3-Арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолы], обладающие высокой цитотоксической активностью в отношении к клеткам линии карциномы шейки матки человека HeLa, и способ их получения
3-ARYL-4-(TRIFLUOROMETHYL)-4H-SPIRO[CHROMENO[3,4-C]PYRROLIDINE-1,3'-OXINDOLES] HAVING HIGH CYTOTOXIC ACTIVITY AGAINST HUMAN UTERINE NECK CARCINOMA HeLa CELLS, AND THE METHOD FOR THEIR PREPARATION

Область техники
Настоящее изобретение относится к области органического синтеза биологически активных соединений и касается ранее неизвестных 3-арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолов], обладающих выраженной цитотоксической активностью к клеткам линии карциномы шейки матки человека HeLa и высокой селективностью относительно к клеткам линии здоровых дермальных фибробластов человека. Указанные соединения могут быть использованы в качестве противоопухолевых агентов, в первую очередь для лечения рака шейки матки человека.
Уровень техники
Сведения о способах получения, биологической активности и области применения 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных 3-арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолов] общей формулы I в научно-технической и патентной литературе отсутствуют.
Ближайшими аналогами арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолов] общей формулы I являются спирохромено[3,4-c]пирролидины (3), получаемые из соответствующих 2-фенил или 2-трифторметилзамещенных 3-нитро-2H-хроменов (1), изатинов (2) и α-аминокислот при 70°С в этаноле в течение 3 ч [I. B. Kutyashev, A. Y. Barkov, V. Y. Korotaev, V. Y. Sosnovskikh. 3-Nitro-2H-chromenes in [3+2] cycloaddition reaction with azomethine ylides derived from N-unsubstituted α-amino acids and isatins: regio- and stereoselective synthesis of spirochromeno[3,4-c]pyrrolidines. // Chem. Heterocycl. Compd. 2019, DOI: 10.1007/s10593-019-02490-w].
Биологическая активность 6-арилзамещенных спирохромено[3,4-c]пирролидинов (3) не изучалась.
В последнее время большое внимание уделяется разработке методов получения новых производных индолин-2-она, содержащих спиропирроли(зи)диновый фрагмент при атоме С-3. Это прежде всего связано с тем, что спиро[пирролидин-оксиндолы], например, SAR405838 [V.A. de Weger, M. de Jonge, M.H.G. Langenberg, J.H.M. Schellens, M.Lolkema, A. Varga, B. Demers, K. Thomas, K. Hsu, G. Tuffal, S. Goodstal, S. Macé, E. Deutsch. A phase I study of the HDM2 antagonist SAR405838 combined with the MEK inhibitor pimasertib in patients with advanced solid tumours. // British Journal of Cancer, 2019, DOI: 10.1038/s41416-018-0355-8], являются мощными непептидными ингибиторами белок-белкового взаимодействия p53-MDM2 и обладают выраженным противораковым действием. Причина высокой цитотоксической активности спирооксиндолов заключается в образовании ими комплексов с белком MDM2, нейтрализующим молекулы опухолевого супрессора p53, ответственного за апоптоз раковых клеток, благодаря ингибированию связи p53-MDM2.
3
Было показано, что 6-трифторметилзамещенные спиро[хроменопирролидин-1,3'-оксиндолы] обладают выраженной цитотоксической активностью к клеткам рака шейки матки человека HeLa [I.B. Kutyashev, M.V. Ulitko, A.Y. Barkov, N.S. Zimnitskiy, V.Y. Korotaev, V.Y. Sosnovskikh. A regio- and stereocontrolled approach to the synthesis of 4-CF-substituted spiro[chromeno-[3,4-c]pyrrolidine-oxindoles] via reversible [3+2] cycloaddition of azomethine ylides generated from isatins and sarcosine to 3-nitro-2-(trifluoromethyl)-2H-chromenes. // New Journal of Chemistry, 2019, DOI: 10.1039/c9nj04498a].
1
где R = H, Me, MeO, Cl, Br;
2
R = H, EtO, Br;
3
R = H, Me.
4
Задача изобретения: синтезировать новую группу соединений, обладающих противоопухолевой активностью в мягких условиях без применения методов колоночной хроматографии или перекристаллизации для очистки целевых продуктов. Поставленная задача решается тем, что с целью получения новых 3-арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолов] общей формулы I, суспензию изатина (2) (1 эквивалент), арилметанамина (6) (1 эквивалент) и безводного MgSO (2 эквивалента) перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин в сухом дихлорметане, а затем добавляют нитрохромен (5) (1 эквивалент), DABCO (0.1 эквивалент) и перемешивают реакционную массу при кипячении в течение 24 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры, осадок отфильтровывают и промывают дихлорметаном, растворитель из фильтрата упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавляют 70% этанол, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат при 100°C для удаления воды. Исходные 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромены (5a-g) получают согласно методике, описанной в литературе [V.Y. Korotaev, I.B. Kutyashev, V.Y. Sosnovskikh. Synthesis of 3-substituted 2-trifluoro(trichloro)methyl-2H-chromenes by reaction of salicylaldehydes with activated trihalomethyl alkenes. // Heteroatom Chemistry, 2005, DOI: 10.1002/hc.20146]. Выходы соединений общей формулы I представлены в таблице 1 (см. в графической части).
1
19
13
3
6
6
3
Анализ целевых соединений проводят с использованием ЯМР-спектроскопии [Спектры ЯМР Н и F (400 и 376 МГц соответственно) зарегистрированы на спектрометре Bruker Avance DRX-400 в CDCl, внутренние стандарты ТМС и CF. Спектры ЯМР C (126 МГц) зарегистрированы на спектрометре Bruker Avance 500 в CDCl, внутренний стандарт - сигнал растворителя (77.2 м. д.).] и элементного анализа на автоматическом анализаторе Perkin-Elmer РЕ-2400. Масс-спектры высокого разрешения записаны на спектрометре Bruker maXis Impact HD. Рентгеноструктурное исследование выполнено на дифрактометре Xcalibur Eos (Mo-Kα излучение, графитовый монохроматор, ω-сканирование, длина волны = 0.7107 нм).
Краткое описание чертежей
На чертеже показана молекулярная структура (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-фторфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она в представлении атомов эллипсоидами тепловых колебаний с 50% вероятностью.
Пример 1.
