Способ дифференциальной диагностики возрастной и осложненной катаракты
METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF AGE AND COMPLICATED CATARACT

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии и может быть использовано для экспресс-диагностики этиологической формы катаракты.
На сегодняшний день известны методы диагностики нозологических форм офтальмологических заболеваний, использующих различные тест-полоски, позволяющие выбрать наиболее адекватную тактику лечения заболевания.
Известны тест-полоски офтальмологические с флуоресцеином натрия USP для окрашивания  витальными красителями переднего отрезка глаза и определения времени разрыва слезной пленки (Abelson M, Ousler G, Nally L. Alternate reference values for tear film break-up time in normal and dry eye populations. Adv Exp Med Biol 2002; 506 (Part B):1121-1125. Lemp MA, Dohlman CH, Holly FJ. Corneal desiccation despite normal tear volume. Ann Ophthalmol 1970; 284:258-261).
Недостатки способа: пробы на качество и продукцию слезы  не являются специфическими и не могут служить маркерами нозологических состояний.
Известен способ экспресс-диагностики глазных инфекций, основанный на исследовании кислотно-щелочного состояния конъюнктивальной полости, позволяющий выявить вид и стадию специфического воспалительного процесса органа зрения по объективным критериям (патент на изобретение № 2241993, 2004). Ковалевская М. А., Майчук  Ю. Ф. Патофизиологическое обоснование выбора терапии при офтальмохламидиозе //Рефракционная хирургия и офтальмология. – 2006. – Т. 6. – №. 1. – С. 46-50.
Автор предлагает определить величину кислотно-щелочного равновесия (рН) на наиболее гиперемированной поверхности конъюнктивы. При его значении 8.0-12.0 диагностируют острую стадию хламидиоза, 5.1-6.0 - подострую стадию. При значении рН 7.43 - острую стадию кандидоза, 6.21 - подострую стадию. При значении рН 8.18 - острую стадию токсоплазмоза, 5.46 - подострую. При значении рН 3.45 - острую стадию микоплазмоза, 4.52 - подострую стадию. При значении рН 6.0-6.8 - острую стадию воспаления, вызванного золотистым стафилококком, 4.75 - подострую стадию.
Недостатки способа: разработанная методика не нашла широкого клинического применения, поскольку выявленные диапазоны очень узкие, трудно поддаются интерпретации в условиях клинического приёма.
Известен способ экспресс-диагностики с помощью RPS Аденодетектора на основе качественного анализа аденовирусных антигенов — гексон-протеинов в слезной жидкости  (Майчук Ю.Ф., Зайцева О.В. RPS Аденодетектор для экспресс-диагностики аденовирусного конъюнктивита // Новое в офтальмологии. 2009. №3. С. 65–68).
Действие RPS Аденодетектора базируется на принципе латеральной проточной иммунохроматографии. Для анализа требуется до 10 мкл слезной жидкости. Продолжительность анализа составляет 10 минут. Чувствительность теста 89%, специфичность  94%. Исследование возможно в кабинете офтальмолога без лабораторного оборудования.
Недостатки способа. Данный метод имеет недостаточную чувствительность и при высокой специфичности. Таким образом, мы можем судить только о наличии вирусной инфекции органа зрения, а генерализованный процесс остается вне диагностики.
Известен способ дифференциальной диагностики катаракты, обусловленной возрастными метаболическими нарушениями, и катаракты, обусловленной изменениями хрусталика в ответ на фоновые расстройства метаболизма, и выбор тактики их лечения (пат. 2380706 RU заявл. от 10.04.2009; опубл. 27.01.2010), основанный на определении уровня защиты от окислительного стресса. Способ заключается в том, что в дооперационный период в слезной жидкости определяют присутствие маркера возрастных изменений хрусталика – активного пероксиредоксина 6 и/или фрагментов его распада. Для исследования белкового состава слезы, проведен PAAG электрофорез в присутствии SDS образцов слезы до и после лечения (данная методика позволяет сократить время исследования с 48 до 4 часов), представлен форетический прибор; средняя  концентрация белка в пробах определялась спектрофотометрически с использованием спектрофотометра Nano-Drop 1000,Western – блот, для дальнейшего иммуноферментного анализа присутствия пептидов, белков и фрагментов белков в биологических жидкостях глаза, мажорные белки слезы, жидкости передней камеры, стекловидного тела, субретинальной жидкости, фрагментов тканей глаза анализировали методом  MALDI-TOF - триптический гидролиз белка в полиакриламидном геле, надгелевый раствор использовался для получения MALDI-масс-спектров. Всего было проведено более 500 тестов, была проведена не только оценка белкового спектра, но и определены белковые маркеры – молекулы белка слезы с помощью масс-спектрометрии, оборудование для масс-спектрометрии.
Недостатки способа – длительное время выполнения и существенные материальные затраты, необходимые для его выполнения.
