Композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, обогащенные DPA
DPA-ENRICHED COMPOSITIONS OF OMEGA-3 POLYUNSATURATED FATTY ACIDS IN FREE ACID FORM

1. ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данной заявке на изобретение заявлен приоритет в соответствии с 35 U.S.С. (Свод законов США) §119(e) над предварительными заявками на патенты США №№61/583796, поданной 6 января 2012 года; 61/664047, поданной 25 июня 2012 года; 61/669940, поданной 10 июля 2012 года; 61/680622, поданной 7 августа 2012 года; 61/710517, поданной 5 октября 2012 года; и 61/713388, поданной 12 октября 2012 года, содержание всех из которых включено здесь посредством ссылки во всей их полноте.
2. ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Фармацевтические композиции, богатые омега-3 («ω-3» или «n-3») полиненасыщенными жирными кислотами («PUFA»), разрабатывают для лечения различных клинических показаний.
Эти продукты, которые происходят из естественных источников, как правило рыбьего жира, представляют собой гетерогенные композиции, и содержат различные виды омега-3 PUFA, омега-6 PUFA и другие минорные компоненты, включающие мононенасыщенные и насыщенные жирные кислоты. Обнаруженные клинические эффекты как правило приписываются композиции в целом, хотя полагают, что самые распространенные из видов PUFA, представленные в смеси, обычно ЕРА (эйкозапентаеновая кислота) и DHA (докозагексаеновая кислота), вносят существенный вклад в обнаруженный клинический эффект. Поскольку они представляют собой гетерогенные композиции, продукты определены как включающие некоторые обязательные виды полиненасыщенных жирных кислот, каждая из которых находится в пределах определенного диапазона допустимого процентного содержания. Композиции дополнительно определены таким образом, чтобы ограничить некоторые нежелательные компоненты, как происходящие из естественного источника, такие как некоторые примеси из окружающей среды, так и потенциально возникающие в процессе переработки.
Оптимальная композиция, вероятно, отличается в зависимости от предполагаемых клинических показаний. Тем не менее, даже для первого одобренного клинического показания, а именно, лечения тяжелой гипертриглицеридемии (TG (триглицериды) более 500 мг/дл), оптимальная композиция не была определена.
Таким образом, одобренная в первую очередь фармацевтическая композиция для лечения тяжелой гипертриглицеридемии содержит виды омега-3 PUFA, эйкозапентаеновую кислоту («ЕРА») и докозагексаеновую кислоту («DHA») в форме этиловых эфиров в массовых процентных долях приблизительно 46:38 (EPA:DHA), где ЕРА и DHA вместе составляют приблизительно 84% от всех видов PUFA в композиции. Наоборот, позже одобренный продукт Vascepa (ранее известный как AMR101), который одобрен для того же самого клинического показания, более чем на 96% представляет собой чистую ЕРА в форме этилового эфира, по существу без DHA. Нутрицевтический продукт ОМАХ3, представленный на рынке в качестве пищевой добавки, и продвигаемый частично для снижения уровней триглицеридов, содержит ЕРА и DHA в массовом отношении приблизительно 4,1:1, где ЕРА и DHA аналогично представлены в форме этилового эфира, при этом композиция содержит более чем 84% ЕРА и DHA по массе и более чем 90% омега-3 жирных кислот по массе.
Эти широкие вариации в композиции отражают продолжающуюся неопределенность в отношении оптимальной композиции для данного клинического показания.
Неопределенность частично является следствием конкуренции клинических целей. Например, известно, что вид омега-3 PUFA, DHA, обладает большей силой в отношении снижения уровней триглицеридов в сыворотке крови по сравнению с ЕРА, но, как известно, обладает большей тенденцией в отношении повышения уровней LDL (липопротеиды низкой плотности), Mori et al., Am. J. Clin. Nutr. 71: 1085-94 (2000), Grimsgaard et al., Am. J. Clin. Nutr. 66: 649-59 (1997); полагают, что увеличение уровня LDL клинически неблагоприятно у субъектов с повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний. Хотя уменьшение агрегации тромбоцитов и тромбогенеза за счет омега-3 PUFA часто является клинически желательным, потенциальное увеличение времени свертывания крови побудило некоторых исследователей предложить добавление некоторого количества видов омега-6 PUFA, арахидоновой кислоты («АА»), в фармацевтические композиции, обогащенные в отношении омега-3 PUFA. Смотри публикацию заявки на патент США, опубликованной через 18 месяцев с даты приоритета, №2010/0160435.
Трудность в определении оптимальной композиции также частично возникает вследствие ферментативного взаимного превращения видов омега-3 PUFA, и в конкуренции между омега-3 и омега-6 полиненасыщенными жирными кислотами за ферменты, общие для соответствующих путей их биосинтеза из среднецепочечных потребляемых с пищей PUFA (смотри фиг. 1).
Еще одна проблема при разработке оптимальной композиции заключается в вариации биологической доступности перорально вводимых композиций PUFA. Известно, что например поглощение PUFA в форме этиловых эфиров зависит от присутствия панкреатической липазы, которая высвобождается в ответ на жиры, потребляемые в пищу. Поэтому поглощение этиловых эфиров PUFA является неэффективным, и подвергается значительной вариации как среди субъектов, так и у любого отдельного субъекта в зависимости от потребления жира с пищей. Смотри Lawson et al., "Human absorption of fish oil fatty acids as triacylglycerols, free acids, or ethyl esters," Biochem Biophys Res Commun. 152: 328-35 (1988); Lawson et al., Biochem Biophys Res Commun. 156: 960-3 (1988). Поглощение особенно снижено у субъектов, находящихся на диетах с низким содержанием жира, диете, предписанной для субъектов, имеющих повышенные уровни триглицеридов сыворотки или сердечно-сосудистое заболевание.
Для любой специфической желаемой фармацевтической композиции PUFA процесс переработки разработан таким образом, чтобы получать конечный продукт, имеющий обязательные компоненты жирных кислот, находящиеся в предопределенных пределах допустимого процентного содержания, и чтобы ограничить некоторые нежелательные компоненты уровнями, находящимися ниже определенных предопределенных пределов допустимости, причем достаточный выход делает процесс коммерчески реализуемым и экологически устойчивым. Различия в желаемой конечной композиции диктуют различия в способе переработки.
Тем не менее, соотношение различных стадий известного способа может варьировать, что затрудняет адаптацию и оптимизацию способа очистки конкретных композиций. Например, комплексообразование с включением мочевины (образование клатратов) в присутствие этанола часто используется для удаления насыщенных и мононенасыщенных длинноцепочечных жирных кислот, увеличения относительной доли желаемых длинноцепочечных омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в получающейся в результате композиции. Слишком малое количество мочевины уменьшает обогащение длинноцепочечными омега-3 PUFA. Тем не менее, избыточное количество мочевины может приводить к концентрации нежелательных компонентов, и обладает потенциалом к тому, чтобы при любой заданной температуре и времени реакции приводить к увеличенному образованию этилкарбамата, представляющего собой канцерогенное вещество, содержание которого выше определенных низких пределов является недопустимым. Тем не менее, существующие альтернативы комплексообразованию с мочевиной представляют другие трудности.
Таким образом, существует потребность в улучшенных фармацевтических композициях, богатых омега-3 полиненасыщенными жирными кислотами, в частности для лечения гипертриглицеридемии и смешанных дислипидемий, и для улучшенных способов переработки таких композиций из рыбьего жира.
3. КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом аспекте описания настоящего изобретения предложены обогащенные DPA (докозапентаеновая кислота) фармацевтические композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты. Обогащение по содержанию DPA представляло собой непреднамеренное и неожиданное следствие способа получения промышленного масштаба. Эти обогащенные DPA фармацевтические композиции демонстрировали исключительную фармакологическую и клиническую эффективность в экспериментах in vitro и в клинических исследованиях на людях.
Соответственно, в другом аспекте предложены способы лечения. В одной из серий воплощений лечения предложены способы лечения тяжелой гипертриглицеридемии (TG более 500 мг/дл). В еще одной серии воплощений лечения предложены способы лечения гипертриглицеридемии (200 мг/дл - 500 мг/дл) путем дополнительного введения статина и описанных здесь фармацевтических композиций. Дополнительные способы лечения включают среди прочего способы лечения для увеличения отношений ЕРА:АА в плазме крови, способы лечения для снижения уровней ApoCIII и способы лечения для уменьшения или предупреждения резистентности к ингибиторам агрегации тромбоцитов.
Также здесь раскрыты способы приготовления фармацевтических композиций в промышленном масштабе, в том числе способы, которые включают стадию комплексообразования с мочевиной, в которых ограниченные по своему составу партии трансэтерифицированного промежуточного сырья подвергают стадии комплексообразования с мочевиной с использованием количеств мочевины, находящихся в пределах диапазонов, определяемых при помощи алгоритма нового процесса.
4. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
ФИГ. 1 демонстрирует известные пути биосинтеза у человека омега-3 и омега-6 длинноцепочных полиненасыщенных жирных кислот из имеющих промежуточную (среднюю) длину цепи незаменимых жирных кислот.
ФИГ. 2 представляет собой блок-схему примера способа изготовления промежуточного сырья этиловых эфиров PUFA.
ФИГ. 3А представляет среднюю относительную очистку классов жирных кислот через стадию комплексообразования с мочевиной, в которой алгоритмически определяемые количества мочевины добавляют к определенному по своему составу промежуточному сырью этиловых эфиров PUFA.
ФИГ. 3Б иллюстрирует среднюю дифференциальную очистку отдельных видов этиловых эфиров омега-3 и омега-6 PUFA, когда алгоритмически определенные количества мочевины добавляют к определенному по составу промежуточному сырью этиловых эфиров PUFA.
ФИГ. 4 представляет собой блок-схему лечения, иллюстрирующую схему клинического исследования ECLIPSE, дополнительно описанного в примере 7.
ФИГ. 5 сравнивает биологическую доступность общих ЕРА и DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza в течение периодов соблюдения диеты с высоким и низким содержанием жиров.
ФИГ. 6 сравнивает биологическую доступность общих ЕРА и DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza («EE-FA») или Epanova, обогащенной DPA композиции омега-3 PUFA в форме свободной кислоты («FFA»), в течение периода соблюдения диеты с высоким содержанием жиров.
ФИГ. 7 сравнивает общие концентрации ЕРА и DHA в плазме крови (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza или Epanova в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жиров.
ФИГ. 8 сравнивает общие концентрации ЕРА в плазме крови (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza или Epanova в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жиров.
ФИГ. 9 сравнивает общие концентрации DHA в плазме крови (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza или Epanova в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жиров.
0-t
0-t
0-t
ФИГ. 10А и 10Б представляют ответы AUC (площадь под фармакокинетической кривой) у отдельных субъектов в течение периода соблюдения диет с низким и высоким содержанием жиров, выраженные как отношение (%) AUC при низком содержании жиров к AUC при высоком содержании жиров. Отрицательные отношения не представлены.
ФИГ. 11 представляет собой блок-схему лечения, иллюстрирующую схему 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, дополнительно описанного в примере 8 (временная шкала не масштабирована).
ФИГ. 12А представляет зависимость средних нескорректированных общих концентраций ЕРА и DHA в зависимости от времени (линейная шкала) для лечения Lovaza по сравнению с лечением Epanova в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности, дополнительно описанном в примере 8.
ФИГ. 12Б представляет собой гистограмму, демонстрирующую различие в нескорректированных ЕРА и DHA (нмоль/мл) для точек, заключенных в скобки на фиг. 12А.
ФИГ. 13 представляет средние скорректированные относительно базового уровня общие концентрации ЕРА и DHA в плазме крови в зависимости от времени (линейная шкала) для лечения Lovaza по сравнению с лечением Epanova в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности.
ФИГ. 14А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение от базового значения до стабильного состояния нескорректированных уровней ЕРА и DHA в крови в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности.
avg
ФИГ. 14Б представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение от базового значения до стабильного состояния нескорректированных C для ЕРА и DHA в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности.
ФИГ. 15А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение от базового значения до стабильного состояния общих уровней DHA в крови в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности.
avg
ФИГ. 15Б представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение от базового значения до стабильного состояния уровней C DHA в группе Epanova по сравнению с группой Lovaza в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности.
ФИГ. 16А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение от базового значения до стабильного состояния общих уровней ЕРА в крови в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности.
avg
ФИГ. 16Б представляет увеличение от базового значения до стабильного состояния уровней C ЕРА в группах Epanova и Lovaza в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности.
ФИГ. 17 представляет блок-схему лечения, иллюстрирующую схему исследования EVOLVE, дополнительно описанного в примере 10.
ФИГ. 18 обобщает схему исследования EVOLVE более подробно, дополнительно идентифицируя моменты времени визитов для исследования.
ФИГ. 19 демонстрирует распределение субъектов в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 20А-20Г отображают средние базовые уровни в плазме крови ЕРА (ФИГ. 20А), DHA (ФИГ. 20Б), DPA (ФИГ. 20В) и АА (ФИГ. 20Г) и уровни в плазме крови в конце лечения («ЕОТ») (в мкг/мл), для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 20Д сравнивает средние базовые уровни ЕРА и уровни ЕРА EOT для исследования ECLIPSE, описанного в примере 7, представляющего собой 14-суточное исследование биологической доступности, описанное в примере 8, исследования статинового межлекарственного взаимодействия («STATIN DDI»), описанного в примере 11, каждой подвергаемой лечению группы, а также контрольной группы исследования EVOLVE, описанного в примере 10, и значений, ранее представленных в литературе для несвязанного исследования JELIS («JELIS»), в котором использовалась отличающаяся композиция омега-3.
ФИГ. 21А-21Г представляют медиану для базовых уровней ЕРА (ФИГ. 21A), DHA (ФИГ. 21Б), DPA (ФИГ. 21В) и АА (ФИГ. 21Г) в плазме крови и уровней в плазме крови в конце лечения («ЕОТ») (в мкг/мл) в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 22А и 22Б представляют изменение от базового значения до EOT для абсолютных уровней (в мкг/мл) АА, DHA, ЕРА и DPA в плазме крови для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE. ФИГ. 22А представляет средние изменения; ФИГ. 22Б отображает медианы изменений.
ФИГ. 23А представляет среднее изменение от базового значения до EOT в виде процентного изменения относительно базовой величины для АА, DHA, ЕРА и DPA в каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE. ФИГ. 23Б представляет медиану процентного изменения от базового значения до EOT.
ФИГ. 24А-24И представляют средние базовые и уровни EOT в плазме крови (в мг/дл, за исключением того, что LpPLA2 (липопротеин-ассоциированная фосфолипаза А2) представлены в нг/мл) в исследовании EVOLVE для триглицеридов (ФИГ. 24А), не-HDL-C (холестерин, не связанный с липопротеинами высокой плотности) (ФИГ. 24Б), HDL-C (холестерин, связанный с липопротеинами высокой плотности) (ФИГ. 24В), V-LDL-C (холестерин, связанный с липопротеинами очень низкой плотности) (ФИГ. 24Г), LDL-C (холестерин, связанный с липопротеинами низкой плотности) (ФИГ. 24Д), АроВ (аполипопротеин В) (ФИГ. 24Е), ApoCIII (аполипопротеин С III) (ФИГ. 24Ж), RLP (рецептороподобный белок) (ФИГ. 243), LpPLA2 (ФИГ. 24И).
ФИГ. 25А-25И представляет медиану для базовых уровней и EOT в плазме крови (в мг/дл, за исключением того, что LpPLA2 представлены в нг/мл) в исследовании EVOLVE для триглицеридов (ФИГ. 25А), He-HDL-C (ФИГ. 25Б), HDL-С (ФИГ. 25В), V-LDL-C (ФИГ. 25Г). LDL-C (ФИГ. 25Д), АроВ (ФИГ. 25Е), ApoCIII (ФИГ. 25Ж), RLP (ФИГ. 253), LpPLA2 (ФИГ. 25И).
ФИГ. 26А и 26Б представляют изменение от базового значения до EOT абсолютных уровней в плазме крови (в мг/дл) в исследовании EVOLVE для триглицеридов («TG»), He-HDL-C («NHDL-C»), HDL-C, VLDL-C, и LDL-C для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE, где ФИГ. 26А представляет среднее изменение и ФИГ. 26Б демонстрирует медиану изменения.
ФИГ. 27 представляет процентную долю субъектов в исследовании EVOLVE, приведенную по оси Y, для которых уровни триглицеридов уменьшались на указанную процентную долю, приведенную по оси X, для дозы Epanova 2 г и дозы 4 г.
ФИГ. 28А представляет среднее изменение от базового значения до EOT в виде процентного изменения относительно базовой величины для TG, не-HDL-c («NHDL-C»), HDL-C, VLDL-C, LDL-C, АроВ, ApoCIII, LpLPA2 и RLP в каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE, где ФИГ. 28Б представляет медиану процентного изменения от базового значения до EOT.
ФИГ. 29 представляет скорость изменения (абсолютная величина) медианы процентного изменения относительно базового значения в уровнях плазмы крови для ЕРА, DHA, DPA, АА, TG, NHDL-C и HDL-C между дозами Epanova 2 г и 4 г в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 30 иллюстрирует сравнительные данные для Epanova, измеренные в исследовании EVOLVE, и данные, представленные другими исследователями для AMR-101 (Vascepa) в обозначенных дозах, относительно уровней TG.
ФИГ. 31 иллюстрирует сравнительные данные для Epanova, измеренные в исследовании EVOLVE и AMR-101 (Vascepa), в отношении различных липидных параметров крови. Данные для AMR-101 предоставлены другими исследователями. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 32 иллюстрирует сравнительные данные для доз Epanova 2 г и 4 г, определенные в исследовании EVOLVE, и дозы Lovaza 4 г в отношении различных липидных параметров крови. Данные для Lovaza предоставлены другими исследователями. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 33 иллюстрирует сравнительные данные для доз Epanova 2 г и 4 г, оцененные в исследовании EVOLVE, и дозы Lovaza 4 г, предоставленные другими исследователями, в отношении уровней TG. Верхние индексы указывают на данные, полученные из (1) исследования EVOLVE, (2) мета-анализа из Lovaza New Drug Application («NDA») (3) одобренной FDA (Управление по санитарному надзору за пищевыми продуктами и медикаментами) инструкции к продукту Lovaza и (4) исследования Takeda. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 34 представляет корреляцию между процентным изменением для LDL и процентным изменением для ApoCIII, измеренными в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 35 представляет среднее процентное изменение, вычисленное по методу наименьших квадратов (LS), относительно базового значения для подгруппы субъектов исследования EVOLVE, имеющих базовые уровни TG более 750 мг/дл или равные этому значению, для указанных подвергаемых лечению групп исследования EVOLVE, как дополнительно описано в Примере 10. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 36 представляет среднее процентное изменение, вычисленное по методу наименьших квадратов (LS), относительно базового значения для подгруппы субъектов, страдающих от сахарного диабета II типа, для указанных подвергаемых лечению групп исследования EVOLVE, как описано в Примере 10. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 37 представляет среднее процентное изменение, вычисленное по методу наименьших квадратов (LS), относительно базового значения для подгруппы субъектов, подвергающихся одновременной статиновой терапии, для указанных подвергаемых лечению групп исследования EVOLVE, как описано в Примере 10. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 38 представляет среднюю процентную разницу, вычисленную по методу наименьших квадратов (LS), по сравнению с контролем для триглицеридов («TG»), He-HDL-холестерина («NHDL-C»), HDL-C, LDL-C, ТС, VLDL-C и TC/HDL-C по сравнению с субъектами исследования EVOLVE, описанного в Примере 10, которые получали (STATIN) или не получали (NON-STATIN) статиновую терапию одновременно с лечением дозой 2 г Epanova. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 39 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для TG, NHDL-C, HDL-C, LDL-C, ТС, VLDL-C и TC/HDL-C для подгруппы субъектов, подвергающихся одновременной статиновой терапии, в указанных подвергаемых лечению группах исследования EVOLVE, дополнительно описанного в Примере 10. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 40 представляет блок-схему лечения, иллюстрирующую схему исследования ESPRIT, дополнительно описанного в Примере 12.
ФИГ. 41 демонстрирует распределение субъектов в исследовании ESPRIT.
ФИГ. 42А и 42Б демонстрируют медиану процентного изменения LS относительно базового значения для ЕРА (ФИГ. 42А) и DHA (ФИГ. 42Б) в соответствии с исследованием ESPRIT, дополнительно описанном в Примере 12. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 43 представляет среднее процентное изменение LS относительно базового значения для TG, He-HDL-C и HDL-C. Представленные данные получены в результате исследования ESPRIT, дополнительно описанного в Примере 12. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 44 представляет среднее процентное изменение LS относительно базового значения для АроВ, LDL-C, VLDL-C и TC/HDL-C. Представленные данные получены в результате исследования ESPRIT, дополнительно описанного в Примере 12. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 45 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для TG, где субъекты сгруппированы в терцили в соответствии с базовыми уровнями TG для субъектов в исследовании ESPRIT.
ФИГ. 46 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для He-HDL-C, где субъекты сгруппированы в терцили в соответствии с базовыми уровнями He-HDL-C, для субъектов в исследовании ESPRIT.
ФИГ. 47 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для LDL-C, где субъекты сгруппированы в терцили в соответствии с базовыми уровнями LDL-C, для субъектов в исследовании ESPRIT.
