Определение наличия простатоспецифического антигена на вещественных доказательствах с помощью тестов Seratec® PSA Semiquant и прибора seraquant

Таблица 1

Сравнительная оценка результатов исследования глюкозы, мочевины и креатинина в трупной крови, полученных при параллельном исследовании двумя методами

методом, составляла 3,4±0,8 ммоль/л , а на анализаторе

— 3,6±0,84 ммоль/л ; мочевины — 11,5±0,82 ммоль/л и 12,4±0,84 ммоль/л, креатинина — 259±17 мкмоль/л и 237±15 мкмоль/л, соответственно. Полученные различия статистически мало достоверны (Р>0,5). Коэффициенты вариации при определении концентрации исследуемых тестов общепринятыми методами и на биохимическом анализаторе равны: для глюкозы — 22,4 и 23,5, мочевины

— 7,1 и 6,8 , креатинина — 6,5 и 6,5 , соответственно.

Коэффициенты корреляции между уровнями концентраций, определенных параллельно двумя методами, близки к 1 и составляют: для глюкозы — 0,94, мочевины

— 0,93, креатинина — 0,81. Оценку результатов по индексу среднеквадратичного отклонения (15) производили по следующей шкале:

0 > 15 < 1 хорошо

1 > 15 > 2 удовлетворительно

15 > 2 неудовлетворительно,

чем ближе 15 к 0, тем больше сходимость полученных данных.

Наибольшая сходимость результатов в наших исследованиях получена при определении глюкозы — 0,24, затем мочевины — 1,15 и креатинина — 1,3, что является приемлемым для интерпретации полученных данных.

Таким образом установлено, что для судебно-биохимических исследований можно применять в равной мере как общепринятые современные лабораторные методы, так и методы с использованием автоматического биохимического анализатора. Однако работа на анализаторе более удобна, требует значительно меньшего рабочего времени на проведение анализа, дает широкие возможности внедрения новых методик, позволяет существенно снизить материальные затраты, достигнуть устойчивого контролируемого качества исследований и принципиально по-новому организовать архив.

Проведенный сравнительный анализ показал перспективность, экономическое и информативное преимущество использования автоматического биохимического анализатора в судебно-медицинской практике.

Тесты глюкоза мочевина креатинин

Количество определений 36 90 53

Методы Глюкозо оксидаз ный А -15 BioSistems с диацетил моноокси мом А -15 BioSistems по реакции Яффе А -15 BioSistems

Концентрация средняя арифметическая минимальная максимальная 3,4±0,8 мМоль/л 1.9 4.9 3,6±0,84 мМоль/л 1,9 5,2 11,5±0,82 мМоль/л 9,8 13,1 12,4±0,84 мМоль/л 10,7 14,1 253±17 мМоль/л 226 294 237±15 мМоль/л 207 268

Коэффициент вариации 22,4 23,5 7,1 6,8 6,5 6,5

Коэффициент корреляции 0,94 0,93 0,81

Индекс среднеквадратичного отклонения (18) 0,24 1,15 1,3

Оценка очень хорошо допустимо допустимо

© Н.Н. Михайлова, О.М. Зороастров, 2009 УДК 340.6

Н.Н. Михайлова, О.М. Зороастров ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ ПРОСТАТОСПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА НА ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ С ПОМОЩЬЮ ТЕСТОВ SERATEC PSA SEMIQUANT И ПРИБОРА SERAQUANT

Кафедра судебной медицины

ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия»

Из всех выделений человеческого организма чаще всего объектом судебно-медицинской экспертизы является сперма. Это можно объяснить, во-первых, относительной частотой уголовных и гражданских дел, в связи с которыми возникает необходимость производить подобные экспертизы, во-вторых, тем, что еще примерно с середины прошлого столетия эксперты располагают хорошо разработанными достоверными способами определения следов спермы как в жидком виде, так и в виде следов на вещественных доказательствах [1].

