КОНТРАСТИРУЮЩИЙ АГЕНТ, СОДЕРЖАЩИЙ ПОЛУФТОРОУГЛЕВОДОРОДНОЕ ВЕЩЕСТВО
SEMIFLUOROCARBON COMPOUND CONTAINING CONTRAST AGENT

Настоящее изобретение относится к водной эмульсии, включающей специфическое полуфтороуглеводородное вещество, среднецепочечный триглицерид (СЦТ) и эмульгатор, а также к использованию эмульсии в качестве контрастирующего вещества или вещества усиливающего контраст. Также изобретение относится к использованию указанной эмульсии для диагностического выявления воспалительных патологических состояний с использованием МР томографии.
Воспалительные заболевания являются, несомненно, наиболее важными причинами заболеваемости и смертности в мире. Хотя во многих случаях существуют эффективные диагностические и терапевтические методы для острых воспалительных заболеваний (преимущественно вызванных патогенами), диагностирование хронических воспалительных заболеваний является наиболее трудным, а их лечение ограничено симптоматическими мерами. Неинвазивные методы визуализации, такие как эхокардиография, компьютерная томография и ядерно-магнитно-резонансная спектроскопия предоставляют детальную анатомическую информацию и являются, таким образом, ценными инструментами для оценки функционирования органов. Однако ни с одним из упомянутых методов не было возможным до настоящего времени однозначно определять воспалительные процессы с высоким пространственным разрешением.
1
19
В Nature Biotechnology Vol.23, No. 8, August 2005, p. 983-987, Arens et al. описывают способы отслеживания иммунотерапевтических клеток. Путем магнитно-резонансной томогафии (МРТ) перфтор-15-краун-5 эфира была сделана попытка определить in vivo клетки, которые обладают терапевтической значимостью. Они использовали дендритные клетки, заряженные ex vivo перфтор-15-краун-5 эфиром. Затем их судьба после инъекции в мышиную ткань или внутривенного введения мыши была изучена in vivo. WO 2005/072780 A2 и WO 03/075747 A2 относятся к похожим исследованиям. В Medica Mundi 47/1, April 2003, p. 34-39, G.M. Lanza et al. описывают использование парамагнитных наночастиц для направленного выявления клеток. В этом методе парамагнитные наночастицы применяют, чтобы получить затухание сигнала на H магнитно-резонансном изображении. Носители, загруженные F, были использованы в качестве зондов.
18
WO-А-2005/072780 относится к мечению ex vivo изолированных клеток перфтороуглеводородами. Раскрыто, что изолированные клетки, меченные перфтороуглеводородами ex vivo, являются подходящими для изучения миграции клеток в организме после инъекции. Oku, Naoto et al. (Biochemica et Biophisica Acta 1280 (1996), 149-154) касается использования липосом, загруженных F-меченной глюкозой, для изучения «липосомного провоза». Исследования были проведены путем ПЭТ-диагностик.
US 2009/0280055 A1 раскрывает использование перфтороктилбромида с применением томографических методов для диагностических целей.
Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ, который делает возможным визуализацию специфических патологических состояний, таких как воспалительные процессы, с помощью методов томографии, и таким образом распознание пораженных областей.
Другой целью настоящего изобретения является предожение диагностических веществ, на основе фторуглеводородов, для специфической диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, в частности диагностики воспалительных процессов в сердечно-сосудистой системе, а именно для диагностики миокардитов или воспалительной кардиомиопатии.
Еще одной целью изобретения является предоставление биосовместимого масла в водной эмульсии, которое может быть использовано для магнитно-резонансной спектроскопии и которое стабильно при хранении даже при таких стрессовых условиях как стерилизация.
Первый вариант осуществления настоящего изобретения является водной эмульсией, включающей
а) полуфторированное соединение формулы I:
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-(CH) (I),
в котором x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 2 до 10,
б) триглицерид, который является смешивающимся с полуфторированным соединением при 20°С; и
в) эмульгатор.
Еще один конкретный вариант осуществления изобретения является водной эмульсией, включающей
а) полуфторированное соединение формулы I:
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-(CH) (I),
в котором x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 2 до 10,
б) среднецепочечный триглицерид (СЦТ) и
в) эмульгатор.
Эмульсия по настоящему изобретению является предпочтительно эмульсией масла в воде, которая обязательно включает полуфторированное соединение.
Полуфторированные соединения в понимании настоящего изобретения являются полуфторированными алканами. Полуфторированные алканы включают фтороуглеродную и углеводородную часть. Обычно полуфторированные алканы соответствуют следующей номенклатуре: FXHY, где X представляет число атомов углерода, которые замещены атомами фтора, а Y представляет число атомов углерода, которые замещены атомами водорода. Например, перфторгексилоктан представляется формулой:F6H8
F6H8 показан в следующей формуле:
.
Полуфторированные соединения, которые являются подходящими для эмульсий по настоящему изобретению, выражены формулой (I):
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-(CH) (I),
в которой x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 1 до 10.
В одном из вариантов осуществления изобретения x в формуле (I) находится в интервале от 2 до 6, предпочтительно от 3 до 6, более предпочтительно от 4 до 6 и главным образом x равен 5.
Еще в одном предпочтительном варианте осуществления изобретения y в формуле (I) находится в интервале от 2 до 9, предпочтительно от 3 до 8, более предпочтительно от 5 до 8, еще более предпочтительно от 6 до 8 и главным образом y равен 7.
Хорошие результаты с точки зрения томографии и стабильности эмульсии могут быть достигнуты с полуфторированными соединениями формулы (I), в которых y больше чем x.
Особенно предпочтитительными полуфторированными соединениями являются перфторгексилоктан (F6H8) и/или перфторбутилпентан (F4H5).
Еще одним компонентом изобретения является триглицерид, который является смешивающимся с полуфторированным соединением при 20°С (здесь и далее также вещество б)).
По смыслу настоящего изобретения триглицерид (компонент б)) является смешивающимся с полуфторированным соединением (компонент а)), если при температуре 20°С и после смешения и последующего хранения при 20°С в течение 24 часов компонент а) и компонент б) не образуют раздельные непрерывные фазы.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент б) является смешивающимся с компонентом а) в любом соотношении. В частности компонент а) и компонент б) являются смешивающимися в массовом отношении компонента а) к компоненту б) от 1:20 до 1:0,7, предпочтительно от 1:15 до 1: 0,8, более предпочтительно от 1:10 до 1:0,9, еще более предпочтительно от 1:4 до 1:1, главным образом от 1:2 до 1:1.
В альтернативном варианте осуществления изобретения отношение масс компонентов а) и б) равно от 1:20 до 1:0,20, предпочтительно от 1:15 до 1:0,25, более предпочтительно от 1:10 до 1:0,30, еще более предпочтительно от 1:4 до 1:0,35, главным образом от 1:2 до 1:0,4.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения триглицерид, который является смешивающимся с полуфторированным соединением, является среднецепочечным триглицеридом (СЦТ).
В конкретном варианте осуществления изобретения весовое отношение вещества а), предпочтительно F6H8 к СЦТ находится в диапазоне от 4:1 до 1:4, главным образом от 3:2 до 2:3.
Эмульсия масло-в-воде, описанная в данном документе, предпочтительно включает среднецепочечные триглицериды. «Среднецепочечные триглицериды» (СЦТы) являются видом триглицеридного масла, которое может быть либо природного происхождения, либо синтетическим. СЦТы образованы из жирных кислот с длиной от 6 до 14 углеродов, предпочтительно от 6 до 12 углеродов, главным образом от 8 до 10 углеродов. СЦТ могут содержать каприловую кислоту (например, в количестве от около 50% до около 80% по массе СЦТ), 8-углеродную насыщенную ЖК (8:0). СЦТ могут содержать каприновую кислоту (например, в количестве от около 50% до около 80% по массе СЦТ), 10-углеродную насыщенную ЖК (10:0). Например, среднецепочечные триглицериды могут содержать триглицериды каприловой кислоты и каприновой кислоты в количестве не менее 90% по массе среднецепочечных триглицеридов. Описание СЦТ для использования в настоящем раскрытии может, например, соответствовать требованиям EP моногафии 0868, озаглавленной “Triglycerides, Medium Chain” (Tryglicerida saturate media) (EP 0868, 2008).
В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения среднецепочечный триглицерид (СЦТ) является глицерином, который этерифицирован карбоновыми кислотами как конкретизуется ниже:
капроновая кислота в количестве 2 масс.% или меньше;
каприловая кислота в количестве от около 50 до около 80 масс.%;
каприновая кислота в количестве от около 20 до около 50 масс.%;
лауриловая кислота в количестве 3 масс.% или меньше;
миристиновая кислота в количестве 1 масс.% или меньше, где масс.% (масс.%) берутся от совокупной массы жирных кислот.
Среднецепочечные триглицериды (СЦТ) являются прекрасными растворителями для полуфторированных веществ. В соответствии с настоящим изобретением может быть использован один или более СЦТ. СЦТ является коммерчески доступным, как например, Miglyol 812 (SASOL GmbH, Германия) или CRODAMOL GTCC-PN (Croda Inc, Ню Джерси).
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения эмульсия включает СЦТ, который состоит из глицерина, который этерифицирован жирными кислотами, содержащими не менее 50 масс.% жирных кислот, выбранных из группы жирных кислот имеющих 7, 9 и 11 атомов углерода. Предпочтительным является трифептаноин.
