АНТИТЕЛА К ЛИМФОТОКСИНУ-α

1. Выделенное антитело к лимфотоксину-α (LTα), содержащее, по меньшей мере, одну последовательность определяющей комплементарность области (CDR), выбранную из группы, состоящей из:
(a) последовательности CDR-L1, содержащей аминокислоты A1-A11, где A1-A11 представляют собой KASQAVSSAVA (SEQ ID № 1) или RASQAVSSAVA (SEQ ID № 2), или содержащей аминокислоты A1-A17, где A1-A17 представляют собой KSSQSLLYSTNQKNFLA (SEQ ID № 3) или KSSQSLLYSANQKNFLA (SEQ ID № 4) или KSSQSLLYSTNQKNALA (SEQ ID № 6), где N представляет собой любую аминокислоту;
(b) последовательности CDR-L2, содержащей аминокислоты B1-B7, где B1-B7 представляют собой SASHRYT (SEQ ID № 7) или WASTRDS (SEQ ID № 8);
(c) последовательности CDR-L3, содержащей аминокислоты C1-C9, где C1-C9 представляют собой QQHYSTPWT (SEQ ID № 9) или QENYSTPWT (SEQ ID № 11) или QQYYSYPRT (SEQ ID № 13) или QQYASYPRT (SEQ ID № 14) или QQYYAYPRT (SEQ ID № 15), где N представляет собой любую аминокислоту;
(d) последовательности CDR-H1, содержащей аминокислоты D1-D10, где D1-D10 представляют собой GYTFTSYVIH (SEQ ID № 16) или GYTFSSYWIE (SEQ ID № 17);
(e) последовательности CDR-H2, содержащей аминокислоты E1-E17, где E1-E17 представляют собой YNNPYNDGTNYNEKFKG (SEQ ID № 18) или EISPGSGSTNYNEEFKG (SEQ ID № 19) или YNNPYNAGTNYNEKFKG (SEQ ID № 101) или EINPGSGSTIYNEKFKG (SEQ ID № 110), где N представляет собой любую аминокислоту; и
(f) последовательности CDR-H3, содержащей аминокислоты F1-F9, где F1-F9 представляют собой PTMLPWFAY (SEQ ID № 20), или содержащей аминокислоты F1-F5, где F1-F5 представляют собой GYHGY (SEQ ID № 21) или GYHGA (SEQ ID № 22).
2. Антитело по п.1, где SEQ ID № 3 представляет собой KSSQSLLYSTAQKNFLA (SEQ ID № 5).
3. Антитело по п.1 или 2, где SEQ ID № 11 представляет собой QESYSTPWT (SEQ ID № 10) или QEVYSTPWT (SEQ ID № 12).
4. Антитело по п.1, где последовательность CDR-L1 представляет собой SEQ ID № 2 или 3, или 4, или 6.
5. Антитело по п.1, содержащее или все SEQ ID №№ 1 или 2 и 7 и 9, или все SEQ ID №№ 1 или 2 и 7 или 8 и 11, или все SEQ ID №№ 16, 18 и 20, или все SEQ ID №№ 16, 101 и 20.
6. Антитело по п.1, содержащее или все SEQ ID №№ 3, 8 и 13, или все SEQ ID №№ 4, 5 или 6, 8 и 13, или все SEQ ID №№ 3, 8 и 14 или 15, или все SEQ ID №№ 4, 5 или 6, 8 и 14 или 15, или все SEQ ID №№ 17, 19 и 21 или 22, или все SEQ ID №№ 17, 110 и 21.