ФИГ. 48 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для TG для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT, где субъекты сгруппированы в соответствии с идентичностью статина, принимаемого в одновременной терапии.
ФИГ. 49 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для TG для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT, где субъекты сгруппированы на две группы в соответствии с низкой или высокой эффективностью одновременной статиновой терапии.
ФИГ. 50 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для He-HDL-C для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT, где субъекты сгруппированы в соответствии с низкой или высокой эффективностью одновременной статиновой терапии.
ФИГ. 51 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для LDL-C для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT, где субъекты сгруппированы в две группы в соответствии с низкой или высокой эффективностью одновременной статиновой терапии.
ФИГ. 52 представляет медиану процентного изменения относительно базового значения для TG, для субъектов в каждой из подвергаемых лечению групп исследования ESPRIAT, сгруппированных в три группы в соответствии с высокими базовыми TG, высокими базовыми ЕРА или одновременной терапии розувастатином.
ФИГ. 53 представляет среднее процентное изменение LS в распределении размера частиц относительно базового значения для частиц V-LDL, сгруппированных по размеру, как определили в исследовании ESPRIT. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 54 представляет среднее процентное изменение LS в распределении размера частиц относительно базового значения для частиц LDL, сгруппированных по размеру для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT. (*) обозначает, что величина p составляет менее 0,05, (**) обозначает, что величина p составляет менее 0,01, и (***) обозначает, что величина p составляет менее 0,001.
ФИГ. 55 представляет медиану LS процентного изменения в размере частиц LDL, где субъекты сгруппированы в три группы в соответствии с уровнями триглицеридов ESPRIT EOT.
ФИГ. 56А представляет базовые уровни в плазме крови арахидоновой кислоты (АА) (в мкг/мл) для субъектов в клиническом исследовании, дополнительно описанном в Примере 11, сгруппированных в соответствии с генотипом по rs174546 SNP. ФИГ. 56Б представляет процентное изменение относительно базового значения в уровнях АА в плазме крови субъектов на 15 сутки лечения посредством Epanova, сгруппированных в соответствии с генотипом по rs174546 SNP. Для каждого генотипа межквартильный диапазон показан прямоугольником, медиана показана горизонтальной линией внутри межквартильного прямоугольника, и среднее значение представлено ромбом. Выбросы представлены незаштрихованными кружками. «Усы» продолжаются до минимальной и максимальной величины, не являющейся выбросом. Оценка 1 идентифицирует субъектов, которые являются гомозиготами по основному аллелю; оценка 3 идентифицирует субъектов, гомозиготных по минорному аллелю; и оценка 2 представляет гетерозигот.
5. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
5.1 Обзор: Фармацевтические композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, которые неожиданно обогащены DPA, обладают исключительной клинической эффективностью
Включение мочевины путем комплексообразования (образование клатрата) представляет собой стандартную стадию, часто используемую в переработке рыбьего жира для удаления насыщенных и мононенасыщенных длинноцепочечных жирных кислот, таким образом обогащая получающуюся в результате композицию омега-3 полиненасыщенными жирными кислотами с желаемой длинной цепи. Тем не менее, несмотря на длительное использование и исследования, разработанные для того, чтобы охарактеризовать эффекты различных физико-химических параметров этого процесса, та степень, до которой комплексообразование с мочевиной обогащает отдельными видами длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот, остается непредсказуемой. Ввиду этой остаточной непредсказуемости при комплексообразовании с мочевиной в сочетании с риском получения неприемлемо высоких уровней этилкарбамата, которые приводили бы к необходимости дополнительной обработки, комплексообразование с мочевиной сначала было исключено из способа очистки, применяемого для промышленного изготовления композиций омега-3 PUFA в форме свободных кислот, имеющих определенные желаемые характеристики, для фармацевтического применения.
Тем не менее, как далее описано в Примере 1, ранние попытки разработать способ без использования мочевины в коммерческом масштабе ясно показали, что такие способы не могут достоверно воспроизводить партии композиции, удовлетворяющие необходимым техническим требованиям. Соответственно, искали способ с использованием комплексообразования с мочевиной, и обнаружили, что строгий контроль в композиции над видами PUFA, находящимися в промежуточном исходном сырье сложного этилового эфира, совместно с применением алгоритмически определенного количества мочевины, может достоверно воспроизводить партии, удовлетворяющие необходимым техническим требованиям, и без превышения приемлемых пределов этилкарбамата.
Как описано в Примере 2, четыре иллюстративные производимые партии полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты готовили с использованием стадии комплексообразования с мочевиной. Строгий контроль над композицией применяли к промежуточному сырью сложного этилового эфира применяя только те партии, в которых определенные виды полиненасыщенных жирных кислот находятся в пределах определенного диапазона, и использовали количества мочевины, которые находятся в пределах диапазона, требующегося алгоритмом расчета мочевины. Определили, что все четыре производимые партии фармацевтической композиции удовлетворяли желаемым композиционным техническим требованиям.
Как ожидалось, стадия комплексообразования с мочевиной по существу уменьшала процент насыщенных жирных кислот и мононенасыщенных жирных кислот в получающейся композиции, таким образом, по существу, обогащая ее полиненасыщенными жирными кислотами. Смотри ФИГ. 3А. Тем не менее, неожиданно, что проведение комплексообразования с мочевиной с использованием количеств мочевины, которые находятся в пределах алгоритмически определенного диапазона, оказывает отличающиеся действия на обогащение конкретными видами омега-3 полиненасыщенных жирных кислот и омега-6 полиненасыщенных жирных кислот.
Как описано ниже в примере 3, было обнаружено, что виды омега-3, докозапентаеновая кислота DPA (С22:5 n-3), обогащены, тогда как преобладание соответствующих видов омега-6 с идентичной длиной цепи и степенью ненасыщенности, докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6), уменьшено. Отличающееся действие комплексообразования с мочевиной на обогащение этими двумя изомерами - в сочетании с различиями в их относительных концентрациях сложного этилового эфира, промежуточного сырья - привело в результате к различию логарифмического порядка в их концентрациях в конечной не содержащей кислоту фармацевтической композиции («API»).
Осуществляли дополнительное приготовление партий, и, как описано в Примере 4, композиционный анализ 10 партий API продемонстрировал воспроизводимо повышенные уровни DPA в конечной композиции. Как описано в Примере 5, композиционный анализ 21 партии, приготовленной с использованием комплексообразования с мочевиной, продемонстрировал воспроизводимое 10-кратное различие в концентрации видов омега-3 DPA по сравнению с его омега-6 изомером докозапентаеновой кислотой (С22:5 n-6).
При средней концентрации по меньшей мере приблизительно (а/а, от англ. «at least about») 4,44% для 21 производственной партии, DPA представляет собой третьи наиболее преобладающие виды полиненасыщенной жирной кислоты в API, которые превосходят только ЕРА и DHA. На этом уровне концентрация DPA также приблизительно в 10 раз больше чем концентрация, о которой сообщалось для более ранней фармацевтической композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, названной Purepa, в которой DPA, как сообщалось, присутствовала на уровне 0,5%. Смотри Belluzzl et al., Dig. Dis. Sci. 39(12): 2589-2594 (1994).
Хотя DPA представляет собой промежуточное звено в пути биосинтеза от ЕРА до DHA (смотри ФИГ. 1), удивительно мало известно о специфических биологических эффектах DPA. Для разъяснения потенциального вклада DPA в клиническую эффективность фармацевтической композиции провели эксперименты по профилированию генной экспрессии с использованием клеток гепатокарциномы HepG2.
Как дополнительно описано в Примере 6, эффект DPA на экспрессию генов клеток печени прогнозирует большую клиническую эффективность композиций, обогащенных DPA.
Эксперименты по профилированию генной экспрессии продемонстрировали, что DPA оказывает значительный биологический эффект при релевантных концентрациях in vitro. Эти эффекты заметно отличаются от таковых, наблюдаемых для ЕРА и для DHA.
Обнаружено, что при релевантной концентрации DPA влияет на экспрессию генов в множественных метаболических путях, включающих гены в категориях, которые, как известно, релевантны клиническим эффектам омега-3 полиненасыщенных жирных кислот: гены, вовлеченные в липидный метаболизм, гены, вовлеченные в сердечно-сосудистую физиологию, и гены, вовлеченные в воспаление. Также предсказывают значительные эффекты второго порядка, учитывая изменения, обнаруженные в экспрессии генов, кодирующих белки, которые сами влияют на экспрессию генов, и генов, кодирующих белки, которые влияют на посттранскрипционную модификацию.
Специфические эффекты, оказываемые на экспрессию нескольких генов, вовлеченных в липидный метаболизм, свидетельствуют о том, что DPA в аналогичной концентрации in vivo, должна вносить вклад в улучшение различных клинически релевантных липидных параметров. В частности, обнаруженная зависимая от DPA повышающая регуляция ACADSB, коротко-/разветвлено-цепочечной ацил-СоА дегидрогеназы, прогнозирует более низкий уровень триглицеридов в сыворотке крови; зависимая от DPA понижающая регуляция HMGCR, аналогичная ингибированию статинами кодируемого фермента HMG-СоА-редуктазы, как можно прогнозировать, приведет к благоприятным уменьшениям отношения общий холестерин:HDL; и зависимая от DPA понижающая регуляция SQLE, представляющая собой ограничивающую скорость стадию в синтезе стерола, аналогично прогнозирует уменьшения в общих уровнях холестерина.
Эксперименты по исследованию профиля экспрессии также продемонстрировали порог дозы для эффектов DPA. Более низкая протестированная концентрация, выбранная для того, чтобы имитировать в 10 раз более меньшую концентрацию DPA в более ранней композиции свободной омега-3 кислоты, Purepa, оказала влияние на экспрессию в 10 раз меньшего количества генов, чем более высокая концентрация DPA, выбранная для того, чтобы имитировать воздействие, ожидаемое для фармацевтических композиций, описанных здесь, демонстрируя то, что меньшая концентрация DPA обеспечивает подпороговое воздействие, и, как можно ожидать, обеспечит субтерапевтическую дозу in vivo.
Клинические исследования на людях подтвердили исключительную клиническую эффективность обогащенной DPA фармацевтической композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты.
Пример 7 представляет результаты клинического исследования ECLIPSE, представляющего собой рандомизированное четырехстороннее перекрестное открытое исследование разовой дозы, сравнивающее биологическую доступность дозы 4 г Lovaza с биологической доступностью дозы 4 г обогащенной DPA фармацевтической композиции омега-3 PUFA в описанной здесь форме свободной кислоты (далее «Epanova») в условиях как диеты с высоким уровнем жира, так и с низким уровнем жира. В соответствии с одобренной FDA инструкцией к продукту каждый 1 грамм капсулы Lovaza содержит по меньшей мере 900 мг этиловых эфиров омега-3 жирных кислот, полученных из рыбьего жира, преимущественно комбинацию этиловых эфиров эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА - приблизительно 465 мг) и докозагексаеновой кислоты (DHA - приблизительно 375 мг). Партия Epanova, использованная в исследовании, содержала 57,3% (а/а) ЕРА, 19,6% (а/а) DHA, и 6,2% (а/а) DPA, каждую по существу в форме свободной кислоты.
Изменение профилей поглощения общих EPA+DHA и отдельных ЕРА и DHA (AUC) для Epanova (омега-3 PUFA в форме свободной кислоты), скорректированное относительно базового уровня, было значительно больше чем для Lovaza (омега-3-PUFA сложные этиловые эфиры) во время периода диеты с высоким содержанием жира и существенно лучше в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира. Кроме того, существовало сильное воздействие содержания жира в пище на биологическую доступность Lovaza, тогда как биологическая доступность Epanova была гораздо более предсказуемой вследствие лишь умеренного пищевого эффекта.
Превосходная независимая от жира биологическая доступность Epanova по сравнению с Lovaza является клинически важной в свете рекомендации NCEP ATP III, которая приписывает диету с низким содержанием жира во время вспомогательной терапии субъектам, страдающим от гипертриглицеридемии и дислипидемий.
max
Пример 8 представляет результаты 14-суточного исследования биологической доступности, которое демонстрирует, что увеличение биологической доступности, обнаруженное в исследовании с разовой дозой ECLIPSE сохраняется, даже увеличивается в течение 2 недель введения доз. Дополнительно, данные дезагрегированного специфического для субъекта исследования продемонстрировали, что субъект с наименьшим ответом на Epanova все же обладает большей 14-суточной EPA+DHA C, нежели чем субъект с лучшим ответом на Lovaza.
Пример 10 представляет результаты исследования EVOLVE, представляющего собой 12-недельное двойное слепое, с оливковым маслом в качестве контроля, исследование пациентов, отобранных на основе высоких уровней триглицеридов в диапазоне 500-2000 мг/дл (тяжелая гипертриглицеридемия). Первичный конечный критерий исследования представлял собой процентное изменение уровней триглицеридов в плазме крови от базового значения к концу лечения («ЕОТ»). Вторичный конечный критерий представлял собой процентное изменение холестерина, не ассоциированного с HDL, в плазме крови («не-HDL-C») от базового значения к EOT.
Как можно видеть на основе ФИГ. 20-23, 12-недельное лечение Epanova вызвало значительное увеличение уровней ЕРА, DHA и DPA в плазме крови.
Повышения уровней ЕРА, DHA и DPA в плазме крови сопровождались значительными снижениями уровней АА в плазме крови, причем схема введения 4 г доз вызывала среднее уменьшение на 18%, медиану уменьшения 25,9%, и среднее уменьшение по методу наименьших квадратов («LS») 23,2%. Эти снижения уровней арахидоновой кислоты в плазме крови были обнаружены, несмотря на экзогенное введение арахидоновой кислоты в концентрации 2,446% (а/а) в партии Epanova, используемой в этом исследовании.
Увеличение уровней ЕРА в плазме крови с сопутствующим уменьшением уровней АА в плазме крови вызывало значимое улучшение отношения ЕРА/АА от приблизительно 0,10 для базового уровня до приблизительно 0,67 (среднее) и 0,62 (медиана) в конце лечения («ЕОТ») для дозы 4 г. Сообщалось, что отношение ЕРА/АА составило независимый фактор риска для коронарного атеросклероза, Nakamua & Maegawa, Endocrine Abstracts (2012) 29 OC19.1, причем меньшие отношения ассоциируются с прогрессированием коронарного атеросклероза у подвергаемых лечению статинами пациентов с ишемической болезнью сердца, Nozue et al., Am J Cardiol. 2013 Jan 1; 111(1): 6-1 (накануне публикации ePub).
Кроме того, лечение с использованием Epanova привело в результате к существенным уменьшениям уровней триглицеридов (смотри ФИГ. 26А и 26Б), уменьшениям не-HDL-C и VLDL-C, и увеличениям HDL-C. Уровни LDL-C были повышены, что может быть связано с увеличением размера частиц LDL после лечения (дополнительно обсуждается в Примере 12).
Исследование EVOLVE также продемонстрировало, что уровень аполипопротеина CHI (ApoCIII) значимо уменьшался вследствие лечения Epanova. Обнаружено, что повышенные уровни ApoCIII представляют собой независимый прогнозирующий фактор для риска сердечно-сосудистого заболевания (CHD), тогда как генетически уменьшенные уровни ApoCIII ассоциируются с защитой от CHD, и также коррелируют с увеличением продолжительности жизни.
Чрезвычайно высокая биологическая доступность омега-3 PUFA в Epanova выявила ранее не известные и неожиданные различия в фармакокинетическом ответе среди различных видов PUFA.
ФИГ. 29 представляет скорость изменения медианы процентного изменения относительно базового значения уровней ЕРА, DHA, DPA, АА, TG, не-HDL-C и HDL-C (абсолютная величина) в плазме крови для доз 2 г и 4 г Epanova. При небольшом повышении или отсутствии повышения уровней DHA и DPA в плазме крови при дублировании дозы Epanova с 2 г до 4 г в сутки скорость изменения (наклон) медианы процентного изменения относительно базового значения является почти нулевой, прогнозируя то, что может быть достигнуто небольшое дополнительное увеличение уровней DHA и DPA в плазме крови, если доза дополнительно увеличивается. Похожее отсутствие роста ответа обнаружено для уровней триглицеридов, уровней HDL-C и уровней не-HDL-C (данные не представлены).
Наоборот, скорость изменения ЕРА остается высокой с наклоном 0,59; ожидается, что дополнительное увеличение уровней ЕРА в плазме крови будет достигнуто увеличением дозы Epanova свыше 4 г в сутки. Важно то, что скорость изменения (уменьшения) уровней АА при удвоении дозы Epanova с 2 г до 4 г в сутки еще более высока, чем скорость для ЕРА; по мере увеличения дозы Epanova выше 4 г/сутки, ожидаются дополнительные снижения уровней АА в плазме крови. Таким образом, Epanova демонстрирует беспрецедентную эффективность в способности повышать уровни ЕРА, уменьшать уровни АА и улучшать отношение ЕРА:АА.
Как представлено на ФИГ. 38, подгруппа субъектов в группе, подвергаемой лечению 2 г, в исследовании EVOLVE, получавших параллельную статиновую терапию, демонстрировала большие процентные изменения величин (среднее различие LS) по сравнению с контролем для TG, не-HDL-C, HDL-C, LDL-C, ТС, VLDL-C и TC/HDL-C по сравнению с теми субъектами в подвергаемой лечению группе 2 г, которые не получали параллельную статиновую терапию. Субъекты, получающие одновременную статиновую терапию, демонстрировали дозозависимый ответ на Epanova, как представлено в сравнительных данных для Epanova 2 г и Epanova 4 г, представленных на ФИГ. 39.
Пример 12 описывает клиническое исследование ESPRIT, которое проводили для изучения базовой статиновой терапии на пациентах с уровнями триглицеридов 200-500 мг/дл, меньше чем у пациентов, страдающих от тяжелой гипертриглицеридемии, вовлеченных в исследование EVOLVE, описанное в Примере 10.
Обнаружены дозозависимые уменьшения уровня триглицеридов, уменьшения уровня не-HDL-C и увеличения уровня HDL-C при сравнении с оливковым маслом в качестве плацебо (смотри ФИГ. 43). Кроме того, обнаружены дозозависимые снижения уровней VLDL-C и TC/HDL-C (смотри ФИГ. 44). Эти результаты, взятые вместе (обобщенные на ФИГ. 42-44) демонстрируют эффективность Epanova в качестве дополнения к статиновой терапии у пациентов с уровнями триглицеридов 200-500 мг/дл.
ФИГ. 45-52 иллюстрируют, что Epanova эффективен в качестве дополнения к низкоактивным и выскокоактивным статинам в диапазоне базовых условий для пациентов. Как видно на ФИГ. 48, уменьшение уровней TG наблюдали у пациентов, получающих параллельную терапию розувастатином, аторвастатином и симвастатином. Статистически значимые эффекты в отношении уровней триглицеридов, не-HDL-C и LDL-C обнаружены независимо оттого, вводили ли одновременно низкоактивные или выскокоактивные статины, как представлено на ФИГ. 49-51.
5.2 Обогащенные DPA омега-3 композиции в форме свободной кислоты
Соответственно, в первом аспекте предложены улучшенные композиции полиненасыщенных жирных кислот («PUFA») в форме свободной кислоты. В различных воплощениях композиция представляет собой фармацевтическую композицию, подходящую для перорального введения. В различных воплощениях композиция представляет собой нутрицевтическую композицию, подходящую для перорального введения.
5.2.1 Типичные воплощения
Композиция содержит множество видов омега-3 PUFA, каждая из которых представлена по существу в форме свободной кислоты.
Композиция содержит эйкозапентаеновую кислоту (С20:5 n-3) («ЕРА», также известную как тимнодоновая кислота), докозагексаеновую кислоту (С22:6 n-3) («DHA», также известную как цервоновая кислота), и докозапентаеновую кислоту (С22:5 n-3) («DPA», также известную как клупанодоновая кислота), каждая по существу в форме свободной кислоты.
Композиция содержит ЕРА в количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на хроматограмме GC (газовая хроматография), по меньшей мере приблизительно 45% («45% (а/а)»). В различных воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве по меньшей мере приблизительно 46% (а/а) 47% (а/а), 48% (а/а), 49% (а/а), или по меньшей мере приблизительно 50% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве по меньшей мере приблизительно 51% (а/а), по меньшей мере приблизительно 52% (а/а), по меньшей мере приблизительно 53% (а/а), по меньшей мере приблизительно 54% (а/а), по меньшей мере приблизительно 55% (а/а), по меньшей мере приблизительно 56% (а/а), по меньшей мере приблизительно 57% (а/а), по меньшей мере приблизительно 58% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 59% (а/а), по меньшей мере приблизительно 60% (а/а), по меньшей мере приблизительно 61% (а/а), 62% (а/а), 63% (а/а), 64% (а/а) или 65% (а/а).
В некоторых воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве от приблизительно 45 до приблизительно 65% (а/а). В конкретных воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 50 до приблизительно 60% (а/а). В различных воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 52 до приблизительно 58,0% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 55% (а/а) до приблизительно 56% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве приблизительно 55% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве, рассчитанном как процент по массе всех жирных кислот в композиции («% (м/м)»), от приблизительно 50% (м/м) до приблизительно 60% (м/м). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве приблизительно 55% (м/м).
