СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАППАКОНИТИНА ГИДРОБРОМИДА (ВАРИАНТЫ)
METHOD FOR PREPARING LAPPACONITINE HYDROBROMIDE (VERSIONS)

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения (и его варианту) лаппаконитина гидробромида (аллапинина), применяемого в качестве лекарственного противоаритмического средства.
Лаппаконитина гидробромид получают экстракцией из корней или травы аконита белоустого (Aconitum leucostomum) или корней или травы аконита северного (Aconitum septentrionale).
Известные способы получения лаппаконитина основаны на экстракции указанного растительного сырья различными растворителями: метанолом (Marion L., Fonzer L., Wilkins C.K., Boca Jr and J.P., Sandberg F., Thorsen R., Linden E. // Can J. Chem. 1967. vol. 45, pp. 969-973 [1]); 80%-ным этанолом (Ross A., Pelletier S.W.//Tetrahedron. 1992, vol. 48, № 7, pp. 1183-1192 [2]; дихлорэтаном (Платонова Т.Ф., Кузовков А.Д., Массагетов П.С.//ЖОХ. - 1958, с. 258-261 [3] ); хлороформом (Усманова С.К., Тельнов В.А., Юнусов М.С., Абдуллаев Н.Д., Шретер А.И., Филиппова Г.Б. // ХПС. - 1987, с. 879-883 [4] ).
С легкими вариациями условий экстракции и экстрагентов описанная в уровне техники общепринятая последовательность получения лаппаконитина включает следующие стадии:
- экстракция измельченного сухого растительного сырья органическим растворителем,
- упаривание полученного экстракта до полного удаления растворителя,
- подкисление остатка до кислой реакции,
- экстракция полученного кислого раствора не смешивающимся с водой органическим растворителем для удаления примесей неосновного характера,
- подщелачивание водного раствора до щелочной реакции,
- отделение выделяющегося лаппаконитина (фильтрованием или экстракцией),
- переведение основания лаппаконитина в гидробромид действием бромистоводородной кислоты,
- очистка до фармакопейной чистоты гидробромида лаппаконитина кристаллизацией из спирта.
В некоторых случаях дополнительно использовалась колоночная хроматография на окиси алюминия для доочистки основной массы основания лаппаконитина [1] или объединенных маточников [2].
Структура лаппаконитина содержит фрагмент эфира N-ацетил антраниловой (о-аминобензойной) кислоты. В силу этого, данная молекула весьма лабильна, поэтому и в кислых, и в основных средах может достаточно быстро происходить гидролиз как сложноэфирного, так и N-ацетильного фрагмента. Таким образом, проведение процесса получения лаппаконитина из растительного сырья согласно известным способам требует большой осторожности в соблюдении рН раствора и температурного режима на стадии подкисления упаренного экстракта, на стадии подщелачивания после экстракции примесей неосновного характера, а также при получении гидробромида подкислением бромистоводородной кислотой основания лаппаконитина. Кроме того, во избежание гидролиза все эти способы должны проводиться быстро и не занимать много времени для минимизации побочных процессов гидролиза. Несоблюдение вышеперечисленных условий легко может приводить к значительному снижению выхода целевого продукта из-за процесса гидролиза на одной или нескольких стадиях способа.
Наиболее близким к заявленным способам является способ получения лаппаконитина гидробромида путем 3-5-кратной экстракции корней или травы аконита северного или корней или травы аконита белоустого 50-80%-ным по объему водным раствором ацетона, с последующей отгонкой ацетона из объединенного водно-ацетонового экстракта, удалением примесей неалкалоидного характера из подкисленного серной кислотой водного остатка однократной обработкой дихлорэтаном, выделением алкалоидов из подщелоченного раствора 2-3-кратной экстракцией дихлорэтаном или этилацетатом, обработкой алкалоидов спиртовым раствором бромистоводородной кислоты и однократной перекристаллизацией лаппаконитина гидробромида из водного спирта ( RU 2123347, 1998 [5] ).
