ПРОИЗВОДНЫЕ ДИГИДРОПИРИДИНА
DIHYDROPYRIDINE DERIVATIVES

Настоящее изобретение относится к получению низкомолекулярного гормономиметика, который имеет селективную агонистическую активность по отношению к FSH рецептору.
Гонадотропины выполняют важные функции в различных функциях организма, включающих метаболизм, терморегуляцию и репродуктивные процессы. Гонадотропины действуют на специфические клетки гонадного типа, вызывая овариальную и тестикулярную дифференцировку и образование стероидов. Например, гонадотропин гипофиза FSH (фолликулостимулирующий гормон) играет основную роль в стимулировании развития фолликул и созревании, в то время как LH (лютеинизирующий гормон) стимулирует овуляцию (Sharp, R.M. Clin. Endocrinol. 33: 787-807, 1990; Dorrington and Armstrong, Recent Prog. Horm. Res. 35: 301-342, 1979). В данный момент FSH в сочетании с LH применяется клинически для овариальной стимуляции, то есть для овариальной гиперстимуляции для оплодотворения in vitro (IVF) и возбуждения овуляции у ановуляторных бесплодных женщин (Insler V., Int. J. Fertility 33: 85-97, 1988; Navot и Rosenwaks, J. Vitro Fert. Embryo Transfer 5: 3-13, 1988), так же, как и при мужском гипогонадизме и мужском бесплодии.
Гонадотропин FSH выделяется из передней доли гипофиза под воздействием гонадолиберина и эстрогена и из плаценты во время беременности. У женщин FSH действует на яичники, стимулируя развитие фолликул, и является основным гормоном, регулирующим выделение эстрогенов. У мужчин FSH является ответственным за сохранность семенных канальцев и действует на клетки Сертоли, поддерживая гаметогенезис. Очищенный FSH клинически используется для лечения бесплодия у женщин и некоторых типов расстройств сперматогенеза у мужчин. Гонадотропины, предназначенные для терапевтических целей, могут быть выделены из человеческой мочи и являются низкой чистоты (Morse et al., Amer. J. Reproduct. Immunol. and Microbiology 17: 143, 1988). В качестве альтернативы они могут быть получены в виде рекомбинантных гонадотропинов. Рекомбинантный человеческий FSH является коммерчески доступным и используется для поддержания репродукции (Olijve et al. Mol. Hum. Reprod. 2: 371, 1996; Devroey et al. Lancet 339: 1170, 1992).
Действия гормона FSH опосредуются специфическим рецептором плазматической мембраны, которая является членом большого семейства рецепторов, связанных с G-белком. Эти рецепторы состоят из отдельного полипептида с семью трансмембранными доменами и способны взаимодействовать с Gs-белком, приводя к активации аденилатциклазы.
Рецептор FSH является высокоспецифичной мишенью в процессе роста овариального фолликула и экспрессируется исключительно в яичнике. Блокирование рецептора или ингибирование передачи сигнала, которое обычно вызывается после активации FSH-опосредованного рецептора, нарушит развитие фолликула и, таким образом, овуляцию и фертильность. Низкомолекулярные антагонисты FSH могли бы составлять основу для новых контрацептивов, в то время как низкомолекулярные агонисты FSH могут быть использованы в тех же самых клинических целях как нативные FSH, например, для лечения бесплодия и для яичниковой гиперстимуляции оплодотворения in vitro.
Низкомолекулярные миметики FSH с агонистическими свойствами были раскрыты в международных заявках WO 2000/08015 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.) и в WO 2002/09706 (Affymax Research Institute).
Некоторые производные тетрагидрохинолина в настоящее время раскрыты в международной заявке WO2003/004028 (AKZO NOBEL N.V.) в качестве веществ, модулирующих FSH и обладающих агонистическими или антагонистическими свойствами.
Настоящее изобретение относится к получению низкомолекулярных гормономиметиков, которые селективно активируют рецепторы FSH.
Таким образом, было обнаружено, что следующий класс производных дигидропиридина формулы I или его фармацевтически приемлемых солей обладает FSH агонистической активностью:
Формула I,
в которой
1
1-6
2-6
2-6
1-5
R является Салкилом, Салкенилом, Салкинилом, фенилом или Сгетероарилом;
2
3
1-4
2-4
2-4
1-4
2-4
3-4
R, R независимо являются Салкилом, Салкенилом, Салкинилом, Салкоксигруппой, Салкенилоксигруппой, Салкинилоксигруппой, галогеном;
2
2
X является SO, CH, C(O) или X является связью;
4
1-6
2-6
2-6
3-6
3-6
3-6
1-4
2-6
2-6
1-4
6-10
6-10
1-4
1-9
1-9
1-4
R является Салкилом, Салкенилом, Салкинилом, Сциклоалкилом, Сциклоалкенилом, СциклоалкилСалкилом, Сгетероциклоалкилом, СгетероциклоалкилСалкилом, Сарилом, СарилСалкилом, Сгетероарилом или СгетероарилСалкилом.
2
4
5
5
Если Х является СН, то R может дополнительно быть R-оксиакарбонилом или R-карбонилом.
4
6-10
Если R является фенилом, то дополнительно к заместителям Сарильных групп, как упомянуто в определениях, фенил может быть необязательно замещенным одним или более заместителями, выбранными из следующих групп:
1-4
1-4
5
5
5
6
Салкилтио, Салкилсульфонил, R-оксиакарбонил, R-карбонил или R,R-аминокарбонил;
5
6
5
6
1-4
2-4
2-4
3-6
3-6
1-4
2-6
2-6
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
6-10
1-9
6-10
1-4
1-9
1-4
6-10
1-4
1-9
1-4
2-6
R, R независимо являются Н, Салкилом, Салкенилом, Салкинилом, Сциклоалкилом, СциклоалкилСалкилом, Сгетероциклоалкилом, СгетероциклоалкилСалкилом, СалкоксикарбонилСалкилом, С(ди)алкиламинокарбонилСалкилом, Сарилом, Сгетероарилом, СарилСалкилом, СгетероарилСалкилом, СариламинокарбонилСалкилом, СгетероариламинокарбонилСалкилом, или R, R могут быть связаны с Сгетероциклоалкильным кольцом.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением модулируют функцию рецептора FSH и могут быть использованы в тех же самых клинических целях, что нативный FSH, поскольку они ведут себя подобно агонистам с тем преимуществом, что они могут проявлять измененные свойства стабильности и могут быть применены по-разному.
Таким образом, агонисты рецептора FSH настоящего изобретения могут быть использованы для лечения бесплодия. Предпочтительно, чтобы соединения настоящего изобретения были использованы для активации рецептора FSH.
1-4
втор
трет-
Термин «Салкил», как он использован в определении, означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-4 атома углерода, такую как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, -бутил и бутил.
1-6
1-5
1-4
трет-
н
н
Термин «Салкил» означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-6 атомов углерода, например метил, этил, пропил, изопропил, бутил, бутил, -пентил и -гексил. Предпочтительными являются Салкильные группы, наиболее предпочтительными являются Салкилы.
2-6
н
Термин «Салкенил» означает разветвленную или неразветвленную алкенильную группу, имеющую 2-6 атомов углерода, такую как этенил, 2-бутенил и -пентенил.
