Способ моделирования острого деструктивного панкреатита у свиней
METHOD FOR MIMICKING ACUTE DESTRUCTIVE PANCREATITIS IN PIGS

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и экспериментальной хирургии, и может быть использовано при моделировании острого деструктивного панкреатита (ОДП).
Известны 3 группы создания модели острого деструктивного панкреатита у свиней. К первой группе относятся каналикулярно-гипертензионные, 2-й - сосудисто-аллергические, 3 - травматические и токсико-инфекционные [Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Кейсевич Л.В. Руководство по экспериментальной хирургии. Москва, Изд. «Медицина», 1989 г., с. 190-205]. Вместе с тем, данным моделям свойственны трудноустранимые недостатки, создающие проблемы в достижении искомых изменений в органе.
Гипертензионные модели являются довольно кропотливыми и вызывают геморрагический панкреонекроз. Сосудисто-аллергические способы не всегда способны вызвать деструктивный процесс в поджелудочной железе и быстро приводят к склерозу органа. Введение агрессивных растворов в протоковую систему поджелудочной железы также не всегда сопровождается развитием развернутой картины острого панкреатита.
Прототипом избрана модель Meirelles R.F. (2008), суть которой заключается в введении в протоковую систему железы свиней таурохолата натрия и энтерокиназы [Methylene blue improves hemodynamic shock but increases lipoperoxidation in severe pancreatitis pig model. Acta Cir Bras. 2008;23 Suppl 1:8-16]. Однако способ применим для создания шокового состояния на фоне геморрагической формы острого панкреатита, без обязательного вовлечения окружающей жировой ткани.
Задачей изобретения было развитие у животных (свиней) гнойно-некротической формы панкреонекроза в динамике.
Технический результат при использовании изобретения - снижение травматичности и продолжительности оперативного вмешательства.
Для отработки технических приемов опыта была сформирована контрольная группа в количестве пяти животных, умерших от других заболеваний. Предлагаемый способ моделирования острого деструктивного панкреатита осуществляется следующим образом. Свиней подвергают лапаротомии путем срединного разреза кожи и подлежащих тканей по белой линии. Затем эвакуируют желчь из желчного пузыря посредством пункции дна органа с последующим наложением на место прокола кисетного шва. После проникновения в полость сальниковой сумки, выделяют поджелудочную железу. С помощью одноразового шприца в область головки, тела и хвоста поджелудочной железы вводят 3 мл аутожелчи. Затем, посредством сдавления браншами анатомического пинцета наносят повреждение органу в различных отделах. После этого послойно ушивают ткани передней брюшной стенки кетгутом и капроновым швом №3. В послеоперационном периоде в течение 72 часов при кормлении в воду добавляют 40% этиловый спирт в количестве 50 мл. Последнее способствует секреции поджелудочной железы.
Пример. Протокол №3. Свинья мужского пола, весом 19 кг, под общим наркозом после премедикации («Золетил 100» в дозе 15 кг/кг внутримышечно, миорелаксанта - ксилазин в дозе 4.5 мг/кг.) произведена верхнесрединная лапаротомия, затем производился забор аутожелчи в одноразовый шприц с последующим наложением на него кисетного шва. Затем вскрывалась полость сальниковой сумки, выделялась поджелудочная железа. В область головки, тела и хвоста вводилась желчь общим объемом 3 мл, после чего путем сдавления браншами пинцета осуществлялось механическое сдавление органа в различных отделах. После завершения манипуляций, рана послойно ушивалась и накладывалась стерильная повязка. В последующие дни (72 часа) для
поддержания секреции в воду добавлялся 40% раствор этилового спирта в количестве 50 мл.
