КОМПОЗИЦИИ IL-12, НАЦЕЛЕННЫЕ НА EDB

1. Иммуноцитокин для нацеленной на злокачественную опухоль доставки IL-12, где злокачественная опухоль экспрессирует экстрадомен B фибронектина (EDB-FN), где иммуноцитокин содержит:
а) белок IL-12 человека, содержащий первую белковую субъединицу IL-12 и вторую белковую субъединицу IL-12;
b) белок, содержащий EDB-связывающий домен;
c) линкер между белком IL-12 и белком, содержащим EDB-связывающий домен,
где линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4,
где первая белковая субъединица белка IL-12 представляет собой p40, и вторая субъединица представляет собой p35, которые конъюгированы друг с другом посредством линкера согласно следующей схеме (направление N->C): p40-линкер-p35, и
где белок, содержащий EDB-связывающий домен, представляет собой одноцепочечное диатело.
2. Иммуноцитокин для нацеленной на злокачественную опухоль доставки IL-12, где злокачественная опухоль экспрессирует экстрадомен B фибронектина (EDB-FN), где иммуноцитокин содержит:
а) белок IL-12 человека, содержащий первую белковую субъединицу IL-12 и вторую белковую субъединицу IL-12;
b) белок, содержащий EDB-связывающий домен;
c) линкер между белком IL-12 и белком, содержащим EDB-связывающий домен,
где линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4,
где первая субъединица белка IL-12 представляет собой p40, и вторая субъединица представляет собой p35, которые конъюгированы друг с другом посредством линкера согласно следующей схеме (направление N->C): p40-линкер-p35, и
где белок, содержащий EDB-связывающий домен, представляет собой scFv.
3. Иммуноцитокин по п.1 или 2, где p40 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:1, или ее фрагмент,
где белок IL-12 может активировать рецептор IL-12.
4. Иммуноцитокин по любому из пп.1-3, где p35 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:3, или ее фрагмент,
где белок IL-12 может активировать рецептор IL-12.
5. Иммуноцитокин по любому из пп.1-4, где белок, содержащий EDB-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична каждой последовательности из SEQ ID NO:28-33.
6. Иммуноцитокин по любому из пп.1-5, где белок, содержащий EDB-связывающий домен, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO:5 или 7, или обеим последовательностям.
7. Иммуноцитокин по любому из пп.1-6, где белок, содержащий EDB-связывающий домен,
a) обладает аффинностью связывания в отношении экстрадомена B (ED-B) фибронектина, равной ≥50%, по сравнению с любым из белков, содержащих EDB-связывающий домен, по любому из пп.4-5 и/или
b) конкурирует за связывание с экстрадоменом B (ED-B) фибронектина с любым из белков, содержащих EDB-связывающий домен, по любому из пп.5-6.
8. Иммуноцитокин по любому из пп.1-7, где белок, содержащий EDB-связывающий домен, содержит по меньшей мере один домен VH L19 и по меньшей мере один домен VL L19.
9. Иммуноцитокин по любому из пп.1 и 6-7, где иммуноцитокин содержит:
а) домен p40, связанный с доменом p35 посредством первого линкера;
b) первый домен VH L19, связанный с доменом p35 посредством линкера SAD;
c) первый домен VL L19, связанный с первым доменом VH L19 посредством третьего линкера;
d) второй домен VH L19, связанный с первым доменом VL L19 посредством четвертого линкера; и/или
e) второй домен VL L19, связанный со вторым доменом VH L19 посредством пятого линкера.
10. Иммуноцитокин по любому из пп.2-8, где иммуноцитокин содержит:
а) домен p40, связанный с доменом p35 посредством первого линкера;
b) домен VH L19, связанный с доменом p35 посредством линкера SAD;
c) домен VL L19, связанный с первым доменом VH L19 посредством третьего линкера.
11. Иммуноцитокин по любому из пп.9-10, где первый линкер содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:2.
12. Иммуноцитокин по любому из пп.9-11, где третий линкер содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:6.
13. Иммуноцитокин по любому из п.9 и 11-12, где четвертый линкер содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:8.
14. Иммуноцитокин по любому из пп.9 и 11-13, где третий линкер содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:6.
15. Применение иммуноцитокина по любому из пп.1-14 (для производства лекарственного средства) для лечения человека или животного
а) у которого диагностирован,
b) который страдает или
c) который имеет риск развития
неопластического заболевания, характеризующегося экспрессией или сверхэкспрессией фибронектина ED-B, или для профилактики такого состояния.
16. Применение по п.15, где неопластическое заболевание выбрано из группы, состоящей из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), почечно-клеточной карциномы, уротелиальной карциномы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи (HNSCC), метастатического колоректального рака с высокой микросателлитной нестабильностью (MSI-H) или дефицитом репарации ошибок репарации ДНК (dMMR), гепатоцеллюлярного рака, рака желудка, плоскоклеточной карциномы кожи, рака шейки матки и диффузной B-крупноклеточной лимфомы (DLBCL).
17. Применение иммуноцитокина по любому из пп.1-14 для ингибирования ангиогенеза в опухолевых тканях, экспрессирующих EDB-FN.
18. Фармацевтическая композиция для нацеленной на злокачественную опухоль доставки IL-12, где композиция содержит эффективное количество иммуноцитокина по любому из пп.1-14 и один или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.
19. Комбинация для лечения человека или животного, у которого диагностировано, который страдает или который имеет риск развития неопластического заболевания, характеризующегося экспрессией или сверхэкспрессией фибронектина ED-B, или для профилактики такого состояния, где комбинация содержит:
(а) иммуноцитокин по любому из пп.1-14 или фармацевтическую композицию по п.18, и
(b) одно или несколько терапевтически активных соединений для лечения рака.
20. Способ лечения или профилактики расстройства, связанного с экспрессией или сверхэкспрессией фибронектина ED-B, включающий введение пациенту эффективного количества иммуноцитокина по любому из пп.1-14, фармацевтической композиции по п.18 или комбинацию по п.19.
21. Терапевтический набор для нацеленной на злокачественную опухоль доставки IL-12, где злокачественная опухоль экспрессирует EDB-FN, где набор содержит:
а) иммуноцитокин по любому из пп.1-14, фармацевтическую композицию по п.18 или комбинацию по п.19,
b) устройство для введения иммуноцитокина, фармацевтической композиции или комбинации, и
с) инструкцию по применению.
22. Полинуклеотид, кодирующий иммуноцитокин по любому из пп.1-14.
23. Вектор, содержащий промотор и полинуклеотид по п.22.
24. Способ получения иммуноцитокина по любому из пп.1-14, включающий:
а) приведение полинуклеотида, кодирующего иммуноцитокин по п.22, в контакт с клеткой;
b) экспрессию полинуклеотида в количествах, достаточных для продукции иммуноцитокина, кодируемого в а); и
c) восстановление иммуноцитокина.
25. Клетка, содержащая полинуклеотид по п.22.