СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ СИНХРОНИЗАЦИИ ВРЕМЕНИ ОСЕМЕНЕНИЯ
METHOD AND COMPOSITION FOR SYNCHRONISING INSEMINATION TIME

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Эта заявка заявляет приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) относительно Предварительной заявки № 61/172009, поданной 23 апреля 2009 года, которая специально включена здесь посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Данное изобретение относится к способам и композициям для синхронизации времени осеменения в животном. Более конкретно, это изобретение относится к способам и композициям для синхронизации времени осеменения свиней без детектирования периода течки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Гонадотропинвысвобождающий гормон (гонадолиберин) является пептидом из 10 аминокислот, а также известен как рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона (LHRH). Гонадотропинвысвобождающий гормон продуцируется в гипоталамусе и является ответственным за высвобождение фолликулостимулирующего гормона и лютеинизирующего гормона из гипофиза. Гонадотропинвысвобождающий гормон высвобождается из нейронов в гипоталамусе и играет роль в комплексной регуляции высвобождения фолликулостимулирующего гормона и лютеинизирующего гормона. Фолликулостимулирующий гормон и лютеинизирующий гормон, в комбинации, регулируют функционирование гонад для продуцирования тестостерона в семенниках и прогестерона и эстрогена в яичниках и регулирует продуцирование и созревание гамет. Например, фолликулостимулирующий гормон стимулирует рост и рекрутмент (пополнение) незрелых яичниковых фолликулов в яичнике, а лютеинизирующий гормон запускает овуляцию.
[0004] Имеются различия в секреции гонадотропинвысвобождающего гормона между самками и самцами. В самцах, гонадотропинвысвобождающий гормон секретируется импульсно при постоянной частоте, а в самках частота этих импульсов варьируется во время эстрального (течкового) цикла, и имеется большой выброс гонадотропинвысвобождающего гормона непосредственно перед овуляцией. Секреция гонадотропинвысвобождающего гормона является импульсной во всех позвоночных и является необходимой для правильной репродуктивной функции. Таким образом, гонадотропинвысвобождающий гормон контролирует комплексный процесс фолликулярного роста, овуляции и поддержания corpus luteum (желтого тела) в самке и сперматогенеза в самцах.
[0005] Гонадотропинвысвобождающий гормон был выделен и охарактеризован как декапептид. Синтетические формы гонадотропинвысвобождающего гормона являются доступными, и модификации структуры гонадотропинвысвобождающего гормона привели к множественным аналогам гонадотропинвысвобождающего гормона, которые либо стимулируют (например, агонисты гонадотропинвысвобождающего гормона), либо подавляют (например, антагонисты гонадотропинвысвобождающего гормона) высвобождение гонадотропинов, таких как лютеинизирующий гормон и фолликулостимулирующий гормон.
[0006] Для коммерческого свиноводства важно максимизировать репродуктивную эффективность, чтобы сделать свиноводство более рентабельным. Существовала сильная надежда на ежедневное детектирование течки отдельных свиноматок со связанными с этим затратами на рабочую силу, уделяемыми для мануального детектирования течки в самках свиней на основе ежедневных проверок молодых племенных свиней или свиноматок для получения наилучших результатов, например, с использованием искусственного осеменения. Детектирование течки с использованием трудоемких способов, таких как ежедневные проверки, увеличивает возможность успеха с искусственным осеменением. Таким образом, затраты на потраченное время, ручной труд и материалы для ежедневных проверок для детектирования течки являются необходимыми, так как трудно предсказать время течки (т.е. лучшее время для осеменения) без применения способов, требующих ежедневной схемы для мониторинга детектирования течки. Таким образом, необходимы способы оптимизации успеха осеменения животных, без детектирования течки, для уменьшения затрат на рабочую силу и для увеличения рентабельности свиноводства.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007] Заявители сделали неожиданное открытие, что контролирование времени овуляции посредством введения гормона может элиминировать осеменение на основе течки и позволить свинье получать только одно осеменение для оптимальной фертильности и оптимального расходования затрат. В одном варианте осуществления, описан способ синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки. Этот способ включает в себя стадию введения свинье, на четвертый день после отъема, дозы гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций, причем эту свинью осеменяют только один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения этого гормона и при этом не применяется детектирование течки.
[0008] В вышеописанном варианте осуществления, применяются следующие признаки или любая их комбинация. В вышеописанном варианте осуществления, 1) эта свинья может быть опоросившейся свиноматкой; 2) эта свинья может быть молодой племенной свиньей; 3) осеменение может быть искусственным осеменением, 4) осеменение может осуществляться посредством природного осеменения; 5) овуляция может быть синхронизированной; 6) гормон может вводиться в количестве, эффективном для стимуляции овуляции фолликулов яичников; 7) доза этого гормона может вводиться с использованием способа, выбранного из группы, состоящей из применения депонирующего катетера, мануального введения и инъекции; 8) эта свинья может быть осеменена приблизительно при 15 - приблизительно при 18 часах после введения этого гормона; 9) эта свинья может быть осеменена при приблизительно 18 часах после введения этого гормона; 10) коэффициент беременности свиньи может быть увеличен относительно свиньи, которой не введен гормон; 11) размер помета свиньи может быть увеличен относительно свиньи, которой не введен гормон; 12) гормон может вводиться более, чем одной свинье; 13) процент свиней, овулирующих после приблизительно 48 часов после введения этого гормона, может быть увеличенным относительно свиньи, которой не введен гормон; 15) гормон может вводиться внутривлагалищно; 16) гормон может вводиться в передний свод влагалища; 17) этот гормон может быть агонистом рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона; 18) этот гормон может быть агонистом рецептора лютеинизирующего гормона; 19) этот гормон может быть агонистом рецептора хорионического гонадотропина человека; 20) этот гормон может быть трипторелином; 21) этот гормон может быть солью трипторелина; 22) этот гормон может быть синтетическим; 23) этот гормон может быть в форме ацетата; 24) этот гормон может вводиться в содержащей гель композиции; 25) этот гель может содержать полисахарид; 26) этот полисахарид может быть выбран из группы, состоящей из целлюлоз, декстранов и альгинатов; 27) этот гель может содержать целлюлозу и 28) эта целлюлоза может быть метилцеллюлозой. Рассматривается любая комбинация варианта осуществления абзаца [0007] с пунктами 1-28 или любой их комбинацией.
[0009] В другом варианте осуществления, описан набор, содержащий дозу гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций. Этот набор дополнительно включает в себя инструкции для применения, где этот гормон находится в композиции, содержащей гель, и эта композиция имеет рН приблизительно 5 - приблизительно 6.
[0010] В варианте, описанном в абзаце [0009], применяются следующие признаки или любая их комбинация. В варианте, описанном в абзаце [0009], 1) эти инструкции могут указывать, что этот гормон должен вводиться в свинью приблизительно на четвертый день после отъема и что эта свинья может быть осеменена один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения этого гормона; 2) эти инструкции могут указывать, что это осеменение должно быть искусственным осеменением; 3) эти инструкции могут указывать, что это осеменение должно осуществляться посредством природного осеменения; 4) этот набор может дополнительно содержать депонирующий катетер, приспособление для мануального введения или шприц; 5) эти инструкции могут указывать, что свинья должна быть осеменена при приблизительно 15 - приблизительно 18 часах после введения гормона; 6) эти инструкции могут указывать, что свинья должна быть осеменена при приблизительно 18 часах после введения гормона; 7) эти инструкции могут указывать, что этот гормон должен вводиться внутривлагалищно; 8) эти инструкции могут указывать, что этот гормон должен вводиться в передний свод влагалища; 9) этот гормон может быть агонистом рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона; 10) этот гормон может быть агонистом рецептора лютеинизирующего гормона; 11) этот гормон может быть агонистом рецептора хорионического гонадотропина; этот гормон может быть трипторелином; 12) этот гормон может быть солью трипторелина; 13) этот гормон может быть синтетическим; 14) этот гормон может находиться в форме ацетата; 15) этот гель может содержать сахарид; 16) этот гель может содержать полисахарид; 17) этот полисахарид может быть выбран из группы, состоящей из целлюлоз, декстранов и альгинатов; 18) этот гель может содержать целлюлозу; и 19) эта целлюлоза может быть метилцеллюлозой. Рассматривается любая комбинация варианта осуществления абзаца [0009] с пунктами 1-19 или любой их комбинацией.
[0011] В другом варианте осуществления, описана композиция, содержащая агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона, где эта композиция имеет рН приблизительно 5,0 - приблизительно 6,0.
[0012] В варианте, описанном в абзаце [0011], применяются следующие признаки или их любая комбинация. В варианте осуществления, описанном в абзаце [0011], 1) эта композиция может дополнительно содержать консервант; 2) этот консервант может быть выбран из группы, состоящей из метилпарабена и пропилпарабена; 3) эта композиция может дополнительно содержать стабилизатор; 4) этот стабилизатор может быть L-аминокислотой; 5) этот стабилизатор может быть L-метионином; 6) этот гель может содержать полисахарид; 7) этот полисахарид может быть выбран из группы, состоящей из целлюлоз, декстранов и альгинатов; 8) этот гель может содержать целлюлозу; 9) эта целлюлоза может быть метилцеллюлозой; 10) эта композиция может дополнительно содержать агент тоничности; 11) этот агонист может быть трипторелином; 12) эта композиция может сопровождаться инструкциями по применению; 13) эти инструкции в комбинации с этой композицией могут указывать, что свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения агониста; и 14) эти инструкции могут указывать, что свинья должна быть осеменена при приблизительно 18 часах после введения агониста. Рассматривается любая комбинация варианта осуществления абзаца [0011] с пунктами 1-14 или любой их комбинацией.
[0013] Обеспечены следующие различные варианты осуществления.
1. Описан способ синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки. Этот способ предусматривает стадию введения этой свинье, на четвертый день после отъема, дозы гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций, где эту свинью осеменяют только один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения этого гормона и где отсутствует детектирование течки.
2. Способ по пункту 1, где эта свинья является опоросившейся свиноматкой.
3. Способ по пункту 1, где эта свинья является молодой племенной свиньей.
4. Способ по пунктам 1-3, где это осеменение является искусственным осеменением.
5. Способ по пунктам 1-4, где это осеменение осуществляется посредством природного размножения.
6. Способ по пунктам 1-5, где овуляция является синхронизированной.
7. Способ по пунктам 1-6, где этот гормон вводят в количестве, эффективном для стимуляции овуляции фолликулов яичников.
8. Способ по пунктам 1-7, где это эффективное количество гормона равно приблизительно 10 мкг - приблизительно 1000 мкг.
9. Способ по пунктам 1-7, где это эффективное количество гормона равно приблизительно 10 мкг - приблизительно 500 мкг.
10. Способ по пунктам 1-9, где эту дозу гормона вводят с использованием способа, выбранного из группы, состоящей из применения депонирующего катетера, мануального введения и инъекции.
11. Способ по пунктам 1-10, где эту свинью осеменяют при приблизительно 15 - приблизительно 18 часах после введения гормона.
12. Способ по пунктам 1-10, где эту свинью осеменяют при приблизительно 16 - приблизительно 24 часах после введения гормона.
13. Способ по пунктам 1-10, где эту свинью осеменяют при приблизительно 18 - приблизительно 22 часах после введения гормона.
14. Способ по пунктам 1-13, где эту свинью осеменяют при приблизительно 18 часах после введения гормона.
15. Способ по пунктам 1-14, где коэффициент беременности этой свиньи увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
16. Способ по пунктам 1-15, где общее количество здоровых фетусов увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
17. Способ по пунктам 1-16, где процент опоросившихся свиноматок увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
18. Способ по пунктам 1-17, где общее количество родившихся поросят увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
19. Способ по пунктам 1-18, где общее количество родившихся поросят на дозу спермы увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
20. Способ по пунктам 1-19, где общее количество родившихся поросят увеличивается относительно свиньи, осемененной после детектирования течки.
21. Способ по пунктам 1-20, где индекс поросят увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
22. Способ по пунктам 1-21, где индекс поросят увеличивается относительно свиньи, осемененной после детектирования течки.