Количество триглицерида б) предпочтительно среднецепочечных триглицеридов в эмульсии настоящего изобретения может быть в диапазоне от 2 до 40, предпочтительно от 5 до 25, и наиболее предпочтительно от 8 до 18 масс.% (масс.%) от совокупной массы эмульсии.
В предпочтительном аспекте настоящего изобретения количество полуфторированного вещества а) и триглицерида б), который предпочтительно является среднецепочечным триглицеридом находящегося в диапазоне от 5 до 40 масс.%, предпочтительно от 10 до 30 масс.%, главным образом от 15 до 25 масс.%, в частности от 18 до 22 масс.%, например, около 20 масс.% от совокупной массы эмульсии.
Хороший баланс высокой концентрации полуфторированного вещества и великолепной долгосрочной стабильности может быть достигнут, если массовое отношение вещества полуфторированного углеродного вещества а) к триглицериду, который предпочтительно является среднецепочечным триглицеридом (СЦТ), находится в диапазоне от 1:20 до 1:0,7, предпочтительно от 1:15 до 1:0,8, более предпочтительно от 1:10 до 1:0,9, более предпочтительно от 1:4 до 1:1, главным образом от 1:2 до 1:1, например, около 1:1,5.
В альтернативном варианте осуществления изобретения массовое отношение компонента а) к компоненту б) равно от 1:20 до 1:0,20, предпочтительно от 1:15 до 1:0,25, более предпочтительно от 1:10 до 1:0,30, еще более предпочтительно от 1:4 до 1:0,35, главным образом от 1:2 до 1:0,4.
Эмульсия по настоящему изобретению содержит полуфторированное вещество и предпочтительно среднецепочечный триглицерид (СЦТ). В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения масляные компоненты эмульсии образуют гомогенный раствор при 20°С. СЦТ и полуфторированное вещество, как например, F6H8 являются смешивающимися при 20°С и образуют, таким образом, гомогенный раствор. Масляная фаза может содержать также масляные компоненты, такие как триглицериды длинноцепочечной жирной кислоты, основанные на растительном масле или морском масле, как например, рыбий жир. Количество других масляных компонентов предпочтительно добавляется, чтобы поддерживалась полностью смешивающаяся масляная фаза. Обычно количество масляных компонентов, которые отличаются от полуфторированного вещества и триглицерида б), который предпочтительно является СЦТ, составляет меньше 50 массовых процентов (масс.%), предпочтительно меньше 40 масс.%, более предпочтительно меньше 30 масс.%, еще более предпочтительно меньше чем 20 масс.%, главным образом меньше чем 10 масс.%, в частности меньше 5 масс.% или в основном отсутствует, где количество относится к совокупной массе масляных компонентов.
Массовое отношение СЦТ к длинноцепочечным триглицеридам (ДЦТ) в эмульсии настоящего изобретения может в основном находится в диапазоне от 1:1 до 10000:1 или больше, предпочтительно в диапазоне от 3:2 до 1000:1, более предпочтительно в диапазоне от 3:1 до 500:1, главным образом от 5:1 до 200:1.
Масла, которые могут присутствовать в эмульсиях по настоящему изобретению и которые отличаются от СЦТ, могут быть выбраны из «длинноцепочечных триглицеридов» (ДЦТ).
В определенных вариантах осуществления изобретения масло может содержать растительное масло. «Растительное масло» относится к маслу, полученному из семян растений или орехов. Растительные масла являются обычно «длинноцепочечными триглицеридами» (ДЦТы), образованными, когда три жирных кислоты (обычно длиной от 14 до 22 углеродов с ненасыщенными связями в варьируемых количествах и положениях в зависимости от источника масла) образуют эфирные связи с тремя гидроксильными группами глицерина. В определенных вариантах осуществления изобретения растительные масла высокой степени очистки (также называемые «особо рафинированными») используют для улучшения сохранности и стабильности эмульсий масла в воде. В определенных вариантах осуществления изобретения могут быть использованы гидрированные растительные масла, которые получены путем контролируемого гидрирования растительного масла.
Типичные растительные масла включают, но не ограничены этим, миндальное масло, масло бабассу, масло семян черной смородины, бурачниковое масло, масло канолы, касторовое масло, кокосовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, оливковое масло, арахисовое масло, пальмовое масло, пальмоядровое масло, рапсовое масло, сафлоровое масло, соевое масло, подсолнечное масло и кунжутное масло. Гидрированные и/или частично гидрированные формы этих масел также могут быть использованы. В конкретных вариантах осуществления изобретения масло дополнительно включает сафлоровое масло, кунжутное масло, кукурузное масло, оливковое масло и/или соевое масло. В более конкретных вариантах осуществления изобретения масло дополнительно включает сафлоровое масло и/или соевое масло.
В конкретных вариантах осуществления изобретения, когда масло дополнительно включает соевое масло, соевое масло может иметь содержание пальмитиновой кислоты (масс/масс) между 9 и 13%, а содержание стеариновой кислоты между 2,5% и 5%, содержание олеиновой кислоты между 17% и 30%, линолевой кислоты между 48% и 58% и содержание линоленовой кислоты между 5% и 11%.
Также в конкретном варианте осуществления изобретения водная эмульсия по настоящему изобретению может содержать структурированные триглицериды. «Структурированный триглицерид», как используется в данном документе, является триглицеридом, содержащим триглицериды или смеси триглицеридов, имеющие не менее одной жирнокислотной группы с длиной углеродной цепи от 6 до 12 атомов углерода и не менее одной жирнокислотной группы с длиной углеродной цепи более чем 12 углеродных единиц.
Еще одним компонентом эмульсии по настоящему изобретению является эмульгатор. Предпочтительно эмульгатор выбирают из группы, состоящей из фосфолипидов, амфотерных и ионных поверхностно-активных веществ, таких как соли жирных кислот.
Эмульгатор может присутствовать в эмульсии в количестве до 10 масс.%, предпочтительно от 0,5 до 5 масс.% от совокупной массы эмульсии.
Предпочтительно эмульгатор является фосфолипидом или смесью фосфолипидов.
В одном из аспектов эмульгатор может содержать лецитины, предпочтительно лецитины природного происхождения, такие как соевый лецитин, яичный лецитин, лецитин подсолнечного масла, сфингозин, ганглиозиды, фитосфингозин, и их комбинации. Гидрированный лецитин, то есть продукт контролированного гидрирования лецитина, может быть тоже дополнительно использован в эмульгаторе.
Типичные фосфолипиды, применимые в настоящем изобретении включают, но не ограничиваются этим фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилглицерин, фосфатидная кислота, лизофосфатидилхолин и их смеси. Фосфолипидный компонент композиций может быть либо единственным фосфолипидом или смесью нескольких фосфолипидов. Применяемые фосфолипиды могут быть природными или синтетическими, но должны быть допустимыми для парентерального, в особенности внутривенного введения.
Не исчерпывающий список подходящих фосфолипидов, которые могут дополнительно присутствовать в эмульгаторе перечислен ниже:
Фосфатидиловые кислоты, включая натриевую соль 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфатидиловой кислоты (DMPA, Na), натриевую соль 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидиловой кислоты (DPPA, Na), натриевую соль 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфатидиловой кислоты (DSPANa); фосфохолины, включая 1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DLPC), 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DMPC), 1,2-дипалмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DPPC), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DSPC); фосфоэтаноламины, включая 1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DLPE), включая 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DMPE), 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DPPE), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE); фосфоглицеролы, включая натриевую соль 1,2-дилауороил-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (DLPG, Na), натриевую соль 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (DMPG, Na), соль аммония 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфо-sn-1-глицерола (DMP-sn-1-G, NH4), натриевую соль 1,2-дипалмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (DPPG, Na), натриевую соль 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (DSPG, Na), натриевую соль 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфо-sn-1-глицерола (DSP-sn-1-G, Na); фосфосерины, включая натриевую соль 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфо-L-серин, (DPPS, Na); фосфолипиды со смешанными цепями, включая 1-пальмитоил-2-олеол-sn-глицеро-3-фосфохолин (POPC), натриевую соль 1-пальмитоил-2-олеол-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (POPG Na), соль аммония 1-пальмитоил-2-олеол-sn-глицеро-3-фосфоглицерола (POPG NH4); лизофосфолипиды, включая 1-пальмитоил-2-лизо-sn-глицеро-3-фосфохолин (P-лизо-PC), 1-стеароил-2-лизо-sn-глицеро-3-фосфохолин (S-лизо-PC); пегилированные фосфолипиды, включая N-(карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 2000)- МПЭГ-2000-DPPE, натриевую соль, N-(карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 5000)- МПЭГ-5000-DSPE, натриевую соль, N-(карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 5000)- МПЭГ-5000-DPPE, натриевую соль, N-(карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 750)- МПЭГ-750-DSPE, натриевую соль, N-(карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 2000)- МПЭГ-2000-DSPE, натриевую соль.
В одном из вариантов осуществления изобретения количество фосфолипида в эмульсии по настоящему изобретению по массе, отнесенной к совокупной массе композиции, находится в диапазоне от 0,1 до 30 масс.%. В определенных вариантах осуществления изобретения фосфолипид может присутствовать в диапазоне от 0,5 до 15 масс.%, включая от 0,8 до 10 масс.%, например, от 1 до 5 масс.%.
