ЧЕТЫРЕХВАЛЕНТНЫЕ АНТИТЕЛА К PSGL-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Четырехвалентное антитело, которое специфически связывается с человеческим PSGL-1, указанное четырехвалентное антитело, содержащее димер двух мономеров, при этом каждый мономер указанного димера содержит одноцепочечный полипептид, содержащий от N-конца к C-концу:
(a) первый вариабельный домен легкой цепи (VL);
(b) первую линкерную последовательность;
(c) первый вариабельный домен тяжелой цепи (VH);
(d) вторую линкерную последовательность;
(e) второй домен VL;
(f) третью линкерную последовательность;
(g) второй домен VH;
(h) четвертую линкерную последовательность; и
(i) домен Fc антитела,
при этом каждый из первого и второго доменов VL содержит CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3; при этом каждый из первого и второго доменов VH содержит CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; и при этом каждый из первого и второго доменов VL образует единицу связывания VH-VL с соответствующим доменом VH первого и второго доменов VH и при этом каждая из двух единиц связывания VH-VL специфична к человеческому PSGL-1.
2. Четырехвалентное антитело по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере один из двух доменов VH содержит: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
3. Четырехвалентное антитело по п. 2, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержат: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
4. Четырехвалентное антитело по п. 3, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 23.
5. Четырехвалентное антитело по п. 3, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 29.
6. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что по меньшей мере один из двух доменов VL содержит: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
7. Четырехвалентное антитело по п. 6, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержат: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
8. Четырехвалентное антитело по п. 7, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 24.
9. Четырехвалентное антитело по п. 7, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 30.
10. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-9, отличающееся тем, что первая, вторая и третья линкерные последовательности каждая содержит два или более повторов аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, или первая, вторая и третья линкерные последовательности содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, 34, 35 или 36.
11. Четырехвалентное антитело по п. 10, отличающееся тем, что первая и третья линкерные последовательности имеют одинаковую последовательность и содержат два повтора SEQ ID NO: 25.
12. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-11, отличающееся тем, что вторая линкерная последовательность содержит пять повторов SEQ ID NO: 25.
13. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-12, отличающееся тем, что четвертая линкерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
14. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-13, отличающееся тем, что каждый из двух одноцепочечных полипептидов содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 1.
15. Четырехвалентное антитело по п. 14, отличающееся тем, что каждый из двух одноцепочечных полипептидов кодируется полинуклеотидом, содержащим полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2.
16. Четырехвалентное антитело, которое специфически связывается с человеческим PSGL-1, указанное четырехвалентное антитело, содержащее димер двух мономеров, при этом каждый мономер димера включает в себя одноцепочечный полипептид, содержащий от N-конца к C-концу:
(a) первый вариабельный домен тяжелой цепи (VH);
(b) первую линкерную последовательность;
(c) первый вариабельный домен легкой цепи (VL);
(d) вторую линкерную последовательность;
(e) второй домен VL;
(f) третью линкерную последовательность;
(g) второй домен VH;
(h) четвертую линкерную последовательность; и
(i) домен Fc антитела,
при этом каждый из первого и второго доменов VL содержит CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3; при этом каждый из первого и второго доменов VH содержит CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; и при этом каждый из первого и второго доменов VL образует единицу связывания VH-VL с соответствующим доменом VH первого и второго доменов VH и при этом каждая из двух единиц связывания VH-VL специфична кчеловеческому PSGL-1.
17. Четырехвалентное антитело по п. 16, отличающееся тем, что по меньшей мере один из двух доменов VH содержит: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
18. Четырехвалентное антитело по п. 17, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержат: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
19. Четырехвалентное антитело по п. 18, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 23.
20. Четырехвалентное антитело по п. 18, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 29.
21. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 16-20, отличающееся тем, что по меньшей мере один из двух доменов VL содержит: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
22. Четырехвалентное антитело по п. 21, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержат: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
23. Четырехвалентное антитело по п. 22, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 24.
