Роль экспериментального лактат-ацидоза в развитии структурных нарушений селезенки1

НАУЧНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

УДК 616.15 ББК Р410

Е. В. Альфонсова,

Н. В. Бочкарникова

Роль экспериментального лактат-ацидоза в развитии структурных нарушений селезенки1

В статье приведены данные о влиянии метаболического ацидоза на структурную организацию селезенки. Модель метаболического ацидоза создавали на кошках в/в введением 3-процентного раствора лактата в бедренную вену, происходило изменение рН 7,25-6,5 продолжительностью от 15 до 180 мин. В селезенке возникали неспецифические изменения: отек, деструкция капсулы, подкапсулярных трабекул, аргирофильного каркаса, делимфатизация паренхимы, которые зависят от глубины и продолжительности ацидоза. В сосудах микроциркуляторного русла при рН 7,2 выявлялись сладжи эритроцитов и агрегаты тромбоцитов, происходила дегрануляция тучных клеток, сдвиг рН до 7,0-6,8 сопровождался образованием внутрисосу-дистых тромбов, нарушением целостности мембран эндотелиоцитов, появлением в микроциркуляторном русле разрушенных органоидов эндотелиальных клеток. Подобные изменения, по нашему мнению, приводят к развитию иммунодефицитных состояний при ацидозе.

Ключевые слова: ацидоз, лактат, морфология, селезенка, иммунодефицит.

E. V. Alfonsova, N. V. Bochkarnicova

The Role of Experimental Lactat-Acidosis in the Development of Structure Violations of Spleen.

The article containts data on the influence of metabolic acidosis on structure organization of spleen. They made metabolic acidosis by intravenous injection 3 % solution of lactate into the femoral vein to cats and get various improvements pH from 7,25 to 6,5. In spleen unspecific changes arise, such as: edema and destruction of capsule and capsular septa, argyrophil frame, delymphatisation of parenchyma, all these changes depend on depth and duration of acidosis. Basing on morphological researches in vessels of microcir-culatory channel with pH 7,2, the sledges of erythrocytes and aggregates of thrombocytes are formed, degranulation of mast cells take place, deplacement pH to 7,0-6,8 leads to the formation of intravascular thrombs, violation the integrity of endothelial cells in the microcirculatory channel. We think that similar changes lead to the development of im-munodeficient state in acidosis.

Key words: acidosis, lactate, morphology, spleen, fibrosis, immunodeficient state.

Селезенка - это орган, обладающий разнообразными и недостаточно полноизучен-ными функциями. В настоящее время селезенку относят к главным органам иммуногенеза и рассматривают как бактериальный фильтр крови, играющий важную роль в борьбе с инфекцией. Большой фактический материал, накопленный за последние годы, свидетель-

1 Исследования поддержаны грантом ГК №П1080 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» 2009-2013 гг.

ствует о том, что селезенка является уникальным органом, в котором лимфатическая ткань и ретикулоэндотелиальная система анатомически и функционально связаны между собой [1-11]. В настоящее время выявлена роль селезенки в поддержании иммунологического и реологического гомеостаза [2-12], доказана противоопухолевая функция [10, 13, 15], установлена способность спленоцитов синтезировать большое количество цитокинов: IL-1b, IL-2[11], IL3 [6], IL-4 [14], IL5 [9], IL-7, IL-8, IL-10 [11, 14], IL-12 [11], IL-15 [12] и т. д. Нейропептиды, вырабатываемые нейронами селезенки, по предположению Е. М. Журко-вой и Н. Ф. Воробьёвой, принимают участие в регуляции гемодинамики и основного обмена, адаптационно-трофических механизмов при стрессе, эмоциональном возбуждении, воспалении и др. [2]. В то же время остается до конца не выясненным влияние различных патологических факторов, в том числе и нарушений кислотно-щелочного равновесия на структурную организацию селезенки.

Целью наших исследований явилось изучение стромально-паренхиматозных изменений в органе при метаболическом ацидозе.

Материалы и методы. Для решения поставленных задач эксперименты по созданию метаболического ацидоза были поставлены на беспородных животных. Влияние метаболического ацидоза изучалось на кошках весом от 2,5 до 2,83 кг (всего 42 животных обоего пола), которым под гексеналовым наркозом внутривенно капельно вводили 3 % раствор (на 0,85 % растворе хлорида натрия) молочной кислоты со скоростью 26-40 капель в минуту на протяжении от 15 до 120 мин и достигали различных сдвигов рН крови от 7,4 до 6,5.

