Связь полиморфизма гена Toll-подобного рецептора 2 с риском развития митральных пороков сердца

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Статья поступила в редакцию 8.04.2015 г.

Понасенко А.В., Хуторная М.В., Кутихин А.Г., Южалин А.Е., Хрячкова О.Н., Головкин А.С.

ФГБНУ НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний,

г. Кемерово, Россия,

Кафедра онкологии, Оксфордский институт радиационной онкологии, Оксфордский университет, Оксфорд, Соединенное Королевство Великобритании и Северной Ирландии Северо-Западный Федеральный медицинский исследовательский центр,

г. Санкт-Петербург, Россия

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TdJJ-ПОДОбНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ пороков СЕРДЦА

Предметом исследования явились 80 пациентов, перенесших операцию репротезирования митрального клапана по поводу его стеноза на фоне кальцификации, и 300 доноров крови.

Цель исследования - выявить полиморфизмы генов рецепторов врожденного иммунного ответа (TLR1 (rs5743551, rs5743611), TLR2 (rs3804099, rs5743708), TLR4 (rs4986790, rs4986791), TLR6 (rs3775073, rs5743810), TREM-1 (rs1817537, rs3 8 0 4277, rs6910730, rs7768162, rs2234246, rs4711668, rs9471535, rs2234237)), имеющих значение при формировании пороков и кальцификации биопротезов митральных клапанов сердца.

Методы исследования. Генотипирование методом аллель-специфичной ПЦР в реальном времени.

Основные результаты. Генотип C/T rs3804099 TLR2 статистически значимо ассоциирован с более чем двукратным увеличением риска развития митральных пороков сердца (ОШ = 2,17; 95% ДИ = 1,28-3,67; P = 0,004, с поправкой на пол и возраст). Особенно данный эффект был выражен у женщин (ОШ = 3,15; 95% ДИ = 1,44-6,90; P = 0,0093, с поправкой на возраст) и у пациентов старше 50 лет (ОШ = 2,65; 95% ДИ = 1,13-6,22; P = 0,025, с поправкой на пол). Область применения. Кардиология и кардиохирургия.

Выводы: В формировании пороков и кальцификации биопротезов митральных клапанов сердца имеется вклад полиморфизмов генов рецепторов врожденного иммунитета, причем у женщин и возрастных пациентов их эффекты выражены интенсивнее.

Ключевые слова: пороки сердца; кальцификация митрального кольца; интерлейкин-6; полиморфизмы генов; биопротезы клапанов сердца.

Ponasenko A.V., Khutornaya M.V., Kutikhin A.G., YuzhaJin A.E., Hryachkova O.N., Golovkin A.S.

Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia,

Department of Oncology, Cancer Research UK and Medical Research Council Oxford Institute for Radiation Oncology, University of Oxford, Oxford, United Kingdom,

Federal North-West Medical Research Centre, St. Petersburg, Russia

TOLL-LIKE RECEPTOR 2 GENE POLYMORPHISM IS ASSOCIATED WITH RISK OF MITRAL VALVE DISEASE Subject. A total of 80 consecutive Russian patients who underwent mitral valve replacement surgery due to mitral valve disease and 300 healthy age, gender, and ethnicity-matched blood donors recruited in the study.

Aim - to investigate the genes encoding innate immune receptors (TLR1 (rs5743551, rs5743611), TLR2 (rs3804099, rs5743708), TLR4 (rs4986790, rs4986791), TLR6 (rs3775073, rs5743810), TREM-1 (rs1817537, rs3804277, rs6910730, rs7768162, rs2234246, rs4711668, rs9471535, rs2234237)) with the aim to find polymorphisms with functional consequences that may predict the risk of mitral valve disease and bioprosthetic mitral valve failure due to calcification.

Methods. Allele-specific real-time polymerase chain reaction.

Results. We have found that C/T genotype of rs3804099 polymorphism within TLR2 gene has been associated with more than 2-fold risk increase (OR = 2,17; 95% CI = 1,28-3,67; P = 0,004, adjusted by age and gender). Furthermore, it has been even higher in females (OR = 3,15; 95% CI = 1,44-6,90; P = 0,0093, adjusted by age) and in subjects over 50 years of age (OR = 2,65; 95% CI = 1,13-6,22; P = 0,025, adjusted by gender).

Field. Cardiology and cardiac surgery.

Conclusions. Polymorphisms of genes encoding innate immune receptors have an impact on mitral valve disease and bioprosthetic heart valve calcification, particularly in females and elderly.

Key words: valvular heart disease; mitral annular calcification; interleukin-6; gene polymorphisms;

bioprosthetic heart valve.

Наиболее частой причиной формирования стенозов митрального клапана сердца является их кальцификация [1], что ассоциировано с формированием сердечно-сосудистых заболеваний

Корреспонденцию адресовать:

ПОНАСЕНКО Анастасия Валериевна,

650002, г. Кемерово, ул. Сосновый бульвар, д. 6, ФГБНУ НИИ КПССЗ.

Тел.: +7-951-591-05-50:8 (3842) 64-41-56.