В примере осуществления изобретения количество фосфолипида в водной эмульсии настоящего изобретения составляет до 10 масс.% (масс.%), предпочтительно от 0,5 до 5 масс.% от совокупной массы эмульсии.
В одном из вариантов осуществления изобретения эмульгатор включает яичный лектин, содержащий 60-80% масс/масс, например, 67% масс/масс фосфатидилхолина; 10-20% масс/масс, например, 15% масс/масс фосфатидилэтаноламина; <=3% масс/масс, например, 2% масс/масс сфингомиелина; и <=3% масс/масс, например, 1% масс/масс лизофосфатидилхолина.
«Яичный лецитин PL90» (Fresenius Kabi AB) является одним примером яичного лецитина, имеющего такое содержание фосфолипида.
В частности хорошие результаты могут быть достигнуты с эмульгатором, включающим лецитин, включающий от около 80 до около 85 масс.% фосфатидилхолина;
от около 7,0 до около 9,5 масс.% фосфатидилэтаноламина;
менее чем 3 масс.% лизофосфатидилхолина;
менее чем 0,5 масс% лизофосфатидилэтаноламина; и
от около 2 до около 3 масс.% сфингомиелина.
Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения эмульгатор включает смесь фосфолипидов и гликолипидов. Неожиданно было обнаружено, что смеси фосфолипидов и гликолипидов также улучшают стабильность при хранении эмульсий при более высоких температурах (40°С). В частности эти смеси стабилизируют эмульсии даже при стрессовых условиях, таких как стерилизация эмульсий. Эмульсии настоящего изобретения обычно стерилизуют, например, при 121°С в течение 15 минут под давлением в 2 бара в роторном автоклаве.
Гликолипиды - это липиды с присоединенным углеводом. Гликолипиды являются не содержащими фосфора мембранными липидами клеточных мембран, в которых один или более моно или олигосахаридов соединены с липидом. Липиды являются жирными кислотами, которые соединены посредством эфирных связей с глицерином или посредством амидных связей со сфингозином.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения эмульсия по настоящему изобретению дополнительно включает гликолипиды, которые предпочтительно выбирают из глицерогликолипидов, как например, моногалактозилдиглицерид или гликосфинголипиды или цереброзиды.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения количество гликолипидов равно от 5 до 30 масс.%, предпочтительно от 10 до 28 масс.% от совокупной массы суммы гликолипидов и фосфолипидов. Смеси фосфолипидов и гликолипидов коммерчески доступны в качестве Lipoid S75 от Lipoid GmbH, Germany.
В особом варианте осуществления изобретения эмульгатор содержит
от около 68 до около 73 масс.% фосфатидилхолина;
от около 7 до 10 масс.% фосфатидилэтаноламина;
меньше чем около 3 масс.% лизофосфатидилхолина; и
от около 14 до около 25 масс.% гликолипидов, где все массы отнесены к совокупному количеству суммы гликолипидов и фосфолипидов.
Эмульсия предпочтительно содержит от 0,5 до 5 масс.%, более предпочтительно от 1,0 до 4,0 масс.% эмульгатора, где все массы отнесены к совокупной массе эмульсии.
Эмульсия по настоящему изобретению является предпочтительно эмульсией масла в воде, где водная фаза являются непрерывной фазой, а масляная фаза является дисперсной фазой.
Как отмечено выше, эмульсия по настоящему изобретению масло-в-воде также содержит водную среду. «Водная среда» или «водная фаза» относится к водосодержащей жидкости. В некоторых вариантах осуществления изобретения водная среда является водой и/или водным буферным раствором.
Водная эмульсия, предпочтительно эмульсия масло-в-воде, по настоящему изобретению может содержать от 70 до 98 масс.%, предпочтительно от 70 до 90 масс.% воды от совокупной массы эмульсии.
В некоторых вариантах осуществления изобретения эмульсия может содержать физиологчески совместимое буферное вещество от 0 до 4 мМ, предпочтительно от 0,5 до 3 мМ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, водные эмульсии согласно настоящему изобретению как вариант содержат со-поверхностно-активное вещество. Со-поверхностно-активные вещества, подходящие для использования в эмульсиях по настоящему изобретению, являются тем, что предотвращает флоккуляцию и/или коалесценцию липидной эмульсии. Примеры со-поверхностно-активных веществ включают, но не ограничиваются ими, холестерол, олеиновую кислоту, олеат, Твин80 (ПЭГ-сорбитан моноолеат), HCO-60, солютол H15 (полиоксиэтилен-660-гидроксистеарат), ПЭГ-400, (полиэтиленгликоль), Плюроник F68 (BASF), Cremophor EL (полиоксиэтилен-35-рицинолеат) или соль желчной кислоты, как например, дезоксихолиновой кислоты. В других вариантах осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из С12-С22 жирных кислот, их солей и/или их смесей, например, С16-С20 жирных кислот, их солей и/или их смесей, или из С18 жирных кислот, их солей и/или их смесей. В особых вариантах осуществления изобретения жирная кислота является мононенасыщенной.
В некоторых вариантах осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество может присутствовать в эмульсии в количестве (масс.%) больше чем или равное 0,005%, больше чем или равное 0,01%, или больше чем или равное 0,02%. В соответствии с любыми из этих вариантов осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве (масс.%) меньшем или равным 4%, меньше или равным 1% или меньше или равным 0,04%.
В особых вариантах осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из длинноцепочечных жирных кислот, как например, пальмитиновой кислоты, олеиновой кислоты или стеариновой кислоты или их солей щелочных металлов. Олеат и/или олеиновая кислота, особенно олеат натрия являются особенно подходящими cо-поверхностно-активными веществами.
В определенных вариантах осуществления изобретения, в которых cо-поверхностно-активное вещество является олеатом и/или олеиновой кислотой, cо-поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве (масс.%) равным или больше чем 0,005 масс.%, равным или больше чем 0,01 масс.%, или равным или больше чем 0,02 масс.%. В соответствии с любыми из этих вариантов осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве (масс.%) меньшем или равным 0,5 масс.%, меньшем или равным 0,2 масс.%, меньшем или равным 0,1 масс.% или меньшем или равным 0,05 масс.%. В особых вариантах осуществления изобретения cо-поверхностно-активное вещество является олеатом натрия и присутствует в количестве 0,03 масс.% (0,3 г/л). Эмульсии, описанные в данном документе, могут быть подходящими для парентального вливания, как, например, внутривенного вливания. Поэтому в особых вариантах осуществления изобретения для предотвращения побочных эффектов, таких как раздражение, ингибирование цитохрома P450 и т.д., концентрация определенных cо-поверхностно-активных веществ поддерживается минимальной. В особых вариантах осуществления изобретения Плюроник F68 (полиэтиленгликоль-13-полипропиленгликоль-cо-пропиленгликоль) присутствует в количестве меньшем чем 0,7 масс.%, или меньшем чем 0,5 масс.%. В других специальных вариантах осуществления изобретения Солютол-HS (макрогол-15-гидроксистеарат) присутствует в количестве меньшем чем 1,2 масс.% или меньшем чем 1 масс.%.
Эмульсия масло-в-воде согласно настоящему изобретению может содержать вещество регулирующее тоничность. Такие композиции могут иметь осмоляльность в диапазоне 200-1000 мОсм/кг, предпочтительно от 220 до 800 мОсм/кг, особенно от 250 до 600 мОсм/кг.
В соответствии с особыми вариантами осуществления изобретения эмульсии могут быть изотоническими и изоосмотическими. Композиции могут иметь осмоляльность 220-600 мОсм/кг или 230-360 мОсм/кг.
Подходящие вещества, регулирующие тоничность, включают хлорид калия или натрия, трахалозу, сахарозу, сорбит, глицерин, глюкозу, ксилит, маннит, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, альбумин, аминокислоту и их смеси. В определенных вариантах осуществления изобретения осмоляльность от 270 до 330 мОсм/кг, как, например, от 280 до 300 мОсм/кг, достигается с помощью вещества, которое также повышает осмотическое давление, такого как глицерин, декстроза, лактоза, сорбит или сахароза.
В одном из вариантов осуществления изобретения вещество, регулирующее тоничность, является физиологически приемлемым полиолом таким как глицерин, сорбит иди ксилит. В особом варианте осуществления изобретения веществом, регулирующим тоничность, является глицерин.
Таким образом, в соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения эмульсия дополнительно содержит вещество, регулирующее тоничность, предпочтительно глицерин.
Вещество, регулирующее тоничность, может присутствовать в количестве в диапазоне от 0,1 до 10 масс.%, предпочтительно от 0,5 до 8 масс.%, более предпочтительно от 1 до 5 масс.% от совокупной массы эмульсии.
Вещество, регулирующее тоничность, обычно используют в количестве, которое не имеет побочных биологических эффектов, но достаточном для образования изоосмотических и/или изотонических композиций. Когда глицерин является веществом регулирующим тоничность, глицерин может присутствовать в диапазоне от 2 до 5% (масс.%), например, от 2,1% до 2,9% (масс.%), включая от 2,3% до 2,7%. В особых вариантах осуществления настоящего изобретения эмульсии настоящего изобретения включают 2,5% глицерина (25 г/л). В следующем варианте осуществления изобретения вещество, регулирующее тоничность, присутствует в количестве от 2,5 масс.% или больше, от совокупной массы эмульсии.
