Влияние препарата стабизола на интенсивность индуцированной липопероксидации в крови детей

УДК 547 458.6:616.45 С.Г. Гаймоленко, Б.С. Хышиктуев, И.Б. Ли, П.П. Терешков

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА - СТАБИЗОЛА - НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ИНДУЦИРОВАННОЙ

ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ В КРОВИ ДЕТЕЙ

Читинская государственная медицинская академия, областная детская клиническая больница

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния различных концентраций стабизола на показатели липопероксидации в модельной системе. Объектом изучения была кровь 10 практически здоровых детей. После приготовления разведений крови со стабизолом и физиологическим раствором в 1,1, 1,2 и 1,4 раза процессы перекисного окисления липидов индуцированы сернокислым железом в течение 30 минут. Исследовано содержание интермедиатов ПОЛ, ТЕК активных продуктов, общий антиокислительный потенциал плазмы, перекисная резистентность эритроцитов. Полученные результаты свидетельствуют об интенсификации процессов липопероксидации и угнетении исследованных параметров антиоксидантной защиты под воздействием ионов Fe2+ на кровь, разбавленную физиологическим раствором. Индукция ПОЛ в присутствии препарата ГЭК — стабизола

- менее выражена: прослеживается отчетливое нормализующее влияние на содержание интермедиатов липопероксидации, отмечается увеличение общей АОА, скорости каталазных реакций в эритроцитах, стабилизация мембран эритроцитов. Установлена взаимосвязь некоторых параметров системы «ПОЛ- антиоксиданты» от концентрации препарата.

Ключевые слова: катализ, взаимосвязь, раствор

INFLUENCING OF A HIDROKSIATILKRAKHMAL DRUG А - STABIZOL - ON INTENSITY INDUCED LIPID PEROXIDATION IN A BLOOD OF CHILDREN

S.G. Gimolenko, B.S. Hishikuev, I.B. Li, P.P. Tereshcov

The aim of the investigation was to study effects of different levels of stabizoI on lipid peroxidation (LPO) values in a model system. The object of the study was blood collected from 10 healthy children donors. Blood was 1.1, 1.2 and 1.4 times diluted with stabizol and saline after which lipid peroxidation was induced by iron sulfate exposure for 30 minutes. Levels of LPO - intermediates, TBA - active products, plasma total antioxidant potential, and erythrocyte peroxide resistance were studied. The data obtained testify to intensified lipid peroxidation and inhibited antioxidant defense values of saline diluted blood under Fe2+ exposure. Stabizol induced lipid peroxidation was less marked: there were distinct normalizing effects of stabizol on LPO — intermediates, antioxidant activity was elevated, the rate of erythrocyte catalase reactions was increased, and erythrocyte membranes were stabilized. Changes in some parameters of “LPO - Antioxidants” were found to be directly correlated to stabizol levels.

Key words: a catalysis, intercoupling, solution

В настоящее время препараты гидроксиэтил-крахмала (ГЭК) широко применяются в клинической практике в качестве искусственных плазмо-заменителей. Сравнительные исследования показали значительные преимущества производных ГЭК по сравнению с ранее распространенными растворами декстранов, желатина, Рингера, альбумина [4,7,8]. Данные преимущества, прежде всего, обусловлены очень низкой частотой аллергических реакций и побочных влияний, устойчивым волемическим эффектом, улучшением реологических свойств крови [4,8]. Наиболее значимым отрицательным воздействием ГЭК является развитие геморрагических осложнений, которые

связаны с нарушением функции тромбоцитов и недостаточностью фактора VIII (ЛУіІІеЬгапсІ), гипофибриногенемией [4,8,15]. Выраженность побочных реакций имеет прямую зависимость от дозы препарата и его химических свойств: чем больше молекулярная масса и соотношение Сг/Сб, тем чаще регистрируются нарушения гемостаза [4,8,15]. В литературе практически отсутствуют сведения о влиянии препаратов ГЭК на процессы перекисного окисления липидов (ГІОЛ) и антиоксидантную защиту [14].

