АНТИ-GDF15 АНТИТЕЛА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
ANTI-GDF15 ANTIBODIES, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связывают фактор роста и дифференцировки 15 (GDF15), и их композициям, способам и применению, включая применение комбинации анти-GDF15 антитела по изобретению и антагониста связывания оси PD-1 и/или ингибитора CD40 для лечения рака.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
GDF15, также известный как макрофаг ингибирующий цитокин 1 (MIC-1), полученный из простаты фактор (PDF), плацентарный костный морфогенетический белок (PLAB), НПВП-активированный ген 1 (NAG-1) и плацентарный активирующий фактор роста β (PTGFB), является 12-кДа секретированным белком, который образует 25 кДа дисульфид-связанный гомодимер, который является членом суперсемейства трансформирующего ростового фактора бета (TGFβ). Обычно GDF15 слабо экспрессируется или вообще не экспрессируется в тканях, и концентрации в плазме являются низкими. Экспрессия GDF15 усиливается во время воспаления и злокачественных новообразований, ограничивая воспаление и рост опухоли. Эта повышенная экспрессия приводит к заметно повышенным концентрациям GDF15 в кровотоке (>1-100 нг/мл) при раке (например, простаты, поджелудочной железы, толстой кишки и желудка), сердечной недостаточности, хронической болезни почек (ХБП), саркопении и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Связанная с GDF15 потеря веса была показана в доклинических моделях. Экзогенное введение GDF15 снижает потребление пищи и массу тела в физиологических и патофизиологических условиях. Повышенный уровень GDF15 в плазме связан с потерей веса у онкологических больных с кахексией (WO2005/099746; WO2009/021293, WO2014/100689, WO2016/049470). Хотя доказательства наиболее убедительны у онкологических больных, также сообщалось о связи между GDF15 и потерей веса при кахексии, связанной с сердечной недостаточностью (WO/2015/196142). В соответствии с данными для человека, повышенный уровень GDF15 в плазме связан с кахексией в моделях опухолей мышей. Кроме того, многочисленные исследования с использованием многомерного анализа идентифицировали GDF15 как независимый прогностический биомаркер, связанный с плохой выживаемостью при многих типах рака (например, НМКРЛ, поджелудочной железы и саркоме, среди прочих), а также при сердечной недостаточности, ХБП и ХОБЛ.
Совсем недавно, в октябре 2017 года, сообщалось, что активность GDF15, например, его метаболические эффекты, опосредована связыванием GDF15 с его когнатным рецептором, α-подобным рецептором семейства GDNF (GFRAL), членом-сиротой семейства GFR-α. См., например, Hsu et al., 2017, Nature 550:255-259; Yang et al., 2017, Nature Med. 23(10): 1158; и Emmerson et al., 2017, Nature Med. 23(10):1215. Эти исследования продемонстрировали, что связывание GDF15 с GFRAL активирует GFRAL-опосредованный сигнальный путь, посредством чего рецепторная тирозинкиназа, RET, активируется и действует как корецептор GFRAL, а RET, в свою очередь, опосредует последующее фосфорилирование ERK (pERK), рибосомного белка S6 (pS6), AKT, MAPK и фосфолипазы C гамма 1 (PLC-γ1), среди прочих. Кроме того, эти исследования продемонстрировали, что активация GFRAL с помощью GDF15 происходит в областях ствола мозга, самого заднего поля и ядре одиночного пути, которые содержат хемосенсорные нейроны и рецепторы нейропептидов, которые контролируют аппетит и рвоту. Самое заднее поле воспринимает химические мессенджеры в крови и контролирует вегетативные физиологические системы, включая системы, контролирующие обмен веществ и аппетит. Кроме того, эти области ствола головного мозга находятся вне гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), что делает их доступными, среди прочего, для крупных молекул, включая антитела, которые могут связывать GFRAL или GDF15 и предотвращать взаимодействие GFRAL-GDF15 для модуляции метаболических эффектов GDF15, связанных с аппетитом, массой тела, весом, жировой массой и потреблением пищи. Таким образом, путь GDF15-GFRAL, присутствующий в стволе мозга, является потенциальной мишенью для модуляции заболеваний, состояний и расстройств, опосредованных активностью GDF15.
По-прежнему существует значительная потребность в возможных методах лечения потери веса, вызванной или связанной с кахексией, которая опосредована или связана с повышенными уровнями GDF15. Настоящее изобретение представляет новые потенциальные терапевтические антитела, которые удовлетворяют этой потребности.
PD-L1 (лиганд программируемой смерти 1; также известный как CD274 и B7 гомолог 1 [B7-H1]) сверхэкспрессируется во многих видах рака и часто ассоциируется с плохим прогнозом (Okazaki T et al., Intern. Immun. 2007 19(7):813) (Thompson RH et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381). Интересно, что большинство Т лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, преимущественно экспрессируют PD-1, в отличие от Т лимфоцитов в нормальных тканях и периферической крови. PD-1 (белок 1 программируемой смерти клеток), когнатный рецептор PD-L1 на опухолереактивных Т клетках, может способствовать нарушению противоопухолевых иммунных ответов (Ahmadzadeh et al, Blood 2009 1 14(8): 1537). Это может быть связано с использованием передачи сигналов PD-L1, опосредованной опухолевыми клетками, экспрессирующими PD-L1, взаимодействующими с Т клетками, экспрессирующими PD-1, что приводит к ослаблению активации Т клеток и уклонению от иммунного надзора (Sharpe et al., Nat Rev 2002) (Keir ME et al., 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677). Следовательно, ингибирование взаимодействия PD-L1/PD-1 и сигнального пути (также называемого «осью PD-1») может усиливать опосредованное CD8+ T клетками уничтожение опухолей.
Ингибирование передачи сигналов оси PD-1 через его прямые лиганды (например, PD-L1, PD-L2 [лиганд 2 программируемой смерти клеток 1 и B7-DC]) было предложено для усиления Т клеточного иммунитета для лечения рака (например, опухолевого иммунитета). Более того, подобное усиление Т клеточного иммунитета наблюдалось при ингибировании связывания PD-L1 с другим партнером по связыванию, т. е. B7-1 (также известным как CD80).
В настоящее время существует, по меньшей мере, пять антагонистов связывания осей PD-1, одобренных FDA для более чем 10 показаний к раку (A Ribas et al, Science, 359, 1350-1355, 2018), а также другие, известные в данной области техники. Среди них ниволумаб (OPDIVO), пембролизумаб (KEYTRUDA), спартализумаб, пидилизумаб, тислелизумаб, AMP-224, AMP-514, цемиплимаб, PF-06801591 (сасанлимаб, RN888), каждый из которых является анти-PD-1 антителом, в то время как каждый из авелумаба (BAVENCIO), атезолизумаба (TECENTRIQ), дурвалумаба (IMFINZI), BMS-936559 (MDX-1105), MEDI4736, MPDL3280A (YW243.55.s70) является анти PD-L1 антителом.
Комбинированная терапия антагонистом связывания PD-1 оси с одним или несколькими противораковыми агентами была исследована, первое клиническое испытание началось в 2009 году. Количество новых клинических испытаний, направленных на такие комбинации, резко увеличилось; с тех пор в 2017 г. было зарегистрировано 467 новых исследований. (C. Schmidt, Nature, Vol 552, 21/28 December 2017). Хотя комбинированная терапия ниволумабом (анти-PD-1) и ипилимумабом (анти-CTLA-4) для лечения меланомы, а также комбинированная терапия пембролизумабом (анти-PD-1) с химиотерапией для лечения немелкоклеточного рака легкого была одобрена FDA в 2015 и 2017 годах, соответственно, существует постоянная потребность в поиске оптимального терапевтического лечения, которое сочетает антагонист связывания PD-1 оси с одним или несколькими другими противораковыми агентами для лечения, стабилизации, профилактики и/или отсрочки развития различных видов рака.
Было показано, что GDF15 индуцируется множеством провоспалительных факторов и липополисахаридом (LPS) и участвует в механизме обратной связи, нарушая активацию макрофагов путем подавления продуцирования фактора некроза опухоли альфа (TNFα) через ингибирование сигнального пути NF-kB (Bootcov et al., 1997, PNAS 94(21): 11514-11519, Ratnam et al., 2017, J. Clin. Invest. 127(10): 3796-3809). Пониженная экспрессия TNFα связана со смещением популяции макрофагов в сторону про-онкогенного фенотипа M2 (Kratochvill, 2015, Cell Reports 12(11): 1902-1914). Таргетирование фенотипа M2 в опухолеассоциированных макрофагах является потенциальной стратегией усиления ответа на противораковые терапии, сфокусированные на активации иммунного ответа хозяина.
По-прежнему существует значительная потребность в вариантах лечения рака, особенно солидных опухолей. Настоящее изобретение представляет новые потенциальные терапевтические GDF15 антитела с одним или несколькими другими противораковыми агентами или без них, которые отвечают этим потребностям. Также остается потребность в поиске оптимального терапевтического лечения, которое комбинирует антагонист связывания PD-1 оси с другим терапевтическим агентом, таким как ингибитор GDF15, с одним или несколькими другими противораковыми агентами или без них, для лечения, стабилизации, профилактики и/или задержки развития различных видов рака. Настоящее изобретение представляет новые потенциально полезные терапевтические комбинации GDF15 антител по изобретению с антагонистом связывания PD-1 оси, отвечающие этой потребности.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение представляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с GDF15, а также применение и связанные с ними способы. Специалисты в данной области поймут или смогут установить, используя не более чем рутинные эксперименты, множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления по изобретению, описанных в настоящем документе. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются следующими вариантами осуществления (E).
E1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с GDF15.
E2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1, содержащее HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности по одной из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 и 166.
E3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E2, содержащее LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности по одной из группы, состоящей из SEQ ID NO:11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 и 163.
E4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E3, содержащее одну или несколько из (a)-(f)
(a) LCDR-1LCDR-1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:7, 27, 36, 46, 55, 62, 82, 88, 95, 101, 129, 138, 150 и 157,
(b) LCDR-2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:8, 28, 37, 47, 70, 108, 114, 122 и 130,
(с) LCDR-3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:9, 29, 38, 48, 63, 76, 89 и 102,
(d) HCDR-1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:17, 32, 41, 58, 66, 117, 125, 133 и 153,
(е) HCDR-2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:18, 33, 42, 51, 59, 67, 85, 92, 98, 105, 118, 126, 134, 141, 146 и 165,
(f) HCDR-3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 19, 43, 52, 79, 111, 119, 135, 147, 154 и 160.
1
2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
10
11
12
E5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E4 содержащее: i) HCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность GYTFXXYNID, где X является S или T и X является S или D; ii) HCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность XINPXXGXAXXXQKFQG, где X является G или Q; X является I или N; X является F или N; X является T или L; X является F или N; X является Y или F и X является N или A; и iii) HCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность EXITTXGAMDX, где X является A или Q; X является V или I; и X является H или Y.
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
6
7
8
6
7
8
9
10
11
12
9
10
11
12
E6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E5, содержащее: i) LCDR-1LCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность RXSQXXXXYLA, где X является T или A, X является S или N, X является V или L, Xявляется H или S и X является N или S; ii) LCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность DAXXRAX, где X является S или K; X является T или N; и X является D или T; и iii) LCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность QQFXXXPXT, где X является W или S; X является S или N; Xявляется W или D; и X является W или Y.
E7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E6, содержащее одну или несколько из следующих:
(а) LCDR-1LCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174,
(b) LCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:175,
(с) LCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176,
(d) HCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:171,
(е) HCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172,
(f) HCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173.
E8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E7, содержащее HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности из одной из, по меньшей мере, одной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:34, 106, 148, 155 и 166.
E9. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E8, содержащее LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности по одной из, по меньшей мере, одной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:30, 103, 144, 151 и 163.
E10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E9, содержащее одну или несколько из (a)-(f):
(а) LCDR-1LCDR-1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:27, 88, 95, 101 и 150.
(b) LCDR-2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:8, 28 и 108.
(с) LCDR-3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:9, 29, 38, 48 и 102.
(d) HCDR-1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:32, 41 и 153.
(е) HCDR-2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:33, 105, 146 и 165.
(f) HCDR-3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:19, 52, 147 и 154.
E11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E10, содержащее HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности SEQ ID NO:166.
E12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E11, содержащее LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности SEQ ID NO:163.
E13. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E12, содержащее одну или несколько из следующих:
(a) LCDR-1, содержащей последовательность SEQ ID NO:95,
(b) LCDR-2LCDR-2, содержащей последовательность SEQ ID NO:28,
(с) LCDR-3, содержащей последовательность SEQ ID NO:9,
(d) HCDR-1, содержащей последовательность SEQ ID NO:32,
(е) HCDR-2, содержащей последовательность SEQ ID NO:165, и
(f) HCDR-3, содержащей последовательность SEQ ID NO:52.
E14. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E13, содержащее LCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95, LCDR-2LCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:28, LCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, HCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32, HCDR-2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165 и HCDR-3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52.
E15. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E14, содержащее одно или несколько из следующих замещений:
а) 1, 2, 3, 4, 5, или 6 замещений в LCDR-1 соответствующего остатка VL последовательности зародышевого типа человека,
b) 1, 2, 3, 4, или 5 замещений в LCDR-2 соответствующего остатка VL последовательности зародышевого типа человека,
c) 1, 2, 3, 4, 5, или 6 замещений в LCDR-3 соответствующего остатка VL последовательности зародышевого типа человека,
d) 1 замещение в HCDR-1 соответствующего остатка VH последовательности зародышевого типа человека,
е) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, или 8 замещений в HCDR-2 соответствующего остатка VH последовательности зародышевого типа человека,
где VL последовательность зародышевого типа человека выбирают из группы, состоящей из IGKV1-12*01, IGKV1-13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 и IGKV4-1*01, и VH последовательность зародышевого типа человека выбирают из группы, состоящей из IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3-23*01, IGHV3-23*04, IGHV3-30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 и IGHV5-51*01.
E16. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E15, содержащее VH каркасную последовательность, полученную из VH последовательности зародышевого типа человека, выбранной из группы, состоящей из IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3-23*01, IGHV3-23*04, IGHV3-30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 и IGHV5-51*01.
E17. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E16, содержащее IGHV1-69*01VH каркасную последовательность.
E18. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E17, содержащее VL каркасную последовательность, полученную из VL последовательности зародышевого типа человека, выбранной из группы, состоящей из IGKV1-12*01, IGKV1-13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 и IGKV4-1*01.
E19. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E18, содержащее IGKV3-11*01VL каркасную последовательность.
E20. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E19, содержащее VL каркасную последовательность и VH каркасную последовательность, и где VL каркасная последовательность на, по меньшей мере, 72% идентична последовательности зародышевого типа человека, из которой она получена.
E21. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E20, содержащее VL каркасную последовательность и VH каркасную последовательность, и где VL каркасная последовательность на, по меньшей мере, 72%, 74%, 75%, 77%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентична последовательности зародышевого типа человека, из которой она получена.
E22. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E21, содержащее VL каркасную последовательность и VH каркасную последовательность, и где VH каркасная последовательность на, по меньшей мере, 53% идентична последовательности зародышевого типа человека, из которой она получена.
E23. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E22, содержащее VL каркасную последовательность и VH каркасную последовательность, и где VH каркасная последовательность на, по меньшей мере, 53%, 58%, 60%, 63%, 71%, 72%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентична последовательности зародышевого типа человека, из которой она получена.
E24. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E23, содержащее VH, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную SEQ ID NO:166.
E25. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E24, содержащее VH, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO:166.
E26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E25, содержащее VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166.
E27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E26, содержащее VL, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную SEQ ID NO:163.
E28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E27, содержащее VL содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере,91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99%, идентичную SEQ ID NO:163.
E29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E28, содержащее VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163.
E30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E29, содержащее VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166 и VL аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163.
E31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E30, содержащее Fc домен.
1
2
1
2
3
4
E32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E31, где Fc доменом является Fc домен IgA (например, IgA или IgA), IgD, IgE, IgM или IgG (например, IgG, IgG, IgG, или IgG).
E33. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E32, где Fc доменом является Fc домен IgG.
1
2
3
4
E34. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E33, где IgG выбран из группы, состоящей из IgG, IgG, IgG или IgG.
1
E35. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E34, где IgG является IgG.
E36. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E35, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную SEQ ID NO:164.
E37. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E36, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, идентичную SEQ ID NO:164.
E38. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E37, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164.
E39. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E38, содержащее LC, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную SEQ ID NO:162.
E40. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E39, содержащее LC, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99%, идентичную SEQ ID NO:162
E41. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E40, содержащее LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162.
E42. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E41, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162.
E43. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E42, содержащее CDR1, CDR2 и CDR3, кодированные вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125038.
E44. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E43, содержащее CDR1, CDR2 и CDR3, кодированные вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125039.
E45. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E44, кодированное вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125038.
E46. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E45, кодированное вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125039.
E47. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E46, содержащую аминокислотную последовательность, кодированную вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125038, и аминокислотную последовательность, кодированную вставкой в плазмиде, депонированной в ATCC и имеющей номер доступа ATCC PTA-125039.
E48. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E47, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент является Fc слитым белком, монотелом, максителом, бифункциональным антителом, scFab, scFv, пептителом.
D
E49. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E48, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает GDF15 человека с K примерно или менее чем значение, выбранное из группы, состоящей из примерно 10 нМ, 5 нМ, 2 нМ, 1 нМ, 900 пМ, 800 пМ, 700 пМ, 600 пМ, 500 пМ, 400 пМ, 300 пМ, 250 пМ, 200 пМ, 150 пМ, 100 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 25 пМ, 20 пМ, 15 пМ и 10 пМ.
D
E50. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E49, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает GDF15 яванского макака с K примерно или менее чем значение, выбранное из группы, состоящей из примерно 10 нМ, 5 нМ, 2 нМ, 1 нМ, 900 пМ, 800 пМ, 700 пМ, 600 пМ, 500 пМ, 400 пМ, 300пМ, 250 пМ, 200 пМ, 150 пМ, 100 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 25 пМ, 20 пМ, 15 пМ, 13 пМ,10 пМ и 9 пМ.
D
E51. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E50, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает GDF15 яванского макака с K примерно 8 пМ или 9 пМ.
D
E52. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E51, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает GDF15 яванского макака с K примерно 8,28 пМ.
E53. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E52, где конечный период полувыведения у человека составляет, по меньшей мере, примерно 16 дней.
E54. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E53, где конечный период полувыведения у человека составляет, по меньшей мере, 17 дней.
E55. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E54, где спрогнозированный иммуногенный потенциал антитела, который показывает скорректированная оценка t-регитопа (tReg), составляет менее примерно -24.
E56. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E55, где спрогнозированный иммуногенный потенциал антитела, который показывает скорректированная оценка tReg, составляет менее чем скорректированная оценка tReg, выбранная из группы, состоящей из примерно -24, -26, -27, -30, -32, -33, -34, -35, -36, -37, -38, -39, -40, -41, -42, -43, -50 и -51.
E57. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E56, где спрогнозированный иммуногенный потенциал антитела, который показывает скорректированная оценка tReg, выбран из группы, состоящей из примерно -26, -34, -36, -41 и -42.
E58. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E57, где спрогнозированный иммуногенный потенциал антитела, который показывает скорректированная оценка tReg, составляет примерно -41 или -42.
E59. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по E1-E58, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент имеет вязкость, выбранную из группы, состоящей из, по меньшей мере, примерно 10 сантипуаз (cП), по меньшей мере, примерно 15 сП, по меньшей мере, примерно 20 сП, по меньшей мере, примерно 40 сП и, по меньшей мере, примерно 70 сП, измеренную при 25°C.
E60. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по E1-E59, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент имеет вязкость примерно 20 сП, измеренную при 25°C.
E61. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по E1-E60, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент имеет вязкость 20 сП, измеренную при 25°C.
D
E62. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E61, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет от примерно 0,05 и примерно 0,10.
D
E63. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E62, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет примерно 0,07.
D
E64. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E63, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет 0,07.
D
E65. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E64, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 яванского макака составляет от примерно 1,0 до примерно 1,5.
D
E66. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E65, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 яванского макака составляет примерно 1,2.
D
E67. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E66, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 человека по сравнению со связыванием с GDF15 яванского макака составляет 1,21.
D
E68. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E67, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 яванского макака по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет от примерно 0,03 до примерно 0,09.
D
E69. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E68, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 яванского макака по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет от примерно 0,04 до 0,08.
D
E70. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E69, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 яванского макака по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет от примерно 0,05 до 0,06.
D
E71. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по E1-E70, где отношение K связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с GDF15 яванского макака по сравнению со связыванием с GDF15 мыши составляет 0,05.
m
H
E72. Антитело по E1-E71, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T1) или температурой, при которой C2 антитела на 50% разворачивается, примерно 71°C или больше, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
H
E73. Антитело по E1-E72, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T1) или температурой, при которой C2 антитела на 50% разворачивается, от 71°C до 72°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
H
E74. Антитело по E1-E73, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T1) или температурой, при которой C2 антитела на 50% разворачивается, от 71°C и 72°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
E75. Антитело по E1-E74, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T2), или температурой, при которой Fab антитела на 50% разворачивается, примерно 80°C или больше, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
E76. Антитело по E1-E75, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T2), или температурой, при которой Fab антитела на 50% разворачивается, от 80°C до 86°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
E77. Антитело по E1-E76, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T2), или температурой, при которой Fab антитела на 50% разворачивается, от 84°C до 85°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
H
E78. Антитело по E1-E77, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T3), или температурой, при которой C3 антитела на 50% разворачивается, примерно 82°C или больше, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
H
E79. Антитело по E1-E78, где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T3), или температурой, при которой C3 антитела на 50% разворачивается, от 83°C до 91°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
m
H
E80. Антитело по E1-79 где антитело имеет термоустойчивость с температурой плавления (T3), или температурой, при которой C3 антитела на 50% разворачивается, от 87°C до 89°C, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии.
E81. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из E1-E80.
E82. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, по меньшей мере, одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E81.
E83. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VL, VH или обе, антитела или его антигенсвязывающей части, которая специфически связывается с GDF15 человека, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:167, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:168 или обе.
E84. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:167, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:168 или обе.
E85. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, тяжелую цепь или обе, антитела или его антигенсвязывающей части, которое специфически связывается с GDF15 человека, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:169, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:170 или обе.
E86. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:169, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:170 или обе.
E87. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, по меньшей мере, одну последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из множества последовательностей, указанных как SEQ ID NO:167, 168, 169, или 170.
E88. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:167.
E89. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:168.
E90. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:169.
E91. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:170.
E92. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающую часть, которое специфически связывается с GDF15 человека, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125038.
E93. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающей части, которое специфически связывается с GDF15 человека, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125039.
E94. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающей части, которое специфически связывается с GDF15 человека, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125038 и последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125039.
E95. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125038.
E96. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125039.
E97. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125038 и последовательность нуклеиновой кислоты вставки плазмиды, депонированной в АТСС и имеющей номер доступа PTA-125039.
E98. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из E81-E97.
E99. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из E81-E98, или вектор по E98.
E100.Клетка-хозяин по E99, где указанной клеткой является клетка млекопитающего.
E101. Клетка-хозяин по E100, где указанной клеткой-хозяином является CHO клетка, HEK-293 клетка, NS0 клетка, PER.C6 клетка или Sp2.0 клетка.
E102. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по любому из E99-E101, в условиях, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент экспрессируется указанной клеткой-хозяином.
E103. Способ по E102, дополнительно включающий выделение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
E104. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из E1-E103, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
E105. Композиция по E104, содержащая тиотепа, циклофосфамид (CYTOXAN), бусульфан, импросульфан, пипосульфан, бензодопа, карбоквон, метуредопа, уредопа, альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид, триметилоломеламин; буллатацин, буллатацинон), дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL), бета-лапахон, лапахол, колхицины, бетулиновую кислоту, топотекан (HYCAMTIN), CPT-11 (иринотекан, CAMPTOSAR), ацетилкамптотецин, скополектин, 9-аминокамптотецин, бриостатин, пеметрексед, каллистатин, CC-1065 (включая его адозелезиновые, карцелезиновые и бицелезиновые синтетические аналоги), подофиллотоксин, подофиллиновую кислоту, тенипозид, криптофицины, доластатин, дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1), элеутеробин, панкратистатин, TLK-286, CDP323, пероральный ингибитор альфа-4 интегрина, саркодиктин, спонгистатин, хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин, кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимннустин, энедииновые антибиотики (включая калихеамицин, калихеамицин гамма и калихеамицин омега), динемицин, динемицин A, эсперамицин, хромофор неокарциностатина и родственные хромопротеиновые недииновые антибиотики хромофоры, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая ADRIAMYCIN, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, доксорубицин HC1 липосомы для инъекций (DOXIL) и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицин C, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин, метотрексат, гемцитабин (GEMZAR), тегафур (UFTORAL), капецитабин (XELODA), эпотилон, 5-фторурацил (5-FU), деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат, флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин, анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, иматиниб, аминоглутетимид, митотан, трилостан, фролиновую кислоту, ацеглатон, альдофосфамид гликозид, аминолевулиновую кислоту, энилурацил, амсакрин, бестрабуцил, бисантрен, эдатраксат, дефофамин, демеколцин, диазиквон, эльфорнитин, ацетат эллиптина, этоглюцид, нитрат галлия, гидроксимочевину, лентинан, лонидаинин, майтанзин, ансамитоцины, митогуазон, митоксантрон, мопиданмол, нитраерин, пентостатин, фенамет, пирарубицин, лозоксантрон, 2-этилгидразид, прокарбазин, полисахаридный комплекс PSK, разоксан, ризоксин, сизофиран, спирогерманий, тенуазоновую кислоту, триазиквон, 2,2',2”-трихлортриэтиламин, Т-2 токсин, верракурин A, роридин A, ангуидин, уретан, виндезин (ELDISINE, FILDESIN), дакарбазин, манномустин, митобронит, митолактол, пипоброман, гацитозин, арабинозид («Ara-C»), тиотепа, паклитаксел (TAXOL), альбумин-сконструированный наночастичный состав паклитаксела (ABRAXANE), доксетаксел (TAXOTERE), хлорамбуцил, 6-тиогуанин, меркаптопурин, метотрексат, цисплатин, карбоплатин, винбластин (VELBAN), платину, этопозид (VP-16), ифосфамид, митоксантрон, винкристин (ONCOVIN), оксалиплатин, лейкововин, винорелбин (NAVELBINE), новантрон, эдатраксат, дауномицин, аминоптерин, ибандронат, ингибитор топоизомеразы RFS 2000, дифторметилхиломитин (DMFO), антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM) (включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX тамоксифен), ралоксифен (EVISTA), дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 1 1 7018, онапристон и торемифен (FARESTON), антипрогестероны, супрессоры рецепторов эстрогена (ERD), фулвестрант (FASLODEX), агонисты люлибирина (LHRF1) (включая ацетат лейпролида (LUPRON и ELIGARD), гозерелина ацетат, бусерелина ацетат и триптерелин), антиандрогены (включая фиутамид, нилутамид и бикалутамид); ингибиторы ароматазы (включая 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат (MEGASE), экземестан (AROMASIN), форместани, фадрозол, ворозол (RJVISOR), летрозол (FEMARA) и анастрозол (ARIMIDEX), бисфосфонаты (включая клодронат (BONEFOS или OSTAC), этидронат (DIDROCAL), NE-58095, золедроновую кислоту/золедронат (ZOMETA), алендронат (FOSAMAX), памидронат (AREDIA), тилудронат (SKELID) и ризедронат (ACTONEL), троксацитабин, антисмысловые олигонуклеотиды (включая PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R)), вакцину THERATOPE, вакцину для генной терапии (включая вакцину ALLOVECTIN, вакцину LEUVECTIN и вакцину VAXID; ингибитор топоизомеразы 1 (например, LURTOTECAN)), фулвестрант; иматиниб, EXEL-0862, эрлотиниб, цетуксимаб, бевацизумаб, аринотекан, rmRH (например, ABARELIX), лапатиниб, дитозилат лапатиниба (также известный как GW572016), 17AAG, инотузумаб озогамицин (BESPONSA), босутиниб (BOSULIF), палбоциклиб (IBRANCE), акситиниб (INLYTA), малат сунитиниба (SUTENT), кризотиниб (XALKORI), энзалутамид (XTANDI) и комбинации двух или более фармацевтически приемлемых солей и/или кислот или производных любого из вышеперечисленных.
E106. Способ снижения активности GDF15, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из вариантов осуществления E1-E80, или фармацевтическую композицию по E104 или E105 и сравнение активности GDF15 до введения с уровнем активности GDF15 после введения антитела, тем самым снижая активность GDF15.
E107. Способ по E106, где активность GDF15 выбрана из группы, состоящей из:
(a) связывания GFRAL;
(b) снижения поглощения пищи;
(c) снижения массы тела;
(d) снижения мышечной массы;
(e) снижения жировой массы;
(f) активации RET;
(g) повышения фосфорилирования ERK (pERK); и
(h) повышения фосфорилирования рибосомного белка S6 (S6)
(i) повышения фосфорилирования AKT;
(j) повышения фосфорилирования MAPK; и
(k) повышения фосфорилирования PLC-γ1.
E108. Способ снижения уровня свободного GDF15 у пациента, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, по любому из вариантов осуществления E1-E80, или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E109. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 1 нг/мл.
E110. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,9 нг/мл.
E111. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,8 нг/мл.
E112. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,7 нг/мл.
E113. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,6 нг/мл.
E114. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,5 нг/мл.
E115. Способ по E108, где уровень свободного GDF15 до введения сравнивают с уровнем свободного GDF15 после введения, и дозу и схему дозирования корректируют для снижения уровня свободного GDF15 ниже 0,4 нг/мл.
E116. Способ лечения кахексии, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из E1-E80, или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E117. Способ по E116, где кахексия связана с раком, химиотерапией, химиотерапией в сочетании с иммуноонкологической терапией, хроническим обструктивным заболеванием легких, хроническим заболеванием почек, хронической сердечной недостаточностью, застойной сердечной недостаточностью или саркопенией.
E118. Способ по E117, где раком является солидная опухоль, рак поджелудочной железы, рак легких, немелкоклеточный рак легких, колоректальный рак, рак простаты, рак яичников, рак шейки матки или рак яичек.
E119. Способ по E117 или E118, где химиотерапией является тиотепа, циклофосфамид (CYTOXAN), бусульфан, импросульфан, пипосульфан, бензодопа, карбоквон, метуредопа, уредопа, альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид, триметилоломеламин; буллатацин, буллатацинон), дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL), бета-лапахон, лапахол, колхицины, бетулиновую кислоту, топотекан (HYCAMTIN), CPT-11 (иринотекан, CAMPTOSAR), ацетилкамптотецин, скополектин, 9-аминокамптотецин, бриостатин, пеметрексед, каллистатин, CC-1065 (включая его адозелезиновые, карцелезиновые и бицелезиновые синтетические аналоги), подофиллотоксин, подофиллиновую кислоту, тенипозид, криптофицины, доластатин, дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1), элеутеробин, панкратистатин, TLK-286, CDP323, пероральный ингибитор альфа-4 интегрина, саркодиктин, спонгистатин, хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин, кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимннустин, энедииновые антибиотики (включая калихеамицин, калихеамицин гамма и калихеамицин омега), динемицин, динемицин A, эсперамицин, хромофор неокарциностатина и родственные хромопротеиновые недииновые антибиотики хромофоры, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая ADRIAMYCIN, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, доксорубицин HC1 липосомы для инъекций (DOXIL) и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицин C, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин, метотрексат, гемцитабин (GEMZAR), тегафур (UFTORAL), капецитабин (XELODA), эпотилон, 5-фторурацил (5-FU), деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат, флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин, анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, иматиниб, аминоглутетимид, митотан, трилостан, фролиновую кислоту, ацеглатон, альдофосфамид гликозид, аминолевулиновую кислоту, энилурацил, амсакрин, бестрабуцил, бисантрен, эдатраксат, дефофамин, демеколцин, диазиквон, эльфорнитин, ацетат эллиптина, этоглюцид, нитрат галлия, гидроксимочевину, лентинан, лонидаинин, майтанзин, ансамитоцины, митогуазон, митоксантрон, мопиданмол, нитраерин, пентостатин, фенамет, пирарубицин, лозоксантрон, 2-этилгидразид, прокарбазин, полисахаридный комплекс PSK, разоксан, ризоксин, сизофиран, спирогерманий, тенуазоновую кислоту, триазиквон, 2,2',2»-трихлортриэтиламин, Т-2 токсин, верракурин A, роридин A, ангуидин, уретан, виндезин (ELDISINE, FILDESIN), дакарбазин, манномустин, митобронит, митолактол, пипоброман, гацитозин, арабинозид ("Ara-C"), тиотепа, паклитаксел (TAXOL), альбумин-сконструированный наночастичный состав паклитаксела (ABRAXANE), доксетаксел (TAXOTERE), хлорамбуцил, 6-тиогуанин, меркаптопурин, метотрексат, цисплатин, карбоплатин, винбластин (VELBAN), платину, этопозид (VP-16), ифосфамид, митоксантрон, винкристин (ONCOVIN), оксалиплатин, лейкововин, винорелбин (NAVELBINE), новантрон, эдатраксат, дауномицин, аминоптерин, ибандронат, ингибитор топоизомеразы RFS 2000, дифторметилхиломитин (DMFO), антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM) (включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX тамоксифен), ралоксифен (EVISTA), дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 1 1 7018, онапристон и торемифен (FARESTON), антипрогестероны, супрессоры рецепторов эстрогена (ERD), фулвестрант (FASLODEX), агонисты люлибирина (LHRF1) (включая ацетат лейпролида (LUPRON и ELIGARD), гозерелина ацетат, бусерелина ацетат и триптерелин), антиандрогены (включая фиутамид, нилутамид и бикалутамид); ингибиторы ароматазы (включая 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат (MEGASE), экземестан (AROMASIN), форместани, фадрозол, ворозол (RJVISOR), летрозол (FEMARA) и анастрозол (ARIMIDEX), бисфосфонаты (включая клодронат (BONEFOS или OSTAC), этидронат (DIDROCAL), NE-58095, золедроновую кислоту/золедронат (ZOMETA), алендронат (FOSAMAX), памидронат (AREDIA), тилудронат (SKELID) и ризедронат (ACTONEL), троксацитабин, антисмысловые олигонуклеотиды (включая PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R)), вакцину THERATOPE, вакцину для генной терапии (включая вакцину ALLOVECTIN, вакцину LEUVECTIN и вакцину VAXID; ингибитор топоизомеразы 1 (например, LURTOTECAN)), фулвестрант; иматиниб, EXEL-0862, эрлотиниб, цетуксимаб, бевацизумаб, аринотекан, rmRH (например, ABARELIX), лапатиниб, дитозилат лапатиниба (также известный как GW572016), 17AAG, инотузумаб озогамицин (BESPONSA), босутиниб (BOSULIF), палбоциклиб (IBRANCE), акситиниб (INLYTA), малат сунитиниба (SUTENT), кризотиниб (XALKORI), энзалутамид (XTANDI) и комбинации двух или более фармацевтически приемлемых солей и/или кислот или производных любого из вышеперечисленных.
E120. Способ по E119, где химиотерапией является химиотерапия на основе платины.
E121. Способ по любому из E106-E120, где указанным субъектом является человек.
E122. Способ по любому из E106-E121, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции подкожно.
E123. Способ по любому из E106-E122, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции внутривенно.
E124. Способ по любому из E106-E123, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию вводят примерно два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в восемь недель, один раз в девять недель, один раз в десять недель, два раза в месяц, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца или один раз в четыре месяца один раз в пять месяцев, один раз в шесть месяцев, один раз в семь месяцев, один раз в восемь месяцев, один раз в девять месяцев, один раз в десять месяцев, один раз в одиннадцать месяцев или один раз в двенадцать месяцев.
E125. Способ по любому из E106-E124, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 60 мг.
E126. Способ по любому из E106-E125, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 2 мг до примерно 50 мг.
E127. Способ по любому из E106-E126, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 7 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 40 мг и примерно 50 мг.
E128. Способ по любому из E106-E124, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 130 мг.
E129. Способ по любому из E106-E124 или E128, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе от примерно 5 мг до примерно 125 мг.
E130. Способ по любому из E106-E124 или E128-E129, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 5 мг, примерно 12 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 90 мг и примерно 125 мг.
E131. Способ по любому из E106-E124, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 400 мг.
E132. Способ по любому из E106-E124 или E131, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе от примерно 15 мг до примерно 385 мг.
E133. Способ по любому из E106-E124 или E131-E132, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 15 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг и примерно 385 мг.
E134. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E80, или фармацевтическая композиция по E104 или E105, для применения в качестве лекарственного средства.
E135. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-80, или фармацевтическая композиция по E104 или E105, для применения для снижения активности GDF15 у субъекта.
E136. Способ снижения активности GDF15, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего
а) HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности SEQ ID NO:177 и LCDR-1, LCDR-2LCDR-2 и LCDR-3 последовательности SEQ ID NO:178, или
b) VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177 и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:178
и сравнение активности GDF15 перед введением с уровнем активности GDF15 после введения антитела, тем самым снижая активность GDF15.
E137. Способ снижения активности GDF15, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего
а) фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности SEQ ID NO:177; LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности SEQ ID NO:178; и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, или
b) фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177; VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:178; и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, тем самым снижая активность GDF15.
E138. Способ по E137, активность GDF15 выбрана из группы, состоящей из:
(a) связывания GFRAL;
(b) снижения поглощения пищи;
(c) снижения массы тела;
(d) снижения мышечной массы;
(e) снижения жировой массы;
(f) активации RET;
(g) повышения фосфорилирования ERK (pERK); и
(h) повышения фосфорилирования рибосомного белка S6 (S6)
(i) повышения фосфорилирования AKT;
(j) повышения фосфорилирования MAPK; и
(k) повышения фосфорилирования PLC-γ1.
E139. Способ лечения кахексии, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего
а) HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности SEQ ID NO:177 и LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности SEQ ID NO:178, или
b) VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:178.
E140. Способ лечения кахексии, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего
а) фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 последовательности SEQ ID NO:177; LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3 последовательности SEQ ID NO:178; и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, или
b) фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177; VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:178; и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
E141. Способ по E139 или E140, где кахексия связана с раком, химиотерапией, химиотерапией в сочетании с иммуноонкологической терапией, хронической обструктивной болезнью легких, хронической болезнью почек, хронической сердечной недостаточности, застойной сердечной недостаточности или саркопении.
E142. Способ по E141, где раком является солидная опухоль, рак поджелудочной железы, рак легких, немелкоклеточный рак легких, колоректальный рак, рак простаты, рак яичников, рак шейки матки или рак яичек.
E143. Способ по E141 или E142, где химиотерапией является тиотепа, циклофосфамид (CYTOXAN), бусульфан, импросульфан, пипосульфан, бензодопа, карбоквон, метуредопа, уредопа, альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид, триметилоломеламин; буллатацин, буллатацинон), дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL), бета-лапахон, лапахол, колхицины, бетулиновую кислоту, топотекан (HYCAMTIN), CPT-11 (иринотекан, CAMPTOSAR), ацетилкамптотецин, скополектин, 9-аминокамптотецин, бриостатин, пеметрексед, каллистатин, CC-1065 (включая его адозелезиновые, карцелезиновые и бицелезиновые синтетические аналоги), подофиллотоксин, подофиллиновую кислоту, тенипозид, криптофицины, доластатин, дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1), элеутеробин, панкратистатин, TLK-286, CDP323, пероральный ингибитор альфа-4 интегрина, саркодиктин, спонгистатин, хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин, кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимннустин, энедииновые антибиотики (включая калихеамицин, калихеамицин гамма и калихеамицин омега), динемицин, динемицин A, эсперамицин, хромофор неокарциностатина и родственные хромопротеиновые недииновые антибиотики хромофоры, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая ADRIAMYCIN, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, доксорубицин HC1 липосомы для инъекций (DOXIL) и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицин C, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин, метотрексат, гемцитабин (GEMZAR), тегафур (UFTORAL), капецитабин (XELODA), эпотилон, 5-фторурацил (5-FU), деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат, флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин, анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, иматиниб, аминоглутетимид, митотан, трилостан, фролиновую кислоту, ацеглатон, альдофосфамид гликозид, аминолевулиновую кислоту, энилурацил, амсакрин, бестрабуцил, бисантрен, эдатраксат, дефофамин, демеколцин, диазиквон, эльфорнитин, ацетат эллиптина, этоглюцид, нитрат галлия, гидроксимочевину, лентинан, лонидаинин, майтанзин, ансамитоцины, митогуазон, митоксантрон, мопиданмол, нитраерин, пентостатин, фенамет, пирарубицин, лозоксантрон, 2-этилгидразид, прокарбазин, полисахаридный комплекс PSK, разоксан, ризоксин, сизофиран, спирогерманий, тенуазоновую кислоту, триазиквон, 2,2',2»-трихлортриэтиламин, Т-2 токсин, верракурин A, роридин A, ангуидин, уретан, виндезин (ELDISINE, FILDESIN), дакарбазин, манномустин, митобронит, митолактол, пипоброман, гацитозин, арабинозид ("Ara-C"), тиотепа, паклитаксел (TAXOL), альбумин-сконструированный наночастичный состав паклитаксела (ABRAXANE), доксетаксел (TAXOTERE), хлорамбуцил, 6-тиогуанин, меркаптопурин, метотрексат, цисплатин, карбоплатин, винбластин (VELBAN), платину, этопозид (VP-16), ифосфамид, митоксантрон, винкристин (ONCOVIN), оксалиплатин, лейкововин, винорелбин (NAVELBINE), новантрон, эдатраксат, дауномицин, аминоптерин, ибандронат, ингибитор топоизомеразы RFS 2000, дифторметилхиломитин (DMFO), антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM) (включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX тамоксифен), ралоксифен (EVISTA), дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY11 7018, онапристон и торемифен (FARESTON), антипрогестероны, супрессоры рецепторов эстрогена (ERD), фулвестрант (FASLODEX), агонисты люлибирина (LHRF1) (включая ацетат лейпролида (LUPRON и ELIGARD), гозерелина ацетат, бусерелина ацетат и триптерелин), антиандрогены (включая фиутамид, нилутамид и бикалутамид); ингибиторы ароматазы (включая 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат (MEGASE), экземестан (AROMASIN), форместани, фадрозол, ворозол (RJVISOR), летрозол (FEMARA) и анастрозол (ARIMIDEX), бисфосфонаты (включая клодронат (BONEFOS или OSTAC), этидронат (DIDROCAL), NE-58095, золедроновую кислоту/золедронат (ZOMETA), алендронат (FOSAMAX), памидронат (AREDIA), тилудронат (SKELID) и ризедронат (ACTONEL), троксацитабин, антисмысловые олигонуклеотиды (включая PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R)), вакцину THERATOPE, вакцину для генной терапии (включая вакцину ALLOVECTIN, вакцину LEUVECTIN и вакцину VAXID; ингибитор топоизомеразы 1 (например, LURTOTECAN)), фулвестрант; иматиниб, EXEL-0862, эрлотиниб, цетуксимаб, бевацизумаб, аринотекан, rmRH (например, ABARELIX), лапатиниб, дитозилат лапатиниба (также известный как GW572016), 17AAG, инотузумаб озогамицин (BESPONSA), босутиниб (BOSULIF), палбоциклиб (IBRANCE), акситиниб (INLYTA), малат сунитиниба (SUTENT), кризотиниб (XALKORI), энзалутамид (XTANDI) и комбинации двух или более фармацевтически приемлемых солей и/или кислот или производных любого из вышеперечисленных.
E144. Способ по E141, где химиотерапией является химиотерапия на основе платины.
E145. Способ по любому из E136-E144, где указанным субъектом является человек.
E146. Способ по любому из E136-E145, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции подкожно.
E147. Способ по любому из E136-E146, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции внутривенно.
E148. Способ по любому из E136-E147, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию вводят примерно два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в восемь недель, один раз в девять недель, один раз в десять недель, два раза в месяц, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца или один раз в четыре месяца.
E149. Способ по любому из E136-E148, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 60 мг.
E150. Способ по любому из E136-E149, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 2 мг до примерно 50 мг.
E151. Способ по любому из E136-E150, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 7 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 40 мг и примерно 50 мг.
E152. Способ по любому из E136-E148, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 130 мг.
E153. Способ по любому из E136-E148 или E152, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе от примерно 5 мг до примерно 125 мг.
E154. Способ по любому из E136-E148 или E152-E153, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в две недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 5 мг, примерно 12 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 90 мг и примерно 125 мг.
E155. Способ по любому из E136-E148, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 400 мг.
E156. Способ по любому из E136-E148 или E155, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе от примерно 15 мг до примерно 385 мг.
E157. Способ по любому из E136-E148 или E155-E156, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 15 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг и примерно 385 мг.
E158. Способ снижения уровня свободного GDF15 в плазме пациента, где указанный способ включает введение антитела по любому из E1-E80 или композиции по любому из E104-E105.
E159. Способ по любому из E106-E108 или E116-E158, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается от примерно 0,05 нг/мл до примерно 3 нг/мл.
E160. Способ по любому из E106-E108 или E116-E159, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается от примерно 0,1 нг/мл до примерно 1 нг/мл.
E161. Способ по любому из E106-E108 или E116-E160, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается от примерно 0,4 нг/мл до примерно 0,8 нг/мл.
E162. Способ по любому из E106-E114 или E116-E158, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается до ниже 0,5 нг/мл.
E163. Способ по любому из E106-E158 или E162, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается до ниже 0,4 нг/мл.
E164. Способ по любому из E106-E108 или E116-E158, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается до диапазона, нижнее значение которого выбрано из группы, состоящей из 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 нг/мл и верхнее значение которого выбрано из группы, состоящей из 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 и 3,0 нг/мл.
