СПОСОБ (ВАРИАНТЫ) И СРЕДСТВО ДЛЯ МОДИФИКАЦИИ ПИЩЕВОГО ПОВЕДЕНИЯ
METHOD (VERSIONS) AND PREPARATION FOR MODIFICATION OF EATING BEHAVIOUR

Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к способам модификации пищевого поведения и применению агентов для контроля аппетита, питания, потребления пищи, затрат энергии и потребления калорий, в особенности в случае ожирения.
Соответствующие исследования были осуществлены при поддержке правительства Соединенных Штатов в соответствии с грантами Национального Института здоровья RR00163, DK51730 и DK55819. Правительство Соединенных Штатов имеет определенные права на данное изобретение.
Уровень техники
Согласно данным Государственной службы инспекции здравоохранения и питания (National Health и Nutrition Examination Survey) (NHANES III, 1988-1994), от одной трети до половины мужчин и женщин в США имеют избыточную массу тела. В США шестьдесят процентов мужчин и пятьдесят один процент женщин в возрасте 20 лет и старше либо имеют избыточную массу тела, либо страдают ожирением. Кроме того, в США большой процент детей имеют избыточную массу тела или ожирение.
Причина ожирения является комплексной и многофакторной. Растет количество данных, которые позволяют предположить, что ожирение - это не просто проблема самоконтроля, но комплексное нарушение, включающее регуляцию аппетита и энергетический обмен. Кроме того, ожирение связано с множеством состояний, ассоциированных с повышенной заболеваемостью и смертностью населения. Хотя этиология ожирения окончательно не установлена, полагают, что в ней участвуют генетические, метаболические, биохимические, культурные и психологические факторы. Как правило, ожирение описывали как состояние, при котором избыток жира в организме является фактором риска для здоровья субъекта.
Имеется строгое доказательство того, что ожирение связано с повышенной заболеваемостью и смертностью. Риск развития заболевания, такой как риск развития сердечно-сосудистого заболевания и риск развития диабета типа 2, возрастает независимо с повышением индекса массы тела (ВМ1). В самом деле данный риск количественно оценен как повышение на пять процентов риска развития сердечных заболеваний у женщин и повышение на семь процентов риска развития сердечных заболеваний у мужчин для каждого пункта ВМ1, превышающего 24,9 (см. статьи Kenchaiah и соавт., N. Engl. J. Med. 347:305, (2002); Massie, N. Engl. J. Med. 347:358, (2002)). Кроме того, существует достаточно доказательств того, что снижение массы тела у субъектов с ожирением уменьшает факторы риска серьезных заболеваний. Даже небольшое снижение массы тела, такое как 10% от исходной массы тела у взрослых субъектов, как с избыточной массой тела, так и с ожирением, было связано со снижением факторов риска, например, гипертензии, гиперлипидемии и гипергликемии.
Несмотря на то что диета и физические упражнения являются простым способом уменьшения набора массы тела, субъекты с избыточной массой тела и ожирением зачастую не могут в достаточной мере контролировать данные факторы с целью эффективной потери массы тела. Существует возможность фармакотерапии. Управлением по контролю за продуктами и лекарствами одобрен ряд лекарственных препаратов для снижения массы тела, которые могут быть использованы как часть комплексной программы снижения массы тела. Однако многие из данных лекарственных препаратов имеют серьезные вредные побочные эффекты. При неэффективности использования менее инвазивных способов и при наличии высокого риска для пациента развития связанных с ожирением заболеваний или смерти вариантом выбора для тщательно отобранных пациентов с клинически тяжелым ожирением является хирургическое вмешательство, направленное на снижение массы тела. Впрочем, данные способы лечения входят в область высокого риска и пригодны для использования только на ограниченном числе пациентов. Не только субъекты с ожирением желают снижения массы тела. Люди с массой тела, находящейся в рекомендованных границах, например в верхней области рекомендованного интервала, могут иметь желание снизить массу своего тела с целью приближения ее к идеальной массе тела. Таким образом, остается потребность в агентах, которые могут быть использованы для воздействия на массу тела у субъектов с избыточной массой тела или ожирением.
Раскрытие изобретения
3-36
В данном контексте представлены сведения о том, что периферическое введение субъекту PYY или его агониста в результате приводит к пониженному поглощению пищи, потреблению калорий и аппетиту, а также изменению энергетического обмена. Субъект может быть представлен любым субъектом, включающим, но без ограничения перечисленным, человека. В ряде вариантов осуществления субъект, желающий потерять массу тела, имеет ожирение, избыточную массу тела или страдает от нарушения, связанного с массой тела. Предпочтительным может быть введение субъекту PYY.
В одном из вариантов осуществления описан способ снижения потребления калорий у субъекта. Способ включает периферическое введение субъекту терапевтически эффективного количества PYY или его агониста для снижения, таким образом, потребления субъектом калорий.
В другом варианте осуществления описан способ снижения аппетита у субъекта. Способ включает периферическое введение терапевтически эффективного количества PYY или его агониста субъекту для снижения таким образом аппетита у субъекта.
В следующем варианте осуществления описан способ снижения поглощения пищи у субъекта. Способ включает периферическое введение терапевтически эффективного количества PYY или его агониста субъекту для снижения таким образом поглощения пищи у субъекта.
В еще одном варианте осуществления в данном контексте описан способ повышения затрат энергии у субъекта. Способ включает периферическое введение терапевтически эффективного количества PYY или его агониста субъекту для повышения таким образом затрат энергии у субъекта.
Описан также способ снижения потребления калорий, поглощения пищи или аппетита у субъекта-человека. Способ включает периферическое инъекционное введение субъекту терапевтически эффективного количества PYY или его агониста в фармацевтически приемлемом носителе в пульсовой дозе для снижения таким образом потребления калорий, поглощения пищи или аппетита у субъекта.
В данном контексте представлены сведения о том, что периферическое введение субъекту антагониста PYY в результате дает повышение поглощения пищи, потребления калорий и аппетита, а также изменение энергетического обмена. Субъект может быть любым субъектом, включая, но без ограничения перечисленным, человека. В некоторых вариантах осуществления субъект желает увеличить массу тела или страдает от анорексии или кахексии.
Вышеуказанные и иные признаки и преимущества будут более очевидны из последующего детального описания некоторых вариантов осуществления, которому предшествует ссылка на сопровождающие фигуры.
Краткое описание чертежей
На Фигуре 1 представлен набор диаграмм и цифровых изображений, демонстрирующих получение трансгенных мышей, экспрессирующих EGFP (белка зеленой флуоресценции) в РОМС (проопиомеланокортиновых) нейронах ARC (дугообразного ядра). Фигура 1 представляет собой схематическую диаграмму структуры трансгена POMC-EGFP. На Фигуре 1а представлено цифровое изображение, показывающее идентификацию одного РОМС нейрона (показано стрелкой) с помощью флуоресценции EGFP (вверху) и IR-DIC-микроскопии (внизу) в живом срезе ARC перед регистрацией электрофизиологических данных. На Фигуре 1с представлен набор цифровых изображений, демонстрирующий колокализацию (светлые, справа) иммунореактивности EGFP (слева) и β-эндорфина (в середине) в нейронах РОМС дугообразного ядра. Столбики, показывающие масштаб изображения: b и с, 50 мкм. На Фигуре 1d представлен набор диаграмм, показывающий распространение EGFP-положительной сомы нейронов в ядре ARC. O = 5 клеток, • = 10 клеток.
+
На Фигуре 2 представлены запись регистрирующего прибора и графики, демонстрирующие, что активация MOP-Rs приводит к гиперполяризации нейронов РОМС, меченных EGFP, путем открывания G-белок-связанных калиевых каналов внутренней регуляции. На Фигуре 2а представлена запись регистрирующего прибора, которая показывает, что met-энкефалин приводит к гиперполяризации нейронов РОМС и ингибирует все потенциалы действия. Горизонтальная полоса показывает время, в которое 30 мМ Met-Enk наносят на срез путем погружения. На Фигуре 2b представлен график, демонстрирующий сдвиг тока met-энкефалина и потенциала реверсии под воздействием внеклеточной концентрации K. На Фигуре 2с представлен график, показывающий, что met-энкефалин активирует MOP-R на нейронах РОМС. Наблюдают ток Met-Enk (30 мкМ) и в течение 1 минуты воздействуют MOP-R-специфическим антагонистом СТАР (1 мкМ). Дальнейшее воздействие СТАР Met-Enk не вызывает ток. Фигура представляет данные по трем экспериментам.
На Фигуре 3 представлены записи регистрирующих приборов и графики, демонстрирующие, что лептин деполяризует нейроны РОМС, действуя через неспецифический катионный канал, и снижает ГАМКергический сигнал на клетках РОМС. На Фигуре 3а представлены записи регистрирующих приборов, демонстрирующие, что лептин деполяризует нейроны РОМС и повышает частоту потенциалов действия в интервале от 1 до 10 минут после введения. Фигура является репрезентативным примером записей, сделанных по 77 нейронам РОМС. На Фигуре 3b представлен график, показывающий, что лептин вызывает зависимую от концентрации деполяризацию клеток РОМС. Деполяризацию, вызываемую лептином, определяют как 0,1, 1, 10, 50 и 100 нМ (ЕС50=5,9 нМ) в (8, 7, 9, 3, 45) клетках, соответственно. На Фигуре 3с представлен график, показывающий, что лептин деполяризует клетки РОМС путем активации неспецифического катионного тока. Фигура представляет реакцию в 10 клетках. На Фигуре 3d представлен график, показывающий, что лептин снижает частоту IPSCS в клетках РОМС. На Фигуре в качестве примера приведено 5 клеток, в которых лептин (в концентрации 100 нМ) снижает частоту IPSCS. На Фигуре 3е представлены записи регистрационных приборов, демонстрирующие, что лептин не действует на 5 соседних нефлуоресцентных нейронов ARC. На Фигуре 3f приведены записи регистрационных приборов, показывающие, что лептин вызывает гиперполяризацию 5 нефлуоресцентных нейронов ARC.
8
8
На Фигуре 4 представлен набор изображений, показывающий, что ГАМКергические вводы в клетки РОМС происходят из нейронов NPY, которые коэкспрессируют ГАМК. На Фигуре 4а приведен график, демонстрирующий, что NPY повышает частоту miniIPSCS в нейронах РОМС. На Фигуре 4b представлен график, демонстрирующий, что D-Trp-yMSH (7 нМ), в дозе, которая селективно активирует MC3-R, повышает частоту ГАМКергических IPSCS в нейронах РОМС. На Фигуре 4с представлены записи регистрационных приборов, показывающие, D-Trp-yMSH вызывает гиперполяризацию нейронов РОМС. Фигуры 4а, 4b и 4с являются репрезентативными. На Фигуре 4d представлен набор цифровых изображений, демонстрирующих экспрессию NPY в нервных окончаниях, прилежащих к нейронам РОМС в ARC. Нервные окончания NPY (черные, указаны стрелками); сома нейронов РОМС (показана серым). Столбик, показывающий масштаб, имеет размер 10 мкм. На Фигуре 4е приведено цифровое изображение, демонстрирующее экспрессию ГАМК и NPY в нервных окончаниях с синапсами на нейронах в ARC. Иммунореактивность ГАМК (частицы золота размером 10 нм, стрелки без хвостового оперения) и иммунореактивность NPY (частицы золота размером 25 нм, стрелки с хвостовым оперением) находятся в раздельных популяциях везикул, колокализованных в синаптических бутонах, которые обеспечивают непосредственный контакт с сомой нейронов РОМС (DAB при контрастировании уранилацетатом и цитратом свинца, диффузное черное окрашивание цитоплазмы). Столбик, указывающий масштаб, 1 мкм. На Фигуре 4f представлена диаграмма модели NPY/ГАМК и нейронов РОМС в ARC.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
На Фигуре 5 представлен набор графиков, касающихся пищевой реакции крыс на PYY3-36. На Фигуре 5а приведен график в виде столбиков питания в темной фазе, сводящий данные по поглощению пищи после внутрибрюшинной инъекции PYY3-36. Крысам со свободным доступом к пище инъекционным путем вводили PYY в указанных дозах (мкг/100 г) или физиологический раствор непосредственно перед выключением света и измеряли кумулятивное поглощение пищи за 4 часа. Результаты представляют как среднее значение ± s.e.m. (стандартная ошибка) (n=8/группу), *=p<0,05, **=p<0,01, ***=<0,001 относительно физиологического раствора. На Фигуре 5b представлен график в виде столбиков, отражающий поглощение пищи после внутрибрюшинной инъекции PYY. Подвергнутым голоданию крысам инъекционным путем вводили PYY в указанных дозах (мкг/100 г) или физиологический раствор и измеряли кумулятивное поглощение пищи за 4 часа. Результаты представляют как среднее значение ± s.e.m. (n=8/группу), *=p<0,05, **=p<0,01, ***=<0,001 относительно физиологического раствора. На Фигуре 5с представлен график в виде столбиков, отражающий кумулятивное поглощение пищи после внутрибрюшинной инъекции физиологического раствора или PYY. Подвергнутым голоданию крысам инъекционным путем вводили либо физиологический раствор (черные столбики), либо PYY в дозе 5 мкг/100 г (белые столбики) и измеряли кумулятивное поглощение пищи в указанных точках времени. Результаты выражают как среднее значение ± s.e.m. (n=12/группу), **=p<0,01 относительно физиологического раствора. На Фигуре 5d приведен линейный график увеличения массы тела в период хронического лечения PYY. Крысам путем внутрибрюшинной инъекции дважды в день в течение 7 дней вводили PYY в дозе 5 мкг/100 г (белые квадраты) или физиологический раствор (черные перевернутые треугольники). Увеличение массы тела вычисляли ежедневно. Результаты выражают как среднее значение ± s.e.m. (n=12/группу), **=p<0,01 относительно физиологического раствора.
2
3-36
На Фигуре 6 представлен набор цифровых изображений экспрессии c-fos у мышей Pomc-EGFP. На Фигурах 6а и 6b представлены цифровые изображения репрезентативных срезов (теменная область - 1,4 мм), отражающие экспрессию c-fos в дугообразном ядре мышей Pomc-EGFP как ответ на внутрибрюшинное введение физиологического раствора (см. Фигуру 6а) или PYY (5 мкг/100 г) (см Фигуру 6b). Линия, показывающая масштаб изображения 100 мкм. 3V - третий желудочек; ARC дугообразное ядро. На Фигурах 6с и 6d представлены цифровые изображения репрезентативных срезов, демонстрирующие нейроны POMC-EGFP (см. Фигуру 6с) и иммунореактивность c-fos (см. Фигуру 6d) либо в колокализованном виде (светлые стрелки), либо отдельно друг от друга (одна более темная стрелка). Линия, показывающая масштаб изображения, 25 мкм.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
На Фигуре 7 представлен набор графиков в виде столбиков, отражающий введение крысам PYY в дугообразное ядро и эффекты на питание внутрибрюшинного введения PYY мышам Y2r-null. На Фигуре 7а представлен график в виде столбиков поглощения пищи после инъекционного введения PYY в дугообразное ядро. Подвергнутым голоданию крысам инъекционным путем вводили физиологический раствор или PYY в дугообразное ядро в указанных дозах. Через 2 часа после инъекции измеряли поглощение пищи, **=p<0.01 относительно физиологического раствора. На Фигурах 7b и 7с представлены графики в виде столбиков, отражающие пищевую реакцию на PYY у мышей Y2r-null после внутрибрюшинного введения: потомству мышей дикого типа (см. Фигуру 7b) и мышам Y2r-null (см. Фигуру 7с), подвергнутым голоданию в течение 24 часов, инъецировали PYY в указанных дозах (мкг/100 г) или физиологический раствор и измеряли кумулятивное поглощение пищи в течение 4 часов. Результаты представлены как среднее значение ± s.e.m. (n=5/группу), *=p<0,05, **=p<0,01 относительно физиологического раствора.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
На Фигуре 8 представлен набор изображений, касающихся электрофизиологического и нейропептидного ответа на PYY и Y2A. На Фигуре 8а представлена запись регистрирующего прибора, демонстрирующая эффект PYY (концентрация 10 нМ) на частоту потенциалов действия в нейронах РОМС (записи для цельноклеточной конфигурации; n=22) * p<0,05. PYY вводят во время D в течение 3 минут; линия базового уровня - 3 - 0 минут; PYY 2-5 минуты и отмывание 8-11 минут. Вставка показывает репрезентативную запись мембранного потенциала и частоту следования импульсов потенциала действия. На Фигуре 8b представлен график, отражающий эффект PYY (в концентрации 10 нМ) на частоту следования импульсов потенциала действия в записях потенциала пэтч-клампа со свободным прикреплением к клеткам (n=8). Данные, характеризующие отдельные клетки, нормализованы относительно числа импульсов за период 200 с до добавления PYY. На Фигуре 8с приведена запись регистрирующего прибора и график эффекта PYY (в концентрации 50 нМ) на спонтанные IPSCS на нейронах РОМС (n=13). На вставке показана репрезентативная запись IPSCS до и после добавления PYY (концентрация 50 нМ), соответственно. Результаты, приведенные на Фигурах 8а-8с выражают как среднее значение ± s.e.m. На Фигурах 8d и 8е приведены графики в виде столбиков, показывающие выход NPY (см. Фигуру 8d) и α-MSH (см. Фигуру 8е) из эксплантатов гипоталамуса в ответ на Y2A. Срезы гипоталамуса инкубируют с искусственным CSF (aCSF) с добавлением или без добавления 50 нМ Y2A в течение 45 минут. Результаты выражают как среднее значение ± s.e.m. (n=40), **=p<0,01, ***=p<0,001 относительно физиологического раствора.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
На Фигуре 9 представлен набор графиков, показывающий эффект вливания PYY на аппетит и поглощение пищи у человека. На Фигуре 9а приведен график потребления калорий из свободно выбранных закусок через 2 часа после вливания физиологического раствора или PYY. Тонкие линии показывают индивидуальные изменения в потреблении калорий у каждого субъекта при введении физиологического раствора и PYY. Толстая линия отражает среднее изменение, происходящее при двух вариантах вливаний (n=12). На Фигуре 9b приведен график 24-часового потребления калорий после вливания физиологического раствора или PYY. Общее потребление калорий показывают для 24-часового периода после вливания либо физиологического раствора, либо PYY на основании оценки с помощью журнала регистрации питания. Данные приведены как среднее значение ± s.e.m. (n=12), [***]=p<0,0001 относительно физиологического раствора. На Фигуре 9с представлен график учета аппетита (относительная шкала). Аналоговые визуальные системы учета (см. статью Raben и соавт., Br. J. Nutr., 73:517-30, (1995)) показывают ощущение голода во время и после вливаний. Результаты представлены как отклонение от уровня базовой линии, и они являются средними значениями + s.e.m. по всем 12 субъектам.
Список последовательностей
Последовательности нуклеиновых кислот и аминокислот, перечисленные в прилагаемом списке последовательностей, приведены с использованием стандартных буквенных сокращений для нуклеотидных оснований и буквенного кода для аминокислот, как определено в 37C.F.R. 1.822. Показана только одна нить каждой последовательности нуклеиновой кислоты, но включение комплементарной нити подразумевается в виде любой ссылки на представленную нить.
Осуществление изобретения
I. Сокращения
α-MSH: α-меланокортин-стимулирующий гормон
ARC: дугообразное ядро
EPSP: возбуждающий постсинаптический потенциал
ГАМК: γ-аминомасляная кислота
GFP, EGFP: белок зеленой флуоресценции
IPSCS: тормозной постсинаптический ток
т.п.н.: килобаз, (тысяча пар оснований)
кг: килограмм
MOP-R: мю-опиоидный рецептор
мВ: милливольт
NPY: нейропептид Y
пмоль: пикомоль
РОМС: проопиомеланокортин
RIA: радиоиммуноанализ
RPA: анализ защиты РНКазы
s.e.m: стандартная ошибка
ТН: тирозингидроксилаза
мкМ: микромольный
В: вольт
28
31
Y2A: N-aцeтил(Leu,Leu)NPY(24-36)
II. Термины
Если не указано иначе, технические термины используют в соответствии с принятой в данной области их трактовкой. Определения терминов, распространенных в молекулярной биологии, можно найти в монографии Benjamin Lewin, Гены V (Genes V), опубликованной Oxford University Press, (1994) (ISBN 0-19-[854287-9)]; в монографии под ред. Kendrew и соавт. Энциклопедия молекулярной биологии (The Encyclopedia of Molecular Biology), опубликованной Blackwell Science Ltd., (1994) (ISBN 0-632-02182-9) и монографии под ред. Robert A. Meyers, Полный настольный справочник по молекулярной биологии и биотехнологии (Molecular Biology и Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference), опубликованный VCH Publishers, Inc., (1995) (ISBN 1-56081-569-8).
Для облегчения экспертизы различных вариантов осуществления данного открытия представлены следующие объяснения специальных терминов.
Потенциал действия: быстро распространяющийся электрический сигнал, который проходит по аксону нейрона и над поверхностной мембраной многих мышечных и железистых клеток. В аксонах они короткие, проходят с постоянной скоростью и поддерживают постоянную амплитуду. Как все электрические сигналы центральной нервной системы, потенциал действия представляет собой изменение мембранного потенциала, вызываемое потоком ионов, проходящим через мембранные каналы. В одном из вариантов осуществления потенциал действия является регенеративной волной проницаемости натрия.
Животное: живые многоклеточные позвоночные организмы категории, которая включает, например, млекопитающих и птиц. Термин млекопитающее включает как человека, так и млекопитающих, отличных от человека. Аналогично термин "субъект" включает как человека, так и объекты ветеринарии.
Анорексия: Недостаток или потеря аппетита, вызываемого пищей. В одном из вариантов осуществления анорексия является результатом "нервной анорексии". Это пищевое нарушение, в основном поражающее женщин обычно в начале периода полового созревания. Оно характеризуется отказом от поддержания нормальной минимальной массы тела, сильным страхом увеличения массы тела или ожирения и беспокойством по поводу внешнего вида тела, что в результате дает ощущение того, что некоторые части тела толстеют или стали толстыми даже в случаях сильного истощения, неоправданную уверенность в собственной оценке массы или формы тела и вызывает аменорею. Сопутствующие признаки часто включают отрицание заболевания и невосприимчивость к психотерапии, симптомы депрессии, значительно пониженное либидо и обсессию (навязчивую идею) или специфическое поведение в отношении пищи, такое как запасание пищи. Нарушение разделяют на два подтипа - ограничивающий тип, при котором снижение массы тела достигается в основном путем диеты или физических упражнений, и тип, связанный с перееданием/очищением организма, при котором поведение переедания или очищения также происходят регулярно.
Антагонист: Субстанция, тенденцией активности которой является отмена действия другой, как в случае агента, который связывает клеточный рецептор, не вызывая биологической реакции, блокируя связывание субстанций, которые могли бы вызвать такие реакции.
Аппетит: Естественное желание или стремление к пище. В одном из вариантов осуществления, аппетит измеряют путем обследования с целью оценки желания пищи. Повышенный аппетит, как правило, приводит к усилению пищевого поведения.
Препараты для подавления аппетита: Соединения, снижающие желание пищи. Имеющиеся в продаже препараты для подавления аппетита включают без ограничения перечисленным амфепрамон (диэтилпропион), фентермин, мазиндол и фенилпропаноламин фенфлурамин, дексфенфлурамин и флуоксетин.
d
Связывание: Специфическое взаимодействие между двумя молекулами такое, что две молекулы взаимодействуют. Связывание может быть специфическим и избирательным, при этом одна молекула имеет преимущество в связывании по сравнению с другой молекулой. В одном из вариантов осуществления специфическое связывание идентифицируют по константе диссоциации (K).
2
2
2
2
2
2
2
Индекс массы тела (ВМI): Математическая формула для измерения массы тела, иногда также называемая индексом Quetelet. BMI вычисляют путем деления массы тела (в кг) на рост (в м). Согласно современным стандартам как для мужчин, так и для женщин за "нормальный" принимают ВМI 20-24,9 кг/м. В одном из вариантов осуществления ВМI, превышающий 25 кг/м, может быть использован для идентификации ожирения у субъекта. Ожирение I степени соответствует ВМI 25-29,9 кг/м. Ожирение II степени соответствует ВМI 30-40 кг/м, и ожирение III степени соответствует ВМI более 40 кг/м (см. статью Jequier, Am. J. Clin. Nutr., 45: 1035-47, (1987)). Идеальная масса тела будет варьировать у видов и отдельных лиц в зависимости от роста, телосложения, структуры костей и пола.
c-fos: Клеточный гомолог вирусного онкогена v-fos, обнаруженного в FBJ (Finkel-Biskis-Jinkins) и вирусах мышиной остеосаркомы FBR (MSV). Человеческий ген fos картируется на хромосоме 14q21-q31. Человеческий fos идентифицирован как TIS-28. Считают, что c-fos играет важную роль в сигнальной трансдукции, пролиферации и дифференцировке клеток. Он является ядерным белком, который в комбинации с другими факторами транскрипции (например, jun) действует как транс-активирующий регулятор экспрессии генов. C-fos представляет собой ген немедленного раннего ответа, который, как полагают, играет ключевую роль в раннем ответе клеток на факторы роста. C-fos также участвует в контроле клеточного роста и дифференцировки эмбриональных гемопоэтических клеток и нервных клеток. Известны кодирующие последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот человеческого c-fos (например, см. работу Verma и соавт., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 51:949, (1986); GenBank, регистрационные номера K00650 и М 16287, а информацию в Интернете).
Кахексия: Общее физическое истощение и неправильное питание, которые зачастую связаны с хроническим болезненным процессом. Кахексию часто отмечают у пациентов, больных раком, СПИДом или другими заболеваниями. Кахексия включает без ограничения перечисленным 1) раковую кахексию, наблюдаемую в случаях злокачественной опухоли; 2) сердечную кахексию - истощение, обусловленное сердечным заболеванием, которое обычно обусловлено сочетанием повышенного расхода калорий и пониженного потребления или использования калорий; 3) фторную кахексию, отмечаемую при флюорозе; 4) гипофизарную кахексию; 5) кахексию, связанную с недостаточностью функции гипофиза - комплекс симптомов, происходящих от общей депривации функции гипофиза, включая туберкулез, потерю половой функции, атрофию желез, связанных с гипофизом, брадикардию, гипотермию, апатию и кому; 6) малярийную кахексию - группу физических признаков хронического характера, которые обусловлены предшествующими приступами тяжелой малярии; 7) меркуриализм, наблюдаемый при хроническом отравлении ртутью; 8) гипофизарную кахексию (болезнь Симмондса); 9) свинцовую кахексию, наблюдаемую при хроническом отравлении свинцом; 10) супраренальную кахексию, связанную с болезнью Аддисона и 11) уремическую кахексию, связанную с другими системными симптомами хронической почечной недостаточности.
Калорийность или потребление калорий: Количество калорий (энергии), потребляемой отдельным лицом.
Калория: Единица измерения пищи. Стандартную калорию определяют как 4,184 абсолютных джоулей или количество энергии, необходимое для того, чтобы повысить температуру одного грамма воды от 15 до 16°С (или 1/100 количества энергии, необходимой для повышения температуры одного грамма воды при давлении в 1 атмосферу от 0°С до 100°С. Пищевая калория фактически равна 1000 стандартных калорий (1 пищевая калория = 1 килокалории).
Консервативная вариация: Замена одного остатка аминокислоты другим, биологически близким остатком. Примеры консервативных вариаций включают замену одного гидрофобного остатка, такого как изолейцин, валин, лейцин или метионин, другим, или замену аргинина лизином, или замену одного полярного остатка другим, такую как замена аргинина лизином, глутаминовой кислоты аспарагиновой кислотой или глутамина аспарагином и т.п. Термин "консервативная вариация" включает также использование замещенной аминокислоты вместо незамещенной исходной аминокислоты при условии, что антитела, образующиеся к замещенному полипептиду иммунореактивны также с незамещенным полипептидом.
Неограничивающие примеры консервативных замен аминокислот включают нижеперечисленные замены:
Исходный остаток
Консервативные замены
Ala
Ser
Arg
Lys
Asn
Gln, His
Asp
Glu
Cys
Ser
Gln
Asn
Glu
Asp
His
Asn; Gln
Ile
Leu, Val
Leu
Ile; Val
Lys
Arg; Gln; Glu
Met
Leu; Ile
Phe
Met; Leu; Tyr
Ser
Thr
Thr
Ser
Trp
Tyr
Tyr
Trp; Phe
Val
Ile; Leu
Деполяризация: Повышение мембранного потенциала клетки. Некоторые стимулы снижают заряд в плазматической мембране. Они могут быть представлены электрическими стимулами (которые открывают потенциал-регулируемые каналы), механическими стимулами (которые активируют механически регулируемые каналы) или определенными нейромедиаторами (которые открывают лиганд-регулируемые каналы). В каждом случае облегченная диффузия натрия в клетки повышает потенциал покоя в той точке на клетке, которая создает возбуждающий постсинаптический потенциал (EPSP). Деполяризации могут быть также созданы путем снижения частоты тормозных постсинаптических токов (IPSCs), которые с помощью ингибирующих нейромедиаторов способствуют притоку ионов хлорида в клетку, создавая IPSC. При повышении потенциала до порогового напряжения (приблизительно 50 мВ в нейронах млекопитающих) в клетке происходит генерация потенциала действия.
Диабет: Неспособность клеток транспортировать через мембраны эндогенную глюкозу как вследствие эндогенной недостаточности инсулина, так и/или дефекта чувствительности к инсулину. Диабет представляет собой хронический синдром нарушения обмена углеводов, белков или жиров вследствие недостаточной секреции инсулина или устойчивости к инсулину ткани-мишени. Существует две основные формы диабета: инсулинзависимый сахарный диабет (IDDM, тип I) и неинсулинзависимый сахарный диабет (NIDDM, тип II), которые отличаются по этиологии, патологии, генетике, возрасту начала заболевания и лечению.
Обе основные формы диабета характеризуются неспособностью доставлять инсулин в количестве и в точное время, которые необходимы для контроля гомеостаза глюкозы. Диабет типа I или инсулинзависимый сахарный диабет (IDDM) обусловлен деструкцией β-клеток, которая приводит в результате к недостаточным уровням эндогенного инсулина. Диабет типа II или неинсулинзависимый диабет вызван как дефектом чувствительности организма к инсулину, так и относительной недостаточностью продукции инсулина.
Поглощение пищи: Количество пищи, употребляемой лицом. Поглощение пищи может быть измерено объемом или массой. В одном из вариантов осуществления поглощение пищи представляет собой пищу, потребляемую лицом. В другом варианте осуществления поглощение пищи представлено количеством белков, жиров, углеводов, холестерина, витаминов, минералов или любых других пищевых компонентов, потребляемых лицом. Термин "поглощение белков" относится к количеству белков, потребляемых лицом. Аналогично, термины "поглощение жиров", "поглощение углеводов", "поглощение холестерина", "поглощение витаминов" и "поглощение минералов" относятся к количеству белков, жиров, углеводов, холестерина, витаминов или минералов, употребляемых лицом.
Гиперполяризация: Снижение мембранного потенциала клетки. Ингибирующие нейромедиаторы подавляют передачу нервных импульсов посредством гиперполяризации. Данный тип гиперполяризации называют тормозным постсинаптическим потенциалом (IPSP). Несмотря на то что клетка не заряжена до порогового напряжения, для гиперполяризованной клетки необходим более сильный возбуждающий стимул для достижения порогового значения.
Тормозной постсинаптический ток: Ток, который ингибирует электрофизиологический параметр постсинаптической клетки. Потенциал постсинаптической клетки может быть проанализирован с целью определения эффекта на пресинаптическую клетку. В одном из вариантов осуществления постсинаптическую клетку поддерживают в состоянии фиксации напряжения и регистрируют постсинаптические токи. При необходимости могут быть добавлены антагонисты других классов токов. В одном конкретном неограничивающем примере с целью регистрации ГАМКергических IPSCs добавляют блокаторы возбуждающих каналов или рецепторов. Затем в течение времени определяют мгновенную частоту.
В одном из вариантов осуществления IPSCs является мерой частоты выхода ГАМК из нейрона, содержащего NPY. Поскольку нейроны, содержащие NPY выделяют ГАМК на нейроны РОМС, измерение частоты IPSCs является мерой ингибирующего сигнала, который получают нейроны РОМС, и может быть использовано для оценки эффекта агониста PYY.
Мембранный потенциал: Электрический потенциал внутренней части клетки относительно окружающей среды, такой как раствор, в котором находится клетка. Компетентный специалист в данной области легко может определить мембранный потенциал клетки, например, с помощью принятых методик с использованием целых клеток. Активация клетки связана с менее отрицательными мембранными потенциалами (например, сдвигами от приблизительно -50 мВ до приблизительно -40 мВ). Данные изменения потенциала повышают вероятность возникновения потенциалов действия и, таким образом, приводят к повышению частоты потенциалов действия.
Частоту следования потенциалов действия можно определить с помощью многих подходов, таких как использование принятой методики на основе целых клеток или, например, использование цельноклеточных конфигураций с перфорированным участком или конфигураций с прикреплением к клеткам. В каждом событии оценивают не абсолютное значение напряжения или тока, а частоту быстрых отклонений, характеризующих потенциалы действия, которую определяют как функцию времени (вследствие этого данная частота представляет собой мгновенную частоту, обозначаемую в "бинах"). Данный временной компонент может быть связан со временем, в которое соединение, такое как агонист PYY, вносят в емкость для анализа эффекта соединения, такого как агонист PYY, на частоту следования импульсов потенциала действия.
Нейропептид Y (NРY): Пептид из 36 аминокислот, который представляет собой нейропептид, идентифицированный в головном мозге человека. Считают, что NPY является важным регулятором как в центральной, так и в периферической нервной системе и воздействует на широкий круг физиологических параметров, включая эффекты на психомоторную активность, поглощение пищи, центральную эндокринную секрецию и вазоактивность сердечно-сосудистой системы. Высокие концентрации NPY обнаружены в симпатических нервах, обеспечивающих коронарную, церебральную и почечную сосудистую сеть и играющих роль в вазоконстрикции. Центры связывания NPY идентифицированы во многих тканях, включая селезенку, кишечные оболочки, головной мозг, гладкую мускулатуру аорты, почки, яичко и плаценту. Кроме того, связывающие центры описаны в ряде клеточных линий крысы и человека.
