ПИРИМИДИНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ ИЛИ ЕГО СОЛЬ
PYRIMIDINE COMPOUND OR ITS SALT

Область техники, к которой относится изобретение
[0001]
Настоящее изобретение относится к новому пиримидиновому соединению, обладающему HER2-ингибирующей активностью, или к его соли, и к фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение в качестве активного ингредиента.
Уровень техники
[0002]
HER2 (который также называется «ErbB2») представляет собой рецепторную тирозинкиназу, принадлежащую к семейству ErbB.
HER2 считается протоонкогеном. Сообщалось, что амплификация гена HER2, сверхэкспрессия, мутация и тому подобное имеют место при различных типах рака. На основе данных неклинических и клинических исследований считается, что активация HER2 и нисходящих сигнальных путей играет важную роль в жизнеспособности и/или пролиферации и т.п. раковых клеток, связанных с генетическим нарушением, сверхэкспрессией и тому подобным HER2 (непатентный документ 1).
Соответственно, предполагается, что ингибитор, способный регулировать киназную активность HER2, ингибирует HER2 и нисходящие сигнальные пути в раковых клетках с амплификацией гена HER2, сверхэкспрессией или мутацией, с проявлением противоопухолевого действия на раковые клетки. Поэтому считается, что такой ингибитор полезен для лечения, увеличения продолжительности жизни или улучшения качества жизни больных раком.
[0003]
Сообщалось, что метастазы в головном мозге встречаются приблизительно в 25-40% случаев рака легких, приблизительно в 15-30% случаев рака молочной железы и в определенных процентах разных других случаев рака (непатентные документы 2 и 3). Фактически сообщалось, что метастаз в гловном мозге встречается приблизительно в 20-30% случаев HER2-положительного рака молочной железы (непатентный документ 4).
[0004]
Соединения, имеющие HER2-ингибирующую активность, такие как лапатиниб и нератиниб, одобрены в качестве терапевтических агентов против HER2-положительного рака молочной железы. Однако сообщается, что поскольку все эти терапевтические агенты являются субстратами p-gp или Bcrp, свойства проникновения в головной мозг этих агентов ограничены в неклинических испытаниях (непатентный документ 5). Фактически, в клинических испытаниях с использованием лапатиниба или нератиниба, не удавалось получить достаточного действия этих агентов в отношении метастатического рака головного мозга (непатентные документы 6, 7, 8 и 9).
С точки зрения контроля патологических состояний, включая очаг метастазирования в мозг, было бы желательно разработать ингибитор HER2, обладающий ингибирующей активностью в отношении HER2, а также обладающий свойствами проникновения в мозг.
[0005]
Сообщалось, что одна из HER2 мутаций, HER2ex20ins мутация является активирующей мутацией при раке легких и т.п. (непатентный документ 10), и в отношении такой HER2ex20ins мутации было проведено множество клинических испытаний. Однако на сегодняшний день способ ее терапевтического лечения еще не создан. Соответственно, было бы желательно разработать ингибитор HER2, обладающий ингибирующей активностью в отношении HER2ex20ins мутации.
Перечень ссылок
Патентные документы
[0006]
Патентный документ 1: Международная публикация WO 2017/146116
Патентный документ 2: Международная публикация WO 2017/038838
Непатентные документы
[0007]
Непатентный документ 1: Cancer Treatment Reviews, 40, pp. 770-780 (2014)
Непатентный документ 2: Current Oncology, 25, pp. S103-S114 (2018)
Непатентный документ 3: Breast Cancer Research, 18(1), 8, pp. 1-9 (2016)
Непатентный документ 4: Journal of Clinical Oncology, 28, pp. 3271-3277 (2010)
Непатентный документ 5: Journal of Medicinal Chemistry, 59, pp. 10030-10066 (2016)
Непатентный документ 6: Journal of Medicinal Chemistry, 26, pp. 2999-3005 (2008)
Непатентный документ 7: Journal of Clinical Oncology, 26, pp. 1993-1999 (2008)
Непатентный документ 8: Journal of Clinical Oncology, 28, pp. 1301-1307 (2010)
Непатентный документ 9: Journal of Clinical Oncology, 34, pp. 945-952 (2016)
Непатентный документ 10: Proc Natl Acad Sci USA., 106, pp. 474-479 (2009)
Сущность изобретения
[0008]
Задачей настоящего изобретения является предоставление нового пиримидинового соединения, которое ингибирует активность HER2 и проявляет свойства проникновения в головной мозг, или его соль, и содержащую их фармацевтическую композицию.
[0009]
В результате интенсивных исследований авторы настоящего изобретения обнаружили новое соединение, представленное следующей формулой (I), содержащее пиримидин в качестве основного каркаса. Это новое соединение отличается тем, что имеет структуру, в которой пирроло[2,3-d]пиримидин представляет собой основной каркас, замещенный в положении 5 карбоксамидом, замещенный в положении 6 алкином, и, кроме того, в положении 7 присутствует пирролидиновая группа, замещенная акриламидом.
[0010]
В частности, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает перечисленное ниже в п.п. [1] - [25]:
[1] Соединение, представленное приведенной ниже формулой (I) или его соль:
1
где R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу;
2
R представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп, каждая в качестве заместителя (заместителей) или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей), или C1-C6 алкоксигруппу;
3
R представляет собой атом водорода, или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей);
4
R представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу; и
5
R представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-3 заместителя, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.
[2] Соединение по указанному выше п.[1], представленное приведенной ниже формулой (II), или его соль:
1
где R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу;
2
R представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп, каждая в качестве заместителя (заместителей) или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей), или C1-C6 алкоксигруппу;
3
R представляет собой атом водорода, или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей);
4
R представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу; и
5
R представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-3 заместителя, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.
2
[3] Соединение по указанному выше п.[1] или п.[2], или его соль, где R представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителя (заместителей).
3
[4] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[3], или его соль, где R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).
5
[5] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[4], или его соль, где R представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.
1
[6] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[5], или его соль, где R представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.
2
[7] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[6], или его соль, где R представляет собой метильную группу, этильную группу, метоксиметильную группу или этоксиметильную группу.
3
[8] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[7], или его соль, где R представляет собой метильную группу.
4
[9] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[8], или его соль, где R представляет собой атом водорода.
5
[10] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[9], или его соль, где R представляет собой фенильную группу.
[11] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[10], или его соль, где соединение выбирают из следующих (1)-(3):
(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид, и
(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.
[12] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.
[13] Противоопухолевое средство, содержащее, в качестве активного ингредиента, соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.
[14] Противоопухолевое средство для перорального введения, содержащее, в качестве активного ингредиента, соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.
[15] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения фармацевтической композиции.
[16] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения противоопухолевого средства.
[17] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения.
[18] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в качестве лекарственного средства.
[19] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении опухоли.
[20] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении опухоли путем перорального введения.
[21] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения по любому из указанных выше п.п.[1]-[12] или его соли нуждающемуся в этом субъекту.
[22] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).
[23] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения фармацевтической композиции, используемой в профилактике и/или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).
[24] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в качестве лекарственного средства, используемого в профилактике или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).
[25] Способ профилактики и/или лечения первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.), где способ включает введение эффективного количества соединения по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соли нуждающемуся в этом субъекту.
[0011]
Настоящее изобретение имеет следующие один или более полезных эффектов.
(1) В соответствии с настоящим изобретением предлагается новое соединение, представленное указанной выше формулой (I), которое подходит в качестве ингибитора HER2, имеющее свойства проникновения в головной мозг, его соль, фармацевтическая композиция, противоопухолевое средство или противоопухолевое средство для перорального введения.
(2) Соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной HER2 селективной ингибирующей активностью и проявляет ингибирующее действие на рост раковых клеточных линий.
(3) Можно ожидать, что соединение настоящего изобретения или его соль будут обладать свойствами проникновения в головной мозг.
(4) Можно ожидать, что соединение настоящего изобретения или его соль не будут иметь серьезных побочных эффектов, но будут обладать лечебными эффектами.
(5) Соединение настоящего изобретения или его соль проявляют превосходную ингибирующую активность в отношении мутанта HER2 (например, HER2, имеющего инсерционную мутацию YVMA в экзоне 20).
(6) Соединение настоящего изобретения или его соль используется в качестве профилактического и/или терапевтического агента при опухолях.
(7) Соединение настоящего изобретения или его соль осуществляет новое соединение, представленное указанной выше формулой (I), которое подходит для лечения больных раком, его соль, фармацевтическая композиция, противоопухолевое средство или противоопухолевое средство для перорального введения.
Краткое описание чертежей
[0012]
[Фиг.1] На фиг.1 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 2 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).
[Фиг.2] На фиг.2 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 11 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).
[Фиг.3] На фиг.3 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 12 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).
[Фиг.4] На фиг.4 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 2.
[Фиг.5] На фиг.5 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 11.
[Фиг.6] На фиг.6 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 12.
Описание вариантов осуществления
[0013]
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, представленному приведенной ниже формулой (I), или его соли:
Один из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, представленному приведенной ниже формулой (II), или его соли:
[0014]
Соединение, представленное указанной выше формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, представляет собой соединение, содержащее пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве базовой структуры, и является новым соединением, не описанным ни в одной из вышеупомянутых публикаций известного уровня техники и т.п.
[0015]
В настоящем описании конкретные примеры «атома галогена» могут включать атом хлора, атом брома, атом фтора и атом йода. Среди них атом хлора и атом фтора являются предпочтительными, и атом фтора является более предпочтительным.
[0016]
В настоящем описании «алкильная группа» означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу. Конкретные примеры алкильной группы могут включать метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, пентильную группу и гексильную группу. Среди них линейная или разветвленная алкильная группа, содержащая 1-4 атомов углерода, является предпочтительной, и метильная группа и трет-бутильная группа являются более предпочтительными.
[0017]
В настоящем описании «галогеналкильная группа» означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу, в которой от одного до всех атомов водорода замещено описанными выше атомами галогена. Конкретные примеры галогеналкильной группы могут включать монофторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, 1-фторэтильную группу, 2-фторэтильную группу, 1,1-дифторэтильную группу, 1,2-дифторэтильную группу, 2,2-дифторэтильную группу, 2,2,2-трифторэтильную группу, монохлорметильную группу, дихлорметильную группу, трихлорметильную группу, 1-хлорэтильную группу, 2-хлорэтильную группу и 1,1-дихлорэтильную группу. Среди них линейная или разветвленная насыщенная углеводородная группа, содержащая 1-6 атомов углерода, в которой 1-3 атома водорода замещено описанными выше атомами галогена, является предпочтительной, и монофторметильная группа является более предпочтительной.
[0018]
В настоящем описании «циклоалкильная группа» означает моноциклическую или полициклическую насыщенную углеводородную группу, содержащую 3-7 атомов углерода. Конкретные примеры циклоалкильной группы могут включать циклопропильную группу, циклобутильную группу, циклопентильную группу, циклогексильную группу и циклогептильную группу. Среди них циклопропильная группа и циклобутильная группа являются предпочтительными.
[0019]
В настоящем описании «ароматическая углеводородная группа» означает циклический заместитель, состоящий из углерода и водорода, имеющий ненасыщенную связь, в которой 4e+2 (где e представляет собой целое число, равное 1 или более) электронов содержится в циклической π-электронной системе.
[0020]
В настоящем описании «C6-C14 ароматическая углеводородная группа» означает моноциклическую или полициклическую ароматическую углеводородную группу, содержащую 6-14 атомов углерода. Конкретные примеры C6-C14 ароматической углеводородной группы могут включать фенильную группу, нафтильную группу, тетрагидронафтильную группу и антраценильную группу. Среди них фенильная группа является предпочтительной.
[0021]
В настоящем описании «аралкильная группа» означает описанную выше алкильную группу, замещенную описанной выше ароматической углеводородной группой. Конкретные примеры аралкильной группы могут включать C7-C16 аралкильные группы, такие как бензильная группа, фенилэтильная группа, фенилпропильная группа, нафтилметильная группа и нафтилэтильная группа. Среди них бензильная группа является предпочтительной.
[0022]
В настоящем описании «ненасыщенная углеводородная группа» означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую 2-6 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную или тройную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры ненасыщенной углеводородной группы могут включать винильную группу, аллильную группу, метилвинильную группу, пропенильную группу, бутенильную группу, пентенильную группу, гексенильную группу, этинильную группу и 2-пропинильную группу. Среди них винильная группа, аллильная группа и 1-пропенильная группа являются предпочтительными.
[0023]
В настоящем описании «алкенильная группа» означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую 2-6 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры алкенильной группы могут включать C2-C6 алкенильные группы, такие как винильная группа, аллильная группа, 2-метил-2-пропенильная группа, изопропенильная группа, 1-, 2- или 3-бутенильная группа, 2-, 3- или 4-пентенильная группа, 2-метил-2-бутенильная группа, 3-метил-2-бутенильная группа и 5-гексенильная группа. Среди них винильная группа, аллильная группа, 1-пропенильная группа и 2-метил-2-пропенильная группа являются предпочтительными.
[0024]
В настоящем описании термин «алкинильная группа» означает линейную или разветвленную ненасыщенную углеводородную группу, содержащую по меньшей мере одну тройную связь (например, 1 или 2 и предпочтительно 1 тройную связь). Конкретные примеры алкинильной группы могут включать C2-C6 алкинильные группы, такие как этинильная группа, 1- или 2-пропинильная группа, 1-, 2- или 3-бутинильная группа и 1-метил-2-пропинильная группа. Среди них этинильная группа и 2-пропинильная группа являются предпочтительными.
[0025]
В настоящем описании «C3-C10 циклическая ненасыщенная углеводородная группа» означает моноциклическую или полициклическую углеводородную группу, содержащую 3-10 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры С3-С10 циклической ненасыщенной углеводородной группы могут включать циклопропенильную группу, циклобутенильную группу, циклопентенильную группу, циклогексенильную группу, циклогептенильную группу, циклооктенильную группу и циклононильную группу. Среди них моноциклическая или полициклическая углеводородная группа, содержащая 3-7 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь, является предпочтительной, и циклопропенильная группа является более предпочтительной.
[0026]
В настоящем описании «алкоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкоксигруппы могут включать C1-C6 алкоксигруппы, такие как метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, н-бутоксигруппа, изобутоксигруппа, втор-бутоксигруппа, трет-бутоксигруппа, пентилоксигруппа, изопентилоксигруппа и гексилоксигруппа. Среди них метоксигруппа и этоксигруппа являются предпочтительными, и метоксигруппа является более предпочтительной.
[0027]
В настоящем описании «галогеналкоксигруппа» может включать в себя описанную выше алкоксигруппу, содержащую по меньшей мере один атом галогена (предпочтительно 1-13 и более предпочтительно 1-3 атома галогена). Конкретные примеры галогеналкоксигруппы могут включать C1-C6 галогеналкоксигруппы, такие как фторметоксигруппа, дифторметоксигруппа, трифторметоксигруппа, трихлорметоксигруппа, фторэтоксигруппа, 1,1,1-трифторэтоксигруппа, монофтор-н-пропоксигруппа, перфтор-н-пропоксигруппа и перфторизопропоксигруппа.
[0028]
В настоящем описании «циклоалкоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше циклоалкильную группу. Конкретные примеры циклоалкоксигруппы могут включать C3-C7 циклоалкоксигруппы, такие как циклопропоксигруппа, циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа, циклогексилоксигруппа и циклогептилоксигруппа. Среди них циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа и циклогексилоксигруппа являются предпочтительными.
[0029]
В настоящем описании «аралкилоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше аралкильную группу. Конкретные примеры аралкилоксигруппы могут включать C7-C20 аралкилоксигруппы, такие как бензилоксигруппа, фенэтилоксигруппа, нафтилметилоксигруппа и флуоренилметилоксигруппа. Среди них бензилоксигруппа является предпочтительной.
[0030]
В настоящем описании «алкилтиогруппа» означает тиоксигруппу, содержащую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкилтиогруппы могут включать C1-C6 алкилтиогруппы, такие как метилтиогруппа, этилтиогруппа, н-пропилтиогруппа, изопропилтиогруппа, н-бутилтиогруппа, изобутилтиогруппа, трет-бутилтиогруппа, н-пентилтиогруппа, изопентилтиогруппа и гексилтиогруппа. Среди них метилтиогруппа, этилтиогруппа и н-пропилтиогруппа являются предпочтительными.
[0031]
В настоящем описании «алкоксиалкильная группа» означает описанную выше алкильную группу, содержащую по меньшей мере одну из описанных выше алкоксигрупп. Конкретные примеры алкоксиалкильной группы могут включать C1-C6 алкокси-C1-C6 алкильные группы, такие как метоксиметильная группа, этоксиэтильная группа, метоксиэтильная группа и метоксипропильная группа.
[0032]
В настоящем описании «алкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой 1 или 2 атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородной группой (группами), содержащей 1-6 атомов углерода. Конкретные примеры алкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них предпочтительной является аминогруппа, в которой 1 или 2 атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода.
[0033]
В настоящем описании «моноалкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой один атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры моноалкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, н-пропиламиногруппу, изопропиламиногруппу, н-бутиламиногруппу, изобутиламиногруппу, втор-бутиламиногруппу, трет-бутиламиногруппу, пентиламиногруппу и гексиламиногруппу. Среди них предпочтительной является аминогруппа, в которой один атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода.
[0034]
В настоящем описании «диалкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой два атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородными группами, содержащими 1-6 атомов углерода. Конкретные примеры диалкиламиногруппы могут включать диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них аминогруппа, в которой два атома водорода замещены линейными или разветвленными углеводородными группами, содержащими 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и диметиламиногруппа является более предпочтительной.
[0035]
В настоящем описании «ацильная группа» означает формильную группу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры ацильной группы могут включать ацетильную группу, н-пропаноильную группу, изопропаноильную группу, н-бутилоильную группу и трет-бутилоильную группу. Среди них формильная группа, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и ацетильная группа является более предпочтительной.
[0036]
В настоящем описании «ацилоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше ацильную группу. Конкретные примеры ацилоксигруппы могут включать алкилкарбонилоксигруппу и арилкарбонилоксигруппу. Среди них оксигруппа, в которой атом водорода формильной группы замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и алкилкарбонилоксигруппа является более предпочтительной.
[0037]
В настоящем описании «алкоксикарбонильная группа» означает карбонильную группу, содержащую описанную выше алкоксигруппу. Конкретные примеры алкоксикарбонильной группы могут включать (C1-C6 алкокси)карбонильные группы, такие как метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропоксикарбонильная группа, изопропоксикарбонильная группа, бутоксикарбонильная группа, изобутоксикарбонильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, пентилоксикарбонильная группа, изопентилоксикарбонильная группа и гексилоксикарбонильная группа. Среди них трет-бутоксикарбонильная группа является предпочтительной.
[0038]
В настоящем описании «аралкилоксикарбонильная группа» означает карбонильную группу, содержащую описанную выше аралкилоксигруппу. Конкретные примеры аралкилоксикарбонильной группы могут включать (С6-С20 аралкил)оксикарбонильные группы, такие как бензилоксикарбонильная группа, фенэтилоксикарбонильная группа, нафтилметилоксикарбонильная группа и флуоренилметилоксикарбонильная группа. Среди них бензилоксикарбонильная группа является предпочтительной.
[0039]
В настоящем описании «насыщенная гетероциклическая группа» означает моноциклическую или полициклическую насыщенную гетероциклическую группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно 1-5, и более предпочтительно 1-3 гетероатома), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической группы могут включать азиридинильную группу, азетидинильную группу, имидазолидинильную группу, морфолиногруппу, пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу, тетрагидрофуранильную группу, тетрагидропиранильную группу, тетрагидротиофенильную группу, тиазолидинильную группу и оксазолидинильную группу. Среди них азетидинильная группа, пирролидинильная группа и пиперидинильная группа являются предпочтительными, и азетидинильная группа и пирролидинильная группа являются более предпочтительными.
[0040]
В настоящем описании «ненасыщенная гетероциклическая группа» означает моноциклическую или полициклическую полностью ненасыщенную или частично ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно 1-5 и более предпочтительно 1-3 гетероатома), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры ненасыщенной гетероциклической группы могут включать имидазолильную группу, тиенильную группу, пирролильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, тиадиазолильную группу, оксадиазолильную группу, пиразолильную группу, триазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиразильную группу, пиримидинильную группу, пиридазинильную группу, индолильную группу, изоиндолильную группу, индазолильную группу, триазолопиридильную группу, бензимидазолильную группу, бензоксазолильную группу, бензотиазолильную группу, бензотиенильную группу, фуранильную группу, бензофуранильную группу, пуринильную группу, хинолильную группу, изохинолильную группу, хиназолинильную группу, хиноксалильную группу, метилендиоксифенильную группу, этилендиоксифенильную группу и дигидробензофуранильную группу. Среди них имидазолильная группа, пиразолильная группа, тиазолильная группа, изоксазолильная группа и фуранильная группа являются предпочтительными; имидазолильная группа, пиразолильная группа и тиазолильная группа являются более предпочтительными; и имидазолильная группа является наиболее предпочтительной.
[0041]
В настоящем описании «насыщенная гетероциклическая оксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше насыщенную гетероциклическую группу. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической оксигруппы могут включать морфолинилоксигруппу, 1-пирролидинилоксигруппу, пиперидинооксигруппу, пиперазинилоксигруппу, 4-метил-1-пиперазинилоксигруппу, тетрагидрофуранилоксигруппу, тетрагидропиранилоксигруппу, тетрагидротиофенилоксигруппу, тиазолидинилоксигруппу и оксазолидинилоксигруппу. Среди них предпочтительными являются 1-пирролидиноксигруппа, пиперидинооксигруппа и пиперазинилоксигруппа.
[0042]
1
В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащая C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу.
[0043]
1
«C1-C4 алкоксигруппа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно содержащей C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу. Здесь количество заместителей предпочтительно составляет 1-3, и наиболее предпочтительно - 1. Когда C1-C4 алкильная группа имеет два или более заместителей, заместители могут быть одинаковыми или могут отличаться друг от друга.
[0044]
1
«C1-C4 алкильная группа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно содержащей C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно метильную группу или трет-бутильную группу.
[0045]
1
«C1-C4 алкильная группа, необязательно содержащая C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R, предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, содержащую 1-3 метоксигрупп в качестве заместителей, более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу или 1-метил-1-метоксиэтильную группу, и наиболее предпочтительно метильную группу или трет-бутильную группу.
[0046]
1
«C3-C4 циклоалкильная группа», представленная R, предпочтительно представляет собой циклопропильную группу или циклобутильную группу, и наиболее предпочтительно - циклопропильную группу.
[0047]
1
R предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую 1-3 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4 циклоалкильную группу.
[0048]
1
R более предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую 1-3 метоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4 циклоалкильную группу.
[0049]
1
R представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу или циклопропильную группу.
[0050]
1
R представляет собой наиболее предпочтительно метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.
