарный или смешанный фенотип, который являются как эозинофильным, так и нейтрофильным. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th17. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th1. В определенных конкретных вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки Th1 CD6 и T-клетки Th17 CD6. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th17. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6 T-клетка, которая представляет собой T-клетку Th1. В определенных конкретных вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки Th1 CD6 и T-клетки Th17 CD6. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма представляет собой смешанную нейтрофильную и эозинофильную астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th1, T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th17, и T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th2.
+
[00125] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th17.
+
[00126] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th1.
+
+
[00127] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th17, и T-клетки CD6, которая представляет собой T-клетку Th1.
[00128] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает низкий уровень эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая не предусматривает наличия эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001).
+
+
+
+
+
+
[00129] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ, но по сути не предусматривает наличия эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ и низкий уровень эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает Т-клеточный ответ, который по сути опосредован эффекторной клеткой Th17 CD4, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает Т-клеточный ответ, который по сути опосредован эффекторными клетками Th1 и Th17 CD4, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению астмы (например, тяжелой астмы), которая предусматривает Т-клеточный ответ, опосредованный эффекторными клетками Th1 и/или Th17 CD4, количество которых является по меньшей мере в 2 раза (2x) большим, чем количество эффекторных клеток Th2 CD4, или эффекторными клетками Th1 и/или Th17 CD4, количество которых является в 3x, 4x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x, 40x, 50x, 100x, 1000x, 10000x раз больше, чем количество эффекторных клеток Th2 CD4.
[00130] Партнер по связыванию, который специфически связывается с CD6 на Т-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6, может представлять собой антитело к CD6 или его антигенсвязывающую часть.
[00131] Антитело к CD6 может представлять собой любое антитело, которое связывается с CD6 и блокирует опосредованную CD6 нисходящую передачу сигнала в T-клетке. Например, исследования блокирования с применением моноклональных антител к CD6 (mAb) свидетельствуют о том, что CD6 играет важную роль в развитии Т-клеток, путем регулирования адгезивных взаимодействий Т-клеток с эпителиальными клетками тимуса (ТЕ) (Patel et al., J. Exp. Med. (1995) 181:1563-1568). Дополнительные исследования показали, что CD6 может функционировать как важная вспомогательная молекула при активации Т-клеток. Например, некоторые mAb к CD6 являются непосредственно митогенными для Т-клеток (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Bott et al., Int. Immunol. (1993) 7: 783), в то время как другие способны совместно стимулировать пролиферацию Т-клеток в сочетании с антителом к CD3, антителом к CD2 или PMA (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Morimoto et al., J. Immunol. (1988) 140:2165-2170; Osorio et al., Cell. Immunol. (1994) 154:23). Еще дополнительные доказательства роли CD6 в активации Т-клеток получены из исследований, показывающих, что CD6 становится гиперфосфорилированным по остаткам Ser и Thr (Swack et al., Mol. Immunol. (1989) 26:1037-1049; Swack et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:7137; Cardenas et al., J. Immunol., 145:1450-1455 (1990)) и фосфорилированным по остаткам Tyr (Wee et al., J. Exp. Med. (1993) 177:219-223) после активации Т-клеток. Эти и другие исследования указывают на то, что CD6 является важным модулятором функции как незрелых, так и зрелых Т-клеток in vivo, воздействуя как на активацию Т-клеток, так и на передачу сигнала (De Wit, J. et al., Blood (2011) 118: 6107-6114), и любое антитело, которое способно предотвратить данные эффекты, подходит для применения в настоящем изобретении.
[00132] В патенте США № 6372215 раскрыты антитела и другие связывающие средства, которые специфически связываются с доменами 3 SRCR (D3) CD6 человека (hCD6) или стволовым доменом CD6 человека (CD6S) и ингибируют связывание молекулы клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM) с CD6.
