Исследование противовоспалительной активности липосомальных средств из природных липидов

что у пациентов с высоким содержанием в периферической крови липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), триглицеридов, холестерина (ХС), через определенное время происходили процессы стабилизации данных показателей. В эту группу вошли 54 пациента (9 женщин и 45 мужчин), их средний возраст составил 54±6 лет.

У 49 пациентов проводилось внутривенное введение алло-генных (фетальных) клеток в дозе 100 млн., под контролем основных витальных функций, 5 пациентам внутривенно вводились аутологичные клетки, полученные при пункции костей таза, с последующими культуральными работами. Количество введенных аутологичных клеток было не менее 120 млн. Осложнений при заборе аутологичных клеток и после их введения отмечено не было. От всех пациентов получено информированное согласие на применение клеточных технологий в лечении их болезней.

Тестирование пациентов проводилось через месяц после первичного введения клеток (аллогенных и аутологичных).

Результаты. Отмечено, что у всех пациентов происходило не только снижение уровня ЛПНП, холестерина, но и повышение уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). В среднем снижение ЛПНП, холестерина в течение первого месяца составляло 14,8%, повышение ЛПВП <10%. В дальнейшем группе пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями выполнялись повторные введения клеток. Достоверно показано, что корректировка дислипидемии происходит в течение первого месяца и наиболее выражена у пациентов с применением аллогенных, а не аутологичных клеток. После первичного однократного введения эффекты снижения и нормализации дислипидемии длились в течение 3-х месяцев. Затем происходила стабилизация процесса.

Клинический эффект объясняется органотропностью алло-генных клеток, способностью их тканеспецифично заселять печень, нормализовать метаболизм ЛПОНП, ЛПНП и ХС повреждённых клеток, а также способствовать восстановлению нормальной рецепции липопротеидов на поверхности гепатоцитов. Другой возможный механизм их действия - неспецифический. Введёные клетки, будучи малодифференцироваными, с помощью биологически активных веществ (цитокинов, факторов роста) активизируют собственные эндогенные механизмы регуляции восстановительных процессов в печени, путём регуляции диффе-ренцировки клеток макрофагально-моноцитарного ряда и выделения ими собственных (эндогенных) регуляторных пептидов. Регуляторные свойства аллогенных клеток могут быть воспроизведены аутологичными клетками костного мозга, в популяции которых присутствуют плюрипотентные клетки.

Заключение. Клеточные технологии позволяют осуществлять коррекцию дислипидемий различного генеза.

УДК 615.34:599.745, 665.215

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ СРЕДСТВ ИЗ ПРИРОДНЫХ ЛИПИДОВ

Г.П. ЛАМАЖАПОВА, С.Д. ЖАМСАРАНОВА, А.Ц. ХАНДАЕВА*

Благодаря широкому использованию биотехнологических подходов при конструировании лекарственных, лечебнопрофилактических и косметических средств, современный рынок насыщен различными их формами. Тем не менее, далеко не все задачи решены положительно или с максимальной результативностью. В последнее время широкое распространение получило направление, связанное с конструированием лекарственных средств на основе наночастиц. Одним из представителей нанокапсул, широко применяемых в медицине и фармакологии, являются липосомы как контейнеры для доставки лекарственных средств. Липосомы формируют как из природных, так и синтетических индивидуальных фосфолипидов, а также из смеси фосфолипидов. Имеющиеся методы получения липосом позволяют заключать в полость фосфолипидных везикул водорастворимые лекарственные препараты и встраивать в мембраны липофильные биологически активные вещества [1]. Ранее нами были разработаны способы получения липосомальных структур на основе

Восточно-Сибирский государственный технологический университет, 670013, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40В, стр. 1, тел. (3012) 373433, факс (3012) 431415, E-mail: biochim@esstu.ru

смеси яичных фосфолипидов [2] и фосфолипидов печени байкальской нерпы [3] с добавлением триацилглицеролов жира нерпы. Экспериментально было показано, что полученные липо-сомальные средства обладают активностью в отношении иммунной и гепатобилиарной систем организма на фоне их угнетения.