[0051]
2
В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей), или C1-C6 алкоксигруппу.
[0052]
2
«Атом галогена», представленный R, предпочтительно представляет собой атом фтора или атом хлора.
[0053]
2
«C1-C4 алкоксигруппа» в «C1-C6 алкильной группе, необязательно содержащая 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.
[0054]
2
«C1-C6 алкильная группа, необязательно содержащая 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.
[0055]
2
«C1-C6 алкильная группа» в «C1-C6 алкильной группе, необязательно содержащей 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R, предпочтительно представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей), (в частности, метильную группу, метоксиметильную группу, этоксиметильную группу, метоксиэтильную группу, этоксиэтильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу и т.д.), более предпочтительно C1-C6 алкильную группу, еще более предпочтительно - метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.
[0056]
2
«C1-C6 алкоксигруппа», представленная R, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.
[0057]
2
2
2
R представляет собой предпочтительно C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей). В одном варианте осуществления R представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей). В другом варианте осуществления R представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу (предпочтительно метильную группу или этильную группу, и более предпочтительно - метильную группу), каждая из них необязательно содержит 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).
[0058]
2
2
2
2
R представляет собой более предпочтительно C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В одном варианте осуществления R представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В другом варианте осуществления R представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу (предпочтительно метильную группу или этильную группу, и более предпочтительно - метильную группу), каждая из которых необязательно имеет 1-5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В еще одном варианте осуществления R представляет собой метильную группу, этильную группу, метоксиметильную группу или этоксиметильную группу.
[0059]
2
R даже более предпочтительно является C1-C6 алкильной группой.
[0060]
2
R еще более предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.
2
R особенно предпочтительно представляет собой метильную группу или этильную группу.
2
R наиболее предпочтительно представляет собой метильную группу.
[0061]
3
В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).
[0062]
3
«C1-C4 алкильная группа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно, содержащей 1-5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей)», представленная R, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.
[0063]
3
«C1-C4 алкильная группа», необязательно содержащая 1-5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей)», представленная R, предпочтительно представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, более предпочтительно метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.
[0064]
3
R предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).
[0065]
3
R представляет собой более предпочтительно метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, этильную группу, фторэтильную группу, дифторэтильную группу, трифторэтильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.
[0066]
3
R представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.
[0067]
3
R представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.
3
R представляет собой особенно предпочтительно метильную группу или этильную группу.
3
R наиболее предпочтительно представляет собой метильную группу.
[0068]
4
В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу.
[0069]
4
«C1-C4 алкильная группа», представленная R, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.
[0070]
4
R представляет собой предпочтительно атом водорода, метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.
[0071]
4
R представляет собой более предпочтительно атом водорода, метильную группу или этильную группу.
[0072]
4
R представляет собой еще более предпочтительно атом водорода или метильную группу.
4
R представляет собой наиболее предпочтительно атом водорода.
[0073]
5
В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую
1-3 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.
[0074]
5
R представляет собой предпочтительно фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.
[0075]
5
R представляет собой более предпочтительно фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу или 3,5-дифторфенильную группу.
[0076]
5
R представляет собой наиболее предпочтительно фенильную группу.
[0077]
Соединение по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II),
1
R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу,
2
R представляет собой C1-C6 алкильную группу,
3
R представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей),
4
R представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, и
5
R представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.
[0078]
Соединение по настоящему изобретению более предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II),
1
R представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу, циклопропильную группу или циклобутильную группу,
2
R представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу или трет-бутильную группу,
3
R представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, этильную группу, фторэтильную группу, дифторэтильную группу, трифторэтильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу,
4
R представляет собой атом водорода, метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и
5
R представляет собой фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-фторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 3,5-дифторфенильную группу, 2-хлорфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,4-дихлорфенильную группу или 3,5-дихлорфенильную группу.
[0079]
Соединение по настоящему изобретению еще более предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II),
1
R представляет собой метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу или циклопропильную группу,
2
R представляет собой метильную группу,
3
R представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу,
4
R представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, и
5
R представляет собой фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу или 3,5-дифторфенильную группу.
[0080]
Соединение по настоящему изобретению еще более предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II),
1
R представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу,
2
R представляет собой метильную группу,
3
R представляет собой метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу,
4
R представляет собой атом водорода или метильную группу, и
5
R представляет собой фенильную группу.
[0081]
Соединение по настоящему изобретению особенно предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II),
1
R представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу,
2
R представляет собой метильную группу,
3
R представляет собой метильную группу,
4
R представляет собой атом водорода, и
5
R представляет собой фенильную группу.
[0082]
Конкретные примеры соединения настоящего изобретения могут включать соединения в следующих ниже примерах, но ими не ограничиваются.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих ниже (1)-(18), или к его соли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих ниже (1)-(15), или к его соли.
(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(4) 7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(5) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(6) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(7) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(8) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(9) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(10) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(11) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропан-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(12) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(13) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(14) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(15) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(16) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(17) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(18) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид, и
(19) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.
[0083]
Предпочтительным примером соединения настоящего изобретения может быть соединение, выбранное из следующих (1)-(3), или его соль.
(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,
(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид, и
(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.
[0084]
< Способ получения соединения, представленного формулой (I) >
Соединение по настоящему изобретению может быть получено, например, следующим способом получения или способами, описанными в примерах. Однако способ получения соединения по настоящему изобретению не ограничивается этим примерами.
Соединение (I) настоящего изобретения может быть получено с помощью применения, например, следующего способа получения.
< Способ получения >
1
2
3
1
2
В указанном выше способе каждый из L, L и L, которые являются одинаковыми или различными, представляют уходящую группу; каждый из P, и P, которые являются одинаковыми или различными, представляют защитную группу; и другие символы являются такими, как определено выше.
[0085]
< Стадия 1 >
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 3, путем проведения реакции Мицунобу между соединением, представленным формулой 1, и соединением, представленным формулой 2, которое является коммерчески доступным соединением, или может быть получено известным способом. Реакция Мицунобу обычно проводится в присутствии реагента Мицунобу и фосфинового реагента.
1
Соединение, представленное формулой 2 (в формуле 2, P представляет защитную группу для аминогруппы), может быть использовано в количестве 1-10 эквивалентов, предпочтительно 1-3 эквивалента, в расчете на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль).
«Защитная группа для аминогруппы» не имеет особых ограничений при условии, что она выполняет защитную функцию. Примеры защитной группы для аминогруппы могут включать: аралкильные группы, такие как бензильная группа, п-метоксибензильная группа, 3,4-диметоксибензильная группа, о-нитробензильная группа, п-нитробензильная группа, бензгидрильная группа, тритильная группа и кумильная группа; низшие алканоильные группы, такие как, например, формильная группа, ацетильная группа, пропионильная группа, бутирильная группа, пивалоильная группа, трифторацетильная группа и трихлорацетильная группа; например, бензоильные группы; арилалканоильные группы, такие как, например, фенилацетильная группа и феноксиацетильная группа; низшие алкоксикарбонильные группы, такие как, например, метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропилоксикарбонильная группа и трет-бутоксикарбонильная группа; аралкилоксикарбонильные группы, такие как, например, п-нитробензилоксикарбонильная группа и фенэтилоксикарбонильная группа; низшие алкилсилильные группы, такие как, например, триметилсилильная группа и трет-бутилдиметилсилильная группа; например, тетрагидропиранильные группы; например, триметилсилилэтоксиметильные группы; низшие алкилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, метилсульфонильная группа, этилсульфонильная группа и трет-бутилсульфонильная группа; низшие алкилсульфинильные группы и т.д., такие как, например, трет-бутилсульфинильная группа; арилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, бензолсульфонильная группа и толуолсульфонильная группа; и имидные группы, такие как, например, фталимидная группа. Среди них трифторацетильная группа, ацетильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа, триметилсилилэтоксиметильная группа или кумильная группа являются особенно предпочтительными.
[0086]
В качестве реагента Мицунобу используется диэтилазодикарбоксилат, диизопропилазодикарбоксилат или тому подобное. Такой реагент Мицунобу используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на соединение, представленное формулой 1 (1 моль).
В качестве фосфинового реагента используется трифенилфосфин, трибутилфосфин, трифурилфосфин или тому подобное. Такой фосфиновый реагент используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на соединение, представленное формулой 1 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 3, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0087]
< Стадия 2 >
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 4, путем реакции соединения, представленного формулой 3, с аммиаком или его солью.
Аммиак или его соль могут быть использованы в количестве 1-1000 эквивалентов и предпочтительно 1-100 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 3 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 150°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 4, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0088]
< Стадия 3 >
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 5, путем реакции соединения, представленного формулой 4, в атмосфере монооксида углерода, например, в присутствии катализатора на основе переходного металла, основания и спирта.
На этой стадии давление монооксида углерода обычно составляет 1-20 атмосфер (0,1-2 МПа), предпочтительно 1-10 атмосфер (0,1-1 МПа).
Примеры спирта могут включать метанол, этанол, пропанол, изопропанол, диэтиламиноэтанол, изобутанол, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, 3-морфолинопропанол и диэтиламинопропанол.
Спирт используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-50 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).
[0089]
Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем изобретении, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракистрифенилфосфинпалладий, палладий на угле и т.д.). Лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.) может быть добавлен при необходимости. Количество используемого катализатора на основе переходного металла различается в зависимости от типа катализатора. Катализатор на основе переходного металла используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-1 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-0,5 моль, в расчете на количество соединения 4 (1 моль). Лиганд используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).
[0090]
Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Среди прочего, соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия, алкоксиды щелочных металлов, такие как трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия, органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин, и тому подобное, являются предпочтительными. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,1-50 моль, и предпочтительно приблизительно 1-20 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).
[0091]
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид, N-метилпирролидон и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 150°С.
[0092]
После завершения данной реакции сложноэфирную форму, соответствующую используемому спирту, или смесь сложноэфирной формы и соединения, представленного формулой 5, подвергают реакции гидролиза, чтобы она могла быть преобразована в соединение, представленное формулой 5.
В качестве такого основания предпочтительно используется гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития или тому подобное. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,5-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Например, вода, метанол, этанол, изопропанол, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, N, N-диметилформамид и тому подобное могут использоваться по отдельности или в сочетании. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 5, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0093]
< Стадия 4 >
2
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 6 (где P представляет собой защитную группу для карбоксильной группы), путем введения защитной группы в соединение, представленное формулой 5. Защита может быть осуществлена с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентного ему способа.
«Защитная группа для карбоксильной группы» не имеет особых ограничений при условии, что она выполняет защитную функцию. Примеры защитной группы для карбоксильной группы могут включать: низшие алкильные группы, такие как, например, метильная группа, этильная группа, пропильная группа, изопропильная группа и трет-бутильная группа; галогеновые низшие алкильные группы, такие как, например, 2,2,2-трихлорэтильная группа; низшие алкенильные группы, такие как, например, аллильная группа; например, триметилсилилэтоксиметильная группа; аралкильные группы, такие как, например, бензильная группа, п-метоксибензильная группа, п-нитробензильная группа, бензгидрильная группа и тритильная группа. В частности, метильная группа, этильная группа, трет-бутильная группа, аллильная группа, бензильная группа, п-метоксибензильная группа или триметилсилилэтоксиметильная группа является предпочтительной.
В данной реакции предпочтительно вводится защитная группа, такая как, например, группа сложного трет-бутилового эфира, группа сложного метилового эфира или группа сложного этилового эфира.
Агентом защитной группы, используемым в настоящей реакции, может быть, например, 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевина. Такой агент защитной группы используется в количестве, как правило, приблизительно 1-50 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 5 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран, трет-бутилметиловый эфир и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 6, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0094]
< Стадия 5 >
3
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 7 (где L представляет атом галогена), галогенированием соединения, представленного формулой 6. Галогенирование может быть проведено способом с использованием фтора, хлора, брома, йода и т.д., или способом с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида или N-йодсукцинимида, и т.д. В рассматриваемой реакции способ с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида и т.д. является предпочтительным.
N-хлорсукцинимид, N-бромсукцинимид, N-йодсукцинимид и т.д. могут быть использованы в количестве от 1 до 10 эквивалентов и предпочтительно от 1 до 3 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 6 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 7, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0095]
< Стадия 6 >
1
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 8, путем удаления защитной группы для аминогруппы (Р в формуле 7) из соединения, представленного формулой 7 (снятие защиты). Такое снятие защиты может быть осуществлено с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентного ему способа.
Защитная группа может представлять собой, например, трет-бутилоксикарбонил. Когда такая трет-бутилоксикарбонильная группа используется, например, в качестве защитной группы, снятие защиты предпочтительно проводится в кислых условиях. Примеры используемой в данном документе кислоты могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.
Кислоту предпочтительно используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 7 (1 моль).
Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до 100°С, и предпочтительно от 0°С до 50°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 8, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0096]
< Стадия 7 >
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 9, путем проведения реакции амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галогенидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты.
В случае использования галогенида акриловой кислоты или ангидрида акриловой кислоты, такой галогенид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты используется в количестве, составляющем, как правило, приблизительно 0,5-10 моль, и предпочтительно приблизительно 1-5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль). Следует отметить, что рассматриваемый галогенид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты могут быть получены в виде коммерчески доступного продукта или могут быть получены в соответствии с известным способом.
Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание. Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, изопропилэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль).
Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 9, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0097]
< Стадия 8 >
Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 10, путем проведения реакции Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетилена, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть получено известным способом.
Производное ацетилена может быть использовано в количестве 1-50 эквивалентов и предпочтительно 1-10 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).
Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем изобретении, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракистрифенилфосфинпалладий, дихлорбис(трифенилфосфин)палладий, дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий и т.д.) и никелевые катализаторы (например, хлорид никеля и т.д.). При необходимости может быть добавлен лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.), и медный катализатор (например, йодид меди, бромид меди или хлорид меди) или тому подобное может использоваться в качестве сокатализатора. Количество используемого катализатора на основе переходного металла различается в зависимости от типа катализатора. Катализатор на основе переходного металла используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-1 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-0,5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Лиганд используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Медный катализатор используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,010-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).
[0098]
Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Среди них предпочтительные примеры основания могут включать: соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия; алкоксиды щелочных металлов, такие как натрий-трет-бутоксид и калий-трет-бутоксид; и органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,1-10 моль, и предпочтительно приблизительно 1-5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).
Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 150°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 10, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0099]
< Стадия 9 >
2
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 11, путем снятия защитной группы для карбоксильной группы (Р в формуле 10) соединения, представленного формулой 10. Снятие защиты может быть осуществлено с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентного ему способа.
Защитная группа может представлять собой, например, группу сложного трет-бутилового эфира. Когда такая группа сложного трет-бутилового эфира используется, например, в качестве защитной группы, снятие защиты предпочтительно проводится в кислых условиях. Примеры используемой в данном документе кислоты могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.
Кислоту предпочтительно используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль).
Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до 100°С, и предпочтительно от 0°С до 50°С.
Полученное таким образом соединение, представленное формулой 11, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.
[0100]
< Стадия 10 >
Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой (I), путем проведения реакции амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом.
Амидирование может быть осуществлено в соответствии с общеизвестным способом. Примеры способа амидирования могут включать способ проведения реакции в присутствии конденсирующего агента, и способ, включающий активацию части карбоновой кислоты в соответствии с традиционно известным способом для получения реакционноспособного производного, и затем проведение амидирования между производным и амином (для обоих способов см. «Peptide Gosei no Kiso to Jikken (Principle of Peptide Synthesis and Experiments)» (Nobuo IZUMIYA et al., Maruzen Co., Ltd., 1983)).
Примеры конденсирующего агента могут включать N, N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N, N'-диизопропилкарбодиимид (DIC), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимидгидрохлорид (WSC), дифенилфосфорилазид (DPPA), бензoтриазол-1-ил-окситрисдиметиламинофосфонийгексафторфосфат (BOP), бензoтриазол-1-ил-окситрипирролидинoфосфонийгексафторфосфат (PyBOP), 7-азабензотриазол-1-илoкситриспирролидинoфосфонийфосфат (PyAOP), бромтриспирролидинoфосфонийгексафторфосфат (BroP), хлортрис(пирролидин-1-ил)фосфонийгексафторфосфат (PyCroP), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензoтриазин-4(3H)-он (DEPBT), O-(азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилуронийгексафторфосфат (HATU), и 4-(5,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолингидрохлорид (DMTMM). Примеры добавки, используемой при этом, могут включать 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt), и N-гидроксисукцинимид (HOSu). Такие агенты используются в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 11 (1 моль).
[0101]
Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание. Примеры такого основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 11 (1 моль).
Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.
Полученное таким образом соединение (I) может быть выделено и очищено в соответствии с известными способами выделения и очистки, такими как, например, концентрирование, концентрирование под вакуумом, кристаллизация, сольвентная экстракция, переосаждение или хроматография.
В описанном выше способе получения, стадии, начиная от «введения защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5» (стадия 4) до «реакции амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом» (стадия 10), последовательно выполняются в данном порядке. Однако порядок выполнения этих стадий может быть изменен. Кроме того, «введение защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5» (стадия 4) и «удаление защитной группы для карбоксигруппы из соединения, представленного формулой 10» (стадия 9), может быть исключено.
[0102]
В частности, отдельные стадии выполняются в порядке: «реакция амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом» (стадия 10), «галогенирование соединения, представленного формулой 6» (стадия 5), «удаление защитной группы для аминогруппы из соединения, представленного формулой 7» (стадия 6), «реакция амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галогенидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты» (стадия 7), и «реакция Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетилена, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть получено известным способом, когда L3 соединения, представленного формулой 9, имеет уходящую группу, такую как галоген» (стадия 8), так что соответствующее соединение может быть приведено к соединению, представленному формулой (I). Условия, применяемые на индивидуальных стадиях, являются такими же, как описанные выше условия.
[0103]
Когда соединение настоящего изобретения имеет изомер, такой как оптический изомер, стереоизомер, ротационный изомер или таутомер, все такие изомеры или их смеси включены в соединение настоящего изобретения, если не утверждается иное. Например, когда соединение настоящего изобретения имеет оптический изомер, в соединение настоящего изобретения включен как рацемат, так и оптический изомер, полученный в результате рацемического разделения, если не утверждается иное.
[0104]
Соль соединения настоящего изобретения означает фармацевтически приемлемую соль, и она может быть, например, аддитивной солью основания или аддитивной солью кислоты.
[0105]
Соединение настоящего изобретения или его соль также включает пролекарство. «Пролекарство» означает соединение, которое превращается в соединение настоящего изобретения или его соль в результате реакции с ферментом, желудочным соком или т.п. в физиологических условиях в живом организме; то есть, соединение, которое инициирует ферментативное окисление, восстановление, гидролиз и т.п., так что оно превращается в соединение настоящего изобретения или его соль, или соединение, которое подвергается гидролизу и т.п. за счет действия желудочного сока или тому подобного, так что оно превращается в соединение настоящего изобретения или его соль. В остальных случаях это также может быть соединение, которое превращается в соединение настоящего изобретения или его соль в физиологических условиях, как описано в «Iyakuhin no Kaihatsu (Development of Pharmaceutical Products),» Hirokawa Shoten, 1990, Vol. 7, Bunshi Sekkei (Molecular Designing), pp. 163-198.
[0106]
3
14
35
125
Соединение настоящего изобретения или его соль может быть аморфным веществом или кристаллом. Хотя кристаллическая форма указанного может являться монокристаллом или полиморфной смесью, они включены в соединение по настоящему изобретению или его соль. Кристалл может быть получен кристаллизацией соединения настоящего изобретения или его соли с использованием известного способа кристаллизации. Соединение настоящего изобретения или его соль могут представлять собой или сольват (например, гидрат и т.д.) или не-сольват, при этом и то и другое включено в соединение настоящего изобретения или его соль. Соединения, меченные радиоизотопами (например, H, C, S, I и т.д.) и тому подобное, также включены в соединение настоящего изобретения или его соль.
[0107]
Соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении HER2. Кроме того, соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной селективностью в отношении HER2. Соответственно, соединение настоящего изобретения или его соль пригодны в качестве противоопухолевого средства против злокачественной опухоли, имеющей сверхэкспрессию HER2, амплификацию гена HER2, мутацию HER2 и т.п. Кроме того, поскольку у мышей не было обнаружено значительного снижения веса, настоящее соединение или его соль являются предпочтительными в том смысле, что они имеют мало побочных эффектов.
В настоящем описании термин «HER2» включает HER2 человека или отличного от человека млекопитающего, и предпочтительно является HER2 человека. Кроме того, термин «HER2» включает изоформы.
[0108]
Поскольку соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении HER2, оно годится в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения заболеваний, связанных с HER2.
«Заболевание, связанное с HER2», означает заболевание, при котором снижение частоты случаев или ремиссия, облегчение и/или полная реверсия его симптомов достигается путем удаления, подавления и/или ингибирования функции HER2. Примеры таких заболеваний могут включать злокачественные опухоли, но не ограничиваются ими. Предпочтительные примеры заболевания могут включать злокачественные опухоли, имеющие сверхэкспрессию HER2, амплификацию гена HER2 или мутацию HER2.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает ингибитор HER2, содержащий соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ ингибирования HER2, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения по настоящему изобретению или его соли для получения ингибитора HER2. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве ингибитора HER2. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для ингибирования HER2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для профилактики или лечения заболевания, связанного с HER2.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает противоопухолевое средство, содержащее соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения противоопухолевого средства.
Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает соединение настоящего изобретения или его соль для применения при профилактике и/или лечении опухоли.
[0109]
Соединение согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения или его соль селективно ингибирует HER2 дикого типа, а также мутант HER2, имеющий одну или более инсерционных мутаций, точечных мутаций, делеционных мутаций и т.п. в домене HER2, такие как инсерционная мутация экзона 20. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предусматривает: соединение, обладающее ингибирующей активностью в отношении HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, которая является одной из инсерционных мутаций экзона 20, или его соль; или лекарственное средство или фармацевтическую композицию, содержащие указанное. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает ингибитор HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п., где ингибитор содержит соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ ингибирования HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п., где способ включает введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения ингибитора HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве ингибитора HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для ингибирования HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для профилактики или лечения заболевания, связанного с HER2 дикого типа и мутантом HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п.
[0110]
Ген человеческого HER2 показан, например, в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 5. Белок HER2 дикого типа состоит из аминокислотной последовательности, указанной, например, в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 6. Информация о нуклеотидной последовательности гена человеческого HER2 и информация о аминокислотной последовательности белка HER2 дикого типа могут быть получены, например, из номеров доступа NM_004448, NM_001289936, NM_001005862, или подобных.
[0111]
В нескольких вариантах осуществления, соединение одного из вариантов осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G309A, S310F, R678Q, L755S, L755_T759del, D769H, A775_G776insYVMA, V777L, V842I и R896C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A775_G776insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 в качестве эталона.
