Роль апоптоза в патогенезе ревматоидного артрита и остеоартроза

РОЛЬ АПОПТОЗА В ПАТОГЕНЕЗЕ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА И ОСТЕОАРТРОЗА

А. И. Дубиков, Л.А. Белоголовых, Е.Э. Медведь Владивостокский государственный медицинский университет

Известно, что вслед за бурным ростом исследований и накоплением обширных сведений по той или иной проблеме всегда наступает период, когда на первый план выдвигаются задачи их теоретического обобщения. Такой период, по нашему мнению, наступил для проблемы апоптоза в патологии опорно-двигательного аппарата. Накопленные исследователями данные о нарушениях апоптоза при заболеваниях опорно-двигательного аппарата убеждают в том, что в развитии или предотвращении последних могут играть роль тип участвующих молекул-рецепторов (Fas-семейство или семейство фактора некроза опухоли - ФНО-семейст-во), механизмы активации и инактивации апоптоза, клетки, подвергающиеся апоптозу (лимфоциты или синовиальные фибробласты), триггерные механизмы апоптоза.

Апоптоз - это физиологический процесс, приводящий к гибели определенные типы клеток. В противоположность некрозу клетки, который инициируется сильными неспецифическими или токсическими повреждениями апоптоз является результатом взаимодействия рецепторов и лигандов. Описаны молекулы, опосредующие или ингибирующие апоптоз, такие как Fas-рецептор, рецепторы 1 типа фактора некроза опухоли (ФНО-PI), рецепторы, связанные с доменами смерти (DR, death domen-related) DR-3, DR-4, DR-5, DR-6 [4], белки семейства Bel, белок p53.

Fas/Apo-1 является членом суперсемейства рецепторных молекул, включающих два типа рецепторов ФНО-PI и ФНО-РП, низкоаффинный фактор роста нервов (ФРН), Т-клеточный активационный антиген CD-27, антиген CD-30, ассоциированный с лимфогранулематозом, В-клеточный антиген CD-40 и некоторые иные гомологи молекул млекопитающих и вирусов [1,8]. Было сделано предположение о существовании природного лиганда Fas/Apo-1 (CD-95), подтвержденное работами Т. Suda [57]. Fas-лиганд является членом суперсемейства лигандов ФНО, которые относятся к цитокинам. Другой рецептор семейства ФНО, TRAIL (TNF-related-apoptosis-inducing ligand), был идентифицирован как молекула, опосредующая клеточную смерть в различных линиях злокачественных опухолей [61]. TRAIL-рецепторы модулируют два различных сигнала -клеточную смерть, опосредованную каспазами, и экспрессию определенных генов, опосредованную ядерным транскрипционным фактором NF-кВ (nuclear factor regulating expression of kappa light-chain immunoglobulin). Супрессия TRAIL-индуцированной активации NF-кВ истощает рези-стентость к апоптозу и инициирует проапоптотический сигнал. На мышиных моделях аутоиммунного артрита было показано, что TRAIL предотвращает гиперпролиферацию синовиальных клеток и артритогенных лимфоцитов, однако этот эффект ассоциировался с остановкой клеточного цикла вместо стимуляции апоптоза [56]. В последних работах было продемонстрировано отсутствие экспрессии TRAIL-1 и -2 лимфоцитами и макрофагами синовиальной жидкости больных РА, а также культивированными синовиальными фибробластами (RASF) [49].

Семейство белков Вс1-2 имеет в своем составе как про-апоптотические молекулы

Адрес: Дубиков Александр Иванович 690105, Владивосток, ул. Давыдова 42, кв. 75. Электронная почта: aihavlad@online.vladivostok.rn Тел.: (4232) 33-87-47

[1]. Соотношение агонистов и антагонистов апоптоза, своеобразный молекулярный "реостат", определяет чувствительность к "смертельному сигналу". Bcl-XL, Bcl-2, Вах способны образовывать поро-формирующие каналы в синтетическом липидном бислое с различной селективностью и тем самым регулировать проницаемость мембраны и внешнее высвобождение цитохрома С в процессе апоптоза [54]. Вс1-2 и Bcl-XL демонстрируют обратный паттерн экспрессии в цикле развития лимфоцитов. Обнаружено снижение экспрессии Вах и повышение Bcl-2 в 24-часовой культуре CD4(+) и CD8(+) Т-лимфоцитов, взятых у больных ревматоидным артритом (РА) [59]. Повышение экспрессии Bcl-2 в клетках синовии сопровождалось повышенной экспрессией FLICE (FADD-like IL-10 converting епгуте)-подобного белка и слабо выраженным апоптозом [48]. Некоторые исследователи сообщают об уменьшении экспрессии Bcl-2 Т-лимфоцитами синовиальной жидкости или отсутствии значимого отличия в экспрессии Bcl-2 Т-лимфоцитами синовиальной оболочки при РА, остеоартрозе (ОА) и реактивном артрите [52]. В то же время in vivo выявлена более интенсивная экспрессия Bcl-2 RASF в сравнении с клетками больных ОА [48]. Авторы приходят к выводу, что Вс1-2 оказывает антиапоптогенный эффект на уровне митохондриального гомеостаза, тем самым способствуя пролиферативным процессам в синовиальной оболочке у больных РА. Этот эффект мог бы нейтрализовать Вах, повышенная экспрессия которого определяется в синовиальных клетках при РА, однако при этом он ко-лока-лизован с Bcl-XL, что сопровождается неинтенсивным апоптозом |18]. Следовательно, активности Вах недостаточно для супрессии синовиальной гиперплазии.

