Исследование иммунотропной активности экстракта асцидии при моделировании токсического гепатита

медико-биологические науки

medical and life sciences

DOI: 10.12731/wsd-2016-6-5 УДК 612.017+615.32

исследование

иммунотропной активности экстракта асцидии при моделировании токсического гепатита

Пономарева Т.И.

Как известно, при химическом повреждении печени страдает ее де-токсикационная функция, что способствует нарушению иммунных процессов в организме. В связи с этим актуален поиск и разработка эффективных средств с гепатопротекторными и иммунокорректорными свойствами. Ранее было показано, что экстракт асцидии Halocynthia aurantium (АЕ) обладает гепато- и мембранопротекторным эффектом. В работе исследовали возможность коррекции АЕ показателей иммунитета у крыс Вистар (40 особей, самцы) при остром токсическом гепатите, смоделированным введением тетрахлорметана (CCl4, 50% раствор на оливковом масле в дозе 2 мл/кг в течение 4 дней). На 7 день после отмены тетрахлорметана в периферической крови животных продолжалась рассогласованность форменных элементов лейкоцитов, прогрессировали лимфопения и снижение общих иммуноглобулинов и наблюдались изменения, свидетельствующие о продолжающемся токсическом стрессе и недостаточности собственных защитных сил организма противостоять развитию негативных последствий воздействия ксенобиотика. Применение АЕ (24 мг/кг массы ежедневно в течение 7 дней после отмены токсиканта) оказывало влияние преимущественно на Т-клеточ-

ное звено иммунитета. Показано, что в группе животных, получающих экстракт, содержание CD8+ на 25-30% (p<0,05) было снижено, а содержание CD4+ достоверно повышено по сравнению с группой ЧХУ+«де-привация», таким образом, иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+) сохранялся в пределах интактных животных. Эти позитивные изменения зарегистрированы как в периферической крови, так и в селезенке. Восстанавливались угнетенные действием CC14 лимфопролифератив-ные процессы в тимусе и селезенке крыс. Отмечалось также увеличение концентрации неспецифических иммуноглобулинов и IgG в сыворотке, что может свидетельствовать о повышении функциональной активности В-клеток и усилении гуморальных факторов защиты под действием экстракта. В целом, представленные результаты свидетельствуют о возможности коррекции иммунного статуса и усилении защитных сил подопытных животных при применении экстракта асцидии в условиях токсического поражения организма.

Ключевые слова: экстракт асцидии; токсический гепатит; лимфоциты; тимус; селезенка.

immunoactivity properties of ascidian extract on acute toxic hepatitis model investigation

Ponomareva T.I.

Immunodepressive state risk at patient with toxic damage is one of the reasons for the search of the remedy with hepatoprotective and immunoregulation properties. There was established that extract of marine hydrobiont Halocyn-thia aurantium (AE) possess the hepato-and membranoprotection effects. Im-munoactivity properties of AE on the background of the experimental acute toxic hepatitis caused by carbon tetrachloride (CCl4 50% in olive oil, 2 ml/ kg during 4 days) at rats Wistar (40 animals, male) were investigated. It was known, that CCl4 action the metabolically and immune process disturbance

in animals manifested. It was shown that 7 days after CCl4 action there did not any positive changes in the peripheral blood cells and lymphoid organs of animals. This data was shown that negative consequence of toxic influence at rats continued. АЕ administration (24 mg/kg) during 7days after CCl4 action provided positive effect on the leukocytes and lymphocytes population at rats. There was established that CD8+ higher level decrease (on 25-30%, p<0,05), CD4+ quantity increase. Moreover there was stimulated T-helper lymphocytes activity and recovered the immunity reactions by optimization T-helper/T-sup-pressor lymphocytes correlation and this index approaches to the normal condition in blood and spleen under AE influence. The depressed by CCl4 action lymphoproliferative processes in spleen and thymus was restoration to intact level in animals with AE. And there was pronounced stimulating effect on the nonspecific immunoglobulins synthesis too. These results possibly are the evidence of B-lymphocyte functional activity increased and humoral reactivity intensify by AE. The positive effect of AE may be explained both direct action on cellular and humoral parameters of immunity and promote the restoration of conditions for normal interaction between different parts of immune system.

Thus, this data was demonstrated the potential use of AE for immunity correction in acute toxic hepatitis conditions.