Рецептор нейропептида Y (NPY) по структуре/активности близок семейству пептидов поджелудочной железы. Данное семейство включает NPY, который преимущественно синтезируется в нейронах, пептид YY (PYY), который преимущественно синтезируется в эндокринных клетках кишки, и полипептид поджелудочной железы (РР), который преимущественно синтезируется в эндокринных клетках поджелудочной железы. Данные пептиды из 36 аминокислот имеют компактную спиральную структуру, включающую аминокислотную структуру, называемую "РР-складкой", в середине пептида.
NPY связывается с несколькими рецепторами, включая рецепторы Y1, Y2, Y3, Y4 (РР), Y5, Y6 и Y7. Данные рецепторы распознают по аффинностям связывания, фармакологии и последовательности (если она известна). Большинство, если не все из данных рецепторов представляют собой G-белок-связанные рецепторы. В целом предполагают, что рецептор Y1 является постсинаптическим и опосредует многие из известных функций нейропептида Y на периферии. Изначально данный рецептор описан, как обладающий низкой аффинностью к С-концевым фрагментам нейропептида Y, таким как фрагмент 13-36, но он взаимодействует с нейропептидом Y полной длины и пептидом YY с равной афинностью (например, см. публикацию РСТ WO 93/09227).
Фармакологически рецептор Y2 отличается от Y1 тем, что проявляет аффинность к С-концевым фрагментам нейропептида Y. Рецептор Y2 наиболее часто дифференцируют по аффинности нейропептида Y(13-36), хотя фрагмент 3-36 нейропептида Y и пептид YY обладают повышенной аффинностью и избирательностью (см. статью Dumont и соавт., Society for Neuroscience Abstracts, 19:726, (1993)). Передача сигнала через оба рецептора, Y1 и Y2, связана с ингибированием аденилатциклазы. Обнаружено также, что связывание с рецептором Y-2 снижает внутриклеточные уровни кальция в синапсе путем избирательного ингибирования кальциевых каналов N-типа. Кроме того, рецептор Y-2 подобно рецепторам Y1 различным образом связывается с вторичными мессенджерами (см. Патент США No. 6355478). Рецепторы Y2 обнаружены во многих участках головного мозга, включая гиппокамп, черная субстанция, таламусе (зрительном бугре), гипоталамусе и стволе головного мозга. Клонированы рецепторы Y2 человека, мыши, обезьяны и крысы (например, см. Патент США No. 6420352 и Патент США No. 6355478).
Агонист рецептора Y2 представляет собой пептид, маленькую молекулу или химическое соединение, которые преимущественно связываются с рецептором Y2 и стимулируют передачу внутриклеточного сигнала. В одном из вариантов осуществления агонист рецептора Y2 связывается с рецептором с равной или большей аффинностью, чем NPY. В другом варианте осуществления агонист избирательно связывается с рецептором Y2 по сравнению со связыванием другого рецептора.
d
d
Компетентный специалист в данной области легко может определить значение константы диссоциации (K) заданного соединения. Данная величина зависит от избирательности тестируемого соединения. Например, соединения с K меньше, чем 10 нМ, как правило, считают перспективным кандидатным лекарственным веществом. Однако соединение, которое имеет более низкую аффинность, но является избирательным в отношении определенного рецептора, также может быть хорошим кандидатным лекарственным веществом. В одном специфическом неограничивающем примере анализ, например конкурентный анализ, используют для определения, представляет ли соединение интерес в качестве агониста рецептора Y2. Анализы, используемые для оценки антагонистов рецептора нейропептида Y, также хорошо известны в области техники (см. Патент США No. 5284839, который включен в данном контексте в виде ссылки, и статью Walker и соавт., Journal of Neurosciences, 8:2438-2446, (1988)).
Нормальная каждодневная диета: Среднее поглощение пищи для особи данного вида. Нормальную каждодневную диету можно выразить в единицах потребления калорий, потребления белка, потребления углеводов и/или потребления жиров. Для человека нормальная каждодневная диета, как правило, предусматривает следующее: приблизительно 2000, приблизительно 2400 или приблизительно 2800 до значительно большего количества калорий. Кроме того, нормальная каждодневная диета человека, как правило, включает от приблизительно 12 г до приблизительно 45 г белка, от приблизительно 120 г до приблизительно 610 г углеводов и от приблизительно 11 г до приблизительно 90 г жиров. Низкокалорийная диета для человека не превышала бы приблизительно 85% и предпочтительно приблизительно 70% от нормального потребления калорий.
У животных потребности в калориях и питательных веществах варьируют в зависимости от вида и размера животного. Например, у кошек общее потребление калорий/фунт, а также процентное распределение белка, углеводов и жиров меняется с возрастом и репродуктивным статусом кошки. Однако общая норма для кошек составляет 40 кал./фунт/день (18,2 кал./кг/день). От приблизительно 30% до приблизительно 40% должен составлять белок, от приблизительно 7% до приблизительно 10% должно быть из углеводов и от приблизительно 50% до приблизительно 62,5% должно происходить из потребления жиров. Компетентный специалист в данной области может легко определить нормальную каждодневную диету особи любого вида.
2
2
2
Ожирение: Состояние, при котором избыток жира в организме может предполагать наличие риска для здоровья субъекта (см. статью Barlow и Dietz, Pediatrics, 102:E29, (1998); National Institutes of Health, National Heart, Lung, и Blood Institute (NHLBI), Obes. Res. 6 (suppl. 2): 51S- 209S, (1998)). Избыток жира в организме является результатом нарушения равновесия потребления энергии и затрат энергии. В одном из вариантов осуществления индекс массы тела (BMI) используют для оценки ожирения. В одном из вариантов осуществления BMI от 25,0 кг/м до 29,9 кг/м является избыточной массой тела, тогда как BMI 30 кг/м является ожирением.
В другом варианте осуществления для оценки ожирения используют окружность талии. В данном варианте осуществления окружность талии у мужчин 102 см и более рассматривают как ожирение, тогда как у женщин ожирением считается окружность талии 89 см и более. Имеются строгие доказательства того, что ожирение воздействует на заболеваемость и смертность субъектов. Например, субъект с ожирением имеет повышенный риск развития сердечных заболеваний, инсулинонезависимого диабета (типа 2), гипертензии, инсульта, рака (например, рака эндометрия, молочной железы, простаты и толстой кишки), дислипидемии, заболевания желчного пузыря, приступов апноэ во сне, пониженной фертильности и остеоартрита и др. (см. статью Lyznicki и соавт., Am. Fam. Phys., 63:2185, (2001)).
2
2
Избыточная масса тела: Субъект, масса тела которого превышает его идеальную массу тела. Субъект с избыточной массой тела может иметь ожирение, но не обязательно страдает ожирением. В одном из вариантов осуществления субъект с избыточной массой тела является любым субъектом, который желает уменьшить свою массу тела. В другом варианте осуществления субъект с избыточной массой тела является субъектом с ВМI от 25,0 кг/м до 29,9 кг/м.
Полипептид поджелудочной железы: пептид из 36 аминокислот, продуцируемый поджелудочной железой, который имеет гомологию с PYY и NPY.
Периферическое введение: Введение вне центральной нервной системы. Периферическое введение не включает прямое введение в головной мозг. Периферическое введение включает без ограничения перечисленным внутрисосудистое, внутримышечное, подкожное, ингаляционное, пероральное, ректальное, чрескожное или интраназальное введение.
Полипептид: Полимер, в котором мономеры представляют собой остатки аминокислот, которые связаны амидными связями. Когда аминокислоты представлены α-аминокислотами, могут быть использованы либо L-оптический изомер, либо D-оптический изомер, при этом предпочтительными являются L-изомеры. Термины "полипептид" или "белок", как используют в данном контексте, предназначены для схватывания любой аминокислотной последовательности и включают модифицированные последовательности, такие как гликопротеины. Термин "полипептид" специально предназначен для того, чтобы покрывать природные белки, а также те белки, которые получены рекомбинантным или синтетическим путем. Термин "фрагмент полипептида" относится к части полипептида, например, такому фрагменту, который представляет по меньшей мере одну последовательность, участвующую в связывании рецептора. Термин "функциональные фрагменты полипептида" относится ко всем фрагментам полипептида, которые сохраняют активность полипептида. Биологически функциональные пептиды могут также включать слитые белки, в которых пептид, представляющий интерес, слит с другим пептидом, который не снижает его желательную активность.
3-36
PYY: Пептид полипептида YY, полученный или выделенный из любого вида. Так, PYY включает человеческий полипептид полной длины (как представлено в SEQ ID NO:1) и видовые вариации PYY, содержащие, например, PYY мыши, хомячка, курицы, крупного рогатого скота, крысы и собаки (SEQ ID NOS:5-12). В одном из вариантов осуществления агонисты PYY не включают NPY. PYY включает также PYY. "Агонист PYY" представляет собой любое соединение, которое связывается с рецептором, который специфически связывает PYY и вызывает эффект PYY. В одном из вариантов осуществления агонист PYY представляет собой соединение, которое влияет на поглощение пищи, потребление калорий или аппетит и/или которое демонстрирует специфическое связывание в анализе с использованием рецептора Y или конкурирует за связывание с PYY, как в анализе конкурентного связывания с меченым PYY. Агонисты PYY включают, но без ограничения перечисленным, соединения, которые связываются с рецептором Y2.
Практически очищенный: Полипептид, который практически не содержит другие белки, липиды, углеводы или другие материалы, с которыми он связан в естественных условиях. Например, полипептид может быть по меньшей мере на 50%, 80% или 90% очищен от других белков, липидов, углеводов или других материалов, с которыми он связан в естественных условиях.
Терапевтически эффективное количество: Доза, достаточная для предупреждения развития, или для регрессии нарушения, или способная облегчать признак или симптом нарушения, или которая может давать желательный результат. В ряде вариантов осуществления терапевтически эффективное количество PYY или его агониста - это количество, достаточное для подавления или прекращения увеличения массы тела, или количество, достаточное для снижения аппетита, или количество, достаточное для уменьшения потребления калорий, или поглощения пищи, или повышения затрат энергии.
Если не объяснено иначе, все технические и научные термины, используемые в данном контексте, имеют такое же значение, какое обычно подразумевает обычный специалист в области, к которой относится данное открытие. Термины в единственном числе включают объекты во множественном числе, пока из контекста ясно не следует иное. Аналогично, слово "или" предусматривает включение "и", пока из контекста ясно не следует иное. Кроме того, следует понимать, что все размеры оснований или размеры аминокислот, а также все молекулярные массы или величины молекулярных масс, данные для нуклеиновых кислот и полипептидов являются приблизительными и приведены для описания. Хотя способы и материалы, близкие или эквивалентные описанным в данном контексте, могут быть использованы при реализации или апробировании данного описания, подходящие способы и материалы описаны ниже. Термин "содержит" означает "включает". Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в данном контексте, введены в виде ссылки во всей их полноте. В случае возникновения противоречий данное описание, включая разъяснения терминов, будет служить для проверки. Кроме того, материалы, способы и примеры служат только для иллюстрации и не предназначены для ограничения.
Способы изменения поглощения пищи, аппетита, потребления калорий и затрат энергии
3-36
В данном контексте описан способ снижения поглощения пищи путем периферического введения субъекту терапевтически эффективного количества PYY или агониста PYY. В одном из вариантов осуществления введение PYY или агониста PYY приводит в результате к снижению количества либо общей массы, либо общего объема пищи. В другом варианте осуществления введение PYY или его агониста в результате дает снижение поглощения компонентов пищи, такое как снижение приема липидов, углеводов, холестерина или белков. В любом из способов, описанных в данном контексте, как предпочтительное соединение может быть введен PYY. Данное открытие включает способ модификации пищевого поведения и соответствующее применение PYY или его агониста для приготовления лекарственного препарата для целей, представленных в данном контексте, и включает применение PYY в качестве средства для уменьшения калорий, уменьшения потребления пищи или снижения аппетита или увеличения энергозатрат у субъекта.
В данном контексте представлен также способ снижения потребления калорий путем периферического введения субъекту терапевтически эффективного количества PYY или агониста PYY. В одном из вариантов осуществления общее потребление калорий снижают посредством периферического введения терапевтически эффективного количества PYY. В других вариантах осуществления снижают потребление калорий, связанное с приемом специфических компонентов пищи, таких как, но без ограничения перечисленным, прием липидов, углеводов, холестерина или белков.
В дополнительном варианте осуществления в данном контексте описан способ снижения аппетита путем введения терапевтически эффективного количества PYY или его агониста. Аппетит можно измерить любыми средствами, известными компетентному специалисту в данной области. Например, пониженный аппетит может быть определен с помощью психологической оценки. В данном варианте осуществления введение PYY в результате приводит к изменению ощущения голода, насыщения и/или сытости. Голод можно оценить любыми средствами, известными компетентному специалисту в данной области. В одном из вариантов осуществления голод оценивают с помощью психологических анализов, таких как оценка ощущения голода и чувственного восприятия, при использовании вопросника, такого как, но без ограничения указанным, вопросник с визуальной аналоговой шкалой (Visual Analog Score, VAS) (см. раздел Примеры). В одном конкретном неограничивающем примере голод оценивают путем ответов на вопросы, касающиеся желания пищи, напитков, будущего употребления пищи, тошноты и ощущений, связанных с запахом или вкусом.
В следующем варианте осуществления в данном контексте описан способ изменения энергетического обмена у субъекта. Способ включает периферическое введение субъекту терапевтически эффективного количества PYY или его агониста с целью изменения таким образом затрат энергии. Сжигание энергии происходит во всех физиологических процессах. Организм может напрямую изменить уровень затрат энергии посредством модуляции эффективности данных процессов или путем изменения числа и природы происходящих процессов. Например, при переваривании организм тратит энергию на передвижение пищи по кишке, а также расщепление пищи и внутриклеточные процессы, при этом эффективность клеточного метаболизма может быть изменена так, чтобы получить больше или меньше тепла. В следующем варианте осуществления в данном контексте описан способ любых и всех манипуляций в системе дугообразного ядра, представленных с данной заявке, которые согласованно изменяют поглощение пищи и противоположным образом изменяют затраты энергии. Затраты энергии представляют собой результат метаболизма клеток, синтеза белка, скорости метаболизма и использования калорий. Таким образом, в данном варианте осуществления периферическое введение PYY приводит к повышению затрат энергии и снижению эффективности использования калорий. В одном из вариантов осуществления терапевтически эффективное количество PYY или его агониста вводят субъекту для повышения таким образом затрат энергии.
3-36
В ряде вариантов осуществления PYY (например, PYY) или его агонист используют для контроля массы тела, а также лечения, снижения или профилактики ожирения, в частности, любого одного или более из следующих признаков: предупреждения и снижения набора массы тела, индукции и стимуляции уменьшения массы тела и снижения ожирения, измеренного с помощью индекса массы тела. Кроме того, описание касается применения PYY или его агониста в качестве активного ингрединта при производстве лекарственного средства для уменьшения потребления калорий, уменьшения потребления пищи или снижения аппетита или увеличения энергозатрат у субъекта. Далее описание касается способа поддержания желаемой массы тела, поддержания желаемого индекса массы тела, желательной внешности и хорошего здоровья с помощью PYY и его агониста.
Субъект может быть любым субъектом, включая человека и млекопитающих объектов ветеринарии. Так, субъект может быть представлен человеком или может быть приматом, отличным от человека, сельскохозяйственным животным, таким как свинья, крупный рогатый скот и птица, спортивным животным или домашним животным, таким как собаки, кошки, лошади, хомячки, грызуны, или животным - обитателем зоопарка, таким как львы, тигры или медведи.
В настоящее время ожирение является трудно поддающимся лечению, хроническим, практически неизлечимым нарушением обмена веществ. Терапевтический лекарственный препарат, эффективный в плане снижения массы тела у лиц с ожирением, мог бы оказать сильное положительное воздействие на их здоровье. Таким образом, субъект может быть представлен без ограничения перечисленным субъектом, который имеет избыточную массу тела или ожирение. В одном из вариантов осуществления субъект имеет или находится в зоне риска развития нарушения, при котором ожирение или наличие избыточной массы тела является фактором риска возникновения нарушения. Нарушения, представляющие интерес, включают, но без ограничения перечисленным, сердечно-сосудистое заболевание (включая, но без ограничения перечисленным, гипертензию, атеросклероз, застойную сердечную недостаточность и дислипидемию), инсульт, заболевание желчного пузыря, остеоартрит, апноэ во сне, репродуктивные нарушения, такие как, но без ограничения перечисленным, синдром поликистоза яичников, формы рака (например, рак молочной железы, простаты, толстой кишки, эндометрия, почки и пищевода), варикоз вен, acanthosis nigricans, экзема, непереносимость физических нагрузок, устойчивость к инсулину, гипертензия, гиперхолестеринемия, холелитиаз, остеоартрит, ортопедические повреждения, инсулинорезистентность (такая как, но без ограничения перечисленным, при диабете типа 2 и синдроме X) и тромбоэмболическое заболевание (см. статьи Kopelman, Nature, 404:635-43; Rissanen и соавт., British Med. J., 301,835, (1990)).
Другие сопутствующие нарушения включают также депрессию, тревогу, приступы паники, головные боли типа мигреней, PMS (предменструальный синдром), хронические боли, фибромиалгию, бессонницу, импульсивность, обсессивно-компульсивное расстройство и миоклонус. Ожирение является признанным фактором риска в плане повышения вероятности осложнений при общей анестезии (см., например, Kopelman, Nature, 404:635-43, (2000)). Она уменьшает продолжительность жизни и заключает в себе серьезный риск развития сочетанных заболеваний из вышеперечисленных.
Другими заболеваниями или нарушениями, ассоциированными с ожирением, являются врожденные пороки (ожирение у матери связано с повышенной вероятностью дефектов нервной трубки), карпальный туннельный синдром (CTS), хроническая венозная недостаточность (CVI), сонливость в дневное время, тромбоз глубоких вен (DVT), конечная стадия болезни почек (ESRD), подагра, нарушения температуры, нарушения иммунного ответа, нарушения функции дыхания, бесплодие, болезни печени, боль в нижней части спины, осложнения при родах и гинекологические осложнения, панкреатит, а также грыжи живота, acanthosis nigricans, эндокринные нарушения, хроническая гипоксия и гиперкапния, дерматологические эффекты, слоновая болезнь, желудочно-пищеводный рефлюкс, пяточные шпоры, отек нижних конечностей, маммомегалия (вызывающая большие проблемы, такие как боль от бретелек бюстгальтера, повреждения кожи, боль в шейке матки, постоянный запах и инфекции в кожных складках под грудью и т.п.), большая масса передней стенки живота (абдоминальный панникулит, сопровождающийся частым панникулитом, затруднениями в ходьбе, частыми инфекциями, запахом, трудностями одевания, болью в нижней части спины), мышечно-скелетные заболевания, псевдоопухоли головного мозга (или доброкачественная внутричерепная гипертензия) и скользящая грыжа пищеводного отверстия диафрагмы.
Данное описание изобретения касается лечения, профилактики, ослабления или облегчения состояний или нарушений, вызываемых, осложняющихся или обостряющихся в связи с относительно высокой доступностью питательных веществ. Под "состоянием или нарушением, которые могут облегчаться посредством снижения доступности калорий (или питательных веществ)" подразумевают любое состояние или нарушение у субъекта, которое либо вызывается, осложняется или обостряется в связи с относительно высокой доступностью питательных веществ, либо может быть может быть облегчено путем снижения доступности питательных веществ, например, путем уменьшения поглощения пищи. Данное изобретение может быть также полезным для субъектов с устойчивостью к инсулину, непереносимостью глюкозы или имеющих любую форму сахарного диабета (например, типа 1, 2 или гестационного диабета).
Данные состояния или нарушения представляют собой нарушения, связанные с повышенным потреблением калорий, инсулинорезистентностью или непереносимостью глюкозы, и включают, но без ограничения перечисленным, ожирение, диабет, в том числе диабет типа 2, пищевые нарушения, синдромы инсулинорезистентности и болезнь Альцгеймера.
В другом варианте осуществления субъект является субъектом, который желает уменьшить массу тела, такой как субъект женского или мужского пола, который желает изменить свою внешность. В еще одном варианте осуществления субъект является субъектом, который желает уменьшить ощущение голода, такой как, но без ограничения перечисленным: лицо, участвующее в выполнении долгосрочной работы, которая требует высокого уровня концентрации (например, солдаты на действительной службе, авиадиспетчеры или водители грузовиков на дальних маршрутах и т.п.).
3-36
Данное изобретение относится также к способу контроля потребления пищи у млекопитающих с помощью PYY или его антагониста. Описание изобретения касается также способа контроля массы тела с помощью PYY или его антагониста, в особенности, любого одного или более из следующих признаков: стимуляции, способствования и увеличения набора массы тела, снижения, подавления и предупреждения снижения массы тела, а также увеличения массы тела, измеряемого с помощью индекса массы тела. Кроме того, изобретение касается способа контроля любой одной или более из следующих характеристик: аппетита, насыщения и голода, в частности любого одного или более из следующих признаков: повышения, пробуждения и стимуляции аппетита, снижения, подавления или предупреждения насыщения и чувства насыщения и увеличения, стимуляции и усиления голода и чувства голода с помощью PYY или PYY.
Усиление набора массы может быть желательным по коммерческим причинам в животноводстве. Таким образом, возможно использование антагониста PYY для человека, домашних животных и других объективно или субъективно ценных животных, например лошадей. Антагонисты PYY могут быть использованы для стимуляции аппетита и усиления набора массы тела при плохом аппетите и снижении массы тела или возможности ее снижения. Конкретные неограничивающие примеры включают время болезни, период после случайной травмы или травмы, обусловленной хирургическим вмешательством (например, после ожогов и, в особенности, после тяжелых ожогов), период выздоровления, пожилой возраст, а также анорексия и булимия и другие состояния, вызывающие истощение. Стимуляция аппетита и увеличение массы тела могут быть особенно желательны при специфических состояниях, например, при кахексии (истощении) при СПИДе и у онкологических больных.
Подходящий формат введения может быть наилучшим образом определен субъектом или практическим врачом. В одном из вариантов осуществления фармацевтические композиции, которые включают PYY или его агонист или антагонист, предпочтительно будут приготовлены в виде унифицированной лекарственной формы, пригодной для индивидуального применения точных доз. Эффективное количество PYY или его агониста может быть введено в одной дозе или во множестве доз, например, ежедневно в течение курса лечения. В одном из вариантов осуществления PYY вводят, когда желателен его эффект (например, подавление аппетита, уменьшенное поглощение пищи или пониженное потребление калорий). В другом варианте осуществления PYY или его аналог вводят незадолго до момента, когда желателен его эффект, так, например, но без ограничения перечисленным, приблизительно за 10 минут, приблизительно за 15 минут, приблизительно за 30 минут, приблизительно за 60 минут, приблизительно за 90 минут или приблизительно за 120 минут до времени, когда желателен эффект. В другом варианте осуществления используют время выхода препарата.
В одном из вариантов осуществления терапевтически эффективное количество PYY или его агониста вводят в однократной пульсовой дозе, как болюсную дозу или как пульсовые дозы, вводимые в течение длительного времени. Таким образом, при пульсовых дозах используют болюсное введение PYY, за которым следует период времени, в который PYY не вводят субъекту, с последующим вторым болюсным введением. В конкретных неограничивающих примерах пульсовые дозы PYY вводят в течение дневного курса, в течение недельного курса или в течение месячного курса.
3-36
Терапевтически эффективное количество PYY или его агониста будет зависеть от используемой молекулы, субъекта, которого предполагают лечить, тяжести и типа заболевания и способа введения. Например, терапевтически эффективное количество PYY или его агониста может варьироваться от приблизительно 0,01 мкг/килограмм (кг) массы тела до приблизительно 1 г/кг массы тела, например, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 5 мг/кг массы тела или от приблизительно 5 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела. В другом варианте осуществления PYY или его агонист вводят субъекту в дозе от 0,5 до 135 пикомоль (пмоль)/кг массы тела или приблизительно 72 пмоль/кг массы тела. В одном конкретном неограничивающем примере подкожной инъекцией вводят от приблизительно 5 до приблизительно 50 нмоль, например, от приблизительно 2 до приблизительно 20 нмоль или путем подкожной инъекции вводят приблизительно 10 нмоль. Компетентный специалист в данной области легко установит точную дозу на основе активности конкретного используемого соединения (такого как полипептид PYY или его агонист), возраста, массы тела, пола и физиологического состояния субъекта. Доза агониста может быть молярно эквивалентной терапевтически эффективной дозе PYY или PYY.
3-36
Композиции или фармацевтические композиции могут быть введены любым путем, включая внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное, подъязычное, чрескожное, внутримышечное, пероральное, наружное введение, а также введение через слизистые оболочки или легочную ингаляцию. Композиции, используемые в изобретении, легко могут быть получены в форме препаратов, пригодных для парентерального (включая внутривенное, внутримышечное и подкожное), назального или перорального применения. Термин "парентеральный", как используют в данном контексте, относится к способам введения, которые включают внутривенную, внутримышечную, внутрибрюшинную, внутригрудинную, подкожную и внутрисуставную инъекцию и инфузию. PYY, включая PYY, агонист PYY или антагонист PYY, могут вводиться подкожно. В области техники хорошо известно, что подкожные инъекции легко сделать самому себе.
В ряде случаев будет удобным получение PYY или агониста PYY и другого агента, уменьшающего поглощение пищи, снижающего уровень глюкозы в плазме или изменяющего уровень липидов в плазме, в одной композиции или раствор для совместного введения. В других случаях более целесообразным является введение дополнительного агента отдельно от указанного PYY или агониста PYY.
Подходящий формат введения может быть наилучшим образом определен практическим врачом индивидуально для каждого пациента. Различные фармацевтически приемлемые носители и их состав описаны в монографии, посвященной стандартным препаратам, например, Ремингтоновском справочнике по фармацевтическим наукам (Remington's Pharmaceutical Sciences) под ред. E.W.Martin. См. также работу Wang Y.J. и Hanson M.A., Journal of Parenteral Science и Technology, Техническое заключение (Technical Report) No. 10, Доп. 42:2S, (1988).
PYY, агонисты PYY и антагонисты PYY, используемые в способах, соответствующих данному описанию, могут быть получены в виде парентеральных композиций, например, для инъекции или инфузии. Предпочтительно, когда они суспендированы в водном носителе, например, в изотоническом буферном растворе при рН от приблизительно 3,0 до приблизительно 8,0, предпочтительно при рН от приблизительно 3,5 до приблизительно 7,4, 3,5 до 6,0 или от 3,5 до приблизительно 5,0. Подходящие буферы включают цитрат натрия-лимонную кислоту и фосфат натрия-фосфорную кислоту, а также буферы на основе ацетата/уксусной кислоты. Может быть использована форма с длительным действием или депо-препарате медленным выходом, при этом терапевтически эффективные количества препарата доставляют в кровоток в течение многих часов или дней после чрескожной инъекции или доставки.
Поскольку PYY и агонисты являются амфотерными, их можно использовать в виде свободных оснований, солей, образованных добавлением кислоты или солей металлов. Конечно, соли должны быть фармацевтически приемлемыми, и они будут включать соли металлов, в особенности, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например соли калия и натрия. Имеется широкий круг фармацевтически приемлемых солей, полученных при добавлении кислот. Данные продукты легко получить способами, хорошо известными компетентным специалистам в данной области.
Для применения врачами композиции могут быть представлены в унифицированной лекарственной форме, содержащей количество PYY или агонист PYY с добавлением или без добавления другого активного ингредиента, например агента, уменьшающего поглощение пищи, снижающего уровень глюкозы в плазме или изменяющего уровень липидов в плазме. Введение можно начинать, когда желательны подавление доступности питательных веществ, поглощение пищи, снижение массы тела, уровня глюкозы в крови или липидов в плазме, например, при первых признаках развития симптомов нарушений, связанных с массой тела или вскоре после того, как диагностированы ожирение, сахарный диабет или синдром инсулин-устойчивости.
Терапевтически эффективными количествами PYY или агониста PYY для снижения доступности питательных веществ являются количества, которые подавляют аппетит на желательном уровне. Как будет очевидно для специалистов, работающих в данной области, эффективное количество терапевтического агента будет варьироваться в зависимости от многих факторов, включая активность конкретного соединения, возраст и массу тела пациента, физическое состояние пациента, уровень сахара в крови, уровень массы тела, который хотят получить, и другие факторы. Аналогично, терапевтически эффективными количествами антагониста PYY для получения повышения доступности питательных веществ являются количества, которые повышают аппетит до желательного уровня. Как будет очевидно для специалистов, работающих в данной области, эффективное количество данного терапевтического агента также будет варьироваться в зависимости от многих факторов, включая активность конкретного соединения, возраст и массу тела пациента, физическое состояние пациента, уровень сахара в крови, уровень массы тела, который хотят получить, и другие факторы. Введение можно начинать, когда желательны повышение доступности питательных веществ, поглощения пищи, массы тела, уровня глюкозы или снижение уровня липидов в плазме, например, но без ограничения перечисленным, при первых признаках развития симптомов анорексии или в начале потери массы тела при СПИДе.
Оптимальный препарат и способ введения PYY, агонистов PYY и антагонистов PYY пациенту зависит от факторов, известных в данной области, таких как конкретное заболевание или нарушения, желательный эффект и тип пациента. Хотя PYY, агонисты PYY и антагонисты PYY, как правило, используют для лечения человека, они могут быть также использованы для лечения аналогичных или идентичных заболеваний у других позвоночных, таких как другие приматы, сельскохозяйственные животные, такие как свиньи, крупный рогатый скот и птица, а также спортивные животные и домашние животные, такие как лошади, собаки и кошки.
В качестве фармацевтического препарата PYY, агонисты PYY и антагонисты PYY, соответствующие данному изобретению, могут вводиться непосредственно любым подходящим способом, включая парентеральный, интраназальный, пероральный или путем впитывания через кожу. Конкурентный способ введения каждого из агентов будет зависеть, например, от истории болезни животного.
Для парентерального введения в одном из вариантов осуществления PYY, агонисты PYY и антагонисты PYY могут быть приготовлены в основном путем смешивания их при желательной степени чистоты в унифицированной дозированной инъекционной форме (растворе, суспензии или эмульсии) с фармацевтически приемлемым носителем, т.е. носителем, который нетоксичен для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и совместим с другими ингредиентами препарата. Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу или вспомогательному препарату любого типа. Например, предпочтительно, когда препарат не включает окислители и другие соединения, известные, как повреждающие PYY и агонисты PYY.
Как правило, препараты готовят путем однородного и тесного контактирования PYY, агониста PYY или антагониста PYY с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями или обеими формами носителей. Затем при необходимости из продукта создают желательный препарат. Предпочтительно, когда носитель представлен носителем для парентерального применения, более предпочтительно раствором, изотоническим относительно крови реципиента. Примеры таких носителей включают воду, физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, в данном контексте используют неводные носители, такие как жирные (нелетучие) масла и этилолеат, а также липосомы.
PPY, антагонисты PYY и агонисты PYY соответственным образом вводят также с помощью систем с замедленным высвобождением. Соответствующие примеры PYY и агонистов PYY с замедленным высвобождением включают подходящие полимерные материалы (такие как, например, полупроницаемые полимерные основы в виде формованных изделий, например, пленок или микрокапсул), подходящие гидрофобные материалы (как, например, эмульсия в приемлемом масле) или ионообменные смолы и плохорастворимые производные (как, например, плохорастворимая соль). Композиции PPY, антагониста PYY и агониста PYY с замедленным высвобождением могут быть введены перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, внутривагинально, внутрибрюшинно, наружно (например, в виде порошков, мазей, гелей, капель или чрескожного пластыря), защечно (буккально) или в форме спрея для рта или носа.
Основы с замедленным высвобождением включают полилактиды (см. Патент США No. 3773919, ЕР 58481), сополимеры L-глутамовой кислоты и γ-этил-L-глутамата (см. статью Sidman и соавт., Biopolymers, 22:547-556, (1983)), поли-(2-гидроксиэтилметакрилат) (см. статьи Langer и соавт., J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277, (1981); Langer, Chem. Tech., 12:98-105, (1982), этиленвинилацетат (см. статью Langer и соавт., id.) или поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту (ЕР 133988).
PPY, антагонисты PYY и агонисты PYY с замедленным высвобождением включают липосомальные PPY и агонисты PYY (см. в основном статью Langer, Science, 249:1527-1533, (1990); раздел, написанный Treat и соавт. в монографии "Липосомы в терапии инфекционных болезней и рака" ("Liposomes in the Therapy of Infectious Disease и Cancer") под ред. Lopez-Berestein и Fidler, Liss, New York, c.317-327 и 353-365, (1989)). Липосомы, содержащие пептид и пептидные аналоги PPY, готовят способами, которые сами по себе известны: см. патентную заявку DE 3218121; статьи Epstein и соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:3688-3692, (1985); Hwang и соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 77:4030-4034, (1980); патентные заявки ЕР 52322, ЕР 36676, ЕР 88046, ЕР 143949, ЕР 142641, Японскую патентную заявку No. 83-118008; Патент США No. 4485045, Патент США No. 4544545 и патентную заявку ЕР 102324. Обычно липосомы представлены типом маленьких (приблизительно 200-800 ангстрем) однослойных липосом, в которых содержание липидов превышает приблизительно 30 моль% холестерина, выбранное соотношение доводят до получения оптимальных характеристик.
Препараты для введения могут быть приготовлены соответствующим образом, чтобы обеспечить контролируемый выход PYY, антагонистов PYY и агонистов PYY. Например, фармацевтические композиции могут быть в форме частиц, содержащих биодеградируемый полимер и/или полисахаридный желирующийся и/или биодеградируемый полимер, амфифильный полимер, агент, модифицирующий свойства раздела поверхностей частиц и фармакологически активной субстанции. Данные композиции проявляют определенные свойства биосовместимости, которые позволяют обеспечивают контролируемый выход активной субстанции. См. Патент США No. 5700486.
