СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ВЫСОКООЧИЩЕННОГО ЛАКТОФЕРРИНА И ЛАКТОПЕРОКСИДАЗЫ ИЗ МОЛОКА, МОЛОЗИВА, А ТАКЖЕ КИСЛОЙ ИЛИ СЛАДКОЙ СЫВОРОТКИ

1. Способ получения фракции, содержащей белки лактоферрин и/или лактопероксидазу, из источника, содержащего по меньшей мере один из указанных белков, где источник выбран из группы, состоящей из молока, молозива, кислой или сладкой сыворотки, посредством процесса хроматографического разделения с помощью монолитной колонки, обладающей сильными катионообменными свойствами, в котором в процессе разделения применяют элюирование с градиентом pH или комбинированное элюирование с градиентом pH и соли после загрузки источника в колонку.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что градиент pH начинается в диапазоне pH от примерно 4,0 до примерно менее 8,0.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что градиент pH заканчивается в диапазоне от примерно 8 до менее 13.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что источник фильтруют перед загрузкой источника в колонку.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что собирают фракцию А, которая элюируется в диапазоне pH от примерно 8 до примерно менее 11, в частности, от примерно 8,9 до примерно 10 или от примерно 6,6 до примерно 7,5 при более высокой электропроводности в диапазоне примерно от 5 до 55 мСм/см.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что собирают фракцию В, которая элюируется в диапазоне pH от примерно более 10,4 до примерно 12, в частности, от примерно более 11 до примерно 11,7 или от примерно 9,6 до примерно 10,7 при более высокой электропроводности в диапазоне примерно от 5 до 55 мСм/см.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что процесс хроматографического разделения включает этапы:
(i) Доведение значения pH источника до значения ниже 7, в частности, ниже 6,5;
(ii) Приведение в контакт источника с этапа (i) с монолитной колонкой, обладающей сильными катионообменными свойствами; за которым следует
(iii) пропускание буфера с градиентом pH через колонку, тем самым увеличивая значение pH; и
(iv) Сбор фракции A, которая элюируется в диапазоне pH от примерно 8 до примерно менее 11, в частности, от примерно 8,0 до примерно 10, предпочтительно в диапазоне pH от примерно 8,2 до примерно 10, более предпочтительно, от примерно 8,9 до примерно 10 или от примерно 6,6 до примерно 7,5 при более высокой электропроводности в диапазоне примерно от 5 до 55 мСм/см и обычно содержит лактопероксидазу; и/или
(v) Сбор фракции B, которая элюируется в диапазоне pH от примерно более 10 до примерно 12,0, предпочтительно от примерно более 10,4 до примерно 12, более предпочтительно, от примерно более 11,0 до примерно 12,0, в частности, от примерно более 11 до примерно 11,7 либо от примерно 9,6 до примерно 10,7 при более высокой электропроводности примерно от 5 до 55 мСм/см и обычно содержит лактоферрин;
(vi) Необязательно, дополнительную обработку фракций А и/или В, в частности, путем обработки для нейтрализации, концентрирования, консервирования и тому подобного.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что источник фильтруют перед этапом (ii) или монолитную колонку перед этапом (ii) уравновешивают уравновешивающим буфером с pH примерно менее 7, в частности, примерно менее 6.5.
3
3
3
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что монолитную колонку, обладающую сильными катионообменными свойствами, выбирают из группы, состоящей из монолитной колонки, модифицированной -SOH, монолитной колонки, модифицированной -COOH, монолитной колонки, модифицированной -OSOH или монолитной колонки, модифицированной -OPOH.
10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что градиент соли достигают посредством концентрации солей, в частности, градиент соли соответствует электропроводности в диапазоне от примерно 5 мСм/см до примерно 55 мСм/см.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что перед этапом (iii) или (iv) колонку промывают уравновешивающим буфером по п. 8.
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что фракции, содержащие лактоферрин и лактопероксидазу, сушат, в частности, методом распылительной сушки.
13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что чистота лактоферрина составляет более 90% и чистота лактопероксидазы составляет более 50%, в частности, значение C лактоферрина составляет более 50 и значение A лактоферрина составляет более 1.
14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что после этапа (iv) или (v) колонку дезинфицируют путем промывания колонки буфером с pH более 12.
15. Композиция, содержащая лактоферрин, имеющий значение C более 60% и значение A более 1%.
16. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что значение C составляет 70% или более и значение A составляет 2% или более.
17. Композиция, содержащая лактоферрин или лактопероксидазу, получаемая способом по любому из пп. 1-14.