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить влияние различных концентраций препарата ГЭК - стабизола - на показатели индуцированной липопероксидации в крови здоровых детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследована кровь 10' практически здоровых детей старшего возраста. Забор крови выполнялся утром натощак, в качестве антикоагулянта использовался раствор цитрата натрия. Модельную систему готовили следующим образом: кровь разводили стабизолом (450 000/0,7/6%) в кварцевых кюветах объемом 5 мл в соотношениях

0,5:4,5, 1,0:4,0 и 2,0:3,0, что соответствовало 10, 20 и 40% замещению объема. Аналогичные пробы с физиологическим раствором NaCI выполнены для отслеживания эффекта разведения. В последующем инициацию перекисного окисления липидов вызывали добавлением раствора сернокислого железа (1 мкмоль/л) на шейкере при t 37°С течение 30 мин. Реакция липопероксидации останавливалась путем одномоментного введения 6% раствора ЭДТА (1:19). После центрифугирования концентрацию начальных интермедиатов ПОЛ [6], ТБК-активных продуктов [1], общую антиокислительную активность (АОА) изучали в плазме крови [5], а в эритроцитах исследовалась активность каталазы [3] и их устойчивость к перекисному гемолизу [2]. Изучение биохимических показателей проводили до и после инициирования ПОЛ. При оценке показателей системы «ПОЛ-антиокислительная активность» в присутствии физиологического раствора и стабизола выполнен перерасчет всех плазменных параметров в соответствии с осуществленным разведением, что было необходимо для сравнения с результатами исследований цельной крови. Полученные результаты обработаны методами вариационной статистики с использованием программного пакета «Microsoft Excel Professional for Windows - 98»,

корреляционные зависимости устанавливались по методу Пирсона.

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Направленность изменений в системе «ПОЛ-антиокислительная активность» после инициации липопероксидации в присутствии физиологического раствора и стабизола неоднозначна. Так, вследствие инициации ПОЛ в крови, разбавленной изотоническим раствором NaCI, отмечен достоверный рост содержания диеновых конъюгатов (ДК), кетодиенов и сопряженных триенов (КД и СТ) по сравнению с исходными данными в

разведениях 1,4 и 1,1 (табл.). Наименьшие изменения зарегистрированы при добавлении к крови 20 об% физиологического раствора (табл.). Накопление ТБК-активных продуктов прогрессировало по мере нарастания степени разведения, что подтверждается результатами корреляционного анализа. Коэффициент корреляции между степенью объемного разведения и значением изученного показателя равен 0,81.

Цифры общей АОА плазмы прогрессивно уменьшались с увеличением степени разведения (рис.1). Интенсивность каталазной реакции в эритроцитах в разведениях 1,4 и 1,1 была достоверно ниже, а в соотношении 4:1 приближалась к исходным значениям (рис.2). Дисбаланс в системе «ПОЛ-антиокислительная защита» за счет накопления интермедиатов липопероксидации усиливает мембранодеструктивные процессы, что проявляется снижением устойчивости эритроцитов к перекисному гемолизу (рис.З).

Исследование параметров индуцированного ПОЛ в присутствии стабизола выявило некоторые отличия по сравнению с таковыми при разведении физиологическим раствором. В обеих фазах липидного экстракта отмечено нормализующее влияние данного препарата ГЭК на содержание ДК, КД и СТ (табл.). Накопления ДК в гептановом экстракте в присутствии различных концентраций стабизола не наблюдалось, а при разведении 1,2 их содержание было на 37,1% ниже исходных значений. В изопропа-нольной фазе нормализующее влияние стабизола на содержание ДК было менее выраженным, однако при добавлении 20 объемных процентов стабизола их концентрация приближалась к контрольным величинам. Рост КД и СТ в обеих фазах липидного экстракта было менее значимым, однако, при увеличении концентрации препарата в пробах крови значения этих показателей приближались к исходным. Нормализующее влияние стабизола более выражено в изопропанольной фазе при наибольшем разведении: интенсивность накопления КД и СТ снижена более чем в 2 раза по сравнению с соответствующим разведением физиологическим раствором (табл.).