Первоначальные исследования апоптоза в синовиальной оболочке при РА показали, что инфильтрирующие синовию Т-лимфоцнты экспрессировали высокий уровень белков семейства Вс1-2 и были резистентны к Fas- опосредованному апоптозу [19]. Вместе с тем был обнаружен активный апоптоз лимфоцитов в периферической крови у больных ювенильным идиопатическим артритом [55]. Введение в эксперименте моноклональных антител к Fas рецептору завершалось интенсивным апоптозом Т-лимфоци-тов синовиальной оболочки и тормозило остеокластогенез [43]. Вс1-2 белки оказывают сильное влияние на развитие Fas-опосредовэнного апоптоза Т-лимфоцитов и проявляют высокую активность в отношении RASF [36].

Растворимый Fas рецептор, способный связывать Fas-лиганд и, тем самым, тормозить апоптоз, обнаруживает повышенную концентрацию в синовиальной жидкости пациентов с РА [16]. Выявлено снижение концентрации Fas-лиганда в плазме больных РА [59]. Другие авторы указывают на повышение экспрессии Fas-лиганда активированными Т-клетками ревматоидной синовии [19], гиперэкспрессию Fas рецептора и высокую чувствительность к апоптозу [15]. Таким образом, большинство исследований указывает на то, что Т клетки синовиальной оболочки у больных РА активизированы на фоне гиперэкспрессии Fas-рецепторов и Fas-лигандов, а, следовательно, высокочувствительны к Fas-опосредовэнному апоптозу. Аналогичная ситуация наблюдается и в ревматоидном узле [17]. Однако остается невыясненным вопрос - достаточно ли этого апоптоза для элиминации Т клеток, которые поддерживают воспаление.

Установлено, что удаление аутореактивных Т-клеток в мутантной по Fas-лиганду линии мышей Вб-gld/gld приво-

дило к регрессии атрита, вызванного микоплазмой [40]. Тем не менее это не сопровождалось стимуляцией апопто-за синовиоцитов и не предотвращало развития артрита у инфицированных мышей. Исследователи сообщают, что внутривенное введение М.pulmonis мышам линии В6-gld/gld вызывало развитие острого воспаления периартику-лярных тканей и тяжелого хронического эрозивного артрита. В то же время подобное инфицирование мышей линии В-6-+/+ (wild type) заканчивалось развитием острого воспаления, которое спонтанно регрессировало. В дальнейшем авторы использовали другую стратегию: антиген-презенти-рующие клетки (АРС), выделенные от мышей линии 1рг, мутантных по Fas-рецептору (lpr-АРС), были трансфециро-ваны аденовирусом (AdCMVLoxpFasL+AxCANCre), экспрессирующим Fas-лиганд ex vivo. Последующее лечение артрита у мышей с использованием этого типа клеток (1рг-APC-AdFasL) индуцировало регрессию артрита как в острой, так и в хронической фазе. Эти результаты подтверждены в других моделях артрита 130]. При этом в лимфатических узлах присутствовало значительно меньше мононук-леарных клеток периферической крови и аномальных CD-3+В220+ Т-клеток, но не было усиления апоптоза. В более поздних работах авторы создали новую модель аденовируса, индуцирующего экспрессию TRAIL в дендритных клетках, обеспечивая супрессию инфильтрации Т-клетками синовиальной оболочки и, тем самым, регрессию коллаген-индуцированного артрита [35].

Были получены аналогичные результаты и на других моделях артрита [64], указывающие на то, что взаимодействие генетических дефектов и факторов внешней среды может влиять на характер и течение артрита, а нарушение регуляции завершения Т-клеточного ответа, вызванного отклонениями в Fas-опосредованном апоптозе, может быть важным патогенетическим фактором в этом процессе. Можно предполагать, что элиминация аутоиммунных лимфоцитов и пролиферирующих синовиоцитов - неотъемлемое условие предотвращения развития артрита, вызванного микоплазменной инфекцией.