24. Четырехвалентное антитело по п. 22, отличающееся тем, что каждый из двух доменов VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 30.
25. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 16-24, отличающееся тем, что первая и третья линкерные последовательности имеют одинаковую последовательность, содержащую пять повторов SEQ ID NO: 25.
26. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 16-25, отличающееся тем, что вторая линкерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
27. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 16-26, отличающееся тем, что четвертая линкерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
28. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 16-27, отличающееся тем, что каждый из двух одноцепочечных полипептидов содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 3.
29. Четырехвалентное антитело по п. 28, отличающееся тем, что каждый из двух одноцепочечных полипептидов кодируется полинуклеотидом, содержащим полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 4.
30. Четырехвалентное антитело, которое специфически связывается с человеческим PSGL-1, указанное четырехвалентное антитело содержащее димер двух мономеров, при этом каждый мономер димера содержит тяжелую цепь антитела и легкую цепь антитела;
при этом легкая цепь антитела содержит от N-конца к С-концу:
(i) первый вариабельный домен тяжелой цепи (VH),
(ii) первую линкерную последовательность,
(iii) первый вариабельный домен легкой цепи (VL),
(iv) вторую линкерную последовательность,
(v) второй домен VL и
(vi) константный домен легкой цепи (CL);
при этом тяжелая цепь антитела содержит:
(i) второй домен VH, и
(ii) константную область тяжелой цепи, содержащую первый домен константной области тяжелой цепи (CH1), шарнирную область антитела, второй домен константной области тяжелой цепи (CH2) и третий домен константной области тяжелой цепи (CH3);
при этом каждый из первого и второго доменов VL содержит CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3; при этом каждый из первого и второго доменов VH содержит CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; и при этом каждый из первого и второго доменов VL образует единицу связывания VH-VL с соответствующим доменом VH первого и второго доменов VH и при этом каждая из двух единиц связывания VH-VL специфична к человеческому PSGL-1.
31. Четырехвалентное антитело по п. 30, отличающееся тем, что по меньшей мере один из первого и второго доменов VH содержит: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
32. Четырехвалентное антитело по п. 31, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VH содержат: (i) CDR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (ii) CDR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (iii) CDR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
33. Четырехвалентное антитело по п. 32, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VH содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 23.
34. Четырехвалентное антитело по п. 32, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VH содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 29.
35. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-34, отличающееся тем, что по меньшей мере один из первого и второго доменов VL содержит: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
36. Четырехвалентное антитело по п. 35, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VL содержат: (i) CDR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (ii) CDR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (iii) CDR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
37. Четырехвалентное антитело по п. 36, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 24.
38. Четырехвалентное антитело по п. 36, отличающееся тем, что каждый первый и второй домены VL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 30.
39. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-38, отличающееся тем, что домен CL представляет собой домен CL каппа.
40. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-39, отличающееся тем, что первая линкерная последовательность содержит пять повторов SEQ ID NO: 25.
41. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-40, отличающееся тем, что вторая линкерная последовательность содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
42. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-41, отличающееся тем, что легкая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 7.
43. Четырехвалентное антитело по п. 42, отличающееся тем, что легкая цепь антитела кодируется полинуклеотидом, содержащим полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 8.
44. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 30-43, отличающееся тем, что тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 или аминокислотную последовательность, имеющую последовательность по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 11.
45. Четырехвалентное антитело по п. 44, отличающееся тем, что тяжелая цепь антитела кодируется полинуклеотидом, содержащим полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 12.
46. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-45, отличающееся тем, что домен Fc антитела представляет собой домен Fc антитела человека.
47. Четырехвалентное антитело по п. 46, отличающееся тем, что домен Fc антитела представляет собой домен Fc IgG4 человека.