E165. Способ по E106-E114 или E116-E158, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается до менее чем примерно 0,5 нг/мл.
E166. Способ по любому из E106-E165, где уровень свободного GDF15 в плазме субъекта снижается ниже нижнего уровня определения с применением анализа, известного в данной области техники, для определения свободного GDF15 в плазме.
E167. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из E1-E80, антагонист связывания PD-1 оси и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
E168. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по E1-E80, антагонист связывания PD-1 оси и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, при условии, что антагонистом связывания PD-1 оси не является авелумаб.
E169. Способ лечения рака, включающий введение пациенту некоторого количества антагониста связывания PD-1 оси и некоторого количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из E1-E80, или некоторого количества фармацевтической композиции по E167-E168, где количества вместе эффективны для лечения рака.
E170. Способ лечения рака, включающий введение пациенту некоторого количества антагониста связывания PD-1 оси и некоторого количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из E1-E80, или некоторого количества фармацевтической композиции по E167-E169, где количества вместе эффективны для лечения рака, и где антагонистом связывания PD-1 оси не является авелумаб.
E171. Способ по E169-E170, где количества вместе обеспечивают синергетический терапевтический эффект при лечении рака.
E172. Способ по E169, где антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-L1 антитело.
E173. Способ по E169, где антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-L1 антитело, при условии, что анти-PD-L1 антителом не является авелумаб.
E174. Способ по E172, где PD-L1 антитело выбрано из группы, состоящей из авелумаба, атезолизумаба или дурвалумаба.
E175. Способ по E172, где PD-L1 антителом является атезолизумаб или дурвалумаб.
E176. Способ по E172, где антагонистом связывания PD-1 оси является авелумаб и его вводят внутривенно в количестве примерно 10 мг/кг Q2W или примерно 800 мг Q2W.
E177. Способ по п.E168, где антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-1 антитело.
E178. Способ по п.E177, где анти-PD-1 антитело выбрано из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, спартализумаба, тислелизумаба, пидилизумаба, AMP-224, AMP-514, цемиплимаба и сасанлимаба (PF-06801591, RN888, mAb7).
E179. Способ по п.E178, где антагонистом связывания PD-1 оси является сасанлимаб, и его вводят подкожно в количестве примерно 300 мг Q4W или примерно 600 мг Q6W.
E180. Способ по любому из E170-E180, где рак выбран из группы, состоящей из меланомы, немелкоклеточного рака легкого, почечно-клеточной карциномы, карциномы из клеток Меркеля, рака яичников, рака груди, рака поджелудочной железы, уротелиального рака и резистентного к кастрации рака простаты.
E181. Способ по E180, раком является почечно-клеточная карцинома.
E182. Способ по E1181, раком является рак поджелудочной железы.
E183. Способ определения GDF15 в образце, ткани или клетке с применением антитела или его антигенсвязывающей части по любому из E1-E80, включающий контакт образца, ткани или клетки с антителом и определение антитела.
E184. Способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту комбинированной терапии, содержащей синергетическое терапевтически эффективное количество антагониста связывания PD-1 оси и синергетическое терапевтически эффективное количество ингибитора GDF15, где количества вместе обеспечивают синергетический терапевтический эффект, тем самым вылечивая рак.
E185. Способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту комбинированной терапии, содержащей синергетическое терапевтически эффективное количество антагониста связывания PD-1 оси и синергетическое терапевтически эффективное количество ингибитора GDF15, где количества вместе обеспечивают синергетический терапевтический эффект, тем самым вылечивая рак, и где антагонистом связывания PD-1 оси не является авелумаб.
E186. Способ по E184-E185, где ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по любому из E1-E80.
E187. Способ по E186, где анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
а) LCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95;
b) LCDR-2, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:28;
с) LCDR-3, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:9;
d) HCDR-1, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:32;
е) HCDR-2, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:165; и
f) HCDR-3, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:52.
E188. Способ по E187, где антагонистом связывания PD-1 оси является антитело, которое специфически связывается с PD-1 и содержит:
а) LCDR-1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216;
b) LCDR-2, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:217;
c) LCDR-3, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:218;
d) HCDR-1, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:210;
е) HCDR-2, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:213; и
f) HCDR-3, содержащую aa последовательность SEQ ID NO:215.
E189. Способ по E186, где антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-1 антитело, выбранное из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, спартализумаба, пидилизумаба, тислелизумаба, AMP-224, AMP-514, цемиплимаба и сасанлимаба (PF-06801591).
E190. Способ по п.E188-E189, где анти-PD-1 антителом является сасанлимаб (PF-06801591).
E191. Способ по п.186, где антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-L1 антитело.
E192. Способ по п.190, где сасанлимаб вводят подкожно в количестве примерно 300 мг Q4W или примерно 600 мг Q6W.
E193. Способ по п.191, где PD-L1 антитело выбрано из группы, состоящей из атезолизумаба, дурвалумаба, BMS-936559, MEDI4736 и MPDL3280A.
E194. Способ по п.187, где анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163.
E195. Способ по E194, где анти-GDF15 антитело содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162.
E196. Способ по E195, где анти-PD-1 антитело содержит HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:199.
E197. Способ по п.31, где рак выбран из группы, состоящей из меланомы, немелкоклеточного рака легкого, почечно-клеточной карциномы, карциномы из клеток Меркеля, рака яичников, рака груди, рака поджелудочной железы, уротелиального рака и резистентного к кастрации рака простаты.
E198. Способ по E184-E197, раком является почечно-клеточная карцинома или рак поджелудочной железы.
E199. Набор для лечения рака, содержащий синергетическое терапевтически эффективное количество анти-PD-1 антитела и синергетическое терапевтически эффективное количество анти-GDF15 антитела.
E200. Способ лечения рака, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из E1-E80, или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E201. Способ по E200, где раком является, например, без ограничений, рак мочевого пузыря, рак груди, рак шейки матки, хориокарцинома, рак толстой кишки, рак пищевода, рак желудка, глиобластома, глиома, опухоль мозга, рак головы и шеи, рак почки, рак легких, рак полости рта, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак печени, рак матки, рак костей, лейкоз, лимфома, саркома, рак крови, рак щитовидной железы, рак тимуса, рак глаз и рак кожи.
E202. Способ по E200 или E201, где способ дополнительно включает введение одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов.
E203. Способ по E202, где дополнительный терапевтический агент(ы) выбран из химиотерапии, вакцины, терапии на основе CAR-T клеток, радиотерапии, цитокиновой терапии, вакцины, биспецифического антитела, ингибитора других иммунодепрессивных путей, ингибиторов ангиогенеза, активатора Т клеток, ингибитора метаболического пути, ингибитора mTOR, ингибитора аденозинового пути, ингибитора тирозинкиназы, включая, но не ограничиваясь ими, INLYTA, ингибиторы ALK и сунитиниб, ингибитора BRAF, эпигенетического модификатора, ингибиторов или деплетора Treg клеток и/или миелоидных супрессорных клеток, JAK ингибитора, ингибитора STAT, ингибитора циклин-зависимой киназы, биотерапевтического агента (включая, но не ограничиваясь ими, антитела к VEGF, VEGFR, EGFR, Her2/neu, другим рецепторам фактора роста, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB и ICOS), иммуногенного агента (например, ослабленных раковых клеток, опухолевых антигенов, антигенпрезентирующих клеток, таких как дендритные клетки, в которые ввели антиген опухолевого происхождения или нуклеиновые кислоты, иммуностимулирующих цитокинов (например, IL-2, IFNα2, GM-CSF), клеток, трансфицированных генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины, такие как, но не ограниченные ими, GM-CSF), агониста STING и агониста толл-подобных рецепторов (например, TLR3, TLR7, TLR8, TLR9).
E204. Способ по E202, где дополнительным терапевтическим агентом является анти-CD40 антитело.
E205. Способ по E203, где химиотерапией является тиотепа, циклофосфамид (CYTOXAN), бусульфан, импросульфан, пипосульфан, бензодопа, карбоквон, метуредопа, уредопа, альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид, триметилоломеламин; буллатацин, буллатацинон), дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL), бета-лапахон, лапахол, колхицины, бетулиновую кислоту, топотекан (HYCAMTIN), CPT-11 (иринотекан, CAMPTOSAR), ацетилкамптотецин, скополектин, 9-аминокамптотецин, бриостатин, пеметрексед, каллистатин, CC-1065 (включая его адозелезиновые, карцелезиновые и бицелезиновые синтетические аналоги), подофиллотоксин, подофиллиновую кислоту, тенипозид, криптофицины, доластатин, дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1), элеутеробин, панкратистатин, TLK-286, CDP323, пероральный ингибитор альфа-4 интегрина, саркодиктин, спонгистатин, хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин, кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимннустин, энедииновые антибиотики (включая калихеамицин, калихеамицин гамма и калихеамицин омега), динемицин, динемицин A, эсперамицин, хромофор неокарциностатина и родственные хромопротеиновые недииновые антибиотики хромофоры, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая ADRIAMYCIN, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, доксорубицин HC1 липосомы для инъекций (DOXIL) и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицин C, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин, метотрексат, гемцитабин (GEMZAR), тегафур (UFTORAL), капецитабин (XELODA), эпотилон, 5-фторурацил (5-FU), деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат, флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин, анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, иматиниб, аминоглутетимид, митотан, трилостан, фролиновую кислоту, ацеглатон, альдофосфамид гликозид, аминолевулиновую кислоту, энилурацил, амсакрин, бестрабуцил, бисантрен, эдатраксат, дефофамин, демеколцин, диазиквон, эльфорнитин, ацетат эллиптина, этоглюцид, нитрат галлия, гидроксимочевину, лентинан, лонидаинин, майтанзин, ансамитоцины, митогуазон, митоксантрон, мопиданмол, нитраерин, пентостатин, фенамет, пирарубицин, лозоксантрон, 2-этилгидразид, прокарбазин, полисахаридный комплекс PSK, разоксан, ризоксин, сизофиран, спирогерманий, тенуазоновую кислоту, триазиквон, 2,2',2»-трихлортриэтиламин, Т-2 токсин, верракурин A, роридин A, ангуидин, уретан, виндезин (ELDISINE, FILDESIN), дакарбазин, манномустин, митобронит, митолактол, пипоброман, гацитозин, арабинозид ("Ara-C"), тиотепа, паклитаксел (TAXOL), альбумин-сконструированный наночастичный состав паклитаксела (ABRAXANE), доксетаксел (TAXOTERE), хлорамбуцил, 6-тиогуанин, меркаптопурин, метотрексат, цисплатин, карбоплатин, винбластин (VELBAN), платину, этопозид (VP-16), ифосфамид, митоксантрон, винкристин (ONCOVIN), оксалиплатин, лейкововин, винорелбин (NAVELBINE), новантрон, эдатраксат, дауномицин, аминоптерин, ибандронат, ингибитор топоизомеразы RFS 2000, дифторметилхиломитин (DMFO), антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM) (включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX тамоксифен), ралоксифен (EVISTA), дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 1 1 7018, онапристон и торемифен (FARESTON), антипрогестероны, супрессоры рецепторов эстрогена (ERD), фулвестрант (FASLODEX), агонисты люлибирина (LHRF1) (включая ацетат лейпролида (LUPRON и ELIGARD), гозерелина ацетат, бусерелина ацетат и триптерелин), антиандрогены (включая фиутамид, нилутамид и бикалутамид); ингибиторы ароматазы (включая 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат (MEGASE), экземестан (AROMASIN), форместани, фадрозол, ворозол (RJVISOR), летрозол (FEMARA) и анастрозол (ARIMIDEX), бисфосфонаты (включая клодронат (BONEFOS или OSTAC), этидронат (DIDROCAL), NE-58095, золедроновую кислоту/золедронат (ZOMETA), алендронат (FOSAMAX), памидронат (AREDIA), тилудронат (SKELID) и ризедронат (ACTONEL), троксацитабин, антисмысловые олигонуклеотиды (включая PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R)), вакцину THERATOPE, вакцину для генной терапии (включая вакцину ALLOVECTIN, вакцину LEUVECTIN и вакцину VAXID; ингибитор топоизомеразы 1 (например, LURTOTECAN)), фулвестрант; иматиниб, EXEL-0862, эрлотиниб, цетуксимаб, бевацизумаб, аринотекан, rmRH (например, ABARELIX), лапатиниб, дитозилат лапатиниба (также известный как GW572016), 17AAG, инотузумаб озогамицин (BESPONSA), босутиниб (BOSULIF), палбоциклиб (IBRANCE), акситиниб (INLYTA), малат сунитиниба (SUTENT), кризотиниб (XALKORI), энзалутамид (XTANDI) и комбинации двух или более фармацевтически приемлемых солей и/или кислот или производных любого из вышеперечисленных.
E206. Способ E203, где химиотерапией является химиотерапия на основе платины.
E207. Способ по любому из E200-E206, где указанным субъектом является человек.
E208. Способ по любому из E200-E207, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или фармацевтической композиции подкожно.
E209. Способ по любому из E200-E206, включающий введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или фармацевтической композиции внутривенно.
E210. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят примерно два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в восемь недель, один раз в девять недель, один раз в десять недель, два раза в месяц, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца или один раз в четыре месяца.
E211. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 60 мг.
E212. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе от примерно 2 мг до примерно 50 мг.
E213. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят один раз в неделю в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 7 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 40 мг и примерно 50 мг.
E214. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в две недели в дозе от примерно 0,1 мг и примерно 130 мг.
E215. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в две недели в дозе от примерно 5 мг до примерно 125 мг.
E216. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в две недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 5 мг, примерно 12 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 90 мг и примерно 125 мг.
E217. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в четыре недели в дозе от примерно 0,1 мг до примерно 400 мг.
E218. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в четыре недели в дозе от примерно 15 мг до примерно 385 мг.
E219. Способ по любому из E200-E206, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию вводят раз в четыре недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из примерно 15 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг и примерно 385 мг.
E220. Способ лечения рака у пациента где способ включает введение терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по E1-E80 или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E221. Способ по E220, где способ дополнительно содержит введение субъекту эффективного количества одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов.
E222. Способ по E221, где дополнительным терапевтическим агентом является анти-CD40 антитело его или антигенсвязывающий фрагмент.
E223. Способ по любому из E220-E222, где рак выбран из группы, состоящий из рака желудка, саркомы, лимфомы, лимфомы Ходжкина, лейкоза, рака головы и шеи, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака тимуса, рака эпителия, рака слюны, рака печени, рака желудка, рака щитовидной железы, рака легких, рака яичников, рака груди, рака простаты, рака пищевода, рака поджелудочной железы, глиомы, лейкоза, множественной миеломы, почечно-клеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака шейки матки, хориокарциномы, рака толстой кишки, рака полости рта, рака кожи и меланомы.
E224. Способ по любому из E220-223, где субъектом является человек.
E225. Способ улучшения терапевтического эффекта иммунного модулятора, введенного субъекту для лечения рака, где способ включает введение субъекту, получающему иммунный модулятор, эффективного количества анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из E1-E80 или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E226. Способ по E225, где рак выбран из группы, состоящей из рака груди, рака желудка, рака печени, рака легких, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака простаты, глиомы, глиобластомы, рака почек, рака эндометрия и рака прямой кишки.
E227. Способ лечения или профилактики синдрома высвобождения цитокинов (CRS) у субъекта, нуждающемуся в этом, где способ включает введение субъекту эффективного количества анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по E1-E80, или фармацевтической композиции по E104 или E105, тем самым вылечивая или предотвращая CRS у субъекта.
E228. Способ снижения или ингибирования токсичности у субъекта, страдающего синдромом высвобождения цитокинов (CRS) или цитокиновым штормом, или чувствительного к синдрому высвобождения цитокинов или цитокиновому шторму, включающий стадию введения композиции, включающий введение субъекту эффективного количества анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по E1-E80, или фармацевтической композиции по E104 или E105.
E229. Способ по п.E227 или E228, где продуцирование, по меньшей мере, одного провоспалительного цитокина снижается или ингибируется у указанного субъекта по сравнению с субъектом, страдающим синдромом высвобождения цитокинов или цитокиновым штормом или чувствительным к синдрому высвобождения цитокинов или цитокиновому шторму и не принимающим анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по E1-E80, или фармацевтическую композицию по E104 или E105.
E230. Способ по любому из E227-E229, где субъект проходит курс противораковой терапии, и указанный способ не снижает эффективность противораковой терапии.
E231. Способ по E230, где противораковая терапия включает иммунный модулятор.
E232. Способ по E230 или E231, где введение анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента происходит до, одновременно с или после противораковой терапии.
E233. Способ по любому из E231-E232, где иммунным модулятором является: анти-CD40 антитело, анти-CD47 антитело, анти-CTLA4 антитело, анти-4-1BB/CD137 антитело, интерлейкин 12 (IL-12) или IL-15.
E234. Способ по любому из E228-E233, где причина CRS или цитокинового шторма включает инфекционные стимулы, состояние или синдром, или где причина указанного синдрома высвобождения цитокинов или цитокинового шторма включает не инфекционные стимулы, состояние или синдром или любую их комбинацию.
E235. Способ по E234, где указанные инфекционные стимулы, состояние или синдром включают грипп, птичий грипп, тяжелый острый респираторный синдром (SARS), гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (HLH), связанный с вирусом Эпштейн-Барр, сепсис, грамотрицательный сепсис, малярию, вирус Эбола, вирус натуральной оспы, системную грамотрицательную бактериальную инфекцию или синдром Яриша-Герксхаймера, или где указанные не инфекционные стимулы, состояние или синдром включают гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (HLH), спорадический HLH, синдром активации макрофагов (MAS), хронический артрит, системный ювенильный идиопатический артрит (sJIA), болезнь Стилла, криопирин-ассоциированный периодический синдром (CAPS), семейный холодовой аутовоспалительный синдром (FCAS), семейную холодовую крапивницу (FCU), синдром Макл-Уэла (MWS), хронический детский неврологический кожный и суставной синдром (CINCA), криопиринопатию, содержащую наследуемые или de novo функциональные мутации в гене NLRP3, наследственное аутовоспалительное расстройство, острый панкреатит, тяжелые ожоги, травмы, острый респираторный дистресс-синдром, иммунотерапию, терапию моноклональными антителами, вторичную по отношению к применению лекарств, вторичную по отношению к ингаляции токсинов, липополисахарида (LPS), грамположительных токсинов, грибковых токсинов, гликозилфосфатидилинозита (GPI) или модуляции экспрессии гена RIG-1.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
m
m
H
На ФИГ. 1A показан график, изображающий температуры перехода (T1) для анти-GDF15 антитела по изобретению, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). T1 представляет температуру, при которой C2 антитела на 50% развертывается.
m
m
На ФИГ. 1B показан график, изображающий температуры перехода (T2) для анти-GDF15 антитела по изобретению, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). T2 представляет температуру, при которой Fab антитела на 50% развертывается.
m
m
H
На ФИГ. 1C показан график, изображающий температуры перехода (T3) для анти-GDF15 антитела по изобретению, по данным дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). T3 представляет температуру, при которой C3 антитела на 50% развертывается.
На ФИГ. 2 показана вязкость GDF15_001, проанализированная на инструменте Anton Parr. Приемлемая предельная вязкость (20cP) достигается при примерно 140 мг/мл.
На ФИГ. 3 показана концентрация GDF15 в плазме человека после инъекции аденоассоциированного вируса (AAV)-GDF15 человека здоровым самцам мышей C57Bl6N. GDF15 в плазме измеряют на 13 и 14 дни после инъекции AAV (соответствующие дням -2 и -1 на фигуре 3) через ELISA (R&D Systems DGD150). Горизонтальные линии означают середину. n=9 на группу.
На ФИГ. 4 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать GDF15-индуцированную потерю массы у здоровых мышей. Стрелки указывают на сроки инъекции AAV-GDF15 человеку (день -15) и дозу первого моноклонального антитела (mAb) (день 0). Здоровых самцов мышей C57Bl6N лечат GDF15_001 (30 мг/кг подкожно (ПК) каждый третий день (Q3D)) или контрольным иммуноглобулином G (IgG). Значения являются средними ± СОС. n=8 на группу. Повторяющиеся измерения ANOVA с авторегрессионной (1) ковариационной структурой применяют для сравнения процента изменения от исходной массы тела между группами лечения в течение дней 4-6 периода дозирования. Корректировку критерия множественных сравнений Тьюки-Крамера используют для контроля групповой вероятности ошибки для сравнения групп лечения в дисперсионном анализе повторных измерений (ANOVA). * p<0,0001 к контролю + IgG (дни 4-6); † p<0,0001 к GDF15+GDF15_001 (дни 4-6).
На ФИГ. 5 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать GDF15-индуцированную потерю массы жировой ткани. Здоровым самцам мышей C57Bl6N вводят инъекцией AAV-GDF15 человека в день -15 после первой дозы mAb, начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (30 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают в течение 6 дней. Состав тела измеряют на 6 день с применением компьютерной томографии (МРТ). Значения являются средними ± СОС. n=8 на группу. Статистический анализ проводят с применением ANOVA. * p<0,0001 к контролю+IgG, † p<0,01 к GDF15+GDF15_001.
На ФИГ. 6 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать GDF15-вызванную потерю массы мышечной ткани. Здоровым самцам мышей C57Bl6N вводят инъекцией AAV-GDF15 человека в день -15 после первой дозы mAb, начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (30 мг/кг, подкожно каждый третий день) или IgG контролем продолжают в течение 6 дней. Состав тела измеряют на 6 день с применением МРТ. Значения являются средними ± СОС. n=8 на группу. Статистический анализ проводят с применением ANOVA. * p<0,01 к контролю + IgG; † p<0,01 к GDF15+GDF15_001.
На ФИГ. 7 показан график, изображающий концентрацию GDF15 в плазме мышей после инъекции AAV-GDF15 мыши здоровым самцам мышей C57Bl6N. GDF15 в плазме измеряют на 9 дни после инъекции AAV (соответствуют дню 9 на фигуре 5) с применением ELISA (R&D Systems MGD150). Горизонтальные линии представляют середину. n=6 на группу. Средние уровни GDF15 в плазме сравнивают между группами лечения с применением t-критерия с применением корректировки Саттерсвейта для неодинаковой дисперсии. * p<0,001 к контролю.
На ФИГ. 8 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать GDF15-индуцированную потерю массы у здоровых мышей. Стрелки указывают моменты времени инъекции AAV-GDF15 мыши (день 0) и первой дозы mAb (день 11). Здоровых самцов мышей C57Bl6N лечат GDF15_001 (30 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=10 на группу. Повторяющийся ANOVA с неструктурированной ковариационной структурой применяют для сравнения процента от исходных масс тела между группами лечения в течение 12-16 дней периода дозирования. В присутствии статистически значимого лечения временным взаимодействием, сравнения между группами лечения проводят на 16 день с определением процента массы тела от исходной с применением ANOVA, подходящего для полностью рандомизированной модели. * p<0,0001 к контролю + IgG на день 16, † p<0,0001 к hGDF15+PF-06946860 на день 16.
На ФИГ. 9 показан график, изображающий способность GDF15_001 увеличивать поглощение пищи после лечения GDF15 у здоровых мышей. Здоровых самцов мышей C57Bl6N лечат GDF15_001 (30 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Поглощение пищи измеряют ежедневно, и рассчитывают суммарное поглощение пищи. Значения являются средними ± СОС. n=8-10 на группу. ANOVA применяют для сравнения суммарного поглощения пищи в группах лечения с 11 по 16 дни с применением поправки Бонферрони для множественных сравнений. * p<0,001 к контролю + IgG, † p<0,001 к контролю+GDF15_001, p=0,0505 GDF15+GDF15_001 к GDF15+IgG.
На ФИГ. 10 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю массы у мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека). Стрелки указывают на моменты времени подкожной имплантации HT-1080 клеток (день -13) и первого дозирования mAb (день 0). Самок мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом обрабатывают GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=9-10 на группу. Повторяющиеся измерения ANOVA с авторегрессионной (1) ковариационной структурой применяют для сравнения процента изменения от исходной массы тела между группами лечения в течение дней 9-11 периода дозирования (где болезнь стабилизирована и животные не начинают отсеиваться из-за потери массы тела). * = p<0,0001 HT-1080+IgG к NTB+PBS и HT-1080+GDF15_001 (дни 9-11).
На ФИГ. 11 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю жировой массы у мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) HT-1080 клетки в день -13 после первого дозирования mAb, начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают в течение 18 дней. Состав тела измеряют на день 18 с применением эхо МРТ. Значения являются средними ± СОС. n=9-10 на группу. Статистический анализ проводят с применением ANOVA. * = p<0,0001 HT-1080+IgG к NTB+PBS и HT-1080+GDF15_001.
На ФИГ. 12 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю массы мышечной ткани без опухоли у мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) HT-1080 клетки в день -13 после первого дозирования mAb, начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают в течение 18 дней. Состав тела измеряют на день 18 с применением эхо МРТ. Значения являются средними ± СОС. n=9-10 на группу. Статистический анализ проводят с применением ANOVA. * = p<0,001 HT-1080+IgG к NTB+PBS, † = p<0,0001 HT-1080+IgG к HT-1080+GDF15_001.
На ФИГ. 13 показан график, изображающий способность GDF15_001 продлевать выживание мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) HT-1080 клетки в день -13 после первого дозирования mAb, начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают до смерти или эвтаназии (определенной плохим здоровьем и/или >30% потерей массы согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee). n=9-10 на группу. Кривые выживаемости Каплана-Мейера сопоставляют с данными о времени отказа с использованием лог-ранковой статистики для сравнения групп лечения. * p< 0,0001 к HT-1080+GDF15_001 группе.
На ФИГ. 14 показан график, изображающий концентрацию GDF15 в плазме человека у мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека), размещенных в условиях термонейтральности (86°F). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) HT-1080 клетки в день -13 после первой дозы mAb (IgG контроль, 10 мг/кг, ПК, Q3D), начиная с 0 дня. GDF15 в плазме измеряют на 18 день с применением ELISA (R&D Systems DGD150). Горизонтальная линия представляет середину. n=7.
На ФИГ. 15 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю массы у мышей, имеющих опухоль HT-1080 (клеточной линии фибросаркомы человека), размещенных в условиях термонейтральности (86°F). Стрелки указывают на моменты времени подкожной имплантации HT-1080 клеток (день -13) и первого дозирования mAb (день 0). Самок мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом лечат GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=10 на группу. Повторяющиеся измерения ANOVA с неструктурированной ковариационной структурой применяют для сравнения процента от исходной массы тела между группами лечения в течение 1-13 дней периода дозирования с последующим сравнением между группами лечения на день 7 и день 13 с применением ANOVA. Сравнения, представляющие интерес, между группами лечения затем тестируют с применением t-критериев с применением объединенной оценки вариантов из ANOVA. Поправки Бонферрони для множественных сравнений применяют для контроля групповой вероятности ошибки для сравнения групп лечения. * = p<0,0001 к NTB+IgG и HT-1080+GDF15_001 (дни 7 и 13).
На ФИГ. 16 показан график, изображающий концентрацию GDF15 в плазме человека у мышей с опухолью PA-1065 (полученной из печеночных метастазов опухоли поджелудочной железы). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) PA-0165 опухолевую ткань на день -18 после первой дозы mAb (IgG контроль, 10 мг/кг, ПК, Q3D), начиная с 0 дня. GDF15 в плазме измеряют на день 27 с применением ELISA (R&D Systems DGD150). Горизонтальная линия представляет середину. n=14.
На ФИГ. 17 показан график, изображающий способность GDF15_001 предотвращать потерю массы у мышей, имеющих опухоль PA-0165 (полученную из печеночных метастазов опухоли поджелудочной железы). Стрелки указывают на моменты времени подкожной имплантации опухолевой ткани PA-0165 (день -18) и первого дозирования mAb (день 0). Самок мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом лечат GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=10-17 на группу. Анализ вариации с повторными измерениями с неструктурированной ковариационной структурой используют для сравнения процента исходной массы тела между группами лечения в течение 10-16 дней периода дозирования. При наличии статистически значимого лечения по временному взаимодействию, сравнения между группами лечения проводят на день 16 с применением t-критериев с использованием объединенной оценки дисперсии на основе повторных измерений ANOVA. Поправки Бонферрони для множественных сравнений применяют для контроля групповой вероятности ошибки для сравнения групп лечения. * = p<0,0001 к NTB+PBS и PA-0165+GDF15_001.
На ФИГ. 18 показан график, изображающий способность GDF15_001 для продления выживания у мышей, имеющих опухоль PA-1065 (полученную из печеночных метастазов опухоли поджелудочной железы). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) опухолевую ткань PA-0165 за 18 дней до первого дозирования mAb начиная с 0 дня. Лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают до смерти или эвтаназии (определенной плохим здоровьем и/или >30% потерей массы согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee). n=17 на группу. Кривые выживаемости Каплана-Мейера сопоставляют с данными о времени отказа с использованием лог-ранковой статистики для сравнения степени выживаемости среди групп лечения. * p<0,01 к PA-0165+GDF15_001.
На ФИГ. 19 показан график, изображающий концентрации GDF15 в плазме мыши у мышей, имеющих опухоль RENCA (клеточную линию аденокарциномы почек мышей) в условиях термонейтральности (86°F). Самкам мышей Balb/c имплантируют (подкожно) клетки RENCA и GDF15 в плазме измеряют в конце исследования (соответствует фигуре 17) с применением ELISA (R&D Systems MGD150). Значения являются средними. n=10-12 на группу. ANOVA с корректировкой Кенварда-Роджера для неравномерной дисперсии применяют для сравнения совокупного потребления пищи и естественного логарифмического преобразования GDF15 в плазмы между группами лечения с использованием корректировки множественного сравнения Тьюки-Крамера для контроля групповой вероятности ошибки. Средние геометрические получают для натуральных логарифмических преобразованных средних значений GDF15 и 95%оценок доверительных интервалов. Все ответные переменные оценивают на соответствие предположению о нормальности с помощью теста Шапиро-Уилкса и графиков Q-Q. * p<0,0001 отличный от NTB + носитель, ‡ p<0,0001 отличный от NTB + Сорафениб, † p<0,01 к RENCA + Сорафениб + IgG.
На ФИГ. 20 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю массы у мышей с опухолью RENCA (клеточной линией аденокарциномы почек мышей) с противораковым агентом и размещают в условиях термонейтральности (86°F). Стрелки указывают на моменты времени подкожной имплантации клеток RENCA (день -12), первого дозирования Сорафениба (день -2) и первого дозирования mAb (день 0). Самок мышей Balb/c обрабатывают Сорафенибом (15 мг/кг, ПО, QD) и GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=10-12 на группу. Повторные измерения ANOVA с гетерогенной авторегрессионной ковариационной структурой (1) применяют для сравнения процента изменения от основных масс между группами лечения в течение дней 3-7 и 13-17 периода дозирования. Критерий множественных сравнений Тьюки-Крамера применяют для контроля групповой вероятности ошибки для сравнения групп лечения в повторных измерениях ANOVA. ** p<0,0001 отличный от NTB+Носитель (дни 3-7), * p<0,0001 отличный от NTB+Сорафениб (дни 13-17), † p<0,0001 к RENCA+Сорафениб+GDF15_001 (дни 13-17).
На ФИГ. 21 показан график, изображающий способность GDF15_001 продлевать выживаемость у мышей, имеющих опухоль RENCA (клеточную линию аденокарциномы почек мышей), леченных противораковым агентом и размещенных в условиях термонейтральности (86°F). Самкам мышам Balb/c имплантируют (подкожно) клетки RENCA за 10 дней до первого дозирования Сорафениба после первого дозирования mAb 2 днями позже (соответствует дню 0). Сорафениб (15 мг/кг, ПО, QD) и лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем продолжают до смерти или эвтаназии (определенной плохим здоровьем и/или >30% потерей массы согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee). n=10-12 на группу. Кривые выживаемости Каплана-Мейера сопоставляют с данными о времени отказа с использованием лог-ранковой статистики для сравнения степени выживаемости между группами лечения. * p<0,01 к RENCA+Сорафениб+GDF15_001.
На ФИГ. 22 показан график, изображающий концентрацию GDF15 в плазме человека у мышей, имеющих опухоль NSX-26115 (полученную из аденокарциномы немелкоклеточной карциномы легких человека). Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) NSX-26115 опухолевую ткань и GDF15 в плазме измеряют в конце исследования (соответствует фигуре 20) с применением ELISA (R&D Systems DGD150). n=10-12 на группу. ANOVA с корректировкой Кенварда-Роджера для гетерогенных вариантов применяют для сравнения уровней GDF15 в плазме между разными группами лечения. Нормальность оценивают с применением гистограмм и теста Шапиро-Уилка, и гомогенность вероятностей оценивают с применением критерия Левена. Парное сравнение групп лечения корректируют для множественных сравнений с применением способа Тьюки-Крамера. * p<0,01 ко всем другим группам.
На ФИГ. 23 показан график, изображающий способность GDF15_001 обращать потерю массы у мышей, имеющих опухоль NSX-26115 (полученную из аденокарциномы немелкоклеточной карциномы легких человека) с или без противоракового агента. Стрелки указывают на моменты времени подкожной имплантации NSX-26115 опухолевой ткани (день -30), первого дозирования цисплатина (день 0) и первого дозирования mAb (день 0). Самок мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом лечат цисплатином (5 мг/кг, ВБ, Q7D) и/или GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем. Значения являются средними ± СОС. n=10-12 на группу. Повторный ANOVA с авторегрессионной ковариационной структурой первого порядка применяют для сравнения процента изменения массы тела в течение времени между группами лечения с применением данных для дней 17-19. В это время заболевание было в стабилизированном состоянии при отсутствии значительного взаимодействия между лечением и днем. Многомерную нормальность оценивают с применением тестов Мардиа для асимметрии и эксцесса. Однофакторный ANOVA лечением проводят на 10 день для оценки разницы между группами лечения в день максимального действия цисплатина, по информации схемы дозирования. Все парные сравнения групп лечения корректируют на множественные сравнения с применением способа Тьюки-Крамера. * p<0,0001 к NTB+Носитель (дни 17-19), ‡ p<0,0001 к NSX-26115+GDF15_001 (дни 17-19), † p<0,001 к NTB+Цисплатин (дни 17-19), § p<0,0001 к NSX-26115+Цисплатин+GDF15_001 (дни 17-19), ‡‡ p<0,01 к NTB+Носитель (день 10), ** p<0,0001 к NSX-26115+IgG (день 10).
На ФИГ. 24 показан график, изображающий способность GDF15_001 продлевать выживаемость у мышей, имеющих опухоль NSX-26115 (полученную из аденокарциномы немелкоклеточной карциномы легких человека), леченных противораковым агентом. Самкам мышей с тяжелым объединенным иммунодефицитом имплантируют (подкожно) NSX-26115 опухолевую ткань за 30 дней до первой дозы Цисплатина и mAb (соответствуют дню 0). Цисплатин (5 мг/кг, ВБ, Q7D) и лечение mAb с GDF15_001 (10 мг/кг, ПК, Q3D) или IgG контролем проводят до смерти или эвтаназии (определяемой плохим здоровьем и/или >30% потерей массы согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee). n=10-12 на группу. Кривые выживаемости Каплана-Мейера с использованием лог-ранковой статистики применяют для сравнения выживания до преждевременной эвтаназии между группами. * p<0,0001 к NSX-26115+Цисплатин+GDF15_001.
На ФИГ. 25 показан график, предлагающий еженедельную подкожную дозу, способную снизить уровни свободного GDF15 до менее чем 0,5 нг/мл у субъекта, по интервалу дозирования, для GDF15_001, как функцию от исходного уровня свободного GDF15 у субъекта.
На ФИГ. 26 показан график, предлагающий еженедельную подкожную дозу, способную снизить уровни свободного GDF15 до менее чем 0,5 нг/мл у субъекта, по интервалу дозирования, для GDF15_001, как функцию от исходного уровня свободного GDF15 у субъекта.
На ФИГ. 27 показан график, предлагающий еженедельную подкожную дозу, способную снизить уровни свободного GDF15 до менее чем 0,5 нг/мл у субъекта, по интервалу дозирования, для GDF15_001, как функцию от исходного уровня свободного GDF15 у субъекта.
На ФИГ. 28 представлена таблица, показывающая SEQ ID NOs, соответствующие GDF15 антителам по изобретению.
На ФИГ. 29 изображен график, суммирующий результаты лечения анти-GDF15 (сплошные треугольники), лечения анти-CD40 антителом (полые круги) и комбинированного лечения (перевернутые полые треугольники). Уровни экспрессии MHCII представлены как средняя интенсивность флуоресценции (MFI) популяции макрофагов, инфильтрующих опухоль.
На ФИГ. 30 изображен график, суммирующий результаты лечения анти-GDF15 (сплошные треугольники), лечения анти-CD40 антителом (полые круги) и комбинированного лечения (полые треугольники).
На ФИГ. 31 изображен график, суммирующий результаты лечения анти-GDF15 (перевернутые сплошные треугольники), лечения анти-CD40 антителом (полые треугольники) и комбинированного лечения (сплошные квадраты).
На ФИГ. 32 изображен график, суммирующий результаты лечения анти-GDF15_297 антителом (полые круги), лечения анти-GD15_001 антителом (полые треугольники).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем изобретении представлены антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с GDF15 и снижают или ингибируют активность GDF15, включающую, но не ограниченную ими, способность GDF15 взаимодействовать с белком, подобным α рецептору семейства GDNF (GFRAL). В изобретении также представлены способы получения, приготовления или продуцирования GDF15 антител. Антитела по изобретению применяют в диагностике, профилактике и/или лечении расстройств или состояний, опосредованных или ассоциированных с активностью GDF15 включая, но не ограничиваясь ими, гиперпролиферативные заболевания, характеризующиеся GDF15, потерей мышечной массы, потерей массы тела, потерей жировой массы, пониженным поглощением пищи и подобными. Изобретение также охватывает экспрессию антител и приготовление и производство композиций, содержащих антитела по изобретению или их антигенсвязывающие фрагменты, таких как лекарственные средства для применения антител.
Представлены полинуклеотиды, кодирующие антитела, которые связывают GDF15 или его антигенсвязывающие части. Также представлены полинуклеотиды, кодирующие тяжелую цепь или легкую цепь антитела, или обе. Представлены клетки-хозяева, которые экспрессируют анти-GDF15 антитела. Представлены способы лечения с использованием антител к GDF15. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, способы лечения заболеваний, ассоциированных или опосредованных экспрессией GDF15 и/или связыванием GDF15 с GFRAL, включая, но не ограничиваясь ими, воспалительные и иммунные заболевания и гиперпролиферативные расстройства.
Заголовки разделов, используемые в данном документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие описываемый предмет.
Все ссылки, процитированные в настоящем документе, включая заявки на патенты, патентные публикации и номера доступа Genbank, включены в настоящее описание в качестве ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и индивидуально указана для включения в качестве ссылки в полном объеме.
rd
Методы и процедуры, описанные или упомянутые в настоящем документе, в целом хорошо понятны и обычно используются специалистами в данной области с использованием традиционной методологии, например, широко используемых методологий, описанных в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3 edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); в серии METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames и G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al, eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); и Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993); и их обновленные версии.
Антитела
«Антитело» или «Ab» является молекулой иммуноглобулина, способной распознавать и связываться с конкретной мишенью или антигеном (Ag), таким как углевод, полинуклеотид, жир, полипептид и т.д., по меньшей мере, через один сайт распознавания антигена, расположенный в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемый здесь термин «антитело» может охватывать любой тип антитела, включая, помимо прочего, моноклональные антитела, поликлональные антитела, антигенсвязывающие фрагменты (или части) интактных антител, которые сохраняют способность специфически связываться с данным антигеном (например, GDF15).
Термин «антиген» относится к молекулярному объекту, используемому для иммунизации иммунокомпетентного позвоночного с целью продуцирования антитела, которое распознает Ag, или для скрининга библиотеки экспрессии (например, библиотеки фаговых, дрожжевых или рибосомных дисплеев, среди прочих). В данном документе Ag обозначается более широко и, как правило, предназначен для включения молекул-мишеней, которые специфически распознаются Ab, таким образом, включает фрагменты или миметики молекулы, используемые в процессе иммунизации для повышения Ab или в скрининге библиотеки для выбора Ab. Таким образом, для антител по изобретению, связывающихся с GDF15, полноразмерные GDF15 видов млекопитающих (например, GDF15 человека, обезьяны, мыши и крысы), включая их мономеры и мультимеры, такие как димеры, тримеры и т.д., а также усеченные и другие варианты GDF15, называются антигеном.
«Антигенсвязывающий фрагмент» антитела относится к фрагменту полноразмерного антитела, который сохраняет способность специфически связываться с антигеном (предпочтительно, с по существу той же аффинности связывания). Примеры антигенсвязывающего фрагмента включают (i) Fab фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из VL, VH, CL и CH1 доменов; (ii) F(ab')2 фрагмент, двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab фрагмента, связанных дисульфидным мостиком на шарнирной области; (iii) Fd фрагмент, состоящий из VH и CH1 доменов; (iv) Fv фрагмент, состоящий из VL и VH доменов одного плеча антитела, (v) dAb фрагмент (Ward et al., 1989 Nature 341:544-546), который состоит из VH домена; и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), связанные дисульфидом Fvs (dsFv) и анти-идиотипические (анти-Id) антитела и интратела. Кроме того, хотя два домена Fv фрагмента, VL и VH, кодированы разными генами, они могут быть объединены с применением рекомбинантных способов, синтетическим линкером, который позволяет им образовывать единую белковую цепь, в которой VL и VH области спарены с образованием одновалентных молекул (известных как одноцепочечная Fv (scFv)); см., например, Bird et al. Science 242:423-426 (1988) и Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883. Другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела, также охватываются. Диатела являются двухвалентными, биспецифическими антителами, в которых VH и VL домены экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с применением линкера, который слишком короткий, чтобы позволить спаривание между двумя доменами на одной и той же цепи, тем самым заставляя домены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антигенсвязывающих сайта (см., например, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-1123).
«Вариабельный домен» антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела (VL) или вариабельной области тяжелой цепи антитела (VH), либо по отдельности, либо в комбинации. Как известно в данной области техники, каждая из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей состоит из четырех каркасных областей (FR), соединенных тремя определяющими комплементарность областями (CDR) и участвует в образовании антигенсвязывающего сайта антитела.
th
«Определяющие комплементарность области» (CDR) могут быть идентифицированы согласно определениям по Кэботу, Чотиа, совместно по Кэботу и Чотиа, AbM, контакту, Норту и/или конформационному определениями или любому способу определения CDR, хорошо известному в данной области техники. См., например, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 ed. (гипервариабельные области); Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883 (структурные петлевые структуры). Идентичность аминокислотных остатков в конкретном антителе, которые составляют CDR, может быть определена с применением способов, хорошо известных в данной области техники. Определение AbM CDR является компромиссом между Кэботом и Чотиа и применяет программу для моделирования антитела Oxford Molecular's AbM (Accelrys). Определение «контакта» CDR основано на наблюдаемых контактах антигена, описанных в MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745. «Конформационное» определение CDR основано на остатках, которые делают энтальпийный вклад в связывание антигена (см., например, Makabe et al., 2008, J. Biol. Chem., 283:1156-1166). Норт имеет идентифицированные канонические CDR конформации с применением разных предпочтительных множеств определений CDR (North et al., 2011, J. Mol. Biol. 406: 228-256). При другом подходе, названным в настоящем документе «конформационное определение» CDR, положения CDR могут быть идентифицированы как остатки, которые вносят энтальпийный вклад в связывание антигена (Makabe et al., 2008, J Biol. Chem. 283:1156-1166). Другие разграничительные определения CDR могут не строго соответствовать одному из вышеперечисленных подходов, но, тем не менее, будут частично совпадать с частью CDR по Кэботу, хотя они могут быть сокращены или удлинены в свете прогнозов или экспериментальных результатов, касающихся конкретных остатков или групп остатков или даже полных CDR, не оказывающих значительного влияния на связывание антигена. В настоящем документе, CDR могут относиться к CDR, определенным любым подходом, известным в данной области техники, включая комбинации подходов. Способы, применяемые в настоящем документе, могут применять CDR, определенные по любому из этих подходов. Для любого данного варианта осуществления, включающего более одной CDR, CDR (или другие остатки антитела) могут быть определены по любому из Кэбота, Чотиа, Норта, расширенного, AbM, контакта и/или конформационных определений.
«Каркасные» (FR) остатки являются остатками вариабельного домена антитела, отличными от CDR остатков. Каркас VH или VL домена содержит четыре каркасных суб-области, FR1, FR2, FR3 и FR4, расположенные попеременно с CDR в следующей структуре: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4.
Как известно в данной области техники, «константная область» антитела относится к константной области легкой цепи антитела или константной области тяжелой цепи антитела, отдельно или в комбинации.
Термины «Fc область», «Fc домен» и «Fc», применяемые в настоящем документе взаимозаменяемо, относятся к части молекулы иммуноглобулина (Ig), которая коррелирует с кристаллизуемым фрагментом, полученным папаиновым переваром Ig молекулы. В настоящем документе, относятся к константной области антитела, исключая первый домен константной области иммуноглобулина, и также относится к частям этой области. Таким образом, Fc относится к последним двум доменам константной области иммуноглобулина IgA, IgD и IgG и последним трем доменам константной области иммуноглобулина IgE и IgM и гибкому шарниру, N-концевому к этим доменам, или их частям. Для IgA и IgM, Fc могут включать J цепь.