В еще одном дополнительном варианте осуществления PPY, антагонисты PYY и агонисты PYY доставляют с помощью насоса (см. статьи Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng., 14:201, (1987); Buchwald и соавт., Surgery, 88:507, (1980); Saudek и соавт., N. Engl. J. Med., 321:. 574, (1989)) или путем непрерывных подкожных инфузий, например, с помощью мининасоса. Может быть также использован резервуар с раствором для внутривенного введения. Ключевым фактором в выборе соответствующей дозы является полученный результат, измеряемый по снижению общей массы тела или соотношения жира и массы, не содержащей жир, или по другим критериям определения результата борьбы или предупреждения развития ожирения или предупреждения развития состояний, связанных с ожирением, которые практический врач считает подходящими. Другие системы с контролируемым выходом обсуждаются в обзоре Langer (см. Science, 249:1527-1533, (1990)).
В другом аспекте изобретения PPY, антагонисты PYY и агонисты PYY доставляют с помощью имплантированного насоса, описанного, например, в Патенте США No. 6436091, Патенте США No. 5939380 и Патенте США No. 5993414.
Имплантируемые устройства для инфузии лекарственных веществ используют для обеспечения пациентов постоянной длительно действующей дозировкой или инфузией лекарственного вещества или иного терапевтического агента. В целом такие устройства могут быть отнесены к категориям активных и пассивных.
Активные устройства для программируемой инфузии лекарственных веществ характеризуются насосом или дозирующей системой, которые служат для доставки лекарственного вещества в систему пациента. Примером такого имеющегося в настоящее время устройства для активной инфузии лекарственного вещества является программируемый насос Medtronic SynchroMed™. Данные насосы, как правило, включают резервуар для лекарства, перистальтический насос для выкачивания лекарства из резервуара и отверстие для катетера для переноса выкачанного с помощью насоса лекарства из резервуара в организм пациента. Данные устройства обычно имеют аккумулятор для питания насоса, а также электронный модуль для контроля скорости потока, обеспечиваемого насосом. Насос Medtronic SynchroMed™, кроме того, включает антенну, обеспечивающую дистанционное программирование насоса. В противоположность этому пассивные устройства для инфузии лекарств не имеют насоса, но в основе их действия лежит резервуар с лекарством, находящийся под давлением, что обеспечивает доставку лекарства. Таким образом, данные устройства обыкновенно меньше и более дешевы по сравнению с активными устройствами. Пример такого устройства включает Medtronic IsoMed™. Данное устройство осуществляет доставку лекарственного вещества пациенту посредством силы, которую дает резервуар под давлением, подключенный через блок контроля потока.
Имплантированный насос может быть полностью имплантирован под кожу пациента, устраняя тем самым необходимость использования подкожного катетера. Данные имплантированные насосы могут обеспечивать пациента PYY, антагонистом PYY или агонистом PYY с постоянной или программируемой скоростью доставки, например давать пульсовые дозы во время принятия пищи или около этого времени. Насосы с постоянной скоростью или программируемой скоростью основаны либо на изменении фазы, либо на перистальтической технологии. Когда требуется постоянная неизменяющаяся скорость доставки, насос с постоянной скоростью хорошо подходит для имплантируемой системы доставки лекарства длительного действия. Если предполагают изменения скорости диффузии, можно использовать программируемый насос вместо системы насоса с постоянной скоростью. Осмотические насосы гораздо меньше, чем другие насосы с постоянной скоростью или программируемые насосы, поскольку скорость инфузии может быть очень низкой. Пример такого насоса представлен в Патенте США No. 5728396.
При пероральном введении фармацевтические композиции могут принимать форму, например, таблеток или капсул, приготовленных принятыми способами с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, такими как связующие агенты (например, предварительно клейстеризованный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или кислый фосфорнокислый кальций); скользящие компоненты (например, стеарат магния, тальк или оксид кремния); дезинтергирующие компоненты (например, картофельный крахмал или гликолат крахмала натрия) или увлажняющие агенты (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки могут быть покрыты с использованем способов, хорошо известных в области техники. Жидкие препараты для перорального применения могут, например, принимать форму растворов, сиропов или суспензий или могут быть представлены сухим продуктом для восстановления водой или другим подходящим носителем перед применением. Данные жидкие препараты можно приготовить принятыми способами с использованием фармацевтически приемлемых дополнительных компонентов, таких суспендирующие агенты (например, сироп сорбита, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры), эмульгирующие агенты (например, лецитин или гуммиарабик); неводные носители (например, миндальное масло, жирные сложные эфиры, этиловый спирт или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метил- или пропил-р-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). По необходимости препараты могут также содержать буферные соли, вкусовые компоненты, красители и подсластители.
Для введения ингаляционным путем соединения, применяемые согласно данному изобретению, удобно доставлять в форме аэрозоля, представленного упаковками под давлением или распылителя, в которых используют подходящий пропеллент, например, дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторпентан, диоксид углерода или другой подходящий газ. В случае аэрозоля под давлением единицу дозировки определяют при использовании клапана, доставляющего отмеренное количество. Для применения в ингаляторе или устройстве для вдувания могут быть приготовлены капсулы и картриджи, например из желатина, содержащие порошковую смесь соединения и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.
Соединения могут быть также приготовлены в виде ректальных композиций, таких как суппозитории или клизмы с замедленным действием, например, содержавшие принятые основания для суппозиториев, такие как масло какао или другие глицериды.
Кроме вышеописанных препаратов соединения могут быть приготовлены как депо-препараты. Данные препараты длительного действия могут быть введены путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или посредством внутримышечной инъекции. Так, например, соединения могут быть приготовлены в комбинации с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии с приемлемым маслом) или ионообменными смолами или в виде плохорастворимых производных, например плохорастворимой соли.
В рецептуру фармацевтических композиций, которые в качестве активного агента содержат PYY, или его агонист, или антагонист PYY, как описано в данном контексте, обычно будет входить соответствующий твердый или жидкий носитель в зависимости от выбранного конкретного способа введения. Фармацевтически приемлемые носители и наполнители, используемые в данном описании изобретения, являются общепринятыми. Например, парентеральные препараты обычно содержат инъекционные жидкости, которые представляют собой фармацевтически и физиологически приемлемые жидкие носители, такие как вода, физиологический раствор, другие сбалансированные солевые растворы, водный раствор декстрозы, глицерин и т.п. Наполнители, которые могут быть включены, представлены, например, другими белками, такими как человеческий сывороточный альбумин или препараты плазмы. Если желательно, фармацевтическая композиция, предназначенная для введения, может также содержать минорные количества нетоксичных вспомогательных субстанций, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты и агенты, забуферивающие рН и т.п., например ацетат натрия или сорбитанмонолаурат. Могут быть также введены другие медицинские и фармацевтические агенты, например другие компоненты, подавляющие аппетит, или ингибиторы протеазы. Компетентным специалистам в данной области известны или будут очевидны современные способы приготовления данных лекарственных форм.
Лекарственная форма фармацевтической композиции будет определяться выбранным способом введения. Например, кроме инъекционных жидкостей могут быть использованы ингаляционные формы, суппозитории и пероральные препараты. Фармацевтические композиции могут быть приготовлены с использованием принятых процессов смешивания, гранулирования, перемешивания с медом или сиропом, растворения или лиофилизации.
Пероральные препараты могут быть жидкими (например, сиропы, растворы или суспензии) или твердыми (например, порошки, пилюли, таблетки или капсулы). Например, фармацевтические композиции для перорального применения могут быть получены при комбинировании активного ингредиента с одним или более твердых носителей, необязательном гранулировании полученной смеси и, если желательно, с обработкой смеси или гранул, в которые при необходимости вводят дополнительные наполнители для формирования таблеток или коров драже.
Подходящие носители включают наполнители, такие как сахара, например лактоза, сахароза, маннит или сорбит, препараты целлюлозы и/или фосфаты кальция, например трикальцийфосфат или гидрофосфат кальция, а также связующие компоненты, такие как крахмалы, например кукурузный, пшеничный или картофельный крахмал, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлозы натриевая соль и/или поливинилпирролидон и/или, если желательно, дезинтеграторы, такие как вышеперечисленные крахмалы, перекрестно-сшитый поливинилпирролидон, альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия. Дополнительные наполнители включают агенты, кондиционирующие текучесть и смазывающие компоненты, например кремниевую кислоту, тальк, стеариновую кислоту или ее соли, такие как стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоль или его производные.
Композиции для парентерального введения включают подходящие водные растворы активного ингредиента в водорастворимой форме, например в форме водорастворимой соли или водных инъекционных суспензий, которые содержат субстанции, изменяющие вязкость, например натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, сорбит и/или декстран, и, если желательно, стабилизаторы. Активный ингредиент необязательно вместе с наполнителями может быть также в форме лиофилизата и может быть переведен в раствор перед парентеральным введением путем добавления подходящих растворителей. Такие растворы, как, например, используемые для парентерального введения, могут быть использованы также в качестве инфузионных растворов.
Для ингаляции PYY, или его агонист, или антагонист PYY вводят в виде аэрозоля или дисперсии в носителе. В одном конкретном неограничивающем примере PYY или его агонист вводят в аэрозоле из обычного клапана, такого как, но без ограничения перечисленным, дозирующий клапан, через аэрозольный адаптер, известный также как регулирующий клапан. В препарат может быть также введен подходящий жидкий носитель, такой как, но без ограничения перечисленным, воздух, углеводород, в том числе н-бутан, пропан, изопентан и др., или пропеллент, такой как, но без ограничения перечисленным, фторуглерод. Необязательно, но может быть также введен стабилизатор и/или для глубокой доставки в легкие могут быть включены пористые частицы (например, см. Патент США No. 6447743).
Для получения препаратов соединений с плохой растворимостью в водных системах требуется применение солюбилизирующих агентов, таких как ионные поверхностно-активные вещества, холаты, полиэтиленгликоль (ПЭГ), этанол и другие агенты, которые могут вызывать нежелательные эффекты при использовании для ингаляции. Кроме того, лечению, требующему эффективной доставки в альвеолы нижних долей легкого, может препятствовать применение в препарате некоторых раздражающих компонентов, таких как хлорфторуглеродов, и оно должно включать минимальное число необходимых доз. Альтернативно, чтобы избежать подобных ограничений, можно использовать липосомы или гидрофобные частицы. В одном из вариантов осуществления аэрозольный препарат с замедленным высвобождением основан на применении аэрозольных капельных частиц размером приблизительно 1-2,1 мкм или размером меньше 1 мкм. Маленькие частицы аэрозольных липосом и комбинации липосом и лекарственных веществ для применения в медицине описаны ранее (например, см. патентную заявку ЕР 87309854.5).
В одном из вариантов осуществления терапевтически эффективное количество PYY или его агониста вводят вместе с терапевтически эффективным количеством другого агента, такого как, но без ограничения перечисленным, дополнительный агент, подавляющий аппетит. Конкретный неограничивающий пример дополнительного агента, подавляющего аппетит, включает амфепрамон (диэтилпропион), фентермин, мациндол и фенилпропаноламин, фенфлурамин, дексфенфлурамин и флуоксетин. PYY и/или агонист PYY можно вводить одновременно с дополнительным агентом, подавляющим аппетит или они могут вводиться последовательно. Так, в одном из вариантов осуществления PYY готовят и вводят с агентом, подавляющим аппетит, как разовую дозу.
Дополнительно в данном контексте описан способ лечения ожирения. Способ включает введение субъекту с ожирением терапевтически эффективного количества PYY или агониста PYY. Агонист PYY может обладать активностью, которая по меньшей мере в одном аспекте - поглощении пищи или опорожнении желудка, превышает активность NPY. PYY и/или агонист PYY могут быть введены периферически, например, в разовой или разделенной дозе. Подходящая разовая или разделенная дозы включают, но без ограничения перечисленным от 1 мкг до приблизительно 5 мг или приблизительно от 0,01 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг/дозу. Субъект может иметь устойчивость к инсулину или непереносимость глюкозы или иметь оба данных нарушения. Кроме ожирения субъект может страдать сахарным диабетом.
Способ уменьшения поглощения пищи также описан в данном контексте. Способ включает введение субъекту с ожирением терапевтически эффективного количества PYY или агониста PYY. Агонист PYY может обладать активностью, которая по меньшей мере в одном аспекте - поглощении пищи или опорожнении желудка, превышает активность NPY. PYY и/или агонист PYY могут быть введены периферически, например, в разовой или разделенной дозе. Подходящая разовая или разделенная дозы включают, но без ограничения перечисленным, от 1 мкг до приблизительно 5 мг или приблизительно от 0,01 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг/дозу. Субъект может страдать диабетом типа II или иметь избыточную массу тела.
В данном контексте описан способ улучшения липидного профиля субъекта. Способ включает введение субъекту эффективного количества PYY или агониста PYY. Улучшение липидного профиля предусматривает, но без ограничения перечисленным, по меньшей мере один аспект - снижение уровня холестерина, снижение уровней триглицеридов и повышение уровней HDL-холестерина (холестерина, содержащего липопротеины высокой плотности). PYY и/или агонист PYY могут быть введены периферически, например, в разовой или разделенной дозе. Подходящая разовая или разделенная дозы включают, но без ограничения перечисленным от 1 мкг до приблизительно 5 мг или приблизительно от 0,01 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг/дозу. Агонист PYY может обладать активностью, которая по меньшей мере в одном аспекте - поглощении пищи или опорожнении желудка, превышает активность NPY.
3-36
В другом варианте осуществления в данном контексте описан способ облегчения состояния или нарушения, которое может быть облегчено путем снижения доступности питательных веществ. Способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества PYY или агониста PYY. Соответствующие нарушения включают любое из вышеупомянутых нарушений. PYY и/или агонист PYY могут вводиться периферически, например, в разовой или разделенной дозе. Подходящая разовая или разделенная дозы включают, но без ограничения перечисленным от 1 мкг до приблизительно 5 мг или приблизительно от 0,01 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг/дозу. Агонист PYY может обладать активностью, которая по меньшей мере в одном аспекте - поглощении пищи или опорожнении желудка, превышает активность NPY. Подходящие дозы включают также дозы, которые повышают концентрацию PYY и/или его агониста значительно выше базовой концентрации PYY, такие как, но без ограничения перечисленным, доза, имитирующая концентрации PPY (или его агониста) в сыворотке после приема пищи. Так, в одном из вариантов осуществления PYY или его агонист вводят для достижения уровня или получения эффекта снижения потребления калорий, поглощения пищи или аппетита, равных снижению потребления калорий, поглощения пищи или аппетита или повышению затрат энергии, вызываемых уровнем PYY, возникающим после приема пищи. Конкретные неограничивающие примеры доз включают, но без ограничения перечисленным, дозы, которые дают эффект, демонстрируемый, когда сывороточные уровни PYY составляют от приблизительно 40 пМ до приблизительно 50 пМ или от приблизительно 40 пМ до приблизительно 45 пМ или до приблизительно 43 пМ.
3-36
3-36
3-36
Для всех способов, описанных в данном контексте, доза PYY или PYY может быть основана на физиологических уровнях, наблюдаемых после приема пищи. Нормальные уровни PYY в системе кровообращения составляют приблизительно 8 пмоль/л, как правило, поднимаясь до приблизительно 40-60 пмоль/л после приема пищи. Агонисты PYY могут быть использованы в аналогичных дозах. Разовая доза может вводиться один раз в день или могут быть использованы разделенные дозы (см. выше). Поскольку показано, что PYY эффективен до 12 и даже до 24 часов после введения, возможно проводить введение только два или даже только один раз/день.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
В одном из вариантов осуществления при периферическом введении PYY, в том числе PYY, проявляет эффекты на физиологических уровнях. Другие кишечные гормоны (например, GLP) при периферическом введении проявляют эффект только на уровнях выше физиологических и при имеют побочное действие. При использовании PYY3-36 побочные эффекты не наблюдают. Вне зависимости от теории, PYY не действует на рецепторы Y2 в головном мозге, которые могли бы вызвать побочные эффекты. Не делая ограничений, следует отметить, что следующее преимущество PYY состоит в том, что PYY не повышает кровяное давление. Эффекты PYY являются длительными и составляют 24 часа. Описано, что реципиенты отмечают снижение аппетита во время данного периода и уменьшение поглощения пищи приблизительно на одну треть.
3-36
3-36
3-36
3-36
В одном конкретном неограничивающем примере PYY вводят в дозе приблизительно 1 нмоль или более, 2 нмоль или более или 5 нмоль или более. В данном примере доза PYY, как правило, не превышает 100 нмоль, например доза составляет 90 нмоль или меньше, 80 нмоль или меньше, 70 нмоль или меньше, 60 нмоль или меньше, 50 нмоль или меньше, 40 нмоль или меньше, 30 нмоль или меньше, 20 нмоль или меньше, 10 нмоль. Например, интервал дозировок может содержать любую комбинацию любых пределов указанных более низких доз с любыми пределами указанных более высоких доз. Так, примерные неограничивающие интервалы доз включают дозу PYY, которая может находиться в интервале от 1 до 100 нмоль, от 1 до 90 моль, от 1 до 80 нмоль. Примерные неограничивающие интервалы доз включают от 2 до 100 нмоль, от 2 до 90 нмоль, например от 2 до 80 нмоль и т.п., от 5 нмоль до 100 моль, от 5 нмоль до 90 нмоль, от 5 нмоль до 80 нмоль и т.п. Примером дозы, которая может быть введена, является доза от приблизительно 5 до приблизительно 50 нмоль, такая как, но без ограничения перечисленным, от приблизительно 2 до приблизительно 20 нмоль, например приблизительно 10 нмоль. Выбранная доза может быть введена, например, с помощью инъекции, в частности в виде подкожной инъекции. В одном из вариантов осуществления вводят дозу PYY или PYY 0,143 нмоль (1/7 моль)/кг для достижения дозы, аналогичной уровню PYY после приема пищи.
3-36
При использовании PYY или его агониста доза предпочтительно представляет собой молярный эквивалент дозы PYY, как описано выше. Дозы могут быть рассчитаны по данным субъекта, такого как субъект с массой тела от 70 до 75 кг. Компетентному специалисту в данной области легко определить точную дозу на основе активности конкретного используемого соединения (такого как полипептид или агонист PYY), а также возраста, массы тела, пола и физиологического состояния субъекта.
3-36
3-36
3-36
3-36
Как представлено в данном контексте, природный пептид, PYY или PYY могут быть использованы для достижения физиологического эффекта. Это дает в результате минимальные побочные эффекты и, если необходимо, обеспечивает длительное действие. Доза PYY или PYY может иметь в основе физиологические уровни, наблюдаемые после приема пищи. Нормальные уровни PYY в системе кровообращения составляют приблизительно 8 пмоль/л, как правило, поднимаясь до приблизительно от 40 до 60 пмоль/л после приема пищи. PYY (например, PYY) и агонисты могут быть использованы в аналогичных дозах.
3-36
Так, различные способы применения PYY или его агониста или антагониста, как представлено выше, могут осуществляться в способе лечения млекопитающего субъекта, которому требуется данное лечение, или могут быть представлены при производстве лекарственных препаратов для такого лечения. PYY (например, PYY, или его агонист, или антагонист следует вводить в количестве, эффективном для достижения заявленного объекта. Некоторые из описанных решений представляют собой способы лечения, например, лечения ожирения. Однако другие решения не касаются лечения и являются частью поддержания здорового образа жизни или служат для косметических целей.
Агонисты PYY
Агонист PYY, используемый в способах, соответствующих данному изобретению, представляет собой молекулу, которая связывается с рецептором, который специфически связывает PYY и обусловливает эффект PYY. В области техники известны способы анализа связывания с рецепторами PYY и получения ответа в клетке, имеющей рецептор PYY. Специфический анализ, направленный на детекцию агониста PYY, представлен в данном контексте. Так, в одном из вариантов осуществления агонист PYY связывается с нейроном, содержащим NPY, в дугообразном ядре, что в результате вызывает электрофизиологический эффект в отношении нейрона, содержащего NPY. Как представлено в данном контексте, образует синапс с нейронами РОМС. Таким образом, электрофизиологический эффект в отношении нейрона, содержащего NPY, может вызывать дальнейший электрофизиологический эффект на нейрон РОМС. В одном из конкретных неограничивающих примеров введение агониста PYY приводит в результате к гиперполяризации мембранного потенциала нейрона РОМС. В другом конкретном неограничивающем примере введение агониста PYY приводит к повышению IPSCs в нейроне РОМС.
В другом варианте осуществления агонисты PYY не включают NPY. Подходящие агонисты PYY представлены молекулами, которые связывают нейроны, содержащие NPY, но не проходят через гематоэнцефалический барьер. Нейроны дугообразного ядра, на которые воздействует PYY, не защищены гематоэнцефалическим барьером, и вследствие этого они легко достижимы для периферически вводимых молекул. Кроме того, другие участки головного мозга, которые экспрессируют рецептор Y2, защищены гематоэнцефалическим барьером. Вне зависимости от теории агенты, способные связываться с Y2R дуговидного ядра, но не пересекающие гематоэнцефалический барьер после периферического введения, вероятно, являются эффективными.
В одном из вариантов осуществления агонист PYY представляет собой соединение, которое влияет на поглощение пищи, потребление калорий или аппетит и/или которое специфически связывается в анализе с использованием рецептора Y или конкурирует за связывание с PYY, как в анализе конкурентного связывания с использованием меченого PYY. Агонисты PYY включают, но без ограничения перечисленным, соединения, которые связываются с рецептором Y2.
PYY и агонисты, используемые в способах, описанных в данном контексте, включают, но без ограничения перечисленным, полипептиды, содержащие или, альтернативно, состоящие из последовательности аминокислот PPY и его агонистов, например их мутанты, инверсии, фрагменты и/или варианты. Варианты содержат делеции, инсерции, инверсии, повторы и замены, например консервативные замены и неконсервативные замены (см., например, Таблицы 1 и 2 ниже). Больше, чем одна аминокислота (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) могут быть удалены, или введены или заменены другой аминокислотой. Как правило, консервативные замены представляют собой замещения одной аминокислоты другой среди алифатических аминокислот Ala, Val, Leu и Ilе; взаимозамену Ser и Thr, содержащих гидроксильные остатки, взаимозамену кислых остатков Asp и Glu, взаимозамену среди амидных остатков Asn и Gln, взаимозамену основных остатков Lys и Аrg, взаимозамену ароматических остатков Phe и Тyr и взаимозамену аминокислот маленького размера Ala, Ser, Thr, Met и Gly. Указания, касающиеся того, как производить фенотипически молчащие замены аминокислот, представлены в статье Bowie и соавт., Science, 247:1306-1310, (1990).
В качестве другого примера полипептидные фрагменты могут содержать непрерывную серию удаленных остатков из амино (N)- или карбоксильного (С)-конца или обоих концов (см., например, Таблицы 1 и 2 ниже). Из N-конца, С-конца или обоих концов может быть удалено любое число аминокислот в интервале от 1 до 24.
Более того, агонистические полипептиды могут также включать, но без ограничения перечисленным, полипептиды, содержащие или, альтернативно, состоящие из внутренних делеций последовательностей аминокислот PPY и/или его агониста (см., например, Таблицы 1 и 2 ниже). Данные делеции могут быть представлены делециями из одного или более остатков аминокислот (например, одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти и т.д.) и могут начинаться с любого положения аминокислоты (например, второго, третьего, четвертого, пятого, шестого, седьмого, восьмого, девятого, десятого и т.д.). Кроме того, полипептиды, соответствующие данному описанию изобретения, могут содержать одну или более внутренних делеций. Данные делеции возможны в PPY, NPY и PP.
Рассматривают также агонистические пептиды, представленные химерами PPY, NPY и/или РР, которые обладают высокой аффинностью и/или избирательностью в отношении рецептора Y2. Данные химеры могут содержать замены аминокислот одной или более аминокислотами (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) из PPY, NPY и/или РР, их вариантов, мутантов и/или делеций одной или более аминокислотами (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) из второго PPY, NPY или РР, их вариантов, мутантов и/или делеций. Данные замены могут начинаться с положения любой аминокислоты (например, второго, третьего, четвертого, пятого, шестого, седьмого, восьмого, девятого, десятого и т.д.).
Предпочтительно, когда пептид обладает избирательностью в отношении рецептора Y2. Это означает, что он связывается с Y2 более высокой аффинностью по сравнению с другими рецепторами, такими как Y1, Y2, Y3, Y4, Y5 и Y6. В другом варианте осуществления пептид обладает избирательностью в отношении рецепторов Y2 и Y5 относительно рецепторов Y1, Y3, Y4 и Y6.
Другие полипептидные фрагменты представляют собой фрагменты, содержащие структурный или функциональный домен полипептидов, соответствующих данному описанию изобретения. Данные фрагменты включают остатки аминокислот, которые содержат спираль полипролинового типа II (остатки 1-8), β-складку (остатки 9-14), амфипатическую α-спираль (остатки 15-32) и/или структуру С-концевой складки (остатки 33-36). См. статью Kirby и соавт., J. Med. Chem., 36:385-393, (1993).
Кроме того, данное описание изобретения включает применение полипептида или агониста, содержащего или, альтернативно, состоящего из последовательности аминокислот видовых вариантов PPY, NPY и РР (см. Таблицу 1, ниже) и/или их мутантов и фрагментов.
Рассмотрены также слитые белки, где PYY или агонист PYY будет слит с другим белком или полипептидом (партнером слияния) при использовании рекомбинантных способов, известных в области техники. Альтернативно такой слитый белок может быть получен путем синтеза с помощью любого известного способа. В качестве партнера слияния можно использовать любой известный пептид или белок (например, сывороточный альбумин, угле рода нгидразу, глутатион S-трансферазы или тиоредоксин и т.п.). Предпочтительные партнеры слияния не будут обладать вредной биологической активностью in vivo. Данные партнеры слияния могут быть сконструированы связыванием карбокси-конца партнера слияния с аминоконцом пептида PYY или агониста или наоборот. Необязательно может быть использован расщепляемый линкерный участок, связывающий PYY или агонист PYY с партнером слияния, и он может быть отщеплен in vivo, что в результате приведет к выходу активной формы PYY или агониста PYY. Примеры данных участков расщепления включают, но без ограничения перечисленным, линкерные участки D-D-D-D-Y (SEQ ID NO:330), G-P-R (SEQ ID NO:331), A-G-G (SEQ ID NO:332) и H-P-F-H-L (SEQ ID NO 333), которые могут расщепляться энтерокиназой, тромбином, убиквитин-расщепяющим ферментом и ренином, соответственно. См., например, Патент США No. 6410707.
Кроме того, в качестве эффективных рассмотрены агонисты PYY, представленные Y2-специфическими пептидными агонистами NPY, как описано в Патенте США No. 5026685, Патенте США No. 5574010, Патенте США No. 5604203, Патенте США No. 5696093, Патенте США No. 6046167. (См. ниже.)
Предпочтительные агонисты PPY описаны в данном контексте следующим образом.
ТАБЛИЦА 1
PYY: Вариации среди видов организмов
Пептид YY
Последовательность аминокислот
Человек
YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY
(SEQ ID NO:1)
Крыса
YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRY
(SEQ ID NO:5)
Свинья
YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRY
(SEQ ID NO:6)
Морская свинка
YPSKPEAPGSDASPEELARYYASLRHYLNLVTRQRY
(SEQ ID NO:7)
Лягушка
YPPKPENPGEDASPEEMTKYLTALRHYINLVTRQRY
(SEQ ID NO:8)
Скат
YPPKPENPGDDAAPEELAKYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:9)
Акула
YPPKPENPGEDAPPEELAKYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:10)
Минога
FPPKPDNPGDNASPEQMARYKAAVRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:11)
Petromyzon
MPPKPDNPSPDASPEELSKYMLAVRNYINLITRQRY
(SEQ ID NO:12)
Нейропептид Y
Последовательность аминокислот
Человек
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:2)
Крыса
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:13)
Кролик
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:14)
Собака
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:15)
Свинья
YPSKPDNPGEDAPAEDLARYYSALRHYINUTRQRY
(SEQ ID NO:16)
Корова
YPSKPDNPGEDAPAEDLARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:17)
Овца
YPSKPDNPGDDAPAEDLARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:18)
Морская свинка
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:19)
Птицы
YPSKPDSPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:20)
Лягушка-бык
YPSKPDNPGEDAPAEDMAKYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:21)
Золотой карась
YPTKPDNPGEGAPAEELAKYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:22)
Акула
YPSKPDNPGEGAPAEDLAKYYSALRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:23)
Минога
PPNKPDSPGEDAPAEDLARYLSAVRHYINLITRQRY
(SEQ ID NO:24)
Полипептид поджелудочной железы
Последовательность аминокислот
Человек
ASLEPEYPGDNATPEQMAQYAAELRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:3)
Овца
APLEPVYPGDNATPEQMAQYAADLRRYINMLTRPRY
(SEQ [D NO:25)
Свинья
APLEPVYPGDDATPEQMAQYAAELRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:26)
Собака
APLEPVYPGDDATPEQMAQYAAELRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:27)
Кошка
APLEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:28)
Корова
APLEPEYPGDNATPEQMAQYAAELRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:29)
Крыса
APLEPMYPGDYATHEQRAQYETQLRRYINTLTRPRY
(SEQ ID NO:30)
Мышь
APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRY
(SEQ ID NO:31)
Морская свинка
APLEPVYPGDNATPEQQMAQYAAEMRRYINMLTRPRY
(SEQ ID NO:32)
Курица
GPSQPTYPGDDAPVEDLIRFYNDLQQYLNWTRHRY
(SEQ ID NO:33)
Аллигатор
TPLQPKYPGDGAPVEDLIQFYNDLQQYLNWTRPRF
(SEQ ID NO:34)
Лягушка-бык
APSEPHHPGDQATPDQLAQYYSDLYQYITFITRPRF
(SEQ ID NO:35)
См. статью Beck-Sickinger A.G., Jung G., Biopolymers (Биополимеры), 37:123-142, (1995).
ТАБЛИЦА 2
ПЕПТИД - АГОНИСТ PYY
Пептид
Последовательность
PPY(3-36)(человек)
IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:334)
Ссылка: см. статьи Eberlein и соавт., Peptides, 10:797-803, (1989), Grandt и соавт., Peptides, 15(5):815-20, (1994).
Вариации PPY (3-36)
N-концевые делеции PYY, включающие без ограничения перечисленным: PYY(26-36), PYY(25-36), PYY(24-36), PYY(23-36), PYY(22-36), PYY(21-36), PYY(20-36), PYY(19-36), PYY(18-36), PYY(17-36), PYY(16-36), PYY(15-36), PYY(14-36), PYY(13-36), PYY(12-36), PYY(11-36), PYY(10-36), PYY(9-36), PYY(8-36), PYY(7-36), PYY(6-36), PYY(5-36), PYY(4-36), PYY(3-36).
Ссылка: См., например, статьи Balasubramaniam и соавт., Pept. Res. 1(1):32-5, (сент.-окт. 1998 г.); Liu и соавт., J. Gastrointest. Surg., 5(2):147-52, (март-апрель 2001 г.).
Пептид Последовательность
NPY (человек)
YPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY (SEQ ID NO:2)
Ссылка: см. статью Tatemoto и соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 79:5485-9, (1982).
Вариации NPY
N-концевые делеции NYY, включающие, но без ограничения перечисленным: NPY(26-36), NPY(25-36), NPY(24-36), NPY(23-36), NPY(22-36), NPY(21-36), NPY(20-36), NPY(19-36), NPY(18-36), NPY(17-36), NPY(16-36), NPY(15-36), NPY(14-36), NPY(13-36), NPY(12-36), NPY(11-36), NPY(10-36), NPY(9-36), NPY(8-36), NPY(7-36), NPY(6-36), NPY(5-36), NPY(4-36), NPY(3-36).
Ссылка: см., например, статьи Gehlert и соавт., Proc. Soc. Exp.Biol. Med., 218: 7-22, (1998); Sheikh и соавт., Am. J. Physiol., 261:0701-15, (ноябрь 1991 г.).
Внутренние делеции, включающие без ограничения перечисленным: (1-4)-Aca-(14-36)pNPY, (1-4)-Aca-(15-36)pNPY, (1-4)-Aca-(16-36)]pNPY, (1-4)-Aca-(17-36)pNPY, (1-4)-Aca-(18-36)pNPY, (1-4)-(31-36)pNPY11, (1-4)-Aca-(31-36)pNPY, (4-1)-(31-36)pNPY, (4-1)-Aca-(31-36)pNPY, (4-1)D-(31-36)pNPY, (4-1)D-Aca-(31-36)pNPY.
Ссылка: см. статью Fournier и соавт., Mol. Pharmacol., 45(1):93-101, (янв. 1994 г.).
10-17
10-17
9
10-17
9
10-17
7,21
10-17
7,21
10-17
7
21
11-17
10
7,21
10-17
7
21
10-17
7
9
21
10-17
7,21
34
10-17
7
21
34
10-17
7
21
34
10-17
7,21
31
34
10-20
7,21
34
10-17
2,27
10-17
2
27
Дополнительные внутренние делеционные мутанты, включающие без ограничения перечисленным: дез-AA-NPY, дез-AA, Ac-[D-Lys(∈-Ac-Ala)]NPY, дез-AA, Ac[D-Lys[∈-Ac-Ala)]NPY, дез-AA[Ala]NPY, дeз-AA[Cys]NPY, дeз-AA[Glu,Lys]NPY, [дез-АА[D-Lys(∈-Ас), Cys]NPY, дeз-AA[D-Cys,D-Lys(∈-Ac),Cys]NPY, дез-АА[D-Cys,Lys(∈-Ac),Cys]NPY, дeз-AA[Cys,Pro]NPY, дез-АА[Asp,Dpr,Pro]NPY, дeз-AA[Glu,Lys,Pro]NPY, дeз-AA[Cys,Leu,Pro]NPY, дез-АА[Сys,Рrо]NPY, дез-АА[Cys]NPY, дез-АА[Cys, D-Cys]NPY.
Ссылка: см. статью Kirby и соавт., J. Med. Chem., 38:4579-86, (1995).
Циклический агонист NPY, включающий без ограничения перечисленным: [Lys25-Glu29]NPY(Ac-25-36), [Glu25-Lys29]NPY(Ac-25-36), [Lys26-Glu31] NPY(Ac-25-36), [Glu27-Lys31]NPY(Ac-25-36), [Lys28-Glu32]NPY(Ac-25-36), [Lys27-Glu34]NPY(Ac-25-36).
Ссылка: см. статью Rist и соавт., Eur. J. Biochem. 247:1019-1028, (1997).
