ГЕЛЬ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ ОБРАЗОВАНИЯ КЕЛОИДНЫХ И ГИПЕРТРОФИЧЕСКИХ РУБЦОВ КОЖИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
GEL FOR TREATMENT, PREVENTION OF FORMATION OF KELOID AND HYPERTROPHIC SKIN CICATRICES AND METHOD FOR MAKING THEREOF

Группа изобретений относится к медицине, а именно эмульсионным лечебно-профилактическим средствам наружного применения для профилактики, лечения келоидных и гипертрофических рубцов.
Проблема патологической репарации обусловлена большим количеством пациентов, страдающих келоидными и гипертрофическими рубцами, частотой и непредсказуемостью их образования, склонностью к рецидивированию и, следовательно, сложностью и длительностью лечения. Образование рубцов - это неизбежное следствие любых хирургических вмешательств или ожогв и травм, затрагивающих ретикулярный слой дермы. Проблемы профилактики и лечения послеожоговых, послеоперационных и посттравматических рубцов, влияющих как на физическое, так и на психологическое состояния пациентов, являются одной из важных задач современной медицины. Как известно, даже своевременное восстановление кожного покрова при глубоких ожогах, при использовании комплексного подхода с применением всего арсенала пластической хирургии (метод дермотензии, липосакции, лазерной шлифовки кожи, консервативного лечения и др.), в 20-40% случаев наблюдений приводит к формированию рубцовых контрактур (Аникин Ю.В., Кикория Н.Г. «Профилактика и лечение послеожоговых и послеоперационных рубцов» // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии №4, 2004, Санкт-Петербург, с.35.). Закономерно высоки требования к качеству послеоперационных рубцов у пациентов, перенесших косметические операции, особенно на открытых областях тела. Внешний вид рубцов оказывает большое влияние на эстетическую, а их клинико-морфологический тип (атрофические, нормотрофические, гипотрофические, келоидные) - на функциональную оценку результатов вмешательства. Келоидные и гипертрофические рубцы могут вызвать контрактуры, которые приводят к потере функции, если пересекают сустав, обезображивание, если располагаются на лице. Помимо этого, они могут быть болезненными или зудящими. Только иссечение дает рецидив в 45-100% случаях и, по мнению большинства клиницистов, должно крайне редко использоваться как отдельная модель лечения келоидных рубцов. Таким образом, именно лекарственная терапия келоидных и гипертрофических рубцов является актуальным разделом современной медицины.
Согласно Международным рекомендациям 2007 года по клиническому лечению рубцов, только силиконовый гель и введение стероидных гормонов в область рубца обладают эффективностью, подтвержденной клиническими испытаниями (Гущина М.Б., Терещенко А.В., Голенков А.К. «Способ лечения гипертрофических и келоидных рубцов». Патент РФ №2200557, 20.03.2003 г., бюл. №8; Белоусов А.Е. «Рубцы как глобальная проблема пластической хирургии» // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии, №4, Санкт-Петербург, 2004, C.41). Однако введением стероидов в зону повреждения ассоциируются такие осложнения, как атрофия эпидермиса и дермы, гипопигментация, телеангиоэктазии, акнеформная сыпь, необратимые атрофические стрии, стероидная розацеа, периоральный дерматит, развитие системных побочных эффектов, синдром отмены. Использование силиконовых пластин не эффективно в отношении рубцов старше 6-12 месяцев; кроме того, давящая повязка неудобна, должна носиться длительное время и днем, и ночью, а эффективное давление невозможно создать в некоторых анатомических зонах (Anthony Е. Brissett, M.D., and David A. Sherris, M.D. «Scar Contractures, Hypertrophic Scars, and Keloids», Vol 1. Chicago: University of Chicago Press; 1930:403-406).
Современный рынок насыщен различными формами лекарственных и лечебно-профилактических средств, предназначенных для решения проблемы патологического рубцевания. Для этих целей используются гормональные препараты «Дипроспан», «Триамценолона ацетонид», инъецируемые внутрикожно в область рубца или применяемые в составе мазей, кремов «Аристокорд», «Кеналог». Однако наличие кортикостероидов в данных препаратах ограничивает возможность их длительного применения из-за системного и пагубного их воздействия на гормональный фон пациентов.
