ФАГОВЫЙ ДИСПЛЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОТРАНСЛЯЦИОННОЙ ТРАНСЛОКАЦИИ СЛИТЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ

1. Способ проявления с применением нитчатого фага, в котором исследуемые полипептиды, кодируемые библиотекой ДНК, проявляют на фаговых частицах, причем исследуемые полипептиды котрансляционно транслоцируются через цитоплазматическую мембрану грамотрицательных бактерий.
2. Способ по п.1, в котором котрансляционная транслокация осуществляется, основываясь на метаболическом пути сигнал-распознающих частиц.
3. Способ по п.п.1 или 2, в котором сигнальная последовательность, применяемая для транслокации исследуемого полипептида, подвергаемого проявлению на фаговой частице, является сигнальной последовательностью, индуцирующей котрансляционную транслокацию TrxA.
4. Способ по пп.1 или 2, в котором сигнальную последовательность, применяемую для транслокации исследуемого полипептида, подвергаемого проявлению на фаговой частице, выбирают из группы, включающей сигнальные последовательности TorT, SfmC, FocC, CcmH, Yral, TolB, NikA, FlgI, и DsbA, a также их гомологи.
5. Способ по п.4, в котором сигнальную последовательность, применяемую для транслокации исследуемых полипептидов, подвергаемых проявлению на фаговых частицах, выбирают из группы, включающей сигнальные последовательности TorT, SfmC, TolB и DsbA.
6. Способ по пп.1 или 2, в котором исследуемые полипептиды, подвергаемые проявлению на фаговых частицах, являются повторяющимися белками.
7. Способ по пп.1 или 2, включающий стадии
(а) конструирования вектора в виде нитчатого фага или фагмиды, содержащего экспрессирующую кассету для слитого полипептида, имеющего N-концевую сигнальную последовательность, индуцирующую котрансляционную транслокацию слитого полипептида через цитоплазматическую мембрану грамотрицательных бактерий;
(б) конструирования комбинаторной библиотеки фаговых или фагмидных векторов путем клонирования библиотеки ДНК, кодирующей исследуемые полипептиды в экспрессирующей кассете вектора стадии (а);
(в) трансформации соответствующих грамотрицательных бактерий библиотекой векторов стадии (б) и
(г) осуществления циклов отбора способом фагового дисплея для разделения фаговых частиц на основании свойств проявленных исследуемых белков.
8. Способ проявления с применением нитчатого фага, в котором исследуемый полипептид, проявленный на частице фага, котрансляционно транслоцируется через цитоплазматическую мембрану грамотрицательных бактерий, используя сигнальную последовательность, выбранную из группы, включающей сигнальные последовательности TorT, SfmC, FocC, CcmH, YraI, TolB, NikA, FlgI и DsbA, а также их гомологи.
9. Способ по п.8, в котором сигнальная последовательность выбрана из группы, состоящей из сигнальных последовательностей TorT, SfmC, ToBl и DsbA.
10. Фаговый или фагмидный вектор, включающий генную конструкцию, кодирующую слитый белок, включающий исследуемый полипептид, подвергаемый проявлению на фаговых частицах, и сигнальную последовательность, выбранную из группы, состоящей из сигнальных последовательностей TorT, SfmC, FocC, CcmH, YraI, TolB, NikA, FlgI и DsbA, a также их гомологов.
11. Вектор по п.10, в котором сигнальная последовательность выбрана из группы, состоящей из сигнальных последовательностей TorT, SfmC, TolB и DsbA.
12. Библиотека фаговых или фагмидных векторов, включающих генные конструкции, кодирующие слитые белки, причем каждый из белков включает сигнальную последовательность, активирующую котрансляционную транслокацию TrxA, и исследуемый полипептид, подвергаемый проявлению на фаговых частицах, причем каждый исследуемый полипептид кодируется представителем библиотеки ДНК.
13. Библиотека векторов по п.12, в которой сигнальная последовательность выбрана из группы, состоящей из сигнальных последовательностей TorT, SfmC, FocC, CcmH, YraI, TolB, NikA, FlgI и DsbA и их гомологов.
14. Библиотека векторов по п.12, в которой сигнальная последовательность выбрана из группы, состоящей из сигнальных последовательностей TorT, SfmC, TolB и DsbA.
15. Библиотека векторов по одному из пп.12-14, в которой библиотека ДНК, кодирующая исследуемые полипептиды, является библиотекой ДНК, кодирующей повторяющиеся белки.