Известно изменение уровня пероксиредоксина 6 и продуктов его распада у пациентов с различными формами катаракты (Ковалевская М.А., Ведринцева Н.В. Окислительный стресс в прогнозировании результатов факоэмульсификации катаракты // Офтальмология. 2015. Т. 12. № 1. С. 69-75). Авторы исследовали содержание в слезной жидкости активного пероксиредоксина 6 (PRDX6) и/или фрагментов его распада, в крови определяли маркеры метаболического синдрома. Исследована экспрессия ферментов защиты от окислительного стресса в образцах слезной жидкости и дана сравнительная оценка уровня активности ферментов-антиоксидантов слезной жидкости при окислительном стрессе на фоне терапевтического лечения и после различных видов оперативных вмешательств (факоэмульсификация/фЭк и экстракапсулярная экстракция катаракты). В послеоперационном периоде у пациентов с возрастной катарактой определяется повышение уровня PRDX6, что подтверждается отсутствием осложнений ФЭК. При осложненной катаракте содержание PRDX6 оказалось в 6 раз ниже, чем у пациентов с возрастной катарактой.
Недостатки способа – нет сведений о диапазонах изменений уровня пероксиредоксина 6, соответствующих клиническому диагнозу формы катаракты.
Технический результат -  сокращение времени, необходимого для диагностики нозологической формы катаракты, объективное определение объема предоперационной подготовки у пациентов с катарактой.
Технический результат получен путем наблюдения  256 пациентов с катарактой в период предоперационной подготовки и отслеживанием результатов выполненных оперативных вмешательств.
Пациентам, наряду с традиционными исследованиями, выполняемыми в рамках предоперационного планирования, составления плана оперативного вмешательства проводили исследование с использованием сухих антител к пероксиредоксину 6 (Anti-Peroxiredoxin 6 antibody  ab59544 at 1/100 staining Peroxiredoxin 6 in human brain astrocytes in Parkinson's disease by Immunohistochemistry. Secondary antibody: Molecular Probes, Peroxiredoxin 6 / PRDX6 Antibody, Mouse MAb).
Готовят раствор антител пероксиредоксина 6 в нейтральном буфере, например, физиологическом растворе натрия хлорида, дистиллированной воде или другом.  Концентрация антител в растворе от пяти до девяти процентов, добавляют флуоресцеина в концентрации 0,1-0,3 мг/мл. В приготовленном растворе смачивают полоску из целлюлозы или синтетического полимера, подсушивают  в условиях атмосферного воздуха при температуре не выше 40º С.
Подготовленные описанным выше способом тест-полоски  используют в качестве диагностического теста, помещая за область нижнего века пациента между наружной и средней третью.
Через 1-2 минуты после контакта со слезной жидкостью в случае наличия в ней белка проявляется флуоресцентная полоса в месте контакта.
В наших исследованиях установлено, что при содержании белка слезы в концентрации равной или более 7,93 проявляется интенсивное окрашивание полоски, стандартные клинико-диагностические исследования соответствуют диагнозу возрастной катаракты. Для таких пациентов дополнительной предоперационной подготовки не требуется.
Содержание белка слезы менее 7,93 соответствует слабому окрашиванию полоски, такую катаракту относят к осложненной,  необходимы дополнительные  исследования уровня антиоксидантной и иммунной защиты и выполнения дополнительного  курса предоперационной подготовки.
Пациент М., 54 года, история болезни 8134. Клинические данные, острота зрения правого глаза - 0,02. Исследование щелевой лампой: помутнение средней интенсивности у заднего полюса хрусталика в его наружных слоях задней коры, помутнение довольно стабильное, помутнение не распространяется на другие слои хрусталика, но локализовано по всей задней поверхности хрусталика и носит характер так называемой туфообразной порозности. Клинические признаки документируют достаточно выраженные метаболические нарушения и в результате развитие интенсивного помутнения всей задней поверхности хрусталика. Сопутствующие заболевания - сахарный диабет, тип 1.
Проведен анализ слезной жидкости больной до операции - ФЭК (факоэмульсификация катаракты): активный пероксиредоксин - VI, 14 килодальтон, отсутствует.
Применение тест-полоски показало слабое окрашивание, содержание белка слезы 7,67 - слабое окрашивание полоски, осложненная катаракта,  требуется дополнительная предоперационная подготовка.
Диагноз - катаракта, обусловленная изменениями хрусталика в ответ на фоновые расстройства метаболизма, диабетическая ретинопатия.
Метод оперативного вмешательства - факоэмульсификация катаракты с имплантацией интраокулярной линзы.
После операции ФЭК: острота зрения правого глаза - 0,6. Получен белковый спектр слезы: пероксиредоксин - VI, 14 килодальтон не определяется.
Послеоперационная терапия направлена на улучшение метаболических процессов сетчатки и зрительного нерва: Доксиум 0,1, в капсулах, принимается внутрь 2 раза в день, продолжительность приема 12 дней (общая терапия); Тауфон 4% и Эмоксипин 1% в каплях (местная терапия).