В некоторых вариантах осуществления изобретения эмульсии, согласно настоящему изобретению, имеют pH в диапазоне от pH 6,0 до pH 9,0, как например, от pH 6,5 до pH 8,5, включая от pH 7,5 до 8,5, например, от 8,0 до 8,5. В альтернативном варианте осуществления изобретения pH может быть в диапазоне от 5,0 до 9,0. pH композиций может быть доведен способами известными в данной облати техники, например, путем использования соответствующего основания, которое нейтрализует отрицательный заряд жирных кислот, путем использования подходящего буфера или их комбинации. Ряд оснований и буферов являются подходящими для использования с эмульсиями настоящего изобретения. Специалист в данной области техники оценит, что добавление буфера к эмульсии будет воздействовать не только на конечный pH, но также на ионную силу эмульсии. Высокая ионная сила буферов может негативно воздействовать на зета-потенциал эмульсии и является, таким образом, не желательной. В особом варианте осуществления изобретения pH доводится до желаемого значения путем добавления гидрооксида натрия, например, 0,1N гидроксид натрия или 1N гидроксид натрия. Кроме того, для того, чтобы стабилизировать эмульсии по настоящему изобретению от окислительных процессов, может присутствовать антиоксидант. В предпочтительном варианте осуществления изобретения эмульсия дополнительно включает антиоксидант, предпочтительно альфа-токоферол.
Эмульсия согласно настоящему изобретению в некоторых случаях содержит один или больше фармацевтически приемлемых добавок, как например, подкислители, подщелачиватели, связующие, хелатирующие, образующие комплексы, растворяющие вещества, антисептики, консерванты (включая антимикробные и антиоксиданты), суспендирующие вещества, стабилизаторы, смачиватели, вещества, модифицирующие вязкость, растворители, крио-протектанты, разбавители, лубриканты, и другие биосовместимые вещества или терапевтические вещества. В определенных вариантах осуществления изобретения такие добавки участвуют в дополнительной стабилизации эмульсии или придании эмульсиям по настоящему изобретению биосовместимости.
3
3
3
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения плотность при 25°С масляной фазы, в частности плотность смеси, состоящей из триглицерида б), который является преимущественно СЦТ и полуфторированного вещества, находится в диапазоне между от 0,9 до 1,1 г/см, более предпочтительно в диапазоне между 0.95 и 1,05 г/смили от около 0,95 до около 1,10 г/см. В другом аспекте по настоящеу изобретению плотность масляной фазы не отклоняется больше чем на 10%, предпочтительно не больше чем на 5%, главным образом не больше чем на 3% от плотности водной фазы. Водная фаза включает все ингредиенты, которые находятся в непрерывной фазе, масляная фаза включает все компоненты, которые находятся в дисперсной фазе.
Было обнаружено, что хорошие диагностические результаты могут быть достигнуты с эмульсиями, имеющими размеры масляных капель в нано диапазоне. Согласно предпочтительному аспекту настоящего изобретения частицы прерывистой фазы имеют средний диаметр частиц предпочтительно в диапазоне от 1 до 500 нм, более предпочтительно от 10 до 400 нм и еще более предпочтительно от 50 до 350 нм, измеренных фотон корреляционной спектроскопией (PCS) при 25°C.
Еще один вариант осуществления изобретения является эмульсией по настоящему изобретению для использования в качестве медикамента.
Было обнаружено, что полуфторированное вещество, присутствующее в эмульсии по настоящему изобретению, захватывается моноцитами/макрофагами таким образом, что клетки становятся специфически меченными, что может быть использовано для диагностики в методах томографии. Неожиданно был обнаружен диагностический потенциал для визуализации воспалительных процессов, в частности в сердечно-сосудистой системе и лимфатических узлах.
Вследствие этого, эмульсии по настоящему изобретению подходят для использования в качестве контрастирующего вещества или вещества усиливающего контраст. В частности для методов ядерной магнитной резонансной томографии, эмульсии являются подходящими, поскольку указанное полуфторированное углеродное вещество эмульсий специфически обогащается и распределяется в воспалительных тканях.
Другой аспект настоящего изобретения является эмульсией по настоящему изобретению для использования в качестве вещества усиливающего контраст или контрастного вещества для диагностического выявления посредством процедуры томографии с использованием МР-методов.
19
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения является эмульсией по настоящему изобретению для использования в качестве контрастного вещества для диагностического выявления посредством процедуры томографии, в частности, когда процесс томографии основывается на измерении ядерного магнитного резонанса изотопаF.
Оценка соответствующих измерений и их преобразование в изображение известно специалисту, как может быть видно, например, из:
Haacke M E, Brown W R, Thompson M R, Venkasetan R: Magnetic Resonance Imaging-Physical Principles and Sequence Design, Wiley, New York, 1999;
Yu J X, Kodibagkar V D, Cui W, Mason R P. 19F: a versatile reporter for non-invasive physiology and pharmacology using magnetic resonance; Curr Med Chem.12: 819-48, 2005;
Wernick M N, Aarsvold J N Emission Tomography: The Fundamentals of PET and SPECT, Academic Press, London, 2004.
19
Эти эмульсии являются особенно подходящими для выявления воспалительных процессов. Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения эмульсия предназначена для диагностического выявления посредством процедуры томографии воспалительных процессов выбранных из группы, состоящей из воспалительной реакции по периферии инфарктов, например, инфаркту миокарда, инсульту; воспаления органов, например, миокардитов, энцефалитов, менингитов; множественного склероза; воспаления желудочно-кишечного тракта, например, болезни Крона; воспаления сосудов, как например, атеросклероза, в особенности нестабильной атероматозной бляшки; определения абсцессов и также артритов, где процесс томографии основан на измерении ядерного магнитного резонанса изотопа F.
В другом аспекте настоящего изобретения эмульсия предназначена для использования в диагностическом выявлениии, основанном на неинвазивных способах томографии сердечно-сосудистой системы, включая миокард, артерии и вены; воспалительных реакций, возникающих в болезненных процессах, таких как инфаркт миокарда, миокардит, атеросклероз и тромбоз, приводящих к воспалительным и дегенеративным процессам в сосудистой системе, обнаруженным в неврологии, например, инсульт или опухоль; пульмонологии, как например, тромбоза, воспаления, саркоидоза; гастроэнтерологии, например, опухолей, воспалительного заболевания кишечника такого как болезнь Крона; и ревматологии, например, аутоиммунных заболеваний сосудов, например, артерита Такаясу.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, включающему получение неинвазивных процедур томографии пациентом, которому была ранее введена эмульсия изобретения для того, чтобы растворить ее в кровотоке пациента.
Предпочтительно процедура неинвазивной томографии является процедурой МР томографии.
19
19
1
Еще в одном предпочтительном аспекте способа изобретения процесс томографии основывается на измерении ядерно-магнитного резонанса изотопа F или изотопа F и изотопа H.
19
18
19
18
Присутствие изотопов F и/или F во фторированных веществах дает преимущества в использовании уже известного и имеющегося в больницах оборудования, а именно ядерной магнитно-резонансной спектроскопии с изотопами F и/или использование позитронно-эмиссионной спектроскопии изотопов F.
Следующие патологии могут быть главным образом выявлены с использованием эмульсии согласно настоящему изобретению:
1) визуализация лимфатических узлов и их патологическое увеличение:
а) онкозаболевания, которые прямо воздействуют на лимфатические узлы: болезнь Ходжкина, неходжкинская лимфома;
б) опухолевые метастазы, например, рак молочной железы;
в) вирусные и бактериальные инфекции, например, сифилис, туберкулез;
2) воспалительные реакции в краевых зонах:
а) инфаркты, например, инфаркт миокарда, инсульт;
б) опухоли;
3) воспаление органов: миокорадит, энцефалит, менингит (оболочки церебрального и спинального мозга);
4) множественный склероз;
5) воспаление желудочно-кишечного тракта, например, болезнь Крона;
6) воспаление сосудов, например, атеросклероз, в частности так называемая «нестабильная атероматозная бляшка»;
7) выявление абсцессов;
8) выявление артрита.
Эмульсия по настоящему изобретению обычно вводится парентерально до начала процесса томографии. В предпочтительном варианте осуществления изобретения эмульсия вводиться внутривенно или внутрисуставно.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является способ выявления воспалительного процесса, включающий:
(а) введение эмульсии по настоящему изобретению субъекту в этом нуждающемуся; и
(б) томографию фторсодержащего вещества в указанном субъекте,
где, указанный воспалительный процесс предпочтительно выбирают из группы, состоящей из:
рака, который напрямую воздействует на лимфатические узлы; воспалительного процесса в краевых зонах инфаркта или опухоли; воспаления органа; множественного склероза; воспаления желудочно-кишечного тракта; воспаления сосудов; артритов и абсцессов.
Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является способ производства эмульсии по настоящему изобретению, содержащий следующие этапы:
i) предоставление смеси, включающей
а) полуфторированное соединение формулы (I);
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-CH (I),
где x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 1 до 10,
б) триглицерид, который является смешивающимся с полуфторированным веществом при 20°С, предпочтительно среднецепочечный триглицерид (СЦТ) и
в) эмульгатор, и
г) воду, и
ii) гомогенизирование смеси, предпочтительно гомогенизирование смеси в гомогенизаторе высокого давления;
iii) необязательно стерилизация эмульсии.
В другом аспекте способ производства включает этапы:
i) растворение полуфторированного соединения в триглицериде б), который является предпочтительно среднецепочечным триглицеридом; и
ii) эмульгирование фазы масла в водной фазе, предпочтительно в присутствии эмульгатора.
Согласно конкретному варианту осуществления изобретения водную композицию гомогенизируют так, чтобы получить гомогенную суспензию, до этого указанную водную композицию объединяют с масляной композицией.
В особом варианте осуществления изобретения гомогенизацию осуществляют при давлении большем чем или равном 350 бар или при давлении большем чем или равном 370 бар.
В особых вариантах осуществления изобретения способы производства эмульсий включают этапы растворения эмульгатора в водной среде (а не в масле), добавление фазы масла к водной фазе (а не наоборот), и гомогенизирование при давлении большем чем или равном 350 бар. Эти этапы приводят к эмульсиям с преимущественными свойствами касательно размера частиц и стабильности эмульсии.
Еще в одном особом варианте осуществления изобретения эмульсию упаковывают в заклеенные контейнеры и стерилизуют, например, путем нагревания до не менее 121°С (например, от 121°С до 123°С) с временем выдержки минимум 15 минут. Программа стерилизации в автоклаве может быть циклической.
Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является контейнер, содержащий эмульсию по настоящему изобретению. Материал контейнера предпочтительно выбирают из группы, состоящей из стекла или органических полимеров и их смесей. Предпочтительными органическими полимерами являются полиэтилен и/или полипропилен.
В предпочтительном варианте способа производства по настоящему изобретению указанный способ включает следующие этапы:
а) приготовление смеси путем:
а-1) приготовления смеси, включающей воду и эмульгатор,
а-2) приготовления гомогенной смеси, включающей полуфторированное вещество и триглицерид,
а-3) объединения смеси, полученной на этапе а)-1, со смесью, полученной на этапе а-2); и
б) гомогенизирование смеси, полученной на этапе а), предпочтительно гомогенизирование смеси, полученной на этапе а) с использованием гомогенизатора высокого давления.
В особенно предпочтительном варианте способа производства эмульсии по настоящему изобретению указанный метод включает следующие этапы:
а) приготовление смеси путем:
а-1) приготовления смеси, включающей водорастворимые компоненты эмульсии, предпочтительно смеси содержащей воду, эмульгатор и вещество, регулирующее тоничность, в частности смеси, содержащей воду, фосфолипид, олеат натрия и глицерин;
а-2) приготовления гомогенной смеси компонентов эмульсии, растворимых в масле, предпочтительно смеси, содержащей полуфторированное вещество, триглицерид и антиоксидант, более предпочтительно смеси, содержащей F6H8, СЦТ и альфа-токоферол,
а-3) объединения смеси полученной на этапе а)-1 со смесью, полученной на этапе а-2); и
б) гомогенизирование смеси, полученной на этапе а) для приготовления пре-эмульсии;
в) дальнейшее гомогенизирование смеси полученной на этапе б) с помощью гомогенизатора высокого давления.
Неожиданно было обнаружено, что наилучшие результаты могут быть получены путем гомогенизирования эмульсии на этапе б) и этапе в) при предпочтительной температуре в диапазоне между от 30°С до 70°С, более предпочтительно между 40°С и 60°С.
Еще в одном предпочтительном варианте способа производства применяют этап г), когда эмульсию стерилизуют, предпочтительно путем нагревания до не менее 121°С в течение минимум 15 минут.
Предпочтительные количества и компоненты эмульсии упомянуты относительно эмульсии по настоящему изобретению.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является способ проведения магнитно-резонансной томографии. В этом способе излучается переменное магнитное поле и детектируется абсорбция излучаемого магнитного поля образцом, предназначенным для исследования. Эти этапы способа соответствуют обычному проведению магнитно-резонансной томографии. Изобретенный способ служит детекции полуфторированного вещества формулы (I):
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-(CH) (I),
в котором в эмульсии настоящего изобретения x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 2 до 10.
Изобретенный способ характеризуется тем, что частота переменного поля находится между B × 40,045600 МГц/Т и В × 40,065600 МГц/Т, В является индукцией магнитного поля в Теслах.
Для того чтобы получить выше упомянутую частоту для переменного магнитного поля были осуществлены следующие этапы способа:
Сначала, частота переменного магнитного поля была выбрана с B x 40,05560 МГц/Т. Для того чтобы детектировать неизвестное вещество, содержащее атом фтора, используют широкую ширину полосы возбуждения и приема (например, +/- 5 кГц). Посередине эта полоса возбуждения является частотой возбуждения ядра атома фтора (40,05560 МГц/Т). Эту частоту устанавливают как нулевую позицию.
В процессе возбуждения характерный спектр неизвестного вещества, содержащего фтор, появляется с определенной частотой смещения. Если так не происходит, то выбранная ширина полосы (например, +/- 5 кГц) должна быть расширена.
После обнаружения специфического спектра при определенной частоте спектр возбуждения смещают путем выбора соответствующей частоты смещения. Авторы обнаружили, что частота смещения от +/-100 Гц до +/-10000 Гц является подходящей. При выборе такой частоты ширина полосы возбуждения и приема может быть значительно уменьшена, таким образом получая снижение шума, так, что может быть получено лучшее соотношение сигнала и шума.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу детекции в образце, предназначенном для изучения, полуфторированного вещества формулы I:
3
2
x
2
y
3
CF-(CF)-(CH)-(CH) (I),
в котором в эмульсии по настоящему изобретению x является целым в интервале от 1 до 8, а y является целым в интервале от 2 до 10. В этом способе излучается переменное магнитное поле и измеряется поглощение излученного магнитного поля образцом, предназначенным для изучения. Эти этапы относятся к обычному проведению магнитно-резонансной томографии.
19
1
1
19
19
19
Согласно этому изобретению не менее одного изображения протона фтора F великолепно накладывается поверх изображения H протона. Таким образом, изображение протонов H высвечивается как изображение серой шкалы а изображение протонов фтора F высвечивается с использованием цветного градиента, один конец этого цветного градиента указывает низкую концентрацию протонов фтора F, а другой конец этого цветного градиента указывает высокую концентрации протонов фтора F.
19
1
1
19
Эти методические этапы можно применять, например, для приписывания детектированного сигнала фтора определенной части тела пациента. Для этой цели можно интерполировать объем F и объем H для того, чтобы получить лучшее разрешение. Как пояснено изображение H протона высвечивается как изображение в серой шкале, в то время как изображение протона фтора F может быть высвечено, например, как цветной градиент, меняющийся, например, от черного к зеленому или от синего к красному. Сначала генерируется трехмерное изображение. Однако предпочтительно, чтобы последовательно генерировались двухмерные изображения каждого слоя, каждое из которых показывающее поперечное сечение образца предназначенного для исследования. Предпочтительно, чтобы вычислялись проекции максимальной интенсивности (MIP’s). Такие двухмерные послойные изображения показывают всеобъемлющим образом в какой анатомической структуре присутствует контрастное вещество.
19
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, возмущающие сигналы, генерированные протонами фтора F во втором образце не предназначенном для исследования элиминируются. Такие возмущающие сигналы могут быть, например, генерированы контрастным веществом в печени или селезенке пациента. Контрастное вещество в печени может вызвать очень сильный возмущающий сигнал, когда в течение процесса томографии пытаются выявить, например, воспаление в районе сердца пациента, так как печень расположена очень близко к сердцу.
Для того чтобы элиминировать такие возмущающие сигналы можно сравнивать значение для концентрации фтора в первой точке со значениями всех соседних точек в трехмерном пространстве вокруг первой точки. Таким образом, если разница между значениями для концентрации фтора двух соседних точек ниже порога, считается, что эти две точки принадлежат кластеру точек, например, печени пациента. Этот возмущающий кластер точек может быть удален из полученного изображения, если этот кластер не представляет образец, предназначенный для исследования (в данном случае сердце пациента). Удаление этого возмущающего кластера может быть осуществлено, например, вручную.
19
1
Когда накладываются изображения фтора F с изображением H протона, является предпочтительным, чтобы эти изображения были получены без изменения геометрии измерения, что означает, что оба набора данных содержат сигналы от одного и того же объема.
19
1
Шум, который может присутствовать в изображениях протонов фтора F, может быть подавлен путем усреднения различных поглощений. Измеряется стандартное отклонение σ этого шума, на основании чего 3 σ или 5 σ могут быть использованы как порог для сигнала, который предназначен для измерения. Это означает, что только сигналы, которые в три раза выше, чем стандартное отклонение от шума рассматриваются как являющиеся «реальными» сигналами. Этот порог может быть адаптирован пользователем так, что можно адаптировать полученные изображения к количеству шума. Является предпочтительным, чтобы последние упомянутые этапы метода не применяли к изображениям протонов H, так как они имеют более высокий ОСШ.
Все этапы способа, которые были обсуждены в контексте упомянутого изобретения, в основном связаны, с этапами обработки сигналов и, таким образом, могут быть осуществлены независимо от процесса получения данных в любое время и в любом месте. В частности выполнение этапов этого способа не требует присутствия тела пациента.
