Способ моделирования острого панкреатита различной степени тяжести у крыс
METHOD FOR MODELING ACUTE PANCREATITIS OF VARIOUS SEVERITY IN RAT

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для моделирования острого панкреатита у крыс.
Близким решением является способ моделирования, разработанный Р.А. Емельяновым, С.А. Алехиным, Д.П. Назаренко, М.В. Покровским, Т.Г. Покровской, Е.Б. Артюшковой, М.П. Гладченко, описанный в статье Исследование микроциркуляции методом лазердоплеровской флуометрии при остром экспериментальном панкреатите. Кубанский научный медицинский вестник от 30.11.2006 г. Стр. 50-52 г., где для моделирования острого деструктивного панкреатита вместо раствора таурохолата натрия, описанного Aho HJ, Koskensalo SM, и Nevalainen TJ в статье Experimental pancreatitis in the rat. Sodium taurocholate-induced acute haemorrhagic pancreatitis. Scand J Gastroenterol 15: 411-416, 1980 г., используется трансдуоденальное внутри-протоковое введение специальной буферной системы, содержащей соль желчной кислоты при оптимальной для интрапанкреатической активации ферментов рН. Для возможности управления площадью панкреонекроза использовали различное наложение (дистальнее или проксимальнее места впадения добавочного протока поджелудочной железы в общий желчный проток) лигатуры, что обеспечивать развитие тотального или субтотального панкреонекроза.
При использовании данного способа моделирования острого деструктивного панкреатита не учитывалась обструкция протоковой системы поджелудочной железы крыс, этиологический критерий развития острого панкреатита, лежащие в основе большого количества летальных исходов, отличаются от таковых при развитии острого панкреатита в клинике.
Техническим результатом изобретения является повышение вероятности удачной повторяемости результатов воспроизведения модели данного заболевания.
Технический результат достигается тем, что для моделированияострого панкреатита вместо специальной буферной системы мы используем 50% раствор желчи с рН=6,0 в дозе 0,2 мг/кг с последующим его введением в общий желчный проток, без канюлизации большого дуоденального сосочка. Для возможности управления степенью тяжести и площадью поражения поджелудочной железы мы используем этапное наложение турникетов на места впадения добавочных протоков поджелудочной железы и общий желчный проток, что обеспечивает развитие острого панкреатита различной степени тяжести.
Изобретение поясняется фигурами:
- фиг. 1 - Вскрытие брюшной полости крысы.
- фиг. 2 - Демонстрация забора желчи.
- фиг. 3 - Моделирование острого панкреатита средней степени тяжести.
- фиг. 4 - Моделирование острого панкреатита тяжелой степени тяжести.
- фиг. 5 - Микрофото: крупные участки деструкции ткани в виде обширных бесструктурных эозинофильных очагов некроза с выраженной перифокальной воспалительной инфильтрацией преимущественно полиморфноядерными лейкоцитами. Окр. Гематоксилином и эозином (х 100).
- фиг. 6 - Микрофото: некротические изменения распространились на парапанкреатическую клетчатку с ее воспалительной инфильтрацией. Окр. Гематоксилином и эозином (х 100).
- фиг. 7 - Микрофото: в близи очагов некроза, выраженный интерстициальный отек. Окр. Гематоксилином и эозином (х 100).
- фиг. 8 - Микрофото: в близи очагов некроза, выраженный интерстициальный отек. Окр. Гематоксилином и эозином (х 200).
Способ осуществляется следующим образом.
