Противотуберкулезная активность базидиомицета Coriolus pubescens (Shum. :Fr. ) Quel. И препарата, получаемого на его основе

THE PHYTOCHEMICAL STUDY AND STANDARDIZATION OF THE BIOLOGICAL ACTIVE

ADDITION «PHITOPROST»

E.A. Garmaeva, G.G. Nikolaeva, V.V. Mantatov, T.D. Dargaeva, A.A. Markaryan

Studied are the qualitative composition of dried extract «Phitoprost», identified flavonoids, fenolcarbonic acids, fenologlicozids. The method of quantitative analysi of dried extract on the content of fenologlicozids in presented.

ЛИТЕРАТУРА

1. Максютина Н.П., Литвиненко В.И. Методы выделения и исследования флавоноидных соединений. // Фенольные соединения и их биологические функции. - М.: Наука, 1968.-С.7-26.

2. Азизов И.К. Анализ и контроль качества лекарственных веществ с использованием спектральных методов анализа в видимой области спектра: Дисс... докт. фарм. наук. - М., 1993. - 222 с.

3. Беликов В.В., Точкова Т.В., КолесникН.Т. Некоторые особенности спектрофотометрического метода анализа флавоноидных соединений. // Тезисы докладов IV съезда фармацевтов. - Казань, 1986. -С.514-515.

4. Георгиевский В.П., Казаринов Н.А., Каррыев М.О. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения. -Ашхабад, 1976. - 239 с.

5. Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. Биологически активные вещества растительного происхождения. В трех томах. М.,2001.-Т.1.-350 с., Т II-764 с.-2002, ТШ.-216 с.

6. Кан Д.В., Сегал А.С., Козьменко А.П. Диагностика и лечение хронического простатита: Методические рекомендации. - М., 1980. - 30 с.

7. Кравченко Н.В. О возможности замены лекарственных чаев аналогичными по составу суммарными препаратами. // Сб.тез.докл.Ш

Всесоюз. съезда фарм-тов. - Свердловск, 1975. -С.151-152.

8. Краснов К.А., Березовская Т.П., Алексюк Н.В. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. - Томск, 1987. - 184 с.

9. Кругляк Л.Г. Простатит. - Элиста, 1996. - 64с.

10. Лекарственные растения Бурятии. - Улан-Удэ, 1974.

- 207 с.

11. Лекарственные растения Государственной фармакопеи: Фармакогнозия. /И.А. Самылина, В.А Северцев, А. А. Сорокина, В. А. Ермакова и др. - М.: АНМИ, 2003. - 534 с.

12. Мамчур Ф.И., Кушнирук Ю.И. Фитотератия в комплексном лечении половых расстройств у мужчин. - Киев, 1992. - 144 с.

13. Мантатов В.В. Влияние комплексного средства «Фитопрост» на течение экспериментального хронического простатита: Дисс. ... канд. биол. наук.

- Улан-Удэ, 1999. - 20 с.

14. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник.-4-е изд., перераб. и доп. -М.: Медицина, 2002. - 656 с.

15. Настои, экстракты, эликсиры и их стандартизация /Под ред. Багировой В.Л., Северцева В.А. - С-Пб., 2001. - С.129-147.

16. Суворов А.П., Тюренков И.Н., Богословская С.И. и др. Фитотерапия воспалительных заболеваний мочеполовой системы. - Саратов, 1994 .- 39 с.

© ЧХЕНКЕЛИ В.А., ШКИЛЬ Н.А. -

ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНАЯ АКТИВНОСТЬ БАЗИДИОМИЦЕТА CORIOLUS PUBESCENS (SHUM.:FR.) QUEL. И ПРЕПАРАТА, ПОЛУЧАЕМОГО НА ЕГО ОСНОВЕ

В.А. Чхенкели, Н.А. Шкиль (Иркутский филиал института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН, г. Иркутск,

директор - д.в.н., А.С. Донченко)

Резюме. При экспериментальном моделировании туберкулезной инфекции установлено, что антимикробный препарат «Леван-2», полученный на основе базидиального гриба Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel. с использованием современных методов биотехнологии, обладает противотуберкулезной активностью в дозе 2,0 мл/кг массы тела при введении внутримышечно. Монотерапия препаратом приводит к излечению животных и увеличению массы их тела. Активность препарата сравнима с активностью широкоизвестных туберкулостатиков (изониазида). Ключевые слова. Базидиомицеты, биотехнология, модель, противотуберкулезная активность.

