АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ FC-РЕЦЕПТОРОВ

1. Применение иммобилизованного нековалентного комплекса неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) в качестве лиганда для аффинной хроматографии при аффинной хроматографии с восходящим линейным градиентом pH.
2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что аффинную хроматографию с восходящим линейным градиентом pH применяют для разделения антител или химерных полипептидов, содержащих по меньшей мере Fc-участок.
3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что неонатальный Fc рецептор и бета-2-микроглобулин независимо друг от друга имеют человеческое происхождение или мышиное происхождение или происходят от яванского макака, крысы или кролика.
4. Применение по п. 1, отличающееся тем, что бета-2-микроглобулин происходит из того же биологического вида, что и неонатальный Fc рецептор.
5. Применение по п. 1, отличающееся тем, что неонатальный Fc рецептор и бета-2-микроглобулин представляют собой человеческий неонатальный Fc рецептор дикого типа и человеческий бета-2-микроглобулин дикого типа, независимо друг от друга имеющие от 0 до 10 аминокислотных модификаций.
6. Применение по п. 1, отличающееся тем, что нековалентный комплекс неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) связан с твердой фазой.
7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что твердая фаза представляет собой хроматографический материал.
8. Применение по п. 6, отличающееся тем, что нековалентный комплекс неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) биотинилирован, а твердая фаза модифицирована стрептавидином.
9. Применение по п. 1, отличающееся тем, что градиент pH представляет собой изменение pH от первого значения до второго значения, где первое значение pH составляет от приблизительно 3,5 до приблизительно 7,5, а второе значение pH составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 9,5.
10. Применение по п. 9, отличающееся тем, что первое значение pH составляет приблизительно 5,5, а второе значение pH составляет приблизительно 8,8.
11. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для определения времени полужизни антитела in vivo путем определения соотношения времени удерживания антитела и времени удерживания референтного антитела.
12. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для определения окисленного метионина в составе антитела.
13. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для определения степени олигомеризации антитела.
14. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для скрининга библиотеки модифицированных антител или модифицированных химерных полипептидов родительского антитела или родительского химерного полипептида, содержащих по меньшей мере связывающую FcRn область Fc-участка, на такие модифицированные антитела или модифицированные химерные полипептиды, у которых аффинность связывания с FcRn изменена по сравнению с родительским антителом или родительским химерным полипептидом.
15. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для идентификации антител или химерных полипептидов, которые содержат по меньшей мере связывающую FcRn область Fc-участка, демонстрирующих измененное связывание с неонатальным Fc рецептором.
16. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для удаления половинных молекул антител из препаратов IgG.
17. Применение по п. 1, отличающееся тем, что применение предназначено для удаления агрегатов антител и олигомерных форм антител из препаратов IgG.
18. Применение по любому из пп. 1-17, отличающееся тем, что антитело представляет собой моноспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или биспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или триспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или тетраспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида.
19. Применение иммобилизованного нековалентного комплекса неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) в качестве лиганда для аффинной хроматографии при аффинной хроматографии с нисходящим линейным градиентом pH.
20. Применение по п. 19, отличающееся тем, что аффинную хроматографию с нисходящим линейным градиентом pH применяют для разделения антител или химерных полипептидов, содержащих по меньшей мере Fc-участок.
21. Применение по п. 19, отличающееся тем, что неонатальный Fc рецептор и бета-2-микроглобулин независимо друг от друга имеют человеческое происхождение или мышиное происхождение или происходят от яванского макака или крысы, или кролика.
22. Применение по п. 19, отличающееся тем, что бета-2-микроглобулин происходит из того же биологического вида, что и неонатальный Fc рецептор.
23. Применение по п. 19, отличающееся тем, что неонатальный Fc рецептор и бета-2-микроглобулин представляют собой человеческий неонатальный Fc рецептор дикого типа и человеческий бета-2-микроглобулин дикого типа, независимо друг от друга имеющие от 0 до 10 аминокислотных модификаций.
24. Применение по п. 19, отличающееся тем, что нековалентный комплекс неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) связан с твердой фазой.
25. Применение по п. 24, отличающееся тем, что твердая фаза представляет собой хроматографический материал.
26. Применение по п. 24, отличающееся тем, что нековалентный комплекс неонатального Fc рецептора (FcRn) и бета-2-микроглобулина (b2m) биотинилирован, а твердая фаза модифицирована стрептавидином.
27. Применение по п. 19, отличающееся тем, что градиент pH представляет собой изменение pH от первого значения до второго значения, где первое значение pH составляет от приблизительно 7,0 до приблизительно 8,5, а второе значение pH составляет от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,9.
28. Применение по п. 27, отличающееся тем, что первое значение pH составляет приблизительно 7,4, а второе значение pH составляет приблизительно 6,0.
29. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для определения времени полужизни антитела in vivo путем определения соотношения времени удерживания антитела и времени удерживания референтного антитела.
30. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для определения окисленного метионина в составе антитела.
31. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для определения степени олигомеризации антитела.
32. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для скрининга библиотеки модифицированных антител или модифицированных химерных полипептидов родительского антитела или родительского химерного полипептида, содержащих по меньшей мере связывающую FcRn область Fc-участка, на такие модифицированные антитела или модифицированные химерные полипептиды, у которых аффинность связывания с FcRn изменена по сравнению с родительским антителом или родительским химерным полипептидом.
33. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для идентификации антител или химерных полипептидов, которые содержат по меньшей мере связывающую FcRn область Fc-участка, демонстрирующих измененное связывание с неонатальным Fc рецептором.
34. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для удаления половинных молекул антител из препаратов IgG.
35. Применение по п. 19, отличающееся тем, что применение предназначено для удаления агрегатов антител и олигомерных форм антител из препаратов IgG.
36. Применение по любому из пп. 19-35, отличающееся тем, что антитело представляет собой моноспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или биспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или триспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида, или тетраспецифическое антитело или антительный фрагмент химерного полипептида.
37. Вариант человеческого IgG1 с модификацией Fc-участка, у которого в позиции 252 произведена аминокислотная замена метионина на гистидин, а в позиции 428 произведена аминокислотная замена метионина на глутаминовую кислоту.