ШТАММЫ AGROBACTERIUM, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ ЧАСТОТЫ ТРАНСФОРМАЦИИ РАСТЕНИЙ

1. Способ трансформации растения, включающий контактирование клетки растения со штаммом Agrobacterium, содержащим, по меньшей мере, одну вспомогательную плазмиду pTi, включающую фрагмент 14,8 KpnI из pSBl, и плазмиду pTi, содержащую, по меньшей мере, одну обезоруженную область Т-ДНК, причем область Т-ДНК включает, по меньшей мере, правую границу Т-ДНК и экзогенную ДНК, прилегающую к границе, где плазмиды содержат различающиеся между собой ориджины репликации.
2. Способ по п. 1, где фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG, выделенный из pSBl, в штаммах Agrobacterium имеет недостаточность функции RecA.
3. Способ трансформации растения, включающий контактирование клетки растения с бактерией рода Agrobacterium, содержащей фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG из pSBl и плазмиду pTi, содержащую, по меньшей мере, одну обезоруженную область Т-ДНК, где фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG интегрирован в нейтральный сайт интеграции хромосомы бактерии.
4. Способ трансформации растения по любому из пп. 1 и 2, где бактерия дополнительно включает плазмиду, содержащую область Т-ДНК, прилегающую, по меньшей мере, к одной границе Т-ДНК, причем плазмида содержит ориджин репликации группы несовместимости IncP.
5. Способ трансформации растения по п. 3, где бактерия дополнительно включает плазмиду, содержащую область Т-ДНК, прилегающую, по меньшей мере, к одной границе Т-ДНК Agrobacterium.
6. Способ трансформации растения по п. 3, где штамм Agrobacterium имеет недостаточность функции RecA.
7. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК содержит последовательности трех или более генов.
8. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК содержит 25000 или более пар нуклеотидных оснований.
9. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК вставляется в единое место локализации в растительной клетке при трансформации растения.
10. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК содержит последовательность более одного гена, и последовательности генов имеют гомологию последовательности, равную или превышающую 60%.
11. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК кодирует один или более инсектицидный белок, гербицидный белок или сочетание инсектицидных белков и белков устойчивости к гербицидам.
12. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК кодирует инсектицидный белок Cry1Ca, инсектицидный белок Cry1F и инсектицидный белок Cry1Ab1.
13. Способ трансформации растения по п. 4, где область Т-ДНК кодирует инсектицидный белок Cry1Ca, инсектицидный белок Cry1F, инсектицидный белок Cry1Ab1 и белок устойчивости к гербицидам AAD-1.
14. Способ по п. 1, где растение является однодольным.
15. Способ по п. 1, где фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG клонирован в сайт Kpn I плазмиды pDAB9291.
16. Способ по п. 1, где вспомогательная плазмида pTi представляет собой плазмиду pMP90.
17. Способ по п. 1, где вспомогательная плазмида pTi представляет собой плазмиду pTiC58Δ.
18. Способ по п. 15, дополнительно включающий трансформацию штамма Agrobacterium с помощью ДНК плазмиды pDAB9292.
19. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадию отбора трансформированной клетки или трансформированной ткани после того, как указанная культивируемая ткань была подвергнута трансформации.
20. Штамм Agrobacterium, содержащий, по меньшей мере, одну вспомогательную плазмиду pTi, включающую фрагмент 14,8 KpnI из pSB1, и плазмиду pTi, содержащую, по меньшей мере, одну обезоруженную область Т-ДНК, где плазмиды содержат различающиеся между собой ориджины репликации.
21. Штамм Agrobacterium по п. 20, где штамм Agrobacterium имеет недостаточность функции RecA.
22. Штамм Agrobacterium, обладающий усиливающими трансформацию свойствами, включающий фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG, выделенный из pSB1, и плазмиду pTi, содержащую, по меньшей мере, одну обезоруженную область Т-ДНК.
23. Штамм Agrobacterium по любому из пп. 20 и 21, где бактерия дополнительно включает плазмиду, содержащую область Т-ДНК, прилегающую, по меньшей мере, к одной границе Т-ДНК Agrobacterium.