RASF имеют некоторые дефекты Fas-рецепторов, Fas-лигандов и других проапоптотических молекул, таких как р53. В основном апоптоз в синовиальной оболочке касается А-клеток (макрофагов) и в значительно меньшей степени В-клеток (фибробластов). Особенно чувствительными к апоптозу оказались синовиальные фибробласты у трансгенных мышей линии HTLV-1 при введении в сустав большого количества энти-Fas антител. Эти эксперименты были проведены с использованием новых энти-Fas антител (RK-8), которые связывают Fas-рецепторы, вызывая апоптоз в некоторых линиях мышей. Трансфекция человеческого Fas-лиганда в синовиальные фибробласты, трансплантированные мышам линии SCID, также стимулировала развитие апоптоза [44]. Аналогичные результаты были получены при индукции апоптоза моноклональными энти-Fas антителами в ревматоидной синовии, подсаженной мышам линии SC1D. ФНО может как ингибировать, так и усиливать Fas-опосредовзнный апоптоз RASF [21]. Вместе эти исследования показывают, что Fas-опосредованный апоптоз RASF имеет дефекты и может быть модулирован такими цитокинами, как ФНО и трансформирующий фактор роста (ТФР), которые содержатся в большом количестве в суставных тканях при РА [26]. Последние исследования показали, что ТФРР1 обладает антиапоптогенным эффектом, поскольку при его добавлении к культуре синовиальных клеток, инкубированных с энти-Fas IgM, резко снижалась активность апоптоза [27]. Авторы отмечают, что эффект торможения апоптозэ реализовался на уровне стабилизации митохондриального гомеостаза.

Одним из возможных важных механизмов резистентности синовиальных клеток к апоптозу может быть экспрессия мутантной молекулы р53 [58,62]. Предполагается, что свободные радикалы, образующиеся в большом количестве при оксидативном стрессе в синовиальных тканях и паннусе, вызывают мутацию в р53 гене, супрессирующем рост

опухолей. В то же время сам р53 может стимулировать Н202-опосредованный апоптоз [3]. Сообщается о прямом влиянии фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (ФИМ), на уровень экспрессии р53 в модели антиген-ин-дуцированного артрита [33]. ФИМ снижает экспрессию р53, способствуя тяжелому течению экспериментального артрита. Следовательно, р53 ген может играть критическую роль в регуляции пролиферации, апоптоза и инвазивности синовиальных фибробластов. Отклонения в функционировании р53 гена могут отражаться на росте грануляционной ткани и разрушении костной структуры суставов при РА.

Fas-опосредовэнный апоптоз синовиальных фиброблзс-тов изучен недостаточно. Вместе с тем единичные исследования свидетельствуют о дисрегуляции этого пути передачи апоптотического сигнала при РА. Сообщается об активировании таких сигнальных путей Fas-опосредованного апоптоза, как Jun киназы и API [45], а также церамида, вторичного мессенджера апоптоза [3S]. Другие авторы обнаружили дефекты в передаче сигнала через митоген-эктивирован-ные белки киназ (MAP kinase) [12].

Развитие Fas- и ФНО-опосредованного апопотоза ассоциируется с каспаз-зависимым путем, дебютирующим с ка-спазы-8 [2]. Каспазы - от английской аббревиатуры CAS-PASES (cysteine proteases which cleave proteins after an asp3r-tic 3cid residue) - цистеиновые протеазы, которые расщепляют белки после остатка аспарагиновой кислоты [1]. Неэффективная стимуляция каспазы-8 выливается в прямую активацию Bid, проапоптотического белка семейства Вс1-2. Почти сразу происходит потеря трансмембранного потенциала митохондрий, сопровождающаяся формированием пор с измененной проницаемостью, что приводит к началу освобождения цитохрома С [11]. Инактивированный цитохром С (Apaf-2) высвобождается в цитоплазму и связывается с Apaf-l(apoptotic protease activating factor-1), адаптерным человеческим белком. Это приводит к активации каспазы-

9 (Apaf-З), которая, 8 свою очередь, расщепляет каспазу-3 [68]. Эффекторные каспазы-3, -6, -7, расщепляя свои субстраты, приводят к характерным изменениям ядра и клетки, типичным для апоптоза. Данный путь прохождения апоптотического сигнала через митохондрии является С095-зависимым, но не зависит от активации FADD (Fas-associated death domain)/Kacna3bi-8 и может ингибироваться антиапоптотическим белком Вс1-2 через прямое влияние на взэимодействие между Apaf-1 и каспазой-9 [34]. Тем не менее механизмы высвобождения цитохрома С и его ингиби-ции Вс1-2 остаются не до конца ясными. Недавно была показана актуальность этого пути проведения сигнала апоптоза в RASF [31]. Большинство авторов сообщают о резистентности RASF к Fas-зависимому апоптозу [44]. Резистентность может проявляться на проксимальном уровне, уровне активации каспззы-8 или дистапьнее, на уровне митохондрий и терминальных каспаз. Чувствительность пяти различных линий RASF к апоптозу изучалась при обработке клеточных линий моноклональными антителами к Fas (СН-11) различных концентраций. При концентрациях до

10 ng/mL интенсивность апоптоза была низкой. В сто раз меньшие концентрации (до 0,1 ^ig/mL) приводили к выраженному апоптозу в линии клеток СЕМ-6 через 48 часов [40]. Эти данные подтверждают феномен резистентности RASF к Fas-опосредованному апоптозу.