Для обеспечения коллагенолизирующего эффекта рубцов кожи используют ферментосодержащие препараты с гиалуронидазной активностью «Лидаза», «Лонгидаза», вводимые в виде инъекций внутрикожно или внутримышечно, либо апплицируемые на рубцы в виде марлевых примочек - «Ронидаза». Указанные препараты не лишены ряда недостатков. Так, инъекционное введение ферментов не обеспечивает их длительного нахождения в зоне развития патологического процесса, поэтому их лечебный эффект более выражен в начальных стадиях формирования рубцов при многочисленных повторных введениях препаратов. Накожное нанесение фермента оказывается малоэффективным из-за трудностей по преодолению им кожного барьера. По этой же причине невысоким эффектом при лечении рубцов обладает гель «Контратубекс», содержащий экстракт лука Серае, гепарин и аллантоин.
Для лечения и профилактики образования келоидов и гипертрофических рубцов используются также органопрепараты, представляющие собой экстракты из органов и тканей, содержащие комплекс биологически активных веществ (Органопрепараты в эстетической медицине: красота, ревитализация, профилактика старения, под ред. Ролика И.С. 2006, Москва, с.307). Для инъекций в область формирования рубцовой ткани применяют Revitorgan №71 (экстракт из фетальной части плаценты) и Revitorgan №72 (экстракт из пуповины). Невысоким регенеративным действием на рубцы обладает крем Neydin F, содержащий экстракт плаценты (Органопрепараты в эстетической медицине: красота, ревитализация, профилактика старения, под ред. Ролика И.С. 2006, Москва, с.224). Производители этих средств отмечают отсутствие ограничений по длительности их применения на людях, однако биологически активные вещества, инъецируемые в зону патологического процесса, быстро выводятся из нее, а наносимые в составе мази лишены выраженной эффективности из-за ограничений по преодолению кожного барьера.
Известен противоожоговый гель и способ его получения (Патент РФ №2236845, 29.09.2002, бюл №27). Гель содержит в качестве биологически активной добавки 18-20% суспензию липосом, полученную методом обращения фаз в 0,01М фосфатном буфере рН 7,5 из фосфолипидов, липидов животного и растительного происхождения с включенным в них хлороформным экстрактом календулы, подорожника, зверобоя, тысячелистника, корня солодки, донника с весовым соотношением 2:2:1, при этом хлороформный экстракт трав содержит вытяжку из их смеси в равных количествах в соотношении с хлороформом 1:20, а также аммонийную соль редкосшитого сополимера акриловой кислоты и полиаллиловых эфиров пентаэритрита, глицерин, триэтаноламин, метиловый и пропиловый эфиры параоксибензойной кислоты, отдушку и воду в определенных соотношениях (мас.%). Способ получения геля включает подготовку водной эмульсии водорастворимого полимера из аммонийной соли редкосшитого сополимера акриловой кислоты и полиаллиловых эфиров пентаэритрита и триэтаноламина, нагревание ее до 60-65°С и добавление раствора консервантов, а именно: метиловый и пропиловый эфиры параоксибензойной кислоты в глицерине, эмульгирование, охлаждение до 30-35°С и введение биологически активной добавки, эмульгирование смеси и добавление отдушки. Изобретение обеспечивает пролонгированное действие противоожогового геля, обладающего противоожоговым, противовоспалительным действием. Липиды, входящие в структуру мембран липосом, восстанавливают липидный состав клеток кожи, пополняя их энергетический запас. Встраивание липосом в мембрану клетки и постепенный выход лекарственных компонентов обеспечивает пролонгированность их действия и исключает аллергизирующее действие противоожогового геля.
Однако данное лекарственное средство и способ его получения имеет ряд недостатков. Липосомы, вносимые в качестве биологически активной добавки в гель, содержат только гидрофобные биологически активные молекулы (липиды, фосфолипиды животного, растительного происхождения и хлороформные экстракты лекарственных трав) в составе мембран липидных везикул, а водная фаза, входящая в их внутренний объем, представлена лишь 0,01 М фосфатным буфером. При этом хлороформные экстракты календулы, подорожника, зверобоя, тысячелистника, корня солодки и донника оказывают в комплексе противовоспалительное, антиаллергенное, кровоостанавливающее, эпителизирующее, бактерицидное действие и светофильтрующий эффект при ожогах, не проявляя ремоделирующего эффекта на келоидные и гипертрофические рубцы.
