ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ДЕЗОБРАБОТКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕРАТОРА ГОРЯЧЕГО ТУМАНА
DISINFECTANT FOR DISINFORMATION USING A HOT FOG GENERATOR

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, инфектологии и дезинфектологии и может быть использовано для получения дезинфицирующего средства, обладающего высокой бактерицидной и спороцидной активностью при применении с использованием генератора горячего тумана, обеспечивающего равномерное распределение частиц дезинфицирующего раствора в воздушном пространстве и на поверхности объектов окружающей среды.
Микроорганизмы занимали и продолжают занимать ведущее место среди потенциально опасных для людей факторов внешней среды, к которым с января 2020 г. относится коронавирус, вызвавший инфекционное заболевание, признанное пандемией [Воробьев А.А., Гинцбург А.Л., Бондаренко В.М. Мир микробов // Вестник РАМН. - 2000. - №11. - С.11-14; Воробьев А.А. Современные проблемы микробиологической безопасности // Вестник РАМН. - 2002. - №10. - С.9-12; Супотницкий М.В. Новый коронавирус SARS-CoV-2 в аспекте глобальной эпидемиологии коронавирусной инфекции // Вестник войск РХБ защиты. - 2020. - Т. 4, №1. - С.32-65.]. В начале XXI века смертность от инфекционных болезней составляла 25% от всех смертей в мире. Ежегодно инфекционные болезни уносят более 13 млн жизней, причем каждый час в мире от них умирает 1500 человек. От 60 до 80% смертей регистрируется от так называемых «неуправляемых» инфекций, к которым до сентября 2020 г. ввиду отсутствия вакцины относилась корона-вирусная инфекция.
Многочисленными экспериментами установлено, что микроорганизмы, относящиеся к различным филогенетическим группам, обладают неодинаковой устойчивостью к внешним воздействиям. Выживаемость многих микроорганизмов в различных условиях, способность длительно сохраняться и размножаться в широком диапазоне температуры и рН на различных объектах окружающей среды является непременным условием их сохранения как биологического вида в природе. Поэтому в арсенале методов профилактики инфекционных заболеваний одним из ключевых является дезинфекция [Шандала М.Г. Оценка состояния и задачи совершенствования отечественных дезинфектологических технологий // Дезинфекционное дело. - 2013. - №2. - С. 20-28]. В то же время необходимо особо отметить, что эффективность дезинфектологической профилактики инфекционной патологии в значительной степени зависит от устойчивости возбудителей к дезинфицирующим средствам. Данная проблема стала волновать как клиницистов, так и дезинфектологов в последние годы, поскольку выяснилось, что устойчивость бактерий к дезинфектантам в определенной степени коррелирует с их анти-биотикорезистентностью [Лучинин Д.Н., Ротов К.А., Спиридонов В.А., Викторов Г.В. Основные механизмы резистентности микроорганизмов к антисептикам и дезинфектантам // Дезинфекционное дело. - 2014. - №1. - С.24-30], [Туманов А.С., Гурин К.И., Погорельский И.В., Лундовских И.А., Гаврилов К.Н., Менухова B.C. и др. Изучение устойчивости к дезинфицирующим средствам бактерий, обладающих антибиотикорезистентностью // Дезинфекционное дело. - 2016. - №2. - С.17-27]. В борьбе с лекарственными препаратами бактерии «задействовали» природные генетические механизмы формирования устойчивости. Появились новые генерации микробов, на которые не действуют даже самые сильные препараты. Проблема усугубляется тем, что антибиотикорезистентные бактерии в свою очередь обладают в определенной степени устойчивостью к дезинфицирующим средствам. Возбудители инфекционных заболеваний с множественной лекарственной устойчивостью, по данным Европейского центра по профилактике и контролю заболеваний, ежегодно уносят жизни до 25 тыс.человек. По прогнозам ВОЗ, через 20 лет все микроорганизмы приобретут устойчивость к антибактериальным препаратам [Antimicrobial resistance: global report on surveillance. World Health Organization - 2014: WHO Press, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211. Geneva, 27, Switzerland].
