Провоспалительные и иммунорегуляторные цитокины у больных с синдромом вторичного иммунодефицита при рецидивирующей герпетической инфекции

Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, № 5-6, стр 583-590 © 2003, СПб РО РААКИ

Оригинальные статьи

ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ И ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫЕ ЦИТОКИНЫ У БОЛЬНЫХ С СИНДРОМОМ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Соловьёва Н.Ю., Сенникова Ю.А., Гришина JI.B., Старостина Н.М., Сенников С.В., Ширинский B.C.

ГУ Научно-исследовательский Институт Клинической Иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Резюме. Проводилось исследование содержания в сыворотке крови основных цитокинов, таких как IL-1Р, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFa и IFNy, наряду со стандартными показателями иммунного статуса у больных с рецидивирующей герпетической инфекцией. Обследовано 22 человека с часто рецидивирующим лабиальным и генитальным герпесом в фазе обострения и 30 доноров. У всех больных выявлены лабораторные признаки селективной или комбинированной иммунной недостаточности. Показано повышение сывороточного уровня провоспалительных цитокинов - IL-1J3 и TNFa, но не IL-6; повышение содержания в сыворотке крови IL-2, IFNy и IL-10. Уровень IL-4 по средним значениям не менялся, но обратно коррелировал с тяжестью клинических проявлений заболевания. Показана взаимосвязь между содержанием цитокинов и некоторыми другими иммунологическими показателями. Результаты работы свидетельствуют о разнородности молекулярно-клеточных механизмов иммунных нарушений при рецидивирующей герпетической инфекции.

Ключевые слова: цитокипы, иммунный статус, иммунодефицит, герпес.

Solovyeva N.Y., Sennikova Y.A., Grishina L.V., StarosCina N.M., Sennikov S.V., Shyrinsky V.S.

PROINFLAMMATORY AND IMMUNOREGULATORY CYTOKINES

IN PATIENTS WITH SECONDARY IMMUNODEFICIENCY SUFFERING

FROM RECURRENT HERPES

Abstract. The serum levels of main cytokines such as IL-f

Адрес для переписки:

630099, Новосибирск, ул. Ядринцевская, д. 14, ГУ НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН, лаборатория иммунофармакологии,

Соловьёвой Н.Ю.

Тел.: (3832) 28-25-47, факс: (3832) 22-70-28. E-mail: kalinovska@mmbler.m

Введение

Инфицированность населения вирусом простого герпеса (НБУ) близка к 90%, а часто возникающие рецидивы инфекции, встречаются у 2-6 % людей [7]. Герпетическая инфекция является серьезной медицинской проблемой, т.к. приводит к развитию осложнений течения беременности и родов,

тяжелой врожденной патологии, высокой перинатальной смертности [9]. По данным ВОЗ, герпес, как причина смерти от вирусных заболеваний, стоит на втором месте после гриппа.

Рецидивирующая герпетическая инфекция (РГИ) различных локализаций является, как правило, манифестацией иммунных нарушений в организме, транзиторных или более стойких, объединяемых понятием вторичного иммунодефицита (ВИД). Сама по себе персистенция HSV способна приводить к состоянию иммуносупрессии, поскольку все вирусы герпеса (в т.ч., HSV) имеют тропизм к клеткам иммунной системы, и инфицирование этих клеток приводит к нарушениям иммунных функций. [2,3,20], в том числе, к изменениям продукции про-воспалительных и иммунорегуляторных цитокинов. При РГИ описано снижение числа CD4+ Т-клеток, цитотоксических лимфоцитов, моноцитов, NK-кле-ток, а также угнетение активности фагоцитирующих клеток, снижение способности лейкоцитов к выработке а- и у-интерферонов [2,3]. Большинство экспериментальных и клинических работ, посвященных изучению цитокинов при герпетической инфекции, касается оценки отдельных групп этих медиаторов, чаще изучаемых in vitro, на животных или продуцируемых локально в очагах поражения, причем роль некоторых цитокинов (например, IL-10, TNFa) в патогенезе заболевания разными авторами трактуется неоднозначно. Работы, выполненные на клиническом материале, носят фрагментарный характер и не отражают полноты картины нарушений, происходящих в цитокиновой сети in vivo. В задачу настоящего исследования входило изучение содержания в сыворотке периферической крови больных РГИ основных провоспалительных и иммунорегуляторных цитокинов и их взаимосвязи с содержанием и функциональными свойствами иммунокомпетент-ных клеток.