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
4
c
Суспензию 37 мг (0.25 ммоль) изатина (2a), 27 мг (0.25 ммоль) бензиламина (6a) и 60 мг (0.50 ммоль) безводного MgSO в 3 мл сухого дихлорметана перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем добавляют 61 мг (0.25 ммоль) 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 3 мг (0.025 ммоль) DABCO и суспензию перемешивают при кипячении в течение 24 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры, осадок отфильтровывают и промывают дихлорметаном (3×0.5 мл). Растворитель из фильтрата упаривают при пониженном давлении, к остатку добавляют 1 мл 70% этанола, осадок отфильтровывают, промывают водой (3×1 мл) и сушат при 100°С. Получают (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-]пиррол-1,3'-индолин]-2'-он в виде белого порошка. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 189-190°C.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.68 (уш. с, 1H, NH-2), 5.04 (с, 1H, H-9b), 5.45 (к, J = 7.0 Гц, 1H, H-4), 5.92 (с, 1H, H-3), 6.59 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-9), 6.81-6.91 (м, 2H, H-8,7'), 7.06 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-6), 7.18 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-7), 7.26-7.32 (м, 2H, H-5', NH-1'), 7.35-7.49 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.04 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 51.2, 67.9, 70.6, 75.3 (к, J = 31.2 Гц, C-4), 97.1, 110.3, 118.0, 121.2, 123.5 (к, J = 287.6 Гц, CF), 124.0, 124.1, 125.6, 126.7, 127.5 (2С), 129.1 (2С), 129.6, 129.9, 130.5 (2C), 135.2, 140.8, 151.6, 179.4.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.6 (уш. с, CF).
+
25
19
3
3
4
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 482.1323 [М+Н]. CHFNO. Вычислено, m/z: 482.1322.
Пример 2
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-метил-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5b), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 194-195°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.10 (с, 3H, CH), 2.68 (уш. с, 1H, NH-2), 4.98 (с, 1H, H-9b), 5.40 (к, J = 6.7 Гц, 1H, H-4), 5.91 (с, 1H, H-3), 6.36 (c, 1H, H-9), 6.87 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 6.91-7.02 (м, 2H, H-6,7), 7.15 (с, 1H, NH-1'), 7.30 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-5'), 7.35-7.49 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.05 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 20.8, 51.2, 68.0, 70.6, 75.3 (к, J = 31.5 Гц, C-4), 97.1, 110.2, 117.6, 120.7, 123.6 (к, J = 287.4 Гц, CF), 124.1, 125.5, 126.9, 127.4 (2С), 129.1 (2C), 129.9, 130.2, 130.4, 130.5, 133.4, 135.2, 140.8, 149.4, 179.5.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.7 (уш. с, CF).
+
26
21
3
3
4
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 496.1483 [М+Н]. CHFNO. Вычислено, m/z: 496.1479.
Пример 3
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-метокси-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-метокси-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5c), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 209-210°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.70 (д, 1H, J = 5.5 Гц, NH-2), 3.50 (с, 3H, OCH), 5.00 (с, 1H, H-9b), 5.40 (к, 1H, J = 6.7 Гц, H-4), 5.91 (д, 1H, J = 5.5 Гц, H-3), 6.07 (д, 1H, J = 2.9 Гц, H-9), 6.68 (д.д, 1H, J = 8.9, 2.9 Гц, H-7), 6.86 (д, 1H, J = 7.6 Гц, H-7'), 6.96 (д, 1H, J = 8.9 Гц, H-6), 7.18 (с, 1H, NH-1'), 7.28 (т, 1H, J = 7.6 Гц, H-5'), 7.36-7.48 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.03 (д, 1H, J = 7.5 Гц, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 51.7, 55.5, 67.9, 70.5, 75.6 (к, J = 31.8 Гц, C-4), 97.0, 110.1, 110.8, 115.5, 118.9, 121.6, 123.6 (к, J = 287.2 Гц, CF), 124.2, 125.7, 127.6 (2C), 129.1 (2C), 129.9, 130.5 (2C), 135.4, 140.8, 145.6, 155.6, 179.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.5 (уш. с, CF).
+
26
21
3
3
5
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 512.1430 [М+Н]. CHFNO. Вычислено, m/z: 512.1428.
Пример 4
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-бром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5d), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 219-220°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.69 (д, 1H, J = 3.5 Гц, NH-2), 4.97 (с, 1H, H-9b), 5.43 (к, J = 6.6 Гц, 1H, H-4), 5.88 (д, J = 3.5 Гц, 1H, H-3), 6.70 (д, J = 1.5 Гц, 1H, H-9), 6.91 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 6.95 (д, J = 8.9 Гц, 1H, H-6), 7.25-7.32 (м, 3H, H-7,5', NH-1'), 7.39-7.46 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.02 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.9, 68.0, 70.5, 75.4 (к, J = 31.9 Гц, C-4), 96.5, 110.4, 116.3, 119.8, 123.3 (к, J = 287.5 Гц, CF), 123.4, 124.3, 125.6, 127.5 (2С), 129.1 (2С), 129.4, 130.0 (2C), 130.8, 132.6, 135.0, 140.6, 150.8, 179.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.7 (уш. с, CF).
+
25
18
3
3
4
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 560.0417 [M+H]. CHBrFNO. Вычислено, m/z: 560.0427.
Пример 5
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-6,8-дибром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5e), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 225-226°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.72 (д, J = 5.4 Гц, 1H, NH-2), 4.96 (с, 1H, H-9b), 5.49 (к, J = 6.8 Гц, 1H, H-4), 5.98 (д, J = 5.4 Гц, 1H, H-3), 6.67 (д, J = 2.0 Гц, 1H, H-9), 6.92 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 7.20 (с, 1H, NH-1'), 7.30 (т, J = 7.7 Гц, 1H, H-5'), 7.39-7.49 (м, 6H, H-6', H Ph), 7.57 (д, J = 2.0 Гц, 1H, H-7), 8.06 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.8, 68.1, 70.3, 75.5 (к, J = 31.3 Гц, C-4), 96.4,110.3, 113.3, 116.2, 122.9 (к, J = 287.4 Гц, CF), 124.3, 124.8, 125.5, 127.2 (2С), 128.3, 129.1 (2С), 129.6, 130.0, 130.8, 134.3, 135.5, 140.4, 147.8, 178.5.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.7 (уш. с, CF).
+
25
17
2
3
3
4
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 639.9507 [M+H]. CHBrFNO. Вычислено, m/z: 639.9512.
Пример 6
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-бром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-6-этокси-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-8-этокси-2H-хромена (5f), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в табл. 1.