Исследование уровня ТБК-активных продуктов ПОЛ на фоне индукции липопероксидации в присутствии стабизола выявило снижение их цифр ниже исходных величин, особенно при максимальном разведении (р<0,05). Во всех разведениях концентрация ТБК-активных продуктов была достоверно ниже, чем в присутствии физиологического раствора.

Исходные данные

!Физиологический раствор ИСтабизол

4,5:0,5

Рис. 1. Изменение общей антиокислительной активности плазмы в исследуемых группах (%). Примечания: * - достоверные отличия с исходными величинами;

** - достоверные отличия между контрольной и опытной группами в соответствующих разведениях.

Исходные данные

3,0:2,0 Физ р-р

4,0:1,0 Физ р-р

] Физиологический раствор

I Стабизол

4,5:0,5 Физ р-р

Рис. 2. Изменение активности каталазы эритроцитов в исследуемых группах (нм/с мг белка). Примечания: Примечания: * - достоверные отличия с исходными величинами;

- достоверные отличия между контрольной и опытной группами в соответствующих разведениях.

Рис. 3. Изменение перекисной резистентности эритроцитов исследуемых группах (% гемоптированных клеток).

Примечания: Примечания: * - достоверные отличия с исходными величинами;

** - достоверные отличия между контрольной и опытной группами в соответствующих разведениях.

Изучение антиокислительного потенциала разведенных стабизолом образцов крови показало наличие протекторного действия препарата. Общая АОА плазмы крови при максимальном разведении восстанавливалась до исходных величин (рис.1). При корреляционном анализе выявлена взаимосвязь между концентрацией препарата в пробе и уровнем АОА (г = 0,89). Восстановление антиоксидантного потенциала крови обусловлено, в том числе, и увеличением интенсивности каталазной реакции в эритроцитах. Активность каталазы эритроцитов была достоверно выше при максимальной концентрации стабизола в пробе, а в остальных - не отличалась от исходных значений (рис.2).

Восстановление антиокислительного резерва крови, снижение интенсивности накопления интермедиатов ПОЛ способствует повышению устойчивости эритроцитов к перекисному гемолизу по мере нарастания концентрации стабизола. Сильная взаимосвязь регистрировалась между степенью разведения и процентом гемолизиро-ванных эритроцитов (г = -0,75). При минимальном разведении ПРЭ достоверно не отличалась от таковой при разведении физиологическим раствором, а в последующих разведениях была достоверно ниже (рис.З).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о нормализующем влиянии стабизола на баланс в системе «ПОЛ - антиоксиданты», что проявляется восстановлением АОА на фоне снижения содержания начальных и промежуточных продуктов ПОЛ. Известно, что препараты ГЭК обладают способностью изменять патологическую проницаемость биологических мембран за счет абсорбции молекул вещества на их поверхности [9,11], а так же повышают устойчивость эритроцитов к механическому и криогенному воздействию [12,13]. По-видимому, этим и обусловлено снижение выраженности повреждающего воздействия свободных радикалов на мембраны эритроцитов, что проявляется, прежде всего, снижением ПРЭ. Увеличение интенсивности каталазной реакции в эритроцитах, безусловно, взаимосвязано со стабилизацией мембран, однако не исключено, что повышение активности каталазы выше исходных значений по мере нарастания концентрации стабизола обусловлено объемным воздействием препарата [4,8]. Поскольку препараты ГЭК обладают свойством связывать и удерживать молекулы воды, при нарастании концентрации стабизола источником воды могут быть сами эритроциты, а, следовательно, активность каталазы может возрастать [10].