Для IgG, Fc содержит домены иммуноглобулина Cγ2 и Cγ3 (C гамма 2 и C гамма 3) и шарнир между Cγ1 (C гамма 1) и Cγ2 (C гамма 2). Хотя границы Fc области могут варьироваться, Fc область тяжелой цепи IgG человека обычно определяют как содержащую остатки C226 или P230 к ее карбоксильному концу, где нумерация проводится согласно EU индексу из Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85 как описано у Kabat et al., 1991. Обычно Fc домен содержит аминокислотные остатки от примерно 236 до примерно 447 константного домена IgG1 человека. Типовая аминокислотная последовательность Fc домена IgG1 дикого типа человека указана в SEQ ID NO:31. Fc полипептид может относиться к этой области в выделении, или этой области в контексте антитела или его антигенсвязывающей части, или Fc слитого белка.
Константный домен тяжелой цепи содержит Fc область и дополнительно содержит CH1 домен и шарнир, а также CH2 и CH3 (и, необязательно, CH4 IgA и IgE) домены тяжелой цепи IgG.
1
2
1
2
3
4
В некоторых вариантах осуществления, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, описанное в настоящем документе, содержит Fc домен. Fc домен может быть получен из IgA (например, IgA или IgA), IgD, IgE, IgM, или IgG (например, IgG, IgG, IgG, или IgG).
«Fc слитым» белком может быть белок, где один или несколько полипептидов функционально связаны с Fc полипептидом. Fc слияние объединяет Fc области иммуноглобулина с партнером по слиянию.
«Эпитоп» относится к участку или области антигена, с которой антитело специфически связывается, например, участку или области, содержащей остатки, которые взаимодействуют с антителом. Эпитопы могут быть линейными или конформационными.
На самом детальном уровне эпитоп для взаимодействия между Ag и Ab может быть определен пространственными координатами, определяющими атомные контакты, присутствующие во взаимодействии Ag-Ab, а также информацией об их относительном вкладе в термодинамику связывания. На менее детальном уровне, эпитоп может быть охарактеризован пространственными координатами, определяющими атомные контакты между Ag и Ab. На еще более менее детальном уровне, эпитоп может быть охарактеризован аминокислотными остатками, которые он содержит, как определено конкретным критерием, например, расстоянием между атомами (например, тяжелыми, то есть не водородными атомами) в Ab и Ag. На еще более менее детальном уровне, эпитоп может быть охарактеризован через функцию, например, через конкурентное связывание с другими Abs. Эпитоп также может быть определен более общем смысле как содержащий аминокислотные остатки, замена которых другой аминокислотой изменит характеристики взаимодействия между Ab и Ag (например, с использованием аланинового сканирования).
Из того факта, что описания и определения эпитопов, в зависимости от используемого метода картирования эпитопов, получены на разных уровнях детализации, следует, что сравнение эпитопов для разных Abs на одном и том же Ag может аналогичным образом проводиться на разных уровнях детализации.
Эпитопы, описанные на уровне аминокислот, например, определенные с помощью рентгеновской структуры, считаются идентичными, если они содержат одинаковый набор аминокислотных остатков. Эпитопы считаются перекрывающимися, если, по меньшей мере, одна аминокислота является общей между эпитопами. Эпитопы считаются отдельными (уникальными), если эпитопы не имеют общих остатков аминокислот.
Эпитопы, характеризующиеся конкурентным связыванием, считаются перекрывающимися, если связывание соответствующих антител является взаимоисключающим, т.е. связывание одного антитела исключает одновременное или последовательное связывание другого антитела. Эпитопы считаются отдельными (уникальными), если антиген способен одновременно связывать оба соответствующих антитела.
Антитело, которое «предпочтительно связывается» или «специфически связывается» (используется взаимозаменяемо в настоящем документе) с эпитопом, является термином, хорошо известным в данной области техники, и способы определения такого специфического или предпочтительного связывания также хорошо известны в данной области. Молекула считается проявляющей «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание», если она взаимодействует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «преимущественно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или дольше, чем с другими веществами. Например, антителом, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом GDF15, PD-1 или PD-L1, является антителом, которое связывает этот эпитоп с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другим эпитопами GDF15, PD-1 или PD-L1 или эпитопами не GDF15, PD-1, PD-L1. Обычно, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание. «Специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» включает соединение, например, белок, нуклеиновую кислоту, антитело и подобные, которое распознает и связывается с конкретной молекулой в образце, но по существу не распознает или не связывает другие молекулы в образце. Например, антитело или пептидный рецептор, который распознает и связывается с родственным лигандом или партнером по связыванию (например, анти-человеческим антителом опухолевого антигена человека, которое связывает опухолевый антиген, молекулой PD-1, которая связывает PD-L1 или PD-L2 и т.д.) в образце, но по существу не распознает или не связывает другие молекулы в образце, специфически связывается с этим когнатным лигандом или партнером по связыванию. Таким образом, в обозначенных условиях анализа, указанная связывающая группа (например, антитело или его антигенсвязывающая часть или рецептор или его лигандсвязывающая часть) предпочтительно связывается с конкретной молекулой-мишенью и не связывается в значительном количестве с другими компонентами, присутствующими в тестовом образце.
D
Множество форматов анализов может применяться для выбора антитела или пептида, который специфически связывается с молекулу, представляющую интерес. Например, твердофазный иммуноанализ ELISA, иммунопреципитация, BIAcore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ), сортировка флуоресцентно-активированных клеток (FACS), Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA) и вестерн-блоттинг находятся среди множества анализов, которые могут применяться для идентификации антитела, которое специфически взаимодействует с антигеном или рецептором или их лигандсвязывающей частью, которые специфически связываются с когнатным лигандом или партнером по связыванию. Обычно, специфическая или селективная реакция будет, по меньшей мере, двукратной к фоновому сигналу или шуму, и более часто, более чем в 10 раз превышать фон, даже более конкретно, антитело считается «специфически связывающим» антиген, если равновесная константа диссоциации (K) равна ≤1 мкМ, предпочтительно, ≤100 нМ, более предпочтительно, ≤10 нМ, даже более предпочтительно, ≤100 пМ, еще более предпочтительно, ≤10 пМ и даже более предпочтительно, ≤1 пМ.
in vitro
Термин «конкурировать», используемый в настоящем документе в отношении антитела, означает, что связывание первого антитела или его антигенсвязывающей части с антигеном снижает последующее связывание того же антигена вторым антителом или его антигенсвязывающей частью. В общем, связывание первого антитела создает пространственное затруднение, конформационное изменение или связывание с обычным эпитопом (или его частью), так что связывание второго антитела с тем же антигеном снижается. Стандартные конкурентные анализы можно использовать для определения, конкурируют ли два антитела друг с другом. Один подходящий анализ на конкуренцию антитела включает использование технологии Biacore, которая может измерять степень взаимодействий с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR), обычно с использованием биосенсорной системы (такой как система BIACORE). Например, SPR можно использовать в анализе ингибирования конкурентного связывания  для определения способности одного антитела ингибировать связывание второго антитела. Другой анализ для измерения конкуренции антител использует подход, основанный на ELISA.
Кроме того, процесс с высокой пропускной способностью для «сортировки» антител на основе их конкуренции описан в международной заявке на патент № WO2003/48731. Конкуренция присутствует, если одно антитело (или фрагмент) снижает связывание другого антитела (или фрагмент) с GDF15. Например, может применяться конкурентный анализ последовательного связывания с последовательным добавлением разных антител. Первое антитело может быть добавлено для достижения связывания, близкого к насыщению. Затем добавляют второе антитело. Если связывание второго антитела с GDF15 не определяется или значительно снижается (например, снижается на, по меньшей мере, примерно 10%, по меньшей мере, примерно 20%, по меньшей мере, примерно 30%, по меньшей мере, примерно 40%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80%, или, по меньшей мере, примерно 90%) по сравнению с параллельным анализом с отсутствием первого антитела (значение которого может быть установлено как 100%), два антитела считаются конкурирующими друг с другом.
Вариантное антитело может содержать 1, 2, 3, 4, 5, вплоть до 10, вплоть до 20, вплоть до 30 или более аминокислотных замещений и/или делеций и/или вставок из определенных последовательностей и фрагментов, обсуждаемых выше. Варианты «делеции» могут содержать делецию отдельных аминокислот, делецию малых групп аминокислот, таких как 2, 3, 4 или 5 аминокислоты, или делецию больших аминокислотных областей, такую как делеция определенных аминокислотных доменов или других признаков. Варианты «вставки» могут содержать вставку отдельных аминокислот, вставку малых групп аминокислот, таких как 2, 3, 4 или 5 аминокислот, или вставку больших аминокислотных областей, такую как вставку определенных аминокислотных доменов или других признаков. Варианты «замещения» предпочтительно, включают замещение одной или нескольких аминокислот тем же количеством аминокислот и проведением консервативных замещений. Например, аминокислота может быть замещена альтернативной аминокислотой, имеющей похожие свойства, например, другой основной аминокислотой, другой кислой аминокислотой, другой нейтральной аминокислотой, другой заряженной аминокислотой, другой гидрофильной аминокислотой, другой гиброфобной аминокислотой, другой полярной аминокислотой, другой ароматической аминокислотой или другой алифатической аминокислотой. Некоторые свойства 20 основных аминокислот, которые могут применяться для выбора подходящих заместителей, следующие.
Варианты замещения имеют, по меньшей мере, один удаленный аминокислотный остаток в молекуле антитела и другой остаток, вставленный на его место. Сайты, представляющие наибольший интерес для замещающего мутагенеза, включают гипервариабельные области, но также рассматриваются каркасные изменения. Консервативные замещения показаны в таблице 1 под заголовком «консервативные замещения». Если такие замещения приводят к изменению биологической активности, тогда могут быть внесены более существенные изменения, названные «типовые замещения», показанные ниже, или, как дополнительно описано ниже со ссылкой на классы аминокислот, могут быть введены и продукты подвергнуты скринингу.
ТАБЛЦА 1Аминокислоты и замещения
Исходный остаток
Консервативные замещения
Типовые замещения
аланин Ala (A)
Val
Val; Leu; Ile
аргинин Arg (R)
Lys
Lys; Gln; Asn
аспарагин Asn (N)
Gln
Gln; His; Asp, Lys; Arg
аспарагиновая кислота Asp (D)
Glu
Glu; Asn
цистеин Cys (C)
Ser
Ser; Ala
глутамин Gln (Q)
Asn
Asn; Glu
глутаминовая кислота Glu (E)
Asp
Asp; Gln
глицин Gly (G)
Ala
Ala
гистидин His (H)
Arg
Asn; Gln; Lys; Arg
изолейцин Ile (I)
Leu
Leu; Val; Met; Ala; Phe; Норлейцин
лейцин Leu (L)
Ile
Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe
лизин Lys (K)
Arg
Arg; Gln; Asn
метионин Met (M)
Leu
Leu; Phe; Ile
фенилаланин Phe (F)
Tyr
Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
пролин Pro (P)
Ala
Ala
серин Ser (S)
Thr
Thr
треонин Thr (T)
Ser
Ser
триптофан Trp (W)
Tyr
Tyr; Phe
тирозин Tyr (Y)
Phe
Trp; Phe; Thr; Ser
валин Val (V)
Leu
Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Норлейцин
Существенные модификации биологических свойств антитела достигаются путем выбора замен, которые значительно отличаются по своему влиянию на поддержание (а) структуры полипептидного остова в области замещения, например, в виде бета-складчатой или спиральной конформации, (б) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени или (в) основной части боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки делятся на группы на основе общих свойств боковой цепи:
Не полярные: Норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
Полярные без заряда: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
Кислые (отрицательно заряженные): Asp, Glu;
Основные (положительно заряженные): Lys, Arg;
Остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro; и
Ароматические: Trp, Tyr, Phe, His.
Неконсервативные замены производятся путем замены члена одного из этих классов на другой класс.
Один тип замещения, например, который может быть осуществлен, заключается в замещении одного или нескольких цистеинов в антителе, которые могут быть химически реактивными, на другой остаток, такой как, без ограничения, аланин или серин. Например, возможна замена на не канонический цистеин. Замещение может быть произведено в CDR или каркасной области вариабельного домена или в константной области антитела. В некоторых вариантах осуществления, цистеин является каноническим. Любой цистеиновый остаток, не участвующий в поддержании надлежащей конформации антитела, также может быть замещен, обычно серином, для улучшения окислительной стабильности молекулы и предотвращения аберрантного перекрестного сшивания. И наоборот, цистеиновая связь(и) может быть добавлена к антителу для улучшения его стабильности, особенно если антителом является фрагмент антитела, такой как Fv фрагмент.
В процессе, известном как «гуманизирование», определенные аминокислоты в VH и VL последовательностях могут быть мутированы для соответствия тем, который найдены в природе и VH и VL последовательностях зародышевой линии. В частности, аминокислотные последовательности каркасных областей в VH и VL последовательностях могут мутировать, чтобы соответствовать последовательностям зародышевой линии для снижения риска иммуногенности при введении антитела. Используемый в настоящем документе термин «зародышевая линия» относится к нуклеотидным последовательностям и аминокислотным последовательностям генов антитела и сегментов генов по мере их передачи от родителей к потомству через зародышевые клетки. Эта последовательность зародышевой линии отличается от нуклеотидной последовательности, кодирующей антитела в зрелых В-клетках, которые были изменены в результате событий рекомбинации и гипермутации в ходе созревания В-клеток. Антитело, которое «использует» конкретную зародышевую линию, имеет нуклеотидную или аминокислотную последовательность, которая наиболее близко совпадает с нуклеотидной последовательностью или с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, которую она определяет. Такие антитела часто мутируют по сравнению с зародышевой последовательностью. Последовательности ДНК зародышевой линии для генов VH и VL человека известны в данной области (см., например, «Vbase» базу данных последовательностей зародышевой линии человека; см. также Kabat, E. A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson et al., J. Mol. Biol. 227:776-798, 1992; и Cox et al., Eur. J. Immunol. 24:827-836, 1994.)
Аффинность связывания
D
D
off
on
D
off
on
D
D
Аффинность связывания антитела может быть выражена как значение K, которое относится к скорости диссоциации определенного взаимодействия антиген-антитело. K является отношением степени диссоциации, также называемой «скорость диссоциации (k)» к степени ассоциации или «скорости ассоциации (k)». Таким образом, K равна k/k и выражается как молярная концентрация (M), и чем меньше K, тем сильнее аффинность связывания. Значения K для антител может быть определена с применением способов, хорошо известных в данной области техники. Одним из способов для измерения Kd является поверхностный плазмонный резонанс (SPR), обычно с применением биосерсорной системы, такой как система BIACORE. Кинетический анализ BIAcore включает анализ связывания и диссоциации антигена из чипов с иммобилизованными молекулами (например, молекулами, содержащими домены, содержащие эпитоп) на их поверхности. Другой способ определения Kd антитела включает применением Интерферометрии биослоя, обычно с применением технологии OCTET (система Octet QKe, ForteBio). Альтернативно или в добавление, также может применяться анализ KinExA (Анализ кинетического исключения), доступный от Sapidyne Instruments (Boise, Id.).
Анти-GDF15 антитела
В изобретении представлены анти-GDF15 антитела. Анти-GDF15 антитело, предпочтительно, антитело с высоким сродством, может быть эффективным в плазме и множестве тканевых отделов, где считается, что GDF15 действует на его клетки-мишени. Антитела по изобретению обладают потенциалом модифицировать путь, который управляет развитием и прогрессией кахексии, связанной с раком, сердечной недостаточностью или ХОБЛ, среди прочих.
Нейтрализующее или «блокирующее» антитело относится к антителу, связывание которого с GDF15 препятствует, ограничивает или ингибирует взаимодействие между GDF15 или фрагментом GDF15 и рецептором GDF15, таким как GFRAL, или компонентом рецептора GDF15; и/или (ii) приводит к ингибированию, по меньшей мере, одной биологической функции GDF15. Анализы для определения нейтрализации антителом по изобретению описаны в другом месте в настоящем документе и хорошо известны в данной области.
Как используется в настоящем документе, термин «GDF15» включает варианты, изоформы, гомологи, ортологи и паралоги GDF15 человека. В некоторых аспектах изобретения, антитела перекрестно реагируют с GDF15 видов, отличных от человека, такими как GDF15 мыши, крысы или приматов, отличных от человека, а также с различными формами GDF15. В других аспектах, антитела могут быть полностью специфичными для GDF15 человека и могут не проявлять видовой или другой тип перекрестной реактивности. Используемый в настоящем документе термин GDF15 относится к встречающемуся в природе GDF15 человека, если иное не оговорено контекстом. Следовательно, «GDF15 антитело», «анти-GDF15 антитело» или другое подобное обозначение означает любое антитело (как определено в настоящем документе), которое специфически ассоциируется, связывается или взаимодействует с лигандом или изоформой типа GDF15, или их фрагментом или производным. Полноразмерная зрелая форма GDF15 человека, представленная под номером доступа UniProtKB/Swiss-Prot Q99988.1, представлена в настоящем документе как SEQ ID NO: 1.
Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, при взаимодействии с GDF15, GFRAL взаимодействует с рецептором протоонкогена, кодирующего тирозинпротеинкиназу Ret (RET) и индуцирует клеточную передачу сигналов посредством активации путей передачи сигналов MAPK- и AKT-. Затем передача сигналов RET индуцирует или опосредует фосфорилирование, например, ERK, S6, среди прочих. Используемый в настоящем документе термин «GFRAL» включает варианты, изоформы, гомологи, ортологи и паралоги GFRAL человека. Полноразмерная зрелая форма GFRAL человека представлена номером доступа UniProtKB/Swiss-Prot Q6UXV0. Используемый в настоящем документе термин «RET» включает варианты, изоформы, гомологи, ортологи и паралоги RET человека. Полноразмерная зрелая форма RET человека представлена номером доступа UniProtKB/Swiss-Prot P07949.
«Биологическая функция» или «биологическая активность» GDF15 включает регуляцию воспалительных и апоптотических путей в тканях и программу ответа клеток на стресс после клеточного повреждения. «Биологическая функция» или «биологическая активность» GDF15 включает опосредованное увеличение: кахексии, снижения потребления пищи, снижения аппетита, снижения массы тела, потери массы тела, снижения жировой массы, снижения мышечной массы, связывания GFRAL, активации RET, фосфорилирования ERK и фосфорилирования S6, среди прочих, известных в настоящее время в данной области или выявленных позже. Биологическая функция или биологическая активность GDF15 может, но не обязательно, опосредоваться взаимодействием между GDF15 и его когнатным рецептором GFRAL.
Изобретение включает антитело или его антиген-связывающую часть, которая может модулировать биологическую активность GDF15. То есть изобретение включает выделенное антитело или его антиген-связывающую часть, которая специфически связывается с GDF15 и модулирует, по меньшей мере, одну выявляемую активность GDF15, так что антитело: (а) увеличивает потребление пищи; (b) повышает аппетит; (c) увеличивает массу тела; (d) снижает потерю массы тела; (e) увеличивает жировую массу; (f) увеличивает мышечную массу; (g) уменьшает потерю жировой массы, (h) уменьшает потерю мышечной массы, (i) снижает связывание GDF15 с GFRAL; (j) снижает последующую передачу сигналов, опосредованную RET; (k) снижает или ингибирует фосфорилирование ERK; (l) снижает или ингибирует фосфорилирование S6; (m) снижает RET активацию сигнального пути MAPK; (n) снижает RET активацию сигнального пути AKT; и/или (o) снижает активацию сигнального пути PLC-γ1.
in vitro
Биологическая активность GDF15 и GDF15-зависимая сигнальная активность может быть оценена  с использованием клеток HEK293 или CHO, коэкспрессирующих GFRAL и RET, среди многих известных в данной области анализов. Активация пути MAPK после стимуляции GDF15 может быть измерена, среди прочего, с использованием системы репортерных генов люциферазы (например, PathDetect, Agilent Technologies). Анализы фосфобелка, основанные на технологии гомогенной флуоресценции с временным разрешением (Cisbio Inc.), также могут использоваться в качестве ортогональных подходов для измерения активации путей MAPK и AKT (например, фосфо-ERK1/2) в ответ на связывание GDF15 его рецептором. Способность нейтрализующих антител предотвращать GDF15-зависимую передачу сигналов также можно оценить путем инкубации клеток с фиксированной концентрацией GDF15 в отсутствие или в присутствии возрастающих концентраций анти-GDF15 антитела.
В одном аспекте изобретения, GDF15 антитело по изобретению включает антитело, которое конкурирует за связывание с GDF15 человека с, и/или связывает тот же эпитоп, что и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, имеющий аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, указанную как SEQ ID NO: 166 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, указанную как SEQ ID NO: 163.
В одном аспекте по изобретению, GDF15 антитело по изобретению включает антитело, которое ингибирует или снижает связывание GDF15 с GFRAL.
В одном аспекте, изобретение охватывает антитело, которое конкурирует с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, имеющим аминокислотную последовательность вариабельной область тяжелой цепи, представленной SEQ ID NO:166 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, представленной SEQ ID NO:163, в ингибировании связывания GDF15 с GFRAL.
В некоторых аспектах по изобретению, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включает константную область тяжелой цепи IgG1, например, тяжелую цепь GDF15, представленную SEQ ID NO:164. В других аспектах, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает константную область каппа легкой цепи, например, легкой цепи GDF15, представленной SEQ ID NO:162.
В таблице 2 представлены аминокислотные (белковые) последовательности и ассоциированные последовательности нуклеиновых кислот (ДНК) анти-GDF15 антитела по настоящему изобретению. CDR VH анти-GDF15 и VL анти-GDF15, как определено по Кэботу и Чотиа, представлены как отдельные последовательности.
В некоторых аспектах, CDR содержат SEQ ID NOs: 171, 172, 173, 174, 175 и 176. Эти последовательности CDR включают консенсус на основе благоприятного анализа последовательности и данных биофизического профиля, представленных в примерах 1-10 ниже. Эти последовательности CDR обладают преимуществами, основанными на их последовательности, связывании, термоустойчивости, стабильности при низком pH и профилях вязкости.
<b>Таблица 2</b>. Последовательности GDF15 пептидов и анти-GDF15 антител
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
1
GDF15 человека, зрелая форма
ARNGDHCPLG PGRCCRLHTV RASLEDLGWA DWVLSPREVQ VTMCIGACPS QFRAANMHAQ IKTSLHRLKP DTVPAPCCVP ASYNPMVLIQ KTDTGVSLQT YDDLLAKDCH CI
2
Димерный IgG1 мышиFc-человека GDF-15 с сайтом отщепления FXa
GCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKIEGRMDGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
3
CH23 Fc-GDF15 человека с сайтом расщепления TEV
GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVNLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLNSTLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPKGSENLYFQGARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
4
Димерный IgG1 мышиFc-яванского макака GDF-15 с сайтом отщепления FXa
GCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKIEGRMDGGGGSARNGDRCPLGPGRCCRLHTVHASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFREANMHAQIKMNLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCV
5
Димерный IgG1 мышиFc-мыши GDF-15 с сайтом отщепления FXa
GCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKIEGRMDGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
6
GDF15_200 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
7
GDF15_200 LCDR-1LCDR-1
RASQSVHSYL A
8
GDF15_010 LCDR-2GDF15_013 LCDR-2GDF15_014 LCDR-2GDF15_200 LCDR-2
DASNRAT
9
GDF15_001 LCDR-3GDF15_002 LCDR-3GDF15_005 LCDR-3GDF15_007 LCDR-3GDF15_009 LCDR-3GDF15_200 LCDR-3
QQFWSWPWT
10
LC CL
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC
11
GDF15_200 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
12
IgG1 Легкая цепь JK
FGQGTKVEIK R
13
IgG1 Тяжелая цепь Шарнир
epkscdktht cppcp
14
IgG1 Тяжелая цепь CH2
apeaagapsv flfppkpkdt lmisrtpevt cvvvdvshed pevkfnwyvd gvevhnaktk preeqynsty rvvsvltvlh qdwlngkeyk ckvsnkalpa piektiskak
15
Тяжелая цепь CH3
gqprepqvyt lppsreemtk nqvsltclvk gfypsdiave wesngqpenn ykttppvlds dgsfflyskl tvdksrwqqg nvfscsvmhe alhnhytqks lslspg
16
GDF15_200 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
17
GDF15_200 HCDR-1
GYTFSSYNIS
18
GDF15_200 HCDR-2
GINPINGLAF YNQKFQG
19
GDF15_007 HCDR-3GDF15_010 HCDR-3GDF15_013 HCDR-3GDF15_014 HCDR-3GDF15_017 HCDR-3GDF15_018 HCDR-3GDF15_020 HCDR-3GDF15_100 HCDR-3GDF15_200 HCDR-3
EAITTVGAMD Y
20
Тяжелая цепь CH1
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKK
21
GDF15_200 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
22
Каркасный H1
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS
23
Каркасный H2
WVRQAPGQGL EWMG
24
Каркасный H3
RVTITADEST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR
25
JH
WGQGTLVTVS S
26
GDF15_100 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
27
GDF15_008 LCDR-1LCDR-1GDF15_009 LCDR-1GDF15_100 LCDR-1
RTSQNVHSYL A
28
GDF15_001 LCDR-2GDF15_004 LCDR-2GDF15_012 LCDR-2GDF15_018 LCDR-2GDF15_020 LCDR-2GDF15_100 LCDR-2
DASTRAD
29
GDF15_100 LCDR-3
QQFWSDPWT
30
GDF15_100 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPWTFGQ GTKVEIK
31
GDF15_100 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
32
GDF15_001 HCDR-1GDF15_002 HCDR-1GDF15_004 HCDR-1GDF15_021 HCDR-1GDF15_100 HCDR-1
GYTFSSYNID
33
GDF15_003 HCDR-2GDF15_009 HCDR-2GDF15_015 HCDR-2GDF15_017HCDR-2GDF15_100 HCDR-2
QINPNNGLAF YNQKFQG
34
GDF15_100 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
35
GDF15_022 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
36
GDF15_022 LCDR-1
RTSQSVHSYL A
37
GDF15_005 LCDR-2GDF15_022 LCDR-2
DAKTRAD
38
GDF15_003 LCDR-3GDF15_012 LCDR-3GDF15_017 LCDR-3GDF15_022 LCDR-3
QQFSSDPYT
39
GDF15_022 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK
40
GDF15_022 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
41
GDF15_010 HCDR-1GDF15_022 HCDR-1
GYTFSDYNID
42
GDF15_022 HCDR-2
QINPNNGLIF FNQKFQG
43
GDF15_012 HCDR-3GDF15_022 HCDR-3
EVITTVGAMD Y
44
GDF15_022 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
45
GDF15_021 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
46
GDF15_007 LCDR-1GDF15_021 LCDR-1
RTSENVHSYL A
47
GDF15_021 LCDR-2
DASNLAD
48
GDF15_004 LCDR-3GDF15_009 LCDR-3GDF15_014 LCDR-3GDF15_020 LCDR-3GDF15_021 LCDR-3
QQFWSDPYT
49
GDF15_021 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK
50
GDF15_021 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
51
GDF15_021 HCDR-2
GINPINGLIF FNQKFQG
52
GDF15_001 HCDR-3GDF15_021 HCDR-3
EAITTVGAMD H
53
GDF15_021 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQGTLVTVSS
54
GDF15_020 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
55
GDF15_020 LCDR-1
RASQNLHSYL A
56
GDF15_020 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK
57
GDF15_020 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLANY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
58
GDF15_005 HCDR-1GDF15_012 HCDR-1GDF15_013 HCDR-1GDF15_015 HCDR-1GDF15_020 HCDR-1
GYTFSDYNMD
59
GDF15_020 HCDR-2
QINPNNGLAN YNQKFQG
60
GDF15_020 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLANY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
61
GDF15_018 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
62
GDF15_018 LCDR-1
RASQNVHSYL A
63
GDF15_008 LCDR-3GDF15_018 LCDR-3
QQFWNDPYT
64
GDF15_018 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIK
65
GDF15_018 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
66
GDF15_017 HCDR-1GDF15_018 HCDR-1
GYTFTDYNID
67
GDF15_018 HCDR-2
QINPNNGLIF YNQKFQG
68
GDF15_018 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
69
GDF15_017 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
70
GDF15_017 LCDR-2
DAKTRAT
71
GDF15_017 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK
72
GDF15_017 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED NAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
73
GDF15_017 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED NAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
74
GDF15_017 FW_H3
RVTITADEST STAYMELSSL RSEDNAVYYC AR
75
GDF15_015 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
76
GDF15_015 LCDR-3
QQFSNDPWT
77
GDF15_015 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSNDPWTFGQ GTKVEIK
78
GDF15_015 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGATDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
79
GDF15_015 HCDR-3
EAITTVGATD Y
80
GDF15_015 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGATDYW GQGTLVTVSS
81
GDF15_014 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
82
GDF15_014 LCDR-1
RTSQNVHNYL A
83
GDF15_014 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK
84
GDF15_014 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPINGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
85
GDF15_014 HCDR-2
QINPINGLAF YNQKFQG
86
GDF15_014 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPINGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
87
GDF15_013 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
88
GDF15_004 LCDR-1GDF15_013 LCDR-1
RTSESVHSYL A
89
GDF15_013 LCDR-3
QQFWNWPWT
90
GDF15_013 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNWPWTFGQ GTKVEIK
91
GDF15_013 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
92
GDF15_013 HCDR-2
GINPNNGLAF YNQKFQG
93
GDF15_013 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
94
GDF15_012 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
95
GDF15_001 LCDR-1GDF15_012 LCDR-1
RTSQSVHNYL A
96
GDF15_012 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK
97
GDF15_012 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPIFGLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
98
GDF15_012 HCDR-2
QINPIFGLAF YAQKFQG
99
GDF15_012 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPIFGLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
100
GDF15_010 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
101
GDF15_010 LCDR-1
RTSQSLHSYL A
102
GDF15_006 LCDR-3GDF15_010 LCDR-3
QQFWNDPWT
103
GDF15_010 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIK
104
GDF15_010 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGLAFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
105
GDF15_010 HCDR-2
GINPNNGLAF FNQKFQG
106
GDF15_010 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGLAFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
107
GDF15_009 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
108
GDF15_003 LCDR-2GDF15_009 LCDR-2
DAKNRAD
109
GDF15_009 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK
110
GDF15_009 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMEYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
111
GDF15_009 HCDR-3
EAITTVGAME Y
112
GDF15_009 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMEYW GQGTLVTVSS
113
GDF15_008 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
114
GDF15_002 LCDR-2GDF15_008 LCDR-2
DASNRAD
115
GDF15_008 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIK
116
GDF15_008 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFF AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
117
GDF15_008 HCDR-1
GYTFTSYNIS
118
GDF15_008 HCDR-2
QINPNNGLIF FAQKFQG
119
GDF15_005 HCDR-3GDF15_008 HCDR-3
EAITTVGAMD Q
120
GDF15_008 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLIFF AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQGTLVTVSS
121
GDF15_007 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTLATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
122
GDF15_007 LCDR-2
DASTLAT
123
GDF15_007 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTLATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
124
GDF15_007 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
125
GDF15_007 HCDR-1
GYTFSDYNIS
126
GDF15_002 HCDR-2GDF15_007 HCDR-2
GINPIFGLAF YNQKFQG
127
GDF15_007 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
128
GDF15_006 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVS NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
129
GDF15_006 LCDR-1
RTSQSVSNYL A
130
GDF15_006 LCDR-2
DAKNRAT
131
GDF15_006 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVS NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIK
132
GDF15_006 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREF ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
133
GDF15_006 HCDR-1
GYTFTDYNIS
134
GDF15_006 HCDR-2
QINPNNGLAF YAQKFQG
135
GDF15_006 HCDR-3
EFITTVGAMD Y
136
GDF15_006 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREF ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
137
GDF15_005 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
138
GDF15_005 LCDR-1
RTSESVSSYL A
139
GDF15_005 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
140
GDF15_005 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGTAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
141
GDF15_005 HCDR-2
GINPNNGTAF YAQKFQG
142
GDF15_005 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNGTAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQGTLVTVSS
143
GDF15_004 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
144
GDF15_004 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK
145
GDF15_004 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLANY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTIGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
146
GDF15_004 HCDR-2
QINPNNGLAN YAQKFQG
147
GDF15_004 HCDR-3
EAITTIGAMD Y
148
GDF15_004 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLANY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTIGAMDYW GQGTLVTVSS
149
GDF15_003 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSLS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
150
GDF15_003 LCDR-1
RASQSLSSYL A
151
GDF15_003 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSLS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK
152
GDF15_003 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREQ ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
153
GDF15_003 HCDR-1
GYTFTSYNID
154
GDF15_003 HCDR-3
EQITTVGAMD Y
155
GDF15_003 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREQ ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
156
GDF15_002 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
157
GDF15_002 LCDR-1
RASQNVHNYL A
158
GDF15_002 VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
159
GDF15_002 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDPW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
160
GDF15_002 HCDR-3
EAITTVGAMD P
161
GDF15_002 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDPW GQGTLVTVSS
162
GDF15_001 LC
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
163
GDF15_001VL
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
95
GDF15_001 LCDR-1
RTSQSVHNYL A
28
GDF15_001 LCDR-2
DASTRAD
9
GDF15_001 LCDR-3
QQFWSWPWT
164
GDF15_001 HC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGTAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
32
GDF15_001 HCDR-1
GYTFSSYNID
165
GDF15_001 HCDR-2
GINPIFGTAF YNQKFQG
52
GDF15_001 HCDR-3
EAITTVGAMD H
166
GDF15_001 VH
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGTAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQGTLVTVSS
167
GDF15_001 VL ДНК
GAAATTGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC CTGAGCCTGA GCCCGGGCGA ACGCGCGACC CTGAGCTGCC GCACCAGCCA GAGCGTTCAT AACTATCTGG CGTGGTATCA GCAGAAACCG GGCCAGGCGC CGCGCCTGCT GATTTATGAT GCGAGCACCC GTGCGGATGG CATTCCGGCA CGCTTTAGCG GCAGCGGCAG CGGCACCGAT TTTACCCTGA CCATTAGCAG CCTGGAACCG GAAGATTTTG CGGTGTATTA TTGCCAGCAG TTTTGGAGCT GGCCGTGGAC CTTTGGCCAG GGCACCAAAG TGGAAATTAAA
168
GDF15_001 VH ДНК
CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CGAGCGGCTA TACCTTTAGC AGCTATAACA TTGATTGGGT GCGCCAGGCG CCGGGCCAGG GCCTGGAATG GATGGGCGGT ATTAACCCGA TTTTTGGCAC CGCATTTTAT AACCAGAAAT TTCAGGGCCG CGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA GCAGCCTGCG CAGCGAAGAT ACCGCGGTGT ATTATTGCGC ACGCGAAGCG ATTACCACCG TGGGCGCGAT GGATCATTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC CGTGAGCAGC
169
GDF15_001 LC ДНК
GAAATTGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC CTGAGCCTGA GCCCGGGCGA ACGCGCGACC CTGAGCTGCC GCACCAGCCA GAGCGTTCAT AACTATCTGG CGTGGTATCA GCAGAAACCG GGCCAGGCGC CGCGCCTGCT GATTTATGAT GCGAGCACCC GTGCGGATGG CATTCCGGCA CGCTTTAGCG GCAGCGGCAG CGGCACCGAT TTTACCCTGA CCATTAGCAG CCTGGAACCG GAAGATTTTG CGGTGTATTA TTGCCAGCAG TTTTGGAGCT GGCCGTGGAC CTTTGGCCAG GGCACCAAAG TGGAAATTAA ACGTACGGTG GCTGCACCAT CTGTCTTCAT CTTCCCGCCA TCTGATGAGC AGTTGAAATC TGGAACTGCC TCTGTTGTGT GCCTGCTGAA TAACTTCTAT CCCAGAGAGG CCAAAGTACA GTGGAAGGTG GATAACGCCC TCCAATCGGG TAACTCCCAG GAGAGTGTCA CAGAGCAGGA CAGCAAGGAC AGCACCTACA GCCTCAGCAG CACCCTGACG CTGAGCAAAG CAGACTACGA GAAACACAAA GTCTACGCCT GCGAAGTCAC CCATCAGGGC CTGAGCTCGC CCGTCACAAA GAGCTTCAAC AGGGGAGAGT GT
170
GDF15_001 HC ДНК
CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CGAGCGGCTA TACCTTTAGC AGCTATAACA TTGATTGGGT GCGCCAGGCG CCGGGCCAGG GCCTGGAATG GATGGGCGGT ATTAACCCGA TTTTTGGCAC CGCATTTTAT AACCAGAAAT TTCAGGGCCG CGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA GCAGCCTGCG CAGCGAAGAT ACCGCGGTGT ATTATTGCGC ACGCGAAGCG ATTACCACCG TGGGCGCGAT GGATCATTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC CGTGAGCAGC GCGTCGACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC CTGGCACCCT CCTCCAAGAG CACCTCTGGG GGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG GCGCCCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CGGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAGCTTGGG CACCCAGACC TACATCTGCA ACGTGAATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAA AGTTGAGCCC AAATCTTGTG ACAAAACTCA CACATGCCCA CCGTGCCCAG CACCTGAAGC CGCTGGGGCA CCGTCAGTCT TCCTCTTCCC CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACAT GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CTGAGGTCAA GTTCAACTGG TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC CGCGGGAGGA GCAGTACAAC AGCACGTACC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTCCTGCACC AGGACTGGCT GAATGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGGTCTC CAACAAAGCC CTCCCAGCCC CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAGCCAAAG GGCAGCCCCG AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGGAGGAG ATGACCAAGA ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTATCC CAGCGACATC GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC GCCTCCCGTG CTGGACTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAT AGCAAGCTCA CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC ATGCTCCGTG ATGCATGAGG CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC CCCCGGA
171
GDF15 HCDR-1 Консенсусная последовательность
GYTFX<sub>1</sub>X<sub>2</sub>YNIDгде X<sub>1</sub> является S или T и X<sub>2</sub> является S или D
172
GDF15 HCDR-2 Консенсусная последовательность
X<sub>3</sub>INPX<sub>4</sub>X<sub>5</sub>GX<sub>6</sub>AX<sub>7</sub>X<sub>8</sub>X<sub>9</sub>QKFQG,где X<sub>3</sub> является G или Q; X<sub>4</sub> является I или N; X<sub>5</sub> является F или N; X<sub>6</sub> является T или L; X<sub>7</sub> является F или N; X<sub>8</sub> является Y или F и X<sub>9</sub> является N или A
173
GDF15 HCDR-3 Консенсусная последовательность
EX<sub>10</sub>ITTX<sub>11</sub>GAMDX<sub>12</sub>,где X<sub>10</sub> является A или Q; X<sub>11</sub> является V или I; и X<sub>12</sub> является H или Y
174
GDF15 LCDR-1 Консенсусная последовательность
RX<sub>1</sub>SQX<sub>2</sub>X<sub>3</sub>X<sub>4</sub>X<sub>5</sub>YLA, где X<sub>1</sub> является T или A, X<sub>2</sub> является S или N, X<sub>3</sub> является V или L, X<sub>4 </sub>является H или S и X<sub>5</sub> является N или S
175
GDF15 LCDR-2 Консенсусная последовательность
DAX<sub>6</sub>X<sub>7</sub>RAX<sub>8</sub>, где X<sub>6</sub> является S или K; X<sub>7</sub> является T или N; и X<sub>8</sub> является D или T
176
GDF15 LCDR-3 Консенсусная последовательность
QQFX<sub>9</sub>X<sub>10</sub>X<sub>11</sub>PX<sub>12</sub>T, где X<sub>9</sub> является W или S; X<sub>10</sub> является S или N; X<sub>11 </sub>является W или D; и X12 является W или Y
177
hu01G06 VH
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMDWVRQA PGQSLEWMGQ INPNNGLIFF NQKFQGRVTL TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
178
hu01G06 VL
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRTSENLH NYLAWYQQKP GKSPKLLIYD AKTLADGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQH FWSDPYTFGQ GTKLEIK
179
GDF15_0297 HCDR-1GDF15_0301 HCDR-1GDF15 0470 HCDR-1
GYPFEGWYIH
180
GDF15_0297 HCDR-2GDF15_0301 HCDR-2GDF15 0470 HCDR-2
WNNPRTGLTNHAQKFQG
181
GDF15_0297 HCDR-3GDF15_0301 HCDR-3GDF15 0470 HCDR-3
GVGADAAFDI
182
GDF15 0297 VH
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKVTM TRDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTTLTVSS
183
GDF15 0297 HC
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKVTM TRDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTTLTVSSA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV AISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY FIYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS PGK
184
GDF15_0297 LCDR-1GDF15_0301 LCDR-1GDF15 0470 LCDR-1
RSSQSLLWKHGYNYLD
185
GDF15_0297 LCDR-2GDF15_0301 LCDR-2GDF15 0470 LCDR-2
LDRNRAH
186
GDF15_0297 LCDR-3GDF15_0301 LCDR-3GDF15 0470 LCDR-3
MQSFETPIT
187
GDF15_0297 VL
DIVMTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRNRA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IK
188
GDF15_0297 LC
DIVMTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRNRA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IKRADAAPTV SIFPPSSEQL TSGGASVVCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD QDSKDSTYSM SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPI VKSFNRNEC
189
GDF15 0301 VH
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTTLTVSS
190
GDF15 0301 HC
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTTLTVSSA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV AISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY FIYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS PGK
191
GDF15_0301 VL
DIVLTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRNRA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IK
192
GDF15_0301 LC
DIVLTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRNRA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IKRADAAPTV SIFPPSSEQL TSGGASVVCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD QDSKDSTYSM SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPI VKSFNRNEC
193
GDF15 0470 VH
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYPFE GWYIHWVRQA PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTMVTVSS
194
GDF15 0470 HC
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYPFE GWYIHWVRQA PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGV GADAAFDIWG QGTMVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG
195
GDF15_0470 VL
EIVLTQSPA TLSLSPGER ATLSCRSSQ SLLWKHGYN YLDWYQQKP GQAPRLLIY LDRNRAHGI PARFSGSGS GTDFTLTIS SLEPEDFAV YYCMQSFET PITFGQGTK VEIK
196
GDF15_0470 LC
EIVLTQSPA TLSLSPGER ATLSCRSSQ SLLWKHGYN YLDWYQQKP GQAPRLLIY LDRNRAHGI PARFSGSGS GTDFTLTIS SLEPEDFAV YYCMQSFET PITFGQGTK VEIKRTVAA PSVFIFPPS DEQLKSGTA SVVCLLNNF YPREAKVQW KVDNALQSG NSQESVTEQ DSKDSTYSL SSTLTLSKA DYEKHKVYA CEVTHQGLS SPVTKSFNR GEC
В некоторых вариантах осуществления, замещением является замещение в зародышевой линии человека, в котором остаток (донор) CDR замещен на соответствующий остаток (акцептор) зародышевой линии человека, чтобы увеличить содержание аминокислот человека и потенциально снизить иммуногенность антитела, как описано, например, в Публикации заявки на патент США № 2017/0073395 и Townsend et al., 2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112(50):15354-15359). Например, если применяют каркас IGHV1-69*01 зародышевой линии человека и сравнивают типовое антитело, GDF15_001 VH (SEQ ID NO:166), то выравнивание HCDR-1 GDF15_001 антитела (SEQ ID NO:32) и IGHV1-69*01 зародышевой линии человека является следующим:
Положение
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
IGHV1-69*01 зародышевой линии человека
G
G
T
F
S
S
Y
A
I
S
GDF15_001VH (SEQ ID NO:166)
G
Y
T
F
S
S
Y
N
I
D
курсив
Для аминокислотных положений 26, 28, 29, 30, 31, 32 и 34 (), остаток зародышевой линии человека (акцептор) и соответствующие остатки GDF15_001 (донор) совпадают, и замещение зародышевой линии невозможно. Для положений 27, 33 и 35 (жирный и подчеркнутый) остаток зародышевой линии человека (акцептор) и соответствующий остаток GDF15_001 (донор) являются разными. Остатки GDF15_001 в этих положениях могут быть замещены соответствующим остатком IGHV1-69*01 зародышевой линии человека для дальнейшего увеличения содержания остатков человека. Тот же самый процесс может выполняться для каждой тяжелой и легкой цепей CDR для увеличения содержания аминокислотных остатков человека при сохранении характеристик связывания, например связывания эпитопа, аффинности и подобных, при минимизации содержания остатков мыши, тем самым снижая любую потенциальную иммуногенность, например, иммунный ответ человека против антитела мыши (HAMA) на антитело человека.
Способы и библиотеки для введения остатков зародышевой линии человека в CDR антитела подробно описаны в публикации заявки на патент США № 2017/0073395 и Townsend et al., 2015, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112(50):15354-15359, оба включены в настоящий документ в качестве ссылки полностью.
Анти-GDF15 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут содержать VH каркас, содержащий VH каркасную последовательность зародышевой линии человека. В некоторых аспектах, могут применяться VH каркасы из следующих зародышевых линий: IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3-23*01, IGHV3-23*04, IGHV3-30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 или IGHV5-51*01 (наименования зародышевой линии основаны на IMGT определении зародышевой линии). В некоторых аспектах, могут применяться VL каркасы из следующих зародышевых линий: IGKV1-12*01, IGKV1-13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 и IGKV4-1*01 (наименования зародышевой линии основаны на IMGT определении зародышевой линии). Последовательности каркасов зародышевой линии человека доступны из разных общественных баз данных, таких как V-base, IMGT, NCBI или Abysis.
Анти-GDF15 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут содержать VL каркас, содержащий VL каркасную последовательность зародышевой линии человека. VL каркас может содержать одно или несколько аминокислотных замещений, добавлений или делеций, все еще сохраняя функциональное и структурное сходство с зародышевой линии из которой он получен. В некоторых аспектах, VL каркас на, по меньшей мере, 53%, 58%, 60%, 63%, 71%, 72%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичен последовательности зародышевого типа человека, из которой он получен. В некоторых аспектах, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VL каркас, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 аминокислотных замещений, добавлений или делеций в VL каркасной последовательности зародышевой линии человека. В некоторых аспектах, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замещений, добавлений или делеций находятся только в каркасных областях. В некоторых аспектах, доля (%) идентичности основана на сходстве с VL за исключением тех частей, которые в настоящем документе определены как CDR.