Метод получения липосом путем «обращения фаз» делает практически невозможным включение во внутренний объем липосом гидрофильных молекул, в первую очередь белковой природы, которые подвержены денатурации в присутствии хлороформа. Отсутствие же таких биомолекул, включая ферменты, в составе липосом, ограничивает их возможности в качестве биологически активной добавки к гелю для лечения и профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи.
Таким образом, существующие методы ремоделирования и профилактики рубцов в целом остаются болезненными, инвазивными, неудобными для применения или недостаточно эффективными. Поэтому создание эффективного препарата для профилактики, лечения данного заболевания и подбор рациональной лекарственной формы, позволяющей наиболее полно реализовать его возможности, является актуальной задачей.
Целью группы изобретений является создание космецевтического липосомального препарата для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов и разработка способа его получения, обеспечивающего включение в липосомы гидрофобных и гидрофильных биологически активных веществ с сохранением их биологической активности.
Поставленная цель достигается тем, что гель для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи содержит в качестве биологически активной добавки 18,0-20,0% суспензию липосом, мембрана которых представлена фосфолипидами, липидами животного и растительного происхождения с включенным в них хлороформным экстрактом лекарственных трав (листьев) алоэ древовидного, зверобоя продырявленного, клевера лугового, корня солодки, лавра благородного, подорожника большого, ромашки аптечной в весовом соотношении 2:2:1, а во внутреннем водном объеме липидных везикул присутствуют экстракты фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи в минеральной воде "Нарзан" в весовом соотношении 1:1:2.
При этом хлороформный экстракт трав (листьев) содержит вытяжку из их смеси в равных количествах в соотношении с хлороформом 1:20. Экстрагирование биологически активных веществ из предварительно гомогенизированных и подвергшихся 3-м циклам «замораживания-оттаивания» плаценты и пупочных канатиков свиньи осуществляют минеральной водой «Нарзан». Липосомы в асептических условиях приготавливают методом «ручного встряхивания», используя в качестве водной фазы простерилизованные с помощью мембранных фильтров полученные экстракты. Помимо липосом гель содержит также аммонийную соль редкосшитого сополимера акриловой кислоты и полиаллиловых эфиров пентаэритрита, глицерин, триэтаноламин, метиловый и пропиловый эфиры параоксибензойной кислоты, отдушку и воду, при следующем содержании компонентов, мас.%.
суспензия липосом
18,0-20,0
аммонийная соль редкосшитого
сополимера акриловой кислоты
и полиаллиловых эфиров
пентаэритрита
1,0-1,25
триэтаноламин
0,7-0,8
глицерин
1,7-2,0
метиловый эфир
параоксибензойной кислоты
0,08-0,1
пропиловый эфир
параоксибензойной кислоты
0,08-0,1
отдушка
0,02-0,03
вода
остальное
Способ получения геля для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи включает подготовку водной эмульсии водорастворимого полимера из аммонийной соли редкосшитого сополимера акриловой кислоты и полиаллиловых эфиров пентаэритрита и триэтаноламина, нагревание ее до 60-65°С и добавления раствора консервантов, в качестве которых используют метиловый и пропиловый эфиры параоксибензойной кислоты в глицерине, эмульгирование, охлаждение до 30-35°С, введение биологически активной добавки - суспензии липосом, водная фаза которых содержит экстракты фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи и минеральную воду «Нарзан», а мембрана состоит из фосфолипидов и липидов животного и растительного происхождения с включенным в них хлороформным экстрактом лекарственных трав (листьев): алоэ древовидного, зверобоя продырявленного, клевера лугового, корня солодки голой, лавра благородного, подорожника большого, ромашки аптечной, с весовым соотношением 2:2:1, при этом хлороформный экстракт трав готовят из их смеси в равных количествах в соотношении с хлороформом 1:20, эмульгирование смеси и добавление отдушки.