Проблема полирезистентных бактерий требует безотлагательного решения, поскольку антибиотикорезистеностные штаммы микроорганизмов, выделенные в медицинских организациях, часто становятся устойчивыми к дезинфицирующим средствам [Саперкин Н.В. Комплексная характеристика чувствительности возбудителей различных инфекций к хлорсодержащим дезинфицирующим средствам. Автореферат дисс.канд. мед. наук. - Н.Новгород: Изд-во Нижегородской гос.мед. академии, 2010. - 26 с.], [Сер-гевнин В.И. Приобретенная устойчивость возбудителей внутрибольничных гнойно-септических инфекций к дезинфицирующим средствам и антибиотикам. Электронный ресурс https://cyberleninka.ru/article/priobretennaya-ustoychivost-vozbyditeley-vnutribolnichnyh-gnouno-septicheskih-infectsiy-k-dezinfitsiruyuschim-sredstvam-i (дата обращения 8.10.2020)]. Вместе с тем, следует признать, что устойчивость к антибактериальным препаратам и дезинфектантам не всегда очевидна. Скорее всего становление устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам является следствием их адаптации к низким концентрациям, используемым в течение длительного периода одних и тех же дезинфектантов.
Сами дезинфицирующие средства, будучи биоцидными агентами, не являются «облигатно избирательными» для патогенных микроорганизмов. Они могут неблагоприятно воздействовать не только на них, но и на организм людей, а также на компоненты экосистем [Соколова Н.Ф. Современные проблемы организации и проведения дезинфекционных мероприятий в ЛПУ в целях профилактики внутрибольничных инфекций // Дезинфекционное дело. - 2005. - №4. - С.31-39]. В этой связи очевидно, что дезинфицирующие средства, перспективные для использования в дезинфектологических технологиях, должны обладать высокой биоцидной активностью в отношении широкого спектра микроорганизмов, которую обеспечивают химические соединения, именуемые действующими веществами. Специфические свойства действующих веществ определяют особенность антимикробного действия дезинфицирующих средств, в состав которых они входят, а именно, спектр антимикробного действия - бактерицидного, вирулицидного, спороцидного, фунгицидного и др., а также определенную токсичность, аллергенность и экологическую безопасность [Соколова Н.Ф. Методическое обеспечение оценки эффективности и безопасности дезинфицирующих средств // Дезинфекционное дело. - 2011. - №3. - С.56-58].
До настоящего времени наиболее распространенным методом обеззараживания поверхностей объектов и помещений является химический главным образом потому, что применение его значительно доступнее, чем применение эффективного и дешевого физического метода. Кроме того, многие предметы, портящиеся при воздействии на них высокой температуры, могут быть без ущерба обработаны химическими дезинфицирующими средствами. Химический метод дезинфекции заключается в применении различных химических веществ, вызывающих гибель микроорганизмов на поверхности и внутри объектов и предметов окружающей среды, а также в воздухе и различных органических субстратах (гной, мокрота, испражнения и т.д.) [Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине. М.: Медицина, 1973. - 368 с.]. Однако используемые при дезинфекции такие способы обработки, как протирание и орошение, требуют больших затрат времени и физических сил персонала, значительного расхода дезинфицирующих средств. Наряду с этим сохраняется вероятность вторичной контаминации обеззараженных объектов, а также ограничивается сфера применения препаратов, так как возможна обработка только поверхности. Влажные методы позволяют нанести дезинфицирующее средство только на доступные поверхности. При этом в силу капиллярных явлений и поверхностного натяжения дезинфектант не проникает в микротрещины, находящиеся на поверхности, - основную нишу патогенной микрофлоры. Таким образом, при протирании или орошении не достигается требуемая полнота контакта дезинфицирующего средства с источником микробного загрязнения, а также не обеспечивается точная дозировка препарата [Голубкова А.А., Платонова Т.А., Смирнова С.С. Современные клининговые технологии в медицинских организациях с позиций эпидемиологической безопасности, гигиенической целесообразности и экономической эффективности // Дезинфекционное дело. - 2016. - №2. - С. 7-11].