2-4
н
Термин «Салкенил» означает разветвленную или неразветвленную алкенильную группу, имеющую 2-4 атома углерода, такую как этенил, -пропенил и 2-бутенил.
2-6
н
Термин «Салкинил» означает разветвленную или неразветвленную алкинильную группу, имеющую 2-6 атомов углерода, такую как этинил, пропинил и -пентинил.
2-4
Термин «Салкинил» означает разветвленную или неразветвленную алкинильную группу, имеющую 2-4 атома углерода, такую как этинил и пропинил.
3-6
Термин «Сциклоалкил» означает циклоалкильную группу, имеющую 3-6 атомов углерода, такую как циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
3-6
Термин «Сциклоалкенил» означает циклоалкенильную группу, имеющую 3-6 атомов углерода, такую как циклопропенил, циклопентенил и циклогексенил.
3-6
1-4
Термин «СциклоалкилСалкил» означает циклоалкилалкильную группу, циклоалкильная группа которой имеет 3-6 атомов с тем же значением, как определено выше, и алкильную группу, имеющую 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
2-6
Термин «Сгетероциклоалкил» означает гетероциклоалкильную группу, имеющую 2-6 атомов углерода, предпочтительно 3-5 атомов углерода, и включает, по меньшей мере, один гетероатом, выбранный из N, O и/или S, которые могут быть присоединены, если возможно, через гетероатом или атом углерода. Предпочтительными являются гетероатомы N или O. Наиболее предпочтительными являются пиперидинил, морфолинил, пирролидинил и пиперазинил.
2-6
1-4
Термин «СгетероциклоалкилСалкил» означает гетероциклоалкилалкильную группу, гетероциклоалкильная группа которой имеет 2-6 атомов с тем же значением, как определено выше, и алкильную группу, имеющую 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
1-4
1-2
Термин «Салкокси» означает алкоксильную группу, имеющую 1-4 атома углерода, при этом алкильная часть имеет то же значение, что определено выше. Предпочтительными являются Салкоксигруппы.
1-4
Термин «Салкилтио» означает алкилтиогруппу, имеющую 1-4 атома углерода, при этом алкильная часть имеет то же значение, что определено выше.
2-4
Термин «Салкенилокси» означает алкенилоксильную группу, имеющую 2-4 атома углерода, при этом алкенильная часть имеет то же значение, что определено выше.
3-4
Термин «Салкинилокси» означает алкинилоксильную группу, имеющую 3-4 атома углерода, при этом алкинильная часть имеет то же значение, что определено выше.
6-10
1-4
2-4
2-4
1-4
1-4
Термин «Сарил» означает ароматическую углеводородную группу, имеющую 6-10 атомов углерода, такую как фенил, нафтил, тетрагидронафтил или инденил, которые могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, выбранными из гидрокси, амино, галогена, нитро, трифторметила, циано, Салкила, Салкенила, Салкинила, Салкоксигруппы или С(ди)алкиламиногруппы, при этом алкильная часть имеет то же значение, что определено выше. Предпочтительной ароматической углеводородной группой является фенил.
1-9
1-9
6-10
1-5
1-9
Термин «Сгетероарил» означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, имеющую 1-9 атомов углерода, включающую, по меньшей мере, один гетероатом, выбранный из N, O и/или S, как тетразолил, имидазолил, тиадиазолил, пиридинил, (бензо)тиенил, (бензо)фурил, (изо)хинолинил, тетрагидро(изо)хинолинил, кумаринил, хиноксалинил или индолил. Заместители в Сгетероарильной группе могут быть выбраны из группы заместителей, перечисленных для Сарильной группы. Предпочтительным является Сгетероарил. Сгетероарильная группа может быть присоединена, если возможно, через атом углерода или через гетероатом.
1-5
1-5
6-10
Термин «Сгетероарил» означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, имеющую 1-5 атомов углерода, включающую, по меньшей мере, один гетероатом, выбранный из N, O и/или S, как тетразолил, имидазолил, тиадиазолил, пиридинил, тиенил или фурил, причем наиболее предпочтительным является фурил. Предпочтительными гетероарильными группами являются тиенил, фурил и пиридинил. Заместители в Сгетероарильной группе могут быть выбраны из группы заместителей, перечисленных для Сарильной группы.
6-10
1-4
Термин «СарилСалкил» означает арилалкильную группу, арильная группа которой содержит 6-10 атомов углерода с тем же значением, как определено выше, и алкильную группу, имеющую 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше. Наиболее предпочтительным является бензил.
1-9
1-4
Термин «СгетероарилСалкил» означает гетероарилалкильную группу, гетероарильная группа которой содержит 1-9 атомов с тем же значением, как определено выше, и алкильную группу, имеющую 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
1-4
Термин «Салкилсульфонил» означает алкилсульфонильную группу, алкильная группа которой содержит 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
1-4
1-4
1-2
Термин «Салкоксикарбонил» означает Салкоксикарбонильную группу, алкоксигруппа которой содержит 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше. Предпочтительными являются Салкоксикарбонильные группы.
1-4
1-4
Термин «СалкоксикарбонилСалкил» означает алкоксикарбонилалкильную группу, алкильная группа которой содержит 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
1-4
1-4
Термин «С(ди)алкиламинокарбонилСалкил» означает (ди)алкиламинокарбонилалкильную группу, алкильная группа которой содержит 1-4 атома углерода с тем же значением, как определено выше.
Термин «галоген» означает фтор, хлор, бром и йод.
Термин «фармацевтически приемлемые соли» представляет те соли, которые являются подходящими для использования в контакте с тканями человека и низших животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и подобного и являются соразмерными с разумным соотношением выгода/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в уровне техники. Они могут быть получены в процессе конечного выделения и очистки соединений изобретения или отдельно взаимодействием свободного функционального основания с подходящей минеральной кислотой, такой как хлористоводородная кислота, фосфорная кислота или серная кислота, или с органической кислотой, такой как аскорбиновая кислота, лимонная кислота, винная кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, фумаровая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота, пропионовая кислота, уксусная кислота, метансульфоновая кислота и подобное. Кислотная функциональная группа может взаимодействовать с органическим или минеральным основанием, таким как гидроксид натрия, гидроксид калия или гидроксид лития.
1
1
1
1-6
1-5
1-6
4
н
Изобретение также относится к соединениям формулы I, в которых R является Салкилом, фенилом или Сгетероарил, все необязательно замещенные заместителями, как упомянуто в определениях. Более конкретно, изобретение относится к соединениям, в которых R является Салкилом, фенилом, С-гетероарилом. Изобретение также касается соединений, в которых R является -пропилом или фурилом.
2
3
1-4
Другим аспектом изобретения являются соединения формулы I, в которых R, R являются галогеном и/или Салкокси.
2
В еще одном аспекте изобретение касается соединений формула I, в которых Х является СН.
4
Другим аспектом изобретения является соединение, в котором R является фенилом, необязательно замещенным заместителями, как упомянуто в определении.
