СПОСОБ СОХРАНЕНИЯ СВОЙСТВ ПОЛИПЕПТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ САХАРА И ПОЛИЭТИЛЕНИМИНОВ

1. Способ сохранения свойств полипептида, включающий:
n
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного полипептида, где концентрация полиэтиленимина составляет 25 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (M) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М; и
(ii) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный полипептид.
2. Способ по п.1, где:
n
n
(a) M полиэтиленимина составляет от 20 до 1000 кДа, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,001 до 100 нМ в расчете на M; и/или
n
n
(b) M полиэтиленимина составляет от 1 до 10000 Да, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,0001 до 10 мкМ в расчете на M.
3. Способ по п.1, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет (а) 20 мкМ или менее или менее чем 500 нМ, и/или (b) 0,025 нМ или более, или 0,1 нМ или более.
4. Способ по п.1, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет 0,1 нМ-5 мкМ или 0,1 нМ-200 нМ.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где:
(a) концентрация сахара или общая концентрация сахара составляет от 0,5 до 2 М; и/или
(b) указанны сахаром является сахароза, стахиоза, раффиноза или сахарный спирт.
6. Способ по п.1, где в указанном водном растворе присутствуют два или более сахаров.
n
7. Способ по п.6, где сахароза присутствует вместе с другим сахаром; соотношение концентрации сахарозы и концентрации указанного другого сахара представляет собой соотношение молярных концентраций и составляет от 3:7 до 9:1; а концентрация полиэтиленимина, в расчете на M в стадии (i), составляет от 0,0025 нМ до 5 мкМ.
8. Способ по п.6 или 7, где указанными сахарами являются сахароза и раффиноза.
9. Способ по любому из пп.1-4, где указанный раствор подвергают лиофилизации в стадии (ii).
10. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является гормон, фактор роста, пептид или цитокин.
11. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является тахикининовый пептид, вазоактивный кишечный пептид, пептид, родственный панкреатическому полипептиду, опиоидный пептид или пептид кальцитонина.
12. Способ по п.1, где указанным полипептидом является антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
13. Способ по п.12, где указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом являются моноклональное антитело или его фрагмент.
14. Способ по п.12, где указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом являются химерное, гуманизированное или человеческое антитело или их фрагмент.
15. Способ по п.14, где указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом являются IgG1, IgG2 или IgG4 или их антигенсвязывающий фрагмент.
16. Способ по любому из пп.12-15, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент способны связываться:
(a) с фактором некроза опухоли-α (TNF-α), интерлейкином-2 (IL-2), интерлейкином-6 (IL-6), гликопротеином IIb/IIIa, CD33, CD52, CD20, CD11a, CD3, белком RSVF, рецептором HER2/neu (erbB2), васкулярным эндотелиальным фактором роста (VEGF), рецептором эпидермального фактора роста (EGFR), анти-TRAILR2 антителом (против рецептора лиганда 2, индуцирующего апоптоз, ассоциированный с действием фактора некроза опухоли), белком системы комплемента С5, интегрином-α4 или IgE; или
(b) с адгезивной молекулой эпителиальных клеток (ЕрСАМ), с муцином-1 (MUCl/Can-Ag), EGFR, CD20, карциноэмбриональным антигеном (СЕА), HER2, CD22, CD33, с Lewis-Y-сахарами или с мембранным антигеном, специфичным для предстательной железы (PMSA).
17. Способ по п.1, где указанным полипептидом является фермент.
18. Способ по п.17, где указанным ферментом является оксидоредуктаза, трансфераза, гидролаза, лиаза, изомераза или лигаза.
19. Способ по п.17 или 18, где указанный фермент выбран из α-галактозидазы, β-галактозидазы, люциферазы, сериновой протеазы, эндопептидазы, каспазы, химазы, химотрипсина, эндопептидазы, гранзима, папаина, панкреатической эластазы, оризина, плазмина, ренина, субтилизина, тромбина, трипсина, триптазы, урокиназы, амилазы, ксиланазы, липазы, трансглутаминазы, фермента, разрушающего клеточную стенку, глюканазы, глюкоамилазы, фермента свертывания крови, гидролизата молочного белка, фермента, разрушающего клеточную стенку, фермента свертывания крови, лизоцима, фермента, разлагающего волокно, фитазы, целлюлазы, гемицеллюлазы, протеазы, маннаназы или глюкоамилазы.
20. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является вакцинный иммуноген.
21. Способ по п.20, где указанным вакцинным иммуногеном является полноразмерный вирусный или бактериальный белок, гликопротеин или липопротеин или их фрагмент.