По составу и способу заявляемая группа изобретений характеризуются тем, что при формировании мембран липосом используются фосфолипиды и липиды животного и растительного происхождения с включенным в их состав хлороформным экстрактом алоэ древовидного, зверобоя продырявленного, клевера лугового, корня солодки, лавра благородного, подорожника большого, ромашки аптечной, а во внутренний объем липидных везикул иммобилизуются стерильные экстракты фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи в минеральной воде "Нарзан".
Хлороформный экстракт предлагаемого фитосбора содержит алкалоиды, флавоноиды, каратиноиды, азулены, органические кислоты, дубильные вещества, жирорастворимые витамины А, Д, Е, К, в комплексе эти компоненты оказывают антисептическое, противовоспалительное, болеутоляющее, антиаллергическое, кортикостероидноподобное действия, повышают защитные силы организма, расслабляют гладкую мускулатуру, усиливают регенеративные процессы, стимулируя рост грануляций и эпителизацию. Наличие токоферолов (витамин Е) обеспечивает ингибирование перекисных реакций и образование свободных радикалов - разрушителей мембран клеток.
Обладая способностью к преодолению анатомических барьеров, в том числе кожных, липосомы при нанесении на ее поверхность обеспечивают доставку в места формирования келоидных и гипертрофических рубцов биологически активных веществ фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи и минеральных компонентов воды «Нарзан», а также липидов и фосфолипидов, присутствующих в их мембранах, которые оказывают лизирующее действие на келоидные и гипертрофические рубцы кожи. При этом пролонгированность действия указанных веществ обеспечивается постепенной естественной биодеградацией мембран липосом с дискретным высвобождением растворенных в их водной фазе лекарственных компонентов, оказывающих регенерирующее действие на патологические процессы рубцевания кожи. Присутствующая в липосомах минеральная вода «Нарзан» активно воздействуют на нервные окончания, способствуя усилению микроциркуляции крови и снижению воспалительных процессов.
Использование для получения липосом липидов животного происхождения обусловлено их близким составом липидным компонентам кожи (Кузякова Л.М., Бутова О.А. Дерматокосметология. Тенденции и перспективы развития. Ставрополь, 2004, 295 с.).
Для липосом характерны химическая инертность, биосовместимость, биодеградируемость, практическое отсутствие токсичных и антигенных свойств, способность предохранять заключенные в них вещества от действия ряда факторов и ферментов, целенаправленное взаимодействие с различными клеточными системами органов и тканей с внутриклеточной доставкой заключенных в них веществ. Сливаясь с мембраной клетки, липидный компонент липосом встраивается в нее, а водорастворимый препарат проникает в цитоплазму клетки. При накожном нанесении липосом в виде геля или мазей они обеспечивают трансдермальный перенос заключенных в них веществ, в разы превышая их проникновение в кожу по сравнению с интактными лечебными препаратами (Швец В.М., Краснопольский Ю.М. «Липиды в лекарственных препаратах» // Вестник Акад. мед. наук., 1990 №6, с.19-28; Ефременко В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине). Ставрополь, 1999, 236 с.).
Таким образом, повышение эффективности заявляемого средства (геля) для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи обеспечивается составом мембран липосом, в которых сбалансированы липиды животного, растительного происхождения и биологически активные компоненты лекарственных растений, а также наличием во внутреннем объеме липидных везикул экстрактов фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи в минеральной воде «Нарзан», оказывающих коллагенолизирующий эффект на рубцы. Липосомы, глубоко проникая в кожу, взаимодействуя с мембранами ее клеток, обеспечивают постепенный выход лекарственных компонентов и пролонгированность их действия.
Использование в качестве структурообразующего компонента аммонийной соли редкосшитого сополимера акриловой кислоты, полиаллиловых эфиров пентаэритрита и эмульгирование гелеобразной основы с суспензией липосом создает условия образования связанодисперсной системы за счет поликонденсации компонентов основы с полярными липидами бислойной мембраны липосом и обеспечивает стабильное распределение биологически активной добавки в массе продукта.
Возможность практического использования заявляемой рецептуры и способа получения геля для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи иллюстрируется примером конкретного исполнения.
Пример. Готовят гелеобразный раствор водорастворимого полимера.
