Вирус-кодируемые регулируемые агенты, связывающие T-клетки (CATVERT) или NK-клетки (CATVERN), нацеленные на рак

1. Полинуклеотид или вектор, включающий:
(а) первую полинуклеотидную последовательность, содержащую первую часть открытой рамки считывания, кодирующую первый полипептид;
(b) вторую полинуклеотидную последовательность, содержащую вторую часть открытой рамки считывания, кодирующую первый полипептид;
(c) третью полинуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид; и
(d) полинуклеотидную последовательность регуляции гена, расположенная между первым полинуклеотидом и вторым полинуклеотидом.
2. Полинуклеотид или вектор по п. 1, отличающиеся тем, что полинуклеотидная последовательность регуляции гена включает донорный сайт сплайсинга, вышележащий интрон, экзон, содержащий более одной последовательности стоп-кодона в их соответствующих рамках считывания, нижележащий интрон и акцепторный сайт сплайсинга.
3. Полинуклеотид или вектор по п. 1 или 2, отличающиеся тем, что полинуклеотидная последовательность, регулирующая ген, содержит одну или несколько последовательностей связывания для антисмыслового олигонуклеотида, последовательности связывания для доксициклина или полинуклеотидной последовательности, кодирующей рибосвитч.
4. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-3, отличающиеся тем, что антисмысловой олигонуклеотид представляет собой морфолиноолигонуклеотид.
5. Полинуклеотид или вектор по п. 4, отличающиеся тем, что связывающая последовательность для морфолиноолигонуклеотида включает полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 24 или 25.
6. Полинуклеотид или вектор по п. 4, отличающиеся тем, что морфолиноолигонуклеотид содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 27 или 28.
7. Полинуклеотид или вектор по п. 2, отличающийся тем, что стоп-кодон содержит:
олигонуклеотид из группы:TAA, TAG или TGA;
полинуклеотидную последовательность TAAxTAGxTGAxTAGxTAAxTGAx (SEQ ID NO. 1), где x представляет собой любой нуклеотид; или
полинуклеотидную последовательность TAATTAGTTGATTAGTTAATTGAT (SEQ ID NO. 2) или их эквивалент.
8. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-7, отличающиеся тем, что полинуклеотид, регулирующий ген, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 21.
9. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-8, отличающиеся тем, что первый полипептид представляет собой первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, а второй полипептид представляет собой второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
10. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-9, отличающиеся тем, что первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с активирующим антигеном на иммунной эффекторной клетке, а второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с опухолевым антигеном.
11. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-9, отличающиеся тем, что первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с опухолевым антигеном, а второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с активирующим антигеном на иммунной эффекторной клетке.
12. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-11, дополнительно содержащий четвертую полинуклеотидную последовательность, кодирующую третье антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, при этом третье антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с активирующим антигеном на иммунной эффекторной клетке или опухолевым антигеном.
13. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 10-12, отличающиеся тем, что иммунная эффекторная клетка включает дендритную клетку, клетку-натуральный киллер («NK»), макрофаг, Т-клетку, В-клетку или их комбинацию.
14. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 10-12, отличающиеся тем, что эффекторная иммунная клетка представляет собой Т-клетку или NK-клетку.
15. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 10-12, отличающиеся тем, что активирующий антиген на иммунной эффекторной клетке включает CD3, CD2, CD4, CD8, CD19, LFA1, CD45, NKG2D, NKp44, NKp46, NKp30, DNAM, B7-H3, CD20, CD22 или их комбинацию.
16. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 10-12, отличающиеся тем, что опухолевый антиген включает один или несколько из числа рецептора 2 эфрина типа A (EphA2), интерлейкина (IL)-13r альфа 2, EGFR VIII, PSMA, EpCAM, GD2 или GD3, фукозил GM1, PSCA, PLAC1, точечного разрыва саркомы, опухоли Вильмса 1, альфафетопротеина (AFP), карциноэмбрионального антигена (CEA), CA-125, MUC-1, эпителиального опухолевого антигена (ETA), тирозиназы, меланома-ассоциированного антигена (MAGE), антигена гематологической дифференцировки, поверхностного гликопротеина, ганглиозидов (GM2), рецептора фактора роста, стромального антигена, сосудистого антигена, орфанного рецептора 1, подобного рецепторной тирозинкиназе (ROR1), мезотелина, CD38, CD123, рецептора 2 эпидермального фактора роста человека (HER2), антигена созревания В-клеток (BCMA), белка активации фибробластов (FAP) альфа или их комбинации.
17. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-16, отличающиеся тем, что вектор представляет собой рекомбинантный вектор, необязательно вирусный вектор, и способен экспрессировать пре-мРНК, кодирующую dimert, когда пре-мРНК находится в контакте с антисмысловым олигонуклеотидом, необязательно морфолиноолигонуклеотидом.