22. Способ сохранения свойств полипептида, включающий:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного полипептида; и
(ii) сушку раствора с образованием аморфной твердой матрицы, содержащей указанный полипептид.
23. Способ по п.1 или 22, который также включает получение осушенной аморфной твердой матрицы в виде порошка, упакованного в герметично закрытый сосуд, ампулу или шприц.
24. Сухой порошок, содержащий стабильный полипептид, полученный способом по любому из пп.1-22.
25. Стабильный продукт, содержащий полипептид, один или несколько сахаров и полиэтиленимин, где указанный продукт имеет форму аморфного твердого вещества.
26. Герметично закрытый сосуд, ампула или шприц, содержащие сухой порошок по п.24 или стабильный продукт по п.25.
27. Применение эксципиента, содержащего:
(a) сахарозу, стахиозу или раффинозу или любую их комбинацию; и
n
(b) полиэтиленимин в концентрации, в расчете на M, составляющей 25 мкМ или менее;
в целях сохранения свойств полипептида.
28. Применение по п.27, где концентрация указанного полиэтиленимина составляет 5 мкМ или менее.
29. Способ сохранения свойств вакцинного иммуногена, включающий:
n
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена, где концентрация полиэтиленимина составляет 25 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (M) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М; и
(ii) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.
30. Способ по п.29, где:
n
n
(a) M полиэтиленимина составляет от 20 до 1000 кДа, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,001 до 100 нМ в расчете на M; и/или
n
n
(b) M полиэтиленимина составляет от 1 до 10000 Да, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,0001 до 10 мкМ в расчете на M.
31. Способ по п.29, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет (а) 20 мкМ или менее или менее чем 500 нМ, и/или (b) 0,025 нМ или более, или 0,1 нМ или более.
32. Способ по п.29, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет 0,1 нМ-5 мкМ или 0,1 нМ-200 нМ.
33. Способ по любому из пп.29-32, где:
(a) концентрация сахара или общая концентрация сахара составляет от 0,5 до 2 М; и/или
(b) указанным сахаром является сахароза, стахиоза, раффиноза или сахарный спирт.
34. Способ по п.29, где в указанном водном растворе присутствуют два или более сахаров.
n
35. Способ по п.34, где сахароза присутствует вместе с другим сахаром; соотношение концентрации сахарозы и концентрации указанного другого сахара представляет собой соотношение молярных концентраций и составляет от 3:7 до 9:1; а концентрация полиэтиленимина, в расчете на M в стадии (i), составляет от 0,0025 нМ до 5 мкМ.
36. Способ по п.34 или 35, где указанными сахарами являются сахароза и раффиноза.
37. Способ по любому из пп.29-32, где указанный раствор подвергают лиофилизации в стадии (ii).
38. Способ по п.29, где указанным вакцинным иммуногеном является субъединичная вакцина, конъюгированная вакцина или токсоид.
39. Способ по п.38, где указанный иммуноген субъединичной вакцины происходит от белка вирусной поверхности или вирусного капсидного белка.
40. Способ сохранения свойств вакцинного иммуногена, включающий:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена; и
(ii) сушку раствора с образованием аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.
41. Способ по п.29 или 40, который также включает получение осушенной аморфной твердой матрицы в виде порошка, упакованного в герметично закрытый сосуд, ампулу или шприц.
42. Сухой порошок, содержащий стабильный вакцинный иммуноген, полученный способом по любому из пп.29-40.
43. Стабильный продукт, содержащий вакцинный иммуноген, один или несколько сахаров и полиэтиленимин, где указанный продукт имеет форму аморфного твердого вещества.
44. Герметично закрытый сосуд, ампула или шприц, содержащие сухой порошок по п.42 или стабильный продукт по п.43.
45. Вакцина, содержащая стабильный продукт по п.42 и необязательно адъювант.
46. Применение эксципиента, содержащего:
(a) сахарозу, стахиозу или раффинозу или любую их комбинацию; и
n
(b) полиэтиленимин в концентрации, в расчете на M, составляющей 25 мкМ или менее;
в целях стабилизации вакцинного иммуногена.
47. Применение по п.46, где концентрация указанного полиэтиленимина составляет 5 мкМ или менее.
48. Способ получения вакцины, содержащей вакцинный иммуноген, где указанный способ включает:
n
(a) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена, где концентрация полиэтиленимина составляет 15 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (M) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М;
(b) добавление, но необязательно, адъюванта, буфера, антибиотика и/или добавки к указанной смеси; и
(c) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.