Заболевание, вызываемое вирусом Зика

НАУЧНЫЕ ОБЗОРЫ

Заболевание, вызываемое вирусом Зика

Т.Е. Сизикова,

B.Н. Лебедев,

C.И. Сыромятникова, C.B. Борисевич

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Минобороны России, Московская область, Сергиев Посад

Вирус Зика впервые был выделен в Уганде в 1947 г. Данный возбудитель принадлежит к роду Flavivirus семейства Flaviviridae. Вирус Зика является близкородственным другим флавивирусам, в том числе вирусам денге, желтой лихорадки и Западного Нила представляющим опасность для здоровья населения.

Вирус Зика - арбовирус, передаваемый комарами рода Aedes. Энзоотический цикл вируса включает сочетание естественного цикла (низшие приматы как резервуар, комары рода Aedes как вектор передачи) и городского цикла, включающего человека как резервуар и комара как вектор.

Вирус Зика передается через укус инфицированных самок комаров. Рассматривается возможность вертикального, перинатального, полового и трансфузионного способа передачи возбудителя.

Основным методом диагностики заболевания является выявление РНК возбудителя с помощью поли-меразной цепной реакции с обратной транскрипцией. Специфические средства для профилактики и лечения не разработаны. В качестве эффективных препаратов против заболевания, вызываемого вирусом Зика, действующих на уровне вирусного генома, рассматриваются малые интерферирующие РНК.

В обзоре обсуждается потенциальная опасность заболевания, вызванного вирусом Зика. Рассмотрены эпидемиология, клиника, диагностика, профилактика и лечение заболевания, вызываемого флавивирусом Зика. Отдельно изучены вопросы взаимоотношения вируса с его переносчиками, резервуаром инфекции.

Zika virus infection

T.E. Sizikova, V.N. Lebedev, Central Research Institute # 48, Moscow Region, Sergiev Posad

S.I. Syromyatnikova,

S.V. Borisevich

Ключевые слова:

вирус Зика,

флавивирусы,

комары, способ

передачи

возбудителя,

РНК, обратная

транскрипция,

полимеразная

цепная реакция,

диагностика

заболевания

Zika virus was first isolated in Uganda in 1947. The agent belongs to genus FLavivirus, family Flaviviridae. Zika virus is closely related to other flaviviruses of public health relevance including dengue, yellow fever and West Nile viruses.

Zika virus is an arthropod borne virus transmitted by Aedes mosquitoes.

Enzootic cycle of Zika virus is combine of natural cycle (non-human primates as reservoirs, Aedes mosquitoes as vectors) and urban cycle (human as the reservoir, urban mosquitoes as vectors.

Zika virus is transmitted by the bite of infected female mosquitoes. The possibilities of vertical, perinatal, sexual and blood transfusion transmission are viewed.

The diagnosis of disease, caused by Zika virus, is primarily based on detection of viral RNA by RT-PCR. There are no specific treatments and vaccines against the disease, caused by Zika virus. The small interfering RNAs may be viewed as efficient antiviral agent for Zika virus mediated infection at viral genome level.

The potential threat of disease, caused by Zika virus for public health, is discussed in this review. The epidemiologist characteristics, clinical features, diagnostics, prophylactic and treatment of Zika virus infection. The questions of interrelation of Zika virus with its vectors and reservoirs are viewed.

Keywords:

Zika virus, flaviviruses, mosquitoes, route of transmission of agent, reverse transcription, polymerase chain reaction, обратная транскрипция, полимеразная цепная реакция, diagnostic of disease

В

ирус Зика был впервые выделен в районе леса Зика (отсюда название возбудителя) в Уганде в 1947 г. от макаки резус и комаров Aedes africanus [1]. От чело-

века впервые вирус Зика был выделен в Уганде и Танзании в 1952 г. [2]. Заболевание эндемично для Африки и Юго-Восточной Азии [3].

Возбудитель принадлежит к роду Flavivirus семейства Flaviviridae. Морфология вируса Зика характерна для представителей данного семейства. Вирионы имеют сферическую форму диаметром до 50-60 нм, снаружи покрыты гликопротеиновой оболочкой. Внутри внешней оболочки размещается вирусный капсид - геномный нуклеопротеино-вый комплекс диаметром около 30 нм.

