Мониторинг гемцитабина методом ВЭЖХ в плазме крови больных раком поджелудочной железы

МОНИТОРИНГ ГЕМЦИТАБИНА МЕТОДОМ ВЭЖХ В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Паршина Н. А., Байкова В. Н., Нариманов М. Н., Плетенева Т. В. РУДН, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, г. Москва РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, отделение клинической фармакологии НИИ Клинической онкологии, г. Москва

Гемцитабин (2',2'-дифтородезоксицитидин) - цитотоксический агент с широким спектром противоопухолевой активности, применяемый при раке поджелудочной железы, легких, яичников, молочной железы, мочевого пузыря. Гемцитабин является пролекарством, молекула которого фосфорилируется до монофосфата при участии дезоксицитидинкиназы, а затем последовательно до ди- и трифосфата. Для проявления цитостатического эффекта решающее значение имеет внутриклеточная концентрация трифосфата, накопление которого происходит по законам сатурационной кинетики и зависит от лимитирующей стадии - фосфорилирования гемцитабина дезоксицитидин-киназой до монофосфата. В связи с этим концентрация гемцитабина в крови выше 20-30 мкмоль/л (6-9 мкг/мл) не влияет на накопление гемцитабина трифосфата внутри клеток.

Цель работы: Определить количественное содержание гемцитабина в плазме крови больных раком поджелудочной железы для оптимизации режима его введения.

Задачи исследования: Сравнить экспериментальные результаты по содержанию гемцитабина в плазме при двухчасовом введении с литературными данными для 30-мин инфузий.

Материалы и методы. Гемцитабин в плазме крови определяли методом изократической обращенно-фазной ВЭЖХ. Калибровочную кривую для определения содержания гемцитабина в плазме крови получали путем анализа образцов донорской плазмы с известными количествами внесенного стандарта гемцитабина гидрохлорида. Для проведения анализов использовали жидкостной хроматограф Metrohm (Швейцария) модель 844UV/VIS с диодно-матричным УФ-детектором. В работе использовали аналитическую колонку Prontosil C18 (150х4,6 мм, размер частиц 5 мкм); в качестве экспериментально подобранной подвижной фазы - смесь ацетатный буфер (рН 5,0):ацетонитрил в соотношении 97,5 : 2,5 (по объему); температура колонки - 25 °С; скорость подачи элюента -

0.7.мл/мин. УФ-детектирование 2',2'-дифтородезоксицитидина проводили при 282 нм.

На стадии пробоподготовки в пробирки на 3 мл помещали 0,5 мл плазмы. Затем в пробу вносили 1 мл смеси ацетонитрил-метанол (9:1), интенсивно встряхивали в течение 30 с и центрифугировали (3500 об/мин, 10 мин при 4 °С). Надосадочную жидкость переносили в стеклянную пробирку, а к преципитату снова добавляли 1 мл смеси ацетонитрил-метанол (9:1), встряхивали и повторно центрифугировали. Супернатанты объединяли, и образец выпаривали на водяной бане роторно-вакуумного испарителя при 42 °С в течение 15-20 мин. Сухой остаток растворяли в 500 мкл подвижной фазы и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин. Затем 50 мкл надосадочной жидкости вводили в хроматограф. Результаты исследования и их обсуждение.

Определение содержания гемцитабина проводили в плазме крови 10 пациентов с диагнозом неоперабельный рак поджелудочной железы, не получавших предшествующих курсов химиотерапии. Возраст пациентов - от 55 до 65 лет.

Гемцитабин вводили в дозе 1200 мг/м2 120-мин инфузией с постоянной скоростью введения 10 мг/м2 в минуту. Пробы для определения содержания гемцитабина отобрали до начала введения и через 30, 90, 150, 180 минут от начала инфузии.

Было показано, что во взятых пробах содержание гемцитабина находится в пределах оптимальной величины или существенно не превышает ее. При этом максимальное накопление на наблюдается у пациентов через 60 минут от начала инфузии. Через 60 мин после окончания введения гемцитабин не детектируется в плазме крови. Таким образом, пролонгированное введение гемцитабина в меньшей дозе позволяет добиться поддержания такой концентрации пролекарства в крови, при которой полностью реализуется каталитическая способность дезоксицитидинкиназы. При этом в отличие от стандартного режима введения (30-мин внутривенная инфузия при дозировке 2200 мг/м2) предельно допустимая концентрация не достигается.

ЛИТЕРАТУРА

1. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2007. Т. 9. № 4.

2. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2006. Т. 8. № 4.

3. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2005. Т. 7. № 4.

4. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2004. Т. 6. № 4.

5. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2003. Т. 5. № 4.

6. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2002. Т. 4. № 4.

7. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2001. Т. 3. № 4.

8. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2000. Т. 2. № 4.

9. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2007. Т. 9. № 12.

10. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2006. Т. 8. № 12.

Материалы1 IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва

11. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2005. Т. 7. № 12.

12. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2004. Т. 6. № 12.

13. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2003. Т. 5. № 12.

14. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2002. Т. 4. № 12.

15. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2001. Т. 3. № 1.

16. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». URL: http://e-pubmed.org/isu.html. 2000. Т. 2. № 1.

Материалы1 IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва