СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИЦЕЛИЯ Grifola frondosa
METHOD OF GROWING MYCELIUM OF Grifola frondosa

Изобретение относится к биотехнологии и сельскохозяйственному производству, в частности к грибоводству.
Известен способ выращивания мицелия высших грибов, включающий высевание базидиоспор на питательную среду и инкубирование их до образования мицелия (Патент РФ 2101914, опубл. 20.01.1998, A01G 1/04). Недостатком данного способа является его значительная трудоемкость и технологическая сложность прохождения этапов данного способа, что в значительной степени увеличивает продолжительность способа и увеличивает материальные затраты.
2
4
4
2
2
4
3
-4
Известен способ получения посевного мицелия съедобных грибов (Патент РФ 2249614, опубл. 21.03.2003 г., C12N 1/14, A01G 1/04), включающий выращивание посевного мицелия на картофельно-пшеничную питательную среду следующего состава (вес.ч.): мука - 20 г, картофельный отвар - из расчета 200 г картофеля на 1 л воды. Культуру выращивали при температуре 26 градусов в течение 3-х дней. В качестве стимулятора роста использовали суспензию бактерий Azospirillum brasilense Sp 7, выращенный на синтетической жидкой среде следующего состава (г/л): KHPO - 13,61; NaOH - 1,7; FeSO·7НО - 0,01; CaCl 2-0,026; NaMoO - 0,002; MgSO4 - 0,2; KNO - 0,05; биотин - 10; фруктоза - 1,44; pH - 6,8. Выращивание осуществляли при температуре 30-35°C. Недостатком данного способа являются трудоемкость получения мицелия из-за необходимости выращивания культуры на картофельно-пшеничной питательной среде с использованием стимулятора роста бактерий Azospirillum brasilense Sp 7, a также увеличение материальных затрат.
Наиболее близким является способ выращивания мицелия Boletus edulis, предусматривающий высевание базидиоспор белого гриба Boletus edulis на питательную среду, инкубирование их до образования первичного мицелия, отбирают образованный первичный мицелий, вносят его в емкость с питательной средой и инкубируют в темноте при температуре 20-24°C до 30 дней с образованием на поверхности среды мицелия. (Патент РФ 2239984, опубл. 20.11.2004, A01G 1/04).
Недостатком данного способа является длительность технологического процесса.
Задачей настоящего изобретения разработка способа выращивания мицелия Grifola frondosa с целью увеличения воздушно-сухой массы мицелия без каких-либо химических добавок, что позволяет выращивать экологически чистый продукт с конкурентоспособными свойствами.
2
Поставленная задача решается тем, что способ выращивания мицелия Grifola frondosa включает приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде в присутствии стимулятора роста, но в отличие от прототипа в качестве стимулятора роста используют селективный свет с длиной волны 620-680 нм, интенсивностью 0,88-1,77 Вт/м в течение 60-90 минут при температуре 22-26°C, 25-30 дней.
Объектом наших исследований стал один из известных базидиальных грибов Grifola frondosa или майтаке, используемый в восточной медицыне несколько сотен лет. Майтаке - это лекарственный гриб, который использовался издревле в Японии и Китае для поддержания жизненных сил. Майтаке имеет ряд уникальных лечебных свойств. Это тоник, повышающий энергетическое состояние организма, это иммуномодулятор, который укрепляет и нормализует работу иммунитета человека, это гриб, повышающий стрессоустойчивость и выносливость организма, а следовательно, является адаптогеном, помогает организму адаптироваться к стрессовым ситуациям и нормализует все функции организма.
Было обнаружено, что Майтаке успешно подавляет опухоли, эффективно защищает от гепатита, стабилизирует артериальное давление, регулирует уровень сахара в крови и холестерин, разрушает вирусы в том числе вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).
На сегодняшний день из плодовых тел и мицелия этого гриба выделено более 30 биологически активных веществ, по большей части полисахаридов, имеющих иммуностимулирующую активность, антивирусные и антигиперлипидные свойства. Глюканы с Grifola frondosa также вызывают гибель раковых клеток и проявляют синергизм в отношении химиотерапевтических препаратов, уменьшая их побочное действие.
Предлагаемый способ выращивания мицелия реализуется следующим образом. В заявленном изобретении используют агаризованную питательную среду Чапека, которая готовится путем смешения всех необходимых компонентов и автоклавирования 15-30 мин при 1-1,5 атм.
Для выращивания мицелия используют стеклянные чашки Петри, после предварительной стерилизации в сухожаровом шкафу 2 ч 20 мин при 160°C остужают их и разливают питательную среду, так чтобы дно чашки было полностью покрыто на 1-2 мм, эту и все дальнейшие процедуры проводят в стерильных условиях (ламинарном боксе).
Чашки оставляют на некоторое время в ламинарном боксе (на 10-15 минут), для того чтобы среда застыла. На застывшую питательную среду, в центр чашки Петри высаживают мицелий определенного штамма Grifola frondosa. После посева чашки Петри закрывают парафилмом (пленкой для герметизации открытых сосудов) и экспанируют сутки в темноте при температуре 24-26°C. Следующим этапом является стимуляция роста селективным светом с длиной волны 620-680 нм, по 1-90 минут ежедневно, при температуре 22-26°C, чашки при этом выставляют на специальные световые установки, остальное время чашки находятся в темноте при той же температуре. Эта процедура продолжается до полного обрастания поверхности субстрата (25-30 дней).
На рисунке 1 изображена разница показаний воздушно-сухой массы мицелия Grifola frondosa, выращенного при 60-минутном освещении красным селективным светом по сравнению с контролем в темноте.
Примеры конкретного осуществления
2
Пример 1. Способ выращивания мицелия Grifola frondosa, включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде при температуре 22-26°C. В качестве посевного материала используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 60 мин красным селективным светом (650 нм), интенсивностью 0,88 Вт/м при температуре 22-26°C до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 25-30 дней.
2
Пример 2. Способ выращивания мицелия Grifola frondosa, включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде при температуре 22-26°C. В качестве посевного материала используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 90 мин красным селективным светом (650 нм), интенсивностью 1.77 Вт/м при температуре 22-26°C до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 25-30.
Использование данного способа выращивания позволяет существенно ускорить выход мицелия, без поражения его на этапе разрастания низшими грибами, за счет полной стерильности процесса, а также отсутствия химических добавок для культивирования позволяет обеспечить его экологическую чистоту, а также увеличить выход воздушно-сухой массы мицелия.