Другой путь трансдукции сигнала Fas(CD95/Apo- 1)-за-висимого апоптоза заключается во взаимодействии адзп-терных белков FADD и RIP (Receptor interacting protein), после стимуляции Fas-рецепторэ, что ведет к активации каспазы-8 с дальнейшим расщеплением каспазы-3. Этот процесс не зависит от активации митохондрий и не блокируется гиперэкспрессией Вс1-2 [25]. Сообщается о высоком уровне экспрессии FLIP (FLICE-like inhibitory protein) у больных с ранним РА, что ассоциировалось с низкой апоп-тотической активностью синовиальных макрофагов [6].

Таким образом, охарактеризованы два различных сигнальных пути CD95-3aBitciiMoro апоптоза [51]. И первый, и второй участвуют в развитии резистентности ревматоидной

синовии к апоптотическому сигналу. В случае передачи апоптогического сигнала через ФНО-Р, адаптерный белок TRADD (ФНОР-associated death domain) взаимодействует с FADD и RIP после стимуляции рецептора. В дальнейшем передача сигнала не отличается от таковой при Fas-зависимом апоптозе. Однако надо отметить одновременный запуск антиапоптотического сигнала через взаимодействие R1P и TRAF2, что ведет к активации NF-кр индуцирующей киназы (NIK) [20]. В свою очередь, NIK вызывает фосфо-рилирование ингибиторов-к-В-а и -к-В-р (IkBa и IkB-|i соответственно) цепей NF-кр и транслокации последнего в ядро. Этот, параллельный с апоптотическим, сигнал превалирует в RASF, а перемещение NF-кр в ядро вызывает экспрессию генов таких цитокинов как ФНО, IL-ip, IL-6, кол-лагеназы, стромолизин и молекул адгезии [65]. В то же время транслокация NF-кр ингибирует апоптоз во многих клеточных линиях, включая опухолевые, но механизм индукции анти-апоптотических генов в RASF остается невыясненным. RASF, подобно опухолевым клеткам, не подвергаются апоптозу в ответ на стимуляцию ФНО. Возможно, это связано с тем, что ФНО -опосредованное ацетилирование р53 как путь активации апоптоза нейтрализуется параллельным истощением транскрипционной активности р53 через торможение ко-стимуляторных молекул (CREB binding protein) [42].

Анализ синовиальной оболочки у крыс с моделью SCW артрита (Streptococcal cell wall arthritis) показал, что наличие мутации в 1кВа цепи приводит к предотвращению транслокации NF-кр в ядро и тем самым усиливает апоптоз клеток синовии. Фосфорилирование 1кВа цепи всегда завершается освобождением NF-кр и его готовностью к перемещению в ядро, но может быть предотвращено мутацией в кВа [22]. Суть мутации кВа цепи заключается в отсутствии участка с 36 аминокислотами, в том числе содержащего сериновый остаток. Именно фосфорилирование се-ринового остатка является необходимым условием освобождения 1кВа от NF-кр с дальнейшей его деградацией в протеосомах. Измененная кВа цепь очень прочно связана с NF-кр и не подвергается фосфорилированию при участии NIK. Невозможность перемещения NF-кр в ядро вызывает развитие апоптоза широкого диапазона клеток, ранее резистентных к ФНО-зависимому апоптозу [9]. Биохимическая блокада перемещения NF-кр в ядро с использованием ингибитора Z-Leu-Leu-Leu-aldehyde (LLL-CHO) также способствует развитию апоптоза синовиальных клеток. стимулированных ФНО, 1L-I [63]. Фибробласты и макрофаги NF-Kp-p-65-дефииитных мышей становятся более чувствительными к ФНО-опосредованному апоптозу [24]. J.D. Mountz с соавт. получили аденовирус, экспрессирующий высокий уровень коротких форм 1кВа, названный AdCMVk-p-DN [40].