23. Способ по пунктам 1-22, где размер помета этой свиньи увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
24. Способ по пунктам 1-23, где этот гормон вводят более чем одной свинье.
25. Способ по пунктам 1-24, где процент овуляции свиньи при приблизительно 48 часах после введения гормона увеличивается относительно свиньи, которой не введен гормон.
26. Способ по пунктам 1-25, где этот гормон вводят внутривлагалищно.
27. Способ по пунктам 1-26, где этот гормон вводят в передний свод влагалища.
28. Способ по пунктам 1-27, где этот гормон является агонистом рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона.
29. Способ по пунктам 1-28, где этот гормон является агонистом рецептора лютеинизирующего гормона.
30. Способ по пунктам 1-29, где этот гормон является агонистом рецептора хорионического гонадотропина человека.
31. Способ по пунктам 1-30, где этот гормон является трипторелином.
32. Способ по пунктам 1-31, где этот гормон является солью трипторелина.
2
33. Способ по пунктам 1-32, где гонадотропинвысвобождающий гормон имеет формулу pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH.
34. Способ по пунктам 1-33, где агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона имеет формулу
или его сольвата, гидрата или фармацевтически приемлемой соли, где
1
2
1
2
R и R обозначают независимо в каждом случае водород или независимо выбраны из группы, состоящей из гетероалкила, циклоалкила, гетероциклоалкила, галогеналкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила, каждый из которых является необязательно замещенным, или R и R и присоединенный углерод образуют карбоцикл или гетероцикл;
X обозначает водород или X выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, гетероалкила, необязательно замещенного алкиленкарбоксамида; и
3
4
3
4
HNC(O)NRR, где R и R в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила и галогеналкила.
1
35. Способ по п. 34, где R обозначает метиленгетероарил, где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, тиазолила, пиридазолила, пиримидинила, хинолинила, пиразолила, имидазолила, пирролила, индолила, бензопиразолила и бензимидазолила; и
2
R обозначает водород или метил.
2
2
36. Способ по пунктам 34-35, где Х обозначает CHC(O)NH.
37. Способ по пунктам 1-36, где этот гормон является синтетическим.
38. Способ по пунктам 1-37, где этот гормон находится в форме ацетата.
39. Способ по пунктам 1-38, где этот гормон вводят в композиции, содержащей гель.
40. Способ по п. 39, где этот гель содержит полисахарид.
41. Способ по п. 40, где этот полисахарид выбран из группы, состоящей из целлюлозы, декстранов и альгинатов.
42. Способ по пунктам 39-41, где этот гель содержит целлюлозу.
43. Способ по п. 42, где эта целлюлоза является метилцеллюлозой.
44. Способ по пунктам 39-43, где этот гель содержит приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 10 масс.% метилцеллюлозы.
45. Способ по пунктам 39-43, где этот гель содержит приблизительно 0,5 масс.% - приблизительно 4,0 масс.% метилцеллюлозы.
46. Способ по пунктам 1-45, где этот гормон вводят со стабилизатором и где этот стабилизатор является L-метионином.
47. Набор, содержащий дозу гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций, и инструкции для применения, где этот гормон находится в композиции, содержащей гель, и эта композиция имеет рН приблизительно 5 - приблизительно 6.
48. Набор по п. 47, где эти инструкции указывают, что этот гормон должен вводиться свинье приблизительно на четвертый день после отъема и что эта свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения гормона.
49. Набор по пунктам 47-48, где эти инструкции указывают, что это осеменение должно быть искусственным осеменением.
50. Набор по пунктам 47-49, где эти инструкции указывают, что это осеменение должно осуществляться посредством природного осеменения.
51. Набор по пунктам 47-50, где этот набор дополнительно содержит депонирующий катетер, приспособление для мануального введения или шприц.
52. Набор по пунктам 47-51, где эти инструкции указывают, что эта свинья должна быть осеменена при приблизительно 15 - приблизительно 18 часах после введения этого гормона.
53. Набор по пунктам 47-51, где эти инструкции указывают, что эта свинья должна быть осеменена при приблизительно 16 - приблизительно 24 часах после введения этого гормона.
54. Набор по пунктам 47-51, где эти инструкции указывают, что эта свинья должна быть осеменена при приблизительно 18 - приблизительно 22 часах после введения этого гормона.
55. Набор по пунктам 47-54, где эти инструкции указывают, что эта свинья должна быть осеменена при приблизительно 18 часах после введения этого гормона.
56. Набор по пунктам 47-55, где эти инструкции указывают, что этот гормон должен вводиться внутривлагалищно.
57. Набор по пунктам 47-56, где эти инструкции указывают, что этот гормон должен вводиться в эффективном количестве приблизительно 10 мкг - приблизительно 1000 мкг.
58. Набор по пунктам 47-56, где эти инструкции указывают, что этот гормон должен вводиться в эффективном количестве приблизительно 10 мкг - приблизительно 500 мкг.
59. Набор по пунктам 47-58, где эти инструкции указывают, что этот гормон должен вводиться в передний свод влагалища.
60. Набор по пунктам 47-59, где этот гормон является агонистом рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона.
61. Набор по пунктам 47-60, где этот гормон является агонистом рецептора лютеинизирующего гормона.
62. Набор по пунктам 47-61, где этот гормон является агонистом рецептора хорионического гонадотропина человека.
63. Набор по пунктам 47-62, где этот гормон является трипторелином.
64. Набор по пунктам 47-63, где этот гормон является солью трипторелина.
2
65. Набор по пунктам 47-64, где гонадотропинвысвобождающий гормон имеет формулу pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH.
66. Набор по пунктам 47-65, где агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона имеет формулу
или его сольвата, гидрата или фармацевтически приемлемой соли, где
1
2
1
2
R и R обозначают независимо в каждом случае водород или независимо выбраны из группы, состоящей из гетероалкила, циклоалкила, гетероциклоалкила, галогеналкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила, каждый из которых является необязательно замещенным, или R и R и присоединенный углерод образуют карбоцикл или гетероцикл;
X обозначает водород или X выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, гетероалкила, необязательно замещенного алкиленкарбоксамида; и
3
4
3
4
HNC(O)NRR, где R и R в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила и галогеналкила.
1
2
67. Набор по пункту 66, где R обозначает метиленгетероарил и где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, тиазолила, пиридазолила, пиримидинила, хинолинила, пиразолила, имидазолила, пирролила, индолила, бензопиразолила и бензимидазолила; и R обозначает водород или метил.
2
2
68. Набор по пунктам 66-67, где Х обозначает CHC(O)NH.
69. Набор по пунктам 47-68, где этот гормон является синтетическим.
70. Набор по пунктам 47-69, где этот гормон находится в форме ацетата.
71. Набор по пунктам 47-70, где этот гель содержит сахарид.
72. Набор по пунктам 47-71, где этот гель содержит полисахарид.
73. Набор по п. 72, где этот полисахарид выбран из группы, состоящей из целлюлоз, декстранов и альгинатов.
74. Набор по пунктам 47-73, где этот гель содержит целлюлозу.
75. Набор по п. 74, где эта целлюлоза является метилцеллюлозой.
76. Набор по пунктам 47-75, где этот гель содержит приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 10 масс.% метилцеллюлозы.
77. Набор по пунктам 47-75, где этот гель содержит приблизительно 0,5 масс.% - приблизительно 4,0 масс.% метилцеллюлозы.
78. Набор по пунктам 47-77, может дополнительно содержащий стабилизатор, где этот стабилизатор является L-метионином.
79. Описана композиция, содержащая агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона и гель, где эта композиция имеет рН приблизительно 5,0 - приблизительно 6,0.
80. Композиция по п. 79, дополнительно содержащая консервант.
81. Композиция по пунктам 79-80, где этот консервант состоит из метилпарабена и пропилпарабена.
82. Композиция по пунктам 79-81, дополнительно содержащая стабилизатор.
83. Композиция по п. 82, где этот стабилизатор является L-аминокислотой.
84. Композиция по пунктам 82-83, где этот стабилизатор является L-метионином.
85. Композиция по пунктам 79-84, где этот гель является полисахаридом.
86. Композиция по п. 85, где этот полисахарид выбран из группы, состоящей из целлюлоз, декстранов и альгинатов.
87. Композиция по пунктам 79-96, где этот гель содержит целлюлозу.
88. Композиция по п. 87, где эта целлюлоза является метилцеллюлозой.
89. Композиция по пунктам 79-88, где этот гель содержит приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 10 масс.% метилцеллюлозы.
90. Композиция по пунктам 79-88, где этот гель содержит приблизительно 0,5 масс.% - приблизительно 4,0 масс.% метилцеллюлозы.
91. Композиция по пунктам 79-90, дополнительно содержащая агент тоничности.
92. Композиция по пунктам 79-92, где этот агонист является трипторелином.
93. Композиция по пунктам 79-92 в комбинации с инструкциями для применения.
94. Композиция по п. 93, где эти инструкции в комбинации с этой композицией указывают, что свинье должен быть введен агонист и что эта свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения агониста.
95. Композиция по п. 93, где эти инструкции в комбинации с этой композицией указывают, что свинье должен быть введен агонист и что эта свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 16 - приблизительно 22 часах после введения агониста.
96. Композиция по п. 93, где эти инструкции в комбинации с этой композицией указывают, что свинье должен быть введен агонист и что эта свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 18 - приблизительно 22 часах после введения агониста.
97. Композиция по пунктам 93-96, где эти инструкции указывают, что эта свинья должна быть осеменена один раз при приблизительно 18 - приблизительно 22 часах после введения агониста.
2
98. Композиция по пунктам 79-97, где агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона является гонадотропинвысвобождающим гормоном и где этот гонадотропинвысвобождающий гормон имеет формулу pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH.
99. Композиция по пунктам 79-98, где агонист гонадотропинвысвобождающего гормона имеет формулу
или его сольвата, гидрата или фармацевтически приемлемой соли, где
1
2
1
2
R и R обозначают независимо в каждом случае водород или независимо выбраны из группы, состоящей из гетероалкила, циклоалкила, гетероциклоалкила, галогеналкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила, каждый из которых является необязательно замещенным, или R и R и присоединенный углерод образуют карбоцикл или гетероцикл;
X обозначает водород или X выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, гетероалкила, необязательно замещенного алкиленкарбоксамида; и
3
4
3
4
HNC(O)NRR, где R и R в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила и галогеналкила.
1
2
100. Композиция по п. 99, где R обозначает метиленгетероарил и где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, тиазолила, пиридазолила, пиримидинила, хинолинила, пиразолила, имидазолила, пирролила, индолила, бензопиразолила и бензимидазолила; и R обозначает водород или метил.
2
2
101. Композиция по пунктам 99-100, где Х обозначает CHC(O)NH.
102. Композиция по пунктам 79-101, где агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона находится в эффективном количестве приблизительно 10 мкг - приблизительно 1000 мкг.
103. Композиция по пунктам 79-101, где агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона находится в эффективном количестве приблизительно 10 мкг - приблизительно 500 мкг.
104. Композиция по пунктам 79-103, содержащая метилпарабен, пропилпарабен, хлорид натрия, цитрат натрия, L-метионин, лимонную кислоту, трипторелин и метилцеллюлозу.
105. Композиция по пунктам 79-104, где эта композиция содержит метилпарабен в количестве приблизительно 0,09 масс.% на объем, пропилпарабен в количестве 0,01 масс.% на объем, хлорид натрия в количестве приблизительно 0,91 масс.% на объем, цитрат натрия в количестве приблизительно 0,186 масс.% на объем, L-метионин в количестве приблизительно 0,1 масс.% на объем, лимонную кислоту в количестве приблизительно 0,07 масс.% на объем, трипторелин в количестве приблизительно 0,01 масс.% на объем и метилцеллюлозу в количестве приблизительно 1,2 масс.% на объем.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0014] Фигура 1 показывает процент свиноматок, овулирующих после обработки (0 часов), предоставляемой при 96±2 часа после отъема.
[0015] Фигура 2 показывает стабильность трипторелина после 13 дней при 0-4°C (треугольники), 30°C (квадраты) и 50°С (ромбы).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0016] В одном варианте осуществления, описан способ синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки. Этот способ предусматривает стадию введения свинье, на четвертый день после отъема, дозы гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций, где эту свинью осеменяют только один раз при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения этого гормона и где не применяется детектирование течки.