В нескольких вариантах осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G294A, S295F, R663Q, L740S, L740_T744del, D754H, A760_G761insYVMA, V762L, V827I и R881C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A760_G761insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4 в качестве эталона.
В нескольких вариантах осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G279A, S280F, R648Q, L725S, L725_T729del, D739H, A745_G746insYVMA, V747L, V812I и R866C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A745_G746insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6 в качестве эталона.
[0112]
Далее, в нескольких вариантах осуществления, в отношении мутации в определенной изоформе HER2, даже когда положение мутации отличается от положения аминокислоты, показанного в SEQ ID NO: 2, вследствие делеции или инсерции аминокислоты (аминокислот), имеется ввиду, что мутация является такой же, как и мутация в положении, соответствующем положению аминокислоты, показанному в SEQ ID NO: 2. Так, например, глицин в положении 309 в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2, соответствует глицину в положении 294 в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4. Например, термин «G309A» означает, что глицин в положении 309 в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2, мутирует в аланин. Так как такой «G309» находится в положении, соответствующем аминокислоте в положении 294 в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, «G294A» в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, соответствует «G309A» в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2. Кроме того, положение аминокислоты в SEQ ID NO: 2, которое соответствует определенной аминокислоте в определенной изоформе HER2, может быть подтверждено множественным выравниванием BLAST.
[0113]
Список последовательностей
[Таблица А]
SEQ ID NO: 1Номер доступа: NM_004448CDS: 262..40291 gcttgctccc aatcacagga gaaggaggag gtggaggagg agggctgctt gaggaagtat61 aagaatgaag ttgtgaagct gagattcccc tccattggga ccggagaaac caggggagcc121 ccccgggcag ccgcgcgccc cttcccacgg ggccctttac tgcgccgcgc gcccggcccc181 cacccctcgc agcaccccgc gccccgcgcc ctcccagccg ggtccagccg gagccatggg241 gccggagccg cagtgagcac catggagctg gcggccttgt gccgctgggg gctcctcctc301 gccctcttgc cccccggagc cgcgagcacc caagtgtgca ccggcacaga catgaagctg361 cggctccctg ccagtcccga gacccacctg gacatgctcc gccacctcta ccagggctgc421 caggtggtgc agggaaacct ggaactcacc tacctgccca ccaatgccag cctgtccttc481 ctgcaggata tccaggaggt gcagggctac gtgctcatcg ctcacaacca agtgaggcag541 gtcccactgc agaggctgcg gattgtgcga ggcacccagc tctttgagga caactatgcc601 ctggccgtgc tagacaatgg agacccgctg aacaatacca cccctgtcac aggggcctcc661 ccaggaggcc tgcgggagct gcagcttcga agcctcacag agatcttgaa aggaggggtc721 ttgatccagc ggaaccccca gctctgctac caggacacga ttttgtggaa ggacatcttc781 cacaagaaca accagctggc tctcacactg atagacacca accgctctcg ggcctgccac841 ccctgttctc cgatgtgtaa gggctcccgc tgctggggag agagttctga ggattgtcag901 agcctgacgc gcactgtctg tgccggtggc tgtgcccgct gcaaggggcc actgcccact961 gactgctgcc atgagcagtg tgctgccggc tgcacgggcc ccaagcactc tgactgcctg1021 gcctgcctcc acttcaacca cagtggcatc tgtgagctgc actgcccagc cctggtcacc1081 tacaacacag acacgtttga gtccatgccc aatcccgagg gccggtatac attcggcgcc1141 agctgtgtga ctgcctgtcc ctacaactac ctttctacgg acgtgggatc ctgcaccctc1201 gtctgccccc tgcacaacca agaggtgaca gcagaggatg gaacacagcg gtgtgagaag1261 tgcagcaagc cctgtgcccg agtgtgctat ggtctgggca tggagcactt gcgagaggtg1321 agggcagtta ccagtgccaa tatccaggag tttgctggct gcaagaagat ctttgggagc1381 ctggcatttc tgccggagag ctttgatggg gacccagcct ccaacactgc cccgctccag1441 ccagagcagc tccaagtgtt tgagactctg gaagagatca caggttacct atacatctca1501 gcatggccgg acagcctgcc tgacctcagc gtcttccaga acctgcaagt aatccgggga1561 cgaattctgc acaatggcgc ctactcgctg accctgcaag ggctgggcat cagctggctg1621 gggctgcgct cactgaggga actgggcagt ggactggccc tcatccacca taacacccac1681 ctctgcttcg tgcacacggt gccctgggac cagctctttc ggaacccgca ccaagctctg1741 ctccacactg ccaaccggcc agaggacgag tgtgtgggcg agggcctggc ctgccaccag1801 ctgtgcgccc gagggcactg ctggggtcca gggcccaccc agtgtgtcaa ctgcagccag1861 ttccttcggg gccaggagtg cgtggaggaa tgccgagtac tgcaggggct ccccagggag1921 tatgtgaatg ccaggcactg tttgccgtgc caccctgagt gtcagcccca gaatggctca1981 gtgacctgtt ttggaccgga ggctgaccag tgtgtggcct gtgcccacta taaggaccct2041 cccttctgcg tggcccgctg ccccagcggt gtgaaacctg acctctccta catgcccatc2101 tggaagtttc cagatgagga gggcgcatgc cagccttgcc ccatcaactg cacccactcc2161 tgtgtggacc tggatgacaa gggctgcccc gccgagcaga gagccagccc tctgacgtcc2221 atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc2281 ctcatcaagc gacggcagca gaagatccgg aagtacacga tgcggagact gctgcaggaa2341 acggagctgg tggagccgct gacacctagc ggagcgatgc ccaaccaggc gcagatgcgg2401 atcctgaaag agacggagct gaggaaggtg aaggtgcttg gatctggcgc ttttggcaca2461 gtctacaagg gcatctggat ccctgatggg gagaatgtga aaattccagt ggccatcaaa2521 gtgttgaggg aaaacacatc ccccaaagcc aacaaagaaa tcttagacga agcatacgtg2581 atggctggtg tgggctcccc atatgtctcc cgccttctgg gcatctgcct gacatccacg2641 gtgcagctgg tgacacagct tatgccctat ggctgcctct tagaccatgt ccgggaaaac2701 cgcggacgcc tgggctccca ggacctgctg aactggtgta tgcagattgc caaggggatg2761 agctacctgg aggatgtgcg gctcgtacac agggacttgg ccgctcggaa cgtgctggtc2821 aagagtccca accatgtcaa aattacagac ttcgggctgg ctcggctgct ggacattgac2881 gagacagagt accatgcaga tgggggcaag gtgcccatca agtggatggc gctggagtcc2941 attctccgcc ggcggttcac ccaccagagt gatgtgtgga gttatggtgt gactgtgtgg3001 gagctgatga cttttggggc caaaccttac gatgggatcc cagcccggga gatccctgac3061 ctgctggaaa agggggagcg gctgccccag ccccccatct gcaccattga tgtctacatg3121 atcatggtca aatgttggat gattgactct gaatgtcggc caagattccg ggagttggtg3181 tctgaattct cccgcatggc cagggacccc cagcgctttg tggtcatcca gaatgaggac3241 ttgggcccag ccagtccctt ggacagcacc ttctaccgct cactgctgga ggacgatgac3301 atgggggacc tggtggatgc tgaggagtat ctggtacccc agcagggctt cttctgtcca3361 gaccctgccc cgggcgctgg gggcatggtc caccacaggc accgcagctc atctaccagg3421 agtggcggtg gggacctgac actagggctg gagccctctg aagaggaggc ccccaggtct3481 ccactggcac cctccgaagg ggctggctcc gatgtatttg atggtgacct gggaatgggg3541 gcagccaagg ggctgcaaag cctccccaca catgacccca gccctctaca gcggtacagt3601 gaggacccca cagtacccct gccctctgag actgatggct acgttgcccc cctgacctgc3661 agcccccagc ctgaatatgt gaaccagcca gatgttcggc cccagccccc ttcgccccga3721 gagggccctc tgcctgctgc ccgacctgct ggtgccactc tggaaaggcc caagactctc3781 tccccaggga agaatggggt cgtcaaagac gtttttgcct ttgggggtgc cgtggagaac3841 cccgagtact tgacacccca gggaggagct gcccctcagc cccaccctcc tcctgccttc3901 agcccagcct tcgacaacct ctattactgg gaccaggacc caccagagcg gggggctcca3961 cccagcacct tcaaagggac acctacggca gagaacccag agtacctggg tctggacgtg4021 ccagtgtgaa ccagaaggcc aagtccgcag aagccctgat gtgtcctcag ggagcaggga4081 aggcctgact tctgctggca tcaagaggtg ggagggccct ccgaccactt ccaggggaac4141 ctgccatgcc aggaacctgt cctaaggaac cttccttcct gcttgagttc ccagatggct4201 ggaaggggtc cagcctcgtt ggaagaggaa cagcactggg gagtctttgt ggattctgag4261 gccctgccca atgagactct agggtccagt ggatgccaca gcccagcttg gccctttcct4321 tccagatcct gggtactgaa agccttaggg aagctggcct gagaggggaa gcggccctaa4381 gggagtgtct aagaacaaaa gcgacccatt cagagactgt ccctgaaacc tagtactgcc4441 ccccatgagg aaggaacagc aatggtgtca gtatccaggc tttgtacaga gtgcttttct4501 gtttagtttt tacttttttt gttttgtttt tttaaagatg aaataaagac ccagggggag4561 aatgggtgtt gtatggggag gcaagtgtgg ggggtccttc tccacaccca ctttgtccat4621 ttgcaaatat attttggaaa acagctaaaa aaaaaaaaaa aaaa
SEQ ID NO: 2Номер доступа: NM_004448MELAALCRWG LLLALLPPGA ASTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL 60ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG 120DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA 180LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC 240AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP 300YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN 360IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP 420DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV 480PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC 540VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC 600PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG 660ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL 720RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAGVGSP 780YVSRLLGICL TSTVQLVTQL MPYGCLLDHV RENRGRLGSQ DLLNWCMQIA KGMSYLEDVR 840LVHRDLAARN VLVKSPNHVK ITDFGLARLL DIDETEYHAD GGKVPIKWMA LESILRRRFT 900HQSDVWSYGV TVWELMTFGA KPYDGIPARE IPDLLEKGER LPQPPICTID VYMIMVKCWM 960IDSECRPRFR ELVSEFSRMA RDPQRFVVIQ NEDLGPASPL DSTFYRSLLE DDDMGDLVDA 1020EEYLVPQQGF FCPDPAPGAG GMVHHRHRSS STRSGGGDLT LGLEPSEEEA PRSPLAPSEG 1080AGSDVFDGDL GMGAAKGLQS LPTHDPSPLQ RYSEDPTVPL PSETDGYVAP LTCSPQPEYV 1140NQPDVRPQPP SPREGPLPAA RPAGATLERP KTLSPGKNGV VKDVFAFGGA VENPEYLTPQ 1200GGAAPQPHPP PAFSPAFDNL YYWDQDPPER GAPPSTFKGT PTAENPEYLG LDVPV 1255
SEQ ID NO: 3Номер доступа: NM_001289936CDS: 583..43051 aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc61 ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg121 cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc181 atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc241 ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg301 cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat361 gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag421 agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga481 gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt541 ggacatgcac aaaagtgaga tacttcaaag attccagaag atatgccccg ggggtcctgg601 aagccacaag tgtgcaccgg cacagacatg aagctgcggc tccctgccag tcccgagacc661 cacctggaca tgctccgcca cctctaccag ggctgccagg tggtgcaggg aaacctggaa721 ctcacctacc tgcccaccaa tgccagcctg tccttcctgc aggatatcca ggaggtgcag781 ggctacgtgc tcatcgctca caaccaagtg aggcaggtcc cactgcagag gctgcggatt841 gtgcgaggca cccagctctt tgaggacaac tatgccctgg ccgtgctaga caatggagac901 ccgctgaaca ataccacccc tgtcacaggg gcctccccag gaggcctgcg ggagctgcag961 cttcgaagcc tcacagagat cttgaaagga ggggtcttga tccagcggaa cccccagctc1021 tgctaccagg acacgatttt gtggaaggac atcttccaca agaacaacca gctggctctc1081 acactgatag acaccaaccg ctctcgggcc tgccacccct gttctccgat gtgtaagggc1141 tcccgctgct ggggagagag ttctgaggat tgtcagagcc tgacgcgcac tgtctgtgcc1201 ggtggctgtg cccgctgcaa ggggccactg cccactgact gctgccatga gcagtgtgct1261 gccggctgca cgggccccaa gcactctgac tgcctggcct gcctccactt caaccacagt1321 ggcatctgtg agctgcactg cccagccctg gtcacctaca acacagacac gtttgagtcc1381 atgcccaatc ccgagggccg gtatacattc ggcgccagct gtgtgactgc ctgtccctac1441 aactaccttt ctacggacgt gggatcctgc accctcgtct gccccctgca caaccaagag1501 gtgacagcag aggatggaac acagcggtgt gagaagtgca gcaagccctg tgcccgagtg1561 tgctatggtc tgggcatgga gcacttgcga gaggtgaggg cagttaccag tgccaatatc1621 caggagtttg ctggctgcaa gaagatcttt gggagcctgg catttctgcc ggagagcttt1681 gatggggacc cagcctccaa cactgccccg ctccagccag agcagctcca agtgtttgag1741 actctggaag agatcacagg ttacctatac atctcagcat ggccggacag cctgcctgac1801 ctcagcgtct tccagaacct gcaagtaatc cggggacgaa ttctgcacaa tggcgcctac1861 tcgctgaccc tgcaagggct gggcatcagc tggctggggc tgcgctcact gagggaactg1921 ggcagtggac tggccctcat ccaccataac acccacctct gcttcgtgca cacggtgccc1981 tgggaccagc tctttcggaa cccgcaccaa gctctgctcc acactgccaa ccggccagag2041 gacgagtgtg tgggcgaggg cctggcctgc caccagctgt gcgcccgagg gcactgctgg2101 ggtccagggc ccacccagtg tgtcaactgc agccagttcc ttcggggcca ggagtgcgtg2161 gaggaatgcc gagtactgca ggggctcccc agggagtatg tgaatgccag gcactgtttg2221 ccgtgccacc ctgagtgtca gccccagaat ggctcagtga cctgttttgg accggaggct2281 gaccagtgtg tggcctgtgc ccactataag gaccctccct tctgcgtggc ccgctgcccc2341 agcggtgtga aacctgacct ctcctacatg cccatctgga agtttccaga tgaggagggc2401 gcatgccagc cttgccccat caactgcacc cactcctgtg tggacctgga tgacaagggc2461 tgccccgccg agcagagagc cagccctctg acgtccatca tctctgcggt ggttggcatt2521 ctgctggtcg tggtcttggg ggtggtcttt gggatcctca tcaagcgacg gcagcagaag2581 atccggaagt acacgatgcg gagactgctg caggaaacgg agctggtgga gccgctgaca2641 cctagcggag cgatgcccaa ccaggcgcag atgcggatcc tgaaagagac ggagctgagg2701 aaggtgaagg tgcttggatc tggcgctttt ggcacagtct acaagggcat ctggatccct2761 gatggggaga atgtgaaaat tccagtggcc atcaaagtgt tgagggaaaa cacatccccc2821 aaagccaaca aagaaatctt agacgaagca tacgtgatgg ctggtgtggg ctccccatat2881 gtctcccgcc ttctgggcat ctgcctgaca tccacggtgc agctggtgac acagcttatg2941 ccctatggct gcctcttaga ccatgtccgg gaaaaccgcg gacgcctggg ctcccaggac3001 ctgctgaact ggtgtatgca gattgccaag gggatgagct acctggagga tgtgcggctc3061 gtacacaggg acttggccgc tcggaacgtg ctggtcaaga gtcccaacca tgtcaaaatt3121 acagacttcg ggctggctcg gctgctggac attgacgaga cagagtacca tgcagatggg3181 ggcaaggtgc ccatcaagtg gatggcgctg gagtccattc tccgccggcg gttcacccac3241 cagagtgatg tgtggagtta tggtgtgact gtgtgggagc tgatgacttt tggggccaaa3301 ccttacgatg ggatcccagc ccgggagatc cctgacctgc tggaaaaggg ggagcggctg3361 ccccagcccc ccatctgcac cattgatgtc tacatgatca tggtcaaatg ttggatgatt3421 gactctgaat gtcggccaag attccgggag ttggtgtctg aattctcccg catggccagg3481 gacccccagc gctttgtggt catccagaat gaggacttgg gcccagccag tcccttggac3541 agcaccttct accgctcact gctggaggac gatgacatgg gggacctggt ggatgctgag3601 gagtatctgg taccccagca gggcttcttc tgtccagacc ctgccccggg cgctgggggc3661 atggtccacc acaggcaccg cagctcatct accaggagtg gcggtgggga cctgacacta3721 gggctggagc cctctgaaga ggaggccccc aggtctccac tggcaccctc cgaaggggct3781 ggctccgatg tatttgatgg tgacctggga atgggggcag ccaaggggct gcaaagcctc3841 cccacacatg accccagccc tctacagcgg tacagtgagg accccacagt acccctgccc3901 tctgagactg atggctacgt tgcccccctg acctgcagcc cccagcctga atatgtgaac3961 cagccagatg ttcggcccca gcccccttcg ccccgagagg gccctctgcc tgctgcccga4021 cctgctggtg ccactctgga aaggcccaag actctctccc cagggaagaa tggggtcgtc4081 aaagacgttt ttgcctttgg gggtgccgtg gagaaccccg agtacttgac accccaggga4141 ggagctgccc ctcagcccca ccctcctcct gccttcagcc cagccttcga caacctctat4201 tactgggacc aggacccacc agagcggggg gctccaccca gcaccttcaa agggacacct4261 acggcagaga acccagagta cctgggtctg gacgtgccag tgtgaaccag aaggccaagt4321 ccgcagaagc cctgatgtgt cctcagggag cagggaaggc ctgacttctg ctggcatcaa4381 gaggtgggag ggccctccga ccacttccag gggaacctgc catgccagga acctgtccta4441 aggaaccttc cttcctgctt gagttcccag atggctggaa ggggtccagc ctcgttggaa4501 gaggaacagc actggggagt ctttgtggat tctgaggccc tgcccaatga gactctaggg4561 tccagtggat gccacagccc agcttggccc tttccttcca gatcctgggt actgaaagcc4621 ttagggaagc tggcctgaga ggggaagcgg ccctaaggga gtgtctaaga acaaaagcga4681 cccattcaga gactgtccct gaaacctagt actgcccccc atgaggaagg aacagcaatg4741 gtgtcagtat ccaggctttg tacagagtgc ttttctgttt agtttttact ttttttgttt4801 tgttttttta aagatgaaat aaagacccag ggggagaatg ggtgttgtat ggggaggcaa4861 gtgtgggggg tccttctcca cacccacttt gtccatttgc aaatatattt tggaaaacag4921 ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa
SEQ ID NO: 4Номер доступа: NM_001289936MPRGSWKPQV CTGTDMKLRL PASPETHLDM LRHLYQGCQV VQGNLELTYL PTNASLSFLQ 60DIQEVQGYVL IAHNQVRQVP LQRLRIVRGT QLFEDNYALA VLDNGDPLNN TTPVTGASPG 120GLRELQLRSL TEILKGGVLI QRNPQLCYQD TILWKDIFHK NNQLALTLID TNRSRACHPC 180SPMCKGSRCW GESSEDCQSL TRTVCAGGCA RCKGPLPTDC CHEQCAAGCT GPKHSDCLAC 240LHFNHSGICE LHCPALVTYN TDTFESMPNP EGRYTFGASC VTACPYNYLS TDVGSCTLVC 300PLHNQEVTAE DGTQRCEKCS KPCARVCYGL GMEHLREVRA VTSANIQEFA GCKKIFGSLA 360FLPESFDGDP ASNTAPLQPE QLQVFETLEE ITGYLYISAW PDSLPDLSVF QNLQVIRGRI 420LHNGAYSLTL QGLGISWLGL RSLRELGSGL ALIHHNTHLC FVHTVPWDQL FRNPHQALLH 480TANRPEDECV GEGLACHQLC ARGHCWGPGP TQCVNCSQFL RGQECVEECR VLQGLPREYV 540NARHCLPCHP ECQPQNGSVT CFGPEADQCV ACAHYKDPPF CVARCPSGVK PDLSYMPIWK 600FPDEEGACQP CPINCTHSCV DLDDKGCPAE QRASPLTSII SAVVGILLVV VLGVVFGILI 660KRRQQKIRKY TMRRLLQETE LVEPLTPSGA MPNQAQMRIL KETELRKVKV LGSGAFGTVY 720KGIWIPDGEN VKIPVAIKVL RENTSPKANK EILDEAYVMA GVGSPYVSRL LGICLTSTVQ 780LVTQLMPYGC LLDHVRENRG RLGSQDLLNW CMQIAKGMSY LEDVRLVHRD LAARNVLVKS 840PNHVKITDFG LARLLDIDET EYHADGGKVP IKWMALESIL RRRFTHQSDV WSYGVTVWEL 900MTFGAKPYDG IPAREIPDLL EKGERLPQPP ICTIDVYMIM VKCWMIDSEC RPRFRELVSE 960FSRMARDPQR FVVIQNEDLG PASPLDSTFY RSLLEDDDMG DLVDAEEYLV PQQGFFCPDP 1020APGAGGMVHH RHRSSSTRSG GGDLTLGLEP SEEEAPRSPL APSEGAGSDV FDGDLGMGAA 1080KGLQSLPTHD PSPLQRYSED PTVPLPSETD GYVAPLTCSP QPEYVNQPDV RPQPPSPREG 1140PLPAARPAGA TLERPKTLSP GKNGVVKDVF AFGGAVENPE YLTPQGGAAP QPHPPPAFSP 1200AFDNLYYWDQ DPPERGAPPS TFKGTPTAEN PEYLGLDVPV 1240
SEQ ID NO: 5Номер доступа: NM_001005862CDS: 577..42541 aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc61 ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg121 cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc181 atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc241 ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg301 cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat361 gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag421 agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga481 gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt541 ggacatgcac aaaagtgagt gtgcaccggc acagacatga agctgcggct ccctgccagt601 cccgagaccc acctggacat gctccgccac ctctaccagg gctgccaggt ggtgcaggga661 aacctggaac tcacctacct gcccaccaat gccagcctgt ccttcctgca ggatatccag721 gaggtgcagg gctacgtgct catcgctcac aaccaagtga ggcaggtccc actgcagagg781 ctgcggattg tgcgaggcac ccagctcttt gaggacaact atgccctggc cgtgctagac841 aatggagacc cgctgaacaa taccacccct gtcacagggg cctccccagg aggcctgcgg901 gagctgcagc ttcgaagcct cacagagatc ttgaaaggag gggtcttgat ccagcggaac961 ccccagctct gctaccagga cacgattttg tggaaggaca tcttccacaa gaacaaccag1021 ctggctctca cactgataga caccaaccgc tctcgggcct gccacccctg ttctccgatg1081 tgtaagggct cccgctgctg gggagagagt tctgaggatt gtcagagcct gacgcgcact1141 gtctgtgccg gtggctgtgc ccgctgcaag gggccactgc ccactgactg ctgccatgag1201 cagtgtgctg ccggctgcac gggccccaag cactctgact gcctggcctg cctccacttc1261 aaccacagtg gcatctgtga gctgcactgc ccagccctgg tcacctacaa cacagacacg1321 tttgagtcca tgcccaatcc cgagggccgg tatacattcg gcgccagctg tgtgactgcc1381 tgtccctaca actacctttc tacggacgtg ggatcctgca ccctcgtctg ccccctgcac1441 aaccaagagg tgacagcaga ggatggaaca cagcggtgtg agaagtgcag caagccctgt1501 gcccgagtgt gctatggtct gggcatggag cacttgcgag aggtgagggc agttaccagt1561 gccaatatcc aggagtttgc tggctgcaag aagatctttg ggagcctggc atttctgccg1621 gagagctttg atggggaccc agcctccaac actgccccgc tccagccaga gcagctccaa1681 gtgtttgaga ctctggaaga gatcacaggt tacctataca tctcagcatg gccggacagc1741 ctgcctgacc tcagcgtctt ccagaacctg caagtaatcc ggggacgaat tctgcacaat1801 ggcgcctact cgctgaccct gcaagggctg ggcatcagct ggctggggct gcgctcactg1861 agggaactgg gcagtggact ggccctcatc caccataaca cccacctctg cttcgtgcac1921 acggtgccct gggaccagct ctttcggaac ccgcaccaag ctctgctcca cactgccaac1981 cggccagagg acgagtgtgt gggcgagggc ctggcctgcc accagctgtg cgcccgaggg2041 cactgctggg gtccagggcc cacccagtgt gtcaactgca gccagttcct tcggggccag2101 gagtgcgtgg aggaatgccg agtactgcag gggctcccca gggagtatgt gaatgccagg2161 cactgtttgc cgtgccaccc tgagtgtcag ccccagaatg gctcagtgac ctgttttgga2221 ccggaggctg accagtgtgt ggcctgtgcc cactataagg accctccctt ctgcgtggcc2281 cgctgcccca gcggtgtgaa acctgacctc tcctacatgc ccatctggaa gtttccagat2341 gaggagggcg catgccagcc ttgccccatc aactgcaccc actcctgtgt ggacctggat2401 gacaagggct gccccgccga gcagagagcc agccctctga cgtccatcat ctctgcggtg2461 gttggcattc tgctggtcgt ggtcttgggg gtggtctttg ggatcctcat caagcgacgg2521 cagcagaaga tccggaagta cacgatgcgg agactgctgc aggaaacgga gctggtggag2581 ccgctgacac ctagcggagc gatgcccaac caggcgcaga tgcggatcct gaaagagacg2641 gagctgagga aggtgaaggt gcttggatct ggcgcttttg gcacagtcta caagggcatc2701 tggatccctg atggggagaa tgtgaaaatt ccagtggcca tcaaagtgtt gagggaaaac2761 acatccccca aagccaacaa agaaatctta gacgaagcat acgtgatggc tggtgtgggc2821 tccccatatg tctcccgcct tctgggcatc tgcctgacat ccacggtgca gctggtgaca2881 cagcttatgc cctatggctg cctcttagac catgtccggg aaaaccgcgg acgcctgggc2941 tcccaggacc tgctgaactg gtgtatgcag attgccaagg ggatgagcta cctggaggat3001 gtgcggctcg tacacaggga cttggccgct cggaacgtgc tggtcaagag tcccaaccat3061 gtcaaaatta cagacttcgg gctggctcgg ctgctggaca ttgacgagac agagtaccat3121 gcagatgggg gcaaggtgcc catcaagtgg atggcgctgg agtccattct ccgccggcgg3181 ttcacccacc agagtgatgt gtggagttat ggtgtgactg tgtgggagct gatgactttt3241 ggggccaaac cttacgatgg gatcccagcc cgggagatcc ctgacctgct ggaaaagggg3301 gagcggctgc cccagccccc catctgcacc attgatgtct acatgatcat ggtcaaatgt3361 tggatgattg actctgaatg tcggccaaga ttccgggagt tggtgtctga attctcccgc3421 atggccaggg acccccagcg ctttgtggtc atccagaatg aggacttggg cccagccagt3481 cccttggaca gcaccttcta ccgctcactg ctggaggacg atgacatggg ggacctggtg3541 gatgctgagg agtatctggt accccagcag ggcttcttct gtccagaccc tgccccgggc3601 gctgggggca tggtccacca caggcaccgc agctcatcta ccaggagtgg cggtggggac3661 ctgacactag ggctggagcc ctctgaagag gaggccccca ggtctccact ggcaccctcc3721 gaaggggctg gctccgatgt atttgatggt gacctgggaa tgggggcagc caaggggctg3781 caaagcctcc ccacacatga ccccagccct ctacagcggt acagtgagga ccccacagta3841 cccctgccct ctgagactga tggctacgtt gcccccctga cctgcagccc ccagcctgaa3901 tatgtgaacc agccagatgt tcggccccag cccccttcgc cccgagaggg ccctctgcct3961 gctgcccgac ctgctggtgc cactctggaa aggcccaaga ctctctcccc agggaagaat4021 ggggtcgtca aagacgtttt tgcctttggg ggtgccgtgg agaaccccga gtacttgaca4081 ccccagggag gagctgcccc tcagccccac cctcctcctg ccttcagccc agccttcgac4141 aacctctatt actgggacca ggacccacca gagcgggggg ctccacccag caccttcaaa4201 gggacaccta cggcagagaa cccagagtac ctgggtctgg acgtgccagt gtgaaccaga4261 aggccaagtc cgcagaagcc ctgatgtgtc ctcagggagc agggaaggcc tgacttctgc4321 tggcatcaag aggtgggagg gccctccgac cacttccagg ggaacctgcc atgccaggaa4381 cctgtcctaa ggaaccttcc ttcctgcttg agttcccaga tggctggaag gggtccagcc4441 tcgttggaag aggaacagca ctggggagtc tttgtggatt ctgaggccct gcccaatgag4501 actctagggt ccagtggatg ccacagccca gcttggccct ttccttccag atcctgggta4561 ctgaaagcct tagggaagct ggcctgagag gggaagcggc cctaagggag tgtctaagaa4621 caaaagcgac ccattcagag actgtccctg aaacctagta ctgcccccca tgaggaagga4681 acagcaatgg tgtcagtatc caggctttgt acagagtgct tttctgttta gtttttactt4741 tttttgtttt gtttttttaa agatgaaata aagacccagg gggagaatgg gtgttgtatg4801 gggaggcaag tgtggggggt ccttctccac acccactttg tccatttgca aatatatttt4861 ggaaaacagc taaaaaaaaa aaaaaaaaa