Самый распространенный метод выявления сперматозоидов - морфологический. Этот метод исследования семенных пятен давно известен судебным медикам. Он всегда импонировал абсолютной специфичностью, будучи основан на обнаружении сперматозоидов, т.е. таких элементов, которые присущи только сперме и имеют весьма характерный вид, позволяющий уверенно отличать их от других морфологических элементов. Однако у этого метода имеются свои недостатки. Под влиянием различных факторов морфологический состав спермы может существенно изменяться. При исследовании тампонов и мазков с содержимым влагалища на сперматозоиды может влиять микрофлора женских половых путей. Она

может либо частично разрушать сперматозоиды, отделяя хвост от комплекса голова-шейка, либо полностью их лизировать. Этим во многом и объясняется получение частых отрицательных результатов морфологического исследования сперматозоидов в мазках и тампонах с содержимым влагалища потерпевших. Сперматозоиды могут быть разрушены в следах спермы не только под действием микрофлоры влагалища, но и в результате воздействия на пятно различных внешних факторов. Кроме того, при некоторых патологических состояниях (олиго- и азооспермия) сперматозоиды или полностью отсутствуют в следах спермы, или содержатся в очень малом количестве, затрудняющем их морфологическое исследование. Сам по себе метод является трудоемким, требует профессионализма и длительного времени на приготовление и исследование мазков или отпечатков [1, 3].

При не выявлении сперматозоидов в пятне, подозрительном на сперму, необходимо провести исследование другими доказательными методами (серологический, электрофоретический). Серологический метод осуществляют с помощью антиспермальной сыворотки (АСС). С помощью АСС устанавливают наличие спермы в количестве не менее 2-3 мг методом преципитации в агаровом

геле. Электрофоретический метод не имеет решающего значения при судебно-медицинской экспертизе следов спермы. В этом направлении метод пока еще недостаточно разработан и к тому же получаемая электрофоретическая картина лабильна, слишком зависима от возрастных и патологических особенностей, чтобы позволить строить уверенные экспертные суждения [2].

В последнее время в практику лабораторных исследований широко внедряются другие способы:

- хроматографический метод основан на определении отдельных составных частей спермы (обычно холина и спермина).

Ферментный способ. В связи с тем, что в сперме содержатся различные ферменты, которые также имеются и в других биологических жидкостях пришлось искать ферменты, количество которых в сперме значительно превышало бы содержание их в других биологических объектах. Такими ферментами являются фосфатазы (в данном случае это кислая простатическая фосфатаза) [4].

Фитоагглютинационный метод. Метод основан на способности некоторых растительных экстрактов агглютинировать морфологические элементы, содержащиеся в биологических жидкостях.

Не всегда на вещественных доказательствах достаточное количество спермы для установления ее наличия методом концентрированного извлечения сперматозоидов. В ряде случаев (недостаточное количество семенной жидкости, аспермия или олигоспермия, пятна, подвергшиеся изменениям (гнилостным, под воздействием внешней среды, лизис сперматозоидов в прямой кишке)) приводят к тому, что визуально обнаружить сперматозоиды не

Рис. 1. Положительный результат исследования

представляется возможным [3]. В этом случае уместно использование тест-кассет SERATEC PSA SEMIQUANT. Проведение теста основано на выявлении простатоспецифического антигена.

ПСА общий (простатический специфический антиген общий, Prostate-specific antigen total, PSA total)- гликопротеин с молекулярной массой 33000-34000 дальтон и с большим содержанием глицина (10,4%) и глутаминовой кислоты (10,6%). ПСА впервые был идентифицирован в 1979 г.

Тест PSA SEMIQUANT - иммунохроматографический тест для судебно-медицинского анализа, определяющий простато-специфический антиген (ПСА) в пробном материале. О положительном результате тестирования позволяет говорить появление особой полосы результата, легко определяемой визуальным способом. Использование теста на практике не требует каких-либо подготовительных навыков. Тест может быть проведен непосредственно на месте преступления.

Минусы такого исследования:

- эффект дозы (High dose hook effect). Слишком высокая концентрация ПСА приводит к так называемому «эффекту высокой дозы» и, следовательно, к неверным результатам теста. Чтобы исключить подобный эффект, следует развести пробу.