E-mail: ponasenkoav@list.ru

и в полтора раза увеличивает риск летального исхода при этой патологии. К настоящему времени не найдено эффективных консервативных методов предотвращения и лечения стенозов клапанов сердца и операция по их протезированию в ряде случаев является единственно возможным способом сохранения жизни пациенту [2]. В отличие от механических протезов клапанов сердца, биологические протезы обладают рядом преимуществ, в том числе позволяют в послеоперационном периоде отказаться от постоянного приема антикоагулянтов [3]. Однако биома-

24

T. 14 № 2 2015

Medicine

in Kuzbass

в Кузбассе

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА

териал, применяемый для изготовления биологических протезов митрального клапана, в процессе эксплуатации подвергается прогрессивным дегенеративным изменениям, одной из основных причин которой является кальцификация [4]. В то же время, в гистологических препаратах створок клапанов сердца с кальцинатами присутствуют признаки хронического воспаления, активным участником которого является система врожденного иммунного ответа [5].

Таким образом, кальцификация митрального клапана (КМК) является сложной проблемой, требующей изучения с различных позиций. Так же из литературных источников известно, что имеется семейная предрасположенность к КМК [6], одновременно имеются данные о популяционных различиях в частоте дисфункций биопротезов, обусловленных кальцификацией, между населением европейской части России и юга Западной Сибири [7]. Однако, к настоящему времени не определено безусловных геномных предикторов кальцификации ни нативных, ни биопротезов митрального клапана [8]. В то же время, выявление генов-кандидатов кальцификации может помочь в определении механизмов КМК и обеспечить патогенетически обоснованное лечение этой патологии.

Наиболее распространённым способом определения вклада отдельных генов в течение заболевания является анализ ассоциаций однонуклеотидных полиморфизмов генов-кандидатов с изучаемым патологическим процессом. Однонуклеотидные полиморфизмы, в зависимости от их места в гене, могут иметь различные последствия: изменять аминокислотный состав кодируемого белка или белковый сплайсинг, или скорость и/или количество синтезируемого белка, что, в свою очередь, оказывает влияние на биологическую функцию белка [9].

Цель исследования — определить наличие ассоциаций между отдельными полиморфизмами некоторых генов рецепторов врожденного иммунного ответа (гены рецепторов системы TLR и TREM-1) и пороками сердца, обусловленными кальцификацией митрального клапана.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследуемая группа

Критериями включения в исследование были принадлежность к русскому этносу, проживание в Кеме-

ровской области на протяжении как минимум двух поколений, операция по замене митрального клапана вследствие его пороков и подписание протокола информированного согласия на участие в исследовании. Критериями исключения были наличие злокачественных опухолей в анамнезе, а также сопутствующие аутоиммунные и психические заболевания.

В исследование были включены 102 пациента, поступивших в НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний (г. Кемерово, Россия) в период с 2011 по 2013 гг. и перенесших операцию по замене митрального клапана вследствие его пороков. Стоит отметить, что 22 пациента были исключены из исследования в соответствии с указанными выше критериями. В конечном итоге в опытную группу были включены 80 пациентов (26 мужчин и 54 женщины) в возрасте от 25 до 69 лет (средний возраст 50,77 лет, 95% доверительный интервал (ДИ) для среднего 48,83-52,70 лет, стандартное отклонение 8,52 года). Несостоятельность биопротеза митрального клапана вследствие кальцификации была диагностирована у 23 пациентов (29,87 %). Клинико-патологические характеристики исследуемых больных представлены в таблице 1.

Контрольная группа была сформирована из асим-птомных доноров крови (300 человек, 110 мужчин,

Таблица 1

Клинико-патологические характеристики пациентов, перенесших операцию по замене митрального клапана

Table 1

Clinical and pathological characteristics of patients undergoing surgery for replacement of the mitral valve

Характеристика Количество, N

Недостаточность митрального клапана 70

III-IV функционального класса

Артериальная гипертензия 23

Сахарный диабет 6

Стабильная стенокардия 9

Инфаркт миокарда в анамнезе 6

Острое нарушение мозгового 10

кровообращения в анамнезе

Заболевания периферических артерий 2

Хронической пиелонефрит 16

Кальцификация биопротеза митрального клапана 23

Сведения об авторах:

ПОНАСЕНКО Анастасия Валериевна, канд. мед. наук, зав. лабораторией геномной медицины, отдел экспериментальной и клинической кардиологии, ФГБНУ НИИ КПССЗ, г. Кемерово, Россия. E-mail: ponasenkoav@list.ru

ХУТОРНАЯ Мария Владимировна, мл. науч. сотрудник, лаборатория геномной медицины, отдел экспериментальной и клинической кардиологии, ФГБНУ НИИ КПССЗ, г. Кемерово, Россия. E-mail: masha_hut@mail.ru

КУТИХИН Антон Геннадьевич, мл. науч. сотрудник, лаборатория геномной медицины, отдел экспериментальной и клинической кардиологии, ФГБНУ НИИ КПССЗ, г. Кемерово, Россия. E-mail: antonkutikhin@gmail.com

ЮЖАЛИН Арсений Евгеньевич, аспирант, кафедра онкологии, Оксфордский институт радиационной онкологии, Оксфордский университет, Оксфорд, Соединенное Королевство Великобритании и Северной Ирландии. E-mail: yuzhalin@gmail.com ХРЯЧКОВА Оксана Николаевна, мл. науч. сотрудник, лаборатория геномной медицины, отдел экспериментальной и клинической кардиологии, ФГБНУ НИИ КПССЗ, г. Кемерово, Россия. E-mail: oksana_hryachkova@mail.ru

