СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ

1. Способ выделения и/или очистки рекомбинантно экспрессированного внутриклеточного белка, содержащего последовательность аннексина A5 (AnxA5), из клетки-хозяина, продуцирующей эндотоксин, с клеточной стенкой, при этом указанный способ включает высвобождение внутриклеточного белка из клетки-хозяина
и характеризуется тем, что указанный этап высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 проводят в присутствии буфера для гомогенизации, содержащего неионный детергент, и
предпочтительно при этом способ не включает в себя этапы центрифугирования для выделения и/или очистки белка AnxA5 после его высвобождения из клетки-хозяина и/или в котором белок AnxA5 остается в растворе на всех этапах способа, за исключением случаев, когда он временно связывается с какими-либо хроматографическими смолами.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что неионным детергентом является полисорбат, предпочтительно полисорбат, выбранный из Твин 20 и Твин 80, наиболее предпочтительно - Твин 80.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что этап высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 проводят в присутствии буфера для гомогенизации, содержащего количество неионного детергента, которое является эффективным для уменьшения или предотвращения связывания аннексина A5 с эндотоксином.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что этап высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 проводят в присутствии буфера для гомогенизации, содержащего от 0,01 до 10% (мас./мас.) неионного детергента, например, от 0,02 до 5% (мас./мас.), от 0,05 до 2% (мас./мас.) или около 1% мас./мас.) неионного детергента.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов для выделения и/или очистки рекомбинантно экспрессированного внутриклеточного белка, содержащего последовательность аннексина A5 (AnxA5), из клетки-хозяина с клеточной стенкой, при этом указанный способ включает высвобождение внутриклеточного белка AnxA5 из клетки-хозяина,
при этом концентрация свободных ионов кальция в буфере для гомогенизации при высвобождении внутриклеточного белка AnxA5 из клетки-хозяина или после высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 из клетки-хозяина, но до любой последующей хроматографической очистки, составляет ниже 10 мМ, предпочтительно ниже 5 мМ, 1 мМ, более предпочтительно ниже 500 мкM или, по существу, ноль и/или
при этом буфер для гомогенизации содержит хелатор ионов металлического кальция или модифицирован после высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 с целью его включения.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что хелатор ионов металлического кальция выбирают из ЭДТА или ее соли, ЭГТА или ее соли, но наиболее предпочтительно ЭДТА.
7. Способ по п. 5 или 6, отличающийся тем, что уровень свободных ионов кальция и/или количество хелатора ионов металлического кальция является эффективным для уменьшения или предотвращения связывания аннексина А5 с компонентами клеточной стенки клетки-хозяина.
8. Способ по любому из пп. 5-7, отличающийся тем, что буфер для гомогенизации содержит, или модифицирован (до или после высвобождения белка AnxA5) таким образом, что содержит, от 0,01 до 500 мМ, например, от 0,05 до 100 мМ, от 0,5 до 20 мМ, от 1 до 15 мМ, от 2 до 10 мМ или около 4 мМ хелатора ионов металлического кальция, и предпочтительно, при этом хелатор ионов металлического кальция представляет собой ЭДТА.
9. Способ по пп. 5, 6, 7 или 8, отличающийся тем, что буфер для гомогенизации содержит неионный детергент согласно способу по любому из пп. 2, 3 или 4.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что хелатор ионов металлического кальция представляет собой ЭДТА.
11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что неионный детергент представляет собой Твин 80.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ включает выделение и/или очистку рекомбинантно экспрессируемого внутриклеточного белка AnxA5 из культуры клеток-хозяев и при этом культура имеет объем по меньшей мере 100 л, 500 л, 1000 л, 5000 л, или 10 000 л.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, включающий этап смешивания биомассы из культуры клеток-хозяев в буфере для гомогенизации в концентрации около 10 г биомассы на мл буфера для гомогенизации.
14. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный этап высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 из клетки-хозяина в буфере для гомогенизации включает лизирование, разрушение или другое гомогенизирующее, ультразвуковое воздействие или воздействие давлением на клетку-хозяина, в результате чего клеточная стенка и барьер клеточной мембраны клетки-хозяина разрушаются и, как следствие, высвобождается внутриклеточный белок AnxA5 и, необязательно, при этом указанный этап не включает воздействия осмотическим шоком и/или этапа замораживания/оттаивания.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что этап высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 из клетки-хозяина включает гомогенизацию под высоким давлением, например, один или большее количество циклов гомогенизации под высоким давлением в диапазоне от около 400 бар до около 2500 бар, предпочтительно три цикла гомогенизации около 600 бар или два цикла гомогенизации около 800 бар.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что в результате этапа высвобождения внутриклеточного белка AnxA5 можно получить гомогенат биомассы, содержащий высвобожденный белок AnxA5.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что гомогенат биомассы дополнительно содержит одну или большее количество (как правило, все) примесей, выбранных из группы, состоящей из белков клетки-хозяина, компонентов клеточной стенки клетки-хозяина, мембраны клетки-хозяина, нуклеиновой кислоты клетки-хозяина и эндотоксина.
18. Способ по п. 16 или 17, дополнительно включающий этап осветления гомогената биомассы, в результате чего получают осветленный продукт, содержащий высвобожденный белок AnxA5.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что этап осветления гомогената биомассы включает обработку гомогената нуклеазой, такой как нуклеаза А, предпочтительно нуклеазой А из Serratia marescens, и. необязательно, при этом нуклеаза включена в буфер для гомогенизации до высвобождения внутриклеточного белка AnxA5.
20. Способ по п. 18 или 19, отличающийся тем, что этап осветления гомогената биомассы включает (предпочтительно после обработки нуклеазой по п. 18 или 19) этап пропускания гомогената биомассы, содержащего высвобожденный белок AnxA5, через фильтр (такой как целлюлозный или полипропиленовый фильтр, предпочтительно, в при этом фильтр представляет собой глубинный фильтр и/или предпочтительно, при этом фильтр имеет граничный размер пор менее 4 мкм), и в при этом фильтрат представляет собой осветленный продукт, содержащий освобожденный белок AnxA5.
21. Способ по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающий этап подвергания высвобожденного белка AnxA5 воздействию анионообменной смолы с целью осуществления первого анионообменного этапа, и получения посредством этого продукта первого анионообмена, который содержит высвобожденный белок AnxA5.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что осветленный продукт, содержащий высвобожденный белок AnxA5, полученный по способу по п. 20, подвергают первому анионообменному этапу, в результате чего получают продукт первого анионообмена, который содержит высвобожденный белок AnxA5.
23. Способ по п. 21 или 22, отличающийся тем, что перед первым анионообменным этапом корректируют один или большее количество параметров среды высвобожденного белка AnxA5, выбранных из группы, состоящей из рН, проводимости, уровня хелатора ионов кальция и уровня неионного детергента.
24. Способ по любому из пп. 21-23, отличающийся тем, что высвобожденный белок AnxA5, который подвергают анионообменному этапу, приготовляют при рН около 6,9, проводимости около 2,8 мСм/см, концентрации хелатора ионов кальция около 1 мМ и разбавляют с применением неионного детергента, например, с целью получения конечной концентрацию неионного детергента от 0,01 до 1% (мас./об.), более предпочтительно около 0,1% (мас./об.).
25. Способ по любому из пп. 21-24, отличающийся тем, что белок AnxA5 связывается во время анионообменного этапа, и продукт первого анионообмена, который содержит высвобожденный белок AnxA5, получают путем нанесения промывочного раствора и/или буфера для элюирования на анионообменную смолу для высвобождения связанного белка AnxA5, при этом буфер для элюирования необязательно содержит NaCl, например, около 300 мМ NaCl.
26. Способ выделения и/или очистки белка, содержащего последовательность аннексина А5 (AnxA5), из раствора, содержащего белок AnxA5 и одну или большее количество примесей, при этом способ включает
подвергание раствора, содержащего белок AnxA5 и одну или большее количество примесей, воздействию анионообменной смолы с целью осуществления первого анионообменного этапа, и получение таким образом продукта первого анионообмена, который содержит высвобожденный белок AnxA5; а также
подвергание продукта первого анионообмена, прямо или опосредованно, этапу аффинной хроматографии, и получение таким образом продукта первой аффинной хроматографии, который содержит высвобожденный белок AnxA5; а также
предпочтительно, при этом белок AnxA5 остается в растворе на всех этапах осуществления способа, включая любые предыдущие или последующие этапы, за исключением случаев, когда он временно связывается с какими-либо хроматографическими смолами.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что этап аффинной хроматографии включает связывание белка AnxA5 с иммобилизованным гепарином и при этом связывание стимулируют добавлением ионов кальция.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что белок AnxA5 элюируют из иммобилизованного гепарина с помощью буфера для элюирования, содержащего хелатор ионов кальция, такой как ЭДТА.