Предпочтительные варианты эмульсий, используемых в способах по настоящему изобретению, описаны относительно эмульсии по настоящему изобретению.
Ниже, изобретение также иллюстрируется путем примеров.
Экспериментальный раздел
ПРИМЕРЫ 1-3
Эмульсии экспериментального раздела обычно были приготовлены следующим образом:
1) смешивание эмульгатора с водой;
2) приготовление смеси гидрофобных компонентов таких как СЦТ, фторированного вещества и в некоторых случаях α-токоферола;
3) добавление водной смеси этапа 1) к масляной смеси этапа 2);
4) гомогенизирование эмульсии гомогенизатором высокого давления 3 раза при 700 бар и 2 раза при 1000 бар в гомогенизаторе высокого давления Panda Plus 2000.
Таблица 1 демонстрирует эмульсионные композиции масло в воде, а Таблица 2 демонстрирует соответствующие данные стабильности при хранении при 20°С. Количества, указанные в Таблице, являются массовыми % (масс.%) по отношению к совокупной массе эмульсии.
Таблица 1
Эмульсионные композиции масло в воде, соответствующие примерам по настоящему изобретению от 1 до 3 и Сравнительного примера 9
Компонент
Пример 1
Пример 2
Пример 3
Сравни-тельный пример 9
F6H8 <sup>1}</sup>
4
6
8
20
СЦТ <sup>2)</sup>
16
14
12
Lipoid E 80 <sup>3)</sup>
2
2
2
2
Вода
до 100
до 100
до 100
до 100
<sup>1</sup>) Перфторгексилоктан от Novaliq, Германия.
<sup>2</sup>) Среднецепочечные триглицериды (50-80 масс.% С<sub>8</sub>-жирной кислоты и 20-50 масс.% С<sub>10</sub>-жирной кислоты).
<sup>3</sup>) Яичный фосфолипид от Lipoid GmbH, Германия.
Таблица 2
Данные по стабильности при хранении эмульсий, соответствующих примерам с 1 по 3
Пример
Время хранения [дни]
Z средний [нм]
P.I.
pH
1
0
148,3
0,073
8,09
7
158,1
0,093
6,61
14
169,2
0,098
6,12
28
173,9
0,098
5,83
2
0
166,1
0,054
8,10
7
173,6
0,075
6,59
14
184,2
0,061
6,19
28
185,0
0,069
5,96
3
0
155,7
0,075
8,11
7
167,7
0,065
6,62
14
176,7
0,068
6,08
28
178,5
0,090
5,98
Средний диаметр частицы (Z средний) и индекс полидисперсности (P.I.) были определены путем фотонной корреляционной спектроскопии (ФКС).
Фиг. 1 демонстрирует данные по испытаниям на стабильность при хранении, как отражено в Таблице 2, а также данные, касающиеся сравнительного примера 9.
Фиг. 1А демонстрирует скорость роста частиц эмульсий, соответствующих примерам от 1 до 3 , а также сравнительного примера 9. Измерение скорости роста частиц было начато немедленно после производства эмульсии.
Фиг. 1А демонстрирует, что средний размер диаметра частиц масляных капель в течение 28 дней увеличивается на приблизительно 11% для примера 1, на приблизительно 15% для примера 2, и на приблизительно 17% для примера 3 и на приблизительно 23% для сравнительного примера 9. Скорость роста частиц увеличивается тем сильнее, чем выше концентрация полуфторированного вещества.
Фиг. 1Б демонстрирует зависимость увеличения скорости роста частиц от концентрации полуфторированного вещества F6H8.
Таблица 2А отражает данные, которые демонстрируются на Фиг. 1, 1А и 1Б. Испытания на хранение были проведены при 20°С.
Таблица 2А
Пример
Время хранения [дни]
Z средний [нм]
P.I.
Абсолютное увеличение скорости роста частиц [нм]
Относительное увеличение скорости роста частиц [%]
1
0
148,3
0,073
0,0
0,0
7
158,1
0,093
7,5
4,5
14
169,2
0,098
18,1
10,9
28
173,9
0,098
18,9
11,4
2
0
166,1
0,054
0,0
0,0
7
173,6
0,075
12,0
7,7
14
184,2
0,061
21,0
13,5
28
185,0
0,069
22,8
14,6
3
0
155,7
0,075
0,0
0,0
7
167,7
0,065
9,8
6,6
14
176,7
0,068
10,9
14,1
28
178,5
0,090
25,6
17,3
Сравни-тельный пример 9
0
132,4
0,181
0,0
0,0
7
154,1
0,183
21,7
16,4
14
156,2
0,187
23,8
18,0
28
163,4
0,177
31,0
23,4
Было обнаружено, что оптимизированный баланс высокой концентрации полуфторированного вещества (что является необходимым для достижения хорошего контраста в МР измерении) и стабильности при хранении эмульсии может быть достигнут, если плотность масляных капель (СЦТ и полуфторированное вещество) является приблизительно такой же, как и плотность водной фазы. Путем подгонки плотности масляной фазы к плотности водной фазы могут быть уменьшены феномен слияния капель и также феномен седиментации, которые дестабилизируют эмульсию.
Фиг. 1С демонстрирует результаты измерения плотности различных смесей СЦТ и F6H8.
Плотность масляной смеси соответствует плотности водной фазы при приблизительно 38,5 масс.% F6H8 и приблизительно 61,5 масс.% СЦТ (масса от совокупной массы масляной фазы).
СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫ 1-8, 9А И 10-12
Перфтороктилбромид (ПФОБ) является известным контрастным веществом для магнитно-резонансной спектроскопии. Было обнаружено, что ПФОБ не может быть растворен в СЦТ. Таким образом, эмульсии были приготовлены тогда, когда ПФОБ был стабилизирован перфтордецилбромидом (ПФДБ), который может быть растворен в ПФОБ.
Таблица 3 и Таблица 4 демонстрируют композиции эмульсии масла в воде сравнительных примеров 1-8, 9А и 10-12 и Таблица 6 демонстрирует соответствующие данные по стабильности при хранении при 20°С. Количества, указанные в таблицах 2 и 4, являются массовыми % (масс.%) по отношению к совокупной массе эмульсии.
Таблица 3
Сравнительные Примеры от 1 до 4
Компонент
Сравнительный пример 1
Сравнительный пример 2
Сравнительный пример 3
Сравнительный пример 4
ПФОБ <sup>1}</sup>
20
20
20
20
ПФДБ <sup>2)</sup>
0,2
1
2
4
Lipoid E 80 <sup>3)</sup>
2
2
2
2
Вода
до 100
до 100
до 100
до 100
<sup>1</sup>) Перфтороктилбромид от ABCR GmbH & Co, KG, Германия
<sup>2</sup>) Перфтордецилбромид от ABCR GmbH & Co, KG, Германия
<sup>3</sup>) Яичный фосфолипид от Lipoid GmbH, Германия
Таблица 4
Сравнительные Примеры от 5 до 8
Компонент
Сравнительный пример 1
Сравнительный пример 2
Сравнительный пример 3
Сравнительный пример 4
ПФОБ <sup>1}</sup>
20
20
20
20
ПФДБ <sup>2)</sup>
0,2
1
2
4
Lipoid S PC-3 <sup>3)</sup>
2
2
2
2
Вода
до 100
до 100
до 100
до 100
<sup>1</sup>) Перфтороктилбромид
<sup>2</sup>) Перфтордецилбромид
<sup>3</sup>) Фосфолипид сои от Lipoid GmbH, Германия
Таблица 5
Сравнительные примеры 9А и от 10 до 12
Компонент
Сравнительный пример 1
Сравнительный пример 2
Сравнительный пример 3
Сравнительный пример 4
ПФОБ <sup>1}</sup>
20
20
20
20
ПФДБ <sup>2)</sup>
0,2
1
2
4
Lipoid S 75 <sup>3)</sup>
2
2
2
2
Вода
до 100
до 100
до 100
до 100
<sup>1</sup>) Перфтороктилбромид от ABCR GmbH & Co, KG, Германия
<sup>2</sup>) Перфтордецилбромид от ABCR GmbH & Co, KG, Германия
<sup>3</sup>) Фосфолипид сои от Lipoid GmbH, Германия
Таблица 6
Данные по стабильности при хранении эмульсий, соответствующих сравнительным примерам от 1 до 8, 9А и от 10 до 12
Cравнительный пример
Время хранения [дни]
Z средний [нм]
P.I.
pH
1
0
168,5
0,128
6,93
7
314,3
0,197
5,59
14
310,0
0,217
5,14
28
316,5
0,242
4,52
2
0
119,7
0,187
6,75
7
270,8
0,150
5,55
14
278,4
0,221
5,35
28
267,6
0,187
5,32
3
0
157,7
0,155
7Д1
7
249,0
0,156
5,85
14
263,7
0,153
5,53
28
178,4
0,061
5,74
4
0
157,5
0,193
6,99
7
244,7
0,121
6,01
14
267,5
0,120
5,71
28
259,2
0,154
5,55
5
0
141,5
0,222
7,25
7
318,8
0,160
6,47
14
377,9
0,250
6,40
28
485,8
0,358
6,04
6
0
130,1
0,282
7,27
7
290,5
0,134
6,98
14
444,3
0,224
6,62
28
365,5
0,257
6,73
7
0
146,7
0,184
7,75
7
269,0
0,171
6,96
14
289,8
0,160
5,83
28
315,4
0,156
6,56
8
0
141,9
0,217
7,58
7
230,8
0,129
6,68
14
253,0
0,117
6,69
28
346,6
0,133
5,90
9A
0
170,1
0,117
7,29
7
272,8
0,114
6,38
14
283,2
0,121
5,79
28
249,6
0,071
5,23
10
0
152,4
0,137
7,18
7
241,8
0,094
5,96
14
233,5
0,100
5,59
28
243,3
0,092
5,29
11
0
165,5
0,128
7,18
7
217,5
0,115
6,04
14
224,1
0,136
6,03
28
224,8
0,096
5,66
12
0
144,9
0,135
7,24
7
207,0
0,127
5,78
14
212,4
0,092
5,97
28
208,9
0,107
5,71
Фиг. 2 демонстрирует данные по исследованиям стабильности при хранении как отражено в Таблице 6. В левой части фиг. 2 изображены данные для эмульсий, соответствующих Сравнительным примерам от 1 до 4, а в правой части - данные для эмульсий, соответствующих Сравнительным примерам от 5 до 8.