Keywords: ascidian extract; toxic hepatitis; lymphocyte; thymus; spleen.

Ухудшение экологической обстановки, в частности, растущее загрязнение окружающей среды химическими веществами приводит к росту гепа-топатологии среди населения, поскольку основным барьером, нейтрализующим токсические продукты в организме человека и животных, является печень. Известно, что в основе гепатотоксического эффекта химических веществ лежит усиление интенсивности перекисного окисления липидов в мембранах гепатоцитов, продукты которого оказывают неблагоприятное влияние на большинство функций организма, и в первую очередь на его иммунологическую реактивность [1, с. 105; 2, с. 4062; 3, с. 723]. Следует отметить, что в патогенезе токсического гепатита состоянию иммунных процессов отводится важная роль. В связи с этим актуален поиск и раз-

работка эффективных гепатопротекторов с иммунокорректорными свойствами. Ранее исследования фармакологической активности препарата на основе экстракта из асцидии Halocynthia aurantium выявили его высокую способность к предотвращению роста пероксидации липидов в тканях животных и восстановлению липидного спектра мембран эритроцитов и гепатоцитов в условиях метаболической патологии [4, с. 658; 5, с. 28]. При моделировании у животных иммунодепрессивного состояния показана им-мунокорректорная и иммуномодулирующая активность [6, с. 52; 7, с. 228]. Вместе с тем, на иммунный статус интактных животных экстракт асцидии в терапевтических дозах не оказывал значимого влияния.

Целью настоящей работы явилось исследование возможности коррекции экстрактом асцидии (АЕ) показателей иммунитета при токсическом гепатите.

Материалы и методы

Опыты с использованием животных проводились с соблюдением принципов гуманности, изложенных в Директивах Европейского Сообщества (86/609/ЕС). Исследование проведено на 40 крысах-самцах Вистар массой тела 200-220 г, содержащихся при температуре 220 и естественном световом режиме, на стандартном рационе вивария в условиях свободного передвижения и доступа к воде. Экспериментальную модель острого токсического гепатита осуществляли введением животным подкожно (в дорзальную шейную складку) четыреххлористого углерода (ЧХУ 50% раствор на оливковом масле) в дозе 2 мл/кг в течение 4 дней [8, с. 9]. Было сформировано 4 группы по 10 животных: первую группу составили интактные животные; вторая группа - животные с острым токсическим гепатитом (ОТГ), которые были выведены из эксперимента на следующие сутки после окончания введения ЧХУ; третья группа (ЧХУ+«депривация») - животные, которым в течение 7 дней вводили физиологический раствор, начиная с на следующие сутки после окончания введения ЧХУ; четвертая группа (ЧХУ+АЕ) - животные с 7-дневным введением АЕ 24 мг/кг аналогично третьей группе. Экстракт асцидии и

физиологический раствор вводили животным по 0,2 мл внутрижелудоч-но через зонд. Экстракт из морского гидробионта - асцидии пурпурной (Halocynthia aurantium) - комплекс биологически активных веществ, основными структурными компонентами которого являются фосфоли-пиды, свободные аминокислоты, полиненасыщенные жирные кислоты, каротиноиды [4, с. 658], доза 24 мг/кг составляет 1/100 ЛД50. Животных выводили из эксперимента декапитацией под легким эфирным наркозом. Анализировали гемограмму, содержание Т- и В-лимфоцитов в периферической крови и селезенке, клеточность тимуса и селезенки, определяли количественное содержание общих иммуноглобулинов и IgG в сыворотке [9, с. 21; 10, с. 3; 11, с. 7]. Статистическую обработку результатов проводили с использованием параметрического ^критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Четырехдневное воздействие ЧХУ сопровождалось снижением общего количества лейкоцитов периферической крови, при существенном повышении относительного количества сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов и моноцитов. Популяционный состав лимфоцитов сыворотки (наряду со сниженным общим количеством) был существенно изменен: снижена численность CD3+, CD4+ и увеличена - CD8+, наименьшим изменениям подверглась популяция В-лимфоцитов (CD20+) (табл. 1). Зарегистрировано также угнетение лимфопролиферативных процессов в тимусе и селезенке крыс. Через 7 суток после токсического воздействия (группа ЧХУ+«депривация») позитивных изменений анализируемых показателей не зарегистрировано, более того происходила дальнейшая рассогласованность форменных элементов крови, увеличивалось относительное количество эозинофильных лейкоцитов, прогрессировали лим-фопения и снижение общих иммуноглобулинов.