Геном данного возбудителя представлен одноцепочеч-ной «плюс»-РНК размером 10 794 нуклеотидов. Вирусная РНК содержит 7-метилгуанозиновый кэп на 5'-конце. Геномная РНК служит в качестве информационной РНК для внутриклеточного синтеза вирусных белков. Последовательность генов на открытой рамке считывания следующая:

5'-С-ргеМ-Е^1^2А^2В^3^4А^4В^5-3' [4].

В процессе репродукции вируса в клетках синтезируются 3 вирусных структурных белка: капсидный белок С, мембранный белок М и поверхностный белок Е. Незрелые внутриклеточные вирусные частицы содержат гликозилированный белок - предшественник ргеМ. Кроме того, геном вируса Зика (как и других флавивирусов) содержит гены неструктурных белков NS1, NS2A, NS2В, NS3, NS4A, NS4В, NS5 и вирусной РНК-полимеразы, которые присутствуют в инфицированной клетке и участвуют в репликации вируса. В геноме все белки закодированы последовательно в виде одной открытой рамки считывания, фланкируемой на 5'- и 3'-концах нетрансли-руемыми участками. Нетранслируемый участок на 5'-конце размером 95-101 нуклеотидов содержит 2 консервативных структурных элемента, большую стволовую петлю (SLA) и короткую стволовую петлю (SLB). SLA в процессе репликации вирусной РНК играет роль промотора, SLB регулирует процесс взаимодействия между 5'- и З'-концами, обеспечивая процесс циклизации вирусной РНК, необходимый для ее репликации [5-9].

Нетранслируемый участок на З'-конце размером 300500 нуклеотидов содержит 7 высококонсервативных стволовых петель, играющих важную роль в формировании структуры вирусной РНК, обеспечивающей ее защиту от действия клеточных РНКаз [9].

Индивидуальные белки вируса образуются в результате посттрансляционного расщепления единого вирусного полипротеина-предшественника протеазами вирусного или клеточного происхождения. В репликативном цикле геномная РНК является инициатором инфекционного процесса и служит матрицей для создания дочерних копий [7, 8].

Для накопления вируса в лабораторных условиях используют монослойную культуру клеток комаров Aedes pseudoscutellaris - клон 61 с применением среды Лейбовица (L-15) в качестве ростовой [6].

Проведенный анализ изолятов вируса Зика с использованием молекулярно-биологических методов позволил установить наличие африканского и азиатского клайдов возбудителя [1, 10].

Вирус Зика близкородственен другим флавивирусам, в том числе вирусам денге, желтой лихорадки и Западного Нила, представляющим опасность для здоровья населения [6, 11].

Вирус Зика - арбовирус, передаваемый комарами рода Aedes. Энзоотический цикл вируса включает сочетание естественного цикла (низшие приматы как резервуар, комары рода Aedes как вектор передачи) и городского цикла, включающего человека как резервуар и комара как вектор передачи. Возможно, что резервуаром вируса Зика в природе являются животные, не относящиеся к классу млекопитающих [12].

В течение 60 лет после первичного выделения вируса Зика в Азии и в Африке были отмечены отдельные спорадические случаи заболевания, вызванные данным возбудителем. Случаи заболевания с 1951 по 1981 г. были зарегистрированы в Уганде, Танзании, Египте, Центрально-Африканской Республике, Сьерра-Леоне, Габоне, Индии, Малайзии, Филиппинах, Таиланде, Вьетнаме и Индонезии [3, 13]. Отмечено, что ареал распространения возбудителя постепенно расширяется.

В результате серологических исследований, проведенных в западных и северо-западных провинциях Замбии, у 217 из 3625 обследованных были выявлены специфические антитела к вирусу Зика [14].

В 2007 г. в Федеративных Штатах Микронезии, а именно на острове Яп, была зарегистрирована вспышка заболевания, вызванного вирусом Зика [13]. Это была первая вспышка заболевания за пределами Азии и Африки. Официально подтверждены 49 случаев заболевания, согласно же проведенной оценке, примерно 73% от общего числа жителей были инфицированы [15].

В 2013-2014 гг. произошла наиболее масштабная до настоящего времени вспышка заболевания во Французской Полинезии, в ходе которой, согласно проведенной оценке, были инфицированы примерно 28 тыс. человек (11% от всего населения) [16].

В ходе данной эпидемической вспышки одновременно были зарегистрированы случаи заболеваний, вызванные вирусами денге 1 и денге 3 [17].