Анти-GDF15 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут содержать VH каркас, содержащий VH каркасную последовательность зародышевой линии человека. VH каркас может содержать одно или несколько аминокислотных замещений, добавлений или делеций, все еще сохраняя функциональное и структурное сходство с зародышевой линии, из которой он получен. В некоторых аспектах, VH каркас на, по меньшей мере, 72%, 74%, 75%, 77%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичен последовательности зародышевого типа человека, из которой он получен. В некоторых аспектах, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH каркас, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 аминокислотных замещений, добавлений или делеций в VH каркасной последовательности зародышевой линии человека. В некоторых аспектах, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замещений, добавлений или делеций находятся только в каркасных областях. В некоторых аспектах, % идентичности основана на сходстве с VH за исключением тех частей, которые в настоящем документе определены как CDR.
Анти-GDF15 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут содержать VH, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:6. VH может содержать аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 и 166. VH может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 и 166.
Антитело или антигенсвязывающ фрагмент может содержать VL, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1. VL может содержать аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 и 163. VL может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 и 163.
В некоторых аспектах, антитело или его антигенсвязывающая часть содержит LCDR-1, LCDR-2 и LCDR-3, представленные в аминокислотной последовательности, по меньшей мере, одной из SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 и 163.
В некоторых аспектах, антитело или его антигенсвязывающая часть дополнительно содержит HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 представленные в аминокислотной последовательности, по меньшей мере, одной из SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 и 166.
В некоторых аспектах, антитело или его антигенсвязывающая часть содержит LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3 представленные в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:163, и HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3 представленные в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:166.
Антитело или его антигенсвязывающая часть может содержать VL, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:163. VL может содержать аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:163. VL может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163.
Антитело или его антигенсвязывающая часть может содержать VH, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:166. VH может содержать аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:166. VH может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166.
Антитело или антигенсвязывающ фрагмент может содержать HC, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:164. HC может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164.
Антитело или антигенсвязывающ фрагмент может содержать LC, содержащую аминокислотную последовательность на, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO:162. LC может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162.
Антагонисты связывания PD-1 оси
Термин «антагонист связывания PD-1 оси» в настоящем документе относится к молекуле, которая ингибирует взаимодействие партнера по связыванию оси PD-1 с одним или несколькими партнерами по связыванию, чтобы устранить дисфункцию Т-клеток, возникающую в результате передачи сигналов по оси передачи сигналов PD-1 (также называемой «путь PD-1/PD-L» или «путь передачи сигналов PD-1/PD-L»), в результате чего восстанавливается или усиливается функция Т-клеток. В настоящем документе, антагонист связывания оси PD-1 включает антагонист связывания PD-1, антагонист связывания PD-L1 и антагонист связывания PD-L2. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 оси является анти PD-1 антитело. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 оси является анти PD-L1 антитело. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-L2 антитело.
В некоторых аспектах, антагонист PD-1 оси, антагонист связывания PD-1 оси, антагонист связывания PD-1 и анти-PD-L1 антитело не включает авелумаб. То есть, необязательно, авелумаб исключен из агентов, которые ингибируют сигнальную ось PD-1 оси.
Типовые антагонисты связывания PD-1 оси для применения в способе лечения, лекарственных средствах и областях применения настоящего изобретения включают, без ограничений, ниволумаб, пембролизумаб, AMP-224 с или без сигнальной последовательности, как описано в публикации заявки на международный патент № WO2010/027827 и WO2011/066342, mAb7 и mAb15, как описано в публикации заявки на международный патент № WO2016/092419, и авелумаб, как описано в WO2013/079174. Описания WO2010/027827, WO2011/066342, WO2016/092419 и WO2013/079174 включены в качестве ссылки полностью. В таблице 3 перечислены разные последовательности некоторых из представленных антагонистов связывания PD-1 оси.
<b>Таблица 3</b>
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
197
mAb7 (RN888) или mAb15 полноразмерная тяжелая цепь (HC) с подчеркнутыми CDR, включая концевой лизин (K).
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKFKNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK (SEQ ID NO:1 в US 62/750579)(SEQ ID NO:29 в WO 16/092419)
198
mAb7 (RN888) или mAb15 полноразмерная тяжелая цепь без C-концевого лизина, с подчеркнутыми CDR.
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKFKNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLG (SEQ ID NO:2 в US 62/750579)(SEQ ID NO:38 в WO 16/092419)
199
mAb7 (RN888) полноразмерная легкая цепь, с подчеркнутыми CDR.
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLW DSGNQKNFLT WYQQKPGQPP KLLIYWTSYR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYFY PHTFGGGTKV EIKRGTVAAP SVFIFPPSDE QLKSGTASVV CLLNNFYPRE AKVQWKVDNA LQSGNSQESV TEQDSKDSTY SLSSTLTLSK ADYEKHKVYA CEVTHQGLSS PVTKSFNRGE C (SEQ ID NO:3 в US 62/750579)(SEQ ID NO:39 в WO 16/092419)
200
mAb7 (RN888) вариабельная область легкой цепи, с подчеркнутыми CDR.
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKFKNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSS (SEQ ID NO:4 в US 62/750579) (SEQ ID NO:8 в WO 16/092419)
201
mAb7 (RN888) и mAb15 вариабельная область тяжелой цепи, с подчеркнутыми CDR.
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IWPGSSLTNY NEKFKNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLL TGTFAYWGQG TLVTVSS (SEQ ID NO:5 в US 62/750579) (SEQ ID NO:4 в WO 16/092419)
202
mAb15 вариабельная область легкой цепи, с подчеркнутыми CDR.
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLWD SGNQKNFLT WYQQKPGQPP KLLIYWTSYR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLTI SSLQAEDVA VYYCQNDYFY PHTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO:6 в US 62/750579)
203
ниволумаб, MDX1106, полноразмерная тяжелая цепь из WO2006/121168
QVQLVESGGG WQPGRSLRLD CKASGITFSN SGMHWVRQAP GKGLEWVAVR WYDGSKRYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTLFL QMNSLRAEDT AVYYCATNDD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTT YTCNVDHKPS NTKVDRVESY GPPCPPCPAP EFLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCW VDVSQEDPEV QFNWYYDGVE VHNATKPREE QFNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKGLPSSIEK TISKAGQPRE PQVYTLPPSQ EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPEKNYKTTP PVLDSDGSFF LYSRLTVDKS RWQEGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSL GK
204
ниволумаб, MDX1106, полноразмерная легкая цепь из WO2006/121168
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQPG QAPRLLIYDA SNRATGIPAR FSGSGSGTDF TLTISSLEPE DFAVYYCQQS SNWPRTFGQG TKVEIRTVAA PSVFIFPPSD EQLSGTASVV CLLNNFYPRE AVQWKVDNAL QSGNSQESVT EQDSDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TSFNRGEC
205
пембролизумаб, MK3475, полноразмерная тяжелая цепь из WO2009/114335
QVQLVQSGVE VKKPGASVK VSCKASGYTF TNYYMYWVRQA PGQGLEWMGG INPSNGGTNF NEKFKNRVT LTTDSSTTTA YMELKSLQFDD TAVYYCARRD YRFDMGFDYW GQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQKS LSLSLGK
206
пембролизумаб, MK3475, полноразмерная легкая цепь из WO2009/114335
EIVLTQSPAT LSLSPGERA TLSCRASKGV STSGYSYLHWY QQKPGQAPRL LIYLASYLES GVPARFSGS GSGTDFTLTI SSLEPEDFAVY YCQHSRDLPL TFGGGTKVEI KRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
207
AMP-224, без сигнальной последовательности из WO2010/027827 и WO2011/066342
LFTVTVPKEL YIIEHGSNVT LECNFDTGSH VNLGAITASL QKVENDTSPH RERATLLEEQ LPLGKASFHI PQVQVRDEGQ YQCIIIYGVA WDYKYLTLKV KASYRKINTH ILKVPETDEV ELTCQATGYP LAEVSWPNVS VPANTSHSRT PEGLYQVTSV LRLKPPPGRN FSCVFWNTHV RELTLASIDL QSQMEPRTHP TWEPKSCDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRWSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK
208
YW243.55.S70, MPDL3280A) вариабельная область тяжелой цепи из WO2010/077634
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DSWIHWVRQA PGKGLEWVAW ISPYGGSTYY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCARRH WPGGFDYWGQ GTLVTVSA
209
YW243.55.S70, MPDL3280A, вариабельная область легкой цепи из WO2010/077634
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVS TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YLYHPATFGQ GTKVEIKR
Термин «антагонист связывания PD-1» в настоящем документе относится к молекуле, которая специфически связывается с PD-1 и снижает, блокирует, ингибирует, отменяет или препятствует передаче сигнала в результате взаимодействия PD-1 с одним или несколькими его партнерами по связыванию, такими как PD-L1, PD-L2. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 является молекула, которая ингибирует связывание PD-1 с его партнерами по связыванию. В конкретном аспекте, антагонист связывания PD-1 специфически связывается с PD-1 и тем самым ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. Например, антагонист связывания PD-1 включает анти-PD-1 антитела, их антигенсвязывающие фрагменты, иммуноадгезины, слитые белки, олигопептиды и другие молекулы, которые уменьшают, блокируют, ингибируют, отменяют или препятствуют передаче сигнала в результате взаимодействия PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В одном варианте осуществления, антагонист связывания PD-1 специфически связывается с PD-1 и тем самым снижает отрицательный костимуляторный сигнал, опосредованный белками или через белки клеточной поверхности, экспрессируемые на Т лимфоцитах, опосредованные через передачу сигнала через PD-1, таким образом, делая дисфункциональную Т-клетку менее не дисфункциональной. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 является анти-PD-1 антитело, включающее, но не ограниченное ими, ниволумаб, пембролизумаб, спартализумаб, тислелизумаб, пидилизумаб, AMP-224, AMP-554, цемиплимаб и PF-06801591.
PF-06801951 также называемый сасанлимаб (CAS Registry No. 2206792-50-7), RN888 и описанный в публикации заявки на международный патент № WO 2016/092419, которая полностью включена в качестве ссылки в настоящий документ. Сасанлимаб является гуманизированным, стабилизированным в шарнирной области IgG4-каппа (κ) моноклональным антителом. Аминокислотные последовательности сасанлимаба (PF-06801951; RN888) представлены ниже в таблице 4.
В конкретном аспекте, антагонистом связывания PD-1 является ниволумаб. В другом конкретном аспекте, антагонистом связывания PD-1 является пембролизумаб. В другом конкретном аспекте, антагонистом связывания PD-1 является пидилизумаб.
Термин «Антагонист связывания PD-L1» в настоящем документе относится к молекуле, которая которое специфически связывается с PD-L1 и снижает, блокирует, ингибирует, отменяет или препятствует трансдукции сигнала, возникающего при взаимодействии PD-L1 с любым или несколькими из его партнеров связывания, такими как PD-1, B7-1. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-L1 является молекула, которая ингибирует связывание PD-L1 с его партнерами связывания. В некоторых аспектах, антагонист связывания PD-L1 не включает авелумаб. В конкретном аспекте, антагонист связывания PD-L1 ингибирует связывание PD-L1 с PD-1 и/или B7-1. В некоторых вариантах осуществления, антагонист связывания PD-L1 включает анти-PD-L1 антитела, его антигенсвязывающие фрагменты, иммуноадгезины, слитые белки, олигопептиды и другие молекулы, которые снижают, блокируют, ингибируют, отменяют или препятствуют трансдукции сигнала, возникающего при взаимодействии PD-L1 с одним или несколькими его партнерами связывания, такими как PD-1, B7-1. В одном варианте осуществления, антагонист связывания PD-L1 снижает отрицательный костимуляторный сигнал, опосредованный белками или через белки клеточной поверхности, экспрессируемые на Т лимфоцитах, опосредованные через передачу сигнала через PD-L1, таким образом, делая дисфункциональную Т-клетку менее не дисфункциональной. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-L1 является анти-PD-L1 антитело. В конкретном аспекте, анти-PD-L1 антителом является авелумаб (описанный как A09-246-2, в публикации заявки на международный патент № WO2013/079174). В некоторых аспектах, авелумаб не включен как антагонист PD-1 оси.
В другом конкретном аспекте, анти-PD-L1 антителом является атезолизумаб. В другом конкретном аспекте, анти-PD-L1 антителом является дурвалумаб. В другом конкретном аспекте, анти-PD-L1 антителом является BMS-936559 (MDX-1105).
В настоящем документе, анти-человеческое PD-L1 антитело относится к антителу, которое специфически связывается со зрелым PD-L1 человека или его частью, где молекула зрелого PD-L1 человека состоит из аминокислот 19-290 следующей последовательности: MRTFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (SEQ ID NO:221).
<b>Таблица 4. АНТИ-HUMAN PD-L1 MONOCLONAL АНТИТЕЛО САСАНЛИМАБ (PF-06801951, RN888, mAb7) ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ</b>
SEQ ID NO
Описание
Аминокислотная последовательность
210
HCDR-1 (Чотиа) (SEQ ID NO:14 в WO 2016/092419)
GYTFTSY
211
HCDR-1 (расширенная) (SEQ ID NO:13 в WO 2016/092419)
GYTFTSYWIN
212
HCDR-1 (Кэбот) (SEQ ID NO:15 в WO 2016/092419)
SYWIN
213
HCDR-2 (Чотиа) (SEQ ID NO:16 в WO 2016/092419)
NIYPGSSL
214
HCDR-2 (расширенная) (SEQ ID NO:17 в WO 2016/092419)
NIYPGSSLTNYNEKFK
215
HCDR-3 (SEQ ID NO:23 в WO 2016/092419)
LSTGTFAY
216
LCDR-1 (SEQ ID NO:10 в WO 2016/092419)
KSSQSLWDSGNQKNFLT
217
LCDR-2 (SEQ ID NO:20 в WO 2016/092419)
WTSYRES
218
LCDR-3 (SEQ ID NO:21 в WO 2016/092419)
QNDYFYPHT
219
VH (SEQ ID NO:4 в WO 2016/092419)указаны Чотиа (жирные), Кэбот (подчеркнутые) и расширенные (обе) CDR;
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLSTGTFAYWGQGTLVTVSS
220
VL (SEQ ID NO:8 в WO 2016/092419) CDR указаны жирным и подчеркнутым шрифтом
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYWTSYRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPHTFGGGTKVEIK
197
Тяжелая цепь (HC) (SEQ ID NO:29 в WO 16/092419)Концевой лизин (K) необязательный;CDR по Чотиа указаны жирным шрифтом;CDR по Кэботу подчеркнуты; расширенные CDR (оба)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(K)
199
Легкая цепь (LC) (SEQ ID NO:39 в WO 2016/092419)CDR указаны жирным и подчеркнутым шрифтом
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYWTSYRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPHTFGGGTKVEIKRGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
221
PD-L1 белок человека; зрелый PD-L1 человека состоит из аминокислотных остатков 29-290; остатки, не включенные в зрелый белок, подчеркнуты
MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERTH LVILGAILLC LGVALTFIFR LRKGRMMDVK KCGIQDTNSK KQSDTHLEET
Термин «антагонисты связывания PD-L2» в настоящем документе относится к молекуле, которая специфически связывается с PD-L2 и снижает, блокирует, ингибирует, отменяет или препятствует передаче сигнала в результате взаимодействия PD-L2 с одним или несколькими его партнерами по связыванию, такими как PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-L2 является молекула, которая ингибирует связывание PD-L2 с его партнерами связывания. В конкретном аспекте, антагонист связывания PD-L2 ингибирует связывание PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антагонисты PD-L2 включают анти-PD-L2 антитела, их антигенсвязывающие фрагменты, иммуноадгезины, слитые белки, олигопептиды и другие молекулы, которые специфически связывают PD-L2 и уменьшают, блокируют, ингибируют, отменяют или препятствуют передаче сигнала в результате взаимодействия PD-L2 с одним или несколькими его партнерами по связыванию, такими как PD-1. В одном варианте осуществления, антагонист связывания PD-L2 снижает отрицательный костимуляторный сигнал, опосредованный или через белки клеточной поверхности, экспрессируемые на Т лимфоцитах, опосредованные передачей сигнала через PD-L2, чтобы сделать дисфункциональные Т-клетки менее не дисфункциональными. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-L2 является иммуноадгезин PD-L2.
Нуклеиновые кислоты
Изобретение также относится к полинуклеотидам, кодирующим любые антитела по изобретению, включая части антитела и модифицированные антитела, описанные в настоящем документе. Изобретение также представляет способ получения любого из полинуклеотидов, описанных в настоящем документе. Полинуклеотиды могут быть получены и экспрессированы способами, известными в данной области техники.
Последовательность желаемого антитела, его антигенсвязывающего фрагмента и нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, можно определить с использованием стандартных методик секвенирования. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая желаемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, может быть вставлена в различные векторы (такие как векторы клонирования и экспрессии) для рекомбинантного продуцирования и характеризации. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь или антигенсвязывающий фрагмент тяжелой цепи, и нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь или антигенсвязывающий фрагмент легкой цепи, могут быть клонированы в один и тот же вектор или в разные векторы.
В одном аспекте, в изобретении представлены полинуклеотиды, кодирующие аминокислотные последовательности любого из следующих GDF15 антител и их антигенсвязывающих частей: GDF15_001, GDF15_002, GDF15_003, GDF15_004, GDF15_005, GDF15_006, GDF15_007, GDF15_008, GDF15_009, GDF15_010, GDF15_011, GDF15_012, GDF15_013, GDF15_014, GDF15_015, GDF15_017, GDF15_018, GDF15_020, GDF15_021, GDF15_022, GDF15_100, GDF15_200, GDF15_297, GDF15_301, GDF15-470.
В изобретении представлены полинуклеотиды, кодирующие один или несколько белков, содержащих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (i) SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161, 166, 11, 30, 39, 49,56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158,163, 166, 183, 187, 189, 191, 193 и 195.
В изобретении представлены полинуклеотиды, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как одна или несколько SEQ ID NOs: 167, 168, 169 и 170. В изобретении представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO: 167. В изобретении представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:168. В изобретении представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:169. В изобретении представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, указанную как SEQ ID NO:170. Из-за вырожденности генетического кода, в изобретении дополнительно представлена последовательность нуклеиновой кислоты, где нуклеотидом в положении номер 1344 SEQ ID NO: 170 может быть A, C, G, T, и/или нуклеотидом в положении 1347 может быть A, C,G, T. Последние два кодона, представленные в SEQ ID NO:170, дополнительно кодируют пролин и глицин, соответственно.
В изобретении представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125038, кодирующей VH домен GDF15_001. Изобретение также представляет полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125039, кодирующей VL домен GDF15_001. Кроме того, в изобретении представлен полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, кодированную ДНК вставкой плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125038, кодирующей VH домен GDF15_001. В изобретении также представлен полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, кодированную вставкой плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125039, кодирующей VL домен GDF15_001.
В изобретении также представлен полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125038, кодирующей VH домен GDF15_001, и последовательность нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, плазмиды, депонированной АТСС и имеющей № доступа PTA-125039, кодирующей VL домен GDF15_001.
В другом аспекте, в изобретении представлены полинуклеотиды и их варианты, кодирующие анти-GDF15 антитело, где такие варианты полинуклеотидов разделяют, по меньшей мере, 70%, по меньшей мере, 75%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 87%, по меньшей мере, 89%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98%, или, по меньшей мере, 99% идентичность последовательности нуклеиновой кислоты в любой из последовательностей нуклеиновых кислоты, описанных или указанных в качестве ссылки в настоящем документе. Эти количества не являются огранивающими, и шаги между указанными процентами специально предусмотрены как часть описания.
В изобретении представлены полипептиды, кодированные молекулами нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе.
В одном варианте осуществления, VH и VL домены или их антигенсвязывающая часть или полноразмерные HC или LC кодированы отдельными полинуклеотидами. Альтернативно, обе VH и VL или их антигенсвязывающая часть или HC и LC кодированы отдельным полинуклеотидом.
Полинуклеотиды, комплементарные любым таким последовательностям, также охватываются настоящим описанием. Полинуклеотиды могут быть одноцепочечными (кодирующими или антисмысловыми) или двухцепочечными и могут быть молекулами ДНК (геномной, кДНК или синтетической) или РНК. Молекулы РНК включают молекулы HnРНК, которые содержат интроны, и взаимно однозначно соответствуют молекуле ДНК, и молекулы иРНК, не содержащие интроны. Дополнительные кодирующие или некодирующие последовательности могут, но не обязательно, присутствовать в полинуклеотиде настоящего описания, и полинуклеотид может, но не обязательно, быть связан с другими молекулами и/или материалами подложки.
Полинуклеотиды могут содержать последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело или его часть или может содержать вариант такой последовательности. Варианты полинуклеотида содержат одно или несколько замещений, добавлений, делеций и/или вставок, так, чтобы характеристики связывания кодированного полипептида не ухудшались по сравнению с молекулой нативного антитела. Влияние на характеристики связывания полипептида, кодированного вариантом последовательности нуклеиновой кислоты, обычно можно оценить как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, варианты полинуклеотида демонстрируют, по меньшей мере, примерно 70% идентичность, в некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, примерно 80% идентичность, в некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, примерно 90% идентичность, и в некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, примерно 95% идентичность полинуклеотидной последовательности, кодирующей исходное (родительское) антитело, не содержащее никаких замещений, добавлений, делеций и/или вставок или их частей. Эта доля идентичности не предназначена для ограничения, и шаги между указанными долями специально предусмотрены как часть описания.
Два полинуклеотида или полипептидных последовательности считаются «идентичными», если последовательность нуклеотидов или аминокислот в двух последовательностях одинакова, когда они выровнены для максимального соответствия, как описано ниже. Сравнение между двумя последовательностями обычно выполняют сравнением последовательностей в окне сравнения для идентификации и сравнения локальных областей сходства последовательностей. «Окно сравнения» в настоящем документе относится к сегменту из, по меньшей мере, примерно 20 непрерывных положений, обычно от 30 до примерно 75 или от 40 до примерно 50, в которых последовательность может сравниваться с эталонной последовательностью с тем же количеством последовательных положений после оптимального выравнивания двух последовательностей.
Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может проводиться с применением программы MegAlign в Lasergene наборе программ для биоинформатики (DNASTAR, Inc., Madison, WI), с применением параметров по умолчанию. Эта программа включает несколько схем выравнивания, описанных в следующих ссылках: Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730.
В некоторых вариантах осуществления, «процент идентичности последовательностей» определен путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в окне сравнения из, по меньшей мере, 20 положений, где часть полинуклеотидных или полипептидных последовательностей в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т. е. гэпы) в количестве 20 процентов или меньше, обычно от 5 до 15 процентов или от 10 до 12 процентов, по сравнению с эталонными последовательностями (которые не содержат добавления или делеции) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывают через определение количества позиций, в которых идентичные основания нуклеиновых кислот или аминокислотный остаток встречаются в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, делением количества совпадающих положений на общее количество положений в эталонной последовательности (т. е. размер окна) и умножение результатов на 100 с получением процента идентичности последовательности.
Варианты полинуклеотидов могут также, или альтернативно, быть по существу гомологичными гену или его части или комплементу. Такие варианты полинуклеотидов способны гибридизоваться в умеренно жестких условиях со встречающейся в природе последовательностью ДНК, кодирующей антитело (или комплементарной последовательностью).
Подходящие «умеренно жесткие условия» включают предварительное промывание в растворе 5X SSC, 0,5% SDS, 1,0 мМ ЭДТК (pH 8,0); гибридизацию при примерно от 50°C до 65°C, 5X SSC (0,75 M NaCl, 0,075 M цитрата натрия), в течение ночи; с последующим промыванием дважды при 65°C в течение 20 минут с каждым из 2X, 0,5X и 0,2X SSC, содержащим 0,1% SDS.
В настоящем документе, «значительно жесткие условия» или «условия высокой жесткости» включают такие, где: (1) применяется низкая ионная сила и высокая температура для промывания, например, 0,015 M хлорид натрия/0,0015 M цитрат натрия/0,1% додецилсульфат натрия при 50°C; (2) во время гибридизации применяется денатурирующий агент, такой как формамид, например, 50% (об./об.) формамида с 0,1% альбумином бычьей сыворотки/0,1% Ficoll/0,1% поливинилпирролидона/50 мМ буфера на основе фосфата натрия при pH 6,5 с 750 мМ хлорида натрия, 75 мМ цитрата натрия при 42°C; или (3) применяется 50% формамид, 5X SSC, 50 мМ фосфата натрия (pH 6,8), 0,1% пирофосфата натрия, 5X раствора Денхардта, обработанная ультразвуком ДНК спермы лосося (50 мкг/мл), 0,1% SDS и 10% сульфата декстрана при 42°C, при промывании при 42°C в 0,2X SSC (хлориде натрия/цитрате натрия) и 50% формамиде при 55°C, с последующей промывкой высокой жесткости, состоящей из 0,1X SSC, содержащего ЭДТК при 55°C. Специалист в данной области техники поймет, как скорректировать температуру, ионную силу и т.д. при необходимости, с учетом таких факторов, как длина пробы и подобные.
Специалистам в данной области будет понятно, что в результате вырожденности генетического кода существует множество нуклеотидных последовательностей, которые кодируют полипептид, как описано в настоящем документе. Некоторые из этих полинуклеотидов имеют минимальную гомологию с нуклеотидными последовательностями любого нативного гена. Тем не менее, полинуклеотиды, которые различаются из-за различий в использовании кодонов, конкретно рассматриваются в настоящем описании. Кроме того, аллели генов, содержащих полинуклеотидные последовательности, представленные в настоящем документе, входят в объем настоящего описания. Аллелями являются эндогенные гены, которые изменяются в результате одной или нескольких мутаций, таких как делеции, добавления и/или замещения нуклеотидов. Полученная иРНК и белок могут, но не обязательно, иметь измененную структуру или функцию. Аллели можно идентифицировать с использованием стандартных методов (таких как гибридизация, амплификация и/или сравнение баз данных последовательностей).
Полинуклеотиды этого описания могут быть получены с использованием химического синтеза, рекомбинантных методов или ПЦР. Способы химического синтеза полинуклеотидов хорошо известны в данной области и не нуждаются в подробном описании в настоящем документе. Специалист в данной области может использовать последовательности, представленные в настоящем документе, и коммерческий синтезатор ДНК для получения желаемой последовательности ДНК.
et al.
Для получения полинуклеотидов с использованием рекомбинантных методов полинуклеотид, содержащий желаемую последовательность, может быть вставлен в подходящий вектор, и этот вектор, в свою очередь, может быть введен в подходящую клетку-хозяин для репликации и амплификации, как дополнительно обсуждается в настоящем документе. Полинуклеотиды могут быть вставлены в клетки-хозяева любыми способами, известными в данной области. Клетки трансформируются путем введения экзогенного полинуклеотида путем прямого захвата, эндоцитоза, трансфекции, F-спаривания или электропорации. После введения экзогенный полинуклеотид может сохраняться в клетке в виде не интегрированного вектора (такого как плазмида) или интегрирован в геном клетки-хозяина. Амплифицированный таким образом полинуклеотид может быть выделен из клетки-хозяина способами, хорошо известными в данной области техники. См., например, Sambrook , 1989.
et al.
Альтернативно, ПЦР позволяет воспроизводить последовательности ДНК. Технология ПЦР хорошо известна в данной области техники и описана в патентах СЩА №№ 4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 и 4,683,202, а также PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis  eds., Birkauswer Press, Boston, 1994.
et al.
РНК может быть получена с использованием выделенной ДНК в подходящем векторе и вставкой ее в подходящую клетку-хозяин. Когда клетка реплицируется и ДНК транскрибируется в РНК, РНК затем может быть выделена с использованием методов, хорошо известных специалистам в данной области, как изложено в Sambrook , 1989, например.
Как используется в настоящем документе, «вектор» означает конструкт, который способен доставлять и, предпочтительно, экспрессировать один или несколько генов или последовательностей, представляющих интерес, в клетке-хозяине. Примеры векторов включают, но не ограничиваются ими, вирусные векторы, векторы экспрессии «голой» ДНК или РНК, плазмидные, космидные или фаговые векторы, векторы экспрессии ДНК или РНК, связанные с катионными конденсирующими агентами, векторы экспрессии ДНК или РНК, инкапсулированные в липосомы и определенные эукариотические клетки, такие как клетки-продуценты.
Подходящие векторы клонирования и экспрессии могут включать множество компонентов, таких как промотор, энхансер и другие транскрипционные регуляторные последовательности. Вектор также может быть сконструирован для обеспечения возможности последующего клонирования вариабельного домена антитела в различные векторы. Подходящие клонирующие векторы могут быть сконструированы согласно стандартным методикам, или могут быть выбраны из большого числа клонирующих векторов, доступных в данной области техники. Хотя выбранный вектор клонирования может варьироваться в зависимости от клетки-хозяина, которую предполагается использовать, полезные векторы клонирования, как правило, будут обладать способностью к саморепликации, могут иметь единственную мишень для конкретной рестрикционной эндонуклеазы и/или могут нести гены для маркера, которые можно использовать при выборе клонов, содержащих вектор. Подходящие примеры включают плазмиды и бактериальные вирусы, например, pUC18, pUC19, Bluescript (например, pBS SK+) и его производные, mp18, mp19, pBR322, пМB9, ColE1, pCR1, RP4, фаговые ДНК и челночные векторы, такие как pSA3 и pAT28. Эти и многие другие векторы клонирования доступны от коммерческих поставщиков, таких как BioRad, Strategene и Invitrogen. Также представлены векторы экспрессии. Векторы экспрессии обычно представляют собой реплицируемые полинуклеотидные конструкты, которые содержат полинуклеотид в соответствии с описанием. Подразумевается, что вектор экспрессии должен реплицироваться в клетках-хозяевах либо как эписомы, либо как неотъемлемая часть хромосомной ДНК. Подходящие векторы экспрессии включают, но не ограничиваются ими, плазмиды, вирусные векторы, включая аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, ретровирусы, космиды и вектор(ы) экспрессии, раскрытые в публикации РСТ № WO 87/04462. Компоненты вектора могут обычно включать, но не ограничиваются ими, один или несколько из следующих: сигнальная последовательность; источник репликации; один или несколько маркерных генов; подходящие транскрипционные контролирующие элементы (такие как промоторы, энхансеры и терминатор). Для экспрессии (т.е. трансляции) также обычно требуются один или несколько трансляционных контролирующих элементов, таких как сайты связывания рибосом, сайты инициации трансляции и стоп-кодоны.
Векторы, содержащие полинуклеотиды, представляющие интерес и/или сами полинуклеотиды, могут быть введены в клетку-хозяина любым из множества подходящих способов, включая электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию; и инфекцию (например, если вектором является инфекционный агент, такой как вирус осповакцины). Выбор вводящих векторов или полинуклеотидов часто зависит от характеристик клетки-хозяина.
in vivo
Таким образом, «клетка-хозяин» включает индивидуальную клетку или культуру клеток, которая может быть или была реципиентом полинуклеотидов и/или вектора(ов), содержащего полинуклеотиды, для включения полинуклеотидов и/или векторов. Клетки-хозяева включают в себя потомство одной клетки-хозяина, и это потомство не обязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или комплементу геномной ДНК) исходной родительской клетке из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные и/или трансформированные  полинуклеотидом по настоящему изобретению.
E. coli
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть получен рекомбинантно с использованием подходящей клетки-хозяина. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, может быть клонирована в вектор экспрессии, который затем может быть введен в клетку-хозяина, такую как клетка , клетка дрожжей, клетка насекомого, клетка COS обезьяны, клетка яичника китайского хомяка (СНО) или миеломная клетка, где клетка иначе не продуцирует белок иммуноглобулина, для получения синтеза антитела в рекомбинантной клетке-хозяине. Предпочтительные клетки-хозяева включают в себя клетку CHO, клетку 293 почки эмбриона человека (HEK), клетку NS0 или клетку Sp2.0 среди многих клеток, хорошо известных в данной области техники. Фрагмент антитела может быть получен протеолитической или другой деградацией полноразмерного антитела, рекомбинантными способами или химическим синтезом. Полипептидный фрагмент антитела, особенно более короткие полипептиды, содержащие вплоть до 50 аминокислот, могут быть удобно получены химическим синтезом. Способы химического синтеза белков и пептидов известны в данной области и коммерчески доступны.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может быть с созревшей аффинностью. Например, антитело с созревшей аффинностью может быть получено методами, известным в данной области техники (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896; и WO2004/058184).
Иммуногенность
Иммуногенность является основным препятствием для разработки и использования белковых терапевтических средств, включая антитела и Fc слитые белки. Несколько факторов могут вносить вклад в иммуногенность белка, включая, но не ограничиваясь этим, последовательность белка, путь и частоту введения и популяцию пациентов. Хотя иммунные ответы обычно наиболее серьезны для белков не человека, таких как антитела мыши, иммуногенными могут быть даже терапевтические средства, в основном или полностью содержащие последовательности человека. Иммуногенность представляет собой сложную серию ответов на вещество, которое воспринимается как чужеродное, и может включать продуцирование нейтрализующих и не нейтрализующих антител, образование иммунных комплексов, активацию комплемента, активацию мастоцитов, воспаление и анафилаксию. Нежелательные иммунные ответы могут снижать эффективность терапевтических средств на основе антитела и Fc слитого белка путем прямого вмешательства в распознавание антигена, изменения взаимодействий с эффекторными молекулами или нарушения периода полужизни в сыворотке или распределения в тканях терапевтического средства.
Белковые терапевтические средства могут быть проанализированы для прогнозирования присутствия потенциальных иммуногенных эпитопов с использованием коммерчески доступных услуг, таких как предоставляются Epivax, Inc. из Providence, R.I. В некоторых вариантах осуществления, электронные алгоритмы могут прогнозировать эпитопы, которые связываются с молекулами MHC II класса. Анализ набора данных полипептида с такими алгоритмами обеспечивает прогнозируемые эпитопы. Прогнозируемые эпитопы используют для получения пептидов, полученных стандартными способами автоматического синтеза пептидов или методами рекомбинантной ДНК. Оценочная информация, предоставленная Epivax, может служить индикатором того, насколько широко распространен спрогнозированный эпитоп, распознанный популяцией.
Как описано в примере 10 ниже, антитела настоящего изобретения подвергают скринингу на присутствие эпитопов, распознанных T клетками, также называемых в настоящем документе T клеточные эпитопы, «T-регитопы» или «tReg», с применением алгоритма EpiMatrix, разработанного EpiVax. Последовательности антитела разбирают на перекрывающиеся 9-mer рамки, где каждая рамка перекрывает последнюю на 8 аминокислот. Каждую из полученных рамок оценивают на спрогнозированную аффинность связывания в отношении панели из восьми общих HLA аллелей MHC II класса (DRB1*0101, DRB1*0301, DRB1*0401, DRB1*0701, DRB1*0801, DRB1*1101, DRB1*1301 и DRB1*1501). Необработанные оценки нормализуют по результатам большой выборки случайно сгенерированных пептидов, и выдают итоговую оценку «Z».
Общая оценка последовательности, скорректированная оценка tReg, может быть рассчитана с использованием Z-оценки EpiMatrix для прогнозирования иммуногенности антитела. Как описано в Примере 10, скорректированную оценку tReg рассчитывают суммированием Z-оценок EpiMatrix для 9-mer рамок (промежуточный итог) и с учетом количества наблюдений типа HLA. Рассматриваются все индивидуальные комбинации 9-mer и типа HLA («наблюдения»), независимо от того, является ли 9-mer эпитопом. Если конкретное наблюдение показывает, что пептид входит в 5% лучших связывающих агентов для данного типа HLA, Z-оценка EpiMatrix для этого наблюдения добавляется к текущей сумме, связанной со всей последовательностью белков. Также записывается общее количество изученных наблюдений. Единственное исключение состоит в том, что все наблюдения за 9-mer, идентифицированными программным пакетом ISPRI, разработанным EpiVax как «T-региотопы», предположительно имеют нулевые оценки EpiMatrix. Как используется в настоящем документе, «Т-регитопы» представляют собой последовательные последовательности внутри каркасной области моноклонального антитела, которые могут потенциально активировать естественные регуляторные Т клетки и снижать нежелательные иммунные ответы. Скорректированную оценка tReg рассчитывают следующим образом: Скорректированная оценка tReg = (Промежуточный итог) * 1000 / (Количество наблюдений). В промежуточном итоге исходный балл 0,05 * 2,2248 вычитают из каждого наблюдения (включая Т-регитопы). Более низкий показатель скорректированной tReg предсказывает более низкий потенциал риска иммуногенности.
Применение
Способы лечения кахексии
В некоторых аспектах, в изобретении представлены терапевтические способы снижения или ингибирования активности GDF15 с использованием анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где терапевтические способы включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Расстройством, которое лечат, является любое заболевание или состояние, которое улучшается, облегчается, ингибируется или предотвращается путем удаления, ингибирования или снижения активности GDF15 или передачи сигналов.
Изобретение включает способ снижения уровня свободного GDF15 у пациента. Способ включает определение уровня свободного GDF15 у субъекта, введение терапевтического количества антитела по изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента и сравнение уровня GDF15 до введения с уровнем свободного GDF15 после введения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, тем самым снижая уровень свободного GDF15 у субъекта.
В одном варианте осуществления, снижение уровня свободного GDF15 снижает нежелательную, вредную или ненужную биологическую активность GDF15. Такая активность GDF15 включает, но не ограничена ими, (а) снижение потребления пищи; (б) снижение аппетита; (c) уменьшение массы тела; (г) увеличение потери массы тела; (д) уменьшение жировой массы; (е) уменьшение мышечной массы; (g) увеличение потери жировой массы, (h) увеличение потери мышечной массы, (i) связывание с GFRAL; (j) усиление нисходящей передачи сигналов, опосредованной RET; (k) повышение фосфорилирования ERK; (l) повышение фосфорилирования S6; (m) усиление RET-опосредованной активации сигнального пути MAPK; (n) усиление активации RET сигнального пути AKT; и (o) усиление активации сигнального пути PLC-γ1.
В одном варианте осуществления, изобретение включает способ снижения биологической активности GDF15 у пациента. Способ включает введение терапевтического количества антитела по изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента, тем самым снижая биологическую активность GDF15.
В одном аспекте, биологическая активность GDF15 включает, но не ограничена ими, (а) снижение потребления пищи; (б) снижение аппетита; (c) уменьшение массы тела; (г) увеличение потери массы тела; (д) уменьшение жировой массы; (е) уменьшение мышечной массы; (g) увеличение потери жировой массы, (h) увеличение потери мышечной массы, (i) связывание с GFRAL; (j) усиление нисходящей передачи сигналов, опосредованной RET; (k) повышение фосфорилирования ERK; (l) повышение фосфорилирования S6; (m) усиление RET-опосредованной активации сигнального пути MAPK; (n) усиление активации RET сигнального пути AKT; и (o) усиление активации сигнального пути PLC-γ1.
Термины «лечение» или «леченный» включают профилактическое и/или терапевтическое лечение. Если оно проводится до клинического проявления состояния, лечение считается профилактическим. Терапевтическое лечение включает, например, облегчение или уменьшение тяжести заболевания или сокращение продолжительности заболевания.
В настоящем документе термин «кахексия» включает метаболическое расстройство и сопутствующие заболевания, которые возникают с несколькими хроническими заболеваниями, включая рак, химиотерапию, химиотерапию в сочетании с иммуноонкологической терапией, хроническую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность, саркопению, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), саркопению и хроническую болезнь почек (ХБП).
Изобретение охватывает способы лечения заболевания, расстройства или состояния, опосредованного или связанного с GDF-15. В одном аспекте, расстройством является кахексия. В других аспектах, расстройством является кахексия, связанная с раком, химиотерапией, химиотерапией в сочетании с иммуноонкологической терапией, хронической обструктивной болезнью легких, хронической болезнью почек, хронической сердечной недостаточностью, застойной сердечной недостаточностью или саркопенией. В некоторых аспектах, раком является солидная опухоль, рак поджелудочной железы, рак легких, немелкоклеточный рак легкого, колоректальный рак, рак простаты, рак яичников, рак шейки матки или рак яичек. В некоторых аспектах, химиотерапией является химиотерапия на основе платины. Заболевание или расстройство или симптом могут быть облегчены или уменьшены по тяжести, продолжительности или частоте возникновения.
Изобретение также включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию, как определено в настоящем документе, для использования в определенных способах лечения. В вариантах осуществления, которые относятся к способу лечения, описанному в настоящем документе, такие варианты осуществления также являются дополнительными вариантами осуществления, касающимися антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, фармацевтической композиции для использования в этом лечении, или, альтернативно, для производства лекарственного средства для использования в этом лечении.
Антитела и фрагменты антител могут быть введены в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными соединениями. Дополнительные терапевтически активные соединения включают агенты, применяемые для лечения хронических расстройств, ассоциированных с кахексией, противораковые агенты (например, иммунная терапия и химиотерапия), противораковые агенты, которые вызывают клеточный стресс (например, химиотерапевтические агенты на основе платины, такие как цисплатин), мышечные анаболики (например, селективные модуляторы андрогенового рецептора (SARM), ингибиторы миостатина и ингибитор рецептора Активина A), противовоспалительные агенты (например, ингибиторы JAK, ингибиторы IL-6, ингибиторы IL-8), стимуляторы аппетита (например, миметики грелина, ингибиторы рецептора меланокортина 4) и агенты, которые улучшают метаболизм (например, метформин). Профилактические или терапевтические агенты комбинированной терапии, включая антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, могут быть введены субъекту в одной фармацевтической композиции. Альтернативно, профилактические или терапевтические агенты комбинированной терапии могут быть введены субъекту одновременно в отдельных фармацевтических композициях. Профилактические или терапевтические агенты могут быть введены субъекту одним и тем же или разными путями введения.
«Химиотерапевтическим агентом» является химическое соединение, используемое при лечении рака. Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбохон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL); бета-лапахон; лапахол; колхицины; бетулиновую кислоту; камптотецин (включая синтетический аналог топотекан (HYCAMTIN), CPT-11 (иринотекан, CAMPTOSAR), ацетилкамптотецин, скополектин и 9-аминокамптотецин); бриостатин; пеметрексед; каллистатин; CC-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); подофиллотоксин; подофиллиновую кислоту; тенипозид; криптофицины (особенно криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и CB1-TM1); элеутеробин; панкратистатин; TLK-286; CDP323, пероральный ингибитор интегрина альфа-4; саркодиктиин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как эндииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма I и калихеамицин омегал l (см., например, Nicolaou et al, Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); динемицин, включая динемицин А; эсперамицин; а также хромофор неокарзиностатина и родственный хромопротеиновый енедииновый антибиотик, хромофоры), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая ADRIAMYCIN, морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, инъекцию липосомы доксорубицина HCl (DOXIL) и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин C, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; анти-метаболиты, такие как метотрексат, гемцитабин (GEMZAR), тегафур (UFTORAL), капецитабин (XELODA), эпотилон и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин и иматиниб (производное 2-фениламинопиримидина), а также другие ингибиторы c-it; средства, угнетающие функции надпочечников, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; восполнитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; эльфорнитин; эллиптиния ацетат; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2”-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин (ELDISINE, FILDESIN); дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Аra-С»); тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел (TAXOL), состав паклитаксела (ABRAXANE) и доксетаксела (TAXOTERE) в виде наночастиц, созданных на основе альбумина; хлорамбуцил; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин (VELBAN); платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин (ONCOVIN); оксалиплатин; лейкововин; винорелбин (NAVELBINE); новантрон; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; ибандронат; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилхиломитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; инотузумаб озогамицин (BESPONSA), босутиниб (BOSULIF), палбоциклиб (IBRANCE), акситиниб (INLYTA), малат сунитиниба (SUTENT), кризотиниб (XALKORI), энзалутамид (XTANDI); фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленных; а также комбинации двух или более из вышеперечисленных, таких как CHOP, сокращение для комбинированной терапии циклофосфамидом, доксорубицином, винкристином и преднизолоном и FOLFOX, сокращение для схемы лечения оксалиплатином (ELOXATIN) в сочетании с 5-FU и лейкововином.
Дополнительные примеры химиотерапевтических агентов включают антигормональные агенты, которые действуют, регулируя, уменьшая, блокируя или ингибируя действие гормонов, которые могут способствовать росту рака, и часто применяются в форме системного лечения или лечения всего тела. Это могут быть сами гормоны. Примеры включают антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогена (SERM), в том числе, например, тамоксифен (включая NOLVADEX тамоксифен), ралоксифен (EVISTA), дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 11 7018, онапристон и торемифен (FARESTON)); анти-прогестероны; суппрессоры эстрогеновых рецепторов (ERD); антагонисты эстрогеновых рецепторов, такие как фулвестрант (FASLODEX); агенты, которые подавляют или закрывают яичники, например агонисты люлибирина (LHRF1), такие как ацетат лейпролида (LUPRON и ELIGARD), ацетат гозерелина, ацетат бусерелина и триптерелин; антиандрогены, такие как фьютамид, нилутамид и бикалутамид; и ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, который регулирует выработку эстрогена в надпочечниках, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, ацетат мегестрола (MEGASE), экземестан (AROMASIN), форместание, фадрозол, ворозол (RJVISOR), летрозол (FEMARA) и анастрозол (ARIMIDEX). Кроме того, такое определение химиотерапевтических агентов включает бисфосфонаты, такие как клодронат (например, BONEFOS или OSTAC), этидронат (DIDROCAL), NE-58095, золедроновую кислоту/золедронат (ZOMETA), алендронат (FOSAMAX), памидронат (AREDIA), тилудронат (SKELID) или ризедронат (ACTONEL); а также троксацитабин (аналог 1,3-диоксоланнуклеозидцитозина); антисмысловые олигонуклеотиды, особенно те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, участвующих в аберрантной пролиферации клеток, такие как, например, PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор фактора роста эпидермиса (EGF-R); вакцины, такие как вакцина THERATOPE и вакцины для генной терапии, например, вакцина ALLOVECTIN, вакцина LEUVECTIN и вакцина VAXID; ингибитор топоизомеразы 1 (например, LURTOTECAN); антиэстроген, такой как фулвестрант; ингибитор Kit, такой как иматиниб или EXEL-0862 (ингибитор тирозинкиназы); ингибитор EGFR, такой как эрлотиниб или цетуксимаб; ингибитор анти-VEGF, такой как бевацизумаб; аринотекан; rmRH (например, ABARELIX); лапатиниб и дитозилат лапатиниба (низкомолекулярный ингибитор двойной тирозинкиназы ErbB-2 и EGFR, также известный как GW572016); 17AAG (производное гелданамицина, которое является ядом белка теплового шока (Hsp) 90) и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленных.
