СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ
METHOD OF IDENTIFYING NOSOCOMIAL STRAINS OF MICROORGANISMS

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления внутрибольничных штаммов и слежения за их циркуляцией в лечебно-профилактических учреждениях, в частности при проведении эпидемиологического мониторинга.
Известен способ выявления внутрибольничных штаммов и слежения за ними, основанный на определении профиля антибиотикочувствительности как внутривидового маркера штаммов для идентификации однородных возбудителей и выявления закономерностей их циркуляции в госпитальных условиях (Л.П.Зуева, М.С.Поляк, Е.Н.Колосовская и др. Микробиологический мониторинг и эпидемиологический анализ антибиотикорезистентности микроорганизмов с использованием компьютерной программы WHONET. Методические рекомендации. СПб., 2005. - 72 с.).
Недостатки: невысокая точность из-за изменения уровня антибиотикочувствительности культур в процессе лечения, низкая производительность из-за необходимости определения чувствительности к большому количеству антибиотиков (не менее 6-8).
Технический результат: повышение точности способа за счет изучения более стабильной характеристики, а именно чувствительности к анилиновым красителям, повышение производительности благодаря исследованию чувствительности к меньшему количеству препаратов (3 и более). Указанный результат достигается путем определения уровня чувствительности микробных культур к 3 и более анилиновым красителям. Изучение чувствительности к анилиновым красителям для определения видовой принадлежности микробных культур описано в книге: Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга II. / Под ред. А.С.Лабинской, Н.Н.Костюковой, С.М.Ивановой. - М.: БИНОМ, 2010. В качестве эпидемиологического маркера этот показатель используется в настоящее время впервые.
Способ осуществляют следующим образом.
6
В лунки стерильного 96-луночного планшета вносят по 5 мкл 0,1%-ных водно-спиртовых растворов анилиновых красителей (генциан фиолетовый, метиловый красный, бромфеноловый синий и бромкрезоловый пурпурный). С помощью многоканального дозатора готовят серийные двукратные разведения красителей в жидкой питательной среде, после чего в лунки добавляют стандартизованную взвесь исследуемой микробной культуры в физиологическом растворе плотностью 10 клеток/мл. Микробные культуры могут быть взяты из клинических (пациенты с гнойно-воспалительными заболеваниями) и санитарных (смывы с объектов) проб. При определении тождества культур выявляют внутрибольничные штаммы, а при отсутствии тождества культур - внебольничные.
Примеры использования предлагаемой методики.
Пример №1. Изучена чувствительность к анилиновым красителям 3 культур энтерококка (Enterococcus faecalis), выделенных от разных пациентов отделения реанимации хирургического стационара. Результаты (см. табл.1) свидетельствуют об отсутствии подобия в показателях чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, об отсутствии эпидемических связей между данными клиническими случаями, то есть выявлены внебольничные штаммы.
Таблица 1
№№ культур
генцианвиолет
бромкрезоловый пурпурный
бромфеноловый синий
метиловый красный
51
0,63
5
2,5
80
138
0,16
40
10
10
139
5
5
20
40
Пример №2. Изучена чувствительность к 4 анилиновым красителям 2 культур клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae), выделенных с объектов внутрибольничной среды хирургического стационара. Результаты (см. табл.2) свидетельствуют о тождественности показателей чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, о наличии эпидемических связей между данными культурами, то есть о наличии внутрибольничного штамма.
Таблица 2
№№ культур
генцианвиолет
бромкрезоловый пурпурный
бромфеноловый синий
77 с
0,31
160
160
79 с
0,31
160
160
Пример №3. Изучена чувствительность к анилиновым красителям 2 культур золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus), одна из которых выделена от пациента отделения реанимации хирургического стационара, а другая - с объекта внешней среды (ручка тумбочки) в данном отделении. Результаты (см. табл.3) свидетельствуют о подобии показателей чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, отражают процесс распространения микроорганизма в больничной среде, то есть выявлен внутрибольничный штамм.
Таблица 3
№№ культур
генцианвиолет
бромкрезоловый пурпурный
бромфеноловый синий
метиловый красный
фуксин кислый
56
40
10
40
160
5
257 с
40
10
40
160
5