Является ли устойчивость к дезинфицирующим средствам обязательным признаком госпитального штамма возбудителей внутрибольничных гнойно-септических инфекций?

as markers of lung tissue destruction during pulmonary tuberculosis in humans. PLoS One. 2012, 7 (8).

11. Pai M., Zwerling A., Menzies D. Systematic review: T-cell-based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: an update. Ann. Intern. Med. 2008, 149 (3): 177-184.

12. Raja A. Immunology of tuberculosis. Indian J. Med. Res. 2004, 120 (4): 213-232.

13. Ruhwald M., Aabye M.G., Ravn P. IP-10 release assays in the diagnosis of tuberculosis infection: current status and future directions. Expert Rev. Mol. Diagn. 2012, 12 (2): 175-187.

14. Strieter R.M., Belperio J.A., Keane M.P. Cytokines in innate host defense in the lung. J. Clin. Invest. 2002, 109 (6): 699-705.

15. Sutherland J.S., de Jong B.C., Jeffries D.J. et al. Production of TNF-alpha, IL-12 (p40) and IL-17 can discriminate between active TB disease and latent infection in a West African cohort. PLoS One. 2010, 5 (8).

16. Turgut T., Akbulut H., Deveci F. et al. Serum interleukin-2 and neopterin levels as useful markers for treatment of active pulmonary tuberculosis. Tohoku J. Exp. Med. 2006, 209 (4): 321328.

17. Wallis R.S., Pai M., Menzies D. et al. Biomarkers and diagnostics for tuberculosis: progress, needs, and translation into practice. Lancet. 2010, 375 (9729): 1920-1937.

18. Walzl G., Ronacher K., Hanekom W et al. Immunological biomarkers of tuberculosis. Nat. Rev. Immunol. 2011, 11 (5): 343-354.

Поступила 12.02.13

Контактная информация: Васильева Елена Викторовна, 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14, р.т. (812) 232-80-35

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013

В.И.Сергевнин1, Н.Г.Зуева2, Т.В.Клюкина3, Э.О.Волкова4

ЯВЛЯЕТСЯ ЛИ УСТОЙЧИВОСТЬ К ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИМ СРЕДСТВАМ ОБЯЗАТЕЛЬНЫМ ПРИЗНАКОМ ГОСПИТАЛЬНОГО ШТАММА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНУТРИ-БОЛЬНИЧНЫХ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ?

1Пермская государственная медицинская академия; 2Пермская краевая клиническая

больница; 3Медико-санитарная часть № 15, Пермь, 4Пермский краевой госпиталь для ветеранов войн

Цель. Оценка устойчивости к рабочим растворам дезинфектантов Staphylococcus haemolyticus и Klebsiella pneumoniae, выделенных от новорожденных и из объектов больничной среды акушерского стационара в период регистрации групповых заболеваний гнойно-септическими инфекциями (ГСИ). Материалы и методы. Проведен анализ двух эпидемических ситуаций по заболеваемости новорожденных ГСИ, обусловленных S. haemolyticus и K. рneumoniaе. Изучена чувствительность изолированных от новорожденных и из больничной среды штаммов S. haemolyticus и K. рneumoniae к антибиотикам диско-диффузионным методом и генетическое типирование K. рneumoniae посредством полимеразной цепной реакции с универсальным праймером М13 (RAPD-ПЦР). Определена чувствительность S. haemolyticus и K. рneumoniae к рабочим растворам дезинфектантов на тест-поверхностях (стекло, металл, пластик, дерево, клеенка). Результаты.

Выявленная идентичность антибиотикофенотипа штаммов S. haemolyticus и K. рneumo-niaе, а также генотипа штаммов K. рneumoniaе в сочетании с регистрацией групповой заболеваемости ГСИ среди новорожденных подтверждает, что циркулирующие штаммы

(клоны) возбудителей были госпитальными. При этом штаммы S. haemolyticus и K. pneumoniae в большинстве случаев были чувствительны к рабочим растворам дезинфек-тантов. Заключение. Резистентность возбудителей внутрибольничных ГСИ к дезинфек-тантам не является безусловным признаком госпитального штамма, а совпадение профиля устойчивости микроорганизмов к обеззараживающим препаратам — обязательным признаком наличия эпидемиологической связи между заболевшими.

