Морфофункциональное состояние нейтрофилов человека при воздействии фемтосекундного лазерного излучения в условиях in vitro

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА___________

УДК 61:577.3+535.3:612.128

Т. П. Генинг, Т. В. Абакумова, Д. Р. Арсланова,

О. С. Воронова, С. О. Генинг, Б. Б. Костишко

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ФЕМТОСЕКУНДНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ В УСЛОВИЯХ IN VITRO1

Аннотация. Изучалось влияние фемтосекундного лазерного излучения на нейтрофилы человека in vitro. Для этого цитохимически определяли параметры функционирования аэробной бактерицидной системы и фагоцитарную активность, а также исследовали топологию и ригидность мембраны нейтрофи-лов донорской крови при действии на них различных доз фемтосекундного лазерного излучения. Под действием фемтосекундного лазера изменяется ригидность мембраны нейтрофилов, увеличивается число клеток, продуцирующих активные формы кислорода (спонтанный НСТ-тест).

Ключевые слова: нейтрофилы, фемтосекундное лазерное излучение, сканирующая зондовая микроскопия.

Abstract. ТИе authors have studied the effect of femtosecond laser radiation on human neutrophils in vitro. For this purpose the researchers have cytochemically determined the operating parameters of an aerobic bactericidal system and phagocytic activity. Besides that the topology and rigidity of a blood neutrophils membrane under the action of different doses of femtosecond laser radiation was also investigated. Rigidity of the neutrophils membrane changes and the number of cells producing reactive oxygen species increases under the influence of the femtosecond laser (spontaneous nitroblue tetrazolium test).

Key words: neutrophils, femtosecond laser irradiation, atomic force microscopy.

Введение

Выбор нейтрофилов в качестве клеток-мишеней лазерного облучения обусловлен их полифункциональной ролью в поддержании защитной реакции организма, а также потенциальной возможностью их активации при действии экзогенных физико-химических факторов [1, 2]. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на функциональную активность нейтрофилов (Нф) оценивалось в эксперименте и клинике как in vivo, так и in vitro [3-6]. При этом обнаружены разнонаправленные эффекты. При облучении суспензии Нф in vitro красным лазерным светом (плотность мощности 110 Вт/м2, доза до 200 кДж/м2) не выявлено изменений в фагоцитарной ак-

1 Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические

кадры инновационной России на 2009-2013 гг.».

тивности, способности генерировать супероксидный радикал при активации Нф дигитонином [7]. В работах Гизингера О. А. [8-10] выявлено, что при хламидийном цервиците на фоне депрессии фагоцитарной активности Нф, коррелирующей с низким кислородзависимым микробоцидным потенциалом, наблюдается реорганизация экспрессии рецепторов цитоплазматической мембраны нейтрофильного гранулоцита (НГ). НИЛИ в условиях in vitro при этом проявляет выраженную иммуномодулирующую активность в отношении нейтрофилов пациентов с хламидийным цервицитом. При облучении нейтрофилов доноров выявлена активация ферментов кислородзависимой системы, снижение энергетических резервов, свидетельствующее об усилении катаболизма [11]. Установлено, что НИЛИ запускает Ca2+-зависимые реакции, приводящие к предстимуляции (праймингу) полиморфноядерных лейкоцитов [12].

В настоящее время фемтосекундная лазерная физика - одно из приоритетных направлений науки, которое может найти применение и в биомедицинских исследованиях. Основными преимуществами данного типа лазеров является малая длительность импульса, высокая пиковая и малая средняя мощности, вследствие чего возможно отсутствие выраженных термических эффектов. Фемтосекундные лазеры - идеальный инструмент для управления процессами в физических, химических и биологических системах, так как с помощью коротких (10-15 с) оптических импульсов можно контролируемо возбуждать молекулы и атомы и наблюдать происходящие процессы.

Однако в доступной отечественной и зарубежной литературе нами не обнаружено исследований по оценке влияния фемтосекундного лазерного излучения (ФСЛИ) на нейтрофилы человека.

Цель исследования: изучить морфофункциональное состояние нейтрофилов человека в условиях облучения фемтосекнудным лазером in vitro.

