СПОСОБ ПОДГОТОВКИ РАСТИТЕЛЬНОГО ОБЪЕКТА К ИЗУЧЕНИЮ СОСТОЯНИЯ УСТЬИЦ
METHOD TO PREPARE VEGETABLE OBJECT FOR INVESTIGATION OF STOMATA CONDITION

Изобретение относится к области физиологии растений, а в частности к лабораторной практике исследования растительного объекта, и может быть использовано для изучения состояния устьиц в процессе варьирования напряженностью внешних факторов (например, временем суток, температурой окружающей среды, составом химических соединений различных классов в качестве компонентов питания при их различной концентрации).
Известен способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц, заключающийся в получении тонкой прозрачной пленки отпечатков устьиц с использованием полимерных соединений в органическом растворителе (например, нитроцеллюлоза, кинофотопленка в ацетоне) с последующим снятием полученного отпечатка и исследования его с использованием микроскопа. Например, определение площади устьичной щели с использованием окуляр-микрометра и объект-микрометра (Рябинина З.Н., Семенова Н.В. Практикум по физиологии растений: Учебно-методическое пособие. - Оренбург, - Издательство ОГУ, 1989, с.25-26) - аналог.
Однако данный способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц обладает следующими недостатками.
1. Очень часто при снятии полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит ее деформация (растяжение, изменение размера, толщины) либо происходит ее разрыв, что делает такой образец непригодным для проведения дальнейших операций по изучению состояния устьиц растительного объекта и микроскопирования, что приводит к необходимости повторения операции получения отпечатка.
В результате этого операцию по получению отпечатка эпидермиса растительного объекта с использованием полимерного материала в органическом растворителе необходимо проводить повторно, что вынуждает исследователя затрачивать дополнительное время на повторение операций по подготовке объекта к его изучению.
2. Нанесение на значительную часть поверхности листовой пластины (эпидермиса) растительного объекта полимерного материала в органическом растворителе приводит к возникновению глубоких химических ожогов с последующим некрозом клеток эпидермиса. Это в итоге также даст искаженную картину хода транспирации воды с поверхности изучаемого растительного объекта в динамических условиях длительного эксперимента.
3. Достаточно часто в момент снятия полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит повреждение поверхности листовой пластины (происходит отрыв частиц эпидермиса совместно с полимерной пленкой).
2
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ подготовки растительного объекта к изучению устьиц, заключающийся в размещении на поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей по крайней мере одну прорезь площадью 10-120 мм, и нанесении на поверхность растительного объекта раствора полимера в органическом растворителе. Варианты способа позволяют получить оттиски устьичного аппарата растительного объекта на пластинке с кромкой толщиной 25-250 мкм, в качестве материала которой используют: бумагу, кальку, металлическую фольгу, полимерный материал, не взаимодействующий с органическим растворителем (Пат. 2344416 RU Способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц. / А.Р.Самакаева, МПК G01N 33/00 // G01B 1/00, Опубл. 20.01.2009 г. Бюл. №2) - прототип.
Однако данный способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц обладает следующими недостатками.
1. Очень часто при снятии полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит ее деформация (растяжение, изменение размера, толщины) либо происходит ее разрыв, что делает такой образец непригодным для проведения дальнейших операций по изучению состояния устьиц растительного объекта и микроскопирования, что приводит к необходимости повторения операции получения отпечатка.
Согласно техническому решению, принятого нами в качестве прототипа, качественными и пригодными к работам по изучению состояния устьиц растительного объекта являются только 86-92% полимерных пленок.
В результате этого, ≈10% операций по получению отпечатка эпидермиса растительного объекта с использованием полимерного материала в органическом растворителе необходимо проводить повторно, что вынуждает исследователя затрачивать дополнительное время на повторение операций по подготовке объекта к его изучению.
Решаемая изобретением задача - повышение качества отпечатков, сокращение времени приготовления полимерной пленки.
Технический результат, который может быть получен при осуществлении заявленного способа - повышение качества отпечатков растительного объекта и высокий процент их пригодности для оценки состояния устьиц.