Журн. микробиол. 2013, № 4, С. 85—89

Ключевые слова: новорожденные, гнойно-септические инфекции, госпитальный штамм, устойчивость к дезинфектантам

V.I.Sergevnin1, N.G.Zueva2, T.V.Klyukina3, E.O.Volkova4

IS RESISTANCE TO DISINFECTANTS A MANDATORY FEATURE OF A HOSPITAL STRAIN OF CAUSATIVE AGENTS OF NOSOCOMIAL PURULENT-SEPTIC INFECTIONS?

1Perm State Medical Academy; 2Perm Regional Clinical Hospital; 3Medical-Sanitary Unit No. 15, Perm; 4Perm Regional Hospital for War Veterans, Russia

Aim. Evaluate resistance to working solutions of disinfectants by Staphylococcus haemolyticus and Klebsiella pneumoniae isolated from newborns and hospital environment objects of obstetric hospital during registration of group purulent-septic infections (PSI). Materials and methods. Analysis of 2 epidemic situations on PSI morbidity of newborns caused by S. haemolyticus and K. рneumoniaе was carried out. Sensitivity to antibiotics of S. haemolyticus and K. рneumoniaе strains isolated from newborns and hospital environment was studied by disc-diffusion method and geno-typing of Kpneumoniae — by using polymerase chain reaction with universal primer M 13 (RAPD-PCR). Sensitivity of S. haemolyticus and K. pneumoniae to working solutions of disinfectants was determined on test-surfaces (glass, metal, plastic, wood, oilcloth). Results. The detected identity of antibiotic phenotype of S. haemolyticus and K. pneumoniae strains as well as genotype of K. pneumoniae strains combined with registration of group PSI morbidity among newborns confirms that the circulating strains (clones) of the causative agents were hospital. S. haemolyticus and K. pneumoniae strains in most cases were sensitive to working solutions of disinfectants. Conclusion. Resistance of causative agents of nosocomial PSI to disinfectants is not an unconditional feature of a hospital strain, and concurrence of resistance profile of microorganisms to disinfectant preparations — a mandatory feature of the presence of epidemiologic connection between the diseased.

Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2013, No. 4, P. 85—89

Key words: newborns, purulent septic infections, hospital strain, resistance to disinfectants

В литературе широко используется термин «госпитальный штамм» возбудителей гнойно-септических инфекций (ГСИ). Считается, что госпитальный штамм (клон) может отличаться повышенной вирулентностью, устойчивостью к антибиотикам, дезинфицирующим средствам (ДС) и способностью вызывать групповые внутрибольничные заболевания. Вместе с тем, вопрос о том, являются ли указанные биологические свойства, в частности устойчивость к ДС, обязательным атрибутом госпитального штамма условно патогенных бактерий, остается открытым.

Цель работы — оценка устойчивости к рабочим растворам дезинфектантов Staphylococcus haemolyticus и Klebsiella pneumoniae, выделенных от новорожденных и из объектов больничной среды акушерского стационара в период регистрации групповых заболеваний ГСИ.

Проведен ретроспективный анализ двух эпидемических ситуаций, имевших место в акушерском стационаре в 2010, 2011 гг., по заболеваемости новорожденных типичными и донозологическими формами ГСИ, обусловленными S. haemolyticus и K. рneumoniaе. ГСИ констатировали по результатам изучения медицинской документации в соответствии со стандартными определениями случаев: пневмонию — при наличии у новорожденных воспалительной реакции в легких на рентгенограмме грудной клетки и мокроты [5], ГСИ кожи — при покраснении кожи и выделении микроорганизма [1]. К донозологическим формам ГСИ относили такие состояния новорожденного, когда уже имелись отдельные патологические симптомы, характерные для ГСИ, но их совокупность еще была недостаточна для постановки диагноза типичной ГСИ. Фактически донозологи-ческую форму пневмонии учитывали при наличии мокроты, донозологическую форму конъюнктивита — при наличии слезотечения [4].

Обобщены результаты оценки чувствительности диско-диффузионным методом [3] изолированных от новорожденных и из больничной среды 18 штаммов S. haemolyticus к оксациллину, гентамицину, линкомицину, эритромицину, ципроф-локсацину, ванкомицину и 26 штаммов K. рneumoniae к ампициллину, амокси-клаву, цефотаксиму, цефепиму, ципрофлоксацину, цефоперазону/сульбактаму, амикацину, имипенему.