В ноябре 2013 г. был зарегистрирован первый, лабора-торно подтвержденный случай заболевания, вызванного вирусом Зика в Европе. Заболел немецкий турист, вернувшийся из 3-недельного отпуска, проведенного в Таиланде. Заболевание началось 12 дней спустя после возвращения в Германию. Вероятный механизм заражения был трансмиссивный, так как несмотря на использование репеллентов, зафиксировано несколько укусов комаров. У больного была отмечена макулопапулезная сыпь на груди и спине, которая затем распространилась на руки, ноги и лицо, головные боли, лихорадка и озноб [18].

В 2013 г. описан случай заболевания, вызванного вирусом Зика, у 52-летней жительницы Австралии, возвратившейся из Индонезии [19]. Завозные случаи заболевания, вызванного вирусом Зика, впервые выявлены в Канаде и США [20, 21].

В феврале 2014 г. в Чили (на острове Пасха, расположенном в юго-восточной части Тихого океана) зарегистрирован первый случай заболевания, вызванного вирусом Зика [22].

В начале 2015 г. в г. Натал (штат Риу-Гранди-Ду-Норти, Бразилия) были зарегистрированы многочисленные случаи ден-геподобных заболеваний. В ходе лабораторных исследований

установлено, что этиологическим агентом данных заболеваний не является ни вирус денге, ни вирус Чикунгунья. Симптомы заболевания включали артралгию, эдему, умеренную лихорадку, макулоподобную сыпь, головные боли, боль в глазных яблоках, конъюнктивит, головокружение, миалгию, расстройства пищеварения. На основании клинических проявлений провести дифференциацию с заболеваниями, вызванными вирусами денге и Чикунгунья, не представлялось возможным [15, 23]. К тому же был описан случай одновременного инфицирования человека вирусами Зика и денге [24].

В мае 2015 г. в штатах Баия, Риу-Гранди-Ду-Норти и Сан-Паулу были зарегистрированы 17 подтвержденных случаев заболевания, вызванного вирусом Зика. Проведенный филогенетический анализ показал, что идентифицированный изолят вируса Зика принадлежал к азиатскому клайду данного возбудителя [25, 26].

Заражение вирусом Зика в период беременности может привести к рождению ребенка, страдающего микроцефалией (заболевание, характеризующееся недоразвитием черепа и головного мозга, сопровождающееся умственной отсталостью и неврологическими отклонениями). В Бразилии рост числа детей с микроцефалией связывают именно с заболеванием, вызываемым вирусом Зика. По данным Министерства здравоохранения Бразилии (по состоянию на 28 декабря 2015 г.), случаи микроцефалии у новорожденных встречались в 20 штатах и 618 муниципалитетах страны. Большое количество случаев заболевания отмечено на северо-востоке страны, где больше всего зарегистрировано заражений вирусом Зика [27]. ВОЗ объявила о распространении вируса Зика в 27 странах, расположенных в Западном полушарии [22].

Вирус Зика отнесен к эмерджентным вирусам [28]. Для последних характерно волнообразное распространение, определяемое изменениями в окружающей среде, трансформацией экосистем, снижением финансирования систем здравоохранения, спонтанным появлением вирулентных штаммов возбудителей вследствие генетической изменчивости. Данные факторы могут активно воздействовать на расширение ареала распространения возбудителя [28, 29].

Основным механизмом передачи возбудителя является трансмиссивный. Наряду с ним рассматривается возможность вертикального, перинатального и полового способа передачи возбудителя заболевания [21, 30, 31].

Во время вспышки заболевания во Французской Полинезии в 2013 г. была показана возможность заражения путем переливания крови инфицированных людей [32]. В начале 2016 г. в США зарегистрирован случай передачи вируса Зика от больного человека здоровому половым путем. 1 февраля 2016 г. ВОЗ объявила вирус Зика угрозой мирового масштаба. Делается прогноз, что в ближайшее время количество заболевших лихорадкой Зика может достигнуть 2 млн человек [22]. 15 февраля 2016 г. первый случай лихорадки Зика был зарегистрирован в Российской Федерации. Больная женщина, как и другие заболевшие в странах Европы, заразилась вирусом Зика, находясь на отдыхе в эндемичном для возбудителя регионе - Доминиканской Республике. Заболевание протекало в легкой форме, клинические симптомы регистрировали всего несколько суток [33].