Композиция содержит DHA в количестве по меньшей мере приблизительно 13% (а/а). В различных воплощениях композиция содержит DHA в количестве по меньшей мере приблизительно 14% (а/а), по меньшей мере приблизительно 15% (а/а), по меньшей мере приблизительно 16% (а/а), по меньшей мере приблизительно 17% (а/а), по меньшей мере приблизительно 18% (а/а), по меньшей мере приблизительно 19% (а/а) или по меньшей мере приблизительно 20% (а/а). В выбранных воплощениях композиция содержит DHA в количестве по меньшей мере приблизительно 21% (а/а), по меньшей мере приблизительно 22% (а/а), по меньшей мере приблизительно 23% (а/а), по меньшей мере приблизительно 24% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 25% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит DHA в количестве от приблизительно 13% (а/а) до приблизительно 25% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 15% (а/а) до приблизительно 25% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 17% (а/а) до приблизительно 23% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 19% (а/а) до приблизительно 20% (а/а).
В различных воплощениях композиции содержат DHA в количестве от приблизительно 15% (м/м) до приблизительно 25% (м/м). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 17% (м/м) до приблизительно 23% (м/м). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве приблизительно 20% (м/м).
Композиция содержит DPA в количестве по меньшей мере приблизительно 1% (а/а). В различных воплощениях композиция содержит DPA в количестве по меньшей мере приблизительно 1,5% (а/а), 2% (а/а), 2,5% (а/а), 3% (а/а), 3,5% (а/а), 4% (а/а), 4,5% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 5% (а/а). В выбранных воплощениях композиция содержит DPA в количестве по меньшей мере приблизительно 6% (а/а), по меньшей мере приблизительно 7% (а/а), по меньшей мере приблизительно 8% (а/а) или по меньшей мере приблизительно 9% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит DPA в количестве от приблизительно 1% (а/а) до приблизительно 8% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит DPA в количестве от приблизительно 2% (а/а) до приблизительно 7% (а/а). В выбранных воплощениях композиция содержит DPA в количестве от приблизительно 3% (а/а) до приблизительно 6% (а/а). В конкретных воплощениях композиция содержит DPA в количестве от приблизительно 4% (а/а) до приблизительно 5% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит DPA, рассчитанную как процент по массе всех жирных кислот в композиции, в количестве не менее чем приблизительно 1% (м/м). В различных воплощениях композиция содержит DPA в количестве от приблизительно 1% (м/м) до приблизительно 8% (м/м). В конкретных воплощениях композиция содержит DPA в количестве не более чем приблизительно 10% (м/м).
Композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 60% (а/а). В различных воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 61% (а/а), 62% (а/а), 63% (а/а), 64% (а/а), 65% (а/а), 66% (а/а), 67% (а/а), 68% (а/а), 69% (а/а) или по меньшей мере приблизительно 70% (а/а). В конкретных воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 71% (а/а), 72% (а/а), 73% (а/а), 74% (а/а), 75% (а/а), 76% (а/а), 77% (а/а), 78% (а/а), 79% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 80% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 81% (а/а), 82% (а/а), по меньшей мере приблизительно 83% (а/а), 84% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 85% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в количестве от приблизительно 70,0% (м/м) до приблизительно 80,0% (м/м). В некоторых воплощениях композиция содержит приблизительно 75% (м/м) ЕРА плюс DHA.
Композиция содержит ЕРА, DHA и DPA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 61% (а/а). В типичных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA и DPA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 62% (а/а), 63% (а/а), 64% (а/а), 65% (а/а), 66% (а/а), по меньшей мере приблизительно 67% (а/а), по меньшей мере приблизительно 68% (а/а), по меньшей мере приблизительно 69% (а/а) или по меньшей мере приблизительно 70% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA и DPA в общем количестве по меньшей мере приблизительно 71% (а/а), 72% (а/а), 73% (а/а), 74% (а/а), 75% (а/а), 76% (а/а), 77% (а/а), 78% (а/а), 79% (а/а), 80% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 81% (а/а), 82% (а/а), 83% (а/а), 84% (а/а), 85% (а/а), 86% (а/а), 87% (а/а), даже по меньшей мере приблизительно 88% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA и DPA в общем количестве от приблизительно 70% (а/а) до приблизительно 90% (а/а).
В конкретных сериях воплощений ЕРА представлена в количестве от приблизительно 55% (а/а) до приблизительно 56% (а/а); DHA представлена в количестве от приблизительно 19% (а/а) до приблизительно 20% (а/а); и DPA представлена в количестве от приблизительно 4% (а/а) до приблизительно 5% (а/а).
В некоторых воплощениях композиция дополнительные содержит один или более чем один вид омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты, выбранной из группы, состоящей из: α-линоленовой кислоты (С18:3 n-3), мороктиновой кислоты (С18:4 n-3, также известной как стеаридоновая кислота), эйкозатриеновой кислоты (С20:3 n-3), эйкозатетраеновой кислоты (С20:4 n-3), и генэйкозапентаеновой кислоты (С21:5 n-3).
В конкретных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA, DPA и мороктиновую кислоту, каждую по существу в форме свободной кислоты. В различных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA, DPA, мороктиновую кислоту и генэйкозапентаеновую кислоту, каждую по существу в форме свободной кислоты. В конкретных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA, DPA, мороктиновую кислоту, генэйкозапентаеновую кислоту и эйкозатетраеновую кислоту, каждую по существу в форме свободной кислоты. В выбранных воплощениях композиция содержит ЕРА, DHA, DPA, α-линоленовую кислоту (С18:3 n-3), мороктиновую кислоту (С18:4 n-3), эйкозатриеновую кислоту (С20:3 n-3), эйкозатетраеновую кислоту (С20:4 n-3) и генэйкозапентаеновую кислоту (С21:5 n-3).
В различных воплощениях общие омега-3 жирные кислоты - определенные как сумма альфа-линоленовой кислоты (С18:3 n-3), мороктиновой кислоты (С18:4 n-3), эйкозатриеновой кислоты (С20:3 n-3), эйкозатетраеновой кислоты (С20:4 n-3), эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) (С20:5 n-3), генэйкозапентаеновой кислоты (С21:5 n-3), докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-3) и докозагексаеновой кислоты (DHA) (С22:6 n-3) - составляют от приблизительно 80% (а/а) до приблизительно 95% (а/а) всех жирных кислот в композиции. В различных воплощениях общие омега-3 жирные кислоты составляют от приблизительно 80 до приблизительно 95% (м/м) всех жирных кислот в композиции.
В различных воплощениях композиция дополнительно содержит один или более чем один вид омега-6 PUFA, каждый из которых представлен по существу в форме свободной кислоты.
В некоторых воплощениях композиция содержит один или более чем один вид омега-6 PUFA, выбранный из группы, состоящей из линолевой кислоты (С18:2 n-6), гамма-линоленовой кислоты (С18:3 n-6), эйкозадиеновой кислоты (С20:2 n-6), дигомо-гамма-линоленовой кислоты (С20:3 n-6) («DGLA»), арахидоновой кислоты (С20:4 n-6) («АА») и докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6, также известной как кислота Осбонда).
В конкретных воплощениях композиция содержит линолевую кислоту (С18:2 n-6), гамма-линоленовую кислоту (С18:3 n-6), эйкозадиеновую кислоту (С20:2 n-6), дигомо-гамма-линоленовую кислоту (С20:3 n-6) («DGLA»), арахидоновую кислоту (С20:4 n-6) («АА») и докозапентаеновую кислоту (С22:5 n-6), каждая из которых представлена по существу в форме свободной кислоты.
В различных воплощениях АА представлена в количестве не более чем приблизительно 5% (а/а) от жирных кислот в композиции. В некоторых воплощениях АА составляет не более чем приблизительно 4,5% (а/а) от жирных кислот в композиции. В конкретных воплощениях АА представлена в количестве не более чем приблизительно 4% (а/а) от жирных кислот в композиции.
В некоторых воплощениях АА представлена в количестве не более чем приблизительно 5% (м/м) от жирных кислот в композиции. В некоторых воплощениях АА составляет не более чем приблизительно 4,5% (м/м) от жирных кислот в композиции. В конкретных воплощениях АА представлена в количестве не более чем приблизительно 4% (м/м) от жирных кислот в композиции.
В некоторых воплощениях общие омега-6 полиненасыщенные жирные кислоты - определенные как сумма линолевой кислоты (С18:2 n-6), гамма-линоленовой кислоты (С18:3 n-6), эйкозадиеновой кислоты (С20:2 n-6), дигомо-гамма-линоленовой кислоты (С20:3 n-6), арахидоновой кислоты (С20:4 n-6) и докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) - составляют не более чем приблизительно 10% (а/а) от жирных кислот в композиции. В некоторых воплощениях общие омега-6 полиненасыщенные жирные кислоты- определенные как сумма линолевой кислоты (С18:2 n-6), гамма-линоленовой кислоты (С18:3 n-6), эйкозадиеновой кислоты (С20:2 n-6), дигомо-гамма-линоленовой кислоты (С20:3 n-6), арахидоновой кислоты (С20:4 n-6) и докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) - составляют не более чем приблизительно 10% (м/м) от жирных кислот в композиции.
В конкретных воплощениях композиция приведена в Таблице 11, причем каждый вид PUFA, идентифицированный в ней, попадает в диапазон от приблизительно -3 SD (стандартное отклонение) до приблизительно +3 SD относительно соответствующего описанного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид PUFA, идентифицированный в ней, попадает в диапазон от приблизительно -2 SD до приблизительно +2 SD относительно соответствующего описанного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид попадает в диапазон от приблизительно -1 SD до приблизительно +1 SD относительно соответствующего описанного среднего значения.
В выбранных воплощениях композиция приведена в Таблице 13, причем каждый вид PUFA, идентифицированный в ней, попадает в диапазон от приблизительно -3 SD до приблизительно +3 SD относительно соответствующего описанного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид попадает в диапазон от приблизительно -2 SD до приблизительно +2 SD относительно соответствующего описанного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид PUFA попадает в диапазон от приблизительно -1 SD до приблизительно +1 SD относительно соответствующего описанного среднего значения.
В некоторых воплощениях полиненасыщенные жирные кислоты, отличные от омега-3 и омега-6 полиненасыщенных жирных кислот, представлены в количестве не более чем приблизительно 5% (а/а). В различных воплощениях полиненасыщенные жирные кислоты, отличающиеся от омега-3 и омега-6 полиненасыщенных жирных кислот, представлены в количестве не более чем приблизительно 5% (м/м).
В различных воплощениях по меньшей мере 90% каждого из множества видов омега-3 PUFA в композиции представлены в форме свободной кислоты. В некоторых воплощениях по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, даже по меньшей мере 99% каждого вида омега-3 PUFA в композиции представлены в форме свободной кислоты. В примерах воплощений по меньшей мере 90% содержания общих омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в композиции представлены в форме свободной кислоты. В некоторых воплощениях по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, даже по меньшей мере 99% от содержания общих омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в композиции представлены в форме свободной кислоты.
В различных воплощениях по меньшей мере 90% каждого из множества видов омега-6 PUFA в композиции представлены в форме свободной кислоты. В некоторых воплощениях по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, даже по меньшей мере 99% каждого вида омега-6 PUFA в композиции представлены в форме свободной кислоты. В примерах воплощений по меньшей мере 90% от содержания общих омега-6 полиненасыщенных жирных кислот в композиции представлены в форме свободной кислоты.
В различных воплощениях по меньшей мере 90% от общих полиненасыщенных жирных кислот в композиции представлены в форме свободной кислоты. В некоторых воплощениях по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, даже по меньшей мере 99% от общих полиненасыщенных жирных кислот в композиции представлены в форме свободной кислоты.
В типичных воплощениях композиция содержит не более чем приблизительно 3,0% (а/а) насыщенных жирных кислот и не более чем приблизительно 5,0% (а/а) моно-ненасыщенных жирных кислот. В различных воплощениях композиция содержит не более чем приблизительно 3,0% (м/м) насыщенных жирных кислот и не более чем приблизительно 5,0% (м/м) мононенасыщенных жирных кислот.
В типичных воплощениях композиция эффективно дополнительно содержит антиоксидант. В некоторых воплощениях антиоксидант представляет собой бутилированный гидроксианизол (ВНА). В некоторых воплощениях антиоксидант представляет собой альфа-токоферол. В некоторых воплощениях альфа-токоферол представлен в количестве от приблизительно 0,20 до приблизительно 0,40% (м/м). В различных воплощениях альфа-токоферол представлен в количестве от приблизительно 0,25 до приблизительно 0,35% (м/м). В конкретных воплощениях альфа-токоферол представлен в количестве от приблизительно 0,27 до приблизительно 0,33% (м/м).
-1
-1
-1
В типичных воплощениях композиция содержит не более чем приблизительно 0,1 млн (частей на миллион) этилкарбамата. В некоторых воплощениях композиция содержит не более чем 0,1 млн этилкарбамата. В различных воплощениях композиция содержит менее чем 0,1 млн этилкарбамата.
5.2.2 Дополнительные воплощения
В некоторых дополнительных воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 45,0 до приблизительно 65,0% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 50,0 до приблизительно 60,0% (а/а). В различных воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 52,0 до приблизительно 58,0% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве приблизительно 55,0% (а/а).
В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 55,0 до приблизительно 58,4% (а/а). В различных воплощениях ЕРА представлена в количестве от приблизительно 55,6 до приблизительно 57,9% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве приблизительно 56,7% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит ЕРА в количестве, рассчитанном как процент по массе всех жирных кислот в композиции, от приблизительно 50,0 до 60,0% (м/м). В некоторых воплощениях ЕРА представлена в количестве приблизительно 55% (м/м).
В некоторых дополнительных воплощениях композиция содержит DHA в количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 13,0 до приблизительно 25,0% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 15,0 до приблизительно 23,0% (а/а). В различных воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 17,0 до приблизительно 21,0% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 19,0 до приблизительно 20,0% (а/а).
В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 17,7 до приблизительно 22,2% (а/а). В различных воплощениях DHA представлена в количестве от приблизительно 18,4 до приблизительно 21,4% (а/а). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве приблизительно 19,9% (а/а).
В различных воплощениях композиции содержат DHA в количестве, рассчитанном как процент по массе всех жирных кислот в композиции, от приблизительно 15,0 до 25,0% (м/м). В некоторых воплощениях DHA представлена в количестве приблизительно 20,0% (м/м).
В различных дополнительных воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 67,0 до приблизительно 81,0% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит общее количество ЕРА и DHA от приблизительно 69,0 до приблизительно 79,0% (а/а). В различных воплощениях композиция содержит общее количество ЕРА и DHA от приблизительно 71,0 до приблизительно 77,0% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит общее количество EPA+DHA от приблизительно 74,0 до приблизительно 75,0% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит ЕРА и DHA в общем количестве, рассчитанном как процент по массе всех жирных кислот в композиции, от приблизительно 70,0 до 80,0% (м/м). В некоторых воплощениях композиция содержит приблизительно 75,0% (м/м) ЕРА плюс DHA.
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат α-линоленовую кислоту (С18:3 n-3), α-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,07 до приблизительно 1,10% (а/а). В некоторых воплощениях α-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,24 до приблизительно 0,91% (а/а). В различных воплощениях α-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,40 до приблизительно 0,80% (а/а). В некоторых воплощениях α-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,50 до приблизительно 0,600% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат мороктиновую кислоту (С18:4 n-3), мороктиновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 7,90% (а/а). В некоторых воплощениях мороктиновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,25 до приблизительно 6,40% (а/а). В некоторых воплощениях мороктиновая кислота представлена в количестве от приблизительно 1,70% до приблизительно 4,90% (а/а). В конкретных воплощениях мороктиновая кислота представлена в количестве приблизительно 3,25% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат эйкозатриеновую кислоту (С20:3 n-3), эйкозатриеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,75 до приблизительно 3,50% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозатриеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 1,20 до приблизительно 3,00% (а/а). В различных воплощениях эйкозатриеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 1,60 до приблизительно 2,60% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозатриеновая кислота представлена в количестве приблизительно 2,10% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат эйкозатетраеновую кислоту (С20:4 n-3), эйкозатетраеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,40% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозатетраеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,30% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозатетраеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,22% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозатетраеновая кислота представлена в количестве приблизительно 0,12% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат генэйкозапентаеновую кислоту (С21:5 n-3), генэйкозапентаеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до 4,10% (а/а). В некоторых воплощениях генэйкозапентаеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 3,20% (а/а). В конкретных воплощениях генэйкозапентаеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,60 до приблизительно 2,35% (а/а). В различных воплощениях генэйкозапентаеновая кислота представлена в количестве приблизительно 1,50% (а/а).
В различных дополнительных воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 0,90 до приблизительно 7,60% (а/а). В различных воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 2,00 до приблизительно 6,50% (а/а). В некоторых воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 3,10 до приблизительно 5,40% (а/а). В различных воплощениях DPA представлена в количестве приблизительно 4,25% (а/а).
В различных дополнительных воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 2,13 до приблизительно 8,48% (а/а). В некоторых воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 3,19 до приблизительно 7,42% (а/а). В некоторых воплощениях DPA представлена в количестве от приблизительно 4,25 до приблизительно 6,37% (а/а). В различных воплощениях DPA представлена в количестве приблизительно 5,31% (а/а).
В различных воплощениях общие омега-3 жирные кислоты содержат от приблизительно 80,0 до приблизительно 95% (м/м) всех жирных кислот в фармацевтической композиции.
В дополнительных воплощениях, которые содержат DGLA, DGLA представлена в количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 0,01 до приблизительно 4,40% (а/а). В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 3,30% (а/а). В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 2,20% (а/а). В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве приблизительно 1,10% (а/а).
В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве от приблизительно 0,28 до приблизительно 0,61% (а/а). В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве от приблизительно 0,33 до приблизительно 0,56% (а/а). В некоторых воплощениях DGLA представлена в количестве приблизительно 0,44% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые содержат АА, АА в количестве, рассчитанном как процент от всех жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 0,01 до приблизительно 6,90% (а/а). В различных воплощениях АА представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 5,40% (а/а). В некоторых воплощениях АА представлена в количестве от приблизительно 0,70 до приблизительно 3,80% (а/а). В множестве воплощений АА представлена в количестве приблизительно 2,25% (а/а).
В различных воплощениях АА представлена в количестве от приблизительно 1,41 до приблизительно 4,87% (а/а). В некоторых воплощениях АА представлена в количестве от приблизительно 1,99 до приблизительно 4,30% (а/а). В множестве воплощений АА представлена в количестве от приблизительно 2,57 до приблизительно 3,72% (а/а).
В различных воплощениях композиция содержит АА в количестве не более чем приблизительно 4,5% (а/а). В некоторых воплощениях композиция содержит АА в количестве не более чем приблизительно 3,14% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат линолевую кислоту (С18:2 n-6), линолевая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,25% до приблизительно 1,30% (а/а). В некоторых воплощениях линолевая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,40% до приблизительно 1,20% (а/а). В различных воплощениях линолевая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,60% до приблизительно 0,95% (а/а). В конкретных воплощениях линолевая кислота представлена в количестве приблизительно 0,80% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат гамма-линоленовую кислоту (С 18:3 n-6), гамма-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,65% (а/а). В различных воплощениях гамма-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,51% (а/а). В некоторых воплощениях гамма-линоленовая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,40% (а/а). В некоторых воплощениях гамма-линоленовая кислота представлена в количестве приблизительно 0,27% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат эйкозадиеновую кислоту (С20:2 n-6), эйкозадиеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,30 (а/а). В различных воплощениях эйкозадиеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,24% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозадиеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,09 до приблизительно 0,20% (а/а). В некоторых воплощениях эйкозадиеновая кислота представлена в количестве приблизительно 0,14% (а/а).
В дополнительных воплощениях, которые дополнительно содержат докозапентаеновую кислоту (С22:5 n-6), докозапентаеновая кислота представлена в количестве от приблизительно 0,01 до 0,95% (а/а). В различных воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 1,05% (а/а). В некоторых воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,71% (а/а). В некоторых воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,48% (а/а). В конкретных воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве приблизительно 0,24% (а/а).
В некоторых воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 1,19% (а/а). В некоторых воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве от приблизительно 0,16 до приблизительно 0,98% (а/а). В конкретных воплощениях докозапентаеновая кислота (С22:5 n-6) представлена в количестве приблизительно 0,57% (а/а).
В некоторых воплощениях композиция содержит не более чем приблизительно 10,0% (а/а) общего количества омега-6 жирных кислот.
-1
-1
-1
Среди этих дополнительных воплощений, в типичных воплощениях композиция содержит не более чем приблизительно 3,0% (а/а) насыщенных жирных кислот, не более чем приблизительно 5,0% (а/а) моно-ненасыщенных жирных кислот, и не более чем приблизительно 0,1 млн этилкарбамата. В некоторых воплощениях композиция содержит не более чем 0,1 млн этилкарбамата. В различных воплощениях композиция содержит менее чем 0,1 млн этилкарбамата.
5.3 Стандартные лекарственные формы
В еще одном аспекте фармацевтическая или нутрицевтическая композиция обогащенных DPA омега-3 PUFA в форме свободной кислоты, описанная в разделе 5.2 выше, эффективно упакована в стандартные лекарственные формы для перорального введения.