ГОЛОВКИН Алексей Сергеевич, доктор мед. наук, ст. науч. сотрудник, институт молекулярной биологии и генетики, Северо-Западный Федеральный медицинский исследовательский центр, г. Санкт-Петербург, Россия. E-mail: golovkin_a@mail.ru

в Кузбассе

Medicine

in Kuzbass

T. 14 № 2 2015

25

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА

190 женщин) в возрасте от 21 до 81 года (средний возраст 53,09 лет, 95%ДИ для среднего 51,61-54,57 лет, стандартное отклонение 13,06 лет), спаренных с опытной группой по полу, возрасту и этнической принадлежности и не имевших в анамнезе сердечно-сосудистых заболеваний, основных факторов риска ишемических событий, злокачественных опухолей, хронических инфекционных, аутоиммунных и психических заболеваний. Гендерно-возрастные характеристики опытной и контрольной групп приведены в таблице 2, различия между этими двумя группами не были статистически значимыми. Исследование было одобрено местным этическим комитетом, и всеми участниками исследования был подписан протокол информированного согласия после полного разъяснения им целей и протокола исследования.

Диагностика митральных пороков сердца и решение об операции по замене митрального клапана были основаны на рекомендациях Европейского общества кардиологов [10]. Для замены нативных клапанов использовались биопротезы КемКор и Пери-Кор, предварительно консервированные диэпоксидом для сохранения структурной целостности [11]. После хирургического вмешательства функциональное состояние биопротеза регулярно оценивалось при помощи эхокардиографии. Кальцификация биопротезов митрального клапана подтверждалась методами световой (окраска по Коссу) и сканирующей электронной микроскопии.

Выбор однонуклеотидных полиморфизмов, генотипирование

Тремя основными критериями для выбора однонуклеотидных полиморфизмов были (1) высокая рас-

пространенность в популяции (частота минорного аллеля > 5 % в русской популяции согласно HapMap), (2) предполагаемые или доказанные функциональные последствия на молекулярном уровне и (3) малое количество или отсутствие исследований роли относительно ИБС. Для выбора полиморфизмов использовались базы данных NCBI dbSNP (http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP), SNPinfo (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpinfo/snpfunc.htm) и SNPnexus (http://www.snp-nexus.org/) [12, 13]. Всего было изучено 16 полиморфизмов 5 генов, кодирующих Toll-подобные рецепторы (Toll-like receptors, TLR) и Триггерный рецептор, экспрессируемый на миелоидных клетках-1 (TREM-1, табл. 3).

Пять миллилитров цельной периферической венозной крови забирали в пробирку с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА). Геномную ДНК выделяли фенол-хлороформным методом в соответствии со стандартным протоколом. Генотипирование проводили в 96-луночном формате по технологии Taq-Man (аллель-специфичная ПЦР) при помощи амп-лификатора Viial 7 Real-Time PCR в соответствии с протоколом производителя. Лабораторный персонал, осуществлявший генотипирование, не знал, к опытной или контрольной группе пациентов принадлежат образцы ДНК. Контроль качества генотипи-рования проводили посредством повторного геноти-пирования 10 % образцов.

Статистический анализ

Распределение возраста было нормальным в соответствии с критерием д’Агостино-Пирсона. Для описания возраста участников исследования вычисляли среднее арифметическое, стандартное отклонение и

Таблица 2

Гендерно-возрастные характеристики опытной и контрольной групп

Table 2

Gender-age characteristics of the experimental and control groups

Характеристика Контрольная группа Опытная группа Всего P

Объем выборки Средний возраст Стандартное отклонение 300 (78,95 %) 53,09 (51,61-54,57) 13,06 80 (21,05 %) 50,77 (48,83-52,70) 8,52 380 (100,00 %) 52,61 (51,37-53,86) 12,3 0,14

от среднего возраста Мужчины 110 (37,00 %) 26 (32,50 %) 136 (35,79 %) 0,58

Женщины 190

Information about authors:

PONASENKO Anastasia Valerievna, candidate of medical sciences, head of the laboratory for genomic medicine, division of experimental and clinical cardiology, Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia. E-mail: ponasenkoav@list.ru KHUTORNAYA Maria Vladimirovna, junior researcher, laboratory for genomic medicine, division of experimental and clinical cardiology, Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia. E-mail: masha_hut@mail.ru

KUTIKHIN Anton Gennadievich, junior researcher, laboratory for genomic medicine, division of experimental and clinical cardiology, Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia. E-mail: antonkutikhin@gmail.com

YUZHALIN Arseniy Evgenievich, graduate student, Department of Oncology, Cancer Research UK and Medical Research Council Oxford Institute for Radiation Oncology, University of Oxford, Oxford, United Kingdom. E-mail: yuzhalin@gmail.com

HRYACHKOVA Oksana Nikolaevna, junior researcher, laboratory for genomic medicine, division of experimental and clinical cardiology, Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia. E-mail: oksana_hryachkova@mail.ru

GOLOVKIN Alexey Sergeevich, doctor of medical sciences, senior researcher, Institute of Molecular Biology and Genetics, Federal North-West Medical Research Centre, St. Petersburg, Russia.