[00133] В более ранних публикациях и патентах раскрыты последовательности моноклонального антитела к CD6 (IOR-T1) мыши и модификации аминокислот, которые были выполнены для гуманизации IOR-T1 до -T1h (гуманизированного IOR-T1). В патенте США №5712120 и его эквиваленте ЕР 0699755 раскрыты конкретные способы гуманизации моноклональных антител мыши и последовательности IOR-T1 и -T1h. В патенте США №6572857 и его эквиваленте ЕР 0807125 раскрыта последовательность IOR-T1 и -T1h (гуманизированного IOR-T1). В PCT/IN2008/00562 и родственном патенте США №8524233 под названием «Моноклональное антитело и способ его получения» раскрыто продуцирование в клетках NS0 антитела к CD6, которое имеет последовательности тяжелой и легкой цепей, представленные в данном документе под SEQ ID NO: 1 и 2. Это антитело также упоминалось в упомянутом патенте как T1h, хотя его последовательность отличалась от исходного T1h. INN-название данного антитела - итолизумаб. Итолизумаб продуцируется в линии клеток NS0, полученных от мыши, и в клетках яичника китайского хомячка (СНО), и упоминается в данном документе под коммерческим названием EQ001, если продуцируется в клетках СНО, и под коммерческим названием ALZUMAb, если продуцируется в клетках NS0. EQ001 (т.е. итолизумаб, продуцируемый в клетках CHO) также известен в данной области техники как «Bmab-600». В различных вариантах осуществления в данном документе авторы настоящего изобретения называют само антитело независимо от способа его получения по его INN-названию - итолизумаб. Таким образом, используемый в данном документе термин «итолизумаб» охватывает ALZUMAb и EQ001, каждый из которых имеет ту же последовательность, что и итолизумаб. Аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VK) итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены в данном документе под SEQ ID NO: 1 и 2 соответственно. Нуклеотидные (ДНК) последовательности VH и VK итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены в данном документе под SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR 1-3 VH итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены под SEQ ID NO: 5-7 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR 1-3 VK итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены под SEQ ID NO: 8-10 соответственно.
[00134] Соответственно, антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.
[00135] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, предусматривающие (а) нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 3, или комплементарную ей последовательность; и (b) молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 4, или комплементарную ей последовательность.
[00136] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80% гомологична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.
[00137] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое специфически связывает CD6 и предусматривает в этой части по меньшей мере приблизительно 65% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 70% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 75% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 80% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 80% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 85% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 90% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 95% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 98% аминокислотная последовательность идентичность или по меньшей мере приблизительно 99% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, относительно аминокислотных остатков, представленных под SEQ ID NO 1 и 2.
[00138] Антитело к CD6 может содержать одну или более CDR, выбранных из CDR1 тяжелой цепи EQ001: GFKFSRYAMS (SEQ ID NO: 5); CDR2 тяжелой цепи EQ001: TISSGGSYIYYPDSVKG (SEQ ID NO: 6); CDR3 тяжелой цепи EQ001: RDYDLDYFDS (SEQ ID NO: 7); CDR1 легкой цепи EQ001: KASRDIRSYLT (SEQ ID NO: 8); CDR2 легкой цепи EQ001: YATSLAD (SEQ ID NO: 9); CDR3 легкой цепи EQ001: LQHGESP (SEQ ID NO: 10); и их комбинации.
[00139] В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело IgG, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело IgG1, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело, продуцируемое в клетке CHO, где гуманизированное антитело содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10.
[00140] Антитело к CD6 может быть выбрано из mAb UMCD6 (Li et al., PNAS March 7, 2017, vol. 114, no. 10, 2687-2692, источник полностью включен в данный документ посредством ссылки) и любого из антител, перечисленных в таблице 2.
Таблица 2. Антитела к CD6
[00141] Антитело к CD6 может представлять собой T1h, раскрытое в патенте США №8524233, включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
[00142] Антитело к CD6 может представлять собой итолизумаб. Антитело к CD6 может представлять собой ALZUMAb. Антитело к CD6 может представлять собой EQ001.
[00143] Антитело к CD6 может представлять собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640.
[00144] Антитело к CD6 может связываться с CD6 на поверхности Т-клетки. Антитело к CD6 может связываться с доменом 1, доменом 2 или доменом 3 CD6 на поверхности Т-клетки. В определенных аспектах антитело к CD6 связывается с доменом 1 или доменом 3 на CD6. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 связывается с доменом 3 на CD6. Связывание антитела к CD6 с CD6 на поверхности T-клетки может модулировать активность T-клетки. В определенных аспектах связывание антитела к CD6 c CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки. В конкретных аспектах связывание антитела к CD6 с CD6 на поверхности T-клетки модулирует миграцию T-клетки в ткань легких и через нее.
[00145] Антитело к CD6 (например, EQ001) можно доставлять субъекту в виде фармацевтической композиции на основе антитела к CD6.