Потенциальная угроза распространения вируса Зика в неэндемичные регионы во многом обусловливается проведением в августе 2016 г. в Бразилии, являющейся в настоящее время зоной максимального распространения заболевания (более 1,5 млн подтвержденных случаев), летних Олимпийских игр - мероприятия, которое обычно сопровождается массовым приездом туристов.

Использование серологических методов анализа для выявления вируса Зика и диагностики вызываемого им заболевания ограничено ввиду перекрестной активности вируса Зика с другими флавивирусами, что проявляется даже в наиболее специфичном серологическом тесте - реакции нейтрализации [34]. Поэтому ведущим методом диагностики заболевания является определение РНК возбудителя моле-кулярно-биологическими методами.

Для выявления РНК вируса Зика с помощью полимераз-ной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в реальном времени можно использовать следующие специфические компоненты [18]:

прямой праймер 5'-TGGAGATGAGTACATGTATG-3';

обратный праймер 5'-GGTAGATGTTGTCAAGAAG-3';

зонд, меченный флуоресцентными красителями ^АМ и BHQ-1) - BHQ-1: 5'^АМ CTGATGAAGCCATGCACAGTG BHQ-1-3'.

Выявить РНК вируса Зика можно в пробах крови и слюны, взятых во время острой фазы заболевания [4, 35]. Возможность определения вируса Зика в слюне представляет несомненный практический интерес, так как взятие крови значительно более трудоемкий процесс [4]. В течение 7 дней после проявления симптомов заболевания РНК вируса Зика может быть выделена в моче [36].

Следует отметить, что проведение анализа возможно только в специализированных лабораториях, так как коммерческие препараты для диагностики отсутствуют.

Анализ данных по вспышке заболевания, вызванного вирусом Зика, в Бразилии, наглядно демонстрирует проблемы, возникающие при проведении идентификации возбудителя в клинических пробах.

Сыворотки крови 21 больного, взятые во время острой фазы заболевания (хранившиеся до анализа при температуре -80 °С), были исследованы в Лаборатории молекулярной вирусологии Института Освальдо Круза, штат Парана (Бразилия) [37]. Сыворотки крови вначале были проанализированы с помощью ОТ-ПЦР на наличие в них РНК вируса денге, с помощью иммунофлюоресцентного анализа (ИФА) для выявления антигена вируса денге и антител изо-типа 1дМ к нему. Все исследования дали отрицательный результат. В последующем с помощью ОТ-ПЦР подтвержден факт отсутствия в исследуемых пробах РНК вируса Чикунгунья [37].

В ОТ-ПЦР были использованы праймеры, специфичные по отношению к гену белка оболочки вируса Зика [38]. Положительный результат был выявлен в 8 исследуемых сыворотках из 21. Последующее секвенирование полученного олигонуклеотида размером 364 п.о. и сравнение полученной последовательности с последовательностями, зарегистрированными в GenBank (^815989 и ^815990), показало идентичность полученного участка таковому для азиатского

клайда вируса Зика [37]. Наиболее вероятным является предположение о возможном заносе вируса Зика в Бразилию во время проведения там Чемпионата мира по футболу 2014 г.

Несмотря на сходство клинических признаков заболевания, в остальных 13 пробах ОТ-ПЦР дала отрицательный результат. Возможными причинами являются короткий по времени период продолжительности вирусемии и низкий уровень концентрации вируса в крови на 3-5-е сутки (время взятия проб) после появления клинических признаков заболевания [37].

Специфические средства профилактики и лечения лихорадки Зика не разработаны [25]. ВОЗ планирует в этом году приступить к разработке вакцин против данного заболевания [22]. В качестве неспецифического лечебного средства описано использование нестероидных противовоспалительных препаратов [18].

Перспективным направлением разработки специфических средств терапии является создание малых интерферирующих РНК, блокирующих процесс репликации вируса в инфицированных клетках [9].