26

T. 14 № 2 2015 MediciinnLass

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 3

Характеристики исследованных генных полиморфизмов Table 3

The characteristics studied gene polymorphisms

95% доверительный интервал (95% ДИ) для среднего арифметического; для описания качественных данных вычисляли доли (MedCalc, MedCalc Software, Бельгия). Статистический анализ результатов ге-нотипирования проводили посредством программы SNPStats [14]. Равновесие Харди-Вайнберга (РХВ) определялось при помощи критерия хи-квадрат Пирсона с одной степенью свободы для сравнения наблюдаемых и ожидаемых частот генотипов. Для оценки риска вычисляли отношение шансов (ОШ) и 95%

ДИ для ОШ по пяти моделям наследования (кодоминантной, доминантной, рецессивной, сверхдоминантной и лог-аддитивной). Выбор наиболее вероятной модели наследования осуществляли по информационному критерию Акаике (Akaike information criterion, AIC); модель с наименьшим значением этого критерия принимали в качестве наиболее вероятной. Различия признавали статистически значимыми при вероятности отклонить верную нулевую гипотезу р менее 0,05. Поправку на множественные сравнения проводили при помощи вычисления средней доли ложных отклонений гипотез (False Discovery Rate, FDR, http://users.ox.ac.uk/ ~npike/fdr/) и критерия перестановок (permutation test, Statxact 9, Cytel Inc., MA, USA). Для многофакторного анализа провели логистическую регрессию с пошаговым включением и исключением предикторов (MedCalc, Med-Calc Software, Belgium) с построением ROC-кривой и вычислением площади под кривой.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Выявлено, что генотип C/T полиморфизма rs3804099 гена TLR2 статистически значимо ассоциирован (табл. 4) с более чем двукратным увеличением риска развития митральных пороков сердца (ОШ = 2,17; 95% ДИ = 1,28-3,67; P = 0,004, с поправкой на пол и возраст). Особенно данный эффект был выражен у женщин (ОШ = 3,15; 95% ДИ = 1,44-6,90; P = 0,0093, с поправкой на возраст) и у пациентов старше 50 лет (ОШ = 2,65; 95% ДИ = 1,13-6,22; P = 0,025, с поправкой на пол).

С целью выявления предикторных клинических и геномных маркеров кальцификации биопротезов митрального клапана была проведена логистическая регрессия с пошаговым включением и исключением предикторов (табл. 5). Ценных предикторных клинических и геномных маркеров обнаружено не было.

Полиморфизм Нуклеотидная замена Хромосомная позиция Аминокислотная замена

TLR1

rs5743551 T>C 38807654 5'-upstream

rs5743611 C>G 38800214 Arg80Thr

TLR2

rs3804099 T>C 154624656 Asn199Asn

rs5743708 G>A 154626317 Arg753Gln

TLR4

rs4986790 A>G 120475302 Asp299Gly

rs4986791 C>T 120475602 Thr399Ile

TLR6

rs3775073 T>C 38829832 Lys421Lys

rs5743810 A>G 38830350 Ser249Pro

TREM-1

rs1817537 C>G 41244567 интронный

rs3804277 C>T 41245172 интронный

rs6910730 A>G 41246633 3'-downstream

rs7768162 A>G 41255511 5'-upstream

rs2234246 C>T 41243740 3'-нетранслируемый регион

rs4711668 T>C 41246473 3'-downstream

rs9471535 T>C 41255490 5'-upstream

rs2234237 T>A 41250466 Thr25Ser

Таблица 4

Связь полиморфизмов генов, кодирующих Toll-подобные рецепторы и TREM-1,

с риском развития митральных пороков сердца

Table 4

Contact polymorphisms of genes encoding Toll-like receptors and the TREM-1, with the risk of mitral heart defects

Полиморфизм Модель наследования Генотип Контрольная группа Опытная группа ОШ (95%ДИ) P РХВ

TLR1

T/T 172 (57,3%) 40 (53,3%) 1

Кодоминантная C/T 109 (36,3%) 34 (45,3%) 1,30 (0,77-2,19) 0,1

C/C 19

rs5743551 Доминантная T/T C/T-C/C 172 (57,3%) 128 (42,7%) 40 (53,3%) 35 (46,7%) 1 1,15 (0,69-1,91) 0,6 0,58

Рецессивная T/T-C/T C/C 281 (93,7%) 19 (6,3%) 74 (98,7%) 1 (1,3%) 1 0,21 (0,03-1,60) 0,058

Сверхдоминантная T/T-C/C C/T 191 (63,7%) 109 (36,3%) 41 (54,7%) 34 (45,3%) 1 1,40 (0,84-2,35) 0,2

Лог-аддитивная 0,96 (0,63-1,48) 0,86

О'Йййя#та

в Кузбассе

Medicine

in Kuzbass

T. 14 № 2 2015

27

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА

Таблица 4

C/C 193 (64,3%) 46 (61,3%) 1

Кодоминантная C/G 95 (31,7%) 25 (33,3%) 1,07 (0,62-1,85) 0,81

G/G 12

rs5743611 Доминантная C/C C/G-G/G 193 (64,3%) 107 (35,7%) 46 (61,3%) 29 (38,7%) 1 1,11 (0,66-1,88) 0,69