Трансфекция этого вируса в RASF приводила к гиперэкспрессии кВа, не подвергающихся фосфорилированию. предотвращая тем самым транслокацию NF-кр в ядро. Это способствовало беспрепятственному проведению апоптоти-ческого сигнала в RASF при их культивировании с ФНО. Стимуляция синовиальных клеток ФНО после инкубации с AdCMVIkp-DN заканчивалась апоптозом от 80 до 90 % клеток в течение 12 часов [67]. Спустя четыре недели после в/с введения RASF мышам линии SCID наблюдалась интенсивная пролиферация собственных фибробластов синовиальной оболочки. Последующее последовательное в/с введение мышам этой линии AdCMVkp-DN и ФНО приводило к пикнозу ядер и деструкции клеток в течение 24 часов. Таким образом, можно считать, что в присутствии AdCMVkp-DN апоптотический сигнал в синовиальных фибробластах реализуется через воздействие ФНО.

Ген ингибитора апоптоза (IAP) является консервативным в эволюционном аспекте этого биологического фено-

мена у всех биологических видов. У человека 1АР варьирует в своих формах (Х1АР, cIAPI, CIAP2), но все они ингибируют каспазу-3, -6, -7 [7]. IAP может предотвращать развитие Fas-зависимого апоптоза путем торможения цитохром С -опосредованной активации прокаспазы-9. Стимуляция клеток ФНО инициирует два типа сигналов: первый активизирует программированную смерть клеток, а второй через активизацию NF-кр запускает IAP и способствует синтезу провоспалительных факторов [60]. Активация ингибитора апоптоза через NF-кр может отменять ФНО-зави-симый апоптоз в клеточных линиях, полученных из синовиальной оболочки больных РА. Обработка этих линий аденовирусом, экспрессирующим ингибиторы IAP, завершалась развитием интенсивного апоптоза после воздействия ФНО [40].

Akt - протоонкоген, который вызывает лейкемию у мышей и гиперэкспрессируется опухолями человека [31]. Akt является белком киназы В (РКВ- protein kinase В) и принадлежит к семейству серин/треониновых протеаз, содержащих SH2 подобные домены, участвующие в межмемб-ранных взаимодействиях. Akt тормозит апоптоз на стадии освобождения цитохрома С, а также селективность переформирующих каналов в мембране митохондрий, которые образуются под влиянием Вах и Bid. Akt способен обеспечивать выживание клеток через торможение апоптотичес-кого каскада до митохондриального этапа. Добавление экзогенного цитохрома С инициирует апоптоз даже в присутствии Akt. Активность Akt может быть нейтрализована ингибитором PI-3 киназы - вортманнином. Влияние Akt на апоптоз RASF было изучено при инкубировании культуры клеток с анти-Fas антителами, вортманнином и их комбинацией. Незначительный апоптоз наблюдался в присутствии энти-Fas антител. Добавление вортманнина (50пМ) сопровождалось резкой активизацией апоптоза RASF [40].

Апоптоз хондроцитов в пораженном ОА хряще человека и животных описан многими исследователями [5,13,29,46]. Развитие ОА у человека в определенной мере связано с возрастом, и патологические изменения хряща включают в себя уменьшение количества клеточных элементов и увеличение числа пустых лакун. Программированная смерть хондроцитов является одной из наиболее важных причин этих изменений и коррелирует с частотой развития ОА [14,53]. Апоптоз клеток в здоровом хряще описан неоднократно даже в молодом возрасте [5.29,39]. Отмечено, что он значительно чаще наблюдается в зонах механической нагрузки и, как ее следствие, зонах повреждения [41],

Исследования показывают, что интенсивность апоптоза хондроцитов и дегенерация хряща сильно коррелируют [28]. Хрящ, полученный от крыс с экспериментальной моделью ОА, интенсивно экспрессировал TRAIL и DR-4, что указывает на актуальность ФНО-зависимого апоптоза клеточных элементов хряща [32,50]. Отсутствие изменений в соотношении уровня экспрессии Вах и Вс1-2 в хондроцитах может свидетельствовать о незаинтересованности митохондриального пути развития апоптоза хондроцитов [37).

Таким образом, обилие накопленных фактов в изучении феномена апоптоза при патологии опорно-двигательного аппарата убеждает в том, что создание новых эффективных лечебных препаратов возможно при тщательной идентификации не только процессов, происходящих в клетках синовиальной оболочки и хряща (гиперпролиферация, апоптоз), но и регуляторных молекул и механизмов, обеспечивающих проведение апоптотического (проапопто-тические молекулы Вс1-2 семейства, каспазы, цитохром С, Apaf-1) или пролиферативного (антиапоптотические молекулы Вс1-2 семейства, NF-kp, IAP, Akt-ассоциированные механизмы) сигналов, определяющих структурно-функциональный исход.

ЛИТЕРАТУРА

1. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М., Эдиториал УРСС, 2002, 320 с.

2. Ярилин А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии. В кн.: Актуальные проблемы патофизиологии: Избранные лекции. Под ред. Б.Б. Мороза. М., Медицина, 2001, 13-56.

