ПЛАЗМИДА БЕЗ УСТОЙЧИВОСТИ К АНТИБИОТИКУ

1. Безлекарственная плазмида, содержащая полинуклеотид, кодирующий белок-репрессор cI.
2. Безлекарственная плазмида по п.1, где полинуклеотид, кодирующий белок-репрессор cI, который обладает, по меньшей мере, 90% идентичностью последовательности с полипептидом, содержащим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56 или 58.
3. Безлекарственная плазмида по п.1, где полинуклеотид функционально связан с промотором.
4. Безлекарственная плазмида по п.3, где промотор представляет собой промотор Р1 или нативный промотор cI.
5. Безлекарственная плазмида по п.1, где полинуклеотид обладает, по меньшей мере, 90% идентичностью последовательности с полинуклеотидом, содержащим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, or 59.
6. Безлекарственная плазмида по любому из пп.1-5, где плазмида дополнительно содержит гетерологичный полинуклеотид, кодирующий иммуноген или белок.
7. Безлекарственная плазмида по п.6, где гетерологичный полинуклеотид функционально связан с промотором, функциональным в эукариотических или прокариотических клетках.
8. Безлекарственная плазмида по п.7, где промотор представляет собой промотор CMV или промотор, выделенный из грамотрицательной бактерии.
9. Сконструированный штамм клеток-хозяев, относящихся к грамотрицательным бактериям, содержащий безлекарственную плазмиду по любому из пп.1-8.
10. Бактериальный штамм клеток-хозяев по п.9, в котором бактериальные клетки-хозяева содержат один или несколько гетерологичных полинуклеотидов в несущественном участке бактериальной хромосомы, где гетерологичный полинуклеотид кодирует продукт, который токсичен по отношению к организму-хозяину.
11. Бактериальный штамм по п.10, в котором полинуклеотид содержит ген sacB.
12. Бактериальный штамм по п.11, в котором ген sacB кодирует белок SacB, обладающий, по меньшей мере, 90% идентичностью последовательности с полипептидом, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72 или 74.
13. Бактериальный штамм по п.9, в котором гетерологичный полинуклеотид функционально связан с промотором.
14. Бактериальный штамм по п.13, в котором промотор является промотором из фага λ.
15. Бактериальный штамм по п.9, в котором несущественный участок содержит ген deA или ген purN.
16. Бактериальный штамм по п.9, в котором ген sacB кодирует белок SacB, обладающий, по меньшей мере, 90% идентичностью последовательности с полипептидом, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, и где ген sacB функционально связан с промотором, содержащим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5.
17. Бактериальный штамм по п.9, в котором бактериальный штамм содержит одну или несколько копий полинуклеотида, содержащего последовательность, представленную в SEQ ID NO: 75.
18. Бактериальный штамм по п.17, где бактериальный штамм содержит две копии полинуклеотида SEQ ID NO: 75, вставленного в ген deA и в ген purN хромосомы организма-хозяина.
19. Бактериальный штамм по любому из пп.10-18, в котором бактериальный штамм выбран из группы, состоящей из Avibacterium, Brucella, Escherichia coli, Haemophilus (например, Haemophilus suis), Salmonella (например, Salmonella enteridis, Salmonella typhimurium, Salmonella infantis), Shigella, Pasteurella и Rimeirella.
20. Композиция, содержащая безлекарственную плазмиду по любому из пп.1-8.
21. Композиция по п.20, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.
22. Способ получения безлекарственной плазмиды, включающий стадии:
1) создания штамма клеток-хозяев, относящихся к грамотрицательным бактериям, содержащих гетерологичный полинуклеотид, вставленный путем аллельной замены в один или несколько несущественных участков хромосомы организма-хозяина;
2) конструирования ДНК-плазмиды, содержащей полинуклеотид, кодирующей белок-репрессор cI;
3) трансформации штамма бактериальных клеток-хозяев ДНК-плазмидой, содержащей ген, кодирующей белок-репрессор cI;
4) роста трансформированного штамма бактериальных клеток-хозяев в присутствии сахарозы при температуре в интервале от 30°С до 42°С; и
5) извлечения ДНК-плазмиды.
23. Способ получения белка или иммуногена, включающий стадии:
1) создания штамма клеток-хозяев, относящихся к грамотрицательным бактериям, содержащих гетерологичный полинуклеотид, вставленный путем аллельной замены в один или несколько несущественных участков хромосомы организма-хозяина;
2) конструирования ДНК-плазмиды, содержащей полинуклеотид, кодирующей белок-репрессор cI, и ген, кодирующий иммуноген или белок;
3) трансформации штамма бактериальных клеток-хозяев ДНК-плазмидой, содержащей полинуклеотид, кодирующий белок-репрессор cI, и ген, кодирующий иммуноген или белок;
4) роста трансформированного штамма бактериальных клеток-хозяев в присутствии сахарозы при температуре в интервале от 30°С до 42°С; и
5) извлечения иммуногена или белка.
24. Композиция, содержащая белок или иммуноген, полученный согласно способу по п.23.