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
1
2
3
4
5
6
7
8
10
11
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
Замены D-аминокислот: [D-Tyr]NPY, [D-Pro]NPY, [D-Ser]NPY, [D-Lys]NPY, [D-Pro]NPY, [D-Asp]NPY, [D-Asn]NPY, [D-Pro]NPY, [D-Ala]NPY, [D-Glu]NPY, [D-Asp]NPY, [D-Ala]NPY, [D-Pro]NPY, [D-Ala]NPY, [D-Glu]NPY, [[D-Asp]NPY, [D-Leu]NPY, [D-Ala]NPY, [D-Arg]NPY, [D-Tyr]NPY, [D-Tyr]NPY, [D-Ser]NPY, [D-Ala]NPY, [D-Leu]NPY, [D-Arg]NPY, [[D-His]]NPY, [D-Tyr]NPY, [D-Ile]NPY, [D-Asn]NPY, [D-Leu]NPY, [D-Ile]NPY, [D-Thr]NPY, [D-Arg]NPY, [D-Gln]NPY, [D-Arg]NPY, [D-Tyr]NPY, [D-Tyr,D-Pro]NPY, [D-Ser,D-Lys]NPY, [D-Pro,D-Asp]NPY, [D-Asn,D-Pro]NPY, [D-Glu,D-Asp]NPY, [D-Asp,D-Ala]NPY, [D-Pro,D-Ala]NPY, [D-Glu,D-Asp]NPY, [D-Met,D-Ala]NPY, [D-Arg,D-Tyr]NPY, [D-Tyr,D-Ser]NPY, [D-Ala,D-Leu]NPY, [D-Arg,D-His]NPY, [D-Tyr,D-Ile]NPY, [D-Asn,D-Leu]NPY, [D-Ile,D-Thr]NPY, [D-Arg,D-Gln]NPY, [D-Arg,D-Tyr]NPY.
Ссылка: см. статьи Kirby и соавт., J. Med. Chem., 36:3802-08, (1993);
Grundemar и соавт., Regulatory Peptides, 62:131-136, (1996).
Другие агонисты и аналоги NPY
Пептид Последовательность
NPY(3-36)
SKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRY (SEQ ID NO:335)
Ссылка: см. статью Grandt и соавт., Regulatory Peptides, 67(1):33-7, (1996).
Пептид Последовательность
N-Ацетил NPY(24-36)
LRHYINLITRQRY (SEQ ID NO:213)
Ссылка: см. статью Potter и соавт., Eur. J. Pharmacol. 267(3):253-262, (17 мая 1994 г.).
Пептид Последовательность
28
31
N-Ацетил [Leu,Leu]NPY(24-36)
LRHYLNLLTRQRY (SEQ ID NO:214)
Ссылка: см. статью Potter и соавт., Eur. J. Pharmacol. 267(3):253-262, (17 мая 1994 г.).
Пептид Последовательность
28
31
[Leu,Leu]NPY(24-36)
LRHYLNLLTRQRY (SEQ ID NO:215)
Ссылка: см. статью Potter и соавт., Eur. J. Pharmacol. 267(3):253-262, (17 мая 1994 г.).
Пептид Последовательность
17
19
21
22
23
28
31
[Leu,Gln, Ala, Ala,Glu,Leu,Leu]NPY(13-36)
PAEDLAQYAAELRHYLNLLTRQRY (SEQ ID NO:216)
Ссылка: см. статью Potter и соавт., Eur. J. Pharmacol. 267(3):253-262, (17 мая 1994 г.).
Пептид Последовательность
20
24
Цикло S-S [Cys,Cys]pNPY
SKPDNPGEDAPAEDMARCysACRHYINLITRQRY (SEQ ID NO:315)
Ссылка: см. статью Soil и соавт., Eur. J. Biochem., 268(10):2828-37, (май 2001 г.).
Пептид Последовательность
28
32
Цикло-(28/32)-Ac-[Lys-Glu]-(25-36)-pNPY
RHYLNLIGRQRY (SEQ ID NO:316)
Ссылка: Cabrele и соавт., J. Pept. Sci., 6(3):97-122, (март, 2000 г.)
Пептид Последовательность
27
31
Циклo-(27/31)-Ac-[Glu-Lys]-(25-36)-pNPY]
RHGLNLLGRQRY (SEQ ID NO:317)
Ссылка: Cabrele и соавт., J. Pept. Sci., 6(3):97-122, (март, 2000 г.)
Пептид Последовательность
32
34
[Tyr,Leu]NPY(27-36)
YINLIYRLRY (SEQ ID NO:318)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
32
34
[Тyr,Leu]NPY(26-36)
HYINLIYRLRY (SEQ ID NO:319)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
32
34
[Тyr,Leu]NPY(25-36)
RHYINLIYRLRY (SED ID NO:320)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
31
[Leu]NPY(27-36)
YINLLYRQRY (SEQ ID NO:321)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
32
34
[Тyr,Leu](1-4)-Ahr-(27-36)NPY
YPSL-Aha-YINLIYRLRY (SED ID NO:322)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
32
34
[Тyr,Leu]NPY(28-36)
INLIYRLRY (SEQ ID NO:323)
Ссылка: см. статью Leban и соавт., J. Med. Chem., 38:1150-57, (1995).
Пептид Последовательность
РР(человека)
ASLEPEYPGDNATPEQMAQYAAELRRYINMLTrpRY (SEQ ID NO:3)
Ссылка: см. статью Kimmel и соавт., Endocrinology, 83:1323-30, (1968).
Вариации РР
N-концевые делеции, включающие без ограничения перечисленным: РР(26-36), РР(25-36), РР(24-36), РР(23-36), РР(22-36), РР(21-36), РР(20-36), РР(19-36), РР(18-36), РР(17-36), РР(16-36), РР(15-36), РР(14-36), РР(13-36), РР(12-36), РР(11-36), РР(10-36), РР(9-36), РР(8-36), РР(7-36), РР(6-36), РР(5-36), РР(4-36), РР(3-36).
ТАБЛИЦА 3
Примеры консервативных замен аминокислот в PYY
Одинарные точечные мутации PYY(25-36)
ПЕПТИД
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
[Lys<sup>25</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:36)
[Thr<sup>27</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTRQRY (SEQ ID NO:37)
[Phe<sup>27</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLVTRQRY (SEQ ID NO:38)
[Ile<sup>28</sup>]PYY(25-36)
RHYINLVTRQRY (SEQ ID NO:39)
[Val<sup>28</sup>]PYY(25-36)
RHYVNLVTRQRY (SEQ ID NO:40)
[Gln<sup>29</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTRQRY (SEQ ID NO:41)
[Ile<sup>30</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTRQRY (SEQ ID NO:42)
[Val<sup>30</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVTRQRY (SEQ ID NO:43)
[Ile<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITRQRY (SEQ ID NO:44)
[Leu<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTRQRY (SEQ ID NO:45)
[Ser<sup>32</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSRQRY (SEQ ID NO:46)
[Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKQRY (SEQ ID NO:47)
[Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKNRY (SEQ ID NO:48)
[Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRQKY (SEQ ID NO:49)
[Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRQRT (SEQ ID NO:50)
[Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRQRF (SEQ ID NO:51)
Двойные точечные мутации
ПЕПТИД
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
[Lys<sup>25</sup>,Thr<sup>27</sup>]PPY(25-36)
KHTLNLVTRQRY (SEQ ID NO:52)
[Lys<sup>25</sup>,Phe<sup>27</sup>]PPY(25-36)
KHFLNLVTRQRY (SEQ ID NO:53)
[Lys<sup>25</sup>,Ile<sup>28</sup>]PPY(25-36)
KHYINLVTRQRY (SEQ ID NO:54)
[Lys<sup>25</sup>,Val<sup>28</sup>]PPY(25-36)
KHYVNLVTRQRY (SEQ ID NO:55)
[Lys<sup>25</sup>,Gln<sup>29</sup>]PPY(25-36)
KHYLQLVTRQRY (SEQ ID NO:56)
[Lys<sup>25</sup>,Ile<sup>30</sup>]PPY(25-36)
KHYLNIVTRQRY (SEQ ID NO:57)
[Lys<sup>25</sup>,Val<sup>30</sup>]PPY(25-36)
KHYLNVVTRQRY (SEQ ID NO:58)
[Lys<sup>25</sup>,Ile<sup>31</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLITRQRY (SEQ ID NO:59)
[Lys<sup>25</sup>,Leu<sup>31</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLLTRQRY (SEQ ID NO:60)
[Lys<sup>25</sup>,Ser<sup>32</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVSRQRY (SEQ ID NO:61)
[Lys<sup>25</sup>,Lys<sup>33</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTKQRY (SEQ ID NO:62)
[Lys<sup>25</sup>,Asn<sup>34</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTRNRY (SEQ ID NO:63)
[Lys<sup>25</sup>,Lys<sup>35</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTRQKY (SEQ ID NO:64)
[Lys<sup>25</sup>,Thr<sup>36</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTRQRT (SEQ ID NO:65)
[Lys<sup>25</sup>,Phe<sup>36</sup>]PPY(25-36)
KHYLNLVTRQRF (SEQ ID NO:66)
[Thr<sup>27</sup>,Ile<sup>28</sup>]PPY(25-36)
RHTINLVTRQRY (SEQ ID NO:67)
[Thr<sup>27</sup>,Val<sup>28</sup>]PPY(25-36)
RHTVNLVTRQRY (SEQ ID NO:68)
(Thr<sup>27</sup>,Gln<sup>29</sup>]PPY(25-36)
RHTLQLVTRQRY (SEQ ID NO:69)
[Thr<sup>27</sup>,Ile<sup>30</sup>]PPY(25-36)
RHTLNIVTRQRY (SEQ ID NO:70)
[Thr<sup>27</sup>,Val<sup>30</sup>]PPY(25-36)
RHTLNVVTRQRY (SEQ ID NO:71)
[Thr<sup>27</sup>,Ile<sup>3l</sup>]PPY(25-36)
RHTLNUTRQRY (SEQ ID NO:72)
[Thr<sup>27</sup>,Leu<sup>31</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLLTRQRY (SEQ ID NO:73)
(Thr<sup>27</sup>,Ser<sup>32</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVSRQRY (SEQ ID NO:74)
[Thr<sup>27</sup>,Lys<sup>33</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTKQRY (SEQ ID NO:75)
[Thr<sup>27</sup>,Asn<sup>34</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTRNRY (SEQ ID NO:76)
[Thr<sup>27</sup>,Lys<sup>35</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTRQKY (SEQ ID NO:77)
[Thr<sup>27</sup>,Thr<sup>36</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTRQRT (SEQ ID NO:78)
[Thr<sup>27</sup>,Phe<sup>36</sup>]PPY(25-36)
RHTLNLVTRQRF (SEQ ID NO:79)
[Phe<sup>27</sup>,lle<sup>28</sup>]PPY(25-36)
RHFINLVTRQRY (SEQ ID NO:80)
[Phe<sup>27</sup>,Val<sup>28</sup>]PPY(25-36)
RHFVNLVTRQRY (SEQ ID NO:81)
[Phe<sup>27</sup>,Gln<sup>29</sup>]PPY(25-36)
RHFLQLVTRQRY (SEQ ID NO:82)
[Phe<sup>27</sup>,Ile<sup>30</sup>)PPY(25-36)
RHFLNIVTRQRY (SEQ ID NO:83)
[Phe<sup>27</sup>,Val<sup>30</sup>]PPY(25-36)
RHFLNVVTRQRY (SEQ ID NO:84)
[Phe<sup>27</sup>,Ile<sup>31</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLITRQRY (SEQ ID NO:85)
[Phe<sup>27</sup>,Leu<sup>31</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLLTRQRY (SEQ ID NO:86)
[Phe<sup>27</sup>,Ser<sup>32</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLVSRQRY (SEQ ID NO:87)
[Phe<sup>27</sup>,Lys<sup>33</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLVTKQRY (SEQ ID NO:88)
[Phe<sup>27</sup>,Asn<sup>34</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLVTRNRY (SEQ ID NO:89)
[Phe<sup>27</sup>,Lys<sup>35</sup>]PPY(25-36)
RHPLNLVTRQKY (SBQ ID NO:90)
[Рhe<sup>27</sup>,Thr<sup>36</sup>]РРY(25-36)
RHFLNLVTRQRT (SEQ ID NO:91)
[Phe<sup>27</sup>,Phe<sup>36</sup>]PPY(25-36)
RHFLNLVTRQRF (SEQ ID NO:92)
[Gln<sup>29</sup>,Ile<sup>30</sup>]PYY(25-36)
RHYLQIVTRQRY (SEQ ID NO:93)
[Gln<sup>29</sup>,Val<sup>30</sup>]PYY(25-36)
RHYLQVVTRQRY (SEQ ID NO:94)
[Gln<sup>29</sup>,Ile<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLITRQRY (SEQ ID NO:95)
[Gln<sup>29</sup>,Leu<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLLTRQRY (SEQ ID NO:96)
[Gln<sup>29</sup>,Ser<sup>32</sup>)PYY(25-36)
RHYLQLVSRQRY (SEQ ID NO:97)
(Gln<sup>29</sup>,Leu<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTKQRY (SEQ ID NO:98)
[Gln<sup>29</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTRNRY (SEQ ID NO:99)
[Gln<sup>29</sup>,Leu<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTRQKY (SEQ ID NO:100)
[Gln<sup>29</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTRQRT (SEQ ID NO:101)
[Gln<sup>29</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLQLVTRQRF (SEQ ID NO:102)
[Ile<sup>30</sup>,Ile<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIITRQRY (SEQ ID NO:103)
[Ile<sup>30</sup>,Leu<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNILTRQRY (SEQ ID NO:104)
[Ile<sup>30</sup>,Ser<sup>32</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVSRQRY (SEQ ID NO:105)
[Ile<sup>30</sup>,Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTKQRY (SEQ ID NO:106)
[Ile<sup>30</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTRNRY (SEQ ID NO:107)
[Ile<sup>30</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTRQKY (SEQ ID NO:108)
[Ile<sup>30</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTRQRT (SEQ ID NO:109)
[Ile<sup>30</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNIVTRQRF (SEQ ID NO:110)
[Val<sup>30</sup>,Ile<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVITRQRY (SEQ ID NO:111)
[Val<sup>30</sup>,Leu<sup>31</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVLTRQRY (SEQ ID NO:112)
[Val<sup>30</sup>,Ser<sup>32</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVSRQRY (SEQ ID NO:113)
[Val<sup>30</sup>,Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVTKQRY (SEQ ID NO:114)
[Val<sup>30</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVTRNRY (SEQ ID NO:115)
[Val<sup>30</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVTRQKY (SEQ ID NO:116)
(Val<sup>30</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNVVTRQRT (SEQ ID NO:117)
[Val<sup>30</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNWTRQRF (SEQ ID NO:118)
[Ile<sup>31</sup>,Ser<sup>32</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLISRQRY (SEQ ID NO:119)
[Ile<sup>31</sup>,Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITKQRY (SEQ ID NO:120)
[Ile<sup>31</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITRNRY (SEQ ID NO:121)
[Ile<sup>31</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITRQKY (SEQ ID NO:122)
[Ile<sup>31</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITRQRT (SEQ ID NO:123)
[Leu<sup>31</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLITRQRF (SEQ ID NO:124)
[Leu<sup>31</sup>,Ser<sup>32</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLSRQRY (SEQ ID NO:125)
[Val<sup>31</sup>,Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTKQRY (SEQ ID NO:126)
[Leu<sup>31</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTRNRY (SEQ ID NO:127)
[Leu<sup>31</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTRQKY (SEQ ID NO:128)
[Leu<sup>31</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTRQRT (SEQ ID NO:129)
(Leu<sup>31</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLLTRQRF (SEQ ID NO:130)
[Ser<sup>32</sup>,Lys<sup>33</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSKQRY (SEQ ID NO:131)
[Ser<sup>32</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSRNRY (SEQ ID NO:132)
[Ser<sup>32</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSRQKY (SEQ ID NO:133)
(Ser<sup>32</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSRQRT (SEQ ID NO:134)
[Ser<sup>32</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVSRQRY (SEQ ID NO:135)
[Lys<sup>33</sup>,Asn<sup>34</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKNRY (SEQ ID NO:136)
[Lys<sup>33</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKQKY (SEQ ID NO:137)
[Lys<sup>33</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKQRT (SEQ ID NO:138)
[Lys<sup>33</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTKQRF (SEQ ID NO:139)
[Asn<sup>34</sup>,Lys<sup>35</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRNKY (SEQ ID NO:140)
[Asn<sup>34</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRNRT (SEQ ID NO:141)
[Asn<sup>34</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRNRF (SEQ ID NO:142)
[Lys<sup>35</sup>,Thr<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRQKT (SEQ ID NO:143)
[Lys<sup>35</sup>,Phe<sup>36</sup>]PYY(25-36)
RHYLNLVTRQKF (SEQ ID NO:144)
Точечные мутации PYY(24-36)
Пептид
Последовательность
PYY(24-36)
LRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:145)
[Ilе<sup>24</sup>]PYY(24-36)
IRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:146)
[Val<sup>24</sup>]PYY(24-36)
VRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:147)
25
В качестве мутаций PYY(24-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных трех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36), например [Lys]PPY(24-36) (Последовательность аммнокислот=LKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:191)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:145.
Точечные мутации PYY (23-36)
Пептид
Последовательность
PYY(23-36)
SLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:148)
[Thr<sup>23</sup>]PYY(23-36)
TLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:149)
25
В качестве мутаций PYY(23-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(24-36), например [Lys]PPY(23-36) (Последовательность аминокислот=SLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:192)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:148.
Точечные мутации PYY(22-36)1
Пептид
Последовательность
PYY(22-36)
ASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:150)
[Ser<sup>22</sup>)PYY(22-36)
SSLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:151)
25
В качестве мутаций PYY(22-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(23-36), например [Lys]PPY(22-36) (Последовательность аминокислот=ASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:193)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:150.
Точечные мутации PYY(21-36)
Пептид
Последовательность
PYY(21-36)
YASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:152)
[Thr<sup>21</sup>]PYY(21-36)
TASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:153)
[Phe<sup>21</sup>]PYY(21-36)
FASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:154)
25
В качестве мутаций PYY(21-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных трех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(22-36), например [Lys]PPY(21-36) (Последовательность аминокислот=YASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:194)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:152.
Точечные мутации PYY(20-36)
Пептид
Последовательность
PYY(20-36)
YYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:155)
[Thr<sup>20</sup>]PYY(20-36)
TYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:156)
[Phe20]PYY(20-36)
FYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:157)
25
В качестве мутаций PYY(20-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных трех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(21-36), например [Lys]PPY(20-36) (Последовательность аминокислот=YYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:195)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:155.
Точечные мутации PYY(19-36)
Пептид
Последовательность
PYY(19-36)
RYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:158)
[Lys<sup>19</sup>]PYY(19-36)
KYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:159)
25
В качестве мутаций PYY(19-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(20-36), например [Lys]РРY(19-36) (Последовательность аминокислот=RYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:196)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:158.
Точечные мутации PYY(18-36)]
Пептид
Последовательность
PYY(18-36)
NRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:160)
[Gln<sup>18</sup>]PYY(18-36)
QRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:161)
25
В качестве мутаций PYY(18-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(19-36), например [Lys]PPY(18-36) (Последовательность аминокислот=NRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:197)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:160.
Точечные мутации PYY(17-36)
Пептид
Последовательность
PYY(17-36)
LNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:162)
[Ile<sup>17</sup>]PYY(17-36)
INRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:163)
[VAL<sup>17</sup>]PYY(17-36)
VNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:164)
25
В качестве мутаций PYY(17-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных трех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(18-36), например [Lys]РРY(17-36) (Последовательность аминокислот=LNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:198)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:162.
Точечные мутации PYY(16-36)
Пептид
Последовательность
PYY(16-36)
ELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:165)
[Asp<sup>16</sup>]PYY(16-36)
DLNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:166)
25
В качестве мутаций PYY(16-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(17-36), например [Lys]PPY(16-36) (Последовательность аминокислот=ELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:199)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:165.
Точечные мутации PYY(15-36)
Пептид
Последовательность
PYY(15-36)
EELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:167)
[Asp<sup>15</sup>]PYY(15-36)
DELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:168)
25
В качестве мутаций PYY(15-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(16-36), например [Lys]PPY(15-36) (Последовательность аминокислот=EELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:200)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:167.
Точечные мутации PYY(14-36)
Пептид
Последовательность
PYY(14-36)
PEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:169)
25
В качестве мутаций PYY(14-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации данного мутанта с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(15-36), например [Lys]PPY(14-36) (Последовательность аминокислот=PEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:201)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:169.
Точечные мутации PYY(13-36)
Пептид
Последовательность
PYY(13-36)
SPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:170)
[Thr<sup>13</sup>]PYY(13-36)
TPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:171)
25
В качестве мутаций PYY(13-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(14-36), например [Lys]РРY(13-36) (Последовательность аминокислот=SEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:202)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:170.
Точечные мутации PYY(12-36)
Пептид
Последовательность
PYY(12-36)
ASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:172)
[Ser<sup>12</sup>]PYY(12-36)
SSPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:173)
25
В качестве мутаций PYY(12-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(13-36), например [Lys]PPY(12-36) (Последовательность аминокислот=ASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:203)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:172.
Точечные мутации PYY(11-36)
Пептид
Последовательность
PYY(11-36)
DASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:174)
[Glu<sup>11</sup>]PYY(11-36)
EASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:175)
25
В качестве мутаций PYY(12-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(12-36), например [Lys]PPY(11-36) (Последовательность аминокислот=DASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:204)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:174.
Точечные мутации PYY(10-36)
Пептид
Последовательность
PYY(10-36)
EDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:176)
[ASP<sup>10</sup>]PYY(10-36)
DDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:177)
25
В качестве мутаций PYY(10-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(11-36), например [Lys]PPY(10-36) (Последовательность аминокилот=EDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:205)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:176.
Точечные мутации PYY(9-36)
Пептид
Последовательность
PYY(9-36)
GEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:178)
25
В качестве мутаций PYY(9-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации данного мутанта с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(10-36), например [Lys]PPY(9-36) (Последовательность аминокислот=GEDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:206)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:178.
Точечные мутации PYY(8-36)
Пептид
Последовательность
PYY(8-36)
PGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:179)
25
В качестве мутаций PYY(8-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации данного мутанта с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(9-36), например [Lys]PPY(8-36) (Последовательность аминокислот=SEQ ID NO:207)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO: 36 с SEQ ID NO:179.
Точечные мутации PYY(7-36)
Пептид
Последовательность
PYY(7-36)
APGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:180)
[Ser<sup>9</sup>]PYY(7-36)
SPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:181)
25
В качестве мутаций PYY(7-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(8-36), например [Lys]PPY(7-36) (Последовательность аминокислот=APGEDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:208)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:180.
Точечные мутации PYY(6-36)
Пептид
Последовательность
PYY(6-36)
EAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:182)
[Asp<sup>6</sup>]PYY(6-36)
DAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:183)
25
В качестве мутаций PYY(6-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных двух мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(7-36), например [Lys]РPY(6-36) (Последовательность аминокислот=EAPGEDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:209)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:182.
Точечные мутации PYY(5-36)
Пептид
Последовательность
PYY(5-36)
PEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:184)
25
В качестве мутаций PYY(5-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации данного мутанта с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(6-36), например [Lys]PPY(5-36) (Последовательность аминокислот=PEAPGEDASPEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY SEQ ID NO:210)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:184.
Точечные мутации PYY(4-36)
Пептид
Последовательность
PYY(4-26)
KPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:185)
[Arg<sup>4</sup>]PYY(4-36)
RPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:186)
[Gln<sup>4</sup>]PYY(4-36)
QPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:187)
[Asn<sup>4</sup>]PYY(4-36)
NPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:188)
25
В качестве мутаций PYY(4-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных четырех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(5-36), например [Lys]PPY(4-36) (Последовательность aминoкиcлoт=KPEAPGEDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:211)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:185.
Точечные мутации PYY(3-36)
Пептид
Последовательность
PYY(3-36)
IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:1)
[Leu<sup>3</sup>]PYY(3-36)
LKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:189)
[Va<sup>13</sup>]PYY(3-36)
VKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY] (SEQ ID NO:190)
25
В качестве мутаций PYY(3-36) включены также вариации полипептидов (вариации последовательностей аминокислот), образующиеся в результате комбинации любого из данных трех мутантов с любым из вышеперечисленных мутантов PYY(25-36) и/или любым из вышеперечисленных мутантов PYY(4-36), например [Lys]PPY(3-36) (Последовательность аминокислот=IKPEAPGEDASEELNRYYASLKHYLNLVTRQRY (SEQ ID NO:212)) образуется при комбинировании мутаций из SEQ ID NO:36 с SEQ ID NO:1.
19
20
21
22
23
25
26
27
28
29
30
31
32
34
17
18
18
17
18
19
20
21
22
23
25
26
27
28
29
30
31
32
34
36
2
18
27
36
a
a
Рассмотрены также агонисты PYY (аналоги NPY), имеющие формулу: X-Q-R-R-R-R-R-Leu-R-R-R-R-R-R-R-R-Arg-R-Arg-R36-Y, в которой Х представлен Н или С Me или N Me или дезамино- или ацильной группой, содержащей 7 или менее атомов углерода; Q представлено R-R, R или дезQ; R представлено Met, Arg, Nle, Nva, Leu, Ala или D-Ala; R представлено Ala, Ser, Ile, D-Ala, D-Ser или D-Ile; R представлено Arg, Lys или Gln; R представлено Тyr или Phe; R представлено Тyr, Glu, His или Ala; R представлено Ser, Ala, Thr, Asn или Asp; R представлено Ala, Asp, Glu, Gln Asn или Ser; R представлено Arg или Gln; R представлено His, Arg или Gln; R представлено Phe или Тyr; R представлено Ile, Leu, Val или Arg; R представлено Asn или Ile; R представлено Leu, Met, Thr или Val; R представлено Ile, Val или Leu; R представлено Thr или Phe; R представлено Gln, Pro или His; R представлено Phe или Тyr и Y представлено NH или ОН; при условии, что, когда Q представлено R, то по меньшей мере один из R и R представлено Phe. Аналоги NPY имеют следующее применение: как сильные агенты постсинаптического действия для лечения гипертензии и кардиогенного шока, а также для лечения острой сердечно-сосудистой недостаточности кровообращения и повышения внутриклеточного содержания кальция. См. Патент США No. 5026685.
18
22
23
28
31
2
18
22
23
27
28
31
36
27
36
a
a
Некоторые предпочтительные аналоги NPY имеют формулу: X-R-Arg-Tyr-Tyr-R-R-Leu-Arg-нis-Tyr-R-Asn-Leu-R-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NН, в которой Х представлено Н или С Me или N Me или дезамино- или ацильной группой, содержащей 7 атомов углерода или меньше; R представлено Ala или Ser; R представлено Ser или Ala; R представлено Ala или Ser; R представлено Рhе или Тyr; R представлено Ilе или Leu; R представлено Ilе или Val и R представлено Phe или Тyr при условии, что по меньшей мере один из R и R представлено Phe. См. Патент США No. 5026685.
Другие рассматриваемые аналоги NPY имеют формулу:
17
18
27
36
2
17
18
27
36
X-R-R-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-R-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-R-NH, в которой R представлено Arg или Leu и R представлено Ser или Ala или Ilе и в которой X, R и R указаны выше.
Еще одни предпочтительные аналоги NPY имеют формулу:
18
25
27
36
2
18
25
27
36
a
a
X-R-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-R-His-R-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-R-NH, в которой Х представлено дезаминогруппой или С Me или N Me и где R, R, R и R указаны выше.
Примеры данных агонистов NPY включают:
pNPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Leu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln- Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:217)
Пептид hNPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:218)
27
Пептид [Phe]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:219)
17
Пептид [Ac-D-Ala]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
Ac-D-Ala-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:220)
Пептид NPY(19-36), имеющий формулу:
2
H-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:221)
17
Пептид [Nle]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Nle-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:222)
18
Пептид [D-Ser]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-D-Ser-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:223)
17
21
Пептид [Ala,His]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Ala-Ala-Arg-Tyr-His-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:224)
18
Пептид [D-Ile]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
D-Ile-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH(SEQ ID NO:225)
17
Пептид [Ac-Arg]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
Ac-Arg-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:226)
19
Пептид [Gln]-NPY(19-36), имеющий формулу:
2
H-Gln-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:227)
20
Пептид [Phe]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Phe-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:228)
a
17
Пептид [CMeLeu]-pNPY(17-36)), имеющий формулу:
a
2
H-CMeLeu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:229)
a
17
Пептид [NMeLeu]-pNPY(17-36), имеющий формулу:
a
2
H-NMeLeu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:230)
18
Пептид [дезамино Аla]-NpY(18-36), имеющий формулу:
2
дезамино-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:231)
18
23
26
Пептид [For-Ala,Glu,Arg]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
For-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Glu-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:232)
18
21
28
Пептид [Nva,Ala,Leu]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Nva-Ala-Arg-Tyr-Ala-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:233)
22
23
Пептид [Thr,Gln]-NPY(18-36)), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Thr-Gln-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:234)
17
23
30
Пептид [дезамино Leu,Asn,Val]-NPY(17-36)), имеющий формулу:
2
Н-дезамино Leu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Asn-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-VAL-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:235)
22
23
30
Пептид [Asp,Ser,Thr]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Asp-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Thr-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:236)
25
31
34
Пептид [Gln,Leu,Pro]-NPY(18-36)), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Gln-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:237)
25
36
Пептид [Gln,Phe]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Leu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-Gln-Tyr-Arg-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:238)
36
Пептид [Phe]-pPYY(19-36), имеющий формулу:
2
H-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:239)
Пептид pPYY(18-36)), имеющий формулу:
2
H-Ser-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:240)
18
27
Пептид [Ac-Ser,Рhе]-рРYY(18-36), имеющий формулу:
2
Ac-Ser-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg- Tyr-NH (SEQ ID NO:241)
17
22
27
Пептид [Nle,Asn,Phe]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Nle-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Asn-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:242)
18
21
34
Пептид [D-Ala,Glu,His]-NPY(18-36)), имеющий формулу:
2
H-D-Ala-Arg-Tyr-GLU-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-His-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:243)
17
34
36
Пептид [Bz-Leu,Pro,Phe]-pNPY(17-36)), имеющий формулу:
2
Bz-Leu-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Pro-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:244)
19
27
28
Пептид [Lys,Phe,Val]-NPY(18-36)), имеющий формулу:
2
H-Ala-Lys-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Val-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:245)
28
32
Пептид [D-Ala,Val,Phe]-NPY(17-36)), имеющий формулу:
2
D-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Val-Asn-Leu-Ile-Phe-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:246)
a
18
30
36
Пептид [СMeSer,Met,Phe]-NPY(18-36)), имеющий формулу:
a
2
H-CMeSer-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Met-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:247)
17
18
27,36
Пептид [Arg,Ile,Phe]-NPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Arg-Ile-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:248)
18
27
Пептид [Ser,Phe]-pNPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Leu-Ser-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln- Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:249)
a
18
25
27
Пептид [N Melle,Gln,Phe]-NPY(18-36), имеющий формулу:
a
2
N Melle-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Gln-His-Phe-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:250)
18
36
Пептид [D-Ser,Phe]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-D-Ser-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH (SEQ ID NO:251)
23
26
Пептид [Asp,Arg]hNPY(17-36), имеющий формулу:
2
H-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Asp-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:252)
23
29
Пептид [Glu,Ile]-NPY(18-36), имеющий формулу:
2
H-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Glu-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Ile-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:253)
17
Пептид [D-Ala]-NPY(17-36)-OH, имеющий формулу:
D-Ala-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-OH (SEQ ID NO:254).
Другие агонисты пептида YY имеют формулу:
в которой:
1
2
Х - цепь из 0-5 аминокислот, в том числе цепь, в которой N-концевая аминокислота связана с R и R
3
4
Y - цепь из 0-4 аминокислот, в том числе цепь, в которой С-концевая аминокислота связана с R и R,
1
1
2
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
2
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
22
А - ароматическая аминокислота, Ala, Aib, Anb, N-Me-Ala или делеция;
23
А - Ser, Thr, Ala, N-Me-Ser, N-Me-Thr, N-Me-Ala или делеция;
24
A - Leu, Ile, Vat, Trp, Gly, Aib, Anb, N-Me-Leu или делеция;
25
1
10
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - H, С-С-алкильная группа с разветвленной или прямой цепью или арильная группа), Orn или делеция;
26
1
10
А - His, Thr, 3-Me-His, 1-Me-His, β-пирозолиламин, N-Me-His, Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - H, С-С-алкильная группа с разветвленной или прямой цепью или арильная группа), Orn или делеция;
27
А - ароматическая аминокислота, отличная от Тyr;
28
А - Leu, Ile, Vat, Trp, Aib, Aib, Anb или N-Me-Leu;
29
А - Asn, Ala, Gln, Gly, Trp, или N-Me-Asn;
30
A - Leu, Ile, Val, Trp, Aib, Anb или N-Me-Leu;
31
A - Vat, He, Trp, Aib, Anb или N-Me-Val;
32
A - Thr, Ser, N-Me-Set, или N-Me-Thr;
3
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
4
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил) или его фармацевтически приемлемая соль. См. Патент США No. 5574010.
Особенно предпочтительные агонисты данной формулы, пригодные для использования в способе, соответствующем описанию изобретения, включают:
2
N-α-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ ID NO:255).