- с течением времени, при отрицательном первоначальном результате, наравне с полосой контроля появляется полоса, свидетельствующая о положительном результате. Следовательно, мы наблюдаем противоречие между иллюстрацией и описанием результата.

Чтобы исключить этот минус исследования, в Германии при совместной разработке компаний Seratec GmbH (Гёттинген) и Micromata Objects GmbH (Кассель) был введен в эксплуатацию SeraQuant — прибор для количественного анализа мембранных тестов и документации результатов.

SeraQuant — прибор для количественного анализа иммунологических мембранных тест-кассет. Кассетные иммунотесты служат для качественного анализа пробы, показывая наличие или отсутствие искомого вещества в пробе с помощью цветных полос. Эти полосы обладают различной цветовой интенсивностью и насыщенностью в зависимости от концентрации искомого вещества в пробе. С помощью особого алгоритма SeraQuant анализирует интенсивность полос, что позволяет сделать вывод о значении концентрации исследуемого параметра. Кроме того, программное обеспечение прибора позволяет легко и наглядно документировать результаты измерений и дополнять их соответствующими дескриптивными данными. Сохранённые в базе данных программы результаты могут быть распечатаны, пересланы по сети или же использованы в других программах.

Принцип работы прибора SeraQuant: вычисление концентрации исследуемого вещества на основе анализа интенсивности образующихся полос.

В нашем отделение работа с этим прибором началась в 2007 году и продолжается до настоящего времени. За всё это время проведено 742 исследования для установления наличия PSA. До исследования иммунохроматографичес-ким методом все объекты были исследованы цитологически. В 90% случаев при цитологическом исследовании в препаратах сперматозоиды не были обнаружены, и лишь в 10 % сомнительных препаратах (были найдены образования похожие на сперматозоиды). При дальнейшей работе, с помощью тестов были получены следующие результаты:

- 365 положительных результатов.

- 377 отрицательных результатов.

Таким образом, в 51% случаев подтвердился первоначальный отрицательный результат. В свою очередь, в 49% случаев в препаратах, в которых были не найдены сперматозоиды, выявлен простатоспецифический антиген, что указывает на присутствие спермы.

Таким образом, полученные нами результаты исследований показывают, что 8егаОиаП существенно расширяет и дополняет профессиональную работу с экспресс-тестами, обладая при этом следующими преимуществами: субъективная оценка качественного результата экспресс-теста (наличие или отсутствие полосы) дополняется объективным количественным результатом (значением концентрации вещества); воспроизводимость результата, полученного с помощью 8ега0иаЩ;

8егаОиаП упрощает принятие дальнейшего решения на основе результата экспресс-теста, в особенности в случаях, когда полоса результата экспресс-теста выражена слабо (граничные значения диапазона измерения). В таких случаях результат, оцениваемый визуальным способом, может вызвать различные интерпретации.

Объективность анализа с помощью 8егаОиаП устраняет неуверенность и сомнение, служит надёжным источником аргументов для определения дальнейших действий; процесс измерения на основе 8егаОиаП стандартизирован и происходит с помощью наглядного программного обеспечения и пошагового объяснения необходимых действий; удобная документация результатов и возможность их дополнительного индивидуального описания.

Литература:

1. Барсегянц Л. О. Современное состояние судебно-медицинского исследования вещественных доказательств и пути развития // Судебно-медицинская экспертиза, 2004. —№5. — С 25-27.

2. Вавилов А. Ю., Чирков В. Е., Поздеев А. Р., Плешакова Н. П. О возможности применения метода измерения электрического сопротивления при исследовании биологических сред //Проблемы экспертизы вмедицине. Ижевск, 2004. —№1. — С 21-23.

3. Гуртовая С. В., Тучик Л. Н., Курджиева О. Б. Некоторые новые возможности при работе с пятнами крови на вещественных доказательствах // Сборник научных статей по судебной биологии, Москва, 1999. - С. 34-37.

