СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ УДЕРЖАНИЯ В ПЛАЗМЕ И ИММУНОГЕННОСТИ АНТИГЕН СВЯЗЫВАЮЩЕЙ МОЛЕКУЛЫ

1. Способ согласно любому из (a) или (b) ниже, где способ включает модификацию Fc-области антигенсвязывающей молекулы, содержащей антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность варьирует в зависимости от концентрации ионов, и Fc-область, которая имеет активность связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH, в Fc-область, которая не образует гетерокомплекс, содержащий две молекулы FcRn и одну молекулу активирующего Fcγ-рецептора в диапазоне нейтральных значений pH:
(a) способ улучшения фармакокинетики антигенсвязывающей молекулы; и
(b) способ снижения иммуногенности антигенсвязывающей молекулы.
2. Способ по п.1, где модификация в Fc-область, которая не образует указанный гетерокомплекс, включает модификацию Fc-области в Fc-область, активность связывания которой с активирующим Fcγ-рецептором является более низкой, чем активность связывания Fc-области нативного IgG человека с активирующим Fcγ-рецептором.
3. Способ по п.1, где активирующий Fcγ-рецептор представляет собой FcγRIa человека, FcγRIIa(R) человека, FcγRIIa(H) человека, FcγRIIIa(V) человека или FcγRIIIa(F) человека.
4. Способ по п.1, который включает замену аминокислоты указанной Fc-области в одном или нескольких из положений аминокислот 235, 237, 238, 239, 270, 298, 325 и 329, как указано согласно нумерации EU.
5. Способ по п.4, который включает замену аминокислоты указанной Fc-области, как указано согласно нумерации EU, в любом одном или нескольких из:
аминокислота в положении 234 на любую из Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr и Trp;
аминокислота в положении 235 на любую из Ala, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Val и Arg;
аминокислота в положении 236 на любую из Arg, Asn, Gln, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro и Tyr;
аминокислота в положении 237 на любую из Ala, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Val, Tyr и Arg;
аминокислота в положении 238 на любую из Ala, Asn, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Thr, Trp и Arg;
аминокислота в положении 239 на любую из Gln, His, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr и Arg;
аминокислота в положении 265 на любую из Ala, Arg, Asn, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr и Val;
аминокислота в положении 266 на любую из Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 267 на любую из Arg, His, Lys, Phe, Pro, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 269 на любую из Ala, Arg, Asn, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr и Val;
аминокислота в положении 270 на любую из Ala, Arg, Asn, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr и Val;
аминокислота в положении 271 на любую из Arg, His, Phe, Ser, Thr, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 295 на любую из Arg, Asn, Asp, Gly, His, Phe, Ser, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 296 на любую из Arg, Gly, Lys и Pro;
аминокислота в положении 297 на Ala;
аминокислота в положении 298 на любую из Arg, Gly, Lys, Pro, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 300 на любую из Arg, Lys и Pro;
аминокислота в положении 324 на Lys или Pro;
аминокислота в положении 325 на любую из Ala, Arg, Gly, His, Ile, Lys, Phe, Pro, Thr, Trp, Tyr и Val;
аминокислота в положении 327 на любую из Arg, Gln, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr и Val;
аминокислота в положении 328 на любую из Arg, Asn, Gly, His, Lys и Pro;
аминокислота в положении 329 на любую из Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val и Arg;
аминокислота в положении 330 на Pro или Ser;
аминокислота в положении 331 на любую из Arg, Gly и Lys; или
аминокислота в положении 332 на любую из Arg Lys и Pro.
6. Способ по п.1, где модификация в Fc-область, которая не образует указанный гетерокомплекс, включает модификацию Fc-области в Fc-область, которая имеет более высокую активность связывания с ингибирующим Fcγ-рецептором, чем с активирующим Fcγ-рецептором.
7. Способ по п.6, где ингибирующий Fcγ-рецептор представляет собой FcγRIIb человека.
8. Способ по п.6, где активирующий Fcγ-рецептор представляет собой FcγRIa человека, FcγRIIa(R) человека, FcγRIIa(H) человека, FcγRIIIa(V) человека или FcγRIIIa(F) человека.
9. Способ по п.6, который включает замену аминокислоты в положении 238 или 328, указанном согласно нумерации EU.
