СПОСОБ СЕЛЕКЦИИ И РЕГЕНЕРАЦИИ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ ВИДА BRASSICA JUNCEA НА КСИЛОЗЕ

1. Новый улучшенный способ получения трансформантов Brassica juncea, основанный на способе положительной селекции и регенерации, включающий:
(а) конструирование рекомбинантного вектора, включающего последовательность нуклеиновой кислоты, отдельно связанную с регуляторной последовательностью, кодирующей фермент ксилозоизомеразу, необходимую для метаболизма селективного агента ксилозы;
(b) опосредованный агробактериями способ трансформации указанным вектором клеток растений или тканей растений в условиях, оптимальных для инфецирования;
(c) стадию селекции возможных трансформантов из популяции генетически нетрансформированных клеток растений или тканей растений на среде MS, содержащей селективный агент стадии (а);
(d) стадию регенерации отобранных клеток растений или тканей.
2. Способ по п.1, в котором используемое растение принадлежит виду Brassica juncea.
3. Способ по п.1, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент ксилозоизомеразу, выделена из организма Schizochytrium и представлена как SEQ ID NO:1.
4. Способ по п.3, в котором по крайней мере одна нуклеотидная последовательность модифицирована таким образом, что модифицированная ДНК экспрессируется в эксплантате растения-хозяина.
5. Способ по п.4, в которой модифицированная последовательность представлена как SEQ ID NO:3.
6. Способ по п.5, в котором соответствующая аминокислотная последовательность экспрессируемого белка, представлена как SEQ ID NO:2.
7. Способ по п.1, в котором клетки растения или ткани, подвергнутые трансформации, получены из черешков семядолей проросших семян растения-мишени в среде MS.
8. Способ по п.1, в котором клетки/ткани растений перед трансформацией векторной конструкции неспособны использовать ксилозу в качестве единственного источника углерода.
9. Способ по п.1, в котором растения рода Brassica, трансформированное рекомбинантным вектором, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую фермент ксилозоизомеразу, необходимую для метаболизма ксилозы, отличается тем, что при трансформации применяется ступенчатый процесс совместного культивирования эксплантатов, который включает:
(а) стадию получения эксплантатов путем вырезания черешка семядоли, избегая включения любой зародышевой ткани;
(b) стадию инфецирования в течение 10 с указанного эксплантата агробактериями, несущими указанную векторную конструкцию, и последующий перенос в среду для совместного культивирования;
(c) стадию совместного культивирования указанных эксплантатов в течение 3 дней при 28°С в темноте;
(d) стадию переноса эксплантатов на селективную среду, содержащую селективный агент;
(e) стадию последующего переноса отобранных эксплантатов в среду для селекции и элонгации;
(f) стадию, дополнительно включающую регенерацию отобранных трансформантов.
10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что подтверждение трансформации регенерированных ростков геном указанного селективного маркера осуществляется с использованием известных молекулярных методик скрининга.
11. Способ по любому из пп.1-9, в котором генетически трансформированные эксплантаты растений несут вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по п.3, экспрессия которой обеспечивает метаболическое преимущество трансформированным эксплантатам по сравнению с нетрансформированными клетками.
12. Способ по любому из пп.1-9, в котором трансформированные клетки отбирают на основе указанного конкурентного метаболического преимущества использования селективного агента ксилозы в качестве источника углеводов, благодаря экспрессии фермента с нуклеиновой кислотой по п.3.
13. Способ по п.1, в котором получаемая эффективность трансформации выше 35%.
14. Способ по п.1, в котором получаемая эффективность трансформации выше 30%.
15. Способ по п.1, в котором получаемая эффективность трансформации выше 25%.