НОВЫЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ К АНТИБИОТИКАМ ШТАММЫ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ

1. Способ изолирования штамма Bifidobacterium sp., содержащего мутантный tetW на хромосоме, где указанная мутация придает штамму чувствительность к тетрациклинам и указанный штамм изолируется из устойчивого к действию тетрациклина штамма-предшественника, причем устойчивый к антибиотику фенотип обусловлен экспрессией tetW, стабильно интегрированного в хромосоме, где указанный способ включает воздействие на клетки химического мутагена и физического мутагена и где способ содержит следующие стадии:
1) культивирование клетки-предшественника с получением экспоненциально растущей культуры клеток,
2) перенос аликвоты клеток в свежую среду, содержащую бромид этидия (EtBr),
3) перенос культуры в один или несколько контейнеров для образования слоя культуры толщиной 0,5-10 мм,
4) воздействие на культуру УФ-излучения,
5) культивирование мутантных клеток с получением культуры экспоненциально растущих клеток,
6) перенос аликвоты бактерий в одну или несколько чашек Петри, содержащих пригодную среду для роста на основе загара, где аликвоту бактерии выбирают для получения единичных колоний,
7) идентификация тех колоний, которые обладают приобретенной чувствительностью к антибиотику посредством копирования посевов на чашках Петри с тетрациклиновым антибиотиком и без него,
8) выделение, выращивание и хранение тех чувствительных к тетрациклину колоний, которые идентифицированны как новый чувствительный к тетрациклину штамм, и
где минимальная ингибирующая концентрация (МИК) тетрациклина штамма-предшественника составляет, по меньшей мере, 10 мкг тетрациклина/мл и МИК тетрациклина чувствительного к антибиотику штамма составляет 1,5 мкг тетрациклина/мл.
2. Способ по п.1, где культуру после стадии 4) подвергают стадии накопления мутаций, содержащей стадии:
4a) переноса аликвоты обработанной УФ-излучением культуры в свежую среду, содержащую дозу аналога пенициллина, которая оказывает отрицательное воздействие на экспоненциально растущие клетки, но которую переносят не растущие клетки, и
4b) культивирования клеток в указанной содержащей аналог пенициллина среде в условиях, которые обеспечивают экспоненциальный рост в отсутствии пенициллина или аналога пенициллина, такого как ампициллин.
3. Штамм Bifidobacterium sp., который является чувствительным к тетрациклину вследствие инактивирующей мутации в tetW, расположенном на хромосоме, причем ген tetW содержит, по меньшей мере, одну последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID 3 [GGA TAC TGA ACC], SEQ ID NO:6 [GTG GTT TAG TCT]; и где МИК тетрациклина чувствительного штамма составляет 1,5 мкг тетрациклина/мл или меньше.
4. Штамм Bifidobacterium sp. по п.3, который идентифицирован как штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis CHCC8902 (Bb-12Tet-S139) и депонирован 28 апреля 2005 года в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen под регистрационным номером DSM17281.
5. Штамм Bifidobacterium по п.3, который идентифицирован как штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis CHCC9070 (DR10Tet-S9X) и депонирован 28 апреля 2005 года в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen под регистрационным номером DSM17282.
6. Штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis, который является чувствительным к тетрациклину вследствие инактивирующей мутации в tetW, расположенном на хромосоме, и где МИК тетрациклина чувствительного штамма составляет 1,5 мкг тетрациклина/мл или меньше.
7. Штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis по п.6, где штаммом-предшественником является Bb-12 или HN019 (DR10).
8. Применение штамма Bifidobacterium по любому из пп.3-7 для изготовления материала для употребления внутрь или бактериальной культуры.
9. Применение материала для употребления внутрь или бактериальной культуры по п.8, которые содержат штамм Bifidobacterium, перечисленный в любом из пп.3-7, где материал для употребления внутрь или материал бактериальной культуры используются для получения композиции для лечения или предотвращения заболевания, синдрома или состояния, или для улучшения переваривания пищевых добавок, или для улучшения общего состояния человека или позвоночного животного.