[00146] Фармацевтические композиции, подходящие для доставки антитела к CD6, и способы их получения будут очевидны для специалистов в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в 19-м издании Remington’s Pharmaceutical Sciences, (Mack Publishing Company, 1995г.), включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Фармацевтические композиции, содержащие антитела к CD6, также известны в данной области техники. Например, антитело к CD6 может представлять собой фармацевтическую композицию, раскрытую в патентной  заявке США №12/525449 (US20100047242), включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
[00147] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать активное фармацевтическое средство (например, антитело к CD6, такое как EQ001) и одно или более из фармацевтически приемлемых носителя, вспомогательных веществ, разбавителя, поверхностно-активного вещества и/или сред-носителей.
[00148] Фармацевтическая композиция может содержать антитело к CD6 (или его антигенсвязывающий фрагмент) и одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ. Такие средства известны в данной области техники (см., например, 18-е издание Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Истон, Пенсильвания (1990 г.), включенное в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
[00149] Настоящее изобретение также включает виды комбинированной терапии, предусматривающие введение пациенту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части в комбинации со вторым активным средством, или устройством, или процедурой, с помощью которых можно обеспечивать лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В данном контексте «вводится в комбинации» означает: (1) часть одной и той же единичной лекарственной формы; (2) введение по отдельности, но в качестве части одной и той же терапевтической лечебной программы или схемы, как правило, но не обязательно в один и тот же день.
[00150] Как отмечалось ранее, EQ001 (или другое антитело к CD6) в некоторых аспектах можно вводить отдельно в качестве монотерапии или в некоторых аспектах в качестве комбинированной терапии. В некоторых аспектах любое из EQ001 (или других антител к CD6), описанных в данном документе (например, EQ001), предназначено для введения пациенту в соответствии со способами, раскрытыми в данном документе, может вводить в сочетании с одним или более другими терапевтическими средствами в качестве комбинированной терапии. Например, EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить пациенту в качестве комбинированной терапии с другим средством для лечения воспалительного или аутоиммунного заболевания. Комбинированная терапия может включать введение с EQ001 (или другим антителом к CD6) средства, выбранного, например, без ограничения из стероида или иммунодепрессанта. Стероид может представлять собой кортикостероид. Кортикостероид может представлять собой преднизон.
[00151] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить до, после или одновременно с одним или более из таких противовоспалительных средств или средств против аутоиммунных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления такие комбинации могут обеспечивать значительные преимущества, включая аддитивную или синергетическую активность в терапии.
[00152] В различных вариантах осуществления композиции и способы, раскрытые в данном документе, например способы для лечения астмы, включают введение субъекту эффективного количества EQ001 (или другого антитела к CD6) или композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей EQ001 (или другое антитело к CD6).
[00153] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить в виде фармацевтической композиции. Ингибитор пути CD6-ALCAM можно вводить до, после и/или одновременно с одним или более другими терапевтическими средствами. При одновременном введении с одним или более другими терапевтическими средствами такое введение может осуществляться совместно (например, в одной композиции) или может осуществляться посредством двух или более отдельных композиций, необязательно посредством одного и того же или разных путей введения (например, местного, системного, перорального, внутривенного и др.).
[00154] Введение EQ001 (или другого антитела к CD6) и/или других терапевтических средств можно осуществлять посредством любого пути введения терапевтических средств. Эти пути включают системное или местное введение, такое как пероральный, назальный, парентеральный, трансдермальный, подкожный, вагинальный, буккальный, ректальный или местный пути введения.
[00155] Для введения согласно способам применения, описанным в данном документе, EQ001 (или другое антитело к CD6) можно смешивать перед введением с нетоксичным фармацевтически приемлемым веществом-носителем (например, физиологическим раствором или натрий-фосфатным буфером) и вводить с помощью любой подходящей с медицинской точки зрения процедуры, например парентерального введения (например, инъекции), такого как внутривенная или внутриартериальная инъекция.
[00156] Составы на основе EQ001 (или другого антитела к CD6), применяемые в соответствии с настоящим изобретением, можно получить путем смешивания антитела, характеризующегося желаемой степенью чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами в форме либо лиофилизированных составов, либо водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и на основе других органических кислот; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты, такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол; полипептиды с низкой молекулярной массой (менее приблизительно 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалозу или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™ PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
[00157] EQ001 (или другое антитело к CD6) также может заключаться в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или полимеризации на границе раздела фаз, например, микрокапсулы из гидроксиметилцеллюлозы или желатина и микрокапсулы из поли-(метилметакрилата) соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, микросферы альбумина, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики широко известны в данной области техники.