Нерешенной остается проблема дезинфекции воздуха. Широко используемые для этих целей ультрафиолетовые бактерицидные лампы обладают рядом недостатков. Так, имеются данные о зависимости эффективности работы ультрафиолетовых ламп от колебания напряжения в сети. В процессе работы ламп происходит снижение интенсивности бактерицидного потока, поэтому необходимо после истечения 1/3 номинального срока службы ламп увеличивать облучение, для чего должен вестись учет времени работы облучателей помещения. На срок службы ламп влияет число их включений (каждое включение уменьшает срок службы лампы на 2 часа). С понижением температуры воздуха увеличивается распыление электродов, что сокращает срок службы ламп. Необходимо периодически осуществлять чистку от пыли поверхности отражателя и колбы лампы, так как даже небольшой слой пыли заметно снижает выход бактерицидного потока. Ультрафиолетовые лучи не обладают проникающей способностью. Кроме того, при использовании бактерицидных ламп в воздух выделяется большое количество озона, который обладает раздражающим действием на слизистые оболочки верхних дыхательных путей и глаз. Ультрафиолетовое излучение является разрушающим фактором для всех без исключения типов покрытий: краски, пластика, искусственной и натуральной кожи, винила, тканей [Методические рекомендации по использованию метода аэрозольной дезинфекции в медицинских организациях. MP 3.5.1.01103. Утв. 28.09.2015 руководителем Федеральной службы Роспотребнадзора].
Более рациональным и современным способом обеззараживания является использование дезинфицирующих растворов в виде аэрозолей [Riest, Р. Introduction to aerosol science / Пер. с англ. - М.: Мир, 1987. - 278 с.]. Сущность дезинфекции аэрозолями заключается в том, что водные растворы химических препаратов с помощью генераторов распыляются до туманообразного состояния - аэрозоля с размером частиц от 5 до 50 мкм. Аэрозоль заполняет весь объем помещения или другого обрабатываемого объекта и держится в воздухе 3-4 часа. Это позволяет содержащемуся в аэрозоле дезинфектанту за счет адгезии и тепловой преципитации проникнуть во все мелкие дефекты поверхности и тем самым обеспечить ее равномерное и полное покрытие, обработать воздух, в котором за счет конвекционных потоков осуществляется миграция микроорганизмов в пространстве.
Для получения аэрозолей используют оборудование различной степени сложности - от так называемых «гидропультов» и «квазаров» до сложной дистанционно управляемой аппаратуры, позволяющей получать аэрозоли дезинфицирующих средств диспергационным, конденсационным и термомеханическим способами.
В практической дезинфектологии и микробиологии были исследованы различные бактерицидные аэрозоли, такие как гексилрезорцин, триэтиленгликоль, формальдегид, формалино-креолиновая и формалино-ксилонафтоловая смеси, препараты на основе хвойных масел, фагогена и эуфаголя, препараты конифераля, комплексного английского препарата «Ибкол» (4 части триэтиленгликоля и 6 частей 4% хлорированного ксиленола), чешского препарата «Пестерил», в состав которого входят перотцовая кислота, перекись водорода, серная кислота и стабилизатор. В перечень изученных бактерицидных аэрозолей входит также хлорамин, гексохлорбензол, пентахлорфенол, гексахлорфенол, метоксихлор, антрацен, гипохлорит натрия, смесь хлороксиленола с триэтиленгликолем, бета-пропиолактона, гексилрезорцин, ловый эфир резорцина, перекись водорода в смеси с молочной кислотой и поверхностно-активным веществом - сульфонолом [Ярных B.C. Аэрозоли в ветеринарии. – М.: Колос, 1972. - 352 с.; Медведев Н.П. Биологические и технологические основы экологически безопасной системы аэрозольной дезинфекции объектов ветеринарного надзора: автореф. дис. д-ра биол. наук. - М., 2001. - 47 с.].