Т. пл. 199-200°C, белый порошок.
1
3
2
3
3
3
H
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 1.47 (т, J = 7.0 Гц, 3H, CHC), 2.72 (уш. с, 1H, NH-2), 4.07 (д.д, J = 9.5, 7.0 Гц 1H, CHCH), 4.10 (1H, д.д, J = 9.5, 7.0 Гц, CHCH), 4.91 (с, 1H, H-9b), 5.43 (к, J = 6.8 Гц, 1H, H-4), 5.93 (с, 1H, H-3), 6.32 (д, J = 2.0 Гц, 1H, H-9), 6.89 (д, J = 2.0 Гц, 1H, H-7), 6.90 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 7.15 (с, 1H, NH-1'), 7.29 (т, J = 7.7 Гц, 1H, H-5'), 7.38-7.48 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.06 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 14.7, 51.0, 65.2, 68.4, 70.5, 75.3 (к, J = 31.6 Гц, C-4), 96.8, 110.3, 116.2, 116.5, 120.5, 123.3 (к, J = 288.1 Гц, CF), 124.2, 124.5, 125.6, 127.4 (2С), 129.2 (2С), 130.0, 130.2, 130.6, 134.6, 140.7, 140.8, 149.4, 178.9.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.9 (уш. с, CF).
H
+
27
22
3
3
5
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 604.0680 [M+]. CHBrFNO. Вычислено, m/z: 604.0689.
Пример 7
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a,8-динитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3,6-динитро-2-трифторметил-2H-хромена (5g), изатина (2a) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 206-207°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.74 (д, J = 5.5 Гц, 1H, NH-2), 5.08 (с, 1H, H-9b), 5.59 (к, J = 6.3 Гц, 1H, H-4), 5.86 (д, J = 5.5 Гц, 1H, H-3), 6.92 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 7.14 (с, 1H, NH-1'), 7.21 (д, J = 9.0 Гц, 1H, H-6), 7.35 (т, J = 7.7 Гц, 1H, H-5'), 7.41-7.48 (м, 6H, H-6', H Ph), 7.52 (д, J = 2.6 Гц, 1H, H-9), 8.04 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-4'), 8.10 (д.д, J = 9.0, 2.6 Гц, 1H, H-7).
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.9, 67.9, 70.6, 75.7 (к, J = 32.4 Гц, C-4), 96.0, 110.8, 118.9, 122.2, 123.0, 123.1 (к, J = 286.9 Гц, CF), 124.7, 125.4, 125.5, 127.5 (2С), 129.2 (2С), 129.4, 130.2, 131.2, 134.8, 140.4, 143.8, 156.5, 179.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.4 (уш. с, CF).
25
17
3
4
6
Элементный анализ для CHFNO (526.43):
Вычислено (%):С 57.04; Н 3.26; N 10.64.
Найдено (%): С 57.40; Н 3.26; N 10.64.
Пример 8
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-5'-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 5-метилизатина (2b) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 146-147°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.47 (с, 3H, CH), 2.65 (д, J = 4.8 Гц, 1H, NH-2), 5.02 (с, 1H, H-9b), 5.46 (к, J = 6.7 Гц, 1H, H-4), 5.90 (д, J = 4.8 Гц, 1H, H-3), 6.58 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H-9), 6.73 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H-7'), 6.84 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-8), 7.05 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H-6), 7.14-7.20 (м, 2H, H-7,6'), 7.39-7.49 (м, 6H, NH-1', H Ph), 7.81 (с, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 21.4, 51.1, 67.8, 70.7, 75.4 (к, J = 31.8 Гц, C-4), 97.1, 110.2, 117.9, 121.1, 123.5 (к, J = 287.4 Гц, CF), 123.9, 126.0, 126.7, 127.5 (2С), 129.1 (2С), 129.5, 129.9, 130.4, 130.7, 133.8, 135.3, 138.3, 151.6, 179.7.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.5 (уш. с, CF).
26
20
3
3
4
Элементный анализ для CHFNO (495.46):
Вычислено (%): 63.03; Н 4.07; N 8.48.
Найдено (%): С 63.00; Н 3.96; N 8.50.
Пример 9
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-5'-бром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 5-бромизатина (2c) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 184-185°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.68 (уш. c, 1H, NH-2), 5.01 (1H, с, H-9b), 5.37 (к, J = 6.4 Гц, 1H, H-4), 5.90 (уш. с, 1H, H-3), 6.63 (д, J = 6.6 Гц, 1H, H-9), 6.75 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 6.88 (т, J = 6.6 Гц, 1H, H-8), 7.07 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H-6), 7.19 (т, J = 7.8 Гц, 1H, H-7), 7.33-7.56 (м, 7H, NH-1', H-6', H Ph), 8.18 (c, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 51.1, 68.2, 70.5, 75.1 (к, J = 31.5 Гц, C-4), 96.7, 111.8, 116.7, 118.2, 121.2, 123.5 (к, J = 288.0 Гц, CF), 124.1, 126.7, 127.4 (2С), 129.0, 129.2 (2С), 129.8, 130.1, 132.6, 133.4, 134.7, 139.7, 151.5, 179.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 99.0 (с, CF).
25
17
3
3
4
Элементный анализ для CHBrFNO (560.33):
Вычислено (%): С 53.59; Н 3.06; N 7.50.
Найдено (%): С 53.27; Н 2.92; N 7.49.
Пример 10
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-1'-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 1-метилизатина (2d) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 165-166°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (500 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.65 (д, J = 5.4 Гц, 1H, NH-2), 2.88 (с, 3H, NCH), 5.03 (с, 1H, H-9b), 5.49 (к, J = 6.4 Гц, 1H, H-4), 5.98 (д, J = 5.4 Гц, 1H, H-3), 6.44 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-9), 6.80-6.87 (м, 2H, H-8,7'), 7.08 (д, J = 8.0 Гц, 1H, H-6), 7.20 (т. д, J = 7.5, 1.1 Гц, 1H, H-7), 7.30 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.37-7.50 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.04 (1H, д, J = 7.5 Гц, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 25.9, 51.3, 68.0, 70.4, 75.4 (к, J = 31.7 Гц, C-4), 97.2, 108.5, 118.1, 121.2, 123.6 (к, J = 287.5 Гц, CF), 123.5, 124.1, 125.0, 126.3, 127.5 (2С), 129.1 (2С), 129.6, 129.8, 130.0, 130.5, 135.4, 143.9, 151.7, 177.4.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.6 (уш. с, CF).