SEQ ID NO: 6Номер доступа: NM_001005862MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ 60VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK 120GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE 180DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA 240LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR 300CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA 360PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI 420SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA 480CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ 540NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC 600THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL 660LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV 720AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAGVGSP YVSRLLGICL TSTVQLVTQL MPYGCLLDHV 780RENRGRLGSQ DLLNWCMQIA KGMSYLEDVR LVHRDLAARN VLVKSPNHVK ITDFGLARLL 840DIDETEYHAD GGKVPIKWMA LESILRRRFT HQSDVWSYGV TVWELMTFGA KPYDGIPARE 900IPDLLEKGER LPQPPICTID VYMIMVKCWM IDSECRPRFR ELVSEFSRMA RDPQRFVVIQ 960NEDLGPASPL DSTFYRSLLE DDDMGDLVDA EEYLVPQQGF FCPDPAPGAG GMVHHRHRSS 1020STRSGGGDLT LGLEPSEEEA PRSPLAPSEG AGSDVFDGDL GMGAAKGLQS LPTHDPSPLQ 1080RYSEDPTVPL PSETDGYVAP LTCSPQPEYV NQPDVRPQPP SPREGPLPAA RPAGATLERP 1140KTLSPGKNGV VKDVFAFGGA VENPEYLTPQ GGAAPQPHPP PAFSPAFDNL YYWDQDPPER 1200GAPPSTFKGT PTAENPEYLG LDVPV 1225
SEQ ID NO: 7Мутант HER2 (имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 в качестве основы, и содержащий мутацию A775_G776insYVMA (HER2ex20insYVMA))MELAALCRWG LLLALLPPGA ASTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL 60ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG 120DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA 180LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC 240AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP 300YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN 360IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP 420DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV 480PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC 540VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC 600PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG 660ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL 720RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAYVMAG 780VGSPYVSRLL GICLTSTVQL VTQLMPYGCL LDHVRENRGR LGSQDLLNWC MQIAKGMSYL 840EDVRLVHRDL AARNVLVKSP NHVKITDFGL ARLLDIDETE YHADGGKVPI KWMALESILR 900RRFTHQSDVW SYGVTVWELM TFGAKPYDGI PAREIPDLLE KGERLPQPPI CTIDVYMIMV 960KCWMIDSECR PRFRELVSEF SRMARDPQRF VVIQNEDLGP ASPLDSTFYR SLLEDDDMGD 1020LVDAEEYLVP QQGFFCPDPA PGAGGMVHHR HRSSSTRSGG GDLTLGLEPS EEEAPRSPLA 1080PSEGAGSDVF DGDLGMGAAK GLQSLPTHDP SPLQRYSEDP TVPLPSETDG YVAPLTCSPQ 1140PEYVNQPDVR PQPPSPREGP LPAARPAGAT LERPKTLSPG KNGVVKDVFA FGGAVENPEY 1200LTPQGGAAPQ PHPPPAFSPA FDNLYYWDQD PPERGAPPST FKGTPTAENP EYLGLDVPV 1259
[0114]
В настоящем описании термин «эффективное количество», используемый в отношении соединения настоящего изобретения, означает количество соединения настоящего изобретения, которое вызывает у субъекта биологический или медицинский ответ, такой как, например, снижение или ингибирование активности фермента или белка; или смягчает симптомы, облегчает состояния и замедляет или задерживает прогрессирование заболевания; или предотвращает заболевание и т.п. (терапевтически эффективное количество).
В настоящем описании термин «субъект» включает млекопитающих и немлекопитающих. Примеры млекопитающих могут включать, в числе прочего, человека, шимпанзе, человекообразную обезьяну, обезьяну, быка, лошадь, овцу, козу, свинью, кролика, собаку, кошку, крысу, мышь, морскую свинку, ежа, кенгуру, крота, дикую свинью, медведя, тигра и льва. Примеры немлекопитающих могут включать, в числе прочего, птиц, рыб и рептилий. В одном варианте осуществления субъект является человеком и может быть человеком, которому был поставлен диагноз, требующий лечения симптомов, состояний или заболевания, раскрытых в настоящем описании.
[0115]
При использовании соединения настоящего изобретения или его соли в качестве лекарственного средства, с ним, при необходимости, смешивают фармацевтически приемлемый носитель, и различные типы лекарственных форм могут быть выбраны в зависимости от профилактической или терапевтической цели. Примеры лекарственной формы могут включать любое из перорального средства, инъекции, суппозитория, мази и пластыря. Предпочтительно, выбирают пероральное средство. Такие лекарственные формы могут быть получены общепринятыми способами получения, которые известны специалистам.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает противоопухолевое средство для перорального введения, содержащее соединение настоящего изобретения или его соль в качестве активного ингредиента. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту путем перорального введения. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения при профилактике и/или лечении опухоли путем их перорального введения.
[0116]
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает фармацевтическую композицию, содержащую соединение настоящего изобретения или его соль. Фармацевтическая композиция согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения содержит соединение настоящего изобретения или его соль, и фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения по настоящему изобретению или его соли для получения фармацевтической композиции. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве лекарственного средства.
[0117]
В качестве фармацевтически приемлемых носителей используют различные типы органических или неорганических веществ, которые обычно используют в качестве материалов для получения. Когда соединение настоящего изобретения перерабатывают в твердый препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешанного с соединением настоящего изобретения, могут включать эксципиент, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, покрывающий агент и красящий агент. Когда соединение настоящего изобретения перерабатывают в жидкий препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешанного с соединением настоящего изобретения, могут включать растворитель, солюбилизатор, суспендирующий агент, регулятор тоничности, буфер и успокаивающее средство. Кроме того, добавки для приготовления, такие как антисептик, антиоксидант, подсластитель или стабилизатор, также могут использоваться при необходимости.
[0118]
В случае приготовления твердого препарата для перорального введения к соединению настоящего изобретения добавляют эксципиент и, при необходимости, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, красящий агент, корригирующее вещество и т.п., и после этого могут быть получены таблетка, таблетка с покрытием, гранула, порошковое средство, капсула и т.п. с помощью обычных способов.
В случае приготовления инъекции к соединению настоящего изобретения добавляют регулятор pH, буфер, стабилизатор, регулятор тоничности, местный анестетик и т.п., и после этого могут быть произведены подкожные, внутримышечные и внутривенные инъекции с помощью обычных способов.
[0119]
Количество соединения настоящего изобретения, которое смешивают в каждой из вышеупомянутых стандартных дозированных лекарственных форм, зависит от симптомов субъекта, к которому должно быть применено настоящее соединение, лекарственной формы и тому подобного, и таким образом, количество соединения настоящего изобретения не является постоянным. В целом, предпочтительно, чтобы применяемая доза составляла 0,05-1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае перорального средства, составляла 0,01-500 мг на стандартную лекарственную форму в случае инъекции, и составляла 1-1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае суппозитория.
Суточная доза лекарства, имеющего описанную выше лекарственную форму, различается в зависимости от симптомов, массы тела, возраста, пола и тому подобного субъекта и, таким образом, она не может быть определена в целом. Однако соединение настоящего изобретения может быть введено взрослому (масса тела: 50 кг) в суточной дозе, как правило, 0,05-5000 мг и предпочтительно 0,1-1000 мг.
[0120]
Опухоль, которая является объектом применения настоящего изобретения, не имеет особых ограничений. Примеры опухоли могут включать опухоль головного мозга, рак головы и шеи, рак желудочно-кишечного тракта (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (рак желчного пузыря и/или желчевыводящих путей и т.д.), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (рак толстой кишки, рак прямой кишки и т.д.), и т.д.), рак легких (немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, мезотелиома, и т.д.), рак молочной железы, генитальный рак (рак яичников, рак матки (рак шейки матки, рак эндометрия, и т.д.) и т.д.), рак мочеполовой системы (рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, тестикулярная опухоль, и т.д.), опухоли кроветворной ткани (лейкоз, злокачественная лимфома, множественная миелома, и т.д.), опухоли кости и/или мягких тканей, и рак кожи. Среди них предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, рак желчных протоков или рак матки, и более предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак мочевого пузыря или рак желчных протоков.
[0121]
В одном варианте осуществления опухоль представляет собой опухоль головного мозга. Соединение настоящего изобретения может применяться для лечения симптомов головного мозга, для которых требуется прохождение через гематоэнцефалический барьер. Соединение одного из вариантов осуществления обладает благоприятной проницаемостью через гематоэнцефалический барьер для своей доставки в головной мозг, то есть превосходные свойства проникновения в головной мозг. В качестве показателя проникающих свойств соединения в мозг применяется концентрация соединения в мозге или значение Kp (отношение концентрации препарата в мозге к концентрации препарата в плазме).
Опухоль мозга, подвергаемая лечению соединением настоящего изобретения, включает метастатическую опухоль головного мозга и первичную опухоль головного мозга.
Примеры опухоли головного мозга могут включать, без ограничения перечисленным, метастатическую опухоль головного мозга (например, метастаз в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, и т.п. (предпочтительно рака легких, рака молочной железы или рака желудка)), пилоцитарную астроцитому, диффузную астроцитому, олигодендрому и/или олигодендроастроцитому, анапластическую астроцитому и/или анапластическую олигодендроглиому, анапластическую олигодендроастроцитому, глиобластому, эпендимому, анапластическую эпендимому, ганглиоглиому, центральную нейроцитому, медуллобластому, герминому, злокачественную лимфому центральной нервной системы, менингиому, неврилеммому, GH-секретирующую аденому гипофиза, PRL-секретирующую аденому гипофиза, ACTH-секретирующую аденому гипофиза, нефункциональную аденому гипофиза, краниофарингиому, хордому, гемангиобластому и эпидермоидную опухоль.
ПРИМЕРЫ
[0122]
Далее настоящее изобретение будет описано подробно в приведенных ниже примерах. Однако, эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
В настоящем описании «комнатная температура» обычно означает температуру, которая составляет от приблизительно 10°C до приблизительно 35°C. В дополнение к этому, в следующих примерах применительно к соединениям выражение «%» означает % масс., если не указано иное.
Различные типы реагентов, использованные в примерах, были коммерчески доступными продуктами, если не утверждается иное. Хроматографию на силикагеле проводили с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Ultra, выпускаемого Biotage Japan Ltd. Хроматографию на основном силикагеле проводили с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Isolute Flash-NH2, выпускаемого Biotage Japan Ltd.
Препаративную тонкослойную хроматографию осуществляли, используя Kieselgel TM60F254, Art. 5744, производимый компанией Merck, или NH2 Silica Gel 60F254 Plate Wako, производимый компанией Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
1
Для определения H-ЯМР использовали тетраметилсилан в качестве стандарта и применяли приборы AL400 (400 МГц) производства JEOL, Mercury (400 МГц) производства Varian или Inova (400 МГц) производства Varian. Кроме того, масс-спектр измеряли с использованием Micromass ZQ или SQD, производимых Waters, в соответствии с процедурой электрораспылительной ионизации (ESI) или химической ионизации при атмосферном давлении (APCI). Реакцию при микроволновом облучении проводили с использованием устройства Initiator производства Biotage Japan Ltd.
Сокращения имеют следующие значения.
с: синглет
д: дублет
т: триплет
кв: квартет
дд: двойной дублет
дт: двойной триплет
тд: тройной дублет
тт: тройной триплет
ддд: двойной двойной дублет
ддт: двойной двойной триплет
дтд: двойной тройной дублет
тдд: тройной двойной дублет
м: мультиплет
ушир.: уширенный
ATP: аденозинтрифосфат
ДМСО-d6: дейтерированный диметилсульфоксид
3
CDCl: дейтерированный хлороформ
ЭДТА: этилендиаминтетрауксусная кислота
THF: тетрагидрофуран
DMF: N, N-диметилформамид
ДМСО: диметилсульфоксид
NMP: N-метилпирролидон
HATU: O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат
HPMC: гипромеллоза
2
3
2
PdCl(PPh): дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II)
[0123]
Ссылочный пример 1
Ссылочный пример 1(1)
Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2 -метилпирролидин-1-карбоксилат
Трет-бутил-(2S,4S)-4-гидрокси-2-метилпирролидин-1-карбоксилат (19,0 г) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (13,1 г) растворяли в THF (190 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого к реакционному раствору добавляли трифенилфосфин (37,2 г) и диизопропилазодикарбоксилат (28,1 мл), и затем температуру смеси повышали до комнатной температуры с последующим перемешиванием в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток затем очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением соответствующего связующего соединения. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.
Полученное связующее соединение, THF (114 мл) и аммиачную воду (114 мл) добавляли в баростойкую трубку, и полученную смесь затем перемешивали при 100°С в течение 14 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее выливали в воду (285 мл). Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. После этого осажденное твердое вещество собирали фильтрацией, затем промывали водой и затем сушили с получением представляющего интерес продукта (34,5 г).
1
3
HNMR (CDCl)δ: 8,27 (c,1H) 7,15 (c,1H) 5,55-5,73 (м,2H) 5,12-5,25 (м,1H) 3,86-4,18 (м,2H) 3,43-3,57 (м,1H) 2,59-2,69 (м,1H) 1,92-2,03 (м,1H) 1,48 (c,9H) 1,30-1,40 (м,3H)
ESI-MS m/z 444 (MH+)
[0124]
Ссылочный пример 1(2)
4-Амино-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоновая кислота
Соединение ссылочного примера 1(1) (28,0 г), катализатор 10% палладий на угле (720 мг), NMP (84 мл), метанол (26 мл) и триэтиламин (17,6 мл) добавляли в бароустойчивую трубку, с последующим замещением монооксидом углерода, и полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем добавляли к ней 2 М водный раствор гидроксида натрия (79 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 80°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем фильтровали через целит и далее промывали метанолом. Затем метанол в фильтрате концентрировали при пониженном давлении. Затем добавляли воду и водный слой далее промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. К водному слою добавляли 1 М водный раствор гидросульфата калия для доведения рН до приблизительно 3. Осажденное твердое вещество собирали фильтрацией, затем промывали водой и затем сушили с получением представляющего интерес продукта (23,4 г).
1
H-ЯМР (400MHz, ДМСО-d6)δ: 8,14 (с, 1H) 8,08 (с, 1H) 5,16-4,93 (м,1H) 4,07-3,79 (м,2H) 3,61-3,45 (м,1H) 2,53 (м,1H) 2,33-2,02 (м,1H) 1,42 (c,9H) 1,29 (д, J=6,1 Гц, 3H) ESI-MS m/z 362 (MH+)
[0125]
Примеры
Пример 1(1)
Трет-бутил-4-амино-6-бром-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат
В атмосфере азота соединение ссылочного примера 1(2) (15,0 г) растворяли в хлороформе (150 мл), и затем к полученному выше раствору добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл). Температуру полученной смеси повышали до 60°C и смесь затем перемешивали в течение 2 ч. После этого к реакционной смеси дополнительно добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл) и полученную таким образом смесь затем перемешивали в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли простой трет-бутилметиловый эфир, и осажденное твердое вещество собирали фильтрацией и затем промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и затем к полученному остатку добавляли простой трет-бутилметиловый эфир. Осажденное твердое вещество собирали фильтрацией и затем промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением формы сложного трет-бутилового эфира. Полученное соединение использовали в последующей реакции галогенирования без дополнительной очистки.