[00158] Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие EQ001 (или другое антитело к CD6), причем эти матрицы имеют форму формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели, сополимеры L-глутаминовой кислоты, неразлагаемый сополимер этилена и винилацетата и разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты.
[00159] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить субъекту в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение в виде болюса или путем непрерывной инфузии в течение определенного периода времени, внутримышечным, внутрибрюшинным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, интрасиновиальным, интратекальным или пероральным путями. В некоторых случаях предпочтительным является внутривенное или подкожное введение EQ001 (или другого антитела к CD6).
[00160] В зависимости от предполагаемого пути введения раскрытые соединения или фармацевтические композиции могут находиться в твердой, полутвердой или жидкой лекарственной форме, такой как, например, инъекционные препараты, таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы с замедленным высвобождением, эликсиры, вытяжки, эмульсии, сиропы, порошки, жидкости, суспензии или тому подобное, иногда в однократных дозировках и в соответствии с общепринятой фармацевтической практикой. Точно так же их можно также вводить в форме для внутривенного (в виде болюса, так и инфузия), внутрибрюшинного, подкожного или внутримышечного введения, и все формы применения хорошо известны специалистам в области фармацевтики. Фармацевтические композиции, подходящие для доставки EQ001 (или другого антитела к CD6) (отдельно или, например, в комбинации с другим терапевтическим средством в соответствии с настоящим изобретением), и способы их изготовления будут очевидны для специалистов в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в 19-м издании Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 1995 г.), включенном в данный документ во всей своей полноте.
[00161] Схему дозирования с применением EQ001 (или другого антитела к CD6) выбирают в соответствии с множеством факторов, включая тип, вид, возраст, вес, пол и медицинское состояние пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; функцию почек или печени пациента; и конкретное используемое раскрытое соединение. Врач или ветеринар средней квалификации в данной области техники может легко определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предупреждения состояния, противодействия состоянию или остановки прогрессирования состояния.
[00162] Иллюстративный неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества EQ001 (или другого антитела к CD6), используемый в настоящем изобретении, составляет примерно 0,01-100 мг/кг массы тела субъекта, например приблизительно 0,01-50 мг/кг, например приблизительно 0,01-25 мг/кг. Медицинский работник средней квалификации в данной области техники может легко определить и прописать эффективное количество требуемой фармацевтической композиции. Например, врач может начинать с доз EQ001 (или другого антитела к CD6) на уровнях ниже, чем доза, требуемая для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно увеличивать дозировку до тех пор, пока не будет достигнуто необходимого эффекта.
[00163] В одном варианте осуществления EQ001 (или другое антитело к CD6) вводят путем инфузии при еженедельной дозировке, составляющей от 1 до 500 мг/кг в расчете массы тела субъекта, например от 20 до 200 мг/кг. Такое введение можно повторять, например от 1 до 8 раз, например от 3 до 5 раз. В качестве альтернативы введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода, составляющего от 2 до 24 часов, например от 2 до 12 часов.
[00164] В одном варианте осуществления EQ001 (или другое антитело к CD6) вводят при еженедельной дозировке, составляющей от 0 до 200 мг, до 7 раз, например от 4 до 6 раз. Введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода, составляющего от 2 до 24 часов, например от 2 до 12 часов. При необходимости такую схему можно повторять один или более раз, например через 6 месяцев или 2 месяца.
[00165] В некоторых аспектах этих видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой одно или более средств, с помощью которых можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых аспектах этих видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более иммунодепрессантов. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более бета-агонистов.
[00166] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более бета-агонистов кратковременного действия. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой альбутерол. В некоторых аспектах альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой стероид, например кортикостероид. В некоторых аспектах кортикостероид вводят в лекарственной форме, выбранной из таблетки, капсулы с отсроченным высвобождением, таблетки с пролонгированным высвобождением, капсулы с пролонгированным высвобождением, сиропа, раствора, настойки, суспензии, таблетки с отсроченным высвобождением, жидкости и таблетки для рассасывания.
[00167] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой ипратропий. В некоторых аспектах ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей.
