Акарицидная фармацевтическая композиция, средства для лечения паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами, содержащие указанную композицию (варианты)
ACARICIDAL PHARMACEUTICAL COMPOSITION, AGENTS FOR TREATING PARASITIC DISEASES CAUSED BY SCABIES, CONTAINING SAID COMPOSITION (EMBODIMENTS)

.
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности - к фармацевтической композиции, используемой при паразитарных заболеваниях кожи животных, вызванных чесоточными клещами, относящимися к подотряду Sarcoptiformes, надсемейству SarcoptoideaИзобретение также относится к акарицидным средствам, содержащим заявленную фармацевтическую композицию и вспомогательные вещества, которые (средства) могут использоваться для лечения заболеваний кожи животных, вызванных чесоточными клещами, в частности Psoroptes cuniculi, Psoroptes ovis, Otodectes cynotis, Notoedres cati, а также способам получения средств.
Далее в тексте заявителем приведены термины, которые необходимы для облегчения однозначного понимания сущности заявленных материалов и исключения противоречий и/или спорных трактовок при выполнении экспертизы по существу.
Весовая часть - это часть компонента по весу - г, кг и т.д.
Инвазия - проникновение паразитов в организм хозяина, то есть заражение, [https://ru.wikipedia.org/wiki/Инвазия].
Саркоптоидоз - заболевание, вызванное зудневыми клещами надсемейства Sarcoptoidea, подотряда Sarcoptiformes [https://apicenna.ru/bolezni/s/sarkoptoidoz].
Заявленная акарицидная фармацевтическая композиция содержит в своем составе три активных компонента: хлоргексидин формулы (1), 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан формулы (2) и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан формулы (3).
(1)                                                (2)                                          (3)
Изобретение обеспечивает высокий уровень противопаразитарной, противомикробной и противогрибковой активности, лечебной эффективности, пониженную  токсичность.
Чесоточные клещи, подотряд Acariformes, семейство Sarcoptidae являются паразитами домашних и диких животных, могут быть и у человека, локализуются внутри или на коже и вызывают заболевания саркоптоидозы. Данная инвазия наносит значительный экономический ущерб сельскохозяйственным животным, который складывается из снижения продуктивности, ухудшения качества шкуры, затрат на проведение лечебно - профилактических мероприятий.
Основные клинические признаки - зуд, поражение кожи, интоксикация организма и угнетение центральной нервной системы. Борьба с такими видами заболеваний, вызываемых клещами надсемейства Sarcoptoidea, как псороптоз, саркоптоз, отодектоз и др., технически осложняется устойчивостью паразитов к действию многих известных акарицидных средств и ввиду их токсичности среди животных до настоящего времени встречаются случаи летальных исходов. В связи с этим представляется очевидной актуальность задачи, связанная с разработкой и внедрением новых эффективных лекарственных средств с низкой токсичностью для лечения и профилактики саркоптоидоза.
Из исследованного заявителем уровня техники выявлены технические решения, совпадающие с заявленным техническим решением по назначению.
Так, известны спиртовые препараты для лечения и профилактики саркоптоидоза на основе клофентезина, гекситиазокса, тиабендазола, селенотеозина [Лашкова В.А. Акарицидные свойства спиртовых препаратов на основе клофентезина, гекситиазокса, тиабендазола, селенотеозина / В.А. Лашкова, А.Н. Токарев // Сборник научных трудов: Актуальные проблемы ветеринарной медицины - № 150. - Санкт-Петербург, 2019. - С. 19-20].
В разные годы для терапии, больных саркоптоидозами, применялись химические вещества из группы фенолов, серы, гексахлорана [Ятусевич А.И. Паразитология и инва-зионные болезни животных. Практикум / А.И. Ятусевич, Н.Ф. Карасев, С.И. Стасюкевич, В.А. Патафеев // учебное пособие для студентов вузов по специальностям "Ветеринарная медицина", "Ветеринарная санитария и экспертиза" - Минск - 2011].
Недостатками известных технических решений является слабое акарицидное действие, а вещества из группы гексахлорана являются высокотоксичными веществами для животных [Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. М.:, «Колос С» - 2002. - 743 с.].
Из исследованного уровня техники выявлены фосфорорганические препараты, которые длительное время применялись для борьбы с саркоптоидозами.
50
Так, известно широкое применение хлорофоса (СК= 0,7%) в качестве акарицида [Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение / И.А. Архипов // М., 2009. - 406 с.].
Недостатком хлорофоса является то, что он относится к фосфорорганическим соединениям, которые у млекопитающих ингибируют фермент ацетилхолинэстеразу, нарушают функцию нервной системы.
Известны препараты из группы пиретроидов, которые уничтожают клещей, паразитирующих на животных, сравнительно быстро разрушаются во внешней среде, что снижает их опасность для человека и животных [https://ru.wikipedia.org/wiki/Пиретроиды].
Недостатками известных препаратов из этого ряда веществ является то, что все они обладают гепатотоксичным, тератогенным, мутагенным, канцерогенным действием [Соколов В.Д. Эффективность и токсичность акарицидов при демодекозе собак / В.Д. Соколов, Н.П. Андреева, Н.Н. Фисенков // Международный вестник ветеринарии. -  2014. - № 1. - С. 25-28.]. Кроме того, известные препараты, часто эффективные относительно самого клеща, оказываются неэффективными относительно его яиц.
Известно изобретение по патенту РФ №2067863 «Акарицидный состав для лечения чесотки домашних животных», сущностью является акарицидный состав для лечения чесотки домашних животных, включающий действующее вещество (ДВ), отличающийся тем, что в качестве ДВ он содержит смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбенэофуроксанов в соотношении соответственно 70-20 : 30-80 и дополнительно поверхностно-активное вещество и разбавитель при следующем соотношении компонентов, мас. %: смесь 4-нитро-и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов - 0,25-1,0; поверхностно-активное вещество - 0,50-2,0; разбавитель - остальное. Состав по п. 1, отличающийся тем, что в качестве разбавителя используют дистиллированную воду или жидкие минеральные или растительные масла.
Известный состав является аналогом заявленного технического решения по назначению, но отличается по составу, так как входящие в его состав компоненты, а именно 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксан и 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксан, отличны от компонентов заявленной композиции.
Недостатком известного технического решения является отсутствие указания действия известной композиции на яйца и более низкое акарицидное действие по сравнению с заявленным техническим решением.
50
50
Известен источник [Л.М. Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р. Быков, Т.В. Гарипов, И. Ф. Фаляхов // Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана // Вестник Казанского технологического университета. - 2004. - № 1. - С. 103 -111.]. Сущностью является смесь биологически активных веществ 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, обладающая фунгицидной и акарицидной активностью. В качестве критерия оценки акарицидной активности смеси 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-дихлорбензо-фуроксана представлена величина СК, определенная на клещах Psoroptes cuniculi: СК= 0,069%.
Недостатком известного технического решения является более низкая акарицидная и бактерицидная активность по сравнению с заявленным техническим решением и отсутствие действия  на яйца клещей.