Рецессивная C/C-C/G G/G 288 (96%) 12 (4%) 71 (94,7%) 4 (5,3%) 1 1,45 (0,45-4,69) 0,55

Сверхдоминантная C/C-G/G C/G 205 (68,3%) 95 (31,7%) 50 (66,7%) 25 (33,3%) 1 1,04 (0,61-1,79) 0,88

Лог-аддитивная 1,13 (0,73-1,76) 0,58

TLR2

rs5743708 G/G A/G 279 (93%) 21 (7%) 70 (93,3%) 5 (6,7%) 1 0,95 (0,34-2,62) 0,92

T/T 118 (39,3%) 21 (28%) 1

Кодоминантная C/T 131 (43,7%) 46 (61,3%) 2,11 (1,18-3,78) 0,014

C/C 51

rs3804099 Доминантная T/T C/T-C/C 118 (39,3%) 182 (60,7%) 21 (28%) 54 (72%) 1 1,76 (1,00-3,09) 0,044

Рецессивная T/T-C/T C/C 249 (83%) 51 (17%) 67 (89,3%) 8 (10,7%) 1 0,58 (0,26-1,29) 0,16

Сверхдоминантная T/T-C/C C/T 169 (56,3%) 131 (43,7%) 29 (38,7%) 46 (61,3%) 1 2,17 (1,28-3,67) 0,004

Лог-аддитивная 1,13 (0,79-1,63) 0,5

TLR4

A/A 253 (84,3%) 64 (85,3%) 1

Кодоминантная A/G 46 (15,3%) 10 (13,3%) 0,86 (0,41-1,80) 0,61

G/G 1

rs4986790 Доминантная A/A A/G-G/G 253 (84,3%) 47 (15,7%) 64 (85,3%) 11 (14,7%) 1 0,92 (0,45-1,88) 0,82

Рецессивная A/A-A/G G/G 299 (99,7%) 1 (0,3%) 74 (98,7%) 1 (1,3%) 1 3,80 (0,23-63,25) 0,37

Сверхдоминантная A/A-G/G A/G 254 (84,7%) 46 (15,3%) 65 (86,7%) 10 (13,3%) 1 0,85 (0,40-1,78) 0,66

Лог-аддитивная 0,99 (0,51-1,93) 0,98

C/C 252 (84%) 64 (85,3%) 1

Кодоминантная C/T 47 (15,7%) 9 (12%) 0,76 (0,35-1,64) 0,2

T/T 1

rs4986791 Доминантная C/C C/T-T/T 252 (84%) 48 (16%) 64 (85,3%) 11 (14,7%) 1 0,90 (0,44-1,84) 0,78

Рецессивная C/C-C/T T/T 299 (99,7%) 1 (0,3%) 73 (97,3%) 2 (2,7%) 1 7,19 (0,63-82,42) 0,1

Сверхдоминантная C/C-T/T C/T 253 (84,3%) 47 (15,7%) 66 (88%) 9 (12%) 1 0,74 (0,34-1,59) 0,43

Лог-аддитивная 1,06 (0,56-2,00) 0,87

TLR6

T/T 98 (32,7%) 17 (22,7%) 1

Кодоминантная T/C 138 (46%) 43 (57,3%) 1,80 (0,97-3,36) 0,16

C/C 64

rs3775073 Доминантная T/T T/C-C/C 98 (32,7%) 202 (67,3%) 17 (22,7%) 58 (77,3%) 1 1,67 (0,92-3,03) 0,084

T/T-T/C 236 (78,7%) 60 (80%) 1

Рецессивная 0,84

C/C 64

28

T. 14 № 2 2015

Medicine

in Kuzbass

ОЛ&Эицина

в Кузбассе

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 4

Сверхдоминантная T/T-C/C T/C 162 (54%) 138 (46%) 32 (42,7%) 43 (57,3%) 1 1,57 (0,94-2,63) 0,085

Лог-аддитивная 1,20 (0,84-1,71) 0,33

G/G 144 (48%) 34 (45,3%) 1

Кодоминантная A/G 113 (37,7%) 36 (48%) 1,31 (0,77-2,24) 0,1

A/A 43

rs5743810 Доминантная G/G A/G-A/A 144 (48%) 156 (52%) 34 (45,3%) 41 (54,7%) 1 1,09 (0,65-1,81) 0,75 0,06

Рецессивная G/G-A/G A/A 257 (85,7%) 43 (14,3%) 70 (93,3%) 5 (6,7%) 1 0,42 (0,16-1,12) 0,059

Сверхдоминантная G/G-A/A A/G 187 (62,3%) 113 (37,7%) 39 (52%) 36 (48%) 1 1,49 (0,89-2,49) 0,13

Лог-аддитивная 0,89 (0,61-1,29) 0,53

TREM-1

c/c 78 (26%) 19 (25,3%) 1

Кодоминантная C/T 158 (52,7%) 37 (49,3%) 0,96 (0,52-1,78) 0,74

T/T 64

rs2234246 Доминантная C/C C/T-T/T 78 (26%) 222 (74%) 19 (25,3%) 56 (74,7%) 1 1,03 (0,58-1,85) 0,91 0,47