«Химиотерапия», используемая в настоящем документе, относится к химиотерапевтическому агенту, как определено выше, или комбинации двух, трех или четырех химиотерапевтических агентов для лечения рака. Когда химиотерапия состоит из более чем одного химиотерапевтического агента, химиотерапевтические агенты можно вводить пациенту в один и тот же день или в разные дни одного и того же цикла лечения.
«Химиотерапия на основе платины», используемая в настоящем документе, относится к химиотерапии, где, по меньшей мере, одним химиотерапевтическим агентом является координационный комплекс платины. Типовая химиотерапия на основе платины включает, без ограничения, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, недаплатин, гемцитабин в комбинации с цисплатином, карбоплатин в комбинации с пеметремедом.
«Дублет на основе платины», используемый в настоящем документе, относится к химиотерапии, содержащей два и не более двух химиотерапевтических агентов и где, по меньшей мере, одним химиотерапевтическим агентом является координационный комплекс платины. Типовой дублет на основе платины включает, без ограничения, гемцитабин в комбинации с цисплатином, карбоплатин в комбинации с пеметрекседом.
В настоящем документе термин «системная противораковая терапия» относится к системному введению фармацевтических агентов, одобренных регулирующими органами любой страны мира, или в ходе клинических испытаний на людях, проводимых регулирующими органами любой страны мира с общим намерением изменить исход рака. Системная противораковая терапия включает, помимо прочего, химиотерапию, гормональную терапию, таргетную противораковую терапию, противораковые вакцины, онколитические вакцины и адоптивную Т клеточную терапию.
Способ лечения рака
Изобретение включает способ лечения рака, включающий введение пациенту эффективного количества GDF15 антитела. В некоторых вариантах осуществления, рак выбран из группы, состоящей из рака желудка, саркомы, лимфомы, лейкоза, рака головы и шеи, рака тимуса, рака эпителия, рака слюны, рака печени, рака желудка, рака щитовидной железы, рака легких, рака яичников, рака груди, рака простаты, рака пищевода, рака поджелудочной железы, глиомы, лейкоза, множественной миеломы, почечно-клеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака шейки матки, хориокарциномы, рака толстой кишки, рака полости рта, рака кожи и меланомы. В некоторых вариантах осуществления, субъектом является ранее пролеченный взрослый пациент с местнораспространенной или метастатической меланомой, плоскоклеточным раком головы и шеи (SCHNC), карциномой яичника, саркомой или рецидивирующей или рефрактерной классической лимфомой Ходжкина (cHL). В некоторых вариантах осуществления раком может быть собой резистентный к платине и/или рефрактерный к платине рак, такой как, например, резистентный и/или рефрактерный к платине рак яичников, резистентный и/или рефрактерный к платине рак груди, или резистентный и/или рефрактерный к платине рак легких.
В другом аспекте, в изобретении представлен способ ингибирования роста или прогрессирования опухоли у субъекта, имеющего опухоль, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, как описано в настоящем документе.
В другом аспекте, в изобретении представлен способ ингибирования или профилактики метастазирования раковых клеток у субъекта, включающий введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, как описано в настоящем документе.
В другом аспекте, в изобретении представлен способ индукции регрессии опухоли у субъекта, имеющего опухоль, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, как описано в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления, способ может дополнительно включать введение эффективного количества второго терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, вторым терапевтическим агентом является, например, иммуномодулятор. Термин «иммуномодулятор» относится к веществу, способному изменять (например, ингибировать, уменьшать, увеличивать, усиливать или стимулировать) иммунный ответ (как определено в настоящем документе) или работу любого компонента врожденной, гуморальной или клеточной иммунной системы млекопитающего-хозяина. Таким образом, термин «иммуномодулятор» охватывает «усилитель иммунных эффекторных клеток», как определено в настоящем документе, и «ингибитор иммунодепрессивных клеток», как определено в настоящем документе, а также вещество, которое влияет на другие компоненты иммунной системы млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодулятором может быть анти-CD40 агонистическое антитело.
Изобретение также включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию, как определено в настоящем документе, для использования в определенных способах лечения. В вариантах осуществления, которые относятся к способу лечения, как описано в настоящем документе, такие варианты осуществления также являются дополнительными вариантами осуществления, касающимися антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, фармацевтической композиции для использования в этом лечении, или, альтернативно, для производства лекарственного средства для использования в этом лечении.
Таким образом, также представлено анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция, представленная в настоящем документе, для использования при лечении рака или для ингибирования роста или прогрессирования опухоли у пациента.
Также предусмотрено применение любого из анти-GDF15 антител, представленных в настоящем документе, при производстве лекарственного средства для лечения рака или для ингибирования роста или прогрессирования опухоли у пациента.
Антитела и фрагменты антител могут быть введены в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными соединениями. Дополнительные терапевтически активные соединения включают агенты, используемые для лечения хронических расстройств, ассоциированных с кахексией, противораковые агенты (например, иммунотерапию и химиотерапию), противораковые агенты, которые вызывают клеточный стресс (например, химиотерапевтические агенты на основе платины, такие как цисплатин), мышечные анаболики (например, селективные модуляторы андрогенового рецептора (SARM), ингибиторы миостатина и ингибитор рецептора Активина A), противовоспалительные агенты (например, ингибиторы JAK, ингибиторы IL-6, ингибиторы IL-8), стимуляторы аппетита (например, миметики грелина, ингибиторы рецептора меланокортина 4) и агенты, улучшающие метаболизм (например, метформин).
Профилактические или терапевтические агенты комбинированной терапии, включая антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, могут быть введены субъекту в одной фармацевтической композиции. Альтернативно, профилактические или терапевтические агенты комбинированной терапии могут быть введены субъекту одновременно в отдельных фармацевтических композициях. Профилактические или терапевтические агенты могут быть введены субъекту одним и тем же или разными путями введения.
Термин «иммунный ответ» относится к любому обнаруживаемому ответу иммунной системы млекопитающего-хозяина на определенное вещество (например, антиген или иммуноген), например, врожденному иммунному ответу (например, активации сигнального каскада толл-рецептора), клеточно-опосредованным иммунным ответам (например, ответам, опосредованным Т клетками, такими как антигенспецифические Т клетки и неспецифические клетки иммунной системы) и гуморальным иммунным ответам (например, ответам, опосредованным В клетками, таким как образование и секреция антитела в плазму, лимфу и/или тканевые жидкости).
Термин «иммуногенный» относится к способности вещества быть причиной, вызывать, стимулировать или индуцировать иммунный ответ или улучшать, усиливать, увеличивать или продлевать ранее существовавший иммунный ответ против конкретного антигена, независимо от того, одиночного или связанного с носителем, в присутствии или в отсутствие адъюванта.
Композиции и способы лечения рака, представленные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько других иммуномодуляторов.
В некоторых вариантах осуществления, иммуномодулятором может быть анти-CD40 агонистическое антитело. Антитело может быть, например, человеческим, гуманизированным или частично человеческим химерным анти-CD40 антителом. Примеры специфических моноклональных анти-CD40 антител включают моноклональные антитела G28-5, mAb89, EA-5 или S2C6, CP870893 или APX005M. В конкретном варианте осуществления, анти-CD40 агонистическим антителом является CP870893 или дацетузумаб (SGN-40).
CP-870,893 представляет собой полностью человеческое агонистическое моноклональное анти-CD40 антитело, которое было исследовано клинически в качестве противоопухолевой терапии. Структура и получение CP870,893 описаны в WO2003040170, в которой антитело CP870,893 идентифицировано как антитело «21.4.1». Аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи CP-870,893 представлены в SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 48 соответственно, а также в таблице 7 в WO2003040170. В клинических испытаниях CP870,893 вводят внутривенной инфузией в дозах, обычно находящихся в диапазоне 0,05-0,25 мг/кг на инфузию. В способах лечения рака, предусмотренных в настоящем документе, CP-870,893 можно вводить внутрикожно, подкожно или местно.
Дацетузумаб (также известный как SGN-40 или huS2C6; номер CAS 88-486-59-9) является еще одним типовым анти-CD40-агонистическим антителом, которое исследовалось в клинических испытаниях в отношении вялотекущих лимфом, диффузных В-крупноклеточных лимфом и множественной миеломы. В способах лечения рака, представленных в настоящем документе, дацетузумаб можно вводить внутрикожно, подкожно или местно.
Синдром высвобождения цитокинов (CRS)
Изобретение относится к способу лечения CRS, включающему введение пациенту эффективного количества GDF15 антитело. CRS является системной воспалительной реакцией, иногда наблюдаемой после введения моноклональных антител и Т клеточных иммунотерапевтических агентов. (Shimabukuro-Vornhagen et al., Journal for ImmunoTherapy of Cancer 6, 56(2018). Мало что известно о патофизиологии CRS и исходных событиях, которые запускают массовое высвобождение различных цитокинов, которые закрепляют системную воспалительную реакцию CRS.
В некоторых вариантах осуществления? в изобретении представлен способ лечения CRS у пациента включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, как описано в настоящем документе.
В других вариантах осуществления, способ может дополнительно включать введение эффективного количества второго терапевтического агента. Вторые терапевтические агенты включают противовоспалительные агенты, например, ингибиторы ИЛ-6, ингибиторы фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), ингибиторы интерферона гамма (IFN-γ), кортикостероиды, антигистаминные препараты), жаропонижающие средства и/или антибиотики. В некоторых вариантах осуществления, вторым терапевтическим агентом является антитело, например, тоцилизумаб и/или силтуксимаб.
Изобретение также представляет GDF15 антитело, его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию, как определено в настоящем документе, для использования в способе лечения CRS. Изобретение также представляет применение GDF15 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или фармацевтической композиции, как определено в настоящем документе, в производстве лекарственного средства для лечения CRS. В вариантах осуществления, которые относятся к способу лечения, описанному в настоящем документе, такие варианты осуществления также являются дополнительными вариантами осуществления, касающимися антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, фармацевтической композиции, для использования в таком лечении, или, альтернативно, для производства лекарственного средства для использования в таком лечении.
Комбинированная терапия GDF15 антителом и антагонистом связывания PD-1 оси
Изобретение охватывает способу лечения рака путем введения пациенту комбинации антитела GDF15 с антагонистом связывания PD-1 оси, где комбинация эффективна при лечении рака. То есть данные, раскрытые в настоящем документе, демонстрируют, что комбинация анти-GDF15 антитела и антагониста PD-1 оси обеспечивает терапевтический эффект при лечении рака. Данные дополнительно демонстрируют, что комбинация анти-GDF-15 и антагониста оси PD-1 обеспечивает синергетический терапевтический эффект, который является терапевтическим эффектом, превышающим прогнозируемый аддитивный эффект каждой терапии, вводимой отдельно.
Изобретение охватывает способ лечения рака, включающий введение пациенту некоторого количества ингибитора GDF15 в комбинации с некоторым количеством антагониста связывания PD-1 оси, которое эффективно при лечении рака. Изобретение также охватывает способ лечения рака, включающий введение пациенту некоторого количества ингибитора GDF15 и некоторое количество антагонистического связывания PD-1 оси, где эти количества вместе эффективны при лечении рака. В другом варианте осуществления, изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту некоторого количества ингибитора GDF15 и некоторого количества антагониста связывания PD-1 оси, где эти количества вместе обеспечивают синергетический эффект при лечении рака, то есть комбинация является «синергической». В одном аспекте, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело GDF15_001, и антагонист связывания PD-1 оси выбран из группы, состоящей из авелумаба, PF-06801591 (сасанлимаба, RN-888), ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба и дурвалумаба. Изобретение охватывает фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор GDF15 и антагонист связывания PD-1 оси и фармацевтически приемлемый носитель, для использования при лечении рака. Изобретение охватывает фармацевтическую композицию, содержащую синергетически эффективное количество ингибитора GDF15, синергетическое эффективное количество антагониста связывания PD-1 оси и фармацевтически приемлемый носитель, для использования при лечении рака. Композиция может дополнительно содержать дополнительный терапевтический агент, такой как, но не ограниченный ими, по меньшей мере, один химиотерапевтический агент.
Специалист в данной области техники поймет, на основании описания, представленного в настоящем документе, что способ лечения рака по изобретению включает введение синергетического терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела и синергетического терапевтически эффективного количества антагониста связывания PD-1 оси (например, анти-PD-1-антитело, анти-PD-L1-антитело и т. д.) пациенту, который либо получал лечение ранее, либо получает в настоящее время, по меньшей мере, один дополнительный терапевтический агент для лечения рака. Такой дополнительный терапевтический агент включает агент, который является стандартным для лечения рака. То есть, комбинированная терапия по изобретению может быть добавлена к терапевтической схеме для онкологического больного, уже получающего другую терапию, включая, но не ограничиваясь этим, хирургическое вмешательство, радиационную терапию, химиотерапию и любую другую терапию, известную в данной области техники.
Специалисты в данной области смогут определить в соответствии с известными способами, подходящее количество, дозу или дозировку каждого соединения, которое используется в комбинации по настоящему изобретению, для введения пациенту, принимая во внимание такие факторы, как возраст, массу тела, общее состояние здоровья, вводимое соединение, способ введения, природу и стадию рака, требующего лечения, и наличие других лекарственных средств.
В варианте осуществления, ингибитором GDF15 является антитело к GDF15 или его антигенсвязывающую часть, и его вводят внутривенно (ВВ) или подкожно (ПК) в начальной дозе от примерно 0,025 мг/кг до примерно 20 мг/кг. За начальной дозой могут следовать одна или несколько последующих доз. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько последующих доз можно вводить, по меньшей мере, в меньшей степени, раз в неделю, каждую вторую неделю, каждые три недели, каждые четыре недели, каждые пять недель, каждые шесть недель, каждые семь недель, каждые восемь недель, каждые девять недель, каждые десять недель, каждые одиннадцать недель или каждые двенадцать недель.
В некоторых вариантах осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело, где анти-GDF15 антитело вводят внутривенно (ВВ) или подкожно (ПК) в фиксированной дозе от примерно 0,1 до примерно 60 мг каждую неделю. В некоторых вариантах осуществления, анти-GDF15 антитело вводят в фиксированной дозе примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 7 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 40 мг и примерно 50 мг еженедельно.
В некоторых вариантах осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело, где анти-GDF15 антитело вводят внутривенно (ВВ) или подкожно (ПК) в фиксированной дозе от примерно 0,1 до примерно 130 мг через неделю. В некоторых вариантах осуществления, анти-GDF15 антитело вводят в фиксированной дозе примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 50 мг, примерно 60 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 90 мг, примерно 100 мг, примерно 110 мг, примерно 120 мг и примерно 125 мг раз в две недели.
В некоторых вариантах осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело, где анти-GDF15 антитело вводят внутривенно (ВВ) или подкожно (ПК) в фиксированной дозе от примерно 0,1 до примерно 400 мг каждые 21 день (±2 дня). В некоторых вариантах осуществления, анти-GDF15 антитело вводят в фиксированной дозе примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 50 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 125 мг, примерно 150 мг, примерно 175 мг, примерно 200 мг, примерно 225 мг, примерно 250 мг, примерно 275 мг, примерно 300 мг, примерно 325 мг, примерно 350 мг, примерно 375 мг и примерно 385 мг каждые 21 день (±2 дня).
В некоторых вариантах осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело, где анти-GDF15 антитело вводят внутривенно (ВВ) или подкожно (ПК) в фиксированной дозе от примерно 0,1 до примерно 400 мг каждые 28 дней (±2 дня). В некоторых вариантах осуществления, анти-GDF15 антитело вводят в фиксированной дозе примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 50 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 125 мг, примерно 150 мг, примерно 175 мг, примерно 200 мг, примерно 225 мг, примерно 250 мг, примерно 275 мг, примерно 300 мг, примерно 325 мг, примерно 350 мг, примерно 375 мг и примерно 385 мг каждые 28 дней (±2 дня).
Практика способа по настоящему изобретению может осуществляться с помощью различных схем введения или дозирования. Соединения комбинации по настоящему изобретению могут вводиться по очереди, одновременно или последовательно. В варианте осуществления, соединения комбинации по настоящему изобретению могут вводиться по схеме одновременного дозирования.
Повторение схем введения или дозирования может проводиться по мере необходимости для достижения желаемого уменьшения или сокращения раковых клеток. «Схема непрерывного дозирования», используемая в настоящем документе, представляет собой схему введения или дозирования без прерывания приема дозы, например, без дней без лечения. Повторение 21- или 28-дневных курсов лечения без прерывания приема дозы между курсами лечения является примером непрерывной схемы дозирования. В варианте осуществления, соединения комбинации по настоящему изобретению могут вводиться по непрерывной схеме дозирования. В варианте осуществления, соединения комбинации по настоящему изобретению могут вводиться одновременно по непрерывной схеме дозирования.
В варианте осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело. В некоторых вариантах осуществления, анти-GDF15 антителом является GDF-001.
В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 оси является антагонист связывания PD-L1. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-L1 является анти-PD-L1 антитело, такое как, но не ограниченное ими, MEDI4736, MPDL3280A (YW243.55.s70), BMS-936559 (MDX-1105), авелумаб, атезолизумаб и дурвалумаб. В некоторых вариантах осуществления, анти-PD-L1 антителом является авелумаб, и он может вводиться внутривенно в дозе примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мг/кг с интервалами примерно 14 дней (±2 дня) или примерно 21 день (±2 дня) или примерно 30 дней (±2 дня) в течение курса лечения. В некотором варианте осуществления, авелумаб вводят в базовой дозе примерно 80, 150, 160, 200, 240, 250, 300, 320, 350, 400, 450, 480, 500, 550, 560, 600, 640, 650, 700, 720, 750, 800, 850, 880, 900, 950, 960, 1000, 1040, 1050, 1100, 1120, 1150, 1200, 1250, 1280, 1300, 1350, 1360, 1400, 1440, 1500, 1520, 1550 или 1600 мг, предпочтительно, 800 мг, 1200 мг или 1600 мг с интервалами примерно 14 дней (±2 дня) или примерно 21 день (±2 дня) или примерно 30 дней (±2 дня) в течение курса лечения. В некоторых вариантах осуществления, субъекту вводят внутривенную (ВВ) инфузию лекарственного средства, содержащего любой из антагонистов связывания PD-1 оси, описанных в настоящем документе. В определенном варианте осуществления, субъекту вводят подкожную (ПК) инфузию лекарственного средства, содержащего любой из антагонистов связывания PD-1 оси, описанных в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления, антагонистом PD-1 оси является антагонист связывания PD-1 оси. В некоторых вариантах осуществления, антагонистом связывания PD-1 оси является анти-PD-1 антитело, например, PF-06801591 (сасанлимаб, RN888), ниволумаб, пембролизумаб, пидилизумаб, тислелизумаб, AMP-224, AMP-514, цемиплимаб, и анти-GDF15 антитело вводят внутривенно или подкожно, но, предпочтительно, подкожно, в дозе примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 мг/кг с интервалами примерно 14 дней (±2 дня) или примерно 21 день (±2 дня) или примерно 30 дней (±2 дня) в течение курса лечения. В некоторых вариантах осуществления, PF-06801591 (сасанлимаб, RN-888), описанный в US 2016/159905, вводят в базовой дозе примерно 80, 150, 160, 200, 240, 250, 300, 320, 350, 400, 450, 500, 550 или 600 мг, предпочтительно, 300 мг, с интервалами примерно 14 дней (±2 дня) или примерно 21 день (±2 дня) или примерно 30 дней (±2 дня) или примерно 35 дней (±2 дня), или примерно 42 дня (±2 дня). В некоторых вариантах осуществления, PF-06801591 (сасанлимаб, RN888) вводят подкожно в количестве 300 мг Q4W. В некоторых вариантах осуществления, PF-06801591 (сасанлимаб, RN888, mAb7) вводят подкожно в количестве 600 мг Q6W.
Кроме того, изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту некоторого количества антитела GDF15 и количества антагониста связывания PD-1 оси, где эти количества вместе обеспечивают синергетический эффект при лечении рака, который больше, чем терапевтический эффект анти-GDF15 антитела и терапевтический эффект ингибитора связывания оси PD-1, где отдельные эффекты суммируются. Способ или применение по изобретению относится к синергетической комбинации таргетных терапевтических агентов, в частности, GDF15 антитела и антагониста связывания PD-1 оси. В одном аспекте варианта осуществления, ингибитором GDF15 является антитело к GDF15, и антагонист связывания PD-1 оси выбран из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, тислелизумаба, пидилизумаба, AMP-224, AMP-514, цемиплимаба, PF-06801591 (сасанлимаба, RN888, mAb7), авелумаба, атезолизумаба и дурвалумаба. В одном аспекте вариантов осуществления, ингибитором GDF15 является анти-GDF15 антитело, и антагонист связывания PD-1 оси выбран из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, тислелизумаба, пидилизумаба, AMP-224, AMP-514, цемиплимаба, PF-06801591 (сасанлимаба, RN888, mAb7), атезолизумаба, дурвалумаба и не является авелумабом.
В соответствии с настоящим изобретением, количество первого соединения или компонента, например, ингибитора GDF15, вводят с количеством второго соединения или компонента, например, антагониста связывания PD-1 оси (которые не включают авелумаб), и указанные количества вместе эффективны при лечении рака. Количества, которые вместе являются эффективными, в некоторой степени ослабляют один или несколько симптомов заболевания, которое лечат. Что касается лечения рака, эффективное количество относится к количеству, которое имеет эффект (1) уменьшения размера опухоли, (2) ингибирования (то есть замедления до некоторой степени, предпочтительно, остановку) появления метастазов опухоли, (3) подавления до некоторой степени (то есть замедление до некоторой степени, предпочтительно, остановку) роста опухоли или инвазивности опухоли и/или (4) ослабления до некоторой степени (или, предпочтительно, устранение) одного или нескольких признаков или симптомов, связанных с раком. Терапевтическая или фармакологическая эффективность доз и схем введения также может быть охарактеризована как способность индуцировать, усиливать, поддерживать или продлевать контроль заболевания и/или общую выживаемость у пациентов с этими конкретными опухолями, которую можно измерить как продление времени до прогрессирования заболевания.
В изобретении представлены способы введения анти-GDF15 антитела или его антигенсвязывающей части, по описанию, отдельно или в комбинации с другими терапиями, субъекту, нуждающемуся в этом. Комбинированные терапии (например, анти-GDF15 и антагонисты PD-1 оси) по настоящему описанию могут быть введены субъекту одновременно или последовательно. Комбинированная терапия анти-GDF15 и антагонистами PD-1 оси по настоящему описанию также может вводиться циклически. Циклическая терапия включает введение первой терапии (например, первого профилактического или терапевтического агента) в течение определенного периода времени, с последующим введением второй терапии (например, второго профилактического или терапевтического агента) в течение определенного периода времени, и повторение этого последовательного введения, то есть курса, чтобы уменьшить развитие резистентности к одной из терапий (например, агентам), чтобы избежать или уменьшить побочные эффекты одной из терапий (например, агентов) и/или улучшить эффективность терапий.
Изобретение также охватывает анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию, как определено в настоящем документе, для применения в определенных способах лечения, в которых антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию вводят в сочетании с антагонистом связывания PD-1 оси, как определено в настоящем документе. В вариантах осуществления, которые относятся к способу лечения, описанному в настоящем документе, такие варианты осуществления также являются дополнительными вариантами осуществления, относящимися к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, или фармацевтической композиции для применения в таком лечении или, альтернативно, для производства лекарственного средства для применения в таком лечении.
Терапии (например, профилактические или терапевтические агенты) комбинированной терапии по настоящему описанию может вводиться субъекту одновременно. Термин «одновременно» не ограничивается введением терапий (например, профилактических или терапевтических агентов) в одно и то же время, а скорее означает, что фармацевтическую композицию, содержащую GDF15 антитело или его антигенсвязывающую часть, по описанию, вводят субъекту последовательно и в такого пределах временного интервала, что антитело может действовать вместе с другой терапией(ями) (например, антагонистом PD-1 оси, который может не включать авелумаб)с получением повышенной пользы, большей, чем если бы они вводились другим образом, более предпочтительно, комбинированная терапия обеспечивает «синергетический терапевтический эффект» в том смысле, что терапевтический эффект больше, чем аддитивный эффект двух терапий, вводимых по отдельности. Например, каждая терапия может вводиться субъекту одновременно или последовательно в любом порядке в разные моменты времени; однако, если их не вводят одновременно, их следует вводить достаточно близко по времени, чтобы обеспечить желаемый терапевтический или профилактический эффект. Каждая терапия может быть введена субъекту отдельно, в любой подходящей форме и любым подходящим путем. Анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающим фрагментом может быть любое антитело по изобретению, предпочтительно, GDF-15_001. Антагонист PD-1 оси включает, но не ограничивается ими, антагонист связывания PD-1, антагонист связывания PD-L1 и антагонист связывания PD-L2. В других аспектах, антагонистом связывания PD-1 является анти-PD-1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В других аспектах, анти-PD-1 антитело включает, но не ограничено ими, ниволумаб, пембролизумаб, спартализумаб, тислелизумаб, пидилизумаб, AMP-224, AMP-514, цемиплимаб и PF-06801591 (сасанлимаб, RN888). В других аспектах, антагонистом связывания PD-L1 является анти-PD-L1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В других аспектах, анти-PD-L1 антителом является BMS-936559 (MDX-1105), авелумаб, атезолизумаб, дурвалумаб. В других аспектах, антагонистом связывания PD-L1 является анти-PD-L1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, но он не является авелумабом.
В разных вариантах осуществления, анти-GDF15 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят субъекту менее чем с интервалом 15 минут, менее чем с интервалом 30 минут, менее чем с интервалом 1 час, примерно с интервалом 1 час, с интервалом от примерно 1 часа до примерно 2 часов, с интервалом от примерно 2 часов до примерно 3 часов, с интервалом от примерно 3 часов до примерно 4 часов, с интервалом от примерно 4 часов до примерно 5 часов, с интервалом от примерно 5 часов до примерно 6 часов, с интервалом от примерно 6 часов до примерно 7 часов, с интервалом от примерно 7 часов до примерно 8 часов, с интервалом от примерно 8 часов до примерно 9 часов, с интервалом от примерно 9 часов до примерно 10 часов, с интервалом от примерно 10 часов до примерно 11 часов, с интервалом от примерно 11 часов до примерно 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа или 1 неделю от введения антагониста PD-1 оси (например, анти-PD-1 антитела, анти-PD-L1 антитела, которое может не включать авелумаб, или анти-PD-L2 антитело, среди прочих). В других вариантах осуществления, две или несколько терапий (например, анти-GDF15 антитело, анти-PD-L1 антитело, которое может не включать авелумаб, и химиотерапевтический агент) вводят пациенту во время одного и того же посещения.
Профилактические или терапевтические агенты комбинированной терапии могут быть введены субъекту в одной и той же фармацевтической композиции. Альтернативно, профилактические или терапевтические агенты комбинированных терапий могут быть введены субъекту одновременно в отдельных фармацевтических композициях. Профилактические или терапевтические агенты могут быть введены субъекту одним и тем же или разными путями введения.
Способы диагностики
in vitro
in vivo
Анти-GDF15 антитела, композиции антител и способы по настоящему изобретению могут применяться  и , включая иммуноанализы, и использоваться для диагностики и оценки лечения нарушений, опосредованных GDF15. Способы особенно подходят для диагностики, оценки и лечения пациентов-людей, страдающих расстройством, связанным с существованием GDF15 и, более предпочтительно, с повышенным уровнем GDF15, где повышенный уровень GDF15 включает в себя повышенный уровень, превышающий плазменные концентрации свободного GDF15 у здоровых добровольцев. Это расстройство, связанное с существованием GDF15, включает, помимо прочего, кахексию, связанную с раком, химиотерапией, химиотерапией в сочетании с иммуноонкологической терапией, хроническую обструктивную болезнь легких, хроническое заболевание почек, хроническую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность или саркопению.
В изобретении представлен способ обнаружения присутствия GDF15 в образце, где способ включает контакт образца, предполагающего наличие GDF15, с антителом, специфичным для GDF15, и обнаружение присутствия GDF15, связанного с антителом, тем самым обнаруживая GDF15 в образце. Способы обнаружения GDF15, связанного с антителом, хорошо известны в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, анализ, в котором GDF15 связывается с твердой подложкой и к нему добавляют образец, позволяя антителу связывать GDF15 в образце. Добавляют второе GDF15 антитело, которое является либо таким же, либо отличается от антитела, связанного с твердой подложкой, и оно может быть обнаружено либо путем прямого мечения (т. е. второе антитело конъюгировано с обнаруживаемой меткой), либо путем добавления третьего антитела, например, от другого вида, которое взаимодействует с константный доменом второго антитела, и которое содержит определяемую метку. Таким образом, анализ можно использовать для обнаружения присутствия или отсутствия GDF15 в образце.
В другом варианте осуществления, изобретение включает набор для обнаружения присутствия GDF15 в образце, где набор содержит антитело, специфическое для GDF15, аппликатор и инструкции по его применению.
Изобретение также представляет способ определения концентрации GDF15 в образце, где указанный способ включает предоставление помеченного конкурента, содержащего GDF15, связанный с определяемой меткой; предоставление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающего GDF15; объединение образца, антитела и меченого конкурента, где GDF15 в образце конкурирует с меченым конкурентом за связывание с антителом; и определение концентрации GDF15 в указанном образце путем измерения количества меченого конкурента, не связанного с антителом, путем обнаружения метки. Количество меченого конкурента, связанного с антителом в отсутствие образца, сравнивают с количеством меченого конкурента, связанного с антителом, при добавлении образца. Степень уменьшения связанного меченого конкурента в присутствии образца является показателем количества не меченого GDF15, присутствующего в образце, так что анализ можно использовать для оценки присутствия и уровня GDF15 в образце.
В одном варианте осуществления в изобретении представлен способ оценки эффективности лечения заболевания или расстройства, связанного с повышенным уровнем GDF15 у субъекта, где способ включает введение лечения субъекту и сравнение уровня GDF15 в образце, полученном от субъекта до лечения, с уровнем GDF15 в идентичном образце, полученном от субъекта после лечения, где уровень GDF15 в образце оценивается с использованием специфического антитела к GDF15 и, далее, где более низкий уровень GDF15 в образце, взятом у субъекта после лечения, по сравнению с уровнем GDF15 в образце, взятом у субъекта до лечения, является показателем эффективности курса лечения.
In vitro
Термин «меченый» в отношении GDF15-специфического антитела или меченого конкурента включает прямое мечение путем связывания (т. е. физического связывания) определяемого вещества с антителом или меченым конкурентом, а также косвенное мечение антитела или меченого конкурента сочетанием его с другим реагентом, который является прямо меченым. Пример косвенного мечения включает обнаружение первичного антитела с использованием вторичного антитела, меченого флуоресценцией.  методы обнаружения полипептидов по изобретению включают ферментные иммуносорбентные анализы (ELISA), вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию и иммунофлуоресценцию.
Термин «биологический образец» включает ткани, клетки и биологические жидкости, выделенные у субъекта, а также ткани, клетки и жидкости, присутствующие у субъекта.
Антитела, меченые конкуренты и потенциальные терапевтические соединения, описанные в настоящем документе, также подходят для использования с любым из множества других гомогенных и гетерогенных иммуноанализов с множеством систем обнаружения.
Композиции
GDF15 антитела по изобретению могут быть составлены в виде фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или стабилизатор (Remington: The Science and practice of Pharmacy 21st Ed., 2005, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover), в виде лиофилизированного состава или водного раствора. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы не токсичны для реципиентов в дозировках и концентрациях, и могут содержать буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония, хлорид гексаметония, хлорид бензалкония, хлорид бензетония; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексан; 3-пентан; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Фармацевтически приемлемые эксципиенты дополнительно описаны в настоящем документе.
Фармацевтическая композиция по настоящему описанию может дополнительно содержать антагонист PD-1 оси, как описано в настоящем документе, и ингибитор GDF15, как описано в настоящем документе. В одном варианте осуществления, GDF15 ингибитором является анти-GDF15 антитело GDF15_001 или GDF15_297, и антагонист PD-1 оси выбран из группы, состоящей, необязательно, из авелумаба, PF-06801591 (также называемого «сасанлимаб» и «RN-888» и mAb7, все которые описаны в WO 2016/092419), ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб и дурвалумаб. В одном варианте осуществления, антагонист PD-1 оси не включает авелумаб.
Фармацевтические соединения по настоящему описанию могут включать одну или несколько фармацевтически приемлемых солей. Примеры таких солей включают кислотно-аддитивные соли и основно-аддитивные соли. Кислотно-аддитивные соли включают соли, полученные из нетоксичных неорганических кислот, таких как хлористоводородная, азотная, фосфорная, серная, бромистоводородная, йодистоводородная, фосфорная и подобные, а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты., гидроксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и подобные. Основно-аддитивные соли включают соли, полученные из щелочноземельных металлов, таких как натрий, калий, магний, кальций и подобные, а также из нетоксичных органических аминов, таких как N, N'-дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и подобные.
Фармацевтическая композиция по описанию также может включать фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и подобные; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВНА), бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и подобные; и (3) хелатирующие металл агенты, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и подобные.
Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно использовать в фармацевтических композициях по настоящему описанию, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и подобные) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и сложные органические эфиры для инъекций, такие как этилолеат. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем использования материалов покрытия, таких как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсий и за счет использования поверхностно-активных веществ.
Эти композиции могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульгирующие агенты и диспергирующие агенты. Предотвращение присутствия микроорганизмов может быть обеспечено как методами стерилизации, так и включением различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и подобных. Также может быть желательно включить в композиции изотонические агенты, такие как сахара, хлорид натрия и подобные. Кроме того, пролонгированное всасывание инъекционной фармацевтической формы может быть обеспечено за счет включения агентов, замедляющих абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин.
Фармацевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композиция может быть составлена в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и подобные) и их подходящие смеси. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, за счет использования покрытия, такого как лецитин, за счет поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсии и за счет использования поверхностно-активных веществ. Во многих случаях целесообразно включать в композицию изотонические агенты, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций можно обеспечить за счет включения в композицию агента, замедляющего абсорбцию, например, солей моностеаратов и желатина.
Стерильные растворы для инъекций могут быть приготовлены включением активного соединения в необходимом количестве в соответствующий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, если требуется, с последующей стерилизацией микрофильтрацией.
Обычно дисперсии готовят включением активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций, предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и сублимация (лиофилизация), которые дают порошок активного ингредиента плюс любого дополнительного желаемого ингредиента из его раствора, предварительно стерилизованного фильтрованием.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена, упакована или продана в составе, подходящем для офтальмологического введения. Такие составы могут быть, например, в форме глазных капель, включая, например, 0,1%-1,0% (масс./масс.) раствор или суспензию активного ингредиента в водном или масляном жидком носителе. Такие капли могут дополнительно содержать буферные агенты, соли или один или несколько других дополнительных ингредиентов, описанных в настоящем документе. Другие пригодные для офтальмологического введения составы включают те, которые содержат активный ингредиент в микрокристаллической форме или в липосомном препарате.
В настоящем документе «дополнительные ингредиенты» включают, но не ограничены ими, один или несколько из следующих: эксципиенты; поверхностно-активные вещества; диспергирующие агенты; инертные разбавители; гранулирующие и разрыхляющие агенты; связующие агенты; смазывающие агенты; подсластители; ароматизаторы; красители; консерванты; физиологически разлагаемые композиции, такие как желатин; водные носители и растворители; масляные носители и растворители; суспендирующие агенты; диспергирующие или смачивающие агенты; эмульгаторы, мягчители; буферы; соли; загустители; наполнители; эмульгаторы; антиоксиданты; антибиотики; противогрибковые средства; стабилизаторы; и фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные материалы. Другие «дополнительные ингредиенты», которые могут быть включены в фармацевтические композиции настоящего описания, известны в данной области и описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Genaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1985), которые включены в настоящий документ в качестве ссылки.
В одном варианте осуществления, GDF15 антитело или его антигенсвязывающую часть вводят в виде внутривенного состава в виде стерильного водного раствора, содержащего 5 мг/мл, или, в некоторых вариантах осуществления, примерно 10 мг/мл, или, в некоторых вариантах осуществления, примерно 15 мг/мл, или, в некоторых вариантах осуществления, примерно 20 мг/мл антитела, или, в некоторых вариантах осуществления, примерно 25 мг/мл, или, в некоторых вариантах осуществления, примерно 50 мг/мл, ацетата натрия, полисорбата 80 и хлорида натрия при pH от примерно 5 до 6. В некоторых вариантах осуществления, внутривенным составом является стерильный водный раствор, содержащий 5 или 10 мг/мл антитела, с 20 мМ ацетата натрия, 0,2 мг/мл полисорбата 80 и 140 мМ хлорида натрия при pH 5,5. Кроме того, раствор, содержащий антитело или его антигенсвязывающую часть, может содержать, среди многих других соединений, гистидин, маннит, сахарозу, трегалозу, глицин, поли(этилен)гликоль, ЭДТК, метионин и любую их комбинацию, и многие другие соединения, известные в данной области техники.
В одном варианте осуществления, фармацевтическая композиция по настоящему описанию содержит следующие компоненты: 50 мг/мл GDF15 антитело или его антигенсвязывающей части по настоящему описанию, 20 мМ гистидина, 8,5% сахарозы и 0,02% полисорбата 80, 0,005% ЭДТК при pH 5,8; в другом варианте осуществления, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит следующие компоненты: 100 мг/мл GDF15 антитела или его антигенсвязывающей части по настоящему раскрытию, 10 мМ гистидина, 5% сахарозы и 0,01% полисорбата 80 при pH 5,8. Эта композиция может быть представлена в виде жидкого состава или лиофилизированного порошка. Когда порошок восстанавливают до полного объема, композиция сохраняет тот же состав. Альтернативно, порошок может быть восстановлен в половинном объеме, и в этом случае композиция включает 100 мг GDF15 антитела или его антигенсвязывающей части по настоящему описанию, 20 мМ гистидина, 10% сахарозы и 0,02% полисорбата 80 при pH 5,8.
В одном варианте осуществления, часть дозы вводят внутривенным болюсом, а остальную часть инфузией состава антитела. Например, 0,01 мг/внутривенная инъекция GDF15 антитела или его антигенсвязывающей части может быть введена в виде болюса, а остальная доза антитела может быть введена внутривенной инъекцией. Заранее определенную дозу GDF15 антитела или его антигенсвязывающей части можно вводить, например, в течение от полутора до двух часов до пяти часов.
Что касается терапевтического агента, где агент представляет собой, например, малую молекулу, он может присутствовать в фармацевтической композиции в форме физиологически приемлемого сложного эфира или соли, например, в комбинации с физиологически приемлемым катионом или анионом, как хорошо известно в данной области техники.
Составы фармацевтических композицией, описанные в настоящем документе, могут быть приготовлены любым способом, известным или разработанным в дальнейшем в области фармакологии. Как правило, такие способы приготовления включают стадию объединения активного ингредиента с носителем или одним или несколькими другими вспомогательными ингредиентами и затем, если необходимо или желательно, формирования или упаковки продукта в желаемую одно- или многодозовую единицу.
В одном варианте осуществления композиции по описанию представляют собой апирогенные композиции, которые по существу не содержат эндотоксинов и/или родственных пирогенных веществ. Эндотоксины включают токсины, которые содержатся внутри микроорганизма и высвобождаются, когда микроорганизмы разрушаются или умирают. Пирогенные вещества также включают вызывающие лихорадку термостабильные вещества (гликопротеины) из внешней мембраны бактерий и других микроорганизмов. Оба эти вещества могут вызвать жар, гипотонию и шок при введении людям. Из-за потенциальных вредных эффектов полезно удалять даже небольшие количества эндотоксинов из вводимых внутривенно растворов фармацевтических препаратов. Food и Drug Administration («FDA») установил верхний предел в 5 единиц эндотоксина (ЕЭ) на дозу на килограмм массы тела за один час для внутривенного введения лекарств (The United States Pharmacopeia Convention, Pharmacopeia Forum 26 (1):223 (2000)). Когда терапевтические белки вводят в количестве нескольких сотен или тысяч миллиграммов на килограмм веса тела, полезно удалить даже следовые количества эндотоксина. В одном варианте осуществления, уровни эндотоксина и пирогена в композиции составляет менее чем 10 ЕЭ/мг, или менее чем 5 ЕЭ/мг, или менее чем 1 ЕЭ/мг, или менее чем 0,1 ЕЭ/мг, или менее чем 0,01 ЕЭ/мг, или менее чем 0,001 ЕЭ/мг. В другом варианте осуществления, уровни энгдотоксина и пирогенна в растворе составляют менее чем примерно 10 ЕЭ/мг, или менее чем примерно 5 ЕЭ/мг, или менее чем примерно 1 ЕЭ/мг, или менее чем примерно 0,1 ЕЭ/мг, или менее чем примерно 0,01 ЕЭ/мг, или менее чем примерно 0,001 ЕЭ/мг.
В одном варианте осуществления изобретение включает введение композиции, где указанное введение является пероральным, парентеральным, внутримышечным, интраназальным, вагинальным, ректальным, лингвальным, сублингвальным, буккальным, внутрибуккальным, внутривенным, кожным, подкожным или трансдермальным.
В другом варианте осуществления, описание дополнительно включает введение композиции в комбинации с другими видами лечения, такими как хирургия, химиотерапия, гормональная терапия, биологическая терапия, иммунотерапия или радиационная терапия.
Дозировка
Для приготовления фармацевтических или стерильных композиций, включающих GDF15 антитело или его антигенсвязывающую часть, по описанию, антитело смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Составы терапевтических и диагностических агентов могут быть приготовлены путем смешивания с физиологически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами в форме, например, лиофилизированных порошков, суспензий, водных растворов, лосьонов или суспензий (см., например, Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams and Wilkins, New York, N. Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.).
Выбор схемы введения терапевтического агента зависит от нескольких факторов, включая скорость оборота вещества в сыворотке или ткани, уровень симптомов, иммуногенность вещества и доступность клеток-мишеней в биологической матрице. В некоторых вариантах осуществления, схема введения максимизирует количество терапевтического препарата, доставляемого пациенту, в соответствии с приемлемым уровнем побочных эффектов. Соответственно, количество доставляемого биопрепарата частично зависит от конкретного вещества и тяжести состояния, которое лечат. Руководство по выбору подходящих доз антител, цитокинов и малых молекул доступно (см., например, Wawrzynczak, 1996, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y.; Bach (ed.),1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N. Y.; Baert, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom, et al., 1999, New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon, et al., 2001, New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz, et al., 2000, New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky, et al., 2000, New Engl. J. Med. 343:1594-1602).
Определение подходящей дозы производится врачом, например, с использованием параметров или факторов, известных или предполагаемых в данной области как влияющие на лечение или предполагаемых как влияющие на лечение. Обычно доза начинается с количества, несколько меньшего, чем оптимальная доза, и затем ее увеличивают небольшими приращениями до тех пор, пока не будет достигнут желаемый или оптимальный эффект относительно любых отрицательных побочных эффектов.
Термины «снижение уровня GDF15» или «понижение уровня GDF15», используемые в настоящем документе, означают снижение уровня свободного GDF15 по сравнению с уровнем свободного GDF15 перед любым терапевтическим вмешательством. В настоящем документе, «свободный GDF15» означает GDF15, который не связан или иным образом не находится в комплексе с другой молекулой (например, антителом или связывающими молекулами, присутствующими, например, в плазме).
Уровень GDF15 включает уровень свободного GDF15 у субъекта, где уровень оценивают с использованием способов, раскрытых в настоящем документе, или любого другого способа оценки уровня свободного GDF15, известного в данной области техники.
В одном варианте осуществления, уровень свободного GDF15 снижен по сравнению с уровнем GDF15 у субъекта до введения антитела по изобретению. В одном варианте осуществления, уровень свободного GDF15 снижен по сравнению со стандартным уровнем свободного GDF15, который ассоциируется с или указывает на то, что субъект не страдает заболеванием, расстройством или состоянием, связанным с или опосредованным повышенным уровнем свободного GDF15. В одном варианте осуществления, стандартный или эталонный уровень свободного GDF15 составляет от примерно 0,05 нг/мл до примерно 3 нг/мл в плазме. В другом варианте осуществления, стандартный или эталонный уровень свободного GDF15 находится в диапазоне, нижнее значение которого выбрано из группы, состоящей из 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 нг/мл, и верхнее значение которого выбрано из группы, состоящей из 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 и 3,0 нг/мл. В другом варианте осуществления, стандартный или эталонный уровень свободного GDF15 составляет менее чем 1 нг/мл, предпочтительно, менее чем за 0,9 нг/мл, даже более предпочтительно, менее чем за 0,8 нг/мл, еще более предпочтительно, менее чем за 0,7 нг/мл, даже более предпочтительно, менее чем за 0,6 нг/мл, еще более предпочтительно, менее чем за 0,5 нг/мл и даже более предпочтительно, менее чем за 0,4 нг/мл. В одном варианте осуществления, уровнем свободного GDF15 является уровень в плазме.