Расширение применения препаратов, получаемых с использованием современных методов биотехнологии в медицине и ветеринарии, создает необходимость изучения их фармакокинетических свойств, способов, доз и кратности их введения. Не является исключением в этом отношении и антимикробный препарат «Леван-2», разработанный на основе штамма Сопо1ш риЪе8сеш

(Shum. :Fr.) Quel. 0663 и, обладающий широким спектром действия. Ранее нами были проведены исследования антимикробной активности препарата на референтных штаммах микроорганизмов и на штаммах, выделенных от больных животных из хозяйств Иркутской области (родов Salmonella, Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter,

Mycobacterium и др.), а также исследования по определению характера и степени выраженности возможного патогенного действия на организм млекопитающих как гриба С. риЬе8сеш, так и препарата «Леван-2». Проблема борьбы с туберкулезом и поиска новых высокоэффективных противотуберкулезных средств остается по-прежнему актуальной. Так как было установлено in vitro, что препарат «Леван-2» обладает бактерицидным действием в отношении штаммов M. bovis, M. humanus, M. murium и M. avium, логично было продолжить исследования именно в этом направлении. Неотъемлимой частью изучения фармакологических свойств новых лекарственных средств является проведение экспериментальной работы по моделированию патологических процессов. Основная цель данной работы состояла в изучении противотуберкулёзной активности «Левана-2» с экспериментальным моделированием туберкулезной инфекции.

Материалы и методы

Основным объектом исследования явился антимикробный препарат «Леван-2», получаемый на основе штамма гриба Coriolus pubescens(Shum. :Fr.) Quel.0663. Продуцент является возбудителем белой гнили древесины и был отобран для проведения исследований из коллекции базидиомицетов Ботанического Института им. В.Л. Комарова РАН как штамм, обладающий высокой антимикробной активностью и характеризующийся активным ростом в условиях глубинного культивирования [5].

Анализ выживаемости животных показывает, что у нелеченных зараженных мышей и у мышей, леченных цефтазидимом, гибель от генарализованного туберкулезного процесса началась с 23 дня после заражения, то есть задержки сроков начала гибели зараженных мышей при использовании цефтазидима не наблюдается. В таблице 1 представлены показатели выживаемости зараженных животных на трех сроках наблюдения (последний - день вывода животных из опыта), в которой видно, что во всех группах животных, получавших цефтазидим, практически на всех сроках наблюдения процент павших животных устойчиво выше, чем у зараженных нелеченных мышей. Исключение составляет лишь некоторое снижение гибели в группе 4 на первом сроке наблюдения, которое решено считать несущественным, поскольку на следующих сроках этого эффекта не отмечено, а уровень гибели превышал показатель в группе контроля заражения. Следует отметить большую смертность мышей в группах, где препарат вводился два раза в неделю. В группах мышей, леченных туберкулостатиком и «Леваном-2», гибели животных не зарегистрировано.

Исследование противотуберкулезной активности препарата проводили с использованием экспериментальной модели туберкулезной инфекции [1-4] на лабораторных животных - белых беспородных мышах. При экспериментальном моделировании туберкулезной инфекции использовали наряду с «Леваном-2» цефтазидим и изониазид. Цефтазидим был выбран как антимикробный препарат широкого спектра действия, обладающий аналогичным с «Леваном» механизмом бактерицидного действия на клетки микроорганизмов [6].

Все результаты исследования обработаны с использованием методов математической статистики [7].