+
26
21
3
3
4
Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 496.1474 [M+H]. CHFNO. Вычислено, m/z: 496.1479.
Пример 11
S
S
S
S
R
H
c
Получение (1*,3*,3a*,4*,9b*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-1'-этил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4-спиро[хромено[3,4-]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 1-этилизатина (2e) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 182-183°C, белый порошок.
1
3
2
3
3
3
H
H
Спектр ЯМР H (500 МГц, CDCl) δ (м.д.): 0.97 (т, J = 7.2 Гц, 3H, CHCH), 2.65 (д, J = 5.8 Гц, 1H, NH-2), 3.26 (д.к, J = 14.3, 7.2 Гц, 1H, CHCH), 3.60 (д.к, J = 14.3, 7.2 Гц,1H, CHCH), 5.04 (с, 1H, H-9b), 5.52 (к, J = 6.6 Гц, 1H, H-4), 5.99 (д, J = 5.8 Гц, 1H, H-3), 6.47 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-9), 6.81 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-8), 6.87 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 7.07 (д, J = 8.0 Гц, 1H, H-6), 7.19 (т, J = 7.8 Гц, 1H, H-7), 7.29 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.35-7.49 (м, 6H, H-6', H Ph), 8.04 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 12.2, 34.6, 51.3, 67.9, 70.2, 75.5 (к, J = 31.9 Гц, C-4), 97.2, 108.6, 118.1, 121.1, 123.5 (к, J = 287.3 Гц, CF), 123.7, 123.9, 125.2, 126.6, 127.5 (2С), 129.0 (2С), 129.5, 129.8, 130.1, 130.5, 135.5, 143.1, 151.7, 176.9.
1
3
3
Спектр ЯМР H (500 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.5 (уш. с, CF).
27
22
3
3
4
Элементный анализ CHFNO (509.49):
Вычислено (%): С 63.65; Н 4.35; N 8.25.
Найдено (%): С 63.50; Н 4.29; N 8.25.
Пример 12
H
c
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-1'-бензил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-фенил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4-спиро[хромено[3,4-]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 1-бензилизатина (2f) и бензиламина (6a) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 191-192°C, белый порошок.
1
3
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.71 (д, J = 4.3 Гц, 1H, NH-2), 4.36 (д, J = 15.5 Гц, 1H, CH), 4.79 (д, J = 15.5 Гц, 1H, CH), 5.12 (с, 1H, H-9b), 5.64 (к, J = 6.5 Гц, 1H, H-4), 5.99 (д, J = 4.3 Гц, 1H, H-3), 6.42 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-9), 6.73 (т. д, J = 7.6, 1.1 Гц, 1H, H-8), 6.77 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 6.94-7.00 (м, 2H, H Ph), 7.09 (д, J = 8.2 Гц, 1H, H-6), 7.18-7.24 (м, 4H, H-5', H Ph), 7.27 (т. д, J = 7.5, 1.1 Гц, 1H, H-7), 7.34 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-6'), 7.39-7.51 (м, 5H, H Ph), 8.02 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 44.0, 51.3, 67.6, 70.4, 75.8 (к, J = 32.0 Гц, C-4), 97.3, 109.7, 118.2, 120.5, 123.5 (к, J = 286.6 Гц, CF), 123.9, 124.1, 125.0, 126.7, 127.7 (4С), 127.8, 128.8 (2С), 129.0 (2С), 129.4, 129.7, 129.8, 130.5, 135.3, 135.7,143.4, 151.9, 177.5.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.1 (уш. с, CF).
32
24
3
3
4
Элементный анализ для CHFNO (571.56):
Вычислено (%): С 67.25; Н 4.23; N 7.35.
Найдено (%): С 67.03; Н 4.15; N 7.30.
Пример 13
Получение 3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-хлорфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), изатина (2a) и (4-хлорфенил)метанамина (6b) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 191-192°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.60 (уш. с, 1H, NH-2), 5.05 (с, 1H, H-9b), 5.43 (к, J = 7.1 Гц, 1H, H-4), 5.89 (уш. с, 1H, H-3), 6.57 (д, J = 7.2 Гц, 1H, H-9), 6.82-6.89 (м, 2H, H-8,7'), 7.06 (д.д, J = 8.3, 1.0 Гц, 1H, H-6), 7.16-7.22 (м, 2H, H-7, NH-1'), 7.29 (т. д, J = 7.5, 0.9 Гц, 1H, H-5'), 7.36-7.43 (м, 5H, H-6', H Ar); 8.00 (1H, д, J = 7.5 Гц, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.9, 66.8, 70.4; 75.4 (к, J = 32.4 Гц, C-4), 96.8, 110.4, 118.0, 120.7, 123.4 (к, J = 287.1 Гц, CF), 124.0, 124.2, 125.6, 126.7, 128.9 (2С), 129.3 (2С), 129.6, 130.2, 130.6, 134.0, 135.9, 140.7, 151.6, 179.3.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.3 (уш. с, CF).
25
17
3
3
4
Элементный анализ для CHClFNO (515.87):
Вычислено (%): С 58.21; Н 3.32; N 8.15.
Найдено (%): С 57.97; Н 3.58; N 8.03.
Пример 14
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-3-(п-толил)-4-(трифторметил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), изатина (2a) и (4-метилфенил)метанамина (6c) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 170-171°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.37 (с, 3H, CH), 2.67 (д, J = 5.6 Гц, 1H, NH-2), 5.03 (с, 1H, H-9b), 5.42 (к, J = 6.8 Гц, 1H, H-4), 5.89 (д, J = 5.6 Гц, 1H, H-3), 6.59 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-9), 6.84-6.90 (м, 2H, H-8,7'), 6.99 (уш. c, 1H, NH-1'), 7.07 (д.д, J = 8.3, 1.0 Гц, 1H, H-6), 7.18-7.24 (м, 3H, H-7, H Ar), 7.28 (т. д, J = 7.5, 1.0 Гц, 1H, H-5'), 7.33 (2H, д, J = 8.1 Гц, H Ar), 7.39 (т. д, J = 7.5, 1.2 Гц, 1H, H-6'), 8.05 (д.д, J = 7.5, 1.2 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 21.4, 51.2, 67.9, 70.6, 75.3 (к, J = 31.8 Гц, C-4), 97.1, 110.4, 118.0, 121.2, 123.5 (к, J = 287.5 Гц, CF), 123.9, 124.1, 125.5, 126.7, 127.3 (2С), 129.5, 129.8 (2С), 130.4, 130.5, 132.0, 139.9, 140.8, 151.6, 179.6.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.8 (уш. с, CF).
