СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ООЦИСТ ЭЙМЕРИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
METHOD OF CULTIVATION OF OOCYSTS OF EIMERIA OF CATTLE

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарной паразитологии. Изобретение направлено на решение проблемы методов профилактики и борьбы с протозойными болезнями (эймериозами) крупного и мелкого рогатого скота.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является выполнение комплекса эпизоотических вопросов, связанных с установлением видовой принадлежности простейших. Технический результат, достигаемый с помощью изобретения, состоит в повышении эффективности определения видовой принадлежности ооцист, за счет их быстрой споруляции и проявления морфологических признаков.
Способ прост в освоении любым практическим лабораторным работником, связанным с вопросами ветеринарной паразитологии.
Известно, что в кишечном тракте крупного рогатого скота паразитирует 17 видов эймерий, которые с фекалиями животных попадают во внешнюю среду не спорулированными, для того, чтобы в них прошли процессы созревания (споруляции), необходимы определенные благоприятные условия (М.Ш. Акбаев, Н.Е. Косменков и др. «Паразитология и инвазионные болезни животных», М.: Колосс, 2000 - С.743; М.В. Крылов «Определение паразитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений)» - С.-Пб.: Зоологический институт РАН, 1996. - С.602).
Предлагаются простые и сложные способы культивирования ооцист до состояния споруляции. Тем не менее простые сводятся к следующему: пробы фекалий, содержащие ооцисты, помещают в чашки Петри, дно которых выстлано фильтровальной бумагой. Материал увлажняют 2% раствором бихромата калия. Для лучшей аэрации и сохранения влажности крышку чашки Петри приоткрывают.
С интервалом в 24 часа берут пробы материала и исследуют под микроскопом; или собранные методом концентрации ооцисты отмывают водой путем центрифугирования один или два раза, помещают в чашки Петри и заливают очень тонким слоем 2% раствором бихромата калия. Затем эти чашки помещают в термостат при 25-28C°. Ежедневно ооцисты просматривают под микроскопом непосредственно в чашках Петри (Наиболее близкий аналог - М.В. Крылов «Определитель паразитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений)» - С.-Пб.: Зоологический институт РАН, 1996 - С.545). Сложные методы для быстрого спорулирования ооцист требуют аэрации среды путем ввода трубки через которую поступает воздух от микрокомпрессора или же пропускания воздуха через пористый фильтр №4, впаянный в дно сосуда (В.Р. Гобзем «Кокцидиоз телят». - Минск: Урожай, 1972. - С.103).
Недостатками простых способов являются:
1) споруляция ооцист в фекалиях, помещенных в чашки Петри и увлажненных 2% раствором бихромата калия, наблюдается только у отдельных видов, т.е. споруляция е превышает 2%;
2) необходимость проведения однократного или двукратного центрифугирования материала в воде;
3) бихромат калия является химическим реагентом, обладающим концерагенными свойствами.
Недостатками сложных методов является необходимость дополнительных технических приспособлений и сложности контроля за споруляцией.
С целью исключения этих недостатков предлагается способ культивирования ооцист включающий флотационный метод, т.е. основанный на всплывании ооцист в растворах высокой плотности.
Возможность практического осуществления заявленного изобретения подтверждается следующим: пробу фекалий от одного животного или объединенную от группы животных весом примерно 3 грамма кладут в медицинские стаканчики формы усеченного конуса, с делениями на 30 мл (полный объем их 50 мл), заливают небольшим количеством флотационного раствора (1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры на 1 л кипяченой воды), стеклянной палочкой размешивают до появления равномерной взвеси. Затем объем флотационной жидкости доводят до 50 мл и взвесь переливают через металлическое ситечко в такой же стаканчик и вновь объем флотационного раствора доводят до 50 мл. Из последнего стаканчика, после 5 минутного раствора верхний слой раствора (12 мл) отсасывают шприцом без иглы и переносят в центрифужную пробирку. Наполненные одинаковым объемом (12 мл) раствора, пробирки центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин. Всплывшие ооцисты снимают проволочной петлей (1-2 капли) и переносят на обезжиренное предметное стекло на котором предварительно восковым карандашом обведен овал (2,5-3 см в диаметре) и добавляют 3-4 капли водопроводной воды для снижения концентрации флотационной раствора. Стекла помещают на предметный столик и микроскопируют на наличие ооцист. Затем стекла помещают в штатив и ставят в эксикатор. На дно которого наливают водопроводную воду, для предупреждения высыхания ооцист. Эксикатор помещают в термостат с температурой 25-28°C. Ежедневно, стекла с материалом, микроскопируют и следят за споруляцией одних и тех же ооцист эймерий.
Предложенный способ культивирования ооцист имеет существенные отличия от описанных как в паразитологической так и в биологической литературе.