Благодаря схожести клинических признаков заболевания, вызванного вирусом Зика с другими арбовирусными

инфекциями, отсутствию специализированных лабораторий во многих эндемичных по вирусу Зика регионах дальнейшее распространение возбудителя невозможно предсказать. Учитывая, что вирус Зика может передаваться комарами А. аедурИ и А. аШорк^з, вероятным регионом распространения возбудителя может быть весь тропический и субтропический пояс, а с учетом глобального потепления и регионы, расположенные на более высоких географических широтах. Несмотря на то что в большинстве случаев наблюдается доброкачественное течение заболевания, описаны случаи заболевания с неврологическими осложнениями. Группой риска для заболевания, вызванного вирусом Зика, являются беременные женщины. Накапливается все больше данных, устанавливающих причинно-следственную связь между заражением вирусом Зика и микроэнцефалией плода. Второй опасностью является синдром Гийена-Барре, проявляющийся в виде парестезии конечностей, слабости мышц и вялых параличей. Представленные материалы аналитического обзора по проблеме лихорадки Зика констатируют об опасности заболевания, вызванного вирусом Зика, для здоровья населения во многих странах мира.

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Минобороны России, Московская область, Сергиев Посад: Сизикова Татьяна Евгеньевна - кандидат биологических наук, научный сотрудник отдела особо опасных вирусных инфекций Лебедев Виталий Николаевич - доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник отдела генетики вирусов

Сыромятникова Светлана Ивановна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отдела особо опасных вирусных инфекций

Борисевич Сергей Владимирович - доктор биологических наук, кандидат медицинских наук, профессор, начальник Е-таН: 48cnii@miL.ru

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

1. Dick G.W.A., Kithen S.F., Haddow A.J. Zika virus. Isolation and serological specificity. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1952; Vol. 46: 509-20.

2. Hayes E.B. Zika virus outside Africa. Emerg Infect Dis. 2009; Vol. 15: 1347-50.

3. Grard G., Moureau G., Charrel R.N., Holmes E.C., et al. Genomics and evolution of Aedes-borneflaviviruses. J Gen Virol. 2010; Vol. 91: 87-94.

4. Musso D., Roche C., Nhan T., Robin E., Teissier A. Detection of Zika virus in saliva. J Clin Virol. 2015; Vol. 68: 53-5.

5. Alvarez D.E., Lodeiro M., Ludeifia S.J. Long range RNA-RNA interaction circularize the dengue virus genome. J Virol. 2005; Vol. 79: 6631-43.

6. Faye O., Freire C.C., Iamarino A., Faye O., et al. Molecular evolution of Zika virus during its emergence in the 20th century. PLoS Negl Trop Dis. 2014; Vol. 8 (1): 1-10.

7. Gebhard L.G., Filamatori C.V., Gamarnik A.V. Functional RNA elements in dengue virus genome. Viruses. 2011; Vol. 3: 1739-56.

8. Kuno G., Chang G.J. Full-length sequencing and genomic characterization of Bagaza, Kedougou and Zika viruses. Arch Virol. 2007; Vol. 152: 687-96.

9. Parvin A., Akter S., Uddin K.R., Banik S., et al. Design and prediction of potential RNAi (siRNA) molecules for 3' UTP PTGS

of different strains of Zika virus: a computational approach. Nat Sci. 2015; Vol. 13: 37-50.

10. Dash A.P., Bhatia R., Sunyoto T., Mourya D.T. Emerging and re-emerging arboviral diseases in Southeast Asia. J Vector Borne Dis. 2013; Vol. 50: 77-84.

11. Pierson T.C., Diamond M.S. Flaviviruses. In: D.M. Knipe, P.M. Howley (eds). Field Virology. Philadelphia, 2013; 714-94.

12. Musso D., Cao-Lormeau V.M., Gubler D.J. Zika virus: following the path of dengue and chikungunya. Lancet. 2015; Vol. 386: 243-4.

13. Duffy M.R., Chen T.H., Hancock W.T. Zika virus outbreak on Yap Island, Federated States of Micronesia. N Engl J Med. 2009; Vol. 360: 2536-43.

14. Babaniyi O.A., Mwaba P., Songolo P. Seroprevalence of Zika virus infection specific IgG in Western and North-Western Provinces of Zambia. Int J Public Health Epidemiol. 2014; Vol. 4: 110-4.

15. Musso D., Nhan T.X. Emergence of Zika virus. Clin Microbiol. 2015; Vol. 4 (5): 1-4.

16. Musso D., Niles E.J., Cao-Lormeau V.M. Rapid spread of emerging Zika virus in the Pacific Area. Clin Microbiol Infect. 2014; Vol. 20: 595-6.

