НОВЫЕ КОНЪЮГАТЫ ПОЛИСАХАРИДА С БЕЛКОМ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

1. Новые конъюгаты полисахарида с белком с высокой иммуногенностью, причем указанные конъюгаты полисахарида с белком содержат следующее:
по меньшей мере один полисахарид, полученный из группы грамотрицательных бактерий, включая в себя без ограничения Haemophilus influenzae типа b (Hib), Neisseria meningitidis (Men), Streptococcus pneumoniae;
по меньшей мере один белок-носитель, причем
указанные конъюгаты полисахарида с белком характеризуются стабильной карбаматной связью -О- (C=O)-N-,
формула указанных конъюгатов представляет собой PS-L1-L2-CR, где PS представляет собой полисахарид, L1 представляет собой карбаматную связь, L2 представляет собой гидразидную связь, и CR представляет собой белок-носитель.
2. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, где указанный полисахарид представляет собой предпочтительно капсульный полисахарид Neisseria meningitides, более предпочтительно капсульный полисахарид Neisseria meningitides серогруппы А, С, Y, W или X.
3. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 2, где указанный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Neisseria meningitidis серогруппы X.
4. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, где указанный белок-носитель выбран без ограничения из следующего: ТТ (столбнячный анатоксин), DT (дифтерийный анатоксин), CRM 197 (нетоксический мутант DT), OMPV (везикулы из белков наружной мембраны).
5. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, где указанные конъюгаты являются стабильными и их можно использовать в качестве кандидата вакцины либо отдельно, либо в комбинации.
6. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, причем указанные конъюгаты являются стабильными при комнатных температурах.
7. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, причем указанные конъюгаты характеризуются постепенным увеличением содержания свободного полисахарида, составляющим меньше чем 10,5%, при хранении при 37°С в течение 28 дней.
8. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, где указанная высокая иммуногенность указанных конъюгатов находится в диапазоне от 100-кратного до 150-кратного увеличения в значении титра после трех доз по сравнению с отрицательным контролем.
9. Новые конъюгаты полисахарида с белком по п. 1, причем указанные конъюгаты показывают титры в сывороточном бактерицидном тесте в диапазоне от 32-кратного до 128-кратного после двух доз и от 118-кратного до 198-кратного после трех доз по сравнению с контролем носителем.
10. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком с высокой иммуногенностью, причем указанный способ предусматривает стадии, на которых:
(a) разлагают указанный по меньшей мере один капсульный полисахарид до оптимального диапазона размеров,
(b) растворяют указанный разложенный полисахарид согласно стадии (а) в сильных электролитных солях и обеспечивают правильное смешивание полученной смеси в течение заданного периода времени, причем указанный заданный период времени находится в диапазоне от 30 мин до 90 мин,
(c) удаляют влагу из полученной смеси, полученной на стадии (b), с помощью известных техник, включая в себя без ограничения лиофилизацию, роторное испарение или вакуумную сушку, для получения высушенного полисахарида,
(d) растворяют указанный высушенный полисахарид согласно стадии (с) по меньшей мере в одном из неводных апротонных растворителей,
(e) проводят реакцию полученного раствора согласно стадии (d) с заданной концентрацией по меньшей мере одного не содержащего влаги активирующего средства,
(f) выдерживают полученную смесь согласно стадии (е) в течение заданного периода времени по меньшей мере с одним линкером для получения полисахарида, который представляет собой активированный полисахарид, причем указанный заданный период времени находится в диапазоне от 2 ч до 3 ч,
(g) очищают указанный активированный полисахарид согласно стадии (f) с помощью известных способов, включая в себя без ограничения осаждение сульфатом аммония, диафильтрацию, гель-фильтрацию и/или их комбинацию,
(h) проводят реакцию указанного очищенного активированного полисахарида согласно стадии (g) по меньшей мере с одним активированным белком-носителем, имеющим по меньшей мере один встроенный линкер, в течение заданного периода времени при широком диапазоне рН, причем указанный заданный период времени находится в диапазоне от 2 ч до 20 ч.
11. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный диапазон оптимальных размеров указанного разложенного полисахарида находится в диапазоне коэффициента распределения, составляющего 0,38+0,06 kD.
12. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанные неводные апротонные растворители выбраны без ограничения из безводного диметилсульфоксида (DMSO), диметилформамида (DMF), N-метилпирролидона (NMP) или диметилацетамида.
13. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанное по меньшей мере одно не содержащее влаги активирующее средство представляет собой N,N'-карбонилдиимидазол (CDI), N,N'-дисукцинимидилкарбонат (DSC) или N,N'-дисукцинимидилоксалат (DSO).
14. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный по меньшей мере один активированный белок-носитель выбран без ограничения из следующего: ТТ (столбнячный анатоксин), DT (дифтерийный анатоксин), CRM197 (нетоксический мутант DT), OMPV (везикулы из белков наружной оболочки).
15. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанная заданная концентрация по меньшей мере одного не содержащего влаги активирующего средства находится в диапазоне от 5 до 50 молярного избытка, предпочтительно составляет 30 молярный избыток.
16. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный широкий диапазон рН составляет от рН 6 до рН 10.
17. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанные конъюгаты полисахарида с белком характеризуются стабильной карбаматной связью -О- (C=O)-N-.
18. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный способ дает на выходе конъюгаты согласно формуле PS-L1-L2-CR, где PS представляет собой полисахарид, L1 представляет собой карбаматную связь, L2 представляет собой гидразидную связь, и CR представляет собой белок-носитель.
19. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный по меньшей мере один линкер на активированном полисахариде представляет собой карбамат.
20. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный по меньшей мере один линкер на активированном белке-носителе представляет собой гидразид.
21. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанный разложенный и активированный полисахарид и указанный активированный белок-носитель смешивают в пропорции, находящейся в диапазоне от 0,5:1 до 1:0,5 масс/масс, более предпочтительно 1:1 масс/масс, в буфере с рН 7,0-10,0, предпочтительно рН 9,0.
22. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 21, где указанный буфер выбирают без ограничения из карбонатного буфера, боратного буфера.
23. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где соотношение полисахарида к белку в указанном конъюгате находится в диапазоне от 0,3 до 1,0 (масс/масс).
24. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где указанные конъюгаты характеризуются свободным полисахаридом, составляющим меньше чем 10% в очищенных конъюгатах.
25. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где выход конъюгата, полученного с помощью указанного способа конъюгирования, составляет вплоть до 60%.
26. Способ получения новых конъюгатов полисахарида с белком по п. 10, где средний выход конъюгата, полученного с помощью указанного способа конъюгирования, составляет 30±5%.