Полученную форму сложного трет-бутилового эфира растворяли в хлороформе (140 мл) и затем к полученному выше раствору добавляли N-бромсукцинимид (11,8 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. После этого к реакционной смеси последовательно добавляли хлороформ и 10% водный раствор бисульфита натрия, и полученную смесь затем экстрагировали хлороформом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (13,8 г).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,02 (с, 1H) 5,74-5,13 (м,2H) 4,07-3,64 (м,2H) 2,43-2,29 (м,1H) 2,07-1,97 (м,1H) 1,63 (c,9H) 1,48 (м,12H)
ESI-MS m/z 496,498 (MH+)
[0126]
Пример 1(2)
Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат
Соединение примера 1(1) (11,4 г) растворяли в THF (57 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого к смеси добавляли 4 М раствор хлористого водорода в 1,4-диоксане (114 мл) и полученную таким образом смесь затем перемешивали при 0°С в течение 10 ч. Затем к реакционной смеси добавляли 5 М водный раствор гидроксида натрия (92 мл), ацетонитрил (57 мл), диизопропилэтиламин (20 мл) и акрилоилхлорид (2,0 мл), и полученную смесь затем перемешивали в течение 30 мин. После этого реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (7,72 г).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,26-8,16 (м,1H) 6,62-6,30 (м,2H) 5,81-5,64 (м,1H) 5,33-5,14 (м,1H) 4,81-3,75 (м,3H) 3,07-2,86 (м,1H) 2,67-2,33 (м,1H) 1,69-1,61 (м,9H) 1,60-1,51 (м,3H)
ESI-MS m/z 450,452 (MH+)
[0127]
Пример 1(3)
Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат
2
3
2
1,0 М раствор пропина в DMF (85,7 мл) добавляли к соединению примера 1(2) (7,72 г), ацетонитрилу (154 мл), триэтиламину (7,2 мл), PdCl(PPh) (1,2 г) и йодиду меди (I) (330 мг) с последующим замещением азотом. Затем смесь перемешивали при 70°С в течение 4 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. После этого полученную смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (4,06 г).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,29-8,17 (м,1H) 6,63-6,30 (м,2H) 5,81-5,63 (м,1H) 5,42-5,15 (м,1H) 4,66-3,81 (м,3H) 3,01-2,82 (м,1H) 2,65-2,32 (м,1H) 2,92-2,13 (м,3H) 1,65-1,59 (м,9H) 1,57-1,49 (м,3H)
ESI-MS m/z 410 (MH+)
[0128]
Пример 1(4)
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидинкарбоновая кислота
Соединение примера 1(3) (1,52 г) растворяли в хлороформе (5 мл), и затем к полученному выше раствору добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, и затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении К остатку добавляли хлороформ, и полученную смесь снова концентрировали при пониженном давлении. Остаток сушили при пониженном давлении с получением представляющего интерес продукта (1,25 г).
ESI-MS m/z 354 (MH+)
[0129]
Пример 1(5)
7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
К соединению примера 1(4) (100 мг) в растворе DMF(1,0 мл) добавляли (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амин (89,0 мг), диизопропилэтиламин (0,25 мл) и HATU (215 мг), и полученную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением указанного в заголовке соединения (60 мг).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,51 (д, J=7,3 Гц, 1H) 8,16 (с, 1H) 7,25-7,07 (м,3H) 6,74-6,47 (м,1H) 6,25-6,08 (м,1H) 5,78-5,58 (м,1H) 5,41-5,21 (м,1H) 5,21-5,06 (м,1H) 4,45-4,29 (м,1H) 4,24-3,91 (м,2H) 2,78-2,58 (м,1H) 2,52-2,41 (м,1H) 2,23 (c,3H) 1,48 (д, J=7,1 Гц, 3H) 1,39 (д, J=6,1 Гц, 3H)
ESI-MS m/z 493 (MH+)
[0130]
Пример 2
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,35 (д, J=7,8 Гц,1 H) 8,17-8,13 (м,1H) 7,48-7,23 (м,5H) 6,76-6,46 (м,1H) 6,28-6,06 (м,1H) 5,81-5,58 (м,1H) 5,43-5,02 (м,2H) 4,42-4,28 (м,1H) 4,21-3,96 (м,2H) 2,74-2,59 (м,1H) 2,54-2,41 (м,1H) 2,17 (c,3H) 1,50 (д, J=6,8 Гц, 3H) 1,42-1,33 (м,3H)
ESI-MS m/z 457 (MH+)
[0131]
Пример 3
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропaн-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что 2-фенилпропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,26 (c,1H) 8,16-8,08 (м,1H) 7,44 (дд, J=8,8, 1,2 Гц, 2H) 7,38-7,28 (м,2H) 7,21 (тт, J=7,3, 1,27 Гц, 1H) 6,76-6,50 (м,1H) 6,25-6,10 (м,1H) 5,79-5,62 (м,1H) 5,45-5,19 (м,1H) 4,45-4,30 (м,1H) 4,26-4,01 (м,2H) 2,79-2,42 (м,2H) 2,29-2,22 (м,3H) 1,71 (c,6H) 1,43-1,36 (м,3H)
ESI-MS m/z 471 (MH+)
[0132]
Пример 4
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-1-фенилпропaн-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,35 (ушир.д, J=8,0 Гц,1H) 8,17-8,11 (м,1H) 7,46-7,22 (м,5H) 6,74-6,50 (м,1H) 6,26-6,08 (м,1H) 5,79-5,60 (м,1H) 5,40-5,21 (м,1H) 4,99-4,87 (м,1H) 4,43-4,30 (м,1H) 4,23-3,94 (м,2H) 2,76-2,42 (м,2H) 2,21 (c,3H) 1,95-1,74 (м,2H) 1,44-1,34 (м,3H) 0,91 (т, J=7,3 Гц,3H)
ESI-MS m/z 471 (MH+)
[0133]
Пример 5
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропaн-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что 2-(2-фторфенил)пропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,28 (c,1H) 8,11 (д, J=4,4 Гц,1H) 8,02 (c,1H) 7,47-7,42 (м,1H) 7,29-7,23 (м,1H) 7,15 (т, J=7,7 Гц,1H) 7,02 (ддд, J=12,5, 8,1, 1,1 Гц,1H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,79-5,70 (м,1H) 5,30-5,19 (м,1H) 4,53 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,38-4,25 (м,1,6H) 3,92 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,91-2,78 (м,1H) 2,70-2,60 (м,0,3H) 2,54-2,43 (м,0,7H) 2,28 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,88 (дт, J=10,0, 5,0 Гц, 6H) 1,53 (т, J=6,2 Гц,3H)
ESI-MS m/z 489 (MH+)
[0134]
Пример 6
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-(+)-1-(3-хлорфенил)этиламина гидрохлорид использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,22 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,75 (д, J=7,0 Гц,1H) 7,38 (c,1H) 7,35-7,27 (м,3H) 6,58-6,33 (м,2H) 5,78-5,66 (м,1H) 5,29-5,19 (м,2H) 4,56 (т, J=10,3 Гц,0,7H) 4,39-4,20 (м,1,6H) 3,89 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,94-2,82 (м,1H) 2,66-2,58 (м, 0,3H) 2,46 (дт, J=14,5, 6,1 Гц, 0,7H) 2,18 (д, J=11,0 Гц,3H) 1,60 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55-1,51 (м,3H)
ESI-MS m/z 491,493 (MH+)
[0135]
Пример 7
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-(+)-1-(2,4-дифторфенил)этиламина гидрохлорид использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,20 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,98 (д, J=7,7 Гц, 1H) 7,37-7,31 (м,1H) 6,90-6,81 (м,2H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,78-5,65 (м,1H) 5,44-5,37 (м,1H) 5,30-5,19 (м,1H) 4,56 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,38-4,23 (м,1,6H) 3,88 (т,J=8,8 Гц, 0,7H) 2,94-2,83 (м,1H) 2,66-2,57 (м, 0,3H) 2,51-2,42 (м, 0,7H) 2,27 (д, J=9,2 Гц,3H) 1,61 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,56-1,51 (м,3H)
ESI-MS m/z 493 (MH+)
[0136]
Пример 8
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,40 (д, J=8,8 Гц,1H) 8,16 (c,1H) 7,44 (c,5H) 6,58-6,38 (м,2H) 5,92-5,84 (м,1H) 5,81-5,69 (м,1H) 5,29-5,19 (м,1H) 4,55 (т, J=10,3 Гц, 0,7H) 4,41-4,24 (м, 1,6H) 3,91 (т, J=8,6 Гц, 0,7H) 2,92-2,80 (м,1H) 2,70-2,61 (м, 0,3H) 2,54-2,46 (м, 0,7H) 2,35 (д, J=8,4 Гц,3H) 1,54 (т, J=7,3 Гц, 3H)
ESI-MS m/z 511 (MH+)
[0137]
Пример 9
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропaн-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 1(3), и того, что 2-фенилпропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,15 (c,1H) 8,00 (c,1H) 7,44 (д, J=7,7 Гц,2H) 7,37 (т, J=7,7 Гц,2H) 7,32-7,27 (м, 1H) 6,66-6,30 (м,2H) 5,81-5,69 (м,1H) 5,38-5,24 (м,1H) 4,48 (т, J=9,9 Гц, 0,7H) 4,42-4,29 (м,1,6H) 4,22 (т, J=10,4 Гц, 0,7H) 2,77-2,68 (м,1H) 2,67-2,60 (м, 0,3H) 2,59-2,52 (м, 0,7H) 1,83 (c,6H) 1,60-1,52 (м,4H) 1,08-1,01 (м,2H) 0,92-0,88 (м,2H)
ESI-MS m/z 497 (MH+)
[0138]
Пример 10
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 1(3), и того, что (R)-(+)-1-(2,3-дифторфенил)этиламин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,17 (д, J=4,0 Гц,1H) 8,04 (д, J=8,1 Гц, 1H) 7,15-7,05 (м,3H) 6,58-6,36 (м,2H) 5,80-5,68 (м,1H) 5,49-5,42 (м,1H) 5,34-5,24 (м,1H) 4,52 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,37-4,23 (м, 1,6H) 3,92 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,86-2,76 (м,1H) 2,69-2,63 (м, 0,3H) 2,52-2,46 (м, 0,7H) 1,73-1,63 (м,4H) 1,55 (т, J=5,3 Гц, 3H) 1,14-1,07 (м,2H) 1,01-0,92 (м,2H)
ESI-MS m/z 519 (MH+)
[0139]
Пример 11
Пример 11(1)
Трет-бутил(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат
Добавляли соединение эталонного примера 1(2) (1,00 г), (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,503 г), диизопропилэтиламин (1,79 г) и N, N-диметилформамид (10 мл), и затем добавляли HATU (1,58 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После этого к реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением амидной формы (1,53 г). Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.
К амидной форме (1,53 г) добавляли хлороформ (15 мл), и затем полученную смесь охлаждали до 0°C. После этого в реакционную смесь добавляли N-бромсукцинимид (0,88 г), и затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (1,39 г).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,21 (с, 1H) 7,42-7,28 (м,5H) 6,97 (д, J=7,3 Гц,1H) 5,36-5,29 (м,1H) 5,20-5,07 (м,1H) 4,30 (т, J=10,3 Гц,1H) 4,04-3,72 (м,2H) 3,00-2,86 (м,1H) 2,38 (дт, J=14,3, 6,0 Гц, 1H) 1,63 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,53-1,43 (м,12H)
ESI-MS m/z 543,545 (MH+)
[0140]
Пример 11(2)
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
К соединению примера 11(1) (600 мг) добавляли хлороформ (3 мл) и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого в реакционную смесь добавляли трифторуксусную кислоту (4,44 г) и полученную таким образом смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем к остатку добавляли ацетонитрил (5 мл). Полученную смесь снова концентрировали при пониженном давлении с получением аминной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.
К полученной аминной форме добавляли ацетонитрил (3 мл), и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли акрилоилхлорид (99,9 мг) и диизопропилэтиламин (713 мг) и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (этилацетат:метанол) с получением представляющего интерес продукта (281 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,20 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,42-7,36 (м,4H) 7,32-7,28 (м,1H) 7,00-6,94 (м,1H) 6,57-6,33 (м,2H) 5,76-5,66 (м,1H) 5,36-5,29 (м, 1H) 5,14-5,08 (м,1H) 4,71 (т, J=9,9 Гц, 0,7H) 4,42-4,23 (м,1,6H) 3,83 (т, J=8,6 Гц, 0,7H) 3,03-2,92 (м,1H) 2,60-2,57 (м, 0,3H) 2,44-2,40 (м, 0,7H) 1,64 (д, J=6,6 Гц, 3H) 1,56 (дд, J=11,7, 6,2 Гц, 3H)
ESI-MS m/z 497,499 (MH+)
[0141]
Пример 11(3)
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Добавляли соединение примера 11(2) (65 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий (9,2 мг), йодид меди(I) (5,0 мг), циклопропилацетилен (13,0 мг), триэтиламин (39,7 мг) и N, N-диметилформамид (1,3 мл), и затем внутренний объем реакционной системы замещали азотом. После этого смесь перемешивали при 70°С в течение 2,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол) с получением представляющего интерес продукта (50 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,22 (д, J=5,1 Гц,1H) 7,82 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,43-7,35 (м,4H) 7,30 (т, J=6,8 Гц,1H) 6,58-6,34 (м,2H) 5,77-5,66 (м,1H) 5,35-5,20 (м,2H) 4,54 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,35-4,25 (м, 1,6H) 3,88 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,90-2,78 (м,1H) 2,65-2,56 (м, 0,3H) 2,49-2,40 (м, 0,7H) 1,63 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,56-1,45 (м,4H) 1,03-0,91 (м,2H) 0,84-0,69 (м,2H)
ESI-MS m/z 483 (MH+)
[0142]
Пример 12
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 3,3-диметил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,22 (д,J=5,9 Гц, 1H) 7,75 (д, J=7,7 Гц, 1H) 7,38 (дт, J=15,5, 7,1 Гц, 4H) 7,31-7,25 (м,1H) 6,57-6,34 (м,2H) 5,77-5,65 (м,1H) 5,44-5,35 (м,1H) 5,33-5,15 (м,1H) 4,63 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,40-4,20 (м, 1,6H) 3,89 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,90-2,76 (м,1H) 2,65-2,55 (м, 0,3H) 2,49-2,40 (м, 0,7H) 1,85 (c,1H) 1,64 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55 (д, J=5,9 Гц,3H) 1,26 (c,9H)
ESI-MS m/z 499 (MH+)
[0143]
Пример 13
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 3-метокси-3-метил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,17 (с, 1H) 7,61 (д, J=7,7 Гц,1H) 7,43-7,35 (м,4H) 7,30 (д, J=7,0 Гц,1H) 6,57-6,33 (м,2H) 5,81-5,68 (м,1H) 5,43-5,33 (м,1H) 5,29-5,12 (м,1H) 4,59 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,38-4,22 (м,1,6H) 3,92 (т, J=8,6 Гц,0,7H) 3,30 (c,3H) 2,86-2,72 (м,1H) 2,70-2,60 (м, 1,3H) 2,52-2,44 (м, 0,7H) 1,64 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55 (т, J=5,5 Гц,3H) 1,46 (д, J=2,2 Гц,6H)
ESI-MS m/z 515 (MH+)
[0144]
Пример 14
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 1-триметилсилил-1-бутин и фторид тетра-н-бутиламмония использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,26-8,25 (м,1H) 7,79 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,42-7,36 (м,4H) 7,32-7,30 (м,1H) 6,57-6,37 (м,2H) 5,76-5,66 (м,1H) 5,33-5,20 (м,2H) 4,57 (т, J=10,3 Гц,0,7H) 4,36-4,22 (м,1,6H) 3,88 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,92-2,81 (м,1H) 2,65-2,57 (м,0,3H) 2,48-2,38 (м, 2,7H) 1,63 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,54-1,51 (м,3H) 1,17-1,12 (м,3H)
ESI-MS m/z 471 (MH+)
[0145]
Пример 15
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 2-(2-фторфенил)пропaн-2-амин использовали вместо (R)-(+)-1-фенилэтиламина в примере 11(1), и того, что 3-метил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 7,92 (с, 1H) 7,44 (т, J=7,9 Гц,1H) 7,30-7,23 (м,1H) 7,14 (т, J=7,5 Гц,1H) 7,02 (дд, J=12,6, 8,2 Гц,1H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,80-5,69 (м,1H) 5,33-5,16 (м,1H) 4,58 (т, J=9,9 Гц,0,7H) 4,38-4,23 (м,1,6H) 3,91 (т, J=8,4 Гц,0,7H) 3,03-2,93 (м,1H) 2,89-2,75 (м,1H) 2,69-2,60 (м,0,3H) 2,53-2,43 (м, 0,7H) 1,88 (c,6H) 1,55 (д, J=5,1 Гц, 3H) 1,36 (д, J=6,6 Гц,6H)
ESI-MS m/z 517 (MH+)
[0146]
Пример 16
Пример 16(1)
Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-((тозилокси)метил)пирролидин-1-карбоксилат
Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилат (2,0 г) растворяли в метиленхлориде (20 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого в реакционный раствор добавляли 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (2,2 г) и тозилатхлорид (1,9 г), и затем температуру смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 4 ч. После этого к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (4,32 г).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 7,78 (д, J=8,1 Гц,2H), 7,42-7,29 (м,7H), 4,57-4,41 (м,2H), 4,39-3,96 (м,4H), 3,61-3,20 (м,2H),2,46 (c,3H), 2,27-2,02 (м,2H), 1,48-1,31 (м,9H)
+
ESI-MS m/z 462 (MH)
[0147]
Пример 16(2)
Трет-бутил-(2S,4S)-4-(бензилокси)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат
В атмосфере азота йодид меди (2,04 г) суспендировали в простом диэтиловом эфире (12 мл) и полученную суспензию затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли 1,04 М раствор метиллития в простом диэтиловом эфире (0,36 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 30 мин. После этого в реакционную смесь добавляли раствор соединения примера 16(1) (1,98 г) в метиленхлориде (4,0 мл), и затем температуру полученной смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до 0°С, и затем к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (707 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 7,42-7,25 (м,5H), 4,66-4,40 (м,2H), 4,17-4,03 (м,1H), 4,00-3,26 (м,3H), 2,24-2,09 (м,1H), 1,96-1,71 (м,2H), 1,48 (c,9H),1,45- 1,31 (м,1H), 0,86 (т, J=7,4 Гц, 3H)
+
ESI-MS m/z 306 (MH)
[0148]
Пример 16(3)
Трет-бутил-(2S,4S)-2-этил-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилат
Соединение примера 16(2) (1,06 г) и катализатор 10% палладий на угле (160 мг) суспендировали в этаноле (11 мл) и THF (11 мл) с последующим замещением водородом, и продукт реакции затем перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После этого реакционную смесь фильтровали через целит и затем промывали этанолом, и фильтрат затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (709 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 4,46-4,36 (м,1H), 4,02-3,81 (м,1H), 3,71-3,35 (м,2H), 2,15-1,99 (м,1H), 1,95-1,72 (м,2H), 1,49 (c,9H), 1,46-1,35 (м,1H), 0,86 (т, J=7,5 Гц, 3H)
+
ESI-MS m/z 216 (MH)
[0149]
Пример 16(4)
Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат
Соединение примера 16(3) (709 мг) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (1,11 г) растворяли в THF (7,1 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли трифенилфосфин (1,3 г) и диизопропилазодикарбоксилат (1,00 мл), и температуру полученной смеси затем повышали до комнатной температуры, с последующим перемешиванием смеси в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток затем очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением соответствующего связующего соединения. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. В баростойкую трубку добавляли полученное связующее соединение, THF (5,4 мл) и аммиачную воду (5,4 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 100°С в течение 14 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее выливали в воду (12,8 мл), и затем смешанный раствор экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (797 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,29 (c,1H), 7,14 (c,1H), 5,67 (ушир.c,2H), 5,32-5,09 (м,1H), 4,24-4,08 (м,1H), 3,95-3,79 (м,1H), 3,46 (дд, J=9,3, 11,0 Гц, 1H), 2,70-2,55 (м,1H), 2,06-1,95 (м,1H), 1,59-1,51 (м,2H), 1,49 (c,9H), 0,91 (т, J=7,5 Гц, 3H)
+
ESI-MS m/z 458 (MH)
[0150]
Пример 16(5)
Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат
Соединение примера 16(4) (797 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий (25 мг) и (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,55 мл) суспендировали в DMF (8,0 мл) с последующим замещением монооксидом углерода, и продукт реакции затем перемешивали при 80°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем к ней добавляли воду, и далее полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением соответствующей амидной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. Полученную амидную форму растворяли в ацетонитриле (8,2 мл), и полученный раствор затем охлаждали до -10°С. После этого к раствору медленно по каплям добавляли раствор N-бромсукцинимида (457 мг) в ацетонитриле (8,2 мл), и реакционную смесь затем перемешивали в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляли водный раствор сульфита натрия и водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (650 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,23 (c,1H), 7,49-7,29 (м,5H), 6,98 (д, J=7,4 Гц, 1H), 5,41-5,28 (м,1H), 5,24-5,04 (м,1H), 4,38-4,22 (м,1H), 4,07-3,68 (м,1H), 3,19-2,83 (м,1H), 2,43-2,29 (м,1H), 2,25-1,67 (м,3H), 1,66 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,51 (c,9H), 0,98 (т, J=7,4 Гц, 3H)
+
ESI-MS m/z 557,559 (MH)
[0151]
Пример 16(6)
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
К соединению примера 16(5) (650 мг) добавляли ацетонитрил (9,7 мл) и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли йодид натрия (1,05 г) и триметилсилилхлорид (0,89 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого к реакционной смеси последовательно добавляли этанол (9,7 мл), изопропилэтиламин (2,0 мл) и ангидрид акриловой кислоты (0,16 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляли аммиачную воду и воду, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (256 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,27-8,16 (м,1H), 7,47-7,29 (м,5H), 6,98 (д, J=7,3 Гц,1H), 6,61-6,29 (м,2H), 5,84-5,63 (м,1H), 5,43-5,26 (м,1H), 5,22-5,01 (м,1H), 4,80-3,82 (м,3H), 3,23-2,92 (м,1H), 2,58-2,30 (м,1H), 2,22-1,79 (м,2H), 1,66 (д, J=7,0 Гц, 3H),1,07-0,96 (м,3H)
+
ESI-MS m/z 511,513 (MH)
[0152]
Пример 16(7)
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
2
3
2
1,0 М раствор пропина в DMF (0,70 мл) добавляли к соединению примера 16(6) (120 мг), ацетонитрилу (1,2 мл), триэтиламину (0,10 мл), PdCl(PPh) (8,2 мг) и йодиду меди(I) (0,4 мг), с последующим замещением азотом, и смесь затем перемешивали при 60°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (этилацетат:метанол) с получением представляющего интерес продукта (102 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,26 (c,1H), 7,79 (ушир.д, J=7,0 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м,5H), 6,58-6,31 (м,2H), 5,80-5,65 (м,1H), 5,33-5,15 (м,2H), 4,59-3,85 (м,3H), 3,03-2,33 (м,2H), 2,25-1,70 (м,5H), 1,65 (д, J=6,8 Гц, 6H), 1,09-0,91 (м,3H)
+
ESI-MS m/z 471 (MH)
[0153]
Пример 17
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 16(7).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,31-8,16 (м,1H), 7,84 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м,5H), 6,64-6,32 (м,2H), 5,82-5,67 (м,1H), 5,39-5,17 (м,2H), 4,67-3,81 (м,3H), 3,02-2,80 (м,1H), 2,62-1,71 (м,3H), 1,65 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,58-1,47 (м,1H), 1,06-0,92 (м,5H), 0,85-0,70 (м,2H)
+
ESI-MS m/z 497 (MH)
[0154]
Пример 18
7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что трет-бутил-(2R,4S)-4-гидрокси-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбоксилат использовали вместо соединения примера 16(3) в примере 16(4), и что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 М раствора пропина в DMF в примере 16(7).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,29-8,22 (м,1H), 7,86-7,80 (м,1H), 7,36-7,44 (м,4H), 7,34-7,28 (м,1H), 6,48-6,37 (м,2H), 5,78-5,69 (м,1H), 5,29-5,15 (м,2H), 4,55-4,30 (м,2H), 3,96-3,65 (м,3H), 3,42 (c,3H), 3,18-3,06 (м, 0,3H), 2,90-2,80 (м, 0,3H), 2,64-2,58 (м, 0,3H), 2,47-2,35 (м, 0,7H),1,64 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,58-1,47 (м,1H), 1,04-0,94 (м,2H), 0,87-0,69 (м,2H)
+
ESI-MS m/z 513 (MH)
[0155]
Пример 19
7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что трет-бутил-(2R,4S)-2-(этоксиметил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксамид использовали вместо соединения примера 16(3) в примере 16(4), и что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 М раствора пропина в DMF в примере 16(7).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,28-8,18 (м,1H), 7,84 (ушир.д, J=7,0 Гц,1H), 7,47-7,29 (м,5H), 6,82-6,35 (м,2H), 5,79-5,68 (м,1H), 5,40-5,14 (м,2H), 4,63-3,53 (м,7H), 3,20-2,79 (м,1H), 2,69-2,40 (м,1H), 1,67-1,63 (м,3H), 1,59-1,47 (м,1H),1,22 (т, J=7,0 Гц, 3H), 1,05-0,92 (м,2H), 0,87-0,72 (м,2H)
+
ESI-MS m/z 527 (MH)
[0156]
Сравнительный пример 1
4-Амино-N-(4-(метоксиметил)фенил)-7-(1-метилциклопропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали способом, описанным в примере 95 Международной публикации WO 2017/146116.