Из исследованного уровня техники выявлен источник [https://ru.wikipedia.org/wiki/Хлоргексидин], сущностью является хлоргексидин - лекарственный препарат, антисептик, эффективен в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий (Treponema spp., Neisseria gonorrhoeoae, Ureaplasma spp., Bacteroides fragilis, Chlamydia spp.), простейших (Trichomonas vaginalis), вирусов и грибов. Стабилен, после обработки кожи сохраняется на ней в некотором количестве, достаточном для проявления бактерицидного эффекта.
Известный препарат хлоргексидин использован заявителем в качестве антибактериального компонента заявленной фармацевтической композиции.
Из исследованного уровня техники выявлены аналоги заявленного технического решения по способам получения акарицидных препаратов.
Так, известно изобретение по патенту РФ №2497508 «Акарицидная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония, замещенного динитробензофураксана и ксимедонгидрохлорида», сущностью по отношению к способу является то, что в фарфоровой ступке смешивают и растирают в весовых соотношениях (0.1:1:10)-0,1 г четвертичной соли фосфония - н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид формулы (1), 1 г 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-динитробензофураксана (2) и 10 г ксимедонгидрохлорида (3) до получения однородного порошка красного цвета. Затем порциями при тщательном перемешивании добавляют 100 мл димексида (растворителя) и размешивают до получения однородной жидкости. Жидкость является лекарственной формой фармацевтической композиции «Дегельм КД» для лечения животных зараженных чесоточными клещами, который используется в виде спрея.
При этом известная последовательность действий отличается от заявленной последовательности, подобранной с учетом свойств компонентов заявленных средств.
Из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, аналогичные заявленному техническому решению по составу и способу получения, поэтому независимые пункты формулы составлены без отличительной части.
При этом заявитель считает, что заявленное техническое решение не является суммированием известных технических решений, поскольку подобранный заявителем состав действующих веществ (ДВ) композиции и средств с применением этих ДВ для лечения заболеваний животных, вызванных клещами Psoroptes  cuniculi (состав А), Psoroptes ovis (состав Б), Otodectes cynotis (состав В), Notoedres cati  (состав В), соотношение их компонентов, а также способы их получения не является очевидным для специалиста из данной области техники. Заявителем из исследованного уровня техники не выявлены композиции и средства, в которых одновременно использовались бы заявленные компоненты в заявленном соотношении и в заявленном назначении, а именно - при паразитарных заболеваниях кожи животных, вызванных чесоточными клещами. При этом соотношение компонентов было подобрано заявителем опытным путем. Из исследованного уровня техники также не выявлены способы получения с заявленной последовательностью действий.
Задачей и техническим результатом заявленного технического решения является разработка акарицидной фармацевтической композиции, а также содержащих указанную композицию средств для комплексного воздействия на чесоточные клещи семейства Sarcoptidae Psoroptes cuniculi, Psoroptes ovis, Otodectes cynotis, Notoedres cati, а также способы получения указанных средств, что расширяет арсенал известных средств указанного назначения и устраняет недостатки известных аналогов, при этом заявленная композиция и заявленные средства, полученные заявленным способом:
- обладают комплексным акарицидным действием как на имаго клеща, так и на его яйца,
- обладают фунгицидной активностью благодаря наличию компонентов (2) и (3) с известной фунгицидной активностью,
- обладают антибактериальной активностью благодаря наличию компонента (1) с известной антибактериальной активностью, который (компонент (1)) дополнительно способствует транспорту  компонентов (2) и (3) через кутикулу клеща и разрушает ее,
- обладают синергетическим эффектом биологического действия компонентов (2) и (3) благодаря их комплексному воздействию.
Таким образом, входящие в состав композиции активные компоненты оказывают акарицидное, фунгицидное и антибактериальное действие, активизирует процессы регенерации в тканях и обладают пониженным токсическим действием.
Необходимость создания средств, обладающих комплексным акарицидным, фунгицидным и антибактериальным действием, обусловлена тем, что клещи вступают в симбиотическое взаимодействие со стафилококками и грибками, вследствие чего пораженная кожа становится питательной средой для бактерий и грибов.
При этом в связи с быстрой привыкаемостью паразитов и микроорганизмов к однокомпонентным веществам, предпочтительным является разработка многокомпонентных субстанций.
Сущностью заявленного технического решения является акарицидная фармацевтическая композиция, характеризующаяся тем, что содержит следующее соотношение компонентов, весовых частей: 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан - 9; 4,6- динитро-5,7-дихлорбензофуроксан - 1; хлоргексидин - 2. Средство состава А для лечения  паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами Psoroptes cuniculi, характеризующееся тем, что содержит следующее соотношение компонентов, мас. %: композиция по п. 1 - 0,05-0,1; полиэтиленоксид-400 - 4; полиэтиленоксид-1500 - 1; диметилсульфоксид - 5; вода дистиллированная - остальное. Средство состава Б для лечения паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами Psoroptes ovis, характеризующееся тем, что содержит следующее соотношение компонентов, масс. %: композиция по п. 1 - 0,1; полиэтиленоксид-400 - 5; диметилсульфоксид - 5; березовый деготь - 5; вода дистиллированная - остальное. Средство состава В для лечения паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами Otodectes cynotis и Notoedres cati, характеризующееся тем, что содержит следующее соотношение компонентов, масс. %: композиция по п. 1 - 0,05; этиловый спирт 96,3% - 70; диметилсульфоксид - 2; вода дистиллированная - остальное. Средство по п. 4, характеризующееся тем, что выполнено в виде ушных капель. Средство по п. 4, характеризующееся тем, что выполнено в форме спрея. Способ получения средства состава А по п. 2, заключающийся в том, что берут 0,038 - 0,076 мас. % 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 0,004-0,008 мас. % 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, затем добавляют 4 мас. % полиэтиленоксида-400 и перемешивают до полного растворения при температуре 60°C, затем добавляют 1 мас. % полиэтиленоксида-1500 и перемешивают до полного растворения, добавляют при перемешивании 0,008-0.016 мас. % хлоргексидина; затем добавляют при перемешивании 5 мас. % диметилсульфоксида, воду дистиллированную до 100 мас. % и перемешивают при комнатной температуре до получения однородного геля; полученное средство состава А фильтруют и расфасовывают во флаконы. Способ получения средства состава Б по п. 3, заключающийся в том, что берут 0,076 мас. % 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 0,008 мас. % 4,6-динитро-5,7-дихлорбензо-фуроксана, затем добавляют 5 мас. % полиэтиленоксида-400 и перемешивают до полного растворения при температуре 60°C, затем добавляют 1 мас. % полиэтиленоксида-1500 и перемешивают до полного растворения, затем добавляют при перемешивании 0.016 мас. % хлоргексидина; затем добавляют при перемешивании 5 мас. % диметилсульфоксида, 5 мас. % березового дегтя, воду дистиллированную до 100 мас. % и перемешивают при комнатной температуре до получения однородного геля; полученное средство состава Б фильтруют и расфасовывают во флаконы. Способ получения средства состава В по п. 4, заключающийся в том, что берут 0,038 мас. % 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 0,004 мас. % 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, затем добавляют 70 мас. % 96,3%-го этилового спирта и перемешивают до полного растворения при температуре 60°C, добавляют при перемешивании 0,008 мас. % хлоргексидина; затем добавляют при перемешивании 2 мас. % диметилсульфоксида, воду дистиллированную до 100 мас. % и перемешивают при комнатной температуре до получения однородной жидкости; полученное средство состава В фильтруют и расфасовывают во флаконы. Способ получения средства состава В по п. 9, отличающееся тем, что флаконы снабжают дозатором-капельницей. Способ получения средства состава В по п. 9, отличающееся тем, что флаконы снабжают помпой и нажимным устройством со складывающейся канюлей.