К недостаткам указанного способа следует отнести длительность производственного цикла (около 60 часов: 21-28 часов затрачивается на экстракцию растительного сырья посредством 3-5-кратной экстракции, определенное время затрачивается на упаривание экстрагента, проводят 4 экстракции дихлорэтаном, около 24 часов затрачивается на кристаллизацию основания лаппаконитина и около 10 часов - на кристаллизацию гидробромида лаппаконитина), значительные объемы ресурсов, затрачиваемых на производственный цикл, возможность протекания побочных реакций гидролиза, недостаточно высокий выход продукта (средний выход целевого продукта составляет около 0,595% в расчете на исходное сухое сырье).
Задачей настоящего изобретения является упрощение технологического процесса, сокращение его длительности и повышение выхода целевого продукта фармакопейной чистоты.
Поставленная цель достигается предложенным способом получения лаппаконитина гидробромида, который осуществляется следующим образом.
Корни или траву аконита северного (Aconitum septentrioale) или аконита белоустого (Aconitum leucostomum) подвергают экстракции хлористым метиленом в аппарате для непрерывной экстракции, полученный экстракт непосредственно подвергают флэш-хроматографии.
В качестве сорбента для флэш-хроматографии используют окись алюминия или силикагель. При этом адсорбированные алкалоиды элюируют органическим растворителем, таким как ацетон или этилацетат. Полученный этилацетатный раствор основания лаппаконитина упаривают, растворяют в ацетоне и ацетоновый раствор основания лаппаконитина обрабатывают раствором бромистоводородной кислоты в ацетоне, сырой гидробромид лапапконитина фильтруют, сушат и однократной перекристаллизацией из этанола получают гидробромид лапапконитина фармакопейной чистоты.
В качестве сорбента для флэш-хроматографии предпочтительно используют силикагель с использованием в качестве элюента этилацетата.
В качестве сорбента для флэш-хроматографии предпочтительно используют окись алюминия с использованием в качестве элюента ацетона.
В качестве аппарата для непрерывной экстракции используют общепринятые аппараты для экстракции в системе «твердое вещество - жидкость», такие как аппараты Сокслета, перколяторы.
Предложенный способ с использованием непрерывной экстракции исходного растительного сырья, кроме того, позволяет существенно сократить объемы используемого растворителя. В качестве экстрагента при этом используют хлористый метилен, являющийся дешевым низкокипящим растворителем. Экстракция кипящим хлористым метиленом не приводит к осмолению, так как его температура кипения составляет 42ºС.
Необходимо отметить, что предложенный способ с использованием непрерывной экстракции исходного растительного сырья хлористым метиленом позволяет исключить подкисление и последующее подщелачивание экстрактов, то есть исключить возможность протекания побочных реакций гидролиза. Для очистки полученный экстракт пропускают через тонкий слой сорбента (флэш-хроматография), чем достигается сорбция суммы алкалоидов и более полярных примесей на сорбенте и удаление малополярных окрашенных примесей.
Поставленная цель достигается также вариантом предложенного способа получения лаппаконитина гидробромида, осуществляемым следующим образом:
Корни или траву аконита северного (Aconitum septentrioale) или аконита белоустого (Aconitum leucostomum) подвергают экстракции полярным органическим растворителем, выбранным из группы, включающей этанол, ацетон и их водные растворы, с последующим удалением из экстракта полярного органического растворителя, подщелачиванием и экстракцией полученного остатка хлористым метиленом, с последующей очисткой полученного экстракта флэш-хроматографией.
В качестве сорбента для флэш-хроматографии используют окись алюминия или силикагель. При этом адсорбированные алкалоиды элюируют органическим растворителем, таким как ацетон или этилацетат. Полученный этилацетатный раствор основания лаппаконитина упаривают, растворяют в ацетоне и ацетоновый раствор основания лаппаконитина обрабатывают раствором бромистоводородной кислоты в ацетоне, сырой гидробромид лапапконитина фильтруют, сушат и однократной перекристаллизацией из этанола получают гидробромид лапапконитина фармакопейной чистоты
В качестве сорбента для флэш-хроматографии предпочтительно используют силикагель с использованием в качестве элюента этилацетата.