Изобретение не ограничивается уровнем свободного GDF15 менее 0,5 нг/мл; вместо этого специалисту в данной области будет понятно, что терапевтический уровень может быть ниже или выше 0,5 нг/мл для конкретного субъекта. Следовательно, изобретение включает снижение уровня свободного GDF15 до уровня, при котором наблюдается снижение или полное отсутствие обнаруживаемого вредного эффекта(ов), опосредованного или связанного с повышенным уровнем свободного GDF15. Такие эффекты включают, но не ограничиваются ими, кахексию, снижение потребления пищи, снижение аппетита, снижение массы тела, потерю массы тела, уменьшение жировой массы, уменьшение мышечной массы и подобные.
В настоящем документе, «эффективная дозировка», «эффективная доза», «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для воздействия на любой один или более полезных или желаемых результатов. Для профилактического использования, полезные или желаемые результаты включают устранение или снижение риска, уменьшение тяжести или отсрочку начала заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, проявляющиеся во время развития болезни. Для терапевтического использования, полезные или желаемые результаты включают обнаруживаемые клинические результаты, такие как снижение или понижение скорости потери массы тела или уменьшение одного или нескольких симптомов, возникающих в результате высокой экспрессии активного GDF15 (например, снижения потребления пищи, снижения аппетита, снижения массы тела, потери массы тела, уменьшения жировой массы и уменьшения мышечной массы), уменьшение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения заболевания, усиление эффекта другого лекарства и/или замедление прогрессирования заболевания у пациентов. Эффективная доза может вводиться за один или несколько введений. Для целей данного изобретения, эффективная дозировка лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для осуществления профилактического или терапевтического лечения прямо или косвенно. Как следует из клинического контекста, эффективная доза лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может или не может быть достигнута в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективная доза» может рассматриваться в контексте введения одного или нескольких терапевтических агентов, и единичный агент может считаться введенным в эффективном количестве, если в сочетании с одним или несколькими другими агентами может быть достигнут или достигается желаемый результат.
В некоторых вариантах осуществления, эффективная дозировка антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению основана на концентрации свободного GDF-15 в плазме у здоровых добровольцев и у пораженных пациентов. Общая эффективная доза зависит от начальной концентрации свободного GDF-15 в плазме у пораженного пациента. В одном варианте осуществления, эффективной дозировкой может быть доза, способная снижать или уменьшать уровни свободного GDF15 до такого же или более низкого среднего уровня, как измерен у здоровых добровольцев в течение всего периода дозирования в устойчивом состоянии. В другом варианте осуществления, эффективной дозировкой может быть дозировка, способная снижать или уменьшать уровни свободного GDF15 у пациента до менее чем 0,5 нг/мл в течение всего периода дозирования в устойчивом состоянии. В еще одном варианте осуществления, эффективной дозировкой может быть дозировка, вводимая субъекту массой 70 кг, которая может снизить или уменьшить уровень свободного GDF15 у субъекта до менее чем 0,5 нг/мл в течение всего периода дозирования в устойчивом состоянии.
«Человеком», «пациентом» или «субъектом» является млекопитающее, более предпочтительно, человек. Млекопитающие также включают, но не ограничиваются ими, сельскохозяйственных животных, спортивных животных, домашних животных, приматов, лошадей, собак, кошек, мышей и крыс. В некоторых вариантах осуществления, считается, что индивидуум подвержен риску заболевания, расстройства или состояния, опосредованного или связанного со связыванием GDF15 с его рецептором и опосредованной им передачей сигнала. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет кахексию, связанную с раком, химиотерапией, химиотерапией в сочетании с иммуноонкологической терапией, хронической сердечной недостаточностью, застойной сердечной недостаточностью, саркопенией, хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ), саркопенией и хроническим заболеванием почек (ХБП).
В некоторых вариантах осуществления, способ или применение включает введение начальной дозы от примерно 0,025 мг/кг до примерно 20 мг/кг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента или фармацевтической композиции по изобретению. За начальной дозой могут следовать одна или несколько последующих доз. В некоторых вариантах осуществления, одна или несколько последующих доз могут быть введены, по меньшей мере, еженедельно, каждую вторую неделю, каждые три недели, каждые четыре недели, каждые пять недель, каждые шесть недель, каждые семь недель, каждые восемь недель, каждые девять недель, каждые десять недель, каждые одиннадцать недель или каждые двенадцать недель.
В некоторых вариантах осуществления, способ или применение включает введение фиксированной дозы от примерно 0,25 мг до примерно 2000 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят еженедельно, каждые две недели, каждые три недели, каждые четыре недели, каждые пять недель, каждые шесть недель, каждые семь недель, каждые восемь недель, каждые девять недель, каждые десять недель. каждые одиннадцать недель или каждые двенадцать недель.
В других вариантах осуществления, способ или применение включает введение фиксированной дозы от примерно 0,1 до примерно 60 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению каждую неделю. В некоторых вариантах осуществления, фиксированная доза антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению составляет примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 7 мг, примерно 10 мг, примерно 12 мг, примерно 15 мг, примерно 25 мг, примерно 40 мг и примерно 50 мг еженедельно.
В некоторых вариантах осуществления, способ или применение включает введение фиксированной дозы от примерно 0,1 до примерно 130 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению через неделю. В некоторых вариантах осуществления, фиксированная доза антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению составляет примерно 5 мг, примерно 12 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 90 мг и примерно 125 мг каждые две недели.
В некоторых вариантах осуществления, способ или применение включает введение фиксированной дозы от примерно 0,1 до примерно 400 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению каждые четыре недели. В некоторых вариантах осуществления, фиксированная доза антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению составляет примерно 15 мг, примерно 40 мг, примерно 60 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 115 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг и примерно 385 мг каждые четыре недели.
Наборы
Изобретение также представляет наборы или готовое изделие, содержащее антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, по изобретению, и инструкции по применению. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления, представлен набор или готовое изделие, содержащее контейнер, композицию внутри контейнера, содержащую анти-GDF15 антитело, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела для лечения пациента, нуждающегося в этом.
В некоторых вариантах осуществления, набор может содержать первый контейнер, содержащий высушенный белок, и второй контейнер, содержащий водный состав. В некоторых вариантах осуществления включены наборы, содержащие одно- и многокамерные предварительно заполненные шприцы (например, шприцы с жидкостью и шприцы с лиофилизатом).
В одном варианте осуществления, в изобретении представлен набор для определения концентрации GDF15 в образце, при этом набор содержит меченый конкурент, содержащий GDF15, соединенный с определяемой меткой; антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с GDF15; аппликатор; и инструкции по их использованию.
В изобретении также представлен набор для конкурентного иммуноанализа для определения количества GDF15 в тестируемом образце, где конкурентный иммунологический анализ содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с GDF15; меченый конкурент, содержащий GDF15, конъюгированный с определяемой меткой; где меченый конкурент конкурирует с GDF15 в тестируемом образце за связывание с антителом и дополнительно, где метка обеспечивает сигнал, указывающий количество GDF15 в тестируемом образце. В типовом варианте осуществления, снижение метки, связанной с антителом в тестируемом образце, по сравнению с меткой, связанной антителом в идентичном в остальном образце, который не содержит GDF15, является показателем количества GDF15 в тестируемом образце.
В одном варианте осуществления, в изобретении представлен набор для определения концентрации GDF15 в образце, где набор содержит меченый конкурент, содержащий GDF15, соединенный с определяемой меткой; антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с GDF15; аппликатор; и инструкции по их использованию.
В альтернативном варианте осуществления, в изобретении представлен набор для идентификации пациента-человека с риском кахексии, содержащий специфическое антитело к GDF15 или его антигенсвязывающий фрагмент, аппликатор и инструкции по их использованию.
В некоторых вариантах осуществления, представляется набор или готовое изделие, содержащее первый контейнер, композицию внутри контейнера, содержащую анти-GDF15 антитело, второй контейнер, композицию внутри второго контейнера, содержащую антагонист связывания PD-1 оси, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела и антагониста связывания PD-1 оси для лечения пациента, нуждающегося в этом.
Изобретение включает набор или готовое изделие, содержащий первый контейнер, композицию внутри контейнера, содержащую синергетическое терапевтически эффективное количество анти-GDF15 антитела, второй контейнер, композицию внутри второго контейнера, содержащую терапевтически эффективное терапевтическое количество антагониста связывания PD-1 оси, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению синергетического терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела и антагониста связывания PD-1 оси для комбинированного лечения пациента, нуждающегося в этом.
В некоторых аспектах, антагонист связывания PD-1 оси выбран из группы, состоит из PD-1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, PD-L1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и PD-L2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых аспектах, PD-1 антитело выбрано из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, спартализумаба, тислелизумаба, пидилизумаба, AMP-224, AMP-514, цемиплимаба и PF-06801591 (сасанлимаба, RN888). В других аспектах PD-L1 антитело выбрано из группы, состоящей из, необязательно, авелумаба, атезолизумаба, дурвалумаба. В других аспектах, PD-L1 антителом не является авелумаб.
В других вариантах осуществления, представлен набор или готовое изделие, содержащее первый контейнер, композицию внутри контейнера, содержащую анти-GDF15 антитело, второй контейнер, композицию внутри второго контейнера, содержащую противораковый терапевтический агент, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению терапевтически эффективного количества анти-GDF15 антитела и противоракового терапевтического агента для лечения пациента, нуждающегося в этом. В некоторых аспектах, противораковым терапевтическим агентом является анти-CD40-антитело.
Изобретение включает набор или готовое изделие, содержащее первый контейнер, композицию внутри контейнера, содержащую синергетическое терапевтически эффективное количество анти-GDF15 антитела, второй контейнер, композицию внутри второго контейнера, содержащую терапевтически эффективное терапевтическое количество противоракового терапевтического агента, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению синергетического терапевтического эффективного количества анти-GDF15 антитела и противоракового терапевтического агента для комбинированного лечения пациента, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления, противораковым терапевтическим агентом является анти-CD40 антитело.
Инструкции, относящиеся к применению антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, обычно включают информацию о дозировке, схеме дозирования и способе введения для предполагаемого лечения. Контейнеры могут быть единичными дозами, объемными упаковками (например, многодозовыми упаковками) или субъединичными дозами. Инструкции, поставляемые в наборах по изобретению, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковку (например, листе бумаги, включенном в набор), но также приемлемы машиночитаемые инструкции (например, инструкции, хранящиеся на магнитном или оптическом диске).
Наборы по настоящему изобретению находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, помимо прочего, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, герметичные майларовые или пластиковые пакеты) и подобные. Также предусмотрены упаковки для использования в сочетании с конкретным устройством, таким как ингалятор, устройство для назального введения (например, распылитель) или устройство для инфузии, такое как мининасос. Набор может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон с пробкой, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). Контейнер может также иметь порт для стерильного доступа (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). Контейнер может дополнительно содержать второй фармацевтически активный агент.
Наборы могут дополнительно представлять дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Обычно набор включает контейнер и этикетку или вкладыш(и) на контейнере или связанные с ним.
Определения
«Примерно» или «приблизительно», если иное не определено в настоящем документе, когда используется в связи с измеримой числовой переменной, относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего) или в пределах 10 процентов от указанного значения, в зависимости от того, какое из значений больше. Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон.
Термин «идентичность», известный в данной области техники, относится к взаимосвязи между последовательностями двух или нескольких полипептидных молекул или двух или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, как определяется путем сравнения последовательностей. В данной области техники, «идентичность» также означает степень взаимосвязанности последовательностей между полипептидами или молекулами нуклеиновой кислоты последовательностей, в зависимости от обстоятельств, которая определяется соответствием между нитями нуклеотидов или аминокислотных последовательностей. «Идентичность» измеряет долю идентичных совпадений между двумя или более последовательностями с выравниванием гэпов, которые учитываются конкретной математической моделью компьютерных программ (то есть «алгоритмами»).
Термин «сходство» является родственным понятием, но, в отличие от «идентичности», относится к мере сходства, которая включает как идентичные совпадения, так и совпадения с консервативными замещениями. Поскольку консервативные замещения применимы к полипептидам, а не молекулам нуклеиновой кислоты, подобие касается только сравнений полипептидных последовательностей. Если две полипептидные последовательности имеют, например, 10 из 20 идентичных аминокислот, и все остальные являются неконсервативными замещениями, тогда доля идентичности и доля сходства обе будут равны 50%. Если в том же примере есть еще 5 позиций, где есть консервативные замещения, то доля идентичности останется 50%, но доля сходства будет 75% (15 из 20). Следовательно, в случаях, когда есть консервативные замещения, степень сходства между двумя полипептидными последовательностями будет выше, чем доля идентичности между этими двумя последовательностями.
Использование термина «или» в формуле изобретения используется для обозначения «и/или», если явно не указано, что он относится только к альтернативам или альтернативы являются взаимоисключающими, хотя описание поддерживает определение, которое относится только к альтернативам и «и/или». В настоящем документе спецификации «a» или «an» могут означать один или несколько, если явно не указано иное. В контексте настоящего документа в пунктах формулы изобретения, когда они используются вместе со словом «содержащий», слова «a» или «an» могут означать один или более одного. В настоящем документе «другой» может означать, по меньшей мере, второй или более. Если иное не определено в настоящем документе, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, имеют значения, которые обычно понимаются специалистами в данной области техники. Кроме того, если иное не требуется контекстом, термины в единственном числе должны включать множественное число, а термины во множественном числе должны включать единственное число. Слова «содержит/содержащий» и слова «имеющий/включающий», когда они используются в настоящем документе со ссылкой на настоящее изобретение, используются для указания наличия заявленных функций, целых чисел, стадий или компонентов, но не исключают наличие или добавление одной или несколько других функций, целых чисел, стадий, компонентов или их групп.
В настоящем документе, для описания количества карбоплатина, вводимого пациенту, термины «расчетная доза ППК 3», «расчетная доза ППК 4», «расчетная доза ППК 5», «расчетная доза ППК 6» и т. д. относится к количеству карбоплатина, рассчитанному в соответствии с уравнением Калверта на основе таргетной площади под кривой (ППК), равной 3, 4, 5 и 6 мг⋅мин/мл, соответственно, и скорости клубочковой фильтрации пациента (СКФ, мл/мин): доза карбоплатина (мг) = таргетная ППК (мг⋅мин/мл) x (СКФ +25), как описано в National Comprehensive Cancer Network (NCCN) Chemotherapy Order Templates Appendix B, с обновлениями от февраля 2018.
Используемый в настоящем документе термин «цитокин» в целом относится к белкам, высвобождаемым одной клеточной популяцией, которые действуют на другую клетку как межклеточные медиаторы или оказывают аутокринное действие на клетки, продуцирующие эти белки. Примеры таких цитокинов включают лимфокины, монокины; интерлейкины («IL»), такие как IL-1 , IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17A-F, IL-18 - IL-29 (такие как IL-23), IL-31, включая PROLEUKIN rIL-2; фактор некроза опухоли, такой как TNF-a или TNF-β, TGF-I-3; и другие полипептидные факторы, включающие фактор ингибирования лейкоза («LIF»), цилиарный нейротрофический фактор («CNTF»), CNTF-подобный цитокин («CLC»), кардиотрофин («CT») и kit лиганд («L»).
Используемый в настоящем документе термин «хемокин» относится к растворимым факторам (например, цитокинам), которые обладают способностью избирательно индуцировать хемотаксис и активацию лейкоцитов. Они также запускают процессы ангиогенеза, воспаления, заживления ран и туморогенеза. Примеры хемокинов включают IL-8, человеческий гомолог хемоаттрактанта кератиноцитов мыши (KC).
Термины «рак», «раковый» или «злокачественный» относятся или описывают физиологическое состояние млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, лейкоз, бластому и саркому. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, миелому, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, глиому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), множественную миелому, рак желудочно-кишечного тракта, рак почек, рак яичников, рак печени, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, колоректальный рак, рак эндометрия, рак почки, рак простаты, рак щитовидной железы, меланому, хондросаркому, нейробластому, рак поджелудочной железы, мультиформную глиобластому, рак шейки матки, рак мозга, рак желудка, рак мочевого пузыря, гепатому, рак груди, рак толстой кишки и рак головы и шеи. Другой конкретный пример рака включает почечно-клеточную карциному.
Термин «лечение», используемый в настоящем документе, если не указано иное, означает обращение, облегчение, ингибирование развития или предотвращение расстройства или состояния, к которому применяется такой термин, или одного или нескольких симптомов такого расстройства или состояния.
«Пациент», которого лечат в соответствии с настоящим изобретением, включает любое теплокровное животное, такое как, но не ограничиваясь ими, человек, обезьяна или другой примат низшего порядка, лошадь, собака, кролик, морская свинка или мышь. Например, пациентом является человек. Специалисты в области медицины легко могут идентифицировать отдельных пациентов, страдающих немелкоклеточным раком легкого и нуждающихся в лечении.
Термины «схема лечения», «протокол дозирования» и схема дозирования используются взаимозаменяемо для обозначения дозы и времени введения каждого терапевтического агента в комбинации по изобретению.
«Облегчение» означает уменьшение или улучшение одного или нескольких симптомов по сравнению с отсутствием лечения. «Облегчение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
«Опухоль», применительно к субъекту с диагнозом или подозрением на наличие рака, относится к злокачественному или потенциально злокачественному новообразованию или тканевой массе любого размера, и включает первичные опухоли и вторичные новообразования. Солидной опухолью является аномальный рост или масса ткани, которая обычно не содержит кист или жидких участков. Разные типы солидных опухолей названы по типу клеток, которые их образуют. Примерами солидных опухолей являются саркомы, карциномы и лимфомы. Лейкозы (рак крови) обычно не образуют солидных опухолей (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
«Опухолевая масса», также называемая «опухолевой нагрузкой», относится к общему количеству опухолевого материала, распределенного по всему телу. Под опухолевой массой понимается общее количество раковых клеток или общий размер опухоли(ей) по всему телу, включая лимфатические узлы и костный мозг. Массу опухоли можно определить различными способами, известными в данной области, например, путем измерения размеров опухоли(ей) при удалении у субъекта, например, с помощью штангенциркуля, или во время нахождения в теле с использованием методов визуализации, например, ультразвука, сканирования костей, компьютерной томографии (КТ) или магнитно-резонансной томографии (МРТ).
Термин «размер опухоли» относится к общему размеру опухоли, который можно измерить как длину и ширину опухоли. Размер опухоли может быть определен различными способами, известными в данной области, такими как, например, измерение размеров опухоли(ей) при удалении у субъекта, например, с помощью штангенциркуля, или во время нахождения в теле с использованием методов визуализации, например, сканирования костей, УЗИ, КТ или МРТ.
«Индивидуальный ответ» или «ответ» можно оценить с использованием любой конечной точки, указывающей на пользу для человека, включая, помимо прочего, (1) ингибирование, до некоторой степени, прогрессирования заболевания (например, прогрессирования рака), включая замедление или полную остановку; (2) уменьшение размера опухоли; (3) ингибирование (т.е. уменьшение, замедление или полное прекращение) инфильтрации раковых клеток в соседние периферические органы и/или ткани; (4) ингибирование (т. е. уменьшение, замедление или полное прекращение) метастазирования; (5) облегчение, до некоторой степени, одного или нескольких симптомов, связанных с заболеванием или расстройством (например, раком); (6) увеличение или расширение продолжительности выживаемости, включая общую выживаемость и выживаемость без прогрессирования; и/или (7) снижение смертности в определенный момент времени после лечения.
«Эффективный ответ» пациента или «отвечаемость» пациента на лечение лекарственным средством и подобные формулировки относятся к клинической или терапевтической пользе, придаваемой пациенту с риском или страдающим заболеванием или расстройством, таким как рак. В одном варианте осуществления, такое преимущество включает любое одно или несколько из: увеличения выживаемости (включая общую выживаемость и/или выживаемость без прогрессирования); получение объективного ответа (включая полный или частичный ответ); или улучшение признаков или симптомов рака.
«Объективный ответ» относится к измеримому ответу, включая полный ответ (CR) или частичный ответ (PR). В некоторых вариантах осуществления «частота объективного ответа (ORR)» относится к сумме частоты полного ответа (CR) и частоты частичного ответа (PR).
«Полный ответ» или «CR» в настоящем документе означает исчезновение всех признаков рака (например, исчезновение всех целевых поражений) в ответ на лечение. Это не всегда означает, что рак излечен.
Как используется в настоящем документе, «частичный ответ» или «PR» относится к уменьшению размера одной или нескольких опухолей или поражений или степени рака в организме в ответ на лечение. Например, в некоторых вариантах осуществления PR относится к, по меньшей мере, уменьшению на 30% суммы наибольших диаметров (SLD) целевых поражений, принимая в качестве эталона базовый SLD.
«Устойчивый ответ» относится к устойчивому эффекту снижения роста опухоли после прекращения лечения. Например, размер опухоли может быть того же размера или меньше по сравнению с размером в начале фазы введения лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления, устойчивый ответ имеет продолжительность, по меньшей мере, такую же, как продолжительность лечения, по меньшей мере, 1,5х, 2х, 2,5х, или 3х продолжительности лечения или больше.
Как используется в настоящем документе, «выживаемость без прогрессирования» (PFS) относится к промежутку времени во время и после лечения, в течение которого излечиваемое заболевание (например, рак) не ухудшается. Выживаемость без прогрессирования может включать количество времени, в течение которого пациенты испытывали полный или частичный ответ, а также количество времени, в течение которого пациенты переживали стабильное заболевание.
В некоторых вариантах осуществления противораковый эффект способа лечения рака, включая «объективный ответ», «полный ответ», «частичный ответ», «прогрессирующее заболевание», «стабильное заболевание», «выживаемость без прогрессирования», «продолжительность ответа», как они используются в настоящем документе, определены и оценены исследователями с использованием RECIST v1.1 (Eisenhauer et al, Eur J of Cancer 2009; 45(2):228-47) у пациентов с местнораспространенными или метастатическими солидными опухолями, отличными от метастатического CRPC, и RECIST v1.1 и PCWG3 (Scher et al, J Clin Oncol 2016 Apr 20; 34(12):1402-18) у пациентов с метастатическим CRPC. Описания Eisenhauer et al, Eur J of Cancer 2009; 45(2):228-47 и Scher et al, J Clin Oncol 2016 Apr 20; 34(12):1402-18 включены в настоящий документ в качестве ссылок полностью.
В некоторых вариантах осуществления, противораковый эффект лечения, включая «связанный с иммунитетом объективный ответ» (irOR), «связанный с иммунитетом полный ответ» (irCR), «иммунный частичный ответ» (irCR), «связанное с иммунитетом прогрессирующее заболевание» (irPD), «связанное с иммунитетом стабильное заболевание» (irSD), «связанная с иммунитетом выживаемость без прогрессирования» (irPFS), «продолжительность иммунного ответа» (irDR), как они используются в настоящем документе, соответствуют определению и оцениваются критериями связанного с иммунитетом ответа (irRECIST, Nishino et. al. J Immunother Cancer 2014; 2:17) для пациентов с местнораспространенными или метастатическими солидными опухолями, отличными от метастатического CRPC. Описание Nishino et. al. J Immunother Cancer 2014; 2:17 включено в настоящий документ в качестве ссылки полностью.
В настоящем документе «общая выживаемость» (OS) означает долю людей в группе, которые, вероятно, будут живы по прошествии определенного периода времени.
Под «продлением выживаемости» подразумевается продление общей выживаемости или выживаемости без прогрессирования у леченного пациента по сравнению с нелеченным пациентом (то есть по сравнению с пациентом, не леченным лекарственным средством).
В настоящем документе термины «токсичность, связанная с лекарственным средством», «реакции, связанные с инфузией» и «нежелательные явления, связанные с иммунитетом» («irAE»), и их тяжесть или степени приведены в качестве примеров и определены в National Cancer Institute’s Common Terminology Criteria for Adverse Events v 4,0 (NCI CTCAE v 4,0).
В настоящем документе «в комбинации с» или «в сочетании с» относится к применению одного метода лечения в дополнение к другому методу лечения. Таким образом, «в комбинации с» или «в сочетании с» относится к введению индивиду одного лечебного средства до, во время или после введения другого лечебного средства.
«Количество низкой дозы», используемое в настоящем документе, относится к количеству или дозе вещества, агента, соединения или композиции, которое ниже, чем количество или доза, обычно используемые в клинических условиях.
Термин «распространенный», используемый в настоящем документе в отношении солидных опухолей, включает местнораспространенное (неметастатическое) заболевание и метастатическое заболевание. Местнораспространенные солидные опухоли, которые можно лечить или не лечить с радикальным излечением, и метастатическое заболевание, которое нельзя лечить с радикальным излечением, включены в объем «распространенных солидных опухолей», как используется в настоящем изобретении. Специалист в данной области техники сможет распознать и диагностировать распространенные солидные опухоли у пациента.
«Продолжительность ответа» для целей настоящего изобретения означает время от документирования ингибирования роста модели опухоли благодаря лечению лекарственным средством до момента достижения восстановленной скорости роста, аналогичной скорости роста до лечения.
Термин «аддитивный» используется для обозначения того, что результат комбинации двух соединений, компонентов или таргетных агентов не превышает сумму каждого соединения, компонента или таргетного агента по отдельности. Термин «аддитивный» означает, что нет улучшения в болезненном состоянии или расстройстве, которое лечат, при применении каждого соединения, компонента или целевого агента индивидуально.
in vitro
in vivo
in vitro
in vivo
Термины «синергия» или «синергетический» используются для обозначения того, что эффект комбинации двух соединений, компонентов или таргетных агентов больше, чем сумма эффекта, оказываемого каждым агентом в отдельности. Термины «синергия» или «синергетический» означают, что наблюдается улучшение болезненного состояния или расстройства, которое лечат, по сравнению с отдельным применением каждого соединения, компонента или таргетного агента по отдельности. Это улучшение болезненного состояния или расстройства, которое лечат, является «синергическим эффектом» или «синергическим терапевтическим эффектом». «Синергетическое количество», «синергетически эффективное количество» или «синергетическое терапевтически эффективное количество» представляет собой количество соединения, компонента или таргетного агента при введении в комбинации, которое приводит к синергетическому эффекту, как «синергетический» определен в настоящем документе. Определяя синергетическое взаимодействие между двумя или более компонентами, оптимальный диапазон для эффекта и диапазоны абсолютных доз каждого компонента для эффекта могут быть окончательно измерены путем введения компонентов в различных диапазонах соотношения масс./масс. (масса на массу) и доз пациентам, нуждающимся в лечении. Тем не менее, наблюдение синергии в моделях  или моделях  может быть прогностическим для эффекта у людей и других видов, и существуют модели  или модели , как описано в настоящем документе, для измерения синергетического эффекта, и результаты такие исследования также можно использовать для прогнозирования диапазонов эффективных доз и соотношений концентраций в плазме и абсолютных доз и концентраций в плазме, необходимых для людей и других видов, путем применения фармакокинетических/фармакодинамических методов.
Эквиваленты
Вышеприведенное описание и следующие примеры подробно описывают определенные конкретные варианты осуществления описания и описывают лучший режим, предусмотренный изобретателями. Однако следует принимать во внимание, что независимо от того, насколько подробно вышеизложенное может появиться в тексте, раскрытие может быть осуществлено на практике многими способами, и раскрытие следует толковать в соответствии с прилагаемой формулой изобретения и любыми ее эквивалентами.
Хотя раскрытые идеи были описаны со ссылкой на различные применения, способы, наборы и композиции, следует понимать, что различные изменения и модификации могут быть сделаны без отступления от идей в настоящем документе и заявленного в формуле изобретения. Следующие ниже примеры представлены для лучшей иллюстрации раскрытых идей и не предназначены для ограничения объема идей, представленных в настоящем документе. Хотя настоящие идеи были описаны в терминах этих примерных вариантов осуществления, специалист в данной области техники легко поймет, что многочисленные вариации и модификации этих примерных вариантов осуществления возможны без излишнего экспериментирования. Все такие вариации и модификации находятся в пределах объема настоящих идей.
Все ссылки, процитированные в настоящем документе, включая патенты, заявки на патенты, статьи, учебники и подобные, а также ссылки, процитированные в настоящем документе, в той степени, в которой они еще не указаны, включены сюда в качестве ссылки полностью. В случае если один или несколько включенных литературных и подобных материалов отличаются от данной заявки или противоречат ей, включая, помимо прочего, определенные термины, использование терминов, описанные методы и подобные, настоящая заявка является определяющей.
Общие методики
Следует понимать, что это изобретение не ограничивается конкретными синтетическими способами получения, которые, конечно, могут варьироваться. Если иное не определено в настоящем документе, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, имеют значения, которые обычно понимаются специалистами в данной области техники. Кроме того, если иное не требуется контекстом, термины в единственном числе должны включать множественное число, а термины во множественном числе должны включать единственное число. Как правило, номенклатуры, используемые в связи с методами, клеточными и тканевыми культурами, молекулярной биологией, иммунологией, микробиологией, генетикой, химией белков и нуклеиновых кислот и гибридизацией, описанными в настоящем документе, являются хорошо известными и обычно используемыми в данной области.
Практика настоящего изобретения будет использовать, если не указано иное, обычные методы молекулярной биологии (включая рекомбинантные методы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах компетенции специалистов в данной области. Такие методы полностью описаны в литературе, например, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather и P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths и D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002); Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).
Ферментативные реакции и методы очистки выполняются в соответствии со спецификациями производителя, как это обычно делается в данной области техники, или как описано в настоящем документе. Номенклатуры, используемые в связи с лабораторными процедурами и методами аналитической химии, биохимии, иммунологии, молекулярной биологии, синтетической органической химии, медицинской и фармацевтической химии, описанной в настоящем документе, хорошо известны и широко используются в данной области. Стандартные методы используются для химического синтеза, химического анализа, фармацевтического приготовления, составления и доставки и лечения пациентов.
Биологические депозиты
Типовые материалы настоящего изобретения депонированы в American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, USA, 4 апреля 2018. Вектор GDF15_001-VH, имеющий № доступа ATCC PTA-125038, содержит плазмиду, содержащую ДНК вставку, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела GDF15_001, и вектор GDF15_001-VL, имеющий № доступа PTA-125039, содержит плазмиду, содержащую ДНК вставку, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела GDF15_001. Депозиты были внесены в соответствии с положениями Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and Regulations (Budapest Treaty). Это обеспечивает сохранение жизнеспособной культуры депозита в течение 30 лет с даты депозита. Депозит будет предоставлен ATCC в соответствии с условиями Budapest Treaty и при условии соглашения между Pfizer Inc. и ATCC, которое гарантирует постоянную и неограниченную доступность потомства культуры депозита для общественности после выдачи соответствующего патента США или при опубликовании любой заявки на патент США или иностранного государства, в зависимости от того, что наступит раньше, и обеспечивает доступность потомства для одного, определенного U.S. Commissioner of Patents и Trademarks, имеющим право на него в соответствии с 35 USC Раздел 122 и правилами Уполномоченного в соответствии с ним (включая раздел 1.14 37 C.F.R. с конкретной ссылкой на 886 OG 638).
Патентообладатель настоящей заявки согласился с тем, что если культура материалов на депозите погибнет, будет потеряна или уничтожена при культивировании в подходящих условиях, материалы будут незамедлительно заменены при получении уведомления другими такими же. Доступность депонированных материалов не должна толковаться как лицензия на практическое использование изобретения в нарушение прав, предоставленных любым правительством в соответствии с его патентным законодательством.
Примеры
Пример 1: Анти-GDF15 антитела
Панель антител (см. таблицы 2 и 5 и фигуру 29) создают и сравнивают по ряду анализов связывания и биофизических анализов.
Анти-GDF15 антитела настоящего изобретения анализируют на основе их аминокислотных последовательностей и присутствия «горячих точек» в областях CDR (например, потенциальных сайтов гликозилирования, окисления и химического разложения). Анализ последовательностей горячих точек анти-GDF15 антител представлены в таблице 5 ниже. GDF15_005, GDF15_006, GDF15_007, GDF15_008, GDF15_009 и GDF15_200 демонстрируют присутствие N-связанных сайтов гликозилирования в CDR области и не выбираются для дальнейшего исследования.
<b>Таблица 5.</b> Анализ последовательности анти-GDF15 антител
Антитело
HCDR1
HCDR2
HCDR3
LCDR1
LCDR2
LCDR3
GDF15_001
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
GINPIFGTAFYNQKFQG(SEQ ID NO:165)
EAITTVGAMDH(SEQ ID NO:52)
RTSQSVHNYLA(SEQ ID NO:95)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFWSWPWT(SEQ ID NO:9)
GDF15-002
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
GINPIFGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:126)
EAITTVGAMDP(SEQ ID NO:160)
RASQNVHNYLA(SEQ ID NO:157)
DASNRAD(SEQ ID NO:114)
QQFWSWPWT(SEQ ID NO:9)
GDF15-003
GYTFTSYNID(SEQ ID NO:153)
QINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:33)
EQITTVGAMDY(SEQ ID NO:154)
RASQSLSSYLA(SEQ ID NO:150)
DAKNRAD(SEQ ID NO:108)
QQFSSDPYT(SEQ ID NO:38)
GDF15-004
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
QINPNNGLANYAQKFQG(SEQ ID NO:146)
EAITTIGAMDY(SEQ ID NO:147)
RTSESVHSYLA(SEQ ID NO:88)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFWSDPYT(SEQ ID NO:48)
GDF15-005
GYTFSDYNMD(SEQ ID NO:58)
GINPNNGTAFYAQKFQG(SEQ ID NO:141)
EAITTVGAMDQ(SEQ ID NO:119)
RTSESVSSYLA(SEQ ID NO: 138)
DAKTRAD(SEQ ID NO:37)
QQFWSWPWT(SEQ ID NO:9)
GDF15-006
GYTFTDYNIS(SEQ ID NO:133)
QINPNNGLAFYAQKFQG(SEQ ID NO:134)
EFITTVGAMDY(SEQ ID NO:135)
RTSQSVSNYLA(SEQ ID NO:129)
DAKNRAT(SEQ ID NO:130)
QQFWNDPWT(SEQ ID NO:102)
GDF15-007
GYTFSDYNIS(SEQ ID NO:125)
GINPIFGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:126)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSENVHSYLA(SEQ ID NO: 46)
DASTLAT(SEQ ID NO:122)
QQFWSWPWT(SEQ ID NO:9)
GDF15-008
GYTFTSYNIS(SEQ ID NO:117)
QINPNNGLIFFAQKFQG(SEQ ID NO:118)
EAITTVGAMDQ(SEQ ID NO:119)
RTSQNVHSYLA(SEQ ID NO:27)
DASNRAD(SEQ ID NO:114)
QQFWNDPYT(SEQ ID NO:63)
GDF15-009
GYTFSSYNIS(SEQ ID NO:17)
QINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:33)
EAITTVGAMEY(SEQ ID NO:111)
RTSQNVHSYLA(SEQ ID NO:27)
DAKNRAD(SEQ ID NO:108)
QQFWSDPYT(SEQ ID NO:48)
GDF15-010
GYTFSDYNID(SEQ ID NO:41)
GINPNNGLAFFNQKFQG(SEQ ID NO:105)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSQSLHSYLA(SEQ ID NO:101)
DASNRAT(SEQ ID NO:8)
QQFWNDPWT(SEQ ID NO:102)
GDF15-012
GYTFSDYNMD(SEQ ID NO:58)
QINPIFGLAFYAQKFQG(SEQ ID NO:98)
EVITTVGAMDY(SEQ ID NO:43)
RTSQSVHNYLA(SEQ ID NO:95)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFSSDPYT(SEQ ID NO:38)
GDF15-013
GYTFSDYNMD(SEQ ID NO:58)
GINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:92)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSESVHSYLA(SEQ ID NO:88)
DASNRAT(SEQ ID NO:8)
QQFWNWPWT(SEQ ID NO:89)
GDF15-014
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
QINPINGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:85)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSQNVHNYLA(SEQ ID NO:82)
DASNRAT(SEQ ID NO:8)
QQFWSDPYT(SEQ ID NO:48)
GDF15-015
GYTFSDYNMD(SEQ ID NO:58)
QINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:33)
EAITTVGATDY(SEQ ID NO:79)
RTSQNVHSYLA(SEQ ID NO: 27)
DASNLAD(SEQ ID NO:47)
QQFSNDPWT(SEQ ID NO:76)
GDF15-017
GYTFTDYNID(SEQ ID NO:66)
QINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:33)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSQSVHSYLA(SEQ ID NO:36)
DAKTRAT(SEQ ID NO:70)
QQFSSDPYT(SEQ ID NO:38)
GDF15-018
GYTFTDYNID(SEQ ID NO:66)
QINPNNGLIFYNQKFQG(SEQ ID NO:67)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO: 19)
RASQNVHSYLA(SEQ ID NO: 62)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFWNDPYT(SEQ ID NO:63)
GDF15-020
GYTFSDYNMD(SEQ ID NO:58)
QINPNNGLANYNQKFQG(SEQ ID NO:59)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO: 19)
RASQNLHSYLA(SEQ ID NO: 55)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFWSDPYT(SEQ ID NO:48)
GDF15-021
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
GINPINGLIFFNQKFQG(SEQ ID NO:51)
EAITTVGAMDH(SEQ ID NO: 52)
RTSENVHSYLA(SEQ ID NO: 46)
DASNLAD(SEQ ID NO:47)
QQFWSDPYT(SEQ ID NO:48)
GDF15-022
GYTFSDYNID(SEQ ID NO:41)
QINPNNGLIFFNQKFQG(SEQ ID NO:42)
EVITTVGAMDY(SEQ ID NO:43)
RTSQSVHSYLA(SEQ ID NO: 36)
DAKTRAD(SEQ ID NO:37)
QQFSSDPYT(SEQ ID NO:38)
GDF15-100
GYTFSSYNID(SEQ ID NO:32)
QINPNNGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:33)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RTSQNVHSYLA(SEQ ID NO:27)
DASTRAD(SEQ ID NO:28)
QQFWSDPWT(SEQ ID NO:29)
GDF15-200
GYTFSSYNIS(SEQ ID NO:17)
GINPINGLAFYNQKFQG(SEQ ID NO:18)
EAITTVGAMDY(SEQ ID NO:19)
RASQSVHSYLA(SEQ ID NO:7)
DASNRAT(SEQ ID NO:8)
QQFWSWPWT(SEQ ID NO:9)
Потенциальные сайты подверженности последовательностей (например деамидирования: NG, изомеризации: DG, расщепления: DP) также подчеркнуты.
Пример 2: Свойства связывания анти-GDF15 Антител: активность связывания с GDF15 человека, яванского макака и мыши по SPR
Аффинность связывания антитела GDF15_001 (содержащего VH содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166 и VL содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163) с GDF15 человека, яванского макака и мыши определяют с применением инструмента BIAcore T200 (GE Healthcare) при 37°C со скоростью сбора 10 Гц. Мышиное Fc-GDF15 человека (Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15; SEQ ID NO:2), мышиное Fc-мыши GDF15 (Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15; SEQ ID NO:5) и мышиное Fc-яванского макака GDF15 (Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15; SEQ ID NO:4) захватывают на поверхности три разных проточные ячейки сенсорного чипа CM4 (каталожный № BR100534, GE Healthcare) с применением Mouse Antibody Capture Kit (BR100838, GE Healthcare) согласно протоколу производителя. Подвижный и буфер для образца представляет собой 10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15 M NaCl, 3 мМ ЭДТК, 0,05% P-20 (HBS-EP+). Конечные уровни захвата Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 и Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 были 40 резонансных единиц (РЕ), 32 РЕ и 25 РЕ, соответственно. Проточную ячейку 1 применяют как эталонную проточную ячейку. Двукратное серийное разведение GDF15_001 с концентрациями от 10 нМ до 0,625 нМ впрыскивают над сенсорной поверхностью в течение 120 секунд. Диссоциацию отслеживают в течение 2,8 часа, и поверхность регенерируют 10 мМ глицина pH 1,7. Аффинность связывания и константы скорости определяют для GDF15 мыши и яванского макака подгонкой полученных данных сенсограммы к 1:1 модели Langmuir в программе BIAcore T200 Evaluation, версия 2,0 (GE Healthcare). Значения аффинности определяют как показано в таблице 6 ниже.
Аффинность связывания нескольких клонов GDF15 связывающих антител к мышиному Fc-GDF15 человека также определяют с применением методики, описанной в настоящем документе в примере 2, и как показано в таблице 6 ниже. Все клоны, тестированные в двухвалентном формате, показывают кажущееся значение KD ниже 150 пМ, позволяя предположить, что они являются сильными связующими агентами для GDF15 человека. Дополнительно, связывание клона GDF15_001 с GDF15 яванского макака и мыши измеряют с применением указанного выше анализа BIAcore (таблица 7). Клон GDF15_001 демонстрирует сильное связывание с GDF-15 яванского макака (кажущаяся KD 8,28 пМ) и сохраняет связывание с GDF15 мыши (кажущаяся KD 142,3 пМ), делая клон GDF15_001 подходящим для предклинических исследований на обоих видах.
<b>Таблица 6. </b>Кинетические данные BIAcore для клонов антитела, связывающегося с GDF15 человека
Лиганд
Аналит
Ka (1/Мс)
Kd (1/с)
T1/2 мин
Rmax (РЕ)
%Chi2/ Rmax
Кажущаяся KD (пМ)
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_001
1,69E+06
9,22E-06
1252,8
23,2
1,2
<10
GDF15_001
2,03E+06
6,25E-06
1848
70,6
1
<10
GDF15_001
2,18E+06
4,78E-06
2417,3
64,8
0,05
<10
Ср
1,97E+06
6,75E-06
<10
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_003
2,64E+06
7,22E-05
160,04
23,91
0,133
27,4
GDF15_003
3,43E+06
9,19E-05
125,73
17,73
2,51
26,8
Ср
3,03E+06
8,20E-05
27,1 ± 0,3
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_004
2,22E+06
7,14E-05
161,86
45,77
0,291
32,2
1,96E+06
8,20E-05
140,85
37,03
0,51
41,9
Ср
2,09E+06
7,67E-05
37 ± 4,8
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_010
1,31E+06
1,47E-05
783,58
34,1
1,302
11,3
GDF15_010
8,85E+05
1,78E-05
649,24
33,33
1,287
20,1
Ср
1,10E+06
1,63E-05
15,7 ± 4,4
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_013
2,42E+06
6,66E-05
173,35
33,56
1,54
27,5
GDF15_013
7,30E+06
7,51E-05
153,88
25,04
0,57
10,3
Ср
4,86E+06
7,08E-05
18,0 ± 8,6
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_014
1,88E+06
1,79E-05
644,89
29,2
0,13
<10
GDF15_014
1,90E+06
1,48E-05
779,88
23,53
0,13
<10
Ср
1,89E+06
1,64E-05
<10
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_015
1,67E+06
9,93E-05
116,28
23,28
0,42
59,4
GDF15_015
1,81E+06
1,04E-04
111,59
17,68
0,49
57,3
Ср
1,74E+06
1,01E-04
58,4 ± 1,1
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_017
3,24E+06
8,66E-05
133,39
26,35
0,12
26,7
GDF15_017
1,90E+06
8,18E-015
141,22
23,1
0,16
43
Ср
2,57E+06
8,42E-05
34,9 ± 8,2
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_020
9,72E+05
9,46E-05
122,08
22,23
0,1
97,4
GDF15_020
6,86E+05
1,13E-04
102,3
21,57
0,17
165
Ср
8,29E+05
1,04E-04
131,2 ± 33,8
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_021
2,05E+06
2,91E-04
39,64
28,58
0,36
142
GDF15_021
2,14E+06
3,52E-04
32,84
22,75
0,27
165
Ср
2,09E+06
3,22E-04
153,5 ± 11,5
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_022
1,34E+06
1,77E-05
654,39
30,58
0,26
13,2
GDF15_022
8,13E+05
1,45E-05
795,45
38,96
0,33
17,9
Ср
1,08E+06
1,61E-05
15,6 ± 2,4
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_0297
5,54E+06
1,09E-05
1060,61
52,25
0,36
<10
GDF15_0297
5,50E+06
1,29E-05
894,66
53,67
0,39
<10
Ср
5,52E+06
1,19E-05
<10
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_0301
3,36E+06
1,04E-06
11105,77
58,42
1,16
<10
GDF15_0301
5,58E+06
7,08E-06
1632,05
46,84
0,29
<10
GDF15_0301
5,22E+06
1,28E-05
903,76
46,75
0,30
<10
Ср
4,72E+06
6,97E-06
<10
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_0470
1,20E+07
5,21E-05
221,86
43,46
0,17
<10
GDF15_0470
1,30E+07
4,30E-05
268,36
39,94
0,22
<10
Ср
1,25E+07
4,76E-05
<10
<b>Таблица 7.</b> Кинетические данные BIAcore GDF15_001 с GDF15 человека, мыши и яванского макака
Лиганд
Аналит
Ka (1/Мс)
Kd (1/с)
T1/2 мин
Rmax (РЕ)
%Chi2/ Rmax
Кажущаяся KD (пМ)
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
GDF15_001
1,69E+06
9,22E-06
1252,8
23,2
1,2
<10
GDF15_001
2,03E+06
6,25E-06
1848
70,6
1
<10
GDF15_001
2,18E+06
4,78E-06
2417,3
64,8
0,05
<10
Ср
1,97E+06
6,75E-06
<10
Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15
GDF15_001
2,55E+06
2,92E-04
39,6
86,7
1,5
114,0
GDF15_001
2,46E+06
4,31E-04
26,8
58,9
1,1
175,0
GDF15_001
2,51E+06
3,47E-04
33,3
54,0
1,5
138,0
Ср
2,51E+06
3,56E-04
142,3 ± 30,7
Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15
GDF15_001
1,47E+06
1,30E-05
886,4
96,0
0,89
8,86
GDF15_001
1,85E+06
1,24E-05
928,5
49,6
0,28
6,71
GDF15_001
1,12E+06
1,03E-05
1119,2
76,50
0,07
9,26
Ср
1,48E+06
1,19E-05
8,28 ± 1,37
Пример 3: Свойства связывания анти-GDF15 антител: активность связывания мономерного анти-GDF15 антитела с GDF15 человека, яванского макака и мыши по SPR
Для понимания значения KD, без эффекта авидности, связывание GDF15_001 с GDF15, мономерным Fc-Fab получают и тестируют в том же анализе, который применяли в примере 2. Аффинность связывания мономерного GDF15_001 с GDF15 человека, яванского макака и мыши определяют с применением инструмента BIAcore T200 (GE Healthcare) при 37°C со скоростью сбора 10 Гц. Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 и Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 захватывают на поверхности три разных проточные ячейки сенсорного чипа CM4 (каталожный № BR100534, GE Healthcare) с применением Mouse Antibody Capture Kit (BR100838, GE Healthcare) согласно протоколу производителя. Подвижный и буфер для образца представляет собой 10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15 M NaCl, 3 мМ ЭДТК, 0,05% P-20 (HBS-EP+). Конечные уровни захвата Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 и Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 были 19 резонансных единиц (РЕ), 22 РЕ и 19 РЕ, соответственно. Проточную ячейку 1 применяют как эталонную проточную ячейку. Двукратное серийное разведение GDF15_001 с концентрациями от 10 нМ до 1,25 нМ впрыскивают над сенсорной поверхностью в течение 120 секунд. Диссоциацию отслеживают в течение 1200 секунд, и поверхность регенерируют 10 мМ глицина pH 1,7. Аффинность связывания и константы скорости определяют подгонкой полученных данных сенсограммы к 1:1 модели Langmuir в программе BIAcore T200 Evaluation, версия 2,0 (GE Healthcare). Мономерный клон GDF15_001 демонстрирует сильное связывание с GDF15 человека (KD 21,3 пМ) и яванского макака (KD 62,0 пМ), при более слабом связывании с GDF15 мыши (KD 1965,0 пМ), как показано в таблице 8 ниже.