2
Для решения поставленной задачи с достижением указанного технического результата в известном способе подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц, включающем расположение по поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей, по крайней мере, одну прорезь, для заливки раствора полимера в органическом растворителе, нанесение на поверхность растительного объекта ограниченного, по крайней мере, одной прорезью пластинки раствора полимера в органическом растворителе, испарение органического растворителя, снятие и перенос пластинки с полимерной пленкой с оттиском поверхности растительного объекта на предметное стекло и изучение под микроскопом состояния устьиц, при этом после нанесения на поверхность растительного объекта, ограниченную пластинкой с кромкой, по крайней мере, с одной прорезью, раствора полимера в органическом растворителе, размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке с диаметром материала сетки 0,07-0,124 мм и площадью ячеек 1,25-4,00 мм, а в качестве материала сетки используют полиамидные, полипропиленовые, полиэфирные нити или медный провод.
Указанные материалы выпускаются отечественной промышленностью, например, в соответствии с ТУ У 6-00204048.104-96 и в основном используются лентоткацкими фабриками и предприятиями по производству сит, фильтровальных материалов.
В качестве полимера для формирования полимерной пленки с оттиском растительного объекта используют нитроцеллюлозу или полиметилметакрилат, а в качестве органического растворителя вещества, выбранные из группы ацетон, дихлорэтан, хлороформ, диэтиловый эфир либо их смесь.
6
7
2
3-х
2
x
n
3
Нитроцеллюлоза: (целлюлозы нитрат, нитроклетчатка) [CHO(ОН)(ONO)], мол. масса 38-500 тыс., плотность 1,58-1,65 г/см; растворима в ацетоне, сложных эфирах, неустойчива в кислотах и щелочах. Получ. взаимодействием хлопковой целлюлозы с нитрующей смесью. Примен.: при производстве целлулоида, лаков.
2
3
3
n
3
Полиметилметакрилат: (плексиглас) [-СН-С(СН)(СООСН)-], мол. масса от десятков тыс. до млн.; плотность 1,19 г/см, растворим в сложных эфирах, ароматических углеводородах. Получ. радикальной полимеризацией метилметакрилата в массе или суспензии. Примен.: листовое органическое стекло, основа лаков и клеев.
3
3
пл.
кип.
всп.
20
Ацетон: (диметилкетон) СНСОСН, t -95,35°С, t 56,24°С, d 0,7908; смешивается с водой и органическими растворителями; t -18°С, КПВ (концентрационные пределы взрываемости) 2,9-12,8%.
Получ.: гидратация пропилена с последующим дегидрированием образующегося изопропанола. Примен.: в производстве метилметакрилата, метакриловой кислоты, лекарственных средств, растворитель акриловых лаков, ацетатов целлюлозы.
2
2
пл.
кип.
всп.
20
Дихлорэтан: (1,2-дихлорэтан, этилендихлорид) ClCHCHCl, t -35,36°С, t83,47°С, d 1,253; растворимость в воде -0,87%, смешивается с органическими растворителями; t 13°С, КПВ 6,2-16,9%. Получ.: прямым или окислительным хлорированием этилена. Примен.: в производстве винилхлорида, этилендиамина, растворитель красок, клеев.
3
пл.
кип.
20
Хлороформ: (трихлорметан. хладон-20) CHCl, t-63,5°C, t 61,2°С, d 1,483; растворимость в воде -0,32%, смешивается с органическими растворителями Получ.: хлорирование метана. Примен.: хладагент в холодильных установках, сырье в производстве фторопластов.
2
5
2
5
пл.
кип.
всп.
20
Диэтиловый эфир: (этиловый эфир, серный эфир, эфир) СНОСН, t -116,2°С, t 34,48°C, d 0,7135; растворим в спирте, бензоле, воде (6,5% при 20°С), t -43°С, КПВ 1,9-48,0%. Получ.: дегидратация этанола. Примен.: растворитель нитратов целлюлозы, животных, растительных жиров, природных и синтетических смол, экстрагент.
Нанесение раствора полимера в органическом растворителе на растительный объект осуществляют таким образом, чтобы полимерная пленка формировалась, как на поверхности листовой пластины ограниченной материалом пластинки с прорезью (прорезями), в свободном пространстве сетки превышающую площадь прорези, так и на внешней стороне наложенной на растительный объект пластинки с прорезью (прорезями). Отделение сформированной полимерной пленки от растительного объекта осуществляют с использованием кромки у пластинки с прорезью (прорезями), которая располагается либо перпендикулярно, либо под углом к растительному объекту.
Изобретение иллюстрируется примерами. Полученные данные приведены в таблице.
Примеры 1-7 иллюстрируют варианты реализации предлагаемого способа при нижних, оптимальных и верхних значениях отличительных признаков, примеры 8-14 иллюстрируют варианты реализации по способу-прототипу, а сравнительные примеры 15-19 обосновывают границы заявленных отличительных признаков.