Результаты и обсуждение

Результаты исследования действия «Левана-2» на течение туберкулезной инфекции и изониазида свидетельствуют о положительном его влиянии на процесс излечения животных, а цефтазидима - об утяжелении процесса у мышей. Оценка динамики массы тела мышей в течение опыта свидетельствует о том, что если в самом начале терапии различия в массе животных были незначительны, то после 10 дней от начала лечения у мышей, получавших цефтазидим, наблюдалось устойчивое снижение массы, более выраженное, чем в группе контроля заражения. В группах с использованием изониазида и «Левана-2» регистрировалась прибавка массы мышей (4,9% и 7,5% к 28 дню от начала лечения, соответственно).

Таблица 1

Таким образом, использование цефтазидима привело к увеличению смертности мышей от генерализованной туберкулезной инфекции, напрямую зависящему от частоты введения препарата.

У павших мышей была проведена биометрическая и макроскопическая оценка внутренних органов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что у всех животных, получавших цефтазидим, показатели, отражающие распространенность специфического поражения легких (коэффициент массы легких и индекс их поражения), находились на уровне данных павших животных из группы контроля заражения. Так, коэффициент массы легких мышей 2 группы составил 6,62±0,5 усл.ед., а индекс поражения легких - 4,95±0,05 усл.ед., в группе 3 - 7,2±0,21 усл.ед. и 5,07±0,08 усл.ед., в группе 4 - 6,87±0,65 усл.ед. и 4,64±0,17 усл.ед., тогда как у мышей контроля заражения показатели соответствовали 7,4±0,52 усл.ед. и 4,8±0,09 усл.ед. У всех павших животных отмечалось распространенное в виде сливающихся полей некроза некротическое поражение легких, сопровождавшееся тотальным серозным пропитыванием органа.

Динамика гибели животных в ходе опыта

Группы Процент погибших и выживших животных в группах

28 день после заражения 35 день после заражения 39 день после заражения

погибшие выжившие погибшие выжившие погибшие выжившие

1 28,6 71,4 40,4 59,6 40,4 59,6

2 29,4 70,6 58,8 41,2 64,7 35,3

3 35,3 64,7 70,6 29,4 70,6 29,4

4 23,5 76,5 47,0 53,0 52,9 47,1

5 0 100,0 0 100,0 0 100,0

6 0 100,0 0 100,0 0 100,0

Показатели тяжести течения экспериментального туберкулеза у зараженных нелеченных мышей на момент

окончания опыта

й Индивидуальная величина показателей животного

п Масса тела, Легкие Селезенка Печень

Л г Масса, г Коэфф. Индекс Масса, г Коэфф. Масса, г Коэфф.

массы поражения массы массы

1 1 17,6 0,67 3,81 4,75 0,55 3,13 1,3 7,39

1 2 13,7 0,52 3,80 3,5 0,38 2,77 1,29 9,42

1 3 17,9 0,98 5,47 3,75 0,49 2,74 1,32 7,37

1 4 14,9 0,73 4,90 4,75 0,6 4,03 1,53 10,27

1 5 16,7 0,68 4,07 3,75 0,59 3,53 1,3 7,78

1 6 20,1 0,6 2,99 4,75 0,77 3,83 1,6 7,96

1 7 16,7 0,72 4,31 4,75 0,32 1,92 1,32 7,90

1 8 17,6 0,68 3,86 5,25 0,32 1,82 1,4 7,95

М+т 4,15+0,33 4,41+0,23 2,49+0,29 8,26+0,38

Коэффициент массы селезенки, отражающий тяжесть уровню показателя группы контроля заражения (в течения инфекции и степень генерализации процесса у группах 2, 3, 4 - 2,65±0,29; 2,85±0,22; 3,07±0,26 усл.ед. мышей, леченных цефтазидимом, также соответствовал соответственно против 3,01±0,33 усл.ед. в группе 1).