Проведено генетическое типирование 9 штаммов K. рneumoniaе посредством полимеразной цепной реакции с универсальным праймером М13 (RAPD-ПЦР) [6], интерпретацию результатов осуществляли визуально в соответствии с рекомендациями [7].

Чувствительность 18 штаммов S. haemolyticus и 22 штаммов K. рneumoniaе к ДС оценивали согласно методическим рекомендациям [2] на тест-поверхностях (стекло, металл, пластик, дерево, клеенка). Параллельно изучали чувствительность к тем же препаратам эталонных тест-культур (Escherichia coli № 1257 и Staphylococcus aureus № 906), стандартно применяемых для оценки эффективности ДС. В качестве ДС использовали применявшиеся в изучаемом стационаре ЗД-септ (четвертично-аммониевое соединение — ЧАС), амиксидин (комбинация ЧАС и гуанидина), экобриз-окси (комбинация перекиси водорода и гуанидина), фрисепт-гамма (сочетание ЧАС, амина и гуанидина). Использовали предусмотренные инструкциями к препаратам антибактериальные концентрации ДС (0,01 — 0,4%) и экспозиции обработки (30 — 60 мин). Для нейтрализации ДС применяли 3% твин-80 с 0,3% лецитином. Опыты ставили в трех повторах при условии получения однотипных результатов, при разнотипных результатах исследования повторяли до 8 раз. Штамм микроорганизмов считали чувствительным к ДС при отсутствии после обработки тест-объекта роста бактерий или при росте не более 300 КОЕ/мл, что соответствует требуемой эффективности ДС (гибель не менее 99,99% микроорганизмов). В случае роста бактерий в количестве от 1 до 300 КОЕ/ мл штамм относили к категории микроорганизмов с неполной чувствительностью. Штамм считали устойчивым к ДС при росте 300 КОЕ/мл и более.

Во время первой эпидемической ситуации (май—декабрь 2010 г.) от новорожденных акушерского стационара было выделено 8 штаммов S. haemolyticus. Кроме того, 10 штаммов было изолировано в смывах с объектов больничной среды. Анализ медицинской документации с использованием стандартных определений случаев ГСИ позволил установить, что у 8 детей, от которых были выделе-

ны S. haemolyticus, имелись признаки ГСИ. У двух новорожденных были отмечены симптомы типичной пневмонии, у трех — донозологической формы пневмонии, у одного — ГСИ кожи, у двух — донозологической формы конъюнктивита. При исследовании смывов с объектов внешней среды акушерского стационара штаммы S. haemolyticus были выделены с локтевого дозатора, пеленаль-ного стола, весов, детской кроватки. В трех случаях S. haemolyticus были изолированы с рук медицинского персонала.

Вторая эпидемическая ситуация, обусловленная K. рпеитошае, характеризовалась заболеваемостью новорожденных в течение 2011 г. У детей за этот период было выделено 20 штаммов K. рпеитошае, в смывах с объектов больничной среды — 6 штаммов. Ретроспективная оценка ситуации позволила установить, что у всех 20 новорожденных, от которых выделили K. рпеитошае, имелись признаки ГСИ: у 9 чел. отмечались симптомы пневмонии, у 7 — ГСИ кожи, у 4 — конъюнктивита. K. рпеитошае была обнаружена в смывах с локтевого дозатора, пеленаль-ного стола, кувеза, емкости для дезинфицирующих растворов, а также с рук медицинской сестры.

Все штаммы S. haemolyticus, выделенные от новорожденных и из больничной среды во время первой вспышки ГСИ, оказались резистентными к оксациллину, ципрофлоксацину, гентамицину, эритромицину, чувствительны к линкомицину и ванкомицину. При этом различия в зоне задержки роста разных штаммов стафилококка в отношении большинства антибиотиков не превышали 4 мм. Исключение составил лишь линкомицин, по отношению к которому этот диапазон составил 7 мм. Все 26 штаммов K. рneumoniaе, выделенные в период второй вспышки ГСИ, оказались резистентными к ампициллину, амоксиклаву, цефотак-симу, цефепиму и ципрофлоксацину, обладали промежуточной устойчивостью к цефоперазону/сульбактаму и амикацину и были чувствительны к имипенему. Различия в зоне задержки роста разных штаммов K. рneumoniaе в отношении антибиотиков не превышали 4 мм.

