СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МУЛЬТИВАЛЕНТНЫМИ FC СОЕДИНЕНИЯМИ
METHOD FOR TREATMENT OF INFLAMMATORY DISEASES WITH MULTIVALENT Fc COMPOUNDS

ПЕРЕКРЁСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет к опубликованной патентной заявке США № 62/432407, поданной 9 декабря 2016 года, полное содержание которой тем самым включено в настоящую заявку посредством ссылки.
ОПИСАНИЕ ПОДАННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА
[0002] Содержание текстового файла, направленного в электронном виде с настоящим изобретением, полностью включено в настоящее изобретение посредством ссылки: пригодная для ввода в компьютер копия перечня последовательностей (имя файла: GLIK_020_01WO_ST25.txt, дата записи: 8 декабря 2017 года, размер файла 15 килобайт).
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0003] Настоящее изобретение в целом относится к области иммунологии, аутоиммунологии, воспаления и онкоиммунологии. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способам определения ответа пациента на мульти-Fc терапевтическое средство и способам определения эффективной дозы мульти-Fc терапевтического средства. Далее, изобретение относится к лечению патологических состояний, таких как аутоиммунные и воспалительные заболевания.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0004] Препараты иммуноглобулина из плазмы человека использовались для лечения иммунодефицитных заболеваний с ранних 1950-х годов, а в последнее время и для аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ) человека это композиция из стерильного очищенного препарата иммуноглобулина G (IgG), приготовленная из пулированной плазмы человека, которая обычно содержит более 90% немодифицированного IgG только с небольшим и меняющимся количеством агрегированных иммуноглобулинов IgA или IgM (Rutter A et al., J Am Acad Dermatol, 2001, Jun; 44(6): 1010-1024). ВВИГ изначально использовался в качестве заместительной терапии IgG для предотвращения оппортунистических заболеваний у пациентов с низкими уровнями IgG (Baerenwaldt, Expert Rev Clin Immunol, 6(3), p425-434, 2010). В настоящее время самое распространённое применение ВВИГ это лечение хронической воспалительной демиелинизирующей полиневропатии и, в добавок к использованию при первичном и вторичном иммунодефиците, для него имеется разрешение на лечение аутоиммунных заболеваний, включая идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ИТП), хроническую воспалительную демиелинизирующую полиневропатию (ХВДП), мультифокальную моторную невропатию (ММН), синдром Гийена-Барре и синдром Кавасаки. ВВИГ также играет установленную роль в других аутоиммунных заболеваниях, включая воспалительные миопатии (полимиозит, дерматомиозит и миозит с включениями), синдром Ламберта-Итона, миастению гравис и синдром мышечной скованности.
[0005] Согласно наблюдениям, следовые количества (1-5%) IgG в ВВИГ находятся в агрегированной форме, а димеры IgG могут составлять примерно 5-15% от ВВИГ. Доклинические и клинические испытания показывают, что указанные агрегированные фракции ВВИГ непропорционально эффективны при лечении некоторых аутоиммунных заболеваний, опосредованных патологическими иммунными комплексами, с наибольшей активностью отдельно взятой Fc-части указанных ВВИГ агрегатов. Так, наиболее активная фракция ВВИГ, хоть и составляющая небольшой процент от ВВИГ, является мульти-Fc агрегатами (см. Augener et al., Blut, 50, 1985; Teeling et al, Immunobiology, 96, 2001; Bazin et al., British Journal of Haematology, 127, 2004). Описаны альтернативные ВВИГ терапии с применением соединений, содержащих мультивалентные Fc к Fc-рецепторам и, таким образом, сильно связывающие даже Fc-рецепторы с низкой аффиностью, подобно ВВИГ агрегатам (см. опубликованные патентные заявки США №№ 2010/0239633; 2013/0156765; 2015/0218236; 2016/0229913; 2010/0143353, а также опубликованные патентные заявки PCT №№ WO 2017/019565; WO 2015/132364 и WO 2015/132365).
[0006] GL-2045, описанный в опубликованной патентной заявке США № 2013/0156765, является мультимеризующим общим страдомером, являющимся рекомбинантным миметиком ВВИГ. GL-2045 связывает большинство лигандов или все лиганды, с которыми связывается Fc-фрагмент иммуноглобулина (Ig) G1. Далее, GL-2045 связывается с высокой аффинностью и авидностью со всеми каноническими рецепторами и с комплементом C1q и имеет в 10-1000 раз большую in vitro эффективность чем ВВИГ. Поэтому у GL-2045 также есть потенциальная клиническая практическая ценность для лечения широкого спектра аутоиммунных заболеваний, которые включают, но не ограничиваются ими, следующие заболевания: идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), хроническая воспалительная полиневропатия, мультифокальная моторная невропатия, миастения гравис, пересадка органов и ревматоидный артрит.
[0007] ВВИГ является одним из наиболее широко выписываемых лекарственных средств из арсенала врачей, но имеет несколько недостатков, включая высокую стоимость производства, изменчивость от партии к партии, различную эффективность при любой заданной дозе, отсутствие биомаркера для индикации дозировки, достаточной для эффективности, время вливания 1-2 дня, высокое содержание белка, использование нефротоксичных солюбилизаторов и риск инфекционного загрязнения. Кроме того, ВВИГ выписывается в диапазоне доз обычно 0,6-2 г/кг каждые 3-6 недель с различной эффективностью; приблизительно 50-75% пациентов реагируют на терапию. В текущих стандартах медицинской помощи отсутствует возможность прогнозирования, какие пациенты отреагируют или не отреагируют на введённую дозу ВВИГ. Также в текущий момент отсутствует биомаркер для определения, получил ли пациент достаточную дозу ВВИГ. Использование синтетических мульти-Fc терапевтических средств (т. е. GL-2045 и других) обходит многие недостатки ВВИГ, демонстрируя увеличенную эффективность и активность. Использование синтетических рекомбинантно полученных мульти-Fc терапевтических средств также по существу снижает вероятность ошибочного воспалительного ответа реципиента, такого как возникающего вследствие переменных количеств IgA у различных марок и партий ВВИГ, или потенциального переноса вирусных (как вирус Зика) или прионных инфекций. Однако определение ответа данного пациента на введённую дозу и выявление клинически эффективных доз остаются важными проблемами для мульти-Fc терапевтических средств.
[0008] Как и для всех препаратов иммуноглобулина, протоколы лечения для мульти-Fc терапевтических средств должны уравновешивать риски недостаточного дозирования (т. е. неудачу в эффективности лечении основного заболевания или расстройства) с рисками чрезмерного дозирования или скорости введения, включающие, в случае мульти-Fc терапевтических средств, гипотензию, жар, ренальную дисфункцию вследствие избыточного содержания белка или чрезмерную и нецелесообразную стоимость. Поэтому в данной области техники существует потребность в способах, обеспечивающих возможность определения эффективной дозы мульти-Fc препарата, так что максимальная терапевтическая доза будет достигаться с минимальным количеством мульти-Fc препарата. Такие способы позволят оптимизировать терапевтические выгодные эффекты, минимизируя риск нежелательных побочных явлений.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009] Способы настоящего изобретения обеспечивают идентификацию пациентов с воспалительным или аутоиммунным заболеванием, демонстрирующих неадекватный ответ на лечение мульти-Fc терапевтическим средством, и определение оптимальной дозы мульти-Fc терапевтического средства для указанного пациента на основании уровня циркулирующего у пациента «инактивированного C3b», известного как iC3b. Способы настоящего изобретения также обеспечивают использование начальной дозы мульти-Fc терапевтического средства для оценки воздействия мульти-Fc терапевтического средства на уровень iC3b. Способы настоящего изобретения также обеспечивают другие компоненты комплемента, которые могут быть применены в качестве суррогата для iC3b на основании аналогичного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. Указанные способы основаны, по меньшей мере частично, на неожиданных данных, что уровень iC3b коррелирует с in vitro эффективностью мульти-Fc терапевтического средства, и обеспечивают усовершенствования в использовании такого терапевтического средства для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний.
[0010] В некоторых вариантах осуществления изобретения, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания у пациента, у которого диагностирован неадекватный ответ на мульти-Fc терапевтическое средство, включающий введение первой кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства в дозе по меньшей мере около 105% от начальной дозы указанного мульти-Fc терапевтического средства в течение первого периода дозирования, при этом для пациента было установлено, что уровень iC3b в крови составляет меньше заданного порогового значения после введения начальной дозы мульти-Fc терапевтического средства, или что процент изменения уровня iC3b в крови составляет меньше чем около 10% от исходного состояния.
[0011] В некоторых вариантах осуществления изобретения, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания у пациента, включающий введение начальной дозы мульти-Fc терапевтического средства, измерение уровня iC3b в крови у пациента и определение адекватности ответа на начальную дозу мульти-Fc терапевтического средства, если уровень iC3b в крови находится выше заданного порогового значения, или если он вырос на меньше чем около 10% от исходного состояния.
[0012] Способы настоящего изобретения дополнительно содержат повторение определения уровня iC3b в крови пациента после введения первой кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства и введение второй кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства в течение второго периода дозирования, являющейся выше ранее введённой дозы, если определённый уровень iC3b находится ниже заданного порогового значения или если уровень iC3b в крови изменился на меньше чем около 10% от исходного состояния. В некоторых вариантах осуществления изобретения повторное определение уровня iC3b и введение дополнительной кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства повторяются до достижения заданного порогового значения уровня iC3b или до изменения уровня iC3b в крови на более чем около 10% от исходного состояния.
[0013] В некоторых аспектах, настоящее изобретение обеспечивает способы, включающие (а) введение мульти-Fc терапевтического средства субъекту, нуждающемуся в этом, в начальной дозе указанного мульти-Fc терапевтического средства; (б) измерение уровня циркулирующего iC3b у субъекта; (в) определение того, что субъекту требуется первая кумулятивная повышенная доза мульти-Fc терапевтического средства, когда уровень iC3b, циркулирующего в субъекте, находится ниже заданного порогового значения или если уровень iC3b изменился на меньше чем около 10% от исходного состояния; и (г) введение первой кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, способы, обеспечивающие в настоящем изобретении определение эффективной дозы мульти-Fc терапевтического средства, дополнительно содержат (д) повторение определения уровня iC3b в крови пациента после введения первой кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства; и (е) введение второй кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства, являющейся выше ранее введённой кумулятивной повышенной дозы, если уровень iC3b находится ниже заданного порогового значения или если уровень iC3b в крови изменился на меньше чем около 10% от исходного состояния. В некоторых вариантах осуществления изобретения, определение уровня iC3b и введение дополнительной кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства повторяются до достижения заданного порогового значения уровня iC3b или до изменения уровня iC3b в крови на более чем около 10% от исходного состояния.
[0014] В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза включает введение повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства в течение всего периода дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза включает введение как повышенной дозы, так и одной или более нарастающей дозы в течение периода дозирования.
[0015] В некоторых вариантах осуществления изобретения мульти-Fc терапевтическое средство включает (а) первый полипептид, включающий первый мономер Fc-домена, линкер и второй мономер Fc-домена; (б) второй полипептид, включающий третий мономер Fc-домена; и (в) третий полипептид, включающий четвёртый мономер Fc-домена; причём указанный первый мономер Fc-домена и указанный третий мономер Fc-домена объединяются, образуя первый Fc-домен, а указанный второй мономер Fc-домена и указанный четвёртый мономер Fc-домена объединяются, образуя второй Fc-домен.
[0016] В некоторых вариантах осуществления изобретения мульти-Fc терапевтическое средство включает (а) полипептид, включающий по меньшей мере первый и второй Fc-фрагменты IgG; (б) по меньшей мере один из указанных первых Fc-фрагментов IgG, включающий по меньшей мере один СН2-домен и по меньшей мере одну шарнирную область, причём первый и второй Fc-фрагменты IgG соединены через по меньшей мере одну шарнирную область с образованием цепи, причём указанный полипептид дополнительно включает несколько по существу похожих цепей, присоединённых к по меньшей мере одной из других указанных нескольких цепей в по существу параллельном отношении с образованием димера. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, несколько параллельных цепей образуют мультимер.
[0017] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает полипептид, включающий два или более Fc-домена, причём каждый Fc-домен состоит из двух мономеров Fc-домена, причём каждый мономер Fc-домена состоит из (а) СН1- и СН2-домена; (б) N-конечной шарнирной области; и (в) домена мультимеризации, соединённым с С-концом; и причём домен мультимеризации вызывает объединение Fc-доменов в мультимер. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, домен мультимеризации получен из IgM или IgA.
[0018] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает два или более полипептида, каждый включающий по меньшей мере один Fc-домен, соединённый с центральным фрагментом, причём каждый Fc-домен состоит из двух мономеров Fc-домена, каждый состоящий из (а) СН1- и СН2-домена; (б) N-конечной шарнирной области. В некоторых вариантах осуществления изобретения, центральный фрагмент является полистирольными гранулами. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый Fc-домен дополнительно включает CH4-домен IgM, а центральный фрагмент включает J-цепь, что образует биомиметик, способный соединяться с несколькими Fcγ-рецепторами.
[0019] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает пять или шесть полипептидов Fc-домена, причём каждый полипептид Fc-домена включает два мономера Fc-домена, каждый включающий остаток цистеина, соединённый дисульфидной связью с остатком цистеина прилежащего полипептида Fc-домена, и домен мультимеризации, причём указанный домен мультимеризации вызывает объединение Fc-доменов в мультимер. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, указанный домен мультимеризации получен из IgM или IgA.
[0020] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает три, четыре, пять или шесть Fc-доменов.
[0021] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает фракцию агрегированного внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ). В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство включает GL-2045.
[0022] В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза мульти-Fc терапевтического средства составляет по меньшей мере около 110% от начальной дозы указанного мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза мульти-Fc терапевтического средства составляет по меньшей мере около 115%, 120%, 125%, 150%, 175% или 200% от начальной дозы указанного мульти-Fc терапевтического средства.
+
[0023] В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, составляет от около 25 мкг/мл до около 300 мкг/мл выше базового уровня анализа. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, составляет от около 50 мкг/мл до около 200 мкг/мл выше базового уровня анализа. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, составляет от около 75 мкг/мл до около 125 мкг/мл выше базового уровня анализа. Также в дополнительных вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, составляет 100 мкг/мл выше базового уровня анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, составляет около 25% от нейтрофилов и моноцитов, являющимися iC3b. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения уровня iC3b составляет меньше около 20%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения уровня iC3b составляет меньше около 30%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения уровня iC3b составляет меньше около 40%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения уровня iC3b составляет меньше около 50%.
