Способ лечения пародонтита с помощью мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток пульпы зуба человека и препарата стимулятора остеогенеза
METHOD FOR TREATING PERIODONTITIS USING MULTIPOTENT MESENCHYMAL STEM CELLS OF HUMAN TOOTH PULP AND AN OSTEOGENESIS STIMULATOR AGENT

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, и может быть использовано для лечения пародонтита.
Заболеваниями пародонта, к которым относятся гингивит, пародонтит, пародонтоз, по данным ВОЗ страдают до 98% населения. Одной из наиболее распространенных форм является пародонтит, который начинается с поражения маргинальной части десны с последующим вовлечением в патологический процесс всех структур пародонта, а именно альвеолярной кости. Хронический пародонтит характеризуется прогрессирующим течением с разрушением зубодесневого соединения, образованием пародонтального кармана и резорбцией костной ткани альвеолярного отростка. Пародонтит является главной причиной потери зубов в старшем возрасте.
Недостаточная эффективность лечения данной патологии обусловливает необходимость совершенствования существующих консервативных и хирургических методов. Несмотря на разнообразие консервативного воздействия на ткани пародонта хирургические методы лечения остаются основополагающими [Гажва С.И. Хирургические методы лечения заболеваний пародонта. Н. Новгород, 2003 г, с. 4].
Известен способ лечения заболеваний пародонта путем отслаивания лоскута, кюретажа, заполнения костных карманов порошком из деминерализованной аллокости, который вводят в костные карманы после их заполнения кровяным сгустком [патент РФ №2012242, 1994 г.].
Известен способ лечения заболеваний пародонта путем поддесневой и поднадкостничной имплантации остеотропной мембраны на основе коллагена и лекарственного средства. Остеотропная мембрана дополнительно содержит костный порошок, в качестве лекарственного средства - гликозамингликаны [патент РФ №2159101, 2000 г.).
Известен способ лечения заболеваний пародонта с помощью мезенхимальных стволовых клеток (МСК) [патент РФ №2265445, 2005 г.], взятый за прототип. По этому способу суспензию МСК или хондропрогениторных клеток или их комбинации вводят интралигаментарно с латеральной и медиальной сторон каждого пораженного парадонтозом зуба и/или поднадкостнично в пародонтальные участки верхней и нижней челюстей. МСК по этому способу получают из фетального донорского материала или из собственных тканей реципиента (например, из костного мозга, жировой ткани). В качестве клеточного материала используют чужеродные хондропрогениторные клетки, иногда в сочетании также с чужеродными МСК. Внесенные МСК медленно и не полностью приобретают функциональные свойства остеоцитов
К недостаткам известных способов хирургического лечения заболеваний пародонта относится высокая травматичность и вероятность осложнений в раннем послеоперационном периоде, что не создает благоприятных условий для регенерации костной ткани.
Задачей изобретения является повышение эффективности лечения пародонтита.
Технический результат при использовании изобретения - повышение лечебного эффекта за счет усиления регенерации костной ткани и предотвращения осложнений.
Предлагаемый способ лечения пародонтита осуществляется следующим образом. Первым этапом экспериментальным животным крысам моделируют деструктивные изменения в пародонте известным способом [патент РФ №2625295, 2017]. Для этого половозрелым крысам породы Вистар в/м вводят преднизолон из расчета 12 мг/кг веса животного на 1-е, 3-й и 5-е сутки, при этом на 5-е сутки на второй моляр верхней челюсти под в/м наркозом накладывают лигатуру.
Вторым этапом выделяют мультипотентные мезенхимные стволовые клетки (ММСК) из пульпы удаленного ретинированного зуба человека путем методики получения эксплантов [Naz S, Khan FR, Zohra RR, Lakhundi SS, Khan MS, Mohammed N, et al. Isolation and culture of dental pulp stem cells from permanent and deciduous teeth. Pak J Med Sci. 2019; 35(4):997-1002. doi: https://doi.org/10.12669/pjms.35.4.540]. На третьем этапе Аллоплант стимулятор остеогенеза, порошкобразный [ТУ9398-001-04537642-2011
https://alloplant.ru/ru/content/catalogue/files/alloplants_catalogue.pdf] в количестве 0,1 г предварительно замачивают в растворе натрия хлорида 0,9%. ММСК в количестве 0,1 мл, содержащем 150 тыс. клеток, смешивают с Аллоплантом стимулятором остеогенеза. Полученную смесь с помощью гладилки вносят в костные (пародонтальные) карманы крыс в области второго моляра верхней челюсти. Для фиксации массы накладывают защитную повязку Септопак. Курс лечения составляет 3 процедуры с интервалом 5 дней.
Аллоплант представляет собой биоматериал для регенеративной хирургии, обладает предельно низкими антигенными свойствами, практически исключающими иммунный характер реакции после его имплантации [патент РФ 2189257, 2002 г.].