Относительно новая альтернативная система дезинфекции основывается на применении перекиси водорода в паровой фазе. Эта система обеспечивает низкотемпературную обработку и исключает появление многих потенциальных рисков для здоровья операторов, связанных с такими деконтаминантами, как формальдегид и этиленоксид [Peroxigen compounds, in disinfection, sterilization and preservation. 5th ed. Block S. (ed.). Lippincott, Williams & Wilkins. Philadelphia, PA. - 2001. - P. 185-204; Hydrogen peroxide, chemical substances in Threshold limit values for chemical substances and physical agents and biological exposure indices. American conference of Governmental industrial hygenists (ACGIH). - Cincinnati, 2001. - P. 68.]. Авторы указанных разработок считают, что содержащийся в дезинфицирующем средстве гидроксильный радикал, являющийся мощным окислителем, обладает микробоцидной активностью, проявляющейся в его действии на липиды, мембраны, ДНК и другие существенные компоненты клетки. Пары перекиси водорода нестабильны и распадаются на нетоксичные составляющие воду и кислород.
-1
Параллельно рядом исследователей [More F., Perkinson R. Gold gas sterilization using H2O2. - U.S. Patent, 1979. - Bui. 4. - P. 169], [Joslyn L.J. Gaseous chemical sterilization in disinfection, sterilization and preservation. 5th ed. Block S. (ed.). Lippincott, Williams & Wilkins. Philadelphia, PA. - 2001. - P. 344] продемонстрирована спороцидность парообразной перекиси водорода (VHP - vaporized hygrogen peroxide) при довольно низких концентрациях (от 0,5 до 10 мг⋅л) в весьма широком температурном диапазоне (4-80°С).
Для генерации мелкодисперсных аэрозолей применяют два типа устройств. Первым типом являются генераторы тумана, разбивающие жидкость на мелкие частицы (7-10 мкм). В основе принципа работы генератора лежит воздействие на струю жидкости сильной воздушной среды и сил турбулентности, или же дисковый принцип диспергации.
Вторым типом являются термогенераторы аэрозолей - генераторы горячего тумана. Принцип работы генератора горячего тумана состоит в том, что рабочий раствор дезинфектанта впрыскивается в поток горячего, движущегося с большой скоростью газа. При этом раствор дезинфектанта сначала разбивается на мелкие капли, которые почти мгновенно испаряются за счет высокой температуры газа. Эффект охлаждения, вызванный расширением газа и его соприкосновением с относительно холодным окружающим воздухом, приводит к конденсации влаги в виде капелек от 20 до 30 мкм. Эти капельки формируют плотное облако, обычно называемое туманом, которое относится от точки своего образования за счет скорости вырывающегося из выпускающего конца резонатора газа [DEZTRADE. Принципы работы генераторов горячего тумана: достоинства и недостатки. http://diztrade.ru/info/prinsip-raboty-generatorov-goryachegotumana/].
Преимуществами дезинфекционной обработки горячим туманом являются:
-1
- высокая производительность в единицах площади при небольшом расходе рабочего раствора дезинфицирующего средства (5-8 л*га),
- экономия времени в сравнении с обычным опрыскиванием.
- аэрозольная обработка рабочими растворами дезинфицирующего средства на водной или масляной основе без потери активности действующего вещества,
- быстрота и эффективность распространения действующего вещества в составе рабочего раствора дезинфицирующего средства,
- высокая результативность дезобработки даже в труднодоступных местах, в мельчайших трещинах и щелях,
2
- глубокое проникновение дезинфицирующего средства при проведении дезинфекции в помещениях площадью до 150 м.
По совокупности существенных признаков наиболее близкими к предлагаемому изобретению являются 6% раствор перекиси водорода и сложный по составу концентрат дезинфицирующего средства, включающий серебросодержащий пероксид водорода и комплексообразователи [Патент РФ №2361619. Концентрат дезинфицирующего средства]. Кроме сложности процесса приготовления концентрата и практического использования сам концентрат дезинфицирующего средства был испытан только на кишечной палочке, которая обладает высокой чувствительностью ко многим дезинфицирующим средствам. О возможности исследования активности концентрата дезинфицирующего средства в описании к изобретению ничего не сказано. Критическим фактором успеха деконтаминации перекисьсодержащими дезинфектантами является влажность воздуха. Зона деконтаминации должна подвергаться кондиционированию так, чтобы относительная влажность не превышала в ней 30%. Этот уровень гарантирует, что воздух может содержать достаточную концентрацию перекиси водорода для успешной стерилизации искомой зоны.