Материалы и методы

Нами обследовано 22 пациента с РГИ, 2 мужчин и 20 женщин в возрасте 22 - 48 лет, из них: 7 человек с лабиальной локализацией высыпаний, 4 - с генитальным герпесом, 4 - с сочетанием лабиального и генитального, 7 - с орофациальной локализацией; и 30 здоровых доноров. Давность заболевания от 1 до 20 лет в среднем составила 8.8 лет. Для оценки тяжести заболевания были использованы стандартные критерии, характеризующие выраженность клинических симптомов в баллах, с учетом давности заболевания, частоты и длительности рецидивов, распространенности поражения кожи и слизистых, склонности к присоединению вторичной инфекции, подверженности ОРВИ и т.д., поддающиеся количественному анализу и статистической обработке.

Выделение МНК из гепаринизированной венозной крови производилось по стандартной методике центрифугированием на градиенте плотности фи-колла/урографина (г=1,082) (фиколл - Pharmacia Fine Chemical, Швеция, и урографин - Schering, Германия) при 1500 оборотов/мин в течение 40 минут. Субпопуляционную структуру (CD3+, CD4+, CD8+, CD16\ CD20+) иммунокомпетентных клеток ПК исследовали методом проточной цитофлюоримет-рии с помощью моноклональных антител (МедБио-Спектр, Россия). Иммунофенотипирование клеток периферической крови проводили на проточном ци-тофлюориметре FACS Calibur (Becton Dickinson, США) в программе CellQuest (Becton Dickinson, США). Определение показателя эффекторных функций (ПЭФ) лимфоцитов ГЗТ производилось по интенсивности выработки ими факторов торможения миграции и распластывания лейкоцитов в ответ на стимуляцию митогеном. Для этого лейкоциты, собранные из отстоявшейся гепаринизированной венозной крови, дважды отмывали от плазмы и культивировали в среде 199 с 10% инактивированной пулированной сывороткой AB(IV) группы, 2 mM L-глютамина, 5 mM Нерев-буфера и 40 мкг/мл гента-мицина в круглодонных 96-луночных планшетах (100 тыс. в лунке) 18 ч. при 37°С, 100% влажности и 5% СО . В опыте 1 к клеткам добавляли ФГА-Р (Difco, (ЪША) в дозе, стимулирующей миграцию лейкоцитов (2,5 мкг/мл), а в опыте 2 - в дозе, активирующей Т-клетки, и, в результате, ингибирующей миграцию (25 мкг/мл). В контроле митоген не добавлялся. После механического удаления не прилипших клеток и подсчета в камере Горяева прилипших лейкоцитов определяли индексы миграции (опыт 1) и ингибиции миграции (опыт 2), и получали ПЭФ как частное от деления одного на другой [6]. Содержание в сыворотке крови основных классов Ig и ЦИК определяли методом скоростной нефелометрии на иммунохимическом анализаторе (ICS II Beckman, США) [4]. Функциональную активность гранулоци-тов и моноцитов оценивали по Fc-фагоцитозу, показателю активации нейтрофилов (ПАН) и моноцитов (ПАМ), определяемому по продукции перекиси водорода клетками, стимулированными латексом; а также, по экспрессии HLA-DR генов [14]. Проводилась оценка спонтанной и стимулированной Кон А (Pharmacia, Sweden) в дозе 10 мкг/мл пролиферативной активности МНК ПК, культивированных в полной среде RPMI 1640 в круглодонных 96-луночных планшетах по включению 3Н-тимидина, внесенного за 18 ч до окончания 72-часовой инкубации в количестве 1 мкКю/лунку (пробы делались в 5 дублях).

