Композиция и способ приманивания постельных клопов
COMPOSITION AND METHOD OF ATTRACTING BED BUGS

Область техники
Настоящее изобретение относится к области композиций для приманивания постельных клопов для того, чтобы, помимо прочего, поймать или обнаружить постельных клопов. В частности, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновую кислоту, (Е)-2-октеналь, 2-октеновую кислоту и 2-гексанон, и к способу применения данной композиции для приманивания или обнаружения постельных клопов.
Уровень техники
В последние годы возросло заражение насекомыми сред обитания человека. Одной причиной для этого возрастания является развитие стойких видов насекомых, которые фактически обладают иммунитетом к общепринятым способам уничтожения. В качестве примера, популяция постельных клопов, от которой почти полностью избавились в развитом мире в 1940-х, после этого медленно восстановилась. Более того, восстановление ускорилось с середины 1990-х.
Постельные клопы (Cimex lectularius, Cimex hemipterus) являются бескрылыми насекомыми с панцирем, размером и формой с яблочное зернышко. Они предпочитают тесные и темные места. Следовательно, предпочитают прятаться в кроватях и щелях и трещинах в полу/стенах и за плинтусами. Они питаются кровью, активны ночью и кусают любые участки открытой кожи. Множество неблагоприятных воздействий на здоровье может происходить из-за укусов постельных клопов, включая кожные сыпи, аллергические реакции и/или психический стресс. Очевидно, вышеупомянутое увеличение популяции внесло вклад в рост случаев укусов постельных клопов и связанные с этим условия.
Несколько способов противодействия заражению насекомыми в общем и постельными клопами в частности известны в уровне техники.
Одним способом решить указанную проблему является воздействие в течение определенного периода времени на зараженную область посредством температуры, либо высокой, либо низкой, которая губительна для постельных клопов. Соответственно, чтобы убить взрослых постельных клопов, а также отложенные яйца, указанную область необходимо нагреть до 60°С в течение одного часа или удерживать ниже -18°С в течение по меньшей мере 48 часов.
Другим часто используемым способом противодействия постельным клопам является распыление диатомовой земли (ДЗ) в форме порошка на полу и/или вдоль или за плинтусами комнаты. После того, как постельные клопы приходят в контакт с ДЗ, по существу имеющие форму иголок кусочки ДЗ микронного размера поглощают восковой слой, присутствующий на постельных клопах. Это запускает необратимый процесс обезвоживания постельных клопов, что в конечном итоге приводит к их смерти. Этот способ также можно использовать при борьбе с другими насекомыми, имеющими похожие свойства и образ поведения.
В других способах предлагают использовать различные сорта ловушек, сконструированных для поимки постельных клопов.
Однако общим для всех этих способов является необходимость в приманивании постельных клопов в ловушку или к ДЗ или, в любом случае, необходимость в обнаружении постельных клопов до начала борьбы с постельными клопами или в обнаружении любых остающихся постельных клопов после попыток дезинсекции.
В патентной заявке US 15/10676 описана композиция для приманивания и/или удерживания постельных клопов. Композиция содержит по меньшей мере гистамин или диметилдисульфид и диметилтрисульфид. Композиция обычно дополнительно содержит (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-октеналь и 2-гексанон.
В патенте US 7892528 описаны способы приманивания постельных клопов с использованием композиции, содержащей нонаналь, деканаль, (Е)-2-гексаналь, (Е)-2-октеналь, (Е,Е)-2,4-октадиеналь, бензальдегид, бензиловый спирт, (+)-лимонен, (-)-лимонен и сулкатон.
В международной патентной заявке PCT/US2011/037688 описаны способы приманивания постельных клопов с использованием, например, 2-гексанона в сочетании с (Е)-2-гексеналем или (Е)-2-октеналем.
Gries et al в "Bed Bug Aggregation Pheromone Finally Identified", Angewandte Chemie International Edition vol. 54, no. 4 описывают композицию, содержащую (Е)-2-гексаналь, (Е)-2-октеналь и 2-гексанон.
В международной патентной заявке PCT/US2010/026938 описана композиция, содержащая (Е)-(транс)-2-гексеналь и (Е)-(транс)-2-октеналь.
В патентной заявке US 13/335389 описан пестицид, содержащий масло семян маргозы.
Несмотря на эти последние успехи, все еще существует потребность в других композициях и способах приманивания постельных клопов для того, чтобы обеспечить их обнаружение и/или уничтожение.
Соответственно, одной целью настоящего изобретения является предоставление композиции для приманивания постельных клопов.
Другой целью настоящего изобретения является предоставление композиции для приманивания постельных клопов, которую можно использовать в различных способах приманивания постельных клопов.
Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление композиции, которую можно приготовить в различных формах.
Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление ловушки для постельных клопов, в которой используют композицию для приманивания постельных клопов.
Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление способов приманивания и/или обнаружения постельных клопов с использованием композиции или ловушки.
Краткое описание изобретения
По меньшей мере одной из указанных выше целей или по меньшей мере одной из целей, которые очевидны из приведенного ниже описания, достигают согласно первому аспекту изобретения с помощью композиции для приманивания постельных клопов, которая содержит (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновую кислоту, (Е)-2-октеналь, 2-октеновую кислоту и 2-гексанон. Таким образом, настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что эти пять соединений совместно сильно приманивают постельных клопов, как показано в экспериментальном разделе ниже. Соответственно, композицию можно использовать для приманивания постельных клопов с намерением, например, выманить постельных клопов в ловушку и/или с намерением заставить постельных клопов обнаружить себя, таким образом обеспечивая возможность обнаружения заражения постельными клопами.
По меньшей мере одной из указанных выше целей или по меньшей мере одной из целей, которые очевидны из приведенного ниже описания, достигают согласно второму аспекту изобретения с помощью ловушки для поимки постельных клопов, содержащей композицию согласно первому аспекту настоящего изобретения для приманивания постельных клопов.
По меньшей мере одной из указанных выше целей или по меньшей мере одной из целей, которые очевидны из приведенного ниже описания, достигают согласно третьему аспекту изобретения с помощью способа приманивания постельных клопов, включающего стадию размещения порции композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения или ловушки согласно второму аспекту настоящего изобретения в месте, где подозревают присутствие постельных клопов.
По меньшей мере одной из указанных выше целей или по меньшей мере одной из целей, которые очевидны из приведенного ниже описания, достигают согласно четвертому аспекту изобретения с помощью способа обнаружения постельных клопов, включающего стадию размещения порции композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения или ловушки согласно второму аспекту настоящего изобретения в месте, где подозревают присутствие постельных клопов.
Подробное описание изобретения
Первый аспект настоящего изобретения относится к композиции для приманивания постельных клопов, которая содержит (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновую кислоту, (Е)-2-октеналь, 2-октеновую кислоту и 2-гексанон.
Таким образом, настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что эти пять соединений совместно сильно приманивают постельных клопов, как показано в экспериментальном разделе ниже. Соответственно, композицию можно использовать для приманивания постельных клопов с намерением, например, выманить постельных клопов в ловушку и/или с намерением заставить постельных клопов обнаружить себя, таким образом обеспечивая возможность обнаружения заражения постельными клопами.
Композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения может быть аттрактантом, то есть аттрактантом постельных клопов. Композиция способна приманивать постельных клопов. Таким образом, первый аспект настоящего изобретения можно альтернативно рассматривать как аттрактант постельных клопов, содержащий (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновую кислоту, (Е)-2-октеналь, 2-октеновую кислоту и 2-гексанон.
Помимо приманивания постельных клопов, композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения также может быть способна к удерживанию постельных клопов, то есть композиция заставляет постельных клопов оставаться вблизи нее. Таким образом, композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения может быть способна как к приманиванию постельных клопов, то есть заставлять постельных клопов двигаться по направлению к композиции, так и к удерживанию постельных клопов, то есть заставлять постельных клопов оставаться после того, как они переместились в непосредственную близость к композиции.
Любую ссылку на пять соединений следует понимать как относящуюся к (Е)-2-гексеналю, (Е)-2-гексеновой кислоте, (Е)-2-октеналю, 2-октеновой кислоте и 2-гексанону.
Постельный клоп обычно может быть Cimex lectularius или Cimex hemipterus.
В рамках настоящего изобретения предполагают, что некоторые воплощения композиции могут дополнительно включать (Z)-изомеры (Е)-2-гексеналя и (Е)-2-октеналя.
В предпочтительном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция содержит от 0,5 до 2 частей, например, 1 часть (Е)-2-гексаналя, от 2 до 5 частей (Е)-2-гексеновой кислоты, от 0,5 до 2 частей, например, 1 часть (Е)-2-октеналя, от 1 до 10 частей 2-октеновой кислоты и от 0,5 до 2 частей, например, 1 часть 2-гексанона.
Более предпочтительно композиция содержит 1 часть каждого из пяти соединений.
Было показано, что эти пропорции пяти соединений являются эффективными для приманивания постельных клопов, см. экспериментальный раздел.
В предпочтительном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция не содержит никаких других летучих компонентов, помимо (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-гексеновой кислоты, (Е)-2-октеналя, 2-октеновой кислоты и 2-гексанона.
Под летучими компонентами можно понимать химические соединения с высоким давлением паров при нормальной комнатной температуре (20°С), такие как любое органическое соединение, имеющее начальную температуру кипения меньше или равную 250°С (482°F), измеренную при стандартном атмосферном давлении 101,3 кПа.
Это альтернативно можно выразить как то, что (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновая кислота, (Е)-2-октеналь, 2-октеновая кислота и 2-гексанон являются единственными летучими компонентами в композиции.
Предпочтительно композиция не содержит по меньшей мере одного из, более предпочтительно ни одного из следующих соединений: 4-оксо-(Е)-2-гексеналь, 4-оксо-(Е)-2октеналь, лимонен, бензальдегид, сулкатон, октаналь, нонаналь, деканаль, диметилсульфид, диметилтрисульфид и 1-октен-3-ол. Более предпочтительно композиция не содержит 4-оксо-(Е)-2-гексеналя и 4-оксо-(Е)-2-октеналя, так как в испытаниях на арене было определено, что эти соединения не имеют никакого приманивающего воздействия, они скорее имеют отталкивающее воздействие, см. пример 2.
Предпочтительно композиция не должна содержать какого-либо антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота. Это связано с тем, что было обнаружено, что аскорбиновая кислота, обычный антиоксидант, уменьшала срок хранения композиции.
В одном конкретном воплощении композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения состоит из (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-гексеновой кислоты, (Е)-2-октеналя, 2-октеновой кислоты и 2-гексанона.
В предпочтительном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция дополнительно содержит носитель. Это упрощает применение композиции и обращения с ней. Носитель может представлять собой твердое вещество, жидкость или гель. Композицию таким образом можно приготовить в виде жидкости, геля, твердого вещества (такого как таблетка или гранула).
В предпочтительном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения носитель выбран из группы, состоящей из желатина и полиэтиленгликоля (PEG), суперпоглощающего полимера, такого как полиакрилат натрия, минерального масла, парафина и воды.
Желатин и полиэтиленгликоль (PEG) являются предпочтительными носителями, поскольку их легко применять, и они являются дешевыми, и поскольку результаты испытаний, см. примеры 2 и 4, показали, что эти носители обеспечивают высвобождение, то есть испарение, пяти соединений со скоростью, подходящей для обеспечения композиции для приманивания постельных клопов, которую можно использовать в течение достаточно длительного времени (например, по меньшей мере 24 ч, например, по меньшей мере 72 ч, например, 24-144 ч, например, предпочтительно вплоть до 3 недель) для эффективного приманивания постельных клопов.
Композиции, содержащей носитель, можно дополнительно придать форму и размеры, например, формованием, для влияния на скорость, с которой пять соединений высвобождаются/испаряются из носителя. Для получения более высокой скорости высвобождения композицию можно сформировать в гранулы, обеспечивая высокую удельную поверхность на единицу массы композиции. Для получения противоположного, то есть медленного высвобождения, композицию можно сформировать в большие порции или части. На композицию можно дополнительно нанести покрытие для дополнительного уменьшения скорости высвобождения пяти соединений.
PEG может иметь молекулярную массу от 400 до 9500 и находиться в форме жидкости (молекулярная масса ниже 700), полутвердого вещества (молекулярная масса от 700 до 900) и в виде воскообразных твердых хлопьев или порошка (молекулярная масса выше 1000).
В предпочтительном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения носитель содержит или состоит из PEG 4000 (номер CAS 25322-68-3, средняя молекулярная масса от 3600 до 4400).
Этот полиэтиленгликоль может, в зависимости от конечной формы носителя, обеспечивать скорость высвобождения, достаточную для обеспечения композиции, эффективной в течение вплоть до 2 недель, в зависимости от количества композиции и формы композиции. Также PEG 4000 является твердым при комнатной температуре и таким образом с ним очень легко обращаться и его очень легко формовать.
В одном конкретном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция состоит из описанного выше носителя и (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-гексеновой кислоты, (Е)-2-октеналя, 2-октеновой кислоты и 2-гексанона. Как показано в экспериментальном разделе, эффективные композиции не должны содержать дополнительных соединений.
В некоторых воплощениях композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция содержит от 50 до 600 мг/л, например, 100-300 мг/л (Е)-2-гексеналя, 100-1500 мг/л (Е)-2-гексеновой кислоты, от 50 до 600 мг/л, например, 100-300 мг/л (Е)-2-октеналя, 100-3000 мг/л 2-октеновой кислоты и от 50 до 600 мг/л, например, 100-300 мг/л 2-гексанона по отношению к общему объему композиции.
В этих воплощениях композиция предпочтительно содержит описанный выше носитель.
Более предпочтительно композиция содержит 100 мг/л каждого из пяти соединений.
В некоторых воплощениях композиция содержит 100-300 мг/л (Е)-2-гексеналя, 20-1500 мг/л (Е)-2-гексеновой кислоты, 100-300 мг/л (Е)-2-октеналя, 10-3000 мг/л 2-октеновой кислоты и 100-300 мг/л 2-гексанона, исходя из общего объема композиции.
В некоторых воплощениях композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения доза композиции содержит от 0,1 до 100 г, например, от 0,5 до 10 г, например, от 0,5 до 3,5 г композиции или, альтернативно, доза композиции содержит от 0,1 до 100 мл, например, от 0,5 до 10 мл, например, от 0,5 до 3,5 мл композиции.