Рецессивная C/C-C/T T/T 236 (78,7%) 64 (21,3%) 56 (74,7%) 19 (25,3%) 1 1,26 (0,70-2,29) 0,44

Сверхдоминантная C/C-T/T C/T 142 (47,3%) 158 (52,7%) 38 (50,7%) 37 (49,3%) 1 0,87 (0,52-1,45) 0,59

Лог-аддитивная 1,11 (0,76-1,60) 0,59

C/C 116 (38,9%) 29 (38,7%) 1

Кодоминантная T/C 138 (46,3%) 37 (49,3%) 1,07 (0,62-1,86) 0,85

T/T 44

rs4711668 Доминантная C/C T/C-T/T 116 (38,9%) 182 (61,1%) 29 (38,7%) 46 (61,3%) 1 1,02 (0,61-1,72) 0,94 0,99

Рецессивная c/c-t/c T/T 254 (85,2%) 44 (14,8%) 66 (88%) 9 (12%) 1 0,82 (0,38-1,78) 0,61

Сверхдоминантная C/C-T/T T/C 160 (53,7%) 138 (46,3%) 38 (50,7%) 37 (49,3%) 1 1,12 (0,67-1,86) 0,67

Лог-аддитивная 0,96 (0,66-1,40) 0,84

C/C 80 (26,7%) 20 (26,7%) 1

Кодоминантная C/T 158 (52,7%) 36 (48%) 0,90 (0,49-1,66) 0,65

T/T 62

rs3804277 Доминантная C/C C/T-T/T 80 (26,7%) 220 (73,3%) 20 (26,7%) 55 (73,3%) 1 0,99 (0,56-1,76) 0,97 0,54

Рецессивная C/C-C/T T/T 238 (79,3%) 62 (20,7%) 56 (74,7%) 19 (25,3%) 1 1,31 (0,72-2,37) 0,39

Сверхдоминантная C/C-T/T C/T 142 (47,3%) 158 (52,7%) 39 (52%) 36 (48%) 1 0,82 (0,49-1,37) 0,45

Лог-аддитивная 1,10 (0,76-1,59) 0,62

T/T 238 (79,3%) 61 (81,3%) 1

Кодоминантная A/T 60 (20%) 14 (18,7%) 0,87 (0,46-1,68) 0,56

A/A 2

rs2234237 Доминантная T/T A/T-A/A 238 (79,3%) 62 (20,7%) 61 (81,3%) 14 (18,7%) 1 0,84 (0,44-1,62) 0,61 0,41

T/T-A/T 298 (99,3%) 75 (100%) 1

Рецессивная 0,32

A/A 2

в Кузбассе

Medicine

in Kuzbass

T. 14 № 2 2015

1

29

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА

Таблица 4

Сверхдоминантная T/T-A/A A/T 240 (80%) 60 (20%) 61 (81,3%) 14 (18,7%) 1 0,88 (0,46-1,69) 0,71

Лог-аддитивная 0,82 (0,44-1,54) 0,53

A/A 236 (78,7%) 59 (78,7%) 1

Кодоминантная A/G 61 (20,3%) 16 (21,3%) 0,99 (0,53-1,86) 0,45

G/G 3

rs6910730 Доминантная A/A A/G-G/G 236 (78,7%) 64 (21,3%) 59 (78,7%) 16 (21,3%) 1 0,94 (0,51-1,76) 0,85

Рецессивная A/A-A/G G/G 297 (99%) 3 (1%) 75 (100%) 0 (0%) 1 0,00 (0,00-NA) 0,21

Сверхдоминантная A/A-G/G A/G 239 (79,7%) 61 (20,3%) 59 (78,7%) 16 (21,3%) 1 1,01 (0,54-1,89) 0,97

Лог-аддитивная 0,89 (0,49-1,62) 0,7

c/c 79 (26,3%) 20 (26,7%) 1

Кодоминантная C/G 158 (52,7%) 36 (48%) 0,89 (0,48-1,64) 0,68

G/G 63

rs1817537 Доминантная C/C C/G-G/G 79 (26,3%) 221 (23,7%) 20 (26,7%) 55 (73,3%) 1 0,97 (0,54-1,72) 0,91

Рецессивная C/C-C/G G/G 237 (79%) 63 (21%) 56 (74,7%) 19 (25,3%) 1 1,27 (0,70-2,31) 0,43

Сверхдоминантная C/C-G/G C/G 142 (47,3%) 158 (52,7%) 39 (52%) 36 (48%) 1 0,82 (0,49-1,37) 0,45

Лог-аддитивная 1,08 (0,75-1,56) 0,69

T/T 238 (79,3%) 61 (81,3%) 1

Кодоминантная C/T 60 (20%) 14 (18,7%) 0,87 (0,46-1,68) 0,56

C/C 2

rs9471535 Доминантная T/T C/T-C/C 238 (79,3%) 62 (20,7%) 61 (81,3%) 14 (18,7%) 1 0,84 (0,44-1,62) 0,61

Рецессивная T/T-C/T C/C 298 (99,3%) 2 (0,7%) 75 (100%) 0 (0%) 1 0,00 (0,00-NA) 0,32

Сверхдоминантная T/T-C/C C/T 240 (80%) 60 (20%) 61 (81,3%) 14 (18,7%) 1 0,88 (0,46-1,69) 0,71