[00168] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство предусматривает одно или более средств, выбранных из беклометазона дипропионата; будесонида; флунизолида; флутиказона пропионата; мометазона фуроата; триамцинолона ацетонида; дексаметазона; гидрокортизона; метилпреднизона; преднизолона; преднизона; формотерола фумарата; сальметерола ксинафоата; альбутерола сульфата; изоэтарина гидрохлорида; изопротеренола гидрохлорида; левалбутерола гидрохлорида; пирбутерола ацетата; тербуталина сульфата; ипратропия бромида; монтелукаста натрия; зафирлукаста; зилеутона; окситрифиллина; теофиллина; кромолин-натрия; недокромила натрия; омализумаба; комбинированного лекарственного препарата, содержащего флутиказон и сальметерол; комбинированного лекарственного препарата, содержащего ксинафоат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего будесонид и формотерола фумарат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего флутиказона пропионат и салметерола ксинафоат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего будесонид и формотерола фумарат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего ипратропия бромид и альбутерола сульфат; или их комбинаций.
[00169] В некоторых аспектах настоящее изобретение также включает виды комбинированной терапии, предусматривающие введение пациенту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части в комбинации с процедурой, выбранной из интубации, искусственной вентиляции легких, кислородной терапии и их комбинаций. Такие процедуры можно также проводить субъекту в комбинации с любым одним или более из вышеуказанных дополнительных средств, которые являются полезными в видах комбинированной терапии, описанных в данном документе.
[00170] В определенных аспектах способы, раскрытые в данном документе, которые могут включать введение антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части субъекту, могут обеспечивать лечение одного или более симптомов, связанных с астмой.
[00171] Оптимальные дозировки и схемы дозирования для осуществления введения могут легко быть определены специалистами в данной области техники и будут варьироваться в зависимости от фармакодинамических характеристик конкретного средства, его времени и пути введения, эффективности препарата и развития болезненного состояния (включая природу и выраженность симптомов заболевания). Кроме того, факторы, связанные с конкретным пациентом, подвергающимся лечению, включая пол пациента, возраст, вес, пищевой рацион, физическую активность и сопутствующие заболевания, приведут к необходимости корректировки дозировок и/или схем.
[00172] Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, патентные заявки PCT, публикации патентных заявок PCT, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и публикации непатентных документов, упомянутые в данном описании или перечисленные в любом информационном листке заявки, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Из вышеизложенного следует понимать, что, хотя конкретные варианты осуществления изобретения были описаны в данном документе с целью иллюстрации, можно осуществлять различные модификации без отклонения от сущности и границ объема настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
Экспрессия CD6 значительно повышена у пациентов-людей с фатальной астмой
+
[00173] Краткое описание результатов. В ткани легких, взятой у пациентов с фатальной астмой, наблюдали высокий уровень инфильтрации клеток CD6 в собственном слое, в котором происходит сверхэкспрессиия ALCAM, в этой области по сравнению с контролями.
+
+
+
[00174] Легкие получали в свежем виде либо от пациентов с фатальной астмой, либо от пациентов, не страдающих астмой. Образцы тканей фиксировали и затем окрашивали для выявления экспрессии CD6, ALCAM с помощью иммунофлуоресценции. Экспрессия ALCAM в собственном слое была повышенной у пациентов с фатальной астмой; в то время как экспрессия ALCAM в собственном слое контрольной группы, не страдающей астмой, отсутствовала. В таких легких область окрашивания ALCAM локализовалась вместе с высокими уровнями инфильтрирующих клеток CD6 (фиг. 2). Это свидетельствует в пользу того, что тяжелая астма связана с инфильтрацией Т-клетками CD6, и что экспрессия ALCAM может участвовать в миграции/инфильтрации клеток CD6 в легкие в ходе тяжелой астмы/фатальной астмы. Напротив, в предыдущих исследованиях на моделях аллергической астмы продемонстрировали, что уровни ALCAM являются сниженными в тканях легких у животных, подвергшихся воздействию аллергенов, вследствие увеличения уровня шеддинга ALCAM, опосредованного металлопротеазой.
ПРИМЕР 2
Экспрессия CD6 в значительной степени повышена у пациентов-людей с фатальной астмой
[00175] Краткое описание результатов. Анализ de novo общедоступных наборов данных RNASeq подтверждает, что у пациентов с тяжелой астмой экспрессируются значительно более высокие уровни CD6 по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой.