[0017] В одном варианте осуществления, описан набор, содержащий дозу гормона, выбранного из группы, состоящей из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека и их комбинаций. В другом варианте осуществления, этот набор дополнительно содержит инструкции для применения. Еще в одном варианте осуществления, этот гормон находится в композиции, содержащей гель, описанный здесь. Эта композиция обычно имеет рН приблизительно 5 - приблизительно 6, но этот рН может находиться в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 9.
[0018] В одном варианте осуществления, описана композиция, содержащая агонист рецептора гонадотропинвысвобождающего гормона. В другом варианте осуществления, описана композиция, дополнительно содержащая гель. Эта композиция обычно имеет рН приблизительно 5 - приблизительно 6, но этот рН может находиться в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 9.
[0019] Все из этих иллюстративных вариантов осуществления, модификаций и альтернативных форм, описанных ниже, могут быть применены к вариантам осуществления, описанным в предыдущих абзацах [0015]-[0017] раздела Подробное описание и к вариантам, описанным в разделе Сущность изобретения.
[0020] Способ синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки включает в себя введение этой свинье дозы гормона, например, гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека, производных или аналогов гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека или их комбинаций. Согласно одному варианту осуществления, этот гормон вводят свинье. Любой вид свиней, например, молодые племенные свиньи (т.е. самки свиней перед первым спариванием) в том числе достигшие половой зрелости подсвинки и свиноматки, в том числе опоросившиеся свиноматки, или любой другой тип свиней, могут быть использованы в этих способах и могут быть подвергнуты введению описанных здесь композиций.
[0021] Иллюстративно, свиней отлучают от матки в день 0, как описано здесь. Животные обычно получают единственную дозу гормона в день 4 после отъема (т.е. в четвертый день после отъема). Животных, получающих обработку, обычно осеменяют один раз при 15 часах (или 15 часах ±2 часа), 16 часах (или 16 часах ±2 часа), 17 часах (или 17 часах ±2 часа), 18 часах (или 18 часах ±2 часа), 19 часах (или 19 hours ±2 часа), 20 часах (или 20 часах ±2 часа), 21 часе (или 21 часе ±2 часа), 22 часах (или 22 часах ±2 часа), 23 часах (или 23 часах ±2 часа), 24 часах (или 24 часах ±2 часа), 27 часах (или 27 часах ±2 часа) или 30 часах (или 30 часах ±2 часа) после введения гормона.
[0022] Осеменение этого животного может осуществляться любым способом искусственного осеменения (AI) или посредством природного осеменения. В любом описанном здесь варианте осуществления, может выполняться второе осеменение или последующие осеменения. Еще в одном варианте осуществления, свинью осеменяют только один раз. В другом иллюстративном аспекте, не применяют детектирование течки. В другом аспекте, детектирования течки не выполняется между введением гормона и 48 часами после овуляции.
[0023] В любом описанном здесь варианте осуществления гормон вводят, например, на четвертый день после отъема, т.е. при приблизительно 96 часах после отъема. В различных иллюстративных вариантах осуществления, гормон может вводиться, например, при приблизительно 80, приблизительно 82, приблизительно 84, приблизительно 86, приблизительно 88, приблизительно 90, приблизительно 91, приблизительно 92, приблизительно 93, приблизительно 94, приблизительно 95, приблизительно 96, приблизительно 97, приблизительно 98, приблизительно 99, приблизительно 100, приблизительно 102, приблизительно 104 или приблизительно 108 часах после отъема. Более часто, гормон вводят при приблизительно 94 - приблизительно 98 часах после отъема, т.е. при приблизительно 94, приблизительно 95, приблизительно 96, приблизительно 97 или приблизительно 98 часах после отъема. В другом варианте осуществления, гормон вводят при приблизительно 92 - приблизительно 106 часах после отъема.
[0024] В любом описанном здесь варианте осуществления, свинью осеменяют один раз, например, при приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения гормона. В различных дополнительных иллюстративных вариантах осуществления, свинью осеменяют при приблизительно 15 - приблизительно 18 часах, приблизительно 13 - приблизительно 18 часах или приблизительно 15 - приблизительно 20 часах, или приблизительно 13 - приблизительно 20 часах после введения гормона. В других иллюстративных аспектах, свинью осеменяют при приблизительно 13 часах, приблизительно 14 часах, приблизительно 15 часах, приблизительно 16 часах, приблизительно 17 часах, приблизительно 18 часах, приблизительно 19 часах, приблизительно 20 часах, приблизительно 21 часе, приблизительно 22 часах, приблизительно 23 часах или приблизительно 24 часах после введения гормона. Иллюстративно, свинью осеменяют при приблизительно 15 часах, приблизительно 18 часах, приблизительно 20 часах, приблизительно 22 часах или приблизительно 24 часах после введения гормона.
[0025] В любом описанном здесь варианте осуществления, коэффициент беременности этой свиньи может быть увеличен относительно свиньи, которой не введен гормон (например, которой вводят плацебо). Например, коэффициент беременности в обработанных гормоном животных может быть приблизительно 75% - приблизительно 90%. В другом варианте осуществления, величина помета свиньи может быть увеличена относительно свиньи, которой не введен гормон (например, которой вводят плацебо). Например, обычная величина помета в обработанных гормоном животных может быть приблизительно 20 - приблизительно 24 плода (фетуса) на беременность. В других вариантах осуществления, величина помета в обработанных гормоном животных может быть приблизительно 14 - приблизительно 18, приблизительно 14 - приблизительно 24 или приблизительно 14 - приблизительно 20 плодов (фетусов) на беременность. Еще в одном варианте осуществления, процент свиней, овулирующих при приблизительно 48 часах после введения гормона, может быть увеличен относительно свиньи, которой не введен гормон (например, которой вводят плацебо). Например, процент животных, которые овулируют при 48 часах после введения гормона, может быть равен приблизительно 65% - приблизительно 85%.
[0026] В дополнительных описанных здесь вариантах осуществления, общее количество здоровых фетусов может быть увеличено относительно свиньи, которой не введен гормон. Например, количество здоровых плодов для обработанных гормоном животных может быть приблизительно 9 - приблизительно 18, приблизительно 9 - приблизительно 16, приблизительно 9 - приблизительно 14 или приблизительно 9 - приблизительно 12. В других описанных здесь вариантах осуществления, процент опоросившихся свиноматок для обработанных гормоном животных может быть увеличен в сравнении со свиньей, которой не вводят гормон. Например, процент опоросившихся свиноматок для обработанных гормоном животных может быть приблизительно 76% - приблизительно 90%, приблизительно 76% - приблизительно 85% или приблизительно 76% - приблизительно 80%. В дополнительных описанных здесь вариантах осуществления, общее количество поросят, родившихся у обработанных гормоном животных может быть увеличено относительно свиньи, которой не введен гормон. Например, количество родившихся поросят может быть приблизительно 13 - приблизительно 18, приблизительно 13 - приблизительно 17, приблизительно 13 - приблизительно 16, приблизительно 13 - приблизительно 15 или приблизительно 13 - приблизительно 14. В любом описанном здесь варианте осуществления, коэффициент беременности свиньи, величина помета свиньи, общее количество здоровых плодов (фетусов), процент опоросившихся свиноматок и общее количество родившихся поросят, для обработанных гормоном животных могут быть сходными с этими показателями животных, осемененных после детектирования течки.
[0027] В любом описанном здесь варианте осуществления, общее количество родившихся поросят на дозу спермы, может быть увеличено относительно свиньи, которой не введен гормон, и общее количество родившихся поросят на дозу спермы, может быть увеличено относительно животных, осемененных после детектирования течки. Например, общее количество родившихся поросят на дозу спермы, может быть равно приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 14, приблизительно 16, приблизительно 18 или приблизительно 20. В любом описанном здесь варианте осуществления, индекс поросят (поросята, родившиеся живыми/100 выделенных свиноматок) может быть увеличен относительно свиньи, которой не введен гормон, и этот индекс поросят может быть увеличен относительно животных, осемененных после детектирования течки.
[0028] В любом описанном здесь варианте осуществления, композиции для синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки содержат: a) гормон и b) фармацевтически приемлемый рН буферирующий агент для обеспечения рН в диапазоне приблизительно pH 4 - приблизительно pH 9. pH описанной здесь композиции может находиться в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 9. В других вариантах осуществления, этот рН может находиться в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 8, от приблизительно 4 до приблизительно 7, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6 или от приблизительно 5 до приблизительно 6.
[0029] Кроме того, композиции гормонов могут быть получены, в соответствии с этой лекарственной формой, с использованием рутинного способа подходящим смешиванием с добавкой, разведением добавкой или растворением в добавке, такой как различные эксципиенты, дезинтегрирующие агенты, связывающие агенты, соли, смазывающие вещества, местные анестетики (например, лидокаин), разбавители, консерванты, хелатообразующие агенты, буферы, агенты тоничности, антисептические агенты, увлажняющие агенты, эмульгаторы, диспергирующие агенты, стабилизаторы, адъювант раствора или их комбинации.
[0030] Иллюстративно, композиции, содержащие этот гормон, могут быть в форме геля, и эта композиция может иметь, например, вязкость приблизительно 10 сП (сантипуаз, сП) - приблизительно 300,000 сП. В различных иллюстративных вариантах осуществления, вязкость этой композиции может быть приблизительно 100 сП - приблизительно 100000 сП, приблизительно 250 сП - приблизительно 400 сП, приблизительно 300 сП - приблизительно 400 сП, приблизительно 500 сП - приблизительно 100000 сП, приблизительно 700 сП - приблизительно 100000 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 20000 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 10000 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 5000 сП, приблизительно 200 - приблизительно 1000 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 600 сП, приблизительно 100 сП - приблизительно 600 сП, приблизительно 100 сП - приблизительно 500 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 500 сП, приблизительно 200 сП - приблизительно 450 сП или приблизительно 100000 сП - приблизительно 250000 сП. В соответствии с различными описанными здесь вариантами осуществления, вязкость этой композиции может быть приблизительно 200 сП, приблизительно 250 сП, приблизительно 300 сП, приблизительно 400 сП, приблизительно 500 сП, приблизительно 1000 сП, приблизительно 15000 сП, приблизительно 20000 сП, приблизительно 30000 сП, приблизительно 40000 сП, приблизительно 50000 сП, приблизительно 75000 сП, приблизительно 100000 сП, приблизительно 200000 сП или приблизительно 300000 сП. Вязкость раствора может быть измерена при помощи вискозиметра, такого как реометр, на основе способов, хорошо известных в данной области
[0031] Обычно, описанные здесь гели содержат приблизительно 0,001 - приблизительно 3,0% (масса/масса) (м/м) гормона или его соли, более часто приблизительно 0,5-5,0% (м/м) или приблизительно 0,1-5,0% (м/м) гормона или его соли, консервант, гель (т.е. модифицирующий вязкость агент), буфер для поддержания рН между приблизительно 5 - приблизительно 6 и агент тоничности для поддержания тоничности между приблизительно 200 - приблизительно 400 мОсм/кг.
[0032] В соответствии с любым описанным здесь вариантом осуществления, эта композиция является достаточно вязкой для того, чтобы оставаться прикрепленной к ткани-мишени в течение достаточного времени для доставки эффективного количества этого гормона. Обычная вязкость будет зависеть от таких факторов, как, например, скорость проникновения гормона и количество применяемого гормона. Подходящие модулирующие вязкость агенты включают в себя, но не ограничиваются ими, ионогенные и неионогенные водорастворимые полимеры; сшитые полимеры акриловой кислоты; гидрофильные полимеры, такие как полиэтиленоксиды, сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, и поливиниловый спирт; целлюлозные полимеры и производные целлюлозных полимеров, такие как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и этерифицированная целлюлоза; камеди, такие как трагакантовая и ксантановая камедь; альгинат натрия; желатин, гиалуроновую кислоту и ее соли, хитозаны, гелланы или любая их комбинация.