1. Материалы и методы исследования

В исследовании использованы нейтрофилы доноров, выделенные из венозной крови на растворе фиколла/урографина разной плотности (1,117 и 1,077 г/см3). Кольцо Нф собирали и отмывали трижды от фиколл/урографина холодным раствором Хенкса при 1500 об/мин в течение 10 мин. Нейтрофилы облучали в пластиковых кюветах высотой 1 см на расстоянии 3 и 5 см от световода фемтосекундного лазера.

Был использован фемтосекундный волоконный эрбиевый лазер, который является совместной уникальной разработкой Научного центра волоконной оптики РАН и Ульяновского государственного университета с характеристиками: длительность импульса - 10-13 с; средняя мощность - 1,25 мВт; пиковая мощность - 6 кВт; длина волны - 1,55 мкм.

Расчеты по плотности облучения фемтосекундным лазерным излучением.

Для расстояния 3 см (при диаметре пучка 0,6 см) и 5 см (при диаметре пучка 1 см) и исходных энергетических характеристик лазера плотность энергии на биоткань (Э) рассчитывали следующей по формуле [13]:

Э = W/S,

где W - выходная энергия излучения, Дж; S - площадь лазерного пятна на биоткани, см2.

Выходную энергию для импульсно-периодического режима определяли из соотношения

W = P •

t.

где Р - выходная мощность излучения, Вт; t - время воздействия, с; ^ - длительность импульса, с; ^ - длительность паузы, с.

Из приведенных зависимостей следует, что плотность потока энергии на биоткани можно менять как за счет изменения мощности излучения, так и за счет изменения размера лазерного пятна (расфокусировки) (табл. 1).

Таблица 1

Расчет плотности потока облучения в зависимости от длительности облучения, средней и пиковой мощности фемтосекундного лазера

Плотность энергии Параметры облучения

1 мин. 3 см 1 мин. 5 см 3 мин. 3 см 5 мин. 3 см 3 мин. 5 см 10 мин. 3 см 5 мин. 5 см 10 мин. 5 см

Э (средняя), мДж/см2 8.5 23.7 25.4 42.3 71.1 84.5 118.5 237.0

Э (пиковая), кДж/см2 40.3 113.0 121.0 202.0 339.0 403.0 443.7 887.4

Цитохимические методы исследования. Определение активности ми-елопероксидазы (МПО) проводили по методу Грэхема - Кнолля с бензидином [14]. Долю активных нейтрофилов, продуцирующих активные формы кислорода, определяли в спонтанном варианте НСТ-теста [15]. Для определения фагоцитарной активности применяли стандартную методику с использованием дрожжей. Вычисляли следующие показатели фагоцитоза: фагоцитарное число по Райту - среднее число захваченных одним фагоцитом частиц, и фагоцитарный индекс по Гамбургеру - процент фагоцитов, принимающих участие в фагоцитозе к общему числу фагоцитов [16].

В каждом мазке подсчитывали 100 Нф, среди которых определяли процент клеток, содержащих отложения соответствующего фермента и подсчитывали средний цитохимический коэффициент.

Морфологические методы исследования. Для оценки топологии и ригидности мембраны нейтрофилов использован метод сканирующей зондо-вой микроскопии (8шепа А КТ-МБТ, г. Зеленоград, Россия). Использовались фирменные кремниевые зонды с жесткостью 0,2 №ш, радиус закругления кончика зонда составлял примерно 50 пт. Нейтрофилы, фиксированные метанолом, сканировались в полуконтактном режиме. Ригидность мембран оценивалась по модулю Юнга, который рассчитывали согласно теории Герца [17].

Для выявления различий между данными, полученными в эксперименте и контрольной группе, применялся непараметрический ^-критерий Манна-Уитни (81а1а 6.0). Статистически достоверными считались данные прир < 0,05.

2. Полученные результаты и их обсуждение

С 1990-х гг. в биомедицинских исследованиях активно используется метод сканирующей зондовой микроскопии (СЗМ), который предоставил

возможность изучать параметры клеток, не прибегая к длительной и сложной фиксации, тем самым минимально искажая получаемую информацию. Метод СЗМ позволяет измерять локальные упругие свойства поверхности клеток. Для нейтрофильных гранулоцитов исследование механических свойств мембраны имеет первостепенное значение, поскольку процессы диапедеза и миграции в тканях и процесс фагоцитоза сопровождаются комплексными упругомеханическими реакциями. Помимо рецепторных взаимодействий, которые к настоящему времени достаточно полноценно исследованы и охарактеризованы, в рекогносцировочных реакциях нейтрофилов большое значение имеют перестройки цитоскелета, активация хемо- и механорецепторов [18].