В конкретных воплощениях лекарственная форма представляет собой капсулу. В некоторых воплощениях лекарственная форма представляет собой желатиновую капсулу. В конкретных воплощениях желатиновая капсула представляет собой твердую желатиновую капсулу. В других воплощениях лекарственная форма представляет собой мягкую желатиновую капсулу.
В различных воплощениях капсула содержит желатин типа А. В некоторых воплощениях капсула содержит желатин как типа А, так и типа В. Источники коллагена для продукции желатина типа А и типа В включают коров, свиней и рыб, но не ограничиваются ими.
В различных воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение по меньшей мере 3 месяцев при 40°С. В некоторых воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение 6 месяцев при 40°С. В некоторых воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение 12 месяцев при 40°С.
В различных воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение по меньшей мере 3 месяцев при 30°С. В некоторых воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение 6 месяцев при 30°С. В некоторых воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую достаточное количество свиного желатина типа А таким образом, что капсула распадается в течение периода времени не более чем 30 минут в очищенной воде при 37°С после хранения в течение 12 месяцев при 30°С.
В некоторых воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую смесь свиного желатина типа А и желатина типа В. В различных таких воплощениях по меньшей мере 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% даже по меньшей мере приблизительно 50% (масс./масс.) желатина представляет собой свиной желатин типа А. В выбранных воплощениях по меньшей мере приблизительно 55%, 60%, 65%, 70%, 75% (масс./масс.) желатина представляет собой свиной желатин типа А. В конкретных воплощениях по меньшей мере 80%, 85%, 90%, даже 95% (масс./масс.) желатина представляет собой свиной желатин типа А.
В различных воплощениях капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, в которой желатин состоит по существу из свиного желатина типа А.
В некоторых воплощениях капсула представляет собой уменьшенную капсулу из перекрестно-связанного желатина, такую как капсула, описанная в патенте США №7485323, включенном здесь посредством ссылки во всей его полноте.
В некоторых воплощениях капсула содержит сукцинилированный желатин.
В различных воплощениях капсулы приготовлены из веществ, которые не являются продуктами животного происхождения, такие как агар-агар, каррагенан, пектин, конжак, гуаровая камедь, пищевой крахмал, модифицированный кукурузный крахмал, картофельный крахмал и тапиока. Источники веществ, не являющиеся продуктами животного происхождения, которые могут быть использованы для изготовления капсул, полезных в пероральных стандартных лекарственных формах, описанных здесь, описаны в публикации патента США №2011/0117180, включенной здесь посредством ссылки. В некоторых воплощениях используются капсулы Vegicaps (Каталент).
В некоторых воплощениях капсульной стандартной лекарственной формы для перорального введения капсула не имеет оболочки.
В других воплощениях капсульной стандартной лекарственной формы для перорального введения капсула является покрытой.
В некоторых воплощениях покрытой капсулы композиция жирной кислоты высвобождается в зависимости от времени. В различных воплощениях по существу не происходит высвобождение композиции PUFA в течение по меньшей мере 30 минут после приема внутрь. В некоторых воплощениях по существу не происходит высвобождение композиции PUFA в течение по меньшей мере 30 минут, при тестировании высвобождения in vitro. В некоторых воплощениях не более чем приблизительно 20% композиции PUFA высвобождается в течение первых 30 минут при тестировании in vitro. В выбранных воплощениях не более чем приблизительно 25%, 30%, даже не более чем приблизительно 35% композиции PUFA высвобождаются в течение первых 30 минут при тестировании in vitro. В конкретных воплощениях свойства высвобождения in vitro оценивают в соответствии со способами, описанными в предварительной заявке на патент №61/749124, поданной 4 января 2013 года, озаглавленной "Method of release testing for omega-3 polyunsaturated fatty acids" от Bharat Mehta, описание которой включено сюда посредством ссылки во всей ее полноте.
В конкретных воплощениях значительные количества композиции PUFA высвобождаются приблизительно через 60 минут после приема внутрь. В некоторых воплощениях значительные количества композиции PUFA высвобождаются приблизительно через 60 минут при тестировании in vitro. В выбранных воплощениях по меньшей мере приблизительно 40% композиции PUFA высвобождаются приблизительно через 60 минут при тестировании in vitro. В различных воплощениях по меньшей мере приблизительно 45%, 50%, 55%, 60%, даже по меньшей мере приблизительно 65% композиции PUFA высвобождаются приблизительно через 60 минут при тестировании in vitro. В конкретных воплощениях свойства высвобождения in vitro оценивают в соответствии со способами, описанными в предварительной заявке на патент №61/749124, поданной 4 января 2013 года, озаглавленной "Method of release testing for omega-3 polyunsaturated fatty acids" от Mehta, описание которой включено сюда посредством ссылки во всей ее полноте.
В некоторых воплощениях капсулы являются покрытыми, как описано в патентах США №№5792795 и 5948818, описания которых включены здесь посредством ссылки. В различных воплощениях оболочки последняя представляет собой поли(этилакрилат-метилакрилатный) сополимер. В некоторых воплощениях оболочка представляет собой Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG), которая имеет среднюю молекулярную массу приблизительно 800000.
В других воплощениях покрытой капсулы последняя покрыта энтеросолюбильной оболочкой, которая защищает капсулу от растворения или распада в желудке, но которая растворяется при значениях рН, встречающихся в тонкой кишке.
В различных воплощениях стандартная лекарственная форма для перорального введения содержит от приблизительно 100 мг до приблизительно 2000 мг композиции PUFA. В некоторых воплощениях лекарственная форма для перорального введения содержит приблизительно 250 мг композиции PUFA. В некоторых воплощениях лекарственная форма для перорального введения содержит приблизительно 500 мг композиции PUFA. В некоторых воплощениях лекарственная форма для перорального введения содержит приблизительно 750 мг композиции PUFA. В некоторых воплощениях лекарственная форма для перорального введения содержит приблизительно 1000 мг композиции PUFA. В других воплощениях лекарственная форма для перорального введения содержит приблизительно 1500 мг композиции PUFA. В некоторых воплощениях стандартная лекарственная форма содержит нецелочисленные массовые количества композиции PUFA от 100 мг до 2000 мг.
5.4 Дозовые наборы
В другом аспекте множество вышеописанных стандартных лекарственных форм эффективно может быть упаковано вместе в дозовый набор для увеличения легкости применения и соблюдения пациентом режима и схемы лечения.
В некоторых воплощениях дозовый набор представляет собой флакон. В других воплощениях множество лекарственных форм упаковано в блистерные упаковки, множество которых возможно может быть упаковано вместе в коробку или другую упаковку. Как правило, стандартные лекарственные формы находятся во флаконе или одной или более чем одной блистерной упаковке, тогда множество стандартных лекарственных форм достаточно для введения дозы в течение 30 суток, 60 суток или 90 суток. Таким образом, в выбранных воплощениях стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, содержащую приблизительно один грамм вышеописанной фармацевтической композиции, и дозовый набор содержит 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 270 или 300 таких капсул.
В различных воплощениях множество стандартных лекарственных форм упаковано в условиях инертного газа, такого как азот или благородный газ, или упаковано в условиях вакуума.
5.5 Способы лечения
В еще одном аспекте предложены способы лечения.
5.5.1 Лечение тяжелой гипертриглицеридемии (более 500 мг/дл)
В первой серии воплощений лечения предложены способы лечения тяжелой гипертриглицеридемии.
В этих способах осуществляют пероральное введение фармацевтической композиции, описанной выше в разделе 5.2, пациенту, имеющему уровни триглицеридов в сыворотке или плазме крови до лечения не менее 500 мг/дл, в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови ниже уровней до лечения. В типичных воплощениях каждую дозу фармацевтической композиции вводят в виде одной или в виде множества стандартных лекарственных форм, описанных в разделе 5.3 выше.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 5%, 6%, 7%, 8% или по меньшей мере приблизительно на 9% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере на 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18% или 19% ниже уровней до лечения. В конкретных воплощениях композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 20% ниже уровней до лечения. В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, даже по меньшей мере приблизительно на 50% ниже уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50 мг/дл, 60 мг/дл, 70 мг/дл, 80 мг/дл, 90 мг/дл, даже по меньшей мере приблизительно на 100 мг/дл. В некоторых воплощениях композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 110 мг/дл, 120 мг/дл, 130 мг/дл, 140 мг/дл, даже по меньшей мере приблизительно 150 мг/дл. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 160 мг/дл, 170 мг/дл, 180 мг/дл, даже по меньшей мере приблизительно 190 мг/дл или 200 мг/дл.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней не-HDL-c по меньшей мере приблизительно на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, даже по меньшей мере приблизительно 10% ниже уровней до лечения.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней HDL-c по меньшей мере приблизительно на 1% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для увеличения HDL-c по меньшей мере приблизительно на 2%, 3%, 4%, даже по меньшей мере приблизительно 5%, 6%, 7%, 8%, 9% или 10% выше уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения отношения общий холестерин:HDL-c («ТС/HDL») по меньшей мере приблизительно на 1% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для уменьшения отношения ТС/HDL по меньшей мере приблизительно на 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, даже по меньшей мере приблизительно 9% или по меньшей мере приблизительно 10% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней VLDL-c по меньшей мере приблизительно на 5%, 6%, 7%, 8%, 9% или по меньшей мере приблизительно 10% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней VLDL-c по меньшей мере приблизительно на 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, даже по меньшей мере приблизительно 18%, 19% или 20% ниже уровней до лечения. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней VLDL-c по меньшей мере приблизительно на 21%, 22%, 23%, 24%, даже по меньшей мере приблизительно 25% ниже уровней до лечения.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для снижения уровней ApoCIII. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней ApoCIII по меньшей мере приблизительно на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, даже по меньшей мере приблизительно 8%, 9% или 10% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере на 100% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 200%, 250%, 300%, даже по меньшей мере приблизительно 350%, 400%, 450% или по меньшей мере приблизительно 500% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение периода времени и в количестве, эффективном для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 550%, 600%, 650%, даже по меньшей мере приблизительно 700% выше уровней до лечения.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, даже по меньшей мере приблизительно 75%, 80%, 85% или 90% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, даже по меньшей мере приблизительно 80%, 85%, 90%, 95% или 100% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 110%, 120%, даже по меньшей мере приблизительно 125% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 5% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, даже по меньшей мере приблизительно 11%, 12%, 13%, 14%, даже по меньшей мере приблизительно 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% или 21%, 22%, 23%, 24% даже по меньшей мере приблизительно 25% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 25 мкг/мл. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней АА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50 мкг/мл, 55 мкг/мл, 60 мкг/мл, 65 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно 70 мкг/мл, 75 мкг/мл, 80 мкг/мл, 85 мкг/мл, 90 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно 95 мкг/мл или 100 мкг/мл.
В некоторых воплощениях эффективное количество составляет по меньшей мере приблизительно 2 г в сутки. В различных воплощениях эффективное количество составляет по меньшей мере приблизительно 3 г в сутки. В конкретных воплощениях эффективное количество составляет по меньшей мере приблизительно 4 г в сутки. В типичных воплощениях эффективное количество составляет приблизительно 2 г в сутки. В некоторых воплощениях эффективное количество составляет приблизительно 4 г в сутки.
В типичных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение по меньшей мере 30 суток. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение по меньшей мере 60 суток. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение по меньшей мере 90 суток, 120 суток, 180 суток, 240 суток или по меньшей мере 360 суток. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят неопределенный срок.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят ежесуточно. В других воплощениях фармацевтическую композицию вводят через сутки.
В конкретных воплощениях ежесуточную дозу фармацевтической композиции вводят в виде разовой ежесуточной дозы. В других воплощениях фармацевтическую композицию вводят в виде дробных доз, причем ежесуточную дозу разделяют на два введения, три введения или даже четыре введения в течение суток.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят с пищей. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят с пищей, имеющей низкое содержание жира. В других воплощениях фармацевтическую композицию вводят без пищи. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят натощак.
В способах в некоторых воплощениях дополнительно осуществляют введение статина. В конкретных воплощениях статин выбран из группы, состоящей из: правастатина, ловастатина, симвастатина, аторвастатина, флувастатина, розувастатина, тенивастатина и питавастатина.
5.5.2 Лечение гипертриглицеридемии (200-500 мг/дл)
В еще одной серии воплощений лечения предложены способы лечения пациентов, до лечения страдающих от уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови от приблизительно 200 мг/дл до приблизительно 500 мг/дл. В некоторых воплощениях пациенты уже получают терапию статинами; у этих пациентов уровни триглицеридов в сыворотке или плазме крови до лечения являются такими, как измеренные во время статинового лечения до введения фармацевтических композиций, описанных в разделе 5.2 выше.
В способе перорально вводят эффективное количество статина и дополнительно перорально вводят фармацевтическую композицию, описанную здесь в разделе 5.2, в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови ниже уровней, измеренных до лечения описанной здесь фармацевтической композицией. Фармацевтическая композиция, описанная в разделе 5.2, и статин не обязательно должны вводиться одновременно по одной и той же схеме введения доз или даже в одни и те же сутки. Достаточно, чтобы они вводились в достаточной временной близости, и чтобы пациент получал терапевтическую пользу одновременно от обоих лекарств.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию, описанную в разделе 5.2, вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 5% ниже уровней до лечения. В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней триглицеридов в сыворотке или плазме крови по меньшей мере приблизительно на 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, даже по меньшей мере приблизительно на 16%, 17%, 18%, 19%, или по меньшей мере приблизительно на 20% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию, описанную здесь в разделе 5.2, вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для уменьшения He-HDL-холестерина по меньшей мере приблизительно на 1%, по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 3%, 4%, 5%, даже по меньшей мере приблизительно на 7%, 8%, 9%, или по меньшей мере приблизительно на 10% ниже уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию, описанную в разделе 5.2 здесь, вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для повышения уровней HDL-c по меньшей мере на приблизительно 1%, 2%, 3% или больше чем 3% выше уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере на 100% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 200%, 250%, 300%, даже по меньшей мере приблизительно на 350%, 400%, 450% или по меньшей мере приблизительно на 500% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение периода времени и в количестве, эффективном для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 550%, 600%, 650%, даже по меньшей мере приблизительно на 700% выше уровней до лечения.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, даже по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85% или 90% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, даже по меньшей мере приблизительно на 80%, 85%, 90%, 95%, или 100% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 110%, 120%, даже по меньшей мере приблизительно на 125% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 5% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, даже по меньшей мере приблизительно на 11%, 12%, 13%, 14%, даже по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% или 21%, 22%, 23%, 24%, даже по меньшей мере приблизительно на 25% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 25 мкг/мл. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней АА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50 мкг/мл, 55 мкг/мл, 60 мкг/мл, 65 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно на 70 мкг/мл, 75 мкг/мл, 80 мкг/мл, 85 мкг/мл, 90 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно на 95 мкг/мл или 100 мкг/мл.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию, описанную здесь в разделе 5.2, вводят в стандартной лекарственной форме, описанной в разделе 5.3 выше.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 1 г в сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 2 г/сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 3 г/сутки. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 4 г/сутки. В типичных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве приблизительно 2 г/сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве приблизительно 3 г/сутки или приблизительно 4 г в сутки.
5.5.3 Лечение для увеличения отношений ЕРА:АА в плазме крови
Также предложены способы увеличения отношения ЕРА:АА, не принимая во внимание уровни триглицеридов в плазме крови пациента до лечения. В этих способах вводят фармацевтическую композицию, описанную здесь в разделе 5.2, пациенту, имеющему отношение ЕРА:АА ниже приблизительно 0,25, в количестве и в течение периода времени, достаточного для увеличения отношения ЕРА:АА у пациента до по меньшей мере приблизительно 0,25. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для увеличения отношения ЕРА:АА у пациента до по меньшей мере приблизительно 0,3, по меньшей мере приблизительно 0,35, по меньшей мере приблизительно 0,40, по меньшей мере приблизительно 0,45, по меньшей мере приблизительно 0,50, даже до уровня по меньшей мере приблизительно 0,55, 0,60, 0,61, 0,62, 0,63, 0,64 или 0,65.
В некоторых воплощениях в способе вводят фармацевтическую композицию в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере на 100% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 200%, 250%, 300%, даже по меньшей мере приблизительно на 350%, 400%, 450% или по меньшей мере приблизительно на 500% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в течение периода времени и в количестве, эффективном для повышения уровней ЕРА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 550%, 600%, 650%, даже по меньшей мере приблизительно на 700% выше уровней до лечения.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DHA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, даже по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85% или 90% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50% выше уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, даже по меньшей мере приблизительно на 80%, 85%, 90%, 95% или 100% выше уровней до лечения. В выбранных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для повышения уровней DPA в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 110%, 120%, даже по меньшей мере приблизительно 125% выше уровней до лечения.
В сериях воплощений фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 5% ниже уровней до лечения. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, даже по меньшей мере приблизительно на 11%, 12%, 13%, 14%, даже по меньшей мере приблизительно на 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% или 21%, 22%, 23%, 24%, даже по меньшей мере приблизительно на 25% ниже уровней до лечения.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, эффективного для уменьшения концентрации арахидоновой кислоты в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 25 мкг/мл. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней АА в плазме крови по меньшей мере приблизительно на 50 мкг/мл, 55 мкг/мл, 60 мкг/мл, 65 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно на 70 мкг/мл, 75 мкг/мл, 80 мкг/мл, 85 мкг/мл, 90 мкг/мл, даже по меньшей мере приблизительно на 95 мкг/мл или 100 мкг/мл.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию, описанную здесь в разделе 5.2, вводят в стандартной лекарственной форме, описанной в разделе 5.3 выше.
В различных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 1 г в сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 2 г/сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 3 г/сутки. В конкретных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве по меньшей мере приблизительно 4 г/сутки. В типичных воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве приблизительно 2 г/сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве приблизительно 3 г/сутки или приблизительно 4 г в сутки.
5.5.4 Лечение для снижения уровней ApoCIII в сыворотке или плазме крови
Также предложены способы повышения уровней ApoCIII в сыворотке или плазме крови пациента, не принимая во внимание уровни триглицеридов в плазме крови пациента до лечения. Способы включают введение фармацевтической композиции, описанной здесь в разделе 5.2, пациенту, нуждающемуся в снижении уровней ApoCIII, в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней ApoCIII в сыворотке или плазме крови пациента. В типичных воплощениях пациент страдает от риска сердечно-сосудистого заболевания.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве и в течение периода времени, достаточного для снижения уровней ApoCIII по меньшей мере приблизительно на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, даже по меньшей мере приблизительно на 8%, 9% или 10% ниже уровней до лечения.
5.5.5 Другие способы лечения
В другом аспекте описанные здесь фармацевтические композиции применяют для лечения других расстройств, включая одно или более чем одно из неалкогольного стеатогепатита (NASH), гиперлипопротеинемии, включая гиперлипопротеинемию III типа, и метаболического синдрома.
В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию используют для снижения устойчивости к ингибиторам агрегации тромбоцитов, таким как Plavix, включая применение в способах, описанных в заявке на патент США №13/620312, описание которой включено сюда посредством ссылки во всей ее полноте.
5.6 Способ
В еще одном аспекте представлен улучшенный способ переработки рыбьего жира в фармацевтические композиции, содержащие PUFA в форме свободной кислоты, и, в частности, переработки рыбьего жира в фармацевтические композиции, описанные здесь в разделе 5.2.
5.6.1 Приготовление промежуточного сырья
Промежуточное сырье готовят путем трансэтерификации туловищного жира, полученного из рыб, например рыб семейств Engraulidae, Clupeidae и Scombridae, при помощи стандартных способов, хорошо известных в области техники, где параметры процесса скорректированы таким образом, чтобы получить композицию, удовлетворяющую допустимым отклонениям, описанным в разделе 5.6.2 непосредственно ниже.
Подходящие стадии стандартного способа описаны, например, в патентах США №№5656667; 5719302; 5945318; 6204401; 6518049; 6528669; 7491522; 7550613; 7678930; 7718698; 7732488 и в патентах США №№5472705; 5750572; 5776978; 5869714; 7541480; 7553870; и 7619002, включенных здесь посредством ссылки.
В примере способа неочищенное триглицеридное масло экстрагируют из рыб, таких как анчоус, сардина, скумбрия и менхаден. Неочищенное триглицеридное масло затем подвергают щелочной рафинации, например, с использованием гидроксида натрия, и дезодорируют, очищают и сушат. PUFA затем превращают в сложные эфиры, такие как метиловые сложные эфиры или этиловые сложные эфиры путем трансэтерификации. Трансэтерификация может быть осуществлена, например, путем этанолиза в присутствии этанола и этилата натрия с получением этиловых сложных эфиров. За трансэтерификацией следует по меньшей мере один раунд, как правило множество раундов, перегонки.
В еще одном примере способа триглицеридное масло подвергают щелочной рафинации и дезодорируют, трансэтерифицируют этанолом, например, путем этанолиза в присутствии этанола и этилата натрия, и затем подвергают одному или более чем одному раунду фракционной перегонки.