В реактор заливают стерильную очищенную воду в объеме 1,9 литра, загружают 25 грамм карбополла-940 или 32 грамма аксама. Полимер осторожно насыпают на поверхность воды и оставляют набухать 30-40 минут. В случае использования карбопола-940 в реактор осторожно заливают при перемешивании 20 грамм триэтаноламина. Температуру смеси доводят до 60°С и осуществляют перемешивание в течение 20-30 минут до полного растворения полимера.
В отдельную емкость загружают 50 грамм глицерина, нагревают его до 60°С и растворяют в нем консерванты - пропиловый и метиловый эфиры параоксибензойной кислоты по 2,5 грамма. Полученный раствор фильтруют, перемешивают с гелеобразным раствором полимера и смесь охлаждают до 35°С. Затем в гелеобразную массу порциями подают 0,5 литра 18,0-20,0% суспензию липосом, перемешивают в течение 30 минут до получения однородной массы, добавляют отдушку и вновь перемешивают в течение 10 минут.
Готовый гель подают на фасовку. Полученный продукт представляет собой однородную непрозрачную гелеобразную массу серо-зеленого цвета с приятным запахом. Он хорошо впитывается в кожу без образования пленки.
Высушенные лекарственные травы (листья) зверобоя продырявленного, клевера лугового, корня солодки, лавра благородного, подорожника большого, ромашки аптечной смешивают в равных количествах, добавляют пропорциональное количество алоэ древовидного (1/7 часть в пересчете на сухой вес), измельчают и выдерживают в течение 3-х часов под бактерицидной лампой. Затем смесь трав заливают хлороформом в соотношении 1:20, суспензию перемешивают и настаивают в затемненном месте в течение 2-3 суток. По окончании экстракции суспензию перемешивают и отделяют супернатант. Конечную концентрацию липидов в экстракте доводят до 50 мг/мл. Смесь липидов и фосфолипидов из головного мозга свиньи и семян подсолнечника выделяют путем гомогенизации головного мозга свиньи и отдельно семян подсолнечника охлажденным ацетоном с последующей фильтрацией, экстракции осадков смесью хлороформ-этанол 1:1 в течение 1-2 часов при 20°С, отделения липидной фазы и выделения из нее фосфолипидов добавлением охлажденного ацетона в соотношении с супернатантом 1,5-2,0:1. Полученные осадки фосфолипидов отделяют фильтрованием и растворяют в хлороформе, доводя конечную концентрацию липидов до 50 мг/мл (Патент РФ №2192265, 10.11.2002, бюл. №31).
Биологически активные вещества выделяют из фетальной части плаценты и пупочных канатиков свиньи. Органы в весовом соотношении 1:1 тщательно промывают холодной водой, гомогенизируют, для разрушения мембран клеток трехкратно подвергают циклам «замораживания-оттаивания». Процесс замораживания осуществляют при -40°С в течение 12-18 часов, а оттаивание производят при 37°С в течение 2-4 часов, после чего гомогенат заливают 2-мя объемами минеральной воды «Нарзан», а экстракцию проводят при периодическом перемешивании в течение 18 часов при температуре 4°С, затем супернатант отделяют фильтрованием и стерилизуют с использованием мембранных фильтров.
Липосомы получают из смеси хлороформных экстрактов животного, растительного происхождения и лекарственных трав в весовом соотношении 2:2:1. Для этого в асептических условиях в каждую круглодонную колбу объемом 1000 мл вносят по 4 мл хлороформных экстрактов животного и растительного происхождения и 2 мл хлороформного экстракта лекарственных трав. Колбы присоединяют к роторному испарителю и при пониженном давлении и температуре 37±2°C выпаривают органический растворитель. В каждую колбу, на внутренней поверхности которой находится липидная пленка, вносят по 20 мл экстракта фетальной части плаценты, пупочных канатиков свиньи в минеральной воде "Нарзан" и стерильные стеклянные бусинки. Колбу выдерживают 2 часа при комнатной температуре для набухания липидной пленки и затем энергично встряхивают в течение 10-20 минут до формирования стойкой эмульсии липосом. Контроль формирования липидных везикул осуществляют с использованием оптического микроскопа при инструментальном увеличении × 320-400.
