СПОСОБ НЕИНВАЗИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОТНОСТИ ПЕЧЕНИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С
METHOD OF NON-INVASIVE DETERMINATION OF LIVER ACIDITY IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS C

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням, и предназначено для неинвазивного определения кислотности печени у больных хроническим гепатитом С (ХГС).
ХГС относится к числу наиболее распространенных вирусных заболеваний печени, характеризуясь выраженной склонностью к развитию цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (Мамаев С.Н., Рамазанов Ш.Р., Буеверов А.О., Маевская М.В., Абдуллаева А.М., Арбуханова Р.М., Дибиров Д.А., Амирова X.М. Динамика уровней цитокинов сыворотки крови при противовирусной терапии // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. - 2008. - №2. - С.28-31.).
Закономерно развивающиеся при ХГС воспалительные изменения печени сопровождаются повреждением таких субклеточных структур как митохондрии и лизосомы (А.Д.Адо. Патологическая физиология / А.Д.Адо, Г.В.Бурлаков, И.П.Гаранина и др.; под ред. А.Д.Адо, Л.М.Ишимовой. / - М.: Медицина, 1973, 535 с.). Это неминуемо приводит к накоплению в ней ряда недоокисленных продуктов, в частности пировиноградной, яблочной, янтарной, молочной и других кислот, что сопровождается увеличением концентрации водородных ионов с развитием местного тканевого ацидоза (В.Г.Овсянников. Общая патология. - Ростов-на-Дону: РИО АОЗТ «Цветная печать», 1997. - 4.1. и 4.2. - 320 с.; Л.М.Пустовалова. Практикум по биохимии. - Ростов-на-Дону: изд. «Феникс», 1999. - 544 с.; Б.Л.Смолянский, В.Г.Лифляндский. Диетология: новейший справочник для врачей. - СПб.: Сова; М.: ЭКСМО, 2004. - 816 с.). Кислая же среда тормозит в значительной мере функциональную активность лимфоцитов (A.M.Чернух, П.Н.Александров, О.В.Алексеев. Микроциркуляция. - 2-е изд., стереотип. - М.: Медицина, 1984. - 432 с.), являющихся, как известно, основными участниками противовирусной иммунной защиты макроорганизма (Л.П.Сизякина, И.И.Андреева. Справочник по клинической иммунологии / Серия «Больной вопрос». - Ростов-на-Дону: Феникс, 2005. - 448 с.). В связи с этим развитие тканевого ацидоза печени может создавать предпосылки для размножения возбудителей ХГС, а следовательно, способствовать более активному воспалению печени. Иными словами, по показателям кислотности печени можно судить о репликативной активности вирусов и выраженности в ней воспалительных изменений.
Кислотность тканей, в том числе и печени, определяется, как известно, с помощью прямой рН-метрии (Методы практической биохимии. Под ред. Б.Уильямс, К.Уилсон. - Пер. с англ. - М.: Изд. «Мир», 1978. - 268 с.). Однако существенным недостатком этого способа является то, что его существование возможно только после проведения у больных ХГС пункционной биопсии печени и получения ее пунктата. Между тем, эта манипуляция является достаточно инвазивной, что не позволяет проводить ее пациентам, имеющих соответствующие противопоказания. Прямая рН-метрия гепатопунктатов выбрана нами в качестве прототипа как наиболее близкого к заявляемому способу по техническому решению.
Технический результат - исключение инвазивности метода при определении кислотности печени у больных хроническим гепатитом С.
Заявляемый способ прост и экономичен, обеспечивает быстрое получение результата и не требует для своего проведения выполнения пункционной биопсии печени.
Поставленная задача достигается тем, что способ неинвазивного определения кислотности печени у больных хроническим гепатитом С путем рН-метрию биологического материала характеризуется тем, что измеряют с помощью рН-метра уровень кислотности кожи в области красной каймы губ (ККГ). При величинах рН кожи ККГ меньше чем 4,98 ед. констатируют выраженное повышение уровня кислотности ткани печени; при колебаниях значений рН кожи ККГ от 4,98 ед. до 5,76 ед. определяют умеренное повышение уровня кислотности печени и при значениях рН кожи ККГ свыше 5,76 ед. определяют минимальное повышение уровня кислотности печени.
Способ осуществляется следующим образом. Больным ХГС в утренние часы натощак на увлажненную кожу ККГ накладывают плоскую измерительную поверхность электрода рН-метра диаметром 1,0×1,0 см, проводят измерение рН кожи верхней и нижней губ и рассчитывают ее средний показатель. При величинах рН кожи ККГ менее 4,98 ед. констатируют выраженное повышение уровня кислотности ткани печени, соответствующее рН печени <6,76 ед.; рН кожи ККГ от 4,98 ед. до 5,76. соответствует умеренному повышению кислотности печени со значениями рН от 6,76 ед. до 7,25 ед. и рН кожи ККГ свыше 5,76 ед. свидетельствует о минимальном повышении кислотности печени с уровнем рН>7,25 ед.
Заявленный способ базируется на фактическом материале, полученном нами при углубленном клинико-лабораторном и инструментальном обследовании 41 больного с РНК-положительным ХГС. Возраст пациентов колебался от 20 до 44 лет. Число мужчин было несколько большим, чем женщин (n=25). Генотип вируса гепатита С (HCV) 1β регистрировался у 23 человек, у остальных с разной частотой были выявлены генотипы 3а, 2а и их комбинации.