Определялось количественное содержание молекул IL-ip, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFa и IFNy в сыворотке крови методом электрохемолюминесценции с использованием прибора “Origen Analyser” фирмы IGEN (США) [5]. Поликлональные и моноклональ-

ные антитела приобретались у фирмы R&D Systems (Великобритания). Для построения калибровочных кривых были использованы рекомбинантные цитокины человека (R&D Systems, Великобритания и Thomae-Biberach/Riss, Германия). Статистическая обработка результатов производилась при помощи программы Statistica (StatSoft Inc., США).

' При определении частотных характеристик показателей применяли точный метод Фишера.

Результаты

Клиническое обследование пациентов выявило, что у 10 человек на момент поступления имелись свежие герпетические высыпания, у остальных 12 - резидуальные явления в виде корочек, гиперемии или шелушения в местах поражения кожи и слизистых. Непрерывно рецидивирующее течение заболевания

наблюдалось у 10 человек, ежемесячные обострения

- у 6 больных, и у 6 - рецидивы инфекции 5-6 раз в год. Тяжесть клинических проявлений при максимально возможной сумме баллов 17 составила в среднем 9 баллов (от 5 до 14 ).

Показатели иммунного статуса (ИС) больных РГИ и здоровых доноров приведены в табл. 1. Установлено, что у больных РГИ при небольшом абсолютном и относительном (в среднем, 33,1%) лим-фоцитозе достоверно увеличено содержание CD4+ Т-клеток, по сравнению с группой доноров. Показано снижение показателей Fe-зависимого фагоцитоза гранулоцитов, снижение экспрессии HLA DR антигенов на моноцитах ПК и ПЭФ. Уровень ЦИК значительно превышал донорский. Спонтанная пролиферация МНС в культурах in vitro у больных снижена почти в два раза по сравнению с донорской. В то же время, на стимуляцию Кон А клетки

Табл. 1. СРАВНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ РГИ И ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ, М±т

Показатели ИС Больные ГРИ Здоровые

СО 3+(%) 67,3 ±1,6 64,9 ±0,79

СО 4+ 43,5 ±1,2 ** 38,3 ± 0,74

СО 8+ 23,5 ± 1,2 24,8 ± 0,69

СО 20+ 9,4 ±0,8 12,4 ±2,2

СО 16+ 17,3 ± 2,1 19,1 ±0,72

Яс-фагоцитоз (%) - гранулоциты 72,4 ± 3,6 ** 80,7 ± 0,99

- моноциты 65,5 ±1,9 68,9 ± 0,87

Ш-А-ОЙ экспр. моноциты (%) 77,5 ±4,5* 85 ± 1,08

ЩА-ОЯ уровень экспрессии 0,33 ± 0,03 0,41 ±0,05

ПЭФ ГЗТ 2,14 ±0,25* 2,84 ±0,18

1дМ (г/л) 1,78 ±0,19 1,84 ±0,08

1дА 1,30 ±0,09 1,31 ±0,04

1дЭ 9,75 ± 0,5 9,6 ±0,21

ЦИК (у.е.) 19,8 ± 1,8 ** 12,3 ± 1,05

ПАМ (у.е.) 2,31 ±0,08 2,44 ±0,11

ПАН (у.е.) 3,04 ± 0,36 2,57 ±0,14

Пролиф. акт. МНК (имп./мин)- спонтанная 729,36 ±172,6 *** 1273,20 ±285,6

- стимулированная КонА 39357,7 ± 4406,5* 34553,7 ± 3344,6

Достоверность различий по непараметрическому критерию Колмогорова- Смирнова: * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001.

больных отвечали в два раза сильнее, чем МНК здоровых людей.

