КАССЕТА И АВТОМАТИЗИРОВАННОЕ УСТРОЙСТВО ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

1. Кассета (16) для культивирования клеток, содержащая:
- корпус (90), по меньшей мере частично жесткий и образующий внутреннее пространство, в котором расположен и зафиксирован мешок (100) для культивирования клеток, образующий внутренний объем,
- каналы (36, 38), один конец каждого из которых соединен с внутренним объемом мешка (100), а второй конец находится снаружи корпуса (90), и
- клапаны (128, 130) для обеспечения/предотвращения прохождения потока текучей среды через каналы (36, 38), установленные на корпусе (90).
2. Кассета по п. 1, в которой каналы (36, 38) образованы гибкими трубками, и по меньшей мере некоторые из клапанов (128, 130) содержат подвижный элемент (136, 138) для пережатия трубки на элементе (132) конструкции корпуса (90).
3. Кассета по п. 2, в которой каждый подвижный элемент (136, 138) имеет ось (136c, 138c) вращения, а радиально направленная наружная периферийная часть каждого подвижного элемента (136, 138) содержит по меньшей мере одну спиральную поверхность (160) вокруг оси (136c, 138c) вращения, образующую поверхность пережатия трубки (36, 38) для изменения сечения прохода текучей среды через трубку (36, 38) по мере вращения элемента (136, 138).
4. Кассета по п. 3, в которой подвижные элементы (136, 138) установлены в углубление (134) пластины (132), расположенной внутри корпуса (90) и объединены с корпусом (90), причем каждое углубление (134) принимает подвижный элемент.
5. Кассета по одному из пп. 2-4, в которой каждый подвижный элемент (136, 138) включает в себя конец (136a, 138b), доступный снаружи корпуса (90) и оборудованный первым вращающимся средством (154) соединения для взаимодействия со вторым вращающимся средством соединения исполнительного механизма.
6. Кассета по пп. 4 или 5, отличающаяся тем, что подвижные элементы центрированы и направлены с возможностью вращения одним концом в отверстие в корпусе, а другим концом в отверстие в пластине.
7. Кассета по одному из пп. 2-6, в которой мешок (100) имеет по существу прямоугольную форму, включающую в себя первую гибкую стенку (122) и вторую гибкую стенку, по существу параллельные друг другу в пустом и заполненном жидкостью состояниях.
2
2
8. Кассета по п. 7, в которой отношение суммы площадей поверхности первой стенки (122) и второй стенки к общему внутреннему объему мешка (100) составляет от 500 до 690 см/л, предпочтительно порядка 580 см/л.
9. Кассета по одному из пп. 7 или 8, в которой расстояние между первой стенкой (122) и второй стенкой меньше 20 мм, предпочтительно от 10 до 20 мм, еще предпочтительнее порядка 14 мм.
2
10. Кассета по одному из пп. 1-9, в которой стенки мешка (100) проницаемы для газов, в частности CO, и предпочтительно обладают свойствами, которые максимально возможно ограничивают прилипание клеток к стенкам мешка (100).
11. Кассета по одному из пп. 1-10, в которой корпус (90) предпочтительно имеет форму, по существу соответствующую форме прямоугольного параллелепипеда, и содержит нижнюю полуоболочку (96) и верхнюю полуоболочку (98), прикрепленные друг к другу, причем нижняя полуоболочка (96) жесткая, а верхняя полуоболочка (98) жесткая или гибкая.
12. Кассета по п. 11, в которой верхняя полуоболочка (98) содержит центральное отверстие (108) или углубление, форма и размер которой обеспечивают возможность распространения волны жидкости из мешка (100) в отверстие (108), когда кассета (16), содержащая жидкость, совершает колебательные движения вокруг горизонтальной оси, причем отверстие направлено вверх.
13. Кассета по п. 11 или 12, в которой нижняя полуоболочка (96) содержит множество отверстий (104), предпочтительно имеющих диаметр, например, менее 20 мм.
14. Кассета по одному из пп. 11-13, в которой каналы (36, 38) проходят через одну из периферийных кромок (102a, 102b) одной из нижней полуоболочки (96) или верхней полуоболочки (98).
15. Кассета по одному из пп. 1-14, содержащая планку (34) для поддержания каналов (36, 38), расположенную снаружи корпуса (90) и пересекаемую по меньшей мере некоторыми из каналов (36, 38).
16. Кассета по одному из пп. 1-15, отличающаяся тем, что мешок содержит среду для культивирования клеток.
17. Кассета по п. 16, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования клеток содержит человеческий инсулин, человеческий трансферрин и человеческую плазму или сыворотку.