Перед эвтаназией (третьи сутки опыта), был произведен забор крови из краевой вены уха для общего и биохимического анализа. Результаты приведены в таблицах 1 и 2. Как видно из таблиц, в опытной группе содержание нейтрофилов составляет в среднем 32,9±2,90%, тогда как в контрольной - 69,4±3,58%. Сравнение свидетельствует о достоверном (р<0,005) различии данного показателя в периферической крови. В группе животных с острым деструктивным панкреатитом (опытная серия) СОЭ был равен 38±4,6 мм/ч, а у животных контрольной серии - 1±0,90 мм/ч. При этом достоверность различия этих показателей составила р<0,005. В таких показателях, как эритроциты, лейкоциты, гемоглобин, достоверные различия не отмечались. При анализе биохимических показателей также выявлены достоверные различия в опытной и контрольной группах. Так, уровень альфа амилазы в контрольной группе в среднем был 246±4,4 Е/л, а в опытной - 2492±257,0 Е/л, что достоверно (р<0,005). Сравнивая значения общего билирубина (контроль - 1,5±0,38 Мкмоль/л, опыт- 4,2±0,22 Мкмоль/л), щелочной фосфатазы (контроль- 168,0±10,68 Е/л, опыт - 435,2±225,28 Е/л), креатинина (контроль - 76,6±0,86 Мкмоль/л, опыт - 332,2±32,52 Мкмоль/л), а также общего белка (контроль - 44,7±0,40 г/л, опыт - 69,7±3,60 г/л), во всех случаях разница была значима и достоверность составила р<0,005.
Животных выводили из эксперимента следующим образом: вначале достигалось наркотическое состояние животных путем введения «золетила 100», вскоре вливали внутривенно 10% раствор лидокаина в краевую вену уха. При выполнении исследований соблюдались «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» согласно приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г. После вышеуказанных мероприятий, проводилось патологоанатомическое вскрытие. По определенному плану изучались внутренние органы. Данные заносились в
специальную карту. В брюшной полости отмечалось скопление мутной жидкости до 45-40 мл. В поджелудочной железе развивался острый деструктивный панкреатит с очагами геморрагического пропитывания и жирового некроза, гнойного расплавления. Масса поджелудочной железы составила в среднем 34±4,1 г (в норме - 13,5±5,3 г), что достоверно (р<0,005). Имел место переход патологического процесса в окружающую жировую ткань. При этом жировая ткань была малоподвижной, плотной, с инъецированными сосудами, фокусами стеатонекроза. В гистологических препаратах поджелудочной железы определялись плазморрагия за счет повышения сосудистой проницаемости, обнаруживались поля полиморфноядерных лейкоцитов вокруг сосудов и вдали от них, отека и некроза. Все это свидетельствует о достижении модели острого деструктивного панкреатита.
Таким способом была выполнена экспериментальная модель ОДП у семи свиней. У всех животных наблюдали изменения в общем анализе крови и биохимическом анализе крови. Таблица 3 демонстрирует степень достижения деструктивных изменений в поджелудочной железе в результате применения предлагаемой модели острого панкреатита. Модель ОДП у свиней достигнута во всех 7 случаях опыта. При этом очаговое поражение поджелудочной железы наблюдалось в одном случае. Субтотальное повреждение достигнуто у пяти лабораторных животных. Лишь однажды выявлен тотальный вариант панкреонекроза. Примечательно, что лабораторные показатели и результаты патологоанатомического вскрытия свидетельствуют о достижении ОДП у свиней и данная модель может быть использована при выполнении научно-исследовательских задач.
Предлагаемая модель является довольно простой, может быть воспроизведена на большом количестве объектов, не требуя больших затрат фармакологических препаратов и времени на ее выполнение. Техника моделирования очень проста, повторить ее легко, имея из
инструментов лишь одноразовый шприц для забора желчи и анатомический пинцет для механического повреждения поджелудочной железы. Общее время с момента премедикации, последующим наркозом и моделирования ОДП, до выхода животных из наркоза составило не более 40-50 мин. Затраты были связаны лишь с приобретением препаратов для наркоза и премедикации в соответствии с конвенцией по защите домашних животных (№125 от 13.11.1987 г.).