Усредненные показатели ИС не дают представления о том, как часто в группе обследуемых больных выявляются изменения этих показателей, выходящие за пределы интервала нормативных значений. Поэтому представлялось целесообразным изучить частоту сниженных показателей ИС у больных РГИ (рис.1). Установлено, что в относительно однородной группе больных характер изменений в ИС различен. Наиболее часто имели место нарушения функций Т-эффекторов ГЗТ (у 68%) и снижение уровня экспрессии активационных маркеров на моноцитах (у 52%). Снижение количества иммуноком-петентных клеток различных субпопуляций, встречалось реже, чем изменения показателей их функциональной активности. Согласно классификации ВИД [13], выявленные изменения соответствуют признакам приобретенной селективной и комбинированной иммунологической недостаточности.

При исследовании цитокинового статуса больных РГИ (таблица 2) выявлена значительная вариабельность показателей. Из провоспалительных цитоки-нов наибольшего увеличения содержания в сыворотке крови больных РГИ достигал 1Ь-1 р, существенно повышен был уровень ТЫБа, а 1Ь-6 достоверно не изменялся. Содержание цитокинов профиля ТЫ (1Ь-2,1РЫу) также было значительно повышено. Из ТЬ2 - продуцируемых цитокинов повышенным в 5 раз оказался уровень 1Ь-10, а содержание 1Ь-4 не превышало значений, характерных для доноров.

Оценка частоты встречаемости измененных показателей содержания цитокинов у больных РГИ (рис. 2) показала, что наибольшее число больных имеет повышенный уровень ТЫБа (72%) и 1Ь-2 (57%). Несмотря на преобладание очень высоких цифр содержания 1Ь-1(3 в 55% случаев, у остальных больных эти значения оказываются на уровне нижней границы нормы. Также гетерогенной получилась группа больных по содержанию 1Ь-10: у 50% пациентов оно повышено, а у другой половины близко к нижней границе нормы. Образовавшиеся таким образом две подгруппы больных, отличающиеся по содержанию 1Ь-10 (р<0,001), были проанализированы с целью выявления различий по другим позициям. В подгруппе с повышенным уровнем 1Ь-10 по сравнению с подгруппой, где 1Ь-10 в норме, оказались более высокими показатели: С016+(19%и 14% соответственно), Рс-фагоцитоз гранулоцитов (78,2 и 67,1% соотв.), уровень экспрессии НЬА-ОЯ (0,39 и

0,29 соотв.), ПЭФ (2,44 и 1,87 соотв.), балл тяжести клинических проявлений (10,1 и 8,45 соотв.); более низкими: 1Ь-1а( 382,9 пкг/мл и 621,1 пкг/мл соотв.), 1Ь-6 (22,7 пкг/мл и 51,4 пкг/мл соотв.) и 1Ь-4 (0,16 пкг/мл и 56,5 пкг/мл соотв.).

Отмечено, что с содержанием 1Ь-4 обратно коррелировала тяжесть клинических проявлений герпетической инфекции (г = - 0,6; р = 0,019 ). Подтверждением этого факта являются и следующие обнаруженные нами особенности: среднее содержание 1Ь-4 у больных с непрерывно и ежемесячно рецидивирующей ГИ намного ниже, чем у больных с рецидива-

Табл. 2. СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РГИ И ДОНОРОВ

Цитокины (пкг/мл) Больные РГИ Здоровые

И-1Р М + т 515,22 ±200,7 15,20 ±3,2

Мес!

11.-6 М ± т 38,87 ±17,6 10,14 ±1,89

Мес1

ТЫРа М ± т 279,08 ± 93,2 29,76 ± 4,8

Мес1

11.-2 М ± т 646,6 ±310,4 13,34 ±3,3

Мес1

М ± т 133,1 ±65,7 24,2 ± 4,5

Мес!

И-4 М ± т 33,3 ± 24,5 30,75 ± 9,9

Мес1

11.-10 М ± т 310,2 ±126,1 40,9 ± 9,32

Мес)

Достоверность различий по непараметрическому критерию Колмогорова-Смирнова: * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001.

ми 5-6 раз в год (40,4 пкг/мл и 1052,6 пкг/мл соответственно); а также, у больных с давностью заболевания более 5 лет - ниже, чем при меньшем стаже заболевания (49,6 и 604,3 пкг/мл соотв.).