18. Кассета по п. 16 или 17, отличающаяся тем, что среда для культивирования клеток заморожена.
19. Кассета по одному из пп. 1-17, отличающаяся тем, что мешок содержит клетки CD34+.
20. Инкубатор для культивирования клеток, содержащий термостатированную камеру (28) и устройство (14) для поддерживания и встряхивания кассеты для культивирования клеток по одному из вышеуказанных пунктов и средство для позиционирования и блокирования кассеты (16) для культивирования клеток в данном положении в поддерживающем устройстве.
21. Инкубатор по п. 20, в котором устройство (14) для поддерживания и встряхивания содержит лоток (54) для поддержания кассеты (16) для культивирования клеток, установленной с возможностью вращения вокруг горизонтальной оси (63), относительно которой лоток (54) предусмотрено совершение лотком колебательных движений для перемешивания и гомогенизирования содержимого мешка (100).
22. Инкубатор по п. 21, в котором устройство (14) для поддерживания и встряхивания содержит соединительную тягу (64), верхний конец которой соединен с лотком (54) посредством вибратора, а нижний конец соединен с коленчатым рычагом (68), приводимым во вращение валом электродвигателя, ось (70) которого по существу горизонтальная.
23. Инкубатор по одному из пп. 21 или 22, в котором лоток (54) содержит электромеханическое исполнительное устройство (82) для открытия/закрытия клапанов (128, 130), одно выпускное отверстие которых содержит второе средство соединения для взаимодействия с первым средством (154) соединения клапанов (128, 130) кассеты (16), когда кассета находится в указанном положении.
24. Инкубатор по одному из пп. 20-23, содержащий дверцу (22) для герметичного закрытия отверстия (26) камеры (28), причем это отверстие (26) содержит периферийную кромку (24), в которой сформировано углубление (32), форма которого обеспечивает возможность приема планки (34) для поддержания каналов кассеты по п. 15, при этом планка (34) образует уплотнительный элемент между дверцей (22) и периферийной кромкой, когда дверца находится в закрытом положении камеры (28).
25. Инкубатор по одному из пп. 20-24, содержащий средство для управления положением кассеты (16) для культивирования клеток в поддерживающем средстве.
26. Автоматическое устройство для культивирования клеток, содержащее по меньшей мере один инкубатор (12) по одному из пп. 20-25 и компьютерную систему управления, включающую в себя средства сбора и регистрации данных и предназначенную для регулирования условий культивирования в камере указанного по меньшей мере одного инкубатора и управления клапанами кассеты, заключенной в камеру.
27. Способ культивирования клеток с помощью автоматизированного устройства по п. 26, отличающийся тем, что он включает в себя следующие этапы:
a) помещение кассеты (16) для культивирования клеток по одному из пп. 1-19 внутрь камеры инкубатора (12) в положение оттаивания на устройство (14) для поддерживания и встряхивания;
b) подачу мешка (100) с клетками, подлежащими культивированию;
c) помещение кассеты (16) на устройство (14) для поддерживания и встряхивания в положение культивирования клеток;
d) встряхивание кассеты (16) для культивирования клеток в течение заданного периода времени для гомогенизирования ее содержимого;
e) поддержание кассеты (16) для культивирования клеток в условиях инкубации в течение нескольких суток и
f) извлечение содержимого кассеты (16) с помощью одной из трубок кассеты (16).
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что он включает:
- во время этапа d): один или несколько этапов (196) отбора пробы содержимого мешка, каждому из которых предшествует этап наклона поддерживающего лотка (54) из горизонтального положения культивирования в наклонное положение, в котором область отбора пробы в мешке (100) представляет собой самую низкую точку мешка (100).
29. Способ по п. 27 или 28, отличающийся тем, что клетки, подлежащие культивированию, представляют собой клетки CD34+.
30. Фармацевтическая композиция для использования в лечении сердечной недостаточности, вызванной инфарктом миокарда, отличающаяся тем, что она содержит клетки, производимые путем культивирования в кассете по любому из пп. 1-19 или в инкубаторе по любому из пп. 20-25, или в автоматизированном устройстве по п. 26, или с помощью способа культивирования клеток по любому из пп. 27-29, причем эти клетки:
- являются человеческими клетками,
7
- составляют по меньшей мере 10 клеток,
- содержат по меньшей мере 70% человеческих клеток CD34+,
- содержат человеческие клетки CD34- CD14+ в пропорции от 1 до 12% и
- имеют диаметр клеток 11,2±0,5 мкм.