Молекулярно-таксономическое изучение трихинелл наземных и морских млекопитающих Чукотки

не обнаружили ни яиц, ни клещей. На 21-е сутки и в последующие сроки исследования были обнаружены живые клещи, с 28-го дня появились и яйца, а также новые очаги поражения.

В соскобах кожи животных третьей группы на протяжении всего опытного периода обнаруживались как клещи, так и их яйца, а также становились более выраженными клинические признаки псороптоза.

Животные четвертой группы в течение опыта оставались здоровыми.

Таким образом, соединение дегельм КД при двукратной обработке естественно зараженных Psoroptes ovis овец оказывает выраженное акарицидное действие. Причем леченые этим препаратом ягнята в течение 45 суток повторно не заразились.

Литература: 1. Никольский С.Н., Водянов А.А. Псороптозы овец и крупного рогатого скота. М.: Колос.1979.-125 с. 2. Демидов Н.В., Березкина С.В. Методические рекомендации по оценке антгельминтиков в ветеринарии. -М.: ВАСХНИЛ, 1986.- 85 с. 3. Абуладзе К.И. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственных животных. - М.: «Колос», 1984, 252 с. 4. Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. М.: «Колос», 2002, 743 с.

Resume

The combination of "Degelm KD" in double treatment naturally infected pathogen Psoroptesovis sheep has a strong acaricidal action. And treatment with this drug lambs for 45 days is not re-infected.

МОЛЕКУЛЯРНО-ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРИХИНЕЛЛ НАЗЕМНЫХ И МОРСКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ЧУКОТКИ

Хилюта Н.В. *, Спиридонов С.Э. ***,

Одоевская И.М. * ***, Букина Л.А.**

*ГНУ Всероссийский институт гельминтологии им. К. И. Скрябина

Россельхозакадемии

**ФГБОУ ВПО Вятская государственная сельскохозяйственная академия ***Центр паразитологии, Институт проблем экологи и эволюции

им. А.Н Северцова РАН

Введение. Эпизоотическая и эпидемическая ситуация по трихинеллёзу в Чукотском автономном округе РФ характеризуется стойким неблагополучием, при этом чётко прослеживается связь трихинеллёза людей с трихинеллёзом наземных и морских млекопитающих. Значительный интерес представляет таксономическая принадлежность трихинелл, выявляемых у животных арктических регионов. До настоящего времени молекулярно-таксономические исследования трихинелл, циркулирующих на территории ЧАО, не проводились. Однако из литературных данных известно, что на арктических побережьях

394

Г ренландии, Канады и Аляски в основном встречаются два генотипа трихинелл - вид Trichinella nativa и неописанные пока трихинеллы, относимые к генотипу «Trichinella sp. T6». Трихинеллы вышеуказанных генотипов зарегистрированы среди наземных промысловых животных, обитающих в биоценозах Крайнего Севера: диких белых песцов (Alopex lagopus), волков (Canis lupus), бурых медведей (Ursus arctos), белых медведей (Ursus maritimus), росомах (Gulo gulo), лисиц (Vulpes vulpes). Также генотипы трихинелл «T. nativa» и «T6» были обнаружены и у ряда морских млекопитающих: моржей (Odobenus rosmarus rosmarus, Odobenus rosmarus divergens), кольчатой нерпы (Phoca hispida), ларги (Phoca largha), лахтака (Erignathus barbatus), гренландского тюленя (Phoca groenlandica), сивучей (Eumetopias jubatus), а также у представителей отряда китообразных (Cetacea), подотряда зубатых китов - (Odontoceiti) -белухи (Delphinapterus leucas) [1-7].

Нами были проведены молекулярно-генетические исследования 5 изолятов трихинелл, выделенных из мышц наземных и морских млекопитающих Чукотки: кошки Felis familiaris, дикого песца (Alopex lagopus), ездовой собаки Canis familiaris, нерпы Phoca hispida, бурого медведя Ursus arctos.