В качестве сорбента для флэш-хроматографии предпочтительно используют окись алюминия с использованием в качестве элюента ацетона.
В данном способе удаление полярного органического растворителя из экстракта осуществляют при пониженном давлении, затем кубовый остаток подщелачивают до рН 8-10 и экстрагируют его хлористым метиленом. Образующийся раствор в хлористом метилене далее используют в той же последовательности для флэш-хроматографии, как и в случае предложенного способа с использованием непрерывной экстракции.
Экстракцию растительного сырья с использованием полярного растворителя в одном из вариантов осуществления настоящего способа проводят в аппарате для непрерывной экстракции. Данный вариант осуществления заявленного способа позволяет получить дополнительное сокращение длительности процесса.
В предложенных способах для очистки хлористометиленового экстракта используют флэш-хроматографию, пропуская экстракт через тонкий слой сорбента, чем достигается сорбция суммы алкалоидов и более полярных примесей на сорбенте, и удаление малополярных окрашенных примесей.
В качестве сорбента для флеш-хроматографии используют окись алюминия или силикагель. При этом адсорбированные алкалоиды элюируют органическим растворителем, например этилацетатом или ацетоном. Упаривание этилацетатного или ацетонового раствора приводит к получению сырого основания лаппаконитина, содержание целевого алкалоида в котором достигает 80%. Таким образом, используемый в способе элюент (этилацетат или ацетон) практически полностью регенерируется и может быть снова использован для следующего элюирования.
Полученное сырое основание лаппаконитина растворяют в минимальном количестве ацетона, охлаждают и осторожно подкисляют 48% раствором бромистоводородной кислоты в ацетоне. Выпавший осадок гидробромида лаппаконитина (аллапинина) отфильтровывают, промывают минимальным количеством холодного ацетона, хлористого метилена и сушат.
В случае использования окиси алюминия, для элюирования сырого основания лаппаконитина применяют ацетон. В данном случае полученный раствор основания лаппаконитина концентрируют упариванием растворителя в вакууме и далее проводят подкисление, и гидробромид лаппаконитина выделяют и дочищают совершенно аналогично случаю применения в качестве элюента этилацетата.
Чистота полученного предложенными способами препарата гидробромида лаппаконитина составляет более 90%. Доочистка до фармакопейной чистоты достигается однократной перекристаллизацией из этанола.
После однократной кристаллизации из этанола чистота получаемого гидробромида лаппаконитина превышает 97%.
В предложенном способе с применением непрерывной экстракции растительного сырья время технологического процесса составляет около 30 часов, а в случае применения экстракции растительного сырья полярным органическим растворителем - около 12 часов. Средний выход продукта в расчете на исходное сухое сырье в предлагаемых способах составляет 0,73% (что на 20% превышает средний выход продукта согласно известному способу).
Таким образом, поставленная цель, заключающаяся в упрощении технологического процесса, сокращении его длительности и повышении выхода целевого продукта фармакопейной чистоты, достигается предложенными способами получения лаппаконитина гидробромида (вариантами), основанными на принципиально новом подходе к очистке лаппаконитина, который базируется на применении метода флэш-хроматографии для очистки полученного экстракта алкалоида путем пропускания его через тонкий слой сорбента, чем достигается сорбция суммы алкалоидов и более полярных примесей на сорбенте, и удаление малополярных окрашенных примесей. Данный высокоэффективный метод никогда ранее не применялся для получения лаппаконитина фармакопейной чистоты. Данный метод не требует применения специального оборудования и приборов, позволяет использовать значительно меньшие количества сорбента и элюента, и, кроме того, процесс хроматографирования занимает меньше времени, а также данный метод легко масштабируем.