На рис. 1 представлены результаты сканирования препаратов интакт-ных Нф доноров, фиксированных метанолом. Они отражают полиморфизм нейтрофилов. На рис. 1,а видны границы клетки, полиморфное сегментированное ядро и гранулы цитоплазмы, которые выявляются и по боковому сечению клетки (рис. 1,б). При этом Нф не имеют строгой округлой формы, а цитоплазматические гранулы распределены достаточно равномерно, и клетка распластана по поверхности подложки.

б)

Рис. 1. Нейтрофильные гранулоциты контрольной группы, изображения которых получены после фиксации метанолом и сканирования в воздушной среде

На последующих рисунках представлены Нф после ФСЛИ различной интенсивности. На рис. 2 представлены нейтрофилы после ФСЛИ средней

8,5 мДж/см2 и пиковой 40,3 кДж/см2 интенсивности. По сравнению с интакт-ными, в облученных в данной дозе клетках отмечается более отчетливая граница клетки, цитоплазма концентрируется вокруг ядра.

Рис. 2. Нейтрофильные гранулоциты после ФСЛИ средней 8,5 мДж/см и пиковой 40,3 кДж/см2 интенсивности после фиксации метанолом и сканирования в воздушной среде

На рис. 3 представлены Нф после ФСЛИ в дозе 42,3 мДж/см2 средней и 201,6 кДж/см2 пиковой интенсивности. Границы клеток размыты. Сегментированное ядро и гранулы цитоплазмы отдифференцировать сложно при том, что последние опять переместились к периферии клетки. По боковому сечению клетки (рис. 3,б) определяется значительно суженое ядро.

На рис. 4 представлены Нф после ФСЛИ в дозе средней 71,7 мДж/см2 и пиковой 339,1 кДж/см2 интенсивности. Топография этих клеток и в 30, и по боковому сечению сходна с топографией клеток после ФСЛИ в дозе

8,5 мДж/см2 средней и 40,3 кДж/см2 пиковой интенсивности: однако границы клеток размыты, ядро и гранулы цитоплазмы определяются только по боковому сечению.

Ж

но

« М

59

а)

Рис. 3. Нейтрофильные гранулоциты после ФСЛИ средней 42,3 мДж/см2 и пиковой 202 кДж/см2 интенсивности

При оценке топографии Нф, получивших среднюю дозу ФСЛИ

84,5 мДж/см2 и пиковую 403,2 кДж/см2 интенсивности, показано, что клетки имеют неправильную форму, вытянутую в одну сторону с размытой границей (рис. 5,а); ядро определяется плохо и только предположительно (по боковому сечению клетки (рис. 5,б), не отличаясь по высоте существенно от цитоплазмы.

При последующем увеличении интенсивности ФСЛИ топография Нф характеризовалась окончательной утратой овальной формы, появлением выростов, отсутствием четкой клеточной границы, набуханием, отсутствием четкого изображения ядра и невозможностью дифференцировать гранулы цитоплазмы.

Изучение топологии Нф доноров после воздействия фемтосекундного лазерного излучения показало, что после различных доз лазерного облучения происходит активное формирование псевдоподий у нейтрофилов, уменьшение шероховатости и высоты клеток. Установлено, что ригидность Нф после ФСЛИ повышается, мембрана становится более жесткой (рис. 6). Особенно значимо изменяются значения ригидности мембраны Нф при 25,4 и

237 мДж/см2 - средних и 113 и 887,4 кДж/см2 - пиковых плотностях потока энергии ФСЛИ. Возможно, это связано с активацией Нф и перестройкой цитоскелета в процессе облучения.

б)

Рис. 4. Нейтрофильные гранулоциты после ФСЛИ средней 71,1 мДж/см2 и пиковой 339 кДж/см2 интенсивности

Таким образом, методом сканирующей зондовой микроскопии установлено, что ФСЛИ воздействует как на топологию нейтрофилов, так и на упругие свойства их мембран.