[0033] Этот модулирующий вязкость агент может быть в форме геля, пасты, крема, мази и т.п. В одном варианте осуществления, эта композиция содержит гормон и гель, в качестве модифицирующего вязкость агента, и этот гормон вводят в композицию, содержащую гель. В одном варианте осуществления, этот гель является гидрогелем, липогелем или вязким коллоидным раствором (золем). В другом варианте осуществления этот гель является гидрогелем. Этот гель может быть приготовлен с использованием любого способа, известного в данной области, например, такого как способы, описанные в Патентах США с номерами 6908623 и 7456207, включенные здесь посредством ссылки.
[0034] В любом описанном здесь варианте осуществления, этот гель (т.е. модифицирующий вязкость агент) содержит полисахарид. В соответствии с описанными здесь способами и композициями, этот полисахарид может включать в себя, например, альгинаты и глюкозу, например, гликогены, крахмалы (например, амилозу и амилопектин), целлюлозы и декстраны. Этот полисахарид может быть, например, сложным метиловым, этиловым или пропиловым эфиром целлюлозы, простым эфиром, сложным эфиром, простым гидроксиэфиром, сложным гидроксиалкиловым или гидроксиэфиром. Для получения желаемой вязкости, может быть использовано достаточное количество одного или нескольких полисахаридов. Обычно желательным является приблизительно 0,25 - приблизительно 10 масс.% полисахарида (в расчете на общую массу этой композиции). В другом варианте осуществления, масс.% этого полисахарида равен приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 3,0 масс.%, приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 7 масс.%, приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 4,0 масс.% или приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 2,0 масс.%. В других вариантах осуществления, масс.% этого полисахарида равен приблизительно 0,1%, приблизительно 0,5 %, приблизительно 0,75%, приблизительно 0,8%, приблизительно 0,9%, приблизительно 1,0%, приблизительно 1,1%, приблизительно 1,2%, приблизительно 1,4%, приблизительно 1,8%, приблизительно 2,0%, приблизительно 5%, приблизительно 8% или приблизительно 10% (все в расчете м/м). Для увеличения вязкости этой композиции, этот полисахарид может быть использован вместе с одним или несколькими неполисахаридными модулирующими вязкость агентами, известными в данной области. Примеры возможных неполисахаридных модулирующих вязкость агентов, которые могли бы использоваться вместе с одним или несколькими полисахаридами, включают в себя ксантановую камедь, альгиновые кислоты и их соли, силикат магния-алюминия, декстрины, сахарозу и ее производные, и их смеси. Количество неполисахаридного модулирующего вязкость агента, если он присутствует, могут быть 0,1 масс.% - приблизительно 10 масс.%, в зависимости от желаемой вязкости.
[0035] В любом описанном здесь варианте осуществления, этот гель содержит целлюлозу. Иллюстративные варианты этой целлюлозы, описанные здесь, включают в себя метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбометилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и гидроксиэтилметилцеллюлозу. Эта целлюлоза может быть производным целлюлозы, предпочтительно неионогенным сложным эфиром целлюлозы, простым эфиром, простым гидроксиэфиром или сложным гидроксиэфиром или неионогенным производным крахмала. Обычно, желательными являются приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 10 масс.% целлюлозы (в расчете на общую массу этой композиции). В другом варианте осуществления, масс.% целлюлозы равен приблизительно 0,25 масс.% - приблизительно 3,0 масс.%, приблизительно 0,5 масс.% - приблизительно 3,0 масс.%, приблизительно 0,5 масс.% - приблизительно 4,0 масс.%, приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 7 масс.%, приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 4,0 масс.% или приблизительно 1,0 масс.% - приблизительно 2,0 масс.%. В других вариантах осуществления, этот масс.% целлюлозы равен приблизительно 0,1%, приблизительно 0,5 %, приблизительно 0,75%, приблизительно 0,8%, приблизительно 0,9%, приблизительно 1,0%, приблизительно 1,1%, приблизительно 1,2%, приблизительно 1,4%, приблизительно 1,8%, приблизительно 2,0%, приблизительно 5%, приблизительно 8% или приблизительно 10% (все в расчете масса/масса). Если желательным является однородный гель, могут быть добавлены диспергирующие агенты, такие как спирт, сорбит или глицерин, или может быть диспергирован желирующий агент растиранием, механическим смешиванием или перемешиванием или их комбинациями.
[0036] Приемлемые стабилизаторы для применения в описанных способах и композициях включают в себя L-аминокислоту и L-метионин. В других вариантах осуществления, стабилизаторы, которые могут быть использованы, включают в себя, но не ограничиваются ими, полисахариды, такие как аравийская камедь, агар, альгиновая кислота, гуаровая камедь и трагакант, желатин и синтетические и полусинтетические полимеры, такие как карбомерные смолы, простые эфиры целлюлозы и карбоксиметилхитин. Этот стабилизатор находится обычно в количестве приблизительно 0,05 - приблизительно 10%, приблизительно 0,05 - приблизительно 5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1 - приблизительно 5%, приблизительно 0,1 - приблизительно 10%, приблизительно 0,1 - приблизительно 20%, приблизительно 1 - приблизительно 5%, приблизительно 1 - приблизительно 10%, приблизительно 1 - приблизительно 20% (все в расчете масса/масса). В одном варианте осуществления, в присутствии стабилизатора, описанного здесь, срок хранения этой композиции может быть по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяца. В другом варианте осуществления, эта композиция может храниться при температурах в диапазоне приблизительно 2°C - приблизительно 8°C. Могут быть также включены инертные носители, такие как лактоза, крахмал, декстрин, дикальцийфосфат и сульфат кальция. В одном варианте, включающем в себя стабилизатор, эта композиция является химически стабильной и остается по меньшей мере на 99% чистой, по меньшей мере на 99,5% чистой или по меньшей мере на 99,7% чистой в течение по меньшей мере трех месяцев.
[0037] Агент тоничности может быть неионным или ионным. Иллюстративно, приемлемые агенты тоничности для применения в описанных способах и композициях, включают в себя, например, ионные агенты, такие как хлорид натрия, хлорид калия или сбалансированный раствор солей. В соответствии с одним вариантом, агент тоничности присутствует в количестве, достаточном для достижения тоничности между приблизительно 200-400 мОсм/кг, приблизительно 220-380 мОсм/кг или приблизительно 250-340 мОсм/кг. Неионные агенты тоничности включают в себя диолы, такие как глицерин, маннит, эритрит, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль; и сахара, такие как сахароза и декстроза. Этот агент тоничности обычно присутствует в количестве приблизительно 0,05 - приблизительно 10%, приблизительно 0,05 - приблизительно 5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1 - приблизительно 5%, приблизительно 0,1 - приблизительно 10%, приблизительно 0,1 - приблизительно 20%, 0,5 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,6 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,5 - приблизительно 1,8%, приблизительно 0,6 - приблизительно 1,8%, приблизительно 1,0 - приблизительно 5,0%, приблизительно 1,0 - приблизительно 10% или приблизительно 1,0 - приблизительно 20% (все в расчете масса/масса).
[0038] В любом описанном здесь варианте осуществления, рН-буферирующие агенты для применения в композициях и способах, описанных здесь, являются агентами, известными квалифицированному в данной области специалисту в качестве рН-буферирующих агентов или композиций, и включают в себя, например, ацетатный, боратный, карбонатный, цитратный и фосфатный буферы, а также различные биологические буферы, например, TAPS, Бицин, Трис, Трицин, HEPES, TES, MOPS, PIPES, Какодилат и MES. Другие рН-буферирующие агенты включают в себя хлористоводородную кислоту, гидроксид натрия, оксид магния, монокалийфосфат, бикарбонат, аммиак, карбоновую кислоту, цитрат натрия, лимонную кислоту, уксусную кислоту, динатрийгидрофосфат, буру, борную кислоту и т.п. Этот буферирующий агент присутствует обычно в количестве приблизительно 0,01 - приблизительно 10%, приблизительно 0,02 - приблизительно 10%, приблизительно 0,02 - приблизительно 5%, приблизительно 0,02 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,02 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,02 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 10,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1 - приблизительно 5%, приблизительно 0,1 - приблизительно 10%, приблизительно 0,1 - приблизительно 20%, приблизительно 1 - приблизительно 5%, приблизительно 1 - приблизительно 10%, приблизительно 1 - приблизительно 20% (все в расчете масса/масса).
[0039] Буферирующий агент, используемый в описанных здесь готовых формах, может быть использован в любой концентрации, необходимой для получения желаемого диапазона рН. Например, этот буферирующий агент может быть использован в концентрации приблизительно 0,001 M - приблизительно 1 М, приблизительно 0,001 M - приблизительно 2 M, приблизительно 0,001 M - приблизительно 5 M, приблизительно 0,05 M - приблизительно 0,1 M, приблизительно 0,05 M - приблизительно 0,2 M, приблизительно 0,05 M - приблизительно 1 M, 0,05 M - приблизительно 2 M, приблизительно 0,05 М - приблизительно 5 M, приблизительно 0,1 M - приблизительно 1 M, приблизительно 0,1 M - приблизительно 2 M, приблизительно 0,1 M - приблизительно 5 M. Любое количество буферирующего агента, необходимое для получения желаемого диапазона рН, может быть использовано в описанных здесь готовых формах. Обычно, может быть использован фармацевтически приемлемый рН буферирующий агент для обеспечения pH в диапазоне приблизительно pH 4 - приблизительно pH 9. pH описанной здесь композиции может находиться в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 10, от приблизительно 4 до приблизительно 9. В любом описанном здесь варианте осуществления, pH может находиться в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 8, от приблизительно 4 до приблизительно 7, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6, от приблизительно 5 до приблизительно 6, от приблизительно 5 до приблизительно 5,5, от приблизительно 4 до приблизительно 6 или от приблизительно 4,5 до приблизительно 5,5.
[0040] В любом описанном здесь варианте осуществления, описанная здесь композиция содержит один или несколько фармацевтически приемлемых консервантов. В данном контексте, термин "консервант" включает в себя агент или комбинацию агентов, которые способствуют стабилизации этой композиции, ингибированию микробного роста или и того, и другого. Примеры подходящих консервантов включают в себя парабены (например, метиловый, этиловый, пропиловый и бутиловый эфиры парагидроксибензойной кислоты), пропилгаллат, сорбиновую кислоту и ее натриевую и калиевую соли, пропионовую кислоту и ее кальциевую и натриевую соли, "Диоксин" (6-ацетокси-2,4-диметил-м-диоксан), "Бронопол" (2-бром-2-нитропропан-1,3-диол) и салициланилиды, такие как дисбромсалициланилид, трибромсалициланилид, "Цинарил" 100 и 200 или "Довицил" 100 и 200 (цис-изомер 1-(3-хлораллил-3,5,7-триаза-1-азанидадамантанхлорида), гексахлорофен, бензоат натрия, лимонную кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту и ее соли щелочных металлов и щелочно-земельных металлов, бутилгидроксианизол, бутилгидрокситолуол, фенольные соединения, такие как хлор- и бромкрезолы и хром и бромоксиленолы, соединения четвертичного аммония, такие как бензалконийхлорид, ароматические спирты, такие как фенилэтиловый спирт, бензиловый спирт, и т.д., хлорбутанол, производные хинолина, такие как йодхлоргидроксихинолин, и т.п. Общее количество консерванта, когда он присутствует, равно приблизительно 0,005 масс.% - приблизительно 2 масс.%, приблизительно 0,001 масс.% - 1,0 масс.%, приблизительно 0,005 масс.% - приблизительно 0,25 масс.% или приблизительно 0,05 масс.% - приблизительно 0,2 масс.%, обычно приблизительно 0,01 масс.% - приблизительно 0,1 масс.% (все в расчете масса/масса).
[0041] В любом описанном здесь варианте осуществления, эта фармацевтическая композиция содержит хелатообразующий агент, такой как агенты, известные квалифицированным в данной области специалистам, например, этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA), и N,N-бис(карбоксиметил)глицин (NTA) или их соли. Эта композиция может содержать приблизительно 0,003 масс.% - приблизительно 1,0 масс.%, приблизительно 0,02 масс.% - приблизительно 0,2 масс.%, приблизительно 0,01 масс.% - приблизительно 1,0 масс.% или приблизительно 0,02 масс.% - приблизительно 0,5 масс.% (все в расчете масса/масса) хелатообразующего агента.