Другие агонисты пептида YY имеют формулу:
в которой:
1
2
N-концевая аминокислота связана с R и R;
3
4
Y - цепь из 0-4 аминокислот, в том числе цепь, С-концевая аминокислота которой связана с R и R;
1
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил, С-С-арил, С-С-ацил, С-С-аралкил или С-С-алкарил;
2
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил, С-С-арил, С-С-ацил, С-С-аралкил или С-С-алкарил;
25
1
10
А - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или прямой цепью или арильная группа), Orn или делеция;
26
1
10
А - Ala, His, Thr, 3-Me-His, 1-Me-His, β-пирозолилаланин, N-Me-His, Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - H, С-С-алкильная группа с разветвленной или прямой цепью или арильная группа), Orn или делеция;
27
А - ароматическая аминокислота;
28
А - Leu, Ile, Val, Trp, Aib, Anb или N-Me-Leu;
29
А - Asn, Ala, Gln, Gly, Trp, или N-Me-Asn;
30
A - Leu, Ile, Val, Trp, Aib, Anb или N-Me-Leu;
31
A - Val, Ile, Trp, Aib, Anb или N-Me-Val;
32
A - Thr, Set, N-Me-Set или N-Me-Thr или D-Trp;
3
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил, С-С-арил, С-С-ацил С-С-аралкил или С-С-алкарил и
4
1
12
6
8
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил, С-С-арил, С-С-ацил С-С-алкарил или С-С-алкарил или его фармацевтически приемлемая соль. Отметим, что пока не указано иначе, для всех описанных в данном контексте агонистов пептида YY каждый остаток аминокислоты, например Leu и А1, представляет структуру NH--C(R)H-CO--, где R - боковая цепь. Линии между остатками аминокислот представляют пептидные связи, которые соединяют аминокислоты. Кроме того, если остаток аминокислоты является оптически активным, он присутствует в конфигурации L-формы, что подразумевается, если специально не обозначена D-форма.
Другие агонисты PYY имеют формулу:
в которой:
1
2
Х - цепь из 0-5 аминокислот, в том числе цепь, в которой N-концевая аминокислота связана с R и R;
3
4
Y - цепь из 0-4 аминокислот, в том числе цепь, в которой С-концевая аминокислота связана с R и R;
1
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
2
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил (например, метил), C-C-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
22
А - ароматическая аминокислота, Ala, Aib, Anb, N-Me-Ala или делеция;
23
А - Ser, Thr, Ala, Aib, N-Me-Ser, N-Me-Thr, N-Me-Ala или делеция;
24
A - Leu, Ile, Val, Trp, Gly, Nle, Nva, Aib, Anb, N-Me-Leu или делеция;
25
1
10
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lye-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или арильная группа), Orn или делеция;
26
1
10
А - Ala, His, Thr, 3-Me-His, 1-Me-His, β-пирозоилаланин, N-Me-His, Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или арильная группа), Orn или делеция;
27
А - ароматическая аминокислота, отличная от Тyr;
28
А - Leu, Ile, Val, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
29
A - Asn, Ala, Gln, Gly, Trp или N-Me-Asn;
30
A - Leu, Ile, Val, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
31
A - Val, Leu, Ile, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Val;
32
A - Thr, Ser, N-Me-Ser, N-Me-Thr или D-Trp;
3
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил) и
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R4 - H, С-С алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил) или его фармацевтически приемлемая соль.
27
В предпочтительных вариантах осуществления А - Phe, Nal, Bip, Pep, Tic, Trp, Bth, Thi или Dip.
17
18
19
20
21
В предпочтительных вариантах осуществления X-А-А-А-А-А, где
17
А - Cys, Leu, Ile, Val, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
18
А - Cys, Ser, Thr, N-Me-Ser или N-Me-Thr;
19
1
10
6
18
А - Arg, Lys, гомо-Аrg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - H, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или C-C-арильная группа), Cys или Orn;
20
А - ароматическая аминокислота или Cys и
21
33
34
35
36
А - ароматическая аминокислота, Cys или его фармацевтически приемлемая соль. В еще одних предпочтительных вариантах осуществления Y-A-A-A-A, где
33
1
10
6
18
А - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или C-C-арильная группа), Cys или Orn;
34
А - Cys, Gln Asn, Ala, Gly, N-Me-C1n, Aib или Anb;
35
1
10
6
18
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или С-С-арильная группа), Cys или Orn и
36
А - ароматическая аминокислота, Cys или его фармацевтически приемлемая соль. См. Патент США No. 5604203.
Конкретный вариант осуществления включает соединения, имеющие формулу:
2
N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:325),
2
2
2
H-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:326), N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:327), N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-THI-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:328),
2
N-α-Ac-Tyr-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:329) или их фармацевтически приемлемую соль.
Другие агонисты PYY имеют формулу:
1
2
3
4
в которой N-концевая аминокислота связана с R и R; Y - цепь из 0-4 аминокислот, в том числе цепь, в которой С-концевая аминокислота связана с R и R;
1
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил (например, метил), C-C-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
2
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - Н, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил);
25
1
10
6
18
А - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или С-С-арильная группа), Orn или делеция;
26
1
10
6
18
A -Ala, His, Thr, 3-Me-His, 1-Me-His, β-пирозолилаланин, N-Me-His, Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - Н, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или С-С-арильная группа), Orn или делеция;
27
А - ароматическая аминокислота;
28
А - Leu, Ile, Val, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
29
А - Asn, Ala, Gln, Gly, Trp или N-Me-Asn;
30
А - Leu, Ile, Val, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
31
A - Val, Ile, Trp, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Val;
32
A - Thr, Ser, N-Me-Ser, N-Me-Thr или D-Trp;
3
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), C-C-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил) и
4
1
12
6
18
1
12
7
18
7
18
R - H, С-С-алкил (например, метил), С-С-арил (например, фенил, нафтилацетил), С-С-ацил (например, формил, ацетил и миристоил), С-С-аралкил (например, бензил) или С-С-алкарил (например, р-метилфенил) или его фармацевтически приемлемая соль. См. Патент США No. 5604203.
27
В конкретных вариантах осуществления А - Phe, Nal, Bip, Pcp, Tic, Trp, Bth, Thi или Dip.
33
34
35
36
В конкретных вариантах осуществления X-А-А-А-А, где
33
1
10
6
18
А - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, [Lys-∈-NH-R] (где R - H, С-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или С-С-арильная группа), Cys или Orn;
34
А - Gln, Asn, Ala, Gly, N-Me-Gln, Aib, Cys или Anb;
35
1
10
6
18
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R (где R - H, C-С-алкильная группа с разветвленной или неразветвленной цепью или С-С-арильная группа), Cys или Orn и
36
А - ароматическая аминокислота, Cys или его фармацевтически приемлемая соль.
Предпочтительно, когда соединение имеет формулу:
2
N-α-Ac-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH (SEQ. ID. NO:324).
Примеры агонистов PYY включают:
YPAKEAPGEDASPEELSTYYASLR [im-DNP-His<sup>26</sup>]
(SEQ ID NO:256)
YLNLVTRZRY-NH<sub>2</sub>
PYY(22-36)
ASLRHYLNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:257)
[Ala<sup>32</sup>]PYY
ASLRHYLNLV[Ala]RQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:258)
[Ala<sup>23,32</sup>]PYY
A[Ala]LRHYLNLV[Ala]RQRY-NN<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:259)
[Glu<sup>28</sup>]PYY(22-36)
ASLRHY[Glu]NLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:260)
N-α-Ac-PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRHYLNLVTRORY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:261)
N-α-Ac[p.CL.Phe<sup>26</sup>]PYY
N-α-Ac-ASLR[p.CL.Phe<sup>26</sup>]YLNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:262)
N-α-Ac[Glu<sub>28</sub>]PYY
N-α-Ac-ASLRHY[Glu]NLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:263)
N-α-Ac[Phe<sup>27</sup>]PYY
N-α-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-Me-Tyr]-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:264)
N-α-Ac]8N-Me-Tyr<sup>36</sup>]PYY
N-α-Ac-ASLRHYENLVTROR[N-Me-Tyr]-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:265)
N-α-маристоил-РYY(2214 36)
N-α-миристоил-ASLRHYLNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:266)
N-α-нафтилацетил-РYY(22-36)
N-α-нафтилацетил-ASLRHYLNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:267)
N-α-Ac[Phe<sup>27</sup>]PYY
N-α-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTROR[N-Me-Tyr]-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:268)
N-α-Ac-PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:269)
N-α-Ac-[Bth<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:270)
N-α-Ac-[Bip<sup>27</sup>]PYY(22-36)
(SEQ ID NO:271)
N-α-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:272)
N-α-Ac-[Nal<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:273)
N-α-Ac-[Trp<sup>27</sup>]PYY(22-36)
(SEQ ID NO:274)
N-α-Ac-ASLRH[Trp]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:275)
N-α-Ac-[Thi<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRN[Thi]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:276)
N-α-Ac-[Tic<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Tic]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:277)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>]PYY(25-36)
N-α-Ac-H[Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:279)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>,Thi<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR(Thi]-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:280)
N-α-Ac-[Thz<sup>26</sup>,Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Thz][Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:281)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Thz][Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:282)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-[Phe]SLRN[Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:289)
N-α-Ac-[Tyr<sup>22</sup>,Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-[Tyr]SLRH[Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:290)
N-α-Ac-[Trp<sup>28</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRHY[Trp]NLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:291)
N-α-Ac-[Trp<sup>28</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRHYLN[Trp]VTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:292)
N-α-Ac-[Ala<sup>26</sup>,Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLR[Ala][Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:293)
N-α-Ac-[Bth<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLR[Bth]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:294)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:295)
N-α-Ac-[Phe<sup>27,36</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR[Phe]-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:296)
N-α-Ac-[Phe<sup>27</sup>,D-Trp<sup>32</sup>]PYY(22-36)
N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVIT)-Trp]RQRY-NH<sub>2</sub>
(SEQ ID NO:297)
Другие агонисты PYY включают нейтрофильные рецептор YY2-специфические пептиды, имеющие формулу:
n
3
Х1(-Х2-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7-Х8-Х9-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14)-Х15, где Х1-NН, СНСО или одна или две природные аминокислоты.
Х2 - Leu, Ile или Val.
Х3 - Arg, Lys или His.
Х4 - His, Lys или Arg.
Х5 - Тyr или Phe.
Х6 - Leu, Ile или Val.
X7 - Asn или Gln.
X8 - Leu, Ile или Val.
X9 - Leu, Ile или Val.
X10 - Thr или Ser.
X11 - Arg, His или Lys.
X12 - Gln или Asn.
X13 - Arg, His или Lys.
X14 - Тyr или Phe.
2
X15 - COOH, NH или одна или две природные аминокислоты с концевой аминокислотой, находящейся в нормальной или карбоксамидной форме, и n=1-5. См. Патент США No. 5696093.
Примеры агонистов включают:
3
2
CHCO-L-R-H-Y-L-N-L-L-T-R-Q-R-Y-NH (SEQ ID NO:298)
3
2
CHCO-L-R-H-Y-I-N-L-I-T-R-Q-R-Y-NH (SEQ ID NO:299)
2
2
NH-L-R-H-Y-L-N-L-L-T-R-Q-R-Y-NH (SEQ ID NO:300)
2
2
NH-L-R-H-Y-I-N-L-I-T-R-Q-R-Y-NH (SEQ ID NO: [301)
Другие агонисты PYY имеют формулу:
1
2
24,28,30
27
31
35/36
N-α-R-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH,
1
2
24,28
27,30
31
35/36
N-α-R-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH,
1
2
24,28,30
27
31
35/36
N-α-R-[Nle,Phe,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH,
1
2
24,28
27
30
31
35/36
N-α-R-[Nle,Phe,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH,
1
2
30
35/36
N-α-R-[Trp,ψ]PYY(25-36)-NH,
1
2
30
N-α-R-[Trp]PYY(25-36)-NH,
1
2
24,28
30
31
35/36
N-α-R-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH и
1
2
28
30
31
35/36
N-α-R-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH или их фармацевтически приемлемые соли,
1
1-12
1-12
где R - Н, (С)-алкил или (С)-ацил и
2
2
2
2
2
2
ψ - псевдопептидная связь, выбранная из группы, состоящей из -СН-NН--, --СН-S--, --CH-CH--, --СН--O-- и --СН--СО--. См. Патент США No. 6046162.
1
2
В конкретных соединениях группы соединений, описанных в предшествующем абзаце, R - ацетил и ψ - --CH-NH--.
Определенная выборка соединений выбрана из группы, состоящей из
24,28,30
27
31
35/36
2
N-α-Ac-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH, (SEQ ID NO:302)
24,28
27,30
31
35/36
2
N-α-Ac-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH, (SEQ ID NO:303)
24,28,30
27
31
35/36
2
N-α-Ac-[Nle,Phe,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH, (SEQ ID NO:304)
24,28
27
30
31
35/36
2
N-α-Ac-[Nle,Phe,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH, (SEQ ID NO:305)
30
35/36
2
N-α-Ac-[Trp,ψ]PYY(25-36)-NH, (SEQ ID NO:306)]
30
2
N-α-Ac-[Trp]PYY(25-36)-NH (SEQ ID NO:307) и
28
30
31
35/36
2
N-α-Ac-[Nle,Trp,Nva,ψ]PYY(22-36)-NH, (SEQ ID NO:308) или их фармацевтически приемлемых солей.
24,28
30
31
35/36
2
Другое конкретное соединение имеет формулу N-α-Ac-[Nle,Trp, Nva.sup.,ψ]PYY(22-36)-NH (SEQ. ID. NO:309) или его фармацевтически приемлемая соль.
Другой агонист PYY имеет формулу (А),
2
2
2
2
2
2
содержащую одну или две псевдопептидные связи, где каждая псевдопептидная связь независимо выбрана из группы, состоящей из -CH-NH--, --CH-S--, --СН--СН--, --СH-O-- и -CH-CO--, где:
10
1
2
R - цепь из 0-5 аминокислот, в том числе цепь, в которой N-концевая аминокислота связана с R и R посредством боковой цепи N-концевой аминокислоты или азота аминогруппы N-концевой аминокислоты;
20
3
4
R - цепь из 0-4 аминокислот, в том числе цепь, в которой С-концевая аминокислота связана с R и R посредством боковой цепи С-концевой аминокислоты или атома углерода карбоксильной группы С-концевой аминокислоты;
1
2
3
4
1
12
6
18
1
12
1
12
1
12
1-5
Каждое из R, R, R и R независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С-С)-алкила, (C-C)-арила, (С-С)-ацила, фенил(С-С)-алкила и ((С-С)алкил)-фенила;
22
А - ароматическая аминокислота, Ala, Aib, Anb, N-Me-Ala или делеция;
23
А - Ser, Thr, Ala, N-Me-Ser, N-Me-Thr, N-Me-Ala или делеция;
24
A - Leu, Ile, Nle, Val, Trp, Gly, Aib, Anb, N-Me-Leu или делеция;
25
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-p.∈-NH-Z, Orn или делеция;
26
28
A - His, Thr, 3-Me-His, 1-ME-His, β-пиразолилаланин, N-Me-His, Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-Z, Orn или делеция; А - Leu, Ile, Nle, Val, Trp, Aib, Anb или N-Me-Leu;
29
A - Asn, Ala, Gln Gly, Trp или N-Me-Asn;
30
A - Leu, Ile, Nle, Fla, Val, Trp, Aib, Anb или N-Me-Leu;
31
А - Val, Nva, Ile, Trp, Aib, Anb или N-Me-Val и
32
A - Thr, Ser, N-Me-Ser или N-Me-Thr,
1
10
6
18
где Z для каждого случая независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С-С)-алкил и (C-C)-арил или его фармацевтически приемлемой солью. См. Патент США No. 6046167.
10
17
18
19
20
21
В выборке конкретных соединениях группы соединений, описанных в предшествующем абзаце, R - А-А-А-А-А,
17
где А - Cys, Leu, Ile, Val, Nle, Nva, Aib, Anb или N-Me-Leu;
18
A - Cys, Ser, Thr, N-Me-Ser или N-Me-Thr;
19
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-Rg, Cys или Orn;
20
A - ароматическая аминокислота или Cys;
21
A - ароматическая аминокислота или Cys;
20
33
34
35
36
R - A-A-A-A,
33
5
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R, Cys или Orn;
34
A - Cys, Gln, Asn, Ala, Gly, N-Me-Gln, Aib или Anb;
35
5
A - Arg, Lys, гомо-Arg, диэтил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R, Cys или Orn и
36
A - ароматическая аминокислота или Cys,
5
1
1
10
6
18
где R для каждого случая независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С-С)-алкила и (С-С)-арила.
27
27
2
2
Выборка конкретных соединений предшествующей группы предствлена соединениями формулы N-α-Ac-[Fla]PYY(25-36)-NH и N-α-Ac-[Fla]PYY(22-36)-NH или его фармацевтически приемлемой солью.
Другая группа агонистов PYY имеет формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль, в которой
2
------ представляет необязательную связь между аминокислотами, для которых показано наличие связи друг с другом, где каждая связь независимо выбрана из группы, состоящей из --S--S--, только, когда связанные аминокислоты представлены Cys-Cys, -CO-NH-, -СН-NН- и
при условии, что в случае, когда необязательная связь представлена
она заменяет две аминокислоты, к которым присоединена необязательная связь; q=1-4; m=1-4;
30
1
30
1
30
1
7
R - ОН или -O-R, при условии, что когда А-А удалены, то R может быть также NH-R, где R присоединено к атому углерода карбоксила С-концевой аминокислоты;
1
2
1
12
6
18
1
12
1
12
1
12
1-5
1
2
каждое из R и R для каждого случая независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С-С)-алкила, (C-C)-арила, (С-С)-ацила, фенил-(С-С)-алкила и ((С-С)-алкил)-фенила, где R и R присоединены к азоту амина N-концевой аминокислоты;
1
1
4
1
4
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Тrp, Тyr, Fla, Bth, Nal, Tic, Tic-OH, Dip, Bip или необязательно замещенным Phe, где Phe необязательно замещен одним из пяти заместителей, выбранных из группы, состоящей из (С-С)-алкила, галогена, (С-С)-алкоксигруппы, амино- и нитрогрупы;
2
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Ilе, Val, Leu, Nle, Anb, Aib, Pro, Gln или Asn;
3
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Asn, Gln Glu, Asp, Orn, Lys, Dpr или Cys;
4
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Ilе, Val, Leu, Nle, Anb, Aib или Pro;
5
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Ilе, Val, Leu, Nle, Anb, Aib, Pro, Glu, Asp, Om, Lys, Dpr или Cys;
6
1
4
1
4
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Тhr, Ser, Тrp, Тyr, Fla, Bth, Nal, Tic, Tic-OH, Dip, Bip или необязательно замещенным Phe, где Phe необязательно замещен одним из пяти заместителей, выбранных из группы, состоящей из (С-С)-алкила, галогена, (С-С)-алкоксигруппы, амино- и нитрогрупы;
7
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Arg, Lys, гомо-Arg, диалкил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R7 или Orn;
8
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Nva, Val, Ile, Leu, Nle, Anb, Aib, Pro, Gln Asn, Glu, Asp, Orn, Lys, Dpr или Cys;
9
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Arg, Lys, гомо-Arg, диалкил-гомо-Arg, Lys-∈-NH-R7 или Orn и
10
1
4
1
4
А удалено или представлено D- или L-формами следующих аминокислот: Тyr, Trp, Fla, Bth, Nal, Tic, Tic-OH, Dip, Bip, тирамином или необязательно замещенным Phe, где Phe необязательно замещен одним из пяти заместителей, выбранных из группы, состоящей из (С-С)-алкила, галогена, (С-С)-алкоксигруппы, амино- и нитрогруппы или соответствующего декарбоксилированного необязательно замещенного Phe;
7
1
1
10
6
18
1
10
где R для каждого случая независимо выбрано из группы, состоящей из Н(С-С)-алкила и (С-С)-арила при условии, что не все А-А удаляют одновременно. См. Патент США No. 6046167.
Выборка конкретных соединений группы соединений, представленных в непосредственно предшествующем абзаце, содержит
или их фармацевтически приемлемую соль.
PYY и агонисты PYY могут быть модифицированы хорошо известными способами, такими как амидирование, гликозилирование, ацилирование (например, ацетилирование), сульфатирование, фосфорилирование, циклизация, липидизация и пегилирование. Способы липидизации производными жирных кислот сульфгидрилсодержащих соединений раскрыты в Патенте США No. 5936092, Патенте США No. 6093692 и Патенте США No. 6225445. Производные жирных кислот сульфгидрилсодержащих PYY и агонистов PYY, содержащие конъюгированные с жирными кислотами продукты с дисульфидной связью, используют для доставки PYY и агонистов PYY в нервные клетки и ткани. Данная модификация значительно повышает всасывание соединения относительно скорости всасывания неконъюгированных соединений, а также пролонгирует удерживание соединений в крови и тканях. Более того, дисульфидная связь в конъюгате очень лабильна в клетках и, таким образом, облегчает внутриклеточный выход интактных соединений из молекул жирных кислот.
Жирные кислоты, как компоненты фосфолипидов, составляют основную часть клеточных мембран. Благодаря липидной природе жирные кислоты могут легко проникать в клеточную мембрану и взаимодействовать с ней, не вызывая токсического действия. Вследствие этого жирные кислоты представляют собой потенциально эффективный лиганд-носитель для доставки белков и пептидов. Стратегические направления применения жирных кислот для доставки белков и пептидов включают ковалентную модификацию белков и пептидов и применение эмульсий жирных кислот.
Для получения данных конъюгатов сульфгидрилсодержащие PYY и агонист PYY присоединяют к производному жирной кислоты через обратимую биодеградируемую дисульфидную связь. Предполагают, что такой конъюгат будет связываться с апикальной стороной клеточной мембраны, достигать базолатеральной мембраны желудочно-кишечного эпителия в результате мембранного транспорта и включаться в круговорот с выходом в интерстициальной жидкости в результате восстановления дисульфидной связи.
Данные липидизированные соединения PYY и агониста PYY имеют общую формулу,
1
2
3
2
2
где Р - остаток, выделенный из PYY или агониста PYY; R - водород, низший алкил или арил; R - липидсодержащая структура и R - --ОН, липидсодержащая структура или цепь аминокислот, содержащая 1 или 2 аминокислоты и заканчивающаяся -СОН или -COR. См. Патент США No. 5936092. Данные конъюгаты особенно эффективны в плане повышения всасывания и пролонгирования удерживания PYY и агонистов PYY в крови и тканях.
1
6
Типичные алкильные группы включают С-С-алкильные группы, в том числе метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил и т.п.
6
14
Предпочтительные арильные группы представлены С-С-арильными группами и, как правило, включают фенильную, нафтильную, флуоренильную, фенантрильную и антрацильную группы.
15
31
15
29
17
35
Термин "липидсодержащая структура (молекула)" относится либо к липидной группе как таковой, либо к группе на углеводородной основе (в частности, из одной или более аминокислот), содержащей липидную группу. Термином "липидная группа" обозначают гидрофобный заместитель, содержащий 4-26 атомов углерода, предпочтительно 5-19 атомов углерода. Подходящие липидные группы включают, но без ограничения перечисленным, следующие: пальмитил (СН), олеил (CH), стеарил (CH), холат и дезоксихолат.
В заявке РСТ No. WO 00/34236 описывают конъюгаты лекарственного вещества и носителя и стратегию синтеза, направленную на их получение, а также способы синтеза, промежуточные продукты и конечные продукты, применяемые для введения и высвобождения биологически активных соединений, содержащих аминогруппы. Данные липидизированные соединения PYY и агонистов PYY имеют общую формулу I
2
где R выбрано из группы, состоящей из водорода, галогена, алкила или арил, где алкильная или арильная группы необязательно замещены одной или более алкоксигруппой, алкоксиалкилом, алканоилом, нитрогруппой, циклоалкилом, алкенилом, алкинилом, алканоилоксигруппой, алкилом или атомами галогена;
3
4
5
R - липофильная группа; один из R и R и PYY или агонист PYY и другие из
4
5
6
6
R и R - OR, где R - водород, щелочной металл или отрицательный заряд;
Х - кислород или сера;
Y - мостиковая природная или неприродная аминокислота; n - ноль или 1 и
m - целое число от 0 до 10.
1
6
Типичные алкильные группы включают С-С-алкильные группы, в том числе метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил и т.п.
Типичные алкоксигруппы включают кислородзамещенные любой из вышеупомянутых алкильных групп.
Типичные алкоксиалкильные группы включают любую из вышеуказанных алкильных групп, замещенных алкоксигруппой, такие как метоксиметил, этоксиметил, пропоксиметил, бутоксиметил, пентоксиметил, гексоксиметил, метоксиэтил, метоксипропил, метоксибутил, метоксипентил, метоксигексил и т.п.
6
14
Предпочтительные арильные группы представлены С-С-арильными группами и, как правило, включают фенильную, нафтильную, флуоренильную, фенантрильную и антрацильную группы.
Типичные алкоксизамещенные арильные группы включают вышеуказанные арильные группы, замещенные одной или более из вышеуказанных алкоксигрупп, например 3-метоксифенил, 2- этоксифенил и т.п.
1
6
2
n
Типичные алкилзамещенные арильные группы включают любую из вышеуказанных арильных групп, замещенных любой из С-С-алкильных группы, в том числе группу Ph(CH), где n=1-6, например толуол, о-, m- и p-ксилил, этилфенил, 1-пропилфенил, 2-пропилфенил, 1-бутилфенил, 2-бутилфенил, трет-бутилфенил, 1-пентилфенил, 2- пентилфенил, 3-пентилфенил.
2
6
Типичные алкенильные группы включают С-С-алкенильные группы, например этинильную, 2-пропенильную, изопропенильную, 2-бутенильную, 3-бутенильную, 4-пентенильную, 3-пентенильную, 2-пентенильную, 5-гексенильную, 4-гексенильную, 3-гексенильную и 2-гексенильную группы.
2
6
Типичные алкинильные группы включают С-С-алкинильные группы, например этинильную, 2-пропенильную, 2-бутинильную, 3-бутинильную, 4-пентинильную, 3-пентинильную, 2-пентинильную, 5-гексинильную, 4-гексинильную, 3-гексинильную и 2-гексинильную группы.
6
14
2
6
2
6
Типичные алкенил- или алкинилзамещенные арильные группы включают любую из вышеуказанных С-С-арильных групп, замещенных любыми из вышеуказанных С-С-алкенильных или С-С-алкинильных групп, например этинилфенильную, 1-пропенилфенильную, 2-пропенилфенильную, 1-бутенилфенильную, 2-бутенилфенильную, 1-пентенилфенильную, 2-пентенилфенильную, 3-пентенилфенильную, 1-гексенилфенильную, 2-гексенилфенильную, 3-гексенилфенильную, этинилфенильную, 1-пропинилфенильную, 2-пропинилфенильную, 1-бутинилфенильную, 2-бутинилфенильную, 1-пентинилфенильную, 2-пентинилфенильную, 3-пентинилфенильную, 1-гексинилфенильную, 2-гексинилфенильную, 3-гексинилфенильную группы.
Типичные галогеновые группы включают фтор, хлор, бром и иод.
1
6
Типичные галогензамещенные алкильные группы включают C-C-алкильные группы, замещенные одним или более атомов фтора, хлора, брома и иода, например фторметильная, дифторметильная, трифторметильная, пентафторэтильная, 1,1-дифторэтильная и трихлорметильная группы.
1-5
1-5
Типичные алканоильные группы включают СС(=O)-алканоильные группы, например ацетильную, пропионильную, бутаноильную, пентаноильную и гексаноильную группы, или арилалканоильную группу, например СС(=O)-алканоильную группу, замещенную любой из вышеуказанных арильных групп.
3-8
Типичные циклоалкильные группы включают С циклоалкильные группы, в том числе циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную, циклогексильную, циклогептильную и циклооктильную группы.
15
31
15
29
17
35
11
23
13
27
Термин "липофильная группа", как используют в данном контексте, относится либо к природному липиду как таковому, гидрофобному разветвленному или неразветвленному углеводороду, содержащему от приблизительно 4 до приблизительно 26 атомов углерода, предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 19 атомов углерода, жирной кислоте или ее сложному эфиру, либо к поверхностно-активному веществу. Подходящие липофильные группы включают, но без ограничения перечисленным, алканоильные группы с длинной цепью, в том числе: пальмитоил (СН), олеоил (СН), стеарил (CH), лаурил (СН), холил и миристоил CH).
Термин "природная или неприродная аминокислота", как используют в данном контексте, относится к любой из 21 природных аминокислот, а также к D-формам аминокислот, блокированным L- и D-формам аминокислот, таким как аминокислоты, блокированные амидированием или ацилированием, замещенным аминокислотам (например, аминокислотам, замещенным алкильными группами или циклоалкильными группами, такими как циклопропил или циклобутил, создающими стерические препятствия), в которых замещение вводит в аминокислоту конформационное ограничение. Предпочтительные природные аминокислоты, применяемые в данном изобретении, как аминокислоты или компоненты пептида или белка, представлены аланином, аргинином, аспарагином, аспарагиновой кислотой, цитруллином, цистеином, цистином, γ-глутаминовой кислотой, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, норлейцином, лейцином, лизином, метионином, орнитином, фенилаланином, пролином, гидроксипролином, серином, треонином, триптофаном, тирозином, валином, γ-карбоксиглутамином или O-фосфосерином. Предпочтительные неприродные аминокислоты, применяемые в данном изобретении, как аминокислоты или компоненты пептидов или белков, представлены любой из β-аминокислот, например, α-аланином, γ-аминомасляной кислотой, γ-(аминофенил)-масляной кислотой, α-аминоизомасляной кислотой, ∈-аминокапроновой кислотой, 7-аминогептановой кислотой, аминобензойной кислотой, аминофенилуксусной кислотой, аминофенилмасляной кислотой, цистеином (АСМ), метионинсульфоном, фенилглицином, норвалином, орнитином, дельта-орнитином, р-нитро-фенилаланином, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновой кислотой и тиопролином.
Данное изобретение направлено также на способы получения липидизированных конъюгатов PYY и агонистов PYY, фармацевтические композиции, содержащие липидизированные конъюгаты PYY и агонистов PYY, и способы повышения уровня доставки содержащих аминогруппу PYY и агонистов PYY в клетку.
В данном описании изобретения представлены также химически модифицированные производные PYY и агонистов PYY, которые могут обеспечивать дополнительные преимущества, такие как повышенная растворимость, стабильность и время циркуляции полипептидов или пониженная иммуногенность (см. Патент США No. 4179337). Данные модифицированные производные включают PYY и агонисты PYY, модифицированные пегилированием. Термины "пегилированный" и "пегилирование" относятся к процессу реакции полиалкиленгликоля, предпочтительно активированного полиалкиленгиликоля с агентом, облегчающим действие, таким как аминокислота, например лизин, с образованием ковалентной связи. Хотя "пегилирование" часто осуществляют с использованием полиэтиленгликоля или его производных, таких как метоксиполиэтиленгликоль, ограничение термина данным агентом не предусмотрено, и он предназначен для включения любого другого эффективного полиалкиленгликоля, например, такого как полипропиленгликоль.
Химические структуры для дериватизации могут быть также выбраны из водорастворимых полимеров, таких как полиэтиленгликоль, сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт и т.п. Полипептиды могут быть модифицированы по случайным положениям молекулы или по заданным положениям молекулы и могут включать одну, две, три или более присоединенных химических молекул.
Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. Для полиэтиленгликоля предпочтительная молекулярная масса составляет между приблизительно 1 кД и приблизительно 100 кД (термин "приблизительно" показывает, что в препаратах полиэтиленгликоля некоторые молекулы будут иметь массу больше или немного меньше, чем указанная молекулярная масса) для простоты обращения и изготовления. Возможно использование других величин в зависимости от желательного терапевтического профиля (например, желательной продолжительности задержанного выхода, эффектов, если таковые имеются, на биологическую активность, простоты обращения, степени или отсутствия антигенности и других известных эффектов полиэтиленгликоля на терапевтический белок или аналог). Например, полиэтиленгликоль может иметь среднюю молекулярную массу приблизительно 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10000, 10500, 11000, 11500, 12000, 12500, 13000, 13500, 14000, 14500, 15000, 15500, 16000, 16500, 17000, 17500, 18000, 18500, 19000, 19500, 20000, 25000, 30000, 35000, 40000, 50000, 55000, 60000, 65000, 70000, 75000, 80000, 85000, 90000, 95000 или 100000 кД.
Как указано выше, полиэтиленгликоль может иметь разветвленную структуру. Разветвленные политэтиленгликоли описаны, например, в Патенте США No. 5643575; статьях Morpurgo и соавт., Appl. Biochem. Biotechnol., 56:59-72, (1996); Vorobjev и соавт., Nucleosides Nucleotides, 18:2745-2750, (1999) и Caliceti и соавт., Bioconjug. Chem., 10:638-646, (1999).
Молекулы полиэтиленгликоля (или другие химические структуры) следует присоединять к полипептидам и белка учетом эффектов в отношении функциональных и антигенных доменов полипептидов или белков. Существует ряд способов присоединения, доступных для компетентных специалистов в данной области, например, см. заявку ЕР 0401384 (связывание ПЭГ с G-CSF), см. также статью Malik и соавт., Exp. Hematol., 20:1028-1035, (1992) (описано пегилирование GM-CSF с использованием трезилхлорида). Например, полиэтиленгликоль может быть ковалентно связан через аминокислотные остатки посредством реакционной группы, такой как свободная амино- или карбоксильная группа. Реакционные группы представлены группами, с которыми может быть связана активированная молекула полиэтиленгликоля. Аминокислотные остатки, имеющие свободную аминогруппу, могут включать остатки лизина и N-концевые остатки аминокислот; остатки, имеющие свободную карбоксильную группу, могут включать остатки аспарагиновой кислоты, остатки глутаминовой кислоты и С-концевые остатки аминокислот. Сульфгидрильные группы также могут быть использованы в качестве реакционной группы для присоединения молекул полиэтиленгликоля. Предпочтительным для терапевтических целей является присоединение к аминогруппе, такое как присоединение к N-концу или группе лизина.
Как предложено выше, полиэтиленгликоль может быть присоединен к белкам и полипептидам посредством связи с любого из ряда аминокислотных остатков. Например, полиэтиленгликоль может быть связан с белками и полипептидами посредством ковалентной связи с остатками лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина. Можно использовать один или более способов реакции для присоединения полиэтиленгликоля к специфическим аминокислотным остаткам (например, лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина) полипептида или белка или к аминокислотным остаткам более чем одного типа (например, лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина или их комбинациям) белка или полипептида.