Далее заявителем приведено описание заявленного технического решения.
Поставленная задача и заявленный технический результат решаются разработкой заявленной композиции, заявленных средств для лечения таких заболеваний животных, как псороптоз, отодектоз и нотоэдроз, вызванных чесоточными клещами, относящимися к подотряду Sarcoptiformes, надсемейству Sarcoptoidea, в частности Psoroptes cuniculi, Psoroptes ovis, Otodectes cynotis, Notoedres cati, а также способов получения указанных средств.
При этом заявленная композиция содержит действующие вещества (далее - ДВ) из комбинации трех компонентов (1), (2) и (3), а заявленные средства содержат дополнительно к заявленной композиции вспомогательные вещества.
Далее заявителем приведено краткое описание действия каждого компонента заявленной композиции и заявленных средств.
5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан (2) и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан (3) обладают акарицидной активностью по отношению к чесоточным клещам и одновременно фунгицидным действием.
Хлоргексидин (1) - антисептик широкого спектра действия, фармакологическое действие - антибактериальное, бактерицидное, антисептическое. Разрушает клеточные мембраны бактерий [Государственный реестр лекарственных средств (26 мая 2016)].
Диметилсульфоксид является растворителем, а также оказывает противовоспалительное и анальгетическое обезболивающее действие на наносимый пораженный участок кожи животного, усиливает проникновение через кожу ряда лекарственных веществ за счет способности проникать через биологические мембраны, в том числе через кожные барьеры.
Березовый деготь обладает антисептическим, кератолитическим, противовоспалительным, инсектицидным, противопаразитарным и дезинфицирующим действием, улучшает кровоснабжение тканей, стимулирует регенерацию эпидермиса поврежденных тканей, усиливает процесс ороговения, подсушивает раны и ускоряет их заживление. После кратковременного воздействия убивает многие бактерии и, в частности, туберкулезную палочку и споры сибирской язвы. В слабых концентрациях активизирует рост грануляции, в крепких (выше 10 %) резко ослабляет.
Полиэтиленоксид-400 и полиэтиленоксид-1500 являются растворителями ДВ (2) и (3) и одновременно пролонгаторами лечебного действия ДВ. Также являются гелеобразующими компонентами.
Спирт этиловый является растворителем, консервантом и антисептиком.
Вода дистиллированная является растворителем.
Далее заявителем описано получение отдельных компонентов заявленной фармацевтической композиции и заявленных средств.
5-Нитро-4,6-дихлорбензофуроксан формулы (2) получают по известному способу, описанному, например, в [Мухаметшина А.М., Юсупова Л.М., Хузиахметова А.Н. / Оптимизация синтеза 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана с контролем качества исходного сырья, промежуточных и конечного продуктов реакции // Казанский национальный исследо-вательский технологический университет, 11 июня 2016] [https://izron.ru/articles/problemy-meditsiny-v-sovremennykh-usloviyakh-sbornik-nauchnykh-trudov-po-itogam-mezhdunarodnoy-nauch/sektsiya-52-farmatsevticheskaya-khimiya-farmakognoziya-spetsialnost-14-04-02/optimizat-siya-sinteza-5-nitro-4-6-dikhlorbenzofuroksana-s-kontrolem-kachestva-iskhodnogo-syrya-prome/].
4,6-Динитро-5,7-дихлорбензофуроксан формулы (3) получают по известному способу, описанному, например, в [Юсупова Л. М., Спатлова Л. / Оптимизация синтеза 5,7-дихлоро-4,6 -динитробензофуроксана // Вестник Казанского технологического университета, 2011, с. 49-56].
Хлоргексидин формулы (1) представляет собой белый кристаллический порошок, растворимый в воде, например, [https://shop.evalar.ru/encyclopedia/item/khlorgeksidin/].
Диметилсульфоксид является товарным продуктом (например, по ТУ 2635-114-44493179-08).
Полиэтиленоксид-400 является товарным продуктом (например, по ТУ 2483-167-05757587-2000).
Полиэтиленоксид-1500 является товарным продуктом (например, по ТУ 2483-167-05757587-2000 с изм.)
Березовый деготь является товарным продуктом (например, номер регистрации в ГРЛС - Рег. № ФС-001672).
Спирт этиловый является товарным продуктом (например, по ГОСТ 5962-2013).
Воду дистиллированную получают перегонкой.
Разработка заявленной композиции, состоящей из компонентов (1), (2), (3), обладающей комплексным акарицидным, бактерицидным, фунгицидным действием.
В одном аспекте изобретение относится к акарицидной фармацевтической композиции, обладающей комплексным акарицидным, бактерицидным, фунгицидным действием против чесоточных клещей, относящихся к подотряду Sarcoptiformes, надсемейству Sarcoptoidea.
При разработке заявленной композиции заявителем проведено изучение акарицидной активности действующих веществ (1), (2) и (3), взятых при различных соотношениях в массовых процентах с целью подбора оптимального соотношения.
50
.
Оценку проводили путем определения средней смертельной концентрации СК, определенной на примере имаго клещей Psoroptes cuniculi
Для испытаний были приготовлены водные эмульсии составов №1-№9 (Таблица 1), по 100 мл каждого, с концентрациями, мас. %: 1.0; 0.1; 0.05; 0.025; 0.005.
В чашках Петри на фильтровальную бумагу диаметром 10 см, пропитанную составами №1-№9 указанных концентраций, подсаживали по 20 активных и не травмированных имаго клещей Psoroptes cuniculi. Затем чашки Петри закрывали крышкой и помещали в термостат при температуре 27-29°C и влажности 95%.
В контроле фильтровальную бумагу пропитывали физиологическим раствором.
50
Учет результатов акарицидного действия различных концентраций изученных составов №1-№9 проводили методом наблюдения под микроскопом МБС-1 и бинокулярной лупой БМ-51-2 через 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36, 48, 60 и 72 часа. При этом критерием гибели клещей считали отсутствие у них двигательной активности и реакции на дотрагивание с легким поглаживанием их тонкой иглой. С каждой концентрацией препарата опыт ставили в трех повторностях. Оценку акарицидной активности составов (среднюю смертельную концентрацию СК) проводили по результатам состояния клещей по формуле Г. Кербера [https://dommedika.com/farmakology/587.html]. Результаты представлены в Таблице 1.