26
20
3
3
4
Элементный анализ для CHFNO (495.46):
Вычислено (%): С 63.03; Н 4.07; N 8.48.
Найдено (%): С 62.79; Н 3.95; N 8.41.
Пример 15
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3-(4-метоксифенил)-3a-нитро-4-(трифторметил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), изатина (2a) и (4-метоксифенил)метанамина (6d) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 176-177°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.64 (уш. с, 1H, NH-2), 3.82 (с, 3H, OCH), 5.02 (с, 1H, H-9b), 5.40 (к, J = 6.7 Гц, 1H, H-4), 5.87 (уш. с, 1H, H-3), 6.58 (д, J = 7.4 Гц, 1H, H-9), 6.82-6.88 (м, 2H, H-8,7'), 6.93 (д, J = 8.7 Гц, 2H, H Ar), 7.06 (д.д, J = 8.2, 1.0 Гц, 1H, H-6), 7.15-7.22 (м, 2H, H-7, NH-1'), 7.28 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.35-7.41 (м, 3H, H-6', H Ar), 8.04 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 51.1, 55.4, 67.7, 70.5, 75.4 (к, J = 32.3 Гц, C-4), 97.0, 110.4, 114.5 (2C), 118.0, 121.2, 123.5 (к, J = 287.8 Гц, CF), 123.9, 124.1, 125.5, 126.7, 127.0, 128.7 (2С), 129.5, 130.4, 130.5, 140.8, 151.6, 160.8, 179.5.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.8 (уш. с, CF).
26
20
3
3
5
Элементный анализ для CHFNO (511.46):
Вычислено (%): С 61.06; Н 3.94; N 8.22
Найдено (%): С 60.79; Н 3.84; N 8.10.
Пример 16
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-фторфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), изатина (2a) и (4-фторфенил)метанамина (6e) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 187-188°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.59 (д, J = 4.7 Гц, 1H, NH-2), 5.04 (с, 1H, H-9b), 5.42 (к, J = 6.3 Гц, 1H, H-4), 5.89 (д, J = 4.7 Гц, 1H, H-3), 6.56 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-9), 6.80-6.90 (м, 2H, H-8,7'), 7.05 (д, J = 8.1 Гц, 1H, H-6), 7.07-7.14 (м, 2H, H-7, NH-1'), 7.17 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.28 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-6'), 7.34-7.50 (м, 4H, H Ar), 8.00 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.9, 66.9, 70.3, 75.4 (к, J = 32.1 Гц, C-4), 96.8, 110.3, 116.1 (д, J = 21.7 Гц, C-3,5 Ar), 118.0, 120.8, 123.4 (к, J = 287.1 Гц, CF), 124.0, 124.2, 125.6, 126.7, 129.4 (д, J = 8.4 Гц, C-2,6 Ar), 129.6, 130.3, 130.5, 131.2, 140.7, 151.6, 163.8 (д, J = 249.0 Гц, C-4 Ar), 179.4.
19
3
6
4
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.4 (c, 4-FCH), 98.4 (уш. с, CF).
25
17
4
3
4
Элементный анализ для CHFNO (499.42):
Вычислено (%): С 60.12; Н 3.43; N 8.41.
Найдено (%): С 59.99; Н 3.42; N 8.35.
Пример 17
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(2-хлорфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-метил-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5b), изатина (2a) и (2-хлорфенил)метанамина (6f) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 185-186°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.11 (с, 3H, CH), 2.46 (уш. с, 1H, NH-2), 4.95 (с, 1H, H-9b), 5.57 (к, J = 7.0 Гц, 1H, H-4), 6.38 (с, 1H, H-3), 6.59 (уш. c, 1H, H-9), 6.82 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-7'), 6.92-7.01 (м, 2H, H-6,7), 7.19-7.49 (м, 7H, 1'-NH, H-5',6', H Ar), 8.03 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 20.8, 51.0, 63.8, 70.2, 74.5 (к, J = 31.1 Гц, C-4), 97.9, 110.0, 117.9, 121.5, 123.7 (к, J = 289.5 Гц, CF), 124.0, 125.7, 126.7, 127.6, 128.1, 130.2, 130.3, 130.4, 130.7, 130.8, 133.2, 133.4, 134.2, 140.8, 149.2, 180.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 99.5 (уш. с, CF).
26
19
3
3
4
Элементный анализ для CHClFNO (529.90):
Вычислено (%): С 58.93; Н 3.61; N 7.93.
Найдено (%): С 58.64; Н 3.52; N 7.81.
Пример 18
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3-(2-бромфенил)-8-метокси-3a-нитро-4-(трифторметил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-метокси-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5c), изатина (2a) и (2-бромфенил)метанамина (6g) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 194-195°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.54 (д, J = 3.8 Гц, 1H, NH-2), 3.49 (с, 3H, OCH), 4.97 (с, 1H, H-9b), 5.59 (к, J = 7.1 Гц, 1H, H-4), 6.08 (д, J = 2.7 Гц, 1H, H-9), 6.60-6.67 (м, 2H, H-3, H-7), 6.83 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 6.96 (д, J = 8.9 Гц, 1H, H-6), 7.23-7.30 (м, 2H, H-5', H Ar), 7.32-7.40 (м, 2H, H-6', H Ar), 7.51 (д, J = 7.8 Гц, 1H, H Ar), 7.57 (с, 1H, NH-1'), 7.68 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H Ar), 8.05 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 51.2, 55.4, 66.0, 70.2, 74.5 (к, J = 30.7 Гц, C-4), 97.8, 110.2, 110.5, 115.5, 119.1, 122.5, 123.7 (к, J = 289.6 Гц, CF), 124.1, 124.6, 125.8, 128.2, 128.6, 130.5, 130.6, 131.2, 133.6, 135.0, 140.9, 145.2, 155.5, 179.3.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 99.6 (уш. с, CF).
26
19
3
3
5
Элементный анализ для CHBrFNO (590.35):
Вычислено (%): С 52.90; Н 3.24; N 7.12.
Найдено (%): С 52.91; Н 3.32; N 7.04.