48. Четырехвалентное антитело по п. 47, отличающееся тем, что домен Fc IgG4 человека содержит последовательность шарнирной области, содержащую одну или более аминокислотных замен, которые приводят к уменьшению перетасовки IgG4 по сравнению с шарнирной областью IgG4, не содержащей одной или более аминокислотных замен.
49. Четырехвалентное антитело по п. 47 или 48, отличающееся тем, что домен Fc IgG4 человека содержит последовательность шарнирной области, содержащую замену серина на пролин в аминокислоте 228, нумерация согласно индексу EU.
50. Выделенный полинуклеотид, кодирующий четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-49.
51. Выделенный полинуклеотид по п. 50, отличающееся тем, что указанный выделенный полинуклеотид содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16.
52. Вектор, содержащий выделенный полинуклеотид по п. 50 или 51.
53. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п. 50 или 51, или вектор по п. 52.
54. Способ получения четырехвалентного антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 53 таким образом, что продуцируется четырехвалентное антитело.
55. Способ по п. 54, дополнительно включающий выделение четырехвалентного антитела из клетки-хозяина.
56. Фармацевтическая композиция, содержащая четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-49 и фармацевтически приемлемый носитель.
57. Набор, содержащий четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-49 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель.
58. Набор по п. 57, дополнительно содержащий листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению четырехвалентного антитела с целью лечения опосредованного Т-клетками воспалительного заболевания.
59. Набор по п. 57, дополнительно содержащий листок-вкладыш, содержащий инструкции для введения четырехвалентного антитела до, одновременно с и/или после переливания или трансплантации.
60. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-49 для применения с целью лечения опосредованного Т-клетками воспалительного заболевания.
61. Четырехвалентное антитело по любому из пп. 1-49 для применения с целью лечения индивидуума, нуждающегося в переливании или трансплантации.
62. Применение четырехвалентного антитела по любому из пп. 1-49 при изготовлении лекарственного средства для лечения опосредованного Т-клетками воспалительного заболевания.
63. Применение четырехвалентного антитела по любому из пп. 1-49 при изготовлении лекарственного средства с целью лечения индивидуума, нуждающегося в переливании или трансплантации.
64. Способ лечения опосредованного Т-клетками воспалительного заболевания, указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества четырехвалентного антитела по любому из пп. 1-49.
65. Способ лечения индивидуума, нуждающегося в переливании или трансплантации, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества четырехвалентного антитела по любому из пп. 1-49 до, одновременно с и/или после переливания или трансплантации.
66. Набор по п. 58, четырехвалентное антитело по п. 60, применение по п. 62 или способ по п. 64, отличающиеся тем, что опосредованное Т-клетками воспалительное заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание.
67. Набор по п. 58, четырехвалентное антитело по п. 60, применение по п. 62 или способ по п. 64, отличающиеся тем, что опосредованное Т-клетками воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из псориаза, псориатического артрита, ревматоидного артрита, болезни Крона, анкилозирующего спондилоартрита, диабета типа I, язвенного колита, рассеянного склероза и реакции "трансплантат против хозяина" (РТПХ).
68. Набор, четырехвалентное антитело, применение или способ по п. 67, отличающиеся тем, что псориаз представляет собой бляшковидный псориаз, хронический бляшковидный псориаз, каплевидный псориаз, обратный псориаз, пустулезный псориаз или эритродермический псориаз.
69. Набор по п. 59, четырехвалентное антитело по п. 61, применение по п. 63 или способ по п. 65, отличающиеся тем, что трансплантация представляет собой трансплантацию ткани, выбранной из группы, состоящей из костного мозга, почки, сердца, печени, нервной ткани, легкого, поджелудочной железы, кожи и кишечника.
70. Набор по п. 59, четырехвалентное антитело по п. 61, применение по п. 63 или способ по п. 65, отличающиеся тем, что переливание представляет собой переливание, включающее (содержащее) одно или более из белых клеток крови, красных клеток крови и тромбоцитов.