[0024] В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется измерением уровня iC3b1 и/или iC3b2. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется измерением уровня суррогатного маркера iC3b. В некоторых вариантах осуществления изобретения, суррогатный маркер iC3b выбирают из группы, состоящей из C3a, C3a desArg, C4a, C4a desArg, C3f, C3c, C3dg, C3d и C3g. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет меньше чем около 30 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет меньше чем около 20 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет меньше чем около 10 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет меньше чем около 5 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения суррогатного маркера составляет меньше чем около 10%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения суррогатного маркера составляет меньше чем около 20%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения суррогатного маркера составляет меньше чем около 30%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения суррогатного маркера составляет меньше чем около 40%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, процент изменения суррогатного маркера составляет меньше чем около 50%.
[0025] В дополнительных вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b, ниже которого производится введение дополнительной дозы мульти-Fc терапевтического средства, является средней интенсивностью флуоресценции (СИФ) iC3b и составляет около 125% от базового уровня СИФ iC3b. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется иммуноанализом. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, иммуноанализ представляет собой ELISA (иммуноферментный анализ, ИФА) или вестерн-блот. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется проточной цитометрией.
[0026] В некоторых вариантах осуществления изобретения, у пациента устанавливается неадекватный ответ на мульти-Fc терапевтическое средство, когда уровень iC3b в крови изменился на меньше чем около 10% от базового уровня iC3b пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, у пациента диагностируют неадекватный ответ на мульти-Fc терапевтическое средство, когда уровень iC3b в крови изменился на меньше чем около 10% от предыдущего уровня iC3b или уровня суррогата iC3b пациента (т. е. изменение на меньше чем 10% от уровня iC3b, определённого после введения кумулятивной повышенной дозы). В некоторых вариантах осуществления изобретения, указанное изменение уровня в крови пациента составляет меньше чем 15%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, указанное изменение уровня в крови пациента составляет меньше чем 20%. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, указанное изменение уровня в крови пациента составляет меньше чем 50%, меньше чем 100%, меньше чем 200% или более.
[0027] В некоторых вариантах осуществления изобретения, способы настоящего изобретения используются для лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, аутоиммунное или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из аутоиммунной цитопении, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, астмы, синдрома Кавасаки, синдрома Гийена-Барре, синдрома Стивенса-Джонсона, колита Крона, диабета, хронической воспалительной демиелинизирующей полиневропатии, миастении гравис, аутоимунного заболевания, связанного с анти-фактором VIII, дерматомиозита, васкулита, увеита и болезни Альцгеймера.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0028] Фиг. 1А-Фиг. 1В показывают ингибирование GL-2045, HAGG и ВВИГ комплемент-зависимой цитотоксичности (complement-dependent cytotoxicity, CDC), вызванной ритуксимабом в клетках SUDHL4 и Ramos.
[0029] Фиг. 2 показывает концентрации продуктов расщепления комплемента, вызванного GL-2045, HAGG и ВВИГ, в сыворотке c достаточным количеством фактора H.
[0030] Фиг. 3 показывает концентрации продуктов расщепления комплемента, вызванного GL-2045, HAGG и ВВИГ, в обеднённой фактором H сыворотке.
[0031] Фиг. 4 показывает воздействие GL-2045, HAGG и ВВИГ на концентрацию C3a и C5a в обеднённой фактором H сыворотке, состав которой был восстановлен с помощью фактора H.
[0032] Фиг. 5 показывает ингибирующую активность GL-2045 альтернативную C3-конвертазу в присутствии фактора Н.
[0033] Фиг. 6А-Фиг. 6С показывают воздействие GL-2045 на активность альтернативной C3-конвертазы в присутствии как фактора Н, так и фактора I (Фиг. 6А) и эффекты мульти-Fc терапевтического средства на выработку iC3b (Фиг. 6В, 6С).
[0034] Фиг. 7А-Фиг. 7В показывают воздействие G998 на протеинурию в анти-Thy-1-моделе нефрита.
[0035] Фиг. 8 показывает потенциальные варианты осуществления анализа iC3b и дозирования мульти-Fc терапевтического средства.
[0036] Фиг. 9 показывает взаимосвязи между молекулами iC3b и различными суррогатными маркерами iC3b, которые могут быть использованы для анализа и дозирования мульти-Fc терапевтического средства.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0037] В настоящем изобретении обеспечены способы лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний, включающие определение неадекватного ответа у пациента, получающего лечение мульти-Fc терапевтическим средством, основанное на уровне в крови инактивированного C3b (iC3b). Во-вторых, вводят последующие и нарастающие дозы мульти-Fc терапевтического средства и измеряют уровень iC3b в крови или суррогата iC3b для определения терапевтически эффективной дозы мульти-Fc терапевтического средства для данного пациента в данный момент времени. Указанные способы основаны на неожиданных данных, что уровень iC3b коррелирует с эффективностью GL-2045, G994 и G998. Способы, обеспеченные в этом изобретении, имеют практическую ценность для лечения аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания, аллергии, обусловленных антителами заболеваний и обусловленных комплементом заболеваний.
[0038] В контексте настоящего изобретения, использование единственного числа в совокупности с выражением «включающий/ая/ее» в формуле изобретения и/или в описании изобретения может означать «один/одна/одно», но также согласуется со значением «один/одна/одно или более», «по меньшей мере один/одна/одно» и «один/одна/одно или более чем один/одна/одно». Весь ссылочный материал, цитируемый в настоящем изобретении, полностью включен в настоящее изобретение посредством ссылки.
Активация комплемента и iC3b
[0039] Способы настоящего изобретения частично включают измерение активации каскада реакций комплемента и запуска расщепления комплемента специфическим образом и/или продуктов деградации (например, iC3b) для определения ответа пациента на мульти-Fc терапевтическое средство. Некоторые из описанных в настоящем изобретении мульти-Fc терапевтических средств способны, как минимум, предоставлять мультивалентные Fc-фрагменты для компонентов комплемента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, способны предоставлять мультивалентные Fc-фрагменты как для канонических Fc-рецепторов (например, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII), так и для компонентов комплемента, а некоторые мульти-Fc терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, способны предоставлять мультивалентные Fc-фрагменты главным образом для компонентов комплемента, а не для Fc-рецепторов с низкой аффинностью. В контексте настоящего изобретения, термин «комплемент» относится к любому из белков каскада реакций комплемента, и иногда обозначается в литературе как система комплемента или каскад реакций комплемента. В контексте настоящего изобретения, термин «связывание комплемента» или «связывание с комплементом» относится к связыванию любого из компонентов каскада реакций комплемента. Компоненты каскада реакций комплемента известны в данной области техники и описаны, например, в Janeway's Immunobiology, 8th Ed., Murphy ed., Garland Science, 2012. В настоящее время известны три главных пути активации комплемента: классический путь, альтернативный путь и лектиновый путь. Классический путь активируется, когда белок C1q связывается с одной или более молекулами интактного и связанного иммуноглобулина IgM или по меньшей мере с двумя молекулами интактного и связанного иммуноглобулина IgG1, IgG2 или IgG3, после чего образуется C1qC1rC1s, который расщепляет C4. Активация комплемента приводит к комплемент-зависимому цитолизу (complement-dependent cytolysis, CDC). Избыточная активация комплемента может приносить вред и сопряжена с многими заболеваниями, включающими миастению гравис, гемолитико-уремический синдром (ГУС) и пароксизмальную ночную гемоглобинурию (ПНГ).
[0040] Различные пути активации комплемента сводятся к формированию C3b через действие классической C3-конвертазы (C4bC2a) или альтернативной C3-конвертазы (C3bBb). C3b сам является критическим компонентом альтернативной C3-конвертазы, а также классической и альтернативной C5-конвертазы, каждая из которых запускает последующую активацию комплемента. Считается, что время полужизни C3b без стабилизации связыванием с другим белком составляет меньше секунды. C3b можно стабилизировать несколькими способами, включая образование ковалентных комплексов C3b-C3b-IgG, связывание с комплексом C4bC2a с образованием классической C5-конвертазы (C4bC2aC3b), опсонизацию на поверхности микроба или клетки хозяина, приводящее к образованию C3-конвертазы (C3bBb) через ассоциацию с фактором B и расщепление фактора D, и объединение с уже образованной C3-конвертазой (C3bBb) с образованием альтернативной C5-конвертазы (C3bBbC3b).
[0041] Несвязанный C3b деградирует в «инактивированный» C3b, или iC3b, при помощи, помимо прочего, фактора H и фактора I. Расщепление C3b между Arg1298-Ser1299 приводит к инактивации C3b в iC3b1. Дальнейшее расщепление между Arg1298-Ser1299 приводит к высвобождению C3f из iC3b1 и формированию iC3b2. В контексте настоящего изобретения, iC3b может относиться в равной степени к iC3b1 и/или iC3b2, и измерение уровня iC3b может определить уровень либо iC3b1, либо iC3b2, либо обоих iC3b1 и iC3b2. В некоторых вариантах осуществления изобретения, iC3b может далее деградировать в C3c и C3dg, и iC3dg может далее деградировать в C3d и C3g. В настоящем изобретении термины «образование iC3b» и «выработка iC3b» используются взаимозаменяемо и относятся к тому, что описывается в научной литературе как инактивация C3b при помощи фактора H и фактора I, приводящая к возникновению или изменению уровня iC3b, (например, инактивация C3b при помощи фактора H и/или фактора I). Несмотря на его имя, iC3b не является биологически неактивным. В отличие от активного C3b, образование iC3b ингибирует последующую активацию комплемента двумя способами. Во-первых, расщепление C3b, усиленное активностью фактора H и фактора I, ограничивает количество C3b, доступное для образования C5-конвертазы, таким образом ограничивая образование дальнейших воспалительных продуктов комплемента, таких как C5a и мембраноатакующего комплекса (МАК) (также известного как sc5b-9 или терминальный комплекс комплемента (TKK)). Во-вторых, в отличие от C3b, iC3b не может связаться с фактором B, таким образом ограничивая образование дополнительной C3-конвертазы во время альтернативной активации комплемента и предупреждая замкнутый цикл активации комплемента.
[0042] Хотя некоторые исследования и описают iC3b как активирующий фрагмент, указывающий на патологическую активацию комплемента (см. Olson et al, Патент США № 9164088), научно доказано, что iC3b обладает сильными противовоспалительными и толерогенными свойствами. Например, связывание iC3b с рецептором комплемента 3 (complement receptor 3, CR3) уменьшает дифференциацию моноцитов в дендроциты и опосредованный продолжительный толерогенный ответ (Schmidt et al., Cancer Immunol Immunother., 55(1), pp. 31-38, (2006)). iC3b также способствует образованию супрессорных клеткок миелоидного происхождения (myeloid-derived suppressor cells, MDSC) (Hsieh et al., Blood, 121(10), pp. 1760-1768, (2013)) и способствует индукции TGFβ2 и IL-10 (см. Amarilyo et al., Eur J Immunol., 40(3), pp. 699-709, (2010)). Кроме того, в противоположность ультракороткого времени полужизни C3b, iC3b имеет относительно долгое время полужизни, составляющее 30-90 минут, предполагающее способность iC3b вызывать длительный противовоспалительный ответ.
[0043] Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что уровень циркулирующего iC3b и компонентов комплемента, которые изменяются параллельно с iC3b (т.е. суррогаты iC3b), указывают на относительную терапевтическую эффективность мульти-Fc терапевтических средств (например, GL-2045, G994, G998, ВВИГ, SIF3™). Таким образом, в явном противоречии с Olson et al., описанные в настоящем изобретении данные указывают на то, что более высокий уровень iC3b желателен при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Так как для образования iC3b обычно требуется начальная активация каскада реакций комплемента, и не предполагается, что оно произойдёт в какой-либо значительной степени в отсутствие активации комплемента, начальная активация комплемента является желательной при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний мульти-Fc терапевтическим средством, несмотря на поколения учения, что активация каскада реакций комплемента является вредной при аутоиммунных и воспалительных заболеваниях. Подходы с использованием моноклональных антител или небольших молекул для блокировки классического пути активации комплемента выше в каскаде реакций, такие как использование моноклональных антител, нацеленных на C1q, C1r или C1s, будут ингибировать инициацию активации комплемента и поэтому не будут приводит к образованию долгоживущего противовоспалительного iC3b. Подобным образом, подходы с использованием моноклональных антител или небольших молекул к С5 для блокировки пути активации комплемента ниже в каскаде реакций, такие как использование моноклональных антител или небольших молекул, имеющих мишенью С5, не предполагают инициирование активации комплемента и, следовательно, образование долгоживущего противовоспалительного iC3b. Напротив, мульти-Fc терапевтические средства, включающие агрегаты ВВИГ и рекомбинантные биомиметики, описанные в настоящем изобретении, предоставляющие несколько функциональных Fc-фрагментов гексамерному C1q, будет инициировать активацию комплемента выше в каскаде реакций и образование противовоспалительного iC3b, последовательно блокируя активацию комплемента ниже в каскаде реакций на уровне C3/C3b.
[0044] Начальная активация каскада реакций комплемента, наблюдаемая для мульти-Fc терапевтических средств, сопровождается дальнейшим ингибированием каскада реакций комплемента и связана с ингибированием CDC. Данные указанного изобретения демонстрируют, что образование iC3b зависит как от начальной активации, так и от дальнейшего прекращения работы каскада реакций комплемента. Поэтому образование iC3b сопровождается (1) образованием продуктов расщепления комплемента выше в каскаде реакций (таких как C3a и C4a) и (2) ингибированием эффекторных механизмов ниже в каскаде реакций, таких как CDC, с образованием только небольших количеств C5a и TKK. Количество образующихся C5a и TKK обычно составляет в два раза больше значений базового уровня и может оставаться в диапазоне нормальных значений, несмотря на повышенное по сравнению с базовым уровнем значение.
[0045] В некоторых вариантах осуществления изобретения, iC3b может существовать в форме iC3b1, образованной расщеплением C3b между Arg1298-Ser1299. В некоторых вариантах осуществления изобретения, iC3b может существовать в форме iC3b2, образованной расщеплением iC3b, что даёт iC3b2 и C3f. В некоторых вариантах осуществления изобретения, оценка уровня iC3b включает определение уровня iC3b1 и/или iC3b2. В некоторых вариантах осуществления изобретения, оценка уровня iC3b включает определение или измерение уровня суррогата iC3b. В настоящем изобретении термины «суррогат iC3b» и «суррогатный маркер iC3b» используются взаимозаменяемо и относятся к компоненту каскада реакций комплемента или к самому компоненту iC3b, уровень которого коррелирует с уровнем iC3b. Суррогаты iC3b включают как продукты расщепления iC3b, которые включают C3f, C3c, C3dg, C3d и/или C3g, так и продукты расщепления iC3b выше в каскаде реакций, которые включают C3a, C3a desarg, C4a и/или C4a desarg.