Как показано в экспериментальном разделе, в котором отвешивали приманки, то есть дозы композиции, в том числе, 0,9 г, эти дозы способны приманивать постельных клопов. Более крупные дозы обеспечивают большее количество пяти соединений для приманивания постельных клопов в течение более продолжительного времени.
В этих воплощениях композиция предпочтительно содержит описанный выше носитель.
Дозу композиции следует понимать как включающую порцию композиции, то есть приманку. Также можно использовать термин манок для дозы или порции композиции. Размер дозы зависит, в том числе, от того, сколько времени доза должна быть эффективной в приманивании постельных клопов, от размера места, в которое помещают дозу, и от температуры в этом месте. Подходящую дозу можно выбрать путем помещения различных доз в место, в которое нужно приманить постельные клопы, и определения дозы, которая приманивает постельных клопов с требуемой эффективностью и продолжительностью.
В некоторых воплощениях композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения летучие соединения, выделяемые композицией, предпочтительно дозой композиции, при температуре 20°С и стандартном атмосферном давлении 101,3 кПа, содержат от 0,001 до 37,4% (Е)-2-гексеналя, от 0,01 до 2,2% (Е)-2-гексеновой кислоты, от 40,4 до 90,9% (Е)-2-октеналя, от 0,001 до 2,8% 2-октеновой кислоты и от 5,9 до 39,8% 2-гексанона, где сумма процентных долей меньше или равна 100%.
Предпочтительно сумма процентных долей равна 100%, то есть никаких других летучих соединений не выделяется композицией при этих условиях.
Альтернативно, доля пяти соединений, выделяемых композицией, предпочтительно дозой композиции, при температуре 20°С и стандартном атмосферном давлении 101,3 кПа, составляет от 0,001 до 37,4% (Е)-2-гексеналя, от 0,01 до 2,2% (Е)-2-гексеновой кислоты, от 40,4 до 90,9% (Е)-2-октеналя, от 0,001 до 2,8% 2-октеновой кислоты и от 5,9 до 39,8% 2-гексанона, где сумма процентных долей равна 100%.
Эти значения основаны на минимальных и максимальных значениях доли пяти соединений, измеренных в примерах 1 и 4. Летучие соединения, выделяемые композицией, можно, например, измерить путем помещения порции или дозы композиции в контейнер при указанных выше условиях, и собирая воздух свободного пространства контейнера и определяя состав воздуха свободного пространства с помощью газовой хроматографии масс-спектрометрии (ГХ-МС). Воздух из свободного пространства необходимо собирать спустя 240 часов после помещения части или дозы в контейнер. Воздух свободного пространства можно анализировать с использованием газового хроматографа (ГХ, Hewlett-Packard 6890 Series), оборудованного полярной капиллярной колонной (Innowax, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм и толщина пленки 0,25 мкм, Agilent Technologies, США), соединенного с масс-спектрометром (Hewlett-Packard 5973 Mass Selective Detector). Температура инжектора может составлять 225°С и ввод пробы осуществляют без деления потока. Температуру ГХ необходимо программировать в течение 2 минут на 40°С, после чего следует постепенное повышение со скоростью 8°/мин до 225°С, где температуру удерживают постоянной в течение пяти минут.
В одном конкретном воплощении композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения композиция дополнительно содержит инсектицид.
Инсектицид может, например, включать пиретрины, пиретроидные обезвоживающие средства (такие как диатомовая земля (ДЗ)), биохимические инсектициды (такие как масло семян маргозы холодного прессования), пирролы (хлорфенапир), неоникотиноиды и регуляторы развития насекомых.
Второй аспект настоящего изобретения относится к ловушке для ловли постельных клопов, которая содержит (Е)-2-гексеналь, (Е)-2-гексеновую кислоту, (Е)-2-октеналь, 2-октеновую кислоту и 2-гексанон, предпочтительно предоставленные в виде композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения. Ловушку можно сконструировать, например, как в международной патентной заявке WO 2013115719 настоящего заявителя. Альтернативно, ловушка может быть типа западни, включающей конический корпус со входом сверху и композицию согласно первому аспекту настоящего изобретения, помещенную внутри, что заставляет таким образом постельных клопов карабкаться по внешней стороне и падать во внутреннюю часть конуса через вход.
Композицию согласно первому аспекту настоящего изобретения можно использовать для приманивания постельных клопов.
Таким образом, третий аспект настоящего изобретения относится к способу приманивания постельных клопов, включающему стадию i) размещения (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-гексеновой кислоты, (Е)-2-октеналя, 2-октеновой кислоты и 2-гексанона в месте, в котором присутствуют постельные клопы.
Расположение пяти соединений в данном месте приманивает постельных клопов двигаться по направлению к пяти соединениям. Это позволяет поймать и/или выморить постельных клопов.
Пять соединений могут быть отделены друг от друга, например, в виде пяти различных композиций, каждая из которых, например, содержит носитель и одно из пяти соединений. Альтернативно, два или более соединений можно объединить в одной композиции. Однако предпочтительно пять соединений предоставляют в виде композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения или в виде ловушки согласно второму аспекту настоящего изобретения.
Четвертый аспект настоящего изобретения относится к способу обнаружения постельных клопов, включающему стадию i) расположения (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-гексеновой кислоты, (Е)-2-октеналя, 2-октеновой кислоты и 2-гексанона в месте, где подозревают присутствие постельных клопов.
Пять соединений могут быть отделены друг от друга, например, в виде пяти различных композиций, каждая из которых, например, содержит носитель и одно из пяти соединений. Альтернативно, два или более соединений можно объединить в одной композиции. Однако предпочтительно пять соединений предоставляют в виде композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения или в виде ловушки согласно второму аспекту настоящего изобретения.
Таким образом, композицию и ловушку согласно первому и второму аспектам настоящего изобретения можно не только использовать для приманивания постельных клопов в местах, в которых присутствуют постельные клопы, дополнительно композицию и ловушку можно использовать для обнаружения, то есть приманивания, любых присутствующих постельных клопов, если они присутствуют.
Местом может быть кровать, комната, квартира, дом, транспортное средство, чемодан или любое другое место, в котором постельные клопы присутствуют или подозревается их присутствие.
Когда пять соединений предоставляют в виде композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения, можно разместить порцию композиции. Пять соединений, композицию, порцию композиции или ловушку можно расположить в месте на время 0-24 часов, 0-72 часов, 0-144 часов или даже вплоть до 3 недель.
Множество порций композиции или множество ловушек можно разместить в данном месте.
Приманивание постельных клопов может включать побуждение постельных клопов двигаться по направлению к композиции или ловушке.
Обнаружение постельных клопов может включать наблюдение постельных клопов, пойманных в ловушке, или другое наблюдение постельных клопов, например, вблизи от композиции или ловушки.
Приманивание и обнаружение постельных клопов не обязательно охватывает обнаружение или приманивание всех присутствующих постельных клопов, скорее оно является достаточным, если по меньшей мере один постельный клоп приманен или обнаружен.
Примеры
Пример 1. Сбор воздуха свободного пространства с летучими соединениями из популяций постельных клопов
В этом испытании летучие соединения собирали из свободного пространства опытных замкнутых полостей, содержащих постельных клопов. Множество возможных испытываемых соединений определяли для дальнейшего испытания в испытаниях на арене, см. пример 2.