Материалы и методы. Выделение ДНК из личинок трихинелл. Из суспензии личинок трихинелл выделяли ДНК с помощью колонок Wizard SV Genomic DNA Purification System по протоколу фирмы «Promega».

Анализ последовательностей Coxb митохондриальной ДНК_проводили с использованием набора фирмы «Силекс» и праймеров Tricob F1 CAA TCC ATT AGG TAC ACA CTC AC и Tricob R3 TAA GTA AGA TTT CAA TGG CG [4]. Использовался следующий протокол полимеразной цепной реакции (ПЦР): первичная денатурация (94°С) - 4 мин, затем 35 циклов из денатурации при 94°С - 10 сек, отжига при 55°С - 30 сек, элонгации при 72°С - 30 сек. По выполнении 35 циклов проводилась финальная элонгация при 72°С - 3 мин. Визуализацию результатов ПЦР проводили в 1%-ном агарозном геле в видиосистеме «Gel Imager». Очистку продуктов ПЦР проводили в 0,8%-ном агарозном геле. Выделение ДНК из кубиков геля проводили с помощью набора фирмы «Promega» - Wizard  SV Gel and PCR Clean-Up System. Количество ДНК в геле проверяли с помощью спектрофотометра “Nanodrop-2000”. Прямое секвенирование с праймерами использовавшимися для первичной ПЦР проводили в ЦКП «Генотех». Полученные последовательности анализировали с помощью программ «Clustal X 1.81» - построение выравниваний, «Genedoc 2. 5.» - формирование прямоугольной матрицы и экспорт в Nexus-формат и PAUP 4.0b10 (собственно филогенетический анализ). Филогенетический анализ проводили методом максимальной экономии.

Результаты и обсуждение. Анализ нуклеотидных последовательностей и/или числа микросателлитных повторов в настоящее время являются наиболее надежными и информативными методами. Нами были получены нуклеотидные последовательности митохондриального гена цитохромоксидазы b (Cob

mtDNA). Полученные нуклеотидные данные были использованы для построения выравнивания - т.е. матрицы сравнения полученных последовательностей. Для

395

сравнения была использована также последовательность изолята Trichinella spiralis от домашней свиньи из Северной Осетии. Все изученные нами изоляты арктических трихинелл показали значительное сходство 97-100% с последовательностями вида Trichinella nativa и Trichinella sp.T6, депонированными в Г енБанке (NCBI GenBank), также первоначально полученными от наземных и морских млекопитающих арктических территорий Канады, США, о-ва Гренландии. Исследованный нами фрагмент Cob mtDNA не показал существенных различий между T. nativa и Trichinella sp. T6. Однако некоторые из исследованных нами объектов демонстрировали присутствие отдельных нуклеотидных замен, отличающих их от последовательностей, депонированных в ГенБанке NCBI. Так последовательность Cob mtDNA трихинелл от нерпы, добытой на Чукотке отличается от эталонной последовательности T. nativa на 0,4% и на 100% совпадает с депонированными в ГенБанке последовательностями Trichinella sp. T6. Примечательно, что идентичные последовательности Cob mtDNA были получены из мышц росомахи и полярного волка, обитавших на арктических побережьях Северной Канады, что позволяет использовать нуклеотидные данные для выявления ещё одного аспекта циркуляции трихинелл - т. н. эпидемической географии данного антропозооноза. Отметим также, что последовательность изолята трихинелл, выделенных из мышц кошки, обитавшей на звероферме и долгие годы кормившейся отходами морского зверобойного промысла, продемонстрировал большее число нуклеотидных замен в исследуемом фрагменте - до 3% (по сравнению с депонированными в ГенБанке структурами Trichinella sp. T6). Другие изученные нами изоляты трихинелл отличались от данных GenBank NCBI по генотипам (Trichinella nativa - Trichinella sp.T6) не менее чем на 3 нуклеотида, в то время как нуклеотидные различия между видом Trichinella spiralis и комплексом арктических генотипов T. nativa - Trichinella sp. T6 составляли более 60 нуклеотидов, что доказывало таксономическую принадлежность изученных нами трихинелл к комплексу T. nativa - Trichinella sp.T6.