Таблица

Показатели липопероксидации у детей после инициации ПОЛ в присутствии стабизола in vitro

Показатель Исходный Физиологический раствор NaCI (кон-I троль) Стабизол

уровень | 3,0:2,0 (1,4)* 4,0:1,0 d.2)* 4,5:0,5 (1,1)* 3,0:2,0 (1,4)* 4,0:1,0 (1,2)* 4,5:0,5 (1,D*

1 2 3 4 5  6 7.

Гептановая фаза

232 нм (ДК) 0,122 ±0,007 0,213 ±0,022 pi< 0,01 0,085 ±0,005 Pi< 0,001 0,160 ±0,012 Pi< 0,05 0,090 ±0,006 Pi< 0,01 p2< 0,001 0,074 ±0,002 Pi< 0,001 0,115 ±0,006 p4< 0,01

278 нм (КД и СТ) 0,057 ±0,003 0,102 ±0,007 pi< 0,001 0,07 4±0,006 pi< 0,05 0,094 ±0,007 Pi< 0,001 0,067 ±0,006 P2< 0,01 0,061 ±0,005 0,074 ±0,006 Pj< 0,05 p4< 0,05

Изопроданольная фаза

232 нм (ДК) 1,30±0,03 1,91 ±0,04 Pi< 0,001 1,59±0,08 Pi< 0,01 2,06±0,13 Pi< 0,001 1,86±0,13 Pi< 0,001 1,38±0,04 Рз< 0,05 1,55±0,05 Pi< 0,001 P4< 0,01

278 нм (КД и СТ) 0,86±0,03 1,90±0,15 Pi< 0,001 0,98±0,04 Pj< 0,05 1,44±0,08 Pi< 0,001 0,94±0,05 p2< 0,001 0,93±0,05 1,004±0,03 p,< 0,001 p4< 0,001

ТЕК ак- ти-вные продук- ты 1,92±0,07 2,65+0,12 pi< 0,001 2,26±0,09 pi< 0,05 2,22±0,08 Pi< 0,05 1,671 ±0,07 Pi< 0,05 p2< 0,001 1,83±0,08 Рз< 0,01 1,78±0,04 p4< 0,001

Примечания: * - коэффициент перерасчета на разведение;

р - уровень значимости достоверных отличий относительно исходных данных или соответствующих разведений контрольной группы.

ЛИТЕРАТУРА

1. Андреева Л.И. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарби-туровой кислотой / Л.И. Андреева, Л.А. Кожемякин, А.А. Кишкун //Лаб. дело. - 1988.- №11.-С.41-43.

2. Исследование показателей липидного обмена и перекисного окисления липидов: Метод, рекомендации ЦОЛИУВ, под ред. проф. Г.А. Яровой,- М., 1987,- 24с.

3. Метод определения каталазы / М.А. Ко-ролкж, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лаб. дело. - 1988.- №1.- С. 16-19

4. Молчанов И.В. Растворы гидроксиэтили-рованного крахмала - современные и эффективные плазмозамещающие средства инфузионной терапии: Моногр. обзор / И.В. Молчанов, О.А. Гольдина, Ю.В. Горбачевский. - М.: Изд-во НЦССХ им. А.И. Бакулева РАМН, 1998. - 137 с.

5. Промыслов М.Ш., Демчук М.Л. Модификация метода определения суммарной анти-оксидантной активности сыворотки крови / М.Ш. Промыслов, М.Л. Демчук // Вопр. мед. Химии,- 1990,- № 4.- С.90-92.

6. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах крови / И.А. Волчегорский, А.Г. Налимов, Б.Г. Яровинский, Р.И. Лифшиц // Вопр. мед. химии,- 1989.-№ 1,- С. 127-131.

7. Adams Н.А. Volume replacement solu-tions-pharmacology and clinical use / H.A. Adams, S. Piepenbrock, G. Hempelmann // Anasthe-siol Intensivmed Notfallmed Schmerzther. - 1998.

- V. 33, N1,-P.-2-17.

8. An international view of hydroxyethyl starches / J. Treib, J.F. Baron, M.T. Grauer, R.G. Strauss // Intensive Care Med. - 1999. - V. 25, N3. -P.- 258-268.