Таким образом, предложенные способы представляют собой весьма гибкий и эффективный подход к получению лаппаконитина гидробромида. В зависимости от предъявляемых к процессу требований возможно использование различного оборудования, а также широкого спектра растворителей. Независимо от применяемой последовательности значительно сокращается число стадий процесса обеспечивается высокий выход и степень чистоты аллапинина с использованием всего одной перекристаллизации.
Изобретение далее иллюстрируется следующими конкретными примерами осуществления изобретения.
Результаты выделения гидробромида лаппаконитина из растительного сырья в условиях предложенных способов суммированы в Таблице.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Использование непрерывной экстракции (хлористый метилен), сорбент - силикагель
В аппарат Сокслета для непрерывной экстракции объемом 500 мл загружают 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита белоустого). Проводят экстракцию 250 мл хлористого метилена в течение 24 часов (за 18 часов достигается извлечение порядка 90% целевого вещества). Полученный экстракт пропускают самотеком через слой силикагеля на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 4 см, масса силикагеля ~12 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
На фильтр наносят 25 мл этилацетата и дают ему стечь самотеком. Данную порцию элюента отбрасывают, отправляя на регенерацию этилацетата.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с силикагеля ~150 мл этилацетата (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65), и полученный раствор лаппаконитина упаривают на роторном испарителе досуха, получая около 1,5 г желтого вязкого, кристаллизующегося при стоянии масла. По данным ВЭЖХ содержание целевого лаппаконитина в этом остатке достигает 80%.
Остаток растворяют в 3 мл ацетона и охлаждают до -10°С. К полученному раствору при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль - универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°С на 30 минут, и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл), и затем промывают хлористым метиленом (5 мл) и сушат. Получают около 1,5 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 1,61 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лапапконитина из растительного сырья в случае использования данного подхода составляет 0,645%.
Пример 2
Использование непрерывной экстракции (хлористый метилен), сорбент - окись алюминия
В аппарат Сокслета для непрерывной экстракции объемом 500 мл загружают 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита северного). Проводят экстракцию 250 мл хлористого метилена в течение 24 часов (за 18 часов достигается извлечение порядка 90% целевого вещества). Полученный экстракт пропускают самотеком через слой окиси алюминия на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 3 см, масса окиси алюминия ~15 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с окиси алюминия с помощью ~200 мл ацетона (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65). Полученный раствор лаппаконитина концентрируют на роторном испарителе до объема 3-4 мл. Полученный остаток охлаждают до -10°С и при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль - универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°С на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл), а затем промывают хлористым метиленом (5 мл) и сушат. Получают около 1,3 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 1,25 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лаппаконитина из растительного сырья в случае использования данного подхода составляет 0,5%.
Пример 3
Способ осуществляют аналогично примеру 2, но с использованием в качестве растительного сырья травы аконита белоустого. Условия и результаты выделения гидробромида лаппаконитина представлены в Таблице ниже.
Пример 4
Способ осуществляют аналогично примеру 2, но с использованием в качестве растительного сырья травы аконита северного. Условия и результаты выделения гидробромида лаппаконитина представлены в Таблице ниже.
Пример 5
Использование непрерывной экстракции (ацетон), сорбент - силикагель.
В аппарат Сокслета для непрерывной экстракции объемом 500 мл загружают 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита северного). Проводят экстракцию 250 мл ацетона в течение 4 часов. Полученный экстракт упаривают досуха на роторном испарителе, остаток растворяют в 250 хлористого метилена и пропускают самотеком через слой силикагеля на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 4 см, масса силикагеля ~12 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси, отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
На фильтр наносят 25 мл этилацетата и дают ему стечь самотеком. Данную порцию элюента отбрасывают, отправляя на регенерацию этилацетата.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с силикагеля ~150 мл этилацетата (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65), и полученный раствор лаппаконитина упаривают на роторном испарителе досуха, получая около 2,5 г желтого вязкого, кристаллизующегося при стоянии масла. По данным ВЭЖХ содержание целевого лаппаконитина в этом остатке достигает 80%.