ФИГ. 2 представляет блок-схему примера способа получения промежуточного сырья. В этом способе рыб варят в воде, и получающуюся в результате смесь жидких и твердых веществ фильтруют, и жидкую часть центрифугируют для удаления водной фазы. Масляную фракцию, оставшуюся после стадии обработки, обрабатывают щелочью для нейтрализации каких-либо присутствующих жирных кислот, а затем промывают водой. После этого подвергнутый щелочной рафинации рыбий жир в форме триглицеридов дезодорируют, и уменьшают уровень загрязняющих агентов из окружающей среды, например, путем перегонки. Высушенный дезодорированный рыбий жир превращают в форму сложного этилового эфира, применяя реакцию с этанолом, катализируемую применением этилата натрия. После завершения реакции избыток этанола удаляют путем перегонки, и сложные этиловые эфиры промывают раствором лимонной кислоты и затем водой. В этом примере способа сложные этиловые эфиры перегоняют для достижения требующейся концентрации этилового эфира ЕРА (ЕРА-EE) и этилового эфира DHA (DHA-EE) для применения в качестве промежуточного сырья. В некоторых воплощениях осуществляют множество раундов перегонки. Точные используемые условия корректируют в зависимости от состава вводимой композиции этиловых эфиров для достижения требующейся концентрации ЕРА-EE и DHA-EE для промежуточного сырья, как подробно описано в разделе 5.6.2 непосредственно ниже.
Альтернативы этим стадиям способа хорошо известны и могут использоваться при необходимости до тех пор, пока получающаяся в результате композиция промежуточного сырья подпадает под пределы отклонений, определенные в разделе 5.6.2 непосредственно ниже.
5.6.2 Композиция промежуточного сырья
5.6.2.1 Типичные воплощения
Композиции промежуточного сырья содержат множество видов омега-3 PUFA, каждый из которых представлен по существу в форме сложного этилового эфира.
Композиция промежуточного сырья содержит ЕРА, DHA и DPA, каждую по существу в форме сложного этилового эфира.
В различных воплощениях композиция промежуточного сырья содержит этиловый эфир ЕРА (ЕРА-EE), DHA-EE и DPA-EE, в количестве, рассчитанном как процент от всех этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, оказывающемся в пределах диапазона от -3 SD до +3 SD относительно соответствующих средних значений, перечисленных в Таблице 9. В некоторых воплощениях каждый из ЕРА-EE, DHA-EE и DPA-EE оказывается в пределах диапазона от -2 SD до +2 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый из ЕРА-ЕЕ, DHA-EE и DPA-EE оказывается в пределах диапазона от -1 SD до +1 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях композиция промежуточного сырья содержит ЕРА-ЕЕ, DHA-EE и DPA-EE в пределах диапазона, установленного соответствующими минимальными и максимальными процентами от площади среди партий, описанных в Таблице 8.
В некоторых воплощениях композиция дополнительно содержит одну или более чем одну омега-3 полиненасыщенную жирную кислоту, каждая из которых по существу находится в форме сложного этилового эфира, выбранную из группы, состоящей из: α-линоленовой кислоты (С18:3 n-3), мороктиновой кислоты (С18:4 n-3), эйкозатриеновая кислота (С20:3 n-3), эйкозатетраеновой кислоты (С20:4 n-3) и генэйкозапентаеновой кислоты (С21:5 n-3). В различных воплощениях один или более чем один дополнительный вид омега-3-ЕЕ, если присутствует, представлен в количестве, рассчитанном как процент от всех сложных этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, оказывающемся в пределах диапазона от -3 SD до +3 SD относительно соответствующих средних значений, перечисленных в Таблице 9. В некоторых воплощениях каждый вид оказывается в пределах диапазона от -2 SD до +2 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид оказывается в пределах диапазона от -1 SD до +1 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях один или более чем один дополнительный вид омега-3-ЕЕ, если присутствует, представлен в количестве, рассчитанном как процент от всех сложных этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, оказывающемся в пределах диапазона, установленного соответствующими минимальными и максимальными процентами площади среди партий, описанных в Таблице 8.
В некоторых воплощениях композиция промежуточного сырья также содержит по меньшей мере один вид омега-6 PUFA. В различных воплощениях композиция содержит сложные этиловые эфиры одной или более чем одной омега-6 полиненасыщенной жирной кислоты, выбранной из группы, состоящей из: линолевой кислоты (С18:2 n-6), гамма-линоленовой кислоты (С 18:3 n-6), эйкозадиеновой кислоты (С20:3 n-6), дигомо-гамма-линоленовой кислоты («DGLA») (С20:3 n-6), арахидоновой кислоты (С20:4 n-6) («АА») и докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6). Каждый вид омега-6 PUFA представлен по существу в форме сложного этилового эфира.
В различных воплощениях один или более чем один вид омега-6-ΕΕ, если присутствует, представлен в количестве, рассчитанном как процент от всех сложных этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, оказывающемся в пределах диапазона от -3 SD до +3 SD относительно соответствующих средних значений, перечисленных в Таблице 9. В некоторых воплощениях каждый вид оказывается в пределах от -2 SD до +2 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях каждый вид оказывается в пределах от -1 SD до +1 SD относительно соответствующего приведенного среднего значения. В некоторых воплощениях один или более чем один дополнительный вид омега-3-ЕЕ, если присутствует, представлен в количестве, рассчитанном как процент от всех сложных этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, оказывающемся в пределах диапазона, установленного соответствующими минимальными и максимальными процентами площади среди партий, описанных в Таблице 8.
5.6.2.2 Дополнительные воплощения
В различных дополнительных воплощениях композиция промежуточного сырья содержит этиловый эфир ЕРА (ЕРА-EE) в количестве, рассчитанном как процент от всех этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 45,0 до приблизительно 53,0% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА-EE представлен в количестве от приблизительно 48,40 до приблизительно 50,04% (а/а). В различных воплощениях ЕРА-ЕЕ представлен в количестве от приблизительно 48,67 до приблизительно 49,77% (а/а). В некоторых воплощениях композиция промежуточного сырья содержит ЕРА-ЕЕ в количестве от приблизительно 48,95 до приблизительно 49,49% (а/а). В некоторых воплощениях композиция промежуточного сырья содержит ЕРА-ЕЕ в количестве приблизительно 49,22% (а/а).
В различных воплощениях ЕРА-ЕЕ представлен в количестве от приблизительно 44,20% (а/а) до приблизительно 46,92% (а/а). В некоторых воплощениях ЕРА-ЕЕ представлен в количестве приблизительно 45,56% (а/а).
В различных воплощениях ЕРА-ЕЕ представлен в количестве от приблизительно 425 до 460 мг/г.
В различных дополнительных воплощениях композиция промежуточного сырья содержит этиловый эфир DHA (DHA-EE) в количестве, рассчитанном как процент от всех этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 13,0 до приблизительно 20,0% (а/а). В различных воплощениях DHA-EE представлен в количестве от приблизительно 16,43 до приблизительно 18,28% (а/а). В различных воплощениях сырье содержит DHA-EE в количестве от приблизительно 16,74 до приблизительно 17,98% (а/а). В некоторых воплощениях композиция промежуточного сырья содержит DHA-EE в количестве от приблизительно 17,05% до приблизительно 17,67% (а/а). В некоторых воплощениях промежуточное сырье содержит DHA-EE в количестве приблизительно 17,4% (а/а).
В некоторых воплощениях промежуточное сырье содержит DHA в количестве от приблизительно 14,77% (а/а) до приблизительно 17,87% (а/а). В некоторых воплощениях промежуточное сырье содержит DHA в количестве приблизительно 16,32% (а/а).
В некоторых воплощениях промежуточное сырье содержит DHA в количестве от 150 до 170 мг/г.
В различных дополнительных воплощениях DPA-EE представлен в количестве от приблизительно 4,10 до приблизительно 6,74% (а/а). В некоторых воплощениях DPA-EE представлен в количестве от приблизительно 4,54 до приблизительно 6,30% (а/а). В различных воплощениях DPA-EE представлен в количестве от приблизительно 4,98 до приблизительно 5,86% (а/а). В некоторых воплощениях DPA-EE представлен в количестве приблизительно 5,42% (а/а).
В различных воплощениях DPA-EE представлен в количестве от приблизительно 0,41 до приблизительно 0,70% (а/а). В некоторых воплощениях DPA-EE представлен в количестве приблизительно 0,56% (а/а).
В различных воплощениях композиция промежуточного сырья дополнительно содержит этиловый эфир арахидоновой кислоты (С20:4 n-6). В различных воплощениях АА-ЕЕ представлен в количестве от приблизительно 1,72 до приблизительно 2,81% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир арахидоновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,9 до приблизительно 2,63% (а/а). В различных воплощениях этиловый эфир арахидоновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 2,09 до приблизительно 2,45% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир арахидоновой кислоты представлен в количестве приблизительно 2,27% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир арахидоновой кислоты представлен в количестве не более чем 3,0% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир арахидоновой кислоты представлен в количестве не более чем 4,0% (а/а).
В тех воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир α-линоленовой кислоты, последний в некоторых воплощениях представлен в количестве от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,45% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир α-линоленовой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,4% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир α-линоленовой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,24% (а/а) до 0,62% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир α-линоленовой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,43% (а/а).
В тех некоторых воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир мороктиновой кислоты (С18:4 n-3), последний представлен в количестве, рассчитанном как процент от всех этиловых эфиров жирных кислот в композиции по площади на газовой хроматограмме, от приблизительно 0,60 до приблизительно 2,03% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир мороктиновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,84 до приблизительно 1,80% (а/а). В различных воплощениях этиловый эфир мороктиновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,10 до приблизительно 1,60% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир мороктиновой кислоты представлен в количестве приблизительно 1,32% (а/а).
В различных воплощениях этиловый эфир мороктиновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,64% до приблизительно 1,93% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир мороктиновой кислоты представлен в количестве приблизительно 1,28% (а/а).
В многообразии тех воплощений промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир эйкозатриеновой кислоты (С20:3 n-3), последний представлен в количестве меньше чем приблизительно 0,1% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозатриеновой кислоты представлен в количестве менее чем приблизительно 0,4% (а/а).
В воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты (С20:4 n-3), последний в некоторых воплощениях представлен в количестве от приблизительно 1,57 до приблизительно 2,10% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,66 до приблизительно 2,02% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,75 до приблизительно 1,93% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 1,84% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,42 до приблизительно 2,49% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозатетраеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 1,95% (а/а).
В различных воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты (С21:5 n-3), последний представлен в количестве от приблизительно 2,25 до приблизительно 2,36% (а/а). В различных воплощениях этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 2,27 до приблизительно 2,34% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 2,29 до приблизительно 2,32% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 2,31% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 1,42 до приблизительно 2,76% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир генэйкозапентаеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 2,09% (а/а).
В сериях воплощений промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир омега-6 PUFA, линолевой кислоты (С18:2 n-6), этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,53 до приблизительно 0,56% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,53 до приблизительно 0,55% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,54 до приблизительно 0,55% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,54% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,38 до приблизительно 0,83% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир линолевой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,60% (а/а).
В воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир гамма-линоленовой кислоты (С18:3 n-6), последний представлен в примерах воплощений в количестве менее чем 0,1% (а/а). В воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир гамма-линоленовой кислоты (С18:3 n-6), последний представлен в количестве менее чем 0,4% (а/а).
В воплощениях промежуточного сырья, которые дополнительно содержат этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты (С20:2 n-6), последний представлен в количестве от приблизительно 0,00 до приблизительно 0,63% (а/а) в различных примерах воплощений. В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,00 до приблизительно 0,45% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,00 до приблизительно 0,27% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,09% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,00 до приблизительно 0,54% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир эйкозадиеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,25% (а/а).
В множестве воплощений промежуточного сырья, которое дополнительно содержит этиловый эфир дигомо-гамма-линоленовой кислоты (С20:3 n-6), DGLA-ЕЕ представлен в количестве от приблизительно 0,35 до приблизительно 0,68% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир дигомо-гамма-линоленовой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,41 до приблизительно 0,63% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир дигомо-гамма-линоленовой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,46 до приблизительно 0,57% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир дигомо-гамма-линоленовой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,26 до приблизительно 0,55% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир дигомо-гамма-линоленовой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,40% (а/а).
Некоторые дополнительные воплощения промежуточного сырья дополнительно содержат докозапентаеновую кислоту (С22:5 n-6) в форме этилового эфира. В множестве этих воплощений этиловый эфир докозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,54 до приблизительно 0,80% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир докозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,59% до приблизительно 0,76% (а/а). В различных воплощениях этиловый эфир докозапентаеновой кислоты представлен в количестве от приблизительно 0,63% до приблизительно 0,72% (а/а). В конкретных воплощениях этиловый эфир докозапентаеновой кислоты представлен в количестве приблизительно 0,67% (а/а).
В некоторых воплощениях этиловый эфир докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) представлен в количестве от приблизительно 1,45% до приблизительно 7,21% (а/а). В некоторых воплощениях этиловый эфир докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) представлен в количестве приблизительно 4,33% (а/а).
5.6.3 Комплексообразование с мочевиной
Промежуточное трансэтерифицированное сырье, имеющее определенный выше состав, подвергают комплексообразованию с включением мочевины. В типичных воплощениях количество мочевины, используемой для комплексообразования, оказывается в пределах алгоритмически определенного диапазона.
Таким образом, в еще одном аспекте представлен улучшенный способ переработки рыбьего жира в фармацевтические композиции, содержащие PUFA в форме свободной кислоты, в частности переработки рыбьего жира в описанные здесь фармацевтические композиции. Улучшение заключается в том, что промежуточное сырье трансэтерифицированного рыбьего жира, содержащего этиловые эфиры различных видов омега-3 и омега-6 PUFA в определенных процентных диапазонах, подвергают стадии комплексообразования с включением мочевины, где количество мочевины, используемой для комплексообразования, находится в пределах диапазона, рассчитанного в соответствии с (1) формулой I(a) или (2) в соответствии с формулой I(б), или (3) в соответствии с формулой I(a) и формулой I(б), где количество мочевины установлено на величину, которая находится в пределах установленного диапазона, и включает результаты для формул I(a) и I(б), такие как их среднюю величину, где формулы являются следующими:
обогащение-DHA
обогащение-ЕРА
обогащение-DHA
обогащение-ЕРА
Заданные величины для DHA и ЕРА выбраны на основе желаемой конечной композиции. Факторы обогащения, F и F, могут быть одинаковыми или разными. В типичном воплощении F и F являются одинаковыми с величиной приблизительно 100/0,34 или приблизительно 300.
Комплексообразование осуществляют в соответствии со стандартными способами, используя алгоритмически определенное количество мочевины. Смотри, например, патенты США №№4377526; 5106542; 5243046; 5679809; 5945318; 6528669; 6664405; 7541480; 7709668 и 8003813, описания которых включены здесь посредством ссылки.
В примере воплощения промежуточное сырье смешивают с раствором мочевины в этаноле. Комплексообразование осуществляют при 60-80°С, смесь затем охлаждают и затем фильтруют или центрифугируют для удаления комплексов мочевины. Этанол удаляют путем перегонки, и масло несколько раз промывают водой.
5.6.4 Завершающая обработка после образования комплексов
После удаления комплексов мочевины, не подвергшиеся комплексообразованию эфиры PUFA гидролизуют до свободных жирных кислот стандартными способами. Композицию дополнительно очищают перегонкой до или после гидролиза, и дополнительно подвергают завершающей обработке с использованием одного или более чем одного из следующих стандартных способов: обработка активированным углем, хроматографическая очистка, удаление растворителя, осветление, например при помощи отбеливающей глины, и сверхкритическая экстракция. Добавляют антиоксиданты, такие как ВНА (бутилоксианизол) или α-токоферол.
6. ПРИМЕРЫ
6.1 Пример 1: Комплексообразование с мочевиной требуется для надежного получения композиций омега-3 PUFA в форме свободной кислоты, которые удовлетворяют техническим требованиям
Комплексообразование с включением мочевины (образование клатрата) представляет собой стандартную стадию, часто применяемую в переработке рыбьего жира для удаления насыщенных и моно-ненасыщенных длинноцепочечных жирных кислот, таким образом, обогащая получающуюся в результате композицию желаемыми длинноцепочечными омега-3 полиненасыщенными жирными кислотами. Тем не менее, несмотря на длительное использование (смотри, например, патент США №4377526) и исследования, разработанные для того, чтобы охарактеризовать воздействия различных физико-химических параметров на способ (смотри, например Hayes et al., "Triangular Phase Diagrams То Predict The Fractionation Of Free Fatty Acid Mixtures Via Urea Complex Formation," Separation Sci. Technol. 36(1): 45-58 (2001) и Hayes, "Purification of Free Fatty Acids via Urea Inclusion Compounds," в Handbook of Functional Lipids (Taylor & Francis Group) (2005)), степень, с которой образование комплекса с мочевиной обогащает отдельные виды длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот, включая виды омега-3 PUFA и омега-6 PUFA, остается непредсказуемой. Эта остаточная непредсказуемость в способе образования комплекса с мочевиной и возможность при образовании комплекса с мочевиной образовывать недопустимые уровни этилкарбамата, которые могут потребовать дополнительную обработку, исходно свидетельствовали в пользу исключения комплексообразования с мочевиной из способа переработки в промышленном масштабе, используемого для получения композиций омега-3 PUFA в форме свободной кислоты, фармацевтической степени чистоты, удовлетворяющих техническим требованиям, изложенным в таблице 1 ниже.
Тем не менее, ранние попытки разработать способ без мочевины продемонстрировали, что такие способы могут не приводить к воспроизводимому получению фармацевтических композиций в коммерческом масштабе, которые удовлетворяли бы требуемым целевым техническим требованиям к композиции. Таблица 2 ниже представляет данные для двух таких партий. Значения, которые попадают за пределы желаемого диапазона технических требований, подчеркнуты.
Соответственно, искали способ с использованием комплексообразования с мочевиной, и обнаружили, что строгий контроль видов PUFA в композиции, представленных в промежуточном сырье сложного этилового эфира, в сочетании с использованием количеств мочевины в пределах алгоритмически установленных диапазонов может дать возможность для надежного приготовления фармацевтических композиций, удовлетворяющих техническим требованиям, изложенным выше в таблице 1, не выходя за пределы приемлемых ограничений этилкарбамата.
Требования к композиции промежуточного сырья сложного этилового эфира представлены в разделе 5.6.2 и Примерах 2 и 4. Смотри таблицы 3-6, 8-9.
Обнаружено, что оптимальное количество мочевины, требующееся для использования, должно быть определено при помощи (1) формулы I(a), или (2) в соответствии с формулой I(б), или (3) в соответствии с формулой I(a) и формулой I(б), где количество мочевины установлено на величину, которая находится в пределах установленного диапазона, и включает результаты для формул I(a) и I(б), такие как средняя величина двух результатов, где формулы являются следующими:
обогащение-DHA
обогащение-ЕРА
Факторы обогащения, F и F, могут быть одинаковыми или разными. Обнаружено, что типичная величина при использовании партий промежуточного сырья, описанных в Примерах 2 и 4, составляет приблизительно 100/0,34 (т.е. приблизительно 300) для обеих партий.
6.2 Пример 2: Анализ композиции четырех примеров производственных партий, полученных с использованием контролируемого комплексообразования с мочевиной, подтверждает то, что технические требования удовлетворены
Готовили четыре примера производственной партии полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты. Жесткий контроль над композицией применяли в отношении промежуточного сырья сложного этилового эфира с использованием только партий, в которых указанные виды полиненасыщенных жирных кислот попадают в определенные пределы. Сначала эмпирически в лабораторных условиях определяли количество мочевины, используемое для комплексообразования в производственном масштабе, с использованием небольших тестируемых партий промежуточного сырья сложного этилового эфира и изменением концентрации мочевины, таким образом, изменяя отношение масло:мочевина:этанол. Подтвердили, что оптимальная концентрация, определенная при пробных расчетах, входила в диапазон, необходимый для алгоритма, описанного в Примере 1, и использовали эту концентрацию для промышленного изготовления.
Композицию промежуточного трансэтерифицированного сырья и конечную фармацевтическую композицию («действующее фармацевтическое начало» или «API») определяли при помощи газовой хроматографии. Результаты обобщены в таблицах 3-6 ниже.
Все четыре производственные партии API удовлетворяли требованиям к композиции, изложенным выше в таблице 1.
6.3 Пример 3: Контролируемое образование комплексов с мочевиной дифференцированно обогащает выбранные виды омега-3 и омега-6
Как ожидалось, стадия комплексообразования с мочевиной по существу уменьшает процентную долю насыщенных жирных кислот и моно-ненасыщенных жирных кислот в получающейся в результате композиции, таким образом, по существу обогащая ее полиненасыщенными жирными кислотами. Смотри таблицы 3-6, и ФИГ. 3А. Тем не менее, неожиданно, что проведение комплексообразования с мочевиной с использованием количеств мочевины, попадающих в пределы алгоритмически определенного диапазона, оказывает различное действие на обогащение отдельными видами омега-3 полиненасыщенных жирных кислот и омега-6 полиненасыщенных жирных кислот.
В таблице 7 представлена количественная оценка обогащения различными видами полиненасыщенных жирных кислот, сравнивающая преобладание промежуточного сырья сложного этилового эфира над свободной кислотой API, усредненное для четырех производственных партий, описанных в таблицах 3-6. Смотри также ФИГ. 3Б.