Наблюдаемое снижение исследуемых показателей у животных этой группы, свидетельствует о продолжающемся токсическом стрессе и недостаточности собственных защитных сил организма противостоять развитию негативных изменений, что согласуется с результатами биохими-

ческих исследований [4, с. 658]. Показано, что через 7 дней после отмены ЧХУ большинство исследуемых параметров в печени подопытных животных не нормализовалось. По-видимому, продукты метаболизма, нарушенного воздействием токсиканта, накапливаясь в крови, ингибируют иммунные процессы, угнетая как клеточные, так и гуморальные звенья иммунитета [3, с. 4062; 12, с. 106; 13, с. 168].

Таблица 1.

Влияние экстракта асцидии на иммунокомпетентные клетки крыс Вистар при интоксикации четыреххлористым углеродом

Показатели Интактные ЧХУ ЧХУ+ «депривация» ЧХУ+ АЕ

Лимфоциты 106 /мл 4,45 ± 0,83 2,71 ± 0,32* 2,12 ± 0,28* 3,10 ± 0,16**

Т-лимфоциты CD3+,106 /мл 1,29 ± 0,10 0,93 ± 0,10* 0,71 ± 0,08* 1,27 ± 0,08**

Т-лимфоциты CD4+,106 /мл 0,39 ± 0,03 0,20 ± 0,03* 0,18 ± 0,05* 0,41 ± 0,02**

Т-лимфоциты CD8+, 106 /мл 0,17 ± 0,01 0,24 ± 0,01* 0,29 ± 0,01* 0,21 ± 0,01**

В-лимфоциты CD 20+, 106 /мл 0,75 ± 0,17 0,60 ± 0,04 0,37 ± 0,04* 0,49 ± 0,05**

Примечание: р<0,05 при сравнении: * - с интактными животными; ** - с группой ЧХУ+«депривация».

Введение крысам АЕ после действия ксенобиотика сопровождалось смягчением негативных эффектов ЧХУ Это выражалось в достоверно повышенном уровне лейкоцитов (в 1,4 раза, р<0,05) по сравнению с группой ЧХУ+«депривация» и восстановлении характерного для интактных животных соотношения форменных элементов периферической крови, в первую очередь увеличении относительного количества лимфоцитов (до 70% от интактных значений, р<0,05; табл. 1). Были выявлены также существенные отличия при анализе субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови экспериментальных животных. Так у крыс под влиянием экстракта наряду с повышением содержания СD4+ клеток отмечалось снижение числа СD8+ лимфоцитов, также достоверно было

повышено содержание СD20+ клеток по сравнению животными, не получающими лечения. Поскольку известно, что функция обычно более чувствительна к воздействиям различного рода по сравнению с морфологией [14, с. 1970; 15, с. 4; 16, с. 3], можно предположить, что позитивные изменения касаются также и функциональной активности иммуноцитов.

Анализ состояния лимфоидных органов выявил, что на 7 сутки после токсического воздействия массы тимуса в экспериментальных группах практически не различались, а масса селезенки в группе с экстрактом даже была снижена (табл. 2). Вместе с тем, в пересчете на массу органа численность клеток тимуса и селезенки, в группе леченных животных, значительно превышала показатели группы ЧХУ+«депривация», что свидетельствует об усилении лимфопролиферативных процессов под влиянием экстракта. Известно, что именно клеточная пролиферация служит ключевым этапом в развитии иммунных реакций, обеспечивая увеличение числа антигенспецифичных клеток [13, с. 168; 14, с. 1970; 16, с. 3].

Таблица 2.

Влияние экстракта асцидии на массу и клеточность лимфоидных органов

крыс Вистар в условиях интоксикации четыреххлористым углеродом

Показатель Интактные ЧХУ + «де-привация» ЧХУ + АЕ

Масса тимуса, мг 160,5 ± 17,5 144,0 ± 22,0 132,1 ± 12,0

Число клеток тимуса, 106 113,1 ± 19,4 76,10 ± 17,4* 103,1 ± 16,0**

Число клеток тимуса / г массы органа 704,7 ± 27,2 528,5 ± 25,2* 780,5 ± 12,1**

Масса селезенки, мг 499,6 ± 37,0 626,40 ± 31,6* 460,7 ± 27,7**

Число клеток селезенки, 106 358,7 ± 30,2 300,00 ± 21,4 450,0 ± 34,2**

Число клеток селезенки / г массы органа 718,0 ± 43,3 479,0 ± 28,1* 976,9 ± 64,1**

Примечание: р<0,05: * - при сравнении с интактной группой; ** - при сравнении с группой ЧХУ+«депривация».