[00176] Данные по РНК были получены из образцов клеточного осадка, собранных с помощью лаважа бронхов, в рамках двух продолжительных проспективных клинических исследований:
•исследования BOBCAT (Arron et al., Eur Respir J. 2014 Feb;43(2):627-9)
• исследования MAST (Simpson et al., Nat Immunol. 2014 Dec;15(12):1162-70)
[00177] Транскриптом этих образцов определяли с помощью RNASeq, и набор данных, состоящий из количества транскрипционных ридов, которое отображается для всех отдельных генов для каждого образца, предоставили в общедоступной базе данных (Sun et al., Sci Signal. 2015 Dec 1;8(405)).
+
+
[00178] С применением биоинформатики авторы настоящего изобретения собрали литературные данные для создания сравнения экспрессии CD6 в контроле и у пациентов с умеренной и тяжелой астмой, и анализ авторов настоящего изобретения продемонстрировал значительные различия в уровнях экспрессии CD6, при этом пациенты с тяжелой астмой экспрессировали CD6 на значительно более высоких уровнях (фиг. 3B). Аналогичные, хотя и менее выраженные увеличения экспрессии CD4 также наблюдали у пациентов с тяжелой астмой, у которых CD4 экспрессировался на значительно более высоких уровнях, чем у пациентов с умеренной астмой и здоровых пациентов (фиг. 3A). Сопутствующее увеличение указывает на присутствие повышенного количества Т-клеток CD6 в легких у пациентов с тяжелой астмой. Таким образом, эти данные свидетельствуют о том, что для пациентов с тяжелой астмой характерно повышенное количество Т-клеток CD6 в легких вследствие повышенной инфильтрации Т-клетками.
[00179] Анализ, сравнивающий экспрессию маркеров Th17 и цитокинов в контроле и у пациентов с умеренной и тяжелой астмой, продемонстрировал значительные различия в уровнях экспрессии CCR6 (фиг. 3C), CCR4 (фиг. 3D), KLRB1 (фиг. 3E), IL-17A (фиг. 3F) и IL-17F (фиг. 3G), что указывает на повышенное содержание клеток Th17 у пациентов с тяжелой астмой, а также на связь между клетками CD6 и Th17.
[00180] При использовании того же набора данных объективный кластерный анализ, проведенный по всем пациентам с астмой, независимо от типа астмы, продемонстрировал, что подгруппа пациентов с тяжелой астмой имеет как высокий уровень CD6, так и аналогичный профиль экспрессии генов, что позволяет предположить, что отличающийся профиль пациента может быть связан с высоким уровнем экспрессии CD6 (фиг. 4A и фиг. 4B).
[00181] Авторам настоящего изобретения не известен какой-либо предшествующий анализ, в котором изучали экспрессию CD6 в этом наборе данных, или какие-либо предыдущие сообщения о том, что экспрессия CD6 является увеличенной при тяжелой астме. Эти данные демонстрируют, что у пациентов с тяжелой астмой, которые плохо поддаются лечению стероидами, экспрессия CD6 в легких является высокой. Таким образом, эти данные впервые представляют доказательства в поддержку применения ингибирования CD6 для лечения тяжелой астмы (например, вызванной Т-клетками Th1 / Th17).
[00182] Примечательно, что аллергическая астма также включает Т-клеточный компонент, хотя при этом характеризуется ответом, опосредованным Th2, который хорошо поддается лечению стероидами. Таким образом, авторы настоящего изобретения стремились определить, может ли CD6 являться целесообразной мишенью в лечении, эффективном в отношении как тяжелой, так и аллергической астмы, поскольку с помощью этого можно было бы осуществить следующее: (1) свести к минимуму проблемы с соблюдением пациентом режима лечения из-за неблагоприятных побочных эффектов длительного применения стероидов; (2) обеспечить удобную монотерапию для всех форм астмы; и (3) обеспечить терапию, которую пациент может продолжать применять даже при изменении у него эндотипа астмы (например, Th2 на Th2 / Th17 или Th1 / Th17).
ПРИМЕР 3
Ингибирование CD6 представляет собой эффективное лечение аллергической и тяжелой астмы
[00183] Краткое описание результатов. На модели аллергической астмы на мышах было продемонстрировано, что блокада CD6 является эффективным иммуномодулятором при заболевании, опосредованном Th2.