4
4
5
6
5
6
5
6
5
6
5
6
орто
мета
1-4
1-4
1-4
1-4
1-9
1-4
В другом аспекте изобретение относится к соединениям, в которых R является фенилом, который является замещенным в - и/или -положениях. В еще одном аспекте изобретение относится к соединениям формулы I, в которых R является фенилом, замещенным R,R-аминокарбонилом, Салкоксигруппой и/или галогеном. В еще одном аспекте изобретение относится к соединениям, в которых R,R в R,R-аминокарбонильной группе является С(ди)алкиламиногруппой, СалкоксикарбонилСалкилом или СгетероарилСалкилом. В еще одном аспекте, по меньшей мере, один из R, R в R,R-аминокарбонильной группе является Н.
6-10
6-10
1-4
1-9
1-9
1-4
4
В другом аспекте изобретение касается соединений, в которых Сарил, СарилСалкил, Сгетероарил или СгетероарилСалкил в R являются незамещенными.
2
Еще один аспект изобретения касается соединений, в которых Х=СН и в которых
4
R является фенилом, необязательно замещенным заместителями, как упомянуто в определениях.
1
4
Еще один аспект изобретения касается соединений, в которых все особые определения групп от R до R, как здесь определено выше, объединены в соединение дигидропиридина формулы I.
Из объема изобретения исключается 2-метил-5-оксо-7-фенил-4-(3,4,5-триметоксифенил)-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил.
Исключенное соединение относится к CAS330674-72-1, доступному из коммерческих источников, подобных Cembridge Corp., MicroChemistry Ltd, Ambinter, Asinex, Scientific Exchange Inc. и ChemDiv Inc.
Пригодные способы получения соединений изобретения описаны ниже.
1
2
3
4
Производные 1,4-дигидропиридина I настоящего изобретения могут быть получены хорошо описанной трехкомпонентной циклоконденсацией по Ганчу из циклогексан-1,3-дионов общей формулы II, бензальдегидов общей формулы III и 3-аминокротонитрила IV, в которых R, R, R, R и Х являются такими, как определено выше.
ibid.
ibid.
ibid.
Родственные реакции циклоконденсацией по Ганчу могут быть найдены в Bioorg. Med. Chem. Lett. 12 (2002) 1481-1484, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 (2002) 1141-1156, Synlett. (2002) 89-92, Drug Dev. Res. 51 (2000) 233-243, J. Med. Chem. 42 (1999) 1422-1427,  5266-5271,  41 (1998) 2643-2650, WO 9408966, Arzneim.-Forsch./Drug Res. 45 (1995) 1054-1056, J. Med. Chem. 34 (1991) 2248-2260,  17 (1974) 956-65, Chem. Rev. 72 (1972)
1-42. Вышеупомянутые реакции обычно проводятся при повышенной температуре в протонном растворителе, таком как, например, уксусная кислота, (изо)пропанол, этанол, метанол или их смеси.
1
2
3
4
В качестве альтернативы соединения общей формулы I могут быть синтезированы взаимодействием сначала циклогексан-1,3-дионов формулы II с бензальдегидами формулы III в присутствии основания, такого как, но не ограниченного, ацетат аммония, и затем взаимодействием интермедиата 2-бензилиденциклогексан-1,3-диона общей формулы V, в которой R, R, R, R и Х имеют то же значение, как определено выше, с 3-аминокротонитрилом IV.
4
О
О
О
О
Соединения общей формулы I-a, в которых X = связь и R=H, могут быть использованы для получения соединений I-b-e -алкилированием, -(гетеро)арилированием, -ацилированием или -сульфонилированием обычными способами, хорошо известными специалисту в данной области.
N,N
N,N
О
О
О
О
В обычном эксперименте соединения I-a взаимодействуют в таком растворителе, как дихлорметан, -диметилформамид, диметилсульфоксид, этанол, тетрагидрофуран, диоксан, толуол, 1-метилпирролидин-2-он или пиридин, с алкилгалогенидом, или ацилгалогенидом, или ангидридом кислоты, или сульфонилгалогенидом, или (гетеро)арилгалогенидом в присутствии такого основания, как, но не ограничиваясь, триэтиламин, -диизопропилэтиламин (DiPEA), карбонат калия, карбонат цезия или гидрид натрия, необязательно в присутствии каталитического количества йодида калия или йодида тетрабутиламмония, и/или Cu- или Pd-катализатора с образованием -алкилированного, -(гетеро)арилированного, -ацилированного или -сульфонилированного производного формулы I-b, I-c, I-d и I-e соответственно.
2
4
5
6
5
О
N,N,N',N'
О
N,N,N',N'
N,N-
Соединения формул I-f, в которых Х=СН и R=производное алкилкислоты или производное (гетеро)арилкислоты, полученное щелочным (например, NaOH) омылением соответствующего алкильного сложного эфира, могут быть конденсированы с аминами общей структуры R,RNH или спиртами общей формулы ROH с использованием реагента связывания, такого как диизопропилкарбодиимид (DIC), (3-диметиламинопропил)этилкарбодиимид (EDCI), -(бензотриазол-1-ил)--тетраметилуронийгексафторфосфат (TBTU) или -(7-азабензотриазол-1-ил)--тетраметилуронийгексафторфосфат (HATU), и основание третичного амина (DiPEA) в таком растворителе, как диметилформамид или дихлорметан при температуре окружающей среды или повышенной температуре с образованием соединений формулы I-g и I-h.
Замещенные циклогексан-1,3-дионы общей формулы II являются коммерчески доступными или могут быть получены известными из литературы в этой области способами. Подходящие примеры найдены в J. Med. Chem. 43 (2000) 4678-4693, Tetrahedron 56 (2000) 4753-4758, J. Med. Chem. 35 (1992) 3429-3447, ibid. 24 (1981) 1026-1034, Org. Synt. Coll. Vol. V (1973) 400, Chem. Ber. 88 (1955) 316-327, Justus Liebig Ann. Chem. 570 (1950) 15-31.
Бензальдегиды общей формулы III также являются коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии с литературными методиками: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2 (2000) 1119-1124, J. Chem. Soc., Chem. Commun. 4 (1993) 419-420, Synth. Commun. 20 (1990) 2659-2666, Chem. Pharm. Bull. 34 (1986) 121-129, Indian J. Chem. Sect. B 20 (1981) 1010-1013, Monatsh. Chem. 106 (1975) 1191-1201, DE 1070162, J. Org. Chem. 23 (1958) 120.
4
О
О
О
О
В качестве альтернативы соединения III-a, в которых Х=связь и R=H могут быть использованы для синтеза соединений III-b-e -алкилированием, -(гетеро)арилированием, -ацилированием или -сульфонилированием с использованием стандартных условий, как описано выше для соединений I-a.
Соединения настоящего изобретения имеют, по меньшей мере, два хиральных атома углерода и поэтому могут быть получены в виде чистых энантиомеров, или в виде смеси энантиомеров, или смеси диастереомеров. Способы получения чистых энантиомеров хорошо известны в уровне техники, например кристаллизация солей, которые получены из оптически активных кислот и рацемических смесей, или хроматография с использованием хиральных колонок. Для разделения диастереомеров могут быть использованы колонки с нормальной фазой или с обращенной фазой.
Соединения изобретения могут образовывать гидраты или сольваты. Специалистам в данной области известно, что заряженные соединения образуют гидратированные фрагменты при лиофилизации с водой или образуют сольваты при концентрировании в растворе с подходящим органическим растворителем. Соединения данного изобретения включают гидраты или сольваты перечисленных соединений.