10. Способ по п.9, который включает замену аминокислоты в положении 238 на Asp или аминокислоты в положении 328 на Glu, как указано согласно нумерации EU.
11. Способ по п.10, который включает замену любой одной или нескольких аминокислот из:
аминокислота в положении 233 на Asp;
аминокислота в положении 234 на Trp или Tyr;
аминокислота в положении 237 на любую из Ala, Asp, Glu, Leu, Met, Phe, Trp и Tyr;
аминокислота в положении 239 на Asp;
аминокислота в положении 267 на любую из Ala, Gln и Val;
аминокислота в положении 268 на любую из Asn, Asp и Glu;
аминокислота в положении 271 на Gly;
аминокислота в положении 326 на любую из Ala, Asn, Asp, Gln, Glu, Leu, Met, Ser и Thr;
аминокислота в положении 330 на любую из Arg, Lys и Met;
аминокислота в положении 323 на любую из Ile, Leu и Met; и
аминокислота в положении 296 на Asp; где аминокислоты указаны согласно нумерации EU.
12. Способ по любому из пп.1-11, где Fc-область содержит одну или несколько аминокислот, которые отличаются от аминокислот нативной Fc-области в положениях аминокислот 237, 248, 250, 252, 254, 255, 256, 257, 258, 265, 286, 289, 297, 298, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 314, 315, 317, 332, 334, 360, 376, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 424, 428, 433, 434 и 436 указанной Fc-области, как указано согласно нумерации EU.
13. Способ по п.12, где аминокислоты указанной Fc-области, указанные согласно нумерации EU, представляют собой комбинацию одной или нескольких из:
Met в положении аминокислоты 237;
Ile в положении аминокислоты 248;
любой из Ala, Phe, Ile, Met, Gln, Ser, Val, Trp и Tyr в положении аминокислоты 250;
любой из Phe, Trp и Tyr в положении аминокислоты 252;
Thr в положении аминокислоты 254;
Glu в положении аминокислоты 255;
любой из Asp, Asn, Glu и Gln в положении аминокислоты 256;
любой из Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr и Val в положении аминокислоты 257;
His в положении аминокислоты 258;
Ala в положении аминокислоты 265;
Ala или Glu в положении аминокислоты 286;
His в положении аминокислоты 289;
Ala в положении аминокислоты 297;
Gly в положении аминокислоты 298;
Ala в положении аминокислоты 303;
Ala в положении аминокислоты 305;
любой из Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp и Tyr в положении аминокислоты 307;
любой из Ala, Phe, Ile, Leu, Met, Pro, Gln и Thr в положении аминокислоты 308;
любой из Ala, Asp, Glu, Pro и Arg в положении аминокислоты 309;
любой из Ala, His и Ile в положении аминокислоты 311;
Ala или His в положении аминокислоты 312;
Lys или Arg в положении аминокислоты 314;
любой из Ala, Asp и His в положении аминокислоты 315;
Ala в положении аминокислоты 317;
Val в положении аминокислоты 332;
Leu в положении аминокислоты 334;
His в положении аминокислоты 360;
Ala в положении аминокислоты 376;
Ala в положении аминокислоты 380;
Ala в положении аминокислоты 382;
Ala в положении аминокислоты 384;
Asp или His в положении аминокислоты 385;
Pro в положении аминокислоты 386;
Glu в положении аминокислоты 387;
Ala или Ser в положении аминокислоты 389;
Ala в положении аминокислоты 424;
любой из Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp и Tyr в положении аминокислоты 428;
Lys в положении аминокислоты 433;
любой из Ala, Phe, His, Ser, Trp и Tyr в положении аминокислоты 434; и
любой из His, Ile, Leu, Phe, Thr и Val в положении аминокислоты 436.
14. Способ по п.1, где указанный антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от концентрации ионов кальция.
15. Способ по п.14, где указанный антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность при низкой концентрации ионов кальция является более низкой, чем антигенсвязывающая активность при высокой концентрации ионов кальция.
16. Способ по п.1, где указанный антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от pH.
17. Способ по п.16, где указанный антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность в диапазоне кислых значений pH является более низкой, чем антигенсвязывающая активность в диапазоне нейтральных значений pH.
18. Способ по п.1, где антигенсвязывающий домен представляет собой вариабельную область антитела.
