ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ГИПОФОСФАТЕМИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ФАКТОРОМ РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ 23

1. Конструкция нуклеиновой кислоты для генной терапии связанных с FGF-23 гипофосфатемических заболеваний, которая кодирует слитый белок FGF23, включающий:
(a) сигнальный пептид,
(b) C-концевой пептид FGF23, который связывается с комплексом FGFR/klotho,
(c) расщепляемый линкер и
(d) молекулу, стабилизирующую белок,
причем сигнальный пептид находится на N-конце слитого белка, а C-концевой пептид FGF23 и стабилизирующая белок молекула разделены расщепляемым линкером.
2. Конструкция из нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом C-концевой пептид FGF23 включает последовательность от какого-либо из положений 175-189 до какого-либо из положений 203-251 в SEQ ID NO: 1 или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична указанной последовательности.
3. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2, при этом C-концевой пептид FGF23 включает мотив RXXR в положениях 176-179 в SEQ ID NO: 1.
4. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, при этом C-концевой пептид FGF23 включает последовательность SEQ ID NO: 2 или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична указанной последовательности.
5. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-4, при этом сигнальный пептид включает последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3-8, предпочтительно SEQ ID NO: 7; и/или расщепляемый линкер включает последовательность SEQ ID NO: 10.
6. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-5, при этом стабилизирующая белок молекула представляет собой сывороточный альбумин человека, предпочтительно включающий последовательность SEQ ID NO: 9.
7. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-6, которая кодирует белок FGF23, включающий последовательность SEQ ID NO: 12 или 52 либо последовательность, которая по меньшей мере на 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%. 96%, 97%, 98% или 99% идентична какой-либо из указанных последовательностей.
8. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, которая оптимизирована по кодонам для экспрессии у человека.
9. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 7 или 8, которая включает последовательность SEQ ID NO: 13, 51 или 57 либо последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична какой-либо из указанных последовательностей.
1
10. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-9, которая включает экспрессионную кассету, в которой кодирующая последовательность функционально связана по меньшей мере с одним промотором, который функционален в мышечных, печеночных или гемопоэтических клетках или тканях, в частности, специфичным для печени промотором, предпочтительно промотором α-антитрипсина человека.
11. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 10, которая дополнительно включает один или несколько элементов контроля, выбранных из группы, состоящей из энхансеров, связанных с промотором, предпочтительно участок контроля ApoE человека; интронов, расположенных между промотором и кодирующей последовательностью, предпочтительно модифицированный интрон HBB2 из SEQ ID NO: 17 или модифицированный интрон FIX из SEQ ID NO: 19; и сигналов терминации транскрипции, предпочтительно сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста.
12. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11, которая представляет собой ДНК или РНК.
13. Вектор для генной терапии, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-12.
14. Вектор по п. 13, который представляет собой вирусный вектор, в частности AAV или лентивирусный вектор, предпочтительно вектор AAV, содержащий капсид, выбранный из группы, состоящей из капсидов AAV1, AAV2, AAV5, AAV8, AAV2i8, AAV9, AAVrh10, AAVrh39, AAVrh43, AAVrh74, AAV-LK03, AAV2G9, AAV.PHP, AAV-Anc80, AAV3B и их химерных капсидов, более предпочтительно капсид AAV8.
15. Вектор по п. 13, который представляет собой частицу или везикулу, в частности, основанную на липидах микро- или нановезикулу либо частицу, предпочтительно содержащие конструкцию из РНК по п. 12.
16. Клетка, генетически модифицированная конструкцией нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-12 или вектором по любому из пп. 13-15, в частности мышечная, печеночная или гемопоэтическая клетка, предпочтительно клетка печени.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно действующее вещество, выбранное из конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-12, вектора по любому из пп. 13-15 или клетки по п. 16, и фармацевтически приемлемый носитель.
18. Фармацевтическая композиция по п. 17 для применения при лечении связанных с FGF-23 гипофосфатемических заболеваний при помощи генной терапии или клеточной терапии, причем связанное с FGF-23 гипофосфатемическое заболевание предпочтительно представляет собой генетическое заболевание, выбранное из группы, включающей: Х-сцепленную гипофосфатемию, аутосомно-доминантный гипофосфатемический рахит, аутосомно-рецессивный гипофосфатемический рахит 1, аутосомно-рецессивный гипофосфатемический рахит 2, остеоглофоническую дисплазию, метафизарную хондродисплазию янсеновского типа, гипофосфатемию с зубными аномалиями и эктопической кальцификацией, синдром МакКьюна-Олбрайта/фиброзную дисплазию и гипофосфатемию с поражением кожи и костей, или же приобретенное заболевание, выбранное из группы, включающей: онкогенную остеомаляцию, гипофосфатемическую остеомаляцию, осложнения при трансплантации почек или парентеральной терапии железом, хроническую болезнь почек и её осложнения типа гиперпаратиреоза; предпочтительно указанное заболевание представляет собой Х-сцепленную гипофосфатемию.