18. Полинуклеотид или вектор по п. 17, отличающиеся тем, что dimert представляет собой биспецифическое антитело.
19. Полинуклеотид или вектор по п. 17, отличающиеся тем, что dimert представляет собой триспецифическое антитело.
20. Полинуклеотид или вектор по п. 18 или 19, отличающиеся тем, что биспецифическое антитело или триспецифическое антитело включает первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
21. Полинуклеотид или вектор по п. 18, отличающиеся тем, что биспецифическое антитело содержит полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из SEQ ID NO. 13 или 15.
22. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-21, отличающиеся тем, что вектор экспрессирует пре-мРНК, кодирующую триспецифическое антитело, когда пре-мРНК находится в контакте с антисмысловым олигонуклеотидом, необязательно с морфолиноолигонуклеотидом.
23. Полинуклеотид или вектор по п. 22, отличающийся тем, что триспецифическое антитело включает первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и третье антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
24. Полинуклеотид или вектор по п. 22, отличающиеся тем, что триспецифическое антитело содержит полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 11.
25. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-24, отличающиеся тем, что первое антитело и второе антитело, каждое независимо, представляют собой одноцепочечный вариабельный фрагмент.
26. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-25, дополнительно содержащий полинуклеотидную последовательность, кодирующую секреторный пептид, необязательно секреторную консенсусную последовательность.
27. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-26, дополнительно содержащий полинуклеотидную последовательность, кодирующую домен димеризации.
28. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-27, дополнительно содержащий 5’-концевой инвертированный повтор (ITR) и 3’-ITR.
29. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-28, где вектор содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 4, 6, 8, 12, 14, 16-23, 30-33 или 40-46.
30. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-29, отличающийся тем, что вектор представляет собой рекомбинантный вирусный вектор, который содержит вектор основной цепи, выбранный из группы, состоящей из ретровирусного вектора, лентивирусного вектора, вектора вируса мышиного лейкоза («MLV»), вектор вируса Эпштейна-Барр («EBV»), вектор аденовируса, вектор вируса герпеса («HSV») или вектор аденоассоциированного вируса («AAV»).
31. Полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-30, отличающийся тем, что вектор представляет собой вектор AAV, необязательно самокомплементарный вектор AAV, дополнительно необязательно вектор AAV rh74.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-31 и носитель, необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
33. Способ лечения рака у объекта, который в этом нуждается, включающий введение объекту эффективного количества рекомбинантного полинуклеотида или вектора по любому из пп. 1-31 или фармацевтической композиции по п. 32, где полинуклеотид или вектор экспрессирует терапевтическое противоопухолевое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
34. Способ по п. 33, дополнительно включающий введение объекту эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида, необязательно морфолиноолигонуклеотида.
35. Способ по п. 33 или 34, дополнительно включает введение объекту противоракового агента.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что противораковый агент включает агент, выбранный из пептида, полипептида, молекулы нуклеиновой кислоты, небольшой молекулы, вирусной частицы или их комбинаций.
37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что вирусная частица представляет собой онколитическую частицу HSV.
38. Способ по любому из пп. 33-37, отличающийся тем, что объектом является млекопитающее.
39. Способ по любому из пп. 33-38, отличающийся тем, что объектом является человек.
40. Способ получения биспецифического антитела или триспецифического антитела в клетке, включающий контакт клетки, содержащей вектор по любому из пп. 1-31, с эффективным количеством антисмыслового олигонуклеотида, необязательно морфолиноолигонуклеотида.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что морфолиноолигонуклеотид содержит последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную стереочистому полинуклеотиду.
42. Способ по п. 40, отличающийся тем, что вектор вводят в клетку путем трансфекции, инфицирования, трансформации, электропорации, инъекции, микроинъекции или их комбинации.
43. Способ по любому из пп. 40-42, отличающийся тем, что клетка включает фибробласт, скелетную клетку, эпителиальную клетку, мышечную клетку, нервную клетку, эндокринную клетку, меланоцит, клетку крови или их комбинацию.
44. Способ по любому из пп. 40-43, отличающийся тем, что биспецифическое антитело содержит полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 13 или 15.
45. Способ по любому из пп. 40-44, отличающийся тем, что триспецифическое антитело содержит полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 11.
46. Способ по любому из пп. 40-43, отличающийся тем, что биспецифическое антитело кодируется полинуклеотидной последовательностью, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO. 14, 16, 22, 23, 30-33 или 40-46.
47. Способ по любому из пп. 40-44, отличающийся тем, что триспецифическое антитело кодируется полинуклеотидной последовательностью, по меньшей мере на 95% идентичной SEQ ID NO. 12.
48. Набор, содержащий полинуклеотид или вектор по любому из пп. 1-31 или фармацевтическую композицию по п. 32.
49. Набор по п. 48 дополнительно включает инструктивный материал.