[00184] На фиг. 5А и 5В показаны экспериментальные группы и протокол соответственно, применяемые в этом эксперименте по аллергической астме. Вкратце, аллергическую астму вызывали путем сенсибилизации в отношении овальбумина (OVA) посредством вакцинации с помощью OVA/квасцов в дни 0 и 14, что индуцирует иммунный ответ к OVA, обусловленный Th2. В день 23, 25 и 27 мышей обрабатывали антителом к Sc-домену 1 CD6 мыши (mCD6D1), заменителем EQ001 для мыши, которое связывается с доменом 1 CD6 с характеристиками, аналогичными таковым итолизумаба, антитела к CD6 человека. Впоследствии сенсибилизированных мышей подвергают интраназальной стимуляции с помощью OVA в дни 25-27 с последующим прекращением в день 28 для оценки клеток и цитокинов в легких.
[00185] Блокада CD6 во время стимуляции антигеном привела к снижению уровней Th2-продуцируемых цитокинов IL-4, IL-5 и IL-13, в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 5C), сопровождающемуся умеренным уменьшением количества клеток легких, что свидетельствует в пользу ингибирующего действия блокады CD6 в отношении Th2-ответов.
[00186] Для дополнительного подтверждения того, что блокада CD6 может влиять на Th2-ответы, авторы настоящего изобретения проверили ее влияние на классической Th2-модели вакцинации с помощью OVA. На фиг. 6A и 6B показаны экспериментальные группы и протокол соответственно, применяемые в этом эксперименте. Вкратце, мышей вакцинировали с помощью OVA / квасцов в дни 0 и 14 и дважды в неделю обрабатывали антителом к CD6, начиная со дня -1 и до дня 16. В день 19 мышей умерщвляли для исследования ответа в виде антител к OVA. Профилактическая блокада CD6 обеспечивала ингибирование продуцирования OVA-специфического IgE, демонстрируя эффект пути CD6 в отношении Th2-ответов (фиг. 6C).
[00187] Таким образом, взятые вместе эти данные демонстрируют, что блокада CD6 представляет собой эффективное лечение, как при остром заболевании, так и с профилактической целью, от аллергической астмы, опосредованной Th2. И, взятые вместе данные, представленные в данном документе, в сочетании с известной способностью антител к CD6, таких как EQ001, ингибировать активацию и миграцию Т-клеток типа Th1/Th17, подтверждают, что с помощью ингибирования CD6 (например, с помощью EQ001) можно обеспечивать лечение как тяжелой, так и аллергической астмы.
ПРИМЕР 4
Эффективность антитела к CD6 в модели тяжелой астмы
[00188] Мышей подвергают сенсибилизации с помощью 25 мкг HDM интраназально в дни 1, 3 и 5. Мышей оставляли в покое на 5 дней и затем подвергали 3 сериям стимуляции антигеном, включающим по 3 последовательных стимуляции с помощью 25 мкг HDM с 4-дневным периодом покоя между сериями стимуляции антигеном. 25 мкг HDM только в следующих 2 процедурах стимуляции антигеном. Положительный контроль лечения, представляющий собой дексаметазон (Dex) с концентрацией, составляющей 4 мг/кг, или испытуемый образец антитела к CD6 вводят внутрибрюшинно, начиная с первого дня проведения стимуляции антигеном, а затем повторяют каждый третий день в случае Dex и через день в случае антитела к CD6.
ПРИМЕР 5
Эффективность антитела к CD6 в моделях астмы
[00189] В связи со способностью блокады CD6 оказывать направленное воздействие на несколько подтипов Т-клеток, ожидается, что для ингибирования CD6 также будет показана эффективность в отношении ряда моделей астмы, включая модели астмы, индуцированной HDM, индуцированной HDM +LPS, индуцированной аллергенами тараканов и индуцированной аллергенами Alternaria alternata, а также для моделей астмы, полученных на мышах STAT6 -/-, которые обеспечивают фенотип Th1/Th17. Соответственно, для испытания доз антитела к CD6 в диапазоне от 600 мкг до 10 мкг применяли несколько моделей (таблица 3).
Таблица 3. Дополнительные мышиные модели
[00190] Результаты этих экспериментов продемонстрируют, что ингибирование CD6 является одинаково эффективным в отношении ингибирования Th1 / Th17-; как Th2-, так и T2/Th17-формы астмы. Таким образом, настоящее изобретение способствует разработке антитела к CD6 для лечения тяжелой и аллергической астмы.
ПРИМЕР 6
Анализ образцов тканей
[00191] Образцы тканей собирают после выполнения протоколов, представленных в примерах 4 и 5, и анализируют в соответствии со следующими процедурами.