0
1
2
3
Всем наблюдавшимся больным ХГС была проведена пункционная биопсия печени с последующим гистоморфологическим исследованием полученных гепатопунктатов. Чаще регистрировалась слабая степень гистологической активности воспалительного процесса в печени (n=26), реже - минимальная (n=8) и умеренная (n=7). Индекс фиброза колебался от 0 до 3-х баллов, в процентном отношении составляя: 0 баллов (F) - 3 пациента (7,3%), 1 балл (F) - 24 (58,5%), 2 балла (F) - 11 (26,8%) и 3 балла (F) - 3 (7,3%).
Сразу же после проведения пункционной биопсии печени от пунктата отделяли фрагмент длиной 5-7 мм, погружали на 2-3 секунды во флакон с дистиллированной водой и с помощью игольчатой измерительной поверхности электрода рН-метра 340 определяли уровень кислотности гепатопунктата по методу С.В.Федоровича (К методике определения рН поверхности кожи / Серия Вестник дерматологии и венерологии. - 1976. - №3. - С.74-76.). Одновременно у этих же больных ХГС, используя уже плоскую (1,0×1,0 см) измерительную поверхность электрода того же рН-метра, исследовали и уровень рН кожи в области ККГ. В качестве референтных использовали показатели рН кожи ККГ, полученные при обследовании 100 практически здоровых добровольцев от 20 до 44 лет, не страдавших ХГС или другими заболеваниями.
Как показали проведенные исследования, средний показатель кислотности полученных пунктатов печени составил у больных ХГС 6,96±0,05 ед., тогда как таковой кожи ККГ - 5,18±0,06 ед., при этом последний оказался достоверно более низким, чем у практически здоровых людей - 5,68±0,03 ед. (p<0,001).
Проведя корреляционный анализ, мы установили, что у исследовавшихся больных ХГС выявлено наличие прямой связи: r=0,78; p<0,01 между показателями рН пунктатов печени и показателями рН кожи ККГ. Выявленная зависимость позволила определить у наблюдавшихся пациентов четкое соответствие между количественными показателями кислотности печени и кожи ККГ (табл.). Это позволило прийти к заключению, что величина рН кожи ККГ у больных ХГС четко отражает уровень кислотности печени.
Таблица
Взаимоотношения количественных показателей рН ткани печени и кожи красной каймы губ у больных ХГС
Исследованная ткань
Распределение показателей рН (ед.) по уровню их снижения
выраженное
умеренное
минимальное
Печень
<6,76
6,76-7,25
>7,25
Кожа ККГ
<4,98
4,98-5,76
>5,76
Заявленный способ имеет по сравнению с прототипом ряд преимуществ: во-первых, он не требует проведения весьма инвазивной манипуляции - пункционной биопсии печени; во-вторых, технически более прост и менее трудоемок и, в-третьих, позволяет осуществлять постоянный мониторинг за эффективностью противовирусной терапии.
Изобретение иллюстрируется следующими клиническими примерами.
6
Больной М., 41 года (и.б. №1102-10), обратился в Гепатологический центр г.Ростова-на-Дону с установленным в поликлинических условиях диагнозом: ХГС для решения вопроса о необходимости проведения комбинированной противовирусной терапии. При дополнительном обследовании было установлено, что уровень вирусной нагрузки составляет у пациента 1,4×10 МЕ/мл, активность сывороточной АлАТ - 1,8 ммоль/л × час, индекс гистологической активности и индекс фиброза (по данным морфогистологического исследования пунктата печени) - соответственно 9 и 1 баллов. Величина рН гепатопунктата оказалась равной 6,24 ед., что свидетельствовало о выраженном повышении кислотности печени. И последний показатель, и величина индекса гистологической активности печени четко свидетельствовали о наличии у больного М. значительно выраженного воспалительного процесса в печени. Изменение рН кожи ККГ позволило квалифицировать у пациента выраженное повышение уровня ее кислотности - 4,72 ед., что полностью соответствует данным исследования рН печени.
5
Больная С., 32 лет (и.б. №944-10), поступила в Гепатологический центр с верифицированным диагнозом ХГС для проведения начального этапа противовирусной терапии. Исходные показатели (до начала лечения) оказались равны: количественный уровень HCV крови - 9,7×10 МЕ/мл; активность сывороточной АлАТ - 2,2 ммоль/л × час, индекс гистологической активности - 11 баллов, индекс фиброза - 2 балла (F2), рН пунктата печени - 6,12 ед. и рН кожи ККГ - 4,28 ед. Все исследованные показатели свидетельствовали о наличии у пациентки выраженного воспалительного процесса в печени. Спустя полгода после завершения двенадцатимесячного курса противовирусной терапии больная была повторно обследована: 1) HCV в крови не обнаруживался, т.е. был получен устойчивый вирусологический ответ; 2) активность сывороточной АлАТ составила 0,42 ммоль/л х час, т.е. достигла нормального уровня; 3) величины индекса гистологической активности и индекса фиброза снизились до 4-х и 1-го баллов; 4) рН пунктата печени оказался равным 7,31 ед., а рН кожи ККГ - 6,02 ед. При этом последний показатель, во-первых, полностью отражал состояние кислотности печени пациентки, а, во-вторых, наряду с другими свидетельствовал о снижении активности воспалительного процесса в печени, а следовательно, и об эффективности проведенного противовирусного лечения.