29. Способ выделения и/или очистки белка, содержащего последовательность аннексина А5 (AnxA5), из раствора, содержащего белок AnxA5 и одну или большее количество примесей, при этом способ включает
подвергание раствора, содержащего белок AnxA5 и одну или большее количество примесей, этапу аффинной хроматографии с гепарином в присутствии Твин 80 (предпочтительно в присутствии 0,1% Твин 80), в результате чего получают продукт первой аффинной хроматографии, который содержит высвобожденный белок AnxA5; и,
предпочтительно, при этом белок AnxA5 остается в растворе на всех этапах осуществления способа, включая любые предыдущие или последующие этапы, за исключением случаев, когда он временно связывается с какими-либо хроматографическими смолами.
30. Способ по любому из пп. 1-25, дополнительно включающий этап подвергания высвобожденного белка AnxA5 этапу аффинной хроматографии, в результате чего получают продукт первой аффинной хроматографии, который содержит высвобожденный белок AnxA5.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что белок AnxA5 в продукте первого анионообмена, полученный по любому из пп. 21-25, подвергают этапу аффинной хроматографии.
32. Способ по п. 31, включающий этапы, в которых:
(а) гомогенат биомассы, содержащий высвобожденный белок AnxA5 по п. 16 или 17, осветляют согласно любому из пп. 18, 19 или 20, в результате чего получают осветленный продукт, содержащий высвобожденный белок AnxA5, а также
(b) белок AnxA5 в осветленном продукте подвергают воздействию анионообменной смолы с целью осуществления первого анионообменного этапа, согласно любому из пп. 21-25, и таким образом получают продукт первого анионообмена, который содержит белок AnxA5; и
(c) при этом белок AnxA5 в продукте первого анионообмена подвергают этапу аффинной хроматографии согласно п. 30 или 31.
33. Способ по любому из пп. 30-32, отличающийся тем, что этап аффинной хроматографии включает связывание белка AnxA5 с иммобилизованным гепарином и при этом связывание необязательно стимулируют добавлением ионов кальция.
34. Способ по п. 33, отличающийся тем, что белок AnxA5 элюируют из иммобилизованного гепарина с помощью буфера для элюирования, содержащего хелатор ионов кальция, такой как ЭДТА.
35. Способ по любому из пп. 30-34, отличающийся тем, что продукт первой аффинной хроматографии содержит высвобожденный белок AnxA5 и хелатор ионов кальция, такой как ЭДТА или ЭГТА, необязательно в диапазоне от 0,1 до 500 мМ, более предпочтительно около 10 мМ.
36. Способ выделения и/или очистки белка, содержащего последовательность аннексина А5 (AnxA5), из композиции, которая содержит белок AnxA5 и хелатор ионов металлического кальция,
характеризующийся тем, что способ включает подвергание композиции воздействию анионообменной смолы для проведения анионообменного этапа и, таким образом, выделение и/или очистку белка AnxA5 из композиции и
дополнительно характеризуется тем, что анионообменный этап проводят в присутствии дополнительных выбранных ионов металлов,
при этом дополнительные выбранные ионы металлов выбраны так, что хелатор ионов металлического кальция имеет аффинность связывания для выбранных ионов металлов выше, чем аффинность связывания для анионообменной смолы, но ниже, чем его аффинность связывания для ионов кальция, и,
предпочтительно, при этом белок AnxA5 остается в растворе на всех этапах осуществления способа, включая любые предыдущие или последующие этапы, за исключением случаев, когда он временно связывается с какими-либо хроматографическими смолами.
37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что хелатор ионов металлического кальция выбирают из ЭДТА или ее соли, ЭГТА или ее соли, но наиболее предпочтительно ЭДТА.
38. Способ по п. 36 или 37, отличающийся тем, что хелатор ионов металлического кальция присутствует в композиции в избытке и/или в концентрации около 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ, 5 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ или более.