Относительно субпопуляционного состава Т-лимфоцитов селезенки (данные не приводятся) отмечено почти двукратное снижение индекса имму-нореактивности (СD4+/СD8+) в группе ЧХУ+«депривация», в то время как в

группе, получающей экстракт, эти показатели находились в пределах интакт-ных животных. Стабильное содержание лимфоцитов в крови и лимфоидных органах крыс под влиянием АЕ позволяет судить о готовности иммунной системы к иммунному ответу [9, с. 21; 13, с. 168]. Подтверждением служат данные об увеличении концентрации общих иммуноглобулинов и IgG в сыворотке животных группы с экстрактом, что может свидетельствовать о повышении функциональной активности В-клеток и усилении гуморальных факторов защиты под действием экстракта. По мнению ряда исследователей, биологическая активность препаратов из гидробионтов связана с наличием высокоактивного комплекса «морских фосфолипидов», аминокислот, витаминов, каротиноидов, находящихся в них в оптимальных количествах и соотношениях и позволяющих им взаимопотенцировать свое действие [4, с. 658; 5, с. 28; 16, с. 637; 18, с. 26; 19, с. 1]. То обстоятельство, что при введении животным экстракта асцидии наиболее выраженным было увеличение кле-точности лимфоидных органов и поддержание нормального уровня Т-кле-ток, позволяет предположить, что один из механизмов его действия связан со стимуляцией процессов пролиферации лимфоцитов и продукцией факторов клеточного взаимодействия [6, с. 52;]. Наряду с этим, эффект экстракта может рассматриваться и как регуляторный фактор, способствующий восстановлению условий для полноценного взаимодействия между различными звеньями иммунной системы [2, с. 4062; 5, с. 28; 7, с. 228].

В целом, представленные результаты свидетельствуют о возможности коррекции иммунного статуса и усилении защитных сил подопытных животных при применении экстракта асцидии в условиях токсического поражения организма.

Автор выражает благодарность старшему инженеру Стасенко Н.Я. за оказание квалифицированной помощи в проведении экспериментов.

Список литературы

1. Близнецова Г.Н., Рецкий М.И., Полякова Н.Д., Коренская И.М. Роль процессов свободнорадикального окисления в механизме гепатопротекторного действия масла из семян амаранта // Биомедицина. 2006. № 2. С. 105-112.

2. Kominsky D.J., Campbell E.L., Colgan S.P. Metabolic Shifts in Immunity and Inflammation // J. Immunol. 2010. Vol. 184(8), рр. 4062-4068.

3. Lario M., Munoz L., Ubeda M., Borrero M.-J., Martinez J. Defective thymo-poiesis and poor peripheral homeostatic replenishment of T-helper cells cause T-cell lymphopenia in cirrhosis. J. Hepatology. 2013. Vol. 59, рр. 723-730.

4. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Лесникова Л.Н. Применение биологически активных веществ морских гидробионтов как гепато- и мембранопро-текторов// Дальневосточные моря России. М.: Наука, 2007. Кн. 2. Исследование морских экосистем и биоресурсов. С. 658-672.

5. Моторя Е.С., Пивненко Т.Н., Гажа А.К., Иванушко Л.А., Воронцов В.Р., Санина Н.М. Исследование иммуномодулирующей и мембранотропной активности каротиноидов из туники асцидии Halocynthia aurantium // Тихоокеанский медицинский журнал. 2009. № 3. С. 28-31.

6. Пономарева Т.И., Добряков Ю.И. Исследование иммунных свойств хау-рантина при иммуносупрессии в эксперименте // Тихоокеанский медицинский журнал. 2009. № 3. С. 52-54.

7. Пономарева Т.И., Добряков Ю.И. Исследование иммунотропных свойств экстрактов асцидий // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. 2014. №04 (63). С. 228-231.