1.1. Материал и способы
Постельные клопы, используемые в репликатах I и III, происходили исключительно из лабораторной культуры Nattaro, питающейся овечью кровью, в то время как репликаты II, IV и V содержали взрослые особи, питающиеся человеческой кровью, от R. Naylor, Cimex store, UK, и 1-ые и 2-ые личинки нимф из культуры Nattaro.
60 мл пластиковые контейнеры с резьбой на крышке были модифицированы путем сверления отверстий диаметром 1,8 см на дне и в крышке. Чтобы избежать побегов постельных клопов, поверх отверстий наклеивали мелкозернистую пластиковую сетку, которая обеспечивала проход воздуха через контейнер. Каждый контейнер был снабжен фильтровальной бумагой 45×80 мм, сложенной несколько раз для подгонки к контейнеру. Репликат состоял из шести контейнеров: пять с 6, 12, 18, 24 или 48 недавно покормленными нимфами (1-ые и 2-ые личинки), мужскими и женскими особями постельных клопов и один контейнер являлся контрольным без насекомых в нем.
Для пассивного сбора (анфлераж через бумагу) выделений из каждого контейнера поверх отверстия устанавливали дополнительную сетку, на которую помещали адсорбент.
Образцы анфлеража
Все шесть контейнеров репликата держали вместе и обрабатывали одинаково. После введения постельных клопов и добавления адсорбента для сбора анфлеража, постельных клопов оставляли в покое в климатической камере при 25°С в ежесуточном цикле свет/темнота, составляющем 8/16 часов. После 6, 7 и 8 суток каждый репликат отбирали в лабораторию и удаляли крышку. С помощью насоса с приводом от батареи адсорбент откачивали в тефлоновую трубку, оборудованную пробкой из стекловаты в конце по направлению к насосу. Когда адсорбент находился в тефлоновой трубке, другую пробку из стекловаты вставляли в другой конец и образец можно было легко экстрагировать.
Динамические образцы воздуха свободного пространства
После сбора образцов анфлеража выполняли сбор воздуха свободного пространства из каждого контейнера, используя специальную крышку, в которую была вставлена пробка из адсорбента. Воздух свободного пространства всех контейнеров в репликате собирали одновременно в условиях темноты (за исключением первых образцов репликата один), используя работающие на батарее мембранные насосы. Поток воздуха через каждый контейнер устанавливали на уровне 35-40 мл/мин. Образцы воздуха свободного пространства собирали в течение 2 часов для репликатов один - три после первой недели, но расширяли до 4 6 часов для репликатов 4 и 5 и для всех репликатов и сборов после второй недели. Это делали для того, чтобы обеспечить больше материала, так как первые образцы были очень слабыми.
В качестве адсорбента использовали Тепах GR (размер ячейки 60-80, Alltech, США) для сборов как воздуха свободного пространства, так и анфлеража. До использования все адсорбенты очищали метанолом, ацетоном и гексаном в избыточном количестве. Для анфлеража использовали 60 мг для сбора выбросов в течение первой недели после начала эксперимента, после чего 40 мг в течение второй и третьей недели. Каждую пробку промывали 400 мкл высококачественного гексана. Образцы воздуха свободного пространства собирали после одной недели и снова после двух недель с начала эксперимента, используя пробки из адсорбента массой 10 мг. Пробки с воздухом свободного пространства промывали 250 мкл высококачественного гексана.
Анализ
Образцы промывали в пределах 24 часов после сбора, большинство образцов сразу после сбора. Для целей количественного определения 50 нг метилстеарата добавляли в качестве внутреннего стандарта ко всем образцам. Все образцы концентрировали при комнатной температуре до тех пор, пока перед анализами не оставалось от 20 до 50 мкл.
Образцы анализировали на газовом хроматографе (ГХ, Hewlett-Packard 6890 Series), оборудованном полярной капиллярной колонной (Innowax, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм и толщина пленки 0,25 мкм, Agilent Technologies, США), соединенном с масс-спектрометром (Hewlett-Packard 5973 Mass Selective Detector). Температура инжектора составляла 225°С и пробу вводили без деления потока. Температуру ГХ программировали в течение 2 минут на 40°С, после чего следовало постепенное повышение со скоростью 8°/мин до 225°С, где температуру удерживали постоянной в течение пяти минут. Соединения определяли по отношению к спектрам и временам удерживания аутентичных сравнительных соединений или, в нескольких случаях, по отношению к спектральным библиотекам ADAM и NIST2011.
Большинство соединений были количественно определены вручную с использованием вклада основного и характеристических ионов и для получения приблизительного количества отдельных соединений, их области сравнивали с областью добавленного внутреннего стандарта.
1.2. Результаты
Все образцы, собранные из контейнеров, содержащих постельных клопов в репликате, сравнивали с контрольным образцом этого репликата. Соединения, присутствующие в количестве, аналогичном контрольному образцу, считали фоновыми загрязнениями, в то время как те, которые в любом образце присутствовали в более чем пятикратном количестве по сравнению с контрольными образцами, считали происходящими от постельных клопов. Выделения изменялись между различными репликатами: обычно репликаты II и V выделяли наибольшее количество, за ними следовал репликат IV. Репликаты I и III всегда выделяли наименьшее количество летучих соединений. В течение первой недели при плотности 12, выделения из четырех из пяти репликатов были высокими и менее изменчивыми, чем при других плотностях в течение недели 1.
14
(Е)-2-октеналь присутствовал во всех образцах и (Е)-2-гексеналь в большинстве образцов, содержащих постельных клопов, и их соответствующие (Z)-изомеры обнаруживали в более сильных образцах. 4-оксо-(Е)-2-октеналь и 4-оксо-(Е)-2-гексеналь обнаруживали в большинстве образцов с более высокими плотностями постельных клопов, что было справедливо для (Е)-2-октеновой и (Е)-2-гексеновой кислот, при этом (Е)-2-октен-1-ол обнаруживали только в образцах с очень высоким количеством летучих соединений. Несколько других соединений обнаруживали в количестве равном количеству, обнаруженному в контрольных образцах. Одним из них является 2-гексанон.
В таблице 1 ниже показаны относительные выделения (%) из постельных клопов, удерживаемых при различных плотностях. Выделения собирали пассивно посредством анфлеража в течение трех недель. После каждой недели в течение трех недель (W1, W2, W3) адсорбент сверху каждого экспериментального контейнера забирали и заменяли чистым адсорбентом. Контрольный образец без постельных клопов удерживали в том же контейнере, как и все образцы в течение всего эксперимента.
На основе таблицы 1, ряд испытываемых соединений были выбраны для испытаний на арене, описанных в примере 2 ниже.
Пример 2. Испытания на арене для определения требуемого содержания композиции для приманивания постельных клопов
В этих испытаниях постельных клопов помещали на арену и позволяли свободно перемещаться с места на место, при этом регистрировали картины движения, включая, в частности, время, которое постельные клопы проводили вблизи каждого из трех различных пунктов, причем каждый пункт содержал приманку (испытываемое соединение) или был контрольным.
2.1. Материал и способы
Арена
Арена представляла собой круглую (52 см в диаметре) покрашенную в белый цвет металлическую тарелку с ободом высотой 3,8 см. На половине пути между центром и периферией были просверлены равномерно отстоящие друг от друга три отверстия (диаметром 3,4 см). Для предотвращения выхода постельных клопов обод красили Insect-a-Slip (#2871С Fluon, BioQuip Products, Inc. 2321 Ε, Chadwick St., Rancho Dominguez, CA 90220), в результате чего получили непористую скользкую поверхности на ободе тарелки.