Цель исследования - оценка противовоспалительных свойств разработанных липосом.

Материал и методы. Липосомальные средства готовили из смеси яичных фосфолипидов, а также фосфолипидов печени с добавлением жира байкальской нерпы в концентрации 60% по разработанным способам [2, 3]. Экспериментальная работа выполнена на белых беспородных крысах обоего пола массой 150250 г. Противовоспалительную активность липосом оценивали в экспериментах, проведенных на белых беспородных крысах с использованием двух моделей острого перитонита. В первом случае острый перитонит вызывали внутрибрюшинным введением крысам 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра [4]. Липосомальные средства вводили за 30 минут и через 1 час после инъекции нитрата серебра. Через 3 часа после введения флотогенного агента животных декапитировали. Определяли объем экссудата в брюшной полости. Брыжейку фиксировали смесью Карнуа и окрашивали 0,05% раствором толуидинового синего. Осуществляли подсчет количества дегранулированных тучных клеток в 100 окнах полей зрений при увеличении (7x20). Влияние на сосудистую проницаемость определяли на модели острого перитонита, вызванного введением внутрибрюшинно 5,0 мл 0,05% раствора уксусной кислоты на 0,85% изотоническом растворе хлорида натрия, нагретого до 38°С. Через 30 с в хвостовую вену крыс вводили 0,5 мл 1% раствора метиленового синего [5]. Через 1 час животных декапитировали, собирали перитонеальную жидкость, центрифугировали и определяли интенсивность окраски экссудата фотометрически при длине волны 540 нм. Средства вводили превентивно за 1 час до введения р-ра уксусной кислоты.

В обоих случаях липосомальные средства вводили животным внутрижелудочно в дозе 1.5 мг/кг (в пересчете на жир нерпы). Активность липосомальной формы на основе фосфолипидов печени с добавлением жира нерпы сравнивали с активностью липосом на основе смеси яичных фосфолипидов с добавлением жира нерпы, а также смеси фосфолипидов печени нерпы с добавлением фармакопейного препарата «Рыбий жир». Животным контрольной группы вводили эквивалентный объем физиологического раствора. Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами с определением средней величины (М) и средней арифметической ошибки (м). Достоверность результатов оценивалась с применением критерия Стьюдента. Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р < 0,05).

Результаты. Критерием развития и выраженности перитонита являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке. Полученные данные представлены в табл. 1.

Таблица 1

Влияние липосомальных средств на экссудацию в брюшной полости и дегрануляцию брыжеечных тучных клеток при остром перитоните

Группа животных Объем внутрибрюшной жидкости, мл Процент дегранули- рованных тучных клеток

Интактная Не определяется 8,0±0,2

Контрольная 6,4±0,4* 93,0±1,0*

ЛС из яичных фосфолипидов с жиром нерпы - лс (яф+жн) 3,0±0,5** 32,0±0,03**

ЛС из фосфолипидов печени с жиром нерпы - лс (фн+жн) 1,5±0,5**’ *** 36,7±2,5**

ЛС из фосфолипидов печени нерпы с рыбьим жиром - лс (фн+жр) 3,75±0,75** 36,7±1,8**

Примечание: * - достоверное отклонение значения в контрольной группе от значения в интактной группе животных; ** - достоверное отклонение значения в соответствующих группах от значения в контрольной группе животных; ***- достоверное отклонение значения в группе лс (фн+жн) от значения в группах лс (яф+жн) и лс (фн+жр).