При рН крови от 7,4 (контроль) до 7,2; 7,15; 7,0; 6,8 производился макро- и микроскопический анализ морфологических изменений в селезенке. Передняя брюшная стенка экспериментальных животных вскрывалась по белой линии живота и измерялись линейные размеры (длина, толщина, ширина) органа. Затем иссекались кусочки для гистологического исследования и фиксировались в 5 % растворе нейтрального формалина, а животные умерщвлялись передозировкой гексеналового наркоза. В последующем срезы окрашивались гематоксилин-эозином, по Ван-Гизон, фуксилином Вейгерта в модификации Харта, использовалась импрегнация серебром по Футу. На окрашенных препаратах определялись особенности строения капсулы, подкапсулярных трабекул, общих сосудистых влагалищных оболочек, ориентация, характер ветвления и контактирования ретикулиновых, коллагеновых и эластических волокон, форма петель, форма ядер, взаиморасположение фибро-бластов и миоцитов в различных структурах селезенки. Морфометрическое исследование было проведено в контроле (рН 7,4) и в опыте (рН 7,2-7,15) по Автандилову с использованием окуляр-микрометра; измерялись ширина капсулы, подкапсулярных трабекул, общих сосудистых оболочек; диаметры лимфоидных фолликулов и расстояние между ними. Линейной сеткой от окуляр-микрометра (при объективе 20 и окуляре 15 ограничивает

0,0128 мм2) определялось общее количество клеток в единице площади среза фиброзной оболочки капсулы, подкапсулярных трабекул, общих сосудистых влагалищных оболочек. Статистическая обработка материала проводилась на ПЭВМ «Pentium-5» с использованием пакета программ «Microsoft Excel-2002» для операционной системы «Windows ХР». Достоверность различий показателей в группах оценивали по величине t -критерия Стьюден-та. В работе с экспериментальными животными были соблюдены требования, изложенные в «Методических рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» от 1985 г.

Результаты и их обсуждение. Метаболический ацидоз (рН - 7,2-7,0) приводит во всех случаях к достоверному уменьшению длины, ширины органа соответственно на 9,8 %, 29,3 % по сравнению с контролем (табл. 1). От момента введения молочной кислоты и на протяжении 1 часа отмечается увеличение поперечника капсулы на 97,1 %, подкапсу-лярных трабекул на 38,9 % и недостоверное изменение толщины общих сосудистых влагалищных оболочек (табл. 2). В фиброзной оболочке капсулы селезенки прослеживается

увеличение объема коллагеновых волокон на 96,2 % на фоне снижения содержания эластических на 43,2 % и ретикулиновых волокон на 56,1 % в поперечнике фиброзной оболочки капсулы (табл. 3).

Таблица 1

Изменение линейных размеров селезенки кошки при метаболическом лактат-ацидозе

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

рН крови 7,4 п = 8 рН крови 7,2-7,0 п = 8

Длина селезенки (мкм) 10,25 ± 0,06 9,25 ± 0,06 р < 0,001

Ширина селезенки в (мкм) 2,90 ± 0,03 2,05 ± 0,10 р < 0,001

Толщина селезенки в (мкм) 0,62 ± 0,04 0,60 ± 0,001 Р < 0,4

Таблица 2

Изменение поперечника капсулы, подкапсулярных трабекул и общих сосудистых влагалищных оболочек селезенки кошки при метаболическом лактат-ацидозе

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

рН крови 7,4 п = 8 рН крови 7,2-7,0 п = 8

Поперечник капсулы (мкм) 34,50 ± 1,8 68,0 ± 4,9 р < 0,001

Поперечник подкапсулярных 62,6 ± 5,6 87,0 ± 3,6

трабекул (мкм) - р < 0,001

Поперечник общих сосудистых 210,0 ± 22,4 203,5 ± 16,9

влагалищных оболочек (мкм) - р < 0,4

Таблица 3

Изменение процентных отношений содержания коллагеновых, эластических и ретикулиновых волокон в поперечнике фиброзной оболочки капсулы селезенки кошки при метаболическом лактат-ацидозе

Контрольные животные Опытные животные

Исследуемые параметры рН крови 7,4 п = 8 pH крови 7,2-7,0 п = 8

Коллагеновые волокна 35,85 ± 1,16 70,35 ± 0,66 р < 0,001

Эластические волокна 12,05 ± 0,14 6,85 ± 0,06 р < 0,001

Ретикулиновые волокна 52,1 ± 1,02 22,9 ± 0,72 р < 0,001

Примечание к табл. 1-3: р - достоверность различий в опыте по сравнению с контролем, п - количество исследований.

