Оценка качества лиофилизированной лекарственной формы ДМТ

40

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Н.И. Игнатова. И.Н. Дружкова, М.В. Ширманова, Е.В. Загайнова

ВЛИЯНИЕ ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕЗЕНХИМАЛЬНОГО ПЕРЕХОДА НА ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА

ФГБОУ ВО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород, Россия

Введение. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) — это сложный многоступенчатый процесс и один из ключевых механизмов в прогрессии опухолей колорек-тального рака, приводящий к трансформации эпителиального фенотипа клеток в мезенхимальный, что способствует диссеминации опухолевых клеток. Влияние ЭМП на хими-очувствительность клеток представляет значительный интерес в прогностическом плане и до конца не изучено.

Цель исследования — изучить влияние ЭМП в клетках колоректального рака на химиочувствительность к стандартным препаратам, применяемым в клинической практике.

Материалы и методы. На 1-м этапе работы использованы стандартные клеточные линии колоректального рака человека НСТ-116 и НТ-29. Установлены ингибирующие концентрации IC50 химиопрепаратов иринотекан, окса-липлатин и 5-фторурацил. Лекарственную чувствительность оценивали через 72 ч с помощью МТТ-теста. Индукция ЭМП проводилась у рака HT-29 с использованием StemXVivoTM EMT Inducing Media Supplement (США). Выявление экспрессии маркеров ЭМП — Е-кадгерина, Ki-67 и виментина — проводили методом иммуноцитохимии. На 2-м этапе проведено выделение из операционного материала 14 временных клеточных культур: 9 первичных аденокарцином толстого кишечника и 5 метастазов в печень. Установлена химиочувствительность полученных культур.

Результаты. Установлено, что чувствительность стандартных опухолевых культур НСТ-116 и НТ-29 к разным химиопрепаратам отличается. Наиболее чувствительны клетки к оксалиплатину, наименее — к 5-фторурацилу. При этом чувствительность клеток линии НСТ-116 выше, чем НТ-29. Проанализирована степень выраженности ЭМП у исследуемых клеточных линий: линия НТ-29 не имела признаков ЭМП в отличие от линии НСТ-116. Поэтому клеточная линия HT-29 выбрана для индукции ЭМП in vitro. Индукция ЭМП у HT-29 подтверждена изменением морфологии клеток, а также усилением скорости миграции и пролиферации. Отмечено снижение экспрессии Е-кадгерина у ЭМП-индуцированной культуры HT-29. Кроме того, наблюдалось увеличение чувствительности ко всем тестируемым препаратам, особенно к оксалипла-тину по сравнению с исходной клеточной линией. Затем определена химиочувствительность временных клеточных культур колоректального рака, полученных из операционного материала, и степень выраженности ЭМП методами иммуноцитохимии. Установлена более высокая химиочув-ствительность временных культур с признаками ЭМП.

Заключение. На основании полученных результатов рассматривается возможность использования Е-кадгери-на — маркера ЭМП — в качестве прогностического критерия химиочувствительности при колоректальном раке.

П.С. Игнатьев1, А.С. Рыбалова2 ЛАЗЕРНАЯ ИНТЕРФЕРЕНЦИОННАЯ МИКРОСКОПИЯ НАТИВНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ МИКРО- И НАНОСТРУКТУР

1АО «ПО «УОМЗ», Екатеринбург, Россия; 2ООО «Швабе-Москва», Москва, Россия

Введение. Предложен оригинальный метод сверхразрешающей лазерной интерференционной микроскопии (МИМ), позволяющий исследовать нативные неокрашенные биологические препараты в реальном времени.

Цель исследования — обосновать перспективность применения МИМ для биомедицинских исследований и в клинической практике.

Материалы и методы. При выполнении исследований применялся отечественный лазерный микроскоп МИМ-340 производства АО «ПО «Уральский оптико-механический завод им Э.С. Яламова». В качестве объектов исследования выступали клетки крови (эритроциты, лимфоциты, тромбоциты) и культуры опухолевых клеток (HeLa, HEX, C6).

