СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ ОПУХОЛЕВОГО ПРОЦЕССА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА
METHOD OF PREDICTING DISSEMINATION OF TUMOUR PROCESS IN PATIENTS WITH STOMACH CANCER

Изобретение относится к онкологии, иммунологии, лабораторной диагностике и предназначено для прогнозирования метастазирования опухолевого процесса у больных раком желудка.
В Российской Федерации рак желудка - вторая по частоте причина смерти от злокачественных новообразований, уступая лишь раку легкого у мужчин и раку молочной железы у женщин. Хотя средний возраст больных составляет 65,5 года, сейчас все чаще рак желудка встречается у лиц моложе 50 лет, что представляет собой актуальную медико-социальную проблему не только в России, но и в мире. Летальность на первом году с момента подтверждения диагноза достигает 54,6%.
При ранней неосложненной форме рака желудка изменений в крови не наблюдается, однако в дальнейшем снижается содержание гемоглобина. В процессе распада опухоли отмечено повышение СОЭ, при диффузной форме рака СОЭ длительное время может оставаться нормальной. У больных с распространенными формами рака желудка установлено увеличение содержания лейкоцитов со сдвигом формулы влево, особенно это отмечается при метастазировании опухоли в костный мозг. Кроме того, в сыворотке крови снижается концентрация общего белка с повышением уровня глобулиновой фракции (альфа- и гамма-глобулинов), в более позднем периоде болезни развивается гипопротеинемия. Активизируется система фибринолиза с увеличением содержания антитромбопластинов и антитромбинов.
Продолжительность жизни больного в зависимости от стадии заболевания может быть увеличена до 95% при условии оперативного хирургического вмешательства. Неоперабельные больные живут 3-11 мес после подтверждения диагноза. Факторами неблагоприятного прогноза являются появление диффузно-инфильтративной формы роста (linitis plastica), появление большого количества клеток с аномалией ядра и элементов опухоли по краю резекции, проксимальная локализация опухоли, значительная потеря массы тела до начала лечения, молодой возраст. Однако эти указанные факторы неблагоприятного прогноза являются малоинформативными и недостаточно объективными.
Известен способ прогнозирования возможности выполнения радикальной или условно-радикальной операции при раке желудка (Патент №2237901, РФ. Опубл. 10.10.2004), предполагающий наряду с рентгенологическими, ультразвуковыми, томографическими и эндоскопическими исследованиями выявлять концентрацию альбумина в крови больного. Однако необходимость сопровождения белкового теста многочисленными исследованиями в значительной степени повышает трудоемкость, временной период и экономические затраты описываемого аналога изобретения.
В качестве информативных маркеров рака желудка используют РЭА, СА 72-4 и СА 19-9. Так, например, увеличение концентрации СА 72-4 наблюдается за несколько месяцев до клинического рецидива рака желудка с чувствительностью до 70%. Содержание РЭА в крови отражает объем опухоли в организме, что может служить фактором прогноза длительности безрецидивного периода и 5-летней выживаемости пациентов. Однако увеличение уровня РЭА отмечается не более чем у 50% больных раком желудка. СА 19-9 наиболее часто встречается при раке поджелудочной железы, при раке желудка увеличение концентрации СА 19-9 выявлено только у 40% пациентов (Онкология // Под ред. В.И.Чиссова, М.И.Давыдова. - М.: ГОЭТАР-Медиа, 2008). Таким образом, для более объективного мониторинга больных с целью доклинического выявления рецидива опухолевого процесса и эффективного прогнозирования метастазов нужно определять все три описанных маркера. Для осуществления предлагаемого нами изобретения необходимо использовать лишь два иммунологических параметра, что сокращает пробоподготовку и снижает стоимость исследования. Кроме того, способ позволяет повысить точность прогнозирования, используя материалы, реактивы и методы исследования, широко применяемые в стандартной клинико-лабораторной практике.
9
Поставленная цель достигается тем, что в периферической венозной крови обследуемых лиц определяют абсолютное содержание моноцитов и концентрацию фактора некроза опухоли альфа (TNF-α). При содержании моноцитов менее 0,35×10 кл/л и TNF-α более 55 пг/мл прогнозируют высокую вероятность метастазирования.
Заявленный способ осуществляется стандартно следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в минимальном объеме (1 мл) до 10 часов утра, натощак. Методом микроскопирования изучается содержание моноцитов в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Для количественного определения TNF-α используется сыворотка или плазма крови, анализируемая иммуноферментным методом с применением диагностического набора для ИФА. Результаты реакции оцениваются на спектрофотометре с длиной волны 450 нм.