Таблица 3

Показатели тяжести течения экспериментального туберкулеза у зараженных мышей, леченных изониазидом (10 мг/кг, подкожно 5 дней в неделю) на момент окончания опыта

Индивидуальная величина показателей животного

п Масса тела, Легкие Селезенка Печень

& г Масса, г Коэфф. массы Индекс поражения Масса, г Коэфф. массы Масса, г Коэфф. массы

5 1 19,4 0,6 3,09 3,75 0,42 2,16 1,32 6,80

5 2 15,0 0,62 4,13 3,75 0,47 3,13 1,2 8,0

5 3 18,7 0,59 3,16 3,5 0,5 2,67 1,25 6,68

5 4 21,2 0,48 2,26 3,5 0,87 4,1 1,94 9,15

5 5 20,4 0,55 2,7 3,5 0,63 3,09 1,6 7,84

5 6 22,12 0,7 3,17 3,25 0,8 3,62 1,88 8,51

5 7 20,3 0,5 2,46 3,75 0,42 2,07 1,7 8,37

5 8 22,1 0,56 2,81 3,5 0,48 2,41 1,34 6,73

5 9 20,3 0,58 2,91 3,32 0,61 3,07 1,5 7,54

5 10 19,9 0,43 2,34 3,25 0,41 2,23 1,42 7,72

5 11 18,4 0,5 3,14 3,75 0,44 2,77 1,2 7,55

5 12 15,9 0,53 2,72 3,75 0,45 2,31 1,39 7,13

5 13 16,75 0,7 4,18 3,75 0,8 4,78 1,52 9,07

5 14 23,2 0,63 2,72 3,5 0,57 2,46 1,75 7,54

5 15 20,4 0,6 2,94 2,5 0,4 1,96 1,35 6,62

5 16 19,3 0,46 2,38 2,75 0,69 3,58 1,59 8,24

5 17 20,0 0,55 2,75 4,25 0,59 2,95 1,5 7,5

М±т 2,93+0,13 3,43+0,12 2,87+0,2 7,71+0,17

Коэффициент массы печени, величина которого свидетельствует о степени интоксикации, в опытных группах также не отличался от нелеченных зараженных мышей (в группах 2, 3, 4 - 9,02±0,23; 9,94±0,29; 9,95±0,39 усл.ед. соответственно против 9,9±0,88 усл.ед. в группе 1). Следует отметить, что в группах 3 и 4, где мыши получали цефтазидим в максимальной дозе (600 мг/кг), у некоторых животных (в группе 3 - у двух, в группе 4 - у одной мыши) наблюдались некротические изменения печени. Таким образом, тяжесть поражения внутренних органов павших мышей, леченных цефтазидимом, не отличалась от показателей зараженных нелеченных животных.

Распространенность специфического поражения внутренних органов мышей, выживших к моменту окончания опыта, представлена в таблицах 2-5. Полученные данные свидетельствуют о том, что степень

поражения легких (по коэффициенту массы и индексу поражения) животных, получавших цефтазидим, более выражена, чем в группе контроля заражения. Наиболее демонстративны при этом были величины индекса поражения легких, которые в группах 3 и 4 имели выраженную тенденцию к повышению (5,06±0,28 усл.ед. и 4,67±0,22 усл.ед. против 4,41±0,22 усл.ед. у зараженных нелеченных мышей), а в группе 2 различия статистически достоверны (5,17±0,27 усл.ед. против 4,41±0,22 усл.ед., Р=0,05). В группе контроля лечения (изониазид) и лечения «Леваном-2» отмечалось значимое, в 1,3-1,8 раза, снижение коэффициентов массы и индексов поражения легких (Р < 0,001), свидетельствующее о выраженном уменьшении под влиянием туберкулостатика и «Левана-2» специфического воспаления в легких (табл. 2-4).

