СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 11-β-ГИДРОКСИ -9-β,10-α-СТЕРОИД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛЕТОК Amycolatopsis mediterranei

1. Применение бактериальных штаммов вида Amycolatopsis mediterranei для микробиологического превращения 9β,10α-стероидов общей формулы (I)
,
где R1 и R4 вместе представляют собой кислород, или
1
4
1
4
R4 представляет собой β-ацетильную группу и R1 выбрана из группы, состоящей из водорода, -OH, -O-(C-C)алкил, и -O-CO-(C-C)алкил, и
R2 и R3 оба представляют собой водород или вместе формируют метиленовую группу, в их соответствующий 11β-гидроксильный аналог.
2. Применение по п.1, где бактериальный микроорганизм вида Amycolatopsis mediterranei представляет собой штамм, выбранный из группы, содержащей штаммы LS30, DSM 43304, DSM 40773, и DSM 46096.
3. Применение по п.2, где штамм представляет собой Amycolatopsis mediterranei LS30, депонируемый под обозначением DSM 17416.
4. Бактериальный штамм Amycolatopsis mediterranei LS30, депонированный под обозначением DSM 17416.
5. Способ микробиологического превращения in vitro 9β,10α-стероидов общей формулы (I)
где R1 и R4 вместе представляют собой кислород, или
1
4
1
4
R4 представляет собой β-ацетильную группу и R1 выбрана из группы, состоящей из водорода, -OH, -O-(C-C)алкил, и -O-CO-(C-C)алкил, и
R2 и R3 оба представляют собой водород или вместе формируют метиленовую группу, в их соответствующий 11β-гидроксильный аналог, который включает контактирование соединения формулы (I) в ферментирующей среде с бактерией вида Amycolatopsis mediterranei, способной к осуществлению превращения соединения формулы (I) в его соответствующий 11β-гидроксильный аналог.
6. Способ микробиологического превращения in vitro по п.5, в котором 9β,10α-стероидное соединение представляет собой соединение общей формулы (II)
,
1
4
1
4
где R1 выбран из группы, состоящей из водорода, -OH, -O-(C-C)алкил, и -O-CO-(C-C)алкил, и
R2 и R3 оба представляют собой водород или вместе формируют метиленовую группу.
7. Способ микробиологического превращения in vitro по п.6, в котором 9β,10α-стероидное соединение представляет собой соединение общей формулы (III)
,
1
4
где R1 представляет собой водород или -O-(C-C)алкил; и
R2 и R3 представляют собой водород или вместе формируют метиленовую группу.
8. Способ по п.5, в котором бактерия вида Amycolatopsis mediterranei представляет штамм, выбранный из группы, содержащей штаммы LS30, DSM 43304, DSM 40773 и DSM 46096.
9. Способ по п.8, в котором штамм Amycolatopsis mediterranei LS30 депонирован под обозначением DSM 17416.
2
2max
10. Способ по п.5, в котором по меньшей мере стадию ферментации проводят при аэробных условиях, в частности при относительном насыщении кислородом pO/pO ферментирующей среды от приблизительно 5% до приблизительно 95%, предпочтительно от приблизительно 20% до приблизительно 80%, более предпочтительно от приблизительно 30% до приблизительно 75%, и наиболее предпочтительно от приблизительно 40% до приблизительно 70%.
11. Способ по п.5, в котором бактерии Amycolatopsis mediterranei находятся в середине или в поздней фазе экспоненциального роста и превращение 9β,10α-стероидного соединения осуществляют при добавлении их в среду.
12. Способ по любому из пп.5-11, в котором 9β,10α-стероидное соединение добавляют в количестве от приблизительно 50 мг/л до приблизительно 500 мг/л, предпочтительно от приблизительно 100 мг/л до приблизительно 250 мг/л ферментирующей среды, и наиболее предпочтительно в количестве приблизительно 150 мг/л ферментирующей среды.
13. Способ по п.12, в котором все количество 9β,10α-стероидного соединения добавляют сразу в начале процесса превращения или в промежутке от 1 до 5 ч от начала процесса превращения.
14. Способ по п.12, в котором 9β,10α-стероидное соединение непрерывно добавляется к ферментирующей среде в течение всего периода превращения.