Таблица 1. Оценка акарицидной активности действующих веществ (1), (2) и (3), определенной на клещах Psoroptes cuniculi
№ состава
Соотношение[(2) : (3)]
Соотношение[(2) : (3)] : (1)
СК<sub>50,</sub>%
1
9 : 1
[9 : 1] : 1
0,007
2
9 : 1
[9 : 1] : 2
0,007
3
9 : 1
[9 : 1] : 3
0,008
4
8 : 2
[8 : 2] : 1
0,009
5
8 : 2
[8 : 2] : 2
0,009
6
8 : 2
[8 : 2] : 3
0,01
7
7  :  3
[7 : 3] : 1
0,02
8
7  :  3
[7 : 3] : 2
0,02
9
7  :  3
[7 : 3] : 3
0,03
Контроль (физиологический раствор)
-
-
0
50
Из результатов, представленных в Таблице 1, видно, что для соотношения (2) : (3) = 9 : 1 значение СКимеет наименьшую величину, равную 0,007-0,008%.
50
Для соотношений (2) : (3) = 8 : 2 значение СК составило величину 0,009-0, 01%, а для соотношения (2) : (3) = 7 : 3 величину 0,03-0,04%, что больше значения 0,007-0,008%, поэтому в дальнейшем заявителем указанные соотношения не рассматривались.
50
Для соотношения [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 1 и [9 : 1] : 2 значение СКсоставило 0,007%, а для соотношения [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 3-0,008%.
Таким образом, из результатов проведенного эксперимента заявитель делает вывод, что наиболее предпочтительным является соотношение компонентов заявленной композиции, равное [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2 в весовых частях.
50
50
50
50
При этом из данных, приведенных в Таблице 1, можно сделать логический вывод о синергетическом эффекте биологического действия компонентов (1), (2) и (3). Так, известно, что для смеси компонентов (2) и (3) СК = 0,069% [Л. М. Юсупова, С. Ю. Гармонов, И. М. Захаров, А. Р. Быков, Т.В. Гарипов, И.Ф. Фаляхов // Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана // Вестник Казанского технологического университета. - 2004. - № 1. - С. 103-111.], А в композиции, содержащей одновременно (1), (2) и (3), в зависимости от соотношения компонентов (Таблица 1) акарицидная активность составляет величину: СК = 0,007%-0,03%, при этом в заявленном соотношении (2) : (3) = 9 : 1 СК = 0,007%, что на порядок меньше СКсмеси (2) и (3).
Заявленную композицию получают следующим способом:
Пример 1. Получение заявленной композиции, содержащей действующие вещества в соотношении  [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2.
Собственно заявленную композицию в целях исследования ее эффективности получают следующим образом.
Берут 9 весовых частей 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2), например 9 г, добавляют 1 весовую часть 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3), например, 1 г, растирают, например, в фарфоровой ступке, до получения однородного порошка.
Добавляют 2 весовую часть хлоргексидина формулы (1), например, 2 г, смешивают при комнатной температуре до получения однородного порошка.
Получают заявленную композицию в весовом соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2.
Для получения заявленных средств составов А, Б и В берут компоненты заявленной композиции (2) и (3) в соотношении 9 : 1 весовых частей, растворяют в различных растворителях в зависимости от получаемого состава (для составов А и Б - в ПЭГ-400 и ПЭГ-1500, для состава В - в этиловом спирте),  затем добавляют 2 весовые части компонента (1).
Затем  добавляют вспомогательные вещества и проводят последовательность действий по Примерам 2-5.
Акарицидная активность заявленной композиции приведена в Таблице 1.
При этом, по мнению заявителя, заявленная композиция обладает бактерицидным и фунгицидным действием благодаря известной фунгицидной активности соединений (2) и (3)  и известной бактерицидной активности соединения (1).
Разработка заявленных средств для лечения  паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами.
В другом аспекте изобретение относится к средствам для лечения паразитарных заболеваний животных, вызванных чесоточными клещами, таких как:
- псороптоз (Таблица 2, составы А, Б),
- отодектоз (Таблица 2, состав В),
- нотоэдроз (Таблица 2, состав В).
В состав заявленных средств в качестве действующего вещества (ДВ) входит заявленная акарицидная фармацевтическая композиция  из трех активных компонентов (1), (2) и (3) при массовом соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, а также приемлемый растворитель и вспомогательные вещества для создания лекарственной формы.
Составы и формы заявленных средств разработаны таким образом, чтобы проводить лечение наиболее эффективно:
- для лечения псороптоза (клещи паразитируют на поверхности кожи) разработаны составы А и Б в форме геля, позволяющий составам не стекать с поверхности кожи;
- для лечения отодектоза (клещи паразитируют в ушах) разработан состав В в виде ушных капель;
- для лечения нотоэдроза (клещи паразитируют под эпидермалъным слоем кожи) разработан состав В в форме спрея, позволяющий быстро и наименее затратно обрабатывать животных.
Составы заявленных средств приведены  в Таблице 2.
Таблица 2. Составы заявленных средств для лечения паразитарных заболеваний, вызванных чесоточными клещами
Состав средства, форма
Заболевание, вид клеща
Компоненты состава
Содержание, мас. %
Состав А, гель
Псороптоз,Psoroptes  cuniculi
заявленная композиция[(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2
0,05-0,1
полиэтиленоксид-400  (ПЭГ-400)
4
полиэтиленоксид-1500 (ПЭГ-1500)
1
диметилсульфоксид
5
вода дистиллированная
остальное
Состав Б, гель
Псороптоз, Psoroptes ovis
заявленная композиция [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2
0,1
полиэтиленоксид-400 (ПЭГ-400)
5
полиэтиленоксид-1500 (ПЭГ-1500)
1
диметилсульфоксид
5
березовый деготь
5
вода дистиллированная
остальное
Состав В, капли, Состав В, спрей
Отодектоз, Otodectes cynotis Нотоэдроз,Notoedres cati
заявленная композиция [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2
0,05
этиловый спирт 96,3%
70
диметилсульфоксид
2
вода дистиллированная
остальное
Далее заявителем приведен заявленный способ получения заявленных акарицидных фармацевтических средств в целом:
- сначала готовят раствор заявленной композиции, для чего берут компоненты (2) и (3), взятые в весовом соотношении 9 : 1, смешивают друг с другом, растворяют либо в ПЭГ-400 и ПЭГ-1500 (составы А, Б), либо в этиловом спирте (состав  В) при температуре 60°C, к полученному раствору добавляют при перемешивании компонент (1),
- затем добавляют последовательно при перемешивании диметилсульфоксид, затем березовый деготь (состав Б), затем воду дистиллированную до 100%, все перемешивают при комнатной температуре до получения однородного состава.
Полученный состав фильтруют и расфасовывают во флаконы.
Далее заявителем приведены примеры заявленных способов получения заявленных средств более подробно.
Пример 2. Получение состава А с содержанием действующих веществ (1), (2) и (3) 0,05 мас. %.
При суммарном содержании действующих веществ (1), (2) и (3), равным 0,05 мас. % при их соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, содержание отдельных веществ в составе А составляет: (1) = 0.008 мас. %, (2) = 0,038 мас. %, (3) = 0,004 мас. %.
Для получения средства в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,05 мас. %), производят следующую последовательность действий.