Задачей изобретения является разработка экологически безопасного дезинфицирующего средства, обладающего биоцидной активностью в отношении вегетативных и спорообразующих микроорганизмов при применении с использованием генератора горячего тумана при малых концентрациях действующих веществ.
Технический результат, который может быть достигнут при использовании предлагаемого дезинфицирующего средства как объекта изобретения, заключается в том, что его высокая биоцидная активность в отношении вегетативных и спорообразующих микроорганизмов достигается переводом дезинфицирующего средства с использованием генератора горячего тумана в состояние аэрозоля, активно действующего в небольших количествах на взвешенные в воздухе или контаминирующие поверхности объектов микроорганизмы в виде отдельных клеток или их скоплений, находящихся в капельках органических растворов или высохших частиц, защищенных тонкой коллоидной пленкой. В этом случае бактерицидное действие аэрозоля обеспечивается не только контактом его частиц с микрофлорой, но и диффузией паров дезинфицирующего раствора в бактериальную клетку. Пары дезинфицирующего раствора конденсируются на бактериальной клетке, которая служит ядром конденсации, и вступают с ней во взаимодействие. Именно поэтому эффективное действие аэрозоля проявляется в воздушной среде при минимальных концентрациях обеззараживающего средства.
Поставленная задача достигается тем, что заявляемое дезинфицирующее средство содержит клорсепт 25, триамин и акрвад МСВ-50 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
клорсепт 25 (масса таблетки 4,0 г,
масса активного хлора в таблетке 1,6 г)
0,015,
триамин
0,3,
арквад МСВ-50 (49-52% активного вещества)
0,3,
вода
остальное.
Заявляемый состав дезинфицирующего средства содержит клорсепт 25 - натриевую соль дихлоризоциануровой кислоты [Инструкция №25/08 по применению дезинфицирующего средства «Клорсепт». - М.: 2008. Утв. Генеральным директором ООО «Самарово» И.П. Чуевым 29.12.2018]. По параметрам острой токсичности клорсепт 25 относится к 3 классу умеренно опасных соединений, по ГОСТ 12.1.007-76.
50
-1
Вторым компонентом дезинфицирующего средства является третичное аммониевое соединение триамин (N,N-бис-(3-аминопропил)додециламин). Третичные аммониевые соединения имеют низкую токсичность, обладают поверхностно-активными свойствами, которые обеспечивают усиление антимикробного действия в составе композиций [Погорельский И.П., Гурин К.И., Лундовских И.А. и др. Экспериментальная оценка активности дезинфицирующего средства триамин: микробиологические, электронно-микроскопические и аналитические аспекты изучения // Дезинфекционное дело. - 2013. - №3. - С.33-38.]. Триамин совместим с другими биоцидами, не вызывает коррозии металлов [Инструкция по применению (№002/2015 от 2015 г.). Производитель ООО «НПК «Альфа», Россия]. По параметрам острой токсичности относится к умеренно опасным соединениям (LD при пероральном введении белым крысам 200-2000 мг⋅кг).
12
16
50
-1
Третьим компонентом является арквад МСВ-50 - алкилдиметилбензи-ламмониум хлорид, прозрачная бесцветная жидкость, содержащая 49-52% катионного четвертичноаммониевого соединения с алкильной цепочкой С-С. Производитель - компания «Akzo Nobel Surface Chtmistry AB (Швеция) [Арквад МСВ-50. http://izomernn.ru/alkildimetilberizilammonij-chlorid/?yclid=5607992490439247624]. Арквад МСВ-50 обладает минимальной токсичностью (LD при пероральном введении белым крысам 795 мг⋅кг).
Применяется при бактерицидной обработке систем циркуляции воздуха в медицинских организациях.
Объединенные в составе дезинфицирующего средства в определенном соотношении указанные компоненты в результате синергидного действия на бактериальную клетку, проявляющегося усилением антибактериального свойства композиционного дезинфицирующего средства в виде деструкции клеточных стенок и цитоплазматических мембран.