Три пластиковых контейнера (диаметром 34 см и высотой 7 см), каждый с покрытым сеткой отверстием (диаметром 18 мм) на дне для обеспечения потока воздуха, присоединяли ниже отверстий на нижней стороне арены, используя глиняную пасту. В начале эксперимента композиции/приманки и контрольные образцы помещали по одному в каждый контейнер под ареной. Обычно использовали одну (пахнущую) приманку и два контрольных образца, однако в некоторых случаях испытывали две пахнущие приманки совместно, но тогда в экспериментах использовали только один контрольный образец.
Над каждым контейнером помещали круглый выпуклый стеклянный лист (диаметром 6,8 см). Каждый стеклянный лист опирался на верхнюю часть двух пластиковых крестов, поднимающих его на 3 мм выше поверхности арены. Стеклянный лист был пронумерован согласно приманке, находящейся ниже него.
Испытываемые соединения
Использовали следующие испытываемые соединения (на основе результатов сбора летучих соединений из примера 1):
a. (Е)-2-гексеналь
b. (Е)-2-октеналь
e. (Е)-2-гексеновая кислота
f. 2-октеновая кислота
g. 2-гексанон
Что касается а и b, в примере 1 показано, что как (Е)-, так и (Z)- изомеры были обнаружены в качестве летучих соединений от постельных клопов, однако, только (Е)-изомер был выбран для испытаний на арене.
Что касается f, в примере 1 показано, что был обнаружен (Е)-изомер. Однако, для испытаний на арене использовали имеющуюся в продаже смесь обоих изомеров.
В примере 1 дополнительно определили (Е)-2-октен-1-ол, однако, это соединение не использовали в испытаниях на арене.
В примере 1 дополнительно определили:
c. 4-оксо-(Е)-2-гексеналь и
d. 4-оксо-(Е)2-октеналь.
Хотя они изначально предназначались для использования в испытаниях на арене, было быстро обнаружено, что приманки (составленные с использованием 3 масс. % метилцеллюлозы), содержащие эти соединения, сразу начинали разрушаться при комнатной температуре. Из-за этого и из-за того, что эти соединения обнаруживают только в нимфах, и они не показывали какого-либо приманивающего воздействия в начальных испытаниях на арене (показывая значения, равные или ниже значениям контрольных образцов), их далее не изучали в испытаниях на арене.
Что касается g, это соединение в примере 1 определили в небольшом количестве. Однако его включили в испытания на арене, чтобы испытать по меньшей мере одно соединение из группы соединений, которые обнаружили в воздухе свободного пространства и образцах анфлеража в концентрациях, меньших чем пятикратная концентрация в контрольном образце.
Носители
Для начальных экспериментов, с целью обнаружения приманивающего сочетания испытываемых соединений, для образования приманок использовали два типа желатина в качестве носителей для соединений.
Желатиновые приманки и соответствующие контрольные образцы были представлены в небольших чашках, каждая из которых содержала примерно 0,8 мл желатина. В испытаниях на арене испытывали желатиновые приманки, содержащие либо 100 мг/л (10-4), либо 10 мг/л (10-5) каждого из одного или более испытываемых соединений.
Начальные испытания, см. таблицы 2 и 3 в разделе результатов, получали путем растворения испытываемых соединений в деминерализованной воде и смешивания их с охлажденным раствором (80% от общего объема) желатина (кислый костный желатин Bloom 250, 3 масс. %), растворенного в деминерализованной воде. Приманивающие химические вещества и, при необходимости, антиоксидант аскорбиновую кислоту растворяли в 20% от общего объема используемой воды.
Желатин растворяли в воде путем нагрева его до примерно 40°С при постоянном перемешивании. Когда все желатиновые хлопья/гранулы растворялись, суспензию охлаждали до 20°С и добавляли испытываемые соединения, с антиоксидантом или без него. Сразу после этого желатиновый раствор добавляли через пипетку в пробирки и закупоривали/закрывали. Для контрольных образцов приготавливали такие же растворы, содержащие воду и желатин, с аскорбиновой кислотой или без нее.
Что касается аскорбиновой кислоты, этот антиоксидант включали в некоторые приманки, однако было обнаружено, что он разлагает приманки и приводит к более низкой эффективности приманок. Включение аскорбиновой кислоты таким образом затем прекращали.
Более поздние испытания, см. таблицы 4 и 5 в разделе результатов, приготавливали, используя желатин  имеющийся в продаже желатин для домашнего применения, из-за неожиданной недоступности желатина, использованного для начальных испытаний. Эти приманки получали путем растворения твердого соединения е в жидких соединениях a, b, f и g и добавления 20% от общего объема воды к этому раствору, после чего его смешивали с охлажденным 2 масс. % раствором желатина  Раствор сливали в герметичные трубки из алюминиевой фольги и хранили в холодильнике до использования.
Суперпоглощающие приманки, см. таблицы 6 и 7 в разделе результатов, получали путем растворения испытываемых соединений в деминерализованной воде и смешивания их с суперпоглотителем, 0,5 масс. %, растворенным в деминерализованной воде. Суперпоглотитель получали из детского подгузника. Испытываемые соединения растворяли в 20% от общего объема используемой воды.
2.2. План исследования
Постельных клопов, десять за один раз, вводили в отдельные пробирки в середине арены и одновременно начинали видеозапись. Комнату для испытаний освещали красным светом и позже инфракрасным светом. За постельными клопами следили в течение 30 минут. В конце тридцатиминутного экспериментального периода подсчитывали число постельных клопов в каждом контейнере и под ободом или на ободе выпуклого стеклянного листа выше каждого контейнера. Результаты называют конечным распределением постельных клопов. В течение ранних экспериментов конечное положение не регистрировали.
Каждая видеозапись просматривалась оператором, и он подсчитывал число постельных клопов, поступающих под каждый стеклянный лист в течение тридцатиминутного периода. Невозможно было проследить путь отдельных постельных клопов и поэтому один и тот же постельный клоп мог быть подсчитан в более чем одном положении, а также в одном и том же положении более одного раза, если он оставлял его и возвращался. Таким образом, подсчет активности в течение эксперимента не исключает псевдо повторения.
2.3. Статистика
Среднее посещение приманок и контрольных образцов, их стандартное отклонение (SD) и их 95% доверительный интервал (CI) вычисляли для активности в течение эксперимента и для конечных положений постельных клопов, когда их регистрировали. Все чертежи и таблицы включают 95% доверительный интервал (CI), который является консервативной мерой количества членов. Различия в CI указывают на статистически значительное различие на уровне 5%.
2.4. Результаты
-4
В таблице 2 ниже показана активность постельных клопов в отношении приманок, приготовленных с желатином  в течение 30 минут испытания на арене в четырех различных экспериментах (№ пр. 1 4). В таблице 3 показано распределение в конце экспериментов для тех же приманок. Использовали равное количество испытываемых соединений. Концентрация каждого испытываемого соединения составляла 10, то есть 100 мг/л.
2
Как видно из таблиц 2 и 3, единственное значительное различие в активности постельных клопов по отношению к контрольному образцу (НО) видно в экспериментах 1 и 2 для приманки с сочетанием испытываемых соединений abef.