3. Akaike A., Banno Y., Osawa Y. et al. Synergistic induction of apoptosis of rheumatoid arthritis synovial cells by H(2)0(2) and N-acetyl-leucyl-leucyl-norleucinal . J. Orthop. Sci„ 2003, 8 (3), 346-351.

4. Baker S.J., Reddy E.P. Modulation of life and death by the ФНО receptor family. Oncogene, 1998, 17, 3261-3270.

5. Blanco F.J., Guitian R., Vazquez-Martul E. et al. Osteoarthritis chondrocytes die by apoptosis. Arthr. Rheum., 1998, 41, 284-289.

6. Catrina A.I., Ulfgren A.K., Lindblad S. et al. Low levels of apoptosis and high FLIP expression in early rheumatoid arthritis synovium. Ann. Rheum. Dis., 2002, 61 (10), 934936.

7. Deveraux Q.L., Roy N.. Stennicke H.R. et al. IAPs block apoptotic events induced by caspase-8 and cytochrome с by direct inhibition of distinct caspases. EMBO J., 1998, 17, 2215-2223.

8. Dhein J., Waiczak H., Baumier C. et al. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-l/(Fas/CD-95). Nature, 1995, 373, 43S-44I.

9. Doi T.S., Takahashi Т., Taguchi O. et al. NF-kappaB RelA-deficient lymphocytes: normal development of T-cells and В cells, impaired production of IgA and lgGl and reduces proliferative responces. J. Exp. Med., 1997, 185, 953-961.

10. Firestein G.S., Yeo М., Zvaifler N. J. Apoptosis in rheumatoid arthritis synovium. J. Clin. Invest., 1995, 96, 16311638.

11. Green D.R. Apoptotic pathway: the road to ruin. Cell,

1998, 94, 695-698.

12. Han Z., Boyle D.L., Aupperle K.L. et al. Jun N-terminal kinase in rheumatoid arthritis. J. Pharm. Exp. Ther., 1999, 91, 124-130.

13. Hashimoto S., Ochs R.L., Komiya S. et al. Linkage of chondrocyte apoptosis and cartilage degradation in human Osteoarthritis. Arthr. Rheum., 1998, 41, 1632-1638.

14. Hashimoto S., Takahashi K., Amiel D. et al. Chondrocyte apoptosis and nitric oxide production during experimentally induced osteoarthritis. Arthr. Rheum., 1998, 41, 12661274.

15. Hasunuma Т., Hoa T.T., Aono H. et al. Induction of Fas-dependent apoptosis in synovial infiltrating cells in rheumatoid arthritis. Int. Immunol., 1996, 8, 1595-1602.

16. Hasunuma Т., Kayagaki N.* Asahara H. et al. Accumulation of soluble Fas in inflamed joints of patients with rheumatoid arthritis. Arthr. Rheum., 1997, 40, 80-86.

17. Highton J., Hessian P.A., Kean A. et al. Cell death by apoptosis is a feature of the rheumatoid nodule. Ann. Rheum. Dis., 2003, 62 (1), 77-80.

18. Hilbers I., Hansen Т., Petrow P.K. et al. Expression of the apoptosis accelerator Bax in rheumatoid arthritis synovium. Rheum. Int., 2003, 23 (2), 75-81.

19. Hoa T.T., Hasunuma Т., Aono H. et al. Novel mechanisms of selective apoptosis in synovial T cells of patients with rheumatoid arthritis. J. Rheum., 1996, 23, 1332-1337.

20. Hsu H., Xiong J., Goeddel D.V. The ФНО receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-kappa? activation. Cell, 1995, 91, 495-504.

21. Huh S.J., Paik D.J., Chung H.S. et al. Regulation of GRB2 and FL1CE2 expression by ФНО-alpha in rheumatoid synovium. Immunol. Lett., 2003, 90 (2-3), 93-96.

22. Ito C.Y., Adey N., Bautch V.L. et al. Structure and evolution of the human IKBA gene. Genomics, 1995, 29, 490495.

23. Itoh K., Hase H., Kojima H. et al. Central role of mitochondria and p53 in Fas-mediated apoptosis of rheumatoid synovial fibroblasts. Rheum., 2004, 43, 277-285.

24. Jobin C., Panja A., Hellerbrand C. et al. Inhibition of proinflammatory molecule production by adenovirus-mediated expression of a nuclear factor kappaB super-repressor in human intestinal epithelial cells. J. Immunol., 1998, 160, 410-418.

25. Juo P., Kuo C.J., Yuan J. et al. Essential requirement for caspase-8/FLICE in the initiation of the Fas-induced apoptotic cascade. Current Biol., 1998, 8, 1001-1008.

26. Kawakami A., Eguchi K., Matsuoka N. et al. Inhibition of Fas antigen-mediated apoptosis of rheumatoid synovial cells in vitro by transforming growth factor beta 1. Arthr. Rheum., 1996, 39, 1267-1276.

