РЕДАКТИРОВАНИЕ ЦЕЛЕВОЙ РНК

1. Олигонуклеотидная конструкция для сайт-направленного редактирования  нуклеотида в целевой РНК-последовательности в эукариотической клетке, содержащая:
(a) нацеливающий участок, содержащий антисмысловую последовательность, комплементарную части целевой РНК; и
(b) рекрутирующий участок, способный связывать и рекрутировать структуру, редактирующую РНК, естественно присутствующую в указанной клетке и способную осуществлять редактирование указанного нуклеотида.
2. Олигонуклеотидная конструкция по п. 1, в которой рекрутирующий участок не является комплементарным целевой последовательности и способен связывать и рекрутировать структуру, редактирующую РНК, естественно присутствующую в указанной клетке и способную осуществлять редактирование указанного нуклеотида.
3. Олигонуклеотидная конструкция по п. 1 или 2, в которой рекрутирующий участок способен (i) образовывать внутримолекулярную структуру "стебель-петля", (ii) связывать и рекрутировать структуру, редактирующую РНК, естественно присутствующую в указанной клетке, и (iii) осуществлять редактирование указанного нуклеотида.
4. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой нацеливающий участок содержит олигонуклеотидную последовательность, образующую дцРНК структуру посредством спаривания оснований с целевой РНК-последовательностью.
5. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-4, в которой нацеливающий участок содержит некомплементарный нуклеотид в положении, противостоящем нуклеотиду, подлежащему редактированию в целевой РНК-последовательности.
6. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-5, в которой нуклеотид, являющийся мишенью редактирования, представляет собой аденозин или цитидин, а структура, редактирующая РНК, содержит дезаминазную активность.
7. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-6, в которой нуклеотид, являющийся мишенью редактирования, представляет собой аденозин, а редактирующая структура представляет собой аденозиндезаминазу.
8. Олигонуклеотидная конструкция по любому из предыдущих пунктов, причем клетка является человеческой клеткой.
9. Олигонуклеотидная конструкция по любому из предыдущих пунктов, в которой редактирующая структура содержит hADAR1 или hADAR2.
10. Олигонуклеотидная конструкция по п. 5, в которой некомплементарный нуклеотид представляет собой цитидин или уридин, предпочтительно, цитидин.
11. Олигонуклеотидная конструкция по п. 3, в которой последовательность нуклеиновой кислоты, способная образовывать внутримолекулярную структуру стебель-петля, представляет собой олигорибонуклеотидную (РНК) последовательность.
12. Олигонуклеотидная конструкция по п. 11, в которой рекрутирующий участок содержит структуру стебель-петля, содержащую последовательность (RY или YR)nNm(RY или YR)n, где R обозначает аденозин или гуанозин, Y обозначает уридин или цитидин, N обозначает аденозин, гуанозин, цитидин, уридин или инозин, n обозначает 3 или более, m обозначает 4 или более, и где N образует петлю, а две последовательности (RY)n или (YR)n образуют структуру двухцепочечного стебля посредством комплементарного спаривания оснований.
13. Олигонуклеотидная конструкция по п. 11 или 12, в которой петля представляет собой тетрануклеотид или пентануклеотид, имеющий последовательность GCUMA, где G обозначает гуанозин, С обозначает цитидин, М обозначает аденозин или цитидин и U обозначает уридин, предпочтительно, GCUAA.
14. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой рекрутирующий участок содержит нуклеотидную последовательность:
5'-(AUANa)nUAUAACAAUAUgcuaaAUGUUGUUAUA(NbUAU)n-3'
где Na и Nb, каждый, обозначают единичные нуклеотиды, которые могут представлять собой A, G, С или U, при условии, что Na и Nb образуют пару неспаренных оснований (мисмэтчей) при образовании структуры стебель-петля и n обозначает 1 или 0.
15. Олигонуклеотидная конструкция по п.п. 11 или 13, в которой рекрутирующий участок содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NOs: 6, 7, 20, 21, 22, 23 и 24.
16. Олигонуклеотидная конструкция по п.п. 11 или 13, в которой дцРНК структура стебель-петля получена из РНК-последовательности, кодирующей В-домен человеческого белка GluR, или имитирует РНК-последовательность, кодирующую В-домен человеческого белка GluR.
17. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой рекрутирующий участок содержит дезоксиолигонуклеотидную последовательность, включающую последовательность (CG)3T4(CG)3 (SEQ ID NO: 5), где С обозначает цитидин, G обозначает гуанозин и Т обозначает тимидин.
18. Олигонуклеотидная конструкция по п. 1, в которой один или более нуклеотидов содержат химическую модификацию.
19. Олигонуклеотидная конструкция по п. 18, в которой нацеливающий участок олигонуклеотидной конструкции содержит один или более 2'-O рибозил-замещенных уридинов, предпочтительно, 2'-ОМе замещенных уридинов.
20. Олигонуклеотидная конструкция по п. 19, в которой все уридины, противостоящие аденозинам в целевой РНК-последовательности, которые не являются мишенями редактирования, представляют собой 2'-метокси-(2'-ОМе) уридин.
21. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой нацеливающий участок и рекрутирующий участок разделены линкерной последовательностью, содержащей олигонуклеотидную последовательность, олигопептидную последовательность или другую ковалентную химическую связь, например, такую как ПЭГ.
22. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой нацеливающий участок по существу прерывается и образует 5' часть олигонуклеотидной конструкции, а рекрутирующий участок образует 3' часть олигонуклеотидной конструкции.
23. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой нацеливающий участок по существу прерывается и образует 3' часть олигонуклеотидной конструкции, а рекрутирующий участок образует 5' часть олигонуклеотидной конструкции.
24. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, в которой нацеливающий участок прерывается рекрутирующим участком, так что нацеливающий участок образует 5' часть и 3' часть олигонуклеотидной конструкции, а рекрутирующий участок образует средний фрагмент олигонуклеотидной конструкции.
25. Олигонуклеотидная конструкция по п. 24, в которой рекрутирующий участок образует петлю, когда нацеливающий участок отжигается с целевой РНК-последовательностью посредством комплементарного спаривания оснований.
26. Олигонуклеотидная конструкция по любому из предыдущих пунктов, в которой длина олигонуклеотида составляет от 20 до 100 нуклеотидов, предпочтительно, от 24 до 60 нуклеотидов, более предпочтительно, от 30 до 50 нуклеотидов.
27. Олигонуклеотидная конструкция по любому из предыдущих пунктов, в которой целевая РНК-последовательность выбрана из группы, состоящей из предшественника РНК (пре-мРНК), матричной РНК (мРНК), рибосомной РНК (рРНК), транспортной РНК (тРНК) и микроРНК.
28. Олигонуклеотидная конструкция по любому из пп. 1-3, 10-12, 15-16, 18-20 или 25, где целевая РНК кодирует CFTR (например, для редактирования мутации 1784G>A), СЕР290 (например, для редактирования мутации c.2991+1655A>G), А1АТ (например, для редактирования мутации 9989G>A) или LRRK2 (например, для редактирования мутации G6055).
29. Способ сайт-направленного редактирования нуклеотида в целевой РНК в эукариотической клетке, предпочтительно, в клетке млекопитающего, более предпочтительно, в человеческой клетке, с помощью РНК-редактирующей структуры, естественно присутствующей в указанной клетке и способной осуществлять редактирование указанного нуклеотида, включающий стадии: (i) предоставление указанной клетке олигонуклеотидной конструкции по любому предыдущему пункту; (ii) выдерживание в течение времени, достаточного для поглощения клеткой указанной олигонуклеотидной конструкции, отжиг указанной олигонуклеотидной конструкции с целевой РНК-последовательностью и предоставление РНК-редактирующей структуры для осуществления реакции редактирования нуклеотида в указанной целевой РНК-последовательности; и (iii) идентификация присутствия редактированного нуклеотида в РНК-последовательности.
30. Способ по п. 29, где целевая РНК кодирует CFTR (например, для редактирования мутации 1784G>A), СЕР290 (например, для редактирования мутации c.2991+1655A>G), А1АТ (например, для редактирования мутации 9989G>A) или LRRK2 (например, для редактирования мутации G6055).