Для конечного распределения постельных клопов все приманки, за исключением сочетания ab, не показывают значительного отличия от контрольного образца.
Сочетание ef не может обеспечить приманивающий эффект в этих экспериментах.
Для дальнейших экспериментов соединение g (2-гексанон) добавляли к сочетанию abef для того, чтобы увидеть, будет ли это соединение, которое было обнаружено только в очень низких концентрациях в примере 1, вообще оказывать какое-либо воздействие.
Таким образом, в таблице 4 ниже показана активность постельных клопов в отношении приманок, приготовленных с желатином  в течение 30 минут испытания на арене в четырех различных экспериментах (Ex. No. 5-8).
В таблице 5 показано распределение в конце экспериментов для тех же приманок.
-4
Использовали равное количество испытываемых соединений. Концентрация каждого испытываемого соединения составляла 10, то есть 100 мг/л.
Как видно из таблиц 4 и 5, постельные клопы посещали приманки с abefg, то есть с пятью соединениями композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения, больше раз, чем другие приманки и контрольные образцы.
Таким образом, добавление испытываемого соединения g (2-гексанона) неожиданно оказывало сильное влияние на привлекательность приманки, несмотря на то, что это соединение обнаруживалось только в низкой концентрации в примере 1.
Хотя сочетание испытываемых соединений abefg давало статистически значительные отличия в активности по отношению к контрольному образцу (таблица 4) только для экспериментов 6, 7, и 8, следует отметить, что статистически значительное отличие по отношению контрольному образцу наблюдали во всех экспериментах 5-8 в конце экспериментов (таблица 5).
Что касается отличия сочетания abefg и сочетания abef, следует отметить, что ни в одном из экспериментов в таблицах 4 и 5 сочетание abef не показывает значительного отличия от контрольного образца.
Дополнительные испытания, таким образом, выполняли с использованием сочетания abefg испытываемых соединений для того, чтобы показать, что это сочетание также можно составить в других носителях.
В таблицах 6 и 7 показаны результаты для приманок с использованием суперабсорбента в качестве носителя.
-4
Использовали равное количество испытываемых соединений. Концентрация каждого испытываемого соединения составляла 10, то есть 100 мг/л.
Как видно в таблицах 6 и 7, сочетание abefg испытываемых соединений обеспечивало значительный эффект относительно контрольного образца приманивания постельных клопов, также когда в качестве носителя использовали суперабсорбент.
Суммируя результаты, представленные в таблицах 4-7, стоит отметить, что сочетание abefg испытываемых соединений представляет статистически значимое привлекающее средство по отношению к контрольному образцу как для мужских, так и для женских особей постельных клопов.
Пример 2 бис. Дополнительные испытания по приманиванию
Для испытания любого воздействия добавления двух кислот, (Е)-2-гексеновой кислоты (е) и 2-октеновой кислоты (f), к первым трем основным химическим соединениям (abg) композиции приманки выполняли испытания с вычитанием. Приманки для постельных клопов приготавливали со 100 мг/л каждого из соединений в следующих сочетаниях: abg, abeg, abfg и испытывали на аренах привлекательность для постельных клопов этих смесей.
Приманки приготавливали как и раньше в 2% растворе желатина  и каждое сочетание испытывали по сравнению с 2 контрольными образцами желатинового раствора без химикатов. В этих дополнительных испытаниях наблюдали конечные положения постельных клопов в конце каждого тридцатиминутного испытания. Каждое испытание указанных выше сочетаний повторяли 20 раз и каждое испытание включало либо десять женских, либо десять мужских особей постельных клопов.
Статистика
Двумерную обобщенную линейную модель (ОЛМ) с распределенными по Пуассону дискретными данными вычисляли со множеством постельных клопов, привлеченных к приманке, в качестве зависимой переменной и с запахом/приманкой и полом в качестве факторов. Оба фактора, пол и запах, были статистически значимыми (см. результаты) и для исследования данных выполняли дополнительную ОЛМ для каждого пола отдельно с запахом/приманкой в качестве зависимой переменной.
В общем при анализе использовали 162 строки данных: 82 строки, относящиеся к женским особям, и 80 строк, относящиеся к мужским особям. 42 строки относились к сочетанию abefg, и 40 строк каждая к остающимся сочетаниям abeg, abfg и abg.
Результаты
Распределение в конце экспериментов показано в таблице 5 бис ниже.
2
2
2
Оба фактора, пол (χ распределения Вальда (df=l)=8,192, р=0,004) и запах (χ распределения Вальда (df=3) 10,285, р=0,016) и их взаимодействие (χ распределения Вальда (df=3)=12,412, р=0,006) являются статистически значимыми.
2
2
2
2
Воздействие запаха на женские особи было статистически значимым (χ распределения Вальда (df=3)=21,133, р<0,000) и сравнение для женских особей abg с abeg, abfg и abefg обнаружило статистически значимое отличие в приманивании с abefg и abg (χ распределения Вальда (df=l)=l68,095, р=0,008), то есть между приманкой с кислотами и без них, в то время как не существовало существенных отличий между abg и abeg и abfg, χ распределения Вальда (df=l)=2,178, р=0,140 и χ распределения Вальда (df=l)=0,515, р=0,473, соответственно.
2
Для мужских особей не существовало статистически значимого отличия в приманивании к четырем приманкам (χ распределения Вальда (df=3)=1,493, р=0,684), см. таблицу 5 три ниже.
Обсуждение
Женские особи в общем сильнее приманиваются приманкой со всеми пятью компонентами, см. таблицы 5бис и 5 три выше, на 30% - 55% больше женских особей приманивается к полной ловушке (abefg) по сравнению с любым из других сочетаний. В испытаниях либо с одной, либо с другой кислотой (е или f) женские особи не приманивались. В общем, мужские особи кажутся безразличными к присутствию кислот, хотя немного большее число приманивается к любой приманке, содержащей одну или обе кислоты.
Статистически значимое более сильное приманивание (р=0,008) к приманке, содержащей все пять соединений (abefg) (с е: (Е)-2-гексеновой кислотой, f: 2-октеновой кислотой, а: (Е)-2-гексеналем, b: (Е)-2-октеналем и g: 2-гексаноном), по сравнению с приманкой (abg) без (Е)-2-гексеновой кислоты и 2-октеновой кислоты, подтверждает способность кислот приманивать в особенности женские особи постельных клопов по сравнению с любыми другими испытываемыми приманками.
Вывод
Сочетание (abefg) (Е)-2-гексеналя, (Е)-2-октеналя, 2-гексанона, (Е)-2-гексеновой кислоты и 2-октеновой кислоты показывает наибольшее приманивание для женских особей постельных клопов и почти наибольшее приманивание для мужских особей тоже. Две кислоты оказывают явное синергетическое воздействие на женские особи, но не на мужские особи. Однако, одна беременная женская особь постельного клопа является той, которая должна основать новую популяцию, что равно новому нежелательному заражению и, таким образом, желательно обладать способностью приманивать женских особей постельных клопов лучше, чем других постельных клопов (мужские особи и нимфы). Однако, приманка abefg является почти настолько же эффективной для приманивания мужских особей, как и для приманивания женских особей. Без сочетания обеих кислот (ef) эффективность приманивания значительно уменьшается для женских особей, меньше для мужских особей.