[0042] В любом описанном здесь варианте осуществления, в описанные здесь композиции могут быть включены антимикробные агенты. Такие агенты могут включать в себя, но не ограничиваются ими, 5-хлор-2-(2,4-дихлорфенокси)фенол, 8-гидроксихинолин, соединения меди II, фталевую кислоту, хлоргексидин, алексидин, гексетидин, санквинарин, бензалконийхлорид, салициланилид, домифена бромид, цетилпиридинийхлорид, тетрадецилпиридинийхлорид, N-тетрадецил-4-этилпиридинийхлорид, октенидин, йод, сульфонамиды, бисбигуанидины, фенольные соединения, делмопинол, октапинол и другие пиперидинопроизводные и препараты ницина, любые подходящие антибиотики, такие как аугментин, амоксициллин, тетрациклин, доксициклин, миноциклин, метронидазол, неомицин, канамицин и клиндамицин, и любые соли любых из этих соединений, в случае их приемлемости, и любые комбинации этих соединений. Еще в одном варианте осуществления, могут быть включены противогрибковые агенты, отдельно или в комбинации с любым из вышеописанных антимикробных агентов. Противогрибковые агенты, которые пригодны для применения в описанных здесь композициях, включают в себя, но не ограничиваются ими, нистатин, миконазол, эконазол, нитрат, клотримазол и флуцитозин. Эти антимикробные или противогрибковые агенты могут быть добавлены к готовым формам, описанным здесь, в количестве приблизительно 0,01 - приблизительно 10%, приблизительно 0,01 - приблизительно 5%, приблизительно 0,01 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,01 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,01 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,01 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,05 - приблизительно 10%, приблизительно 0,05 - приблизительно 5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1 - приблизительно 5%, приблизительно 0,1 - приблизительно 10%, приблизительно 0,1 - приблизительно 20%, приблизительно 1 - приблизительно 5%, приблизительно 1 - приблизительно 10%, приблизительно 1 - приблизительно 20% (все в расчете масса/масса).
[0043] В любом описанном здесь варианте осуществления, могут быть также добавлены антиоксиданты. Например, антиоксиданты, применимые здесь, могут включать в себя бета-каротин, витамин Е, витамин С, витамин A, токоферол, бутилированный гидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол, третичный-бутилгидрохинон, пропилгаллат, аскорбиновую кислоту, метабисульфит натрия, мочевую кислоту, каротиноиды, флавоноиды, мелатонин и этоксихин. Эти антиоксиданты могут быть добавлены к описанным здесь готовым формам в количестве приблизительно 0,01 - приблизительно 10%, приблизительно 0,01 - приблизительно 5%, приблизительно 0,01 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,01 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,01 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,01 - приблизительно 0,2%, 0,05 - приблизительно 10%, приблизительно 0,05 - приблизительно 5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 2,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 1,0%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,5%, приблизительно 0,05 - приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1 - приблизительно 5%, приблизительно 0,1 - приблизительно 10%, приблизительно 0,1 - приблизительно 20%, приблизительно 1 - приблизительно 5%, приблизительно 1 - приблизительно 10%, приблизительно 1 - приблизительно 20% (все в расчете масса/объем).
2
[0044] Как описано здесь, эта композиция содержит гормон, выбранный из группы, состоящей, например, из гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона, хорионического гонадотропина человека, их производных и аналогов, и их комбинаций, в количестве, эффективном для синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки, при применении описанного здесь способа. Дополнительные примеры приемлемых гормонов для применения в описанных здесь способах и композициях включают в себя простагландины, прогестогены, прогестероны, андрогены, тестостероны, эстрогены, эстрадиолы, гонадотропины, их производные и аналоги, и т.п. Этот гормон может быть в форме ацетата. Кроме того, этот гормон может быть агонистом гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона или хорионического гонадотропина человека или антагонистом гонадотропинвысвобождающего гормона, лютеинизирующего гормона или хорионического гонадотропина человека. В данном контексте, термин "гонадотропинвысвобождающий гормон" относится к любому гонадотропинвысвобождающему гормону, включающему в себя аналоги и производные гонадотропинвысвобождающего гормона и агонисты и антагонисты гонадотропинвысвобождающего гормона. В одном варианте осуществления, этот гонадотропинвысвобождающий гормон может быть синтетическим. В другом варианте осуществления, этот гонадотропинвысвобождающий гормон может быть GnRH (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH) (см., например, Патент США № 5688506, включенный здесь посредством ссылки) или трипторелином. В данном контексте, "лютеинизирующий гормон" относится к любому лютеинизирующему гормону, включающему в себя аналоги и производные лютеинизирующего гормона и агонисты и антагонисты лютеинизирующего гормона. В одном варианте осуществления, этот лютеинизирующий гормон может быть синтетическим. В другом варианте осуществления, этот лютеинизирующий гормон может быть LH (см., например, Патент США № 5444167, включенный здесь посредством ссылки). В данном контексте термин "хорионический гонадотропин человека" относится к любому хорионическому гонадотропину человека, включающему в себя аналоги и производные хорионического гонадотропина человека и агонисты и антагонисты хорионического гонадотропина человека. В одном варианте осуществления, хорионический гонадотропин человека может быть синтетическим. В другом варианте осуществления, этот хорионический гонадотропин человека может быть hCG (см., например, Патенты США с номерами 6469139, 4400316 и 4804626, включенные здесь посредством ссылки).
6
10
6
6
6
6
10
2
2
[0045] Примеры агонистов гонадотропинвысвобождающего гормона для применения здесь включают в себя, но не ограничиваются ими, лейпролид, нафарелин, бусерилин, [DAla, des Gly-NH ]GnRH, [DLys]GnRH, [DAla] GnRH, [2-Me-Ala]GnRH, [D-α-аминобутироил, des-GlyNH ]GnRH, трипторелин, лутрелин, госерелин, деслорелин и хистрелин. Обычно, агонисты гонадотропинвысвобождающего гормона моделируются по образцу природного декапептида гонадотропинвысвобождающего гормона со специфическими аминокислотными заменами обычно в положениях 6 и 10.
1
2
3
5
6
7
8
9
10
1
2
3
6
10
2
3
5
6
10
1
2
3
6
10
1
2
3
6
1
3
6
lo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
3
2
2
[0046] Примеры антагонистов гонадотропинвысвобождающего гормона включают в себя Антид (декапептид, представленный формулой D-Ac-D-2-Nal -DpClPhe -D-3-Pal -Ser4 -NiLys -D-NicLys -Leu -ILys -Pro -D-Ala), [Ac-D4ClDPhe, D4ClDPhe, DTrp, DArg, DAla]GnRH, [Ac-4ClDPhe, DPal, Arg, DNal, DAla]GnRH, [Ac-D2-Nal, 4ClDPhe, DTrp, DArg, DAla]GnRH, [Ac-D2 Nal, 4FDPhe, DTrp, DArg]GnRH, [Ac-D2Nal, 4ClDPhe2, DTrp, DhArg(Et), DAla]GnRH и [Ac-Nal, DME4ClPhe, DPal, Ser, Tyr, DArg, Le, ILys, Pro, DAla]GnRH.
В любом описанном здесь варианте осуществления, описано применение агониста гонадотропинвысвобождающего гормона формулы
или его сольвата, гидрата или фармацевтически приемлемой соли, где
1
2
1
2
R и R обозначают независимо в каждом случае водород или независимо выбраны из группы, состоящей из алкила, гетероалкила, циклоалкила, гетероциклоалкила, галогеналкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила, каждый из которых является необязательно замещенным, или R и R и присоединенный углерод образуют карбоцикл или гетероцикл;
X обозначает водород или X выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, гетероалкила, необязательно замещенного алкилен-карбоксамида; и
3
4
3
4
HNC(O)NRR, где R и R в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила и галогеналкила.
1
2
В другом варианте осуществления, описано вышеуказанное применение, где R обозначает метиленгетероарил, где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, тиазолила, пиридазолила, пиримидинила, хинолинила, пиразолила, имидазолила, пирролила, индолила, бензопиразолила и бензимидазолила; и R обозначает водород или метил.
2
2
Еще в одном варианте осуществления, описано любое из ранее описанных применений, где Х обозначает CHC(O)NH.
[0047] Агонисты и антагонисты гонадотропинвысвобождающего гормона и их аналоги, такие как аналоги, описанные в формуле выше, используемые здесь, могут вводиться в форме фармацевтически приемлемых нетоксичных солей или комплексов. Эти соли включают в себя кислотно-аддитивные соли, такие как, например, гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, нитрат, оксалат, фумарат, глюконат, таннат, малеат, ацетат, бензоат, сукцинат, альгинат, малат, аскорбат, тартрат и т.п. Эти комплексы могут быть с металлами, такими как, например, цинк, барий, кальций, магний, алюминий и т.п.
[0048] Количество гормона, эффективное для применения в соответствии с описанными здесь способами и композициями, зависит от многих параметров, включающих в себя молекулярную массу гормона, его способ введения и то, находится ли он в его нативной форме. Как описано здесь, "эффективное количество" гормона является количеством, достаточным для синхронизации времени осеменения в свинье без детектирования течки с использованием способа, описанного здесь. Эффективное количество этого гормона, которое должно быть введено свинье, может находиться в диапазоне приблизительно 10 мкг - приблизительно 2000 мкг, приблизительно 10 мкг - приблизительно 1000 мкг, приблизительно 10 мкг - приблизительно 500 мкг, приблизительно 10 мкг - приблизительно 100 мкг, приблизительно 10 мкг - приблизительно 50 мкг, приблизительно 50 мкг - приблизительно 2000 мкг, приблизительно 50 мкг - приблизительно 1000 мкг, приблизительно 50 мкг - приблизительно 500 мкг, приблизительно 50 мкг - приблизительно 300 мкг, приблизительно 50 мкг - приблизительно 200 мкг, приблизительно 100 мкг - приблизительно 200 мкг, приблизительно 100 мкг - приблизительно 300 мкг, приблизительно 100 мкг - приблизительно 500 мкг, приблизительно 100 мкг - приблизительно 1000 мкг, приблизительно 200 мкг - приблизительно 2000 мкг или приблизительно 0,05 мг - приблизительно 50 мг. В различных иллюстративных аспектах, этот гормон может быть введен свинье в дозе приблизительно 20 мкг, приблизительно 50 мкг, приблизительно 75 мкг, приблизительно 100 мкг, приблизительно 150 мкг, приблизительно 180 мкг, приблизительно 200 мкг, приблизительно 225 мкг, приблизительно 250 мкг, приблизительно 300 мкг, приблизительно 400 мкг, приблизительно 500 мкг, приблизительно 750 мкг, приблизительно 1000 мкг, приблизительно 1500 мкг или приблизительно 2000 мкг гормона. Этот гормон может вводиться в виде одной дозы или нескольких доз.
[0049] Гормон в описанной здесь композиции может вводиться в концентрации, например, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 500 мкг/мл, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 400 мкг/мл, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 300 мкг/мл, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 200 мкг/мл, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 150 мкг/мл, приблизительно 50 мкг/мл - приблизительно 250 мкг/мл или приблизительно 100 мкг/мл. Эта композиция может вводиться в различных объемах, включающих в себя, например, объем дозы 1 мл, 2 мл, 3 мл, 4 мл или 5 мл.
[0050] В любом описанном здесь варианте осуществления, этот гормон вводят в количестве, эффективном для стимуляции овуляции фолликулов яичников и для синхронизации овуляции в соответствии с описанным здесь способом. Доза гормона может вводиться с использованием способа, выбранного из группы, состоящей из 1) применения депонирующего катетера, 2) мануального введения, 3) инъекции или любого другого признанного в данной области способа для введения фармацевтической композиции, например, любого другого признанного в данной области способа для влагалищного введения фармацевтической композиции, например, композиции, содержащей гормон. В одном варианте осуществления, этот гормон может вводиться более чем одной свинье.