19. Способ по п.1, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
20. Способ по п.1, где модификация в Fc-область, которая не образует указанный гетерокомплекс, включает модификацию в Fc-область, в которой один из двух полипептидов, составляющих Fc-область, обладает активностью связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH, а другой не обладает активностью связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH.
21. Способ по п.20, который включает замену аминокислоты в любом одном или нескольких из положений 237, 248, 250, 252, 254, 255, 256, 257, 258, 265, 286, 289, 297, 298, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 314, 315, 317, 332, 334, 360, 376, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 424, 428, 433, 434 и 436, как указано согласно нумерации EU, в аминокислотной последовательности одного из двух полипептидов, составляющих указанную Fc-область.
22. Способ по п.21, который включает замену аминокислоты указанной Fc-области в любом или нескольких из:
аминокислота в положении 237 на Met;
аминокислота в положении 248 на Ile;
аминокислота в положении 250 на Ala, Phe, Ile, Met, Gln, Ser, Val, Trp или Tyr;
аминокислота в положении 252 на Phe, Trp или Tyr;
аминокислота в положении 254 на Thr;
аминокислота в положении 255 на Glu;
аминокислота в положении 256 на Asp, Asn, Glu или Gln;
аминокислота в положении 257 на Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, или Val;
аминокислота в положении 258 на His;
аминокислота в положении 265 на Ala;
аминокислота в положении 286 на Ala или Glu;
аминокислота в положении 289 на His;
аминокислота в положении 297 на Ala;
аминокислота в положении 298 на Gly;
аминокислота в положении 303 на Ala;
аминокислота в положении 305 на Ala;
аминокислота в положении 307 на Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
аминокислота в положении 308 на Ala, Phe, Ile, Leu, Met, Pro, Gln или Thr;
аминокислота в положении 309 на Ala, Asp, Glu, Pro или Arg;
аминокислота в положении 311 на Ala, His или Ile;
аминокислота в положении 312 на Ala или His;
аминокислота в положении 314 на Lys или Arg;
аминокислота в положении 315 на Ala, Asp или His;
аминокислота в положении 317 на Ala;
аминокислота в положении 332 на Val;
аминокислота в положении 334 на Leu;
аминокислота в положении 360 на His;
аминокислота в положении 376 на Ala;
аминокислота в положении 380 на Ala;
аминокислота в положении 382 на Ala;
аминокислота в положении 384 на Ala;
аминокислота в положении 385 на Asp или His;
аминокислота в положении 386 на Pro;
аминокислота в положении 387 на Glu;
аминокислота в положении 389 на Ala или Ser;
аминокислота в положении 424 на Ala;
аминокислота в положении 428 на Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
аминокислота в положении 433 на Lys;
аминокислота в положении 434 на Ala, Phe, His, Ser, Trp или Tyr; и
аминокислота в положении 436 на His, Ile, Leu, Phe, Thr или Val; где аминокислоты указаны согласно нумерации EU.
23. Способ по любому из пп.20-22, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от концентрации кальция.
24. Способ по п.23, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность при низкой концентрации кальция является более низкой, чем антигенсвязывающая активность при высокой концентрации кальция.
25. Способ по п.20, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует, в зависимости от pH.
26. Способ по п.25, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность в диапазоне кислых значений pH является более низкой, чем антигенсвязывающая активность в диапазоне нейтральных значений pH.
27. Способ по п.20, где антигенсвязывающий домен представляет собой вариабельную область антитела.
28. Способ по п.20, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
29. Антигенсвязывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от концентрации ионов, и Fc-область которая обладает активностью связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH, где Fc-область содержит одну или несколько аминокислот, выбранных из:
Ala в положении аминокислоты 234;
Ala, Lys или Arg в положении аминокислоты 235;
Arg в положении аминокислоты 236;
Arg в положении аминокислоты 238;
Lys в положении аминокислоты 239;
Phe в положении аминокислоты 270;
Ala в положении аминокислоты 297;
Gly в положении аминокислоты 298;
Gly в положении аминокислоты 325;
Arg в положении аминокислоты 328; и
Lys или Arg в положении аминокислоты 329; где аминокислоты указаны согласно нумерации EU.