4. Сосенкова Л. В., Сидоров В. Л., Маяцкая М. В., Курджиева О. Б., Гуртовая С. В. Определение групповой принадлежности изолированных сперматозоидов после отделения их от клеток плоского эпителия // Судебно-медицинская экспертиза, 2004. - № 2. - С 29-31.

© Г.М. Харин, А.З. Шакирова, 2009 УДК 616-036.88-053.3

Г.М. Харин, А.З. Шакирова

КЛИНИКО-АНАТОМИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ДИАГНОСТИКИ ВНЕЗАПНОЙ СМЕРТИ ГРУДНОГО РЕБЁНКА

Кафедра судебной медицины

ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет»

Термин «синдром внезапной смерти младенцев» (СВСМ) был впервые определён в 1969 году на 11-ой Международной конференции по внезапной детской смерти в Сиэтле как «внезапная, неожиданная, ненасильственная смерть грудного ребёнка в возрасте от 7 дней до 1 года, при которой отсутствуют адекватные для объяснения причины смерти данные анамнеза, клиники и патологоанатомического исследования». В 1991 году СВСМ был признан ВОЗ в качестве самостоятельного диагноза и, согласно МКБ-10, имеет шифр Я 95.0 (внезапная смерть грудного ребёнка). Частота СВСМ составляет в среднем 1 случай на 500 живорождённых детей, достигая в разных странах мира до 3 случаев на 1000 новорождённых. СВСМ встречается только у детей 1-го года жизни, в 90% случаев наступает в первые 6 месяцев с пиком смертности между 2-м и 4-м месяцами жизни. Среди внезапно умерших преобладают мальчики (60-75%). Большинство детей обнаруживают мёртвыми в ночное время (от 0 до 6 часов), в положении лёжа на животе, головой, повёрнутой на бок. Смерть часто служит первым и последним медицинским проявлением обсуждаемого синдрома. Реже бывают предвестники в виде возбуждения, вялости, слабости за 1-2 суток до смерти, но признаки, которые позволили бы родителям или врачу заподозрить возможность катастрофы, отсутствуют [1, 2, 4, 7, 8]. К СВСМ не относят случаи внезапной смерти детей в возрасте до 7 дней и старше одного года.

Современные патофизиологические теории, пытающиеся объяснить внезапную младенческую смерть, сводятся к следующим: 1) гипотеза апноэ; 2) синдром удлинённого интервала ОТ; 3) снижение перфузии ствола

мозга; 4) нарушение реакции пробуждения и «хватательное» дыхание; 5) врожденная гипертрофия миокарда.

Другие гипотезы исходят из избытка эндогенных наркотических веществ - эндорфинов, дефекта бета-окисления жирных кислот, задержки созревания кардиорес-пираторного контроля со стороны ЦНС. Для объяснения танатогенеза СВСМ уделяется внимание респираторным механизмам в виде различных форм апноэ, включая её обструктивные формы, и кардиальным механизмам в виде нарушения сердечного ритма вследствие изменений в проводящей системе и дисбаланса его автономной регуляции, а также синдрома удлинённого интервала QT [5, 6, 7 , 9]. Отмечаются также биохимические изменения с повышением в крови общего уровня белков, аминокислот и инсулина. Увеличение последнего в сочетании с длительными перерывами кормления в ночное время приводит к выраженной гипогликемии, рассматриваемой как непосредственная причина «смерти в кроватке» [3]. К механизмам танатогенеза при СВСМ относят и синдром иммунно-эндокринной дисфункции с увеличением тимуса (тимомегалия) за счет коркового слоя, снижением массы надпочечников за счет уменьшения ширины пучковой зоны и объёма клеток, снижением массы гипофиза с уменьшением количества базофильных клеток и объёма их ядер, что обычно сочетается с гипофункцией этих органов [1, 8]. В ряде работ указывается, что Status thymicolymphaticus как особого состояния не существует, в других - указывают на его наличие при СВСМ в 40,4% случаев [2, 6, 9]. Описанные изменения тимуса и надпочечников определяются как эндокринопатия и в МКБ-10