Пример 3. Приготовление PEG приманок
В этом примере описывают, как сочетание abefg испытываемых соединений можно приготовить с полиэтиленгликолем, PEG.
3.1. Материал и способы
PEG приманки приготавливали с пятью химическими соединениями a, b, е, f и g, растворенными/диспергированными в PEG200 (5%), и затем смешивали с расплавленным PEG4000 (температура плавления 68°С). Для достижения хорошего смешивания PEG200 с химическими соединениями и PEG4000, PEG200 с растворенными химическими соединениями помещали в закрытый контейнер и добавляли расплавленный PEG4000 и использовали мощный смеситель с низкой скоростью для смешивания двух растворов в течение одной минуты. Сразу после, перед тем, как PEG приманка затвердеет, ее сливали в ледяную кубическую форму. Форму с PEG приманками охлаждали в течение 10 минут в морозильнике, после чего кубики приманки, каждый массой примерно 3 г, упаковывали в герметичные трубки из алюминиевой фольги и хранили в холодильнике.
PEG приманки содержали 100, 200 или 300 мг/л a, b и g и 100, 200, 300, 500 или 1000 мг/л е nf.
Пример 4. Измерения летучих соединений из приманок
Одну из приманок, используемых в испытании на арене, помещали в контейнер и собирали динамически воздух свободного пространства, как описано в примере 1, и анализировали его, используя газовую хроматографию масс-спектрометрию (ГХ МС).
Доля различных соединений в воздухе свободного пространства показана в таблице 8.
Пример 5. Испытания в мезокосме для определения эффективности композиции для приманивания постельных клопов
-4
В испытаниях в мезокосме испытывали способность композиции согласно первому аспекту настоящего изобретения приманивать постельных клопов в мезокосме, то есть в условиях испытания, нацеленных на лучшее моделирование природной среды обитания постельных клопов. Испытания в мезокосме выполняли с 2% желатиновым гелем  содержащим пять соединений, приготовленным как в примере 1 выше, и в пропорциях 1:1:1:1:1 с концентрацией 10 каждого соединения.
5.1. Материал и способы
4
Мезокосм размером 78×56×18 см помещали в 55-литровый пластиковый ящик "SAMLA" от IKEA с пластиковой крышкой, причем крышка имела вентиляционные отверстия, покрытые сеткой с мелкими ячейками (8 см в диаметре, всего четыре отверстия), в каждом углу крышки. Приманки (2,5-3,0 г) наносили в ловушки Nattaro Scout, которые являются ловушками типа западни, сконструированными так, чтобы обеспечить постельным клопам проход через отверстие сверху конического корпуса для падения во внутреннюю часть ловушки, из которой они не смогут выбраться. Приманку приготавливали в виде 2% желатинового геля, содержащего 100 мг/л, то есть 10" г/л, каждого химического соединения abefg, и она дополнительно содержала аскорбиновую кислоту в качестве антиоксиданта. Контрольные приманки без abefg составляли аналогичным образом. Приманки и контрольные приманки получали так, как описано выше. Каждый мезокосм содержал две ловушки Nattaro Scout, одну с пахучей приманкой (abefg) и одну с непахучей контрольной приманкой. Ловушку с контрольной приманкой предусматривали для определения привлекательности самой ловушки. Помимо ловушек, каждый мезокосм содержал альтернативные укрытия, состоящие из 2 - 3 кусочков древесины (каждый приблизительно 30×5,5×1 см) и двух кусочков одежды различного цвета и размера (приблизительно средний размер 15×15 см). Как кусочки древесины, так и кусочки одежды ранее были подвергнуты воздействию постельных клопов и имели следы их экскрементов и более ранние места их скоплений. Кусочки древесины и одежды были нагреты до приблизительно 50 градусов или заморожены в течение по меньшей мере 24 часов для того, чтобы убить любые яйца, отложенные постельными клопами в предыдущих экспериментах в мезокосме.
Во всех экспериментах использовали постельных клопов от London Field Strain (Cimex lectularius L.), питавшихся дефибринированной овечью кровью. Постельные клопы в основном ведут ночной образ жизни, и световой цикл регулировали (13 часов света между 8:00 и 21:00 и 11 часов темноты 21:00 - 8:00) для приближения к обычному для постельных клопов суточному ритму. Десять постельных клопов, четыре женских и шесть мужских особей, выпускали одновременно в каждом эксперименте. Это соотношение полов использовали в мезокосме, потому что оно отражает распределение, которое близко к тому, что обнаружено в естественных популяциях, и мы ожидали, что оно способствует естественному поведению постельных клопов.
5.2. План исследования
Постельных клопов выпускали в середине мезокосма, приблизительно в 35-40 см как от контрольной, так и от активной ловушки Nattaro Scout. Две ловушки помещали в углах по диагонали, разделенных приблизительно 70-80 см, с древесными материалами и кусочками одежды в середине. Эксперименты в мезокосме начинали после полудня с ловушками Nattaro Scout, загруженными гелями по изобретению. Отмечали время поступления и удаления постельных клопов. Отмечали число и пол постельных клопов, пойманных как в контрольной, так и в активной ловушках через регулярные интервалы времени, или когда новые постельные клопы заменяли тех, которые уже были в мезокосме.
В качестве приближенного значения количества летучих соединений, выделенных приманками, мы измеряли количество жидкости, которая испарялась из гелей в течение экспериментов, путем взвешивания загруженного в ловушки геля в начале и снова каждый раз, когда постельных клопов в мезокосме заменяли новыми, и в конце каждого эксперимента. После каждого эксперимента и перед повторным использованием ловушки промывали непахучим моющим средством и сушили.
Для оценки того, насколько эффективно и насколько долго пахучая приманка была привлекательной, провели опыт, в котором использовали одинаковую приманку в течение шести последовательных суток. В течение этого периода водили новых постельных клопов в три момента времени и в это же время удаляли и отмечали положение и пол постельных клопов, введенных за предыдущий период. Ловушки, содержащие вновь загруженный гель, взвешивали вначале и снова через 24, 72 и 144 часа после начала эксперимента. Десять постельных клопов вводили в то же самое время, когда загруженные гелем ловушки взвешивали и помещали обратно в мезокосм. Первая группа из десяти постельных клопов таким образом находилась в мезокосме в течение 24 часов (вновь открытая пахучая приманка), вторая группа в течение 48 часов (приманка возрастом 24-72 часа) и третья группа в течение 72 часов (приманка возрастом 72-144 часа).
При оценке эффективности приманки в связи с ее сроком эксплуатации мы отметили, что женские и мужские особи постельных клопов ловились с различными интенсивностями. Usinger (1966) сообщал, что при оптимальных условиях взрослые постельные клопы, а также нимфы, начинают искать пищу спустя примерно одну неделю после их предыдущей кормежки кровью и после кормежки нимфы начинают развиваться до их следующей стадии. Однако, чтобы избежать существенных усложнений, мы не включали нимф в настоящее исследование. Используемые в экспериментах постельные клопы, которые питались менее 7 суток до эксперимента, рассматривались как сытые или наевшиеся, в других случаях их отмечали как голодных. Это разделение использовали при поиске различий в поведении.
