КОМПОЗИЦИИ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ

1. Способ культивирования клеток, включающий в себя стадию контактирования клеток со средой клеточной культуры, включающей в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9; и
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
2. Способ по п. 1, включающий в себя стадию контактирования клеток со средой клеточной культуры, включающей в себя:
от приблизительно 0,7 мМоль до приблизительно 2,5 мМоль цистина;
от приблизительно 0,11 мкМоль до приблизительно 0,72 мкМоль витамина В2;
от приблизительно 4,5 мкМоль до приблизительно 30,0 мкМоль витамина В6;
от приблизительно 3,4 мкМоль до приблизительно 22,0 мкМоль витамина В9; и
от приблизительно 0,2 мкМоль до приблизительно 1,5 мкМоль витамина В12.
3. Способ по п. 1, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя любой один или больше из витамина В1, витамина В3, витамина В5 и витамина В7.
4. Способ по п. 3, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя любой один или больше из:
от приблизительно 2,0 мкМоль до приблизительно 14,0 мкМоль витамина В1;
от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 72,0 мкМоль витамина В3;
от приблизительно 6,8 мкМоль до приблизительно 44,0 мкМоль витамина В5; и
от приблизительно 0,02 мкМоль до приблизительно 0,14 мкМоль витамина В7.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя источник железа.
6. Способ по п. 5, в котором источник железа представляет собой лимоннокислое железо или сернокислое железо.
7. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль.
8. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 36,0 мкМоль.
9. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя гидрокортизон.
10. Способ по п. 9, в котором концентрация гидрокортизона в среде клеточной культуры составляет от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,25 мкМоль.
11. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры является химически определенной средой клеточной культуры.
12. Способ по любому из пп. 1-4, в котором среда клеточной культуры является химически неопределенной средой клеточной культуры.
13. Способ по любому из пп. 1-4, в котором клетки контактируют со средой клеточной культуры во время фазы роста клеток.
14. Способ по любому из пп. 1-4, в котором клетки контактируют со средой клеточной культуры во время фазы продуцирования у клеток.
15. Способ по п. 14, который дополнительно включает в себя стадию добавления цистеина к среде клеточной культуры.
16. Способ по п. 15, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 80 мг/л до приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
17. Способ по п. 15, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
18. Способ по п. 15, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 140 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
19. Способ получения полипептида, включающий в себя стадию культивирования в среде клеточной культуры клетки, включающей в себя выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, в котором:
(a) среда клеточной культуры включает в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12; и
(b) клетка экспрессирует полипептид.
20. Способ по п. 19, в котором среда клеточной культуры включает в себя:
от приблизительно 0,7 мМоль до приблизительно 2,5 мМоль цистина;
от приблизительно 0,11 мкМоль до приблизительно 0,72 мкМоль витамина В2;
от приблизительно 4,5 мкМоль до приблизительно 30,0 мкМоль витамина В6;
от приблизительно 3,4 мкМоль до приблизительно 22,0 мкМоль витамина В9; и
от приблизительно 0,2 мкМоль до приблизительно 1,5 мкМоль витамина В12.
21. Способ по п. 19, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя любой один или больше из витамина
В1, витамина В3, витамина В5 и витамина В7.
22. Способ по п. 21, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя любой один или больше из:
от приблизительно 2,0 мкМоль до приблизительно 14,0 мкМоль витамина В1;
от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 72,0 мкМоль витамина В3;
от приблизительно 6,8 мкМоль до приблизительно 44,0 мкМоль витамина В5; и
от приблизительно 0,02 мкМоль до приблизительно 0,14 мкМоль витамина В7.
23. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя источник железа.
24. Способ по п. 23, в котором источник железа представляет собой лимоннокислое железо или сернокислое железо.
25. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль.
26. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 36,0 мкМоль.
27. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя гидрокортизон.
28. Способ по п. 27, в котором концентрация гидрокортизона в среде клеточной культуры составляет от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,25 мкМоль.
29. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры является химически определенной средой клеточной культуры.
30. Способ по любому из пп. 19-22, в котором среда клеточной культуры является химически неопределенной средой клеточной культуры.
31. Способ по любому из пп. 19-22, в котором культивирование происходит во время фазы роста клетки.
32. Способ по любому из пп. 19-22, в котором культивирование происходит во время фазы продуцирования у клетки.
33. Способ по п. 32, который дополнительно включает в себя стадию добавления цистеина к среде клеточной культуры.
34. Способ по п. 33, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 80 мг/л до приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
35. Способ по п. 33, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
36. Способ по п. 33, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 140 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
37. Способ по любому из пп. 19-22, в котором полипептид является антителом.
38. Способ по п. 37, в котором антитело является антителом IgGl.
39. Способ по п. 37, в котором антитело является антителом против VEGF, против мезотелина, против PCSK9 или против Beta7.
40. Способ по любому из пп. 19-22, дополнительно включающий в себя стадию выделения полипептида из среды клеточной культуры.