Ретикулиновые волокна толщиной от 0,6 до 1,0 мкм располагаются в глубоком слое оболочки. Они ориентированы в различных направлениях, ветвятся, контактируя между собой. По ходу ретикулиновых волокон отмечаются разрывы, фрагментации. Ретикулиновые волокна как бы вытесняются в глубокие отделы фиброзной оболочки капсулы. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм располагаются в центре фиброзной оболочки, они становятся более извитыми, редко контактируют между собой, некоторые из них фрагментированы, разорваны, находятся в состоянии отека. Коллагеновые волокна толщиной

от 6,2 до 7,8 мкм в поверхностном слое фиброзной оболочки ориентированы параллельно поверхности капсулы и плотно прилегают друг к другу. В глубоком слое оболочки волокна располагаются рыхло, ориентированы в различных направлениях, отмечается отек и утолщение волокон. Характерна интенсивная окраска волокон кислым фуксином. В целом по органу объем коллагеновых волокон возрастает почти вдвое в поперечнике фиброзной оболочки капсулы селезенки по сравнению с контролем.

Клеточный компонент фиброзной оболочки капсулы селезенки при ацидозе (в экспериментальной группе с рН от 7,2 до 7,0) также претерпевает изменения. Количество фи-бробластов с ядрами шаровидной формы достоверно уменьшается на 30,1 %, фибробла-стов с ядром овоидной формы - на 24,9 % по сравнению с контролем, и они составляют соответственно от 8,6 % до 9,5 % и от 28,4 до 33,2 %, а число гладкомышечных клеток практически не изменяется по сравнению с контролем и составляет от 57,3 до 63,0 % на 100 клеток фиброзной оболочки (табл. 4).

Таблица 4

Изменение процентных отношений

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

рН крови 7,4 п = 8 рН крови 7,2 - 7,0 п = 8

Фибробласты с ядрами шаровидной формы 15,30 ± 0,17 9,05 ± 0,1 р < 0,001

Фибробласты с ядрами овоидной формы 24,65±0,16 30,80 ± 0,6 р < 0,001

Гладкомышечные клетки 60,05 ± 0,01 60,15 ± 0,7 р > 0,4

Примечание: р - достоверность различий в опыте по сравнению с контролем, п - количество исследований.

В подкапсулярных трабекулах при метаболическом лактат-ацидозе (рН крови 7,2-7,0) так же, как и в фиброзной оболочке капсулы органа, отмечается изменение количественного состава волокон. Ретикулиновые волокна толщиной от 0,6 до 1,0 мкм располагаются по периферии подкапсулярных трабекул. Они фрагментированы, и отмечается уменьшение объема ретикулиновых волокон на 61,9 % в поперечнике подкапсулярных трабекул по сравнению с контролем. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм располагаются в центральных отделах трабекул, они более извитые по сравнению с контролем, редко контактируют между собой, их количество достоверно снижается на 15,1 %. Коллагеновые волокна толщиной от 6,0 до 7,4 мкм ориентированы параллельно длинни-ку подкапсулярных трабекул, плотно прилегают друг к другу, рыхлые, в состоянии отека, сохраняется способность волокон окрашиваться кислым фуксином. Объем коллагеновых волокон возрастает при ацидозе (рН крови 7,2) более чем в два раза (р < 0,001) (табл. 5). Клеточный состав подкапсулярных трабекул изменяется недостоверно (табл. 6).

Поперечник общих сосудистых влагалищных оболочек при сдвиге рН крови в кислую сторону до 7,2-7,0 варьирует от 124,0 мкм до 260,0 мкм и в среднем равен 203,5 ± 16,9 мкм. Ретикулиновые волокна в общих сосудистых влагалищных оболочках ориентированы в различных направлениях, фрагментированы, ветвятся, контактируют между собой, их количество достоверно уменьшается более чем в 6 раз. Эластические волокна ориентированы параллельно длиннику общих сосудистых влагалищных оболочек, они становятся извитыми, в них отмечаются разрывы, склеивание, волокна редко контактируют между собой, их количество статистически значимо уменьшается на 25 %. Коллагеновые волокна

общих сосудистых влагалищных оболочек толщиной от 6,7 до 8,4 мкм располагаются рыхло, находятся в состоянии отека, ориентированы в различных направлениях, неравномерно окрашиваются кислым фуксином, особенно в наружной оболочке трабекулярных артерий. Происходит резкое увеличение объема коллагеновых волокон более чем в три раза по сравнению с контролем (табл. 7).

