КОМПОЗИЦИИ ГЕМОГЛОБИНА

1. Композиция, содержащая ковалентный конъюгат функциональной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанная композиция, содержит:
а. водорастворимый компонент гемоглобина, содержащий группу молекул гемоглобина, где каждый представитель указанной группы молекул гемоглобина:
i. находится в восстановленном состоянии;
ii. ковалентно конъюгирован по меньшей мере с одной молекулой указанного поли(этиленгликоля) посредством аминогруппы аминокислотного остатка;
iii. не содержит химических сшивающих средств; и
50
iv. обладает Р от 9 мм рт.ст. до 12 мм рт.ст.;
b. водорастворимый стабилизирующий компонент, делающий указанную группу молекул гемоглобина устойчивой к окислению, где указанный компонент содержит стабилизатор, содержащий структурный элемент, более реакционноспособный в отношении кислорода, чем указанная группа молекул гемоглобина; и
с. компонент разбавителя, содержащий фармацевтически приемлемый разбавитель, в котором растворим указанный компонент гемоглобина,
где указанная композиция лишена вирусной активности и содержит менее 10% метгемоглобина.
2. Композиция по п.1, где каждый представитель указанной группы молекул гемоглобина ковалентно конъюгирован с пятью или более указанными группами поли(этиленгликоля) посредством указанной аминогруппы пяти или более из указанных аминокислотных остатков.
3. Композиция по п.1, где указанная аминогруппа указанного аминокислотного остатка представляет собой ε-аминогруппу остатка лизина.
4. Композиция по п.1, где указанная молекула гемоглобина связана с представителем, выбранным из кислорода и монооксида углерода.
5. Композиция по п.1, где указанная молекула гемоглобина способна к переносу представителя, выбранного из указанного связанного кислорода и указанного связанного монооксида углерода, в ткань, с которой указанный гемоглобин находится в контакте.
6. Композиция, содержащая ковалентный конъюгат функциональной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанную композицию получают способом, включающим:
а. подвергание раствора восстановленного гемоглобина и стабилизатора способу термической инактивации вирусов, включающему, воздействие на указанный раствор температуры, в достаточной степени высокой для инактивации всей вирусной активности в указанном растворе, где указанное воздействие продолжается в течение периода времени, достаточного для достижения указанной инактивации всей вирусной активности в указанном растворе,
где указанный стабилизатор, содержит структурный элемент, более реакционноспособный в отношении кислорода, чем указанный восстановленный гемоглобин в указанном растворе, таким образом, минимизируя связывание кислорода указанным восстановленным гемоглобином,
где указанный раствор содержит количество указанного стабилизатора, достаточное для предотвращения образования в указанном способе тепловой инактивации вирусов более чем 10% метгемоглобина; и
b. приведение указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (а) в контакт с молекулой активированного поли(этиленгликоля) с реакционноспособностью, комплементарной аминокислотному остатку указанного гемоглобина, таким образом, образуя в указанном растворе ковалентный конъюгат поли(этиленгликоля) и молекул гемоглобина.
7. Композиция по п.6, полученная указанным способом, дополнительно включающим (с) до этапа (а), дезоксигенацию раствора окисленного гемоглобина, таким образом, получая указанный раствор указанного восстановленного гемоглобина.
8. Композиция по п.7, полученная указанным способом, дополнительно включающим (d) до этапа (а), с получением указанного раствора указанного восстановленного гемоглобина с указанным стабилизатором.
9. Композиция по п.6, полученная указанным способом, в котором указанный стабилизатор присутствует на этапе (а) в количестве, достаточном для предотвращения образования более 5% метгемоглобина.
10. Композиция по п.6, полученная указанным способом, в котором указанная температура представляет собой 60°С.
11. Композиция по п.6, полученная указанным способом, в котором указанное время составляет 10 ч.
12. Композиция по п.6, где посредством указанной дезоксигенации получают молекулу восстановленного гемоглобина, не связанного ни с кислородом, ни с монооксидом углерода.
13. Композиция по п.6, где посредством указанной дезоксигенации получают молекулу восстановленного гемоглобина, связанную с монооксидом углерода.
14. Композиция по п.6, полученная указанным способом, дополнительно включающим (е) до этапа (b), оксигенацию указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (а).
15. Композиция по п.6, где указанная молекула гемоглобина связана с представителем, выбранным из кислорода и монооксида углерода.
16. Композиция по п.6, где указанная молекула гемоглобина способна к переносу представителя, выбранного из указанного связанного кислорода и указанного связанного монооксида углерода, в ткань.
17. Композиция, содержащая ковалентный конъюгат функциональной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанная композиция, содержит менее 10% метгемоглобина, где указанная композиция получена способом, включающим:
а. нагревание исходного раствора гемоглобина до 60°С в течение 10 ч, где указанный исходный раствор содержит стабилизатор, содержащий структуру более реакционноспособную в отношении кислорода, чем указанные молекулы гемоглобина в указанном растворе, таким образом, инактивируя вирусы в указанном растворе при минимизации связывания кислорода указанным восстановленным гемоглобином; и
b. приведение указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (а) в контакт с молекулой активированного поли(этиленгликоля) с реакционноспособностью, комплементарной аминокислотному остатку указанного гемоглобина, таким образом, образуя в указанном растворе ковалентный конъюгат поли(этиленгликоля) и молекул гемоглобина.
18. Композиция по п.17, где указанный стабилизатор представляет собой аминокислоту.