Указанным способом были обследованы лица, проходившие реабилитацию в медицинской компании «Биокор» г.Архангельска: 15 больных раком желудка на I-IV стадиях заболевания и 10 человек, прошедших курс лечения рака желудка и находящихся в состоянии ремиссии (контроль). Диагноз установлен в Архангельском областном клиническом онкологическом диспансере, обследование проводили с соблюдением основных норм биомедицинской этики. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6» («StatSoft», США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории России. Распределение содержания TNF-α отличалось от нормального, поэтому представлено в виде медианы, нижнего и верхнего квартилей. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия Уилкоксона. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05.
9
Установлено, что общее абсолютное содержание моноцитов значительно снижается у больных раком желудка по сравнению с контролем: 0,28±0,05 и 0,65±0,13×10 кл/л (р<0,05) соответственно. Участие моноцитов/макрофагов в противоопухолевом иммунитете связано с секрецией α- и β-интерферонов, а также с TNF-α, которые активируют клетки-продуценты и усиливают цитотоксическую функцию естественных и специализированных киллеров. Моноциты, инфильтрируя опухоль, способствуют ее разрушению, спонтанному рассасыванию и препятствуют метастазированию (Войтенков Б.О., Окулов В.Б. Основные характеристики макрофага как клетки эффектора // Вопросы онкологии. - 1995. - №3. - С.59-64; Луговская С.А. Структура и функции моноцитов и макрофагов // Клин. лаб. диагностика. - 1997. - №9. - С.10-15; Secchiero P., Gonelli A., Mirandola Р. et al. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand induces monocytic maturation of leukemic and normal myeloid precursors through a caspase-dependent pathway // Blood. - 2002. - V.100. - P.2421-2429).
Нами установлено, что у больных раком желудка повышается уровень сывороточного TNF-α с 34,8 (24,9-68,1) до 189,2 (23,2-189,34) пг/мл. TNF-α является продуктом моноцитов/макрофагов, вызывает генерацию активных форм кислорода в клеточной мембране, супероксидрадикалов и оксида азота, тем самым резко повышается цитотоксическая функция фагоцитов. Кроме того, при связывании TNF-α со своим рецептором на мембране клетки происходит передача апоптозного сигнала, активируются каспазы 8, 10 и 3 с последующим нарушением целостности ядерной мембраны (Опферман Т., Корсмэер С. Роль апоптоза в период становления иммунной системы и при развертывании иммунного ответа // Аллергология и иммунология. - 2006. - Т.7, №4. - С.464-470; Хаитов P.M., Манько В.М., Ярилин А.А. Внутриклеточные сигнальные пути, активирующие или ингибирующие функции клеток иммунной системы. 4. Внутриклеточные сигнальные пути при апоптозе // Успехи современной биологии. - 2006. - Т. 126, №1. - С.3-9). Таким образом, моноциты способствуют рассасыванию опухоли за счет усиления цитотоксической функции естественных и специализированных киллеров, стимулируя апоптоз опухолевых клеток.
Частные примеры использования способа.
9
1. Больной С., возраст 57 лет. Диагноз: рак желудка. При лабораторном обследовании периферической венозной крови установлено абсолютное содержание моноцитов 0,24×10 кл/л. Уровень TNF-α в сыворотке крови составил 189,34 пг/мл. Сделано заключение о высоком риске развития метастазов. При повторном обследовании через 3 месяца были выявлены метастазы в печень, развитие обтурационной кишечной непроходимости и общее истощение организма. Прогноз верен.
9
2. Больной М., возраст 73 года. Диагноз: рак выходного отдела желудка. При исследовании периферической венозной крови уровень моноцитов составил 0,17×10 кл/л. Концентрация TNF-α была равна 189,19 пг/мл. Сделан вывод о высоком риске появления метастазов. Через 5 месяцев пациент был повторно госпитализирован. При обследовании выявлено повышение температуры тела, перфорация и кровотечение, метастазы в легкие. Прогноз верен.
9
3. Больная С., возраст 61 год. Диагноз: плановый контроль противоопухолевого иммунитета. При лабораторном обследовании венозной крови установлено абсолютное содержание моноцитов 0,77×10 кл/л и концентрация TNF-α 13,84 пг/мл. Сделан вывод о минимальном риске появления метастазов. При ежегодном обследовании в течение двух лет не было выявлено активизации опухолевого процесса. Прогноз верен.