Поскольку у большинства больных РГИ было выявлено снижение функций эффекторов ГЗТ - показателя, в определенной степени характеризующего состояние клеточного звена иммунного ответа, мы проанализировали, как эти больные отличались от пациентов с нормальным ПЭФ по содержанию ци-токинов. Обнаружилось, что уровни цитокинов ТЫ профиля у них были ниже: 1Ь-2 в 3 раза, 1РЫу в 20 раз. Напротив, уровень 1Ь-4 в этой подгруппе был в 3 раза выше, по содержанию 1Ь-10 они не отличались.

В группе обследованных нами больных имела место инфекция, вызванная двумя самыми распространенными типами герпесвирусов: Н5У-1, который поражает, обычно, орофациальную область, и НБУ-

2, тропным к генитальной сфере. Достоверных различий в сывороточных уровнях изученных цитокинов в зависимости от локализации поражений не обнаружено.

Обсуждение

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что изменения показателей иммунного статуса у больных РГИ носят не столько количественный характер, сколько касаются функциональных свойств иммунокомпетентных клеток. В ряде работ описано снижение содержания отдельных субпопуляций Т-клеток, в том числе СБ4+, при обострении герпетической инфекции [3,14]. В наших исследованиях выявлено небольшое увеличение процента СБ4*-лим-фоцитов у больных по сравнению с группой доноров, не выходящее за пределы нормы. Известно, что именно С04+-лимфоциты играют ключевую роль в защите от герпетической инфекции. Поскольку Н5У способен препятствовать экспрессии молекул МНС

I класса, зараженные им клетки избегают киллерной активности СБ8+-лимфоцитов, но С04+-цитотокси-ческие Т-клетки, распознающие антиген в комплексе с МНС II класса, эффективно ограничивают распространение вируса [17]. Высказывается предположение о том, что повышенная чувствительность к герпетической инфекции генетически детерминирована и обусловливает наличие какого-либо изолированного или сочетанного дефекта компонентов специфического противогерпетического иммунитета [7]. В таком случае повышенные показатели иммунного статуса могут свидетельствовать о компенсаторных реакциях.

Литературные данные говорят о том, что вирусы герпеса могут оказывать разнонаправленное действие на продукцию различных цитокинов. Чаще всего их иммуносупрессивное влияние выражено в

снижении уровня интерферонов и хемокинов и в усилении продукции 1Ь-10. Содержание провоспа-лительных цитокинов (ТКР-а, 1Ь-1р, 1Ь-6) при герпетической инфекции обычно повышено, как локально [1,15,18,21,24,30], так и системно [1]. В культурах МНК заражение НБУ усиливает продукцию этих цитокинов [20,27]. Нами выявлено повышение содержания ТЫР-а и 1Ь-1|3 в сыворотке крови, причем, ТКР-а было в 2 раза больше у больных со свежими герпетическими высыпаниями, а у больных с резидуальными явлениями отмечалось относительное повышение уровня 1Ь-6, что соответствует описанной динамике продукции цитокинов при воспалительном процессе [12].

Важнейшую роль в противовирусном иммунитете играют цитокины, продуцируемые ТЫ, в особенности, 1РЫу. При обострениях инфекции и в периоды ремиссии он обнаруживается в повышенных количествах как локально [17, 21, 30], так и в ПК

% больных

І І І І І І I [ I

СОЗ С04 СОв С020 0016 Гс- Гс- НіА- НШ- ПЭФ

фаг. фаг. ОЯ ОТ

гр. мон. мон. уров.

Рис. 1. Частота сниженных показателей иммунного статуса у больных РГИ

% больных 72

Рис. 2. Частота повышенного содержания цитокинов в сыворотке крови больных РГИ

[1, 11], а также, внутриклеточно в С04+-лимфоци-тах [15].Частые рецидивы ГИ наблюдаются на фоне снижения способности МНКк продукции 1РЫу [23]. По данным Халдина А.А.[11] уровень сывороточного интерферона у больных во время рецидива был ниже, чем в ремиссии, но оставался в 2 раза превышающим донорский. В нашем исследовании прослеживается та же тенденция: сывороточный уровень 1РЫу в целом значительно повышен, но ниже у больных со свежими высыпаниями. Сведений о 1Ь-2 при ГИ в литературе сравнительно мало. При наличии естественно приобретенного иммунитета к Н5У, 1Ь-2 продуцируется культивируемыми лимфоцитами в значительных количествах в ответ на стимуляцию антигенами вируса [16]. Данных по содержанию 1Ь-

2 в сыворотке у больных РГИ не приводилось, но по результатам настоящего исследования оно оказывается значительно повышенным.