Способность нейтрофилов вызывать гибель различных микроорганизмов и опухолевых клеток связана с наличием в них двух микробицидных систем - кислородзависимой и кислороднезависимой [19]. Микробицидный кислородзависимый механизм связан с активацией НАДФН-оксидазного комплекса, выходом кислородных радикалов, супероксида аниона (О2-) с последующим образованием перекиси водорода (Н2О2). В этом механизме также принимает участие миелопероксидаза, гипохлоридная кислота и хлора-мины [20].

Нами изучена активность миелопероксидазы в Нф доноров после воздействия различных доз ФСЛИ (рис. 7).

а)

б)

Рис. 5. Нейтрофильные гранулоциты после ФСЛИ средней 84,5 мДж/см2 и пиковой 403 кДж/см2 интенсивности

Плотность потока облучения, мДж/см 2  конг роль  8,5 D 25,4  42,3  71,1 а 84,5 8 118,5 0 237,0

Рис. б. Ригидность мембраны нейтрофилов в зависимости от плотности потока облучения фемтосекундным лазерным излучением

ос

s

X

CD

І

С

ю

о

о

t-

o

с

Jj

—

<_>

о

237мДж/См2 118,5мДж/см2 84,5мДж/см2 71,1 мДж/см2 42,ЗмДж/см2 25,4мДж/см2 23,7мДж/см2 8,5мДж/см2 контроль

ттшжжжжтття

шиішііііііііцііііііііііііііііііііііііііт і п

I! iiiiISISS1ІШ і І1.67

1ІІІІ1І111ІІІІІІ1ІІІІІІ1ІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІ1ІІ1І1ІІІ11ІІІІІІ1111І1ІІІ1ІІ1.74

IIIHIHltlHHllHHtlltltttllfltlHlllHHUtltlttllHllttfiHlltllttlllHttlltltlllltl 1.96

т т ннШШшшн їШШт жШтімб

й§ і Щ і 11Н8ЯИІІВІ1ІІ1ШШШ і Ш і Ш і И1.47

ШШШ1ІІ11111іі11111ШШ11Ш1ІІ1Ш1111ІІШЖіШГі .63

ІІІІІ1ІІІІ1111ІІіаіІІІ111ІШІІІ8ІШ18ІШ11ІІІіІ1ІІІІ{11Ш^Щі .69

0.5

1

сцк

1.5

2.5

Рис. 7. Активность миелопероксидазы в нейтрофилах доноров в зависимости от плотности потока облучения ФСЛИ

На начальных дозах облучения ФСЛИ активность МПО в нейтрофилах доноров снижается. При дозах 25,4; 42,3; 71,1 мДж/см2 наблюдается некоторое повышение активности МПО, а в дальнейшем значения не отличаются достоверно от контрольных. Наблюдается волнообразная динамика в пределах коридора значений интактных нейтрофилов.

Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) является одним из наиболее чувствительных методов, отражающих способность Нф генерировать активные формы кислорода (АФК). Данные, представленные в табл. 2, указывают на повышение числа НСТ-положительных Нф, продуцирующих АФК для реализации киллинга, после воздействия фемтосекундного лазера.

Таблица 2

Спонтанный НСТ-тест в нейтрофилах крови человека, облученных ФСЛИ в условиях in vitro

Средняя, пиковая плотность энергии Контроль 8,5 мДж/см2 40,3 кДж/см2 23,7 мДж/см2 іі3 кДж/см2 2 2 S « чч 2 (N 2 2 ^ О S й 3 2 3 8 7і,7 мДж/см2 339 кДж/см2 84,5 мДж/см2 403 кДж/см2 118,5 мДж/см2 443,7 кДж/см2 237 мДж/см2 887,4 кДж/см2

НСТ-тест, і,06 і і,39 і і,45 і і,38 і і,29 і і,38 і 1,42 і 1,02 і 1,27 і

СЦК 0,177 0,266 0,2і6* 0,і78* 0,232 0,і29* 0,143* 0,242 0,218

Примечание. * - данные, статистически значимо отличающиеся от контрольных.

