Новый способ серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза с помощью иммуночипа

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

Вывод. Правильный алгоритм совместных действий эпидемиологов и микробиологов позволяет своевременно и эффективно проводить необходимые мероприятия программе инфекционного контроля.

МОНИТОРИНГОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОКЛЮША В СВЯЗИ С УСИЛЕНИЕМ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ОГРАНИЧЕНИЮ РАСПРОСТРАНЕНИЯ КОКЛЮША СРЕДИ ОРГАНИЗОВАННЫХ ДЕТЕЙ Г.Я. Ценева1, И.Б. Блиман2, Т.Е. Быстрая2 'ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Санкт-Петербург» в Адмиралтейском, Василеостровском и Центральном районах, Санкт-Петербург

В филиале №4 ФБУЗ предложено институтом им. Пастера проводить мониторинговые исследования возбудителя коклюша в связи с усилением мероприятий по ограничению распространения коклюша среди организованных детей.

С 2008 по 2011 гг. прослеживается рост заболеваемости коклюшем: 2008 г. — 81 случай; 2009 г. — 116; 2010 г. — 122 и 2011 г. — 171 случай. Высеваемость в среднем составила 3% — 5%. Обследование кашляющих проводится в сроки от 3-х недель и более от начала заболевания, что объясняет низкую высеваемость.

Возрастная структура обследуемых с кашлем следующая: до года — 2%; от 1 до 6 лет — 61%; 7 лет и старше — 37%. Основная масса обследованных это дети от 3-х до 7-и лет и старше, как правило, на 86% привитые и, обследованы в поздние сроки, что крайне затрудняет выделение коклюшного микроба.

Бактериологический метод выделения коклюшного микроба информативен только в ранние сроки заболевания (от 1 до 14 дней от начала болезни). Актуальность приобретают экспресс-методы обследования кашляющих больных, так как позволяют выделить коклюшный микроб на поздних сроках заболевания и на фоне антибиотикотерапии. Это ИФА, ПЦР, серологический метод.

Только качественное обследование на коклюш позволяет дать правильную оценку распространения возбудителя среди населения и эффективно проводить эпидемиологический надзор за коклюшной инфекцией.

НОВЫЙ СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИКСОДОВОГО КЛЕЩЕВОГО БОРРЕЛИОЗА С ПОМОЩЬЮ ИММУНОЧИПА

Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Л.С. Карань, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина,

A.И. Сажин, И.Н. Манзенюк, Г.А. Шипулин

ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва

Разработана тест-система в формате иммуночипа для серодиагностики иксодового клещевого борре-лиоза (ИКБ), позволяющая дифференциально выявлять антитела классов G и M к антигенам борре-лий B. afzelii и B. garinii. В состав иммуносорбента включены 14 антигенов: p100 B. garinii, p100 B. afzelii, p41 B. garinii, p41 B. afzelii, ВВК32 B. garinii, ВВК32 B. afzelii, p17 B. garinii, p17 B. afzelii, OspC B. garinii, OspC

B. afzelii, р39 B. afzelii, p58 B. afzelii, УкЕ B. afzelii, УкЕ B. garinii, которые иммобилизованы в виде индиви-

дуальных спотов на микроскопных слайдах с модифицированной химической поверхностью. На одном слайде — 12 эрреев для анализа 12 клинических/контрольных образцов. Благодаря конъюгату, состоящему из смеси антител к IgG человека и антител к IgM человека, меченых Су5 и Cy3 соответственно, и учету результатов с помощью многоканального флуоресцентного сканера возможно дифференциальное выявление антител. Общее время инкубации в чипе с образцами и конъюгатом — 1 час, для проведения анализа требуется 10 мкл сыворотки/плазмы крови.

Для оценки чувствительности иммуночипа изучены образцы сывороток/плазмы крови от 79 пациентов, взятых в срок до 1 месяца с момента присасывания клеща, и образцы сывороток крови от 150 больных с диссеминированной и хронической стадиями (2 и 3 стадии) ИКБ. Для оценки специфичности иммуночипа сформирована контрольная группа из 495 сывороток крови (250 образцов — от практически здоровых доноров, не отмечавших ранее присасывание клеща, 50 образцов — от беременных и больных с аутоиммунными заболеваниями; 130 образцов — от больных сифилисом; 65 образцов — от больных лептоспирозом).

Обнаружение в иммуночипе антител класса M среди пациентов, отнесенных к 1-й стадии ИКБ, достигало 60,1%, а антител класса G — 31,6%. Выявление специфических IgG и IgM позволило подтвердить серологический диагноз Лайм-боррелиоза для 87,3% пациентов в этой группе. Выявление IgM в группе пациентов 2 и 3 стадией ИКБ достигало 51,4%, антител класса G — 88,6%, при этом суммарное выявление антител в чипе — 98,1%. Анализ в иммуно-чипе сывороток контрольной группы показал отсутствие специфических IgM и IgG для 97,2% образцов. Подана заявка на получение патента РФ.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА TORCH-ИНФЕКЦИЙ В НОВОМ ФОРМАТЕ ИММУНОЧИПА

Т.А. Чеканова, М.Л. Маркелов, Е.А. Пудова, Н.П. Кирдяшкина, А.Е. Судьина, А.И. Сажин, Г.А. Шипулин

ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва

Для серологической диагностики TORCH-инфекций существует большой спектр иммунофер-ментных тест-систем. Вместе с тем, не существует коммерческой тест-системы для дифференциального выявления антител разных классов к спектру наиболее значимых антигенов возбудителей инфекций в одном анализе. Таким образом, для выявления антител классов G и М, по крайней мере, к основным классическим возбудителям инфекций комплекса TORCH, требуется использование не менее восьми разных наборов, что существенно отражается не только на объеме анализируемого образца, но и увеличивает стоимость анализа и время исследования.

Иммуночипы с флуоресцентной детекцией результатов позволяют повысить информативность исследований за счет возможности раздельного выявления антител разных классов к широкому спектру антигенов возбудителей инфекций. Нами разработан иммуночип для серодиагностики TORCH-инфекций, позволяющий выявлять в одном анализе антитела классов G и М к антигенам: GRA1 (p24), GRA7 (p29), MIC3, SAG1 (p30) Toxoplasma