8. Венгеровский А.И., Маркова И.В., Саратиков А.С. Доклиническое изучение гепатозащитных средств // Ведомости фармакологического комитета. 1999. № 1. С. 9-12.

9. Потапова Г.В., Перевозчикова Т.В., Венгеровский А.И. Некоторые данные об иммунотропных свойствах нового гепатопротектора эплира // Экспер. и клин. иммунол. Томск. 1995. С. 21-25.

10. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. 2000. 450 с.

11. Литвинова Л.С., Гуцол А.А., Сохоневич Н.А. . Основные поверхностные маркеры функциональной активности Т-лимфоцитов // Медицинская иммунология. 2014. Т. 6. № 1. С. 7-26.

12. Поляк Е.И., Татьянченко В.Л., Гаербеков А.Ш. Применение антиокси-дантных препаратов в комплексном лечении хронического гемороя при гепатозе // Биомедицина. 2006. № 3. С. 106-108.

13. Gerriets V.A., Rathmell J.C. Metabolic Pathways in T cell Fate and Function // Trends Immunol. 2012. Vol. 33(4), рр. 168-173.

14. Hassan J., Reen D.J. Human recent thymic emigrants—identification, expansion, and survival characteristics // J Immunol. 2001. Vol. 167 (4), рр. 1970-1976.

15. Пащенков М.В., Муругина Н.Е., Муругин В.В. Пинегин Б.В. Выявление и характеризация цитолитических CD8+ и CD4+ Т-клеток // Иммунология. 2010. Т. 31, №1. С. 4-12.

16. Ярилин А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе // Физиология и патология иммунной системы. 2004. Т. 8, № 11. С. 3-12.

17. Добряков Ю.И., Добряков Е.Ю., Пономарева Т.И. Исследование фармакологических свойств экстракта из морского гидробионта - асцидии пурпурной (Halocynthia aurantium) // Дальневосточные моря России. М.: Наука, 2007. Кн.2. С. 637-657.

18. Raftos D. Interaction of tunicate proteins with mammalians cells // Immunol. Cell Biol. 2006. Vol. 74. P. 26-31.

19. Blunt J.W., Copp B.R., Munro M.H. Marine natural products // Nat. Prod. Rep. 2003. Vol. 20, рр. 1-48.

References

1. Bliznetsova G.N., Retskiy M.I., Polyakova N.D., Kerenskaya I.M. Rol pro-tsessov svobodnoradikal'nogo okisleniya v mehanizme gepatoprotektornogo deystviya masla is semyan amaranta [The role of free radical oxidation processes in mechanisms of amaranth oil hepatoprotective action]. Biomeditsina [Biomedicine]. 2006, no. 2, pp. 105-112.

2. Kominsky D.J., Campbell E.L., Colgan S.P. Metabolic Shifts in Immunity and Inflammation. J. Immunol. 2010, vol. 184(8), pp. 4062-4068.

3. Lario M., Munoz L., Ubeda M., Borrero M.-J., Martinez J. Defective thymo-poiesis and poor peripheral homeostatic replenishment of T-helper cells cause T-cell lymphopenia in cirrhosis. J. Hepatology. 2013, vol. 59, pp. 723-730.

4. Kushnerova N.F., Fomenko S.E., Lesnikova L.N. Primenenie biologicheski aktivnih veshestv morskih gidrobiontov kak gepato- i membranoprotektorov [Application of biological activity substance from marine hydrobiont as hepa-to- and membranoprotectors]. Dal'nevostochnye moryaRossii [Far East sea of Russia]. Moscow: Nature Publ., 2007, book 2, pp. 658-670.

5. Motorya E.S., Pivnenko T.N., Gajza A.K., Ivanushko L.A., Vorontsov V.N., San-ma N.M. Issledovanie immunomoduliruyutshey i membranotropnoy activnosti karotinoidov iz tuniki astsidii Halocynthia aurantium [Carotinoids of ascidian Halocynthia aurantium as immunomodulators and membranoprotectors]. Ti-hookeanskiy meditsinskiyjurnal [Pacific medical journal]. 2009, no. 3, pp. 28-31.

6. Ponomareva T.I., Dobryakov Yu.I. Issledovanie immunnyh svoystv haurantina pri immunosupressii v eksperimente [Investigation of immunity activity of Haurantinum on experimental immunodepression]. Tihookeanskiy meditsinskiy jurnal [Pacific medical journal]. 2009, no. 3, pp. 52-54.

