МУТАНТНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ, УСТОЙЧИВЫЕ К ГИБЕЛИ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЛАКТОЗЫ

1. Способ получения микроорганизмов, устойчивых к явлению гибели под действием лактозы, выращенных в окружении, в котором лактоза комбинируется с другим источником углерода, где способ включает:
a. мутирование экспрессии лактозного транспортера в микроорганизмах, где указанная мутация приводит к экспрессии указанного лактозного транспортера,
b. выращивание мутированных микроорганизмов на среде, включающей источник углерода, отличный от лактозы,
c. добавление лактозы к указанной среде в процессе роста указанных мутированных микроорганизмов, и
d. отбор микроорганизмов, устойчивых к явлению гибели под действием лактозы, растущих на указанной среде, включающей лактозу, которые сохраняют, по меньшей мере, 50% от уровня транспорта лактозы в клетку, достигаемого с экспрессионной кассетой дикого типа указанного лактозного транспортера.
2. Способ по п. 1, где стадию а) осуществляют путем введения гетерологичного промотора перед эндогенным или экзогенным геном лактозного транспортера, и/или путем мутирования нетранслируемой области перед кодирующей последовательностью, которая содержит последовательность связывания рибосомы или последовательность Козак, и/или путем модифицирования частоты использования кодонов эндогенного гена лактозного транспортера.
3. Способ по п. 2, где введение гетерологичного промотора перед эндогенным или экзогенным геном лактозного транспортера осуществляют за счет а) делеции эндогенных лактозных транспортеров из генома и введения их в другой участок в геноме указанного микроорганизма, или b) за счет введения гетерологичного промотора перед эндогенными лактозными транспортерами, или с) за счет нокаута эндогенного лактозного промотора и введения гетерологичного промотора в тот же участок генома указанного микроорганизма.
4. Способ по пп. 1-3, где указанный экспрессированный лактозный транспортер обнаруживают с помощью трансляционного связывания с репортерным геном и/или через связывание с аптамером.
5. Способ по пп. 1-4, где указанный экспрессированный лактозный транспортер обнаруживают посредством генетических конструкций, приведенных в SEQ ID n° 2, 3, 4 и/или 5.
6. Способ по пп. 1-5, где указанный лактозный транспортер представляет собой лактозную пермеазу.
7. Способ по пп. 1-6, где указанный микроорганизм представляет собой бактериальную, дрожжевую или грибную клетку.
8. Последовательности промотора, последовательности нетранслируемой области перед кодирующей последовательностью, которые содержат последовательности связывания рибосомы или последовательности Козак, и/или последовательности лактозной пермеазы, приводящие к экспрессии лактозного транспортера, которые не приводят к фенотипу гибели под действием лактозы, и которые получают способом по пп. 1-7.
9. Микроорганизм, устойчивый к явлению гибели под действием лактозы, выращенный в окружении, в котором лактоза комбинируется с другим (другими) источником (источниками) углерода, и получаемый способом по пп. 1-7.
10. Микроорганизм по п. 9, содержащий гетерологичную последовательность перед геном лактозного транспортера, приведенную в SEQ ID N° 1, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56 или 57.
11. Микроорганизм по пп. 9-10, в котором гены, кодирующие ферменты из путей деградации лактозы и/или галактозы, являются менее функциональными или нефункциональными.
12. Применение микроорганизма и/или последовательности по пп. 9-11 и/или 8, соответственно, для производства специальных продуктов на основе лактозы и/или галактозы.
13. Применение микроорганизма и/или последовательности по п. 12, где указанные специальные продукты на основе лактозы представляют собой специальные углеводы, гликолипиды и галактозилированные соединения.
14. Применение микроорганизма по п. 13, где указанные специальные углеводы представляют собой 2-фукозиллактозу, или 2'-фукозиллактозу, или 3-фукозиллактозу, или 2',3-дифукозиллактозу, или лакто-N-триозу, или лакто-N-тетраозу, или лакто-N-тетраозу, или 3'-сиалиллактозу, или 6'-сиалиллактозу.