Таблица 5

Изменение процентных отношений коллагеновых, эластических и ретикулиновых волокон в подкапсулярных трабекулах селезенки кошки при метаболическом лактат-ацидозе

Исследуемые показатели Контрольные животные Опытные животные

рН крови 7,4 рН крови 7,2-7,0

п = 8 п = 8

Коллагеновые волокна 25,25 ± 1,4 66,15 ± 0,6 р < 0,001

Эластические волокна 11,60 ± 0,25 9,85 ± 0,09 р < 0,001

Ретикулиновые волокна 63,15 ± 1,65 24,00 ± 0,5 р < 0,001

Таблица 6

Изменение процентных отношений

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

pH крови 7,4 п = 8 рН крови 7,2-7,0 п = 8

Фибробласты с ядрами шаровидной формы 10,79± 0,10 10,60 ± 0,09 р < 0,1

Фибробласты с ядрами овоидной формы 28,85±0,09 27,95 ± 0,26 р < 0,01

Гладкомышечные клетки 60,36 ± 0,4 61,50 ± 0,35 р < 0,02

Таблица 7

Изменение процентных отношений коллагеновых, эластических и ретикулиновых волокон в общих сосудистых влагалищных оболочках селезенки кошки при метаболическом лактат-ацидозе

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

рН крови 7,4 PH крови 7,2-7,0

п = 8 п = 8

Коллагеновые волокна 25,25 ± 2,3 80,75 ± 0,01 р < 0,001

Эластические волокна 12,50 ± 0,12 9,35 ± 0,2 р < 0,001

Ретикулиновые волокна 62,25 ± 2,4 9,90 ± 0,22 р < 0,001

Примечание к табл. 5-7: р - достоверность различий в опыте по сравнению с контролем, п - количество исследований.

В общих сосудистых влагалищных оболочках количество гладкомышечных клеток практически не меняется, число фибробластов с ядрами шаровидной формы увеличивается на 15,42 %, а фибробластов с ядрами овоидной формы снижается на 9,18 % с высокой степенью достоверности (табл. 8).

Таблица 8

Изменение процентных отношений

Контрольные животные Опытные животные

Исследуемые рН крови 7,4 pH крови 7,2-7,0

параметры n = 8 n = 8

Фибробласты с ядрами шаровидной формы 9,4 ± 0,12 10,85 ± 0,14 р < 0,001

Фибробласты с ядрами овоидной формы 31,05 ± 0,36 28,20 ± 0,35 р < 0,001

Гладкомышечные клетки 59,60 ± 0,49 60,95 ± 0,49 р < 0,1

Примечание: р - достоверность различий в опыте по сравнению с контролем, п - количество исследований.

При рН 7,2-7,0 процентные отношения красной пульпы достоверно уменьшаются на 3,7 % на фоне статистически значимого увеличения объема соединительной ткани на 13,6 % (табл. 9). Ацидоз при рН 7,2 и ниже вызывает деструктивные изменения в ткани селезенки, разрушение аргирофильного каркаса, нарастающую делимфатизацию лимфатических фолликулов до полного их разрушения при рН 6,5.

Таблица 9

Изменение процентных отношений площади соединительной ткани, лимфатических фолликулов и красной пульпы в 1 мм2 площади среза селезенки кошки при метаболическом ацидозе

Исследуемые параметры Контрольные животные Опытные животные

pH крови 7,4 n = 8 pH крови 7,2-7,0 n = 8

Соединительная ткань 8,25 ± 0,19 11,29 ± 0,48 р < 0,001

Лимфатические фолликулы 5,51 ± 0,28 5,61 ± 0,14 р < 0,4

Красная пульпа 86,25 ± 0,44 83,11 ± 0,61 р < 0,001

Примечание: р - достоверность различий в опыте по сравнению с контролем, п - количество исследований.