[0046] Фиг. 9 представляет схематически изображенную взаимосвязь на молярной основе между iC3b и различными суррогатными маркерами iC3b. Расщепление C3 C3-конвертазой образует эквимолярные количества продуктов расщепления C3 - C3a и C3b. Как описано выше, C3b нестабилен и, в отсутствие стабилизации, деградирует в iC3b меньше, чем за секунду. При ингибировании образования стабильного C3b (т. е. при лечении мульти-Fc терапевтическим средством) расщепление C3 приведёт к образованию эквимолярных количеств C3a и C3b. Поэтому, в контексте мульти-Fc терапевтических средств, которые активируют каскад реакций комплемента, а также ингибируют образование стабильного C3b, и в отсутствие инфекции или другого воздействия, которое стабилизирует C3b, уровень C3a будет возрастать пропорционально уровню C3b. В таких случаях измерение уровня C3a может быть использовано в качестве суррогата для измерения уровня iC3b. Кроме того, биологически активный C3a может быть катаболизирован в менее активный, но более стабильный C3a desArg (также известный как белок, стимулирующий ацилирование (acylation stimulating protein, ASP)) удалением С-конечного аргинина. Поэтому, в некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень C3a desArg может быть использован в качестве суррогата для определения уровня iC3b ниже в каскаде реакций пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, объединённые уровни C3a и C3a desArg могут быть использованы в качестве суррогата для определения уровня iC3b ниже в каскаде реакций. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, уровень C4a и/или C4a desArg используется в качестве суррогата для определения, меняется ли уровень iC3b пациента меньше, чем на 10% от базового уровня. В некоторых вариантах осуществления изобретения, измерение уровня C3a/C3a desArg проводится через от 30 минут до 12 дней или более после введения начальной дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 50% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 40% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 30% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 20% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 10% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство.
[0047] В похожих вариантах осуществления изобретения, рассматривается C4a и продукт его деградации, C4a desArg. Как правило, iC3b не может образовываться без активации комплемента. Когда С4 расщепляется на C4a и C4b в результате активации классического пути, C4b встраивается в C3-конвертазу для классического или лектинового путей. Авторы настоящего изоборетения также обнаружили, что в результате активации классического пути мульти-Fc терапевтическим средством ожидаемое и желаемое образование C4a, который является побочным продуктом активации классического пути, согласовывается с образованием iC3b. Не ограничиваясь теорией, считается, что это обусловлено тем, что мульти-Fc терапевтическое средство (например, ВВИГ или GL-2045) изначально активирует классический путь комплемента, после чего активация комплемента останавливается главным образом на уровне C3/C3b, таким образом, образуя iC3b. Образование C4a и/или продукта его деградации C4a desArg, или комбинации C4a и C4a desArg указывает на классический путь активации и, в контексте мульти-Fc терапевтического средства, которое блокирует активацию комплемента на уровне C3/C3b, также является суррогатом, показывающим достаточное образование iC3b. Поэтому, в некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень C4a и/или C4a desArg может быть использован в качестве суррогата для определения уровня iC3b ниже в каскаде реакций. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, объединённые уровни C4a и C4a desArg могут быть использованы в качестве суррогата для определения уровня iC3b ниже в каскаде реакций.
[0048] В дополнительных вариантах осуществления изобретения, уровень C4a и/или C4a desArg используется в качестве суррогата для определения, меняется ли уровень iC3b пациента меньше, чем на 10% от базового уровня. В некоторых вариантах осуществления изобретения, измерение C3a/C3a desArg проводится через от 30 минут до 12 дней или более после введения начальной дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 50% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 40% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 30% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 20% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня C3a и/или C3a desArg на менее чем 10% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство.
Мульти-Fc терапевтические средства
[0049] В контексте настоящего изобретения, термины «биомиметик», «молекула биомиметика», «соединение-биомиметик» и родственные термины относятся к созданному человеком соединению, которое имитирует функцию другого встречающегося в природе соединения, такого как ВВИГ, моноклональное антитело и Fc-фрагмент антитела. «Биологически активные» биомиметики являются соединениями, обладают такой же или похожей биологической активностью, как и их встречающиеся в природе аналоги. Под «встречающийся в природе» подразумевается молекула или её часть, которые при обычных условиях можно обнаружить в организме. Под встречающийся в природе также подразумевается по существу встречающийся в природе. «Иммунологически активные» биомиметики это биомиметики, проявляющие такую же или похожую иммунологическую активность, как и встречающиеся в природе иммунологически активные молекулы, такие как антитела, цитокины, интерлейкины и другие иммунологические молекулы, известные в данной области техники. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, биомиметики для применения в настоящем изобретении являются мульти-Fc терапевтическими средствами (например, страдомерами), согласно определению в настоящем изобретении.
[0050] Термин «выделенный» полипептид или пептид, в контексте настоящего изобретения, относится к полипептиду или пептиду, которые либо не имеют встречающихся в природе аналогов, либо были выделены из или очищены от компонентов, сопутствующих им в природе, например, в тканях поджелудочной железы, печени, селезёнки, яичников, семенников, мышц, суставов, нервной ткани, желудочно-кишечной ткани или ткани молочной железы, или в опухолевой ткани (например, ткани рака молочной железы), или в жидкостях организма, таких как кровь, сыворотка или моча. Как правило, полипептид или пептид считается «выделенным», когда он по меньшей мере на 70% массы сухого остатка свободен от белков и других встречающихся в природе органических молекул, которые в природе ему сопутствуют. Предпочтительно, препарат полипептида (или пептида) настоящего изобретения по меньшей мере на 80% массы сухого остатка, более предпочтительно по меньшей мере на 90% массы сухого остатка, более предпочтительно по меньшей мере на 99% массы сухого остатка, является полипептидом (или пептидом) настоящего изобретения. Так как химически синтезированный полипептид или пептид по своему существу отделён от компонентов, сопутствующих ему в природе, синтетический полипептид или пептид является «выделенным». Выделенный полипептид (или пептид) настоящего изобретения может быть получен, например, экспрессией рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный полипептид или пептид, или химическим синтезом. Полипептид или пептид, полученный в клеточной системе, не относящейся к его природному источнику, является выделенным, потому что он в обязательном порядке будет свободен от компонентов, сопутствующих ему в природе. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, выделенный полипептид настоящего изобретения включает только последовательности соответствующие Fc-мономеру IgG1 и шарнирному мультимеризующему домену IgG2 (SEQ ID №: 1) и никакие другие последовательности, которые могут помочь в клонировании или очистке указанного белка (например, участки узнавания введённой эндонуклеазы рестрикции или метки очистки). Степень выделения или очистки можно измерить любым подходящим методом, например, колоночной хроматографией, электрофорезом в полиакриламидном геле или ВЭЖХ анализом.
[0051] В контексте настоящего изобретения, «мульти-Fc терапевтическое средство» относится к белку биомиметику, способному по меньшей мере предоставлять мультивалентные (т.е. два или более) Fc-фрагмента для компонентов системы комплемента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, способны предоставлять мультивалентные Fc-фрагменты как для канонических Fc-рецепторов (например, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII), так и для компонентов комплемента. Мульти-Fc терапевтическое средство опционально может быть мультимеризованным. Мульти-Fc терапевтические средства, применяемые в соответствии со способами, описанными в настоящем изобретении, могут относится к общим мульти-Fc соединениям, раскрытым в опубликованных патентных заявках США №№ 2015/0218236; 2016/0229913; 2017/0088603; 2017/0081406; 2017/0029505; 2010/0143353; 2010/0239633 и 2013/0156765, а также в опубликованных международных патентных заявках PCT №№ WO 2016/009232; WO 2015/132364; WO 2015/132365; WO 2015/158867; WO 2016/139365; WO 2017/005767; WO 2017/013203; WO 2017/036905; WO 2015/168643 и WO 2017/151971, и могут включать ВВИГ терапевтические средства, которые включают ВВИГ и фракции мультимерного ВВИГ. В то время как язык описания структуры для определения каждого мульти-Fc терапевтического средства может немного варьироваться, каждое из указанных мульти-Fc терапевтических средств, применяемых в соответствии со способами, описанными в настоящем изобретении, включает по меньшей мере два Fc-домена, которые делают возможным связывание с двумя или более Fc-рецепторами или компонентами комплемента. По меньшей мере, указанный Fc-домен представляет собой димерный полипептид (или димерную область большего полипептида), включающий две пептидные цепи или области, которые соединяются с образованием функционального димера, способного к связыванию с Fc-рецепторами или компонентами комплемента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый Fc-домен дополнительно включает домен мультимеризации. В таких вариантах осуществления изобретения, указанный домен мультимеризации также представляет собой димерный полипептид, включающий две пептидные цепи или области, которые соединяются с образованием функционального домена мультимеризации, способного к содействию при объединении указанных димеров в мультимерный полипептид. Таким образом, функциональная форма индивидуальных фрагментов и доменов, описанных в настоящем изобретении, в общем существует в форме димера. Мономеры индивидуальных фрагментов и доменов, описанных в настоящем изобретении, являются одиночными цепями или областями, которые должны соединиться со второй цепью или областью, чтобы образовать функциональную структуру. Природа соединения одиночных цепей или областей (например, цистеиновые связи или электростатические взаимодействия) не важна, до тех пор, пока она делает возможным образование функционального Fc-домена или домена мультимеризации.
[0052] Под «соединённый напрямую» подразумевается, что две последовательности присоединены друг к другу без посредничества или посторонних последовательностей, например, аминокислотных последовательности, полученных введением участков узнавания эндонуклеазы рестрикции в ДНК или фрагментов клонирования. Среднему специалисту в данной области будет понятно, что «соединённый напрямую» включает добавление или удаление аминокислот до тех пор, пока способность к мультимеризации остается по существу незатронутой.
[0053] Под «гомологический» подразумевается идентичность на всей последовательности данной нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности. Например, под «на 80% гомологический» подразумевается, что данная последовательность имеет общую с заявленной последовательностью идентичность на 80% и может включать инсерции, делеции, замены и сдвиг рамки. Среднему специалисту в данной области будет понятно, что выравнивание последовательностей может быть использовано, чтобы учесть инсерции и делеции и определить идентичность на всей длине последовательности.
[0054] Описано, что ВВИГ связывается с неонатальным Fc-рецептором (FcRn) и полностью его насыщает, и что такое конкурентное ингибирование FcRn может играть важную роль для биологической активности ВВИГ (например, F. Jin et al., Human Immunology, 2005, 66(4)403-410). Так как иммуноглобулины, которые сильно связываются с Fcγ-рецепторами, также по меньшей мере в некоторой степени связываются с FcRn, специалист в данной области осознает, что мульти-Fc терапевтические средства, способные связываться с более чем одним Fcγ-рецептором, будут также связываться и полностью насыщать FcRn.
[0055] Существует два полиморфа IgG1 человека, определяемые как DEL и EEM полиморфы. DEL полиморф имеет D в позиции 356 и L в позиции 358; EEM полиморф имеет E в позиции 356 и M в позиции 358 (по системе нумерации Кабата, SEQ ID №№: 2 и 3, полиморфы EEM и DEL, соответственно). Мульти-Fc терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, могут включать как DEL, так и EEM полиморф. Так, если реплика для определённого мутанта изготовлена исключительно в контексте DEL полиморфизма, специалисту в данной области будет понятно, что такие же мутации могут быть применены к EEM полиморфу с получением тех же результатов.
Fc-фрагменты и домены
Fc-фрагмент
[0056] Fc-фрагмент является профессиональным термином и используется для описания области белка или третичной структуры белка, которые обычно находятся в карбоксильном конце иммуноглобулинов. Fc-фрагмент может быть выделен от Fab-фрагмента моноклонального антитела, используя ферментативное расщепление, например, расщепление папаином, что является несовершенным процессом с недостатками (см. Mihaesco C et al., Journal of Experimental Medicine, Vol 127, 431- 453 (1968)). Вместе с Fab-фрагментом (включающим антиген связывающий домен) Fc-фрагмент образовывает целое антитело, что означает здесь полноценное антитело. Fc-фрагмент состоит из карбоксильных конечных участков тяжёлых цепей антитела. Каждая цепь Fc-фрагмента имеет длину в 220-265 аминокислот, и цепи часто связаны дисульфидной связью. Fc-фрагмент часто включает одну или более структурных укладок или функциональных субдоменов. В частности, Fc-фрагмент включает Fc-домен, определённый в настоящем изобретении как минимальная структура, связывающаяся с Fc-рецептором. Выделенный Fc-фрагмент состоит из двух димеризованных мономеров Fc-фрагмента (например, двух карбоксильных конечных участков тяжёлых цепей антитела; определяется далее в настоящем изобретении). Когда два мономера Fc-фрагмента соединяются, образующийся Fc-фрагмент имеет связывающую активность к комплементу и/или Fc-рецептору.
Частичный Fc-фрагмент
[0057] Частичный Fc-фрагмент является доменом, содержащим меньше, чем целый Fc-фрагмент антитела, но всё ещё сохраняющим достаточную структуру, чтобы иметь такую же активность, как и Fc-фрагмент, что включает связывающую активность к Fc-рецептору и/или связывающую активность к комплементу. Таким образом, у частичного Fc-фрагмента может отсутствовать часть шарнирной области или вся шарнирная область, часть CH2-домена или весь CH2-домен, часть CH3-домена или весь CH3-домен и/или часть CH4-домена или весь CH4-домен, в зависимости от изотипа антитела, из которого домен Fc-фрагмента был выделен. Другой пример частичного Fc-фрагмента содержит молекулу, содержащую CH2- и CH3-домены IgG1. В указанном примере у частичного Fc-фрагмента отсутствует шарнирный домен, присутствующий у IgG1. Частичные Fc-фрагменты состоят из двух мономеров частичного Fc-фрагмента. Как определено далее в настоящем изобретении, когда два таких мономера частичного Fc-фрагмента соединяются, образующийся частичный Fc-фрагмент имеет связывающую активность к комплементу и/или Fc-рецептору.
Fc-домен
[0058] В контексте настоящего изобретения, «Fc-домен» описывает минимальную область (в контексте большего полипептида) или наименьшую третичную структуру белка (в контексте выделенного белка), которые могут связаться с Fc-рецептором (FcR) или быть с ним связанными. Как в Fc-фрагменте, так и в частичном Fc-фрагменте Fc-домен является минимальной связывающей областью, которая делает возможной связывание указанной молекулы с Fc-рецептором. В то время как Fc-домен может быть ограничен отдельным гомодимерным полипептидом, связанным Fc-рецептором, также ясно, что Fc-домен может быть частью или целым Fc-фрагментом, а также частью или целым частичным Fc-фрагментом. Специалист в данной области осознает, что использование в настоящем изобретении термина «Fc-домены» означает более одного Fc-домена. Fc-домен включает два мономера Fc-домена. Как определено далее в настоящем изобретении, когда два таких мономера Fc-домена соединяются, образующийся Fc-домена имеет связывающую активность к Fc-рецептору и/или комплементу. Таким образом, Fc-домен является димерной структурой, которая может связывать комплемент и/или Fc-рецептор.