Заключение. Анализ таксономической принадлежности трихинелл, циркулирующих на территории морских побережий ЧАО РФ показал, что на вышеуказанных территориях широко распространены трихинеллы вида T. nativa, а также принадлежащие к так называемому арктическому комплексу T. nativa - Trichinella sp.T6. Анализ последовательностей гена Cob mtDNA позволяет выявить нуклеотидные различия между отдельными изолятами арктических трихинелл но не позволяет надежно дифференцировать трихинелл видов T. nativa и Trichinella sp. T6.

Литература: 1. Dunams-Morel D. B., M. V. Reichard, L. Torretti, D. S. Zarlenga, and B. M. Rosenthal. // Infection, Genetics and Evolution - 2012. -Vol . 12. - №3. - P. 530-538. 2. Forbes L.B. //Vet. Parasitol. - 2000. - Vol. 93, - P.321334. 3. Gajadhar, A. A., L. B. Forbes. // Vet. Parasitol. - 2010. - Vol. 168. - P. 7883. 4. Leclair D., Forbes L.B., Suppa S., Proulx J. F., Gajadhar A.// Parasitol. Res. -2004. - Vol. 93. - № 6. - P. 507-509. 5. Moller L. N., Petersen E., Kapel C.M.,

396

Melbye M., Koch A. //Vet. Parasitol. - 2005. - Vol. 132. - P. 131-136. 6. Murrell K.D., R.J. Lichtenfels, D.S. Zarlenga, E. Pozio. // Vet. Parasitol. - 2000. - Vol. 93. -P. 293-307. 7. Pozio, E., D. S. Zarlenga. //Int. J. Parasitol. - 2005. -Vol. 35. - № 1112. - Р. 1191-1204. 8. Serhir, B., J. D. MacLean, S. Healey, B. Segal and L. Forbes. // Can. Commun. Dis. Rep. - 2001. - Vol. 27. - № 4. - Р. 31-36.

ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ САНИТАРНОЙ ПАРАЗИТОЛОГИИ

Хроменкова Е.П.,Твердохлебова Т.И., Димидова Л.Л.

ФБУН Ростов НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора

Результаты санитарно-паразитологических исследований играют существенную роль в оценке активности эпидемического процесса паразитарных болезней, так как позволяют определить состояние одного из ключевых элементов паразитарной подсистемы этих заболеваний - механизма передачи заразного начала [3]. В рамках совершенствования системы мероприятий по эпидемиологическому надзору и профилактике паразитарных заболеваний, а также санитарной охране территории Российской Федерации в настоящее время актуальными и перспективными являются научные исследования, направленные на конкретизацию и совершенствование некоторых элементов системы социально-гигиенического мониторинга (в том числе санитарно-паразитологического), а также разработку комплексного подхода к изучению природно-очаговых и эндемичных заболеваний. В этом аспекте перспективным вопросом для научного изучения и разработки соответствующих предложений является изучение и развитие механизмов управления рисками для здоровья населения.

Любые риски должны рассматриваться в плане их прямых и опосредованных влияний на здоровье человека, социальноэпидемиологическое благополучие населения [1]. По аналогии с микробиологическими показателями [2] целесообразна разработка паразитологических критериев оценки риска заражения населения по нескольким направлениям с учетом факторов передачи инвазий (вода, почва, пищевая продукция). Одна из задач этого направления - проведение широкомасштабных санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей природной среды как факторов передачи паразитарных болезней при реализации рисков заражения населения паразитарными болезнями, получение базовых данных для исчисления показателей степени риска заражения. На основе этих данных может быть проведена оценка возможного неблагоприятного влияния выявленных достоверно установленных количественных и качественных критериев контаминации объектов окружающей среды паразитарными патогенами.

397