Показатели тяжести течения экспериментального туберкулеза у зараженных мышей, леченных «Леваном-2» (2,0 мл/кг, внутримышечно 5 дней в неделю) на момент окончания опыта

группа n Индивидуальная величина показателей животного

Масса тела, г Легкие Селезенка Печень

Масса, г Коэфф. массы Индекс поражения Масса, г Коэфф. массы Масса, г Коэфф. массы

6 1 15,0 0,45 3,0 2,75 0,13 0,87 0,8 5,33

6 2 20,2 0,60 2,97 3,25 0,42 2,08 1,12 5,54

6 3 18,7 0,30 1,34 2,0 0,4 1,79 1,3 5,8

6 4 22,4 0,35 3,54 2,0 0,28 1,35 1,0 4,81

6 5 20,8 0,51 1,90 3,0 0,30 2,08 0,9 6,25

6 6 14,4 0,48 1,61 3,0 0,42 1,66 1,58 6,25

6 7 25,3 0,30 1,89 3,25 0,30 1,61 0,95 5,11

6 8 18,6 0,40 2,79 2,5 0,29 1,37 1,0 4,72

6 9 21,1 0,59 2,15 3,5 0,40 1,9 1,52 6,44

6 10 23,3 0,50 2,21 2,75 0,60 2,58 1,5 5,44

6 11 21,7 0,48 4,08 3,75 0,25 1,15 1,18 7,04

6 12 15,9 0,80 1,53 3,5 0,57 1,91 1,38 5,88

6 13 19,6 0,30 1,90 3,5 0,28 1,43 1,15 6,06

6 14 19,55 0,44 3,0 3,5 0,55 2,38 1,40 5,67

6 15 23,1 0,70 2,23 2,75 0,49 2,1 1,32 5,70

6 16 17,9 0,40 2,38 3,5 0,38 31,12 1,02 8,24

6 17 14,6 0,31 2,12 1,75 0,39 2,67 1,0 6,85

M+m 2,35+0,18 2,81+0,11 1,89+0,12 5,89+0,15

Коэффициент массы селезенки у выживших животных, леченных цефтазидимом, также был выше, чем у мышей контроля заражения (табл. 1, 2-4, 5). При этом (табл. 5), если в группах 3 и 4 повышение показателя было не достоверным при статистической обработке (3,02±0,22 усл.ед. и 3,08±0,59 усл.ед. против 2,49±0,29 усл.ед. у нелеченных мышей), то в группе 2 зарегистрированы достоверно значимые различия (3,43±0,32 усл.ед., Р < 0,05).

На величине коэффициентов массы печени использование цефтазидима практически не отразилось. Лечение изониазидом несколько уменьшило величину показателя (7,71±0,17 усл.ед. против 8,26±0,38 усл.ед. в контроле заражения), а применение «Левана-2» привело к его достоверному снижению (5,89±0,15 усл.ед., Р < 0,001).

Таблица 5

Влияние препаратов на тяжесть течения генерализованного туберкулезного процесса у мышей, зараженных

Mycobacterium bovis 8

группа Условия опыта Средние величины показателей в группах

Коэффициент массы легких

1 Контроль заражения, п=8 4,15+0,33 4,41+0,23 2,49+0,29 8,26+0,38

2 Цефтизидим 200 мг/кг, внутримышечно 2 раза в нед., п=6 4,30+0,75 5,17+0,27 Р1-2 = 0,05 3,43+0,32 РЬ2 < 0,05 8,3+0,37

3 Цефтизидим 600 мг/кг, внутримышечно 2 раза в нед., п=6 3,63+0,41 5,06+0,28 3,02+0,22 8,91+0,69

4 Цефтизидим 600 мг/кг, внутримышечно 1 раз в нед., п=6 4,81+0,5 4,67+0,22 3,08+0,59 8,01+0,44

5 Изониазид 10 мг/кг, подкожно, ежедневно, п=17 2,93+0,13 3,43+0,12 Р2-5 <0,001 Р3-5 <0,001 Р4-5 <0,001 2,87+0,2 7,71+0,17

6 Леван-2, 2,0 мл/кг, внутримышечно, ежедневно, п=17 2,35+0,18 Р2-6 <0,02 Рз-б <0,01 Р4-6 <0,001 2,81+0,11 Р2-6 <0,001 Р3-6 <0,001 Р4-6 <0,001 1,89+0,12 Р2-6 <0,001 Р3-6 <0,001 5,89+0,15 Р2-6 <0,001 Р3-6 <0,001 Р4-6 <0,001

Таким образом, монотерапия цефтазидимом в дозах 200 и 600 мг/кг (1 и 2 раза в неделю) привела к утяжелению течения экспериментальной туберкулезной инфекции, что проявилось в увеличении смертности мышей, неблагоприятной динамике массы тела и повышению распространенности специфического поражения легких и селезенки, а монотерапия «Леваном-2» в дозе

2,0 мл/кг в течение 5 дней в неделю, изониазидом в дозе 10 мг/кг подкожно в течение 5-ти дней в неделю привела к излечению экспериментальной туберкулезной инфекции, увеличению массы тела животных.