Пример 19
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-бром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-[3-(трифторметил)фенил]-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5d), изатина (2a) и (3-(трифторметил)фенил)метанамина (6h) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 198-199°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.65 (д, J = 4.3 Гц, 1H, NH-2), 5.02 (с, 1H, H-9b), 5.44 (к, J = 6.3 Гц, 1H, H-4), 5.94 (д, J = 4.3 Гц, 1H, H-3), 6.67 (с, 1H, H-9), 6.93 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 6.96 (д, J = 8.7 Гц, 1H, H-6), 7.27-7.36 (м, 3H, H-7,5', NH-1'), 7.44 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-6'), 7.55 (т, J = 7.7 Гц, 1H, H Ar), 7.64-7.71 (м, 2H, H Ar), 7.72 (с, 1H, H Ar), 7.99 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.5, 66.6, 70.2, 75.4 (к, J = 32.2 Гц, C-4), 96.1, 110.5, 116.4, 119.8, 122.7, 123.1 (к, J = 286.8 Гц, CF), 123.9 (к, J = 272.6 Гц, CF), 124.5, 124.7 (к, J = 3.4 Гц, C-2/C-4 Ar), 125.6, 126.8 (к, J = 3.4 Гц, C-4/C-2 Ar), 129.4, 129.6 (2C), 131.0, 131.1, 131.5 (к, J = 32.7 Гц, C-3 Ar), 132.7, 136.7, 140.5, 150.7, 179.0.
19
3
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.0 (уш. с, CF), 99.1 (с, CF).
26
16
6
3
4
Элементный анализ для CHBrFNO (628.33):
Вычислено (%): С 49.70; Н 2.57; N 6.69.
Найдено (%): С 49.43; Н 2.61; N 6.56.
Пример 20
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-бром-3a-нитро-3-(4-метоксифенил)-4-(трифторметил)-6-этокси-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-8-этокси-2H-хромена (5g), изатина (2a) и (4-метоксифенил)метанамина (6d) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 148-149°C, белый порошок.
1
3
2
3
3
3
3
H
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 1.46 (т, J = 6.9 Гц, 3H, CHC), 2.67 (д, J = 3.5 Гц, 1H, NH-2), 3.82 (с, 3H, OCH), 4.05 (д.д, J = 9.3, 6.9 Гц, 1H, CHCH), и 4.08 (д.д, J = 9.3, 6.9 Гц, 1H, CHCH), 4.88 (с, 1H, H-9b), 5.39 (к, J = 6.6 Гц, 1H, H-4), 5.87 (д, J = 3.5 Гц, 1H, H-3), 6.31 (с, 1H, H-9), 6.86 (с, 1H, H-7), 6.89 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 6.92 (д, J = 8.5 Гц, 2H, H Ar), 7.28 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-5'), 7.32-7.42 (м, 4H, NH-1', H-6', H Ar), 8.05 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 14.7, 50.8, 55.4, 61.2, 65.2, 68.2, 70.3, 75.3 (к, J = 31.5 Гц, C-4), 96.7, 110.3, 114.5 (2С), 116.1, 116.3, 120.3, 123.3 (к, J = 288.3 Гц, CF), 124.1, 125.6, 126.4, 128.5 (2С), 130.3, 130.6, 140.6, 140.7, 149.3, 160.9, 179.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 99.0 (уш. с, CF).
28
23
3
3
6
Элементный анализ для CHBrFNO (634.41):
Вычислено (%): С 53.01; Н 3.65; N 6.62.
Найдено (%): С 52.93; Н 3.70; N 6.48.
Пример 21
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a,8-динитро-4-(трифторметил)-3-(4-хлорфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3,6-динитро-2-трифторметил-2H-хромена (5f), изатина (2a) и (4-хлорфенил)метанамина (6b) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 230-231°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.67 (д, J = 4.0 Гц, 1H, NH-2), 5.10 (с, 1H, H-9b), 5.58 (к, J = 6.5 Гц, 1H, H-4), 5.85 (д, J = 4.0 Гц, 1H, H-3), 6.94 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-7'), 7.00 (с, 1H, NH-1'), 7.21 (д, J = 8.8 Гц, 1H, H-6), 7.36 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.39-7.51 (м, 6H, H-6',9, H Ar), 8.00 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4'), 8.12 (д.д, J = 8.8, 1.9 Гц, 1H, H-7).
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.7, 66.7, 70.3, 75.8 (к, J = 32.6 Гц, C-4), 95.9, 110.7, 119.0, 121.7, 123.0, 123.6 (к, J = 287.8 Гц, CF), 124.8, 125.5 (2C), 129.0 (2С), 129.1, 129.5 (2С), 131.4, 133.7, 136.2, 140.3,143.9, 156.5, 178.6.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 97.9 (уш. с, CF).
25
16
3
4
6
2
Элементный анализ для CHClFNO⋅0.5HO (569.88):
Вычислено (%): С 52.69; Н 3.01; N 9.83.
Найдено (%): С 52.38; Н 2.81; N 9.62.
Пример 22
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-5'-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-фторфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), 5-метилизатина (2b) и (4-фторфенил)метанамина (6e) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 182-183°C, белый порошок.
1
3
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.47 (с, 3H, CH), 2.57 (д, J = 5.2 Гц, 1H, NH-2), 5.03 (с, 1H, H-9b), 5.43 (к, J = 6.5 Гц, 1H, H-4), 5.87 (д, J = 5.2 Гц, 1H, H-3), 6.56 (д, J = 7.6 Гц, 1H, H-9), 6.72 (д, J = 7.9 Гц, 1H, H-7'), 6.83 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-8), 7.04 (д, J = 8.1 Гц, 1H, H-6), 7.07-7.12 (м, 2H, H Ar), 7.13-7.19 (м, 2H, H-7,6'), 7.42-7.48 (м, 2H, H Ar), 7.75 (с, 1H, NH-1'), 7.78 (с, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 21.4, 50.9, 66.8, 70.5, 75.5 (к, J = 31.8 Гц, C-4), 96.9, 110.2, 116.0, 116.2, 117.9, 120.8, 123.4 (к, J = 286.9 Гц, CF), 123.9, 126.0, 126.7, 129.4, 129.5 (2C), 130.2, 130.8, 131.4, 133.9, 138.3, 151.7, 162.7, 164.6, 179.6.
19
3
6
4
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.3 (c, 4-FCH), 98.3 (уш. с, CF).
26
19
4
3
4
Элементный анализ для CHFNO (513.45):
Вычислено (%): С 60.82; Н 3.73; N 8.18.
Найдено (%): С 60.78; Н 3.68; N 8.12.
