МУКОАДГЕЗИВНЫЙ МИКРООРГАНИЗМ

1. Рекомбинантная молочнокислая бактерия (МКБ) для доставки полипептидов, содержащая первую экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую гибридный белок, содержащий (А) N-концевой полипептид фактора «трилистника» (TFF) и (В) С-концевой клеточно-адгезивный полипептид, который содержит домен заякоривания в клеточной стенке.
2. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанный клеточно-адгезивный полипептид выбран из группы, состоящей из: связывающего клетки и слизь белка A (CmbA), связывающего слизь белка (Mub), белка, способствующего адгезии к слизи (МарА), и лактококкового муцин-связывающего белка (MbpL).
3. Рекомбинантная МКБ по п. 2, отличающаяся тем, что указанный клеточно-адгезивный полипептид представляет собой CmbA.
4. Рекомбинантная МКБ по п. 2, отличающаяся тем, что указанный CmbA представляет собой CmbA Lactobacillus reuteri.
5. Рекомбинантная МКБ по п. 2, отличающаяся тем, что указанный полипептид CmbA имеет последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 1.
6. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанный полипептид фактора «трилистника» (TFF) выбран из группы, состоящей из: TFF1, TFF2 и TFF3.
7. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанный полипептид TFF содержит последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 3.
8. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанный гибридный белок содержит CmbA и полипептид TFF3 человека.
9. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанный гибридный белок дополнительно содержит сигнальный пептид секреции.
10. Рекомбинантная МКБ по п. 9, отличающаяся тем, что указанный сигнальный пептид секреции представляет собой лидер секреции неидентифицированного секретируемого белка 45 кДа (SSusp45).
11. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанная первая экзогенная нуклеиновая кислота находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из: промотора thyA (PthyA), промотора hlla (PhllA) и промотора gapB (PgapB).
12. Рекомбинантная МКБ по п. 1, дополнительно содержащая вторую экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую по меньшей мере один терапевтический полипептид, выбранный из группы, состоящей из
a. цитокина;
b. интерлейкина (ИЛ);
c. антитела или его функционального фрагмента;
d. антигена;
e. гормона;
f. TFF; и
g. фермента или его функционального фрагмента;.
13. Рекомбинантная МКБ по п. 12, отличающаяся тем, что
a) указанный интерлейкин (ИЛ) выбран из группы, состоящей из ИЛ-2, ИЛ-10, ИЛ-18;
b) указанное антитело выбрано из группы, состоящей из: антитела против ФНО-α, антитела к ИЛ-4, антитела к ИЛ-5, антитела к ИЛ-13, антитела к ИЛ-15, антитела к иммуноглобулину Е (IgE);
c) указанный антиген выбран из группы, состоящей из следующих антигенов: проинсулин (PINS), декарбоксилаза глутаминовой кислоты (GAD65), ассоциированный с инсулиномой белок 2 (IA-2), специфический островковый связанный с каталитической субъединицей глюкоза-6-фосфатазы белок (IGRP), цинковый транспортер 8 (ZnT8), хромогранин А, островковый амилоидный (препро)полипептид (ppIAPP), периферии, цитруллинированный регулируемый глюкозой белок (GRP), аллерген пыльцы деревьев (в том числе аллерген пыльцы березы или аллерген пыльцы японского кедра), аллерген пыльцы сорных трав, аллерген пыльцы травянистых растений, пищевой аллерген (в том числе аллерген арахиса, аллерген молока, аллерген яйца, аллерген глютена (эпитоп глиадина), аллерген клеща домашней пыли, аллерген плесневых грибов, аллерген частиц эпителия животных;
d) указанный гормон выбран из группы, состоящей из: глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1), глюкагоноподобного пептида 2 (ГПП-2), глюкагона, эксендина-4, эпидермального фактора роста и гормона роста;
e) указанный TFF выбран из группы, состоящей из: TFF1, TFF2 и TFF3, и
f) указанный фермент выбран из группы, состоящей из: фенилаланинаммиаклиазы (ФАЛ) и декарбоксилазы аминокислот.
14. Рекомбинантная МКБ по п. 13, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один терапевтический полипептид представляет собой ФАЛ.
15. Рекомбинантная МКБ по п. 12, отличающаяся тем, что указанная вторая экзогенная нуклеиновая кислота находится под контролем промотора gapB (PgapB).
16. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ выбрана из группы, состоящей из бактерии вида (sp.) Lactobacillus, бактерии вида Bifidobacterium, бактерии вида Streptococcus, бактерии вида Enterococcus и бактерии вида Lactococcus,
17. Рекомбинантная МКБ по п. 16, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ представляет собой Lactococcus lactis.
18. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ отличается от соответствующей МКБ, не содержащей указанной первой экзогенной нуклеиновой кислоты, по меньшей мере одним признаком, при этом указанный по меньшей мере один признак выбран из группы признаков, состоящей из
a. увеличенной по меньшей мере на 10% продолжительностью времени транзита через желудочно-кишечный тракт (ЖКТ);
b. увеличенной по меньшей мере на 10% адгезией к слизистой оболочке кишечника;
c. увеличенной по меньшей мере на 20% муцин-связывающей способностью in vitro; и
d. увеличенной по меньшей мере на 10% способностью к связыванию клеток Сасо-2 in vitro.
19. Рекомбинантная МКБ по п. 18, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ характеризуется увеличенной по меньшей мере на 20% муцин-связывающей способностью in vitro по сравнению с соответствующей МКБ, не содержащей указанной первой экзогенной нуклеиновой кислоты.
20. Рекомбинантная МКБ по п. 18, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ характеризуется увеличенной по меньшей мере на 10% способностью к связыванию клеток Сасо-2 in vitro по сравнению с соответствующей МКБ, не содержащей указанной первой экзогенной нуклеиновой кислоты.
21. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-20, дополнительно содержащая по меньшей мере одну мутацию или инсерцию, которая увеличивает накопление трегалозы, при этом указанная по меньшей мере одна мутация или инерция выбрана из группы, состоящей из
a) инсерции первой полицистронной экспрессионной кассеты, содержащей в направлении 5'-3' промотор usp45, ген usp45, межгенную область, которая находится в 5' направлении непосредственно после гена rpmD, и нуклеиновую кислоту, кодирующую OtsB из Escherichia coli;
b) инсерции второй полицистронной экспрессионной кассеты, содержащей в направлении 5'-3' промотор hllA (PhllA) и нуклеиновую кислоту, содержащую гены транспортера трегалозы llmg_0453 и llmg_0454;
c) инактивированного гена эндогенной трегалоза-6-фосфатфосфорилазы (trePP), где указанный ген trePP инактивирован путем делеции гена, таким образом, что указанная рекомбинантная МКБ не обладает активностью TrePP; и
d) инактивированного гена эндогенного компонента IIC целлобиоза-специфической фосфотрансферазной (PTS) системы (ptcC), где указанный ген ptcC инактивирован путем инсерции преждевременного стоп-кодона, таким образом, что указанная рекомбинантная МКБ не обладает активностью PtcC.
22. Фармацевтическая композиция для доставки полипептидов, содержащая рекомбинантную МКБ по любому из пп. 1-21 и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Применение рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-21 для лечения метаболического заболевания.
24. Применение фармацевтической композиции по п. 22 для лечения аутоиммунного заболевания, аллергии, метаболического заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта или пищевого нарушения.
25. Применение рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-21 для получения лекарственного средства для лечения метаболического заболевания.
26. Способ лечения метаболического заболевания у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества указанной рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-21 или указанной фармацевтической композиции по п. 22.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что указанное метаболическое заболевание выбрано из группы, состоящей из: кислотно-щелочного дисбаланса, метаболического заболевания головного мозга, расстройства метаболизма кальция, связанного с дефектом репарации ДНК расстройства, расстройства метаболизма глюкозы, гиперлактатемии, расстройства метаболизма железа и расстройства метаболизма липидов.
28. Способ по п. 26, отличающийся тем, что указанное метаболическое заболевание представляет собой фенилкетонурию (ФКУ).
29. Нуклеиновая кислота, кодирующая гибридный белок, содержащая
a. последовательность, кодирующую клеточно-адгезивный полипептид, выбранный из группы, состоящей из: связывающего клетки и слизь белка A (CmbA), связывающего слизь белка (Mub), белка, способствующего адгезии к слизи (МарА), и лактококкового муцин-связывающего белка (MbpL); и
b. последовательность, кодирующую муцин-связывающий полипептид, выбранный из группы, состоящей из: полипептида фактора «трилистника» (TFF) и полипептида MucBP.