Лог-аддитивная 0,82 (0,44-1,54) 0,53

G/G 121 (40,3%) 29 (38,7%) 1

Кодоминантная A/G 146 (48,7%) 41 (54,7%) 1,15 (0,67-1,98) 0,57

A/A 33

rs7768162 Доминантная G/G A/G-A/A 121 (40,3%) 179 (59,7%) 29 (38,7%) 46 (61,3%) 1 1,07 (0,64-1,81) 0,79

Рецессивная G/G-A/G A/A 267 (89%) 33 (11%) 70 (93,3%) 5 (6,7%) 1 0,64 (0,24-1,71) 0,35

Сверхдоминантная G/G-A/A A/G 154 (51,3%) 146 (48,7%) 34 (45,3%) 41 (54,7%) 1 1,23 (0,74-2,05) 0,43

Лог-аддитивная 0,96 (0,64-1,44) 0,84

ОБСУЖДЕНИЕ

Проблема генетической предрасположенности к митральным порокам сердца исследована достаточно мало, и работы достаточно разнонаправленные. По данным Novara с соавт. [15] и Tangri с соавт. [16], нет статистически значимой связи между полиморфизмами генов apoE (кодирует аполипопротеин Е), Klotho, p-Klotho, FGF-23 (кодируют одноименные белки, составляющие один из основных путей мета-

болизма кальция и фосфора), и КМК. В то же время, Davutoglu и Nacak [17] выявили, что генотип I/I и аллель I полиморфизма rs4340 гена ACE (кодирует ангиотензинпревращающий фермент) могут быть статистически значимо связаны с повышенным риском развития КМК. Более того, в полногеномном ассоциативном исследовании Thanassoulis с со-авт. [18] было обнаружено, что два полиморфизма (rs17659543 и rs13415097) гена IL1F9 (кодирует белок ^-36г/Ъ-^9), статистически значимо ассоци-

30

T. 14 № 2 2015 MediciinnLass

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 5

Возможные предикторные клинические и геномные маркеры кальцификации биопротезов митрального клапана, включенные в логистическую регрессию с пошаговым включением и исключением предикторов

Table 5

Possible predictor clinical and genomic markers of calcification of the mitral valve bioprosthesis included in stepwise logistic regression with the inclusion and exclusion of predictors

Клинические маркеры

Пол Нет статистически значимой связи

Возраст Нет статистически значимой связи

Недостаточность митрального клапана III-IV функционального класса Нет статистически значимой связи

Артериальная гипертензия Нет статистически значимой связи

Сахарный диабет Нет статистически значимой связи

Стабильная стенокардия Нет статистически значимой связи

Инфаркт миокарда в анамнезе Нет статистически значимой связи

Острое нарушение мозгового кровообращения в анамнезе Нет статистически значимой связи

Заболевания периферических артерий Нет статистически значимой связи

Хронический пиелонефрит Нет статистически значимой связи

Геномные маркеры

rs5743551 Нет статистически значимой связи

rs5743611 Нет статистически значимой связи

rs5743708 Нет статистически значимой связи

rs3804099 Нет статистически значимой связи

rs4986790 Нет статистически значимой связи

rs4986791 Нет статистически значимой связи

rs3775073 Нет статистически значимой связи

rs5743810 Нет статистически значимой связи

rs2234246 Нет статистически значимой связи

rs4711668 Нет статистически значимой связи

rs3804277 Нет статистически значимой связи

rs2234237 Нет статистически значимой связи

rs6910730 Нет статистически значимой связи

rs1817537 Нет статистически значимой связи

rs9471535 Нет статистически значимой связи

rs7768162 Нет статистически значимой связи

ированы с более высокой вероятностью КМК. Используемые в нашей работе гены никогда ранее с этой позиции не рассматривались. Тем не менее, нами впервые выявлена статистически значимая связь с риском развития митральных пороков сердца (полиморфизм rs3804099 TLR2). Однако при проведении логистической регрессии данная связь утрачивается, что может объясняться малым объемом анализируемой выборки.

Необходимо отметить, что данная работа имеет ряд ограничений, такие как относительно малый объем выборки, одноцентровой характер исследования и возможность упустить полиморфизмы, которые могли бы быть предикторными маркерами. Стоит обратить внимание, что для подтверждения результатов данной работы необходимы дальнейшие исследования с большим объемом выборки.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:____________________________________________________________________________

1. Nishimura RA, Otto CM, Bonow RO, Carabello BA, Erwin JP 3rd, Guyton RA et al. 2014 AHA/ACC guideline for the management of patients with valvular heart disease: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2014; 63(22): 157-185.

2. Fox CS, Vasan RS, Parise H, Levy D, O'Donnell CJ, D'Agostino RB et al. Mitral annular calcification predicts cardiovascular morbidity and mortality: the Framingham Heart Study. Circulation. 2003; 107(11): 1492-1496.

3. Chiginev VA, Zhurko SA, Esin SG. Direct results of the valvular heart disease correction in elderly using VASCUTEK ASPIRE bioprosthesis. Medical Almanac. 2014; 2: 157-160. Russian (Чигинев В.А., Жур-ко С.А., Есин С.Г. Непосредственные результаты коррекции различных клапанных пороков биопротезом VASCUTEK ASPIRE у пациентов пожилого и старческого возраста //Медицинский альманах. 2014. №. 2. С. 157-160).