Пример 23
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-5',6,8-трибром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(2-хлорфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5e), 5-бромизатина (2b) и (2-хлорфенил)метанамина (6f) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 184-185°C, белый порошок.
1
3
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.51 (д, J = 3.4 Гц, 1H, NH-2), 4.95 (с, 1H, H-9b), 5.69 (к, J = 6.6 Гц, 1H, H-4), 6.55 (д, J = 3.4 Гц, 1H, H-3), 6.72 (с, 1H, H-9), 6.82 (д, J = 8.2 Гц, 1H, H-7'), 7.28-7.41 (м, 2H, H Ar), 7.46-7.50 (м, 5H, NH-1', H-7,6', H Ar), 8.16 (с, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.6, 63.7, 70.1, 74.9 (к, J = 31.5 Гц, C-4), 97.0, 112.0, 113.7, 116.3, 117.0, 123.1 (к, J = 289.3 Гц, CF), 125.2, 127.9, 128.1, 128.2, 129.2, 130.4, 131.2, 132.0, 132.4, 133.8, 134.1, 135.9, 139.5, 148.0, 178.1.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 99.3 (уш. с, CF).
25
14
3
3
3
4
Элементный анализ для CHBrClFNO (752.56):
Вычислено (%): С 39.90; Н 1.88; N 5.58.
Найдено (%): С 40.05; Н 1.94; N 5.57.
Пример 24
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-бром-1'-метил-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-фторфенил)-6-этокси-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-8-этокси-2H-хромена (5f), 1-метилизатина (2d) и (4-фторфенил)метанамина (6e) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 197-198°C, белый порошок.
1
3
2
3
3
3
3
H
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 1.47 (т, J = 6.9 Гц, 3H, CHC), 2.58 (д, J = 3.6 Гц, 1H, NH-2), 2.94 (с, 3H, NCH), 4.07 (д.д, J = 9.2, 6.9 Гц, 1H, CHCH), 4.13 (д.д, J = 9.2, 6.9 Гц, 1H, CHCH), 4.87 (с, 1H, H-9b), 5.40 (к, J = 5.8 Гц, 1H, H-4), 5.95 (д, J = 3.6 Гц, 1H, H-3), 6.20 (с, 1H, H-9), 6.85-6.93 (м, 2H, H-7,7'), 7.06-7.15 (м, 2H, H Ar), 7.30 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.41-7.52 (м, 3H, H-6', H Ar), 8.04 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 14.7, 25.9, 50.8, 65.1, 67.6, 70.1, 75.1 (к, J = 31.0 Гц, C-4), 96.4, 108.6, 115.8, 116.2 (3C, д, J = 21.6 Гц, C-3,5 Ar), 120.1, 123.3 (к, J = 288.2 Гц, CF), 124.2, 124.4, 125.2, 129.2 (2C, д, J = 8.3 Гц, C-2,6 Ar), 129.7, 130.6 (к, J = 2.5 Гц, C-1 Ar), 130.7, 140.5, 143.7, 149.3, 163.7 (д, J = 249.0 Гц, C-4 Ar), 177.2.
19
3
6
4
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 50.5 (c, 4-FCH), 98.7 (уш. с, CF)
28
22
4
3
5
Элементный анализ для CHBrFNO (636.40):
Вычислено (%): С 52.85; Н 3.48; N 6.60.
Найдено (%): С 52.75; Н 3.43; N 6.52.
Пример 25
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-8-метокси-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-хлорфенил)-1'-этил-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-метокси-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5c), 1-этилизатина (2e) и (4-хлорфенил)метанамина (6b) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 193-194°C, белый порошок.
1
3
2
3
3
3
3
H
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 0.97 (т, J = 7.2 Гц, 3H, CHC), 2.57 (д, J = 4.7 Гц, 1H, NH-2), 3.30 (д.к, J = 14.4, 7.2 Гц, 1H, CHCH), 3.49 (с, 3H, OCH), 3.64 (д.к, J = 14.4, 7.2 Гц, 1H, CHCH), 5.00 (с, 1H, H-9b), 5.46 (к, J = 5.9 Гц, 1H, H-4), 5.93 (д, J = 2.8 Гц, 1H, H-9), 5.95 (д, J = 4.7 Гц, 1H, H-3), 6.72 (д.д, J = 8.9, 2.8 Гц, 1H, H-7), 6.88 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 6.98 (д, J = 8.9 Гц, 1H, H-6), 7.29 (т, J = 7.5 Гц, 1H, H-5'), 7.35-7.48 (м, 5H, H-6', H Ar), 7.99 (д, J = 7.5 Гц 1H, H-4').
13
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 12.2, 34.6, 51.4, 55.3, 66.7, 70.0, 75.7 (к, J = 31.6 Гц, C-4), 96.9, 108.6, 110.7, 115.3, 118.8, 121.1, 123.4 (к, J = 286.8 Гц, CF), 124.0, 125.2, 129.0 (2С), 129.2 (2С), 129.8, 130.6, 134.4, 135.7, 143.1, 145.6, 155.4, 177.0.
19
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 98.1 (уш. с, CF).
28
23
3
3
5
Элементный анализ для CHClFNO (573.95):
Вычислено (%): С 58.60; Н 4.04; N 7.32.
Найдено (%): С 58.52; Н 4.01; N 7.27.
Пример 26
Получение (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-1'-бензил-8-бром-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-[3-(трифторметил)фенил]-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она.
Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5b), 1-этиллизатина (2e) и (3-(трифторметил)фенил)метанамина (6h) по способу, аналогичному способу примера 1. Выход приведен в таблице 1.
Т. пл. 165-166°C, белый порошок.
1
3
H
H
Спектр ЯМР H (400 МГц, CDCl) δ (м.д.): 2.68 (д, J = 4.9 Гц, 1H, 2-NH), 4.45 (д, J = 15.7 Гц 1H, CHPh), 4.84 (д, J = 15.7 Гц, 1H, CHPh), 5.10 (с, 1H, H-9b), 5.72 (к, J = 6.0 Гц, 1H, H-4), 5.87 (д, J = 4.9 Гц, 1H, H-3), 6.51 (д, J = 1.1 Гц, 1H, H-9), 6.78 (д, J = 7.7 Гц, 1H, H-7'), 6.95-7.02 (м, 3H, H-6, H Ph), 7.21-7.35 (м, 5H, H-7,5', H Ar, H Ph), 7.38 (т, J = 7.6 Гц, 1H, H-6'), 7.54 (т, J = 7.8 Гц, 1H, H Ar), 7.68 (т, J = 8.0 Гц, 2H, H Ph), 7.76 (с, 1H, H Ar), 7.95 (д, J = 7.5 Гц, 1H, H-4').