-5
-5
-7
-9
50
Для отбора активных соединений тестирование при 10М должно привести к активности более чем 20% от максимальной активности, когда FSH используется в качестве сравнения. Другим критерием может быть величина EC, которая должна быть <10М, предпочтительно <10М, еще более предпочтительно <10М.
50
50
50
-5
-7
Специалисту будет ясно, что желаемые значения EC зависят от тестируемого соединения. Например, соединение с EC, которое является менее чем 10М, является обычно рассматриваемым кандидатом на отбор лекарственного средства. Предпочтительно, чтобы значение было более низким, чем 10М. Однако соединение, которое имеет более высокое EC, но является селективным для определенного рецептора, может быть даже лучшим кандидатом.
in vitro
in vivo
Способы определения связывания рецептора гонадотропинов, также как и оценки  и  для определения биологической активности, хорошо известны. В общем, экспрессированный рецептор контактирует с тестируемым соединением, и измеряется связывание, или стимуляция, или ингибирование функционального ответа.
Для измерения функционального ответа выделенную ДНК, кодирующую ген рецептора FSH, предпочтительно человеческий рецептор, экспрессируют в подходящей клетке-хозяине. Подобными клетками могут быть клетки яичника китайского хомячка, но другие клетки также пригодны. Предпочтительно, чтобы клетки были клетками млекопитающего (Jia et al., Mol. Endocrin., 5: 759-776, 1991).
Способы создания рекомбинантного FSH, экспрессирующего колонии клеток, хорошо известны в уровне техники (Sambrook et al., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, latest edition). Экспрессия рецептора достигается экспрессией ДНК, кодирующей требуемый белок. Методики целенаправленного мутагенеза, сшивание дополнительных последовательностей, ПЦР и конструирование пригодных систем экспрессии являются на данный момент хорошо известными в уровне техники. Фрагменты или вся ДНК, кодирующая желаемый белок, могут быть сконструированы синтетически по стандартным твердофазным методикам, предпочтительно включить сайты рестрикции для ослабления сшивания. Подходящие регуляторные элементы для транскрипции и трансляции, включенной кодирующей последовательности, могут быть включены в ДНК кодирующие последовательности. Хорошо известно, что в данный момент доступны системы экспрессии, которые являются совместимыми с широким кругом хозяев, включая прокариотических хозяев, таких как бактерии, и эукариотических хозяев, таких как дрожжи, растительные клетки, клетки насекомых, клетки млекопитающих, клетки птиц и подобное.
Клетки, экспрессирующие рецептор, затем контактируют с тестируемым соединением для наблюдения связывания, или стимуляции, или ингибирования функционального ответа.
В качестве альтернативы выделенные клеточные мембраны, содержащие экспрессированный рецептор, могут быть использованы для измерения связывания соединения.
Для измерения связывания могут быть использованы радиоактивные или флуоресцирующие соединения. В качестве соединения сравнения может быть использован человеческий рекомбинантный FSH.
В качестве альтернативы также может быть осуществлен конкурирующий анализ связывания.
Другой анализ включает скрининг соединений-агонистов рецептора FSH путем определения стимулирования опосредованного рецептором накопления cAMP. Таким образом, подобный способ включает экспрессию рецептора на клеточной поверхности клетки-хозяина и воздействие на клетку тестируемого соединения. Затем измеряется количество cAMP. Уровень cAMP будет увеличиваться вследствие стимулирующего воздействия тестируемого соединения на связывание с рецептором.
Дополнительно к прямому измерению, например, уровней cAMP в клетке, на которую оказывается воздействие, могут быть использованы клеточные линии, которые в добавление к трансфекции рецептором, кодирующим ДНК, также трансфекцируются вторичной ДНК, кодирующей ген-репортер, экспрессия которого соответствует уровню cAMP. Подобные гены-репортеры могут быть индуцируемыми cAMP или могут быть получены таким образом, чтобы они были связаны с оригинальными элементами, чувствительными к cAMP. В общем, экспрессия ген-репортера может быть контролирована любыми элементами, чувствительными к изменению уровней cAMP. Подходящими генами-репортерами являются, например, LacZ, щелочная фосфатаза, светлячковая люцифераза и зеленый флуоресцентный белок. Принципы подобных оценок трансактивации хорошо известны в уровне техники и описаны, например, в Stratowa, Ch., Himmler, A. И Czernilofsky, A. P. (1995) Curr. Opin. Biotechnol. 6: 574.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей производное дигидропиридина или его фармацевтически приемлемые соли, имеющее общую формулу I в смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами и необязательно другими терапевтическими средствами. Вспомогательные вещества должны быть «приемлемыми» в том смысле, что они являются совместимыми с другими ингредиентами композиции и не опасны для их хозяев. Фармацевтические композиции также могут содержать 2-метил-5-оксо-7-фенил-4-(3,4,5-триметоксифенил)-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил.
Композиции включают, например, пригодные для перорального, сублингвального, подкожного, внутривенного, внутримышечного, назального, местного или ректального введения и подобное, все в единицах стандартной дозы для приема.
Для перорального введения активный ингредиент может быть представлен в виде отдельных лекарственных форм, таких как таблетки, капсулы, порошки, гранулы, растворы, суспензии и подобное.
Для парентального введения фармацевтическая композиция может быть представлена в виде емкостей, содержащих одну дозу или множество доз лекарственного средства, например жидкости для инъекций в заранее определенных количествах, например, в герметичных флаконах и ампулах, и могут также храниться в вымороженном (лиофилизованном) виде, требующем перед использованием только добавления жидкого стерильного носителя, например воды.
th
Активный агент, смешанный с подобными фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, например, как описано в стандартной ссылке Gennaro, A.R. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20 Edition, Lippincott Williams and Wilkins, 2000, см. специально Part 5: Pharmaceutical Manufacturing), может быть спрессован в твердую стандартную дозу, такую как пилюли, таблетки, или переведен в капсулы или суппозитории. Используя фармацевтически приемлемые жидкости, активный агент может быть использован в виде жидкой композиции, например в виде раствора для инъекций, в виде растворов, суспензий, эмульсий или как спрей, например назальный спрей.
Для приготовления твердой стандартной лекарственной формы используют обычные добавки, такие как наполнители, красители, полимерные связующие вещества и подобное. Вообще могут быть использованы любые фармацевтически приемлемые добавки, которые не взаимодействуют с активными соединениями. Подходящие носители, с которыми активный агент настоящего изобретения может быть использован в качестве твердой стандартной лекарственной дозы, включают лактозу, крахмал, производные целлюлозы и подобное или их смеси, использованные в подходящих количествах. Для парентального введения могут быть использованы водные суспензии, изотонические солевые растворы и стерильные растворы для инъекций, содержащие фармацевтически приемлемые диспергирующие агенты и/или смачивающие агенты, такие как пропиленгликоль или бутиленгликоль.
Изобретение дополнительно включает фармацевтическую композицию, как описано выше, в комбинании с упаковочным материалом, пригодным для указанной композиции, причем указанный упаковочный материал включает инструкции по использованию композиции.