<b>Таблица 8.</b> Кинетические данные BIAcore мономерного GDF15_001 с GDF15 человека, мыши и яванского макака
Лиганд
Аналит
Ka (1/Мс)
Kd (1/с)
T1/2 мин
Rmax (РЕ)
%Chi2/ Rmax
Кажущаяся KD (пМ)
Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15
CH23LS-GDF15_001
1,52E+06
2,25E-05
512,65
29,94
0,655
14,9
CH23LS-GDF15_001
1,66E+06
4,58E-05
252,24
24,61
1,601
27,6
Ср
1,59E+06
3,42E-05
21,3 ± 6,4
Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15
CH23LS-GDF15_001
1,62E+06
3,41E-03
3,39
32,44
0,364
2110
CH23LS-GDF15_001
1,70E+06
3,10E-03
3,73
26,86
0,521
1820
Ср
1,66E+06
3,26E-03
1965,0 ± 145,0
Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15
GDF15_001
1,63E+06
7,48E-05
154,33
29,65
0,661
45,8
GDF15_001
1,20E+06
9,39E-05
123,07
30,11
0,661
78,2
Ср
1,42E+06
8,43E-05
62,0 ± 16,2
Пример 4: Свойства связывания анти-GDF15 антитела: специфичность связывания GDF15_001 с GDF15 человека
Для оценки специфичности связывания GDF15_001to GDF15 человека, тестируют GDF15_001, связывающийся с дополнительными членами семейства TGFβ. Анализ проводят на инструменте Octet Red.
OctetRED 384 (ForteBio, Menlo Park, CA) применяют для оценки нецелевого связывания мономерного GDF15_001(CH23LS-GBT-GDF15_001) с десятью членами семейства TGFβ, включая GDNF человека (R&D, 212-GD/CF), Ингибин A человека (R&D, 8506-AB/CF), Активин B человека (R&D, 659-AB/CF) TGFβ-1 человека (R&D, 240-B/CF) BMP2 человека (R&D, 355-BM/CF), BMP3b человека (R&D, 1543-BP/CF), BMP6 человека (R&D, 507-BP/CF), BMP9 человека (R&D, 3209-BP/CF), BMP11 человека (R&D, 1958-CD/CF), GDF8 человека (Pfizer, 41075-201) и контрольный GDF15 человека (Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15). Члены семейства TGFβ разводят до 10 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, pH 4,5, и амин сочетают в AR2G биосенсоры (каталожный № 18-5092, ForteBio) согласно инструкциям производителя. Мономерный GDF15_001 разводят до 200 нМ в кинетическом буфере (каталожный № 18-5032 ForteBio). Анализы на Octet проводят при комнатной температуре при времени ассоциации 300 секунд и времени диссоциации 180 секунд. Данные дважды представляют (Myszka, D., J. Mol. Recognit 1999; 279-284) и анализируют с применением программы Octet Data Analysis, версия 8.1 (ForteBio).
GDF15_001 связывается с GDF15 как ожидается. Связывание с другими членами семейства TGFβ (GDF-11, BMP-9, GDF-8, BMP-2, BMP-6, TGFβ-1, активин-B, ингибин-A) не определили при 200 нМ мономерного клона GDF15_001, что демонстрирует высокую специфичность GDF15_001, которое не связывается с такими другими родственными членами семейства. Высокая специфичность GDF15_001 минимизирует риск нецелевого связывания и показывает, что GDF15_001 является потенциальным новым полезным терапевтическим агентом для человека.
Пример 5: анти-GDF15 антитела предотвращают связывание GDF15 с GFRAL
Способность GDF15_001 предотвращать связывание GDF15 человека с внеклеточным доменом GFRAL оценивают в конкурентном анализе. Анализ проводят с применением инструмента BIAcore T200 (GE Healthcare, Chicago, IL).
GDF15_001 титруют в 10 нМ GDF-15 человека в концентрациях, варьирующихся от 10 нМ до 2,5 нМ. Смеси GDF-15, GDF15_001 и контролей впрыскивают над внеклеточным доменом GFRAL человека, который непосредственно иммобилизован на CM4 сенсорном чипе. Наблюдают зависимое от концентрации ингибирование связывания GDF15 человека с GFRAL. Связывание GDF15 человека с GFRAL ECD человека было полностью блокировано 7,5 нМ GDF15_001.
Эти данные демонстрируют, что GDF15_001 блокирует взаимодействие между GDF15 человека и его когнатным рецептором, GFRAL, и поэтому может вмешиваться в подачу сигналов GFRAL. Это также демонстрирует, что GDF15_001 может быть новым, потенциально полезным терапевтическим агентом для снижения активности, опосредованной связыванием GDF15 с GFRAL.
Пример 6: Биофизические свойства анти-GDF15 антитела: термоустойчивость
2
4
2
4
Термоустойчивость анти-GDF15 антитела оценивают дифференциальной сканирующей калориметрией (ДСК). Белки разводят в физиологическом растворе с фосфатным буфером (ФРФБ) до 0,3 мг/мл в объеме 400 мкл. ФРФБ используют в качестве пустого буфера в ссылочной ячейке. ФРФБ содержит 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 8,1 мМ NaHPO и 1,47 мМ KHPO, pH 7,2. Образцы распределяют в лотке для исследуемых образцов MicroCal VP-Capillary DSC с автоматическим дозатором (Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK). Образцы уравновешивают в течение 5 минут при 10°C и затем сканируют вплоть до 110°C со скоростью 100°C в час. Выбирают период фильтрации 16 секунд. Необработанные данные корректируют по исходному уровню, и концентрацию белка нормализуют. Origin Software 7,0 (OriginLab Corporation, Northampton, MA) применяют для подгонки данных к модели MN2-State Model с подходящим количеством переходов.
m
H
m
m
H
m
Температуры перехода показаны на фигурах 1A, 1B и 1C и перечислены в таблице 9. T1 представляет температуру, при которой C2 антитела на 50% разворачивается. T2 представляет температуру, при которой Fab антитела на 50% разворачивается. T3 представляет температуру, при которой C3 антитело на 50% разворачивается. Все клоны с температурой плавления (T1) более 65°C обозначают как стабильные клоны, которые буду стабильны во время производства и хранения.
<b>Таблица 9.</b> Температуры перехода анти-GDF15 антител
Клон
T<sub>m</sub>1 (°C)
T<sub>m</sub>2 (°C)
T<sub>m</sub>3 (°C)
GDF15_001
71,67 ± 0,08
84,30 ± 0,25
88,00 ± 0,04
GDF15_002
71,81 ± 0,06
80,51 ± 1,10
82,51 ± 0,21
GDF15_003
71,67 ± 0,10
83,69 ± 0,37
86,66 ± 0,12
GDF15_004
71,57 ± 0,11
84,94 ± 0,29
88,50 ± 0,07
GDF15_005
71,37 ± 0,14
83,30 ± 0,67
85,79 ± 0,18
GDF15_006
71,40 ± 0,09
84,45 ± 0,26
87,92 ± 0,11
GDF15_007
71,41 ± 0,11
85,14 ± 0,23
89,72 ± 0,07
GDF15_008
71,70 ± 0,14
83,05 ± 0,76
85,33 ± 0,24
GDF15_009
71,35 ± 0,15
85,42 ± 0,31
89,88 ± 0,09
GDF15_010
72,14 ± 0,20
81,18 ± 0,64
84,13 ± 0,19
GDF15_100
71,33 ± 0,17
85,45 ± 0,28
90,02 ± 0,07
GDF15_0297
73,01±0,20
74,45±0,07
80,80±0,07
GDF15_0301
76,14±0,06
77,20±0,04
78,82±0,05
Пример 7: Биофизические свойства анти-GDF15 антител: эксклюзионная хроматография
Клоны антитела анализируют аналитической эксклюзионной хроматографией (aSEC). Белки разводят в физиологическом растворе с фосфатным буфером (ФРФБ) до 1,0 мг/мл и анализируют aSEC на колонке YMC-Pack Diol-200, 300×8 мм с изократным подвижным буфером, содержащим 20 мМ фосфатом натрия pH 7,2, 400 мМ NaCl. Нативные SEC применяют для определения относительных количеств высокомолекулярной массы (агрегатов) и мономерного интактного антитела. Долю агрегатов рассчитывают как площадь пика высокомолекулярной массы, деленную на общую (агрегат и мономер) площадь пика, умноженную на 100. Время удержания в минутах записывают и сравнивают с аналитическим контролем. Клоны антитела с нормальным временем удержания и формой пика из анализа aSEC могут предположить минимальные взаимодействия со смолой неподвижной фазы и оптимальную гидрофобность, которые являются полезными характеристиками и показывают, что антитело может быть потенциальным полезным терапевтическим агентом.
Время удержания для каждого тестированного клона антитела показано в таблице 10. GDF15_002 показывает отложенное время удержания и широкую форму пика и поэтому далее не исследуется.
<b>Таблица 10.</b> Время удержания по aSEC для анти-GDF15 антител
Антитело
Время удержания по aSEC (мин)
контрольное mAb
10,40
GDF15_001
10,79
GDF15_002
11,69
GDF15_003
10,22
GDF15_004
10,24
GDF15_005
9,74
GDF15_100
10,30
GDF15_0297
9,96
GDF15_0301
9,91
Пример 8: Биофизические свойства анти-GDF15 антител: стабильность при низком pH
После очистки антител захватом Белка А и элюирования в условиях низкого pH, клоны анти-GDF15 антитела тестируют на стабильность хранения при низком pH. Антитело при 1,0 мг/мл в ФРФБ, pH 7,2 подкисляют глицином pH 3,4 и инкубируют при 25°C в течение 5 часов, затем нейтрализуют Tris Base и прогоняют на aSEC для определения количества высокомолекулярных видов (HMMS) и низкомолекулярных видов (LMMS), таблица 11. Все тестированные клоны показали приемлемое количество повышения HMMS (<5%) после воздействия низкого pH. Это показывает, что анти-GDF15 антитела остаются стабильными во время процессов очистки и могут потенциально применяться в качестве терапевтических средств.
<b>Таблица 11.</b> Количество HMMS и LMMS после воздействия низкого pH.
GDF15
% HMMS нейтральный контроль
% повышения HMMS подкисленных, затем нейтрализо ванных
% LMMS нейтральный контроль
% повышения LMMS подкисленных, затем нейтрализо ванных
% снижения площади пика мономера подкисленных, затем нейтрализо ванных
GDF15_001
2,9
-1,5
0
0
-0,4
GDF15_002
3,0
-0,7
0
0
-0,6
GDF15_003
2,0
-0,3
0
0
1,5
GDF15_004
1,9
-0,3
0
0
1,4
GDF15_005
6,4
-0,6
0
0
1,3
GDF15_100
5,5
-0,3
0
0
3,0
Пример 9: Биофизические свойства анти-GDF15 антител: вязкость
Вязкость GDF15_001 анализируют на инструменте Anton Paar. GDF15_001 концентрируют до 215 мг/мл с применением 30 кДа центрифужных фильтров с границей отсечки по молекулярному весу задерживаемых компонентов Amicon (EMD Millipore, Billerica, MA). Ряд разведений 46-178 мг/мл готовят с 20 мМ Гистидина, 85 г/л сахарозы, 0,05 мг/мл ЭДТК pH 5,8 буфера в качестве разбавителя. Концентрации белка определяют 280 нм анализом на SoloVPE Variable Pathlength System (C Technologies, Inc, Bridgewater, NJ). Измерения вязкости проводят с применением CP25-1 конуса и пластины на реометре MCR-302 (Anton Paar USA Inc., Ashland, VA) при постоянной скорости вращения 150 об./мин при 25°C. Всего 10 измерений по 10 секунд каждое собирают для образца, и данные анализируют с применением программы Rheoplus (Anton Paar USA Inc.) V 3,62. Вязкость представляют в сантипуазах (сП).
Вязкость GDF15_001 показана на фигуре 2. Данные показывают, что предел приемлемой вязкости (20 сП) достигается при от примерно 140 мг/мл, делая подкожную инъекцию GDF15_001 реальной, также показывая, что это антитело является полезным потенциальным терапевтическим агентом.
Пример 10: иммуногенность анти-GDF15 антитела
На основе определения эпитопов не-зародышевой линии T-клеток и рассчитанной скорректированной оценки tReg, прогнозируют иммуногенность анти-GDF15 антитела настоящего изобретения и другого анти-GDF15 антитела, известного в данной области техники как hu01G06 (VH и VL последовательности hu01G06 представлены в настоящем документе как SEQ ID NO:177 и SEQ ID NO:178, соответственно (VH, SEQ ID NO:248 из WO2014/100689 и VL, SEQ ID NO:254 из WO2014/100689)). Более низкая скорректированная оценка tReg прогнозирует низкий потенциал риска иммуногенности.
Последовательности анализируют с применением двух протоколов (протоколы 1 и 2 ниже) для идентификации эпитопов. Любые последовательности, идентифицированные правилами, описанными в настоящем документе для любого протокола, считаются эпитопом. Последовательности исследуют на уровне 9-mer аминокислот.
Протокол 1 - ISPRI/EpiMatrix
: Последовательности подвергают анализу EpiMatrix в программном пакете ISPRI (ISPRI v 1,8,0, EpiVax Inc., Providence, RI (2017); Schafer et al. Vaccine 16(19), 1880-84 (1998)). Необработанные результаты представляют ранжирование вероятности связывания каждого 9-mer аминокислотного фрагмента против 8 разных типов HLA. Таким образом, существует 8 прогнозов («наблюдений») для каждого 9-mer. 9-mer создают, начиная с каждого отдельного положения линейной нумерации последовательности. Для одного и того же 9-mer возможно возникать более одного раза в одной и той же последовательности. Если любые 4 наблюдения показывают, что 9-mer находится в верхних 5% связующих, что означает, что предположительно он будет в верхних 5% связующих для, по меньшей мере, 4 типов HLA, 9-mer считается спрогнозированным эпитопом. Альтернативно, если любой 1 из 8 прогнозов показывает, что 9-mer находится в верхнем 1% связующих, 9-mer также считается спрогнозированным эпитопом.
Протокол 2 - IEDB консенсусный способ
: Последовательности подвергают анализу с применением консенсусного способа связывания MHC-II (Wang et al. BMC Bioinformatics 11, 568 (2010); Wang et al. PLoS Comput Biol. 4(4),e1000048 (2008)) в базе данных иммунных эпитопов (IEDB) (IEDB MHC-II Binding Predictions, http://www.iedb.org; Vita et al., Nucleic Acids Res. Jan 28 (43), D405-12 (2015). На выходе программы результаты классифицируют по 15-mer. Консенсусная оценка и процентильное ранжирование представлено для каждой комбинации 15-mer и типа HLA. Однако, индивидуальные оценки, из которых получают каждый консенсус 15-mer, являются рангами определенных 9-mer, найденных в 15-mer: каждый способ для консенсуса представляет процентильный ранг для 9-mer в 15-mer, и консенсус, взятый как значение для всего 15-mer, является прогнозом для 9-mer, имеющего медианную оценку. 9-mer классифицируют как эпитоп если (a) его выбирают как консенсус, типовой для 15-mer, и (b) он имеет процентильный ранг в верхних 10% связующих агентов для рассматриваемого типа HLA и если критерии (a) и (b) присутствуют для трех или боне отдельных типов HLA для одного и того же 9-mer (т.е. три наблюдения). Рассматриваемыми типами HLA являются DRB1*01, 1*03, 1*04, 1*07, 1*08, 1*11, 1*13 и 1*15, которые являются одинаковыми типами HLA в стандартном отчете ISPRI/EpiMatrix. Для простоты сравнения с протоколом 1, данные перетрактовывают с получением списка спрогнозированных 9-mer эпитопов, хотя первичным выходом консенсусного способа является ранжированием 15-mer.
Каждый эпитоп классифицируют как эпитоп зародышевой линии или не зародышевой линии. Для антител, каждый эпитоп затем классифицируют на основе его локации в антителе (например, CDR или не-CDR). Последовательности V доменов человека, полученных из IMGT (www.imgt.org) фильтруют для удаления зародышевых линий, аннотированных как псевдогены или открытые рамки считывания. Любой спрогнозированный 9-mer эпитоп, найденный в оставшихся последовательностях, считается эпитопом зародышевой линии. Эпитопы, найденные в J или C областях (включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4) или соединения между этими областями также классифицируют как эпитопы зародышевой линии. Иначе, эпитоп классифицируют как эпитоп не зародышевой линии.
Определения CDR основаны на способе по Кэботу, где CDR определены как включающие следующие остатки: HCDR-1 (H26-H35 включающий вставки, такие как H35A, вплоть до, но не включая H36), HCDR-2 (H50-H65 включительно), HCDR-3 (H95-H102 включительно) LCDR-1 (L24-L34 включительно), LCDR-2 (L54-L56 включительно), LCDR-3 (L89-L97, включительно). Спрогнозированный 9-mer эпитоп определен как CDR эпитоп, если любая из его аминокислот является частью CDR области.
Общая оценка последовательности (Скорректированная оценка tReg):
Для отдельной цепи или для спаривания VH и VL домена антитела, обща оценка может быть рассчитана суммированием каждого из составляющих 9-mer, как описано ниже.
Все индивидуальные комбинации 9-mer и типа HLA («наблюдения») проверяют, независимо от того, является ли 9-mer эпитопом. Если конкретное наблюдение показывает, что пептид входит в верхние 5% связующих для данного типа HLA, Z-оценку EpiMatrix для этого наблюдения добавляют к промежуточной сумме, связанной со всей последовательностью белка. Общее количество проверенных наблюдений также записывают. Единственным исключением является то, что все наблюдения на 9-mer, идентифицированные ISPRI как «T-региотопы» (аминокислотные последовательности каркасной области моноклонального антитела, которое потенциально могут активировать природные регуляторные T клетки и снижать нежелательные иммунные ответы) принимаются как имеющие оценки EpiMatrix, равные нулю.
В промежуточной сумме, базовую оценку 0,05 * 2,2248 вычитают из каждого наблюдения (включая T-регитопы). Конечную оценку считают следующим образом: Скорректированная оценка tReg = (промежуточная сумма)*1000 / (количество наблюдений)
Рассчитанные оценки перечислены в таблице 12. Как указано выше, нижняя оценка означает наименьший прогнозируемый иммуногенный потенциал. Анти-GDF15 антитела настоящего изобретения имеют оценки ниже, чем hu01G06. Клоны GDF15_001, GDF15_004, GDF15_005 и GDF15_013 имеют наименьшие оценки, поэтому имеют наименьший потенциальный спрогнозированный риск вызывания иммуногенных ответов. Это также показывает, что антитела по изобретению являются потенциальными полезными терапевтическими агентами.
<b>Таблица 12. </b>Прогнозирование поиска иммуногенности для GDF15 mAb, скорректированная оценка tReg
Клон #
Оценка (скорректированная tReg)
GDF15_001
-41,58
GDF15_002
-39,34
GDF15_003
-26,99
GDF15_004
-42,06
GDF15_005
-50,36
GDF15_006
-34,21
GDF15_007
-39,6
GDF15_008
-24,95
GDF15_009
-29,30
GDF15_010
-34,08
GDF15_012
-38,79
GDF15_013
-42,09
GDF15_014
-34,36
GDF15_015
-34,18
GDF15_017
-38,82
GDF15_018
-33,79
GDF15_020
-33,64
GDF15_021
-31,56
GDF15_022
-33,16
GDF15_100
-36,41
GDF15_200
-26,01
hu01G06
-20,36
in silico
Спрогнозированные T-клеточные эпитопы GDF15_001 и hu01G06 также сравнивают на основе  способов, описанных выше. Как показано в таблице 13 ниже, hu01G06 имеет два спрогнозированных T-клеточных эпитопа в тяжелой цепи и один спрогнозированный T-клеточный эпитоп в легкой цепи, хотя GDF15_001 не имеет никаких спрогнозированных T-клеточных эпитопов. Это означает, что GDF15_001 также имеет потенциальный риск вызова иммуногенных ответов по сравнению с hu01G06. Это также означает, что GDF15_001 является потенциальным полезным новым терапевтическим агентом с улучшенными характеристиками.
<b>Таблица 13.</b> Спрогнозированные T-клеточные эпитопы GDF15_001 и hu01G06
Наименование
Тяжелая цепь
Легкая цепь
Hu01G06
2
1
GDF15_001
0
0
Пример 11: Ингибирование GDF15 человека и мыши у здоровых мышей
Способность GDF15_001 ингибировать активность GDF15 человека оценивают на здоровых C57Bl6N мышах, леченных аденоассоциированным вирусом (AAV)-GDF15 человека. Через две недели после лечения AAV-GDF15 человека, уровни GDF15 человека в кровотоке повышены до приблизительно 17 нг/мл (фигура 3), и масса тела снижается на 15% (фигура 4). Введение GDF15_001 быстро обращает потерю массы тела (фигура 4), жировой (фигура 5) и мышечной массы (фигура 6) у мышей, леченных AAV-GDF15 человека, по отношению к IgG контролю. GDF15_001 не оказывает действие на мышей, леченных AAV контрольным вектором.
Способность GDF15_001 ингибировать активность GDF15 мыши также оценивают у здоровых C57Bl6N мышей, леченных AAV-GDF15 мыши. Через одиннадцать дней после введения AAV-GDF15 мыши, уровни GDF15 мыши в кровотоке повышены до приблизительно 3 нг/мл (фигура 7), и масса тела снижается на приблизительно 10% (фигура 8). Введение GDF15_001 быстро обращает потерю массы тела (фигура 8) и повышает потребление пищи (фигура 9) у мышей, леченных AAV-GDF15 мыши, по отношению к IgG контролю. GDF15_001 не оказывает действие на мышей, леченных AAV контрольным вектором.
Эти данные демонстрируют, что GDF15_001 обращает потерю массы тела из-за потери мышечной и жировой массы, и повышает потребление пищи у здоровых мышей далее в присутствии повышенных уровней GDF15.
Пример 12: Ингибирование GDF15 человека у мышей, имеющих фибросаркому (HT-1080)
Для определения того, может ли GDF15_001 обращать кахексию и увеличивать срок жизни у мышей, имеющих опухоль, мышам с тяжелой иммунной недостаточностью (SCID) подкожно имплантируют HT-1080 клетки фибросаркомы человека. Через две недели после имплантации опухоли, масса тела снижается на приблизительно 10% (фигура 10). Введение GDF15_001 быстро обращает потерю массы тела (фигура 10), потерю жировой массы (фигура 11) и потерю мышечной массы (фигура 12) по сравнению с IgG контролем. В дополнение к улучшению состава тела, GDF15_001 повышает выживаемость (фигура 13) по сравнению с IgG контролем.
Для подтверждения метаболической пользы GDF15_001 у мышей, имеющих опухоль HT-1080, в термонейтральных условиях, в которых исключается оценка основного обмена вещества в условиях холодового стресса, исследование повторяют, когда мышей размещают при 86°F. Уровень GDF15 в кровотоке человека повышается до ~5 нг/мл (фигура 14). Введение GDF15_001 сохраняет быстрое обращение потери массы тела (фигура 15) по сравнению с IgG контролем. GDF15_001 не оказывает действие на какой-либо из этих параметров у аналогичных в остальном, но не имеющих опухоль, мышей.
Эти данные демонстрируют, что GDF15_001 увеличивает выживаемость и обращает кахексию у мышей с опухолью. Таким образом, эти результаты также показывают, что GDF15_001 является потенциальным новым терапевтическим агентом для человека.
Пример 13: Ингибирование GDF15 человека у мышей, имеющих опухоль поджелудочной железы
Для дальнейшей оценки того, может ли GDF15_001 обращать кахексию и увеличивать срок жизни у мышей, имеющих опухоль, SCID мышам подкожно имплантируют PA-0165 фрагменты опухолевой ткани, полученные из печеночных метастазов опухоли поджелудочной железы. Уровень GDF15 в кровотоке человека повышается до ~2 нг/мл (фигура 16). Через четыре недели после имплантации опухоли, масса тела снижается на приблизительно 10% (фигура 17). Введение GDF15_001 полностью предотвращает потерю массы тела (фигура 17) по сравнению с IgG контролем. В дополнение к улучшению массы тела, GDF15_001 повышает выживаемость (фигура 18) по сравнению с IgG контролем.
Эти данные также демонстрируют, что GDF15_001 увеличивает выживаемость и обращает кахексию у мышей с опухолью. Таким образом, эти результаты также показывают, что GDF15_001 является потенциальным новым терапевтическим агентом для человека.
Пример 14: Ингибирование GDF15 человека у мышей, имеющих опухоль, леченных противораковыми агентами
Для определения того, может ли GDF15_001 обращать кахексию и увеличивать срок жизни у мышей, имеющих опухоль, леченных противораковыми агентами, BALB/c мышам имплантируют клетки RENCA (аденокарциномы почек мышей). Уровень в кровотоке GDF15 мыши повышается на ~8 нг/мл (фигура 19). Когда размер опухоли достигает 100 мг, начинают лечение противораковым агентом сорафенибом с последующим добавлением GDF15_001 или IgG контроля, когда достигается 10% потеря массы тела (фигура 20). Введение GDF15_001 мышам, леченным сорафенибом, полностью обращает потерю массы тела (фигура 20). Вместе с улучшением массы тела, комбинация сорафениб+GDF15_001 повышает выживаемость по сравнению с сорафениб+IgG контроль (фигура 21).
Способность GDF15_001 улучшать массу тела также исследуют у мышей, имеющих опухоль, леченных противораковым агентом цисплатином. Мышам SCID имплантируют подкожно фрагменты опухолевой ткани NSX-26115 (полученной из аденокарциномы немелкоклеточной карциномы легких человека). Уровень в кровотоке GDF15 мыши повышается на ~4,5 нг/мл (фигура 22). Когда размер опухоли достигает 100 мг, достигается 10% потеря массы тела и начинают лечение противораковым агентом цисплатином вместе с GDF15_001 или IgG контролем (фигура 23). GDF15_001 или IgG контроль также дают без цисплатина. Введение GDF15_001 обращает потерю массы тела при введении с или без цисплатина по сравнению к IgG контролю (фигура 23). Вместе улучшением с массы тела, комбинация цисплатин+GDF15_001 повышает выживаемость (фигура 24) по сравнению с цисплатин+IgG контроль.
Эти данные также демонстрируют, что GDF15_001 повышает выживаемость и обращает кахексию у мышей, имеющих опухоль, леченных противораковыми агентами. Таким образом, эти результаты дополнительно показывают, что GDF15_001 является новым потенциальным терапевтическим агентом для человека.
Пример 15: Дозирование анти-GDF15 антитела
Существуют проблемы, связанные с определением эффективных доз и схем дозирования анти-GDF15 антитела для лечения кахексии. Общая эффективная доза зависит от начальной концентрации GDF15 в кровотоке пациента, которая, как известно, является переменной. Кроме того, уровни свободного GDF15 у пациентов с кахексией снижаются с разной скоростью в ответ на терапию. Таким образом, эффективная доза может быть определена для данного интервала дозирования как количество, вводимое пациенту с массой тела 70 кг, которое снижает уровень свободного GDF15 до менее чем 0,5 нг/мл на протяжении интервала дозирования в устойчивом состоянии (т. е. после такого количества доз, чтобы максимальная концентрация после дозы была по существу такой же, как максимальная концентрация после предыдущей дозы). Этот уровень свободного GDF15 выбирают на основе данных, описанных для здоровых субъектов (Wollert et al, 2017, J Appl Lab Med 1(5):510-521). Таким образом, эффективная доза, описанная в настоящем документе, описана как функция от исходного уровня свободного GDF15 у пораженного субъекта и снижения этого уровня до менее чем 0,5 нг/мл. Уровень свободного GDF в образце может быть измерен, например, с применением иммуноанализа электрохемилюминесценции, такого как анализ ELECSYS GDF15 (Roche Diagnostics). Анализ ELECSYS GDF15 применяет технологию биотин-стрептавидин и основан на принципах сэндвич-иммуноанализа (см. Wollert et al, 2017). Другие анализы, которые могут измерить количество свободного GDF15 в образце, которые известны в данной области техники, также могут применяться для определения уровня свободного GDF15 у пациента.
a
Для преодоления проблем прогнозирования эффективных доз и схем дозирования для антитела, описанного в настоящем документе, была разработана двухкомпонентная фармакокинетическая модель. Подкожное введение анти-GDF15 антитела моделируют путем дозирования определенного количества в депо, которое затем абсорбируют в центральный компартмент с заданной скоростью k. Антитело распространяется в периферический компартмент и затем выводится из центрального компартмента. Используемый в настоящем документе термин «депо» относится к месту, в которое депонировано лекарственное средство (например, подкожное пространство), термин «центральный компартмент» относится к сосудистому пространству и органам с высокой перфузией (например, печени, почкам и легким) и термин «периферический компартмент» относится к тканям с меньшей перфузией (например, жиру и мышцам).
Параметры для GDF15_001 определяют путем масштабирования из параметров в фармакокинетическом исследовании GDF15_001 на мышах, экспрессирующих FcRn человека. Коротко, 6 мышам вводят 1 мг/кг GDF15_001 внутривенно и наблюдают в течение 1000 часов; полученная фармакокинетику антител подгоняют к двухкомпартментной фармакокинетической модели. Параметры для других антител, описанных в настоящем документе, могут быть определены аналогичным образом. GDF15_001 продуцируется в центральном компартменте, распределяется в периферический компартмент и удаляется из обоих пространств. Предполагают, что объемы и скорость распределения такие же, как определены для GDF15_001 в фармакокинетическом исследовании, описанном выше. Оборот выбирают так, чтобы получить период полувыведения GDF15_001 16,6 часов на основе эксперимента по количественному определению включения стабильных меченых изотопами аминокислот в GDF15 кровотока у двух здоровых добровольцев (экспериментальная методология в основном такая, как представлена в Lassman et al., 2014, Clin Chem 60(9):1217-1224). Скорость синтеза GDF15 выбирают так, чтобы получить определенный уровень GDF15 в кровотоке. Этот уровень в кровотоке может представлять наивысший уровень, описанный для данного заболевания (для лечения всех пациентов с соответствующим состоянием), более низкий порог, но все же выше значений для указанной доли субъектов (для контроля максимальной дозы при одновременном разрешении лечения большинства пациентов), или конкретный уровень, определенный для конкретного субъекта, чтобы обеспечить более точную индивидуальную дозу. Для диапазонов уровней GDF15, связанных с заболеванием человека, см., например, Mutlu et al, 2015, Inflammation 38(5):1805-1813; Montero et al, 2016, PLoS One 11(2):e0148709; Kempf and Wollert, 2009, Heart Fail Clin 5(4):537-547; и Lerner et al, 2016, Oncol Lett 12(5): 4219-4223.
6
-1
-1
-5
-1
a
d
В центральном и периферическом компартментах, GDF15 может обратимо связываться с анти-GDF15 антителом, основываясь на константах скорости ассоциации и диссоциации для антитела. Для GDF15_001, эти параметры определены как 1,59×10 M с (k) и 3,42×10 с (k), соответственно (приравнивая к равновесной константе диссоциации 21,3 пМ), на основе измерений Biacore (см. таблицу 8 выше). Подобные исследования могут быть проведены для других антител, описанных в настоящем документе, или параметры могут применяться как входные параметры для исследования влияния изменения аффинности на дозу. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, комплекс антитело/GDF15 распределяется между двумя компартментами, и выводится из центрального компартмента с применением тех же параметров фармакокинетики, которые определены для самого антитела. Параметры для двухкомпартментной модели дозирования показаны в таблице 14.
Таблица 14. Параметры двухкомпартментной модели дозирования GDF15_001
Параметр
Значение
Единицы
Источник
V1
49
мл/кг
Масштабированы из фармакокинетических параметров, определенных у мышей, экспрессирующих hFcRn, с применением современной оптимальной методологии
V2
46
мл/кг
Q
0,42
мл/ч/кг
CL
0,24
мл/ч/кг
Масса тела
70
кг
Типовой человек
t<sub>1/2,GDF15</sub>
16,6
ч
Определяют из стабильного введения изотопа в GDF15 человека у здоровых субъектов
k<sub>deg</sub>
0,0418
Оборот, ln(2)/t<sub>1,2,GDF15</sub>
k<sub>on</sub>
1,59×10<sup>6</sup>
M<sup>-1</sup> с<sup>-1</sup>
Измерено SPR
k<sub>off</sub>
3,42×10<sup>-5</sup>
с<sup>-1</sup>
Измерено SPR
K<sub>D</sub>
21,3
пМ
k<sub>off</sub>/k<sub>on</sub>
[GDF15]<sub>база</sub>
0,5
нг/мл
ELECSYS GDF15 аналитическая вставка (Roche Diagnostics)
Доза
Переменная
мг
Входная спецификация, или определенная для получения снижения целевого уровня свободного GDF15
k<sub>a</sub>
0,0108
ч<sup>-1</sup>
Типовая
MW<sub>GDF15</sub>
25
кДа
Получена из депозитов генов в Uniprot http://www.uniprot.org/uniprot/Q99988
ММ антитела
150
кДа
Типовая
Биодоступность
0,5
безразмерная
Оценочная
Прогнозируемые терапевтически эффективные подкожные дозы для GDF15_001 в зависимости от начального уровня свободного GDF15 для субъекта показаны в таблицах 15, 16 и 17 и на рисунках 25, 26 и 27. Показаны прогнозируемые терапевтически эффективные дозы для еженедельного, двухнедельного и приблизительно ежемесячного дозирования.
Данные дозирования, представленные в настоящем документе, предполагают, что GDF15_001 можно вводить в таких количествах и интервалах дозирования, которые позволяют достичь потенциально терапевтического уровня снижения уровня свободного GDF15. Эти результаты демонстрируют, что дозирование GDF15_001 может быть достигнуто и поддерживаться по схеме дозирования, которая является выполнимой и обеспечит соблюдение пациентом режима.
<b>Таблица 15.</b> Потенциальное еженедельное дозирование для подкожного введения GDF15_001 для снижения уровня GDF15
Исходный свободный GDF15 (нг/мл)
Еженедельная подкожная доза (мг)
5
2
10
5
15
7
20
10
25
12
30
15
50
25
75
40
100
50
<b>Таблица 16.</b> Потенциальное дозирование раз в две недели для подкожного введения GDF15_001 для снижения уровня GDF15
Исходный свободный GDF15 (нг/мл)
Подкожная доза раз в две недели (мг)
5
5
10
12
15
20
20
25
25
30
30
40
50
60
75
90
100
125
<b>Таблица 17. </b>Потенциальная дозировка для приблизительно ежемесячного подкожного введения GDF15_001 для снижения уровня GDF15
Исходный свободный GDF15 (нг/мл)
Подкожная доза каждые четыре недели (мг)
5
15
10
40
15
60
20
75
25
100
30
115
50
200
75
300
100
385
Пример 16: Комбинированное лечение с анти-PD-1 (F2) антителом и анти-GDF15 (GDF15-297) в подкожной модели RCC
Данные, раскрытые в настоящем документе, демонстрируют синергетический терапевтический эффект комбинированной терапии анти GDF15 антителом и анти-PD1 антителом на модели RENCA метастатической почечно-клеточной карциномы (RCC) у мышей.
2
6
Мышей, имеющих опухоль, получают следующим образом: шесть 6-8-недельных самок мышей BALB/c покупают у Jackson Laboratories. Всех животных размещают в свободном от патогенов виварии при CID, и эксперименты проводят согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Клеточную линию RENCA покупают у American Type Culture Collection (ATCC). Клетки культивируют в среде Игла, модифицированной по Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина при 37°C в 5% диоксиде углерода (CO) и тестированной на патогены по IMPACT в Research Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Беспатогенные клетки, выращенные в экспоненциальной фазе роста, собирают и применяют для инокуляции опухоли. BALB/c мышам подкожно инокулируют в правый бок 0,2 × 10 RENCA в 0,1 мл бессывороточной DMEM.
2
Анализ объема опухоли проводят следующим образом: когда опухоли достигают целевого размера, мышей произвольно распределяют на группы лечения. Лечение начинают в день распределения, т.е. день 0. Размер опухоли измеряют два раза в неделю в 2 размерах с применением штангенциркуля, и объем выражают в кубических миллиметрах с применением формулы: V=0,5 L × W, где L является наибольшим диаметром опухоли, и W является диаметром, перпердикулярным L. Массу тела записывают два раза в неделю.
Терапевтические антитела, применяемые в этом исследовании: анти-мышиное PD1 F2 мыши (иммуноглобулин G1 [mIgG1] мыши) и анти-мышиное GDF15_0297 мыши, содержащее IgG1 мыши с нулевой эффекторной функцией D265A, т.е., от аспарагина (Asp, D) до аланина (Ala, A) на аминокислотном остатке номер 265), мутацию в Fc. Антитело GDF15_0297 по существу является суррогатным антителом мыши GDF15_001, которое аналогично связывается с этим антителом. Также, F2 является суррогатным антителом мыши, которое связывается аналогично с сасанлимабом (RN888). Каждое из анти-PD1 антитела и анти-GDF15 антитела разводят до концентрации 2 мг/мл в физиологическом растворе с фосфатным буфером (ФРФБ) (Life Technologies) и дозируют 10 мг/кг на мышь внутрибрюшинно (вб) в «день лечения 0» (d0). Однофакторный или 2-факторный ANOVA применяют для сравнения статистических различий среди множества групп относительно изотипического контроля (отрицательного контрольного IgG1 мыши) или других групп лечения. Непарный t-критерий применяют для сравнения статистической разницы между двумя группами. P <0,05 считается значительной разницей.
3
Модель RENCA используют для оценки терапевтической эффективности анти-GDF15 в комбинации с анти-PD1 в модели rRCC, средний начальный размер опухоли от 25 до 38 мм (n=10 животных в группе). За животными наблюдают в течение двух недель после начала лечения. Лечение, т.е. в.б. введение анти-GDF15 и анти-PD1, начинают через 11 дней после трансплантации. Комбинированное лечение анти-GDF15-антителом и анти-PD1-антителом значительно ингибирует прогрессирование подкожной опухоли RENCA rRCC по сравнению с группой, получавшей контрольный изотип. Монотерапия анти-GDF15 и монотерапия анти-PD1 не были эффективны в ингибировании прогрессирования опухоли в этих условиях (таблица 18 и таблица 19).
<b>Таблица 18:</b> Измерения опухоли (среднее ± СОС) подкожной RENCA почечной карциномы с течением времени
Группа 1. Изотипический контроль
День лечения
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
0
24,8179
18,48923
10
3
41,10472
16,01365
10
7
118,3017
38,05085
10
11
316,4947
87,86244
10
14
458,5579
180,3841
10
Группа 2. Анти-GDF15 антитело (10 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
0
38,6903
23,46297
10
3
74,46177
55,75148
10
7
118,0962
76,10373
10
11
242,452
131,6799
10
14
421,239
250,0879
10
Группа 3. Анти-PD1 антитело (10 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
SEM
N
0
30,47708
19,57651
10
3
46,06364
33,32501
10
7
81,07916
48,32548
10
11
188,6607
104,1654
10
14
279,6987
159,2461
10
Группа 4. Анти-PD1 и анти-GDF15 антитело (10 мг/кг каждое)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
0
31,10019
20,06108
10
3
58,65684
27,55265
10
7
100,9666
49,4239
10
11
179,1596
73,56688
10
14
367,1608
165,8177
10
3
Объем опухоли выражают в мм. N=количество животных в каждой группе; СОС=стандартная ошибка среднего.
<b>Таблица 19:</b> Статистическое сравнение измерений опухоли подкожной RENCA почечной карциномы с течением времени по сравнению с контролем
День
Анти-GDF15(10 мг/кг)
Анти-PD1(10 мг/кг)
Анти-GDF15 (10 мг/кг) + Анти-PD1 (10 мг/кг)
0
0,9995
>0,9999
>0,9999
3
0,9721
0,9986
>0,9999
7
>0,9999
0,9987
0,9554
11
0,5250
0,0205
0,0394
14
0,9549
0,2835
0,0007
Результаты статистического анализа, представленные в таблице 19, демонстрируют, что лечение анти-GDF15 антителом в комбинации с анти-PD1 имеет синергетический эффект на ранних стадиях прогрессирования опухоли в модели рака RCC.
Пример 17: Лечение рака поджелудочной железы комбинацией анти-PD1 антитела и анти-GDF15 антитела
Этот пример иллюстрирует синергетический терапевтический эффект комбинированной терапии анти-GDF15-антителом и анти-PD1-антителом на модели метастатической аденокарциномы поджелудочной железы у мышей, то есть модели Pan02. Чтобы облегчить идентификацию роста опухоли в ортотопической модели, клетки Pan02 (NHI/NCI) инфицируют конструктом люциферазы светляка, генерирующей клетки Pan02-люциферазы.
Шесть 8-недельных самок B6(Cg)-Tyrc-2J/J (B6 albino) мышей покупают у Jackson Laboratories. Всех животных размещают в беспатогенном виварии при CID и эксперименты проводят согласно протоколам в соответствии с руководством Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
2
6
8
8
Клеточную линию Pan02 получают от NHI/NCI. Клетки культивируют в среде Игла, модифицированной по Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина при 37°C в 5% диоксиде углерода (CO) и тестированной на патогены по IMPACT в Research Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Беспатогенные клетки, выращенные в экспоненциальной фазе роста, собирают и применяют для трансплантации опухоли. Мышам Albino B6 вводят инъекцией в поджелудочную железу 20 мкл опухолевых клеток: смесь matrigel, содержащую 0,2 × 10 мл Pan02-люциферазы в бессывороточной DMEM и matrigel (Corning, ref 356237). Через четыре для после трансплантации, опухолевую массу оценивают по уровню люминесценции. Животных делят на группы и начинают испытание. Для определения эмиссии люциферазы животным вводят инъекцией 0,1 мл 30 мг/мл мононатриевой соли D-люциферина в солевом растворе (Pierce, # 88292). Уровни люминесценции определяют на IVIS Spectrum CT (Caliper Life Science) после 1-15 сек обработки при средней сортировке, 1 F/стоп. Изображения анализируют программой LivingImage 4.5.1. Опухолевую массу рассчитывают как фотон/секунду в ROI (области, представляющей интерес) после вычитания фоновых значений. В одном примере, среднее испускание на момент включения в исследование составляет 4,8*10 фотонов/секунду. В другом примере, среднее испускание на момент включения в исследование составляет 1,8*10 фотонов/секунду.
Анти-мышиное PD1 F2 антитело мыши (иммуноглобулин G1 мыши [mIgG1]) и анти-мышиное GDF15_0297 антитело мыши такие, как описаны в примере 16. Каждое из анти-PD1 антитела и анти-GDF15 антитела разводят до концентрации 2 мг/мл в физиологическом растворе с фосфатным буфером (ФРФБ) (Life Technologies) и дозируют 10 мг/кг на мышь внутрибрюшинно (вб). В другом примере, анти-PD1 антитело разводят до концентрации 1 мг/мл и дозируют 5 мг/кг на мышь. В каждом случае, PD-1 антитело и GDF15 антитело вводят в одним и тот же день (день лечения 0).
Прогрессирование опухоли контролируют еженедельно на основании уровня люминесценции у леченных животных. Уровни люминесценции определяют, как описано выше. Массу тела регистрируют еженедельно.
(поток фотонов в д35 - поток фотонов в д4)/поток фотонов на 4 день
На день 35 после трансплантации, изменения опухолевой массы для животных из групп изотипического антитела, анти-GDF15 антитела, анти-PD1 антитела и комбинации анти-GDF15 антитело+анти-PD1 определяют по формуле: изменение опухолевой массы = . Лечение анти-GDF15 антителом+анти-PD1 антителом значительно снижает опухолевую массу животных, которым трансплантированы опухоли Pan02, где 8 из 12 животных показывают признаки регрессии по сравнению с анти-PD1, анти-GDF15 и изотипической группами (4/12; 1/12 и 0/12, соответственно). Результаты суммированы ниже в таблице 20. В таблице 20 представлены индивидуальные результаты для каждого из двенадцати животных на группу.