Готовят смесь компонентов (2) и (3) в соотношении (2) : (3) = 9:1, для чего берут, 0,038 мас. % (например, 0,038 г) 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2) и 0,004 мас. % (например, 0,004 г) 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3), затем добавляют 4 мас. % ПЭГ-400 (например, 4 г), смесь перемешивают при температуре 60°C, например, в фарфоровом стакане, до полного растворения, добавляют 1 мас. % ПЭГ-1500 (например, 1 г) и перемешивают до полного растворения. Добавляют при перемешивании 0.008 мас. % хлоргексидина формулы (1) (например, 0,008 г).
Затем добавляют при перемешивании 5 мас. % диметилсульфоксида (ДМСО) (например, 5 г), затем воду дистиллированную до 100 мас. %, (например, 89,95 г), и перемешивают при комнатной температуре, например, с помощью магнитной мешалки, до получения однородного геля.
Полученное средство в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,05 мас. %) фильтруют и расфасовывают во флаконы. Флаконы могут быть, например, пластиковые или стеклянные, с последующим вложением в картонную пачку.
Применяют путем нанесения на пораженный участок кожи животного путем нанесения, например, с помощью тампона.
Полученный средство в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,05 мас. %) является средством для лечения животных, зараженных чесоточными клещами Psoroptes  cuniculi, от псороптоза.
Пример 3. Получение состава А с содержанием действующих веществ (1), (2) и (3) 0,1 мас. %.
При суммарном содержании действующих веществ (1), (2) и (3), равным 0,1 мас. % при их соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, содержание отдельных веществ в составе (А) составляет: (1) = 0.016 мас. %, (2) = 0,076 мас. %, (3) = 0,008 мас. %.
Для получения средства в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,1 мас. %), производят следующую последовательность действий.
Готовят смесь компонентов (2) и (3) в соотношении (2) : (3) = 9 : 1, для чего берут 0,076 мас. % (например, 0,076 г) 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2) и 0,008 мас. %. (например, 0,008 г) 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3), смесь растворяют в 4 мас. % ПЭГ-400 (например, 4 г) при температуре 60°C, например, в фарфоровом стакане, добавляют 1 мас. % ПЭГ-1500 (например, 1 г) и перемешивают до полного его растворения. Добавляют при перемешивании 0.016 мас. % хлоргексидина формулы (1) (например, 0,016 г).
Затем добавляют при перемешивании 5 мас. % диметилсульфоксида (ДМСО) (например, 5 г), затем воду дистиллированную до 100 мас. %, (например, 89,90 г), и перемешивают при комнатной температуре, например, с помощью магнитной мешалки, до получения однородного геля.
Полученное средство в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,1 мас. %) фильтруют и расфасовывают во флаконы. Флаконы могут быть, например, пластиковые или стеклянные, с последующим вложением в картонную пачку.
Применяют путем нанесения на пораженный участок кожи животного путем нанесения, например, с помощью тампона.
Полученное средство в виде геля (состав А с содержанием ДВ 0,1 мас. %) является средством для лечения  животных, зараженных чесоточными клещами Psoroptes cuniculi, от псороптоза.
Пример 4. Получение состава Б.
При суммарном содержании действующих веществ (1), (2) и (3), равным 0,1 мас. % при их соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, содержание отдельных веществ в составе Б составляет: (1) = 0.016 мас. %, (2) = 0,076 мас. %, (3) = 0,008 мас. %.
Для получения средства в виде геля (состав Б), производят следующую последовательность действий.
Готовят смесь компонентов (2) и (3) в соотношении (2) : (3) = 9:1, для чего берут, 0,076 мас. % (например, 0,076 г) 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2) и 0,008 мас. %. (например, 0,008 г) 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3), добавляют 5 мас. % ПЭГ-400 (например, 5 г) при температуре 60°C, например, в фарфоровом стакане, добавляют 1 мас. % ПЭГ-1500 (например, 1 г) и перемешивают до полного его растворения. Добавляют при перемешивании 0.016 мас. % хлоргексидина формулы (1) (например, 0,016 г).
Затем добавляют при перемешивании 5 мас. % ДМСО (например, 5 г), затем 5 мас. % березового дегтя (например, 5 г), затем воду дистиллированную до 100 мас. %, (например, 83,90 г), и перемешивают при комнатной температуре, например, с помощью магнитной мешалки, до получения однородного геля желтого цвета.
Полученное средство в виде геля (состав Б) фильтруют и расфасовывают во флаконы. Флаконы могут быть, например, пластиковые или стеклянные, с последующим вложением в картонную пачку.
Применяют путем нанесения на пораженный участок кожи животного путем нанесения, например, с помощью тампона.
Полученное средство в виде геля (состав Б) является средством для лечения  животных, зараженных чесоточными клещами Psoroptes ovis, от псороптоза.
Пример 5. Получение состава В.
При суммарном содержании действующих веществ (1), (2) и (3), равным 0,05 мас. % при их соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, содержание отдельных веществ в составе В составляет: (1) = 0.008 мас. %, (2) = 0,038 мас. %, (3) = 0,004 мас. %.
Для получения средства (состав В), производят следующую последовательность действий.
3
Готовят смесь компонентов (2) и (3) в соотношении (2) : (3) = 9:1, для чего берут 0,038 мас. % (например, 0,038 г) 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2) и 0,004 мас. % (например, 0,004 г) 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3), смесь растворяют в 70 мас. % (например, 70 г) 96,3%-го этилового спирта с плотностью 0,7893 г/см при температуре 60°C, например, в фарфоровом стакане, и перемешивают до полного растворения. Добавляют при перемешивании 0.008 мас. % хлоргексидина формулы (1) (например, 0,008 г).
Затем добавляют при перемешивании 2 мас. % ДМСО (например, 2 г), затем воду дистиллированную до 100 мас. %, (например, 27,95 г), и перемешивают при комнатной температуре, например, с помощью магнитной мешалки, до получения однородной жидкости.
Полученное средство в виде жидкости (состав В) возможно использовать следующим образом:
- в виде ушных капель для лечения животных, зараженных чесоточными клещами Otodectes cynotis, от отодектоза, для чего состав В фильтруют и расфасовывают во флаконы, которые предварительно снабжают дозатором-капельницей. Флаконы могут быть, например, пластиковые или стеклянные, с последующим вложением в картонную пачку.
Применяют путем нанесения в уши животного в виде ушных капель. Возможно нанесение на пораженный участок кожи ушей, например, с помощью тампона.
- в форме спрея для лечения животных, зараженных чесоточными клещами Notoedres cati, от нотоэдроза, для чего состав В фильтруют и расфасовывают во флаконы, которые предварительно снабжают помпой и нажимным устройством со складывающейся канюлей. Флаконы могут быть, например, пластиковые или стеклянные, с последующим вложением в картонную пачку.
Применяют путем нанесения на пораженный участок кожи животных в виде спрея.
Далее заявителем приведены примеры изучения эффективности заявленных средств составов А, Б, В.
Пример 6. Изучение эффективности средства в виде геля  (состав А) в отношении изолированных клещей Psoroptes cuniculi.
Заявителем изучена эффективность в отношении  изолированных клещей Psoroptes  cuniculi средства в виде геля (состав А) при заявленных концентрациях ДВ = 0,05; 0,1 мас. % (Таблица 3, составы 3 и 4). При этом для подтверждения правильности выбора указанных концентраций исследованы также составы с концентрациями ДВ = 0,005; 0,025; 1,0 мас. % (Таблица 3, составы 1, 2 и 5).