Мы также изучали фагоцитарную активность нейтрофильных грануло-цитов человека при различных дозах облучения ФСЛИ. Показано, что фагоцитарный индекс меняется волнообразно, при этом не изменяясь статистически значимо; фагоцитарное число имеет тенденцию к снижению. Таким образом, ФСЛИ при данных дозах in vitro не стимулирует фагоцитарную активность Нф (рис. 8).

Рис. 8. Фагоцитарная активность Нф в зависимости от плотности потока облучения

Полученные данные позволяют предполагать дозозависимую активацию образования АФК в Нф человека при действии ФСЛИ, а также отсутствие влияния этого излучения на их бактерицидную и фагоцитарную активность.

Заключение

1. ФСЛИ дозозависимо влияет на морфофункциональное состояние нейтрофилов человека.

2. Праймирование нейтрофилов под влиянием ФСЛИ сопровождается появлением на клетке выростов, набуханием, дегрануляцией и повышением ригидности клеточной мембраны.

3. ФСЛИ дозозависимо активирует образование АФК в нейтрофилах человека.

Список литературы

1. Москвин, С. В. Возможные пути повышения эффективности лазерной терапии с позиций современных представлений о физиологических механизмах

действия низкоинтенсивного лазерного излучения / С. В. Москвин // Доказательная медицина - основа современного здравоохранения : материалы IV Междунар. конгресса (3-7 октября 2005 г.). - Хабаровск : Изд. центр ИПКСЗ, 2005. - С. 181-182.

2. Чудновский, В. М. Биологические модели и физические механизмы лазерной терапии / В. М. Чудновский, Г. М. Леонова, С. А. Скопинов. - Владивосток, 2002. - 115 с.

3. Siposan, D. G. Relative variation to received dose of some erythrocytic and leukocytic indices of human blood as a result of low-level laser radiation : an in vitro study / D. G. Siposan, A. Lukacs // J. Clin. Laser Med. Surg. - 2001. - V. 19, № 2. -P. 89-103.

4. Артюхов, В. Г. Влияние лазерного облучения на функциональную активность

Нф человека: активация молекул миелопероксидазы в присутствии

гематопорфирина / В. Г. Артюхов, О. В. Башарина, Л. Т. Рязанцева, Б. А. Зон // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 131, № 4. -С. 457-460.

5. Киселева, Р. Е. Динамика активности мембраносвязанных ферментов в нейтрофилах под влиянием низкоэнергетического гелий-неонового лазера / Р. Е. Киселева, Л .В. Кузьмичева, Ю. А. Дарькина, Е. В. Романова // Успехи современного естествознания. - 2001. - № 10. - С. 55-59.

6. Буйлин, В. А. Низкоинтенсивные лазеры в терапии различных заболеваний /

В. А. Буйлин, С. В. Москвин. - М., 2001. - 176 с.

7. Болозон, В. И. О роли фотосенсибилизируемых изменений НГ в терапевтическом действии красного лазерного света / В. И. Болозон, А. В. Воробей, Е. А. Черницкий // Лазерная и магнитолазерная терапия в медицине : материалы конф. - Тюмень, 1984. - С. 131-132.

8. Гизингер, О. А. Низкоинтенсивный лазер в коррекции дисфункций нейтро-фильных гранулоцитов пациентов с церцивитом хламидийной этиологии в эксперименте in vitro / О. А. Гизингер, И. И. Долгушин // Иммунология. - 2008. - Т. 29, № 6. - С. 346-349.

9. Гизингер, О. А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтро-филы периферической крови доноров в условиях эксперимента / О. А. Гизингер, О. Л. Колесников, К. Г. Ишпахтина // Иммунология. - 2009. - № 5. - С. 263-267.

10. Гизингер, О. А. Исследование дегрануляционных возможностей нейтрофилов при их облучении лазером низкой интенсивности in vitro / О. А. Гизингер, И. И. Долгушин, О. И. Летяева / О. А. Гизингер // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2010. - Т. 32, № 4. - С. 23-26.

11. Рудик, Д. В. Оценка функционально-метаболического статуса фагоцитирующих клеток под действием низкоинтенсивного лазерного излучения ИК-диапазона / Д. В. Рудик, Е. С. Тучина, Е. И. Тихомирова, А. С. Сенотов // Фундаментальные исследования. - 2006. - № 5. - С. 100-101.