[0051] Примеры способов эффективного введения гормона, других, чем влагалищное введение, включают в себя парентеральное введение животному, например, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутриоболочечно или внутривенно, или в комбинации с приемлемым носителем. Подходящие средства для парентерального введения включают в себя инжекторы с иглой (в том числе микроиглой), безыгольные инжекторы и инфузионные способы. Парентеральные композиции для применения в соответствии с этим изобретением, могут быть в форме воспроизводимого лиофилизата, содержащего одну или несколько доз композиции гормона. Примеры парентеральных лекарственных форм включают в себя водные растворы этой композиции в хорошо известных жидких носителях, таких как жидкие спирты, гликоли (например, полиэтиленгликоли), растворы глюкозы (например, 5%), сложные эфиры, амиды, стерильную воду, забуференный солевой раствор (например, буферы, такие как фосфат или ацетат; например, изотонический солевой раствор).
[0052] В любом описанном здесь варианте осуществления, эта композиция может вводиться животному локально. Примеры способов локального введения для применения здесь включают в себя местное, внутривлагалищное и внутриректальное введения. Примеры лекарственных форм для применения в этом варианте осуществления включают в себя кремы, мази, гели, пасты, порошки, лосьоны, трансдермальные пластыри, внутриматочные устройства, влагалищные кольца и влагалищные таблетки. В одном иллюстративном варианте осуществления, эту композицию вводят в передний свод влагалища животного. Эти соединения могут быть также приготовлены в виде влагалищных или ректальных композиций, таких как суппозитории, например, содержащие общепринятые основы для суппозиториев, такие как какао-масло, карбоваксы, полиэтиленгликоли или другие глицериды, все из которых плавятся при температуре тела, но являются отвержденными при комнатной температуре.
[0053] Этот гормон может вводиться животному любыми применимыми процедурами и может быть использован в любой эффективной дозе и подходящей лекарственной форме, включающей в себя пероральные лекарственные формы, известные в данной области, такие как пилюли, шарики или капсулы, и эффективные дозы могут вводиться в стандартных или модифицированных формах высвобождения доз. Препараты модифицированного высвобождения доз включают в себя препараты задержанного, пролонгированного, импульсного, контролируемого, нацеленного и программируемого высвобождения.
[0054] Эти композиции могут также содержать подходящие твердофазные или имеющие фазу геля носители или эксципиенты. Примеры таких носителей или эксципиентов включают в себя, но не ограничиваются ими, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин и полимеры, такие как полиэтиленгликоли.
[0055] В другом иллюстративном аспекте этого изобретения обеспечен набор. Этот набор содержит дозу или множественные дозы описанного здесь гормона. В этом варианте осуществления, этот набор может дополнительно содержать аппликатор для мануального введения, депонирующий катетер и/или шприц для применения этой композиции гормона к животному. Еще в одном варианте осуществления, этот гормон находится в композиции, содержащей гель, как описано здесь. В одном иллюстративном варианте осуществления, этот набор может содержать этот гормон и этот гель по отдельности для смешивания перед введением животному. В другом варианте осуществления, этот набор может содержать гормон и гель, смешанные в сосуде, для немедленного введения.
[0056] Еще в одном варианте осуществления, этот набор содержит инструкции для применения. Эти инструкции могут указывать, что осеменение должно проводиться посредством природного осеменения; осеменение должно проводиться посредством искусственного осеменения; свиньи должны осеменяться при приблизительно 15 - приблизительно 18, приблизительно 18 - приблизительно 22 или приблизительно 15 - приблизительно 24 часах после введения гормона; или свиньи должны осеменяться при приблизительно 15, приблизительно 16, приблизительно 17, приблизительно 18, приблизительно 19, приблизительно 20, приблизительно 21, приблизительно 22, приблизительно 23, приблизительно 24 или приблизительно 30 часах после введения гормона. Другие подходящие компоненты набора включают в себя эксципиенты, дезинтегрирующие агенты, связывающие агенты, соли, смазывающие вещества, локальные анестетики (например, лидокаин), разбавители, консерванты, хелатообразующие агенты, буферы, агенты тоничности, антисептические агенты, увлажняющие агенты, эмульгаторы, диспергирующие агенты, стабилизаторы и т.п. Эти компоненты могут быть доступны по отдельности или смешаны с гормоном и/или гелем в случае необходимости. Любой из вариантов гормонов и любой из вариантов композиций, описанных здесь, может быть использован для приготовления этого набора.
[0057] Еще в одном варианте осуществления, обеспечено изделие. Это изделие может включать в себя любую из описанных здесь композиций. Эта композиция может находиться в первичном контейнере, например, стеклянном сосуде, например, во флаконе из янтарного стекла с резиновой пробкой и/или алюминиевым срываемым затвором. В другом варианте осуществления, этот первичный контейнер может содержаться во вторичном контейнере для дополнительной защиты этой композиции от света. Этот вторичный контейнер может быть, например, картоном. Любой из этих вариантов применим также к вышеописанным вариантам набора, и любой из вариантов гормона и композиции, описанных здесь, может быть применен к этому изделию.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
ПЛАН ИССЛЕДОВАНИЯ И ГРУППЫ ОБРАБОТКИ
[0058] Приблизительно 120 паритетных (равноценных) одной - семи свиноматок (30 свиноматок в каждой группе обработки) использовали для получения данных овуляции и репродуктивного тракта. Все свиноматки имели один и тот же генотип (PIC C22). После 16-24 дней лактации, свиноматок собирали в блоки по длине лактации и паритету (равноценности) и случайным образом относили к одной из четырех обработок: 1) группа плацебо, получающая плацебо-гель при 96±2 часах после отъема и единственное AI (искусственное осеменение) спустя 24 часа, 2) гель трипторелина при 96±2 часах после отъема и AI спустя 18-20 часов, 3) гель трипторелина при 96±2 часах после отъема и AI спустя 24-26 часов, и 4) гель трипторелина при 96±2 часах после отъема и AI спустя 30-32 часа. Препарат плацебо был идентичен активному препарату, но не содержал гормона. Все обработки депонировали в передний свод влагалища в пределах 2 см шейки матки. Развитие фолликулов и овуляцию подвергали мониторингу с использованием ультразвука реального времени при 24, 32, 40, 48 и 56 часах после обработки. Спустя тридцать (30) дней после осеменения, всех свиноматок забивали и получали репродуктивные тракты. Определяли коэффициенты беременности и выживание зародышей.
ПРИМЕР 2
ТЕСТ-ВЕЩЕСТВО
2
[0059] Активным ингредиентом был трипторелин (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-PrO-GIy-NH), поставляемый в ацетатной форме (молекулярная масса: 1371,6), из Bachem, Torrance, CA (Item H-4075 CGMP grade). Гель трипторелина (200 мкг/2 мл), партию 054023833-1, готовили в Chem Laboratories Ltd (Auckland, New Zealand) в геле, состоящем из 1,2% Methocel™ Premium A4000 (Dow Chemicals) в цитрате натрия, pH 5,5 с метил- и пропилпарабеном, NaCl, ЭДТА и L-метионином. Носитель препарата, партию 054006645-1, готовили в Chem Laboratories Ltd., он состоял из 1,2% Methocel™ Premium A4000 (Dow Chemicals) в цитрате натрия, pH 5,5 с NaCl и метил- и пропилпарабеном. Пятьдесят миллилитров геля трипторелина (200 мкг ацетата трипторелина/мл) или носителя препарата упаковывали во флаконы для сыворотки из боросиликатного стекла Amber на 50 мл (610206-50) с пробкой для флаконов Gray Butyl Pharmaceutical Serum (73828A-SS) со стандартным алюминиевым затвором (SAS20NAT). Эти тест-вещества хранили в холодильнике (приблизительно 5°C) и транспортировали в изолированных контейнерах с подходящими пакетами со льдом.
ПРИМЕР 3
ПРИМЕРНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
[0060] Примерные препараты для описанной в этой заявке композиции, показаны в таблицах 1 и 2.
<b>Таблица 1</b>
<b>Ингредиент</b>
<b>Функция</b>
<b>Масса</b><b>(% м/о)</b>
Метилпарабен, натриевая соль (USNF)
Антимикробный консервант
0,0900
Пропилпарабен, натриевая соль (USNF)
Антимикробный консервант
0,0100
Хлорид натрия, лабораторный реагент
Агент тоничности
0,910
Цитрат натрия, дигидрат
Буферирующий агент
0,186
L-метионин, лабораторный агент
Стабилизирующий агент
0,100
Лимонная кислота, безводная
Буфер
0,0700
Ацетат трипторелина
Активный фармацевтический ингредиент (API)
0,0100
Вода (USNF)
Растворяющий растворитель
98,4
Метилцеллюлоза (A4M Premium) (USP)
Загущающий агент
1,20
<b>Таблица 2</b>
<b>Компонент</b>
<b>Стандарт качества</b>
<b>Функция</b>
<b>Количество на 100 мг % м/м</b>
Ацетат трипторелина
Лабораторный
Лекарственное средство
11,0 мг0,011%*
Очищенная вода
USP
Растворитель
97,6 г97,54%*
Метилпарабен, соль натрия**
NF
Консервант
89,0 мг0,089%*
Пропилпарабен, соль натрия**
NF
Консервант
10,0 мг0,010%*
Хлорид натрия
USP
Агент тоничности
901 мг0,901%
L-метионин
USP
Стабилизирую-щий агент
99,0 мг0,099%
Цитрат натрия
USP
Буферирующий агент
184 мг0,184%
Лимонная кислота
USP
Буферирующий агент
69,0 мг0,069%*
Метилцеллюлоза
USP
Модификатор вязкости
1,1 г1,10%*
*Номинальное количество**Испытываемый со стандартом руководства
ПРИМЕР 4
НАБЛЮДЕНИЕ ТЕЧКИ
[0061] Свиней содержали в станках (клетках) для беременных свиней после отъема (день 0). Хряков содержали в отдельных помещениях и/или по меньшей мере на расстоянии 12 м и с подветренной стороны. Для определения наступления и продолжительности течки, свиней наблюдали в отношении течки ежедневно (1) от дня 3, пока не подтверждался конец течки, или (2) до дня 6, в зависимости от того, что наступало первым. Для выявления признаков течки, половозрелому хряку давали медленно гулять в аллее перед клетками этих свиноматок, подставляя каждую испытуемую свиноматку визуальным, слуховым и обонятельным сигналам от этого хряка в течение до 5 минут. В соответствии со стандартной практикой в коммерческих фермах, в то время, когда хряк находился вблизи передней стороны клетки свиньи, течка наблюдалась опытным лицом, применяющим нажатие на хребет в среднем отделе свиньи вместе с потиранием бока. Течка подтверждалась, когда свиноматка стояла неподвижно при давлении на хребет, беззвучно и с некоторым указанием на ушной рефлекс.
ПРИМЕР 5
ВВЕДЕНИЕ И ОСЕМЕНЕНИЕ
[0062] Трипторелин вводили при 96 часах (±2 часа) после отъема в виде единственной дозы 2 мл, помещаемой на приблизительно 1-2 см после шейки матки модифицированным катетером для искусственного осеменения. Отъем свиноматок имел место между 10 до полудня и полуднем в день (0). Тайминг этого осеменения для каждой группы свиноматок соответствовал таймингу, указанному в протоколе. Свиноматок, которые должны были осеменяться спустя 18 часов после введения трипторелина, обычно осеменяли между 6:00 до полудня (a.m.) и 8:00 до полудня (a.m.) на следующий день, свиноматок, которые должны были осеменяться спустя 24 часа после введения трипторелина, обычно осеменяли между полуднем и 2:00 после полудня (р.м.) на следующий день, и свиноматок, которые должны были осеменяться спустя 30 часов после введения трипторелина, обычно осеменяли между 6:00 после полудня (р.м.) и 8:00 после полудня (а.м.) на следующий день. Это единственное осеменение для каждой свиноматки выполняли так же, как это делалось обычно на ферме.