Заявляемое содержание всех составляющих в рецептуре геля для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов кожи оптимально обеспечивает достижение желаемого эффекта.
Снижение содержания аммонийной соли редкосшитого сополимера акриловой кислоты и полиаллиловых эфиров пентаэритрита не обеспечивает необходимой консистенции, повышение содержания в продукте акриловой кислоты приводит к формированию слишком густого геля.
Снижение содержания суспензии липосом ниже заявляемого предела приводит к понижению лечебного и профилактического действия геля, повышение количества липосом в препарате нецелесообразно, так как достигаемый эффект уже практически не изменяется.
Сравнительные испытания заявляемого геля для лечения и профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов и широко известной мази «Кеналог» (триамцинолона ацетонид) проведены в Ставропольской государственной медицинской академии. У экспериментальных животных моделированы келоидные и гипертрофические рубцы. Эксперимент выполняли на 30 морских свинках, обоих полов, с массой тела 320-340 г. Подопытных животных разделили на 3 группы. Первая группа состояла из животных с гипертрофическими рубцами в области срединной линии спины (по 2 рубца на каждом животном на расстоянии 3 см), полученными путем нанесения под местной анестезией дугообразного разреза кожи, с последующим обсеменением культурой Staphylococcus aureus. Вторая группа была представлена животными с келоидными рубцами (по 2 рубца на каждом животном на расстоянии 3 см), полученными путем контактного ожога с последующей гиперстимуляцией рубца антигенами, выделенными из келоидного рубца человека. Третья группа - контроль. В каждой из указанных групп животных на 1-й рубец производилось накожное нанесение мази «Кеналог» в течение 1,5 месяцев ежедневно, на 2-й - заявленного препарата 1 раз в 2 дня. В контрольной группе обе методики лечения применялись на неизмененной коже. Через 2 месяца была произведена морфологическая оценка результатов лечения. Оценивались: местная гиперемия, отек, эрозии, изменения пигментации, размеры и качество рубца, сопротивление разрыву и/или рецидивы келоида. Исследование показало, что в первых 2-х группах экспериментальных животных в результате применения заявленного препарата произошло выраженное ремоделирование гипертрофических и келоидных рубцов, в контрольной группе местных и системных побочных эффектов не наблюдалось. Оценка результатов местного применения мази «Кеналог» в группах с келоидными и гипертрофическими рубцами показала способность кортикостероида размягчить, сделать более плоским рубец, а также улучшить симптоматический рельеф, но степень минимизации рубцовой репарации оказалась ниже. Кроме того, во всех группах животных с местным применением мази «Кеналог» ассоциировались такие осложнения, как атрофия кожи, гипопигментация, телеангиоэктазии, уртикарная сыпь.
Таким образом, заявляемая рецептура и способ получения геля для лечения, профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов практически осуществимы, а результаты исследования его фармакологических свойств обусловливают целесообразность практического использования изобретения в массовом производстве эффективного лечебного средства.
Литература
1. Аникин Ю.В., Кикория Н.Г. «Профилактика и лечение послеожоговых и послеоперационных рубцов» // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии №4, 2004, Санкт-Петербург, с.35.
2. Белоусов А.Е. «Рубцы как глобальная проблема пластической хирургии» // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии, №4, Санкт-Петербург, 2004, С.41.
3. Ефременко В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине), Ставрополь, 1999, 236 с.
4. Кузякова Л.М., Бутова О.А. Дерматокосметология. Тенденции и перспективы развития. Ставрополь, 2004, 295 с.
5. Органопрепараты в эстетической медицине: красота, ревитализация, профилактика старения, под ред. Ролика И.С. 2006, Москва, с.307
6. Патент РФ №2236845, 29.09.2002, Бюл. №27.
7. Патент РФ №2192265, 10.11.2002, Бюл. №31.
8. Патент РФ №2200557, 20.03.2003, Бюл. №8.
9. Anthony E. Brissett, M.D., and David A. Sherris, M.D. «Scar Contractures, Hypertrophic Scars, and Keloids», Vol 1. Chicago: University of Chicago Press; 1930: 403-406.