13
3
3
3
Спектр ЯМР C (126 МГц, CDCl) δ (м.д.): 44.2, 50.7, 66.1, 70.2, 76.0 (к, J = 32.6 Гц, C-4), 96.3, 110.1, 116.3, 119.9, 123.1 (к, J = 285.4 Гц, CF), 123.7, 124.0 (к, J = 272.4 Гц, CF), 124.6, 124.9, 125.0 (к, J = 3.6 Гц, C-2/C-4 Ar), 126.7 (к, J = 3.6 Гц, C-4/C-2 Ar), 127.1 (2С), 128.0, 128.7, 129.2 (2С), 129.5 (2C), 131.1, 131.4 (2C, к, J = 32.6 Гц, C-3 Ar), 132.7, 134.9, 137.3, 143.3, 151.1, 177.6.
19
3
3
3
Спектр ЯМР F (376 МГц, CDCl) δ (м.д.): 97.2 (уш. с, CF), 99.1 (с, CF).
33
22
6
3
4
Элементный анализ для CHBrFNO (718.45):
Вычислено (%): С 55.17; Н 3.09; N 5.85.
Найдено (%): С 55.27; Н 3.14; N 5.91.
Относительная конфигурация 3-арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолов] общей формулы I однозначно подтверждена методом рентгеноструктурного анализа, выполненного для (1S*,3S*,3aS*,4S*,9bR*)-3a-нитро-4-(трифторметил)-3-(4-фторфенил)-2,3,3a,9b-тетрагидро-4H-спиро[хромено[3,4-c]пиррол-1,3'-индолин]-2'-она (пример 16). Структура соединения расшифрована прямым методом с использованием комплекса программ SHELX-97 [G.M. Sheldrick. A short history of SHELX. // Acta Crystallographica Section A: Foundations and Advances, 2008, DOI: 10.1107/S0108767307043930]. Все неводородные атомы уточнены в анизотропном приближении независимо, атомы водорода помещены в геометрически рассчитанные позиции и включены в уточнение в модели «наездника» с зависимыми тепловыми параметрами. Полный набор рентгеноструктурных данных депонирован в Кембриджском банке структурных данных (депонент CCDC 2074446).
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Список условных сокращений:
МТТ-тест - метод оценки цитотоксической активности, основанный на восстановлении желтой соли тетразолия (МТТ) митохондриальными дегидрогеназами живых клеток до кристаллов формазана, растворимых в ДМСО
50
IC (индекс цитотоксичности) - концентрация вещества, при которой наблюдается гибель 50% клеток, мкмоль/л
о
ОП - оптическая плотность раствора формазана опытной группы
к
ОП - оптическая плотность раствора формазана контрольной группы
Клеточные линии:
Клеточная линия HeLa - клетки карциномы шейки матки человека
Клеточная линия HDF- клетки здоровых дермальных фибробластов человека
Изучение цитотоксической активности in vitro заявляемых соединений общей формулы I.
проведено на линиях клеток рака шейки матки человека HeLa и дермальных фибробластов человека HDF, полученных из Коллекции клеточных культур Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, Россия).
2
Клетки рассевают в 96-луночные планшеты в посевной дозе 2×105 клеток/мл и культивируют при 37°С в течение 24 ч в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM) с 1% глутамина в присутствии 10% эмбриональной телячьей сыворотки и гентамицина (50 мг/л) в увлажненной атмосфере 5% СО, после чего в лунки добавляют исследуемые соединения формулы I в различных концентрациях. Клетки инкубируют с соединениями формулы I в течение 72 ч, после чего проводят оценку жизнеспособности клеток с помощью МТТ-теста. Опыты проведены в трех повторностях с отрицательным (культуральная среда), положительным (раствор цитотоксического препарата Камптотецин в концентрации 3 ммоль/л) контролями и контролем растворителя (ДМСО).
50
Оценку результатов МТТ-теста проводят на планшетном фотометре Tecan Infinite M200 PRO путем сравнения оптической плотности раствора формазана при длине волны 570 нм в опытных и контрольных лунках и рассчитывают индекс цитотоксичности (IC) по формуле:
50
На основании полученных данных определялся индекс цитотоксичности для каждой концентрации исследуемых веществ. С помощью пробит-регрессии производился расчет показателя IC.
Для проведения статистического анализа использовались программы Microsoft Excell и Statistika 2009. Рассчитывались параметры среднего арифметического значения и стандартной ошибки. За достоверные принимали различия средних величин по критерию Манна-Уитни при р < 0.05.
Соединением сравнения является лекарственный препарат Камптотецин (Sigma-Aldrich, USA). Камптотецин и его производные (например, Топотекан) применяют в медицинской практике для лечения рака толстой кишки и яичников, рецидивирующего или персистирующего рака шейки матки, мелкоклеточного рака легкого и часто используют для систематического скрининга противоопухолевых препаратов.
50
Для изучения цитотоксической активности было проведено определение IC для ряда репрезентативных образцов соединений общей формулы I (примеры 1, 3-6, 8, 10, 12-16, 18-20, 23) по отношению к линии клеток карциномы шейки матки человека HeLa и здоровых дермальных фибробластов человека (HDF), полученных из Коллекции клеточных культур Института цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия. Результаты испытаний представлены в таблице 2 (см. в графической части).
Таким образом, нами впервые получены 3-арил-4-(трифторметил)-4H-спиро[хромено[3,4-c]пирролидин-1,3'-оксиндолы], которые проявили выраженную цитотоксическую активность в отношении к клеткам рака шейки матки человека HeLa, и предложен эффективный способ их получения.
Преимуществами данного способа синтеза являются:
1. Доступность исходных реагентов.
2. Мягкие условия проведения реакций.
3. Не требуется дополнительная очистка целевых продуктов с помощью перекристаллизации или колоночной хроматографии.
Все протестированные соединения общей формулы I проявили выраженную цитотоксическую активность в отношении к клеточной линии HeLa. Пять соединений общей формулы I (примеры 1, 5, 8, 12, 18) наряду с высокой цитотоксической активностью в отношении к клеткам HeLa проявили низкую цитотоксическую активность относительно здоровых клеток дермальных фибробластов человека и представляют собой потенциальные противоопухолевые препараты.