5.3. Результаты
В таблице 9 показано распределение постельных клопов в зависимости от срока/продолжительности эксплуатации приманок. Не существует значительных отличий, относящихся к сроку эксплуатации приманок (0-24, 24-72, 72-144 часа), в распределении постельных клопов в активных ловушках, контрольных ловушках и вне их в мезокосме. Активные ловушки ловили статистически значимое большее количество постельных клопов по сравнению с контрольными ловушками (разница пахучих и контрольных ловушек 0,321, р<0,001 ***) и статистически значимое большее количество постельных клопов было обнаружено вне ловушек в мезокосме, чем в любом типе ловушек (разница вне ловушек и в контрольных ловушках 0,400, р<0,001 *** и вне ловушек и в пахучих ловушках 0,079, р=0.02*).
Таким образом, в таблице 9 показано, что пахучие ловушки, то есть ловушки, содержащие композицию по изобретению, ловят значительно больше постельных клопов, чем контрольные ловушки. Не все постельные клопы были пойманы - большая часть постельных клопов остаются вне ловушек в мезокосме.
Как показано в таблице 8, композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения является эффективной также когда ее использовали вместе с ловушкой.
В таблице 9 показано общее распределение постельных клопов, то есть в ней не указана доля мужских и женских особей, которые были обнаружены в ловушках.
Как указано выше, 6 мужских и 4 женских особей использовали для каждого эксперимента. В таблице 10 показаны улавливание женских и мужских особей постельных клопов в мезокосме в течение 0-24, 24-72 м 72-144 часов. Присутствие постельных клопов и их пол подсчитывали в трех различных положениях: в ловушках Nattaro Scout с пахучей приманкой, в ловушках Nattaro Scout с непахучей приманкой (контрольные) и в мезокосме вне ловушек.
При разделении по полу, как женские, так и мужские особи постельных клопов значительно более склонны к улавливанию в пахучих ловушках Nattaro Scout по сравнению с контрольными ловушками во всех трех временных группах.
Соответственно, композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения является эффективной для приманивания как мужских, так и женских особей постельных клопов. Это важно, так как повышает возможность приманивания постельных клопов, будь то мужские особи или женские особи, и таким образом обеспечивая обнаружение присутствия постельных клопов независимо от пола.
Для оценки влияния сытого/голодного состояния постельных клопов, положения в конце каждого эксперимента сравнивали для сытых и голодных мужских и женских особей постельных клопов и они представлены в таблицах 11-13 ниже.
В экспериментах с композицией (запахом) abefg не обнаружено дополнительных эффектов, независимо от того, были ли сытыми или нет женские или мужские особи постельных клопов, помимо уже установленного эффекта ловушки Nattaro Scout с запахом. Таким образом, статистически композиция согласно первому аспекту настоящего изобретения равным образом способна приманивать как сытых, так и голодных постельных клопов. Это важно, так как позволяет использовать композицию для обнаружения постельных клопов также в местах, из которых источник пищи, то есть люди, выехали. Таким образом, композицию можно использовать для обнаружения любых остающихся постельных клопов после попытки их уничтожения, например, когда место или комната/квартира/дом были необитаемыми в течение некоторого времени после того, как была проведена попытка дезинсекции. В этом случае любые остающиеся постельные клопы наиболее вероятно не имели возможности питаться в течение нескольких суток и, соответственно, важно, что композиция способна приманивать как сытых, так и голодных постельных клопов.
сытые-запах
голодные-запах
сытые-запах
голодные-запах
сытые-контроль
голодные-контроль
сытые-контроль
голодные-контроль
сытые-запах
голодные-запах
сытые-запах
голодные-запах
сытые-контроль
голодные-контроль
сытые-контроль
голодные-контроль
сытые-запах
голодные-запах
сытые-запах
голодные-запах
сытые-контроль
голодные-контроль
сытые-контроль
голодные-контроль
Хотя отсутствует значимый результат, при просмотре средних долей от нового запаха голодные женские особи являются группой, наиболее вероятно улавливаемой как активной ловушкой Nattaro Scout, так и контрольной ловушкой, так как средние доли составляли: женские особи  = 43,8%, женские особи  = 53,1%, мужские особи  = 43,2%, мужские особи  = 43,8%, женские особи  = 18,0%, женские особи  = 17,2%, мужские особи  = 5,2%, мужские особи  = 8,3% (таблица 11). Эти результаты также обнаруживают в экспериментах как с односуточным запахом, так и с трехсуточным запахом, в которых средние доли для активной ловушки Nattaro Scout с односуточным запахом составляли: женские особи  = 37,5%, женские особи  = 50,0%, мужские особи  = 12,5%, мужские особи  = 41,7%, женские особи  = 15,6%, женские особи  = 20,3%, мужские особи  = 3,1%, мужские особи  = 13,6% (таблица 12), и средние доли для активной ловушки Nattaro Scout с трехсуточным запахом составляли: женские особи  = 28,1%, женские особи  = 45,3%, мужские особи  = 24,0%, мужские особи  = 40,1%, женские особи  = 12,5%, женские особи  = 16,4%, мужские особи  = 0,0%, мужские особи  = 15,1% (таблица 13).
Воздействие голода или сытости на постельных клопов, однако, необходимо учитывать с некоторой оговоркой, так как постельным клопам только была или не была предложена возможность питаться в пределах 7 суток, и не каждый постельный клоп питался в течение этого периода. Поэтому эти результаты необходимо рассматривать как предварительные результаты.
Скорость, с которой по меньшей мере 1 постельного клопа обнаруживали в ловушке для активной ловушки Nattaro Scout с новым запахом составляла 89,58±4,41% по сравнению с 54,17±7,19% для контрольной ловушки, коэффициент попаданий в ловушке с односуточным запахом составлял 91,67±3,99% по сравнению с 56,25±7,16% для контрольной ловушки и для ловушки с трехсуточным запахом коэффициент попаданий составлял 91,67±3,99% по сравнению с 47,92±7,21% для контрольной ловушки, см. таблицу 14 ниже.
В таблице 14 показано, что для всех возрастов запаха коэффициент попаданий был значительно выше для ловушек с композицией abefg по сравнению с контрольными ловушками.
5.4. Обобщенные результаты
-4
При обобщении результатов примера 4 следует отметить, что ловушка Nattaro Scout с приманкой с пахучей композицией abefg согласно первому аспекту настоящего изобретения (1:1:1:1:1, концентрация 100 мг/л, то есть 10 каждого компонента) приманивает как женских, так и мужских особей постельных клопов значительно больше, чем контрольная ловушка Nattaro Scout в испытаниях в мезокосме. Только однажды, как известно авторам изобретения, синтетическая пахучая смесь была способна приманивать постельных клопов в испытании в регулируемом мезокосме (патентная заявка US 15/10676 от Gries at al.), в этом случае с использованием мужских особей постельных клопов и только что смешанных пахучих смесей. Наши результаты показывают высоко значимые результаты, что пахучая желатиновая смесь, приманивающая как женские, так и мужские особи постельных клопов к ловушке Nattaro Scout как в группе с запахом возрастом 24-72 часа, так и в группе с запахом возрастом 72-144 часа, лучше, чем контрольная ловушка, содержащая только желатин.
Так как присутствуют 48 репликатов мезокосма во всех трех возрастных группах запаха с 10 постельными клопами в каждом наборе (соотношение женских/мужских особей 6:4), результаты необходимо считать очень убедительным доказательством того, что пахучая гелевая смесь работает для приманивания постельных клопов к ловушке Nattaro Scout в системе регулируемого мезокосма.