СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ СОСТАВОВ ПНЕВМОКОККОВЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ ДЛЯ КОНЪЮГАЦИИ С БЕЛКОМ-НОСИТЕЛЕМ

1. Способ уменьшения размера полисахарида S. pneumoniae из серотипа 12F, 23A, 24F или 31, включающий подвергание полисахарида реакции кислого гидролиза для получения продукта полисахарида с уменьшенным размером.
2. Способ по п.1, где реакцию кислого гидролиза проводят в присутствии по меньшей мере одной кислоты.
3. Способ по п.1 или 2, где pH реакции кислого гидролиза составляет от 1,0 до 5,0.
4. Способ по п.3, где pH составляет от 2,0 до 4,0.
5. Способ по п.3, где pH составляет от 2,5 до 3,0.
6. Способ по п.2, где кислота представляет собой уксусную кислоту, соляную кислоту, фосфорную кислоту или лимонную кислоту, или их смесь.
7. Способ по п.6, где кислота представляет собой уксусную кислоту.
8. Способ по п.6, где концентрация уксусной кислоты составляет от 50 до 200 мМ, или концентрация соляной кислоты составляет от 1 до 5 мМ.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где реакцию кислого гидролиза проводят при температуре от 80°C до 92°C.
10. Способ по любому из пп. 1-9, включающий нейтрализацию реакции кислого гидролиза посредством добавления фосфата калия.
11. Способ по любому из пп. 1-10, дополнительно включающий стерилизацию фильтрацией или диафильтрацию полисахарида с уменьшенным размером.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где продукт полисахарида с уменьшенным размером имеет среднюю молекулярную массу ниже 150 кДа.
13. Способ получения конъюгата полисахарид-белок, включающий реакцию полисахарида в первом растворе с белком во втором растворе для получения третьего раствора, в котором происходит реакция конъюгации полисахарида с белком с образованием конъюгата полисахарида с белком, где третий раствор содержит по меньшей мере 1 мМ соль.
14. Способ по п.13, где соль содержит моновалентный или двухвалентный катион.
15. Способ по п.14, где соль представляет собой соль натрия, соль калия, соль лития, соль магния или соль кальция.
16. Способ по п.15, где соль представляет собой хлорид натрия.
17. Способ по п.16, где концентрация хлорида натрия в третьем растворе составляет от 1 до 100 мМ.
18. Способ по любому из пп. 13-17, где соль присутствует в первом растворе.
19. Способ по любому из пп. 13-17, где соль присутствует во втором растворе, содержащем белок.
20. Способ по любому из пп. 13-17, где первый раствор и второй раствор являются одинаковыми.
21. Способ по любому из пп. 13-17, где соль присутствует в третьем растворе.
22. Способ по любому из пп. 13-17, где третий раствор представляет собой водный раствор.
23. Способ по любому из пп. 13-17, где третий раствор содержит апротонный растворитель.
24. Способ по п.23, где апротонный растворитель представляет собой DMSO.
25. Способ по любому из пп. 13-24, где реакция конъюгации представляет собой восстановление шиффова основания или восстановительное аминирование.
26. Способ по любому из пп. 13-25, где полисахарид происходит из S. pneumoniae.
27. Способ по п.26, где полисахарид происходит из S. pneumoniae серотипа 15A, 16F, 17F, 20, 23A, 24F или 35B.
28. Способ по любому из пп. 13-27, где белок представляет собой столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин или CRM197.
29. Способ по п.28, где белок представляет собой CRM197.
30. Способ лиофилизации раствора, содержащего полисахарид, включающий:
a) добавление сахара к раствору, содержащему полисахарид, для получения массового соотношения сахара:полисахарида по меньшей мере 30; и
b) лиофилизации раствора, содержащего полисахарид.
31. Способ по п.30, где сахар представляет собой невосстанавливающий сахар.
32. Способ по п.30, где сахар представляет собой моносахарид или дисахарид.
33. Способ по п.32, где сахар представляет собой маннит, сахарозу, трегалозу или их комбинацию.
34. Способ по любому из пп. 30-33, где полисахарид выбран из группы, состоящей из менингококковых полисахаридов, пневмококковых полисахаридов, полисахарида Hemophilus influenzae типа b, полисахарида Vi Salmonnella typhi и полисахаридов стрептококка группы B.
35. Способ по п.34, где полисахарид представляет собой полисахарид S. pneumoniae.
36. Способ по п.35, где полисахарид S. pneumoniae не растворяется в условиях, когда массовое соотношение сахара:полисахарида составляет 25 или выше.
37. Способ по п.35, где полисахарид S. pneumoniae происходит из серотипа 3, 8 или 24F.
38. Способ по любому из пп. 30-37, где массовое соотношение сахара:полисахарида составляет по меньшей мере 40 или по меньшей мере 50.
39. Способ по любому из пп. 30-38, где концентрация сахара составляет более, чем 5%.
40. Способ по любому из пп. 30-39, где раствор, содержащий полисахарид, дополнительно содержит белок.
41. Способ по п.40, где белок выбран из группы, состоящей из столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина и CRM197.
42. Способ по любому из пп. 30-41, дополнительно включающий конъюгацию полисахарида с белком.
43. Способ по п.42, где белок выбран из группы, состоящей из столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина и CRM197.
44. Способ по п.43, где белок представляет собой CRM197.
45. Способ по любому из пп. 42-44, где указанная конъюгация происходит посредством восстановительного аминирования.
46. Способ по п.45, где восстановительное аминирование проводят в водных условиях.
47. Способ по п.45, где восстановительное аминирование проводят в диметилсульфоксиде (DMSO).