Точная дозировка и режим приема активного ингредиента или его фармацевтической композиции может меняться в зависимости от конкретного соединения, пути введения и возраста, и состояния индивидуального пациента, которому прописывают лекарственное средство.
В общем парентальный прием требует более низких доз, чем другие способы приема, которые являются более зависимыми от абсорбции. Однако пригодная дозировка для людей может составить 0,05-25 мг на кг веса тела. Требуемая дозировка может быть представлена как одна доза или множество поддоз, принимаемых через соответствующие интервалы в течение дня, или, в случае пациентов-женщин, как дозы, которые следует принимать ежедневно в течение менструального цикла. Дозировка, также как и режим приема, может различаться у пациентов мужчин и женщин.
Таким образом, соединения в соответствии с изобретением могут быть использованы в терапии.
Изобретение относится также к применению производного дигидропиридина, имеющего общую формулу I, для приготовления лекарственного средства для лечения расстройств, чувствительных к метаболическим путям, опосредованных FSH рецептором, предпочтительно для лечения бесплодия.
Изобретение проиллюстрировано следующими примерами.
Пример 1
4-(3-Бром-4-этокси-5-метоксифенил)-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
4-(3-Бром-4-гидрокси-5-метоксифенил)-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
а)
f
Смесь 5-фенилциклогексан-1,3-диона (0,51 г), 3-бром-5-метокси-4-гидроксибензальдегида (0,62 г) и 3-аминокротонитрила (0,22 г) в 20 мл абсолютного этанола перемешивали в течение 3 ч при 75°С. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (3/7 об./об.), R=0,36) получили указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества.
Выход: 0,95 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 463/465.
4-(3-Бром-4-этокси-5-метоксифенил)-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
N
f
Смесь продукта стадии а (15 мг), этилйодида (6,4 мкл), гидрида натрия (2,6 мг, 60% в масле) и тетрабутиламмония йодида (1,2 мг) в 0,5 мл -метилпирролидона перемешивали в течение 2 ч при 80°С. Добавили воду и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Органические фазы концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,52) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 2,2 мг.
-
MS-ESI: [M-H] = 491/493.
Пример 2
4-(3-Бром-4-циклогексилметокси-5-метоксифенил)-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1b из продукта примера 1а (15 мг) и бромметилциклогексана (12 мкл).
Выход: 12 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,59.
-
MS-ESI: [M-H] = 559/561.
Пример 3
4-[3-Бром-5-метокси-4-(3-метилбутокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1b из продукта примера 1а (15 мг) и 1-йод-3-метилбутана (4,7 мкл).
Выход: 14 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,56.
-
MS-ESI: [M-H] = 533/535.
Пример 4
4-[3-Бром-4-(5-хлортиофен-2-илметокси)-5-метоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
f
Смесь продукта из примера 1а (15 мг), 2-хлор-5-хлорметилтиофена (4,3 мкл) и карбоната цезия (21 мг) в 1 мл диоксана перемешивали при 80°С в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (3/7 об./об.), R=0,38) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 4,7 мг.
-
MS-ESI: [M-H] = 593/595/597.
Пример 5
Метиловый эфир [2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифенокси]уксусной кислоты
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта примера 1а (0,47 г) и метилового эфира бромуксусной кислоты (1,0 мл).
Выход: 0,32 г.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,46.
-
MS-ESI: [M-H] = 535/537.
Пример 6
2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифениловый эфир 3-метоксибензойной кислоты
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта примера 1а (15 мг) и 3-метоксибензоилхлорида (5,4 мкл).
Выход: 7,4 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,48.
-
MS-ESI: [M-H] = 597/599.
Пример 7
4-[3-Бром-4-(3-цианобензилокси)-5-метоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта примера 1а (15 мг) и 3-бромметилбензонитрила (7,6 мг).
Выход: 15 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,51.
-
MS-ESI: [M-H] = 578/580.
Пример 8
4-[3-Бром-5-метокси-4-(нафталин-2-илметокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта примера 1а (15 мг) и 2-бромметилнафталина (8,6 мг).
Выход: 11 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,60.
-
MS-ESI: [M-H] = 603/605.
Пример 9
2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифениловый эфир фенилметансульфоновой кислоты
f
Смесь продукта из примера 1а (15 мг), фенилметансульфонилхлорида (9,2 мг) и триэтиламин (9,4 мкл) в 1 мл дихлорметана перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,41) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 15 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 619/621.
Пример 10
2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифениловый эфир тиофен-2-сульфоновой кислоты
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 9 из продукта примера 1а (15 мг) и тиофен-2-сульфонилхлорида (8,8 мг).
Выход: 20 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,30.
-
MS-ESI: [M-H] = 611/613.
Пример 11
4-[3,5-Дибром-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
3,5-Дибром-4-(3-метоксибензилокси)бензальдегид
а)
f
Смесь 3,5-дибром-4-гидроксибензальдегид (0,28 г), 1-бромметил-3-метоксибензол (0,15 мл), карбонат калия (0,29 г) и йодид калия (42 мг) в 10 мл абсолютного этанола перемешивали при 80°С в течение 2 дней. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (3/7 об./об.), R=0,51) получили указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества.
Выход: 0,24 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 463/465.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,88 (с, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 7,34 (т, 1Н), 7,18 (ушир.с, 1Н), 7,15 (д, 1Н), 6,93 (дд, 1Н), 5,10 (с, 2Н), 3,85 (с, 3Н).
4-[3,5-Дибром-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-этилциклогексан-1,3-диона (8,5 мг) и продукта стадии а (24 мг).
Выход: 26 мг.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,40.
+
MS-ESI: [M+H] = 585/587/589.
Пример 12
4-{3-Бром-5-этокси-4-[2-(3-нитрофенил)-2-оксоэтокси]фенил}-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
4-(3-Бром-5-этокси-4-гидроксифенил}-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 3-бром-5-этокси-4-гидроксибензальдегила (0,15 г).
Выход: 0,15 г.
f
R(гептан/этилацетат (4/6 об./об.))=0,18.
+
MS-ESI: [M+H] = 479/481.
4-{3-Бром-5-этокси-4-[2-(3-нитрофенил)-2-оксоэтокси]фенил}-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта стадии а (15 мг) 2-бром-1-(3-нитрофенил)этанона (8,4 мг).
Выход: 14 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,58.
+
MS-ESI: [M+H] = 642/644.
Пример 13
N
3-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифеноксиметил]--тиофен-2-илметилбензамид
Метиловый эфир 3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифеноксиметил]бензойной кислоты
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 4 из продукта примера 1а (0,35 г) и метилового эфира 3-бромметилбензойной кислоты (0,18 г).
Выход: 0,35 г.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,34.
+
MS-ESI: [M+H] = 613/615.
3-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифеноксиметил]бензойная кислота
b)
2
4
Раствор продукта стадии а (0,35 г) растворяли в 20 мл диоксан/вода (7/3 об./об.) и добавили 2 мл 2М NaOH в воде. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 дней. Реакционную смесь выливали в воду и подкисляли 2М HCl в воде до рН 2 и экстрагировали этилацетатом несколько раз. Органические фазы промыли водой и насыщенным рассолом, высушивали над NaSO и упаривали, получив указанное в заголовке соединение.