В микроциркуляторном русле органа выявляются следующие изменения: просвет трабекулярных артерий расширяется, происходит расслоение крови, образование сладжей эритроцитов, агрегация форменных элементов, десквамация эндотелия. Стенка трабекулярных артерий находится в состоянии отека. Просвет вен также расширен, наблюдается расслоение крови, агрегация форменных элементов, венозное полнокровие. Сосудистая стенка вены и артерии, соединительная ткань капсулы, подкапсулярных трабекул находится в состоянии отека, но ядра фибробластов и гладкомышечных клеток отчетливо окрашиваются гематоксилин-эозином. Границы лимфатических фолликулов селезенки становятся нечеткими, размытыми, отмечается расширение межклеточных щелей, что свидетельствует

lO

о делимфатизации. При рН крови 7,2 делимфатизация чаще всего носит очаговый характер (рис. 1). В красной пульпе синусы расширены, и по всей плоскости среза селезенки наблюдаются мелкоочаговые кровоизлияния. В лимфоидных клетках белой пульпы выявляется гликоген.

Рис. 1. Селезенка кошки. Отсутствие гликогена и частичная делимфатизация лимфоидного узелка при рН крови 7,2 и продолжительности ацидоза 30 мин.

Окраска по Ван-Гизон. Ув.: об. 8, ок. 7. Микрофотография

Аргирофильные волокна трабекулярных сосудов, общих сосудистых влагалищных оболочек неравномерно импрегнированы азотнокислым серебром, по ходу волокон отмечаются утолщения, отек. В капсуле, в подкапсулярных трабекулах аргирофильные волокна также неравномерно импрегнируются азотнокислым серебром, по ходу волокон отмечаются фрагментации. В лимфатических узелках и в красной пульпе в местах кровоизлияний и отека структура ретикулярной сети нарушается, выявляются разрывы, фрагментации, расслоение волокон.

При дальнейшем снижении рН крови до 7,0 и продолжительности ацидоза 60 мин в трабекулярных сосудах просвет умеренно расширенный, встречаются единичные артерии с нормальным просветом. Происходит расслоение крови, агрегация форменных элементов, десквамация эндотелия в артериях. Стенка артерий сохраняет свою структуру с признаками отека. В трабекулярных венах просвет расширен, происходит расслоение крови, агрегация форменных элементов, тромбоз. Стенка сосудов отечна. Явления отека усиливаются, увеличивается поперечник капсулы и подкапсулярных трабекул. Соединительная ткань капсулы, подкапсулярных трабекул утолщена. Ядра фибробластов и гладкомышечных клеток слабо окрашены гематоксилин-эозином. Границы между лимфатическими узелками и красной пульпой размыты, в большинстве узелков отсутствуют Т-зоны. Пульпарные артерии спазмированы. В красной пульпе венозные синусы полнокровны, отмечаются мелкоочаговые кровоизлияния. Единичные клетки соединительной ткани содержат гранулы гликогена. Аргирофильные волокна общих сосудистых влагалищных оболочек капсулы, подкапсулярных трабекул, лимфатических узелков теряют способность интенсивно им-прегнироваться азотнокислым серебром, нечеткие, происходит их фрагменация.

Углубление степени ацидоза до рН 6,8 и ниже (экспозиция 120-180 мин) характеризуется более выраженными изменениями. Трабекулярные вены полнокровны, выявляются тромбы в просвете сосудов, фиксированные нитями фибрина к субэндотелию, выражена десквамация эндотелия. Границы между красной пульпой и лимфоидными фолликулами

размыты, нарастают явления делимфатизации (рис. 2). В основной массе узелков Т-зоны отсутствуют, они сохраняются только в единичных фолликулах, пульпарные артерии спаз-мированы.

Рис. 2. Селезенка кошки. Разрушение лимфоидного фолликула при рН крови 6,8 и продолжительности ацидоза 120 мин. Окраска по Ван-Гизон.

Ув.: об. 8, ок. 7. Микрофотография

Капсула, подкапсулярные трабекулы, общие сосудистые влагалищные оболочки находятся в состоянии выраженного отека. Толщина коллагеновых волокон этих образований резко увеличивается, и они неравномерно окрашиваются кислым фуксином. В наружной оболочке трабекулярных артерий, капсуле, подкапсулярных трабекулах и общих сосудистых влагалищных оболочках селезенки размеры и количественные отношения содержания клеток изменяются незначительно, но отмечается бледное окрашивание ядер гематоксилином. Венозные синусы красной пульпы полнокровны, встречаются мелкоочаговые кровоизлияния. В лимфоцитах и клетках красной пульпы сохраняются единичные гранулы гликогена. В соединительной ткани гликоген отсутствует. Аргирофильные волокна селезенки плохо импрегнируются азотнокислым серебром, разрушены, находятся в состоянии геля. В лимфатических узелках ретикулярная сеть разрушена.