24. Штамм Agrobacterium по п. 22, где бактерия дополнительно включает плазмиду, содержащую область Т-ДНК, прилегающую, по меньшей мере, к одной границе Т-ДНК Agrobacterium.
25. Штамм Agrobacterium по п. 24, где штамм Agrobacterium имеет недостаточность функции RecA.
26. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК содержит последовательности трех или более генов.
27. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК содержит 25000 или более нуклеотидов.
28. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК включает последовательности более чем одного гена, и последовательности генов обладают гомологией последовательности, превышающей 60%.
29. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК кодирует один или более инсектицидный белок, гербицидный белок или сочетание инсектицидных белков и белков устойчивости к гербицидам.
30. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК кодирует инсектицидный белок Cry1Ca, инсектицидный белок Cry1F и инсектицидный белок Cry1Ab1.
31. Штамм Agrobacterium по п. 23, где область Т-ДНК кодирует инсектицидный белок Cry1Ca, инсектицидный белок Cry1F, инсектицидный белок Cry1Ab1 и белок устойчивости к гербицидам AAD-1.
32. Геномный локус nilA Agrobacterium tumefaciens, где полинуклеотидная последовательность интегрирована в геномный локус nilA.
33. Геномный локус nilA по п. 32, где полинуклеотидная последовательность включает ген vir.
34. Штамм Agrobacterium с фрагментом 14,8 KpnI VirBCDG из SB1, интегрированным в нейтральный сайт интеграции на хромосоме Agrobacterium.
35. Штамм Agrobacterium по п. 34, где нейтральный сайт интеграции представляет собой геномный локус nilA.
36. Штамм Agrobacterium по любому из пп. 34 и 35, где штамм Agrobacterium имеет недостаточность функции RecA.
37. Штамм Agrobacterium по п. 34, где штамм Agrobacterium представляет собой Agrobacterium tumefaciens.
38. Штамм LB4404 Agrobacterium, включающий фрагмент 14,8 KpnI VirBCDG из pSB1 на вспомогательной плазмиде pTi и плазмиду pTi, содержащую, по меньшей мере, одну обезоруженную область Т-ДНК и экзогенную ДНК, прилегающую, по меньшей мере, к одной границе Т-ДНК Agrobacterium, где плазмиды содержат различающиеся между собой ориджины репликации.
39. Растение, трансформированное способом по любому из пп. 1-19.
40. Растение по п. 39, где любые генетические признаки, введенные в растение путем трансформации, стабильно воспроизводятся в потомках растения.
41. Растение, трансформированное способом по любому из пп. 4-13, где область Т-ДНК стабильно включена в ДНК растения.
42. Растение по п. 41, где любые гены, кодируемые областью Т-ДНК, экспрессируются в растении.
43. Растение по любому из пп. 41 и 42, где любые гены, кодируемые областью Т-ДНК, стабильно воспроизводятся в потомках растения.
44. Растение по п. 41, где растение стабильно экспрессирует инсектицидные белки Cry1Ca, инсектицидные белки Cry1F, инсектицидные белки Cry1Ab1 и гербицидные белки AAD1.
45. Растение по п. 44, где растение представляет собой маис.
46. Штамм LBA4404 Agrobacterium, включающий, по меньшей мере, один ген vir из фрагмента 14,8 KpnI VirBCDG, выделенного из pSB1, интегрированного в нейтральный сайт интеграции на хромосоме Agrobacterium.
47. Плодоносящее трансгенное зерновое растение или его потомство, которое экспрессирует инсектицидные количества белка Cry1Ca, инсектицидного белка Cry1F, инсектицидного белка Cry1Ab1 и устойчивые к гербицидам количества белка AAD-1, где белки Cry1Ca, Cry1F, Cry1Ab1 и AAD-1 совместно экспрессируются с единого локуса рекомбинантной ДНК, стабильно включенной в геном растения.
48. Плодоносящее трансгенное зерновое растение по п. 47, где единый локус рекомбинантной ДНК, по существу, свободен от последовательностей основы вектора из ДНК плазмиды pTi.