Способ подготовки материала для создания биоинженерной конструкции пищевода

2
Способ подготовки матрикса для создания биоинженерной конструкции пищевода в эксперименте, включающий выделение и очищение пищевода экспериментальных животных от окружающей соединительной ткани, канюлирование краниальной и каудальной частей пищевода, децеллюляризацию детергентами и энзимами и отмывание пищевода от децеллюляризирующих растворов, контроль качества матрикса: гистологическое окрашивание, определение количественного содержания ДНК, механическое тестирование, отличающийся тем, что перфузию в течение 28 ч со скоростью 100 мл/мин при канюлировании осуществляют в 2 этапа: после перфузии через краниальный конец пищевода в направлении к каудальному направление перфузии изменяют на противоположное - от каудального к краниальному, каждый из двух этапов перфузии включает обработку деионизированной водой в течение 1,5 ч, затем используют 4% раствор дезоксихолата натрия в комбинации с 0,002 М Na-ЭДТА в течение 70 мин, фосфатный буфер - в течение 15 мин, свиную панкреатическую ДНКазу-I 2000 ЕД/200 мл фосфатного буфера с кальцием и магнием - 70 мин, завершают децеллюляризацию промывкой от децеллюляризирующих растворов и дезинфекцией матрикса в 10% растворе хлоргексидина биглюконата в фосфатном буфере со сменой раствора и направления перфузии каждые 5 ч, дополнительно качество децеллюляризации подтверждают путем иммуногистохимического анализа по наличию коллагенов I и IV типов, ламинина, эластина, фибронектина и отсутствию гладкомышечного актина, тропомиозина, компонентов дыхательной цепи митохондрий - с помощью ЭПР-спектроскопии, а также по отсутствию выраженной клеточной воспалительной реакции на пробу подкожной имплантации подготовленного матрикса in vivo.