41. Способ по п. 40, в котором композиция, включающая в себя выделенный полипептид, выглядит как бесцветная или слегка окрашенная жидкость.
42. Способ по п. 41, в котором композиция включает в себя выделенный полипептид в концентрации по меньшей мере 100 мг/мл.
43. Полипептид, полученный способом по любому из пп. 19-42.
44. Фармацевтическая композиция, включающая в себя полипептид по п. 43 и фармацевтически приемлемый носитель.
45. Набор для дополнения в среду клеточной культуры химически определенных компонентов, включающий в себя:
цистин в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина в среде клеточной культуры;
витамин В2 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2 в среде клеточной культуры;
витамин В6 в таком количестве, чтобы обеспечить от
приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6 в среде клеточной культуры;
витамин В9 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9 в среде клеточной культуры; и
витамин В12 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
46. Набор по п. 45, включающий в себя:
цистин в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,7 мМоль до приблизительно 2,5 мМоль цистина в среде клеточной культуры;
витамин В2 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,11 мкМоль до приблизительно 0,72 мкМоль витамина В2 в среде клеточной культуры;
витамин В6 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 4,5 мкМоль до приблизительно 30,0 мкМоль витамина В6 в среде клеточной культуры;
витамин В9 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 3,4 мкМоль до приблизительно 22,0 мкМоль витамина В9 в среде клеточной культуры; и
витамин В12 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,2 мкМоль до приблизительно 1,5 мкМоль витамина В12 в среде клеточной культуры.
47. Набор по п. 45, который дополнительно включает в себя любой один или больше из витамина В1, витамина В3, витамина В5 и витамина В7.
48. Набор по п. 47, который дополнительно включает в себя любой один или больше из:
витамина В1 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 2,0 мкМоль до приблизительно 14,0 мкМоль витамина В1 в среде клеточной культуры;
витамина В3 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 72,0 мкМоль витамина В3 в среде клеточной культуры;
витамина В5 в таком количестве, чтобы обеспечить от
приблизительно 6,8 мкМоль до приблизительно 44,0 мкМоль витамина В5 в среде клеточной культуры; и
витамина В7 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,02 мкМоль до приблизительно 0,14 мкМоль витамина В7 в среде клеточной культуры.
49. Набор по любому из пп. 45-48, который дополнительно включает в себя источник железа.
50. Набор по п. 49, в котором источник железа представляет собой лимоннокислое железо или сернокислое железо.
51. Набор по любому из пп. 45-48, который дополнительно включает в себя гидрокортизон.
52. Среда клеточной культуры, включающая в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6;
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9; и
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
53. Среда по п. 52, включающая в себя:
от приблизительно 0,7 мМоль до приблизительно 2,5 мМоль цистина;
от приблизительно 0,11 мкМоль до приблизительно 0,72 мкМоль витамина В2;
от приблизительно 4,5 мкМоль до приблизительно 30,0 мкМоль витамина В6;
от приблизительно 3,4 мкМоль до приблизительно 22,0 мкМоль витамина В9; и
от приблизительно 0,2 мкМоль до приблизительно 1,5 мкМоль витамина В12.
54. Среда по п. 52, дополнительно включающая в себя любой один или больше из витамина В1, витамина В3, витамина В5 и витамина В7.
55. Среда по п. 54, дополнительно включающая в себя любой один или больше из:
от приблизительно 2,0 мкМоль до приблизительно 14,0 мкМоль витамина В1;
от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 72,0 мкМоль витамина В3;
от приблизительно 6,8 мкМоль до приблизительно 4 4,0 мкМоль витамина В5; и
от приблизительно 0,02 мкМоль до приблизительно 0,14 мкМоль витамина В7.
56. Среда по любому из пп. 52-55, которая дополнительно включает в себя источник железа.
57. Среда по п. 56, в которой источник железа представляет собой лимоннокислое железо или сернокислое железо.
58. Среда по п. 57, которая включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль.
59. Среда по п. 58, которая включает в себя лимоннокислое железо в концентрации от приблизительно 11,0 мкМоль до приблизительно 36,0 мкМоль.
60. Среда по любому из пп. 52-55, которая дополнительно включает в себя гидрокортизон.
61. Среда по п. 60, которая включает в себя гидрокортизон в концентрации от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,25 мкМоль.
62. Способ культивирования клеток, включающий в себя стадию контактирования клеток со средой клеточной культуры, включающей в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль лимоннокислого железа; и
от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,5 мкМоль гидрокортизона.
63. Способ по п. 62, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя витамин В2, витамин В6, витамин В9
и/или витамин В12.
64. Способ по п. 62, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2.
65. Способ по любому из пп. 62-64, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6.
66. Способ по любому из пп. 62-64, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9.
67. Способ по любому из пп. 62-64, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
68. Способ по любому из пп. 62-64, в котором среда клеточной культуры является химически определенной средой клеточной культуры.
69. Способ по любому из пп. 62-64, в котором среда клеточной культуры является химически неопределенной средой клеточной культуры.