Как следует из данных, приведенных в табл. 1, интрапери-тонеальное введение животным 0,2% нитрата серебра вызывало резкое увеличение процента дегранулированных тучных клеток в брыжейке на 85% и объема внутрибрюшинной жидкости. При введении крысам липосом наблюдалось улучшение морфологических показателей во всех опытных группах по сравнению с контролем. При этом внутрибрюшинная жидкость имела опалес-цирующий оттенок, тогда как у крыс контрольной группы она приобретала буро-красный цвет вследствие присутствия большого количества эритроцитов. Введение липосом из фосфолипидов печени с жиром нерпы сопровождалось четырехкратным уменьшением объема внутрибрюшинного экссудата по сравнению с данными в контрольной группе. У животных, получавших липо-сомы на основе яичных фосфолипидов, было отмечено двукратное уменьшение объема перитонеального экссудата, а в случае применения комбинации «фосфолипиды печени нерпы + рыбий жир» этот показатель составил 1,7. Наряду с этим, в брыжейке животных во всех опытных группах количество дегранулирован-ных тучных клеток было на одном уровне и достоверно снижалось в среднем на 56,3% по сравнению с контролем.

Результаты исследования по влиянию липосомальных средств на показатели сосудистой проницаемости в брюшной полости опытных животных представлены в табл. 2.

Таблица 2

Влияние липосомальных средств на интенсивность окраски внутрибрюшинного экссудата у белых крыс

Группы животных Контрольная ЛС из яичных фосфолипидов с жиром нерпы ЛС из фосфолипидов печени с жиром нерпы Оптическая плотность, ед.опт.пл. 0,38±0,03 0,24±0,03* 0,20±0,02* % по отношению к контролю 100 64 53,3

ЛС из фосфолипидов печени с рыбьим жиром 0,25±0,03* 67,2

Примечание: * - достоверное отклонение значения в соответствующих группах от значения в контрольной группе животных.

Введение животным всех исследуемых липосом оказывает выраженное сосудоукрепляющее действие, о чем свидетельствует уменьшение интенсивности окраски перитонеального экссудата у крыс опытных групп от 32,8 до 46,7% по сравнению с данным показателем у животных контрольной группы.

Таким образом, полученные данные показали, что исследуемые липосомальные средства обладают выраженными противовоспалительными свойствами, уменьшая отек в брюшной полости и стимулируя грануляцию тучных клеток, а также снижая проницаемость сосудов в брюшной полости. Причем липо-сомы на основе фосфолипидов печени с добавлением жира нерпы, оказывают более сильное действие по сравнению с липосо-мами, полученными на основе яичных фосфолипидов, а также по сравнению с липосомами с добавлением рыбьего жира. Наиболее вероятным механизмом защитной реакции организма при поступлении фосфолипидов является их способность восстанавливать мембраны тучных клеток и клеток эндотелия микрососудов, благодаря чему снижается вероятность их деструкции при воздействии агрессивных факторов. С другой стороны, воспаление рассматривается как адаптивная реакция, при которой организм мобилизует специфические и неспецифические факторы защиты.

Для развития воспаления играет важную роль выраженность биохимических изменений в зоне повреждения тканей, в частности, интенсивность образования вазоактивных и хемотак-сических веществ, определяющих стереотипный характер сосудистых и тканевых изменений. В связи с этим, вероятно, большая эффективность применения фосфолипидов печени нерпы по сравнению с фосфолипидами яичных желтков связана с тем, что фракционный жирнокислотный состав как печени, так и подкожного жира нерпы характеризуется низким показателем соотношения омега-6/омега-3 полиненасыщенных жирных кислот (3,03 и

0,77 соответственно) [6, 7], что позволяет соблюдать баланс при ответе организма на воздействия повреждающих факторов. Поскольку происходит изменение содержания относительного количества связанных в мембране омега-3 и омега-6 жирных кислот, изменяется соотношение вырабатываемых медиаторов воспаления - простагландинов. Эйкозаноиды, метаболизирова-

ные из омега-3 и омега-6 жирных кислот, обладают противоположным действием. При этом достоинством эйкозаноидов, образуемых из омега-3 жирных кислот, по сравнению с омега-6, является меньшее стимулирование воспалительного ответа. Более того, омега-3 жирные кислоты подавляют выработку провоспали-тельных эйкозаноидов из омега-6 жирных кислот [8].