7. Антитело по п.1, содержащее (i) все аминокислотные последовательности от CDR-L1 до CDR-L3 с SEQ ID №№ 1 или 2 и 7 и 9, или с SEQ ID №№ 1 или 2 и 7 или 8 и 11, или с SEQ ID №№ 3, 8 и 13; или с SEQ ID №№ 4, 5 или 6, 8 и 13, или с SEQ ID №№ 3, 8 и 14 или 15, или с SEQ ID №№ 4, 5 или 6, 8 и 14 или 15, и (ii) все аминокислотные последовательности от CDR-H1 до CDR-H3 c SEQ ID №№ 16, 18 и 20, или c SEQ ID №№ 16, 101 и 20, или c SEQ ID №№ 17, 19 и 21 или 22, или c SEQ ID №№ 17, 110 и 21.
8. Антитело по п.1, содержащее консенсусную каркасную последовательность κ подгруппы 1 человека.
9. Антитело по п.1, содержащее консенсусную каркасную последовательность тяжелой цепи подгруппы III человека.
10. Антитело по п.9, где каркасная последовательность содержит замену в положении 71, 73 или 78.
11. Антитело по п.10, где указанная замена представляет собой R71A, N73T или N78A или их сочетание.
3
3
3
12. Антитело по п.1, которое связывается с тримером лимфотоксин-α (LTα) и блокирует взаимодействие LTα с рецептором фактора некроза опухоли-I (TNFRI) и рецептором фактора некроза опухоли-II (TNFRII).
13. Антитело по п.1, которое связывается с гетеродимерным комплексом лимфотоксин-αβ (LTαβ).
14. Антитело по п.1, которое блокирует функцию LTαβ.
15. Антитело по п.1, содержащее Fc-область и снижающее уровни воспалительных цитокинов, ассоциированных с ревматоидным артритом, в анализе артрита in vitro.
16. Антитело по п.1, которое блокирует взаимодействие LTαβ с рецептором лимфотоксина-бета (LTβ-R).
17. Антитело по п.1, которое снижает количество несущих LTα клеток.
18. Антитело по п.1, модулирующее экспрессирующие LTαβ клетки.
19. Антитело по п.1, которое является химерным или гуманизированным.
20. Антитело по п.19, которое является гуманизированным.
21. Антитело по п.20, где, по меньшей мере, часть его каркасной последовательности представляет собой консенсусную каркасную последовательность человека.
-12
22. Антитело по п.1, где указанное антитело связывает LTα с аффинностью, по меньшей мере, приблизительно 10 M.
23. Антитело по п.1, которое представляет собой изотип IgG.
24. Антитело по п.23, где IgG представляет собой IgG1 или IgG2a.
25. Антитело по любому из пп.15-24, где Fc-область представляет собой Fc-область дикого типа.
26. Антитело по любому из пп.15-24, дополнительно содержащее в своей Fc-области одну или более аминокислотных замен, которые приводят к тому, что оно обладает увеличенной функцией антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) по сравнению с тем же антителом с Fc-областью с природной последовательностью.
27. Антитело по п.26, дополнительно содержащее в своей Fc-области от одной до трех аминокислотных замен.
28. Антитело по п.26, где Fc-область содержит аминокислотные замены в любом одном или в любом сочетании положений, которые представляют собой 268D, или 298A, или 326D, или 333A, или 334A, или 298A совместно с 333A, или 298A совместно с 334A, или 239D совместно с 332E, или 239D совместно с 298A и 332E, или 239D совместно с 268D, и 298A, и 332E, или 239D совместно с 268D, и 298A, и 326A, и 332A, или 239D совместно с 268D, и 298A, и 326A, и 332E, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298A, и 332E, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298A, и 326A, и 332E, или 239D совместно с 330L, и 332E, и 272Y, и 254T, и 256E, или 250Q совместно с 428L, или 265A, или 297A, где в отсутствие 297A находится замена 265A, а в отсутствие 265A находится замена 297A.
29. Антитело по любому из пп.20-24, 27 и 28 с моновалентной аффинностью к LTα человека, которая является приблизительно такой же или большей, чем моновалентная аффинность к LTα человека антитела мыши, полученного посредством гибридомной клеточной линии, депонированной под инвентарным номером в American Type Culture Collection PTA-7538 (гибридомный лимфотоксин альфа2 бета1 мыши s5H3.2.2).