Выход: 0,35 г.
+
MS-ESI: [M+H] = 599/601.
N
3-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифеноксиметил]--тиофен-2-илметилбензамид
c)
f
К раствору продукта стадии b (20 мг) в 2 мл дихлорметана добавили EDCI (7,0 мг), DiPEA (7 мкл) и 2-тиофенметиламин (4,1 мкл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,78) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 11 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 694/696.
Пример 14
2-Морфолин-4-илэтиловый эфир 3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-метоксифеноксиметил]бензойной кислоты
f
К раствору продукта стадии 13b (20 мг) в 2 мл дихлорметана добавили TBTU (12 мг), DiPEA (7 мкл) и 2-морфолин-4-илэтанол (4,8 мкл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,48) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 11 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 694/696.
Пример 15
4-{3-Бром-5-этокси-4-[3-(пиперидин-1-карбонил)бензилокси]фенил}-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Метиловый эфир 3-(2-бром-6-этокси-4-формилфеноксиметил)бензойной кислоты
а)
2
3
4
4
f
н
К раствору 5-бром-3-этокси-4-гидроксибензальдегида (0,75 г) в 10 мл ДМФ добавили метиловый эфир 3-бромметилбензойной кислоты (0,77 г), KCO (1,0 г) и каталитическое количество -BuNI и реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 1 ч. Добавили 3% раствор лимонной кислоты в воде и экстрагировали реакционную смесь этилацетатом. Органические фазы промыли водой и рассолом, сушили над MgSO и концентрировали. После колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,25) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 1,08 г.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,84 (с, 1Н), 8,20 (ушир.с, 1Н), 8,02 (ушир.д, 1Н), 7,77 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,47 (т, 1Н), 7,39 (д, 1Н), 5,21 (с, 2Н), 4,17 (кв., 2Н), 3,94 (с, 3Н), 1,51 (т, 3Н).
Метиловый эфир 3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойной кислоты
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из продукта стадии а (0,26 г).
Выход: 0,27 г.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,34.
+
MS-ESI: [M+H] = 613/615.
3-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойная кислота
c)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13b из продукта стадии b (0,27 г).
Выход: 0,27 г.
+
MS-ESI: [M+H] = 599/601.
4-{3-Бром-5-этокси-4-[3-(пиперидин-1-карбонил)бензилокси]фенил}-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
d)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13с из продукта стадии с (20 мг) и пиперидина (3,9 мкл).
Выход: 15 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,25.
+
MS-ESI: [M+H] = 680/682.
Пример 16
N
Метиловый эфир -3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензоилглицин
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13с из продукта стадии 15с (20 мг) и гидрохлорида глицинметилового эфира (4,9 мг).
Выход: 9,9 мг.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,16.
+
MS-ESI: [M+H] = 684/686.
Пример 17
Метиловый эфир 3-[2-бром-4-(3-циано-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойной кислоты
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-этилциклогексан-1,3-диона (0,25 г) и продукта стадии 15а (0,64 г).
Выход: 0,45 г.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,25.
+
MS-ESI: [M+H] = 579/581.
Пример 18
3-[2-Бром-4-(3-циано-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойная кислота
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13b из продукта примера 17 (0,43 г).
Выход: 0,38 г.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,17.
+
MS-ESI: [M+H] = 563/565.
Пример 19
N
трет
3-[2-Бром-4-(3-циано-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]---бутилбензамид
трет
4
f
К раствору продукта примера 18 (0,35 г) в 10 мл дихлорметана добавили -бутиламин (0,12 мл), DiPEA (0,39 мл) и HATU (0,30 г) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при 35°С. Добавили 3% раствор лимонной кислоты в воде и несколько раз экстрагировали реакционную смесь этилацетатом. Органические фазы промыли водой и рассолом, сушили над MgSO и концентрировали. После колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.), R=0,34) получили указанное в заголовке соединение.
Выход: 0,28 г.
+
MS-ESI: [M+H] = 620/622.
Пример 20
N
3-[2-Бром-4-(3-циано-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]--циклогексилбензамид
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13с из продукта примера 18 (20 мг) и циклогексиламина (4,9 мкл).
Выход: 7,9 мг.
f
R(силикагель, гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,43.
+
MS-ESI: [M+H] = 646/648.
Пример 21
N
3-[2-Бром-4-(3-циано-7-этил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]--(2-морфолин-4-илэтил)бензамид
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13c из продукта примера 18 (20 мг) и 4-(2-аминоэтил)морфолина (5,5 мкл).
Выход: 15 мг.
f
R(дихлорметан/метанол (95/5 об./об.))=0,22.
+
MS-ESI: [M+H] = 677/679.
Пример 22
4-[3-Йод-5-метокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
3-Йод-5-метокси-4-(3-метоксибензилокси)бензальдегид
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из 4-гидрокси-3-йод-5-метоксибензальдегида (0,70 г) и 1-бромметил-3-метоксибензола (0,39 мл).
Выход: 0,56 г.
f
R(гептан/этилацетат (4/6 об./об.))=0,42.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,83 (с, 1Н), 7,86 (д, 1Н), 7,43 (д, 1Н), 7,29 (т, 1Н), 7,16 (ушир.с, 1Н), 7,09 (д, 1Н), 6,88 (дд, 1Н), 5,14 (с, 2Н), 3,95 (с, 3Н), 3,84 (с, 3Н).
4-[3-Йод-5-метокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-фенил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из продукта стадии а (24 мг).
Выход: 17 мг.
f
R(гептан/этилацетат (1/4 об./об.))=0,59.
-
MS-ESI: [M-H] = 631.
Пример 23
4-[3-Бром-4-(2-хлор-3-метоксибензилокси)-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Исходное сырье было получено в соответствии со способом, описанным McCarthy и др. (J. Org. Chem. 1986 (29) 1586):
2-Хлор-3-метоксибензальдегид
а)
N,N,N'
н
н
4
f
К раствору -триметилэтилендиамина (1,27 мл) в 10 мл тетрагидрофурана при -40°С добавили -бутиллитий (6,25 мл, 1,6М раствор в гексане). Через 15 мин реакционную смесь охладили до -70°С и добавили раствор 3-метоксибензальдегида (1,22 мл) в 5 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь оставили нагреваться до 0°С и затем снова охладили до -70°С и добавили-бутиллитий (6,25 мл, 1,6М раствор в гексане). До того как к раствору добавили раствор гексахлорэтана (7,10 г) в 10 мл тетрагидрофурана, реакционную смесь оставили нагреваться до 10°С и затем снова охладили до -30°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, выливали в 20 мл 10% HCl в воде и экстрагировали несколько раз этилацетатом. Объединенные органические фазы промыли насыщенным рассолом, сушили над MgSO и концентрировали. Указанное в заголовке соединение получили после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (75/25 об./об.), R=0,38) с последующей кристаллизацией из гептана.
Выход: 1,06 г.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 10,46 (с, 1Н), 7,54 (дд, 1Н), 7,35 (т, 1Н), 7,17 (д, 1Н), 3,96 (с, 3Н).