9. Hydroxy ethyl starch reduces the chemotaxis of white cells through endothelial cell monolayers / R. Hofbauer, D. Moser, S. Homykewycz, M. Frass,

S. Kapiotis // Transfusion. - 1999. - V. 39, N3. - P. -289-294.

10. Influence of some infusion fluids on red blood cells deformity in vitro / B. Chmiel, S. Kus-mierski, B. Turczynski // Wiad Lek. - 2000. - V. 53, N3-4.-P. -146-150.

11. Macromolecules reduce abnormal microvas-cular permeability in rat limb ischemia-reperfusion injury / B.A.Zikria, C. Subbarao, M.C. Oz, S.T. Shih, P.F. McLeod, R. Sachdev, H.P. Freeman, M.A. Hardy // Crit Care Med. - 1989. - V. 17, N12. -P.-1306-1309.

12. Protective effects of plasma replacement fluids on erythrocytes exposed to mechanical stress / R. Sumpelmann, T. Schurholz, G. Marx, R. Zander // Anaesthesia. - 2000. - V. 55, N10. - P. -976-979.

13. Stabilization of dry membranes by mixtures of hydroxyethyl starch and glucose: the role of vitrification / J.H. Crowe, A.E. Oliver, F.A. Hoekstra, L.M. Crowe // Cryobiology. - 1997. -V. 35, N1.-P.-20-30.

14. Stratford N. Antioxidant potential of i.v. fluids / N. Stratford // Br J Anaesth. - 1997. - V. 78, N6.-P.-757-759.

15. Treib J. Hydroxyethyl starch: effects on hemostasis / J. Treib, J.F. Baron // Ann Fr Anesth Reanim. - 1998. - V. 17, N1. - P. - 72-81.

УДК 612.821 +612.76 [-053.4] Л.П. Горенштейн, Л.Б. Маюн, Г.Я. Власова, Т.Ф. Трофимова, С.А. Логачёва, Т.В. Юнг

ОСОБЕННОСТИ ПСИХИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ И ДВИГАТЕЛЬНЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ОРГАНИЗОВАННЫХ ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА

Читинская Государственная медицинская академия

В статье рассмотрены данные об уровнях развития психических процессов, двигательной активности детей ДЦУ №74 в комплексной оценке состояния их здоровья. Исследуется взаимозависимость психических особенностей ребёнка с индивидуальными двигательными возможностями.

Ключевые слова: ребенок, активнисть

L.P. Gorenshtan, L.B. Mayn, G.Y. Vlasova, T.F. Trofimova, S.A. Logacheva, T.V. Yung FEATURES OF MENTAL PROCESSES AND PROPULSION CAPABILITIES OF ORGANIZED

CHILDREN OF PRESCHOOL AGE

This paper data concerning different levels of psychic process and motional activity children from kindergarten №74 in health and disease. There are research correlation of children psychic peculiarities and individual motional possibilities.

Key words: the child, activity

Оценивая нервно- психическое развитие детей (НПР), мы изучали углубленно особенности психики ( память, зрительная память, внимание, мышление, восприятие с умением ребенка устанавливать причинно- следственные связи, делать обобщения и давать оценки воспринимаемым ситуациям), направленные на выявление сущности индивидуальных особенностей личности ребенка. Всего было обследовано 40 детей в возрасте 4,5-6 лет, посещающих детский сад №74 Читы. У 30 % детей было выявлено медленное 98 _______________________

вхождение в деятельность; низкая динамика выучивания определялась у 35 %, неустойчивость внимания - у 30 % детей. У 47,5% детей были обнаружены недостатки внимания (недостаточная способность концентрировать внимание на предъявляемых, объектах, плохая наблюдательность, недостаточные переключаемость, устойчивость, распределение, объем), а 40% детей имели плохое развитие зрительной памяти. При исследовании мыслительных процессов, выявлялась способность ребенка проводить