При вскрытии брюшной полости (фиг. 1) в рану выводится петля двенадцатиперстной кишки (фиг. 1. 2). В гепатодуоденальной связке определяется общий желчный проток крысы (фиг. 1. 3) диаметром 0,27- 0,57 мм. На расстоянии приблизительно 1,5 см от ворот печени в общий желчный проток по задней поверхности впадает дистальный панкреатический проток диаметром приблизительно около 0,2-0,3 мм, что лучше видно при рассечении связки аналоги lig. gastrocolicum и отведении желудка (фиг. 1. 1). При этом мы увидим общий желчного проток, впадающий в него дистальный панкреатический проток (фиг. 1. 4), часть поджелудочной железы, прилежащую к задней стенке желудка и к воротам селезенки. При данном доступе можно увидеть дуоденальную часть поджелудочной железы, дренирующуюся дополнительным протоком добавочной долей поджелудочной железы (фиг. 1. 5), который впадает в общий желчный проток по задней его поверхности на расстоянии около 0,5 см от места вхождения общего желчного протока в стенку двенадцатиперстной кишки. Произвели забор желчи из общего желчного протока с помощью катетера для приготовления ее 50% раствора с рН=6,0 (фиг 2.).
Отличие метода от существующих заключается в возможности моделирования ОП различной степени тяжести без канюлизации большого сосочка двенадцатиперстной кишки за счет воспроизведения модели с наложением турникетов (фиг 3. 6, фиг. 3. 7) на общий желчный проток (фиг. 3.3) выше и ниже места впадения дистального протока поджелудочной железы (фиг. 3. 4) и введения по катетеру 50% раствора желчи с рН=6,0 в дозе 0,2 мг/кг (фиг. 3. 9), с последующей перевязкой данного протока (фиг. 3. 8), в результате чего наблюдается формирование ОП средней степени тяжести (фиг. 3). Моделирование ОП тяжелой степени достигается наложением двух турникетов на общий желчный проток выше места впадения дистального протока поджелудочной железы (фиг. 4. 6) и ниже места впадения проксимального протока добавочной доли поджелудочной железы (фиг. 4. 7), введения 50% раствора желчи с рН=6,0 в дозе 0,2 мг/кг (фиг. 4. 9), с последующей перевязкой двух протоков поджелудочной железы крысы (фиг 4. 8, фиг. 4. 10). Во всех случаях перевязка протоковой системы поджелудочной железа происходит через 15 мин, затем турникеты снимаются, рана послойно ушивается.
Моделирование различных по степени тяжести форм ОП производили за 5 суток до выведения животных из эксперимента, поскольку в ранее проводимых исследованиях установлено наличие максимально выраженных метаболических изменений в крови и манифестной морфологической картины ОП именно в эти сроки. Для проведения лабораторных тестов на 5-е сутки от моделирования ОП, под наркозом, с тщательным соблюдением правил асептики и антисептики, осуществляли торакотомию и забор крови в объеме до 5 мл из правого желудочка сокращающегося сердца, с последующим выведением животных из эксперимента передозировкой средств для наркоза.
Результаты моделирования острого панкреатита различной степени тяжести.
У животных с экспериментальной моделью обструктивного панкреатита при гистологическом исследовании поджелудочной железы обнаруживались крупные участки деструкции ткани в виде обширных бесструктурных эозинофильных очагов некроза с выраженной перифокальной воспалительной инфильтрацией преимущественно полиморфноядерными лейкоцитами (фиг. 5). При этом некротические изменения распространялись на парапан-креатическую клетчатку с ее воспалительной инфильтрацией (фиг. 6). В сохранившейся ткани поджелудочной железы, особенно вблизи очагов некроза, развивались выраженное полнокровие сосудов и интерстициальный отек (фиг. 7, фиг. 8).
Таким образом, при экспериментальном ОП средней и тяжелой степенях тяжести обнаружены различные по выраженности метаболические и иммунные нарушения с провоспалительной направленностью. При этом отмечается прямая зависимость выраженности иммунометаболических изменений от тяжести ОП. Установленные лабораторные сдвиги позволяют утверждать о развитии острого панкреатита у крысы.
Данный способ позволяет:
- получать высокий достоверный результат операций при минимальной гибели подопытных животных, т.е. высокая повторяемость положительных результатов;
- техническая простота и доступность операций;
- возможность протекания моделируемого заболевания в течение длительного времени до 5 и более суток, что в последующем дает возможность медикаментозного вмешательства и испытания новых лекарственных форм и препаратов для лечения и изучения их влияния.