2+
39. Способ по любому из пп. 36-38, отличающийся тем, что выбранными ионами металлов являются двухвалентные катионы, такие как ионы Mg
40. Способ по любому из пп. 36-39, отличающийся тем, что выбранные ионы металлов присутствуют на анионообменном этапе в количестве, эффективном для уменьшения или предотвращения взаимодействия между хелатором ионов кальция и анионообменной смолой во время процесса подвергания композиции воздействию анионообменной смолы.
41. Способ по любому из пп. 36-40, отличающийся тем, что выбранные ионы металлов присутствуют на анионообменном этапе в количестве, эффективном для увеличения связывания белка AnxA5 с анионообменной смолой в присутствии хелатора ионов кальция и тем самым уменьшения потери белка AnxA5 в фильтрате анионообменного этапа по сравнению с уровнем потерь, наблюдаемых в тех случаях, когда на анионообменном этапе не применяют выбранных ионов металлов.
42. Способ по любому из пп. 36-41, отличающийся тем, что выбранные ионы металлов присутствуют на анионообменном этапе (например, путем добавления к композиции, содержащей белок AnxA5 и хелатор ионов кальциевого металла, перед подверганием композиции воздействию анионообменной смолы) в концентрации от около 1 до около 100 мМ, например, от около 2 до около 50 мМ, от около 5 до около 25 мМ, от около 10 до около 15 мМ или около 12,5 мМ.
2+
2+
43. Способ по любому из пп. 36-42, отличающийся тем, что хелатором ионов металлического кальция является ЭДТА, а выбранными ионами металла являются ионы Mgи, предпочтительно, молярное отношение ионов Mg к ЭДТА находится в диапазоне от 0,5:1 до 2:1, наиболее предпочтительно по меньшей мере 1:1 или выше.
44. Способ по любому из пп. 36-43, отличающийся тем, что
композиция, которая содержит белок AnxA5 и хелатор ионов металлического кальция и которая подвергается воздействию анионообменной смолы, представляет собой
прямой или опосредованный продукта предшествующего процесса, который включает этап подвергания белка AnxA5 этапу аффинной хроматографии и элюирование белка AnxA5 с помощью хелатора ионов кальция, в результате чего получают продукт аффинной хроматографии, который представляет собой композицию, содержащую белок AnxA5 и хелатор ионов металлического кальция.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что предшествующий этап аффинной хроматографии включает связывание белка AnxA5 с иммобилизованным гепарином и при этом связывание необязательно стимулируют добавлением ионов кальция.
46. Способ по п. 45, отличающийся тем, что белок AnxA5 элюируют из иммобилизованного гепарина с помощью буфера для элюирования, содержащего хелатор ионов кальция, такой как ЭДТА и ЭГТА.
47. Способ по любому из пп. 44-46, отличающийся тем, что между предшествующим этапом аффинной хроматографии и анионообменным этапом не осуществляют этап диализа и/или не осуществляют удаление хелатора ионов кальция из продукта предшествующего этапа аффинной хроматографии перед применением прямого или опосредованного продукта на анионообменном этапе.
48. Способ по любому из пп. 36-47, отличающийся тем, что выбранные ионы металлов добавляют к композиции до или во время анионообменного этапа.
49. Способ по любому из пп. 1-35, отличающийся тем, что указанный способ включает анионообменный этап по любому из пп. 36-48.
50. Способ выделения и/или очистки рекомбинантно экспрессированного внутриклеточного белка, содержащего последовательность аннексина A5 (AnxA5), из клетки-хозяина с клеточной стенкой или из культуры клетки-хозяина, как определено в п. 12, при этом:
(a) способ включает высвобождение внутриклеточного белка из клетки-хозяина в присутствии буфера для гомогенизации, содержащего неионный детергент согласно любому из пп. 1-4;
(b) при этом, необязательно, этап высвобождения осуществляют согласно любому из пп. 13-17;
(c) при этом, необязательно способ дополнительно включает этап осветления гомогената биомассы согласно любому из пп. 18-20; и
(d) при этом, способ дополнительно включает этап подвергания белка AnxA5, прямо или опосредованно, воздействию анионообменной смолы, необязательно в присутствии хелатора ионов кальция, для проведения первого анионообменного этапа, получения таким образом продукта первого анионообменного этапа, который содержит высвобожденный белок AnxA5 согласно любому из пп. 21-25; и
(e) при этом способ дополнительно включает этап подвергания белка AnxA5, прямо или опосредованно, этапу аффинной хроматографии согласно любому из пп. 26-35, а также
(f) при этом продуктом этапа аффинной хроматографии является композиция, которая содержит белок AnxA5 и хелатор ионов металлического кальция; и
(g) при этом прямой или опосредованный продукт этапа аффинной хроматографии, который содержит белок AnxA5 и хелатор ионов металлического кальция, подвергают анионообменному этапу согласно любому из пп. 36-49;
и при этом, предпочтительно, ни один из этапов (а) - (g) не включает или, в который не вмешиваются один или более этапов, выбранных из центрифугирования и/или диализа, и более предпочтительно, при этом белок AnxA5 остается растворимым, за исключением временного связывания с фазами анионообменной и аффинной хроматографии в ходе всего процесса.
51. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ включает, предпочтительно, в конце способа, как определено любым предшествующим пунктом, один или большее количество дополнительных этапов, выбранных из группы, состоящей из концентрирования, замены буфера, кондиционирования и фильтрации (например, стерилизующей фильтрации), и, необязательно, конечный этап хранения продукта, содержащего белок AnxA5, в стерильном контейнере.
52. Способ по п. 51, отличающийся тем, что одним из дополнительных этапов представляет собой диафильтрацию, при этом, необязательно, продукт этапа диафильтрации содержит белок AnxA5 в концентрации по меньшей мере около 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл, 20 мг/мл, 50 мг/мл, 100 мг/мл или выше.
53. Способ по п. 51 или 52, отличающийся тем, что для фильтрации применяют фильтр 0,45-0,2 мкм или фильтр 0,22 мкм, при этом фильтрация предпочтительно представляет собой этап стерилизующей фильтрации.
54. Способ по любому из пп. 51-53, отличающийся тем, что стерилизующая фильтрация представляет собой конечный этап очистки перед хранением продукта, содержащего белок AnxA5, в стерильном контейнере.
2
55. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ включает этапы, необходимые для получения конечного стерильного белкового продукта AnxA5 в бесфосфатном буфере (таком как Бис-Трис или Трис-буфер) при рН около 7,4, содержащем около 150 мМ NaCl, около 1 мМ CaCl, около 0,05% (мас./мас.) полисорбата (такого как Твин 80) или другого неионогенного детергента и, необязательно, при этом концентрация белка AnxA5 в конечном стерильном белковом продукте AnxA5 составляет около 10 мг/мл.
56. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что в результате указанного способа получают конечный стерильный белковый продукт AnxA5, при этом присутствующая концентрация NaCl поддерживает белок AnxA5 в форме, которая преимущественно является мономерной.
57. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ обеспечивает общий выход продукта более 1 г белка AnxA5 на 1 литр культуры клеток-хозяев, более предпочтительно, по меньшей мере около 1,5 г/л, еще более предпочтительно в диапазоне от около 2 до около 4 г/л.
58. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ обеспечивает получение общего количества белка AnxA5, составляющее около 24 мас.% белка AnxA5, присутствующего в культуре клеток-хозяев.
59. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что в результате указанного способа получают продукт, содержащий белок клетки-хозяина (отличающийся от рекомбинантно экспрессированного белка AnxA5) на уровне менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 нг или менее на мг белка AnxA5.
60. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ обеспечивает получение продукта, содержащего уровень эндотоксина менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 45, 40, 35, 30, 35, 20, 15 и предпочтительно менее 10, 5 или 1 ЕЭ на мг белка AnxA5 и/или предпочтительно, при этом указанный способ обеспечивает получение продукта в виде дозированной лекарственной формы, при этом продукт содержит менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 45, 40, 35, 30, 35, 20, 15 и предпочтительно менее 10, 5 или 1 ЕЭ на дозировку.
61. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ обеспечивает получение продукта, содержащего уровни нуклеиновой кислоты клетки-хозяина менее 1000 мкг на мг белка AnxA5, предпочтительно менее 100 мкг на мг белка AnxA5, более предпочтительно менее 10 мкг на мг белка AnxA5.
62. Композиция, содержащая белок AnxA5, при этом указанная композиция представляет собой прямой или опосредованный продукт (или указанную композицию получают в результате прямого или опосредованного) способа согласно любому из предшествующих пунктов.