Могут специально потребоваться белки и полипептиды, химически модифицированные по N-концу. На примере полиэтиленгликоля может быть сделан выбор среди множества молекул полиэтиленгликоля (по молекулярной массе, разветвленности и т.п.), соотношения молекул полиэтиленгликоля и молекул белка (или пептида) в реакционной смеси, типа проводимой реакции пегилирования и способа получения выбранного белка, пегилированного по N-концу. Способ получения препарата, пегилированного по N-концу (т.е. отделения при необходимости данной молекулы от других монопегилированных молекул), может предусматривать очистку материала, пегилированного по N-концу, из популяции пегилированных белковых молекул. Селективные белки, химически модифицированные путем модификации по N-концу, могут быть получены путем алкилирования, в котором используют различия реакционной способности разных типов первичных аминогрупп (лизина относительно N-концевой), доступных для дериватизации в конкретном белке. В соответствующих условиях проведения реакции достигается практически селективная дериватизация белка по N-концу полимером, содержащим карбонильную группу.
Как указано выше, пэгилирование белков и полипептидов может быть осуществлено любым числом способов. Например, полиэтиленгликоль может быть присоединен к белку или полипептиду либо непосредственно, либо с использованием промежуточного линкера. Безлинкерные системы присоединения полиэтиленгликоля к белкам и полипептидам описаны в статьях Delgado и соавт., Crit. Rev. Thera. Drug Carrier Sys., 9:249-304, (1992), Francis и соавт., Intern. J. of Hematol., 68:1-18, (1998); Патенте США No. 4002531, Патенте США No. 5349052, патентных заявках WO 95/06058 и WO 98/32466.
2
2
3
В одной из систем присоединения полиэтиленгликоля непосредственно к остаткам аминокислот белков и полипептидов без промежуточного линкера используют трезилированный МПЭГ, который получают посредством модификации монометоксиполиэтиленгликоля (МПЭГ) с помощью трезилхлорида (ClSOCHCF). При реакции белка или полипептида с трезилированным МПЭГ полиэтиленгликоль непосредственно присоединяется к аминным группам белка или полипептида. Таким образом, изобретение включает конъюгаты белка и полиэтиленгликоля, образующиеся при реакции белков и полипептидов с молекулой полиэтиленгликоля, содержащей 2,2,2-трифлуоретансульфонильную группу.
Полиэтиленгликоль может быть также присоединен к белкам и полипептидам с использованием ряда различных промежуточных линкеров. Например, Патент США No. 5612460 раскрывает уретановые линкеры для связывания полиэтиленгликоля с белками. Конъюгаты белка и полиэтиленгликоля, в которых полиэтиленгликоль присоединяют к белку или полипептиду посредством линкера могут быть получены также путем реакции белков или полипептидов с соединениями, такими как МПЭГ-сукцинимидилсукцинат, МПЭГ, активированный 1,1'-карбонилдимидазолом, МПЭГ-2,4,5-трихлорфениларбонат, МПЭГ-р-нитрофенолкарбонат и различные производные МПЭГ-сукцината. Ряд дополнительных производных полиэтиленгликоля и химические способы реакции присоединения полиэтиленгликоля к белкам и полипептидам описаны в патентной заявке WO 98/32466.
Число молекул полиэтиленгликоля, присоединенных к каждому белку или полипептиду (т.е. степень замещения), также может варьировать. Например, пегилированные белки и полипептиды могут быть связаны в среднем с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20 или более молекулами полиэтиленгликоля. Аналогично средняя степень замещения лежит в таких интервалах, как 1-3, 2-4, 3-5, 4-6, 5-7, 6-8, 7-9, 8-10, 9-11, 10-12, 11-13, 12-14, 13-15, 14-16, 15-17, 16-18, 17-19 или 18-20 молекул полиэтиленгликоля/молекулу белка или полипептида. Способы определения замещения обсуждаются, например, в статье Delgado и соавт., Crit. Rev. Thera. Drug Carrier Sys., 9:249-304, (1992). Белки и полипептиды, содержащие практически неантигенные полимеры, предпочтительно полиалкиленгликоли, могут быть получены, например, как описано в Патенте США No. 5428128, Патенте США No. 6127355 и Патенте США No. 5880131.
Для осуществления ковалентного связывания полиэтиленгликоля (ПЭГ) с белком или полипептидом гидроксильные концевые группы ПЭГ сначала должны быть превращены в реакционные функциональные группы. Данный процесс часто обозначают термином "активация" и полученный продукт называют "активированным ПЭГ". Часто используют метоксиполиэтиленгликоль (мПЭГ) с дистальным кэпом в виде реакционной функциональной группы. Один из таких активированных ПЭГ представлен сукцинимидилсукцинатным производным ПЭГ (SS-ПЭГ). См. также статью Abuchowski и соавт., Cancer Biochem. Biophys., 7:175-186, (1984) и Патент США No. 5122614, который раскрывает полиэтиленгликоль-N-сукцинимидкарбонат и его получение.
Альтернативные практически неантигенные полимеры, которые могут быть использованы в практической реализации данного изобретения, включают такие материалы, как декстран, поливинилпирролидоны, полисахариды, крахмалы, поливиниловые спирты, полиакриламиды или иные подобные неиммуногенные полимеры. Компетентные специалисты в данной области будут осознавать, что вышеизложенное является просто иллюстрацией и не предназначено для ограничения типов полимерных субстанций, пригодных для применения в данном контексте.
В одном из аспектов данного изобретения полимер вводят в молекулу пептида или белка после того, как ее функционализируют или активируют для реакции и присоединения к одной или более аминокислот. Рядовые специалисты в данной области под активацией понимают, что полимер функционализируют путем включения желательной реакционной группы. См., например, Патент США No. 4179337 и Патент США No. 5122614. В данном варианте осуществления гидроксильные концевые группы полиалкиленгликолей превращают и активируют с получением реакционных функциональных групп.
В другом аспекте изобретения полимер перед введением в молекулу полипептида или белка конъюгируют с молекулой, облегчающей реакцию. Молекула, облегчающая реакцию, предпочтительно представлена аминокислотой, такой как лизин, но рассматриваются также молекулы, не являющиеся аминокислотами. В данный аспект входят мультифункционализированные органические молекулы, такие какалкилы или замещенные алкилы. Могут быть получены данные молекулы, которые содержат нуклеофильную функциональную группу, такую как амин, и электрофильную группу, такую как кислота, а также подходящим образом функционализированный участок для конъюгирования с желательным полимером или полимерами.
Молекулы, облегчающие реакцию, позволяют упростить введение полимера в молекулу пептида или белка при синтезе. Например, иллюстрацией к изложенному являются полиалкиленгликоли, связанные с облегчающими реакцию аминокислотами или остатками аминокислот в полипептидах или белках с помощью подходящих связывающих агентов. Полезный обзор ряда связывающих агентов, известных в области техники, представлен Dreborg и соавт. (см. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 6(4):315-165, (1990), см., в частности, cc.317-320).
Пэгилированные пептиды и агонисты PYY могут также иметь общую формулу
где D - остаток пептида или агониста PYY;
Х - группа, удаляющая электрон;
Y и Y' независимо представлены О или S;
(n) - ноль (0) или положительное целое число, предпочтительно от 1 до приблизительно 12;
1
2
1-6
1-6
R и R независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C-алкилов, арилов, замещенных арилов, аралкилов, гетероалкилов, замещенных гетероалкилов и замещенных С-алкилов;
3
1-12
5-8
R - практически неантигенный полимер, С-неразветвленный или разветвленный алкил или замещенный алкил, С-циклоалкил или замещенный циклоалкил, карбоксиалкил, карбоалкоксиалкил, диалкиламиноалкил, фенилалкил, фениларил или
4
5
1-6
1-6
5
7
и R и R независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С-алкилов, арилов, замещенных арилов, аралкилов, гетероалкилов, замещенных гетероалкилов и замещенных С-алкилов или они вместе образуют циклическую С-С-структуру. См. Патент США No. 6127355.
1-6
Типичные алкильные группы включают C-алкильные группы, в том числе метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил и т.п.
6-14
Предпочтительные арильные группы представлены С-арильными группами и, как правило, включают фенильную, нафтильную, флуоренильную, фенантрильную и антрацильную группы.
1-6
2
n
Типичные алкил-замещенные арильные группы включают любую из вышеуказанных арильных групп, замещенных любой из C-алкильных групп, в том числе группой Ph(CH), где n=1-6, например, толуолом, о-, m- и p-ксилилом, этилфенилом, 1-пропилфенилом, 2-пропилфенилом, 1-бутилфенилом, 2-бутилфенилом, трет-бутилфенилом, 1-пентилфенилом, 2-пентилфенилом, 3-пентилфенилом.
3-8
Типичные циклоалкильные группы включают С циклоалкильные группы, в том числе циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную, циклогексильную, циклогептильную и циклооктильную группы.
1
2
1
Типичные группы, удаляющие электрон, включают О, NR, S, SO и SO, где R определено выше.
Антагонисты PYY
Рассмотрено также применение антагониста рецептора Y. Антагонист рецептора Y представляет собой субстанцию (как правило, лиганд), которая связывается с рецептором Y и блокирует физиологический эффект агониста рецептора Y (такого как PYY, NPY или РР (см. Таблицы 1-3, выше). Данные антагонисты могут быть либо пептидными антагонистами, либо непептидными антагонистами PYY, NPY или РР.
Пептидный антагонист включает модификации, мутанты, фрагменты и/или варианты природной аминокислотной последовательности пептидов PYY, NPY или РР (полученные, например, путем делеций, замен аминокислот, делеций, инсерций и модификаций N-концевой амино- и/или С-концевой карбоксильной группы), которые в результате приводят к образованию пептида, действующего как антагонист рецептора Y. Кроме того, последовательности аминокислот PYY, NPY или РР могут быть слитыми или химерными белками, которые действуют как антагонисты рецептора Y. Данные пептиды могут быть также модифицированы с помощью таких процессов, как липидация, пегилирование, амидирование, гликозилирование, ацилирование, сульфатирование, фосфорилирование, ацетилирование и циклизация.
Многие непептидные антагонисты рецепторов Y хорошо известны в области техники, и их предполагают использовать в данном изобретении. (См. Таблицу 5, ниже). Любые известные непептидные антагонисты PYY, NPY или РР могут быть использованы в данном изобретении.
ТАБЛИЦА 5 - Антагонист PYY и NPY
Примеры антагонистов рецептора Y включают, но без ограничения перечисленным следующие соединения:
ВIВ03304
Ссылка: см. статью Berglund, M.M. Biochem. Pharmacol., 60(12):1815-22, 15 декабря 2000 г.
SR120819A
1-[2-[2-(2-нафтилсульфамоил)-3-фенилпропионамидо]-3-[4-N-[4-(диметиламинометил)-цис-циклогексилметил]амидино]фенил]пропионил] пирролидин, (S, R)-стереоизомер
Ссылка: см. статью Berglund, M.M. Biochem. Pharmacol., 60(12):1815-22, 15 декабря 2000 г.
BIIE0246
(S)-N2-[[1-[2-[4-[(R,S)-5,11-дигидро-6(6h)-оксодибенз[b,е]азепин-11-ил]-1-пиперазинил]-2-оксоэтил]циклопентил]ацетил]-N-[2-[1,2-дигидро-3,5(4Н)-диоксо-1,2-[дифенил-3Н-1,2,4-триазол-4-ил]этил]-аргининамид
Ссылка: Malmstrom, Life Sci., 69(17): 1999-2005, 14 сентября 2001 г.
BIBP 3226
[(R)-N2-(дифенилацетил)-N-[(4-гидроксифенил)метил]-D-аргинин-амид] и недавно описанная пептидная структура [Ile-GLU-PRO-ORN-Tyr-Arg-Leu-Arg-Tyr-NH2, циклический (2,4'),(2',4)-диамид].
Ссылка: см. статью Doods, Н. N. J.Pharmacol. Exp.Ther., 275(1): 136-42, октябрь 1995 г.
BIBP 3435
Ссылка: см. статью Lundberg J. M., ModinA., Br.J. Pharmacol., 116(7):2971-82, декабрь 1995 г.
H 394/84
диметиловый сложный эфир 1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[спиро(инден-4,1'-пиперидин-1-ил)]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты
Ссылка: см. статью Malmstrom R. E., Eur. J. Pharmacol., 418(1-2):95-104, 20 апреля 2001 г.
Н 409/22
(2R)-5-([амино(имино)метил]амино)-2-[(2,2-дифенилацетил)амино]-N-[(IR)-1-(4-гидроксифенил)этил]-пентанамид
Ссылка: см. статью Malmstrom R. E. Life Sci., 69(17): 1999-2005, 14 сентября 2001 г.
1229U91
Ссылка: см. статью Schober D. A., Peptides, 19(3):537-42, 1998 г.
L-152804
Ссылка: см. статью Kanatani A. Biochem. Biophys. Res. Commun., 272(1): 169-73, 27 мая 2000 г.
Аминоалкил-замещенные пиразоло-[1,5,-а]-1,5-пиримидины и пиразоло-[1,5-а]-1,3,5-триазины
Ссылка: Патент США No. 6372743
Алкильные и циклоалкильные производные 1,4-дигидропиридина (например, диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-2,6-диметил-4-[4-[[[[3-[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонил]амино]бутил]-3,5-пиридин-карбоновой кислоты)
Ссылка: Патент США NO. 6444675
Производные [4-(3-замещенный фенил)-1,4-дигидропиридина
Ссылка: Патент США No. 5635503
Производные диметилового сложного эфира 4-фенил-1,4-дигидропиридинов например,
1,4-дигидро-4-[3-[[2-[[3-[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]пропил]амино]-3,4-диоксо-1-циклобутен-1-ил]амино]фенил]-2,3-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты
Ссылка: Патент США NO. 6432960
Антагонист рецептора Y на основе замещенного амида, такой как:
N-(4-диэтиламино-фенил)-2-фенил-2-пиридин-4-ил-ацетамид;
2-(4-фторфенил)-2-пиридин-4-ил-N-(3,4,5,6-тетрагидро-2Н-[1,2']-бипиридинил-5'-ил)-ацетамид;
2-фенил-2-пиридин-4-ил-N-(3,4,5,6-тетрагидро-2Н-[1,2']-бипиридинил-5'-ил)-ацетамид;
N-(4-диэтиламино-фенил)-2-фенил-2-пиридин-2-ил-ацетамид;
N-(6-диэтиламино-пиридин-3-ил)-2,2-дифенилацетамид;
N-(4-диэтил-сульфамоил-фенил)-2-фенил-2-пиридин-4-ил-ацетамид;
2,2-дифенил-N-(6-пирролидин-1-ил-пиридин-3-ил)-ацетамид;
2,2-дифенил-N-(3,4,5,6-тетрагидро-2Н-[1,2']-бипиридинил-5'-ил)-ацетамид;
N-[6-(2,5-диметил-пирролидин-1-ил)-пиридин-3-ил]-2,2-дифенил-ацетамид;
N-(4-диэтилсульфамоил-фенил)-2,2-дифенил-ацетамид и
N-(4-диметилсульфамоил-фенил)-2,2-дифенил-ацетамид.
Ссылка: Патент США No. 6407120 Карбазольный антагонист рецептора Y, такой как:
2-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
3-диэтиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-фтор-бензамид;
4-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-бутирамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-гидрокси-2,2-дифенил-ацетамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-гидрокси-2-метил-пропионамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-гидрокси-2-метил-бутирамид;
N-(9-этил-9H-кapбaзoл-3-ил)-2-гидpoкcи-2-фeнил-пpoпиoнaмид;
(R)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-гидрокси-2-фенил-пропионамид;
2-бром-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид и
3-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид.
2-[бис-(2-гидроксиэтил)-амино]-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
2-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
3-дифeнилaминo-N-(9-этил-9H-кapбaзoл-3-ил)-пpoпиoнaмид и
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-3-(4-пиперидин-1-илметил-фенокси)-пропион амид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-3-[метил-(1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-амино]-пропионамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-3-(хинолин-7-илокси)-пропионамид и
2-[бис-(2-гидроксиэтил)-амино]-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид.
3-бром-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид;
N-(9-изопропил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид;
4-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-N-метил-бутирамид;
N-(9-метил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид;
1-гидрокси-циклопропанкарбоновая кислота-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-амид и
2-(4-хлор)-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид.
2-(4-фтор)-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
(R)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-(1-фенил-этиламино)-ацетамид;
(R)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-(1-(4-хлор)-фенил-этиламино)-ацетамид;
2-(3-диэтиламино-2-гидрокси-пропиламино)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
2-(бензил-изопропил-амино)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
N-3-бpoм-(9-этил-9H-кapбaзoл-6-ил)-тpифтopaцeтaмид;
N-(9-этил-6-формил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид;
N-(9-этил-6-гидроксиметил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-метансульфонамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-хлорметансульфонамид;
2-бром-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид и
3-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид.
2-[бис-(2-гидрокси-этил)-амино]-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
2-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
3-дифениламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид;
N-(9-этил-9H-кapбaзoл-3-ил)-3-(4-пипepидин-1-илмeтил-фeнoкcи)-пpoпиoнамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-3-[метил-(1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-амино]-пропионамид;
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-3-(хинолин-7-илокси)-пропионамид;
2-[бис-(2-гидрокси-этил)-амино]-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
3-бром-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-пропионамид и
N-(9-изопропил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид.
4-диметиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-N-метил-бутирамид;
N-(9-метил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид;
1-гидрокси-циклопропанкарбоновая кислота-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-амид;
2-(4-хлор)-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид и
2-(4-фтор)-бензиламино-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид.
(R)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-(1-фенил-этиламино)-ацетамид;
(R)-N-(9-Этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-(1-(4-хлор)-фенил-этиламино)-ацетамид;
(R)-, (S)- или смесь (R)- и
(S)-2-(3-диэтиламино-2-гидрокси-пропиламино)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамида;
(S)-N-(6-трет-бутил-9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-2-(3-диэтиламино-2-гидрокси-пропиламино)-ацетамид,
2-(бензил-изопропил-амино)-N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-ацетамид;
N-3-бром-(9-этил-9Н-карбазол-6-ил)-трифторацетамид;
N-(9-этил-6-формил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид и
N-(9-этил-6-гидроксиметил-9Н-карбазол-3-ил)-трифторацетамид.
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-метансульфонамид и
N-(9-этил-9Н-карбазол-3-ил)-хлорметансульфонамид.
Ссылка: см. Патент США No. 6399631 Различные дигидропиридиновые производные:
Ссылка: см. Патент США No. 4829076
Цианогуанидиновые производные 4-(3-замещенный фенил)-1,4-дигидропиридинов
Ссылка: см. Патент США No. 6001836
Амидные производные, которые являются антагонистами рецептора Y5 NPY
Ссылка: см. Патент США No. 6410792
Связанные с тиомочевиной пиперазиновые и пиперидиновые производные 4-фенил-1,4-дигидропиридинов, такие как: диметиловый сложный эфир 1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-метоксифенил) пиперидинил]пропил]амино]карбонотиоил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты, диметиловый сложный эфир,
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(4-фенилпиперидинил)пропил]амино]каобонотиоил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты и
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[4-[[[[3-(4-циклогексил-1-пиперазинил)пропил]амино]карбонотиоил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты.
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[4-фтор-3-[[[[3-(4-фенилпиперидинил)пропил]амино]карбонотиоил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты,
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(4-метил-1-пиперидинил)пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил)-2,6- диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты,
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[[3-(4-этил-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты,
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[[3-(4-пропил-1-пиперидинил)пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты,
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-1,1-диметилэтил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты,
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(1-метилэтил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты и
диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[4-[[[[3-(4-циклогексил-1-пиперазинил)пропил]амино]карбонотиоил]амино]-4-фторфенил]-2,6-диметил-3,5-пиридин-дикарбоновой кислоты.
Ссылка: см. Патент США No. 6391881
Новые арилсульфонамидные и сульфаамидные соединения
Ссылка: см. Патент США No. 6391877
Аминные и амидные производные антагониста рецептора Y, такие как:
Амино-6-[(2-фторфенилсульфонил)амино]-N-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(3-пиридинилметил)-2-нафтенил]-(2S)-гексанамид бис-гидрохлорид,
N-[5-амино-6-[[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(3-пиридинилметил)-2-]-нафталинил]амино]гексил]-2-фторбензолсульфонамид трис-гидрохлорид,
N-[5-амино-6-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-гидрокси-1-(3-пиридинилметил)-2-нафталинил]амино]гексил]-2-фторбензолсульфонамид трис-гидрохлорид,
(2S)-2-(ацетиламино)-6-[(2-фторфенилсульфонил)амино]-N-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(3-пиридинил метил)-2-нафтенил]гексанамид бис-гидрохлорид,
(2S)-2-(ацетиламино)-6-[(2-фторфенилсульфонил)амино]-N-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-гидрокси-1-(3-пиридинилметил)-2-нафтенил]гексанамид бис-гидрохлорид,
3-[(фенилсульфонил)амино]-N-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-6-фтор-1-(3-пиридинилметил)-2-нафталинил]-1-пирролидинацетамид]бис-трифторацетат,
4-оксо-1-фенил-N-[цис-1,2,3,4-тетрагидро-1-(3-пиридинилметил)-2-нафталинил]-1,3,8-триазаспиро[4.5]-декан-8-ацетамид бис-гидрохлорид, транс-N-[2-(4-фторфенил)-3-(3-пиридинил)пропил]-4-[((2-фтор-фенилсульфонил)амино)метил]-1-циклогексанамид гидрохлорид, транс-N-[[[[[2-(4-фторфенил)-3-(3-пиридинил)пропил]амино]метил]-4-циклогексил] метил]2-фторбензолсульфонамид бис-гидрохлорид.
Ссылка: см. Патент США No. 6380224.
Алкилендиамин-замещенные пиразол-(1,5-а)-1,5-пиримидины и пиразоло-(1,5-а) 1,3,5-триазины, такие как:
[2-{2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этиламино}-бутан-1-ол;
N-2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этил}-N'-метил-циклогексан-1,4-диамин;
N-{2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этил}-N'-этил-циклогексан-1,4-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(4-морфолин-4-ил-циклогексил)-этан-1,2-диамин;
4-{2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этиламино}-циклогексанол;
3-{2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этиламино}-пропан-1,2-диол;
N-{2-[3(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этил}-N'-изобутил-циклогексан-1,4-диамин;
N-{2-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этил}-N-изобутил-циклогексан-1,4-диамин;
4-{2-[3-(2,6-дихлор-4-этоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-1-метил-этиламино}-циклогексанол;
2-{2-[3-(2,6-дихлор-4-этоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-этиламино}-циклогексанол;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(4,4,4-трифтор-бутил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-этоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин -7-ил]-N-(2,2,2-трифторэтил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-трифторметил-циклогексил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(4-трифторметил-циклогексил)-этан]-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2,2-дифтор-этил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-фтор-1-метил-этил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-фтор-циклогексил)-этан-1,2-диамин.
N-[3-(2,6-диxлopфeнил)-2,5-димeтил-пиpaзoлo-[1,5-a]-пиpимидин-7-ил]-N-(1-этил-пиперидин-5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2,2,6,6-тетраметил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-19-пиперидин-4-ил-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлорфенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-этил-пиперидин-3-ил)-этиламин-1,2-диамин;
N-(1-бензил-пирролидин-3-ил)-N'-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-пиримидин-2-ил-этан-1,2-диамин;
N-(1-бензилпиперидин-4-ил)-N'-[3-(2,4-дихлор-6-метоксифенил)-2,5-диэтил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-этан-1,2-диамин;
N-(1-бензил-пиперидин-4-ил)-N'-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-этан-1,2-диамин;
N-[3(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-метил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-этил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-изопропил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2,2,6,6-тетраметил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-этил-пиперидин-3-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диxлop-4-мeтoкcи-фeнил)-2,5-димeтил-пиpaзoлo-[1,5-a]-пиримидин-7-ил]-N'-пиперидин-4-ил-этан-1,2-диамин;
N.sup.2-(1-бензил-пиперидин-4-ил)-N'-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиридин-3-ил-метил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-Дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиридин-4-илметил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
3,5-дихлор-4-12,5-диметил-7-2-(1-фенил-пирролидин-3-иламино)-этиламино]-пиразоло-[1,5-А]-пиримидин-3-ил]-фенол;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]- пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиридин-2-ил-метил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
3,5-дихлор-4-(2,5-диметил-7-[2-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-иламино)-этиламино]-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-3-ил}-бензонитрил;
N-[3-(2,6-дихлор-4-этокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-(1-бензил-пиперидин-4-ил)-N'-[3(2,6-дихлор-4-этокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-5-этил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-5-изопропил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,4-дихлор-фенил)-5-изопропил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-этокси-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диxлop-4-мeтoкcи-фeнил)-5-изoпpoпил-2-мeтил-пиpaзoлo-[1,5-a]-пиримидин-7-ил]-N2-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-5-этил-2-метилпиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2-метил-5-пропил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-5-этил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2-метил-5-пропилпиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-фенил)-2-метил-5-пропил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N2-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлорфенил)-5-этил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]
-N.sup.2-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[5-этил-2-метил-3-(2,4,6-триметил-фенил)-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[5-этил-2-метил-3-(2,4,6-триметил-фенил)-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диxлop-4-этинил-фeнил)-2,5-димeтилпиpaзoлo-[1,5-a]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[2-метил-5-пропил-3-(2,4,6-триметил-фенил)-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[2,[5-диметил-3-(2,4,6-триметилфенил)-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-(1-пиpидин-2-ил-пипepидин-4-ил)-этaн-1,2-диaмин;
N-[3-(2,6-диметил-фенил)-5-этил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диметил-фенил)-2-метил-5-пропил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диметил-фенил)-2-метил-5-пропил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N2-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диметил-фенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-илпиперидин-4-ил)-пропан-1,2-диамин;
N-[3-(2,4-диметил-фенил)-5-этил-2-метил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиpимидин-2-ил-пипepидин-4-ил)-этaн-1,2-диaмин;
N-[3-(2,4-диметил-фенил)-2-метил-5-пропил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(1-пиримидин-2-ил-пиперидин-4-ил)-этан-1,2-диамин и
[1-[4-(1-{[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-иламино]-метил]-пропиламино)пиперидин-1-ил]-этанон.
N-[2,5-диметил-3-(2,4,6-триметилфенил)-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-[2-(4-метоксифенил)-этил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-[2-(4-метоксифенил)-этил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N'-[2-(3-этокси-4-метоксифенил)-этил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-[2-(4-этокси-3-метоксифенил)-этил]-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-диxлop-4-мeтoкcи-фeнил)-2,5-димeтил-пиpaзoлo-[1-a]-пиримидин-7-ил]-N'-(1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-пиридин-2-ил-этил)-этан-1,2-диамин;
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-пиридин-3-ил-этил)-этан-1,2-диамин и
N-[3-(2,6-дихлор-4-метоксифенил)-2,5-диметил-пиразоло-[1,5-а]-пиримидин-7-ил]-N-(2-пиридин-4-ил-этил)-этан-1,2-диамин.
Ссылка: Патент США No. 6372743
Спироизохинолиноновое производное антагониста Y, такое как:
2-(3-хлорпропил)-2-фенил-1,3-диоксолан,
2-(3-хлорпропил)-2-(4-метоксифенил)-1,3-диоксолан,
2-(3-хлорпропил)-2-(4-феноксифенил)-1,3-диоксолан,
2-(3-хлорпропил)-2-(4-бромфенил)-1,3-диоксолан,
2-(3-хлорпропил)-2-(4-хлорфенил)-1,3-диоксолан,
N-3-хлорпропил-N-метилбензолметанамин гидрохлорид,
N-(3-хлорпропил)-N-(фенилметил)бензолметанамин гидрохлорид,
N-(2-гидpoкcиэтил)-N-мeтилбeнзoлмeтaнaмин,
хлор-1-(4-феноксифенил)-этанон,
3-хлор-1-(4-феноксифенил)-пропанон,
1'-[3-(4-феноксифенил)-3-оксопропил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он гидрохлорид,
1'-[3-(4-бромфенил)-3-оксопропил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он],
1'-[2-[(1,1'-бифенил)-4-ил]-2-оксоэтил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он],
1'-[2-(4-бромфенил)-2-оксоэтил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он],
1'-[2-(4-феноксифенил)-2-оксоэтил]спиро[изохинолин-1-(2Н-4'-пиперидин-3-(4Н)-он], гидрохлорид,
1'-[2-[бис(фенилметил)амино]этил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] дигидрохлорид,
1'-(4-фенил-4-оксобутил)спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)он] гидрохлорид,
1'-[4-(4-метоксифенил)-4-оксобутил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[4-(4-феноксифенил)-4-оксобутил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[4-(4-бромфенил)-4-оксобутил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он],
1'-[4-(4-хлорфенил)-4-оксобутил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[2-[(1,1'-бифенил)-3-ил]-2-оксоэтил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[3-[(1,1'-бифенил)-4-ил]-3-оксопропил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[4-(1,1'-бифенил)-4-ил]-4-оксобутил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид,
1'-[2-(1,1'-бифенил)-4-ил]-2-гидроксиэтил]спиро[изохинолин-1-(2Н)-4'-пиперидин-3-(4Н)-он] гидрохлорид.