Результаты. Показано, что МИМ позволяет регистрировать изменения микроморфологии клеток при различных воздействиях с разрешением не более 0,1 нм по вертикали и от 10 до 100 нм в плоскости объекта. Приведены примеры исследований различных биологических микро-и наноструктур. Показано, что параметры фазовой микроморфологии клеток, регистрируемые МИМ в режиме реального времени, позволяют расширить набор объективных количественных параметров для диагностики патологий на ранних стадиях.

Заключение. Методы лазерной интерференционной микроскопии являются перспективным инструментом для широкого круга медико-биологических исследований, в том числе в онкологии. Применение микроскопа МИМ в клинической практике позволит существенно расширить набор критериев ранней диагностики патологий на клеточном уровне.

Е.В. Игнатьева, И.В. Ярцева, Н.А. Дмитричева, С.А. Сасов, О.Л. Орлова, Д.А. Хоченков, З.С. Шпрах ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ДМТ

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. В ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из соцветий Chamaenerium angustifolium L. выделен димерный макроциклический таннин (ДМТ) и разработана его лекарственная форма (ЛФ) в виде лио-филизата для приготовления раствора для инъекций, не содержащая вспомогательных веществ. Полученный препарат обладает выраженной противоопухолевой активностью и проявляет спектр характерных антиангиогенных свойств.

Цель исследования — стандартизация лиофилизиро-ванной ЛФ ДМТ.

Материалы и методы. Образцы ЛФ ДМТ исследовали методами гравиметрии, спектрофотометрии, ИК-спектрометрии, поляриметрии, потенциометрии.

Результаты. Химико-фармацевтическое изучение ЛФ ДМТ проводилось с учетом требований НД к сухим