2-Хлор-1-хлорметил-3-метоксибензол
b)
f
Продукт стадии а (1,00 г) в 5 мл тетрагидрофурана при 0°С добавили к суспензии литийалюмогидрида (0,34 г) в 5 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и при 0°С добавили воду (0,35 мл) в 5 мл тетрагидрофурана, затем 2М раствор гидроксида натрия в воде (0,70 мл) и воду (0,70 мл). Полученную белую суспензию перемешивали в течение 0,5 час и отфильтровывали. Бесцветное масло, полученное после концентрирования фильтрата, растворили в 10 мл 1,2-дихлорпропана и добавили тионилхлорид (1,5 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи и концентрировали. Указанное в заголовке соединение в виде желтого масла, которое кристаллизуется при отстаивании, получили после колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гептан/этилацетат (75/25 об./об.), R=0,43).
Выход: 0,80 г.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 7,24 (т, 1Н), 7,09 (дд, 1Н), 6,93 (дд, 1Н), 4,72 (с, 2Н), 3,92 (с, 3Н).
3-Бром-4-(2-хлор-3-метоксибензилокси)-5-этоксибензальдегид
c)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из продукта стадии b (0,42 г) и 5-бром-3-этокси-4-гидроксибензальдегида (0,49 г).
Выход: 0,56 г.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,85 (с, 1Н), 7,66 (дд, 1Н), 7,40 (дд, 1Н), 7,39 (д, 1Н), 7,29 (т, 1Н), 6,94 (дд, 1Н), 5,32 (с, 2Н), 4,15 (квар., 2Н), 3,93 (с, 3Н), 1,44 (т, 3Н).
4-[3-Бром-4-(2-хлор-3-метоксибензилокси)-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
d)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-пропилциклогексан-1,3-диона (21 мг) и продукта стадии с (53 мг).
Выход: 60 мг.
f
R(гептан/этилацетат (4/6 об./об.))=0,19.
-
MS-ESI: [M-H] = 597/599/601.
Пример 24
N
Метиловый эфир -3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензоилглицина
Метиловый эфир 3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойной кислоты
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-пропилциклогексан-1,3-диона (0,95 г) и продукта примера 15а (2,4 г).
Выход: 3,0 г.
f
R(гептан/этилацетат (1/1 об./об.))=0,20.
-
MS-ESI: [M-H] = 591/593.
3-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойная кислота
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13b из продукта стадии а (3,0 г).
Выход: 3,0 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 577/579.
N
Метиловый эфир -3-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензоилглицина
c)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 14 из продукта стадии b (90 мг) и гидрохлорида глицинметилового эфира (64 мг). Очистка была совершена препаративной ВЭЖХ (Luna C18 [5 мкм], скорость потока:
-1
3
20 мл мин, 0→90% CHCN, 1% TFA).
Выход: 59 мг.
t
2
2
R(CHCl/MeOH (95/5 об./об.))=0,54.
+
MS-ESI: [M+H] = 650/652.
Пример 25
4-[3-Бром-5-этокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-7-(4-хлорфенил)-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
3-Бром-5-этокси-4-(3-метоксибензилокси)бензальдегид
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из 3-бром-5-этокси-4-гидроксибензальдегида (0,75 г) и 1-бромметил-3-метоксибензола (0,48 мл).
Выход: 0,91 г.
f
R(гептан/этилацетат (2/1 об./об.))=0,43.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,83 (с, 1Н), 7,65 (дд, 1Н), 7,38 (дд, 1Н), 7,29 (т, 1Н), 7,13 (ушир.с, 1Н), 7,07 (д, 1Н), 6,88 (дд, 1Н), 5,16 (с, 2Н), 4,16 (квар., 2Н), 3,83 (с, 3Н), 1,56 (т, 3Н).
4-[3-Бром-5-этокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-7-(4-хлорфенил)-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-(4-хлорфенил)циклогексан-1,3-диона (22 мг) и продукта стадии а (37 мг).
Выход: 32 мг.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,19.
+
MS-ESI: [M+H] = 633/635/637.
Пример 26
4-[3-Бром-5-этокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-7-фуран-2-ил-2-метил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-фуран-2-илциклогексан-1,3-диона (18 мг) и продукта стадии а (37 мг).
Выход: 37 мг.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,24.
+
MS-ESI: [M+H] = 589/591.
Пример 27
4-[3,5-Диметокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
3,5-Диметокси-4-(3-метоксибензилокси)бензальдегид
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из 4-гидрокси-3,5-диметоксибензальдегида (0,91 г) и 1-бромметил-3-метоксибензола (0,75 мл).
Выход: 1,42 г светло-желтого масла.
f
R(гептан/этилацетат (1/1 об./об.))=0,40.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,86 (с, 1Н), 7,26 (д, 1Н), 7,23 (д, 1Н), 7,09 (ушир.с, 1Н), 7,04 (д, 1Н), 6,85 (дд, 1Н), 5,12 (с, 2Н), 3,91 (с, 6Н), 3,82 (с, 3Н)
4-[3,5-Диметокси-4-(3-метоксибензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-пропилциклогексан-1,3-диона (11 мг) и продукта стадии а (21 мг).
Выход: 22 мг.
f
R(гептан/этилацетат (3/7 об./об.))=0,21.
+
+
MS-ESI: [M+H] = 503; [M+Na] = 525.
Пример 28
4-[3-Бром-5-этокси-4-(3-пиридинилметокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил трифторуксусной кислоты
а) 3-Бром-5-этокси-4-(3-пиридинилметокси)бензальдегид
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из 3-бром-5-этокси-4-гидроксибензальдегида (0,25 г) и 3-пиколилхлорида гидрохлорида (0,16 г).
4-[3-Бром-5-этокси-4-(3-пиридинилметокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил трифторуксусной кислоты
b)
-1
3
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-пропилциклогексан-1,3-диона (0,15 г) и неочищенного продукта стадии а. Соединение было очищено полупрепаративной ВЭЖХ (Luna C18 [5 мкм], скорость потока: 20 мл мин, 10→90% CHCN, 0,1% TFA) и сублимировано из смеси воды и диоксана.
Выход: 0,25 г.
+
MS-ESI: [M+H] = 536/538.
Пример 29
N
4-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]--тиофен-2-илметилбензамид
Метиловый эфир 4-(2-бром-6-этокси-4-формилфеноксиметил)бензойной кислоты
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 15а из метилового эфира 4-бромметилбензойной кислоты (3,7 г).
Выход: 6,4 г.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 9,84 (с, 1Н), 8,06 (д, 2Н), 7,65 (д, 1Н), 7,61 (д, 2Н), 7,39 (д, 1Н), 5,03 (с, 2Н), 4,16 (кв., 2Н), 3,93 (с, 3Н), 1,48 (т, 3Н).
Метиловый эфир 4-[2-бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойной кислоты
b)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 5-пропилциклогексан-1,3-диона (2,5 г) и продукта стадии а (6,4 г).
Выход: 6,7 г.
f
R(гептан/этилацетат (3/2 об./об.))=0,20.
-
MS-ESI: [M-H] = 591/593.
4-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]бензойная кислота
c)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 13b из продукта стадии b (6,7 г). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение ночи.
Выход: 6,4 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 577/579.
