БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АФФИННЫЕ РЕАГЕНТЫ ДЛЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ СПЕЦИФИЧНЫХ ДЛЯ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ TNF-АЛЬФА

1. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела, которые преимущественно связывают и/или нейтрализуют TNFα, продуцируемый макрофагами и/или нейтрофилами по сравнению с TNFα, продуцируемым другими клеточными типами, где биспецифическое антитело или фрагмент антитела содержат одну или более аминокислотных последовательностей, которые специфично связывают:
- TNFα и
- маркерную молекулу макрофагов и/или нейтрофилов.
2. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что TNFα, продуцируемый в клеточных типах, отличных от макрофагов и нейтрофилов, не связан и/или нейтрализирован или связан и/или нейтрализирован в пониженной степени по сравнению с моноспецифичным TNFα антителом или фрагментом антитела.
3. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что TNFα, продуцируемый Τ-клетками, не связан и/или нейтрализирован или связан и/или нейтрализирован в пониженной степени по сравнению с моноспецифичным TNFα антителом или фрагментом антитела.
4. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что маркерная молекула макрофагов и/или нейтрофилов представляет собой F4/80 (EMR1), CD163, CD169 или Mer Tk.
5. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, которые являются химерным, гуманизированным или одноцепочечным антителом или их комбинацией.
6. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, одна или более аминокислотных последовательностей которых специфично связывает:
- TNFα и
- F4/80 (EMR1).
7. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что связывающий TNFα домен является однодоменным антителом.
8. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что единичный домен является доменом VHH, содержащим
- последовательность SEQ ID NO: 1
(MGSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSDHSGYTYTIGWFRQAPGKEREFVARIYWSSGNTYYADSVKGRFAISRDIAKNTVDLTMNNLEPEDTAVYYCA ARDGIPTSRSVESYNYWGQGTQVTVSSAGA), или
- последовательность со свойствами связывания TNFα, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 1.
9. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что связывающий домен анти-F4/80 и/или анти-EMR1 содержат одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
10. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) содержит:
- домен VH, содержащий по меньшей мере один участок CDR, выбранный из CDR H1 (SEQ ID NO: 2: GYTFTNHMN), CDR H2 (SEQ ID NO: 3: RINPGTGGTSYNVNFKG) и CDR H3 (SEQ ID NO: 4: GDSYWYFDF), или
- домен VH, содержащий по меньшей мере один участок CDR, выбранный из последовательности, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:2, 3 или 4.
11. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, отличающиеся тем, что одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) содержит:
- домен VL, содержащий по меньшей мере один участок CDR, выбранный из CDR L1 (SEQ ID NO: 5: KASKSISKYLA), CDR L2 (SEQ ID NO: 6: EGSTLQS) и CDR L3 (SEQ ID NO: 7: QQHNEYPLT), или
- домен VL, содержащий по меньшей мере один участок CDR, выбранный из последовательности, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 5, 6 или 7.
12. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, содержащие:
- домен VH, содержащий последовательность SEQ ID NO:8
(MQVQLQQSGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTNHMNWVKQTTGQGLEWIGRINPGTGGTSYNVNFKGKATLTVDESSSTAFMQLSSLTPEDSAVYYCARGDSYWYFDFWGPGTMVTVSGS) или последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO:8.
13. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, содержащие:
- домен VL, содержащий последовательность SEQ ID NO:9
(DVQMTQSPYNLVASPGESVSINCKASKSISKYLAWYQQKPGKANKLLIYEGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLEPEDFGLYYCQQHNEYPLTFGSGTKLEIKRADAAPTVAAAPRGGPEQKLISEEDLNSAVD) или последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:9.
14. Выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по п. 1, содержащие:
- последовательность SEQ ID 10 или 21 или последовательность с TNFα и свойствами связывания миелоидных клеток, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:10 или 21.
15. Применение выделенного биспецифического антитела или фрагмент антитела по любому из пп. 1-14 в качестве лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с воспалением.
16. Применение по п. 15, где заболевание, связанное с воспалением, представляет собой ревматическое нарушение.
17. Применение по п. 16, где ревматическое нарушение представляет собой ревматоидный артрит.
18. Применение по п. 15, где заболевание, связанное с воспалением, представляет собой аутоиммунное заболевание с воспалительным компонентом.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, содержащей:
a) молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует биспецифическое антитело или фрагмент антитела по любому из пп. 1-14 или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 21,
b) молекулу нуклеиновой кислоты, которая комплементарна нуклеотидной последовательности подпункта a);
c) молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, которая в достаточной степени идентична последовательности, чтобы быть функционально аналогичной/эквивалентной нуклеотидной последовательности подпункта a) или b), которая предпочтительно идентична нуклеотидной последовательности подпункта a) или b) по меньшей мере на 80%;
d) молекулу нуклеиновой кислоты, которая вследствие генетического кода вырождена в нуклеотидную последовательность подпунктов a)-c); и
e) молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с нуклеотидной последовательностью подпунктов a)-d), которая модифицирована делециями, добавлениями, заменами, транслокациями, инверсиями и/или инсерциями и функционально аналогична/эквивалентна нуклеотидной последовательности подпунктов a)-d).
20. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 19, где аминокислотная последовательность выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 18 или 20.
21. Клетка-хозяин для продукции биспецифического антитела или фрагмента антитела по любому из пп. 1-14, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 20.
22. Клетка-хозяин по п. 21, где клетка представляет собой бактериальную клетку или клетку млекопитающего.
23. Клетка-хозяин по п. 21, где клетка представляет собой клеточная гибридому или клеточную линию.
24. Фармацевтическая композиция для профилактики или терапевтического лечения заболевания, связанного с воспалением, содержащая выделенное биспецифическое антитело или фрагмент антитела по любому из пп. 1-14, молекулу нуклеиновой кислоты по п. 20 или клетку-хозяин по п. 21, вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
25. Способ профилактического или терапевтического лечения заболевания, связанного с воспалением, включающий введение терапевтически эффективного количества биспецифического антитела или фрагмента антитела по любому из пп. 1-14 пациенту, нуждающемуся в лечении.
26. Способ по п. 27, где заболевание, связанное с воспалением, представляет собой ревматическое нарушение.
27. Способ по п. 28, где ревматическое нарушение представляет собой ревматоидный артрит.
28. Способ профилактического или терапевтического лечения аутоиммунного заболевания с воспалительным компонентом, содержащий введение терапевтически эффективного количества биспецифического антитела или фрагмента антитела по любому из пп. 1-14 пациенту, нуждающемуся в лечении.