По данным электронной микроскопии ацидоз (при рН крови 7,2 и продолжительности 15 мин), в фибробластах нарушается структура цитоплазматических мембран, свидетельством чего является поступление органоидов во внеклеточную среду, отмечается разрушение клеточных органоидов, крист, внутренней и наружной мембран митохондрий, изменение аппарата Гольджи, выражающееся в расширении цистерн гладкого и эндоплаз-матического ретикулума.

Выводы. Изменение кислотно-щелочного равновесия крови от рН 7,4 до 7,2 приводит к сокращению селезенки и выбросу крови в общий кровоток с целью поддержания кислотно-щелочного равновесия крови. В условиях прогрессирующего ацидоза нарастают явления делимфатизации органа, до полного разрушения лимфоидных фолликулов. На субклеточном уровне в фибробластах происходит разрушение цитоплазматической мембраны, деструкция ядра, повреждение митохондрий и других органоидов с выходом их в межклеточный матрикс, кровоток. Ацидоз при рН 6,95 и ниже вызывает сосудистые деструктивнодистрофические изменения в ткани селезенки с последующим фиброзом органа.

Список литературы

1. Барта И. Селезенка: анатомия, физиология, патология и клиника. Будапешт, 1976. 264 с.

2. Журкова Е. М., Воробьёва Н. Ф. Морфофункциональные изменения селезенки крыс после капсациновой блокады перефирических афферентных нейронов // Морфология. 1998. № 6. С. 44-46.

3. Краснова М. И., Пинегин Б. В. Лимфоидные образования слизистых оболочек: принципы топической иммунизации // Иммунология. 2003. № 6. С. 359-364.

4. Сапин М. Р., Никитюк Д. Б. Иммунная система, стресс и иммунодефицит. М.: Джангар, 2000. 184 с.

5. Фёдоров Г. Н., Леонов С. Д. Роль селезенки в поддержании гомеостаза организма. М.,

2006. 218 с.

6. Becker-Herman S., Lantner F., Shachar I. Id2 negatively regulates В cell differentiation in the spleen // J Immunol. 2002. Vol. 168. № 1. P. 5507-5513.

7. Herzer U., Crocoll A., Barton D. et al. The Wilms tumor suppressor gene wt1 is required for development of the spleen // Curr. Biol. 1999. № 9. Р. 837-840.

8. Bachmann M. F., Wong B.R., Josien R. et al. TRANCE, a tumor necrosis factor family member critical for CD40 ligand-independent T helper cell activation // J. Exp. Med. 1999. Vol. 189. Р. 10251031.

9. Khaldoyanidi S., Sikora L., Broide D. H., Rothenberg M. E., Sriramarao P. Constitutive overexpression of IL-5 induces extramedullar hematopoiesis in the spleen // Blood. 2003. Vol. 101. № 3. P. 863-868.

10. Lu J., Chang P., Richardson J. A., Gan L., Weiler H., Olson E.N. The basic helix-loop-helix transcription factor capsulin controls spleen organogenesis // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. Vol. 97. № 17. P. 9525-9530.

11. Mebius R. E., Kraal G. Structure and function of the spleen // Nat. Rev. Immunol. 2005. №5. P. 606-616.

12. Ojiri Y., Noguchi K., Shiroma N., Matsuzaki Т., Sakanashi M., Sakanashi M. Uneven changes in circulating blood cell counts with adrenergic stimulation to the canine spleen // Clin Exp Pharmacol Physiol. 2002. Vol. 29. № 1. P. 53-59.

13. Saxena R. K., Adler W. H. In vitro erythrocidal activity of activated spleen cells from young and old mice. // Exp Gerontol. 2000. Vol. 35. № 3. P. 409-416.

14. Wardemann H., Boehm Т., Dear N., Carsetti R. B-la В cells that link the innate and adaptive immune responses are lacking in the absence of the spleen // J Exp Med. 2002. Vol. 195. P. 771-780.

15. Zhang C. H., He Y. L., Zhan W. H., Song W., Chen C. Q., Cai S. R., Huang M. J. Impact of spleen preservation on the outcome of radical resection for cardia cancer // Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi.

2007. Vol. 10. № 6. P. 531-534.