Фиг. 2А демонстрирует данные по исследованиям стабильности при хранении для Примеров 9А и от 10 до 12.
Как можно видеть из Таблицы 6 и Фиг. 2, а также из Фиг. 2А эмульсии сравнительных примеров от 1 до 8, 9А и от 10 до 12 демонстрируют значительное увеличение среднего размера частиц за время хранения в 28 дней.
В отличие от этого, эмульсии, соответствующие примерам от 1 до 3 настоящего изобретения, значительно более устойчивы при хранении. В течение времени хранения в 28 дней можно было наблюдать только незначительное увеличение среднего размера частиц эмульсии (Фиг.1 и Таблица 2).
Исследование с различными эмульгаторами
Неожиданно было обнаружено, что эмульсии по настоящему изобретению могут быть также стабилизированы путем выбора эмульгатора.
Эмульгатор Lipoid S PC-3 считается менее подходящим (Фиг.2) и не был в дальнейшем исследован для эмульсий настоящего изобретения.
Таблица 7 демонстрирует эмульсии по настоящему изобретению, соответствующие примерам 4 и 5.
Таблица 7
Эмульсия масло в воде, соответствующая примерам 4 и 5
Компонент
Пример 4
Пример 5
F6H8 <sup>1)</sup>
8
8
СЦТ <sup>2)</sup>
12
12
Lipoid E 80 <sup>3)</sup>
2
Lipoid S 75 <sup>4)</sup>
- - - - -
2
Олеат натрия
0,03
0,03
альфа-токоферол
0,02
0,02
Вода
до 100
до 100
<sup>1</sup>) Перфторгексилоктан от Novaliq, Германия.
<sup>2</sup>) Среднецепочечные триглицериды (СЦТ) (50-80 масс.% С<sub>8</sub>-жирная кислота; 20-50% С<sub>10</sub>-жирная кислота.
<sup>3</sup>) Яичный фосфолипид от Lipoid GmbH, Германия.
<sup>4</sup>) Фосфолипид от Lipoid GmbH, Германия (соевый фосфолипид с от 14 до 25 масс% гликолипида).
Затем эмульсии, соответствующие примеру 4 и примеру 5, анализируют на воздействие условий стерилизации на стабильность эмульсий. Эмульсии были стерилизованы в роторном автоклаве и сравниваются с нестерильными эмульсиями (условия стерилизации: нагревание при 121°С в течение 15 мин при 2 бар).
Таблица 8 демонстрирует данные по стабильности эмульсий, соответствующих примеру 4 и 5 без стерилизации и после стерилизации.
Таблица 8
Данные по стабильности при хранении для примеров 4 и 5 настоящего изобретения в условиях стерилизации и не стерилизации
Пример
Стерилизованная/Нестерилизованная
Время хранения [дни]
Z средний [нм]
P.I.
pH
4
Нестерилизованная
0
156,5
0,082
8,13
7
170,5
0,108
5,84
14
176,6
0,086
5,68
28
194,9
0,043
5,00
Стерилизованная
0
156,5
0,082
8,13
7
263,2
0,028
7,15
14
264,9
0,072
7,12
28
260,8
0,040
7,07
5
Нестерилизованная
0
170,6
0,102
8,00
7
176,9
0,080
6,40
14
177,7
0,075
5,12
28
167,0
0,067
4,07
Стерилизованная
0
170,6
0,102
8,00
7
177,0
0,059
8,09
14
178,9
0,095
8,00
28
175,4
0,086
7,93
Фиг. 3 демонстрирует данные по исследованиям стабильности при хранении, как отражено в Таблице 8. В левой части фиг. 3 изображены данные для эмульсий, соответствующих примеру 4 и в правой части данные по эмульсиям, соответствующим примеру 5.
Фиг. 3 и таблица 8 демонстрируют, что эмульсия, соответствующая примеру 5 является более стабильной, чем эмульсия примера 4. Эмульсия, соответствующая примеру 5, является также более стабильной после того как эмульсия была стерилизована в ротационном автоклаве.
Также эмульсии примеров 4 и 5 хранили в течение 168 дней при 40°С. Неожиданно было обнаружено, что эмульсия примера 5 даже при хранении при температуре 40°С не изменила значительно физическую стабильность (Фиг. 4).
Фиг.4 демонстрирует результаты исследования 3 образцов эмульсии, соответствующих примеру 5.
Фиг. 3А демонстрирует результаты исследования 3 образцов эмульсии, соответствующих примеру 4.
ПРИМЕР 6 НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ:
Таблица 9
Эмульсионная композиция, соответствующая примеру 6
Компонент
Пример 6
F6H8
8
СЦТ
12
Lipoid S 75
2
альфа-токоферол
0,02
Глицерин
2,5
Олеат натрия
0,03
NaOH
до pH 8,2
Вода
до 100
Эмульсия, соответствующая примеру 6, была приготовлена приготовлением гомогенной смеси F6H8, СЦТ и альфа-токоферола при 50°С. Отдельно смесь эмульгатора Lipoid S 75 и со-эмульгатора олеата натрия вместе с глицерином и водой смешивают в смешивающем приборе ротаторе/статоре (Ultra turrax) при 50°С при 15000 rpm в течение 20 минут. Далее смесь, содержащая СЦТ, F6H8 и альфа-токоферол добавляют к водной смеси и гомогенизируют при 50°С при помощи Ultra turrax (тип T 25 от IKA) при 20000 об/мин в течение 20 минут. Полученную пре-эмульсию затем также гомогенизируют в гомогенизаторе высокого давления (APV тип 1000/2000) [пять циклов при 500 бар и затем при 60 бар].
Полученную эмульсию затем стерилизуют при 121°С в течение 15 минут в автоклаве.
Неожиданно было обнаружено, что эмульсия примера 6 даже при температуре хранения 40°С не меняла существенно физическую стабильность даже через три месяца (Фиг.4А).
Фиг. 4А демонстрирует результаты исследования эмульсии, соответствующей примеру 6.
Эмульсионная композиция примера 6 была использована для МРТ измерений in vivo.
Для того чтобы проверить могут ли эмульсии F6H8/СЦТ быть визуализированы in vivo посредством МРТ и быть детектированы в ткани мишени, были проведены первичные фармакокинетические исследования.
Фиг. 5 демонстрирует эффекты пула крови в форме примера
19
Фиг. 5 демонстрирует эмульсию 6, соответствующую настоящему изобретению, в сердце в качестве ткани мишени пула крови. Типичные 3D реконструкции анатомической T2 TSE и цветных 3D F последовательностей были обычно реконструированы по одному набору данных от крысы в качестве совокупного набора данных (А) и удаленной печени путем компьютерной обработки (B). В нижнем ряду показан полный набор 3D данных (С) с сердцем в виде увеличенного фрагмента (D).
Таким образом, можно показать, что эмульсии, соответствующие настоящему изобретению, могут быть визуализированы in vivo в миокарде. Также было изучено изображение инфаркта при МРТ. Результаты представлены в приведенной ниже Фиг. 6.
Фиг. 6 демонстрирует: (А) Торакс крысы in vivo в поперечном срезе в области миокарда в T2-взвешенном МРТ изображении (1,5 Tesla, Philips), на которое наложено цветное 19F изображение (1H/19F), с той же геометрией через 24 часа после применения эмульсии, соответствующей Примеру 6. (B) Миокард, как увеличенный фрагмент (1H/19F) изображения, который демонстрирует обогащение содержащего фтор контрастирующего вещества на уровне инфаркта миокарда и область адгезии между перикардом и ребрами вызванной операцией. (С) In situ регистрация сердца крысы, которая показывает сильно выраженное воспаление перикарда (очерчено зеленым) рядом с областью пораженной инфарктом.
Таким образом, может быть показано, что контрастирующее вещество обогащается в области инфаркта. Также МРТ изображения были сравнены с гистологическими срезами, что показано на Фиг. 7.
