ИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

1. Способ дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для панкреатической эндокринной линии дифференцировки, включающий стадии:
a. культивирования плюрипотентных стволовых клеток,
b. дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, путем культивирования плюрипотентных стволовых клеток в среде определенного химического состава, содержащей среду, дополненную B27, и обработки плюрипотентных клеток активином A,
c. дифференцировки клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки панкреатической эндодермы, путем обработки клеток, экспрессирующих маркеры характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы по меньшей мере с одним фактором роста фибробластов, или ретиноевой кислотой, и по меньшей мере одним фактором роста фибробластов, и
d. дифференцировки клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии дифференцировки панкреатической эндодермы в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для панкреатической эндокринной линии дифференцировки, путем обработки клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии дифференцировки панкреатической эндодермы с ингибитором гамма секретазы.
2. Способ по п.1, в котором B27 используют в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
3. Способ по п.1, в котором B27 используют в концентрации примерно 1%.
4. Способ по п.1, в котором стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, достигается с помощью способа, включающего стадии:
a. высевания плюрипотентных стволовых клеток на субстрате тканевой культуры, покрытом внеклеточным матриксом, и
b. культивирования плюрипотентных стволовых клеток в среде определенного химического состава, содержащей среду, дополненную B27.
5. Способ по п.1, в котором B27 используют в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
6. Способ по п.1, в котором B27 используют в концентрации примерно 1%.
7. Способ по п.4, в котором B27 используют в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
8. Способ по п.4, в котором B27 используют в концентрации примерно 1%.
9. Способ по п.1, в котором стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, достигается с помощью способа, включающего стадии:
a. высевания плюрипотентных стволовых клеток на субстрат тканевой культуры, покрытый внеклеточным матриксом,
b. культивирования плюрипотентных стволовых клеток с активином A и лигандом Wnt в первой культуральной среде, и
c. культивирования плюрипотентных стволовых клеток с активином A во второй культуральной среде.
10. Способ по п.1, в котором стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, достигается с помощью способа, дополнительно включающего высевание плюрипотентных стволовых клеток на питающий подслой фибробластов.
11. Способ по п.4, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-F12, дополненную B27, лигандом Wnt и активином A.
12. Способ по п.4, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-LG, дополненную B27, лигандом Wnt и активином A.
13. Способ дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки панкреатической эндодермы, включающий стадии:
a. культивирования плюрипотентных стволовых клеток в среде определенного химического состава, содержащей среду, дополненную B27,
b. дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, путем обработки плюрипотентных клеток активином A, и
c. дифференцировки клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки панкреатической эндодермы, путем обработки клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы по меньшей мере одним фактором роста фибробластов, или ретиноевой кислотой и по меньшей мере одним фактором роста фибробластов.
14. Способ по п.13, в котором B27 используют в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
15. Способ по п.13, в котором B27 используют в концентрации примерно 1%.
16. Способ по п.13, в котором стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, достигается с помощью способа, дополнительно включающего высевание плюрипотентных стволовых клеток на питающий подслой фибробластов.
17. Способ дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, которые характерны для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, включающий стадии:
a. высевания плюрипотентных стволовых клеток на субстрат тканевой культуры, покрытый внеклеточным матриксом, и
b. культивирования плюрипотентных стволовых клеток в среде определенного химического состава, содержащей среду, дополненную B27.
18. Способ по п.17, в котором B27 используют в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
19. Способ по п.17, в котором B27 используют в концентрации примерно 1%.
20. Способ по п.17, в котором стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии дифференцировки дефинитивной эндодермы, достигается с помощью способа, включающего высевание плюрипотентных стволовых клеток на питающий подслой фибробластов.
21. Способ по п.17, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-F12 дополненную B27, лигандом Wnt и активином A.
22. Способ по п.21, в котором B27 находится в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
23. Способ по п.21, в котором B27 находится в концентрации примерно 1%.
24. Способ по п.17, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-LG дополненную B27, лигандом Wnt и активином A.
25. Способ по п.24, в котором B27 находится в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
26. Способ по п.24, в котором B27 находится в концентрации примерно 1%.
27. Способ по п.1, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-F12, дополненную B27 и активином A.
28. Способ по п.27, в котором B27 находится в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
29. Способ по п.27, в котором B27 находится в концентрации примерно 1%.
30. Способ по п.1, в котором плюрипотентные стволовые клетки культивируют в среде определенного химического состава, содержащей DMEM-F12, дополненную B27 и активином A.
31. Способ по п.30, в котором B27 находится в концентрации примерно от 0,5% примерно до 1%.
32. Способ по п.30, в котором B27 находится в концентрации примерно 1%.