Принято считать, что преобладание ТЬ2 типа иммунного ответа ассоциировано с неблагоприятным течением вирусных инфекций, в том числе РГИ. В экспериментах показано, что 1Ь-4 утяжеляет течение герпетической инфекции и повышает чувствительность к НБУ [22, 26, 29], а также усиливает ци-топатический эффект вируса [28]. У больных РГИ нами не было обнаружено существенного изменения содержания IЬ-4 по сравнению с донорами ни по средним, ни по частотным показателям, что согласуется с данными литературы [15,16]. Нами показана обратная корреляция между содержанием 1Ь-4 в сыворотке крови и тяжестью клинических проявлений РГИ, в частности, более низкий уровень 1Г.-4 у больных с непрерывно рецидивирующим герпесом и у длительно болеющих.

Возможно, объяснение этих фактов кроется в существовании альтернативного сплайсинга генов ци-токинов, в частности, 1Г-4. Обнаружена изоформа 1Ь-452, являющаяся антагонистом полноразмерной молекулы 1Ь-4 и выполняющая регуляторную роль ограничителя функций этого цитокина [8]. Существующие в настоящее время моноклональные антитела к 1Ь-4 фиксируют обе изоформы.

Что касается 1Ь-10, по данным литературы, его уровень чаще оказывается повышенным локально в очагах поражения вирусом [21, 24, 30], он продуцируется лимфоцитами и кератиноцитами, особенно активно у больных с частыми обострениями РГИ [23]. Однако при обострениях генитального герпеса, количество 1Ь-10 в очаге поражения резко снижается [15]. Содержание в сыворотке крови этого цитокина при РГИ в литературе не приводится, но нами показано его существенное повышение у 50% больных и отмечено, что в этой подгруппе несколько выше средний балл тяжести клинических проявлений.

Возможно, повышенный уровень 1Ь-10 приводит к тому, что иммунная система утрачивает контроль

над репликацией вируса и является фактором риска возникновения рецидива инфекции. Известно, что одним из основных влияний, провоцирующих обострение герпеса, является ультрафиолетовое облучение, под действием которого, как недавно установлено, усиливается продукция IL-10 [25]. Если в процессе иммунного ответа во время обострения РГИ возникает переключение на адекватный ТЫ ответ, то в результате реципрокной регуляции количество IL-10 на некоторое время снижается, но затем повышается снова для регулирования силы воспалительных реакций. Высокий уровень IL-10 при относительно низком IL-6 можно рассматривать и как косвенный признак накопления функционально деком-пенсированных макрофагов, которые не испытывают регуляторного влияния Т-клеток с высокой продукцией IL-6, накапливающихся при благоприятном течении воспалительного процесса. У таких депрессивных макрофагов резко усиливается продукция IL-10. Этот цитокин может также в значительных количествах секретироваться АГ-неспецифическими CD8+ Т-супрессорами, которые являются продуктом терминальной дифференцировки CD4+ Th2 или функционально декомпенсированных CD8+ Т-кил-леров [12]. Свойства IL-10 не ограничиваются только иммуносупрессивной активностью - он оказывает еще и ряд стимулирующих влияний на CD8+ Т- и NK- клетки, повышая их цитотоксичность, и усиливает экспрессию молекул HLA II класса на В-лим-фоцитах [10].

Таким образом, изученный нами характер содержания в сыворотке ПК основных цитокинов при РГИ отличается большой индивидуальной вариабельностью показателей и разнородностью в группе обследованных больных. Цитокиновая регуляция иммунного ответа участвует в обеспечении контроля над течением длительно персистирующей HSV-инфекции и поэтому требует дальнейшего детального изучения.