Исследования проводили в условиях in vitro на изолированных клещах P.cuniculi, взятых от спонтанно инвазированных кроликов по методике Ильященко В.И. (Ильященко В.И. Саркоптоидозные клещи, совершенствование методов диагностики и борьбы с ними.: Автореф. дис. докт. биолог, наук. С. - П., 1993. - 36 с.).
В чашках Петри диаметром 10 см помещали фильтровальную бумагу, пропитанную водными эмульсиями составов 1-5 исследованных концентраций и подсаживали по 20 отобранных активных и не травмированных имаго клещей. Затем чашки Петри закрывали крышкой и помещали в термостат при температуре 27-29°C и влажности 95%.
В контроле фильтровальную бумагу пропитывали физиологическим раствором.
Учет результатов акарицидного действия различных концентраций (составы 1-5) проводили методом наблюдения под микроскопом МБС-1 и бинокулярной лупой БМ-51-2 через 1, 24 и 72 часа. При этом критерием гибели клещей считали отсутствие у них двигательной активности и реакции на дотрагивание с легким поглаживанием их тонкой иглой. С каждой концентрацией препарата опыт ставили в трех повторностях.
Полученные результаты приведены в Таблице 3.
Таблица 3. Изучение эффективности средства в виде геля  на изолированных клещах Psoroptes cuniculi (in vitro)
№ состава
Σ ДВ [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2, мас. %
Число клещей в опыте
Состояние клещей
1 час
24 часа
72 часа
живые
мертвые
% мертвых
живые
мертвые
% мертвых
живые
мертвые
% мертвых
1
0,005
20
8
12
60
2
18
90
-
20
100
2
0,01
20
7
13
65
2
18
90
-
20
100
3
0,05
20
-
20
100
-
20
100
-
20
100
4
0,1
20
-
20
100
-
20
100
-
20
100
5
1,0
20
-
20
100
-
20
100
-
20
100
Контроль
-
20
20
-
0
20
-
0
20
–
0
Из данных, приведенных в Таблице 3, видно, что через 1 час после нанесения состава 1 мертвыми оказались 12 клещей из 20 (60%), состава 2-13 клещей из 20 (65%). При действии составов 3, 4, 5 через 1 час живых клещей не было выявлено. Исследование проб через 24 и 72 часа после нанесения составов 3, 4, 5 показало 100%-е акарицидное действие.
В контроле с использованием только воды клещи на всех сроках исследования оставались живыми. При этом установлено, что концентрации компонентов, соответствующих составу 4, достаточно для достижения заявленного технического результата, при этом нет необходимости в дальнейшем увеличении концентрации активных компонентов, соответствующих составу 5.
Таким образом, полученные результаты подтвердили, что оптимальными концентрациями средства в виде геля является суммарная концентрация ДВ (1), (2) и (3) = 0,05-0,1% при их соотношении [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2 (состав А).
Пример 7. Изучение эффективности средства в виде геля (состав А) при заболевании кроликов, вызванного клещами Psoroptes cuniculi (in vivo).
Опыты по изучению эффективности заявленного средства (состав А) в виде геля при псороптозе кроликов проводили на естественно зараженных псороптозом кроликах со средней степенью поражения. Животные содержались в личном подсобном хозяйстве Шангараева Р.И.
В результате акарологических исследований соскоба с кожи были выделены акариформные клещи Psoroptes cuniculi. У животных проявлялись следующие клинические признаки: беспокойство, в области поврежденных участков кожи отмечался зуд, раны, очаги с образованием толстых корок, воспаление, понижение аппетита.
Кроликов разделили на 6 групп (по 3 кролика в каждой), обрабатывали пораженные участки кожи средством состава А с заявленной концентрацией ДВ 0,05-0,1% (группы 3, 4). При этом для подтверждения правильности выбора указанных концентраций исследованы составы с концентрациями ДВ = 0,005; 0,01; 1,0% (группы 1, 2, 5). Обработку проводили двукратно с интервалом 7 дней:
- 1 группу обрабатывали составом с концентрацией ДВ 0,005%;
- 2 группу обрабатывали составом с концентрацией ДВ 0,01%;
- 3 группу обрабатывали заявленным средством с концентрацией ДВ 0,05%;
- 4 группу обрабатывали заявленным средством с концентрацией ДВ 0,1%;
- 5 группу обрабатывали составом с концентрацией ДВ 1%;
- в 6 группе лечение не проводили (контроль).
Лабораторную диагностику у кроликов проводили путем осмотра, взятия и исследования соскоба с внутренней поверхности ушных раковин и исследования на наличие яиц и живых клещей.
Результаты учитывали через  6, 10, 15, 20 и 30 дней.
Результаты исследований представлены в Таблице 4.
Таблица 4. Изучение эффективности  средств в виде геля  при псороптозе кроликов, вызванном клещами Psoroptes  cuniculi
№ гр.
ИИ* до лечения
ИИ по дням
6 дней
10 дней
15 дней
20 дней
30 дней
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
1
+++
+++
+
–
+
+
+
+
+
+
+
+
2
+++
+++
+
–
–
–
–
–
–
–
–
–
3
+++
+++
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
4
+++
+++
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
5
+++
+++
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
6
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
* ИИ - интенсивность инвазии
+ - единичные яйца и имаго клещей
+++ - высокая степень инвазии.
Из данных, приведенных в Таблице 4, видно, что до лечения в соскобах с кожи во всех группах как опытных, так и контрольных животных было выявлено инвазионное начало (яйца и имаго акариформенного клеща).
У кроликов 1 группы на 6 день лечения имаго клещей не обнаружено, однако в соскобах находились яйца. На 10, 15, 20 и 30 дни в этих группах находили яйца и имаго клещей в разных стадиях развития.
У кроликов 2 группы на 6 день после лечения имаго клещей не обнаружено, однако в соскобах находились яйца. На 10, 15, 20 и 30 дни в этих группах инвазионное начало не было выявлено - яйца и имаго клеща отсутствовали.
У кроликов 3, 4 и 5 групп на 6 день после лечения  в соскобах имаго и яйца клещей не выявлено.
Кролики 6 группы (контрольной) были заражены псороптозом во все сроки исследования.
Таким образом, из полученных результатов можно сделать вывод, что наибольшей эффективностью при лечении псороптоза кроликов обладают заявленные составы 3, 4 и состав 5. При этом, поскольку состав 5 имеет более высокую концентрацию ДВ, что является экономически не выгодным, заявитель считает оптимальным состав А заявленного средства в виде геля с концентрацией ДВ = 0,05-0,1 мас. % при соотношении компонентов [(2) : (3)] : (1) = [9 : 1] : 2.
Пример 8. Изучение эффективности заявленного средства (состав Б) в форме геля при псороптозе овец in vivo.
Лечебную эффективность средства (состав Б) в форме изучали на овцах, естественно инвазированных клещами Psoroptes ovis.
Животные содержались на овцеферме КП «Тан» Черемшанского района РТ. Больных животных из отары выявляли по клиническим признакам, которые были слабо выражены (местами незначительное выпадение шерсти, покраснение кожи).