<b>Таблица 20.</b> Изменения опухолевой массы у животных с трансплантатом Pan02 через 35 дней после трансплантации
Изотип (10 мг/кг)(n=12)
Анти-GDF15 (10 мг/кг)(n=12)
Анти-PD1 (10 мг/кг)(n=12)
Анти-GDF15 (10 мг/кг) + анти-PD1 (10 мг/кг)(n=12)
388650,8
238089,09
51810,29
121462,31
202783,4
42471,88
5095,89
729,61
146446
40946,73
1997,97
509,41
20687,27
35690,5
1435,5
117,08
19259,32
17367,64
390,93
-35,58
11767,25
12343,34
192,99
-53,22
11056,08
4468,03
145,6
-79,94
4223,002
1331,72
48,91
-82,36
1969,562
127,73
-5,73
-98,16
1357,696
70,79
-81,18
-99,36
561,6385
38,24
-94,2
-99,63
477,8538
-64,21
-99,55
-99,67
Эти изменения в опухолевой массе соответствуют увеличению выживаемости животных, леченных антителом анти-GDF15+антителом анти-PD1, при этом средняя выживаемость увеличивалась до 90 дней по сравнению с выживаемостью в течение 66 дней (анти-PD1), 52,5 дней (анти-GDF15) и 45 дней (изотипический контроль). При сравнении со значением p для контрольной изотипической группы в конце эксперимента (день 145), значения p были p <0,0001 (анти-GDF15+анти-PD1), p=0,0010 (анти-PD1) и не статистически значимыми (нс) (анти-GDF15). На день 79 наблюдалась статистически значимая разница между выживаемостью животных, получавших комбинацию анти-GDF15+анти-PD1 и монотерапию анти-PD1, что отражалось в p=0,05, установленном тестом Матела-Кокса, и p=0,042 по тесту Гехана-Бреслоу-Уилкоксона.
8
В другом примере, в модели Pan02 поджелудочной железы со средней опухолевой массой, оцененной через испускание люминесценции на момент включения в исследование 1,8*10 фотонов/секунду (n=13 животных на группу), оценивают терапевтическую эффективность 10 мг/кг анти-GDF15 антитела в комбинации с 5 мг/кг анти-PD1 антитела. Лечение начинают через четыре дня после трансплантации. На день 39 объем опухоли в группе, обработанной анти-GDF15+анти-PD1, упал ниже предела обнаружения у 38% животных. Монотерапия PD1 привела к уменьшению опухоли только у 15% животных, в то время как и изотипический контроль и монотерапия анти-GDF15 не показали терапевтического эффекта в этих условиях.
Эти результаты демонстрируют, что лечение анти-GDF15 антителом в комбинации с анти-PD1 обеспечивает синергетический противоопухолевый эффект, больший, чем аддитивные эффекты каждого лечения, предоставляемого отдельно, на прогрессирование в ортотопической модели рака поджелудочной железы.
Таким образом, эти данные демонстрируют, что комбинированная терапия анти-GDF15 и антагонистом PD-1 оси могла бы быть новой полезной синергической терапией для лечения рака.
Пример 18. Выбор синергетических моделей на мышах для тестирования эффективности при противораковой иммунотерапии.
6
Для выбора подходящей модели для определения терапевтический эффективности анти-GDF15 терапии, тестируют следующие сингенные клетки мыши: MC38 (любезно предоставленные Dr. Antoni Ribas at University of California, Los Angeles, CA), Pan02 (NHI/NCI), 4T1 (ATCC), RENCA (ATCC), CT26 (ATCC), ID8 (University of Kansas и University of Kansas Medical Center), LL2 (ATCC), B16F10 (ATCC) и GL261 (NHI/NCI). GDF15 уровни в кондиционированной среде анализируют с применением набора для мышей GDF15 ELISA (R&D Systems, MGD 150). Клетки высевают трижды в количестве 0,3 × 10 клеток/лунку в 6-луночной чашке для культивирования клеток (353224, Corning), и культивируют в течение сорока восьми часов. Супернатанты собирают, центрифугируют в течение 5-10 мин при 2000 об./мин., переносят в свежие пробирки и хранят при +4°C. Количество живых/мертвых клеток оценивают способам исключения триптанового синего на счетчике клеток BioRad TC 20. Объем и количество клеток для каждого образца записывают. Результаты представлены в таблице 21.
<b>Таблица 21.</b>
Клеточная линия
пг/мл
СО
Репликат
4T1
0
0,33
3
B16-F10
12,8
0,71
3
CT26
0
0,25
3
GL261
14,72744
2,38
3
ID8
6,375451
0,47
3
LL2
4,20784
1,35
3
MC38
55,65824
3,56
3
PAN02
38,44435
16,32
3
RENCA
342,397
8,08
3
3
Для выбора подходящей модели in vivo кровь животных с опухолями собирают ретроорбитальным способом и переносят в пробирки для сбора крови Microtainer (365967, BD). Объем опухоли регистрируют и доводят до 200 мм, если применимо. Сыворотку животных с ортотопическими опухолями Pan02 собирают у животных на конечной стадии (через 35-40 дней после трансплантации). Сыворотку животных, не имеющих опухолей и совпадающих по генетическому фону, собирают в качестве контроля. Уровни GDF15 мыши определяют с помощью набора GDF15 ELISA для мышей, и представляют в таблице 22.
<b>Таблица 22.</b>
Штамм/модель
пг/мл
СО
Репликат
BalbC
31,10779804
6,632974
3
C57Bl6
74,55406
2,443727
2
FVB/N
38,96494373
13,71892286
3
RENCA
3460,438
1398,909
3
4T1
32,45177948
8,056048
3
Pan02
1880,244884
1095,055333
3
MC-38
44,13618956
21,41318
3
PyMT
146,4433483
27,91198329
3
B16_F10
136,8055
193,4721
3
in vivo
Модель метастатической почечной RCC (RENCA) и модель рака поджелудочной железы (Pan02) идентифицируют как самые высокие продуценты GDF15 in vivo и в дальнейшем используют в исследованиях  для определения терапевтического потенциала терапий анти-GDF15 в сочетании с иммуноонкологическими методами терапии.
Пример 19. Комбинированное лечение анти-CD40 антителом и анти-GDF15 антителом
Этот пример иллюстрирует терапевтическую активность комбинированной терапии анти-GDF15 антителом и анти-CD40 антителом на модели метастатической RCC RENCA на мышах.
Шесть 6-8-недельных самок мышей BALB/c покупают у Jackson Laboratories. Всех животных размещают в свободном от патогенов виварии при CID, и эксперименты проводят согласно руководству Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
2
6
Клеточную линию RENCA покупают у American Type Culture Collection (ATCC). Клетки культивируют в среде Игла, модифицированной по Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина при 37°C в 5% диоксиде углерода (CO) и тестированной на патогены по IMPACT в Research Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Беспатогенные клетки, выращенные в экспоненциальной фазе роста, собирают и применяют для инокуляции опухоли. BalbC мышам подкожно инокулируют в правый бок 0,2 × 10 RENCA в 0,1 мл бессывороточной DMEM.
Анти-мышиное CD40 антитело FGK45 (IgG1 мыши) и анти-мышиное GDF15 антитело GDF_0297 (содержащее IgG1 Fc мыши с нулевой эффекторной функцией, содержащее замещение на аминокислотном остатке номер 265 от аспарагиновой кислоты до аланина (D265A)) разводят в концентрациях 2 мг/мл физиологического раствора с фосфатным буфером (ФРФБ) (Life Technologies) и дозируют 10 мг/кг на мышь внутрибрюшинно (вб). В другом примере, анти-CD40 разводят до концентрации 1 мг/мл и дозируют 5 мг/кг на мышь.
2
Когда опухоли достигают целевого размера, мышей произвольно распределяют на группы лечения. Лечение начинают в день распределения. Размер опухоли измеряют два раза в неделю в двух размерах с применением штангенциркуля, и объем выражают в кубических миллиметрах с применением формулы: V=0,5 L × W, где L является наибольшим диаметром опухоли, и W является диаметром, перпердикулярным L. Массу тела записывают два раза в неделю.
Для анализа влияния комбинированного лечения на статус инфильтрации опухоли и лейкоциты в селезенке проводят следующий анализ. Опухоли диссеминируют на одноклеточные суспензии с применением мягкого MACS™ и Miltenyi Mouse Dissociation Kit (Miltenyi Biotec) согласно протоколу производителя с модификацией. Лизирующий буфер на основе аммония-хлорида-калия (ACK) (Life Technologies) применяют для удаления красных клеток крови. Клетки промывают дважды окрашивающим буфером FACS (ФРФБ с добавлением 10% ФБС) и наконец ресуспендируют в окрашивающем буфере FACS. Для определения лейкоцитов в селезенке, иссеченные селезенки обрызгивают 3 мл раствором для перевара, содержащим 0,2 мг/мл Liberase TL (5401020001, Roche) и 20 мк/мл DNase I Roche 4716728001, Roche). Селезенки инкубируют в течение 15 мин при 37°C при осторожном встряхивании. В конце инкубации, ферментную активность гасят добавлением 1 мл ФБС, селезенки разрезают на небольшие куски и процеживают в 50 мл конические пробирки, клетки промывают в ФРФБ, центрифугируют при 1500 об./мин в течение 5 минут, и полученную лепешку ресуспендируют в холодном буфере MACS. Лизирующий буфер ACK применяют для удаления красных клеток крови.
6
Аликвоту клеток прединкубируют с 0,5 мкг/10 клеток BD Fc Block мыши (Biolegend, 101310) в 10% сыворотке крысы в ФРФБ в течение 10 минут, перед фенотипированием mAb добавляют к специфически окрашенным иммунным клеткам. Поверхностноклеточные антигены метят инкубированием клеток при 4°C в течение 30 минут. После удаления несвязанных mAb, клетки промывают дважды окрашивающим буфером FACS, фиксируют в фиксирующем буфере (ФРФБ+1% параформальдегид) и хранят при 4°C в темноте до анализа проточной цитометрией. Внутриклеточное окрашивание проводят с применением набора Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer (eBioscience) согласно протоколу производителя. Данные проточной цитометрии собирают с применением Fortessa™ SORP (BD Biosciences) и анализируют с применением FlowJo™ (TreeStar Inc.).
Антитела, применяемые для поверхностноклеточного или внутриклеточного окрашивания покупают у BD Biosciences, eBioscience, Invitrogen или Biolegend. Они представляют собой анти-мышиное CD45-PerCP-Cy5.5 крысы (клон 30-F11, BD Biosciences), анти-мышиное CD11b Texas Red крысы (M1/70, BD Biosciences), анти-мышиное CD25-BUV395 крысы (PC61, BD Biosciences), анти-мышиное Ly6G-FITC крысы (1A8, BD Biosciences), анти-мышиное CD90,2-BV786 крысы (53-2,1, BD Biosciences), анти-мышиное CD8-BV650 крысы (53-6,7, BD Biosciences), анти-мышиное Ly6C-BV421 крысы (AL-21, BD Biosciences), анти-мышиное F4/80-PECy7 крысы (BM8, Invitrogen™), анти-мышиное CD86-BV605 крысы (GL1, BD Biosciences), анти-мышиное CD49a-APC армянского хомяка (HMA1, BioLegend), анти-мышиное MHCII крысы (IA-IE)-Alexa Fluor 700 (M5/114,15,2, BioLegend), анти-мышиное CD4-V450 крысы (RM4-5, BD Biosciences), анти-мышиное Foxp3-PE крысы (FJK-16s, eBioscience). Для избежания артефактов окрашивания, образцы хранят в Brilliant Stain Buffer (BD Biosciences). Живые клетки отделяют от мертвых клеток с применением набора LIVE/DEAD Fixable eFluor™ 780 Dead Cell Stain Kit (Invitrogen).
Результаты выражают как средние±СОС. Статистический анализ проводят с применением GraphPad Prism 6,0. Однофакторный или 2-факторный ANOVA применяют для сравнения статической разницы между множеством групп, относящихся к изотипическому контролю, или другим группам лечения. Непарный t-критерий применяют для сравнения статистической разницы между двумя группами. P <0,05 считается значительной разницей.
3
3
Модель RENCA применяют для оценки терапевтической эффективности анти-GDF15 в комбинации с анти-CD40 в модели rRCC, средний исходный размер опухоли 25-38 mm (n=10 животных на группу). Животных умерщвляют, когда объем опухоли достигает 2000 мм или 20% потеря массы тела. Средняя выживаемость животного с опухолями для изотипа, только анти-GDF15 антитела и только анти-CD40 антитело и комбинации анти-GDF15 антитела+анти-CD40 антитела составляет 26, 25,5, 32,5 и 34 дня, соответственно. Группа анти-CD40 антитело+анти-GDF15 антитело также дает 30% полных респондеров, по сравнению с 0% в группа изотипа, только анти-GDF15 антитела и только анти-CD40 антитело.
3
В отдельном исследовании, терапевтическая эффективность анти-GDF15 антитела в комбинации с двумя разными дозами анти-CD40 антитела (10 мг/кг и 5 мг/кг) оценивают в модели RENCA рецидивирующей почечно-клеточной карциномы (rRCC), со средним исходным объемом опухоли 47-54 мм (n=10 животных на группу). Результаты суммированы в таблице 23 и таблице 24.
Таблица 23. Измерения опухоли (средние±СОС) подкожной карциномы почек Renca в течение времени
Группа 1. Изотипический контроль
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
10
53,90874
14,3443
10
13
130,8436
28,27738
10
17
353,1065
85,68442
10
20
552,0961
137,3508
10
25
858,6344
162,7132
10
27
1195,16
292,976
10
Группа 2. Анти-GDF15 антитело (10 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
10
53,24435
13,3418
10
13
118,301
31,60418
10
17
347,7124
117,5708
10
20
602,2936
247,2447
10
25
1207,494
545,9653
9
27
1455,983
309,5726
8
Группа 3. Анти-CD40 антитело (10 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
10
53,44178
13,94953
10
13
110,619
34,34105
10
17
224,5232
70,38568
10
20
338,2354
74,07587
10
25
532,1088
155,9947
10
27
715,2596
193,4371
10
Группа 4. Анти-CD40 антитело (5 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
СОС
N
10
53,09616
13,09756
10
13
96,98625
33,47341
10
17
254,366
86,80886
10
20
376,4508
110,6125
10
25
648,832
170,2004
10
27
795,9384
357,4954
10
Группа 5. Анти-GDF15 антитело+анти-CD40 антитело (10 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
10
46,99903
11,86423
10
13
106,4694
43,02584
10
17
186,6874
88,81804
10
20
233,0179
132,9253
10
25
349,6296
234,2788
10
27
458,9107
371,8595
10
Группа 5. Анти-GDF15 антитело+анти-CD40 антитело (5 мг/кг)
Дни после инокуляции опухоли
Средний размер опухоли (мм<sup>3</sup>)
SEM
N
10
53,78749
14,79445
10
13
97,36322
37,22007
10
17
232,1165
95,47443
10
20
315,4536
157,8604
10
25
565,9923
322,4584
9
27
584,3638
417,7759
9
3
Объем опухоли выражен в мм. N=количество животных в каждой группе; СОС=стандартная ошибка среднего.
Таблица 24: Статистическое сравнение между измерениями опухоли при подкожной карциноме почек RENCA с течением времени по сравнению с изотипическим контролем
День
Анти-CD40 антитело (10 мг)
Анти-CD40 антитело (5 мг)
Анти-GDF15 антитело
Анти-GDF15 антитело+анти-CD40 антитело (10 мг)
Анти-GDF15 антитело+анти-CD40 антитело (10 мг)
10
>0,9999
>0,9999
>0,9999
>0,9999
>0,9999
13
0,9997
0,9983
0,9999
0,9997
0,9983
17
0,6932
0,8611
>0,9999
0,4581
0,7398
20
0,2271
0,4057
0,9911
0,0256
0,152
25
0,0213
0,243
0,0152
<0,0001
0,0571
27
0,0002
0,0028
0,1278
<0,0001
<0,0001
Средняя выживаемость животных с опухолями для изотипа, только анти-GDF15 антитела, анти-CD40 антитела (5 мг/кг), анти-CD40 антитела (10 мг/кг) и комбинации анти-GDF15 антитела (10 мг/кг) + анти-CD40 антитела (5 мг/кг) и комбинации анти-GDF15 антитело (10 мг/кг) + анти-CD40 антитело (10 мг/кг) составляет 29,5, 29,5, 36, 36, 38 и 44,5 дня, соответственно.
Для определения вклада лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (TIL) в анти-GDF15-опосредованный противоопухолевый ответ, TIL выделяют из опухолей RENCA через двадцать четыре часа после последнего лечения и анализируют на маркеры, связанные с противоопухолевым иммунным ответом. Результаты суммированы на ФИГ. 29 (значение p определяют по непарному t-критерию; p=0,0026).
Комбинированное лечение [анти-GDF15 антитело (10 мг/кг) + анти-CD40 антитело (10 мг/кг)] увеличивает статус активации (MHCII MFI) макрофагов, гейтированных как CD11b+; F4/80 +; Ly6C-клеток в опухолях в среднем на 187% по сравнению с группой, леченной изотипом (ФИГ. 29). Наоборот, монотерапия анти-CD40 увеличивает MFI MHCII на 67% (ФИГ. 29). Монотерапия анти-GDF15 не повышает активационный статус макрофагов (ФИГ. 29).
Соотношение CD8+ Т клеток/регуляторных Т клеток (Treg) в группах изотипа и анти-GDF15 составляет 2,4 и 2,1, соответственно (ФИГ. 30, заштрихованные кружки и заштрихованные треугольники). Соотношение CD8+ Т клеток/Treg увеличивается до 17 при лечении только анти-CD40 антителом (ФИГ. 30, пустые круги). Наоборот, комбинированное лечение анти-GDF15 антителом плюс анти-CD40 антителом дает соотношение CD8+ Т клеток/Treg, равное 84 (ФИГ. 30, пустые треугольники).
Эти результаты демонстрируют, что терапия на основе анти-CDF15 эффективна в повышении противоопухолевой эффективности анти-CD40-терапии.
В дополнение к усилению противоопухолевой эффективности анти-CD40-терапии в модели RRC, терапия на основе анти-GDF15 смягчает индуцированную анти-CD40 токсичность, проявляющуюся в потере массы тела леченных животных. Хотя терапия на основе анти-CD40 дает потерю массы тела у животных, получавших лечение, на 4,43%, группа комбинированного анти-GDF15 антитела+анти-CD40 антитела продемонстрировала увеличение массы тела на 1,5% по сравнению с увеличением массы тела на 1,2% в группе, леченной изотипическим контролем (n=20 животных в каждой группе, анти-CD40 антитело против анти-CD40 антитела+анти-GDF15 антитела, p=0,0006 по непарному t-критерию). Восстановление массы тела в группе анти-CD40-антитело+анти-GDF15-антитело сопровождается снижением экспрессии цитокинов, обычно связанной с цитокин-опосредованной токсичностью в сыворотке леченных животных.
Образцы сыворотки собирают у леченных животных как описано в примере 1. Уровни цитокинов анализируют набором V-PLEX Proinflammatory Panel 1 (мыши) Kit от Meso Scale Discover (Mescoscale K15048D). Каждый образец разводят 1 до 4 разбавителем Diluent 41 (Mescoscale R50AH-1) и анализируют трижды согласно протоколу производителя. Результаты анализируют на машине Meso Scale Discovery Quickplex SQ 120 и с применением программы Discovery. Анализируют экспрессию следующих цитокинов: IFNγ, IL10, IL12p70, IL1 бета, IL2, IL4, IL5, IL6, KC/GRO, TNFα. Как показано на ФИГ. 31, уровни экспрессии множества провоспалительных цитокинов (IFNγ (IFNg), TNFα (TNFa), IL6, IL10, KC/GRO) значительно снижаются в группе, леченной анти-CD40 после обработки анти-GDF15 (n=5, анти-CD40 против анти-CD40+анти-GDF15, p=0,0044 согласно двухфакторному тесту ANOVA).
Эти результаты демонстрируют, что лечение анти-GDF15 антителом в комбинации с анти-CD40 имеет синергетический противоопухолевый эффект, сопровождающийся повышенными уровнями активации CD11b+; клеток F4/80+ и повышенным соотношением CD8+ T клеток/регуляторных T клеток (Treg) в месте опухоли. Более того, терапия анти-GDF15 смягчает клинические признаки токсичности анти-CD40-терапии, связанные с повышенным продуцированием цитокинов.
Пример 20. Лечение рака поджелудочной железы анти-CD40 антителом и анти-GDF15 антителом
8
Этот пример иллюстрирует терапевтическую активность комбинированной терапии анти-GDF15 антителом и анти-CD40 антителом на модели аденокарциномы поджелудочной железы мышей (Pan02). Животных, имеющих опухоль, получают, как описано в Примере 19. Опухолевую массу рассчитывают как фотон/секунду в ROI (области, представляющей интерес) после вычитания фоновых значений. Средняя эмиссия на момент вступления в исследование составляет 4,8 * 10 фотонов/секунду.
Для этого исследования используют антитела: анти-мышиное CD40 антитело FGK45 мыши (иммуноглобулин G1 мыши [mIgG1]) (10 мкг/кг) и анти-мышиное GDF15_0297 мыши (IgG1 мыши с мутацией D265A с нулевой эффекторной функцией) (10 мкг/кг).
Средняя выживаемость животных, леченных анти-GDF15 антителом+анти-CD40 антителом, составила 126,5 дней, по сравнению с 106 днями в группе, получавшей только анти-CD40 антитело, 52,5 днями в группе, получавшей только анти-GDF15 антитело, и 45 днями в группе изотипического контроля.
Эти результаты демонстрируют, что лечение анти-GDF15 антителом в комбинации с анти-CD40 оказывает синергетический противоопухолевый эффект на прогрессирование рака поджелудочной железы.
Пример 21. GDF15 нейтрализующие антитела обращают GDF15-опосредованное ингибирование опосредованного макрофагом уничтожения клеток
Этот пример иллюстрирует функцию GDF15 в модулировании активности макрофагов по уничтожению опухолей.
6
E.coli
Макрофаги брюшины выделяют у мышей C57Bl6 через пять дней после вб инъекции 1 мл 3% среды Brewer Thioglycollate (B2551, Sigma). Макрофаги высевают в количестве 0,35 × 10 клеток/лунку в 24-луночный планшет для культивирования клеток в полной среде для макрофагов (RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной теплом ФБС, 2 мМ L-глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 0,1 мг/мл стрептомицина, 10 мкМ пирувата натрия, 100 мкМ не жизненно важных аминокислот, 25 мМ HEPES [pH 7,4], 50 мкМ β-меркаптоэтанола) отдельно или в присутствии тестированных цитокинов и антител. Следующие цитокины и антитела используют в исследовании: рекомбинантное GDF15 мыши (очищенные , RD systems 8944-GD), анти-мышиное GDF15_0297 антитело «297» и анти-GDF15_001. Через три часа инкубирования с рекомбинантным GDF15 мыши (10 нМ) и антителами (100 нМ каждого), клетки обрабатывают LPS (10 нг/мл, L2654, Sigma) и IFNγ (100 ед/мл, 485M100/CF, R&D Systems) для достижения активации макрофагов. На следующий день, клетки Pan02 метят CSFE (C34554, Invitrogen) согласно инструкциям производителя и совместно высевают с активированными макрофагами в соотношении 1:4. Через двадцать четыре часа сакрофаги и опухолевые клетки собирают после инкубации с TrypLE Express™ и анализируют FACS как описано в примере 17. Миелоидные клетки идентифицируют анти-мышиным CD11b BUV395 крысы (M1/70, BD Biosciences), опухолевые клетки идентифицируют как CSFE-положительную/CD11b-отрицательную популяцию, живые клетки отделяют от мертвых клеток с применением DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндола) (62247, Thermo Scientific).
Как показано на ФИГ. 32, рекомбинантный GDF15 ингибирует опосредованное макрофагами уничтожение опухолевых клеток (закрашенные треугольники). Это опосредованное GDF15 ингибирование было отменено обработкой анти-GDF15 антителом (пустые кружки и пустые треугольники).
Эти результаты демонстрируют, что лечение анти-GDF15 антителами эффективно в стимулировании антиканцерогенной активности иммунных клеток.
Хотя раскрытые идеи были описаны со ссылкой на различные применения, способы, наборы и композиции, следует понимать, что различные изменения и модификации могут быть сделаны без отступления от идей в настоящем документе и формуле изобретения ниже. Вышеупомянутые примеры предоставлены для лучшей иллюстрации раскрытых идей и не предназначены для ограничения объема идей, представленных в настоящем документе. Хотя настоящие идеи были описаны в терминах этих примерных вариантов осуществления, специалист в данной области техники легко поймет, что многочисленные вариации и модификации этих примерных вариантов осуществления возможны без излишнего экспериментирования. Все такие вариации и модификации находятся в пределах объема настоящих идей.
Все ссылки, процитированные в настоящем документе, включая патенты, заявки на патенты, статьи, учебники и подобные, а также ссылки, процитированные в настоящем документе, в той степени, в которой они еще не указаны, включены сюда в качестве ссылки полностью. В случае если один или несколько включенных литературных и подобных материалов отличаются от данной заявки или противоречат ей, включая, помимо прочего, определенные термины, использование терминов, описанные методы и подобные, настоящая заявка является определяющей.
Для специалистов в данной области техники будет очевидно, что в настоящее изобретение могут быть внесены различные модификации и вариации, не выходящие за рамки объема и сущности изобретения. Другие вариант осуществления по изобретению будут очевидны специалистам в данной области из рассмотрения описания и практики по изобретению, описанных в настоящем документе. Предполагается, что описание и примеры следует рассматривать только как иллюстративные, причем истинный объем и сущность изобретения указаны в следующей формуле изобретения.
--->
СПИСКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  ПФАЙЗЕР ИНК.
БОМОН, Кевин Чарльз
БРИН, Данна М.
ЛАМБЕРТ, Мэттью Аллистер
ЧАБОТ, Джеффри Рэймонд
ХЕ, Тао
ЩОРС, Ксения
АПГАР, Джеймс Р.
<120>  АНТИ-GDF15 АНТИТЕЛА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
<130>  PC72348A
<150>  62/765289
<151>  2018-08-20
<150>  62/750479
<151>  2018-10-25
<150>  62/750393
<151>  2018-10-25
<150>  62/881064
<151>  2019-07-31
<160>  221
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  1
Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
1               5                   10                  15
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
20                  25                  30
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
35                  40                  45
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
50                  55                  60
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
65                  70                  75                  80
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
85                  90                  95
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100                 105                 110
<210>  2
<211>  345
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  2
Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe
1               5                   10                  15
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro
20                  25                  30
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val
35                  40                  45
Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
50                  55                  60
Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu
65                  70                  75                  80
Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys
85                  90                  95
Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100                 105                 110
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro
115                 120                 125
Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile
130                 135                 140
Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly
145                 150                 155                 160
Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp
165                 170                 175
Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp
180                 185                 190
Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His
195                 200                 205
Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Ile Glu
210                 215                 220
Gly Arg Met Asp Gly Gly Gly Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp His Cys
225                 230                 235                 240
Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser
245                 250                 255
Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val
260                 265                 270
Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala
275                 280                 285
Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp
290                 295                 300
Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val
305                 310                 315                 320
Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp
325                 330                 335
Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340                 345
<210>  3
<211>  332
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  3
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
1               5                   10                  15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20                  25                  30
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35                  40                  45
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
50                  55                  60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
65                  70                  75                  80
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85                  90                  95
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100                 105                 110
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
115                 120                 125
Asn Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
130                 135                 140
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
145                 150                 155                 160
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Asn Ser Thr Leu Thr
165                 170                 175
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
180                 185                 190
Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
195                 200                 205
Ser Pro Lys Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ala Arg Asn Gly
210                 215                 220
Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val
225                 230                 235                 240
Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro
245                 250                 255
Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe
260                 265                 270
Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu
275                 280                 285
Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn
290                 295                 300
Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
325                 330
<210>  4
<211>  345
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  4
Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe
1               5                   10                  15
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro
20                  25                  30
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val
35                  40                  45
Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
50                  55                  60
Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu
65                  70                  75                  80
Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys
85                  90                  95
Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100                 105                 110
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro
115                 120                 125
Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile
130                 135                 140
Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly
145                 150                 155                 160
Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp
165                 170                 175
Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp
180                 185                 190
Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His
195                 200                 205
Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Ile Glu
210                 215                 220
Gly Arg Met Asp Gly Gly Gly Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp Arg Cys
225                 230                 235                 240
Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val His Ala Ser
245                 250                 255
Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val
260                 265                 270
Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Glu Ala
275                 280                 285
Asn Met His Ala Gln Ile Lys Met Asn Leu His Arg Leu Lys Pro Asp
290                 295                 300
Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val
305                 310                 315                 320
Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp
325                 330                 335
Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Val
340                 345
<210>  5
<211>  345
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  5
Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe
1               5                   10                  15
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro
20                  25                  30
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val
35                  40                  45
Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
50                  55                  60
Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu
65                  70                  75                  80
Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys
85                  90                  95
Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100                 105                 110
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro
115                 120                 125
Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile
130                 135                 140
Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly
145                 150                 155                 160
Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp
165                 170                 175
Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp
180                 185                 190
Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His
195                 200                 205
Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Ile Glu
210                 215                 220
Gly Arg Met Asp Gly Gly Gly Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp His Cys
225                 230                 235                 240
Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser
245                 250                 255
Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val
260                 265                 270
Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala
275                 280                 285
Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp
290                 295                 300
Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val
305                 310                 315                 320
Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp
325                 330                 335
Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340                 345
<210>  6
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  6
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  7
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  7
Arg Ala Ser Gln Ser Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  8
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  8
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  9
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  9
Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp Thr
1               5
<210>  10
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  10
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100                 105
<210>  11
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  11
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  12
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  12
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
1               5                   10
<210>  13
<211>  15
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  13
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1               5                   10                  15
<210>  14
<211>  110
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  14
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1               5                   10                  15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20                  25                  30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35                  40                  45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50                  55                  60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65                  70                  75                  80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85                  90                  95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100                 105                 110
<210>  15
<211>  106
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  15
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1               5                   10                  15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20                  25                  30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35                  40                  45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50                  55                  60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65                  70                  75                  80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85                  90                  95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
100                 105
<210>  16
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  17
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  17
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Ile Ser
1               5                   10
<210>  18
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  18
Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  19
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  19
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  20
<211>  97
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Lys
<210>  21
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  22
<211>  25
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20                  25
<210>  23
<211>  14
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  23
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1               5                   10
<210>  24
<211>  32
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  24
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1               5                   10                  15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20                  25                  30
<210>  25
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  25
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>  26
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  26
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  27
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  27
Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  28
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  28
Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp
1               5
<210>  29
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  29
Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Trp Thr
1               5
<210>  30
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  30
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  31
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  32
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  32
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Ile Asp
1               5                   10
<210>  33
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  33
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  34
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  35
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  35
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  36
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  36
Arg Thr Ser Gln Ser Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  37
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  37
Asp Ala Lys Thr Arg Ala Asp
1               5
<210>  38
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  38
Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr Thr
1               5
<210>  39
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  39
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  40
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Val Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  41
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  41
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Ile Asp
1               5                   10
<210>  42
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  42
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  43
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  43
Glu Val Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  44
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Val Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  45
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  45
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  46
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  46
Arg Thr Ser Glu Asn Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  47
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  47
Asp Ala Ser Asn Leu Ala Asp
1               5
<210>  48
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  48
Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr Thr
1               5
<210>  49
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  49
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  50
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp His Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  51
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  51
Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  52
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  52
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp His
1               5                   10
<210>  53
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp His Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  54
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Leu His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  55
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  55
Arg Ala Ser Gln Asn Leu His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  56
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Leu His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  57
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  58
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  58
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Asp
1               5                   10
<210>  59
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  59
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  60
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  61
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  62
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  62
Arg Ala Ser Gln Asn Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  63
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  63
Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Tyr Thr
1               5
<210>  64
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  64
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  65
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  65
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  66
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  66
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Ile Asp
1               5                   10
<210>  67
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  67
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  68
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  69
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  69
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  70
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  70
Asp Ala Lys Thr Arg Ala Thr
1               5
<210>  71
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  71
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  72
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  72
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Asn Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  73
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  73
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Asn Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  74
<211>  32
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  74
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1               5                   10                  15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Asn Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20                  25                  30
<210>  75
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  75
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  76
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  76
Gln Gln Phe Ser Asn Asp Pro Trp Thr
1               5
<210>  77
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  77
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  78
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  78
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  79
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  79
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Thr Asp Tyr
1               5                   10
<210>  80
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  80
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  81
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  81
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  82
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  82
Arg Thr Ser Gln Asn Val His Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  83
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  83
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  84
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  85
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  85
Gln Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  86
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  86
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Ile Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  87
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  87
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  88
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  88
Arg Thr Ser Glu Ser Val His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  89
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  89
Gln Gln Phe Trp Asn Trp Pro Trp Thr
1               5
<210>  90
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  90
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  91
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  91
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  92
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  92
Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  93
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  94
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  94
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  95
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  95
Arg Thr Ser Gln Ser Val His Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  96
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  96
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  97
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Val Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  98
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  98
Gln Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  99
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  99
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Val Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  100
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  100
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  101
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  101
Arg Thr Ser Gln Ser Leu His Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  102
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  102
Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Trp Thr
1               5
<210>  103
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  104
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  104
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  105
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  105
Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Phe Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  106
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  106
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  107
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  107
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  108
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  108
Asp Ala Lys Asn Arg Ala Asp
1               5
<210>  109
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  109
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  110
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  111
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  111
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Glu Tyr
1               5                   10
<210>  112
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  112
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  113
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  113
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  114
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  114
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Asp
1               5
<210>  115
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  115
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  116
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Gln Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  117
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  117
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Ile Ser
1               5                   10
<210>  118
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  118
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  119
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  119
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Gln
1               5                   10
<210>  120
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  120
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Gln Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  121
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  121
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  122
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  122
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Thr
1               5
<210>  123
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  123
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Asn Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  124
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  124
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  125
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  125
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Ile Ser
1               5                   10
<210>  126
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  126
Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  127
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  127
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  128
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  129
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  129
Arg Thr Ser Gln Ser Val Ser Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  130
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  130
Asp Ala Lys Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  131
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  131
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Asn Asp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  132
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  132
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Phe Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  133
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  133
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Ile Ser
1               5                   10
<210>  134
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  134
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  135
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  135
Glu Phe Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  136
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  136
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Phe Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  137
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  137
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  138
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  138
Arg Thr Ser Glu Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  139
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  139
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  140
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Thr Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Gln Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  141
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  141
Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Thr Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  142
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  142
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Thr Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Gln Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  143
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  143
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  144
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  144
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val His Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  145
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  145
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Ile Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  146
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  146
Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  147
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  147
Glu Ala Ile Thr Thr Ile Gly Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  148
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Ile Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  149
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  150
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  150
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  151
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  151
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  152
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  152
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Gln Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  153
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  153
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Ile Asp
1               5                   10
<210>  154
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  154
Glu Gln Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  155
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  155
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Gln Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  156
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  156
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  157
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  157
Arg Ala Ser Gln Asn Val His Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  158
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  158
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  159
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Pro Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  160
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  160
Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Pro
1               5                   10
<210>  161
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  161
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Leu Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Pro Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  162
<211>  214
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  162
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  163
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  163
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Ser Trp Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  164
<211>  449
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  164
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Thr Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp His Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly
<210>  165
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  165
Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Thr Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  166
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Phe Gly Thr Ala Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp His Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  167
<211>  321
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  167
gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc
60
ctgagctgcc gcaccagcca gagcgttcat aactatctgg cgtggtatca gcagaaaccg
120
ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaccc gtgcggatgg cattccggca
180
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg
240
gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag ttttggagct ggccgtggac ctttggccag
300
ggcaccaaag tggaaattaa a
321
<210>  168
<211>  360
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  168
caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg
60
agctgcaaag cgagcggcta tacctttagc agctataaca ttgattgggt gcgccaggcg
120
ccgggccagg gcctggaatg gatgggcggt attaacccga tttttggcac cgcattttat
180
aaccagaaat ttcagggccg cgtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat
240
atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc acgcgaagcg
300
attaccaccg tgggcgcgat ggatcattgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc
360
<210>  169
<211>  642
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  169
gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc
60
ctgagctgcc gcaccagcca gagcgttcat aactatctgg cgtggtatca gcagaaaccg
120
ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaccc gtgcggatgg cattccggca
180
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg
240
gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag ttttggagct ggccgtggac ctttggccag
300
ggcaccaaag tggaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca
360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat
420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag
480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg
540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc
600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt
642
<210>  170
<211>  1347
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  170
caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg
60
agctgcaaag cgagcggcta tacctttagc agctataaca ttgattgggt gcgccaggcg
120
ccgggccagg gcctggaatg gatgggcggt attaacccga tttttggcac cgcattttat
180
aaccagaaat ttcagggccg cgtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat
240
atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc acgcgaagcg
300
attaccaccg tgggcgcgat ggatcattgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc
360
gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg
420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg
480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca
540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc
600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc
660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggca
720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct
780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg
840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag
960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc
1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag
1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc
1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg
1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg
1320
cagaagagcc tctccctgtc ccccgga
1347
<210>  171
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (5)..(5)
<223>  Xaa может быть S или T
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (6)..(6)
<223>  Xaa может быть S или D
<400>  171
Gly Tyr Thr Phe Xaa Xaa Tyr Asn Ile Asp
1               5                   10
<210>  172
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (1)..(1)
<223>  Xaa может быть G или Q
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (5)..(5)
<223>  Xaa может быть I или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (6)..(6)
<223>  Xaa может быть F или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (8)..(8)
<223>  Xaa может быть T или L
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (10)..(10)
<223>  Xaa может быть F или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (11)..(11)
<223>  Xaa может быть Y или F
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (12)..(12)
<223>  Xaa может быть N или A
<400>  172
Xaa Ile Asn Pro Xaa Xaa Gly Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  173
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (2)..(2)
<223>  Xaa может быть A или Q
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (6)..(6)
<223>  Xaa может быть V или I
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (11)..(11)
<223>  Xaa может быть H или Y
<400>  173
Glu Xaa Ile Thr Thr Xaa Gly Ala Met Asp Xaa
1               5                   10
<210>  174
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (2)..(2)
<223>  Xaa может быть T или A
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (5)..(5)
<223>  Xaa может быть S или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (6)..(6)
<223>  Xaa может быть V или L
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (7)..(7)
<223>  Xaa может быть H или S
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (8)..(8)
<223>  Xaa может быть N или S
<400>  174
Arg Xaa Ser Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  175
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (3)..(3)
<223>  Xaa может быть S или K
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (4)..(4)
<223>  Xaa может быть T или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (7)..(7)
<223>  Xaa может быть D или T
<400>  175
Asp Ala Xaa Xaa Arg Ala Xaa
1               5
<210>  176
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (4)..(4)
<223>  Xaa может быть W или S
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (5)..(5)
<223>  Xaa может быть S или N
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (6)..(6)
<223>  Xaa может быть W или D
<220>
<221>  ПРОЧИЙ_ПРИЗНАК
<222>  (8)..(8)
<223>  Xaa может быть W или Y
<400>  176
Gln Gln Phe Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1               5
<210>  177
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  177
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gln Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Ile Phe Phe Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ile Thr Thr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  178
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  178
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Leu His Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Asp Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210>  179
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  179
Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp Tyr Ile His
1               5                   10
<210>  180
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  180
Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  181
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  181
Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile
1               5                   10
<210>  182
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  182
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210>  183
<211>  443
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  183
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu
130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165                 170                 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser
180                 185                 190
Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195                 200                 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys
210                 215                 220
Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro
225                 230                 235                 240
Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr
245                 250                 255
Cys Val Val Val Ala Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser
260                 265                 270
Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg
275                 280                 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile
290                 295                 300
Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn
305                 310                 315                 320
Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
325                 330                 335
Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu
340                 345                 350
Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe
355                 360                 365
Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala
370                 375                 380
Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr
385                 390                 395                 400
Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly
405                 410                 415
Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His
420                 425                 430
Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435                 440
<210>  184
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  184
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1               5                   10                  15
<210>  185
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  185
Leu Asp Arg Asn Arg Ala His
1               5
<210>  186
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  186
Met Gln Ser Phe Glu Thr Pro Ile Thr
1               5
<210>  187
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  187
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  188
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  188
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115                 120                 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180                 185                 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195                 200                 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210                 215
<210>  189
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  189
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210>  190
<211>  443
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  190
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu
130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165                 170                 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser
180                 185                 190
Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195                 200                 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys
210                 215                 220
Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro
225                 230                 235                 240
Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr
245                 250                 255
Cys Val Val Val Ala Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser
260                 265                 270
Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg
275                 280                 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile
290                 295                 300
Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn
305                 310                 315                 320
Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
325                 330                 335
Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu
340                 345                 350
Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe
355                 360                 365
Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala
370                 375                 380
Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr
385                 390                 395                 400
Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly
405                 410                 415
Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His
420                 425                 430
Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435                 440
<210>  191
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  191
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  192
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  192
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115                 120                 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180                 185                 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195                 200                 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210                 215
<210>  193
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  193
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  194
<211>  448
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Glu Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Asn Asn Pro Arg Thr Gly Leu Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180                 185                 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210                 215                 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245                 250                 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275                 280                 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290                 295                 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325                 330                 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340                 345                 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355                 360                 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370                 375                 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405                 410                 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420                 425                 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435                 440                 445
<210>  195
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  195
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35                  40                  45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Ile Pro
50                  55                  60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  196
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  196
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Lys
20                  25                  30
His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35                  40                  45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Asn Arg Ala His Gly Ile Pro
50                  55                  60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85                  90                  95
Phe Glu Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  197
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  197
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  198
<211>  443
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  198
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435                 440
<210>  199
<211>  221
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  199
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser
20                  25                  30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Tyr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85                  90                  95
Asp Tyr Phe Tyr Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys Arg Gly Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
115                 120                 125
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
130                 135                 140
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
145                 150                 155                 160
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
165                 170                 175
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
180                 185                 190
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
195                 200                 205
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215                 220
<210>  200
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  200
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  201
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  201
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Asn Ile Trp Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Leu Leu Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  202
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  202
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser
20                  25                  30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Tyr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85                  90                  95
Asp Tyr Phe Tyr Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  203
<211>  432
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  203
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Gln Pro Gly Arg Ser
1               5                   10                  15
Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser Gly
20                  25                  30
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
35                  40                  45
Val Arg Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100                 105                 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
115                 120                 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Asp Tyr Phe
130                 135                 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165                 170                 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Thr Tyr Thr
180                 185                 190
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Arg Val Glu
195                 200                 205
Ser Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
210                 215                 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225                 230                 235                 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Trp Val Asp Val Ser Gln Glu
245                 250                 255
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Tyr Asp Gly Val Glu Val His
260                 265                 270
Asn Ala Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
275                 280                 285
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
290                 295                 300
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
305                 310                 315                 320
Thr Ile Ser Lys Ala Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
325                 330                 335
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
340                 345                 350
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
355                 360                 365
Asn Gly Gln Pro Glu Lys Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
370                 375                 380
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
385                 390                 395                 400
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
405                 410                 415
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
420                 425                 430
<210>  204
<211>  208
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  204
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35                  40                  45
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65                  70                  75                  80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100                 105                 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Ser Gly Thr Ala Ser
115                 120                 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Val Gln Trp
130                 135                 140
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
145                 150                 155                 160
Glu Gln Asp Ser Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
165                 170                 175
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
180                 185                 190
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
195                 200                 205
<210>  205
<211>  447
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  205
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225                 230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245                 250                 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260                 265                 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275                 280                 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290                 295                 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325                 330                 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340                 345                 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355                 360                 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370                 375                 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405                 410                 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420                 425                 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440                 445
<210>  206
<211>  218
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  206
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20                  25                  30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35                  40                  45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85                  90                  95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100                 105                 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115                 120                 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130                 135                 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145                 150                 155                 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165                 170                 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180                 185                 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195                 200                 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  207
<211>  432
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  207
Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly
1               5                   10                  15
Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn
20                  25                  30
Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser
35                  40                  45
Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly
50                  55                  60
Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu
85                  90                  95
Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu
100                 105                 110
Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly
115                 120                 125
Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn
130                 135                 140
Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val
145                 150                 155                 160
Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp
165                 170                 175
Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser
180                 185                 190
Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Glu Pro Lys Ser Cys Asp
195                 200                 205
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
210                 215                 220
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
225                 230                 235                 240
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Trp Val Asp Val Ser His Glu Asp
245                 250                 255
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
260                 265                 270
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Trp
275                 280                 285
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
290                 295                 300
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
305                 310                 315                 320
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
325                 330                 335
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
340                 345                 350
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
355                 360                 365
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
370                 375                 380
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
385                 390                 395                 400
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
405                 410                 415
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
420                 425                 430
<210>  208
<211>  118
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  208
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  209
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  209
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100                 105
<210>  210
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  210
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1               5
<210>  211
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  211
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Asn
1               5                   10
<210>  212
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  212
Ser Tyr Trp Ile Asn
1               5
<210>  213
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  213
Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu
1               5
<210>  214
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  214
Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
<210>  215
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  215
Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr
1               5
<210>  216
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  216
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1               5                   10                  15
Thr
<210>  217
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  217
Trp Thr Ser Tyr Arg Glu Ser
1               5
<210>  218
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  218
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro His Thr
1               5
<210>  219
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  219
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  220
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  220
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser
20                  25                  30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Tyr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85                  90                  95
Asp Tyr Phe Tyr Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  221
<211>  290
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетическая конструкция
<400>  221
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1               5                   10                  15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20                  25                  30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35                  40                  45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50                  55                  60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85                  90                  95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100                 105                 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115                 120                 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130                 135                 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145                 150                 155                 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165                 170                 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180                 185                 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195                 200                 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210                 215                 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225                 230                 235                 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245                 250                 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260                 265                 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275                 280                 285
Glu Thr
290
<---