[00192] Значения веса тела и клинические показатели всех мышей собирают каждый день в соответствии с утвержденным протоколом Комитета по содержанию и использованию лабораторных животных (IACUC).
[00193] Через 24 часа после последней стимуляции аллергеном мышей анестезируют и проводят бронхоальвеолярный лаваж (BAL). Левый бронх у каждой мыши перевязывают, а правую долю промывают с помощью 0,7 мл стерильного PBS для получения BAL-жидкости. Общее количество клеток, полученных с помощью BAL, определяют с помощью окрашивания трипановым синим и стандартной световой микроскопии, и из 75000 клеток из BAL-жидкости, посредством центрифугирования клеток получают мазок на чистых предметных стеклах для дифференциального подсчета клеток с помощью окрашивания по Гимзе.
[00194] Жидкость, получаемую с помощью BAL, центрифугируют для отделения клеток от надосадочной жидкости. Надосадочную жидкость анализируют с помощью стандартных анализов на цитокины для идентификации специфических клеточных маркеров и/или цитокинов, в то время как клетки анализируют с помощью стандартных способов проточной цитометрии. Подвергнутые лаважу легкие помещают в фиксирующий раствор на 48 часов, а затем переносят в 70% этанол вплоть до заливки парафином для периодического окрашивания реактивом Шиффа (PAS), окрашивания гематоксилином и эозином и/или иммуногистохимического или иммунофлуоресцентного окрашивания маркеров Т-клеток (таких как CD3, CD4, CD8), CD6, ALCAM и других известных или потенциальных лигандов CD6.
[00195] Различные варианты осуществления, описанные выше, можно объединять с получением дополнительных вариантов осуществления. Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и не являющиеся патентными публикации, упомянутые в данном описании и/или перечисленные в информационном листке заявки, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Аспекты вариантов осуществления можно модифицировать, если это необходимо для применения концепций различных патентов, заявок и публикаций, с получением дополнительных вариантов осуществления.
[00196] Эти и другие изменения можно вносить в варианты осуществления в свете приведенного выше подробного описания. В целом, в следующей формуле изобретения используемые термины не должны толковаться как ограничивающие формулу изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в описании и формуле изобретения, но должны толковаться как включающие все возможные варианты осуществления вместе с полным объемом эквивалентов, на которые предоставляет право данная формула изобретения. Соответственно, настоящая формула изобретения не ограничивается данным раскрытием.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  Экуиллиум, Инк.
Коннелли, Стивен
Нг, Шери
<120>  КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛОЙ АСТМЫ
<130>  EQIL-006/01WO 330372-2026
<150>  US 62/636092
<151>  2018-02-27
<160>  10
<170>  PatentIn версия 3.5
<210>  1
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность VH T1h
<400>  1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  2
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность VL T1h
<400>  2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65                  70                  75                  80
Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe
85                  90                  95
Thr Leu Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210>  3
<211>  357
<212>  ДНК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность
нуклеиновой кислоты VH T1h
<400>  3
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc       60
tcctgtgcag cctctggatt caagtttagt agatatgcca tgtcttgggt tcgccaggct      120
ccggggaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagtg gtggtagtta catctactat      180
ccagacagtg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca atgtcaagaa caccctgtat      240
ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacgagat      300
tacgacctgg actactttga ctcctggggc caaggcaccc ttgtcaccgt ctcctca         357
<210>  4
<211>  321
<212>  ДНК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность
нуклеиновой кислоты VL T1h
<400>  4
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat cggtgggaga cagagtcact       60
atcacttgca aggcgagtcg ggacattaga agctatttaa cctggtacca gcagaaacca      120
gggaaagctc ctaagaccct gatctattat gcaacaagct tggcagatgg ggtcccgtcg      180
agattcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtct      240
gacgatacag caacttacta ctgtctacaa catggtgaga gtccattcac gctcggctcg      300
gggaccaagc tggaaatcaa a                                                321
<210>  5
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR1 VH T1h
<400>  5
Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser
1               5                   10
<210>  6
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR2 VH T1h
<400>  6
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  7
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR3 VH T1h
<400>  7
Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser
1               5                   10
<210>  8
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR1 VL T1h
<400>  8
Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr Leu Thr
1               5                   10
<210>  9
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR2 VL T1h
<400>  9
Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1               5
<210>  10
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная  последовательность
<220>
<223>  Получена в лаборатории - гуманизированная CDR3 VL T1h
<400>  10
Leu Gln His Gly Glu Ser Pro
1               5
<---