С^Мвдицина

в Кузбассе

Medicine

in Kuzbass

T. 14 № 2 2015

31

СВЯЗЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 2 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ МИТРАЛЬНЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА

4. Zhuravleva IJu, Glushkova TV, Veremeev AV, Hrjachkova ON, Loseva SV, Barbarash LS. Aminodip-hosphonate for the prevention of epoxy-treated bioprosthetic heart valve calcification. Circulation Pathology and Cardiac Surgery. 2010; (2): 18-21. Russian (Журавлева И.Ю., Глушкова Т.В., Веремеев А.В., Хрячкова О.Н., Лосева С.В., Барбараш Л.С. Применение аминодифосфоната для профилактики кальцификации эпоксиобработанных биопротезов //Патология кровообращения и кардиохирургия. 2010. Т. 2. С. 18-21).

5. Roberts WC. The senile cardiac calcification syndrome. Am J Cardiol. 1986; 58(6): 572-574.

6. Bella JN, Tang W, Kraja A, Rao DC, Hunt SC, Miller MB et al. Genome wide linkage mapping for valve calcification susceptibility loci in hypertensive sibships: the Hypertension Genetic Epidemiology Network Study. Hypertension. 2007; 49(3): 453-460.

7. Barbarash LS, Karas'kov AM, Semenovskij ML, Zhuravleva Ju, Odarenko JuN, Vavilov PA, Nohrin AV, Astapov DA. Bioprosthetic heart valves in Russia: an experience of three clinics. Circulation Pathology and Cardiac Surgery. 2011; (2): 21-26. Russian (Барбараш Л.С., Караськов А.М., Семеновский М.Л., Журавлева И.Ю., Одаренко Ю.Н., Вавилов П.А., Нохрин А.В., Астапов Д.А. Биопротезы клапанов сердца в России: опыт трех клиник //Патология кровообращения и кардиохирургия. 2011. №.2. С. 21-26).

8. Kutikhin AG, Yuzhalin AE, Brusina EB, Ponasenko AV, Golovkin AS, Barbarash OL. Genetic predisposition to calcific aortic stenosis and mitral annular calcification. Mol Biol Rep. 2014; 41(9): 5645-5663.

9. Yuzhalin AE, Kutikhin AG. Integrative systems of genomic risk markers for cancer and other diseases: future of predictive medicine. Cancer Manag Res. 2012; 4: 131-135.

10. Joint Task Force on the Management of Valvular Heart Disease of the European Society of Cardiology (ESC); European Association for Cardio-Thoracic Surgery (EACTS), Vahanian A, Alfieri O, And-reotti F, Antunes MJ et al. Guidelines on the management of valvular heart disease (version 2012). Eur Heart J. 2012; 33(19): 2451-2496.

11. Stasev AN, Odarenko JuN, Rutkovskaja NV, Zhuravleva Ju, Barbarash LS. Comparison of short-term results demonstrated by xenoaortic and xenopericardial mitral epoxy-treated bioprosthetic heart valves. Complex Issues of Cardiovascular Diseases. 2013; (4): 12-16. Russian (Стасев А.Н., Одаренко Ю.Н., Рутковская Н.В., Журавлева И.А., Барбараш Л.В. Сравнительная характеристика ближайших результатов применения ксеноаортальных и ксеноперикардиальных эпоксиобработанных биопротезов в митральной позиции //Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2013. №.4. С. 12-16).

12. Xu Z, Taylor JA. SN Pinfo: integrating GWAS and candidate gene information into functional SNP selection for genetic association studies. Nucleic Acids Res. 2009; 37 (Web Server issue): W600-605.

13. Dayem Ullah AZ, Lemoine NR, Chelala C. SNPnexus: a web server for functional annotation of novel and publicly known genetic variants (2012 update). Nucleic Acids Res. 2012; 40 (Web Server issue):

W65-70.

14. So^ X, Gun E, Valls J, Iniesta R, Moreno V. SNPStats: a web tool for the analysis of association studies. Bioinformatics. 2006; 22 (15): 1928-1929.

15. Novaro GM, Sachar R, Pearce GL, Sprecher DL, Griffin BP. Association between apolipoprotein E alleles and calcific valvular heart disease. Circulation. 2003; 108 (15): 1804-1808.

16. Tangri N, Alam A, Wooten EC, Huggins GS. Lack of association of Klotho gene variants with valvular and vascular calcification in Caucasians: a candidate gene study of the Framingham Offspring Cohort. Nephrol Dial Transplant. 2011; 26 (12): 3998-4002.

17. Davutoglu V, Nacak M. Influence of angiotensin-converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism on rheumatic valve involvement, valve severity and subsequent valve calcification. J Heart Valve Dis. 2005; 14 (3): 277-281.

18. Thanassoulis G, Campbell CY, Owens DS, Smith JG, Smith AV, Peloso GM et al. Genetic associations with valvular calcification and aortic stenosis. N Engl J Med. 2013; 368 (6): 503-512.

32

T. 14 № 2 2015

Medicine

in Kuzbass

в Кузбассе