30. Антитело по п.25 с моновалентной аффинностью к LTα человека, которая является приблизительно такой же или большей, чем моновалентная аффинность к LTα человека антитела мыши, полученного посредством гибридомной клеточной линии, депонированной под инвентарным номером в American Type Culture Collection PTA-7538 (гибридомный лимфотоксин альфа2 бета1 мыши s5H3.2.2).
31. Антитело по п.26 с моновалентной аффинностью к LTα человека, которая является приблизительно такой же или большей, чем моновалентная аффинность к LTα человека антитела мыши, полученного посредством гибридомной клеточной линии, депонированной под инвентарным номером в American Type Culture Collection PTA-7538 (гибридомный лимфотоксин альфа2 бета1 мыши s5H3.2.2).
32. Гуманизированное антитело по п.29, где моновалентная аффинность выражена в виде значения Kd.
33. Гуманизированное антитело по п.30 или 31, где моновалентная аффинность выражена в виде значения Kd.
34. Гуманизированное антитело по п.32, где моновалентную аффинность измеряют посредством оптического биосенсора или радиоиммунологическим анализом.
35. Гуманизированное антитело по п.33, где моновалентную аффинность измеряют посредством оптического биосенсора или радиоиммунологическим анализом.
36. Антитело к лимфотоксину-α (LTα), обладающее вариабельным доменом легкой цепи, содержащим SEQ ID № 23 или 24, или вариабельным доменом тяжелой цепи, содержащим SEQ ID № 25 или 26, или вариабельными доменами легких цепей и тяжелых цепей, содержащими обе SEQ ID №№ 23 и 25 или содержащими обе SEQ ID №№ 24 и 26.
37. Антитело к лимфотоксину-α (LTα), обладающее вариабельным доменом легкой цепи, содержащим SEQ ID № 27 или 28, или вариабельным доменом тяжелой цепи, содержащим SEQ ID № 29 или 30 или 31, или вариабельными доменами легких цепей и тяжелых цепей, содержащими обе SEQ ID №№ 27 и 29, или содержащими обе SEQ ID №№ 27 и 30, или содержащими обе SEQ ID №№ 27 и 31, или содержащими обе SEQ ID №№ 28 и 30, или содержащими обе SEQ ID №№ 28 и 31.
38. Антитело к лимфотоксину-α (LTα), обладающее вариабельным доменом легкой цепи, содержащим SEQ ID № 102, или вариабельным доменом тяжелой цепи, содержащим SEQ ID № 103, или вариабельными доменами легких цепей и тяжелых цепей, содержащими обе SEQ ID №№ 102 и 103.
39. Антитело к лимфотоксину-α (LTα), обладающее вариабельным доменом легкой цепи, содержащим SEQ ID № 108, или вариабельным доменом тяжелой цепи, содержащим SEQ ID № 109, или вариабельными доменами легких цепей и тяжелых цепей, содержащими обе SEQ ID №№ 108 и 109.
40. Антитело по любому из пп.1, 36, 37, 38 и 39 со сниженным количеством фукозы относительно количества фукозы на том же антителе, продуцируемом в клетках яичника китайского хомяка дикого типа.
41. Антитело по п.39 без фукозы.
42. Композиция антитела, содержащая антитело по любому из пп.1-41, обладающее Fc-областью, где приблизительно 20-100% антител в композиции содержат в Fc-области зрелую структуру углеводного кора, в котором отсутствует фукоза.
43. Композиция по п.42, где антитело содержит Fc-область, которая модифицирована так, чтобы изменить одно или более из антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) или фармакокинетических свойств антитела по сравнению с последовательностью Fc IgG дикого типа, посредством замены аминокислот, выбранных из группы, состоящей из A, D, E, L, Q, T и Y в любом одном или в любом сочетании положений Fc-области, выбранных из группы, состоящей из: 238, 239, 246, 248, 249, 250, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 314, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 428, 430, 434, 435, 437, 438 и 439.