19. Композиция по п.18, где указанный стабилизатор представляет собой цистеин.
20. Композиция по п.17, полученная указанным способом, дополнительно включающим (с) до этапа (b), оксигенацию указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (а).
21. Способ получения композиции с инактивированными вирусами, содержащей ковалентный конъюгат функциональной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанная композиция, содержит:
а. водорастворимый компонент гемоглобина, содержащий группу функциональных природных молекул гемоглобина, где каждый представитель указанной группы молекул гемоглобина:
i. находится в восстановленном состоянии;
ii. не содержит химических сшивающих средств; и
50
iii. обладает Р от 22 мм рт.ст. до 26 мм рт.ст.;
b. водорастворимый стабилизирующий компонент, поддерживающий указанную группу молекул гемоглобина в указанном восстановленном состоянии, где указанный стабилизирующий компонент, содержит стабилизатор, содержащий структурный элемент, более реакционноспособный в отношении кислорода, чем указанные восстановленные молекулы гемоглобина; и
с. компонент разбавителя, содержащий фармацевтически приемлемый разбавитель, в котором растворим указанный компонент гемоглобина, где указанная композиция лишена вирусной активности и содержит менее 10% метгемоглобина;
где указанный способ включает:
i. подвергание раствора восстановленного гемоглобина и указанного стабилизатора способу термической инактивации вирусов, включающему, воздействие на указанный раствор температуры, в достаточной степени высокой для инактивации всей вирусной активности в указанной смеси, где указанное воздействие продолжается в течение периода времени, достаточного для достижения указанной инактивации всей вирусной активности в указанной смеси; и
ii. приведение указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (i) в контакт с молекулой активированного поли(этиленгликоля) с реакционноспособностью, комплементарной аминокислотному остатку указанного гемоглобина, таким образом, образуя в указанном растворе ковалентный конъюгат поли(этиленгликоля) и молекул гемоглобина.
22. Способ по п.21, где указанный способ дополнительно включает:
iii. перед этапом (ii), оксигенацию указанного раствора гемоглобина с инактивированными вирусами из этапа (i).
23. Композиция, содержащая ковалентный конъюгат функциональной восстановленной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанная композиция содержит:
а. водорастворимый компонент гемоглобина, содержащий группу молекул гемоглобина, где каждый представитель указанной группы молекул гемоглобина:
i. восстановлен и связан с СО;
ii. ковалентно конъюгирован по меньшей мере с одной молекулой указанного поли(этиленгликоля) посредством аминогруппы аминокислотного остатка;
iii. не содержит химических сшивающих средств; и
50
iv. обладает Р от 9 мм рт.ст. до 12 мм рт.ст.;
b. водорастворимый стабилизирующий компонент, делающий указанную группу молекул гемоглобина устойчивой к окислению, где указанный компонент содержит стабилизатор, содержащий структурный элемент, более реакционноспособный в отношении кислорода, чем указанная группа молекул гемоглобина; и
с. компонент разбавителя, содержащий, разбавитель в виде фосфатно-солевого буфера, в котором растворим указанный компонент гемоглобина,
где указанная композиция лишена вирусной активности и содержит менее 10% метгемоглобина.
24. Композиция, содержащая ковалентный конъюгат функциональной восстановленной природной молекулы гемоглобина и по меньшей мере одной молекулы поли(этиленгликоля), где указанная композиция содержит:
а. водорастворимый компонент гемоглобина, содержащий группу молекул гемоглобина, где каждый представитель указанной группы молекул гемоглобина:
i. восстановлен и не связан с СО;
ii. ковалентно конъюгирован по меньшей мере с одной молекулой указанного поли(этиленгликоля) посредством аминогруппы аминокислотного остатка;
iii. не содержит химических сшивающих средств; и
50
iv. обладает P от 9 мм рт.ст. до 12 мм рт.ст.;
b. водорастворимый стабилизирующий компонент, делающий указанную группу молекул гемоглобина устойчивой к окислению, где указанный компонент содержит стабилизатор, содержащий структурный элемент, более реакционноспособный в отношении кислорода, чем указанная группа молекул гемоглобина; и
с. компонент разбавителя, содержащий, разбавитель в виде гипертонического солевого раствора, в котором растворим указанный компонент гемоглобина,
где указанная композиция лишена вирусной активности и содержит менее 10% метгемоглобина.
25. Композиция по п.24, где указанный разбавитель в виде гипертонического солевого раствора содержит NaCl в концентрации от 3% до 7%.
26. Применение композиции по любому из пп.1-20 или пп.23-25 для получения лекарственного средства для трансфузии для доставки кислорода или монооксида углерода в ткани.
27. Применение композиции по любому из пп.1-20 или пп.23-25 для получения лекарственного средства для трансфузии для лечения травмы, геморрагического шока, ишемии, реперфузионного повреждения или серповидно-клеточной анемии, в каждом случае сохраняя дилатацию коллатеральных артерий.
28. Применение композиции по любому из пп.1-20 или пп.23-25 для получения лекарственного средства для трансфузии для индукции ангиогенеза или увеличения кровотока в тканях.
29. Применение композиции по любому из пп.1-20 или пп.23-25 для получения лекарственного средства для трансфузии для лечения или предотвращения гипоксии, являющейся результатом кровопотери, анемии, шока, инфаркта миокарда, инсульта или травматического повреждения головного мозга, или для гипероксигенации опухолей для улучшения терапевтического эффекта лучевой терапии или химиотерапии.