N
4-[2-Бром-4-(3-циано-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-4-ил)-6-этоксифеноксиметил]--тиофен-2-илметилбензамид
d)
-1
3
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 14 из продукта стадии с (0,10 г) и 2-тиофенметиламина (52 мкл). Очистка была выполнена препаративной ВЭЖХ (Luna C18 [5 мкм], скорость потока: 20 мл мин, 10→90% CHCN, 1% TFA).
Выход: 54 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 674/676.
Пример 30
4-[3-Бром-5-этокси-4-(4-нитрофенокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
4-[3-Бром-4-гидрокси-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
а)
Указанное в заголовке соединение было получено аналогично примеру 1а из 3-бром-5-этокси-4-гидроксибензальдегида (2,0 г) 5-пропилциклогексан-1,3-диона (1,3 г).
Выход: 3,6 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 443/445.
4-[3-Бром-4-мезилокси-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
Смесь неочищенного продукта стадии а (0,99 г), мезилхлорид (0,46 мл) и гидроксид натрия (0,32 г) в 4 мл ТГФ/вода (1/1, об./об.) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавили воду и экстрагировали реакционную смесь дихлорметаном. Неочищенное указанное в заголовке соединение было получено после концентрирования органических фаз.
Выход: 1,0 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 521/523.
4-[3-Бром-5-этокси-4-(4-нитрофенокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
c)
Смесь продукта стадии b (0,20 г), 1-фтор-4-нитробензол (53 мкл) и карбонат цезия (0,22 г) растворили в диметилсульфоксиде (1 мл) и перемешивали при 80°С в течение 16 ч. Добавили дихлорметан и промыли реакционную смесь 1% раствором хлористоводородной кислоты в воде и насыщенным рассолом. Органическую фазу концентрировали и после колоночной флэш-хроматографии получили указанное в заголовке соединение (силикагель, гептан/этилацетат).
Выход: 0,19 г.
-
MS-ESI: [M-H] = 564/566.
1
3
Н ЯМР (CDCl): δ = 8,17 (д, 2Н), 7,00 (д, 1Н), 6,91 (м, 3Н), 5,95 (ушир.с, 1Н), 4,63 (с, 1Н), 4,04 (дкв., 2Н), 2,52 (дд, 1Н), 2,42 (д, 2Н), 2,25 (м, 1Н), 2,20 (с, 3Н), 2,15 (дд, 1Н), 1,38 (м, 4Н), 1,20 (т, 3Н), 0,92 (т, 3Н).
Пример 31
4-[3-Бром-5-этокси-4-(5-фтор-2-пропиламинобензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
(5-Фтор-2-нитрофенил)метанол
а)
3
К раствору 5-фтор-2-нитробензойной кислоты (4,58 г) в ТГФ (50 мл) при охлаждении ледяной баней добавили 1М раствор BH∙ТГФ в ТГФ (62 мл). Охлаждающую баню убрали и продолжали перемешивание в течение 1 ч при температуре окружающей среды с последующим кипячением с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охладили и для разрушения избытка борана добавили MeOH. Смесь концентрировали и добавили к остатку воду и этилацетат. Органический слой промыли рассолом, сушили и концентрировали.
Выход: 4,3 г.
4-[3-Бром-5-этокси-4-(5-фтор-2-нитробензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
b)
2
3
н
Смесь неочищенного продукта стадии а (1,5 г), тионилхлорида (1,94 мл) и нескольких капель ДМФ в дихлорметане (30 мл) перемешивали в течение 72 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и остаток растворили в ДМФ (20 мл). К оставшемуся раствору добавили соединение, описанное в примере 30а (3,9 г), KCO (6,1 г) и малое количество бромида тетра--бутиламмония (около 50 мг). Смесь перемешивали в течение 5 ч при 60°С. Добавили воду и этилацетат и экстрагировали органический слой этилацетатом. Объединенные органические фракции промыли рассолом, сушили и концентрировали. Остаток перекристаллизовывали из толуола.
Выход: 3,8 г.
4-[4-(2-Амино-5-фторбензилокси)-3-бром-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
c)
3
2
4
К раствору продукта стадии b (3,8 г) в ТГФ (110 мл) добавляли уксусную кислоту (3,6 мл) и цинковую пыль (8,2 г). Суспензию нагревали в течение 1 ч при 50°С. Реакционную смесь отфильтровывали и концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате и промывали насыщенным NaHCO и рассолом. Отделяли органический слой, высушивали (NaSO) и концентрировали. Оставшееся твердое вещество перемешивали с малым количеством этилацетата с образованием после фильтрации указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества.
Выход: 2,8 г.
4-[3-Бром-5-этокси-4-(5-фтор-2-пропиламинобензилокси)фенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
d)
-1
3
Раствор соединения, описанного на стадии с (200 мг), и пропиональдегид (25 мкл) в дихлорметане (5 мл) перемешивали в течение 2 ч. Затем добавляли уксусную кислоту (81 мкл) и триацетоксиборгидрид натрия (300 мг) и дополнительно перемешивали реакционную смесь в течение 20 ч. Добавляли 2М водный раствор NaOH и продолжили перемешивание в течение 15 мин. Органический слой промывали водой и рассолом, высушивали и концентрировали в вакууме. Указанное в заголовке соединение было получено очисткой остатка препаративной ВЭЖХ (Luna C18 [5 мкм], скорость потока: 20 мл мин, 10→90% CHCN, 0,1% TFA) и лиофилизацией из смеси воды и диоксана. Также могут быть выделены некоторые диалкилированные продукты (см. пример 32).
Выход: 109 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 610/612.
Пример 32
4-[3-Бром-4-(2-дипропиламино-5-фторбензилокси)-5-этоксифенил]-2-метил-5-оксо-7-пропил-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолин-3-карбонитрил
-1
3
Получен из реакционной смеси примера 31d после препаративной ВЭЖХ (Luna C18 [5 мкм], скорость потока: 20 мл мин, 10→90% CHCN, 0,1% TFA) и лиофилизации из смеси воды и диоксана.
Выход: 12 мг.
+
MS-ESI: [M+H] = 652/654.
Пример 33
in vitro
Биоактивность СНО-FSH
50
FSH-активность соединений была протестирована на клетках яичника китайского хомячка (СНО), устойчиво трансфекцированных человеческим FSH рецептором и котрансфекцированных сАМР зависимым элементом (СRE)/промотор, направляющий экспрессию гена люциферазы светлячка. Связывание лиганда с Gs-связанным с FSH рецептором приведет к повышению сАМР, которое, в свою очередь, вызовет увеличение трансактивации конструкции репортера люциферазы. Сигнал люциферазы был измерен люминесцентным счетчиком. Для тестируемых соединений были рассчитаны значения ЕС (концентрация тестируемого соединения, вызывающая половину (50%) максимальной стимуляции). Для этих целей было использовано программное обеспечение GraphPad PRISM, версия 3,0 (GraphPad software Inc., San Diego).
50
50
50
-5
-7
-9
-9
Соединения всех примеров имели активность (ЕС) менее чем при 10М. Соединения примеров 13, 16, 17, 19-21, 23, 26, 28 31 и 32 показали ЕС при между 10 и 10М. Соединения примеров 24 и 29 показали ЕС при менее чем 10М.