Участие CD4+CD39+Т-клеток в формировании иммунной супрессии у больных колоректальным раком

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

выявлен только иммунодефицитный и ареактивный вариант реагирования соответственно 46,15 и 53,85%

Таким образом, установлено, что показатели, характеризующие различные звеньев иммунной системы при ПКР, характеризуются значительным разнообразием значений. Использование кластерного анализа позволило выделить у больных ПКР 4 иммунотипа, определяемых различным состоянием врожденного и адаптивного иммунитета. Эти иммунотипы можно рассматривать как различные патогенетические варианты течения ПКР. Неблагоприятными при этом является иммунодефицитный и, несмотря на нетяжелое течение, — ареактивный иммунотип. Иммуноти-пы с активацией адаптивного и врожденного иммунитета являются наиболее благоприятными. Стратификация пациентов при ПКР по иммунотипам может лечь в основу при назначении иммунотропных препаратов, так как позволит повысить эффективность лечения больных ПКР и реализует персонифицированные подходы к диагностике и лечению нарушений функции иммунной системы.

УЧАСТИЕ CD4+CD39+Т-КЛЕТОК В ФОРМИРОВАНИИ ИММУННОЙ СУПРЕССИИ У БОЛЬНЫХ КОЛОРЕКТАЛЬНЫМ РАКОМ

Жулай Г.А.1, Олейник Е.К.1, Чуров А.В.1, Кравченко П.Н.1, Романов А.А.2, Олейник В.М.1

1ФГБУНИнститут биологии Карельского научного центра РАН, Петрозаводск, Россия 2 ГБУЗ «Республиканский онкологический диспансер», Петрозаводск, Россия

В настоящее время в онкоиммунологии уделяется особое место изучению молекулы эктонуклеозидтри-фосфат дифосфогидролазы-1 (ENTPD1, CD39). CD39 совместно с CD73 участвует в генерации внеклеточного аденозина, оказывающего иммуносупрессорное действие через А2А-рецепторы и способствующего развитию опухоли. Колоректальный рак (КРР) является одним из наиболее распространенных типов злокачественных новообразований, однако роль аденозин-A2AR иммуносупрес-сорного механизма в его развитии до конца не изучена.

Цель. Оценка роли СD4+Т-клеток, экспрессиру-ющих CD39, в формировании иммунной супрессии у больных КРР.

Материалы и методы. Обследовано 42 больных КРР и 30 здоровых доноров. Уровень мРНК CD39, CD73, A2AR определяли методом ПЦР в реальном времени. Проведен анализ фенотипов клеток периферической крови, а также опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов (ОИЛ), выделенных из клинических образцов опухолевой ткани (n = 5). Лимфоциты крови анализировали до начала терапии. Экспрессию CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25, CD127, FoxP3, CD39 оценивали методом проточной ци-тометрии. Достоверность различий между группами рассчитывали по критерию Манна—Уитни при уровне значимости р < 0,05, для выявления и оценки характера связи между признаками использовали коэффициент корреляции Спирмена. Данные представлены в виде M±SD.

Результаты. Для оценки активации аденозин-А2АЯ иммуносупрессорного механизма у больных КРР определяли уровень мРНК генов CD39, CD73, A2AR. Показано, что у больных КРР содержание мРНК CD39 в лейкоцитах увеличивается в процессе развития заболевания, тогда как для CD73 значительных различий по сравнению с контролем не найдено. Наряду с этим для больных с поздними

Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies

стадиями КРР (Ш-ГУ ст.) отмечено повышение экспрессии мРНК A2AR, что может свидетельствовать об активации аденозин-A2AR иммуносупрессорного механизма.

На поздних стадиях развития КРР (Ш-ГУ ст.) наблюдалось накопление периферических CD4+CD39+T-клеток. Среди ОИЛ количество этих клеток было в 4 раза выше (р < 0,05), чем в крови тех же больных. Увеличение числа CD39+ клеток среди ОИЛ наблюдалось и в популяции СD3+CD4-Т-клеток. При этом доля CD4-CD39+ клеток была выше в опухолевой ткани.

В работе проводили анализ популяционного состава периферических лимфоцитов для определения связи с CD4+CD39+Т-клетками у больных КРР. Были отмечены изменения, вероятно, свидетельствующие о развитии вторичного иммунодефицита, особенно в отношении Т-лимфоцитов. У больных КРР по сравнению с контролем снижено число В-лимфоцитов, как на начальных стадиях развития заболевания, так и на поздних (р < 0,05). В отношении №К-клеток у больных КРР достоверных различий по сравнению с контролем не выявлено. Изменения количества CD3+Т-лимфоцитов отмечены для больных с Ш-ГУ стадиями КРР. На всех стадиях развития КРР наблюдалось пониженное число CD4+Т-хелперов (р < 0,05) и активированных CD4+CD25+Т-клеток (р < 0,05), а также повышенное количество CD8+ЦТЛ (р < 0,05). В результате оценки связи изменений в популяционном составе лимфоцитов и CD4+CD39+Т-клеток у больных КРР обнаружена отрицательная корреляция между количеством CD3+CD4+T-хелперов и числом CD4+CD39+T-клеток (г = -0,60, р = 0,0003), а также между CD3-CD19+В-клеток и CD4+CD39+T-клеток (г = -0,40, р = 0,044).

Важную роль при канцерогенезе играет субпопуляция регуляторных CD4+Т-клеток (Т^). В крови больных КРР при анализе CD4+CD25+CDШlo<'- Tгegs наблюдали усиление уровня экспрессии молекулы CD39. Экспрессия CD39 у Т^-клеток увеличивается уже на начальных этапах (1-11 ст.) развития опухоли (55,24±4,2%) по сравнению с контролем (41,16±3,1%; р < 0,05) и достигает максимальных значений у больных с более поздними стадиями КРР (67,95±3,1%; с контролем р < 0,001, с 1-11 стадиями р < 0,05). Тогда как клетки с фенотипом не характерным для CD4+CD25- и CD4+CD25+Т-клетки, не отличались такой закономерностью. Кроме того, у больных КРР обнаружена положительная корреляция между экспрессией СD39 и транскрипционного фактора FoxP3 на СD4+Т-клетках (г = 0,47, р < 0,006). Среди ОИЛ CD4+CD25hi Tгeg-клетки также отличались от циркулирующих в периферической крови более высокой экспрессией эктонуклеотидазы CD39. Повышенная экспрессия этой молекулы наблюдалась и у нерегуляторных клеток с фенотипами CD4+CD25- и CD4+CD25+. Кроме того, при оценке связи экспрессии молекулы CD39 на Tгeg-клетках с уровнем мРНК A2AR, в крови больных КРР обнаружена положительная корреляция (г = 0,45, р < 0,05).

Заключение. Таким образом, повышенный уровень экспрессии молекулы CD39 как на периферии, так и среди ОИЛ, а также изменение мРНК A2AR лейкоцитов могут говорить об активации аденозин-A2AR иммуносупрессорного механизма у больных КРР. Полученные результаты, возможно, свидетельствуют об участии и важной роли Т^-клеток в этом механизме.

Финансовая поддержка: РФФИ (проект № 16-3400970), бюджетная тема № 0221-2014-0040.