Частичный Fc-домен
[0059] В контексте настоящего изобретения, «частичный Fc-домен» описывает область Fc-домена. Частичные Fc-домены включают отдельные домены константной области тяжёлой цепи (например, домены CH1, CH2, CH3 и CH4) и шарнирные области различных классов и подклассов иммуноглобулина. Таким образом, частичные Fc-домены человека настоящего изобретения включают CH1-домен IgG1, CH2-домен IgG1, CH3-домен IgG1 и шарнирные области IgG1 и IgG2. Соответствующие частичные Fc-домены других видов будут зависеть от иммуноглобулинов, представленных в этих видах, и их названий. Предпочтительно, частичные Fc-домены настоящего изобретения включают CH1, CH2 и шарнирные домены IgG1, и шарнирный домен IgG2. Частичный Fc-домен настоящего изобретения также может включать более чем один из указанных доменов и шарниров. Однако, у индивидуальных частичных Fc-доменов настоящего изобретения и у их комбинаций отсутствует способность связывать FcR. Поэтому указанные частичные Fc-домены и их комбинации включают менее одного Fc-домена. Частичные Fc-домены могут быть связаны с образованием пептида, обладающего связывающей комплемент и/или Fc-рецептор активностью, при этом образуя Fc-домен. В настоящем изобретении, частичные Fc-домены, как и Fc-домены используются в качестве строительных блоков для создания мульти-Fc терапевтических средств, используемых в соответствии со способами настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению. Каждый частичный Fc-домен включает два мономера частичного Fc-домена. Когда два таких мономера частичного Fc-домена соединяются, образуется частичный Fc-домен.
[0060] Как указано выше, каждый из Fc-фрагментов, частичных Fc-фрагментов, Fc-доменов и частичных Fc-доменов являются димерными белками или доменами. Поэтому каждая из этих молекул состоит из двух мономеров, которые соединены, формируя димерный белок или домен. Тогда как характеристики и активность гомодимерных форм были рассмотрены выше, мономерные пептиды описаны ниже.
Мономер Fc-фрагмена
[0061] В контексте настоящего изобретения, «мономер Fc-фрагмента» является одноцепочечным белком, который, при соединении с другим мономером Fc-фрагмента, образует Fc-фрагмент. Таким образом, мономер Fc-фрагмента является карбоксильной концевой областью одной из тяжёлых цепей антитела, которая образует Fc-фрагмент целого антитела (например, смежная область тяжёлой цепи, которая включает шарнирную область, CH2-домен и CH3-домен IgG1). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, мономер Fc-фрагмента включает, по меньшей мере, одну цепь шарнирной области (мономер шарнира), одну цепь CH2-домена (мономер CH2-домена) и одну цепь CH3-домена (мономер CH3-домена), смежно связанные с образованием белка. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, CH2-, CH3- и шарнирные домены происходят из разных изотипов. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, мономер Fc-фрагмента включает шарнирный домен IgG2 и CH2- и CH3-домены IgG1.
Мономеры Fc-домена
[0062] В контексте настоящего изобретения, «мономер Fc-домена» описывает одноцепочечный белок, который, при соединении с другим мономером Fc-домена, образует Fc-домен, который может связываться с комплементом и/или каноническими Fc-рецепторами.
[0063] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, мономер Fc-домена включает, от амино до карбоксильного конца Fc-домен, включающий шарнир IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1 и шарнир IgG2.
Мульти-Fc терапевтические средства
[0064] Способы настоящего изобретения обеспечивают определение ответа субъекта на любое соединение, содержащее мульти-Fc домен, причём функциональность Fc-фрагмента сохраняется. В частном случае осуществления изобретения, способы настоящего изобретения используются для определения, имеет ли субъект адекватный ответ на мульти-Fc терапевтическое средство, такое как GL-2045, G994, G998 или другой страдомер, описанный в опубликованных патентных заявках США №№ 2010/0239633 или 2013/0156765, в международном патенте PCT № WO 2017/019565 и в опубликованной международной патентной заявке PCT № PCT/US2017/043538, полное содержание которых тем самым включено в настоящее изобретение посредством ссылки. Также описаны дальнейшие мульти-Fc терапевтические средства (см. опубликованные патентные заявки США №№ 2015/0218236; 2016/0229913; 2010/0143353; 2017/0088603; 2017/0081406; и 2017/0029505, и международные патенты PCT №№ WO 2015/132364; WO 2015/132365; WO 2015/158867; WO 2015/168643; WO 2016/009232; WO 2016/139365; WO 2017/005767; WO 2017/013203; WO 2017/036905; и WO 2017/151971, полное содержание которых тем самым включено в настоящее изобретение посредством ссылки).
[0065] Хотя указанные описания немного отличаются языком, используемым для характеристики отдельных компонентов, указанные мульти-Fc терапевтические средства по существу являются структурно и/или функционально похожи на страдомеры, описанные выше и раскрытые в опубликованных патентных заявках США №№ 2010/0239633 и 2013/0156765. Каждая из них по существу описывает полипептиды, состоящие из димерных полипептидов, включающие последовательно связанные мономеры Fc-домена, соединённые с образованием по меньшей мере двух функциональных Fc-доменов (например, единицы страдомера). Линкер, соединяющий мономеры Fc-домена, может представлять собой ковалентную связь (например, пептидную связь), пептидные линкеры или непептидные линкеры. Далее, природа соединения мономеров Fc-домена с образованием функциональных Fc-доменов не важна, до тех пор, пока она делает возможной образование функционального Fc-домена, способного связываться с каноническими Fc-рецепторами и/или компонентами комплемента (например, цистеиновые связи или электростатические взаимодействия).
Страдомеры
[0066] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство является страдомером (например, GL-2045). В опубликованной патентной заявке США № 2010/0239633 описано применение связанных Fc-доменов иммуноглобулина для создания упорядоченно мультимеризованных иммуноглобулиновых Fc биомиметиков ВВИГ (биологически активных упорядоченных мультимеров, известных как страдомеры), которые содержат короткие последовательности, включающие сайты рестрикции и аффинные метки между отдельными компонентами страдомера, для лечения патологических состояний, включающих аутоиммунные заболевания и другие воспалительные состояния. См. опубликованную патентную заявку США № 2010/0239633, включенную в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки. В опубликованной патентной заявке США № 2013/0156765 описаны страдомеры, отличающиеся тем, что их отдельные компоненты связываются напрямую, а не через сайты рестрикции и аффинные метки. В опубликованной патентной заявке США № 2013/0156765 также конкретно описывается мультимеризующий страдомер (GL-2045), включающий Fc-домен IgG1 и шарнирный мультимеризующий домен IgG2, напрямую связанные с их С-концом, который показывает увеличенную мультимеризацию по сравнению с соединением, связанным с N-концом (GL-2019, описан в опубликованной патентной заявке США № 2010/0239633). См. опубликованную патентную заявку США № 2013/0156765, включенную в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки. GL-2045 имеет следующую структуру: шарнир IgG1 - IgG1CH2 IgG1 CH3 - шарнир IgG2 и GL-2045 обеспечивается как SEQ ID №№: 4 и 5 (EEM и DEL полиморфы, соответственно).
[0067] Страдомеры, применяемые в способах настоящего изобретения, являются соединениями-биомиметиками, способными связываться с комплементом и/или с каноническими Fc-рецепторами. В добавление, специалисту в данной области будет понятно, что любая конформация страдомера (например, последовательный, кластерный, кор-страдомер или Fc-фрагмент) может быть использована в соответствии со способами, описанными в настоящем изобретении. Последовательные страдомеры являются димерными пептидами, состоящими из по меньшей мере двух последовательно соединённых Fc-доменов. Таким образом, последовательные страдомеры способны связываться с двумя или более Fc-рецепторам.
[0068] Кластерные страдомеры являются страдомерами звёздообразной формы, имеющими центральную группу «головку» и две или более «ножки», причём каждая ножка включает один или более Fc-доменов, способных связывать по меньшей мере один Fc-рецептор и/или комплемент. Кластерные страдомеры также называются «мультимеризующими страдомерами» (например, GL-2045). Как будет понятно, Fc-фрагменты, частичные Fc-фрагменты, Fc-домены и частичные Fc-домены, описанные выше, используются в построении различных конформаций страдомеров. Далее, также описанные выше отдельные мономеры Fc-доменов и мономеры частичных Fc-доменов, которые сначала образуются, чтобы сформировать димерные страдомерные единицы, и потом мультимеризуются через включение домена мультимеризации (например, шарнира IgG2) с образованием мультимерных структур, которые являются кластерными страдомерами настоящего изобретения. Конкретные страдомеры в мельчайших подробностях описаны в опубликованных патентных заявках США №№ 2010/0239633 и 2013/0156765, полное содержание которых тем самым включено в настоящее изобретение посредством ссылки).
[0069] Кор-страдомеры состоят из кор-группы, с которой связаны два или более полипептида, включающих один или более связанных Fc-доменов, таким образом создавая соединение-биомиметик, способное связывать два или более Fcγ-рецепторов. Fc-фрагмент, частичный Fc-фрагмент, последовательный страдомер или единица кластерного страдомера способны независимо служить в качестве одной или более (если они включают два Fc-домена) единицы кор-страдомера в кор-страдомере, так как каждая из этих молекул содержит, по меньшей мере, один Fc-домен. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кор-группа является полистирольной гранулой. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый Fc-домен дополнительно включает CH4-домен IgM, и кор-группа включает J-цепь, что даёт биомиметик, способный связывать несколько Fcγ-рецепторов.
[0070] Специалисту в данной области будет понятно, что страдомеры не включают связывающие антигены Fab-фрагменты. Такие Fab-несущие соединения обычно известны как страдотела. Таким образом, в одном аспекте, у мульти-Fc терапевтического средства, полезного в соответствии с настоящим изобретением, отсутствует связывающий антигены Fab-домен.
[0071] В некоторых вариантах осуществления изобретения, димерные полипептиды включают домены мультимеризации, которые содействуют объединению указанных димеров полипептидов в мультимерный белок. В контексте настоящего изобретения, «домен мультимеризации» относится к домену, который содействуют объединению полипептидов, включающих Fc-домены, в мультимерный Fc-белок. Природа домена мультимеризации не важна, до тех пор, пока она делает возможной объединение димерных полипептидов в мульти-Fc-белок, способный предоставлять мультивалентный Fc-фрагмент для Fc-рецепторов и/или компонентов комплемента (например, мульти-Fc терапевтическое средство). В некоторых вариантах осуществления изобретения, домен мультимеризации является шарниром IgG2. В некоторых вариантах осуществления изобретения, димерные полипептиды включают конечный CH4-домен IgM. В некоторых вариантах осуществления изобретения, включение таких доменов делает возможной самоагрегацию страдомеров с кор-группой, такой как J-цепь, с образованием кор-страдомера.
Комплемент-предпочтительные страдомеры, общие страдомеры и гексамерные страдомеры
[0072] В международном патенте PCT № WO 2017/0195656 описаны комплемент-предпочтительные мульти-Fc терапевтические средства, включающих страдомеры, а в международной патентной заявке PCT № PCT/US2017/043538 описываются общие и гексамерные мульти-Fc терапевтические средства, включающие страдомеры, базовая структура которых описана выше. Указанные страдомеры включают домены мультимеризации, а также точечные мутации в CH1- и/или CH2-областях Fc-домена. Определённые точечные мутации позволяют комплемент-предпочтительным страдомерам предпочтительно связывать один или более компонентов комплемента, такие как C1q, по сравнению с нормальным неагрегированным Fc-фрагментом иммуноглобулина человека (WO 2017/0195656). Указанное предпочтительное связывание достигается напрямую через усиленное связывание с компонентами комплемента или опосредованно через ослабленное связывание страдомеров с каноническими Fc-рецепторами. Таким образом, указанные соединения включают единицы страдомера, способные к мультимеризации в мульти-Fc терапевтическое средство и также способные к предпочтительному связыванию с компонентами комплемента. Схожим образом, определённая комбинация точечных мутаций, имеющая место в общих страдомерах, даёт возможность связыванию с компонентами комплемента и/или Fc-рецепторами, в зависимости от комбинации мутаций, с увеличенной или уменьшенной аффинностью, и позволяет гексамерным страдомерам предпочтительно образовывать мультимеризованные Fc терапевтические средства, включающие шесть Fc-доменов (PCT/US2017/043538).
Селективный иммуномодулятор Fc-рецепторов (Selective Immunomodulator of Fc Receptors, SIF)
[0073] В опубликованной патентной заявке США № 2016/0229913 описаны иммуномодуляторы Fc-рецепторов (SIFs), содержащие первый полипептид, включающий первый мономер Fc-домена, линкер и второй мономер Fc-домена; второй полипептид, включающий третий мономер Fc-домена; и третий полипептид, включающий четвёртый мономер Fc-домена. Указанные первый и третий мономеры соединяются с образованием первого Fc-домена, и указанные второй и четвёртый мономеры соединяются с образованием второго Fc-домена. (to form a second Fc domain monomer) Таким образом, указанные соединения образуют два функциональных Fc-домена посредством объединения трёх отдельных полипептидов (SIF3™). Дополнительные примеры исполнения, раскрытые в опубликованной патентной заявке США № 2016/0229913, описывают образование соединений, включающих до пяти мономеров Fc-домена. Указанные соединения по существу включают последовательно соединённые Fc-домены (см. опубликованные патентные заявки США №№ 2005/0249723 и 2010/0239633) и отдельные мономеры Fc-доменов (варианты чего описаны в опубликованной патентной заявке США № 2006/0074225), которые собираются благодаря мутациям последовательности. Таким образом, конечным результатом является мульти-Fc терапевтическое средство, сходное с последовательным страдомером. Соединения SIF3™, описанные в опубликованной патентной заявке США № 2016/0229913, не включают домен мультмеризации. Дополнительные примеры исполнения SIF описаны в международной патентной заявке PCT № WO 2017/151971.
Хвостовые Fc-мультимеры
[0074] В опубликованной патентной заявке США № 2015/0218236 описывается способ лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания, включающий введение мульти-Fc терапевтического средства пациенту, нуждающемуся в этом. Мульти-Fc терапевтическое средство, описанное в указанном изобретении, включает 5, 6 или 7 единиц мономера полипептида, причём каждая единица мономера включает участок, связывающий Fc-рецептор и включающий две константные области тяжёлой цепи IgG. Каждая константная область тяжёлой цепи IgG включает остаток цистеина, соединённый дисульфидной связью с остатком константной области тяжёлой цепи IgG прилежащего мономера полипептида. Так как «мономеры» пептида, описанные в опубликованной патентной заявке США № 2015/0218236, состоят из двух тяжёлых цепей IgG, фактически они являются димерными белками (например, Fc-доменами). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных в опубликованной патентной заявке США № 2015/0218236, единицы мономера дополнительно включают хвостовую область, которая способствует объединению единиц мономера в полимер (например, мультимер). Таким образом, «хвостовая область», в контексте указанного изобретения, является функциональным эквивалентом домену мультимеризации, описанному в текущем изобретении и в опубликованных патентных заявках США №№ 2010/0239633 и 2013/0156765. Это соединение по существу включает единицы страдомера и домены мультимеризации, которые собираются с образованием кластерного страдомера, как описано выше. Также хвостовые Fc-мультимеры описаны в международных патентных заявках PCT №№ WO 2016/009232 и WO 2017/005767.