44. Композиция по п.42, где антитело обладает активностью антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) в присутствии эффекторных клеток человека или обладает увеличенной активностью ADCC в присутствие эффекторных клеток человека по сравнению с таким же во всем остальном антителом, содержащим Fc IgG1 человека дикого типа.
45. Композиция по п.42, где антитело дополнительно содержит замену в Fc, которая представляет собой 268D или 326D или 333A совместно с 334A, или 298A совместно с 333A, или 298A совместно с 334A, или 239D совместно с 332E, или 239D совместно с 298A и 332E, или 239D совместно с 268D и 298A, и 332E, или 239D совместно с 268D и 298A, и 326A, и 332A, или 239D совместно с 268D и 298A, и 326A, и 332E, или 239D совместно с 268D и 283L, и 298A, и 332E, или 239D совместно с 268D и 283L, и 298A, и 326A, и 332E, или 239D совместно с 330L и 332E.
46. Композиция по п.42, где антитело связывает FcγRIII.
47. Композиция по п.42, где антитело связывает FcγRIII с лучшей аффинностью или опосредует антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) более эффективно, чем гликопротеин со зрелой структурой углеводного кора, содержащей фукозу, связанную с Fc-областью гликопротеина.
48. Композиция по п.42, где антитело продуцировано клеткой яичника китайского хомяка (CHO).
49. Композиция по п.48, где клетка CHO представляет собой клетку Lec13.
50. Композиция по любому из пп.42-49, где антитело продуцировано клеткой млекопитающего, не имеющего гена фукозилтрансферазы.
51. Композиция по п.50, где ген фукозилтрансферазы представляет собой ген FUT8.
52. Композиция по п.42, где антитело не содержит разветвляющий надвое N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), связанный со зрелой структурой его углеводного кора.
53. Композиция по п.42, где антитело содержит разветвляющий надвое N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), связанный со зрелой структурой его углеводного кора.
54. Композиция по п.42, где антитело содержит один или более остатков галактозы, связанных со зрелой структурой его углеводного кора.
55. Композиция по п.42, где антитело не содержит одного или более остатков галактозы, связанных со зрелой структурой его углеводного кора.
56. Композиция по п.42, где антитело содержит один или более остатков сиаловой кислоты, связанных со зрелой структурой его углеводного кора.
57. Композиция по п.42, где антитело не содержит одного или более остатков сиаловой кислоты, связанных со зрелой структурой его углеводного кора.
58. Композиция по п.42, которая содержит, по меньшей мере, приблизительно 2% нефукозилированных антител.
59. Композиция по п.42, которая содержит, по меньшей мере, приблизительно 4% нефукозилированных антител.
60. Композиция по п.42, которая содержит, по меньшей мере, приблизительно 10% нефукозилированных антител.
61. Композиция по п.42, которая содержит, по меньшей мере, приблизительно 19% нефукозилированных антител.
62. Композиция по п.42, которая содержит приблизительно 100% нефукозилированных антител.
63. Антиидиотипическое антитело, которое специфически связывает антитело по любому из пп.1-41.
64. Композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-41 и носитель.
65. Композиция по п.64, дополнительно содержащая второе лекарственное средство, где антитело к LTα представляет собой первое лекарственное средство.
66. Композиция по п.65, где второе лекарственное средство представляет собой иммуносупрессирующее средство, антагонист, который связывает поверхностный маркер B-клеток, антагонист BAFF, модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD), антагонист интегринов, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокинов или их сочетание.
67. Гибридома, депонированная в American Type Culture Collection (ATCC) 19 апреля 2006 года под инвентарным № PTA-7538.
68. Антитело, секретируемое гибридомой по п.67.
69. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп.1-41.
70. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.69.
71. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.69.
72. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п.71 в условиях для получения антитела и выделение антитела.
73. Способ ингибирования активированной лимфотоксином-α клеточной пролиферации, где указанный способ включает приведение клетки или ткани в контакт с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-41.
74. Способ лечения аутоиммунного нарушения у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-41.
75. Способ по п.74, где аутоиммунное нарушение выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, волчанки, синдрома Вегенера, воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (TTP), аутоиммунной тромбоцитопении, рассеянного склероза (РС), псориаза, нефропатии IgA-типа, полинейропатии IgM-типа, миастении gravis, васкулита, сахарного диабета, синдрома Рейно, синдрома Шегрена, гломерулонефрита, тиреоидита Хашимото, болезни Грейвса, гастрита с Helicobacter Pylori и хронического гепатита C.
76. Способ по п.75, где аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит, РС, синдром Шегрена, волчанку, миастению gravis или ВЗК.
77. Способ по п.76, где аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит, ВЗК, волчанку или РС.
78. Способ по п.77, где волчанка представляет собой системную красную волчанку или волчаночный нефрит, а ВЗК представляет собой болезнь Крона или язвенный колит.
79. Способ по любому из пп.74-78, где в эффективном количестве вводят второе лекарственное средство, где антитело к LTα представляет собой первое лекарственное средство.
80. Способ по п.79, где второе лекарственное средство представляет собой более одного лекарственного средства.
81. Способ по п.79, где второе лекарственное средство представляет собой иммуносупрессирующее средство, антагонист, который связывает поверхностный маркер B-клеток, антагонист BAFF, модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD), антагонист интегринов, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокинов или их сочетание.
82. Способ по п.81, где второе лекарственное средство представляет собой DMARD или метотрексат.
83. Способ по п.74, где субъекта никогда ранее не лечили лекарственным средством от данного заболевания.
84. Способ по п.83, где субъекта никогда ранее не лечили антагонистом TNF.
85. Способ по п.74, где субъекта ранее лечили лекарственным средством от данного заболевания.
86. Способ по п.85, где субъекта ранее лечили антагонистом TNF или DMARD.
87. Способ по п.74, где антитело представляет собой чистое антитело.
88. Способ по п.74, где антитело конъюгировано с другой молекулой.
89. Способ по п.88, где другая молекула представляет собой цитотоксическое средство.
90. Способ по п.74, где антитело вводят внутривенно.
91. Способ по п.74, где антитело вводят подкожно.
92. Способ по п.74, где субъект страдает ревматоидным артритом, и антитело индуцирует у субъекта значительный клинический ответ.
93. Способ по п.74, где у субъекта существует аномальный уровень одного или более регуляторных цитокинов, антинуклеарных антител (ANA), антител к ревматоидному фактору (RF), креатинина, азота мочевины крови, антиэндотелиальных антител, антинейтрофильных цитоплазматических антител (АНЦА), инфильтрирующих клеток с CD20, антител к двухцепочечной ДНК (дцДНК), антител к Sm, антител к ядерному рибонуклеопротеину, антител к фосфолипиду, антител к рибосомальным P, антител к Ro/SS-A, антител к Ro, антител к La, антител к ассоциированному с синдромом Шегрена антигену A или B (SS-A или SS-B), антител к белку центромер B (CENP B) или белку центромер C (CENP C), аутоантител к ICA69, аутоантител, окрашивающих нуклеарную или перинуклеарную зону нейтрофилов (пАНЦА), антител к Saccharomyces cerevisiae, кросс-реактивных антител к ганглиозиду GM1 или ганглиозиду GQ1b, антител к рецептору ацетилхолина (AchR), антител к подтипам AchR или антител к мышечно-специфичной тирозинкиназе (MuSK), сывороточных антител к эндотелиальным клеткам, IgG или антител к