Аллоплант стимулятор остеогенеза обладает высокими остеоиндуктивными свойствами. Устойчив к воздействию среды полости рта. Применяется в пародонтологии для заполнения костных карманов, костных дефектов челюстей после цистэктомии и резекции верхушки корня, а также для завышения дна верхнечелюстного синуса (синуслифт).
Биоматериал Аллоплант представляет собой ацеллюлярный тканевой матрикс с определенными фиброархитектоникой, механическими свойствами и гистохимическим составом, подвергнутый лучевой стерилизации и лазерному моделированию. С помощью Аллопланта удается стимулировать регенерацию различных видов тканей и анатомических структур: кожных покровов и слизистых оболочек, периферических сосудов и нервов, скелетной мускулатуры, компонентов мягкого остова и костного скелета.
При этом использование заявляемого способа позволило добиться клинического улучшения уже на 6 день наблюдения.
Предлагаемым способом была пролечена группа экспериментальных животных, а именно крысы линии Вистар в количестве 50 особей с экспериментально моделированными деструктивными изменениями в пародонте - пародонтитом.
Исследование проведено с разрешения Этического комитета ФГБОУ ВО БГМУ (протокол №10 от 16.12.2020). В эксперименте использовали 50 крыс линии Вистар от 9 месяцев до года массой 180-200 г. Анестезию и послеоперационную анальгезию выполнили в соответствии с международными стандартами. Все процедуры соответствовали требованиям Европейской конвенции по защите позвоночных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Наблюдение за крысами после курса лечения проводили в сроки от 1-го до 6-х месяцев. Оценка результатов.
На 6 день эксперимента, после нанесения полученной массы Аллопланта и ММСК защитную повязку Septo-Pack удаляют и оценивают полученные результаты.
Кровоточивость была сохранена. Отделяемое из зубодесневых карманов сохранялось, но имело серозный характер. Подвижность второго моляра верхней челюсти - III степени. Средняя глубина зубодесневых карманов на 6 сутки эксперимента составила (2,30±0,13 мм); отмечают образование грануляционной ткани.
На 11 день эксперимента. Кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствует. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (2,00±0,10 мм); Подвижность второго моляра верхней челюсти I-II степени.
На 28 день эксперимента кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствовали. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (1,60±0,06 мм); Подвижность второго моляра верхней челюсти отсутствовала.
На 35 день эксперимента кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствовали. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (1,48±0,04 мм); подвижность второго моляра верхней челюсти отсутствовала.
Через 3 месяца после проведения лечебных процедур на рентгенограммах у крыс определяют признаки новообразования кости, к 6 месяцам эти признаки становятся более выраженными: исчезли очаги пятнистого остеопороза, и стали приобретать мелкопетлистую структуру, контуры межальвеолярных перегородок стали четкими и ровными, с одновременным увеличением высоты резорбированных гребней межальвеолярных перегородок.
Ближайшие и отдаленные результаты показали выраженную терапевтическую эффективность использования способа при лечении деструктивных изменений альвеолярной кости при пародонтите. Таким образом, лечение заболеваний пародонта с использованием предлагаемого способа значительно эффективнее, что выражается в сокращении срока лечения данного заболевания в 2 раза в сравнении с известными методами. Отсутствие прогрессирования и рецидивирования заболеваний пародонта позволяет уменьшить количество случаев заболевания.
Сущность изобретения поясняется следующим примером.
Крысе породы Вистар был смоделирован пародонтит. Вносили в костные (пародонтальные) карманы в области второго моляра верхней челюсти с помощью специальной гладилки смесь мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток пульпы зуба человека и Аллопланта стимулятора остеогенеза, предварительно замоченного в растворе натрия хлорида 0,9%, в соотношении 1:1. Для фиксации массы накладывали защитную повязку Septo-Pack. Проведены 3 процедуры с интервалом 5 дней. На 6 день эксперимента после удаления защитной повязки оценивали полученные результаты.
Кровоточивость была сохранена. Отделяемое из зубодесневых карманов сохранялось, но имело серозный характер. Подвижность второго моляра верхней челюсти III степени. Средняя глубина зубодесневых карманов на 6 сутки эксперимента составила (2,30±0,13 мм); отмечают образование грануляционной ткани.
На 11 день эксперимента. Кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствует. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (2,00±0,10 мм); подвижность второго моляра верхней челюсти I-II степени.
На 28 день эксперимента кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствовали. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (1,60±0,06 мм); подвижность второго моляра верхней челюсти отсутствовала.
На 35 день эксперимента кровоточивость и отделяемое при пальпации десны отсутствовали. Средняя глубина зубодесневых карманов составила (1,48±0,04 мм); подвижность второго моляра верхней челюсти отсутствовала.