Ссылка: см. Патент США No. 6348472
Триазиновые производные антагонистов рецептора Y, такие как:
N1-{[4-({[4-(изопропиламино)-6-(метиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(этиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфенамид
N1-{[4-({[4,6-ди(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-(пропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил-3-метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(бутиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-циклобутиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил] метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(циклопропиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-(пентиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-[(2-цианоэтил)амино]-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-[(2-гидроксиэтил)амино]-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-(4-[(4-(изопропиламино)-6-((2-метоксиэтил)амино]-1,3,5-триазин-2-ил]амино)метил]циклогексилметил)-1-нафталинсульфонамид,
N1-(4-[(4-(изопропиламино)-6-[(3-метоксипропил)амино]-1,3,5-триазин-2-иламино)метил]циклогексилметил)-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-}[2-(диметиламино)этил]амино}-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-[3-(1Н-1-имидазолил)пропил]амино-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-({4-[({4-(изопропиламино)-6-1-(4-метоксифенетил)амино]-1,3,5-[триазин-2-ил}амино)метил]циклогексил}метил)-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-(диметиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-[этил(метил)амино]-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(диэтиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексилметил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-тетрагидро-1Н-1-пирролил-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-(4-[(4-(изопропиламино)-6-[(2S)-2-(метоксиметил)тетрагидро-1Н-1-пирролил]-1,3,5-триазин-2-иламино)метил]циклогексил метил)-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-(изопропиламино)-6-пиперидино-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-(2-метилпиперидино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-морфолино-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-[(2R,6S)-2,6-диметил-1,4-оксазинан-4-ил]-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4-[(2-гидроксиэтил)(метил)амино]-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-(4-ацетилпиперазино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-{[4-({[4-(изопропиламино)-6-(4-изопропилпиперазино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино}метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-(трет-бутил)-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-фтор-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2-фтор-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2-метил-1-бензолсульфонамид,
N3-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-3-пиридинсульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-метокси-1-бензолсульфонамид,
N5-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2,4-диметил-1,3-оксазол-5-сульфонамид,
N2-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2-тиофенсульфонамид,
N4-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-метил-1H-4-имидазолосульфонамид,
N1-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-метил-1-бензолсульфонамид,
N5-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфонамид,
N8-[4-([4,6-ди(этиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-8-хинолинсульфонамид-ил]аминометил)циклогексил]метилметан-сульфонамид,
N1-[4-([4-(изoпpoпилaминo)-6-тeтpaгидpo-1H-1-пиppoлил-1,3,5-тpиaзин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-пирролидинсульфонамид,
N4-[4-([4-(изoпpoпилaминo)-6-мopфoлинo-1,3,5-тpиaзин-2-ил]aминoмeтил)циклогексил]метил-4-морфолинсульфонамид,
N1-[4-([4-(изопропиламино)-6-пиперидино-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-1-пиперидинсульфонамид,
N1-[(4-[(4,6-дитетрагидро-1Н-1-пирролил-1,3,5-триазин-2-ил)амино]метилциклогексил)метил]-4-(трет-бутил)-1-бензолсульфонамид,
N-циклопропил-N'-[4-([4-(циклопропиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метилсульфамид,
N'-[4-([4-(циклопропиламино)-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-N,N-диметилсульфамид,
N1-{[4-({[4-хлор-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]амино} метил)циклогексил]метил}-1-нафталинсульфонамид,
N'-[(4-[(4,6-диморфолино-1,3,5-триазин-2-ил)амино]метилциклогексил) метил]-N,N-[диметилсульфамид,
N1-[4-([4-хлор-6-(изопропиламино)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-(трет-бутил)-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4-(циклопропиламино)-6-тетрагидро-1Н-1-пирролил-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-фтор-1 -бензолсульфонамид,
N'-((4-(((4,6-дихлор-1,3,5-триазин-2-ил)амино)метил)циклогексил)метил)-N,N-диметилсульфамид,
N1-[(4-[(4,6-дитетрагидро-1Н-1-пирролил-1,3,5-триазин-2-ил)амино]метилциклогексил)метил]-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-([4-(циклопропиламино)-6-(2-пиридил)-1,3,5-триазин-2-ил]аминометил)циклогексил]метил-4-фтор-1-бензолсульфонамид,
N1-[4-(аминометил)циклогексил]метил-4-фтор-1-бензолсульфонамид,
N2,N4-диэтил-N6-[5-(1H-1-пиразолил)пентил]-1,3,5-триазин-2,4,6-триамин
N2,N4-диэтил-N6-[3-(1Н-1-имидазолил)пропил]-1,3,5-триазин-2,4,6-триамин
N2,N4-диэтил-N6-(2-пиридилметил)-1,3,5-триазин-2,4,6-триамин
Ссылка: Патент США No. 6340683
Трициклические соединения антагонистов рецепторов Y, такие как:
транс-N2-(4-диметиламиносульфониламинометил)циклогексил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3][тиазол-2-амин;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{5-(диметиламиносульфонил-амино)пентил} амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-2-(5-(2-фторфенил)сульфониламино)пентиламино-4,5- дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(1-нафтил)сульфониламино)-пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(метансульфониламино)-бутил)амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(диметиламиносульфониламино)бутил) амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-2-(4-(2-фторфенил)сульфониламино)бутиламино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-((2(S)-метоксиметил)-пирролидин-1-ил)сульфонил)фениламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(метилсульфониламино)-пентил)амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(метилсульфониламинометил) циклогексил)амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(2,4-дифторфенил)сульфониламино) пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-изопропилсульфониламино)-пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(диэтиламиносульфониламино)пентил) амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(2-метокси-5-метилфенил)сульфониламино) пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-2-(5-бензилсульфониламино)пентиламино-9-фтор-4,5-дигидро-3-тиа- бензо[е]азулен;
1-аза-2-(5-(3,4-дифторфенил)сульфониламино)пентиламино-9-фтор-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(4-метоксифенил)сульфониламино) пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(2-тиенил)сульфониламино)-пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-2-(5-(2-трифторэтил)сульфониламино)пентиламино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-2-(5-этилсульфониламино)пентиламино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-2-(4-диэтиламиносульфониламино)бутиламино-9-фтор-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(1-метилимидазол-4-ил)сульфониламино) пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)сульфонил-амино)пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-аминосульфониламино)пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-2-(4-(2-фторфенил)сульфониламинометил)циклогексил-амино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{4-(4-метоксифенил)сульфониламинометил}циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-(2,6-дифторфенилсульфонил)аминометил)циклогексил-9-фтор- 5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта-[d][1,3]-тиазол-2-амин;
транс-1-аза-2-{4-бензилсульфониламинометил}циклогексиламино-9-фтор-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-(2-тиенилсульфонил)аминометил)циклогексил-9-фтор-5,6-ди-гидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-этилсульфониламинометил)циклогексил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7] циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{4-(1-метилимидазолил-4-ил)сульфонил-аминометил} циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{4-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)сульфониламинометил}циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен)циклогексил-амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-диэтиламиносульфониламино)цикло-гексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(4-метоксифенил)сульфониламино)ци-клогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(2-тиенил)сульфониламино)цикло-гексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(2,2,2-трифтор-этил)сульфониламино) циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(2,2,2-трифторэтил)-сульфониламино)бутил-амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-2-{4-(3,4-дифторфенил)сульфонил-аминометил} цикло-гексиламино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-2-{4-трифторметилсульфониламинометил }циклогек-силамино-4,5-дигидро-3-тиабензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-2-{4-(2-фтор)фенилсульфониламино}-циклогексилметиламино-4,5-дигидро-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-метилсульфониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин: Смесь транс-N2-(4-амино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин дигидрохлорида;
транс-N2-(4-аминосульфониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-амино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-аминосульфониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4H-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]тиазол-2-амин:
6-бром-3-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-бензо[а]циклогептен-5-он;
N1-(9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]тиaзoл-2-ил)-5-бромпентанамид;
[1-5-[(9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]-тиaзoл-2-ил)амино]-5-оксопентил-1,2-триазадиен-2-иум;
N1-(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)-5-аминопентанамид;
N1-(9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]тиaзoл-2-ил)-5-[(метилсульфонил)амино]пентанамид;
транс-N2-(4-аминосульфониламинометил)циклогексил-4,5-дигидро-бензо [2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-метилсульфониламинометил)циклогексил-4,5-дигидро-бензо [2,3]оксепино[4,5-b][1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-4,5-дигидро-2-{4-(2-метокси-5-метил)фенил-сульфониламино-метил}циклогексиламино-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
N1-(9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]-тиaзoл-2-ил)-5-[(2-метокси-5-метилфенил)сульфонил]-аминопентанамид;
N1-(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]-тиазол-2-ил)-5-аминопентанамид;
транс-N2-(4-метилсульфониламино)циклогексилметил-4,5-дигидро-бензо [2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-4,5-дигидро-2-{4-(2-метокси-5-метилфенил)-сульфониламино}циклогексилметиламино-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-этилсульфониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{4-изопропилсульфониламино}циклогек силметиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(3-пиридилсульфониламино)циклогексил)амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(5-(3-пиридил)сульфониламино)пентиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(3-пиридил)сульфониламино)бутиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{2-(2-метилсульфониламино)этокси}этил-амино-3-тиа-бензо[е]азулен;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-{2-[2-(2-метокси-5-метилфенил)сульфониламино] этокси} этиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(3-пиридил)сульфониламинометил) циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-этилсульфониламино)циклогексилметил-8-метокси-4,5-дигидро-бензо[2,3] оксепино[4,5-с1] [[1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-4,5-дигидро-8-метокси-2-{4-метилсульфонил-амино)цикло-гексилметиламино-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-[{4-(3-пиридил)сульфониламино}цикло-гексилметиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-4,5-дигидро-9-метокси-2-{4-метилсульфониламино} циклогексилметиламино-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-этилсульфониламино)циклогексилметил-9-метокси-4,5-дигидро-бензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-метилсульфониламино)циклогексилметил-7-метокси-4,5-дигидpo-бензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин гидрохлорид;
транс-1-аза-4,5-дигидро-7-метокси-2-{4-диметиламиносульфониламино} циклогексилметиламино-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-N2-(4-диметилфосфониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигид-ро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-N2-(4-этоксикарбониламино)циклогексилметил-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин гидрохлорид;
1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(2-(2-изопропилсульфониламино)этокси)этил-амино-3-тиа-бензо[е]-азулен;
2-(4-метилсульфониламинометил)циклогексиламино-4Н-хромено[4,3-d] тиазол;
транс-1-аза-4,5-дигидро-8-метокси-2-(4-метилсульфониламино)цикло-гексилметиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-4,5-дигидро-8-метокси-2-(4-метилсульфониламинометил)цик-логексиламино-3-тиа-бензо[е]-азулен;
транс-1-аза-4,5-дигидро-2-(4-изопропилсульфониламинометил)цикло-гексиламино-8-метокси-3-тиа-бензо[е]-азулен;
транс-1-аза-4,5-дигидро-2-(4-метилсульфониламинометил)циклогексил-амино-7-метокси-3-тиа-бензо[е]-азулен;
транс-1-аза-4,5-дигидро-2-(4-этилкарбониламинометил)циклогексиламино-9-фтор-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(4-морфолинил)-сульфониламино-метил)циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(2-метокси)этокси-карбониламино-метил)циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен 2-метоксиэтил-N-(t4-(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]-циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}метил)-карбамат;
трет-бутил-N-[(4-{[(бензоиламино)карботиоил]амино}циклогексил)метил]карбамат;
трет-бутил-N-({4-[(аминокарботиоил)амино]циклогексил}-метил)]карбамат;
6-бромо-3-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-бензо[а]циклогептен-5-он;
трет-бутил-N-({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта-[D][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}метил)-карбамат;
транс-N2-[[4-(аминометил)циклогексил]-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(2-метокси)этоксикарбониламино-метил)циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен 2-метоксиэтил N-[({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}-метил)]карбамат;
транс-N2-(4-(1-морфолинилсульфониламинометил)]циклогексил-8-метокси-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин гидрохлорид;
3-({4-[(9-фтop-5,6-дигидpo-4H-бeнзo[6,7]циклoгeптa[d][1,3]тиaзoл-2-ил)-амино]циклогексил}метил)- 1,3-оксазолан-2он;
2-хлорэтил-N-({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}метил)-карбамат;
3-({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}метил)-1,3-оксазолан-2он;
N-({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта-[D][1,3]тиазол-2-ил)амино]циклогексил}метил)-2-метоксиацетамид;
N1-({4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]-циклогепта-D][1,3]тиазол-2-ил) амино]циклогексил}метил)ацетамид;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидро-2-(4-(N-пропилформамидо)метил)циклогек-силамино-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-1-аза-9-фтор-4,5-дигидpo-2-(4-(N-изoпpoпилфopмaмидo)мeтил)циклогексиламино-3-тиа-бензо[е]азулен;
N1-{4-[(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-иламино)метил]циклогексил}-2-метоксиацетамид;
бензил-N-(4-{[(аминокарботиоил)амино]метил}циклогексил)-карбамат;
бензил-N-{4-[(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]-тиазол-2-ил-амино)метил]циклогексил}карбамат;
N2-[(4-aминoциклoгeкcил)]мeтил]-4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3] тиазол-2-амин;
N-{[4-(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-иламино)цикло-гексил]метил}-N-пропилформамид;
N1-{[[4-(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-иламино)цикло-гексил]метил}пропанамид;
N2-{4-[(пропиламино)]метил]циклогексил}-4,5-дигидробензо-[2,3]оксепино-[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
N-[{[4-(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]тиaзoл-2-илaминo)циклo-гексил]метил}-N-пропилформамид;
N-{4-[(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][[1,3]тиазол-2-иламино)метил]циклогексил}-N-(2-метоксиэтил)формамид;
N2-({4-[(2-мeтoкcиэтил)aминo]циклoгeкcил}мeтил)-4,5-дигидpoбeнзo[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
N-{4-[(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]тиaзoл-2-илaминo)мeтил]циклогексил}-N-(2-метоксиэтил)формамид;
транс-1-аза-2-(4-(n-(этил)формамидо)циклогексил)метил-амино-4,5-дигидро-6-окса-3-тиа-бензо[е]азулен;
транс-2-(4-ацетамидо)циклогексилметиламино-1-аза-4,5-дигидро-6-окса-3- тиа-бензо[е]азулен;
бензил-N-[4-{[(бензоиламино)карботиоил]амино}метил)-циклогексил]карбамат;
бензил-N-(4-{[(аминокарботиоил)амино]метил}циклогексил)карбамат;
бензил-N-{4-[(4,5-дигидробензо[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]-тиазол-2-ил-амино)метил]циклогексил} карбамат;
N2-[(4-аминоциклогексил)метил]-4,5-дигидробензо[2,3]-оксепино-[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
N1-{4-[(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]-тиaзoл-2-илaминo)метил]циклогексил}ацетамид;
N2-[4-(этиламино)циклогексил]метил}-4,5-дигидробензо-[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
N-{4-[(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]тиaзoл-2-илaминo)мeтил]циклогексил}-N-этилформамид;
N-(4-[(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]тиaзoл-2-илaминo)мeтил]циклогексил}-N-пропилформамид;
N2-{[4-(пропиламино)циклогексил]метил}-4,5-дигидробензо-[2,3]оксепино[4,5-d][1,3]тиазол-2-амин;
N-{4-[(4,5-дигидpoбeнзo[2,3]oкceпинo[4,5-d][1,3]тиaзoл-2-илaминo)мeтил]циклогексил}-N-пропилформамид;
N1-{4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил)амино]бензил}-2-метоксиацетамид;
N-{4-[(9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-ил) амино]бензил}метансульфонамид;
N2-[4-(аминометил)фенил]-9-фтор-5,6-дигидро-4Н-бензо[6,7]циклогепта[d][1,3]тиазол-2-амин.
Ссылка: Патент США No. 6225330
Бициклические соединения антагонистов рецептора Y, такие как:
2-(5-диэтиламиносульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол-гидрохлорид
4-(2-пиридил)-2-(5-(2-тиенил)сульфониламинопентил)аминотиазол-гидрохлорид
2-(5-(2-фторфенил)сульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол-гидрохлорид
2-(5-(4-метоксифенил)сульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол-гидрохлорид
2-(5-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)сульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(3,4-дифторфенил)сульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(2-метокси-5-метилфенил)сульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(бензилсульфониламино)пентиламино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(этилсульфониламино)пентил)амино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(трифторметилсульфониламино)пентил)амино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(аминосульфониламино)пентил)амино-4-(2-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(2-фторфенил)сульфониламино)пентиламино-4-(3-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)сульфониламино)пентиламино-4-(3-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(2-метокси-5-метил)фенилсульфониламино)пентиламино-4-(3-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(2-фтор)фенилсульфониламино)пентиламино-4-(4-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)сульфониламино)пентиламино-4-(4-пиридил)тиазол гидрохлорид
2-(5-(2-метокси-5-метил)фенилсульфониламино)пентиламино-4-(4-пиридил)тиазол гидрохлорид
N-{5-[(4-бензо[b]тиофен-2-ил-1,3-тиазол-2-ил)амино]-пентил}-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
N1-(5-{[4-(5-[лор-3-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}пентил)-2-метокси-5-метил-1-бензол-сульфонамид
N1-(4-{[4-(5-фенил-3-изоксазолил)-1,3-тиазол-2-ил)амино}-пентил)-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
N1-(5-{[4-(3-тиенил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}пентил)-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
N1-[5-({4-[1-(фенилсульфонил)-1Н-3-пирролил-1,3-тиазол-2-ил}амино)пентил]-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
транс-N8-[(4-{[4-(3-Фенил-5-изоксазоил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}цикло-гексил)метил]-8-хинолинсульфонамид
N,N-диметил-N'-(5-{[4-(3-тиенил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}пентил)сульфамид
транс-2-(4-(2-метокси-5-метилфенил)сульфониламино)циклогексилметил-амино-4-(2-пиридил)тиазол дигидрохлорид
транс-2-(4-(2-фторфенил)сульфониламино)циклогексилметил-амино-4-(2-пиридил)тиазол дигидрохлорид
транс-2-(4-(3,5-диметил-4-изоксазоил)сульфониламино)циклогексилметил-амино-4-(2-пиридил)тиазол дигидрохлорид
транс-2-(4-(2-фторфенил)сульфониламино)циклогексилметил-амино-4-(3-пиридил)тиазол дигидрохлорид
транс-2-(4-(2-метокси-5-метилфенил)сульфониламино)циклогексилметил-амино-4-(4-пиридил)тиазол дигидрохлорид
N1-(5-[4-(1,3-тиазол-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминопентил)-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
транс-N1-[(4-[4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминоцикло-гексил)метил]-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
транс-N,N-диметил-N'-[(4-[4-(-1,3-тиазол-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-циклогексил)метил]сульфамид
N,N-диметил-N'-(5-{[4-(2-тиенил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}пентил)сульфамид
N1-(5-{[4-(2-тиенил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}пентил)-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
N1-(5-[4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминопентил)-2-метокси-5-метил-1-бензолсульфонамид
N1-(5-[4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминопентил)-4-фтор-1-бензолсульфонамид
N1-(5-[4-(1,3-тиазол-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминопентил)-4-фтор-1-бензол- сульфонамид
N'-(5-[4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]аминопентил)-N,N-диметилсульфамид
транс-N1-[(4-[4-(2,6-диметил-1,3-тиазол-4-ил])-1,3-тиазол-2-ил]амино-циклогексил)метил]-4-фтор-1-бензол-сульфонамид
транс-N'-[(4-[4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-циклогексил)метил]-N,N-диметилсульфамид]
транс-N'-[4-([5-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-мeтил)циклoгeкcил]мeтил-N,N-димeтил-cyльфaмид
транс-N4-[4-([4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-метил)циклогексил]метил-4-морфолин-сульфонамид
транс-N-[4-([4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-метил)циклогексил]-N-(2-метоксиэтил)формамид
транс-N-[4-([4-(2,5-диметил-1,3-тиазол-4-ил)-1,3-тиазол-2-ил]амино-метил)циклогексил]-N-изопропилформамид
Ссылка: см. Патент США No. 6218408
N-аралкиламинотетралиновый антагонист рецептора Y, такой как:
rac-цис-1-(фенилметил)-6-метокси-N-(2-(3,4-диметоксифенил)этил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин;
rac-цис-1-(фенилметил)-6-метокси-N-(2-(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетра-гидро-2-нафталинамин гемифумарат;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(4-фторфенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафта-линамин моногидробромид;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафталинамин;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин моногидробромид;
rac-цис-1-(4-фторфенилметил)-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин моногидробромид;
rac-транс-1-(4-фторфенилметил)-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин монооксалат;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(4-фторфенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафта-линамин моногидробромид;
rac-цис-1-(фенилметил)-7-метокси-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетра-гидро-2-нафталинамин моногидробромид;
rac-транс-1-(4-фторфенилметил)-N-(2-(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин монооксалат;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(2-метоксифенил-2-оксометил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин моногидробромид;
rac-цис-1-(фенилметил)-7-метокси-N-(2-(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин 0,8 фумарат 0,8 метанол 0,2 гидрат;
rac-транс-1-(фенилметил)-7-метокси-N-(2(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетра-гидро-2-нафталинамин монооксалат;
rac-цис-1-(2-нафтилметил)-N-(2-(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин гемифумарат метанол;
rac-транс-1-(2-нафтилметил)-N-(2-(3-индолил)этил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин монооксалат;
rac-цис-1-(2-нафтилметил)-N-(2-метоксифенилметил)-1,2,3,4-тетрагидро-2 -нафталинамин моногидробромид;
rac-цис-1-(фенилметил)-N-(2-метоксифенил-2-оксоэтил)-1,2,3,4-тетрагид-ро-2-нафталинамин;
rac-цис-1-(4-фторфенилметил)-N-(3-фенилпропил)-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафталинамин моногидробромид;
rac-цис-1-(3-пиридилметил)-N-(2-(3,4-диметоксифенил)этил-1,2,3,4-тетра-гидро-2-нафталинамин моногидробромид.
Ссылка: см. Патент США No. 6201025
Амидное производное антагониста рецептора Y:
Ссылка: см. Патент США No. 6048900
N-замещенные аминотетралиновые антагонисты рецептора Y, такие как:
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(фенилметил)-2-нафталинил]амино]метил]4-циклогексил]метил]2-нафталинсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(фенилметил)-2-нафталинил]амино]-5-пентил]2-нафталинсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(3- пиридинил-метил)-2-нафталинил]амино]метил]-4-циклогексил]метил]2-нафталинсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-фтор-1-(фенилметил)-2-нафталинил]амино]метил]-4-циклогексил]метил]2-фторбензолсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-фтор-1-фенил-2-нафталинил]амино]метил]-4-циклогексил]метил]2-нафталинсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(1-пропен-3-ил)-2-нафталинил]амино]метил]4-циклогексил]метил]бензолсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(3-гидрокси-пропил)-2-нафталинил]амино]метил]-4-циклогексил]метил]бензолсульфонамид;
rac-[1α,2α(транс)]-N-[[[[[1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-(н-пропил)-2-нафталинил]амино]метил]-4-циклогексил]метил]бензолсульфонамид.
Ссылка: см. Патент США No. 6140354
4-фенил-1,4-дигидропиримидиновое производное антагониста рецептора Y:
Ссылка: см. Патент США No. 5889016
Пиперидиновое производное дигидропиридинового антагониста рецептора Y:
Диметиловый сложный эфир
4-дигидро-[3-[[[[[3-[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5- пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-гидрокси-4-(3-метоксифенил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(2-метоксифенил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(4-фенилпиперидин-1-ил) пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(4-гидрокси-4-фенилпиперидин-1-ил)пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-2,6-диметил-4-[3-[[[[3-[4-[3-(2-пропинилокси)фенил]-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-циано-4-фенилпиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-гидроксифенил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-нафталин-1-илпиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
4-[3-[[[[3-[4-(1,1'-бифенил-3-ил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-1,4-дигидро-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(фенилметил)-пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
4-[3-[[[[3-(4-циклогексил-1-пиперидинил)пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-1,4-дигидро-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-гидрокси-4-(2-феноксифенил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Этилметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(4-фенил-1-пиперидинил)пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Этилметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[(4-фенилметил)-1-пиперидинил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Этилметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[3-[[4-гидрокси-4-(2-метоксифенил)-пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Этилметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-гидрокси-4-(3-метоксифенил)-пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-2,6-диметил-4-[3-[[[[3-[4-[3-(2-пропокси)фенил]-1-пипериди-нил]-пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир 1,4-дигидро-4-[3-[[[[2-[4-[(3-метоксифенил)-1-]пиперидинил]этил]амино] карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты, гидрохлорид;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[4-[4-(3-метоксифенил)-1- пиперидинил]бутил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты, гидрохлорид;
Диметиловый сложный эфир
1,4-Дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]пропил]метил-амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты, гидрохлорид;
Диметиловый сложный эфир
4-дигидро-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-тетрагидро-4-(3-метоксифенил)пиридин-1-ил] пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-(1,2,3,6-тетрагидро-4-фенилпиридин-1-]ил)пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-тетрагидро-4-(3-гидроксифенил)пиридин]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-1,2,3,6-тетрагидро-4-(1-нафталинил)-1-]пиридинил] пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[3-(4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-пропил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[4-(4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-бутил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[5-(4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-пентил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[6-(4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-гексил]амино]] фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[5-(4-гидрокси-4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-]пентил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[5-(4-циано-4-фенилпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-пентил]]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[4-[[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]бутил] карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-метоксифенил)-1-пиперидинил]пропил]окси]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты, гидрохлорид;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-метоксифенил)-пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(2-метоксифенил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[4-(3-гидроксифенил)пиперидин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[[4-нафталинилпиперидин-1-]ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты,
Диметиловый сложный эфир
4-[3-[[[[3-(4-циклогексил-1-пиперидинил) пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-1,4-дигидро-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-тетрагидро-4-(3-метоксифенил)пиридин-1-ил]пропил]амино]карбонил]амино]фенил]-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты;
Диметиловый сложный эфир
1,4-дигидро-4-[3-[[[3-[1,2,3,6-тетрагидро-4-(1-нафталинил)пиридин-1-ил] пропил]амино]карбонил]амино]фенил-2,6-диметил-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты.
Ссылка: см. Патент США No. 5668151
3-36
Как описано в данном контексте, обнаружено, что при введении человеку PYY снижает аппетит. При инфузии человеку на физиологических уровнях, соответствующих уровням после приема пищи, PYY значительно снижает аппетит и уменьшает поглощение пищи на одну треть в течение 12 часов и на одну треть даже в течение 24 часов. Как сам эффект, так и продолжительность эффекта являются неожиданными и непредсказуемыми, поскольку они продолжаются в течение многих часов после выведения гормона из кровообращения. Эффекты, которые образуются при использовании физиологических уровней пептида, являются строгими показателями того, что действие PYY in vivo заключается в регуляции пищевого поведения.
3-36
3-36
Как описано в данном контексте, периферическое введение PYY вызывает у крыс повышение иммунореактивности c-fos в дугообразном ядре гипоталамуса и уменьшение уровня мРНК гипоталамического нейропептида Y (NPY). Кроме того, электрофизиологические исследования продемонстрировали, что PYY ингибирует нервные окончания, содержащие NPY и активирует таким образом нейроны РОМС, которые, как известно, имеют ингибирующие синаптические входы NPY.
3-36
3-36
3-36
Вне зависимости от теории данные результаты демонстрируют, что кишечный гормон PYY может действовать через рецептор Y2 нейропептида Y. Данное предположение поддерживает наблюдение, что при введении PYY мышам, у которых отсутствует рецептор Y2 нейропептида Y (мыши, у которых выбит ген Y2R), никакого подавления поглощения пищи не отмечают. Введение PYY потомству дикого типа данных мышей с отсутствием Y2R дает полный эффект подавления поглощения пищи.
3-36
3-36
Таким образом, описан новый путь, связывающий кишку и головной мозг, который подавляет питание после кормления. Вне зависимости от теории, природный путь включает выход PYY из кишки и его превращение в PYY, который действует как агонист рецептора Y2 нейропептида Y (рецептор Y2 NPY) в головном мозге. Рецептор Y2 NPY действует как ингибирующий пресинаптический рецептор, снижающий выход нейропептида Y, который является наиболее сильным стимулятором питания, и действует также на анорексигенные меланокортиновые системы. В результате активность рецептора Y2 NPY приводит к подавлению аппетита и снижению поглощения пищи. Действие PYY может осуществляться в дугообразном ядре гипоталамуса, но может быть также задействованы другие области.
3-36
3-36
Полученные результаты показывают, что кишечный гормон PYY, который циркулирует в крови, подавляет аппетит в физиологических концентрациях и что ингибирующий эффект наблюдается даже через несколько часов после выведения гормона из крови. Данный эффект показан у всех исследованных видов, т.е. у мышей, крыс и человека. По-видимому, циркулирующий в крови кишечный гормон действует через цикл гипоталамуса. Снижение уровня мРНК, необходимой для синтеза аппетитрегулирующих гормонов головного мозга, в частности мРНК гипоталамического NPY, может представлять собой возможный механизм длительного действия PYY.
Описание изобретения иллюстрируется следующими неограничивающими Примерами.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Материалы и способы
Получение мышей POMC-EGFP: кассета EGFP содержит свой собственный консенсусный сайт инициации трансляции Kozak вместе с сигналами полиаденилирования SV40, которые расположены по ходу трансляции ниже кодирующих последовательностей EGFP и направляют соответствующий процессинг 3'-конца мРНК EGFP. Кассету EGFP интродуцируют стандартными методиками в 5'-нетранслируемый участок экзона 2 мышиного геномного клона Роте, который содержит 5'- и 3'-фланкирующие последовательности размером 13 т.п.н. и 2 т.п.н., соответственно (см. статью Young и соавт., J. Neurosci. 18:6631-40, (1998)). Трансген микроинъекцией вводят в пронуклеусы эмбрионов мышей C57BL/6J на стадии одной клетки (Jackson Laboratories), как описано в статье Young и соавт. (см. J. Neurosci. 18:6631-40, (1998)). Получают основателя линии и скрещивают его с диким типом C57BL/6J с целью получения гомизиготных мышей N1. Кроме того, получают также N2 и последующие генерации мышей, гомозиготных по данному трансгену. Мыши являются фертильными и имеют нормальный рост и развитие.
Иммунофлуоресценция и колокализация GFP: Мышам под анестезией транскардиально вливают 4% параформальдегид и в вибратоме готовят свободно плавающие срезы головного мозга. Срезы обрабатывают для получения иммунофлуоресценции и определения колокализации флуоресценции GFP с использованием стандартных методик. Используют следующую первичную антисыворотку и ее разведения: кроличья против β-эндорфина 1:2500 об./об.; кроличья против NPY, 1:25000 об./об. (Alanex Corp.); кроличья против АСТН, 1:2000 об./об. и мышиная против ТН, 1:1000 об./об. (Incstar). После отмывания срезы инкубируют с 10 мг/мл биотинилированного лошадиного IgG против мыши, кролика (Vector Laboratories) с последующей обработкой Cy-3-конъюгированным стрептавидином, 1:500 об./об. (Jackson Immunoresearch Laboratories). Микрофотографии делают с помощью Zeiss Axioscop при использовании наборов фильтров FITC и RITC (Chroma Technology Corp.).
2
2
2
2
4
2
3
2
2
2
+
Электрофизиология (Пример 2): Венечные срезы толщиной 200 мкм делают из ARC самцов мышей POMC-EGFP четырехнедельного возраста. Срезы поддерживают в среде, содержащей (в мМ) NaCl 126; KCl 2,5; MgCl 1,2; CaCl.2HO 2,4; NaHPO.HO 1, 2; NaHCO 21,4; глюкозу 11,1 (Krebs), при 35°С и насыщении 95% O и 5% СО в течение 1 часа (ч) до регистрации результатов. Регистрацию проводят в среде Krebs при 35°С. Срезы визуализируют с помощью Axioskop FS2 (Zeiss) при использовании стандартной инфракрасной оптики и эпифлуоресценции через набор фильтров FITC (см. Фигуру 1C). Регистрацию данных по целым клеткам делают с флуоресцентных нейронов при использовании усилителя Axopatch 1D (Axon Instruments) и Clampex7 (Axon Instruments). Мембранные потенциалы покоя определяют, используя протокол детекции событий в системе PowerLab (AD Instruments, Mountain View, CA) для усреднения полученных на регистрационном приборе расширенных записей мембранного потенциала. Лекарственные вещества вносят в емкость в указанных точках времени. Мембранный потенциал покоя остается стабильным в течение часа в клетках, обрабатываемых только средой Krebs. Кривые зависимости I-V для токов Met-Enk определяют с использованием постадийного протокола; (поддерживаемый потенциал -60 мВ, последовательно пульсирующий (40 мс) от -120 до -50 мВ, клетки возвращают к -60 мВ за 2 с между скачками напряжения). Протокол повторяют после добавления Met Enk. Сетевой ток составляет разницу между двумя кривыми зависимости I-V. Данный протокол повторяют в среде Krebs, содержащей 6,5 мМ K. Кривые зависимости I-V для определения постсинаптического лептинового тока определяют аналогичным образом при использовании медленного линейного изменения напряжения (5 мВ/с от -100 до -20 мВ) до и в течение 10 минут после введения лептина (100 нМ). ГАМКергические IPSCs регистрируют с использованием внутреннего раствора для электродов CsCl, содержащего (в мМ): CsCl 140; Hepes 10; MgCl 5; Bapta 1; (Mg)-АТФ 5; (Na)-ГТФ 0,3. В необработанных срезах наблюдают оба, как мини IPSCs, так и IPSCs большой амплитуды (очевидно, мультисинаптические). ТТХ (1 мкМ) снимает большие IPSCs. Данные получены до и после добавления лекарственного вещества для точек времени, указанных на Фигурах, при поддерживающем потенциале -50 мВ и колебаниях 2 с в течение каждых 4 с. Минипостсинаптические токи анализируют с использованием Axograph 4 (Axon Instruments). IPSCs и возбуждающие постсинаптические токи (EPSCS) разделяют по константам угасания, дополнительное введение пикротоксина (100 мкМ) блокирует все IPSCs. Нейроны РОМС получают низкий сигнал EPSC, и никакие из описанных в данном контексте воздействий не модулируют частоту.
Иммуноокрашивание для световой и электронной микроскопии: Двойную иммуноцитохимическую реакцию на NPY и РОМС с использованием диаминобензидиновых хромогенов (DAB) разных цветов проводят на фиксированных гипоталамусах мышей в соответствии с опубликованными протоколами (см. статью Horvath и соавт., Neuroscience, 51,391-9, (1992)). При электронной микроскопии для иммуноокрашивания на β-эндорфин перед заключением материала используют набор ABC Elite (Vector Laboratories) и проведение реакции DAB с последующим заключением материала. При этом после заключения ГАМК и NPY метят кроличьей анти-ГАМК в соотношении 1:1000 об./об. и конъюгированным с золотом (10 нм) козьим IgG против кролика или овечьим против NPY и конъюгированным с золотом (25 нм) козьим IgG против овцы. Наконец, срезы контрастно окрашивают насыщенным уранилацетатом (10 минут) и цитратом свинца (20-30 с) и исследуют, используя электронный микроскоп Philips CM-10.
Животные: Самцов крыс Wistar (массой 200-250 г), в возрасте 7-8 недель (Charles River Laboratories, United Kingdom) содержат при контролируемой температуре (21-23°С) и условиях освещения (свет с 07:00 до 19:00) при свободном доступе к воде и корму (диета RM1; SDS Ltd., Witham, United Kingdom) за исключением оговоренных случаев. Канюлирование и инъекции в дугообразное и паравентрикулярное ядра осуществляют, как описано ранее (см. статьи Glaum и соавт., Mol. Pharmacol., 50:230-5, (1996); Lee и соавт., J. Physiol. (Lond) 515:439-52, (1999); Shiraishi и соавт., Nutrition, 15:576-9, (1999)). Правильное положение канюли внутри ядра подтверждают гистологически в конце каждого периода исследования (см. статьи Glaum и соавт., Mol. Pharmacol., 50:230-5, (1996); Lee и соавт., J. Physiol. (Lond), 515:439-52, (1999); Shiraishi и соавт., Nutrition, 15:576-9, (1999)). Все процедуры, проводимые с животными, утверждены Главным Отделом по работе с животными Великобритании (British Home Office Animals) (Закон о научных процедурах (Scientific Procedures Act), 1986. Все исследования на голодающих животных, связанные с инъекциями, проводят в течение ранней светлой фазы (08:00-09:00). Все инъекции при исследованиях питания во время темной фазы проводят непосредственно перед выключением света.
Самцов мышей Pomc-EGFP исследуют в возрасте 5-6 недель и получают, как описано выше. Мышей, Y2r-null, получают при использовании рекомбинации, опосредованной Cre-lox Р, которая приводит к делеции зародышевой линии целого кодирующего участка рецептора Y2. Всех мышей Y2r-null поддерживают на смешанном фоне C57/B16-129SvJ. Самцов мышей в возрасте 8-12 недель и массы 2-30 г содержат при контролируемой температуре (21-23°С) и освещении (свет включен с 06:00 до 18:00) при свободном доступе к воде и корму (Gordon's Speciality Stock feeds), если не оговорено иначе. Все исследования проводят во время ранней светлой фазы (07:00-08:00).
3-36
Внутрибрюшинные инъекции: Крыс адаптируют к внутрибрюшинным инъекциям, делая внутрибрюшинные инъекции 0,5 мл физиологического раствора за два дня до проведения исследования. Во всех исследованиях животным делают внутрибрюшинную инъекцию либо PYY, либо физиологического раствора в объеме 500 мкл (для крыс) или 100 мкг (для мышей).
Электрофизиология: Записи регистрирующих приборов пэтч-клампа (фиксации потенциала) в целых клетках делают от нейронов РОМС в венечных срезах гипоталамуса толщиной 180 мкм мышей Pomc-EGFP, как описано ранее (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)). Записи регистрирующих приборов, свободно прикрепленных к клеткам, делают с использованием экстрацеллюларного буфера в электродном растворе и поддерживая изолирующее сопротивление между 3 и 5 мОм в течение записи. Число импульсов определяют с использованием протоколов минианализа (MiniAnaLysis, Jaejin Software, NJ). Контроли в виде носителя, используемые в данной системе, предварительно проверяют в плане электрофизиологического действия нейропептидов (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)). Данные анализируют с помощью ANOVA, сравнением posthoc Neuman-Keuls и с помощью относительного рангового критерия Wilcoxon.
2
2
+
+
Эксплантаты гипоталамуса: Самцов крыс Wistar умерщвляют путем декапитации и немедленно целиком удаленный головной мозг закрепляют вентральной поверхностью вверх и помещают в вибрационный микротом (Biorad, Microfield Scientific Ltd., Dartmouth, UK). Срез толщиной 1,7 мм получают из основания головного мозга так, чтобы он содержал PVN и ARC и немедленно переносят в 1 мл искусственной CSF (спинно-мозговой жидкости) (aCSF) (см. статью Kim и соавт., J. C1in. Invest., 105:1005-11, (2000)), которую уравновешивают 95% O и 5% CO и поддерживают при 37°С. После исходного 2-часового периода уравновешивания с aCSF, заменяемой каждые 60 минут, образцы гипоталамуса инкубируют в течение 45 минут в 600 мкл aCSF (базовый период) перед обработкой Y2A (50 нМ) в 600 мкл aCSF. Наконец, проверяют жизнеспособность ткани путем обработки в течение 45 минут 56 мМ KСl; изотоничность поддерживают заменой K на Na. В конце каждого периода aCSF удаляют и замораживают при -20°С до проведения радиоиммуноанализа на NPY и aMSH.