Пример 1. Изучают состояние устьиц подсолнечника (Helianthus annuus).
2
2
На поверхность листовой пластины подсолнечника перед нанесением раствора полимера в органическом растворителе размещают пластинку с кромкой, расположенной перпендикулярно или под углом к растительному объекту, из кальки толщиной 25 мкм, имеющую одну прорезь площадью 10 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 1,25 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 2. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 100 мкм, имеющую одну прорезь площадью 75 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,09 мм и площадью ячеек 2,63 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 99,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 3. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют пленку из полиэтилена толщиной 250 мкм., имеющую одну прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,124 мм и площадью ячеек 4,00 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 4. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 150 мкм, имеющую три прорези площадью 75 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + дихлорэтан - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,09 мм и площадью ячеек 4,00 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 100,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 5. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 50 мкм., имеющую пять прорезей площадью 75 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют медный провод с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 1,25 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из кальки с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 98,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
2
Пример 6. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 250 мкм, имеющую две прорези площадью 50 мм каждая, две прорези площадью 75 мм и одну прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + ацетон - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,124 мм и площадью ячеек 1,25 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
2
Пример 7. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют алюминиевую фольгу толщиной 50 мкм, имеющую две прорези площадью 25 мм каждая, две прорези площадью 75 мм каждая и одну прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 10 вес.% + ацетон + диэтиловый эфир (1:1) 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 4,00 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из алюминиевой фольги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 98,0%. Полученные данные приведены в таблице.
Пример 8. Изучают состояние устьиц подсолнечника (Helianthus annuus).
2
На поверхность листовой пластины подсолнечника перед нанесением раствора полимера в органическом растворителе размещают пластинку с кромкой, расположенной перпендикулярно или под углом к растительному объекту, из кальки толщиной 25 мкм, имеющую одну прорезь площадью 10 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза -5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600)
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 88,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
Пример 9. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 100 мкм, имеющую одну прорезь площадью 75 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 86,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
Пример 10. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют пленку из полиэтилена толщиной 250 мкм, имеющую одну прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 90,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
Пример 11. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 150 мкм, имеющую три прорези площадью 75 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + дихлорэтан - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 92,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
Пример 12. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 50 мкм, имеющую пять прорезей площадью 75 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из кальки с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 90,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
Пример 13. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 250 мкм, имеющую две прорези площадью 50 мм каждая, две прорези площадью 75 мм и одну прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + ацетон - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 88,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
Пример 14. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют алюминиевую фольгу толщиной 50 мкм, имеющую две прорези площадью 25 мм каждая, две прорези площадью 75 мм каждая и одна прорезь площадью 120 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 10 вес.% + ацетон + диэтиловый эфир (1:1) 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из алюминиевой фольги с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 86,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 15. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 15 мкм, имеющую одну прорезь площадью 8,5 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,04 мм и площадью ячеек 0,80 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 82,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 16. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 300 мкм, имеющую одну прорезь площадью 8,5 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,06 мм и площадью ячеек 0,90 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 78,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
Пример 17. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют полиэтилен толщиной 300 мкм, имеющую одну прорезь площадью 160 мм, наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,04 мм и площадью ячеек 6,00 мм, сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 66,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
Пример 18. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 15 мкм, имеющую пять прорезей площадью 8,5 мм каждая и пять прорезей площадью 160 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют провод медный с диаметром материала сетки 0,2 мм и площадью ячеек 5,50 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 79,0%. Полученные данные приведены в таблице.
2
2
2
Пример 19. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 300 мкм, имеющую пять прорезей площадью 8,5 мм каждая и пять прорезей площадью 160 мм каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,3 мм и площадью ячеек 6,0 мм, сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).
Кратность повторения примера - 100 раз.
Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 84,0%. Полученные данные приведены в таблице.
Из данных, приведенных в таблице видно, что предлагаемый способ выгодно отличается от известного (способа-прототипа) тем, что достигается повышение качества отпечатков, сокращается время приготовления полимерной пленки, а также снижается интенсивность химического ожога на поверхности растительного материала за счет ограничения поверхности растительного объекта контактируемого с органическим растворителем.
Достоверность полученных результатов доказана высокой кратностью (100 раз) повторения каждого из приведенных примеров.
Кроме того, по предлагаемому способу увеличивается до 97-100% пригодность полимерной пленки для оценки состояния устьиц растительного объекта.
