Определение уровня и аффинности антител к вирусу простого герпеса и цитомегаловирусу

Выявлено, что при переезде мужчин из средне широтных регионов на архипелаг Шпицберген содержание 1цМ (1,73±0,09), 1ёО (21,43± 1,15), 1§А (2,88±0,18 г/л), кортизола (504,9±18,1 нмоль/л) в периферической крови достоверно выше среднеширотных значений (р<0,05-0,01). При увеличении продолжительности светового дня на архипелаге происходит параллельное повышение концентраций кортизола (с 469,1 ±42,4 до 592,0 ± 33,5 нмоль/л, р<0,05), иммуноглобулинов классов ДО (с 16,3± 1,3 до 26,5±2,7, р<0,001), 1§А (с 1,9±0,1 до4,0±0,4г/л,р<0,001)иЦИК(с 1,6±0,3 доЗ,4±0,2г/л) по сравнению с периодом полярной ночи, когда значения показателей достоверно снижаются. При контрастных морских переходах (из тропического  заполярный регион и наоборот) в периферической крови у моряков синхронно изменяется уровень иммуноглобулинов классов 1§М, соответственно, (0,9±0,1 и 1,7±0,3);ДО(9,5±1,1 и 22,1 ±2,0); 1^А (1,9±0,2 и2,9±0,3 г/л) и кортизола(178,7± 16,5 и384,4±71,4 нмоль/л), (р<0,05-0,001). При смене сезонов года в тропи-ках(16°с.ш.) выявили, что в зимний период увеличивалось число случаев выявления концентраций изучаемых показателей, превышающих границы физиологической нормы: 1цМ (43,7%), ДО (29,6%), кортизола (11,4% случаев). Для осеннего периода, напротив, характерно наличие максимального уровня дефицитов 1цМ, ДО, 1"А, кортизола (21,5; 24,7;27,6; 1,3% случаев).

Таким образом, однонаправленные изменения содержания кортизола и иммуноглобулинов в сыворотке крови в различные сезоны года и фотопериоды, а также при смене климато-географического региона, свидетельствуют, на наш взгляд, о взаимной активизации глю-кокортикоидной деятельности коры надпочечников и гуморального иммунного ответа у человека при воздействии экстремальных факторов среды.

Определение уровня и аффинности антител к вирусу простого герпеса и цитомегаловирусу

ТоЛкина К.Э., Кострова О.М., Алешкин В.А.

Московский научно-исследовательский институт ш/делталогии и микробиологии т. Г.Н. Габричевского Москва, Россия

Инфекции, вызываемые вирусами семейства НегрезУ1пс1ае, являются одной из наиболее значимых проблем в клинической вирусологии. Одной из основных причин заболеваний, вызываемых вирусом простого герпеса (ВПГ) I и 11 типа и цитомегаловирусом (ЦМВ) является, по-видимому, специфический иммунодефицит, выражающийся недос татком гаплотипоспецифичес-ких антител, а также, возможно, их низкой аффинностью. Перспективным подходом при профилактике и лечении заболеваний, вызываемых ВПГ и ЦМВ, является использование препаратов гаплотипоспецифических иммуноглобулинов человека, получаемых из сывороток здоровых доноров, имеющих повышенное содержание соответствующих специфических антител.

Целью настоящей работы явилось определение уровня и аффинности вирусспецифических IgG в донорских сыворотках и сыворотках больных ВПГ и ЦМВ вострой стадии заболевания, с последующим отбором сывороток здоровых доноров с высоким содержанием нроти-вогерпегических и антицитомегаловирусных антител, для получения препаратов соответствующих специфических иммуноглобулинов человека.

Материалы и методы. ДО-анттела в сыворотке крови определяли с помощью твердофазного иммунофермент-ного анализа (ИФА) на тест-системах ЗАО “Вектор-Бест”.В лунки вносили по 100 мкп исследуемой сыворотки в соответствующих разведениях, после инкубации антитела выявляли с помощью козьих аффииноочищенных антител к IgG человека, конъюгированных с пероксидазой хрена. За титр исследуемой сыворотки принимали разведение, на 0,1 ед превышающее среднее значение отрицательного контроля.

Аффинность атител оценивали с помощью относительной величины RHAV (Relative Affinity Value) по Luxton R.W. и Thompson E.I. Сыворотки брали в разведении, дающем при длине волны 492 нм ОП 800-1200 ед. После фиксации антител на антигене и последующей отмывки в лунки добав-лялитиоционатаммония в различных концентрациях (1,2,3, 4,5М), инкубировали 15 мин. при комнатной температуре и далее опыт проводили по методике ИФА. Относительную аффинность антител определяли по формуле; RH AV=A 1 х 12+А2х 10+АЗх8, где А1, А2, АЗ — процент антител, оставшихся в лунках после их обработки тиоционатом аммония в концентрациях 5; 4; ЗМ соответственно.

Результаты: нами было проанализировано 240 сывороток здоровых доноров, из них отобрано 9 сывороток(4%) с титрами герпесспецифических антител, в 4-6 раз превышающими средние значения, а также 12 (5%) сывороток с титрами антител к цитомегаловирусу, в 5 раз превышающими средние значения. Отобранные сыворотки предполагается использовать для получения препаратов вирусспецифических иммуноглобулинов. Параллельно был определен уровень специфических IgG-антител в 8 сыворотках больных ВПГ и в 7 сыворотках больных ЦМВ.

В сыворотках доноров с высокими титрами антител, а также в сыворотках больных исследована аффинность про-тивогерпетических и антицитомегаловирусных антител. Средние значения индекса относительной аффинности в группах приведены в таблице. Группы состояли из сывороток доноров и больных: I группа—8 сывороток здоровых доноров с высоким уровнем антител к ВПГ и 8 сывороток больных ВПГ; И группа—7 сывороток здоровых доноров с высоким уровнем антител к ЦМВ и 7 сывороток больных ЦМВ. Анализ результатов не выявил значимых различий между RHAV специфических IgG у здоровых доноров и больных. В дальнейшем предполагается разработка более чувствительного метода определения аффинности антител к ВПГ и ЦМВ.

Таблица

Г руппы Кол-во сывороток RHAV доноров RHAV больных

1 со -н СО 504±49 464±150

II 7±7 643±185 534±106