Fc-мультимеры, включающие мутации в позиции 309
[0075] В международных патентах PCT №№ WO 2015/132364, WO 2015/132365, WO 2015/158867, WO 2017/036905, WO 2017/013203 и WO 2016/139365 и в опубликованных патентных заявках США №№ 2017/0081406, 2017/0088603 и 2017/0029505 описано мульти-Fc терапевтическое средство, состоящее из единиц мономера полипептида, причём каждый мономер полипептида включает Fc-домен. Каждый из указанных Fc-доменов состоит из двух Fc-областей тяжёлой цепи, каждая из которых включает цистеин в позиции 309 (WO 2015/132365 и WO 2016/139365) или аминокислоту, отличную от цистеина, в позиции 309 (WO 2015/132364, WO 2017/036905 и WO 2017/013203). Таким образом, «мономеры» полипептида, описанные в международных патентах PCT №№ WO 2015/132364, WO 2015/132365, WO 2015/158867, WO 2017/036905, WO 2017/013203 и WO 2016/139365 и в опубликованных патентных заявках США №№ 2017/0081406, 2017/0088603 и 2017/0029505, фактически являются димерными белками (например, мономеры Fc-домена, в контексте настоящего изобретения). Каждая Fc-область тяжелой цепи соединена с С-концом хвостовой области, что вызывает объединение мономера в мультимер. Таким образом, «хвостовая область», в контексте указанного изобретения, является функционально эквивалентной доменам мультимеризации, описанным в настоящем изобретении. В предпочтительном варианте исполнения указанного изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство является тримерным или гексамерным мультимером. Указанное соединение по существу включает единицы страдомера и домены мультимеризации, которые собираются с образованием кластерного страдомера, как описано выше.
Fc-мультимеры, включающие последовательно соединённые мономеры Fc-домена
[0076] В опубликованной патентной заявке США № 2010/0143353 описано мульти-Fc терапевтическое средство, включающее по меньшей мере первый и второй Fc-фрагменты IgG, по меньшей мере один из первых IgG фрагментов IgG, включающий по меньшей мере один CH2-домен и шарнирную область, причём первый и второй Fc-фрагменты IgG связаны через шарнир с образованием цепи. В некоторых вариантах осуществления изобретения опубликованной патентной заявки США № 2010/0143353, по существу похожие цепи соединяются с образованием димера. В других вариантах осуществления изобретения опубликованной патентной заявки США № 2010/0143353, несколько по существу похожих цепей собираются с образованием мультимера. Согласно настоящему изобретению, Fc-фрагмент включает Fc-домен. Таким образом, раскрытые в опубликованной патентной заявке США № 2010/0143353 терапевтические средства включают мультмеризующее Fc терапевтическое средство, способное связываться с по меньшей мере двумя Fc-рецепторами и собираться в мультимер.
Способы лечения
[0077] Способы настоящего изобретения также обеспечивают способы лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний, включающие введение по меньшей мере одной кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства пациенту, причём у пациента был диагностирован неадекватный ответ на ранее введённое мульти-Fc терапевтическое средство.
[0078] В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к уровням в крови iC3b, меньшим, чем заданное пороговое значение после введения ранее введённой дозы мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к изменению уровня iC3b в крови на менее чем около 10% от базового уровня после введения ранее введённой дозы мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к изменению уровня iC3b в крови на менее чем около 25% или на менее чем около 50% от базового уровня, после введения ранее введённой дозы мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к изменению уровня в крови iC3b, которое остаётся в нормальном диапазоне величин, принятом для указанного пациента и/или группы пациентов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к повышению уровня iC3b в крови на менее чем 10%, на менее чем 25% или на менее чем 50% выше базового уровня после введения ранее введённой дозы мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «неадекватный ответ» на мульти-Fc терапевтическое средство относится к изменению уровня в крови iC3b, которое остаётся около 150% от нормального диапазона величин, принятого для группы пациентов.
[0079] В некоторых вариантах осуществления изобретения, известно, что ранее введённая доза мульти-Fc терапевтического средства не способна привести к адекватному ответу на мульти-Fc терапевтическое средств, введённое субъекту. В таких вариантах осуществления изобретения, введение мульти-Fc терапевтического средства в дозе, неспособной вызвать адекватный ответ, может быть осуществлено, чтобы оценить любые потенциальные побочные эффекты мульти-Fc терапевтического средства, такие как аллергическая реакция или другая нарушенная иммунная реакция, обычно не наблюдаемая у субъектов. Затем могут быть последовательно введены повышенные дозы мульти-Fc терапевтического средства.
[0080] Пациенты с диагностированным неадекватным ответом на ранее введённую дозу мульти-Fc терапевтического средства могут получить лечение «кумулятивной повышенной дозой», причём «кумулятивная повышенная доза» состоит либо из «повышенной дозы», либо из повышенной дозы и одной или более «нарастающей дозы». В контексте настоящего изобретения, «ранее введённая доза» относится к дозе мульти-Fc терапевтического средства, которая была введена пациенту в предшествующий период дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, ранее введённая доза относится к кумулятивная повышенной дозе. В некоторых вариантах осуществления изобретения, ранее введённая доза относится к начальной дозе. В контексте настоящего изобретения, «начальная доза» относится к наименьшей общеупотребительной дозе указанного мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, начальная доза может быть наименьшей коммерчески одобренной дозой мульти-Fc терапевтического средства для данного заболевания или расстройства. В контексте настоящего изобретения, «наименьшая коммерчески одобренная доза» относится к наименьшей дозе данного мульти-Fc терапевтического средства, одобренной для лечения указанного заболевания или расстройства. Однако, стандарт медицинской помощи для данного заболевания или расстройства может предписать начальное лечение с меньшей дозой мульти-Fc терапевтического средства, чем наименьшая коммерчески одобренная доза. В таких вариантах осуществления изобретения, начальная доза может составлять 90%, 80%, 70%, 60%, 50% или менее от наименьшей коммерчески одобренной дозы или дозы стандарта медицинской помощи, if lower. В ином случае, стандарт медицинской помощи для данного заболевания или расстройства может предписать начальное лечение с большей дозой мульти-Fc терапевтического средства. В таких вариантах осуществления изобретения, начальная доза может составлять 105%, 110%, 125%, 150%, 200%, 250% или более от наименьшей коммерчески одобренная дозы. Например, наименьшая коммерчески одобренная доза ВВИГ может составлять 600 мкг/кг для лечения иммунодефицитных заболеваний, но лечение аутоиммунного состояния, такого как ХВДП, по стандарту медицинской помощи, может быть 2000 мкг/кг. В случае, если наименьшая коммерчески одобренная доза не задана, начальная доза может также относиться к начальной дозе, рекомендованной изготовителем и/или врачом, или начальной дозе, впоследствии описанной в научной литературе. Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, начальная доза является первой дозой, фактически введённой пациенту, получающему лечение мульти-Fc терапевтическим средством или ВВИГ.
[0081] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, обеспечен способ лечения воспалительного заболевания у пациента, у которого был диагностирован неадекватный ответ на ранее введённую дозу мульти-Fc терапевтического средства, указанный способ включает введение пациенту одной или более повышенных доз. В контексте настоящего изобретения, «повышенная доза» является дозой мульти-Fc терапевтического средства, величина которой либо составляет больше, чем величина ранее введённой дозы мульти-Fc терапевтического средства, или которая вводится более часто, чем предполагается. Такая одна или более повышенная доза в целом является «кумулятивной повышенной дозой» мульти-Fc терапевтического средства. В контексте настоящего изобретения, «кумулятивная повышенная доза» является дозой мульти-Fc терапевтического средства, которая вводится в течение периода дозирования и которая является кумулятивно большей, чем ранее введённая доза мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза составляет около 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 150%, 200% или более от ранее введённой дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза включает повышенную дозу, которая вводится в течение периода дозирования, причём указанная повышенная доза составляет больше, чем доза мульти-Fc терапевтического средства, введённая в течение предшествующего периода дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, повышенная доза составляет около 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 150% или 200%, или более от дозы мульти-Fc терапевтического средства, введённой в течение предшествующего периода дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза включает повышенную дозу, имеющую то же количество, что доза мульти-Fc терапевтического средства, введённой в течение предшествующего периода дозирования, и введённую чаще, чем доза мульти-Fc терапевтического средства, введённая в течение предшествующего периода дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, повышенную дозу вводят по меньшей мере один раз более, чем ранее введённая доза мульти-Fc терапевтического средства, введённая в течение предшествующего периода дозирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения, повышенную дозу вводят по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или более раз, чем ранее введённая доза мульти-Fc терапевтического средства, введённая в течение предшествующего периода дозирования.
[0082] В любой момент периода дозирования можно измерить уровень iC3b в крови и соответственно скорректировать дозу мульти-Fc терапевтического средства, вводимую в течение указанного периода дозирования. В таких вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза может включать повышенную дозу, вводимую во время части периода дозирования, и «нарастающую дозу», вводимую в оставшийся период дозирования. В контексте настоящего изобретения, «нарастающая доза» является дозой мульти-Fc терапевтического средства, количество которой составляет больше количества повышенной дозы, и которую вводят в тот же период дозирования, что и повышенную дозу. В некоторых вариантах осуществления изобретения, нарастающая доза является увеличенной дозой, вводимой в течение одного периода дозирования, осуществляемого после повышенной дозы, и составляющей больше, чем повышенная доза. В некоторых вариантах осуществления изобретения, нарастающая доза является дозой, вводимой в течение одного периода дозирования и более часто, чем предполагается из режима дозирования для повышенной дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, нарастающая доза составляет около 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 150% или 200%, или более от повышенной дозы, введённой в течение того же периода дозирования. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, кумулятивная повышенная доза может включать повышенную дозу и одну или более нарастающую дозу, вводимые в течение того же периода дозирования. Приводимые в качестве примера диаграммы схем дозирования показаны на Фиг. 8.
[0083] В качестве дополнительного примера, рекомендованная начальная доза для подкожного введения Gammagard Liquid™ (инфузионный раствор иммуноглобулина человека от фирмы Baxalta) взрослому мужчине составляет 400 мг/кг каждые четыре недели. В указанном примере, начальная доза Gammagard™ будет составлять 400 мг/кг. Если способами настоящего изобретения у пациента устанавливают неадекватный ответ на начальную дозу мульти-Fc терапевтического средства, то вводится кумулятивная повышенная доза. В указанном поясняющем примере, кумулятивная повышенная доза может включать повышенную дозу, например, 500 мг/кг, вводимую в течение периода дозирования. В альтернативном варианте, кумулятивная повышенная доза может включать повышенную дозу, причём количество повышенной дозы равняется количеству начальной дозы (например, 400 мг/мл), и она вводится чаще, чем начальная доза (например, по меньшей мере один раз больше, чем начальная доза). В альтернативном варианте, кумулятивная повышенная доза может включать любую из указанных повышенных доз, вводимых во время части периода дозирования, и нарастающую дозу (например, 550 мг/кг), вводимую в оставшийся период дозирования.
[0084] В контексте настоящего изобретения, «период дозирования» относится к периоду времени, в течение которого вводится мульти-Fc терапевтическое средство. Период дозирования может составлять по меньшей мере 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 1 неделю, 1 месяц, 6 месяцев или дольше. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство может вводится по меньшей мере один, два, три, четыре, пять, шесть, семь или более раз в течение периода дозирования. В качестве поясняющего примера, период дозирования может составлять 6 месяцев, причём мульти-Fc терапевтическое средство вводится каждый месяц, в общей сложности шесть раз. Способы, описанные в настоящем изобретении, могут включать введение мульти-Fc терапевтического средства в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 или более периодов дозирования.
[0085] Определённые в настоящем изобретении дозы мульти-Fc терапевтических средств (например, повышенные дозы и нарастающие дозы) могут комбинироваться различным образом в течение нескольких периодов дозирования для применения в соответствии со способами, описанными в настоящем изобретении. Взаимосвязи между повышенными дозами, нарастающими дозами, кумулятивными повышенными дозами и периодами дозирования показаны на Фиг. 8. Варианты осуществления изобретения показаны на Фиг. 8 только с целью иллюстрации и ни в коем случае не ограничивают способы, описанные в настоящем изобретении.
[0086] В некоторых вариантах осуществления изобретения, неадекватный ответ на мульти-Fc терапевтическое средство определяется измерением уровня циркулирующего iC3b в крови или суррогатного маркера iC3b у пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b ниже заданного порогового значения является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В таких вариантах осуществления изобретения, может быть введена повышенная доза мульти-Fc терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b выше заданного порогового значения является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В таких вариантах осуществления изобретения, повышенная доза мульти-Fc терапевтического средства может и не быть введена. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b составляет от около 25 мкг/мл до около 300 мкг/мл выше базового уровня анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b составляет от около 50 мкг/мл до около 200 мкг/мл выше базового уровня анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b составляет от около 75 мкг/мл до около 125 мкг/мл выше базового уровня анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b составляет около 100 мкг/мл выше базового уровня анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня iC3b на менее чем 10% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня iC3b на менее чем 10% от ранее определённого уровня iC3b пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня iC3b на менее чем 20%, менее чем 25%, менее чем 30%, менее чем 35%, менее чем 40%, менее чем 50% является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство.
[0087] В дополнительных вариантах осуществления изобретения, изменение в уровне суррогатного маркера iC3b (например, C4a, C4a desArg, C3a, C3a desArg, C3f, C3c, C3dg, C3d и/или C3g) на менее чем 10% от базового уровня пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня суррогатного маркера iC3b на менее чем 10% от ранее определённого уровня iC3b пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, изменение уровня суррогатного маркера iC3b на менее чем 20%, менее чем 25%, менее чем 30%, менее чем 35%, менее чем 40%, менее чем 50% является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, повышение уровня суррогатного маркера iC3b (например, C4a, C4a desArg, C3a, C3a desArg, C3f, C3c, C3dg, C3d и/или C3g) на менее чем 10% от базового уровня пациента или от ранее определённого уровня iC3b пациента является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень суррогатного маркера iC3b меньший, чем заданного пороговое значение является показателем неадекватного ответа на мульти-Fc терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет от около 5 нг/мл до около 30 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение для суррогатного маркера iC3b составляет от около 10 нг/мл до около 20 нг/мл.