70. Способ по любому из пп. 62-64, в котором клетки контактируют со средой клеточной культуры во время фазы роста клеток.
71. Способ по любому из пп. 62-64, в котором клетки контактируют со средой клеточной культуры во время фазы продуцирования у клеток.
72. Способ по п. 71, который дополнительно включает в себя стадию добавления цистеина к среде клеточной культуры.
73. Способ по п. 72, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 80 мг/л до приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
74. Способ по п. 72, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
75. Способ по п. 72, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 140 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
76. Способ получения полипептида, включающий в себя стадию культивирования в среде клеточной культуры клетки, включающей в себя выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, в котором:
(a) среда клеточной культуры включает в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль лимоннокислого железа; и
от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,5 мкМоль гидрокортизона; и
(b) клетка экспрессирует полипептид.
77. Способ по п. 76, в котором среда клеточной культуры дополнительно включает в себя витамин В2, витамин В6, витамин В9 и/или витамин В12.
78. Способ по п. 76, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2.
79. Способ по любому из пп. 76-78, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6.
80. Способ по любому из пп. 76-78, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9.
81. Способ по любому из пп. 76-78, в котором среда клеточной культуры включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
82. Способ по любому из пп. 76-78, в котором среда клеточной культуры является химически определенной средой клеточной культуры.
83. Способ но любому из пп. 76-78, в котором среда клеточной культуры является химически неопределенной средой клеточной культуры.
84. Способ по любому из пп. 76-78, в котором культивирование происходит во время фазы роста клетки.
85. Способ по любому из пп. 76-78, в котором культивирование
происходит во время фазы продуцирования у клетки.
86. Способ по п. 85, который дополнительно включает в себя стадию добавления цистеина к среде клеточной культуры.
87. Способ по п. 86, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 80 мг/л до приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
88. Способ по п. 86, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 1500 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
89. Способ по п. 86, в котором цистеин добавляется в таком количестве, чтобы обеспечить приблизительно 140 мг/л цистеина в среде клеточной культуры.
90. Способ по любому из пп. 76-78, в котором полипептид является антителом.
91. Способ по п. 90, в котором антитело является антителом IgGl.
92. Способ по п. 90, в котором антитело является антителом против VEGF, против мезотелина, против PCSK9 или против Beta7.
93. Способ по любому из пп. 76-78, дополнительно включающий в себя стадию выделения полипептида из среды клеточной культуры.
94. Способ по п. 93, в котором композиция, включающая в себя выделенный полипептид, выглядит как бесцветная или слегка окрашенная жидкость.
95. Способ по п. 94, в котором композиция включает в себя выделенный полипептид в концентрации по меньшей мере 100 мг/мл.
96. Полипептид, полученный способом по любому из пп. 76-95.
97. Фармацевтическая композиция, включающая в себя полипептид по п. 96 и фармацевтически приемлемый носитель.
98. Набор для дополнения в среду клеточной культуры химически определенных компонентов, включающий в себя:
цистин в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина в среде клеточной культуры;
лимоннокислое железо в таком количестве, чтобы обеспечить концентрацию от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль лимоннокислого железа в среде клеточной культуры; и
гидрокортизон в таком количестве, чтобы обеспечить концентрацию от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,5 мкМоль гидрокортизона в среде клеточной культуры.
99. Набор по п. 98, который дополнительно включает в себя витамин В2, витамин В6, витамин В9 и/или витамин В12.
100. Набор по п. 98, который включает в себя витамин В2 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2 в среде клеточной культуры.
101. Набор по любому из пп. 98-100, который включает в себя витамин В6 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6 в среде клеточной культуры.
102. Набор по любому из пп. 98-100, который включает в себя витамин В9 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9 в среде клеточной культуры.
103. Набор по любому из пп. 98-100, который включает в себя витамин В12 в таком количестве, чтобы обеспечить от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12 в среде клеточной культуры.
104. Среда клеточной культуры, включающая в себя:
от приблизительно 200 мг/л до приблизительно 1200 мг/л цистина;
от приблизительно 2 мкМоль до приблизительно 80 мкМоль лимоннокислого железа; и
от приблизительно 0,05 мкМоль до приблизительно 0,5 мкМоль гидрокортизона.
105. Среда по п. 104, которая дополнительно включает в себя витамин В2, витамин В6, витамин В9 и/или витамин В12.
106. Среда по п. 104, которая включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 1,0 мг/л витамина В2.
107. Среда по любому из пп. 104-106, которая включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 10,0 мг/л витамина В6.
108. Среда по любому из пп. 104-106, которая включает в себя
от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 12,0 мг/л витамина В9.
109. Среда по любому из пп. 104-106, которая включает в себя от приблизительно 0,05 мг/л до приблизительно 2,5 мг/л витамина В12.
110. Композиция, включающая в себя (а) клетку, включающую в себя выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид/ и (b) среду по любому из пп. 52-61 и 104-109.
111. Композиция, включающая в себя: (а) полипептид; и (b) среду по любому из пп. 52-61 и 104-109.