ESI-MS m/z 390 (MH+)
[0157]
Сравнительный пример 2
1-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(4-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)-2,3-диметилфенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали способом, описанным в примере 79 Международной публикации WO 2017/038838.
ESI-MS m/z 505 (MH+)
[0158]
Сравнительный пример 3
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(циклогексилметил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклогексилметанамин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ:8,68-8,31 (м,1H) 8,20-8,10 (м,1H) 8,09-7,97 (м,1H) 7,59-7,20 (м,1H) 6,74-6,49 (м,1H) 6,25-6,09 (м,1H) 5,78-5,60 (м,1H) 5,40-5,20 (м,1H) 4,44-4,29 (м,1H) 4,23-3,92 (м,2H) 3,25-3,12 (м,2H) 2,76-2,40 (м,2H) 2,25 (c,3H) 1,81-1,45 (м,5H) 1,43-1,34 (м,3H) 1,30-0,90 (м,6H)
ESI-MS m/z 449 (MH+)
[0159]
Сравнительный пример 4
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-метилбензил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что o-толилметанамин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
H-ЯМР (DMSO-d6)δ:8,37-8,27 (м,1H) 8,19-8,09 (м,1H) 7,39-7,30 (м,1H) 7,26-7,11 (м,4H) 6,68-6,48 (м,1H) 6,24-6,07 (м,1H) 5,80-5,60 (м,1H) 5,36-5,17 (м,1H) 4,52 (д, J=5,7 Гц, 2H) 4,42-4,28 (м,1H) 4,22-3,92 (м,2H) 2,73-2,42 (м,2H) 2,33 (c,3H) 2,02 (c,3H) 1,43-1,32 (м,3H)
ESI-MS m/z 457 (MH+)
[0160]
Сравнительный пример 5
7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-метил-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-N-метил-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,23 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,50-7,28 (м,4H) 7,09-6,88 (м,1H) 6,57-6,34 (м,2H) 5,79-5,64 (м,1H) 5,22 (т, J=9,3 Гц, 1H) 4,48 (т, J=9,7 Гц, 0,6H) 4,39-4,20 (м,1,9H) 3,90 (т, J=8,6 Гц, 0,5H) 2,85 (c,4H) 2,66-2,63 (м, 0,4H) 2,51-2,44 (м, 0,6H) 2,07 (c,2H) 1,66 (д, J=4,8 Гц, 3H) 1,52 (д, J=5,9 Гц, 3H)
ESI-MS m/z 471 (MH+)
[0161]
Сравнительный пример 6(1)
Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат
2
3
2
1,0 М раствор пропина в DMF (2,1 мл) добавляли к соединению примера 11(1) (230 мг), ацетонитрилу (4,6 мл), триэтиламину (0,29 мл), PdCl(PPh) (5,9 мг) и йодиду меди(I) (1,6 мг), с последующим замещением азотом, и полученную смесь затем перемешивали при 70°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (193 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,23 (с, 1H) 7,79 (д, J=6,8 Гц, 1H) 7,46-7,27 (м,5H) 5,40-5,17 (м,2H) 4,28-3,64 (м,3H) 2,85-2,68 (м,1H) 2,46-2,36 (м,1H) 2,15-1,97 (м,3H) 1,62 (д, J=6,8 Гц, 3H) 1,56-1,32 (м,12H)
ESI-MS m/z 503 (MH+)
[0162]
Сравнительный пример 6(2)
4-Амино-7-((3R,5S)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида гидрохлорид
К соединению сравнительного примера 6(1) (530 мг) добавляли 4 М раствор соляной кислоты в 1,4-диоксане (5 мл), и полученную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, с получением представляющего интерес продукта (420 мг).
ESI-MS m/z 403 (MH+)
[0163]
Сравнительный пример 6(3)
4-Амино-7-((3R,5S)-1-((E)-бут-2-енoил)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид
К соединению сравнительного примера 6(2) (18 мг) добавляли ацетонитрил (0,5 мл), и затем полученную смесь охлаждали до 0°C. После этого в реакционную смесь добавляли акрилоилхлорид (0,004 мл) и диизопропилэтиламин (0,036 мл), и полученную таким образом смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем подвергали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (вода: ацетонитрил (0,1% муравьиная кислота)) с получением представляющего интерес продукта (8,7 мг).
1
3
H-ЯМР (CDCl)δ: 8,31 (с, 1H) 8,14 (д, J=6,2 Гц, 1H) 7,77 (д, J=7,0 Гц, 1H) 7,39-7,36 (м,4H) 7,33-7,31 (м,1H) 7,03-6,90 (м,1H) 6,06 (дд, J=14,3 Гц, 1H) 5,28-5,17 (м,2H) 4,48 (т, J=10,1 Гц,1H) 4,35-4,20 (м,2H) 3,88 (т, 8,8 Гц, 1H) 2,84-2,76 (м,1H) 2,64-2,40 (м,1H) 2,05 (д, J=10,6 Гц,3H) 1,92 (д, J=6,6 Гц,1H) 1,85 (д, J=7,0 Гц, 2H) 1,62 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,55 (дд, J=9,0, 5,7 Гц, 3H)
ESI-MS m/z 471 (MH+)
[0164]
Соединения, синтезированные в описанных выше примерах и сравнительных примерах, показаны ниже.
[Таблица B]
Пример №
Структурная формула
Пример №
Структурная формула
1
<img file="00000006.jpg" he="39" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
2
<img file="00000007.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
3
<img file="00000008.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
4
<img file="00000009.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
5
<img file="00000010.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
6
<img file="00000011.jpg" he="35" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
7
<img file="00000012.jpg" he="35" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
8
<img file="00000013.jpg" he="36" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
9
<img file="00000014.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
10
<img file="00000015.jpg" he="35" wi="30" img-content="undefined" img-format="jpg" />
11
<img file="00000016.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
12
<img file="00000017.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
13
<img file="00000018.jpg" he="35" wi="30" img-content="undefined" img-format="jpg" />
14
<img file="00000019.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
15
<img file="00000020.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
16
<img file="00000021.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
17
<img file="00000022.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
18
<img file="00000023.jpg" he="37" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
19
<img file="00000024.jpg" he="38" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0165]
[Таблица C]
Сравн. прим. №
Структурная формула
Сравн. прим. №
Структурная формула
1
<img file="00000025.jpg" he="41" wi="27" img-content="undefined" img-format="jpg" />
2
<img file="00000026.jpg" he="45" wi="30" img-content="undefined" img-format="jpg" />
3
<img file="00000027.jpg" he="35" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
4
<img file="00000028.jpg" he="36" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
5
<img file="00000029.jpg" he="34" wi="28" img-content="undefined" img-format="jpg" />
6
<img file="00000030.jpg" he="35" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0166]
Экспериментальный пример 1. Измерение ингибирующего эффекта (in vitro) на активность фосфорилирования HER2
2
Для определения условий для способа измерения ингибирующей активности in vitro соединения в отношении активности фосфорилирования HER2, основанного на отчете о HER2 киназной реакции с использованием в качестве субстрата пептида, имеющего такую же последовательность (5-FAM-EEPLYWSFPAKKK-CONH), что и пептид ProfilerPro Peptide 22 от PerkinElmer (Xie H et al., PLoS One.2011; 6(7): e21487), в качестве субстрата использовали пептид ProfilerPro Peptide 22. Очищенный рекомбинантный человеческий белок HER2, используемый в настоящем испытании, приобретали у Carna Biosciences, Inc. Что касается измерения ингибирующей активности соединений, сначала соединение настоящего изобретения разбавляли поэтапно диметилсульфоксидом (ДМСО). Впоследствии, белок HER2, субстратный пептид (конечная концентрация: 1 мкM), хлорид марганца (конечная концентрация: 10 мМ), АТФ (конечная концентрация: 5 мкM), а также соединение настоящего изобретения в растворе ДМСО (конечная концентрация ДМСО: 5%) добавляли в буфер для киназной реакции (13,5 мМ Трис (рН 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,009% Tween 20), и затем полученную смесь инкубировали при 25°C в течение 30 мин, чтобы провести киназную реакцию. К реакционному раствору добавляли ЭДТА до конечной концентрации 30 мМ, чтобы остановить реакцию. И, наконец, используя ридер LabChip (зарегистрированный товарный знак) EZ Reader II (Perkin Elmer), нефосфорилированный субстратный пептид (S) и фосфорилированный пептид (P) разделяли и детектировали в соответствии с микроканальным капиллярным электрофорезом. На основании высот пиков S и P получали количество реакционной среды фосфорилирования, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% реакции фосфорилирования, определяли как значение IC50 (нМ). Результаты показаны в таблице 1.
[0167]
Экспериментальный пример 2. Измерение ингибирующего действия (in vitro) в отношении активности фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20 (HER2ex20insYVMA)
Для определения условий для способа измерения ингибирующей активности in vitro соединения в отношении активности фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20, как и в случае с HER2, в качестве субстрата использовали пептид ProfilerPro Peptide 22. Очищенный рекомбинантный человеческий инсерционный мутантный белок HER2 экзона 20 (A775_G776insYVMA) показан в SEQ ID NO: 7 и был приобретен у SignalChem. Что касается измерения ингибирующей активности соединений, сначала соединение настоящего изобретения разбавляли поэтапно диметилсульфоксидом (ДМСО). Впоследствии, инсерционный мутантный белок HER2 экзона 20 и соединение настоящего изобретения в растворе ДМСО (конечная концентрация ДМСО: 5%) добавляли в буфер для киназной реакции (13,5 мМ Трис (рН 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,009% Tween 20), и полученную смесь затем предварительно инкубировали при 25°C в течение 30 мин. После этого в реакционную смесь добавляли субстратный пептид (конечная концентрация: 1 мкM), хлорид марганца (конечная концентрация: 25 мM), хлорид магния (конечная концентрация: 20 мМ) и АТФ (конечная концентрация: 200 мкM), и полученную таким образом смесь затем инкубировали при 25°C в течение 220 мин, чтобы провести киназную реакцию. К реакционному раствору добавляли ЭДТА до конечной концентрации 30 мМ, чтобы остановить реакцию. И, наконец, используя ридер LabChip (зарегистрированный товарный знак) EZ Reader II (Perkin Elmer), нефосфорилированный субстратный пептид (S) и фосфорилированный пептид (P) разделяли и детектировали в соответствии с микроканальным капиллярным электрофорезом. На основании высот пиков S и P получали количество реакционной среды фосфорилирования, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% реакции фосфорилирования, определяли как значение IC50 (нМ). Результаты показаны в таблице 1.
[0168]
Таблица 1
Пример №
HER2 ингибирующая активностьзначение IC50 (нM)
HER2ex20insYVMA ингибирующая активностьзначение IC50 (нM)
1
2,7
0,34
2
2,5
< 0,30
3
5,8
< 0,30
4
3,9
0,37
5
7,7
0,38
6
2,8
< 0,30
7
4,9
0,39
8
10
< 0,30
9
5,6
0,32
10
2,2
< 0,30
11
3,2
< 0,30
12
3,4
0,39
13
5,2
0,44
14
2,2
< 0,30
15
4,6
0,42
16
3,3
0,44
17
2,9
0,54
18
2,3
< 0,30
19
4,4
1,1
Сравн. прим. 1
> 10000
> 10000
Сравн. прим. 2
19
4,4
Сравн. прим. 3
630
380
Сравн. прим. 4
54
11
Сравн. прим. 5
130
14
Сравн. прим. 6
390
> 10000
[0169]
Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении фосфорилирования HER2 и в отношении фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20.
[0170]
Экспериментальный пример 3. Измерение ингибирующей рост активности в отношении HER2-экспрессирующей клеточной линии
Клетки SK-BR-3 в качестве клеточной линии рака молочной железы человека, сверхэкспрессирующей HER2, суспендировали в среде McCoy's 5a (производства Life Technologies) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. Клеточную суспензию высевали в каждую лунку 384-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. После этого соединение по настоящему изобретению растворяли в ДМСО и соединение разбавляли до 500-кратной конечной концентрации в ДМСО. Соединение в растворе ДМСО разбавляли раствором ДМСО или средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,2%. Полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) и затем рассчитывали процент ингибирования роста в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).
Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100
T: Интенсивность испускания из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение
C: Интенсивность испускания из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение
Результаты приведены в следующей ниже таблице 2.
[0171]
Экспериментальный пример 4. Измерение ингибирующей рост активности в отношении клеточной линии, экспрессирующей инсерционный мутант HER2 экзона 20
Ингибирующую рост активность в отношении инсерционного мутанта HER2 экзона 20 измеряли с использованием клеток Ba/F3, которые представляли собой клеточную линию предшественников В-лимфоцитов мыши, в которую был введен ген человеческого инсерционного мутанта HER2 экзона 20. Клетки Ba/F3 поддерживали в среде RPMI-1640 (Thermo Fisher Scientific) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 Ед/мл пенициллина, 100 μг/мл стрептомицина (Thermo Fisher Scientific) и 1 нг/мЛ мышиного интерлейкина-3 (mIL-3) (CST). После этого вектор pcDNA3.1-hyg(+), в который были включены ген человеческого инсерционного мутанта HER2 экзона 20 (A775_G776insYVMA (HER2ex20insYVMA)), связывающая внутреннюю рибосому последовательность (IRES) и ген Kusabira-Orange, был введен в клетки Ba/F3 в соответствии с методом электропорации с использованием набора Amaxa (зарегистрированный товарный знак) Cell Line Nucleofector (зарегистрированный товарный знак) Kit V. Клетки Ba/F3, экспрессирующие инсерционный мутант HER2 экзона 20 (Ba/F3-HER2insYVMA), которые отбирали с помощью гидромицина В (Nacalai Tesque), демонстрировали mIL-3-независимый рост.
После оценки ингибирующей клеточный рост активности, клетки Ba/F3-HER2insYVMA суспендировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клеточную суспензию высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. Соединение настоящего изобретения растворяли в ДМСО и затем разбавляли ДМСО или средой, используемой в суспензии клеток. Полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,2%. Полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) и затем рассчитывали процент ингибирования роста в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).
Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100
T: Интенсивность испускания из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение
C: Интенсивность испускания из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение
Результаты приведены в следующей ниже таблице 2.
[0172]
Таблица 2
Пример №
Активность ингибирования роста клеток SK-BR-3значение IC50 (нM)
Активность ингибирования роста клеток HER2ex20insYVMAзначение IC50 (нM)
1
9,3
17
2
2,8
12
3
4,5
25
4
5,6
20
5
4,0
14
6
10
28
7
12
40
8
14
26
9
4,2
24
10
13
29
11
6,6
29
12
17
43
13
14
23
14
8,1
27
15
7,0
40
16
1,4
9,7
17
4,0
20
18
3,4
14
19
17
50
Сравн. прим. 1
> 10000
> 10000
Сравн. прим. 2
25
1900
Сравн. прим. 3
4300
3400
Сравн. прим. 4
340
900
Сравн. прим. 5
400
1300
Сравн. прим. 6
3000
4100
[0173]
Из приведенных выше результатов было установлено, что группа соединений настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей рост клеток активностью даже в отношении экспрессирующей HER2 клеточной линии (SK-BR-3), а также в отношении клеточной линии, экспрессирующей инсерционный мутант HER2 экзона 20 (Ba/F3-HER2insYVMA).
[0174]
Экспериментальный пример 5. Измерение ингибирующей рост активности в отношении HER2-экспрессирующей клеточной линии (NCI-N87)
Клетки NCI-N87 в качестве клеточной линии рака желудка человека, сверхэкспрессирующей HER2 (American Type Culture Collection, кат. № ATCC (зарегистрированный товарный знак) CRL-5822), суспендировали в среде RPMI1640 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. После этого, клеточную суспензию высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. После этого соединение по настоящему изобретению растворяли в ДМСО и соединение разбавляли до 1000-кратной конечной концентрации в ДМСО. Соединение в растворе ДМСО разбавляли средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,1%. Что касается контрольной лунки, то ДМСО разбавляли средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,1%. После добавления раствора лекарственного средства полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) в соответствии с протоколами, рекомендованными Promega. Процент ингибирования роста рассчитывали в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).
Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100
T: Интенсивность испускания из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение
C: Интенсивность испускания из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение
Результаты приведены в следующей ниже таблице 3.
[0175]
Таблица 3
Пример №
Активность ингибирования роста клеток NCI-N87значение IC50 (нM)
1
10,7
2
3,0
3
4,7
4
5,6
5
7,0
6
8,5
7
11,1
8
9,7
9
6,2
10
10,5
11
9,9
12
15,0
13
11,7
14
9,1
15
11,6
16
0,9
17
2,2
18
2,6
19
7,9
[0176]
Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей рост клеток активностью даже в отношении сверхэкспрессирующей HER2 клеточной линии (NCI-N87).
[0177]
Экспериментальный пример 6. Оценка пероральной абсорбируемости
Соединение настоящего изобретения суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 н. соляной кислоте, и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сут. Через 0,5, 1, 2, 4 и 6 ч после окончания перорального введения из лицевой вены через определенные интервалы времени отбирали кровь для получения плазмы. Концентрацию соединения в полученной плазме измеряли с помощью ЖХМС/МС и оценивали пероральную абсорбируемость соединения по настоящему изобретению.
Результаты приведены в следующей ниже таблице 4.
[0178]
Таблица 4
Пример №
AUC 0-6 ч (мкM⋅ч)
Пример №
AUC 0-6 ч (мкM⋅ч)
1
50
2
15
3
24
4
12
5
20
6
17
7
15
8
15
9
51
10
50
11
31
12
36
13
18
14
27
15
34
16
15
17
21
18
15
19
6,1
Сравн. прим. 2
1,5
[0179]
Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения содержалось в достаточной концентрации в плазме, так что данное соединение проявляло благоприятную пероральную абсорбируемость. В отличие от этого, соединение сравнительного примера 2 обладало пероральной абсорбируемостью, которая была более чем в 4 раза слабее, чем у соединения настоящего изобретения.
[0180]
Экспериментальный пример 7. Оценка свойств проникновения в головной мозг
Соединение настоящего изобретения суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 н. соляной кислоте, и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сут. Через 0,5 ч после окончания перорального введения из лицевой вены отбирали кровь и весь головной мозг вырезали для получения образцов плазмы и головного мозга. К полученному образцу головного мозга добавляли воду в объеме, в 3 раза превышающем объем образца мозга, и полученный продукт затем гомогенизировали с помощью ультразвукового гомогенизатора для получения гомогената головного мозга. Концентрацию соединения в полученной плазме и гомогенате головного мозга измеряли с помощью ЖХМС/МС, и свойства проникновения в головной мозг данного соединения оценивали по концентрации соединения в головном мозге/плазме.
Результаты приведены в следующей ниже таблице 5.
[0181]
Таблица 5
Пример №
Концентрация соединенияв плазме (мкМ)
Концентрация соединенияв головном мозге (мкM)
Значение Kp(концентрация соединения в головном мозге/плазме)
1
9,1
1,4
0,15
2
6,6
1,8
0,27
3
11
1,4
0,13
4
8,3
2,8
0,34
5
15
2,2
0,15
6
7,5
1,3
0,17
7
7,9
1,1
0,14
8
9,9
3,3
0,33
9
13
2,4
0,18
10
13
2,4
0,18
11
12
2,7
0,23
12
11
3,2
0,29
13
13
2,8
0,22
14
9,9
2,1
0,21
15
8,1
1,2
0,15
16
12
4,4
0,35
17
17
6,5
0,39
18
7,7
1,6
0,22
19
4,9
0,7
0,14
Сравн. прим. 2
1,6
0,008
0,005
[0182]
Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения присутствовало в головном мозге/плазме в высокой концентрации (значение Kp) и, таким образом, проявляло благоприятные свойства проникновения в головной мозг. В то же время, концентрация в головном мозге соединения сравнительного примера 2 была более чем в 80 раз ниже, чем у соединения настоящего изобретения.
[0183]
Экспериментальный пример 8. Испытание на подтверждение противоопухолевого эффекта (in vivo) на моделях прямой трансплантации в головной мозг, в которых непосредственно трансплантировалась экспрессирующая HER2 клеточная линия с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc)
Для подтверждения противоопухолевых эффектов тестируемого соединения на моделях прямой трансплантации в головной мозг использовали NCI-N87-Luc, которую получали путем введения гена люциферазы в NCI-N87, представляющей собой клеточную линию рака желудка человека, приобретенную от American Type Culture Collection. NCI-N87-Luc добавляли в среду RPMI-1640, содержащую 10% фетальную бычью сыворотку (FBS) (с добавлением 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), и затем эту клеточную линию культивировали в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C.
7
Клетки NCI-N87-Luc повторно суспендировали в PBS в концентрации 6,25×10 клеток/мл.
Используя ушную складку мыши, бесшерстную мышь в возрасте 6-7 недель (BALB/cAJcl-nu/nu, CLEA Japan, Inc.) фиксировали в устройстве для стереотаксического исследования мозга, и кожу на верхней части мозга дезинфицировали ватой со спиртом, и затем иссекали хирургическим ножом.