В опыте использовали 20 овец, в возрасте от 6-ти до 8-ми месяцев, которых разделили на 4 группы (по 5 голов в каждой).
- 1 группу обрабатывали заявленным составом Б в форме геля.
- 2 группу обрабатывали 0,0125%-м раствором известного противопаразитарного препарата «Циперил» (группа сравнения).
- 3 группу обрабатывали 0,1%-м раствором известного противопаразитарного препарата «Бутокс 50» (группа сравнения).
- в 4 группе лечение не проводили (контроль).
Перед обработкой препаратами овцы были пострижены. Нанесение препаратов проводили двукратно с интервалом в 7 суток методом опрыскивания всей поверхности тела.
Диагноз на псороптоз подтверждали путем акарологического исследования соскобов кожи овец через 3, 7, 14, 21, 28, 35, 45 дней после обработки препаратами и по клиническим признакам.
Эффективность исследованных заявленного состава Б при псороптозе овец представлена в Таблице 5.
Таблица 5.Исследование эффективности различных акарицидных средств при псороптозе овец in vivo, вызванном клещами Psoroptes ovis
№ гр.
ИИ* до начала лечения
ИИ по дням
3дня
7дней
14 дней
21 дней
28 дней
35 дней
45дней
Яйца
Клещи в разных стадиях развития
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
Яйца
Клещи
1
+++
+++
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
2
+++
+++
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
3
+++
+++
+
-
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+++
+++
4
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
* ИИ - интенсивность инвазии.
+ - единичные яйца и имаго клещей.
+++ - высокая степень инвазии.
Исследования показали, что зуд и расчесывание пораженных участков у овец опытных групп проявлялись до семи дней, а в контрольной группе животных в течение всего опыта наблюдали признаки дерматита паразитарной этиологии.
Из данных, приведенных в Таблице 5, видно, что до обработки овец акарицидными препаратами в соскобах кожи больных овец были обнаружены как клещи Psoroptes ovis, так и их яйца.
У овец 1 группы, обработанной заявленным составом Б, на 3 день после начала лечения при акарологическом исследовании в соскобах кожи овец клещей и яиц не было обнаружено. Было отмечено быстрое восстановление пораженных участков кожи, обрастание их новой шерстью.
У овец 2 группы, обработанных «Циперилом», на 3 день были обнаружены только яйца возбудителя псороптоза, в последующие дни ни яиц, ни клещей в соскобах не находили.
У овец 3 группы, обработанных «Бутоксом 50», на 3 и 7 дни после лечения были выявлены яйца возбудителей псороптоза, на 14 день и в последующие сроки исследования были обнаружены живые клещи, с 28 дня появились и яйца, а также новые очаги поражения.
У овец 4 группы (контроль) на протяжении всего опытного периода обнаруживались как клещи, так и их яйца, а также становились более выраженными клинические признаки псороптоза.
Таким образом, можно сделать вывод, что заявленное средство состава Б при двукратной обработке естественно зараженных возбудителем Psoroptes ovis овец оказывает выраженное акарицидное действие. При этом пролеченные заявленным средством овцы в течение 45 дней повторно не заразились.
Пример 9. Изучение акарицидной эффективности заявленного средства (состав В в виде ушных капель) при отодектозе крыс, вызванном клещами  Otodectes cynotis (in vivo).
Испытание лечебной акарицидной эффективности заявленного средства состава В проводили на 20 крысах, весом 180-200 граммов, естественно зараженных отодектозом.
Животные содержались в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ. Первично у них было замечено отставание в росте и тусклый цвет волос. Затем у животных периодически проявлялись приступы беспокойства, они взвизгивали, быстро бегали в клетке, трясли головой. У некоторых животных отмечали кривоголовость.
Лабораторную диагностику у крыс проводили путем взятия и исследования соскоба из ушных раковин. Все препараты применяли в форме ушных капель двукратно с интервалом 7 дней.
После установления диагноза крыс разделили на 5 групп:
- 1 группу обрабатывали заявленным средством состава В.
- 2 группу обрабатывали 0,01% раствором гексидина в 70% спиртово-водном растворе;
- 3 группу обрабатывали 0,05% раствором смеси 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана формулы (2) и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана формулы (3) в соотношении 9 : 1 в 70% спиртово-водном растворе;
- 4 группу обрабатывали смесью вспомогательных веществ: 2 г диметилсульфоксида, 68 г этилового спирта 96,3%, остальное вода до 100 г.
- в 5 группе лечение не проводили (контрольная группа).
Исследования проводили на яйцах и имаго клеща Otodectes cynotis. Все препараты наносили на пораженное место крыс в форме ушных капель двукратно с интервалом 7 дней.
Лабораторную диагностику у крыс проводили путем осмотра, взятия и исследования соскоба с внутренней поверхности ушных раковин и исследования на наличие яиц и живых клещей.
Результаты учитывали через 6, 12, 18 и 24 дня.
Результаты исследований представлены в Таблице 6.
Таблица 6. Изучение эффективности заявленного средства состава Б в форме ушных капель при заболевании, вызванном клещами Otodectes cynotis.
№ гр.
ИИ* до лечения
ИИ по дням
6 дней
12 дней
18 дней
28 дней
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
1
+++
+++
-
-
-
-
-
-
-
-
2
+++
+++
++
++
++
++
+
+
+
+
3
+++
+++
+
-
+
-
+
-
-
-
4
+++
+++
+++
+++
+++
+++
++
++
+
+
5
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
* ИИ - интенсивность инвазии.
+ - единичные яйца и имаго клещей;
++ - умеренная степень инвазии;
+++ - высокая степень инвазии.
Данные, приведенные в Таблице 6, показывают, что:
- в 1 группе крыс заявленное средство состава В в форме ушных капель оказывает акарицидное действие уже на 6 сутки после лечения. При этом  установлено, что заявленное средство действует губительно как на яйца возбудителя, так и на имаго клещей. Об этом свидетельствуют отрицательные результаты, полученные при исследовании соскобов, взятых на 6 и 12, а также в последующие сроки лечения;
- во 2 группе крыс установлено, что интенсивность инвазии стала меньше, но в течение всего срока исследования в соскобах были установлены яйца и имаго клеща Otodectes cynotis;
- в 3 группе крыс акарицидное действие оказывает на клещи, но в течение 18 дней исследования в соскобах были установлены яйца клеща Otodectes cynotis;
- в 4 группе крыс интенсивность инвазии стала меньше, но в течение всего срока исследования в соскобах были установлены яйца и имаго клеща Otodectes cynotis.
- в 5 группе крыс на протяжении всего опытного периода при акарологических исследованиях соскобов кожи с ушей находили в поле зрения микроскопа как яйца, так и имаго  клещей на разных стадиях развития.
Из результатов исследований, описанных в Примере 10, можно сделать вывод, что заявленное средство состава В, взятое, например, в форме ушных капель, обладает акарицидным действием против клеща Otodectes cynotis.
Пример 10. Изучение эффективности заявленного средства (состав В в форме спрея) для лечения нотоэдроза кошек, вызванного возбудителем Notoedres cati.