Хотя омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты, как класс, по существу обогащены, эффект комплексообразования с мочевиной на омега-6 PUFA, как класс, отличалось от предполагаемого. В среднем, доля видов омега-6 DGLA и докозапентаеновой кислоты уменьшалась; гамма-линоленовой кислоты и арахидоновой кислоты увеличивалась; и обнаружен незначительный эффект в отношении линоленовой кислоты и эйкозадиеновой кислоты или отсутствие такого эффекта.
Авторы изобретения в частности отметили, что виды омега-3 докозапентаеновой кислоты, DPA (С22:5 n-3), обогащаются, тогда как доля соответствующих видов омега-6, имеющих идентичную длину цепи и степень ненасыщенности, докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) уменьшается. Различный эффект образования комплекса с мочевиной на обогащение этими двумя изомерами в сочетании с различием их относительных концентраций в промежуточном сырье сложного этилового эфира приводит в результате к различию логарифмического порядка их концентраций в конечном API в виде свободной кислоты. Усреднение для четырех партий API, представленных в таблицах 3-6, продемонстрировало, что виды омега-3 докозапентаеновой кислоты, DPA, представлены в конечном API в средней концентрации 5,85% (а/а), тогда как виды омега-6 докозапентаеновой кислоты представлены в средней концентрации 0,46% (а/а).
При средней концентрации 5,85% (а/а) DPA представляет собой третий по преобладанию вид полиненасыщенной жирной кислоты в API, который превосходит только ЕРА и DHA. При таком уровне концентрация DPA также в 10 раз больше чем концентрация, о которой сообщали для более ранней фармацевтической композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, названной Purepa, в которой DPA, как сообщалось, представлена на уровне 0,5%. Смотри Belluzzi et al., Dig. Dis. Sci. 39(12): 2589-2594 (1994).
6.4 Пример 4: Анализ композиции десяти (10) примеров производственных партий API демонстрирует воспроизводимо повышенные уровни DPA
Дополнительные производственные партии готовили в соответствии со способами, описанными в Примере 2.
Данные для десяти (10) партий API, включая четыре партии, описанные в таблицах 3-6 в Примере 2, приготовленные из восьми (8) отличающихся партий промежуточного трансэтерифицированного (сложный этиловый эфир) сырья, представлены в нижеприведенных таблицах. Состав каждой из партий промежуточного сырья показан в таблице 8. В таблице 9 представлено среднее значение («AVG»), стандартное отклонение («STDEV», «SD») и дельта («Δ», абсолютная разница между +1 SD и -1 SD, +2 SD и -2 SD, и т.д.) для 8 партий промежуточного сырья для каждого из перечисленных (сложный этиловый эфир) видов. Композиция каждой из десяти партий конечного API представлена в таблице 10 ниже; Таблица 11 представляет среднее значение, стандартное отклонение и величину дельта для каждого из перечисленных (свободная кислота) видов в 10 партиях API.
Как очевидно из таблицы 11, различие логарифмического порядка в относительной концентрации в API видов омега-3 докозапентаеновой кислоты, DPA (С22:5 n-3) и изомера омега-6 докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6) поддерживается на уровне 5,31% (а/а) для DPA (С22:5 n-3) по сравнению с 0,57% (а/а) для докозапентаеновой кислоты (С22:5 n-6), что представляет собой 10-кратное увеличение концентрации DPA по сравнению с раннее известной композицией свободной кислоты омега-3 Purepa, о которой сообщалось в Belluzzi et al. (5,31 по сравнению с 0,5%).
Пример 5: Анализ композиции 21 примера производственных партий демонстрирует воспроизводимое увеличение уровней DPA
Высокая абсолютная и относительная концентрация видов омега-3 докозапентаеновой кислоты DPA обнаружена для 21 партии API, приготовленной с использованием комплексообразования с мочевиной, как обобщено в таблицах 12 и 13 ниже.
6.6. Пример 6: Влияния DPA на экспрессию генов в клетках печени прогнозируют большую клиническую эффективность обогащенных DPA композиций
DPA представляет собой третий наиболее распространенный вид полиненасыщенной жирной кислоты в фармацевтических композициях, проанализированных в вышеприведенных примерах, и представлен в концентрации, которая в 10 раз превосходит концентрацию в Purepa, представляющей собой более раннюю фармацевтическую композицию омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты. Хотя DPA представляет собой промежуточное соединение в пути биосинтеза от ЕРА к DHA (смотри ФИГ. 1), как ни странно, мало что известно о специфических биологических эффектах DPA. Смотри Kaur et al., "Docosapentaenoic acid (22:5n-3): a review of its biological effects" Prog. Lipid Res. 50: 28-34 (2011). Для выявления потенциального вклада DPA в клиническую эффективность фармацевтической композиции проводили эксперименты по определению профилей экспрессии генов.
6.6.1. Способы
3
Культура клеток и обработка. Клетки гепатокарциномы Hep G2 выращивали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) (Sigma-Aldrich), не содержащей сыворотки, с 4,5 г/л глюкозы, l-глутамина, NaHCO и пиридоксина HCl, дополненной 1% (об./об.) заменимых аминокислот, 1% Na-пируватом, 1% пенициллином/стрептомицином и 10% (об./об.) не содержащим жирную кислоту бычьим сывороточным альбумином (BSA), все из которых приобретены в Gibco BRL.
2
Культуры клеток переносили еженедельно путем трипсинизации и инкубировали при 37°С в увлажненном инкубаторе, содержащем 5% СО. После 5 недель выращивания клеточной культуры добавляли в лунки в трех параллелях (250000 клеток/лунку) в конечных эффективных концентрациях, изложенных в таблице 14 ниже, ЕРА (эйкозапентаеновую кислоту, партия №0439708-2, Cayman Chemicals), DPA (докозапентаеновую кислоту, партия 163481-26, Cayman Chemicals) и DHA (докозагексаеновую кислоту, партия 0437083-5, Cayman Chemicals), разбавленные в DMEM без сыворотки непосредственно перед использованием,
Отношения ЕРА (в концентрации 100 мкМ), DHA (в концентрации 40 мкМ) и DPA (в концентрации 11 мкМ) выбирали для приближения к отношениям ЕРА, DHA и DPA в фармацевтических композициях (API), описанных в разделе 5.2 и Примере 5 (смотри таблицы 12 и 13). Абсолютные концентрации выбирали для наилучшего приближения диапазонов плазмы крови, обнаруженных у групп пациентов, получающих лечению 2 г и 4 г в исследовании EVOLVE, в пределах ограничения, накладываемого желаемыми отношениями в композиции, и ограничений, накладываемых культуральными условиями (смотри Пример 10). Меньшая концентрация DPA (1 мкМ) была выбрана для приближения к системному воздействию, которое можно ожидать в результате применения более ранней фармацевтической композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, названной Purepa, в которой DPA, как сообщалось, представлена на уровне 1/10 относительно обнаруженного в фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
Клетки HepG2 инкубировали с идентифицированной жирной кислотой (ЕРА, DHA, DPA или определенными смесями) в течение суммарно 48 часов до сбора клеток и экстракции РНК.
Сбор клеток и выделение РНК. Тотальную РНК выделяли с использованием TRIzol в соответствии с указаниями производителя (Invitrogen). Качество РНК оценивали при помощи спектрофотометра Nanodrop 8000 (Thermo Scientific). Как изложено в таблице 14 выше, каждый из экстрактов РНК для каждой обработки имел отношение 260/280 от 2,0 до 2,2. РНК затем дополнительно очищали при помощи колонок Qiagen RNeasy. От 300 нг тотальной РНК на приготовление, набор Illumina TotalPrep RNA Amplification kit (Ambion) использовали для получения амплифицированной биотинилированной кРНК после обратной транскрипции в соответствии с методом Эбервайна. Аликвоты обработанных и контрольных образцов РНК отправляли в центральную лабораторию генной экспрессии для анализа. Оставшуюся часть образцов тотальной РНК хранили при -70°С.
Анализ экспрессии и анализ данных. Специфические транскрипты в биотинилированных кРНК измеряли при помощи флуоресцентной визуализации после прямой гибридизации с матрицами бусин Illumina НТ-12, v.4.0. Данные по экспрессии генов анализировали с использованием программного обеспечения Ingenuity Report™ (Ingenuity Systems, Redwood City, CA).
6.6.2 Результаты
6.6.2.1 Определение профиля экспрессии демонстрирует, что биологические эффекты OPA отличаются от биологических эффектов ЕРА и DHA
Хотя DPA представляет собой промежуточное соединение в пути биосинтеза DHA из ЕРА, и хотя DPA, как известно, подвергается обратному превращению в ЕРА in vivo, Kaur et al., Prog. Lipid Res. 50:28-34 (2011), авторы изобретения обнаружили явно отличающиеся эффекты на экспрессию генов клеток печени после инкубации с DPA по сравнению с эффектами, обнаруженными для ЕРА и DHA.
Для высокоуровневой оценки сходства и различий эффектов на экспрессию геннов авторы изобретения использовали программное обеспечение Ingenuity iReport™ для запроса данных экспрессии генов для самых частых 5 ответов, ранжированных в соответствии с алгоритмом Ingenuity iReport™, обнаруженных после воздействия каждой из ЕРА (100 мкМ), DHA (40 мкМ) и DPA (11 мкМ) в различных специально отобранных категориях генов. Результаты обобщены в таблице 15 ниже. Аналогичная оценка с использованием других категорий представлена в следующей таблице 16. Используемые символы представляют собой:  - свойство является уникальным для указанных видов жирных кислот;  - свойство является общим для других видов жирных кислот; и  - свойство наблюдали у всех 3 видов жирных кислот.
Жирным шрифтом выделены различия в действиях DPA, ЕРА и DHA во множестве категорий.
Различия в эффектах, оказываемых на экспрессию генов, также обнаружены с использованием другого анализа, в котором были идентифицированы конкретные гены, в наибольшей степени подвергающиеся повышающей и понижающей регуляции каждой из ЕРА (100 мкМ), DHA (40 мкМ) и DPA (11 мкМ). Данные соответствующим образом обобщены ниже в таблицах 17 (гены, подвергающиеся повышающей регуляции) и 18 (гены, подвергающиеся понижающей регуляции). Используемые символы представляют собой:  - на экспрессию влияют обе концентрации DPA;  экспрессию совместно регулируют другие виды жирных кислот, обозначенные в круглых скобках;  гены, регулируемые всеми тремя видами жирных кислот.
Различия в эффектах DPA, ЕРА и DHA также легко видеть путем сравнения генов, на экспрессию которых однозначно влияет каждый из видов омега-3 PUFA.
Различия в эффектах DPA, ЕРА и DHA на экспрессию генов также можно обнаружить путем сравнения генов, на экспрессию которых в наибольшей степени влияют по меньшей мере два вида полиненасыщенных жирных кислот.
Эти анализы вместе демонстрируют, что существуют явные различия в эффектах ЕРА, DHA и DPA на множество физиологических, фармакологических и биохимических категорий. ЕРА, DHA и DPA не идентичны по эффектам; конкретные виды, которые представлены в композиции омега-3 PUFA, явно имеют значение для физиологических эффектов, которые композиция будет оказывать при введении.
6.6.2.2 DPA обладает значимой активностью при более высокой, но не при более низкой концентрации
Оценивали две концентрации DPA. Как указано выше, более высокую концентрацию DPA (11 мкМ) выбирали таким образом, что отношения ЕРА (концентрация 100 мкМ), DHA (концентрация 40 мкМ) и DPA (концентрация 11 мкМ) будут приближены к отношениям ЕРА, DHA и DPA в фармацевтических композициях, (API) описанных в разделе 5.2 и Примере 5, причем абсолютные концентрации выбирали для наилучшего приближения диапазонов плазмы крови, обнаруженных у групп пациентов в исследовании EVOLVE, в пределах ограничения, накладываемого желаемыми отношениями в композиции, и ограничений, накладываемых культуральными условиями (смотри Пример 10). Меньшая концентрация DPA (1 мкМ) была выбрана для приближения к системному воздействию, которое можно ожидать в результате применения более ранней фармацевтической композиции омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в форме свободной кислоты, названной Purepa, в которой DPA, как сообщалось, представлена на уровне 1/10 относительно обнаруженного в фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
В общем 310 генов однозначно отвечали на более высокий, а не на более низкий уровень DPA. Большое количество генов, которые демонстрируют статистически значимые изменения в экспрессии генов, позволяют предположить, что DPA будет оказывать существенные биологические эффекты при достижении более высокой концентрации in vivo. Наоборот, меньшая концентрация DPA явно представляет собой подпороговую дозу, по меньшей мере в отношении регуляции этих 310 генов, и гораздо меньший ответ можно ожидать при этой меньшей концентрации в плазме крови in vivo.
Когда эффекты оценивают в отношении генов, которые широко распределяют по категориям при помощи программного обеспечения iReport™, как влияющие на молекулярную и клеточную функцию, две подкатегории однозначно находятся в пределах 5 наибольших, ранжированных при помощи алгоритма Ingenuity iReport™ при более высокой, но не меньшей концентрации DPA, а именно вовлеченные в экспрессию генов и оказывающие влияние на посттранскрипционную модификацию РНК. Учитывая возможность плейотропных эффектов второго порядка, вызванных изменениями в экспрессии генов, которые кодируют белки, влияющие на экспрессию генов, и генов, кодирующих белки, влияющих на посттранскрипционную модификацию, эти результаты приводят к выводу о том, что DPA способна модулировать большое количество метаболических путей при более высокой, но не при более низкой концентрации.
Действие пороговой дозы также может быть обнаружено путем фокусирования на трех категориях генов, которые релевантны для клинических эффектов омега-3 полиненасыщенных жирных кислот: генов, вовлеченных в липидный метаболизм, генов, вовлеченных в физиологию сердечно-сосудистой системы, и генов, вовлеченных в воспаление (распределение генов по определенным категориям осуществлялось автоматически при помощи программного обеспечения iReport™). Результаты представлены в таблице 24 ниже.
Как представлено в таблице 24, только 2 гена, вовлеченные в липидный метаболизм, продемонстрировали ответ на концентрацию 1 мкМ DPA, тогда как 22 гена липидного метаболизма однозначно реагировали со статистически значимым изменением экспрессии при инкубации в присутствии 11 мкМ DPA. Если сфокусироваться на липидном метаболизме, то 1 мкМ DPA явно представляет собой подпороговую дозу, тогда как 11 мкМ оказывает значительные эффекты.
Оказалось, что большее количество генов отвечает на дозу 1 мкМ DPA в категории физиологии сердечно-сосудистой системы, и авторы изобретения обнаружили пятикратное (а не 10-кратное) увеличение количества генов, на которые влияет 11 мкМ DPA. Даже большее количество генов, вовлеченных в воспалительные пути, отвечает на 1 мкМ DPA, причем лишь небольшое увеличение количества генов обнаруживается при 11 мкМ.
Концентрация in vitro 11 мкМ меньше чем приблизительная концентрация в плазме крови 90 мкМ, обнаруженная у пациентов исследования EVOLVE, получающих 4 г/сутки. Смотри Пример 10. Таким образом, результаты позволяют предсказать, что клинически значимая доза обогащенной DPA композиции, описанной в разделе 5.2 и Примере 5 (смотри таблицы 12 и 13), оказывает значительные метаболические эффекты, включая эффекты на липидный метаболизм, физиологию сердечно-сосудитой системы и воспаление. Немного, если вообще какие-либо из этих эффектов, специфичных для DPA, можно ожидать для концентрации DPA в 10 раз меньшего уровня, обнаруженного в более раннем препарате Purepa.
6.6.2.3 DPA в более высокой концентрации влияет на экспрессию множества генов липидного метаболизма
22 гена липидного метаболизма, которые демонстрируют статистически значимые изменения в экспрессии при концентрации DPA 11 мкМ, но не концентрации 1 мкМ, идентифицированы в таблице 25 ниже.
Эффекты DPA на экспрессию некоторых из этих генов позволяют сделать вывод о том, что DPA при аналогичной концентрации in vivo должна приводить к улучшению различных клинически значимых липидных параметров.
Например, DPA в концентрации 11 мкМ оказывает повышающую регуляцию в отношении ACADSB, представляющей собой коротко/разветвленно-цепочечную ацил-СоА дегидрогеназу. Продукт гена ACADSB вовлечен в разрушение триглицеридов; можно ожидать, что повышающая регуляция приводит в результате к меньшим уровням триглицеридов в сыворотке крови. HMGCR, который подвергается понижающей регуляции, кодирует HMG-CoA редуктазу, представляющую собой фермент, ограничивающий скорость синтеза холестерина и мишень для статинового ингибирования. Таким образом, аналогично действию статинов, понижающая регуляция экспрессии гена HMGCR со стороны DPA должна приводить к благоприятным уменьшениям отношения общий холестерин:НDL. SQLE, который также подвергается понижающей регуляции, кодирует скваленэпоксидазу, которая катализирует первую стадию окисления в биосинтезе стерола и, как полагают, представляет собой один из ферментов, ограничивающих скорость данного пути. Понижающая регуляция SQLE также должна приводить к уменьшению уровня общего холестерина.
6.6.2.4 Обобщение результатов определения профиля экспрессии
Проведенные авторами изобретения эксперименты по определению профиля экспрессии с использованием линии клеток печени демонстрируют, что DPA оказывает значимую биологическую активность в концентрации, которая приближается к уровням в плазме крови, обнаруженным у пациентов-людей, которым ежесуточно вводили дозу 4 г иллюстративной партии фармацевтической композиции, обогащенной DPA.
В этой концентрации DPA влияет на экспрессию генов в множестве метаболических путей, включающих гены в категориях, которые, как известно, связаны с клиническими эффектами омега-3 полиненасыщенных жирных кислот: гены, вовлеченные в липидный метаболизм, гены, вовлеченные в физиологию сердечно-сосудистой системы, и гены, вовлеченные в воспаление. Ожидают значительных эффектов второго порядка, учитывая изменения, которые авторы изобретения обнаружили в экспрессии генов, кодирующих белки, влияющие на генную экспрессию, и генов, кодирующих белки, влияющие на посттранскрипционную модификацию.
Специфические эффекты в отношении экспрессии нескольких генов, вовлеченных в липидный метаболизм, позволяют сделать вывод о том, что DPA в аналогичной концентрации in vivo должна приводить к улучшению различных клинически значимых липидных параметров. В частности, авторы изобретения обнаружили зависимую от DPA повышающую регуляцию ACADSB, представляющей собой коротко-/разветвлено-цепочечную ацил-СоА дегидрогеназу, которая, как ожидают, приводит в результате к меньшим уровням триглицеридов в сыворотке крови; понижающую регуляцию HMGCR, которая, по аналогии с лечением статинами, должна приводить к благоприятным уменьшениям отношения общий холестерин:HDL; и понижающую регуляцию SQLE, которая аналогично должна приводить к уменьшению уровней общего холестерина.
Эти действия отличаются от эффектов, обнаруженных для ЕРА и DHA.
Эксперименты авторов изобретения продемонстрировали статистически значимые дозозависимые эффекты DPA при меньшей концентрации, выбранной для имитации в 10 раз меньшей концентрации DPA в более ранней композиции омега-3 свободной кислоты, эффекты затрагивали 10 раз меньше генов, чем при более высокой концентрации DPA, выбранной для имитации концентраций DPA в плазме крови, наблюдавшихся в клиническом исследовании фармацевтических композиций обогащенных DPA, описанных здесь. По меньшей мере в отношении 300 генов, однозначно регулируемых более высокой концентрацией DPA, в особенности включая гены, благоприятно влияющие на метаболизм липидов, меньшая концентрация DPA оказывает подпороговое воздействие, и, как можно ожидать, in vivo обеспечивает субтерапевтическую дозу.
6.7 Пример 7: Клиническое исследование ECLIPSE
6.7.1 Лекарственные агенты
Lovaza - прописанные капсулы Lovaza приобретены из коммерческих источников в США. В соответствии одобренной FDA инструкцией к продукту каждая капсула Lovaza массой 1 грамм содержит по меньшей мере 900 мг этиловых эфиров омега-3 жирных кислот, полученных из рыбьего жира, преимущественно комбинацию этиловых эфиров эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА - приблизительно 465 мг) и докозагексаеновой кислоты (DHA - приблизительно 375 мг). Независимый композиционный анализ не проводился.
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Epanova). Готовили мягкие капсулы из свиного желатина Типа А, покрытые Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG), каждая из которых содержала один грамм композиции PUFA, в которой полиненасыщенные жирные кислоты представлены в форме свободных жирных кислот («API»). Инкапсулированное API имеет состав, представленный в таблице 26.