Использование для реализации предлагаемого способа химических продуктов (полимеры, органические растворители, сетки) делает его доступным для реализации в лабораториях физиологии растений различного уровня.
Таблица 1
№ п/п
Пример
Существенные признаки предлагаемого изобретения
Альтернативные признаки реализации изобретения
материал сетки
диаметр материала сетки, мм
площадь ячейки сетки, мм<sup>2</sup>
материал пластинки, имеющей прорезь (прорези)
толщина пластинки, мкм
число прорезей в пластинке, шт./ площадь каждой прорези, мм<sup>2</sup>
раствор полимера в органическом растворителе
полимер
органический растворитель
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
по предлагаемому способу
пить полиэфирная
0,07
1,25
калька
25
1/10 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
2
- //-
нить полипропиленовая
0,09
2,63
фольга медная
100
1/75 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
3
-//-
нить полипропиленовая
0,124
4,00
полиэтилен (пленка)
250
1/120 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
4
-//-
нить полиамидная
0,09
4,00
бумага
150
3/75 мм<sup>2</sup> (каждая)
полиметил метакрилат (10 вес.%)
дихлорэтан (90 вес.%)
5
- //-
провод медный
0,07
1,25
калька
50
5/75 мм<sup>2</sup>
полиметил метакрилат (10 вес.%)
хлороформ (90 вес.%)
6
-//-
нить полиамидная
0,124
1,25
фторопласт (пленка)
250
2/50 мм<sup>2</sup> (каждая) 2/75 мм<sup>2</sup> (каждая) 1/120 мм<sup>2</sup> (каждая)
полиметил метакрилат (10 вес.%)
ацетон (90 вес.%)
Таблица 1 (продолжение)
7
-//-
нить полиэфирная
0,07
4,00
фольга алюмин.
50
2/25 мм<sup>2</sup> (каждая) 2/75 мм<sup>2</sup> (каждая) 1/120 мм<sup>2</sup> (каждая)
нитро-целлюлоза (10 вес.%)
ацетон + диэтиловый эфир (1:1) (90 вес.%)
8
По известному способу (прототип)
-
-
-
калька
25
1/10 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
9
-//-
-
-
-
фольга медная
100
1/75 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
10
-//-
-
-
-
полиэтилен (пленка)
250
1/120 мм<sup>2</sup>
нитро целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
11
-//-
-
-
-
бумага
150
3/75 мм<sup>2</sup> (каждая)
полиметил метакрилат (10 вес.%)
дихлорэтан (90 вес.%)
12
-//-
-
-
-
калька
50
5/75 мм<sup>2</sup>
полиметил метакрилат (10 вес.%)
хлороформ (90 вес.%)
13
-//-
-
-
-
фторопласт (пленка)
250
2/50 мм<sup>2</sup> (каждая) 2/75 мм<sup>2</sup> (каждая) 1/120 мм<sup>2</sup> (каждая)
полиметил метакрилат (10 вес.%)
ацетон (90 вес.%)
14
-//-
-
-
-
фольга алюмин.
50
2/25 мм<sup>2</sup> (каждая) 2/75 мм<sup>2</sup> (каждая) 1/120 мм<sup>2</sup> (каждая)
нитро-целлюлоза (10 вес.%)
ацетон + диэтиловый эфир (1:1) (90 вес.%)
Таблица 1 (продолжение)
15
по сравнительному способу
нить полиэфирная
0,04
0,8
калька
15
1/8,5 мм<sup>2</sup>
нитро-целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
16
-//-
нить полипропиленовая
0,06
0,9
фольга медная
300
1/8,5 мм<sup>2</sup>
нитро-целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
17
-//-
нить полиамидная
0,04
6,0
полиэтилен (пленка)
300
1/160 мм<sup>2</sup>
нитро-целлюлоза (5 вес.%)
ацетон (95 вес.%)
18
-//-
провод медный
0,2
5,5
бумага
15
5/8,5 мм<sup>2</sup> (каждая) 5/160 мм<sup>2</sup> (каждая)
полиметил метакрилат (10 вес.%)
дихлорэтан (90 вес.%)
19
-//-
нить полиамидная
0,3
6,0
фторопласт (пленка)
300
5/8,5 мм<sup>2</sup> (каждая) 5/160 мм<sup>2</sup> (каждая)
полимети-метакрилат (10 вес.%)
хлороформ (90 вес.%)