Выводы

1. У больных с рецидивирующей герпетической инфекцией выявляются лабораторные признаки приобретенной селективной или комбинированной иммунологической недостаточности, касающейся, в большинстве случаев, функциональных свойств Т-лимфоцитов и моноцитов.

2. При сниженном показателе эффекторных функций Т-лимфоцитов ГЗТ у больных РГИ наблюдается более низкое содержание в сыворотке крови цитокинов Thl профиля - IL-2 и IFNy и повышение уровня IL-4.

3. Содержание провоспалительных цитокинов в сыворотке крови больных РГИ характеризуется значительным повышением продукции IL-ip и TNFa, и неизмененным уровнем IL-6.

4. У больных РГИ наблюдается преобладание Thl типа иммунного ответа и дисбаланс Th2 ответа, выраженный в относительно низком содержании IL-4 и существенно повышенном уровне IL-10.

Список литературы

1. Алексеев В.Н., Кетлинская О.С., ГрузиноваТЛ. Цитокины в слезной жидкости и их роль в патогенезе офтальмогерпеса // Вест. Росс. Акад. Мед. Наук.

- 1996. -№1.-С.57-59.

2. Баринский И.Ф. Герпетическая инфекция как вторичный иммунодефицит и пути его коррекции // Итоги науки и техники. Иммунология. - 1988. -Т. 22. - С.126-146.

3. Исаков В.А., Борисова В.В., Исаков Д.В. Герпес. Патогенез и лабораторная диагностика: руководство для врачей.-С-Пб, - 1999.-190с.

4. Кожевников В. С., Гичева Т. А., Суржикова Г. С., Черноусова А. В. Определение сывороточных иммуноглобулинов и иммунных комплексов нефело-метрическим методом (методические рекомендации М3 РСФСР) // Новокузнецк. - 1988. - Юс.

5. Крысов С.В., Курамшин Д.Х., Силков С.А., Сенников С.В., Козлов В.А. Использование электрохе-милюминесцентного метода для количественного определения цитокинов в различных средах. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 12. -С.39-43.

6. Лозовой В. П., Кожевников В. С. Методы оценки клеточных эффекторных функций ГЗТ (методические рекомендации М3 СССР) // Москва. - 1990.

- 11с.

7. Неизвестная эпидемия: герпес. / Под ред. Л.Н. Хахалина. - Смоленск, 1997. - 162с.

8. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Роль альтернативного сплайсинга генов цитокинов в формировании полиморфной структуры цитокиновой сети // Мед. Иммунология. - 2001. - Т. 3, № 3. -С.389-400.

9. Сухих Г.Т., Ванько Л.В., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес. - Н.Новгород, 1997. -224с.

10. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. Т. 3: Лимфоциты. - С-Пб., 2001.

- 390 с.

11. Халдин А.А. Изучение эффективности различных методов терапии больных рецидивирующим герпесом с использованием индуктора интерферона

- ридостина и рекомбинантного алфа-2- интерферона // Автореф. канд. дисс., - 1995.

12. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю. Иммунология воспаления: роль цитокинов // Мед. Иммунология. -2001. - Т. 3, № 3. - С.361-368.

13. Ширинский B.C. Вторичные иммунодефициты - проблемы диагностики и лечения. - Новосибирск, 1997. - 111 с.

14. Ширинский B.C., Старостина Н.М., Петрова С.М., Тешукова А.В., Кожевников B.C., Евсюкова Е.В. Характеристика иммунного статуса у больных с рецидивирующей герпетической инфекцией // Бюллетень СО РАМН. - 1999. - № 3-4 (93-94). -С.51-55.

15. Шуршалина А.В., Верясов В.Н., Сухих Г.Т. Соотношение уровней цитокинов при генитальном герпесе в различные фазы инфекционного процесса // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. - 2001. - Т.132, №7. -С.59-61.