3-36
Экспрессия C-fos: Экспрессию C-fos измеряют у зрелых крыс Wistar и мышей Pomc-EGFP через 2 часа после внутрибрюшинного введения физиологического раствора или PYY (5 мкг/100 г) с использованием стандартных иммуногистохимических методик (см. статью Hoffman и соавт., Front. Neuroendocrinol., 14:173-213, (1993)). Данные получают по группам из 3 крыс и 5 мышей в каждой. Для мышей Pomc-EGFP у каждого из животных подсчитывают 5 анатомически близких срезов дугообразного ядра (см. монографию Franklin и соавт., Головной мозг мыши в стереотаксических координатах (The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates), Academic Press, San Diego, (1997)) и делают изображения с использованием конфокального микроскопа Leica TSC (см. статью Grove и соавт., Neuroscience, 100:731-40, (2000)).
Анализ защиты РНКазы (RPA): Тотальную РНК экстрагируют из гипоталамусов (Trizol, Gibco). RPA проводят (набор RPAIII, Ambion) с использованием 5 мкг РНК и зондов, специфических в отношении NPY, aMSH и β-актина (внутренний стандарт). Для каждого нейропептида вычисляют соотношение оптической плотности полосы мРНК нейропептида с оптической плотностью β-актина. Уровни экспрессии мРНК нейропептида выражают относительно контроля в виде физиологического раствора (среднее ± s.e.m., n=4/группу). При статистическом анализе используют ANOVA с анализом post hoc Bonferroni.
Анализы плазмы: Для измерения человеческого лептина используют коммерчески доступный радиоиммунонализ (RIA) (Unco Research, USA). Уровни всех других гормонов плазмы измеряют с использованием разработанных RIA (см. статью Tarling и соавт., Intensive Care Med., 23:256-260, (1997)). Концентрации глюкозы измеряют с использованием анализатора YSI 2300STAT (Yellow Springs Instruments Inc., Ohio, USA). Уровни парацетамола в плазме измеряют с использованием ферментного колориметрического анализа (анализатор Olympus AU600 analyzer).
3-36
Исследования на человеке: PYY приобретают в фирме Bachem (California, USA). Тест с использованием лизата амебоцитов Limulus на пирогены является отрицательным, и пептид стерилен при введении в отношении культур. Этическое разрешение получают от местного комитета по этике исследований (Local Research Ethics Committee (Регистрация проекта (Project registration) 2001/6094) и проводят исследование в соответствии с принципами Хельсинкской декларации. Субъекты дают письменное согласие на основе полученной информации.
-1
-1
3-36
Каждый субъект проходит исследование дважды с интервалом по меньшей мере в 1 неделю между каждым из исследований. Добровольные участники эксперимента заполняют дневник питания за три дня до каждого вливания и последующие 24 часа. Все субъекты голодают и пьют только воду от 20:00 ч вечера, предшествующего каждому из исследований. Субъекты прибывают в 08:30 в каждый из дней исследований, им вводят канюлю и дают отдохнуть в течение 30 минут перед началом протокола исследования. Образцы крови отбирают каждые 30 минут в гепаринизированные пробирки, содержащие 5000 единиц по ингибитору калликреина (0,2 мл) апротинина (Bayer), и центрифугируют. Плазму отделяют, а затем хранят при -70°С до проведения анализа. Субъектам вливают либо физиологический раствор, либо 0,8 пмоль.кг.мин PYY в течение 90 минут (общее вливание составляет приблизительно 72 пмоль) в двойном слепом рандомизированном смешанном формате.
3-36
Через два часа после окончания вливания субъектам предлагают свободный выбор закусок в избытке (см. статью Edwards и соавт., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 281:E155-E166, (2001)), так чтобы можно было удовлетворить все аппетиты. Пищу и воду взвешивают до и после приема пищи и подсчитывают потребление калорий. Оценки аппетита делают с помощью 100-миллиметровых визуальных аналоговых систем учета (VAS) с текстами, выражающими наиболее положительную и отрицательную оценку, присоединенную к каждому концу (см. статью Raben и соавт., Br. J. Nutr., 73:517-30, (1995). VAS используют для оценки голода, насыщения, сытости, предполагаемого потребления пищи и тошноты. Потребление калорий после введения физиологического раствора и PYY сравнивают с использованием парного критерия Стьюдента. Кривые ответа на прием пищи сравнивают с помощью ANOVA при использовании повторных парных измерений с учетом таких факторов, как время и вариант лечения.
2
2
2
2
Измерения затрат энергии: Для определения действия PYY на затраты энергии используют систему OXYMAX на грызунах после инъекции PYY в группе лечения. Данную систему используют также на грызунах после инъекции физиологического раствора (контрольная группа). Оборудование измеряет потребление O и образование CO, при этом эффективность, с которой организм образует CO из O, дает достоверный коэффициент эффективности использования калорий или обмена веществ. Аналогичную систему используют на людях - добровольных участниках эксперимента.
Пример 2
Нервная сеть в дугообразном ядре
Получают линию трансгенных мышей, экспрессирующих белок зеленой флуоресценции (EGFP Clontech) под транскрипционным контролем геномных последовательностей мышей Pomc, которые включают участок, расположенный между -13 т.п.н. и -2 т.п.н., необходимый для точной экспрессии в нейронах (см. статью Young и соавт., J. Neurosci., 18:6631-40, (1998)) (см. Фигуру 1a). Яркую зеленую флуоресценцию наблюдают в двух областях ЦНС, где образуется РОМС - в ARC и ядре одиночного пути. Под ультрафиолетовым светом (450-480 нм) возбуждение нейронов РОМС ясно отличается от соседних нефлуоресцирующих нейронов (см. Фигуру 1b), визуализированных с помощью инфракрасной оптики. Двойная иммунофлуоресценция показывает, >99% клеточной колокализации пептидов EGFP и РОМС в ARC (см. Фигуру 1c). Имеется близкое наложение окончаний, окрашенных тирозингидроксилазой (ТН) и NPY на нейронах РОМС, экспрессирующих EGFP, но отсутствуют доказательства колокализации иммунореактивности ТН или NPY с EGFP. Общее число флуоресцентных клеток на венечных срезах гипоталамуса составляет 3148+62 (среднее ± SEM: N=3) нейронов POMC-EGFP, распределенных в целом ARC (см. монографию Franklin и соавт., Головной мозг мыши в стереотаксических координатах (The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates), Academic Press, San Diego, (1997)) (см. Фигуру 1d). Нейроны РОМС у мыши расположены в ARC как медиально, так и вентрально в противоположность преимущественно латеральному положению в ARC крысы.
+
+
Нейроны POMC-EGFP в срезах гипоталамуса имеют мембранный потенциал покоя от -40 до -45 мВ и демонстрируют частые спонтанные потенциалы действия. Неизбирательный опиоидный агонист met-энкефалин (Met-Enk, концентрация 30 мкМ; Sigma) вызывает быструю (35-40 с) обратимую гиперполяризацию (10-20 мВ) мембранного потенциала клеток РОМС (N=10) и предупреждает спонтанную генерацию потенциала действия (см. Фигуру 2а). В нормальном (2,5 мМ K) буфере Krebs обратимый потенциал входящего выпрямляющего опиоидного тока составляет приблизительно -90 мВ, тогда как в 6,5 мМ Kбуфере Krebs обратимый потенциал сдвигается до приблизительно -60 мВ (n=3, см. Фигуру 2b). Антагонист СТАР мю-опиоидного рецептора (MOP-R) (в концентрации 1 мкМ; Phoenix Pharmaceuticals) полностью подавляет ток, индуцируемый Met-Enk в клетках РОМС (n=3, см. Фигуру 2с). Данные характеристики показывают, что опиоидный ток обусловлен активацией MOP-R и повышенной проводимостью ионов через внутренне регулируемые калиевые каналы, ассоциированные с G-белком (GIRK) (Kelly и соавт., Neuroendocrinology, 52:268-75, (1990)).
Реакции на опиоиды в EGFP-меченых нейронах РОМС, аналогичные реакциям в клетках РОМС морских свинок (см. статью Kelly и соавт., Neuroendocrinology, 52:268-75, (1990)) или мышей (см. статью Slugg и соавт., Neuroendocrinology, 72:208-17, (2000)), идентифицированным с помощью иммуногистохимических реакций после регистрации, позволяют предположить, что экспрессия трансгена EGFP не нарушает ни экспрессию рецепторов, ни связывание с системами вторичных переносчиков в нейронах РОМС.
Далее исследуют прямое действие лептина на идентифицированные клетки РОМС в препаратах срезов. Лептин (в концентрации 0,1-100 нМ) вызывает деполяризацию в 72 из 77 клеток РОМС на 3-30 мВ (см. Фигуру 3a; средняя величина деполяризации ± SEM при воздействии лептина в концентрации 100 нМ=9,7±1,2 мВ, n=45) в течение 2-10 минут в зависимости от концентрации (см. Фигуру 3b). В деполяризации участвуют два компонента и ни один из них не восстанавливается полностью в течение 40 минут. Во-первых, деполяризация обусловлена маленьким входящим током, который обратим при приблизительно -20 мВ (см. Фигуру 3с), что предполагает участие в процессе неспецифического катионного канала (см. статью Powis и соавт., Am. J. Physiol., 274:R1468-72, (1998)). Во-вторых, воздействие лептина снижает ГАМКергический сигнал на клетках РОМС. ГАМКергические тормозные постсинаптические токи (IPSCs) наблюдают в клетках РОМС и лептин (в концентрации 100 нМ) снижает их частоту на 25% (см. Фигуру 3d) в 5 из 15 клеток. Это позволяет предположить, что он действует пресинаптически, снижая выход ГАМК (у лептина отсутствует эффект на IPSCs в 10 из 15 нейронов РОМС). Эффект на частоту IPSC аналогичен эффекту на мембранный потенциал. Таким образом, он не только непосредственно вызывает деполяризацию нейронов РОМС, но действует также на ГАМКергические нервные окончания, снижая выход ГАМК на нейроны РОМС, что позволяет им принимать более деполяризованный потенциал покоя. Существующая деполяризация клеток РОМС лептином является специфической, поскольку лептин не действует на 5 из 13 исследованных соседних нефлуоресцентных клеток (см. Фигуру 3е), тогда как он вызывает гиперполяризацию 5 (см. Фигуру 3f) и деполяризацию 3 других нейронов не-РОМС в ARC. Электрофизиологические эффекты лептина, описанные в данном контексте, соответствуют биологической активности лептина; лептин быстро вызывает выход o-MSH из гипоталамуса крыс (см. статью Kim и соавт., J. Clin. Invest., 105:1005-11, (2000)), преимущественно путем активации нейронов РОМС.
Предшествующие сообщения о гиперполяризации нейронов лептином (см. статьи Glaum и соавт., Mol. Pharmacol., 50:230-5, (1996); Spanswick и соавт., Nature, 390:521-5, (1997)) и продемонстрированная колокализация ГАМК и NPY (см. Horvath и соавт., Brain Res., 756:283-6, (1997)) в субпопуляциях нейронов ARC приводят к предположению, что лептин вызывает гиперполяризацию клеток NPY/GABA, которые непосредственно иннервируют нейроны РОМС и, таким образом, снижает ГАМКергическое воздействие на клетки РОМС. Оба, как лептин, так и рецепторы Y2 NPY экспрессируются на нейронах, содержащих NPY в ARC (см. статьи Hakansson и соавт., J. Neurosci. 18:559-72, (1998); Broberger и соавт., Neuroendocrinology, 66:393-408, (1997)). Более того, активация рецепторов Y2 подавляет выход NPY из нейронов, содержащих NPY (см. статью King и соавт., J. Neurochem., 73:641-6, (1999)) и, вероятно, также снижает до минимума выход ГАМК из окончаний NPY/GABA. Это дает альтернативный фармакологический подход, независимый от лептина, для тестирования гипотетической иннервации нейронов РОМС ГАМКергическими нейронами, содержащими NPY. Действительно, NPY (в концентрации 100 нМ; Bachem) снижает частоту ГАМКергических IPSCs на 55% в течение 3 минут во всех 12 исследованных клетках РОМС (см. Фигуру 4а). Оба, как NPY, так и лептин, кроме того, подавляют IPSCs в присутствии тетродотоксина (ТТХ) (в 6 из 6 и 3 из 5 клеток, соответственно), показывая, что некоторое ингибирование IPSCs обусловлено непосредственными эффектами на пресинаптические нервные окончания. Нейроны РОМС экспрессируют рецептор Y1 NPY (см. статью Broberger и соавт., Neuroendocrinology, 66:393-408, (1997)) и NPY также вызывает гиперполяризацию всех тестированных нейронов РОМС в среднем на 9±6 мВ (n=3).
8
8
8
8
8
Другой фармакологический тест для подтверждения природы ГАМКергической иннервации на нейронах РОМС с окончаний NPY/ГАМК представляет собой тестирование эффекта недавно охарактеризованного и высокоизбирательного агониста MC3-R D-Trp-γMSH (см. статью Grieco и соавт., J. Med. Chem. 43:4998-5002, (2000)) на местный выход ГАМК. D-Trp-γMSH (в концентрации 7 нМ) повышает частоту ГАМКергических IPSCs (280±90%), зарегистрированных для 3 из 4 нейронов РОМС (см. Фигуру 4b). Он не действует на одну клетку. Положительный эффект активации MC3-R вместе с отрицательными эффектами NPY и лептина демонстрирует динамический диапазон синапса NPY/ГАМК на нейронах РОМС и указывает на важную роль данного синапса в модуляции проведения сигнала в ARC. D-Trp-γMSH (в концентрации 7 нМ) также вызывает гиперполяризацию (-5,5±2,4 мВ) 9 из 15 исследованных нейронов РОМС и снижает частоту потенциалов действия (см. Фигуру 4с). В остальных клетках отсутствует значительный ответ на D-Trp-γMSH. Данные эффекты не могут быть всецело обусловлены повышенным выходом ГАМКна клетки РОМС и могли бы быть связаны с дополнительным постсинаптическим действием D-Trp-γMSH на нейроны РОМС, среди которых примерно половина экспрессирует также MC3-R (см. статью Bagnol и соавт., J. Neurosci. (в печати), 19:RC26, (1999)). Так, MC3-R действует аналогичным MOP-R ауторецепторным образом на нейроны РОМС, снижая до минимума активность нейронов РОМС в ответ на повышенный уровень пептидов РОМС.
Для дальнейшего определения того, что IPSCs в нейронах РОМС обусловлены локальной иннервацией клетками NPY/ГАМК, проводят иммуногистохимические исследования с множеством меток при использовании световой и электронной микроскопии. Хотя описана назависимая иннервация NPY (см. статью Csiffary и соавт., Brain Res., 506:215-22, (1990)) и ГАМК (см. статью Horvath и соавт., Neuroscience, 51:391-9, (1992)) на клетках РОМС, колокализация NPY и ГАМК в синапсах, образующих нервные окончания, не показана. Аналогично данным на крысах (см. статью Csiffary и соавт., Brain Res., 506:215-22, (1990)), густая иннервация клеток РОМС окончаниями аксонов NPY обнаружена у мышей (см. Фигуру 4d). Данные электронной микроскопии подтверждают коэкспрессию NPY и ГАМК в окончаниях аксонов и показывают, что данные синапсы, образующие "бутоны" (комплексы), на периферии всех 15 проанализированных нейронов РОМС ARC (репрезентативный пример, см. Фигуру 4е).
На детальной модели регуляции данного цикла показывают парные механизмы действия лептина в ARC, взаимодействий между NPY/ГАМК и нейронами РОМС и ауторегуляторной обратной связи с опиоидными и меланокортиновыми пептидами, а также NPY (см. Фигуру 4f). В данной модели лептин непосредственно вызывает деполяризацию нейронов РОМС и одновременно гиперполяризацию сомы нейронов и снижает выход их окончаний NPY/ГАМК. Этот пониженный выход ГАМК снимает ингибирование нейронов РОМС и приводит в результате к активации нейронов РОМС и повышенной частоте потенциалов действия.
Пример 3
Введение PYY подавляет поглощение пищи
3-36
Системы орексигенного NPY и аноректического α-меланокортин-стимулирующего гормона (α-MSH) дугообразного ядра гипоталамуса участвуют в центральной регуляции аппетита (см. статью Schwartz и соавт., Nature, 404:661-671, (2000)). Однако потенциальные механизмы передачи сигнала поглощения пищи непосредственно в данные гипоталамические замкнутые пищевые цепи остаются неясными. PYY представляет собой выделенный из кишки гормон, который выходит после приема пищи пропорционально количеству потребленных калорий (см. статью Pedersen-Bjergaard и соавт., Scand. J. C1in. Lab. Invest., 56:497-503, (1996)). Исследуют эффекты периферического введения PYY3-36 на питание.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
Внутрибрюшинная инъекция (IP) PYY крысам с режимом свободного питания перед наступлением темной фазы значительно снижает последующее поглощение пищи (см. Фигуру 5а). Аналогичное подавление питания наблюдают после IP-инъекции у крыс, подвергнутых голоданию в течение 24 часов (см. Фигуру 5b). Во временном аспекте уровни PYY в плазме, достигнутые после IP-инъекции PYY, демонстрируют пиковый уровень через 15 минут после инъекции, который лежит в интервале нормальных уровней после приема пищи (пиковые уровни PYY через 15 минут после IP-инъекции 0,3 мкг/100 г=99,3±10,4 пмоль/л относительно пика уровня после приема пищи=112,1±7,8 пмоль/л n=8-10/группу). Это позволяет предположить, что физиологические концентрации PYY подавляют питание. PYY не действует на опорожнение желудка (процент поглощенной пищи, сохраняющейся в желудка через 3 часа составляет для PYY=36±1,9%, для физиологического раствора=37,4±1,0% n=12) (см. статью Barrachina и соавт., Am. J. Physiol., 272:R1007-11, (1997)). PYY при внутрибрюшинном введении два раза в день в течение 7 дней снижает кумулятивное поглощение пищи (7-дневное кумулятивное поглощение пищи составляет для PYY3-36=187,6±2,7 г относительно данных для физиологического раствора=206,8±2,3, n=8/группу, Р<0,0001) и снижает набор массы тела (см. Фигуру 5d) (PYY=48,2±1,3 г относительно физиологического раствора=58,7±1,9, n=8/группу, Р<0,002).
Пример 4
Введение PYY действует на экспрессию c-fos
3-36
3-36
3-36
3-36
Для исследования, участвует ли в данном подавлении поглощения пищи гипоталамический путь, исследуют экспрессию c-fos в дугообразном ядре, важном центре контроля питания (см. статью Schwartz и соавт., Nature, 404:661-671, (2000); Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)) после однократной внутрибрюшинной инъекции PYY3-36. В латеральной дуге крыс отмечают двукратное увеличение числа клеток, положительных по c-fos (PYY3-36=168±2, физиологический раствор=82,7±5, n=3, Р<0,0001). Аналогично у трансгенных мышей Pomc-EGFP (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)) внутрибрюшинное введение PYY врезультате приводит к увеличению в 1,8 раза числа клеток дуги, положительных по c-fos (см. Фигуру 6b) по сравнению с контрольными животными, которым вводят физиологический раствор (см. Фигуру 6а) (PYY=250±40, физиологический раствор=137±15, n=5, Р<0,05). IP-введение PYY вызывает увеличение в 2,6 раза соотношения нейронов РОМС, которые экспрессируют c-fos (PYY=20,4±2,9%, физиологический раствор=8±1,%, n=5, Р<0,006) (см. Фигуры 6с и d).
3-36
3-36
3-36
3-36
Данные наблюдения позволяют предположить, что PYY может действовать через дугообразное ядро. Вследствие этого, изучают PYY и его эффекты на пути NPY и РОМС в гипоталамусе. Ввиду задержанного подавления пищи и эффектов набора массы тела после периферического введения PYY гипоталамическую матричную РНК (мРНК) как Pomc, так и NPY измеряют с использованием анализов защиты РНКазы. Значительное снижение мРНК NPY в ответ на PYY наблюдают через 6 часов после IP-инъекции по сравнению с животными, которым вводят физиологический раствор (физиологический раствор=17,3±2,0, PYY3-36=8,8±1,0, относительные единицы оптической плотности, Р<0,02). Отмечают незначительное повышение уровней мРНК РОМС.
Пример 5
Рецепторы Y2
3-36
3-36
3-36
PYY демонстрирует 70% идентичность последовательности аминокислот с NPY и действует через рецепторы NPY (см. статью Soderberg и соавт., J. Neurochem., 75:908-18, (2000)). Y2R предположительно является тормозным пресинаптическим рецептором и экспрессируется на высоком уровне на нейронах, содержащих NPY, дугообразного ядра (см. статью Broberger и соавт., Neuroendocrinology, 66:393-408, (1997)), хотя не экспрессируется на соседних нейронах РОМС. PYY является высокоаффинным агонистом рецептора Y2 (Grandt и соавт., Regul. Pept, 51:151-159, (1994)). Предполагают, что периферический PYY подавляет поглощение пищи через Y2R в дугообразном ядре, области, известной, как непосредственно доступная для действия гормонов, циркулирующих в крови (см. статью Kaira и соавт., Endocr. Rev., 20:68-100, (1999)).
3-36
50
50
50
Для исследования данного предположения PYY инъецируют прямо в дугоообразное ядро (см. статью Kim и соавт., Diabetes, 49:177-82, (2000)). У крыс, подвергнутых голоданию в течение 24 ч, поглощение пищи значительно снижается при таких низких дозах, как 100 фмоль (см. Фигуру 7а), что в результате приводит к подавлению, аналогичному наблюдаемому после IP-введения. Для того, чтобы определить, опосредуются ли данные эффекты через Y2R, используют избирательный агонист Y2R (см. статьи Potter и соавт., Eur. J. Pharmacol., 267:253-262, (1994)), N-ацетил (Leu 28, Leu 31) NPY24-36) [Y2A]. Его аффинность подтверждают в исследованиях связывания рецептора (см. статью Small и соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 94:11686-91, (1997)) на клеточных линиях, экспрессирующих рецепторы NPY Y1, Y2 и Y5 (Y2 имеет IC=1,3+0,2 нМ, IC Y1>5000 нМ, IС Y5>5000 нМ). Введение Y2A в дугоообразное ядро крыс, предварительно подвергнутых голоданию в течение 24 часов доза-зависимым образом (100 фмоль - 1 нмоль) подавляет поглощение пищи (поглощение корма через 2 часа после инъекции составляет для 0,1 нмоль Y2A=6,2±0,5 г, для физиологического раствора=8,2±0,6 г, n=8/группу, Р<0,05).
3-36
3-36
3-36
Для подтверждения анатомической специфичности данного эффекта Y2A (100 фмоль - 1 нмоль) инъекционно вводят с паравентрикулярное ядро (PVN) (см. статью Kim и соавт., J. C1in. Invest., 105:1005-11, (2000)) крыс, подвергнутых голоданию в течение 24 часов, и не обнаруживают изменений в поглощении пищи (через 2 часа после инъекции: физиологический раствор=8,3±0,4 г, 0,1 нмоль Y2A=8,0±0,6 г, n=8/группу). Для дальнейшего определения роли Y2R в подавлении питания, вызываемого периферическим введением PYY, исследуют эффект PYY на мышах с отсутствием Y2r и контрольном потомстве. PYY подавляет питание в дневное время доза-зависимым образом у подвергнутых голоданию самцов мышей дикого типа, но не подавляет поглощение пищи у подвергнутых голоданию мышей с отсутствием Y2R (см. Фигуры 7b и 7с). Поглощение пищи, измеренное как ответ на голодание, демонстрирует, что самцы мышей с отсутствием Y2r едят значительно больше через 2, 4 и 24 часа по сравнению с их контрольным потомством (24-часовое кумулятивное поглощение пищи; мыши с отсутствием Y2R=7,1±0,48 г относительно дикого типа=5,3±0,7 г, n=8/группу, Р<0,05).
3-36
3-36
3-36
3-36
Исследуют электрофизиологическую реакцию гипоталамических нейронов РОМС на введение как PYY, так и Y2A. Данные нейроны идентифицируют при использовании мышей с направленной экспрессией белка зеленой флуоресценции в нейронах РОМС (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)). PYY снимает ингибирование нейронов РОМС, что в результате приводит к значительной деполяризации 19 из 22 исследованных нейронов РОМС (см. Фигуру 8а, вставка) (деполяризация 10,3+2,1 мВ, n=22, Р<0,0003). Подобную деполяризацию наблюдают при использовании Y2A (деполяризация 8,7±1,8 мВ, n=9, Р<0,002). Деполяризация, вызываемая PYY, стимулирует значительное повышение частоты потенциалов действия в нейронах РОМС (см. Фигуру 8а) (93% повышение относительно контроля, Р<0,05, n=22). В формате целых клеток эффект PYY иногда снимают отмыванием, но только после длительной задержки (30 минут). На данных нейронах наблюдают аналогичные эффекты аналогичного отмывания лептина.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
Для исключения эффектов истощения клеток или повреждения целостности исследуют действие PYY в конфигурации с присоединением свободных клеток (или экстрацеллюларной конфигурации). PYY вызывает обратимое 5-кратное повышение частоты потенциалов действия в регистрационных записях нейронов РОМС при использовании присоединения свободных клеток (см. Фигуру 8b). Данное повышение числа импульсов возбуждения происходит с той же задержкой, с которой PYY снижает частоту тормозных постсинаптических токов (IPSCs) на всех 13 исследованных нейронах РОМС (см. Фигуру 8с) (снижения 51,9±9,2%, n=13, Р<0,0001), что указывает на пониженную частоту выхода ГАМК на нейроны РОМС. Интересно, что число импульсов нейронов РОМС возвращается к базовому уровню, несмотря на непрерывное ингибирование IPSCs. Подобный эффект в отношении частоты IPSC наблюдают при использовании Y2A (снижение 44,4+9,3%, n=8, Р<0,004), что позволяет предположить опосредование данного эффекта через Y2R. PYY3-36 (в концентрации 25 нМ) вызывает гиперполяризацию (5,2±1,16 мВ, Р<0,004, n=5) неидентифицированных, но предположительно содержащих NPY нейронов не-РОМС в дугообразном ядре. Отмечают тоническое ГАМКергическое ингибирование нейронов РОМС нейронами, содержащими NPY (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)), и данные результаты позволяют предположить, что действие PYY заключается в ингибировании нейронов, содержащих NPY neurons, и снижении таким образом ГАМКергического сигнала и, следовательно, снятия ингибирования нейронов РОМС. Исследуют также эффект Y2A на секрецию пептида с использованием гипоталамических эксплантатов (см. статью Kim и соавт., J. Ctin. Invest., 105:1005-11, (2000)). Y2A значительно снижает выход NPY при одновременно повышении выхода a-MSH из гипоталамических эксплантатов (см. Фигуры 8d и 4е). Вместе взятые, данные наблюдения позволяют предположить, что PYY модулирует системы как NPY, так и меланокортина в дугообразном ядре.
Пример 6
Исследования на человеке
3-36
3-36
3-36
-2
-1
-1
Вследствие важности меланокортиновой системы для человека (см. статью Barsh и соавт., Nature, 404:644-651, (2000)) и глубоких эффектов PYY как на питание, так и на изменение массы тела, наблюдаемых у грызунов, исследуют эффекты PYY на аппетит и поглощение пищи у человека. Двенадцати подвергнутых голоданию не имеющих ожирения добровольных участников эксперимента (шесть мужчин и шесть женщин, средний возраст 26,7±0,7 лет, BMI = 24,6±0,94 кг.м) делают вливание PYY (0.8 пмоль.кг.мин) или физиологического раствора в течение 90 минут в исследовании двойным слепым смешанным способом с контролем в виде плацебо.
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
3-36
Концентрации PYY в плазме повышаются от средней базовой концентрации 8,3±1,0 пМ до 43,5±3 пМ в процессе инфузии PYY и имитируют уровни после приема пищи (см. статьи Pedersen-Bjergaard и соавт., Scand. J C1in. Lab. Invest., 56:497-503, (1996), Adrian и соавт., Gastroenterology, 89:1070-1077, (1985)). Концентрации PYY, достигнутые после инфузии возвращаются в базовым в течение 30 минут. Инфузия PYY приводит в результате к значительному снижению оценки голода (см. статью Raben и соавт., Br.J. Nutr., 73:517-30, (1995)) (см. Фигуру 9с), ноне вызывают сонливости или слабости. Потребление калорий при свободном выборе закусок (см. статью Tarling и соавт., Intensive Care Med., 23:256-260, (1997)) через два часа после окончания инфузии снижается больше, чем на одну треть относительно физиологического раствора (36±7,4%, p<0,0001) (см. Фигуру 9а). Отсутствует эффект на поглощение жидкости и различия в ощущении сытости и тошноты, описываемые добровольными участниками эксперимента. Введение PYY не оказывает действия на опорожнение желудка, как определяют способом на основе всасывания парацетамола (см. статьи Edwards и соавт., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 281:E155-E166, (2001); Tarling и соавт., Intensive Care Med., 23:256-260, (1997)) или на уровень глюкозы в плазме, уровни лептина GLP-1 или инсулина в плазме. Анализ дневников питания показывает значительное подавление поглощения пищи в течение 12-часового периода после инфузии PYY3-36 (физиологический раствор=2205±243 ккал, PYY3=1474±207 ккал). Однако поглощение пищи в период между 12 и 24 часами фактически идентично у двух групп. В целом наблюдают 33% снижение кумулятивного общего потребления калорий за 24-часовой период после инфузии PYY (см. Фигуру. 9b). Данные факты демонстрируют, что инфузия PYY в концентрациях, соответствующих уровням после приема пищи, вызывает значительное подавление как аппетита, так и поглощения пищи у человека.
2
2
-1
-1
3-36
3-36
3-36
3-36
В дополнительном исследовании участвуют две группы здоровых субъектов (n=12/группу, 6 мужчин и 6 женщин), одна - субъекты с повышенным индексом массы тела (BMI) (средний индекс = 32,73±0,93 кг/м) и другая группа - субъекты с низким BMI (средний индекс  = 20,49±2,05 кг/м). Группы проходят исследование дважды с интервалом по меньшей мере в 1 неделю между каждым из исследований. Все субъекты голодают и пьют только воду с 20:00 ч вечера, предшествующего каждому из исследований. Субъекты прибывают в 08:30 в каждый из дней исследований, им вводят канюлю и дают отдохнуть в течение 30 минут перед началом протокола исследования. Субъектам вливают либо физиологический раствор, либо 0,8 пмоль.кг.мин PYY в течение 90 минут в двойном слепом рандомизированном смешанном формате. Через два часа после окончания инфузии субъектам предлагают свободный выбор закусок в избытке, чтобы можно было удовлетворить все аппетиты. Пищу и воду взвешивают до и после приема пищи и подсчитывают потребление калорий. Число потребленных калорий после введения физиологического раствора и PYY сравнивают с использованием парного критерия Стьюдента (p<0,001). Число потребленных калорий после введения PYY значительно отличается от числа калорий, потребленных после введения физиологического раствора в обеих группах - группе с избыточной массой тела и группой худощавых субъектов (субъектов без избыточной массы тела). Для группы с избыточной массой тела показано снижение на 28,8±4,3% и для группы без избыточной массы тела снижение на 31,1±4,4%. Однако снижение в группе с избыточной массой тела не имеет значимых различий со снижением в группе без избыточной массы тела. Данные факты демонстрируют, что инфузия PYY в концентрации, соответствующей уровням после приема пищи, вызывает значительно подавление как аппетита, так и поглощения пищи у обоих субъектов - имеющих избыточную массу тела и не имеющих избыточной массы тела.
3-36
3-36
Вне зависимости от теории, клетки в дугообразном ядре могли бы определять периферические сигналы насыщения и передавать данные сигналы в другие области головного мозга (см. статью Butler и соавт., Nature Neuroscience, 4:605-611, (2001)). Это предположение поддерживается наблюдением того, что лептин модифицирует активность нейронов дугообразного ядра РОМС и содержащих NPY (см. статью Cowley и соавт., Nature, 411:480-484, (2001)). Результаты, представленные в данном контексте, демонстрируют на основании комплекса электрофизиологических исследований и исследований гипоталамических эксплантатов, что кишечный гормон PYY может непосредственно воздействовать на гипоталамические циклы, что в результате приводит к координатным изменениям в действии РОМС и NPY. Представленные результаты показывают, что нейроны, содержащие NPY в ARC не защищены гематоэнцефалическим барьером и, вследствие этого, доступны для воздействия молекул, циркулирующих в системе кровообращения. Более того, PYY введенный непосредственно в данную область головного мозга, снижает поглощение пищи.
3-36
Результаты, представленные в данном контексте, демонстрируют, что уровни PYY после приема пищи подавляют поглощение пищи у более, чем одного вида млекопитающих (например, у грызунов и человека) на период до 12 часов, демонстрируя таким образом их роль в регуляции поглощения пищи. Данная роль может быть определена как длительно действующий эффект, такой как продолжающийся в течение нескольких часов (например, по меньшей мере двух, трех, четырех, восьми или двенадцати часов или от приблизительно двух до приблизительно пятнадцати часов). Эти соединения отличаются от ранее охарактеризованных выделенных из кишки сигналов "кратковременного" насыщения, например холецистокининов (см. статьи Schwartz и соавт., Nature, 404:661-671, (2000); Moran, Nutrition, 16:858-865, (2000)), эффекты которых являются относительно короткоживущими (например, от приблизительно 1 до 4 часов).
3-36
3-36
3-36
3-36
Неспособность PYY подавлять поглощение пищи у мышей Y2R-null доказывает, что PYY снижает поглощение пищи, действуя через Y2R-зависимый механизм. Результаты, представленные в данном контексте, предполагают наличие нового кишечно-гипоталамического пути в регуляции питания, включая действие PYY на уровне после приема пищи на Y2R дугообразного ядра. Таким образом, PYY и его аналоги, такие как PYY представляют собой терапевтические агенты для лечения ожирения.
Несомненно, что точные детали описанных способов и композиций могут быть изменены или модифицированы в рамках сущности описанного изобретения. Заявляются все данные модификации и варианты, которые входят в объем и сущность нижеприведенной формулы изобретения.