ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПОСРЕДСТВОМ ЭКСПРЕССИИ ФЕРМЕНТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗНОЙ (ДНКазной) АКТИВНОСТЬЮ, В ПЕЧЕНИ

1. Рекомбинантный вектор экспрессии аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий (i) белок капсида и (ii) нуклеиновую кислоту, содержащую промотор, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей фермент, который имеет дезоксирибонуклеазную (ДНКазную) активность, где промотор представляет собой печень-специфичный промотор.
2. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что печень-специфичный промотор опосредует в значительной степени повышенную экспрессию фермента в печени по сравнению с другими тканями и органами.
in vivo
3. Рекомбинантный вектор экспрессии аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий (i) белок капсида и (ii) нуклеиновую кислоту, содержащую промотор, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей фермент, имеющий дезоксирибонуклеазную (ДНКазную) активность, где белок капсида обеспечивает эффективное и/или предпочтительное нацеливание вектора на печень при введении .
4. Вектор по п. 3, отличающийся тем, что белок капсида включает одну или более мутаций, которые улучшают эффективность и/или специфичность доставки вектора в печень по сравнению с соответствующим белком капсида дикого типа.
5. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что фермент, который обладает ДНКазной активностью, представляет собой ДНКазу I или ее мутант или производное.
6. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота содержит последовательность SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 31.
7. Вектор по п. 5, отличающийся тем, что мутант ДНКазы I содержит одну или более мутаций, увеличивающих ДНКазную активность.
8. Вектор по п. 7, отличающийся тем, что мутант ДНКазы I содержит последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 2.
9. Вектор по п. 8, отличающийся тем, что мутант ДНКазы I содержит мутации Q9R, E13R, N74K и A114F.
10. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что последовательность, кодирующая фермент, обладающий ДНКазной активностью, содержит последовательность, кодирующую секреторную сигнальную последовательность, причем указанная секреторная сигнальная последовательность опосредует эффективную секрецию фермента в синусоидальную систему при экспрессии вектора в печени.
11. Вектор по п. 10, отличающийся тем, что секреторная сигнальная последовательность содержит последовательность MRGMKLLGA LLALAALLQGAVS (SEQ ID NO: 6) или MYRMQLLS CIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 7), или MRYTGLMGTL LTLVNLLQLAGT (SEQ ID NO: 25).
12. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что промотор представляет собой промотор α1-антитрипсина (AAT) или промотор альбумина.
13. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что капсидный белок содержит последовательность SEQ ID NO: 34.
14. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что AAV принадлежит серотипу 8 или Anc 80.
15. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота дополнительно содержит один или более энхансеров, расположенных выше или ниже промотора.
16. Вектор по п. 15, отличающийся тем, что энхансер представляет собой энхансер аполипопротеина E (ApoE).
17. Вектор по п. 15, отличающийся тем, что энхансер содержит последовательность SEQ ID NO: 17.
18. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота включает нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 30.
19. Вектор по п. 1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота содержит последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 19.
20. Вектор по п. 1, содержащий (i) капсидный белок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 34, и (ii) нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 30.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая rAAV вектор по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
22. Способ лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом, отличающийся тем, что заболевание или состояние сопровождается накоплением внеклеточной ДНК (вкДНК) в порто-синусоидальном кровотоке печени субъекта, при этом указанный способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества вектора rAAV по п. 1.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, нейродегенеративного заболевания, атеросклероза и реакции гиперчувствительности замедленного типа.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, который возникает и/или метастазирует в органах, тканях и/или структурах, из которых отток происходит в воротную вену.
25. Способ по п. 23, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из перитонеального карциноматоза, лимфомы, рака желудка, рака толстой кишки, рака кишечника, колоректального рака, рака поджелудочной железы, рака печени, рака желчного протока, рака желчного пузыря, саркомы и метастатического заболевания печени любого происхождения.
26. Способ по п. 23, отличающийся тем, что реакция гиперчувствительности замедленного типа представляет собой болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD).
27. Способ предотвращения или облегчения одного или более побочных эффектов, связанных с химиотерапией или лучевой терапией, у субъекта, нуждающегося в этом, при этом указанный способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества вектора rAAV по п. 1.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что химиотерапия включает введение одного или более соединений, выбранных из группы, состоящей из антрациклина, доксорубицина, 5-фторурацила (5-FU), этопозида, таксана, гемцитабина, паклитаксела, иринотекана и циклофосфамида.
29. Способ по п. 22, отличающийся тем, что вектор rAAV или векторную композицию вводят в дозе и режиме, которые достаточны для снижения уровня внеклеточной ДНК (вкДНК) в портосинусоидальном кровотоке указанного субъекта.
30. Способ лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом, где заболевание или состояние сопровождается накоплением внеклеточной ДНК (вкДНК) в портосинусоидальном кровотоке печени субъекта, при этом указанный способ включает введение субъекту вектора экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту, содержащую промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей фермент, обладающий дезоксирибонуклеазной (ДНКазной) активностью, при этом промотор представляет собой печень-специфичный промотор и/или при этом вектор включает одну или более молекул, способных нацеливать нуклеиновую кислоту в клетки печени.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, нейродегенеративного заболевания, атеросклероза и реакции гиперчувствительности замедленного типа.
32. Способ предотвращения или устранения одного или более побочных эффектов, связанных с химиотерапией или лучевой терапией у субъекта, нуждающегося в этом, при этом указанный способ включает введение субъекту вектора экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту, содержащую промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей фермент, обладающий дезоксирибонуклеазной (ДНКазной) активностью, при этом промотор представляет собой печень-специфичный промотор и/или при этом вектор включает одну или более молекул, способных нацеливать нуклеиновую кислоту в клетки печени.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что промотор представляет собой промотор антитрипсина или промотор альбумина.
34. Способ по п. 30, отличающийся тем, что субъектом является человек.
35. Способ по п. 30, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает выбор субъекта с повышенным уровнем внеклеточной ДНК (вкДНК) в кровотоке по сравнению с уровнем вкДНК в кровотоке нормального здорового субъекта.