30. Антигенсвязывающая молекула по п.29, которая содержит одну или несколько аминокислот, выбранных из:
Lys или Arg в положении аминокислоты 237;
Lys в положении аминокислоты 238;
Arg в положении аминокислоты 239; и
Lys или Arg в положении аминокислоты 329; где аминокислоты указаны согласно нумерации EU.
31. Антигенсвязывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от концентрации ионов, и Fc-область, в которой один из двух полипептидов, составляющих Fc-область, обладает активностью связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH, а другой не обладает активностью связывания FcRn в диапазоне нейтральных значений pH.
32. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.29-31, где Fc-область содержит одну или несколько аминокислот, которые отличаются от аминокислот нативной Fc-области, в любом из положений аминокислот 237, 248, 250, 252, 254, 255, 256, 257, 258, 265, 286, 289, 297, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 314, 315, 317, 332, 334, 360, 376, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 424, 428, 433, 434 и 436, указанных согласно нумерации EU в аминокислотной последовательности одного из двух полипептидов, составляющих Fc-область.
33. Антигенсвязывающая молекула по п.32, которая содержит комбинацию одной или нескольких аминокислот указанной Fc-области из:
Met в положении аминокислоты 237;
Ile в положении аминокислоты 248;
Ala, Phe, Ile, Met, Gln, Ser, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 250;
Phe, Trp или Tyr в положении аминокислоты 252;
Thr в положении аминокислоты 254;
Glu в положении аминокислоты 255;
Asp, Asn, Glu или Gln в положении аминокислоты 256;
Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val в положении аминокислоты 257;
His в положении аминокислоты 258;
Ala в положении аминокислоты 265;
Ala или Glu в положении аминокислоты 286;
His в положении аминокислоты 289;
Ala в положении аминокислоты 297;
Ala в положении аминокислоты 303;
Ala в положении аминокислоты 305;
Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 307;
Ala, Phe, Ile, Leu, Met, Pro, Gln или Thr в положении аминокислоты 308;
Ala, Asp, Glu, Pro или Arg в положении аминокислоты 309;
Ala, His или Ile в положении аминокислоты 311;
Ala или His в положении аминокислоты 312;
Lys или Arg в положении аминокислоты 314;
Ala, Asp или His в положении аминокислоты 315;
Ala в положении аминокислоты 317;
Val в положении аминокислоты 332;
Leu в положении аминокислоты 334;
His в положении аминокислоты 360;
Ala в положении аминокислоты 376;
Ala в положении аминокислоты 380;
Ala в положении аминокислоты 382;
Ala в положении аминокислоты 384;
Asp или His в положении аминокислоты 385;
Pro в положении аминокислоты 386;
Glu в положении аминокислоты 387;
Ala или Ser в положении аминокислоты 389;
Ala в положении аминокислоты 424;
Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 428;
Lys в положении аминокислоты 433;
Ala, Phe, His, Ser, Trp или Tyr в положении аминокислоты 434; и
His, Ile, Leu, Phe, Thr или Val в положении аминокислоты 436; где аминокислоты указаны согласно нумерации EU.
34. Антигенсвязывающая молекула по п.29, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от концентрации ионов кальция.
35. Антигенсвязывающая молекула по п.34, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность при низкой концентрации кальция является более низкой, чем антигенсвязывающая активность при высокой концентрации кальция.
36. Антигенсвязывающая молекула по п.29, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует в зависимости от pH.
37. Антигенсвязывающая молекула по п.36, где антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий домен, антигенсвязывающая активность которого варьирует таким образом, что антигенсвязывающая активность в диапазоне кислых значений pH является более низкой, чем антигенсвязывающая активность в диапазоне нейтральных значений pH.
38. Антигенсвязывающая молекула по п.29, где антигенсвязывающий домен представляет собой вариабельную область антитела.
39. Антигенсвязывающая молекула по п.29, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
40. Полинуклеотид, кодирующий антигенсвязывающую молекулу по любому из пп.29-39.
41. Вектор, который функционально связан с полинуклеотидом по п.40.
42. Клетка, в которую введен вектор по п.41.
43. Способ получения антигенсвязывающей молекулы по любому из пп.29-39, который включает стадию сбора антигенсвязывающей молекулы из культуры клеток по п.42.
44. Фармацевтическая композиция, которая содержит в качестве активного ингредиента антигенсвязывающую молекулу по любому из пп.29-39 или антигенсвязывающую молекулу, полученную способом получения по п.43.