[0088] Термины «определяя», «измеряя» и «количественно определяя», в контексте настоящего изобретения применяемые к уровню iC3b, относятся к оценке уровня iC3b в крови анализом iC3b в определённый момент времени. Момент времени, в который производится оценка образования iC3b может быть до дозирования, менее чем 5 минут, 15 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 12 часа, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 7 дней, 14 дней, 1 месяц или более после применения мульти-Fc терапевтического средства на подходящем пациенте. Как описано выше, в некоторых вариантах осуществления изобретения, уровни продуктов расщепления комплемента выше в каскаде реакций (например, C3a, C3a desArg, C4a и/или C4a desArg) или уровень продуктов расщепления и/или деградации iC3b (например, iC3b1, iC3b2, C3f, C3dg, C3d и/или C3g) используются в качестве суррогатов для уровня iC3b ниже в каскаде реакций. Способы для определения уровня циркулирующего iC3b в крови пациента, описанные в настоящем изобретении, в равной степени подходят для определения уровней iC3b1, iC3b2, C4a, C4a desArg, C3a, C3a desArg, C3f, C3dg, C3d и/или C3g, хотя специалисту в данной области будет понятно, что оптимальное время проведения указанных измерений может отличаться от такого времени для iC3b. Уровни iC3b1, iC3b2, C4a, C4a desArg, C3a, C3a desArg, C3f, C3dg, C3d и/или C3g могут быть определены методами ELISA (иммуноферментный анализ, ИФА), вестерн-блот и/или проточная цитометрия, или другими похожими методами. Термины «уровень в крови iC3b» и «уровень iC3b» используются в настоящем изобретении взаимозаменяемо и относятся к уровню циркулирующего iC3b в крови у пациента или субъекта в данное время.
[0089] Анализы для определения ингибирования CDC известны из уровня техники и могут быть выполнены различными путями, используя линии раковых клеток, свежие эритроциты или другие материалы. Для указанных анализов обычно требуются антитела против целевого антигена и комплемент C1q, чтобы активировать пути активации комплемента, ведущие к CDC клетки-мишени указанного анализа.
+
+
+
[0090] В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень циркулирующего iC3b в крови определяется иммуноанализом, таким как иммуноферментный анализ (ELISA, ИФА) или вестерн-блот. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень циркулирующего iC3b в крови определяется с помощью методов иммуноанализа, описанных в патенте США № 9164088. Указанные анализы способны определять растворимый iC3b. Таким образом, заданное пороговое значение iC3b может быть основано на концентрации iC3b, определённой в образце крови. В некоторых вариантах осуществления изобретения, iC3b может быть связан с поверхностью циркулирующей клетки. В таких вариантах осуществления изобретения, уровень циркулирующего iC3b в крови может быть определён проточной цитометрией. В таких вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение циркулирующего iC3b может быть представлено как фракция или процентная доля клеток, являющихся iC3b и/или фракция или процентная доля клеток с данной средней интенсивностью флуоресценции (СИФ) iC3b. В некоторых вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b составляет около 25% от нейтрофилов и моноцитов, которые являются iC3b. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, заданное пороговое значение iC3b является СИФ iC3b и составляет около 125% от базового уровня СИФ iC3b. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется иммуноанализом. Способы для определения растворимого и клеточно-связанного iC3b можно совместить, чтобы получить заданное пороговое значение (например, концентрация iC3b меньше, чем 0,02 мкг/мл и/или процент iC3b моноцитов и нейтрофилов меньше, чем 25% и/или СИФ iC3b на моноцитах и нейтрофилах меньше, чем 125% базового уровня). В дополнительных вариантах осуществления изобретения, иммуноанализ является анализом ELISA или вестерн-блот. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень iC3b определяется проточной цитометрией.
[0091] В настоящем изобретении обеспечиваются дополнительные способы определения эффективной дозы мульти-Fc терапевтического средства, включающие введение начальной дозы мульти-Fc терапевтического средства субъекту, нуждающемуся в указанном терапевтическом средстве, измерение уровня циркулирующего iC3b, определение того, что субъект нуждается в кумулятивной повышенной дозе мульти-Fc терапевтического средства, в случае, если уровень циркулирующего iC3b составляет менее заданного порогового значения или если уровень циркулирующего iC3b в крови имеет неадекватное изменение от базового уровня до введения, последующее введение начальной дозы мульти-Fc терапевтического средства и, если необходимо, введение кумулятивной повышенной дозы мульти-Fc терапевтического средства. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, процесс определения уровня циркулирующего iC3b повторяется после введения кумулятивной повышенной дозы. Если уровень циркулирующего iC3b остаётся ниже заданного порогового значения после введения кумулятивной повышенной дозы в течение первого периода дозирования или если уровень циркулирующего iC3b в крови имеет неадекватное изменение от базового уровня до введения, вводится вторая кумулятивная повышенная доза в течение второго периода дозирования. В таких вариантах осуществления изобретения, вторая кумулятивная повышенная доза является большей дозой, чем первая кумулятивная повышенная доза. В таких вариантах осуществления изобретения, вторая кумулятивная повышенная доза может занимать меньшее, большее или то же количество времени, что и первый период дозирования. Также в дополнительных вариантах осуществления изобретения, процесс введения нарастающих больших доз мульти-Fc терапевтического средства в течение идущих друг за другом периодов дозирования повторяется до достижения заданного порогового значения iC3b, или пока уровень циркулирующего iC3b в крови не станет адекватно изменяться от значения базового уровня до введения.
[0092] Новые техники для измерения iC3b и/или изменение или улучшение в чувствительности, специфичности, диагностическая ценность положительного результата и/или диагностическая ценность отрицательного результата существующей техники или анализа по существу не меняют настоящее изобретение. Новая и/или улучшенная техника для оценки iC3b может быть использована в способах, описанных в настоящем изобретении.
[0093] Специалисту в данной области техники будет понятно, что акт введения пациенту мульти-Fc терапевтического средства и акт измерения уровня циркулирующего iC3b не должны выполняться одним лицом. Так, в некоторых вариантах осуществления изобретения, акт введения пациенту мульти-Fc терапевтического средства и акт измерения уровня циркулирующего iC3b выполняются разными лицами. В некоторых вариантах осуществления изобретения, акт введения пациенту мульти-Fc терапевтического средства и акт измерения уровня циркулирующего iC3b выполняются одним лицом. Также в некоторых вариантах осуществления изобретения, акт введения пациенту мульти-Fc терапевтического средства и акт измерения уровня циркулирующего iC3b выполняются в разных географических местоположениях (например, мульти-Fc терапевтическое средство вводится врачом в клинических условиях, и кровь пациента отбирается и посылается в удалённую лабораторию для определения уровня iC3b). В некоторых вариантах осуществления изобретения, оба акта выполняются в одном местоположении и/или под руководством одного лица или группы людей.
[0094] В контексте настоящего изобретения, «эффективная доза» или «терапевтически эффективное количество» относятся к количеству мульти-Fc терапевтического средства, которое приводит к уровню iC3b выше заданного порогового значения и которое приводит к улучшению или устранению симптомов заболевания или состояния. Улучшение является любым улучшением или устранением заболевания или состояния, или симптома заболевания или состояния. В других вариантах осуществления изобретения, улучшение является обозримым или измеряемым улучшением, или может быть улучшением общего самочувствия субъекта. Таким образом, специалисту в данной области техники будет понятно, что лечение может улучшать состояние заболевания, но может не быть полным излечением заболевания. Например, улучшения у субъекта могут включать одно или более из следующего: уменьшенное воспаление, пониженные лабораторные маркеры воспаления, такие как C-реактивный белок; пониженный аутоиммунитет, о чём свидетельствует одно или более улучшение среди аутоиммунных маркеров, таких как аутоантитела, или количества тромбоцитов, количества лейкоцитов или эритроцитов, уменьшение сыпи или пурпуры, уменьшение слабости, онемения или покалывания, увеличенный уровень глюкозы у пациентов с гипергликемией, уменьшенные боли в суставах, воспаление, отёк или дегенерация, уменьшение судорог и частоты и объёма диареи, уменьшенная ангина, уменьшенное воспаление тканей или уменьшение частоты конвульсий; уменьшение массы раковой опухоли, увеличенное время развития опухоли, уменьшенные онкологические боли, увеличенная выживаемость или улучшение качества жизни; или задержка в развитии или развитие остеопороза.
[0095] В контексте настоящего изобретения, «профилактика» может означать полное предотвращение симптомов заболевания, задержка в возникновении симптомов заболевания или ослабление тяжести развивающихся впоследствии симптомов заболевания.
[0096] В контексте настоящего изобретения, термин «субъект» или «пациент» используется для обозначения любого субъекта-млекопитающего, в который вводится мульти-Fc терапевтическое средство в соответствии со способами, описанными в настоящем изобретении. В конкретном варианте осуществления изобретения, способы настоящего изобретения используются для лечения человека. Способы настоящего изобретения могут быть также использованы для лечения животных-приматов (например, обезьян, бабуинов и шимпанзе), мышей, крыс, крупного рогатого скота, лошадей, кошек, собак, свиней, кроликов, коз, оленей, овец, хорьков, песчанок, морских свинок, хомяков, летучих мышей, птиц (например, куриц, индюшек и уток), рыб и рептилий. В некоторых вариантах осуществления изобретения, способы настоящего изобретения используются для лечения пациента или субъекта, у которого не наблюдается недостаток фактора Н и/или фактора I. В некоторых вариантах осуществления изобретения, способы настоящего изобретения используются для лечения пациента или субъекта, у которого не наблюдаются мутации гена фактора Н и/или фактора I, которые влияют на функцию белков фактора Н и/или фактора I. В некоторых вариантах осуществления изобретения, пациенты, получающие лечение настоящего изобретения, не страдают от гемолитико-уремического синдрома (ГУС), мембранозно-пролиферативного гломерулонефрита или возрастной макулярной дегенерации, связанных с и/или вызванных мутацией или недостатком фактора Н и/или фактора I.
[0097] Способы введения, естественно, будут изменяться в зависимости от местоположения и природы заболевания, подвергающегося лечению, и могут включать, например, внутрикожное, трансдермальное, субдермальное, назальное, внутривенное, внутримышечное, интраназальное, подкожное, внутритрахеальное, внутрибрюшное, внутриопухолевое, перфузионное введение, лаваж, непосредственную инъекцию и пероральное введение.
[0098] В одном варианте осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство вводится внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, трансдермально, ректально, с помощью подкожного имплантата или внутримышечно. В определённых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство вводится внутривенно, подкожно или внутримышечно.
[0099] Состояния здоровья, подходящие для лечения мульти-Fc терапевтическим средством, включают аллергии, рак, аутоиммунные заболевания, инфекционные заболевания, воспалительные заболевания и любые заболевания, связанные с или вызываемые активацией комплемента или комплементзависимыми эффекторными функциями, включая повышенную или необоснованную активность комплемента. Такие состояния здоровья включают состояния здоровья, которые лечатся в настоящее время или лечились раньше лекарствами, связывающими комплемент, такими как экулизумаб. Экулизумаб связывается с белком комплемента С5 (белок комплемента, который является продуктом C1 и C1q ниже в каскаде реакций классического пути комплемента), ингибируя его расщепление и последующий комплементзависимый лизис клетки. Мульти-Fc терапевтические средства представляют безопасную и эффективную альтернативу другим лекарствам, связывающим комплемент, известным из уровня техники. Например, в некоторых вариантах осуществления изобретения, мульти-Fc терапевтическое средство связывает C1q, первую субъединицу комплекса C1 классического пути комплемента. Состояния здоровья, подходящие для лечения способами, описанными в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, миастению гравис, гемолитико-уремический синдром (ГУС), атипичный гемолитико-уремический синдром (аГУС), пароксизмальную ночную гемоглобинурию (ПНГ), мембранозную нефропатию, оптикомиелит, антителоопосредованное отторжение аллогенных трансплантатов, волчаночный нефрит, макулярную дегенерацию, серповидноклеточную анемию и мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит (МПГН). Дополнительные состояния здоровья, подходящие для лечения мульти-Fc терапевтическими средствами включают такие подвергающиеся в настоящее время лечению согласно обычной практике широким спектром иммуносупрессивных терапий, включая ВВИГ, или в которых ВВИГ показал клиническую полезность, - такие как аутоиммунная цитопения, хроническая воспалительная демиелинизирующейая полиневропатия, синдром Гийена-Барре, миастения гравис, аутоимунное заболевание, связанное с анти-фактором VIII, дерматомиозит, васкулит и увеит (см. F. G. van der Meche et al., N. Engl. J. Med. 326, 1123 (1992); P. Gajdos et al, Lancet, 323 (1984); Y. Sultan et al., Lancet ii, 765 (1984); M. C. Dalakas et al., N. Engl. J. Med. 329, 1993 (1993); D. R. Jayne et al, Lancet 337, 1137 (1991); P. LeHoang et al., Ocul. Immunol. Inflamm. 8, 49 (2000)) и такой рак или воспалительные заболевания, при которых моноклональные антитела могут быть использованы или уже находятся в клиническом использовании. Состояния, которые могут эффективно подвергаться лечению соединениями настоящего изобретения, включают воспалительное заболевание с нарушением баланса цитокинов, аутоиммунное расстройство, вызываемое патогенными аутоантителами или аутоагрессивными T-клетками, или острая или хроническая фаза хронического рецидивирующего аутоиммунного, воспалительного или инфекционного заболевания или процесса.
[0100] Дополнительно, лечение мульти-Fc терапевтическими средствами будет приносить пользу другим состояния здоровья, в которых воспалительный компонент опосредован комплементом, например, боковой амиотрофический склероз, болезнь Гентингтона, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инфаркт миокарда, инсульт, гепатит B, гепатит C, воспаление, ассоциированное с вирусом иммунодефицита человека, адренолейкодистрофия и эпилептические расстройства, особенно считающиеся связанными с поствирусным энцефалитом, включая синдром Расмуссена, синдром Веста и синдром Леннокса-Гасто.