Полученные данные свидетельствуют о расширении возможности использования антимикробного препарата «Левана-2» в качестве химиотерапевтического средства.

ANTITUBERCULOSIS ACTIVITY OF BASIDIOMYCETE CORIOLUSPUBESCENS (SHUM.:FR.)QUEL. AND A PREPARATION ON OBTAINED ITS BASIS

V.A. Chkhenkeli, N.A. Shkil (Irkutsk Affiliate of the Institute of Experimental Veterinary Medicine Siberia Department of Russian Academy of

Agriculture)

In experimental modeling tubercular infection it is established, that the antimicrobial medicine «Levan-2» received on a basidiomycete Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel. with the usage of modern biotechnological methods, possesses antitubercular activity in doze 2,0 ml/kg of body weight when injected intramuscularly. Monotherapy with the preparation leads to recovery of animals and increase their body weight. The activity of the medicine is comparable to the activity of widely known medicine, such as, isoniazide.

ЛИТЕРАТУРА

1. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные: Разведение, содержание, использование в эксперименте. - 3 -е изд. - Киев: Вища школа, 1983. - 383 с.

2. Майборода А.А., Семинский И.Ж., Клейн К.Л., Гурбадам А. Способ моделирования воспаления. // Вост-Сиб. журн. инф .патол. - 1995. - №1. - С.20-24.

3. Методы экспериментальной химиотерапии. /Под редакцией Г.Н.Першина. - М.: Медицина, 1971. - 539 с.

4. Семинский И.Ж. Структура и закономерности развития разных форм экспериментального воспаления.: Автореф.... д.м.н. - Иркутск, 1999. - 44 с.

5. Чхенкели В.А., Никифорова Т.И., Скворцова Р.Г. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum. :Fr.) Quel. // Микол. и фитопатол. - 1998. - Т.32, Вып. 1. - С.69-72.

6. Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., Агапова Е.Д. и др. Некоторые аспекты медико-биологических исследований высших дереворазрушающих базидиомицетов как источника биологически активных веществ. // Сиб. мед. журн. - 2001. - №1. - С.59-65.

7. Рокицкий В. Ф. Биологическая статистика. - 3 - е изд. - Минск: Высш. шк., 1973. - 319 с.

ОБРАЗ ЖИЗНИ, ЭКОЛОГИЯ

© УРМАНЧЕЕВА Л.Ф., ШИЛЬНИКОВА Н.Ф. -

АНАЛИЗ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ РЕАБИЛИТАЦИОННЫХ МЕРОПРИЯТИЙ У БОЛЬНЫХ ИНСУЛЬТОМ НА ТЕРРИТОРИИ ЧИТИНСКОЙ ОБЛАСТИ

Л. Ф. Урманчеева, Н. Ф. Шильникова

(Читинская государственная медицинская академия, ректор - д.м.н., проф. А.В. Говорин, кафедра общественного здоровья и

здравоохранения, зав. - доцент, к.м.н. Н.Ф. Шильникова)

Резюме. Проведен анализ экономической и медицинской реабилитации больных инсультом в двух группах. Первой группе проведена реабилитация в условиях специализированного центра, второй - в условиях поликлиники. Экономический эффект получен за счет сокращения заболеваемости с временной и стойкой утратой трудоспособности у больных первой группы и составляет: 611тысяч 13 рублей 78 копеек (по временной нетрудоспособности), 91 тысяча 350 рублей (пенсионное пособие).

Ключевые слова. Инсульт, реабилитация, экономическая эффективность.