десмоглеину (Dsg), антител к центромерам, антител к топоизомеразе-1 (Scl-70), антител к РНК-полимеразе или к U3-рибонуклеопротеину (U3-RNP), антител к клубочковой базальной мембране (GBM), антител к митохондриям (AMA) или к митохондриальному M2, антител к пероксидазе щитовидной железы (TPO), антител к тироглобину (TG) или антител к рецептору стимулирующего щитовидную железу гормона (TSHR), антинуклеарных антител (AN), антител к актину (AA) или к антигену гладких мышц (ASM), IgA к эндомизиалу, IgA к тканевой трансглутаминазе, антител IgA к глиадину или IgG к глиадину, антител к CYP21A2, антител к CYP11A1 или к CYP17, антител к рибонуклеопротеину (RNP), или специфичных для миозита антител, антител к ассоциированному с миелином гликопротеину (MAG), антител к вирусу гепатита C (HCV), антител к ганглиозиду GM1, антител к сульфат-3-глюкуронилпараглобозиду (SGPG), или антител IgM к глюкоконъюгату, антител IgM к ганглиозиду, антител к пероксидазе щитовидной железы (TPO), антител к тироглобину (TG) или антител к рецептору стимулирующего щитовидную железу гормона (TSHR), антител к основному белку миелина или антител к олигодендроцитарному гликопротеину миелина, антител IgM к ревматоидному фактору, направленных против Fc-части IgG, антител к фактору VIII или их сочетаний.
94. Способ по п.74, где антитело вводят не более чем приблизительно один раз в две недели.
95. Способ по п.94, где антитело вводят приблизительно раз в месяц.
96. Промышленное изделие, содержащее контейнер и содержащуюся в нем композицию, где композиция содержит антитело по любому из пп.1-41, и вкладыш в упаковку, указывающий, что композицию можно использовать для лечения аутоиммунного нарушения.
97. Изделие по п.96, дополнительно содержащее контейнер, содержащий второе лекарственное средство, где антитело представляет собой первое лекарственное средство, и, дополнительно содержащее инструкции на вкладыше в упаковку для лечения субъекта вторым лекарственным средством.
98. Изделие по п.97, где второе лекарственное средство представляет собой иммуносупрессирующее средство, антагонист, который связывает поверхностный маркер B-клеток, антагонист BAFF, модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD), антагонист интегринов, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокинов или их сочетание.
99. Способ рекламирования антитела по любому из пп.1-41 или его фармацевтически приемлемой композиции, включающий популяризацию для целевой аудитории применения антитела или его фармацевтической композиции для лечения пациента или группы пациентов с аутоиммунным заболеванием.
100. Способ по п.99, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит, волчанку, рассеянный склероз или воспалительное заболевание кишечника.
101. Промышленное изделие, содержащее упакованные вместе фармацевтическую композицию, содержащую антитело по любому из пп.1-41 и фармацевтически приемлемый носитель и этикетку, указывающую, что антитело или фармацевтическая композиция предназначены для лечения пациентов с аутоиммунным заболеванием.
102. Изделие по п.101, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит, волчанку, рассеянный склероз, или воспалительное заболевание кишечника.
103. Изделие по п.101 или 102, дополнительно содержащее контейнер, содержащий второе лекарственное средство, где антитело представляет собой первое лекарственное средство, дополнительно содержащее инструкции на вкладыше в упаковку для лечения пациента эффективным количеством второго лекарственного средства.
104. Изделие по п.103, где вторым лекарственным средством является DMARD или метотрексат.
105. Способ упаковки антитела по любому из пп.1-41 или его фармацевтической композиции, включающий сочетание в упаковке антитела или фармацевтической композиции антитела и этикетки, указывающей, что антитело или фармацевтическая композиция предназначены для лечения пациентов с аутоиммунным заболеванием.
106. Способ по п.105, где аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит, волчанку, рассеянный склероз, или воспалительное заболевание кишечника.