Фиг. 7: (А) Торакс крысы in vivo в поперечном срезе в области миокарда в T2-взвешенном МРТ изображении (1,5 Tesla, Philips), которое совмещено с цветным 19F изображением (1H/19F) с той же геометрией через 24 часа после применения эмульсии, соответствующей Примеру 6. (B) Миокард в виде увеличенного фрагмента 1H/19F изображения, который демонстрирует обогащение содержащего фтор контрастирующего вещества на уровне инфаркта миокарда и область адгезии между перикардом и ребрами, вызванной операцией. (С) HE окрашивание примера короткого аксиального гистологического среза [7 мкм] миокарда крысы, пораженного инфарктом, показанного в А. Область миокарда пораженного инфарктом показана синим при окрашивании HE.
Эмульсии были исследованы в двух моделях:
модели инфаркта миокарда, временная линия которого отражена на Фиг. 8; и модели миокардита, время которого отражено на Фиг. 9.
Индукция инфаркта
В качестве животных были использованы SD-крысы, имевшие вес от 200 до 350 г.
Анестезия: этих животных усыпляют в камере для анестезии путем ингаляции изофлураном и затем анестезируют путем внутримышечного введения. Анестезия, которая обеспечивает свободу от боли даже в процессе анестезии должна быть гарантирована. Поэтому животные получают смесь анестезии и анальгезии с: 0,15 мг/кг медетомидина + 0,05 мг/кг фентанила + 2,0 мг/кг мидозалама в/м; противодействие осуществляется 0,75 мг/кг атипамизола + 0,12 налоксона + 0,2 мг/кг подкожно. Благодаря нашим предыдущим опытам с флюниксином (2,5 мг/кг подкожно) нам следует применять его в качестве препарата для послеоперационной болевой терапии. Если терапия не удается, нам следует рассматривать модификацию анальгетической терапии бупренорфином (0,05 мг/кг подкожно).
Далее, животные получают в/м введение атропина в течение последующего зондирования для поддержания циркуляции и для предохранения от раздражения блуждающего нерва.
Основанные на фторе контрастные вещества в сердечно-сосудистых заболеваниях
Даже если использование медетомидина является рекомендованным в основном только для животных со здоровой сердечно-сосудистой системой, следует ожидать что у здоровых молодых животных (запланированные кардиоторакальные измерения производятся с животными, имеющими массу тела около 200 г), механизм Франка Старлинга еще не полностью созрел. Вследствие этого брадикардия опосредованная центральной антисимпатикотонической активностью медетомидина может не быть достаточно скомпенсирована увеличенным объемом удара. Введение атропина вызывает усиление работы сердца. Однако вазоконстрикция, вызванная стимуляцией периферального α2 рецептора, практически не изменяет коронарный (также как и церебральный и ренальный) кровоток, таким образом специфическая сердечная нагрузка здесь не предполагается и хронотропный эффект атропина для общей ситуации циркуляции должен быть преобладающим. В силу вышесказанного, считается, что промежуточные условия гипертензивной циркуляции должны быть хорошо переносимы, что согласуется с клиническими наблюдениями во время послеоперационной фазы. Кроме того всегда принимается во внимание коронарное лигирование и его возможный (острый) эффект на осуществление сердцем накачивания. Однако, из-за сложности ручной операции и вариантов сосудистой анатомии исследуемых животных, универсальное правило не может быть сформулировано.
Гипертензивные эффекты затухают немедленно после постоперационного противодействия медетомидину, таким образом, что продолжение гипертензии остается в разумных пределах и, самое главное, контролируемым.
Так как животные интубируются в связи с операционным измерением, существуют риски раздражения блуждающего нерва (с последующей брадикардией), с одной стороны, и осложненной интубации в случае с повышенным слюноотделением с другой; последнее также согласуется с нашими собственными результатами. Эти риски могут быть снижены путем предоперационного введения атропина.
В итоге было найдено показание для предоперационного введения атропина.
После того как начался этап толерантности, крысу бреют и дезинфицируют с левой стороны.
Затем крысу присоединяют к дыхательному насосу, который установлен на частоте 75-80 ударов в минуту и объемом вдоха в 2,0 мл (для крыс с массой 200-250 г). Рекомендуется присоединять животное к дыхательному насосу как можно позднее до того как начинают торакотомию, так как искусственное дыхание всегда означает другое вмешательство в организм.
После присоединения дыхательного насоса, торакс может быть вскрыт при помощи изогнутого пинцета на уровне 5-го и 6-го ребер. Это должно быть сделано с высочайшей осторожностью, так как таким образом очень легко может быть повреждено легкое. Грудная полость должна быть вскрыта на протяжении длины от около 1,0 см до 1,5 см для того, чтобы ввести ранорасширитель. Как только создана достаточно широкая операционная область, если необходимо путем соответствующего рассечения мягкой ткани, должно быть определено течение левой коронарной артерии. Оно начинается от аорты между легочным стволом и левым ушком предсердия, легко узнаваемым по эпикардиальной жирной линии. Тем не менее, левая коронарная артерия часто может не быть видна, или только частично, так как коронарные сосуды крыс тянутся не на поверхности, а внутри миокарда. Основная ветвь левой коронарной артерии, ПМЖВ (передняя межжелудочковая ветвь; левая передняя нисходящая артерия), проходит практически прямо от корня аорты до верхушки сердца. Одна из проксимальных боковых цепей (D1 или D2) ПМЖВ перекрывается коронарной лигатурой. Зашивание боковой ветви D1 или D2 осуществляется путем одноузелкового шва. Окклюзия (проксимальной) ПМЖВ самой по себе могла бы вызвать чрезвычайно расширенный сценарий инфаркта, который только в редких случаях переживается животными. Затем грудную полость закрывают в двух слоях (реберный и кожный швы). Ребра закрывают двумя или тремя одноузелковыми швами. Грудные мышцы всего лишь накладывают одну поверх другой. Кожный шов закрывают продолжительным скорняжным швом.
Через 3 дня после лигатуры животным вводят эмульсии, содержащие фтороуглеводород. После последующих 24 часов проводят МРТ анализ (см. Фиг.8).
Всем животным вводят обезболивающее каждые 12 часов в течение всей продолжительности исследования в течение 6 дней: флюниксин (Финадин) 2,5 мг/кг массы тела п/к.
Общие данные развития, такие как масса и поведение, получают от всех животных дважды в неделю.
Хирургия инфаркта
Этих животных усыпляют в камере для анестезии путем ингаляции изофлюраном и затем анестезируют путем внутримышечного введения смешанного раствора Domitor/Dormicum (0,3 мг медетомидина и 4 мг мидазолама на кг массы тела). Далее животные получают введение атропина (0,01 мг атропина на кг массы тела, п/к) в течение последующей интубации для поддержания циркуляции и предохранения блуждающего нерва от раздражения.
МРТ исследования
Животные получают только ингаляционную анестезию (кислород + изофлюран 2,0%). Последняя хорошо переносима, и животные не имеют впоследствии долгой фазы просыпания.
Животным, пока находятся под наркозом, через хвостовую вену вводят контрастное вещество на основе фтора.
Модель воспаления миокарда
Все животные получают внутривенное введение доксорубицина или изотонического солевого раствора один раз в неделю в течение 6 последующих недель. Каждое введение проводят под общей анестезией. Через неделю после последнего введения животным вводят эмульсию настоящего изобретения. Через 24 часа проводят МРТ анализ.
Эмульсия в соответствии с Примером 6 была модифицирована таким образом, что эмульгатор был заменен на пегилированный фосфолипид. Было обнаружено, что опсонизация частиц эмульсии значительно уменьшается. Благодаря этому эффекту ожидалось, что количество фторуглеродного вещества (F6H8) в области воспаления будет ниже предела чувствительности. Однако было неожиданно обнаружено, что миокардиты могут быть даже увидены с помощью томографии, что показано на Фиг.11.
В дни исследования путем МРТ, животные получают ингаляционную анестезию (смесь изофлюрана и кислорода 1,5%-2,5%). Далее, в ходе исследования зависящего от группы, к которой они принадлежат, животным через хвостовую вену вводят дозу соединения контрастного вещества, основанного на фторе. После последнего МРТ исследования соответствующее животное умерщвляют путем введения сверхдозы изофлюрана и затем извлекают органы.
Все животные дополнительно получают анальгезию. Для этой цели применяют парацетамол (LA), так как он имеет только не большое противовоспалительное действие. Животные получают парацетамол через питьевую воду в дозировке 150 мг/кг массы тела в течение всего экспериментального периода.
Общие данные развития, такие как вес и поведение, получают ежедневно от всех животных.
Индукция миокардита
Животные получают только ингаляционную анестезию (кислород + изофлюран 2,0% + веселящий газ). Последняя хорошо переносима и не приводит к пролонгированной фазе просыпания. С началом анестезии животные получают соответствующую анальгезию.
МРТ исследования
Животные получают только ингаляционную анестезию (кислород + изофлуран 2,0%). Последняя хорошо переносима и не приводит к пролонгированной фазе просыпания. Животным, пока находятся под наркозом, через хвостовую вену вводят основанное на фторе контрастное вещество.
Результаты МР исследования инфаркта, леченного композицией Примера 6, отражены на Фиг. 10, а миокардита, когда животное лечат эмульсией, как описано в Примере 6, за исключением того, что эмульгатор заменен на пегилированный фосфолипид, отражены на Фиг. 11.