63. Композиция по п. 62, отличающаяся тем, что указанная композиция представляет собой прямой или опосредованный продукт (или указанную композицию получают в результате прямого или опосредованного) способа по п. 50, или по п. 51, зависимого от п. 50.
64. Композиция по п. 62 или 63, которая содержит белок AnxA5 в концентрации по меньшей мере около 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл, 20 мг/мл, 50 мг/мл, 100 мг/мл или выше.
65. Композиция по любому из пп. 62-64, отличающаяся тем, что указанную композицию подвергают этапу стерилизующей фильтрации и/или указанная композиция представляет собой стерильную композицию.
66. Композиция по п. 65, которую хранят в стерильном контейнере.
2
67. Композиция по любому из пп. 62-66, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит стерильный белковый продукт AnxA5 в нефосфатном буфере (таком как Бис-Трис или Трис-буфер) при рН около 7,4, содержащем около 150 мМ NaCl, около 1 мМ CaCl, около 0,05% (мас./мас.) полисорбата (такого как Твин 80) или другого неионогенного детергента и, необязательно, при этом концентрация белка AnxA5 в конечном стерильном белковом продукте AnxA5 составляет около 10 мг/мл.
68. Композиция по любому из пп. 62-67, отличающаяся тем, что концентрация присутствующего NaCl поддерживает белок AnxA5 в форме, которая преимущественно является мономерной.
69. Композиция по любому из пп. 62-68, которая содержит белок не-AnxA5, такой как белок клетки-хозяина, на уровне менее 20 нг на мг белка AnxA5; при этом, необязательно, клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку, такую как грамположительная или грамотрицательная клетка, и, в частности, может быть бактериальной клеткой, продуцирующей эндотоксин, и при этом, необязательно, дополнительно белок клетки-хозяина содержится в композиции на обнаруживаемом уровне (хотя и менее 20 нг на мг белка AnxA5) .
70. Композиция по любому из пп. 62-69, которая содержит эндотоксин в количестве менее 100, 50, 20, 10, 5 или 1 ЕЭ на мг белка AnxA5 и, необязательно, при этом эндотоксин содержится в композиции на обнаруживаемом уровне (хотя и менее 100, 50, 20, 10, 5 или 1 ЕЭ на белок AnxA5).
71. Композиция по любому из пп. 62-70, которая представляет собой продукт в дозированной лекарственной форме и которая содержит эндотоксин в количестве менее 100, 50, 20, 10, 5 или 1 ЕЭ на стандартную дозу AnxA5 и, необязательно, при этом эндотоксин содержится в композиции на обнаруживаемом уровне (хотя и менее 100, 50, 20, 10, 5 или 1 ЕЭ на стандартную дозу).
72. Композиция по любому из пп. 62-71, которая содержит уровни нуклеиновой кислоты, например уровни нуклеиновой кислоты клетки-хозяина, менее 1000 пг , 100 пг или 10 пг на мг белка AnxA5; необязательно, при этом клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку, такую как грамположительная или грамотрицательная клетка, и, в частности, может быть бактериальной клеткой, продуцирующей эндотоксин, и при этом дополнительно, необязательно, нуклеиновая кислота клетки-хозяина содержится в композиции на обнаруживаемом уровне (хотя и менее 1000 пг, 100 пг или 10 пг на мг белка AnxA5).
73. Композиция по любому из пп. 62-72, отличающаяся тем, что уровень глюконоилированного белка AnxA5 в композиции находится в пределах от 0,5 до 30% или от 0,5 до 20% или от 0,5 до 15% или от 0,5 до 10% от общего содержания белка AnxA5 в продукте.
74. Композиция по любому из пп. 62-73, отличающаяся тем, что уровень глюконоилированного белка AnxA5 в композиции находится ниже 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1% и предпочтительно составляет по существу 0%.
75. Композиция по любому из пп. 62-74, отличающаяся тем, что белок AnxA5 не содержит His-тег и/или не содержит одного или большего количества мотивов RGD.
76. Композиция по любому из пп. 62-75, отличающаяся тем, что указанная композиция представляет собой фармацевтически приемлемую и/или ветеринарно приемлемую композицию.
77. Композиция по любому из пп. 62-76 для применения в медицине.
78. Способ лечения человека или животного, нуждающегося в этом, включающий введение композиции по любому из пп. 62 или 76.