БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОЕ ПОЛУЧЕНИЕ 3-ГИДРОКСИИЗОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ

1. Способ, содержащий следующие стадии:
a) обеспечение изомасляной кислоты,
b) введение изомасляной кислоты в контакт с комбинацией изобутират-киназы и фосфотрансизобутирилазы и/или
изобутирил-Коэнзим А-синтазой/лигазой и/или
изобутират-Коэнзим А-трансферазой,
c) введение продукта со стадии b) в контакт с изобутирил-Коэнзим А-дегидрогеназой,
d) введение продукта со стадии c) в контакт с метакрилил-Коэнзим А-гидратазой, и
e) гидролиз продукта со стадии d) с образованием 3-гидроксиизомасляной кислоты,
где по меньшей мере один из ферментов, применяемых на стадиях b), c) и d) из группы изобутират-киназы, фосфотрансизобутирилазы, изобутирил-Коэнзим А-синтазы/лигазы и изобутират-Коэнзим А-трансферазы, предпочтительно все, обеспечивается в форме клетки, которая, по сравнению с ее диким типом, имеет уменьшенную активность 3-гидроксиизомасляной кислоты-дегидрогеназы или ее варианта.
2. Способ по п. 1, где изомасляная кислота образуется посредством введения изобутана в контакт с монооксигеназой, предпочтительно алкангидроксилазой, более предпочтительно AlkBGT-типа или ее вариантом.
3. Способ по п. 1, где гидролиз на стадии d) достигается посредством введения продукта со стадии d) в контакт с 3-гидроксиизобутирил-Коэнзим А-гидролазой.
4. Способ по п. 1, где клетка содержит как изобутирил-Коэнзим А-дегидрогеназу со стадии с), так и метакрилил-Коэнзим А-гидратазу со стадии d), а также
комбинацию изобутират-киназы и фосфотрансизобутирилазы и/или
изобутирил-Коэнзим А-синтазу/лигазу и/или
изобутират-Коэнзим А-трансферазу.
5. Способ по п. 1, где клетка дополнительно содержит алкангидроксилазу, предпочтительно AlkBGT-типа или ее вариант.
6. Способ по п. 1, где 3-гидроксиизомасляной кислоты-дегидрогеназа представляет собой ХР_504911.1 или ее вариант.
7. Способ по п. 1, где клеткой является бактериальная или низшая эукариотическая клетка.
8. Способ по одному из пп. 1-7, где клеткой является клетка дрожжей из группы родов, которая содержит Yarrowia, Candida, Saccharomyces, Schizosaccharomyces и Pichia и предпочтительно Yarrowia lipolytica.
9. Клетка, которая содержит по меньшей мере один фермент из группы, содержащей изобутирил-Коэнзим А-синтазу/лигазу, изобутират-Коэнзим А-трансферазу, изобутират-киназу, фосфотрансизобутирилазу, изобутирил-Коэнзим А-дегидрогеназу и метакрилил-Коэнзим А-гидратазу, и, по сравнению с ее диким диком, уменьшенную активность 3-гидроксиизомасляной кислоты-дегидрогеназы или ее варианта.
10. Клетка по п. 9, где клетка содержит в дополнение к изобутирил-Коэнзим А-дегидрогеназе и в дополнение к метакрилил-Коэнзим А-гидратазе комбинацию изобутират-киназы и фосфотрансизобутирилазы и/или
изобутирил-Коэнзим А-синтазу/лигазу и/или
изобутират-Коэнзим А-трансферазу,
предпочтительно, кроме того, 3-гидроксиизобутирил-Коэнзим А-гидролазу.
11. Клетка по п. 9, дополнительно содержащая алкангидроксилазу, предпочтительно AlkBGT-типа или ее вариант.
12. Клетка по п. 9, где 3-гидроксиизомасляной кислоты-дегидрогеназа представляет собой ХР_504911.1 или ее вариант.
13. Клетка по п. 9, где клеткой является бактериальная или низшая эукариотическая клетка.
14. Клетка по одному из пп. 9-13, где клеткой является клетка дрожжей из группы родов, которая содержит Yarrowia, Candida, Saccharomyces, Schizosaccharomyces и Pichia и предпочтительно Yarrowia lipolytica.
15. Применение клетки по одному из пп. 9-14 для получения 3-гидроксиизомасляной кислоты.
16. Применение по п. 15, где 3-гидроксиизомасляной кислоты-дегидрогеназа представляет собой ХР_504911.1 или ее вариант.
17. Применение по п. 15, где клеткой является бактериальная или низшая эукариотическая клетка.
18. Применение по одному из пп. 15-17, где клеткой является клетка дрожжей из группы родов, которая содержит Yarrowia, Candida, Saccharomyces, Schizosaccharomyces и Pichia и предпочтительно Yarrowia lipolytica.
19. Реакционная смесь, содержащая клетку по одному из пп. 9-14, а также изобутан или изомасляную кислоту.