Микродрель использовали для сверления отверстия в черепе, и затем, используя иглу, манипулятор и шприцевой насос, 4 мкл клеточной суспензии трансплантировали в головной мозг со скоростью 0,8 мкл/мин.
В качестве контроля количества опухоли головного мозга, приблизительно через 3 недели после трансплантации измеряли общий поток (фотон/с) во всех случаях выживания с использованием IVIS (PerkinElmer, Inc., модель: Lumina II). На основании полученных результатов 6 животных распределяли на группы с использованием программы разделения на группы MiSTAT (версия 2.00).
Тестируемое соединение перорально вводили мышам один раз в сутки, каждый день, в течение 21 дня со следующего дня после разделения на группы (дни 1-21).
Для определения наличия или отсутствия эффектов использовали значение (Log10), полученное логарифмическим преобразованием общего потока на дату определения. Тестируемое соединение вводили мышам в дозе 25 мг/кг/сут в примере 2 и в примере 11, в то время как его вводили в дозе 50 мг/кг/сут в примере 12.
Составляли график со значением, полученным путем логарифмического преобразования (Log10) среднего общего потока для каждой группы, отложенным по вертикальной оси, и с числом дней (дни) после трансплантации - по горизонтальной оси. Наблюдали изменение общего потока с течением времени в период введения лекарственного средства.
В качестве тестируемых соединений использовали соединения примера 2, примера 11 и примера 12, и в качестве контроля использовали 0,1 н. HCl и 0,5% водный раствор HPMC.
[0184]
Результаты показаны на следующих фиг.1 - фиг.3. Значение, полученное логарифмическим преобразованием (Log10) общего потока на 22-й день в каждой группе, анализировали с помощью критерия Даннетта или t-критерия Стьюдента. В результате было продемонстрировано, что указанное выше значение для группы тестируемых соединений было статистически достоверно ниже, чем значение контрольной группы (уровень значимости (двусторонний): 5%) (фиг.1: использовали соединение примера 2, P=0,0077; фиг.2: использовали соединение примера 11, P=0,0007; и (фиг.3: использовали соединение примера 12, P=0,0012). Для измерения массы тела использовали электронные весы для животных. Процент изменения массы тела (BWCn) от массы тела на n-й день (BWn) рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
BWCn (%) = [(масса тела на n-ый день) - (масса тела на день группирования]/[(масса тела на день группирования)] × 100.
По результатам данного испытания было установлено, что соединение настоящего изобретения обладают превосходными противоопухолевыми эффектами в отношении сверхэкспрессирующей HER2 клеточной линии (NCI-N87-luc), трансплантированной бесшерстным мышам. Кроме того, снижения массы тела на 20% или более наблюдалось не у всех мышей, которым вводили соединение примера 2 или примера 11. Соответственно, было установлено, что серьезных побочных эффектов не было.
[0185]
Следует отметить, что все документы и публикации, цитируемые в настоящем описании, включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте, независимо от их назначения. Кроме того, настоящее описание включает в себя содержание, раскрытое в формуле изобретения, описании и чертежах японской патентной заявки № 2019-003403 (поданной 11 января 2019), по которой настоящая заявка испрашивает приоритет.
Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения описаны выше. Однако эти варианты осуществления приведены только в иллюстративных целях и, таким образом, не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Эти новые варианты осуществления могут быть выполнены в разных других формах, и могут быть осуществлены различные сокращения, замены и изменения при условии, что они не выходят за пределы сущности изобретения. Эти варианты осуществления и их модификации включены в объем или сущность изобретения и также включены в изобретение в соответствии с формулой изобретения и эквивалентным ей объемом.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.
<120>  Пиримидиновое соединение или его соль
<130>  G2225
<150>  JP 2019-003403
<151>  2019-01-11
<160>  7
<170>  PatentIn версия 3.5
<210>  1
<211>  4664
<212>  ДНК
<213>  Homo sapiens
<400>  1
gcttgctccc aatcacagga gaaggaggag gtggaggagg agggctgctt gaggaagtat       60
aagaatgaag ttgtgaagct gagattcccc tccattggga ccggagaaac caggggagcc      120
ccccgggcag ccgcgcgccc cttcccacgg ggccctttac tgcgccgcgc gcccggcccc      180
cacccctcgc agcaccccgc gccccgcgcc ctcccagccg ggtccagccg gagccatggg      240
gccggagccg cagtgagcac catggagctg gcggccttgt gccgctgggg gctcctcctc      300
gccctcttgc cccccggagc cgcgagcacc caagtgtgca ccggcacaga catgaagctg      360
cggctccctg ccagtcccga gacccacctg gacatgctcc gccacctcta ccagggctgc      420
caggtggtgc agggaaacct ggaactcacc tacctgccca ccaatgccag cctgtccttc      480
ctgcaggata tccaggaggt gcagggctac gtgctcatcg ctcacaacca agtgaggcag      540
gtcccactgc agaggctgcg gattgtgcga ggcacccagc tctttgagga caactatgcc      600
ctggccgtgc tagacaatgg agacccgctg aacaatacca cccctgtcac aggggcctcc      660
ccaggaggcc tgcgggagct gcagcttcga agcctcacag agatcttgaa aggaggggtc      720
ttgatccagc ggaaccccca gctctgctac caggacacga ttttgtggaa ggacatcttc      780
cacaagaaca accagctggc tctcacactg atagacacca accgctctcg ggcctgccac      840
ccctgttctc cgatgtgtaa gggctcccgc tgctggggag agagttctga ggattgtcag      900
agcctgacgc gcactgtctg tgccggtggc tgtgcccgct gcaaggggcc actgcccact      960
gactgctgcc atgagcagtg tgctgccggc tgcacgggcc ccaagcactc tgactgcctg     1020
gcctgcctcc acttcaacca cagtggcatc tgtgagctgc actgcccagc cctggtcacc     1080
tacaacacag acacgtttga gtccatgccc aatcccgagg gccggtatac attcggcgcc     1140
agctgtgtga ctgcctgtcc ctacaactac ctttctacgg acgtgggatc ctgcaccctc     1200
gtctgccccc tgcacaacca agaggtgaca gcagaggatg gaacacagcg gtgtgagaag     1260
tgcagcaagc cctgtgcccg agtgtgctat ggtctgggca tggagcactt gcgagaggtg     1320
agggcagtta ccagtgccaa tatccaggag tttgctggct gcaagaagat ctttgggagc     1380
ctggcatttc tgccggagag ctttgatggg gacccagcct ccaacactgc cccgctccag     1440
ccagagcagc tccaagtgtt tgagactctg gaagagatca caggttacct atacatctca     1500
gcatggccgg acagcctgcc tgacctcagc gtcttccaga acctgcaagt aatccgggga     1560
cgaattctgc acaatggcgc ctactcgctg accctgcaag ggctgggcat cagctggctg     1620
gggctgcgct cactgaggga actgggcagt ggactggccc tcatccacca taacacccac     1680
ctctgcttcg tgcacacggt gccctgggac cagctctttc ggaacccgca ccaagctctg     1740
ctccacactg ccaaccggcc agaggacgag tgtgtgggcg agggcctggc ctgccaccag     1800
ctgtgcgccc gagggcactg ctggggtcca gggcccaccc agtgtgtcaa ctgcagccag     1860
ttccttcggg gccaggagtg cgtggaggaa tgccgagtac tgcaggggct ccccagggag     1920
tatgtgaatg ccaggcactg tttgccgtgc caccctgagt gtcagcccca gaatggctca     1980
gtgacctgtt ttggaccgga ggctgaccag tgtgtggcct gtgcccacta taaggaccct     2040
cccttctgcg tggcccgctg ccccagcggt gtgaaacctg acctctccta catgcccatc     2100
tggaagtttc cagatgagga gggcgcatgc cagccttgcc ccatcaactg cacccactcc     2160
tgtgtggacc tggatgacaa gggctgcccc gccgagcaga gagccagccc tctgacgtcc     2220
atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc     2280
ctcatcaagc gacggcagca gaagatccgg aagtacacga tgcggagact gctgcaggaa     2340
acggagctgg tggagccgct gacacctagc ggagcgatgc ccaaccaggc gcagatgcgg     2400
atcctgaaag agacggagct gaggaaggtg aaggtgcttg gatctggcgc ttttggcaca     2460
gtctacaagg gcatctggat ccctgatggg gagaatgtga aaattccagt ggccatcaaa     2520
gtgttgaggg aaaacacatc ccccaaagcc aacaaagaaa tcttagacga agcatacgtg     2580
atggctggtg tgggctcccc atatgtctcc cgccttctgg gcatctgcct gacatccacg     2640
gtgcagctgg tgacacagct tatgccctat ggctgcctct tagaccatgt ccgggaaaac     2700
cgcggacgcc tgggctccca ggacctgctg aactggtgta tgcagattgc caaggggatg     2760
agctacctgg aggatgtgcg gctcgtacac agggacttgg ccgctcggaa cgtgctggtc     2820
aagagtccca accatgtcaa aattacagac ttcgggctgg ctcggctgct ggacattgac     2880
gagacagagt accatgcaga tgggggcaag gtgcccatca agtggatggc gctggagtcc     2940
attctccgcc ggcggttcac ccaccagagt gatgtgtgga gttatggtgt gactgtgtgg     3000
gagctgatga cttttggggc caaaccttac gatgggatcc cagcccggga gatccctgac     3060
ctgctggaaa agggggagcg gctgccccag ccccccatct gcaccattga tgtctacatg     3120
atcatggtca aatgttggat gattgactct gaatgtcggc caagattccg ggagttggtg     3180
tctgaattct cccgcatggc cagggacccc cagcgctttg tggtcatcca gaatgaggac     3240
ttgggcccag ccagtccctt ggacagcacc ttctaccgct cactgctgga ggacgatgac     3300
atgggggacc tggtggatgc tgaggagtat ctggtacccc agcagggctt cttctgtcca     3360
gaccctgccc cgggcgctgg gggcatggtc caccacaggc accgcagctc atctaccagg     3420
agtggcggtg gggacctgac actagggctg gagccctctg aagaggaggc ccccaggtct     3480
ccactggcac cctccgaagg ggctggctcc gatgtatttg atggtgacct gggaatgggg     3540
gcagccaagg ggctgcaaag cctccccaca catgacccca gccctctaca gcggtacagt     3600
gaggacccca cagtacccct gccctctgag actgatggct acgttgcccc cctgacctgc     3660
agcccccagc ctgaatatgt gaaccagcca gatgttcggc cccagccccc ttcgccccga     3720
gagggccctc tgcctgctgc ccgacctgct ggtgccactc tggaaaggcc caagactctc     3780
tccccaggga agaatggggt cgtcaaagac gtttttgcct ttgggggtgc cgtggagaac     3840
cccgagtact tgacacccca gggaggagct gcccctcagc cccaccctcc tcctgccttc     3900
agcccagcct tcgacaacct ctattactgg gaccaggacc caccagagcg gggggctcca     3960
cccagcacct tcaaagggac acctacggca gagaacccag agtacctggg tctggacgtg     4020
ccagtgtgaa ccagaaggcc aagtccgcag aagccctgat gtgtcctcag ggagcaggga     4080
aggcctgact tctgctggca tcaagaggtg ggagggccct ccgaccactt ccaggggaac     4140
ctgccatgcc aggaacctgt cctaaggaac cttccttcct gcttgagttc ccagatggct     4200
ggaaggggtc cagcctcgtt ggaagaggaa cagcactggg gagtctttgt ggattctgag     4260
gccctgccca atgagactct agggtccagt ggatgccaca gcccagcttg gccctttcct     4320
tccagatcct gggtactgaa agccttaggg aagctggcct gagaggggaa gcggccctaa     4380
gggagtgtct aagaacaaaa gcgacccatt cagagactgt ccctgaaacc tagtactgcc     4440
ccccatgagg aaggaacagc aatggtgtca gtatccaggc tttgtacaga gtgcttttct     4500
gtttagtttt tacttttttt gttttgtttt tttaaagatg aaataaagac ccagggggag     4560
aatgggtgtt gtatggggag gcaagtgtgg ggggtccttc tccacaccca ctttgtccat     4620
ttgcaaatat attttggaaa acagctaaaa aaaaaaaaaa aaaa                      4664
<210>  2
<211>  1255
<212>  ПРТ
<213>  Homo sapiens
<400>  2
Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu
1               5                   10                  15
Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys
20                  25                  30
Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His
35                  40                  45
Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr
50                  55                  60
Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val
65                  70                  75                  80
Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu
85                  90                  95
Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr
100                 105                 110
Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro
115                 120                 125
Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser
130                 135                 140
Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn
165                 170                 175
Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys
180                 185                 190
His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser
195                 200                 205
Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys
210                 215                 220
Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys
225                 230                 235                 240
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu
245                 250                 255
His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val
260                 265                 270
Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg
275                 280                 285
Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu
290                 295                 300
Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln
305                 310                 315                 320
Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys
325                 330                 335
Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu
340                 345                 350
Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys
355                 360                 365
Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp
370                 375                 380
Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe
385                 390                 395                 400
Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro
405                 410                 415
Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg
420                 425                 430
Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu
435                 440                 445
Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly
450                 455                 460
Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val
465                 470                 475                 480
Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr
485                 490                 495
Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His
500                 505                 510
Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys
515                 520                 525
Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys
530                 535                 540
Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys
545                 550                 555                 560
Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys
565                 570                 575
Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp
580                 585                 590
Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu
595                 600                 605
Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln
610                 615                 620
Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys
625                 630                 635                 640
Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser
645                 650                 655
Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly
660                 665                 670
Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg
675                 680                 685
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly
690                 695                 700
Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu
705                 710                 715                 720
Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys
725                 730                 735
Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile
740                 745                 750
Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu
755                 760                 765
Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg
770                 775                 780
Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu
785                 790                 795                 800
Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg
805                 810                 815
Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly
820                 825                 830
Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala
835                 840                 845
Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe
850                 855                 860
Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp
865                 870                 875                 880
Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg
885                 890                 895
Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val
900                 905                 910
Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala
915                 920                 925
Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro
930                 935                 940
Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met
945                 950                 955                 960
Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe
965                 970                 975
Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu
980                 985                 990
Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu  Asp Ser Thr Phe Tyr  Arg Ser Leu
995                 1000                 1005
Leu Glu  Asp Asp Asp Met Gly  Asp Leu Val Asp Ala  Glu Glu Tyr
1010                 1015                 1020
Leu Val  Pro Gln Gln Gly Phe  Phe Cys Pro Asp Pro  Ala Pro Gly
1025                 1030                 1035
Ala Gly  Gly Met Val His His  Arg His Arg Ser Ser  Ser Thr Arg
1040                 1045                 1050
Ser Gly  Gly Gly Asp Leu Thr  Leu Gly Leu Glu Pro  Ser Glu Glu
1055                 1060                 1065
Glu Ala  Pro Arg Ser Pro Leu  Ala Pro Ser Glu Gly  Ala Gly Ser
1070                 1075                 1080
Asp Val  Phe Asp Gly Asp Leu  Gly Met Gly Ala Ala  Lys Gly Leu
1085                 1090                 1095
Gln Ser  Leu Pro Thr His Asp  Pro Ser Pro Leu Gln  Arg Tyr Ser
1100                 1105                 1110
Glu Asp  Pro Thr Val Pro Leu  Pro Ser Glu Thr Asp  Gly Tyr Val
1115                 1120                 1125
Ala Pro  Leu Thr Cys Ser Pro  Gln Pro Glu Tyr Val  Asn Gln Pro
1130                 1135                 1140
Asp Val  Arg Pro Gln Pro Pro  Ser Pro Arg Glu Gly  Pro Leu Pro
1145                 1150                 1155
Ala Ala  Arg Pro Ala Gly Ala  Thr Leu Glu Arg Pro  Lys Thr Leu
1160                 1165                 1170
Ser Pro  Gly Lys Asn Gly Val  Val Lys Asp Val Phe  Ala Phe Gly
1175                 1180                 1185
Gly Ala  Val Glu Asn Pro Glu  Tyr Leu Thr Pro Gln  Gly Gly Ala
1190                 1195                 1200
Ala Pro  Gln Pro His Pro Pro  Pro Ala Phe Ser Pro  Ala Phe Asp
1205                 1210                 1215
Asn Leu  Tyr Tyr Trp Asp Gln  Asp Pro Pro Glu Arg  Gly Ala Pro
1220                 1225                 1230
Pro Ser  Thr Phe Lys Gly Thr  Pro Thr Ala Glu Asn  Pro Glu Tyr
1235                 1240                 1245
Leu Gly  Leu Asp Val Pro Val
1250                 1255
<210>  3
<211>  4940
<212>  ДНК
<213>  Homo sapiens
<400>  3
aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc       60
ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg      120
cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc      180
atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc      240
ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg      300
cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat      360
gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag      420
agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga      480
gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt      540
ggacatgcac aaaagtgaga tacttcaaag attccagaag atatgccccg ggggtcctgg      600
aagccacaag tgtgcaccgg cacagacatg aagctgcggc tccctgccag tcccgagacc      660
cacctggaca tgctccgcca cctctaccag ggctgccagg tggtgcaggg aaacctggaa      720
ctcacctacc tgcccaccaa tgccagcctg tccttcctgc aggatatcca ggaggtgcag      780
ggctacgtgc tcatcgctca caaccaagtg aggcaggtcc cactgcagag gctgcggatt      840
gtgcgaggca cccagctctt tgaggacaac tatgccctgg ccgtgctaga caatggagac      900
ccgctgaaca ataccacccc tgtcacaggg gcctccccag gaggcctgcg ggagctgcag      960
cttcgaagcc tcacagagat cttgaaagga ggggtcttga tccagcggaa cccccagctc     1020
tgctaccagg acacgatttt gtggaaggac atcttccaca agaacaacca gctggctctc     1080
acactgatag acaccaaccg ctctcgggcc tgccacccct gttctccgat gtgtaagggc     1140
tcccgctgct ggggagagag ttctgaggat tgtcagagcc tgacgcgcac tgtctgtgcc     1200
ggtggctgtg cccgctgcaa ggggccactg cccactgact gctgccatga gcagtgtgct     1260
gccggctgca cgggccccaa gcactctgac tgcctggcct gcctccactt caaccacagt     1320
ggcatctgtg agctgcactg cccagccctg gtcacctaca acacagacac gtttgagtcc     1380
atgcccaatc ccgagggccg gtatacattc ggcgccagct gtgtgactgc ctgtccctac     1440
aactaccttt ctacggacgt gggatcctgc accctcgtct gccccctgca caaccaagag     1500
gtgacagcag aggatggaac acagcggtgt gagaagtgca gcaagccctg tgcccgagtg     1560
tgctatggtc tgggcatgga gcacttgcga gaggtgaggg cagttaccag tgccaatatc     1620
caggagtttg ctggctgcaa gaagatcttt gggagcctgg catttctgcc ggagagcttt     1680
gatggggacc cagcctccaa cactgccccg ctccagccag agcagctcca agtgtttgag     1740
actctggaag agatcacagg ttacctatac atctcagcat ggccggacag cctgcctgac     1800
ctcagcgtct tccagaacct gcaagtaatc cggggacgaa ttctgcacaa tggcgcctac     1860
tcgctgaccc tgcaagggct gggcatcagc tggctggggc tgcgctcact gagggaactg     1920
ggcagtggac tggccctcat ccaccataac acccacctct gcttcgtgca cacggtgccc     1980
tgggaccagc tctttcggaa cccgcaccaa gctctgctcc acactgccaa ccggccagag     2040
gacgagtgtg tgggcgaggg cctggcctgc caccagctgt gcgcccgagg gcactgctgg     2100
ggtccagggc ccacccagtg tgtcaactgc agccagttcc ttcggggcca ggagtgcgtg     2160
gaggaatgcc gagtactgca ggggctcccc agggagtatg tgaatgccag gcactgtttg     2220
ccgtgccacc ctgagtgtca gccccagaat ggctcagtga cctgttttgg accggaggct     2280
gaccagtgtg tggcctgtgc ccactataag gaccctccct tctgcgtggc ccgctgcccc     2340
agcggtgtga aacctgacct ctcctacatg cccatctgga agtttccaga tgaggagggc     2400
gcatgccagc cttgccccat caactgcacc cactcctgtg tggacctgga tgacaagggc     2460
tgccccgccg agcagagagc cagccctctg acgtccatca tctctgcggt ggttggcatt     2520
ctgctggtcg tggtcttggg ggtggtcttt gggatcctca tcaagcgacg gcagcagaag     2580
atccggaagt acacgatgcg gagactgctg caggaaacgg agctggtgga gccgctgaca     2640
cctagcggag cgatgcccaa ccaggcgcag atgcggatcc tgaaagagac ggagctgagg     2700
aaggtgaagg tgcttggatc tggcgctttt ggcacagtct acaagggcat ctggatccct     2760
gatggggaga atgtgaaaat tccagtggcc atcaaagtgt tgagggaaaa cacatccccc     2820
aaagccaaca aagaaatctt agacgaagca tacgtgatgg ctggtgtggg ctccccatat     2880
gtctcccgcc ttctgggcat ctgcctgaca tccacggtgc agctggtgac acagcttatg     2940
ccctatggct gcctcttaga ccatgtccgg gaaaaccgcg gacgcctggg ctcccaggac     3000
ctgctgaact ggtgtatgca gattgccaag gggatgagct acctggagga tgtgcggctc     3060
gtacacaggg acttggccgc tcggaacgtg ctggtcaaga gtcccaacca tgtcaaaatt     3120
acagacttcg ggctggctcg gctgctggac attgacgaga cagagtacca tgcagatggg     3180
ggcaaggtgc ccatcaagtg gatggcgctg gagtccattc tccgccggcg gttcacccac     3240
cagagtgatg tgtggagtta tggtgtgact gtgtgggagc tgatgacttt tggggccaaa     3300
ccttacgatg ggatcccagc ccgggagatc cctgacctgc tggaaaaggg ggagcggctg     3360
ccccagcccc ccatctgcac cattgatgtc tacatgatca tggtcaaatg ttggatgatt     3420
gactctgaat gtcggccaag attccgggag ttggtgtctg aattctcccg catggccagg     3480
gacccccagc gctttgtggt catccagaat gaggacttgg gcccagccag tcccttggac     3540
agcaccttct accgctcact gctggaggac gatgacatgg gggacctggt ggatgctgag     3600
gagtatctgg taccccagca gggcttcttc tgtccagacc ctgccccggg cgctgggggc     3660
atggtccacc acaggcaccg cagctcatct accaggagtg gcggtgggga cctgacacta     3720
gggctggagc cctctgaaga ggaggccccc aggtctccac tggcaccctc cgaaggggct     3780
ggctccgatg tatttgatgg tgacctggga atgggggcag ccaaggggct gcaaagcctc     3840
cccacacatg accccagccc tctacagcgg tacagtgagg accccacagt acccctgccc     3900
tctgagactg atggctacgt tgcccccctg acctgcagcc cccagcctga atatgtgaac     3960
cagccagatg ttcggcccca gcccccttcg ccccgagagg gccctctgcc tgctgcccga     4020
cctgctggtg ccactctgga aaggcccaag actctctccc cagggaagaa tggggtcgtc     4080
aaagacgttt ttgcctttgg gggtgccgtg gagaaccccg agtacttgac accccaggga     4140
ggagctgccc ctcagcccca ccctcctcct gccttcagcc cagccttcga caacctctat     4200
tactgggacc aggacccacc agagcggggg gctccaccca gcaccttcaa agggacacct     4260
acggcagaga acccagagta cctgggtctg gacgtgccag tgtgaaccag aaggccaagt     4320
ccgcagaagc cctgatgtgt cctcagggag cagggaaggc ctgacttctg ctggcatcaa     4380
gaggtgggag ggccctccga ccacttccag gggaacctgc catgccagga acctgtccta     4440
aggaaccttc cttcctgctt gagttcccag atggctggaa ggggtccagc ctcgttggaa     4500
gaggaacagc actggggagt ctttgtggat tctgaggccc tgcccaatga gactctaggg     4560
tccagtggat gccacagccc agcttggccc tttccttcca gatcctgggt actgaaagcc     4620
ttagggaagc tggcctgaga ggggaagcgg ccctaaggga gtgtctaaga acaaaagcga     4680
cccattcaga gactgtccct gaaacctagt actgcccccc atgaggaagg aacagcaatg     4740
gtgtcagtat ccaggctttg tacagagtgc ttttctgttt agtttttact ttttttgttt     4800
tgttttttta aagatgaaat aaagacccag ggggagaatg ggtgttgtat ggggaggcaa     4860
gtgtgggggg tccttctcca cacccacttt gtccatttgc aaatatattt tggaaaacag     4920
ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                                 4940
<210>  4
<211>  1240
<212>  ПРТ
<213>  Homo sapiens
<400>  4
Met Pro Arg Gly Ser Trp Lys Pro Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met
1               5                   10                  15
Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg
20                  25                  30
His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr
35                  40                  45
Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu
50                  55                  60
Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro
65                  70                  75                  80
Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn
85                  90                  95
Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr
100                 105                 110
Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg
115                 120                 125
Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro
130                 135                 140
Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys
145                 150                 155                 160
Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala
165                 170                 175
Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu
180                 185                 190
Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly
195                 200                 205
Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln
210                 215                 220
Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys
225                 230                 235                 240
Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu
245                 250                 255
Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly
260                 265                 270
Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr
275                 280                 285
Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn
290                 295                 300
Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser
305                 310                 315                 320
Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg
325                 330                 335
Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys
340                 345                 350
Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly
355                 360                 365
Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val
370                 375                 380
Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp
385                 390                 395                 400
Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile
405                 410                 415
Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly
420                 425                 430
Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser
435                 440                 445
Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr
450                 455                 460
Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His
465                 470                 475                 480
Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys
485                 490                 495
His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln
500                 505                 510
Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu
515                 520                 525
Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His
530                 535                 540
Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr
545                 550                 555                 560
Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys
565                 570                 575
Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp
580                 585                 590
Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys
595                 600                 605
Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp
610                 615                 620
Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile
625                 630                 635                 640
Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe
645                 650                 655
Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met
660                 665                 670
Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser
675                 680                 685
Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu
690                 695                 700
Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr
705                 710                 715                 720
Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala
725                 730                 735
Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile
740                 745                 750
Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser
755                 760                 765
Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln
770                 775                 780
Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly
785                 790                 795                 800
Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys
805                 810                 815
Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala
820                 825                 830
Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp
835                 840                 845
Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala
850                 855                 860
Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu
865                 870                 875                 880
Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr
885                 890                 895
Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro
900                 905                 910
Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln
915                 920                 925
Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp
930                 935                 940
Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu
945                 950                 955                 960
Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn
965                 970                 975
Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser
980                 985                 990
Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly  Asp Leu Val Asp Ala  Glu Glu Tyr
995                 1000                 1005
Leu Val  Pro Gln Gln Gly Phe  Phe Cys Pro Asp Pro  Ala Pro Gly
1010                 1015                 1020
Ala Gly  Gly Met Val His His  Arg His Arg Ser Ser  Ser Thr Arg
1025                 1030                 1035
Ser Gly  Gly Gly Asp Leu Thr  Leu Gly Leu Glu Pro  Ser Glu Glu
1040                 1045                 1050
Glu Ala  Pro Arg Ser Pro Leu  Ala Pro Ser Glu Gly  Ala Gly Ser
1055                 1060                 1065
Asp Val  Phe Asp Gly Asp Leu  Gly Met Gly Ala Ala  Lys Gly Leu
1070                 1075                 1080
Gln Ser  Leu Pro Thr His Asp  Pro Ser Pro Leu Gln  Arg Tyr Ser
1085                 1090                 1095
Glu Asp  Pro Thr Val Pro Leu  Pro Ser Glu Thr Asp  Gly Tyr Val
1100                 1105                 1110
Ala Pro  Leu Thr Cys Ser Pro  Gln Pro Glu Tyr Val  Asn Gln Pro
1115                 1120                 1125
Asp Val  Arg Pro Gln Pro Pro  Ser Pro Arg Glu Gly  Pro Leu Pro
1130                 1135                 1140
Ala Ala  Arg Pro Ala Gly Ala  Thr Leu Glu Arg Pro  Lys Thr Leu
1145                 1150                 1155
Ser Pro  Gly Lys Asn Gly Val  Val Lys Asp Val Phe  Ala Phe Gly
1160                 1165                 1170
Gly Ala  Val Glu Asn Pro Glu  Tyr Leu Thr Pro Gln  Gly Gly Ala
1175                 1180                 1185
Ala Pro  Gln Pro His Pro Pro  Pro Ala Phe Ser Pro  Ala Phe Asp
1190                 1195                 1200
Asn Leu  Tyr Tyr Trp Asp Gln  Asp Pro Pro Glu Arg  Gly Ala Pro
1205                 1210                 1215
Pro Ser  Thr Phe Lys Gly Thr  Pro Thr Ala Glu Asn  Pro Glu Tyr
1220                 1225                 1230
Leu Gly  Leu Asp Val Pro Val
1235                 1240
<210>  5
<211>  4889
<212>  ДНК
<213>  Homo sapiens
<400>  5
aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc       60
ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg      120
cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc      180
atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc      240
ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg      300
cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat      360
gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag      420
agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga      480
gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt      540
ggacatgcac aaaagtgagt gtgcaccggc acagacatga agctgcggct ccctgccagt      600
cccgagaccc acctggacat gctccgccac ctctaccagg gctgccaggt ggtgcaggga      660
aacctggaac tcacctacct gcccaccaat gccagcctgt ccttcctgca ggatatccag      720
gaggtgcagg gctacgtgct catcgctcac aaccaagtga ggcaggtccc actgcagagg      780
ctgcggattg tgcgaggcac ccagctcttt gaggacaact atgccctggc cgtgctagac      840
aatggagacc cgctgaacaa taccacccct gtcacagggg cctccccagg aggcctgcgg      900
gagctgcagc ttcgaagcct cacagagatc ttgaaaggag gggtcttgat ccagcggaac      960
ccccagctct gctaccagga cacgattttg tggaaggaca tcttccacaa gaacaaccag     1020
ctggctctca cactgataga caccaaccgc tctcgggcct gccacccctg ttctccgatg     1080
tgtaagggct cccgctgctg gggagagagt tctgaggatt gtcagagcct gacgcgcact     1140
gtctgtgccg gtggctgtgc ccgctgcaag gggccactgc ccactgactg ctgccatgag     1200
cagtgtgctg ccggctgcac gggccccaag cactctgact gcctggcctg cctccacttc     1260
aaccacagtg gcatctgtga gctgcactgc ccagccctgg tcacctacaa cacagacacg     1320
tttgagtcca tgcccaatcc cgagggccgg tatacattcg gcgccagctg tgtgactgcc     1380
tgtccctaca actacctttc tacggacgtg ggatcctgca ccctcgtctg ccccctgcac     1440
aaccaagagg tgacagcaga ggatggaaca cagcggtgtg agaagtgcag caagccctgt     1500
gcccgagtgt gctatggtct gggcatggag cacttgcgag aggtgagggc agttaccagt     1560
gccaatatcc aggagtttgc tggctgcaag aagatctttg ggagcctggc atttctgccg     1620
gagagctttg atggggaccc agcctccaac actgccccgc tccagccaga gcagctccaa     1680
gtgtttgaga ctctggaaga gatcacaggt tacctataca tctcagcatg gccggacagc     1740
ctgcctgacc tcagcgtctt ccagaacctg caagtaatcc ggggacgaat tctgcacaat     1800
ggcgcctact cgctgaccct gcaagggctg ggcatcagct ggctggggct gcgctcactg     1860
agggaactgg gcagtggact ggccctcatc caccataaca cccacctctg cttcgtgcac     1920
acggtgccct gggaccagct ctttcggaac ccgcaccaag ctctgctcca cactgccaac     1980
cggccagagg acgagtgtgt gggcgagggc ctggcctgcc accagctgtg cgcccgaggg     2040
cactgctggg gtccagggcc cacccagtgt gtcaactgca gccagttcct tcggggccag     2100
gagtgcgtgg aggaatgccg agtactgcag gggctcccca gggagtatgt gaatgccagg     2160
cactgtttgc cgtgccaccc tgagtgtcag ccccagaatg gctcagtgac ctgttttgga     2220
ccggaggctg accagtgtgt ggcctgtgcc cactataagg accctccctt ctgcgtggcc     2280
cgctgcccca gcggtgtgaa acctgacctc tcctacatgc ccatctggaa gtttccagat     2340
gaggagggcg catgccagcc ttgccccatc aactgcaccc actcctgtgt ggacctggat     2400
gacaagggct gccccgccga gcagagagcc agccctctga cgtccatcat ctctgcggtg     2460
gttggcattc tgctggtcgt ggtcttgggg gtggtctttg ggatcctcat caagcgacgg     2520
cagcagaaga tccggaagta cacgatgcgg agactgctgc aggaaacgga gctggtggag     2580
ccgctgacac ctagcggagc gatgcccaac caggcgcaga tgcggatcct gaaagagacg     2640
gagctgagga aggtgaaggt gcttggatct ggcgcttttg gcacagtcta caagggcatc     2700
tggatccctg atggggagaa tgtgaaaatt ccagtggcca tcaaagtgtt gagggaaaac     2760
acatccccca aagccaacaa agaaatctta gacgaagcat acgtgatggc tggtgtgggc     2820
tccccatatg tctcccgcct tctgggcatc tgcctgacat ccacggtgca gctggtgaca     2880
cagcttatgc cctatggctg cctcttagac catgtccggg aaaaccgcgg acgcctgggc     2940
tcccaggacc tgctgaactg gtgtatgcag attgccaagg ggatgagcta cctggaggat     3000
gtgcggctcg tacacaggga cttggccgct cggaacgtgc tggtcaagag tcccaaccat     3060
gtcaaaatta cagacttcgg gctggctcgg ctgctggaca ttgacgagac agagtaccat     3120
gcagatgggg gcaaggtgcc catcaagtgg atggcgctgg agtccattct ccgccggcgg     3180
ttcacccacc agagtgatgt gtggagttat ggtgtgactg tgtgggagct gatgactttt     3240
ggggccaaac cttacgatgg gatcccagcc cgggagatcc ctgacctgct ggaaaagggg     3300
gagcggctgc cccagccccc catctgcacc attgatgtct acatgatcat ggtcaaatgt     3360
tggatgattg actctgaatg tcggccaaga ttccgggagt tggtgtctga attctcccgc     3420
atggccaggg acccccagcg ctttgtggtc atccagaatg aggacttggg cccagccagt     3480
cccttggaca gcaccttcta ccgctcactg ctggaggacg atgacatggg ggacctggtg     3540
gatgctgagg agtatctggt accccagcag ggcttcttct gtccagaccc tgccccgggc     3600
gctgggggca tggtccacca caggcaccgc agctcatcta ccaggagtgg cggtggggac     3660
ctgacactag ggctggagcc ctctgaagag gaggccccca ggtctccact ggcaccctcc     3720
gaaggggctg gctccgatgt atttgatggt gacctgggaa tgggggcagc caaggggctg     3780
caaagcctcc ccacacatga ccccagccct ctacagcggt acagtgagga ccccacagta     3840
cccctgccct ctgagactga tggctacgtt gcccccctga cctgcagccc ccagcctgaa     3900
tatgtgaacc agccagatgt tcggccccag cccccttcgc cccgagaggg ccctctgcct     3960
gctgcccgac ctgctggtgc cactctggaa aggcccaaga ctctctcccc agggaagaat     4020
ggggtcgtca aagacgtttt tgcctttggg ggtgccgtgg agaaccccga gtacttgaca     4080
ccccagggag gagctgcccc tcagccccac cctcctcctg ccttcagccc agccttcgac     4140
aacctctatt actgggacca ggacccacca gagcgggggg ctccacccag caccttcaaa     4200
gggacaccta cggcagagaa cccagagtac ctgggtctgg acgtgccagt gtgaaccaga     4260
aggccaagtc cgcagaagcc ctgatgtgtc ctcagggagc agggaaggcc tgacttctgc     4320
tggcatcaag aggtgggagg gccctccgac cacttccagg ggaacctgcc atgccaggaa     4380
cctgtcctaa ggaaccttcc ttcctgcttg agttcccaga tggctggaag gggtccagcc     4440
tcgttggaag aggaacagca ctggggagtc tttgtggatt ctgaggccct gcccaatgag     4500
actctagggt ccagtggatg ccacagccca gcttggccct ttccttccag atcctgggta     4560
ctgaaagcct tagggaagct ggcctgagag gggaagcggc cctaagggag tgtctaagaa     4620
caaaagcgac ccattcagag actgtccctg aaacctagta ctgcccccca tgaggaagga     4680
acagcaatgg tgtcagtatc caggctttgt acagagtgct tttctgttta gtttttactt     4740
tttttgtttt gtttttttaa agatgaaata aagacccagg gggagaatgg gtgttgtatg     4800
gggaggcaag tgtggggggt ccttctccac acccactttg tccatttgca aatatatttt     4860
ggaaaacagc taaaaaaaaa aaaaaaaaa                                       4889
<210>  6
<211>  1225
<212>  ПРТ
<213>  Homo sapiens
<400>  6
Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu
1               5                   10                  15
Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu
20                  25                  30
Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln
35                  40                  45
Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val
50                  55                  60
Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp
65                  70                  75                  80
Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr
85                  90                  95
Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu
100                 105                 110
Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn
115                 120                 125
Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His
130                 135                 140
Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg
145                 150                 155                 160
Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly
165                 170                 175
Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly
180                 185                 190
Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu
195                 200                 205
Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala
210                 215                 220
Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu
245                 250                 255
Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn
260                 265                 270
Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His
275                 280                 285
Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys
290                 295                 300
Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu
305                 310                 315                 320
Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly
325                 330                 335
Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp
340                 345                 350
Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln
355                 360                 365
Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala
370                 375                 380
Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val
385                 390                 395                 400
Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln
405                 410                 415
Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly
420                 425                 430
Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His
435                 440                 445
Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu
450                 455                 460
His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala
465                 470                 475                 480
Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr
485                 490                 495
Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu
500                 505                 510
Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg
515                 520                 525
His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val
530                 535                 540
Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr
545                 550                 555                 560
Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro
565                 570                 575
Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala
580                 585                 590
Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp
595                 600                 605
Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile
610                 615                 620
Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val
625                 630                 635                 640
Phe Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr
645                 650                 655
Met Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro
660                 665                 670
Ser Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr
675                 680                 685
Glu Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val
690                 695                 700
Tyr Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val
705                 710                 715                 720
Ala Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu
725                 730                 735
Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val
740                 745                 750
Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr
755                 760                 765
Gln Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg
770                 775                 780
Gly Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala
785                 790                 795                 800
Lys Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu
805                 810                 815
Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr
820                 825                 830
Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His
835                 840                 845
Ala Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile
850                 855                 860
Leu Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val
865                 870                 875                 880
Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile
885                 890                 895
Pro Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro
900                 905                 910
Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys
915                 920                 925
Trp Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser
930                 935                 940
Glu Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln
945                 950                 955                 960
Asn Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg
965                 970                 975
Ser Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu
980                 985                 990
Tyr Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe  Phe Cys Pro Asp Pro  Ala Pro Gly
995                 1000                 1005
Ala Gly  Gly Met Val His His  Arg His Arg Ser Ser  Ser Thr Arg
1010                 1015                 1020
Ser Gly  Gly Gly Asp Leu Thr  Leu Gly Leu Glu Pro  Ser Glu Glu
1025                 1030                 1035
Glu Ala  Pro Arg Ser Pro Leu  Ala Pro Ser Glu Gly  Ala Gly Ser
1040                 1045                 1050
Asp Val  Phe Asp Gly Asp Leu  Gly Met Gly Ala Ala  Lys Gly Leu
1055                 1060                 1065
Gln Ser  Leu Pro Thr His Asp  Pro Ser Pro Leu Gln  Arg Tyr Ser
1070                 1075                 1080
Glu Asp  Pro Thr Val Pro Leu  Pro Ser Glu Thr Asp  Gly Tyr Val
1085                 1090                 1095
Ala Pro  Leu Thr Cys Ser Pro  Gln Pro Glu Tyr Val  Asn Gln Pro
1100                 1105                 1110
Asp Val  Arg Pro Gln Pro Pro  Ser Pro Arg Glu Gly  Pro Leu Pro
1115                 1120                 1125
Ala Ala  Arg Pro Ala Gly Ala  Thr Leu Glu Arg Pro  Lys Thr Leu
1130                 1135                 1140
Ser Pro  Gly Lys Asn Gly Val  Val Lys Asp Val Phe  Ala Phe Gly
1145                 1150                 1155
Gly Ala  Val Glu Asn Pro Glu  Tyr Leu Thr Pro Gln  Gly Gly Ala
1160                 1165                 1170
Ala Pro  Gln Pro His Pro Pro  Pro Ala Phe Ser Pro  Ala Phe Asp
1175                 1180                 1185
Asn Leu  Tyr Tyr Trp Asp Gln  Asp Pro Pro Glu Arg  Gly Ala Pro
1190                 1195                 1200
Pro Ser  Thr Phe Lys Gly Thr  Pro Thr Ala Glu Asn  Pro Glu Tyr
1205                 1210                 1215
Leu Gly  Leu Asp Val Pro Val
1220                 1225
<210>  7
<211>  1259
<212>  ПРТ
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  7
Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu
1               5                   10                  15
Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys
20                  25                  30
Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His
35                  40                  45
Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr
50                  55                  60
Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val
65                  70                  75                  80
Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu
85                  90                  95
Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr
100                 105                 110
Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro
115                 120                 125
Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser
130                 135                 140
Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn
165                 170                 175
Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys
180                 185                 190
His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser
195                 200                 205
Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys
210                 215                 220
Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys
225                 230                 235                 240
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu
245                 250                 255
His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val
260                 265                 270
Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg
275                 280                 285
Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu
290                 295                 300
Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln
305                 310                 315                 320
Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys
325                 330                 335
Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu
340                 345                 350
Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys
355                 360                 365
Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp
370                 375                 380
Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe
385                 390                 395                 400
Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro
405                 410                 415
Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg
420                 425                 430
Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu
435                 440                 445
Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly
450                 455                 460
Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val
465                 470                 475                 480
Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr
485                 490                 495
Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His
500                 505                 510
Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys
515                 520                 525
Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys
530                 535                 540
Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys
545                 550                 555                 560
Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys
565                 570                 575
Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp
580                 585                 590
Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu
595                 600                 605
Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln
610                 615                 620
Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys
625                 630                 635                 640
Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser
645                 650                 655
Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly
660                 665                 670
Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg
675                 680                 685
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly
690                 695                 700
Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu
705                 710                 715                 720
Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys
725                 730                 735
Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile
740                 745                 750
Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu
755                 760                 765
Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro
770                 775                 780
Tyr Val Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu
785                 790                 795                 800
Val Thr Gln Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu
805                 810                 815
Asn Arg Gly Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln
820                 825                 830
Ile Ala Lys Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg
835                 840                 845
Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys
850                 855                 860
Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu
865                 870                 875                 880
Tyr His Ala Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu
885                 890                 895
Ser Ile Leu Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr
900                 905                 910
Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp
915                 920                 925
Gly Ile Pro Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg
930                 935                 940
Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val
945                 950                 955                 960
Lys Cys Trp Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu
965                 970                 975
Val Ser Glu Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val
980                 985                 990
Ile Gln Asn Glu Asp Leu Gly Pro  Ala Ser Pro Leu Asp  Ser Thr Phe
995                 1000                 1005
Tyr Arg  Ser Leu Leu Glu Asp  Asp Asp Met Gly Asp  Leu Val Asp
1010                 1015                 1020
Ala Glu  Glu Tyr Leu Val Pro  Gln Gln Gly Phe Phe  Cys Pro Asp
1025                 1030                 1035
Pro Ala  Pro Gly Ala Gly Gly  Met Val His His Arg  His Arg Ser
1040                 1045                 1050
Ser Ser  Thr Arg Ser Gly Gly  Gly Asp Leu Thr Leu  Gly Leu Glu
1055                 1060                 1065
Pro Ser  Glu Glu Glu Ala Pro  Arg Ser Pro Leu Ala  Pro Ser Glu
1070                 1075                 1080
Gly Ala  Gly Ser Asp Val Phe  Asp Gly Asp Leu Gly  Met Gly Ala
1085                 1090                 1095
Ala Lys  Gly Leu Gln Ser Leu  Pro Thr His Asp Pro  Ser Pro Leu
1100                 1105                 1110
Gln Arg  Tyr Ser Glu Asp Pro  Thr Val Pro Leu Pro  Ser Glu Thr
1115                 1120                 1125
Asp Gly  Tyr Val Ala Pro Leu  Thr Cys Ser Pro Gln  Pro Glu Tyr
1130                 1135                 1140
Val Asn  Gln Pro Asp Val Arg  Pro Gln Pro Pro Ser  Pro Arg Glu
1145                 1150                 1155
Gly Pro  Leu Pro Ala Ala Arg  Pro Ala Gly Ala Thr  Leu Glu Arg
1160                 1165                 1170
Pro Lys  Thr Leu Ser Pro Gly  Lys Asn Gly Val Val  Lys Asp Val
1175                 1180                 1185
Phe Ala  Phe Gly Gly Ala Val  Glu Asn Pro Glu Tyr  Leu Thr Pro
1190                 1195                 1200
Gln Gly  Gly Ala Ala Pro Gln  Pro His Pro Pro Pro  Ala Phe Ser
1205                 1210                 1215
Pro Ala  Phe Asp Asn Leu Tyr  Tyr Trp Asp Gln Asp  Pro Pro Glu
1220                 1225                 1230
Arg Gly  Ala Pro Pro Ser Thr  Phe Lys Gly Thr Pro  Thr Ala Glu
1235                 1240                 1245
Asn Pro  Glu Tyr Leu Gly Leu  Asp Val Pro Val
1250                 1255