ПРИМЕР 6
ДЕТЕКТИРОВАНИЕ ОВУЛЯЦИИ И ТЕЧКИ
[0063] Всех свиней наблюдали в отношении овуляции посредством трансректальной ультразвукографии. Ультразвукографию выполняли при 24 часах (±1,5 ч) после обработки в день 5 и снова при 8:00 p.m. (±1,5 ч) в день 5. В день 6 трансректальную ультразвукографию выполняли при 4:00 a.m. (±1 ч), в полдень (±1 ч) и 8:00 p.m. (±1 ч), пока овуляция не завершалась или до 8:00 p.m. в день 6 (56 часовая маркировка от животных, обработанных при 96 часах после отъема), в зависимости от того, что наступало раньше. Для этой цели использовали ультразвуковое устройство Aloka 500, с 7,5 МГц линейным преобразователем, присоединенное к стабилизирующему PVC-стержню с фиксированным углом для облегчения вставления в прямую кишку. Этот преобразователь и PVC-стержень покрывали гинекологическим смазывающим веществом и осторожно вставляли в прямую кишку, пока не могли быть визуализированы яичники, по одному. При каждом сканировании нужно было зарегистрировать три наибольших фолликула (почти до 0,1 мм). Свиноматку считали имеющей овуляцию, когда количество больших фолликулов (≥6,5) падало до менее 3.
[0064] В день 5 после отъема средний размер наибольшего фолликула был равен 7,3 мм, и на него не влияла обработка. Проявление течки в пределах 7 дней после отъема составляло в среднем 79% и не изменялось значимо среди обработок. Обработка не влияла на интервал от отъема до течки (в среднем 112 часов).
[0065] Обработка не влияла значимо на процент свиноматок, которые овулировали, при 24 часах, 32 часах или 40 часах после обработки (см. таблицу 3 и фигуру 1). Однако, процент свиноматок, овулирующих при 48 часах после обработки, увеличивался (p=0,0054) во всех обработанных трипторелином группах [74,0% (AI при 18 часах), 77,0% (AI при 24 часах) и 76,8% (AI при 30 часах)] в сравнении с обработанными носителем свиноматками (42,6%). Обработка не влияла на процент свиноматок, овулирующих при 56 часах после обработки (p=0,10), однако свиноматки, обработанные трипторелином, имели более высокий процент овулирующих свиноматок (среднее 80,4%), чем свиноматки, обработанные носителем (58,3%). Хотя средний интервал от отъема до овуляции не различался между обработанными трипторелином и обработанными носителем животными, наблюдали более высокую синхронность овуляции в обработанных трипторелином свиноматках с 70-77% свиноматок, овулирующих во время их наиболее синхронного 24-часового периода (120-144 часа после отъема) в сравнении с обработанными носителем свиноматками, с только 39,9% свиноматок, овулирующих во время их наиболее синхронного периода (128-156 часов после отъема).
ПРИМЕР 7
КОЭФФИЦИЕНТ БЕРЕМЕННОСТИ И РАЗМЕР ПОМЕТА
[0066] Коэффициенты беременности, рассчитанные как процент животных, предназначенных для каждой группы обработки, которые были беременными при забое, были в среднем равны 66,6% и не изменялись значимо среди групп обработок, хотя беременность была численно наивысшей в обработанных трипторелином свиноматках, осемененных при 18 часах после обработки (74,4%), затем следовали обработанные трипторелином свиноматки, осемененные при 24 часах после обработки (68,1%), обработанные трипторелином свиноматки, осемененные при 30 часах после обработки (62,3%), и обработанные плацебо свиноматки, осемененные при 24 часах после обработки (61,8%). Наблюдалась тенденция (p=0,09) наличия для обработанных трипторелином свиноматок, осемененных при 18 часах (12,4 фетусов) и при 24 часах (11,8 фетусов) после обработки, более высокого количества здоровых фетусов, чем в случае обработанных трипторелином свиноматок, осемененных при 30 часах (8,6) после обработки, и в случае обработанных носителем свиноматок, осемененных при 24 часах (8,6) после обработки. Масса здоровых фетусов не различалась значимо среди этих групп обработки.
ПРИМЕР 8
ИССЛЕДОВАНИЕ 1 (UNITED FEEDS RESEARCH FARM)
[0067] Исследование в трех повторностях выполняли в исследовательской ферме с 800 свиноматками. Все повторности включали в себя данные течки и овуляции и две повторности включали в себя результаты AI, беременности и помета. При отъеме, смешанные паритетные (равноценные) свиноматки (n=32 на 1 обработку) получали либо носитель при 96 ч после отъема и единственное AI (искусственное осеменение) спустя 24 ч (Плацебо), тест-вещество OVUGEL™ при 96 ч после отъема и единственное AI спустя 18 ч (OG18), OVUGEL™ при 96 ч после отъема и единственное AI спустя 24 ч (OG24), либо OVUGEL™ при 96 ч после отъема и единственное AI спустя 30 ч (OG30). OVUGEL™ вводили при ~2 см после шейки матки с использованием депонирующего катетера. Детектирование течки выполняли один раз в день со дня 3 после отъема до дня 7. Ультразвуковое исследование выполняли каждые 8 часов в дни 5-6. В день 30 беременности свиноматок забивали и исследовали репродуктивные тракты.
[0068] Не было действий обработки на свиноматках, проявляющих течку в пределах 7 дней отъема (79%) или в интервале между отъемом и течкой (4,7 дней). Процент свиноматок, которые овулировали при 48 ч после обработки, был более высоким (Р=0,005) в OG18, OG24 и OG30, чем в обработке Плацебо (таблица 4). Интервал от AI до овуляции был различным среди групп обработки (P<0,001, таблица 4) и заканчивался наиболее далеко от овуляции для OG18, был промежуточным для Плацебо и OG24 и заканчивался наиболее близко для OG30. Обработка не влияла на коэффициенты беременности (P=0,60, таблица 4), но интервал от AI до овуляции влиял на коэффициенты беременности (P=0,02). Не было значимого действия обработки (P=0,003) на количество здоровых фетусов в день 30, с большим количеством фетусов в OG18 и OG24 в сравнении с обработками OG30 и Плацебо (таблица 4). Не было действия обработки на количество CL (P=0,30), но была тенденция (P=0,09) в отношении действия на выживание зародышей (таблица 4).
[0069] Результаты показывают, что OVUGEL™ эффективно синхронизировал овуляцию без влияния на коэффициент беременности и что размер помета в день 30 беременности был большим после единственного введения AI при 18 или 24 часах после OVUGEL™ в сравнении с AI при 30 ч после OVUGEL™ или в сравнении с единственными осеменениями после обработки Плацебо.
ПРИМЕР 9
ИССЛЕДОВАНИЕ 2 - ИССЛЕДОВАНИЕ В BACHE FARM
[0070] Свиноматок подвергали отъему (день 0) и подвергали скринингу на внесение в это исследование, регистрировали состояние тела и приписывали к группе обработки. Опоросившиеся свиноматки из паритета 1-10, объединяли в блок по длине лактации, паритета (равноценности) и балльной оценке состояния тела. Не использовали свиноматок с балльной оценкой состояния тела ниже 2,5 или выше 3,5. Используемыми генотипами были генотипы, обычно используемые в торговле в США и Канаде. Группы обработки держали в стойлах в зонах, удаленных друг от друга, так что свиноматки, спариваемые позднее в один и тот же день, не получали множественных возможностей встреч с хряком. Свиноматка каждой обработки получала единственную дозу композиции трипторелина (OVUGEL™) в день 4 после отъема. Контрольные свиноматки не обрабатывались.
[0071] Детектирование течки выполняли в день 4 и продолжали выполнять один раз в день до 4 дней после обработки (день 8), или пока свиноматки не прекращали обнаруживать течку. Контрольных (необработанных) свиноматок осеменяли при интервалах после детектирования течки, как это обычно практикуется на этой ферме. Обработанных OVUGEL™ свиноматок осеменяли единственным осеменением при 15 часах (6:00 am +/- 0,5 ч), 18 часах (9:00 am +/- 0,5 ч), 21 часе (12:00 pm +/- 0,5 ч), 24 часах (3:00 pm +/- 0,5 ч) и 27 часах (6:00 pm +/- 0,5 ч) после обработки.
[0072] Детектирование течки выполняли один раз в день между днями 18-24 после осеменения для определения, произошла ли у свиноматок смена цикла. Свиноматок, которые имели повторную течку, регистрировали и затем повторно спаривали после обычного для ферм SOP (эти животные выводились из исследования, но подвергались периоду отмены обработки). Трансабдоминальный ультразвук (один раз) для подтверждения беременности в свиноматках, которые не имели повторной течки, выполняли спустя 28-32 дня после осеменения. Период отмены подтверждали при 51 дне после обработки. Регистрировали дату опороса, количество живых родившихся свиней и количество мертворожденных свиней в пределах 24 часов после рождения. Поросят выкармливали в соответствии с обычным протоколом фермы.
[0073] По меньшей мере 90 свиноматок приписывали к каждой из следующих групп. Контроли были необработанными. Всем другим свиноматкам давали OVUGEL™, содержащий 200 мкг трипторелина, в виде ацетата.
1) Контроли: Необработанные и осемененные с интервалами после детектирования течки, как это обычно практикуется в каждом местонахождении;
2) Трипторелин: Осемененные один раз при 15 ч (±0,5 ч) после обработки трипторелином;
3) Трипторелин: Осемененные один раз при 18 ч (±0,5 ч) после обработки трипторелином;
4) Трипторелин: Осемененные один раз при 21 ч (±0,5 ч) после обработки трипторелином;
5) Трипторелин: Осемененные один раз при 24 ч (±0,5 ч) после обработки трипторелином;
6) Трипторелин: Осемененные один раз при 27 ч (±0,5 ч) после обработки трипторелином.
ПРИМЕР 10
СТАБИЛЬНОСТЬ ГОРМОНА
[0074] Фигура 2 показывает стабильность трипторелина (250 мкг на мл). Действие рН анализировали при 0-4°C, 30°C и 50°C (буфер Mcllvaine). Фигура 2 показывает диапазон оптимальных рН приблизительно 5 - приблизительно 6 для стабильности гормона.
ПРИМЕР 11
АНАЛИЗ СТАБИЛЬНОСТИ
[0075] Стабильность препаратов, содержащих различные стабилизаторы, исследовали при 3-месячной временной точке. Данные, суммированные в таблице 6, показывают, что L-метионин обеспечивал наиболее стабильный препарат.
<b>Таблица 6</b>
Суммирование стабильности препаратов, содержащих стабилизаторы
Стабилизатор
Препарат
Условие (°С)
%Заявлен-ноесодержание
% ТА (в виде площади пика)
Общеезначение для соответствующихвеществ(каждое>0,15%
Ничего (Контроль)
11
25
94%
95%
2,6%
50
43%
71%
28,8%
ЭДТА 0,02%
2-8
98%
98%
0,5%
25
94%
97%
1,6%
50
78%
89%
10,7%
L-метионин (0,1%)
2-8
102%
99%
Нет >3%
25
99%
98%
0,7%
50
87%
90%
9,3%
ЭДТА/L-метионин (0,02/0,1%)
2-8
101%
98%
0,7%
25
98%
98%
0,7%
40
91%
94%
4,7%
50
79%
90%
8,9%
Маннит (3%)
2-8
96%
98%
0,7%
40
89%
94%
5,5%
50
78%
87%
11,0%
ЭДТА/L-метионин/D-маннит/Р-80 (0,02/0,1/3%)
2-8
98%
99%
0,4%
40
88%
94%
5,0%
50
76%
88%
11,4%
ЭДТА/L-метионин/D-маннит/Р-80 (0,02/0,1/3/0,1%)
2-8
95%
98%
0,3%
40
86%
95%
4,4%
50
73%
88%
10,9%
Где Р-80 означает полисорбат 80
ПРИМЕР 12
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОМПОЗИЦИЙ ГОРМОНОВ
[0076] В одном способе варианта приготовления, этот гормон растворяют в сосуде, содержащем лимонную кислоту и воду, но отделенные от других ингредиентов. Затем добавляют другие ингредиенты к этой композиции гормона и добавляют воду перед добавлением метилцеллюлозной композиции. Метилцеллюлозную композицию добавляют медленно при смешивании с высоким срезающим усилием для гарантии гомогенности этой композиции и во избежание образования комков.