2
[0101] Было показано, что ингибирование комплемента ослабляет заболевания, опосредованные антителами (например, см. Stegall et al., American Journal of Transplantation 2011 Nov; 11(1):2405-2413). Способы настоящего изобретения также могут быть использованы для лечения заболевания или состояния, опосредованного антителами. Аутоантитела вызывают многие аутоиммунные заболевания и, возможно, играют некую роль во многих других аутоиммунных заболеваниях. Идентифицированные заболевания, вызванные антителами, для которые могут быть использованы способы настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, гломерулонефрит, обусловленный антителами к гломерулярной базальной мембране, включая синдром Гудпасчера; анти-донорские антитела (донор-специфические аллоантитела) при трансплантации паренхиматозных органов; антитела к аквапорину-4 при оптикомиелите; антитела к VGKC (потенциалуправляемый калиевый канал) при нейромиотонии, лимбическом энцефалите и синдроме Морвана; антитела к никотиновому ацетилхолиновому рецептору и антитела к MuSK при миастении гравис; антитела к VGCC (потенциалуправляемый кальциевый канал) при миастеническом синдроме Ламберта-Итона; антитела к AMPAR и GABA(B)R при лимбическом энцефалите, часто ассоциированным с опухолями; антитела к GlyR при синдроме мышечной скованности или гиперэкплексии; антитела к фосфолипидам, кардиолипину и β гликопротеину I при рецидивных самопроизвольных выкидышах, синдроме Хьюза и системной красной волчанке; антитела к глутаматдекарбоксилазе при синдроме мышечной скованности, аутоиммунной церебральной атаксии или лимбическом энцефалите; антитела к NMDA рецептору при недавно описанном синдроме, включающем лимбические и субкортикальные характеристики с выраженными расстройствами движения, распространённом у подростков и детей, часто ассоциированным с тератомой яичников, но может быть и не паранеопластическим; антитела к двухцепочечной ДНК, одноцепочечной ДНК, РНК, SM и C1q при системной красной волчанке; антинуклеарные и антинуклеолярные антитела при болезнях соединительной ткани, включая склеродермию, синдроме Шегрена и полимиозите, включая anti-Ro, anti-La, anti-Scl 70, anti-Jo-1; антитела к ревматоидному фактору при ревматоидном артрите; антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B при узелковом периартериите; антитела к центромере при CREST-синдроме; антитела к стрептококку при эндокардите или при риске эндокардита; антитела к тиреоглобулину, тиреоидной пероксидазе и рецепторам TSH при тиреоидите Хашимото; антитела к U1 RNP при смешанном заболевании соединительной ткани и системной красной волчанке; и антитела к десмоглеину и кератиноцитам при пузырчатке.
[0102] Мульти-Fc терапевтические средства могут быть использованы для лечения состояний, включающих, но не ограниченных ими: хроническая сердечная недостаточность (ХСН), васкулит, розацеа, акне, экзема, миокардит и другие заболевания миокарда, системная красная волчанка, диабет, спондилопатии, синовиальные фибробласты и строма костного мозга; потеря костной массы; болезнь Педжета, остеокластома; множественная миелома; рак молочной железы; дисфункциональная остеопения; неправильное питание, пародонтит, болезнь Гоше, гистиоцитоз из клеток Лангерганса, повреждение спинного мозга, острый инфекционный артрит, размягчение костей, синдром Иценко-Кушинга, моностотическая фиброзная дисплазия, полиоссальная фиброзная остеодисплазия, периодонтальная реконструкция и переломы кости; саркоидоз; остеолитический рак костей, рак лёгких, рак почек и рак прямой кишки; костный метастаз, лечение боли в костях и гуморальная злокачественная гиперкальциемия, анкилозирующий спондилоартрит и другие спондилоартрозы; отторжение при трансплантации, вирусные инфекции, опухоли кроветворной системы и относящиеся к новообразованию состояния, например, лимфома Ходжкина, неходжкинские лимфомы (лимфома Бёркитта, лимфома из малых лимфоцитов/хронический лимфоцитарный лейкоз, фунгоидный микоз, мантийноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, диффузная В-крупноклеточная лимфома, лимфома маргинальной зоны, лейкоз ворсистых клеток и лимфоплазмоцитарный лейкоз), опухоли клеток-предшественников лимфоцитов, включая острый лимфобластный лейкоз B клеток/острую лимфобластную лимфому B клеток и острый лимфобластный лейкоз Т клеток/острую лимфобластную лимфому Т клеток, тимома, опухоли зрелых Т и NK клеток, включая периферийный Т-клеточный лейкоз, Т-клеточный лейкоз взрослых/Т-клеточная лимфома и лейкоз из больших зернистых лимфоцитов, лангергансоклеточный гистиоцитоз, миелоидные неоплазии, такие как острый миелобластный лейкоз (ОМЛ), включая ОМЛ с созреванием, ОМЛ без дифференциации, острый промиелоцитарный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз и острый моноцитарный лейкоз, миелодиспластические синдромы и хронические миелопролиферативные нарушения, включая хронический миелолейкоз, опухоли центральной нервной системы, например, опухоли мозга (глиома, нейробластома, астроцитома, медуллобластома, эпендимома и ретинобластома), солидные опухоли (рак носоглотки, базалиома, рак поджелудочной железы, рак желчных протоков, саркома Капоши, рак яичка, рак матки, рак влагалища, рак шейки матки, рак яичников, первичный рак печени или рак эндометрия, опухоли сосудистой системы (ангиосаркома и гемангиоперицитома) или другие виды рака.
[0103] В настоящем изобретении «рак» относится к физиологическим состояниям млекопитающих или описывает их, которые обычно характеризуются нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими: карцинома, лимфома, бластома, саркома (включая липосаркому, остеогенную саркому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, лейомиосаркому, хордому, лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, рабдомиосаркому, фибросаркому, миксосаркому и хондросаркому), нейроэндокринные опухоли, мезотелиома, синовиома, шваннома, менингиома, аденокарцинома, меланома и лейкоз или лимфолейкозы. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак лёгких, включая мелкоклеточный рак лёгкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному лёгкого и плоскоклеточную карциному лёгкого, мелкоклеточная карцинома лёгкого, рак брюшной полости, печеночноклеточный рак, рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак толстой и прямой кишок, карциному эндометрия, или маточную карциному, карциному слюнной железы, рак почки, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, гепатокарциному, анальную карциному, карциному полового члена, рак яичка, рак пищевода, опухоли жёлчных протоков, опухоль Юинга, базальноклеточную карциному, аденокарциному, карциному потовых желёз, карциному сальных желёз, папиллярную карциному, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарциному, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, почечно-клеточную карциному, гепатому, карцинома жёлчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, опухоль яичка, лёгочную карциному, карциному мочевого пузыря, эпителиому, глиому, астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, гемангиобластому, акустическую шванному, олигодендроглиому, менингиому, меланому, нейробластому, ретинобластому, лейкоз, лимфому, множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрёма, миелодиспластическое заболевание, болезнь тяжёлых цепей, нейроэндокринные опухоли, шванномы и другие карциномы, а также рак головы и шеи.
[0104] Мульти-Fc терапевтические средства могут быть использованы для лечения аутоиммунных заболеваний. Термин «аутоиммунное заболевание», используемый в настоящем изобретении, относится к многообразной группе, состоящей из более чем 80 заболеваний и состояний. Фундаментальная проблема всех таких указанных заболеваний и состояний заключается в том, что иммунная система организма атакует сам организм. Аутоиммунные заболевания затрагивают все главные системы организма, включая соединительные ткани, нервы, мышцы, эндокринную систему, кожу, кровь и респираторную и желудочно-кишечную системы. Аутоиммунные заболевания включают, например, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, множественный склероз, миастению гравис и диабет первого типа.
[0105] Заболевание или состояние, поддающееся лечению, используя композиции и способы настоящего изобретения, может быть гематоиммунологическим процессом, включая, но не ограничиваясь ими: серповидноклеточную анемию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуры, аллоиммунную/аутоиммунную тромбоцитопению, приобретённую иммунную тромбоцитопению, аутоиммунную нейтропению, аутоиммунную гемолитическую анемию, ассоциированную с парвовирусом B19 красноклеточную аплазию, приобретённый аутоиммунитет к фактору VIII, приобретённую болезнь фон Виллебранда, множественную миелому и моноклональную гаммапатию неясной значимости, сепсис, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, анемию Даймонда-Блэкфана, гемолитическую болезнь новорождённых, иммуно-опосредованную нейтропению, рефрактерность к переливанию тромбоцитов, неонатальную посттрансфузионную пурпуру, гемолитико-уремический синдром, системный васкулит, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру или синдром Фишера-Эванса.
[0106] Указанное заболевание или состояние также может являться нейроиммунологическим процессом, включая, но не ограничиваясь ими: синдром Гийена-Барре, хроническую воспалительную демиелинизирующейую полиневропатию, парапротеинемическую IgG демиелинизирующейую полиневропатию, синдром Итона-Ламберта, миастению гравис, мультифокальную моторную невропатию, синдром нижнего мотонейрона, ассоциированный с антителами к GM1, демиелинизацию, множественный склероз и неврит зрительного нерва, синдром мышечной скованности, паранеопластическую мозжечковую дегенерацию с антителами к Yo, паранеопластический энцефаломиелит, сенсорную невропатию с антителами к Hu, эпилепсию, энцефалит, миелит, миелопатию, в особенности ассоциированную с лимфотропным Т-клеточным вирусом человека, аутоиммунную диабетическую невропатию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона или острую идиопатическую вегетативно-дистоническую невропатию.
[0107] Указанное заболевание или состояние также может являться воспалением или аутоиммунитетом, ассоциированным с потерей слуха или зрения. Например, заболевание или состояние может быть потерей слуха, связанной с аутоиммунным заболеванием, такой как потеря слуха от воздействия шума или возрастная потеря слуха, или может быть связано с имплантацией устройств, таких как слуховой аппарат (например, кохлеарный имплантат). В некоторых вариантах осуществления изобретения, композиции, обеспечиваемые настоящим изобретением, могут вводиться субъекту до имплантации, одновременно с имплантацией или после имплантации устройства.
[0108] Указанное заболевание или состояние также может являться процессом ревматического заболевания, включая, но не ограничиваясь ими: болезнь Кавасаки, ревматоидный артрит, синдром Фелти, АНЦА-ассоциированный васкулит, спонтанный полимиозит, дерматомиозит, антифосфолипидные синдромы, рецидивные самопроизвольные выкидыши, системную красную волчанку, ювенильный идиопатический артрит, болезнь Рейно, CREST-синдром или увеит.
[0109] Указанное заболевание или состояние также может являться процессом дерматоиммуннологического заболевания, включая, но не ограничиваясь ими: токсический эпидермальный некролиз, гангрену, гранулёму, аутоиммунные пузырчатки, включая обыкновенную пузырчатку, буллёзный пемфигоид, листовидную пузырчатку, витилиго, синдром стрептококкового токсического шока, склеродермию, системную склеродермию, включая диффузную и лимитированную накожную системную склеродермию, или атопический дерматит (в особенности стероидозависимый).
[0110] Указанное заболевание или состояние также может являться процессом скелетно-мышечного иммуннологического заболевания, включая, но не ограничиваясь ими: миозит с включениями, некротизирующий фасцит, воспалительные миопатии, миозит, анти-декорин (BJ антиген) миопатию, паранеопластическую некротическую миопатию, связанную с Х-хромосомой вакуолизированную миопатию, вызванный пеницилламином полимиозит, атеросклероз, заболевание коронарной артерии или кардиомиопатию.
[0111] Указанное заболевание или состояние также может являться процессом желудочно-кишечного иммуннологического заболевания, включая, но не ограничиваясь ими: пернициозную анемию, аутоиммунный хронический активный гепатит, первичный биллиарный цирроз, целиакия, герпетиформный дерматит, криптогенный цирроз печени, реактивный артрит, болезнь Крона, болезнь Уиппла, язвенный колит или склерозирующий холангит.
[0112] Указанное заболевание или состояние также может являться заболеванием «трансплантат против хозяина», антителоопосредованным отторжением трансплантата, отторжением после трансплантации костного мозга, заболеванием послеинфекционного воспаления, лимфомой, лейкозом, неоплазией, астмой, инсулинозависимым сахарным диабетом с антителами к бета-клеткам, синдромом Шёгрена, смешанным заболеванием соединительной ткани, болезней Аддисона, синдромом Фогта-Коянаги-Харада, мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом, синдромом Гудпасчера, болезнью Грейвcа, тиреоидитом Хашимото, синдромом Вегенера, микроскопическим полиартериитом, синдромом Черджа-Строса, нодозный полиартериит или полиорганной недостаточностью.
[0113] Указанное заболевание или состояние может являться антителоопосредованным заболеванием, выбранным из группы, состоящей из: болезнь Гудпасчера; отторжение трансплантации паренхиматозных органов; оптикомиелит; нейромиотония; лимбический энцефалит; синдром Морвана; миастения гравис; миастенический синдром Ламберта-Итона; вегетативная невропатия; болезнь Альцгеймера; атеросклероз; болезнь Паркинсона; синдром мышечной скованности или гиперэкплексия; рецидивный самопроизвольный выкидыш; синдром Хьюза; системная красная волчанка; аутоиммунная мозжечковая атаксия; болезни соединительной ткани, включая склеродермию, синдром Шёгрена; полимиозит; ревматоидный артрит; нодозный полиартериит; CREST-синдром; эндокардит; тиреоидит Хашимото; смешанное заболевание соединительной ткани; каналопатии; аутоиммунные педиатрические невропсихиатрические заболевания, ассоциированные со стрептококковыми инфекциями (PANDAS); клинические состояния, ассоциированные с антителами к рецептору N-метил-D-аспартата, в особенности NR1, контактин-ассоциированно-подобный белок-2, AMPAR, GluR1/GluR2, глутаматдекарбоксилаза, GlyR alpha 1a, ацетилхолиновый рецептор, VGCC P/Q-типа, VGKC, MuSK, GABA(B)R; аквапорин; и пузырница. Указанное заболевание или состояние может быть остеоартрит.
[0114] Указанное заболевание или состояние может являться опосредованным комплементом заболеванием, выбранным из группы, состоящей из: миастения гравис, гемолитико-уремический синдром (ГУС), атипичный гемолитико-уремический синдром (аГУС), пароксизмальную ночную гемоглобинурию (ПНГ), оптикомиелит, антителоопосредованное отторжение трансплантата, нефропатия, включая мембранозную нефропатию, и нефрит, включая мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит (МПГН) и волчаночный нефрит.
0
+
[0115] Указанное заболевание или состояние может являться заболеванием крови, включая анемию, такую как серповидноклеточная анемия, включая гемоглобин SS, гемоглобин SC, гемоглобин Sβ талассемию, гемоглобин Sβ талассемию, гемоглобин SD и гемоглобин SE.
[0116] Указанное заболевание или состояние может являться воспалительным расстройством, включая возрастную дегенерацию макулы, болезнь Альцгеймера, амиотрофический латеральный склероз или болезнь Паркинсона.
[0117] В контексте настоящего изобретения, «аллергия» включает все иммунные реакции, опосредованные IgE, а также такие реакции, которые имитируют реакции, опосредованные IgE. Аллергии вызываются аллергенами, включая белки, пептиды, углеводы или их комбинации, которые запускают IgE или IgE-похожий иммунный ответ. Приводимые в качестве примера аллергии включают аллергии на орехи, аллергии на пыльцу и аллергии на укусы насекомых. Приводимые в качестве примера аллергены включают урушиол в ядовитом плюще или дубе; антиген домашней пыли; компоненты пыльцы берёзы Bet v 1 и Bet v 2; антиген сельдерея 15 кДа; антиген яболка Mal d 1; Pru p3 в персике; антиген пыльца тимофеевки Phl p 1; Lol p 3, Lol p I или Lol p V в райграсе многолетнем пастбищном; Cyn d 1 в бермудской траве; аллергены клещей домашней пыли Der p1, Der p2 или Der f1; эпитопы α-глиадина и β-глиадина в глютене; фосфолипаза пчелиного яда A2; эпитомы Ara h 1, Ara h 2 и Ara h 3 в арахисе.