12. Нечипуренко, Н. И. Механизмы действия и биологические эффекты НИЛИ / Н. И. Нечипуренко, И. Д. Пашковская, Д. И. Степанова, Л. А. Василевская // Медицинские новости. - 2008. - № 2. - С. 123-130.

13. Ежов, В. В. Некоторые биофизические аспекты контактной ИК-лазерной терапии шейки матки / В. В. Ежов, А. М. Торчинов, А. В. Гейниц, В. И. Фириченко // Лазерная медицина. - 2008. - Т. 12, Вып. 3. - С. 15-17.

14. Долгушин, И. И. Нейтрофилы и гомеостаз / И. И. Долгушин, О. В. Бухарин. -Екатеринбург, 2001. - 278 с.

15. Карпищенко, А. И. Медицинские лабораторные технологии : справочник / А. И. Карпищенко. - СПб. : Интермедика, 1999. - 656 с.

16. Медведев, А. Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза / А. Н. Маянский, В. В. Чаленко // Лаб. дело. - 1991. - № 2. - C. 19-20.

17. Henderson, R. M. Pushing, pulling, dragging, and vibrating renal epithelia by using atomic force microscopy / R. M. Henderson, H. Oberleithner // Am. J. Physiol. Renal. Physiol. - 2000. - May. - V. 278 (5). - Р. 689-701.

18. Плескова, С. Н. Использование метода сканирующей зондовой микроскопии для исследования морфологических параметров нейтрофильных гранулоцитов /

С. Н. Плескова, М. Б. Звонкова, Ю. Ю. Гущина // Морфология. - 2005. - Т. 127, № 1. - С. 60-62.

19. Тотолян, А. А. Клетки иммунной системы. Нейтрофилы / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлин. - СПб. : Наука, 2000. - 231 с.

20. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. - М. : Мир, 2000. -592 с.

Генинг Татьяна Петровна

доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой физиологии и патофизиологии, Ульяновский государственный университет

E-mail: Naum-53@yandex.ru

Абакумова Татьяна Владимировна

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, лаборатория молекулярной и клеточной биологии, Научно-исследовательский технологический институт, Ульяновский государственный университет

E-mail: Naum-53@yandex.ru

Арсланова Динара Ришатовна

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, лаборатория молекулярной и клеточной биологии, Научно-исследовательский технологический институт, Ульяновский государственный университет

E-mail: monika_rainbow@mail.ru

Воронова Ольга Сергеевна аспирант, Ульяновский государственный университет

E-mail: monika_rainbow@mail.ru

Генинг Снежанна Олеговна студентка, стажер-исследователь лаборатории молекулярной и клеточной биологии, Научно-исследовательский технологический институт, Ульяновский государственный университет

E-mail: Naum-53@yandex.ru 14

Gening Tatyana Petrovna Doctor of biological sciences, professor, head of sub-department of physiology and pathophysiology,

Ulyanovsk State University

Abakumova Tatyana Vladimirovna Candidate of biological sciences, senior staff scientist, laboratory of molecular and cell biology, Research Technological Institute, Ulyanovsk State University

Arslanova Dinara Rishatovna Candidate of biological sciences, senior staff scientist, laboratory of molecular and cell biology, Research Technological Institute, Ulyanovsk State University

Voronova Olga Sergeevna Postgraduate student, Ulyanovsk State University

Gening Snezhanna Olegovna

Student, trainee-researcher, laboratory of molecular and cell biology, Research Technological Institute, Ulyanovsk State University

Костишко Борис Борисович

студент, лаборант-исследователь лаборатории сканирующей зондовой микроскопии, Научно-исследовательский технологический институт, Ульяновский государственный университет

E-mail: Naum-53@yandex.ru

УДК 61:577.3+535.3:612.128 Генинг, Т. П.

Морфофункциональное состояние нейтрофилов человека при воздействии фемтосекундного лазерного излучения в условиях in vitro /

Т. П. Генинг, Т. В. Абакумова, Д. Р. Арсланова, О. С. Воронова, С. О. Генинг, Б. Б. Костишко // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2011. - № 3 (19). - С. 3-15.

Kostishko Boris Borisovich Student, laboratory assistant, laboratory of scanning probe microscopy, Research Technological Institute, Ulyanovsk State University