ПРИМЕР 13
СИНХРОНИЗИРОВАННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ ПОСЛЕ ВНУТРИВЛАГАЛИЩНОЙ ОБРАБОТКИ АГОНИСТОМ GNRH В ОПОРОСИВШИХСЯ СВИНОМАТКАХ
[0077] Это исследование показывает действие единственного фиксированного синхронизированного осеменения после введения GnRH на последующие степень опороса и размер помета в сравнении с контрольными свиноматками, осеменяемыми при наступлении течки и один раз в течение продолжительности течки (таблицы 7 и 8). Сто девяносто девять подвергнутых отъему свиноматок (PIC) объединяли в блок по паритету (равноценности) (паритеты 1-6; средний паритет 2,9), предыдущей продолжительности лактации (диапазон 13 дней - 23 дня; средняя продолжительность 19 дней) и балльной оценке состояния тела (диапазон 2,0-4,0, средний балл 3,1) и относили к одной из двух обработок. Контрольных свиноматок наблюдали в отношении бихевиористической течки в течение 7 дней после отъема и осеменяли в день, когда их наблюдали в течке, и при 24-часовых интервалах в течение продолжительности течки. Свиноматкам в группе обработки GnRH (GnRH-свиноматкам) вводили внутривлагалищно препарат агониста GnRH (OvuGel™), описанный в примерах 2 и 3, утром в день четыре отъема и осеменяли один раз при 21-22 часах после обработки OvuGel™. GnRH-свиноматок также наблюдали в течение 7 дней после отъема в отношении признаков бихевиористической течки, но осеменяли независимо от признаков установленной течки.
[0078] Из 99 контрольных свиноматок, 90,9% (90) осеменялись при 7 днях после отъема в сравнении с 100% (100) GnRH-свиноматок (P<0,01). Контрольные свиноматки имели в среднем 2,1 осеменений на свиноматку, тогда как GnRH-свиноматки, все, имели 1 осеменение на 1 свиноматку. (P<0,01). Не было различий (P>0,75) в количестве поросившихся свиноматок между контрольными и GnRH-свиноматками, 79,2% (79 свиноматок) и 80,7% (81 свиноматка), соответственно. Не было действия на количество мертворожденных (P>0,45) и мумифицированных фетусов (P>0,15). GnRH-свиноматки поросились со средней величиной 11,2 рожденных живыми поросят в сравнении с 11,4 рожденными живыми поросятами для контрольных свиноматок (P>0,65). Количество поросят, рожденных на 1 дозу спермы, было 5,2 против 9,6 (P<0,01) для контрольных и GnRH-свиноматок, соответственно. Эти данные указывают на то, что обработка свиноматок OvuGel™ и осеменение один раз после обработки приводит к степеням опороса и размерам пометов, сравнимых со свиноматками, получающими множественные осеменения во время бихевиористической течки, и более высокое количество поросят, рожденных на дозу спермы для OvuGel™-обработанных животных.
<b>Таблица 7</b>
<b>Реакции на обработку и сравнения между контрольными и GnRH-свиноматками</b><sup>1</sup>
Контроль
GnRH
Количество распределенных свиноматок
99
100
Интервал от отъема до течки, д.
4,4
4,3
В течке при осеменении, %
100
90
Количество осемененных при 7 д. после отъема
90
100
Дозы спермы на осемененную свиноматку
2,1
1,0
Повторная течка при дне 21 осемененных свиноматок, %
6,7
8
Количество повторных течек при дне 21
6
8
Беременные при дне 30 из распределенных свиноматок
81,8
85
Количество беременных при дне 30
81
85
Количество опоросившихся свиноматок
79
81
Опоросившиеся свиноматки из распределенных свиноматок, %
79,8
81,0
Общее количество рожденных на помет
12,1
11,8
Общее количество на дозу спермы
5,3
9,6
Рожденные живыми на помет
11,4
11,2
Мертворожденные на помет
0,7
0,6
Коэффициент поросят (поросята, рожденные живыми/100 распределенных поросят
906
909
<sup>1</sup> GnRH-свиноматок обрабатывали между 99 и 192 часами после отъема и осеменяли между 21 и 22 часами после обработки. Контрольных свиноматок не обрабатывали и осеменяли обычно. Количества в этой таблице являются некорректированными средними величинами и необработанными цифрами.
Таблица 8
Реакции на обработку (LS-средние ± SEM) и сравнения между контрольными и GNRH-свиноматками<sup>1</sup>
Контроль
GnRH
SEM
Сравнение,Р<
Свиноматки, распределенные на обработки
99
100
*
*
Свиноматки, осемененные в 7-д. периоде после отъема
90
100
*
*
Свиноматки в течке при AI
100
90,0
2,28
0,005
Интервал отъем-течка (д)
4,4
4,3
0,06
0,33
Количество осемененных/свиноматка
2,1
1,0
0,02
0,0001
Беременные свиноматки из распределенных свиноматок
81,4
84,8
3,74
0,52
Количество опоросившихся свиноматок
79
81
*
*
Опоросившиеся свиноматки из распределенных свиноматок
79,2
80,7
3,94
0,78
Общее количество рожденных поросят/доза спермы
5,2
9,6
0,45
0,0001
Общее количество рожденных живыми поросят (все пометы)
901
910
*
*
Общее количество поросят на 1 помет
12,1
11,8
0,36
0,56
Поросята, рожденные живыми/помет
11,4
11,2
0,34
0,67
<sup>1</sup> Данные, собранные из 199 свиноматок (99 контрольных, 100 GnRH). Контрольных свиноматок осеменяли согласно обычному SOP фермы. GnRH-свиноматок обрабатывали в день 4 после отъема и осеменяли один раз спустя 21-22 часа. LS-средние рассчитывали с использованием процедуры PROC MIX SAS и предполагали модель с обработкой и когортой. Не было обработки посредством взаимодействия когорты для какого-либо из испытанных параметров.
ПРИМЕР 14
СИНХРОНИЗИРОВАННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ АГОНИСТА GNRH
В ПОДВЕРГНУТЫХ ОТЪЕМУ СВИНОМАТКАХ
[0079] Это исследование показывает действие единственного синхронизированного осеменения после введения GnRH на последующую степень опороса и размер помета (таблицы 9 и 10). Триста подвергнутых отъему свиноматок (PIC) объединяли в блок по паритету (равноценности) (паритеты 1-6; средний паритет 2,8), предыдущей продолжительности лактации (диапазон 17 дней - 25 дней; средняя продолжительность 21 день) и балльной оценке состояния тела (диапазон 2,5-3,5, средний балл 2,8) и относили к одной из двух обработок. Контрольных свиноматок наблюдали в отношении бихевиористической течки в течение 7 дней после отъема и осеменяли в день, когда их наблюдали в течке, и при 24-часовых интервалах в течение продолжительности течки. Свиноматок в группе обработки GnRH (GnRH-свиноматок) также наблюдали в течение 7 дней после отъема в отношении признаков бихевиористической течки, но обрабатывали внутривлагалищно препаратом агониста GnRH (OvuGel™), описанным в примерах 2 и 3, в день 4 после отъема и затем осеменяли один раз при 24±2 часа после обработки OvuGel™ независимо от того, обнаруживали они или не обнаруживали установленную течку. Из 150 контрольных свиноматок, 80,7% (121) осеменяли спустя 7 дней после отъема в сравнении с 100% (150) GnRH-свиноматок (P<0,01).
[0080] Контрольные свиноматки имели в среднем 2,3 осеменений на свиноматку, тогда как GnRH-свиноматки, все, имели 1 осеменение на 1 свиноматку. (P<0,01). Не было различий (P>0,40) в количестве поросившихся свиноматок между контрольными и GnRH-свиноматками, 72,7% (109 свиноматок) и 76,7% (115 свиноматок), соответственно. Не было действия обработки на количество мертворожденных (P>0,30) и мумифицированных фетусов (P>0,45). GnRH-свиноматки поросились со средней величиной 11,3 рожденных живыми поросят в сравнении с 10,94 рожденными живыми поросятами для контрольных свиноматок (P>0,37). Количество поросят, рожденных на 1 дозу спермы, было 5,6 против 9,6 (P<0,01) для контрольных и GnRH-свиноматок, соответственно. Эти данные указывают на то, что обработка свиноматок OvuGel™ и осеменение один раз относительно времени GnRH-обработки приводит к степеням опороса и размерам пометов, сравнимым со свиноматками, получающими множественные осеменения во время бихевиористической течки. Эти результаты также показывают, что более высокое количество поросят родится на дозу спермы для OvuGel™-обработанных животных.
<b>Таблица 9</b>
<b>Реакции на обработку и сравнения между контрольными и GnRH-свиноматками</b><sup>1</sup>
Контроль
GnRH
Количество распределенных свиноматок
150
150
Интервал от отъема до течки, д.
4,4
4,4
В течке при осеменении, %
100
84
Количество осемененных при 7 д. после отъема
121
150
Количество осемененных в дни 8-15 после объема
5
Дозы спермы на осемененную свиноматку
2,2
1,0
Повторная течка при дне 21 осемененных свиноматок, %
3,3
8,7
Количество повторных течек при дне 21
4
13
Беременные при дне 30 из распределенных свиноматок
74,0
80,0
Количество беременных при дне 30
111
120
Количество опоросившихся свиноматок
109
115
Опоросившиеся свиноматки из распределенных свиноматок, %
72,7
76,7
Общее количество рожденных на помет
12,2
12,6
Общее количество на дозу спермы
5,6
9,6
Рожденные живыми на помет
10,9
11,3
Мертворожденные на помет
1,0
0,9
Коэффициент поросят (поросята, рожденные живыми/100 распределенных поросят
794
867
<sup>1</sup> Свиноматок обрабатывали при 96 часах после отъема и осеменяли спустя 24±2 часа в день 5 после отъема (120-122 ч после отъема). Контрольных свиноматок не обрабатывали и осеменяли обычно. Количества в этой таблице являются некорректированными средними величинами и необработанными цифрами.
Таблица 10
Реакции на обработку (LS-средние ± SEM) и сравнения между контрольными и GNRH-свиноматками<sup>1</sup>
Контроль
GnRH
SEM
Сравнение,Р<
Свиноматки, распределенные на обработки
150
150
*
*
Свиноматки, осемененные в 7-д. периоде после отъема
121
150
*
*
Свиноматки в течке при AI (%)
100
84,0
2,34
0,0001
Интервал отъем-течка (д)
4,4
4,4
0,05
0,75
Количество осемененных/свиноматка
2,3
1,0
0,04
0,0001
Беременные свиноматки из распределенных свиноматок (%)
74,0
80,0
3,44
0,22
Количество опоросившихся свиноматок
109
115
*
*
Опоросившиеся свиноматки из распределенных свиноматок (%)
72,7
76,7
3,56
0,43
Общее количество рожденных поросят/доза спермы
5,6
9,6
0,43
0,0001
Общее количество рожденных живыми поросят (все пометы)
1191
1300
*
*
Общее количество поросят на 1 помет
12,2
12,6
0,31
0,41
Поросята, рожденные живыми/помет
10,9
11,3
0,29
0,37
<sup>1</sup> Данные, собранные из 300 свиноматок (150 контрольных, 150 GnRH). Контрольных свиноматок осеменяли согласно обычному SOP фермы. GnRH-свиноматок обрабатывали в день 4 после отъема и осеменяли один раз спустя 24±2 часа. LS-средние рассчитывали с использованием процедуры PROC MIX SAS и предполагали модель с обработкой и когортой. Не было обработки посредством взаимодействия когорты для какого-либо из испытанных параметров.
ПРИМЕР 15
СТАТИСТИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ
[0081] Эти данные анализировали с использованием процедур Proc MIXED и General linear models SAS (Cary, NC) для непрерывных и дискретных переменных. Для всех анализов, эти модели содержали фиксированные действия обработки (контроли плацебо, осемененные спустя 24 часа после обработки, обработанные трипторелином свиноматки, осемененные спустя 18 часов после обработки, обработанные трипторелином свиноматки, осемененные спустя 24 часа после обработки, и обработанные трипторелином свиноматки, осемененные спустя 30 часов после обработки), и репликат. Протоколы в отношении паритета (равноценности) свиней и продолжительности лактации включали в виде ковариат. Взаимодействие первого порядка и репликат тестировали и удаляли, когда они были незначимыми. Различия между обработками тестировали на оценках способа наименьших квадратов с использованием Т-критерия при P<0,05.