КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ С ГОРЯЧИМ СТАРТОМ ИЛИ ДЛЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИЕЙ С ГОРЯЧИМ СТАРТОМ

2+
1. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом, которая содержит ион Mg, четыре типа dNTP, обратную транскриптазу, пирофосфат (PPi), и фосфатазу (ППазу).
2. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, в котором композиция, содержит пирофосфат (PPi) в концентрации 0,1-5 мМ, а пирофосфотазу в количестве 0,005-0,25 Ед.
3. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, дополнительно содержащая один или несколько праймеров для обратной транскрипции.
4. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, где композиция заморожена или высушена.
5. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, дополнительно содержащая нуклеотидную матрицу.
6. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 5, в котором нуклеотидная матрица является РНК.
7. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, дополнительно содержащая краситель, который не реагирует с нуклеиновой кислотой.
8. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 1, дополнительно содержащая, по меньшей мере, одно выбранное из группы, состоящей из полиола, желатина, бычьего сывороточного альбумина, Thesit и PEG-8000.
9. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 5, в котором нуклеотидная матрица имеет терминатор полимеризации нуклеиновой кислоты, связанный с 3′-концом для предотвращения неспецифической полимеризации нуклеиновых кислот.
10. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 9, в котором терминатор полимеризации нуклеиновых кислот является подобным нуклеиновой кислоте соединением, которое активируется в форме трифосфата, способным действовать на полимеразу нуклеиновых кислот и имеет группы, отличные от гидроксильной группы 3′-конца.
11. Композиция для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по п. 10, в котором соединение, подобное нуклеиновой кислоте, включает, по меньшей мере, выбранное из числа 2′3′-дидезоксинуклеозид 5′-трифосфата, 3′-деоксиаденозин 5′-трифосфата, 3′-азидо-3′-деокситимидин 5′-трифосфата, 1-β-d-арабинофуранозилнуклеозид-5′-трифосфата, ациклогуанозинтрифосфата, 3′-амино-2′-деоксинуклеозид 5′-трифосфата и 3′-фтор-3′-деоксинуклеозид 5′-трифосфата.
2+
12. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом, которая включает ион Mg, четыре типа dNTP, обратную транскриптазу, пирофосфат (PPi) и фосфатазу (ППазу), а также включает ДНК-полимеразу.
13. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, в котором композиция включает пирофосфат (PPi) в концентрации 0,1-5 мМ, и пирофосфатазу в количестве 0,005-0,25 Ед.
14. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно включающая один или несколько праймеров для обратной транскрипции.
15. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая зонды.
16. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, где композиция заморожена или высушена.
17. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая нуклеотидную матрицу.
18. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая флуоресцентный краситель, который связывает ДНК.
19. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, в которой ДНК-полимераза содержит, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из полимеразы, обладающей 5′->3′ экзонуклеазной активностью, полимеразы, обладающей 3′->5′ экзонуклеазной активностью, и полимеразы, которая не обладает ни 5′->3′ экзонуклеазной активностью, ни 3′->5′ экзонуклеазной активностью.
20. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая краситель, который не реагирует с нуклеиновой кислотой.
21. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 17, в котором нуклеотидная матрица имеет терминатор полимеризации нуклеиновых кислот, связанный с 3′-концом, для предотвращения неспецифической полимеризации нуклеиновых кислот.
22. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 21, в котором терминатор полимеризации нуклеиновых кислот является подобным нуклеиновой кислоте соединением, которое активируется в форме трифосфата, способное действовать на полимеразу нуклеиновых кислот и имеет группы, отличные от гидроксильной группы 3′-конца.
23. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 22, где подобное нуклеиновой кислоте соединение включает, по меньшей мере, одно, выбранное из числа 2′3′-дидезоксинуклеозид 5′-трифосфата, 3′-деоксиаденозин 5′-трифосфата, 3′-азидо-3′-деокситимидин 5′-трифосфата, 1-β-d-арабинофуранозилнуклеозид-5′ трифосфата, ацикло-гуанозинтрифосфата, 3′-амино-2′-деоксинуклеозид 5′-трифосфата и 3′-фтор-3′-деоксинуклеозид 5′-трифосфата.
24. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из полиола, желатина, бычьего сывороточного альбумина, Thesit и PEG-8000.
25. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, дополнительно содержащая вещество, которое демонстрирует эффект ПЦР с горячим стартом при связывании с ДНК-полимеразой или регулированием действия ДНК-полимеразы.
26. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, где ДНК-полимераза демонстрирует эффект ПЦР с горячим стартом в модифицированной форме.
27. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 26, где вещество выбирают из группы, состоящей из антитела, аптамера и аффитела, которые связываются с ДНК-полимеразой.
28. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по п. 12, где композиция используется в любой из числа мультиплексной реакции ПЦР с обратной транскрипцией, реакцией ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени, количественной реакцией ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени и мультиплексной реакции ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени.
29. Композиция для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по любому из пп. 12-28, где композиция является композицией для диагностики злокачественного новообразования.
30. Способ получения композиции для реакции обратной транскрипции с горячим стартом, который включает введение композиции для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по любому из пп. 1-11 в отдельную реакционную пробирку.
31. Способ получения композиции для реакции ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом, который включает введение композиции для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по любому из пп. 12-28 в отдельную реакционную пробирку.
32. Набор для реакции обратной транскрипции с горячим стартом, который включает композицию для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по любому из пп. 1-11.
33. Набор для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом, который включает композицию для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по любому из пп. 12-28.
34. Способ обратной транскрипции РНК-матрицы, который включает стадии:
смешивания композиции для реакции обратной транскрипции с горячим стартом по любому из пп. 1-11 с образцом, содержащим, РНК-матрицу для получения реакционной смеси; и
осуществление реакции так, чтобы реакционная смесь могла быть обратно транскрибирована.
35. Способ амплификации нуклеиновой кислоты, который включает стадии:
смешивания композиции для ПЦР с обратной транскрипцией и горячим стартом по любому из пп. 12-28, с образцом, содержащим РНК-матрицу для получения реакционной смеси;
осуществления реакции амплификации реакционной смеси для получения продукта амплификации; и
анализа продукта амплификации.
36. Способ по п. 35, в котором ПЦР выбирают из группы, состоящей из ПЦР, мультиплексной ПЦР, ПЦР в режиме реального времени, и количественной ПЦР в режиме реального времени.
2+
37. Композиция ПЦР с обратной транскрипцией для диагностики злокачественного новообразования, которая включает нуклеотидную матрицу, которая имеет терминатор полимеризации нуклеиновых кислот, связанный с 3′-концом для предотвращения неспецифической полимеризации нуклеиновых кислот, и ион Mg, четыре типа dNTP, полимеразу обратной транскрипции, нуклеиновую кислоту, праймер для синтеза кДНК, пирофосфат, пирофосфатазу и праймер для амплификации биомаркера для диагностики злокачественного новообразования.