[0118] Настоящее изобретение дополнительно включает способы лечения заболеваний, вызванных возбудителями инфекций. Возбудители инфекций включают, но не ограничиваются ими: бактериальный, микологический, паразитический или вирусный возбудитель. Примеры таких возбудителей инфекций включают следующее: Staphylococcus, метициллин-резистентный Staphylococcus Aureus, Escherichia coli, Streptococcaceae, Neisseriaaceae, cocci, Enterobacteriaceae, Enterococcus, ванкомицин-резистентный Enterococcus, Cryptococcus, Histoplasma, Aspergillus, Pseudomonadaceae, Vibrionaceae, Campylobacter, Pasteurellaceae, Bordetella, Francisella, Brucella, Legionellaceae, Bacteroidaceae, грамотрицательные бациллы, Clostridium, Corynebacterium, Propionibacterium, грамположительные бациллы, сибирская язва, Actinomyces, Nocardia, Mycobacterium, Treponema, Borrelia, Leptospira, Mycoplasma, Ureaplasma, Rickettsia, Chlamydiae, Candida, системные микозы, оппортунистический микоз, простейшие животные организмы, нематоды, трематоды, ленточные черви, аденовирусы, вирусы герпеса (включая, например, вирус простого герпеса и вирус Эпштейна-Барра, и вирус опоясывающего герпеса), поксвирусы, паповавирусы, вирусы гепатита (включая, например, вирус гепатита B и вирус гепатита C), вирусы папилломы, ортомиксовирусы (включая, например, грипп A, грипп B и грипп C), парамиксовирусы, коронавирусы, пикорнавирусы, реовирусы, тогавирусы, флавивирусы, буньявирусы, рабдовирусы, ротавирусы, респираторносинцитиальные вирусы, вирус иммунодефицита человека и ретровирусы. Приводимые в качестве примера инфекционные заболевания включают, но не ограничиваются ими: кандидоз, кандидемия, аспергиллёз, стрептококковая пневмония, стрептококковые кожные и ротоглоточные заболевания, грам-отрицательный сепсис, туберкулёз, мононуклеоз, грипп, респираторное заболевание, вызванное респираторно-синцитиальным вирусом, малярия, шистосомоз и трипанозомоз.
[0119] Весь ссылочный материал, цитируемый в настоящем изобретении, полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Опсонизированные антителами клетки, защищённые от CDC GL-2045
+
[0120] Были проведены эксперименты для определения терапевтически эффективной дозы GL-2045 для ингибирования комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). Вкратце, линии CD20 В-клеточной лимфомы, SUDHL4 и Ramos инкубировали с антителами к CD20 (ритуксимаб, 10 мкг/мл) на льду в течение 5 минут в среде с 2% ФБС. Ритуксимаб (RTX), GL-2045, агрегированный под действием тепла ВВИГ (heat-aggregated gamma globulin, HAGG) и ВВИГ (10, 50, 100, 500, 1000 и 10000 мкг/мл) инкубировали с нормальной сывороткой человека в течение 10-15 минут при 37° С. Компоненты сыворотки/анализа добавляли к клеткам с конечной концентрацией 6%. Образцы инкубировали при 37° С в течение 45 минут. Цитотоксичность клеток SUDHL4 и Ramos измеряли методом проточной цитометрии с окрашиванием Аннексином V/7-AAD. Для обеих линий клеток измеренная максимально эффективная доза GL-2045 составляла 100 мкг/мл. Также GL-2045 обладал существенно большей активностью, чем ВВИГ при сходных дозах (Фиг. 1А и Фиг. 1В).
Пример 2. GL-2045 запускает ограниченную начальную активацию комплемента
[0121] Были проведены эксперименты для определения механизмов предохранения GL-2045 клеток от CDC. В бесклеточной системе инкубировали нормальную сыворотку человека (НСЧ) с нарастающей концентрацией GL-2045, HAGG и ВВИГ (1-10000 мкг/мл) в течение 90 минут при 37° С. Уровни продуктов расщепления комплемента C4a, C3a и C5a оценивали с помощью набора для анализа анафилатоксина человека BD Biosciences CBA (номер по каталогу 561418). В этой системе, вызванное GL-2045 значительное расщепление C4 определяли по повышению уровня C4a (Фиг. 2, левая часть), а умеренное расщепление C3 - по меньшему повышению уровня C3a (Фиг. 2, средняя часть). Также, сыворотка, обработанная GL-2045, не содержит обнаруживаемого уровня C5a (Фиг. 2, правая часть). Эти данные показали, что GL-2045 активирует начальные стадии классического пути активации комплемента, на что указывает образование C4a; обладает ограниченной способностью вызывать расщепление C3 ниже в каскаде реакций и не способен вызывать расщепление C5 при дозах, используемых в анализе. Указанные результаты показали, что GL-2045 запускает ограниченную начальную активацию комплемента и не способен вызывать активацию ниже в каскаде реакций.
Пример 3. Ограниченная активация комплемента с помощью GL-2045 является зависимой от фактора H
[0122] Основываясь на способности GL-2045 ингибировать активацию комплемента ниже в каскаде реакций, были проведены эксперименты, чтобы определить, вовлечены ли регуляторы активации комплемента, такие как фактор H, в действие GL-2045. Фактор H является важным регулятором как альтернативного, так и классического пути активации комплемента. Обеднённую фактором H сыворотку инкубировали с GL-2045, HAGG и ВВИГ в разных концентрациях (0,01-10000 мкг/мл) и измеряли образование C4a, C3a и C5a, как индикатора активации комплемента выше в каскаде реакций (C3a, C4a) и ниже в каскаде реакций (C5a). В обеднённой фактором H сыворотке не наблюдались какие-либо значительные уровни C4a при любых концентрациях GL-2045, HAGG или ВВИГ, что означает, что фактор H может играть ранее незафиксированную роль в инициации активации классического пути комплемента (Фиг. 3, левая часть). Неожиданным образом, и в противоположность нормальной сыворотке человека, в обеднённой фактором H сыворотке как GL-2045, так и ВВИГ вызывали образование значительных уровней как C3a, так и C5a в отсутствие фактора H (Фиг. 3, средняя и правая часть). Восстановление состава обеднённой фактором H сыворотки с помощью фактора H вызывало зависимое от концентрации уменьшение уровней C3a и C5a после воздействия 100 мкг/мл GL-2045 и 100 мкг/мл ВВИГ (Фиг. 4). Указанные данные показывает, что фактор H играет важную роль в содействии способности мульти-Fc терапевтических средств ингибировать активацию комплемента ниже в каскаде реакций. Отсутствие образования C5a при воздействии мульти-Fc терапевтического средства в присутствии достаточного количества фактора H означает, что C3b не включён ни в классическую, ни в альтернативную C5-конвертазу, а вместо этого деградирует в iC3b.
Пример 4. GL-2045 содействует функции фактора H и фактора I и увеличивает образование iC3b
[0123] Были проведены эксперименты для определения и дальнейшего объяснения взаимодействия между GL-2045, фактором H и фактором I. Альтернативную форму C3-конвертазы получали инкубацией C3b, фактора D, фактора B и C3 в присутствии GL-2045, HAGG или ВВИГ с фактором H (Фиг. 5, чёрные столбцы) и без фактора H (Фиг. 5, белые столбцы). Как и предполагалось, фактор H ингибирует действие альтернативной C3-конвертазы, что показано понижением уровня C3a. Неожиданным образом, добавление GL-2045 зависимым от концентрации образом усилило ингибиторную функцию фактора H, что показано зависимым от дозы понижением уровня C3a (Фиг. 5). Так как фактор H является кофактором фактора I, аналогичная система была использована для определения взаимодействия между фактором H, фактором I и GL-2045. Образование C3a было измерено в присутствии установленной субоптимальной концентрации фактора H (1 мкг/мл) в присутствии фактора I с нарастающей концентрацией (от 1 до 25 мкг/мл). GL-2045 усиливает способность фактора H и фактора I зависимым от концентрации образом ингибировать альтернативную форму C3-конвертазы (Фиг. 6A, *p < 0.05, ** p < 0.01). Таким образом, GL-2045 способен ингибировать активацию комплемента ниже в каскаде реакций и усиливать функции фактора H и фактора I, даже при субоптимальной концентрации фактора H.
[0124] Также, добавление мульти-Fc терапевтических средств GL-2045, G994, G998 и G1033 в каждом случае приводило к значительному уровню iC3b (Фиг. 6В и 6С). Уровень iC3b, вызванный мульти-Fc терапевтическими средствами демонстрирует несколько важных пунктов. Во-первых, хотя GL-2045 и ВВИГ и были способны вызывать повышение уровня iC3b, GL-2045 вызывал более высокий общий уровень iC3b по сравнению с тем же ВВИГ (~250 мкг/мл в сравнении с ~40 мкг/мл, относительно), что предполагает, что GL-2045 является более активным, чем ВВИГ в образовании уровня iC3b выше терапевтического порога.
[0125] Во-вторых, в отсутствие GL-2045, G994, G998 или G1033 не наблюдалось активации каскада реакций комплемента, и, таким образом, iC3b не образовывался, так как для его образования требуется классический путь активации комплемента. В действительности, концентрации GL-2045, G994, G998 или G1033 около или ниже 1 мкг/мл приводили к образованию относительно небольших количеств iC3b, в то время как концентрации указанных соединений 10-100 мкг/мл приводили к существенному образованию iC3b. В-третьих, уровень iC3b достигал пикового значения в 250 мкг/мл в присутствии 100 мкг/мл GL-2045 и быстро сокращался при повышении концентрации GL-2045 (Фиг. 6В), что указывает на существование максимальной эффективности лекарства, и что дальнейшее увеличение дозы мульти-Fc терапевтического лекарства может быть неблагоприятным. Неожиданным образом, 100 мкг/мл GL-2045 оказалось максимальной эффективной дозой, использованной для ингибирования CDC (Фиг. 1A и 1В). Указанные данные, тем самым, показывают возможность iC3b служить посредником максимальной терапевтической эффективной дозы GL-2045.
Пример 5. Уровень iC3b коррелирует с эффективной дозой GL-2045 in vivo
[0126] Были проведены эксперименты для оценки корреляции между уровнем iC3b и терапевтической эффективностью GL-2045 на мышиной модели нефрита. В указанной модели использовали антитела к тимоцитам (ATS), активные по отношению к поверхностному антигену Thy-1, находящемуся на мезангиальных клетках крысы (Yamamoto 1987 и Jefferson 1999). Введение ATS вызывало комплементозависимый мезангиолиз с последующим быстропрогрессирующим мезангиальным пролиферативным гломерулонефритом, который достигал пика развития в течение 5 дней после инъекции и проходил со временем.
[0127] Заболевание вызывали на день 0 инъекцией мышиного анти-крысиного (mouse anti-rat) CD90 (Thy1.1) (Cedar Lane) крысам Вистар (n = 8), что приводило к гломерулонефриту. На день 0, 2, 4 и 6 животных подвергали воздействию разными дозами ингибиторных страдомеров CDC. Контрольные животные без заболевания не получали антитела к Thy 1 или другое воздействие. Такролимус использовался в качестве позитивного контроля и вводился внутримышечно в дозе 1 мг/кг начиная с -9 дня до введения иммунной сыворотки. Дозирование в день 0 происходило за 4 часа до введения иммунной сыворотки. Мочу отбирали до дозирования на день 3, 5, 7 и 9 после введения иммунной сыворотки. Крысиные почки отбирали в конце исследования и фиксировали в 10% формалине для гистологического анализа. Сыворотку отбирали для анализа на содержание азота мочевины в крови (BUN) и определения уровня iC3b.
[0128] Фиг. 7А-7В показывают воздействие различных доз G998 на предохранение от протеинурии (Фиг. 7А) и воздействие G994 и G998 на предохранение от протеинурии (Фиг. 7В) в Thy-1 модели нефрита. Фиг. 7А показывает частичную эффективность G998 при 2 мг/кг ВВ в указанной модели и полную эффективность при дозе 10 мг/кг ВВ и выше. Дополнительные результаты показывают, что различные дозы мульти-Fc терапевтического средства G998 соотносятся с различными уровнями образования iC3b, C3a и C4a. Дополнительные результаты также показывают, что доза, соответствующая максимальному терапевтическому действию мульти-Fc терапевтического средства также вызывает максимальное увеличение по сравнению с базовым уровнем iC3b. Также, авторы настоящего изобретения обнаружили, что наборы rat ELISA для C3a непреднамеренно также охватывают C3, т. е. не являются специфичными для C3a + C3a desArg. Фиг. 7В показывает, что как G994, так и G998, дозированные 5 мг/кг ВВ соотносятся с полной эффективностью в указанной модели. Дополнительные результаты демонстрируют, что терапевтически эффективная доза G994 и G998 (например, доза образования предохранения от протеинурии, уменьшенных гистологических проявлений нефрита и/или пониженного уровня BUN по сравнению с плацебо) коррелирует с превышением порогового уровня iC3b, определённом в сыворотке.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  ГЛИКНИК ИНК.
БЛОК, Дэвид С.
ОЛСЕН, Хенрик
<120>  СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МУЛЬТИВАЛЕНТНЫМИ FC СОЕДИНЕНИЯМИ
<130>  GLIK-020/01WO
<150>  62/432,407
<151>  2016-12-09
<160>  5
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  12
<212>  PRT
<213>  Хомо Сапиенс
<400>  1
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1               5                   10
<210>  2
<211>  232
<212>  PRT
<213>  Хомо Сапиенс
<400>  2
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1               5                   10                  15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20                  25                  30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35                  40                  45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50                  55                  60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85                  90                  95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100                 105                 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115                 120                 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130                 135                 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165                 170                 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180                 185                 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195                 200                 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210                 215                 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>  3
<211>  232
<212>  PRT
<213>  Хомо Сапиенс
<400>  3
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1               5                   10                  15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20                  25                  30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35                  40                  45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50                  55                  60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85                  90                  95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100                 105                 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115                 120                 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130                 135                 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165                 170                 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180                 185                 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195                 200                 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210                 215                 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>  4
<211>  264
<212>  PRT
<213>  Хомо Сапиенс
<400>  4
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20                  25                  30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35                  40                  45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50                  55                  60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65                  70                  75                  80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85                  90                  95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100                 105                 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115                 120                 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130                 135                 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145                 150                 155                 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165                 170                 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180                 185                 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195                 200                 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210                 215                 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245                 250                 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210>  5
<211>  264
<212>  PRT
<213>  Хомо Сапиенс
<400>  5
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20                  25                  30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35                  40                  45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50                  55                  60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65                  70                  75                  80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85                  90                  95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100                 105                 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115                 120                 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130                 135                 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145                 150                 155                 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165                 170                 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180                 185                 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195                 200                 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210                 215                 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245                 250                 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<---