В результате генетического типирования 9 штаммов K. рneumoniaе, выделенных от больных и из внешней среды в разные периоды времени второй вспышки, было установлено, что все микроорганизмы имели идентичные электрофорети-ческие профили и являлись единым клоном.

Музейные тест-культуры E. coli № 1257 и S. aureus № 906 были чувствительны ко всем изученным ДС. В то же время, чувствительность к ДС внутрибольничных штаммов S. haemolyticus и K. рneumoniaе, несмотря на сходство антибиотикофе-нотипа и генотипа, была неодинаковой. К амиксидину лишь 5,5±5,5% штаммов S. haemolyticus оказались устойчивыми (на клеенке), и столько же штаммов отличались неполной чувствительностью. По отношению к фрисепт-гамма и экобриз-окси среди S. haemolyticus были обнаружены только штаммы с неполной чувствительностью — в 27,8±10,9 и 16,7+2,2% случаев соответственно. Штаммы K. рneumoniaе оказались устойчивыми (на клеенке) только к ЗД-септу — в 20,0+17,9% случаев и неполностью чувствительными к ЗД-септу, амиксидину, экобриз-окси и фрисепт-гамма в 20,0+17,9; 9,1+6,1; 4,5+4,4 и 13,6+7,3%. Иными словами, внутрибольничные штаммы S. haemolyticus и K. рneumoniaе в большинстве случаев оказались чувствительными к рабочим растворам дезинфектантов.

Сходство антибиотикофенотипа штаммов S. haemolyticus, антибиотикофено-типа и генотипа штаммов K. рneumoniae, выделенных от новорожденных, из

больничной среды и с рук персонала акушерского стационара на фоне эпидемических ситуаций по ГСИ указывает на то, что циркулирующие штаммы (клоны) возбудителей были госпитальными. При этом в большинстве случаев госпитальные штаммы микроорганизмов оказались чувствительными к рабочим растворам дезинфектантов. Полученные результаты свидетельствуют, что резистентность возбудителей внутрибольничных ГСИ к дезинфицирующим средствам не является безусловным признаком госпитального штамма (клона) микроорганизмов, а совпадение профиля устойчивости возбудителей ГСИ к обеззараживающим препаратам — обязательным признаком наличия эпидемиологической связи между заболевшими.

ЛИТЕРАТУРА

1. Клинико-организационное руководство по организации работы акушерского стационара на основе новых технологий родовспоможения и инфекционного контроля. Российско-американское сотрудничество по здравоохранению. Проект «Мать и дитя», 2003.

2. Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности. Руководство Р 4.22643-10. М., 2010.

3. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Метод. указ. МУК 4.2.1890-04.

4. Сергевнин В.И., Горовиц Э.С., Маркович Н.И. и др. Внутрибольничные гнойно-септические инфекции новорожденных и родильниц. Микробиологические и эпидемиологические аспекты. Пермь, 2010.

5. Сергевнин В.И., Гусманова П.С., Хохряков Р.В. и др. Стандартное эпидемиологическое определение случая и факторы риска внутрибольничной пневмонии доношенных и недоношенных новорожденных. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012, 2: 4-8.

6. Соломенный А.П., Максимов А.Ю., Мочалова Т.И. ПЦР-генотипирование госпитальных изолятов Аете1оЪае1ег. Журн. микробиол. 2004, 6: 26-30.

7. Шагинян И.А. Роль и место молекулярно-генетических методов в эпидемиологическом анализе внутрибольничных инфекций. Клин. микробиол. и антимикроб. химиотерап. 2000, 2 (3): 82-95.

Поступила 12.02.13

Контактная информация: Сергевнин Виктор Иванович, д.м.н., проф., 614990, Пермь, ул. Петропавловская, 26, р.т. (342)233-40-15.

ОБЗОРЫ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 О.В.Рыбальченко*, О.Г.Орлова*, В.М.Бондаренко

АНТИМИКРОБНЫЕ ПЕПТИДЫ ЛАКТОБАЦИЛЛ

*Санкт-Петербургский государственный университет, НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Приведены данные об антимикробных пептидах (АМП) лактобацилл, механизме их повреждающего действия, химической природе и генетическом контроле. Вне зависимости от источника выделения АМП лактобацилл, исключая реутерин, являют-