Для подтверждения возможности осуществления изобретения и достижения указанного технического результата готовят дезинфицирующее средство и проводят испытание его бактерицидной активности в отношении спор сибиреязвенного микроба Bacillus anthracis вакцинного штамма СТИ-1 и клинического изолята золотистого стафилококка Staphylococcus aureus KM как тест-микроорганизмов, обладающих, соответственно, высокой и средней степенью устойчивости к дезинфицирующим средствам.
6
Оценку бактерицидного и спороцидного действия заявляемого дезинфицирующего средства проводят с использованием генератора горячего тумана ТН-130 [Инструкция по эксплуатации генератора горячего тумана ТН-130 с автоматическим запуском (производство - Корея) // ООО «Агроветсер-вис», 2017. - 15 с.]. Рабочий раствор дезинфицирующего средства впрыскивается в поток горячего, движущегося с высокой скоростью газа. Температуру аэрозоля в генераторе устанавливают на уровне 70°С. Культуры микроорганизмов Staphylococcus aureus и спор Bacillus anthracis СТИ-1 наносят на тест-объекты размером 5×5 см, выполненные из стали, латуни и шифера. Биологическая концентрация стафилококков Staphylococcus aureus и спор Bacillus anthracis СТИ-1, наносимых на тест-объекты, составляет (1,4-1,8)⋅10 КОЕ. После подсушивания тест-объекты контаминируют культурами стафилококков и спор бацилл, обрабатывают однократно горячим туманом дезинфицирующего средства и делают смывы стерильными ватно-марлевыми тампонами с обработанных поверхностей тест-объектов через 1,3 и 5 мин. Контролем в опытах служат контаминированные микроорганизмами и спорами тест-объекты без обработки их горячим туманом. В качестве нейтрализатора дезинфицирующего средства в экспериментах используют универсальный нейтрализатор, содержащий Твин-80 (3%), сапонин (3%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%), тиосульфат натрия (1%), устраняющий действие химического агента на бактерии и споры, но не убивающий и не задерживающий рост микроорганизмов [Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфицирующих средств для оценки их эффективности и безопасности. Руководство 4.2.2643-10. Утв. 01.06. 2010 руководителем Федеральной службы Роспотребнадзора]. Отобранные пробы (опытные и контрольные) после нейтрализации высевают на плотную питательную среду в чашках Петри для подсчета выросших колоний и определения количества жизнеспособных микроорганизмов.
Изучение структуры спор Bacillus anthracis СТИ-1 проводят с использованием просвечивающего электронного микроскопа JEOL JEM (Япония) при ускоряющем напряжении 200 кВ. Статистическую обработку результатов определения проводят по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева [Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 280 с.].
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана на следующих примерах.
Пример 1. Готовят 6% раствор перекиси водорода по ГОСТ 177-88.
6
Выращивают культуру стафилококка Staphylococcus aureus КМ в течение 24 ч при температуре 37°С, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации (1,8±0,5)⋅10бактериальных клеток в 1 мл.
6
-2
Готовят суспензию спор бацилл Bacillus anthracis вакцинного штамма СТИ-1 на изотоническом растворе хлорида натрия, для чего данный раствор вводят во вскрытую ампулу с лиофилизированной культурой спор (производитель - Филиал ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России) до получения суспензии с концентрацией спор (1,7±0,6)⋅10 в 1 мл. Суспензии стафилококков и спор бацилл сибиреязвенного микроба наносят на поверхность тест-объектов из стали, латуни и шифера. После подсушивания микробных культур тест-объекты делят на опытные и контрольные образцы. Опытные образцы обрабатывают в течение 1 мин с помощью генератора горячего тумана ТН-130 на основе 6% раствора перекиси водорода; расход перекиси водорода 80-85 мл⋅м; расстояние от распылителя до тест-объектов - 2 м. Нейтрализацию дезинфектанта проводят с использованием универсального нейтрализатора. Отбор проб бактериальных культур с поверхности отобранных контрольных и опытных тест-объектов осуществляют через 1, 3 и 5 мин. Посев отобранных проб - контрольных и опытных (после воздействия дезинфектанта) проводят на плотные питательные среды в чашках Петри, просматривают через 24 ч инкубирования посевов на наличие или отсутствие роста микроорганизмов. На основании полученных результатов выносят суждение о дезинфицирующей эффективности 6% раствора перекиси водорода.