Остаток растворяют в 4 мл ацетона и охлаждают до -10°С. К полученному раствору при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль - универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°С на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл) и затем промывают хлористым метиленом (5 мл), и сушат. Получают около 1,8 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 2,0 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лапапконитина из растительного сырья в случае использования данного подхода составляет 0,8%.
Пример 6
Использование обычной экстракции (80% этанол), сорбент - силикагель.
В круглодонную колбу на 1 л загружают 100 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита белоустого). Добавляют 900 мл 80% водного этанола и перемешивают в течение 2 часов. Декантируют растворитель через бумажный фильтр. К остатку в колбе добавляют еще 900 мл 80% водного этанола и перемешивают в течение 2 часов. Растворитель декантируют через бумажный фильтр, объединяют с предыдущим экстрактом и упаривают этанол в вакууме (50 миллибар). К остатку добавляют 20 мл 10% водного раствора карбоната натрия (рН ~9) и экстрагируют полученный раствор хлористым метиленом (3 раза по 50 мл). Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и пропускают самотеком через слой силикагеля на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 3 см, масса силикагеля ~9 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси, отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с силикагеля ~150 мл этилацетата (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65) и полученный раствор основания лаппаконитина упаривают на роторном испарителе досуха, получая около 1,3 г желтого вязкого, кристаллизующегося при стоянии масла.
Остаток растворяют в 3 мл ацетона и охлаждают до -10°С. К полученному раствору при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль - универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18ºС на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл) и затем промывают хлористым метиленом (5 мл) и сушат. Получают около 1,1 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 0,95 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Выход извлечения лаппаконитина из растительного сырья в случае использования данного подхода составляет 0,95%.
Пример 7
Использование обычной экстракции (80% этанол), сорбент - окись алюминия.
В круглодонную колбу на 1 л загружают 100 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита северного). Добавляют 900 мл 80% водного этанола и перемешивают в течение 2 часов. Декантируют растворитель через бумажный фильтр. К остатку в колбе добавляют еще 900 мл 80% водного этанола и перемешивают в течение 2 часов. Растворитель декантируют через бумажный фильтр, объединяют с предыдущим экстрактом и упаривают этанол в вакууме (50 миллибар). К остатку добавляют 20 мл 10% водного раствора карбоната натрия (рН ~9) и экстрагируют полученный раствор хлористым метиленом (3 раза по 50 мл). Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и пропускают самотеком через слой окиси алюминия на фильтре с пористой пластинкой (D=3 см, Н слоя = 3 см, масса окиси алюминия ~15 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси, отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с окиси алюминия ~200 мл ацетона (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65), и полученный раствор основания лаппаконитина упаривают на роторном испарителе до объема 3-4 мл. Полученный остаток охлаждают до -10°C и при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль универсальная индикаторная бумага, рН ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°C на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл) и затем промывают хлористым метиленом (5 мл), и сушат. Получают около 0,9 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 0,75 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лаппаконитина из растительного сырья в случае использования данного подхода составляет 0,75%.
Пример 8
Использование обычной экстракции (80% водный ацетон), сорбент - силикагель.
В круглодонную колбу на 1 л загружали 100 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита белоустого). Добавляют 900 мл 80% водного ацетона и перемешивают в течение 2 часов. Декантируют растворитель через бумажный фильтр. К остатку в колбе добавляют еще 900 мл 80% водного ацетона и перемешивают в течение еще 2 часов. Растворитель декантируют через бумажный фильтр и объединяют с предыдущим экстрактом. Упаривают ацетон в вакууме (60 миллибар). К остатку добавляют 20 мл 10% водного раствора карбоната натрия (рН ~9) и экстрагируют полученный раствор хлористым метиленом (3 раза по 50 мл). Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и пропускают самотеком через слой силикагеля на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 3 см, масса силикагеля ~9 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси, отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с силикагеля ~150 мл этилацетата (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65) и полученный раствор основания лаппаконитина упаривают на роторном испарителе досуха, получая около 1,2 г желтого вязкого, кристаллизующегося при стоянии масла.