16. Carmack М.А., Yasukawa L.L., Chang S.Y., Tran С., Saldana F., Arvin A.M., Prober C.G. T cell recognition and cytokine production elicited by common and type-specific glicoproteins of herpes simplex virus type 1 and type 2 //J. Infect. Dis. - 1996. - Vol. 174(5). - P.899-906.

17. Cunningham A.L., Mikloska Z. The Holy Grail: Immune Control of Human Herpes Simplex Virus Infection and Disease // Herpes 8: Supplement 1. - 2001.

- P.6A-10A.

18. Drescher K.M., Whittum-Hudson J.A. Herpes simplex virus type 1 alters transcript levels of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 in retinal glial cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1996. - Vol. 37(11). - P.2302-2312.

19. Ghanekar S., Zheng L., Logar A., Navratil J., Borowski L., Gupta P., Rinaldo C. Cytokine expression by human peripheral blood cells stimulated in vitro with HIV-1 and herpes simplex virus //J. Immunol. - 1996.

- Vol.l57(9). - P.4028-4036.

20. GosselinJ., Flamand L„ D' Addario М., Hiscott J., Menezes J. Infection of peripheral blood cells by herpes simplex and Epstein-Barr viruses. Differential induction of interleukin 6 and tumor necrosis factor-alpha //J. Clin. Invest. - 1992. - Vol.89, N6. - P.1849-1856.

21. Halford W.P., Gebhardt B.M., Carr D.J. Persistent cytokine expression in trigeminal ganglion latently infected with herpes simplex virus type 1 //J. Immunol. - 1996. -Vol.157(8). - P.3542-3549.

22. Matsuo R., Kobayashi М., Herndon D.N., Pollard R.B., Suzuki F. Interleukin-12 protects thermally injured mice from herpes simplex virus type 1 infection //J. Leukoc. Biol. - 1996. - VoL59, N5. - P.623-630.

23. McKenna D.B., Neill W.A., Norval M. Herpes simplex virus-specific immune responses in subjects with frequent and infrequent orofacial recrudescences // Br. J.Dermatol. - 2001. - Vol.144(3). - P.459-464.

24. Mikloska Z., Danis V.A., Adams S., Lloyd A.R., Adrian D.L., Cunningham A.L. In vivo production of cytokine and beta (C-C) chemokines in human recurrent herpes simplex lesions - do herpes simplex virus-infected keratinocytes contribute to their production? //J. Infect. Dis. - 1998. - Vol.l77(4). - P.827-838.

25. Muraille E., Leo O. Revisiting the Thl/Th2 paradigm // Scand. J. Immunol. - 1998. - Vol.47. - P.l-9.

26. Nakajima H., Kobayashi М., Richard B., Pollard R.B., Suzuki F. A pathogenic role of Th2 responses on

the severity of encephalomyelitis induced in mice by herpes simplex virus type 2 infection // J. Neuroimmunology. - 2000. - Vol. 110: 1-2. - P.106-113.

27. Oshima M., Azuma H., Suzutani T„ Ikeda H., Okuno A. Direct and mononuclear cell mediated effects on interleukin-6 production by glioma cells in infection with herpes simplex virus type 1 //]. Med. Virol. - 2001.

- Vol.63(3). - P.252-258.

28. Raychaudhuri S.P., Raychaudhuri S.K. Revisit to Kaposi's varicelliform eruption: role of IL-4 // Int.J.Dermatol. - 1995.-Vol.34, N12,- P.854-856.

29. Sin J.I., Kim J.J., Zhang D., Weiner D.B. Modulation of cellular responses by plasmid CD40L: CD40L plasmid vectors enhance antigen-specific helper T cell type 1 CD4 T cell-mediated protective immunity against herpes simplex virus type 2 in vivo // Hum. Gene Ther. - 2001. - Jun. 10; 12(9). - P.1091-1102.

30. Stumpf Т.Н., Shimeld C., Easty D.L., Hill T.J. Cytokine production in a murine model of recurrent herpetic stromal keratitis // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2001. - Vol.42(2). - 372-378.

поступила в редакцию 20.09.2002 принята к печати 16.03.2003