ИНАКТИВАЦИЯ ВИРУСА ПРИ ОЧИСТКЕ АНТИТЕЛ

1. Способ получения препарата антитела со сниженным содержанием белка клетки-хозяина (HCP) из образца смеси, содержащей антитело, HCP и вирусную частицу, где препарат содержит сниженное число вирусных частиц или обладает сниженной вирусной активностью в сравнении с образцом смеси, где способ включает:
(a) снижение в указанном матричном образце значения pH, что приводит к получению образца первичного извлечения, где указанное снижение pH относится к значениям pH в диапазоне от примерно 3 до примерно 5;
(b) доведение указанного образца первичного извлечения по значению pH до уровня от примерно 4,5 до примерно 6,5, с последующим нанесением указанного образца первичного извлечения на ионообменную смолу и сбор образца после ионного обмена;
(c) нанесение указанного полученного после ионного обмена образца на смолу для проведения хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC) и сбор образца со смолы HIC, где указанный образец после HIC включает указанный препарат антитела со сниженным содержанием HCP.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное снижение pH осуществляют за счет добавления в указанный образец смеси подходящей кислоты, где указанную подходящую кислоту выбирают из группы, состоящей из лимонной кислоты, фосфорной кислоты, уксусной кислоты, каприловой кислоты и т.п.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная ионообменная смола представляет собой либо анионообменную смолу, либо катионообменную смолу.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанная ионообменная смола представляет собой катионообменную смолу.
3
-
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанную катионообменную смолу выбирают из группы, состоящей из карбоксиметильной (CM), сульфоэтильной (SE), сульфопропильной (SP), Fractogel SO , фосфатной (P) и сульфонатной (S) смолы.
3
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанная катионообменная смола представляет собой Fractogel SO-.
7. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанная ионообменная смола представляет собой анионообменную смолу.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанную анионообменную смолу выбирают из группы, состоящей из Q-сефарозы, смолы с диэтиламиноэтильными (DEAE), четвертичными аминоэтильными (QAE) и четвертичными аминными группами (Q).
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная анионообмннная смола представляет собой Q-сефарозу.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная стадия ионного обмена включает первую стадию ионного обмена и вторую стадию ионного обмена.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанная первая стадия ионного обмена представляет собой стадию катионного обмена, за которой следует вторая стадия анионного обмена.
12. Способ по п.10, дополнительно включающий промежуточную стадию, где указанная промежуточная стадия представляет собой стадию фильтрации, проводимую между указанной первой и указанной второй стадиями ионного обмена.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанную стадию фильтрации осуществляют путем ультрафильтрации/диафильтрации по методу захвата.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная HIC проводится с использованием колонки, включающей одну или несколько гидрофобных групп.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанную одну или несколько гидрофобных групп выбирают из групп, состоящей из алкильных, арильных групп и их сочетания.
3
16. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанную колонку выбирают из группы, состоящей из фенил-Сефарозы™ (такой как фенил-Сефароза™ 6 с высокой скоростью течения, колонка с фенил-Сефарозой™ для проведения высокоэффективной хроматографии), колонки для высокоэффективного разделения с Octyl-Sepharose™, колонки Fractogel™ EMD-Propyl, колонки Fractogel™ EMD Phenyl, колонки Macro-Prep™ с метильной подложкой, Macro-Prep™ с т-бутильной подложкой, колонки WP HI-Propyl (C)™ и колонки Toyopearl™ ether, phenyl или butyl.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанная колонка включает фенил-сефарозу.
18. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию фильтрации, где указанный образец после HIC подвергают фильтрации для удаления вирусных частиц и для обеспечения буферного обмена.
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный препарат антитела со сниженным содержанием HCP содержит анти-IL-12 антитело, или анти-IL-18 антитело, или их антиген-связывающие части.
20. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное анти-IL-18 антитело или его антиген-связывающая часть представляет собой гуманизированное антитело, химерное антитело или поливалентное антитело.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанное анти-IL-18 антитело или его антиген-связывающая часть представляет собой гуманизированное антитело.
d
-6
-12
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанное анти-IL-18 антитело или его антиген-связывающая часть представляет собой выделенное человеческое антитело, которое диссоциирует с человеческого IL-18 со значением К, варьирующим от примерно 10 до примерно 10 M или менее.
in vivo
in vitro.
23. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное анти-IL-18 антитело или его антиген-связывающая часть нейтрализует IL-18 как , так и
24. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный препарат, по существу, не содержит HCP.
25. Способ получения препарата антитела со сниженным содержанием белка клетки-хозяина (HCP) из образца смеси, содержащей антитело и по меньшей мере один HCP, где указанный способ включает:
(a) снижение в указанном матричном образце значения pH, что приводит к получению образца первичного извлечения, где указанное снижение pH составляет до примерно 3,5;
(b) доведение указанного образца первичного извлечения по значению pH до примерно рН 5,0 с последующим нанесением указанного образца первичного извлечения на катионообменную смолу и сбор образца после катионного обмена;
(c) нанесение указанного образца после катионного обмена на анионообменную смолу и сбор образца после анионного обмена и
(d) нанесение указанного полученного после анионного обмена образца на смолу для проведения хроматографии, основанной на гидрофобном взаимодействии (HIC), и сбор образца со смолы HIC, где указанный образец после HIC включает препарат антитела со сниженным содержанием НСР.
26. Способ получения препарата антитела со сниженным содержанием белка клетки-хозяина (HCP) из образца смеси, содержащей антитело и по меньшей мере один HCP, где указанный способ включает:
(a) снижение в указанном матричном образце значения pH, что приводит к получению образца первичного извлечения, где указанное снижение pH представляет снижение pH до примерно 3,5;
(b) доведение указанного образца первичного извлечения по значению pH до примерно 5,0 с последующим нанесением указанного образца первичного извлечения на катионообменную смолу и сбор образца после катионного обмена;
(c) фильтрование указанного полученного после катионного обмена образца и сбор фильтрата;
(d) нанесение указанного фильтрата со стадии (с) на анионообменную смолу и сбор образца после анионного обмена и
(e) нанесение указанного полученного после анионного обмена образца на смолу для проведения хроматографии, основанной на гидрофобном взаимодействии (HIC), и сбор образца после HIC, где указанный образец после HIC содержит препарат антитела со сниженным содержанием HCP.
27. Способ по п.26, дополнительно включающий стадию аффинной хроматографии с белком А, осуществляемую перед нанесением образца первичного извлечения на катионообменную смолу.
28. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат антитела со сниженным содержанием HCP, получаемый способом по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель.
29. Фармацевтическая композиция по п.28, отличающаяся тем, что указанное антитело представляет собой анти-IL-12 антитело, или анти-IL-18 антитело, или их антиген-связывающие части.
30. Фармацевтическая композиция по п.28, отличающаяся тем, что указанная композиция, по существу, не содержит HCP.
31. Фармацевтическая композиция по п.28, используемая для нейтрализации нарушений, опосредованных IL-12 или IL-18.