6.7.2 Схема исследования
Проводили рандомизированное четырехстороннее перекрестное открытое исследование разовой дозы с двумя различными способами лечения: 4 грамма Epanova или 4 г Lovaza, каждый из которых вводили с пищей, имеющей низкое и высокое содержание жира, 54 здоровым взрослым людям. ФИГ. 4 представляет блок-схему лечения, иллюстрирующую схему исследования: кратко, после периода выведения препарата из организма субъектов случайным образом распределяли в одну из двух последовательностей лечения:
Период приема пищи с низким содержанием жира (периоды 1 и 2): отсутствие завтрака (голодание); ланч без жира (0 г жира; 600 ккал) после 4-часового забора крови; ужин с низким содержанием жира (9 г жира; 900 ккал) после 12-часового забора крови. Продукты питания с низким содержанием жира представляли собой: йогурт без жира, фруктовый салат, бисквитное печенье «Fig Newtons» без жира, полуфабрикаты «Lean Cuisine». Период приема пищи с высоким содержанием жира (периоды 3 и 4): завтрак с высоким содержанием жира (20 г жира; 600 ккал) непосредственно после 0,5-часового забора крови; ланч с высоким содержанием жира (30 г жира; 900 ккал) после 4-часового забора крови; и ужин с высоким содержанием жира (30 г жира; 900 ккал) после 12-часового забора крови. Продукты питания с высоким содержанием жира представляли собой: сэндвич для завтрака и опудренные мини-пончики; сырная пицца; картофельные чипсы; и панини с сыром и ветчиной.
Требования к отборочному периоду выведения препарата из организма до исследования представляли собой: 60 суток на рыбий жир, добавки ЕРА или DHA или витаминизированные продукты питания; 7 суток на рыбу, льняное семя, семена периллы многолетней, масло конопли, спирулины или черной смородины, статины, секвестранты желчных кислот, ингибиторы абсорбции холестерина или фибраты. Перекрестный период выведения препарата из огранизма составлял, по меньшей мере, 7 суток.
Вечером перед визитом в клинику субъекты употребляли ужин с низким содержанием жира за 12 часов перед моментом времени 0 для каждого периода лечения (9 г жира; 900 ккал). Исследуемый продукт (Epanova или LOVAZA) вводили утром после забора крови перед введением дозы (момент времени 0). Забор крови для фармакокинетических исследований для каждого 2-суточного периода лечения -1,0, -0,5 и 0 часов (до введения дозы) и после введения дозы через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10 и 12 часов (+/- 5 минут) для 1-х суток и через 24 часа (+/-15 мин) для 2-х суток.
6.7.3 Фармакокинетические и статистические анализы
0-t
0-inf
max
max
Следующие фармакокинетические параметры для концентраций ЕРА и DHA в плазме крови рассчитывали для изменения, скорректированного относительно базового уровня, в общих и индивидуальных концентрациях ЕРА и DHA при помощи стандартных бескомпартментных способов: AUC, AUC, C и T.
t
max
Первичные показатели биологической доступности: логарифмически преобразованная площадь под кривой зависимости концентрации в плазме крови от времени (AUC) и максимальная измеренная концентрация в плазме крови (C) в течение 24-часового интервала для изменения, скорректированного относительно базового уровня, общих и индивидуальных концентраций ЕРА и DHA.
Концентрации в плазме крови корректировали относительно базового уровня перед расчетом фармакокинетических параметров. Величины откладывали для изменения, скорректированного относительно базового уровня в геометрических средних (логарифмическое преобразование).
Дисперсионный анализ (ANOVA) использовали для оценки логарифмически преобразованных фармакокинетических параметров на наличие различий в зависимости от способов лечения, периода, последовательности введения доз и субъектов в последовательности.
0-t
0-inf
max
Отношения средних рассчитывали с использованием средних значений по методу наименьших квадратов для логарифмически преобразованных AUC, AUC и C.
0-t
0-inf
max
Отношения средних значений и их 90% доверительные интервалы должны лежать выше верхнего предела 125,00% для AUC, AUC и C для того, чтобы продемонстрировать, что Epanova обладает превосходящей относительной биологической доступностью по сравнению с Lovaza с учетом диеты.
6.7.4 Результаты
Исследуемая популяция. В исследование вовлечены 54 здоровых взрослых человека, 41 мужчина (75,9%) и 13 женщин (24,1%), в возрасте от 21 до 77. 51 субъект (94,4%) завершил все периоды лечения, тогда как 53 субъекта (98,1%) завершили часть исследования с низким содержанием жира. Популяцию преимущественно составляли чернокожие люди или афроамериканцы (66,7%) с 31,5% белых людей и 1,8% азиатов.
t
МАХ
мах
Биологическая доступность. На ФИГ. 5 показано сравнение биологической доступности общих ЕРА и DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы (4 г) Lovaza в течение периодов с высоким и низким содержанием жира (прием дозы натощак), подтверждая то, что биологическая доступность Lovaza значительно снижена для диеты с низким содержанием жира. Изменение, скорректированное относительно базового уровня, общих уровней ЕРА и DHA в плазме крови демонстрирует, что AUC для Lovaza в период приема пищи с низким содержанием жира снижена на 83,3% по сравнению с Lovaza в период приема пищи с высоким содержанием жира: 661,6 по сравнению с 3959,5 нмоль⋅ч/мл, соответственно (р менее 0,0001) (данные, усредненные по методу наименьших квадратов, приведены в таблице 27 ниже). С для Lovaza в период приема пищи с низким содержанием жира снижен на 80,6% по сравнению с периодом приема пищи с высоким содержанием жира (р менее 0,0001) и Т увеличена на 62% в период приема пищи с низким содержанием жира по сравнению с периодом приема пищи с высоким содержанием жира (10,2 по сравнению с 6,3 ч, соответственно; р равно 0,0001).
На ФИГ. 6 показано сравнение биологической доступности общих ЕРА и DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) в течение периода приема пищи с высоким содержанием жира после разовой дозы (4 г) Lovaza по сравнению с разовой дозой (4 г) Epanova, демонстрируя, что в течение периодов приема пищи с высоким содержанием жира, в которых подтверждали, наибольшую биологическую доступность Lovaza, биологическая доступность ЕРА и DHA все же является существенно больше при введении в форме свободной кислоты (Epanova), нежели чем в форме композиции соответствующего этилового эфира омега-3 композиции (Lovaza) (р<0,0007).
t
max
max
ФИГ. 7 сравнивает биологическую доступность общих ЕРА и DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы Epanova по сравнению с Lovaza в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира, демонстрируя то, что изменение общих уровней ЕРА и DHA в плазме крови, скорректированное относительно базового уровня, демонстрирует в 4,6 раз большую AUC для Epanova чем для Lovaza в течение периодов приема пищи с низким содержанием жира: 3077,8 по сранению с 668,9 нмоль-ч/мл, соответственно (р менее 0,0001) (средние данные по методу наименьших квадратов в таблице 28 ниже). C для Epanova в 3,2 раза больше чем для Lovaza (p менее 0,0001) и T на 20% короче чем для LOVAZA (8 по сравнению с 10 ч, соответственно; p равно 0,0138).
t
max
max
ФИГ. 8 сравнивает биологическую доступность ЕРА (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы Epanova по сравнению с Lovaza в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира, демонстрируя в 13,5 раз большую AUC для Epanova чем для Lovaza в течение периодов приема пищи с низким содержанием жира: 578,2 по сравнению с 42,7 мкг ч/мл, соответственно (р менее 0,0001) (средние данные по методу наименьших квадратов представлены в таблице 29 ниже). C для Epanova в 5,6 раз больше чем для Lovaza (р менее 0,0001) и T на 12% короче чем для Lovaza (8 по сравнению с 9 часами, соответственно; p равно 0,2605).
t
max
max
ФИГ. 9 сравнивает биологическую доступность DHA (изменение, скорректированное относительно базового уровня) после разовой дозы Epanova по сравнению с Lovaza в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира, демонстрируя, в 2,2 раза большую AUC для Epanova, чем для Lovaza в течение периодов соблюдения диеты с низким содержанием жира: 383,1 по сравнению с 173,4 мкг ч/мл, соответственно (р менее 0,0001) (данные для средних значений по методу наименьших квадратов представлены в таблице 30 ниже). C для Epanova в 1,9-раз больше чем для Lovaza (p менее 0,0001) и T на 21% короче чем для Lovaza (8 по сравнению с 11 часами, соответственно; p равно 0,0148). Обнаружена в 2,2 раза большая биологическая доступность DHA в Epanova по сравнению с Lovaza, несмотря на то, что DHA на 42% меньше в композиции Epanova.
0-t
0-t
0-t
t
t
ФИГ. 10A и 10В представляют ответы AUC У индивидуальных субъектов в течение диет с низким и высоким содержанием жира, выраженные как отношение (%)AUC для низкого содержания жира к AUC для высокого содержания жира. Отрицательные отношения не представлены. Данные демонстрируют, что в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира у 30 из 54 (56%) субъектов, принимающих Epanova (свободные жирные кислоты), по сравнению с 3 из 52 (6%), принимающих Lovaza (этиловые эфиры жирных кислот), поддерживались AUC, которые составляли не менее 50% от соответствующих AUC в период диеты с высоким содержанием жира.
В общей сложности 51 побочное действие было зафиксировано у 29 субъектов. Наиболее частые побочные действия представляли собой головные боли (10 субъектов) и жидкий стул или диарея (9 субъектов). Все побочные действия были слабыми по тяжести, и ни одно из них не было серьезным. Отсутствовали клинически значимые изменения в лабораторных оценках, оценках жизненных показателей или физических оценках.
6.7.5 ЗАКЛЮЧЕНИЯ
Изменение, скорректированное относительно базового уровня, в профилях поглощения (AUC) в общем для ЕРА и DHA и профилях поглощения отдельно для ЕРА и DHA для Epanova (омега-3 PUFA в форме свободной кислоты) были значимо больше чем для Lovaza (этиловые эфиры омега-3-PUFA) в течение периода диеты с высоким содержанием жира и значительно лучше в течение периода соблюдения диеты с низким содержанием жира. Кроме того, существовало весьма значительное влияние со стороны содержания жира в пище на биологическую доступность Lovaza, тогда как биологическая доступность Epanova была гораздо более предсказуемой вследствие весьма умеренного влияния со стороны пищи. Превосходная не зависящая от жира биологическая доступность Epanova по сравнению с Lovaza является клинически значимой, поскольку субъектам с сильно повышенными уровнями триглицеридов требуется диета с очень низким содержанием жира. Эти открытия демонстрируют значимое терапевтическое преимущество композиции омега-3 в форме свободной кислоты для лечения тяжелой гипертриглицеридемии в свете рекомендации NCEP ATP III, согласно которой эти субъекты должны придерживаться диеты с низким содержанием жира во время вспомогательной терапии.
6.8 Пример 8: 14-суточное исследование биологической доступности Для определения того, поддерживались ли эффекты, обнаруженные после введения разовой дозы, после повторного введения доз, провели более длительное исследование. ФИГ. 11 представляет собой блок-схему лечения, иллюстрирующую схему 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, в котором исследуемое лекарство (Lovaza или Epanova) принимали внутрь во время завтрака с низким содержанием жира. В отличие от этого, в исходном исследовании ECLIPSE, описанном в примере 7, группе, соблюдающей диету с низким содержанием жира, дозы давали натощак.
Изменения относительно базового значения до стабильного состояния в уровнях ЕРА и DHA в группе Lovaza 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности согласовывали с предыдущими исследованиями, как показано в таблице 31, в которой представлено среднее процентное изменение в ЕРА и DHA в обнаруженных предшествующих исследованиях.
ФИГ. 12А представляет средние нескорректированные общие концентрации ЕРА и DHA в зависимости от времени (линейная шкала) как для лечения Lovaza, так и для лечения Epanova. ФИГ. 12Б представляет собой гистограмму, демонстрирующую различие нескорректированных ЕРА и DHA (нмоль/мл) для моментов времени, заключенных в скобки на ФИГ. 12А. ФИГ. 12А и 12Б демонстрируют, что после 14 суток введения дозы, накопление ЕРА и DHA для Epanova было в 2,6 раз более высоким чем для Lovaza у субъектов, которых поддерживали на диете с низким содержанием жира.
0-24
ФИГ. 13 представляет средние скорректированные к базовому уровню общие концентрации ЕРА и DHA в зависимости от времени (линейная шкала) для лечения Lovaza по сравнению с лечением Epanova в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности, демонстрирующем, что после 14 суток введения дозы при приеме пищи с низким содержанием жира, уровни ЕРА и DHA (AUC) для Epanova были в 5,8 раз более высокими чем для Lovaza у субъектов, которых поддерживали на диете с низким содержанием жира.
avg
avg
ФИГ. 14А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение относительно базового значения до стабильного состояния нескорректированных уровней в крови для ЕРА и DHA в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, демонстрирующего, что уровни ЕРА и DHA в крови увеличивались на 316% относительно базового значения до стабильного состояния в группе Epanova по сравнению с 66% в группе Lovaza. ФИГ. 14Б представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение относительно базового значения до стабильного состояния нескорректированных C для ЕРА и DHA в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, демонстрирующего, что уровни средней концентрации (C) ЕРА и DHA увеличивались на 448% относительно базового значения в группе Epanova по сравнению с 90% в группе Lovaza.
avg
avg
ФИГ. 15А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение относительно базового значения до стабильного состояния общих уровней в крови DHA в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, демонстрирующего, что уровни DHA увеличивались на 109% относительно базового значения до стабильного состояния в группе Epanova по сравнению с 34% в группе Lovaza. ФИГ. 15Б представляет увеличение относительно базового значения до стабильного состояния для уровней DHA C в группе Epanova по сравнению с группой Lovaza в 14-суточном сравнительном исследовании биологической доступности, и демонстрирует, что уровни средней концентрации (C) для DHA увеличивались на 157% относительно базового значения в группе Epanova по сравнению с 47% в группе Lovaza.
avg
ФИГ. 16А представляет собой гистограмму, на которой изображено увеличение относительно базового значения до стабильного состояния общих уровней ЕРА в крови в группах Lovaza и Epanova 14-суточного сравнительного исследования биологической доступности, и демонстрирует, что уровни ЕРА увеличивались на 1021% относительно базового значения до стабильного состояния в группе Epanova по сравнению с 210% в группе Lovaza. ФИГ. 16Б представляет среднее увеличение концентрации относительно базового значения до стабильного состояния, и демонстрирует, что уровни C ЕРА увеличивались на 1465% относительно базового значения в группе Epanova по сравнению с 297% в группе Lovaza.
max
Данные демонстрируют, что увеличение биологической доступности, обнаруженное после введения разовой дозы в исследовании ECLIPSE поддерживается, даже увеличивается, в течение более длительного периода (2 недели). Дополнительно, разрозненные специфические для субъектов данные (не представленны) демонстрируют, что у субъекта с наименьшим ответом на Epanova по-прежнему обнаруживается большая C ЕРА и DHA на 14 сутки, по сравнению с субъектом с самым лучшим ответом на Lovaza.
avg
Увеличенные C и общие уровни в крови клинически релевантных видов омега-3 PUFA, достигаемые для Epanova по сравнению с Lovaza, позволяют предсказать значительно улучшенную эффективность в отношении снижения уровней триглицеридов в сыворотке крови и уменьшения риска сердечнососудистого заболевания.
6.9 Пример 9: 13-недельное исследование на крысах
В данном исследовании сравнивали воздействие омега-3 и ее эффекты на уровни липидов в сыворотке крови крыс, которых лечили эквивалентными дозами Epanova или LOVAZA в течение 13 недель.
Для данного исследования выбирали крыс Sprague Dawley, поскольку они представляют собой штамм крыс, используемый в токсикологической программе исследования Lovaza, и, таким образом, обеспечивая возможность для непосредственного сравнения данных исследования в соответствии с настоящим изобретением с использованием Epanova с публично доступными данными по токсичности у крыс, опубликованными в Lovaza Summary Basis of Approval. Схема исследования обеспечивала надежную токсикологическую оценку Epanova при выборе доз, основанном на публично доступных данных по токсичности у крыс для Lovaza (максимально переносимая доза составляет 2000 мг/кг). Крысы Sprague Dawley обеспечивают модель, которая, как представляют, позволяет предсказать действия омега-3 PUFA на липидные изменения для триглицеридов и общего холестерина у субъектов-людей. Результаты для 13 недель представлены в таблице 32 ниже.
max
(0-t)
(0-t)
Как представленно в таблице 32, Epanova обеспечивала не только значительно более высокие максимальные концентрации DHA и ЕРА в плазме крови (C) по сравнению с Lovaza, но также обеспечивала значительно более высокие AUC для двух видов омега-3; AUC представляет собой измерение системного ответа. Большая биологическая доступность и длительное системное воздействие этих двух видов омега-3 PUFA при терапии Epanova привели в результате к длительным различиям в эффективности снижения уровня липидов, тогда как Epanova осуществляла по существу большее снижение уровня триглицеридов и общего холестерина в плазме крови по сравнению с обнаруженным для LOVAZA. Таким образом, описанные здесь композиции обеспечивают большую эффективность в отношении двух клинически важных сердечно-сосудистых параметров.
6.10 Пример 10: Исследование EVOLVE
6.10.1 ЛЕКАРСТВЕННЫЕ АГЕНТЫ
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Epanova). Готовили мягкие капсулы из свиного желатина Типа А, каждая из которых содержала один грамм (1 г) композиции PUFA, содержащей омега-3 PUFA в форме свободной кислоты («API»). Капсулы покрывали Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG). API имел состав, приведенный для партии 2 таблицы 10 (смотри пример 4 выше).
ПЛАЦЕБО. Готовили капсулы, содержащие оливковое масло, для использования в качестве контроля.
6.10.2 СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ
12-недельное двойное слепое исследование с оливковым маслом в качестве контроля проводили в Соединенных Штатах Америки, Дании, Венгрии, Индии, Голландии, России и Украине. Субъектов отбирали на основе высоких уровней триглицеридов в диапазоне 500-2000 мг/дл. Субъектов случайным образом отбирали так, чтобы они получали 2, 3 или 4 грамма Epanova, или 4 грамма оливкового масла в качестве плацебо. Общая схема исследования проиллюстрирована на ФИГ. 17, где ФИГ. 18 представляет более детализированную блок-схему лечения, дополнительно идентифицирующую моменты времени визитов для исследования. Первичный конечный показатель исследования представлял собой процентное изменение уровней триглицеридов в плазме крови относительно базового значения к концу лечения («ЕОТ»). Вторичный конечный показатель исследования представлял собой процентное изменение He-HDL-холестерине («He-HDL-С») в плазме крови относительно базового значения к EOT.
6.10.3 РЕЗУЛЬТАТЫ
ФИГ. 19 демонстрирует распределение всех субъектов, где «АЕ» представляет собой сокращение для словосочетания «побочное действие» и «SAE» представляет собой сокращение для словосочетания «серьезное побочное действие».
Исходно отбирали в общей сложности 1356 субъектов, и из них 399 были отобраны для участия в исследовании. Из 399 субъектов 99 получали оливковое масло в качестве плацебо, 100 получали Epanova 2 г/сутки; 101 получали Epanova 3 г/сутки; и 99 получали Epanova 4 г/сутки. Таблица 33 демонстрирует измерения средних уровней триглицеридов (TG) и холестерина для субъектов после случайного распределения (перед лечением) по сравнению с желаемыми уровнями, описанными в Third Report of the Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III), выпущенном National Heart Lung and Blood Institute.
Из числа пациентов, получающих оливковое масло, в общей сложности пять выбыли из исследования по следующим причинам: отозванное согласие (1), утрата возможности связи с пациентом (1) и другие причины (3). Из числа пациентов, получающих Epanova 2 г/сутки, в общей сложности семь выбыли из исследования по следующим причинам: побочные действия (5), отозванное согласие (1) и другие причины (1). Из числа пациентов, получающих Epanova 3 г/сутки, в общей сложности 14 выбыли из исследования по следующим причинам: побочные действия (7), нарушение схемы лечения (2), отозванное согласие (1), утрата возможности связи с пациентом (3) и другие причины (1). Из числа пациентов, получающих Epanova 4 г/сутки, 9 выбыли из исследования по следующим причинам: побочные действия (5), нарушение схемы лечения (1), отозванное согласие (2) и другие причины (1).
Epanova позволяла достичь первичного конечного показателя снижения уровня триглицеридов и вторичного показателя снижения уровня не-HDL холестерина (общий уровень холестерина минус уровень HDL-холестерина) («не-HDL-С») при всех дозах, и обеспечивал статистически значимые уменьшения в множестве признанных маркеров атерогенности: Аро В, Аро CIII, RLP и LpPLA2. У пациентов, получающих сопутствующую статиновую терапию, Epanova обеспечила дополнительную эффективность в отношении ключевых липидных параметров: TG; не-HDL-C; HLD-c; общий холестерин (ТС); и TC/HDL-C.
Уровни ЕРА, DHA и DPA в плазме крови - три вида омега-3 Ic-PUFA, в наибольшем количестве находящиеся в Epanova - измеряли на базовом уровне и в конце лечения (EOT), а также уровни в плазме крови омега-6 Ic-PUFA, арахидоновой кислоты (АА). В таблице 34 ниже отдельно представлены средние значения для базовых уровней в плазме крови, медиана для базовых уровней в плазме крови, среднее значение уровней в плазме крови к концу лечения (EOT) и медиана уровней в плазме крови EOT для ЕРА, DHA, DPA и АА, а также TG, NHDL-C, HDL-C, VLDL-C и LDL-C.
Базовые уровни в плазме крови для ЕРА, DHA, DPA и АА указывают на эффективное случайное распределение субъектов по подвергаемым лечению группам. Отношения ЕРА:АА для базовых уровней составляли приблизительно 0,10 (смотри таблицу 37 ниже).