27. Kawakami A., Urayama S., Yamasaki S. et al. Anti-apop-togenic function of TGFbetal for human synovial cells: TGFbetal protects cultured synovial cells from mitochondrial perturbation induced by several apoptogenic stimuli. Ann. Rheum. Dis., 2004, 63 (I), 95-97.

28. Kim D.Y. Role of chondrocyte apoptosis in the pathogenesis of equine osteoarthritis. A Dissertation for the degree of Doctor of Philosophy. Baton Rouge LA, Louisiana Univ. Press, 2002.

29. Kim H.A., Lee YJ., Seong S-C. et al. Apoptotic chondrocyte death in human osteoarthritis. J. Rheum., 2000, 27, 455-462.

30. Kim S.H., Kim S., Oligino T.J. et al. Effective treatment of established mouse collagen-induced arthritis by systemic administration of dendritic cells genetically modified to express FasL. Mol. Ther., 2002, 6 (5), 584-590.

31. Kubohara Y., Hosaka K. The putative morphogen, DIF-1, of Dictyostelrum discoideum activates Akt/PKB in human leukemia K562 cells. Biochem. Biophys. Res. Commun.,

1999, 263, 790-796.

32. Lee S.W., Lee H.J., Chung W.T. et al. TRAIL induces apoptosis of chondrocytes and influences the pathogenesis of experimentally induced rat osteoarthritis. Arthr. Rheum., 2004, 50 (2), 534-542.

33. Leech М., Lacey D., Xue J.R. et al. Regulation of p53 by macrophage migration inhibitory factor in inflammatory arthritis. Arthr. Rheum., 2003, 48 (7), 1881-1889.

34. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I. et al. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease caspase. Cell, 1997, 91, 479489.

35. Liu Z., Xu X., Hsu H.C. et al. CIl-DC-AdTRAIL cell gene therapy inhibits infiltration of Cll-reactive T cells and CII-induced arthritis. J. Clin. Invest., 2003, 112 (9), 1332-1341.

36. Matsumoto S., Muller-Ladner U., Gay R.E. Ultrastructural demonstration of apoptosis, Fas and Bcl-2 expression of rheumatoid synovial fibroblast. J. Rheum., 1996, 23, 13451352.

37. Mistry D., Oue Y., Chambers M.G. et al. Chondrocyte death during murine osteoarthritis. Osteoarthr. Cartil., 2004, 12 (2), 131-141.

38. Mizushima N., Kohsaka H., Miyasaka N. et al. Ceramide, a mediator of interleukin-1, tumor necrosis factor alfa, as well as Fas receptor signaling, induces apoptosis of rheumatoid arthritis synovial cells. Ann. Rheum. Dis., 1998, 57, 495-497.

39. Mobasheri A. Role of chondrocyte death and hypocellular-ity in ageing human articular cartilage and the pathogenesis of osteoarthritis. Med. Hypoth., 2002, 58 (3), 193-197.

40. Mountz J. D., Hui-Chen Hsu, Matsuki Y. et al. Apoptosis and rheumatoid arthritis: past, Present, and future directions. Curr. Rheum. Reports, 2001, 3, 70-78.

41. Murray M.M., Zurakowski D., Vrahas M.S. The death of articular chondrocytes after intra-articular fracture in humans. J. Trauma, 2004, 56 (1), 128-131.

42. Nakazawa М., Aratani S., Hatta M. et al. ФНОа1рЬа

induces acetyiation of p53 but attenuates its transcriptional activation in rheumatoid synoviocytes. Int. J. Mol. Med., 2002, 10 (3), 269-275.

43. Ogawa Y., Ohtsuki M., Uzuki M. et al. Suppression of osteoclastogenesis in rheumatoid arthritis by induction of apoptosis in activated CD4+ T cells. Arthr. Rheum., 2003, 48 (12), 3350-3358.

44. Okamoto K., Asahara H., Kobayashi T. et al. Induction of apoptosis in the rheumatoid synovium by Fas ligand gene transfer. Gene. Ther., 1998, 5, 331-338.

45. Okamoto K., Fujisawa K., Hasunuma T. et al. Selective activation of the Jun/APlpathway in Fas-mediated apoptosis in rheumatoid arthritis synoviocytes. Arthr. Rheum., 1997, 40, 919-926.

46. Pelletier J-R., Jovanovic D.V., Lascau-Coman V. et al. Selective inhibition of inducible nitric oxide synthase reduces progression of experimental osteoarthritis in vivo. Possible link with the reduction in chondrocyte apoptosis and caspase-3 level. Arthr. Rheum., 2000, 43, 1290-1299.