Остаток растворяют в 3 мл ацетона и охлаждают до -10°С. К полученному раствору при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль -универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°С на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл) и затем промывают хлористым метиленом (5 мл), и сушат. Получают около 1,0 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 0,85 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лаппаконитина из сырья в случае использования данного подхода составляет 0,85%.
Пример 9
Использование обычной экстракции (80% водный ацетон), сорбент - окись алюминия.
В круглодонную колбу на 1 л загружают 100 г перемолотого до состояния мелкого порошка сухого растительного сырья, содержащего лаппаконитин (корни аконита северного). Добавляют 900 мл 80% водного ацетона и перемешивают в течение 2 часов. Декантируют растворитель через бумажный фильтр. К остатку в колбе добавляют еще 900 мл 80% водного ацетона и перемешивают в течение еще 2 часов. Растворитель декантируют через бумажный фильтр и объединяют с предыдущим экстрактом. Упаривают ацетон в вакууме (60 миллибар). К остатку добавляют 20 мл 10% водного раствора карбоната натрия (рН ~9) и экстрагируют полученный раствор хлористым метиленом (3 раза по 50 мл). Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и пропускают самотеком через слой окиси алюминия на фильтре с пористой пластинкой (D = 3 см, H слоя = 3 см, масса окиси алюминия ~15 г). Остаток хлористого метилена, не слившийся самотеком, откачивают на вакууме досуха. Элюент (хлористый метилен) желто-коричневого цвета, содержащий малополярные окрашенные примеси, отбрасывают, с дальнейшей регенерацией хлористого метилена на роторном испарителе.
f
Целевой лаппаконитин элюируют с окиси алюминия ~200 мл ацетона (контроль - ТСХ, силуфол, ацетон, R лаппаконитина ~0,65) и полученный раствор основания лаппаконитина упаривают на роторном испарителе до объема 3-4 мл. Полученный остаток охлаждают до -10°С и при перемешивании по каплям из капельной воронки прибавляют приготовленный заранее раствор ~0,3 мл 48% бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона (контроль - универсальная индикаторная бумага, pH ~5). Растирают шпателем выпавший белый кристаллический осадок гидробромида лаппаконитина, оставляют в морозилке при -18°С на 30 минут и затем фильтруют на фильтре с пористой пластинкой. Осадок на фильтре промывают минимальным количеством холодного ацетона (3 мл) и затем промывают хлористым метиленом (5 мл) и сушат. Получают около 0,9 г лаппаконитина гидробромида, чистота по данным ВЭЖХ более 90%.
Для финальной очистки гидробромида лаппаконитина его кристаллизуют из спирта, из расчета 2 мл спирта на 850 мг гидробромида. Получают около 0,7 г гидробромида лаппаконитина чистотой более 97%.
Суммарный выход извлечения лаппаконитина из сырья при использовании данного подхода составляет 0,7%.
ТаблицаУсловия и результаты выделения гидробромида лаппаконитина из растительного сырья
№ п/п
Масса сырья, г
Тип экстракции, экстрагент
Выход фармакопейного гидробромида лаппаконитина (аллапинина)
Используемое растительное сырье
г
% от массы сухого сырья
1
250
непрерывная, хлористый метилен
1,61
0,645
Корни аконита белоустого
2
250
непрерывная, хлористый метилен
1,25
0,5
Корни аконита северного
3
250
непрерывная, хлористый метилен
0,875
0,350
Трава аконита белоустого
4
250
непрерывная, хлористый метилен
0,75
0,300
Трава аконита северного
5
250
непрерывная,ацетон
2
0,8
Корни аконита северного
6
100
обычная,80% этанол
0,95
0,95
Корни аконита белоустого
7
100
обычная,80% этанол
0,75
0,75
Корни аконита северного
8
100
обычная, 80% водный ацетон
0,85
0,85
Корни аконита белоустого
9
100
обычная, 80% водный ацетон
0,7
0,7
Корни аконита северного