ФИГ. 20А-20Д представляют средние базовые уровни в плазме крови и уровни в плазме крови к концу лечения («ЕОТ») (в мкг/мл) для ЕРА (ФИГ. 20А), DHA (ФИГ. 20Б), DPA (ФИГ. 20В) и АА (ФИГ. 20Г) для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE. ФИГ. 20Д сравнивает средние базовые и EOT уровни ЕРА для каждой из подвергаемых лечению групп и контрольной группы (оливковое масло) со значениями, ранее приведенными для ECLIPSE (смотри пример 7), 14-суточного исследования биологической доступности (смотри Пример 8), исследования статинового межлекарственного взаимодействия (Statin DDI) и не связанного с ними исследования JELIS, проведенного другими исследователями для отличающейся композиции омега-3 PUFA («JELIS»). Следует отметить, что субъекты-японцы в исследовании JELIS имели более высокие базовые уровни ЕРА. ФИГ. 21А-21Г представляют медиану базовых уровней в плазме крови и уровней в плазме уровни к концу исследования (EOT) (в мкг/мл) для ЕРА (ФИГ. 21A), DHA (ФИГ. 21Б), DPA (ФИГ. 21В) и АА (ФИГ. 21Г).
В таблице 35 ниже приведено среднее значение изменения и медиана изменения абсолютных уровней в плазме крови от базового значения к EOT для ЕРА, DHA, DPA и АА, а также TG, NHDL-C, HDL-C, VLDL-C и LDL-C.
ФИГ. 22А, 22Б, 26А и 26Б представляют данные в таблице выше, демонстрирующие изменение от базового значения к EOT в абсолютных уровнях в плазме крови (в мкг/мл) для АА, DHA, ЕРА и DPA для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE, где ФИГ. 22А представляет среднее изменение, а ФИГ. 22Б представляет медиану изменения относительно базового значения.
В таблице 36А ниже отдельно представлены среднее значение, медиана и среднее процентное изменение по методу наименьших квадратов от базового значения к EOT уровней в плазме крови для ЕРА, DHA, DPA и АА, а также TG, NHDL-C, HDL-C, VLDL-C и LDL-C для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE.
В таблице 21Б ниже отдельно представлены процентное изменение от базового значения к EOT и среднее изменение по методу наименьших квадратов средних уровней в плазме крови и медианы уровней в плазме крови для АроВ, ApoCIII, LpPLA2 и RLP для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE.
ФИГ. 23А представляет среднее изменение от базового значения к EOT в виде процентного изменения относительно базовой величины для АА, DHA, ЕРА и DPA в каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE, и ФИГ. 23Б представляет медиану процентного изменения от базового значения к EOT.
Таблица 37 ниже представляет отношения ЕРА/АА в начале и в конце лечения для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании EVOLVE.
Как можно видеть из таблиц 35 и 36А и ФИГ. 20-23, 12-недельное лечение с использованием Epanova вызвало значительное увеличение уровней ЕРА, DHA и DPA в плазме крови. Например, в дозе 2 г среднее процентное изменение от базового значения к EOT уровней ЕРА в плазме крови составило 411%; в дозе 4 г 778%. Медиана процентного изменения уровней ЕРА в плазме крови составила соответственно 254% и 405%. В дозе 2 г среднее процентное изменение от базового значения к EOT уровней DHA в плазме крови составило 69%; в дозе 4 г среднее процентное изменение составило 106%. Медиана процентного изменения уровней DHA в плазме крови была менее значительной, с изменением 61,2% для 2 г Epanova и изменением 65,5% для 4 г.
Повышения уровней ЕРА, DHA и DPA в плазме крови сопровождались значительным уменьшением уровней АА в плазме крови, причем при схеме введения дозы 4 г достигалось среднее уменьшение на 95,8 мкг/мл и медиана уменьшения 89,2 мкг/мл, что соответствует среднему процентному уменьшению на 18%, медиане процентного изменения на 25,9%, и среднему изменению по методу наименьших квадратов 23,2%. Следует заметить, что обнаружено уменьшение уровней арахидоновой кислоты в плазме крови, несмотря на экзогенное введение арахидоновой кислоты, которая присутствовала в партии Epanova, используемой в этом исследовании, в количестве 2,446% (а/а).
Увеличение уровней ЕРА в плазме крови и одновременное уменьшение уровней АА в плазме крови вызывало значимое улучшение в отношении ЕРА/АА, как представлено в таблице 37, с приблизительно 0,10 на базовом уровне до приблизительно 0,67 (среднее значение) и 0,62 (медиана) для EOT в дозе 4 г.
Кроме того, лечение с использованием Epanova привело в результате в существенному снижению уровней TG, как представлено на ФИГ. 26А и ФИГ. 26Б, на которых представлено соответственно среднее значение и медиана для абсолютного изменения относительно базового значения. ФИГ. 27 иллюстрирует процентную долю субъектов, которые демонстрируют 0-10% уменьшение TG, 10-20% уменьшение TG, 20-30% уменьшение TG, 30-40% уменьшение TG, 40-50% уменьшение TG, и больше чем 50% уменьшение TG для доз Epanova 2 г и 4 г.
ФИГ. 26А и ФИГ. 26Б также демонстрируют, что не-HDL-C и VLDL-C уменьшались, тогда как HDL-C увеличивались. Уровни LDL-C также увеличивались, что вероятно было следствием увеличения размера частиц LDL при лечении (дополнительно обсуждается в примере 12). Среднее значение и медиана процентных изменений представлены на ФИГ. 28А и ФИГ. 28Б, соответственно.
Абсолютные средние базовые уровни и уровни для EOT представлены на ФИГ. 24А-24И для TG (ФИГ. 24А), He-HDL-C (ФИГ. 24Б), HDL-C (ФИГ. 24В), V-LDL-С (ФИГ. 24Г), LDL-C (ФИГ. 24Д), АроВ (ФИГ. 24Е), ApoCIII (ФИГ. 24Ж), RLP (ФИГ. 243) и LpPLA2 (ФИГ. 24И). Абсолютная медиана для базовых уровней и для уровней EOT представлены на ФИГ. 25А-25И для TG (ФИГ. 25А), He-HDL-C (ФИГ. 25Б), HDL-C (ФИГ. 25В), V-LDL-C (ФИГ. 25Г), LDL-C (ФИГ. 25Д), АроВ (ФИГ. 25Е), ApoCIII (ФИГ. 25Ж), RLP (ФИГ. 253) и LpPLA2 (ФИГ. 25И).
Чрезвычайно высокая биологическая доступность омега-3 PUFA в Epanova выявила различия в фармакокинетическом ответе для различных видов частиц в плазме крови. ФИГ. 29 представляет скорость изменения медианы процентного изменения относительно базового значения уровней ЕРА, DHA, DPA, АА, TG, не-HDL-C и HDL-C (абсолютная величина) в плазме крови для доз 2 г и 4 г Epanova. Результаты представлены в таблице 38 ниже:
Принимая во внимание небольшое или отсутствие повышения уровней DHA и DPA в плазме крови при удвоении дозы Epanova с 2 г до 4 г в сутки, скорость изменения (наклон) медианы процентного изменения относительно базового значения составляет почти нуль, предсказывая то, что небольшое дополнительное увеличение уровней DHA и DPA в плазме крови будет обнаружено после дополнительного увеличения дозы. Похожее выравнивание ответа обнаружено для уровней триглицеридов, уровней HDL-C и уровней не-HDL-C (данные не представлены).
Наоборот, скорость изменения ЕРА остается высокой с наклоном 0,59; ожидают, что дополнительное повышение уровней ЕРА в плазме крови достигается путем увеличения дозы Epanova выше 4 г/сутки. Важно то, что скорость изменения уровней АА при удвоении дозы Epanova с 2 г до 4 г в сутки является еще более высокой, чем для ЕРА; ожидают дополнительных снижений уровней АА в плазме крови при увеличении дозы Epanova выше 4 г/сутки. Таким образом, Epanova демонстрирует беспрецедентную способность в снижении уровней АА.
Обобщенные результаты исследования EVOLVE приведены в таблице 39 ниже.
Исследование EVOLVE также продемонстрировало, что уровень аполипопротеина CIII (ApoCIII) значимо снижался вследствие лечения Epanova. ApoCIII ингибирует активность липазы липопротеина и захват в печени обогащенных триглицеридами липопротеинов. Обнаружено, что повышенные уровни ApoCIII представляют собой независимый показатель риска сердечнососудистого заболевания (CHD), тогда как генетически сниженные уровни ApoCIII ассоциированы с защитой от CHD.
Композиции омега-3 жирной кислоты, содержащие DHA, были предложены для увеличения уровней LDL-C у пациентов, страдающих от тяжелой гипертриглицеридемии (Kelley et al., 2009, J. Nutrition, 139(3): 495-501). Утверждается, что этот эффект в отношении LDL-C представляет собой результат увеличенного размера липопротеиновых частиц (Davidson et al., 2009, J. Clin. Lipidology, 3(5): 332-340). Клинические данные свидетельствуют о том, что сама эйкозапентаеновая кислота (ЕРА) в дозе, снижающей уровень триглицеридов в степени, близкой к ЕРА и DHA, не повышает LDL-C, но также не снижает ApoCIII (Homma et al., 1991, Atherosclerosis, 91(1): 145-153).
ФИГ. 34 демонстрирует взаимосвязь между процентным изменением уровня LDL и процентным изменением уровня ApoCIII для данных исследования EVOLVE, когда эти данные подгоняли с использованием линейной регрессии, получали коэффициент корреляции Пирсона -0,28, указывающий на то, что повышения уровней LDL взаимосвязаны со снижением уровня ApoCIII при лечении Epanova. Эти результаты согласуются с ранними сообщениями о повышении уровней LDL после введения DHA, что может относиться к увеличенному размеру липопротеиновых частиц. Эффекты Epanova на размер липопротеиновых частиц дополнительно обсуждаются в примере 12 ниже.
Подгруппа субъектов, представленных в таблице 40, демонстрирует более чем 800% увеличение ЕРА при менее чем 5% снижении уровней триглицеридов. Такое отсутствие ответа вероятно может относиться к дефициту или функциональному дефекту фермента липопротеинлипазы (LPL) 1 типа. LPL гидролизует триглицериды, представленные в хиломикронах, до свободных жирных кислот, и известно, что нарушение LPL ассоциируется с тяжелой гипертриглицеридемией (Fojo and Brewer, 1992, J. of Int. Med. 231: 669-677). Субъекты, демонстрирующие существенное увеличение ЕРА после лечения Epanova сопровождающееся небольшим изменением клинических параметров, таких как уровни триглицеридов, уровни АА и т.д., могут быть классифицированы как пациенты без ответа. Такие субъекты могут быть выведены из лечения с использованием Epanova.
6.11 Пример 11: исследование статинового межлекарственного взаимодействия
6.11.1 ЛЕКАРСТВЕННЫЕ АГЕНТЫ
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Epanova). Готовили мягкие капсулы из свиного желатина Типа А, каждая из которых содержит один грамм (1 г) композиции PUFA, содержащей омега-3 PUFA в форме свободной кислоты («API»). Капсулы покрывали Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG). API имеет состав, приведенный для партии 3 таблицы 9 (смотри пример 4 выше).
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Zocor). 40 мг таблетки симвастатина, изготовленные Merck Sharp & Dohme Ltd., приобретены в коммерческом источнике.
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Aspirin). 81 мг таблетки с энтеросолюбильным покрытием, изготовленные Bayer Healthcare Pharmaceuticals, приобретены в коммерческом источнике.
6.11.2 СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ
Без контроля плацебо рандомизированное двухстороннее перекрестное исследование разработано для оценки действия многократных доз Epanova на фармакокинетику многократных доз симвастатина у здоровых нормальных субъектов. Низкую дозу аспирина (81 мг) также вводили ежесуточно обеим исследуемым группам.
Условия лечения «А» состояли из одновременного перорального введения дозы 40 мг симвастатина (1 таблетка), 81 мг аспирина (1 таблетка) и 4 г (4 капсулы) Epanova один раз в сутки (каждые 24 часа) с 240 мл воды на утро суток с 1 по 14, в общей сложности 14 доз в условиях натощак. Условия лечения «Б» состояли из перорального введения дозы 40 мг симвастатина (1 таблетка) и 81 мг аспирина (1 таблетка) один раз в сутки (каждые 24 часа) с 240 мл воды на утро суток с 1 по 14, в общей сложности 14 доз в состоянии натощак. Между способами лечения имелся 14-суточный период выведения препарата из организма субъектов.
В общей сложности 52 субъекта были вовлечены и случайным образом распределены в зависимости от последовательности лечения. Из них 46 участников были испанцами.
Кровь забирали для определения уровней жирных кислот в плазме крови (ЕРА, DHA, АА) в момент начала (сутки-1) и прекращения исследования (15 сутки) после лечения группы Epanova (лечение «А»). Генотипирование осуществляли для различных ранее идентифицированных SNP (однонуклеотидный полиморфизм), включая SNP в гене FADS1 (например, rs174546), включая SNP, ассоциирующиеся с превращением DGLA в АА (SNP rs174537), гене FADS2 и гене Scd-1.
6.11.3 РЕЗУЛЬТАТЫ
Средние базовые уровни ЕРА в плазме крови и уровни в плазме крови в конце лечения («ЕСТ») (в мкг/мл) представлены на ФИГ. 20Д.
ФИГ. 56 демонстрирует уровни арахидоновой кислоты (АА) в плазме крови для субъектов, сгруппированных в соответствии с генотипом по rs174546 SNP, для (А) базового уровня (в мкг/мл), и (Б) на 15 сутки лечения с использованием Epanova (в процентном изменении относительно базового значения). Для каждого генотипа межквартильный диапазон отмечен прямоугольником, медиана отмечена горизонтальной линией внутри межквартильного прямоугольника, и среднее значение обозначено ромбом. Выбросы представлены окружностями. «Усы» продолжаются до минимальной и максимальной величины, не являющейся выбросом. Оценка 1 идентифицирует субъектов, которые являются гомозиготами по основному аллелю; Оценка 3 идентифицирует субъектов, гомозиготных по минорному аллелю; и Оценка 2 представляет гетерозигот.
Перед лечением в популяции испанцев наблюдалось большее преобладание ТТ гомозигот (41%) по сравнению с СС гомозиготами (24%) для SNP rs174546. Последнее соответствует значимо отличающимся базовым уровням ЕРА (СС=18 мкг/мл; СТ=11 мкг/мл; ТТ=7 мкг/мл, p менее 0,0001) и арахидоновой кислоты (АА) (СС=266 мкг/мл; СТ=202 мкг/мл; ТТ=167 мкг/мл, p менее 0,0001) среди генотипов.
В ответ на лечение Epanova обнаружено существенное увеличение ЕРА с наибольшим процентным увеличением при генотипе ТТ (ТТ: 1054%, СТ:573%, СС:253%).
6.12 Пример 12: исследование ESPRIT
6.12.1 ЛЕКАРСТВЕННЫЕ АГЕНТЫ
ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВО (Epanova). Готовили мягкие капсулы из свиного желатина Типа А, каждая из которых содержит один грамм (1 г) композиции PUFA, содержащей омега-3 PUFA в форме свободной кислоты («API»). Капсулы покрывали Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG). API имеет состав, приведенный для партии 3 таблицы 9 (смотри пример 4 выше).
ПЛАЦЕБО. Для применения в качестве контроля готовили капсулы, содержащие оливковое масло.
6.12.2 СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ
Как представлено на ФИГ. 38, подгруппа субъектов в группе, подвергаемой лечению 2 г, в исследовании EVOLVE, которые получали одновременную статиновую терапию, демонстрировали большие величины процентных изменений (среднее различие по методу наименьших квадратов), по сравнению с контролем для TG, не-HDL-C, HDL-C, LDL-C, ТС, VLDL-C и TC/HDL-C, при сравнении с субъектами в группе, подвергаемой лечению 2 г, которые не получали одновременную статиновую терапию. Субъекты, получающие одновременную статиновую терапию, демонстрировали дозозависимый ответ на Epanova, как представлено в сравнительных данных для Epanova 2 г и Epanova 4 г, представленных на ФИГ. 39.
В дополнение к усиленной эффективности, обнаруженной для Epanova в сочетании со статиновой терапией, клиническое исследование ESPRIT проводили для исследования пациентов, претерпевающих базовую статиновую терапию. Как представлено на ФИГ. 40, пациентов отбирали для исследования ESPRIT на основе уровней TG 200-500 мг/дл и базовой статиновой терапии. Из 660 пациентов, отобранных для исследования, 220 получали оливковое масло в качестве плацебо, 220 лечили дозой 2 г Epanova, и 220 лечили дозой 4 г Epanova. Все способы лечения плацебо и Epanova проводили в дополнение к базовой статиновой терапии.
В таблице 41 ниже продемонстрированы базовые уровни для TG, HDL-C, LDL-C, не-HDL-C и VLDL-C для субъектов в исследовании ESPRIT в сравнении с желаемыми уровнями, описанными в Third Report of the Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III), изданной National Heart Lung and Blood Institute.
6.12.3. РЕЗУЛЬТАТЫ
ФИГ. 41 иллюстрирует распределение пациентов для исследования ESPRIT, демонстрируя то, что 6 пациентов были исключены из группы плацебо, 6 пациентов были исключены из группы, которую лечили 2 г, и 12 пациентов были исключены из группы, которую лечили 4 г. Количество пациентов, испытывающих побочные действия (АЕ), было в общем низким, 2 в группе плацебо, 3 в группе, которую лечили 2 г, и 7 в группе, которую лечили 4 г.
Для пациентов в исследовании ESPRIT были показаны значительные процентные изменения в уровнях ЕРА и DHA в плазме крови, как представлено на ФИГ. 42А и ФИГ. 42Б, соответственно. Для этих пациентов также были показаны дозозависимые снижения уровня TG, снижения уровня не-HDL-C и повышения уровня HDL-C по сравнению с оливковым маслом в качестве плацебо (смотри ФИГ. 43). Кроме того, обнаружены дозозависимые снижения уровня VLDL-C и TC/HDL-C (смотри ФИГ. 44). Взятые вместе, результаты на ФИГ. 42-44 демонстрируют эффективность Epanova в качестве дополнения к статиновой терапии.
Дополнительная подробная информация по результатам исследования ESPRIT представлена на ФИГ. 45-52, демонстрируя то, что Epanova является эффективной в качестве добавки к статинам низкой силы и высокой силы в диапазоне базовых условий для пациентов. ФИГ. 45 демонстрирует результаты для медианы процентного изменения уровня TG относительно базового значения для трех терцилей пациентов, распределенных в соответствии с базовыми уровнями TG. ФИГ. 46 демонстрирует результаты для медианы процентного изменения не-HDL-C относительно базового значения для трех терцилей пациентов, распределенных в соответствии с базовыми уровнями не-HDL-C. ФИГ. 47 демонстрирует результаты для медианы процентного изменения LDL-C относительно базового значения для трех терцилей пациентов, распределенных в соответствии с базовыми уровнями LDL-C.
Как видно на ФИГ. 48, снижения уровней TG обнаружены для пациентов, получающих одновременную терапию розувастатином, аторвастатином и симвастатином. Обнаружены статистически значимые действия в отношении уровней триглицеридов, не-HDL-C и LDL-C независимо от того, вводили ли статины низкой силы или высокой силы, как представлено на ФИГ. 49-51.
ФИГ. 52 сравнивает медиану процентных изменений относительно базового значения для триглицеридов для (А) пациентов, имеющих более высокие базовые уровни TG (не менее 294 мг/дл), (Б) пациентов, имеющих высокие уровни ЕРА EOT (не менее 26,58 мкг/мл), и (В) пациентов, получающих одновременную терапию розувастатином. Результаты демонстрируют, что доза Epanova 2 г действует сходным образом с дозой 4 г у популяций пациентов, представленных на ФИГ. 52.
Повышенные уровни LDL-C, обнаруженные при лечении Epanova, согласовывались с обнаруженным увеличенным размером липопротеиновых частиц. Уровни крупных VLDL, средних VLDL, малых VLDL, общих VLDL и размер VLDL измеряли для плацебо и для каждой из подвергаемых лечению групп в исследовании ESPRIT. Результаты представлены на ФИГ. 53 и демонстрируют, что лечение Epanova привело в результате в увеличенным количествам крупных частиц VLDL и соответственно уменьшенным количествам малых частиц VLDL. Уменьшенные частицы VLDL обнаружены вместе с увеличением размера частиц LDL, как представлено в ФИГ. 54. Как представлено на ФИГ. 55, по мере снижения уровней TG в конце лечения, процентное увеличение размера LDL-P было больше. Рассматриваемые совместно, ФИГ. 53-55 демонстрируют, что лечение Epanova привело в результате к увеличенному размеру липопротеиновых частиц, причем данное открытие может объяснить обнаруженные увеличенные LDL-C.
Таблица 42 ниже обобщает результаты исследования ESPRIT.
Все публикации, патенты, заявки на патенты и другие документы, цитированные в данной заявке на изобретение, включены здесь посредством ссылки для всех задач в той же самой степени, как если бы для каждой отдельной публикации, патента, заявки на патент или другого документа было индивидуально указано, что она включена для всех задач посредством ссылки.
Хотя проиллюстрированы и описаны различные специфические воплощения, понятно, что различные изменения могут быть осуществлены не выходя за пределы сущности и объема изобретения.