47. Perlman H., Georganas C., Pagliari L.J. et al. Bcl-2 expression in synovial fibroblasts is essential for maintaining mitochondrial homeostasis and cell viability. J. Immunol., 2000, 164, 5227-5235.

48. Perlman H., Liu H., Georganas C. et al. Differential expression pattern of the antiapoptotic proteins, Bcl-2 and FLIP, in experimental arthritis. Arthr. Rheum., 2001, 44 (12), 2899-2908.

49. Perlman H., Nguyen N.. Liu H. et al. Rheumatoid arthritis synovial fluid macrophages express decreased tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand R2 and increased decoy receptor tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand R3. Arthr. Rheum., 2003, 48

(11), 3096-30101.

50. Pettersen I., Figenschau Y., Olsen E. et al. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand induces apoptosis in human articular chondrocytes in vitro. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 296 (3), 671-676.

51. ScafTidi C., Krammer P.H. Differential modulation of apoptosis sensitivity in CD95 Type 1 and Type II. J. Biol. Chem., 1999, 274, 22532-22538.

52. Zdichavsky M., Schorpp C., Nickels A. et al. Analysis of bcl-2+ lymphocyte subpopulation to inflammatory synovial infiltrates by a double-immunostaining technique. Rheum. Int., 1996, 16, 151-157.

53. Sharif M., Whitehouse A., Sharman P. et al. Increased apoptosis in human osteoarthritic cartilage corresponds to reduced cell density and expression of caspase-3. Arthr. Rheum., 2004, 50 (2), 507-515.

54. Shimizi S., Narita M., Tsujimoto Y. et al. Bcl-2 family proteins regulate the release of apoptogenic cytochrome c by the mitohondrial channal VDAC. Nature, 1999, 399, 483487.

55. Smolewska E., Brozik H., Smolewski P. et al. Apoptosis of peripheral blood lymphocytes in patients with juvenile idiopathic arthritis. Ann. Rheum. Dis., 2003, 62 (11), 1126.

56. Song K., Chen Y., Goke R. et al. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is an inhibitor of autoimmune inflammation and cell cycle progression. J. Exp. Med., 2000, 191, 1095-1104.

57. Suda T., Takahashi T., Golstein P. et al. Molecular cloning and expression of the Fas-ligand, a novel member of the tumor necrosis factor family. Cell, 1993, 75, 1169-1178.

58. Sun Y., Cheung H.S. p53, proto-oncogene and rheumatoid arthritis. Semin. Arthr. Rheum., 2002, 31 (5), 287-288.

59. Szodoray P., Jellestad S., Nakken B. et al. Programmed cell death in rheumatoid arthritis peripheral blood T-cell subpopulations determined by laser scanning cytometry. Lab. Invest., 2003, 83 (12), 1839-1848.

60. Tanino M., Matsuo M., Uenaka A. et al. Transforming activity of the Rl-akt gene, a c-akt gene activated by long terminal repeat insertion in murine leukemia RL (male symbol) 1 cells. Mol. Carcinog., 1999, 26, 286-297.

61. Walszak H., Krammer P.H. The CD-95 (Apo-l/Fas) and the TRAIL (Apo2L) apoptosis systems. Exp. Cell Res.,

2000, 256, 58-66.

62. Yamanishi Y., Boyle D.L., Rosengren S. et al. Regional analysis of p53 mutations in rheumatoid arthritis synovium. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, 99 (15), 10025-10030.

63. Yamasaki S., Kawakami A., Nakashima T. et al. Importance of NF- B in rheumatoid synovial tissues: in situ NF- B expression and in vitro study using cultured synovial cells. Ann. Rheum. Dis., 2001, 60, 678-684.

64. Yao Q., Wang S., Gambotto A. et al. Intra-articular aden-oviral-mediated gene transfer of trail induces apoptosis of arthritic rabbit synovium. Gene. Ther., 2003, 10 (12), 10551060.

65. Youn J., Kim H.Y., Park J.H. et al. Regulation of OHO-alpha-mediated hyperplasia through OHO receptors, TRAFs, and NF-kappaB in synoviocytes obtained from patients with rheumatoid arthritis. Immunol. Lett., 2002, 83

(2), 85-93.

66. Zdichavsky M., Schorpp C., Nickels A. et al. Analysis of bcl-2+ lymphocyte subpopulation to inflammatory synovial infiltrates by a double-immunostaining technique. Rheum. Int., 1996, 16, 151-157.

67. Zhang H.D., Huang N., Liu D. et al. Gene therapy that inhibits nuclear translocation of nuclear factor kappaB results in tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis of human synovial fibroblasts. Arthr. Rheum., 2000, 43, 10941105.

68. Zou H., Li Y., Liu X. et al. An APAF-I cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activate procaspase-9. J. Biol. Chem., 1999. 274. 11549-11556.

Поступила 9.10.04