17. Cao-Lormeau V.M., Roche C., Tessier A., Robin E., et al. Zika virus, French Polynesia, South Pacific, 2013. Emerg Infect Dis. 2014; Vol. 20: 1084-6.

18. Tappe D., RissLand J., Gabriel M., Emmerich P., et al. First case of Laboratory-confirmed Zika virus infection imported into Europe, Novemder 2013. Euro SurveiLL. 2014; VoL. 19 (4): 1-4.

19. Kwong J.C., Druce J.D., Leder K. Zika virus infection during brief traveL to Indonesia. Am J Trop Med Hyg. 2013; VoL. 89: 516-7.

20. Fonseca K., MeatheraLL B., Zarra D., Drebot M., et aL. Case Report: first case of Zika virus infection in a returning Canadian TraveLer. Am J Trop Med Hyg. 2014; VoL. 91: 1035-8.

21. Foy B.D., KobyLinski K.C., Foy J.L.C., BLitvich B.J., et aL. ProbabLe non-vector-borne transmission of Zika virus, CoLorado, USA. Emerg Infect Dis. 2011; VoL. 14: 880-2.

22. WHO. WeekLy EpidemioLogicaL Record. 2015: VoL. 90 (45): 609-16.

23. Simpson D.I. Zika virus infection in man. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1964; VoL. 58: 335-8.

24. Dupont-RouzeyroL M., O'Connor O., CaLvez E., Daures M., et aL. Co-infection with Zika and dengue viruses in 2 patients, New CaLedonia, 2014. Emerg Infect Dis. 2014; VoL. 21: 381-2.

25. Rodrigues-MoraLes A.J. No era suficiente con Dengue y Chikungunya: iLego tambien Zika. Archivos de Medicina. 2015; 11: e3.

26. Rodrigues-MoraLes A.J. Zika: the new arbovirus threat for Latin America virus. J Infect Dev Ctries. 2015; VoL. 9: 684-5.

27. Marcondes C.B., Ximenes M.F. Zika virus in BraziL and the danger of infestation by Aedes (Stegomyia) mosquitoes. Rev Soc Bras Med Trop. 2015. pii: S0037-86822015005003102.

28. Ioos S., MaLLet H.P., Goffart H., Gauther V., et aL. Current Zika virus epidemioLogy and recent epidemics. Med MoL Infect. 2014; VoL. 44: 302-7.

29. Dikid T., Jain S.K., Sharma A., Kumar A., Narain J.P. Emerging and re-emerging arboviral diseases in India: an overview. Indian J Med Res. 2013; Vol. 138: 19-31.

30. Beshard M., Lastere S., Teissier A., Cao-Lormeau V.M., Musso D. Evidence of perinatal transmission of Zika virus, French Polynesia, December 2013 and February 2014. Euro Surveill. 2014; Vol. 19: pii: 20751.

31. Musso D., Roche C., Robin E., Nhan T., et al. Potential sexual transmission of Zika virus. Emerg Infect Dis. 2015; Vol. 21: 359-61.

32. Musso D., Nhan T., Robin E., Roche C. et al. Potential for Zika virus transmission through blood transfusion demonstrated during an outbreak in French Polynesia, November 2013 to February 2014. Euro Surveill. 2014; Vol. 19 (14): 1-3.

33. URL: http://regnum.ru/new/society/2045/44.html.

34. Kuno G. Serodiagnosis of flavivirus infections and vaccination in humans. Adv Virus Res. 2003; Vol. 61: 3-65.

35. Lanciotti R.S., Kosoy O.L., Laven J.J., Velez J.O., et al. Genetic and serologic properties of Zika virus associated with an epidemic, Yap State, Micronesia, 2007. Emerg Infect Dis. 2008; Vol. 14 (8): 1232-9.

36. Gourinat A.C., O'Connor O., Calvez E. Detection of Zika virus in urine. Emerg Infect Dis. 2015; Vol. 21: 84-6.

37. Zanluca C., de Melo V.C.A., Mosimann A.L.P., Dos Santos G.I.V., et al. First report of autochthonous transmission of Zika virus in Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro). 2015; Vol. 110: 569-72.

38. Faye O., Faye O., Dupressoir A., Weidman M., et al. One step RT-PCR for detection of Zika virus. J Clin Virol. 2008; Vol. 43: 96-101.