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 41

ЛФ. ЛФ ДМТ представляет собой сухую пористую массу Цель исследования — изучить влияние геля на основе би-белого цвета с желтоватым оттенком, без запаха. Содер- ополимеров (альгината натрия и гиалуроната натрия) на тече-жимое флакона для всех исследованных образцов ЛФ ние постоперационного периода у пациентов с новообразова-ДМТ растворялось в 20 мл воды в течение 30 с. При этом ниями полости носа и околоносовых пазух. в растворах при наблюдении в проходящем свете не об- Материалы и методы. 20 пациентам с заболеваниями наруживались частицы вещества. Для подтверждения полости носа и околоносовых пазух (из них 12 пациентов подлинности использованы электронные спектры по- с диагнозом полипозный полисинусит и 8 пациентов с ди-глощения (ЭСП), ИК-спектры, а также цветная качест- агнозом доброкачественное новообразование полости но-венная реакция на полифенолы. ДМТ является оптиче- са, околоносовых пазух и основания черепа) выполнены ски активным веществом. Величина угла оптического эндоскопические эндоназальные операции. После выпол-вращения для всех исследуемых серий ЛФ, содержащих нения хирургического этапа интраоперационно послеопе-от 87,0 до 90,0 % основного действующего вещества, рационные полости заполнялись гелем «Колегель» на ос-определялась в интервале от +305° до +307°. Средняя нове альгината натрия, гиалуроната натрия и диоксидина, масса содержимого флакона укладывалась в интервал производилась тампонада по стандартизованной методике. от 0,105 г до 0,113; отклонение от средней массы не пре- Удаление тампонов производилось на 2-е сутки после опе-вышало ± 5 %. Растворы содержимого флакона в 20 мл рации, всем пациентам ежедневно выполнялся эндоско-воды были прозрачны, интенсивность их окрашивания пически ассистированный туалет полости носа и околоно-для всех серий ЛФ ДМТ не превышала интенсивности совых пазух с определением выраженности воспа-эталона Y6, а значения рН укладывались в интервал лительных явлений, контролем транспозиции геля. от 3,2 до 3,5. Изучение условий высушивания ДМТ по- При необходимости излишки геля, вышедшие за пределы казало, что препарат очень медленно теряет массу постоперационной полости, удалялись путем аспирации. при комнатной температуре в вакууме (остаточное дав- При недостаточном количестве геля в постоперационной ление 7 мм рт. ст.) в присутствии фосфора (V) оксида, полости производилось его повторное введение. однако легко высушивается при нагревании при атмос- Результаты. При применении геля «Колегель» на ос-ферном давлении в сушильном шкафу при температуре нове альгината натрия и гиалуроната натрия с антимикроб-125 °С. Потеря в массе для представленных образцов ЛФ ным препаратом диоксидином в послеоперационном пери-в этих условиях не превышала 3,5 % от исходной наве- оде ни у одного из пациентов кровотечений не отмечено. ски. Вещество, высушенное таким образом, сохраняет При послеоперационном наблюдении у всех пациентов характеристический ЭСП и ИК-спектр. Высушивание отмечено уменьшение секреторных явлений, отсутствие при более высокой температуре приводит к окислитель- формирования свежих геморрагических сгустков, снижение ной деструкции препарата. Для количественного опре- количества образуемого фибрина, отсутствие инфицирован-деления ДМТ в ЛФ применена спектрофотометрическая ности послеоперационных полостей. Заживление и реэпи-методика с использованием стандартного образца. Со- телизация слизистой оболочки оперированных пазух про-держание действующего вещества в одном флаконе на- исходили без формирования синехий и стеноза соустий. ходилось в пределах от 97,2 до 100,4 мг. Скорость реэпителизации слизистой оболочки была выше Заключение. Выбраны критерии качества и разработа- по сравнению со стандартным ведением пациентов. ны методики их определения с целью стандартизации пре- Заключение. Использование геля «Колегель» на осно-парата «ДМТ лиофилизат для приготовления раствора ве альгината натрия, гиалуроната натрия и диоксидина для инъекций 100 мг». ускоряет сроки постоперационной реабилитации пациентов, перенесших эндоскопические операции на околоно-И.М. Кириченко1, В.М. Авербух1, С.В. Фролов1, совых пазухах и полости носа, улучшает постоперацион-Н.Д. Олтаржевская2, Т.С. Хлыстова2 ный результат. ПРИМЕНЕНИЕ ГЕЛЕЙ НА ОСНОВЕ БИОПОЛИМЕРОВ В ПОСТОПЕРАЦИОННОМ М.П. Киселева. Л.М. Борисова. З.С. Шпрах, ПЕРИОДЕ У ПАЦИЕНТОВ И.Ю. Кубасова, А.В. Ланцова, Е.В. Санарова, С НОВООБРАЗОВАНИЯМИ В ПОЛОСТИ НОСА Н.А. Оборотова, З.С. Смирнова И ОКОЛОНОСОВЫХ ПАЗУХ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ 1ФГБУ«Научно-клинический центр оториноларингологии ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФМБА России», Москва, Россия; ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЦИФЕТРИЛИНА 2ООО «Колетекс», Москва, Россия В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СПОСОБА ВВЕДЕНИЯ Введение. После выполненной эндоскопической эндона- МЫШАМ С ПРИВИТОЙ АДЕНОКАРЦИНОМОЙ зальной операции среда, состоящая из кровяных сгустков, МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ СА- 755 слизистого секрета, девитализированных фрагментов кости ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, и слизистой оболочки, оголенных участков кости, предраспо- Москва, Россия лагает к инфицированию и воспалению и обеспечивает потен- Введение. Данная работа является продолжением иссле-циальную основу для рубцевания и раннего рецидива заболе- дования противоопухолевой активности аналога гипотала-вания. В практике оториноларинголога для предотвращения мического гормона соматостатина цифетрилина, синтези-этих нежелательных последствий применяются препараты рованного в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава с антиадгезивными и противовоспалительными свойствами. России. Ранее создана лекарственная форма цифетрилина

Спецвыпуск/ том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