Опыты по изучению эффективности заявленного средства в форме спрея  (состав В) проводили на больных нотоэдрозом кошек, вызванным возбудителем Notoedres cati, паразитирующим на коже головы. Перед применением заявленное средство состава В в форме спрея подогревали до 30-35°C. Обработку проводили путем аэрозольного распыления в пораженные участки головы, где локализуются возбудители болезни.
Кошки были разделены на 3 группы (по 3 кошки в каждой). Обработку проводили 2 раза с интервалом в 6 дней.
- 1 группу обрабатывали составом В заявленного средства в форме спрея.
- 2 группу обрабатывали лекарственным препаратом «Ивермек спрей» (группа сравнения).
- в 3 группе лечение не проводили (контроль).
Учет результатов исследований проводили путем осмотра обработанной поверхности кожи и исследованием соскобов на наличие инвазионного начала через 7, 15 и 30 дней после обработки.
Результаты приведены в Таблице 7.
Таблица 7. Изучение эффективности различных акарицидных средств при заболевании кошек, вызванном клещами Notoedres cati
№ гр.
ИИ* до лечения
ИИ по дням
7 дней
15 дней
30 дней
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
яйца
имаго клеща
1
+++
+++
-
-
-
-
-
2
+++
+++
-
+
-
-
-
-
3
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
* ИИ - интенсивность инвазии.
+ - единичные яйца и имаго клещей
+++ - высокая степень инвазии.
Из данных, приведенных в Таблице 7, видно, что до лечения в соскобах кожи больных животных обнаружили как имаго клещей Notoedres cati, так и яйца. При акарологическом исследовании животных 1 группы (состав В) через 7, 15 и 30 дней после лечения имаго и яйца клещей не были обнаружены.
У кошек 2 группы через 7 дней после начала лечения в соскобах с кожи выявлены яйца клещей. В последующие сроки исследований результаты акарологических исследований были отрицательные. Животные контрольной группы были заражены нотоэдрозом во все сроки исследования.
Таким образом, при лечении нотоэдроза кошек наиболее эффективным является заявленное средство состава В, например, в форме спрея.
Пример 11. Определение острой токсичности заявленной трехкомпонентной акарицидной фармацевтической композиции.
Из уровня техники известно, что 5-нитро-4,6-динитробензофуроксан (2) относится к 3 классу опасности (LD50=380 мг/кг) [Юсупова, Л.М. Фунгицидные и токсикологические свойства функционально замещенных нитробензофуроксанов / Л.М. Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р. Быков, И.Ф. Фаляхов, Т.В. Гарипов // Химико-фармацевтический журнал. - 2008. - Т. 42. - №4. - С. 27-29].
При оценке острой токсичности заявленной акарицидной фармацевтической композиции использовали «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению токсичности новых фармакологических веществ» (под ред. Р.У. Хабриева, 2005). Заявленную композицию растворяли в подсолнечном масле.
В опыте использовали 49 белых крыс, массой тела 200-220 г.
По принципу аналогов животных разделили на 7 групп по 7 особей в каждой.
6 групп служили опытной, одна - контрольной.
1-6 опытным группам вводили заявленную акарицидную фармацевтическую композицию внутрижелудочно с помощью зонда в форме раствора на подсолнечном масле в дозах 500, 700, 900, 1100, 2300 и 1500 мг/кг соответственно.
Крысам контрольной группы вводили подсолнечное масло в дозе 5 мл.
Крыс допускали к воде и корму через 4 часа после введения заявленной композиции. Наблюдение вели в течение 14 дней. Обращали внимание на подвижность, ментальный статус, наличие пищевой возбудимости, состояние кожи и видимых слизистых оболочек. Павших животных подвергали патологоанатомическому вскрытию.
Среднесмертельную дозу LD50 рассчитывали по формуле:
LD50 = LD100 - Σ ⋅(Z ⋅D)/n,
где:
LD100 - абсолютная летальная доза;
Z - среднее арифметическое из двух значений числа тест-объектов, у которых проявился положительный эффект при воздействии каждой из двух смежных доз;
D - промежуток между дозами (мг/кг);
n - число животных в группе.
Результаты определения острой токсичности заявленной акарицидной фармацевтической композиции в виде спрея представлены в Таблице 8.
Таблица 8. Исследование острой токсичности заявленной акарицидной фармацевтической композиции в виде спрея при внутрижелудочном введении
Исследуемые дозы, мг/кг
500
700
900
1100
1300
1500
Число животных в группе, n
7
7
7
7
7
7
Число выживших животных в каждой группе
7
7
7
5
2
0
Число павших животных в каждой группе
0
0
0
2
5
7
Z
0
0
0
1
35
6
D, мг/кг
200
200
200
200
200
200
Z⋅D
0
0
0
200
700
1200
По результатам данных, приведенных в Таблице 8, рассчитана LD50 заявленной акарицидной фармацевтической композиции:
LD50 = 1500 - (200 + 700 + 900) / 7 = 1500 - 2100 / 7 = 1500 - 300 = 1200 мг/кг.
Таким образом, средне смертельная доза заявленной композиции в виде спрея при внутрижелудочном введении составила 1200 мг/кг, что соответствует 4 классу опасности (малоопасные вещества) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
Таким образом, из описанного выше можно сделать вывод,  что заявителем достигнут заявленный технический результат, а именно: разработана акарицидная фармацевтичекая композиция и содержащие ее средства для комплексного воздействия на чесоточные клещи семейства Sarcoptidae Psoroptes cuniculi, Psoroptes ovis, Otodectes cynotis, Notoedres cati, а также способы получения указанных средств, что расширяет арсенал известных средств указанного назначения и устраняет недостатки известных аналогов, при этом заявленная композиция и заявленные средства, полученные заявленным способом:
- обладают комплексным акарицидным действием как на имаго клеща, так и на его яйца,
- обладают фунгицидной активностью благодаря наличию компонентов (2) и (3) с известной фунгицидной активностью,
- обладают антибактериальной активностью благодаря наличию компонента (1) с известной антибактериальной активностью, который (компонент (1)) дополнительно способствует транспорту компонентов (2) и (3) через кутикулу клеща и разрушает ее,
- обладают синергетическим эффектом биологического действия компонентов (2) и (3) благодаря их комплексному воздействию.
Таким образом, входящие в состав композиции активные компоненты оказывают акарицидное, фунгицидное и антибактериальное действие, активизирует процессы регенерации в тканях и обладают пониженным токсическим действием.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как на дату предоставления заявочных материалов заявителем из исследованного уровня техники не выявлены источники, обладающие совокупность признаков, идентичными совокупности признаков заявленного технического решения.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, т.к. совокупность заявленных признаков обеспечивает получение неочевидных для специалиста технических результатов, превышающих технический результат прототипа. Заявителем из исследованного уровня техники не выявлены составы, в которых одновременно использовались бы заявленные компоненты в заявленном соотношении и в заявленном назначении, а именно - в составе фармацевтической композиции для лечения для лечения паразитарных заболеваний кожи животных. При этом соотношение компонентов было подобрано заявителем опытным путем.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость» предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленная композиция может быть получена посредством использования известных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.