Изучение бактерицидного действия горячего тумана на основе 6% раствора перекиси водорода при времени распыливания 30 с приводит к значительному сокращению числа жизнеспособных тестируемых микроорганизмов: при экспозиции воздействия 5 мин остаются жизнеспособными лишь десятки и сотни микроорганизмов. Исключение составляет опыт с тест-объектами из латуни: через 5 мин экспозиции жизнеспособными остаются тысячи тестируемых микроорганизмов (таблица 1). Очевидно, что в тех местах латунных тест-объектов, где остались выжившие микроорганизмы, существовало накопление ионов меди в повышенном количестве, достаточном для каталитического расщепления перекиси водорода и локального снижения биоцидного эффекта дезинфектанта.
Пример 2. Готовят заявляемое дезинфицирующее средство при следующем соотношении компонентов, мас. %:
клорсепт 25 (масса таблетки 4,0 г,
масса активного хлора в таблетке 1,6 г)
0,015,
триамин
0,3,
арквад МСВ-50 (49-52% активного вещества)
0,3,
вода
остальное.
6
Выращивают культуру стафилококка Staphylococcus aureus КМ в течение 24 ч при температуре 37°С, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации (1,8±0,5)⋅10бактериальных клеток в 1 мл.
6
-2
Готовят суспензию спор бацилл Bacillus anthracis вакцинного штамма СТИ-1 на изотоническом растворе хлорида натрия, для чего данный раствор вводят в вскрытую ампулу с лиофилизированной культурой спор (производитель - Филиал ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России) до получения суспензии с концентрацией спор (1,7±0,6)⋅10 в 1 мл. Суспензии стафилококков и спор бацилл сибиреязвенного микроба наносят на поверхность тест-объектов из стали, латуни и шифера. После подсушивания микробных культур тест-объекты делят на опытные и контрольные образцы. Опытные образцы обрабатывают в течение 30 секунд с помощью генератора горячего тумана ТН-130 на основе заявляемого дезинфицирующего средства; расход дезинфицирующего средства 75-80 мл⋅м; расстояние от распылителя до тест-объектов -2 м. Нейтрализацию дезинфектанта осуществляют с использованием универсального нейтрализатора. Отбор проб бактериальных культур с поверхности отобранных контрольных и опытных тест-объектов проводят через 1, 3 и 5 мин. Посев отобранных проб - контрольных и опытных (после воздействия дезинфектанта) проводят на плотные питательные среды в чашках Петри, просматривают через 24 ч инкубирования посевов на наличие или отсутствие роста микроорганизмов. На основании полученных результатов выносят суждение об эффективности заявляемого дезинфицирующего средства.
Изучение бактерицидного действия горячего тумана на основе заявляемого дезинфицирующего средства при времени распыливания 30 с приводит к гибели всех бактерий Staphylococcus aureus КМ и спор Bacillus anthracis вакцинного штамма СТИ-1, в том числе экспонированных действию горячего тумана на тест-объектах из латуни: жизнеспособных микроорганизмов на поверхности плотных питательных сред при посеве опытных проб не выявлено. Результаты контроля спороцидного действия заявляемого дезинфицирующего средства на споры Bacillus anthracis СТИ-1 оценивают также по данным электронно-микроскопического исследования спор. Изменения структуры спор под воздействием дезинфицирующего средства представлено на фиг., где А - споры до контакта с дезинфицирующим средством, Б - после контакта с дезинфицирующим средством в течение 5 мин. Как показано на фиг., нативные споры имеют естественную для спор структуру с ровной, четкой поверхностью кортекса, электронно-оптическая плотность не изменена. После воздействия на споры дезинфицирующего средства споры утратили естественную форму, что привело при сохранении электронно-оптической плотности к образованию агломератов спор с потерей их жизнеспособности и это подтверждено бактериологическим методом (таблица 2).
Заявленное дезинфицирующее средство обеспечивает высокий уровень бактерицидной и спороцидной активности в составе горячего тумана при низкой концентрации компонентов в рабочем растворе.