Результаты наших исследований согласуются с новой стратегией лечения воспалительных заболеваний, сформулированной Чарлз Сёхан и др. [9, 10]. Сторонники этой стратегии утверждают, что для предотвращения перехода процесса воспаления из острой в хроническую форму в организме происходит переключение синтеза медиаторов с провоспалительных на противовоспалительные, или медиаторы завершения.

Таким образом, разработанные нами липосомальные средства на основе природных липидов можно отнести к противовоспалительным средствам нового поколения, действие которых обусловлено мембранной структурой липосомальных частиц и основано на фармакологическом регулировании стадии завершения воспалительного процесса.

Литература

1.Каплун А.П., Ле Банг Шон, Краснопольский ЮМ., Швец

B.И. // Вопросы медицинской химии. 1999. № 1. С. 4-11.

2.Пат. 2153328 РФ. Способ получения липосом / Тыхеева Н.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. // Бюл. № 21. 2000.

ЪЛатент 2308940 РФ. Способ получения липосом, обладающих иммунокорригирующим и гепатопротекторным действием / Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Цыренжапов А.В., Николаев С.М. // Бюл. № 30. 2007.

4.Александров П.Н., Сперанская Т.В., Бобков Ю.Г. и др. // Фармакология и токсикология. 1986. №1. С. 84-86.

5Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран. М., 1989. 45 с.

6.Кабирова И.Р. Характеристика и промышленное использование печени байкальской нерпы на пищевые цели: Дис...канд. тех. наук. Улан-Удэ, 2005.

7.Раднаева Л.Д., Пестерева О.В., Чиркина Т.Ф., АверинаЕ.С., Бодоев Н. В. // Химия в интересах устойчивого развития. 1999. №7. С. 713-717.

8.Vaugn DM., Reinharr G.A., Swaim S.F. // J. Vet Intern Med. 1994. Vol. 8. Р. 188.

9.Serhan C.N., Brain S.D., Buckley CD., Gilroy D.W., Haslett

C, O'Neill L.A., Perretti M., Rossi A.G., Wallace J.L. // FASEB J. 2007. Vol. 21. P. 325-332.

10.Gilroy DW, Lawrence T, Perretti M, Rossi AG. // Nat Rev Drug Discover. 2004. Vol. 3(5). P. 401-416.

УДК 616.711.9; 616.71-018.3-002

ЭФФЕКТИВНОСТЬ САНАТОРНОГО ЭТАПА ВОССТАНОВИТЕЛЬНОГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ОСТЕОХОНДРОЗОМ ПОЗВОНОЧНИКА С МИОФАСЦИАЛЬНЫМ БОЛЕВЫМ СИНДРОМОМ ПОЯСНИЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ

В.В. МАКЕЕВ, Л.В. КУДЕЛЬКИНА, Г.Н. ПРИБЕЖИЩАЯ*

Ключевые слова: миофасциальный болевой синдром

Миофасциальный болевой синдром (МФБС) являются довольно частой патологией, диагностируется в 30-93% случаев среди пациентов, проходящих лечение у врачей различных специальностей [15]. МФБС возникает вследствие дисфункции нейромо-торного аппарата мышцы и определяется как скелетно-мышечный болевой синдром с острым или хроническим течением, сопровождающийся патологическими моторными, сенсорными и психовегетативными проявлениями [2,9,15]. МФБС может быть как первичным заболеванием, являющимся причиной местных или регионарных болевых синдромов, так и вторичным, возникшим вследствие развития иного патологического процесса [10].

Главной задачей лечения спондилогенного МФБС является достижение лечебного эффекта при минимальном использовании лекарственных средств, способами максимально приближенными к физиологическим [3,7,9]. В связи с этим, целью настоящего исследования явилось создание схем восстановительного лечения без применения лекарственных средств, с максимальным использованием санаторно-курортных факторов курорта Сочи.

* НИИ нейроортопедии и восстановительной медицины