15. Способ по п.14, в котором 9β,10α-стероидное соединение добавляют в концентрации от 1 до 20 мг в час культивации на литр ферментирующей среды, предпочтительно в концентрации от 2 до 5 мг в час культивации на литр ферментирующей среды.
16. Способ по п.5, в котором 11β-гидроксильный аналог отделяют от ферментирующей среды по процессу, состоящему из стадий:
а) получение надосадочной жидкости из ферментирующей среды, необязательно свободной от бактериальных клеток, разрушенных бактериальных клеток, слизистых веществ и твердых частиц,
б) контактирование надосадочного материала, выбранного из группы, состоящей из надосадочной жидкости, полученной на стадии а), концентрата, полученного из указанной надосадочной жидкости уменьшением объема, и ретентата, полученного мембранной фильтрацией указанной надосадочной жидкости, с достаточным количеством для адсорбции содержащегося в надосадочном материале 11β-гидроксильного аналога неионной полуполярной полимерной адсорбирующей смолы, в результате чего получают нагруженную 11β-гидроксильным аналогом неионную полуполярную полимерную адсорбирующую смолу, и следующее за этим отделение нагруженной адсорбирующей смолы от остатка надосадочного материала;
в) промывание нагруженной адсорбирующей смолы щелочным водным раствором с уровнем pH по меньшей мере 12,0, предпочтительно от 12,5 до 14;
г) необязательное промежуточное промывание, при котором нагруженная адсорбционная смола промывается водой, и
д) контактирование промытой адсорбирующей смолы с достаточным для десорбции адсорбированного на ней 11β-гидроксильного аналога количеством элюента, при этом упомянутый элюент содержит по меньшей мере один смешивающийся с водой органический растворитель, выбранный из группы, состоящей из смешивающихся с водой простых эфиров, низших спиртов, и низших алифатических кетонов или смесь воды, к которой может быть добавлена щелочь, и по меньшей мере одного органического растворителя, выбранного из группы, состоящей из смешивающихся с водой простых эфиров, низших спиртов, и низших алифатических кетонов и
е) отделение содержащего 11β-гидроксильный аналог элюата от адсорбирующей смолы и необязательной концентрации элюата уменьшением его объема.
17. Способ по п.16, в котором указанная неионная полуполярная полимерная адсорбирующая смола представляет макропористую смолу на основе эфиров поликарбоновых кислот, предпочтительно смолу на основе поперечно сшитых алифатических сложных эфиров поликарбоновых кислот, и более предпочтительно смолу на основе поперечно сшитых алифатических сложных эфиров поликарбоновых кислот, имеющую макросетчатую структуру.
18. Способ по п.16 или 17, в котором на стадии д) элюент содержит этанол.
19. 11β-гидрокси-9β,10α-стероидное соединение общей формулы (V)
,
1
4
1
4
где а) R1 выбран из группы, состоящей из водорода, -OH, -O-(C-C)алкил, и -O-CO-(C-C)алкил, и
R2 и R3 оба представляют собой водород или вместе формируют метиленовую группу, или
1
4
1
4
б) R1 выбран из группы, состоящей из -O-(C-C)алкил и -O-CO-(C-C)алкил, и
R2 и R3 оба представляют собой водород, или
в) R1 представляет собой -OH, и
R2 и R3 оба представляют собой водород, и
соединение представляет собой 4,6-диен.
20. 11β-гидрокси-9β,10α-стероидное соединение по п.19, где соединение выбрано из группы, состоящей из
11β-гидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4,6-diene-3,20-диона,
17α-этокси-11β-гидрокси-9β,10α-прегна-4,6-диен-3,20-диона,
17α-этокси-11β-гидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4,6-диен-3,20-диона,
11β-17α-дигидрокси-9β,10α-прегна-4,6-диен-3,20-диона,
11β-17α-дигидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4,6-диен-3,20-диона,
11β-гидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4-ен-3,20-диона,
17α-этокси-11β-гидрокси-9β,10α-прегна-4-ен-3,20-диона,
17α-этокси-11β-гидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4-ен-3,20-диона, и
11β-17α-дигидрокси-1,2-метилен-9β,10α-прегна-4-ен-3,20-диона.