Способ получения рекомбинантных герпесвирусов для одновременной трансдукции и иммортализации первичных Т-лимфоцитов и НК-клеток

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pUC-HVS-OFP, состоящая из следующих ключевых генетических элементов:
а) гена устойчивости к пуромицину (рас);
б) гена оранжевого флуоресцентного белка (OFP);
в) фланкирующих участков (600 п.н.), гомологичных области vCD59 генома HVS, имеющих последовательности SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2;
г) гена устойчивости к антибиотику ампициллину (AmpR) и бактериального промотора гена устойчивости к ампициллину (AmpR promoter);
д) ориджина репликации бактериофага f1 (ori);
е) промотора цитомегаловируса (CMV).
2. Способ получения рекомбинантных герпесвирусов, характеризующийся следующими параметрами:
пермиссивную к литической инфекции вирусом Herpesvirus Saimiri культуру клеток заражают штаммом вируса Herpesvirus Saimiri HVS-C488, а другую перевиваемую линию клеток трансфицируют смесью из экспрессионных плазмид и плазмиды п. 1, которая содержит целевой участок, предназначенный для введения в геном вируса штамма Herpesvirus Saimiri HVS-C488, фланкированный последовательностями протяженностью 300-900 пар нуклеотидных оснований, гомологичных тому участку генома Herpesvirus Saimiri, в который производится введение целевого участка, а две другие экспрессионные плазмиды кодируют поверхностные гликопротеины F и Н вакцинного штамма вируса кори, после чего инфицированную Herpesvirus Saimiri пермиссивную клеточную культуру и трансфицированную экспрессионными плазмидами клеточную культуру смешивают и подвергают ко-культивации, в результате чего происходит образование многоядерных синцитиев из клеток обеих культур, что обеспечивает прохождение рекомбинации гомологичных участков, внедрение целевого гена в геном Herpesvirus Saimiri и выход во внеклеточную жидкость рекомбинантных герпесвирусов.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве пермиссивной к литической инфекции Herpesvirus Saimiri культуры клеток используют культуру клеток ОМК (owl monkey kidney cells, почечный эпителий ночных обезьян).
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве перевиваемой клеточной линии, которую трансфицируют смесью экспрессионных плазмид и плазмиды п. 1, используют клеточную линию HEK-293 либо ее производные.
5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве последовательности протяженностью 300-900 пар нуклеотидных оснований, гомологичной участку генома Herpesvirus Saimiri, используют последовательность вирусного гена vCD59.
6. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в состав целевого участка, предназначенного для введения в геном штамма вируса Herpesvirus Saimiri HVS-C488, входят последовательности, кодирующие флуоресцентный белок и химерный антигенный рецептор.