7. Ponomareva T.I., Dobryakov Yu.I. Issledovanie immunotropnyh svoystv ek-straktov astsidiy [Immunity activity of ascidian extracts investigation]. Aktu-al'nye problemi gumanitarnih I estestvennih nauk [Humanitarity and natural topical problems]. 2014, no. 04, pp. 228-231.

8. Vengerovskiy A.I., Markova I.V, Saratikov A.S. Doklinicheskoe izuchenie gepatozat-sitnih sredstv [Preclinical study of hepatoprotective remedy]. Vedomosti farmakolog-icheskogo komiteta [Bulletin of pharmacology committee]. 1999, no. 1, pp. 9-12.

9. Potapova G.V., Perevozchikova T.V., Vengerovskiy A.I. Nekotorye dannye ob immunotropnyh svoystvah novogo gepatoprotectora eplira [Some data about immunity properties of new hepatoprotector eplir]. Eksperimennal'nay I klinicheskaya immunologya, Tomsk [Experimental and clinical immunology, Tomsk]. 1995, pp. 21-25.

10. Roiyt A., Brostoff Dj., Meiyl D. Immunologiya [Immunology]. Moscow: Peace Publ., 2000. 450 p.

11. Litvinova L.S., Gutsol A.A., Sohnevich N.A. Osnovnye poverhnostnye mark-eri funktsional'noy aktivnosty T-limfotsitov [T-lymphocyte functional activity primary surface markers]. Meditsinskaya immunologia [Medical immunology]. 2014, vol. 6, no. 1, pp. 7-26.

12. Polyak E.I., Tatyanchenko V.K., Gaerbekov A. Sh. Primenenie antioksidantnyh preparatov v kompleksnom lechenii hronicheskogo gemorroya pri gepatose [Application of antioxidant preparations for complex therapy of chronic hemorrhoids complicated by hepatosis]. Biomeditsina [Biomedicine]. 2006, no. 3, pp. 106-108.

13. Gerriets V.A., Rathmell J.C. Metabolic Pathways in T cell Fate and Function. Trends Immunol. 2012, vol. 33(4), pp. 168-173.

14. Hassan J., Reen D.J. Human recent thymic emigrants - identification, expansion, and survival characteristics. J. Immunol. 2001, vol. 167(4), pp. 1970-1976.

15. Patshenkov M.V., Murugina N.E., Vurugin V.V., Pinegin B.V. Viyavlenie i harakterizatsia tsitoliticheskih CD8+ i CD4+ T-kletok [Detection and characterization of CD8+ and CD4+ T-cells]. Immunologiya [Immunology]. 2010, vol. 31, no. 1, pp. 4-21.

16. Yarilin A.A. Gomeostaticheskie protsessi v immunnoy sisteme [Homeostasis of immune system]. Fiziologia ipatologia immunnoy sistemi [Physiology and pathology of immune system]. 2004, vol. 8, no. 11, pp. 3-12.

17. Dobryakov Yu. I., Dobryakov E.Yu., Ponomareva T.I. Issledovanie farma-kologicheskih cvoystv ekstrakta iz morskogo gidrobionta astsidii purpurnoy (Halocynthia aurantium) [Investigation of pharmacological properties of marine hydrobiont (Halocynthia aurantium)]. Dal'nevostochnye morya Rossii [Far East sea of Russia]. Moscow: Nature Publ., 2007, book 2, pp. 637-657.

18. Raftos D. Interaction of tunicate proteins with mammalians cells. Immunol. Cell Biol. 2006, vol. 74, pp. 26-31.

19. Blunt J.W., Copp B.R., Munro M.H. Marine natural products. Nat. Prod. Rep. 2003, vol. 20, pp. 1-48.

ДАННЫЕ ОБ АВтОРЕ Пономарева татьяна Ивановна, старший научный сотрудник, кандидат биологических наук

Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ул. Балтийская, 43, г. Владивосток, 690041, Российская Федерация pti. 50@yandex.ru

DATAABOUT THE AUTHOR ponomareva Tatiana Ivanovna, Doctor of Biological Science, Senior Researcher

V.I. Il'ichev Pacific Oceanological Institute

43, Baltiyskaya Str., Vladivostok, 690041, Russian Federation

pti.50@yandex.ru